JP2001316268A - 皮膚外用剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 従来のメラニン生成抑制剤にみられる熱や酸
化に対しての安定性が高く、外用剤中での経時的分解着
色がないメラニン生成抑制剤配合の皮膚外用剤を提供す
る。 【解決手段】 メラニン生成抑制剤としてヒトのチロシ
ナーゼに対する活性阻害に優れたハイドロキノン−α−
Ｄ−グルコピラノシドを含有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、グルコースがハイ
ドロキノンのＯＨ基の１つにα結合したハイドロキノン
−α−Ｄ−グルコピラノシドを含有する皮膚外用剤に関
する。ここで言う皮膚外用剤とは、クリーム、ローショ
ン、美容液、パック料、マッサージ料、化粧下地等の基
礎化粧料、ファンデーション、チークカラー、アイシャ
ドウ、アイライナー、マニュキュア等のメイクアップ化
粧料、シャンプー、トニック等の頭髪化粧料、洗顔料、
ボディー化粧料、入浴剤、石鹸、香水等である。

【０００２】

【従来の技術】従来より皮膚の美白化（皮膚黒化予防）
および紫外線に過度に暴露されるために生じるしみ・そ
ばかすならびに肝斑などの予防、改善のために各種のメ
ラニン生成抑制剤が用いられてきた。例えば、ハイドロ
キノン、ハイドロキノンのフェノール性ＯＨ基にグルコ
ースがβ結合したアルブチン（β−アルブチン）、ビタ
ミンＣならびにその誘導体およびコウジ酸がその代表例
として挙げられる。

【０００３】しかし、ビタミンＣ、ハイドロキノン、コ
ウジ酸は、特に水中で熱や酸化に対して極めて弱く、不
安定で皮膚外用剤中において経時的に分解着色などの問
題がある。

【０００４】また、ビタミンＣの誘導体であるリン酸Ｌ
−アスコルビルマグネシウム、β−アルブチンは、熱や
酸化に対する安定性は改善されてはいるが、効果の面な
どで必ずしも満足できるものではない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明は、従来
のメラニン生成抑制剤にみられる上記のような問題を改
善ないしは解決できるメラニン生成抑制剤を皮膚外用剤
として提供することを課題とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく、外用剤として安定で、しかも安全性が高
く、さらに従来のものより遥かに効果の高い物質を追求
して行く中で、次のような知見を得た。 （１）先ず、前記の目的に叶う化合物としてハイドロキ
ノン−α−Ｄ−グルコピラノシド（以下、α−アルブチ
ン）が存在すること。 （２）α−アルブチンがヒト由来のチロシナーゼに対し
特異的に極めて強力に阻害効果があること。 （３）α−アルブチンは、市販の美白剤であるβ−アル
ブチンよりも安定であるため、安全であること。

【０００７】本発明の皮膚外用剤は、上記の知見に基づ
くもので、ヒトのチロシナーゼに対する活性阻害に優れ
たα−アルブチンを含有することを特徴とする。本来ハ
イドロキノン−β−グルコピラノシドをアルブチンと言
い、化１に示す本発明のハイドロキノン−α−Ｄ−グル
コピラノシドは、その構造上、このアルブチンとは全く
異なる物質ではあるが、本発明中では、このアルブチン
と明確に区別するために、α−アルブチンと表現する。
そして、上記のアルブチンをβ−アルブチンと表現す
る。

【０００８】

【化１】

【０００９】このα−アルブチンは、例えば細菌由来の
酵素によるハイドロキノンの配糖化により得られるもの
で、この酵素はα−アミラーゼであり、このα−アミラ
ーゼは特許第２６６２６６７号公報に開示されたアミラ
ーゼＸ−２３であってよい。

【００１０】色素沈着を惹起するメラニンの生成は、チ
ロシナーゼ酵素がもっとも重要な役割を果たしており、
美白剤、しみ・そばかすの予防、肝斑の改善を目的とし
た外用剤の多くは、チロシナーゼを阻害する物質で構成
されている。このチロシナーゼの阻害作用の強弱が、こ
れらの目的を達成する度合いと深く関わっており、チロ
シナーゼ阻害作用の大きい物質ほど、優れた美白効果、
しみ・そばかすの予防効果、肝斑の改善作用が期待され
る。

【００１１】このチロシナーゼ活性阻害の評価法は、従
来、マッシュルーム由来のチロシナーゼを用いるのが一
般的であった。しかし、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５９，１４３（１９９５）に記
載されたデータによれば、この従来の評価法では、α−
アルブチンは、マッシュルーム由来のチロシナーゼに対
する阻害効果を有するとは認められない。また、特開平
５−９３２号公報によれば、α−アルブチンがマッシュ
ルームのチロシナーゼ活性をむしろ促進し、日焼け剤と
して有効であると結論づけている。さらに、特開平６−
１５３９７６号公報では、α−アルブチンがマッシュル
ームのチロシナーゼに対し阻害効果があることを記載し
ている。一方、酵素は、鍵と鍵穴の関係でたとえられる
ように、特異性が非常に高く、特定の基質にしか作用し
ないことが知られている。酵素阻害剤についても、例え
ば、Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４４，１６８
３（１９８０）には、動物由来のα−アミラーゼには作
用するが、植物及び微生物由来のα−アミラーゼには作
用しないα−アミラーゼ阻害剤が記載されており、この
α−アミラーゼ阻害剤のように、特定の酵素を阻害した
からと言って、起源の異なる酵素を阻害するかどうかは
全く判断できないことは明らかである。以上から明らか
なように、α−アルブチンのチロシナーゼ阻害効果を評
価する上で、マッシュルーム由来のチロシナーゼを用い
た実験結果の記述はまちまちであり、マッシュルーム由
来のチロシナーゼを用いた評価法で他の動植物由来のチ
ロシナーゼに対する効果を評価することはできない。

【００１２】そこで、本発明者らは、酵素化学の観点か
ら各種酵素の特異性に着目し、上記のように従来のマッ
シュルーム由来のチロシナーゼの評価法ではヒトに適用
する美白剤などの評価法としては適当でないとの考えの
下で、本来、美白剤などを使用するのはヒトであること
から、ヒト由来のチロシナーゼによって本発明に係るα
−アルブチンの活性阻害を評価すべきとの結論に達し、
これを実行した。つまり、ヒトの皮膚の培養細胞からチ
ロシナーゼを精製し、ヒトのチロシナーゼに対するα−
アルブチンの阻害効果を検討したところ、α−アルブチ
ンは、ヒト由来のチロシナーゼに対し特異的に極めて高
い阻害活性を有するとの知見を得た。

【００１３】この知見に基づき、本発明に係るα−アル
ブチンを配合した皮膚外用剤を用いてボランティアによ
る美白効果（皮膚黒化予防効果）および肝斑改善効果の
臨床試験を行ったところ、従来から用いられているメラ
ニン生成抑制剤より遥かに優れた効果を得ることができ
ることを確認した。しかも、従来から用いられているメ
ラニン生成抑制剤であるβ−アルブチンは、分解してハ
イドロキノンを生成すると、細胞毒性が約４００倍も増
加することが報告されている。これに対し、α−アルブ
チンは、この従来から用いられているβ−アルブチンに
比べ、安定性が高く、ハイドロキノンを生成し難いこと
から、安全性も極めて高いことをも確認している。

【００１４】一方、α−アルブチンの製造方法として、
本発明者らにより、酵素としてバチルス サブチリス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（例えば、Ｘ
−２３《生工研菌寄Ｐ−１３５６０》）由来のα−アミ
ラーゼ（例えば、アミラーゼＸ−２３）を用い、糖供与
体としてマルトオリゴ糖、アミロース、アミロペクチ
ン、各種スターチ等のα−１，４結合を持つグルカンを
用いて得る方法が提案されている（特許第２６６２６６
７号公報参照）。この公報記載の方法を基礎として得ら
れるα−アルブチンは、前述した従来のβ−アルブチン
に比して、ヒト由来のチロシナーゼに対する活性阻害作
用が遙に高く、しかも後述の実施例から明らかなように
ヒトに対する安全性も高く、かつ空気中はもとより水中
でも熱や酸化に対して極めて高い安定性を示し、皮膚外
用剤中における経時的な分解、着色等を生じることがな
いことが確認されている。

【００１５】このような優れたヒト由来のチロシナーゼ
活性阻害作用を有し、ヒトに対する安全性が高く、空気
中・水中での熱・酸化に対する安定性が高く、皮膚外用
剤中での経時的変質の無いα−アルブチンは、上記のα
−アミラーゼと、上記の糖供与体（工業的に有利に得る
ためには可溶性デンプン）を用い、例えば次のような条
件で工業的に量産することができる。ハイドロキノンが
１〜２０重量％、好ましくは１〜１５重量％、可溶性デ
ンプンが１〜２０重量％、好ましくは５〜１０重量％と
なるように、ｐＨ４〜９、好ましくはｐＨ５〜８の溶媒
（燐酸、酢酸等を加えた水溶液）中に溶解し、これを室
温〜９０℃、好ましくは３０〜７０℃に加温し、ここに
上記のα−アミラーゼ１〜１００単位、好ましくは５〜
８０単位を加え、上記温度で１〜４８時間、好ましくは
５〜２４時間反応させる。このとき、可溶性デンプンの
初期投入量を上記量の１０〜５０％としておき、反応途
上で、残りの量を徐々に（例えば１〜５時間毎の所定時
間毎に）添加したり、あるいは初期投入量を上記量の半
量とし反応時間の１／２が経過した時点で残りの半量を
添加する等により、収率の向上を図ることができる。

【００１６】本発明は、上記のようにして得られ、かつ
上記のような特性を有するα−アルブチンを含む皮膚外
用剤であり、剤型としては、軟膏、クリーム、ローショ
ン等を挙げることができるが、これらの剤型の種類は本
発明を限定するものではない。本発明の皮膚外用剤にお
けるα−アルブチンの配合量は、皮膚外用剤全量中、
０．０５〜１０重量％程度、好ましくは０．０５〜２重
量％程度で美白効果（皮膚黒化予防効果）、しみ・そば
かすの予防、肝斑の改善などの効果を良好に得ることが
できるが、この配合量は、本発明を何ら拘束するもので
はない。

【００１７】

【実施例】〔α−アルブチンの調製例〕ハイドロキノン
を１０重量％、マルトペントースを２０重量％となるよ
うに、２０ｍＭ酢酸水溶液（ｐＨ５．５）に溶解した。
この溶液１０ミリリットル（以下、ミリリットルを「ｍ
Ｌ」と記し、リットルを「Ｌ」と記す）に、α−アミラ
ーゼ（アミラーゼＸ−２３）６０単位を有する酵素液１
０ｍＬを添加した。この溶液を４０℃で１６時間保持し
た後、該溶液の３倍量の酢酸エチルを加え激しく振盪
し、室温で３０分間静置した後、水相画分を回収した。
この操作を３回行ない、未反応のハイドロキノンを完全
に取り除いた後、減圧乾燥した。乾燥物を精製水に溶解
し、精製水で平衡化した活性炭カラムに配糖体を吸着さ
せた。このカラムを、先ず２０％メタノールで処理して
該カラムに吸着している未反応の糖を溶出した後、１０
０％メタノールで処理して配糖体を溶出した。１００％
メタノール画分を減圧乾燥した後、再び精製水に溶解
し、凍結乾燥した。以上の操作によりハイドロキノンの
配糖体を約２００ｍｇ得た。この糖転移率は、約２７％
であった。

【００１８】また、上記酢酸水溶液に、反応開始６時間
後にマルトペントースを５重量％となるように添加した
ところ、糖転移率は、約４０％に向上した。

【００１９】〔皮膚外用剤の調製例〕 調製例１ 表１に示す配合割合において、精製水とプロピレングリ
コールの混液に、上記のα−アルブチンの調製例で得ら
れたα−アルブチン（以下「α−アルブチン」と記すと
きは、このα−アルブチンを指す）、パラオキシ安息香
酸メチルおよびパラオキシ安息香酸ブチルを加え、８０
℃で加熱溶解した。これに、８０℃に加熱し均一に溶解
した表１に示す他の成分の混合体を、少しずつ加え、ホ
モミキサーで高速乳化した。乳化後、徐々に冷却し、３
０℃まで攪拌冷却して、軟膏を製した。

【００２０】

【表１】

【００２１】調製例２ 表２に示す配合割合において、精製水にα−アルブチン
を添加し、７０℃で溶解し、この温度に保持した。一
方、表２に示す他の成分を７０℃で混合し、この温度に
保持した。この７０℃に保持した他の成分に、上記の７
０℃に保持したα−アルブチンと精製水の混合体を加
え、充分攪拌した後、冷却して、クリームを製した。

【００２２】

【表２】

【００２３】調製例３ 表３に示す配合割合において、精製水にα−アルブチン
を添加し、７０℃で溶解し、この温度に保持した。一
方、表３に示すローカストビーンガムを除く他の成分を
７０℃で混合し、この温度に保持した。この７０℃に保
持した他の成分に、上記の７０℃に保持したα−アルブ
チンと精製水の混合体を加え、充分攪拌した後、５０℃
まで冷却し、さらに均質化して３０℃まで冷却した。こ
の３０℃まで冷却したものに、ローカストビーンガムを
加え、攪拌し、冷却して、ローションを製した。

【００２４】

【表３】

【００２５】〔皮膚外用剤の評価例〕 評価例１ α−アルブチンのチロシナーゼ阻害活性についての評価
を、ヒト細胞由来チロシナーゼを用いて行った。活性阻
害の測定は、船山らの方法〔Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅ
ｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５７（１０）１６６６−１６
６９（１９９３）〕において、マッシュルーム由来のチ
ロシナーゼを、ヒト由来のそれに置き換えて行い、ポジ
ティブコントロールとしてβ−アルブチン（日清製粉社
製）を用いて行った。結果を、表４に示す。

【００２６】

【表４】 ＩＣ_５０は、チロシナーゼ活性を５０％阻害する供試化
合物の濃度（ｍＭ）

【００２７】表４から明らかなように、本発明に係るα
−アルブチンのヒト由来チロシナーゼに対する阻害活性
は極めて強く、ＩＣ_５０でβ−アルブチンの９倍の値を
示した。

【００２８】評価例２ α−アルブチンの含有量を０．５重量％にした以外は調
製例２と同様にして得た本発明のクリームと、α−アル
ブチンをβ−アルブチン１．０重量％に置き換えた同処
方の対照クリームを用いて臨床試験を行った。ボランテ
ィアの各被験者（男性６名、女性６名、計１２名、年令
２５〜５５才）の半数（男性３名、女性３名の計６名）
の右上腕内側部に上記本発明のクリームを塗布し、残り
半数の被験者にβ−アルブチン配合の対照クリームを同
部位に塗布した。塗布は１日３回（８時間毎）で７日間
連続して行い、クリーム塗布後、初日よりＵＶＢ光源を
用い、１ＭＥＤ量（最少紅斑量）の紫外線を１日１回計
３回、塗布部位に照射した。上述の臨床試験終了３０日
後、被験者をクロスオーバーし、右上腕内側部の前回と
は別の部位で同様の試験を行い、両群の同等性を維持し
た。試験の管理は、ダブルブラインドで実施した。皮膚
黒化の予防効果は、紫外線照射開始より１４日目の皮膚
黒化度を比較し、著しく有効、有効、やや有効、無効、
悪化の５段階で肉眼判定した。その結果を表５に示す。

【００２９】

【表５】

【００３０】表５から明らかなように、α−アルブチン
０．５重量％含有の本発明のクリームは、β−アルブチ
ンが倍量の１．０重量％含有する対照クリームより、皮
膚黒化の予防効果が優れていることが分かる。しかも、
本発明の皮膚外用剤は、副作用が観察されず、皮膚黒化
防止上優れたものであることが確認できた。

【００３１】評価例３ 調製例１で得た軟膏と、α−アルブチンをβ−アルブチ
ン２．０重量％に置き換えた同処方の対照軟膏を用いて
臨床試験を行った。肝斑罹病の女性（２６名４０〜６５
歳）のボランティアに、上記の本発明軟膏およびβ−ア
ルブチン含有対照軟膏を両群の同等性に配慮し、３ヶ月
間連用し、肝斑改善の効果を観察した。肝斑改善効果
は、３ケ月連用後に、著しく改善、改善、やや改善、無
効、悪化の５段階で肉眼判定した。その結果を表６に示
す。

【００３２】

【表６】

【００３３】表６から明らかなように、α−アルブチン
２．０重量％含有の本発明軟膏は、β−アルブチン同量
含有の対照軟膏より、有効であることが分かる。また、
本発明の軟膏は、副作用が観察されず、優れた肝斑改善
効果のあることが確認された。

【００３４】評価例４ α−アルブチンの酸〜アルカリ領域での安定性につい
て、ハイドロキノンとの比較試験を行って評価した。酸
性（ｐＨ５．５）、中性（ｐＨ６．５）、アルカリ性
（ｐＨ７．５）の各水溶液中の分解速度（ハイドロキノ
ン、α−アルブチンともに０．０４５Ｍ、３７℃）を測
定した。その結果を表７に示す。

【００３５】

【表７】 ＊１；６９時間後測定

【００３６】表７から明らかなように、アルカリ〜酸領
域におけるハイドロキノンの半減期が０．６〜１０．８
時間と短時間であるのに比して、α−アルブチンのそれ
は極めて優れた安定性を示していることが分かる。従っ
て、本発明のα−アルブチンは、皮膚外用剤中で優れた
安定性を保持することが確認できた。

【００３７】評価例５ α−アルブチンのマウス皮膚での持続性について、次の
要領で、β−アルブチンとの比較試験を行って評価し
た。２４週齢のマウスを頸椎脱臼後、背部を除毛し、皮
膚を剥がし採り、０．５ｇと２．０ｇを秤量し、これら
をα−アルブチンまたはβ−アルブチンを０．０３７Ｍ
の濃度で含有するクエン酸−りん酸ナトリウム緩衝液
（２．０ｍｌ、ｐＨ７．０）にそれぞれ添加し、３７℃
でインキュベートした。１９時間および４０時間後に試
料を遠心分離し、上清中のα−アルブチン、β−アルブ
チンの量をＨＰＬＣで測定し、残存率を算出した。な
お、各試験区とも同じ試料を３検体（ｎ＝３）作成し、
残存率はその平均値を用いた。また、ＨＰＬＣの測定条
件は、次の通りとした。 カラム：ＯＤＳ（４．６×２５０ｍｍ） 溶媒 ：メタノール−水（２０：８０ｖ／ｖ、りん酸で
ｐＨ２．５に調整） 検出 ：２８０ｎｍ 流速 ：０．５ｍｌ／分 温度 ：４０℃ 結果を図１に示す。

【００３８】図１から明らかなように、１９時間後では
α−アルブチンもβ−アルブチンも殆ど分解されていな
いが、４０時間後には各試験区とも分解が確認され、皮
膚を０．５ｇ添加した試験区ではα−アルブチンは８
７．５％の残存率であったが、β−アルブチンでは残存
率０％で完全に分解されていることが分かった。また、
皮膚を２．０ｇ添加した試験区では、４０時間後の残存
率が、α−アルブチンではβ−アルブチンの約１０倍の
値を示し、α−アルブチンはβ−アルブチンに比して分
解され難いことが分かった。

【００３９】評価例６ 評価例５と同様のマウス皮膚での持続性を評価した。評
価例５で剥がし採った皮膚を２．６ｇ秤量し、クエン酸
−りん酸ナトリウム緩衝液（５．２ｍｌ、ｐＨ７．０）
に添加した後、ホモジェネートし、皮膚抽出液とした。
この皮膚抽出液と、α−アルブチンまたはβ−アルブチ
ンを０．１Ｍの濃度で含有するクエン酸−りん酸ナトリ
ウム緩衝液（５．２ｍｌ、ｐＨ７．０）を、１：１（ｖ
／ｖ）で混合した後、３７℃でインキュベートした。４
時間および２０時間後に試料を遠心分離し、上清中のα
−アルブチン、β−アルブチンの量をＨＰＬＣで測定
し、残存率を算出した。なお、各試験区とも同じ試料を
３検体（ｎ＝３）作成し、残存率はその平均値を用い
た。ＨＰＬＣの測定条件は、評価例５と同じとした。結
果を図２に示す。

【００４０】図２から明らかなように、４時間後ではα
−アルブチンもβ−アルブチンも殆ど分解されていない
が、２０時間後にはα−アルブチンはβ−アルブチンの
２倍以上高い残存率を示しており、α−アルブチンはβ
−アルブチンに比して安定性が優れていることが分かっ
た。

【００４１】

【発明の効果】以上のように、本発明に係るα−アルブ
チンを含有する本発明の皮膚外用剤によれば、次のよう
な効果を得ることができる。 （１）皮膚黒化、色素沈着を惹起するメラニンの生成に
関与するチロシナーゼの阻害作用をヒト由来のチロシナ
ーゼを用いて評価した結果では、本発明に係るα−アル
ブチンは、従来から広く賞用されているβ−アルブチン
に比して、極めて高い阻害作用を有することから、ヒト
の皮膚の美白化用として有効である。 （２）ボランティアを用いて臨床試験を行った結果で
は、美白効果（皮膚黒化予防効果）および肝斑改善効果
が、本発明に係るα−アルブチンを含有する皮膚外用剤
は、従来から広く賞用されているβ−アルブチンを含有
する皮膚外用剤に比して、優れており、また副作用が観
察されず安全性に問題がないことから、ヒトの皮膚の美
白化用や肝斑改善用として有効である。 （３）本発明に係るα−アルブチンは、水溶液中で安定
であることから、軟膏、ローション、クリームなどの外
用剤として有効である。 （４）本発明に係るα−アルブチンは、マウス皮膚によ
る持続性が高いことから、ヒトの皮膚外用剤として有効
である。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明に係るα−アルブチンとβ−アルブチン
とのマウス皮膚での安定性についての比較試験結果を示
すグラフである。

【図２】本発明に係るα−アルブチンとβ−アルブチン
とのマウス皮膚での安定性についての他の比較試験結果
を示すグラフである。

フロントページの続き (72)発明者 西村 隆久 奈良市西大寺野神町１−７−10−５ (72)発明者 中山 宏基 東京都新宿区百人町３−１−４−703 Ｆターム(参考） 4C057 BB02 DD01 JJ23 4C083 AC012 AC022 AC072 AC122 AC182 AC352 AC422 AC482 AD352 AD391 AD392 CC19 DD22 DD27 DD31 EE16 4C086 AA01 AA02 EA08 MA01 NA14 ZA89 ZC20 ZC80

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒトのチロシナーゼに対する活性阻害に
   優れたハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシドを含
   有する皮膚外用剤。