KR100419527B1 - 멜라닌생성-억제효과또는탈색활성을갖는,화장품또는약학적조성물을제조하기위한,특히피부과학에의아황산염과메타중아황산염의사용 - Google Patents

Abstract

본 발명은 멜라닌 합성-억제제 또는 탈색제로서의 메타중아황산염을 포함한 아황산염의 사용에 관한 것이다. 본 발명은 멜라닌생성-억제 또는 탈색 화장품 조성물과 선택적으로 유리하게는 병변 치료를 위한 약학적 조성물을 제조할 수 있게 한다.

Description

멜라닌생성-억제효과 또는 탈색활성을 갖는, 화장품 또는 약학적 조성물을 제조하기 위한, 특히 피부과학에의 아황산염과 메타중아황산염의 사용{USE OF SULFITES AND METABISULFITES FOR MANUFACTURING COSMETIC OR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS, NOTABLY IN DERMATOLOGY, WITH MELANOGENESIS-INHIBITING EFFECT OR WITH DEPIGMENTING ACTIVITY}

(본발명의 배경기술)

본 발명은 본질적으로 멜라닌생성-억제효과 또는 탈색활성을 갖는, 화장품에 또는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물을 제조하기 위한 아황산염 또는 메타중아황산염의 사용에 관한 것이다.

본 발명은 또한 상기한 바와같이 하여 얻어진 멜라닌생성-억제효과 또는 탈색활성을 갖는 화장품 조성물 또는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물을 다룬다.

본 발명은 게다가 탈색을 위한 활성성분으로서 아황산염 또는 메타중아황산염을 사용한 미용 탈색 처치방법을 다룬다.

태양 광선을 차단하기 위하여, 피부는 이 작용에 특히 적응된 다른세포 즉,멜라닌 세포를 지닌다.

복합과정인 멜라닌생성의 동안에 이들 세포는 어두운 색소, 즉 멜라닌을 생성하는데, 그것의 효과는 피부구조를 보호하고 볕에 탄것을 수축시키는데 필요한 시간을 증가시키는 것이다.

그러나 멜라닌 모두가 보호적이지는 않고 특히 매우 광독성인 파오멜라닌이라 일컫는 멜라닌의 형태가 있다. 모든 멜라닌은 일정형태의 자유라디칼과 반응할 수 있기 때문에 파오멜라닌은 훨씬 더 독성인 자유라디칼의 형성을 야기하는데, 이 자유라디칼은 케라틴합성세포의 유전자 물질에 비가역적 손상을 야기할 수 있다.

한편, 멜라닌화 단위의 비기능화에 연관된 일정한 질병들은 때때로 미적이지 않은 과도 색소침착을 야기할 수 있다.

따라서, 멜라닌 합성의 억제제의 사용은 예를들어 많이 착색된 피부를 희게 하거나 어떤 미적이지 않은면에서 과도 색소침착을 억제하는 경우에 있어서와 같이 진정한 탈색을 추구하는 용도뿐만 아니라, 색조를 밝게하고 피부를 투명하게하고 표면 조직을 빛나게하는 것을 목적으로 하는 용도를 위해서 화장품에 특히 흥미가 있다.

또한 멜라닌 합성의 억제는 특히 진정한 병변을 치료하기 위한 치료학적 처치의 상황에 흥미가 있을 것이다.

그러나 본 발명은 간단한 화장품 사용을 목적으로 하고 있지만 병변치료 상황에의 약학적 사용이 또한 고려되고 또한 본 발명의 일부이다.

(종래 기술의 설명)

여러가지 화장품 또는 선택적으로 약학적 조성물들이 이미 제안되었다.

종래기술의 예로서, 1974년 GB-A-1 349 955 명세서를 인용할 수 있는데, 이것은 히드로퀴논, 구체적으로는 불포화 지방산의 긴-사슬 지방산 에스테르인 박리자극제, 알킬아민, 그리고 플루오로메톨론, 디아메타손 또는 히드로코르티손 같은 항-염증성 코르티코스테로이드를 함유하는, 상승 작용을 갖는 피부를 창백하게하는 조성물을 기술한다.

한편, 루마니아 명세서 RO-81370, WPIL 요약서 AN-83-762909는 세타졸, 와셀린, 라놀린 및 메타중아황산염(Na₂S₂O₅)같은 항-산화안정제로 이루어진 부형제를 기재로한, 피부로부터 착색된 자국을 제거하기위한 연화제 크림에 관한 것이다.

JP-A-58198421 명세서, WPIL 요약서 AN-84-002869는 또한 간유를 함유하는 피부병을 치료하기 위한 피부를 창백하게 하는 조성물, 염기성 황화합물을 함유하는 조성물, 과산화수소와 살리실산으로 이루어진 조성물 그리고 브롬산염을 함유하는 산성 조성물을 기술한다. 간유는 어류의 간유로부터 얻을 수 있고 황-함유 화합물의 예에는 바람직하게는 여러가지 아민과의 염의 형태로 티오글리콜산, 티오락트산, 티오프로피온산, 티오살리실산 및 티오부티르산, 또는 중아황산나트륨, 및 시스테인이 있다. 티오글리콜산 암모늄이 특히 바람직하다.

게다가, US-A-692,261 명세서로부터 메타중아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨 및/또는 과산화수소뿐만아니라 코지산 또는 코지산 유도체로 이루어진 멜라닌 생성-억제활성을 갖는 외용피부제제가 공지되어 있다.

제제의 상업적 가치를 유지하기 위하여 아황산수소나트륨 및/또는 과산화수소를 혼입함으로써 긴 기간동안의 보관중 또는 보관후 제제의 변색이 방지되어있다고 명시되어 있다.

이로부터, 아황산수소나트륨 또는 메타중아황산나트륨의 사용은 단지 멜라닌 생성에 있어서 기본 효소인 티로시나아제의 활성을 억제하기위한 활성제로서가 아니라 제제의 착색 안정제로서 고려되어있다.

게다가, 1992년의 JP-A-04/082834 명세서, WPIL 요약서 AN-92-138630에서는 갈락토스아민 또는 그것의 염 및/또는 만노오스아민 또는 그것의 염과 0.05%의 비율로 아황산수소나트륨 또는 메타중아황산나트륨인 안정제를 함유하는 여러가지 부형제를 함유하는 약물을 기술한다.

게다가, 1995년의 JP-A-07/025742 명세서는 제제의 착색을 막기위하여 황-함유 안정제, 특히 아황산수소염뿐만 아니라 활성성분으로서 아스코르브산유도체, 히드로퀴논유도체 및/또는 식물추출물 및/또는 태반추출물을 함유하는 피부를 창백하게 하는 화장품 조성물에 관한 것이다.

요약하면, 종래 기술에서는 멜라닌생성-억제 활성성분으로서가 아니라 단지 항-탈색제 또는 안정제로서 메타중아황산염 또는 아황산수소염이 사용되었다.

본 발명의 주 목적은 멜라닌생성-억제효과를 가지고 있는 화장품 조성물 또는 유리하게는 약학적 조성물 특히 피부과학적 조성물을 제공하는 것으로 구성된 과제를 해결하는 것이고 이것들은 착색 병변의 상황내에서 화장용 그리고 유리하게는 독립적으로 약제용 및/또는 피부과학용으로 탈색활성을 얻게 할 수 있다.

본 발명의 추가 목적은, 특히 화장품 분야에 근무하는 본 분야에 숙련된 사람에게 있어서 바람직한 pH 범위, 즉 약 5 내지 약 8의 pH에서 특히 안정해야만 하는, 멜라닌생성에서의 기본 효소인 티로시나아제의 억제효과를 가지고 있는 화장품 조성물 및 유리하게는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물로 구성된 신규한 기술적 과제를 해결하는 것이다.

본 발명의 추가 목적은, 냄새가 나지 않고 매우 높은 안정성을 갖는 화장품 조성물과 유리하게는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물을 얻을 수 있게 하는 용액의 도움으로 상기 언급한 신규한 기술적 과제를 해결하는 것이다.

본 발명의 추가 목적은, 소수의 멜라닌생성-억제 활성성분을 제한된 양으로 필요로하며, 특히 실행이 쉽고 공업적 규모와 화장품 또는 유리하게는 약학적, 특히 피부과학적 규모로 제조될 수 있는 특히 간단한 용액에 따라 상기 언급한 수많은 기술적 과제를 해결하는 것이다.

이 기술적 과제 모두는 본 발명에 의해 처음으로 동시에 해결되었다.

그래서, 본 발명의 상황내에서 메타중아황산염을 포함한 아황산염이, 그것들을 함유하는 조제에, 주로 화장용뿐만 아니라 유리하게는 피부 병변을 치료하는 상황에서의 약제적사용 특히 피부과학적사용을 가능하게 하기 위하여 특히 흥미가 있는 탈색활성을 조달해주는데 있어서, 멜라닌생성의 기본 효소인 티로시나아제의 억제활성을 지닌다는것이 매우 예상외로 발견되었다.

본 발명의 상황내에서 메타중아황산염을 포함하여 아황산염이 티로시나아제의 활성을 감소시키는데 개입함으로써 과도의 착색을 막을 수 있게 한다는 것을 입증하는 것이 예상외로 가능했다.

그래서, 첫번째 측면에 따라, 본 발명은 멜라닌생성의 기본 효소인 티로시나아제의 억제활성을 갖거나, 또는 탈색활성을 갖는 화장품으로서의 메타중아황산염을 포함한 아황산염의 사용에 관한 것이다.

두번째 측면에 따라, 본 발명은 또한 멜라닌생성-억제활성 또는 탈색활성을 갖는 약학적 조성물과 특히 피부과학적 조성물을 제조하기 위한 메타중아황산염을 포함한 아황산염의 사용을 다룬다.

세번째 측면에 따라, 본 발명은 또한 멜라닌생성-억제활성제 또는 탈색활성제로서 메타중아황산염을 포함하여 적어도 한 가지의 아황산염을 이 목적에 효과적인 양으로 이루어진 화장품 조성물 또는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물을 다룬다.

네번째 측면에 따라, 본 발명은 또한 동물, 유리하게는 인간과 연관된 부위에, 멜라닌생성-억제 또는 탈색 활성성분으로서 메타중아황산염을 포함하여 적어도 한가지의 아황산염을 이 목적에 효과적인 양을 함유하는 조성물의 국소도포로 이루어지는, 멜라닌생성-억제 또는 탈색 화장품 처치방법을 다룬다.

본 발명은 다섯번째 측면에 따라 또한 피부와 연관된 부위상에 멜라닌생성-억제 또는 탈색 활성성분으로서 메타중아황산염을 포함하여 적어도 한 가지의 아황산염을 이 목적에 효과적인 양의 도포로 이루어지는, 동물, 유리하게는 인간의 치료학적 처치, 특히 피부과학적 처치법을 다룬다.

본 발명의 명세서 또는 청구항의 상황내에서, 용어 "아황산염"은 모든 아황산염 또는 아황산염유도체, 특히 알칼리금속 또는 알칼리토금속, 바람직하게는 나트륨 또는 칼륨 같은 알칼리금속과의 아황산염을 포함한다. 나트륨이 현재 바람직한 이점이 있다.

한편, 그 용어는 또한, 특히 알칼리금속 또는 알칼리토금속, 바람직하게는 알칼리금속, 특히 나트륨 또는 칼륨, 바람직하게는 나트륨과의 메타중아황산염 또는 아황산수소염과 같은 아황산의 부분염을 포함한다.

본 발명의 측면들중 어떤 하나의 상황내에, 아황산염의 혼입비율은 0.001중량% 내지 20중량%, 바람직하게는 0.01중량% 내지 10중량%이다.

게다가, 본 발명의 특히 유리한 구체예에 따라, 본 발명의 메타중아황산염을 포함하여 아황산염을 적어도 한가지의 식물추출물과 조합하여 사용한다.

본 발명의 상황내에서, 어떤 식물추출물이든 사용될 수 있다.

그러나, 오디추출물, 레몬추출물, 바위취추출물, 그레이프프루트추출물, 포도추출물 및 황금(黃芩)추출물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것이 바람직하다.

그런 추출물의 혼합 비율은 넓은 범위에 이른다. 추출물의 총 비율은 조성물의 주요부를 구성할 수 있다.

일반적으로, 추출물비율은 조성물의 총 중량의 0.01% 내지 90%, 더 좋게는 약 5% 내지 70%이다. 추출물의 조합물을 사용하는 것이 바람직하다. 각 추출물에 의해 얻어진 이점을 최상으로 사용하기 위하여 각 추출물은 적어도 약 5%이고 많아야 약 30%의 비율로 존재하고 이 이점들은 본 분야에 숙련된 사람에게는 매우 명백하다.

매우 예상외로 식물 추출물의 존재가 메타중아황산염을 포함하여 아황산염의 효과적인 안정화를 초래한다는 것을 증명하는 것이 가능했다.

화장품 용액에서 그대로 사용된 메타중아황산염을 포함하여 아황산염은, 화장품의 견지로부터 받아들일 수 없는 냄새를 발생시키는 것이 실제로 관찰되며 이 냄새는 5 내지 7의 pH 또는 훨씬 더 산성인 pH에 특히 민감하다.

이제, 이 아황산염이 식물 추출물과 조합되었을 때 이 식물추출물은, 냄새가 화장품 조성물 또는 약학적 조성물, 특히 여부과학적 조성물의 종래의 pH에 놓일때를 포함하여 아황산염에 의해 나는 냄새를 차단한다.

게다가, 이렇게 제조된 활성성분이 화장품조성물, 훨씬더 유리하게는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물내에서 완전하게 잘 허용되며 극단적으로 낮은 세포독성, 즉 통상 사용되고 상기 종래기술에 의해 예시된 것 같은 탈색 활성성분 특히 히드로퀴논 또는 코지산 같은 화장품에서 사용되는 탈색 활성성분의 세포독성보다 200배나 낮은 세포독성을 갖는 것을 관찰하는 것이 가능했다.

종래 기술의 분자는 멜라닌의 유기구조를 분해하는 것을 기초로 피부를 매우 빠르게 창백하게하는 결과에 의존하는 그것들의 활성을 갖는다는 것이 주목된다.

이들 생성물 대부분은, 부식성, 세포독성, 심지어는 민감성이 나타나고 이것은 현재 화장품에서의 그것들의 사용을 매우 제한한다.

게다가, 만약 코지산, 아스코르브산 및 그것들의 유도체가 티로신의 활성의선택적 방해에 극단적으로 효과적이라면, 이 분자들은 화장품 제제물인 복합 매질에서 매우 불안정하고 화장품 제제물에 대하여 보통 필요로 하고 있는 감각수용성과 거의 상용성이 아닌 착색된 분해 생성물로 빠르게 산화한다.

게다가, 히드로퀴논과 리놀레산에 대하여 관찰되는 방법과 어떠한 공통적 방법도 없다할지라도, 일정한 독성이 코지산 또는 아스코르브산 형태의 생성물로 얻어진다.

본 발명자에 의해 메타중아황산염을 포함하여 아황산염이 티로시나아제를 억제하여 멜라닌생성을 억제하는 데 매우 효과적이어서 매우 상당한 탈색 활성을 가질뿐만 아니라 결정적인 기술적 이점을 구성하는 세포독성의 부재를 나타낸다는 것이 매우 예상외로 발견되었다.

한편, 메타중아황산염을 포함하여 아황산염은 pH 및 온도의 함수로서 우수한 안정성을 갖고 적어도 한 가지의 식물 추출물과 조합되었을때 주로 화장품에서 유리하게는 약학에서 특히 피부과학에서 보통 필요로 하고 있는 감각수용성 기준을 만족시킬 수 있게 한다.

자연적으로, 본 발명은 사용자에게 어떠한 위험도 없는 피부를 밝게할 수 있는 크림이나 로션 제제물을 얻기 위하여 멜라닌생성-억제 활성을 가지고 있거나 가지고 있지 않은 여러가지 다른 활성성분 뿐만 아니라 여러가지 화장품용으로 또는 약학적으로, 특히 피부과학적으로 허용가능한 담체와 조합할 수 있다.

그래서, 화장품 조성물 또는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물은 약 5 내지 약 8의 pH를 갖도록 제조될 수 있다.

상기한 바와 같이, 그런 조성물은 완전히 안정하고 몇달 동안의 저장후에도 냄새가 나지 않는다.

본 발명의 다른 목적, 특성 및 이점을, 효과 및/또는 제제시험의 여러가지 예를 참조로한 설명의 도움으로 분명히 나타내었고 따라서 이것은 단지 설명으로서 주어진 것이고 본 발명의 범위를 제한하는 것이 결코 아니다.

실시예는 본 발명의 일체적인 부분을 형성하며, 실시예를 포함하여 전체로서 취해진 명세서로부터 모든 종래기술과 비교하여 신규한 것으로 나타나는 모든 특징은 작용과 개요에 있어서 발명의 일체적인 부분을 형성한다.

그래서, 실시예 모두는 일반적인 범위의 것이다.

한편 실시예에서, 모든 퍼센트는 달리 지시하지 않았다면 중량으로 주어지고 주위 온도는 달리 지시하지 않았다면 ℃로 표시하며 압력은 달리 지시하지 않았다면 대기압이다.

[실시예]

실시 예 1. 아황산나트륨에 의해 단리된 티로시나아제의 억제의 생체외시험

티로시나아제는 L-Dopa 로부터 L-Dopaquinone의 형성 및 그다음 도파크롬의 형성을 촉매 작용할 수 있다는 것이 공지되어 있다. 현재, 도파크롬은 475nm에서 UV 가시분광광도계에 의해 출현이 따를수 있는 착색된 화합물이다. 효소적 활성을 변경시킬 수 있는 활성성분의 사용은 이 착색된 분자의 출현 비율의 변화에 의해 나타난다.

도파크롬의 형성속도의 비율은 시험된 다른 분자들로 얻어진 활성화 또는 억제를 정밀하게 측정할 수 있게 한다.

본 발명의 생체외 시험의 상황내에서, 아황산나트륨을 0.01%, 0.1%, 1% 및 10% 각각의 농도로 이 시험에서 사용하여 티로시나아제의 억제에서 얻어진 결과를 이하 표 1에 나타냈다.

[표 1]

감각수용성 시험을 5% 아황산나트륨 용액상에서 또는 10% 오디추출물과 함께 또는 20% 레몬추출물과 함께 행했다. 이 시험을 4주에 걸쳐 45℃, pH 5.5 및 6.5에서 행했다. 결과를 이하 표 2에 나타냈다.

[표 2]

아황산나트륨이 거의 모든 티로시나아제를 심지어는 0.01%와 같이 약한 비율로도 억제하는 것이 표 1로부터 분명하게 보여졌고 반면에 표 2에서 식물추출물, 예를들면 오디추출물 또는 레몬추출물을 첨가함으로써 냄새를 막는 것이 분명하게 보여졌고 이 활성 각각은 본 분야에 숙련된 사람에게 있어서 매우 예상외의 성질이다.

실시예 2. 메타중아황산나트륨에 의한 단리된 티로시나아제의 억제 시험이 시험에서, 메타중아황산나트륨을 0.01%, 0.1%, 1% 및 10% 농도에서 사용하여 티로시나아제상의 얻어진 결과를 이하 표 3에 나타냈다.

[표 3]

메타중아황산나트륨은 심지어 0.01%와 같이 낮은 농도에서 티로신 억제의 거의 모든 효과를 갖는 것이 또한 주목된다.

또한, 그런다음 감각수용성 시험을 5% 메타중아황산나트륨용액을 20% 바위취 추출물과 10% 그레이프프루트추출물중 한가지와 함께 또는 없이 행했다. 이 시험을 45℃, pH 5.5 및 6.5에서 4주에 걸쳐 행했다. 결과를 이하 표 4에 나타냈다.

[표 4]

실시예 1에서와 같이, 식물 추출물의 존재, 여기서는 바위취 추출물 또는 그레이프프루트 추출물의 존재가 4주에 걸쳐 45℃, pH 5.5 또는 6.5에서 장기 보존동안 냄새가 나는 것을 막게 할 수 있는 것이 주목된다.

실시예 3. 아황산칼륨에 의한 티로시나아제의 억제

이 시험에서, 아황산칼륨을 0.01%, 0.1%, 1%및 10% 농도에서 사용하여 티로시나아제 억제상에서 얻어진 결과를 이하 표 5에 나타냈다.

[표 5]

아황산칼륨이 심지어 0.01%와 같은 비율에서 80% 이상의 억제, 즉 주목할 만한 0.01%의 비율로부터의 거의 완전한 억제를 얻을 수 있게 한다는 것이 상기 표 5로 부터 주목된다.

감각수용성 시험을 또한 5% 아황산칼륨용액 상에서 20% 포도추출물과 10% 황금추출물중 한가지와 함께 또는 없이 행했다. 황금은 또한 Scutellaria로도 불려지는 것이 주목된다. 이 시험을 4주에 걸쳐 45℃, pH 5.5 및 6.5에서 행했다. 결과를 이하 표 6에 나타내었다.

[표 6]

여기서 다시, 식물추출물의 존재, 여기서는 포도추출물 또는 황금 추출물의 존재가 pH 5.5 또는 6.5에서의 연장된 보존동안 냄새가 나는 것을 제거할 수 있게하는 것이 주목된다.

실시예 4. 메타중아황산염에 의한 티로시나아제의 억제시험

이 시험에서, 메타중아황산칼륨을 0.01%, 0.1%, 1% 및 10% 농도에서 사용하여 티로시나아제 억제상에서 얻어진 결과를 이하 표 7에 나타냈다.

[표 7]

메타중아황산칼륨이 매우 주목할만한 0.01중량%와 같이 낮은 농도에서 90% 이상, 즉 거의 모든 티로시나아제를 억제하는 것이 표 7로부터 주목된다.

그런다음 감각수용성 시험을 5% 메타중아황산칼륨용액상에서 10% 바위취추출물이나 아니면 5% 황금추출물+ 10% 그레이프프루트추출물과 함께 또는 없이 행했다. 이 시험을 또한 4주에 걸쳐 45℃, pH 5.5 및 6.5에서 행했다. 결과를 이하 표 8에 나타냈다.

[표 8]

그레이프프루트추출물과 조합된 식물추출물, 예를들면, 바위취추출물 또는황금추출물의 존재가 45℃의 온도에서 pH 5.5 및 6.5에서 긴 기간 보존동안 냄새가 나는 것을 막을 수 있게 하는 것이 표 8로부터 분명히 나타났다.

실시예 5. 화장품 조성물로서 주로 유용할 뿐만아니라 약학적 또는 피부과학적 조성물로서 사용되게 할 수 있는 조성물의 제제예

다음 조성물을 다음 활성 성분으로부터 종래의 방법으로 조제하였다:

- 아황산나트륨 5%

- 메타중아황산나트륨 5%

- 바위취추출물 25%

- 포도추출물 30%

- 오디추출물 5%

- 황금추출물 5%

- EDTA 0.5%

- 탈이온수 총 양이 100%가 되도록 하는 양

항-티로시나아제의 활성을 탈이온수로 간단히 희석시킴으로써 이 조성물의 여러가지 농도에 대하여 측정하였다.

a) 0.015% 농도에서, 조성물은 티로시나아제 활성의 21.6%를 이미 억제하고;

b) 0.02% 농도에서, 조성물은 티로시나아제 활성의 46%를 억제하고;

c) 0.5%에서, 조성물은 티로시나아제 활성의 93%를 억제하고;

d) 1% 에서, 조성물은 티로시나아제 활성의 97%를 억제하고;

e) 5% 이상의 농도에서, 조성물은 완전히 티로시나아제 활성을 억제한다.

순수하게 사용된 이 조성물은 주위온도 및 45℃에서 우수한 안정성을 갖는다. 45℃에서 안정화시킨 4주후, 조성물은 고려된 2개의 pH, 즉 pH 5.5 및 pH 6.5에서 아무런 냄새도 가지지 않았다.

따라서 이 조성물은 항-티로시나아제 활성 또는 멜라닌생성-억제 활성 또는 달리 탈색 활성을 갖는 기재 또는 최종 화장품 조성물, 또는 유리하게는 약학적 특히 피부과학적 조성물을 구성할 수 있다.

실시예 6. 실시예5의 본 발명의 조성물의 항-티로시나아제 활성의 생체내시험

실시예 5에 기술된 조성물의 항-티로시나아제 활성의 평가를 인간 피부의 외식편상의 생체조직모델의 도움으로 수행하였다. 이 모델에서, 티로시나아제 활성의 평가는 티로시나아제의 기질인 L-Dopa의 용액에 의한 외식편의 처리를 기초로한 조직화학연구에 의해 증명된다. 티로시나아제에 의한 L-Dopa의 산화는 멜라닌세포내에서 백색광을 갖는 광학현미경검사로 쉽게 발견되는 멜라닌의 흑색소를 만들었다. 티로시나아제 활성을 얻어진 색차계 반응의 세기에 의해 측정하였다.

연구의 원리

인간 피부의 외식편을 27세 여자에게 실행한 복부의 성형수술로 부터 만들었다.

실시예 5의 조성물을 아주 순수한 물내에서 0.1%, 1% 및 10%(v/v)에서 시험하였다. 또한 양성 대조표준과 음성 대조표준을 병렬로 행하여 수행하였다. 이 연구를 위하여 선택된 양성 대조표준은 매우 높은 탈색 활성을 갖는 것으로 인정되고활성 OTC들에 속한 0.55%(w/v)의 히드로퀴논이다. 어떠한 항-티로시나아제 활성도 갖지 않음에도 불구하고, 이 분자는 멜라닌세포에서 멜라닌 색소의 형성을 억제하고, 이것은 이 연구내에서 그것의 사용을 할 수 있게 한다.

이 연구내에서의 여러가지 생성물을 L-DOPA(0.05M)의 존재하에 15시간동안 37℃에서 인큐베이션시켰다.

파라핀내에 고정 및 포함시킨후, 절편을 헤말룬/에오신/사프란으로 그리고 크레실 바이올렛으로 염색한 다음 광학현미경 검사로 백색광에서 관찰하였다.

내생의 티로시나아제에 의한 외생의 L-DOPA의 산화를 통하여 형성된 멜라닌 색소를 관찰하였다. 티로시나아제 활성을 얻어진 색차계 반응의 강도에 의해 측정하였다.

관찰된 효과를 표시하는 사진상의 음화가 만들어졌다.

L-DOPA로 처리된 대조표준 외식편의 관찰로 활성 멜라닌세포, 활성 멜라닌세포의 존재 즉 공여자의 외피의 기저층에서 티로시나아제 활성을 가짐을 증명할 수 있었다.

대조 생성물로서 사용된 0.55%(w/v)히드로퀴논은 멜라닌 색소의 형성을 완전히 억제했다. 이 예상된 결과는 수행된 연구를 유효하게 했다.

또한 0.1%, 1% 및 10%(v/v)에서 시험된 실시예 5의 조성물 자체는 조직화학 반응을 완전히 억제했다.

결론으로, 유지된 실험 조건하 시험된 3가지 농도에서 실시예 5의 조성물은 티로시나아제의 효소적 활성을 완전히 억제했다. 이 억제는, 실시예 5의 조성물의0.1%의 사용이 극단적 세포독성 탈색 활성 화합물을 제외하고 인지된 0.55% 히드로퀴논으로 얻어진 것에 필적하는 수준의 억제를 허용하기 때문에 예외적으로 강하다.

본 발명의 이 결과는 매우 놀라운 일이었다.

본 발명 조성물의 세포독성을 이하 실시예 7에서 시험하였다.

실시예 7. 멜라닌세포에 대한 실시예 5 조성물의 세포독성 시험

실시예 5에서 제조한 제조물을 멜라닌세포에 대한 그것의 독성에 대하여 시험하였다.

G 361 라인의 멜라닌세포(인간의 흑색종)을 GIBCO^R로부터의 MacCOY 배지에서 배양하고 우태아혈청, 50 IU/ml 페니실린, 50 ㎍/ml 스트렙토마이신 및 2 mM 글루타민으로 완료하였다.

세포를 24-웰 배양 플레이트에 웰당 3×10⁵세포의 비율로 파종하였다. 여러가지 농도로 실시예 5의 생성물을 배양 배지에 직접 첨가하였다. 실시예 5의 생성물의 존재하에 72시간 인큐베이션시킨 후, 세포독성을 총 세포내 단백질의 측정에 의해 평가하였다.

모든 경우에 있어서, 결과는 이 시험동안 사용된 농도와 세포독성 사이의 관계를 보여주었다. 또한 이것들은 멜라닌세포에 관한 실시예 5의 생성물의 세포독성이 1 내지 10mg/ml 인 것을 보여주었다.

이들 값을 J. Soc. Cosmeti. Chem. 42, 페이지 361-368(1991)에 공개된 "Invitro effectiveness of several whitening cosmetic components in human melanocytes"에서 MAEDA & FUKUDA에 의한 문헌에 기술된 것과 비교되고 여기서 배양기에 위치한 세포의 반이 더이상 살아있지 않은 억제 농도(IC₅₀)의 계산에서 인간의 멜라닌세포에 대한 매우 높은 세포독성을 보여주었다.

- 5.5×10^-3mg/ml의 IC₅₀을 갖는 히드로퀴논;

- 2.8×10^-3mg/ml의 IC₅₀을 갖는 리놀레산;

- 0.88 mg/ml의 IC₅₀을 갖는 아스코르브산.

이것으로부터, 본 발명은 히드로퀴논 또는 리놀레산의 세포독성보다 약 1000배 낮은 세포독성을 얻을 수 있게 했다.

이 세포독성은 아스코르브산의 그것보다 낮다.

실시예 8. 독물 연구

경구독성시험, 눈의 자극시험 및 피부 자극시험을 자세한 하기에 따라 순행하였다.

A. 구강 독성

급성 경구 독성연구에 관한, 1987년 2월 24일의 공보 제 401호에 공개된 OECD의 지시에 의해 확립된 프로토콜에 따라 수행하였다.

시험을 실시예 5의 조성물상에서 킬로그램 체중당 5g의 최대 투여량에서 수행한 결과 치명적이지 않았다.

순수하게 그리고 경구로 5g/kg 미만의 투여량으로 사용한 실시예 5에 기술된 것 같은 본 발명의 생성물은 어떠한 비 정상적인 세포독성도 가지지 않았다.

B. 눈의 자극

눈의 자극 시험을 1987년 2월 24일의 공보 제 405 같은 눈상에 심한 자극적/부식적 효과의 연구에 관한 OECD의 지시에 따라 확립된 프로토콜에 따라 수행하였다.

순수하게 적하한 실시예 5에 기술된 바와같은 본 발명의 생성물은 Directive 91/326 EEC의 점에서 눈에 비자극성인 것을 나타냈다.

C. 피부 자극

피부 자극의 이 시험을 1992년 7월 17일의 공보 제 404호의 피부상의 심한 자극적/부식적 효과의 연구에 관한 OECD의 지시에 따른 프로토콜에 따라 수행하였다.

순수하게 사용된 실시예 5에 기술된 것같은 본 발명의 생성물은 Directive 91/326 EEC의 점에서 피부에 비자극성인 것을 나타냈다.

D. 저자극 시험

극대화 시험을 Magnusson & Kligman(J. Invest. Derm. 52, 268-276. 1969)에 의해 기술된 방법으로부터 적합시킨 프로토콜에 따라 수행하였다.

순수하게 사용된 실시예 5의 조성물은 중요한 어떠한 민감화 반응도 야기하지 않았다. 그래서, 이 조성물은 저자극성이라고 생각된다, Class I.

실시예 9. 화장품 또는 약학적 사용을 위한 유중수형 유탁액 화장품 제제물내에서의 본 발명의 생성물의 사용

유중수형 유탁액을 중량 퍼센트로 성분 A,B,C,D 의 다음 4개의 그룹으로부터 제조하였다:

그룹 A

부틸렌글리콜 2

글리신 3

소디움 디히드록시세틸포스페이트, 이소프로필디히드록시세틸에테르 2

물 총 양이 100이 되도록 하는 양

그룹 B

글리코스테아르산 세륨 14

트리이소노나노인 5

코코산옥틸 6

그룹 C

부틸렌 글리콜 2

메틸,에틸 및 프로필파라벤의 형태의 파라벤혼합물 2

희석된 강산 또는 약산으로 pH 5.5로 조절됨

그룹 D

실시예 5의 본 발명의 조성물 0.01-10%

그룹 A의 성분의 혼합을 약 75℃의 온도로 교반 가열함으로써 시작했다. 상 B의 성분을 또한 따로 혼합하고 약 75℃의 같은 온도에서 가열하였다. 상 B를 강한교반하에 상 A에 도입한 다음 약 30℃로 냉각한 후 그룹 C와 D의 성분들을 연속적으로 첨가하였다. 그룹 C에 대하여, pH를 시트르산 같은 수중 희석산을 가지고 5.5로 조절하였다.

이 조성물을 브러쉬나 도포주걱에 의해 피부의 자국에 직접적으로 도포하여 점차적으로 사라지게, 즉 약 2주후 일반적으로 관찰될 수 있는 사라짐 효과를 발휘할 수 있게 했다. 또한 멜라닌생성을 억제하거나 탈색을 희망하는 피부의 영역상에 좀 더 일반적으로 도포할 수도 있다.

실시예 10. 화장품 또는 약학적 사용을 위한 수중유형 유탁액의 형태로 화장품 제제내에의 본 발명의 생성물의 사용

이 실시예에 관해서는 수중유형의 유탁액을 성분 A,B,C,D 및 E의 5개의 다음 그룹으로부터 제조하였다:

그룹 A

그룹 B

그룹 C

그룹 A의 조성물을 약 75℃로 가열하면서 지시된 순서로 연속적으로 그것들을 첨가함으로써 함께 혼합하였다. 또한 그룹 B의 성분들에 대하여 약 75℃의 온도에서 그것들을 따로따로 가열하였다.

그후, 그룹 B를 강한 교반하에 그룹 A에 도입한 다음 주위 온도로 냉각시키고 마지막으로 그룹 C,D 및 E의 성분을 온도가 약 30℃일때 첨가하였다.

이 조성물을 브러쉬나 도포주걱에 의해 피부의 자국상에 직접적으로 도포하여 점차적으로 사라지게, 즉 약 2주후 일반적으로 관찰될 수 있는 사라짐 효과를 발휘할 수 있게 했다. 또한 멜라닌생성을 억제하거나 탈색을 희망하는 피부의 영역상에 좀 더 일반적으로 사용할 수도 있다.

실시예 11. 샴푸 또는 샤워 젤의 형태인 화장품 조성물 또는 약학적 조성물

중량 퍼센트로 다음 5개 성분 A,B,C,D 및 E의 그룹으로 이루어진 샴푸 또는 샤워 젤의 형태로 화장품 조성물을 제조하였다.

그룹 A

그룹 B

그룹 C

그룹 D

그룹 E

우선 크산탄검을 물에 주위 온도에서 용해시킨 다음 약 75℃ 온도에 도달할 때까지 점차적으로 가열하고 주위 온도로 냉각하였다.

그룹 B, 그런다음 그룹 C, 그런다음 그룹 D의 성분들을 미리 혼합하고 그런다음 그룹 E의 성분을 첨가하였다.

이 조성물은 멜라닌생성 억제 효과 또는 탈색효과를 위한 처리를 희망하는신체의 모든 부위상에 샴푸 또는 샤워 젤의 행태로 사용할 수 있다.

실시예 12. 눈의 외곽 형태의 수용성 젤, 즉 바디 젤의 형태인 본 발명에 따른 화장품 또는 약학적 조성물.

이 조성물을 중량 퍼센트로 다음 활성성분을 혼합함으로써 제조하였다.

이 조성물을 종래 방법으로 실시예 5의 조성물을 부틸렌글리콜, 파라벤과의 혼합물중의 페녹시에탄올 및 물을 혼합한 다음 마지막으로 카르보머를 첨가하여 제조하고 수성 젤을 얻었다. 이 젤은 눈의 외곽과 같은 티로시나아제를 억제하는 효과, 따라서 멜라닌생성을 억제하는 효과 또는 탈색효과를 필요로 하는 신체의 부위상에 도포할 수 있다.

이 조성물에서, 카르보머를 주위 온도에서 물에 분산시킨 다음 강한 교반하에 약 75℃까지 점차적으로 가열하고 이 온도를 젤이 형성될때까지 약 30분동안 교반하에 유지시켰다.

그런다음 약 30℃까지 냉각되게하고 그런다음 부틸렌 글리콜을 첨가한 다음파라벤중의 페녹시에탄올을 첨가하고 마지막으로 본 발명에 따른 조성물을 첨가하였다. 실시예 9 내지 12의 상기 조성물 각각에 대하여, 실시예 5의 조성물을 본 발명에 따른 모든 다른 생성물로 대치될 수 있는 것이 주목된다.

실시예 13. 화장품 또는 약학적 조성물에 포함된 본 발명의 생성물의 항-티로시나아제 활성의 증명시험

실시예 1의 표 2에서 지적된 바와 같이, 5% 농도의 아황산나트륨 단독 또는 10% 오디추출물과의 혼합물 또는 20% 레몬추출물과의 혼합물, 또는 심지어 탈이온수중의 5% 농도의 메타중아황산나트륨과의 혼합물을 따로따로 실시예 9의 유중수형 유탁액으로 약 30%로 혼입하여 이 제제에 1% 농도를 얻게 하였다.

주위 온도로 냉각한 후, 제제의 항-티로시나아제 활성을 평가하였다.

이를 얻기 위하여, 20% NaCl 수용액 100g을 화장품 또는 약학적 제제 각각의 100g에 첨가하고 이 제제를 본 발명의 생성물과 함께 얻었다. 얻어진 전체를 매우 강한 교반하에 10분동안 균일화시킨다음 6,000 rpm으로 60분동안 원심분리하였다.

수상을 회수하고 항-티로시나아제 활성을 실시예 1에 기술된 방법에 의해 찾아냈다.

화장품 또는 약학적 조성물에 혼입된 실시예 1의 본 발명의 생성물 상에서 평가된 바와같이 항-티로시나아제 활성은 그것들 각각에 대하여 95-100%인 것으로 검출되었다.

같은 항-티로시나아제 활성평가를 제조후 30일, 60일, 90일후에 수행하였다.

항-티로시나아제 활성의 어떠한 감소도 검출되지 않았고 이것은 티로시나아제의 매우 높은 안정성을 보여준다.

자연히, 본 발명은 모든 기술된 수단의 기술적으로 동등한 수단뿐만 아니라 여러가지 그것들의 조합물로 이루어진다.

본 발명의 메타중아황산염을 포함한 아황산염으로 이루어진 조성물은 멜라닌 생성 억제 또는 탈색을 유도한다. 이 조성물은 pH 5 내지 pH 8에서 안정하고 이 조성물에 식물추출물을 넣음으로써 냄새의 발생을 막을 수가 있다.

Claims (20)

1. 냄새의 발생을 감소시키거나 막기에 충분한 양의 적어도 한가지 식물추출물과 배합하여, 메타중아황산염을 포함하는 아황산염을 사용하는 것을 포함하는, 멜라닌생성-억제 활성 또는 탈색 활성을 갖는 화장품을 제조하는 방법.
2. 냄새의 발생을 감소시키거나 막기에 충분한 양의 적어도 한가지 식물추출물과 배합하여, 메타중아황산염을 포함하는 아황산염을 사용하는 것을 포함하는, 멜라닌생성-억제 활성 또는 탈색 활성을 갖는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물을 제조하는 방법.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 아황산염은 알칼리금속이나 알칼리토금속과의 아황산염 뿐 아니라, 알칼리금속이나 알칼리토금속과의, 메타중아황산염이나 아이티온산염 같은 부분 아황산염을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 아황산염이 0.001 중량% 내지 20 중량%의 비율로 혼합되는 것을 특징으로 하는 방법.
5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 아황산염이 0.001 중량% 내지 10 중량%의 비율로 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 냄새의 발생을 감소시키거나 막기 위한 목적으로, 상기 식물추출물이 오디추출물, 레몬추출물, 바위취추출물, 그레이프프루트추출물, 포도추출물, 황금추출물 또는 이러한 추출물들의 어떤 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
7. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 식물추출물의 비율이 조성물 전체 중량의 0.01% 내지 90%인 것을 특징으로 하는 방법.
8. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 식물추출물의 비율이 조성물 전체 중량의 5 중량% 내지 70 중량%인 것을 특징으로 하는 방법.
9. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 각 식물추출물은 조성물 전체 중량의 적어도 5 중량%이고 30 중량%를 넘지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
10. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 화장품 또는 약학적 조성물, 특히 피부과학적 조성물은 pH 5 내지 8로 제조되는 것을 특징으로 하는 방법.
11. 10 중량%의 오디추출물과 함께 5 중량%의 아황산나트륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5인 용액.
12. 20 중량%의 레몬추출물과 함께 5 중량%의 아황산나트륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5인 용액.
13. 20 중량%의 바위취추출물과 함께 5 중량%의 메티중아황산나트륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5인 용액.
14. 10 중량%의 그레이프프루트추출물과 함께 5 중량%의 메타중아황산나트륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5인 용액.
15. 20 중량%의 포도추출물과 함께 5 중량%의 아황산칼륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5인 용액.
16. 10 중량%의 황금추출물과 함께 5 중량%의 아황산칼륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5인 용액.
17. 10 중량%의 바위취추출물과 함께 5 중량%의 메타중아황산칼륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5인 용액.
18. 5 중량%의 황금추출물 및 10 중량%의 그레이프프루트추출물과 함께 5 중량%의 메타중아황산칼륨을 함유하는, pH는 5.5 또는 6.5를 나타내는 용액.
19. 5 중량%의 아황산나트륨, 5 중량%의 메타중아황산나트륨, 25 중량%의 바위취추출물, 30 중량%의 포도추출물, 5 중량%의 오디추출물, 5 중량%의 황금추출물, 0.5 중량%의 EDTA, 및 전체가 100 중량%가 되도록 탈염수로 구성되며, 조성물의 pH는 5.5 또는 6.5인 화장품 또는 약학적 조성물.
20. 5 중량%의 아황산나트륨, 5중량%의 메타중아황산나트륨, 25 중량%의 바위취추출물, 30 중량%의 포도추출물, 5 중량%의 오디추출물, 5 중량%의 황금추출물, 0.5 중량%의 EDTA, 및 전체가 100 중량%가 되도록 탈염수로 구성되며, 조성물의 pH는 5.5 또는- 6.5인, 화장품 또는 약학적 조성물의 제조에 유용한 기초 조성물.