JP3909290B2 - アルブチンとグルコシダーゼを有効成分として含有する美白剤 - Google Patents

Description

【０００１】
（技術分野）
本発明はアルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）とグルコシダーゼ（Ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）を含有する美白剤に関するものであり、さらに詳細には、下記化学式１に示されているアルブチンと、ヒドロキノン（Ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）およびグルコース（Ｇｌｕｃｏｓｅ）にアルブチンを加水分解するグルコシダーゼとを含有している美白剤、またはアルブチンとグルコシダーゼとが分離されており、皮膚に使用する直前に混合する美白剤に関するものである。
【０００２】
化学式 １

【０００３】
（背景技術）
一般的に、皮膚の色素沈着が発生するのは、皮膚に紫外線が照射されたメラニン細胞（Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ）においてメラニンが合成されるためである。メラニンはチロシンが連続的に酸化することにより合成される。チロシンはグルコシダーゼ、酸化酵素により触媒作用が及ぼされ、ドパキノン（ＤＯＰＡｑｕｉｎｏｎｅ）に変化する。ドパキノンは自発的に酸化過程を経てメラニンを生成する。メラニンは保護のために太陽の紫外線を吸収するが、肝斑、すなわち特定の位置における黒い点など皮膚の色素性疾患を引き起こす。そのため皮膚を白くするために、色素を取り除く配合が化粧品に含まれている。
【０００４】
皮膚の色素を取り除くのはメラニン生成のプロセスを抑制することにより可能である。ヒロドキシン、アルブチン、コウジ酸（Ｋｏｊｉｃ ａｃｉｄ）およびその誘導体が皮膚の色素を取り除くために使用されている。上記成分を含むベアベリーの植物抽出物（韓国出願公開公報番号２０００−０３５３９８）、マルベリーおよびりんごの植物抽出物（韓国特許公告番号１９８８−１４７４１２）が皮膚の色素を取り除くために化粧品に含まれている。
【０００５】
しかし、アスコルビン酸、グルタチオン、マルベリー抽出物など色素を取り除く作用物質は安定性がなく、皮膚炎を誘発する。さらに、最も良く効く抑制剤であるコウジ酸およびその誘導体は、大量に色素を取り除くそれらを含む作用物質を生成するためのコストが高い。太陽の光と熱はアルブチンの脱色を誘発し、チロシナーゼの抑制効果が減少する。それゆえに、アルブチンはヒロドキノンより色素を取り除く効果が少ないと認識されている。最も強力な美白化合物であるヒロドキノンは、処方箋なしで購入できる軟膏または皮膚科医の処方箋に広く使用されている。肝斑のような色素沈着過度に対する色素を取り除く効果を有するというヒドロキノンの臨床的な研究が多数報告されている。（アルントなどＪＡＭＡ．１９４：９６５−９６７、１９６５）。化学式２に示されているヒロドキノンは、メラニン形成のプロセスに含まれる重要な酵素であるチロシナーゼを抑制する。特に、チロシナーゼはチロシンのヒドロキシナーゼの作用によるジヒドロキシフェニルアラニン（ｄｏｐａ）への変換、および酸化酵素によるドーパのドパキノンへの変換に触媒作用を及ぼす。
【０００６】
化学式 ２

【０００７】
ヒドロキノンには一定の効果があるが、不安定で反応性蒸着であり、ミセルおよびエマルションといった化粧品の製法において脱色しやすい。残念なことに、低濃度のヒドロキノンでさえ、アレルギー性の接触性皮膚炎および急性または慢性の皮膚炎を誘発する。（ｃｈｏｕｄａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｊ Ｉｎｄ． Ｍｅｄ． ４５（６）： ３７６−８０、 １９８８）このような副作用を避けるため、患者の感受性に合わせて投薬量が厳しく管理されるべきである。（Ｐｅａｒｌ Ｅ． ｅｔ ａｌ．、Ａｒｃｈｉ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ． １３１：１４５３−１４５７、 １９９５）
【０００８】
アルブチンはベータ−Ｄ−グルコースと結合しているヒドロキノンの配糖体である。アルブチンは美白用化粧品に利用されているが、皮膚に吸収されにくくヒドロキノンより美白効果が劣っている。チロシナーゼの働きを抑制するアルブチンの効果はヒドロキノンの１／１０００である。（Ｋａｚｕｈｉｓａ ＭａｅｄａおよびＭｉｎｏｒｕ Ｆｕｋｕｄａ、アルブチン：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｔｓ ｄｅｐｉｇｍｅｎｔｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ ｃｕｌｔｕｒｅ、 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒａｐ． １９９６； ２７６（２）： ７６５−７６９）
【０００９】
窒素を加えた界面活性剤を使用した方法がアルブチンの皮膚への吸収を促進するために用いられている。（米国特許第５、７５９、５２８号）新しい美白誘導体の開発の関する多数の報告および研究が進行しているが、未だに成功したという報告はほとんど発行されていない。結論として、アルブチンは安定性があり皮膚のトラブルが少ないにもかかわらず、皮膚への吸収率が低く、またヒドロキノンよりも美白効果が低いため、広く使用されてはいない。
【００１０】
現在、ヒドロキノンは最も効果のある美白剤である。皮膚への毒性および不安定性といった副作用や問題のため、皮膚への刺激が少なく、安定性が高く新しい効果的な美白剤が必要とされている。
【００１１】
前述およびその他の不利点を打開するために、本発明は皮膚に使用する直前にアルブチンおよびグルコシダーゼを混合することにより、皮膚炎を最小限に抑え、安定性を最大限にする新しい皮膚の美白剤を提供する。
【００１２】
（発明の開示）
本発明の目的は人間の皮膚の色素脱失において高い効果を示す、毒性、刺激、およびアレルギー性のない組成物を提供することである。
【００１３】
本発明のその他の目的は、使用前は別々の容器に分離されているアルブチンおよびグルコシダーゼを有効成分としてなり、皮膚に使用する直前に該成分を混合して酵素反応を開始させることを特徴とする皮膚美白用組成物を提供することである。
【００１４】
混合時におけるアルブチン含有量は全体量の０．０５〜５．０％、できれば０．１〜３．５％に調整するのがよい。混合時においてグルコシダーゼ含有量はアルブチンの３％に対して７５〜１５０ｕｎｉｔに調節するのがよい。アルブチンまたはグルコシダーゼの濃度が不十分であれば十分な美白効果にはならず、またアルブチンまたはグルコシダーゼが多すぎれば炎症の原因にはなる。
【００１５】
上記アルブチンは天然アルブチン、合成アルブチン、またはバイオテクノロジーにより生成されたアルブチンでよい。できれば、ベアベリーの葉またはベアベリー抽出物自体から分離された天然アルブチンをこの発明では使用するのがよい。
【００１６】
グルコシダーゼは、配糖体の結合をグルコースおよびアグリコン（Ａｇｌｙｃｏｎ）に加水分解する酵素である。グルコシダーゼは酵母、細菌、菌類および動物の消化器に広く見られる。最近は、グルコシダーゼの遺伝子の複製が作られ、バイオテクノロジーにおいて生成が可能である。上記に記された本発明を実施するためのグルコシダーゼの源は制限されない。本発明では、グルコシダーゼを含む植物または微生物の抽出物が化粧品に加えられる。できれば、前記植物はアーモンド、大麦またはオート麦がよく、前記微生物は黒色アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）がよい。本発明で使用するアルブチンをヒドロキノンに加水分解するグルコシダーゼの起源は問わない。本発明の組成物では、アルブチンおよびグルコシダーゼは使用前は別々の容器に分離されており皮膚に使用する直前に混合する。そして、アルブチンはヒドロキノンおよびグルコースに加水分解し、美白効果はメラニン形成を抑制するヒドロキノンにより実現される。本発明の組成物は安全性および安定性において優れている。
【００１７】
本発明の組成物は、肌洗浄用化粧液（トナー）、ローション、ジェル、エマルション、クリームおよび軟膏といった化粧品に加えられる。保存料、酸化防止剤、色素、香水、界面活性剤、増粘剤、保湿剤、ＵＶ吸収剤または界面活性剤を、必要に応じて組成物に加えることができる。補助剤および／またはその他の成分の量は、好ましくは混合時の全体量の０．０１〜２０％に調節するのがよい。
【００１８】
本発明の組成物は、局所的に色素化した皮膚に対して使用することを意図し、液体、ジェル、単一または複合エマルジョン、マイクロカプセルまたはリポソームの方法において通常は薬用として提供することができる。この組成物において、構成物にアルブチンおよびグルコシダーゼを含有している場合、含有物の１つグルコシダーゼは、できれば皮膚に使用するまで、加水分解反応を妨げるために、マイクロカプセル、リポソームまたは脂質の小嚢に入れておければ、その結果、安定性を最大にすることができる。
【００１９】
有機物質の分析に一般的に使用される薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）法を利用して、グルコシダーゼによりヒドロキノンおよびグルコースにアルブチンを完全に加水分解されることを確認した。
【００２０】
アルブチンおよびグルコシダーゼを含む混合製剤がヒドロキノンのみの単独製剤より安定性があるを確認するために、アルブチンおよびグルコシダーゼを含む混合製剤を３７℃で１０分間反応させ、冷水で冷却して反応を終了させた。吸光度は４００ｎｍで測定し、変色度はヒドロキノン溶液の脱色の範囲に対するアルブチン溶液の脱色範囲の割合で表されている。これによりアルブチンおよびグルコシダーゼを含む混合製剤の安定性が、ヒドロキノンの単独製剤の安定性より優れていることが確認された。グルコシダーゼの濃度が減少するにつれて、安定性が増加するのは、加水分解がグルコシダーゼの濃度に比例して促進されるからである。
【００２１】
本発明の別の実施例において、この組成物の安全性は健康な成人の志願者に閉塞性の傷当てを使用した皮膚炎により試験された。結果として、ヒドロキノンが放出されるにもかかわらず、アルブチンおよびグルコシダーゼを含む混合製剤では炎症は示されなかった。しかし、同様に実験した同じ濃度のヒドロキノンは陽性の炎症を示した。これにより、皮膚が次第に増加する刺激剤の量に対しては、高い濃度の刺激剤よりも適合できることが判断できる。
【００２２】
さらに、アルブチンおよびグルコシダーゼを含有する混合製剤が志願者の腕の皮膚に人工的にＵＶ照射により誘発される色素沈着に使用した。結果はアルブチンおよびグルコシダーゼを含有する混合製剤は、アルブチンのみを含有する単独製剤またはヒドロキノンのみを含有する単独製剤よりもより有効であることが示された。
【００２３】
（発明を実施するための最良の形態）
以下は本発明の実施例による詳細な説明である。しかし、この実施例は１例であり、これらの技術が本発明の範囲内において修正、および改良される可能性があることは言うまでもないことである。
【００２４】
実施例１：グルコシダーゼによるアルブチンからの加水分解生成物
０．０５％アルブチン（ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ）および２０ｕｎｉｔ／ｍｌベータ１、４グルコシダーゼ（ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ、ＥＣ ３．２．１．２１）を０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）において、３７℃で３０分間反応させた。反応後、ヒドロキノン生成物は、ｎ−ブタノール、エタノールおよび水を５：３：２の割合の混合物において薄層クロマトグラフィーを使用することにより確認された。その後、ＴＬＣ板を乾かし、チヤリング溶液（１０％ ＣｕＳＯ４ ｉｎ ８％ Ｈ３ＰＯ４）をスプレーし、すぐに熱線銃で乾かした。斑点のＲｆ値が計算される。
【００２５】
表１に従って、ヒドロキノンおよびグルコースのみＴＬＣで観察した。その結果、グルコシダーゼによりアルブチンが完全に加水分解していることが推察される。
表１

＊Ｒｆ＝溶質が展開した距離／溶液により広がった全体の距離
【００２６】
実施例２：混合製剤の安定性試験
アルブチン―グルコシダーゼの混合製剤の安定性は、ヒドロキノンのみの単独製剤と比較した色素の脱色程度により試験した。アルブチン１００ｍＭとグルコシダーゼ１、１０、２０ｕｎｉｔ／ｍｌの組合せをそれぞれ、３７℃で１０分間、１ｍｌの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）において反応させた後、冷水で冷却して反応を終了させた。その後、冷却済みの２０％トリクロロ酢酸（Ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）１ｍｌ混合液を加えグルコシダーゼの働きを取り去った。前記混合製剤は１２００ｒｐｍで遠心分離した。各溶液を３７℃で２４時間培養し、吸光度は４００ｎｍで測定した。ヒドロキノンの色素脱失の程度は１００％としてみなされ、ヒドロキノンと比較するその他のサンプルの割合を計算した。対象として、１００ｍＭアルブチンおよび１００ｍＭヒドロキノン溶液（ｓｉｇｍａ、 ＵＳＡ）が使用された。表２において、グルコシダーゼの濃度の減少に伴い安定性が増加するのは、加水分解がグルコシダーゼの濃度に比例して促進されるからである。
表２

＊ヒドロキノンの変色率は１００％とみなされ、他の溶液はヒドロキノン溶液と比較で表される。
【００２７】
実施例３:アルブチンとグルコシダーゼによる皮膚の１次的な炎症の抑制効果
健康な大人３０名にアルブチンおよびグルコシダーゼの混合製剤に対する皮膚の炎症を調べるために閉塞した傷当ての試験を実施した。試験用の傷当てには実施例２のアルブチンおよびグルコシダーゼの溶液が含まれており、志願者の腕の下部分に貼られ、２４時間後傷当てが取られた。皮膚の状態は、傷当てを除去後３０分から４８時間後まで観察された。炎症の程度は表３ａで示されているとおりに分類している。
表３ｂは炎症試験の結果を示している。ヒドロキノン溶液が非常に強い皮膚の炎症を起こした一方、アルブチン―グルコシダーゼ混合溶液ではほとんど皮膚の炎症はみられなかった。
表３ａ

表３ｂ

【００２８】
実施例４:アルブチンとグルコシダーゼ混合製剤の皮膚美白効果
上記の実施例に基づいた実用的な製剤ができ、皮膚の美白に使用された。製剤１はアルブチンを含有し、製剤２はグルコシダーゼを含有している。両製剤は別々に準備され、使用直前に混合し、製剤１と製剤２を１０：１の割合で混合した後、皮膚に使用した後、各々の効果を比較した。
２５歳〜３０歳の大人の志願者１０名を選び、生体研究を６週間行った。志願者の前腕下部に、各１．５ＭＥＤでＵＶの光（ＵＶ ｌａｍｐ； Ｐｈｉｌｉｐｓ ＴＬ２０ｗ／１２ＵＶ、 ＴＭ０２／０９ＵＶ）を照射したことにより、直径１．５ｃｍの円形状の４箇所色素沈着された。この色素沈着は２日にわたり１日に２回行われた。実験の製剤として製剤１および製剤２を１０：１の割合で混合したものと比較製剤１、２、３とを、６週間に渡り１日に２回使用し、皮膚の美白効果を観察した。結果として、脱色作用物質を使用しない製剤、アルブチンのみを含む製剤では皮膚の美白効果は示されなかった。ヒドロキノンを含有する製剤は皮膚の美白効果を有するが、皮膚のトラブルの原因となることが確認された。これに対して、アルブチンおよびグルコシダーゼを含有する混合製剤では、副作用もなく、その他の製剤より、より優れた脱色効果が示された。
表４ａ

表４ｂ

【００２９】
本発明における混合製剤を含むエッセンスの好ましい例は、次のとおりである。
製剤１と製剤２を１０：１の割合で手のひらで混合してから、顔に前記混合製剤を使用する。
製法例１ 本発明の成分を利用したエッセンスの調合

製法例２ 本発明の成分を利用したオイルインウォーター化粧用エマルションの調合

製法例３ 本発明の成分を利用したパックの調合

製法例４ 本発明の成分を利用した栄養クリームの調合

【００３０】
（産業における可能性）
本発明の皮膚の美白作用物質はアルブチンおよびグルコシダーゼを含んでおり、グルコシダーゼの加水分解反応によりヒドロキノンを徐々に生成する。本発明の脱色効果はヒドロキノンの脱色効果より高く、皮膚のトラブルおよび保存中における不要な反応も見られなかった。したがって、本発明は化粧品または皮膚用または薬用の配合を用いる美白製品に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１はアルブチンがグルコシダーゼによりヒドロキノンおよびグルコースに加水分解されることを確認する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を示している。
アルブチン＋グルコシダーゼ
グルコース
ヒドロキノン
アルブチン

Claims (3)

1. 使用前は別々の容器に分離されているアルブチンおよびグルコシダーゼを有効成分としてなり、皮膚に使用する直前に該成分を混合して酵素反応を開始させることを特徴とする皮膚美白用組成物。
2. ０．０５〜５．０％のアルブチンおよびアルブチン３％あたり７５〜１５０ｕｎｉｔのグルコシダーゼを含むことを特徴とする、請求項第１項に記載の皮膚美白用組成物。
3. アルブチンおよびカプセル化されたグルコシダーゼからなることを特徴とする、請求項第１項に記載の皮膚美白用組成物。

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