CZ281102B6

CZ281102B6 - Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru

Info

Publication number: CZ281102B6
Application number: CZ951254A
Authority: CZ
Inventors: Michael Allen Cook; Robert Bennett Wilkins
Original assignee: Smithkline Beecham P.L.C.
Priority date: 1992-06-11
Filing date: 1993-06-07
Publication date: 1996-06-12
Also published as: SE503077C2; JPH07507324A; CZ19396A3; AP471A; HU9402405D0; RO111192B1; HU9500610D0; AU4342793A; RU2081121C1; ES2095059T3; SE9600797L; GB2287026A; HK1003222A1; FI980630A0; AU1471697A; SI9300296A; EP0672670B1; CS202194A3; AU665159B2; AP474A

Abstract

Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru, spočívající v tom, že se i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede v organickém rozpouštědle do styku s aminem obecného vzorce II, v němž jednotlivé symboly mají specifický ii) sůl kyseliny klavulanové s aminem se izoluje a iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester. ŕ

Description

Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby kyseliny klavulanové, a jejích solí, zejména farmaceuticky využitelných solí.

Dosavadní stav techniky

Kyselina klavulanová se obvykle připravuje fermentací mikroorganismu, který tuto kyselinu produkuje. Jde například o různé mikroorganismy z čeledi Streptomyces, například kmeny S. clavuligerus NRRL 2585, S. jumoninesis NRRL 5741, S. katsurahamanus IFO 13716 a Streptomyces sp. P 6621 FERM P2804 tak, jak byly popsány například ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. Kokai 80-162993. Výsledné živné prostředí, obvykle vodné prostředí se běžným způsobem čistí a koncentruje, užívá se například filtrace a potom chromatografického čištění, například podle GB 1 508 977 a JP Kokai 80-62993, potom se vodný roztok extrahuje organickým rozpouštědlem, čímž se získá roztok surové kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle.

V GB 1 508 977 mimo jiné popisuje, že soli kyseliny klavulanové je možno připravit tak, že se klavulanátový anion ve zfiltrovaném živném prostředí absorbuje na aniontoméničovou pryskyřici, potom se eluce provádí elektrolytem,, výsledný roztok se zbaví solí a nanese na další aniontoméničovou pryskyřici, z níž se eluce opět provádí elektrolytem, výsledný roztok se zbaví solí a rozpouštědlo se odstraní. Tímto způsobem je možno získat přijatelné výtěžky čisté látky, avšak použití pryskyřic znamená náklady a mimoto může představovat omezení při provádění postupu ve velkém měřítku. Bylo by tedy žádoucí navrhnout jiný postup bez použití velkého množství pryskyřic.

V britském patentovém spisu č. 1 543 563 je popsán způsob výroby kyseliny klavulanové a jejích solí přes vysrážení klavulanátu lithného. V GB patentovém spisu č. 1 578 739 se popisují různé soli kyseliny klavulanové s aminy jako látky, vhodné pro farmaceutické použití. EP č. 26 044 popisuje použití soli kyseliny klavulanové s terobutylaminem pro přípravu kyseliny klavulanové a sůl je uváděna jako cenný meziprodukt. Uvedená sůl byla popsána v BE 862 211 jako vhodná složka farmaceutických prostředků. PT.94.908 popisuje použití solí kyseliny klavulanové s nižšími trialkylaminy a s dimethylaminem při čištění kyseliny klavulanové, postupuje se tak, že se připraví sůl kyseliny klavulanové s triethylaminem a tato sůl se potom převádí na silyldiester kyseliny klavulanové. EP 887 178A popisuje způsob čištění kyseliny klavulanové, při němž je možno použít organické aminy pro tvorbu soli s aminy, tyto soli jsou meziprodukty v průběhu čištění kyseliny klavulanové z nečistého prostředku.

Kyselinu klavulanovou je možnou vyjádřit strukturním vzorcem I

CH₂OH (I)

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří způsob výroby anebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru, postup spočívá v tom, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl uvede v organickém rozpouštědle do styku s aminem obecného vzorce II

R¹

kde R¹ znamená skupinu obecného vzorce

	R N CH₂CH₂NI-\|₁₁CH₂CH₂ ^- R²^
kde
R⁴ a R⁵	nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný aminoskupinou
R² a R³	se nezávisle volí ze skupiny vodík, alkyl 6 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný skupinou nebo hydroxyskupinou	o 1 až amino-
m	znamená 0 nebo celé číslo 1 až 5,

ii) sůl kyseliny klavulanové s aminem se izoluje, iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

Při provádění způsobu podle vynálezu může být sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II užita k čištění kyseliny klavulanové v průběhu její výroby. Z tohoto důvodu může být tato sůl

-2CZ 281102 B6 vytvořena v roztoku kyseliny klavulanové nebo jejího labilního derivátu s obsahem nečistot, sůl může být z roztoku izolována jako oddělená fáze, například jako pevná sraženina, takže zbývající nečistoty zůstávají v roztoku, potom se sůl převádí zpět na kyselinu klavulanovou nebo je možno vytvořit farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester této kyseliny.

Vhodné labilní deriváty kyseliny klavulanové zahrnují soli, například soli s alkalickými kovy, jako klavulanát lithný nebo sodný a také estery, například silylestery. Vhodnými labilními deriváty aminu vzorce II jsou soli, jako fosfalát, boritan, chlorid, chlorečnan, chloristan, bromid, toluensulfonát nebo alkanoáty, jako acetát nebo ethylhexanoát. Ve výhodném provedení se uvádí do styku s kyselinou klavulanovou, která má být čištěna, amin vzorce II jako takový v roztoku v organickém rozpouštědle.

Uvedený postup se s výhodou provádí v organickém rozpouštědle, které je s výhodou v podstatě bezvodé, například obsahuje méně než 6 g, například 0,25 až 0,6 g vody na litr, může však obsahovat určité množství vody jako rozpouštědlo pro kyselinu klavulanovou a pro amin vzorce II. Vodu je možno odstranit běžným způsobem, například odstředěním. Voda může být v rozpouštědle rozpuštěná nebo může být přítomna ve formě kapiček jako oddělená fáze.

Roztok kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle je možno získat tak, že extrahuje okyselený vodný roztok kyseliny klavulanové, například shora uvedené fermentační prostředí. V případě, že počátečním zdrojem kyseliny flavulanové je živné prostředí, získané fermentací produkčního mikroorganismu pro kyselinu klavulanovou, tak jak byly tyto mikroorganismy shora uvedeny, je možno postupovat tak, že se neextrahuje celé živné prostředí, ale před extrakcí se alespoň z části odstraní z tohoto prostředí pevný podíl, například filtrací. Mimoto může být žádoucí takto získaný vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentrovat tak, aby byl několikrát koncentrovanější než výchozí živné prostředí a obsahovat 10 až 100, například 10 až 40 nebo 10 až 25 g kyseliny klavulanové v 1 litru koncentrovaného roztoku.

Vhodným postupem pro tuto předběžnou koncentraci je například absorpce kyseliny klavulanové na aniontoměničovou pryskyřici s následnou eluci kyseliny klavulanové vodním roztokem elektrolytu, například chloridem sodným s případným odstraněním solí. Je také výhodné vodný roztok okyselit, okyselit je možno přímo živné prostředí nebo koncentrovaný vodný roztok před extrakcí rozpouštědlem, například na pH 1 až 3, vhodné rozmezí je pH 1,5 až 2,5. Je také výhodné extrakt organickým rozpouštědlem vysušit nebo zbavit vody před tvorbou soli s aminem vzorce II, například na méně než 6 g vody/litr. Extrakt se s výhodou provádí při teplotě 5 až 15 °C.

Vhodnými organickými rozpouštědly, v nichž je možno kyselinu klavulanovou za účelem jejího čištěni uvádět do styku s aminem obecného vzorce II, jsou například uhlovodíková rozpouštědla, jako toluen a hexan, dále ethery, jako tetrahydrofuran, dioxan nebo diethylether, halogenovaná rozpouštědla, jako dichlormethan nebo chloroform, ketony, jako aceton a methylisobutylketon a také estery, jako ethylacetát. Rozpouštědla, obsahující karbonylovou

-3CZ 281102 B6 skupinu, například sloučeniny obecného vzorce III c

¹¹ 9

R^tí - C - R⁹ (III) kde

Q

R° znamena alkyl nebo alkoxyskupinu vždy o 1 až 6 atomech uhlíku a

Q

R znamena alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku mohou být příkladem podskupiny vhodných rozpouštědel, jde například o organické ketony nebo alkanoáty. Použít je možno také směs těchto rozpouštědel.

S výhodou se jako organické rozpouštědlo užije takové rozpouštědlo, které je možno přímo použít k extrakci okyselené vodné směsi, jde například o organické alkylalkanoáty, ketony a některé alifatické alkoholy nebo o směsi těchto rozpouštědel, jako jsou ethylacetát, methylacetát, propylacetát, n-butylacetát, methylethylketon, methylisobutylketon, tetrahydrofuran, butanol a směsi těchto rozpouštědel. Z uvedených látek jsou velmi vhodné methylisobutylketon, methylethylketon a ethylacetát. Vhodné směsi zahrnují například směs methylethylketonu a methylisobutylketonu nebo směs tetrahydrofuranu a methylisobutylketonu. Výhodným rozpouštědlem je ethylacetát.

Vhodným rozpouštědlem pro amin vzorce II může být některé z rozpouštědel, uvedených pro kyselinu klavulanovou nebo pro její extrakci, například aceton, ethylacetát, methylisobutylketon a methylethylketon.

Zvláště výhodné je použití ketonu, například acetonu v systému rozpouštědel vzhledem k tomu, že použití ketonu patrně brání tvorbě soli kyseliny klavulanové s aminem vzorce II ve formě oleje.

Pro přípravu soli kyseliny klavulanové se obvykle užívá ekvivalentní množství aminu vzorce II nebo malý přebytek, vztaženo na 1 mol kyseleny klavulanové. Roztoky kyseliny klavulanové a aminu vzorce II je například možno pomalu mísit za stálého míchání, výsledná směs se ještě určitou dobu míchá po zkončeném přidávání. Reakce mezi kyselinou klavulanovou nebo jejím labilním derivátem a aminem se provádí při teplotě nižší než je teplota místnosti, například 0 až 15, 0 až 10 nebo 0 až 5 °C. Vhodná koncentrace kyseliny klavulanové nebo jejího labilního derivátu v roztoku je alespoň 1,0 g na litr, například 1,0 až 4,0 g na litr. Může být výhodné dále zahustit extrakt v rozpouštědle na vyšší než uvedené koncentrace, například na koncentrace 20 g/litr.

Je také možno postupovat tak, že se amin vzorce II přivádí do proudu roztoku kyseliny klavulanové v rozpouštědle tak, že ke tvorbě soli dochází v tomto proudu, přičemž sůl zůstává v roztoku

-4CZ 281102 B6 nebo se tvoří částice kapiček, které zůstávají v roztoku nebo v suspenzi. Amin je možno přivádět jako takový nebo v roztoku, například ve stejném organickém rozpouštědle, v němž je rozpuštěna kyselina klavulanová.

Požadovanou sůl kyseliny klavulanové s aminem obecného vzorce II je potom možno izolovat. Tímto způsobem je možno oddělit uvedenou sůl od většiny nečistot nebo ode všech nečistot. Izolace je možno uskutečnit běžným způsobem, například odstředěním nebo filtrací.

Je také možno postupovat tak, že se sůl kyseliny klavulanové a aminu vzorce II izoluje z organického rozpouštědla, které je zcela nebo z části nemísitelné s vodou tak, že se toto rozpouštědlo uvede do styku s vodou, takže se sůl, která je v roztoku nebo v suspenzi z organického rozpouštědla extrahuje a vznikne roztok soli ve vodě. Vzhledem k tomu, že soli uvedeného typu jsou ve vodě dobře rozpustné, může být získaný vodný roztok velmi koncentrovaný, například 20 až 30 % hmot.

Tímto způsobem zůstane převážná většina organických nečistot v roztoku v organickém rozpouštědle, zatímco kyselina klavulanová přechází ve formě své soli s aminem vzorce II v poměrně čistém stavu do vodného roztoku. Takto získaný vodný roztok kyseliny klavulanové je možno dále zpracovávat běžným způsobem, například různými čisticími postupy, nebo je možno kyselinu klavulanovou převést na farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester, jak bude dále podrobněji popsáno.

Je také možno postupovat tak, že se kyselina klavulanová a amin mísí v roztoku v prvním organickém rozpouštědle, potom se vytvořená sůl vysráží z roztoku přidáním druhého organického rozpouštědla. Prvním roupouštédlem je s výhodou organický ester, jako ethylacetát a druhým rozpouštědlem může být halogenované rozpouštědlo, jako chloroform, ether, jako diethylether, uhlovodík, jako toluen, alkohol, například ethanol nebo rozpouštědlo obecného vzorce III, jako aceton nebo methylisobutylketon.

V jednom z možným provedeni vynálezu je možno použít sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II ve formě solvátu v acetonu. Uvedené solváty mají v některých případech výhodnější stálost a čistotu ve srovnání s čistou solí kyseliny klavulanové a aminu. Solváty tohoto typu jsou zvláště vhodné také vzhledem k tomu, že je často možné je izolovat jako velmi čisté a stálé krystalické látky.

Solváty solí kyselina klavulanové a aminu vzorce II s acetonem tvoří také součást podstaty vynálezu. V průběhu izolace a/nebo sušení může být určité množství acetonu ztraceno vzhledem k nedostatečné síle solvatace, množství acetonu v produktu však není kritické.

Solváty uvedeného typu je možno vytvořit tak, že se kyselina klavulanová uvede do styku s aminem vzorce II v přítomnosti acetonu, Obvykle se postupuje tak, že se roztok s obsahem kyseliny klavulanové mísí s alespoň stejným objemem acetonu a aminem vzorce II při srážení soli.

-5CZ 281102 B6

Amin vzorce II je možno rozpustit v acetonu a získaný roztok mísit s roztokem kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle. Vhodné organické rozpouštědlo zahrnuje ethylacetát, tetrahydrofuran, methylethylketon, methylisobutylketon a směsi těchto rozpouštědel, výhodným rozpouštědlem je ethylacetát. Je také možno postupovat, tak, že se vodný roztok soli kyseliny klavulanové s aminem vzorce II, získaný extrakcí vodou svrchu uvedeným způsobem mísí s acetonem za vzniku solvátu. S výhodou se mísí koncentrovaný vodný roztok soli s přebytkem acetonu za vzniku solvátu.

Překrystalování soli kyseliny klavulanové nebo solvátu s acetonem může být výhodné pro další snížení množství nečistot. Vhodným rozpouštědlem pro toto překrystalování je směs vody a acetonu. Překrystalování je možno uskutečnit obvyklým způsobem, například tak, že se sůl nebo solvát rozpustí ve vodě, přidá se malé množství acetonu, směs se filtruje a potom se přidá větší množství acetonu, popřípadě za míchání anebo chlazení, čímž se získá překrystalovaný výsledný produkt.

Podstatu vynálezu tvoři také způsob výroby kyseliny klavulanové nebo jejího farmaceuticky přijatelného esteru nebo její farmaceuticky přijatelné soli, který spočívá v tom, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

Farmaceuticky přijatelné soli a estery kyseliny klavulanové, které je možno připravit způsobem podle vynálezu zahrnují sloučeniny, popsané V GB 1 508 977 a 1 508 978.

Zvláště vhodnými solemi, přijatelnými z farmaceutického hlediska jsou soli s alkalickými kovy a s kovy alkalických zemin, například soli sodné, draselné, vápenaté a hořečnaté. Z těchto solí jsou zvláště výhodné soli sodné a draselné a zejména soli draselné.

Vhodné estery zahrnují sloučeniny, které po rozštěpení dávají vznik kyselině klavulanové nebo její soli, jde zejména o štěpení chemickými postupy, jako je hydrogenolýza nebo biologickými metodami.

Sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II je popřípadě ve formě solvátu s acetonem možno převést na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo estery například výměnou iontů v případě volné kyseliny nebo soli nebo esterifikací.

Výměnu iontů je možno uskutečnit použitím iontoméničových pryskyřic, například tak, že se roztok soli nechá projít vrstvou kationtoměničové pryskyřice v sodné, draselné nebo vápenaté formě. Vhodnou kationtoměničovou pryskyřicí je například Amberlit IR 120 a podobné materiály.

Výměnu iontů je možno uskutečnit také reakcí s protonovaným kationtem aminu a prekursorem soli, může jít o bázi, například uhličitan, hydrogenuhličitan nebo hydroxid farmaceuticky přijatelného alkalického kovu nebo kovu alkalických zemin nebo o sůl organické karboxylové kyseliny s farmaceuticky přijatelným kationtem, například alkalickým kovem nebo kovem alkalických zemin,

-6CZ 281102 B6 jde například o sůl alkanové kyseliny obecného vzorce IV

R¹⁰ - C0₂H (IV)

Kde R¹⁰ znamená alkylovou skupinu, obsahující například 2 až 20 atomu uhlíku, s výhodou 1 až 8 uhlíkových atomu. Příkladem vhodných solí mohou být acetáty, propionáty nebo ethylhexanoáty, výhodný je 2-ethylhexanoát draselný a 2-ethylhexanoát sodný. Typicky se postupuje tak, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II v roztoku uvede do reakce se solí alkalického kovu s kyselinou obecného vzorce IV v roztoku nebo v suspenzi ve vhodném rozpouštědle, například v organickém rozpouštědle, ve vodě nebo ve směsi vody a organického rozpouštědla, například isopropanolu. Ve výhodném provedení se postupuje tak, že se mísí sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II a sůl prekursorové sloučeniny, potom se nechá krystalizovat vzniklá farmaceuticky přijatelná sůl. Reakci je možno provádět s výhodou při teplotě nižší než teplota místnosti, například 0 až 15 nebo 0 až 10 °C, s výhodou 0 až 0,5 ’C. S výhodou se sůl kyseliny klavulanové s aminem vytvoří ve vodném roztoku nebo může být vysrážena smísením vodného roztoku s přebytkem acetonu.

Esterifikace je možno uskutečnit některým z následujících postupů:

a) sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II se uvede do reakce se sloučeninou obecného vzorce Q - R¹¹, kde Q znamená snadno odštěpitelnou skupinu a R¹¹ znamená organickou skupinu,

b) sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II se uvede do reakce s alkoholem nebo thiolem v přítomnosti kondenzačního činidla, například karbodiimidu, nebo

c) sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II se uvede do reakce s diazosloučeninou.

Uvedené postupy zahrnuji i ty postupy při nichž se sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II nejprve převede na kyselinu klavulanovou nebo na jinou sůl této kyseliny, která se potom převádí na požadovaný ester. Další podrobnosti esterifikace jsou uvedeny v GB 1 508 977 a 1 508 978, způsob podle vynálezu však dovoluje získat soli a estery kyseliny klavulanové snadnějším způsobem a v čistší formě.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

V následující tabulce bylo použito téhož postupu, při němž byl amin míšen s kyselinou klavulanovou v tetrahydrofuranovém roztoku, pevná sůl byla získána rychlou krystalizaci.

-7CZ 281102 B6

amin	forma soli	stálost soli
triethylentetramin	bleděžlutá pevná látka	obtížné stanovení

Příklad 2

Byly připraveny dva vzorky shora uvedené sloučeniny, pro každý z nich byl získán odlišný výsledek. V prvním případě byl získán středné vysoký výtěžek produktu s obsahem vody, který odpovídá obsahu vody v hemihydrátu, ve druhém případě byl v nízkém výtěžku získán bezvodý produkt.

2A. Roztok 0,00346 molu kyseliny klavulanové ve 25 ml tetrahydrof uranu byl zpracováván přidáním 0,4 g, 0,00346 molu triethylaminu, smísením vznikl homogenní čirý roztok. Krystalizace byla vyvolána naočkováním a ukončena stáním přes noc při teplotě +4 °C. Produkt byl odfiltrován a usušen ve vakuu. Ve výtěžku 63 % bylo získáno 0,7 g velkých špinavěbílých jehlliček.

Analýza B 24639 pro ^ci4^H24^N2°5 vypočteno C 56,05, H 8,00, N 9,33 % nalezeno C 54,74, H 7,95, N 8,94 % pro C^₄H₂₄N₂0g · 1/2 H₂0 vypočteno C 56,36, H 8,14, N 9,05 %.

Analýza A 15220: imidazol 61,0, 61,1 % (vypočteno 64,4 %, čistota přibližně 95,0 %) voda 2,64 % (prohemihydrát vypočteno 12,91 %)

2B. Roztok 0,021 molu kyseliny klavulanové v 60 ml tetrahydrofuranu se zpracovává přidáním 2,1 g, 0,021 molu triethylaminu, smísením vznikne čirý roztok, který se naočkuje krystalky výsledné soli. Produkt počne krystalizovat při teplotě místnosti ve formě dlouhých jehliček, krystalizace je ukončena přes noc při teplotě +4 C. Produkt se oddělí filtrací, na filtru se promyje přibližné 10 ml čerstvého rozpouštědla a 20 ml diethyletheru a potom se suší ve vakuu, čímž se ve výtěžku 27 % získá 1,7 g produktu ve formě špinavé bílých krystalků.

Analýza B 24676 pro ^ci4^H24^N2°5 vypočteno C 56,05, H 8,00, N 9,33 % nalezeno C 56,07, H 7,83, N 9,32 % vypočteno pro ^ci4^H24^N2°5 ' ^{ly/2 H}2^{0: C 54}/³⁶> H 8,14, N 9,05 %

Analýza A 15268: imidazol 65,1, 65,1 % (vypočteno 66,3 %, čistota přibližné 98,2 %) voda 0,9 %

-8CZ 281102 B6 /alfa/_D ²⁴ = +47,0° (c = 0,2 % ve vodě).

Uvedené dva příklady ilustrují tvorbu vysoce čistých solí kyseliny klavulanové z roztoků této kyseliny v organických rozpouštědlech.

Tento produkt se při stání na vzduchu v průběhu několika dnů rozkládá.

Příklad 3

Vzorek triethylaminklavulanátu z příkladu 2 se rozpustí v co nejmenším množství chladné vody. K roztoku se přidá koncentrovaný roztok 2-ethylhexanoátu draselného v isopropanolu za stálého míchání. Po delší době míchání se krystalky klavulanátu draselného vyloučí a je možno je odfiltrovat, promýt chladným isopropanolem a usušit.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečné čistá kyselina klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelná sůl uvede v organickém rozpouštědle do styku s aminem obecného vzorce II (II) kde R¹ znamená skupinu obecného vzorce

R

N ch₂ch₂ni-^ch₂ch₂kde

R⁴ a R⁵ nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný aminoskupinou

R²a R³ se nezávisle volí ze skupiny vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný aminoskupinou nebo hydroxyskupinou m znamená 0 nebo celé číslo 1 až 5,

-9CZ 281102 B6 ii) sůl kyseliny klavulanové s aminem se izoluje, iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se jako labilní derivát kyseliny klavulanové užije sůl s alkalickým kovem.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se jako sůl kyseliny klavulanové s alkalickým kovem užije sodná nebo lithná sůl.
4. Způsob podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se reakce provádí v bezvodém organickém rozpouštědle .
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo obsahuje méně než 6 g vody na litr.
6. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že organické rozpouštědlo obsahuje 0,25 až 0,6 g vody na litr.
7. Způsob podle některého z nároků 4 až 6, vyznačující se tím, že se organické rozpouštědlo zbaví vody odstředěním.
8. Způsob podle některého z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že se zpracovává kyselina klavulanová s nedostatečnou čistotou, získaná fermentací pomocí produkčního mikroorganismu.
9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že se zpracovává kyselina klavulanová, po fermentací alespoň částečně čištěná odstraněním alespoň části suspendovaných pevných částic.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se pevné částice odstraní filtrací.
11. Způsob podle některého z nároků 8 až 10, vyznačující se tím, že se zpracovává kyselina klavulanová po fermentací ve vodném roztoku, před extrakcí předem koncentrovaném.
12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentruje na obsah kyseliny 10 až 100 mg/ml.
13. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentruje na obsah kyseliny 10 až 40 mg/ml.
14. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentruje na obsah kyseliny 10 až 25 mg/ml.

-10CZ 281102 B6
15. Způsob podle některého z nároků 11 až 14, vyznačující se tím, že se vodný roztok předem koncentruje absorpcí kyseliny klavulanové na iontoměničovou pryskyřici s následnou elucí kyseliny klavulanové vodným roztokem elektrolytu.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že se k eluci jako elektrolyt užije chlorid sodný.
17. Způsob podle některého z nároku 15 nebo 16, vyznačující se tím, že se získaný koncentrát zbaví solí.
18. Způsob podle některého z nároků 8 až 17, vyznačující se tím, že se prostředí po fermentaci nebo vodný roztok kyseliny klavulanové před extrakcí rozpouštědlem okyselí.
19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že se prostředí po fermentaci nebo vodný roztok kyseliny klavulanové okyselí na pH 1 až 3.
20. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že se prostředí po fermentace nebo vodný roztok kyseliny klavulanové okyselí na pH 1,5 až 2,5.
21. Způsob podle některého z nároků 1 až 20, vyznačující se tím, že se nedostatečné čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát extrahuje organickým rozpouštědlem při teplotě 5 až 15 °C.
22. Způsob podle některého z nároků 1 až 21, vyznačující se tím, že se nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát extrahuje organickým rozpouštědlem ze skupiny uhlovodíku, etheru, halogenované uhlovodíky a ketony.
23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že se rozpouštědlo volí ze skupiny toluen, hexan, tetrahydrofuran, dioxan, diethylether, dichlormethan, chloroform, aceton, methylisobutylketon a ethylacetát.
24. Způsob podle některého z nároků 1 až 23, vyznačující se tím, že se nedostatečné čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede v organickém rozpouštědle do styku s jedním ekvivalentem nebo malým přebytkem aminu obecného vzorce II podle nároku 1, na 1 mol kyseliny.
25.Způsob podle že se amin 15 C.
26.Způsob podle jící se klavulanové v nároku 24, vyznačující se tím, kyseliny klavulanové vytvoří při teplotě 0 až některého z nároků 24 nebo 25, tím, že se amin přivádí do organickém rozpouštědle.

vyznačuproudu kyseliny
27.Způsob podle některého z nároků 1 až 26, vyznačující se tím, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem izoluje extrakcí organického rozpouštědla s obsahem aminu vo

-11CZ 281102 B6 dou a potom se sůl s aminem převádí na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.
28. Způsob podle některého z nároků 1 až 27, vyznačující se tím, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem nechá překrystalovat.
29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem nechá překrystalovat ze směsi vody a acetonu.
30. Způsob podle některého z nároků 1 až 29, vyznačující se tím, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem převádí na farmaceuticky přijatelnou sůl výměnou iontů.
31. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že se výměna iontů uskuteční průchodem soli s aminem vrstvou kationtoméničové pryskyřice v sodné, draselné nebo vápenaté formě.
32. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že se výměna iontů provádí protonací kationtů aminu prekursorem soli.
33. Způsob podle nároku 32, vyznačující se tím, že se jako prekursor soli užije ethylhexanoát draselný.
34. Způsob podle některého z nároků 30 až 33, vyznačující se tím, že se jako rozpouštědlo užije organické rozpouštědlo, voda nebo směs vody a organického rozpouštědla .
35. Způsob podle některého z nároků 30 až 33, vyznačující se tím, že se reakce provádí při teplotě nižší než je teplota místnosti.

36.Způsob podle nároku 35, vyznač u j í c í s e t í m, že se reakce provádí při teplotě 0 až 10 “C. 37.Způsob podle nároku 36, vyznač U 3 í C í s e t í m, že se reakce provádí při teplotě 0 až 0,5 °C. 38.Způsob podle : nároku 1 vyznač u 3 í c í s e t í m,

že se jako amin obecného vzorce II užije triethylentetramin.
39.Způsob podle některého z nároků 1 až 38, vyznačující se tím, že se užije amin obecného vzorce II, v němž jeden ze symbolů R⁴ a R⁵ znamená atom vodíku a druhý z těchto symbolu znamena alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku a R a R³ znamenají atom vodíku nebo alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku.
40.Sůl kyseliny klavulanové s aminem obecného vzorce II jako meziprodukt způsobu podle nároku 1.