CZ54495A3

CZ54495A3 - Process for preparing and/or purification of clavulanic acid

Info

Publication number: CZ54495A3
Application number: CZ95544A
Authority: CZ
Inventors: Michael Allen Cook; Robert Bennett Wilkins
Original assignee: Smithkline Beecham Plc
Priority date: 1992-06-11
Filing date: 1993-06-07
Publication date: 1997-08-13
Also published as: SE9600797L; AU665159B2; HU212583B; FI103973B1; GB2287025A; FI951414A0; HK1003245A1; SK153294A3; MA22907A1; DK170569B1; RO111192B1; SE9404290D0; DK0644887T3; NL9320037A; FI980631A0; EP0672670A1; HUT68775A; GR3019006T3; GR3022006T3; HK1007311A1

Description

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby kyše: jejího použití a jejích solí, zejména farma·: telných solí.

lny klavulanové, euticky využiDosavadní stav techniky

Kyselina klavulanová se obvykle připravuje fermentací mikroorganismu, který tuto kyselinu produkuje. Jde například o různé mikroorganismy z čeledi Streptomyces, například kmeny S. clavuligerus NRRL 2585, S. jumoninesis NRRL 5741, S. katsurahamanus IFO 13716 a Streptomyces sp.

P 6621 FERM P2804, tak jak byly popsány například ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. Kokai 80-162993. Výsledné živné prostředí, obvykle vodné prostředí se běžným způsobem čistí a koncentruje, užívá se například filtrace a pak chromatografického čištění, například podle G3 1 508 977 a JP Kokai 80-62993, pak se vodný roztok extrahuje organickým rozpouštědlem, čímž se získá roztok surové kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle.

V GB 1 508 977 mimo jiné popisuje, že soli kyseliny klavulanové je možno připravit tak, že se klavulanátový anion ve zfiltrovaném živném prostředí absorbuje na aniontoměničovou pryskyřici, pak se eluce provádí elektrolytem, výsledný roztok se zbaví solí a nanese na další aniontoměničovou pryskyřici, z níž se eluce opět provádí elektrolytem, výsledný roztok se zbaví solí a rozpouštědlo se odstraní. Tímto způsobem je možno získat přijatelné výtěžky čisté látky, avšak použití pryskyřic znamená značné náklady a mimoto může představovat omezení při provádění postupu ve velkém měřítku. Bylo by tedy žádoucí navrhnout jiný postup bez použití velkého množství pryskyřic.

V britském patentovém spisu č. 1 5-3 553 je popsán způsob výroby kyseliny klavulanové a jejích solí přes vysrážení klavulanátu lithného. V C-3 pacentcvém spisu č.

578 739 se popisují různé soli kyseliny klavulanové s aminy jako látky, vhodné pro farmaceutické použití. E? č.

044 popisuje použití soli kyseliny klavulanové s terc.butylaminem pro přípravu kyseliny klavulanové a sůl je uváděna jako cenný meziprodukt. Uvedená sůl byla popsána v BE 862 211 jako vhodná složka farmaceutických prostředků. PT.94.908 popisuje použití solí kyseliny klavulanové s nižšími trialkylaminy a s dimethylaminem při čištění kyseliny klavulanové, postupuje se tak, že se připraví sůl kyseliny klavulanové s triethylaminem a tato sůl se pak převádí na silyldiester kyseliny klavulanové. EP 887 178A popisuje způsob čištění kyseliny klavulanové, při němž je možno použít organické aminy pro tvorbu solí s aminy, tyto soli jsou meziprodukty v průběhu čištění kyseliny klavulanové z nečistého prostředku.

Kyselinu klavulanovou je možno vyjádřit strukturním vzorcem I

CO₂H

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo jejích farmaceuticky přijatelných soli, tento postup spočívá v tom, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede v roztoku v organickém rozpouštědle do styku s terč.oktylaminem, ii) sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem, která se tímto způsobem vytvoří, se izoluje a iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

Při provádění způsobu podle vynálezu může být sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem užita k čištění kyseliny klavulanové v průběhu její výroby. Z tohoto důvodu může být tato sůl vytvořena v roztoku kyseliny klavulanové nebo jejího labilního derivátu s obsahem nečistot, sůl může být z roztoku izolována jako oddělená fáze, například jako pevná sraženina, takže zbývající nečistoty zůstávají v roztoku, pak se sůl přivádí zpět na kyselinu klavulanovou nebo je možno vytvořit farmaceuticky přijatelnou sůl této kyseliny

Vhodné labilní deriváty kyseliny klavulanové zahrnují soli, například soli s alkalickými kovy, jako klavulanát lithný nebo sodný a také estery, například silylestery.

Uvedený postup se s výhodou provádí v organickém rozpouštědle, které je s výhodou v podstatě bezvodé, například obsahuje méně než 6 g, například 0,25 až 0,6 g vody na litr, může však obsahovat určité množství vody jako rozpouštědlo pro kyselinu klavulanovou a pro terč.oktylamin. Vodu je mož no odstranit běžným způsobem, například odstředěním. Voda může být v rozpouštědle rozpuštěná nebo může být přítomna ve formě kapiček jako oddělená fáze.

Roztok kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle je možno získat tak, že se extrahuje okyselený vodný roztok kyseliny klavulanové, například svrchu uvedené fermentační prostředí. V případě, že počátečním zdrojem kyseliny klavulanové je živné prostředí, získané fermentací produkčního mikroorganismu pro kyselinu klavulanovou, tak jak byly tyto mikroorganismy svrchu uvedeny, je možno postupovat tak, že se neextrahuje celé živné prostředí, nýbrž se před extrakcí alespoň z části odstraní z tohoto prostředí pevný podíl, například filtrací. Mimoto může být žádoucí takto získaný vodný roztok kyseliny klavulanové předem koncentrovat tak, aby byl několikrát koncentrovanější než výchozí živné prostředí a obsahoval 10 až 100, například 10 až 40 nebo 10 až 25 g kyseliny klavulanové v 1 litru koncentrovaného roztoku.

Vhodným postupem pro tuto předběžnou koncentraci je například absorpce kyseliny klavulanové na aniontoměničovou pryskyřici s následnou elucí kyseliny klavulanové vodným roztokem elektrolytu, například chloridem sodným s případným odstraněním solí. Je také výhodné vodný roztok okyselit, okyselit je možno přímo živné prostředí nebo koncentrovaný vodný roztok před extrakcí rozpouštědlem, například na pH 1 až 3, vhodné rozmezí je pH 1,5 až 2,5. Je také výhodné extrakt organickým rozpouštědlem vysušit nebo zbavit vody před tvorbou soli s terč.oktylaminem, například na méně než 6 g vody/litr. Extrakt se s výhodou provádí při teplotě 5 až 15 °C.

Vhodnými organickými rozpouštědly, v nichž je možno kyselinu klavulanovou za účelem jejího čištění uvádět do styku s terč.oktylaminem, jsou například uhlovodíková rozpouštědla, jako toluen a hexan, dále ethery, jako tetrahydrofuran, dioxan nebo diethylether, halogenovaná rozpouštědla, jako dichlormethan nebo chloroform, ketony, jako aceton a methylisobutylketon a také estery, jako ethylacetát. Rozpouštědla, obsahující karbonylovou skupinu, například sloučeniny obecného vzorce III q π q

R° - C - R^ (III) kde θ

R znamená alkyl nebo alkoxyskupinu vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, a

R znamena alkyl o 1 az 6 atomech uhlíku, mohou být příkladem podskupiny vhodných rozpouštědel, jde například o organické ketony nebo alkanoáty. Použít je možno také směs těchto rozpouštědel.

S výhodou se jako organické rozpouštědlo užije takové rozpouštědlo, které je možno přímo použít k extrakci okyselené vodné směsi, jde například o organické alkylalkanoáty, ketony a některé alifatické alkoholy nebo o směsi těchto rozpouštědel, jako jsou ethylacetát, methylacetát, propylacetát, n-butylacetát, methylethylketon, methylisobutylketon, tetrahydrofuran, butanol a směsi těchto rozpouštědel. Z uvedených látek jsou velmi vhodné methylisobutylketon, methylethylketon a ethylacetát. Vhodné směsi zahrnují například směs methylethylketonu a methylisobutylketonu nebo směs tetrahydrofuranu a methylisobutylketonu. Výhodným rozpouštědlem je ethylacetát.

Vhodným rozpouštědlem pro terč.oktylamin může být některé z rozpouštědel, uvedených pro kyselinu klavulanovou nebo pro její extrakci, například aceton, ethylacetát, methylisobutylketon a methylethylketon.

Zvláště výhodné je použití ketonu, například acetonu v systému rozpouštědel vzhledem k tomu, že použití ketonu patrně brání tvorbě soli kyseliny klavulanové s terc.oktylaminem ve formě oleje.

Pro přípravu soli kyseliny klavulanové se obvykle užívá ekvivalentní množství terč.oktylaminu nebo malý přebytek, vztaženo na 1 mol kyseliny klavulanové. Roztoky kyseliny klavulanové a terč.oktylaminu je například možno pomalu mísit za stálého míchání, výsledná směs se ještě určitou dobu míchá po zkončeném přidávání. Reakce mezi kyselinou klavulanovou nebo jejím labilním derivátem a aminem se provádí při teplotě nižší než je teplota místnosti, například 0 až 15, 0 až 10 nebo 0 až 5 °C. Vhodná koncentrace kyseliny klavulanové nebo jejího labilního derivátu v roztoku je alespoň 1,0 g na litr, například 1,0 až 4,0 g na litr. Může být výhodné dále zahustit extrakt v rozpouštědle na vyšší než uvedené koncentrace, například na koncentrace 20 g/litr.

Je také možno postupovat tak, že se terč.oktylamin přivádí do proudu roztoku kyseliny klavulanové v rozpouštědle tak, že ke tvorbě soli dochází v tomto proudu,přičemž sůl zůstává v roztoku nebo se tvoří částice kapiček, které zůstávají v roztoku nebo v suspenzi. Amin je možno přivádět jako takový nebo v roztoku, například ve stejném organickém rozpouštědle, v němž je rozpuštěna kyselina klavulanová.

Ί

Požadovanou sůl kyseliny klavulanové s terc.oktylaminem je pak možno Izolovat. Tímto způsobem je možno oddělit uvedenou sůl od většiny nečistot nebo ode všech nečistot. Izolaci je možno uskutečnit běžným způsobem, například odstředěním nebo filtrací.

Je také možno postupovat tak, že se sůl kyseliny klavulanové a terč.oktylaminu izoluje z organického rozpouštědla, které je zcela nebo z části nemísitelné s vodou tak, že se toto rozpouštědlo uvede do styku s vodou, takže se sůl, která je v roztoku nebo v suspenzi z organického rozpouštědla extrahuje a vznikne roztok soli ve vodě. Vzhledem k tomu, že soli uvedeného typu jsou ve vodě dobře rozpustné, může být získaný vodný roztok velmi koncentrovaný, například 20 až 30 % hmotnostních.

Tímto způsobem zůstane převážná většina organických nečistot v roztoku v organickém rozpouštědle, kdežto kyselina klavulanová přechází ve formě své soli s terc.oktylaaminem v poměrně čistém stavu do vodného roztoku. Takto získaný vodný roztok kyseliny klavulanové je možno dále zpracovávat běžným způsobem, například různými čisticími postupy, nebo je možno kyselinu klavulanovou převést na farmaceuticky přijatelnou sůl jak bude dále podrobněji popsáno .

Je také možno postupovat tak, že se kyselina klavulanová a amin mísí v roztoku v prvním organickém rozpouštědle, načež se vytvořená sůl vysráží z roztoku přidáním druhého organického rozpouštědla. Prvním rozpouštědlem je s výhodou organický ester, jako ethylacetát a druhým rozpouštědlem může být halogenované rozpouštědlo, jako chloroform, ether, jako diethylether, uhlovodík, jako toluen, alkohol, například ethanol nebo rozpouštědlo obecného vzorce III, jako aceton nebo methylisobutylketon.

Některé ze svrchu uvedených solí kyseliny klavulanové jsou nové látky a tvoří rovněž součást podstaty vynálezu. Jde například o soli kyseliny klavulanové s fenylethylaminem, terč.amylaminem, l-hydroxy-2-methyl-2-propylaminem, cyklopentylaminem, cyklohexylaminem, 1-adamantanaminem, N-ethylpiperidinem, N,N-dimethylcyklohexylaminem a Ν,κ'-diisopropylethylendiaminem.

V jednom z možných provedení vynálezu je možno použít sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem ve formě solvátu v acetonu. Uvedené solváty mají v některých případech výhodnější stálost a čistotu ve srovnání s čistou solí kyseliny klavulanové a aminu. Solváty tohoto typu jsou zvláště vhodné také vzhledem k tomu, že je často možné je izolovat jako velmi čisté a stálé krystalické látky.

Solváty solí kyseliny klavulanové a terč.oktylaminu s acetonem tvoří rovněž součást podstaty vynálezu. V průběhu izolace a/nebo sušení může být určité množství acetonu ztraceno vzhledem k nedostatečné síle solvatace, množství acetonu v produktu však není kritické.

Solváty uvedeného typu je možno vytvořit tak, že se kyselina klavulanová uvede do styku s terč.oktylaminem v přítomnosti acetonu. Obvykle se postupuje tak, že se roztok s obsahem kyseliny klavulanové mísí s alespoň stejným objemem acetonu a terč.oktylaminem při srážení soli.

Terč.oktylamin je možno rozpustit v acetonu a získaný roztok mísit s roztokem kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle. Vhodné organické rozpouštědlo zahrnuje ethylacetát, tetrahydrofuran, methylethylketon, methylisobutylketon a směsi těchto rozpouštědel, výhodným rozpouštědlem je ethylacetát. Je také možno postupovat tak, že se vodný roztok soli kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem, získaný extrakcí vodou svrchu uvedeným způsobem mísí s acetonem za vzniku solvátu. S výhodou se mísí koncentrovaný vodný roztok soli s přebytkem acetonu za vzniku solvátu.

Překrystalování soli kyseliny klavulanové nebo solvátu s acetonem může být výhodné pro další snížení množství nečistot. Vhodným rozpouštědlem pro toto překrystalování je směs vody a acetonu. Překrystalování je možno uskutečnit obvyklým způsobem, například tak, že se sůl nebo solvát roz pustí ve vodě, přidá se malé množství acetonu, směs se zfil truje a pak se přidá větší množství acetonu, popřípadě za míchání a/nebo chlazení, čímž se získá překrystalovaný výsledný produkt.

Podstatu vynálezu tvoří rovněž způsob výroby kyseliny klavulanové nebo jejího farmaceuticky přijatelného esteru nebo její farmaceuticky přijatelné soli, který spočívá v tom, že se sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

Farmaceuticky přijatelné soli kyseliny klavulanové, které je možno připravit způsobem podle vynálezu zahrnují sloučeniny, popsané v GB 1 508 977 a 1 508 978.

Zvláště vhodnými solemi, přijatelnými z farmaceutického hlediska jsou soli s alkalickými kovy a s kovy alkalických zemin, například soli sodné, draselné, vápenaté a horečnaté. Z těchto solí jsou zvláště výhodné soli sodné a draselné a zejména soli draselné.

Sůl kyseliny klavulanové s . terč.oktylaminem je popřípadě ve formě solvátu s acetonem možno převést na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo estery, například výměnou iontů v případě volné kyseliny nebo soli nebo esterifikací.

Výměnu iontů je možno uskutečnit použitím iontoměničových pryskyřic, například tak, že se roztok soli nechá projít vrstvou kationtoměničové pryskyřice v sodné, drasel né nebo vápenaté formě. Vhodnou kationtoměničovou pryskyři cí je například Amberlit IR 120 a podobné materiály.

Výměnu iontů je možno uskutečnit také reakcí s proto novaným kationtem sminu a prekursorem soli, může jít o bázi, například uhličitan, hydrogenuhličitan nebo hydroxid farmaceuticky přijatelného alkalického kovu nebo kovu alka lických zemin nebo o sůl organické karboxylové kyseliny s farmaceuticky přijatelným kationtem, například alkalickým kovem nebo kovem alkalických zemin, jde například o sůl alkanové kyseliny obecného vzorce IV

R¹⁰ - CO₂H (IV) kde R¹⁰ znamená alkylovou skupinu, obsahující například 1 až 20 atomů uhlíku, s výhodou 1 až 8 uhlíkových atomů. Příkladem vhodných solí mohou být acetáty, propionáty nebo ethylhexanoáty, výhodný je 2-ethylhexanoát draselný a 2-ethylhexanoát sodný. Typicky se postupuje tak, že se sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem v roztoku uvede do reakce se solí alkalického kovu s kyselinou obecného vzorce IV v roztoku nebo v suspenzi ve vhodném rozpouštědle, například v organickém rozpouštědle, ve vodě nebo ve směsi až 14 vody a organického rozpouštědla, například isopropanolu.

Ve výhodném provedení se postupuje tak, že se mísí sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem a sůl prekursorové sloučeniny, načež se nechá krystalizovat vzniklá farmaceuticky přijatelná sůl. Reakci je možno provádět s výhodou při teplotě nižší než teplota místnosti, například 0 až 15 nebo O až 10 °C, s výhodou 0 až 0,4 °C. S výhodou se sůl kyseliny klavulanové s aminem vytvoří ve vodném roztoku nebo může být vysrážena smísením vodného roztoku s přebytkem ac e tonu.

Vhodné estery zahrnují sloučeniny, které po rozštěpení dávají vznik kyselině klavulanové nebo její soli, jde zejména o štěpení chemickými postupy, jako je hydrogenolýza nebo biologickými metodami.

Jsou zahrnuty i ty postupy, při nichž se ester získá z již uvolněné kyseliny klavulanové. Možná esterifikace je uveden například v GB 1 508 977 a 1 508 978, způsobem podle vynálezu je však možno získat soli i estery kyseliny klavulanové snadnějším způsobem a v čistší formě.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následují čími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

V následující tabulce bylo použito téhož postupu, při němž byl amin míšen s kyselinou klavulanovou v tetrahydrofuranovém roztoku, pevná sůl byla získána rychlou krystalizací.

amin forma soli terč.oktylamin krystalická pev: la~ka

S’

2'

l-hydroxy-2-methyl- krystalicl· -2-propylamin amoniak krystalická sůl

770 h, 50% RH malé odbarvení

Příklad 2

Při dále uvedených postupech byla vytvořena sůl klavulanové kyseliny s aminem v roztoku v prvním organickém rozpouštědle a pak byla z roztoku vysráže.na ve formě pevné sraženiny přidáním druhého organického rozpouštědla.

2a. Terč.oktylamin

Zásobní roztok kyseliny klavulanové v ethylacetátu byl připraven tak, že obsahoval 28 g kyseliny v nečisté formě na 1 litr, kyselina byla získána extrakcí fermentačního prostředí S. clavuligerus ethylacetátem. Ke 45 ml roztoku bylo přidáno 0,84 g terč .oktylaminu. Po 10 minutách se směs zakalila a začaly se vylučovat jemné krystalky soli. K podílu tohoto roztoku byl přidán chloroform, čímž se vytvořily větší jehličky. K dalšímu podílu byl přidán aceton, čímž se opět vytvořily jehličkovité krystalky, které však byly menší a tvořily se pomaleji než při použití chloroformu.

Ke zbytku roztoku bylo přidáno přibližně 20 ml chloroformu a pak objem toluenu, přibližně odpovídající celému počácečnímu objemu roztoku, čímž došlo k vystižení velkého množství jehličkovitých krystalků.

2b.

Terč.oktylamin

K 500 mí zásobního roztoku, připraveného poc prokladu 2a, bylo přidáno 6,7 g terč.oktylaminu. Roztok se stal mírně neprůhledný. Bylo přidáno 20 ml acetonu, čímž došlo k vyěeření roztoku. K podílu roztoku byl pak přidán diethyiether, čímž došlo k okamžité krystalizaci. Ke zbývající většině roztoku bylo pak přidáno 55 ml diethyietheru, čímž se vytvořily krystalky. Tyto krystalky byly odfiltrovány a promyty acetonem. Bylo získáno 12,9 g produktu, což znamená výtěžek kyseliny klavulanové z roztoku 77 %.

Příklad 3

Roztok kyseliny klavulanové v ethylacetátu s obsahem přibližně 20 mikrogramů uvedené látky v 1 ml byl zředěn stejným objemem acetonu. Pak byl v průběhu půl hodiny při teplotě 10 °C přidán ještě roztok 1,25 molárního ekvivalentu terč.oktylaminu v acetonu. Směs byla míchána ještě 1 hodinu, vysrážené krystalky byly odděleny, promyty acetonem a sušeny ve vakuu.

Poměrně rychle se vytvořila bílá sraženina. Celkový výtěžek s opravou na čistotu byl 76 %.

Příklad 4

Benzylklavulanát, čištěný chromatografií na Sephadexu byl v množství 20 g, 0,07 molu rozpušzěn ve 4C0 ml tetrahydrofuranu, destilovaného v přítomnosti hydridu vápr. ku a bylo přidáno 5,7 g 10% paladia na aktivním uhlí jako katalyzátor. Směs byla hydrogenována za míchání při teplot místnosti a tlaku přibližně 0,1 MPa po dobu 20 až 30 minut Stav reakce byl stanoven chromatografií na tenké vrstvě oxidu křemičitého při použití ethylacetátu, k vizualizaoi byl použit trifenyltetrazoliumchlorid ve formě postřiku. Kyselina klavulanové má Rf 0,0, její benzylester 0,4.

Reakční směs byla zfiltrována a filtrační vrstva dobře promyta. Bylo získáno přibližně 500 ml filtrátu s obsahem kyseliny flavulanové, k filtrátu bylo za míchání přidáno 9,0 g, 0,07 molu 2-amino-2,4,4-trimethylpentar.u v 50 ml bezvodého tetrahydrofuranu. V průběhu 1 minuty došlo ke krystalizací. Směs byla míchána ještě 0,5 hodiny při teplotě místnosti a pak 2 hodiny při teplotě 5 °C. Produkt byl odfiltrován, promyt 100 ml bezvodého tetrahydrofuranu a sušen 12 hodin ve vakuu, ve výtěžku 100 % bylo získáno 23,0 g výsledné soli s teplotou tání 160 a 170 °C za rozkladu.

Příklad 5

Postup byl prováděn obdobným způsobem jako v příkladu 5 při použití 0,9 g, 0,003 molu benzylklavulanátu, výsledný roztok kyseliny klavulanové byl zpracováván puso bením 0,22 g, 0,003 molu 2-amino-2-methylpropanu v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Ve výtěžku 73 % bylo získáno 0,6 g výsledné soli s teplotou tání 150 až 152 °C za rozkladu.

Příklad 6

Vodný roztok klavulanátu lit éhc se smísí s vc roztokem alkylamoniumfosfátu. Vysrážený fosf odfiltruje a sůl· kyseliny klavulanové s amin přidáním acetonu. Bylo zjištěno, že je možno klavulanát sodný, v tomto případě však bylo dat ještě ethanol, aby došlo k vyloučení fos ného. Použít je možno také hydrochloridy ani áo 1 i

·³ C O t

Uvedeným způsobem byl klavulanát lithný použit pro výrobu N-ethylpiperidinklavulanátu a klavulanát sodný byl použit pro výrobu N-ethylpiperidinklavulanátu.

Příklad 7

K 500 ml nečistého roztoku kyseliny klavulanové s obsahem 21 mikrogramů/ml, tak jak byl užit v příkladu 9, mimoto obsahujícímu 20 ml acetonu bylo přidáno 7,6 g terc.oktylaminu, čímž došlo ke tvorbě mírného zákalu. Po přidání 55 ml diethyletheru došlo k vyloučení soli s aminem ve formě jemných jehličkovitých krystalků, které byly odfiltrovány a promyty acetonem. Ve výtěžku 77,2 % bylo získáno 12,9 g soli, 62,8 % pfa (teoretická hodnota 60,6 %) .

Příklad θ

Roztok 0,0046 molu kyseliny klavulanové ve 30 ml tetrahydrofuranu se zpracovává působením 1,0 ml 25% roztoku trimethylaminu v methanolu, přibližně 0,0042 molu, čímž vznikne žlutý roztok. Krystalizace se vyvolá naočkováním a stáním při teplotě místnosti. Krystalizace je rychlá, vznikají jemné jehličkovité krystalky, krystalizace je ukončena stáním přes noc při teplotě +4 °C. Produkt se odfiltruje, promyje se malým objemem přibližně 5 ml čerstvé19 ho rozpouštědla a suší ve vakuu. Ve výtěžku 75 % se získá 0,9 g produktu s teplotou tání vyšší než 310 °C, produkt pomalu hnědne nad uvedenou teplotou.

Analýza B 24641 pro vypočteno C 51,16, H 7,02, N 10,84 % nalezeno C 51,32, H 7,15, N 10,68 %

Analýza A 15230 : imidazol 77,2, 76,4 % (vypočteno 77,1 %, čistota přibližně 99,5 %; voda 1,18, 1,34 %.

Výsledná látka ve formě krémových jemných jehliček přijímá při stání na vzduchu v průběhu několika dnů vodu a pomalu se rozkládá a žloutne.

Příklad 14

Byly připraveny dva vzorky svrchu uvedené sloučeni ny, pro každý z nich byl získán odlišný výsledek. V prvním případě byl získán středně vysoký výtěžek produktu s obsahem vody, který odpovídá obsahu vody v hemihydrátu, ve dru hém případě byl v nízkém výtěžku získán bezvodý produkt.

14A Roztok 0,00346 molu kyseliny klavulanové ve 25 ml tetrahydrofuranu byl zpracováván přidáním 0,4 g, 0,00346 molu triethylaminu, smísením vznikl homogenní čirý roztok. Krystalizace byla vyvolána naočkováním a ukončena stáním přes noc při teplotě +4 °C. Produkt byl odfiltrován a usušen ve vakuu. Ve výtěžku 63 % bylo získáno 0,7 g velkých špinavěbílých jehliček.

Analýza B 24639 pro ^C14^H24^N2°5 vypočteno C 56,05, H 8,00, N 9,33 % nalezeno C 54,74, H 7,95, N 8,94 % ^ΡΓ° ^C14^H24^N2°5 ’ ^{1/2 H}2° vypočteno C 56,36, H 8,14, N 9,05 %.

Analýza A 15220: imidazol 61,0, 61,1 % (vypočteno 64,4 %, čistota přibližně 95,0 %';

voda 2,64'% (prohemihydráz vypočteno 12,91 %'

14B. Roztok 0,021 molu kyseliny klavulanové v 60 ml tetrahydrofuranu se zpracovává přidáním 2,1 g, 0,021 molu triethylaminu, smísením vznikne čirý roztek, který se naočkuje krystalky výsledné soli. Produkt počne krystalizovat při teplotě místnosti ve formě dlouhých jehliček, krystalizace je ukončena přes noc při teplotě +4 °C. Produkt se oddělí filtrací, na filtru se promyje přibližně 10 ml čerstvého rozpouštědla a 20 ml diethyletheru a pak se suší ve vakuu, čímž se ve výtěžku 27 % získá 1,7 g produktu ve formě špinavě bílých krystalků.

Analýza B 24676 pro C. .H. „N-0.14 čh d □ vypočteno C 56,05, H 8,00, N 9,33 % nalezeno C 56,07, H 7,83, N 9,32 % vypočteno pro C-^H^I^O . 1/2 H₂0: C 54,36, H 8,14, N 9,05 %

Analýza A 15268: imidazol 65,1, 65,1 % (vypočteno 66,3 %, čistota přibližně 98,2 %) voda 0,9 % /alfa/²⁴ = +47,0° (c = 0,2 % ve vodě).

Stejně jako sůl s trimethylaminem se tento produkt stáním na vzduchu v průběhu několika dnů rozkládá.

Uvedené dva příklady ilustrují tvorbu vysoce čistých solí kyseliny klavulanové z roztoků této kyseliny v organických rozpouštědlech.

Příklad 10

Oddělené vzorky trimethylaminklavulanátu a triethylaminklavulanátu z příkladů 13 a 14 se rozpustí v co nejmenším množství chladné vody. K roztokům se přidá koncentrovaný roztok 2-ethyíhexanátu draselného v isopropanolu za míchání. Po delší době míchání se krystalky klavulanátu draselného vyloučí a mohou být odfiltrovány, promyty chladným isopropanolem a usušeny.

Příklad 11

Nečistý vodný roztok kyseliny klavulanové, získané z fermentačního prostředí S. clavuligerus předčištěním na iontoměniči, tak jak bylo svrchu obecně uvedeno a obsahující 17,1 g kyseliny na 1 .litr byl okyselen na pH 2,0 kyselinou sírovou s koncentrací 25 % objemových a pak byl kontinuálně extrahován ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt byl zchlazen na 2 °C, voda byla odstraněna odstředě-ním a pak vysušením síranem hořečnatým, načež byl extrakt zfiltrován na sloupci uhlíku CPG. V tomto stupni obsahoval ethylacetátový extrakt 6,02 g/litr kyseliny klavulanové a byl pak koncentrován odpařením na obsah 25,7 g/litr kyseliny klavulanové a při této koncentraci byl použit. Obsah vody v koncentrátu byl přibližně 0,26 % objemových.

7,8 ml terč.oktylaminu se smísí s 25 ml čerstvého ethylacetátu. Směs se pomalu přidá ke 2 litrům ethylacetátového extraktu s vyšším obsahem klavulanátu a pak se roztok zředí na obsah 23,0 g/litr čerstvým ethylacetátem za rychlého míchání. Suspenze se míchá ještě další hodinu při teplotě 5 °C. Terč .oktylaminklavulanát se pak oddělí filtrací a promyje se ethylacetátem. Sušení se provádí přes noc ve vakuu při teplotě 20 °C pod dusíkem. Získá se celkem 6,13 g produktu.

Příklad 12 g soli s aminem, získané v příkladu 15 bylo rozpuštěno v 97 ml isopropanolu. Vzhledem k tomu, že se produkt okamžitě nerozpustil, bylo nutno směs zahřát na 24 °C , aby došlo k úplnému rozpuštění. Pak bylo v průběhu 10 minut přidáno 14 ml, 1,5N roztoku 2-ethylhexanoátu draselného v isopropanolu. Suspenze byla míchána 1,5 hodin při teplotě 5 °C. Výsledný produkt, klavulanát draselný byl pak odfiltrován, promyt malým množstvím isopropanolu a pak acetonu a byl sušen přes noc ve vakuu při teplotě 20 °C pod dusíkem. Bylo získáno celkem 3,16 g produktu.

Příklad Í3

Zfiltrované živné prostředí (RVF) po fermentaci S. clavuligerus, obsahující 2 g/litr kyseliny klavulanové bylo okyseleno na pK 1,6 přidáním kyseliny sírové s koncentrací 25 % objemových a pak byla směs kontinuálně extrahována ethylacetátem. Extrakt byl zchlazen na teplotu 3 °C a pak byl zbaven vody odstředěním a vysušením síranem hořec natým, načež se roztok nechal projít sloupcem uhlíku CPG. Takto zpracovaný extrakt byl pak zahuštěn odpařením na obsah kyseliny klavulanové přibližně 20 g/litr, obsah vody byl přibližně 0,06 % objemových.

13,5 ml terč .oktylaminu bylo smí seno se 43 ml čerstvého ethylacetátu. Směs byla pomalu přidána ke 400 ml ethylacetátového extraktu s vysokým obsahem kyseliny klavulanové 20 g/litr za rychlého míchání. Suspenze byla míchána ještě další hodinu při teplotě 5 °C. Pak byl terc.oktylaminklavulanát oddělen filtrací a promyt ethylacetátem. Konečné sušení bylo uskutečněno pres noc ve vakuu při teplotě 20 °C v dusíkové atmosféře. Tímto způsobem bylo získáno 12,44 g produktu.

Příklad 14 g soli s aminem, získané způsobem podle příkladu 18 bylo rozpuštěno ve 213 ml isopropar.olu. Vzhledem k . tomu, že se produkt okamžitě nerozpustil, byla směs mírně zahřát a na 24 °G. Mimoto bylo pro snadnější rozpuštění přidáno 3,75 ml vody. Jakmile byl získán čirý roztok, bylo přidáno ješcě 100 ml iscpropanolu ke snížení obsahu vody před krystalizao í. Pak bylo v průběhu 15 minut přidáno 30 ml 1,5 N roztoku 2-ethyIhexancátu draselného v iscpropanolu. Vzniklá suspenze byla míchána 1,5 hodiny při teplotě 5 °C. Výsledný klavulanát draselný byl odfiltrován, prorayt malým množstvím iscpropanolu a pak acetonu a sušen přes noc ve vakuu pod dusíkem při teplotě 20 °C. Bylo získáno 7,29 g produktu.

Claims

1. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo jejích farmaceuticky přijatelných soli, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její sůl s alkalickým kovem uvede v organickém rozpouštědle do styku s terč.oktylaminem, ii) vytvořená sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje a iii) vytvořená sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl.

2. Způsob podle nároku 1, vyznačuj íc í se t i m , že se jako sůl s alkalickým kovem užije sodná nebo lithná sůl.

3. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí, vyznačující se t í m , že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl uvede do styku s terc.oktylaminem v organickém rozpouštědle, obsahujícím 0,25 až 0,6 g vody na litr, ii) vytvořená sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje a iii) vytvořená sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

II

4. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se

i) uvede do styku nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát s terč.oktylaminem v organickém rozpouštědle, které bylo předem zbaveno vody odstředěním, li) vytvořená sůl terč.oktylaminu s kyselinou klavulanovou se izoluje a iii) takto vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

5. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová, získaná fermentací produkčními mikroorganismy, s alespoň částečně odstraněným pevným podílem, nacházejícím se ve formě suspenze v živném prostředí, uvede do styku s terč. oktylaminem v·organickém rozpouštědle, il) vytvořená sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje, a iii) vzniklá sůl kyseliny klavulanové se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

6. Způsob podle nároku 5,vyznačující se tím, že se pevný podíl odfiltruje.

7. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačuIII jící se t í m, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová, získaná fermentací produkčním mikroorganismem s následným alespoň částečným zahuštěním získaného vodného roztoku po fermentaci před extrakcí, uvede do styku s terc.oktylaminem v organickém rozpouštědle, ii) sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje a iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

8. Způsob podle nároku 7, vyznačuj íc í se t í m , že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem zahustí na koncentraci 10 až 100 mg/ml.

9. Způsob podle nároku 7, vyznačující se t í m , že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem zahustí na koncentraci 10 až 40 mg/ml.

10. Způsob podle nároku 7,vyznačující se t í m , že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem zahustí na koncentraci 10 až 25 mg/ml.

11. Způsob podle některého z nároků ý až 10, v y značující se tím, že se vodný roztok kyseliny klavulanové předem zahustí absorpcí kyseliny klavulanové na iontoměničovou pryskyřici s následnou elucí kyseliny klavulanové vodným roztokem elektrolytu.

12. Způsob podle nároku 11, vyznačuj íc í se t í m , že se jako elektrolyt užije chlorid sodný.

IV

13. Způsob podle nároku 11 nebo 12, vyznačující se tím, že se výsledný koncentrát zbaví solí.

14. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede do styku s terč.oktylaminem v rozpouštědle ze skupiny uhlovodíků, etherů a halogenovaných rozpouštědel, ii) vzniklá sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje a iii) získaná sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo na její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

15. Způsob podle nároku 14,vyznačuj íc i se tím, že se rozpouštědlo volí ze skupiny toluen, hexan, tetrahydrofuran, dioxin, diethylether, dichlormethan, chloroform, aceton a methylisobutylketon.

16. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede v organickém rozpouštědle do styku s terč.oktylaminem, který se přivádí při míšení do proudu kyseliny klavulanové v organickém rozpouštědle, ii) vytvořená sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluke, a v

iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

17. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede do styku s terč.oktylaminem v organickém rozpouštědle, ii) vytvořená sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje extrakcí organického rozpouštědla, které tyto sůl obsahuje, pomocí vody, načež se iii) získaná sůl převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

18. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede do styku s terč.oktylaminem v organickém rozpouštědle, ii) vytvořená sůl kyselliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje a nechá překrystalovat a iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo na její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester.

19. Způsob podle nároku 18, vyznačuj íc i se t í m , že se sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem provádí ve vodném acetonu.

VI

20. Způsob výroby a/nebo čištění kyseliny klavulanové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že se

i) nedostatečně čistá kyselina klavulanová nebo její labilní derivát uvede do styku s terč.oktylaminem v organickém rozpouštědle, ii) vytvořená sůl kyseliny klavulanové s terč.oktylaminem se izoluje a iii) vzniklá sůl se převede na kyselinu klavulanovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo ester výměnou lontů, která se uskuteční průchodem roztoku soli s terč.oktylaminem vrstvou kationtoměničové pryskyřice v sodné, draselné nebo vápenaté formě.