HU225646B1 - Hvegf receptors as vascular endothelial cell growth factor antagonists - Google Patents
Hvegf receptors as vascular endothelial cell growth factor antagonists Download PDFInfo
- Publication number
- HU225646B1 HU225646B1 HU0102070A HU0102070A HU225646B1 HU 225646 B1 HU225646 B1 HU 225646B1 HU 0102070 A HU0102070 A HU 0102070A HU 0102070 A HU0102070 A HU 0102070A HU 225646 B1 HU225646 B1 HU 225646B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- hvegf
- antibody
- receptor
- cells
- antibodies
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
A leírás terjedelme 24 oldal (ezen belül 10 lap ábra)
HU 225 646 Β1
A jelen találmány tárgyköre a véredény belhártyasejt növekedési faktor (vascular endothelial cell growth factor; VEGF) antagonistákkal, az antagonistákat tartalmazó terápiás készítményekkel, valamint az antagonisták diagnosztikai és terápiás célokra történő felhasználásával összefüggő eljárásokkal kapcsolatos.
Az érrendszer két legfőbb sejtkomponense az endotél- (belhártyasejt) és a simaizomsejt. Az endotélsejtek alkotják valamennyi véredény belső felszínének a bevonatát, és nem trombogén érintkező felületet képeznek a vér és a szövet között. Mindezeken túl az endotélsejtek fontos komponensei az új kapillárisok és véredények kialakulásának. így endotélsejtek burjánzanak az érképződés (angiogenezis) vagy neovaszkularizáció során, amely a tumor növekedéséhez és a metasztázishoz, továbbá számos nem daganatos jellegű betegséghez vagy rendellenességhez társul.
Különféle, a természetben is előforduló polipeptidről leírták, hogy kiváltja az endotélsejtek burjánzását. Az ezen tulajdonsággal rendelkező polipeptidek közé tartoznak a bázikus és savas fibroblaszt növekedési faktorok (FGF; fibroblast growth factor) [Burgess and Maciag, Annual Rév. Biochem. 58:575 (1989)], trombocitákból származó érfal belhártyasejt növekedési faktor (PD-ECGF; platelet-derived endothelial growth factor) [Ishikawa, et al., Natúré 338:557 (1989)] és a vaszkuláris endotél növekedési faktor (VEGF) [Leung, ef al., Science 246:1306 (1989); Ferrara & Henzel, Biochem. Biophys. Rés. Commun. 161:851 (1989); Tisher, ef al., Biochem. Biophys. Rés. Commun. 165:1198 (1989); Ferrara, etal., PCT Pat. Pub. No. WO 90/13649 (a nyilvánosságra hozatal időpontja: 1990. november 15.)].
A VEGF-et először szarvasmarha agyalapi mirigy (hipofízis) follikuiáris vagy follikulosztelláris sejtekkel kondicionált tápközegekben azonosították. Biokémiai elemzések arra utalnak, hogy a szarvasmarha VEGF dimer fehérje, amelynek látszólagos molekulatömege megközelítőleg 45 000 dalton, és amely nyilvánvaló mitogén specifitással rendelkezik a vaszkuláris endotélsejtekre. Szarvasmarha VEGF-et kódoló DNS-t izoláltak ilyen sejtekből készített cDNS-könyvtár átvizsgálásával, olyan oligonukleotidokat alkalmazva hibridizálószondaként, amelyek a fehérje aminoterminális aminosavszekvenciáján alapulnak.
Humán VEGF-et először úgy nyertek, hogy humán sejtekből készített cDNS-könyvtárat vizsgáltak át szarvasmarha VEGF cDNS-t használva hibridizálószondaként. Az így azonosított egyik cDNS egy olyan 165 aminosavas fehérjét kódol, amely 95%-nál nagyobb homológiát mutat a szarvasmarha VEGF-fel, e fehérjét humán VGEF-nek (hVEGF) nevezik. A humán VEGF mitogén aktivitását úgy erősítették meg, hogy a humán VEGF cDNS-t emlős gazdasejtekben fejezték ki. A humán VEGF cDNS-sel transzfektált sejtek által kondicionált tápközegek kedveztek a kapilláris-endotélsejtek burjánzásának, ezzel szemben a kontrollsejtek nem kedveztek annak [Leung, etal., Science 246:1306 (1989)].
Számos további cDNS-t azonosítottak olyan humán cDNS-könyvtárakban, amelyek a hVEGF 121, 189 és 206 aminosavas izoformáit kódolják (ezeket együttesen szokás hVEGF-rokon fehérjéknek nevezni). A 121 aminosavas fehérje eltér a hVEGF-től, amennyiben törölve van a 116. és 159. gyökök közti 44 aminosav a hVEGF-ben. A 189 aminosavas fehérje eltér a hVEGF-től, amennyiben be van illesztve 24 aminosav a 116. gyöknél a hVEGF-be, és minden jel szerint megegyezik a humán vaszkuláris permeabilitási faktorral (hVPF). A 206 aminosavas fehérje eltér a hVEGF-től, amennyiben be van illesztve 41 aminosav a 116. gyöknél a hVEGF-be [Houck, ef al., Mól. Endocrin. 5:1806 (1991); Ferrara, ef al., Endocrine Reviews 13:18 (1992); Keck, ef al., Science 246:1309 (1989); Connolly, ef al., J. Bioi. Chem. 264:20 017 (1989); Keck, ef al., EPO Pat. Pub. No. 0 370 989 (a nyilvánosságra hozatal időpontja: 1990. május 30.)].
A VEGF nemcsak a vaszkuláris endotélsejt burjánzását segíti elő, hanem fokozza a vaszkuláris permeabilitást és az angiogenezist is. Az angiogenezis, amely új véredények kialakulását jelenti a már korábban is létező endotéliumból, fontos komponense betegségek és rendellenességek széles skálájának, ideértve a daganatnövekedést és a daganatos áttételek kialakulását, a reumatoid arthritist, pikkelysömört, ateroszklerózist, a diabéteszes retinopátiát, retrolentális fibropláziát, a neovaszkuláris glaukómát, a hemangiomákat, a transzplantált szaruhártyaszövet és más szövetek immunológiai összeférhetetlenségen alapuló kilökődését, valamint a krónikus gyulladásokat.
A daganatok növekedése esetében az angiogenezis döntő fontosságúnak látszik a hiperpláziából a neopláziába való átmenet szempontjából, valamint a növekvő tömör daganat részére táplálék biztosítása szempontjából [Folkman, etal., Natúré 339:58 (1989)]. Az angiogenezis azt is lehetővé teszi a daganatoknak, hogy kontaktusban legyenek a gazdaszervezet érrendszerével, ami a tumorsejtek metasztázisához nyithat utat. Az angiogenezisnek a tumormetasztázisban betöltött szerepére bizonyítékként szolgálnak például olyan tanulmányok, amelyek korrelációt mutatnak ki az invazív humán emlőrák kórszövettani metszeteiben levő mikroerek száma és sűrűsége és távoli metasztázisok tényleges jelenléte között [Weidner; ef al., New Engl. J. Med. 324:1 (1991)].
A vaszkuláris endotélsejt növekedés és az angiogenezis szerepére, továbbá e folyamatoknak számos betegségben és rendellenességben betöltött szerepére való tekintettel kívánatos egy olyan módszerrel rendelkezni, amelynek segítségével csökkenteni vagy meggátolni lehet a VEGF egy vagy több biológiai hatását. Kívánatos továbbá olyan módszerrel rendelkezni, amelynek segítségével ki lehet mutatni VEGF jelenlétét normális és kóros állapotokban, különösen rákban.
Az alábbiakban röviden összefoglaljuk a találmányt.
Első szempontja szerint a találmány egy hVEGFantagonista, amely egy anti-VEGF antitest, alkalmazását nyújtja gyógyszerek készítéséhez rák kezelésére. Az antagonisták gátolják a hVEGF mitogén, angiogén és más biológiai aktivitásait, és így hasznosak olyan betegségek és rendellenességek kezelésére, amelyeket nemkívánatos, fölösleges neovaszkularizáció jelle2
HU 225 646 Β1 mez; ilyenek például a daganatok, különösen a tömör, rosszindulatú daganatok.
Egy további szempontja szerint a VEGF-antagonisták konjugálva vannak valamely citotoxikus résszel.
Az alábbiakban röviden ismertetjük az ábrákat.
Az 1. ábra bemutatja hVEGF-ellenes monoklonális antitestek (A4. 6.1 vagy B2. 6.2), illetve egy irreleváns májsejt inhibitor növekedési faktor ellen képződött (anti-HGF=anti-hepatocyte growth factor antibody) antitest hatását az anti-hVEGF monoklonális antitestek kötődésére a hVEGF-hez.
A 2. ábra azokat a hatásokat szemlélteti, amelyeket az anti-hVEGF monoklonális antitestek (A4. 6.1 vagy B2. 6.2) vagy egy irreleváns anti-HGF antitest fejt ki a hVEGF biológiai aktivitására szarvasmarha mellékvesekéreg kapilláris endotél- (ACE=adrenal cortex capillary endothel) sejtek tenyészetében.
A 3. ábra azt mutatja be, hogy miképpen hatnak az anti-hVEGF monoklonális antitestek (A4. 6.1, B2. 6.2 vagy A2. 6.1) a hVEGF kötődésére szarvasmarha ACE sejtekhez.
A 4. ábra bemutatja az anti-hVEGF monoklonális antitestek (A4. 6.1, B2. 6.2 vagy A2. 6.1) hatását az NEG55 daganatok növekedési sebességére egerekben.
Az 5. ábra bemutatja az A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest kezelés hatását az NEG55 daganatok méretére egerekben 5 hetes kezelés után.
A 6. ábra bemutatja az A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest (VEGF Ab) kezelés hatását SK-LMS-1 daganatok növekedésére egerekben.
A 7. ábra bemutatja A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest (VEGF Ab) kezelés különböző dózisainak hatását A673 daganatok növekedésére egerekben.
A 8. ábra bemutatja az A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest hatását az NEG55 (G55) glioblasztómasejtek növekedésére és túlélésére egerekben.
A 9. ábra bemutatja az A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest hatását az A673 rabdomioszarkómasejtek növekedésére és túlélésére tenyészetben.
A 10. ábra bemutatja az A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest hatását humán endotélsejtek szinoviális folyadékkal indukált kemotaxisára.
Az alábbiakban részletesen leírjuk a találmányt.
A „hVEGF” elnevezés alkalmazása a jelen leírásban a 165 aminosavból álló emberi véredény belhártyasejt növekedési faktorra, illetve az ezzel rokon 121, 189, valamint 206 aminosavas véredény belhártyasejt növekedési faktorokra utal, ahogyan azt Leung, et al., Mól. Endocrin. 5.Ί806 (1991), leírták, továbbá a szóban forgó növekedési faktorok természetben is előforduló alléi-, illetve feldolgozott formáira.
A jelen találmány olyan, hVEGF-ellenes antagonistákat bocsát rendelkezésre, amelyek képesek gátolni a hVEGF egy vagy több biológiai hatását, például mitogén vagy angiogén jellegű tevékenységét. A hVEGFantagonisták úgy működnek, hogy megzavarják a hVEGF kötődését egy sejtfelszíni receptorhoz, így működésképtelenné teszik, vagy akár el is pusztítják azokat a sejteket, amelyek hVEGF-fel voltak aktiválva, vagy pedig miután a hVEGF kötődött a sejtfelszíni receptorhoz, ellene hatnak a vaszkuláris endotélsejtek aktiválódásának. A találmány céljait tekintve a hVEGF-antagonisták minden ilyesfajta, az előzőekben említett támadáspontját egyenértékűnek lehet minősíteni. Ennek értelmében a találmány oltalmi köre magában foglalja az olyan antitesteket, előnyösen monoklonális antitesteket, illetve azokból származó töredékrészeket, amelyek kötődnek a hVEGF-hez, a hVEGF receptorához vagy egy, a hVEGF receptorával összekapcsolódott hVEGF-ből álló komplexumhoz.
A „hVEGF-receptor”, illetve a „hVEGF elnevezés a jelen leírásban a hVEGF celluláris receptorára, rendszerint az erek belhártyáját alkotó sejteken elhelyezkedő sejtfelületi receptorra vonatkozik, továbbá ezek olyan változataira, amelyek továbbra is rendelkeznek a hVEGF megkötésének képességével. Típusosnak mondható esetben a hVEGF-receptorok és ezeknek olyan változatai, amelyek hVEGF-antagonista tulajdonsággal rendelkeznek, elsősorban inkább izolált formában fordulnak elő, semmint beépülve a sejtmembránba, vagy egy adott sejt felszínéhez rögzülve, amint ez a természetes körülmények között a helyzet szokott lenni. A hVEGF-receptorra egyik példa az fms-szerű tirozinkináz (fit), amely a tirozinkinázok családjába tartozó transzmembránreceptor [DeVries, ef al., Science 255:989 (1992); Shibuya, ef al., Oncogene 5:519 (1990)]. Az fit receptor egy extracelluláris tartományból, egy transzmembrántartományból, valamint egy tirozinkináz-aktivitással rendelkező intracelluláris tartományból áll. A sejtmembrán külső oldalán elhelyezkedő tartomány a hVEGF megkötése terén játszik szerepet, míg a sejthártya belső felületén elhelyezkedő tartomány a jeltovábbítás folyamatában vesz részt.
Egy másik példa a hVEGF-receptorra az flk-1 receptor (ugyancsak ismeretes KDR elnevezéssel is) [Matthews, ef al., Proc. Nat. Acad. Sci. 88:9026 (1991); Termán, etal., Oncogene 6:1677 (1991); Termán, etal., Biochem. Biophys. Rés. Commun. 187:1579 (1992)].
A hVEGF kötődése az fit receptorhoz legalább két nagy molekulatömegű komplexum képződését eredményezi, melyek látszólagos molekulatömege egyrészt 205 000, másrészt 300 000 dalton. A 300 000 dalton molekulatömegű komplexumról feltételezik, hogy ez tulajdonképpen egy két receptormolekulából álló dimer, melyhez egyetlen hVEGF-molekula van hozzákötve.
A hVEGF-receptor extracellulárisan elhelyezkedő tartománya akár önmagában véve, akár egy immunglobulin-polipeptid vagy egyéb hordozó (carrier) immoglobulin-polipeptiddel fuzionálva különlegesen alkalmas arra, hogy hVEGF-ellenes antagonista szerepet töltsön be, köszönhetően ezt annak a képességének,
HU 225 646 Β1 hogy képes a gazdaszervezetben lévő hVEGF eltávolítására, ugyanakkor viszont nem kötődik a sejtek felszínén elhelyezkedő hVEGFr-ekhez.
A hVEGFr és változatai ugyancsak használhatók olyan szűrővizsgálatok céljaira, melyeknek célja a hVEGF agonistáinak és antagonistáinak azonosítása. Például a hVEGFr-t kódoló DNS-sel (például fit vagy flk-1) transzferált gazdasejtek túlexpresszálják a receptorpolipeptidet a sejt felszínén, ideálissá téve az ilyen rekombináns gazdasejteket egy tesztvegyület (példaképpen lehetne említeni egy kisméretű molekulát, egy lineáris vagy ciklikus peptidet, vagy egy polipeptidet) azon képességének elemzésére, hogy milyen mértékben képes kötődni a hVEGFr-hez. A hVEGFr és hVEGFr fúziós fehérjék, mint amilyen példának okáért egy hVEGFr-IgG fúziós fehérje, ehhez hasonló módon ugyancsak felhasználhatók. Például a fúziós fehérje kötve van egy immobilizált hordozóhoz, és meg lehet határozni azt, hogy a vizsgálati anyag milyen mértékben képes leszorítani a radioaktív úton jelzett hVEGF-molekulát a fúziós fehérje hVEGFr-tartományáról.
A hVEGF, hVEGF-receptor, monoklonális antitestek, illetve egyéb fehérjék fogalmával kapcsolatosan használt „rekombináns szakkifejezés olyan fehérjékre utal, amelyek rekombináns DNS segítségével képződnek valamely gazdasejtben. A gazdasejt lehet akár prokarióta (például egy olyan baktériumsejt, mint az E. coli), akár eukarióta (például egy élesztősejt vagy egy emlősből származó sejt).
Antagonista monoklonális antitestek
A „monoklonális antitest szakkifejezés olyan antitestet jelöl, amelyet lényegében homogén antitestek egy adott populációjából nyerünk, azaz a populációt alkotó egyedi antitestek mind specificitásukat, mind affinitásukat tekintve teljesen megegyeznek egymással, kivéve azokat a természetben esetlegesen előforduló mutációkat, amelyek jelenléte elhanyagolhatóan csekély mennyiségben nem zárható ki. Fel kell hívni a figyelmet arra, hogy az ilyen, természetben előforduló mutációk és hasonlók révén egy találmány szerinti monoklonális antitest kompozíció, amely túlnyomórészt hVEGF, a hVEGFr vagy egy, a hVEGF és a hVEGFr összekapcsolódásából létrejött komplexum („hVEGF-hVEGFr komplexum”) fajlagos megkötésére képes antitesteket tartalmaz, ugyancsak tartalmazhat elenyésző mennyiségben egyéb antitesteket is.
így a „monoklonális módosító jelző az antitest karakterére utal, ahogyan ezt egy homogén antitestpopulációból kinyerték, és nem úgy alkalmazzuk, mintha meg lenne követelve, hogy az antitest termelése egy bizonyos módszerrel legyen végrehajtva. Például a találmányban szereplő monoklonális antitestek előáll íthatók az először Kohler & Milstein [Natúré 256:495 (1975)] által leírt hibridómamódszerrel is, vagy pedig előállíthatók rekombináns DNS technikát alkalmazó eljárásokkal is [Cabilly et al., U. S. Pat. No. 4,816,567],
A hibridómamódszer során egeret vagy erre a célra alkalmas más gazdaállatot szubkután, intraperitoneális vagy intramuszkuláris beadási móddal antigénnel immunizálunk, hogy ez ezáltal olyan limfociták képződését váltsa ki, amelyek az immunizációhoz alkalmazott fehérjé(k)hez specifikusan kötődő antitesteket termelnek, vagy rendelkeznek az ilyen ellenanyagok termelésére vonatkozó képességgel. Egy más úton a limfociták immunizálhatók in vitro is. Ezek után a limfocitákat egy, az adott célnak megfelelő fúziós közeg (mint amilyen például a polietilénglikol) segítségével mielómasejtekkel fuzionáltatjuk, amely folyamat eredményeképpen hibridómasejt jön létre [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practices, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)].
Az antigén lehet hVEGF, hVEGFr, illetve hVEGFhVEGFr komplexum. Az antigén megválasztható olyan módon, hogy akár a hVEGF, akár a hVEGFr valamely azzal a tulajdonsággal jellemezhető töredéke vagy részlete legyen, amely tartalmaz egy vagy több, a hVEGF valamely receptorának egyikéhez történő kötődésében szerepet játszó aminosavgyököt. Példának okáért egy hVEGFr extracelluláris tartományával (azaz egy olyan módon megcsonkult hVEGFr-pollpeptid, amelyből hiányzik mind a transzmembrán-, mind az intracelluláris tartomány) történő immunizálás különösen alkalmas lehet a hVEGF-fel szembeni antagonista tulajdonsággal rendelkező antitestek előállítására, mivel az extracelluláris tartomány az, amely szerepet játszik a hVEGF kötődésében.
A hVEGF-hVEGFr komplexum megkötésére képes monoklonális antitestek igen jól használhatók, különösen akkor, ha egyúttal viszont nem mutatnak kötődést a nem asszociált (nem komplex formájú) hVEGF, illetve hVEGFr irányában. Az ilyen antitestek így csakis azokhoz a sejtekhez kötődnek, amelyek a hVEGF által létrehozott azonnali aktiváláson esnek át, és következésképpen a szabad hVEGF vagy hVEGFr által nem tűnnek el, ahogyan ez emlősökben normálisan található. Az ilyen antitestek típusosán egy olyan epitóphoz kötődnek, amely egy vagy több, a receptor és a hVEGF közötti érintkezési ponton ível át. Ilyenfajta antitesteket már készítettek más ligand-receptor komplexumokhoz, és ezeket itt ugyanilyen módon állíthatjuk elő. Ezeket az antitesteket nem szükséges és nem is kell semlegesíteni, vagy a nem asszociált hVEGF vagy hVEGFr biológiai aktivitását gátolni, akár képesek az antitestek a nem asszociált hVEGF-hez vagy hVEGFr-hez kötődni, akár nem.
Az ilyen módon előkészített hibridómasejteket olyan alkalmas tápközegre oltjuk és olyan tápközegen szaporítjuk, amely előnyösen tartalmaz egy vagy több olyan anyagot, amelyik gátolja a nem fuzionált, szülői mielómasejtek növekedését vagy túlélését. Például amennyiben a szülő-mielómasejtekben nincsen jelen a hipoxantin guanin foszforibozil transzferáz (HGPRT vagy HPRT) enzim, akkor a hibridómákhoz szolgáló tenyésztő tápközeg típusos esetben tartalmazni fog hipoxantint, amlnopterint és timidint (HAT tápközeg), mivel ezek a vegyületek megakadályozzák a HGPRT-hiányos sejtek növekedését.
Azok az előnyös mielómasejtek, amelyek magas hatékonysággal fuzionálnak, stabilan magas szinten tartják
HU 225 646 Β1 fenn a kiválasztott antitesttermelő sejtek antitestexpressziójának mértékét, továbbá érzékenyek az olyanfajta tápközegek irányában, mint amilyen a HAT táptalaj. Ezek közül legelőnyösebb mielóma-sejtvonalak az egér-mielómasejtvonalak, mint például a Salk Institute Cell Distribution Centernél (San Diego, Kalifornia, USA) rendelkezésre álló MOPC-21 és MPC-11 egérdaganatokból származó sejtvonalak, az American Type Culture Collection (Rockville, Maryland, USA)-tól beszerezhető SP-2 sejtek, illetve azok a P3X63Ag8U.1 sejtek, amelyeket Yelton ef al., [Curr. Top. Microbiol. Immunoi. 81:1 (1978)] írtak le. Emberi monoklonális antitestek előállítására ugyancsak leírtak humán mielóma- és egér-humán heteromielóma-sejtvonalakat is [Kozbor, J. Immunoi. 133:3001 (1984); Brodeur, ef al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)].
Tenyészközeget, amelyben hibridómasejtek nőnek, megvizsgálunk az antigén ellen irányuló monoklonális antitestek termelése szempontjából. A hibridómasejtek által termelt monoklonális antitestek kötési specificitását előnyösen immunprecipitációval vagy egy olyan in vitro kötési vizsgálat segítségével határozzuk meg, mint amilyen a radioimmunelemzés (RIA) vagy enzimhez kapcsolt immunabszorbens elemzés (ELISA; enzyme-linked immunoabsorbent assay). A találmányban szereplő monoklonális antitestek olyanok, amelyek elsősorban a hVEGF, a hVEGFr vagy a hVEGF-hVEGFr komplexum immunprecipitációjára hajlamosak, vagy pedig előnyösen kötődnek ezen antigének legalább egyikéhez, továbbá amelyek képesek gátolni a hVEGF biológiai aktivitását.
Miután sikerült azonosítani azokat a hibridómasejteket, amelyek a kívánt specificitással, affinitással, illetve aktivitással képesek antagonista hatású antitesteket termelni, a kiónokat alklónozni lehet korlátozott hígításos eljárásokkal, és a szabványos módszerekkel lehet növekedésre késztetni őket [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-104 (Academic Press, 1986)]. Az erre a célra megfelelő tenyésztő tápközegek közé tartozik például Dulbecco módosított Eagle's médiuma vagy az RPMI-1640 tápközeg. Ezen túlmenőleg a hibridómasejteket lehet in vivő is növeszteni aszcitesztumorok formájában állatokban.
Az alklónok által kiválasztott monoklonális antitestek megfelelőképpen elválaszthatók a tenyésztő tápközegtől, az aszciteszfolyadéktól vagy a szérumtól olyan hagyományos immunglobulin-tisztítási eljárások segítségével, mint amilyen például a protein A-Sepharose, a hidroxilapatit-kromatográfia, gélelektroforézis, dialízis vagy affinitáskromatográfia.
A találmányban szereplő monoklonális antitesteket kódoló DNS hagyományos eljárások alkalmazása segítségével viszonylag zökkenőmentesen izolálható és szekvenciájuk meghatározható (például olyan oligonukleotidszondák alkalmazásával, amelyek specifikusan képesek kötődni az egérből származó antitestek nehéz és rövid láncait kódoló génekhez). A találmány szerinti hibridómasejtek az ilyen DNS előnyös forrását képezik. Az izolálás után a DNS-t expressziós vektorokba lehet belehelyezni, amelyeket azután transzfektálunk olyan gazdasejtekbe, mint amilyenek a majom COS sejtek, a kínai hörcsög petefészek (CHO=Chinese Hamster Ovary) sejtek, vagy pedig olyan mielómasejtek, amelyek egyébként nem termelnek immunglobin típusú fehérjéket. Ilyen módon lehet elérni monoklonális antitestek szintézisét a rekombináns gazdasejtben.
A DNS szükség esetén módosítható, hogy az expressziója által termelődött immunglobulin jellemzőit meg lehessen változtatni. Például az egérantitestek humanizált formáit úgy lehet előállítani, hogy az egérantitest variábilis tartományának komplementaritást meghatározó régióját (CDR: complementarity determining region) helyettesítjük a humán antitest megfelelő régiójával. Bizonyos megvalósítási módozatokban az egérantitest kiválasztott keretrégió (FR; framework region) aminosavgyökeit ugyancsak helyettesítjük az emberi antitestben található megfelelő aminosavgyökökkel [Carter, ef al., Proc. Natl. Acad. Sci. 89:4285 (1992); Carter, ef al., BioTechnology 10:163 (1992)]. Az egérantitestek kiméra formáit ugyancsak úgy lehet előállítani, hogy a kiválasztott emberi nehéz és könnyű konstans lánc tartományok kódolószekvenciáit helyettesítjük be a homológ egérszekvenciák helyére [Cabilly, ef al., U. S. Pat. No. 4,816,567; Morrison ef al., Proc. Natl. Acad. Sci. 81:6851 (1984)].
A találmány oltalmi körébe tartozó antitestek magukban foglalnak olyan variáns antitesteket, mint amilyenek a kiméra (beleértve a „humanizált”) antitestek és az olyan immunglobinláncokat tartalmazó hibrid antitestek, amelyek képesek megkötni a hVEGF-et, hVEGFr-t vagy a hVEGF-hVEGFr komplexumot, és egy nem-hVEGF epitópot.
Az itt szereplő antitestek magukban foglalnak minden eredetű fajtát és immunglobulin-osztályt (például IgA, IgD, IgE, IgG, illetve IgM) és alosztályt csakúgy, mint antitesttöredékeket [például Fab, F(ab')2 és FV], amennyiben ezek képesek megkötni a hVEGF-et, hVEGFr-t vagy a hVEGF-hVEGFr komplexumot, és képesek antagonizálni a hVEGF biológiai aktivitását.
A találmány egy előnyös megvalósítási formájában a monoklonális antitestnek legalább mintegy 103 liter/mólos affinitása van az immunizálóantigénhez, ahogyan azt meghatározta például Scatchard-analízis segítségével Munson & Pollard [Anal. Biochem 107:220 (1980)]. A monoklonális antitest továbbá típusos esetben legalább mintegy 50%-kal, de előnyösen több mint 80%-kal és még legelőnyösebben a 90%-ot is meghaladó arányban gátolja a hVEGF mitogén vagy angiogén aktivitását, ahogyan azt például egy in vitro sejttúlélési vagy proliferációs vizsgálatban meghatározzuk, mint például ahogyan ez a 2. példában le van írva.
Bizonyos terápiás és diagnosztikai alkalmazások szempontjából kívánatos lehet, hogy a monoklonális antitest a hVEGF nem minden különböző molekuláris formájával reagáljon. Például kívánatosnak bizonyulhat, hogy olyan monoklonális antitesttel rendelkezzünk, amelyik specifikusan képes kötődni a hVEGF 165 aminosavas formájával, ellenben a hVEGF-polipeptidek
HU 225 646 Β1
121 vagy 189 aminosavas változatával nem. Az ilyen antitestek könnyen azonosíthatók a különböző hVEGF-polipeptidek összehasonlító ELISA-elemzésével vagy összehasonlító immunprecipitációjával.
Konjugátumok citotoxikus részekkel
Bizonyos megvalósítási formákban kívánatos annak biztosítása, hogy egy citotoxikus molekularész konjugációs kapcsolatra lépjen egy hVEGF-specifikus monoklonális antitesttel vagy hVEGFr-rel. Ezekben a megvalósítási formákban citotoxin arra szolgál, hogy működésképtelenné tegye vagy elpusztítsa azokat a sejteket, amelyek expresszálják vagy megkötik a hVEGF-et vagy ennek receptorát. A konjugátumot az a tartomány vezeti rá a sejtre, amely képes megkötni a hVEGF-et, a hVEGFr-t vagy a hVEGF-hVEGFr komplexumot. Ilyen módon a hVEGF, hVEGFr vagy hVEGF-hVEGFr komplexum kötésére képes monoklonális antitestek konjugálódnak a citotoxinokhoz. Hasonlóképpen a hVEGFr konjugálódik egy citotoxinhoz. Amíg a monoklonális antitestek optimálisan képesek semlegesíteni önmagában levő (citotoxin nélküli) hVEGF aktivitását, addig ebben a megvalósítási formában nincsen szükség annál többre, mint hogy a monoklonális antitest vagy receptor képes legyen hozzákötődni a hVEGF-hez, a hVEGFr-hez vagy a hVEGF-hVEGFr komplexumhoz.
Tipikus esetben a citotoxin valamilyen fehérjecitotoxin, például diftéria, ricin vagy Pseudomonas toxin, jóllehet az immunglobulinok bizonyos osztályai esetében a monoklonális antitest Fc tartománya önmaga is képes arra, hogy citotoxinként szolgáljon [például az lgG2 antitestek esetében, amelyek képesek fixálni a komplementet és részt venni az antitestfüggő celluláris citotoxicitásban (ADCC; antibody-dependent cellular citotoxicity)]. Ugyanakkor azonban nem feltétlenül szükségszerű, hogy a citotoxin fehérje természetű legyen, és ideértendők olyan kemoterápiás szerek is, amelyeket eddig példának okáért daganatok kezelésére használtak.
A citotoxin típusos esetben egy monoklonális antitesthez vagy annak töredékéhez az antitest Fc tartományán belül levő (vagy egy részét vagy egészét helyettesítő) amidgerinckötéssel kapcsolódik. Ahol a célzott funkciót a hVEGFr látja el, a citotoxikus rész a receptor bármely olyan tartományába helyettesíthető, amely nem vesz részt a hVEGF kötődésében; a molekularész előnyösen a receptor transzmembránés/vagy citoplazmatikus tartományának helyébe vagy arra szubsztituálódik. A szubsztitúció optimális helye rutinkísérletezéssel határozható meg, és ez a szakember köteles tudásán belül van.
A fehérjefúzióból származó konjugátumok minden különösebb nehézség nélkül előállithatók rekombináns sejttenyészetben a konjugátumot kódoló gén expressziója által. Alternatív megoldásképpen a konjugátumok a citotoxikus molekularész kovalens keresztkötésével készíthetők el az antitest vagy a receptor egy aminosavgyök-oldalláncához vagy C-terminálisán elhelyezkedő karboxilcsoportjához olyan önmagában ismert eljárások alkalmazásával, mint amilyen a diszulfidcsoportok cseréje, diszulfidcsoportok létesítése tioészterkötésen át, például imino-tiolátot és metil-4-merkapto-butirimadátot alkalmazva.
Konjugátumok más molekulákkal
A hVEGF-antagonista tulajdonságokkal rendelkező monoklonális antitesteket, illetve a hVEGFr-t ugyancsak összekapcsolhatjuk olyan anyagokkal, amelyeket pusztán önmaguk jellemző tulajdonságai alapján nem lehet egyértelműen a citotoxinok osztályába besorolni, amelyek azonban nagymértékben fokozhatják az itt szereplő kompozíciók aktivitásának szintjét. Például a hVEGF, a hVEGFr vagy hVEGF-hVEGFr komplexum kötésére képes monoklonális antitestek vagy hVEGFr fuzionálhatok olyan heterológ polipeptidekkel, mint amilyen például bizonyos virális szekvenciák, továbbá celluláris receptorokkal, olyan citokinekkel, mint amilyen példának okáért a TNF (tumomekrózis-faktor), az interferonok vagy az interleukinok, illetve prokoaguláns aktivitással rendelkező polipeptidekkel, valamint más egyéb biológiai vagy immunológiai szempontból aktív polipeptidekkel. Az ilyenfajta fúziók rekombináns módszerek alkalmazása segítségével minden különösebb nehézség nélkül végrehajthatók. Tipikus esetben az ilyen nem immunglobulin természetű polipeptideket egy anti-hVEGF vagy anti-hVEGF-hVEGFr komplex antitest konstans tartományával vagy tartományaival helyettesítjük, vagy pedig egy hVEGFr transzmembrán- és/vagy intracelluláris tartományával. Alternatív megközelítési módként ezek helyettesíthetők egy, a fentiekben leírt anti-hVEGF antitest egy antigénkötő helyének változó tartományával.
Előnyös megvalósítási módokban az ilyen nem immunglobulin-polipeptideket egy imént tárgyalt antitest konstans tartományaihoz csatlakoztatjuk, vagy pedig annak helyére helyettesítjük be [Bennett, et al., J. Bioi. Chem. 266:23 060-23 067 (1991)]. Alternatív megoldás gyanánt ezek helyettesíthetők egy ugyancsak itt tárgyalt antitest Fv-jével, amely által egy olyan kiméra polivalens antitest képződik, amely legalább egy, a hVEGF-re, hVEGFr-re vagy egy hVEGF-hVEGFr komplexumra specificitással rendelkező maradék antigénkötő helyet tartalmaz, és egy olyan helyettesítő jellegű antigénkötő helyet, amelynek a funkciója vagy a specificitása különbözik attól, ami a kiindulópontként használt antitest esetében figyelhető meg.
Heterospecifikus ellenanyagok
A hVEGF-hez, hVEGFr-hez vagy hVEGF-hVEGFr komplexumhoz kötődni képes monoklonális antitesteknek csak egyetlen kötőhelyet kell tartalmazniuk az imént felsorolt epitópok vonatkozásában, típusos esetben egy egyedi nehézlánc-könnyűlánc komplexumot vagy annak töredékét. Mindazonáltal az ilyen ellenanyagok kívánt esetben ugyancsak hordoznak olyan antigénkötő tartományokat, amelyek kötődni képesek a hVEGF, hVEGFr vagy hVEGF-hVEGFr komplexum egyikében sem található epitóphoz. Például egy natív hVEGF ellen, hVEGFr ellen vagy hVEGF-hVEGFr komplexum ellen képződött antitest megfelelő aminosavszekvenciájának vagy aminosavgyökeinek helyettesítése egy, a hVEGF-től,
HU 225 646 Β1 hVEGFr-től vagy a hVEGF-hVEGFr komplexumtól különböző antigén iránt specificitást mutató antitestkomplementaritást meghatározó elemeivel, és ha szükséges, keretgyökeivel egy olyan polispecifikus antitestet alakít ki, amely egyrészt tartalmaz egy, a hVEGF, a hVEGFr vagy hVEGF-hVEGFr komplexumra specificitással rendelkező antigénkötő helyet, másrészt pedig egy másik antigénkötő helyet, amelynek specificitása a nemhVEGF, nem-hVEGFr vagy nem-hVEGF-hVEGFR komplexum antigének irányában mutatkozik meg. Ezek az antitestek legalábbis bivalens jellegűek, de lehetnek polivalensek is, annak függvényében, hogy a kiválasztott antitestosztály milyen számú antigénkötő hellyel rendelkezik. Példának okáért az IgM osztályába tartozó antitestek polivalensek lesznek.
A találmány egyik előnyös kiviteli formájában az ilyen antitestek képesek kötődni egy hVEGF- vagy hVEGFr-epitóphoz, valamint vagy (a) egy olyan, a véralvadás területén aktív polipeptidhez, mint amilyen például a C-fehérje, vagy a szöveti faktor, vagy (b) egy olyan citotoxikus fehérjéhez, mint amilyen a tumomekrózis-faktor (TNF) vagy (c) az olyan nem-hVEGFr sejtfelületi receptorhoz, mint amilyen például a CD4, vagy a HER-2 receptor [Maddon, et al., Cell 42:93 (1985); Coussens, etal., Science 230:1137 (1985)]. Heterospecifikus, multivalens antitesteket könnyen elő lehet állítani a gazdasejtek egy, mindkét antitest nehéz láncát és könnyű láncát kódoló DNS-sel végzett együtt-transzformálásával, majd ezek után immunaffinitásos kromatográfia vagy más ehhez hasonló eljárás segítségével történő kinyerésével, így állítható elő az az expresszált antitestrész, amely rendelkezik a kívánt antigénkötő tulajdonságokkal. Alternatív megközelítési módként szolgálhat, amennyiben az ilyen antitesteket monospecifikus antitestek in vitro rekombinációja útján állítjuk elő.
Monovalens ellenanyagok
A hVEGFr-hez vagy a hVEGF-hVEGFr komplexumhoz kötődni képes monovalens ellenanyagok különösen jól hasznosíthatók hVEGF-antagonísta szerepkörben. Anélkül, hogy a találmányt leszűkítenénk bármilyen speciális biológiai aktivitási mechanizmusra, azt lehet gondolni, hogy a celluláris hVEGF-receptorok aktiválása egy olyan mechanizmus segítségével folyik le, amelynek során a hVEGF kötődése a celluláris hVEGF-receptorhoz a receptorok aggregációját indukálja, ez viszont a maga részéről aktiválja az intracelluláris receptor kináz aktivitást. Mivel a monovalens anti-hVEGF-receptor-antitestek nem képesek indukálni ilyen aggregációt, és ennek következtében nem képesek az említett mechanizmus útján aktiválni a hVEGF-receptort, ezért ezek a hVEGF ideális antagonistáinak tekinthetők.
Mindazonáltal meg kell jegyezni azt is, hogy ezeket az antitesteket a receptor hVEGF-kötőhelye ellen kell Irányítani, vagy pedig ezeknek valamilyen más módon kell képeseknek lenniük akadályozni a hVEGF kötődését a hVEGF-receptorhoz, példának okáért szterikus módon gátolva a hVEGF hozzáférését a receptorhoz. Ahogyan ezt ebben az összefüggésben más helyütt tárgyaltuk, a hVEGF kötődésével interferálni nem képes hVEGFr ellen képződött antitestek azonban hasznosíthatók lehetnek olyan esetekben, amikor konjugáljuk ezeket olyan nem immunglobulin típusú molekularészekkel, mint amilyenek például a citotoxinok.
A monovalens antitestek előállítására szolgáló módszerek a területen jól ismertek. Például az egyik ilyen módszer lényege abban áll, hogy immunglobulin könnyű lánc és módosított nehéz lánc rekombináns expressziójára kerül sor. Általában a nehéz láncot az Fc régió valamelyik pontján csonkolhatjuk, hogy ezen a módon elkerülhető legyen a nehézlánc-keresztkötések kialakulása. Egy alternatív megközelítési mód szerint az idevonatkozó ciszteingyököket más aminosavmaradékokkal helyettesíthetjük, vagy pedig eltávolíthatjuk, ugyancsak a keresztkötések kialakulásának megelőzése céljából. In vitro módszerek ugyancsak alkalmasak lehetnek monovalens antitestek előállítására. Például Fab-fragmentumokat elő lehet állítani intakt antitestek enzimatikus úton végzett hasításával.
Diagnosztikai alkalmazások
Diagnosztikai alkalmazások céljaira a találmányban szereplő antitesteket vagy hVEGFr-t típusos esetben valamilyen kimutatható molekularésszel meg kell jelölni. A kimutatható molekularész olyan természetű lehet, amely képes valamilyenfajta, akár közvetlenül, akár közvetett módon felismerhető jel kibocsátására. Például a felismerhető rész lehet egy olyanféle radioaktív izotóp, mint a 3H, a 14C, a 32P, a 35S vagy a 125l, egy fluoreszcens vagy kemolumlneszcens anyag, mint a fluoreszcein izotiocianát, a rodamin vagy a luciferin; radioaktív izotópos jelzőanyagok, mint például a 125l, a 32P, a 14C vagy a 3H, vagy valamilyen olyanfajta enzim, mint amilyen az alkalikus foszfatáz, a béta-galaktozidáz vagy a torma-peroxidáz.
A szakterületen az antitestnek vagy a hVEGFr-nek a felismerhető molekularésszel történő elkülönült konjugációjára szolgáló bármely ismert módszer használható, beleértve azokat ez eljárásokat, amelyeknek leírása a következő irodalmi hivatkozásokban található meg: Hunteref al., Natúré 144:945 (1962); Dávid etal., Biochemistry 73:1014 (1974); Pain ef al., J. Immunoi. Meth. 40:219 (1981); valamint Nygren, J. ef al., J. Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982).
A jelen találmányban szereplő antitestek és receptorok alkalmazhatók minden ismert elemzési módszerben, ideértve a kompetitív kötési elemzéseket, a direkt és indirekt szendvicselemzéseket, továbbá az immunprecipitációs elemzéseket [Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc., 1987)].
A kompetitív kötési elemzések egy jelzett standard (amely lehet hVEGF, vagy annak egy immunológiailag aktív részlete) azon a képességén alapulnak, hogy egy korlátozott mennyiségben jelen lévő antitest megkötéséért versenyezni képes a vizsgálati minta analittal (hVEGF). A vizsgálati mintában található hVEGF mennyisége fordított arányban áll az antitestekhez vagy receptorokhoz kötődött standard mennyiségével. A kötötté váló standard mennyisége meghatározásá7
HU 225 646 Β1 nak elősegítése céljából a versengés előtt vagy azt követően az antitesteket vagy a receptorokat általában inszolubilizáljuk úgy, hogy az antitestekhez vagy a receptorokhoz kötött standardok és analitok könnyen elkülöníthetők legyenek a nem megkötött állapotban maradt analitoktól és standardoktól.
A szendvicselemzések során két olyan antitestet vagy receptort használunk, amelyek mindegyike a kimutatni kívánt fehérje más-más immunogén részletéhez vagy epitópjához képes kötődni. Egy szendvicsvizsgálatban a vizsgálati analit egy első antitesthez vagy receptorhoz kötődik, amely egy szilárd hordozón van immobilizálva, majd ezek után egy második antitest kötődik az analithoz, egy három részből összetevődő oldhatatlan komplexumot hozva ilyen módon létre (Dávid & Greene, U. S. Pat. No. 4,376,110). Magát a második antitestet vagy receptort is jelölni lehet egy felismerhető molekularésszel (direkt szendvicselemzések), vagy pedig meghatározására egy felismerhető molekularésszel jelzett antiimmunglobulin antitest segítségével kerül sor (indirekt szendvicselemzés). Példának okából a szendvicselemzés egyik típusa egy ELISA elemzés, amelynek esetében a felismerhető molekularész egy enzim.
Az itt tárgyalt antitestek vagy receptorok mindezeken túlmenőleg in vivő képalkotó eljárások céljaira is felhasználhatóak, amelyek folyamán egy felismerhető molekularésszel jelzett antitestet vagy hVEGF-et adunk be a betegnek, előnyösen közvetlenül a vérkeringésbe, és a beteg szervezetében a jelzett antitest vagy receptor jelenlétét vagy elhelyezkedését észleljük. Ez a képalkotási technika felhasználható lehet például rosszindulatú daganatok előrehaladottságának megállapításaira, gyógykezeléseire. Az antitest vagy a hVEGF jelölése minden olyan molekularésszel elvégezhető, amely emlősben felismerhető, legyen szó bár mágneses magrezonancián alapuló, radiológiai vagy bármely más, a szakmában ismert kimutatási eljárásról.
Terápiás alkalmazások
Terápiás alkalmazások céljából a találmányban szereplő antagonistákat gyógyszerészetileg elfogadható adagolási formában adjuk be emlősöknek, elsősorban embernek. Ezek közé az adagolási formák közé tartoznak az intravénás bejuttatás emberbe akár boluszként, akár egy bizonyos időtartamot felölelő folyamatos infúzió formájában, valamint az intramuszkuláris, intraperitoneális, intracerebrospinális, szubkután, intraartikuláris, intraszinoviális, intratekális, orális, helyi vagy inhalációs bejuttatási módok. Az antagonisták ugyancsak megfelelőképpen alkalmasak intratumorális, peritumorális, intralezionális vagy perilezionális beadási módokkal történő bevezetésre olyan célból, hogy akár lokális, akár szisztémás terápiás hatásokat lehessen elérni segítségükkel. Az előzetes várakozások szerint az intraperitoneális bejuttatási mód különösen hasznosnak bizonyulhat például a petefészek daganatainak kezelése terén.
Az ilyen adagolási formák kiterjednek olyan gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagok alkalmazására is, amelyek önmagukban sem toxikus, sem terápiás hatásokkal nem rendelkeznek. Az ilyen vivőanyagok közé tartoznak az ioncserélők, a timföld, az alumínium-sztearát, a lecitin, a különféle szérumfehérjék, mint például a humán szérumalbumin, az olyan pufferanyagok, mint amilyenek a foszfátok, a glicin, a szorbinsav, a kálium-szorbát, a telített növényi zsírsavakból készült részleges gliceridkeverékek, a víz, a különféle sók vagy olyan elektrolitok, mint például a protamin-szulfát, a dinátrium-hidrogén-foszfát, a kálium-hidrogén-foszfát, a nátrium-klorid, a cinksók, a kolloid állapotban levő kovasav, a magnézium-triszilikát, a poli(vinil-pirrolidon), a cellulózalapú anyagok, valamint a polietilénglikol. Az antagonista topikális vagy gélalapú formáinak vivőanyagai közé tartoznak az olyan poliszacharidok, mint például a nátrium-karboxi-metil-cellulóz vagy a metil-cellulóz, a poli(vinil-pirrolidon), a poliakrilátok, a poli(oxi-etilén)-poli(oxi-propilén) tömbpolimerek, a polietilénglikol és a faviasz alkoholok. Minden beadáshoz a hagyományos depót formák megfelelőképpen használhatók. Az ilyen formák közé tartoznak például a mikrokapszulák, a nanokapszulák, a liposzómák, a tapaszok, az inhalációs formák, az orrspray-k, a szublingvális tabletták és a késleltetett felszivódású készítmények. Az ilyenfajta vivőanyagokhoz az antagonistát tipikus esetekben mintegy 0,1 milligramm/millilitertől 100 milligramm/milliliterig terjedő koncentrációban adják hozzá.
A késleltetett felszivódású készítményekre alkalmas példák közé tartoznak az antagonistát tartalmazó szilárd hidrofób polimerekből álló szemipermeábilis (féligáteresztő) mátrixok, amely mátrixok olyan kialakítású kiszerelési formákban fordulhatnak elő, mint például filmek vagy mikrokapszulák. A késleltetett felszivódású mátrixokkal kapcsolatos példák közé tartoznak a poliészterek, a hidrogélek [például a poli(2-hidroxi-etil-metakrilát)], ahogy leírták Langer ef al., [J. Biomed. Mater. Rés. 15:167 (1981)] és Langer [Chem. Tech. 12:98-105 (1982)], vagy poli(vinil-alkohol)-polilaktidok (U. S. Pat. No. 3,773,919), az L-glutaminsav és a gamma-etil-L-glutamát kopolimerjei [Sidman ef al., Biopolymers 22:547 (1983)], nem degradálódó etilén-vinil-acetát (Langer ef al., mint a föntebbiekben), degradálódó tejsav-glikolsav kopolimerek, mint például a Lupron Depot™ (injektálható mikroszférák, amelyek tejsav-glikolsav kopolimerekből és leuprolid-acetátból állnak), és poli-D-(-)-3-hidroxi-vajsav. Míg az olyan polimerek, mint amilyen például az etilén-vinil-acetát és a tejsav-glikolsav, több mint száznapos időtartamra teszik lehetővé a molekulák felszabadulását, bizonyos hidrogélek rövidebb időszakokra szabadítják fel a fehérjéket. Ha a kapszulába zárt polipeptidantagonisták hosszabb ideig maradnak a szervezetben, a 37 °C-os nedves közegnek kitéve denaturálódhatnak vagy aggregálódhatnak, amelynek eredményeképpen elveszíthetik biológiai aktivitásukat, és fennáll annak a lehetősége is, hogy immunogenitásuk terén bizonyos változások következhetnek be. Az adott mechanizmustól függően a stabilizáció céljait szolgáló racionális stratégiák alakíthatók ki. Például ha az derül ki, hogy az aggregáció mechanizmusa a tio8
HU 225 646 Β1 diszulfidkicserélődés útján létrejövő intramolekuláris S-S kötés kialakulására vezethető vissza, akkor a stabilizáció a szulfhidrilmaradékok módosításával érhető el savas vegyhatású oldatokból történő liofilizálással, a nedvességtartalom ellenőrzésével, megfelelő adalék anyagok használatával, illetve specifikus polimer-mátrix összetételek kifejlesztésével.
A késleltetett kibocsátású hVEGF-antagonista összetételek közé ugyancsak beletartoznak a liposzomálisan becsomagolt antagonista antitestek. Az antagonistákat tartalmazó liposzómák a szakmában ismert olyan módszerekkel állíthatók elő, mint például ahogyan az a következő közleményekben van leírva: Epstein, etal., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688 (1985); Hwang, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030 (1980); U. S. Patent No. 4,485,045; U. S. Patent No. 4,544,545. Rendszerint a liposzómák kicsiny (mintegy 200-800 angströmnyi) unilamelláris típusúak, amelyek lipidtartalma meghaladja a körülbelül 30 mólszázalék koleszterint, és a megválasztott arány az optimális HRG terápia szempontjához igazodik. A fokozott keringési idővel rendelkező liposzómákra vonatkozó információk megtalálhatók a következő szabadalmi leírásban: U. S. Patent No. 5,013,556.
A jelen találmány egy másik felhasználási módja magában foglalja egy hVEGF-antagonista beépítését formázott termékbe (formed article). Az ilyen formázott termék felhasználható lehet az endoteliális sejt növekedés és angiogenezis módosítása terén. Ezen túlmenőleg a daganatos invázió és áttétképzés is módosítható ezekkel a készítményekkel.
Betegségek megelőzése vagy kezelése céljából az antagonista megfelelő adagolása függ a kezelni kívánt betegség típusától, amint az fentebb meghatározásra került, a betegség súlyossági fokától és lefolyásától, attól a körülménytől, hogy az antitestek adagolása preventív vagy terápiás célzattal történik, az előzőleg végzett kezeléstől, a beteg klinikai anamnézisétől és az antagonistával kapcsolatos reakciójától, illetve a kezelőorvos belátásától. Az antagonista a beteg számára megfelelőképpen alkalmazható egyszeri beadás vagy sorozatos kezelések formájában.
A hVEGF-antagonisták hasznosak lehetnek különféle neopláziás és nem neopláziás jellegű betegségek és rendellenességek kezelése terén. A kezelés szempontjából számításba jöhető daganatos folyamatok és azzal összefüggésben álló kóros állapotok közé tartoznak az emlő rosszindulatú daganatai, a tüdő rosszindulatú daganatai, a gyomor rosszindulatú daganatai, a nyelőcső rosszindulatú daganatai, a vastagbél és a végbél rosszindulatú daganatai, a petefészek rosszindulatú daganatai, tekómák, arrenoblasztómák, a méhnyak rosszindulatú daganatai, az endometriális karcinóma, az endometriális hiperplázia, az endometriózis, a különféle fibroszarkómák, a koriokarcinóma, a fej és nyak rosszindulatú daganatai, a nazofaringeális karcinóma, a gége rosszindulatú daganatai, a hepatoblasztóma, a Kaposi-szarkóma, a melanoma, a bőr rosszindulatú daganatai, a hemangioma, a kavernás hemangioma, a hemangioblasztóma, a hasnyálmirigy rosszindulatú daganatai, a retinoblasztóma, az asztrocitóma, a glioblasztóma, a Schwannoma, az oligodendroglioma, a medulloblasztóma, a különféle neuroblasztómák, a rabdomioszarkóma, az oszteogén szarkóma, a leiomioszarkómák, a húgyutak rosszindulatú daganatai, a pajzsmirigy rosszindulatú daganatai, a Wilm-tumor, a vesesejtek rosszindulatú daganatai, a prosztatarák, a fakomatózisokkal kapcsolatos abnormális vaszkuláris proliferáció, az ödéma (mint például ami az agydaganatokhoz társul) és a Meig-szindróma.
A betegség típusától és súlyossági fokától függően az antagonista mintegy 1 pg/kg-tól 15 mg/kg-ig terjedő dózisai tekinthetőek kezdeti dózisjelöltnek, ebben szerepet játszik, hogy például egyszeri vagy többszöri elkülönített adagolásról van-e szó, vagy folyamatos infúzió alkalmazásáról. A tipikus napi dózistartomány körülbelül 1 μ/kg-tól 100 mg/kg-ig vagy még feljebb terjedhet, a fentebb említett tényezők függvényében. Néhány napon át vagy még hosszabb ideig tartó ismételt alkalmazás esetén a beteg állapotától függően a kezelés addig ismételhető, amíg a betegség tüneteinek kívánt visszaszorítása be nem következik. Mindazonáltal más adagolási előírások is hasznosaknak bizonyulhatnak. A terápia előrehaladása könnyen figyelemmel kísérhető az olyan hagyományos technikák és elemzések segítségével, mint amilyen például a daganatok radiográfiás leképezése.
A találmány egy másik megvalósulási módja szerint az antagonistának betegségek megelőzése vagy kezelése terén mutatott hatékonysága fokozható magának az antagonistának a sorozatos adásával, vagy pedig egyéb, az olyan, a kitűzött terápiás célok szempontjából hatékony szerekkel kombinációban adva, mint amilyen például a tumomekrózis-faktor (TNF), egy, a savanyú vagy bázikus fibroblaszt növekedési faktor (FGF) vagy a hepatocita növekedési faktor (HGF) angiogén aktivitását gátolni vagy semlegesíteni képes antitest, egy, a szöveti faktor, a C-fehérje vagy az S-fehérje koagulációs aktivitásait gátolni vagy semlegesíteni képes antitest (lásd Esmon, et al., PCT Patent Publication No. WO 91/01753, megjelent 1991. február 21-én), vagy egy, illetve több olyan hagyományos terápiás készítmény, mint amilyenek példának okáért az alkilezőszerek, a folsavantagonisták, a nukleinsav-anyagcsere antlmetabolitjai, a különféle antibiotikumok, a pirimidinanalógok, az 5-fluor-uracil, a purin-nukleozidok, a különféle aminok, aminosavak, triazol-nukleozidok vagy kortikoszteroidok. Az ilyen egyéb szerek részei lehetnek az adagolásra kerülő kompozíciónak, vagy pedig beadásuk külön is történhet. Ugyancsak az antagonista megfelelőképpen adagolható kúraszerűen vagy radiológiai típusú kezelésekkel kombinációban alkalmazva, legyen az besugárzás vagy radioaktív anyagok beadása.
Egy megvalósulási formában a daganatok vaszkularizációja kombinációs terápia formájában támadható meg. Ilyen esetekben a daganatos betegeknek egy vagy több hVEGF-antagonistát adagolunk terápiásán hatékony dózisokban, amelyek megállapítása például a daganat, illetve ha vannak ilyenek, akkor a metasztatikus gócok elhalási ütemének figyelemmel kísérése útján tör9
HU 225 646 Β1 ténhet. Ezt a terápiát addig folytatjuk, amíg további jótékony hatás nem figyelhető meg, vagy a klinikai vizsgálat nem mutatja daganat vagy áttétes góc nyomait sem. Ekkor TNF-adagolásra kerül sor, akár önmagában, akár olyan kiegészítő szerekkel kombinációban, mint amilyenek például az alfa-, béta- vagy a gamma-interferon, az anti-HER2 antitest, a heregulin, a heregulinellenes antitest, a D-faktor, az interleukin-1 (IL-1), az interleukin-2 (IL-2), a granulocita-makrofág telepstimuláló faktor (GM-CFS), vagy az olyan szerek, amelyek elősegítik a mikrovaszkuláris koagulációt a daganatokban, mint amilyen például az anti-C-fehérje antitest, az anti-S-fehérje antitest vagy a C4b kötő fehérje (lásd Esmond et al., PCT Patent Publication No. WO 91/017053, a nyilvánosságra hozatal időpontja: 1991. február 21.), illetve a hőkezelés vagy a besugárzás.
Mivel a kiegészítő készítmények hatékonysága bizonyos változékonyságot mutat, ezért kívánatos dolog hagyományos módon végrehajtott mátrixátvizsgálás segítségével összehasonlítani a daganatra gyakorolt hatásukat. A hVEGF-antagonista és a TNF bevezetését addig kell ismételni, amíg a kívánt klinikai hatás elérésére sor nem kerül. Alternatív módon a hVEGF-antagonistá(ka)t együtt alkalmazzuk a TNF-fel, és kívánt esetben kiegészítő szerrel vagy szerekkel. Bizonyos olyan esetekben, ahol szilárd tumorok fordulnak elő a végtagok területén vagy más olyan helyeken, amely hajlamos az általános keringéstől való elkülönülésre, a fentiekben leírt terápiás szereket az izolált daganatba vagy szervbe adjuk be. Más megvalósítási módokban egy FGF vagy trombocitaeredetű növekedési faktor (PDGF) antagonistát adunk a betegnek a hVEGF-antagonistával együtt. A hVEGF antagonistáival történő kezelés optimális esetben felfüggeszthető a sebgyógyulás vagy a kívánatos revaszkularizáció időszakai folyamán.
Egyéb felhasználási területek
A találmány tárgyát képező anti-hVEGF antitestek ugyancsak használhatók affinitásos tisztítószerekként. Ebben az eljárásban a hVEGF-ellenes antitestek olyan megfelelő hordozón vannak immobilizálva, mint amilyen egy Sephadex gyanta vagy szűrőpapír, a szakmában ismert eljárások alkalmazásával. Az immobilizált antitest ezután érintkezésbe kerül egy, a tisztítandó hVEGF-et tartalmazó mintával, és ezután a hordozót átmossuk egy, a célnak megfelelő oldószerrel, amely lényegében minden, a mintában levő anyagot a hVEGF kivételével eltávolít, amely viszont hozzá van kötődve az immobilizált antitesthez. Végül a hordozót átmossuk egy másik megfelelő oldattal, mint például egy pH 5,0 értékű glicinpufferrel, amelyik leválasztja a hVEGF-et az antitestről.
A következő példák csak az illusztráció célját szolgálják, és nem arra vannak szánva, hogy a találmány oltalmi körét bármely módon lehatárolják.
1. példa
Anti-hVEGF monoklonális antitestek előállítása
Abból a célból, hogy az immunizáláshoz keyhole limpet (kulcslyuk kagyló) hemocianinhoz (KLH) konjugált hVEGF-et kapjunk, rekombináns hVEGF-et (165 aminosav) [Leung, ef al., Science 246:1306 (1989)] összekeverünk KLH-val 4:1 arányban 0,05% glutáraldehid jelenlétében, és a keveréket három óra hosszat inkubáljuk szobahőmérsékleten finoman végzett kevertetés mellett. A keveréket ezután foszfáttal pufferolt élettani konyhasóoldattal (PBS; phosphate buffered saline) szemben dializáljuk 4 °C hőmérsékleten egy éjszakán át.
Balb/c egereket kéthetente összesen 4 darab, 5 pg hVEGF és 20 pg KLH konjugátumából álló intraperitoneális injekcióval immunizálunk, és a KLH-val konjugált hVEGF ugyanazon dózisával emlékeztető oltást adunk be 4 nappal a sejtfúzió előtt.
Az immunizált egerekből származó lépsejteket P3X63Ag8U.1 mielómasejtekkel fuzionáljuk [Yalton, ef al., Curr. Top. Microbiol. Immunoi., 81:1 (1978)], 35%-os polietilénglikol (PEG) alkalmazásával, ahogyan az a következő közleményben szerepel: Yarmush, ef al., Proc. Natl. Acad. Sci. 77:2899 (1980). A hibridómákat HAT tápközegben szelektáljuk.
A hibridóma-sejttenyészetekből származó felülúszót anti-hVEGF antitest termelés szempontjából ELISA vizsgálat segítségével vizsgáljuk át, amelynek során hVEGF-fel burkolt mikrotitrálólemezeket használunk. Az egyes mélyedésekben található hVEGF-hez kötődött antitesteket alkalikus foszfatázzal konjugált kecske antiegér IgG immunglobulin és a p-nitro-fenil-foszfát kromogén szubsztrát alkalmazásával határozzuk meg [Harlow & Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, p. 597 (Cold Spring Harbor Laboratory, 1988)]. Az ilyen módon meghatározott, anti-hVEGF antitestek termelésére szánt hibridómasejteket korlátozó hígítással szubklónozzuk, és az így nyert kiónok közül további vizsgálatok céljaira kettőt választunk ki, amelyeket A4.
6.1 és B2. 6.2 megjelöléssel látunk el.
2. példa
Anti-hVEGF monoklonális antitestek jellemzése
A) Antigénspecificitás
Az A4. 6.1 és B2. 6.2 hibridómák által termelt anti-hVEGF monoklonális antitestek kötési specificitását ELISA segítségével határozzuk meg. A monoklonális antitesteket az előzetesen hVEGF-fel, FGF-fel, HGF-fel vagy epidermális növekedési faktorral (EGF; epidermal growth factor) bevont mikrotitrálólemezek mélyedéseihez adjuk hozzá. A megkötött antitesteket peroxidázzal konjugált kecske antiegér IgG immunglobulinok segítségével ismerjük fel. Ezeknek a vizsgálatoknak az eredményei megerősítették azt, hogy az A4.
6.1 és a B2. 6.2 hibridómák által termelt monoklonális antitestek kötődnek a hVEGF-hez, viszont az egyéb fehérje növekedési faktorokhoz kimutatható mértékű kötődést nem lehetett észlelni.
B) Epitóp-térképezés
Egy kompetitiv kötést alkalmazó ELISA vizsgálatot használunk annak a kérdésnek az eldöntésére, hogy vajon az A4. 6.1 és B2.6.2 hibridómák által termelt monoklonális antitestek a hVEGF-en belül ugyanahhoz vagy különböző epitópokhoz (helyekhez) kötődnek-e
HU 225 646 Β1 [Kim, et al., Infect. Immun. 57:944 (1989)]. Az előzőleg hVEGF-fel burkolt mikrotitrálólemezek mélyedéseihez egyedi jelzetlen anti-hVEGF monoklonális antitesteket (A4. 6.1 vagy B2. 6.2) vagy irreleváns anti-hVEGF antitesteket (lgG1 izotípus) adunk. Ezután biotinilezett anti-hVEGF monoklonális antitestek (BIO-A4. 6.1 vagy BIO-B2.6.2) hozzáadására kerül sor. A biotinilezett antitest aránya a jelzetlen antitesthez viszonyítva 1:100. A biotinilezett ellenanyagok kötődését avidinnel konjugált peroxidáz hozzáadásával tesszük láthatóvá, amelyet O-fenilén-diamin-dihidroklorid és hidrogén-peroxid hozzáadása követ. A biotinilezett antitest kötés mennyiségi viszonyait jelző színreakciót a 495 nm hullámhosszon mért optikai sűrűség (O. D.) mérésével határozzuk meg.
Ahogyan az 1. ábrán is látszik, minden egyes esetben a biotinilezett anti-hVEGF antitest kötődését a megfelelő jelöletlen antitest gátolja, ezzel szemben az egyéb jelöletlen anti-hVEGF antitestek vagy anti-HGF antitestek ilyen gátlóhatást nem fejtenek ki. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy az A4. 6.1 és a B2.
6.2 hibridómák által termelt monoklonális antitestek a hVEGF-en belül különböző epitópokhoz kötődnek.
C) Izotipizálás
Az A4. 6.1 és B2. 6.2 hibridómák által termelt anti-hVEGF monoklonális antitestek izotípusait ELISA segítségével határozzuk meg. Az előzőleg hVEGF-fel bevont mikrotitrálólemezek mélyedéseihez az egyes hibridómák tenyésztéséhez használt tenyésztő tápközegek (felülúszó) mintáit adjuk hozzá. A megkötött anti-hVEGF monoklonális antitesteket különböző izotípusokra specifikus alkalikus foszfatázzal konjugált kecske antiegér immunglobulinokkal inkubáljuk, és a konjugált antitestek kötődését az anti-hVEGF monoklonális antitestekhez p-nitro-fenil-foszfát hozzáadásával határozzuk meg. A színreakciót 405 nanométeren mérjük egy ELISA lemez leolvasóval.
Ezzel a módszerrel mind az A4. 6.1, mind pedig a B2.6.2 hibridómák által termelt monoklonális antitestek izotípusairól megállapítjuk, hogy az lgG1 immunglobulin-csoportba tartoznak.
D) Kötési affinitás
Az A4. 6.1 és B2. 6.2 hibridómák által termelt anti-hVEGF monoklonális antitesteknek a hVEGF irányában mutatott affinitásait kompetitív kötési vizsgálatok segítségével határozzuk meg. A monoklonális antitesteket egy előre meghatározott szuboptimális koncentrációban adjuk hozzá a 20 000-40 000 cpm 125l-hVEGF- (1-2 ng) tartalmú mintákhoz, illetve különféle ismert mennyiségű jelöletlen hVEGF-et (1-1000 ng) tartalmazó mintákhoz. Szobahőmérsékleten tárolva 1 óra elteltével 100 pl kecske antiegér lg antiszérumot (Pel-Freez, Rogers, AR, USA) adunk hozzá, majd az ilyen módon kapott keveréket még további egy órán keresztül inkubáljuk szobahőmérsékleten. Az antitestből és megkötött fehérjéből álló komplexumokat (immunkomplexumokat) 500 μΙ 6%-os polietilénglikol (PEG; molekulatömeg: 8000) hozzáadásával kicsapjuk 4 °C-os hőmérsékleten. Ezt húsz percen keresztül tartó 2000*g centrifugálás követi 4 ’C-on. Az anti-hVEGF monoklonális antitestekhez kötött 125l-hVEGF mennyiségét minden egyes mintában az üledékbe vitt anyag aktivitásának gamma-számlálóval mért beütésszáma alapján határozzuk meg.
Az affinitási konstansokat a nyert adatokból Scatchard-analízissel számítjuk ki. Az A4. 6.1 hibridóma által termelt anti-hVEGF monoklonális antitestek affinitására a számítás szerint 1,2*109 liter/mól értéket kapunk. A számítások szerint a B2. 6.2 hibridóma által termelt monoklonális antitestek affinitása 2,5*109 liter/mólnak adódott.
E) A hVEGF mitogén aktivitás gátlása
Szarvasmarha mellékvesekéreg kapilláris endotél (ACE) sejteket [Ferrara, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 84:5773 (1987)] oltunk 104 sejt/ml sűrűségben 12 többmélyedéses lemezre, és mindegyik mélyedéshez 2,5 ng/ml hVEGF-et adunk az A4. 6.1 vagy B2. 6.2 hibridómák által termelt anti-hVEGF monoklonális antitestek, illetve egy irreleváns anti-HGF monoklonális antitestek, illetve egy irreleváns anti-HGF monoklonális antitest különféle koncentrációinak jelenlétében vagy azok hiányában, ötnapi tenyésztés után minden egyes mélyedésben egy Coulter számláló segítségével meghatározzuk a jelen levő sejtek számát. Kontrollként ACE sejteket tenyésztünk hozzáadott hVEGF nélkül.
Ahogyan ez a 2. ábrán látszik, mindkétfajta anti-hVEGF monoklonális antitest gátolja a hozzáadott hVEGF azon képességét, hogy elősegítse a szarvasmarha ACE sejtek növekedését vagy túlélését. Az A4.
6.1 hibridóma által termelt monoklonális antitest teljesen legátolja a hVEGF mitogén aktivitását (mintegy 90%-osnál nagyobb mértékű gátlás), miközben a B2.
6.2 hibridóma által előállított monoklonális antitest csupán részleges gátlóhatást fejt ki a hVEGF mitogén aktivitására.
F) A hVEGF kötés gátlása
Szarvasmarha ACE sejteket oltunk mélyedésenként 2,5* 104 sejt/0,5 ml/mélyedés sűrűségben 24 mélyedéses mikrotitrálólemezekre 10%-os borjúszérumot, 2 mmol/liter glutamint és 1 ng/ml bázikus fibroblaszt növekedési faktort tartalmazó Dulbecco-féle módosított Eagle tápközegben (DMEM; Dulbecco's Modified Eagle’s Médium). Egy éjszakán át tartó tenyésztés után a sejteket egyszer átmossuk kötőpufferral (egyenlő térfogatú DMEM és F12 tápközeg plusz 25 mmol/l HEPES és 1 % szarvasmarha-szérumalbumin) 4 ’C-on.
000 cpm mennyiségű 125l-hVEGF-et (kb. 5*104 cpm/ng/ml) előzetes inkubálásnak vetünk alá 30 percen keresztül 5 pg anti-hVEGF monoklonális antitesttel, amelyet az A4. 6.1, B2. 6.2 vagy A2. 6.1 hibridómákkal hozunk létre (250 μΙ teljes térfogattal), és ezt követően a keveréket hozzáadjuk a mikrotitrálólemezeken lévő szarvasmarha ACE sejtekhez. Miután a sejteket 4 ’C-on három órán keresztül inkubáltuk, ugyancsak 4 ’C-on három alkalommal átmossuk kötőpufferral, azután 0, 5 ml 0,2 n NaOH hozzáadásával oldatba visszük, és egy gamma-számláló segítségével mérjük a beütésszámot.
Ahogyan ezt a 3. ábra (felső) mutatja, az A4.
6.1 és B2. 6.2 hibridómák által termelt anti-hVEGF
HU 225 646 Β1 monoklonális antitestek gátolják a hVEGF kötődését a szarvasmarha ACE sejtekhez. Ezzel szemben az A2.
6.1 hibridóma által termelt hibridóma nem rendelkezik semmilyen érzékelhető hatással a hVEGF szarvasmarha ACE sejtekhez való kötődésének vonatkozásában. A fentebb leírt sejtproliferációs vizsgálat során nyert eredményekkel összhangban az A4. 6.1 hibridóma által előállított monoklonális antitest nagyobb mértékben gátolja a hVEGF kötődését, mint a B2. 6.2 hibridóma.
Ahogyan az a 3. (alsó) ábrán látszik, az A4.6.1 hibridóma által termelt monoklonális antitest a hVEGF szarvasmarha ACE sejtekhez való kötődését teljes mértékben gátolja a hVEGF-nek az antitesthez viszonyított 1:250 moláris aránya mellett.
G) Keresztreaktivitás egyéb VEGF-izoformákkal
Annak érdekében, hogy meghatározhassuk, hogy az A4. 6.1 hibridóma által termelt anti-hVEGF monoklonális antitest reagál-e a hVEGF 121 aminosavas és 189 aminosavas formáival, az antitestet megvizsgáljuk arra, hogy mennyire képes immunprecipitálni ezeket a polipeptideket.
Humán 293 sejteket a 121 aminosavas és a 189 aminosavas hVEGF-polipeptidek szekvenciáit kódoló nukleotidot tartalmazó vektorokkal transzfektálunk, ahogyan az le van írva a következő közleményben: Leung, et al., Science 246:1306 (1989). Két nappal a transzfekciót követően a sejteket átvisszük egy olyan tápközegbe, amely nem tartalmaz ciszteint és metionint. A sejteket 30 percen keresztül inkubáljuk ebben a tápközegben, azután mind 35S-metioninból, mind 35S-ciszteinből hozzáadunk 100 μθ/ml-t, és a sejteket tovább inkubáljuk két órán keresztül. A jelzést olyan módon követjük nyomon, hogy a sejteket áthelyezzük szérummentes tápközegbe és három órán keresztül inkubáljuk. A sejttenyésztő tápközegeket összegyűjtjük, és a sejteket egy lízispufferban [150 mmol/l nátrium-klorid, 1% NP40, 0,5% dezoxikolsav, 0,1% nátrium-dodecil-szulfát (SDS), 50 mmol/l Trls (pH 8,0)] 30 perces inkubálással lizáljuk. A sejttörmeléket 30 percen keresztül tartó 200xg centrifugálás segítségével távolítjuk el a lizátumokból.
A sejttenyésztő tápközegből és a sejtlizátumokból származó 500 mikroliteres mintákat 2 mikroliter A4.
6.1 hibridóma antitesttel (2,4 mg/ml) 1 órán keresztül 4 °C-on, azután ugyancsak 1 órán keresztül 4 °C-on inkubáljuk 5 mikroliter nyúl antiegér IgG immunglobulinnal. A 36S-izotóppal jelzett hVEGF és az antihVEGF monoklonális antitest immunkomplexeit A-fehérje Sepharose (Pharmacia) segítségével kicsapjuk, azután SDS-12% poliakrilamid-gélelektroforézisnek vetjük alá redukálókörülmények között. A gélt röntgenfilmre exponáljuk az immunprecipitált, radioaktív jelzéssel ellátott fehérjék autoradiográfiás analízise céljából.
Ennek az elemzésnek az eredményei azt mutatják, hogy az A4. 6.1 hibridóma által termelt anti-hVEGF monoklonális antitestek keresztreaktívak mind a 121 aminosavas, mind a 189 aminosavas hVEGF-változat vonatkozásában.
3. példa
A hVEGF-receptor-IgG fúziós protein előállítása
Az fit hVEGF-receptor nukleotid- és aminosav-kódolószekvenciálnak feltárása megtalálható a következő közleményben: Shibuya, ef al., Oncogene 5:519-524 (1990). Az fit hVEGF-receptor extracelluláris tartományának kódolószekvenciáját az emberi lgG1 nehézlánc-kódoló szekvenciájához fuzionáljuk egy kétlépcsős folyamat során.
Helyre irányuló mutagenezist használunk BstBI restrikciós hely bevezetésére az flt-t kódoló DNS-ben az fit 759. aminosava kodonjának 5’-helyén, és a pBSSKFC plazmid egyedi BstEII restrikciós helyének konvertálására egy BstBI hellyé, ahogyan azt a következő közlemény írja le: Bennett, ef al., J. Bioi. Chem. 266:23 060-23 067 (1991). A módosított plazmidot EcoRI és BstBI segítségével végzett emésztésnek vetjük alá, és a plazmid-DNS ennek eredményeképpen keletkezett nagyméretű fragmentumát összekapcsoljuk az fit hVEGF-receptor extracelluláris tartományát (1-758-as aminosavak) kódoló fit DNS EcoRI-BstBI fragmentumával.
Az ez által a folyamat által eredményezett konstrukciót Clal-gyel és Notl-gyel emésztjük abból a célból, hogy egy megközelítőleg 3,3 kb-os fragmentumot hozzunk létre, amelyet azután ligálás segítségével beillesztünk a pHEBO2 emlős expressziós vektor többszörös klónozási helyére (Leung, et al., Neuron 6:1045 (1992). A 3,3 kb-os fragmentum végeit például linkerek hozzáadásával módosítjuk abból a célból, hogy olyan módon illesszük be a fragmentumot a vektorba, hogy annak orientációja megfelelő legyen az expresszió vonatkozásában.
Az emlős gazdasejteket [például a CEN4 sejtek (Leung, et al., lásd fentebb)] elektroporáció segítségével transzfektáljuk az fit inzertet tartalmazó pHEBO2 plazmiddal. A transzfektált sejteket egy olyan tápközegben tenyésztjük, amelyik mintegy 10% fetális szarvasmarhaszérumot, 2 mmol/l glutamint, valamint antibiotikumokat tartalmaz, és mintegy 75%-os összefolyásnál áthelyezzük azt szérummentes tápközegbe. A tápközeget a begyűjtést megelőzőleg 3-4 napon keresztül kondicionáljuk, és az fit-IgG fúziós fehérje tisztítása a kondicionált tápközegből egy A-fehérje affinitás mátrixon végrehajtott kromatográfiás eljárás segítségével történik, lényegében a következő közleményben leírt módon: Bennett, et al., J. Bioi. Chem. 266:23 060-23 067 (1991).
4. példa
A daganatnövekedés gátlása hVEGF-antagonístákkal
Különféle tenyészetben növekvő emberi daganatsejtvonalakat vizsgálunk ELISA módszerrel a hVEGF-termelés vonatkozásában. Ez petefészek-, tüdő-, vastagbél-, gyomor-, emlő- és agydaganat-sejtvonalak esetében járt azzal az eredménnyel, miszerint hVEGF-et termelnek. A további tanulmányokhoz három hVEGF-et termelő sejtvonalat használunk, amelyek a következők: hVEGF, NEG55 (úgy is ismert, mint G55) (emberi gliomasejtvonal dr. Westphal M. anyagá12
HU 225 646 Β1 ból, Department of Neurosurgery, University Hospital Eppendor, Hamburg, Németország; maga a sejtvonal az előzőhöz hasonlóképpen ugyancsak olyan elnevezéssel is ismeretes, mint G55), A-673 [emberi rabdomioszarkóma-sejtvonal, beszerzése a The American Type Culture Collection (ATCC) anyagából történt, Rockville, Maryland, USA 20852, CRL 1598 számú sejtvonalként] és SK-LMS-1 (leiomioszarkóma-sejtvonal az ATCC anyagából, HTB 83 sejtvonalként).
Hattól tízhetesig terjedő életkorú nőstény Beige/szőrtelen egereknek (Charles River Laboratory, Wilmington, Massachusetts, USA) szubkután injekció formában 1-5*106 daganatsejtet alkalmazunk 100-200 μΙ PBSben. A daganatnövekedés beindítása után különböző időpontokban az egereknek hetente egyszer vagy kétszer intraperitoneálisan A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitestet, egy irreleváns anti-gp 120 monoklonális antitestet (5B6) vagy PBS-t fecskendezünk be. Minden héten mérjük a daganatok méreteit, és a vizsgálat befejezésekor a daganatokat kimetsszük és tömegüket mérjük.
A különböző mennyiségben adott A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitesteknek az NEG55 daganatokra egerek esetében gyakorolt hatása a 4. és
5. ábrán található. A 4. ábra bemutatja, hogy az NEG55 sejtek inokulálása után 1 héttel kezdődően 25 pg vagy 100 pg A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitestekkel kezelt egerek esetében a daganatnövekedés lényegesen csökkent sebességgel folyik, mint az összehasonlítás céljából akár irreleváns antitesttel, akár PBS-sel kezelt egerek esetében. Az 5. ábra bemutatja, hogy 5 héttel az NEG55 sejtek inokulálását követően az A4. 6.1 anti-hVEGF antitesttel kezelt egerek esetében a daganatok mérete mintegy 50%-tól (az antitest 25 pg-os dózisával kezelt egerek esetében) 85%-ig (az antitest 100 pg-os dózisával kezelt egerek esetében) terjedő nagyságrendű csökkenést mutatott, összehasonlítva az irreleváns antitesttel vagy PBS-sel kezelt egerek szervezetében megfigyelhető daganatokkal.
Az A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest kezelés SK-LMS-1 daganatok növekedésére gyakorolt hatása egerekben a 6. ábrán tanulmányozható, öt héttel az SK-LMS-1 sejtek inokulációja után az A4. 6.1 anti-hVEGF antitest kezelésében részesült egerek szervezetében található daganatok átlagos mérete mintegy 75%-kal volt kisebb annál, amit az irreleváns antitesttel vagy PBS-sel kezelt egerek esetében lehetett megfigyelni.
Az A4. 6.1 anti-hVEGF monoklonális antitest kezelés A673 daganatok növekedésére gyakorolt hatása egerekben a 7. ábrán tanulmányozható. Négy héttel az A673 sejtek inokulálását követően az A4. 6.1 anti-hVEGF antitesttel kezelt egerekben jelen lévő daganatok átlagos mérete mintegy 60%-tól (az antitest 10 pg-os dózisaival kezelt egerek esetében) 90%-ot meghaladó (az antitest 50-400 pg-os dózisaival kezelt egerek esetében) mértékben volt kisebb, mint az irreleváns antitesttel vagy PBS-sel végzett kezelésben részesült egerek esetében.
5. példa
Az anti-hVEGF ellenanyag tenyészetben megfigyelhető daganatsejt-növekedésre gyakorolt közvetlen hatásának elemzése
NEG55 humán glioblasztómasejteket vagy A673 rabdomioszarkómasejteket oltunk 7*103 sejt/mélyedés sűrűségében többmélyedéses lemezekre (12 mélyedés/lemez) F12/DMEM tápközegben, amely 10% borjúembrió-szérumot, 2 mmol/l glutamint, valamint antibiotikumokat tartalmaz. Ezután olyan módon adunk anti-hVEGF ellenanyagot a sejttenyészetekhez, hogy a végső koncentráció 0-20 pg antitest/ml legyen. Öt nap elteltével a mélyedésekben növekvő sejteket tripszinnek kitéve disszociáltatjuk, és egy Coulter számláló segítségével számszerű meghatározást végzünk.
A 8. és a 9. ábrán láthatók a szóban forgó vizsgálatok eredményei. Amint az nyilvánvalónak látszik, az A4. 6.1 anti-hVEGF antitest nem rendelkezik semmilyen jelentősebb mértékű hatással az NEG55 vagy A673 sejtek növekedésére a tenyészetben. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy az A4. 6.1 anti-hVEGF antitest nem citotoxikus, és határozottan azt a következtetést sugallják, hogy az antitest megfigyelt daganatellenes hatásai a VEGF által közvetített neurovaszkularizációt gátló hatásra vezethetők vissza.
6. példa
Az anti-hVEGF ellenanyag hatása az endoteliális sejtek kemotaxisára
Az endoteliális sejtek és az olyan egyéb sejtek, amelyek közé tartoznak a monociták és a limfociták is, kemotaxisa jelentős szerepet tölt be a reumatoid ízületi gyulladás patogenezisében. Az endoteliális sejtek migrációja és proliferációja társul ahhoz az angiogenezishez, amelyik a reumatoid szinoviumban fordul elő. A beereződött szövet (pannus) behatol az Ízületi porc állományába és pusztító hatást fejt ki.
Annak a kérdésnek az eldöntése céljából, hogy vajon a hVEGF-antagonisták képesek-e akadályt gördíteni ez elé a folyamat elé, megvizsgáljuk az A4. 6.1 anti-hVEGF antitest hatását reumatoid ízületi gyulladásban szenvedő betegekből nyert ízületi folyadék által stimulált endoteliális sejt kemotaxisra. Kontrollként vizsgáljuk az A4. 6.1 anti-hVEGF antitestnek az oszteoartritiszben szenvedő betegekből nyert ízületi nedv által stimulált endoteliális sejt kemotaxisra gyakorolt hatását is (a reumatoid ízületi gyulladásban előforduló angiogenezis oszteoartritiszben nem lép fel).
Az endoteliális sejt kemotaxist módosított Boyden-kamrák felhasználásával vizsgáljuk az adott szakterületen elfogadott és bevált eljárásmódok szerint [Thompson, ef al., Cancer Rés. 51:2670 (1991); Phillips, etal., Proc. Exp. Bioi. Med. 197:458 (1991)]. Mintegy 104 humán köldökzsinórvénából származó endoteliális sejtet hagyunk feltapadni zselatinnal bevont szűrőkhöz (0,8 mikronos pórusméret) 48 mélyedéses többmélyedéses mikrokamrákban olyan tápközegekben, amely 0,1% borjúembrió-szérumot tartalmaz. Mintegy 2 óra elteltével a kamrákat megfordítjuk, és
HU 225 646 Β1 tesztmintákat [reumatoid ízületi gyulladásban keletkezett szinoviális folyadék, oszteoartritiszben keletkezett szinoviális folyadék, bázikus FGF (bFGF) (1 pg/ml végső koncentrációban) vagy PBS] és A4. 6.1 anti-hVEGF ellenanyagot (10 pg/ml végső koncentrációban) adunk a mélyedésekhez. Kettőtől négy óráig terjedő időtartam elteltével az elvándorolt sejteket megfestjük és megszámláljuk.
A 10. ábra mutatja be a szóban forgó vizsgálatok átlagolt eredményeit. A „szinoviális folyadék” jelzéssel ellátott oszlopban mutatott értékek és az oldal alján a kontrollok vonatkozásában bemutatott értékek azon endoteliális sejtek átlagos számának felelnek meg, amelyek szinoviális folyadék, bFGF vagy önmagában alkalmazott PBS jelenlétében elvándorolnak. A „szinoviális folyadék+mAB VEGF” felirattal megjelölt oszlopban szereplő értékek azon endoteliális sejtek átlagos számának felelnek meg, amelyek szinoviális folyadék+hozzáadott A4. 6.1 anti-hVEGF antitest jelenlétében vándorolnak. A „% visszaszorítás jelzéssel ellátott oszlop jelzi az anti-hVEGF antitest hozzáadása által eredményezett százalékos csökkenést a folyadék indukálta endoteliális sejtvándorlásban. Ahogyan jelezzük, az anti-hVEGF antitest szignifikánsan gátolja a reumatoid ízületi gyulladásból származó szinoviális folyadék endoteliális sejtvándorlást kiváltó képességét (53, 40 átlagos százalékos gátlás), de az oszteoartritiszes szinoviális folyadék (13, 64 átlagos százalékos gátlás) képességét nem.
Claims (18)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. hVEGF-antagonista, amely egy izolált hVEGF-receptor, alkalmazása tumor kezelésére való gyógyszer készítésére.
- 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a transzmembrán- és citoplazmás domének ki vannak iktatva a receptorból.
- 3. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az izolált hVEGF-receptor egy hVEGF-receptor extracelluláris doménje.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-receptor az fit receptor.
- 5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-receptor a KDR receptor.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-antagonistát olyan mennyiségben alkalmazzák, amely elegendő egy tumor méretének csökkentésére.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a tumor egy szilárd, rosszindulatú tumor.
- 8. A 6. vagy 7. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-receptor csökkenti a tumor méretét a VGF által közvetített új érképződés (neovaszkularizáció) gátlása révén.
- 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-receptor fuzionálva van egy hordozópolipeptidhez.
- 10. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a hordozópolipeptid egy immunglobulin-polipeptid.
- 11. A 10. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az immunglobulin IgG.
- 12. A 11. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-antagonista egy fit—IgG fúziós fehérje.
- 13. Az 1-12. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-antagonista hozzá van kapcsolva egy citotoxikus részhez.
- 14. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a citotoxikus rész egy fehérjecitotoxin.
- 15. Az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a hVEGF-receptor konjugálva van egy nem fehérje jellegű polimerrel.
- 16. A 14. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a polimer valamilyen polietilénglikol.
- 17. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer olyan módon van kiszerelve, amely lehetővé teszi, hogy ez bevezethető legyen sorozatosan vagy kombinálva más szerrel rák kezeléséhez.
- 18. Az 1-17. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer olyan módon van kiszerelve, amely lehetővé teszi, hogy ez bevezethető legyen sorozatosan vagy kombinálva radiológiai kezeléssel.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/US1992/009218 WO1994010202A1 (en) | 1992-10-28 | 1992-10-28 | Vascular endothelial cell growth factor antagonists |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU0102070D0 HU0102070D0 (en) | 2001-07-30 |
HU225646B1 true HU225646B1 (en) | 2007-05-29 |
Family
ID=44652081
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9501201A HU221343B1 (en) | 1992-10-28 | 1992-10-28 | Use of anti-vegf antibodies for the treatment of cancer |
HU0102070A HU225646B1 (en) | 1992-10-28 | 1992-10-28 | Hvegf receptors as vascular endothelial cell growth factor antagonists |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9501201A HU221343B1 (en) | 1992-10-28 | 1992-10-28 | Use of anti-vegf antibodies for the treatment of cancer |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
EP (4) | EP0666868B2 (hu) |
JP (1) | JP3398382B2 (hu) |
KR (1) | KR100335584B1 (hu) |
AT (4) | ATE498632T1 (hu) |
AU (1) | AU687727B2 (hu) |
BG (1) | BG99605A (hu) |
BR (1) | BR9207175A (hu) |
CA (1) | CA2145985C (hu) |
CZ (1) | CZ291047B6 (hu) |
DE (3) | DE69233739D1 (hu) |
DK (4) | DK1167384T3 (hu) |
ES (4) | ES2360641T3 (hu) |
FI (1) | FI951987A (hu) |
HU (2) | HU221343B1 (hu) |
NO (1) | NO321825B1 (hu) |
RO (1) | RO119721B1 (hu) |
SK (1) | SK285035B6 (hu) |
WO (1) | WO1994010202A1 (hu) |
Families Citing this family (401)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5776093A (en) | 1985-07-05 | 1998-07-07 | Immunomedics, Inc. | Method for imaging and treating organs and tissues |
US6168778B1 (en) | 1990-06-11 | 2001-01-02 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Vascular endothelial growth factor (VEGF) Nucleic Acid Ligand Complexes |
US6582959B2 (en) | 1991-03-29 | 2003-06-24 | Genentech, Inc. | Antibodies to vascular endothelial cell growth factor |
US6762290B1 (en) | 1999-07-29 | 2004-07-13 | Gilead Sciences, Inc. | High affinity vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor nucleic acid ligands and inhibitors |
CA2131528C (en) * | 1992-03-05 | 2004-07-13 | Philip E. Thorpe | Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors |
US5965132A (en) * | 1992-03-05 | 1999-10-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors |
US5877289A (en) * | 1992-03-05 | 1999-03-02 | The Scripps Research Institute | Tissue factor compositions and ligands for the specific coagulation of vasculature |
US6093399A (en) * | 1992-03-05 | 2000-07-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the specific coagulation of vasculature |
US5660827A (en) * | 1992-03-05 | 1997-08-26 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibodies that bind to endoglin |
US6004555A (en) * | 1992-03-05 | 1999-12-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for the specific coagulation of vasculature |
US6036955A (en) * | 1992-03-05 | 2000-03-14 | The Scripps Research Institute | Kits and methods for the specific coagulation of vasculature |
US6749853B1 (en) | 1992-03-05 | 2004-06-15 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Combined methods and compositions for coagulation and tumor treatment |
US6824777B1 (en) | 1992-10-09 | 2004-11-30 | Licentia Ltd. | Flt4 (VEGFR-3) as a target for tumor imaging and anti-tumor therapy |
US5776755A (en) * | 1992-10-09 | 1998-07-07 | Helsinki University Licensing, Ltd. | FLT4, a receptor tyrosine kinase |
US6107046A (en) * | 1992-10-09 | 2000-08-22 | Orion Corporation | Antibodies to Flt4, a receptor tyrosine kinase and uses thereof |
US5981569A (en) * | 1992-11-13 | 1999-11-09 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Substituted phenylacrylonitrile compounds and compositions thereof for the treatment of disease |
US5763441A (en) * | 1992-11-13 | 1998-06-09 | Sugen, Inc. | Compounds for the treatment of disorders related to vasculogenesis and/or angiogenesis |
US5712395A (en) * | 1992-11-13 | 1998-01-27 | Yissum Research Development Corp. | Compounds for the treatment of disorders related to vasculogenesis and/or angiogenesis |
US5792771A (en) * | 1992-11-13 | 1998-08-11 | Sugen, Inc. | Quinazoline compounds and compositions thereof for the treatment of disease |
US6177401B1 (en) | 1992-11-13 | 2001-01-23 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften | Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis |
CA2158745C (en) | 1993-03-25 | 2007-06-19 | Richard L. Kendall | Inhibitor of vascular endothelial cell growth factor |
US6306829B1 (en) | 1995-12-08 | 2001-10-23 | Hybridon, Inc. | Modified VEGF oligonucleotides for treatment of skin disorders |
US5731294A (en) * | 1993-07-27 | 1998-03-24 | Hybridon, Inc. | Inhibition of neovasularization using VEGF-specific oligonucleotides |
WO1995006131A1 (en) * | 1993-08-23 | 1995-03-02 | Monash University | A method for the assay, prophylaxis and/or treatment of human disease conditions |
AUPM379394A0 (en) * | 1994-02-10 | 1994-03-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Immunointeractive molecules - i |
US5861499A (en) | 1994-02-10 | 1999-01-19 | Imclone Systems Incorporated | Nucleic acid molecules encoding the variable or hypervariable region of a monoclonal antibody that binds to an extracellular domain |
US5840301A (en) * | 1994-02-10 | 1998-11-24 | Imclone Systems Incorporated | Methods of use of chimerized, humanized, and single chain antibodies specific to VEGF receptors |
US6811779B2 (en) | 1994-02-10 | 2004-11-02 | Imclone Systems Incorporated | Methods for reducing tumor growth with VEGF receptor antibody combined with radiation and chemotherapy |
US6448077B1 (en) * | 1994-02-10 | 2002-09-10 | Imclone Systems, Inc. | Chimeric and humanized monoclonal antibodies specific to VEGF receptors |
GB9410533D0 (en) * | 1994-05-26 | 1994-07-13 | Lynxvale Ltd | In situ hybridisation and immuno-Chemical localisation of a growth factor |
ATE326484T1 (de) * | 1994-06-09 | 2006-06-15 | Licensing Oy | Monoklonaler antikörper gegen flt4-rezeptor- tyrosinkinase und dessen verwendung zur diagnose und therapie |
WO1996006641A1 (en) * | 1994-08-29 | 1996-03-07 | Prizm Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of vascular endothelial growth factor with targeted agents |
EP1353952B1 (en) | 1994-11-14 | 2007-04-11 | Ludwig Institute For Cancer Research | Flt4(vegfr-3) as a target for tumor imaging and anti-tumor therapy |
EP0854185A3 (en) * | 1994-12-23 | 1998-10-21 | Ludwig Institute For Cancer Research | Assay receptor proteins and ligands |
IL117645A (en) * | 1995-03-30 | 2005-08-31 | Genentech Inc | Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration |
US6316635B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-11-13 | Sugen, Inc. | 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity |
US5650415A (en) * | 1995-06-07 | 1997-07-22 | Sugen, Inc. | Quinoline compounds |
US6906093B2 (en) | 1995-06-07 | 2005-06-14 | Sugen, Inc. | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease |
DE69618587T2 (de) * | 1995-06-07 | 2002-08-29 | Sugen, Inc. | Chinazoline und pharmazeutische zusammensetzungen |
US5880141A (en) * | 1995-06-07 | 1999-03-09 | Sugen, Inc. | Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease |
US5710173A (en) * | 1995-06-07 | 1998-01-20 | Sugen, Inc. | Thienyl compounds for inhibition of cell proliferative disorders |
US5773459A (en) * | 1995-06-07 | 1998-06-30 | Sugen, Inc. | Urea- and thiourea-type compounds |
WO1996040629A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Sugen, Inc. | Tyrphostin-like compounds for the treatment of cell proliferative disorders or cell differentiation disorders |
US6147106A (en) | 1997-08-20 | 2000-11-14 | Sugen, Inc. | Indolinone combinatorial libraries and related products and methods for the treatment of disease |
WO1997000957A1 (en) * | 1995-06-23 | 1997-01-09 | President And Fellows Of Harvard College | Transcriptional regulation of genes encoding vascular endothelial growth factor receptors |
US5888765A (en) * | 1995-06-23 | 1999-03-30 | President And Fellows Of Harvard College | Endothelial-cell specific promoter |
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
US5730977A (en) * | 1995-08-21 | 1998-03-24 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Anti-VEGF human monoclonal antibody |
DE69628652T3 (de) | 1995-09-08 | 2012-05-03 | Genentech, Inc. | Vegf-verwandtes protein |
JPH09154588A (ja) | 1995-10-07 | 1997-06-17 | Toagosei Co Ltd | Vegf結合性ポリペプチド |
US5942385A (en) * | 1996-03-21 | 1999-08-24 | Sugen, Inc. | Method for molecular diagnosis of tumor angiogenesis and metastasis |
US6030955A (en) * | 1996-03-21 | 2000-02-29 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York And Imclone Systems, Inc. | Methods of affecting intracellular phosphorylation of tyrosine using phosphorothioate oligonucleotides, and antiangiogenic and antiproliferative uses thereof |
US6696448B2 (en) | 1996-06-05 | 2004-02-24 | Sugen, Inc. | 3-(piperazinylbenzylidenyl)-2-indolinone compounds and derivatives as protein tyrosine kinase inhibitors |
DE69733204T3 (de) | 1996-07-15 | 2012-03-08 | Chugai Seiyaku K.K. | Neuartige vegf-ähnliche faktoren |
US6426335B1 (en) | 1997-10-17 | 2002-07-30 | Gilead Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor (VEGF) nucleic acid ligand complexes |
US6051698A (en) * | 1997-06-06 | 2000-04-18 | Janjic; Nebojsa | Vascular endothelial growth factor (VEGF) nucleic acid ligand complexes |
WO1998028006A1 (en) * | 1996-12-23 | 1998-07-02 | Cambridge University Technical Services Limited | Diagnosis and treatment of pathological pregnancies |
JP3837748B2 (ja) | 1997-01-17 | 2006-10-25 | 東亞合成株式会社 | Vegf結合性ポリペプチド |
JP2002514201A (ja) | 1997-01-22 | 2002-05-14 | ボード オブ リージェンツ,ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | 凝固および腫瘍の処置のための組織因子の方法および組成物 |
US5981508A (en) * | 1997-01-29 | 1999-11-09 | Vanderbilt University | Facilitation of repair of neural injury with CM101/GBS toxin |
US6670337B1 (en) | 1998-01-29 | 2003-12-30 | Yeda Reaearch And Development Co., Ltd. | Facilitation of wound healing with CM101/GBS toxin |
US5858991A (en) * | 1997-01-29 | 1999-01-12 | Vanderbilt University | Facilitation of wound healing with CM101/GBS toxin |
US6028060A (en) | 1997-01-29 | 2000-02-22 | Vanderbilt University | Treatment of chronic inflammatory diseases with CM101/GBS toxin |
US7122636B1 (en) * | 1997-02-21 | 2006-10-17 | Genentech, Inc. | Antibody fragment-polymer conjugates and uses of same |
US7365166B2 (en) | 1997-04-07 | 2008-04-29 | Genentech, Inc. | Anti-VEGF antibodies |
PT1325932E (pt) | 1997-04-07 | 2005-06-30 | Genentech Inc | Anticorpos anti-vegf |
US20020032315A1 (en) | 1997-08-06 | 2002-03-14 | Manuel Baca | Anti-vegf antibodies |
WO1998045332A2 (en) * | 1997-04-07 | 1998-10-15 | Genentech, Inc. | Humanized antibodies and methods for forming humanized antibodies |
US6884879B1 (en) * | 1997-04-07 | 2005-04-26 | Genentech, Inc. | Anti-VEGF antibodies |
US6316429B1 (en) | 1997-05-07 | 2001-11-13 | Sugen, Inc. | Bicyclic protein kinase inhibitors |
US6486185B1 (en) | 1997-05-07 | 2002-11-26 | Sugen, Inc. | 3-heteroarylidene-2-indolinone protein kinase inhibitors |
AU7345798A (en) * | 1997-05-12 | 1998-12-08 | Kennedy Institute Of Rheumatology, The | Suppression of tumor necrosis factor alpha and vascular endothelial growth factor in therapy |
US6987113B2 (en) | 1997-06-11 | 2006-01-17 | Sugen, Inc. | Tyrosine kinase inhibitors |
US6313158B1 (en) | 1997-06-20 | 2001-11-06 | Sugen, Inc. | Bioavailability of 3-heteroarylidenyl-2-indolinones active as protein tyrosine kinase inhibitors |
US6114371A (en) * | 1997-06-20 | 2000-09-05 | Sugen, Inc. | 3-(cyclohexanoheteroarylidenyl)-2-indolinone protein tyrosine kinase inhibitors |
US6051593A (en) | 1997-06-20 | 2000-04-18 | Sugen, Inc. | 3-(cycloalkanoheteroarylidenyl)-2- indolinone protein tyrosine kinase inhibitors |
US6130238A (en) * | 1997-06-20 | 2000-10-10 | Sugen, Inc. | 3-(cyclohexanoheteroarylidenyl)-2-indolinone protein tyrosine kinase inhibitors |
US6329375B1 (en) | 1997-08-05 | 2001-12-11 | Sugen, Inc. | Tricyclic quinoxaline derivatives as protein tyrosine kinase inhibitors |
JPH1180024A (ja) * | 1997-09-12 | 1999-03-23 | Toagosei Co Ltd | 角膜血管新生阻害剤 |
US6133305A (en) | 1997-09-26 | 2000-10-17 | Sugen, Inc. | 3-(substituted)-2-indolinones compounds and use thereof as inhibitors of protein kinase activity |
DE19744531A1 (de) * | 1997-10-09 | 1999-05-27 | Klaus Dr Rer Nat Bosslet | Bindemoleküle gegen Rezeptor-Ligand-Komplexe |
US6225346B1 (en) | 1997-10-24 | 2001-05-01 | Sugen, Inc. | Tyrphostin like compounds |
US6531502B1 (en) | 1998-01-21 | 2003-03-11 | Sugen, Inc. | 3-Methylidenyl-2-indolinone modulators of protein kinase |
DK1064382T3 (da) * | 1998-03-17 | 2008-12-08 | Genentech Inc | Homologe polypeptider til VEGF og BMP1 |
EP2311495B1 (en) | 1998-03-24 | 2014-09-24 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Vascularization inhibitors |
US6514981B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-02-04 | Sugen, Inc. | Methods of modulating tyrosine protein kinase function with indolinone compounds |
US6887674B1 (en) | 1998-04-13 | 2005-05-03 | California Institute Of Technology | Artery- and vein-specific proteins and uses therefor |
US6864227B1 (en) | 1998-04-13 | 2005-03-08 | California Institute Of Technology | Artery-and vein-specific proteins and uses therefor |
EP2020408B1 (en) | 1998-05-29 | 2013-06-26 | Sugen, Inc. | Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitor |
JP2002523455A (ja) | 1998-08-31 | 2002-07-30 | スージェン・インコーポレーテッド | 蛋白質キナーゼ活性の調節剤としての幾何学的に制限された2−インドリノン誘導体 |
DE69928411D1 (de) | 1998-09-08 | 2005-12-22 | Agouron Pharma | Modifikationen des vegf-rezeptor-2 proteins und verfahren zu seiner verwendung |
US6680335B2 (en) | 1998-09-28 | 2004-01-20 | Sugen, Inc. | Methods of modulating protein tyrosine kinase function with substituted indolinone compounds |
AU1103900A (en) | 1998-10-07 | 2000-04-26 | Stryker Corporation | Modified tgf-beta superfamily proteins |
AU774266B2 (en) | 1998-10-09 | 2004-06-24 | Vegenics Limited | Flt4 (VEGFR-3) as a target for tumor imaging and anti-tumor therapy |
CA2355976C (en) | 1998-12-22 | 2012-07-17 | Genentech, Inc. | Vascular endothelial cell growth factor antagonists and uses thereof |
US6689806B1 (en) | 1999-03-24 | 2004-02-10 | Sugen, Inc. | Indolinone compounds as kinase inhibitors |
JP4926320B2 (ja) | 1999-04-28 | 2012-05-09 | ボード・オブ・リージエンツ,ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | Vegfの選択的阻害による癌処置のための組成物および方法 |
US6703020B1 (en) | 1999-04-28 | 2004-03-09 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF |
IT1306704B1 (it) * | 1999-05-26 | 2001-10-02 | Sirs Societa Italiana Per La R | Anticorpi monoclonali e suoi derivati sintetici o biotecnologici ingrado di agire come molecole antagoniste per il ngf. |
ATE410685T1 (de) * | 1999-06-17 | 2008-10-15 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Diagnostikum und heilmittel für krankheiten unter teilnahme von makrozyten/makrophagen |
US6921763B2 (en) | 1999-09-17 | 2005-07-26 | Abbott Laboratories | Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents |
US6878733B1 (en) | 1999-11-24 | 2005-04-12 | Sugen, Inc. | Formulations for pharmaceutical agents ionizable as free acids or free bases |
DK1255536T3 (da) | 1999-12-22 | 2006-10-30 | Sugen Inc | Indolinonderivater til modulation af c-kit-tyrosinproteinkinase |
KR20020084116A (ko) | 2000-02-07 | 2002-11-04 | 애보트 게엠베하 운트 콤파니 카게 | 2-벤조티아졸릴 우레아 유도체 및 이의 단백질 키나제억제제로서의 용도 |
EP2286843A3 (en) | 2000-06-02 | 2011-08-03 | Bracco Suisse SA | Compounds for targeting endothelial cells |
US8263739B2 (en) | 2000-06-02 | 2012-09-11 | Bracco Suisse Sa | Compounds for targeting endothelial cells, compositions containing the same and methods for their use |
US6726918B1 (en) | 2000-07-05 | 2004-04-27 | Oculex Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating inflammation-mediated conditions of the eye |
US7175844B2 (en) | 2000-07-18 | 2007-02-13 | Joslin Diabetes Center, Inc. | Methods of modulating fibrosis |
ES2250504T3 (es) | 2000-11-29 | 2006-04-16 | Allergan Inc. | Prevencion del rechazo de injerto en el ojo. |
PT2762140T (pt) | 2001-02-19 | 2017-07-04 | Novartis Ag | Resumo |
MXPA03008560A (es) | 2001-03-22 | 2004-06-30 | Abbot Gmbh & Co Kg | Pirazolopirimidinas como agentes terapeuticos. |
MXPA03010401A (es) | 2001-05-16 | 2004-03-09 | Novartis Ag | Combinacion que comprende n-[5-[4- (4-metil- piperazino-metil) -benzoilamido] -2-metilfenil] -4-(3-piridil)-2 -pirimidin-amina, y un agente quimioterapeutico. |
DE60233509D1 (de) | 2001-06-20 | 2009-10-08 | Fibron Ltd | Fgfr3 blockierende antikörper, verfahren zum screening darauf und verwendungen davon |
TWI315982B (en) | 2001-07-19 | 2009-10-21 | Novartis Ag | Combinations comprising epothilones and pharmaceutical uses thereof |
EP1430048A1 (en) | 2001-09-27 | 2004-06-23 | Allergan, Inc. | 3-(arylamino)methylene-1, 3-dihydro-2h-indol-2-ones as kinase inhibitors |
US6559173B1 (en) | 2001-09-27 | 2003-05-06 | Allergan, Inc. | 3-(heteroarylamino)methylene-1,3-dihydro-2H-indol-2-ones as kinase inhibitors |
US20050123925A1 (en) | 2002-11-15 | 2005-06-09 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
US7211240B2 (en) | 2002-03-01 | 2007-05-01 | Bracco International B.V. | Multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications |
US7985402B2 (en) | 2002-03-01 | 2011-07-26 | Bracco Suisse Sa | Targeting vector-phospholipid conjugates |
US8623822B2 (en) | 2002-03-01 | 2014-01-07 | Bracco Suisse Sa | KDR and VEGF/KDR binding peptides and their use in diagnosis and therapy |
CA2513044A1 (en) | 2002-03-01 | 2004-08-05 | Dyax Corp. | Kdr and vegf/kdr binding peptides and their use in diagnosis and therapy |
US7261876B2 (en) | 2002-03-01 | 2007-08-28 | Bracco International Bv | Multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications |
US7666979B2 (en) | 2002-03-01 | 2010-02-23 | Bracco International B.V. | Methods for preparing multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications and methods of preparing the same |
US7794693B2 (en) | 2002-03-01 | 2010-09-14 | Bracco International B.V. | Targeting vector-phospholipid conjugates |
GB0206215D0 (en) | 2002-03-15 | 2002-05-01 | Novartis Ag | Organic compounds |
US6541504B1 (en) | 2002-04-03 | 2003-04-01 | Allergan Sales, Llc | (3Z)-3-(2,3-dihydro-1H-inden-1-ylidene)-1,3-dihydro-2H-indol-2-ones as kinase inhibitors |
DE60324416D1 (de) | 2002-05-16 | 2008-12-11 | Novartis Ag | Verwendung von edg rezeptor bindenden wirkstoffen für die krebstherapie |
US7696320B2 (en) | 2004-08-24 | 2010-04-13 | Domantis Limited | Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor |
ATE514717T1 (de) | 2002-07-18 | 2011-07-15 | Merus B V | Rekombinante produktion von antikörpermischungen |
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
AU2003297282A1 (en) | 2002-11-14 | 2004-06-15 | Cornell Research Foundation, Inc. | Protection of cardiac myocardium |
US6747025B1 (en) | 2002-11-27 | 2004-06-08 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors for the treatment of disease |
US6699863B1 (en) | 2002-11-27 | 2004-03-02 | Allergan, Inc. | Kinase inhibitors for the treatment of disease |
CU23204A1 (es) * | 2002-12-27 | 2007-05-18 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Combinaciones de factores reguladores del crecimiento y hormonas para el tratamiento de neoplasias |
US20050048099A1 (en) | 2003-01-09 | 2005-03-03 | Allergan, Inc. | Ocular implant made by a double extrusion process |
RS53118B (en) | 2003-02-26 | 2014-06-30 | Sugen Inc. | AMINOHETEROARYL UNITS AS PROTEIN KINASE INHIBITORS |
ES2557286T3 (es) | 2003-03-03 | 2016-01-25 | Dyax Corp. | Usos de péptidos que se unen específicamente al receptor del HGF (cMet) |
US7381410B2 (en) | 2003-03-12 | 2008-06-03 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Polypeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
JP2006521111A (ja) | 2003-03-12 | 2006-09-21 | バスジーン セラピューティクス, インコーポレイテッド | 血管形成及び腫瘍増殖阻害用ポリペプチド化合物及びその応用 |
SI1615646T2 (sl) | 2003-04-08 | 2022-11-30 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | Farmacevtske formulacije vsebujoče metilnatrekson |
US7417065B2 (en) | 2003-05-19 | 2008-08-26 | Irm Llc | Immunosuppressant compounds and compositions |
MY150088A (en) | 2003-05-19 | 2013-11-29 | Irm Llc | Immunosuppressant compounds and compositions |
WO2004106375A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Merus Biopharmaceuticals B.V. I.O. | Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs |
US20100069614A1 (en) | 2008-06-27 | 2010-03-18 | Merus B.V. | Antibody producing non-human mammals |
KR20180014881A (ko) | 2003-05-30 | 2018-02-09 | 제넨테크, 인크. | 항-vegf 항체를 사용한 치료 |
EP1638600A4 (en) | 2003-06-09 | 2008-06-11 | Samuel Waksal | PROCESS FOR INHIBITING RECEPTOR TYROSINE KINASES WITH AN EXTRACELLULAR ANTAGONIST AND AN INTRA CELLULAR ANTAGONIST |
CA2534509A1 (en) | 2003-08-06 | 2005-02-24 | Sugen, Inc. | Geometrically restricted 3-cyclopentylidene-1,3-dihydroindol-2-ones as potent protein kinase inhibitors |
GB0320238D0 (en) * | 2003-08-29 | 2003-10-01 | Medical Res Council | Treatment of disease |
WO2005046602A2 (en) * | 2003-11-10 | 2005-05-26 | Greenville Hospital System | Vegf receptor antagonists |
KR20070034465A (ko) | 2004-03-12 | 2007-03-28 | 바스진 테라퓨틱스, 인크. | 혈관형성 및 종양 성장을 억제하기 위한 폴리펩티드 화합물 |
AU2005224081B2 (en) | 2004-03-12 | 2011-06-30 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Polypeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
US8685435B2 (en) | 2004-04-30 | 2014-04-01 | Allergan, Inc. | Extended release biodegradable ocular implants |
US20050244469A1 (en) | 2004-04-30 | 2005-11-03 | Allergan, Inc. | Extended therapeutic effect ocular implant treatments |
JP2008500830A (ja) | 2004-06-01 | 2008-01-17 | ドマンティス リミテッド | 増加した血清半減期を有する二重特異性融合抗体 |
GB0512324D0 (en) | 2005-06-16 | 2005-07-27 | Novartis Ag | Organic compounds |
US8604185B2 (en) | 2004-07-20 | 2013-12-10 | Genentech, Inc. | Inhibitors of angiopoietin-like 4 protein, combinations, and their use |
EP2361931B1 (en) | 2004-07-20 | 2017-12-06 | Genentech, Inc. | Inhibitors of angiopoietin-like 4 protein, combinations, and their use |
EP1804835B9 (en) | 2004-09-13 | 2010-09-29 | Genzyme Corporation | Multimeric constructs |
CA2581423A1 (en) | 2004-09-23 | 2006-03-30 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Polipeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
EP2319492A3 (en) | 2004-10-21 | 2011-08-10 | Genentech, Inc. | Method for treating intraocular neovascular diseases |
SI1819358T1 (sl) | 2004-11-18 | 2014-10-30 | Imclone Llc | Protitelesa proti receptorju 1 za vaskularni endotelijski rastni dejavnik (vegfr-1) |
US20080161251A1 (en) | 2005-01-21 | 2008-07-03 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical Compounds |
US8524731B2 (en) | 2005-03-07 | 2013-09-03 | The University Of Chicago | Use of opioid antagonists to attenuate endothelial cell proliferation and migration |
US9662325B2 (en) | 2005-03-07 | 2017-05-30 | The University Of Chicago | Use of opioid antagonists to attenuate endothelial cell proliferation and migration |
CN104248763A (zh) | 2005-03-07 | 2014-12-31 | 芝加哥大学 | 阿片样物质拮抗剂用于减少内皮细胞增殖和迁移的用途 |
US8518962B2 (en) | 2005-03-07 | 2013-08-27 | The University Of Chicago | Use of opioid antagonists |
GB0510390D0 (en) | 2005-05-20 | 2005-06-29 | Novartis Ag | Organic compounds |
AR057325A1 (es) | 2005-05-25 | 2007-11-28 | Progenics Pharm Inc | Sintesis de (s)-n-metilnaltrexona, composiciones farmaceuticas y usos |
AR057035A1 (es) | 2005-05-25 | 2007-11-14 | Progenics Pharm Inc | SíNTESIS DE (R)-N-METILNALTREXONA, COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y USOS |
EP1996550A2 (en) | 2005-09-27 | 2008-12-03 | Novartis AG | Carboxyamine compounds and their use in the treatment of hdac dependent diseases |
CA2933875C (en) | 2005-11-21 | 2018-06-26 | Novartis Ag | 40-o-(2-hydroxyethyl)-rapamycin for use as a sole drug substance in the treatment of carcinoid tumors arising from the foregut, midgut, or hindgut |
DK1973950T3 (en) | 2006-01-05 | 2014-12-15 | Genentech Inc | ANTI-EphB4 ANTIBODIES AND METHODS FOR USING SAME |
JO2660B1 (en) | 2006-01-20 | 2012-06-17 | نوفارتيس ايه جي | Pi-3 inhibitors and methods of use |
US8367664B2 (en) | 2006-01-24 | 2013-02-05 | Allergan, Inc. | Substituted 3-(5-membered unsaturated heterocyclyl-1, 3-dihydro-indol-2-one's and derivatives thereof as kinase inhibitors |
US7977351B2 (en) | 2006-03-22 | 2011-07-12 | Allergan, Inc. | Heteroaryl dihydroindolones as kinase inhibitors |
TW200812615A (en) | 2006-03-22 | 2008-03-16 | Hoffmann La Roche | Tumor therapy with an antibody for vascular endothelial growth factor and an antibody for human epithelial growth factor receptor type 2 |
EP2591775A1 (en) | 2006-04-05 | 2013-05-15 | Novartis AG | Combinations comprising mtor inhibitors for treating cancer |
AR060358A1 (es) | 2006-04-06 | 2008-06-11 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Quinazolinas para la inhibicion de pdk 1 |
AR060635A1 (es) | 2006-04-27 | 2008-07-02 | Banyu Pharma Co Ltd | Derivados de 1,2-dihidro-3h-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-ona, composiciones farmaceuticas que los comprenden y su uso en el tratamiento del cancer |
AU2007247112B2 (en) | 2006-05-09 | 2010-08-26 | Novartis Ag | Combination comprising an iron chelator and an anti-neoplastic agent and use thereof |
WO2008060705A2 (en) | 2006-06-06 | 2008-05-22 | Genentech, Inc. | Anti-dll4 antibodies and methods using same |
GB0612721D0 (en) | 2006-06-27 | 2006-08-09 | Novartis Ag | Organic compounds |
NZ574580A (en) | 2006-08-21 | 2011-12-22 | Hoffmann La Roche | Her2 tumor therapy with an anti-vegf antibody |
JP2008081492A (ja) | 2006-08-31 | 2008-04-10 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | オーロラa選択的阻害作用を有する新規アミノピリジン誘導体 |
ATE502943T1 (de) | 2006-09-29 | 2011-04-15 | Novartis Ag | Pyrazolopyrimidine als pi3k-lipidkinasehemmer |
WO2008044045A1 (en) | 2006-10-12 | 2008-04-17 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
EP2073803B1 (en) | 2006-10-12 | 2018-09-19 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
US8558002B2 (en) | 2006-11-16 | 2013-10-15 | Allergan, Inc. | Sulfoximines as kinase inhibitors |
WO2008061236A2 (en) | 2006-11-16 | 2008-05-22 | Allergan, Inc. | Sulfoximines as kinase inhibitors |
JP2010513566A (ja) | 2006-12-19 | 2010-04-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | アジュバント療法およびネオアジュバント療法のためのvegf特異的アンタゴニストと初期ステージ腫瘍の治療 |
US7977336B2 (en) | 2006-12-28 | 2011-07-12 | Banyu Pharmaceutical Co. Ltd | Aminopyrimidine derivatives as PLK1 inhibitors |
MX2009008584A (es) | 2007-02-15 | 2009-08-18 | Novartis Ag | Combinacion de lbh589 con otros agentes terapeuticos para el tratamiento de cancer. |
AR065877A1 (es) | 2007-03-29 | 2009-07-08 | Progenics Pharm Inc | Antagonoistas del receptor opioide periferico y usos de los mismos |
MX2009010550A (es) | 2007-03-29 | 2009-12-14 | Progenics Pharm Inc | Formas de cristal de bromuro de (r)-n-metilnaltrexona y uso de las mismas. |
PT2139890E (pt) | 2007-03-29 | 2014-09-03 | Wyeth Llc | Antagonistas do receptor opióide periférico e respectivas utilizações |
ES2541051T3 (es) | 2007-05-17 | 2015-07-15 | Genentech, Inc. | Estructuras cristalinas de fragmentos de neuropilina y complejos neuropilina-anticuerpo |
US8231892B2 (en) | 2007-05-24 | 2012-07-31 | Allergan, Inc. | Biodegradable drug delivery system |
PE20090321A1 (es) | 2007-06-04 | 2009-04-20 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica |
KR100883430B1 (ko) | 2007-06-13 | 2009-02-12 | 한국생명공학연구원 | 혈관내피성장인자 수용체를 중화하는 인간 단클론항체 및그 용도 |
JP5749009B2 (ja) | 2007-08-13 | 2015-07-15 | バスジーン セラピューティクス,インコーポレイテッドVasgenetherapeutics,Inc. | EphB4に結合するヒト化抗体を利用する癌治療剤 |
AU2008315048A1 (en) | 2007-10-23 | 2009-04-30 | Msd K.K. | Pyridone-substituted-dihydropyrazolopyrimidinone derivative |
PE20090983A1 (es) | 2007-11-09 | 2009-08-13 | Genentech Inc | Composiciones y metodos de uso de la quinasa-1 similar al receptor de la activina |
CA2705537A1 (en) | 2007-11-12 | 2009-05-22 | Bipar Sciences, Inc. | Treatment of breast cancer with a parp inhibitor alone or in combination with anti-tumor agents |
TWI580694B (zh) | 2007-11-30 | 2017-05-01 | 建南德克公司 | 抗-vegf抗體 |
PE20091523A1 (es) | 2007-12-20 | 2009-10-29 | Novartis Ag | Derivados de tiazol como inhibidores de la enzima fosfatidilinositol 3-cinasa (pi3k) |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
EP2240489A1 (en) | 2008-02-06 | 2010-10-20 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | Preparation and use of (r),(r)-2,2'-bis-methylnaltrexone |
WO2009117669A2 (en) | 2008-03-21 | 2009-09-24 | The University Of Chicago | Treatment with opioid antagonists and mtor inhibitors |
EP2628726A1 (en) | 2008-03-26 | 2013-08-21 | Novartis AG | Hydroxamate-based inhibitors of deacetylases b |
JP5425180B2 (ja) | 2008-03-27 | 2014-02-26 | ザイモジェネティクス, インコーポレイテッド | PDGFRβおよびVEGF−Aを阻害するための組成物および方法 |
EP3216803B1 (en) | 2008-06-25 | 2020-03-11 | Novartis Ag | Stable and soluble antibodies inhibiting vegf |
JP5606438B2 (ja) | 2008-07-23 | 2014-10-15 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 抗血管新生療法を受容可能な被験体の同定 |
CA2676881C (en) | 2008-09-30 | 2017-04-25 | Wyeth | Peripheral opioid receptor antagonists and uses thereof |
US8268314B2 (en) | 2008-10-08 | 2012-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies |
TWI572357B (zh) | 2008-10-14 | 2017-03-01 | 建南德克公司 | 免疫球蛋白變異體及其用途 |
WO2010043050A1 (en) | 2008-10-16 | 2010-04-22 | Celator Pharmaceuticals Corporation | Combinations of a liposomal water-soluble camptothecin with cetuximab or bevacizumab |
PL2361085T5 (pl) | 2008-11-22 | 2018-12-31 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Zastosowanie przeciwciała anty-vegf w połączeniu z chemioterapią w leczeniu raka sutka |
KR20110112352A (ko) | 2008-12-18 | 2011-10-12 | 노파르티스 아게 | 1-(4-{l-[(e)-4-시클로헥실-3-트리플루오로메틸-벤질옥시이미노]-에틸}-2-에틸-벤질)-아제티딘-3-카르복실산의 신규한 다형체 형태 |
US20120115840A1 (en) | 2008-12-18 | 2012-05-10 | Lech Ciszewski | Hemifumarate salt of 1-[4-[1-(4-cyclohexyl-3-trifluoromethyl-benzyloxyimino)-ethyl]-2-ethyl-benzyl]-azetidine-3-carboxylic acid |
EP2379499B1 (en) | 2008-12-18 | 2014-04-09 | Novartis AG | Hydrochloride salt of 1-(4-(1-((E)-4-cyclohexyl-3-trifluoromethyl-benzyloxyimino)-ethyl)-2-ethyl-benzyl)-azetidine-3-carboxylic acid |
KR101596539B1 (ko) | 2008-12-23 | 2016-02-22 | 제넨테크, 인크. | 암 환자에서의 진단 목적용 방법 및 조성물 |
JP2012516345A (ja) | 2009-01-29 | 2012-07-19 | ノバルティス アーゲー | 星細胞腫治療用置換ベンゾイミダゾール |
WO2010091234A2 (en) | 2009-02-06 | 2010-08-12 | The General Hospital Corporation | Methods of treating vascular lesions |
CA2750716A1 (en) | 2009-02-25 | 2010-09-02 | Msd K.K. | Pyrimidopyrimidoindazole derivative |
EP2403339B1 (en) | 2009-03-06 | 2017-01-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Combination cancer therapy with an akt inhibitor and other anticancer agents |
EP2414391B1 (en) | 2009-04-02 | 2018-11-28 | Roche Glycart AG | Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments |
PL2417156T3 (pl) | 2009-04-07 | 2015-07-31 | Roche Glycart Ag | Trójwartościowe, bispecyficzne przeciwciała |
CA2760246A1 (en) | 2009-05-08 | 2010-11-11 | Weilan Ye | Humanized anti-egfl7 antibodies and methods using same |
US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
UA105794C2 (uk) | 2009-06-26 | 2014-06-25 | Новартіс Аг | 1,3-ДИЗАМІЩЕНІ ПОХІДНІ ІМІДАЗОЛІДИН-2-ОНУ ЯК ІНГІБІТОРИ Cyp17 |
EP2450055B1 (en) | 2009-06-30 | 2018-01-03 | Obshestvo S OgranichennoyOtvetstvennostiu"OncoMax" | Method for suppressing renal tumor growth by blocking fibroblast growth factor receptor |
US8293753B2 (en) | 2009-07-02 | 2012-10-23 | Novartis Ag | Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas |
US20110076271A1 (en) | 2009-07-13 | 2011-03-31 | Genentech, Inc. | Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer |
AR077595A1 (es) | 2009-07-27 | 2011-09-07 | Genentech Inc | Tratamientos de combinacion |
MX2012001306A (es) | 2009-07-31 | 2012-02-28 | Genentech Inc | Inhibicion de matastasis de tumor. |
US8389526B2 (en) | 2009-08-07 | 2013-03-05 | Novartis Ag | 3-heteroarylmethyl-imidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl derivatives |
AU2010283806A1 (en) | 2009-08-12 | 2012-03-01 | Novartis Ag | Heterocyclic hydrazone compounds and their uses to treat cancer and inflammation |
SG178419A1 (en) | 2009-08-15 | 2012-04-27 | Genentech Inc | Anti-angiogenesis therapy for the treatment of previously treated breast cancer |
ES2709108T3 (es) | 2009-08-17 | 2019-04-15 | Intellikine Llc | Compuestos heterocíclicos y usos de los mismos |
AU2010284972A1 (en) | 2009-08-20 | 2012-03-08 | Novartis Ag | Heterocyclic oxime compounds |
EA201200321A1 (ru) | 2009-08-26 | 2012-09-28 | Новартис Аг | Тетразамещенные гетероарильные соединения и их применение в качестве модуляторов mdm2 и/или mdm4 |
WO2011028642A1 (en) | 2009-09-04 | 2011-03-10 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Genetic determinants of prostate cancer risk |
IN2012DN02139A (hu) | 2009-09-10 | 2015-08-07 | Novartis Ag | |
JP2013504595A (ja) | 2009-09-11 | 2013-02-07 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗癌剤に対する応答の可能性が増加した患者を同定するための方法 |
RU2573915C2 (ru) | 2009-09-16 | 2016-01-27 | Дженентек, Инк. | Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применение |
ES2530732T3 (es) | 2009-09-17 | 2015-03-05 | Hoffmann La Roche | Procedimientos de diagnóstico para el cáncer de pulmón |
WO2011056497A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Activin receptor type iib compositions and methods of use |
WO2011056502A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use |
MX2012005293A (es) | 2009-11-04 | 2012-06-19 | Novartis Ag | Derivados de sulfonamida heterociclicos utiles como inhibidores de mek. |
WO2011064211A1 (en) | 2009-11-25 | 2011-06-03 | Novartis Ag | Benzene-fused 6-membered oxygen-containing heterocyclic derivatives of bicyclic heteroaryls |
JP5456908B2 (ja) | 2009-12-08 | 2014-04-02 | ノバルティス アーゲー | ヘテロ環式スルホンアミド誘導体 |
US8486397B2 (en) | 2009-12-11 | 2013-07-16 | Genentech, Inc. | Anti-VEGF-C antibodies and methods using same |
CN102770158B (zh) | 2009-12-21 | 2016-10-19 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗体配制剂 |
US8440693B2 (en) | 2009-12-22 | 2013-05-14 | Novartis Ag | Substituted isoquinolinones and quinazolinones |
CU24130B1 (es) | 2009-12-22 | 2015-09-29 | Novartis Ag | Isoquinolinonas y quinazolinonas sustituidas |
AU2010336485B2 (en) | 2009-12-23 | 2015-03-26 | Genentech, Inc. | Anti-Bv8 antibodies and uses thereof |
EP2539367A2 (en) | 2010-02-23 | 2013-01-02 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-angiogenesis therapy for the treatment of ovarian cancer |
TWI426920B (zh) | 2010-03-26 | 2014-02-21 | Hoffmann La Roche | 雙專一性、雙價抗-vegf/抗-ang-2抗體 |
TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
WO2011153224A2 (en) | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Genentech, Inc. | Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer |
WO2011153243A2 (en) | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Genentech, Inc. | Anti-angiogenesis therapy for treating gastric cancer |
CN102947274A (zh) | 2010-06-17 | 2013-02-27 | 诺瓦提斯公司 | 联苯基取代的1,3-二氢-苯并咪唑-2-亚基胺衍生物 |
WO2011157793A1 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Novartis Ag | Piperidinyl substituted 1,3-dihydro-benzoimidazol-2-ylideneamine derivatives |
EP2848940A1 (en) | 2010-07-19 | 2015-03-18 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy |
EP2596359A1 (en) | 2010-07-19 | 2013-05-29 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy |
AR082418A1 (es) | 2010-08-02 | 2012-12-05 | Novartis Ag | Formas cristalinas de 1-(4-metil-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil)-piridin-4-il]-tiazol-2-il)-amida de 2-amida del acido (s)-pirrolidin-1,2-dicarboxilico |
SI2601214T1 (en) | 2010-08-06 | 2018-03-30 | Genzyme Corporation | VEGF antagonist compositions and their use |
AR082693A1 (es) | 2010-08-17 | 2012-12-26 | Roche Glycart Ag | Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf |
BR112013001847A2 (pt) | 2010-08-24 | 2016-05-31 | Hoffmann La Roche | anticorpo biespecífico, método de preparação do anticorpo biespecífico, do anticorpo biespecífico trivalente, métodos e composição farmacêutica |
JP2013537210A (ja) | 2010-09-16 | 2013-09-30 | ノバルティス アーゲー | 17α−ヒドロキシラーゼ/C17,20−リアーゼ阻害剤 |
EP2447301A1 (de) | 2010-10-29 | 2012-05-02 | Rhein Chemie Rheinau GmbH | Verfahren zur Herstellung von Gusspolyamiden |
SG190788A1 (en) | 2010-11-15 | 2013-07-31 | Five Prime Therapeutics Inc | Fgfr1 extracellular domain combination therapies |
SG191153A1 (en) | 2010-12-23 | 2013-07-31 | Hoffmann La Roche | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
WO2012092539A2 (en) | 2010-12-31 | 2012-07-05 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Antibodies to dll4 and uses thereof |
UY33883A (es) | 2011-01-31 | 2012-08-31 | Novartis Ag | Novedosos derivados heterocíclicos |
EP2673277A1 (en) | 2011-02-10 | 2013-12-18 | Novartis AG | [1, 2, 4]triazolo [4, 3 -b]pyridazine compounds as inhibitors of the c-met tyrosine kinase |
US9127000B2 (en) | 2011-02-23 | 2015-09-08 | Intellikine, LLC. | Heterocyclic compounds and uses thereof |
EP2681239B8 (en) | 2011-02-28 | 2015-09-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antigen binding proteins |
MX342034B (es) | 2011-02-28 | 2016-09-12 | Hoffmann La Roche | Proteinas monovalentes que se unen a antigenos. |
CN103492390A (zh) | 2011-03-08 | 2014-01-01 | 诺瓦提斯公司 | 氟苯基双环杂芳基化合物 |
PT2691417T (pt) | 2011-03-29 | 2018-10-31 | Roche Glycart Ag | Variantes de fc de anticorpos |
EP2694072B1 (en) | 2011-04-01 | 2017-11-29 | Genentech, Inc. | Combination of akt inhibitor compound and abiraterone for use in therapeutic treatments |
CN108178789B (zh) | 2011-04-20 | 2021-11-02 | 阿塞勒隆制药公司 | 内皮糖蛋白多肽及其用途 |
JP6002210B2 (ja) | 2011-04-28 | 2016-10-05 | ノバルティス アーゲー | 17α−ヒドロキシラーゼ/C17,20−リアーゼ阻害剤 |
CA2834776A1 (en) | 2011-05-03 | 2012-11-08 | Genentech, Inc. | Therapeutic apo2l/trail polypeptides and death receptor agonist antibodies |
CA2838029A1 (en) | 2011-06-09 | 2012-12-13 | Novartis Ag | Heterocyclic sulfonamide derivatives |
WO2012175487A1 (en) | 2011-06-20 | 2012-12-27 | Novartis Ag | Cyclohexyl isoquinolinone compounds |
US8859535B2 (en) | 2011-06-20 | 2014-10-14 | Novartis Ag | Hydroxy substituted isoquinolinone derivatives |
WO2013025944A1 (en) | 2011-08-17 | 2013-02-21 | Genentech, Inc. | Inhibition of angiogenesis in refractory tumors |
BR112014006223A8 (pt) | 2011-09-15 | 2018-01-09 | Novartis Ag | 3-(quinolin-6-iltio)-[1,2,4-triazol[4,3-a] piradinas 6-substituídas, seus usos, composições farmacêuticas, e combinação |
WO2013061305A1 (en) | 2011-10-28 | 2013-05-02 | Novartis Ag | Novel purine derivatives and their use in the treatment of disease |
EP2785717B1 (en) | 2011-11-29 | 2016-01-13 | Novartis AG | Pyrazolopyrrolidine compounds |
WO2013082511A1 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Genentech, Inc. | Methods for overcoming tumor resistance to vegf antagonists |
WO2013096060A1 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Novartis Ag | Compounds for inhibiting the interaction of bcl2 with binding partners |
MX2014007729A (es) | 2011-12-23 | 2015-01-12 | Novartis Ag | Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace. |
KR20140107578A (ko) | 2011-12-23 | 2014-09-04 | 노파르티스 아게 | Bcl2와 결합 파트너의 상호작용을 억제하기 위한 화합물 |
MX2014007730A (es) | 2011-12-23 | 2015-01-12 | Novartis Ag | Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace. |
CN104136429A (zh) | 2011-12-23 | 2014-11-05 | 诺华股份有限公司 | 用于抑制bcl2与结合配偶体相互作用的化合物 |
US8815926B2 (en) | 2012-01-26 | 2014-08-26 | Novartis Ag | Substituted pyrrolo[3,4-D]imidazoles for the treatment of MDM2/4 mediated diseases |
EP2812357B1 (en) | 2012-02-10 | 2020-11-04 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Single-chain antibodies and other heteromultimers |
PE20141909A1 (es) | 2012-03-13 | 2014-11-29 | Hoffmann La Roche | Terapia combinada para el tratamiento del cancer de ovario |
CN104245701A (zh) | 2012-04-03 | 2014-12-24 | 诺华有限公司 | 有酪氨酸激酶抑制剂的组合产品和其应用 |
PT2838917T (pt) | 2012-04-20 | 2019-09-12 | Merus Nv | Métodos e meios para a produção de moléculas similares a ig heterodiméricas |
US10213432B2 (en) | 2012-05-16 | 2019-02-26 | Novartis Ag | Dosage regimen for a PI-3 kinase inhibitor |
EP2855483B1 (en) | 2012-05-24 | 2017-10-25 | Novartis AG | Pyrrolopyrrolidinone compounds |
CA2874144C (en) | 2012-05-31 | 2023-12-19 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer using pd-l1 axis binding antagonists and vegf antagonists |
JP6203838B2 (ja) | 2012-06-27 | 2017-09-27 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 少なくとも2つの異なる結合実体を含む、テーラーメイドの高度に選択的かつ多重特異的なターゲティング実体を選択および作製するための方法、ならびにその使用 |
WO2014001325A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof |
ES2896493T3 (es) | 2012-07-13 | 2022-02-24 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos biespecíficos anti-VEGF/anti-ANG-2 y su uso en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares |
WO2014025813A1 (en) | 2012-08-07 | 2014-02-13 | Genentech, Inc. | Combination therapy for the treatment of glioblastoma |
AU2014205369B2 (en) | 2013-01-11 | 2018-08-09 | Massachusetts Eye And Ear Infirmary | CYP450 lipid metabolites reduce inflammation and angiogenesis |
EP2948453B1 (en) | 2013-01-22 | 2017-08-02 | Novartis AG | Pyrazolo[3,4-d]pyrimidinone compounds as inhibitors of the p53/mdm2 interaction |
WO2014115077A1 (en) | 2013-01-22 | 2014-07-31 | Novartis Ag | Substituted purinone compounds |
EP3693381A1 (en) | 2013-02-18 | 2020-08-12 | Vegenics Pty Limited | Ligand binding molecules and uses thereof |
CA2906057A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Genentech, Inc. | Antibody formulations |
EP2968340A4 (en) | 2013-03-15 | 2016-08-10 | Intellikine Llc | COMBINING KINASE INHIBITORS AND USES THEREOF |
WO2014155268A2 (en) | 2013-03-25 | 2014-10-02 | Novartis Ag | Fgf-r tyrosine kinase activity inhibitors - use in diseases associated with lack of or reduced snf5 activity |
WO2014190147A2 (en) | 2013-05-23 | 2014-11-27 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Methods of treating cancer |
CN104341504B (zh) | 2013-08-06 | 2017-10-24 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 双特异性抗体 |
WO2015022664A1 (en) | 2013-08-14 | 2015-02-19 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of mek |
US9227969B2 (en) | 2013-08-14 | 2016-01-05 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of MEK |
WO2015022663A1 (en) | 2013-08-14 | 2015-02-19 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of mek |
US10617755B2 (en) | 2013-08-30 | 2020-04-14 | Genentech, Inc. | Combination therapy for the treatment of glioblastoma |
US10456470B2 (en) | 2013-08-30 | 2019-10-29 | Genentech, Inc. | Diagnostic methods and compositions for treatment of glioblastoma |
JP6422956B2 (ja) | 2013-10-11 | 2018-11-14 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体 |
EA035481B1 (ru) | 2013-10-25 | 2020-06-23 | Акселерон Фарма, Инк. | Эндоглиновые пептиды для лечения фиброзных заболеваний |
ES2875878T3 (es) | 2013-11-18 | 2021-11-11 | Formycon Ag | Composición farmacéutica de un anticuerpo anti-VEGF |
WO2015084804A1 (en) | 2013-12-03 | 2015-06-11 | Novartis Ag | Combination of mdm2 inhibitor and braf inhibitor and their use |
JP2016539149A (ja) | 2013-12-06 | 2016-12-15 | ノバルティス アーゲー | アルファ−アイソフォーム選択的ホスファチジルイノシトール3−キナーゼ阻害剤の投薬レジメン |
JOP20200094A1 (ar) | 2014-01-24 | 2017-06-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها |
JOP20200096A1 (ar) | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
EP3104880B1 (en) | 2014-02-14 | 2020-03-25 | MacroGenics, Inc. | Improved methods for the treatment of vascularizing cancers |
AU2015229103C9 (en) | 2014-03-14 | 2020-11-26 | Immutep S.A.S | Antibody molecules to LAG-3 and uses thereof |
MA39776A (fr) | 2014-03-24 | 2017-02-01 | Hoffmann La Roche | Traitement du cancer avec des antagonistes de c-met et corrélation de ces derniers avec l'expression de hgf |
MX2016012779A (es) | 2014-03-31 | 2017-04-27 | Genentech Inc | Terapia de combinacion con agentes antiangiogénesis y agonistas de unión a ox40. |
EP3143044A1 (en) | 2014-05-12 | 2017-03-22 | Formycon AG | Pre-filled plastic syringe containing a vegf antagonist |
EP3169801A1 (en) | 2014-07-14 | 2017-05-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic methods and compositions for treatment of glioblastoma |
MX2017001461A (es) | 2014-07-31 | 2017-05-11 | Novartis Ag | Terapia de combinacion. |
WO2016025645A1 (en) | 2014-08-12 | 2016-02-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and an immune checkpoint blocker |
AU2015301753B2 (en) | 2014-08-12 | 2021-04-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with IL-2 and integrin-binding-Fc-fusion protein |
EP3925622A1 (en) | 2014-09-13 | 2021-12-22 | Novartis AG | Combination therapies |
WO2016044334A1 (en) | 2014-09-15 | 2016-03-24 | Genentech, Inc. | Antibody formulations |
US20170209574A1 (en) | 2014-10-03 | 2017-07-27 | Novartis Ag | Combination therapies |
MA41044A (fr) | 2014-10-08 | 2017-08-15 | Novartis Ag | Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer |
TWI716362B (zh) | 2014-10-14 | 2021-01-21 | 瑞士商諾華公司 | 針對pd-l1之抗體分子及其用途 |
EA201791029A1 (ru) | 2014-11-10 | 2017-12-29 | Дженентек, Инк. | Антитела против интерлейкина-33 и их применение |
ES2764111T3 (es) | 2014-12-03 | 2020-06-02 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos multiespecíficos |
US20170340733A1 (en) | 2014-12-19 | 2017-11-30 | Novartis Ag | Combination therapies |
SG11201704707PA (en) | 2014-12-23 | 2017-07-28 | Genentech Inc | Compositions and methods for treating and diagnosing chemotherapy-resistant cancers |
CN107750164A (zh) | 2015-06-08 | 2018-03-02 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用抗ox40抗体和pd‑1轴结合拮抗剂治疗癌症的方法 |
US20180222982A1 (en) | 2015-07-29 | 2018-08-09 | Novartis Ag | Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1 |
LT3317301T (lt) | 2015-07-29 | 2021-07-26 | Novartis Ag | Kombinuotos terapijos, apimančios antikūno molekules prieš lag-3 |
EP3316902A1 (en) | 2015-07-29 | 2018-05-09 | Novartis AG | Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3 |
CA3001362C (en) | 2015-10-30 | 2020-10-13 | Genentech, Inc. | Anti-htra1 antibodies and methods of use thereof |
AU2016347881A1 (en) | 2015-11-02 | 2018-05-10 | Novartis Ag | Dosage regimen for a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor |
JP2019500893A (ja) | 2015-11-03 | 2019-01-17 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | Pd−1及びtim−3に特異的に結合する抗体及びそれらの使用 |
US11654046B2 (en) | 2015-11-18 | 2023-05-23 | Sio2 Medical Products, Inc. | Pharmaceutical package for ophthalmic formulations |
MX2018006092A (es) | 2015-11-18 | 2019-01-31 | Formycon Ag | Envase farmacéutico precargado que comprende una formulación líquida de un antagonista del vegf. |
WO2018218013A2 (en) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | Sio2 Medical Products, Inc. | Sterilizable pharmaceutical package for ophthalmic formulations |
BR112018010005A2 (pt) | 2015-11-18 | 2018-11-21 | Formycon Ag | seringa pré-carregada, e, kit |
US20180371093A1 (en) | 2015-12-17 | 2018-12-27 | Novartis Ag | Antibody molecules to pd-1 and uses thereof |
US10576128B2 (en) | 2016-01-26 | 2020-03-03 | Formycon Ag | Liquid formulation of a VEGF antagonist |
JP7503887B2 (ja) | 2016-04-15 | 2024-06-21 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | がんを監視及び治療するための方法 |
CN109154027A (zh) | 2016-04-15 | 2019-01-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于监测和治疗癌症的方法 |
WO2017209519A1 (en) | 2016-05-31 | 2017-12-07 | Mogam Institute For Biomedical Research | Ab6 family designer ligands of tgf-beta superfamily |
CN109690315A (zh) | 2016-07-08 | 2019-04-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 人附睾蛋白4(he4)用于评估muc16阳性癌症治疗的响应性的用途 |
EP3481963A1 (en) | 2016-07-08 | 2019-05-15 | Genentech, Inc. | Methods for diagnosing and treating cancer by means of the expression status and mutational status of nrf2 and downstream target genes of said gene. |
BR112019002036A2 (pt) | 2016-08-12 | 2019-05-14 | Genentech Inc | métodos de tratamento de um sujeito com câncer colorretal, kit para tratamento do câncer colorretal em um sujeito humano e combinação de fármacos para a terapia do câncer colorretal |
WO2018060833A1 (en) | 2016-09-27 | 2018-04-05 | Novartis Ag | Dosage regimen for alpha-isoform selective phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor alpelisib |
US10350266B2 (en) | 2017-01-10 | 2019-07-16 | Nodus Therapeutics, Inc. | Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein |
US10603358B2 (en) | 2017-01-10 | 2020-03-31 | Nodus Therapeutics | Combination tumor treatment with an integrin-binding-Fc fusion protein and immune stimulator |
CN110546277B (zh) | 2017-03-01 | 2024-06-11 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的诊断和治疗方法 |
WO2018215580A1 (en) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | Formycon Ag | Method for sterilizing prefilled plastic syringes containing a vegf antagonist |
WO2018217995A1 (en) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | Formycon Ag | Sterilizable pre-filled pharmaceutical packages comprising a liquid formulation of a vegf-antagonist |
CN110785187B (zh) | 2017-06-22 | 2024-04-05 | 诺华股份有限公司 | 针对cd73的抗体分子及其用途 |
EP3642240A1 (en) | 2017-06-22 | 2020-04-29 | Novartis AG | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
WO2019020777A1 (en) | 2017-07-26 | 2019-01-31 | Formycon Ag | LIQUID FORMULATION OF A VEGF ANTAGONIST |
JP7021356B2 (ja) | 2017-12-21 | 2022-02-16 | ヘフェイ インスティテューツ オブ フィジカル サイエンス, チャイニーズ アカデミー オブ サイエンシーズ | ピリミジン誘導体系キナーゼ阻害剤類 |
WO2019129677A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-vegf antibodies and methods of use |
CN111989095A (zh) | 2018-04-16 | 2020-11-24 | 上海岸阔医药科技有限公司 | 预防或治疗肿瘤疗法副作用的方法 |
JOP20200303A1 (ar) | 2018-05-24 | 2020-11-23 | Janssen Biotech Inc | عوامل ربط psma واستخداماتها |
TW202015726A (zh) | 2018-05-30 | 2020-05-01 | 瑞士商諾華公司 | Entpd2抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法 |
WO2019232244A2 (en) | 2018-05-31 | 2019-12-05 | Novartis Ag | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
JP2022512744A (ja) | 2018-10-18 | 2022-02-07 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 肉腫様腎臓がんのための診断および治療方法 |
BR112021020532A2 (pt) | 2019-04-19 | 2022-03-15 | Janssen Biotech Inc | Métodos para tratamento de câncer de próstata com um anticorpo anti-psma/cd3 |
WO2020226986A2 (en) | 2019-05-03 | 2020-11-12 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody |
JP2022548881A (ja) | 2019-09-18 | 2022-11-22 | ノバルティス アーゲー | Entpd2抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法 |
US20220395553A1 (en) | 2019-11-14 | 2022-12-15 | Cohbar, Inc. | Cxcr4 antagonist peptides |
JP2023517345A (ja) | 2020-03-13 | 2023-04-25 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗インターロイキン-33抗体及びその使用 |
CN115698717A (zh) | 2020-04-03 | 2023-02-03 | 基因泰克公司 | 癌症的治疗和诊断方法 |
KR20230033647A (ko) | 2020-06-30 | 2023-03-08 | 멘두스 비.브이. | 난소암 백신에서 백혈병 유래 세포의 용도 |
KR20230088781A (ko) | 2020-11-13 | 2023-06-20 | 제넨테크, 인크. | 고형 종양 치료를 위한 krasg12c 억제제 및 vegf 억제제를 포함하는 방법 및 조성물 |
US20220249639A1 (en) | 2021-01-22 | 2022-08-11 | Dcprime B.V. | Methods of tumor vaccination |
MX2023008909A (es) | 2021-01-28 | 2023-10-23 | Janssen Biotech Inc | Proteínas de unión a psma y usos de estas. |
WO2022190058A1 (en) | 2021-03-12 | 2022-09-15 | Dcprime B.V. | Methods of vaccination and use of cd47 blockade |
JP2024516230A (ja) | 2021-04-30 | 2024-04-12 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | がんのための治療及び診断方法並びに組成物 |
WO2023279092A2 (en) | 2021-07-02 | 2023-01-05 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for treating cancer |
EP4377351A1 (en) | 2021-07-28 | 2024-06-05 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods and compositions for treating cancer |
WO2023080900A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for classifying and treating kidney cancer |
WO2023212298A1 (en) | 2022-04-29 | 2023-11-02 | Broadwing Bio Llc | Bispecific antibodies and methods of treating ocular disease |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4456550A (en) * | 1982-11-22 | 1984-06-26 | President And Fellows Of Harvard College | Vascular permeability factor |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5036003A (en) * | 1987-08-21 | 1991-07-30 | Monsanto Company | Antibodies to VPF |
JP3549202B2 (ja) * | 1989-03-24 | 2004-08-04 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 内皮細胞成長因子、その分離および発現 |
US5332671A (en) * | 1989-05-12 | 1994-07-26 | Genetech, Inc. | Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same |
US6384191B1 (en) * | 1989-07-06 | 2002-05-07 | Regents Of The University Of California | Receptors for fibroblast growth factors |
US5194596A (en) * | 1989-07-27 | 1993-03-16 | California Biotechnology Inc. | Production of vascular endothelial cell growth factor |
SG49753A1 (en) * | 1991-02-22 | 1998-06-15 | American Cyanamid Co | Identification of a novel human receptor tyrosine kinase gene |
-
1992
- 1992-10-28 DE DE69233739T patent/DE69233739D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 RO RO95-00816A patent/RO119721B1/ro unknown
- 1992-10-28 AT AT08010320T patent/ATE498632T1/de active
- 1992-10-28 ES ES08010320T patent/ES2360641T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 DK DK01119430T patent/DK1167384T3/da active
- 1992-10-28 DE DE69232539T patent/DE69232539T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 HU HU9501201A patent/HU221343B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 1992-10-28 CZ CZ19951057A patent/CZ291047B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-10-28 JP JP51099994A patent/JP3398382B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 AT AT01119430T patent/ATE348110T1/de active
- 1992-10-28 EP EP92923512A patent/EP0666868B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 EP EP01119430A patent/EP1167384B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 AU AU29289/92A patent/AU687727B2/en not_active Expired
- 1992-10-28 ES ES02006351T patent/ES2309119T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 CA CA002145985A patent/CA2145985C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 EP EP08010320A patent/EP1975181B1/en not_active Revoked
- 1992-10-28 ES ES01119430T patent/ES2278663T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 DK DK02006351T patent/DK1238986T3/da active
- 1992-10-28 AT AT92923512T patent/ATE215565T1/de active
- 1992-10-28 SK SK551-95A patent/SK285035B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-10-28 BR BR9207175A patent/BR9207175A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-10-28 DE DE69233803T patent/DE69233803D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 EP EP02006351A patent/EP1238986B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 KR KR1019950701621A patent/KR100335584B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-10-28 ES ES92923512T patent/ES2173873T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-28 AT AT02006351T patent/ATE399181T1/de active
- 1992-10-28 HU HU0102070A patent/HU225646B1/hu unknown
- 1992-10-28 WO PCT/US1992/009218 patent/WO1994010202A1/en active IP Right Grant
- 1992-10-28 DK DK92923512T patent/DK0666868T4/da active
- 1992-10-28 DK DK08010320.3T patent/DK1975181T3/da active
-
1995
- 1995-04-26 FI FI951987A patent/FI951987A/fi not_active Application Discontinuation
- 1995-04-27 NO NO19951609A patent/NO321825B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-04-28 BG BG99605A patent/BG99605A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0666868B1 (en) | Use of anti-VEGF antibodies for the treatment of cancer | |
AU696487B2 (en) | Vascular endothelial cell growth factor antagonists | |
AU775806B2 (en) | Vascular endothelial cell growth factor antagonists and uses thereof | |
US20100092492A1 (en) | Vascular endothelial cell growth factor antagonists | |
US20020032313A1 (en) | Vascular endothelial cell growth factor antagonists | |
US20010021382A1 (en) | Vascular endothelial cell growth factor antagonists | |
US20030023046A1 (en) | Vascular endothelial cell growth factor antagonists | |
US20060193862A1 (en) | Vascular endothelial cell growth factor antagonists | |
KR100315613B1 (ko) | 혈관 내피 세포 성장 인자에 대한 길항제 |