KR0165179B1 - 클라불란산의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

클라불란산을 하기 일반식(II)의 아민과 접촉시켜 얻은 클라불란산의 아민염을 중간체로서 사용하여 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 및 그의 에스테르를 제조하는 방법.

(식중 R¹은 하기 일반식의 기인데,

상기 식중, R⁴및 R⁵는 독립적으로 수소, C_1-6알킬기, 아미노-치환된 C_1-6알킬기, 또는 치환된 아미노-치환된 C_1-6알킬기이고, R²및 R⁵는 독립적으로 수소, C_1-6알킬기, 아미노- 또는 히드록시-치환된 C_1-6알킬기 또는 C_1-6알킬기-치환된 아미노-치환된 C_1-6알킬기로부터 선택되고, m은 0 또는 1 내지 5의 정수임).

Description

클라불란산의 제조방법

본 발명은 클라불란산(I) :

및 그의 제약학적으로 허용가능한 염 및 에스테를 제조하는 신규 방법에 관한 것이다.

클라불란산은 보통 다양한 스트랩토마이세스속(streptomyces)균주에 속하는 다양한 미생물 예컨데, 에스, 클라불리게루스(s.clavuligerus) NRRL. 3585, 에스. 주모니넨시스(s.jumoninensis) NRRL 5741, 에스. 카트수라하마누스(s.katsurahamanus) IFO 13716 및 예컨대 JP Kokai 80-162993에 서술한 바와 같은 스트랩토마이세스속 종(Streptomyces sp.) P6621 FERM P2804와 같은, 클라불란산을 생성하는 미생물을 발효시켜 제조한다. 결과 얻어진 수성육즙을 GB 1508977 및 JP Kokai 80-62993에 서술된 바와 같이, 예를 들어 여과 및 크로마토그래피 정제를 포함하는, 종래의 정제 및 농축 방법에 적용한 후, 유기 용매로 수성용액을 추출하여 유기 용매 내 미정제 클라불란산 용액을 얻을 수 있다.

GB 1508977은 특히 여과된 육즙 내 클라불란네이트 음이온을 음이온 교환 수지 상에 흡수시키고, 전해액과 함께 상기로부터 용리시키고, 결과 얻어진 용액을 탈염시키고, 탈염 용액을 부가의 음이온 교환 수지에 적용하고, 전혜액과 함께 상기로부터 크로마토그래피하며 용리시키고, 결과 얻어진 용액을 탈엽시킨 후 용매를 제거함으로써 클라불란산을 얻을 수 있음을 공개한다. 상기 방법을 사용하여 순수한 물질을 허용가능한 수율로 얻을 수 있지만, 수지 칼럼의 사용이 상당한 비용 투자를 포함하고 대량 생산 공정에서 한계를 야기할 수 있다. 따라서 수지 사용 단계를 포함하지 않는 유효한 대안적 방법을 발견하는 것이 바람직하다.

GB 1543563에는 리튬 클라불라네이트의 침전을 통해 클라불란산 염을 제조하는 방법이 개시되어 있다. GB 1578739는 제약학적 화합물로서 다양한 클라불란산의 아민 염을 개시하고 있다. EP 0026044에는 클라불란산 제조에 있어서 유용한 중간체로서 클라불란산의 사차-부틸아민 염을 사용하는 것이 개시되어 있다. 상기 염은 BE 862211에도 개시되어 있으나 단기 제약학적 배합물을 위한 적합한 성분으로서 개시되어 있을 뿐이다. PT.94.908은 클라불란산의 트리에틸아민 염이 형성되고 난 후 클라불란산의 실릴 디에스테르로 전환시키는 클라불란산 정제 방법에서의 클라불란산의 트리-(저급알킬)아민염 및 디메틸아릴린 염의 사용을 개시하고 있다. EP 0887178A는 유기 아민을 사용하여 불순한 용액내 클라불란산과 중간체 아민염을 형성할 수 있는 클라불란산의 정제방법을 개시하고 있다.

본 발명의 종래의 기술과는 달리 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 에스테를 순수한 형태도 고수율로 얻고자 한다.

본 발명은 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 및 에스테르의 제조방법에서 중간체로서 하기 일반식(II)의 아민과 클라불란산의 염의 사용을 제공하며;

(이때, 식에서 R¹,R²및 R³은 하기 사양에 따라 선택된다:

(1) R¹은 하기 일반식의 임의로 치환된 시클릭 기이고:

(이때, 식에서 m은 0 또는 1-5의 정수이고, R은 3-8개 고리 탄소원자를 갖는 임의로 치환된 지방족 탄화수소 고리 시스템이고, R₄는 수소 또는 알킬, 아미노- 또는 히드록시-치환된 알킬 또는 치환된 아미노-치환된 알킬, 또는 상기 R₁의 일반식과 동일한 기이다) R²및 R³은 R¹으로부터 선택된 동일한 기들로부터, 또는 수소, 알킬, 알케닐, 아미노- 또는 히드록시-치환된 알킬 또는 알케닐, 또는 치환된 아미노-치환된 알킬 또는 알케닐로부터, 그러나 시클로헥실아민을 제외하고 선택될 수 있다: 또는

(2) 각 R¹,R²및 R³은 같거나 다르고 각각이 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 아미노- 또는 히드록시- 또는 알콕시-치환된 알킬 또는 알케닐, 또는 치환된 아미노- 치환된 알킬 또는 알케닐로부터, 그러나 t-부틸아민, s-부틸아민, N,N-디메틸에틸아민, 1,2-디메틸프로필아민, 네오펜틸아민 및 2-아미노-3,3-디메틸부탄을 제외하고 선택되고; 그리고 만일 아민(II)이 트리메틸아민 또는 트리에틸아민이면 유기 용매의 용액내 클라불란산 또는 그의 불안정한 유도체의 아민(II) 또는 그의 불안정한 유도체의 반응에 의해 클라불란산과 아민(II)의 염이 형성되고나서 상기 염은 유기 용매로부터 분리 상으로서 또는 분리상에서 단리된다; 또는 (3) R¹은 하기 일반식의 임의로 치환된 아릴기이고:

(이때, 식에서, R⁴는 수소 또는 하나 이상의 치환체이고, m은 0 또는 1-5의 정수이다) R²및 R³은 독립적으로 수소, 알킬, 아미노- 또는 히드록시-치환된 알킬 또는 치환된-아미노-치환된 알킬 또는 일반식이 R¹과 동일한 기로부터 그러나 벤질터트부틸아민을 제외하고 선택되고, 단 만일 R⁴이 수소이고 m이 0이면, R²및 R³은 모두 메틸이 아니다 : 또는

(4) R¹및 R², 및 임의로 R³은 제시된 질소 원자와 함께, 고리 구성원으로서 질소원자를 포함하고, 그리고 임의로 하나 이상의 부가의 고리 이종 원자를 포함하는 임의로 치환된 헤테로시클릭 고리 시스템의 잔기이고, 만일 R³이 고리 시스템의 일부분이 아니라면 독립적으로 수소, 알킬, 아미노- 또는 히드록시-치환된 알킬 또는 치환된 아미노-치환된 알킬로부터, 그러나 피페리딘을 제외하고 선택된다 : 또는

(5) R¹은 하기 일반식의 기이고:

(이때, 식에서 R⁴및 R⁵는 독립적으로 수소, 알킬, 아미노-치환된 알킬 또는 치환된 아미노-치환된 알킬이다) R²및 R³은 독립적으로 수소, 알킬, 아미노-또는 히드록시-치환된 알킬 또는 치환된 아미노-치환된 알킬로부터 선택되고, m은 0 또는 1-5의 정수이다 : 또는

(6) R¹및 R²중 하나 또는 모두가 수소이고 R³은 아미노산의 잔기이고 상기에서 아미노산의 카르복실레이트기는 에스테르화된거나 아미드 형태일 수 있다).

알킬기 또는 치환된 알킬기가 본원에서 언급될 때 달리 정의되지 않는다면 알킬 시스템 내 1-6개 탄소원자를 적합하게 함유할 수 있다. 아미노가 상 적합한 치환체는 알킬을 포함한다.

상기 사양(1)에서 아민(III)은 적합하게 R¹이 시클로알킬기이고 m은 0이고 R²및 R³은 모두 시클로알킬로부터 또는 수소 또는 C_nH_2ntl(n은 1-7이다)로부터 선택되는 아민 이외의 것이다.

상기 사양(1)에서 시클릭기 R은 적합하게 포화될 수 있고, m은 적합하게 0이다. R기는 모노시클릭 또는 폴리시클릭일 수 있고, 각 고리는 적합하게 융합되거나 브릿징된 고리 시스템내 고리들간에 공유된 원자를 포함하여 5,6 또는 7개 탄소원자를 함유할 수 있다. 적합하게 R 시클릭기는 치환되지 않을 수 있다.

바람직하게 아민(II)은 둘 이상의 R¹시클릭기 또는 융합된 R¹고리 시스템 또는 예를 들어 메틸과 같은 하나 이상의 알킬 치환체를 갖는 R 치환 고리 시스템을 포함할 수 있다. 적합하게 R²및 R³은 수소 이외의 것일 수 있으며, 예를 들면 하나 또는 모두가 알킬 또는 치환 알킬일 수 있다.

상기 아민의 예는 시클로펜틸아민, 시클로헵틸아민, N,N-디메틸시클로헥시아민, 디시클로헥실아민, 아다만틸아민, N,N-디에틸시클로헥실아민, N-이소프로필시클로헥실아민, N-메틸시클로헥실아민, 시클로프로필아민, 시클로부틸아민, 노르보르닐아민, 및 데히드로아비에틸아민을 포함한다.

상기 사양(2)에서 아민(II)은 적합하게 R¹이 수소 또는 C_nH_2n+1(n은 1-7이다)이고 R²및 R³이 또한 모두 수소 또는 C_nH_2n+1(n은 1-7이다)으로부터 선택되는 아민 이외의 것이다.

적합하게 상기 사양(2)에서 R¹은 하기 일반식의 알킬 또는 치환된 알킬기일수 있다 :

(이때, 식에서 R⁴,R⁵및 R⁶은 독립적으로 C_1-10알킬, 또는 아미노- 또는 히드록시- 치환된 알킬 또는 치환된 아미노-치환된 알킬을 나타낸다.)

R⁴,R⁵및 R⁶은 적합하게 모든 알킬일 수 있으며, 적합하게 R⁴,R⁵또는 R⁶중 2개는 메틸이다. 상기 아민의 예는 t-옥틸아민, (즉 2-아미노-2,4,4-트리메틸펜탄) 및 t-아밀아민을 포함한다. 대안적으로 R⁴, R⁵또는 R⁶중 2개는 알킬일 수 있고 하나는 히드록시-치환된 알킬 일 수 있다. 상기 아민의 예는 1-히드록시-2-메틸-2-프로필아민을 포함한다.

상기 사양(2)에서 R¹은 대한적으로 적합하게 C_1-20알킬, 예를 들면 C_8-20알킬, C_1-20알케닐, C_1-20히드록시 알킬 또는 C_1-20아마노알킬일 수 있다.

상기 아민의 예는 트리-n-프로필아민, 트리-n-옥틸아민, 트리-n-부틸아민, 디메틸아민, 1-프로필아민, 디-n-헥실아민, 디-n-부틸아민, 디에틸아민, 2-아미노에탄올, N,N-디에틸에탄올아민, N,N-디메틸에탄올아민, 에탄올아민, n-부틸아민, n-헥실아민, n-옥타데실아민, N-에티에탄올아민, 1-히드록시에틸아민, 디에탄올아민, N,N-디메틸에탄올아민, N-에틸디에탄올아민, 1,6-디아미노헥산, 트리에탄올아민, 디이소부틸아민, 디이소프로필아민, 2-메톡시에틸아민, 히드록실아민, 암모니아, 메틸아민, 에틸아민, n-프로필아민, n-부틸아민, n-펜틸아민, n-헥실아민, n-헵틸아민, n-옥틸아민, n-노닐아민, n-데실아민, n-운데실아민, n-도데실아민, n-프로프-2-일아민, n-부트-2-일아민, n-펜트-2-일아민, n-헥스-2-일아민, n-헵트-2-일아민, n-옥트-2-일아민, n-논-2-일아민, n-테스-2-일아민, n-운데스-2-일아민, n-도데스-2-일아민, n-헥스-3-일아민, n-헵트-3-일아민, n-옥트-3-일아민, n-논-3-일아민, n-테스-3-일아민, n-운데스-3-일아민, n-도데스-3-일아민, n-옥트-4-일아민, n-논-4-일아민, n-데스-4-일아민, n-운데스-4-일아민, n-도데스-4-일아민, n-논-5-일아민, n-운데스-5-일아민, n-도데스-5-일아민, 및 n-옥타데실아민을 포함한다.

상기 사양(3)에서 아민 (11)은 적합하게 R²및 R³이 수소 또는 C_nH_2n+1(n은 1-7이다) 또는 벤질 또는 치환된 벤질로부터 선택되는 아민이 dkselk.

상기 사양(3)에서 적합한 치환체 R⁴기는 메틸, 페닐 또는 임의로 치환된 페닐과 같은 C_1-6알킬, 카르복실 산 또는 술폰산기 및 에스테르(예를 들면 C_1-6알킬 에스테르) 및 아미드와 같은 상기 산 기의 유도체; 니트로 및 브롬과 같은 할로겐을 포함한다. 적합하게 m은 0.1 또는 2일 수 있고 R⁵는 수소 또는 메틸일 수 있다. 적합하게 R²및 R³은 수소일 수 있고, 또는 R²및 R³중 하나는 수소일 수 있고 다른 하나는 R¹과 일반식이 같은 방향족 기일 수 있다.

상기 아민의 예는 1-페닐에틸아민, p-톨루이딘, p-아미노벤조산, p-브로모아닐린, 에틸-4-아미노벤조에이트(즉 벤조카인), 벤질아민, 디페닐아민, p-메틸아미노 벤젠술폰아미드, m-니트로아닐린, N,N'- 디벤질에틸렌디아민(즉 벤자틴), 디페닐메틸아민, 4-메틸벤질아민 및 4-페닐부틸아민을 포함한다.

상기 사양(4)에서 고리 시스템은 방향족 또는 지방족일 수 있고 모노시클릭 또는 폴리시클릭일 수 있다. 적합하게 시스템 내 각 고리는 고리 질소 원자를 포함하고, 고리들간에 공유된 원자를 포함하여, 5 또는 6개 고리 원자를 함유할 수 있다. 적합한 고리 시스템상 임의의 치환제는 알킬, 아미노, 치환된 아미노, 옥소 및 할로겐을 포함한다. 만일 고리시스템이 제시된 질소 원자에 대해 부가의 고리 이종 원자를 포함한다면 상기 이종 원자는 적합하게 질소 및 산소로부터 선택될 수 있다.

상기 아민 종류의 예는 치환된 피페리딘 및 임의로 치환된 피페리딘을 포함하며, 예를 들면 이때 치환체는 알킬, 히드록시알킬, 할로겐, 아미노, 치환된 아미노 및 아미노-치환된 알킬로부터 선택된다. 상기 아민의 구체적인 예는 N-에틸 피페리딘, 2,6-디메틸피페리딘, 2-메틸-N-히드록시프로필 피페리딘(즉 시클로메디칸), 4-메틸피페라진, 1-메틸-4-페닐 피페라진, N-에틸모르폴아민, 헥사메틸레인이민, 피리딘, 2-프로필피리딘, 3-클로로-2-아미노피리딘, 모르폴아민, 1, 5-디아자비시클로[4.3.0]논-5-엔, 1,4-디아자비시클로[2.2.2] 옥탄, 피롤리돈, 키누클리딘 및 크산티놀을 포함한다.

상기 사양(5)에서 R⁴및 R⁵은 접합하게 모두 수소일 수 있고, 또는 하나는 수소이고 다른 하나는 알킬일 수 있다. R²및 R³은 적합하게 수소 또는 알킬일 수 있다.

상기 아민의 예는 에틸렌 디아민, NN-디에틸에틸렌 디아민, NN'-디이소프로필에틸렌디아민 및 트리에틸렌 테트라민을 포함한다.

상기 사양(6)에서 아미노산은 천연 생성 아미노산일 수 있다. 아미노산 에스테르는 알킬기 또는 벤질과 같은 치환된 알킬기와의 에스테르일 수 있다.

상기 아민의 예는 아르기닌, 오르니틴, 히스티딘, 리신, 벤질 글리신, 3-아미노-3-메틸부탄산, L-에틸 리시네이트, L-메틸 히스티디네이트, 메틸-N-카르보벤질옥시-L-리시네이트, 메틸 L-페닐알라네이트, 에틸 글리실 글리시네이트, 에틸 P-히드록시 페닐 글리시네이트, 에틸 P-히드록시 페닐 글리시네이트, 에틸 글리시네이트, 에틸 L-티로시네이트, P-메톡시벤질 α-아미노페닐아세테이트, n-부틸 α-아미노페닐아세테이트, 메틸 아리그네이트, 벤질 글리신, 벤질 페닐글리신, 1-니트로벤질 페닐글리신, n-부틸 페닐글리신, P-메톡시벤질 페니글리신, 에틸 페닐글리신, P-니트로벤질 P-히드록시페닐 글리신, P-니트로벤질세린, n-부틸세린, 메틸아르기닌, 디메틸 글루타메이트, P-니트로벤질 티로시네이트, P-니트로벤질 글리시네이트, 벤질글리시네이트, P-니트로벤질, α-아미노-P-히드록시페닐 아세테이트, P-니트로벤질 α-아미노페닐아세테이트, 에틸 α-아미노-P-히드록시 페닐 아세테이트, 에틸 L-티로시네이트를 포함한다.

아민(II)이 하나이상의 질소 원자를 함유할 때 클라불란산은 하나 이상의 질소 원자와 염을 형성할 수 있는데, 예를 들면 NN'-디이소프로필렌디아민 디클라불라네이트에서와 같다.

상기 언급된 아민 중, 바람직한 아민은 : 페닐에틸아민 t-아밀아민, t-옥틸아민, 1-히드록시-2-메틸-2-프로필아민, 시클로펜틸아민, 시클로헵틸아민, 1-아다만탄아민, N-에틸피페리딘, N'N'-디이소프로필에틸렌디아민 및 N,N-디메틸시클로헥실아민이다.

부가의 면에서 본 발명은 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르를 제조 및 / 또는 정제하는 방법을 제공하며 그 방법은 하기로 구성된다.

i) 유기 용매의 용액내 불순한 클라불란산 또는 그의 불안정한 유도체를 일반식(II)의 아민 또는 그의 불안정한 유도체와 접촉시키고,

ii) 일반식(II)의 아민과 형성된 클라불란산의 염을 단리하고, 그리고

iii) 그리하여 형성된 염을 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르로 전환시킨다.

본 발명의 방법에서 클라불란산과 아민(II)의 염은 그의 제조중에 불순한 클라불란산을 정제하는데 사용될 수 있다. 그러므로 염은 불순물을 함유한 클라불란산 또는 그의 불안정한 유도체의 용액내 형성될 수 있고, 잔류 불순물을 함유한 용액으로부터 분리상으로서, 예를 들면 고체 침전물로서 염을 단리하고 나서, 클라불란산을 재형성하거나 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르를 형성한다.

적합한 클라불란산의 불안정한 유도세는 염, 예를 들면 리튬 또는 나트륨 클라불라네이트와 같은 알칼리 금속 염 또는 실릴 에스테르와 같은 에스테르를 포함한다. 적합한 아민(II)의 불안정한 유도체는 포스페이트, 보레이트, 클로라이드, 클로레이트, 퍼클로레이트, 브로마이드, 톨루엔 설포네이트 또는 아세테이트 또는 에틸헥소노에이트와 같은 알카노에이트와 같은 염을 포함한다. 편리하게 아민(II) 자체를 유기 용매의 용액내 불순한 클라불란산 자체와 접촉시킨다.

상기 방법은 적합하게 유기 용매내에서 수행하며, 이때 상기 용매는 예를 들어 6 g/L이하, 예를 들면 0.25-0.6g/L의 물을 함유한 실질적으로 건조한 상태가 바람직하지만 클라불란산 및 아민(II)을 위한 용매로서, 소량 물을 함유할 수 있다. 적합한 건조 상태의 정도는 원심 분리와 같은 종래의 탈수 방법에 의해 얻을 수 있다. 용매내 존재하는 물은 용해되거나 또는 분리상의 소적 형태일 수 있다.

유기 용매내 클라불란산의 용액은 상기 언급된 발효 액제와 같은 클라불란산의 산성화 수용액을 추출하여 얻을 수 있다. 만일 클라불란산의 출발재료가 상기 언급된 바와 같이, 클라불란산-생성 미생물의 발효로부터 결과 얻은 육즙이라면, 본방법에 사용하는데 적합한 클라불란산 농도의 용매 추출물을 얻기 위하여, 육즙 자체를 추출하지 않고, 적어도 육즙 내 현탁된 고체 소량의 예를 들면 추출에 앞서 여과하여 제거하는 것이 바람직할 수 있다. 또한 클라불란산의 수용액이 예를 들면 출발 육즙 보다 더 클라불란산 내 농축되도록 발효에서 얻어진 클라불란산의 수용액을 부가로 예비-농축시키는 것이 바람직할 수 있으며, 예를 들면 ca, 10-100mg/ml, 즉 10-25g/L 클라불란산과 같은 예를 들면 10-40mg/ml의 농도로 예비 농축시킨다.

적합한 예비-농축 방법은 음이온 교환수지 상에 클라불란산을 흡수시킨 후 염화나트륨과 같은 전해액 수용액과 함께 그로부터 클라불란산을 용리시키고, 임의로 탈염시키는 것을 포함한다. 또한 수용액, 예를 들면 육즙 또는 예비 농축된 수용액을 용매 추출에 앞서 예를 들면 pH 1-3으로, 예를 들어 약 pH 1.5-2.5로 산성화시키는 것이 바람직하다. 또한 아민(II)과의 염 형성에 앞서 유기 용매 추출물을 예를 들어 6g/L물 이하로 건조 또는 탈수시키는 것이 바람직하다. 바람직하게는 추출은 5-15℃ 온도에서 수행한다.

불순한 클라불란산이 그 안에서 아민(II)과 접촉할 수 있는 적합한 유기 용매는 톨루엔 및 헥산과 같은 탄화수소 용매, 테트라히드로퓨란과 같은 에테르, 디옥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 클로로포름과 같은 할로겐화 용매, 아세톤 및 메틸이소부틸 케톤과 같은 케톤 및 에틸아세테이트와 같은 에스테르를 포함한다. 카르보닐기를 포함하는 용매, 예를 들면 하기 일반식(III) 용매는 :

적합한 용매 예를 들면 유기 케톤 또는 유기 알카노에이트 에스테르의 하위 등급의 예이며, 이때 식에서 R⁸은 C_1-6알킬기 또는 C_1-6알콕시기 이고 R⁹는 C_1-6알킬기이다. 본 발명은 또한 상기 용매의 혼합물의 사용을 포함한다.

보다 적합하게 유기 용매는 산성화 수용액 예를 들면 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 프로필 아세테이트, n-부틸 아세테이트, 메틸에틸 케톤, 메틸 이소부틸케톤, 테트라히드로퓨란, 부탄올 및 상기 용매의 혼합물과 같은, 유기 알킬 알카노에이트 에스테르, 케톤 및 특정 지방족 알콜 또는 상기의 혼합물을 추출하는데 직접 사용될 수 있는 용매이다. 상기 중 메틸 이소부틸 케톤, 메틸 에틸 케톤 및 에틸 아세테이트가 가장 적합한 것으로 보인다. 적합한 용매 혼합물은 메틸 에틸 케톤/ 메틸 이소부틸게톤 및 테트라히드퓨란/메틸 이소부틸 케톤을 포함한다. 바람직한 용매는 에틸 아세테이트이다.

아민(II)을 위한 적합한 용매는 클라불란산이 용해되거나 추출될 수 있는 상기 언급된 것으로 아세톤, 에틸 아세테이트, 메틸 이소부틸 케톤 및 메틸 에틸 케톤을 포함한다.

용매 시스템내 아세톤과 같은 케톤을 포함하는 것이 특히 바람직한 것으로 나타나는데, 이는 상기가 기름인 아민과 클라불란산의 염 형성을 방해하는 것으로 보이기 때문이다.

일반적으로 클라불란산 몰당 아민(II) 1당량 또는 그의 약간 과량을 사용하여 클라불란산의 염을 생성한다. 클라불란산가 아민(II)의 용액은 예를 들면 서서히 교반하며 혼합할 수 있고 첨가가 완결된 후 몇 시간 동안 혼합물을 교반할 수 있다. 클라불란산 또는 그의 불안정한 유도체간의 반응은 적합하게 주변 온도 이하에서, 예를 들면 0-15℃, 예를 들면 0-10℃, 예를 들면 0-5℃에서 수행한다. 용액내 클라불란산 또는 그의 불안정한 유도체에 대한 적합한 농도는 적어도 1.0g/L, 예를 들면 1.0-4.0g/L 클라불란산 범위내이다. 부가로 용매 추출물을 예를 들면 20g/L이상 초과한 농도로 농축시키는 것이 유리할 수 있다.

예를 들면 다른 방법에서는 염이 스트림 내, 용액내 또는 현탁액 내 용해된 염의 현탁된 소적 또는 입자로서 형성되도록, 용매 내 클라불란산의 용액 스트림내로 아민(II)을 혼합시킴으로써 혼입할 수 있다. 상기 방식으로 혼입된 아민(II)은 깨끗하게 혼입될 수 있고, 또는 용매 내 용액으로서 예를 들면 클라불란산이 용해된 같은 유기 용매내 혼입될 수 있다.

그리고나서 클라불란산과 아민(II)의 바람직한 염은 단리될 수 있다. 상기 방식에서, 클라불란과 아민(II)의 염은 대부분 또는 모두 불순물로부터 분리된다. 단리는 종래의 방법으로 예를 들면 원심분리 또는 여과에 의해 이루어질 수 있다.

대안적 단리 방법에서 클라불란산과 아민(II)의 염은 만일 용매가 전체적으로 또는 부분적으로 물과 혼합되지 않는다면 물과 용매를 접촉시켜 용액 또는 현탄액 내 있을 수 있는 염을 유기 용매로부터 추출하고 염의 수용액을 형성함으로써 유기 용매로부터 단리할 수 있다. 클라불란산과 아민(II)의 염이 물에 상당히 가용성이므로, 상기 수용액은, 예를 들면 약 20-30중량: 중량%으로 매우 농축될 수 있다.

상기 방식에서 클라불란산의 유기용매 용액내 유기 불순물 덩어리가 유기 용매내 남아있고, 아민과의 염 형태인 클라불란산은 비교적 순수한 상태로 수용액내 얻어진다. 그렇게 형성된 클라불란산 염의 수용액은 종래의 부가적 처리, 예를 들면, 정제, 또는 클라불란산 또는 하기 서술되는 바와 같은 제약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르의 전환에 적용될 수 있다.

다른 대안적 또는 부가적 방법에서 클라불란산 및 아민은 제1 유기 용매내 용액으로 혼합될 수 있고, 그리고나서 제2유기 용매를 첨가하여 용액으로부터 염을 분리시킬 수 있다. 적합하게 제1유기 용매는 에틸 아세테이트와 같은 유기 에스테르일 수 있고, 제2용매는 예를 들면 클로로포름과 같은 할로겐화 용매, 디에틸에테르와 같은 에테르, 톨루엔과 같은 탄화수소, 에탄올과 같은 알콜, 또는 아세톤 또는 메틸이소부틸 케톤과 같은 상기 일반식(III)의 용매일 수 있다.

상기 언급된 클라불란산의 염증 몇몇 예를들어, 클라불란산과 페닐에틸아민, t-아밀아민, 1-히드록시-2-메틸-2-프로필아민, 시클로펜틸아민, 시클로헥실아민, 1-아다만탄아민, N-에틸피페리딘, NN-디메틸시클로헥실아민 NN'-디이소프로필에틸렌디아민의 염은 신규한 화합물로 믿어지며 상기는 본 발명의 염이다.

본 발명의 한 구체예에서 클라불란산과 아민(II)의 염을 아세톤 용매 화합물로서 사용할 수 있다. 특정 경우에 있어서 아세톤 용매 화합물은 클라불란산과 아민의 염 그 자체에 비하여 유리한 안정성 및 순도 특성을 갖는다. 상기 용매 화합물은 특히 본 발명에 유용한데 이는 그들이 종종 매우 순순하고 안정한 결정성 화합물로서 단리될 수 있기 때문이다.

따라서 본 발명은 또한 아세톤 용매화합물 형태의 클라불란산과 아민(II)의 염을 제공한다. 단리 및/또는 건조시키는 중에 용매화력이 크지 않을 수 있으므로 소량 아세톤이 손실 될 수 있고 그러나 생성물 내 아세톤의 양은 중요하지 않다.

아세톤 용매 화합물은 아세톤 존재하에 클라불란산과 아민(II)을 접촉시켜 형성할 수 있다. 일반적으로 클라불란산을 함유한 용액은 아민(II)과 함께 적어도 같은 부피의 아세톤과 혼합될 수 있으며, 이때 염이 침전된다.

아민(II)은 아세톤내 용해되고 유기 용매내 클라불란산의 용액과 혼합될 수 있다. 유리한 유기 용매는 에틸아세테이트, 테트라히드로퓨란, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 및 상기 용매의 혼합물을 포함하며, 상기 중 에틸 아세테이트가 바람직하다. 대안적으로, 상기 약술된 바와 같이 물 추출에 의해 얻어진, 클라불란산과 아민(II)염의 수용액은 아세톤과 혼합되어 용매화합물을 형성할 수 있다. 적합하게 염의 농축 수용액은 과량의 아세톤과 혼합되어 용매 화합물을 형성할 수 있다.

클라불란산의 염 또는 아세톤 용매 화합물의 재결정은 불순물 수준을 부가로 저하시키는데 유리할 수 있다. 재결정화에 편리한 용매는 수성아세톤이다. 상기 재결정은 종래의 방식으로 수행하는데, 예를 들면 염 또는 용매화 물을 물에 용해시키고, 소량의 아세톤으로 처리하고, 여과하고나서, 임의로 교반하고/거나 냉각시키면서 다량의 아세톤으로 처리하여 재결정 생성물을 얻는다.

다른 면에서 본 발명은 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용 가능한 염 또는 에스테르 제조 방법을 제공하며 상기 방법은 클라불란산과 일반식(II)아민의 염을 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르로 전환시키는 것으로 구성된다.

본 발명의 방법에 의해 제조되는 제약학적으로 허용가는 한 클라불란산의 염 및 에스테르는 GB 1508977 및 1508978에 서술된 것을 포함하며 상기 문헌은 본원에 참고문헌으로 병합된다.

특히 적합한 제약학적으로 허용 가능한 염은 제약학적으로 허용가능한 알칼리 및 알칼리 토 금속염, 예를 들면 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘염을 포함한다. 상기 염들 중 나트륨 및 칼륨이 가장 적합하고 칼륨이 바람직하다.

적합한 에스테르는 클라불란산 또는 그의 염을 제공하는 가수소 분해와 같은 화학적 방법 또는 생물적 방법에 의해 분해가능한 에스테르를 포함한다.

임의로 그의 아세톤 용매화합물 형태인 클라불란산과 아민(II)의 염은 예를 들면 유리산 또는 염의 경우 이온-치환법에 의해, 또는 에스테르화에 의해 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르로 전환될 수 있다.

이온-치환법은 이온-교환 수지를 사용하여 수행할 수 있는데 예를 들면 나트륨, 칼륨 또는 칼슘 형태인 양이온 교환 수지의 배드를 통해 염 용액을 통과시켜 수행할 수 있다. 적합한 양이온 교환수지는 Amberlite IR 120 및 동일한 수지를 포함한다.

대안적으로 이온-치환법은 양성자 첨가된아민 양이온과 염-선구체 화합물의 반응에 의해 결과될 수 있는데, 상기는 염기, 예를 들면 제약학적으로 허용가능한 알칼리 또는 알칼리 토 금속의 탄산염, 중탄산염 또는 수산화물, 또는 알칼리 또는 알칼리토 금속과 같은 제약학적으로 허용가능한 양이온과 유기 카르복실산의 염, 예를 들면 하기 일반식(IV)의 알칼산 염일 수 있다 :

상기 식에서 R¹⁰은, 예를 들면 1-20개 탄소원자, 바람직하게 1-8개 탄소원자를 함유한 알킬기이다. 적합한 염의 예는 아세테이트, 프로피오네이트 또는 에틸핵사노에이트 염을 포함하고, 칼륨 2-에틸헥사노에이트 및 나트륨 2-에틸헥사노에이트가 바람직하다. 대표적으로 용액 내 클라불란산과 아민(II)의 염은 적합한 용매내 용액 또는 현탁액으로 산(IV)과 알칼리 금속의 염과 반응할 수 있으며, 상기 용매는 예를 들면, 유기 용매, 물 또는 이소프로판올과 같은 유기 용매와 물의 혼합물일 수있다. 적합하게 클라불란산과 아민(II)염의 용액 및 염-선구체 화합물의용액은 혼합될 수 있고, 제약학적으로 허용가능한 염은 결정화할 수 있다. 적합하게 반응은 예를 들면 0-15℃, 예를 들면 0-10℃, 적합하게 0-0.5℃인 주변 온도이하에서 수행할 수 있다. 적합하게 만일 클라불란산과 아민(II)의 염이 수용액 내 형성되면 수용액과 과량의 아세톤을 혼합하여 상기를 침전시킬 수 있다.

적합한 에스테르화 방법은 하기를 포함한다 :

a) 클라불란산과 아민(II)의 염과 일반식 Q-R¹¹의 화합물의 반응(식에서 Q는 쉽게 치환 가능한 기이고 R¹¹은 유기 기이다):

b) 카르보디이미드와 같은 축합 촉진제의 존재하에 클라불란산과 아민(II)의 염과 알콜 또는 티올의 반응; 및

c) 클라불란산과 아민(II)의 염과 디아조 화합물의 반응.

앞서의 방법은 확장되어 클라불란산과 아민(II) 염이 먼저 클라불란산 또는 그의 다른 염으로 전환되고 이어서 원하는 에스테르로 전환되는 면을 포함한다. 에스테르화 방법에 대한 부가의 세부 사항은 Gb 1508977 및 150897에 공개된다. 본 발명의 사용은 GB 1508977 및 1543563의 방법을 수행하는 것 보다 쉽게 클라불란산의 염 및 에스테르를 순수한 형태로 얻어지도록 한다.

본 발명은 이제 단지 실시예 만의 방식으로 서술 될 것이다.

각 하기에서 방법은 동일했고, 아민을 THF내 용액으로 클라불란산과 혼합했으며 고체염을 형성하는 빠른 결정화가 관찰되었다.

[실시예 2]

하기에서 클라불란산과 아민의 염은 먼저 유기 용매 용액으로 형성시키고나서 제2 유기용매와 혼합하여 고체 침전물로서 용액으로부터 분리시켰다.

2a. t-옥틸아민-불순한 에스테르. 클라불리게루스 발효 육즙을 에틸 아세테이트로 추출하여, 불순한 형태로 ca. 28g/L 클라불란산을 함유하는 에틸 아세테이트내 클라불란산의 재료 용액을 제조했다. 상기 46ml에 t-옥틸아민(0.84g)을 첨가했다. 10분 후 혼합물이 탁해지고 미세한 결정의 염이 결정으로 석출되었다. 용액 분취량에 클로로포름을 첨가했고, 보다 큰 바늘 모양의 결정이 형성되었다. 부가의 분취량에 아세톤을 첨가하고, 바늘 모양 결정이 다시 형성되었는데, 그러나 클로로포름으로부터 얻은 것보다 작고 느리게 형성되었다. 용액의 나머지에 ca. 20ml 클롤포름 그리고 나서 초기 용액 부피와 대략 동일한 부피의 톨루엔을 첨가했으며 상기로 바늘 모양 결정을 실제량의 침전물로 얻었다.

2b. 디시클로헥실 아민-상기 2a에서와 같이 제조된 재료 용액 46ml에 디시클로헥실아민(1.18g)을 첨가했다. 상기로 맑은 용액을 얻었다. 아세톤을 분취량에 첨가했고 미세한 무정형 침전물이 형성되었다.

2c. 암모니아-상기 2a에서와 같이 제조된 재료 용액 500ml에 암모니아(에틸 아세테이트 내 2.5M 암모늄 2-에틸크사노에이트 21.1ml, 즉 ca.1당량)를 첨가했다. 산업용 메틸화 스피리트(1MS) 50ml를 첨가하여 미세한 바늘 모양 침전물을 쉽게 형성시켰다. 불순한 클라불란산 용액을 사용할 때, 용액의 색으로 명백히 나타나는 바, 상당량의 유색 불순물이 용액내 남는 것을 관찰했다. 수율-75%

2d. N,N-디메틸시클로헥실아민-상기 2a에서와 같이 제조된 재료 용액 500ml에 N,N-디메틸실클로헥실 아민(6.7ml)을 첨가했다. 첨가를 시작하자 기름이 형성되었다. 아세톤(150ml)을 서서히 첨가했고 용액이 탁해졌다. 상기 탁한 용액의 분취량을 취하고, 그에 디에틸에테르를 첨가했고, 결정이 석출되었다. 디에틸에테르(100ml)를 용액의 주부피에 첨가했고 즉시 결정이 석출되었다. 결정(13.4g)을 여과하고 아세톤으로 세척했다.

2e. t-옥틸아민-상기 2a에서와 같이 제조된 재료 용액 500ml에 t-옥틸 아민(6.7g)을 첨가했다. 용액이 약간 탁해졌다. 아세톤(20ml)을 첨가하자, 용액이 맑아졌다. 용액의 분취량에 디에틸 에테를 첨가했고 즉시 결정이 석출되었다. 디에틸에테르(55ml)를 용액의 주부피에 첨가했고 결정이 석출되었다. 결정을 여과하고 아세톤으로 세척했다. 수율(12.9g)은 클라불란산을 용액으로부터 77%회수한 것으로 나타났다.

2f. 벤즈아틴-벤즈아틴 디아세테이트(9.16g)을 수산화나트륨 수용액(5N, 10.15ml)와 함께 교반했다. 수용액을 에틸 아세테이트(55ml)로 추출하고, 추출물을 상기 2a에서와 같이 제조된 클라불란산 재료 용액 (1.0L)에 첨가했다. 기름이 처음에 형성되었다. 아세톤(600ml)을 첨가했고 결정이 형성되었다(시험관 실행 잔류물인 약 10ml의 디에틸 에테르를 첨가했다). 그리고 나서 메틸 이소부틸 케톤(200ml)을 첨가한 다음, 혼합물을 아세톤으로 2L로 만들었다. 형성된 결정을 여과하고 아세톤으로 세척했다. 수율은 11.5g으로 클라불란산을 59.1% 회수한 것으로 나타났다.

[실시예 3]

에틸 아세테이트(ca 20㎍/ml) 내 클라불란산의 용액을 동일한 부피의 아세톤으로 희석했다. 그리고나서 t-옥틸아민(1.25mole 당량)의 아세톤 용액을 10℃에 1/2시간에 걸쳐 적가했다. 부가로 1시간 동안 교반한 후 침전된 결정을 수집하고, 아세톤으로 세척하고 진공하에 건조시켰다.

침전물에 꽤 쉽게 형성되었고 백색이었다. 수율(순도에 대해 보정됨)=76%

[실시예 4]

THF 내 벤질 클라볼라네이트 0.012M용액을 촉매로 사용하며 수소첨가하여 THF 내 클라불란산 용액을 형성시켰다. 상기 용액(100ml)에 1-아미노아다만탄(THF 내 0.012M 25ml)를 주변 온도에서 첨가했다. 빠른 결정화가 나타났다. 용액을 주변 온도에서 30분 동안 그리고나서, 5℃에서 2시간 동안 교반했다. 그리고 나서 용액을 여과하고 결정을 세척하고 건조시켰다. 수율 = 83%, 염의 융점은 190-192℃(d)였다.

[실시예 5]

벤질 클라불라네이트(세파덱스 크로마토그래피에 의해 정제됨. 20g, 0.07moles)를 테트라히드로퓨란(칼슘 히드라이드로부터 증류, 400ml) 내 용해시키고 목탄산 10% 팔라듐 촉매(5.7g)를 첨가했다. 혼합물을 실온 및 약 15psi에서 20-30분 동안 교반하며 수소첨가했다. 반응의 상태를 실리카 플레이트를 사용하여 에틸 아세테이트와 함께 전개하고 트리페닐테트라졸륨 클로라이드 분무제를 사용하여 가시화하며 얇은 막 그로마토그래피에 의해 평가했다. 클라불란산 Rf 0.0벤질 에스테르 0.4.

반응 혼합물을 여과하고 여과 패드를 완전히 세척했다. 클라불란산을 함유한 합친 여액(~500ml)을 교반하며 건조한 테타르히드로퓨란(50ml) 내 2-아미노-2,4,4-트리메틸펜탄(9.0g, 0.07moles)를 처리했다. 1분 내에 결정이 관찰되었다. 혼합물의 주변 온도에서 0.5시간 동안 그리고 나서 5℃에서 2시간 동안 교반했다. 생성물을 여과해내고, 건조한 테트라히드로퓨란(100ml)로 세척하고 진공에서 12새간 동안 건조시켜 융점 160-170。(d)를 갖는 100%의 표제 염 23.0g을 얻었다.

[실시예 6]

실시예 5에서와 같이 벤질 클라불라네이트(0.9g, 0.003moles)를 사용하고 결과 얻어진 클라불란산 용액을 건조한 테트라히드로퓨란(10ml)내 2-아미노-2-메틸프로판(0.22g, 0.003mol)으로 처리하여 제조를 수행했다. 표제 염(0.6g, 73% 수율)은 융점 150-152。(d)였다.

[실시예 7]

실시예 5에서와 같이 벤질 클라불라네이트(0.9g, 0.003moles)를 사용하고 결과 얻어진 클라불란산 용액을 건조한 테트라히드로퓨란(10ml) 내 (D(+)1-메틸벤질아민으로 처리했다. 혼합물을 2일 동안 5℃에 보관했으며 상기 기간 동안 서서히 결정이 나타났다. 여과하여 융점 125。(d)를 갖는 표제 염 0.6g(62% 수율)을 얻었다.

[실시예 8]

리튬 클라불라네이트의 수용액을 알킬암모늄 포스페이트의 수용액과 혼합했다. 침전된 리튬 포스페이트를 여과해 냈고 아민 클라불라네이트 염이 아세톤의 첨가에 의해 침전되었다. 나트륨 클라블라네이트 또한 사용될 수 있지만, 상기 경우 나트륨 포스페이트의 분리를 촉진하기 위해, 에탄올을 첨가할 필요가 있음이 밝혀졌다. 또한 아민히드로클로라이드를 사용할 수 있었다.

상기 방식에서 리튬 클라불라네이트를 사용하여 N-에틸 피페리딘 클라불라네이트를 제조했고 나트륨 클라블라네이트를 사용하여 N-에틸 피페리딘 클라블라네이트를 제조했다.

[실시예 9]

이온-교환에 의해 다소 예비-정제한 후 에스. 클라불리게루스 발효 육즙으로부터 얻은 미정제 추출물인 클라불란산의 불순한 용액(500ml, 에틸아세테이트내 21uf/ml)을 아테노(150ml)가 혼합되고, 아세톤(25ml)내 N'N-메틸시클로헥실아민(6.7ml)의 용액으로 서서히 처리했다. 분취량을 제거하고 디에틸 에테르로 처리했고 즉시 결정이 나타났다. 상기 결정을 주 부피에 시딩(seeding)하여 빠른 백색 소판 결정을 초래했고 상기는 에테르(110ml)를 처가하여 더욱 완결되었다. 아민 염을 여과해내고 아세톤(3x100ml)로 세척하고 공기 건조시켰다. 수율=13.4g, 82% 회수, 64.9% pfa(이론치 61.0%).

[실시예 10]

아세톤(20ml)을 부가로 함유한 실시예 9에서 사용한 클라불란산의 불순한 용액(500ml, 21㎍/ml)에 t-옥틸아민(7.6g, 1.0e.q.)을 첨가했고 상기는 약간 용액을 흐리게 했다. 디에틸 에테르(55ml)를 첨가하여 아민염을 미세한 백색 바늘모양 결정으로 분리시켰으며 상기를 여과해 내고 아세톤으로 세척했다. 수율 12.9g, 77.2% 회수, 62.8% pfa(이론치 =60.6%).

[실시예 11]

에스. 클라불리게루스 발효 육즙을 에틸아세테이트로 추출하고 이온-교환에 의해 다소 예비-정제하여 얻은 에틸 아세테이트내 클라불란산의 불순한 용액(1L,10.14㎍/mg)을 아세톤(600ml)과 혼합하고 나서, 에틸 아세테이트(55ml) 내 벤즈아틴(6.15g)으로 처리했다. 벤즈아틴의 첨가를 완료할 때 쯤 혼합물은 결정화하기 시작했다. 그리고 나서 메틸 이소부틸 케톤(200ml)을 첨가하여 침전을 더욱 완결했다. 결정을 여과해내고 아세톤(3x100ml)으로 세척했다.

수율 =11.5g, 67.0% 회수.

[실시예 12]

불순하고, 습한(Ca, 1% 물) 에틸아세테이트내 클라불란산의 용액을 사용하며 실시예 11의 방법을 반복했다. 상기 용액의 분리된 1L 배치들에 물을 갖지 않은 과량의 에틸렌 디아민, N,N'-디에틸에틸렌 디아민, 및 N,N'-디아소프로필에틸렌디아민을 교반하며 첨가했고, 각 아민의 양은 클라불라산과의 디암모늄 염을 형성하는데 필요한 양 이상이었다. 교반을 계속한 후 염 침전물이 형성되었다. 과량의 아세톤을 첨가하여 부가의 결정 생산량을 얻었다. 침전된 디암모늄 염을 여과해내고 아세톤으로 세척했다.

그리하여 형성된 상기 각각의 디암모늄염의 결정은 최소량의 물내 염을 용해시킨 후, 이소프로필 알콜내 과량의 칼륨 2-에틸헥사노에이트 용액을 첨가하여 칼륨 클라불라네이트로 전환시켰다. 교반을 계속한 후 형성된 칼륨 클라불라네이트 침전물을 여과하고 이소프로필 알콜로 세척하고 건조시켰다.

[실시예 13]

테트라히드로퓨란(300ml)내 클라불란산(0.0046mole)의 용액을 메탄올 내트리메틸아민의 용액(25% 중량/부피 용액 1.0ml, ca, 0.0042mole)으로 처리했고, 엷은 황색 용액을 얻었다. 결정화는 시딩하고 실온에서 방치함으로써 유도했다. 결정화는 빠르게 진행되었으며 미세한 바늘모양 결정을 얻었고 밤새 +4。에 방침함으로써 유도했다. 생성물을 여과해내고, 적은 부피의 신선한 용매(ca, 5ml)로 세척하고 진공에서 건조시켰다. 수율은 0.9g(75%이고 융점은 310。이고, ca 130。이상에서 서서히 갈색으로 변했다. 분석 B24641 : 실측치 C, 51. 32 : H. 7.15: N, 10.68% CHNO는 C, 51.16: H, 7.02:N, 10.84%를 필요로 한다. 분석 A 15230 : 이미다졸 77.2 : 76.4%(계산치 77.1%,

ca, 99.5% 순도)

물 1.18 : 1.34%

화합물(크림색 미세한 바늘모양 결정)은 수일에 걸쳐 공기중에 방치할 경우 변질되고, 물을 흡수하고 서서히 황색으로 변한다.

[실시예 14]

상기 화합물의 2개 제조법이 각각 약간 다른 결과를 나타낸 것으로 포함한다. 첫 번째는 반수화물에 해당되는 정도로 물을 함유한 생성물을 적당한 수율로 얻고, 두 번째는 본질적으로 무수 물질이지만 낮은 수율로 얻었다.

14A. 테트라히드로퓨란(25ml) 내 클라불란산(0.00346 mole)을 트리에틸아민(0.4g, 0.00346mole)로 처리하고 혼합하여 균질의 맑은 용액을 얻었다. 시딩에 의해 결정화를 개시하고 밤새 +4。에 방치하여 완결했다. 생성물을 여과한 진공에서 건조시켰다. 수율 0.7g(63%), 큰 회색 바늘 모양 결정.

분석 B 24639 : 실측치 C, 54.74: H. 7.95: N, 8.94%

CHNO는 C, 56.05: H, 8.00:N, 9.33%를 필요로 한다.

CHNOHO는 C, 54.36: H, 8.14:N, 9.05%를 필요로 한다.

분석 A 15220 : 아미다졸 61.0: 61.1%(계산치, 64.4%, ca, 95.0% 순도)

물 2.64%(반수화물은 12.91%를 필요로 한다).

14B. 테트라히드로퓨란(60ml)내 클라불란산(0.021mole)을 트리에틸아민(2.1g 0.021 mole)으로 처리하고 혼합하고 결과 얻은 맑은 용액을 실제 염으로 시딩했다. 생성물이 실온에서 기다란 바늘 모양으로 결정화하기 시작했고, 방법은 +4。에서 밤새 완결했다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 신선한 용매(ca, 10ml) 및 디에틸에테르(ca, 20ml)로 필터상 세척하고 최종적으로 진공에서 건조시켜, 회색 결정성 생성물을 얻었다. 수율 1.7g(27%)

분석 B 24639 : 실측치 C, 56.07: H. 7.83: N, 9.32%

CHNO는 C, 56.05: H, 8.00:N, 9.33%를 필요로 한다.

CHNOHO는 C, 54.36: H, 8.14:N, 9.05%를 필요로 한다.

분석 A 15220 : 아미다졸 65.1:65.1%(계산치, 66.3%, ca, 98.2% 순도)

물 0.9%

[α] +47.0°(C=물내 0.2%)

트리메틸아민 염과 같이 생성물은 수일에 걸쳐 공기중에 방치할 경우 변질된다.

상기 두 실시예는 유기 용매내 클라불란산의 용액으로부터 고순도의 클라불란산염의 형성을 예시한다.

[실시예 15]

실시예 13 및 14로부터 얻은 트리메틸아민 클라불라네이트 밑 트리에틸아민 클라불라네이트의 분리된 샘풀을 찬 물에 용해한다. 상기 용액에 이소프로판올 내 갈륨 2-에틸헥사노에이트의 진한 용액을, 교반하며,첨가한다. 교반을 계속 한 후 칼륨 클라불라네이트 결정이 분리되고 여과해내고, 찬 이소프로판올로 세척하고 건조시킬 수 있다.

[실시예 16]

이온-교환 클로마토그래피를 포함하는 또는 상기 일반적으로 약술된 정비-정제에 에스. 클라불리게루스 발효 육즙으로부터 얻어지는 클라불란산 Ca,17.1g/L를 함유하는 불순한 수용액을 25 부피/부피% 황산으로 pH 2.0으로 산성화시키고 나서, 연속적으로 에틸 아세테이트내로 추출했다. 에틸 아세테이트 추출물을 2℃로 냉각시키고, 원심분리에 의해 탈수하고나서 MgSO와 함께 건조시키고나서 CPG탄소 칼럼을 통과시켰다. 상기 단계에서 에틸 아세테이트 추출물은 클라불란산 6.02g/L을 함유했고, 그리고 나서 상기를 증발에 의해 클라불란산 25.7g/L의 농도로 농축시키고, 상기 농도로 사용했다. 농축물의 수분 수준은 ca. 0.26 부피/부피 % 였다.

t-옥틸아민 7.8ml를 신선한 에틸 아세테이트 25ml와 혼합했다. 상기 혼합물을 신선한 에틸 아세테이트로 적정량 23.0g/L로 다시 희석된 클라불라네이트가 풍부한 에틸 아세테이트 추출물 2L에 빠르게 교반하며 서서히 첨가했다. 슬러리를 5℃에서 부가의 1시간 동안 교반했다. t-옥틸아민 클라불라네이트를 이어서 여과에 의해 단리하고 에틸 아세테이트로 세척했다. 20℃의 진공오븐내에서 질소 블리이드와 함께 밤새 최종 건조를 수행했다. 생성물 중량 =6.13g

[실시예 17]

실시예 16에서 생성된 아민염 5g을 이소프로판을 97ml에 용해시켰다. 생성물은 쉽게 용해되지 않고, 전체를 용해시키기 위해서 24℃로 온건히 가열할 필요가 있음이 밝혀졌다. 이소프로판을 내 1.5N 칼륨 2-에틸헥사노에이트 14ml를 10분에 걸쳐 첨가했다. 뒤이어 슬러리를 5℃에서 1.5시간동안 교반했다. 그리고나서 생성물 칼륨 클라볼라네이트를 여과해내고, 소량의 이소프로판을 그리고나서 아세톤으로 세척하고, 20℃에서 질소 블리이트와 함께 밤새 진공하에 건조시켰다. 생성물 중량=3.16g.

[실시예 18]

클라불란산 2g/L를 함유한 여과한 (RVF)에스, 클라불리 게루스, 발효육즙을 25 부피/부피 % 황산으로 pH1.6으로 산성화시키고 연속적으로 에틸 아세테이트로 추출했다. 용매 추출물을 3℃로 냉각시키고 나서 원심분리에 탈수하고 나서, MgSO와 함께 건조시키고나서, CPG 탄소 칼럼을 통과시켰다. 그리고나서 탄소-처리된 추출물을 증발에 의해 수분함량 ca, 0.06 부피/부피 %를 갖는, 클라불란산 농도 ca, 20g/L로 종축시켰다.

t-옥틸아민 13.5ml를 신선한 에틸 아세테이트 43ml와 함께 혼합했다. 상기 혼합물을 적정량 20g/L 클라불란산의 클라불라네이트가 풍부한 에틸아세테이트 추출물 400ml에 빠르게 교반하여 서서히 첨가했다. 슬러리를 5℃에서 부가의 1시간 동안 교반했다. t-옥틸아민 클라불라네이트를 이어서 여과에 의해 단리하고, 에틸 아세테이트로 세척했다. 20℃의 진공 오븐내에서, 질소 블리이드와 함께 밤새 최종 건조를 수행했다. 생성물 중량 = 12.44g

[실시예 19]

실시예 18에서 생성된 아민염 11g을 이소프로판을 213ml에 용해시켰다. 24℃로 온건히 가열한 후에도, 생성물은 쉽게 용애되지 않았다. 물(3.75ml)을 첨가하여 용해를 가능케했다. 일단 용액을 얻으면 부가의 이소프로판올(100ml)를 첨가하여 결정화에 앞서 물 함량을 감소시켰다. 이소프로판올내 1.5N 칼륨 2-에틸 헥사노에이트 30ml를 15분에 걸쳐 첨가했다. 뒤이어 슬러리를 5℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 그리고나서 칼륨 클라불라네이트 생성물을 여과해내고, 소량의 이소프로판올 그리고나서 아세톤으로 세척하고, 20℃에서 질소 블리이드와 함께 밤새진공하에 건조시켰다. 생성물 중량 = 7.29g

본 발명의 방법에 따르면 순수한 형태의 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 에스테르를 간단한 공정으로 고수율로 수득할 수 있다.

Claims (9)

1. i) 클라불란산 생성 미생물을 발효시켜 수득한 육즙에서 불순한 클라불란산을 수득하고, b) 상기 육즙을 여과시켜 현탁된 고체의 적어도 일부를 제거하고, c) 유기 용매내에서 하기 일반식(2)의 아민과 상기에서 수득한 불순한 클라불란산용액과 접촉시키고,

   (식중, R¹은 하기 일반식의 기인데,

   상기 식중, R⁴및 R⁵는 독립적으로 수소, C_1-6알칼리, 아미노-치환된 C_1-6알킬기, 또는 치환된 아미노-치환된 C_1-6알킬기이고, R²및 R³는 독립적으로 수소, C_1-6알킬기, 아미노-또는 히드록시-치환된 C_1-6알킬기 또는 C_1-6알킬기-치환된 아미노-치환된 C_1-6알킬기로부터 선택되고, m은 0 또는 1 내지 5의 정수임); ⅱ)상기 형성된 클라불란산의 아민염을 단리하고; ⅲ) 상기 수득된 염을 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 에스테르로 전환시키는 것을 포함하는, 클라불란산 또는 그의 제약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 에스테르의 제조 또는 정제 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 현탁된 고체의 적어도 일부를 제거한 후의 불순한 클라불란산 육즙을 예비 농축시키는 방법.
3. 제2항에 있어서, 상기 예비 농축을 10-100mg/ml의 농도로 하는 방법.
4. 제3항에 있어서, 상기 예비 농축을 10-40mg/ml의 농도로 하는 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 예비 농축을 10-25mg/ml의 농도로 하는 방법.
6. 제2항에 있어서, 음이온 수지상에서 클라불란산을 흡착시키고 그로부터 전해질 수용액으로 클라불란산을 용리시키는 것에 의해 예비 농축을 행하는 방법.
7. 제6항에 있어서, 상기 전해질인 염화나트륨인 방법.
8. 제6항에 있어서, 상기 용출물이 탈염되는 방법.
9. 제1항 내지 제8항 중의 어느 한항에 있어서, R⁴및 R⁵중의 하나가 수소이고, 다른 하나는 C_1-6알킬리이고, R²및 R³는 수소 또는 C_1-6알킬기인 방법.