KR20180014881A - 항-ｖｅｇｆ 항체를 사용한 치료 - Google Patents

항-ｖｅｇｆ 항체를 사용한 치료 Download PDF

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그웬돌린 피프
에릭 홈그렌
로버트 디. 마쓰
윌리엄 노보트니
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 발명은 일반적으로 항-VEGF (vascular endothelial cell growth factor) 항체를 사용한 질병 및 병적 증상의 치료에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 항-VEGF 항체를 사용하거나, 바람직하게는 항-VEGF 항체를 하나 이상의 추가의 항-종양 치료제와 함께 사용하는, 암에 걸리기 쉽거나 암으로 진단된 인간 환자의 치료에 관한 것이다.

Description

항-ＶＥＧＦ 항체를 사용한 치료{Treatment with anti-VEGF antibodies}
본원은 2003년 5월 30일자로 출원된 미국 가출원 번호 60/474,480에 대한 우선권을 주장한다. 상기 출원의 기술이 본원에 참조로 인용된다.
본 발명은 일반적으로 인간의 질병 및 병적 증상의 치료에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본원은 단독으로 또는 다른 항암 치료와 병행하는 암에 대한 항-혈관신생 치료에 관한 것이다.
암은 인간의 건강에 대한 가장 치명적인 위협 중의 하나이다. 미국에서는 매년 거의 1,300,000명의 새로운 환자가 암에 걸리며 심장병에 이어 제 2의 사망 원인으로 4명 중 약 1명에 이른다. 또한, 암은 5년 이내에 사망의 제 1 원인이 되어 심혈관 질병을 능가할 수 있다고 예측된다. 고형암이 이러한 사망의 대부분을 차지한다. 특정 암의 의학적 치료에 있어서는 상당한 진전이 있었지만, 모든 암에 대한 총 5-년 생존률은 지난 20년 동안 단지 약 10 % 만이 개선되었다. 암 또는 악성 종양은 전이되며 조절되지 않는 방식으로 급속히 성장하므로, 적시에 발견하여 치료하기가 매우 어렵다. 또한, 암은 조직 내의 하나 또는 수개의 정상 세포가 악성 전환을 통해 신체 내의 거의 모든 조직으로부터 발생할 수 있으며, 특정한 조직 기원을 갖는 암의 유형 마다 서로 상이하다.
암을 치료하기 위한 현행 방법은 상대적으로 비-선택적이다. 수술로 질병을 갖는 조직을 제거하고; 방사선 치료로 고형 종양을 감소시키며; 화학치료로 빠르게 분열하는 세포를 죽인다. 특히, 화학치료는 다양한 부작용을 낳아, 일부의 경우엔 투여될 수 있는 용량을 제한하여 결국엔 잠재적으로 유효한 약물의 사용을 배제시킬 정도로 부작용이 매우 심각하다. 또한, 암은 종종 화학요법 약물에 대해 내성을 발달시킨다.
따라서, 특이적이고 보다 효과적인 암 치료가 시급하다.
혈관신생은, 혈관 내피 세포가 증식하고 전지하며 재조직화하여 기존의 혈관 네트웍으로부터 새로운 혈관을 형성하는 중요한 세포성 사건이다. 혈관 공급의 발달이 정상 및 병적 증식 과정에 필수적이라는 주목할만한 증거가 있다 (Folkman and Klagsbrun (1987) Science 235:442-447). 이화작용 산물의 제거뿐만 아니라 산소 및 영양물의 공급이 다세포 유기체에서 일어나는 대부분의 성장 과정에서 속도-제한 단계이다. 따라서, 일반적으로 혈관 구획이 배형성 동안의 기관 발달 및 분화뿐만 아니라 성인에서 상처를 치유하고 재생하는 작용에 필요하다고 간주되고 있다.
또한, 혈관신생은, 이에 제한되지는 않으나 종양, 증식성 망막증, 노인성 황반변성, 류마티스 관절염 (RA) 및 건선을 포함하여 다양한 장애의 병인에 연루된다. 혈관신생은 대부분의 1차 종양의 성장 및 이들의 연속한 전이에 필수적이다. 종양은 단순 확산에 의해 1 내지 2 mm까지 충분한 영양물 및 산소를 흡수할 수 있으며, 이 지점에서 추가의 성장을 위해 혈관 공급의 가공을 필요로 한다. 이러한 과정은, 종양 덩이로 성장하여 이를 침윤하는 새로운 모세혈관을 생기게 하도록 이웃하는 호스트 (host) 성숙 혈관계를 모으는 것으로 생각된다. 또한, 종양 혈관신생은 신혈관화를 촉진시키기 위해 골수로부터 순환하는 내피 전구체 세포의 모집을 포함한다 (Kerbel (2000) Carcinogenesis 21:505-515; Lynden et al. (2001) Nat. Med. 7:1194-1201).
새로운 혈관의 유도가 종양 혈관신생의 주된 형태로 간주되지만, 최근의 자료에 의하면 일부 종양은 기존의 호스트의 혈관을 자기 것으로 만들어 성장할 수 있다. 이어서, 자기 것으로 만들어진 혈관계는 퇴화하여, 종국적으로는 종양의 가장자리에서 저산소증-유도된 혈관신생에 의해 역전되는 종양 퇴화를 이끈다 (Holash et al. (1999) Science 284:1994-1998).
혈관신생의 주목할 만한 생리학적 및 병리학적 중요성에 비추어 볼 때, 이러한 과정을 조절할 수 있는 인자들을 설명하기 위해 많은 연구들이 수행되어왔다. 혈관신생 과정이 프로-혈관신생 분자와 항-혈관신생 분자 사이의 균형에 의해 조절되고 다양한 질병, 특히 암에서 탈선된다고 제시되고 있다 (Carmeliet and Jain (2000) Nature 407:249-257).
혈관 내피 세포 성장 인자 (Vascular endothelial cell growth factor: VEGF) (VEGF-A 또는 혈관 투과성 인자 (VPF)로도 불림)은 정상적 혈관신생 및 비정상적 혈관신생 모두의 중요한 조절자로 보고되었다 (Ferrara and Davis-Smyth (1997) Endocrine Rev. 18:4-25; Ferrara (1999) J. Mol. Med. 77:527-543). 혈관 형성의 과정에 기여하는 다른 성장 인자와 비교하여, VEGF는 혈관 시스템 내의 내피 세포에 대해 높은 특이성을 갖는 것이 독특하다. VEGF는 배아의 혈관형성 (vasculogenesis) 및 혈관신생 (angiogenesis)에 필수적이다 (Carmeliet et al. (1996) Nature 380:435-439; Ferrara et al. (1996) Nature 380:439-442). 또한, VEGF는 여성 생식관에서 주기적인 혈관 증식 및 골 성장과 연골 형성에 필요하다 (Ferrara et al. (1998) Nature Med. 4:336-340; Gerber et al. (1999) Nature Med. 5:623-628).
다면발현성 성장 인자로서의 VEGF는 혈관신생 및 혈관형성에서 혈관신생 인자인 것 이외에, 다른 생리학적 과정, 예를 들어 내피 세포 생존, 혈관 투과성 및 확장, 단구 화학주성 및 칼슘 유입에서 많은 생물학적 효과를 나타낸다 (Ferrara and Davis-Smyth (1997), 상기 참조). 또한, 최근의 연구는 소수의 비-내피 세포 타입, 예를 들어 망막 색소 내피 세포, 췌장관 세포 및 슈반 (Schwann) 세포에서 VEGF의 유사분열 효과를 보고하였다 (Guerrin et al. (1995) J. Cell Physiol. 164:385-394; Oberg-Welsh et al. (1997) Mol. Cell. Endocrinol. 126:125-132; Sondell et al. (1999) J. Neurosci. 19:5731-5740).
또한, 실질적 증거가 병적 혈관신생을 수반하는 증상 또는 질병의 발병에 VEGF의 중요한 역할을 연루시킨다. VEGF mRNA는 시험된 다수의 인간 종양에 의해 과발현된다 (Berkman et al. J Clin Invest 91:153-159 (1993); Brown et al. Human Pathol. 26:86-91 (1995); Brown et al. Cancer Res. 53:4727-4735 (1993); Mattern et al. Brit. J. Cancer. 73:931-934 (1996); Dvorak et al. Am J. Pathol. 146:1029-1039 (1995)). 또한, 안액 중 VEGF의 농도는 당뇨병 및 다른 허혈-관련 망막증을 갖는 환자에서 혈관의 활성적 증식의 존재와 고도로 연관이 있다 (Aiello et al. N. Engl. J. Med. 331:1480-1487 (1994)). 또한, 최근의 연구에서는 VEGF가 AMD에 걸린 환자의 맥락막 신혈관 막에 존재한다는 것을 입증하였다 (Lopez et al. Invest. Ophtalmo. Vis. Sci. 37:855-868 (1996)).
종양 성장을 촉진하는데 있어 VEGF의 중심적 역할을 감안할 때, VEGF는 치료적 중재를 위해 관심을 끄는 표적물을 제공한다. 실제로, 다수의 치료적 전략들이 VEGF를 차단하는데 목표를 두거나 VEGF 수용체 시그널화 시스템이 신생물 질병의 치료를 위해 현재 개발되고 있다 (Rosen (2000) Oncologist 5:20-27; Ellis et al. (2000) Oncologist 5:11-15; Kerbel (2001) J. Clin. Oncol. 19:45S-51S). 지금까지는, 단일클론 항체에 의한 VEGF/VEGF 수용체 차단 및 티로신 키나제 억제제에 의한 수용체 시그널화의 억제가 가장 잘 연구된 접근법이다. 또한, VEGFR-1 리보좀, VEGF 독소 결합체 및 가용성 VEGF 수용체가 연구되고 있다.
항-VEGF 항체 "베바시주맙 (Bevacizumab: BV)" ("rhuMAb VEGF" 또는 "AvastinTM"으로도 불림)은 문헌 (Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599)에 따라 제조된 재조합의 인간화된 항-VEGF 단일클론 항체이다. 이는 인간 IgG1 골격 (framework) 및 인간 VEGF의 이의 수용체에의 결합을 차단하는 쥐 (murine) 항-hVEGF 단일클론 항체 A4.6.1로부터의 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 대부분의 골격 영역을 포함하여 베바시주맙의 아미노산 서열의 약 93 %가 인간 IgG1으로부터 유래되며, 서열의 약 7 %가 쥐 항체 A4.6.1로부터 유래한다. 베바시주맙은 분자량이 약 149,000 달톤이며 당화된다. 베바시주맙은 다양한 암을 치료하기 위해 임상적으로 조사되고 있으며 일부 초기 단계의 시도가 희망적인 결과를 보였다 (Kerbel (2001) J. Clin. Oncol. 19:45S-51S; De Vore et al. (2000) Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 19:485a; Johnson et al. (2001) Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20:315a; Kabbinavar et al. (2003) J. Clin. Oncol. 21:60-65).
발명의 요지
본 발명은 질병 및 병적 증상을 치료하기 위한 항-VEGF 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은, 부분적으로는 항-VEGF 항체를 표준 화학치료에 추가하는 것이 암 환자 사이에서 통계학적으로 유의하며 임상적으로 의미 있는 개선을 갖는다는 예상치 못한 결과에 기초하여, 암을 치료하기 위한 효과적인 접근법을 제공한다.
따라서, 하나의 측면에서, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 인간 암 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 인간 환자의 암 치료 방법을 제공한다.
본 발명에 의해 치료할 수 있는 암은, 이에 한정되는 것은 아니나, 암종 (carcinoma), 림프종 (lymphoma), 아구종 (blastoma), 육종 (sarcoma), 및 백혈병 (leukemia) 또는 림프종양 (lymphoid malignancy)을 포함한다. 이러한 암의 특정 예는 편평상피 세포암, 폐암 (소세포성 폐암, 비-소세포성 폐암, 폐의 선암, 및 폐의 편평상피 암종을 포함), 복막암, 간세포암 (hepatocellular cancer), 위암 (gastric 또는 stomach cancer) (위장암을 포함), 췌장암, 교아구종, 경부암, 난소암, 간암 (liver cancer), 방광암, 간종양 (hepatoma), 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막암 또는 자궁암, 타액선암, 신장암 (kidney 또는 renal cancer), 전립선암, 외음암, 갑상선암, 간암종 (hepatic carcinoma) 및 다양한 유형의 두경부암; B-세포 림프종 (저등급/여포성 비-호지킨스 림프종 (NHL); 소림프구성 (SL) 비-호지킨스 림프종 ; 중간등급/여포성 비-호지킨스 림프종; 중간등급 확산 비-호지킨스 림프종; 고등급 면역아구성 비-호지킨스 림프종; 고등급 림프아구성 비-호지킨스 림프종; 고등급 소 비-절단세포성 (non-cleaved cell) 비-호지킨스 림프종; 벌키 질병 (bulky disease) 비-호지킨스 림프종; 외투세포 (mantle cell) 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 (Waldenstrom's Macroglobulinemia)을 포함); 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 급성 림프아구성 백혈병 (ALL); 유모세포 (Hairy cell) 백혈병; 만성 골수아구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 장애 (PTLD); 모반증과 관련된 비정상적 혈관 증식, 부종 (뇌종양과 관련된 부종), 및 메이그 증후군 (Meigs' syndrome)을 포함한다. 바람직하게는, 암은 유방암, 대장암, 직장암, 비-소세포성 폐암, 비-호지킨스 림프종, 신세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연부조직육종, 카포시육종, 유암종 (carcinoid carcinoma), 두경부암, 흑색종, 난소암, 중피암, 및 다발성골수종으로 이루어진 군 중에서 선택된다. 보다 바람직하게는, 암은 대장암이다. 본 발명에 따라 치료할 수 있는 암적 증상은 전이성 암을 포함한다. 본 발명의 방법은 유혈관 (vascularized) 종양의 치료에 특히 적합하다.
항암 활성을 나타내는 어떠한 화학치료제도 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 바람직하게는, 화학치료제는 알킬화제, 대사길항물질, 폴산 동족체, 피리미딘 동족체, 퓨린 동족체 및 관련 억제제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 항생제, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 억제제, 인터페론, 백금 배위 착물, 안트라센디온 치환된 우레아, 메틸 히드라진 유도체, 부신피질 억제제, 아드레노코르티코스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 안티에스트로겐, 안드로겐, 안티안드로겐, 및 고나도트로핀-방출 호르몬 동족체로 이루어진 군 중에서 선택된다. 보다 바람직하게는, 화학치료제는 5-플루오로우라실 (5-FU), 류코보린 (LV), 이리노테칸, 옥살리플라틴, 카페시타빈, 파클리탁셀 및 독세탁셀로 이루어진 군 중에서 선택된다. 2개 이상의 화학치료제가 칵테일로서 항-VEGF 항체의 투여와 병행하여 사용될 수 있다. 하나의 바람직한 병행 화학치료는 5-FU와 하나 이상의 다른 화학치료제(들)을 포함하는 플루오로우라실계이다. 병행 화학치료의 적합한 용량 투여계획은 당업자에게 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 (Saltz et al. (1999) Proc ASCO 18:233a; Douillard et al. (2000) Lancet 355:1041-7)에 기술되어 있다.
하나의 양태에서, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체 조성물 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 암을 갖는 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항-VEGF 항체와 항-신생물 조성물의 공동-투여로 생존기간이 효과적으로 증가되는, 상기 환자의 생존기간 증가 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체 조성물 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 암을 갖는 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항-VEGF 항체와 항-신생물 조성물의 공동-투여로 진행이 없는 (progression-free) 생존기간이 효과적으로 증가되는, 상기 환자의 진행이 없는 생존기간 증가 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체 조성물 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 암을 갖는 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항-VEGF 항체와 항-신생물 조성물의 공동-투여로 환자 군의 반응률이 효과적으로 증가되는, 상기 환자 군의 치료 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체 조성물 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 암을 갖는 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 항-VEGF 항체와 항-신생물 조성물의 공동-투여로 반응기간이 효과적으로 증가되는, 상기 환자의 반응기간 증가 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체를 대장암에 걸리기 쉽거나 대장암으로 진단된 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자의 치료 방법을 제공한다. 직장암은 전이성일 수 있다. 항-VEGF 항체 치료는 추가로 직장암을 위한 표준 화학치료, 예를 들어 문헌 (Saltz et al. (1999))에 기술된 살쯔(Saltz) (5-FU/LV/이리노테칸) 투여계획과 병행될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체 조성물 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 전이성 대장암을 갖는 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기한 항-VEGF 항체와 항-신생물 조성물의 공동-투여에 의해 생존기간, 진행이 없는 생존, 반응률 또는 반응기간으로 측정 시 통계학적으로 유의하고 임상적으로 의미 있는 치료된 환자의 개선을 갖는, 상기 환자 또는 상기 환자 군의 치료 방법을 제공한다. 바람직하게는, 항-신생물 조성물은 플루오로우라실계 병행 투여계획이다. 보다 바람직하게는, 병행 투약물은 5-FU + 류코보린, 5-FU + 류코보린 + 이리노테칸 (IFL), 또는 5-FU + 류코보린 + 옥살리플라틴 (FOLFOX)을 포함한다.
본 발명은 용기; 용기 내에 포함된 항-VEGF 항체를 포함하는 조성물; 및 항-VEGF 항체 조성물 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 암 환자에게 투여하도록 조성물의 사용자를 교시하는 패키기 삽입물을 포함하는 제품을 제공한다.
또한, 본 발명은 항-VEGF 항체 조성물을 포함하는 패키지 및 항-VEGF 항체 조성물 및 하나 이상의 화학치료제를 포함하는 항-신생물 조성물을 인간 환자의 암을 치료하는데 사용하기 위한 설명서를 포함하는 인간 환자의 암 치료용 키트를 제공한다.
도 1은 생존에 대한 카플란-마이어 (Kaplan-Meier) 평가를 나타낸다. 평균 생존기간 (점선)은, 이리노테칸, 플루오로우라실 및 류코보린 (IFL) + 위약이 투여된 군에서의 15.6개월과 비교하여, IFL + 베바시주맙 (BV)이 투여된 군은 20.3개월이었으며, 사망 위험률 0.66 (P<0.001)에 상응한다.
도 2는 진행이 없는 생존에 대한 카플란-마이어 평가를 나타낸다. 진행이 없는 평균 생존기간 (점선)은, IFL + 위약이 투여된 군에서의 6.2개월과 비교하여, IFL + BV이 투여된 군은 10.6개월이었으며, 진행 위험률 0.54 (P<0.001)에 상응한다.
도 3A 내지 3C는 기본 특징으로 분류된 환자의 상이한 서브군에 의한 생존기간 분석을 제공한다.
도 4는 5-FU/LV + BV 투여 군에 대해 5-FU/LV + 위약 투여 군을 비교하는, 생존에 대한 카플란-마이어 평가를 나타낸다.
도 5는 5-FU/LV + BV 투여 군에 대해 5-FU/LV + 위약 투여 군을 비교하는, 진행이 없는 생존에 대한 카플란-마이어 평가를 나타낸다.
I. 정의
용어 "VEGF" 및 "VEGF-A"은 165개 아미노산의 혈관 내피 세포 성장 인자 및 관련된 121개, 189개 및 206개 아미노산의 혈관 내피 세포 성장 인자 (Leung et al. Science, 246:1306 (1989); Houck et al. Mol. Endocrin., 5:1806 (1991)), 및 이의 자연 발생 대립 형질 및 프로세싱 형태를 언급하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 또한, 용어 "VEGF"는 165개 아미노산의 인간 혈관 내피 세포 성장 인자 중 아미노산 8 내지 109 또는 1 내지 109를 포함하는 폴리펩티드의 절단형을 언급하기 위해 사용된다. 이러한 모든 형태의 VEGF에 대한 참조가 본원에서는 예를 들어 "VEGF (8-109)," "VEGF (1-109)" 또는 "VEGF165"로 확인될 수 있다. "절단된" 천연 VEGF에 대한 아미노산 위치는 천연 VEGF 서열에 나타난 바와 같이 번호 매김 된다. 예를 들어 절단된 천연 VEGF에서 아미노산 위치 17 (메티오닌)은 천연 VEGF에서 위치 17 (메티오닌)이다. 절단된 천연 VEGF는 KDR 및 Flt-1 수용체에 대해 천연 VEGF에 필적하는 결합 친화성을 갖는다.
용어 "항-VEGF 항체"는 충분한 친화성 및 특이성으로 VEGF에 결합하는 항체이다. 바람직하게는, 본 발명의 항-VEGF 항체는 VEGF 활성이 관련된 질병 또는 증상을 표적하고 이를 방해하는 치료제로서 사용될 수 있다. 항-VEGF 항체는 일반적으로 다른 VEGF 동족체, 예를 들어 VEGF-B 또는 VEGF-C 및 다른 성장 인자, 예를 들어 PIGF, PDGF 또는 bFGF에 결합하지 않는다. 바람직한 항-VEGF 항체는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생산되는 단일클론 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 단일클론 항체이다. 보다 바람직하게는, 항-VEGF 항체는, 이에 한정되는 것은 아니나, 베바시주맙 (BV; AvastinTM)으로 공지된 항체를 포함하여, 문헌 (Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599)에 따라 생성되는 재조합의 인간화된 항-VEGF 단일클론 항체이다.
용어 "VEGF 길항물질"은 하나 이상의 VEGF 수용체에 대한 이의 결합을 포함하여 VEGF 활성을 중화하거나 차단하거나 억제하거나 제거하거나 감소시키거나 방해할 수 있는 분자를 언급한다. VEGF 길항물질은 VEGF에 특이적으로 결합하여 하나 이상의 수용체, 항-VEGF 수용체 항체 및 VEGF 수용체 길항물질, 예를 들어 VEGFR 티로신 키나제의 소분자 억제제에 대한 이의 결합을 격리시키는 항-VEGF 항체 및 이의 항원-결합 단편, 수용체 분자 및 유도체를 포함한다.
본원의 명세서 및 특허청구범위를 통해서, 면역글로불린 중쇄에서 잔기의 번호매김은, 본원에 참조로 특별히 삽입된 문헌 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))에 기술된 바와 같은 EU 색인의 번호매김이다. 용어 "Kabat 에서와 같은 EU 색인"이란 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 번호매김을 언급한다.
용어 "천연 서열" 폴리펩티드는 자연으로부터 유래된 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 천연 서열의 폴리펩티드는 모든 포유동물로부터의 자연-발생 폴리펩티드의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 이러한 천연 서열 폴리펩티드는 자연으로부터 분리하거나 재조합 또는 합성 수단에 의해 제조될 수 있다. 용어 "천연 서열" 폴리펩티드는 특별히 자연-발생의 절단 또는 분비 형태의 폴리펩티드 (예: 세포외 도메인 서열), 자연-발생 변이 형태의 폴리펩티드 (예: 상이하게 스플라이싱된 형태) 및 자연-발생의 대립형질 변이체 폴리펩티드를 포함한다.
용어 폴리펩티드 "변이체"란 천연 서열 폴리펩티드와 약 80 % 이상의 아미노산 동일성을 갖는 생물학적 활성 폴리펩티드를 의미한다. 이러한 폴리펩티드 변이체는, 예를 들어 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에 하나 이상의 아미노산 잔기가 삽입되거나 결실된 폴리펩티드를 포함한다. 통상적으로, 변이체는 천연 서열 폴리펩티드와 약 80 % 이상, 보다 바람직하게는 약 90 % 이상, 보다 더 바람직하게는 약 95 % 이상의 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다.
용어 "항체"는 광범위한 의미로 사용되었으며, 단일클론 항체 (완전한 길이 또는 온전한 (intact) 단일클론 항체 포함), 폴리클론 항체, 다가 (multivalent) 항체, 다중-특이적 (multispecific) 항체 (예: 이중특이적 항체), 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 항체 단편 (하기 참조)를 포함한다.
달리 언급하지 않는 한, 표현 "다가 항체"는 본원의 명세서를 통해 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 항체를 나타내기 위해 사용된다. 다가 항체는 바람직하게는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖도록 조작되며, 일반적으로 천연 서열의 IgM 또는 IgA 항체는 아니다.
용어 "항체 단편"은, 일반적으로 온전한 항체의 항원 결합 부위를 포함하여 항원을 결합하는 능력을 보유하는, 온전한 항체의 단지 일부분을 포함한다. 본 정의에 포함되는 항체 단편의 예는 (i) VL, CL, VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fab 단편; (ii) CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 단편인 Fab' 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (iv) VH 및 CH1 도메인 및 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fd' 단편; (v) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 구성된 dAb 단편 (Ward et al., Nature 341, 544-546 (1989)); (vii) 단리된 CDR 영역; (viii) 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 이가 (bivalent) 단편인 F(ab')2 단편; (ix) 단일쇄 항체 분자 (예: 단일쇄 Fv; scFv) (Bird et al., Science 242:423-426 (1988); Huston et al., PNAS (USA) 85:5879-5883 (1988)); (x) 동일한 폴리펩티드 쇄에 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함하는, 2개의 항원 결합 부위를 갖는 "디아바디 (diabody)" (예: EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); (xi) 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 탠덤한 Fd 분절 (VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 "선형 항체" (Zapata et al. Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995); U.S. Pat. No. 5,641,870)를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 언급한다. 즉, 상기 항체 집단을 형성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단일클론 항체는 고도로 특이적이어서 단일 항원에 대해서 지시된다. 또한, 통상적으로 상이한 결정자 (에피토프)에 대해 지시되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클론 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 단일클론 항체는 항원에 있는 단일 결정자에 대해 지시된다. 개질자 "단일클론"는 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 문헌 (Kohler et al., Nature 256:495 (1975))에 처음으로 기술된 하이브리도마 방법으로 제조되거나, 재조합 DNA 방법 (예: U.S. Pat. No. 4,816,567)으로 제조될 수 있다. "단일클론 항체"는 또한 예를 들어 문헌 (Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991) 또는 Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991))에 기술된 기술을 이용하여 파아지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
본원에서 단일클론 항체는, 특히, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특정 종으로부터 유래된 항체의 상응 서열과 동일 또는 상동이거나 특정한 항체 부류 또는 아부류에 속하고, 쇄(들)의 나머지 부분이 다른 종으로부터 유래된 항체의 상응 서열과 동일 또는 상동이거나 다른 항체 부류 또는 아부류에 속하는 "키메릭" 항체, 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 포함한다 (U.S. Pat. No. 4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)).
비-인간 (예: 쥐) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소한의 서열을 포함하는 키메릭 항체이다. 대부분의 경우에서, 인간화된 항체는 수용체의 초가변 영역으로부터의 잔기가, 목적하는 특이성, 친화성 및 수용력을 갖는, 비-인간 종 (공여체 항체), 예를 들어 마우스, 래트, 래비트 또는 비인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기로 대체된, 인간 면역글로불린 (수용체 항체)이다. 일부의 경우에서는, 인간 면역글로불린의 골격 영역 (FR) 잔기가 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화된 항체는 수용체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변화는 항체의 성능을 보다 더 우수하게 하기 위해서 가해진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프가 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR이 인간 면역글로불린 서열의 것인, 하나 이상, 통상적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이다. 또한, 인간화된 항체는 임의로 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 통상적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 일부분 이상을 포함할 것이다. 보다 구체적인 설명은 문헌 (Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992))을 참조한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산에 상응하고/하거나 본원에 기술된 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 이용하여 제조되었던 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 인간 항체에 대한 이러한 정의는 특별히 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 배제시킨다. 인간 항체는 당 분야에 공지된 다양한 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 하나의 양태에서, 인간 항체는 인간 항체들을 발현하는 파아지 라이브러리로부터 선택된다 (Vaughan et al. Nature Biotechnology 14:309-314 (1996): Sheets et al. PNAS (USA) 95:6157-6162 (1998)); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)). 또한, 인간 항체는 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 형질전환 동물, 예를 들어 마우스로 인간 면역글로불린 유전자 좌 (locus)를 도입함으로써 제조될 수 있다. 챌린지 시, 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 포함하여 모든 측면에서 인간에서 보여지는 것을 밀접히 닮은 인간 항체 생산이 관측된다. 이러한 접근법이 예를 들어 문헌 (U.S. Pat. Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995))에 기술되어 있다. 달리, 인간 항체는 표적 항원에 대해 지시되는 항체를 생산하는 인간 B 림프구의 불멸화를 통해 제조될 수 있다 (이러한 B 림프구는 개체로부터 회수되거나 시험관 내에서 면역화될 수 있다) (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147 (1):86-95 (1991); U.S. Pat. No. 5,750,373).
"친화성이 성숙된" 항체는 하나 이상의 CDR에 하나 이상의 변화를 가져 그렇지 않은 모 항체에 비해 항원에 대한 항체의 친화성이 개선된 항체이다. 바람직한 친화성이 성숙된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어는 피코몰 친화성을 가질 것이다. 친화성이 성숙된 항체는 당 분야에 공지된 공정으로 제조된다. 문헌 (Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992))은 VH 및 VL 도메인 셔플링 (shuffling)에 의한 친화성 성숙을 기술하고 있다. CDR 및/또는 골격 잔기의 무작위 돌연변이가 문헌 (Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992))에 기술되어 있다.
"단리된" 폴리펩티드는 자연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다. 자연 환경의 오염 성분은 폴리펩티드에 대한 진단 또는 치료적 이용을 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서, 폴리펩티드는 (1) 로우리 (Lowry) 방법으로 측정 시 95 중량% 초과, 보다 바람직하게는 99 중량% 초과의 폴리펩티드, (2) 스피닝 컵 서열분석기로 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상의 잔기를 얻기에 충분한 정도, 또는 (3) 코마시 블루 또는 바람직하게는 실버 염색을 이용한 환원 또는 비환원 조건 하의 SDS-PAGE에 의해 균질할 정도로 정제될 것이다. 폴리펩티드의 자연 환경 중의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이므로, 단리된 폴리펩티드는 재조합 세포에 있는 폴리펩티드를 그대로 포함한다. 그러나, 통상적으로 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
항체의 "기능적 항원 결합 부위 (functional antigen binding site)"는 표적 항원을 결합할 수 있는 것이다. 항원 결합 부위의 항원 결합 친화도는 반드시 항원 결합 부위가 유래하는 모 항체와 같이 강력해야 하는 것은 아니나, 항원을 결합하는 능력이 항원에 대한 항체 결합을 평가하는 공지된 다양한 방법 중의 임의의 하나로 측정가능해야 한다. 또한, 다가 항체의 항원 결합 부위 각각의 항원 결합 친화도가 정량적으로 동일할 필요는 없다. 다가 항체에 대한 기능적 항원 결합 부위의 수는 하기 실시예 2에 기술되는 바와 같이 초원심분리 분석을 이용하여 평가될 수 있다. 이러한 분석 방법에 따라, 다가 항체에 대한 표적 항원의 상이한 비율을 조합하고, 다수의 기능적 결합 부위가 차이가 난다는 것을 가정하여 컴플렉스의 평균 분자량을 계산한다. 이러한 이론적 값은 기능적 결합 부위의 수를 평가하기 위해 수득된 실제 실험값과 비교된다.
지정된 항체의 "생물학적 특징"을 갖는 항체는 동일한 항원에 결합하는 다른 항체로부터 지정 항체를 구별가능하게 하는 하나 이상의 생물학적 특징을 포함하는 것이다.
목적 항체에 의해 결합되는 항원의 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, 일반적인 크로스-차단 분석, 예를 들어 문헌 (Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988))에 기술된 분석이 수행될 수 있다.
"효능제 항체 (agonist antibody)"는 수용체에 결합하고 이를 활성화시키는 항체이다. 일반적으로, 효능제 항체의 수용체 활성화 능력은 수용체의 천연 효능제 리간드와 적어도 정량적으로 유사할 것이다 (본질적으로 정량적으로 유사할 수 있다). 효능제 항체의 예는 TNF 수용체 슈퍼패밀리의 수용체에 결합하고 TNF 수용체를 발현하는 세포의 아폽토시스를 유도하는 것이다. 아폽토시스 유도를 측정하기 위한 분석이 본원에 참조로 삽입된 문헌 (WO98/51793 및 WO99/37684)에 기술되어 있다.
"장애"란 항체로 치료하는 것이 유리한 모든 증상이다. 이는 포유동물을 문제의 장애에 걸리기 쉽게 하는 병적 증상을 포함하여 만성 및 급성 장애 또는 질병을 포함한다. 본원에서 치료하고자 하는 장애의 비-제한적 예는 양성 및 악성 종양; 백혈병 및 림프 악성종양; 뉴런, 신경교, 성상세포, 시상하부 및 기타 선, 대식구, 상피, 기질 및 할강 장애; 및 염증, 혈관신생 및 면역 장애를 포함한다.
용어 "치료학적 유효량"은 포유동물의 질병 또는 장애를 치료하기에 효과적인 약물을 양을 언급한다. 암의 경우, 약물의 치료학적 유효량은 다음을 수행할 수 있다: 암 세포 수의 감소; 종양 크기의 축소; 말초 기관으로의 암 세포의 침윤 억제 (즉, 다소 늦추고 바람직하게는 정지시킴); 종양 전이의 억제 (즉, 다소 늦추고, 바람직하게는 정지시킴); 종양 성장의 다소간의 억제; 및/또는 장애와 관련된 하나 이상의 증후군의 다소간의 경감. 약물은 기존의 암 세포의 성장을 억제시키고/시키거나 죽이는 정도로 세포증식억제 (cytostatic) 및/또는 세포독성 (cytotoxic) 일 수 있다. 암 치료를 위해, 생체 내에서의 효능은, 예를 들어 생존기간, 질병 진행에 대한 시간 (TTP), 반응률 (RP), 반응기간 및/또는 삶의 질을 평가하여 측정될 수 있다.
"치료"는 치료학적 처리 및 예방적 (prophylactic 또는 preventative) 조치를 언급한다. 치료가 필요한 자는 이미 장애를 갖는 자 및 장애가 예방될 자를 포함한다.
용어 "암" 및 "암적인"은 통상적으로 비조절된 세포 성장으로 특징지워지는 포유동물의 생리학적 증상을 언급하거나 기술한다. 암의 예는, 이에 한정되는 것은 아니나, 암종, 림프종, 아구종, 육종, 및 백혈병을 포함한다. 이러한 암의 특정 예는 편평상피세포암, 폐암 (소세포성 폐암, 비-소세포성 폐암, 폐의 선암, 및 폐의 편평상피암종을 포함), 복막암, 간세포암, 위암 (위장암을 포함), 췌장암, 교아구종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막암 또는 자궁암, 타액선암, 신장암, 전립선암, 외음암, 갑상선암, 간암종 및 다양한 유형의 두경부암; B-세포 림프종 (저등급/여포성 비-호지킨스 림프종 (NHL); 소림프구성 (SL) 비-호지킨스 림프종; 중간등급/여포성 비-호지킨스 림프종; 중간등급 확산 비-호지킨스 림프종; 고등급 면역아구성 비-호지킨스 림프종; 고등급 림프아구성 비-호지킨스 림프종; 고등급 소 비-절단세포성 비-호지킨스 림프종; 벌키 질병 비-호지킨스 림프종; 외투세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함); 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 급성 림프아구성 백혈병 (ALL); 유모세포 백혈병; 만성 골수아구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 장애 (PTLD); 모반증과 관련된 비정상적 혈관 증식, 부종 (뇌종양과 관련된 부종), 및 메이그 증후군을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "포유동물 호스트"는 모든 적합성 (compatible) 이식 수용체를 언급한다. "적합성"은 포유동물 호스트가 제공된 이식물을 수용할 수 있다는 것을 의미한다. 바람직하게는, 호스트는 인간이다. 이식물의 공여체 및 호스트가 모두 인간인 경우, 이들은 바람직하게는 조직적합성을 개선하기 위해 HLA 제 II 형 항원에 대해 조화되게 한다.
본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 제지 또는 억제하고/하거나 세포를 파괴시키는 물질을 언급한다. 이 용어는 방사성 동위원소 (예: At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학치료제, 및 독소, 예를 들어 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소적으로 활성인 독소 (이의 단편 및/또는 변이체 포함)를 포함하려는 의도이다.
용어 "항-신생물 조성물"은 종양 성장 또는 기능을 제지 또는 억제하고/하거나 종양 세포를 파괴시킬 수 있는 하나 이상의 활성 치료제를 포함하는 암 치료에 유용한 조성물을 말한다. 암을 치료하기 위한 항-신생물 조성물에 적합한 치료제는, 이에 한정되는 것은 아니나, 화학치료제, 방사성 동위원소, 독소, 사이토킨, 예를 들어 인터페론, 및 사이토킨, 사이토킨 수용체 또는 종양 세포와 관련된 항원을 표적하는 길항제를 포함한다. 예를 들어, 본 발명에 유용한 치료제는 항체, 예를 들어 항-HER2 항체 및 항-CD20 항체, 또는 소분자 티로신 키나제 억제제, 예를 들어 VEGF 수용체 억제제 및 EGF 수용체 억제제일 수 있다. 바람직하게는, 치료제는 화학치료제이다.
"화학치료제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학치료제의 예는 알킬화제, 예를 들어 티오테파 및 CYTOXAN® 사이클로포스파미드; 알킬 설포네이트, 예를 들어 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예를 들어 벤조도파, 카보퀴온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민 (알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸롤로멜라민을 포함); 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 동족체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 동족체를 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 동족체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰기스타틴; 질소 무스타드, 예를 들어 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 무스타드; 니트로스우레아, 예를 들어 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 항생제, 예를 들어 에네디인 항생제 (예: 칼리체아미신, 특히 칼리체아미신 감마 1I 및 칼리케아미신 오메가 I1 (Agnew, Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186 (1994)); 디네미신 (디네미신 A를 포함); 비스포스포네이트, 예를 들어 클로드로네이트; 에스페라미신; 네오카지노스타틴 발색단 및 관련 크로모단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, ADRIAMYCIN® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신을 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예를 들어 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물, 예를 들어 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 동족체, 예를 들어 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 동족체, 예를 들어 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 동족체, 예를 들어 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예를 들어 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤; 항-아드레날, 예를 들어 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제, 예를 들어 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미놀레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지퀴온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 안 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 마이탄시노이드, 예를 들어 마이탄신 및 안사미토신스; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; PSK® 다당류 컴플렉스 (JHS Natural Products, Eugene, Oregon.); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리초테세네스 (특히 T-2 톡신, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 데카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 톡소이드, 예를 들어 TAXOL® 파클리탁셀 (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANETM (파클리탁셀의 크레모포가 없는 알부민-가공된 나노입자 제형 (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois), 및 TAXOTERE® 독세탁셀 (Rhoene-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로란부실; GEMZAR® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 배위 착물, 예를 들어 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; NAVELBINE® 바노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 크셀로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (예: CPT-11); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예를 들어 레틴산; 카페시타빈; 및 상기한 것들의 제약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.
또한, 이러한 정의에는 종양에 대한 호르몬 작용을 조절 또는 억제하도록 작용하는 항-호르몬제, 예를 들어 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM), 예를 들어 타목시펜 (NOLVADEX® 타목시펜을 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 FARESTONㆍ 토레미펜; 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는, 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE® 메게스트롤 아세테이트, AROMASIN® 엑세메스탄, 포르메스타니, 파드로졸, RIVISOR® 보로졸, FEMARA® 레트로졸, 및 ARIMIDEX® 아나스트로졸; 항-안드로겐, 예를 들어 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 동족체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상적 세포 증식에 연관된 시그널화 경로의 유전자 발현을 억제하는 것들, 예를 들어 PKC-알파, Ralf 및 H-Ras; 리보자임, 예를 들어 VEGF 발현 억제제 (예: ANGIOZYME® 리보자임) 및 HER2 발현 억제제; 백신, 예를 들어 유전자 치료 백신, 예를 들어 ALLOVECTIN® 백신, LEUVECTIN® 백신, 및 VAXID® 백신; PROLEUKIN® rIL-2; LURTOTECAN® 토포이소머라제 1 억제제; ABARELIX® rmRH; 및 상기한 물질의 제약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.
본원에 사용된 "성장 억제제"는 시험관 내 및/또는 생체 내에서 세포의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 언급한다. 따라서, 성장 억제제는 S 상의 세포의 비율 (%)을 상당히 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제제의 예는 (S상 이외의 장소에서) 세포 주기 진행을 차단하는 제제, 예를 들어 G1 정지 및 M-상 정지를 유발하는 제제를 포함한다. 종래의 M-상 차단제는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), TAXOL®, 및 토포 II 억제제, 예를 들어 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드, 및 블레오마이신을 포함한다. 또한, G1을 정지시키는 제제는 S-상 정지까지 영향을 미치며, 예를 들어 DNA 알킬화제, 예를 들어 타목시펜, 프레드니손, 다카바진, 메클로레타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 및 ara-C를 포함한다. 추가의 정보를 문헌 (The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (WB Saunders: Philadelphia, 1995)), 특히 13쪽에서 찾을 수 있다.
용어 "사이토킨"은 하나의 세포 집단에 의해 방출되어 세포간 매개자로서 또 다른 세포에 작용하는 단백질에 대한 포괄적인 용어이다. 이러한 사이토킨이 예는 림포킨, 모노킨, 및 종래의 폴리펩티드 호르몬이다. 사이토킨에는 성장 호르몬, 예를 들어 인간 성장 호르몬, N-메티오닌 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬: 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬, 예를 들어 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체형성 호르몬 (LH); 표피 성장 인자; 간 성장 인자; 섬유아구 성장 인자; 프롤락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자-알파 및 -베타; 물레리안-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-관련 펩티드; 인히빈; 악티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴 (TPO); 신경 성장 인자, 예를 들어 NGF-알파; 혈소판-성장 인자; 전환 성장 인자 (TGF), 예를 들어 TGF-알파 및 TGF-베타; 인슐린형 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도 인자; 인터페론, 예를 들어 인터페론-알파, -베타 및 -감마, 콜로니 자극 인자 (CSF), 예를 들어 대식구-CSF (M-CSF); 과립구-대식구-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); 인터류킨 (IL), 예를 들어 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; 종양 괴사 인자, 예를 들어 TNF-알파 또는 TNF-베타; 및 다른 폴리펩티드 인자 (LIF 및 kit 리간드 (KL)을 포함)가 포함된다. 본원에 사용된 용어 사이토킨은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 사이토킨의 생물학적 활성 등가물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "프로드럭"은 모 약물과 비교하여 종양 세포에 대해 덜 세포독성이고 효소적 처리로 보다 활성인 모 형태로 활성화되거나 전환될 수 있는 제약학적으로 활성인 물질의 전구체 또는 유도체 형태를 언급한다 (Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986); Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985)). 본 발명의 프로드럭은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 포스페이트-함유 프로드럭, 티오포스페이트-함유 프로드럭, 설페이트-함유 프로드럭, 펩티드-함유 프로드럭, D-아미노산-개질된 프로드럭, 당화된 프로드럭, 베타-락탐-함유 프로드럭, 임의로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 프로드럭 또는 임의로 치환된 페닐아세트아미드-함유 프로드럭, 5-플루오로시토신 및 보다 활성인 세포독성이 없는 약물로 전환될 수 있는 다른 5-플루오로우리딘 프로드럭을 포함한다. 본 발명에서 사용하기 위한 프로드럭 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는, 이에 한정되는 것은 아니나, 상술된 화학치료제를 포함한다.
용어 "정맥 내 주입"은 약 5분 초과의 기간, 바람직하게는 약 30 내지 90분에 걸쳐 동물 또는 인간 환자의 정맥 내로 약물을 도입하는 것을 언급하지만, 본 발명에 따라 정맥내 주입은 달리는 10 시간 이하의 기간 동안 투여된다.
용어 "정맥 내 볼루스 (bolus)" 또는 "정맥 내 밀침 (push)"는 신체가 약 15분 이하, 바람직하게는 5분 이하의 기간 내에 약물을 수령하도록 동물 또는 인간의 정맥으로 약물을 투여하는 것을 언급한다.
용어 "피하 투여"는 동물 또는 인간 환자의 피부 아래, 바람직하게는 피부와 아래 조직 사이의 포켓에 약물 저장소로부터 비교적 서서히 지속되는 전달에 의해 약물을 도입하는 것을 언급한다. 포켓은 아래 조직으로부터 피부를 집거나 들어올려 떨어지게 하여 만들 수 있다.
용어 "피하 주입"은 동물 또는 인간 환자의 피부 아래, 바람직하게는 피부와 아래 조직 사이의 포켓에, 이에 한정되는 것은 아니나, 30분 이하 또는 90분 이하를 포함한 기간 동안, 약물 저장소로부터 비교적 서서히 지속되는 전달에 의해 약물을 도입하는 것을 언급한다. 임의로, 주입은 예정된 기간 동안, 예를 들어 30분, 90분, 또는 치료 투여계획 길이에 걸친 기간 동안 예정량의 약물을 전달하는, 동물 또는 인간 환자의 피부 아래 이식된 약물 전달 펌프의 피하 이식에 의해 수행될 수 있다.
용어 "피하 볼루스"는 동물 또는 인간 환자의 피부 아래 약물을 투여하는 것을 언급하며, 볼루스 약물 전달은 바람직하게는 약 15분 미만, 바람직하게는 5분 미만, 가장 바람직하게는 60초 미만이다. 투여는 바람직하게는 피부와 아래 조직 사이의 포켓 내이며, 포켓은 예를 들어 아래 조직을 집거나 들어올려 떨어지게 하여 만든다.
"혈관신생 인자"는 혈관의 발달을 자극하는 성장 인자이다. 본원에서 바람직한 혈관신생 인자는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)이다.
본원에 사용된 용어 "라벨"은 폴리펩티드에 직접적으로나 간접적으로 결합된 검출가능한 화합물 또는 조성물을 언급한다. 라벨은 그 자체가 검출가능할 수 있거나 (예: 방사성 동위원소 라벨 또는 형광 라벨), 효소적 라벨의 경우에는 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변화를 촉매할 수 있다.
"단리된" 핵산 분자는 폴리펩티드 핵산의 천연 공급원에 통상적으로 연관되어 있는 하나 이상의 오염 핵산 분자로부터 확인 및 분리되는 핵산 분자이다. 단리된 핵산 분자는 천연에서 발견되는 형태 또는 세팅의 것과 다르다. 따라서, 단리된 핵산 분자는 천연 세포에 존재하는 핵산 분자와 구별된다. 그러나, 단리된 핵산 분자는 통상적으로 폴리펩티드를 발현하는 세포 (여기서, 예를 들어 핵산 분자는 천연 세포의 위치와는 다른 염색체 위치에 존재한다)에 포함된 핵산 분자를 포함한다.
표현 "조절 서열"은 특정 호스트 유기체에서 작동적으로 연결된 코딩 서열의 발현을 위해 필요한 DNA 서열을 언급한다. 예를 들어 원핵세포에 적합한 조절 서열은 프로모터, 임의로 오퍼레이터 서열, 및 리보좀 결합 부위를 포함한다. 진핵세포는 프로모터, 폴리아데닐화 시그널, 및 인핸서를 사용하는 것으로 공지되어 있다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 있는 경우 "작동적으로 연결"된다. 예를 들어, 폴리펩티드의 분비에 참여하는 프리단백질로서 발현되는 경우 프리서열 또는 분비 리더를 위한 DNA가 폴리펩티드를 위한 DNA에 작동적으로 연결되며; 프로모터 또는 인핸서가 서열의 전사에 영향을 끼치는 경우 코딩 서열에 작동적으로 연결되고; 또는 번역을 용이하게 하기 위해 리보좀 결합 부위가 코딩 서열에 작동적으로 연결된다. 일반적으로, "작동적으로 연결된"은 연결되는 DNA 서열은 인접하며, 분비 리더의 경우 인접하고 판독 상인 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 연속적일 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서 결찰에 의해 수행된다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 통상의 실시예 따라 사용된다.
본원에 사용된 표현 "세포", "세포주", 및 "세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되며, 모든 이러한 표시는 후손 (progeny)을 포함한다. 따라서, 단어 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"는 1차 대상 세포 및 전달 (transfer)의 횟수에 무관하게 이로부터 유래된 배양물을 포함한다. 또한, 모든 후손은, 계획적 또는 부주의한 돌연변이에 의해, DNA 함유물이 정확히 동일할 수 없다고 믿어진다. 최초에 형질전환된 세포에서 스크리닝되는 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 후손이 포함된다. 구별되는 표시가 의도되는 경우, 이는 문맥으로부터 분명해질 것이다.
II. 항-VEGF 항체의 생성
A. 항체 제조
(i) VEGF 항원
항체를 생산하고 특징화하는 수단은 당 분야에 널리 공지되어 있다. 본 발명에 따라 이용된 항-VEGF 항체의 제조를 위한 예시적 기술이 후술된다. 항체의 생산을 위해 사용되는 VEGF 항원은 예를 들어 VEGF165 분자 및 VEGF의 다른 이소형태 또는 목적하는 에피토프를 포함하는 이의 단편일 수 있다. 본 발명의 항-VEGF 항체를 생성하는데 유용한 VEGF의 다른 형태는 당업자에게 명백할 것이다.
인간 VEGF는 하이브리드화 프로브로서 소 VEGF cDNA를 사용하여 인간 세포로부터 제조된 cDNA 라이브러리를 처음으로 스크리닝하여 수득하였다 (Leung et al. (1989) Science, 246:1306). 이로써 확인된 하나의 cDNA는 소 VEGF와 95 % 초과의 상동성을 갖는 165개 아미노산 단백질을 코딩한다: 이러한 165개 아미노산 단백질은 통상적으로 인간 VEGF (hVEGF) 또는 VEGF165 로 언급된다. 인간 VEGF의 유사분열 활성은 포유동물 호스트 세포에서 인간 VEGF cDNA를 발현시켜 확인하였다. 인간 VEGF cDNA로 트랜스펙션된 세포에 의해 조절된 배지는 모세혈관 내피 세포의 증식을 촉진시켰으며 대조군 세포는 그러하지 못하였다 (Leung et al. (1989) Science, 상기 참조).
혈관 내피 세포 성장 인자가 연속한 치료적 이용을 위해 천연 공급원으로부터 단리 및 정제될 수 있었으나, 여포 세포에서의 단백질의 비교적 낮은 농도 및 노력과 경비 면에서 VEGF의 회수에 대한 고비용은 상업적으로 이용할 수 없었다. 따라서, 재조합 DNA 기술을 이용하여 VEGF를 클로닝 및 발현하고자 추가로 노력하였다 (Ferrara (1995) Laboratory Investigation 72:615-618, 및 본원에 인용된 참조문).
VEGF는 상이한 RNA 스플라이싱에 의해 다수의 호모이량체 형태 (단량체 당 121, 145, 165, 189, 및 206개 아미노산)로서 다양한 조직에서 발현된다. VEGF121는 헤파린에 결합하지 않는 가용성 유사분열물질이며; 보다 긴 형태의 VEGF는 점진적으로 보다 높은 친화성으로 헤파린을 결합한다. VEGF의 헤파린-결합 형태는 플라스민에 의해 카복시 말단에서 절단되어 VEGF의 확산 형태(들)을 방출할 수 있다. 플라스민 절단 후 확인된 카복시 말단 펩티드의 아미노산 서열은 Arg110-Ala111 이다. 아미노 말단 "코어" 단백질 VEGF (1-110)가 호모이량체로서 단리되었으며, 온전한 VEGF165 호모이량체와 비교하여 유사한 친화성으로 중화 단일클론 항체 (예: 4.6.1 및 3.2E3.1.1로 언급되는 항체) 및 가용 형태의 VEGF 수용체를 결합한다.
최근 들어, 태반 성장 인자 (PIGF), VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 및 VEGF-E를 포함한 VEGF와 구조적으로 연관된 수개의 분자가 확인되었다 (Ferrara and Davis-Smyth (1987) Endocr. Rev., supra; Ogawa et al. (1998) J. Biological Chem. 273:31273-31281; Meyer et al. (1999) EMBO J., 18:363-374). 수용체 티로신 키나제 Flt-4 (VEGFR-3)가 VEGF-C 및 VEGF-D에 대한 수용체로서 확인되었다 (Joukov et al. (1996) EMBO. J. 15:1751; Lee et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1988-1992; Achen et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:548-553). 최근에 VEGF-C는 림프성 혈관신생의 조절에 관여하는 것으로 밝혀졌다 (Jeltsch et al. (1997) Science 276:1423-1425).
2개의 VEGF 수용체가 확인되었다: Flt-1 (VEGFR-1로도 불림) 및 KDR (VEGFR-2로도 불림) (Shibuya et al. (1990) Oncogene 8:519-527; de Vries et al. (1992) Science 255:989-991; Terman et al. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 187:1579-1586). 뉴로필린-1은 선택적 VEGF 수용체이며 헤파린-결합 VEGF 이소형태를 결합할 수 있는 것으로 밝혀졌다 (Soker et al. (1998) Cell 92:735-45). Flt-I 및 KDR는 모두 수용체 티로신 키나제 (RTK)의 패밀리에 속한다. RTK는 다양한 생물학적 활성을 갖는 큰 패밀리의 막통과 수용체를 포함한다. 현재, 19개 이상의 상이한 RTK 서브패밀리가 확인되었다. RTK 패밀리는 다양한 세포 타입의 성장 및 분화에 중요한 수용체를 포함한다 (Yarden and Ullrich (1988) Ann. Rev. Biochem. 57:433-478; Ullrich and Schlessinger (1990) Cell 61:243-254). RTK의 고유한 기능은 리간드 결합 시 활성화되며, 이 결과 수용체 및 다수의 세포성 기질을 포스포릴화하여 다양한 세포 반응을 일으킨다 (Ullrich & Schlessinger (1990) Cell 61:203-212). 따라서, 수용체 티로신 키나제 매개된 시그널 전달은, 특정한 성장 인자 (리간드)와의 세포외 상호작용에 의해 개시되어, 통상적으로 수용체 이량체화, 고유한 단백질 티로신 키나제 활성의 자극 및 수용체 트랜스-포스포릴화가 후속적으로 일어난다. 따라서, 결합 부위는 세포간 시그널 전달 분자에 대해 만들어져, 적합한 세포성 반응 (예: 세포 분열, 분화, 대사 효과, 세포외 미세환경에서의 변화)을 촉진하는 다양한 세포질 시그널화 분자와의 컴플렉스 형성을 이끈다 (Schlessinger and Ullrich (1992) Neuron 9:1-20). 구조적으로, Flt-1 및 KDR 모두 세포외 도메인에 7개의 면역글로불린-유사 도메인, 단일 막통과 영역 및 키나제-삽입 도메인에 의해 방해되는 컨센서스 티로신 키나제 서열을 갖는다 (Matthews et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:9026-9030; Terman et al. (1991) Oncogene 6:1677-1683).
(ii) 폴리클론 항체
폴리클론 항체는 바람직하게는 관련 항원 및 아주방트의 수회에 걸친 피하 (sc) 또는 복강 내 (ip) 주사에 의해 동물에서 생성된다. 이작용성 또는 유도체화 제제, 예를 들어 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통해 결합), N-히드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통해 결합), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl2, 또는 R1N=C=NR (여기서, R 및 R1은 상이한 알킬기이다)을 이용하여 면역화시킬 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들어 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 또는 대두 트립신 억제제에 관련 항원을 결합시키는 것이 유용할 수 있다.
동물을, 예를 들어 100 μg 또는 5 μg의 단백질 또는 결합체 (각각 래비트 또는 마우스에 대한 것)를 3 용적의 프로인트 완전 아주방트와 배합하여 그 용액을 다수의 부위에서 피부 내 주사하여 항원, 면역원성 결합체 또는 유도체에 대해 면역화시킨다. 1개월 후, 동물을 프로인트 완전 아주방트 중의 원래량의 1/5 내지 1/10의 펩티드 또는 결합체를 사용하여 다수의 부위에서 피하 주사하여 부스팅한다. 7 내지 14일 후, 동물을 출혈시켜 혈청에 대해 항체 역가를 분석한다. 동물을 역가가 안정 수준을 보일 때까지 부스팅한다. 바람직하게는, 동물을 항원은 동일하나 상이한 단백질에 및/또는 상이한 가교-결합 시약을 통해 결합된 결합체를 사용하여 부스팅한다. 또한, 결합체는 단백질 융합과 같이 재조합 세포 배양물로 제조될 수 있다. 또한, 응집제, 예를 들어 알룸을 면역반응을 증진시키기 위해 적당히 사용한다.
(iii) 단일클론 항체
단일클론 항체는 문헌 (Kohler et al., Nature, 256:495 (1975))에 처음으로 기술된 하이브리도마 방법을 이용하여 제조하거나 재조합 DNA 방법 (U.S. Pat. No. 4,816,567)에 의해 제조할 수 있다.
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적합한 호스트 동물, 예를 들어 햄스터 또는 머카크 원숭이를 상술된 바와 같이 면역화시켜 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 할 수 있는 림프구를 유도한다. 달리는, 림프구를 시험관 내에서 면역화시킬 수 있다. 이어서, 림프구를 하이브리도마 세포를 형성하기에 적합한 융합 제제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포와 융합시킨다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)).
이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 시딩하여 바람직하게는 비융합된 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 포함하는 적합한 배양 배지 중에서 배양한다. 예를 들어 모 골수종 세포가 효소 히포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결핍되는 경우, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 통상적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 억제하는 물질인 히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 수 있다.
바람직한 골수종 세포는 효과적으로 융합하고 선택된 항체-생성 세포에 의한 항체의 안정한 고수준 생성을 지지하며, 배지, 예를 들어 HAT 배지에 민감한 것이다. 이들 중에서, 바람직한 골수종 세포주는 쥐 골수종 세포주, 예를 들어 Salk Institute Cell Distribution Center (San Diego, Calif. USA)로부터 입수할 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유도되는 것, 및 ATCC (Rockville, Mayland, USA)로부터 입수할 수 있는 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포이다. 또한, 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주가 인간 단일클론 항체의 생성에 대해 기술되었다 (Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지를 항원에 대해 지시된 단일클론 항체의 생성에 대해 분석한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성된 단일클론 항체의 결합 특이성을 면역 침전 또는 시험관 내 결합 분석, 예를 들어 방사면역분석 (RIA) 또는 효소-결합된 면역흡착 분석 (ELISA)으로 측정한다.
목적하는 특이성, 친화성 및/또는 활성을 갖는 항체를 생성하는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 한계 희석 공정에 의해 클론을 서브클로닝하고 표준 방법으로 성장시킨다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)). 이러한 목적에 적합한 배양 배지는, 예를 들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양 같이 생체 내에서 성장될 수 있다.
서브클론에 의해 분비되는 단일클론 항체는 배양 배지, 복수액, 또는 혈청으로부터 통상의 면역글로불린 정제 공정, 예를 들어 단백질 A-세파로즈, 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 적합하게 분리된다.
단일클론 항체를 코딩하는 DNA는 통상의 공정 (예: 단일클론 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용)을 이용하여 쉽게 단리되고 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로 사용된다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터에 위치시키고, 이어서 호스트 세포, 예를 들어 이. 콜라이 (E. coli ), 시미안 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 달리는 면역글로불린 단백질을 생성하지 않는 골수종 세포로 트랜스펙션되어 재조합 호스트 세포에서 단일클론 항체를 합성할 수 있다. 항체의 재조합 생산은 더 자세히 후술될 것이다.
추가의 양태에서, 항체 또는 항체의 단편은 문헌 (McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990))에 기술된 기술을 이용하여 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 문헌 (Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991))은 파아지 라이브러리를 사용하여 각각 쥐 및 인간 항체를 단리하는 것을 기술한다. 이어진 공개문들은 쇄 셔플링 (chain shuffling) (Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)), 매우 큰 파아지 라이브러리를 제작하기 위한 계획으로써 조합 감염 및 생체 내 재조합 (Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res., 21:2265-2266 (1993))에 의한 고친화성 (nM 범위) 인간 항체의 생성을 기술한다. 따라서, 이들 기술들은 단일클론 항체를 단리하기 위한 종래의 단일클론 항체 하이브리도마 기술에 대한 실행가능한 대체법이다.
또한, DNA는, 예를 들어 상동성 쥐 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 대체시키거나 (U.S. Pat. No. 4,816,567; Morrison, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)), 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 모두 또는 일부를 면역글로불린 코딩 서열에 공유결합시켜 개질시킬 수 있다.
통상적으로, 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드가 항체의 불변 도메인 대신 사용되거나, 하나의 항원에 대해 특이성을 갖는 하나의 항원-결합 부위 및 상이한 항원에 대해 특이성을 갖는 또 다른 항원-결합 부위를 포함하는 키메릭 이가 항체를 제조하기 위해 항체의 항원-결합 부위의 가변 도메인 대신 사용될 수 있다.
(iv) 인간화된 및 인간 항체
인간화된 항체는 비-인간인 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "수입 (import)" 잔기로 언급되며, 수입 잔기는 통상적으로 "수입" 가변 도메인으로부터 취해진다. 인간화는 본질적으로 Winter와 공동-연구자들의 방법 (Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988))에 따라 설치류 (rodent) CDR 또는 CDR 서열들을 인간 항체의 상응하는 서열 대신 사용하여 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화된" 항체는, 온전한 인간 가변 도메인 중 이보다 실질적으로 적은 도메인이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 대체된 키메릭 항체이다 (U.S. Pat. No. 4,816,567). 실지로, 인간화된 항체는 통상적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사 부위로부터의 잔기로 대체된 인간 항체이다.
인간화된 항체를 제조하는데 사용하기 위한 경쇄 및 중쇄의 인간 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키기 위해 매우 중요하다. 소위 "최상의 피트" 방법에 따라, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 공지된 인간 가변-도메인 서열의 모든 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 설치류의 서열에 가장 가까운 인간 서열을 인간화된 항체를 위한 인간 골격 (FR)로 채택한다 (Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). 또 다른 방법은 특정 서브군의 경쇄 또는 중쇄에 대한 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특정 골격을 이용한다. 동일한 골격이 수개의 상이한 인간화된 항체에 사용될 수 있다 (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)).
또한, 항체는 항원에 대한 고친화성 및 다른 유리한 생물학적 특성을 보유하면서 인간화되는 것이 중요하다. 이를 위해, 바람직한 방법에 따라, 모 서열과 인간화된 서열의 3차원적 모델을 이용하여 모 서열과 다양한 개념적 인간화된 산물을 분석하는 과정에 의해 인간화된 항체가 제조된다. 3차원적 면역글로불린 모델이 일반적으로 이용가능하며 당업자에게 익숙하다. 선택된 후보물 면역글로불린 서열의 가능한 3차원적 형태 구조를 설명하고 나타내는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이러한 디스플레이의 조사로 후보 면역글로불린 서열의 기능화에 있어 잔기의 가능한 역할을 분석, 즉 후보 면역글로불린이 이의 항원을 결합하는 능력에 영향을 끼칠 수 있는 잔기를 분석할 수 있다. 이러한 방법으로, FR 잔기가 선택되고 수용 서열 및 수입 서열로부터 조합되어 목적하는 항체 특징, 예를 들어 표적 항원에 대한 증가된 친화성이 성취될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 직접적으로 및 가장 실질적으로 항원 결합에 영향을 끼친다.
달리는, 면역화되었을 때 내인성 면역글로불린 생산의 부재 하에 인간 항체의 완전한 래퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예: 마우스)를 현재 생산할 수 있다. 예를 들어 키메릭 및 생식계 (germ-line) 돌연변이 마우스에서 항체 중쇄 연결 영역 (JH) 유전자의 동형접합 결실에 의해 내인성 항체 생산이 완전히 억제된다고 기술되었다. 생식계 돌연변이 마우스에서 인간 생식계 면역글로불린 유전자 배열의 전달에 의해 항원 챌린지 시 인간 항체가 생산될 것이다 (Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993); Duchosal et al. Nature 355:258 (1992)). 또한, 인간 항체는 파아지-디스플레이 라이브러리로부터 유도될 수 있다 (Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991); Vaughan et al. Nature Biotech 14:309 (1996)).
(v) 항체 단편
항체 단편의 생산에 대한 다양한 기술이 개발되었다. 종래에는, 온전한 항체의 단백질 분해를 통해 유도되었다 (Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); Brennan et al., Science, 229:81 (1985)). 그러나, 현재 이들 단편은 재조합 호스트 세포에 의해 직접적으로 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 상술된 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 달리, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이로부터 직접적으로 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다 (Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)). 또 다른 접근법에 따라, F(ab')2 단편은 재조합 호스트 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 항체 단편을 생성하기 위한 다른 기술이 당업자에게 자명할 것이다. 또 다른 양태에서, 선택 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다 (WO 93/16185).
(vi) 다특이적 항체
다특이적 항체는 2개 이상의 상이한 항원에 대해 결합 특이성을 갖는다. 이러한 분자는 통상적으로 단지 2개의 항원을 결합하나 (즉, 이특이적 항체, BsAb), 추가의 특이성을 갖는 항체, 예를 들어 삼특이적 항체가 본원에 사용된 표현에 포함된다. BsAb의 예는 종양 세포 항원에 대해 지시된 하나의 암과 세포독성 유발 분자에 대해 지시된 또 다른 암을 갖는 BsAb, 예를 들어 항-FcγRI/항-CD15, 항-p185HER2/FcγRIII (CD16), 항-CD3/항-악성 B-세포 (1D10), 항-CD3/항-p185HER2, 항-CD3/항-p97, 항-CD3/항-신세포암, 항-CD3/항-OVCAR-3, 항-CD3/L-D1 (항-결장암), 항-CD3/항-멜라닌구 자극 호르몬 동족체, 항-EGF 수용체/항-CD3, 항-CD3/항-CAMA1, 항-CD3/항-CD19, 항-CD3/MoV18, 항-신경 세포 부착 분자 (NCAM)/항-CD3, 항-폴레이트 결합 단백질 (FBP)/항-CD3, 항-pan 암종 관련 항원 (AMOC-31)/항-CD3; 종양 항원에 특이적으로 결합하는 하나의 암과 독소에 결합하는 하나의 암을 갖는 BsAb, 예를 들어 항-사포닌/항-Id-1, 항-CD22/항-사포닌, 항-CD7/항-사포닌, 항-CD38/항-사포닌, 항-CEA/항-리신 A 쇄, 항-인터페론-α(IFN-α)/항-하이브리도마 이디오타입, 항-CEA/항-빈카 알칼로이드; 효소 활성화되는 프로드럭을 전환시키기 위한 BsAb, 예를 들어 항-CD30/항-알칼리 포스파타제 (이는 미토마이신 포스파타제 프로드럭의 미토마이신 알콜로의 전환을 촉매함); 피브린분해제로서 사용될 수 있는 BsAb, 예를 들어 항-피브린/항-조직 플라스미노겐 활성화제 (tPA), 항-피브린/항-우로키나제-타입 플라스미노겐 활성화제 (uPA); 세포 표면 수용체에 면역 컴플렉스를 표적하기 위한 BsAb, 예를 들어 항-저밀도 지단백질 (LDL)/항-Fc 수용체 (예: FcγRI, FcγR11 또는 FcγRIII); 감염성 질병의 치료에 사용하기 위한 BaAb, 예를 들어 항-CD3/항-헤르페스 심플렉스 바이러스 (HSV), 항-T-세포 수용체:CD3 컴플렉스/항-인플루엔자, 항-FcγR/항-HIV; 시험관 내 또는 생체 내에서 종양 검출을 위한 BsAb, 예를 들어 항-CEA/항-EOTUBE, 항-CEA/항-DPTA, 항-p185HER2/항-헵텐(hapten); 백신 아주방트로서의 BsAb; 및 진단 수단으로의 BsAb, 예를 들어 항-래비트 IgG/항-페리틴, 항-호스 래디쉬 퍼옥시다제 (HRP)/항-호르몬, 항-소마토스타틴/항-물질 P, 항-HRP/항-FITC, 항-CEA/항-β-갈락토시다제를 포함한다. 삼특이적 항체의 예는 항-CD3/항-CD4/항-CD37, 항-CD3/항-CD5/항-CD37 및 항-CD3/항-CD8/항-CD37을 포함한다. 이특이적 항체는 전체 길이의 항체 또는 항체 단편 (예: F(ab')2 이특이적 항체)으로 제조될 수 있다.
이특이적 항체를 제조하기 위한 방법은 당 분야에 공지되어 있다. 전체 길이의 이특이적 항체의 통상의 제조 방법은 2개의 쇄가 상이한 특이성을 갖는, 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동-발현에 기초한다 (Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류 때문에, 이들 하이브리도마 (쿠아드로마스: quadromas)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생산하며, 이중 단지 하나만이 정확한 이특이적 구조를 갖는다. 통상 친화성 크로마토그래피로 수행하는 정확한 분자의 정제는 다소 번거롭고, 생산 수율이 낮다. 유사한 공정이 문헌 (WO 93/08829; Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991))에 기술되어 있다.
상이한 접근법으로서, 목적하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인 (항체-항원 결합 부위)이 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 바람직하게는 적어도 일부의 힌지, CH2 및 CH3 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 갖는다. 적어도 하나의 융합물에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 포함하는 제 1 중쇄 불변 영역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합물을 코딩하는 DNA 및, 필요한 경우, 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA가 별개의 발현 벡터로 삽입되고 적합한 호스트 유기체로 공동-트랜스펙션된다. 이는, 제작에 사용된 상이한 비율의 3개의 폴리펩티드 쇄가 최적의 수율을 제공하는 양태에서, 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조절하는데 커다란 유연성을 제공한다. 그러나, 동일한 비율의 적어도 2개의 폴리펩티드 쇄의 발현이 고수율을 갖거나 비율이 특별한 의미가 없는 경우에는, 하나의 발현 벡터에 2개 또는 3개 모두의 폴리펩티드 쇄에 대한 코딩 서열을 삽입할 수 있다.
이러한 접근법의 바람직한 양태에서, 이특이적 항체는 하나의 암에 제 1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄 및 다른 암에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제 2 결합 특이성을 제공)을 포함한다. 이특이적 분자의 단지 절반에만 면역글로불린 경쇄가 존재하여 간단한 분리 방법을 제공하기 때문에, 이러한 비대칭적 구조가 목적하지 않는 면역글로불린 쇄 배합물로부터 목적하는 이특이적 화합물의 분리를 용이하게 하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 접근법은 문헌 (WO 94/04690)에 기술되어 있다. 이특이적 항체를 제조하는 보다 상세한 설명은 문헌 (Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986))을 참조한다. 문헌 (WO96/27011)에 기술된 또 다른 접근에 따라, 한쌍의 항체 분자 사이의 경계면을 조작하여 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 헤테로이량체 비율 (%)을 최대화시킬 수 있다. 바람직한 경계면은 항체 불변 도메인의 CH3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 이러한 방법에서, 제 1 항체 분자의 경계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄는 보다 커다란 측쇄 (예: 티로신 또는 트립토판)으로 대체된다. 큰 아미노산 측쇄를 작은 아미노산 측쇄 (예: 알라닌 또는 트레오닌)로 대체시킴으로써 큰 측쇄(들)에 대한 동일하거나 유사한 크기의 보상적 "캐비티 (cavity)"가 제 2 항체 분자의 경계면에 생긴다. 이는 다른 목적하지 않는 최종-산물, 예를 들어 호모이량체를 능가하는 헤테로이량체의 생산을 증가시키는 기작을 제공한다.
이특이적 항체는 가교-결합 항체 또는 "헤테로결합체" 항체를 포함한다. 예를 들어, 헤테로결합체의 항체 중 하나가 아비딘에 커플링되고 다른 하나가 바이오틴에 커플링될 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어 목적하지 않는 세포로 면역 시스템 세포를 표적하고 (U.S. Pat. No. 4,676,980), HIV 감염을 치료 (WO 91/00360, WO 92/200373, 및 EP 03089) 하기 위해 제시되었다. 헤테로결합체 항체는 편리한 가교-결합 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 적합한 가교-결합제는 당 분야에 널리 공지되어 있으며, 다수의 가교-결합 기술과 함께 문헌 (U.S. Pat. No. 4,676,980)에 기술되어 있다.
또한, 항체 단편으로부터 이특이적 항체를 생성하기 위한 기술이 문헌에 기술되어 있다. 예를 들어, 이특이적 항체는 화학적 결합을 이용하여 제조될 수 있다. 문헌 (Brennan et al., Science, 229: 81 (1985))는 온전한 항체가 단백질이 분해되도록 절단되어 F(ab')2 단편을 생성하는 공정을 기술하고 있다. 이들 단편은 인접한 디티올을 안정화시키고 분자간 디설파이드 형성을 막기 위해 디티올 컴플렉스화제 나트륨 아르세나이트의 존재 하에 환원된다. 이어서, 생성된 Fab' 단편은 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환된다. 이어서, Fab'-TNB 유도체 중 하나는 머캅토에틸아민으로 환원시켜 Fab'-티올로 재전환되며 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합되어 이특이적 항체를 형성한다. 생산된 이특이적 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 제제로서 사용될 수 있다.
최근의 공정이 이. 콜라이로부터 Fab'-SH 단편의 직접적 회수를 용이하게 하였으며, 이는 화학적으로 커플링되어 이특이적 항체를 형성할 수 있다. 문헌 (Shalaby et al., J. Exp. Med., 175: 217-225 (1992))은 완전히 인간화된 이특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산을 기술하고 있다. 각각의 Fab' 단편은 이. 콜라이로부터 개별적으로 분비되었으며 시험관 내에서 화학적 커플링되어 이특이적 항체를 형성하였다. 이렇게 형성된 이특이적 항체는 VEGF 수용체 및 정상적 인간 T 세포를 과발현하는 세포에 결합하고 인간 유방 종양 표적물에 대한 인간 세포독성 림프구의 분해 활성을 유발할 수 있었다.
또한, 재조합 세포 배양물로부터 직접적으로 이특이적 항체 단편을 제조하고 단리시키기 위한 다양한 기술이 기술되었다. 예를 들면, 이특이적 항체는 류신 지퍼를 사용해 제조되었다 (Kostelny et al., J. Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992)). Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드를 유전자 융합에 의한 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 결합시켰다. 항체 호모이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성하고, 이어서 재산화되어 항체 헤테로이량체를 형성하였다. 또한, 이러한 방법은 항체 호모이량체의 생산에도 이용될 수 있다. 문헌 (Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993))에 기술된 "디아바디" 기술은 이특이적 항체 단편을 제조하기 위한 다른 기작을 제공하였다. 이 단편은 너무 짧아 동일한 쇄의 2개의 도메인 사이에서 쌍의 형성을 허용하지 않는 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 쌍을 형성하여, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 또한, 단일 쇄 Fv (sFv) 이량체의 사용에 의한 이특이적 항체 단편의 제조에 대한 또 다른 방법이 보고되었다 (Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)).
2개 이상의 결합가를 갖는 항체가 고려된다. 예를 들어, 삼특이적 항체를 제조할 수 있다 (Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)).
(vii) 이펙터 (effector) 기능의 조작
예를 들어 암을 치료하는 항체의 효능을 증진시키기 위해, 이펙터 기능면에서 본 발명의 항체를 개질시키는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어 시스테인 잔기(들)을 Fc 영역에 도입하여 이러한 영역에서 쇄간 디설파이드 결합을 가능하게 할 수 있다. 이렇게 생성된 호모이량체 항체는 내화 능력이 증진되고/되거나 보체-매개된 세포 사멸 및 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC)이 증가될 수 있다 (Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992); Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)). 또한, 향상된 항-종양 활성을 갖는 호모이량체 항체가 문헌 (Wolff et al. Cancer Research 53:2560-2565 (1993))에 기술된 바와 같이 헤테로이작용성 가교-링커를 사용하여 제조될 수 있다. 달리, 이중 Fc 영역을 지녀 향상된 보체 분해 및 ADCC 능력을 가질 수 있는 항체가 조작될 수 있다 (Stevenson et al. Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)).
(viii) 면역결합체
또한, 본 발명은 세포독성제, 예를 들어 화학치료제, 독소 (예: 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 이의 단편), 또는 방사성 동위원소 (즉, 방사성결합체)에 결합된 본원에 기술된 항체를 포함하는 면역결합체에 관한 것이다.
이러한 면역결합체의 제조에 유용한 화학치료제는 상술된 바와 같다. 사용될 수 있는 효소적 활성 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 엑소톡신 A 쇄 (슈도모나즈 아에루기노사 (Pseudomonas aeruginosa)로부터의 것), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디 (Aleurites fordii ) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나 (Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 (momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 (sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테세네스를 포함한다. 다양한 방사성 핵종이 방사성결합체 항체의 제조에 이용될 수 있다. 이러한 예는 212Bi, 131I, 131In, 90Y 및 186Re을 포함한다.
다양한 이작용성 단백질 커플링제, 예를 들어 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올)프로피오네이트 (SPDP), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체 (예: 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르 (예: 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예: 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예: 비스 (p-아지도벤조일)헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예: 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예: 톨리엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물 (예: 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)를 사용하여 항체와 세포독성제의 결합체가 제조된다. 예를 들어, 리신 면역독소가 문헌(Vitetta et al. Science 238: 1098 (1987))에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다. 카본-14-라벨링된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)이 항체에 방사성뉴클레오티드를 결합시키기 위한 예시적 킬레이트제이다 (WO94/11026).
또 다른 양태에서, 항체는, 항체-수용체 결합체를 환자에게 투여하고 제거제를 사용하여 순환물로부터 비결합된 결합체를 제거시킨 후 세포독성제 (예: 방사성뉴클레오티드)에 결합된 "리간드" (예: 아비딘)를 투여하는, 종양 예비표적화에 이용하기 위해 "수용체" (예: 스트렙트아비딘)에 결합될 수 있다.
(ix) 면역리포좀
본원에 기술된 항체는 면역리포좀으로 제형화될 수 있다. 항체를 포함하는 리포좀을 당 분야에 공지된 방법으로 제조된다 (Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980); U.S. Pat. Nos. 4,485,045 및 4,544,545). 향상된 순환 시간을 갖는 리포좀이 문헌 (U.S. Pat. No. 5,013,556)에 기술되어 있다.
특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하는 역상 증발 방법으로 제조될 수 있다. 리포좀은 목적하는 직경을 갖는 리포좀을 수득하기 위해 제한된 포어 크기를 갖는 필터를 통해 여과시킨다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 문헌 (Martin et al. J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982))에 기술된 바와 같이 디설파이드 교체 반응을 통해 리포좀에 결합될 수 있다. 화학치료제 (예: 독소루비신)이 임의로 리포좀 내에 포함된다 (Gabizon et al. J. National Cancer Inst. 81(19)1484 (1989)).
(x) 항체 의존적 효소 매개된 프로드럭 치료 (ADEPT)
또한, 본 발명의 항체는 프로드럭 (예: 펩티드 화학치료제, WO81/01145)을 활성 항암 약물로 전환시키는 프로드럭-활성화 효소에 항체를 결합시킴으로써 ADEPT에 사용될 수 있다. 예를 들어 문헌 (WO 88/07378 및 U.S. Pat. No. 4,975,278)을 참조한다.
ADEPT에 유용한 면역결합체의 효소 성분은, 프로드럭이 이의 보다 활성인 세포독성 형태로 전환되도록 이에 작용할 수 있는 모든 효소를 포함한다.
본 발명의 방법에 유용한 효소는, 이에 한정되는 것은 아니나, 포스페이트-함유 프로드럭을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 알칼리 포스파타제; 설페이트-함유 프로드럭을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 아릴설파타제; 무독성 5-플루오로시토신을 항암 약물 5-플루오로우라실로 전환시키는데 유용한 시토신 데아미나제; 펩티드-함유 프로드럭을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 프로테아제, 예를 들어 세라티아 프로테아제, 테르몰리신, 서브틸리신, 카복시펩티다제 및 카텝신 (예: 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환체를 포함하는 프로드럭을 전환시키는데 유용한 D-알라닐카복시펩티다제; 당화된 프로드럭을 유리 약물로 전환시키는데 유융한 탄수화물-절단 효소, 예를 들어 β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제; β-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 β-락타마제; 및 아민 질소에서 각각 펜옥시아세틸 또는 페닐아세틸기로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 페니실린 아미다제, 예를 들어 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제를 포함한다. 달리, 당 분야에서 "abzyme"으로도 공지된 효소적 활성을 갖는 항체를 본 발명의 프로드럭을 유리 활성 약물로 전환시키는데 사용할 수 있다 (Massey, Nature 328: 457-458 (1987)). 항체-abzyme 결합체는 abzyme을 종양 세포 집단에 전달시키기 위해 본원에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.
본 발명의 효소는 당 분야에 널리 공지된 기술, 예를 들어 상술된 헤테로이작용성 가교결합 시약을 사용하여 항체에 공유 결합될 수 있다. 달리, 본 발명의 효소의 적어도 기능적으로 활성인 부분에 연결된, 본 발명의 항체의 적어도 항원 결합 영역을 포함하는 융합 단백질이 당 분야에 공지된 재조합 DNA 기술을 이용하여 제조될 수 있다 (Neuberger et al., Nature, 312: 604-608 (1984)).
(xi) 항체-샐비지 수용체 결합 에피토프 융합
본 발명의 특정 양태에서, 예를 들어 종양 침투를 증가시키기 위해 온전한 항체 보다는 항체 단편을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 경우, 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해 항체 단편을 개질시키는 것이 바람질할 수 있다. 이는 예를 들어 샐비지 (salvage) 수용체 결합 에피토프를 항체 단편에 삽입 (예: 항체 단편의 적합한 영역의 돌연변이에 의하거나, 예를 들어 DNA 또는 펩티드 합성에 의해 항체 단편의 말단 또는 중간에서 항체 단편에 융합되는 펩티드 태그로 에피토프를 삽입)시켜 달성할 수 있다.
샐비지 수용체 결합 에피토프는 바람직하게는 Fc 도메인의 하나 또는 2개의 루프로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기가 항체 단편의 유사한 위치에 전달되는 영역을 구성한다. 보다 바람직하게는, Fc 도메인의 하나 또는 2개의 루프로부터의 3개 이상의 잔기가 전달된다. 보다 더 바람직하게는, 에피토프는 (예를 들어 IgG의) Fc 영역의 CH2 도메인으로부터 취해져 항체의 CH1, CH3, 또는 VH 영역, 또는 이러한 영역의 하나 이상에 전달된다. 달리, 에피토프는 Fc 영역의 CH2 도메인으로부터 취해져 항체 단편의 CL 영역 또는 VL 영역, 또는 이둘 모두에 전달된다.
(xii) 항체의 기타 공유결합 개질
항체의 공유결합 개질은 본 발명의 범위에 포함된다. 이는 화학적 합성에 의하거나, 적용가능한 경우, 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 수행될 수 있다. 항체의 표적 아미노산 잔기를 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시킴으로써 다른 타입의 항체의 공유결합 개질이 항체 분자에 도입될 수 있다.
시스테인 잔기는 가장 통상적으로 α-할로아세테이트 (및 상응하는 아민), 예를 들어 클로로아세트산 또는 클로로아세트아미드와 반응되어 카복시메틸 또는 카복시아미도메틸 유도체가 수득된다. 또한, 시스테인 잔기는 브로모트리플루오로아세톤, α-브로모-β-(5-이미다조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이미드, 3-니트로-2-피리딜 디설파이드, 메틸 2-피리딜 디설파이드, p-클로로머쿠리벤조에이트, 2-클로로머쿠리-4-니트로페놀, 또는 클로로-7-니트로벤조-2-옥사-1,3-디아졸과 반응하여 유도체화된다.
히스티딘 잔기는 pH 5.5 내지 7.0에서 디에틸피로카보네이트와 반응시켜 유도체화되는데, 이는 이 제제가 히스티딘 측쇄에 비교적 특이적이기 때문이다. 또한, 파라-브르모펜아실 브로마이드도 유용하다; 반응은 바람직하게는 pH 6.0에서 0.1 M 나트륨 카코딜레이트 중에서 수행된다.
리신 및 아미노-말단 잔기는 숙신산 무수물 또는 다른 카복실산 무수물과 반응된다. 이들 제제로의 유도체화는 리신 잔기의 하전을 역전시키는 효과를 갖는다. α-아미노-함유 잔기의 유도체화에 적합한 다른 시약은 이미도에스테르, 예를 들어 메틸 피콜린이미데이트, 피리독살 포스페이트, 피리독살, 클로로보로히드리드, 트리니트로벤젠설폰산, O-메틸이소우레아, 2,4-펜탄디온, 및 글리옥실레이트와의 트랜스아미나제-촉매화된 반응을 포함한다.
아르기닌 잔기는 하나 이상의 통상의 시약, 예를 들어 페닐글리옥살, 2,3-부타디온, 1,2-사이클로헥산디온, 및 닌히드린과 반응시켜 개질된다. 아르기닌 잔기의 유도체화는 구아니딘 작용기의 높은 pKa 때문에 알칼리 조건에서 수행해야 한다. 또한, 이들 시약은 리신기 및 아르기닌 엡실론-아미노기와 반응할 수 있다.
티로신 잔기의 특정한 개질은, 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과의 반응에 의해 티로신 잔기로 스펙트럼 라벨을 도입시키는데 특별한 관심이 모아질 수 있다. 가장 일반적으로, N-아세틸이미디졸 및 테트라니트로메탄이 각각 O-아세틸 티로신 종 및 3-니트로 유도체를 형성하는데 사용된다. 티로신 잔기는 방사성면역분석에 사용하기 위한 라벨링된 단백질을 제조하기 위해 125I 또는 131I을 사용하여 요오드화된다.
카복실 측쇄기 (아스파테이트 또는 글루타메이트)은 카보디이미드 (R-N=C=N-R', R 및 R'는 상이한 알킬기이다), 예를 들어 1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리닐-4-에틸)카보디이미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-디메틸펜틸)카보디이미드와의 반응에 의해 선택적으로 개질된다. 또한, 아스파테이트 및 글루타메이트 잔기는 암모늄 이온과의 반응에 의해 아스파라긴 또는 글루타민 잔기로 전환된다.
글루타민 및 아스파라긴 잔기는 종종 각각 상응하는 글루타메이트 및 아스파테이트 잔기로 탈아민화된다. 이들 잔기는 중성 또는 염기성 조건 하에 탈아민화된다. 이들 잔기의 탈아민화 형태가 본 발명의 범위에 속한다.
기타 개질은 프롤린 및 리신의 히드록실화, 세린 또는 트레오닌 잔기의 히드록실기의 포스포릴화, 리신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노기의 메틸화 (T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)), N-말단 아민의 아세틸화, 및 C-말단 카복실기의 아미드화를 포함한다.
또 다른 타입의 공유결합 개질은 항체에 글리코시드를 화학적으로나 효소적으로 커플링시키는 것을 포함한다. 이들 공정은 N- 또는 O-결합된 당화를 위해 당화 능력을 갖는 호스트 세포에서 항체의 생성을 필요로 하지 않는다는 점에서 유리하다. 사용되는 커플링 방식에 따라, 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카복실기, (c) 유리 설프히드릴기, 예를 들어 시스테인의 것, (d) 유리 히드록실기, 예를 들어 세린, 트레오닌 또는 히드록시프롤린의 것, (e) 방향족 잔기, 예를 들어 페닐알라닌, 티로신 또는 트립토판의 것, 또는 (f) 글루타민의 아미드기에 결합될 수 있다. 이러한 방법이 문헌 (WO 87/05330, 1987년 9월 11일에 공개 및 Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981))에 기술되어 있다.
항체에 존재하는 탄수화물 잔기의 제거는 화학적으로나 효소적으로 수행될 수 있다. 화학적 탈당화는 항체를 화합물 트리플루오로메탄설폰산 또는 동등한 화합물에 노출시켜야 한다. 이러한 처리로, 항체는 온전하게 남아 있으면서, 연결 당 (N-아세틸글루코사민 또는 N-아세틸갈락토사민)을 제외한 대부분 또는 모든 당이 절단된다. 화학적 탈당화는 문헌 (Hakimuddin, et al. Arch. Biochem. Biophys. 259:52 (1987); Edge et al. Anal. Biochem., 118:131 (1981))에 기술되어 있다. 항체의 탄수화물 잔기의 효소적 절단은 문헌 (Thotakura et al. Meth. Enzymol. 138:350 (1987))에 기술된 바와 같이 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다제를 사용하여 달성될 수 있다.
또 다른 타입의 항체의 공유결합 개질은, 문헌 (U.S. Pat. No. 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 또는 4,179,337)에 기술된 바와 같이, 항체를 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌 중의 하나와 연결시키는 것을 포함한다.
B. 벡터, 호스트 세포 및 재조합 방법
본 발명의 항-VEGF 항체는 쉽게 입수가능한 기술 및 물질을 이용하여 재조합적으로 생산될 수 있다.
항-VEGF 항체의 재조합 생산을 위해, 이를 코딩하는 핵산을 단리하고 추가의 클로닝 (DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터에 삽입한다. 단일클론 항체를 코딩하는 DNA는 통상의 공정 (예: 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용)을 이용하여 용이하게 단리되고 서열분석된다. 많은 벡터가 이용가능하다. 벡터 성분은 일반적으로, 이에 한정되는 것은 아니나, 다음 중 하나 이상을 포함한다: 시그널 서열, 복제 기원, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 인자, 프로모터 및 전사 종결 서열.
(i) 시그널 서열 성분
본 발명의 항체는 직접적으로, 및 바람직하게는 시그널 서열 또는 성순 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특정한 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩티드인 이종 폴리펩티드와의 융합 폴리펩티드로서 재조합적으로 생산될 수 있다. 선택되는 이종 시그널 서열은 바람직하게는 호스트 세포에 의해 인식되고 프로세싱되는 (즉, 시그널 펩티다제에 의해 절단되는) 것이다. 천연 항체 시그널 서열을 인식하여 프로세싱하지 못하는 원핵 호스트 세포에 있어서, 시그널 서열은 예를 들어 알칼리 포스파타제, 페니실리나제, lpp, 또는 열-안정한 엔테로톡신 II 리더로 이루어진 군 중에서 선택되는 원핵세포 시그널 서열에 의해 치환된다. 효모 분비를 위해, 천연 시그널 서열은 예를 들어 효모 인버타제 리더, α 인자 리더 (사카로마이세스 (Saccharomyces) 및 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces) α-인자 리더), 또는 산 포스파타제 리더, 씨. 알비칸스 (C. albicans) 글루코아밀라제 리더, 또는 문헌 (WO 90/13646)에 기술된 시그널에 의해 치환될 수 있다. 포유동물 세포 발현에서, 포유동물 시그널 서열 및 바이러스성 분비 리더, 예를 들어 헤르페스 심플렉스 gD 시그널이 이용가능하다.
이러한 전구체 영역을 위한 DNA는 항체를 코딩하는 DNA에 판독 프레임으로 결찰된다.
(ii) 복제 성분의 기원
발현 벡터와 클로닝 벡터는 벡터가 하나 이상의 선택된 호스트 세포에서 복제가능하도록 하는 핵산 서열을 포함한다. 일반적으로, 클로닝 벡터에서 이러한 서열은 벡터가 호스트 염색체 DNA와 독립적으로 복제할 수 있게 하는 것이며, 복제 기원 또는 자동적 복제 서열을 포함한다. 이러한 서열은 다양한 세균, 효모 및 바이러스에 대해 널리 공지되어 있다. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기원은 대부분의 그람-네가티브 세균에 적합하고, 2 μ 플라스미드 기원은 효모에 적합하며, 다양한 바이러스 기원 (SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV 또는 BPV)는 포유동물 세포에서의 클로닝 벡터에 유용하다. 일반적으로, 복제 성분의 기원은 포유동물 발현 벡터에 필요하지 않다 (SV40 기원은 초기 프로모터를 포함하기 때문에 통상적으로 사용될 수 있다).
(iii) 선별 유전자 성분
발현 및 클로닝 벡터는 선별 마커로도 불리는 선별 유전자를 포함할 수 있다. 통상의 선별 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트, 또는 테트라사이클린에 대한 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보충하거나, (c) 복합 배지로부터 이용가능하지 않은 중요한 영양물, 예를 들어 바실러스에 대한 D-알라닌 라세마제를 코딩하는 유전자를 공급하는 단백질을 코딩한다.
선별 계획에 대한 하나의 예시는 호스트 세포의 성장을 정지시키는 약물을 이용한다. 이종 유전자로 성공적으로 형질전환된 세포는 약물 내성을 부여하는 단백질을 생성하여 선별 처리 계획에도 불구하고 살아남는다. 이러한 우세한 선별에 대한 예는 약물 네오마이신, 미코페놀산 및 히그로마이신을 사용한다.
포유동물 세포에 대한 적합한 선별 마커의 또 다른 예는 항체 핵산을 택하기에 적합한 세포를 확인할 수 있게 하는 것, 예를 들어 DHFR, 티미딘 키나제, 메틸로티오네인-I 및 -II, 바람직하게는 영장류 메탈로티오네인 유전자, 아데노신 데아미나제, 오르니틴 데카복실라제 등이다.
예를 들어, DHFR 선별 유전자로 형질전환된 세포는 우선적으로 모든 형질전환체를 DHFR의 경쟁적 길항물질인 메토트렉세이트 (Mtx)를 포함하는 배양 배지에서 배양하여 확인된다. 야생형 DHFR이 사용되는 경우 적합한 호스트 세포는 DHFR 활성이 결핍된 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포주이다.
달리, 항체, 야생형 DHFR 단백질, 및 또 다른 선별 마커, 예를 들어 아미노글리코시드 3'-포스포트란스퍼라제 (APH)를 코딩하는 DNA 서열로 형질전환되거나 공동-형질전환된 호스트 세포 (특히 내인성 DHFR을 포함하는 야생형 호스트)는 선별 마커에 대한 선별제, 예를 들어 아미노글리코시드 항생제, 예를 들어 카나마이신, 네오마이신, 또는 G418을 포함하는 배지에서 세포 성장시켜 선별될 수 있다 (U.S. Pat. No. 4,965,199).
효모에서 사용하기 위한 적합한 선별 유전자는 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는 trp1 유전자이다 (Stinchcomb et al., Nature, 282:39 (1979)). trp1 유전자는 트립토판에서 성장하는 능력이 결여된 효모의 돌연변이 균주, 예를 들어 ATCC No. 44076 또는 PEP4-1을 위한 선별 마커를 제공한다 (Jones, Genetics, 85:12 (1977)). 효모 호스트 세포 게놈 중 trp1 손실의 존재는 트립토판의 부재 하에 성장시켜 형질전환체를 검출하기 위한 효과적인 환경을 제공한다. 유사하게, Leu2-결핍 효모 균주 (ATCC 20,622 또는 38,626)는 Leu2 유전자를 갖는 공지된 플라스미드에 의해 보완된다.
또한, 1.6 μm 환형 플라스미드 pKD1로부터 유래된 벡터는 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces) 효모의 형질전환에 사용될 수 있다. 달리, 재조합 송아지 키모신의 대규모 생산을 위한 발현 시스템이 케이 . 락티스 (K. lactis )에 대해 보고되었다 (Van den Berg, Bio/Technology, 8:135 (1990)). 또한, 클루이베로마이세스의 산업 균주에 의한 성숙한 재조합 인간 혈청 알부민의 분비를 위한 안정한 다중-카피 발현 벡터가 문헌 (Fleer et al., Bio/Technology, 9:968-975 (1991))에 기술되어 있다.
(iv) 프로모터 성분
통상적으로, 발현 및 클로닝 벡터는 호스트 유기체에 의해 인식되고 항체 핵산에 작동적으로 연결된 프로모터를 포함한다. 원핵세포 호스트에 사용하기에 적합한 프로모터는 phoA 프로모터, β-락타마제 및 락토즈 프로모터 시스템, 알칼리 포스파타제, 트립토판 (trp) 프로모터 시스템, 및 하이브리드 프로모터, 예를 들어 tac 프로모터를 포함한다. 그러나, 다른 공지된 세균성 프로모터도 적합하다. 또한, 세균 시스템에 사용하기 위한 프로모터는 항체를 코딩하는 DNA에 작동적으로 연결된 샤인-달가노 (S.D.) 서열을 포함할 것이다.
진핵세포에 대한 프로모터 서열이 공지되어 있다. 실질적으로, 모든 진핵세포 유전자는 전사가 개시되는 부위로부터 약 25 내지 30 염기 위쪽으로 위치된 AT-풍부 영역을 갖는다. 많은 유전자의 전사 개시부로부터 70 내지 80 염기 위쪽에서 발견되는 또 다른 서열은 N이 모든 뉴클레오티드인 CNCAAT 영역이다. 코딩 서열의 3' 말단에 폴리 A 테일을 첨가시키기 위한 시그널일 수 있는 AATAAA 서열이 대부분의 진핵세포 유전자의 3' 말단에 있다. 이들 서열은 모두 진핵세포 발현 벡터로 적합하게 삽입된다.
효모 호스트와의 사용에 적합한 프로모터 서열의 예는 3-포스포글리세레이트 키나제 또는 기타 해당 효소, 예를 들어 에놀라제, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제, 헥소키나제, 피루베이트 데카복실라제, 포스포프룩토키나제, 글루코즈-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타제, 피루베이트 키나제, 트리오세포스페이트 이소머라게, 포스포글루코즈 이소머라제, 및 글루코키나제에 대한 프로모터를 포함한다.
성장 조건에 의해 전사 조절되는 추가의 잇점을 갖는 유도성 프로모터인 기타 효모 프로모터는, 알콜 데히드로게나제 2, 이소시토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사와 관련된 분해 효소, 메탈로티오네인, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제, 및 말토즈 및 갈락토즈 이용에 필요한 효소에 대한 프로모터 영역이다. 효모 발현에 사용하기에 적합한 벡터 및 프로모터가 추가로 문헌 (EP 73,657)에 기술되어 있다. 또한, 효모 인핸서가 효모 프로모터와 함께 유리하게 사용된다.
포유동물 호스트 세포에서 벡터로부터 항체 전사는, 호스트 세포 시스템과 적합하기만 하다면, 예를 들어 바이러스, 예를 들어 폴리오마 바이러스, 파울폭스 바이러스, 아데노바이러스 (예: 아데노바이러스 2), 소 파필로마 바이러스, 조류 육종 바이러스, 시토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 대부분의 시미안 바이러스 40 (SV40)의 게놈으로부터 수득된 프로모터, 이종 포유동물 프로모터, 예를 들어 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터, 열-쇽 프로모터에 의해 조절된다.
SV40 바이러스의 초기 및 후기 프로모터는 편리하게는 SV40 바이러스 복제 기원도 포함하는 SV40 제한 단편으로 수득된다. 인간 시토메갈로바이러스의 IE (immediate early) 프로모터는 편리하게는 HindIII E 제한 단편으로서 수득된다. 벡터로서 소 파필로마 바이러스를 사용하는 포유동물 호스트에서의 DNA 발현 시스템이 문헌 (U.S. Pat. No. 4,419,446)에 기술되어 있다. 이 시스템의 변형이 문헌 (U.S. Pat. No. 4,601,978)에 기술되어 있다. 헤르페스 심플렉스 바이러스로부터의 티미딘 키나제 프로모터의 조절하에 마우스 세포에서 인간 β-인터페론 cDNA를 발현시키는 것에 대해 문헌 (Reyes et al., Nature 297:598-601 (1982))을 참조한다. 달리, 라우스 육종 바이러스의 긴 말단 반복물이 프로모터로서 사용될 수 있다.
(v) 인핸서 인자 성분
고등 진핵세포에 의한 본 발명의 항체를 코딩하는 cDNA의 전사는 종종 인핸서 서열을 벡터로 삽입함으로써 증가된다. 현재, 포유동물 유전자 (글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-페토프로테인, 및 인슐린)로부터의 많은 인핸서 서열이 공지되어 있다. 그러나, 통상적으로 진핵세포 바이러스로부터의 인핸서를 사용할 것이다. 예를 들어, 복제 기원의 후기 측 (late side)에 있는 SV40 인핸서, 시토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 기원의 후기 측에 있는 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서를 포함한다. 진핵세포 프로모터의 활성화에 대한 인핸서 성분에 대해 문헌 (Yaniv (1982) Nature 297:17-18)을 참조한다. 인핸서는 항체-코딩 서열의 5' 또는 3' 위치에서 벡터로 스플라이싱될 수 있으나, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 부위에 위치된다.
(vi) 전사 종결 성분
진핵세포 호스트 세포 (효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간, 또는 다른 다세포 유기체로부터의 유핵 세포)에 사용되는 발현 벡터는 또한 전사의 종결 및 mRNA를 안정화시키는데 필요한 서열을 포함할 것이다. 이러한 서열은 통상적으로 5' 및 경우에 따라서는 진핵세포 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 3' 비해독 영역으로부터 이용가능하다. 이들 영역은 항체를 코딩하는 mRNA의 비해독 부분에 폴리아데닐화 단편으로 전사되는 뉴클레오티드 절편을 포함한다. 하나의 유용한 전사 종결 성분이 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 영역이다. 문헌 (WO94/11026) 및 본원에 기술된 발현 벡터를 참조한다.
(vii) 호스트 세포의 선별 및 형질전환
본원에서 벡터에 DNA를 클로닝하거나 발현하기에 적합한 호스트 세포는 상술된 원핵세포, 효모, 또는 고등 진핵세포이다. 이러한 목적에 적합한 원핵세포는 유박테리아, 예를 들어 그람-네가티브 또는 그람-포지티브 유기체, 예를 들어 엔테로박테리아세애 ( Enterobacteriaceae ), 예를 들어 에쉐리키아 ( Escherichia ), 예를 들어 이. 콜라이 , 엔테로박터 ( Enterobacter ), 어위니아 ( Erwinia ), 클렙시엘라 (Klebsiella), 프로테우스 ( Proteus ), 살모넬라 ( Salmonella ), 예를 들어 살모넬라 티피무륨 ( Salmonella typhimurium ), 세라티아 ( Serratia ), 예를 들어 세라티아 마르세스칸스 ( Serratia marcescans ), 및 시겔라 ( Shigella ), 바실러스 ( Bacillus ), 예를 들어 비. 서브틸리스 (B. subtilis ) 및 비. 리체니포르미스 (B. licheniformis) (예: 비. 리체니포르미스 41P, 문헌 (DD 266,710, 1989년 4월 12일에 공개됨)에 기술됨), 슈도모나즈 ( Pseudomonas ), 예를 들어 피. 아에루기노사 (P. aeruginosa ), 및 스트렙토미세스 ( Streptomyces )를 포함한다. 하나의 바람직한 이. 콜라이 클로닝 호스트는 이. 콜라이 294 (ATCC 31,446)이며, 다른 균주, 예를 들어 이. 콜라이 B, 이. 콜라이 X1776 (ATCC 31,537), 및 이. 콜라이 W3110 (ATCC 27,325)도 적합하다. 이들 예들은 단지 설명을 위한 것으로서 이로써 제한되지 않는다.
원핵세포에 추가하여, 진핵세포 미생물, 예를 들어 필라멘트성 진균 또는 효모가 항체-코딩 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 호스트이다. 사카로마이세스 세레비지애 ( Saccharomyces cerevisiae) 또는 일반적인 제빵 효모가 하등 진핵세포 호스트 미생물 중에서 가장 일반적으로 사용된다. 그러나, 다수의 기타 속, 종 및 균주, 예를 들어 쉬조사카로마이세스 폼베 ( Schizosaccharomyces pombe ); 클루이베로마이세스 호스트, 예를 들어 케이 . 락티스 (K. lactis ), 케이 . 프라질리스 (K. fragilis ) (ATCC 12,424), 케이 . 불가리쿠스 (K. bulgaricus ) (ATCC 16,045), 케이. 윅케라미 (K. wickeramii) (ATCC 24,178), 케이 . 왈티 (K. waltii ) (ATCC 56,500), 케이 . 드로소필라룸 (K. drosophilarum) (ATCC 36,906), 케이 . 테르모톨레란스 (K. thermotolerans ), 및 케이 . 마르시아누스 (K. marxianus); 야로위아 (yarrowia) (EP 402,226); 피치아 파스토리스 ( Pichia pastoris) (EP 183,070); 칸디다 ( Candida); 트리초데르마 리시아 ( Trichoderma reesia ) (EP 244,234); 뉴로스포라 크라사 ( Neurospora crassa ); 쉬완니오마이세스 ( Schwanniomyces ), 예를 들어 쉬완니오마이세스 옥시델탈리스 ( Schwanniomyces occidentalis); 및 필라민트성 진균, 예를 들어 뉴로스포라 ( Neurospora ), 페니실륨 ( Penicillium ), 톨리포클라듐 (Tolypocladium), 및 아스퍼질루스 호스트, 예를 들어 에이. 니둘란스 (A. nidulans) 및 에이. 니거 (A. niger) 가 일반적으로 이용가능하며 본원에 유용하다.
당화된 항체의 발현에 적합한 호스트 세포는 다세포 유기체로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 많은 바큘로바이러스 균주 및 변이체 및 호스트, 예를 들어 스포도프테라 프루기페르다 ( Spodoptera frugiperda) (모충), 아에데스 아에깁티 ( Aedes aegypti ) (모기), 아에데스 알보픽투스 ( Aedes albopictus ) (모기), 드로소필라 멜라노가스테르 ( Drosophila melanogaster) (과일 파리), 및 봄빅스 모리 ( Bombyx mori )로부터의 상응하는 허용되는 곤충 호스트 세포가 확인되었다. 트랜스펙션을 위한 다양한 바이러스 균주, 예를 들어 아우토그라파 칼리포르니카 ( Autographa californica ) NPV의 L-1 변이체 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 균주가 널리 이용가능하다. 이러한 바이러스는 본 발명에 따라, 특히 스포도프테라 프루기페루다 세포의 트랜스펙션에 바이러스로서 사용될 수 있다. 또한, 면화, 옥수수, 감자, 대두, 피튜니아, 토마토 및 담배의 식물 세포 배양물이 호스트로서 사용될 수 있다.
그러나, 척추동물 세포가 가장 관심을 끌며, 척추동물 세포의 배양물 (조직 배양물)로의 증식은 통상적인 공정이 되었다. 유용한 포유동물 호스트 세포주의 예로는 SV40으로 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주 (293 또는 현탁 배양으로 성장시키기 위해 서브클로닝된 293 세포, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); 베이비 햄스터 신장 세포 (BHK, ATCC CCL 10); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 마우스 세르톨리 (sertoli) 세포 (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); 원숭이 신장 세포 (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 그린 원숭이 신장 세포 (VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 경부암 세포 (HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포 (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포 (W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포 (Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51); TR1 세포 (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간종양 세포주 (Hep G2)가 있다.
호스트 세포는 항체 생산을 위한 상술한 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환되며, 프로모터를 유도하거나 형질전환체를 선별하거나 목적하는 서열을 코딩하는 유전자를 증폭시키기에 적합하게 개질된 통상의 영양 배지에서 배양된다.
(viii) 호스트 세포의 배양
본 발명의 항체를 생산하기 위해 사용되는 호스트 세포는 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 시판되는 배지, 예를 들어 Ham's F10 (Sigma), MEM (Minimal Essential Medium, Sigma), RPMI-1640 (Sigma), 및 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Sigma)가 호스트 세포의 배양에 적합하다. 또한, 문헌 (Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979); Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980); U.S. Pat. No. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655; 또는 5,122,469; WO 90/03430; WO 87/00195; 또는 U.S. Pat. Re. 30,985)에 기술된 배지가 호스트 세포의 배양 배지로서 사용될 수 있다. 이들 배지는, 필요한 경우, 호르몬 및/또는 기타 성장 인자 (예: 인슐린, 트란스페린, 또는 표피 성장 인자), 염 (예: 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘, 및 포스페이트), 완충제 (예: HEPES), 뉴클레오티드 (예: 아데노신 및 티미딘), 항생제 (예: GENTAMYCINTM 약물), 미량 원소 (통상 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로 정의됨), 및 글루코즈 또는 동등한 에너지 공급원으로 보충될 수 있다. 또한, 기타 필수 보충물이 당업자에게 공지된 적합한 농도로 포함될 수 있다. 배양 조건, 예를 들어 온도, pH 등은 발현을 위해 선택되는 호스트 세포와 관련하여 전술한 것이며 당업자에게 명백할 것이다.
(ix) 항체 정제
재조합 기술을 이용하는 경우, 항체는 페리플라즘 공간에 세포 내로 생산되거나 배지로 직접적으로 분비될 수 있다. 항체가 제 1 단계로서 세포 내에 생산되는 경우, 미립자 파편 (호스트 세포 또는 분해된 단편)은 예를 들어 원심분리 또는 한외여과로 제거된다. 문헌 (Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992))은 이. 콜라이의 페리플라즘 공간으로 분비되는 항체를 단리시키는 공정을 기술하고 있다. 간단히 설명하면, 세포 페이스트를 약 30 분에 걸쳐 나트륨 아세테이트 (pH 3.5), EDTA 및 페닐메틸설포닐플루오라이드의 존재 하에 해동시킨다. 세포 단편은 원심분리시켜 제거될 수 있다. 항체가 배지로 분비되는 경우, 일반적으로 이러한 발현 시스템으로부터의 상등액이 시판되는 단백질 농축 필터, 예를 들어 Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외여과 유니트를 사용하여 농축된다. 프로테아제 억제제, 예를 들어 PMSF가 단백질분해를 억제하기 위해 앞서의 임의의 단계에 포함될 수 있으며, 항생제가 우발적 오염물의 성장을 억제하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조되는 항체 조성물은 예를 들어 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 이용하여 정제될 수 있으며, 친화성 크로마토그래피가 바람직하다. 친화성 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체에 존재하는 면역글로불린 Fc 도메인의 종류 및 이소타입에 따른다. 단백질 A는 인간 γ1, γ2, 또는 γ4 중쇄에 기초하여 항체를 정제하는데 사용될 수 있다 (Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)). 단백질 G는 모든 마우스 이소타입 및 인간 γ3에 대해 권장된다 (Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)). 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 종종 아가로즈이나 다른 매트릭스도 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예를 들어 조절된 포어 글래스 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠이 아가로즈로 달성될 수 있는 것 보다 빠른 유속 및 짧은 프로세싱 시간을 가능하게 한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABXTM 수지 (J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.)가 정제에 유용하다. 또한, 단백질 정제를 위한 다른 기술, 예를 들어 이온-교환 컬럼에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카에서의 크로마토그래피, 헤파린 SEPHAROSETM에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지에서의 크로마토그래피 (예: 폴리아스파트산 컬럼), 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전이 회수되는 항체에 따라 이용가능하다.
예비적 정제 단계(들)에 이어서, 항-VEGF 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물은, 바람직하게는 저염 농도 (예: 약 0 내지 0.25 M 염)에서 수행되는, pH 약 2.5 내지 4.5의 용출 완충액을 사용하는 낮은 pH의 소수성 상호작용 크로마토그래피가 수행될 수 있다.
III. 제약학적 제형
본 발명에 따라 사용되는 항체의 치료적 제형은 목적하는 정도의 순도를 갖는 항체를 임의의 제약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합하여 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태로 저장을 위해 제조된다 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. [1980]). 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용체에 무독성이며, 다음을 포함한다: 완충제, 예를 들어 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산; 항산화제 (아스코르브산 및 메티오닌 포함); 방부제 (예: 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레솔); 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물 (글루코즈, 만노즈, 또는 덱스트린을 포함); 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당, 예를 들어 슈크로즈, 만니톨, 트레할로즈 또는 소르비톨; 염-형성 카운터-이온, 예를 들어 나트륨; 금속 착물 (예: Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예를 들어 TWEENTM, PLURONICSTM 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG). 바람직한 동결건조된 항-VEGF 항체 제형은 문헌 (WO 97/04801)에 기술되어 있으며, 본원에 참조로 인용된다.
또한, 본원에서 제형은 특정 증상이 치료되는 경우에 필요한 경우 하나 이상의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 불리한 영향을 끼치지 않는 보완적 활성을 갖는 것들을 포함할 수 있다. 예를 들어 하나의 제형에 EGFR, VEGF (예: VEGF의 상이한 에피토프를 결합하는 항체), VEGFR, 또는 ErbB2 (예: Herceptin®)에 결합하는 항체를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 달리, 또는 추가로, 조성물은 세포독성제, 사이토킨, 성장 억제제 및/또는 소분자 VEGFR 길항물질을 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도하는 목적에 맞게 유효한 양으로 배합물로 적합하게 존재한다.
또한, 활성 성분은, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로즈 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐, 콜로이드 약물 전달 시스템 (예: 리포좀, 알부민 마이크로스포어, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼에 포함 (entrapping) 시킬 수 있다. 이러한 기술이 문헌 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))에 기술되어 있다.
생체 내 투여에 사용되는 제형은 멸균되어야 한다. 이는 멸균 여과막을 통해 여과시켜 용이하게 수행된다.
서방출 제제가 제조될 수 있다. 서방출 제제의 적합한 예는 항체를 포함하는 고형 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함한다. 이러한 매트릭스는 성형 물품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 서방출 매트릭스의 예에는 폴리에스테르, 히드로겔 (예: 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (U.S. Pat. No. 3,773,919), L-글루탐산과 γ 에틸-L-글루타메이트와의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들어 LUPRON DEPOTTM (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사가능한 마이크로스피어), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 포함된다. 중합체, 예를 들어 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산이 100일 이상 동안 분자의 방출을 가능하게 하지만, 특정한 히드로겔은 보다 짧은 기간 동안 단백질을 방출시킨다. 캡슐화된 항체가 오랜 시간 동안 체내에 머무는 경우, 항체는 37 ℃의 습기에 노출되는 결과로서 변성 또는 응집하여 생물학적 활성을 상실하고 면역원성에 변화가 생길 수 있다. 수반되는 기작에 따라 안정화를 위해 합리적인 계획이 고안될 수 있다. 예를 들어, 응집 기작이 티오-디설파이드 교환을 통한 세포간 S-S 결합 형성인 것으로 밝혀지는 경우, 설프히드릴 잔기를 개질시키고, 산성 용액으로부터 동결건조시키고, 습기 함량을 조절하고, 적합한 첨가제를 사용하고, 특정한 중합체 매트릭스 조성을 개발하여 안정화시킬 수 있다.
IV. 항-VEGF 항체의 치료적 이용
본 발명에 따라, 항-VEGF 항체가 병적 혈관신생에 의해 특징 지워지는 다양한 신생물 또는 비-신생물 증상을 치료하는데 사용될 수 있다는 것이 고려된다. 치료될 수 있는 비-신생물 증상은 류마티스 관절염, 건선, 아테롬성 동맥경화증, 당뇨병 및 기타 증식성 망막증 (미숙아 망막증 포함), 후수정체섬유증식증, 신생혈관성 녹내장, 노인성황반부변성, 갑상선 과형성 (그레이브병 (Grave's disease) 포함), 각막 및 기타 조직 이식, 만성 염증, 폐렴, 신증후군, 자간전증, 복수, 심낭 삼출 (예: 심낭염과 관련된 심낭 삼출), 및 흉막삼출을 포함한다.
본 발명의 항체는 바람직하게는 혈관신생이 암 및 양성 종양을 포함하여 종양 성장에 중요한 역할을 하는 종양의 치료에 바람직하게 사용된다. 치료될 암의 예는, 이에 한정되는 것은 아니나, 암종, 림프종, 아구종, 육종 및 백혈병을 포함한다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평상피세포암, 폐암 (소세포성 폐암, 비-소세포성 폐암, 폐의 선암, 및 폐의 편평상피암종을 포함), 복막암, 간세포암, 위암 (위장암을 포함), 췌장암, 교아구종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막암 또는 자궁암, 타액선암, 신장암, 전립선암, 외음암, 갑상선암, 간암종 및 다양한 유형의 두경부암; B-세포 림프종 (저등급/여포성 비-호지킨스 림프종 (NHL); 소림프구성 (SL) 비-호지킨스 림프종; 중간등급/여포성 비-호지킨스 림프종; 중간등급 확산 비-호지킨스 림프종; 고등급 면역아구성 비-호지킨스 림프종; 고등급 림프아구성 비-호지킨스 림프종; 고등급 소 비-절단세포성 비-호지킨스 림프종; 벌키 질병 비-호지킨스 림프종; 외투세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함); 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 급성 림프아구성 백혈병 (ALL); 유모세포 백혈병; 만성 골수아구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 장애 (PTLD); 모반증과 관련된 비정상적 혈관 증식, 부종 (뇌종양과 관련된 부종), 및 메이그 증후군을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명 항체에 의해 치료될 암은 유방암, 대장암, 직장암, 비-소세포성 폐암, 비-호지킨스 림프종, 신세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연부조직육종, 카포시육종, 유암종, 두경부암, 흑색종, 난소암, 중피암, 및 다발성골수종을 포함한다. 보다 바람직하게는, 본 발명에 따른 방법은 인간 환자의 대장암을 치료하는데 사용된다.
본 발명은 항혈관신생 치료 (종양 성장을 지지하는 영양물을 제공하는데 필요한 종양 혈관의 발달을 억제하는 것을 목표로 하는 신규한 암 치료 계획)을 포함한다. 혈관신생은 1차 종양 성장 및 전이 모두에 수반되기 때문에, 본 발명에 의해 제공되는 항혈관신생 치료는 1차 부위에서 종양의 신생물 성장을 억제하고 2차 부위에서 종양의 전이를 예방할 수 있어 다른 치료제에 의한 종양의 공격을 가능하게 한다.
병행 치료
본 발명의 항체는 다양한 질병, 예를 들어 종양을 치료하기 위해 사용되는 경우, 동일하거나 유사한 질병에 적합한 다른 치료제와 병행될 있다는 것이 고려된다. 암을 치료하는데 사용되는 경우, 본 발명의 항체는 통상의 암 치료, 예를 들어 수술, 방사선치료, 화학요법 또는 이들의 조합과 병행하여 사용될 수 있다.
특정 양태에서, 본 발명의 항체와의 병행 암 치료에 유용한 다른 치료제는 기타 항-혈관신생제를 포함한다. 많은 항-혈관신생제가 확인되었으며 당 분야에 공지되어 있다 (Carmeliet and Jain (2000)). 바람직하게는 본 발명의 항-VEGF 항체는 또 다른 VEGF 길항물질 또는 VEGF 수용체 길항물질, 예를 들어 VEGF 변이체, 가용성 VEGF 수용체 단편, VEGF 또는 VEGFR을 차단할 수 있는 압타머 (aptamer), 중화성 항-VEGFR 항체, VEGFR 티로신 키나제의 저분자량 억제제 및 이들의 배합물과 병행하여 사용된다. 달리, 또는 추가하여, 2개 이상의 항-VEGF 항체가 환자에게 공동-투여될 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명의 항체와 병행 종양 치료에 유용한 다른 치료제는 종양 성장에 관련되는 다른 인자, 예를 들어 EGFR, ErbB2 (Her2로도 공지됨) ErbB3, ErbB4, 또는 TNF의 길항물질을 포함한다. 때때로, 환자에게 하나 이상의 사이토킨을 투여하는 것이 유리할 수 있다. 바람직한 양태에서, VEGF 항체는 성장 억제제와 함께 공동-투여된다. 예를 들어 성장 억제제가 먼저 투여된 후, VEGF 항체가 투여될 수 있다. 그러나, 동시 투여 또는 먼저 VEGF 항체를 투여하는 것도 고려된다. 성장 억제제의 적합한 투여량은 현재 사용되는 양이며, 성장 억제제와 항-VEGF 항체의 조합 작용 (상승작용)에 기인하여 감량될 수 있다.
화학치료제
특정 양태에서, 본 발명은 유효량의 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제를 암에 걸리기 쉬운 환자 또는 암으로 진단된 환자에게 투여하여 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 병행 치료 방법에 다양한 화학치료제가 사용될 수 있다. 고려되는 화학치료제의 예 및 비제한적 목록이 "정의" 부문에서 제공되었다.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 화학치료제의 적합한 투여량은 일반적으로 화학치료제가 단독으로 또는 다른 화학치료제와 배합하여 투여되는 임상치료에서 이미 사용되는 투여량 정도일 것이다. 투여량은 치료되는 증상에 따라 변화될 수 있을 것이다. 주치의라면 개개인에 적합한 투여량을 결정할 수 있을 것이다.
단지 하나의 예시로서, 전이성 대장암에 대한 표준 화학치료가 후술된다.
하나의 바람직한 양태에서, 본 발명의 방법은 전이성 대장암을 포함하는 대장암을 치료하는데 이용된다. 대장암은 미국에서 암 사망에 있어 제 3의 일반적 원인이다. 1999년 미국에서 약 129,000명이 대장암으로 새로이 진단되고 56,000 명이 대장암으로 사망한 것으로 평가되었다 (Landis et al., Cancer J. Clin. 49:8-31 (1999)). 대장암 환자의 약 70 %가 외과적 절제에 의해 잠재적으로 치유될 수 있는 질병과 함께 존재한다 (August et al., Cancer Metastasis Rev 3:303-24 (1984)). 그러나, 진행된 또는 전이성 질병을 갖는 30 % 및 절제 후 재발하는 20 %에 대한 예후는 불량하다. 전이성 질병을 갖는 환자의 평균 생존은 12 내지 14개월이다 (Advanced Colorectal Cancer Meta-Analysis Project, J Clin Oncol 10:896-903 (1992)).
최근까지 미국에서 전이성 대장암에 대한 표준 치료는 5-플루오로우라실 (5-FU) + 5-FU의 생화학적 조절제인 류코보린으로의 화학치료이다 (Advanced Colorectal Cancer Meta-Analysis Project, J Clin Oncol 10:896-903 (1992); Moertel N Engl J Med 330:1136-42 (1994)). 5-FU/류코보린의 배합물은 빈번하지 않은 대장암의 일시적 축소를 제공하지만 5-FU 단독에 비해 생존을 연장하는 것으로는 입증되지 않았고 (Advanced Colorectal Cancer Meta-Analysis Project, J Clin Oncol 10:896-903 (1992)), 5-FU는 비효과적인 치료 + 최적 보조 요법과 비교하여 생존을 연장시키는 것이 입증되지 않았다(Ansfield et al. Cancer 39:34-40 (1977)). 5-FU/류코보린에 대한 입증된 생존 이익의 부족은 부적합하게 분류된 임상 시도에 부분적으로 기인할 수 있다. 절제가능한 대장암에 대해 아주방트 화학치료를 받는 환자에 대한 큰 무작위 시도에서, 5-FU/류코보린은 로무스틴 (MeCCNU), 빈크리스틴, 및 5-FU와 비교하여 연장된 생존을 입증하였다 (MOF; Wolmark et al., J Clin Oncol 11: 1879-87(1993)).
미국에서, 5-FU/류코보린 화학치료는 일반적으로 2개의 스케쥴 중 하나에 따라 투여된다: Mayo Clinic 투여계획 및 Roswell Park 투여계획. Mayo Clinic 투여계획은 5-FU + 저용량 류코보린의 집중적인 과정으로 구성된다 (425 mg/m2 5-FU + 20 mg/m2 류코보린을 5일 동안 정맥 내 (IV) 주입으로 매일 투여, 4- 내지 5-주 간격으로 반복) (Buroker et al. J Clin Oncol 12:14-20 (1994)). Roswell Park 투여계획은 5-FU + 고용량 류코보린의 주 (week) 단위 투여로 구성된다 (IV 주입되는 500 내지 600 mg/m2 5-FU + 2시간 주입으로 투여되는 500 mg/m2 류코보린을 6주 동안 매주 투여, 8주 마다 반복) (Petrelli et al., J Clin Oncol 7:1419-26 (1989)). Mayo Clinic과 Roswell Park 투여계획을 비교하는 임상 시도에서 효능 상의 차이를 입증하지 못하였으나 그렇게 하도록 고무되지 않았다 (Buroker et al., J Clin Oncol 12:14-20 (1994); Poon et al., J Clin Oncol 7:1407-18 (1989)). 2개의 투여계획의 독성 프로필이 상이하여, Mayo Clinic 투여계획은 백혈구 감소 및 위염을 일으키고, Roswell Park 투여계획은 보다 빈번한 설사를 일으킨다. 투여계획을 받은 전이성 대장암으로 새로이 진단된 환자에 있어 질병 진행에 대한 평균시간은 4 내지 5개월 및 평균 생존은 12 내지 14개월을 예측할 수 있다 (Petrelli et al., J Clin Oncol 7:1419-26 (1989); Advanced Colorectal Cancer Meta-Analysis Project, J Clin Oncol 10:896-903 (1992); Buroker et al., J Clin Oncol 12:14-20 (1994); Cocconi et al., J Clin Oncol 16:2943-52 (1998)).
최근에, 전이성 대장암에 대한 새로운 제 1 선 (first-line)의 치료가 부상하였다. 각각 약 400명의 환자를 갖는 2개의 무작위 임상 시도로 5-FU/류코보린과 배합하여 이리노테칸을 평가하였다 (Saltz et al., Proc ASCO 18:233a (1999); Douillard et al., Lancet 355:1041-7 (2000)). 두가지 연구 모두에서, 이리노테칸/5-FU/류코보린의 배합물은 5-FU/류코보린 단독에 비해, 생존 (2.2 및 3.3개월), 질병 진행에 대한 시간 및 반응률에서 통계학적으로 유의한 증가를 입증하였다. 이리노테칸의 이익은 증가된 독성의 댓가로서 오는 것이며, 이리노테칸의 5-FU/류코보린에의 추가는 5-FU/류코보린 단독과 비교하여, NCI-CTC (National Cancer Institute Common Toxicity Criteria) 등급 3/4 설사, 등급 3/4 구토, 등급 4 호중구감소증, 및 무력증의 증가된 출현과 관련된다. 또한, 단일 제제 이리노테칸이 제 2 선 (second-line) 세팅에서 생존기간을 연장시킨다는 증거가 있다 (Cunningham et al., Lancet 352:1413-18 (1998); Rougier et al., Lancet 352:1407-12 (1998)). 2개의 무작위 연구는, 이리노테칸이 5-FU 치료에 따라 진행되는 환자에서 생존을 연장시킨다는 것을 입증하였다. 하나의 연구는 이리노테칸을 최적 보조 요법에 비교하였으며 2.8개월의 생존 연장을 나타내었고, 또 다른 연구는 이리노테칸을 주입되는 5-FU와 비교하여 2.2개월의 생존 연장을 나타내었다. 이리노테칸이 제 1- 또는 제 2-세팅에서 생존에 보다 많은 영향을 끼치는 지의 여부는 잘-통제된 방식으로 연구되지 않았다.
투여량 및 투여
본 발명의 항체 및 화학치료제는 공지된 방법, 예를 들어 볼루스로서 정맥 내 투여 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입, 근육 내, 복강 내, 뇌척수 내, 피하, 관절 내, 활막 내, 협막 내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로에 의해 인간 환자에게 투여된다. 항체의 정맥 내 또는 피하 투여가 바람직하다.
하나의 양태에서, 본 발명의 치료는 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제의 병행 투여에 관한 것이다. 본 발명은 상이한 화학치료제의 칵테일 투여를 고려한다. 병행 투여는 분리된 제형 또는 단일 제약학적 제형을 이용하는 공동투여, 및 양 순서에 의한 연속 투여를 포함하며, 바람직하게는 2개의 (또는 모든) 활성 제제가 동시에 생물학적 활성을 발휘하기까지 일정 시간이 걸린다. 이러한 화학치료제를 위한 제제 및 투여량 스케쥴은 제조자의 지시에 따르거나 당업자에 의해 경험적으로 결정될 수 있다. 또한, 화학치료를 위한 제제 및 투여 스케쥴이 문헌 (Chemotherapy Service Ed., M. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, Md. (1992))에 기술되어 있다. 화학치료제가 미리 투여되거나, 항체의 투여 후 투여되거나, 동시에 투여될 수 있다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 항체의 적합한 투여량은 상기 정의된 바와 같이 치료되는 질병의 타입, 질병의 중증도 및 경과, 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는 지의 여부, 이전 치료, 환자의 임상 스토리 및 항체에 대한 반응도, 및 주치의의 판단에 따를 것이다. 항체는 한번에 또는 수회의 처리에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다. 병행 치료 투여계획에서, 본 발명의 조성물은 치료학적 유효량 또는 상승작용량으로 투여된다. 본원에 사용된 바와 같은 치료학적 유효량이란, 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제의 공동-투여 또는 본 발명의 조성물의 투여로 표적하는 질병 또는 증상이 감소되거나 억제되는 양이다. 치료학적 상승작용량이란, 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제의 양이 특정 질병과 관련된 증상 및 증후군을 상승작용적으로나 상당히 감소시키거나 제거시키데 필요한 양이다.
질병의 타입 및 중증도에 따라서, 항체 약 1 μg/kg 내지 50 mg/kg (즉, 0.1 내지 20 mg/kg)이, 예를 들어 하나 이상의 분리된 투여로 또는 연속 주입으로 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 통상적인 1일 투여량은 상술한 요인에 따라 약 1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg 이상일 수 있다. 수일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여에 있어, 치료는 증상에 따라, 질병 증후근에 대해 목적하는 억제가 있을 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투여량 투여계획도 유용할 수 있다. 바람직한 측면에서, 본 발명의 항체는 2주 또는 3주 마다 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 보다 바람직하게는, 이러한 투여량 투여계획은 전이성 대장암을 치료하기 위한 제 1 선 치료로서 화학요법 계획과 병행된다. 또 다른 측면에서, 화학요법 계획은 종래의 고용량의 간헐적 투여에 관한 것이다. 또 다른 측면에서, 화학치료제는 계획된 중지 없이 보다 적고 보다 빈번한 투여량을 이용하여 투여된다 ("메트로놈 (metronomic) 화학치료"). 본 발명의 치료 과정은 통상의 기술 및 분석으로 쉽게 모니터링된다.
적합한 투여량에 대한 추가의 정보는 하기 실시예에서 제공된다.
치료 효능
본 발명의 치료의 주요한 잇점은 주목할 만한 독성 또는 부작용을 일으키지 않으면서 인간 환자에서 현저한 항암 효과를 갖는다는 것으로서, 환자는 치료를 통해 이익을 얻었다. 본 발명의 치료 효능은, 이에 한정되는 것은 아니나 종양 퇴화, 종양 중량 및 크기 축소, 진행 시간, 생존기간, 진행이 없는 생존, 총 반응률, 반응기간, 및 삶의 질을 포함하여 암치료를 평가하는데 통상 사용되는 다양한 관점에서 측정될 수 있다. 본 발명의 항-혈관신생제는 종양 혈관망을 표적하며 반드시 신생물 세포 자체를 표적하지는 않기 때문에, 이는 특이한 부류의 항암제를 나타내며, 따라서 특정한 측정 및 약물에 대한 임상 반응의 정의가 필요할 수 있다. 예를 들어, 2차원적 분석에서 50 % 초과의 종양 축소가 반응을 나타내는 표준 컷-오프이다. 그러나, 본 발명의 항-VEGF 항체는 초기 종양의 축소 없이 전이 확산을 억제하거나 단순히 종양정지 (tumouristatic) 효과를 나타낼 수 있다. 따라서, 예를 들어 혈관신생의 혈장 또는 뇨 마커의 측정 및 방사선학적 이미지화를 통한 반응 측정을 포함하여, 항-혈관신생 치료의 효능을 측정하는 새로운 접근이 이용되어야 한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 암에 걸리기 쉽거나 암으로 진단된 인간 환자의 생존을 증가시키는데 이용될 수 있다. 생존기간은 약물의 제 1 투여부터 사망까지로 정의된다. 바람직한 양태에서, 본 발명의 항-VEGF 항체는 하나 이상의 화학치료제와 병행하여 인간 환자에게 투여되어, 화학요법 단독과 비교하여 환자의 생존기간을 효과적으로 증가시킨다. 예를 들어, 2개 이상, 바람직하게는 3개의 화학치료제의 화학요법 칵테일과 병행하여 항-VEGF 항체로 치료된 환자군은, 동일한 화학요법 칵테일 단독으로 치료된 환자군에 비해 보다 긴 생존 기간인 약 2개월 이상, 바람직하게는 약 2 내지 약 5개월의 평균 생존기간을 가질 수 있으며, 이러한 증가는 통계학적으로 유의한 것이다. 또한, 생존기간은 치료 동안 환자의 사망에 대한 위험을 나타내는, 치료군 대 대조군의 층화 (stratified) 위험률 (HR)로 측정될 수 있다. 바람직하게는, 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제의 병행 치료가, 화학요법 단독과 비교하여, 약 30 % 이상 (즉, 약 0.70의 층화 HR), 바람직하게는 약 35 % 이상 (즉, 약 0.65의 층화 HR)으로 사망 위험을 상당히 감소시킨다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 암에 걸리기 쉽거나 암으로 진단된 인간 환자의 진행이 없는 생존을 증가시키는 방법을 제공한다. 질병 진행에 대한 시간은 약물의 투여로부터 질병이 진행할 때까지의 시간으로 정의된다. 바람직한 양태에서, 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제를 사용하는 본 발명의 병행 치료는, 화학치료제 단독으로의 치료와 비교하여, 약 2개월 이상, 바람직하게는 약 2 내지 약 5개월로 진행이 없는 생존을 유의하게 증가시킨다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 치료는 다양한 치료법으로 치료된 암에 걸리기 쉽거나 암으로 진단된 인간 환자 군에서 반응률을 상당히 증가시킨다. 반응률은 치료에 반응하는 치료된 환자 비율 (%)로서 정의된다. 하나의 측면에서, 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제를 사용하는 본 발명의 병행 치료는, 화학치료제 단독으로 치료된 군과 비교하여, 치료된 환자 군에서 반응률이 상당히 증가한다 (0.005 미만의 카이-제곱 검정 p-값).
하나의 양태에서, 본 발명은 암에 걸리기 쉽거나 암으로 진단된 인간 환자 또는 환자 군의 반응기간을 증가시키는 방법을 제공한다. 반응기간은 개시반응으로부터 질병의 진행까지의 시간으로 정의된다. 항-VEGF 항체와 하나 이상의 화학치료제를 사용한 본 발명의 병행 치료로, 반응기간이 2개월 이상으로 통계학적으로 유의하게 증가되고 바람직하다.
치료 안전성
본 발명은 치료되는 인간 환자에게 주목할 만한 부작용 없이 암을 효과적으로 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 치료의 임상 결과는, 본 발명에 따른 치료 과정 동안 항-혈관신생 치료와 관련될 것으로 생각되는 수개의 부작용이 관측되지 않았다는 점에서, 다소 예기치 못한 것이다. 예를 들어, 이전의 임상 연구에서는 항-VEGF 항체로 치료하면 혈전 (특정 경우엔 치명적), 고혈압, 단백뇨 및 코피 (출혈)을 일으킬 수 있다고 제시한다. 그러나, 2개 이상, 바람직하게는 3개 이상의 화학치료제를 포함하는 화학요법 칵테일과 병행하여 항-VEGF 항체를 이용한 본 발명의 병행 치료는 화학요법 단독과 비교하여 이러한 부작용의 부수적 발생을 유의하게 증가시키지 않는다. 따라서, 본 발명의 치료는 놀랍게도 항암 효능을 상당히 개선시키는 동시에 허용 수준에서 부수적 효과를 갖는다.
V. 제품
본 발명의 또 다른 양태에서, 상술된 장애의 치료에 유용한 물질을 포함하는 제품이 제공된다. 제품은 용기, 라벨 및 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어 바틀, 바이알, 시린지 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예를 들어 유리 또는 플라스틱으로 성형될 수 있다. 용기는 증상을 치료하기에 효과적인 조성물을 담고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어 용기는 피하 주사 니들에 의해 찌를 수 있는 스토퍼를 갖는 정맥 내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물 중 하나 이상의 활성제는 항-VEGF 항체이다. 용기에 또는 이에 부착된 라벨은 조성물이 선택된 증상을 치료하기 위해 사용된다는 것을 나타낸다. 제품을 또한 제약학적으로 허용되는 완충제, 예를 들어 포스페이트-완충된 염수, 링거 용액 및 덱스트로즈 용액을 포함하는 제 2 용기를 포함할 수 있다. 또한, 기타 완충제, 희석제, 필터, 니들 및 시린지를 포함하여 상업적으로 및 사용자의 입장에서 바람직한 추가의 물질을 포함할 수 있다. 또한, 제품은 예를 들어 조성물이 안타사이클린-타입 화학치료제, 예를 들어 독소루비신, 또는 에피루비신과 배합하여 사용해서는 안된다는 것을 경고하거나 조성물의 사용자가 항-VEFG 항체 조성물 및 항신생물 조성물을 환자에게 투여하는 것을 교시하는, 사용 설명서를 갖는 패키지 삽입물을 포함한다.
기탁
하기 하이브리도마 세포주가 부다페스트 조약 하의 기탁으로 ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA., USA)에 기탁되었다:
항체 표시 ATCC No.
A4.6.1 ATCC HB-10709 1991년 3월 29일
하기 실시예는 단지 본 발명의 실시를 설명하기 위한 것으로서 이에 제한되지 않는다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학적 문헌에 대한 기술이 전부 본원에 참조로 삽입된다.
<실시예>
실시예 1: 제 1 선 전이성 대장암에서 볼루스 이리노테칸/플루오로우라실/류코보린(IFL)에 항-VEGF 항체의 추가
전이성 대장암을 치료하기 위해 사용된 제 1 선 화학치료에 추가된 베바시주맙의 효능과 안전성을 평가하기 위해 멀티센터, 제 III 상, 무작위, 능동-조절된 시도 (muticenter, Phase III, randomized, active-controlled trial)가 수행되었다. 이 시도는 조직학적으로 확인되고 이전에는 치료된 바 없으며 2차원적으로 측정가능한 전이성 대장암을 갖는 900명 이상의 환자를 포함시켰다.
방법 및 재료
항-VEGF 항체 베바시주맙
항-VEGF 항체 "베바시주맙 (BV)" (또한 "rhuMAb VEGF" 또는 "AvastinTM"으로도 공지됨)은 문헌 (Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599)에 따라 생성된 재조합의 인간화된 항-VEGF 단일클론 항체이다. 이는 돌연변이된 인간 IgG1 골격 영역 및 인간 VEGF의 이의 수용체에의 결합을 차단하는 쥐 항-VEGF 단일클론 항체 A4.6.1으로부터의 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다 (U.S. Pat. No. 6,582,959; WO 98/45331). 대부분의 골격 영역을 포함하여 베바시주맙의 아미노산 서열 약 93%가 인간 IgG1로부터 유래하고, 서열의 약 7%가 쥐 항체 A4.6.1로부터 유래한다. 베바시주맙의 분자량은 약 149,000 달톤이고 당화되어 있다.
폴리펩티드의 확인 및 당화 부위는 아미노산 조성 및 펩티드 맵으로부터 유추되었다. 분자의 크기 및 하전 특징 및 임상 로트의 순도는 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 모세관 전기영동 비-겔 시이빙, 등전점 포커싱, 이온-교환 및 크기-배제 크로마토그래피로 입증되었다. 베마시주맙의 활성은 재조합 인간 VEGF에 대한 키나제 수용체 분석 또는 결합 효소-연결된 면역흡착 분석에 의해 정량되었다.
베바시주맙은 유전자 조작된 차이니즈 햄스터 난소 세포주를 사용하여 재조합 DNA 기술로 생산되었다. 단백질은 컬럼 크로마토그래피 및 여과의 통상적 방법에 의해 세포 배양 배지로부터 정제되었다. 최종 산물은 미국 식품의약청 (U.S. Food and Drug Administration)의 지침에 따라 품질, 동일성, 안전성, 순도, 효능, 강도 및 부형제/화학적 조성에 대해 시험하였다. 베바시주맙의 순도는 95 % 초과이다. 베바시주맙은 비경구 투여될 수 있는 투명하거나 약간 유백광이 나는 멸균 액체로서 공급된다.
환자 선별
적임의 환자는 이차원적으로 측정가능한 질병과 함께 조직학적으로 확인된 전이성 대장암을 가졌다. 다른 포함 기준은 18세 이상의 연령, 0 또는 1의 ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group) 수행 상태 (Oken et al. (1982) Am. J. Clin. Oncol. 5:649-55), 예상 생존기간 3개월 이상, 및 서면 통지된 동의서를 포함하였다. 또한, 적당한 혈액학적, 간 및 신장 기능 (1일 500mg 이하의 단백질의 소변 배출을 포함)이 요구되었다.
제외 기준은 전이성 질병에 대해 선행된 화학요법 또는 생물학적 치료 (조사에 참여하는 것을 허락하기 12개월 이상 이전에 류코보린 또는 레바미졸의 존재 또는 부재 하에 플루오로피리미딘의 방사선감수성증강 또는 아주방트 이용), 연구 치료를 개시하기 14일 이내의 방사선치료 처방, 연구 치료를 개시하기 28일 이내에 대수술, 임상적으로 중요한 심혈관 질병, 임상적으로 검출가능한 복수, 임신 또는 수유, 아스피린(1일 325 mg 초과) 또는 다른 비-스테로이드성 약제 및 소염제의 정규적 사용, 기존의 출혈성 특이체질 또는 응혈이상 또는 최고 투여량의 항응고 요구, 및 공지된 중추 신경계 전이를 포함하였다.
연구 고안
적임의 환자를, 군들 사이에 전체적 균형이 이루어지도록 고안된 동적 무작위 알고리즘을 이용하여 치료에 배정하였다: 무작위 추출은 연구 센터, 베이스라인 ECOG 수행 상태 (0 대 1), 초기 질병의 부위 (결장 대 직장), 및 전이 부위의 수(1 대 1 이상)에 따라 층화되었다. 먼저, 환자는 IFL + 위약, IFL + 베바시주맙, 또는 플루오로우라실 및 류코보린 + 베바시주맙이 투여되도록 1:1:1의 비율로 무작위 배정되었으며 (표 1), 질병 진행 또는 허용될 수 없는 부작용이 발생할 때가지 또는 최대 96주 동안 계속되었다.
제 1 선 치료 투여계획*
치료 개시 투여량 스케쥴
이리노테칸
플루오로우라실
류코보린
위약		 125 mg/m2 체표면적
500 mg/m2 체표면적
20 mg/m2 체표면적		 4주 동안 매주 1회; 매 6주 마다 주기 반복

2주에 1회
이리노테칸
플루오로우라실
류코보린
베바시주맙		 125 mg/m2 체표면적
500 mg/m2 체표면적
20 mg/m2 체표면적
5 mg/kg 체중		 4주 동안 매주 1회; 매 6주 마다 주기 반복


2주에 1회
플루오로우라실
류코보린
베바시주맙		 500 mg/m2 체표면적
500 mg/m2 체표면적
5 mg/kg 체중		 4주 동안 매주 1회; 매 8주 마다 주기 반복

2주에 1회
* 플루오로우라실, 류코보린 및 베바시주맙을 사용한 치료는, 이리노테칸, 플루오로우라실, 및 류코보린의 투여계획에 베바시주맙의 추가에 대한 안전성이 확인된 후 중단되었다. 313명의 환자를 무작위 추출한 후 확인되었다. 모든 약물은 정맥 내로 투여되었다.
300명의 환자를 무작위 추출한 후, 중간 분석 (interim analysis)이 수행되도록 예정되었다. 비맹검 독립적 DMC (Data Monitoring Committee)는 모든 이용가능한 안전 정보에 기초하여, 단 종양 반응과 관련된 정보의 부재 하, 각각의 군에서의 사망의 수를 포함하여 IFL + 베바시주맙의 안전성을 평가할 수 있었다. DMC가 베바시주맙을 IFL에 추가하는 것에 기인한 바람직하지 못한 부작용을 발견하지 못하는 경우, 플루오로우라실 및 류코보린 + 베바시주맙이 투여되도록 배정된 군의 환자에 대한 기록이 중단되었으며, 추가의 환자가 IFL + 위약 또는 IFL + 베바시주맙이 투여되도록 1:1 비율로 무작위 배정되었다. 그러나, DMC가 IFL + 베바시주맙의 안전성 프로필이 허용가능하지 않다고 결론지으면, 그러한 치료에 대한 배정을 중단하고 대신에 환자는 플루오로우라실과 류코보린 + 베바시주맙 또는 IFL + 위약의 배합물이 투여되도록 1:1 비율로 무작위 배정되었다.
종양 반응 및 진행은 문헌 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors. Therasse et al. (2000) J. Natl. Cancer Inst. 92:205-16)을 이용하여 측정되었다. 질병 진행시, 치료 배정을 보이고, 환자는 제 2 선 치료에 들어갔다. 베바시주맙-함유 치료에 배정된 군의 환자는 이러한 제 2 치료 동안 베바시주맙을 계속할 선택을 가졌다. IFL + 위약이 투여되는 군에서는 어떠한 교차도 허용되지 않았다. 96-주의 연구 기간의 끝까지 진행적 질병의 징후를 갖지 않는 베바시주맙을 함유하는 치료에 배정된 환자에게는 계속해서 별도의 연장 연구에서 베바시주맙을 투여할 수 있었다. 화학치료로부터 확인된 완전한 반응 또는 허용되지 않는 부작용을 갖는 베바시주맙이 투여된 군의 환자에서는 화학치료를 중단하고 베바시주맙만을 투여할 수 있었다.
베바시주맙 (또는 위약)은 화학치료제와 동시에 투여되었다. 베바시주맙과 화학치료제의 투여량은 연구 기간 동안 환자의 체중이 10 % 이상 변화하는 경우 다시 계산되었다. (패키지 삽입물에 따른) 이리노테칸 및 플루오로우라실의 표준 인트라사이클 (intracycle) 및 인터사이클 (intercycle) 투여량 변화는 치료-관련된 부작용을 갖는 환자에게 허용되었다. 류코보린 및 베바시주맙의 투여량을 변화되지 않았다.
생존 및 연속한 치료의 분석에서, 모든 환자는 죽을 때까지 또는 진료를 계속 받지 않을 때까지 또는 연구를 마칠 때까지 추적되었다.
평가
베이스라인 평가 후, 종양 상태를 연구의 처음 24주 동안은 매 6주 마다, 이어서 나머지 치료 동안은 매 12주 마다 평가되었다. 모든 완전 반응 및 부분적 반응은 처음 주목된 지 적어도 4주 이후에 확인이 필요하였다.
안전성은 부작용, 실험실-시험 결과, 및 중요한 징후 측정치의 보고에 기초하여 평가되었다. 부작용은 기준 (the Common Toxicity Criteria of the National Cancer Institute, version 2)에 따라 분류하였으며, 여기서 1 등급은 경미한 부작용, 2 등급은 중간 부작용, 3 등급은 심각한 부작용, 4 등급은 생명을 위협하는 부작용을 나타낸다. 미리상술된 안전 측정은 모든 부작용의 빈도, 모든 심각한 부작용, 및 베바시주맙-고혈압, 혈전, 등급 3 또는 4의 출혈, 단백뇨, 등급 3 또는 4의 설사와 관련된 부작용, 다양한 실험값 및 중요한 징후의 베이스라인으로부터의 변화를 포함하였다.
IFL + 위약 및 IFL + 베바시주맙의 투여계획의 안전성을 모니터링하기 위해, 사망 빈도, 심각한 부작용, 등급 3 또는 4의 설사, 출처불문의 등급 3 또는 4의 출혈, 및 혈전이, 회복의 완료 또는 효능에 대한 중간 분석시까지 DMC에 의해 비-맹검 (un-blinded) 방식으로 연구 동안 모리터링되었다.
통계 분석
1차적 결과 측정은 총 생존기간이었으며; 생존은 후속한 치료와 무관하게 측정되었다. 그러나, 군 간의 교차는 없었다. 카플란-마이어 방법, log-rank 시험, 및 Cox 비례 위험 모델과 같은 생존 분석 기술이 이용되었다. 2차적 결과 측정은 진행이 없는 생존, 객관적 반응률 (완전 및 부분적 반응), 반응기간, 및 삶의 질이었다.
분석 시 살아있는 환자에 대해, 생존에 대한 자료는 최종 접촉시에 점검되었다. 진행이 없는 생존은 무작위 추출부터 연구하는 동안의 진행 또는 사망까지의 시간으로 정의되었다. 연구하는 동안의 사망은 베바시주맙 또는 화학치료제의 최종 투여 후 30일 내에 발생하는 사망으로 정의되었다. 최종 분석 시 질병의 진행이 없는 환자에 대해, 진행이 없는 생존 자료가 종양 상태의 최종 평가 시 또는 베이스라인 이후 추가의 평가가 수행되지 않는다면 0일에 점검되었다. 적합한 추가 자료가 없는 환자는 반응이 없는 것으로 분류하였다.
대조군과 비교하여 IFL + 베바시주맙이 투여된 군에서의 사망에 대해 0.75의 위험률을 검출하기 위해, 약 385명의 사망이 필요하였다. 모든 계산은 log-rank 시험으로 수행되었으며, 0.05의 알파 값, 80 %의 통계적 파워 및 효능에 대한 하나의 중간 분석과 함께, 양측 P값 (two-sided P value)을 포함하였다.
중간 분석은 비-맹검 방식으로 수행되었다. 안전성에 대한 중간 분석은 각각의 군에 대해 약 100명의 환자를 무작위 배당한 후 수행되었다. 안전성 및 효능에 대한 제 2 중간 분석은 193명의 사망이 발생한 후 (필요한 사건의 수의 절반) 수행되었다.
효능은 의도-대-치료 (intention-to-treat) 원칙에 따라 수행되었다. 안전성 분석은 연구 약물의 1회 이상의 용량이 투여된 모든 환자를 포함하였다.
결과
환자 특징
약 20개월의 기간 동안, 923명의 환자는 미국, 호주 및 뉴질랜드의 164 곳에서 무작위 추출되었다. 313명의 환자가 3개의 군 (IFL + 위약에 100명, IFL + 베바시주맙에 103명, 및 플루오로우라실, 류코보린 및 베바시주맙에 110명)중 하나에 무작위로 배정된 후, 플루오로우라실, 류코보린, 및 베바시주맙이 투여되는 군에 대한 배정을 멈추었다 (이러한 군에 대한 결과는 나타내지 않음). 이러한 단계는, 안전성에 대한 제 1 형식적 중간 분석에 따라 IFL + 베바시주맙의 투여계획이 허용되는 안전 프로필을 갖고 이러한 군으로의 배정을 계속할 수 있다고 결론이 나온 후 프로토콜에 의해 요구되었다.
총 생존의 제 1 종점 (primary end point)에 대한 의도-대-치료 분석은 IFL + 위약이 투여되는 군에 411명의 환자 및 IFL + 베바시주맙이 투여되는 군에 402명의 환자를 포함하였다. 표 2는 선택된 인구적 특징 및 기본적 특징을 나타내며, 이들은 각각의 군 간에 균형을 잘 이루었다. 각각의 군에서 유사한 수의 환자가 이미 수술을 받거나 대장암에 대한 방사선 치료 또는 아주방트 화학치료를 받았다.
치료
평균 치료 기간은 IFL + 위약이 투여된 군이 27.6주이고 IFL + 베바시주맙이 투여된 군이 40.4주였다. 투여되는 이리노테칸의 계획된 투여량 (%)은 2개의 군에서 유사하였다 (IFL + 위약이 투여된 군은 78 %이고 IFL + 베바시주맙이 투여된 군은 73 % 였다).
자료 컷오프의 날짜 (date)로, IFL + 위약이 투여된 군의 33명 환자 및 IFL + 베바시주맙이 투여된 군의 71명의 환자는 이들에게 배정된 초기 치료를 계속해서 받았다. 생존에 영향을 끼칠 수 있는 제 2 선 치료, 예를 들어 옥살리플라틴 또는 전이암절제의 이용 비율은 2개의 군 간에 균형을 잘 이루었다. 두 군 모두에서, 약 50 %의 환자가 소정 형태의 제 2 선 치료를 받았으며; 전체 환자 중 25 %가 옥살리플라틴을 받고 2 % 미만의 환자가 전이암절제를 받았다.
선택된 인구적 특징 및 기본적 특징*
특징 IFL + 위약 (N=411) IFL + 베바시주맙 (N=402)
성별 (%)
남성
여성
평균 연령 (year)
60
40
59.2
59
41
59.5
인종 (%)
백인
흑인
기타
80
11
9
79
12
9
센터 소재 (%)
미국
호주 또는 뉴질랜드
99
<1
99
<1
ECOG 수행 상태 (%)
0
1
2
55
44
<1
58
41
<1
암의 타입 (%)
결장
직장
81
19
77
63
전이 부위수 (%)
1
>1
39
61
37
63
선행된 암치료 (%)
아주방트 화학치료
방사선치료
전이 질병의 평균 기간
28
14
4
24
15
4
* 군 간에는 유의한 차이가 없었다. IFL은 이리노테칸, 플루오로우라실 및 류코보린을 나타내고, ECOG는 Eastern Cooperative Oncology Group이다.
효능
전체 생존의 평균 기간 (제 1 종점)은 IFL + 베바시주맙이 투여된 군이 IFL + 위약이 투여된 군 보다 상당히 길었으며 (20.3개월 대 15.6개월), 이는 베바시주맙 군에서 사망 위험률 0.66 (P<0.001) (표 3 및 도 1)에 상응하거나 34 %의 사망 위험 감소에 상응한다. 1년 (year) 생존률은 IFL + 베바시주맙이 투여된 군이 74.3 %이고 IFL + 위약이 투여된 군이 63.4 %였다 (P<0.001). 옥살리플라틴으로 제 2 선 치료를 받은 환자의 서브군에서, 전체 생존의 평균 기간은 IFL + 베바시주맙이 투여된 군이 25.1개월이고 IFL + 위약이 투여된 군이 22.2개월이었다.
IFL에 베바시주맙의 추가는, 진행이 없는 평균 생존기간 (10.6개월 대 6.2개월; 진행의 위험률, 0.54, IFL + 위약이 투여된 군과의 비교; P<0.001); 반응률 (44.8 % 대 34.8 %; P=0.004); 및 반응 평균기간 (10.4개월 대 7.1개월; 진행의 위험률, 0.62; P=0.001)의 증가와 관련되었다 (표 3). 도 2는 진행이 없는 생존에 대한 카플란-마이어 평가를 나타낸다. 연령, 성별, 인종, ECOG 수행 상태, 초기 종양의 위치, 이전 아주방트 치료의 유무, 전이 질병의 기간, 전이 부위의 수, 대장암으로 진단된 이후의 년수 (year), 이전 방사선치료의 유무, 베이스라인 종양 부담, 및 알부민, 알칼리 포스파타제, 및 락테이트 데히드로게나제의 혈청 농도에 따라 정의된 것을 포함하는 치료 효과는 미리상술된 서브군에 걸쳐 일정하였다.
효능 분석*
종점 IFL + 위약 IFL + 베바시주맙 p값
평균 생존 (mo)
사망에 대한 위험률		 15.6 20.3
0.66		 <0.001
1년 생존률 (%) 63.4 74.3 <0.001
진행이 없는 생존 (mo)
진행에 대한 위험률 		6.2 10.6

0.54		 <0.001
총반응률 (%)
완전반응
부분적반응		 34.8
2.2
32.6		 44.8
3.7
41.0		 0.004
반응평균기간 (mo)
재발에 대한 위험률		 7.1 10.4
0.62		 0.001
* IFL은 이리노테칸, 플루오로우라실 및 류코보린을 나타낸다.
안전성
표 4는 평균 치료기간 동안 (IFL + 위약이 투여된 군이 27.6주 및 IFL + 베바시주맙이 투여된 군이 40.4주) 조정 없이 배정된 치료 동안 선택된 등급 3 또는 4의 부작용 발생을 나타낸다. 등급 3 또는 4의 부작용의 발생은 IFL + 위약이 투여된 환자에서 보다 IFL + 베바시주맙이 투여된 환자에서 약 10 % 높았다. 이는 주로 등급 3의 고혈압 (치료가 필요함) 발생의 증가 및 등급 4의 설사 및 백혈구감소증 발생의 작은 증가에 기인한다. 그러나, 입원을 요하거나 연구 치료의 중단을 요하는 부작용의 발생 또는 원인 불문의 60일 사망률에는 유의한 차이가 없었다.
선택된 부작용*
부작용 IFL + 위약 (N=397) (%) IFL + 베바시주맙 (N=393) (%)
등급3 또는 4의 모든 부작용 74.0 84.9**
부작용으로 입원 치료 39.6 44.9
부작용으로 치료 중단 7.1 8.4
부작용으로 사망 2.8 2.6
60일 내 사망 4.9 3.0
등급3 또는 4 백혈구감소증 31.1 37.0
고혈압
모든 고혈압
등급3
8.3
2.3
22.4**
11.0**
모든 혈전 사건 16.2 19.4
심부혈전성정맥염 6.3 8.9
폐색전 5.1 3.6
등급3 또는 4 출혈 2.5 3.1
단백뇨
모든 단백뇨
등급2
등급3
21.7
5.8
0.8
26.5
3.1
0.8
위장천공 0.0 1.5
* 자료는 IFL + 위약이 투여된 군과 IFL + 베바시주맙이 투여된 군 사이의 평균 치료기간 (27.6주 대 40.4주)의 차이에 대해 조절되지 않았다.
** P < 0.01. 하나 이상의 연구-약물 치료를 받은 환자만을 포함함.
제 1 상 및 제 2 상 시도에서는 가능한 베바시주맙 관련 부작용으로서 출혈, 혈전색전증, 단백뇨, 및 고혈압을 확인하였다. 그러나, 본 연구에서는 IFL + 위약이 투여된 군과 비교하여 IFL + 베바시주맙이 투여된 군에서 단지 고혈압의 발생만이 선명히 증가하였다. 고혈압의 모든 에피소드는 표준 경구 항고혈압제 (예: 칼슘 채널 차단제, 안지오텐신-전환-효소 억제제, 및 이뇨제)로 관리할 수 있었다. 베바시주맙 군에서 베바시주맙 치료의 중단, 고혈압 위기 또는 고혈압 관련된 사망은 없었다.
원인 불문의 등급 2 또는 3의 단백뇨 (등급 4의 단백뇨 또는 신증후근의 에피토프는 없었음) 및 등급 3 또는 4의 출혈 비율은, 비록 등급 4의 출혈의 모든 3가지 경우가 IFL + 베바시주맙이 투여된 군에서 있었지만, 2개의 군에서 비슷하였다. 모든 정맥 및 동맥 혈전증 사건의 발생은 IFL + 베바시주맙이 투여된 군에서는 19.4 %였고 IFL + 위약이 투여된 군에서는 16.2 %였다 (P=0.26).
위장 천공은 IFL + 베바시주맙이 투여된 6명의 환자 (1.5 %)에서 발생하였다. 1명의 환자는 이 사건의 직접적 결과로 사망하였고, 다른 5명의 환자는 회복되었다 (이들 중 3명은 후속한 합병증 없이 치료를 재개시할 수 있었다). 천공을 갖는 6명의 환자 중, 3명은 IFL + 베바시주맙에 대해 확인된 완전 또는 부분적 반응을 가졌다. 위장관 천공과 관련될 수 있었된 본 연구 치료 이외의 다른 요인은, 2명의 환자에서는 이전 2개월 내 결장 수술이었으며, 한 명의 환자에서는 소화성 궤양이었다.
이러한 제 III 상 연구의 결과는 암 치료에서 항혈관신생제의 광범위한 적용에 대한 직접적 지지를 제공한다. IFL 화학치료에 베바시주맙 (항-VEGF 항체)의 추가는 암 환자에서, 예를 들어 전체 생존, 진행이 없는 생존, 반응률 및 반응기간으로 측정되는 임상적으로 의미있고 통계적으로 유의한 개선을 부여하였다. 베바시주맙에 기인한 평균 생존기간 4.7개월의 증가는 대장암의 치료를 위한 다른 제 3상 시도에서 관측된 것 보다 크거나 비슷한 것이다 (Goldberg et al. (2004) J. Clin. Oncol. 22:23-30). 이러한 시도 동안 제 2 선 치료를 위한 옥살리플라틴의 제한된 이용에도 불구하고, 베바시주맙-치료된 집단에서 20.3개월의 평균 생존이 이루어졌다.
IFL 단독과 비교하여, IFL + 베바시주맙의 투여계획은 진행이 없는 생존을 평균 6.2개월 내지 10.6개월, 전체 반응률을 34.8 % 내지 44.8 %, 및 평균 반응기간을 7.1개월 내지 10.4개월 증가시켰다. 이러한 개선은 임상적으로 상당한 것이다. IFL + 베바시주맙을 이용한 10 %의 반응률의 절대적인 개선이 이러한 크기의 생존 증가와 연관된다는 것은 예측되지 못했었다. 이러한 관측은 베바시주맙의 주요 기작이 종양감소 (cytoredution) 보다는 종양 성장의 억제라는 것을 제시한다.
이러한 임상적 이익은 쉽게 관리할 수 있었던 치료 부작용의 비교적 크지 않은 증가를 동반하였다. 주로 치료를 요하는 고혈압, 설사 및 백혈구감소증에 기인한 등급 3 또는 4의 부작용의 총 발생에 있어 약 10 %의 절대적 증가가 있었다. 원인 불문의 60-일 사망률, 입원, 및 치료의 중단은 IFL에 베바시주맙을 추가하는 것에 의해 유의하게 증가되지 않았다.
이전의 제 1 상 및 제 2 상 임상 시도는 베바시주맙의 단독 치료 또는 화학치료제와의 치료로 혈전, 출혈, 단백뇨, 및 고혈압의 발생이 증가한다는 것을 제시하였다 (Kabbinavar et al. (2003) J. Clin. Oncol. 21:60-65; Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-34). 고혈압을 제외하고, IFL + 위약이 투여된 군에서의 발생과 비교하여 과도한 부작용이 발견되지 않았다 - 이는 안전성 및 효능의 평가를 위한 무작위의 위약-조절된 연구의 중요성을 강조한다. 발병된 하나의 새로운 잠재적 부작용이 위장 천공이었다. 이러한 합병증은 일반적이지 않으며 다양한 임상적 표현을 갖는다. 대장암을 치료하기 위해 IFL 및 다른 화학치료제 투여계획을 이용하는 경우 특히 호중구 감소증을 갖는 환자에서 심각한 장 합병증이 보고되었으며, 하나의 시리즈로서 플루오로우라실계 투여계획으로 치료된 환자의 2% 이상에서 누관(fistulas)이 보고되었다 (Saltz et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:905-914; Rothenberg et al. (2001) J. Clin. Oncol. 19:3801-7; Tebbutt et al. (2003) Gut 52:568-73). 때때로 전체 종양 반응의 세팅 시, IFL + 베바시주맙이 투여된 군에서는 6개의 사건이 관측되는 반면 (1.5 %), IFL + 위약이 투여된 군에서는 이러한 사건이 발생하지 않았다. 이들 6명의 환자 중 3명은 후속 합병증이 없어 치료를 재개시할 수 있었으나, 한 명의 환자는 사망하였고, 2명의 환자는 이러한 합병증의 결과로서 영구히 치료를 중단하였다.
이전의 동물 연구 및 초기 상 임상 시도가 암을 치료하기 위해 항-혈관신생 치료의 이용을 제시하였지만, 본 연구는 혈관신생 억제제, 예를 들어 항-VEGF 항체의 사용이 암 환자에 대해 실제로 통계학적으로 유의하고 임상적으로 의미있는 이익을 제공한다는 것을 처음으로 밝혔다.
실시예 2: 제 1 선 전이성 대장암에서 볼루스 5-FU/류코보린에 베바시주맙의 추가
본 무작위 제 II 상 시도는, 제 1 선 이리노테칸에 대해 비-최적 후보로 간주된 환자에서 제 1 선 치료로서, 위약 + 5-플루오로우라실 및 류코보린 (5-FU/LV)에 대해 베바시주맙 + 5-FU/LV을 비교하였다.
환자 및 방법
환자 적임성
연구자가 판단하여 제 1 선 이리노테칸-함유 치료에 최적 후보가 아니며, 특징 (나이 65세 이상, ECOG PS 1 또는 2, 혈청 알부민 3.5 g/dL 이하, 복부 또는 골반에 대한 이전 방사선치료) 중 하나 이상을 지니는 경우, 조직학적으로 확인되고 이전에 치료를 받은 바 없으며 측정가능한 전이성 대장암을 갖는 환자가 적임이었다. 다음 환자는 제외시켰다: 연구 개시 28일 이내에 대수술 또는 개방 생검을 받거나 상당한 외상 손상을 경험하거나; 연구 과정 동안 대수술의 필요가 예상되거나; 현재 또는 최근까지 치료적 항응고제 (카테터 개방에 필요한 것은 제외), 혈전 치료 또는 아스피린 (≥325 mg/일) 또는 비스테로이드성 소염 약물로 장기간의 1일 치료를 이용하거나; 심각한 치유되지 않는 상처, 궤양, 골절을 갖거나; CNS 전이에 대한 경력 또는 증거를 갖거나; 임신 또는 수유 중이거나; 단백뇨를 갖거나 베이스라인의 신기능이 임상적으로 상당히 손상된 환자. 모든 환자는 이들의 참여에 대해 서면 보고된 동의서를 제공하였다.
연구 고안 및 치료
적임의 환자를 2개의 치료군 (5-FU/LV + 위약 또는 5-FU/LV + 베바시주맙) 중 하나에 무작위로 배정하기 위해 상호작용 음성 반응 시스템을 이용하였다. 전체적으로 각각의 하기 분류 내에서 균형을 맞추기 위해 동적 무작위 알고리즘을 이용하였다: 연구 센터, 베이스라인 ECOG 수행 상태 (0 대 ≥1), 초기 질병의 부위 (결장 대 직장), 및 전이 부위의 수 (1 대 >1). LV 주입을 통한 볼루스로서 LV 500 mg/m2 (2시간 이상) 및 5-FU 500 mg/m2을 포함하는 5-FU/LV 치료 (Roswell Park regimen; Petrelli et al. (1989) J. Clin. Oncol. 7:1419-1426)는 각각의 8주 주기 중 처음 6주 동안 매주 투여되었다. 화학치료는 연구가 끝나거나 (96주) 질병이 진행할 때까지 계속하였다. 베바시주맙 5 mg/kg 또는 위약은 2주 마다 투여하였다. 화학치료의 결과로서 확인된 완전한 반응 또는 경험된 허용되지 않는 독성을 갖는 베비시주맙 암의 환자는 5-FU/LV를 중단하고 제 1 선 치료로서 베바시주맙이 단독으로 투여되었다. 질병 진행 시, 환자는 이들의 치료 배정을 알고 연구자의 판단으로 제 2 선 치료를 받을 수 있었다. 베바시주맙 군으로 무작위 배정된 환자만이 제 2 선 치료의 성분으로서 베바시주맙이 투여되었다. 연구를 마친 후, 환자들은 사망할 때까지 또는 진료 계속을 상실할 때까지 또는 연구를 종결할 때까지 모든 후속 치료를 받았다.
연구 평가
환자들은 베이스라인 및 8주 주기가 끝날 때마다 적합한 방사선학 기술, 예를 들어 나선 CT 스캐닝을 이용하여 종양 상태의 평가를 받았다. 종양 반응 또는 진행은 RECST (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors)을 이용하여 연구자 및 IRF (independent radiology facility)에 의해 측정되었다(Therasse et al. (2000)). IRF 평가는 치료 배정 또는 연구자 평가에 대한 정보 없이 수행되었다. 또한, 환자는 베이스라인 및 각각의 치료 주기 이전부터 질병 진행 때까지 FACT-C (Functional Assessment of Cancer Therapy-Colorectal (Version 4), 대장암 환자에서 삶의 질 (QQL)을 평가하기 위한 인증된 기구)를 완결하였다 (Ward et al. (1999) Qual. Life Res. 8:181-195).
안전성은 부작용, 실험실-시험 결과, 및 중요한 징후 측정치의 보고에 기초하여 평가되었다. 부작용 및 비정상적 실험 결과는 NCI-CTC (National Cancer Institute Common Toxicity Criteria, Version 2)에 따라 분류되었다. 미리상술된 안전 측정은, 베바시주맙의 이전 임상 시도에서의 발견에 기초하여, 특별히 관심을 갖는 4개의 부작용 (고혈압, 단백뇨, 혈전, 및 출혈)을 포함했다.
통계 분석
주요한 결과 측정은 전체적 생존 기간이었다. 부수적 결과 측정은 진행이 없는 생존, 객관적 반응률 (완전 및 부분적), 반응기간, 및 FACT-C QOL 득점의 변화를 포함하였다. 생존 기간은 무작위 추출로부터 사망까지의 시간으로 정의되었다. 분석 시 생존한 환자에 대해, 생존기간은 최종 접촉 날짜에 검사되었다. 진행이 없는 생존은 무작위 추출로부터 질병의 진행의 초기 또는 연구 시 사망까지의 시간으로 정의되었다. 연구시 사망은 연구 약물 또는 화학치료제의 최종 투여 30일 내의 이유불문의 사망으로 정의되었다. 분석 시 질병의 진행 없이 생존한 환자에 대해, 진행이 없는 생존은 이들의 마지막 종양 평가에서, 또는 베이스라인 사후평가가 수행되지 않는 경우 1일 (연구 치료의 첫번째 일)에 검사되었다. 객관적 반응의 분석에서, 종양 평가가 없는 환자는 비반응자로 분류되었다. 질병 진행 및 반응 분석은 IRF 평가에 기초하였다. 삶의 질의 변화는, QOL (TDQ) (무작위 추출로부터, 결장암 특이적 FACT-C 서브스케일 득점 (CCS)에서 베이스라인으로부터 3점 이상 감소의 최초 관측까지의 시간 길이로서 정의됨)에서의 악화, 질병 진행, 또는 연구 시 사망까지의 시간으로 분석되었다. 또한, TDQ는 각각 7점 및 9점의 베이스라인으로부터의 변화에 대해 총 FACT-C 및 TOI-C (CCS, 물리적 및 기능적 웰빙의 합)로 측정되었다.
5-FU/LV/위약 군과 비교하여 5-FU/LV/베바시주맙 군의 사망에 대한 0.61의 위험률을 검출하기 위해, 약 133명의 사망이 필요하였다. 양측 log-rank 시험 (0.05 수준의 유의성, 80 % 파워) 및 2개의 중간 분석이 계산에 취해졌다. 중간 분석은 비맹검 독립적 DMC (Data Monitoring Committee)에 의해 수행되었다. 안전성 중간 분석은 44명의 사망 후 수행되었으며, 제 2 안전성 및 효능 중간 분석은 89명의 사망 후 수행되었다. 중간 효능 분석은 오브리엔-플레밍(O'Brien-Fleming) 소비 함수 (O'Brien-Fleming spending function)에 기초하여 포멀 그룹 시퀀셜 스토핑 룰 (formal group sequential stopping rule)에 의해 관리되었다. 각각의 치료 군에 대한 평균 생존, 진행이 없는 생존, 및 반응 시간 지속을 평가하기 위해 카플란-마이어 방법이 적용되었다. 위약 군과 비교된 베바시주맙 군에 대한 위험률은 층화된 Cox 비례 위험 모델을 이용하여 측정되었다. 2개의 군을 비교하기 위해 양측 층화 log rank (two-sided stratified log rank) 시험이 이용되었다. 층화 분석은 베이스라인 ECOG 수행 상태, 초기 질병의 부위, 및 전이 부위의 수를 포함하였다. 객관적 반응률은 카이-제곱 검정 시험에 의해 비교되었다. 예비적 분석으로서, 생존기간 및 진행이 없는 생존에 대한 치료 효과의 변화에 대한 위험 인자의 영향을 평가하기 위해 Cox 비례 위험 모델이 이용되었다. 효능 분석은 모든 무작위 추출된 환자로 정의되는 의도-대-치료 집단에 대해 수행되었다. 안전성 분석은 1회 이상의 용량의 연구 약물이 투여된 모든 환자를 포함하였다.
결과
환자 특징
23개월 기간에, 209명의 환자가 미국 및 호주/뉴질랜드의 60 곳에서 무작위 추출되었다. 제 1 종점 (전체 생존)에 대한 의도-대-치료 분석을 위해, 5-FU/LV/위약 군에 105명의 환자 및 5-FU/LV/베바시주맙 군에 104명의 환자가 있었다. 실시예 1에 기술된 것과 유사한 선택된 인구적 및 기본 특징은 치료 군 간에 합리적으로 균형을 이루었다. 베이스라인으로서 낮은 혈청 알부민 (≤3.5 g/dL)은 위약 군에서 보다 베바시주맙 군에서 덜 일반적이었다.
치료
평균 치료기간은 5-FU/LV/위약이 투여된 군이 23주이고 5-FU/LV/베바시주맙이 투여된 군이 31주였다. 치료기간 동안 5-FU 투여량 강도 (실제 투여되는 계획된 5-FU (%))는 2개의 군에서 유사하였다 (92 % 대 84 %). 자료 컷오프의 날짜로서, 5-FU/LV/위약이 투여된 군의 1명 환자 및 5-FU/LV/베바시주맙이 투여된 군의 7명의 환자는 이들에게 배정된 초기 치료를 받았다. 5-FU/LV/위약 군에서 보다 많은 환자가 활성 약제 이리노테칸 및 옥살리플라틴으로 치료되었지만, 생존에 영향을 끼칠 수 있는 후속 치료가 두 군 모두에서 약 50 %의 환자에게 적용되었다.
효능
전체적 생존 (제 1 종점)은 5-FU/LV/위약 군 (평균 12.9개월) 보다 5-FU/LV/베바시주맙 군 (평균 16.6개월)에서 보다 길어 유의성에 대한 경향을 보여주었다. 사망에 대한 위험률은 0.79 (95% CI, 0.56 내지 1.10; P=0.16; 표 5 및 도 4)로 평가되었다. 베바시주맙을 5-FU/LV에 추가함으로써 진행이 없는 생존의 평균 (9.2개월 대 5.5개월; 위험률=0.50; 95% CI, 0.34 내지 0.73; P=0.0002, 표 5 및 도 4), 반응률 (26.0% 대 15.2%, P=0.055), 및 평균 반응기간 (9.2개월 대 6.8 개월; 위험률=0.42; 95% CI, 0.15 내지 1.17; P=0.088)이 증가하였다. 기본 특징으로 전체적 생존의 치료 효과에 대한 추가 분석 결과, 베이스라인으로서 낮은 혈청 알부민 (≤3.5 g/dL)을 갖는 환자가 상당한 생존 이익 (위험률=0.46; 95% CI, 0.29 내지 0.74; P=0.001)을 유도하는 것으로 나타났다.
효능 분석의 요약
효능 변수 5-FU/LV/위약 (N=105) 5-FU/LV/베바시주맙 (N=104) p값
평균생존 (개월)
위험률
95 % CI		 12.9 16.6
0.79
0.56 내지 1.10
0.160
진행이 없는 생존 (개월)
위험률
95 % CI		 5.5 9.2
0.50
0.34 내지 0.73
0.0002
총반응률 (%)
완전반응
부분적반응		 15.2
0
15.2		 26.0
0
26.0		 0.055
반응지속 (개월)
위험률
95 % CI		 6.8 9.2
0.42
0.15 내지 1.17
0.088
5-FU/LV = 5 플루오로우라실/류코보린
베바시주맙 치료는 삶의 질에 치명적 영향을 끼치지 않았으며, TDQ 결과는 가능한 유리한 효과를 제시한다. CCS 득점으로 측정한 평균 TDQ는 5-FU/LV/위약 군에서 3.0개월이고 5-FU/LV/베바시주맙 군에서 3.1개월 이었다 (위험률=0.79, P=0.188). 제 2 TDQ 측정으로 측정된 위약-치료된 환자 및 베바시주맙-치료된 환자에 대한 평균 TDQ는 2.3개월 및 3.2개월 (TOI-C; 위험률=0.71, P=0.048) 및 2.6개월 및 3.6개월 (총 FACT-C; 위험률=0.66, P=0.016)이었다.
안전성
1 용량 이상의 연구 약물이 투여된 총 204명의 환자 (5-FU/LV/위약 104명 및 5-FU/LV/베바시주맙 100명)는 안전 집단을 포함하였다. 총 등급 3 및 4 독성의 16 % 증가 (71% 대 87%)가 베바시주맙이 투여된 환자에서 관측되었다. 5-FU/LV와 관련된 것으로 공지된 부작용 (특히 설사 및 백혈구 감소증)이 있었기 때문에, 사망 또는 연구 중단을 이끄는 부작용은 2개의 군에서 유사하였다. 5-FU/LV/베바시주맙 군의 2명의 환자가 장 천공 사건을 경험하였다. 이들 사건은 치료 110일 및 338일에 발생하였으며 모두 외과 조사에서 결장 게실과 관련되는 것으로 밝혀졌다. 1명의 환자는 이러한 합병증으로 사망하였다. 이전의 임상 시도는 가능한 베바시주맙-관련 독성으로서 출혈, 혈전색전증, 단백뇨 및 고혈압을 제시하였으나, 본 연구에서는 정맥 혈전 형성, 등급 3 이상의 출혈, 또는 임상적으로 중요한 (등급 3 이상) 단백뇨에서 어떠한 증가도 보이지 않았다. 동맥 혈전 사건 (심근경색, 발작, 또는 말초 동맥 혈전 사건)이, 5-FU/LV/위약 군에서의 5명의 환자와 비교하여 5-FU/LV/베바시주맙 군에서 10명의 환자에서 발생하였다.
5-FU/LV/위약 군은 5-FU/LV/베바시주맙 군에 비교하여 보다 높은 60-일 이유불문 사망률을 가졌다 (13.5% 대 5.0%). 처음 60일 내 질병 진행에 근거한 사망은 2개의 군에서 유사하였다 (5.8% 대 4.0%). 5-FU/LV/위약 군에서, 질병 진행에 근거하지 않은 처음 60일 내 사망은 하기에 기인하였다: 심부전 (1), 폐혈증 (3), 설사 (2), 호흡기 장애 (1), 및 폐색전 (1). 5-FU/LV/베바시주맙 군에서, 질병 진행에 근거하지 않은 단일 초기 사망은 심근경색에 기인하였다.
또한, 이러한 임상적 시도의 결과는, 베바시주맙 (VEGF에 대한 인간화된 단일클론 항체)가 전이성 대장암의 치료에 제 1 선 화학치료에 추가되는 경우 중요한 임상적 이익을 제공한다는 것을 입증한다. 5-FU/LV 단독과 비교하여, 베바시주맙의 추가는 평균 생존을 3.7개월, 진행이 없는 생존을 3.7개월, 반응기간을 2.4개월 연장시키고, 반응률을 11 % 증가시켰다.
이러한 결과는 연구 집단의 배경에서 관측되어야 한다. 이익이 낮을 가능성 또는 치료-관련 독성이 높을 가능성 때문에, 제 1 선 이리노테칸-함유 치료에 대해 좋지 않은 후보자였던 환자를 특별히 선별하였다. 중요한 (pivotal) 이리노테칸 시도에 대한 주의 깊은 분석 결과, 이러한 약제로부터의 임상적 이익은 정상적 ECOG 수행 상태 (PS=0)를 갖는 환자로 제한되었다. 21, 22세 고령, 이전 골반 방사선 치료, 손상된 수행 상태, 및 낮은 혈청 알부민은 모두 이리노테칸-관련 독성을 증가시키는 것으로 보고되었다. 이러한 특징을 갖는 23 내지 27명의 환자는 대체 치료 선택이 필요하다. CRC로 베바시주맙 및 5-FU/LV를 평가하는 소규모의 무작위 제 II상 시도로부터의 회고적 (retrospective) 서브셋 분석이 이전에 수행되었으며, 베바시주맙은 베이스라인 PS 1 또는 2의 서브셋 환자 (평균 생존, 6.3개월 대 15.2개월), 65세 이상 연령의 서브셋 (11.2개월 대 17.7개월), 및 3.5 미만의 혈청 알부민을 갖는 서브셋 (8.1개월 대 14.1개월)에서 실질적인 치료 효과를 제공하였다. 이러한 결과는, 특히 좋지 않은-예후 연구 집단을 포함하며 생존에 대한 커다란 치료 효과를 검출하기 위한 시도에 동력을 공급하는 현재의 시도를 고안하도록 고무하였다. 본 발명자는 IFL/위약 대 IFL/베바시주맙에 대해 현재까지 수행된 중요한 시도에서의 집단과 다른 집단을 기록하는데 크게 성공하였다. 중요한 시도와 비교하여, 본 연구 시도의 환자는 보다 높은 평균 연령 (72세 대 61세)을 가졌으며, 실질적으로 많은 환자가 0 초과의 수행 상태 (72% 대 43%) 및 3.5 mg/dL 이하의 알부민 (46% 대 33%)을 가졌다.
이러한 고위험 연구 집단에도 불구하고, 5-FU/LV/베바시주맙의 투여계획은 잘 받아들여지는 것으로 여겨졌다. 등급 3의 고혈압에 대한 잘 설명된 베바시주맙-관련 부작용이 5-FU/LV/베바시주맙 군에서는 16 %이고 5-FU/LV/위약 군에서는 3 %로 나타났다. 등급 4의 고혈압은 어떠한 경우에도 발생하지 않았다. 모든 등급의 단백뇨가 5-FU/LV/베바시주맙 군에서는 38 %이고 5-FU/LV/위약 군에서는 19 %였다; 그러나, 베바시주맙 군 중 1명의 환자만이 등급 3의 단백뇨를 나타냈으며 등급 4의 단백뇨는 없었다. 등급 3 또는 4의 출혈 또는 정맥 혈전 사건의 증가가 베바시주맙-치료된 환자에서는 나타나지 않았다. 동맥 혈전 사건의 발생에 있어 불균형이 있었다: 5-FU/LV/베바시주맙 군에서의 10 %가 5-FU/LV 위약 군에서의 4.8 %와 비교되었다. 유사한 불균형이 중요한 베바시주맙 시도에서 나타났다 (IFL/위약 군에서 1.0% 및 IFL/베바시주맙 군에서 3.3%). 본 연구에 포함된 집단 중 노령 환자가 이러한 부작용 사건에 대해 보다 높은 전체 발생에 기여될 수 있었으나, 2가지 조사 모두에서 불균형은 주목할 만하다. 베바시주맙 치료와 관련된 이러한 일반적이지 않은 부작용 및 기타의 일반적이지 않은 부작용의 발생 및 이에 대한 잠재적 위험 인자를 더욱 분명하게 하기 위해서 대규모의 관찰에 입각한 안전성 시도가 필요할 수 있다.
요약하면, 이들 자료는 베바시주맙이 볼루스 5-FU/LV와 병행되는 경우 이리노테칸-함유 치료에 대해 좋지 않은 후보로 간주된 이전에 치료받은 바 없는 전이성 대장암을 갖는 환자에 대해 실질적으로 임상적 이익을 제공한다는 것을 입증한다. 중요한 시도 결과와 함께, 이들 자료는 베바시주맙에 기초한 5-FU/LV-함유 치료가 전이성 대장암의 초기 치료를 위한 표준 선택으로 간주되어야 한다는 증거를 강화한다.
ATCC HB10709 19910329

Claims (1)

  1. 베바시주맙(Bevacizumab)을 이용한 암 치료 방법.
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Families Citing this family (248)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6582959B2 (en) * 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ATE477280T1 (de) * 2001-06-28 2010-08-15 Domantis Ltd Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
WO2004003019A2 (en) * 2002-06-28 2004-01-08 Domantis Limited Immunoglobin single variant antigen-binding domains and dual-specific constructs
US7696320B2 (en) 2004-08-24 2010-04-13 Domantis Limited Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor
US9321832B2 (en) * 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
ES2377318T3 (es) 2002-09-06 2012-03-26 Cerulean Pharma Inc. Polímeros a base de ciclodextrina para el suministro de los agentes terapéuticos enlazados covalentemente a ellos
EP1578801A2 (en) * 2002-12-27 2005-09-28 Domantis Limited Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand
BRPI0411200A (pt) * 2003-05-30 2006-07-18 Genentech Inc método de tratamento de cáncer, métodos de tratamento de paciente humano, artigo industrializado e kit de tratamento de cáncer
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7758859B2 (en) * 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US8735394B2 (en) 2005-02-18 2014-05-27 Abraxis Bioscience, Llc Combinations and modes of administration of therapeutic agents and combination therapy
HUE038768T2 (hu) 2005-02-18 2018-11-28 Abraxis Bioscience Llc Terápiás szerek kombinációi, valamint beadásukra szolgáló módszerek, és kombinációs terápia
US20070166388A1 (en) 2005-02-18 2007-07-19 Desai Neil P Combinations and modes of administration of therapeutic agents and combination therapy
TWI671403B (zh) 2005-03-31 2019-09-11 中外製藥股份有限公司 控制組裝之多肽的製造方法
CA2616008A1 (en) * 2005-07-21 2007-01-25 Stefan Meuer Stabilized chlorite solutions in combination with fluoropyrimidines for cancer treatment.
CA2609023C (en) 2005-08-01 2012-11-27 Canon Kabushiki Kaisha Target substance detecting device, target substance detecting method using the same, and detecting apparatus and kit therefor
JP4878238B2 (ja) * 2005-08-01 2012-02-15 キヤノン株式会社 標的物質検出用の素子及びそれを用いた標的物質の検出方法、並びにそのための検出装置及びキット
CA2615636A1 (en) * 2005-08-12 2007-02-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Treatment of diseases by subcutaneous administration of a vegf antagonist
EP1928435B8 (en) 2005-08-31 2019-03-20 Abraxis BioScience, LLC Compositions of poorly water soluble drugs with increased stability and methods for preparation thereof
SI3311805T1 (sl) 2005-08-31 2020-07-31 Abraxis Bioscience, Llc Sestave, ki zajemajo slabo vodotopne farmacevtske učinkovine in antimikrobna sredstva
AU2006321364B2 (en) * 2005-12-01 2011-11-10 Domantis Limited Noncompetitive domain antibody formats that bind Interleukin 1 Receptor type 1
TW200812615A (en) 2006-03-22 2008-03-16 Hoffmann La Roche Tumor therapy with an antibody for vascular endothelial growth factor and an antibody for human epithelial growth factor receptor type 2
ZA200807590B (en) * 2006-03-29 2009-11-25 Genentech Inc Diagnostics and treatments for tumors
EP3056568B1 (en) 2006-03-31 2021-09-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
CA2648947A1 (en) * 2006-04-10 2007-11-15 Fusion Antibodies Limited Therapy targeting cathepsin s
US20070258976A1 (en) * 2006-05-04 2007-11-08 Ward Keith W Combination Therapy for Diseases Involving Angiogenesis
JP2009537606A (ja) * 2006-05-25 2009-10-29 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト チロシンキナーゼ阻害剤
WO2007143689A2 (en) * 2006-06-06 2007-12-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for modulating vascular development
KR20090027227A (ko) * 2006-06-06 2009-03-16 제넨테크, 인크. 항-ｄｌｌ4 항체 및 이의 사용 방법
EP2040751A2 (en) * 2006-06-15 2009-04-01 Biogen Idec MA Inc. Combination therapy employing lymphotoxin beta receptor binding molecules in combination with second agents
NZ574580A (en) 2006-08-21 2011-12-22 Hoffmann La Roche Her2 tumor therapy with an anti-vegf antibody
DK2059533T3 (da) 2006-08-30 2013-02-25 Genentech Inc Multispecifikke antistoffer
US20100112077A1 (en) * 2006-11-06 2010-05-06 Abraxis Bioscience, Llc Nanoparticles of paclitaxel and albumin in combination with bevacizumab against cancer
ES2700074T3 (es) 2006-12-14 2019-02-13 Abraxis Bioscience Llc Terapia para el cáncer de mama sobre la base del estado de los receptores hormonales con nanopartículas que comprenden taxano
AU2007333735A1 (en) * 2006-12-19 2008-06-26 Genentech, Inc. VEGF-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and the treatment of early stage tumors
AU2014201795B2 (en) * 2006-12-19 2016-05-19 Genentech, Inc. VEGF-specific antagonists for adjuvant and neoadjuvant therapy and the treatment of early stage tumors
JP2010516625A (ja) 2007-01-24 2010-05-20 インサート セラピューティクス， インコーポレイテッド 制御された薬物送達のためのテザー基を有するポリマー−薬物コンジュゲート
EP2125013A4 (en) * 2007-01-26 2010-04-07 Bioinvent Int Ab DLL4 SIGNALING INHIBITOR AND ITS USES
TW200838875A (en) * 2007-02-01 2008-10-01 Genentech Inc Combination therapy with angiogenesis inhibitors
CA2683801A1 (en) 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
CL2008002782A1 (es) * 2007-09-21 2009-07-31 Genentech Inc Anticuerpo anti-bv8 neutralizante; composicion que lo comprende; y su uso para tratar tumores en humanos previamente tratados con un antagonista del factor de crecimiento endotelial vascular.
ES2595638T3 (es) 2007-09-26 2017-01-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método para modificar el punto isoeléctrico de un anticuerpo mediante la sustitución de aminoácidos en una CDR
US11331294B2 (en) 2007-09-26 2022-05-17 Indiana University Research And Technology Corporation Benzoquinone derivative E3330 in combination with chemotherapeutic agents for the treatment of bladder cancer
KR101689796B1 (ko) 2007-09-26 2016-12-27 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 암 및 혈관신생의 치료를 위하여 화학요법제와 병용하는 벤조퀴논 유도체 ｅ３３３０
WO2009055343A2 (en) * 2007-10-22 2009-04-30 Schering Corporation Fully human anti-vegf antibodies and methods of using
US20090226441A1 (en) * 2007-11-09 2009-09-10 Minhong Yan Activin receptor-like kinase-1 compositions and methods of use
TWI580694B (zh) * 2007-11-30 2017-05-01 建南德克公司 抗-ｖｅｇｆ抗體
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
CA2710483C (en) 2007-12-26 2018-05-08 Biotest Ag Methods and agents for improving targeting of cd138 expressing tumor cells
US8580755B2 (en) * 2008-02-19 2013-11-12 University Of Rochester Methods and compositions for treating inflammatory conditions
US20110159080A1 (en) * 2008-06-03 2011-06-30 Colin Lowery Composition comprising liposome-entrapped doxorubicin and methods of administration
HUE032894T2 (hu) 2008-06-25 2017-11-28 Esbatech Alcon Biomed Res Unit VEGF-gátló, stabilis és oldható antitestek
JP5745720B2 (ja) 2008-06-25 2015-07-08 エスバテック − ア ノバルティスカンパニー エルエルシー イムノバインダーの溶解性の最適化
US20100029491A1 (en) * 2008-07-11 2010-02-04 Maike Schmidt Methods and compositions for diagnostic use for tumor treatment
WO2010010155A1 (en) * 2008-07-23 2010-01-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Monitoring anti-angiogenesis therapy
EP2321651B1 (en) * 2008-07-23 2017-08-23 F. Hoffmann-La Roche AG Identification of subjects being susceptible to anti-angiogenesis therapy
CN102137939A (zh) * 2008-08-29 2011-07-27 霍夫曼-拉罗奇有限公司 不依赖vegf的肿瘤的诊断和治疗
BRPI0918648A2 (pt) 2008-09-03 2019-09-03 Genentech Inc anticorpos multiespecíficos
US8268314B2 (en) 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
SG195558A1 (en) * 2008-10-14 2013-12-30 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
CA2744158A1 (en) 2008-11-22 2010-05-27 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for the treatment of breast cancer
US20100143290A1 (en) * 2008-12-04 2010-06-10 Lallatin Nathaniel C Monoclonal antibodies to human thymidine kinase to treat cancer
KR20140020368A (ko) 2008-12-23 2014-02-18 제넨테크, 인크. 암 환자에서의 진단 목적용 방법 및 조성물
US20120039943A1 (en) * 2009-01-09 2012-02-16 Oxford Biomedica (Uk) Limited Factors
WO2010091234A2 (en) 2009-02-06 2010-08-12 The General Hospital Corporation Methods of treating vascular lesions
TW201438739A (zh) 2009-03-20 2014-10-16 Genentech Inc 抗-ｈｅｒ抗體
BRPI1014089A2 (pt) 2009-04-02 2016-04-19 Roche Glycart Ag anticorpos multiespecíficos que compreendem anticorpos de comprimento completo e fragmentos fab de cadeia simples
JP5616428B2 (ja) 2009-04-07 2014-10-29 ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト 三価の二重特異性抗体
WO2010123891A1 (en) * 2009-04-20 2010-10-28 Genentech, Inc. Adjuvant cancer therapy
NZ618067A (en) 2009-05-08 2015-07-31 Vaccinex Inc Anti-cd100 antibodies and methods for using the same
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
UA104626C2 (ru) * 2009-06-17 2014-02-25 Эббви Биотерапеутикс Инк. Анти-vegf антитело и его применение
CA2766403A1 (en) 2009-07-13 2011-01-20 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
BR112012002083A2 (pt) 2009-07-31 2016-11-08 Genentech Inc inibição de metaste tumoral
SG178419A1 (en) 2009-08-15 2012-04-27 Genentech Inc Anti-angiogenesis therapy for the treatment of previously treated breast cancer
US20180057602A1 (en) * 2009-08-17 2018-03-01 Tracon Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy of cancer with anti-endoglin antibodies and anti-vegf agents
CN102711809B (zh) * 2009-08-17 2015-09-30 特雷康制药公司 使用抗-内皮因子抗体和抗-vegf剂联合治疗癌症
WO2011028642A1 (en) 2009-09-04 2011-03-10 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Genetic determinants of prostate cancer risk
SG179070A1 (en) 2009-09-11 2012-04-27 Genentech Inc Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer agent
SG10201408401RA (en) 2009-09-16 2015-01-29 Genentech Inc Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
AU2010297344A1 (en) 2009-09-17 2012-02-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for diagnostics use in cancer patients
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
EP2493458A2 (en) * 2009-10-30 2012-09-05 The Ohio State University Multi-functional biodegradable particles for selectable targeting, imaging, and therapeutic delivery and use thereof for treating ocular disorders
CA3061784C (en) 2009-11-13 2023-09-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions, kits, and methods for the diagnosis, prognosis, monitoring, treatment and modulation of post-transplant lymphoproliferative disorders and hypoxia associated angiogenesis disorders using galectin-1
US8486397B2 (en) 2009-12-11 2013-07-16 Genentech, Inc. Anti-VEGF-C antibodies and methods using same
PL2515941T3 (pl) 2009-12-21 2020-04-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Preparat farmaceutyczny zawierający bewacyzumab
AU2010336485B2 (en) 2009-12-23 2015-03-26 Genentech, Inc. Anti-Bv8 antibodies and uses thereof
KR20180028561A (ko) 2010-02-23 2018-03-16 제넨테크, 인크. 난소암의 치료를 위한 항혈관신생 요법
TW201138821A (en) 2010-03-26 2011-11-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies
TWI426920B (zh) 2010-03-26 2014-02-21 Hoffmann La Roche 雙專一性、雙價抗－ｖｅｇｆ／抗－ａｎｇ－２抗體
MX369728B (es) 2010-03-29 2019-11-20 Abraxis Bioscience Llc Métodos para mejorar suministro de fármacos y efectividad de agentes terapéuticos.
CA2793974A1 (en) 2010-03-29 2011-10-06 Abraxis Bioscience, Llc Methods of treating cancer
MX346731B (es) 2010-04-23 2017-03-30 Genentech Inc * Producción de proteínas heteromultiméricas.
WO2011153243A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Anti-angiogenesis therapy for treating gastric cancer
WO2011153224A2 (en) 2010-06-02 2011-12-08 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of cancer
CN106924219A (zh) 2010-06-04 2017-07-07 阿布拉科斯生物科学有限公司 治疗胰腺癌的方法
EP2596362A1 (en) 2010-07-19 2013-05-29 F. Hoffmann-La Roche AG Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy
WO2012010548A1 (en) 2010-07-19 2012-01-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Method to identify a patient with an increased likelihood of responding to an anti-cancer therapy
CN103261225A (zh) 2010-07-23 2013-08-21 波士顿大学董事会 作为用于抑制病理性血管生成和肿瘤细胞侵袭力的治疗剂以及用于分子成像和靶向递送的抗DEspR抑制剂
AR082693A1 (es) 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
WO2012025530A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies comprising a disulfide stabilized - fv fragment
NZ610538A (en) 2010-11-15 2015-02-27 Five Prime Therapeutics Inc Fgfr1 extracellular domain combination therapies
BR112013013311A2 (pt) 2010-11-30 2017-09-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd agente terapêutico de indução de citotoxicidade
WO2012085111A1 (en) 2010-12-23 2012-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
AR085138A1 (es) 2011-02-04 2013-09-11 Genentech Inc VARIANTES DE Fc Y METODOS PARA SU PRODUCCION
AR085403A1 (es) 2011-02-28 2013-09-25 Hoffmann La Roche Proteinas monovalentes que se unen a antigenos
RU2607038C2 (ru) 2011-02-28 2017-01-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антигенсвязывающие белки
MY163539A (en) 2011-03-29 2017-09-15 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
AU2012236138A1 (en) 2011-04-01 2013-11-14 Genentech, Inc. Combinations of AKT inhibitor compounds and erlotinib, and methods of use
CA2833747C (en) 2011-04-20 2022-10-18 Asya Grinberg Endoglin polypeptides and uses thereof
EP2704735A1 (en) 2011-05-03 2014-03-12 Genentech, Inc. Vascular disruption agents and uses thereof
SG10201604497UA (en) * 2011-06-02 2016-07-28 Almac Diagnostics Ltd Molecular Diagnostic Test For Cancer
WO2012167122A1 (en) 2011-06-03 2012-12-06 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds, compositions and methods for treating oxidative dna damage disorders
BR112013030472A2 (pt) 2011-06-30 2019-09-24 Genentech Inc formulação farmacêutica, artigo de fabricação e método
MX2014001736A (es) 2011-08-17 2014-03-31 Genentech Inc Inhibicion de angiogenesis en tumores refractarios.
AU2012316402B2 (en) * 2011-09-30 2017-04-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-ErbB3 antibodies and uses thereof
WO2013055922A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4d binding molecules for modulation of blood brain barrier permeability
CA2858246C (en) * 2011-11-04 2019-11-12 Paul Zachary JOSEFOWITZ Use of neu1 sialidase inhibitors in the treatment of cancer
WO2013078170A1 (en) 2011-11-21 2013-05-30 Genentech, Inc. Purification of anti-c-met antibodies
WO2013082511A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Genentech, Inc. Methods for overcoming tumor resistance to vegf antagonists
US8790652B2 (en) 2011-12-06 2014-07-29 Vaccinex, Inc. Use of the combination of semaphorin-4D inhibitory molecules and VEGF inhibitory molecules to inhibit angiogenesis
FR2984750B1 (fr) * 2011-12-23 2014-01-10 Lfb Biotechnologies Nouvelles compositions pharmaceutiques comprenant un anticorps liant le recepteur humain de l'hormone anti-mullerienne de type ii
CA2861124A1 (en) 2012-02-10 2013-08-15 Genentech, Inc. Single-chain antibodies and other heteromultimers
LT2825558T (lt) 2012-03-13 2019-08-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Derinių terapija, skirta kiaušidžių vėžiui gydyti
WO2013148337A1 (en) * 2012-03-29 2013-10-03 Altor Bioscience Corporation Methods for treating neoplasia
US10494440B2 (en) 2012-05-11 2019-12-03 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4D binding molecules to promote neurogenesis following stroke
CN103417965B (zh) * 2012-05-17 2018-04-13 江苏先声药业有限公司 一种含有抗vegf抗体的药物组合物
SG10201709555SA (en) * 2012-05-18 2017-12-28 Genentech Inc High-concentration monoclonal antibody formulations
SG10201603055WA (en) 2012-05-31 2016-05-30 Genentech Inc Methods Of Treating Cancer Using PD-L1 Axis Binding Antagonists And VEGF Antagonists
AU2013202947B2 (en) 2012-06-13 2016-06-02 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan
US9717724B2 (en) 2012-06-13 2017-08-01 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies
CN104395339A (zh) 2012-06-27 2015-03-04 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于选择并产生含有至少两种不同结合实体的定制高度选择性和多特异性靶向实体的方法及其用途
RU2015100656A (ru) 2012-06-27 2016-08-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способ получения конъюгатов fc-фрагмента антитела, включающих по меньшей мере одну связывающую группировку, которая специфически связывается с мишенью, и их применения
JP6325534B2 (ja) 2012-07-05 2018-05-16 バクシム アクチェンゲゼルシャフト 膵臓癌患者用ｄｎａワクチン
CA2874554C (en) 2012-07-13 2019-12-03 Roche Glycart Ag Bispecific anti-vegf/anti-ang-2 antibodies and their use in the treatment of ocular vascular diseases
BR112015002681A2 (pt) 2012-08-07 2018-08-28 Genentech Inc método para tratar um paciente e kit
WO2014055493A1 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for polymer precipitation and generation of particles
US9877981B2 (en) 2012-10-09 2018-01-30 President And Fellows Of Harvard College NAD biosynthesis and precursors for the treatment and prevention of cancer and proliferation
US20140154255A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-vegf antibodies and their uses
CN105102631A (zh) 2012-12-03 2015-11-25 阿尔玛克诊断有限公司 用于癌症的分子诊断测试
JP6526570B2 (ja) 2013-01-11 2019-06-12 マサチューセッツ アイ アンド イヤー インファーマリー 炎症及び血管形成を減少させるｃｙｐ４５０脂質メタボライト
US9500464B2 (en) * 2013-03-12 2016-11-22 Adidas Ag Methods of determining performance information for individuals and sports objects
SG10201913932VA (en) 2013-03-13 2020-03-30 Genentech Inc Antibody formulations
WO2014144911A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Capon Daniel J Hybrid immunoglobulin containing non-peptidyl linkage
SG11201507131WA (en) * 2013-03-15 2015-10-29 Aerpio Therapeutics Inc Compositions, formulations and methods for treating ocular diseases
US20150050277A1 (en) 2013-03-15 2015-02-19 Aerpio Therapeutics Inc. Compositions and methods for treating ocular diseases
BR112015029145A2 (pt) 2013-05-23 2017-09-19 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Usos de um domínio extracelular (ecd) de receptor de fator de crescimento de fibroblastos 1 (fgfr1) e métodos de identificação de pacientes
KR101541478B1 (ko) * 2013-05-31 2015-08-05 동아쏘시오홀딩스 주식회사 항-vegf 항체 및 이를 포함하는 암 또는 신생혈관형성관련 질환의 예방, 진단 또는 치료용 약학 조성물
CA2916245C (en) 2013-06-25 2023-01-24 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4d inhibitory molecules in combination with an immune modulating therapy to inhibit tumor growth and metastases
CN104341504B (zh) 2013-08-06 2017-10-24 百奥泰生物科技(广州)有限公司 双特异性抗体
US10456470B2 (en) 2013-08-30 2019-10-29 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of glioblastoma
US10617755B2 (en) 2013-08-30 2020-04-14 Genentech, Inc. Combination therapy for the treatment of glioblastoma
EP3050896B1 (en) 2013-09-27 2021-07-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for producing polypeptide heteromultimer
NZ630881A (en) 2013-10-10 2016-03-31 Vaccinex Inc Use of semaphorin-4d binding molecules for treatment of atherosclerosis
JP6422956B2 (ja) 2013-10-11 2018-11-14 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体
NZ630892A (en) 2013-10-21 2016-03-31 Vaccinex Inc Use of semaphorin-4d binding molecules for treating neurodegenerative disorders
AU2014339898B2 (en) 2013-10-25 2020-07-23 Acceleron Pharma, Inc. Endoglin peptides to treat fibrotic diseases
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
GB201409479D0 (en) 2014-05-28 2014-07-09 Almac Diagnostics Ltd Molecular diagnostic test for cancer
US9603927B2 (en) * 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
BR112016018408A2 (pt) 2014-03-14 2017-12-26 Immutep Sas moléculas de anticorpo à lag-3 e usos das mesmas
ES2788973T3 (es) 2014-03-14 2020-10-23 Biomolecular Holdings Llc Inmunoglobulina híbrida que contiene una unión distinta de peptidilo
KR20160137599A (ko) 2014-03-24 2016-11-30 제넨테크, 인크. C-met 길항제로의 암 치료 및 이것과 hgf 발현과의 상관관계
AU2015241038A1 (en) 2014-03-31 2016-10-13 Genentech, Inc. Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and OX40 binding agonists
US9388239B2 (en) 2014-05-01 2016-07-12 Consejo Nacional De Investigation Cientifica Anti-human VEGF antibodies with unusually strong binding affinity to human VEGF-A and cross reactivity to human VEGF-B
EP3140392B1 (en) 2014-05-06 2023-07-26 F. Hoffmann-La Roche AG Production of heteromultimeric proteins using mammalian cells
WO2016011052A1 (en) 2014-07-14 2016-01-21 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of glioblastoma
WO2016025647A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine
CA2957717C (en) 2014-08-12 2021-10-19 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2 and integrin-binding-fc-fusion protein
MY192918A (en) 2014-09-09 2022-09-15 Janssen Biotech Inc Combination therapies with anti-cd38 antibodies
US9993551B2 (en) 2014-09-13 2018-06-12 Novartis Ag Combination therapies of EGFR inhibitors
MX2017003121A (es) 2014-09-15 2017-08-02 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpos.
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
US20170209574A1 (en) 2014-10-03 2017-07-27 Novartis Ag Combination therapies
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
UY36351A (es) 2014-10-14 2016-06-01 Novartis Ag Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1 y usos de las mismas
EA201791029A1 (ru) 2014-11-10 2017-12-29 Дженентек, Инк. Антитела против интерлейкина-33 и их применение
CN107001482B (zh) 2014-12-03 2021-06-15 豪夫迈·罗氏有限公司 多特异性抗体
AU2015358615B2 (en) 2014-12-04 2021-08-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute myeloid leukemia
WO2016100882A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
EP3237639A2 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing chemotherapy-resistant cancers
EP3040075B1 (en) * 2014-12-30 2017-09-13 Curadis GmbH C-19 steroids for inhibiting neovascularization
WO2016159213A1 (ja) 2015-04-01 2016-10-06 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
AU2016252773B2 (en) 2015-04-24 2022-06-02 Genentech, Inc. Multispecific antigen-binding proteins
US11318131B2 (en) 2015-05-18 2022-05-03 Ipsen Biopharm Ltd. Nanoliposomal irinotecan for use in treating small cell lung cancer
BR112017024877A2 (pt) 2015-05-20 2019-09-17 Janssen Biotech, Inc. anticorpo anti-cd38 e seu uso no tratamento de amiloidose de cadeia leve e outras malignidades hematológicas positivas para cd38
AU2016274584A1 (en) 2015-06-08 2018-01-04 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-OX40 antibodies and PD-1 axis binding antagonists
JP6816038B2 (ja) 2015-06-22 2021-01-20 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｄ３８抗体及びサバイビン阻害剤による血液悪性疾患の併用療法
US20170044265A1 (en) 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
WO2017019894A1 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to lag-3
EP3316902A1 (en) 2015-07-29 2018-05-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
CN108348480A (zh) 2015-08-20 2018-07-31 益普生生物制药有限公司 使用脂质体伊立替康和parp抑制剂用于癌症治疗的组合疗法
ES2826826T3 (es) 2015-08-21 2021-05-19 Ipsen Biopharm Ltd Combinación farmacéutica que comprende irinotecán liposómico, oxaliplatino, 5-fluorouracilo y leucovorina para el tratamiento del cáncer pancreático metastático
CA2994888A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Immunogen, Inc. Therapeutic combinations comprising anti-folr1 immunoconjugates
CN116987187A (zh) 2015-09-23 2023-11-03 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-vegf抗体的优化的变体
SI3368578T1 (sl) 2015-10-30 2021-08-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa proti HtrA1 in postopki uporabe
US10781261B2 (en) 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
AU2016348391A1 (en) 2015-11-03 2018-05-17 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding TIM-3 and their uses
LT3370770T (lt) 2015-11-03 2021-04-12 Janssen Biotech, Inc. Anti-cd38 antikūnų poodinės kompozicijos ir jų panaudojimas
MX2018007423A (es) 2015-12-17 2018-11-09 Novartis Ag Moleculas de anticuerpo que se unen a pd-1 y usos de las mismas.
SG11201807936VA (en) 2016-03-14 2018-10-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Cell injury inducing therapeutic drug for use in cancer therapy
WO2017165681A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Gensun Biopharma Inc. Trispecific inhibitors for cancer treatment
EP3443350B1 (en) 2016-04-15 2020-12-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods for monitoring and treating cancer
EP3443120A2 (en) 2016-04-15 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods for monitoring and treating cancer
JP2019524706A (ja) 2016-07-08 2019-09-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｍｕｃ１６陽性癌治療の応答性を評価するためのヒト精巣上体タンパク質４（ｈｅ４）の使用
CN109890982B (zh) 2016-07-08 2023-07-07 基因泰克公司 通过nrf2及其下游目标基因的表达状态和突变状态诊断和治疗癌症的方法
MX2019004783A (es) 2016-11-02 2019-08-12 Ipsen Biopharm Ltd Tratamiento de cancer gastrico usando terapias de combinacion que comprenden irinotecan liposomico oxaliplatino, 5-fluoruracilo (y leucovorina).
US10537637B2 (en) 2017-01-05 2020-01-21 Gensun Biopharma Inc. Checkpoint regulator antagonists
US10350266B2 (en) 2017-01-10 2019-07-16 Nodus Therapeutics, Inc. Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein
AU2018207303A1 (en) 2017-01-10 2019-07-25 xCella Biosciences, Inc. Combination tumor treatment with an integrin-binding-Fc fusion protein and immune modulator
AU2018228873A1 (en) 2017-03-01 2019-08-29 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
US20200172628A1 (en) 2017-06-22 2020-06-04 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CA3066774A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3703749A1 (en) 2017-10-31 2020-09-09 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating high risk multiple myeloma
JP7436365B2 (ja) 2017-12-29 2024-02-21 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 抗ｖｅｇｆ抗体及び使用の方法
EP3782618A4 (en) 2018-04-16 2022-01-26 OnQuality Pharmaceuticals China Ltd. METHOD OF PREVENTING OR TREATING SIDE EFFECTS OF CANCER THERAPY
JOP20200303A1 (ar) 2018-05-24 2020-11-23 Janssen Biotech Inc عوامل ربط psma واستخداماتها
TW202015726A (zh) 2018-05-30 2020-05-01 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
WO2020006516A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Gensun Biopharma, Inc. Antitumor immune checkpoint regulator antagonists
EP3867646A1 (en) 2018-10-18 2021-08-25 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
MX2021012767A (es) 2019-04-19 2021-11-18 Janssen Biotech Inc Metodos para tratar el cancer de prostata con un anticuerpo anti-psma/cd3.
EP3962947A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
CN112010971A (zh) * 2019-05-30 2020-12-01 义慧科技(深圳)有限公司 抗vegf抗体在制备预防和/或治疗脂肪肝的药物中的应用
JP2022540571A (ja) 2019-06-28 2022-09-16 ゲンスン バイオファーマ、インコーポレーテッド 変異したＴＧＦβ１－ＲＩＩ細胞外ドメインおよび免疫グロブリン足場で構成される抗腫瘍アンタゴニスト
JP2022548881A (ja) 2019-09-18 2022-11-22 ノバルティス アーゲー Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法
CA3174680A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
JP2023520515A (ja) 2020-04-03 2023-05-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんに対する治療方法及び診断方法
US20220023405A1 (en) 2020-06-30 2022-01-27 Dcprime B.V. Use of leukemia-derived cells in ovarian cancer vaccines
US20220152030A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising a krasg12c inhibitor and a vegf inhibitor for treating solid tumors
EP4281102A1 (en) 2021-01-22 2023-11-29 Mendus B.V. Methods of tumor vaccination
KR20230137393A (ko) 2021-01-28 2023-10-04 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Psma 결합 단백질 및 이의 용도
US20220305100A1 (en) 2021-03-12 2022-09-29 Dcprime B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
KR20220141572A (ko) 2021-04-13 2022-10-20 김문재 확장형 실내 캠핑실이 삽입 및 인출되는 차량
WO2022232503A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods and compositions for cancer
WO2022256820A1 (en) 2021-06-03 2022-12-08 Gensun Biopharma Inc. Multispecific antagonists
CN113244388A (zh) * 2021-07-01 2021-08-13 江苏先声药业有限公司 抗人vegf抗体与化药联用在制备治疗卵巢癌的药物中的应用
AU2022302170A1 (en) 2021-07-02 2023-12-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
AU2022317820A1 (en) 2021-07-28 2023-12-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
WO2023080900A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 Genentech, Inc. Methods and compositions for classifying and treating kidney cancer

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
EP0272253A4 (en) 1986-03-07 1990-02-05 Massachusetts Inst Technology METHOD FOR IMPROVING GLYCOPROTE INSTABILITY.
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
GB8705477D0 (en) 1987-03-09 1987-04-15 Carlton Med Prod Drug delivery systems
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5036003A (en) 1987-08-21 1991-07-30 Monsanto Company Antibodies to VPF
WO1990003430A1 (en) 1988-09-23 1990-04-05 Cetus Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity and product expression
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
EP0479909B1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
JP2938569B2 (ja) 1990-08-29 1999-08-23 ジェンファーム インターナショナル，インコーポレイティド 異種免疫グロブリンを作る方法及びトランスジェニックマウス
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
WO1992009690A2 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
DE69232718T2 (de) 1991-02-22 2003-04-03 American Cyanamid Co Identifizierung eines menschlichen rezeptor-tyrosinkinasegens
US20020032313A1 (en) 1991-03-29 2002-03-14 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
US20030206899A1 (en) 1991-03-29 2003-11-06 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
US20010021382A1 (en) 1991-03-29 2001-09-13 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
OA10149A (en) 1991-03-29 1996-12-18 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists
WO1992020373A1 (en) 1991-05-14 1992-11-26 Repligen Corporation Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2122732C (en) 1991-11-25 2008-04-08 Marc D. Whitlow Multivalent antigen-binding proteins
ATE419355T1 (de) 1992-02-06 2009-01-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
JPH08500017A (ja) 1992-08-17 1996-01-09 ジェネンテク，インコーポレイテッド 二特異的免疫アドヘジン
AU687727B2 (en) 1992-10-28 1998-03-05 Genentech Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
WO1994011026A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US20060193862A1 (en) 1995-03-30 2006-08-31 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
DK1516628T3 (da) 1995-07-27 2013-09-08 Genentech Inc Stabil, isotonisk lyofiliseret proteinformulering
JPH10114680A (ja) 1996-10-08 1998-05-06 Toagosei Co Ltd 制癌剤
US20070059302A1 (en) 1997-04-07 2007-03-15 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
EP1787999B1 (en) 1997-04-07 2010-08-04 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
US20150023951A1 (en) 1997-04-07 2015-01-22 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
DK0971959T3 (da) 1997-04-07 2006-05-15 Genentech Inc Humaniserede antistoffer og fremgangsmåder til dannelse af humaniserede antistoffer
DK0981618T4 (da) 1997-05-15 2011-11-21 Genentech Inc Anti-Apo-2-antistof
ES2368823T3 (es) 1998-01-26 2011-11-22 Genentech, Inc. Anticuerpos del receptor 4 de muerte (dr4) y usos de los mismos.
WO2000037502A2 (en) 1998-12-22 2000-06-29 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists and uses thereof
KR20010113642A (ko) 1999-01-13 2001-12-28 추후기재 약물의 효능을 증대시키기 위한 조성물 및 증대 방법
ES2223705T3 (es) * 1999-04-28 2005-03-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Composiciones y metodos para el tratamiento de cancer mediante inhibi cion selectiva del vegf.
US7342016B2 (en) * 2000-08-30 2008-03-11 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors as antitumor agents
RU2177349C1 (ru) 2001-02-20 2001-12-27 Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт МЗ РФ Способ лечения инфильтративно-отечного рака молочной железы
JP2005525368A (ja) 2002-03-04 2005-08-25 メディミューン，インコーポレーテッド インテグリンαｖβ３アンタゴニストをＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤またはビスフォスフォネートと併用投与する障害の予防または治療方法
CN1187373C (zh) 2002-03-20 2005-02-02 上海中信国健药业有限公司 人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体及其制法和药物组合物
US20070036755A1 (en) 2004-05-28 2007-02-15 Genentech, Inc. Treatment with anti-vegf antibodies
BRPI0411200A (pt) 2003-05-30 2006-07-18 Genentech Inc método de tratamento de cáncer, métodos de tratamento de paciente humano, artigo industrializado e kit de tratamento de cáncer
TW200812615A (en) 2006-03-22 2008-03-16 Hoffmann La Roche Tumor therapy with an antibody for vascular endothelial growth factor and an antibody for human epithelial growth factor receptor type 2

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