MX2014007730A - Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de la fórmula I; en donde R1, R2, R3 y R4 son como se definen en la Breve Descripción de la Invención. Los compuestos de la fórmula I son capaces de interrumpir las interacciones de BCL-2 con las proteínas que contienen un dominio BH3. La interrupción de esta interacción puede restablecer la función anti-apoptótica de BCL-2 en las células de cáncer y en el tejido tumoral que expresa BCL-2. La invención proporciona además un proceso para la preparación de los compuestos de la invención, preparaciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, y métodos de uso de tales compuestos en el tratamiento de enfermedades cancerosas.

Description

COMPUESTOS PARA I N H I BI R LA I NTERACCIÓN DE BCL2 CON LOS COMPON ENTES DE EN LACE REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad para la Solicitud Provisional de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 61 /579, 724, presentada el 23 de diciembre de 201 1 . La divulgación completa de esta solicitud se incorpora a la presente como referencia en su totalidad y para todos los propósitos.

ANTECEDENTES CAMPO DE LA I NVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos capaces de interrumpir las interacciones de BC L-2 con proteínas que contienen un dominio BH3. La interrupción de esta interacción tiene el potencial para restaurar la función anti-apoptótica de BCL-2 en las células de cáncer y en el tejido tumoral que expresa BC L-2. La invención proporciona además un proceso para la preparación de los compuestos de la invención , las preparaciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, y los métodos para utilizar tales compuestos en el tratamiento de cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La apoptosis, o la muerte celular programada, es importante para u n desarrollo embrionario o anatómico normal , la defensa del huésped, y la supresión de oncogénesis. La regulación fallida de la apoptosis se ha implicado en los cánceres y en muchas otras enfermedades humanas que resultan de un desequilibrio entre el proceso de la división celular y la muerte celular. BCL-2 pertenece a una familia de proteínas, las cuales regulan la apoptosis. BCL-2 contribuye al progreso de las células de cáncer al impedir la rotación celular normal causada por los mecanismos fisiológicos de la muerte celular.

Los niveles de expresión de las proteínas BCL-2 se correlaciona con la resistencia a un amplio espectro de fármacos quimioterapéuticos y terapia de radiación-?. Se ha observado una sobre-expresión de BCL-2 en muchas formas de cáncer. Se han observado los siguientes porcentajes de sobre-expresión en los cánceres: del 20 al 40 por ciento en próstata; del 80 al 100 por ciento en próstata resistente a hormonas; del 60 al 80 por ciento en mama; del 20 al 40 por ciento en pulmonar no microcelular; del 60 al 80 por ciento en pulmonar microcelular; del 50 al 100 por ciento en colo-rectal; 65 por ciento en melanoma; 13 por ciento en cabeza y cuello; y 23 por ciento en pancreático.

Se ha demostrado que los planteamientos biológicos para modular la función de Bcl-2 utilizando oligonucleótidos anti-sentido o anticuerpos de una sola cadena mejoran la quimiosensibilidad de las células tumorales. Se han observado efectos sinérgicos y la regresión completa del tumor in vivo en los tratamientos combinados con una combinación de un oligonucleótido anti-sentido (G3139), y docetaxel. Por consiguiente, BCL-2 representa un objetivo altamente atractivo para el desarrollo de una terapia novedosa para el tratamiento de muchas formas de cánceres. En particular, existe una necesidad de moléculas pequeñas que se enlacen a BCL-2 y que bloqueen su función anti-apoptótica en el cáncer, y que promuevan la muerte celular en los tumores. La presente invención satisface esta necesidad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención proporciona los compuestos de la fórmula I: en donde: Ri se selecciona a partir de hidrógeno y halógeno; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde R2 está en la posición mera y R3 está en la posición para en relación con el anillo de pirazol, o R2 está en la posición para y R3 está en la posición meta en relación con el anillo de pirazol; R3 se selecciona a partir de hidroxilo y -L-R5; en donde L se selecciona a partir de -??·,0(0)-, -OXTCÍOJO-, -OXT- y -OX,C (O)NH-; en donde Xi se selecciona a partir de un enlace y alquileno de 1 a 4 átomos de carbono ramificado o no ramificado; en donde el alquileno de X-? puede estar insustituido o sustituido con un grupo seleccionado a partir de carboxi-metilo, metoxi-carbonil-metilo, metil-carbonil-amino, y fenilo; R4 se selecciona a partir de hidrógeno, hidroxilo, -X3NR8R9, -X3C(0)OR8, -X3OR8, -X3C(0)NR8R9 y -X3NR8C(0)R9; en donde X3 se selecciona a partir de un enlace y alquileno de 1 a 4 átomos de carbono; y R8 y Rg se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y fenilo; o R8 y R9 junto con el nitrógeno con el que R8 y R9 están unidos, forman un anillo saturado de 5 a 7 miembros que contiene de 1 a 3 grupos o heteroátomos independientemente seleccionados a partir de C(O), NR10, O y S(O)0-2; en donde R 0 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R5 se selecciona a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, ciclopropilo, imidazo-[1 ,2-a]-pirimidinilo, 2-oxo-4-fenil-piperazin-1 -i lo, 4-(2-cloro-bencil)-3-oxo-piperazin-1-ilo, imidazo-[1 ,2-a]-piridinilo, benzo-[d]-isoxazolilo, nafto-[2, 1 -d][1 ,2,3]-oxadiazol-5-ilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridinilo, imidazo-[2,1-b]-tiazolilo, 1 H-pirazolo-[3,4-b]-piridinilo, benzo-[c][1 ,2,5]-tiadiazolilo, 4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzo-furanilo, 2-???-1 ,2,3, 6-tetrahidro-pirimidinilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 2,3-dihidro-benzo-[b][1 ,4]-dioxin-2-ilo, nafto-[2,3-d][1 ,3]-dioxol-2-ilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-[b][1 ,4]-oxazin-7-ilo, 2,3-dihidro-benzo-furan-3-ilo, croman- 8-ilo, 3-oxo-3H-pirazolilo, 6-oxo-1 ,6-dihidro-piridazinilo, benzo-[b]-tiofenilo, benzo-[b]-furanilo, 2-oxo-1 ,2-dihidro-piridinilo, 2-oxo-1,2,5,6, 7,8-hexahidro-quinolinilo, 4-oxo-1 ,4-dihidro-1 ,8-naftiridinilo, 4-???-4 H-p¡ ra no-[2,3-b]-piridinilo, 0, 10-dioxido-9-oxo-9H-tioxanten-3-ilo, 5-oxo-pirrolidin-3-ilo, fenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, fenoxilo, tiofenilo, benzoxilo, fenil-sulfonilo, furanilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tienilo, pirrolilo, quinolin-8-iloxilo, pirimidinilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirrolidinonilo, imidazolidina-2,4-dionilo, piperidinilo, piperazinilo, pirazinilo, pirazolilo, morfolino, oxo-morfolino, indolilo, benzo-[b]-tiofen¡lo, benzo-[b]-furanilo, benzo-[d][1 ,2,3]-triazol y oxo-piperazinilo; en donde el alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, ciclopropilo, imidazo-[1 ,2-a]-pirimidinilo, benzo-[d]-isoxazolilo, ímidazo-[1 ,2-aJ-piridinilo, 4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzo-furanilo, 2-oxo-1 ,2,3,6-tetrahidro-pirimidinilo, imidazo-[2, 1 -b]-tiazolilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridinilo, 1H-pirazolo-[3,4-b]-piridinilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, benzo-[c][1 ,2, Sitiad iazolilo, 2,3-dihidro-benzo-[b][1 ,4]-dioxin-2-ilo, nafto-[2,3-d][1 ,3]-dioxol-2-ilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-[b][1 ,4]-oxazin-7-ilo, 2,3-dihidro-benzo-furan-3-ilo, croman-8-ilo, 3-oxo-3H-pirazolilo, 6-oxo-1,6-dihidro-piridazinilo, 2-oxo-1 ,2-dihidro-piridinilo, 2-oxo-1 ,2,5,6,7,8-hexahidro-quinolinilo, 4-oxo-1 ,4-dihidro-1 ,8-naftiridinilo, 4-oxo-4H-pirano-[2,3-b]-piridinilo, 10,10-dióxido-9-oxo-9 H-tioxanten -3-ilo, 5-oxo-pirrolidin-3-ilo, fenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, fenoxilo, benzoxilo, fenoxi-metilo, tiofenilo, fenil-sulfonilo, furanilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tienilo, piridinilo, pirrolilo, quinolin-8-iloxilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, pirrolidinonilo, piperazinilo, piperidinilo, pirazinilo, pirazolilo, morfolino, oxo-morfolino, indolilo, benzo-[d][1 ,2,3]-triazol u oxo-piperazinilo de R5 está insustituido o sustituido con 1 a 3 grupos independientemente seleccionados a partir de halógeno, ciano, nitro, -NR6R7, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, tioalquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, -C(0)OR6, -X3OR6, -C(0)R6, -C(O) NR6R7, -NR6S (0)2X3R7, -X3NR6C(0)R7, -S(O)0.2Rs, -S(O)0.2N R6R7, fenilo, bencilo, piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, morfolin-metilo, 1 ,2,4-oxa-diazolilo, pirazolilo, fenoxilo, indolilo, (1 H-1 ,2,4-triazolil)-metilo y benzoxilo; en donde R6 y R7 se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono, piridinilo, fenilo, bencilo y naftilo; en donde los sustituyentes de fenilo, piridinilo, bencilo, morfolino, morfolin-metilo, 1 ,3-dioxo-isoindolinilo, 1,2,4-oxadiazolilo, pirazolilo, indolilo y benzoxilo de R5 o el piridinilo y fenilo de R6 pueden estar insustituidos o adicionalmente sustituidos con un grupo seleccionado a partir de halógeno, nitro, amino-sulfonilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno; en donde X3 se selecciona a partir de un enlace y alquileno de 1 a 4 átomos de carbono; o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; con la condición de que los compuestos de la fórm ula I no incluyan los dos com puestos en donde Ri es hidrógeno, R2 es hidrógeno y R3 es un grupo seleccionado a partir de -OCH2C(0)-fenilo y -OCH2C(0)OH; y los derivados de N-óxido, derivados de pro-fármaco, derivados proteg idos, los isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos; y las sales farmacéuticamente aceptables y solvatos (por ejemplo, hidratos) de estos compuestos.

En u n segundo aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica , la cual contiene un compuesto de la fórmula I o u n derivado de N-óxido, los isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en mezcla con uno o más excipientes adecuados.

En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad en un animal en donde la mod ulación de la actividad de BCL-2 pueda prevenir, inhibir, o d isminuir la patolog ía y/o sintomatolog ía de las enfermedades, cuyo método comprende administrar al animal , una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I o un derivado de N-óxido, los isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula I en la elaboración de u n medicamento para el tratamiento de u na enfermedad en un animal en donde la actividad de BC L-2 contribuya a la patolog ía y/o sintomatología de la enfermedad.

En un q ui nto aspecto , la presente inven ción proporciona u n proceso para la preparación de los com puestos de la fórm ula I , y los derivados de N -óxido, derivados de pro-fármaco , derivados protegidos , los isómeros ind ividuales y mezclas de isóm eros de los m ism os , y las sales fa rmacéuticamente aceptables de los m ismos.

Definiciones Los términos generales utilizados anteriormente en la presente y más adelante en la presente , de preferencia tienen, dentro del contexto de esta d ivulgación , los siguientes significados, a menos que se indique de otra manera, en donde los términos más generales dondequiera que se utilicen , independientemente unos de otros, pueden ser reemplazados por definiciones más específicas o pueden quedarse, definiendo de esta manera las modalidades más detalladas de la invención : "Alquilo" como un grupo y como un elemento estructural de otros grupos, por ejemplo, alquilo y alcoxilo sustituidos por halógeno, puede ser de cadena recta o ramificada . Alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono incluye, metoxilo, etoxilo, y similares. Halo-alq uilo sustituido incluye difluoro-metilo, trifluoro-metilo, pentafluoro-etilo , y similares .

"Arilo" significa u n ensamble de anillo aromático monocíclico o bicíclico fusionado que contiene de seis a diez átomos de carbono en el anillo. Por ejemplo, arilo puede ser fenilo o naftilo, de preferencia fenilo. "Arileno" sig nifica un radical divalente derivado a partir de un grupo arilo.

"Heteroarilo" es como se define para arilo anteriormente, en donde uno o más de los miembros del anillo es un heteroátomo. Por ejemplo, heteroarilo de 5 a 10 átomos de carbono es un mínimo de 5 miembros como se indica por los átomos de carbono, pero que estos átomos de carbono pueden ser reemplazados por un heteroátomo. En consecuencia, heteroarilo de 5 a 10 átomos de carbono incluye piridilo, indolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinolinilo, benzo-furanilo, benzo-piranilo, benzo-tiopiranilo, benzo-[1 ,3]-dioxol, imidazolilo, benzo-imidazolilo, pirimidinilo, furanilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, tienilo, etc.

"Cicloalquilo" significa un ensamble de anillos monocíclico, bicíclico fusionado, o policíclico puenteado, saturado o parcialmente insaturado, que contiene el número indicado de átomos en el anillo. Por ejemplo, cicloalquilo de 3 a 10 átomos de carbono incluye ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc.

"Heterocicloalquilo" significa cicloalquilo, como se define en esta solicitud, en el entendido de que uno o más de los átomos de carbono indicados en el anillo, son reemplazados por una fracción seleccionada a partir de -O-, -N = , -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O)- o -S(0)2-, en donde R es hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o un grupo protector de nitrógeno. Por ejemplo, heterocicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono, como se utiliza en esta solicitud para describir los compuestos de la invención, incluye morfolino, pirrolidinilo, pirrolidinil-2-ona, piperazinilo, piperidinilo, piperidinilona, 1,4-dioxa- 8-aza-espiro-[4.5]-dec-8-ilo, tiomorfolino, sulfano-morfolino, sulfono-morfolino, etc.

"Halógeno" (o halo) de preferencia representa cloro o flúor, pero también puede ser bromo o yodo.

Los compuestos de la fórmula I pueden tener diferente formas isoméricas. Por ejemplo, cualquier átomo de carbono asimétrico puede estar presente en la configuración (R), (S), o (R,S), de preferencia en la configuración (R) o (S). Los sustituyentes en un doble enlace, o en especial en un anillo, pueden estar presentes en la forma c/'s (= Z-) o trans (= E-). Los compuestos, por lo tanto, pueden estar presentes como mezclas de isómeros o de preferencia como los isómeros puros, de preferencia como los diaestereómeros puros o los enantiómeros puros.

Cuando se utiliza la forma plural (por ejemplo, los compuestos, las sales), ésta incluye al singular (por ejemplo, un solo compuesto, una sola sal). "Un compuesto" no excluye que esté presente (por ejemplo, en una formulación farmacéutica) más de un compuesto de la fórmula I (o una sal del mismo), en donde "un" meramente representa el artículo indefinido. "Un", por consiguiente, se puede leer de preferencia como "uno o más", y menos preferiblemente de una manera alternativa como "uno".

Siempre que se mencione un compuesto o los compuestos de la fórmula I, esto también pretende incluir además los N-óxidos de estos compuestos y/o los tautómeros de los mismos.

El término "y/o un N-óxido del mismo, un tautómero del mismo y/o una sal (de preferencia farmacéuticamente aceptable) del mismo" en especial significa que un compuesto de la fórmula I puede estar presente como tal o en mezcla con su N-óxido, como el tautómero (por ejemplo, debido al tautomerismo de ceto-enol, lactama-lactima, amida-ácido imídico o enamina-imina) o en mezcla (por ejemplo, la reacción de equivalencia causada) con su tautómero, o como una sal del compuesto de la fórmula I, y/o cualquiera de estas formas o las mezclas de dos o más de estas formas.

La presente invención también incluye todas las variaciones isotópicas adecuadas de los compuestos de la invención, o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Una variación isotópica de un compuesto de la invención, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se define como una en donde cuando menos un átomo es reemplazado por un átomo que tiene el mismo número atómico pero una masa atómica diferente de la masa atómica usualmente encontrada en la naturaleza. Los ejemplos de los isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos incluyen, pero no se limitan a, isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno y oxígeno, tales como 2H, 3H, 11C, 3C, 14C isN 170_ 180 3sSi i8p 36Q, y 123, Cjertas variaciones isotópicas de los compuestos de la invención y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, por ejemplo, aquéllas en donde se incorpora un isótopo radioactivo, tal como 3H o 14C, son útiles en los estudios de distribución de fármacos y/o de sustratos en el tejido. En los ejem plos particu lares , se pueden utilizar los isótopos de 3H y 1 C por su facilidad de preparación y detectabilidad . En otros ejemplos, la sustitución con isótopos, tales como 2H , puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas q ue resultan de la mayor estabi lidad metabólica, tal como una mayor vida media in vivo o requerimientos de dosificación reducida. Las variaciones isotópicas de los compuestos de la invención o de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se pueden preparar en términos generales mediante los procedimientos convencionales utilizando las variaciones isotópicas apropiadas de los reactivos adecuados.

Descripción de las Modalidades Preferidas La presente invención se refiere al descubrimiento de los compuestos de la fórmula I capaces de in hibir la interacción entre BCL-2 y BH3. En una modalidad , con respecto a los compuestos de la fórmula I , están los compuestos de la fórmula la: en donde: L se selecciona a partir de -OCH2C(0)-, -OCH2C(0)0-, -O- y -0C H2C(O)N I-K y R5 se selecciona a partir de hidrógeno, metilo, etilo, fenilo y bencilo; en donde el fenilo o bencilo están insustituidos o sustituidos con halógeno.

En una modalidad adicional, se proporcionan los compuestos seleccionados a partir de: Farmacología v Utilidad La presente invención pone a disposición métodos y compuestos capaces de inhibir la interacción entre BCL-2 y las proteínas que contienen un dominio BH3. Un aspecto de la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de un trastorno mediado por BCL-2, el cual comprende el paso de administrar a un paciente que lo necesite, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I como se define en la Breve Descripción de la Invención.

Se ha demostrado que los inhibidores de BCL-2 son activos contra un número de líneas celulares de cáncer como un solo agente, incluyendo, pero no limitándose a, cáncer de mama (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 2003/0119894, Solicitudes Internacionales del TCP Publicadas Números WO 02/ 097053 y WO 02/13833), linfomas (Nature (2005) 435, 677-681), cáncer pulmonar microcelular (Nature (2005) 435, 677-681), cáncer de cabeza y cuello (Solicitud Internacional del TCP Publicada Número WO 02/097053), y leucemias (Solicitud Internacional del TCP Publicada Número WO 02/13833).

BCL-2 se identificó originalmente en el punto de rompimiento cromosómico de los linfomas de células-B portadores de t(14;18), y pertenece a una familia creciente de proteínas, las cuales regulan la apoptosis. (Gross, A; McDonnell, JM; Korsmeyer, S. J. BCL-2 family members and the mitochondria in apoptosis. Genes & Development 1999, 13, 1899-1911, Cory, S.; Huang, D.C.S.; Adams, J.M. The BCL-2 family: roles in cell survival and oncogenesis. Oncogene, 2003 22, 8590-8607. Danial, N.N.; Korsmeyer, S. J. Cell death: Critical control points. Cell 2004, 116, 205-218. Chao, D. T.; Korsmeyer, S. J. BCL-2 family: regulators of cell death. Annu. Rev. Immunol. 1998, 16, 395-419. Apoptosis, Christopher Potten, James Wilson, Cambridge University Press, 2004). La familia de proteínas BCL-2 incluye tanto las moléculas anti-apoptóticas, tales como BCL-2 y BCL-XL, como las moléculas pro-apoptóticas, tales como BAX, BAK, BID y BAD. BCL-2 contribuye al progreso de las células de cáncer al impedir la rotación celular normal causada por los mecanismos fisiológicos de la muerte celular. Se ha observado una sobre-expresión de BCL-2 en el 70 por ciento del cáncer de mama y en muchas otras formas de cáncer (Buolaniwini, J. K. Novel anticancer drug discovery. Curr. Opin. Chem. Biol. 1999, 3, 500-509). Los niveles de expresión de las proteínas BCL-2 también se correlacionan con la resistencia a un amplio espectro de fármacos quimioterapéuticos y terapia de radiación-? (Reed, J. C; Miyashita, T.; Takayama, S.; Wang, H.-G.; Sato, T.; Krajewski, S.; Aime-Sempe, C; Bodrug, S.; Kitada, S.; Hanada, M. BCL-2 family proteins: Regulators of cell-death involved in the pathogenesis of cáncer and resistance to therapy. J. Cell. Biochem. 1996, 60, 23-32; Reed, J. C. BCL-2 family proteins: strategies for overcoming chemoresistance in cáncer. Advances in Pharmocology 1997, 41, 501-553; Strasser, A.; Huang, D. C. S.; Vaux, D. L. The role of the BCL-2/ced-9 gene family in cáncer and general implications of defects in cell death control for tumorigenesis and resistance to chemotherapy. Biochem. Biophys. Acta 1997,1333, F151-F189; DiPaola, R. S.; Aisner, J. Overcoming BCL-2- and p53-mediated resistance in prostate cáncer. Semin. Oncol. 1999, 26, 112-116).

Los miembros de la familia de proteínas BCL-2 representan reguladores clave de la apoptosis, con una función pro-apoptótica (por ejemplo, BAX, BAK, BID, BIM, NOXA, PUMA), y anti-apoptótica (por ejemplo, BCL-2, BCL-XL, MCL-1). La dimerización selectiva y competitiva entre los miembros pro- y anti-apoptóticos de la familia determina el destino de una célula a la que se da un estímulo pro-apoptótico. Aunque no se entienden completamente las funciones precisas de BCL-2 y BCL-XL en el cáncer, existen varias líneas de evidencia que sugieren que BCL-2 y BCL-XL no solamente contribuyen al progreso del cáncer al impedir la rotación celular normal, sino que también tienen una función en la resistencia de las células de cáncer a los tratamientos actuales para el cáncer. La sobre-expresión experimental de BCL-2 (BCL-XL) hace que las células de cáncer sean resistentes a un amplio espectro de agentes quimioterapéuticos y radiación (BCL-2 family proteins: Regulators of cell-death involved in the pathogenesis of cáncer and resistance to therapy. J. Cell. Biochem. 1996, 60, 23-32; Reed, J. C). BCL-2 y/o BCL-XL se sobre-expresan en más del 50 por ciento de todos los tumores, como se muestra más adelante (a partir de Wang, S.; Yang, D.; Lippman, .E. Targeting BCL-2 and BCL-XL with nonpeptidic small-molecule antagonists. Seminars in Oncology, 2003, 5, 133-142).

Se ha demostrado que los planteamientos biológicos para modular la función de BCL-2 utilizando oligonucleótidos anti-sentido o anticuerpos de una sola cadena mejoran la quimiosensibilidad de las células tumorales (Ziegler, A.; Luedke, G. H.; Fabbro, D.; Altmann, K. H.; Stahel, R. A.; Zangemeister-Wittke, U. Induction of apoptosis in small-cell lung cáncer cells by an antisense oligodeoxynucleotide targeting the BCL-2 coding sequence. J. Nati. Cáncer. Inst. 1997, 89, 1027-1036; Webb, A.; Cunningham, D.; Cotter, F.; Clarke, P. A.; Di Stefano, F.; Ross, P.; Corpo, M.; Dziewanowska, Z. BCL-2 antisense therapy in patients with non-hodgkin lymphoma. Lancet 1997, 349, 1137-1141; Cotter, F. E. Phase I clinical and pharmacokinetic study of BCL-2 antisense oligonucleotide therapy in patients with non-hodgkin's lymphoma. J.

Clin. Oncol. 2000, 18, 1812-1823; Piche, A.; Grim, J.; Rancourt, C; Gómez-Navarro, J.¡ Reed, J. C; Curiel, D. T. Modulation of BCL-2 protein levéis by an intracellular anti- BCL-2 single-chaln antlbody increases drug-induced cytotoxicity in the breast cáncer cell line MCF-7. Cáncer Res. 1998, 58, 2134-2140).

Se ha demostrado que un oligonucleótido anti-sentido (G3139) (Raynaud, F. I.; Orr, R. M.; Goddard, P. M.; Lacey, H. A.; Lancashire, H.; Judson, I. R.; Beck, T.; Bryan, B.; Cotter, F. E. Pharmacokinetics of G3139, a phosphorothioate oligodeoxynucleotide antisense to BCL-2, after intravenous administration or continuous subcutaneous infusión to mlce. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997, 281, 420-427), diseñado para hibridarse a la secuencia en el ARNm de BCL-2, inhibe la expresión de BCL-2, induce la apoptosis, e inhibe el crecimiento celular en las células de cáncer de mama humanas que tienen una sobre-expresión de Bcl-2 (Chen, H. X., Marchall, J. L., Trocky, N., Baidas, S., Rizvi, N., Ling, Y., Bhagava, P., Lippman, M. E., Yang, D., y Hayes, D. F. A Phase I study of BCL-2 antisense G3139 (Genta) and weekly docetaxel in patients with advanced breast cáncer and other solid tumors. Proceedings of American Society of Clinical Oncology, 2000). Es importante que se observaron efectos sinérgicos y la regresión completa del tumor in vivo en los tratamientos combinados de G3139 con docetaxel. Por consiguiente, BCL-2 representa un objetivo altamente atractivo para el desarrollo de una terapia novedosa para el tratamiento de muchas formas de cánceres.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el trastorno mediado por BCL-2 mencionado es cáncer.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el cáncer mencionado se selecciona a partir del grupo que consiste en leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica, eritroleucemia, leucemia crónica, leucemia mielocítica (granulocítica) crónica, leucemia linfocítica crónica, policitemia Vera, enfermedad de Hodgkin, enfermedad no de Hodgkin; mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de cadena pesada, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcom a, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células básales, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, estadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, cáncer cervical, cáncer uterino, tumor testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma pulmonar microcelular, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, y cáncer endometrial.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el cáncer mencionado es linfoma folicular, linfoma de células-B grandes difuso, linfoma de células de manto, leucemia linfocítica crónica, cáncer de próstata, cáncer de mama, neuroblastoma, cáncer colo-rectal, endometrial, de ovario, de pulmón, carcinoma hepatocelular, mielorna múltiple, cáncer de cabeza y cuello o testicular.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el cáncer mencionado sobre-expresa BCL-2.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el cáncer mencionado es dependiente de BCL-2 para el crecimiento y la sobrevivencia.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el compuesto mencionado se administra parenteralmente.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el compuesto mencionado se administra intramuscularmente, intravenosamente, subcutáneamente, oralmente, pulmonarmente, intratecalmente, tópicamente o intranasalmente.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el compuesto mencionado se administra sistémicamente.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el paciente es un mamífero.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el paciente es un primate.

En ciertas modalidades, la presente invención se refiere al método anteriormente mencionado, en donde el paciente es un ser humano.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de un trastorno mediado por Bel, el cual comprende el paso de: administrar a un paciente que lo necesite, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente quimioterapéutico en combinación con una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I como se define en la Breve Descripción de la Invención.

Composiciones Farmacéuticas En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos descritos anteriormente, formulados junto con uno o más vehículos (aditivos) y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Como se describe con detalle más adelante, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden formular especialmente para su administración en una forma sólida o líquida, incluyendo aquéllas adaptadas para las siguientes: (1) administración oral, por ejemplo, líquidos (soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), tabletas, por ejemplo, aquéllas dirigidas para absorción bucal, sublingual y sistémica, bolos, polvos, gránulos, pastas para su aplicación a la lengua; (2) administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o epidural como, por ejemplo, una solución o suspensión estéril, o una formulación de liberación sostenida; (3) aplicación tópica, por ejemplo, como una crema, ungüento, o un parche de liberación controlada o aspersión aplicada a la piel; (4) intravaginalmente, o intra-rectalmente, por ejemplo, como un pesario, crema o espuma; (5) sublingualmente; (6) ocularmente; (7) transdérmicamente; (8) nasalmente; (9) pulmonar; o (10) intratecalmente.

La frase "cantidad terapéuticamente efectiva", como se utiliza en la presente, significa la cantidad de un compuesto, material, o una composición, la cual comprende un compuesto de la presente invención, el cual es efectivo para producir algún efecto terapéutico deseado en cuando menos una sub-población de células en un animal, en una proporción razonable de beneficio/riesgo aplicable a cualquier tratamiento médico.

La frase "farmacéuticamente aceptable" se emplea en la presente para referirse a los compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosificación que, dentro del alcance de un buen juicio médico, son adecuados para utilizarse en contacto con los tejidos de los seres humanos y animales sin una excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, de una manera conmensurada con una proporción razonable de beneficio/riesgo.

La frase "vehículo farmacéuticamente aceptable", como se utiliza en la presente, significa un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un relleno, diluyente, excipiente, auxiliar de manufactura, líquido o sólido (por ejemplo, lubricante, talco, magnesio, calcio o estearato de zinc, o ácido esteárico), o un material encapsulador de solvente, involucrado en la portación o el transporte del compuesto objeto desde un órgano, o porción del cuerpo, hasta otro órgano, o porción del cuerpo. Cada vehículo debe ser "aceptable" en el sentido de que sea compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial para el paciente lastimado. Algunos ejemplos de los materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz y almidón de papa; (3) celulosa, y sus derivados, tales como carboxi-metil-celulosa de sodio, etil-celulosa y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (9) aceites, tales como un aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de azafrán, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de semilla de soya; (10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietileng licol ; (12) ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes reguladores, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (15) ácido algínico; (16) agua sin pirógeno; (17) solución salina isotónica; (18) solución de Ringer; (19) alcohol etílico; (20) soluciones reguladoras del pH; (21) poliésteres, policarbonatos y/o polianhídridos; y (22) otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en las formulaciones farmacéuticas.

Como se estipula anteriormente, ciertas modalidades de los presentes compuestos pueden contener un grupo funcional básico, tal como amino, o alquil-amino, y, por consiguiente, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos farmacéuticamente aceptables. El término "sales farmacéuticamente aceptables" con respecto a esto, se refiere a las sales de adición de ácido inorgánicas y orgánicas relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Estas sales se pueden preparar in situ en el vehículo de administración o en el proceso de elaboración de la forma de dosificación, o haciendo reaccionar por separado un compuesto purificado de la invención en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado, y aislando la sal formada de esta manera durante la purificación subsiguiente. Las sales representativas incluyen las sales de bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato, y lauril-sulfonato, y similares. (Véase, por ejemplo, Berge y colaboradores (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci.66: 1-19).

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos objeto incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario de los compuestos, por ejemplo, a partir de los ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos. Por ejemplo, estas sales no tóxicas convencionales incluyen aquéllas derivadas a partir de ácidos inorgánicos, tales como clorhidrato, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico, y similares; y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos, tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, palmítico, maleico, hidroximaleico, fenil-acético, glutámico, benzoico, salicíclico, sulfanílico, 2-acetoxi-benzoico, fumárico, toluen-sulfónico, metan-sulfónico, etan-disulfónico, oxálico, isotiónico, y similares.

En otros casos, los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más grupos ácidos funcionales y, por consiguiente, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con bases farmacéuticamente aceptables. El término "sales farmacéuticamente aceptables" en estas instancias se refiere a las sales de adición de base inorgánicas y orgánicas relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Estas sales se pueden preparar de la misma manera in situ en el vehículo de administración o en el proceso de elaboración de la forma de dosificación, o mediante la reacción por separado del compuesto purificado en su forma de ácido libre con una base adecuada, tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión de metal farmacéuticamente aceptable, con amoníaco, o con una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria farmacéuticamente aceptable. Las sales alcalinas o alcalinotérreas representativas incluyen las sales de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, y aluminio, y similares. Las aminas orgánicas representativas útiles para la formación de las sales de adición de base incluyen etil-amina, dietil-amina, etilen-diamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, y similares. (Véase, por ejemplo, Berge y colaboradores, supra) También pueden estar presentes en las composiciones los agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como lauril-sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como los agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes, conservadores y antioxidantes.

Los ejemplos de los antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio, y similares; (2) antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxi-tolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y (3) agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilen-diamina-tetra-acético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, y similares.

Las formulaciones de la presente invención incluyen aquéllas adecuadas para administración oral, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones se pueden presentar, de una manera conveniente, en una forma de dosificación unitaria, y se pueden preparar mediante cualesquiera métodos bien conocidos en la materia de la farmacia. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una sola forma de dosificación variará dependiendo del huésped que sea tratado y del modo particular de administración. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una sola forma de dosificación, en términos generales, será la cantidad del compuesto que produzca un efecto terapéutico. En términos generales, del cien por ciento, esta cantidad estará en el intervalo de aproximadamente el 0.1 por ciento a aproximadamente el noventa y nueve por ciento de ingrediente activo, de preferencia de aproximadamente el 5 por ciento a aproximadamente el 70 por ciento, más preferiblemente de aproximadamente el 10 por ciento a aproximadamente el 30 por ciento.

En ciertas modalidades, una formulación de la presente invención comprende un excipiente seleccionado a partir del grupo que consiste en ciclodextrinas, celulosas, liposomas, agentes formadores de micelios, por ejemplo, ácidos biliares, y vehículos poliméricos, por ejemplo, poliésteres y polianhídridos; y un compuesto de la presente invención. En ciertas modalidades, una formulación anteriormente mencionada hace que un compuesto de la presente invención sea oralmente biodisponible.

Los métodos para la preparación de estas formulaciones o composiciones incluyen el paso de poner en asociación un compuesto de la presente invención con el vehículo y, opcionalmente, uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociación de una manera uniforme e íntima un compuesto de la presente invención con los vehículos líquidos, o con los vehículos sólidos finamente divididos, o con ambos, y entonces, si es necesario, se configura el producto.

Las formulaciones de la invención adecuadas para su administración oral pueden estar en la forma de cápsulas, pastillas, pildoras, tabletas, grageas (utilizando una base saborizada, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto), polvos, gránulos, o como una solución, suspensión o dispersión sólida en un líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite, o como un elíxir o jarabe, o como pastillas (utilizando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia) y/o como enjuagues bucales y similares, cada uno conteniendo una cantidad previamente determinada de un compuesto de la presente invención, como un ingrediente activo. Un compuesto de la presente invención también se puede administrar como un bolo, electuario o pasta.

En las formas de dosificación sólidas de la invención, para su administración oral (cápsulas, tabletas, pildoras, grageas, polvos, granulos, trociscos, y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o difosfato de calcio, y/o cualquiera de los siguientes: (1) rellenos o extensores, tal como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y/o ácido silícico; (2) aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboxi-metil-celulosa, alginatos, gelatina, polivinil-pirrolidona, sacarosa y/o acacia; (3) humectantes, tales como glicerol; (4) agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o de tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos, y carbonato de sodio; (5) agentes retardantes de solución, tales como parafina; (6) aceleradores de absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario, y tensoactivos, tales como poloxámero y lauril-sulfato de sodio; (7) agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico, monoestearato de glicerol, y tensoactivos no iónicos; (8) absorbentes, tales como caolín y arcilla de bentonita; (9) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril-sulfato de sodio, estearato de zinc, estearato de sodio, ácido esteárico, y mezclas de los mismos; (10) agentes colorantes; y (11) agentes de liberación controlada, tales como crospovidona o etil-celulosa. En el caso de las cápsulas, tabletas y pildoras, las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes reguladores. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como rellenos en las cápsulas de gelatina de cubierta blanda y dura utilizando excipientes tales como lactosa o azúcares de leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular, y similares.

Una tableta se puede hacer mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes auxiliares. Las tabletas comprimidas se pueden preparar utilizando un aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxi-metil-celulosa), diluyente inerte, conservador, desintegrante (por ejemplo, glicolato de almidón de sodio o carboxi-metil-celulosa de sodio reticulada), agente de actividad superficial o de dispersión. Las tabletas moldeadas se pueden hacer mediante el moldeo, en una máquina adecuada, de una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.

Las tabletas, y otras formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas de la presente invención, tales como grageas, cápsulas, pildoras, y gránulos, opcionalmente se pueden marcar o preparar con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos hemisféricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. También se pueden formular para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo en las mismas, utilizando, por ejemplo, hidroxi-propil-metil-celulosa en diferentes proporciones para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Se pueden formular para liberación rápida, por ejemplo, se pueden secar por congelación. Se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias, o mediante la incorporación de agentes esterilizantes en la forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver en agua estéril, o en algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de usarse. Estas composiciones también pueden contener opcionalmente agentes opacificantes, y pueden ser de una composición tal que liberen los ingredientes activos solamente, o preferencialmente, en cierta porción del tracto gastrointestinal, opcionalmente en una forma retardada. Los ejemplos de las composiciones de empotramiento que se pueden utilizar incluyen sustancias poliméricas y ceras. El ingrediente activo también puede estar en una forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o más excipientes anteriormente descritos.

Las formas de dosificación líquidas para administración oral de los compuestos de la invención incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes, y elíxires farmacéuticamente aceptables. En adición al ingrediente activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente utilizados en este campo, tales como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilen-glicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, de cacahuate, de maíz, de germen, de oliva, de ricino, y de ajonjolí), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilen-glicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán, y mezclas de los mismos.

Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes, colorantes, perfumantes, y conservadores.

Las suspensiones, en adición a los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión, como por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, ésteres de sorbitol y de sorbitán de polioxietileno, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, ágar-ágar, y tragacanto, y mezclas de los mismos.

Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas de la invención para administración rectal o vaginal se pueden presentar como un supositorio, el cual se puede preparar mediante la mezcla de uno o más compuestos de la invención con uno o más excipientes o vehículos no irritantes adecuados que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilen-glicol, una cera para supositorios o un salicilato, y que sean sólidos a temperatura ambiente, pero líquidos a la temperatura corporal, y por consiguiente, que se fundan en el recto o en la cavidad vaginal y liberen el compuesto activo.

Las formulaciones de la presente invención que son adecuadas para administración vaginal también incluyen pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas, o formulaciones en aerosol que contengan los vehículos que son conocidos en la materia como apropiados.

Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen polvos, aerosoles, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches, e inhalantes. El compuesto activo se puede mezclar bajo condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y con cualesquiera conservadores, reguladores del pH, o propelentes que se puedan requerir.

Los ungüentos, pastas, cremas, y geles pueden contener, en adición a un compuesto activo de esta invención, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilen-glicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco, y óxido de zinc, o mezclas de los mismos.

Los polvos y aerosoles pueden contener, en adición a un compuesto de esta invención, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Los aerosoles pueden contener adicionalmente los propelentes acostumbrados, tales como cloro-fluoro-hidrocarburos, e hidrocarburos insustituidos volátiles, tales como butano y propano.

Los parches transdérmicos tienen la ventaja adicional de proporcionar un suministro controlado de un compuesto de la presente invención al cuerpo. Estas formas de dosificación se pueden hacer mediante la disolución o dispersión del compuesto en el medio apropiado. También se pueden utilizar potenciadores de absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad de este flujo se puede controlar ya sea proporcionando una membrana de control de velocidad, o bien dispersando el compuesto activo en una matriz polimérica o en un gel.

Las formulaciones oftálmicas, los ungüentos, los polvos, soluciones, y similares, también se contemplan dentro del alcance de esta invención.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención adecuadas para administración parenteral comprenden uno o más compuestos de la invención en combinación con una o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotónicas estériles farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles que se puedan reconstituir hasta soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de usarse, las cuales pueden contener azúcares, alcoholes, antioxidantes, reguladores del pH, bacteriostáticos , solutos que hagan a la formulación isotónica con la sangre del receptor pretendido, o agentes de suspensión o espesantes.

Los ejemplos de los vehículos acuosos y no acuosos adecuados que se pueden emplear en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. Se puede mantener la fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de las dispersiones, y mediante el uso de tensoactivos.

Estas composiciones también pueden contener adyuvantes, tales como conservadores, agentes humectantes, agentes emulsionantes, y agentes de dispersión. Se puede asegurar la prevención de la acción de los microorganismos sobre los presentes compuestos mediante la inclusión de diferentes agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, cloro-butanol, ácido sórbico de fenol, y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio, y similares, en las composiciones. En adición, se puede provocar una absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable mediante la inclusión de agentes que demoren la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina.

En algunos casos, con el objeto de prolongar el efecto de un fármaco, es deseable hacer más lenta la absorción del fármaco a partir de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede llevar a cabo mediante el uso de una suspensión líquida de un material cristalino o amorfo que tenga una pobre solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende entonces de su velocidad de disolución, la cual, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. De una manera alternativa, se lleva a cabo la absorción demorada de una forma de fármaco parenteralmente administrada mediante la disolución o suspensión del fármaco en un vehículo oleoso.

Las formas de depósito inyectable se hacen mediante la formación de matrices microencapsuladas de los presentes compuestos en polímeros biodegradables, tales como poliláctido-poliglicólido. Dependiendo de la proporción del fármaco al polímero, y de la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli-(orto-ésteres) y poli-(anhídridos). Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan mediante el atrape del fármaco en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con el tejido corporal.

Cuando los compuestos de la presente invención se administran como productos farmacéuticos a seres humanos y animales, se pueden dar por sí mismos o como una composición farmacéutica que contenga, por ejemplo, del 0.1 al 99 por ciento (más preferiblemente, del 10 al 30 por ciento) del ingrediente activo en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las preparaciones de la presente invención se pueden dar oralmente, parenteralmente, tópicamente, o rectalmente. Desde luego, se dan en las formas adecuadas para cada vía de administración. Por ejemplo, se administran en tabletas o en la forma de cápsulas, mediante inyección, inhalación, loción para los ojos, ungüento, supositorio, etc., administración mediante inyección, infusión o inhalación; administración tópica mediante loción o ungüento; y administración rectal mediante supositorios. Se prefiere la administración oral.

Las frases "administración parenteral" y "administrado parenteralmente", como se utilizan en la presente, significan los modos de administración diferentes de la administración enteral y tópica, usualmente mediante inyección, e incluyen, sin limitación, la inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, e intraesternal.

Las frases "administración sistémica", "administrado sistémicamente", "administración periférica", y "administrado periféricamente", como se utilizan en la presente, significan la administración de un compuesto, fármaco, u otro material, diferente de hacerlo directamente en el sistema nervioso central, de tal manera que entre al sistema del paciente y, por lo tanto, se someta al metabolismo y a otros procesos similares, por ejemplo, la administración subcutánea.

Estos compuestos se pueden administrar a seres humanos y a otros animales para terapia mediante cualquier vía de administración adecuada, incluyendo oralmente, nasalmente, como por ejemplo, mediante un aerosol, rectalmente, intravaginalmente, parenteralmente, intracisternalmente, y tópicamente, mediante polvos, ungüentos o gotas, incluyendo bucalmente y subllngualmente.

Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, los cuales se pueden utilizar en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables mediante los métodos convencionales conocidos por los expertos en este campo.

Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden variar para obtener una cantidad del ingrediente activo que sea efectiva para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición, y modo de administración particulares, sin que sean tóxicos para el paciente.

El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto particular de la presente invención empleado, o del éster, sal, o amida del mismo, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción o el metabolismo del compuesto particular empleado, la velocidad y el grado de absorción, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos, y/o materiales utilizados en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, el sexo, el peso, la condición, la salud general y la historia médica previa del paciente que se esté tratando, y factores similares bien conocidos en el ámbito médico.

Un médico o veterinario que tenga una experiencia ordinaria en la materia puede determinar fácilmente y prescribir la cantidad efectiva de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario podría iniciar con dosis de los compuestos de la invención empleados en la composición farmacéutica en niveles más bajos que los requeridos, con el objeto de lograr el efecto terapéutico deseado, y aumentar gradualmente la dosificación hasta que se logre el efecto deseado.

En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será la cantidad del compuesto que sea la dosis más baja efectiva para producir un efecto terapéutico. Esta dosis efectiva dependerá en general de los factores descritos anteriormente. En términos generales, las dosis oral, intravenosa, intracerebro-ventricular y subcutánea de los compuestos de esta invención para un paciente, cuando se utilicen para los efectos analgésicos indicados, estarán en el intervalo de aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 100 miligramos por kilogramo de peso corporal al día.

Si se desea, la dosis diaria efectiva del compuesto activo se puede administrar como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más sub-dosis administradas por separado a intervalos apropiados a través de todo el día, opcionalmente, en formas de dosificación unitaria.

La dosificación preferida es una administración al día.

Aunque es posible que un compuesto de la presente invención se administre solo, es preferible administrar el compuesto como una formulación (composición) farmacéutica.

Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden formular para su administración en cualquier forma conveniente para utilizarse en medicina humana o veterinaria, por analogía con otros productos farmacéuticos.

En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los presentes compuestos, como se describe anteriormente, formulados junto con uno o más vehículos (aditivos) y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Como se describe con detalle más adelante, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden formular especialmente para su administración en forma sólida o líquida, incluyendo aquéllas adaptadas para las siguientes: (1) administración oral, por ejemplo, líquidos (soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), tabletas, bolos, polvos, gránulos, pastas para su aplicación a la lengua; (2) administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa como, por ejemplo, una solución o suspensión estéril; (3) aplicación tópica, por ejemplo, como una crema, ungüento o aspersión aplicada a la piel, pulmones, o membranas mucosas; o (4) intravaginalmente o intra-rectalmente, por ejemplo, como un pesario, crema o espuma; (5) sublingualmente o bucalmente; (6) ocularamente; (7) transdérmicamente; u (8) nasalmente.

El término "tratamiento" pretende abarcar también la profilaxis, terapia y curación.

El paciente que reciba este tratamiento es cualquier animal que lo necesite, incluyendo primates, en particular, los seres humanos, y otros mamíferos, tales como equinos, reses, cerdos y ovejas; y aves de corral y mascotas en general.

El compuesto de la invención se puede administrar como tal o en mezclas con vehículos farmacéuticamente aceptables y también se puede administrar en conjunto con agentes antimicrobianos, tales como penicilinas, cefalosporinas, aminoglicósidos y glicopéptidos. La terapia conjunta, por consiguiente, incluye la administración en secuencia, simultánea y separada del compuesto activo de una manera en que no desaparezcan enteramente los efectos terapéuticos del primer compuesto administrado cuando se administre el siguiente.

La tecnología de microemulsión puede mejorar la biodisponibilidad de algunos agentes farmacéuticos lipofílicos (insolubles en agua). Los ejemplos incluyen Trimetrina (Dordunoo, S. K. y colaboradores, Drug Development and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991 y REV 5901 (Sheen, P. C, y colaboradores, J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991). Entre otras cosas, la microemulsión proporciona una mejor biodisponibilidad al dirigir preferencialmente la absorción hacia el sistema linfático en lugar del sistema circulatorio, desviándose de esta manera del hígado, y previniendo la destrucción de los compuestos en la circulación hepatobiliar.

Aunque se contemplan todos los vehículos anfifílicos adecuados, los vehículos actualmente preferidos son en términos generales aquéllos que tengan el estado de generalmente reconocidos como seguros (GRAS), y que puedan tanto solubilizar el compuesto de la presente invención como microemulsionarlo en una etapa posterior cuando la solución entre en contacto con una fase de agua compleja (tal como una encontrada en el tracto gastro-intestinal humano). Usualmente, los ingredientes anfifllicos que satisfacen estos requerimientos tienen valores de HLB (balance hidrofílico a lipofílico) de 2 a 20, y sus estructuras contienen radicales alifáticos de cadena recta en el intervalo de 6 a 20 átomos de carbono. Los ejemplos son los glicéridos grasos polietilenglicolizados y los polietilenglicoles.

Se contemplan en particular los vehículos anfifílicos comercialmente disponibles, incluyendo la serie Gelucire, Labrafil, Labrasol, o Lauroglicol (todos elaborados y distribuidos por Gattefosse Corporation, Saint Priest, Francia), mono-oleato de PEG, di-oleato de PEG, mono-laurato y di-laurato de PEG, Lecitina, Polisorbato 80, etc. (producidos y distribuidos por un número de compañías en EUA y en todo el mundo).

Los polímeros hidrofílicos adecuados para utilizarse en la presente invención son aquéllos que sean fácilmente solubles en agua, que se puedan unir de una manera covalente a un lípido formador de vesículas, y que sea tolerados in vivo sin efectos tóxicos (es decir, que sean biocompatibles). Los polímeros adecuados incluyen polietiienglicol (PEG), ácido poliláctico (también denominado como poliláctido), ácido poliglicólico (también denominado como poliglicólido), un copolímero de ácido poliláctico-pottg Eicólico , y poli-alcohol vinílico. Los polímeros preferidos son aquéllos que tienen un peso molecular de aproximadamente 100 ó 120 dáltones hasta aproximadamente 5,000 ó 10,000 dáltones, y de una manera más preferible de aproximadamente 300 dáltones a aproximadamente 5,000 dáltones. En una modalidad particularmente preferida, el polímero es polietilenglicol que tiene un peso molecular de aproximadamente 100 a aproximadamente 5,000 dáltones, y de una manera más preferible que tiene un peso molecular de aproximadamente 300 a aproximadamente 5,000 dáltones. En una modalidad particularmente preferida, el polímero es polietilenglicol de 750 dáltones (PEG(750)). Los polímeros también se pueden definir por el número de monómeros en los mismos; una modalidad preferida de la presente invención utiliza polímeros de cuando menos aproximadamente 3 monómeros, tales como polímeros de PEG consistentes en tres monómeros (de aproximadamente 150 dáltones).

Otros polímeros hidrofílicos que pueden ser adecuados para utilizarse en la presente invención incluyen polivinil-pirrolidona, poli-metoxazolina, poli-etil-oxazolina, poli-hidroxi-propil-metacrilamida, poli-metacrilamida, poli-dimetil-acrilamida, y las celulosas derivadas, tales como hidroxi-metil-celulosa o hidroxi-etil-celulosa.

En ciertas modalidades, la formulación de la presente invención comprende un polímero biocompatible seleccionado a partir del grupo que consiste en poliamidas, policarbonatos, polialquilenos, polímeros de ésteres acrílicos y metacríMcos, polímeros de p o I i vi n i lo , poliglicólidos, polisiloxanos, poliuretanos y copolímeros de los mismos, celulosas, polipropileno, polietilenos, poliestireno, polímeros de ácido láctico y ácido glicólico, polianhídridos, poli(orto)ésteres, poli(ácido butílico), poli-(ácido valérico), poli-(láctido-co-caprolactona), polisacáridos, proteínas, poli-ácidos hialurónicos, poli-ciano-acrilatos, y mezclas o copolímeros de los mismos.

Las ciclodextrinas son oligosacáridos cíclicos, consistentes en 6, 7, u 8 unidades de glucosa, designadas por las letras griegas alfa, beta, o gamma, respectivamente. No se sabe que existan ciclodextrinas con menos de 6 unidades de glucosa. Las unidades de glucosa están enlazadas mediante enlaces alfa-1 ,4-glucosídicos. Como una consecuencia de la conformación de la cadena de las unidades de azúcar, todos los grupos hidroxilo secundario (en C-2, C-3) se localizan sobre un lado del anillo, mientras que todos los grupos hidroxilo primario en C-6 están situados sobre el otro lado. Como un resultado, las caras externas son hidrofílicas, haciendo que las ciclodextrinas sean solubles en agua. En contraste, las cavidades de las ciclodextrinas son hidrofóbicas, debido a que están revestidas por el hidrógeno de los átomos C-3 y C-5, y por los oxígenos tipo éter. Estas matrices permiten formar complejos con una variedad de compuestos relativamente hidrofóbicos, incluyendo, por ejemplo, compuestos esteroideos, tales como 17.beta-estradiol (ver, pro ejemplo, van Uden y colaboradores, Plant Cell Tiss. Org. Cult. 38:1- 3-113 (1994)). La formación de complejo tiene lugar mediante interacciones de Van der Waals, y mediante la formación del enlace de hidrógeno. Para una revisión general de la química de las ciclodextrinas, ver Wenz, Agnew. Chem. Int. Ed. Engl., 33:803-822 (1994).

Las propiedades fisicoquímicas de los derivados de ciclodextrina dependen mucho de la clase y del grado de sustitución. Por ejemplo, su solubilidad en agua está en el intervalo desde insoluble (por ejemplo, triacetil-beta-ciclodextrina) hasta 147 por ciento soluble (peso/volumen) (G-2-beta-ciclodextrina). En adición, son solubles en muchos solventes orgánicos. Las propiedades de las ciclodextrinas hacen posible controlar la solubilidad de diferentes componentes de la formulación mediante el aumento o la disminución de su solubilidad.

Se han descrito numerosas ciclodextrinas y los métodos para su preparación. Por ejemplo, Parmeter (I) y colaboradores (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 3,453,259), y Gramera y colaboradores (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 3,459,731), describieron las ciclodextrinas electroneutras. Otros derivados incluyen las ciclodextrinas con propiedades catiónicas [Parmeter (II), Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 3,453,257], las ciclodextrinas reticuladas insolubles (Sohms, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 3,420,788), y las ciclodextrina con propiedades aniónicas [Parmeter (III), Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 3,426,011]. Entre los derivados de ciclodextrina con propiedades aniónicas, se han adjuntado a la ciclodextrina progenitora los ácidos carboxílicos, ácidos fosforosos, ácidos fosfinosos, ácidos fosfónicos, ácidos fosfóricos, ácidos tiofosfónicos, ácidos tiosulfínicos, y ácidos sulfónicos [ver Parmeter (III), supra]. Adicionalmente, los derivados de sulfoalquil-éter-ciclodextrina han sido descritos por Stella y colaboradores (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,134,217).

Los liposomas consisten en cuando menos una membrana de bicapa de lípido que encierra a un compartimiento interno acuoso. Los liposomas se pueden caracterizar por el tipo de membrana y por el tamaño. Las vesículas unilamelares pequeñas (SUVs) tienen una sola membrana, y típicamente están en el intervalo de entre 0.02 y 0.05 mieras de diámetro; las vesículas unilamelares grandes (LUVs) son típicamente mayores de 0.05 mieras. Las vesículas grandes oligolamelares y las vesículas multilamelares tienen múltiples capas de membrana, normalmente concéntricas, y son típicamente mayores de 0.1 mieras. Los liposomas con varias membranas no concéntricas, es decir, varias vesículas más pequeñas contenidas dentro de una vesícula más grande, se denominan como vesículas multivesiculares.

Un aspecto de la presente invención se refiere a las formulaciones que comprenden liposomas, las cuales contienen un compuesto de la presente invención, en donde la membrana del liposoma se formula para proporcionar a un liposoma una mayor capacidad portadora. De una manera alternativa o en adición, el compuesto de la presente invención puede estar contenido dentro, o adsorbido sobre, la bicapa del liposoma. El compuesto de la presente invención se puede acumular con un tensoactivo de lípido, y puede ser portado dentro del espacio interno del liposoma; en estos casos, la membrana del liposoma se formula para resistir los efectos alteradores del agregado de agente activo-tensoactivo.

De acuerdo con una modalidad de la presente invención, la bicapa de lípido de un liposoma contiene lípidos derivados con polietilenglicol (PEG), de tal manera que la cadena de PEG se extiende desde la superficie interna de la bicapa de lípido hacia el espacio interno encapsulado por el liposoma, y se extiende desde el exterior de la bicapa de lípido hasta el medio ambiente circundante.

Los agentes activos contenidos dentro de los Iiposomas de la presente invención están en una forma solubilizada. Los agregados de tensoactivo y agente activo (tales como emulsiones o micelios que contengan al agente activo de interés) se pueden atrapar dentro del espacio interno de los Iiposomas de acuerdo con la presente invención. Un tensoactivo actúa para dispersar y solubilizar al agente activo, y se puede seleccionar a partir de cualquier tensoactivo alifático, cicloalifático o aromático adecuado, incluyendo, pero no limitándose a, las lisofosfatidil-colinas (LPCS) biocompatibles de diferentes longitudes de cadena (por ejemplo, de aproximadamente 14 átomos de carbono a aproximadamente 20 átomos de carbono). También se pueden utilizar lípidos derivados de polímero, tales como lípidos de PEG, para la formación de los micelios, debido a que actuarán para inhibir la fusión del micelio/membrana, y debido a que la adición de un polímero a las moléculas de tensoactivo reduce la CMC del tensoactivo y ayuda a la formación del micelio. Se prefieren los tensoactivos con CMCs en el intervalo micromolar; se pueden utilizar tensoactivos con CMC más alta para preparar los micelios atrapados dentro de los liposomas de la presente invención; sin embargo, los monómeros del tensoactivo de micelios podrían afectar a la estabilidad de la bicapa del liposoma, y serían un factor en el diseño de un liposoma de una estabilidad deseada.

Los liposomas de conformidad con la presente invención se pueden preparar mediante cualquiera de una variedad de técnicas conocidas en este campo. Ver, por ejemplo, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 4,235,871; Solicitud del TCP Publicada Número WO 96/14057; New RRC, Liposomes: A practical approach, IRL Press, Oxford (1990), páginas 33-104; Lasic DD, Liposomes from physics to applications, Elsevier Science Publishers BV, Ámsterdam, 1993.

Por ejemplo, los liposomas de la presente invención se pueden preparar mediante la difusión de un lípido derivado con un polímero hid rofílico en los liposomas preformados, tal como mediante la exposición de los liposomas preformados a los micelios compuestos de polímeros injertados con lípido, en concentraciones de lípido correspondientes al porcentaje molar final del lípido derivado que se desee en el liposoma. También se pueden formar liposomas que contengan un polímero hidrofílico mediante homogeneización, hidratación de campo de lípido, o técnicas de extrusión, como se conocen en este campo.

En un aspecto de la presente invención, los liposomas se preparan para tener tamaños sustancialmente homogéneos en un intervalo de tamaños seleccionado. Un método de dimensionamiento efectivo involucra extruir una suspensión acuosa de los liposomas a través de una serie de membranas de policarbonato que tengan un tamaño de poros uniforme seleccionado; el tamaño de poros de la membrana corresponderá aproximadamente con los tamaños más grandes de los liposomas producidos mediante la extrusión a través de esa membrana. Ver, por ejemplo, Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 4,737,323 (12 de abril de 1988).

Las características de liberación de una formulación de la presente invención dependen del material encapsulante, de la concentración del fármaco encapsulado, y de la presencia de modificadores de liberación. Por ejemplo, la liberación se puede manipular para ser dependiente del pH, por ejemplo utilizando un recubrimiento sensible al pH que se libere solamente en un bajo pH, como en el estómago, o en un pH más alto, como en el intestino. Se puede utilizar un recubrimiento entérico para evitar que ocurra la liberación hasta después de pasar a través del estómago. Se pueden utilizar múltiples recubrimientos o mezclas de cianamida encapsulada en diferentes materiales para obtener una liberación inicial en el estómago, seguida por una liberación posterior en el intestino. La liberación también se puede manipular mediante la inclusión de sales o agentes formadores de poros, los cuales pueden aumentar la absorción de agua o la liberación del fármaco mediante difusión desde la cápsula. También se pueden utilizar excipientes que modifiquen la solubilidad del fármaco para controlar la velocidad de liberación. También se pueden incorporar agentes que mejoren la degradación de la matriz o la liberación desde la matriz. Se pueden agregar al fármaco, se pueden agregar como una fase separada (es decir, como particulados), o se pueden co-disolver en la fase polimérica dependiendo del compuesto. En todos los casos, la cantidad debe ser de entre el 0.1 y el 30 por ciento (peso/peso de polímero). Los tipos de mejoradores de la degradación incluyen las sales inorgánicas, tales como sulfato de amonio y cloruro de amonio, los ácidos orgánicos tales como ácido cítrico, ácido benzoico, y ácido ascórbico; las bases inorgánicas tales como carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de calcio, carbonato de zinc, e hidróxido de zinc; y las bases orgánicas, tales como sulfato de protamina, espermina, colina, etanolamina, dietanolamina, y trietanolamina; y los tensoactivos, tales como Tween® y Pluronic®. Los agentes formadores de poros que agregan microestructura a las matrices (es decir, compuestos solubles en agua tales como sales inorgánicas y azúcares) se agregan como particulados. El intervalo debe estar entre el 1 y el 30 por ciento (peso/peso de polímero).

La absorción también se puede manipular mediante la alteración del tiempo de residencia de las partículas en el intestino. Esto se puede lograr, por ejemplo, recubriendo la partícula con, o seleccionando como el material encapsulante, un polímero adhesivo mucoso. Los ejemplos incluyen la mayoría de los polímeros con grupos carboxilo libres, tales como quitosano, celulosas, y en especial poliacrilatos (como se utilizan en la presente, los poliacrilatos se refieren a los polímeros que incluyen grupos acrilato y grupos acrilato modificados, tales como ciano-acrilatos y metacrilatos).

Combinaciones Farmacéuticas La invención se refiere en especial al uso de un compuesto de la fórmula I (o de una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula I) en el tratamiento de una o más de las enfermedades mencionadas en la presente; en donde la respuesta al tratamiento es benéfica, como se demuestra, por ejemplo, por la eliminación parcial o completa de uno o más de los síntomas de la enfermedad hasta llevar a cabo la curación o la remisión.

Se ha demostrado que los inhibidores de Bcl-2 son activos contra un número de líneas celulares de cáncer en combinación con otros agentes contra el cáncer y radiación, incluyendo, pero no limitándose a, cáncer de mama (con docetaxel, Solicitud Internacional del TCP Publicada Número WO 02/097053), cáncer de próstata (con docetaxel, Solicitud Internacional del TCP Publicada Número WO 02/097053), cáncer de cabeza y cuello (con docetaxel, Solicitud Internacional del TCP Publicada Número WO 02/097053), y cáncer pulmonar no microcelular (con paclitaxel, Nature (2005) 435, 677-681). En adición a los productos quimioterapéuticos de combinación anteriormente mencionados, los inhibidores de moléculas pequeñas de las proteínas BCL-2 exhiben sinergismo con otros agentes contra el cáncer, Incluyendo, pero no limitándose a, etoposida, doxorrubicina, cisplatina, paclitaxel, y radiación (Nature (2005) 435, 677-681).

Un compuesto de la fórmula (I) también se puede utilizar en combinación con otros compuestos anti-proliferativos. Estos compuestos anti-proliferativos incluyen, pero no se limitan a, los inhibidores de aromatasa; anti-estrógenos; inhibidores de topoisomerasa I; inhibidores de topoisomerasa II; compuestos activos en microtúbulos; compuestos alquilantes; inhibidores de desacetilasa de histona; compuestos que inducen los procesos de diferenciación celular; inhibidores de ciclo-oxigenasa; inhibidores de MMP; inhibidores de mTOR, tales como RAD001; anti-metabolitos anti-neoplásicos; compuestos de platina; compuestos que dirigen/ reducen una actividad de cinasa de proteína o de lípido y otros compuestos anti-angiogénicos; compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de una fosfatasa de proteína o de lípido; agonistas de gonadorelina; anti-andrógenos; inhibidores de amino-peptidasa de metionina; bisfosfonatos; modificadores de la respuesta biológica; anticuerpos anti-proliferativos, tales como HCD122; inhibidores de heparanasa; inhibidores de las isoformas oncogénicas Ras; inhibidores de telomerasa; inhibidores de proteasoma; compuestos utilizados en el tratamiento de malignidades hematológicas, tales como FLUDARABINA; compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de Flt-3, tales como PKC412; inhibidores de HSP90, tales como 17-AAG (17-alil-amino-geldanamicina, NSC330507), 17-DMAG (17-dimetil-amino-etil-amino-17-desmetoxi-geldanamicina, NSC707545), IPI-504, CNF1010, CNF2024, CNF1010 de Conforma Therapeutics y AUY922; temozolomida (TEMODAL®); inhibidores de proteína de huso de cinesina, tales como SB715992 o SB743921 de GlaxoSmithKIine, o pentamidina/clorpromazina de CombinatoRx; inhibidores de PI3K, tales como BEZ235; inhibidores de Raf, tales como LGX818 o RAF265; inhibidores de MEK, tales como ARRY142886 de Array PioPharma, AZD6244 de AstraZeneca, PD181461 de Pfizer, leucovorina, Aglutinantes EDG, los compuestos contra la leucemia, los inhibidores de reductasa de ribonucleótido, los inhibidores de descarboxilasa de S-adenosil-metionina, anticuerpos anti-proliferativos u otros compuestos quimioterapéuticos. Además, de una manera alternativa o en adición, se pueden utilizar en combinación con otros planteamientos de tratamiento de tumores, incluyendo cirugía, radiación ionizante, terapia fotodinámica, implantes, por ejemplo, con corticosteroides, hormonas, o se pueden utilizar como radiosensibilizantes. También, en el tratamiento antiinflamatorio y/o anti-proliferativo, se incluye la combinación con fármacos anti-inflamatorios. También es posible la combinación con sustancias de fármaco antihistamínicas, fármacos broncodilatadores, fármacos anti-inflamatorios no esteroideos (NSAID) o antagonistas de los receptores de quimiocina.

El término "inhibidor de aromatasa", como se utiliza en la presente, se refiere a un compuesto que inhibe la producción de estrógeno, es decir, la conversión de los sustratos androstenodiona y testosterona hasta estrona y estradiol, respectivamente. El término incluye, pero no se limita a, esteroides, en especial atamestano, exemestano y formestano y, en particular, no esteroides, en especial amino-glutetimida, rogletimida, pirido-glutetimida, trilostano, testolactona, quetoconazol, vorozol, fadrozol, anastrozol y letrozol. El exemestano se pgede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada AROMASIN. El formestano se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada LENTARON. El fadrozol se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada AFEMA. El anastrozol se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ARIMIDAX. El letrozol se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada FEMARA o FEMAR. La amino-glutetimida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ORIMETEN. Una combinación de la invención que comprenda un agente quimioterapéutico que sea un inhibidor de aromatasa, es particularmente útil para el tratamiento de los tumores positivos para el receptor de hormonas, por ejemplo, tumores de mama.

El término "anti-estrógeno", como se utiliza en la presente, se refiere a un compuesto que antagoniza el efecto de los estrogenos al nivel del receptor de estrógeno. El término incluye, pero no se limita a, tamoxifeno, fulvestrant, raloxifeno y clorhidrato de raloxifeno. El tamoxifeno se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada NOLVADEX. El clorhidrato de raloxifeno se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada EVISTA. El fulvestrant se puede formular como se da a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 4,659,516 o se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada FASLODEX. Una combinación de la invención que comprenda un agente quimioterapéutico que sea un anti-estrógeno, es particularmente útil para el tratamiento de los tumores positivos para el receptor de estrógeno, por ejemplo, tumores de mama.

El término "anti-andrógeno", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier sustancia que sea capaz de inhibir los efectos biológicos de las hormonas androgénicas e incluye, pero no se limita a, bicalutamida (CASODEX), que se puede formular, por ejemplo, como se da a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 4,636,505.

El término "agonista de gonadorelina", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, abarelix, goserelina y acetato de goserelina. La goserelina se da a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 4,100,274 y se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ZOLADEX. El abarelix se puede formular, por ejemplo, como se da a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 5,843,901.

El término "inhibidor de topoisomerasa I", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, topotecano, gimatecano, irinotecano, camptotecina y sus análogos, 9-nitro-camptotecina y el conjugado de camptotecina macromolecular PNU-166148 (Compuesto A1 de la Publicación Internacional Número W099/ 17804). El irinotecano se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada CAMPTOSAR. El topotecano se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada HYCAMTIN.

El término "inhibidor de topoisomerasa II", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, las antraciclinas, tales como doxorrubicina (incluyendo la formulación liposomal, por ejemplo, CAELYX), daunorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y nemorrubicina, las antraquinonas mitoxantrona y losoxantrona, y las podofilotoxinas etoposida, y teniposida. La etoposida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ETOPOPHOS. La teniposida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada VM 26-BRISTOL. La doxorrubicina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ADRIBLASTIN o ADRIAMYCIN. La epirrubicina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada FARMORUBICIN. La idarrubicina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ZAVEDOS. La mitoxantrona se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada NOVANTRON.

El término "compuesto activo en microtúbulos" se refiere a los compuestos estabilizantes de microtúbulos y desestabilizantes de microtúbulos, y a los inhibidores de la polimerización de microtubulina, incluyendo, pero no limitándose a, taxanos, por ejemplo, paclitaxel y docetaxel, alcaloides vinca, por ejemplo, vinblastina, en especial sulfato de vinblastina, vincristina, en especial sulfato de vincristina, y vinorelbina, discodermolidas, colquicina, y epotilonas y los derivados de las mismas, por ejemplo, epotilona B o D o derivados de las mismas. El paclitaxel se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, TAXOL. El docetaxel se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada TAXOTERE. El sulfato de vinblastina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada VINBLASTIN R.P. El sulfato de vincristina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada FARMISTIN. La discodermolida se puede obtener, por ejemplo, como se da a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 5,010,099. También se incluyen los derivados de epotilona que se dan a conocer en las Patentes Números WO 98/10121, US 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 y WO 00/31247. Se prefieren en especial Epotilona A y/o B.

El término "compuesto alquilante", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalano o nitrosourea (BCNU o Gliadel). La ciclofosfamida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada CICLOSTIN. La ifosfamida se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada HOLOXAN.

El término "inhibidores de desacetilasa de histona" o "inhibidores de HDAC" se refiere a los compuestos que inhiben la desacetilasa de histona y que poseen una actividad anti-proliferativa. Esto incluye a los compuestos tales como LDH589 que se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 02/22577, en especial la N-hidroxi-3-[4-[[(2-hidroxi-etil)[2-(1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, la N-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, y las sales farmacéuticamente aceptables de las mismas. Además incluye en especial al ácido hidroxámico de suberoil-anilida (SAHA).

El término "anti-metabolito anti-neoplásico" incluye, pero no se limita a, 5-fluoro-uracilo o 5-FU, capecitabina, gemcitabina, compuestos desmetilantes del ADN, tales como 5-azacitidina y decitabina, metotrexato y edatrexato, y antagonistas del ácido fólico, tales como pemetrexed. La capecitabina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada XELODA. La gemcitabina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada GEMZAR.

El término "compuesto de platina", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, carboplatina, cis-platina, cisplatino y oxaliplatina. La carboplatina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada CARBOPLAT. La oxaliplatina se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ELOXATIN.

El término "compuestos que dirigen/reducen una actividad de cinasa de proteína o de lípido"; o una "actividad de fosfatasa de proteína o de lípido"; u "otros compuestos anti-angiogénicos", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, los inhibidores de cinasa de tirosina de las proteínas y/o de cinasa de serina y/o treonina, o los inhibidores de cinasa de lípido, por ejemplo: a) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los receptores del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR), tales como los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR), en especial los compuestos que inhiben al receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, por ejemplo, un derivado de N-fenil-2-pirimidin-amina, por ejemplo, imatinib, SU101, SU6668 y GFB-111; b) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR); c) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad del receptor del factor de crecimiento tipo insulina I (IGF-IR), tales como los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad del IGF-IR, en especial los compuestos que inhiben la actividad de cinasa del receptor del IGF-I, tales como los compuestos que se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 02/092599, o los anticuerpos que se dirigen al dominio extracelular del receptor del IGF-I o sus factores de crecimiento; d) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la familia de la cinasa de tirosina receptora Trk, o los inhibidores de efrina B4; e) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la familia de la cinasa de tirosina receptora Axl; f) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la cinasa de tirosina receptora Ret; g) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la cinasa de tirosina receptora Kit/SCFR, es decir, las cinasas de tirosina receptoras c-Kit - (parte de la familia PDGFR), tales como los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la familia de la cinasa de tirosina receptora c-Kit, en especial los compuestos que inhiben al receptor c-Kit, por ejemplo, imatinib; h) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los miembros de la familia c-Abl, sus productos de fusión genética (por ejemplo, la cinasa BCR-Abl), y sus mutantes, tales como los compuestos que dirigen, reducen o inhiben la actividad de los miembros de la familia c-Abl y sus productos de fusión genética, por ejemplo, un derivado de N-fenil-2-pirimidin-amina, por ejemplo, imatinib o nilotinib (AMN107); PD180970; AG957; NSC 680410; PD173955 de ParkeDavis; o dasatinib (BMS-354825) i) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los miembros de la cinasa C de proteína (PKC), y la familia de cinasas de serina/treonina Raf, los miembros de la familia MEK, SRC, JAK, FAK, PDK1, PKB/Akt, y Ras/MAPK, y/o los miembros de la familia de cinasa dependiente de ciclina (CDK), y son en especial los derivados de estaurosporina que se dan a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 5,093,330, por ejemplo, midostaurina; los ejemplos de compuestos adicionales incluyen, por ejemplo, UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Briostatina 1, Perifosina; llmofosina; RO 318220 y RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; los compuestos de isoquinolina, tales como aquéllos que se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 00/09495; FTIs; BEZ235 (un inhibidor de P13K) o AT7519 (un inhibidor de CDK); j) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los inhibidores de cinasa de tirosina de las proteínas, tales como los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los inhibidores de cinasa de tirosina de las proteínas que incluyen mesilato de Imatinib (GLEEVEC) o tirfostina. Una tirfostina es de preferencia un compuesto de bajo peso molecular (Mr < 1500), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en especial un compuesto seleccionado a partir de la clase de benciliden-malonitrilo o de la clase de compuestos de S-aril-bencen-malonitrilo o de quinolina de bisustrato, más especialmente cualquier compuesto seleccionado a partir del grupo que consiste en Tirfostina A23/RG-50810; AG 99; Tirfostina AG 213; Tirfostina AG 1748; Tirfostina AG 490; Tirfostina B44; enantiómero de Tirfostina B44 (+); Tirfostina AG 555; AG 494; Tirfostina AG 556, AG957 y adafostina (adamantil-éster del ácido 4-{[(2,5-dihidroxi-fenil)-metil]-amino}-benzoico; NSC 680410, adafostina); k) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la familia de cinasas de tirosina receptoras del factor de crecimiento epidérmico (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 como homo- o hetero-dímeros), y sus mutantes, tales como los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la familia de receptores del factor de crecimiento epidérmico que son en especial los compuestos, proteínas o los anticuerpos que inhiben a los miembros de la familia de cinasa de tirosina receptora del factor de crecimiento epidérmico, por ejemplo, el receptor de EGF, ErbB2, ErbB3 y ErbB4, o que se enlazan con el factor de crecimiento epidérmico o con los ligandos relacionados con el factor de crecimiento epidérmico, y son en particular, los compuestos, proteínas, o anticuerpos monoclonales genérica y específicamente dados a conocer en la Publicación Internacional Número WO 97/02266, por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 39, o en la Patente Europea Número EP 0 564 409, en la Publicación Internacional Número WO 99/03854, en las Patentes Europeas Números EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0 787 722, EP 0 837 063, en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 5,747,498, en las Publicaciones Internacionales Números WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 y, en especial, en las Publicaciones Internacionales Números WO 96/30347 (por ejemplo, el compuesto conocido como CP 358774), WO 96/33980 (por ejemplo, el compuesto ZD 1839), y WO 95/03283 (por ejemplo, el compuesto ZM105180); por ejemplo, trastuzumab (HerceptinMR), cetuximab (Erbitux R), Iressa, Tarceva, OSI-774, Cl-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 o E7.6.3, y los derivados de 7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidina, los cuales se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 03/013541; y I) los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad del receptor c-Met, tales como los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de c-Met, en especial los compuestos que inhiben la actividad de cinasa del receptor c-Met, o los anticuerpos que se dirigen al dominio extracelular de c-Met o que se enlazan a HGF.

Otros compuestos anti-angiogénicos incluyen los compuestos que tienen otro mecanismo para su actividad, por ejemplo, no relacionado con la inhibición de la cinasa de proteína o de lípido, por ejemplo, talidomida (THALOM ID), y TNP-470.

Los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de una fosfatasa de proteína o de lípido son, por ejemplo, los inhibidores de fosfatasa 1, fosfatasa 2A, o CDC25, por ejemplo, el ácido ocadaico o un derivado del mismo.

Los compuestos que inducen los procesos de diferenciación celular son, por ejemplo, el ácido retinoico, a-, ?-, o d-tocoferol o a-, ?-, o d-tocotrienol.

El término inhibidor de ciclo-oxigenasa, como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, por ejemplo, los inhibidores de Cox-2, ácido 2-aril-amino-fenil-acético sustituido por 5-alquilo y sus derivados, tales como celecoxib (CELEBREX), rofecoxib (VIOXX), etoricoxib, valdecoxib o un ácido 5-alquil-2-aril-amino-fenil-acético, por ejemplo, el ácido 5-metil-2-(2'-cloro-6'-fluoro-anilino)-fenil-acético, lumiracoxib.

El término "bisfosfonatos", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, ácido etridónico, clodrónico, tiludrónico, pamidrónico, alendrónico, ibandrónico, risedrónico, y zoledrónico. El "ácido etridónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada DIDRONEL. El "ácido clodrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada BONEFOS. El "ácido tiludrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada SKELID. El "ácido pamidrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada AREDIAMR. El "ácido alendrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada FOSAMAX. El "ácido ibandrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada BONDRANAT. El "ácido risedrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ACTONEL. El "ácido zoledrónico" se puede administrar, por ejemplo, en la forma como se comercia, por ejemplo, bajo la marca comercial registrada ZOMETA.

El término "inhibidores de mTOR" se refiere a los compuestos que inhiben al objetivo de mamífero de rapamicina (mTOR), y que poseen una actividad anti-proliferativa, tales como sirolimus (Rapamune®), everolimus (CerticanMR), CCI-779 y ABT578.

El término "inhibidor de heparanasa", como se utiliza en la presente, se refiere a los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la degradación del sulfato de heparina. El término incluye, pero no se limita a, PI-88.

El término "modificador de la respuesta biológica", como se utiliza en la presente, se refiere a una linfocina o interferones, por ejemplo, interferón ?.

El término "inhibidor de las isoformas oncogénicas Ras", por ejemplo, H-Ras, K-Ras, o N-Ras, como se utiliza en la presente, se refiere a los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad oncogénica de Ras, por ejemplo, un "inhibidor de farnesil-transferasa", por ejemplo, L-744832, DK8G557 o R115777 (Zarnestra).

El término "inhibidor de telomerasa", como se utiliza en la presente, se refiere a los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la telomerasa. Los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la telomerasa son en especial los compuestos que inhiben al receptor de telomerasa, por ejemplo, telomestatina.

El término "inhibidor de amino-peptidasa de metionina", como se utiliza en la presente, se refiere a los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la amino-peptidasa de metionina.

Los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de la amino-peptidasa de metionina son, por ejemplo, bengamida o un derivado de la misma.

El término "inhibidor de proteasoma", como se utiliza en la presente, se refiere a los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad del proteasoma. Los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad del proteasoma incluyen, por ejemplo, Bortezomid (Velcade R) y MLN 341.

El término "inhibidor de metaloproteinasa de matriz" o (inhibidor de " MP") como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, inhibidores peptidomiméticos y no peptidomiméticos de colágeno, derivados de tetraciclina, por ejemplo, el inhibidor peptidomimético de hidroxamato batimastato y su análogo oralmente biodisponible marimastato (BB-2516), prinomastato (AG3340), metastato (NSC 683551) BMS-279251 , BAY 12-9566, TAA211, MMI270B o AAJ996.

El término "compuestos utilizados en el tratamiento de malignidades hematológicas", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, inhibidores de cinasa de tirosina tipo FMS, por ejemplo, los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los receptores de cinasa de tirosina tipo FMS (Flt-3R); interferón, 1-b-D-arabino-furanosil-citosina (ara-c), y bisulfano; e inhibidores de ALK, por ejemplo, los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la cinasa de linfoma anaplásico.

Los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los receptores de cinasa de tirosina tipo FMS (Flt-3R) son en especial los compuestos, proteínas o los anticuerpos que inhiben a los miembros de la familia de la cinasa receptora Flt-3R, por ejemplo, PKC412, TKI258, midostaurina, un derivado de estaurosporina, SU11248 y MLN518.

El término "inhibidores de HSP90", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad intrínseca de ATPasa de HSP90; que degradan, dirigen, reducen, o inhiben las proteínas clientes de HSP90 por medio de la senda del proteasoma de ubiquitina. Los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad intrínseca de ATPasa de HSP90 son en especial los compuestos, proteínas o los anticuerpos que inhiben la actividad de ATPasa de HSP90, por ejemplo, 17-alil-amino, 17-desmetoxi-geldanamicina (17AAG), un derivado de geldanamicina; otros compuestos relacionados con geldanamicina; radicicol e inhibidores de desacetilasa de histona. Un ejemplo de un inhibidor de HSP90 es AUY922.

El término "anticuerpos anti-proliferativos", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, trastuzumab (HerceptinMR), Trastuzumab-DM1 , erbitux, bevacizumab (AvastinMR), rituximab (Rituxan®), PR064553 (anti-CD40), Anticuerpo 2C4 y anticuerpo HCD122 (anti-CD40). Los anticuerpos significan, por ejemplo, los anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos formados a partir de cuando menos 2 anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpos siempre que éstos exhiban la actividad biológica deseada.

Para el tratamiento de leucemia mieloide aguda (A L), los compuestos de la fórmula (I) se pueden utilizar en combinación con terapias para leucemia convencionales, en especial en combinación con terapias utilizadas para el tratamiento de leucemia mieloblástica aguda (AML). En particular, los compuestos de la fórmula (I) se pueden administrar en combinación con, por ejemplo, los inhibidores de farnesil-transferasa y/u otros fármacos útiles para el tratamiento de leucemia mieloblástica aguda (AML), tales como Daunorrubicina, Adriamicina, Ara-C, VP-16, Teniposida, Mitoxantrona, Idarrubicina, Carboplatino, y PKC412.

El término "compuestos anti-leucémicos" incluye, por ejemplo, Ara-C, un análogo de pirimidina, la cual es el derivado de 2'-alfa-hidroxi-ribosa (arabinosida) de desoxicitidina. También se incluye el análogo de purina de la hipoxantina, 6-mercapto-purina (6-MP), y fosfato de fludarabina.

Los compuestos que dirigen, reducen, o inhiben la actividad de los inhibidores de la desacetilasa de histona (HDAC), tales como butirato de sodio y ácido hidroxámico de suberoil-anilida (SAHA), inhiben la actividad de las enzimas conocidas como desacetilasas de histona. Los inhibidores de desacetilasa de histona específicos incluyen MS275, SAHA, FK228 (anteriormente FR901228), tricostatina A, y los compuestos que se dan a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 6,552,065, en particular, la A/-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y la /V-hidroxi-3-[4-[(2-hidroxi-etil)-{2-(1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2£-2-propenamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, en especial la sal de lactato.

Los antagonistas del receptor de somatostatina, como se utilizan en la presente, se refieren a los compuestos que dirigen, tratan, o inhiben al receptor de somatostatina, tales como octreotida, y SOM230 (pasireotida).

Los planteamientos que dañan las células tumorales se refieren a los planteamientos tales como radiación ionizante. El término "radiación ionizante", referido anteriormente y más adelante en la presente, significa la radiación ionizante que se presenta como rayos electromagnéticos (tales como rayos-X y rayos gamma), o bien como partículas (tales como partículas alfa y beta). La radiación ionizante se proporciona en, pero no limitándose a, terapia de radiación, y se conoce en este campo. Véase Hellman, Principies of Radiation Therapy, Cáncer, en Principies and Practice of Oncology, Devita y colaboradores, Editores, 4a. Edición, Vol. 1, págs 248-275 (1993).

El término "Aglutinantes EDG", como se utiliza en la presente, se refiere a una clase de inmunosupresores que modulan la recirculación de los linfocitos, tales como FTY720.

El término "inhibidores de reductasa de ribonucleótido" se refiere a los análogos de nucleósido de pirimidina o purina, incluyendo, pero no limitándose a, fludarabina y/o citosina-arabinosida (ara-C), 6-tioguanina, 5-fluoro-uracilo, cladribina, 6-mercapto-purina (en especial en combinación con ara-C contra ALL) y/o pentostatina. Los inhibidores de reductasa de ribonucleótido son en especial hidroxiurea o los derivados de 2-hidroxi-1 H-isoindol-1 ,3- diona, tales como PL-1, PL-2, PL-3, PL-4, PL-5, PL-6, PL-7 o PL-8 mencionados en Nandy y colaboradores, Acta Oncológica, Volumen 33, Número 8, páginas 953-961 (1994).

El término "inhibidores de descarboxilasa de S-adenosil-metionina", como se utiliza en la presente, incluye, pero no se limita a, los compuestos que se dan a conocer en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número US 5,461,076.

También se incluyen en particular, los compuestos, proteínas, o anticuerpos monoclonales del factor de crecimiento endotelial vascular que se dan a conocer en la Publicación Internacional Número WO 98/35958, por ejemplo, 1 -(4-cloro-anilino)-4-(4-piridil-metil)-ftalazina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, por ejemplo, el succinato, o en las Publicaciones Internacionales Números WO 00/09495, WO 00/27820, WO 00/59509, WO 98/11223, y WO 00/27819, y en la Patente Europea Número EP 0 769 947; aquéllos descritos por Prewett y colaboradores, Cáncer Res, Volumen 59, páginas 5209-5218 (1999); Yuan y colaboradores, Proc Nati Acad Sel EUA, Volumen 93, páginas 14765-14770 (1996); Zhu y colaboradores, Cáncer Res, Volumen 58, páginas 3209-3214 (1998); y Mordenti y colaboradores, Toxicol Pathol, Volumen 27, Número 1, páginas 14-21 (1999); en las Publicaciones Internacionales Números WO 00/37502 y WO 94/10202; ANGIOSTATINA, descrita por O'Reilly y colaboradores, Ce//, Volumen 79, páginas 315-328 (1994); ENDOSTATINA, descrita por O'Reilly y colaboradores, Cell, Volumen 88, páginas 277-285 (1997); amidas del ácido antranílico; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; bevacízumab; o anticuerpos contra el factor de crecimiento endotelial vascular o anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), por ejemplo, rhuMAb y RHUFab, aptámero del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), por ejemplo, Macugon; los inhibidores de FLT-4, los inhibidores de FLT-3, el anticuerpo IgG 1 de VEGFR-2 Angiozima (RPI 4610), y Bevacizumab (AvastinMR).

Terapia fotodinámica, como se utiliza en la presente, se refiere a la terapia que utiliza ciertos productos químicos conocidos como compuestos fotosensibilizantes para tratar o prevenir cánceres. Los ejemplos de la terapia fotodinámica incluye el tratamiento con compuestos, tales como, por ejemplo, VISUDYNE y porfímero-sodio.

Esferoides angiostáticos, como se utiliza en la presente, se refiere a los compuestos que bloquean o inhiben la anglogénesis, tales como, por ejemplo, anecortave, triamcinolona, hidrocortisona, 11 -a-epihidrocotisol, cortexolona, 17a-hidroxi-progesterona, corticosterona, desoxi-corticosterona, testosterona, estrona y dexametasona.

Implantes que contienen corticosteroides, se refiere a los compuestos, tales como, por ejemplo, fluocinolona, dexametasona.

"Otros compuestos quimioterapéuticos" incluyen, pero no se limitan a, alcaloides de plantas, los compuestos y antagonistas hormonales; modificadores de la respuesta biológica, de preferencia linfocinas o interferones; oligonucleótidos anti-sentido o derivados de los oligonucleótidos; shARN o siARN; o compuestos diversos, o los compuestos con un mecanismo de acción diferente o desconocido.

La estructura de los compuestos activos identificados por números de código, nombres genéricos o comerciales, se puede tomar de la edición actual del compendio estándar "The Merck Index" o de las bases de datos, por ejemplo, Patents International (por ejemplo, IMS World Pgblications).

Ninguna de las citas de referencias hechas dentro de la presente descripción debe entenderse como una admisión de que las referencias citadas sean técnica anterior que pudiera afectar negativamente a la patentabilidad de la presente invención.

Procesos para la elaboración de los compuestos de la invención La presente invención también incluye procesos para la preparación de los compuestos de la invención. En las reacciones descritas, puede ser necesario proteger a los grupos funcionales reactivos, por ejemplo, los grupos hidroxilo, amino, imino, tio, o carboxilo, en donde se deseen éstos en el producto final, para evitar su participación indeseada en las reacciones. Se pueden utilizar los grupos protectores convencionales de acuerdo con la práctica estándar, por ejemplo, véase T.W. Greene y P. G. M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991.

Los compuestos de la fórmula I, en donde R3 se enlaza al anillo de fenilo por medio de un enlazador de oxígeno, se pueden preparar procediendo como en el siguiente esquema de reacción I: Esquema de Reacción I: en donde R1( R2, R4 y R5 son como se definen para la fórmula I en la Breve Descripción de la Invención. Un compuesto de la fórmula I se puede preparar mediante la reacción del Intermediario D con l-CH2OC2H5 seguido por NaOH, y hacer reaccionar el producto con NH2R5 en la presencia de un agente de deshidratación y reticulante adecuado (tal como hidroxi-benzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-carbodi-imida, o similares), una base adecuada (tal como trietil-amina, y similares), y un solvente adecuado (tal como DCM, y similares). La reacción tiene lugar a aproximadamente la temperatura ambiente y puede tomar hasta aproximadamente 12 horas para com pletarse . Para el esquem a de reacción VI , las posiciones de OH sobre el anillo de fenilo del I ntermed iario D se pueden m over para queda r ara-sustitu idas en relación con el grupo carbonilo unido al anillo de fenilo.

Los ejemplos detallados de la síntesis de los compuestos de la fórmula I se pueden encontrar en los Ejemplos más adelante.

Procesos adicionales para la elaboración de los compuestos de la invención Un compuesto de la invención se puede preparar como una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, mediante la reacción de la forma de base libre del compuesto con un ácido inorgánico u orgánico farmacéuticamente aceptable. De una manera alternativa, se puede preparar u na sal de adición de base farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la invención mediante la reacción de la forma del ácido libre del compuesto con una base inorgánica u orgánica farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la fórmula (I) también se pueden mod ificar adjuntando las funcionalidades apropiadas para mejorar las propiedades biológicas selectivas. Las modificaciones de esta clase se conocen en la técnica, e incluyen aquéllas que aumentan la penetración en un sistema biológico dado (por ejemplo, sangre, sistema linfático, sistema nervioso central, testículos) , aumentan la biodisponibilidad , aumentan la solubilidad para permitir la administración parenteral (por ejemplo, inyección , infusión) , alteran el metabolismo y/o alteran la velocidad de secreción. Los ejemplos de este tipo de modificaciones incluyen , pero no se lim itan a, esterificación, por ejemplo, con polietilenglicoles, derivación con pivaloiloxilo o sustituyentes de ácidos grasos, conversión hasta carbamatos, hidroxilación de los anillos aromáticos, y sustitución de heteroátomos en anillos aromáticos. Siempre que se mencionen los compuestos de la fórmula (I) y/o los N-óxidos, tautómeros y/o las sales de los mismos (de preferencia farmacéuticamente aceptables), esto comprende las fórmulas modificadas, mientras que, de preferencia, se refieren a las moléculas de la fórmula (I) , sus N-óxidos, sus tautómeros y/o sus sales.

De una manera alternativa, las formas de sal de los compuestos de la invención se pueden preparar utilizando sales de los materiales de partida o intermediarios. En vista de la estrecha relación entre los compuestos novedosos de la fórmula (I) en forma libre y aquéllos en la forma de sus sales, incluyendo las sales que se pueden utilizar como intermediarios, por ejemplo, en la purificación o identificación de los compuestos novedosos, cualq uier referencia a los compuestos o u n compuesto de la fórmula (I) anteriormente en la presente y posteriormente en la presente, se debe entender para referirse al compuesto en forma libre y/o también a una o más sales de los mismos , como sea apropiado y conven iente, así como a uno o más solvatos, por ejemplo, hidratos.

Las sales se forman , por ejemplo, como las sales de adición de ácido, de preferencia con ácidos orgánicos o inorgánicos, a partir de los compuestos de la fórmula (I) , con un átomo de nitrógeno básico, en especial las sales farmacéuticamente aceptables. Los ácidos inorgánicos adecuados son, por ejemplo, los ácidos de halógeno, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, o ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos adecuados son, por ejemplo, los ácidos carboxílicos, fosfónicos, sulfónicos o sulfámicos, por ejemplo, el ácido acético, ácido propiónico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido malónico, ácido adípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, aminoácidos, tales como ácido glutámico o ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroxi-maleico, ácido metil-maleico, ácido ciclo-hexan-carboxílico, ácido adamantan-carboxílico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido 4-amino-salicíclico, ácido itálico, ácido fenil-acético, ácido mandélico, ácido cinámico, ácido metan- o etan-sulfónico, ácido 2-hidroxi-etan-sulfónico, ácido etan-1 ,2-disulfónico, ácido bencen-sulfónico, ácido 4-toluen-sulfónico, ácido 2-naftalen-sulfónico, ácido 1 ,5-naftalen-disulfónico, ácido 2- o 3-metil-bencen-sulfónico, ácido metil-sulfúrico, ácido etil-sulfúrico, ácido dodecil-sulfú rico , ácido N-ciclohexil-sulfámico, ácido N-metil-, N-etil- o N-propil-sulfámico, u otros ácidos protónicos orgánicos, tales como ácido ascórbico.

Para los propósitos de aislamiento o purificación, también es posible utilizar sales farmacéuticamente inaceptables, por ejemplo, picratos o percloratos. Para uso terapéutico, solamente se emplean las sales farmacéuticamente aceptables o los compuestos libres (donde sea aplicable, en la forma de preparaciones farmacéuticas) y, por consiguiente, éstas son las preferidas.

Las formas de ácido libre o de base libre de los compuestos de la invención se pueden preparar a partir de la forma de sal de adición de base o de sal de adición de ácido correspondiente, respectivamente. Por ejemplo, un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de ácido se puede convertir hasta la base libre correspondiente mediante el tratamiento con una base adecuada (por ejemplo, una solución de hidróxido de amonio, hidróxido de sodio, y similares). Un compuesto de la invención, en una forma de sal de adición de base se puede convertir hasta el ácido libre correspondiente mediante el tratamiento con un ácido adecuado (por ejemplo, ácido clorhídrico, etc.).

Los compuestos de la invención, en una forma no oxidada, se pueden preparar a partir de los N-óxidos de los compuestos de la invención, mediante el tratamiento con un agente reductor (por ejemplo, azufre, dióxido de azufre, trifenil-fosfina, borohidruro de litio, borohidruro de sodio, tricloruro de fósforo, tribromuro, o similares), en un solvente orgánico inerte adecuado (por ejemplo, acetonitrilo, etanol, dioxano acuoso, o similares) de 0°C a 80°C.

Los derivados de pro-fármaco de los compuestos de la invención se pueden preparar mediante los métodos conocidos por aquéllos de una experiencia ordinaria en la materia (por ejemplo, para mayores detalles, véase Saulnier y colaboradores (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Volumen 4, página 1985). Por ejemplo, los pro-fármacos apropiados se pueden preparar mediante la reacción de un compuesto no derivado de la invención con un agente carbamilante adecuado (por ejemplo, 1,1-aciloxi-alquil-carbano-cloridato, carbonato de para-nitro-fenilo, o similares).

Los derivados protegidos de los compuestos de la invención se pueden hacer por medios conocidos por aquéllos de una experiencia ordinaria en este campo. Se puede encontrar una descripción detallada de las técnicas aplicables a la creación de los grupos protectores y su remoción en T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3a Edición, John Wiley and Sons, Inc., 1999.

Los compuestos de la presente invención convenientemente se pueden preparar, o formar, durante el proceso de la invención, como solvatos (por ejemplo, hidratos). Los hidratos de los compuestos de la presente invención convenientemente se pueden preparar mediante recristalización a partir de una mezcla de solventes acuosos/orgánicos, utilizando solventes orgánicos, tales como dioxina, tetrahidrofurano (THF) o metanol.

Los compuestos de la invención se pueden preparar como sus estereoisómeros individuales mediante la reacción de una mezcla racémica del compuesto con un agente de resolución ópticamente activo para formar un par de compuestos diaestereoisoméricos, se separan los diaestereómeros, y se recuperan los enantiómeros ópticamente puros. Aunque la resolución de los enantiómeros se puede llevar a cabo utilizando derivados diaestereoméricos covalentes de los compuestos de la invención, se prefieren los complejos disociables (por ejemplo, las sales diaestereoméricas cristalinas). Los diaestereómeros tienen distintas propiedades físicas (por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, solubilidades, reactividad, etc.), y se pueden separar fácilmente aprovechando estas diferencias. Los diaestereómeros se pueden separar mediante cromatografía, o de preferencia, mediante las técnicas de separación/resolución basadas en las diferencias en la solubilidad. Entonces se recupera el enantiomero ópticamente puro, junto con el agente de resolución, por cualquier medio práctico que no dé como resultado la racemización. Se puede encontrar una descripción más detallada de las técnicas aplicables a la resolución de estereoisómeros de los compuestos a partir de su mezcla racémica en Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981.

En resumen, los compuestos de la fórmula I se pueden elaborar mediante un proceso que involucra: (a) aquéllos del esquema de reacción I; y (b) opcionalmente convertir un compuesto de la invención, en una sal farmacéuticamente aceptable; (c) opcionalmente convertir una forma de sal de un compuesto de la invención hasta una forma no de sal; (d) opcionalmente convertir una forma no oxidada de un compuesto de la invención hasta un N-óxido farmacéuticamente aceptable; (e) opcionalmente convertir una forma de N-óxido de un compuesto de la invención hasta su forma no oxidada; (f) opcionalmente resolver un isómero individual de un compuesto de la invención a partir de una mezcla de isómeros; (g) opcionalmente convertir un compuesto no derivado de la invención hasta un derivado de pro-fármaco farmacéuticamente aceptable; y (h) opcionalmente convertir un derivado de pro-fármaco de un compuesto de la invención hasta su forma no derivada.

Hasta donde no se describa particularmente la producción de los materiales de partida, los compuestos son conocidos o se pueden preparar de una manera análoga a los métodos conocidos en la técnica, o como se da a conocer en los Ejemplos posteriormente en la presente.

Un experto en la materia apreciará que las transformaciones anteriores son solamente representativas de los métodos para la preparación de los compuestos de la presente invención, y que se pueden emplear similarmente otros métodos bien conocidos.

EJEMPLOS Los siguientes intermediarios y ejemplos sirven para ilustrar la invención sin limitar su alcance. Las siguientes abreviaturas y métodos se utilizan en la descripciones de los Ejemplos : Abreviaturas: aq. (acuoso); AcOH (ácido acético); DCM (dicloro-metano); DIPEA (di-isopropil-etil-amina); DME (1 ,2-dimetoxi-etano); DMSO (sulfóxido de dimetilo); EDC (clorhidrato de 1 -(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-carbodi-imida); eq (equivalente(s)); Et3N (trietil-amina); EtOAc (acetato de etilo); EtOH (etanol); h (hora(s)); HOBt (1-hidroxi-benzotriazol); MeOH (metanol); min (minuto(s)); MS (espectrometría de masas); N (normalidad); RMN (espectrometría de resonancia magnética nuclear); Rf (factor de retención); RT (temperatura ambiente); TBDMS (terbutil-dimetil-sililo); THF (tetrahidrofurano); y TLC (cromatografía de capa delgada).

Condiciones de HPLC: Método A: Columna: Inertsil ODS3V (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P040.01M / KH2P040.01M, pH ajustado a 6.5; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 2/30, 6/85, 16/85, 17/30, 18/30); Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método B: Columna: Inertsil ODS3V (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P040.01M / KH2P040.01M, pH ajustado a 6.5; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 2/30, 6/80, 13/80, 14/30, 15/30); Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método C: Columna: XTerra RP18 (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P040.01M / KH2P040.01M, pH ajustado a 6.5; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 2/30, 6/85, 16/85, 17/30, 18/30); Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método D: Columna: XTerra RP18 (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P040.01M / KH2P040.01M, pH ajustado a 6.5; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 2/30,6/80,13/80,14/30,15/30); Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método E: Columna: Hipersil BDS C18 (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P040.01M / KH2P040.01M, pH ajustado a 6.5; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 15/50,18/90,28/90,28.10/30); Velocidad de flujo: 0.8 mililitros/minuto; Detección mediante UV a: 260.0 nanómetros.

Método F: Columna: Hipersil BDS C18 (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: acetato de amonio 0.01M; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 15/50,18/90,28/90,28.10/30); Velocidad de flujo: 0.8 mililitros/minuto; Detección mediante UV a: 260.0 nanómetros.

Método G: Columna: XTerra RP18 (250 X 4.0 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P04 0.01M (pH de 6.5); B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 2/30, 6/80, 13/80, 14/30, 15/30; Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método H: Columna: Inertsil ODS3V (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P040.01M (pH ajustado a 6.5); B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/70, 1.5/70, 5/85, 13/85, 14/70, 15/70; Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método I: Columna: XTerra RP18 (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P04 0.01M; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 2/30, 6/80, 16/80, 17/30, 18/30; Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 2 0.0 nanómetros.

Método J: Columna: ACE5 C18 (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P04 0.01M; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/30, 2/30, 6/85, 16/85, 17/30, 18/30; Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método K: Columna: Inertsil ODS3V; Fase móvil: A: KH2P04 0.01 M; B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/50, 1.5/50, 5/80, 13/80, 14/50, 15/50; Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método L: Columna: XTerra RP18 (250 X 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: KH2P04 0.01M (pH de 6.5); B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/50, 2/50, 9/85, 16/85, 17/50, 18/50; Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Método M: Columna: Symmetry Shield RP18 (150 milímetros x 4.6 milímetros), 5 mieras; Fase móvil: A: ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.01 por ciento (acuoso); B: acetonitrilo (ACN); Información de gradiente: (T/%B): 0/20, 2/20, 6/85, 13/85, 14/20, 15/20; Velocidad de flujo: 1.0 mililitro/minuto; Detección mediante UV a: 210.0 nanómetros.

Espectros de RMN: Los espectros de H RMN se registraron en un espectrómetro Varían 400 MHz (Varían Mercury Plus) o 500 MHz (Unity INOVA) con DMSO-de o CDCI3 como los solventes. Los cambios químicos se reportaron en la escala d utilizando tetrametil-silano (TMS, d 0.Q0) como el estándar interno, y las constantes de acoplamiento (J) se reportaron en Hz. Se utilizaron las abreviaturas convencionales s, d, t, q, dd, dt y m para simbolizar singulete, doblete, triplete, cuarteto, doble doblete, doblete de un triplete y multiplete, respectivamente.

Espectros de Masas: La LC-MS y los espectros de ES-MS se llevaron a cabo en el Perkin-Elmer Sciex, modelo API 3000.

Condiciones de LC-MS: Método A: Método regular en ácido fórmico (FA); Columna: Cynergi de 2.5 mieras, Max-RP100A (20 X 4.0 milímetros); Fase móvil: A: ácido fórmico (FA) al 0.1 por ciento (acuoso); B: acetonitrilo (ACN); T/%B: 0/20, 0.5/20, 2.5/95, 4.5/95, 5.0/20; flujo: 1.5 mililitros/minuto.

Método B: Método regular en acetato de amonio (AA); Columna: Cynergi de 2.5 mieras, Max-RP100A (20 X 4.0 milímetros); Fase móvil: A: acetato de amonio (acuoso) 0.01M; B: acetonitrilo (ACN); T%B: 0/20, 1.0/20, 2.5/85, 4.0/95, 4.5/20, 5.0/20; flujo: 1.0 mililitro/minuto.

Intermediario A (S)-1 -(4-amino-2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2- carbonil)-fenin-N.N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida Paso 1: Preparación de clorhidrato de ácido 2-hidrazinil-5- nitro-benzoico.

A una solución helada de ácido 2-amino-5-nitro-benzoico (50.0 gramos, 274.5 milimoles) en agua (350 mililitros), se le agregó HCI concentrado (404 mililitros). La mezcla de reacción se agitó hasta que la sal se hubo precipitado. Se agregó una solución de nitrito de sodio (29.0 gramos, 411.8 milimoles) en agua (300 mililitros) lentamente a 0°C con agitación durante 15 minutos. Esta mezcla de reacción se agregó lentamente a ácido sulfúrico enfriado con hielo (2.5 litros), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se enfrió nuevamente hasta 0°C y se agregó HCI concentrado hasta que el sólido se separó. El sólido se filtró, se lavó con HCI frío y se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título como 60 gramos de un sólido color amarillo (93 por ciento), el cual se utilizó sin mayor purificación. Rf = 0.10 (metanol (MeOH) al 10 por ciento en dicloro-metano (DCM)).

Paso 2: Preparación de ácido 2-(3-(etoxi-carbonil)-5-metil- 1 H -pi razo 1-1 -i l)-5-n i tro-benzoico.

A una solución de clorhidrato de ácido 2-hidrazinil-5-nitro-benzoico (59.4 gramos, 255.1 milimoles) en AcOH (500 mililitros), se le agregó 2,4-dioxovalerato de etilo (31.0 gramos, 196.2 milimoles). La mezcla de reacción se puso a reflujo durante 2 horas. AcOH se evaporó al vacío y el residuo se co-destiló con tolueno (100 mililitros) dos veces. El residuo se disolvió en EtOAc, y se lavó con agua hasta que la capa acuosa se hizo neutra. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró al vacío. El material de goma se trituró con dietil-éter para proporcionar el compuesto del título como 35 gramos de un sólido blanco (56 por ciento). Rf = 0.30 (metanol (MeOH) al 10 por ciento en dicloro-metano (DCM)); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 13.90 - 13.60 (brs, 1H), 8.62 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.54 (dd, J = 2.6 & 8.5 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.27 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.28 (t, J = 7.1Hz, 3H)¡ LC-MS: m/z 320.1 (M + H).

Paso 3: Preparación de (S)-1 -(2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de etilo.

A una solución helada de ácido 2-(3-(etoxi-carbonil)-5-metil- 1 H-pirazol-1 -il)-5-nitro-benzoico (25.0 gramos, 78.4 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) (250 mililitros) se le agregaron (S)(1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-3-il)-metanol (31.0 gramos, 62.7 milimoles), EDC.HCI (23.0 gramos, 117.5 milimoles), HOBT (13.75 gramos, 101.9 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc (500 mililitros, 2 veces) dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (500 mililitros), salmuera (100 mililitros), se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar 18 gramos del compuesto "grisáceo" del título (49 por ciento). Rf = 0.45 (25 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, D SO-d6): d 8.70 - 8.35 (m, 2H), 8.15 - 7.98 (m, 1H), 7.25 - 6.95 (m, 4H), 6.82 - 6.58 (m, 1H), 5.20 - 3.80 (m, 8H), 3.40 - 2.40 (m, 2H), 2.38 - 2.10 (m, 3H), 1.30 -0.80 (m, 3H); ES-MS: m/z 465.3 (M + H).

Paso 4: Preparación de ácido (S)-1 -(2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico.

A una solución de (S)-1-(2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro- isoquinolin-2-carbon¡l)-4-nitro-fen¡l)-5-met¡l-1 H-pirazol-3-carboxilato de etilo (18.0 gramos, 38.8 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (30 mililitros), y agua (20 mililitros), se le agregó monohidrato de hidróxido de litio (5.0 gramos, 116.8 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío, se diluyó con agua (80 mililitros), y se extrajo con dietil-éter (100 mililitros). La capa acuosa se enfrió hasta 0°C, se acidificó hasta un pH de aproximadamente 4, utilizando HCI 3N y se extrajo con EtOAc (200 mililitros, 2 veces) dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (200 mililitros), salmuera (100 mililitros), se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como 14 gramos de un sólido color blanco (82 por ciento). Rf = 0.25 (70 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 12.90 - 12.50 (brs, 1H), 8.64 - 8.30 (m, 2H), 8.06 - 7.72 (m, 1H), 7.24 - 6.82 (m, 4H), 6.80 - 6.42 (m, 1H), 5.20 - 3.80 (m, 6H), 3.40 -2.40 (m, 2H), 2.40 - 2.10 (m, 3H); ES-MS: m/z 437.2 (M + H).

Paso 5: Preparación de (S)-N,N-dibutil-1 -(2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida.

A una solución de ácido (S)-1 -(2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2 ,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (14.0 gramos, 32.1 milimoles) en N,N-dimetil-formamida (DMF) (150 mililitros) se le agregaron dibutil-amina (8.6 mililitros, 48.2 milimoles), EDC.HCI (9.2 gramos, 48.2 milimoles), HOBT (5.63 gramos, 41.7 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua, y se extrajo con EtOAc (300 mililitros, 2 veces) dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (300 mililitros), salmuera (100 mililitros), se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como 9 gramos de sólido "grisáceo" (51 por ciento). Rf = 0.47 (25 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 8.62 -8.22 (m, 2H), 8.00 - 7.80 (m, 1H), 7.30 - 6.84 (m, 4H), 6.60 - 6.35 (m, 1H), 5.20 - 3.80 (m, 3H), 3.79 - 2.40 (m, 9H), 2.38 - 2.20 (m, 3H), 1.60 - 0.50 (m, 14H); LC-MS: m/z 548.0 (M + H).

Paso 6: Preparación de (S)-1-(4-amino-2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-N,N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida.

A una solución de (S)-N,N-dibutil-1-(2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida (1.1 gramos, 2.0 milimoles) en EtOH (10 mililitros), se le agregó Pd-C al 10 por ciento (0.04 gramos), seguido por agitación bajo presión de globo de H2 a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite, el lecho se lavó con EtOH (20 mililitros), y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como 0.8 gramos de un sólido "grisáceo" (77 por ciento). Rf = 0.33 (40 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 7.30 - 6.82 (m, 5H), 6.80 - 6.15 (m, 3H), 5.72 - 5.50 (m, 2H, DzO intercambiable), 5.20 -4.78 (m, 1H, DzO intercambiable), 4.90 - 4.00 (m, 2H), 4.00 - 2.22 (m, 9H), 2.20 - 2.00 (m, 3H), 1.60 - 0.60 (m, 14H); LC-MS: m/z 518.3 (M + H); HPLC: 98.64 por ciento (RT = 5.997 minutos, método B).

Intermediario B (S)-1 -(4-amino-2-(3-(((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-metil)- .2.3.4-tetrahidro-isoauinolin-2-carbonil)-fenil)-N.N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol- 3-carboxamida Paso l: Preparación de (S)-N,N-dibutil-1 -(2-(3-(((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida.

A una solución de (S)-N,N-dibutil-1-(2-(3-(hidroxi-metil)-1 l2,3,4-tetra idro-isoquinolin-2-carbonil)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida (9.0 gramos, 16.4 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (150 mililitros) se le agregaron TBDMS-cloruro (2.98 gramos, 19.7 milimoles), imidazol (2.23 gramos, 32.9 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua, y se extrajo con EtOAc (300 mililitros, 2 veces), dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (300 mililitros), salmuera (100 mililitros), se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como 7 gramos de un líquido (64 por ciento). Rf = 0.74 (25 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-de): d 8.60 - 8.20 (m, 2H), 8.05 - 7.80 (m, 1H), 7.40 - 6.80 (m, 4H), 6.60 - 6.30 (m, 1H), 5.10 - 3.84 (m, 4H), 3.82 -2.40 (m, 7H), 2.40 - 2.20 (m, 3H), 1.60 - 0.55 (m, 23H), 0.05 - -0.40 (m, 6H); LC-MS: m/z 662.4 (M + H).

Paso 2: Preparación de (S)-1 -(4-amino-2-(3-(((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-N,N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida.

A una solución de (S)-N,N-dibutil-1-(2-(3-(((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonN)-4-nitro-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida (3.0 gramos, 4.5 milimoles) en EtOH (50 mililitros), se le agregó Pd-C al 10 por ciento (0.3 gramos), seguido por agitación bajo presión de globo de H2 a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite, el lecho se lavó con EtOH (150 mililitros), y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como 2.0 gramos de un sólido "grisáceo" (69 por ciento). Rf = 0.45 (25 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 7.40 - 6.82 (m, 5H), 6.80 - 6.20 (m, 3H), 5.74 - 5.50 (m, 2H), 5.10 - 4.00 (m, 2H), 3.99 - 2.20 (m, 9H), 2.20 - 2.00 (m, 3H), 1.60 - 0.58 (m, 23H), 0.00 - - 0.04 (m, 6H); LC-MS: m/z 632.6 (M + H).

Intermediario C (S)-1-(4-bromo-2-(3-(((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-rnetin-1.2.3.4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-N.N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol- 3-carboxamida Paso 1 : Preparación de clorhidrato de ácido 5-bromo-2-hidrazinil-benzoico.

A una suspensión de ácido 2-amino-5-bromo-benzoico (50.0 gramos, 231.5 milimoles) en HCI concentrado (250 mililitros) a -10°C, se le agregó una solución de nitrito de sodio (23.92 gramos, 347.2 milimoles) en agua (250 mililitros), lentamente, seguido por agitación durante 2 horas. A esta mezcla de reacción se le agregó lentamente una solución de cloruro estaño (130.50 gramos, 225.6 milimoles) en HCI concentrado (125 mililitros) con agitación continua a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se filtró, el residuo se lavó con la mínima cantidad de agua y se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título como 61 gramos de un sólido "grisáceo" (100 por ciento), el cual se utilizó para el siguiente paso sin mayor purificación. Rf = 0.10 (acetato de etilo); 1H RMN (400 MHz, DMSO-de): d 11.60 - 9.60 (brs, 3H), 7.93 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 2.4 & 8.8Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8Hz, 1H); ES-MS: m/z 229.1 (M-H).

Paso 2: Preparación de ácido 5-bromo-2-(3-(etoxi-carbonil)-5-metil-1 H-pirazol-1 -il)-benzoico.

A una solución de clorhidrato de ácido 5-bromo-2-hidrazinil-benzoico (60.0 gramos, 225.6 milimoles) en AcOH (600 mililitros), se le agregó 2,4-dioxovalerato de etilo (35.67 gramos, 225.6 milimoles), seguido por poner a reflujo durante 3 horas. El AcOH se evaporó al vacío y el residuo se co-destiló con tolueno (100 mililitros), dos veces. El residuo se disolvió en EtOAc, y se lavó con agua hasta que la capa acuosa se hizo neutra. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró al vacío. El material de goma se trituró con dietil-éter para proporcionar el compuesto del título como 80 gramos de un aceite color café (100 por ciento), el cual se utilizó sin mayor purificación para el siguiente paso. Rf = 0.23 (metanol (MeOH) al 10 por ciento en dicloro-metano (DCM)); 1H RMN (400 MHz, DMSO-de): d 13.80 - 12.80 (brs, 1H), 8.08 (d, J = 1.9Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 2.4&8.3HZ, 1H), 7.53 (d, J = 8.3Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.26 (q, J = 7.2Hz, 2H), 2.13 (s, 3H), 1.28 (t, J = 7.1Hz, 3H); ES-MS: m/z 353.1 (M+H).

Paso 3: Preparación de (S)-1-(4-bromo-2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de etilo.

A una solución helada de ácido 5-bromo-2-(3-(etoxi-carbonil)-5-metil-1 H-pirazol-1 -il)-benzoico (45.0 gramos, 127.8 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (450 mililitros) se le agregaron (S)(1, 2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-3-il)-metanol (20.8 gramos, 102.27 milimoles), HATU (72.7 gramos, 191.2 milimoles), di-isopropil-etil-amina (DIPEA) (55.7 mililitros, 319.6 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se diluyó con dicloro-metano (DCM) (750 mililitros), se lavó con agua (500 mililitros), salmuera (100 mililitros), se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró al vacio. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como 50 gramos de un líquido (79 por ciento). Rf = 0.44 (55 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 8.00 - 7.40 (m, 3H), 7.30 - 7.00 (m, 4H), 6.80 - 6.40 (m, 1H), 5.10 - 3.80 (m, 7H), 3.50 - 2.40 (m, 3H), 2.40 - 2.10 (m, 3H), 1.30 - 1.00 (m, 3H); ES-MS: m/z 498.2 (M + H).

Paso 4: Preparación de ácido (S)-1 -(4-bromo-2-(3-(hidroxi- metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinoMn-2-carbonil)-fenil)-5-metil-1 H-pi razo l-3-carboxíl ico.

A una solución de (S)-1 -(4-bromo-2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxilato de etilo (50.0 gramos, 100.6 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (80 mililitros), y agua (20 mililitros) se le agregó monohidrato de hidróxido de litio (21.1 gramos, 503.0 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío, se diluyó con agua (80 mililitros), y se extrajo con dietil-éter (100 mililitros). La capa acuosa se enfrió hasta 0°C, se acidificó hasta un pH de aproximadamente 4, utilizando HCI 3N, y se extrajo con EtOAc (200 mililitros, 2 veces), dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (200 mililitros), salmuera (100 mililitros), se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido, 40 gramos (crudo). Rf = 0.10 (30 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 12.80 - 11.80 (m, 1H), 8.15 - 7.40 (m, 3H), 7.30 - 6.90 (m, 4H), 6.70 - 6.30 (m, 1H), 5.10 - 3.70 (m, 5H), 3.50 - 2.40 (m, 3H), 2.38 - 2.10 (m, 3H); ES-MS: m/z 470.5 (M+H).

Paso 5: Preparación de (S)-1-(4-bromo-2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-N,N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida.

A una solución de ácido (S)-1-(4-bromo-2-(3-(hidroxi-metil)- 1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (10.0 gramos, 21.3 milimoles) en N ,?-dimetil-formamida (DMF) (100 mililitros) se le agregaron dibutil-amina (3.7 mililitros, 21.3 milimoles), EDC.HCI (6.1 gramos, 31.9 milimoles), HOBT (3.3 gramos, 21.3 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc (100 mililitros, 2 veces), dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 mililitros), salmuera (50 mililitros), se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como un sólido higroscópico, 4.5 gramos (36 por ciento). Rf = 0.44 (55 por ciento de EtOAc en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 8.00 -7.40 (m, 3H), 7.30 - 6.80 (m, 4H), 6.50 - 6.20 (m, 1H), 5.10 - 4.00 (m, 3H), 4.00 - 2.40 (m, 9H), 2.40 - 2.00 (m, 3H), 1.60 - 0.50 (m, 14H); LC-MS: m/z 581.4 (M+H); HPLC: 90.74 por ciento (RT = 9.216 minutos, método C).

Paso 6: Preparación de (S)-1-(4-bromo-2-(3-(((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fenil)-N,N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida.

A una solución de (S)-1 -(4-bromo-2-(3-(hidroxi-metil)-1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-2-carbonil)-fen¡l)-N,N-dibutil-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxamida (3.0 gramos, 5.2 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (30 mililitros) se le agregaron cloruro de TBDMS (0.93 gramos, 6.2 milimoles), imidazol (0.70 gramos, 10.3 milimoles), seguido por agitación a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc (100 mililitros, 2 veces), dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 mililitros), salmuera (50 mililitros), se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron al vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice (malla de 100 a 200), para proporcionar el compuesto del título como 3.0 gramos de un líquido (83 por ciento). Rf = 0.66 (EtOAc al 50 por ciento en hexano); 1H RMN (400 MHz, DMSO-de): d 8.00 - 7.40 (m, 3H), 7.30 - 6.60 (m, 4H), 6.55 - 6.20 (m, 1H), 5.00 - 4.10 (m, 2H), 4.10 - 2.40 (m, 6H), 2.40 - 2.00 (m, 6H), 1.60 - 0.50 (m, 23H), 0.20 - -0.40 (m, 6H); LC-MS: m/z 695.3 (M + H).

Intermediario D dibutil-amida de ácido 4-cloro-1 -f4-hidroxi-2-((S)-3-hidroxi-metil-3.4- dihidro- H-isoquinolin-2-carbonil)-fen¡n-5-metil-1 H-pirazol-3- carboxílico Paso 1: Preparación de etil-éster de ácido 4-cloro-5-metil-1 H -pi razo l-3-carboxíl ico.

Una mezcla de etil-éster de ácido 5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (4.45 gramos, 28.9 milimoles), y /V-cloro-succinimida (5.01 gramos, 37.5 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) (60 mililitros) se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. Entonces la reacción se concentró y se purificó eluyendo a través de una columna de gel de sílice con gradiente del 0 hasta el 100 por ciento de acetato de etilo / heptano para proporcionar el compuesto del título (5.2 gramos, 96 por ciento de rendimiento), como un sólido blanco. MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 189.3. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-a1) d ppm 9.39 (br. s., 1 H), 4.44 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 2.35 (S, 3 H), 1.43 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).

Paso 2: Preparación de dibutil-amida de ácido 4-cloro-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico.

A una solución agitada de dibutil-amina (13 mililitros, 76 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (250 mililitros), bajo una atmósfera de nitrógeno, se le agregó trimetil-aluminio (38 mililitros, 2M en tolueno, 76 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se agregó etil-éster de ácido 4-cloro-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (4.8 gramos, 25 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (30 mililitros) por goteo a ia mezcla. La reacción se agitó durante 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se vertió en una solución saturada de sal de Rochelle lentamente y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La capa orgánica se recolectó. La capa acuosa se extrajo con dicloro-metano (DCM) y se combinó con la capa orgánica. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, se concentró, y se secó. El residuo se purificó eluyendo a través de una columna de gel de sílice con gradiente del 0 hasta el 100 por ciento de acetato de etilo / heptano para proporcionar el compuesto del título (4.7 gramos, 68 por ciento de rendimiento), como un aceite transparente. MS (ESI) [míe, (M + H)+] = 272.4. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 3.50 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 3.37 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 2.28 (s, 3 H), 1.64 (quinteto, J = 7.5 Hz, 2 H), 1.44 -1.55 (m, 2 H), 1.30 -1.43 (m, 2 H), 1.10 -1.22 (m, 2 H), 0.97 (t, J = 8.0 Hz, 3 H), 0.82 (t, J = 7.3 Hz, 3 H).

Paso 3: Preparación de dibutil-amida de ácido 4-cloro-1-(2-ciano-4-metoxi-fenil)-5-metil-1 H-pi razo l-3-carboxíl ico.

Una mezcla de dibutil-amida de ácido 4-cloro-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (1.5 gramos, 5.5 milimoles), 2-fluoro-5-metox¡-benzonitrilo (1.1 gramos, 7.2 milimoles), y carbonato de cesio (1.8 gramos, 5.5 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (D F) (5 mililitros) se pasó por microondas a 130°C durante 30 minutos. El solvente se removió al vacío. El material crudo se eluyó a través de una columna de gel de sílice con gradiente del 0 hasta el 70 por ciento de acetato de etilo / heptano para proporcionar el compuesto del título (1.3 gramos, 59 por ciento de rendimiento), como un sólido blanco. MS (ESI) [m/e, (M+H)+] = 403.5. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-cf) d ppm 7.32 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.18 - 7.22 (m, 1 H), 7.12 - 7.18 (m, 1 H), 3.84 (s, 3 H), 3.41 - 3.51 (m, 2 H), 3.32 - 3.41 (m, 2 H), 2.15 (s, 3 H), 1.54 -1.66 (m, 2 H), 1.48 (qd, J = 7.7, 7.5 Hz, 2 H), 1.26 -1.40 (m, 2 H), 1.17 (ddd, J = 14.9, 7.4, 7.3 Hz, 2 H), 0.89 (t, J = 7.3 Hz, 3 H), 0.77 (t, J = 7.3 Hz, 3 H).

Paso 4: Preparación de ácido 2-(4-cloro-3-dibutil-carbamoil- 5-metil-pirazol-1 -il)-5-metoxi-benzoico.

Una mezcla de dibutil-amida de ácido 4-cloro-1 -(2-ciano-4-metoxi-fenil)-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (1.3 gramos, 3.2 milimoles), e hidróxido de potasio (1.2 gramos, 21 milimoles) en etanol (5 mililitros), y agua (5 mililitros) se pasó por microondas a 150°C durante 90 minutos. El pH se ajustó a aproximadamente 5 con una solución acuosa de HCI (15 N). El solvente se removió al vacío. El material crudo se eluyó a través de una columna de gel de sílice con gradiente del 10 hasta el 100 por ciento de acetato de etilo / heptano y entonces del 1 hasta el 20 por ciento de metanol (MeOH) / cloruro de metileno para proporcionar el compuesto del título (0.53 gramos, rendimiento del 39 por ciento), como un sólido blanco. MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 422.4.

Paso 5: Preparación de dibutil-amida de ácido 4-cloro-1-[2-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-4-metoxi-fenil]-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico.

A una solución agitada de ácido 2-(4-cloro-3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol-1 -il)-5-metoxi-benzoico (0.35 gramos, 0.82 milimoles), y (S)(1 ,2,3,4-tetrahidro-isoquinol¡n-3-il)-metanol (0.13 gramos, 0.82 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (8 mililitros), bajo una atmósfera de nitrógeno, se le agregó 1 -etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-carbodi-imida (0.16 gramos, 0.82 milimoles) e hidroxi-benzotriazol (0.13 gramos, 0.82 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se agregó trietil-amina (0.34 mililitros, 2.5 milimoles) a la mezcla. La reacción se agitó durante 60 horas a temperatura ambiente. La mezcla se lavó con agua, y se purificó eluyendo a través de una columna de gel de sílice con gradiente del 10 hasta el 100 por ciento de acetato de etilo / heptano para proporcionar el compuesto del título (21 miligramos, 4.5 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 567.3. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-cf) d ppm 6.75 - 7.36 (m, 7 H), 4.13 - 5.41 (m, 4 H), 3.80 - 3.96 (m, 3 H), 2.51 - 3.71 (m, 8 H), 2.17 - 2.32 (m, 3 H), 1.48 -1.68 (m, 4 H), 1.19 - 1.44 (m, 4 H), 0.70 - 0.97 (m, 6 H).

Paso 6: Dibutil-amida de ácido 4-cloro-1 -[4-hidroxi-2-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenil]-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico.

Una mezcla de dibutil-amida de ácido 4-cloro-1 -[2-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-4-metoxi-fenil]-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (40 miligramos, 0.071 milimoles), y cloruro de aluminio (75 miligramos, 0.56 milimoles), se agitó en etanotiol (0.052 mililitros, 0.71 milimoles), y dicloro-metano (DCM) (0.5 mililitros) durante 12 horas a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó agua a la mezcla, y se extrajo con 1:4 metanol loruro de metileno. La capa orgánica se removió al vacío. Después se eluyó a través de un cojín corto de columna de gel de sílice y columna C18, el material crudo se purificó mediante HPLC, para proporcionar el compuesto del título (9 miligramos, 33 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 553.5. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) d ppm 6.66 - 7.50 (m, 7 H), 2.03 - 5.08 (m, 14 H), 0.53 - 1.62 (m, 14 H).

Intermediario E Dibutil-amida de ácido 1 -r5-hidroxi-2-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro- 1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenin-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico Paso 1 : Preparación de dibutil-amida de ácido 5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico.

Siguiendo la preparación del Intermediario D/Paso 2, se preparó el compuesto del título (6 gramos, 65 por ciento) a partir de etil-éster de ácido 5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico. MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 238.1. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 6.29 (s, 1 H), 3.59 (t, J = 7.5 Hz, 2 H), 3.38 - 3.51 (m, 2 H), 2.32 (s, 3 H), 1.47 -1.74 (m, 4 H), 1.17 -1.47 (m, 4 H), 0.76 -1.03 (m, 6 H).

Paso 2: ácido 2-(3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol-1 -il)-4-metoxi-benzoico.

Una mezcla de dibutil-amida de ácido 5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (0.85 gramos, 3.6 milimoles), ácido 2-yodo-4-metox¡-benzoico (1.0 gramo, 3.6 milimoles), yoduro de cobre (0.14 gramos, 0.72 milimoles), carbonato de cesio (1.2 gramos, 3.6 milimoles), y trans-dimetil-amina-ciclohexano (0.23 mililitros, 1.44 milimoles) en dioxano (5 mililitros) se pasó por microondas a 120°C durante 15 minutos. Se diluyó con acetato de etilo, el material crudo se eluyó a través de una columna de gel de sílice con gradiente del 0 hasta el 100 por ciento de acetato de etilo / heptano y entonces del 0 al 20 por ciento de metanol (MeOH) / cloruro de metileno para proporcionar el compuesto del título (0.43 gramos, 31 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 388.5.

Paso 3: Dibutil-amida de ácido 1-[2-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoqu i noli n-2 -carbón il)-5-metoxi-fenil]-5-meti 1-1 H-pirazol-3-carboxílico.

Siguiendo la preparación del Intermediario D/Paso 5, se preparó el compuesto del título (610 miligramos, 29 por ciento) a partir de ácido 2-(3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol-1 -il)-4-metoxi-benzoico. MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 533.3. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-cf) d ppm 6.81 - 7.33 (m, 7 H), 5.95 - 6.40 (m, 1 H), 4.28 - 5.62 (m, 4 H), 3.83 - 3.96 (m, 3 H), 2.66 - 3.81 (m, 7 H), 2.01 -2.38 (m, 3 H), 1.10 - 1.65 (m, 8 H), 0.76 - 1.01 (m, 6 H).

Ejem plo 1 Etil-éster de ácido f4-(4-cloro-3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol- -il)- 3-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihid ro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenoxn- acético Una mezcla de dibutil-amida de ácido 4-cloro-1 -[4-hidroxi-2- ((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenil]-5- metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (intermediario D, 1 70 miligramos, 0.31 milimoles) , 2-yodo-acetato de etilo (99 miligramos, 0.46 milimoles), carbonato de potasio ( 1 3 miligramos, 0.092 milimoles) , y trietilaime (0.085 mililitros, 0.62 milimoles) , se agitó en acetonitrilo (3 mililitros) , a temperatura ambiente durante 1 2 horas. El solvente se removió al vacío. El material crudo se purificó eluyendo a través de una columna de gel de sílice con gradiente del 10 hasta el 100 por ciento de acetato de etilo / heptano para proporcionar el compuesto del título ( 1 5 miligramos, 7.6 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 639.3. H RM N (400 M Hz, cloroformo-d) d ppm 6.73 - 7.39 (m, 7 H), 2.51 - 5.41 (m, 17 H), 2.16 - 2.41 (m, 3 H), 0.68 - 1.70 (m, 16 H).

Ejemplo 2 Ácido r4-(4-cloro-3-dibutil-carbamoij-5-metil-pirazol-1 -il)-3-((S)-3- hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinol¡n-2-carbonjl)-fenoxi1-acéttco Una solución de etil-éster de ácido [4-(4-cloro-3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol-1 -il)-3-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenoxi]-acético (10 miligramos, 0.016 mili-moles) en hidróxido de sodio (2N, 0.039 mililitros), y metanol (MeOH) (0.1 mililitros) se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Se agregó una solución acuosa de HCI hasta un pH de aproximadamente 5. El material crudo se purificó mediante HPLC, para proporcionar el compuesto del título (1.9 miligramos, 20 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [m/e, (M+H)+] = 611.5. 'H RMN (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 6.78 - 7.37 (m, 7 H), 4.08 - 5.51 (m, 5 H), 2.33 - 3.75 (m, 8 H), 2.13 - 2.33 (m, 3 H), 0.60- 1.72 (m, 14 H).

Ejemplo 3 Dibutil-amida de ácido 4-cloro-1 -r2-((S)-3-hid roxi-metil-3.4-dihidro- 1 H-isoquinolin-2-carbonil)-4-fenil-carbamoil-metoxi-fenil1-5-metil-1 H- Dirazol-3-carboxílico A una sol ución agitada de ácido [4-(4-cloro-3-dibutil-carbamoil- 5-metil-pirazol-1 -il)-3-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dih idro-1 H-isoquinolin- 2-carbonil)-fenoxi]-acético (1 5 milig ramos, 0.025 milimoles), y anilina (3.4 microlitros, 0.037 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (0.2 mililitros) , bajo una atmósfera de nitrógeno, se le agregaron 1 -etil-3- (3-dimetil-amino-propil)-carbodi-imida (7.1 milig ramos, 0.037 milimoles) e hidroxi-benzotriazol (5.6 miligramos, 0.037 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente du rante 5 minutos. Se agregó trietil-amina (1 0 microlitros, 0.074 milimoles) a la mezcla. La reacción se agitó durante 1 2 horas . Después de eluir a través de una columna de coj ín corto de gel de sílice, el material crudo se purificó mediante H PLC , para proporcionar el compuesto del título (8 miligramos, el 50 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 686.3. H RMN (400 MHz, cloroformo-cf) d ppm 6.82 - 7.69 (m, 12 H), 4.13 - 5.38 (m, 5 H), 2.38 - 3.75 (m, 8 H), 2.15 - 2.32 (m, 3 H), 1.12 - 1.70 (m, 8 H), 0.66 - 0.99 (m, 6 H).

Ejemplo 4 Etil-éster de ácido {3-(3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol-1 -il)-4-((S)- 3-hidrox¡-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenoxi1-acético Una solución de dibutil-amida de ácido 1 -[5-hidroxi-2-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenil]-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico (100 miligramos, 0.19 milimoles), y terbutóxido de potasio (0.21 mililitros, 1 M, 0.21 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (2 mililitros) se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se agregó 2-yodo-acetato de etilo (0.027 mililitros, 0.23 milimoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregaron acetato de etilo y una solución acuosa de HCI hasta que el pH fue de aproximadamente 7. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se removió al vacío. El material crudo se purificó eluyendo a través de una columna de cojín corto de gel de sílice, para proporcionar el compuesto del título (100 miligramos, 86 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 605.3. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 6.30 - 7.41 (m, 8 H), 2.68 -5.46 (m, 18 H), 2.20 - 2.61 (m, 3 H), 0.70 - 1.74 (m, 15 H).

Ejemplo 5 Ácido r3-(3-d¡butil-carbamoil-5-metil-pirazol-1 -il)-4-((S)-3-hidroxi- metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenoxi1-acético Siguiendo el método general h, se preparó el compuesto del título (60 miligramos, 63 por ciento) a partir de etil-éster de ácido [3-(3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol-1-il)-4-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-soquinolin-2-carbonil)-fenoxi]-acético. MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 577.3. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) d ppm 6.09 - 7.55 (m, 8 H), 3.88 - 5.34 (m, 5 H), 2.34 - 3.69 (m, 8 H), 2.10 - 2.33 (m, 3 H), 0.62- 1.71 (m, 14 H).

Ejemplo 6 Dibutil-amida de ácido 1 -r2-((S)-3-hidroxi-metil-3.4-dihidro-1 H- isoquinolin-2-carbonil)-5-fenil-carbamoil-metoxi-fenil1-5-metil-1 H- pirazol-3-carboxílico Siguiendo la preparación de dibutil-amida de ácido 4-cloro-1-[2-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-4-fenil-carbamoil-metoxi-fenil]-5-metil-1 H-pirazol-3-carboxílico, se preparó el compuesto del título (5 miligramos, 22 por ciento) a partir de ácido [3-(3-dibutil-carbamoil-5-metil-pirazol-1-il)-4-((S)-3-hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-carbonil)-fenoxi]-acético. MS (ESI) [m/e, (M + H)+] = 652.3. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-cf) d ppm 8.22 - 8.44 (m, 1 H), 6.79 - 7.69 (m, 12 H), 6.20 - 6.39 (m, 1 H), 4.00 - 5.30 (m, 5 H), 2.41 - 3.61 (m, 8 H), 2.18 - 2.37 (m, 3 H), 1.13 - 1.71 (m, 8 H), 0.66 - 1.12 (m, 6 H).

Ejem plo 7 Bencil-éster de ácido r3-(3-dibutil-carbamoil-5-metil-p¡razol-1 -il)-4- ((S)-3-hidrox¡-metil-3.4-d¡hidro-1 H-isoq uinolin-2-carbonin-fenoxil- acético Una solución de dibutil-amida de ácido 1 -[5-hid roxi-2-((S)-3- hidroxi-metil-3,4-dihidro-1 H-isoq uinolin-2-carbon il)-fenil]-5-metil-1 H- pirazol-3-carboxílico (intermediario E , 29 miligramos, 0.056 milimoles) , y terbutóxido de potasio (0.062 mililitros, 1 M , 0.062 milimoles) en tetrahidrofurano (TH F) (0.5 mililitros) se agitó a temperatura ambiente du rante 1 0 minutos. Se agregó 2-cloro-acetato de bencilo (0.010 mililitros, 0.067 milimoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente du rante 2 horas . Se agregaron acetato de etilo y una solución acuosa de HCI hasta q ue el pH fue de aproximadamente 7. La capa orgánica se eluyó a través de una columna de cojín corto de gel de sílice y el material crudo se purificó mediante HPLC y TLC de preparación para proporcionar el compuesto del título (1.3 miligramos, 3.5 por ciento de rendimiento). MS (ESI) [míe, (M + H)+] = 667.3. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-a1) d ppm 6.74 - 7.70 (m, 12 H), 6.15 - 6.31 (m, 1 H), 3.94- 5.36 (m, 8 H), 2.56 - 3.71 (m, 6 H), 2.09 - 2.35 (m, 3 H), 0.65 - 1.70 (m, 14 H).

Repitiendo los procedimientos descritos en los ejemplos anteriores, utilizando los materiales de partida apropiados y los Método de HPLC, se obtienen los siguientes los compuestos de la fórmula I, como se identifica en la Tabla 1.

Tabla 1 El enlace de BCL-2 se puede determinar empleando una variedad de métodos conocidos. Uno de estos ensayos es un ensayo de enlace in vitro sensible y cuantitativo utilizando la polarización de fluorescencia (FP) descrita por Wang, J. -L; Zhang, Z -J.; Choksi, S.; Sjam. S.; Lu, Z.; Croce, C. M.; Alnemri, E. S.; Komgold, R.; Huang, Z. Cell permeable BCL-2 binding peptides: a chemical approach to apoptosis induction in tumor cells. Cáncer Res. 2000, 60, 1498-1502).

Métodos para determinar las ICfins El presente método incluye la utilización de un biosensor basado en la resonancia de plasmón superficial (SPR) (Biacore R' GE Healthcare, Uppsala, Suecia) para caracterizar los inhibidores de BCL-2.

El Biacore utiliza el fenómeno de resonancia de plasmón superficial (SPR) para detectar y medir las interacciones de enlace. En un experimento Biacore típico, una de las moléculas interactuantes (ligando) se inmoviliza sobre una matriz de dextrano flexible, mientras que se permite que el componente interactuante (analito) fluya a través de esa superficie. Una i nteracción de enlace da como resultado un aumento en la masa sobre la superficie del sensor y u n cambio directo correspondiente en el índice de refracción en la vecindad de la superficie del sensor. Los cambios en el índice de refracción o en la señal se registran en un idades de resonancia (R. U .) Los cambios en la señal debido a la asociación y disociación de los complejos se monitorean de una manera no invasiva, continuamente y en tiempo real, cuyos resultados se reportan en la forma de un sensograma.

El ensayo de rango de respuesta fotoparoxismal estandarizado (SPR) se configura para examinar la inhibición en solución del enlace de BCL-2 a las superficies del sensor derivado del péptido para generar los valores IC50 como una medida de la potencia del inhibidor.

Formato de ensayo de inhibición en sol ución : Se utilizó el BíacoreMR A100 (G E Healthcare, Uppsala, Suecia) para conducir todos los experimentos reportados en la presente. La preparación de la superficie del sensor y todos los experimentos de los análisis de interacción se llevaron a cabo a 25°C . Los reactivos se adqu irieron en GE Healthcare. A través de todos los análisis se utilizó el regulador de ejecución que contenía Hepes 10 mM, pH de 7.4, cloruro de sodio 150 mM, Ditioeritritol 1.25 mM, sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 3 por ciento, y Polisorbato 20 al 0.05 por ciento.

Los péptidos BAK, BAD y NOXA biotinilados se diluyeron a 10 nM en el regulador de ejecución, y se capturaron sobre una superficie de sensor previamente derivado con estreptavidina (chip sensor SA) hasta densidades de la superficie de péptido en el intervalo de 50 a 100 R.U. Las superficies capturadas de péptido se bloquearon con PE02-Biotina 500 µ?. De una manera similar, se bloqueó un punto de detección de referencia en cada celda de flujo con PEC>2-biotina, y sirvió como un punto de referencia en el ensayo de competición.

Los análisis de interacción se llevaron a cabo equilibrando primero cada muestra dentro de una serie de dilución triple del compuesto de 6 puntos en el intervalo de 16 µ? a 0.004 nM con BCL-2 56 nM durante una hora para los procedimientos de arranque del instrumento.. Entonces se inyectaron las mezclas del compuesto-proteína sobre cada superficie de péptido en paralelo durante 60 segundos a una velocidad de flujo de 30 microlitros/minuto. También se prepararon muestras de control de BCL-2 56 nM, y se ejecutaron a intervalos regulares durante el ensayo. Al final de cada ciclo de análisis, se llevó a cabo la regeneración de la superficie mediante dos inyecciones de 30 segundos de Glicina 10 mM, pH de 2.5, cloruro de sodio 1M, Polisorbato 20 al 0.05 por ciento. Las muestras y las muestras del compuesto de control se ejecutaron por duplicado, y los controles ta m bién se ejecuta ron a intervalos regulares d u rante el ensayo para m on itorear la superficie y el desem peño de l ensayo .

Los análisis de datos se lleva ron a cabo utilizando el software de evaluació n BiacoreM R A1 00 v1 .1 para validar la calidad del ensayo. Se utilizaron puntos de reporte del n ivel de enlace en relación con las muestras de control de BCL-2 con el fin de calcular los valores del porcentaje de inhibición para cada mezcla de compuesto-proteína . Estos datos se graficaron entonces contra la concentración del compuesto, y se analizaron en un Tibco® Spotfire® v2.1 por medio de regresión logística para calcular los valores ICso para cada compuesto. El intervalo de datos mostrado en la Tabla 1 representa los valores I C50 altos y bajos obtenidos a partir de múltiples experimentos.

Método de ensayo de activación de caspasa En las líneas celulares de cáncer que dependen de BCL2 para la sobrevivencia, tales como la línea celular de carcinoma de células claras de riñón Caki-2 , la inhibición de BCL2 induce la apoptosis caracterizada por la activación de las caspasas . Los compuestos de la invención se prueban para determinar su capacidad para inducir la activación de caspasa en la línea celular Caki-2 como sigue. En el día uno, se aplican 2 ,500 células Caki-2 a las placas de cultivo de tejido de 384 pozos . En el día dos, las células se tratan con un rango de dosis de un compuesto de la invención en el medio Opti-MEM (Invitrogen) conteniendo suero bovino fetal al 1 por ciento du rante cuatro horas. A las cuatro horas después del tratamiento, se evalúan los niveles relativos de activación de caspasa , en relación con los niveles de la l ínea base en las célu las tratadas con veh ículo, utilizando el reactivo C aspase-g lo de P romega .

Método de ensayo de proliferación celular Los compuestos de la invención se prueban para determinar su capacidad para impactar a la proliferación y/o sobrevivencia celular en la línea celu lar Caki-2 como sigue. En el d ía uno, se aplican 2,500 células Caki-2 en las placas de cultivo de tejido de 384 pozos. En el día dos, las cél ulas se tratan con un rango de dosis de un compuesto de la invención en el medio Opti-M EM (I nvitrogen) conteniendo suero bovino fetal al 1 por ciento durante 24 horas. A las 24 horas después del tratamiento , se evalúa la viabilidad celular, en relación con las células tratadas con vehículo, utilizando el reactivo ATPLite de Perkin Elmer.

Se entiende q ue los Ejemplos y modalidades descritos en la presente son para propósitos ilustrativos solamente, y que se sugerirán diferentes modificaciones o cambios a la luz de los mismos para las personas expertas en la materia, y se deben incluir dentro del espíritu y alcance de esta solicitud , y dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patente citadas en la presente, se incorporan a la presente como referencia para todos los propósitos.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula I: en donde: Ri se selecciona a partir de hidrógeno y halógeno; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; en donde R? está en la posición meta y R3 está en la posición para en relación con el anillo de pirazol, o R2 está en la posición para y R3 está en la posición meta en relación con el anillo de pirazol; R3 se selecciona a partir de hidroxilo y -L-R5; en donde L se selecciona a partir de -OX1C(0)-, -OX^OJO-, -??t- y -OX^C (O)NH-; en donde X se selecciona a partir de un enlace y alquileno de 1 a 4 átomos de carbono ramificado o no ramificado; en donde el alquileno de X puede estar insustituido o sustituido con un grupo seleccionado a partir de carboxi-metilo, metoxi-carbonil-metilo, metil-carbonil-amino, y fenilo; R4 se selecciona a partir de hidrógeno, hidroxilo, -X3N R8R9l -X3C(0)OR8, -X3OR8, -X3C(0)NR8R9 y -X3NR8C(0)R9; en donde X3 se selecciona a partir de un enlace y alquileno de 1 a 4 átomos de carbono; y R8 y Rg se seleccionan independientemente a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y fenilo; o Rs y Rg junto con el nitrógeno con el que R8 y R9 están unidos, forman un anillo saturado de 5 a 7 miembros que contiene de 1 a 3 grupos o heteroátomos independientemente seleccionados a partir de C(O), NR10, O y S(0)o-2; en donde R10 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; R5 se selecciona a partir de hidrógeno, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, ciclopropilo, imidazo-[1 ,2-a]-pirimidinilo, 2-oxo-4-fenil-piperazin-1 -ilo, 4-(2-cloro-bencil)-3-oxo-piperazin-1 -i lo, imidazo-[1 ,2-a]-piridinilo, benzo-[d]-isoxazolilo, nafto-[2,1-d][1 ,2,3]-oxadiazol-5-ilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridinilo, imidazo-[2,1 -b]-tiazolilo, 1 H-pirazolo-[3,4-b]-piridinilo, benzo-[c][1 ,2,5]-tiadiazolilo, 4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzo-furanilo, 2-oxo-1 ,2,3,6-tetrahidro-pirimidinilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 2,3-dihidro-benzo-[b][1 ,4]-dioxin-2-ilo, nafto-[2,3-d][1 ,3]-dioxol-2-ilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-[b][1 ,4]-oxazin-7-ilo, 2,3-dihidro-benzo-furan-3-ilo, croman-8-ilo, 3-oxo-3H-pirazolilo, 6-oxo-1,6-dihidro-piridazinilo, benzo-[b]-tiofenilo, benzo-[b]-furanilo, 2-oxo-1,2-dihidro-piridinilo, 2-oxo-1 ,2,5,6, 7,8-hexahidro-quinolinilo, 4-oxo-1,4-dihidro-1 ,8-naftiridinilo, 4-oxo-4H-pirano-[2,3-b]-piridinilo, 10,10-dióxido-9-oxo-9H-tioxanten-3-ilo, 5-oxo-pirrolidin-3-ilo, fenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, fenoxiio, tiofenilo, benzoxilo, fenil-sulfonilo, furanilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tienilo, pirrolilo, quinolin-8-iloxilo, pirimidinilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirrolidinonilo, imidazolidina-2,4-dionilo, piperidinilo, piperazinilo, pirazinilo, pirazolilo, morfolino, oxo-morfolino, indolilo, benzo-[b]-tiofenilo, benzo-[b]-furanilo, benzo-[d][1 ,2,3]-triazol y oxo-piperazinilo; en donde el alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono, ciclopropilo, imidazo-[1 ,2-a]-pirimidinilo, benzo-[d]-isoxazolilo, imidazo-[1,2-a]-piridin¡lo, 4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-benzo-furanilo, 2-oxo-1 ,2,3,6-tetrahidro-pirimidinilo, imidazo-[2, 1 -b]-tiazolilo, 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridinilo, 1 H-pirazolo-[3,4-b]-piridinilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, benzo-[c][1 ,2,5]-tiadiazolilo, 2,3-dihidro-benzo-[b][1,4]-dioxin-2-ilo, nafto-[2,3-d][1 , 3]-d ioxol-2-ilo , 3,4-dihidro-2H-benzo-[b][1 ,4]-oxazin-7-ilo, 2,3-dihidro-benzo-furan-3-ilo, croman-8-ilo, 3-oxo-3H-pirazolilo, 6-oxo-1 ,6-dihidro-piridazinilo, 2-oxo-1 ,2-dihidro-piridinilo, 2-oxo-1 ,2,5,6,7,8-hexahidro-quinolinilo, 4-oxo-1 ,4-dihidro-1 ,8-naftiridinilo, 4-oxo-4H-pirano-[2,3-b]-piridinilo, 10,10-dióxid 0-9-0X0-9 H -ti oxanten-3-i lo, 5-oxo-pirrolidin-3-ilo, fenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, fenoxilo, benzoxilo, fenoxi-metilo, tiofenilo, fenil-sulfonilo, furanilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tienilo, piridinilo, pirrolilo, quinolin-8-iloxilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, pirrolidinonilo, piperazinilo, piperidinilo, pirazinilo, pirazolilo, morfolino, oxo-morfolino, indolilo, benzo-[d][1 ,2,3]-triazol u oxo-piperazinilo de R5 está insustituido o sustituido con 1 a 3 grupos independientemente seleccionados a partir de halógeno, ciano, nitro, -N R6R7, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alq uilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, tioalquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno, -C(0)OR6, -X3OR6, -C(0)R6, -C(0)N R6R7, -NR6S (0)2X3 R7 , -X3NR6C(0)R7, -S(O)0 - 2 R6 , -S(O)0.2N R6R7, fenilo, bencilo, piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, morfolin-metilo, 1 ,2 ,4-oxa-diazolilo, pirazolilo, fenoxilo, indolilo, (1 H-1 ,2 ,4-triazolil)-metilo y benzoxilo; en donde R6 y R7 se seleccionan independientemente a partir de hid rógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono, piridinilo, fenilo, bencilo y naftilo; en donde los sustituyentes de fenilo, piridinilo, bencilo, morfolino, morfolin-metilo, 1 , 3-dioxo-isoindolinilo, 1 ,2 ,4-oxadiazolilo , pirazolilo, indolilo y benzoxilo de R5 o el piridinilo y fenilo de R6 o R7 pueden estar insustituidos o adicionalmente sustituidos con un grupo seleccionado a partir de halógeno, nitro, amino-sulfonilo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono, y alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido por halógeno; en donde X3 se selecciona a partir de u n enlace y alq uileno de 1 a 4 átomos de carbono; o la sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; con la condición de que los compuestos de la fórmula I no incluyan los dos compuestos en donde Ri es hidrógeno, R2 es hidrógeno y R3 es un grupo seleccionado a partir de -OCH2C(0)-fenilo y -OCH2C(0)OH .

2. El compuesto de la reivindicación 1 de la fórmula la: en donde : L se selecciona a partir de -OC H2C(0)-, -OCH2C(0)0-, -O- y -OCH2C(0)N H-; y R5 se selecciona a partir de h idrógeno, metilo, etilo, fen ilo y bencilo; en donde el fenilo o bencilo están insustituidos o sustituidos con halógeno.

3. El compuesto de la reivindicación 2 seleccionado a partir de: 130

4. Una composición farmacéutica, la cual comprende un compuesto de la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y cuando menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. Un método de tratamiento, el cual comprende administrar un compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a una persona que necesite dicho tratamiento, en una cantidad efectiva para el tratamiento profiláctico o terapéutico de una enfermedad o de un trastorno, el cual es mediado por la actividad de BCL-2.

6. El método de la reivindicación 5, en donde la enfermedad o el trastorno mediado por la actividad de BCL-2 es un cáncer seleccionado a partir de próstata, próstata resistente a hormonas, mama, pulmonar no microcelular, pulmonar microcelular, colo-rectal, melanoma, cabeza y cuello, y pancreático.

7. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal del mismo, para utilizarse en el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por la actividad de BCL-2.

8. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 o de una sal del mismo, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad en un sujeto, mediada por la actividad de BCL-2.

9. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal del mismo, en combinación con uno o más agentes terapéuticamente activos.