CN103822976B - 一种测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的测定方法，具体的说是一种测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的方法。向待测样品中加入甲醇混匀后，超声提取，离心，取上清液，经滤膜过滤，滤液进行液相色谱测定，并采用十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂，使用紫外检测器、二极管阵列检测器在190-400nm进行检测，采用甲醇-磷酸二氢钾溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.6-1.0mL/min，其中，流动相采用15～40%（v/v）甲醇-85～60%（v/v）的0.01mol/L～0.1mol/L磷酸二氢钾溶液。本发明分辨率高、灵敏度高、选择性好，样品处理方法简单，适宜化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的定性和定量分析。
Description
技术领域
本发明涉及4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的测定方法，具体的说是一种测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的方法。
背景技术
4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）其结构和水杨酸类似，是一种新型的药用美白成分，应用于化妆品中，起到美白作用，是化妆品的功效成分。4-甲氧基水杨酸钾可以协调角质代谢，纠正表皮不正常增生，促进黑色素的排出，达到皮肤光滑、增白；还可以阻断麦拉宁黑色素生成的源头，并具有提升自愈力，其与各类型美白产品搭配使用，能提高美白效果，具有良好的发展前景。中华人民共和国卫生部于2007年4月26日，颁发了《卫生部关于批准4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）作为化妆品原料使用的通知》（卫监督发【2007】141号），其中，限制使用条件，4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）在化妆品中最大允许使用浓度为3%。同时资生堂公司号称为其费时14年研究的第五代美白成分4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）。
目前，关于4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的检测方法，没有资料报道，没有检测方法，没有相关标准出台，而在去年的国家风险监测样品抽检中，检出了4-甲氧基水杨酸钾成分，针对上述情况，制定4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的检测方法非常必要。
发明内容
本发明目的是提供一种测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的方法。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的方法，将待测化妆品样品的甲醇提取液上样进行液相色谱测定，定性和/或定量对待测化妆品样品中的4MSK进行确定。
具体为：将待测化妆品样品的甲醇提取液上样进行液相色谱测定，采用4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）标准品的甲醇溶液作为参比上样进行液相色谱测定，定性确定待测化妆品样品是否含有4MSK，或者定量确定待测化妆品样品4MSK的含量；
所述样品分析采用外标法，根据其保留时间及光谱进行定性分析，根据其峰面积进行定量分析。
进行液相色谱测定时，采用C8柱或C18柱，使用紫外检测器、二极管阵列检测器在190-400nm进行检测，采用甲醇-磷酸二氢钾溶液流动相，梯度洗脱；其中，待测样品与甲醇按质量体积比为1:10-40（g/ml）;流动相采用15-40%（v/v）甲醇—85-60%（v/v）的浓度为0.01-mol/L-0.1mol/L磷酸二氢钾水溶液的混合液。
具体梯度洗脱流程为，25min内完成检测，0→5min：甲醇15%（v/v），0.02mol/L-0.1mol/L磷酸二氢钾85%（v/v）；5→20min：甲醇15%（v/v）→40%（v/v），0.02mol/L-0.1mol/L磷酸二氢钾85%（v/v）→60%（v/v）；20→25min：甲醇40%（v/v）→15%（v/v），0.02mol/L-0.1mol/L磷酸二氢钾60%（v/v）→85%（v/v）。
流速0.6-1.0mL/min，采用C18柱，C18柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂，温度25℃-40℃，进样量2-10uL，以甲醇-0.01-0.04mol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，梯度洗脱，收集10.9-20.0min min的组分即为4-甲氧基水杨酸钾。
或，流速0.6-1.0mL/min，采用C8柱，C8柱采用辛烷基硅烷键合硅胶为C8柱的填充剂，温度25℃-40℃，进样量2-10uL，以甲醇-0.01-0.04mol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，梯度洗脱，收集12.0-22.4min min的组分即为4-甲氧基水杨酸钾。
所述进行液相色谱测定时，采用十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂，C18柱规格为4.6mm*250mm，5μm，并且柱温25-40℃，进样体积为2-10uL；或采用辛烷基硅烷键合硅胶为C8柱的填充剂，C8柱规格为4.6mm*250mm，5μm，并且柱温25-40℃，进样体积为2-10uL。
所述使用紫外检测器或二极管阵列检测器在220nm进行检测。
甲醇提取液的制备：向待测化妆品样品中加入甲醇混匀后，超声提取，离心，取上清液，经滤膜过滤，滤液即为待测化妆品样品的甲醇提取液。
所述待测样品经甲醇溶解后，超声提取15-30min，而后以5000-8000r/min离心，离心时间10-20min。
所述待测样品为化妆品中的膏、霜、水剂、乳液或面膜；
所述以膏或霜为待测化妆品样品时，向待测样品中先加入纯净水溶解分散，再加甲醇混匀提取；
或者，所述以面膜为待测化妆品样品时，取样时挤压面膜取其液体，而后向待测样品中直接加入甲醇混匀提取；
或者，所述以水剂或乳液为待测样品时，向待测样品中直接加入甲醇混匀提取。
滤液进行液相色谱测定时，采用C18柱，C18柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂，C18柱规格为4.6mm*250mm，5μm，使用紫外检测器或二极管阵列检测器在220nm进行检测，采用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，梯度洗脱，温度25℃，流速0.8mL/min；
当甲醇体积含量为31.7%-33.2%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为68.3%-66.8%，收集对应的15.148min组分即为4-甲氧基水杨酸钾；另外，当甲醇体积含量为15%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85%，收集对应的3.048min组分为维生素C磷酸酯镁，收集3.281min组分为维生素C，收集对应的4.457min组分为β-熊果苷；当甲醇体积含量为15.0%-16.0%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85%-84%，收集对应的4.982min组分为曲酸；当甲醇体积含量为16.8%-17.8%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为83.2%-82.2%，收集对应的6.160min组分为氢醌；当甲醇体积含量为17.9%-19.3%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为82.1%-80.7%，收集对应的6.854min组分为烟酰胺；当甲醇体积含量为39.6%-37.2%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为60.4%-62.8%，收集对应的19.874min组分为苯酚。
或，进行液相色谱测定时，采用C8柱，C8柱采用辛烷基硅烷键合硅胶为C8柱的填充剂，C8柱规格为4.6mm*250mm，5μm，使用紫外检测器或二极管阵列检测器在220nm进行检测，采用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，梯度洗脱，温度25℃，流速0.8mL/min；
当甲醇体积含量为37.9%-39.0%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为62.1%-61.0%，收集对应的18.994min组分即为4-甲氧基水杨酸钾；另外，当甲醇体积含量为15%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85%，收集对应的3.093min组分为维生素C磷酸酯镁，收集对应的3.397min组分为维生素C；当甲醇体积含量为15.1%-15.9%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为84.9%-84.1%，收集对应的5.209min组分为β-熊果苷；当甲醇体积含量为16.6%～17.3%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为83.4%-82.7%，收集对应的6.111min组分为曲酸；当甲醇体积含量为19.7%-20.4%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为80.3%-79.6%，收集对应的8.016min组分为氢醌；当甲醇体积含量为20.5%-21.2%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为79.5%-78.8%，收集对应的8.395min组分为烟酰胺；当甲醇体积含量为15.0%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85.0%，收集对应的26.891min组分为苯酚。
本发明所具有的优点：本发明方法因4-甲氧基水杨酸钾与相邻目标化合物距离远，峰宽窄，因而分辨率高；通过选择合适的色谱柱，柱温，改变流动相配比方式，缩短响应时间因而灵敏度高；样品用甲醇直接提取或先加少量水再加甲醇提取，处理方法简便，适宜化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的定性和定量分析，填补了化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）测定方法的空白，而且在测定4-甲氧基水杨酸钾的同时，也检测了维生素C磷酸酯镁、维生素C、β-熊果苷、曲酸、氢醌、烟酰胺、苯酚七种美白成分，既检测了化妆品中美白禁用成分（氢醌、苯酚），又检测了美白功效成分（4-甲氧基水杨酸钾、维生素C磷酸酯镁、维生素C、β-熊果苷、曲酸、烟酰胺），因此，更好更全面地评价化妆品中美白成分，也为化妆品市场监管和检验提供有利的技术支持。
采用本发明的高效液相色谱测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）检出限为0.86ng，平均回收率为95.5%-96.5%，日内精密度RSD0.2%，日间精密度（稳定性）RSD0.6%。
附图说明
图1为本发明实施例提供的4-甲氧基水杨酸钾标准溶液的色谱图；（按照具体实施方式中3.色谱条件进行测定的色谱图）。
图2为本发明实施例提供的4-甲氧基水杨酸钾的光谱图。
图3为本发明实施例1提供的样品中含有4-甲氧基水杨酸钾的色谱图。
图4为实施例4含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在Inspire C8柱的色谱图。
图5为实施例5含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在Discovery RP Amide C16柱的色谱图。
图6为实施例6含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相为0.25%（v/v）甲酸的色谱图。
图7为实施例7含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相为0.25%（v/v）乙酸的色谱图。
图8为实施例8含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相质量浓度为1.1%三乙醇胺的色谱图。
图9为实施例9含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相为0.02mol/L磷酸氢二铵的色谱图。
图10为实施例10含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相为0.005mol/L磷酸二氢钾的色谱图。
图11为实施例11含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾的色谱图。
图12为实施例12含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相为0.04mol/L磷酸二氢钾的色谱图。
图13为实施例13含有4-甲氧基水杨酸钾的混合标准溶液在流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾的色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明
1仪器
Agilent Technologies1260型高效液相色谱系统，配紫外检测器G1314F，二极管阵列检测器G4212B；超声机AS3210A，天津奥特赛恩斯仪器有限公司；高速台式离心机GT10-1，北京时代北利离心机有限公司；pH计HI2221Calibration cheek PH/ORP Meter；
2试剂
甲醇，色谱纯，Merck公司；磷酸二氢钾，分析纯AR，批号：T20091117a，国药集团化学试剂有限公司；纯净水，娃哈哈饮用纯净水；标准品4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）批号：STBB3522V，含量99%，ALDRICH。
3.色谱条件
色谱柱：ODS—2HYPERSIL（十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂），C18柱规格为：250mm×4.6mm，5μm，批号11879。
检测器：G4212B-1260DAD二极管阵列检测器，G1314F-1260VWD紫外检测器。
检测波长：220nm。
流动相：采用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液梯度洗脱，25min内完成检测，0→5min：甲醇15%（v/v），0.02mol/L磷酸二氢钾85%（v/v）；5→20min：甲醇15%（v/v）→40%（v/v），0.02mol/L磷酸二氢钾85%（v/v）→60%（v/v）；20→25min甲醇40%（v/v）→15%（v/v），0.02mol/L磷酸二氢钾60%（v/v）→85%（v/v）。
流速：0.8mL/min
柱温：25℃
进样体积为：5uL
4.标准品储备液配制
精密称取0.1081g4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）标准品置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解，并用甲醇定容，摇匀，配制成浓度为1081ug/mL的标准液作为储备液，于4℃冰箱中存放备用。
5.标准工作液及线性回归方程
用甲醇将4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）储备液稀释成如下梯度浓度的标准系列：2.16ug/mL，4.32ug/mL、8.68ug/mL、17.30ug/mL、43.24ug/mL。标准工作液进行高效液相色谱定性定量分析按照上述3.色谱条件进行测定，，得到4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）线性回归方程（以峰面积Y为纵坐标，浓度X为横坐标），Y=25.22766X﹣16.32126相关系数R=0.9998。
另外，采用4.标准品储备液配制，分别制备维生素C磷酸酯镁(用纯净水溶解定容)、维生素C、β-熊果苷、曲酸、氢醌、烟酰胺、苯酚的储备液，用甲醇分别将储备液稀释成如表1的标准浓度系列，按3.色谱条件进行高效液相色谱定性定量分析，得到线性回归方程及相关系数（以峰面积Y为纵坐标，浓度X为横坐标）。
表1七种化合物的标准液浓度、线性方程及相关系数
6.混合标准溶液配制
取上述4-甲氧基水杨酸钾储备液浓度0.1mL、维生素C磷酸酯镁储备液浓度0.4mL、维生素C储备液浓度0.07mL、β-熊果苷储备液浓度0.1mL、曲酸储备液浓度0.03mL、氢醌储备液浓度0.1mL、烟酰胺储备液浓度0.1mL、苯酚储备液浓度0.1mL置于液相进样瓶中，作为混合标准溶液，按3.色谱条件进行高效液相色谱分析。结果显示：当甲醇体积含量为31.7%-33.2%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为68.3%-66.8%，收集15.148min组分即为4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）。（另外，当甲醇体积含量为15%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85%，收集3.048min组分为维生素C磷酸酯镁，收集3.281min组分为维生素C，收集4.457min组分为β-熊果苷，当甲醇体积含量为15.0%-16.0%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85%-84%，收集4.982min组分为曲酸，当甲醇体积含量为16.8%-17.8%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为83.2%-82.2%，收集6.160min组分为氢醌，当甲醇体积含量为17.9%-19.3%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为82.1%-80.7%，收集6.854min组分为烟酰胺，当甲醇体积含量为39.6%-37.2%，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为60.4%-62.8%，收集19.874min组分为苯酚），见图1。
本发明以随机市购的52批次各种剂型美白化妆品（包括精华乳、日霜、保湿水）作为样品进行检测，随机顺序编号。
实施例1
待处理样品为化妆品的精华乳（编号7）:准确称取精华乳样品两份平行样，每份0.5g（精确到0.01g，样品称样量）于15mL刻度离心管中，加入甲醇定容至10mL（定容体积），超声提取20min，5000r/min离心15分钟，取上清液，经0.45um滤膜过滤，滤液按照上述3.色谱条件进行液相色谱定性定量分析，结果检出4-甲氧基水杨酸钾（4MSK），收集15.375min的组分即为4-甲氧基水杨酸钾（4MSK），见图3。
样品含量计算：
X---样品浓度μg/mL，V---定容体积mL，A---样品称样量g
实施例1精华乳检出4-甲氧基水杨酸钾（4MSK），峰面积代入上述5.标准工作液及线性回归方程中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）的线性回归方程，得到浓度，代入含量公式，计算出精华乳4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）含量为0.8%。
实施例2
待处理样品为化妆品的日霜（编号18）；准确称取日霜样品两份平行样，每份1.0g（精确到0.01g）于50mL刻度离心管中，先加2mL纯净水溶解分散，再加入甲醇定容至20mL，超声提取30min，7000/min离心15分钟，取上清液，经0.45um滤膜过滤，滤液按照上述3.色谱条件进行液相色谱定性定量分析，结果未检出4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）。
实施例3
待处理样品为化妆品中的保湿水（编号32）；准确称取保湿水样品两份平行样，每份1.5g（精确到0.01g）于50mL刻度离心管中，加入甲醇定容至40mL，超声提取20min，5000rpm/min离心15分钟，取上清液，经0.45um滤膜过滤，滤液按照上述3.色谱条件进行液相色谱定性定量分析，结果未检出4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）。
本发明方法回收率、精密度、稳定性、检出限的测定：
取不含4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）保湿水样品（编号32），每份0.5g（精确到0.01g），于15mL刻度离心管中，分别添加浓度为1081ug/mL4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）标准储备液0.04mL和0.16mL，每个添加水平取2个平行样，甲醇定容至10mL，使样品中含4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）浓度分别为4.32ug/mL、17.30ug/mL，按实施1样品处理方法，按3.色谱条件上机进行液相色谱测定，结果显示低 点回收率为95.5%，高点回收率为96.5%（见表2）；每个平行样连续测定6次，得到日内精密度RSD0.2%（见表3）；连续测定3天，得到日间精密度（稳定性）RSD0.6%（见表4）。取4-甲氧基水杨酸钾标准储备液1081ug/mL浓度1.0mL置于100mL容量瓶中，用甲醇定容得标准溶液10.81ug/mL，取10.81ug/mL浓度0.16mL置于15mL不含4-甲氧基水杨酸钾保湿水样品（编号32）的刻度管中，用甲醇定容至10mL，得含4-甲氧基水杨酸钾标准溶液0.16ug/mL，按实施1样品处理方法，按3.色谱条件，进行液相色谱分析，当信噪比（S/N）为3时，测出检出限为0.86ng。由此可知本发明有较好的回收率、精密度、稳定性和检出限，适合实际样品的分析。
表24-甲氧基水杨酸钾（4MSK）回收率
表34-甲氧基水杨酸钾（4MSK）日内精密度
表44-甲氧基水杨酸钾（4MSK）日间精密度（稳定性）
由上述可见本发明具有准确、快速、灵敏度高、重复性好，样品处理方法简便，适宜化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）定性和定量分析。
采用与实施例1相同条件的检测条件（只是待测化妆品样品不同），在运用本发明检测的52批次各种剂型美白化妆品中，检出4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）2个批次，占3.8%，本发明以理论分析和大量实验，找到了一种利用高效液相色谱检测化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）方法，填补了化妆品中4-甲氧基水杨酸钾（4MSK）分析方面的空白。
实施例4
采用上述1-6的条件进行检测，与其中3.色谱条件不同之处在于采用的色谱柱：Inspire C8（辛烷基硅烷键合硅胶为C8柱的填充剂），C8柱规格为：250mm×4.6mm，5μm。
混合标准溶液检测结果如图4所示：证明C8柱的检测效果也很好，用此C8柱可以。
实施例5
采用上述1-6的条件进行检测，与其中3.色谱条件不同之处在于采用的色谱柱：Discovery RP Amide C16250mm×4.6mm，5μm。
混合标准溶液检测结果如图5所示：此柱4-甲氧基水杨酸钾峰形不对称，峰宽分辨率底，不适合。
实施例6
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相体积浓度0.25%（v/v）甲酸代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图6所示：甲酸有吸收，基线漂移，目标化合物4-甲氧基水杨酸钾基本不能检出。
实施例7
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相体积浓度0.25%乙酸（v/v）代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3.色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图7所示：乙酸有吸收，基线漂移，目标化合物4-甲氧基水杨酸钾峰型太宽而不能达到基线分离。
实施例8
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相质量浓度1.1%三乙醇胺（用磷酸调节PH=7.4）代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图8所示：三乙醇胺有吸收，基线噪音大，目标化合物4-甲氧基水杨酸钾没有检出。
实施例9
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相0.02mol/L磷酸氢二铵（PH=8.0）代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图9所示：目标化合物4-甲氧基水杨酸钾峰前沿有杂质，后部脱尾，流动相不适合应用。
实施例10
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相0.005mol/L磷酸二氢钾代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3.色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图10所示：目标化合物4-甲氧基水杨酸钾峰前沿，流动相浓度不适合应用。
实施例11
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相0.01mol/L磷酸二氢钾代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3.色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图11所示：目标化合物4-甲氧基水杨酸钾峰满足检测要求，流动相浓度适合应用。
实施例12
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相0.04mol/L磷酸二氢钾代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3.色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图12所示：目标化合物4-甲氧基水杨酸钾峰型对称，满足检测要求，流动相浓度适合应用。
实施例13
采用上述1-6的条件进行检测，采用的色谱柱：C18ODS—2HYPERSIL，250mm×4.6mm，5μm。
与其中3.色谱条件不同之处在于：流动相0.1mol/L磷酸二氢钾代替0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，其它条件：与上述3.色谱条件一致；
混合标准溶液检测结果如图13所示：目标化合物4-甲氧基水杨酸钾峰型对称，满足检测要求，但缓冲盐浓度高容易析出，使用时注意。
Claims (8)
1.一种测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：
将待测化妆品样品的甲醇提取液上样进行液相色谱测定，定性和/或定量对待测化妆品样品中的4MSK进行确定；
进行液相色谱测定时，采用C18柱或C8柱，使用紫外检测器或二极管阵列检测器在220nm进行检测，采用甲醇-磷酸二氢钾溶液流动相，梯度洗脱；其中，待测样品与甲醇按质量体积比为1:10-40g/ml；
具体梯度洗脱流程体积比为，0→5min：甲醇15％，0.02mol/L-0.1mol/L磷酸二氢钾85％；5→20min：甲醇15％→40％，0.02mol/L-0.1mol/L磷酸二氢钾85％→60％；20→25min：甲醇40％→15％，0.02mol/L-0.1mol/L磷酸二氢钾60％→85％；
流速0.6-1.0mL/min，采用C18柱，C18柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂，温度25℃-40℃，进样量2-10uL，以甲醇-0.01-0.04mol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，梯度洗脱，收集10.9-20.0min的组分即为4-甲氧基水杨酸钾及苯酚；或，流速0.6-1.0mL/min，采用C8柱，C8柱采用辛烷基硅烷键合硅胶为C8柱的填充剂，温度25℃-40℃，进样量2-10uL，以甲醇-0.01-0.04mol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，梯度洗脱，收集12.0-22.4min的组分即为4-甲氧基水杨酸钾。
2.按权利要求1所述的测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：具体为，
将待测化妆品样品的甲醇提取液上样进行液相色谱测定，采用4-甲氧基水杨酸钾(4MSK)标准品的甲醇溶液作为参比上样进行液相色谱测定，定性确定待测化妆品样品是否含有4MSK，或者定量确定待测化妆品样品4MSK的含量；
所述样品分析采用外标法，根据其保留时间及光谱进行定性分析，根据其峰面积进行定量分析。
3.按权利要求1或2所述的测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：
向待测化妆品样品中加入甲醇混匀后，超声提取，离心，取上清液，经滤膜过滤，滤液即为待测化妆品样品的甲醇提取液。
4.按权利要求3所述的测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：所述待测样品为化妆品中的膏、霜、水剂、乳液或面膜；
所述以膏或霜为待测化妆品样品时，向待测样品中先加入纯净水溶解分散，再加甲醇混匀提取；
或者，所述以面膜为待测化妆品样品时，取样时挤压面膜取其液体，而后向面膜挤压的液体中直接加入甲醇混匀提取；
或者，所述以水剂或乳液为待测样品时，向待测样品中直接加入甲醇混匀提取。
5.按权利要求3所述的测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：所述待测样品经甲醇溶解后，超声提取15-30min，而后以5000-8000r/min离心，离心时间10-20min。
6.按权利要求3所述的测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：所述滤液进行液相色谱测定，并采用十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂，C18柱规格为4.6mm*250mm，5μm；或采用辛烷基硅烷键合硅胶为C8柱的填充剂，C8柱规格为4.6mm*250mm，5μm。
7.按权利要求1或2所述的测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：所述使用紫外检测器、二极管阵列检测器在220nm进行检测。
8.按权利要求1所述的测定化妆品中4-甲氧基水杨酸钾的方法，其特性在于：
进行液相色谱测定时，采用C18柱，C18柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为C18柱的填充剂，C18柱规格为4.6mm*250mm，5μm，使用紫外检测器或二极管阵列检测器在220nm进行检测，采用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，梯度洗脱，温度25℃，流速0.8mL/min；当甲醇体积含量为31.7％-33.2％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为68.3％-66.8％，收集15.148min组分即为4-甲氧基水杨酸钾；另外，当甲醇体积含量为15％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85％，收集3.048min组分为维生素C磷酸酯镁，收集3.281min组分为维生素C，收集4.457min组分为β-熊果苷；当甲醇体积含量为15.0％-16.0％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85％-84％，收集4.982min组分为曲酸；当甲醇体积含量为16.8％-17.8％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为83.2％-82.2％，收集6.160min组分为氢醌；当甲醇体积含量为17.9％-19.3％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为82.1％-80.7％，收集6.854min组分为烟酰胺；当甲醇体积含量为39.6％-37.2％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为60.4％-62.8％，收集19.874min组分为苯酚；
或，进行液相色谱测定时，采用C8柱，C8柱采用辛烷基硅烷键合硅胶为C8柱的填充剂，C8柱规格为4.6mm*250mm，5μm，使用紫外检测器或二极管阵列检测器在220nm进行检测，采用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，梯度洗脱，温度25℃，流速0.8mL/min；
当甲醇体积含量为37.9％-39.0％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为62.1％-61.0％，收集18.994min组分即为4-甲氧基水杨酸钾；另外，当甲醇体积含量为15％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85％，收集3.093min组分为维生素C磷酸酯镁，收集3.397min组分为维生素C；当甲醇体积含量为15.1％-15.9％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为84.9％-84.1％，收集5.209min组分为β-熊果苷；当甲醇体积含量为16.6％-17.3％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为83.4％-82.7％，收集6.1116min组分为曲酸；当甲醇体积含量为19.7％-20.4％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为80.3％-79.6％，收集8.016min组分为氢醌；当甲醇体积含量为20.5％-21.2％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为79.5％-78.8％，收集8.395min组分为烟酰胺；当甲醇体积含量为15.0％，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液体积含量为85.0％，收集26.891min组分为苯酚。
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