CZ125495A3

CZ125495A3 - Process for preparing clavulanic acid and salt thereof

Info

Publication number: CZ125495A3
Application number: CZ951254A
Authority: CZ
Inventors: Michael Allen Cook; Robert Bennett Wilkins
Original assignee: Smithkline Beecham Plc
Priority date: 1992-06-11
Filing date: 1993-06-07
Publication date: 1996-06-12
Also published as: SE503077C2; JPH07507324A; CZ19396A3; AP471A; HU9402405D0; RO111192B1; HU9500610D0; AU4342793A; RU2081121C1; ES2095059T3; SE9600797L; GB2287026A; HK1003222A1; FI980630A0; CZ281102B6; AU1471697A; SI9300296A; EP0672670B1; CS202194A3; AU665159B2

Description

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby kyseliny klavular.cvi ího--použi-td^ a jejích solí, zejména farmaceuticky využitelných solí.

Dosavadní stav techniky

Kyselina klavulanová se obvykle připravuje fermentací mikroorganismu, který tuto kyselinu produkuje. Jde například o různé mikroorganismy z čeledi Streptomyces, například kmeny S. clavuligerus NRRL 2585, S. jumoninesis NRRL 5741, S. katsurahamanus IFO 13715 a Streptomyces sp.

-P 6621 FERM P2804y tak jak byly popsány například ve zveřejněné japonské patentové přihlášce é. Kokai 80-162993. Výsledné živné prostředí, obvykle vodné prostředí se běžným způsobem čistí a koncentruje, užívá se například filtrace

-potom achromatografického čištění, například podle G3 potorn | 508 977 a JP Kokai 80-62993,/paty se vodný roztok extrahuje organickým rozpouštědlem, čímž se získá roztok surové kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle.

V GB 1 508 977 mimo jiné popisuje, že soli kyseliny klavulanové je možno připravit tak, že se klavulanátový anion ve zfiltrovaném živném prostředí absorbuje na aniontopoáo/T7 měničovou pryskyřici,/pak/se eluce provádí elektrolytem, výsledný roztok se zbaví solí a nanese na další aniontoměničovou pryskyřici, z níž se eluce opět provádí elektrolytem, výsledný roztok se zbaví solí a rozpouštědlo se odstraní. Tímto způsobem je možno získat přijatelné výtěžky čisté látky, avšak použití pryskyřic znamená značné náklady a mimoto může představovat omezení při provádění postupu ve velkém měřítku. Bylo by tedy žádoucí navrhnout jiný postup bez použití velkého množství pryskyřic.

V britském patentovém spisu č. 1 5-Ξ 563 je popsán způsob výroby kyseliny klavulanové a jejích solí přes vysnážení klavular.átu lithného. V GB patentovém spisu č.

578 739 se popisují různé soli kyseliny klavulanové s aminy jako látky, vhodné pro farmaceutické použizí. E? č.

044 popisuje použití soli kyseliny klavulanové s terc.butylaminem pro přípravu kyseliny klavulanové a sůl je uváděna jako cenný meziprodukt. Uvedená sůl byla popsána v BE 862 211 jako vhodná složka farmaceutických prostředků. PT.94.908 popisuje použití solí kyseliny klavulanové s nižšími trialkylaminy a s dimethylaminem při čištění kyseliny klavulanové, postupuje se tak, že se připraví sůl kyseliny polom klavulanové s triethylaminem a tato sůl se /j^ak/ převádí na silyldiester kyseliny klavulanové. EP 887 178A popisuje způsob čištění kyseliny klavulanové, při němž je možno použít organické aminy pro tvorbu solí s aminy, tyto soli jsou meziprodukty v průběhu čištění kyseliny klavulanové z nečistého prostředku.

Kyselinu klavulanovou je možno vyjádřit strukturním vzorcem I

H

I co₂H

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru, postup spočívá v tom, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl uvede v organickém rozpouštědle do styku s aminem obecného vzorce ZZ kde R~ kde a“ a a^s

namená skupinu obecného vzorce

-CH.NKA C 2 2 m

2^2 nezávisle znamenají vodík, alky i o 1 až 5 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný aminoskupinou .

ZZ)

3.

R a R se nezávisle volí ze skupiny vodík, alkyl o až 6 atomech uhlíku, popřícadě substituovaný aminoskupinou nebo hydro xy skup i.ncu znamená 0 nebo ceLé číslo 1 až 5,

ii) sůl kyseliny klavulanové s aminem se izoluje, iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

Tam, kde jsou ůváděny. alkylové nebo substituované alkylové skupiny, obsahudz tyto skupiny v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, n^níAli uvedeno jinak. Vhodnými substituenty na aminosjíupinách \jsou alkylové skupiny.

itorrj

Při provádění způsobu podle vynálezu může být sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II užiza k čištění kyseliny klavulanové v průběhu její výroby. Z tohoto důvodu může být tato sůl vytvořena v roztoku kyseliny klavulanové nebo jejího labilního derivátu s obsahem neoistoo, sůl může být z roztoku izolována jako oddělená fáze, např; klad jako pevná sraženina, takže zbývající nečistoty zůstí vají v roztoku,/p-ek/se sůl převádí zpěo na kyselinu klavulancvcu nebo je možno vytvořit farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester této kyseliny.

Vhodné labilní deriváty kyseliny klavulanové zahrnují soli, například soli s alkalickými kovy, jako klavulahát lithný nebo sodný a také estery, například silylestery. Vhodnými labilními deriváty aminu vzorce II jsou soli, jako fosfalát, boritan, chlorid, chlorečnan, chloristan toluensulíor.át nebo a kar.oáoy, jako aoetáo nebo e.hylhez.ancáo. Ve výhodném provedení se uvádí do styku s kyselinou klavulanovou, která má být čišoěna, amin vzorce II jako o; kovv v roztoku v orzar.ickém rozooušoědle.

Uvedeny postup se s výhodou prováži v o rzaní o.-.em rozpouštědle, koeré je s výhodou v podsoaoě bezvodé, například obsahuje méně než 6 «, například 0,25 až Q,6 z vody na litr, může však obsahovat určité množství vody jako

rozpouštědlo pro kyselinu YrávuI'šhbVba~a~pro—arniTrvzoh Vodu je možno odstranit běžným způsobem, například cst ním. Voda může být v rozpouštědle rozpuštěná nebe může p.řítomna ve formě kapiček jako oddělená fáze.

oy~

Roztok kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle je možno získat tak, že se extrahuje okyselený vodný shora roztok kyseliny klavulanové, například/svreft-u/uvedené fermentační prostředí. V případě, že počátečním zdrojem kyseliny flavulanevé je živné prostředí, získané ferner.tací produkčního mikroorganismu pro kyselinu klavular.ovou, tak jak byly tyto mikroorganismy svrchu uvedeny, je možno postupovat tak, že se neextrahuje celé živné prostředí, feeýdržf a!o.

>^se: - . , před extrakoil alespoň z časti odstra.no z tohoto· proszredí pevný podíl, například filtrací. Mimoto může být žádoucí takto získaný vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentrovat^ tak, aby byl několikrát koncentrovanější než výchozí živné prostředí a obsahoval 10 až ICO, například 10 až 40 nebo 10 áž 25 g kyseliny klavulanové v 1 litru koncentrovaného roztoku.

Vhodným postupem pro tuto předběžnou končen-raci je například absorpce kyseliny klavulanové na aniontoměničovou pryskyř v o o n m roz - o x —, s přízadnvm o i s následnou elucí elektrolytu, nap říz ny x eridí s

Je ke vvnoor.e

Vhodnými organickými rozpouštědly, v nichž je možno kyselinu klavulanovou za účelem jejího čištění uvádět do styku s aminem obecného vzorce II, jsou například uhlovodíková rozpouštědla, jako toluen a hexan, dále ethery, jako tetrahydroíuran, dioxan nebo diethylether, halogenovaná rozpouštědla, jako dichlormethan nebo chloroform, ketony, jako aceton a methyl i sobutylketon a také estery, jako ethylacetaRozpouštědla, obsahující karbonylovou skupinu, například sloučeniny obecného vzorce III

G

II c

(m:

kde

R⁸

R' znamená alkyl nebo alkoxy skup inu vždy o 1 až δ atomech uhlíku a alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, τ-.namena mohou být příkladem podskupiny vhodných rozpouštědel, jde například o organické ketony nebo alkanoéty. Použít je možno také směs těchto rozpouštědel.

S výhodou se jako organické rozpouštědlo užije ta kové rozpouštědlo, které je možno přímo použít k extrakci okyselené vcdr.é směsi, jde například o organické alkylalkar.oáty, ketony a některé alifatické alkoholy nebo o so si těchto rczpouštěčel, jako jsou eťnylacetát, methylace; propylaoetát, n-butylacstéc, meťnylethylkeccn, methyliso: tylketon, tetrahydrofuran, butanol a směsi těchto rozpou! del. Σ uvedených · áoek jsou velmi vhodné methyliscbutylke' methylethylketcn a ethylacefét. Vhodné směsi zahrnují například směs methylethylketonu a methy liscbutylke tonu r.e: směs te trahy drof urar.u a neihylisocutylkeicr.u. Výhodným r·

Vhodným rozpouštědlem pro amin vzorce ZZ muže bj některé z rozpouštědel, uvedených pro kyselinu kZavular.: nebe pro její extrakci, například aceton, eťr.yZaoetát, metnyitsooutyixston a ir r/iKS

Zvláště výhodné je použití ketonu, například aoet nu v systému rozpouštědel vzhledem k tonu, že použití ketonu patrně brání tvorbě soli kyseliny klavuianové s aminem vzorce II ve formě oleje.

Pro přípravu soli kyseliny klavuianové se obvykle užívá ekvivalentní množství aminu vzorce IZ nebo malý přebytek, vztaženo na 1 mol kyseliny klavuianové. Roztoky kyseliny klavuianové a aminu vzorce II je například možno pomalu mísit za stálého míchání, výsledná směs se ještě určitou dobu míchá po zkončeném přidávání. Reakce mezi kyselinou klavulancvou nebo jejím labilním derivátem a aminem se provádí při teplotě nižší než je teplota místnosti, například 0 až 15,· 0 až 10 nebo 0 až 5 °C. Vhodná koncentrace kyseliny klavuianové nebo jejího labilního derivátu v roztoku je alespoň 1,0 g na litr, například 1,0 až 4,0 g na litr. Muže být výhodné dále zahustit extrakt v rozpouštědle na vyšší než uvedené koncentrace, například r.a' koncentrace 20 g/litr.

Je také mošno postupovat tak, že se amin vzorce ZZ přivádí do proudu roztoku'kyseliny klavuianové v rozpouštědle tak, že ke tvorbě soli dochází v tomto proudu, přičemž sul zůstává v roztoku nebo se tvoří částice kapiček, které zůstávají v roztoku nebo v suspenzi. Amin je možno přivádět jako takový nebe v roztoku, například ve stejném organickém rozpouštědle, v němž je rozpuštěna ky klávulanová

P°

Požadovanou sál kyseliny klavulancvé s aminem cbeoněho vzorce II je /aaéy mcžno izolovat. Tímto způsobem je možno oddělit uvedenou súl od většiny nečistot nebo ode všech nečistot. Izolaci je možno uskutečnit běžným způsobem, naoříklad odstředěním nebe filtrací.

Je také možno postupovat tak, že se sůl kyseliny klavulancvé a aminu vzorce II izoluje z organického rozpouštědla, které je zcela nebo z části nemísitelr.é s vodou tak, že se toto rozpouštědlo uvede do styku s vodou, takže se sůl, která je v roztoku nebo v suspenzi z organického rozpouštědla extrahuje a vznikne roztok soli ve vodě. Vzhledem k tomu, že soli uvedeného typu jsou ve vodě dceře rozpustné, může být získaný vedný roztok velmi koncentrovaný, například 20 až 30 % hmoí

Tímto způsobem zůstane převážná většina organických nečistot v roztoku v organickém rozpouštědle, /kdežto/ kyše- Zatímco lina klavulanová přechází ve formě své soli s aminem vzorce II v poměrně čistém stavu do vodného rozteku. Takto získaný vodný roztok kyseliny klavulanové je možno dále zpracovávat běžným způsobem, například různými čisticími postupy, nebo je možno kyselinu klavular.ovou převést na farmaceuticky přijatelnou sůl nebe ester, jak bude dále podrobněji popsáno.

potom

Je také možno postupovat tak, ze se kyselina klavulanová a amin mísí v roztoku v prvním organickém rozpouštědle, se vytvořená sůl vysráží z roztoku přidáním cruhenc crzar.zcxeno rozocustecoa, m ronoc s vynocou organooxy pouštedlem může být halogenované rozpouštědlo, alkohol, například ethanol nebo rozpouštědlo ce III, jako aoetor. nebo methylisc

V^jěťinonf z~mcžných provedení vynaTežtT^e~íSC'Shtrc-C⁵' užít sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II ve formě solvátu v acetonu. Uvedené solváty mají v některých případech výhodnější stálost a čistotu ve srovnání s čistou solí kyseliny klavulanové a aminu. Solváty tohoto typu jsou zvláště vhodné také vzhledem k tomu, že je často možné je izolovat jako velmi čisté-a stálé krystalické látky.

tak<z

Solváty solí kyseliny klavulanové a aminu vzorce II s acetonem tvoří /pewtěš/ součást podstaty vynálezu. V průběhu izolace a/nebo sušení může být určité množství acetonu ztraceno vzhledem k nedostatečné síle solvataoe, množství acetonu v produktu však není kritické.

Solváty uvedeného typu je možno vytvořit tak, že se kyselina klavular.ová uvede do styku s aminem vzorce II v přítomnosti acetonu. Obvykle se postupuje tak, že se roztok s obsahem kyseliny klavulanové mísí s alespoň stejným objemem acetonu a aminem vzorce II při srážení soli.

Amin vzorce II je možno rozpustit v acetonu a získaný roztok mísit s roztokem kyseliny klavulanové v organické: ΓΌ ZC O U.S w eč.13 VC-CCLní CO Z < CTCS ~ β 3 Z 3.Π Γ'Τ'ι’Ζ ’ t? 3ΖΓ// — “ acetát, tetrahydrofuran, methylethylketo.o, methylisobuty 1^ keton a směsi těchto rozpouštědel, výhodným rozpouštědlem je ethylacetát. Je také možno postupovat tak, že se vodný roztok soli kyseliny klavulanové s aminem vzorce II, získaný extrakcí vodou svrchu uvedeným způsobem mísí s acetonem za vzniku solvátu. S výhodou se mísí koncentrovaný vodný roztok soli s přebytkem acetonu za vzniku solvátu.

Překrystalování soli kyseliny klavulanové nebo solvátu s acetonem může být výhodné pro další snížení množstv: nečistot. Vhodným rozpouštědlem pro toto překrystalování je směs vody a acetonu. Překrystalování je možno uskutečni obvyklým způsobem, například tak, že se sůl nebo solvát ro:

pustí ve vodě, přidá se malé mnbžstvY^čětbT?u'Yšmeš” se z: pobom truje a /pak/ se přidá větší množství acetonu, popřípadě z = míchání a/nebc chlazení, čímž se získá překnystalovaný v;

sledny produkt.

také Podstatu vynálezu tvoří /revně-ě/ způsob výroby kyseliny klavulanové nebo jejího farmaceuticky přijatelného esteru nebo její farmaceuticky přijatelné soli, který spcčí vá v tom, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

QFarmaceuticky přijatelné soli a estery kyše klavulanové, které je možno připravit způsobem pcdl nálezu zahrnují sloučeniny, popsané v GB 1 5 i 508 573.

e v·/ óVíasze vnocnvmi solemi, přijaté-nymi z rarmaoeutickeho hlediska jsou soli s alkalickými kovy a s kovy alkalickoh zemin, například soli sodné, draselné, vápenaté a horečnaté. Z těchto solí jsou zvláště výhodné soli sodné a draselné a zejména soli draselné.

Vhodné estery zahrnují sloučeniny, které po rozště per.í dávají vznik kyselině klavulanové r.ebo její soli, jde zejména o štěpení chemickými postupy, jako je hydrogenolýza nebo biologickými metodami.

Sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II je popřípadě ve formě solvátu s acetonem možno převést na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo estery například výměnou iontů v případě volné kyseliny nebo soli nebo esteriíikací.

t použitím

Λ Srf ** O 'v i c e v s o dr. é □měničovou

Výměnu iontů je možno uskutečni ničových pryskyřic, například tak, že s projít vrstvou kationtoměničové pryskyř né nebo vápenaté formě. Vhodnou kationt cí je například Amberlit IR 120 a podob i o r. torně -

y.

Výměnu iontů je možno uskutečnit také reakcí s protoncvar.ým kationtem aminu a prekursorem soli, může jít o bani, například uhličitan, hydrogenuhlicitan nebo hydroxid farmaceuticky přijatelného alkalického kovu nebo kovu alkalických zemin nebo o sůl organické karboxylové kyseliny s farmaceuticky přijatelným kationtem, například alkalickým kovem nebo kovem alkalických zemin, jde například o sůl alkar.ové kyseliny obecného vzorce IV ¹ 0

R - CO₂H pot&W kde znamená alkylovou skupinu, obsahující například 1 až 20 atomů uhlíku, s výhodou 1 až 8 uhlíkových atomů. Překladem vhodných solí mohou oýt acetáty, prcpior.áty nebo ethyihexanoáty, výhodný je 2-ethylhexar.oát draselný a 2-ethylhexancát sodný. Typicky se postupuje mak, že se sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II v roztoku uvede do reakce se selí alkalického kovu s kyselinou obecného vzorce IV v roztoku nebo v suspenzi ve vhodném rozpouštědle, například v organickém rozpouštědle, ve vodě nebo ve směsi vody a organického rozpouštědla, například isopropar.olu.

Ve výhodném provedení se postupuje tak, že se mísí sůl kyseliny klavulanové s aminem vzorce II a sůl prekurserové sloučeniny, /r-ečc-ž/ se nechá krystalizovat vzniklá farmaceuticky přijatelná sůl. Reakci je možno provádět s výhodou při teplotě nižší než teplota místnosti, například C až 15 nebo 0 až 10 °C, s výhodou 0 až 0,5 °C. S výhodou se sůl kyseliny klavulanové s aminem vytvoří ve vodném roztoku ne bo může být vvsrážena smísením vodného roztoku s přebytkem acetonu.

amin forma soli stálost soli triethyleňtetramín bleděžlutá pevná látka obtížné stanovení

Příklad 2 shora.

Byly připraveny dva vzorky /sv-rehty uvedené sloučeni ny, pno každý z nich byl získán odlišný výsledek případe byl získán středně vysoký výtěžek pročuk hem vody, který odpovídá obsahu vody v hemihydrá hém případě byl v nízkém výtěžku získán bezvodý < U-.t.

tu s oosa,tu, ve drup rodukt.

2A. Roztok 0,003-5 molu kyseliny klavulanové ve 25 ml tetrahydrofuranu byl zpracováván přidáním 0,4 g, 0,00245 molu triethylaminu, smísením vznikl homogenní čirý roztok. Krystalizace byla vyvolána naočkováním a ukončena stáním přes noc při teplotě +4 °C. Produkt byl odfiltrován a usušen ve vakuu. Ve výtěžku 63 % bylo získáno 0,7 g velkých špinavěbílých jehliček.

Analýza B 24639 pro C₁₄H₂4^N2°S vypočteno C 56,05, K 8,00, N 9,33 % nalezeno C 54,74, H 7,95, N 8,94 % pro C_l4H_2dN₂ ⁰S * ^{1/2 ?}'2° vvocč”°no C 56,36, H 8,14, N 9,05 %.

Ar.alvza A 15220: imidazol 61,0, 61,1 % (vy.

čisoota přibližně 95,0 veda 2,64 % (prohemihyzra ccc

23. Roztok 0,021 molu kyseliny klavulanové v 52 ~ tetrahydrcfuranu se zpracovává přidáním 2,1 z. 0,221 triethylaminu, smísením vznikne čirý roztok, který sť očkuje krystalky výsledné soli. Produkt počne krystal při teplotě místnosti ve formě dlouhých jehliček, kry lizaoe je ukončena cřes noc při teplotě t- '0. Pro dul oddělí filtrací, na filtru se promyje přibližně 12 ~stvého .rozpouštědla a 20 mi diethyleoheru a £s-ak/ se s\ ve vakuu, čímž se ve výtěžku 2? % získá 1,7 z produk' formě špinavě bílých krystalků.

sťo/n

Analýza B 24575 pro ^ciz^H2-^,W2°5 vypočteno C 55,05, K 3,00, N

9,32 % nalezeno C 55,07, K 7,83, M 9,32 vypočteno pro C. 1/2 H^O: C ·_· q i

Analýza A 15258: imidazol 55,1, 55,1 % (vypočteno 55,3 %, čistota přibližně 92,2 %' voda 0,9% /alfa/²^ = +47,0° (c = 0,2 % ve vodě).

Uvedené dva příklady ilustrují tvorbu vysoce čís tých solí kyseliny klavulanové z roztoků této kyseliny v organických rozpouštědlech.

Tento produkt se při stání na vzduchu v průběhu několika dnů rozkládá.

Příklad 3

Vzorek triethylaminklavulanátu z příkladu 2 se rozpustí v co nejmenším množství chladné vody. K roztoku se přidá koncentrovaný roztok 2-ethylhexanoátu draselného v isopropanolu za stálého míehání. Po delší době míchání se krystalky klavulanátu draselného vyloučí a je možno je odfiltrovat, promýt chladným isopropanolem a usušit.

f-Zastupu je

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob výroby a/nebo Čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl uvede v organickém rozpouštědle do styku s aminem obecného vzorce II (II) kde R^ znamená skupinu obecného vzorce mech uhlíku, popřípadě substituovaný aminoskupinou
2-3

R a R se nezávisle volí ze skupiny vodík,' alkyl o

1 až 6 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný aminoskupinou nebo hydroxyskupinou m

znamená 0 nebo celé číslo 1 až 5, ii) sůl kyseliny klavulanové s aminem se izoluje, iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

2. Způsob podle nároku 1, vyznačuj í.c í se t í m , že se jako labilní derivát kyseliny klavulanové užije sůl s alkalickým kovem.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačuj íc í se t í m , že se jako sůl kyseliny klavulanové s alkalickým kovem užije sodná nebo lithná sůl.
4. Způsob podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se reakce provádí v bezvodém organickém rozpouštědle.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačuj íc í se t í m , že organické rozpouštědlo obsahuje méně než 6 g vody na litr.
6. Způsob podle nároku 4, vyznačuj íc í se t í m, že organické rozpouštědlo obsahuje 0,25 až 0,6 g vody na litr.
7. Způsob podle některého z nároků 4 až 6, vyznačující se tím, že se organické rozpouštědlo zbaví vody odstředěním.
8. Způsob podle některého z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že se zpracovává kyselina klavulanová s nedostatečnou čistotou, získaná fermentací pomocí produkčního mikroorganismu.
9. Způsob podle nároku 8, vyznačuj íc í se t i m , že se zpracovává kyselina klavulanová, po

- 18 fermentaci alespoň částečně čištěná odstraněním alespoň části suspendovaných pevných částic.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačuj íc í se t í m , že se pevné částice odstraní filtrací.
11. Způsob podle některého z nároků 8 až 10, v y značující se tím, že se zpracovává kyselina klavulanová po fermentaci ve vodném roztoku, před extrakcí předem koncentrovaném.
12. Způsob podle nároku 11, vyznačuj íc í se t í m , že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentruje na obsah kyseliny 10 až 100 mg/ml.
13. Způsob podle nároku 11, vyznačuj íc í se t í m , že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentruje na obsah kyseliny 10 až 40 mg/ml.
14. Způsob podle nároku 11, vyznačuj íc í se t í m , že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentruje na obsah kyseliny 10 až 25 mg/ml.
15. Způsob podle některého z nároků 11 až 14, v y značující. se tím, že se vodný roztok předem koncentruje absorpcí kyseliny klavulanové na iontoměničovou pryskyřici s následnou elucí kyseliny klavulanové vodným roztokem elektrolytu.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačuj íc í se t í m , že se k elucí jako elektrolyt užije chlorid sodný.
17. Způsob podle některého z nároků 15 nebo 16, vyznačující se tím, že se získaný koncentrát zbaví solí.

- 19
18. Způsob podle některého z nároků 8 až 17, vyznačující se tím, že se prostředí po fermentaci nebo vodný roztok kyseliny klavulanové před extrakcí rozpouštědlem okyselí.
19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se t í m , že se prostředí po fermentaci nebo vodný roztok kyseliny klavulanové okyselí na pH 1 až 3.
20. Způsob podle nároku 18, vyznačuj íc í se t í m , že se prostředí po fermentaci nebo vodný roztok kyseliny klavulanové okyselí na pH 1,5 až 2,5.
21. Způsob podle některého z nároků 1 až 20, vyznačující se tím, že se nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát extrahuje organickým rozpouštědlem při teplotě 5 až 15 °C.
22. Způsob podle některého z nároků 1 až 21, vyznačující se tím, že se nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát extrahuje organickým rozpouštědlem ze skupiny uhlovodíku, etheru, halogenované uhlovodíky a ketony.
23. Způsob podle nároku 22, vyznačuj íc í se t í m , že se rozpouštědlo volí ze skupiny toluen, hexan, tetrahydrofuran, dioxan, diethylether, dichlormethan, chloroform, aceton, methylisobutylketon a ethylacetát.
24. Způsob podle některého z nároků 1 až 23, vyznačující se tím, že se nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede v organickém rozpouštědle do styku s jedním ekvivalentem nebo malým přebytkem aminu obecného vzorce II podle nároku 1, na

1 mol kyseliny.