NO178499B

NO178499B - Fremgangsmåte for fremstilling og/eller rensing av clavulansyre

Info

Publication number: NO178499B
Application number: NO951725A
Authority: NO
Inventors: Michael Allen Cook; Robert Bennett Wilkins
Original assignee: Smithkline Beecham Plc
Priority date: 1992-06-11
Filing date: 1995-05-03
Publication date: 1996-01-02
Also published as: SE9600797L; AU665159B2; HU212583B; FI103973B1; GB2287025A; FI951414A0; HK1003245A1; SK153294A3; MA22907A1; DK170569B1; RO111192B1; SE9404290D0; DK0644887T3; NL9320037A; FI980631A0; EP0672670A1; HUT68775A; GR3019006T3; GR3022006T3; HK1007311A1

Description

FREMGANGSMÅTE FOR FREMSTILLING AV CLAVULANSYRE

Denne oppfinnelse vedrører en ny fremgangsmåte for fremstilling av clavulansyre (I):

og farmasøytisk akseptable salter og estere derav.

Clavulansyre fremstilles vanligvis ved fermentering av en mikroorganisme som danner clavulansyre, så som forskjellige mikroorganismer tilhørende forskjellige streptomyces-arter, så som S. clavuligerus NRRL 3585, S. jumoninensis NRRL 5741, S. katsurahamanus IFO 13716 og Streptomyces sp. P 6621 FERM

P2804, f.eks. som beskrevet i JP Kokai 80-162993. Den resulterende vandige buljong kan underkastes konvensjonelle rense-og konsentreringsprosesser, som for eksempel involverer filtrering og kromatografisk rensing, som f.eks. beskrevet i GB 1508977 og JP Kokai 80-62993, før ekstraksjon av den

vandige oppløsning med et organisk oppløsningsmiddel, for å gi en oppløsning av rå clavulansyre i det organiske oppløsnings-midlet.

Av GB 1508977 fremgår det blant annet at salter av clavulansyre kan oppnås ved å absorbere clavulanat-anionet i den filtrerte buljong på anionbytter-harpiks, hvorfra det elueres med en elektrolytt, den resulterende oppløsning avsaltes, den avsaltede oppløsningen påsettes på en ytterligere anionbytter-harpiks som kromatografisk elueres med en elektrolytt, hvoretter den resulterende oppløsning avsaltes og oppløsningsmidlet fjernes. Denne fremgangsmåte kan benyttes for å gi akseptable utbytter av rent materiale, men anvend-elsen av harpiks-kolonner medfører betydelige investeringer og kan gi begrensninger ved produksjon i stor skala. Det ville derfor være ønskelig å ha tilgang til en alternativ fremgangsmåte som involverte få harpiks-benyttende trinn.

GB 1543563 omtaler en fremgangsmåte for fremstilling av clavulansyre-salter via utfelling av litium-clavulanat. GB 1578739 beskriver forskjellige aminsalter av clavulansyre som farmasøytiske forbindelser. EP 0026044 omtaler bruken av det tertiære butylaminsalt av clavulansyre som et egnet mellomprodukt ved fremstillingen av clavulansyre. Saltet er omtalt i BE 862211, men kun som en egnet farmasøytisk formulerings-ingrediens. PT.94.908 beskriver bruken av tri(lavere alkyl)-aminsalter og dimetylanilinsalter av clavulansyre i en rense-prosess for clavulansyre, hvor trietylaminsaltet av clavulansyre dannes og deretter omdannes til en silyl-diester av clavulansyre. EP 0887178A omtaler en fremgangsmåte for rensingen av clavulansyre, hvori organiske aminer kan benyttes for å danne et intermediært aminsalt med clavulansyre i en uren oppløsning.

Ved foreliggende oppfinnelse benyttes saltet av clavulansyre med et amin med formel (II)

som mellomprodukt ved en fremgangsmåte for fremstilling av clavulansyre, eller farmasøytisk akseptable salter og estere derav, hvor R<1>, R<2> og R3 er valgt i henhold til følgende muligheter:

R<1> utgjør en gruppe med generell formel:

hvor R<4> og R<5> uavhengig er hydrogen, Cj-C^-alkyl eller aminosubstituert (^-Cg-alkyl, og R<2> og R<3> uavhengig er valgt fra

hydrogen, C^-Cg-alkyl eller amino- eller hydroksy-substituert Ci-Ce-alkyl, og m er null eller et heltall fra 1 til 5.

RA og R<5> begge kan hensiktsmessig være hydrogen, eller den ene være hydrogen og den andre Cx-C6-alkyl. R<2> og R<3> kan være hydrogen eller Cj-C6-alkyl.

Eksempler på slike aminer inkluderer etylendiamin, N,N-dietyletylendiamin, N,N'-diisopropyletylendiamin og trietylentetramin.

Clavulansyren kan danne et salt med ett eller flere av nitrogenatomene, for eksempel som i N,N'-diisopropyletylen-diamin-diclavulanat.

Av aminene nevnt ovenfor, er et foretrukket amin N',N'-diisopropyletylendiamin.

I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse, tilveiebringes en fremgangsmåte for fremstilling og/eller rensing av clavulansyre eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en ester derav, som omfatter: i) uren clavulansyre, eller et labilt derivat derav oppløst i et organisk oppløsningsmiddel, bringes i kontakt med et amin med formel (II) eller et labilt

derivat derav,

ii) saltet av clavulansyre dannet med aminet med formel

(II), isoleres og

iii) det således dannede salt omdannes til clavulansyre,

eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en ester derav.

I prosessen i henhold til foreliggende oppfinnelse, kan saltet av clavulansyre med aminet (II) benyttes til å rense uren clavulansyre under fremstillingen av denne. Saltet kan således dannes i en forurensningsholdig oppløsning av clavulansyre eller et labilt derivat derav, hvoretter saltet isoleres som en separat fase, f.eks. som et fast bunnfall, fra oppløsningen som inneholder gjenværende forurensninger, hvorpå clavulansyre gjendannes eller det dannes et farmasøytisk akseptabelt salt eller en ester derav.

Egnede labile derivater av clavulansyre innbefatter salter, f.eks. et alkalimetallsalt, så som litium- eller natriumclavulanat, eller estere, så som silylestere. Egnede labile derivater av aminet (II) inkluderer slike salter som fosfat, borat, klorid, klorat, perklorat, bromid, toluen-sulfonat eller alkanoater, så som acetatet eller etylheksa-noatet. Hensiktsmessig bringes aminet (II) selv i kontakt med den urene clavulansyre oppløst i et organisk oppløsningsmid-del.

Ovennevnte fremgangsmåte utføres i et organisk opp-løsningsmiddel, som selv om det fortrinnsvis er tilnærmet tørt, for eksempel inneholder mindre enn 6 g/L, f.eks. 0,25-0,6 g/L vann, kan inneholde noe vann som oppløsningsmiddel for clavulansyren og aminet (II). En passende tørrhetsgrad kan oppnås gjennom konvensjonelle awanningsprosessér, så som sentrifugering. Vann som forekommer i oppløsningsmidlet kan oppløses eller utskilles i form av små dråper av en separat fase.

Oppløsningen av clavulansyre i et organisk oppløsnings-middel kan oppnås ved ekstraksjon av en surgjort vandig opp-løsning av clavulansyre, så som den ovenfor nevnte fermen-teringsvæske. Hvis den opprinnelige clavulansyre-kilde er en buljong som resulterer fra fermentering av en clavulansyre-dannende mikroorganisme, som f.eks. den som er nevnt ovenfor, kan det for å oppnå et ekstrakt av passende konsentrasjon av clavulansyre for denne fremgangsmåte, være ønskelig å ikke ekstrahere selve buljongen, men å fjerne noe av det suspen-derte faststoffet i buljongen, f.eks. ved filtrering før ekstraksjon. Det kan dessuten også være ønskelig å prekon-sentrere den vandige oppløsningen av clavulansyre oppnådd ved fermentering, slik at for eksempel en vandig oppløsning er flere ganger mer konsentrert med hensyn til clavulansyre enn utgangsbuljongen, for eksempel prekonsentrert til en konsentrasjon på ca. 10-100 mg/mL, f.eks. 10-40 mg/mL, så som 10-25 g/L clavulansyre.

Egnede prekonsentreringsmetoder innbefatter absorpsjon av clavulansyren på en anionbytter-harpiks, hvoretter clavulansyren elueres fra dette med en vandig oppløsning av en elektrolytt, så som natriumklorid, eventuelt fulgt av avsaltning. Det foretrekkes også å surgjøre den vandige opp-løsningen, f.eks. buljongen eller den prekonsentrerte vandige oppløsningen, før ekstraksjonen, f.eks. til pH 1 til 3, f.eks. til ca. pH 1,5 til 2,5. Det foretrekkes også å tørke eller avvanne det organiske ekstrakt før saltdannelsen med aminet (II), f.eks. til mindre vann enn 6 g/L. Fortrinnsvis foretas ekstraksjonen ved en temperatur fra 5 til 15°C.

Egnede organiske oppløsningsmidler hvori uren clavulansyre kan bringes i kontakt med aminet (II), inkluderer hydro-karboner, så som toluen og heksan, etere som tetrahydrofuran, dioksan, dietyleter, halogenerte oppløsningsmidler, så som diklormetan og kloroform, ketoner som aceton og metylisobutylketon, og estere, så som etylacetat. Oppløsningsmidler som inneholder en karbonylgruppe, f.eks. de med formel (III):

hvor R<8> er en Ci-galkylgruppe eller en Ci^alkoksygruppe og R<9> er en Ci-galkylgruppe, er eksempler på en underklasse av passende oppløsningsmidler, for eksempel organiske ketoner eller organiske alkanoatestere. Foreliggende oppfinnelse omfatter også bruken av blandinger av slike oppløsningsmidler.

Bedre egnede organiske oppløsningsmidler er slike som kan benyttes direkte for å ekstrahere den surgjorte vandige opp-løsningen, for eksempel organiske alkylalkanoatestere, ketoner og enkelte alifatiske alkoholer, eller blandinger derav, så som etylacetat, metylacetat, propylacetat, n-butylacetat, metyletylketon, metylisobutylketon, tetrahydrofuran, butanol og blandinger av slike oppløsningsmidler. Blant disse synes de best egnede å være metylisobutylketon, metyletylketon og etylacetat. Passende oppløsningsmiddelblandinger inkluderer metyletylketon/metylisobutylketon og tetrahydrofuran/metylisobutylketon. Et foretrukket oppløsningsmiddel er etylacetat.

Egnede oppløsningsmidler for aminet (II), inkluderer de som er omtalt ovenfor og som clavulansyren kan være oppløst i, eller ekstrahert over i, for eksempel aceton, etylacetat, metylisobutylketon og metyletylketon.

Det synes å være særlig fordelaktig å inkludere ketoner, så som aceton, i løsningsmiddelsystemet da disse synes å motvirke dannelse av en olje av saltet av clavulansyre med aminet (II).

Oppløsninger av clavulansyre og amin (II) kan for eksempel blandes langsomt under omrøring, hvorpå blandingen omrøres en viss tid etter at tilsetningen er fullført. Reaksjonen mellom clavulansyre eller dens labile derivat, foretas hensiktsmessig ved lavere temperatur enn omgivelsene, for eksempel ved 0 til 15°C, f.eks. 0 til 10°C, f.eks. 0 til 5°C. En egnet konsentrasjon av clavulansyren, eller dens labile derivat, i oppløsningen, er minst 1,0 g/L, for eksempel i området 1,0 til 4,0 g/L clavulansyre. Det kan være fordelaktig å konsentrere ekstraktet ytterligere til en konsentrasjon høyere enn den nevnte, f.eks. høyere enn 20 g/L.

Det ønskede salt av clavulansyre med aminet (II) kan deretter isoleres. På denne måte separeres saltet av clavulansyre med aminet (II) fra de fleste eller alle forurensninger. Isoleringen kan foretas på konvensjonell måte, for eksempel ved sentrifugering eller filtrering.

Ved en alternativ isoleringsmetode kan saltet av clavulansyre med aminet (II), dersom oppløsningsmidlet er helt eller delvis ikke-blandbart med vann, isoleres fra det organiske oppløsningsmiddel ved å bringe oppløsningsmidlet i kontakt med vann, slik at saltet, som kan være i oppløsning eller suspensjon, ekstraheres fra det organiske oppløsnings-middel og det dannes en vandig oppløsning av saltet. Siden salter av clavulansyre med aminet (II) er relativt oppløselige i vann, kan en slik vandig oppløsning være meget konsentrert, f.eks. ca. 20-3 0 vekt%.

Det vesentlige av organiske forurensninger i oppløsningen av clavulansyre i den organiske oppløsning forblir på denne måte i det organiske oppløsningsmiddel, mens clavulansyren oppnås i form av dens salt med aminet (II), i relativt ren tilstand i den vandige oppløsning. Den vandige oppløsning av den således dannede clavulansyre kan underkastes konvensjonell videre behandling, f.eks. rensning eller omdannelse til clavulansyre eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en ester, slik som beskrevet nedenfor.

Etter en annen alternativ eller ytterligere fremgangsmåte, kan clavulansyren og aminet blandes i oppløsning i et første organisk oppløsningsmiddel, hvoretter saltet kan bringes til separasjon fra oppløsningen ved tilsetning av et andre organisk oppløsningsmiddel. Det første organiske opp-løsningsmidlet kan være en organisk ester, så som etylacetat, og det andre oppløsningsmidlet for eksempel være et halogenert oppløsningsmiddel, så som kloroform, en eter, så som dietyleter, et hydrokarbon som toluen, en alkohol som etanol eller et oppløsningsmiddel med den ovenfor angitte formel (III), så som aceton eller metylisobutylketon.

Noen av de ovennevnte salter av clavulansyre antas å være nye forbindelser og utgjør som sådanne et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen, som for eksempel saltet av clavulansyre med N,N'-diisopropyletylendiamin.

I henhold til en utførelsesform av oppfinnelsen, kan saltet av clavulansyre med aminet (II) benyttes som et acetonsolvat. Acetonsolvater har i enkelte tilfeller fordelaktige stabilitets- og renhetskarakteristika sammenlignet med salter av clavulansyre med aminene som sådanne. Slike solvater er særlig anvendelige i sammenheng med foreliggende oppfinnelse, siden de ofte kan isoleres som en meget ren og stabil krystal-linsk forbindelse.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer således også saltet av clavulansyre med aminet (II) i form av et acetonsolvat. Under isolering og/eller tørking kan noe av acetonet gå tapt siden solvatiseringsstyrken muligens ikke er høy, men mengden av aceton i produktet er ikke avgjørende.

Acetonsolvatet kan dannes ved å bringe clavulansyre i kontakt med aminet (II) i nærvær av aceton. I alminnelighet kan en oppløsning som inneholder clavulansyre, blandes med minst samme volum aceton sammen med aminet (II), ved utfelling av saltet.

Aminet (II) kan oppløses i aceton og blandes med en oppløsning av clavuiansyre i et organisk oppløsningsmiddel.

Gunstige organiske oppløsningsmidler inkluderer etylacetat, tetrahydrofuran, metyletylketon, metylisobutylketon og

blandinger av slike oppløsningsmidler, hvorav etylacetat er å foretrekke. Alternativt kan en vandig oppløsning av saltet av clavulansyre med aminet (II), oppnådd ved vannekstraksjon som skissert ovenfor, blandes med aceton for å danne solvatet. En konsentrert vandig oppløsning av saltet kan blandes med aceton-overskudd for å danne solvatet.

Omkrystallisasjon av saltet av clavulansyre eller aceton-solvåtet, kan være fordelaktig for ytterligere å redusere forurensningsnivået. Et egnet oppløsningsmiddel for omkrystallisasjon er vandig aceton. Denne omkrystallisering foretas på konvensjonell måte, for eksempel ved at saltet eller solvatet oppløses i vann, behandles med små mengder aceton og filtreres og deretter behandles med større volumer aceton, eventuelt under omrøring og/eller avkjøling for å gi det omkrystal-liserte produkt.

I henhold til et annet aspekt, tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for fremstilling av clavulansyre, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en ester derav, som omfatter omdannelse av saltet av clavulansyre med et amin med formel (II) til clavulansyre eller et farmasøytisk akseptabelt salt éller en ester derav.

De farmasøytisk akseptable salter og estere av clavulansyre fremstillet etter fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen, inkluderer de som er beskrevet i GB 1508977 og 1508978 som herved inkorporeres med hele sitt innhold i foreliggende beskrivelse.

Særlig egnede farmasøytisk akseptable salter inkluderer farmasøytisk akseptable alkali- og jordalkalimetallsalter, for eksempel natrium-, kalium-, kalsium- og magnesiumsaltene. Av disse saltene er natrium- og kaliumsaltene de best egnede, hvorav kalium er å foretrekke.

Egnede estere inkluderer de som kan spaltes til clavulansyre, eller et salt derav, ved kjemiske metoder, så som hydrogenolyse, eller ved biologiske metoder.

Saltet av clavulansyre med amin (II), eventuelt i form av dets acetonsolvat, kan omdannes til clavulansyre eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en ester derav, for eksempel ved ione-utskifting når det er tale om den frie syre eller salter, eller ved forestring.

Ione-utskifting kan foretas ved å benytte ionebytter-harpikser, for eksempel ved å sende en oppløsning av saltet i natrium-, kalium- eller kalsiumform gjennom et lag av kationbytter-harpiks. Egnede kationbytter-harpikser inkluderer Amberlite IR 120 og likeverdige harpikser.

Alternativt kan ione-utskifting skje ved omsetning av det protonerte aminkation med en salt-forløper, som kan være en base, for eksempel et karbonat, bikarbonat eller hydroksyd av et farmasøytisk akseptabelt alkali- eller jordalkalimetall, eller et salt av en organisk karboksylsyre, med et farma-søytisk akseptabelt kation, så som et alkali- eller jordalkalimetall, for eksempel et salt av en alkansyre med formel (IV):

hvor R<10> er en alkylgruppe som for eksempel inneholder 1 til 20 karbonatomer, fortrinnsvis frå 1 til 8 karbonatomer. Eksempler på egnede salter inkluderer acetat-, propionat- eller etyl-heksanoatsaltet, hvorav kalium-2-etylheksanoat og natrium-2-etylheksanoat er å foretrekke. Saltet av clavulansyre med amin (II) omsettes i alminnelighet i oppløsning med et salt av et alkalimetall med syre (IV) i oppløsning eller suspensjon i et egnet oppløsningsmiddel, som for eksempel kan være et organisk oppløsningsmiddel, vann eller en blanding av vann og et organisk oppløsningsmiddel, så som isopropanol. Oppløsninger av saltet av clavulansyre med aminet (II), og av salt-forløperen, kan blandes, hvoretter det farmasøytisk akseptable salt får anledning til å krystallisere. Hensiktsmessig foretas reaksjonen ved lavere temperatur, f.eks. 0 til 15°C, f.eks. 0

til 10°C, eller 0 til 0,5°C. Dersom saltet av clavulansyre med aminet (II) dannes i vandig oppløsning, kan det utfelles ved å blande den vandige oppløsningen med et overskudd av aceton.

Egnede forestringsmetoder inkluderer:

a) omsetning av saltet av clavulansyre med aminet (II) med en forbindelse med formel Q-R<11>, hvor Q er en lett avspaltbar

gruppe og R<11> er en organisk gruppe;

b) omsetning av saltet av clavulansyre med aminet (II) med en alkohol eller tiol i nærvær av et kondensasjons-befordrende

middel, så som karbodiimid; og

c) omsetning av saltet av clavulansyre med aminet (II) med en diazoforbindelse.

De foran omtalte fremgangsmåter skal dekke de aspekter hvor saltet av clavulansyre med aminet (II) først omdannes til clavulansyre, eller et annet salt derav, og deretter omdannes til den ønskede ester. Nærmere detaljer angående forestringsmetoder er omtalt i GB 1508977 og 1508978. Gjennom foreliggende oppfinnelse er det mulig lettere å oppnå salter og estere av clavulansyre i ren form, enn ved å benytte fremgangsmåten i henhold til GB 1508977 og 1543563.

Oppfinnelsen beskrives i det følgende ved hjelp av eksempler.

Eksempel 1

I det følgende ble aminet blandet med clavulansyre oppløst i THF, hvorved hurtig krystallisasjon under dannelse av et faststoff, ble iakttatt.

Eksempel 2

En uren oppløsning av clavulansyre i etylacetat (1 L, 10,14 jzg/mL) oppnådd ved ekstraksjon av en S. clavuligerus-fermenteringsbuljong med etylacetat ble anvendt etter en viss forutgående rensing ved ionebytting.

Til separate 1 L-porsjoner av denne oppløsningen ble det under omrøring tilsatt et overskudd av ufortynnet etylendiamin, N,N'-dietyletylendiamin og N,N'-diisopropyletylen-diamin, hvor mengden av hvert amin forelå i et overskudd av den nødvendige mengde for å danne et diammoniumsalt med clavulansyren. Etter fortsatt omrøring dannet det seg et bunnfall av saltet. En ytterligere fraksjon krystaller ble oppnådd ved tilsetning av overskudd av aceton. Det utfelte diammoniumsalt ble frafiltrert og vasket med aceton.

Krystallmassen av hver av disse således dannede diammoniumsaltene ble omdannet til kalium-clavulanat ved oppløsning av saltet i et minimum vann, etterfulgt av tilsetning av en oppløsning av et overskudd av kalium-2-etyl-heksanoat i isopropylalkohol. Etter fortsatt omrøring, dannet det seg et bunnfall av kalium-clavulanat som ble frafiltrert, vakset med isopropylalkohol og tørket.

Claims

1. Fremgangsmåte for fremstilling og/eller rensing av clavulansyre eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller ester derav, karakterisert vedi) kontakt av uren clavulansyre eller et labilt derivat derav i løsning i et organisk løsningsmiddel med et amin med formel (H) hvor R<1> er en gruppe med den generelle formel hvor RA og R<5> uavhengig er hydrogen, Ci-Cfi-alkyl, aminosubstituert C1-C6-alkyl, og R2 og R<3> uavhengig er valgt fra hydrogen, C^-Cg-alkyl, amino- eller hydfoksysubstituert C-L-Cg-alkyl, og m er null eller et heltall 1 til 5; ii) isolering av det dannede aminsalt av clavulansyren; iii) overføring av det således dannede salt i clavulansyre eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller ester derav.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det organiske løs-ningsmiddel er hovedsakelig tørt.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at det organiske løsnings-middel inneholder mindre enn 6 g pr. 1 vann.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at det organiske løsnings-middel inneholder mellom 0,25 og 0,6 g pr. 1 vann.

5. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 2-4, karakterisert ved at det organiske løsnings-middel tørkes ved awanning av løsningsmiddelet ved sentri-fuger ing.

6. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-5, karakterisert ved at den urene clavulansyre stammer fra fermenteringen av en clavulansyreproduserende mikroorganisme.

7. Fremgangsmåte ifølge krav 6, karakterisert ved at minst noen av de opp-slemmede faststoffer i den urene clavulansyresuppen fjernes.

8. Fremgangsmåte ifølge krav 7, karakterisert ved at faststoffene fjernes ved filtrering.

9. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 7 eller 8, karakterisert ved at den vandige løsning av clavulansyre oppnådd ved fermenteringen forkonsentreres før ekstraksjon.

10. Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakterisert ved at den vandige løsning av clavulansyre forkonsentreres til en konsentrasjon på 10-100 mg/ml.

11. Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakterisert ved at den vandige løsning av clavulansyre forkonsentreres til en konsentrasjon på 10-40 mg/ml.

12. Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakterisert ved at den vandige løsning av clavulansyre forkonsentreres til en konsentrasjon på 10-25 mg/ml.

13. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 9-12, karakterisert ved at forkonsentrerings-prosessen foregår ved absorbsjon av clavulansyren på en ione-bytterharpiks, etterfulgt av eluering av clavulansyren fra denne med en vandig løsning av en elektrolytt.

14. Fremgangsmåte ifølge krav 12, karakterisert ved at elektrolytten er natriumklorid.

15. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 13 eller 14, karakterisert ved at det resulterende kon-sentrat avsaltes.

16. Fremgangmåte ifølge hvert av kravene 6-15, karakterisert ved at suppen eller den vandige løsning av clavulansyre surgjøres før løsningsmiddel-ekstraksjon.

17. Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved at suppen eller den vandige løsning av clavulansyre surgjøres til en pH på 1-3.

18. Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved at suppen eller den vandige løsning av clavulansyre surgjøres til en pH på 1,5-2,5.

19. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-18, karakterisert ved at ekstraksjon av uren clavulansyre eller et labilt derivat derav i et organisk løsningsmiddel utføres ved en temperatur ved fra 5-15°C.

20. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-19, karakterisert ved at det organiske løs-ningsmiddel som brukes til å ekstrahere den urene clavulansyre eller det labile derivat derav velges fra gruppen bestående av hydrokarbonløsningsmidler, eterløsningsmidler, halogenerte løsningsmidler og ketonløsningsmidler.

21. Fremgangsmåte ifølge krav 20, karakterisert ved at løsningsmidlene velges fra gruppen bestående av toluen, heksan, tetrahydrofuran, dioksan, dietyleter, diklormetan, kloroform, aceton, metylisobutylketon og etylacetat.

22. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-21, karakterisert ved at aminsaltet av clavulansyren dannes ved å behandle clavulansyren eller det labile derivat derav i et organisk løsningsmiddel med en ekvivalent pr. mol eller et svakt overskudd av aminet med formel II som definert i krav 1.

23. Fremgangsmåte ifølge krav 22, karakterisert ved at aminsaltet av clavulansyre dannes ved 0 til 15°C.

24. Fremgangsmåte ifølge krav 22 eller 23, karakterisert ved at aminet innføres ved blanding av det i en strøm av clavulansyren i det organiske løsningsmiddel.

25. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-24, karakterisert ved at isoleringen av aminsaltet av clavulansyre utføres ved å ekstrahere det organiske løsningsmiddel som inneholder aminsaltet med vann for å ekstrahere saltet, og deretter overføre aminsaltet i clavulansyren eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller ester derav.

26. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-25, karakterisert ved at aminsaltet av clavulansyre omkrystalliseres.

27. Fremgangsmåte ifølge krav 26, karakterisert ved at aminsaltet av clavulansyre omkrystalliseres ved bruk av vandig aceton.

28. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-27, karakterisert ved at aminsaltet av clavulansyre overføres i et farmasøytisk akseptabelt salt derav ved ioneutskifting.

29. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at ioneutskiftingen utfø-res ved å føre en løsning av aminsaltet gjennom en skikt av en kationbytterharpiks i natrium-, kalium- eller kalsiumform.

30. Fremgangsmåte ifølge krav 28, karakterisert ved at ioneutskiftingen utfø-res ved protonering av aminkationet med en saltforløper-forbindelse.

31. Fremgangsmåte ifølge krav 30, karakterisert ved at saltforløperforbind-elsen er kaliumetylheksanoat.

32. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 28-31, karakterisert ved at løsningsmiddelet er et organisk løsningsmiddel, vann eller en blanding av vann og et organisk løsningsmiddel.

33. Fremgangsmåte ifølge krav 28-31, karakterisert ved at reaksjonen utføres ved en temperatur under romtemperatur.

34. Fremgangsmåte ifølge krav 33, karakterisert ved at reaksjonen utføres ved en temperatur fra 0 til 10°C.

35. Fremgangsmåte ifølge krav 34, karakterisert ved at reaksjonen utføres ved en temperatur på 0-0,5 ° C.

36. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at aminet med formel (II) er trietylentetramin.

37. Fremgangsmåte ifølge hvert av kravene 1-36, karakterisert ved at i aminet med formel (II) er en av R* og R<5> hydrogen, og den andre er C^-Cgalkyl, og R2 og R3 er hydrogen eller Ci-Cgalkyl.;

38. Salt av clavulansyre med et amin med formel (II), karakterisert ved at det er som definert i krav 1.;

39. Salt av clavulansyre med et amin med formel (II), karakterisert ved at en av R* og R<5> er hydrogen, og den andre er Ci-C^alkyl, og R<2> og R<3> er hydrogen eller C^-Cgalkyl.

40. Salt av clavulansyre som definert i krav 38 eller 39, karakterisert ved at aminet er trietyl-tetramii