CN101287732A

CN101287732A - 囊性纤维化跨膜电导调节剂的调控剂

Info

Publication number: CN101287732A
Application number: CNA2006800375561A
Authority: CN
Inventors: S·哈迪达鲁阿; F·F·范格尔; M·T·米勒; J·麦卡特尼; V·阿鲁姆加姆; 周竞兰
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2005-08-11
Filing date: 2006-08-11
Publication date: 2008-10-15
Also published as: ES2367844T3; ZA200802172B

Abstract

本发明涉及囊性纤维化跨膜电导调节剂(CFTR)的调控剂、其组合物和有关方法。本发明也涉及使用这类调控剂治疗CFTR介导疾病的方法。

Description

囊性纤维化跨膜电导调节剂的调控剂

技术领域

本发明涉及囊性纤维化跨膜电导调节剂(CFTR)的调控剂、其组合物和有关方法。本发明也涉及使用这类调控剂治疗CFTR介导的疾病的方法。

背景技术

ABC转运蛋白是一族膜转运蛋白，调节多种药理成分、潜在毒性药物和异生素以及阴离子的转运。ABC转运蛋白是同源性膜蛋白，它们结合和利用细胞三磷酸腺苷(ATP)供它们的特异性活性。这些转运蛋白中有些被发现是多药耐受性蛋白(象MDR1-P糖蛋白或多药耐受性蛋白MRP1)，为恶性癌细胞防御化学治疗剂。迄今已经鉴别了48种ABC转运蛋白，基于它们的序列同一性和功能分为7个家族。

ABC转运蛋白在体内起多种重要的生理作用，并且提供对有害环境化合物的防御。因为如此，它们代表重要的潜在药物靶，用于治疗与该转运蛋白缺陷有关的疾病，防止药物从靶细胞中转运出去，并干预其他其中ABC转运蛋白活性的调控可能是有益的疾病。

普遍与疾病有关的一族ABC转运蛋白的成员是cAMP/ATP-介导的阴离子通道CFTR。CFTP在多种细胞类型中被表达，包括吸收性和分泌性上皮细胞，在那里它调节阴离子的跨膜流动以及其他离子通道和蛋白质的活性。在上皮细胞中，CFTP的正常功能发挥是维持电解质在体内各处转运的关键，包括呼吸和消化组织。CFTP由大约1480个氨基酸组成，它们编码由跨膜结构域的串联重复要素所构成的蛋白质，各自含有六个跨膜螺旋和一个核苷酸结合结构域。两个跨膜结构域通过大型极性调节性(R)-结构域连接，具有多个调节通道活性和细胞运输的磷酸化位点。

编码CFTR的基因已被鉴别和测序(参见Gregory，R.J.等人(1990)Nature 347：382-386；Rich，D.P.等人(1990)Nature 347：358-362；Riordan，J.R.等人(1989)Science 245：1066-1073)。这种基因的缺陷引起CFTR突变，导致囊性纤维化，这是人类最常见的致命性遗传疾病。囊性纤维化影响大约两千五百分之一的美国新生儿。在全部美国人口中，多达一千万人携带有缺陷基因的单一副本，没有明显的疾病效应。相反，带有两个囊性纤维化相关基因副本的个体患有囊性纤维化的衰弱与致命性效应，包括慢性肺疾病。

在囊性纤维化患者中，在呼吸道上皮中被内源性表达的CFTR的突变引起顶端阴离子分泌减少，导致离子和体液转运的失衡。所致阴离子转运疾病对肺中粘液蓄积增强和伴随微生物感染有贡献，最终导致囊性纤维化患者死亡。除了呼吸疾病以外，囊性纤维化患者通常患有胃肠问题和胰腺机能不全，如果不加治疗则导致死亡。另外，大多数囊性纤维化男性是不育的，囊性纤维化女性的生育力降低。与两个囊性纤维化相关基因副本的严重效应相反，带有单一囊性纤维化相关基因副本的个体表现出对霍乱和腹泻所致脱水的抗性增加——这也许解释了人群内相对高频率的囊性纤维化基因的原因。

囊性纤维化染色体CFTR基因的序列分析已经揭示了多种致病性突变(Cutting，G.R.等人(1990)Nature 346：366-369；Dean，M.等人(1990)Cell 61：863：870；和Kerem，B-S.等人(1989)Science 245：1073-1080；Kerem，B-S等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：8447-8451)。迄今已经鉴别了1000种以上致病性囊性纤维化基因突变(http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/)。最常见的突变是CFTR氨基酸序列508位苯丙氨酸的缺失，普遍被称为ΔF508-CFTR。这种突变发生在大约70％的囊性纤维化病例中，与严重的疾病有关。

ΔF508-CFTR中508残基的缺失阻止初生蛋白正确地折叠。这导致该突变蛋白不能退出内质网(“ER”)并运输至质膜。其结果是，膜中通道数量远远少于表达野生型CFTR的细胞中所观察到的。除了运输受损以外，突变还导致有缺陷的通道门控。总之，膜中通道数量减少和有缺陷的门控引起跨越上皮的阴离子转运减少，引起有缺陷的离子和体液转运(Quinton，P.M.(1990)，FASEB J.4：2709-2727)。不过，研究已经显示，膜中ΔF508-CFTR的数量减少是功能性的，尽管少于野生型CFTR(Dalemans等人(1991)，Nature Lond.354：526-528；Denning等人，见上；Pasyk和Foskett(1995)，J.Cell.Biochem.270：12347-50)。除了ΔF508-CFTR以外，其他导致有缺陷的运输、合成和/或通道门控的致病性CFTR突变可能被增量或减量调节，以改变阴离子分泌和修改疾病进展和/或严重性。

尽管CFTR除了阴离子以外还转运多种分子，不过显然这种角色(阴离子的转运)代表了跨越上皮转运离子和水的重要机理中的一种要素。其他要素包括上皮Na⁺通道、ENaC、Na⁺/2Cl^-/K⁺共同转运蛋白、Na⁺-K⁺-ATP酶泵和基底外侧膜K⁺通道，它们负责摄取氯化物进入细胞。

这些要素一起工作，经由它们在细胞内的选择性表达和定位实现跨越上皮的定向转运。借助存在于顶端膜上的ENaC与CFTR和在细胞基底外侧表面上表达的Na⁺-K⁺-ATP酶泵与Cl^-通道的协调活性，发生氯化物的吸收。氯化物从腔侧的次级主动转运引起细胞内氯化物的蓄积，然后可以被动地经由Cl^-通道离开细胞，导致向量转运。Na⁺/2Cl^-/K⁺共同转运蛋白、Na⁺-K⁺-ATP酶泵和基底外侧膜K⁺通道在基底外侧表面上的排列和腔侧上的CFTR协调氯化物经由腔侧上CFTR的分泌。因为水可能从不主动转运自己，它跨越上皮的流动依赖于由钠和氯的大量流动所生成的微小跨上皮渗透梯度。

除了囊性纤维化以外，CFTR活性的调控也可以有益于其他不直接由CFTR突变所导致的疾病，例如分泌性疾病和其他由CFTR介导的蛋白质折叠疾病。这些疾病包括但不限于慢性阻塞性肺疾病(COPD)、干眼病和斯耶格伦氏综合征。

COPD是以气流受限为特征的，它是进行性的，不是完全可逆的。气流受限是由于粘液分泌过多、肺气肿和细支气管炎。突变或野生型CFTR的活化剂提供COPD常见的粘液分泌过多和粘液纤毛廓清率减低的潜在治疗。具体而言，增加跨越CFTR的阴离子分泌可以有利于体液转运进入气道表面液体，以水化粘液，优化纤毛周围的体液粘度。这将引起粘液纤毛廓清率增强和与COPD有关的症状减少。干眼病是以泪水产生降低和异常泪膜脂质、蛋白质与粘蛋白行为为特征的。干眼有很多原因，其中一些包括年龄、Lasik眼手术、关节炎、药物治疗、化学/热灼伤、变态反应和疾病，例如囊性纤维化和斯耶格伦氏综合征。增加经由CFTR的阴离子分泌将增强体液从角膜内皮细胞和眼周围分泌腺体的转运，以增加角膜的水化作用。这将有助于缓解与干眼病有关的症状。斯耶格伦氏综合征是一种自身免疫疾病，其中免疫系统攻击体内各处产生水分的腺体，包括眼、口、皮肤、呼吸组织、肝、阴道和肠。症状包括眼、口和阴道干燥以及肺疾病。该疾病也与类风湿性关节炎、系统性狼疮、系统性硬化和多肌炎/皮肤肌炎有关。有缺陷的蛋白质运输据信会导致该疾病，治疗选择是有限的。CFTR活性调控剂可以水化各种受疾病影响的器官，帮助改善有关症状。

正如上文所讨论的，据信ΔF508-CFTR中508残基的缺失阻止初生蛋白正确地折叠，导致这种突变蛋白不能退出ER和运输至质膜。其结果是，存在于质膜的成熟蛋白数量不足，上皮组织内氯化物的转运显著减少。事实上，这种ABC转运蛋白被ER机构有缺陷的ER加工的细胞现象已被显示不仅是囊性纤维化疾病的基础，而且是广泛的其他孤立性与遗传性疾病的基础。ER机构可能发生故障的两种方式要么是与蛋白质的ER输出的偶联丧失，引起降解，要么是这些有缺陷/误折叠的蛋白质的ER蓄积[Aridor M，等人，Nature Med.，5(7)，pp745-751(1999)；Shastry，B.S.，等人，Neurochem.International，43，pp 1-7(2003)；Rutishauser，J.，等人，Swiss Med Wkly，132，pp 211-222(2002)；Morello，JP等人，TIPS，21，pp.466-469(2000)；Bross P.，等人，Human Mut.，14，pp.186-198(1999)]。与前一类ER故障有关的疾病有囊性纤维化(由误折叠的ΔF508-CFTR引起，正如上文所讨论的)、遗传性肺气肿(由a1-抗胰蛋白酶非Piz变体引起)、遗传性血色素沉着、凝血-纤维蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遗传性血管水肿、脂质加工缺陷(例如家族性高胆固醇血)、1型乳糜微粒血、β-脂蛋白血、溶酶体贮存疾病(例如I-细胞疾病/假性赫尔勒氏病)、粘多糖病(由溶酶体加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-萨二氏病(由β-己糖胺酶引起)、克-纳二氏病II型(由UDP-葡糖醛酸基-唾液酸(sialyc)-转移酶引起)、多内分泌病/高胰岛素血、糖尿病(由胰岛素受体引起)、拉伦侏儒(由生长激素受体引起)、髓过氧化物酶缺陷、原发性甲状旁腺机能减退(由前促甲状旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。与后一类ER故障有关的疾病有聚糖病(glycanosis)CDG 1型、遗传性肺气肿(由α1-抗胰蛋白酶PiZ变体引起)、先天性甲状腺机能亢进、成骨不全(由I、II、IV型前胶原引起)、遗传性低纤维蛋白原血(由纤维蛋白原引起)、ACT缺陷(由α1-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩症(DI)、后叶激素运载蛋白性DI(由后叶加压素/V2-受体引起)、肾原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-马-图三氏综合征(由外周髓磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神经变性疾病(例如阿尔茨海默氏病(由βAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神经病学障碍(例如亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓与延髓肌肉萎缩、齿状红核苍白球丘脑下核萎缩和肌强直性营养不良)以及海绵状脑病(例如遗传性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶体α-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏综合征(由Prp加工缺陷引起))、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、干眼病和斯耶格伦氏综合征。

除了CFTR活性的增量调节以外，减少CFTR分泌阴离子也可以有益于分泌性腹泻的治疗，其中作为促分泌性活化的氯化物转运的结果，上皮水转运戏剧性地增加。该机理牵涉cAMP的升高和CFTR的刺激。

尽管腹泻有大量原因，不过由过量氯化物转运所致腹泻性疾病的主要后果是共同的，包括脱水、酸中毒、生长减退和死亡。

急性与慢性腹泻在世界很多地区代表了主要的医学问题。腹泻在不到五岁的儿童中既是营养不良的显著因素，又是死亡的主导原因(5,000,000例死亡/年)。

分泌性腹泻也是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)和慢性炎性肠疾病(IBD)患者中的危险病症。每年从工业化国家到发展中国家旅行的人中有一千六百万人患上腹泻，腹泻病例的严重性和数量因旅行的国家和地区而异。

牲畜和宠物、例如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫和狗的腹泻也称为家畜腹泻病，是这些动物死亡的主要原因。腹泻可以由任何重大转变所致，例如断奶或身体运动，以及响应于多种细菌或病毒感染，一般发生在动物寿命的前几个小时内。

最常见的致腹泻性细菌是肠毒原性大肠杆菌(ETEC)，具有K99毛发抗原。腹泻的常见病毒原因包括轮状病毒和冠形病毒。其他感染性成分包括隐孢子虫、兰伯氏贾第虫和沙门氏菌等等。

轮状病毒感染的症状包括水样便的排泄、脱水和虚弱。冠形病毒导致更严重的新生动物疾病，具有比轮状病毒感染更高的死亡率。不过经常是年幼动物可能同时感染有一种以上病毒或者病毒与细菌微生物的组合。这戏剧性地增加疾病的严重性。

因此，需要CFTR活性的调控剂及其组合物，它们能够用于在哺乳动物细胞膜中调控CFTR的活性。

需要使用这类CFTR活性调控剂治疗CFTR-介导疾病的方法。

需要在来自体内的哺乳动物细胞膜中调控CFTR活性的方法。

发明内容

现已发现，本发明化合物及其药学上可接受的组合物可用作CFTR活性的调控剂。这些化合物具有式I或式II：

或其药学上可接受的盐，其中R^X、环A、R^AA、R^BB、Z和q如下所述。

这些化合物和药学上可接受的组合物可用于治疗多种疾病、疾患或病症或者减轻其严重性，包括但不限于囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着、凝血-纤维蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遗传性血管水肿、脂质加工缺陷(例如家族性高胆固醇血)、1型乳糜微粒血、β-脂蛋白血、溶酶体贮存疾病(例如I-细胞疾病/假性赫尔勒氏病)、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨二氏病、克-纳二氏病II型、多内分泌病/高胰岛素血、糖尿病、拉伦侏儒、髓过氧化物酶缺陷、原发性甲状旁腺机能减退、黑素瘤、聚糖病CDG 1型、遗传性肺气肿、先天性甲状腺机能亢进、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血、ACT缺陷、尿崩症(DI)、后叶激素运载蛋白性DI、肾原性DI、夏-马-图三氏综合征、佩-梅二氏病、神经变性疾病(例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神经病学障碍(例如亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓与延髓肌肉萎缩、齿状红核苍白球丘脑下核萎缩和肌强直性营养不良)以及海绵状脑病(例如遗传性克-雅二氏病、法布里氏病和斯-施二氏综合征)、COPD、干眼病和斯耶格伦氏病。

发明详细内容

I.本发明化合物的一般说明：

本发明提供式I或式II化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个R^X独立地是氢、卤代基、CF₃、C1-C4烷基或-OC1-C4烷基；其条件是两个R^X不同时是氢；或者两个R^X一起构成环(a)：

X是CH₂、CF₂、CH₂-CH₂或CF₂-CF₂；

环A是3-7元单环的环烷基环；

R^AA和R^BB与氮原子一起构成被OR’取代的吡咯烷基环；

R’是氢或者C1-C6脂族基，其中所述脂族基的至多两个碳单元选择性地和独立地被-CO-、-CS-、-COCO-、-CONR-、-CONRNR-、-CO₂-、-OCO-、-NRCO₂-、-O-、-NRCONR-、-OCONR-、-NRNR，-NRNRCO-、-NRCO-、-S-、-SO，-SO₂-、-NR-、-SO₂NR-，NRSO₂-或-NRSO₂NR-代替；

R是氢或者C1-C6脂族基；

Z是吸电子取代基；而

q是0-3。

本文应当适用下列定义，另有说明除外。

本文所用的术语“CFTR”表示囊性纤维化跨膜电导调节剂或具有其调节剂活性的突变体，包括但不限于ΔF508-CFTR和G551D-CFTR(例如参见http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/关于CFTR突变)。

本文所用的术语“调控”表示以可测量的量增加或降低。

本文所用的术语“纠正”表示增加细胞膜中CFTR的数量。

本文所用的术语“强化剂”表示增加细胞膜中CFTR门控活性的化合物。

本文所用的术语“吸电子取代基”表示相对于氢而言是电负性的原子或基团。例如参见“Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，”Jerry March，4^th Ed.，John Wiley& Sons(1992)，例如，pp.14-16，18-19等。示范性的这类取代基包括卤代基、CN、COOH、CF₃等。

出于本发明的目的，化学元素按照Periodic Table of theElements，CAS version，Handbook of Chemistry and Physics，75^thEd鉴定。另外，有机化学的一般原理参见″Organic Chemistry″，Thomas Sorrell，University Science Books，Sausalito：1999，和″March′s Advanced Organic Chemistry″，5^th Ed.，Ed.：Smith，M.B.和March，J.，John Wiley & Sons，New York：2001，其完整内容引用在此作为参考。

除非另有指定，本文所用的术语“脂族基”或“脂族基团”本身表示直链(即未分支)或支链的取代或未取代的烃链，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，或者表示单环烃或二环烃，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但是不是芳族的(本文也称之为“碳环”、“环脂族基”或“环烷基”)，它具有单一的与分子其余部分连接的点。除非另有说明，脂族基团含有1-20个脂族碳原子。在有些实施方式中，脂族基团含有1-10个脂族碳原子。在其他实施方式中，脂族基团含有1-8个脂族碳原子。在其他实施方式中，脂族基团含有1-6个脂族碳原子，在其他实施方式中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。在有些实施方式中，“环脂族基”(或者“碳环”或“环烷基”)表示单环C₃-C₈烃或二环C₈-C₁₂烃，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但不是芳族的，它具有单一的与分子其余部分连接的点，其中所述二环环系中任意单一的环是3-7元环。适合的脂族基团包括但不限于直链或支链的取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其杂合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。

本文所用的术语“不饱和”意味着基团具有一个或多个不饱和单元。

除非在立体化学上指定，本文所描绘的结构也意味着包括该结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如每个不对称中心的R与S构型，(Z)与(E)双键异构体，和(Z)与(E)构象异构体，包括含有相对于另一种对映体过量的一种对映体或者相对于另一种非对映体过量的一种非对映体的混合物。除非另有指定，这些化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物都属于本发明的范围。除非另有规定，本发明化合物的所有互变异构形式都属于本发明的范围。另外，除非另有规定，本文所描绘的结构也意味着包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在上有所不同的化合物。例如，除了氢被氘或氚代替或者碳被¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替以外具有本发明结构的化合物都属于本发明的范围。这类化合物例如可用作生物学测定法中的分析工具或探针。

在一种实施方式中，每个R^X独立地是氢、卤代基或CF₃；其条件是两个R^X不同时是氢。在另一种实施方式中，一个R^X是氢，另一个R^X是卤代基或CF₃。在另一种实施方式中，两个R^X都是卤代基。

在一种实施方式中，两个R^X基团一起构成环(a)。

在某些实施方式中，X是CH₂。在其他实施方式中，X是CF₂。或者，X是CH₂-CH₂。在某些其他实施方式中，X是CF₂-CF₂。

在一种实施方式中，环A是环丙基、环戊基或环己基。在另一种实施方式中，环A是环丙基或环戊基。在某些实施方式中，环A是环丙基。

在一种实施方式中，R是氢。或者，R是C1-C6烷基。示范性R包括甲基、乙基或丙基。

在一种实施方式中，R’是氢。或者，R’是C1-C6烷基。示范性R’包括甲基、乙基、丙基或C(O)Me。

在一种实施方式中，R^AA和R^BB一起构成被OH取代基取代的吡咯烷基。

在一种实施方式中，Z选自卤代基、CF₃或二氟亚甲二氧基。

在一种实施方式中，q是0。或者，q是1-2。在某些实施方式中，q是1。或者，q是2。

在另一种实施方式中，式I或式II化合物包含一个或多个、优选全部下列特征：

两个R^X一起构成环(a)；

X是CH₂；

环A是环丙基；

R’是氢；

q是1或2；而

Z是卤代基、CF₃或二氟亚甲二氧基。

两个R^X一起构成环(a)；

X是CH₂；

R是氢；

环A是环丙基；

R’是氢；

q是1或2；而

Z是卤代基、CF₃或二氟亚甲二氧基。

两个R^X一起构成环(a)；

X是CF₂；

环A是环丙基；

R’是氢；

q是1或2；而

Z是卤代基、CF₃或二氟亚甲二氧基。

两个R^X一起构成环(a)；

X是CF₂；

R是氢；

环A是环丙基；

R’是氢；

q是1或2；而

Z是卤代基、CF₃或二氟亚甲二氧基。

在式I化合物的一种实施方式中，R^AA和R^BB与氮原子一起构成下列环(i)：

在式II化合物的一种实施方式中，R^AA和R^BB与氮原子一起构成下列环(ii)：

在式I化合物的一种实施方式中，R^AA和R^BB与氮原子一起构成下列环(iii)：

在式II化合物的一种实施方式中，R^AA和R^BB与氮原子一起构成下列环(iv)：

在替代的实施方式中，本发明提供具有式I’或式II’的中间体：

其中：

R^X、R、环A、Z和q是如上定义的；

L是选自C(O)、SO₂的连接基团；

p是0或1；而

CA是适合的手性助剂。

本文所用的术语“手性助剂”表示用于实现外消旋或非对映体混合物的化学拆分的不对称分子或分子片段。这类手性助剂可以具备一个手性中心，例如甲基苄基胺，或者若干手性中心，例如薄荷醇。手性助剂一旦嵌入原料，目的是使得所得非对映体混合物简便分离。例如参见J.Jacques等人，“Enantiomers，Racemates AndResolutions，”pp.251-369，John Wiley & Sons，New York(1981)；E.L.Eliel & S.H.Wilen，“Stereochemistry of OrganicCompounds，”pp.868-870，John Wiley & Sons(1994)。

适合用于本发明的手性助剂连接于上述连接基团L(也就是说p是1)或者直接连接于氧原子(也就是说p是0)的那些。示范性的这类手性助剂例如参见E.L.Eliel & S.H.Wilen，ibid，pp.337-340。

在一种实施方式中，CA、L、p和连接于此的氧原子一起是(+)-10-樟脑磺酸酯、(1S，4R)-(-)-ω-莰烷酸酯、(1R，2S，5R)-(-)-薄荷醇碳酸酯、(1S，2R，5S)-(+)-薄荷醇碳酸酯、(1R，2R)-1-苯基-2-环丙基酯或(3R)-四氢呋喃-3-碳酸酯。

本发明的示范性化合物如下表1所示。

表1

在一种实施方式中，本发明提供生产式I或式II化合物的方法：

包括在第一适合的条件下使式R-1化合物与式I-A化合物反应生成所述式I化合物或者与式II-A化合物反应生成所述式II化合物的步骤：

其中：

每个R^X独立地是氢、卤代基、CF₃、C1-C4烷基或-OC1-C4烷基；其条件是两个R^X不同时是氢；或者

两个R^X一起构成环(a)：

X是CH₂、CF₂、CH₂-CH₂或CF₂-CF₂；

环A是3-7元单环的环烷基环；

R^AA和R^BB与氮原子一起构成被OR’取代的吡咯烷基环；

R是氢或者C1-C6脂族基；

Z是吸电子基团；而

q是0-3；和

LG₁是第一适合的离去基团。

本文所用的术语“第一适合的条件”表示适合于发生式I-A化合物与式R-1化合物之间或者式II-A化合物与式R-1化合物之间的反应的条件。这类适合的条件例如包括第一适合的溶剂、第一适合的温度和适合的还原剂。本领域技术人员将熟知各种这类适合于发生式I-A化合物与式R-1化合物之间或者式II-A化合物与式R-1化合物之间的反应的条件。

在一种实施方式中，第一适合的溶剂是极性非质子溶剂、极性质子溶剂、非极性溶剂或其适合的组合。可用作第一适合的溶剂的示范性溶剂包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、甲苯、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、二甲醚、乙腈、二甲基甲酰胺、DMAC或NMP。

在一种实施方式中，第一适合的温度是足以在第一适合的溶剂中发生式I-A化合物与式R-1化合物之间的反应的温度。在另一种实施方式中，第一适合的温度是足以在第一适合的溶剂中发生式II-A化合物与式R-1化合物之间的反应的温度。示范性第一适合的温度包括在约0℃至约110℃之间。在一种实施方式中，第一适合的温度在约0℃至约25℃之间。

在一种实施方式中，适合的还原剂是能够发生式I-A化合物与式R-1化合物之间的反应的还原剂。在另一种实施方式中，适合的还原剂是能够发生式II-A化合物与式R-1化合物之间的反应的还原剂。本领域技术人员将熟知适合于该反应的还原剂。适合于本发明的试剂包括金属硼氢化物或者能够催化氢化的试剂。示范性的这类适合的还原剂包括硼氢化钠、氰基硼氢化钠、硼氢化锂、三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化钙、在适合的金属催化剂、例如Pd/C存在下的氢。

在另一种实施方式中，LG₁是第一适合的离去基团，它能够置换生成式I化合物或式II化合物。参见″Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，″pp.339-357，Jerry March，4^th Ed.，John Wiley & Sons(1992)。

根据权利要求1的方法，其中LG₁选自烷基磺酸酯、芳基磺酸酯、卤化物、烷基羧酸酯。

在一种实施方式中，式I-A化合物是从式I-B化合物生成的：

其中[CA]是适合的手性助剂；

所述方法包括在第二适合的条件下除去所述手性助剂的步骤。

[001]在替代的实施方式中，式II-A化合物是从式II-B化合物生成的：

其中[CA]是适合的手性助剂；

上述式II-B或式I-B化合物中“适合的手性助剂”是能够连接于氨基的手性助剂。含有这样一种连接有适合的手性助剂的氨基的化合物的异构体混合物容易借助适合的分离手段分离为它的个别异构体。例如参见J.Jacques等人，“Enantiomers，Racemates AndResolutions，”pp.251-369，John Wiley & Sons，New York(1981)；E.L.Eliel & S.H.Wilen，“Stereochemistry of OrganicCompounds，”pp.868-870，John Wiley & Sons(1994)。

在一种实施方式中，所述适合的手性助剂是烷基次硫酸基。

在另一种实施方式中，所述适合的第二条件包括适合的质子酸和适合的第二溶剂。

在一种实施方式中，所述适合的第二溶剂选自极性非质子溶剂或质子溶剂。示范性极性非质子溶剂包括二噁烷、四氢呋喃、二乙醚、二氯甲烷等。示范性质子溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇等。

在一种实施方式中，所述适合的第二溶剂是极性非质子溶剂。

在另一种实施方式中，所述式I-B化合物和式II-B化合物是如下生成的，分别使式I-C或式II-C化合物与式R-2化合物在第三适合的条件下反应：

其中：

R是氢或者C1-C6脂族基；

R¹是氢或者第一适合的保护基团；

[CA]是适合的手性助剂；而

LG₂是第二适合的离去基团。

在一种实施方式中，LG₂选自卤化物、OC(O)(C1-C6烷基)、五氟苯氧基、C1-C6烷氧基、OCO₂(C1-C6烷基)或羟基。

在一种实施方式中，R¹是氢。

在另一种实施方式中，所述第三适合的条件包括第三适合的偶联剂和第三适合的溶剂。

在另一种实施方式中，所述适合的偶联剂选自DCC、DCI、HATU、TCPH或HBTU。

在一种实施方式中，所述第三适合的溶剂选自二氯甲烷、二噁烷、乙腈、DMF、二氯乙烷或四氢呋喃。

在另一种实施方式中，所述式I-C或式II-C化合物是从式R-3化合物的异构体混合物生成的：

其中：

R、Z和q是如上定义的；

PG₁是第二适合的保护基团；而

[CA]是适合的手性助剂；

所述方法包括两个步骤，所述两个步骤之一是利用适合的分离手段分离所述异构体混合物，所述两个步骤中的另一个是在第四适合的条件下转化PG₁为R¹。

在一种实施方式中，所述适合的分离手段包括适合的色谱手段。示范性的这类手段包括柱色谱或薄层色谱。

在另一种实施方式中，所述适合的分离手段包括适合的结晶手段。

在另一种实施方式中，所述第四适合的条件包括适合的去保护剂和第四适合的溶剂。示范性适合的去保护剂是三氟乙酸。

在一种实施方式中，所述第四适合的溶剂是极性非质子溶剂。示范性溶剂包括二氯甲烷、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚等。

在另一种实施方式中，所述式R-3化合物是从式R-4化合物和式R-5化合物生成的：

其中：

PG₁是第二适合的保护基团；

M是适合的金属阳离子；而

[CA]是适合的手性助剂；

所述方法包括在第五适合的条件下使所述式R-4化合物与所述式R-5化合物反应的步骤。

在一种实施方式中，所述M选自Li⁺、Na⁺或Mg⁺⁺。

在另一种实施方式中，所述PG₁选自烷基氨基甲酸酯、三氟乙酰基、三烷基甲硅烷基或新戊酰基。或者，所述PG₁是BOC或三甲基甲硅烷基。

在一种实施方式中，所述第五适合的条件包括第五适合的溶剂和第五适合的温度。在一种实施方式中，所述适合的温度为约-78℃。

在另一种实施方式中，所述第五适合的溶剂是四氢呋喃。

在替代的实施方式中，所述式R-1化合物是：

或者，所述式R-1化合物是：

在另一种实施方式中，所述式I或式II化合物选自表1。

4.一般合成流程

本发明化合物可以借助本领域已知的方法制备。下文阐述制备本发明化合物的示范性合成途径。

下列流程I-A阐述生产中间体A的过程：

流程I-A：

a)50％ NaOH，Y(CH₂)nY，BTEAC(苄基三乙基氯化铵)；Y＝适合的离去基团。

下列流程I-B阐述生产中间体B的过程。

流程I-B：

a)Br₂；b)硫脲，(Me)₂NCH(OMe)₂；c)HCl

下列流程I-C阐述生产式I或式II化合物的过程：

流程I-C：

a)SOCl₂，DMF；b)1，4-二噁烷，Et₃N；c)NaBH₄，MeOH；d)i)CH₃SO₂Cl，DCM，Et₃N；ii)R^AAR^BBNH；e)手性色谱

流程I-D阐述本发明的示范性化合物的合成。

流程I-D：

a)50％ NaOH水溶液，1，2-氯溴乙烷，BTEAC

a)Br₂；b)硫脲，(Me)₂NCH(OMe)₂；c)HCl

a)SOCl₂，DMF；b)1，4-二噁烷，Et₃N；c)NaBH₄，MeOH；d)i)CH₃SO₂Cl，DCM，Et₃N；ii)(R)-吡咯烷醇；e)手性色谱

下列流程II-A阐述另一种利用手性助剂制备本发明化合物的示范性过程。

流程II-A：

下列流程II-B阐述利用手性助剂制备本发明的示范性化合物的过程。

流程II-B：

下列流程III阐述另一种制备本发明化合物的过程。

流程III，步骤A：

b)Ti(OPr)₄，二噁烷；b)(Boc)₂O，Et₃N，DMAP，THF；c)n-BuLi，-78℃，THF；d)50％TFA，CH₂Cl₂。

流程III，步骤B：

a)SOCl₂，DMF，60℃；b)Et₃N，CH₂Cl₂；c)HCl的二噁烷溶液，CH₃OH；d)NaBH₄(LG＝离去基团)。

流程III，步骤C：

a)SOCl₂，DMF，60℃；b)Et₃N、CH₂Cl₂；c)HCl的二噁烷溶液、CH₃OH；d)NaBH₄(LG＝离去基团)。

下文陈述其他制备本发明化合物的说明性实例。

5.用途、制剂和给药

药学上可接受的组合物

正如上文所讨论的，本发明提供这样的化合物，它们可用作CFTR的调控剂，因而可用于治疗疾病、疾患或病症，例如囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着、凝血-纤维蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遗传性血管水肿、脂质加工缺陷(例如家族性高胆固醇血)、1型乳糜微粒血、β-脂蛋白血、溶酶体贮存疾病(例如I-细胞疾病/假性赫尔勒氏病)、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨二氏病、克-纳二氏病II型、多内分泌病/高胰岛素血、糖尿病、拉伦侏儒、髓过氧化物酶缺陷、原发性甲状旁腺机能减退、黑素瘤、聚糖病CDG1型、遗传性肺气肿、先天性甲状腺机能亢进、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血、ACT缺陷、尿崩症(DI)、后叶激素运载蛋白性DI、肾原性DI、夏-马-图三氏综合征、佩-梅二氏病、神经变性疾病(例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神经病学障碍(例如亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓与延髓肌肉萎缩、齿状红核苍白球丘脑下核萎缩和肌强直性营养不良)以及海绵状脑病(例如遗传性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病和斯-施二氏综合征)。

因此，在本发明的另一方面，提供药学上可接受的组合物，其中这些组合物包含任意如本文所述的化合物，并且选择性地包含药学上可接受的载体、助剂或赋形剂。在某些实施方式中，这些组合物选择性地进一步包含一种或多种其他治疗剂。

也将被领会的是，某些本发明化合物能够以游离形式存在供治疗，或者在适当情况下为其药学上可接受的衍生物。按照本发明，药学上可接受的衍生物包括但不限于药学上可接受的盐、酯、这类酯的盐、或者任何其他加合物或衍生物，一旦对需要的患者给药即能够直接或间接提供如本文所述的化合物或者其代谢产物或残余物。

本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示这样的盐，在合理的医学判断范围内，它们适合用于与人体和低等动物组织接触，没有不适当的毒性、刺激性、变态反应等，与合理的利益/风险比相称。“药学上可接受的盐”表示本发明化合物的任意无毒性盐或酯的盐，一旦对接受者给药，即能够直接或间接提供本发明化合物或者其抑制活性代谢产物或残余物。本文所用的术语“其抑制活性代谢产物或残余物”意味着其代谢产物或残余物也是ATP-结合弹夹转运蛋白的抑制剂。

药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，S.M.Berge等在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19中详细描述了药学上可接受的盐，引用在此作为参考。本发明化合物的药学上可接受的盐包括从适合的无机与有机酸与碱衍生的那些。药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例是与无机酸或有机酸生成的那些盐，无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者利用本领域所用的其他方法，例如离子交换形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。从适当的碱衍生的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明也涵盖如本文所公开的化合物的任意碱性含氮基团的季铵化作用。借助这类季铵化作用可以得到可溶于水或油或可分散在水或油中的产物。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。当适当的时候，其他药学上可接受的盐包括无毒的铵盐、季铵盐和胺阳离子盐，利用抗衡离子生成，例如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐。

如上所述，本发明的药学上可接受的组合物另外包含药学上可接受的载体、助剂或赋形剂，正如本发明中所述，它们包括适合于所需的特定剂型的任意和所有溶剂、稀释剂或其他液体赋形剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。Remington′s Pharmaceutical Sciences，SixteenthEdition，E.W.Martin(Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1980)公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体和用于其制备的已知技术。除了任何与本发明化合物不相容的常规载体介质以外，例如产生任何不可取的生物学效应或者以有害方式相互作用于药学上可接受的组合物的任何其他组分，它的使用涵盖在本发明的范围内。能够充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白质，例如血清白蛋白；缓冲物质，例如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸或山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶体二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蜡类；聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物；羊毛脂；糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉碎的黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂用蜡；油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及其他无毒的可相容的润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；根据制剂人员的判断，在组合物中也可以存在着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和香料、防腐剂和抗氧化剂。

化合物和药学上可接受的组合物的用途

另一方面，本发明提供治疗牵涉CFTR的病症、疾病或疾患的方法。在某些实施方式中，本发明提供治疗牵涉CFTR缺陷的病症、疾病或疾患的方法，该方法包括对有此需要的受治疗者、优选哺乳动物给予包含式(I)化合物的组合物。

在某些实施方式中，本发明提供治疗如下疾病的方法：囊性纤维化、遗传性肺气肿(由a1-抗胰蛋白酶非Piz变体引起)、遗传性血色素沉着、凝血-纤维蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遗传性血管水肿、脂质加工缺陷(例如家族性高胆固醇血)、1型乳糜微粒血、β-脂蛋白血、溶酶体贮存疾病(例如I-细胞疾病/假性赫尔勒氏病)、粘多糖病(由溶酶体加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-萨二氏病(由β-己糖胺酶引起)、克-纳二氏病II型(由UDP-葡糖醛基-sialyc-转移酶引起)、多内分泌病/高胰岛素血、糖尿病(由胰岛素受体引起)、拉伦侏儒(由生长激素受体引起)、髓过氧化物酶缺陷、原发性甲状旁腺机能减退(由前促甲状旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。与后一类ER故障有关的疾病有聚糖病CDG1型、遗传性肺气肿(由α1-抗胰蛋白酶PiZ变体引起)、先天性甲状腺机能亢进、成骨不全(由I、II、IV型前胶原引起)、遗传性低纤维蛋白原血(由纤维蛋白原引起)、ACT缺陷(由α1-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩症(DI)、后叶激素运载蛋白性DI(由后叶加压素/V2-受体引起)、肾原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-马-图三氏综合征(由外周髓磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神经变性疾病(例如阿尔茨海默氏病(由βAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神经病学障碍(例如亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓与延髓肌肉萎缩、齿状红核苍白球丘脑下核萎缩和肌强直性营养不良)以及海绵状脑病(例如遗传性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶体α-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏综合征)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、干眼病和斯耶格伦氏综合征，包括对所述哺乳动物给予有效量的包含式(I)化合物或其上述优选实施方式的组合物的步骤。

按照替代的优选实施方式，本发明提供治疗囊性纤维化的方法，包括对所述哺乳动物给予有效量的包含式(I)化合物或其上述优选实施方式的组合物的步骤。

按照本发明，化合物或药学上可接受的组合物的“有效量”是有效治疗一种或多种如下疾病或者减轻其严重性的量：囊性纤维化、遗传性肺气肿(由a1-抗胰蛋白酶非Piz变体引起)、遗传性血色素沉着、凝血-纤维蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遗传性血管水肿、脂质加工缺陷(例如家族性高胆固醇血)、1型乳糜微粒血、β-脂蛋白血、溶酶体贮存疾病(例如I-细胞疾病/假性赫尔勒氏病)、粘多糖病(由溶酶体加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-萨二氏病(由β-己糖胺酶引起)、克-纳二氏病II型(由UDP-葡糖醛基-sialyc-转移酶引起)、多内分泌病/高胰岛素血、糖尿病(由胰岛素受体引起)、拉伦侏儒(由生长激素受体引起)、髓过氧化物酶缺陷、原发性甲状旁腺机能减退(由前促甲状旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。与后一类ER故障有关的疾病有聚糖病CDG 1型、遗传性肺气肿(由α1-抗胰蛋白酶PiZ变体引起)、先天性甲状腺机能亢进、成骨不全(由I、II、IV型前胶原引起)、遗传性低纤维蛋白原血(由纤维蛋白原引起)、ACT缺陷(由α1-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩症(DI)、后叶激素运载蛋白性DI(由后叶加压素/V2-受体引起)、肾原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-马-图三氏综合征(由外周髓磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神经变性疾病(例如阿尔茨海默氏病(由βAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神经病学障碍(例如亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓与延髓肌肉萎缩、齿状红核苍白球丘脑下核萎缩和肌强直性营养不良)以及海绵状脑病(例如遗传性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶体α-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏综合征)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、干眼病和斯耶格伦氏综合征。

按照本发明的方法，化合物和组合物可以使用就治疗一种或多种如下疾病或者减轻其严重性而言有效的任意量和任意给药途径给药：囊性纤维化、遗传性肺气肿(由a1-抗胰蛋白酶非Piz变体引起)、遗传性血色素沉着、凝血-纤维蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遗传性血管水肿、脂质加工缺陷(例如家族性高胆固醇血)、1型乳糜微粒血、β-脂蛋白血、溶酶体贮存疾病(例如I-细胞疾病/假性赫尔勒氏病)、粘多糖病(由溶酶体加工酶引起)、桑德霍夫病/泰-萨二氏病(由β-己糖胺酶引起)、克-纳二氏病II型(由UDP-葡糖醛基-sialyc-转移酶引起)、多内分泌病/高胰岛素血、糖尿病(由胰岛素受体引起)、拉伦侏儒(由生长激素受体引起)、髓过氧化物酶缺陷、原发性甲状旁腺机能减退(由前促甲状旁腺激素引起)、黑素瘤(由酪氨酸酶引起)。与后一类ER故障有关的疾病有聚糖病CDG1型、遗传性肺气肿(由α1-抗胰蛋白酶PiZ变体引起)、先天性甲状腺机能亢进、成骨不全(由I、II、IV型前胶原引起)、遗传性低纤维蛋白原血(由纤维蛋白原引起)、ACT缺陷(由α1-抗凝乳蛋白酶引起)、尿崩症(DI)、后叶激素运载蛋白性DI(由后叶加压素/V2-受体引起)、肾原性DI(由水通道蛋白II引起)、夏-马-图三氏综合征(由外周髓磷脂蛋白22引起)、佩-梅二氏病、神经变性疾病(例如阿尔茨海默氏病(由βAPP和早老蛋白引起)、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神经病学障碍(例如亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓与延髓肌肉萎缩、齿状红核苍白球丘脑下核萎缩和肌强直性营养不良)以及海绵状脑病(例如遗传性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病(由溶酶体α-半乳糖苷酶A引起)、斯-施二氏综合征)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、干眼病和斯耶格伦氏综合征。

所需确切的量将因受治疗者而异，取决于受治疗者的种类、年龄与一般状态、感染的严重性、特定药物、其给药的方式等。本发明化合物优选地被配制成剂量单元形式，有易于给药和剂量的一致性。本文所用的表达方式“剂量单元形式”表示物理上离散的药物单元，对所治疗的患者而言是适当的。不过将被理解的是，本发明化合物和组合物的总每日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任意特定患者或生物体的具体有效剂量水平将依赖于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重性；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药的时间、给药的途径和所采用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的具体化合物联合或同时使用的药物；和医药领域熟知的其他因素。本文所用的术语“患者”表示动物，优选哺乳动物，最优选人。

本发明的药学上可接受的组合物可以对人和其他动物口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(以粉剂、软膏剂或滴剂)、颊、以口用或鼻用喷雾剂等方式给药，这依赖于所治疗感染的严重性。在某些实施方式中，本发明化合物可以被口服或肠胃外给药，剂量水平为每天约0.01mg/kg至约50mg/kg、优选约1mg/kg至约25mg/kg受治疗者体重，一天一次或多次，以获得所需的治疗效果。

口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬液、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型可以含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、麦胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯，和它们的混合物。除了惰性稀释剂以外，口服组合物还可以包括助剂，例如湿润剂、乳化与悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂，可以按照已知技术配制可注射制剂，例如无菌可注射的水性或油性悬液。无菌可注射制剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬液或乳液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，常规上采用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任何温和的固定油，包括合成的单-或二-甘油酯。另外，在注射剂的制备中也可以使用脂肪酸，例如油酸。

可注射制剂可以这样进行灭菌，例如通过细菌截留性滤器过滤，或者掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，可以在使用前将其溶解或分散在无菌的水或其他无菌可注射介质中。

为了延长本发明化合物的作用，经常需要延缓化合物在皮下或肌内注射后的吸收。这可以利用水溶性差的结晶性或无定形物质的液体悬液来实现。化合物的吸收速率取决于它的溶解速率，后者反过来又可能取决于晶体大小和晶型。作为替代选择，将化合物溶解或悬浮在油类载体中，实现肠胃外给药化合物形式的延迟吸收。可注射的储库形式是这样制备的，在生物可降解的聚合物中，例如聚交酯-聚乙醇酸交酯，生成化合物的微囊包封基质。根据化合物与聚合物的比例和所采用特定聚合物的属性，可以控制化合物的释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库型可注射制剂也可以将化合物包合在与机体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

直肠或阴道给药组合物优选地是栓剂，它们可以这样制备，将本发明化合物与适合的无刺激性赋形剂或载体混合，例如可可脂、聚乙二醇或栓剂用蜡，它们在环境温度下是固体，但是在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔中融化，释放出活性化合物。

口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或a)填充剂或增容剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)润湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶解迟延剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)湿润剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，该剂型还可以包含缓冲剂。

也可以采用相似类型的固体组合物作为软或硬的填充的明胶胶囊剂中的填充剂，胶囊所用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂等固体剂型可以带有包衣和外壳，例如肠溶衣和药物配制领域熟知的其他包衣。它们可以选择性地含有遮光剂，也可以是仅仅或优先在肠道某一部分释放活性成分的组合物，选择性地为延迟的方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。也可以采用相似类型的固体组合物作为软与硬的填充的明胶胶囊剂中的填充剂，胶囊所用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。

活性化合物也可以是微囊包封的形式，其中含有一种或多种上述赋形剂。片剂、锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂等固体剂型可以带有包衣和外壳，例如肠溶衣、释放控制性包衣和药物配制领域熟知的其他包衣。在这类固体剂型中，可以将活性化合物与至少一种惰性稀释剂混合，例如蔗糖、乳糖或淀粉。在正常情况下，这类剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可以选择性地含有遮光剂，也可以是仅仅或优先在肠道某一部分释放活性成分的组合物，选择性地为延迟的方式。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。

本发明化合物的局部或透皮给药剂型包括软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。将活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何必需的防腐剂或缓冲剂混合，根据需要而定。眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也被涵盖在本发明的范围内。另外，本发明涵盖透皮贴剂的使用，它们具有控制化合物向机体递送的附加优点。这类剂型可以通过将化合物溶解或分散在恰当的介质中来制备。还可以使用吸收增强剂以增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或者将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。

正如上文一般性描述的，本发明化合物可用作CFTR的调控剂。因而，不希望受任意特定理论所限，化合物和组合物特别可用于治疗疾病、病症或疾患或者减轻其严重性，其中在该疾病、病症或疾患中牵涉CFTR活性过高或无活性。当在特定疾病、病症或疾患中牵涉时CFTR活性过高或无活性，该疾病、病症或疾患也可以被称为“CFTR-介导的疾病、病症或疾患”。因此，在另一方面，本发明提供治疗疾病、病症或疾患或者减轻其严重性的方法，其中在该疾病状态中牵涉CFTR活性过高或无活性。

在本发明中用作CFTR调控剂的化合物的活性可以按照本领域和本文实施例所一般描述的方法加以测定。

也将被领会的是，本发明的化合物和药学上可接受的组合物可以用在联合疗法中，也就是说，化合物和药学上可接受的组合物可以在一种或多种其他所需治疗剂或医药程序同时、之前或随后给药。用在联合方案中的特定疗法组合(治疗剂或程序)将考虑所需治疗剂和/或程序与所要达到的所需治疗效果的可相容性。也将被领会的是，所用疗法可以对同一病症达到所需效果(例如，本发明化合物可以与另一种用于治疗同一病症的药物同时给药)，或者它们可以达到不同的效果(例如控制任何副作用)。正如本文所用的，在正常情况下给药以治疗或预防特定疾病或病症的其他治疗剂被称为“就所治疗的疾病或病症而言是适当的”。

其他治疗剂在本发明组合物中的含量将不超过在包含该治疗剂作为唯一活性成分的组合物中通常的给药量。优选地，其他治疗剂在目前所公开的组合物中的量将是通常的包含该药物作为唯一治疗活性成分的组合物中的含量的约50％至100％。

本发明化合物或其药学上可接受的组合物也可以引入到涂覆可植入医药装置的组合物中，例如假肢、人工瓣膜、脉管移植物、支架和导管。因此，本发明在另一方面包括涂覆可植入装置的组合物，包含如上一般性描述和在本文大类与小类中所述的本发明化合物，和适合于涂覆所述可植入装置的载体。在另一方面，本发明包括涂有组合物的可植入装置，所述组合物包含如上一般性描述和在本文大类与小类中所述的本发明化合物，和适合于涂覆所述可植入装置的载体。适合的涂料和涂覆可植入装置的一般制备方法描述在美国专利6,099,562、5,886,026和5,304,121中。涂料通常是生物可相容的聚合材料，例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物和它们的混合物。涂料可以选择性地进一步被适合的氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合的表层所覆盖，以赋予组合物的控释特征。

本发明的另一方面涉及在生物样品或患者中调控CFTR活性(例如体外或体内)，该方法包括对患者给予或者使所述生物样品接触式I化合物或包含所述化合物的组合物。本文所用的术语“生物样品”非限制性地包括细胞培养物及其提取物；从哺乳动物或其提取物获得的活组织检查材料；和血液、唾液、尿、粪便、精液、泪液或其他体液或其提取物。

在生物样品中调控CFTR活性、例如CFTR，可用于本领域技术人员已知的多种目的。这类目的的实例包括但不限于生物与病理现象中的CFTR研究；和新的CFTR调控剂的对比评价。

在另一种实施方式中，提供了体外或体内调控阴离子通道活性的方法，包括使所述通道与式(I)化合物接触的步骤。在优选的实施方式中，该阴离子通道是氯化物通道或碳酸氢盐通道。在其他优选的实施方式中，该阴离子通道是氯化物通道。

按照替代的实施方式，本发明提供增加细胞膜中功能性CFTR数量的方法，包括使所述细胞与式(I)化合物接触的步骤。本文所用的术语“功能性ABC转运子”表示能够发挥转运活性的CFTR。

按照另一种优选的实施方式，通过测量跨膜电位来测量CFTR的活性。测量生物样品中跨膜电位的手段可以采用本领域已知的任意已知方法，例如光学膜电位测定法或其他电生理方法。

光学膜电位测定法采用如Gonzalez和Tsien所述的电压-敏感性FRET传感器(参见Gonzalez，J.E.and R.Y.Tsien(1995)″Voltagesensing by fluorescence resonance energy transfer in singlecells″Biophys J 69(4)：1272-80，and Gonzalez，J.E.and R.Y.Tsien(1997)″Improved indicators of cell membrane potentialthat use fluorescence resonance energy transfer″Chem Biol 4(4)：269-77)与测量荧光变化的仪器的组合，例如电压/离子探针读数器(VIPR)(参见Gonzalez，J.E.，K.Oades，等人(1999)″Cell-basedassays and instrumentation for screening ion-channel targets″Drug Discov Today 4(9)：431-439)。

这些电压敏感性测定法基于膜溶性、电压敏感性染剂DiSBAC₂(3)与荧光磷脂CC2-DMPE之间荧光共振能量转移(FRET)的变化，所述荧光磷脂连接于质膜的外部小叶，充当FRET供体。膜电位(V_m)的变化导致带负电的DiSBAC₂(3)跨越质膜重新分布，从CC2-DMPE转移的能量相应地改变。荧光发射的变化可以利用VIPR^TMII监测，它是一种整合的液体处理器和荧光检测器，被设计用来在96-或384-孔微量滴定平板中进行细胞类筛选。

另一方面，本发明提供药盒，用于体外或体内测量生物样品中CFTR或其片段的活性，包含：(i)包含式(I)化合物或任意上述实施方式的组合物；和(ii)关于如下内容的指导：a)使组合物与生物样品接触；和b)测量所述CFTR或其片段的活性。在一种实施方式中，药盒进一步包含关于如下内容的指导：a)使附加组合物与生物样品接触；b)在所述附加化合物的存在下测量所述CFTR或其片段的活性；和c)比较在附加化合物存在下的CFTR活性与在式(I)组合物存在下的CFTR密度。在优选的实施方式中，药盒用于测量CFTR的密度。

为了可以更加充分地理解本文所述发明，提供下列实施例。应当理解，这些实施例仅供说明，不以任何方式被解释为限制本发明。

具体实施方式

实施例1：

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(2)盐酸盐和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(1)盐酸盐

1-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-环丙烷羧酸

将苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-腈(5.10g 31.7mmol)、1-溴-2-氯-乙烷(9.000mL 108.6mmol)与苄基三乙基氯化铵(BTEAC，0.181g0.795mmol)的混合物加热至70℃，然后缓慢加入50％(wt./wt.)氢氧化钠水溶液(26mL)。将反应物在70℃下搅拌24小时，然后加热至回流(130℃浴温)达72小时。将深褐色/黑色反应混合物用水(400mL)稀释，用等体积的乙酸乙酯和二氯甲烷萃取两次。将碱性水溶液用浓盐酸酸化至pH小于一，过滤沉淀，用1M盐酸洗涤。将固体产物溶于二氯甲烷(400mL)，用等体积的1M盐酸洗涤两次，用饱和氯化钠水溶液洗涤一次。将有机溶液经硫酸钠干燥，蒸发至干，得到白色至轻微灰白色固体(5.23g，25.4mmol，80.1％)。ESI-MS m/z计算206.1，实测207.1(M+1)⁺。保留时间2.37分钟。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.07-1.11(m，2H)，1.38-1.42(m，2H)，5.98(s，2H)，6.79(m，2H)，6.88(m，1H)，12.26(s，1H)。

2-溴-1-(氯-苯基)-乙酮

在0℃下，将溴(3.8mL，65mmol)滴加到1-(2-氯-苯基)-乙酮(10g，65mmol)的乙酸(75mL)溶液中。然后将混合物升温至室温，搅拌过夜。蒸发混合物至干，无需进一步纯化即可用于下一步。

N′-[5-(2-氯-苯甲酰基)-噻唑-2-基]-N，N-二甲基-甲脒

将硫脲(4.95g，65.0mmol)与二甲氧基甲基-二甲基-胺(23.2g，195mmol)在甲醇(80mL)中的混合物加热至回流达30分钟。使混合物冷却后，加入三乙胺(19.8g，195mmol)和2-溴-1-(氯-苯基)-乙酮(来自上步的粗产物)的甲醇(50mL)溶液。将混合物加热至回流达4小时。除去溶剂，残余物直接用于下一工艺。

(2-氨基-噻唑-5-基)-(2-氯-苯基)-甲酮

将粗的N′-[5-(2-氯-苯甲酰基)-噻唑-2-基]-N，N-二甲基-甲脒溶于10％ HCl(150mL)，加热至70℃达4小时。过滤沉淀，用乙醚洗涤，然后悬浮在10％碳酸钠溶液(250mL)中。将悬液搅拌1小时，过滤沉淀，用乙醚洗涤，风干，得到(2-氨基-噻唑-5-基)-(2-氯-苯基)-甲酮，为褐色固体(8.5g，36mmol，55％从1-(2-氯-苯基)-乙酮计)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.27(s，1H)，7.41-7.58(m，4H)，8.37(s，2H).ESI-MS m/z计算238.0，实测239.3(M+1)⁺.

1-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-环丙烷羧酸[5-(2-氯-苯甲酰基)-噻唑-2-基]-酰胺

在氮下，将1-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-环丙烷羧酸(1.29g，6.28mmol)置于经过烘箱干燥的烧瓶中。加入亚硫酰氯(3mL)和N，N-二甲基甲酰胺(0.3mL)，将溶液搅拌2小时。在真空下除去过量亚硫酰氯，将所得固体悬浮在含有三乙胺(1.77mL，12.6mmol)的30mL无水1，4-二噁烷中。向该悬液缓慢加入悬浮在10mL无水1，4-二噁烷中的(2-氨基-噻唑-5-基)-(2-氯-苯基)-甲酮(1.50g，6.28mmol)。将所得悬液搅拌20分钟。过滤混合物，然后蒸发滤液至干。将粗产物溶于50mL二氯甲烷，用50mL 1N HCl、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤三次。有机层然后经硫酸钠干燥，蒸发至干，得到产物，为米色固体(1.51g，3.54mmol，56.4％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.20-1.24(m，2H)，1.54-1.57(m，2H)，6.01(s，2H)，6.88(d，J＝1.3Hz，2H)，6.98(s，1H)，7.48-7.52(m，1H)，7.56-7.60(m，3H)，7.77(s，1H)，11.98(s，1H).ESI-MS m/z计算426.0，实测427.3(M+1)⁺；保留时间3.46分钟。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)-N-(5-((2-氯苯基)(羟基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

将1-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-环丙烷羧酸[5-(2-氯-苯甲酰基)-噻唑-2-基]-酰胺(1.0g，2.3mmol)悬浮在150mL无水甲醇中。缓慢加入硼氢化钠(1.3g，35mmol)，将所得淡黄色溶液在室温下搅拌1小时。将粗产物蒸发至干，然后溶于少量乙酸乙酯。将有机层用等体积的1N盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤三次。有机层然后经硫酸钠干燥，过滤，蒸发至干，得到产物，为米色固体(0.64g，1.5mmol，63％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.10-1.14(m，2H)，1.41-1.45(m，2H)，6.00(s，2H)，6.14(s，1H)，6.86(d，J＝1.0Hz，2H)，6.95(t，J＝1.0Hz，1H)，7.14(d，J＝0.6Hz，1H)，7.29-7.34(m，1H)，7.38-7.43(m，2H)，7.71(d，J＝7.5Hz，1H)，10.93(s，1H)ESI-MS m/z计算428.1，实测429.5(M+1)⁺保留时间3.17分钟。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

将1-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-环丙烷羧酸[5-[(2-氯-苯基)-羟基-甲基]-噻唑-2-基]-酰胺(0.500g，1.17mmol)置于含有三乙胺(984μL，7.02mmol)的10mL无水二氯甲烷中。将混合物冷却至0℃，加入甲磺酰氯(364μL，4.68mmol)，随后立即加入(R)-吡咯烷-3-醇(945μL，11.7mmol)，将溶液在室温下搅拌10分钟。将粗产物用等体积的饱和碳酸氢钠水溶液继之以饱和氯化钠水溶液洗涤三次。有机层然后经硫酸钠干燥，蒸发至干。粗混合物经过柱色谱纯化(20-90％乙酸乙酯的己烷溶液，硅胶)，得到产物，为白色固体(194.2mg，0.390mol，33.3％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.09-1.15(m，2H)，1.41-1.44(m，2H)，1.54-1.63(m，1H)，1.93-2.77(m，5H)，4.20(s，1H)，4.72-4.77(m，1H)，4.96(d，J＝7.0Hz，1H)，6.00(s，2H)，6.85(d，J＝0.9Hz，2H)，6.95(s，1H)，7.24-7.29(m，1H)，7.37-7.43(m，3H)，7.76-7.80(m，1H)，11.03(s，1H)。ESI-MS m/z计算497.1，实测498.1(M+1)⁺；保留时间2.36分钟。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺盐酸盐

将HCl的乙醚溶液(0.1556mL，0.3112mmol，1M)缓慢加入到经过搅拌的1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(0.1550g，0.3112mmol)的100mL无水二氯甲烷溶液中。将溶液蒸发至干，得到纯产物(0.1654g，0.3095，99.45％)。ESI-MS m/z计算497.1，实测498.1(M+1)⁺；保留时间5.74分钟。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(1)盐酸盐和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(2)盐酸盐

利用来自Chiral Technologies的Chiralpak AS-H 4.6mmx250mm柱分离如上制备的1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺盐酸盐。

将20-25μL的2mg/mL 1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺盐酸盐的甲醇溶液注射上Chiralpak AS-H柱，用10％的50/50(v/v)乙醇与甲醇在己烷中的混合物洗脱，流速1.5mL/min。

在这些条件下第一洗脱产物的保留时间为8.2min(ChiralpakAS-H柱)。该产物在Chiralpak OJ-H 4.6mmx250mm柱上的保留时间为14.5min(25％的50/50(v/v)乙醇与甲醇在己烷中的混合物，流速1.0mL/min.)。

使用Chiralpak AS-H柱，第二产物洗脱于9.6min。该第二产物在Chiralpak OJ-H 4.6mmx250mm柱上的保留时间为10.9min(25％的50/50(v/v)乙醇与甲醇在己烷中的混合物，流速1.0mL/min.)。

实施例2

(R)-1-((2-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)环丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1S，2R，5S)-2-异丙基-5-甲基环己基碳酸酯

将1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(3.00g，6.02mmol)悬浮在含有N，N-二甲基吡啶-4-胺(2.20g，18.0mmol)的200mL无水二氯甲烷中。向悬液缓慢加入(1S，2R，5S)-2-异丙基-5-甲基环己基氯甲酸酯(1.91mL，9.00mmol)，将所得混合物加热至回流达16小时。使所得淡黄色溶液冷却至室温，用20mL甲醇稀释，然后蒸发至干。利用0-5％甲醇的二氯甲烷溶液梯度在330g硅胶上分离粗反应混合物，得到纯产物，为淡黄色固体(2.0087g，2.9529mmol，49.1％)。ESI-MS m/z计算679.3，实测680.5(M+1)⁺；保留时间3.88分钟。

(R)-1-((S)-(2-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)环丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1S，2R，5S)-2-异丙基-5-甲基环己基碳酸酯和(R)-1-((R)-(2-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)环丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1S，2R，5S)-2-异丙基-5-甲基环己基碳酸酯

利用来自Chiral Technologies的Chiralpak AD 21mm x250mm柱分离如上制备的(R)-1-(2-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)环丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1S，2R，5S)-2-异丙基-5-甲基环己基碳酸酯。将1mL的30mg/mL如上制备的化合物的异丙醇溶液注射上Chiralpak AD柱，用7.5％异丙醇在庚烷中的混合物洗脱，流速15mL/min。第一洗脱产物((R)-1-((S)-(2-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)环丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1S，2R，5S)-2-异丙基-5-甲基环己基碳酸酯)的保留时间为14.4min.(Chiralpak AD柱)；¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ0.79(d，J＝7.0Hz，3H)，0.85-1.84(m，18H)，1.86-2.04(m，3H)，2.23-2.34(m，1H)，2.43-2.51(m，1H)，2.62-2.69(m，1H)，2.73-2.78(m，2H)，4.45-4.54(m，1H)，5.04-5.08(m，1H)，5.12(s，1H)，5.99(s，2H)，6.82(d，J＝8.5Hz，1H)，6.93-6.97(m，2H)，7.25(t，J＝6.8Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.34-7.40(m，2H)，7.85(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)。ESI-MSm/z计算679.3，实测680.5(M+1)⁺；保留时间3.91分钟。

第二洗脱产物((R)-1-((R)-(2-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-6-基)环丙烷甲酰氨基)噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)吡咯烷-3-基(1S，2R，5S)-2-异丙基-5-甲基环己基碳酸酯)的保留时间为28.6min(Chiralpak AD柱)。ESI-MS m/z计算值679.3，实测值680.5(M+1)⁺；保留时间3.86分钟。

在含有(0.9153g，16.31mmol)氢氧化钾的182mL甲醇中，将来自前步的第一洗脱产物(1.20g，1.76mmol)在室温下搅拌4天。然后冷却溶液至0℃，向反应混合物缓慢加入16.31mL 1N HCl。将所得溶液蒸发至几乎干燥，然后在100mL二氯甲烷与100mL饱和碳酸氢钠水溶液中分配。分离各层，将有机层用等体积的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，继之以饱和氯化钠水溶液洗涤三次。有机层然后经无水硫酸钠干燥，浓缩，在120g硅胶上纯化，利用20-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱40分钟，得到纯产物1，为白色固体(0.70g，1.4mmol)。然后将该产物溶于少量二氯甲烷，向该溶液加入1.4mL 1M HCl的乙醚溶液。蒸发溶液至干，得到HCl盐，为白色固体(0.7818g，1.463mmol，83.1％)。ESI-MS m/z计算497.1，实测498.3(M+1)⁺；保留时间2.36分钟。该产物的保留时间在Chiralpak OJ-H 4.6mmx250mm柱上为14.5min(25％的50/50(v/v)乙醇与甲醇在己烷中的混合物，流速1.0mL/min)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(游离碱)1.07-1.15(m，2H)，1.40-1.44(m，2H)，1.51-1.65(m，1H)，1.95-2.08(m，1H)，2.32-2.58(m，4H)，4.10-4.31(m，1H)，4.76(d，J＝4.3Hz，1H)，4.95(s，1H)，6.00(s，2H)，6.85(s，2H)，6.95(d，J＝0.9Hz，1H)，7.26(t，J＝7.6Hz，1H)，7.34-7.44(m，3H)，7.78(d，J＝7.7Hz，1H)，11.02(s，1H)。

在含有(9.5mg，0.17mmol)氢氧化钾的15mL甲醇中，将来自前步的第二洗脱产物(0.1018g，0.1497mmol)在室温下搅拌3天。加入另一份氢氧化钾(64.8mg，1.15mmol)，将溶液搅拌另外3天。然后将溶液冷却至0℃，向反应混合物缓慢加入1.319mL 1N HCl。将所得溶液蒸发至几乎干燥，然后在10mL二氯甲烷与10mL饱和氯化钠水溶液之间分配。有机层然后经无水硫酸钠干燥，浓缩，在12g硅胶上纯化，利用20-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱40分钟。然后用含有2.5％三乙胺的乙酸乙酯冲洗柱子。合并纯的级分，蒸发至干，得到纯产物2，为白色固体(15.7mg，0.0315mmol)。然后将该产物溶于少量二氯甲烷，向该溶液加入0.0315mL 1M HCl。蒸发溶液至干，得到HCl盐，为白色固体(16.8g，0.0315mmol，21.0％)。ESI-MS m/z计算497.1，实测498.3(M+1)⁺；保留时间2.42分钟。在Chiralpak OJ-H 4.6mmx250mm柱上的保留时间为10.9分钟(25％的50/50(v/v)乙醇与甲醇在己烷中的混合物，流速1.0mL/min.)。

(R)-N-(2-氯亚苄基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺

向经过搅拌的无水二噁烷(500mL)加入2-氯苯甲醛(34.8g，247.5mmol)，将溶液在冰浴中冷却至0℃。向醛溶液加入(R)-2-甲基丙烷亚磺酰胺(30.0g，247.5mmol)的无水二噁烷(100mL)溶液。然后向该溶液缓慢加入Ti(OPr)₄(105.5g，371.3mmol)，同时在0℃下搅拌。使反应混合物升温至25℃，在25℃下搅拌18h，用NaHCO₃淬灭，然后通过短C盐管过滤，用EtOAc洗脱。从水层中分离有机层，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-25％EtOAc/己烷)，得到(R)-N-(2-氯亚苄基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺，为黄色液体(45.1g，75％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.05(s，1H)，8.06(dd，J＝7.9，1.1Hz，1H)，7.47-7.41(m，2H)，7.37-7.33(m，1H)，1.28(s，9H)。HPLC保留时间3.45min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 244.3m/z(MH⁺)。

叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯

向2-氨基噻唑(20.0g，199.7mmol)与(Boc)₂O(48.0g，219.7mmol)的无水THF(100mL)溶液加入DMAP(20mg)和Et₃N(36.0mL，260.0mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌18h，用CH₂Cl₂稀释，用0.1NHCl(X1)、盐水(X1)和H₂O(X1)洗涤。从水层中分离有机层，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-40％EtOAc/己烷)，得到叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯，为白色固体(20.7g，72％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ11.44(s，1H)，7.38(d，J＝3.6Hz，1H)，6.89(d，J＝3.6Hz，1H)，1.58(s，9H)。HPLC保留时间2.61min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 145.1m/z(MH⁺)。

(R)-N-(1-((2-叔丁氧基羰基氨基)噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)-甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺

将叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯(15.0g，75.0mmol)的无水THF(175mL)溶液搅拌和冷却至-78℃。向该溶液缓慢加入n-BuLi(2.5M己烷溶液：60.0mL，150.0mmol)。一旦n-BuLi的加入完成，使混合物升温至-40℃，在-40℃下维持1h，然后冷却至-78℃。经由套管向上述溶液缓慢加入预先冷却至-78℃的(R)-N-(2-氯亚苄基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺(10.0g，41.0mmol)的无水THF(175mL)溶液。将反应物在-78℃下保持0.5h，升温至室温，在室温下搅拌2h。然后用NH₄Cl水溶液淬灭反应，用EtOAc萃取粗产物(X3)。合并有机层，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-80％ EtOAc/己烷)，得到(R)-N-(1-((2-叔丁氧基羰基氨基)噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)-甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺的非对映体混合物，为黄色固体(15.1g，83％)，直接用于下一步。

(R)-N-(S)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺和(R)-N-(R)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺

向(R)-N-(1-((2-叔丁氧基羰基氨基)噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)-甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺(7.0g，15.8mmol)的CH₂Cl₂(28mL)溶液加入三氟乙酸(28mL)。将反应物在室温下搅拌3.5h。在真空下除去三氟乙酸和CH₂Cl₂。将粗产物重新溶于CH₂Cl₂，用NaHCO₃水溶液(20mL X 2)和水(20mL X 1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-5％EtOH/EtOAc)，得到(R)-N-(S)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺和(R)-N-(R)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺。

(R)-N-(S)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺：黄色固体，4.3g(79％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.53(dd，J＝7.6，1.8Hz，1H)，7.38(dd，J＝7.7，1.5Hz，1H)，7.32(td，J＝7.5，1.6Hz，1H)，7.27(td，J＝7.5，1.8Hz，1H)，6.84(d，J＝0.7Hz，1H)，6.17(s，2H)，6.07(d，J＝4.5Hz，1H)，4.17(d，J＝4.6Hz，1H)，1.26(s，9H)。HPLC保留时间2.11min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 344.0m/z(MH⁺)。

(R)-N-(R)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺：黄色固体，596mg，(11％)。HPLC保留时间2.35min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 344.0m/z(MH⁺)。

(S)-N-(5-((R)-叔丁基亚磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

向1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸(2.16g，10.5mmol)缓慢加入SOCl₂(2.3mL，31.5mmol)继之以DMF(3滴)。将反应混合物在60℃下加热0.5h。在真空下除去过量SOCl₂。然后将酰氯(10.5mmol)溶于无水CH₂Cl₂(16mL)，缓慢加入到冷的(温度～0℃)(R)-N-(S)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺(3.6g，10.5mmol)与Et₃N(7.33mL，52.6mmol)的无水CH₂Cl₂(16mL)溶液中。将反应混合物在25℃下搅拌18h，用CH₂Cl₂稀释，用1N HCl(50mL X 2)、NaHCO₃(50mL X 1)和盐水(50mL X 1)洗涤。从水层中分离有机层，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-80％ EtOAc/己烷)，得到(S)-N-(5-((R)-叔丁基亚磺酰氨基-(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，为黄色固体(4.7g，84％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.52(s，1H)，7.60(dd，J＝7.7，1.7Hz，1H)，7.35(dd，J＝7.8，1.4Hz，1H)，7.32(dd，J＝7.5，1.4Hz，1H)，7.29(d，J＝0.7Hz，1H)，7.23(dd，J＝7.6，1.7Hz，1H)，6.89(dd，J＝7.9，1.8Hz，1H)，6.86(d，J＝1.6Hz，1H)，6.81(d，J＝7.9Hz，6.21(d，J＝4.0Hz，1H)，6.01(s，2H)，3.93(d，J＝4.0Hz，1H)，1.75-1.66(m，2H)，1.27(s，9H)，1.22(t，J＝3.3Hz，2H)HPLC保留时间3.52min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 532.0m/z(MH⁺)。

(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

向(S)-N-(5-((R)-叔丁基亚磺酰氨基-(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷-酰胺(11.25g，21.19mmol)的MeOH(100mL)溶液加入4M HCl的二噁烷溶液(32mL，128mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1.5h，蒸发至干。将粗产物溶于CH₂Cl₂。将有机层用NaHCO₃水溶液(50mL X 2)、盐水(50mL X1)洗涤，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-2.5％Et₃N-EtOAc)，得到(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(6.5g，72％，＞99％ ee)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.51(s，1H)，7.60(dd，J＝7.7，1.7Hz，1H)，7.33(dd，J＝7.9，1.3Hz，1H)，7.29-7.25(m，1H)，7.20(td，J＝7.6，1.7Hz，1H)，7.16(d，J＝1.0Hz，1H)，6.89(td，J＝7.8，1.7Hz，2H)，6.80(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，5.79(s，1H)，1.86(bs，2H)，1.72-1.69(m，2H)，1.22-1.19(m，2H)HPLC保留时间2.66min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 428.1 m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

向(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(214mg，0.5mmol)的MeOH(2.5mL)溶液加入(R)-4-氯-3-二甲基-叔丁基羟基丁醛(142mg，0.6mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌5min，然后加入NaBH₄(28mg，0.75mmol)。继续在25℃下搅拌1h。将反应物用H₂O稀释，用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥。除去溶剂后，残余物经过柱色谱纯化(10-20％EtOAc-己烷)，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(162mg，53％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.45(s，1H)，7.81(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.25-7.22(m，2H)，7.13-7.09(m，1H)，6.85(td，J＝7.7，1.7Hz，2H)，6.77(d，J＝7.9Hz，1H)，5.98(s，2H)，5.05(s，1H)，4.36-4.31(m，1H)，2.81(dd，J＝9.8，6.2Hz，1H)，2.57-2.46(m，2H)，2.37(dd，J＝9.8，4.5Hz，1H)，2.08-1.99(m，1H)，1.73-1.62(m，3H)，1.17(t，J＝3.9Hz，2H)，0.85(s，9H)，-0.01(d，J＝6.9Hz，6H)。HPLC保留时间3.51min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 612.41m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(1)

将1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(61mg，0.1mmol)与TBAF(1M THF溶液，0.6mL，0.6mmol)的混合物在25℃下搅拌3h。将反应物用H₂O稀释，用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥。除去溶剂后，残余物经过柱色谱纯化(10-20％EtOAc-己烷)，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(1)(30mg，62％，＞99％ ee)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.00(s，1H)，7.79(dd，J＝7.8，1.5Hz，1H)，7.43-7.37(m，3H)，7.26(td，J＝7.6，1.4Hz，1H)，6.95(s，1H)，6.86(d，J＝0.7Hz，2H)，6.00(s，2H)，4.96(s，1H)，4.76(d，J＝4.4Hz，1H)，4.20(ddd，J＝6.6，3.4Hz，1H)，2.56-2.45(m，2H)，2.43-2.36(m，2H)，2.06-1.97(m，1H)，1.62-1.54(m，1H)，1.43(q，J＝3.7Hz，2H)，1.14-1.09(m，2H)。HPLC保留时间2.85min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 498.0m/z(MH⁺)。

(R)-N-(5-((R)-叔丁基亚磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

利用与(S)-N-(5-((R)-叔丁基亚磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺相同的方案，从(R)-N-(R)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(2-氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸制备(R)-N-(5-((R)-叔丁基亚磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.55(s，1H)，7.62(dd，J＝7.7，1.7Hz，1H)，7.37(d，J＝0.7Hz，1H)，7.34(dd，J＝7.8，1.4Hz，1H)，7.31-7.20(m，2H)，6.87(td，J＝8.4，1.7Hz，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.30(d，J＝2.8Hz，1H)，6.01(s，2H)，3.74(d，J＝2.8Hz，1H)，1.71-1.68(m，2H)，1.24(s，9H)，0.88(t，J＝6.9Hz，2H)。HPLC保留时间3.59min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS532.1m/z(MH⁺)。

(R)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

利用与(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺所述相同的方案，从(R)-N-(5-((R)-叔丁基亚磺酰氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺制备(R)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.47(s，1H)，7.60(dd，J＝7.7，1.7Hz，1H)，7.33(dd，J＝7.9，1.3Hz，1H)，7.27(td，J＝7.4，1.5Hz，1H)，7.20(td，J＝7.6，1.8Hz，1H)，7.16(d，J＝1.0Hz，1H)，6.89(td，J＝8.2，1.7Hz，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，5.79(s，1H)，1.89(s，2H)，1.72-1.70(m，2H)，1.22-1.19(m，2H)。HPLC保留时间2.52min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 428.2m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

利用与1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺相同的方案，从(R)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺。1H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.45(s，1H)，7.79(dd，J ＝8.1，1.5Hz，1H)，7.28-7.23(m，3H)，7.14-7.10(m，1H)，6.85(td，J＝8.1，1.7Hz，2H)，6.78(d，J＝7.9Hz，1H)，5.99(s，2H)，5.08(s，1H)，4.36-4.31(m，1H)，2.94(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)，2.65(td，J＝8.4，3.9Hz，1H)，2.56(q，J＝8.3Hz，1H)，2.16(dd，J＝9.9，4.6Hz，1H)，2.06-1.97(m，1H)，1.73-1.62(m，3H)，1.20-1.15(m，2H)，0.84(s，9H)，-0.01(d，J＝7.9Hz，6H)。HPLC保留时间3.51min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 612.41m/z(MH+)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(2)

利用与1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺所述相同的方案，从1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-3-二甲基-叔丁基甲硅烷基羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.01(s，1H)，7.79(dd，J＝7.8，1.6Hz，1H)，7.45-7.39(m，3H)，7.30-7.26(m，1H)，6.97(s，1H)，6.87(d，J＝0.9Hz，2H)，6.02(s，2H)，4.99(s，1H)，4.73(d，J＝4.3Hz，1H)，4.24-4.18(m，1H)，2.72(dd，J＝9.9，6.1Hz，1H)，2.62(q，J＝7.8Hz，1H)，2.37-2.32(m，1H)，2.22(dd，J＝9.9，3.2Hz，1H)，2.04-1.96(m，1H)，1.64-1.57(m，1H)，1.44(q，J＝3.8Hz，2H)，1.13(t，J＝3.8Hz，2H)。HPLC保留时间2.56min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 498.3m/z(MH⁺)。

利用下列流程A、流程B和流程C所述方法制备如下引用的本发明代表性化合物。

流程A：

a)Ti(OPr)₄，二噁烷或THF；b)(Boc)₂O，Et₃N，DMAP，THF；c)n-BuLi，-78℃，THF；d)50％TFA，CH₂Cl₂。

流程B：

流程C：

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸

将2-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)乙腈(5.10g，31.7mmol)、1-溴-2-氯-乙烷(9.000mL 108.6mmol)与苄基三乙基氯化铵(BTEAC，0.181g，0.795mmol)的混合物加热至70℃，然后缓慢加入50％(wt./wt.)氢氧化钠水溶液(26mL)。将反应物在70℃下搅拌88小时，然后加热至回流(130℃浴温)达24小时。将深褐色/黑色反应混合物用水(400mL)稀释，用等体积的乙酸乙酯和二氯甲烷萃取两次。将碱性水溶液用浓盐酸酸化至pH小于一，过滤沉淀，用1M盐酸洗涤。将固体产物溶于二氯甲烷(400mL)，用等体积的1M盐酸洗涤两次，用饱和氯化钠水溶液洗涤一次。将有机溶液经硫酸钠干燥，蒸发至干，得到白色至轻微灰白色固体(5.23g，80.1％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.07-1.11(m，2H)，1.38-1.42(m，2H)，5.98(s，2H)，6.79(m，2H)，6.88(m，1H)，12.26(s，1H)；HPLC保留时间2.37min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 206.1m/z(MH⁺)。

甲基2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-羧酸酯

将5-溴-2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯(11.8g，50.0mmol)与四(三苯膦)钯(0)[5.78g，5.00mmol]在含有乙腈(30mL)和三乙胺(10mL)的甲醇(20mL)中的溶液在一氧化碳气氛(55psi)和75℃(油浴温度)下搅拌15h。冷却反应混合物，过滤，蒸发滤液至干。残余物经过硅胶柱色谱纯化，得到甲基2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-羧酸酯(11.5g)，直接用于下一步。

(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)甲醇

方法A：在0℃下，将来自前步的甲基2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-羧酸酯(11.5g)溶于无水四氢呋喃(20mL)缓慢加入到氢化铝锂(4.10g，106mmol)的无水THF(100mL)悬液中。然后将混合物升温至室温，搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃，用水(4.1g)继之以氢氧化钠(10％水溶液，4.1mL)处理。过滤所得浆液，用THF洗涤。合并滤液，蒸发至干，残余物经过硅胶柱色谱纯化，得到(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)甲醇，为无色的油(7.2g，76％两步收率)。

方法B：在0℃下，向2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-甲醛(125g，0.67mol)的无水THF(400mL)溶液逐份加入NaBH₄(28g，0.74mol)。将混合物在0℃下搅拌1h，然后倒入500mL水中。混合物用乙酸乙酯萃取(200mL x 3)。有机相经Na₂SO₄干燥，在真空中浓缩，得到(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)甲醇，为无色的油(120g，95％)。

5-(氯甲基)-2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯

将(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)甲醇(120g，0.64mol)在净亚硫酰氯(500mL)中的溶液在25℃下搅拌2h。在真空中蒸馏除去过量亚硫酰氯。使残余物在饱和NaHCO₃(400mL)与二氯甲烷(200mL)之间分配。分离水层，用二氯甲烷萃取(300mL x 3)。合并有机层，干燥，过滤，在真空中浓缩，得到5-(氯甲基)-2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯(117.6g，89％)，直接用于下一步。

2-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)乙腈

将5-(氯甲基)-2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯(117.6g，来自上步的粗产物)与NaCN(84g，1.7mmol)在DMSO(800mL)中的混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入冰中，用EtOAc萃取(500mL x 3)。合并有机层，用无水Na₂SO₄干燥，在真空中浓缩，得到粗产物，经过柱色谱纯化(P.E./EtOAc 10∶1)，得到2-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)乙腈(77.8g，66％)。¹H NMR(300MHz、CDCl₃)δ7.06-7.07(m，3H)，3.75(s，2H)。

1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸的工艺制备1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸，始于2-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)乙腈。得到(86％)白色固体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.14-7.04(m，2H)，6.98-6.96(m，1H)，1.74-1.64(m，2H)，1.26-1.08(m，2H)；ESI-MS m/z计算242.04，实测241.58(M-1)。

叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯

向氨基噻唑(20.0g，199.7mmol)与(Boc)₂O(48.0g，219.7mmol)的无水THF(100mL)溶液加入DMAP(20mg)和Et₃N(36.0mL，260.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h，用DCM稀释，用0.1NHCl、H₂O和盐水洗涤。从水层中分离有机层，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-40％ EtOAc/己烷)，得到叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯，为白色固体(20.7g，72％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ11.44(s，1H)，7.38(d，J＝3.6Hz，1H)，6.89(d，J＝3.6Hz，1H)，1.58(s，9H)；HPLC保留时间2.61min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 145.1m/z(MH⁺)。

叔丁基4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯

向4-甲基噻唑-2-胺(25g，219mmol)与(Boc)₂O(53g，241mmol)的无水THF(110mL)溶液加入DMAP(250mg)和Et₃N(39.6mL，285mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。然后将反应物加热至回流达5h，直至根据LC-MS检测不再有原料存在。将反应物冷却至室温，过滤除去沉淀。将滤液浓缩，然后溶于CH₂Cl₂，用0.1N HCl水溶液、H₂O和盐水洗涤。有机层经MgSO₄干燥，浓缩。将残余物悬浮在己烷中，然后过滤，得到叔丁基4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯，为奶油色固体(30.9g，66％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.30(s，1H)，6.68(d，J＝1.0Hz，1H)，2.20(d，J＝0.9Hz，3H)，1.47(s，9H)；HPLC保留时间2.68min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 215.3m/z(MH⁺)。

(R)-二甲基2-羟基琥珀酸酯

向(R)-2-羟基琥珀酸(134g，1mol)的CH₃OH(500mL)溶液加入甲苯-4-磺酸(9.5g，0.05mol)。将混合物加热至回流过夜。蒸发甲醇，然后向残余物加入水(250mL)。将混合物用饱和NaHCO₃溶液碱化至pH 7-8，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，在减压下浓缩，得到(R)-二甲基2-羟基琥珀酸酯(140g，86％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ4.46(dd，J＝6Hz，4.8Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.64(s，3H)，3.42(s，1H)，2.69-2.85(m，2H)。

(R)-甲基3，4-二羟基丁酸酯

在20℃下，历经30min向(R)-二甲基2-羟基琥珀酸酯(140g，0.86mol)的THF(1400mL)溶液滴加Me₂S·BH₃(86mL，10M)。将混合物在20℃下搅拌30min。在10℃下加入NaBH₄(1.63g，42.9mmol)，在10℃下搅拌30min。将混合物升温至室温，搅拌1h。向混合物缓慢加入CH₃OH(200mL)，同时在冰水浴中冷却。蒸发所得混合物，得到(R)-甲基3，4-二羟基丁酸酯(130g，粗产物)。

(R)-甲基4-氯-3-羟基丁酸酯

向(R)-甲基3，4-二羟基丁酸酯(125.1g，0.93mol)的CH₂Cl₂(1.8L)溶液加入PPh₃(244.5g，0.93mol)，并且在冰水冷却下缓慢加入NCS(124.2g，0.93mol)。将混合物在5℃下搅拌20min，然后在室温下搅拌18h。蒸发溶剂后，残余物经过柱色谱纯化(P.E\E.A 20∶1-5∶1，梯度)，得到(R)-甲基4-氯-3-羟基丁酸酯(33g，26％三步收率)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ4.18-4.25(m，1H)，3.68(s，3H)，3.55-3.60(m，2H)，3.32-3.33(d，J＝4.2Hz，1H)，2.52-2.68(m，2H)。

(R)-甲基3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁酸酯

将(R)-甲基4-氯-3-羟基丁酸酯(15g，98.7mmol)的CH₂Cl₂(240mL)溶液与叔丁基-氯-二甲基-硅烷(17.82g，118.2mmol)、咪唑(33.6g，493.5mmol)和催化量DMAP(0.6g，4.92mmol)在室温N₂下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(150mL)中，滴加冷的HCl水溶液(0.5M)酸化至pH 6-7。水相用CH₂Cl₂萃取(3x 60mL)。合并有机相，用饱和Na₂CO₃溶液、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，浓缩，得到(R)-甲基3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁酸酯(30g，粗产物)。

(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛

在-78℃的N₂气氛下，向(R)-甲基3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁酸酯(27.9g，104.7mmol)的CH₂Cl₂溶液滴加DIBAL-H(120mL，1M甲苯溶液，120mmol)。将混合物在-78℃下搅拌4h。在-78℃下向反应混合物缓慢加入CH₃OH(80mL)。然后使温度逐渐升至室温。过滤混合物，用CH₂Cl₂洗涤滤饼。合并滤液，在减压下浓缩，经过柱色谱纯化(PE)，得到(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(13g，60％两步收率)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ9.80(t，J＝1.6Hz，1H)，4.35-4.42(m，1H)，3.53(dd，J＝11.1Hz，4.8Hz，1H)，3.46(dd，J＝12Hz，6.3Hz，1H)，2.63-2.82(m，2H)，0.87(s，9H)，0.12(s，3H)，0.08(s，3H)。

(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛

借助与(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛相同的途径制备(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛，始于(S)-2-羟基琥珀酸。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.72(dd，J＝1.6，2.2Hz，1H)，4.33-4.28(m，1H)，3.46(dd，J＝4.7，11.1Hz，1H)，3.39(dd，J＝6.4，11.1Hz，1H)，2.68(dd，J＝1.5，4.7Hz，1H)，2.62(dd，J＝2.3，6.8Hz，1H)，0.79(s，9H)，0.04(s，3H)，0.01(s，3H)。

(R)-N-(2-氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

向经过搅拌的无水二噁烷(500mL)加入2-氯苯甲醛(34.8g，247.5mmol)，将溶液在冰浴中冷却至0℃。向醛溶液加入(R)-2-甲基丙烷亚磺酰胺(30.0g，247.5mmol)的无水二噁烷(100mL)溶液。然后向溶液缓慢加入Ti(OPr)₄(105.5g，371.3mmol)，同时在0℃下搅拌。使反应混合物升温至室温，搅拌18h，然后用饱和NaHCO₃水溶液淬灭，通过短C盐管过滤，用EtOAc洗脱。从水层中分离有机层，经Na₂SO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-25％ EtOAc/己烷)，得到(R)-N-(2-氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，为黄色液体(45.1g，75％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.05(s，1H)，8.06(dd，J＝7.9，1.1Hz，1H)，7.47-7.41(m，2H)，7.37-7.33(m，1H)，1.28(s，9H)；HPLC保留时间3.45min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 244.3m/z(MH⁺)。

(R)-N-(3，4-二氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

借助用于(R)-N-(2-氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的工艺制备(R)-N-(3，4-二氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，始于3，4-二氯苯甲醛和(R)-2-甲基丙烷亚磺酰胺。得到(93％)黄色的油，放置后结晶。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.51(s，1H)，7.96(d，J＝1.9Hz，1H)，7.66(dd，J＝1.9，8.3Hz，1H)，7.57(d，J＝8.3Hz，1H)，1.27(s，9H)；HPLC保留时间3.72min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 278.1m/z(MH⁺)。

(R)-N-(2-氯-4-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

借助用于(R)-N-(2-氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的工艺制备(R)-N-(2-氯-4-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，始于2-氯-4-氟苯甲醛和(R)-2-甲基丙烷亚磺酰胺。得到(74％)无色固体。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.00(s，1H)，8.11(dd，J＝8.8，6.2Hz，1H)，7.23(dd，J＝8.4，2.5Hz，1H)，7.13-7.08(m，1H)，1.29(s，9H)；HPLC保留时间3.46min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 262.1m/z(MH⁺)。

(S)-N-(2-氯-4-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

借助用于(R)-N-(2-氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的工艺制备(S)-N-(2-氯-4-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，始于2-氯-4-氟苯甲醛和(S)-2-甲基丙烷亚磺酰胺。得到(78％)无色固体。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.00(s，1H)，8.11(dd，J＝6.2，8.8Hz，1H)，7.23(dd，J＝2.5，8.4Hz，1H)，7.13-7.08(m，1H)，1.29(s，9H)；HPLC保留时间3.49min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS262.1m/z(MH⁺)。

(R)-N-(4-氯-2-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

借助用于(R)-N-(2-氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的工艺制备(R)-N-(4-氯-2-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，始于4-氯-2-氟苯甲醛和(R)-2-甲基丙烷亚磺酰胺。得到(65％)无色固体。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.84(s，1H)，7.97-7.93(m，1H)，7.28-7.19(m，2H)，1.27(s，9H)；HPLC保留时间3.53min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 262.0m/z(MH⁺)。

(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯

搅拌叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯(2.0g，10.0mmol)的无水THF(25mL)溶液并冷却至-78℃。向该溶液缓慢加入n-BuLi(2.5M己烷溶液：8.0mL，20.0mmol)。一旦n-BuLi的加入完成，使混合物在-78℃下维持1h。经由套管向上述溶液缓慢加入预先冷却至-78℃的(R，E)-N-(2-氯-4-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.4g，5.4mmol)的无水THF(25mL)溶液。将反应物在-78℃下保持0.5h，升温至室温，用NH₄Cl水溶液淬灭，用EtOAc萃取(x 3)。合并有机层，经MgSO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(0-80％ EtOAc/己烷)，得到(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的非对映体混合物，为黄色固体(2.1g，84％)，无需进一步纯化即可使用。

(S)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯

借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的工艺制备(S)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯，始于叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯和(S)-N-(2-氯-4-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。粗产物经过柱色谱纯化，得到(S)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的非对映体混合物，为橙色-黄色固体(95％)，无需进一步纯化即可使用。

(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯

借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的工艺制备(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯，始于叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯和(R)-N-(4-氯-2-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。粗产物经过柱色谱纯化，得到(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的非对映体混合物(78％)，无需进一步纯化即可使用。

(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯

借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的工艺制备(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯，始于叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯和(R)-N-(3，4-二氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。粗产物经过柱色谱纯化(用70％ EtOAc/己烷洗脱过量叔丁基噻唑-2-基氨基甲酸酯，所需产物随后用0-15％MeOH/EtOAc洗脱)，得到(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的非对映体混合物，为黄色固体(92％)，无需进一步纯化即可使用。

(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯

借助用于(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯的工艺制备(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯，始于叔丁基4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯和(R)-N-(2-氯亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。使粗产物吸附于硅胶上，经过柱色谱纯化(20-80％ EtOAc/己烷)，得到(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯的非对映体混合物，为奶油色固体(90％)，无需进一步纯化即可使用。

(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

向(R)-叔丁基5-((2-氯-4-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯(1.6g，3.5mmol)的CH₂Cl₂(6mL)溶液加入TFA(6mL)。将反应物在室温下搅拌2h。在真空下除去TFA和CH₂Cl₂。将粗产物重新溶于CH₂Cl₂，用NaHCO₃水溶液洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩。使粗产物从EtOAc中重结晶，得到(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，为无色固体(672mg，53％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.56(dd，J＝8.7，5.9Hz，1H)，7.16(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.06(td，J＝8.2，2.6Hz，1H)，6.89(d，J＝0.8Hz，1H)，6.07(d，J＝4.6Hz，1H)，5.22(d，J＝2.9Hz，2H)，4.06(d，J＝4.6Hz，1H)，1.28(s，9H)；HPLC保留时间2.28min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS362.3m/z(MH⁺)。

(S)-N-((R)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

借助用于(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的工艺制备(S)-N-((R)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，始于(S)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯。粗产物经过柱色谱纯化(0-5％ EtOH/EtOAc)，得到所需产物(38％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.14(br s，2H)，7.54(dd，J＝5.7，8.7Hz，1H)，7.21(dd，J＝2.6，8.1Hz，1H)，7.13-7.08(m，1H)，6.73(d，J＝0.6Hz，1H)，6.00(d，J＝5.6Hz，1H)，4.67(d，J＝5.7Hz，1H)，1.26(s，9H)；HPLC保留时间2.23min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 362.3m/z(MH⁺)。

(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

借助用于(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的工艺制备(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，始于(R)-叔丁基5-((4-氯-2-氟苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯。粗产物经过柱色谱纯化(0-5％ EtOH/EtOAc)，得到橙色固体(87％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.62(br s，2H)，7.36(t，J＝8.1Hz，1H)，7.21(dd，J＝1.7，8.3Hz，1H)，7.16(dd，J＝1.9，10.1Hz，1H)，6.74(s，1H)，5.81(d，J＝5.9Hz，1H)，4.18(d，J＝5.9Hz，1H)，1.25(s，9H)；HPLC保留时间2.29min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 362.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

在-10℃下，向1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸(618mg，3.0mmol)的无水CH₂Cl₂(6mL)溶液缓慢加入(COCl)₂(0.3mL，3.4mmol)，继之以DMF(3滴)。将反应混合物在-10℃下搅拌0.5h。在真空下除去过量(COCl)₂。然后将酰氯(10.5mmol)溶于无水CH₂Cl₂(3mL)，缓慢加入到(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(648mg，1.8mmol)与Et₃N(1.8mL，6mmol)的无水CH₂Cl₂(3mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1h，用CH₂Cl₂稀释，用1N HCl、NaHCO₃和盐水洗涤。从水层中分离有机层，经MgSO₄干燥，浓缩。粗产物经过柱色谱纯化(40-60％ EtOAc/己烷)，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺，为无色固体(680mg，69％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.60(s，1H)，7.60(dd，J＝8.7，5.9Hz，1H)，7.28(d，J＝2.0Hz，1H)，7.13(dd，J＝8.3，2.6Hz，1H)，7.05(td，J＝8.2，2.6Hz，1H)，6.90(td，J ＝8.3，1.7Hz，2H)，6.83(d，J＝7.9Hz，1H)，6.18(d，J ＝4.3Hz，1H)，6.04(s，2H)，3.90(d，J＝4.3Hz，1H)，1.73(td，J＝5.4，2.0Hz，2H)，1.28(t，J＝7.1Hz，2H)，1.29(s，9H)。HPLC保留时间3.65min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS550.5m/z(MH⁺)。

N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。收率(77％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.63(s，1H)，7.59(dd，J＝8.7，5.9Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.21-7.11(m，4H)，7.06(td，J＝8.2，2.5Hz，1H)，6.18(d，J＝4.2Hz，1H)，3.92(d，J＝4.3Hz，1H)，1.82-1.79(m，2H)，1.32-1.25(m，11H)；HPLC保留时间3.90min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 586.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(S)-N-((R)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。收率(50％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.10(s，1H)，7.78(dd，J＝6.3，8.8Hz，1H)，7.45(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，7.35(td，J＝8.6，2.7Hz，1H)，7.03(s，1H)，6.95(s，1H)，6.86(s，2H)，6.45(d，J＝6.7Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.95(d，J＝6.5Hz，1H)，1.46-1.43(m，2H)，1.25-1.24(m，2H)，1.14(s，9H)；HPLC保留时间3.65min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 550.5m/z(MH⁺)。

N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(S)-N-((R)-(2-氨基噻唑-5-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。收率(50％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.38(s，1H)，7.78(dd，J＝6.2，8.8Hz，1H)，7.47-7.44(m，2H)，7.37-7.32(m，2H)，7.21(dd，J＝1.6，8.3Hz，1H)，7.04(s，1H)，6.45(d，J＝6.6Hz，1H)，5.95(d，J＝6.5Hz，1H)，1.54-1.50(m，2H)，1.22-1.21(m，2H)，1.14(s，9H)；HPLC保留时间3.90min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 586.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。收率(64％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.56(s，1H)，7.43(t，J ＝8.1Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.16(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)，7.08(dd，J＝2.0，10.0Hz，1H)，6.89(td，J＝8.0，1.7Hz，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01-5.99(m，3H)，3.90(d，J＝5.0Hz，1H)，1.73-1.70(m，2H)，1.28-1.23(m，11H)；HPLC保留时间3.69min，10-99％ CH₃CN，5min 流出；ESI-MS 550.5m/z(MH⁺)。

N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。收率(53％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.37(s，1H)，7.66(t，J＝8.3Hz，1H)，7.45-7.42(m，2H)，7.38(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H)，7.34(d，J＝8.3Hz，1H)，7.21(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)，7.11(s，1H)，6.33(d，J＝6.7Hz，1H)，5.89(d，J＝6.5Hz，1H)，1.55-1.52(m，2H)，1.24-1.22(m，2H)，1.13(d，J＝9.5Hz，9H)；HPLC保留时间3.93min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 586.5m/z(MH⁺)。

(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

向1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(659mg，1.2mmol)的MeOH(5mL)溶液加入4M HCl的二噁烷溶液(1.8mL，7.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1.5h，蒸发至干。将粗产物溶于CH₂Cl₂。将有机层用NaHCO₃水溶液(50mL x 2)、盐水(50mLx 1)洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩，得到(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，为无色固体，无需进一步纯化即可使用。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.48(br s，1H)，7.63(dd，J＝6.1，8.7Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.08(dd，J＝2.6，8.4Hz，1H)，6.99(td，J＝8.3，2.6Hz，1H)，6.91-6.86(m，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，5.78(s，1H)，3.80(s，2H)，1.74-1.67(m，2H)，1.30-1.22(m，2H)；HPLC保留时间2.67min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 446.3m/z(MH⁺)。

(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺。粗产物无需进一步纯化即可使用。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.35(s，1H)，7.65(dd，J＝6.1，8.7Hz，1H)，7.22-7.17(m，3H)，7.12-7.10(m，2H)，7.02(td，J＝8.3，2.6Hz，1H)，5.80(s，1H)，3.83(s，2H)，1.83-1.77(m，2H)，1.28-1.25(m，2H)；HPLC保留时间2.87min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 482.3m/z(MH⁺)。

(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺。粗产物经过柱色谱纯化(0-2.5％ Et₃N/EtOAc)，得到淡黄色固体(77％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.80(br s，1H)，7.80(dd，J＝6.4，8.8Hz，1H)，7.38(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，7.27(td，J＝8.5，2.7Hz，1H)，7.07(d，J＝0.9Hz，1H)，6.95(s，1H)，6.86(d，J＝0.9Hz，2H)，6.00(s，2H)，5.53(s，1H)，1.44-1.41(m，2H)，1.13-1.10(m，2H)；HPLC保留时间2.67min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 446.3m/z(MH⁺)。

(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((S)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(79％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.80(dd，J＝6.4，8.8Hz，1H)，7.43(d，J＝1.7Hz，1H)，7.38(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，7.34(d，J＝8.3Hz，1H)，7.27(t d，J＝8.5，2.6Hz，1H)，7.20(dd，J＝1.8，8.3Hz，1H)，7.07(d，J＝0.9Hz，1H)，5.53(s，1H)，1.52-1.49(m，2H)，1.21-1.19(m，2H)；HPLC保留时间2.91min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 482m/z(MH⁺)。

(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(79％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.48(s，1H)，7.47(t，J＝8.2Hz，1H)，7.14-7.12(m，2H)，7.05(dd，J＝2.0，10.1Hz，1H)，6.91-6.87(m，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，5.61(s，1H)，1.86(s，2H)，1.71(dd，J＝3.6，6.7Hz，2H)，1.22-1.19(m，2H)；HPLC保留时间2.71min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 446.3m/z(MH⁺)。

(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(88％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.20(br s，1H)，7.66(t，J＝8.3Hz，1H)，7.43(d，J＝1.7Hz，1H)，7.39-7.30(m，3H)，7.20(dd，J＝1.7，8.3Hz，1H)，7.09(s，1H)，5.45(s，1H)，1.52-1.49(m，2H)，1.22-1.20(m，2H)；HPLC保留时间2.94min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 482.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

向(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(1.2mmol)的MeOH(10mL)溶液加入(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(341mg，1.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5min。然后加入NaBH₄(68mg，1.8mmol)，继续在室温下搅拌1h。将反应物用H₂O稀释，用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥。除去溶剂后，残余物经过柱色谱纯化(10-20％ EtOAc/己烷)，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(446mg，59％两步收率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.45(s，1H)，7.79(dd，J＝8.6，6.3Hz，1H)，7.25(d，J＝6.4Hz，1H)，7.01-6.94(m，2H)，6.85(td，J＝8.3，1.7Hz，2H)，6.78(d，J＝7.9Hz，1H)，5.99(s，2H)，4.99(s，1H)，4.35-4.30(m，1H)，2.77(dd，J＝9.9，6.2Hz，1H)，2.51-2.48(m，2H)，2.36(dd，J＝9.9，4.3Hz，1H)，2.06-2.01(m，1H)，1.71-1.65(m，3H)，1.18(t，J＝3.0Hz，2H)，0.85(s，9H)，-0.01(d，J＝7.3Hz，6H)；HPLC保留时间3.59min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 630.6m/z(MH⁺)。

N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于(S)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(56％两步收率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.31(s，1H)，7.79(dd，J＝8.6，6.3Hz，1H)，7.25(d，J＝7.9Hz，1H)，7.13(td，J＝8.4，1.6Hz，2H)，7.06(d，J＝8.1Hz，1H)，7.01-6.95(m，2H)，4.99(s，1H)，4.35-4.30(m，1H)，2.76(dd，J＝9.8，6.2Hz，1H)，2.50(t，J＝6.9Hz，2H)，2.37(dd，J＝10.0，4.2Hz，1H)，2.08-1.98(m，1H)，1.79-1.64(m，3H)，1.24-1.19(m，2H)，0.85(s，9H)，-0.01(d，J＝7.4Hz，6H)；HPLC保留时间3.80min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 666.4m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺，始于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(99％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.01(s，1H)，7.77(dd，J＝6.4，8.8Hz，1H)，7.38-7.36(m，2H)，7.29(td，J＝8.5，2.7Hz，1H)，6.94(s，1H)，6.85(m，2H)，5.99(s，2H)，4.99(s，1H)，4.38-4.34(m，1H)，2.83(dd，J＝6.2，9.9Hz，1H)，2.58-2.54(m，1H)，2.46-2.42(m，1H)，2.14(dd，J＝3.7，9.9Hz，1H)，2.05-1.99(m，1H)，1.68-1.57(m，1H)，1.43-1.40(m，2H)，1.12-1.10(m，2H)，0.82(s，9H)，-0.00(s，3H)，-0.02(s，3H)；HPLC保留时间3.60min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 630.5m/z(MH⁺)。

N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于(R)-N-(5-(氨基(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(92％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.32(s，1H)，7.77(dd，J＝6.4，8.8Hz，1H)，7.43(d，J＝1.4Hz，1H)，7.39-7.30(m，4H)，7.20(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)，4.99(s，1H)，4.40-4.35(m，1H)，2.83(dd，J＝6.1，9.9Hz，1H)，2.60-2.52(m，1H)，2.46-2.41(m，1H)，2.15(dd，J＝3.7，9.9Hz，1H)，2.07-1.99(m，1H)，1.63-1.57(m，1H)，1.51-1.48(m，2H)，1.25-1.24(m，2H)，0.83(s，9H)，0.01(s，3H)，-0.02(s，3H)；HPLC保留时间3.79min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 666.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺，始于(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(89％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.48(s，1H)，7.64(t，J＝8.1Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.11(dd，J＝1.9，8.4Hz，1H)，6.99(dd，J＝2.0，9.9Hz，1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.80(d，J＝7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，4.91(s，1H)，4.35-4.33(m，1H)，2.83(dd，J＝6.2，9.8Hz，1H)，2.55-2.50(m，2H)，2.35(dd，J＝4.4，9.8Hz，1H)，2.07-2.02(m，1H)，1.93-1.91(m，1H)，1.73-1.70(m，2H)，1.22-1.20(m，2H)，0.86(s，9H)，0.01(s，3H)，0.00(s，3H)；HPLC保留时间3.59min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 630.5m/z(MH⁺)。

N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于(S)-N-(5-(氨基(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(90％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.33(s，1H)，7.63(t，J＝8.2Hz，1H)，7.43-7.32(m，5H)，7.20(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)，4.93(s，1H)，4.39-4.34(m，1H)，2.69(dd，J＝6.1，9.8Hz，1H)，2.49-2.45(m，2H)，2.34(dd，J＝3.9，9.9Hz，1H)，2.10-1.99(m，1H)，1.62-1.55(m，1H)，1.52-1.49(m，2H)，1.24-1.19(m，2H)，0.83(s，9H)，0.01(s，3H)，-0.01(s，3H)；HPLC保留时间3.79min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 666.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

将1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(365mg，0.58mmol)与TBAF(1M THF溶液，2.3mL，2.3mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用H₂O稀释，用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥。除去溶剂后，残余物经过柱色谱纯化(20-50％ EtOAc/己烷)，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(183mg，61％，＞99％de)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.41(s，1H)，7.72(t，J＝7.1Hz，1H)，7.20(d，J＝8.3Hz，2H)，6.95(t，J＝7.2Hz，2H)，6.80(td，J＝8.5，1.6Hz，2H)，6.73(d，J＝7.9Hz，1H)，5.94(s，2H)，4.95(s，1H)，4.25(s，1H)，2.75(s，1H)，2.58-2.56(m，1H)，2.42(s，1H)，2.28-2.27(m，1H)，2.12-2.11(m，1H)，1.71-1.61(m，3H)，1.19-1.10(m，2H)；HPLC保留时间2.68min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 516.2m/z(MH⁺)。

N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(77％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.36(s，1H)，7.80(t，J＝7.2Hz，1H)，7.30(d，J＝10.6Hz，1H)，7.17(td，J＝8.5，1.7Hz，2H)，7.11-7.01(m，4H)，5.05(s，1H)，4.35-4.33(m，1H)，2.84-2.83(m，1H)，2.67-2.64(m，1H)，2.50(dd，J＝10.0，4.9Hz，1H)，2.38-2.34(m，1H)，2.20(dd，J＝12.9，5.8Hz，1H)，1.87-1.76(m，3H)，1.30-1.23(m，2H)；HPLC保留时间2.91min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 552.4m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(61％，＞99％ de)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.01(s，1H)，7.80(dd，J＝6.4，8.8Hz，1H)，7.39-7.36(m，2H)，7.30(td，J＝8.5，2.6Hz，1H)，6.95(s，1H)，6.85(s，2H)，6.00(s，2H)，4.94(s，1H)，4.72(d，J＝4.3Hz，1H)，4.19-4.18(m，1H)，2.70-2.66(m，1H)，2.60-2.56(m，1H)，2.34-2.30(m，1H)，2.20(dd，J＝3.1，9.9Hz，1H)，2.00-1.95(m，1H)，1.60-1.57(m，1H)，1.44-1.41(m，2H)，1.14-1.08(m，2H)；HPLC保留时间2.72min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 516.3m/z(MH⁺)。

N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((R)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯-4-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(73％，＞99％ de)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.32(s，1H)，7.80(dd，J＝6.4，8.8Hz，1H)，7.43(d，J＝1.4Hz，1H)，7.39-7.28(m，4H)，7.20(dd，J＝1.6，8.3Hz，1H)，4.94(s，1H)，4.72(d，J＝4.3Hz，1H)，4.20-4.19(m，1H)，2.71-2.67(m，1H)，2.63-2.57(m，1H)，2.34-2.29(m，1H)，2.20(dd，J＝3.2，9.8Hz，1H)，2.02-1.93(m，1H)，1.62-1.54(m，1H)，1.54-1.48(m，2H)，1.23-1.17(m，2H)；HPLC保留时间2.94min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS552.5m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(37％，＞99％ de)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.48(s，1H)，7.62(t，J＝8.1Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.13(dd，J＝1.9，8.4Hz，1H)，7.01(dd，J＝2.1，9.9Hz，1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.92(s，1H)，4.34-4.28(m，1H)，2.86-2.80(m，1H)，2.63(d，J＝10.1Hz，1H)，2.50-2.46(m，1H)，2.34-2.23(m，1H)，2.21-2.12(m，1H)，1.80-1.70(m，4H)，1.24-1.18(m，2H)；HPLC保留时间2.77min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 516.3m/z(MH⁺)。

N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯-4-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺的工艺制备N-(5-((S)-(4-氯-2-氟苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺，始于N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(4-氯-2-氟苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(78％，＞99％ de)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.32(s，1H)，7.66(t，J＝8.1Hz，1H)，7.43(d，J＝1.5Hz，1H)，7.39-7.33(m，4H)，7.20(dd，J＝1.6，8.3Hz，1H)，4.88(s，1H)，4.75(d，J＝4.4Hz，1H)，4.21-4.16(m，1H)，2.57(dd，J＝6.1，9.8Hz，1H)，2.51-2.44(m，1H)，2.41-2.33(m，2H)，2.04-1.95(m，1H)，1.60-1.45(m，3H)，1.24-1.15(m，2H)；HPLC保留时间2.97min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 552.5m/z(MH⁺)。

(R)-N-((R)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺和(R)-N-((S)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

向(R)-叔丁基5-((2-氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基氨基甲酸酯(19.0g，41.6mmol)的CH₂Cl₂(83mL)溶液加入TFA(83mL)。将反应物在室温下搅拌1h。浓缩反应物，然后在CH₂Cl₂与饱和NaHCO₃水溶液之间分配。向水层加入1N NaOH溶液碱化至pH＞12，用CH₂Cl₂萃取。合并有机层，经MgSO₄干燥，浓缩。使粗产物吸附于硅胶，经过柱色谱纯化(70-100％ EtOAc/己烷。EtOAc含有2％ NH₄OH，搅拌以维持混合物)，得到(R)-N-((R)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺和(R)-N-((S)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，为两种非对映体的混合物(7.1g，47％)。第一洗脱产物(异构体A)(白色固体，3.0g，20％，＞99％ de)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.60(dd，J＝1.6，7.7Hz，1H)，7.38-7.22(m，3H)，6.15(d，J＝2.5Hz，1H)，4.94(s，2H)，3.87(d，J＝2.3Hz，1H)，2.34(s，3H)，1.27(s，9H)；HPLC保留时间3.08min，10-99％CH₃CN，15min流出；ESI-MS 358.3m/z(MH⁺)。第二洗脱产物(异构体B)(黄色蜡状固体，5.0g，33％.98％de)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.64(dd，J＝7.7，1.7Hz，1H)，7.36(dd，J＝7.8，1.4Hz，1H)，7.32-7.21(m，2H)，6.19(d，J＝1.8Hz，1H)，4.86(s，2H)，3.65(d，J＝1.2Hz，1H)，2.33(s，3H)，1.26(s，9H)；HPLC保留时间3.77min，10-99％ CH₃CN，15min流出；ESI-MS 358.3m/z(MH⁺)。

(R)-N-((R)-(2-氨基噻唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺和(R)-N-((S)-(2-氨基噻唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

借助用于(R)-N-((R)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺和(R)-N-((S)-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的工艺制备(R)-N-(S)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(3，4-二氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺和(R)-N-(R)-1-(2-氨基噻唑-5-基)-1-(3，4-二氯苯基)甲基)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺，始于(R)-叔丁基5-((3，4-二氯苯基)(1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基氨基甲酸酯。粗产物经过柱色谱纯化(5％EtOH/EtOAc洗脱异构体A，20％EtOH/EtOAc洗脱异构体B)。异构体A(黄色固体，5.67g，35％，＞99％de)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.49(d，J＝2.1Hz，1H)，7.44(d，J＝8.3Hz，1H)，7.25(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)，6.95(s，1H)，5.63(d，J＝3.5Hz，1H)，5.03(s，2H)，3.84(d，J＝3.5Hz，1H)，1.26(s，9H)；HPLC保留时间2.37min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS378.0m/z(MH⁺)。异构体B(黄色固体，3.64g，23％，96％de)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.50(d，J＝2.1Hz，1H)，7.44(d，J＝8.3Hz，1H)，7.25(dd，J＝2.1，8.5Hz，1H)，6.88(d，J＝0.5Hz，1H)，5.65(d，J＝2.5Hz，1H)，5.02(s，2H)，3.88(d，J＝2.3Hz，1H)，1.26(s，9H)；HPLC保留时间2.50min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 378.2m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

向1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸(864mg，4.2mmol)缓慢加入SOCl₂(916μL，12.6mmol)继之以DMF(3滴)。将反应混合物在60℃下加热0.5h。在真空下除去过量SOCl₂。然后将酰氯溶于无水CH₂Cl₂(6mL)，缓慢加入到(R)-N-((2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(异构体A)(1.35g，3.8mmol)与Et₃N(2.92mL，21.0mmol)的无水CH₂Cl₂(18mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌18h，用CH₂Cl₂稀释，用1N HCl溶液、饱和NaHCO₃水溶液和盐水洗涤。有机层经MgSO₄干燥，浓缩，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，为橙色固体(1.54g，75％)，无需进一步纯化即可使用。HPLC保留时间3.59min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 546.5m/z(MH⁺)。

借助用于异构体A的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(R)-N-((2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(异构体B)。使粗产物吸附于硅胶，经过柱色谱纯化(25-60％ EtOAc/己烷)，得到产物，为浅橙色固体(62％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.48(s，1H)，7.70(dd，J＝7.8，1.6Hz，1H)，7.34-7.20(m，3H)，6.88-6.79(m，3H)，6.26(d，J＝1.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，3.55(d，J＝1.7Hz，1H)，2.40(s，3H)，1.68(m，2H)，1.28-1.18(m，11H)；HPLC保留时间3.69min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 546.5m/z(MH⁺)。

N-(5-((R)-(2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和N-(5-((S)-(2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(R)-N-((2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(异构体A)。使粗产物吸附于硅胶，经过柱色谱纯化(25-100％ EtOAc/己烷)，得到橙色固体(55％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.36(s，1H)，7.67(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，7.35-7.21(m，3H)，7.17-7.07(m，3H)，6.21(d，J＝2.5Hz，1H)，3.80(d，J＝2.4Hz，1H)，2.41(s，3H)，1.80-1.70(m，2H)，1.26-1.18(m，11H)；HPLC保留时间3.81min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 582.3m/z(MH⁺)。

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸和(R)-N-((2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)(2-氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(异构体B)。使粗产物吸附于硅胶，经过柱色谱纯化(30-80％ EtOAc/己烷)，得到橙色固体(37％)¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.33(s，1H)，7.70(dd，J＝7.8，1.7Hz，1H)，7.35-7.20(m，3H)，7.16-7.07(m，3H)，6.26(d，J＝2.0Hz，1H)，3.55(d，J＝1.8Hz，1H)，2.39(s，3H)，1.79-1.71(m，2H)，1.28-1.21(m，11H)；HPLC保留时间3.98min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 582.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸、(COCl)₂和(R)-N-((2-氨基噻唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(异构体A)。粗产物经过柱色谱纯化(60-80％EtOAc/己烷)，得到黄色固体(2.70g，72％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.57(s，1H)，7.49(d，J＝2.1Hz，1H)，7.43(d，J＝8.3Hz，1H)，7.28-7.26(m，2H)，6.90(dd，J＝1.8，7.9Hz，1H)，6.87(d，J＝1.6Hz，1H)，6.82(d，J＝7.9Hz，1H)，6.02(s，2H)，5.74(d，J＝3.1Hz，1H)，3.73(d，J＝3.2Hz，1H)，1.73-1.71(m，2H)，1.28-1.21(m，11H)；HPLC保留时间3.80min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 566.2m/z(MH⁺)。

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷羧酸、(COCl)₂和(R)-N-((2-氨基噻唑-5-基)(3，4-二氯苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(异构体B)。粗产物经过柱色谱纯化(60-100％ EtOAc/己烷)，得到黄色固体(2.65g，71％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.59(s，1H)，7.52(d，J＝2.1Hz，1H)，7.42(d，J＝8.3Hz，1H)，7.29-7.26(m，2H)，6.90-6.86(m，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.02(dd，J＝1.4，1.9Hz，2H)，5.77(d，J＝1.8Hz，1H)，3.72(d，J＝1.9Hz，1H)，1.72(dd，J＝3.2，6.7Hz，2H)，1.28-1.22(m，11H)；HPLC保留时间3.91min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 566.4m/z(MH⁺)。

(R)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

向1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)(1.47g，2.69mmol)的MeOH(13mL)溶液加入4MHCl的二噁烷溶液(4mL，16mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后浓缩。将粗产物溶于CH₂Cl₂，用饱和NaHCO₃水溶液(x2)和盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，浓缩。使粗产物吸附于硅胶，经过柱色谱纯化(70-100％EtOAc/己烷)，得到N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，为橙色固体(540mg，45％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.80(d，J＝7.9Hz，1H)，7.40-7.36(m，2H)，7.27(m，1H)，6.94(s，1H)，6.85(m，2H)，6.00(s，2H)，5.56(s，1H)，2.19(s，3H)，1.40(m，2H)，1.10(m，2H)；HPLC保留时间2.65min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 442.5m/z(MH⁺)。

借助用于异构体A的工艺制备N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)(90％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.80(d，J＝7.8Hz，1H)，7.40-7.36(m，2H)，7.27(m，1H)，6.94(s，1H)，6.85(m，2H)，6.00(s，2H)，5.56(s，1H)，2.19(s，3H)，1.40(m，2H)，1.10(m，2H)；HPLC保留时间2.69min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 442.3m/z(MH⁺)。

(R)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(S)-N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)(83％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.81(m，1H)，7.41-7.32(m，4H)，7.27(m，1H)，7.18(dd，J＝1.7，8.3Hz，1H)，5.57(s，1H)，2.20(s，3H)，1.48(m，2H)，1.17(m，2H)；HPLC保留时间2.84min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 478.1m/z(MH⁺)。

借助用于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于N-(5-((2-氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)(65％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.81(m，1H)，7.41-7.32(m，4H)，7.28(m，1H)，7.18(dd，J＝1.7，8.3Hz，1H)，5.56(s，1H)，2.19(s，3H)，1.48(m，2H)，1.18(m，2H)；HPLC保留时间2.84min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 478.1m/z(MH⁺)。

(R)-N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和(S)-N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)。粗产物经过柱色谱纯化(0-20％ MeOH/DCM)(98％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.8(bs，1H)，7.70(d，J＝2.0Hz，1H)，7.58(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H)，7.16(d，J＝0.8Hz，1H)，6.96(s，1H)，6.86(d，J＝0.9Hz，2H)，6.01(s，2H)，5.29(s，1H)，1.44-1.42(m，2H)，1.13-1.10(m，2H)；HPLC保留时间2.81min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 462.3m/z(MH⁺)。

借助用于(异构体A)的工艺制备N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰氨基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)(定量收率)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.8(bs，1H)，7.70(d，J＝2.0Hz，1H)，7.58(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(dd，J＝2.0，8.4Hz，1H)，7.16(d，J＝0.7Hz，1H)，6.96(s，1H)，6.86(d，J＝0.9Hz，2H)，6.01(s，2H)，5.29(s，1H)，1.44-1.42(m，2H)，1.13-1.10(m，2H)；HPLC保留时间2.81min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 462.1m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

向N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)(450mg，1.02mmol)的MeOH(5mL)溶液加入(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(289mg，1.22mmol)。将反应混合物在室温下搅拌20min，然后加入NaBH₄(58mg，1.53mmol)。继续在室温下搅拌3h。大约1h后在反应溶液中开始生成沉淀/胶，因此加入MeOH(5mL)和CH₂Cl₂(2mL)以保持全部溶解。将反应物用H₂O稀释，用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩。使残余物吸附于硅胶，经过柱色谱纯化(0-25％EtOAc/己烷)，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，为淡黄色固体(470mg，74％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.40(s，1H)，7.83(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28-7.25(m，2H)，7.13(m，1H)，6.88-6.83(m，2H)，6.79(d，J＝7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.08(s，1H)，4.33(m，1H)，2.94(dd，J＝9.9，6.3Hz，1H)，2.67(td，J＝8.3，3.4Hz，1H)，2.53(q，J＝8.4Hz，1H)，2.37(s，3H)，2.17(dd，J＝9.9，4.7Hz，1H)，2.00(m，1H)，1.74-1.61(m，3H)，1.17(m，2H)，0.86(m，9H)，0.01(s，3H)，-0.01(s，3H)；HPLC保留时间3.45min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 626.5m/z(MH⁺)。

借助用于(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)和(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(81％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.41(s，1H)，7.86(dd，J＝7.2，0.7Hz，1H)，7.27-7.24(m，2H)，7.12(m，1H)，6.88-6.84(m，2H)，6.79(d，J＝7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.05(s，1H)，4.34(m，1H)，2.84(dd，J＝9.7，6.3Hz，1H)，2.56-2.46(m，2H)，2.37-2.32(m，4H)，2.03(m，1H)，1.74-1.62(m，3H)，1.18(m，2H)，0.86(m，9H)，0.02(s，3H)，0.00(s，3H)；HPLC保留时间3.54min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 626.3m/z(MH⁺)。

N-(5-((R)-((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和N-(5-((S)-((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)和(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(73％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.25(s，1H)，7.83(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28-7.25(m，2H)，7.16-7.11(m，3H)，7.06(d，J＝8.1Hz，1H)，5.08(s，1H)，4.33(m，1H)，2.94(dd，J＝9.9，6.2Hz，1H)，2.66(td，J＝8.3，3.7Hz，1H)，2.54(q，J＝8.3Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.18(dd，J＝9.9，4.7Hz，1H)，2.02(m，1H)，1.75(m，2H)，1.65(m，1H)，1.20(m，2H)，0.86(m，9H)，0.01(s，3H)，-0.01(s，3H)；HPLC保留时间3.69min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 662.1m/z(MH⁺)。

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于N-(5-(氨基(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)和(S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(93％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.26(s，1H)，7.85(dd，J＝8.1，1.7Hz，1H)，7.28-7.24(m，2H)，7.16-7.10(m，3H)，7.07(d，J＝8.2Hz，1H)，5.05(s，1H)，4.34(m，1H)，2.83(dd，J＝9.7，6.3Hz，1H)，2.55-2.47(m，2H)，2.36-2.33(m，4H)，2.04(m，1H)，1.79-1.63(m，3H)，1.21(m，2H)，0.86(m，9H)，0.02(s，3H)，0.00(s，3H)；HPLC保留时间3.73min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 662.1m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)和(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(85％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.47(s，1H)，7.51(d，J＝2.0Hz，1H)，7.35(d，J＝8.3Hz，1H)，7.30(dd，J＝2.0，8.3Hz，1H)，7.19(s，1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.80(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.47(s，1H)，4.34(m，1H)，2.84(dd，J＝6.2，9.8Hz，1H)，2.55-2.44(m，2H)，2.31(dd，J＝4.4，9.9Hz，1H)，2.17(s，1H)，1.73-1.64(m，3H)，1.26-1.19(m，2H)，0.91(s，3H)，0.86(s，6H)，0.02(s，6H)；HPLC保留时间3.66min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 646.5m/z(MH⁺)。

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于N-(5-(氨基(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)-1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)和(R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-4-氯丁醛(70％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.47(s，1H)，7.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.36(d，J＝8.3Hz，1H)，7.29(dd，J＝2.0，8.3Hz，1H)，7.19(s，1H)，6.90-6.85(m，2H)，6.80(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.51(s，1H)，4.34(m，J＝3.4，9.4Hz，1H)，2.88(dd，J＝6.2，10.0Hz，1H)，2.67-2.62(m，1H)，2.53(dd，J＝8.2，16.7Hz，1H)，2.17(dd，J＝4.4，10.0Hz，1H)，2.07-1.78(m，1H)，1.75-1.63(m，3H)，1.22-1.18(m，2H)，0.86(d，J＝2.5Hz，9H)，0.01(m，6H)；HPLC保留时间3.67min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 646.4m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

将1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)(400mg，0.64mmol)与TBAF(1M THF溶液，3.84mL，3.84mmol)的混合物在室温下搅拌5h。使反应物在H₂O与EtOAc之间分配。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩。使残余物吸附于硅胶，经过柱色谱纯化(25-75％EtOAc/己烷)，得到1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，为淡黄色固体(245mg，75％，＞99％ de)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.41(s，1H)，7.85(dd，J＝8.1，1.7Hz，1H)，7.29-7.26(m，2H)，7.14(m，1H)，6.88-6.84(m，2H)，6.79(d，J＝7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.07(s，1H)，4.30(m，1H)，2.79(td，J＝8.6，5.8Hz，1H)，2.63-2.56(m，2H)，2.36(s，3H)，2.29(td，J＝9.0，5.9Hz，1H)，2.15(m，1H)，1.85(d，J＝7.9Hz，1H)，1.78-1.65(m，3H)，1.18(m，2H)；HPLC保留时间2.70min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 512.5m/z(MH⁺)。

借助用于(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)(50％，＞99％de)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.44(s，1H)，7.84(dd，J＝7.8，1.5Hz，1H)，7.29-7.25(m，2H)，7.14(td，J＝7.6，1.7Hz，1H)，6.88-6.84(m，2H)，6.79(d，J＝7.9Hz，1H)，6.00(s，2H)，5.07(s，1H)，4.29(m，1H)，2.83(td，J＝8.6，5.0Hz，1H)，2.61(d，J＝10.1Hz，1H)，2.49(m，1H)，2.36-2.29(m，4H)，2.17(m，1H)，1.89(d，J＝7.9Hz，1H)，1.76-1.66(m，3H)，1.19(m，2H)；HPLC保留时间2.71min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS512.5m/z(MH⁺)。

N-(5-((R)-(2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺和N-(5-((S)-(2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)(72％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.28(s，1H)，7.84(dd，J＝8.1，1.7Hz，1H)，7.30-7.26(m，2H)，7.17-7.12(m，3H)，7.07(d，J＝8.2Hz，1H)，5.07(s，1H)，4.30(m，1H)，2.79(td，J＝8.6，5.7Hz，1H)，2.62-2.55(m，2H)，2.35(s，3H)，2.28(td，J＝9.0，5.9Hz，1H)，2.15(m，1H)，1.86(d，J＝7.9Hz，1H)，1.80-1.71(m，3H)，1.21(m，2H)；HPLC保留时间2.91min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 548.3m/z(MH⁺)。

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于N-(5-(((S)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(2-氯苯基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)-1-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)(85％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.28(s，1H)，7.82(dd，J＝7.7，1.5Hz，1H)，7.30-7.25(m，2H)，7.14(m，3H)，7.07(d，J＝8.2Hz，1H)，5.07(s，1H)，4.29(m，1H)，2.83(td，J＝8.7，5.1Hz，1H)，2.61(d，J＝10.0Hz，1H)，2.50(dd，J＝10.1，5.1Hz，1H)，2.36-2.29(m，4H)，2.17(m，1H)，1.88(d，J＝7.8Hz，1H)，1.82-1.70(m，3H)，1.22(m，2H)；HPLC保留时间2.94min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 548.3m/z(MH⁺)。

1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((R)-(3，4-二氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((S)-(3，4-二氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺

借助用于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((2-氯苯基)((S)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)-4-甲基噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体A)。粗产物经过柱色谱纯化(60-90％EtOAc/己烷)(74％，98％de)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.49(s，1H)，7.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.37(d，J＝8.3Hz，1H)，7.31(dd，J＝2.0，8.3Hz，1H)，7.20(s，1H)，6.90-6.86(m，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.48(s，1H)，4.32(m，1H)，2.82-2.76(m，1H)，2.59-2.57(m，1H)，2.51(q，J＝5.1Hz，1H)，2.33(td，J＝8.9，6.1Hz，1H)，2.16(dd，J＝5.3，12.5Hz，1H)，1.81-1.69(m，4H)，1.22(dd，J＝5.0，7.6Hz，2H)；HPLC保留时间2.81min，10-99％CH₃CN，5min流出；ESI-MS 532.2m/z(MH⁺)。

借助用于(异构体A)的工艺制备1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-((3，4-二氯苯基)((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)，始于1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(5-(((R)-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)吡咯烷-1-基)(3，4-二氯苯基)甲基)噻唑-2-基)环丙烷甲酰胺(异构体B)(78％，95％ de)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.49(s，1H)，7.52(d，J＝2.0Hz，1H)，7.37(d，J＝8.3Hz，1H)，7.30(dd，J＝2.0，8.3Hz，1H)，7.20(s，1H)，6.90-6.86(m，2H)，6.81(d，J＝7.9Hz，1H)，6.01(s，2H)，4.48(s，1H)，4.34-4.32(m，1H)，2.76(td，J＝8.5，6.0Hz，1H)，2.57(m，2H)，2.29(m，1H)，2.15(q，J＝7.2Hz，1H)，1.81-1.68(m，4H)，1.25-1.20(m，2H)；HPLC保留时间2.80min，10-99％ CH₃CN，5min流出；ESI-MS 532.2m/z(MH⁺)。

检测和测量化合物ΔF508-CFTR纠正性质的测定法

I)测定化合物ΔF508-CFTR调控性质的膜电位光学方法

光学膜电位测定法采用如Gonzalez和Tsien所述的电压-敏感性FRET传感器(参见Gonzalez，J.E.and R.Y.Tsien(1995)“Voltagesensing by fluorescence resonance energy transfer in singlecells”Biophys J 69(4)：1272-80，and Gonzalez，J.E.和R.Y.Tsien(1997)“Improved indicators of cell membrane potentialthat use fluorescence resonance energy transfer”Chem Biol 4(4)：269-77)与测量荧光变化的仪器的组合，例如电压/离子探针读数器(VIPR)(参见Gonzalez，J.E.，K.Oades，等人(1999)“Cell-basedassays and instrumentation for screening ion-channel targets”Drug Discov Today 4(9)：431-439)。

细胞培养

使用稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纤维细胞进行膜电位的光学测量。在175cm²培养烧瓶中，将细胞维持在37℃下、在5％CO₂和90％湿度中、和Dulbecco氏改性Eagle氏培养基中，其中补充有2mM谷氨酰胺、10％胎牛血清、1X NEAA，β-ME、1X青霉素/链霉素和25mMHEPES。就全部光学测定而言，将细胞按30,000/孔接种在384-孔涂有matrigel的平板中，在37℃下培养2小时，然后在27℃下培养24小时，供强化剂测定。就纠正(correction)测定而言，在27℃或37℃下将细胞用和不用化合物培养16-24小时。

B)测定化合物的ΔF508-CFTR调控性质的电生理测定法

1.Ussing室测定法

对表达ΔF508-CFTR的极化上皮细胞进行Ussing室实验，以进一步鉴定在光学测定法中鉴别的ΔF508-CFTR调控剂。将生长在CostarSnapwell细胞培养插件上的FRT^ΔF508-CFTR上皮细胞固定在Ussing室内(Physiologic Instruments，Inc.，San Diego，CA)，利用电压箝系统(Department of Bioengineering，University of Iowa，IA，and，Physiologic Instruments，Inc.，San Diego，CA)连续使单层短路。施加2mV脉冲测量跨上皮电阻。在这些条件下，FRT上皮证明有4KΩ/cm²或以上的电阻。将溶液维持在27℃下，通入空气。利用无电池插件纠正电极偏移电位和流体电阻。在这些条件下，电流反映顶端膜中Cl^-通过ΔF508-CFTR的流动。利用MP100A-CE界面和AcqKnowledge软件(v3.2.6；BIOPAC Systems，Santa Barbara，CA)获取数字方式的I_SC。

纠正化合物的鉴别

典型的方案采用基底外侧至顶端膜Cl^-浓度梯度。为了建立这种梯度，对基底外侧膜使用正常的套环，而顶端NaCl被等摩尔葡糖酸钠代替(用NaOH滴定至pH 7.4)，得到跨越上皮的大幅Cl^-浓度梯度。所有实验均是用完整单层进行的。为了充分活化ΔF508-CFTR，施加福司扣林(10μM)和PDE抑制剂IBMX(100μM)，继之以加入CFTR强化剂染料木素(50μM)。

正如在其他细胞类型中所观察到的，在低温下温育稳定表达ΔF508-CFTR的FRT细胞会增加CFTR在质膜中的功能密度。为了测定纠正化合物的活性，将细胞与10μM供试化合物在37℃下温育24小时，随后洗涤3次，然后记录。将cAMP-和染料木素-介导的化合物-处置细胞I_SC正常化为27℃和37℃对照，以活性百分比表示。与37℃对照相比，细胞用纠正化合物预温育显著增加cAMP-和染料木素-介导的I_SC。

为了测定纠正化合物增加质膜中功能性ΔF508-CFTR密度的活性，我们利用上述开孔-碎片-记录技术测量纠正化合物处理24小时后的电流密度。为了充分活化ΔF508-CFTR，向细胞加入10μM福司扣林和20μM染料木素。在我们的记录条件下，在27℃下温育24小时后的电流密度高于在37℃下温育24小时后的观测值。这些结果与低温温育对质膜中ΔF508-CFTR密度的已知影响是一致的。为了测定纠正化合物对CFTR电流密度的影响，将细胞与10μM供试化合物在37℃下温育24小时，与27℃和37℃对照比较电流密度(活性％)。在记录之前，将细胞用细胞外记录介质洗涤3次，以除去任何剩余的供试化合物。与37℃对照相比，用10μM纠正化合物预温育显著增加cAMP-和染料木素-依赖性电流。

表3阐述本发明示范性实施方式的EC50和相对功效。下表3中，适用下列含义：

EC50：“+++”表示＜2uM；“++”表示2uM至20uM之间；“+”表示25uM至60uM之间。

％功效：“+”表示＜25％；“++”表示25％至100％之间；“+++”表示＞100％。

表3

化合物号	EC 50	％功效
化合物号	EC 50	％功效	1	+++	+++
2	++	+++	1	+++	+++
2	++	+++	3	+++	+++
4	+++	+++	3	+++	+++
4	+++	+++	5	+++	+++
6	+++	+++	5	+++	+++
6	+++	+++	7	+++	+++
8	+++	+++	7	+++	+++
8	+++	+++	9	+++	+++
10	+++	+++	9	+++	+++
10	+++	+++	11	+++	+++
12	+++	++	11	+++	+++
12	+++	++	13	+++	+++

如上表3所述，本发明化合物意外地表现较好的纠正活性，正如上述测定法所测量的。

Claims

1.式I或式II化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

两个R^X一起构成环(a)：

X是CH₂、CF₂、CH₂-CH₂或CF₂-CF₂；

环A是3-7元单环的环烷基环；

R^AA和R^BB与氮原子一起构成被OR’取代的吡咯烷基环；

R是氢或者C1-C6脂族基；

Z是吸电子基团；而

q是0-3。

2.根据权利要求1的化合物，其中两个R^X一起构成环(a)，X是CH₂。

3.根据权利要求1的化合物，其中两个R^X一起构成环(a)，X是CF₂。

4.根据权利要求1的化合物，其中一个R^X是氢，另一个R^X是卤代基、CF₃、C1-C4烷基或-OC1-C4烷基。

5.根据权利要求1的化合物，其中一个R^X是氢，另一个R^X是4-甲氧基。

6.根据权利要求1-5任意一项的化合物，其中环A是环丙基、环戊基或环己基。

7.根据权利要求6的化合物，其中环A是环丙基或环戊基。

8.根据权利要求6的化合物，其中环A是环丙基。

9.根据权利要求1-8任意一项的化合物，其中R’是氢。

10.根据权利要求1-8任意一项的化合物，其中R’是C_1-6烷基。

11.根据权利要求1-10任意一项的化合物，其中R^AA和R^BB一起构成被OH取代基取代的吡咯烷基。

12.根据权利要求1-11任意一项的化合物，其中Z选自卤代基、CF₃或二氟亚甲二氧基。

13.根据权利要求1-12任意一项的化合物，其中q是0。

14.根据权利要求1-12任意一项的化合物，其中q是1。

15.根据权利要求1-14任意一项的化合物，其中R是氢。

16.根据权利要求1-12或14任意一项的化合物，其中式I或式II化合物包含一个或多个、优选全部下列特征：

两个R^X一起构成环(a)；

X是CH₂；

环A是环丙基；

R是氢；

q是1；而

Z是卤代基、CF₃或二氟亚甲二氧基。

17.根据权利要求1-16任意一项的化合物，其中式I中的R^AA和R^BB与氮原子一起构成下列环(i)：

18.根据权利要求1-16任意一项的化合物，其中式I中的R^AA和R^BB与氮原子一起构成下列环(ii)：

19.选自表1的化合物。

20.药物组合物，包含：

(i)根据权利要求1-19任意一项的化合物；和

(ii)药学上可接受的载体。

21.根据权利要求20的组合物，选择性地进一步包含一种附加成分选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、除本发明化合物以外的CFTR强化剂或CFTR纠正剂、或者营养剂。

22.增加细胞膜中功能性CFTR数量的方法，包括使所述细胞与根据权利要求1-19任意一项的化合物接触的步骤。

23.用于体外或体内测量生物样品中CFTR或其片段活性的药盒，包含：

(i)第一组合物，包含根据权利要求1-19任意一项的化合物；和

(ii)关于下列内容的说明书：

a)使该组合物与该生物样品接触；

b)测量所述CFTR或其片段的活性。

24.根据权利要求23的药盒，进一步包含关于下列内容的说明书：

a)使附加组合物与该生物样品接触；

b)在所述附加化合物的存在下测量所述CFTR或其片段的活性，和

c)比较在该附加化合物存在下的CFTR活性与在所述第一组合物存在下的CFTR密度。

25.根据权利要求24的药盒，其中该药盒用于测量CFTR的密度。

26.治疗患者牵涉CFTR的病症、疾病或疾患的方法，包括对所述患者给予根据权利要求1-19任意一项的化合物的步骤。

27.根据权利要求26的方法，其中所述病症、疾病或疾患选自囊性纤维化、遗传性肺气肿、遗传性血色素沉着、凝血-纤维蛋白溶解缺陷(例如C蛋白缺陷)、1型遗传性血管水肿、脂质加工缺陷(例如家族性高胆固醇血)、1型乳糜微粒血、β-脂蛋白血、溶酶体贮存疾病(例如I-细胞疾病/假性赫尔勒氏病)、粘多糖病、桑德霍夫病/泰-萨二氏病、克-纳二氏病II型、多内分泌病/高胰岛素血、糖尿病、拉伦侏儒、髓过氧化物酶缺陷、原发性甲状旁腺机能减退、黑素瘤、聚糖病CDG1型、遗传性肺气肿、先天性甲状腺机能亢进、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血、ACT缺陷、尿崩症(DI)、后叶激素运载蛋白性DI、肾原性DI、夏-马-图三氏综合征、佩-梅二氏病、神经变性疾病(例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、皮克氏病)、若干聚谷氨酰胺神经病学障碍(例如亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓与延髓肌肉萎缩、齿状红核苍白球丘脑下核萎缩和肌强直性营养不良)以及海绵状脑病(例如遗传性克-雅二氏病(由朊病毒蛋白加工缺陷引起)、法布里氏病和斯-施二氏综合征)、分泌性腹泻、多囊性肾疾病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、干眼病或斯耶格伦氏综合征。

28.具有式I’或式II’的化合物：

其中：

R^X、环A、Z和q是如权利要求1定义的；

L是选自C(O)或SO₂的连接基团；

p是0或1；

CA是适合的手性助剂。

29.根据权利要求28的化合物，其中CA、L、p和连接于此的氧原子一起是(+)-10-樟脑磺酸酯、(1S，4R)-(-)-ω-莰烷酸酯、(1R，2S，5R)-(-)-薄荷醇碳酸酯、(1S，2R，5S)-(+)-薄荷醇碳酸酯、(1R，2R)-1-苯基-2-环丙基酯或(3R)-四氢呋喃-3-碳酸酯。

30.生产式I或式II化合物的方法：

包括在第一适合的条件下使式R-1化合物与式I-A化合物反应生成所述式I化合物、或者与式II-A化合物反应生成所述式II化合物的步骤：

其中：

每个R^X独立地是氢、卤代基、CF₃、C1-C4烷基或-OC1-C4烷基；其条件是两个R^X不同时为氢；或者

两个R^X一起构成环(a)：

X是CH₂、CF₂、CH₂-CH₂或CF₂-CF₂；

环A是3-7元单环的环烷基环；

R^AA和R^BB与氮原子一起构成被OR’取代的吡咯烷基环；

R是氢或者C1-C6脂族基；

Z是吸电子基团；而

q是0-3；和

LG₁是第一适合的离去基团。

31.根据权利要求30的方法，其中LG₁选自烷基磺酸酯、芳基磺酸酯、卤化物、烷基羧酸酯。

32.根据权利要求30的方法，其中所述第一适合的条件包括第一适合的溶剂、第一适合的温度和适合的还原剂。

33.根据权利要求32的方法，其中所述第一适合的溶剂是极性或非极性、质子或非质子溶剂。

34.根据权利要求33的方法，其中所述溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、甲苯、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、二甲醚、乙腈、DMF、DMAC或NMP。

35.根据权利要求32的方法，其中所述第一适合的温度在约0℃至约110℃之间。

36.根据权利要求32的方法，其中所述适合的还原剂是金属硼氢化物或能够催化氢化的试剂。

37.根据权利要求36的方法，其中所述适合的还原剂选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、硼氢化锂、三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化钙、在适合的金属催化剂存在下的氢。

38.根据权利要求30的方法，其中所述式I-A和式II-A化合物分别是从式I-B和式II-B化合物生成的：

其中[CA]是适合的手性助剂；

39.根据权利要求38的方法，其中所述适合的手性助剂是烷基次硫酸基。

40.根据权利要求38的方法，其中所述适合的第二条件包括适合的质子酸和适合的第二溶剂。

41.根据权利要求40的方法，其中所述适合的第二溶剂选自极性非质子溶剂或质子溶剂。

42.根据权利要求41的方法，其中所述适合的第二溶剂是极性非质子溶剂。

43.根据权利要求42的方法，其中所述极性非质子溶剂选自二噁烷、四氢呋喃、二乙醚或二氯甲烷。

44.根据权利要求38的方法，其中所述式I-B化合物和式II-B化合物是如下生成的，分别使式I-C或式II-C化合物与式R-2化合物在第三适合的条件下反应：

其中：

R¹是氢或者第一适合的保护基团；而

[CA]是适合的手性助剂；

LG₂是第二适合的离去基团。

45.根据权利要求44的方法，其中LG₂选自卤化物、OC(O)烷基、五氟苯氧基，烷氧基、OCO₂烷基或羟基。

46.根据权利要求44的方法，其中R¹是氢。

47.根据权利要求44的方法，其中所述第三适合的条件包括第三适合的偶联剂和第三适合的溶剂。

48.根据权利要求47的方法，其中所述适合的偶联剂选自三乙胺、吡啶、DIEA、二甲基吡啶、HATU、TCPH或HBTU。

49.根据权利要求47的方法，其中所述第三适合的溶剂选自二氯甲烷、二噁烷、DMF、二氯乙烷或四氢呋喃。

50.根据权利要求44的方法，其中所述式I-C或式II-C化合物是从式R-3化合物的异构体混合物生成的：

其中：

PG₁是第二适合的保护基团；而

[CA]是适合的手性助剂；

所述方法包括两个步骤，其中所述两个步骤之一是利用适合的分离手段分离所述异构体混合物，所述两个步骤中的另一个是在第四适合的条件下转化PG₁为R¹。

51.根据权利要求50的方法，其中所述适合的分离手段包括适合的色谱手段。

52.根据权利要求51的方法，其中所述适合的色谱手段选自柱色谱或薄层色谱。

53.根据权利要求50的方法，其中所述适合的分离手段包括结晶方法。

54.根据权利要求50的方法，其中所述第四适合的条件包括适合的去保护剂和第四适合的溶剂。

55.根据权利要求54的方法，其中所述适合的去保护剂是三氟乙酸。

56.根据权利要求54的方法，其中所述第四适合的溶剂是极性非质子溶剂。

57.根据权利要求56的方法，其中所述极性非质子溶剂是二氯甲烷。

58.根据权利要求50的方法，其中所述式R-3化合物是从式R-4化合物和式R-5化合物生成的：

其中：

PG₁是第二适合的保护基团；

M是适合的金属阳离子；而

[CA]是适合的手性助剂；

59.根据权利要求58的方法，其中所述M选自Li⁺、Na⁺或Mg⁺⁺。

60.根据权利要求58的方法，其中PG₁选自烷基氨基甲酸酯、三氟乙酰基、三烷基甲硅烷基或新戊酰基。

61.根据权利要求60的方法，其中所述PG₁是BOC或三甲基甲硅烷基。

62.根据权利要求58的方法，其中所述第五适合的条件包括第五适合的溶剂和第五适合的温度。

63.根据权利要求62的方法，其中所述适合的温度为约-78℃。

64.根据权利要求62的方法，其中所述第五适合的溶剂是四氢呋喃。

65.根据权利要求30的方法，其中所述式R-1化合物是

66.根据权利要求30的方法，其中所述式I或式II化合物选自表1。