CN102740870A - 用于预防和治疗高血压的组合物和组合物制备方法 - Google Patents

Abstract

本文公开了植物日本路边青的化合物、提取物和活性部位以及预防或治疗高血压的方法。本文提供的化合物可以配制为可用于公开的方法的药物组合物和药物。还提供了所述化合物和提取物在制备药物制剂和药物中的用途。

Description

用于预防和治疗高血压的组合物和组合物制备方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2009年6月12日提交的美国临时申请第61/186,709号和于2009年6月17日提交的美国临时申请第61/187,905号的优先权，通过引用将上述申请的全部内容并入本文。

发明背景

提供以下描述是为了有助于阅读者的理解，并不是承认提供的信息或引用的文献是本发明的现有技术。

美国心脏协会估计高血压影响美国约1/3的成年人，即七千三百万人。按照美国医学协会杂志的报道，估计高血压还影响约两百万的美国青少年和儿童。高血压已明显成为主要公众健康问题。无并发症的高血压通常没有任何症状，因此高血压被称为“超级无声杀手”。高血压可以悄悄地进展并最终发生数种潜在致死并发症中的任意一种或多种，例如心脏病发作或中风。心脏病发作或中风是西方国家中的首要死因并且现在已成为很多亚洲国家中的首要死因。由于寿命的延长和诸如肥胖的影响因素的流行，高血压已成为世界范围内高度普遍的心血管风险因素。

尽管当今治疗技术高速发展，目前可用的例如血管扩张剂、β-阻断剂、利尿剂等的高血压药物和治疗方式仅能在持续服药下提供血压的适当控制和症状改善，目前还没有药物或治疗策略被认为可以对高血压提供治愈性治疗的效果。目前的治疗药物和方法仅能减轻高血压的症状或延缓其恶化速度。因此，高血压目前仍然是不可治愈的并且无法得到有效的控制。

发明概述

一方面，本发明提供治疗或预防哺乳动物个体中的高血压的方法，所述方法包括给予有需要的个体有效量的日本路边青(Geum japonicum)的有机提取物(OEGJ)。在一个实施方案中，与未给予OEGJ的个体相比，给予OEGJ的个体中小动脉的外周阻力系统性降低。在一个实施方案中，小动脉的外周阻力是通过器官或组织中的侧支血管形成而降低。在一个实施方案中，OEGJ诱导在小动脉阻力已经增加了的器官或组织中形成侧支血管，从而使这些器官和组织的外周阻力降低。在一个实施方案中，与未给予OEGJ的个体相比，所述个体的血压降低。在一个实施方案中，所述哺乳动物个体是人。

在一个实施方案中，给予的OEGJ的量为约0.01mg至约10g提取物/千克体重/天。在一个实施方案中，给予的OEGJ是剂量单位形式。在一个实施方案中，给予的OEGJ是包含药学可接受的载体的剂量单位形式。在一个实施方案中，OEGJ通过口服给药。在一个实施方案中，OEGJ通过皮下注射、肌内注射或静脉输注进行给药。

在一个实施方案中，OEGJ是日本路边青的低级烷基醇溶剂提取物。在一个实施方案中，所述低级烷基醇具有1-6个碳原子。在一个实施方案中，所述低级烷基醇是乙醇。在一个实施方案中，所述低级烷基醇是甲醇。

另一方面，本发明提供用于治疗或预防哺乳动物个体中的高血压的药物组合物，包含有效量的日本路边青有机提取物(OEGJ)和药学可接受的赋形剂。

另一方面，本发明提供试剂盒，其包含有效量的日本路边青有机提取物(OEGJ)和药学可接受的载体、容器和表明该药物组合物对患高血压(hypertension)或高血压(high blood pressure)的人有益的说明书。

附图简要描述

图1是显示OEGJ诱导的血管内皮细胞(HUVEC)分化的显微图片。图(a)：介质处理的细胞显示出增殖，但没有分化的迹象。图(b)：OEGJ(30μg/ml)处理增强内皮细胞增殖(根据MTT测定，多30-50％的细胞)。图(c)：OEGJ(60μg/ml)处理的细胞显示出细长和折光性好的细胞形态，这是血管内皮细胞分化的特征。图(d)：OEGJ(180μg/ml)处理的细胞表现出薄且细长的表型，并形成管腔样结构。

图2提供的数据显示出OEGJ治疗降低2VO大鼠模型的血压。图(a)：在2VO结扎后6周测量介质处理的大鼠时，2VO结扎后的血压升高(154.25±3.95mmHg)。图(b)：相比之下，在结扎后6周测量OEGJ治疗的大鼠时，由于2VO而升高的血压被降低(135±2.14mmHg)。

图3显示出停止OEGJ治疗后2周，2VO脑部中降低的血管外周阻力的多普勒超声评价。通过测量实验动物的基底动脉来评价脑血流量。横轴表示时间，纵轴表示血液流速。每个信号对应于1个心动周期。A：实时二维图像显示出介质处理的动物中纵向截面的基底动脉(上图)和从基底动脉记录的多普勒频移信号(下图)。B：实时二维图像显示出OEGJ治疗的动物纵向截面的基底动脉(上图)和从基底动脉记录的多普勒频移信号(下图)。虽然OEGJ治疗动物的血压(128mmHg)低于介质处理动物中显著升高的血压(148mmHg)，但是OEGJ治疗组的脑血流量(21.1ml/分钟)显著高于介质处理对照组(14.6ml/分钟)。根据公式血压(BP)/血流量(BF)＝血管外周阻力，在正常组和对照组之间几乎未观察到外周阻力的差异，然而，与介质处理的2VO动物相比，OEGJ治疗组的阻力低43％，提示有新的侧支动脉的生成，血管计数定量分析表明，OEGJ治疗的脑的血管截面积增加了37.4％，并提供多于介质处理的2VO动物约30.8％的脑部供血。

图4T，代表性的OEGJ治疗的2VO大鼠s额叶皮质的血管(约61.7±20.3/HPF)显著多于介质处理的对照2VO大鼠(C)的血管(38.5±12.6/HPF)

图5显示2VO动物模型的血压和脑血流。BP代表血压。基底CBFV代表通过基底动脉的脑血流量。Nor代表正常对照大鼠。Mod代表介质处理的2VO大鼠。OEGJ代表OEGJ治疗的2VO大鼠。

图6显示右侧颈动脉部分结扎(60％)的SD大鼠的血压和脑血流。(BP)代表血压；(CBFV)代表总脑血流量；(对照)代表介质处理的模型大鼠；(治疗)代表OEGJ治疗的模型大鼠。OEGJ治疗显著增加了通过基底动脉的脑血流，同时保持正常血压。相比之下，介质处理的大鼠中通过基底动脉的脑血流显著低于OEGJ治疗的大鼠，同时血压升高。

图7显示APP小鼠的血压。(OEGJ)代表OEGJ治疗的APP小鼠；(对照)代表介质处理的APP小鼠。与介质处理的APP小鼠相比，OEGJ治疗使APP小鼠的血压降低约10％，达到正常水平。

发明详细描述

在各个方面，本发明提供用于预防或治疗高血压的化合物、提取物和方法。本文提供的化合物可以配制为可用于公开的方法的药物组合物和药物。还提供了所述化合物和提取物在制备药物制剂和药物中的用途。

应当理解，为了提供对本发明的实质性理解，下文以不同详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方案、变化和特征。以下术语在全文中按下文所述使用，除非上下文明确指明另外情况。

本文中，试剂或药物对个体的“给药”包括将化合物引入或递送至个体以行使化合物预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、胃肠外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)、直肠或局部给药。给药包括自给药和由他人给药。

本文所用的术语组合物的“有效量”或“药学有效量”或“治疗有效量”是足以实现所需治疗和/或预防效果的量，例如，实现了所治疗疾病相关的症状的预防或减少的量。给予个体的组合物的量将取决于疾病的类型和严重程度以及个体的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。其还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些因素以及其它因素能确定合适的剂量。本发明的组合物也可以与一种或多种其它治疗化合物联合给药。

在没有特别指明的情况下，本发明所用的缩写“OEGJ”表示下文所述的植物日本路边青的有机溶剂提取物。

本文所用的术语“疾病”或“医学疾病状态”可交换使用，并且包括但不限于表现为一种或多种需要治疗和/或预防的身体和/或心理症状的任何疾病状态或疾病，并且包括之前鉴定出的和新近鉴定出的疾病和其它病症。例如，医学疾病状态可以是高血压。

本文所用的术语“个体”包括任何哺乳动物个体，例如人，但也可以是动物，例如，家畜(例如，狗、猫等)，农畜(例如，牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)。

本文所用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“缓解”是指治疗性处理以及预防性(prophylactic)或预防性(preventative)措施，其目的是预防或延缓(减轻)所针对的病理疾病状态或病症。如果个体按照本发明的方法接受了治疗剂后，该个体表现出具体疾病或疾病状态的一种或多种指征和症状的可观察到的和/或可测定的减少或缺失，则认为该个体被成功“治疗”了病症。

本文所用的病症或疾病状态的“预防(prevention)”或“预防(preventing)”是指在统计学样品中，相对于未处理的对照样品，化合物能减少处理的样品中病症或疾病状态的发生，或者相对于未处理的对照样品，化合物能延缓病症或疾病状态的一种或多种症状的发作或降低其严重程度。

本发明的组合物

本发明提供利用来自多种植物的试剂和/或提取物和化合物以及该化合物的衍生物治疗或预防高血压的方法，所述植物包括日本路边青。在一些实施方案中，所述试剂是日本路边青的提取物，例如日本路边青的有机提取物。在具体实施方案中，所述试剂是日本路边青的甲醇或乙醇提取物或其活性部位。本发明的试剂可以是含有一种或多种赋形剂、载体或填充剂的药物组合物的一部分。在一个实施方案中，所述药物组合物以单位剂量形式包装。所述单位剂量形式当给予有需要的个体时能有效改善各种疾病或医学疾病状态。

提供了制备日本路边青有机提取物的方法。该方法包括以下步骤：(a)用醇提取日本路边青植物，所述醇选自C1-C4醇。该步骤可以室温下重复3-6次，通常5次。在进行步骤(a)之前，可以将植物材料制成粉末或切成小块。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。通常，添加的醇的重量是待提取的日本路边青重量的1-10倍。

所述方法还可以包括以下步骤：(b)将获自步骤(a)的提取物干燥为干燥粉末；和(c)用C6烷、EtOAc和选自C1-C4醇的醇相继提取获自步骤(b)的粉末。C6烷包括具有6个碳原子的环状和非环状烷，包括，例如，环己烷、正己烷和新己烷等。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。所用的有机溶剂的重量通常是待进一步提取的粉末重量的1-10倍。

上文所述的方法还可以包括过滤提取物以去除其中的任何不溶性粉末。可以在高于室温的温度下(例如50℃)的减压条件下完成干燥步骤。

为了纯化OEGJ，所述方法可以还包括以下步骤：将粉末施加到色谱柱；并用含有渐增浓度的选自C1-C4醇的醇的水性溶液洗脱柱。例如，可以使用Sephadex或反相柱。所用的醇可以是选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇的任何一种。

通过NMR分析，我们发现OEGJ通常主要含有单宁类和三萜类，所述单宁类包括gemin A、B、C、D、E和F，所述三萜类包括2-羟基齐墩果酸、2-羟基熊果酸、2，19-二羟基-熊果酸、2-α，19-α-二羟基-3-氧代-12-乌索烯-28-酸、熊果酸、epimolic acid、山楂酸、野鸭椿酸、委陵菜酸，委陵菜酸的28-β-D-葡糖苷。

在一个实施方案中，本发明的提取物、部分和化合物是利用水和/或有机溶剂从植物原材料提取得到的，包括以下过程：

1.将水和/或有机溶剂添加到植物材料，将全部进行诸如浸泡/浸滤、超声或微波的处理而进行提取；

2.在提取过程之前或之后，利用石油醚、己烷或氯仿类型的溶剂进行脱脂；

3.任选地，利用乙酸乙酯或乙醚类型的有机溶剂对回收的提取物进行进一步提取；

4.任选地，将获得的粗提取物浓缩，并如果需要将其冻干。

一方面，考虑到允许获得的富集，粗提取物可以接受色谱纯化过程。在一个实施方案中，使用离心分配色谱(CPC)。该技术具体描述于A.P.FOUCAULT，Ed.，Centrifugal Partition Chromatography(离心分配色谱)，Chromatographic Science Series，Marcel Dekker Inc.，1995，68或W.D.CONWAY，Ed.，Countercurrent Chromatography apparatus theory andapplications(逆流色谱装置理论和应用)，VCH Publishers Inc.，1990。CPC是基于通过混合两种或更多种溶剂或溶液而制备的两种不混溶液相的溶质分配。所述两相中的一种通过离心力保持静止。溶剂、它们的比例和流速的选择与CPC柱中静止相的稳定性和实际压力密切相关。

因此，本领域技术人员能根据所需纯化的提取物的性质选择最合适的溶剂。这些不同的提取物，即粗提取物或富集的提取物，也在本发明的范围内。实施其它分离过程允许分离这些富集了一种或多种化合物的提取物。使用合适溶剂的按照适合于所选择的分离的比例的混合物，可以对从粗提取物富集的部分或对粗提取物自身进行这些分离。

预防和治疗高血压的方法

收缩压是当心脏收缩时动脉中的最大压力并且将血液推入体内。舒张压是搏动之间当心脏舒张充满血液时动脉中的最小压力。高血压被定义为平均收缩压高于140-150mm Hg、舒张压高于90-95mm Hg或同时满足两者。收缩压和/或舒张压的升高增加了发生心脏病、肾病、动脉硬化(hardening of the arteries)(动脉硬化(atherosclerosis)或动脉硬化(arteriosclerosis))、眼损伤和中风(脑损伤)的风险。这些高血压并发症通常称为最终器官损伤，因为这些器官的损伤是慢性高血压的最终结果。因此，高血压的诊断和早期治疗对于正常化血压和预防并发症是很重要的。

尽管目前先进的治疗策略能延缓该疾病进展，但同时也能发生严重的并发症，例如ACE抑制剂抑制血管紧张素II的产生，所述血管紧张素II使血管收缩变窄；血管紧张素-II受体拮抗剂与ACE抑制剂的作用方式相似；β-阻断剂阻断激素肾上腺素和交感神经系统对身体的作用，舒张心脏；α-阻断剂导致血管舒张和变宽；以及钙通道阻断剂降低动脉肌肉张力。

血压是心脏将血液泵入动脉时所产生，是血液流动的动力。心脏泵出的血越多并且动脉越窄，血压就会越高。为了保持向所有器官和组织提供足够量的血液来满足身体正常活动的必然需求，需要心脏能泵出一定量的血液通过动脉遍布全身。因此，降低血压而且不会对身体正常活动造成不利影响的最好方法是永久性增加全身总动脉的横截面积。

本发明人发现，用日本路边青有机提取物治疗高血压个体约2周后，该提取物能显著降低个体中升高的血压。在一些实施方案中，用提取物治疗4-8周能永久增加高血压个体外周小动脉的横截面积，明显降低外周动脉的阻力，从而使血压降低，而且不会影响全身的功能表现。

本发明涉及日本路边青有机提取物(OEGJ)的用途和治疗人或动物的高血压和高血压相关疾病的方法。本发明特别涉及用于降低系统血压的药物组合物和方法。不希望被理论所束缚，OEGJ可以通过系统性地刺激在外周阻力已经增加的个体中生长新的侧支循环毛细血管、小动脉和微血管，从而在不同水平上增加小血管的横截面积从而明显改善对重要器官和组织的血液灌注。因此，高血压中增加的小动脉外周阻力由于新生侧支血管对变窄动脉的补偿而得到调整，从而导致血压降低。因此，本方法提供了能解决高血压的根本病理学变化的实质性治疗方式。

一方面，本发明提供治疗或预防有需要的个体中的高血压的方法，包括给予所述个体有效量的本文所述的化合物、组合物、部分或提取物。一方面，预防或治疗高血压的方法包括给予有需要的哺乳动物来自多种植物的部分和/或提取物，所述植物包括日本路边青。在一些实施方案中，所述提取物是获自植物日本路边青的有机提取物。

另一方面，用于治疗或预防高血压的试剂是含有一种或多种赋形剂、载体或填充剂的药物组合物的一部分。在一个实施方案中，所述药物组合物以单位剂量形式包装。所述单位剂量形式能有效改善(即，降低)个体的血压。

在本发明的各个实施方案中，进行合适的体外或体内分析来确定本发明的试剂(提取物、部分和化合物)的治疗效果，以及所述试剂的给药是否适用于治疗或预防个体的高血压。在一些实施方案中，使用高血压的体内模型来评价试剂对个体的治疗效果。研究了试剂在治疗动物个体高血压的效果，并与合适的对照进行比较。

在一个实施方案中，本发明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以作为与另一心血管药的联合治疗的一部分进行给药。心血管药的实例包括血管舒张剂，例如肼屈嗪；血管紧张素转化酶抑制剂，例如卡托普利；抗心绞痛药，例如硝酸异山梨酯、三硝酸甘油酯和季戊四醇四硝酸酯；抗心律失常药，例如奎尼丁、procainaltide和利诺卡因；强心甙，例如地高辛和洋地黄毒苷；钙拮抗剂，例如维拉帕米和硝苯地平；利尿剂，例如噻嗪类和相关化合物，例如苄氟噻嗪、氯噻嗪、氯噻酮、氢氯噻嗪和其它利尿剂，例如呋塞米和氨苯蝶啶；以及镇静剂，例如，硝基安定、氟西泮和地西泮。

其它示例性的心血管药包括，例如，环氧酶抑制剂，例如阿司匹林或吲哚美辛；血小板聚集抑制剂，例如氯吡格雷、ticlopidene或阿司匹林；纤维蛋白原拮抗剂或利尿剂，例如氯噻嗪、氢氯噻嗪、氟甲噻嗪、氢氟甲噻嗪、苄氟甲噻嗪、甲基氯噻嗪、三氯噻嗪、泊利噻嗪或苄噻嗪，以及依他尼酸、替尼酸、氯噻酮、呋塞米、莫唑胺、布美他尼、氨苯蝶啶、阿米洛利和螺内酯以及这些化合物的盐；血管紧张素转化酶抑制剂，例如卡托普利、佐芬普利、福辛普利、依那普利、ceranopril、西拉普利、地拉普利、喷托普利、喹那普利、雷米普利、赖诺普利以及这些化合物的盐；血管紧张素II拮抗剂，例如氯沙坦、伊贝沙坦或缬沙坦；溶栓剂，例如组织纤溶酶原活化剂(tPA)、重组tPA、链激酶、尿激酶、尿激酶原和茴酰化纤溶酶原链激酶活化剂复合物(APSAC，阿尼普酶，BeechamLaboratories)或动物唾液腺纤溶酶原活化剂；钙通道阻断剂，例如维拉帕米、硝苯地平或地尔硫卓；血栓素受体拮抗剂，例如伊非曲班、环前列腺素模拟物；或磷酸二酯酶抑制剂。这些组合产品(如果配制为固定的剂量)在上文所述的剂量范围内使用本发明化合物，其它药学活性剂处于其被认可的剂量范围。

其它示例性的心血管药包括，例如，血管扩张剂，例如苄环烷、桂利嗪、胞磷胆碱、环扁桃酯、环烟酯、ebumamonine、phenoxezyl、氟桂利嗪、异丁司特、艾芬地尔、洛美利嗪、naphlole、nikamate、尼麦角林、尼莫地平、罂粟碱、喷替茶碱、nofedoline、长春蔓胺、长春西汀、vichizyl、己酮可可碱、环前列腺素衍生物(例如前列腺素E1和前列腺素I2)、内皮肽受体阻断药(例如博沙坦)、地尔硫卓、尼可地尔和硝酸甘油。脑保护药物的实例包括自由基清除剂(例如依达拉奉、维生素E和维生素C)、谷氨酸盐拮抗剂、AMPA拮抗剂、红藻氨酸拮抗剂、NMDA拮抗剂、GABA激动剂、生长因子、阿片类拮抗剂、磷脂酰胆碱前体、血清素激动剂、Na⁺/Ca²⁺通道抑制剂性药物和K⁺通道开放药物。脑部代谢刺激剂的实例包括金刚烷胺、泰必利和γ氨基丁酸。抗凝剂的实例包括肝素(例如肝素钠、肝素钾、达肝素钠、达肝素钙、肝素钙、帕肝素钠(pamaparin sodium)、瑞肝素钠和达那肝素钠)、华法林、依诺肝素、阿加曲班、巴曲酶和柠檬酸钠。抗血小板药的实例包括盐酸噻氯匹定、双嘧达莫、西洛他唑、二十碳五烯酸乙酯、盐酸沙格雷酯、盐酸地拉卓、曲匹地尔、非甾体抗炎药(例如阿司匹林)、贝前列素钠、伊洛前列素和吲哚布芬。溶栓药物的实例包括尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂(例如阿替普酶、替索激酶、那替普酶、帕米普酶、孟替普酶和瑞替普酶)和那沙普酶。降压药的实例包括血管紧张素转化酶抑制剂(例如卡托普利、阿拉普利、赖诺普利、咪达普利、喹那普利、替莫普利、地拉普利、贝那普利、西拉普利、群多普利、依那普利、西罗普利、福辛普利、咪达普利、mobertpril、培哚普利、雷米普利、螺普利和群多普利)、血管紧张素II拮抗剂(例如氯沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、依普罗沙坦和伊贝沙坦)、钙通道阻滞剂(例如阿雷地平、依福地平、尼卡地平、巴尼地平、贝尼地平、马尼地平、西尼地平、尼索地平、尼群地平、硝苯地平、尼伐地平、非洛地平、氨氯地平、地尔硫卓、苄普地尔、克仑硫卓、phendilin、戈洛帕米、米贝拉地尔、甲基丁烯胺、司莫地尔、特罗地林、异搏定、西尼地平、依高地平、伊拉地平、拉西地平、乐卡地平、尼莫地平、桂利嗪、氟桂利嗪、利多氟嗪、洛美利嗪、苄环烷、依他苯酮和哌克昔林)、β肾上腺素受体阻断剂(普萘洛尔、吲哚洛尔、茚诺洛尔、卡替洛尔、布尼洛尔、阿替洛尔、醋丁洛尔、美托洛尔、噻吗洛尔、尼普洛尔、喷布洛尔、纳多洛尔、替利洛尔、卡维地洛、比索洛尔、倍他洛尔、塞利洛尔、波吲洛尔、贝凡洛尔、拉贝洛尔、阿普洛尔、氨磺洛尔、阿罗洛尔、苯呋洛尔、布库洛尔、布非洛尔、丁呋洛尔、布拉洛尔、butylidine、丁非洛尔、卡拉洛尔、塞他洛尔、氯拉洛尔、地来洛尔、依泮洛尔、左布诺洛尔、甲吲洛尔、美替洛尔、莫普洛尔、萘肟洛尔、萘比洛尔、氧烯洛尔、普拉洛尔、丙茶洛尔、索他洛尔、sufinalol、他林洛尔、tertalol、托利洛尔、xybenolol和艾司洛尔)、α受体阻断剂(例如氨磺洛尔、哌唑嗪、特拉唑嗪、多沙唑嗪、布那唑嗪、乌拉地尔、酚妥拉明、阿罗洛尔、达哌拉唑、芬司匹利、吲哚拉明、拉贝洛尔、萘哌地尔、尼麦角林、坦索罗辛、妥拉唑林、曲马唑嗪和育亨宾)、交感神经抑制剂(例如氯压定、胍法辛、胍那苄、甲基多巴和利血平)、肼苯哒嗪、托屈嗪、布屈嗪和卡屈嗪。抗心绞痛药物的实例包括硝酸酯药物(例如亚硝酸戊酯、硝酸甘油和异山梨醇)、β-肾上腺素受体阻断药(例如普萘洛尔、吲哚洛尔、茚诺洛尔、卡替洛尔、布尼洛尔、阿替洛尔、醋丁洛尔、美托洛尔、噻吗洛尔、尼普洛尔、喷布洛尔、纳多洛尔、替利洛尔、卡维地洛、比索洛尔、倍他洛尔、塞利洛尔、波吲洛尔、贝凡洛尔、拉贝洛尔、阿普洛尔、氨磺洛尔、阿罗洛尔、苯呋洛尔、布库洛尔、布非洛尔、丁呋洛尔、布拉洛尔、butylidine、丁非洛尔、卡拉洛尔、塞他洛尔、氯拉洛尔、地来洛尔、依泮洛尔、左布诺洛尔、甲吲洛尔、美替洛尔、莫普洛尔、萘肟洛尔、萘比洛尔、氧烯洛尔、普拉洛尔、丙茶洛尔、索他洛尔、sufinalol、他林洛尔、tertalol、托利洛尔、xybenolol和艾司洛尔)、钙通道阻滞剂(例如阿雷地平、依福地平、尼卡地平、巴尼地平、贝尼地平、马尼地平、西尼地平、尼索地平、尼群地平、硝苯地平、尼伐地平、非洛地平、氨氯地平、地尔硫卓、苄普地尔、克仑硫卓、phendilin、戈洛帕米、米贝拉地尔、甲基丁烯胺、司莫地尔、特罗地林、异搏定、西尼地平、依高地平、伊拉地平、拉西地平、乐卡地平、尼莫地平、桂利嗪、氟桂利嗪、利多氟嗪、洛美利嗪、苄环烷、依他苯酮和哌克昔林)曲美他嗪、双嘧达莫、依他苯酮、地拉、曲匹地尔、尼可地尔、依诺肝素和阿司匹林。利尿剂的实例包括噻嗪类利尿剂(例如氢氯噻嗪、甲氯噻嗪、三氯噻嗪、苄氢氯噻嗪和戊氟噻嗪)、袢利尿剂(例如呋喃苯胺酸、依他尼酸、布美他尼、吡咯他尼、阿左塞米和托拉塞米)、保钾利尿剂(螺内酯、三氨蝶呤和坎利酸钾)、渗透利尿剂(例如异山梨醇、D-甘露醇和甘油)、非噻嗪类利尿剂(例如美替克仑、曲帕胺、氯噻酮和美夫西特)和乙酰唑胺。强心剂的实例包括洋地黄制剂(例如洋地黄毒苷、地高辛、甲基地高辛、去乙酰毛花苷、维司力农、毛花洋地黄甙C和海葱次苷)、黄嘌呤制剂(例如氨茶碱、胆茶碱、二羟丙茶碱和丙羟茶碱)、儿茶酚胺制剂(例如多巴胺、多巴酚丁胺和多卡巴胺)、PDE III抑制剂(例如氨力农、奥普力农和米力农)、地诺帕明、泛癸利酮、匹莫苯、左西孟旦、氨乙基磺酸、维司力农、卡培立肽和达普酸考福新。抗心律失常药的实例包括阿吗灵、吡美诺、普鲁卡因胺、西苯唑啉、丙吡胺、奎尼丁、安搏律定、美西律、利多卡因、苯妥英、吡西卡尼、丙胺苯丙酮、氟卡尼、阿替洛尔、醋丁洛尔、索他洛尔、普萘洛尔、美托洛尔、吲哚洛尔、胺碘酮、尼非卡兰、地尔硫卓、苄普地尔和维拉帕米。抗高血脂药的实例包括阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀钠、氟伐他汀钠、克利贝特、氯贝特、双贝特、非诺贝特、苯扎贝特、考来替兰和考来烯胺。

药物组合物的制剂和剂量

通常，足以实现治疗或预防效果的本发明组合物的有效量为约0.000001mg/千克体重/天至约10,000mg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约0.0001mg/千克体重/天至约10000mg/千克体重/天。对于试剂的给药，剂量范围可以为每周、每2周或每3周约0.0001至10000mg/kg宿主体重，更通常为0.1至10000mg/kg宿主体重。示例性的治疗方案为每两周一次或每月一次或每3-6个月一次给药。通常多次给予所述试剂。单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要给药的频率减少。剂量和频率根据试剂在个体中的半衰期而不同。给药的剂量和间隔可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，在长期以相对低频率的间隔给予相对低的剂量。某些个体持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展减缓或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善。在此之后，可以给予患者预防方案。

毒性

合适的情况下，本文所述的试剂的有效量(例如，剂量)能提供有益的治疗效果，而不会产生对个体的明显毒性。可以通过标准药学程序在细胞培养或实验动物中确定本文所述的试剂的毒性，例如，通过测定LD₅₀(半数致死量)或LD₁₀₀(绝对致死量)。治疗指数(半数致死量与半数有效量的比值是。由这些细胞培养测试和动物研究的数据可以用于参考制定人类中使用无毒性的剂量范围。本文所述的试剂的剂量优选地处于包括有效剂量且仅具有很小的毒性或无毒性的血循环浓度的范围内。根据所用剂型和给药途径，剂量可以在该范围内变化。确切的制剂、给药途径和剂量可以由医师根据个体的疾病状态来选择。参见，例如，Fingl et al，In：The Pharmacological Basis of Therapeutics，Ch.1(治疗的药理学基础，第一章)(1975)。

根据一个实施方案，可以将所述试剂合并到适于给药的药物组合物中。在一些实施方案中，所述药物组合物可以包含适于对个体进行给药的形式的纯化的或基本纯化的日本路边青提取物和药学可接受的载体。在其它实施方案中，所述药物组合物所包含的药学可接受的载体在一定程度上由所给予的具体组合物以及用于给予组合物的具体方法决定。因此，适于给予组合物的药物组合物制剂有很多种(参见，例如，Remington′sPharmaceutical Sciences(雷明顿制药科学)，Mack Publishing Co.，Easton，PA 18^th ed.，1990)。通常将药物组合物配制为无菌的、基本上等渗的并且完全符合美国食品与药品管理局的所有良好生产规范(GMP)规程。

当形容组合物、载体、稀释剂和试剂时，术语“药学可接受的”、“生理学容许的”以及其语法变体可交换使用，并且表示该材料能够给予个体，并且不会产生需要禁止组合物给药的程度的不希望的生理学影响。例如，“药学可接受的赋形剂”表示该赋形剂可用于制备通常是安全的，无毒性的且满足需要的药物组合物，并且还包括兽医用途以及人类制药用途能接受的赋形剂。这些赋形剂可以是固体、液体、半固体，或者对于喷雾剂组合物来说，可以是气体。“药学可接受的盐和酯”是指药学可接受的并具有所需药学性质的盐和酯。这类盐包括试剂中存在的酸性质子能够与无机或有机碱反应的情况下形成的盐。合适的无机盐包括与碱金属形成的盐，所述碱金属例如钠和钾、镁、钙和铝。合适的有机盐包括与有机碱形成的盐，所述有机碱例如胺类碱，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等。这类盐还包括与无机酸(例如，盐酸和氢溴酸)和有机酸(例如乙酸、柠檬酸，马来酸和烷基磺酸和芳基磺酸，例如甲磺酸和苯磺酸)形成的酸加成盐。药学可接受的酯包括与试剂中存在的羧基、磺酰氧基和膦酰氧基形成的酯，例如，C_1-6烷基酯。当存在两种酸性基团时，药学可接受的盐或酯可以是单酸单盐或酯或二盐或酯；同样，当存在多于两种酸性基团时，部分的或所有的这些基团可以被盐化或酯化。本发明中命名的试剂可以以非盐化或非酯化的形式或盐化和/或酯化的形式存在，并且这些试剂的命名意图包括原始(非盐化的和非酯化的)化合物及其药学可接受的盐和酯。此外，本发明所述的某些试剂可以以多种立体异构体的形式存在，涉及该试剂时意图包括所有单种立体异构体和这些立体异构体的所有混合物(无论是外消旋的还是其它)。本领域技术人员可容易地确定本发明的具体药物和组合物的合适的给药时机、顺序和剂量。

这些载体或稀释剂的实例包括但不限于，水、盐溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用脂质体和诸如不挥发性油的非水性载体。这些介质和化合物在药学活性物质中的使用是本领域公知的。除了与所述试剂不相容的任何常规介质或化合物之外，其它介质或化合物可用于组合物中。还可以将补充性活性化合物合并到组合物中。

本发明的药物组合物的配制符合其预期的给药途径。本发明的组合物可以通过以下途径给药：胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂。所述试剂可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。

胃肠外、真皮内或皮下施用的溶液或悬液可以包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌化合物，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合化合物，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲液，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的化合物，例如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱调节pH，例如盐酸或氢氧化钠。胃肠外制剂可以装入安瓶、一次性注射器或玻璃或塑料制成的多剂量瓶中。

适于注射使用的药物组合物包括无菌水性溶液(在可溶于水的情况下)或用于临时制备无菌注射液或分散液的分散剂和无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL^TM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲液(PBS)。无论在什么情况下，组合物必须是无菌的，并且其流动性应当易于注射。其在生产和贮存条件下必须稳定，并且必须能抵抗诸如细菌和真菌的微生物的污染活动。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液态聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用诸如卵磷脂的包被、保持需要的颗粒尺寸(在分散液的情况下)和施用表面活性剂来保持合适的流动性。可以利用各种抗菌和抗真菌化合物实现微生物活动的预防，所述抗菌和抗真菌化合物例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸，硫柳汞等。在很多情况下，优选在组合物中包含等渗化合物，例如糖，诸如甘露醇、山梨醇的多元醇，氯化钠。可以通过在组合物中包含延缓吸收的化合物实现注射组合物的持续吸收，所述化合物例如单硬脂酸铝和明胶。

可以通过将所需量的试剂合并入含有一种上文所列成分或上文所列成分的组合的合适的溶剂中然后视情况进行过滤灭菌来制备无菌注射液。通常，通过将结合剂合并到含有基本分散介质和上文所列的所需其它成分的无菌介质中来制备分散剂。对于用于制备无菌注射液的无菌粉末，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从而从之前过滤灭菌的溶液得到活性成分和任何其它所需成分的粉末。可以以积存注射(depot injection)或植入制剂的形式给予本发明的试剂，植入制剂的制备形式能允许活性成分的持续释放或脉冲释放。

口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用的载体。可以将口服组合物封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗给药，结合剂可以与赋形剂合并，并用于片剂、锭剂或胶囊的形式。还可以使用用于漱口水的流体载体来制备口服组合物，其中流体载体中化合物是经口施用、漱口和吐出或吞下。药学相容的结合化合物和/或辅助材料可以作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任何下述成分或具有相似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶态二氧化硅；甜味剂化合物，例如蔗糖或糖精；或调味剂化合物，例如薄荷油、水杨酸甲酯或桔子香精。

在一个实施方案中，所述试剂与能保护所述试剂免于从体内快速清除(例如控释制剂，包括植入物和微胶囊化的递送体系)或保护药物免于被胃酸降解的载体一起进行制备。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对于本领域技术人员是显而易见的。还可以从Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc购买所述材料。脂质体悬液(包括靶向于感染细胞的具有针对病毒抗原的单克隆抗体的脂质体)也可用作药学可接受的载体。可以根据本领域已知的方法进行制备，例如，美国专利第4,522,811号中的描述。

实施例

通过以下实施例进一步阐述本技术，但这些实施例不应解释为以任何方式进行限制。

实施例1.日本路边青有机提取物的制备

使用由生物活性导向的分离方法来筛选植物成分，从而鉴定出通过诱导机体侧支循环的小动脉和微血管的形成，进而降低小动脉的外周阻力的化合物的组合物。简而言之，将10kg采集自安徽省的干燥的日本路边青切成小块，用75％乙醇(10倍量)在40℃下渗滤3天。将提取物进行电喷雾，得到棕色粉末。

实施例2.OEGJ增强血管内皮细胞的增殖和分化

按照修改过的ATCC流程，使用MTT方法来测定血管内皮细胞的增殖。将人脐静脉内皮细胞(HUVEC，2×10³/孔)接种于96孔培养板的生长培养基中(含15％FBS、6U/ml肝素和30μg/ml内皮细胞生长补充剂的F12K培养基)。细胞贴壁后，将培养基更换为含2％FBS的Ham′s F12K培养基，培养12小时。然后，用浓度梯度为50、100和200μg/ml的OEGJ(按照实施例1中所述制备)处理细胞48小时。利用Tecan Sunrise酶标仪(GmbH，Australia)测定光学密度(OD)。在MTT测定之前，用倒置显微镜观察所有不同处理的孔用于评价培养的内皮细胞的表型和分化。

我们发现，OEGJ不仅在低浓度下促进HUVEC增殖，还能增强HUVEC的分化，在培养物中形成薄且细长的且相互连接的管样结构，提示其在促进血管生成中的潜力(图1)。

实施例3.OEGJ在高血压大鼠模型中的治疗效果

我们的初步研究提示双侧颈动脉(2VO)的永久性结扎由于脑小动脉的阻力增加而导致轻度高血压。2VO后，脑供血主要依靠双侧椎动脉，椎动脉通常提供脑总血量的约40％。为了代偿通常由双侧颈动脉提供的脑供血的60％的减少，心脏需要产生更大的压力(这个推论已在实验过程中通过测量血压得到证实)来克服脑部小动脉的阻力，从而通过椎动脉将更大量的血液供至脑部。

在本实验中，使用重250-300g的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。本研究的进行符合国家实验动物管理条例，并且所有动物实验得到张江高科技园区的实验动物管理委员会的批准。对于2VO(n＝12)，在麻醉下，通过中线颈部切口暴露两条颈总动脉，然后用6-0尼龙缝线将其结扎，并用微型手术剪切断。然后用缝线缝合伤口。进行中线颈部切开手术但未进行颈总动脉结扎的大鼠(n＝6)作为假手术对照。从麻醉苏醒后，允许实验动物自由进食和饮水。

对于OEGJ治疗组的2VO大鼠(n＝6)，每天灌胃给予OEGJ悬液(480mg/kg/天，配制于水中)，给药4周。对于介质处理组的2VO动物(n＝6)，每天给予等量的水。对假手术治疗组中的3只大鼠每天灌胃给予OEGJ悬液(480mg/kg/天，配制于水中)，给药4周，剩余的3只动物每天给予等量的水。治疗后4周分析血压和脑血流。

血压的测量

治疗4周后，在一段预热期后，用配备了尾套的计算机化自动测血压系统(BP-98A，Softron)，在未麻醉的大鼠中测量实验动物的收缩压(SBP)和平均血压(MBP)。室温27℃保持恒定。我们发现，治疗后4周，介质处理的2VO大鼠的血压升高(154.25±3.95mmHg)(图2)，其显著高于假手术动物的血压(约125mmHg)。相比之下，OEGJ治疗的2VO大鼠的血压为135.25±2.14mmHg(图2)，其显著低于介质处理的对照大鼠的血压，但稍高于假手术大鼠的水平，这就提示由于OEGJ治疗促进了脑侧支循环血管的形成，从而降低了脑小动脉的外周阻力。

为了排除OEGJ的血管扩张效应的可能性，在OEGJ治疗停药后2周，我们再次测量了2VO实验动物的脑部血流量和血压。我们发现，OEGJ治疗停止后2周，OEGJ治疗的大鼠的血流量仍然与上一次的测量值相似，血压为约128mmHg。而介质处理的大鼠的脑血流量和血压与2周前的上一次的测量值大致相同。综上所述，OEGJ治疗恢复了由于2VO而引起的脑缺血的脑部供血。该效果可能是由于OEGJ的治疗诱导脑部中侧支血管的形成，从而降低了脑部小动脉的外周阻力，这个推测已经被通过在相同脑样品的组织学研究(血管计数)的结果得到了证实。

脑血流的多普勒超声评价

如果OEGJ治疗能刺激脑部侧支血管的生长，从而降低脑部小动脉的外周阻力，则在一定的血压下总脑血流量应当增加。为了证实这个猜测，我们按照上文所述的方法测量了血压，并通过利用配备了PLT-1202S线性阵列换能器的东芝ApHo XG超声仪来测量实验动物的颅外基底动脉的血流，来评估实验动物的脑血流量。永久性2VO之后，大鼠脑部供血主要依赖于双侧椎总动脉-基底动脉，其通常提供脑部总血量的约40％。我们的结果表明，假手术大鼠基底动脉的血流量为约12.4±3.5ml/分钟，但是在介质处理的动物的基底动脉的血流由于对2VO的代偿机制而达到了16.04±6.4ml/分钟(图3)，相当于正常脑部总血量的52％。有趣的是，OEGJ治疗的动物的基底动脉的血流量增加至25.9±11.80ml/分钟(图3)，相当于总脑血流量的正常水平的约83.5％。

为了确定OEGJ介导的脑外周血管阻力降低的效果是由于其引起的血管扩张还是由于其诱导了脑部新的侧支血管的形成，在OEGJ治疗停药后2周我们再次测量了这些实验动物的脑血流量。我们发现，OEGJ治疗停止后2周，OEGJ治疗大鼠的脑血流量仍然与上一次的测量值相似(21.1±6.3ml/分钟)，血压为约128mmHg，与正常血压水平相似。而介质处理的大鼠中脑血流量(14.6ml/分钟)和血压(148mmHg)也都与2周前的上一次的测量值大致相似。

根据公式：血压(BP)/血流量(BF)＝外周血管阻力(PR)，对于正常大鼠：第一次测量时，Rn0＝125/12.4＝10.08，2周后，Rn2＝121/12＝10.1；对于介质处理的对照大鼠：Rc0＝154.25/16.04＝9.62，介质处理停止后2周，Rc2＝148/14.6＝10.14；对于OEGJ治疗的大鼠：Ro0＝135.25/25.9＝5.22，OEGJ治疗停止后2周，Ro2＝128/21.1＝6.06(图3)。通过以上计算发现，正常和介质处理的对照大鼠的外周血管阻力之间几乎没有差异(约10)。然而，OEGJ治疗组的外周血管阻力低了约43％，这就提示在脑部有新的侧支动脉生成，增加了脑部外周动脉的截面积，这点通过组织学定量分析的血管计数得到进一步证实。

脑部新的侧支血管形成的证实

我们发现，OEGJ治疗的大鼠的脑部平均重量比介质处理的对照大鼠重9.1±2.3％(P＜0.01)。最后一次测量脑血流后，处死实验动物，取出的脑部，福尔马林固定，石蜡包埋，组织切片(5μm)，H&E染色。在光学显微镜高倍镜视野(HPF)(40倍)下，对脑额叶皮质内和海马区周围的血管进行计数，从而确定切片样品中血管密度。取额叶或海马内6个随机且非重叠HPF进行观察和血管计数，取HPF血管数的平均值，并将其表示为每个HPF的血管数。由2个研究人员以双盲法的方式进行血管计数。

我们发现，在OEGJ治疗的大鼠中，额叶皮质区内的血管数为约61.7±20.3/HPF(图4)，海马区周围的血管数为56.4±12.3/HPF。相比之下，在介质处理的大鼠中，额叶皮质区内的血管数为约38.5±12.6/HPF(图4)，海马区周围的血管数为30.7±10.5/HPF。综上所述，OEGJ治疗可以在缺血的脑中诱导新生侧支血管形成(增多37.4％)，这就揭示了OEGJ治疗可以使2VO诱导的高血压动物的脑缺血供血增加30.8％以及血压降低14.5％的内在机理(图5)。

实施例4.轻度高血压动物模型中OEGJ的治疗效果

测试了在数种轻度高血压动物模型中OEGJ的治疗效果。所有研究的进行符合国家实验动物管理条例，并且所有动物实验都得到张江高科技园区的实验动物管理委员会的批准。动物模型包括如下文所述的单侧颈动脉的部分结扎的大鼠、APP小鼠、中风大鼠和衰老加速小鼠产生的轻度高血压动物模型。

较轻度高血压大鼠模型的产生

为此目的，进行了SD大鼠(n＝12)右侧颈动脉的部分结扎(60％)(PLRCA)。在麻醉下，通过右侧中线颈部切口暴露右侧颈总动脉。然后，用6-0尼龙缝线将暴露的右侧颈动脉部分结扎(60％)，并用微型手术剪切断。然后用缝线缝合伤口。进行右侧中线颈部切开手术但未进行颈总动脉结扎的6只大鼠作为假手术对照。从麻醉苏醒后，允许实验动物自由进食和饮水。将大鼠随机分为OEGJ治疗组(n＝6)和介质处理组(n＝6)。

APP小鼠发展出纤维淀粉样斑块

随着APP小鼠衰老，它们表现出空间学习和记忆障碍，并伴随轻度升高的血压。由Takeda和其同事(Takeda et al.，1991)开发的SAMP10小鼠表现出快速衰老的特征。当它们衰老时，它们发生早期学习和记忆异常，并伴随轻度高血压。在本研究中，使用了APP(n＝30)和SAMP10小鼠(n＝30)。分别将APP小鼠和SAMP10小鼠随机分为OEGJ治疗组(n＝15)和介质处理组(n＝15)。

缺血性中风诱导的高血压的大鼠模型

按照之前使用的方法(Mayzel-Oreg et al.，2004)，通过手术在SD大鼠中引发缺血性中风。简而言之，通过颈部右侧的正中切口暴露颈动脉分叉周围的颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)和颈外动脉(ECA)。在颈动脉分叉近端结扎CCA。利用注射器将含有约1000个微球(80-150μM)的盐溶液(0.5ml)朝向颈动脉分叉注射入ECA。在注射位点的远端结扎ECA并去除CCA结扎之后，注射的微球进入ICA，从而导致脑中的多发性梗塞缺血性中风。按照大鼠的神经学评级，将大鼠(n＝28)分为OEGJ治疗组(n＝12)和介质处理组(n＝16)，使每组中的大鼠具有大体上相似的等级。

对于所有以上动物模型的OEGJ治疗组中的大鼠和小鼠，分别用OEGJ悬液(480mg/kg/天，配制于水中)灌胃治疗4周。对于介质处理组的大鼠和小鼠，在相同的时间段内每天灌胃给予等量的水。

结果表明，介质处理的大鼠(PLRCA)的平均血压升高至约142mmHg，总脑血流量为约37ml/分钟(图6)。相比之下，在OEGJ治疗的大鼠中，由于PLRCA而升高的血压降低至正常水平(121mmHg)，同时总脑血流量显著增加至58ml/分钟，从而能保持对缺血性脑部的供血(图6)。在APP小鼠(6-7月龄)中，介质处理组的小鼠的平均血压为约124mmHg(图7)。相比之下，OEGJ治疗组的小鼠的平均血压为约114mmHg，比介质处理的对照小鼠的平均血压低约10％(图7)。我们还发现，OEGJ治疗组的脑部平均重量比介质处理组的脑部平均重量重约15％。组织学研究还表明，在OEGJ治疗的APP小鼠的脑部皮质和海马中发现了显著较多的新生血管。综上所述，1个月的OEGJ治疗不仅诱导脑部和其它组织中新的侧支血管的形成，还能降低APP小鼠的系统血压(约114mmHg)。相比之下，介质处理的APP小鼠的血压(124mmHg)比OEGJ治疗的APP小鼠的血压高约10％(图7)。此外，我们还证实，1个月的OEGJ治疗(480mg/kg)后，大鼠中风模型和SAMP10小鼠模型中轻度升高的血压(130-150mmHg)下降了约10％，与这些动物的正常血压水平相似。

实施例5.OEGJ对人类个体的高血压的治疗效果

基于以上从细胞培养物体系中OEGJ增强的血管内皮细胞增殖和分化以及更重要的，在动物模型中OEGJ介导的对2VO、中风、PLRCA和APP所引起的高血压的明显治疗所获得的十分具有前景的结果，在人道治疗的基础上，在高血压患者中测试了在高血压动物模型中观察到的OEGJ引起的明显治疗效果能否相似地移用到临床应用上的可能性。在10名原发性或继发性高血压患者上进行了我们的初步临床治疗。

参与本测试的所有原发性或继发性高血压患者(n＝10)都报告具有长期高血压病史。近些年来，目前的商业药物不能对他们的高血压进行令人满意的治疗。他们的高血压对常规治疗或联合治疗策略的反应不好。在检查时，他们的血压为约162±20/106±10mmHg。此外，除高血压外，他们还主诉受到频繁性头痛、头晕、胸闷、呼吸短促和视力模糊等的困扰。

在知情和书面同意后，他们接受了4-8周的OEGJ治疗(2-3g/天，口服给药)。1-2周OEGJ口服给药后，所有这些患者经历了血压平稳下降。4-8周治疗后，所有这些患者的血压回到正常范围内(119±10/79±6mmHg)，他们主诉上述的高血压伴随症状也得到了缓解(表1)。

表1.治疗后高血压相关症状的缓解

实施例6.利用MEGJ治疗高血压

在测试日本路边青(Geum japonicum Thunb.variant)甲醇提取物(MEGJ)(MEGJ的组成与OEGJ相似)对高血压的治疗效果的初步临床试验中，我们发现，2周MEGJ治疗(口服，3-4g/天)能将对常规抗高血压治疗反应不是很好的患者的血压平缓降低10-20％。此外，不进行任何其它治疗的情况下，降低的血压能保持数月，这表明MEGJ在治疗高血压、特别是难治性高血压中的重要潜力。推测MEGJ对高血压的显著治疗效果的内在机制是增加治疗的个体中小动脉床的总横截面积。

对5名临界性高血压患者(140-150/90-95mm Hg)的1周MEGJ治疗将血压降至115-125/70-75mm Hg，持续了超过3个月。另外6名难治性高血压患者(140-180/95-140)在对常规抗高血压治疗方案反应不好之后接受了1个月的MEGJ治疗。在第一周MEGJ治疗时，血压未显著降低。然而，用MEGJ治疗2周之后，这些患者的血压平缓地降至135-145/85-100mmHg，头痛、头晕、耳鸣、反映紊乱和视神经乳头水肿等症状也显著改善或消失(表2)。用MEGJ治疗4周后，所有6名患者的血压都下降，并且在不服用任何其它药物的情况下，可以保持数月。

综上所述，2-4周MEGJ口服给药能将临界性或难治性高血压患者升高的血压平稳地降至正常水平，并且源于高血压的症状也显著改善或消失。MEGJ引起的降压效果似乎与目前抗高血压药物不同。增加治疗个体中小动脉床的总横截面积被认为是作为MEGJ平稳、有效降低血压的主要机制之一。

表2.高血压的MEGJ治疗

尽管已经展示并描述了某些实施方案，但是应当理解，在不脱离权利要求书所限定的较宽范围中的技术的情况下，本领域技术人员可以在其中做出改变和改动。

本公开不应局限于本申请所述的具体实施方案。在不脱离其实质和范围的情况下，可以进行很多改动和变化，这对于本领域技术人员是显而易见的。本公开范围内除本文所列之外的功能上等同的方法和装置对于阅读了上述描述的本领域技术人员是显而易见的。这些改动和变化意图包括在附加权利要求书的范围内。本公开仅受附加权利要求书的内容以及这些权利要求赋予权力的等同物的全部范围的限制。应当理解，本公开不局限于具体方法、试剂、化合物、组合物或生物体系，上述是必然能够变化的。还应当理解，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案，而并非意图进行限制。

此外，当以马库什组的方式描述本公开的特征或方面时，本领域技术人员应当认识到，还从任何个体成员或马库什组成员的亚组的方式描述了本公开。

本领域技术人员应当理解，为了任何和所有目的，特别是在提供书面描述方面的目的，本文公开的所有范围还包括任何和所有可能的子范围以及子范围的组合。任何列出的范围能容易地被认为充分描述和赋予了同一范围被分解为至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等的情况。作为非限制性实例，本文讨论的每个范围能容易地分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本领域技术人员还应当理解，诸如“多至”、“至少”、“大于”、“少于”等的所有语言包括所记载的数值，并且是指能如上文所讨论随后分解成子范围的范围。最后，本领域技术人员应当理解，一个范围包括每个个体成员。因此，例如，具有1-3个单元的组是指具有1、2或3个单元的组。同样，具有1-5个单元的组是指具有1、2、3、4或5个单元的组，以此类推。

尽管本文中公开了各个方面和实施方案，其他方面和实施方案对于本领域技术人员是显而易见的。本文公开的各个方面和实施方案仅是说明目的，而不是意图进行限制，附加权利要求书表明真正的范围和实质。

参考文献

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8.Cheung WL，Cheng L，Liu H，Gu X，Li M.，The dual actions ofangiogenesis and anti-apoptosis induced by an isolated fraction from Geumjaponicum repair muscle ischemia(从日本路边青分离的部分所产生的血管生成和抗凋亡双重作用修复肌肉缺血).Arch Biochem Biophys，2007，459：91-97.

9.MTT Cell Proliferation Assay Instructions(MTT细胞增殖测定说明书).ATCC.

10.Bunag RD，Validation in awake rats of a tail-cuff method for measuringsystolic pressure(在清醒大鼠中尾套法测量收缩压的验证).J Appl Physiol.，1973，34：279-82.

11.Yen TT，Powell CE，Pearson DV，An indirect method of measuring theblood pressure of rats without heating(无需加热来测量大鼠血压的间接方法).In Spontaneous Hypertension：its Pathogenesis and Complications.DHEW Publication No.77-1179.Bethesda，Maryland：US Public HealthService，1977，p 486.

12.Medsger，Oliver Perry(1972)Edible Wild Plants(可食用野生植物)，London，Collier-Macmillan Limited.

13.Takeda T，Hosokawa M & Higuchi K(1991)Senescence-acceleratedmouse(SAM)：a novel murine model of accelerated senescence(衰老加速小鼠(SAM)：加速衰老的新的鼠类模型).Journal of the American GeriatricsSociety 39：911-919.

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Claims (17)

1.治疗或预防哺乳动物个体中的高血压的方法，所述方法包括给予有需要的个体有效量的日本路边青(Geum japonicum)有机提取物(OEGJ)。

2.如权利要求2所述的方法，其中与未给予OEGJ的个体相比，给予OEGJ的个体中小动脉的外周阻力系统性降低。

3.如权利要求2所述的方法，其中小动脉的外周阻力是通过器官或组织中的侧支循环血管形成而降低。

4.如权利要求1所述的方法，其中给予的OEGJ的量为约0.01mg至约10,000mg提取物/千克体重/天。

5.如权利要求1所述的方法，其中给予的OEGJ是剂量单位形式。

6.如权利要求1所述的方法，其中给予的OEGJ是包含药学可接受的载体的剂量单位形式。

7.如权利要求1所述的方法，其中OEGJ诱导在小动脉阻力已经增加了的器官或组织中形成侧支循环血管。

8.如权利要求1所述的方法，其中与未给予OEGJ的个体相比，所述个体的血压降低。

9.如权利要求1所述的方法，其中OEGJ通过口服给药。

10.如权利要求1所述的方法，其中OEGJ通过皮下注射、肌内注射或静脉输注进行给药。

11.如权利要求1所述的方法，其中OEGJ是日本路边青的低级烷基醇溶剂提取物。

12.如权利要求11所述的方法，其中低级烷基醇具有1-6个碳原子。

13.如权利要求11所述的方法，其中所述溶剂是乙醇。

14.如权利要求11所述的方法，其中所述溶剂是甲醇。

15.如权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物个体是人。

16.用于治疗或预防哺乳动物个体中的高血压的药物组合物，包含有效量的日本路边青(Geum japonicum)有机提取物(OEGJ)和药学可接受的赋形剂。

17.试剂盒，包含权利要求16所述的药物组合物、容器和表明该药物组合物对患高血压(hypertension)或高血压(high blood pressure)的人有益的说明书。

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