JPH1180024A - 角膜血管新生阻害剤 - Google Patents
角膜血管新生阻害剤Info
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- JPH1180024A JPH1180024A JP9267843A JP26784397A JPH1180024A JP H1180024 A JPH1180024 A JP H1180024A JP 9267843 A JP9267843 A JP 9267843A JP 26784397 A JP26784397 A JP 26784397A JP H1180024 A JPH1180024 A JP H1180024A
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- JP
- Japan
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- vpf
- vegf
- corneal
- inhibitor
- antibody
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
(57)【要約】
【課題】 角膜炎や角膜移植時の血管新生を抑制するこ
とのみならず、それに伴う角膜の混濁や浮腫を発生させ
ない実用的な角膜血管新生阻害剤を提供する。 【解決手段】 ＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを有効
成分とする角膜血管新生阻害剤。ＶＥＧＦ／ＶＰＦアン
タゴニストはＶＥＧＦ／ＶＰＦに対する抗体であること
が好ましい。移植された角膜の混濁及び／又は浮腫の抑
制剤としても使用でき、移植片の生着を促進する。
とのみならず、それに伴う角膜の混濁や浮腫を発生させ
ない実用的な角膜血管新生阻害剤を提供する。 【解決手段】 ＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを有効
成分とする角膜血管新生阻害剤。ＶＥＧＦ／ＶＰＦアン
タゴニストはＶＥＧＦ／ＶＰＦに対する抗体であること
が好ましい。移植された角膜の混濁及び／又は浮腫の抑
制剤としても使用でき、移植片の生着を促進する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血管透過性因子(V
PF)[血管内皮細胞増殖因子(VEGF)とも呼称されており、
本明細書では「ＶＥＧＦ／ＶＰＦ」と総称する] アンタ
ゴニストを有効成分とする角膜血管新生阻害剤、特に、
角膜炎や角膜移植時の血管新生を抑制するとともに角膜
の混濁及び／又は浮腫を抑制する薬剤に関する。
PF)[血管内皮細胞増殖因子(VEGF)とも呼称されており、
本明細書では「ＶＥＧＦ／ＶＰＦ」と総称する] アンタ
ゴニストを有効成分とする角膜血管新生阻害剤、特に、
角膜炎や角膜移植時の血管新生を抑制するとともに角膜
の混濁及び／又は浮腫を抑制する薬剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】眼は身体の中で異物をもっとも認識し難
い組織と云われているので、ヒト角膜移植は同種移植で
ある腎移植のように集中的に免疫抑制剤を投与しなくて
も、成功率は高く、約７割とされている。一方、拒絶さ
れる残りの３割の中の８０％は、適切な抗炎症剤や免疫
抑制剤を用いて拒絶反応を抑制することにより生着させ
ることが出来ると考えられている。
い組織と云われているので、ヒト角膜移植は同種移植で
ある腎移植のように集中的に免疫抑制剤を投与しなくて
も、成功率は高く、約７割とされている。一方、拒絶さ
れる残りの３割の中の８０％は、適切な抗炎症剤や免疫
抑制剤を用いて拒絶反応を抑制することにより生着させ
ることが出来ると考えられている。
【０００３】実際、角膜移植時の拒絶反応防止に、ステ
ロイド系と非ステロイド系の抗炎症剤が使用されてい
る。しかし、ステロイド系と非ステロイド系の抗炎症剤
は、いずれも大きな問題を抱えている。すなわち、ステ
ロイド系の点眼薬は強力な消炎作用を持っている半面、
重篤な副作用がある。この副作用としては、感染症の増
悪、感染症の誘発、創傷治癒の遅延、白内障、緑内障、
副腎系機能抑制などがあり、投薬を止めるとリバウンド
現象により炎症の増悪が起こることもある。非ステロイ
ド系抗炎症剤は、ステロイド系ほど重篤な副作用がない
が、効力が弱い欠点がある。
ロイド系と非ステロイド系の抗炎症剤が使用されてい
る。しかし、ステロイド系と非ステロイド系の抗炎症剤
は、いずれも大きな問題を抱えている。すなわち、ステ
ロイド系の点眼薬は強力な消炎作用を持っている半面、
重篤な副作用がある。この副作用としては、感染症の増
悪、感染症の誘発、創傷治癒の遅延、白内障、緑内障、
副腎系機能抑制などがあり、投薬を止めるとリバウンド
現象により炎症の増悪が起こることもある。非ステロイ
ド系抗炎症剤は、ステロイド系ほど重篤な副作用がない
が、効力が弱い欠点がある。
【０００４】免疫抑制剤については、角膜移植時の拒絶
反応防止に使用できるものは限定されており、他の臓器
移植に使用できる薬剤でも角膜移植では効力が弱いのが
現状である。シクロスポリンＡやＦＫ５０６のようなＴ
リンパ球機能を特異的に抑制する免疫抑制剤の利用も有
効と思われるが、水に難溶性であるため眼科用としては
製剤化が困難で有効な薬物動態の維持や臨床での有効性
確認など開発には多くの問題がある。
反応防止に使用できるものは限定されており、他の臓器
移植に使用できる薬剤でも角膜移植では効力が弱いのが
現状である。シクロスポリンＡやＦＫ５０６のようなＴ
リンパ球機能を特異的に抑制する免疫抑制剤の利用も有
効と思われるが、水に難溶性であるため眼科用としては
製剤化が困難で有効な薬物動態の維持や臨床での有効性
確認など開発には多くの問題がある。
【０００５】一方、角膜移植術実施における同種移植片
拒絶には、角膜の血管新生が関与していることが知られ
ている（Jpn. J. Ophthalmol.,38(3),311-316(199
4)）。このことから、角膜移植後に血管新生の阻害を行
えば、移植片の拒絶を抑制することが出来ると考えられ
る。このような血管新生阻害物質としては、これまで
に、例えば、プロタミン（Taylor, S. et al., Nature,
297, 307, 1982)、ヘパリンとコーチゾンの併用剤（Fo
lkman, J. et al., Science, 221, 71, 1983)、プレド
ニゾロン・アセテート（Robin, J. B., Arch. Opthalmo
l., 103, 284, 1985）、硫酸化多糖（特開昭63-119500
号公報）、ハービマイシンＡ（特開平63-295509号公
報）、フマギリン（特開平1-279828号公報）、インター
フェロンβ（国際公開第WO/29092号公報）等が知られて
いる。
拒絶には、角膜の血管新生が関与していることが知られ
ている（Jpn. J. Ophthalmol.,38(3),311-316(199
4)）。このことから、角膜移植後に血管新生の阻害を行
えば、移植片の拒絶を抑制することが出来ると考えられ
る。このような血管新生阻害物質としては、これまで
に、例えば、プロタミン（Taylor, S. et al., Nature,
297, 307, 1982)、ヘパリンとコーチゾンの併用剤（Fo
lkman, J. et al., Science, 221, 71, 1983)、プレド
ニゾロン・アセテート（Robin, J. B., Arch. Opthalmo
l., 103, 284, 1985）、硫酸化多糖（特開昭63-119500
号公報）、ハービマイシンＡ（特開平63-295509号公
報）、フマギリン（特開平1-279828号公報）、インター
フェロンβ（国際公開第WO/29092号公報）等が知られて
いる。
【０００６】VEGF/VPFについては、角膜および他の組織
の移植における過度の血管新生を抗VEGF/VPF抗体によっ
て阻止することの可能性が示唆されている（特表平８−
５０２５１４号公報）が、その実用性については未だ不
明である。特に、眼科領域では常に視機能の保持を念頭
において薬剤を使用しなければならず、角膜移植時の血
管新生を抑制することのみならず、移植した角膜の混濁
や浮腫を生じさせないことを確認することなくしては、
その有用性あるいは実用性を認定できない。
の移植における過度の血管新生を抗VEGF/VPF抗体によっ
て阻止することの可能性が示唆されている（特表平８−
５０２５１４号公報）が、その実用性については未だ不
明である。特に、眼科領域では常に視機能の保持を念頭
において薬剤を使用しなければならず、角膜移植時の血
管新生を抑制することのみならず、移植した角膜の混濁
や浮腫を生じさせないことを確認することなくしては、
その有用性あるいは実用性を認定できない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】このようなことから、
本発明者等は、角膜炎や角膜移植時の血管新生を抑制す
ることのみならず、これに伴う角膜の混濁や浮腫を発生
させない実用的な角膜血管新生阻害剤を提供することを
目的として鋭意研究を行った結果、本発明を完成させた
のである。
本発明者等は、角膜炎や角膜移植時の血管新生を抑制す
ることのみならず、これに伴う角膜の混濁や浮腫を発生
させない実用的な角膜血管新生阻害剤を提供することを
目的として鋭意研究を行った結果、本発明を完成させた
のである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、Ｖ
ＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを有効成分とする角膜血
管新生阻害剤に関するものである。本発明者等は、VEGF
/VPFの活性を中和できる抗VEGF/VPF抗体を用いてラット
の角膜移植実験（Invest. Ophthalmol. VisualSci.,26,
23(1985)）を行い、抗VEGF/VPF抗体によって血管新生の
抑制のみならず、血管サイズ、浮腫、清澄度などが有意
にコントロール群に比べ改善されることを見出した結
果、本発明を完成したのである。
ＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを有効成分とする角膜血
管新生阻害剤に関するものである。本発明者等は、VEGF
/VPFの活性を中和できる抗VEGF/VPF抗体を用いてラット
の角膜移植実験（Invest. Ophthalmol. VisualSci.,26,
23(1985)）を行い、抗VEGF/VPF抗体によって血管新生の
抑制のみならず、血管サイズ、浮腫、清澄度などが有意
にコントロール群に比べ改善されることを見出した結
果、本発明を完成したのである。
【０００９】本発明において、ＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタ
ゴニストとは、血管内皮細胞に対する特異的細胞増殖促
進活性または血管透過性促進活性を有するＶＥＧＦ／Ｖ
ＰＦの機能を阻害する機能を有するものをさし、その機
能を有するものであれば如何なる形態のものでもよく、
最も一般的には、ＶＥＧＦ／ＶＰＦに作用する抗体、ま
たはその一部分が挙げられるが、それらに限定されるこ
となく、例えば、ＶＥＧＦ／ＶＰＦの作用を阻害する不
活性なＶＥＧＦ／ＶＰＦ、またはその一部分、ＶＥＧＦ
／ＶＰＦの受容体の機能を損なう、例えば、血管内皮細
胞増殖因子／血管透過性因子受容体（例えばＦＬＴやＫ
ＤＲなど）に対する抗体、またはその一部分、さらに
は、ＶＥＧＦ／ＶＰＦの産生そのものを抑制する薬剤等
を挙げることができる。
ゴニストとは、血管内皮細胞に対する特異的細胞増殖促
進活性または血管透過性促進活性を有するＶＥＧＦ／Ｖ
ＰＦの機能を阻害する機能を有するものをさし、その機
能を有するものであれば如何なる形態のものでもよく、
最も一般的には、ＶＥＧＦ／ＶＰＦに作用する抗体、ま
たはその一部分が挙げられるが、それらに限定されるこ
となく、例えば、ＶＥＧＦ／ＶＰＦの作用を阻害する不
活性なＶＥＧＦ／ＶＰＦ、またはその一部分、ＶＥＧＦ
／ＶＰＦの受容体の機能を損なう、例えば、血管内皮細
胞増殖因子／血管透過性因子受容体（例えばＦＬＴやＫ
ＤＲなど）に対する抗体、またはその一部分、さらに
は、ＶＥＧＦ／ＶＰＦの産生そのものを抑制する薬剤等
を挙げることができる。
【００１０】ＶＥＧＦ／ＶＰＦには、アミノ酸残基数１
２１、１６５、１８９又は２０６の４種類のサブタイプ
が存在するが（渋谷正史、臨床免疫、２８（６）７５８
−７６４（１９９６）参照）、前記抗体は、何れのサブ
タイプに対する抗体であってもよい。また、該抗体とし
ては、マウス抗体等もあげられるが、ヒトへの投与にお
いて副作用を軽減するための処理を行ったものを使用す
るのが望ましい。例えば、マウスモノクローナル抗体を
ポリエチレングリコールのような物質で化学修飾を行
い、抗原性を軽減させたものや、マウス・ヒトキメラ抗
体またはヒト化抗体等を用いることできる。さらに、こ
れらを酵素的に切断して低分子化した抗体も使用するこ
とができる。該キメラ抗体またはヒト化抗体としては、
ＩｇＧタイプまたはＩｇＡタイプ等があげられ、該Ｉｇ
Ｇのイソタイプとしては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３またはＩｇＧ４があげられる。
２１、１６５、１８９又は２０６の４種類のサブタイプ
が存在するが（渋谷正史、臨床免疫、２８（６）７５８
−７６４（１９９６）参照）、前記抗体は、何れのサブ
タイプに対する抗体であってもよい。また、該抗体とし
ては、マウス抗体等もあげられるが、ヒトへの投与にお
いて副作用を軽減するための処理を行ったものを使用す
るのが望ましい。例えば、マウスモノクローナル抗体を
ポリエチレングリコールのような物質で化学修飾を行
い、抗原性を軽減させたものや、マウス・ヒトキメラ抗
体またはヒト化抗体等を用いることできる。さらに、こ
れらを酵素的に切断して低分子化した抗体も使用するこ
とができる。該キメラ抗体またはヒト化抗体としては、
ＩｇＧタイプまたはＩｇＡタイプ等があげられ、該Ｉｇ
Ｇのイソタイプとしては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３またはＩｇＧ４があげられる。
【００１１】該キメラ抗体またはヒト化抗体は、例え
ば、VEGF/VPFによるヒト臍帯血管内皮細胞（ＨＵＶＥ
Ｃ）の増殖を抗VEGF/VPFウサギポリクローナル抗体と同
様の中和活性で中和する抗VEGF/VPFマウスモノクローナ
ル抗体ＭＶ８３３（特開平９−１２４６９７参照）を用
い、マウスモノクローナル抗体からキメラ抗体やヒト化
抗体への公知の変換技術（キメラ抗体作製の報告例：Ca
ncer Res.,47,999(1987)、実験医学 臨時増刊、6(10),9
65-971(1988)、ヒト化抗体作製例：特開昭６２−２９６
８９０等参照）に従って作製することが出来る。
ば、VEGF/VPFによるヒト臍帯血管内皮細胞（ＨＵＶＥ
Ｃ）の増殖を抗VEGF/VPFウサギポリクローナル抗体と同
様の中和活性で中和する抗VEGF/VPFマウスモノクローナ
ル抗体ＭＶ８３３（特開平９−１２４６９７参照）を用
い、マウスモノクローナル抗体からキメラ抗体やヒト化
抗体への公知の変換技術（キメラ抗体作製の報告例：Ca
ncer Res.,47,999(1987)、実験医学 臨時増刊、6(10),9
65-971(1988)、ヒト化抗体作製例：特開昭６２−２９６
８９０等参照）に従って作製することが出来る。
【００１２】本発明の角膜血管新生阻害剤は、好ましく
は非経口的に、たとえば、点眼、硝子体注入、皮下注
射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射等により全身
あるいは局部的に投与することができる。さらに、少な
くとも一種の医薬用担体または希釈剤とともに医薬組成
物のキットの形態をとることができる。本発明の角膜血
管新生阻害剤のヒトに対する投与量は患者の病態、年齢
あるいは投与方法により異なるが、適宜適当な量を選択
することが必要である。例えば、全身投与の場合は、１
０μｇ〜１０mg/kgの範囲で投与することができ、点眼
のような局所投与では１μｇ〜１mg／患者として投与す
る。しかしながら、本発明の角膜血管新生阻害剤はこれ
らの投与量に制限されるものではない。
は非経口的に、たとえば、点眼、硝子体注入、皮下注
射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射等により全身
あるいは局部的に投与することができる。さらに、少な
くとも一種の医薬用担体または希釈剤とともに医薬組成
物のキットの形態をとることができる。本発明の角膜血
管新生阻害剤のヒトに対する投与量は患者の病態、年齢
あるいは投与方法により異なるが、適宜適当な量を選択
することが必要である。例えば、全身投与の場合は、１
０μｇ〜１０mg/kgの範囲で投与することができ、点眼
のような局所投与では１μｇ〜１mg／患者として投与す
る。しかしながら、本発明の角膜血管新生阻害剤はこれ
らの投与量に制限されるものではない。
【００１３】本発明の角膜血管新生阻害剤は常法にした
がって製剤化することができる。たとえば、注射用製剤
は、精製されたＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを溶
剤、たとえば、生理食塩水、緩衝液などに溶解し、それ
に、吸着防止剤、たとえば、Ｔｗｅｅｎ８０、ゼラチ
ン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などを加えたもので
あり、または、使用前に溶解再構成するために凍結乾燥
したものであってもよい。凍結乾燥のための賦形剤とし
ては例えばマンニトール、ブドウ糖などの糖アルコール
や糖類を使用することができる。同様に、点眼液、点眼
軟膏、乳化剤等の形態としたり、滞留を延長させるため
にリポソームやマイクロスフェアーにして使用すること
も出来る。
がって製剤化することができる。たとえば、注射用製剤
は、精製されたＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを溶
剤、たとえば、生理食塩水、緩衝液などに溶解し、それ
に、吸着防止剤、たとえば、Ｔｗｅｅｎ８０、ゼラチ
ン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などを加えたもので
あり、または、使用前に溶解再構成するために凍結乾燥
したものであってもよい。凍結乾燥のための賦形剤とし
ては例えばマンニトール、ブドウ糖などの糖アルコール
や糖類を使用することができる。同様に、点眼液、点眼
軟膏、乳化剤等の形態としたり、滞留を延長させるため
にリポソームやマイクロスフェアーにして使用すること
も出来る。
【００１４】本発明によれば、ＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタ
ゴニストの作用によって血管新生を誘発するＶＥＧＦ／
ＶＰＦの作用を抑えることにより、角膜移植に伴う血管
新生を抑制するとともに移植角膜の混濁や浮腫の発生を
抑制し、移植角膜の拒絶反応を起こすことなく生着を促
進する作用を示し、透明度を維持し、移植角膜の治癒に
寄与するものと考えられる。また、以下の実施例の動物
実験モデルは角膜炎モデルと考えられることから、ＶＥ
ＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを角膜炎による血管新生の
治療に使用することもできると考えられる。かかる角膜
炎を起こす疾患としては、Stevens-Johnson症侯群、Ste
vens-Johnson症侯群類縁の疾患、眼類天疱瘡、眼類天疱
瘡類縁の疾患、角膜腐食（アルカリ、酸、界面活性剤、
各種溶媒や揮発性ガス、その他細胞毒性を示す種々の薬
剤などによる）、コンタクトレンズ長期装着などや、ウ
イルス感染や細菌、真菌感染による角膜炎、異物による
角膜炎、アレルギーによる角膜炎などが挙げられる。
ゴニストの作用によって血管新生を誘発するＶＥＧＦ／
ＶＰＦの作用を抑えることにより、角膜移植に伴う血管
新生を抑制するとともに移植角膜の混濁や浮腫の発生を
抑制し、移植角膜の拒絶反応を起こすことなく生着を促
進する作用を示し、透明度を維持し、移植角膜の治癒に
寄与するものと考えられる。また、以下の実施例の動物
実験モデルは角膜炎モデルと考えられることから、ＶＥ
ＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを角膜炎による血管新生の
治療に使用することもできると考えられる。かかる角膜
炎を起こす疾患としては、Stevens-Johnson症侯群、Ste
vens-Johnson症侯群類縁の疾患、眼類天疱瘡、眼類天疱
瘡類縁の疾患、角膜腐食（アルカリ、酸、界面活性剤、
各種溶媒や揮発性ガス、その他細胞毒性を示す種々の薬
剤などによる）、コンタクトレンズ長期装着などや、ウ
イルス感染や細菌、真菌感染による角膜炎、異物による
角膜炎、アレルギーによる角膜炎などが挙げられる。
【００１５】
【実施例】以下、参考例および実施例により本発明を具
体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。
体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。
【００１６】参考例１（ＧＳＴ−ＶＥＧＦ／ＶＰＦの作
製および抗ＶＥＧＦ／ＶＰＦウサギポリクローナル抗体
の作製）
製および抗ＶＥＧＦ／ＶＰＦウサギポリクローナル抗体
の作製）
【００１７】ヒト子宮頸癌細胞HeLa/v5(微生物工業技術
研究所に寄託：寄託番号「微工研菌寄第１３１８５
号」）から単離したVEGF/VPF（VEGF121)のcDNAを大腸菌
の中でグルタチオンSトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）と
の融合蛋白として発現させ、得られた蛋白を抗原として
常法に従いウサギを免疫した。抗体価の上昇した血清か
らDEAEのクロマトグラフィーでIgG画分を分画した。
研究所に寄託：寄託番号「微工研菌寄第１３１８５
号」）から単離したVEGF/VPF（VEGF121)のcDNAを大腸菌
の中でグルタチオンSトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）と
の融合蛋白として発現させ、得られた蛋白を抗原として
常法に従いウサギを免疫した。抗体価の上昇した血清か
らDEAEのクロマトグラフィーでIgG画分を分画した。
【００１８】得られた抗体が活性型VEGF/VPFと反応する
ことを確認するためにVEGF121遺伝子を組み込み、VEGF
が高発現するようになったHeLa/v5を培養した培地から
硫安塩析により蛋白を取り出し、それを12%SDS-PAGEで
展開し、ゲルからナイロン膜に蛋白を移し、上記の免疫
して得られた抗体を反応させWestern blotを行った。VE
GF/VPFの分子量に相当する位置に特異的な交差反応が認
められ、作製した抗体は活性型のVEGF/VPF分子を認識す
ることが確認された。
ことを確認するためにVEGF121遺伝子を組み込み、VEGF
が高発現するようになったHeLa/v5を培養した培地から
硫安塩析により蛋白を取り出し、それを12%SDS-PAGEで
展開し、ゲルからナイロン膜に蛋白を移し、上記の免疫
して得られた抗体を反応させWestern blotを行った。VE
GF/VPFの分子量に相当する位置に特異的な交差反応が認
められ、作製した抗体は活性型のVEGF/VPF分子を認識す
ることが確認された。
【００１９】実施例１（角膜移植ラットに対する抗VEGF
/VPF抗体投与効果の評価）
/VPF抗体投与効果の評価）
【００２０】(1)角膜移植モデルラットの作製 Ｌｅｗｉｓ ラット（雄、８週齢、日本チャールズリバ
ー）をネンブタール麻酔下、左目の角膜を直径３mmのト
レパンで取り除き、ここにＦｉｓｈｅｒ ラット（雄、
８週齢、日本チャールズリバー）から直径３mmのトレパ
ンで取り出した角膜を１０−０ナイロン糸で４ヶ所縫合
して移植した。
ー）をネンブタール麻酔下、左目の角膜を直径３mmのト
レパンで取り除き、ここにＦｉｓｈｅｒ ラット（雄、
８週齢、日本チャールズリバー）から直径３mmのトレパ
ンで取り出した角膜を１０−０ナイロン糸で４ヶ所縫合
して移植した。
【００２１】(2)抗ＶＥＧＦ／ＶＰＦ抗体による拒絶反
応防止 この角膜移植したラットを１０匹ずつＡ〜Ｃの３群に分
けた。Ｃ群は、参考例１でＶＥＧＦ121-ＧＳＴ（glutat
hione-S-transferase）融合蛋白を抗原として作製した
抗VEGF/VPFウサギポリクローナル抗体を１日５回（５、
９、１３、１７、２２時）１０μｌづつ１０日間点眼し
た。なお、この抗体は、参考例１で得られた免疫グロブ
リン(IgG)分画の蛋白濃度１４mg／mlとしたものを生理
食塩水で１０倍に希釈して使用した。Ｂ群は、ウサギ免
疫グロブリン画分（ＤＡＫＯ Japan、２０mg／ml）を生
理食塩水で１０倍に希釈し、抗VEGF/VPF抗体と同様に１
０μｌ／回、１日５回、１０日間点眼した。Ａ群は、生
理食塩水を用いて抗VEGF/VPF抗体と同様に行った。
応防止 この角膜移植したラットを１０匹ずつＡ〜Ｃの３群に分
けた。Ｃ群は、参考例１でＶＥＧＦ121-ＧＳＴ（glutat
hione-S-transferase）融合蛋白を抗原として作製した
抗VEGF/VPFウサギポリクローナル抗体を１日５回（５、
９、１３、１７、２２時）１０μｌづつ１０日間点眼し
た。なお、この抗体は、参考例１で得られた免疫グロブ
リン(IgG)分画の蛋白濃度１４mg／mlとしたものを生理
食塩水で１０倍に希釈して使用した。Ｂ群は、ウサギ免
疫グロブリン画分（ＤＡＫＯ Japan、２０mg／ml）を生
理食塩水で１０倍に希釈し、抗VEGF/VPF抗体と同様に１
０μｌ／回、１日５回、１０日間点眼した。Ａ群は、生
理食塩水を用いて抗VEGF/VPF抗体と同様に行った。
【００２２】(3)拒絶反応防止効果の評価 評価は、移植した角膜の清澄度、血管新生の範囲とその
血管サイズ、浮腫の度合を移植手術当日から、１、２、
４、６、８、１１、１２、１４、１９日目に実体顕微鏡
により写真撮影して調べた。さらに、手術１４日目に投
与群を知らせずに眼科医に血管新生の範囲、血管サイ
ズ、浮腫の度合をランダムに実体顕微鏡下で評価するよ
う依頼した。各評価の評価基準は以下のとおりである：
血管サイズ、浮腫の度合を移植手術当日から、１、２、
４、６、８、１１、１２、１４、１９日目に実体顕微鏡
により写真撮影して調べた。さらに、手術１４日目に投
与群を知らせずに眼科医に血管新生の範囲、血管サイ
ズ、浮腫の度合をランダムに実体顕微鏡下で評価するよ
う依頼した。各評価の評価基準は以下のとおりである：
【００２３】・移植片の清澄度 ０：完全に透明 １：かすかに靄がかかっているが、虹彩と瞳孔は容易に
看取できる ２：不透明であるが虹彩と瞳孔は看取できる ３：不透明であり虹彩と瞳孔が容易に看取できない ４：完全に不透明であり瞳孔が全く見えない
看取できる ２：不透明であるが虹彩と瞳孔は看取できる ３：不透明であり虹彩と瞳孔が容易に看取できない ４：完全に不透明であり瞳孔が全く見えない
【００２４】・眼科医による新生血管の範囲 顕微鏡下で角膜上の新生血管の範囲を、割合で評価し
た。 ０：移植片の縁に血管なし １：移植片の縁に血管あり ２：移植片の縁から中心までの距離の２５％に血管あり ３：移植片の縁から中心までの距離の５０％に血管あり ４：移植片の縁から中心まで血管あり
た。 ０：移植片の縁に血管なし １：移植片の縁に血管あり ２：移植片の縁から中心までの距離の２５％に血管あり ３：移植片の縁から中心までの距離の５０％に血管あり ４：移植片の縁から中心まで血管あり
【００２５】・新生血管サイズ ０：血管なし １：顕微鏡下で看取できる血管あり ２：顕微鏡下で容易に看取できる血管あり ３：顕微鏡なしで容易に看取できる血管あり
【００２６】・移植片の浮腫の度合 ０：浮腫なし １：浮腫はあるが軽い ２：その縁で隆起している重篤な浮腫
【００２７】図１から、Ｃ群（抗VEGF/VPF抗体投与群）
の清澄度は、４〜１４日目まで、Ｂ群（ウサギＩｇＧ投
与群）よりも有意に良好に保たれることが示され、４〜
１２日目まで、Ａ群（生理食塩水投与群）よりも有意に
良好に保たれることが示された。図２から、Ｃ群の血管
新生が起こっている範囲は、６〜１９日目で、Ｂ群およ
びＡ群よりも有意に狭く保たれることが示された。図３
から、Ｃ群の新生血管の太さは、６〜１９日目で、Ｂ群
およびＡ群よりも有意に細く保たれることが示された。
図４から、Ｃ群の浮腫は、６〜１９日目で、Ｂ群および
Ａ群よりも有意に抑制されることが示された。
の清澄度は、４〜１４日目まで、Ｂ群（ウサギＩｇＧ投
与群）よりも有意に良好に保たれることが示され、４〜
１２日目まで、Ａ群（生理食塩水投与群）よりも有意に
良好に保たれることが示された。図２から、Ｃ群の血管
新生が起こっている範囲は、６〜１９日目で、Ｂ群およ
びＡ群よりも有意に狭く保たれることが示された。図３
から、Ｃ群の新生血管の太さは、６〜１９日目で、Ｂ群
およびＡ群よりも有意に細く保たれることが示された。
図４から、Ｃ群の浮腫は、６〜１９日目で、Ｂ群および
Ａ群よりも有意に抑制されることが示された。
【００２８】また、図５から、眼科医による新生血管範
囲の判定の結果、Ｃ群の血管新生が起こっている範囲
は、１４日目で、Ｂ群およびＡ群よりも有意に狭いこと
が示された。図６から、眼科医による新生血管サイズの
判定の結果、Ｃ群の新生血管の太さは、１４日目で、Ｂ
群およびＡ群よりも有意に細いことが示された。図７か
ら、眼科医による浮腫の判定の結果、Ｃ群の浮腫は、１
４日目で、Ｂ群およびＡ群よりも有意に抑制されている
ことが示された。
囲の判定の結果、Ｃ群の血管新生が起こっている範囲
は、１４日目で、Ｂ群およびＡ群よりも有意に狭いこと
が示された。図６から、眼科医による新生血管サイズの
判定の結果、Ｃ群の新生血管の太さは、１４日目で、Ｂ
群およびＡ群よりも有意に細いことが示された。図７か
ら、眼科医による浮腫の判定の結果、Ｃ群の浮腫は、１
４日目で、Ｂ群およびＡ群よりも有意に抑制されている
ことが示された。
【００２９】さらに、移植後１９日目にラットを屠殺、
その角膜移植した眼球を取りだした。この取り出した眼
球を固定した後、切片を作製しパス染色を行った。この
結果を図８及び図９の写真に示す。図８の写真はウサギ
免疫グロブリン画分を点眼したもの、図９の写真は抗Ｖ
ＥＧＦウサギポリクローナル抗体を点眼したもので、図
９の方が明かに移植角膜の腫脹が抑えられていることが
分かる。
その角膜移植した眼球を取りだした。この取り出した眼
球を固定した後、切片を作製しパス染色を行った。この
結果を図８及び図９の写真に示す。図８の写真はウサギ
免疫グロブリン画分を点眼したもの、図９の写真は抗Ｖ
ＥＧＦウサギポリクローナル抗体を点眼したもので、図
９の方が明かに移植角膜の腫脹が抑えられていることが
分かる。
【００３０】以上から、抗VEGF/VPF抗体は、VEGF/VPFの
作用を中和する機能によって、投与している間は、移植
角膜片に生じる血管新生を有意に抑制するとともに、該
移植片の清澄度を良好に保ち、かつ、浮腫の発生を防止
して、角膜移植拒絶反応を抑制することが示された。
作用を中和する機能によって、投与している間は、移植
角膜片に生じる血管新生を有意に抑制するとともに、該
移植片の清澄度を良好に保ち、かつ、浮腫の発生を防止
して、角膜移植拒絶反応を抑制することが示された。
【００３１】
【発明の効果】本発明によれば、ＶＥＧＦ／ＶＰＦアン
タゴニストを投与することにより移植角膜片の血管新生
を抑制するとともに、該移植片の清澄度を良好に保ち、
かつ、浮腫の発生を防止して、角膜移植拒絶反応を防止
することができ、また角膜炎の治療剤として、さらに
は、移植片の混濁防止剤又は浮腫防止剤としての利用も
可能である。本発明の薬剤はさらに血管新生抑制効果を
向上させるために、免疫抑制剤、抗炎症剤、抗サイトカ
イン剤等と併用することもできる。
タゴニストを投与することにより移植角膜片の血管新生
を抑制するとともに、該移植片の清澄度を良好に保ち、
かつ、浮腫の発生を防止して、角膜移植拒絶反応を防止
することができ、また角膜炎の治療剤として、さらに
は、移植片の混濁防止剤又は浮腫防止剤としての利用も
可能である。本発明の薬剤はさらに血管新生抑制効果を
向上させるために、免疫抑制剤、抗炎症剤、抗サイトカ
イン剤等と併用することもできる。
【図１】角膜移植モデルラットに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼した際の移植片の清澄度を示すグラフ。
点眼した際の移植片の清澄度を示すグラフ。
【図２】角膜移植モデルラットに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼した際の新生血管の範囲を示すグラフ。
点眼した際の新生血管の範囲を示すグラフ。
【図３】角膜移植モデルラットに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼した際の新生血管サイズを示すグラフ。
点眼した際の新生血管サイズを示すグラフ。
【図４】角膜移植モデルマウスに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼した際の移植片の浮腫の発生を示すグラフ。
点眼した際の移植片の浮腫の発生を示すグラフ。
【図５】角膜移植モデルマウスに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼して１４日目の眼科医による新生血管の範囲の判定
を示すグラフ。
点眼して１４日目の眼科医による新生血管の範囲の判定
を示すグラフ。
【図６】角膜移植モデルラットに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼して１４日目の眼科医による新生血管サイズの判定
を示すグラフ。
点眼して１４日目の眼科医による新生血管サイズの判定
を示すグラフ。
【図７】角膜移植モデルラットに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼して１４日目の眼科医による浮腫の発生の判定を示
すグラフ。
点眼して１４日目の眼科医による浮腫の発生の判定を示
すグラフ。
【図８】角膜移植モデルラットに対しウサギ免疫グロブ
リン画分を点眼して１９日目の移植角膜の状態を示す顕
微鏡写真。
リン画分を点眼して１９日目の移植角膜の状態を示す顕
微鏡写真。
【図９】角膜移植モデルラットに対し抗VEGF/VPF抗体を
点眼して１９日目の移植角膜の状態を示す顕微鏡写真。
点眼して１９日目の移植角膜の状態を示す顕微鏡写真。
フロントページの続き (72)発明者 瀬川 俊章 茨城県つくば市大久保２番 東亞合成株式 会社つくば研究所内
Claims (4)
- 【請求項１】 ＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストを有効
成分とする角膜血管新生阻害剤。 - 【請求項２】 角膜移植拒絶反応防止剤として用いられ
ることを特徴とする請求項１に記載の角膜血管新生阻害
剤。 - 【請求項３】 角膜炎治療剤として用いられることを特
徴とする請求項１に記載の角膜血管新生阻害剤。 - 【請求項４】 ＶＥＧＦ／ＶＰＦアンタゴニストがＶＥ
ＧＦ／ＶＰＦに対する抗体であることを特徴とする請求
項１の角膜血管新生阻害剤。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9267843A JPH1180024A (ja) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | 角膜血管新生阻害剤 |
| PCT/JP1998/004114 WO1999013909A1 (en) | 1997-09-12 | 1998-09-11 | Corneal neovascularization inhibitors |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9267843A JPH1180024A (ja) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | 角膜血管新生阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1180024A true JPH1180024A (ja) | 1999-03-23 |
Family
ID=17450404
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9267843A Pending JPH1180024A (ja) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | 角膜血管新生阻害剤 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1180024A (ja) |
| WO (1) | WO1999013909A1 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007529418A (ja) * | 2003-05-28 | 2007-10-25 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | Ｖｅｇｆアンタゴニストの使用による角膜移植拒絶を処置する方法 |
| JP2009137998A (ja) * | 2000-12-19 | 2009-06-25 | Res Dev Found | レンチウイルス・ベクター媒介遺伝子導入及びその使用 |
| JP2011084578A (ja) * | 1999-01-05 | 2011-04-28 | Fliners Univ Of South Australia | 眼障害を治療及び診断するための新規な薬物及び方法 |
| US10501523B2 (en) | 2014-07-18 | 2019-12-10 | Sanofi | IL-8 level based method of predicting the outcome of colon cancer treatment |
| US11033606B2 (en) | 2011-04-26 | 2021-06-15 | Sanofi | Composition comprising aflibercept, folinic acid, 5-fluorouracil (5-FU) and irinotecan (FOLFIRI) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7141607B1 (en) | 2000-03-10 | 2006-11-28 | Insite Vision Incorporated | Methods and compositions for treating and inhibiting retinal neovascularization |
| CA2373237A1 (en) * | 2000-03-10 | 2001-09-20 | Insite Vision Incorporated | Methods and compositions for treating and preventing posterior segment ophthalmic disorders |
| AU2006214658A1 (en) | 2005-02-02 | 2006-08-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating eye injury with local administration of a VEGF inhibitor |
| PL1861116T3 (pl) | 2005-03-25 | 2016-02-29 | Regeneron Pharma | Formulacje antagonistów VEGF |
| WO2007038453A2 (en) * | 2005-09-26 | 2007-04-05 | Advanced Ocular Systems Limited | Use of an anti-vascular endothelial growth factor (vegf) agent to ameliorate inflammation |
| EP2944306B1 (en) | 2006-06-16 | 2021-01-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Vegf antagonist formulations suitable for intravitreal administration |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR9207175A (pt) * | 1992-10-28 | 1995-12-12 | Genentech Inc | Composição contendo antagonista de fator de crescimento de célula endotelial vascular sequência aminoácida de anticorpo monoclonal polipeptídeo e método de tratamento de tumor em mamífero |
-
1997
- 1997-09-12 JP JP9267843A patent/JPH1180024A/ja active Pending
-
1998
- 1998-09-11 WO PCT/JP1998/004114 patent/WO1999013909A1/ja active Application Filing
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011084578A (ja) * | 1999-01-05 | 2011-04-28 | Fliners Univ Of South Australia | 眼障害を治療及び診断するための新規な薬物及び方法 |
| JP2009137998A (ja) * | 2000-12-19 | 2009-06-25 | Res Dev Found | レンチウイルス・ベクター媒介遺伝子導入及びその使用 |
| JP2007529418A (ja) * | 2003-05-28 | 2007-10-25 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | Ｖｅｇｆアンタゴニストの使用による角膜移植拒絶を処置する方法 |
| US11033606B2 (en) | 2011-04-26 | 2021-06-15 | Sanofi | Composition comprising aflibercept, folinic acid, 5-fluorouracil (5-FU) and irinotecan (FOLFIRI) |
| US10501523B2 (en) | 2014-07-18 | 2019-12-10 | Sanofi | IL-8 level based method of predicting the outcome of colon cancer treatment |
| US11208461B2 (en) | 2014-07-18 | 2021-12-28 | Sanofi | Method for predicting the outcome of a treatment with aflibercept of a patient suspected to suffer from a cancer |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1999013909A1 (en) | 1999-03-25 |
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