CN102917692A - 3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的药物组合物和其给药方法 - Google Patents

Abstract

药物组合物，其包含化合物1，(3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸)和至少一种选自下列的赋形剂：填料，稀释剂，崩解剂，表面活性剂，粘合剂，助流剂和润滑剂，该组合物适合于口服给予需要其的患者，用于治疗CFTR介导的疾病，例如囊性纤维化。治疗需要其的患者的方法，包括口服给予患者化合物1的药物制剂。

Description

3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[D][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的药物组合物和其给药方法

本发明的技术领域

本发明涉及包含3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物1)的药物组合物、制备这种组合物的方法和给予含有该化合物的药物组合物的方法。

背景

CFTR是在各种细胞类型中表达的cAMP/ATP介导的阴离子通道，包括吸收和分泌上皮细胞，在这些细胞中，它调节阴离子穿过膜的流量，以及其它离子通道和蛋白的活性。在上皮细胞中，CFTR的正常功能对于保持电解质在整个身体(包括呼吸和消化组织)中的转移是很关键的。CFTR由大约1480个编码蛋白的氨基酸组成，这种蛋白由串联重复的跨膜结构域构成，各自包含六个跨膜螺旋和一个核苷酸结合域。两个跨膜结构域通过带有多个磷酸化位点的大的极性调节(R)域连接，这种位点调节通道活性和细胞运输（trafficking）。

已经鉴定了编码CFTR的基因，并将其排序(参见Gregory, R. J.等人(1990)Nature 347:382-386; Rich, D. P.等人(1990)Nature 347:358-362),(Riordan, J. R.等人(1989)Science 245:1066-1073)。这种基因的缺陷导致CFTR的突变，从而导致囊性纤维化(“CF”)，这是在人类当中最常见的致命性遗传疾病。在美国，在每2,500个幼儿当中，囊性纤维化影响大约一个幼儿。在常规美国人口中，高达一千万人携带缺陷基因的单个副本，但没有明显的有害影响。与此相反，带有CF相关基因的两个副本的个体出现虚弱和CF的致命后果，包括慢性肺疾病。

在患有囊性纤维化的患者中，在呼吸上皮中内源性表达的CFTR的突变导致顶端阴离子分泌降低，从而导致离子和流体输送的失调。所导致的阴离子输送的降低有助于粘液在肺中的积聚增加，并且伴有微生物感染，最终导致CF患者死亡。除了呼吸系统疾病之外，CF患者典型地具有胃肠问题和胰腺机能不全，如果未经治疗，会导致死亡。另外，患有囊性纤维化的大部分男性不能生育，并且在患有囊性纤维化的女性当中，生育力降低。与CF相关基因的两个副本的严重后果相反，带有CF相关基因的单个副本的个体对霍乱和脱水(起因于腹泻)的耐受性提高，这也许可以解释CF基因在人群中相对频繁出现的原因。

CF染色体的CFTR基因的序列分析展现了导致各种疾病的突变(Cutting, G. R.等人(1990)Nature 346:366-369; Dean, M.等人(1990)Cell 61:863:870; 和Kerem, B-S.等人(1989)Science 245:1073-1080; Kerem, B-S等人(1990)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447-8451)。迄今为止，按照科学和医学文献的报道，在CF基因中，已经鉴定了导致1000种以上疾病的突变。最流行的突变是CFTR氨基酸序列的508位缺失苯丙氨酸，并且通常称为ΔF508-CFTR。这种突变出现在大约70%的囊性纤维化的病例中，并且与严重疾病有关。其它突变包括R117H和G551D。

在ΔF508-CFTR中缺失残基508妨碍了未成熟（nascent）蛋白正确地折叠。这导致突变蛋白不能脱离ER，从而不能输送至质膜。结果，存在于膜上的通道数目远比在表达野生型CFTR的细胞中所观察到的数目少。除了输送受损之外，突变导致通道门控出现缺陷。膜中的通道数减少和门控缺陷一起导致阴离子穿过上皮的输送降低，从而导致离子和流体输送出现缺陷。(Quinton, P. M.(1990), FASEB J. 4: 2709-2727)。然而，研究表明，即使少于野生型的CFTR，膜中ΔF508-CFTR的数量减少是功能性的减少。(Dalemans等人(1991), Nature Lond. 354: 526-528; Denning等人，supra; Pasyk and Foskett(1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347-50)。除了ΔF508-CFTR之外，导致疾病的CFTR的其它突变(其导致运输（trafficking）、合成和/或通道门控出现缺陷)可以被向上或向下调节，改变阴离子分泌，改变疾病发展和/或严重程度。

虽然CFTR还输送除了阴离子之外的各种分子，但很明显，这种作用(输送阴离子)代表了输送离子和水穿过上皮的重要机制中的一个要素。其它要素包括：上皮Na⁺通道，ENaC，Na⁺/2Cl^-/K⁺共同转运体，Na⁺-K⁺-ATP酶泵和基底外侧膜K⁺通道(负责将氯吸收到细胞中)。

这些要素进行合作，通过它们的选择性表达，和在细胞内定位，达到定向输送穿过上皮。通过顶膜上存在的ENaC和CFTR与细胞基底外侧表面上表达的Na⁺-K⁺-ATP酶泵和Cl^-通道的协调作用进行氯吸收。氯从腔面的继发性主动运输导致胞内氯的积聚，其然后通过Cl^-通道被动地脱离细胞，导致向量运输。基底外侧表面上排列的Na⁺/2Cl^-/K⁺共同转运体、Na⁺-K⁺-ATP酶泵和基底外侧膜K⁺通道和腔面上的CFTR通过腔面上的CFTR来协调氯的分泌。因为水本身多半不能主动输送，所以，其依赖于微小的跨上皮渗压梯度(通过钠和氯的总体流动产生)流过上皮。

正如以上的讨论，人们相信，ΔF508-CFTR中缺失残基508可以妨碍未成熟蛋白正确地折叠，导致这种突变蛋白不能脱离ER，从而不能输送至质膜。结果，存在于质膜中的成熟蛋白的数量不足，并且氯在上皮组织内的输送显著地减少。事实上，通过ER机构加工ATP结合盒(ABC)转运体的缺陷内质网(ER)的这种细胞现象不但表明了其是构成CF疾病的基础、而且是构成许多其它孤立性和遗传疾病的基础。使ER机构机能失调的两个途径是：丧失与蛋白的ER输出（export）进行连接，导致降解，或这些有缺陷的/折叠错误的蛋白的ER积聚[Aridor M,等人，Nature Med., 5(7), pp 745-751(1999); Shastry, B.S.,等人，Neurochem. International, 43, pp 1-7(2003); Rutishauser, J.,等人，Swiss Med Wkly, 132, pp 211-222(2002); Morello, JP等人，TIPS, 21, pp. 466-469(2000); Bross P.,等人，Human Mut., 14, pp. 186-198(1999)]。

国际PCT公开WO 2007056341公开了3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的盐形式，作为CFTR活性的调节剂，由此用于治疗CFTR介导的疾病，例如囊性纤维化。美国专利申请12/327,902(2008年12月4日申请)公开了3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的I型(其基本上是晶体和游离盐形式，被称为I型化合物1)。美国临时专利申请61/321,729(2010年4月7日申请)公开了3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的II型和HCl盐形式A(分别是II型化合物1和化合物1 HCl盐形式A)。本文以引证的方式结合所有申请的全部内容。然而，还需要容易制备并且适合于用作治疗的含有I型、II型或HCl盐形式A的化合物1的药物组合物。

概述

本发明涉及含有3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物1)的药物组合物、药物制剂和固体剂型，其具有下面的结构：

在一方面，本发明提供了药物组合物，其包含：

a. 化合物1；

b. 填料；

c. 崩解剂；

d. 表面活性剂；

e. 稀释剂；

f. 润滑剂；和

g. 助流剂和粘合剂中的至少一种。

在其它实施方案中，化合物1基本上是它的结晶固体形式之一。在一个实施方案中，化合物1基本上是结晶形式I(I型化合物1)。在一个实施方案中，化合物1基本上是结晶形式II(II型化合物1)。在一个实施方案中，化合物1基本上是晶体HCl盐形式(化合物1 HCl盐形式A)。应当理解，贯穿本文使用的术语“化合物1”包括下列固态形式：I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A，还有其它形式，包括非晶形式。

在一些实施方案中，该药物组合物包含25 mg至400 mg。在一些实施方案中，该药物组合物包含25 mg化合物1。在一些实施方案中，该药物组合物包含50 mg化合物1。在一些实施方案中，该药物组合物包含100 mg化合物1。在一些实施方案中，该药物组合物包含125 mg化合物1。在一些实施方案中，该药物组合物包含150 mg化合物1。在一些实施方案中，该药物组合物包含200 mg化合物1。在一些实施方案中，该药物组合物包含250 mg化合物1。在一些实施方案中，该药物组合物包含400 mg化合物1。

在一方面，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

。

在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含下列组分：

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在另一个方面，本发明提供了片剂形式的药物组合物，其包含化合物1和一或多种可药用赋形剂，例如，填料，崩解剂，表面活性剂，稀释剂，粘合剂，助流剂和润滑剂和其任何组合，其中该片剂在大约30分钟内溶解至少大约50%。在另一个实施方案中，在大约30分钟内的溶解率至少为大约75%。在另一个实施方案中，在大约30分钟内的溶解率至少为大约90%。

在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其由片剂组成，片剂包含化合物1与一或多种可药用赋形剂的粉末混合物或颗粒，其中赋形剂包括，例如，填料，崩解剂，表面活性剂，稀释剂，粘合剂，助流剂和润滑剂，其中片剂具有至少大约5 kP的硬度(kP=千磅；1 kP=～9.8 N)。在另一个实施方案中，片剂经过400次旋转之后，其目标脆度小于1.0%。在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其由片剂组成，片剂包含II型化合物1、化合物1与一或多种可药用赋形剂的粉末混合物或颗粒，其中赋形剂包括，例如，填料，崩解剂，表面活性剂，稀释剂，粘合剂，助流剂和润滑剂，其中片剂具有至少大约5 kP的硬度(kP=千磅；1 kP=～9.8 N)。在另一个实施方案中，片剂经过400次旋转之后，其目标脆度小于1.0%。

在另一个方面，本发明提供了进一步包含额外治疗剂的本文所描述的药物组合物。在一些实施方案中，额外治疗剂是N-(5-羟基-2,4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。

在另一个方面，本发明提供了治疗哺乳动物的CFTR介导的疾病的方法，该方法包括：给予哺乳动物有效量的本文所描述的药物组合物。在一些实施方案中，CFTR介导的疾病是囊性纤维化，（肺）气肿（emphysema），COPD（慢性阻塞性肺病）或骨质疏松症。在其它实施方案中，CFTR介导的疾病是囊性纤维化。该方法可以进一步包括给予额外的治疗剂，其中在一些实施方案中，额外治疗剂是N-(5-羟基-2,4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。

在另一个方面，本发明提供了通过碾压方法来制备本文所描述的药物组合物的方法，包括下列步骤：筛分和称量化合物1与赋形剂；将化合物1和赋形剂混合适当的时间；将该混合物碾压成带状物，并将带状物碾压成颗粒；将颗粒与外加的颗粒状（extra-granular）赋形剂混合适当的时间；将该混合物压制成片剂；将片剂包衣；任选，在片剂的一面或两面上印刷字母图案（monogram）。

在另一个方面，本发明提供了通过高剪切造粒来制备本文所描述的药物组合物的方法，包括下列步骤：筛分和称量化合物1与赋形剂；将化合物1和赋形剂混合，同时加入包含表面活性剂和粘合剂的造粒用流体，在合适的混合速度混合适当的时间，并将该混合物切割为颗粒；将颗粒干燥；将颗粒与外加的颗粒状赋形剂混合适当的时间；将该混合物压制成片剂；将片剂包衣；任选，在片剂的一面或两面上印刷字母图案。

附图的简要说明

图1是由I型化合物1的单晶结构计算的X射线衍射图。

图2是I型化合物1的实际X射线粉末衍射图。

图3是II型化合物1的X射线粉末衍射图。

图4提供了选自下列的II型化合物1的X射线衍射图：

1)II型化合物1，甲醇溶剂化物；

2)II型化合物1，乙醇溶剂化物；

3)II型化合物1，丙酮溶剂化物；

4)II型化合物1，2-丙醇溶剂化物；

5)II型化合物1，乙腈溶剂化物；

6)II型化合物1，四氢呋喃溶剂化物；

7)II型化合物1，乙酸甲酯溶剂化物；

8)II型化合物1，2-丁酮溶剂化物；

9)II型化合物1，甲酸乙酯溶剂化物；和

10)II型化合物1，2-甲基四氢呋喃溶剂化物。

图5提供了II型化合物1甲醇溶剂化物的X射线衍射图。

图6提供了II型化合物1乙醇溶剂化物的X射线衍射图。

图7提供了II型化合物1丙酮溶剂化物的X射线衍射图。

图8提供了II型化合物1的2-丙醇溶剂化物的X射线衍射图。

图9提供了II型化合物1的乙腈溶剂化物的X射线衍射图。

图10提供了II型化合物1的四氢呋喃溶剂化物的X射线衍射图。

图11提供了II型化合物1的乙酸甲酯溶剂化物的X射线衍射图。

图12提供了II型化合物1的2-丁酮溶剂化物的X射线衍射图。

图13提供了II型化合物1的甲酸乙酯溶剂化物的X射线衍射图。

图14提供了II型化合物1的2-甲基四氢呋喃溶剂化物的X射线衍射图。

图15是II型化合物1丙酮溶剂化物的差示扫描量热(DSC),迹线（trace）图。

图16是II型化合物1丙酮溶剂化物的热重分析(TGA)图。

图17是基于单晶X射线分析的II型化合物1丙酮溶剂化物的构象（conformational image）图。

图18是化合物1 HCl盐形式A的二聚体的构象图。

图19是由晶体结构计算的化合物1 HCl盐形式A的X射线衍射图。

图20是化合物1的¹HNMR谱。

图21是化合物1 HCl盐的¹HNMR谱。

图22是I型化合物1的差示扫描量热(DSC)迹线图。

图23是基于单晶X射线分析的I型化合物1的构形图。

图24是基于单晶X射线分析的II型化合物1丙酮溶剂化物的构象图。

图25是II型化合物1丙酮溶剂化物的固态¹³C NMR谱(15.0 kHz旋转)。

图26是II型化合物1丙酮溶剂化物的固态¹⁹F NMR谱(12.5 kHz旋转)。

图27是由晶体结构计算的化合物1 HCl盐形式A的X射线衍射图。

详细说明

定义

本文使用的术语“活性药物组分”或“API”是指生物活性化合物。示范性的API包括3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物1)。

术语“固态”、“固体形式”和相关术语，当在本文中用于3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物1)时，指的是固体形式，例如晶体等等，包括不是显著地为液体或气态的化合物1。

本文使用的术语“基本上为非晶体”是指其分子的位置中几乎没有顺序或不具有长程有序（long range order）的固体物质。例如，基本上非晶体的物质的结晶度小于大约15%(例如，结晶度小于大约10%，或结晶度小于大约5%)。还应该注意，术语'基本上为非晶体'包括描述词'非晶体'，其是指没有(0%)结晶度的物质。

本文使用的术语“基本上为晶体”(如在短语基本上是晶体I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A中)是指固体物质，其在分子位置中具有占优势的长程有序。例如，基本上为晶体的物质的结晶度大于大约85%(例如，结晶度大于大约90%，或结晶度大于大约95%)。还应该注意，术语'基本上为晶体'包括描述词'晶体'，其是指具有100%结晶度的物质。

本文使用的术语“晶体”和相关术语，当用于描述物质、组分、产物或形式时，是指该物质、组分或产物根据X射线衍射测定基本上为晶体。(参见，例如，Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.(2003); The United States Pharmacopeia, 23^rd ed., 1843-1844(1995))。

本文使用的术语“组合物”泛指两种或多种组分的组合物，通常是一或多种药物(例如，一种药物(例如，I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A))和一或多种药物赋形剂的组合物。

本文使用的术语“固体剂型”泛指药物组合物，当用于口服给药模式时，包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性可药用赋形剂或载体混合。

本文使用的“赋形剂”包括药物组合物中的功能和无功能组分。

本文使用的“崩解剂”是使药物组合物水合并有助于片剂分散的赋形剂。本文使用的“稀释剂”或“填料”是加大药物组合物的体容度的赋形剂。

本文使用的“表面活性剂”是使药物组合物提高溶解性和/或浸湿性的赋形剂。

本文使用的“粘合剂”是使药物组合物提高内聚性或拉伸强度(例如，硬度)的赋形剂。

本文使用的“助流剂”是使药物组合物提高流动特性的赋形剂。

本文使用的“着色剂”是使药物组合物具有目标颜色的赋形剂。着色剂的例子包括商购的色素，例如FD & C蓝#1铝色淀，FD & C蓝#2，其它FD & C蓝色，二氧化钛，氧化铁和/或其组合物。在一个实施方案中，本发明提供的药物组合物是紫色的。

本文使用的“润滑剂”是加入到压缩成为片剂的药物组合物中的赋形剂。润滑剂有助于将颗粒挤压成为片剂，并有助于片剂从压模中排出药物组合物的片剂。

本文使用的“立方厘米”和“cc”可互换使用，代表体积单位。注释：1 cc=1 mL。

本文使用的“千磅”和“kP”可互换使用，是力的量度，其中1kP=大约9.8牛顿。

本文使用的“脆度”是指片剂在外部压力下保持完整无损和保持其形式的性能。脆度可以使用方程式1提供的数学式来定量：

其中W₀ 是片剂的原重量，W_f 是片剂通过脆度测定器之后的最后重量。脆度是使用标准USP试验设备测定的，这种设备使实验片剂滚转100或400转。本发明的一些片剂具有小于5.0%的脆度. 在另一个实施方案中，脆度小于2.0%。在另一个实施方案中，400转之后，目标脆度小于1.0%。

本文使用的“平均粒径”是使用技术例如激光散射、图像(image)分析或筛分分析测定的平均粒径。在一个实施方案中，用于制备本发明所提供的药物组合物的颗粒具有小于1.0 mm的平均粒径。

本文使用的“堆积密度”是物质颗粒的质量除以颗粒占据的总体积。总体积包括颗粒体积、颗粒之间空隙体积和内空隙体积。堆积密度不是物质的固有特性；它可以根据如何加工物质而变化。在一个实施方案中，用于制备本发明所提供的药物组合物的颗粒具有大约0.5-0.7 g/cc的堆积密度。

本发明的药物化合物的有效量或“治疗有效量”可以根据下列因素而改变：例如，患者的疾病状态、年龄和体重，本发明化合物引起患者目标响应的能力。可以调节剂量方案，以便提供最佳治疗响应。有效量也是其中本发明化合物的治疗有利效果胜于任何毒性或不利影响(例如，副作用)的数量。

除非另作说明，否则，本文使用的术语化合物的“治疗有效量”和“有效量”是指在治疗或控制疾病或病症过程中足以提供治疗益处、或使与疾病或病症相关的一或多种症状得到延迟或使其减到最小的数量。化合物的“治疗有效量”和“有效量”是指单独或与一或多种其它药剂联用的治疗剂的数量，该数量在疾病或病症的治疗或控制过程中提供治疗益处。术语“治疗有效量”和“有效量”可以包括提高总体治疗效果、减少或避免疾病或病症的症状或病因、或提高另一治疗剂的治疗效能的数量。

在短语“基本上纯的I型化合物、II型化合物或化合物1 HCl盐形式A”中使用的“基本上纯的”是指纯度高于大约90%。在另一个实施方案中，基本上纯是指纯度高于大约95%。在另一个实施方案中，基本上纯是指纯度高于大约98%。在另一个实施方案中，基本上纯是指纯度高于大约99%。

就化合物1(例如，I型化合物1，II型化合物1，化合物1 HCl盐形式A)而论，术语“大约”和“大致”，当与组合物或剂型的组分的剂量、数量或重量百分数结合使用时，是指本领域普通技术人员所认识到的、能够提供药理效果的剂量、数量或重量百分数，这种效果相当于由列举的剂量、数量或重量百分数所获得的效果。具体地说，术语“大约”或“大致”是指本领域普通技术人员所测定的具体值的容许误差，其部分地取决于如何测定或确定该值。在某些实施方案中，术语“大约”或“大致”是指在1、2、3或4标准偏差范围之内。在某些实施方案中，术语“大约”或“大致”是指在给定值或范围的30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%或0.05%以内。

除非另作说明，否则，术语“化合物1”包括但不局限于：本文描述的固体形式的化合物1，例如I型化合物1，II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A，以及其组合。

药物组合物

本发明提供了包含化合物1的药物组合物、药物制剂和固体剂型，其中化合物1可以基本上是结晶形式。在一些实施方案中，化合物1是结晶形式I(I型化合物1)。在一些实施方案中，化合物1是结晶形式II(II型化合物1)。在一些实施方案中，化合物1是晶体HCl盐形式(化合物1 HCl盐形式A)。在该方面的一些实施方案中，存在于药物组合物中的化合物1的数量是25 mg，50 mg，75 mg，100 mg，125 mg，150 mg，200 mg，250 mg或400 mg。在该方面的一些实施方案中，存在于药物组合物中的化合物1的重量/重量相对百分数是10至75%。在这些及其它实施方案中，3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸以基本上纯的化合物1形式存在。“基本上纯”是指纯度大于90%；优选纯度大于95%；更优选纯度大于99.5%(即，不与化合物1的其它结晶形式混合)。

由此，在一方面，本发明提供了药物组合物，其包含：

a. 化合物1；

b. 填料；

c. 崩解剂；

d. 表面活性剂；

e. 稀释剂；

f. 润滑剂；和

g. 助流剂和粘合剂中的至少一种。

在该方面的一个实施方案中，药物组合物包含25 mg化合物1。在该方面的另一个实施方案中，药物组合物包含50 mg化合物1。在该方面的另一个实施方案中，药物组合物包含100 mg化合物1。在该方面的另一个实施方案中，药物组合物包含125 mg化合物1。在该方面的另一个实施方案中，药物组合物包含150 mg化合物1。在该方面的另一个实施方案中，药物组合物包含200 mg化合物1。在该方面的另一个实施方案中，药物组合物包含250 mg化合物1。在该方面的另一个实施方案中，药物组合物包含400 mg化合物1。

在一些实施方案中，药物组合物包含化合物1，其中化合物1的存在数量至少是该组合物重量的15 wt%(例如，至少20 wt%，至少30 wt%，至少40 wt%，至少50 wt%，或至少60 wt%)。

在一些实施方案中，药物组合物包含化合物1，填料，稀释剂，崩解剂，表面活性剂，助流剂和润滑剂。在该实施方案中，该组合物包含占组合物重量的大约20 wt%至大约50 wt%(例如，大约25-35 wt%)的化合物1，且更典型地包含该组合物重量的25 wt%至大约45 wt%(例如，大约28-32 wt%)的化合物1。

在一些实施方案中，药物组合物包含化合物1，填料，稀释剂，崩解剂，表面活性剂，粘合剂和润滑剂。在该实施方案中，该组合物包含占组合物重量的大约30 wt%至大约60 wt%(例如，大约40-55 wt%)的化合物1，且更典型地包含该组合物重量的35 wt%至大约70 wt%(例如，大约45-55 wt%)的化合物1。

化合物1在组合物中的浓度取决于若干因素，例如，提供目标数量的化合物1所需要的药物组合物的数量和药物组合物的目标溶解特性。

在另一个实施方案中，药物组合物包含化合物1，其中化合物1是固体形式，具有0.1微米至10微米的平均粒径，利用光散射测定(例如，使用Malvern Mastersizer，得自于英格兰的Malvern Instruments)。在另一个实施方案中，化合物1的粒径是1微米至5微米。在另一个实施方案中，化合物1具有2.0微米的粒径D50。

正如所指明的那样，在本发明的一些实施方案中，除了化合物1之外，口服制剂的药物组合物还包含一或多种赋形剂，例如填料，崩解剂，表面活性剂，稀释剂，粘合剂，助流剂，润滑剂，着色剂或芳香剂和其任何组合。

适合于本发明的填料与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的溶解性、硬度、化学稳定性、物理稳定性或生物活性。示范性的填料包括：纤维素，改性纤维素(例如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素羟甲基纤维素，羟丙基纤维素)，醋酸纤维素，微晶纤维素，磷酸钙，磷酸氢钙，淀粉(例如玉米淀粉，马铃薯淀粉)，糖(例如，山梨糖醇)乳糖，蔗糖，等等），或其任何组合。

由此，在一个实施方案中，药物组合物包含至少一种填料，数量为组合物重量的至少5 wt%(例如，至少大约20 wt%，至少大约30 wt%，或至少大约40 wt%)。例如，药物组合物包含占组合物重量的大约10 wt%至大约60 wt%的填料(例如，大约20 wt%至大约55 wt%，大约25 wt%至大约50 wt%，或大约27 wt%至大约45 wt%)。在另一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的至少大约20 wt%(例如，至少30 wt%或至少40 wt%)的微晶纤维素，例如MCC Avicel PH102。在又一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约10 wt%至大约60 wt%的微晶纤维素(例如，大约20 wt%至大约55 wt%，或大约25 wt%至大约45 wt%)。

适合于本发明的崩解剂可提高药物组合物的分散，并与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的化学稳定性、物理稳定性、硬度或生物活性。示范性的崩解剂包括交联羧甲纤维素钠，淀粉羟基乙酸钠或其组合。

由此，在一个实施方案中，药物组合物包含崩解剂，数量为组合物重量的大约10 wt%或更少(例如，大约7 wt%或更少，大约6 wt%或更少，或大约5 wt%或更少)。例如，药物组合物包含占组合物重量的大约1 wt%至大约10 wt%(例如，大约1.5 wt%至大约7.5 wt%或大约2.5 wt%至大约6 wt%)的崩解剂。在另一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约10 wt%或更少(例如，7 wt%或更少，6 wt%或更少，或5 wt%或更少)的交联羧甲纤维素钠。在又一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约1 wt%至大约10 wt%(例如，大约1.5 wt%至大约7.5 wt%或大约2.5 wt%至大约6 wt%)的交联羧甲纤维素钠。在一些实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约0.1%至大约10 wt%(例如，大约0.5 wt%至大约7.5 wt%或大约1.5 wt%至大约6 wt%)的崩解剂。在其它实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约0.5%至大约10 wt%(例如，大约1.5 wt%至大约7.5 wt%或大约2.5 wt%至大约6 wt%)的崩解剂。

适合于本发明的表面活性剂可提高药物组合物的湿润性，并与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的化学稳定性、物理稳定性、硬度或生物活性。示范性的表面活性剂包括：月桂基硫酸钠(SLS)，十八烷基富马酸钠(SSF)，聚氧乙烯20脱水山梨糖醇单油酸酯(例如，Tween^TM)，其任何组合，等等。

由此，在一个实施方案中，药物组合物包含表面活性剂，数量为组合物重量的大约10 wt%或更少(例如，大约5 wt%或更少，大约2 wt%或更少，大约1 wt%或更少，大约0.8 wt%或更少，或大约0.6 wt%或更少)。例如，药物组合物包含占组合物重量的大约10 wt%至大约0.1 wt%的表面活性剂(例如，大约5 wt%至大约0.2 wt%或大约2 wt%至大约0.3 wt%)。在另一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的10 wt%或更少(例如，大约5 wt%或更少，大约2 wt%或更少，大约1 wt%或更少，大约0.8 wt%或更少，或大约0.6 wt%或更少)的月桂基硫酸钠。在又一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约10 wt%至大约0.1 wt%(例如，大约5 wt%至大约0.2 wt%或大约2 wt%至大约0.3 wt%)的月桂基硫酸钠。

适合于本发明的粘合剂可提高药物组合物的片剂强度，并与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的化学稳定性、物理稳定性或生物活性。示范性的粘合剂包括：聚乙烯吡咯烷酮，磷酸氢钙，蔗糖，玉米(包谷)淀粉，改性纤维素(例如，羟甲基纤维素)，或其任何组合。

由此，在一个实施方案中，药物组合物包含粘合剂，数量为组合物重量的至少大约0.1 wt%(例如，至少大约1 wt%，至少大约3 wt%，至少大约4 wt%，或至少大约5 wt%)。例如，药物组合物包含占组合物重量的大约0.1 wt%至大约10 wt%(例如，大约1 wt%至大约10 wt%或大约2 wt%至大约7 wt%)的粘合剂。在另一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的至少大约0.1 wt%(例如，至少大约1 wt%，至少大约2 wt%，至少大约3 wt%，或至少大约4 wt%)的聚乙烯吡咯烷酮。在又一个实施例中，药物组合物包含以组合物重量计大约0.1 wt%至大约10 wt%(例如，大约1 wt%至大约8 wt%或大约2 wt%至大约5 wt%)的聚乙烯吡咯烷酮助流剂。

为了制备目标大小的片剂，可以向制剂中加入需要体积的适合于本发明的稀释剂，并通常与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的溶解性、硬度、化学稳定性、物理稳定性或生物活性。示范性的稀释剂包括：糖，例如，糖果剂的糖，可压缩的糖，葡萄糖粘合剂（dextrates），糊精(dextrin)，葡萄糖(dextrose)，乳糖，甘露糖醇，山梨糖醇，纤维素和改性纤维素，例如，粉末纤维素，滑石粉，磷酸钙，淀粉，或其任何组合。

由此，在一个实施方案中，药物组合物包含稀释剂，数量为组合物重量的40 wt%或更少(例如，35 wt%或更少，30 wt%或更少，或25 wt%或更少，或20 wt%或更少，或15 wt%或更少，或10 wt%或更少)。例如，药物组合物包含占组合物重量的大约40 wt%至大约1 wt%(例如，大约35 wt%至大约5 wt%或大约30 wt%至大约7 wt%，大约25 wt%至大约10 wt%，大约20 wt%至大约15 wt%)的稀释剂。在另一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的40 wt%或更少(例如，35 wt%或更少，25 wt%或更少，或15 wt%或更少)的甘露糖醇。在又一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约35 wt%至大约1 wt%(例如，大约30 wt%至大约5 wt%或大约25 wt%至大约10 wt%)的甘露糖醇。

适合于本发明的助流剂可提高药物组合物的流动特性，并与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的溶解性、硬度、化学稳定性、物理稳定性或生物活性。示范性的助流剂包括胶体二氧化硅，滑石粉，或其组合。

由此，在一个实施方案中，药物组合物包含助流剂，数量为组合物重量的2 wt%或更少(例如，1.75 wt%，1.25 wt%或更少，或1.00 wt%或更少)。例如，药物组合物包含占组合物重量的大约2 wt%至大约0.05 wt%(例如，大约1.5 wt%至大约0.07 wt%或大约1.0 wt%至大约0.09 wt%)的助流剂。在另一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的2 wt%或更少(例如，1.75 wt%，1.25 wt%或更少，或1.00 wt%或更少)的胶体二氧化硅。在又一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约2 wt%至大约0.05 wt%(例如，大约1.5 wt%至大约0.07 wt%或大约1.0 wt%至大约0.09 wt%)的胶体二氧化硅。

在一些实施方案中，药物组合物可以包括口服固体药物剂型，该剂型可以包含润滑剂，润滑剂可以防止颗粒混合物与表面(例如，搅拌斗、挤压模和/或冲头的表面)粘附。润滑剂还可以降低颗粒-珠的粒间摩擦，并且提高压制的药物组合物的挤压和从压模中排出。润滑剂还应该与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的溶解性、硬度或生物活性。示范性的润滑剂包括硬脂酸镁，硬脂酸钙，硬脂酸锌，硬脂酸钠，硬脂酸，硬脂酸铝，亮氨酸，山嵛酸甘油酯，氢化植物油或其任何组合。在一个实施方案中，药物组合物包含润滑剂，数量为组合物重量的5 wt%或更少(例如，4.75 wt%，4.0 wt%或更少，或3.00 wt%或更少，或2.0 wt%或更少)。例如，药物组合物包含占组合物重量的大约5 wt%至大约0.10 wt%(例如，大约4.5 wt%至大约0.5 wt%或大约3 wt%至大约1 wt%)的润滑剂。在另一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的5 wt%或更少(例如，4.0 wt%或更少，3.0 wt%或更少，或2.0 wt%或更少，或1.0 wt%或更少)的硬脂酸镁。在又一个实施例中，药物组合物包含占组合物重量的大约5 wt%至大约0.10 wt%(例如，大约4.5 wt%至大约0.15 wt%或大约3.0 wt%至大约0.50 wt%)的硬脂酸镁。

为了提高组合物的视觉吸引力、味道和/或香味，本发明的药物组合物可以任选包含一或多种着色剂、调味剂和/或芳香剂。合适的着色剂、调味剂或芳香剂与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的溶解性、化学稳定性、物理稳定性、硬度或生物活性。在一个实施方案中，药物组合物包含着色剂、调味剂和/或芳香剂。在一个实施方案中，本发明提供的药物组合物是紫色的。

在一些实施方案中，药物组合物包括片剂或可以制成片剂，片剂可以涂有着色剂，并且任选使用合适的墨汁来标明标志、其它图像(image)和/或文字。在其它实施方案中，药物组合物包括片剂或可以制成片剂，片剂可以涂有着色剂、涂蜡，并且任选使用合适的墨汁来标明标志、其它图像(image)和/或文字。合适的着色剂和墨汁与药物组合物的组分相容，即，它们基本上不会降低药物组合物的溶解性、化学稳定性、物理稳定性、硬度或生物活性。合适的着色剂和墨汁可以是任何颜色，并且是水基或溶剂基着色剂和墨汁。在一个实施方案中，用药物组合物制备的片剂涂有着色剂，而后使用合适的墨汁来标明标志、其它图像(image)和/或文字。例如，包含本文所描述的药物组合物的片剂可以涂有大约3 wt%(例如，小于大约6 wt%或小于大约4 wt%)的薄膜包衣，其中薄膜包衣包含着色剂。染色的片剂可以使用合适的墨汁来标明标志和文字，指明片剂中活性组分的强度。在另一个实施例中，包含本文所描述药物组合物的片剂可以涂有大约3 wt%(例如，小于大约6 wt%或小于大约4 wt%)的薄膜包衣，其中薄膜包衣包含着色剂。

在另一个实施方案中，用药物组合物制备的片剂涂有着色剂、涂蜡，而后使用合适的墨汁来标明标志、其它图像(image)和/或文字。例如，包含本文所描述的药物组合物的片剂可以涂有大约3 wt%(例如，小于大约6 wt%或小于大约4 wt%)的薄膜包衣，其中薄膜包衣包含着色剂。染色的片剂可以用加洛巴蜡粉末(称出起始片剂核重量的大约0.01% w/w重量)来进行涂蜡。涂蜡的片剂可以使用合适的墨汁来标明标志和文字，这种标志和文字指明片剂中活性组分的强度。在另一个实施例中，包含本文所描述药物组合物的片剂可以涂有大约3 wt%(例如，小于大约6 wt%或小于大约4 wt%)的薄膜包衣，其中薄膜包衣包含着色剂。染色的片剂可以用加洛巴蜡粉末(称出起始片剂核重量的大约0.01% w/w重量)来进行涂蜡。涂蜡的片剂可以使用药物等级墨汁(例如黑色墨汁(例如，Opacode® S-1-17823，基于溶剂的墨汁，从Colorcon，Inc. of West Point，PA.商购))来标明标志和文字，这种标志和文字指明片剂中的活性组分的强度。

一种示范性的药物组合物包含占组合物重量的大约15 wt%至大约70 wt%(例如，大约15 wt%至大约60 wt%，大约15 wt%至大约50 wt%，或大约15 wt%至大约40 wt%，或大约20 wt%至大约70 wt%，或大约30 wt%至大约70 wt%，或大约40 wt%至大约70 wt%，或大约50 wt%至大约70 wt%)的化合物1。上述组合物还可以包含一或多种可药用赋形剂，例如，大约20 wt%至大约50 wt%的填料；大约1 wt%至大约5 wt%的崩解剂；大约2 wt%至大约0.3 wt%的表面活性剂；大约0.1 wt%至大约5 wt%的粘合剂；大约1 wt%至大约30 wt%的稀释剂；大约2 wt%至大约0.05 wt%的助流剂；和大约5 wt%至大约0.1 wt%的润滑剂。或者，药物组合物包含组合物，该组合物包含占组合物重量的大约15 wt%至大约70 wt%(例如，大约20 wt%至大约40 wt%，大约25 wt%至大约60 wt%，或大约30 wt%至大约55 wt%)的化合物1；和一或多种赋形剂，例如，大约20 wt%至大约50 wt%的填料；大约1 wt%至大约5 wt%的崩解剂；大约2 wt%至大约0.3 wt%的表面活性剂；大约0.1 wt%至大约5 wt%的粘合剂；大约1 wt%至大约30 wt%的稀释剂；大约2 wt%至大约0.05 wt%的助流剂；和大约5 wt%至大约0.1 wt%的润滑剂。

另一个示范性的药物组合物包含占组合物重量的大约15 wt%至大约70 wt%(例如，大约15 wt%至大约60 wt%，大约15 wt%至大约50 wt%，或大约15 wt%至大约40 wt%或大约20 wt%至大约70 wt%，或大约30 wt%至大约70 wt%，或大约40 wt%至大约70 wt%，或大约50 wt%至大约70 wt%)的化合物1，和一或多种赋形剂，例如，大约20 wt%至大约50 wt%的填料；大约1 wt%至大约5 wt%的崩解剂；大约2 wt%至大约0.3 wt%的表面活性剂；大约0.1 wt%至大约5 wt%的粘合剂；大约1 wt%至大约30 wt%的稀释剂；大约2 wt%至大约0.05 wt%的助流剂；和大约2 wt%至大约0.1 wt%的润滑剂。

另一个示范性的药物组合物包含占组合物重量的大约15 wt%至大约70 wt%(例如，大约15 wt%至大约60 wt%，大约15 wt%至大约50 wt%，或大约15 wt%至大约40 wt%或大约20 wt%至大约70 wt%，或大约30 wt%至大约70 wt%，或大约40 wt%至大约70 wt%，或大约50 wt%至大约70 wt%)的化合物1，和一或多种赋形剂，例如，大约20 wt%至大约50 wt%的填料；大约1 wt%至大约5 wt%的崩解剂；大约2 wt%至大约0.3 wt%的表面活性剂；大约0.1 wt%至大约5 wt%的粘合剂；大约1 wt%至大约30 wt%的稀释剂；大约2 wt%至大约0.05 wt%的助流剂；和大约2 wt%至大约0.1 wt%的润滑剂。

另一个示范性的药物组合物包含大约15 wt%至大约70 wt%(例如，大约15 wt%至大约60 wt%，大约15 wt%至大约50 wt%，或大约15 wt%至大约40 wt%或大约20 wt%至大约70 wt%，或大约30 wt%至大约70 wt%，或大约40 wt%至大约70 wt%，或大约50 wt%至大约70 wt%)的化合物1和一或多种赋形剂，例如，大约20 wt%至大约50 wt%的填料；大约1 wt%至大约5 wt%的崩解剂；大约2 wt%至大约0.3 wt%的表面活性剂；大约0.1 wt%至大约5 wt%的粘合剂；大约1 wt%至大约30 wt%的稀释剂；大约2 wt%至大约0.05 wt%的助流剂；和大约2 wt%至大约0.1 wt%的润滑剂。

在一个实施方案中，本发明是包含下列的颗粒状药物组合物：

a. 占组合物重量的大约30 wt%的化合物1；

b. 占组合物重量的大约42 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约21 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约3 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；

f. 占组合物重量的大约2 wt%的硬脂酸镁；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的胶态二氧化硅。

配制为本发明的口服制剂的另一种颗粒状组合物包含：

a. 大约50 wt%的化合物1；

b. 占组合物重量的大约30 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约13 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约2 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；和

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠。

在一个实施方案中，本发明的药物口服制剂包含：

a. 占组合物重量的大约30 wt%的化合物1；

b. 占组合物重量的大约42 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约21 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约3 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；

f. 占组合物重量的大约2.5 wt%的硬脂酸镁；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的胶态二氧化硅。

本发明的另一个药物口服制剂包含：

a. 占组合物重量的大约50 wt%的化合物1；

b. 占组合物重量的大约30 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约13 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约4 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的硬脂酸镁。

本发明的另一个药物口服制剂包含：

a. 占组合物重量的大约60 wt%的化合物1；

b. 占组合物重量的大约20 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约13 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约4 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的硬脂酸镁。

本发明的另一个药物口服制剂包含：

a. 大约150至250 mg的化合物1；

b. 大约40至50 mg的甘露糖醇；

c. 大约120至130 mg的微晶纤维素；

d. 大约10至20 mg的交联羧甲纤维素钠；

e. 大约10至20 mg的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 大约1至5 mg的月桂基硫酸钠；和

g. 大约1至5 mg的硬脂酸镁。

本发明的另一个药物口服制剂包含：

a. 大约200 mg的化合物1；

b. 大约43 mg的甘露糖醇；

c. 大约123 mg的微晶纤维素；

d. 大约15 mg的交联羧甲纤维素钠；

e. 大约13 mg的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 大约3 mg的月桂基硫酸钠；和

g. 大约4 mg的硬脂酸镁。

本发明的另一个药物口服制剂包含：

a. 大约200 mg的化合物1；

b. 大约45 mg的甘露糖醇；

c. 大约123 mg的微晶纤维素；

d. 大约15 mg的交联羧甲纤维素钠；

e. 大约10.4 mg的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 大约2.6 mg的月桂基硫酸钠；和

g. 大约4 mg的硬脂酸镁。

本发明的另一个药物口服制剂包含：

a. 占组合物重量的大约70 wt%的化合物1；

b. 占组合物重量的大约12 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约11 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约4 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的硬脂酸镁。

可以将本发明的药物组合物加工为适于口服给药的片剂形式、胶囊剂形式、小袋形式、糖锭形式或其它固体形式。由此，在一些实施方案中，药物组合物是片剂形式。

在本发明的又另一个药物口服制剂中，具有5-21 kP±20%的初始硬度的成型的药物片剂组合物包含：大约30 wt%的化合物1；占组合物重量的大约42 wt%的微晶纤维素；占组合物重量的大约21 wt%的甘露糖醇；占组合物重量的大约3 wt%的交联羧甲纤维素钠；占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；占组合物重量的大约2.5 wt%的硬脂酸镁；和占组合物重量的大约0.5 wt%的胶态二氧化硅。其中对于每个片剂来说，化合物1在成型的药物片剂中的数量在大约25 mg至大约250 mg的范围，例如，50 mg，或75 mg，或100 mg，或150 mg，200 mg，或250 mg化合物1。

在本发明的又另一个药物口服制剂中，具有5-21 kP±20%的初始硬度的成型的药物片剂组合物包含：大约49 wt%的化合物1；占组合物重量的大约29 wt%的微晶纤维素；占组合物重量的大约12.6 wt%的甘露糖醇；占组合物重量的大约4 wt%的交联羧甲纤维素钠；占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和占组合物重量的大约0.5 wt%的硬脂酸镁。对于每个片剂来说，化合物1在成型的药物片剂中的数量在大约25 mg至大约250 mg的范围，例如，50 mg，或75 mg，或100 mg，或150 mg，200 mg，或250 mg化合物1。

在某些实施方案中，成型的药物片剂包含大约100 mg的化合物1。在某些实施方案中，成型的药物片剂包含大约200 mg的化合物1。

本发明的另一个方面提供了由片剂或胶囊剂组成的药物制剂，片剂或胶囊剂包含化合物1及其它赋形剂(例如，填料，崩解剂，表面活性剂，粘合剂，助流剂，着色剂，润滑剂，或其任何组合)，各自如上所述和下面的实施例所述，其中片剂在大约30分钟内溶解至少大约50%(例如，至少大约60%，至少大约70%，至少大约80%，至少大约90%，或至少大约99%)。在一个实施例中，药物组合物由片剂组成，片剂包含化合物1(数量为25 mg至250 mg的范围，例如，25 mg，或50 mg，或75 mg，或100 mg，或150 mg，200 mg，或250 mg)和一或多种赋形剂(例如，填料，崩解剂，表面活性剂，粘合剂，助流剂，着色剂，润滑剂，或其任何组合)，各自如上所述和下面的实施例所述，其中片剂在大约30分钟内溶解大约50%至大约100%(例如，大约55%至大约95%或大约60%至大约90%)。在另一个实施例中，药物组合物由片剂组成，片剂包含由化合物1和一或多种选自下列的赋形剂组成的组合物：填料，稀释剂，崩解剂，表面活性剂，粘合剂，助流剂和润滑剂，其中片剂在大约30分钟内溶解至少大约50%(例如，至少大约60%，至少大约70%，至少大约80%，至少大约90%，或至少大约99%)。

在一个实施方案中，片剂包含组合物，该组合物包含至少大约25 mg(例如，至少大约30 mg，至少大约40 mg，或至少大约50 mg)的化合物1；和一或多种选自下列的赋形剂：填料，稀释剂，崩解剂，表面活性剂，粘合剂，助流剂和润滑剂。在另一个实施方案中，片剂包含组合物，该组合物包含至少大约25 mg(例如，至少大约30 mg，至少40 mg，至少大约50 mg，至少大约100 mg，或至少大约150 mg)的化合物1和一或多种选自下列的赋形剂：填料，稀释剂，崩解剂，表面活性剂，粘合剂，助流剂和润滑剂。

可以用标准USP II型装置来测定溶解，这种装置使用0.1% CTAB的溶解介质，溶于900 mL DI水中，在pH6.8用50 mM 磷酸二氢钾缓冲，在大约50-75 rpm下、在大约37℃温度下搅拌。在该装置的每个试验容器中检验单个实验片剂。还可以用标准USP II型装置来测定溶解，这种装置使用0.7%月桂基硫酸钠的溶解介质，溶于900 mL 50 mM磷酸钠缓冲剂(pH6.8)中，在大约65 rpm下、在大约37℃温度下搅拌。在该装置的每个试验容器中检验单个实验片剂。还可以用标准USP II型装置来测定溶解，这种装置使用0.5%月桂基硫酸钠的溶解介质，溶于900 mL 50 mM磷酸钠缓冲剂(pH6.8)中，在大约65 rpm下、在大约37℃温度下搅拌。在该装置的每个试验容器中检验单个实验片剂。

制备化合物1、I型化合物1、II型化合物1、化合物1 HCl盐形式A的方法

化合物 1

化合物1用作其它固态形式的起点，并且可以按照反应路线1-4、通过酰氯部分与胺部分偶合来制备。

反应路线1. 酰氯部分的合成

反应路线1描述了1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羰基氯的制备方法，其在反应路线3中使用，制备化合物1的酰胺连接基。

起始原料，2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲酸，从Saltigo(Lanxess公司的分支机构)购买。将2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲酸中的羧酸部分还原为伯醇，而后使用亚硫酰氯(SOCl₂)转化至相应的氯化物，提供5-(氯甲基)-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯，随后使用氰化钠使其转变为2-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙腈。用碱和1-溴-2-氯乙烷处理2-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙腈，提供1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙腈。使用碱，将1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙腈中的腈部分转变为羧酸，得到1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酸，使用亚硫酰氯将其转变为目标酰氯。

反应路线2. 酰氯部分的另一个合成法

反应路线2描述了必要的酰氯的另一个合成法。在钯催化剂的存在下，5-溴甲基-2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯与氰乙酸乙酯偶合，形成相应的α氰基乙酯。酯部分进行皂化反应成为羧酸，得到氰乙基化合物。在碱的存在下，用1-溴-2-氯乙烷将氰乙基化合物烷基化，得到氰基环丙基化合物。用碱处理氰基环丙基化合物，得到羧酸盐，将其用酸处理，转变为羧酸。然后，使用氯化剂，例如亚硫酰氯等等，将羧酸转化为酰氯。

反应路线3. 胺部分的合成

反应路线3描述了所需要的3-(6-氨基-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯的制备方法，在反应路线3中，其与1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羰基氯偶合，得到化合物1。2-溴-3-甲基吡啶与3-(叔丁氧羰基)苯基硼酸进行钯催化的偶合，得到3-(3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯，随后将其转变为目标化合物。

反应路线4. 形成3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的酸式盐

反应路线4描述了1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羰基氯与3-(6-氨基-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯的偶合，使用三乙基胺和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)，初始提供化合物1的叔丁基酯。

I 型化合物 1

如下制备I型化合物1：将化合物1的盐形式(例如HCl盐)分散或溶解在合适的溶剂中，保持有效量的时间。用酸例如HCl处理叔丁基酯，得到化合物1的HCL盐，其典型地是结晶固体。还可以通过用合适的酸例如甲酸处理、由叔丁基酯前体来直接制备I型化合物1。

通过将3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的盐酸盐分散或溶解在合适的溶剂中，并保持有效量的时间，3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的盐酸盐可用于制备I型。可以使用3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的其它盐，例如，衍生自其它无机或有机酸的盐。其它盐由酸介导的叔丁基酯部分的水解所产生。衍生自其它酸的盐可以包括，例如，硝酸盐，硫酸盐，磷酸盐，硼酸盐，乙酸盐，苯甲酸盐和丙二酸盐。根据使用的溶剂，3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的这些盐形式可能溶解或可能不溶解，但没有溶解性不会妨碍I型的形成。例如，在一个实施方案中，尽管3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的HCl盐形式只微溶于水，但合适的溶剂可以是水或醇/水混合物，例如，50%甲醇/水混合物。在一个实施方案中，合适的溶剂是水。

由3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的盐形成I型的有效量的时间可以是2至24小时之间的任何时间，或时间可以更长。应该认识到，需要的时间量与温度成反比。也就是说，温度越高，影响酸离解形成I型所需要的时间越少。当溶剂是水时，在室温下将分散体搅拌大约24小时，提供I型，产率大约98%。如果为了处理目的而需要3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的盐的溶液，则可以使用高温。将溶液在高温下搅拌有效量的时间之后，一旦冷却，发生重结晶，提供基本上纯的I型。在一个实施方案中，基本上纯是指纯度高于大约90%。在另一个实施方案中，基本上纯是指纯度高于大约95%。在另一个实施方案中，基本上纯是指纯度高于大约98%。在另一个实施方案中，基本上纯是指纯度高于大约99%。选择的温度部分地取决于使用的溶剂，并且在本领域普通技术人员的测定能力范围之内。在一个实施方案中，温度在室温和大约80℃之间。在另一个实施方案中，温度在室温和大约40℃之间。在另一个实施方案中，温度在大约40℃和大约60℃之间。在另一个实施方案中，温度在大约60℃和大约80℃之间。

I型化合物1还可以直接由3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-苯甲酸叔丁酯形成(参见反应路线3)，其是化合物1的盐的前体物。由此，在合适的反应条件下，使3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-苯甲酸叔丁酯与合适的酸例如甲酸进行反应，得到I型化合物1。

通过用有机溶剂重结晶，可以进一步纯化I型化合物1。有机溶剂的例子包括但不局限于：甲苯，枯烯，苯甲醚，1-丁醇，乙酸异丙酯，乙酸丁酯，乙酸异丁酯，甲基叔丁基醚，甲基异丁基酮和1-丙醇-水混合物。温度可以如上所述。例如，在75℃，将I型溶于1-丁醇中，直到它完全溶解为止。将该溶液以0.2℃/min的速度冷却至10℃，得到I型的晶体，可以将其过滤分离。

在一个实施方案中，I型化合物1的特征为：在使用Cu Kα-辐射获得的X射线粉末衍射中在15.2至15.6度、16.1至16.5度和14.3至14.7度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的特征为：在15.4、16.3和14.5度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在14.6至15.0度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在14.8度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在17.6至18.0度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在17.8度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在16.4至16.8度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在16.4至16.8度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在16.6度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在7.6至8.0度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在7.8度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在25.8至26.2度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在26.0度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在21.4至21.8度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在21.6度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在23.1至23.5度具有峰。在另一个实施方案中，I型化合物1的进一步特征为：在23.3度具有峰。在一些实施方案中，I型化合物1的特征为：衍射图基本上与图1中的相似。在一些实施方案中，I型化合物1的特征为：衍射图基本上与图2中的相似。

在一些实施方案中，对于I型化合物1，D90的粒径分布大约为82 μm或更小。在一些实施方案中，对于I型化合物1，D50的粒径分布大约为30μm或更小。

II 型化合物 1

如下制备II型化合物1：使I型化合物1在合适的溶剂中形成足够浓度的浆液，保持足够的时间。然后离心或真空过滤该浆液，在环境条件下干燥足够的时间，得到II型化合物1。

在一些实施方案中，使大约20至40 mg的I型化合物1在大约400至600 μL合适的溶剂中形成浆液。在另一个实施方案中，使大约25至35 mg的I型化合物1在大约450至550 μL合适的溶剂中形成浆液。在另一个实施方案中，使大约30 mg的I型化合物1在大约500 μL合适的溶剂中形成浆液。

在一些实施方案中，使I型化合物1与溶剂形成浆液的时间是1小时至四天。更尤其是，使I型化合物1与溶剂形成浆液的时间是1至3天。更尤其是，该时间是2天。

在一些实施方案中，合适的溶剂选自大小足以适合II型化合物1的晶格中的空隙的有机溶剂。在其它实施方案中，溶剂化物是大小足以适合大约100ų空隙的溶剂化物。

在其它实施方案中，溶剂选自甲醇，乙醇，丙酮，2-丙醇，乙腈，四氢呋喃，乙酸甲酯，2-丁酮，甲酸乙酯和2-甲基四氢呋喃。

在其它实施方案中，两种或多种这些溶剂的混合物可以用于获得II型化合物1。或者，II型化合物1可以由包含一或多种这些溶剂和水的混合物获得。

在一些实施方案中，干燥II型化合物1的有效量的时间是1至24小时。更尤其是，该时间是6至18小时。更尤其是，该时间是大约12小时。

在另一个实施方案中，如下制备II型化合物1：将化合物1的盐形式(例如，化合物1的HCl盐)分散或溶解在合适的溶剂中，保持有效量的时间。

本文公开的II型化合物1包含化合物1的晶格，其中晶格中的空隙是空的，或被合适溶剂的一个或多个分子占据，或被其部分地占据。合适的溶剂包括但不局限于：甲醇，乙醇，丙酮，2-丙醇，乙腈，四氢呋喃，乙酸甲酯，2-丁酮，甲酸乙酯和2-甲基四氢呋喃。化合物1同型溶剂化物形式的某些物理特征，例如X射线粉末衍射、熔点和DSC，基本上不受所述具体溶剂分子的影响。

在一个实施方案中，II型化合物1的特征为：在使用Cu Kα-辐射获得的X射线粉末衍射中，在21.50至21.90度、8.80至9.20度和10.80至11.20度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的特征为：在使用Cu Kα-辐射获得的X射线粉末衍射中，在21.50至21.90度、8.80至9.20度、10.80至11.20度、18.00至18.40度和22.90至23.30度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的特征为：在21.70、8.98和11.04度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的特征为：在21.70、8.98、11.04、18.16和23.06度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在21.50至21.90度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在21.70度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在8.80至9.20度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在8.98度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在10.80至11.20度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在11.04度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在18.00至18.40度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在18.16度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在22.90至23.30度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在23.06度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在20.40至20.80度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在20.63度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在22.00至22.40度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在22.22度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在18.40至18.80度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在18.57度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在16.50至16.90度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在16.66度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在19.70至20.10度具有峰。在另一个实施方案中，II型化合物1的进一步特征为：在19.86度具有峰。

在一些实施方案中，II型化合物1的特征为：衍射图基本上与图3中的相似。在一些实施方案中，II型化合物1特征为：衍射图基本上与图4中提供的相似。

在另一个实施方案中，形成II型化合物1的溶剂化物选自甲醇，乙醇，丙酮，2-丙醇，乙腈，四氢呋喃，乙酸甲酯，2-丁酮，甲酸乙酯和2-甲基四氢呋喃。为下列II型化合物1提供了衍射图：甲醇(图5)，乙醇(图6)，丙酮(图7)，2-丙醇(图8)，乙腈(图9)，四氢呋喃(图10)，乙酸甲酯(图11)，2-丁酮(图12)，甲酸乙酯(图13)和2-甲基四氢呋喃(图14)。

在另一个实施方案中，本发明提供了II型化合物1，据利用DSC或技术人员已知的类似的分析法测定，其显示两种或多种相变。在一些实施方案中，II型化合物1的DSC基本上与图15描述的DSC图相似。在该方面的另一个实施方案中，DSC给出两种相变。在另一个实施方案中，DSC给出三种相变。在另一个实施方案中，相变之一出现在200和207℃之间。在另一个实施方案中，相变之一出现在204和206℃之间。在另一个实施方案中，相变之一出现在183和190℃之间。在另一个实施方案中，相变之一出现在185和187℃之间。在另一个实施方案中，化合物1 A型溶剂化物的熔点在183℃至190℃之间。在另一个实施方案中，化合物1 A型溶剂化物的熔点在185℃至187℃之间。

在另一个实施方案中，II型化合物1包含1至10重量百分数(wt%)的溶剂化物(用TGA测定)。在一些实施方案中，II型化合物1的TGA基本上与图16描述的TGA图相似。在另一个实施方案中，II型化合物1包含2至5 wt%的溶剂化物(用TGA或技术人员已知的类似分析法测定)。

在另一个实施方案中，II型化合物1的丙酮溶剂化物的构象基本上与图17描述的构象相似，其是基于单一X射线分析。

在另一个实施方案中，II型化合物1丙酮溶剂化物具有P2₁/n空间群和下列单位晶胞大小：

a=16.5235(10)Å α=90°

b=12.7425(8)Å β=103.736(4)°

c=20.5512(13)Å γ=90°。

化合物 1 HCl 盐形式 A

化合物1 HCl盐形式A可以由化合物1的HCl盐制备：将化合物1的HCl盐溶解在最少量的溶剂中，缓慢蒸发，除去溶剂。在另一个实施方案中，溶剂是醇。在另一个实施方案中，溶剂是乙醇。缓慢蒸发通常通过阻碍溶剂蒸发来进行。例如，在一个实施方案中，缓慢蒸发包括：将化合物1的HCl盐溶解在小瓶中，用石蜡膜覆盖该小瓶，并在石蜡膜上刺出一个孔。

在一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：在使用Cu Kα-辐射获得的X射线粉末衍射中，在8.80至9.20度、17.30至17.70度和18.20至18.60度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：在使用Cu Kα-辐射获得的X射线粉末衍射中，在8.80至9.20度、17.30至17.70度、18.20至18.60度、10.10至10.50度和15.80至16.20度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：在8.96、17.51和18.45度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：在8.96、17.51、18.45、10.33和16.01度具有一个或多个峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：在8.80至9.20度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：在8.96度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在17.30至17.70度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：在17.51度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在18.20至18.60度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在18.45度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在10.10至10.50度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在10.33度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在15.80至16.20度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在16.01度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在11.70至12.10度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在11.94度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在7.90至8.30度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在8.14度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在9.90至10.30度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在10.10度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在16.40至16.80度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在16.55度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在9.30至9.70度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在9.54度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在16.40至16.80度具有峰。在另一个实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的进一步特征为：在16.55度具有峰。在一些实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为图18描述的二聚体。

在一些实施方案中，化合物1 HCl盐形式A的特征为：衍射图基本上与图19中的相似。

在另一个实施方案中，本发明的晶体化合物1 HCl盐形式A特征为具有P^-1空间群和下列单位晶胞大小：

a=10.2702(2)Å α=67.0270(10)°

b=10.8782(2)Å β =66.1810(10)°

c=12.4821(3)Å γ =72.4760(10)°。

制备药物组合物的方法

本发明的单位剂型可以通过压缩或压制混合物或组合物来制备，例如，在压力下压缩或压制粉末或颗粒，形成稳定的三维形状(例如，片剂)。本文使用的“片剂”包括所有形状和大小的压制的单位剂型(不论是否包衣或无包衣的)。

本文使用的表达“单位剂型”是指适合于所治疗患者的药剂的物理离散单位。通常，压缩的混合物的密度大于挤压之前的该混合物的密度。本发明的单位剂型可以具有几乎任何形状，包括凹和/或凸状表面、圆形或楔形角和圆形至直线性的形状。在一些实施方案中，本发明的压制剂型包括具有平表面的圆形片剂。本发明的固体药物剂型可以通过本领域普通技术人员已知的、形成压制固体药物剂型的任何挤压和压缩法来制备。在具体实施方案中，本文提供的制剂可以使用药物制剂领域技术人员已知的常规方法来制备，例如，在相关的教科书中所描述的方法。参见，例如，Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.(2003); Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms And Drug Delivery Systems, 第七版，Lippincott Williams & Wilkins,(1999); The Handbook of Pharmaceutical Excipients,第4版， Rowe等编， American Pharmaceuticals Association(2003); Gibson, Pharmaceutical Preformulation And Formulation, CRC Press(2001), 将这些参考文献以其整体结合到本文中作为参考。

造粒和挤压

在一些实施方案中，可以对包含活性剂化合物1和包括的可药用赋形剂(例如填料，稀释剂，崩解剂，表面活性剂，助流剂，粘合剂，润滑剂，或其任何组合)的固体形式(包括粉末)进行干法成粒过程。干法成粒过程导致粉末聚集成为具有适合于进一步加工的粒径的大颗粒。为了能够制备符合质量变化或含量均匀性要求的片剂，干法成粒可以提高混合物的流动性。

本文所描述的制剂可以使用一个或多个混合和干法成粒步骤来制备。混合和成粒步骤的顺序和数量似乎不是很关键。然而，可以对至少一种赋形剂和化合物1进行干法成粒或湿式高剪切成粒，而后挤压成为片剂。在片剂挤压之前，使化合物1和赋形剂结合在一起进行的干法成粒似乎意外地是在本发明组合物和制剂的组分之间提供紧密物理接触的简单、廉价和有效方法，并由此导致具有良好稳定性的片剂制剂。干法成粒可以通过机械方法进行，与本文还涉及的湿式成粒方法相反，这种方法将能量转移至混合物，而不使用任何液体物质(不是水溶液形式、基于有机溶质的溶液形式或其混合物形式)。通常，机械方法需要挤压，例如碾压所提供的挤压。干法成粒的另一个方法的例子是击压法（slugging）。

在一些实施方案中，碾压是包括高强度机械压缩一或多种物质的成粒方法。在一些实施方案中，在2个反向旋转辊之间，将包含粉末混合物的药物组合物压缩，即碾压，产生固体薄片，随后将其在筛网中破碎，形式颗粒物质。在这种颗粒物质中，可以获得组分之间的紧密机械接触。碾压设备的例子是Minipactor® Gerteis 3W-Polygran(得自于Gerteis Maschinen+Processengineering AG)。

在一些实施方案中，在不使用任何液体物质(不是水溶液形式、基于有机溶质的溶液形式或其混合物形式)的条件下，可以进行按照本发明的片剂挤压方法，即，干法成粒方法。在典型的实施方案中，得到的核或片剂具有在1至15 kP范围内的压缩强度；例如，1.5至12.5 kP，优选在2至10 kP范围内。

制备方法概述

在一些实施方案中，按照本文给定的配方称量组分。接下来，将所有颗粒内的组分过筛，并很好地混合。可以用合适的润滑剂(例如，硬脂酸镁)润滑组分。下一步可以包括挤压/击压粉末混合物和筛过的组分。接下来，将压缩或形成棒条的混合物碾磨成为颗粒，并过筛，获得所需要的粒径。紧接着，进一步用例如硬脂酸镁润滑颗粒。接下来，可以用合适的冲头压制本发明的颗粒组合物，形成按照本发明的各种药物制剂。任选，可以用薄膜、着色剂或其它包衣将片剂包衣。

本发明的另一个方面提供了制备药物组合物的方法，该方法包括：提供组合物的混合物，其中组合物包含化合物1和一或多种选自下列的赋形剂：填料，稀释剂，粘合剂，助流剂，表面活性剂，润滑剂，崩解剂，将该组合物压制成为片剂，这种片剂在大约30分钟内溶解至少大约50%。

在另一个实施方案中，进行湿式成粒方法，由粉末和液体组分的混合物得到本发明的药物制剂。例如，按照本文给定的配方称量包含组合物的混合物的药物组合物，其中组合物包含化合物1和一或多种选自下列的赋形剂：填料，稀释剂，粘合剂，助流剂，表面活性剂，润滑剂，崩解剂。接下来，将所有颗粒内的组分过筛，并在高剪切或低剪切造粒机中混合，使用水或水与表面活性剂或水与粘合剂或水与表面活性剂和粘合剂，使该粉末混合物形成颗粒。也可以使用非水流体，其可以与表面活性剂和/或粘合剂一起使用，或不使用，使粉末混合物形成颗粒。紧接着，可以任选使用合适的碾磨机来碾磨湿润的颗粒。接下来，任选使用任何合适的方式将组分干燥，从混合物中除去水。紧接着，可以任选将干燥的颗粒碾磨至所需粒径。接下来，可以通过混合的方式加入额外的颗粒赋形剂(例如填料、稀释剂和崩解剂)。紧接着，可以用硬脂酸镁和崩解剂(例如，交联羧甲纤维素钠)进一步润滑定径的颗粒。接下来，将本发明的颗粒组合物筛分足够的时间，获得合适的粒径，而后用合适的冲头压制成为按照本发明的各种药物制剂。任选，可以用薄膜、着色剂或其它包衣将片剂包衣。

这种示范性混合物的每个组分如上所述和下面实施例所述。此外，该混合物可以包含任选的添加剂，例如上面描述的和下面实施例描述的一或多种着色剂、一或多种调味剂和/或一或多种芳香剂。在一些实施方案中，上面和下面实施例也提供了该混合物中的这些组分(和任何任选的添加剂)的每个组分的相对浓度(例如，wt%)。可以顺序地、或以任何组合加入形式提供组成该混合物的组分；并且可以以任何顺序提供组分或组分的组合物。在一个实施方案中，润滑剂是最后加入到该混合物中的组分。

在另一个实施方案中，该混合物包含化合物1，和任何一或多种赋形剂；粘合剂，助流剂，表面活性剂，稀释剂，润滑剂，崩解剂和填料的组合物，其中以粉末形式提供这些组分当中的每个组分(例如，提供中间或平均直径(利用光散射测定)250μm或更小直径的颗粒(例如，150μm或更小，100μm或更小，50μm或更小，45μm或更小，40μm或更小，或35μm或更小))。例如，该混合物包含化合物1、稀释剂、助流剂、表面活性剂、润滑剂、崩解剂和填料的组合物，其中以粉末形式提供这些组分当中的每个组分(例如，提供中间直径(利用光散射测定)250μm或更小直径的颗粒(例如，150μm或更小，100μm或更小，50μm或更小，45μm或更小，40μm或更小，或35μm或更小))。在另一个实施例中，该混合物包含化合物1、稀释剂、粘合剂、表面活性剂、润滑剂、崩解剂和填料的组合物，其中以粉末形式提供这些组分当中的每个组分(例如，提供中间直径(利用光散射测定)250μm或更小直径的颗粒(例如，150μm或更小，100μm或更小，50μm或更小，45μm或更小，40μm或更小，或35μm或更小))。

在另一个实施方案中，该混合物包含化合物1与下列的任何组合的组合物：粘合剂，助流剂，稀释剂，表面活性剂，润滑剂，崩解剂和填料，其中这些组分当中的每个组分基本上不含水。每个组分包含占组分重量的小于5 wt%(例如，小于2 wt%，小于1 wt%，小于0.75 wt%，小于0.5 wt%，或小于0.25 wt%)的水。例如，该混合物包含化合物1、稀释剂、助流剂、表面活性剂、润滑剂、崩解剂和填料的组合物，其中这些组分当中的每个组分基本上不含水。在一些实施方案中，每个组分包含占组分重量的小于5 wt%(例如，小于2 wt%，小于1 wt%，小于0.75 wt%，小于0.5 wt%，或小于0.25 wt%)的水。

在另一个实施方案中，将该混合物压制成为片剂是如下实现的：用混合物填充模板(例如，模具)，并对混合物施加压力。这可以使用压模或其它类似的装置来实现。在一些实施方案中，可以首先将化合物1和赋形剂的混合物加工成为粒形。然后，筛分颗粒，并按照药物领域已知的方法压成片剂，或配制成为胶囊形式。还应该注意，在每次挤压期间，对模板中的混合物施加压力可以使用相同压力重复进行，或在挤压期间使用不同压力来进行。在另一个实施例中，可以使用施加足够压力的压模来压缩粉末组分或颗粒的混合物，形成在大约30分钟时溶解大约50%或溶解更多的片剂(例如，在大约30分钟时溶解大约55%或更多，在大约30分钟时溶解大约60%或更多)。例如，使用压模来压缩该混合物，产生至少大约5 kP(至少大约5.5 kP，至少大约6 kP，至少大约7 kP，至少大约10 kP或至少15 kP)的片剂硬度。在有些情况下，压缩该混合物，产生大约5和20 kP之间的片剂硬度。

在一些实施方案中，包含本文所描述药物组合物的片剂可以涂有占片剂重量的大约3.0 wt%的薄膜包衣，其中薄膜包衣包含着色剂。在某些情况下，用于包衣片剂的着色剂悬浮液或溶液包含占该着色剂悬浮液或溶液重量的大约20%w/w的固体。在更进一步情况下，可以用标志、其它图像(image)或文字给包衣片剂做标志。

在另一个实施方案中，制备药物组合物的方法包括：提供固体形式的混合物，例如，粉末和/或液体组分的混合物，该混合物包含化合物1和一或多种选自下列的赋形剂：粘合剂，助流剂，稀释剂，表面活性剂，润滑剂，崩解剂和填料；将该混合物混合，直到混合物基本上均匀为止，将该混合物压缩或压制成为粒形。然后，将包含化合物1的颗粒组合物压缩成片剂，或配制到胶囊剂中，如上面所描述或下面实施例所描述。或者，制备药物组合物的方法包括：提供化合物1和一或多种下列赋形剂的混合物：粘合剂，助流剂，稀释剂，表面活性剂，润滑剂，崩解剂和填料；将该混合物混合，直到混合物基本上均匀为止，使用辊压机，使用下面实施例列出的干法成粒组合物，将该混合物压缩/压制成为粒形，或者，使用下面实施例列出的高剪切湿式颗粒压制方法，将该混合物压缩/压缩成为颗粒。药物制剂，例如，本文所描述的片剂，可以使用颗粒来制备，这种颗粒除了结合所选择的本文描述的赋形剂之外，还结合了化合物1。

在一些实施方案中，使用人工搅拌、混合器、搅拌机、其任何联用形式等等，通过搅拌、掺和、摇动等等来将混合物混合。当顺序地加入组分或组分的组合物时，混合可以在顺序加入之间进行、可以在连续加入组分的整个过程中进行混合、在加入所有组分或组分的组合物之后进行混合或其任何组合形式。将混合物混合时，直到它基本上成为均匀组合物为止。

在另一个实施方案中，本发明包括在合适的常规碾磨装置中喷射研磨化合物1、I型化合物1、II型化合物1、化合物1 HCl盐形式A，该装置使用适合于制备在0.1微米和50微米之间具有显著粒径部分的颗粒的空气压。在另一个实施方案中，粒径在0.1微米和20微米之间。在另一个实施方案中，粒径在0.1微米和10微米之间。在另一个实施方案中，粒径在1.0微米和5微米之间。在又另一个实施方案中，化合物1、I型化合物1、II型化合物1、化合物1 HCl盐形式A具有2.0微米的粒径D50。

在各种实施方案中，可以与化合物1一起配制第二个治疗剂，形成单一或单个剂量形式，例如，片剂或胶囊剂。

按照United States Pharmacopoeia 29(United States Pharmacopeial Convention，Inc.，Rockville，Md.，2005(“USP”))中的Test 711“Dissolution”，可以对上面制备的剂型进行体外溶解评价，测定活性物质从该剂型中释放的比例。可以利用例如高效液相色谱(HPLC)技术，方便地测定活性物质的含量和杂质水平。

在一些实施方案中，本发明包括使用包装材料，例如，高密度聚乙烯(HDPE)、低密度聚乙烯(LDPE)和/或聚丙烯和/或玻璃的容器和密封盒，玻璃纸薄片，铝箔袋和由铝或高密度聚氯乙烯(PVC)，任选包括干燥剂，聚乙烯(PE)，聚偏二氯乙烯(PVDC)，PVC/PE/PVDC，等等组成的泡罩或条板。使用药物领域通常利用的化学或物理杀菌技术将包装和其内含物进行合适的杀菌之后，这些包装材料可以以无菌方式用于保存各种药物组合物和制剂。

给予药物组合物的方法

在一方面，可以每天或大约每24小时给予患者本发明的药物组合物一次。或者，可以每天两次或大约每12小时给予患者本发明的药物组合物。以口服制剂形式给予这些药物组合物，该口服制剂包含大约25 mg、50 mg、100 mg、125 mg、150 mg、200 mg、250 mg或400 mg的化合物1。在该方面，除了化合物1之外，药物组合物还包含填料；稀释剂；崩解剂；表面活性剂；粘合剂和助流剂中的至少一种；和润滑剂。例如，400 mg剂量的化合物1可以包括两个本发明的片剂，每个包含200 mg化合物1，或四个本发明的片剂，每个包含100 mg化合物1。

还可以理解，本发明的化合物和可药用组合物和制剂可以在联合治疗中使用；也就是说，化合物1和其可药用组合物可以与一或多种其它所需要的疗法或医疗过程同时给予、在其之前或在其之后给予。用于联合方案的疗法(治疗或过程)的具体组合将考虑目标疗法和/或过程的相容性以及所要达到的目标治疗效果。可以理解，所使用的疗法对于相同病症可以达到目标效果(例如，本发明的化合物可以与另一种治疗相同病症所使用的药剂同时给予)，或它们可以达到不同效果(例如，控制任何副作用)。本文使用的“其它治疗剂”(其通常用于治疗或预防具体疾病(例如，CFTR介导的疾病)或病症)被称为“适合于所治疗的疾病或病症的治疗剂”。

在一个实施方案中，其它治疗剂选自：溶粘蛋白剂，支气管扩张剂，抗菌素，抗感染剂，消炎剂，不同于本发明的化合物1的CFTR调节剂或营养剂。

在一个实施方案中，其它药剂是(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。在另一个实施方案中，其它药剂是N-(5-羟基-2,4-二叔-丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。在另一个实施方案中，其它药剂选自表1：

表1.

。

在另一个实施方案中，其它药剂是上述药剂的任何组合物。例如，组合物可以包含化合物1、(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺和N-(5-羟基-2,4-二叔-丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。在另一个实施例中，组合物可以包含化合物1、N-(5-羟基-2,4-二叔-丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺和表1中的任何一个化合物(即，表1的化合物1至14)或其任何组合。

在一个实施方案中，其它治疗剂是抗菌素。本文使用的示范性的抗菌素包括：托普霉素，包括托普霉素吸入粉末(TIP)，阿奇毒素，氨曲南，包括雾化形式的氨曲南，阿米卡星，包括其脂质体制剂，环丙沙星，包括适合于吸入给药的其制剂，左氧氟沙星，包括其雾化制剂和两种抗菌素的联用形式，例如，磷霉素(fosfomycin)和托普霉素组合。

在另一个实施方案中，其它药剂是mucolyte（溶粘蛋白剂）。本文使用的示范性的mucolytes（溶粘蛋白剂）包括Pulmozyme®。

在另一个实施方案中，其它药剂是支气管扩张剂。示范性的气管扩张剂包括：沙丁胺醇，硫酸异丙喘宁(metaprotenerol)，乙酸吡布特罗，沙美特罗或tetrabuline硫酸盐。

在另一个实施方案中，其它药剂是可有效恢复肺呼吸道表面液体的药剂。这种药剂提高盐在细胞中的位移和从细胞当中移出，使肺呼吸道中的粘液更水合化，并因此更容易廓清。示范性的这种药剂包括：高渗盐水，地纽福索(denufosol)四钠([[(3S,5R)-5-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1-基)-3-羟基草脲胺-2-基（oxolan-2-yl）]甲氧基-羟基磷酰基][[[(2R,3S,4R,5R)-5-(2,4-二氧代嘧啶-1-基)-3，4-二羟基草脲胺-2-基（oxolan-2-yl）]甲氧基-羟基磷酰基]氧基-羟基磷酰基]磷酸氢盐)，或bronchitol(甘露糖醇的吸入制剂)。

在另一个实施方案中，额外的药剂是消炎剂，即，可以减轻肺部炎症的药剂。本文使用的示范性的这种药剂包括：布洛芬，二十二碳六烯酸（docosahexanoic acid）(DHA)，西地那非，吸入式谷胱甘肽，吡格列酮，羟氯奎或辛伐他汀(simavastatin)。

在另一个实施方案中，额外的药剂是不同于化合物1的CFTR调节剂，即，具有调节CFTR活性的效果的药剂。示范性的这种药剂包括ataluren(“PTC124®”；3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸)，西那普肽(sinapultide)，兰考韦泰(lancovutide)，depelestat(人重组体嗜中性白细胞弹性酶抑制剂)和cobiprostone(7-{(2R,4aR,5R,7aR)-2-[(3S)-1,1-二氟-3-甲基戊基]-2-羟基-6-氧代八氢环戊烷并[b]吡喃-5-基}庚酸)。

在另一个实施方案中，额外的药剂是营养剂。示范性的营养剂包括胰脂肪酶(胰酶置换)，包括Pancrease®，Pancreacarb®，Ultrase®或Creon®，Liprotomase®(以前的Trizytek®)，Aquadeks®或谷胱甘肽吸入剂。在一个实施方案中，额外的营养剂是胰脂肪酶。

在另一个实施方案中，额外的药剂是选自下列的化合物：庆大霉素，姜黄素，环磷酰胺，4-苯基丁酸酯，美格鲁特(miglustat)，非洛地平，尼莫地平，Philoxin B，geniestein，Apigenin，cAMP/cGMP调节剂，例如洛利普利(rolipram)，西地那非，米利酮，他达拉非(tadalafil)，氨利酮，异丙基肾上腺素，沙丁胺醇和沙美特罗(almeterol)，去氧精胍啉(deoxyspergualin)，HSP 90抑制剂，HSP 70抑制剂，蛋白体抑制剂，例如epoxomicin，乳胞素(Lactacystin)，等等。

在其它实施方案中，额外的药剂是公开在WO 2004028480、WO 2004110352、WO 2005094374、WO 2005120497或WO 2006101740中的化合物。在另一个实施方案中，额外的药剂是显示CFTR调节活性的苯并[c]喹嗪鎓衍生物或显示CFTR调节活性的苯并吡喃衍生物。在另一个实施方案中，额外的药剂是公开在美国专利US 7,202,262、美国专利US 6,992,096、US20060148864、US20060148863、US20060035943、US20050164973、WO2006110483、WO2006044456、WO2006044682、WO2006044505、WO2006044503、WO2006044502或WO2004091502中的化合物。在另一个实施方案中，额外的药剂是公开在WO2004080972、WO2004111014、WO2005035514、WO2005049018、WO2006099256、WO2006127588或WO2007044560中的化合物。在另一个实施方案中，额外的药剂是N-(5-羟基-2,4-二叔-丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。

在一个实施方案中，可以给予需要其的患者400 mg化合物1，而后共同给予150 mg的N-(5-羟基-2,4-二叔-丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺(化合物2)。在另一个实施方案中，可以给予需要其的患者400 mg化合物1，而后共同给予250 mg化合物2。在这些实施方案中，通过给予一个或多个本发明的片剂，可以达到剂量要求。例如，通过给予每个包含200 mg化合物1的两个片剂或每个包含100 mg化合物1的四个片剂，可以给予400 mg化合物1。可以以包含化合物2和可药用载体的药物组合物形式给予化合物2。给药时间可以持续，直到疾病得到改善为止，或直到患者的医生给予建议为止，例如，给药时间可以小于1周、1周、2周、3周或一个月或更长时间。在共同给药周期之前，可以进行只是单独化合物1的给药周期。例如，可以给予2周的400 mg化合物1，而后共同给予额外1周150 mg或250 mg化合物2。

在一个实施方案中，给予需要其的患者400 mg化合物1，一天一次，而后共同给予150 mg化合物2，一天一次。在另一个实施方案中，可以给予需要其的患者400 mg化合物1，一天一次，而后共同给予250 mg化合物2，一天一次。在这些实施方案中，通过给予一个或多个本发明的片剂，可以达到剂量要求。例如，通过给予每个包含200 mg化合物1的两个片剂或每个包含100 mg化合物1的四个片剂，可以给予400 mg化合物1。可以以包含化合物2和可药用载体的药物组合物形式给予化合物2。给药时间可以持续，直到疾病得到改善为止，或直到患者的医生给予建议为止，例如，给药时间可以小于1周、1周、2周、3周或一个月或更长时间。在共同给药周期之前，可以进行只是单独化合物1的给药周期。例如，可以给予2周的400 mg化合物1，而后共同给予额外1周150 mg或250 mg化合物2。

在一个实施方案中，可以给予需要其的患者400 mg化合物1，一天一次，而后每12小时共同给予150 mg化合物2。在另一个实施方案中，可以给予需要其的患者400 mg化合物1，一天一次，而后每12小时共同给予250 mg化合物2。在这些实施方案中，通过给予一个或多个本发明的片剂，可以达到剂量要求。例如，通过给予每个包含200 mg化合物1的两个片剂或每个包含100 mg化合物1的四个片剂，可以给予400 mg化合物1。可以以包含化合物2和可药用载体的药物组合物形式给予化合物2。给药时间可以持续，直到疾病得到改善为止，或直到患者的医生给予建议为止，例如，给药时间可以小于1周、1周、2周、3周或一个月或更长时间。在共同给药周期之前，可以进行只是单独化合物1的给药周期。例如，可以给予2周的400 mg化合物1，而后共同给予额外1周150 mg或250 mg化合物2。

这些联用形式可有效用于治疗本文所描述的疾病，包括囊性纤维化。这些联用形式也在本文所描述的试剂盒中使用。

存在于本发明组合物中的额外的治疗剂的数量不超过通常在包含该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中所给予的数量。优选，相对于额外的治疗剂在包含其作为唯一治疗活性剂的组合物中通常存在的数量，在本发明公开的组合物中额外的治疗剂的数量在大约50%至100%的范围。

组合物的治疗用途

在某些实施方案中，包含化合物1和任选额外药剂的可药用组合物可用于治疗在呼吸和非呼吸上皮的顶膜显示残余CFTR活性的患者的囊性纤维化或减轻其严重程度。可以使用本领域已知的方法，例如，标准电生理学、生物化学或组织化学技术，容易地检测上皮表面的残余CFTR活性的存在。这种方法使用体内或体表外电生理学技术测定汗液或唾液的Cl^-浓度，或使用体表外生物化学或组织化学技术，检测细胞表面密度，从而确定CFTR活性。使用这种方法，可以容易地检测各种不同突变的患者杂合体或纯合子的残余CFTR活性，包括最常见突变ΔF508以及其它突变例如G551D突变或R117H突变的患者纯合子或杂合体。

在一个实施方案中，本文所描述的化合物1或其可药用组合物可有效用于治疗显示残余CFTR活性的某些基因型患者的囊性纤维化或减轻其严重程度，例如，III型突变(削弱调节或门控)、IV型突变(改变传导性)或V型突变(降低合成)(Lee R. Choo-Kang, Pamela L., Zeitlin, Type I, II, III, IV, and V cystic fibrosis Tansmembrane Conductance Regulator Defects and Opportunities of Therapy; Current Opinion in Pulmonary Medicine 6:521-529, 2000)。显示残余CFTR活性的其它患者基因型包括这些种类之一的患者纯合子或与任何其它突变型的杂合体，包括I型突变、II型突变或没有分类的突变。

在一个实施方案中，本文所描述的化合物1或其可药用组合物可有效用于治疗患者的囊性纤维化或减轻其严重程度，这种患者具有某些临床表型，例如，典型地与上皮顶膜中的残余CFTR活性数量有关的中度至轻微的临床表型。这种表型包括胰腺机能不全的患者或确诊患有自发性胰腺炎和先天性不存在双向输精管或轻微肺疾病的患者。

所需要的确切数量将根据患者的不同而不同，取决于患者的物种、年龄、和一般状况，感染的严重程度、具体药剂、它的给药模式，等等。为了容易给药和剂量的均匀性，优选，将本发明的化合物配制为剂量单位形式。本文使用的词语“剂量单位形式”是指适合于所治疗患者的药剂的物理离散单位。然而，应该理解，本发明化合物和组合物的总的日用量取决于主治医师的可靠的医疗判断。对于任何具体患者或有机体来说，具体有效剂量水平取决于各种因素，包括：所治疗的病症和该病症的严重程度；所使用的具体化合物的活性；所使用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康情况、性别和饮食；所使用的具体化合物的给药时间、给药途径和排出速率；治疗期限；在组合药物中使用的药物或与所使用的具体化合物相符的药物，和医疗领域众所周知的类似因素。本文使用的术语“患者”是指动物，优选哺乳动物，最优选人。

在本申请中的任何地方，如果化合物的名称不能准确地描述化合物的结构，则该结构可替代该名称，并以其为准。

实施例

XRPD(X 射线粉末衍射 )

在Bruker D8 DISCOVER粉末衍射仪(带有HI-STAR二维检测器和平面石墨单色器)上收集化合物1、I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A的X射线衍射(XRD)数据。在40 kV、35mA下使用具有Kα辐射的Cu密封管。在25℃，将样品放置在零背景硅片上。对于每个样品，在2个不同的θ₂角度(8度和26度)，在120秒时收集两个数据帧。将该数据用GADDS软件整合，并用DIFFRACT^plusEVA软件融合。报道的峰位置的不确定性是±0.2度。

喷射研磨说明

将未微粉化的化合物1、I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A筛分，使其破块，而后将其放到喷射碾机料斗中。所有的筛网是一次性筛网，在使用之前擦净。将未微粉化的化合物1、I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A加入到喷射碾机料斗中，使用压缩氮气来控制进料速率。气体压力范围是40-45/45-70(喷射管/碾机)PSI，进料速率范围是0.5-1.6 Kg/小时。在碾机中，通过颗粒-颗粒和颗粒-壁之间的碰撞，使化合物1、I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A微粉化，并将加工的化合物1、I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A注入到微粉化产品容器中。人们普遍相信，利用轴销式碾机(pin milling)，部分地基于如上所述的条件，本领域普通技术人员也可以使化合物1、I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A达到合适的粒径。

差示扫描量热 (DSC)

使用DSC Q100 V9.6 Build 290(TA Instruments，New Castle，DE)，收集化合物1、I型化合物1、II型化合物1或化合物1 HCl盐形式A的差示扫描量热(DSC)数据。用铟校正温度，用蓝宝石校正热容量。将3-6 mg样品称量到铝盘中，使用带有1个针孔的盖压紧。从25℃至350℃扫描样品，加热速率1.0℃/min，并用50 ml/min的氮气吹扫。用Thermal Advantage Q SeriesTM version 2.2.0.248软件收集数据，用通用分析软件4.1D版本(TA Instruments，New Castle，DE)进行分析。报告编号代表单一的分析。

I 型化合物 1 、 II 型化合物 1 和化合物 1 HCl 盐形式 A 的单晶结构测定

利用配备有密封管Cu Kα源和Apex II CCD检测器的Bruker Apex II衍射器获得衍射数据。使用SHELX程序(Sheldrick，G.M.，Acta Cryst.，(2008)A64，112-122)来解析和精修结构。基于系统缺乏和强度统计学，在P2₁/n空间群中解析和精修结构。

Vitride®(二(2-甲氧基乙氧基)氢化铝钠[或NaAlH₂(OCH₂CH₂OCH₃)₂]，65 wgt%溶液，在甲苯中)购买于Aldrich Chemicals。

2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-甲酸购买于Saltigo(Lanxess Corporation的分支机构)。

(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇的制备

使商购的2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-甲酸(1.0 eq)在甲苯(10 vol)中形成浆液。通过加入漏斗加入Vitride®(2eq)，要求加入速度必须保持温度在15-25℃。在加入的最后，使温度升至40℃，保持2小时，然后通过加入漏斗小心地加入10%(w/w)NaOH水溶液(aq)(4.0 eq)，保持温度在40-50℃。额外搅拌30分钟之后，在40℃分离各层。将有机相冷却至20℃，然后用水(2 x 1.5 vol)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩，得到粗品(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇，其直接用于下一步。

制备5-氯甲基-2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯

将(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇(1.0 eq)溶于MTBE(5 vol)中。加入催化数量的4-(N,N-二甲基)氨基吡啶(DMAP)(1 mol%)，并通过加入漏斗加入SOCl₂(1.2 eq)。加入SOCl₂，加入速度应该使反应器中的温度保持在15-25℃。将温度升至30℃，保持1小时，而后冷却至20℃。通过加入漏斗加入水(4 vol)，同时保持温度小于30℃。额外搅拌30分钟之后，分离各层。搅拌有机层，加入10%(w/v)NaOH水溶液(4.4 vol)。搅拌15至20分钟之后，分离各层。然后干燥(Na₂SO₄)有机相，过滤，浓缩，得到粗品5-氯甲基-2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯，其直接用于下一步。

制备(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈

将5-氯甲基-2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯(1 eq)的DMSO(1.25 vol)溶液加入到NaCN(1.4 eq)的DMSO(3 vol)浆液中，同时保持温度在30-40℃之间。将该混合物搅拌1小时，而后加入水(6 vol)，而后加入甲基叔丁基醚(MTBE)(4 vol)。搅拌30分钟之后，分离各层。用MTBE(1.8 vol)提取水层。用水(1.8 vol)洗涤合并的有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩，得到粗品(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈(95%)，其直接用于下一步。

合成(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-1-乙酸乙酯-乙腈

用氮气吹扫反应器，并加入900 mL甲苯。通过氮气吹扫来使溶剂脱气，吹扫不少于16小时。然后向该反应器中加入Na₃PO₄(155.7 g，949.5 mmol)，而后加入二(二亚苄基丙酮)钯(0)(7.28 g，12.66 mmol)。在23℃，用10分钟从氮气吹扫的加入漏斗中加入10% w/w叔丁基膦的己烷(51.23 g，25.32 mmol)溶液。将该混合物搅拌50分钟，此时，用1分钟加入5-溴-2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯(75 g，316.5 mmol)。额外搅拌50分钟之后，用5分钟向该混合物中加入氰乙酸乙酯(71.6 g，633.0 mmol)，而后加入一份水(4.5 mL)。用40分钟将该混合物加热至70℃，每1-2小时用HPLC分析反应物至产物的百分转化率。观察到完全转化之后(典型地5-8小时之后，转化100%)，将该混合物冷却至20-25℃，通过硅藻土垫过滤。用甲苯(2 X 450 mL)冲洗硅藻土垫，并在60-65℃将合并的有机物真空浓缩至300 mL。向浓缩物中加入225mL DMSO，在70-80℃真空浓缩，直到溶剂停止蒸馏为止。将该溶液冷却至20-25℃，并在步骤2的制备中用DMSO稀释至900 mL。¹H NMR(500 MHz, CDCl₃)δ 7.16 – 7.10(m, 2H), 7.03(d, J=8.2 Hz, 1H), 4.63(s, 1H), 4.19(m, 2H), 1.23(t, J=7.1 Hz, 3H)。

合成(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈

用20分钟向上述(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-1-乙酸乙酯-乙腈的DMSO溶液中加入3N HCl(617.3 mL，1.85 mol)，同时保持内部温度<40℃。然后用1小时将该混合物加热到75℃，每1-2小时用HPLC分析转化率(%)。当观察到转化率>99%时(典型地5-6小时之后)，将该反应冷却至20-25℃，用MTBE(2 X 525 mL)提取，在提取期间，用足够的时间完成相分离。将合并的有机提取物用5% NaCl(2 X 375 mL)洗涤。然后将该溶液转入适合于1.5-2.5 Torr真空蒸馏的装置(配备有冷却的接收烧瓶)中。将该溶液在<60℃条件下真空浓缩，除去溶剂。然后，在125-130℃(烘箱温度)和1.5-2.0 Torr条件下，从得到的油中蒸馏出(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈。从5-溴-2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯中分离出(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈，是清澈的油，产率66%(2步)，HPLC纯度为91.5% AUC(相当于实测含量95% w/w)。¹H NMR(500 MHz, DMSO)δ 7.44(br s, 1H), 7.43(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.22(dd, J=8.2, 1.8 Hz, 1H), 4.07(s, 2H)。

制备(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-环丙腈

将(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈(1.0 eq)、50 wt% KOH水溶液(5.0 eq)、1－溴－2－氯乙烷(1.5 eq)和Oct₄NBr(0.02 eq)的混合物在70℃下加热1小时。将该反应混合物冷却，然后用MTBE和水后处理。用水和盐水洗涤有机相。除去溶剂，得到(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-环丙腈。

制备1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲酸

使用6M NaOH(8当量)/乙醇(5 vol)，将(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-环丙腈在80℃水解过夜。将该混合物冷却至室温，并真空蒸发乙醇。将残余物吸收在水和MTBE中，加入1M HCl，分离各层。然后用二环己基胺(DCHA)(0.97当量)处理MTBE层。将该浆液冷却至0℃，过滤，用庚烷洗涤，得到相应的DCHA盐。将盐吸收到MTBE和10%枸橼酸中，搅拌，直到所有的固体溶解为止。分离各层，用水和盐水洗涤MTBE层。溶剂换为庚烷，而后过滤，在真空烘箱中、在50℃干燥过夜之后，得到1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲酸。

制备1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羰基氯

使1-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲酸(1.2 eq)在甲苯(2.5 vol)中形成浆液，并将该混合物加热至60℃。通过加入漏斗加入SOCl₂(1.4 eq)。30分钟之后，从该反应混合物中蒸馏出甲苯和SOCl₂。加入额外的甲苯(2.5 vol)，并将得到的混合物再次蒸馏，剩下产物酰氯油，其不用进一步纯化就使用。

制备3-(3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯

将2-溴-3-甲基吡啶(1.0 eq)溶于甲苯(12 vol)中。加入K₂CO₃(4.8 eq)，而后加入水(3.5 vol)。在氮气流条件下，将得到的混合物加热至65℃，保持1小时。然后加入3-(叔丁氧羰基)苯基硼酸(1.05 eq)和Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂(0.015 eq)，并将该混合物加热至80℃。2小时之后，停止加热，加入水(3.5 vol)，并分离各层。然后用水(3.5 vol)洗涤有机相，用10%甲磺酸水溶液(2 eq MsOH，7.7 vol)提取。用50% NaOH水溶液(2 eq)使水相呈碱性，并用EtOAc(8 vol)提取。将有机层浓缩，得到粗品3-(3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯(82%)，其直接用于下一步。

制备2-(3-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基吡啶-1-氧化物

将3-(3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯(1.0 eq)溶于EtOAc(6 vol)中。加入水(0.3 vol)，而后加入脲-过氧化氢(3 eq)。然后将固体邻苯二酸酐(3 eq)分批加入到该混合物中，加入速度应该保持反应器中的温度低于45℃。邻苯二酸酐加入完毕后，将该混合物加热至45℃。额外搅拌4小时之后，停止加热。通过加入漏斗加入10% w/w Na₂SO₃水溶液(1.5 eq)。Na₂SO₃加入完成之后，将该混合物额外搅拌30分钟，并分离各层。搅拌有机层，加入10% wt/wt Na₂CO₃水溶液(2 eq)。搅拌30分钟之后，分离各层。用13% w/v NaCl水溶液洗涤有机相。然后过滤有机相，浓缩，得到粗品2-(3-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基吡啶-1-氧化物(95%)，其直接用于下一步。

制备3-(6-氨基-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯

将2-(3-(叔丁氧羰基)苯基)-3-甲基吡啶-1-氧化物(1 eq)和吡啶(py, 4 eq)的乙腈(8 vol)溶液加热至70℃。用50分钟通过加入漏斗加入甲磺酸酐(Ms₂O, 1.5 eq)的MeCN(2 vol)溶液，同时保持温度低于75℃。加入完成之后，额外搅拌该混合物0.5小时。然后将该混合物冷却至环境温度。通过加入漏斗加入乙醇胺(10 eq)。搅拌2小时之后，加入水(6 vol)，并将该混合物冷却至10℃。搅拌3小时之后，过滤收集固体，用水(3 vol)、2:1乙腈/水(3 vol)和乙腈(2 x 1.5 vol)洗涤。在真空烘箱中、在50℃、在细微的氮气流条件下，将固体干燥至恒重(差值<1%)，得到3-(6-氨基-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯红黄色固体(53%产率)。

制备3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-叔丁基苯甲酸酯

将上述粗品酰氯溶于甲苯(2.5 vol，基于酰氯)中，并通过加入漏斗加入到3-(6-氨基-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯(1 eq)、DMAP(0.02 eq)和三乙胺(3.0 eq)的甲苯(4 vol，基于3-(6-氨基-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯)混合物中。2小时之后，将水(4 vol，基于3-(6-氨基-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸叔丁基酯)加入到该反应混合物中。搅拌30分钟之后，分离各层。然后过滤有机相，浓缩，得到3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-叔丁基苯甲酸酯的稠油(定量的粗品产率)。加入乙腈(3 vol，基于粗品)，蒸馏，直到出现结晶为止。加入水(2 vol，基于粗品)，并将该混合物搅拌2小时。过滤收集固体，用1:1(体积)乙腈/水(2 x 1个体积，基于粗品)洗涤，在过滤器上部分地真空干燥。将固体在真空烘箱中、在60℃、在细微的氮气流条件下干燥至恒重(差值<1%)，得到3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-叔丁基苯甲酸酯褐色固体。

制备3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸·HCl盐

向3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-叔丁基苯甲酸酯(1.0 eq)的MeCN(3.0 vol)浆液中加入水(0.83 vol)，而后加入浓HCl水溶液(0.83 vol)。将该混合物加热至45±5℃。搅拌24至48小时之后，该反应完成，将该混合物冷却至周围温度。加入水(1.33 vol)，并搅拌该混合物。过滤收集固体，用水(2 x 0.3 vol)洗涤，在过滤器上部分地真空干燥。将固体在真空烘箱中、在60℃、在细微的氮气流条件下干燥至恒重(差值<1%)，得到3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-苯甲酸·HCl类白色固体。

化合物1的¹H NMR谱示于图20中，图21描述了化合物1的HCl盐的¹H NMR谱。

下面的表2列出了化合物I的¹H NMR数据。

表2.

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I型化合物1的制备，方法A

将3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸·HCl(1 eq)在水(10 vol)中的浆液在室温下搅拌。搅拌24小时之后，获取样品。过滤样品，并将固体用水(2次)洗涤。对固体试样进行DSC分析。当DSC分析表明完全转化为I型时，过滤收集固体，用水(2 x 1.0 vol)洗涤，并部分地在过滤器上真空干燥。然后，在真空烘箱中、在60℃、在细微的氮气流条件下，将固体干燥至恒重(差值<1%)，得到I型化合物1类白色固体(98%产率)。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) 9.14(s, 1H), 7.99-7.93(m, 3H), 7.80-7.78(m, 1H), 7.74-7.72(m, 1H), 7.60-7.55(m, 2H), 7.41-7.33(m, 2H), 2.24(s, 3H), 1.53-1.51(m, 2H), 1.19-1.17(m, 2H)。

I型化合物1的制备，方法B

将3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-叔丁基苯甲酸酯(1.0 eq)的甲酸(3.0 vol)溶液在搅拌下加热至70±10℃，保持8小时。当剩余至多1.0% AUC(色谱方法)的3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-叔丁基苯甲酸酯)时，认为反应完成。将该混合物冷却至环境温度。将该溶液加入到水(6 vol)中，在50℃下加热，并将该混合物搅拌。然后将该混合物加热到70±10℃，直到3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)-叔丁基苯甲酸酯的水平不超过0.8%(AUC)为止。过滤收集固体，用水(2 x 3 vol)洗涤，在过滤器上部分地真空干燥。在真空烘箱中、在60℃、在细微的氮气流条件下，将固体干燥至恒重(差值<1%)，得到I型化合物1类白色固体。

I型化合物1的DSC图示于图22中。I型化合物1在大约204℃出现熔融。

由I型化合物1的单晶结构计算X射线衍射图，并示于图1中。表3列出了图1的计算的峰。

表3.

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I型化合物1的实际X射线粉末衍射图示于图2中。表4列出了图2的实际的峰。

表4.

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将浓1-丁醇溶液以0.2℃/min的速度从75℃冷却至10℃，获得I型化合物1的无色晶体。选择0.50 x 0.08 x 0.03 mm规格的晶体，用矿物油洗净，安装在MicroMount上，并定位在Bruker APEX II系统的中心。获得倒易空间中分离的三批40帧信息图像(image)，从而提供取向矩阵和起始晶胞参数。获得最终晶胞参数，并基于全部数据组进行精修。

获得倒易空间的衍射数据组，达到0.82Å的分辨率，使用0.5°步长，每帧使用30 s曝光时间。在100(2)K下收集数据。使用APEXII软件完成晶胞参数的强度积分和精修。数据收集之后，观察晶体表明没有分解的迹象。

基于单晶X射线分析的I型化合物1的构象图片示于图23中。I型化合物1是单斜晶的，P₂1/n，具有下列单位晶胞大小：a=4.9626(7)Å，b=12.299(2)Å，c=33.075(4)Å，β=93.938(9)°，V=2014.0 ų，Z=4。由结构数据计算的I型化合物1的密度是1.492 g/cm³(在100 K下)。

由I型化合物1制备II型化合物1

使I型化合物1(大约30 mg)在500μL合适的溶剂(例如，甲醇，乙醇，丙酮，2-丙醇，乙腈，四氢呋喃，乙酸甲酯，2-丁酮，甲酸乙酯和-甲基四氢呋喃)中形成浆液，并保持两天。然后离心或真空过滤该浆液，将其在室温下放置过夜，至干，得到II型化合物1。

II型化合物1丙酮溶剂化物的DSC图示于图15中，显示了两个相变。II型化合物1丙酮溶剂化物的熔点出现在大约188℃和205℃。

II型化合物1的实际X射线粉末衍射图示于图3中。表5以相对强度的递减次序列出了图3的实际的峰。

表5.

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基于单晶X射线分析的II型化合物1丙酮溶剂化物的结构描述示于图24中。在II型化合物1和丙酮之间的化学计量是大约4.4:1(4.48:1，由¹H NMR计算；4.38:1，由X射线计算)。晶体结构显示了一束分子，其中每个单位晶胞存在两个空隙或袋，或每个主体分子存在1个空隙。在丙酮溶剂化物中，大约92%的空隙被丙酮分子占据。II型化合物1是单斜晶的P2₁/n空间群，具有下列单位晶胞大小：a=16.5235(10)Å，b=12.7425(8)Å，c=20.5512(13)Å，α=90°，β=103.736(4)°，γ=90°，V=4203.3(5)ų,=4。由结构数据计算的II型化合物1中的化合物1的密度是1.430/cm³(在100 K下)。

II型化合物1丙酮溶剂化物的固态¹³C NMR谱示于图25中。表6提供了相关峰的化学位移。

表6.

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II型化合物1丙酮溶剂化物的固态¹⁹F NMR谱示于图26中。加注星号的峰表示自旋边带。表7提供了相关峰的化学位移。

表7.

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制备化合物1 HCl盐形式A

将化合物1的HCl盐的乙醇浓缩溶液缓慢蒸发，获得化合物1 HCl盐形式A的无色晶体。选择0.30 x 1/5 x 0.15 mm规格的晶体，用矿物油洗净，安装在MicroMount上，并定位在Bruker APEXII衍射器的中心。获得倒易空间中分离的三批40帧信息图像(image)，从而提供取向矩阵和起始晶胞参数。获得最终晶胞参数，并基于全部数据组进行精修。

图18提供了基于单晶分析的化合物1 HCl盐形式A的二聚体的构象。由晶体结构计算的化合物1 HCl盐形式A的X射线衍射图示于图27中。表8包括以相对强度的递减次序列出的图27的计算峰。

表8.

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示范性的包含化合物1的口服药物制剂

制备片剂，其具有表9的示范性片剂1A所列组分和数量，包含100mg API，即I型化合物1。使用干式碾压仪器配制方法，制备示范性的片剂1A(配制具有100 mg化合物1)。在表9中，等级/商标是微晶纤维素：Avicel PH102；甘露糖醇：Pearlitol SD 100；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；和胶态二氧化硅：Cabosil。

表9.

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制备片剂，其具有表10的示范性片剂1B所列组分和数量，包含100mg API，即I型化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1B(配制具有100 mg I型化合物1)。在表10中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片剂组合物中-交联羧甲纤维素钠：Acdisol。

表10.

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制备片剂，其具有表11的示范性片剂1C所列组分和数量，包含100mg API，即晶体I型化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1C(配制具有100 mg晶体I型化合物1)。在表11中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片剂组合物中-交联羧甲纤维素钠：Acdisol。

表11.

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制备片剂，其具有表12的示范性片剂1D所列组分和数量，包含200mg API，即晶体I型化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1D(配制具有200 mg晶体I型化合物1)。在表12中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片剂组合物中-微晶纤维素：Avicel PH200；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；和硬脂酸镁：5712。

表12.

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制备片剂，其具有表13的示范性片剂1E所列组分和数量，包含200mg API，即晶体I型化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1E(配制具有200 mg晶体I型化合物1)。在表13中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片芯组合物中-微晶纤维素：Avicel PH200；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；和硬脂酸镁：5712；在薄膜包衣中-薄膜包衣：Opadry II；蜡：棕榈蜡。

表13.

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制备片剂，其具有表14的示范性片剂1F所列组分和数量，包含200mg API，即晶体I型化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1F(配制具有200 mg晶体I型化合物1)。在表14中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片芯组合物中-微晶纤维素：Avicel PH200；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；和硬脂酸镁：5712；在薄膜包衣中-薄膜包衣：Opadry II；蜡：棕榈蜡。

表14.

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制备片剂，其具有表15的示范性片剂1G所列组分和数量，包含100mg API，即晶体I型化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1G(配制具有100 mg晶体I型化合物1)。在表15中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片剂组合物中-交联羧甲纤维素钠：Acdisol。

表15.

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制备片剂，其具有表16的示范性片剂1H所列组分和数量，包含100mg API，即I型或II型晶体化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1H(配制具有100 mgI型或II型晶体化合物1)。在表16中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片芯组合物中-微晶纤维素：Avicel PH200；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；和硬脂酸镁：5712。

表16.

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制备片剂，其具有表17的示范性片剂1I所列组分和数量，包含100mg API，即晶体I型或II型化合物1。使用湿式高剪切颗粒配制方法，制备示范性的片剂1I(配制具有100 mg晶体I型或II型化合物1)。在表17中，等级/商标如下。高剪切颗粒混合物-微晶纤维素：Avicel PH101；甘露糖醇：Pearlitol C50；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；聚乙烯吡咯烷酮：Kollidon PVP K30；在片芯组合物中-微晶纤维素：Avicel PH200；交联羧甲纤维素钠：Acdisol；和硬脂酸镁：5712。

表17.

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由碾压颗粒组合物形成片剂

设备 / 方法

设备

辊压机：Alexanderwerk WP 120，Vector TF-Mini，或Vector TF-Labo。

筛分 / 称量

在称重之前或之后，可以筛分化合物1和赋形剂。合适的筛目大小是20目、40目或60目。为了简化筛分，化合物1可以预先与一或多种赋形剂混合。

混合

可以用不同顺序将化合物1和赋形剂加入到搅拌机中。可以在Turbula搅拌机或V壳搅拌机中进行搅拌。可以在没有润滑剂的条件下，将组分搅拌10分钟，而后与润滑剂一起额外搅拌3分钟。

碾压

可以将该混合物碾压成为带状物，并使用Alexanderwerk WP 120碾压成为颗粒。使用的辊可以是25 mm辊，使用18至50 bar的压制压力，辊速为3至12 RPM，螺旋进料器速度为20至80 RPM。一体化碾机的筛网大小可以是：上筛：2 mm；底筛：0.8 mm。

混合

可以使用V壳混合机，将碾压的颗粒与额外的颗粒赋形剂例如填料和润滑剂一起混合。混合时间可以是5、3或1分钟。

压制

使用单工作站Riva MiniPress(带有10 mm工具)，将压缩混合物压制成片剂。100 mg剂量的片剂的重量可以是大约200、250或300 mg。

薄膜包衣

使用盘式涂布机，例如，O'Hara Labcoat，可以将片剂进行薄膜包衣。

印刷

可以用例如Hartnett Delta印刷机，在片剂的一个或两个面上将薄膜包衣片印上字母图案。

由高剪切颗粒组合物形成片剂

设备 / 方法

设备

造粒机：Procept MiPro，带有250 ml或1 L造粒斗。

筛分 / 称量

在称重之前或之后，可以筛分化合物1和赋形剂。合适的筛目大小是20目、40目或60目。为了简化筛分，化合物1可以预先与一或多种赋形剂混合。

造粒操作

造粒流体 – 将SLS和粘合剂加入到净化水中，混合，直到溶解为止。合适的比例是2.5% w/w SLS和10.0% w/w PVP K30(在水中)。

造粒 – 将赋形剂和化合物1加入到造粒斗中。加入顺序可以是化合物1、崩解剂、稀释剂和填料。可以将组分在250 ml斗中混合1分钟，推进器速度1000 RPM，切碎机速度1000 RPM。可以在2000 RPM的推进器速度、4000 RPM的切碎机速度下进行造粒，同时用注射泵加入造粒流体，速度1.5至4.5 g/min。流体加入时间可以是4至12分钟。加入所需的粘合剂流体之后，可以使颗粒形成湿块大约10秒钟至大约1分钟。本发明的高剪切造粒方法的一个显著的优点是使用造粒流体，其包含表面活性剂和粘合剂两者，通过提高湿润性而使造粒更优化。在一个实施方案中，表面活性剂是SLS。

干燥

可以使用真空烘箱、盘式烘燥机、双锥形干燥器或流化床式干燥机将颗粒干燥。已使用真空烘箱干燥颗粒(用氮气吹扫)。

混合

颗粒可以与额外的颗粒赋形剂一起混合。使颗粒与额外的颗粒崩解剂、稀释剂、填料和润滑剂一起混合。在润滑之前（pre-lubricant），使用Turbula混合机将颗粒混合3分钟，与润滑剂一起混合1分钟。可以使用更大规模的混合机，例如，4-夸脱V壳混合机。

压制

使用单工作站Riva MiniPress(带有8 mm或10 mm工具)，将压缩混合物压制成片剂。100 mg剂量的片剂的重量可以是大约160、200或250 mg。

薄膜包衣

使用盘式涂布机，例如，O'Hara Labcoat，可以将片剂进行薄膜包衣。

印刷

可以用例如Hartnett Delta印刷机，在片剂的一个或两个面上将薄膜包衣片印上字母图案。

剂量给药方案

在另一个方面，本发明涉及治疗患者的CFTR介导的疾病的方法，该方法包括：给予需要其的患者有效量的本发明提供的药物组合物。在另一个实施方案中，每两周给予患者一次该药物组合物。在另一个实施方案中，每周给予患者一次该药物组合物。在另一个实施方案中，每三天给予患者一次该药物组合物。在另一个实施方案中，每天给予患者一次该药物组合物。在一个实施方案中，当药物组合物是按照表9、10、11、12、13、14、15、16或17的片剂时，每天给药一次。

试验

检测和测定化合物的ΔF508-CFTR纠正性能的试验

检验化合物的ΔF508-CFTR调节性能的膜电位光学法（Membrane potential optical methods）

光学膜电位试验使用Gonzalez和Tsien(参见Gonzalez，J. E.和R. Y. Tsien(1995)“Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells”Biophys J 69(4)：1272-80，Gonzalez，J. E.和R. Y. Tsien(1997)“Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer”Chem Biol 4(4)：269-77)描述的压敏FRET检测器与测定荧光变化的仪器例如电压/离子探针读数器(VIPR)(参见Gonzalez，J. E.，K. Oades等人(1999)“Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets”Drug Discov Today 4(9)：431-439)的联用形式。

这些压敏试验基于膜溶解的压敏染料DiSBAC₂(3)和荧光磷脂CC2-DMPE(其附着于质膜的外层小叶片，并起到FRET供体的作用)之间的荧光共振能量转移(FRET)的变化。膜电位(V_m)的变化导致带负电荷的DiSBAC₂(3)跨过质膜重新分布，并且从CC2-DMPE转移的能量相应地发生变化。使用VIPR^TM II监测荧光发射的变化，VIPR^TM II是一体化的液体处理器和荧光检测器，设计能够在96或384孔微孔滴定板中进行基于细胞的筛选。

1. 校正化合物的鉴定

为了确定能够校正与ΔF508-CFTR相关的输送缺陷的小分子，进行单个加入HTS测定格式。在37℃，在存在试验化合物或不存在试验化合物(阴性对照)的条件下，将细胞在不含血清的培养基中培养16小时。作为阳性对照，在27℃，将涂覆在384孔板中的细胞培养16小时，达到“温度校正(temperature-correct)”ΔF508-CFTR。随后，用Krebs Ringers溶液冲洗该细胞三次，并加入压敏染料。为了活化ΔF508-CFTR，向每个孔中加入10μM毛喉素和CFTR增效剂、染料木素(20μM)以及不含Cl^-的培养基（Cl^--free medium）。在对ΔF508-CFTR活化的响应的过程中，加入不含Cl^-的培养基（Cl^--free medium）可以促进Cl-流出（efflux），并使用基于FRET的电压敏感染料来光学检测所导致的膜去极化。

2. 增效化合物的鉴定

为了确定ΔDF508-CFTR的增效剂，进行双加入HTS试验模式。在第一次加入期间，将不含Cl^-的培养基(有或没有试验化合物)加入到每个孔中。22秒之后，第二次加入不含Cl^-的培养基(包含2-10μM毛喉素)，使ΔF508-CFTR活化。两次加入之后，胞外Cl^-浓度是28 mM，在对ΔF508-CFTR活化的响应的过程中，其可以促进Cl^-流出（efflux），并使用基于FRET的电压敏感染料来光学检测所导致的膜去极化。

3. 溶液

槽液（Bath Solution）#1：(mM)NaCl 160，KCl 4.5，CaCl₂ 2，MgCl₂ 1，HEPES 10，pH7.4(用NaOH调节)。

不含氯的槽液（Bath Solution）：槽液（Bath Solution）#1中的盐酸盐被葡糖酸盐替代。

CC2-DMPE：在DMSO中制备成为10 mM储备溶液，并在-20℃下保存。

DiSBAC₂(3)：在DMSO中制备成为10 mM储备溶液，并在-20℃下保存。

4. 细胞培养

稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠纤维母细胞用于膜电位的光学测量。在175 cm²培养烧瓶中，在Dulbecco's改性的Eagle's培养基(补充有2 mM谷氨酰胺，10%胎牛血清，1 X NEAA，β-ME，1X青霉素/链霉素和25 mM HEPES)中，将该细胞在37℃保持在5% CO₂和90%湿度条件下。对于所有光学试验，将细胞以30,000个/孔播种在384孔涂有基质胶的板中，并在37℃培养2小时，而后在27℃下培养24小时，用于增效试验。用于校正试验，将有和没有化合物的条件下，将细胞在27℃或37℃培养16-24小时。

检验化合物的Δ F508-CFTR 调节性能的电生理学试验

1. 尤斯灌流室试验

为了进一步表征在光学试验中鉴定的ΔF508-CFTR调节剂，在表达ΔF508-CFTR的极化上皮细胞上进行尤斯灌流室实验。将生长在Costar Snapwell细胞培养板(inserts)上的FRT^{Δ F508-CFTR}上皮细胞装在尤斯灌流室(Physiologic Instruments，Inc.，San Diego，CA)中，并使用电压-夹钳系统(Department of Bioengineering，University of Iowa，IA和Physiologic Instruments，Inc.，San Diego，CA)使该单层连续短路。通过施加2 mV脉冲，测定跨上皮电阻。在此条件下，FRT上皮显示4 KΩ/cm²或更大的电阻。使该溶液保持在27℃，并鼓入空气。使用无细胞的插件（insert），校正电极偏移电位和流体电阻。在此条件下，电流反映Cl^-通过顶膜中表达的ΔF508-CFTR的流量。使用MP100A-CE界面和AcqKnowledge软件(v3.2.6；BIOPAC Systems，Santa Barbara，CA)，数字性获得I_SC。

2. 校正化合物的鉴定

典型的方案使用基底外侧至顶膜的Cl^-浓度梯度。为了建立这种梯度，在基底外侧膜上使用正常Ringer溶液，而顶端NaCl被等摩尔的葡糖酸钠(用NaOH滴定至pH7.4)替代，得到跨上皮的大的Cl^-浓度梯度。用完整的单层进行所有实验。为了充分地活化ΔF508-CFTR，加入毛喉素(10μM)和 PDE抑制剂IBMX(100μM)，而后加入CFTR增效剂,染料木素(50μM)。

正如在其它细胞类型中所观察到的那样，在低温下培养稳定地表达ΔF508-CFTR的FRT细胞，可提高CFTR在质膜中的功能密度。为了测定校正化合物的活性，在37℃，用10μM试验化合物培养细胞24小时，随后洗涤三次，而后记录。在化合物处理的细胞中，将cAMP-和染料木素-介导的I_SC对27℃和37℃对照物归一化，并表示为百分比活性。相比于37℃对照物，用校正化合物预培养细胞，可显著地提高cAMP-和染料木素-介导的I_SC。

3. 增效化合物的鉴定

典型的方案使用基底外侧至顶膜的Cl^-浓度梯度。为了建立这种梯度，在基底外侧膜上使用正常Ringers溶液，并用制霉菌素(360µg/ml)透化，而顶端NaCl被等摩尔的葡糖酸钠(用NaOH滴定至pH7.4)替代，得到跨上皮的大的Cl^-浓度梯度。制霉菌素透化之后，将所有的实验进行30分钟。将毛喉素(10µM)和所有的试验化合物加入到细胞培养物插件的两面。将推定的ΔF508-CFTR增效剂的效果与已知的增效剂染料木素的效果进行比较。

4. 溶液

基底外侧溶液(mM)：NaCl(135)，CaCl₂(1.2)，MgCl₂(1.2)，K₂HPO₄(2.4)，KHPO₄(0.6)，N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)(10)和葡萄糖(10)。用NaOH将该溶液滴定至pH7.4。

顶部溶液(mM)：与基底外侧溶液相同，用葡糖酸钠(135)替代NaCl。

5. 细胞培养

表达ΔF508-CFTR(FRT^{Δ F508-CFTR})的 Fisher小鼠上皮(FRT)细胞用于尤斯灌流室实验，用于推定我们光学试验所鉴定的ΔF508-CFTR调节剂。将细胞在Costar Snapwell细胞培养插件上培养，在37℃和5% CO₂条件下，在Coon's改性的Ham's F-12培养基(补充有5%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100µg/ml链霉素)中培养五天。在用于表征化合物的增效活性之前，将细胞在27℃下培养16-48小时，以便校正ΔF508-CFTR。为了测定校正化合物的活性，在有和没有化合物的条件下，将细胞在27℃或37℃培养24小时。

6. 全细胞记录

在全细胞记录中，使用多孔膜片检测温度和试验化合物校正的、稳定地表达ΔF508-CFTR的NIH3T3细胞中的宏观ΔF508-CFTR电流(I_{Δ F508})。简要地说，在室温下，使用Axopatch 200B膜片钳增强器(Axon Instruments Inc.，Foster，CA)，进行IΔF508的电压钳（voltage-clamp）记录。在10 kHz的取样频率和低通滤波器(1 kHz)条件下，获得所有记录。当充满胞内溶液时，移液管具有5-6 MΩ的电阻。在这些记录条件下，在室温下计算的Cl^-的逆转电位(reversal potential)(E_Cl)是-28 mV。所有的记录具有密封电阻>20 GΩ和串联电阻<15MΩ。使用配备有Digidata 1320 A/D界面(与Clampex 8(Axon Instruments Inc.)结合)的PC，进行脉冲发生、数据收集和分析。液槽包含<250μl的盐水，并且使用重力驱动的灌注系统，以2ml/min的速度连续地表面灌流（perifused）。

7. 校正化合物的鉴定

为了测定校正化合物在质膜中提高功能性ΔF508-CFTR的密度的活性，我们使用上述多孔膜片记录技术，测定用校正化合物处理24小时之后的电流密度。为了充分活化ΔF508-CFTR，将10μM毛喉素和20μM染料木素加入到细胞中。在我们的记录条件下，在27℃培养24小时之后的电流密度高于在37℃培养24小时之后所观察到的电流密度。对于质膜中ΔF508-CFTR的密度来说，这些结果与已知的低温培养效果一致。为了测定校正化合物对CFTR电流密度的效果，在37℃，用10μM试验化合物培养细胞24小时，并将电流密度与27℃和37℃对照物进行比较(%活性)。在记录之前，用胞外记录培养基洗涤细胞三次，除去任何残留的试验化合物。相比于37℃对照物，用10μM校正化合物进行预培养，可显著地提高cAMP-和染料木素-依赖性电流。

8. 增效化合物的鉴定

使用多孔膜片记录技术，还研究了ΔF508-CFTR增效剂在稳定地表达ΔF508-CFTR的 NIH3T3细胞中提高宏观ΔF508-CFTR Cl^-电流(I_{Δ F508})的能力。光学试验鉴定的增效剂引起I_{Δ F508}的剂量依赖性提高，与光学试验中所观察到的效能和效果类似。在检验的所有细胞中，在增效剂运用之前和在增效剂运用期间，逆转电位(reversal potential)大约为-30 mV，其是计算的E_Cl(-28 mV)。

9. 溶液

胞内溶液(mM)：Cs-天冬氨酸盐(90)，CsCl(50)，MgCl₂(1)，HEPES(10)和240µg/mL两性霉素（amphotericin）-B(用CsOH将pH值调节至7.35)。

胞外溶液(mM)：N-甲基-d-葡糖胺(NMDG)-Cl(150)，MgCl₂(2)，CaCl₂(2)，HEPES(10)(用HCl将pH值调节至7.35)。

10. 细胞培养

稳定地表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠纤维母细胞用于全细胞记录。 在175 cm²培养烧瓶中，在Dulbecco's改性的Eagle's培养基(补充有2 mM谷氨酰胺，10%胎牛血清，1 X NEAA，β-ME，1X青霉素/链霉素和25 mM HEPES)中，将该细胞在37℃保持在5% CO₂和90%湿度条件下。对于全细胞记录，将2,500-5,000个细胞播种在涂有聚L-赖氨酸的玻璃盖片上，并在27℃培养24-48小时，而后用于检验增效剂的活性；在有或者没有校正化合物的条件下，在37℃进行培养，用于测定校正剂的活性。

11. 单通道记录

使用切开的外翻膜片，观察在NIH3T3细胞中稳定表达的、温度校正的ΔF508-CFTR的单通道活性和增效化合物的活性。简要地说，在室温下，使用Axopatch 200B膜片钳增强器(Axon Instruments Inc.)，进行单通道活性的电压钳（voltage-clamp）记录。在10 kHz的取样频率和低通滤波器(400Hz)条件下，获得所有记录。用Corning Kovar Sealing #7052玻璃(World Precision Instruments，Inc.，Sarasota，FL)加工膜片移液管，当充满胞外溶液时，具有5-8 MΩ的电阻。切除之后，通过加入1 mM Mg-ATP和75 nM依赖于cAMP的蛋白激酶，催化亚单位(PKA；Promega Corp. Madison，WI)，使ΔF508-CFTR活化。通道活性稳定之后，使用重力驱动的微灌注系统，对膜片进行表面灌流（perifused）。使入流靠近膜片，导致全部溶液在1-2秒之内互换。为了在快速表面灌流（perifusion）期间保持ΔF508-CFTR活性，将非特异性的磷酸酶抑制剂F^-(10 mM NaF)加入到槽液（Bath Solution）中。在这些记录条件下，在整个膜片记录期间(至高达60 min)，通道活性保持恒定。正电荷从胞内溶液移动至胞外溶液(阴离子在相反方向上移动)所产生的电流显示为正电流。移液管电位(V_p)保持在80 mV。

用包含≤2个活性通道的膜片分析通道活性。在实验期间，同时开放的最大数目确定活性通道数目。为了测定单通道电流振幅，在100 Hz，“脱线”过滤ΔF508-CFTR活性的120sec所记录的数据，而后使用Bio-Patch分析软件(Bio-Logic Comp. France)，用于构成与多高斯函数拟合的所有的点振幅直方图（all-point amplitude histograms）。由120 sec的通道活性测定总的显微电流和开放概率(P_o)。使用Bio-Patch软件，或利用关系式P_o=I/i(N)，测定P_o，其中I=平均电流，i=单通道电流振幅，N=膜片中活性通道的数目。

12. 溶液

胞外溶液(mM)：NMDG(150)，门冬氨酸(150)，CaCl₂(5)，MgCl₂(2)，HEPES(10)(用Tris碱将pH值调节至7.35)。

胞内溶液(mM)：NMDG-Cl(150)，MgCl₂(2)，EGTA(5)，TES(10)和Tris碱(14)(用HCl将pH值调节至7.35)。

13. 细胞培养

稳定地表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠纤维母细胞用于离体的膜片钳记录。在175 cm²培养烧瓶中，在Dulbecco's改性的Eagle's培养基(补充有2 mM谷氨酰胺，10%胎牛血清，1 X NEAA，β-ME，1X青霉素/链霉素和25 mM HEPES)中，将该细胞在37℃保持在5% CO₂和90%湿度条件下。对于单通道记录，将2,500-5,000个细胞播种在涂有聚L-赖氨酸的玻璃盖片上，并在27℃培养24-48小时，而后使用。

使用上述方法，测定化合物1的活性，即EC50值，并示于表18中。

表18.

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其它实施方案

本文以引证的方式结合本公开中所提到的所有出版物和专利，好象每个单独出版物或专利具体和独立地以引证的方式结合到本文中一样。如果在以引证的方式结合的任何专利或出版物中的术语的含义与本公开所使用术语的含义不一致，则以本公开中术语的含义为准。此外，上述讨论仅仅公开和描述了本发明的示范性的实施方案。本领域技术人员由这种讨论和附图和权利要求可以容易地认识到，在不背离下面权利要求所定义的本发明的精神和范围的条件下，可以进行各种改变、修饰和变化。

Claims (91)

1.口服给药片剂，其包含：

a. 化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 填料；

c. 稀释剂；

d. 崩解剂；

e. 表面活性剂；

f. 润滑剂；和

g. 粘合剂和助流剂中的至少一种。

2.权利要求1的片剂，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A在该片剂中的存在数量为大约25 mg至大约250 mg的范围。

3.权利要求1或2的片剂，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A在该片剂中的数量在片剂重量的大约15 wt%至大约75 wt%的范围。

4.权利要求3的片剂，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A在该片剂中的数量在片剂重量的大约20 wt%至大约45 wt%的范围。

5.权利要求4的片剂，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A在该片剂中的数量在片剂重量的大约40 wt%至大约60 wt%的范围。

6.权利要求1至5的任一项的片剂，其中填料选自：纤维素，改性纤维素，羧甲基纤维素钠，乙基纤维素羟甲基纤维素，羟丙基纤维素，醋酸纤维素，微晶纤维素，磷酸氢钙，蔗糖，乳糖，玉米淀粉，马铃薯淀粉或其任何联用形式。

7.权利要求6的片剂，其中填料是微晶纤维素(MCC)，其在该片剂中的存在数量为片剂重量的大约20 wt%至大约50 wt%的范围。

8.权利要求1至7的任一项的片剂，其中稀释剂选自：乳糖，甘露糖醇，山梨糖醇，纤维素，磷酸钙，淀粉，糖或其任何联用形式。

9.权利要求8的片剂，其中稀释剂是甘露糖醇，且其在该片剂中的存在数量为片剂重量的大约1 wt%至大约30 wt%的范围。

10.权利要求1至9的任一项的片剂，其中崩解剂选自：琼脂，藻胶，碳酸钙，羧甲纤维素，纤维素，羟丙基纤维素，低取代的羟丙基纤维素，粘土，交联羧甲纤维素钠，交聚维酮，树胶，硅酸镁铝，甲基纤维素，聚克利林钾，海藻酸钠，羟基乙酸淀粉钠，玉米淀粉，马铃薯淀粉，木薯淀粉或其任何联用形式。

11.权利要求10的片剂，其中崩解剂是交联羧甲纤维素钠，其在该片剂中的存在浓度为片剂重量的5 wt%或更低。

12.权利要求1至11的任一项的片剂，其中表面活性剂选自：月桂基硫酸钠，十八烷基丁烯二酸钠，聚氧乙烯20脱水山梨糖醇单油酸酯或其任何联用形式。

13.权利要求12的片剂，其中表面活性剂是月桂基硫酸钠，且其浓度为片剂重量的大约5 wt%或更低。

14.权利要求1至13的任一项的片剂，其中助流剂选自：胶体二氧化硅，滑石粉，玉米淀粉或其联用形式。

15.权利要求14的片剂，其中助流剂是胶体二氧化硅，且其浓度为片剂重量的大约5 wt%或更低。

16.权利要求1至15的任一项的片剂，其中粘合剂选自：聚乙烯吡咯烷酮，磷酸氢钙，蔗糖，玉米淀粉，改性纤维素或其任何联用形式。

17.权利要求16的片剂，其中粘合剂是聚乙烯吡咯烷酮，且其浓度小于片剂重量的10 wt%。

18.权利要求1至17的任一项的片剂，其中润滑剂选自：硬脂酸镁，硬脂酸钙，硬脂酸锌，硬脂酸钠，硬脂酸，硬脂酸铝，亮氨酸，山嵛酸甘油酯，氢化植物油或其任何联用形式。

19.权利要求18的片剂，其中润滑剂是硬脂酸镁，且其浓度小于片剂重量的5 wt%。

20.权利要求1至19的任一项的片剂，其中该片剂进一步包含着色剂。

21.包含许多颗粒的药物组合物，该组合物包含：

a. 化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A，数量为该组合物重量的大约20 wt%至大约80 wt%的范围；

b. 填料，该填料数量为组合物重量的大约20 wt%至大约50 wt%的范围；

c. 崩解剂，数量为该组合物重量的大约1 wt%至大约5 wt%的范围；

d. 表面活性剂，数量为组合物重量的大约2 wt%至大约0.3 wt%的范围；

e. 稀释剂，数量为组合物重量的大约1 wt%至大约30 wt%的范围；

f. 润滑剂，数量为组合物重量的大约0.3 wt%至大约5 wt%的范围；和

g. 至少一种粘合剂，数量为该组合物重量的大约20 wt%至大约45 wt%，或助流剂，数量为该组合物重量的大约0.05 wt%至大约2 wt%的范围。

22.包含下列的片剂：

a. 化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A，数量为大约25 mg至大约250 mg的范围；

b. 填料；

c. 稀释剂；

d. 崩解剂；

e. 表面活性剂；

f. 润滑剂；和

g. 粘合剂和助流剂中的至少一种。

23.下列配方的片剂：

。

24.下列配方的片剂：

。

25.下列配方的片剂：

。

26.下列配方的片剂：

。

27.下列配方的片剂：

。

28.下列配方的片剂：

。

29.下列配方的片剂：

。

30.下列配方的片剂：

。

31.下列配方的片剂：

。

32.适合于口服给药的药物组合物，其包含：

a. 化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A，数量为该组合物重量的大约20 wt%至大约80 wt%的范围；

b. 填料，包括微晶纤维素，数量为组合物重量的大约20 wt%至大约50 wt%的范围；

c. 崩解剂，包括交联羧甲纤维素钠，数量为该组合物重量的大约1 wt%至大约5 wt%的范围；

d. 表面活性剂，包括月桂基硫酸钠，数量为组合物重量的大约2 wt%至大约0.3 wt%的范围；

e. 稀释剂，包括甘露糖醇，数量为组合物重量的大约1 wt%至大约30 wt%的范围；

f. 润滑剂，包括硬脂酸镁，数量为组合物重量的大约0.3 wt%至大约5 wt%的范围；和

g. 下列中的至少一种：粘合剂，包括聚乙烯吡咯烷酮，数量为该组合物重量的大约0.1 wt%至大约5 wt%的范围，和助流剂，包括胶态二氧化硅，数量为该组合物重量的大约0.05 wt%至大约2 wt%的范围。

33.权利要求32的药物组合物，进一步包含该组合物重量的大约0.4 wt%的着色剂。

34.权利要求32的药物组合物，其中该药物组合物包含许多颗粒。

35.权利要求34的药物组合物，其中许多颗粒具有100μm至大约2mm范围的中间或平均粒径。

36.权利要求35的药物组合物，其中该药物组合物是片剂。

37.权利要求36的药物组合物，其中片剂含有包衣。

38.权利要求32至37的任一项的药物组合物，其中该药物组合物进一步包含至少一种额外的治疗剂。

39.权利要求88的药物组合物，其中额外的治疗剂是CFTR调节剂。

40.权利要求39的药物组合物，其中CFTR调节剂是CFTR增效剂。

41.单位剂型，其包含：

a. 占组合物重量的大约30 wt%的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 占组合物重量的大约42 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约21 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约3 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；

f. 占组合物重量的大约2.5 wt%的硬脂酸镁；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的胶态二氧化硅。

42.单位剂型，其包含：

a. 大约50 wt%的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 占组合物重量的大约30 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约13 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约2 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的硬脂酸镁。

43.单位剂型，其包含：

a. 大约60 wt%的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 占组合物重量的大约20 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约13 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约2 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的硬脂酸镁。

44.单位剂型，其包含：

a. 大约60 wt%的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 占组合物重量的大约34 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约13 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约4 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和

g. 占组合物重量的大约1.5 wt%的硬脂酸镁。

45.单位剂型，其包含：

a. 大约150至250 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 大约40至50 mg的甘露糖醇；

c. 大约120至130 mg的微晶纤维素；

d. 大约10至20 mg的交联羧甲纤维素钠；

e. 大约10至20 mg的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 大约1至5 mg的月桂基硫酸钠；和

g. 大约1至5 mg的硬脂酸镁。

46.单位剂型，其包含：

a. 大约200 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 大约43 mg的甘露糖醇；

c. 大约123 mg的微晶纤维素；

d. 大约15 mg的交联羧甲纤维素钠；

e. 大约13 mg的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 大约3 mg的月桂基硫酸钠；和

g. 大约4 mg的硬脂酸镁。

47.单位剂型，其包含：

a. 大约70 wt%的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 占组合物重量的大约12 wt%的微晶纤维素；

c. 占组合物重量的大约11 wt%的甘露糖醇；

d. 占组合物重量的大约2 wt%的交联羧甲纤维素钠；

e. 占组合物重量的大约4 wt%的聚乙烯吡咯烷酮；

f. 占组合物重量的大约1 wt%的月桂基硫酸钠；和

g. 占组合物重量的大约0.5 wt%的硬脂酸镁。

48.权利要求1至47的任一项的片剂、药物组合物或单位剂型，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A具有0.1微米至50微米的粒径。

49.权利要求1至47的任一项的片剂、药物组合物或单位剂型，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A具有0.1微米至20微米的粒径。

50.权利要求1至47的任一项的片剂、药物组合物或单位剂型，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A具有0.1微米至10微米的粒径。

51.权利要求1至47的任一项的片剂、药物组合物或单位剂型，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A具有1.0微米至5微米的粒径。

52.权利要求1至47的任一项的片剂、药物组合物或单位剂型，其中化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A具有2.0微米的粒径D50。

53.制备药物组合物的方法，该方法包括下列步骤：将治疗有效量的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A和至少一种选自下列的造粒赋形剂混合：粘合剂；助流剂；表面活性剂；润滑剂；崩解剂；填料；稀释剂和其联用形式，形成混合物；将该混合物混合；压制该混合物，形成药物组合物。

54.权利要求53的方法，其中该方法包含许多颗粒。

55.权利要求53的方法，其中压制混合物包括：在辊压机中压制混合物，形成混合物的压缩片材；将混合物的片材碾磨，形成许多颗粒。

56.权利要求54的方法，进一步包括：将许多颗粒与至少一种药物可接受的赋形剂一起压制，形成片剂。

57.权利要求56的方法，其中至少一种药物可接受的赋形剂选自硬脂酸镁、交联羧甲纤维素钠和其联用形式。

58.按照权利要求57的方法，其中压制许多颗粒，制备硬度至少5 kP的片剂。

59.权利要求53的方法，其中压制混合物形成药物组合物的步骤进一步包括干燥该混合物。

60.权利要求53的方法，其中将混合物混合包括：将混合物混合，直到该混合物基本上均匀为止。

61.权利要求53至60的任一项的方法，其中许多颗粒是通过化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A与包含表面活性剂和粘合剂的造粒流体混合而形成的。

62.权利要求61的方法，其中表面活性剂是月桂基硫酸钠。

63.给予片剂的方法，包括：口服给予患者片剂，每天至少一次，片剂包含：

a. 大约25至200 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 填料；

c. 稀释剂；

d. 崩解剂；

e. 表面活性剂；

f. 粘合剂和助流剂中的至少一种；和

g. 润滑剂。

64.权利要求63的方法，其中片剂包含大约25 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

65.权利要求63的方法，其中片剂包含大约75 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

66.权利要求63的方法，其中片剂包含大约100 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

67.权利要求63的方法，其中片剂包含大约150 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

68.权利要求63的方法，其中片剂包含大约200 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

69.给予片剂的方法，包括：口服给予患者片剂，每天两次，片剂包含：

a. 大约25至200 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 填料；

c. 稀释剂；

d. 崩解剂；

e. 表面活性剂；

f. 粘合剂和助流剂中的至少一种；和

g. 润滑剂。

70.权利要求69的方法，其中片剂包含大约25 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

71.权利要求69的方法，其中片剂包含大约50 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

72.权利要求69的方法，其中片剂包含大约75 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

73.权利要求69的方法，其中片剂包含大约100 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

74.权利要求69的方法，其中片剂包含大约150 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

75.权利要求69的方法，其中片剂包含大约200 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

76.给予片剂的方法，包括：口服给予患者片剂，每12小时一次，片剂包含：

a. 大约25至200 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A；

b. 填料；

c. 稀释剂；

d. 崩解剂；

e. 表面活性剂；

f. 粘合剂和助流剂中的至少一种；和

g. 润滑剂。

77.权利要求76的方法，其中片剂包含大约25 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

78.权利要求76的方法，其中片剂包含大约50 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

79.权利要求76的方法，其中片剂包含大约75 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

80.权利要求76的方法，其中片剂包含大约100 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

81.权利要求76的方法，其中片剂包含大约150 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

82.权利要求76的方法，其中片剂包含大约200 mg的化合物1、I型化合物1、II型化合物1和/或化合物1 HCl盐形式A。

83.治疗患者疾病或减轻其严重程度的方法，该方法包括：给予该患者权利要求1至52的任一项的片剂、药物组合物或单位剂型，其中疾病选自：囊性纤维化，哮喘，吸烟诱导的COPD，慢性支气管炎，鼻窦炎，便秘，胰腺炎，胰腺机能不全，由先天性的双向不存在输精管(CBAVD)所引起的男性不育症，轻微肺病，自发性胰腺炎，过敏性支气管肺曲霉病(ABPA)，肝脏疾病，遗传性的（肺）气肿，遗传性的血色沉着病，凝血-纤溶缺乏症，蛋白C缺乏，1型遗传性的血管性水肿，脂质处理缺陷，家族性高胆甾醇血症，1型乳糜微粒血症，无β脂蛋白血症，溶酶体储存疾病，粘脂病第二型（I-cell disease）/假Hurler，粘多糖病，Sandhof/Tay-Sachs，II型Crigler-Najjar，内分泌病变/高胰岛素血症(hyperinsulemia)，糖尿病，Laron侏儒症，髓过氧化物酶缺乏，原发性甲状旁腺功能减退，黑素瘤，1型glycanosis CDG，先天性的甲状腺机能亢进，成骨不全，遗传性的血纤维蛋白原过少，ACT缺乏，尿崩症(DI)，neurophyseal DI，neprogenic DI，Charcot-Marie Tooth综合症，Perlizaeus-Merzbacher疾病，神经变性疾病，阿尔海默氏疾病，帕金森氏症，肌萎缩性侧索硬化，渐进性的核上性麻痹，Pick's疾病，一些多麸酰胺神经障碍，Huntington's，I型脊髓小脑运动失调，脊椎和延髓肌肉萎缩，齿状核红核苍白球丘脑下部核萎缩，萎缩性肌强直，海绵状脑病，遗传性的Creutzfeldt-Jakob疾病(由于朊病毒蛋白处理缺陷)，Fabry疾病，Straussler-Scheinker综合症，COPD，干眼病，Sjogren's疾病，骨质疏松症，骨质减少，Gorham's综合症，氯通道病，先天性肌强直(Thomson和Becker形式)，III型巴特氏综合征，Dent's疾病，惊跳症，癫痫，惊跳症，溶酶体贮积病，Angelman综合症，原发性纤毛运动障碍(PCD)，纤毛的结构和/或功能性遗传病症，原位倒置的PCD(亦称Kartagener综合症)，没有原位倒置的PCD或纤毛发育不全。

84.权利要求83的方法，其中疾病是囊性纤维化，（肺）气肿，COPD或骨质疏松症。

85.权利要求83的方法，其中疾病是囊性纤维化。

86.权利要求83至85的任一项的方法，其中所述患者具有囊性纤维化横跨膜受体(CFTR)，该受体带有ΔF508突变。

87.权利要求83至85的任一项的方法，其中所述患者具有囊性纤维化横跨膜受体(CFTR)，该受体带有R117H突变。

88.权利要求83至85的任一项的方法，其中所述患者具有囊性纤维化横跨膜受体(CFTR)，该受体带有G551D突变。

89.权利要求83至85的任一项的方法，其中该方法包括：给予额外的治疗剂。

90.试剂盒，其包括权利要求1至52的任一项的片剂、药物组合物或单位剂型和其使用说明书。

91.权利要求90的试剂盒，其中化合物1是I型化合物1，其存在于片剂、药物组合物或剂量单位中，数量从25 mg至大约200 mg的范围。

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