CN102573865A - 用于预防和治疗红细胞聚集的组合物 - Google Patents

Abstract

公开了用于抑制哺乳动物红细胞聚集的药物组合物。所述组合物包含有效量的柔毛水杨梅(又名日本路边青)有机提取物和药学可接受的载体。

Description

用于预防和治疗红细胞聚集的组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2009年6月12日提交的美国临时申请第61/186,709号和于2009年6月17日提交的美国临时申请第61/187,905号的优先权，通过引用将上述申请的全部内容并入本文。

发明背景

提供以下描述是为了有助于阅读者的理解。提供的信息或引用的文献不被承认是本发明的现有技术。

红细胞(RBC)聚集已被广泛研究，其在微循环流变学的重要性得到公认(Aleksander S et al.2005；E.Vicaut et al.1994；JJ.Durussel et al.1998)。引起微循环血流障碍的3个主要因素分别是RBC聚集增加、血浆粘度增加和红细胞变形能力下降(S Chien et al.1987；G.Cicco et al.1999；V.Nagaprasad et al.1998)。在生理状态下，静态或缓慢流动的血液中的RBC能像硬币堆一样彼此吸附，从而形成可逆的细胞-细胞接触，导致形成聚集物。

RBC聚集增加血液粘度，并因此影响细胞通过微血管，特别是小静脉(Mark J et al.2000；George Mchedlishvili et al.2002)。在病理状态下，RBC能形成不可逆的或可逆性较低的聚集物，该聚集物能堵塞小动脉和小静脉。发现异常的RBC聚集与数种疾病和疾病状态有关，包括糖尿病、疟疾、心衰、缺血性心脏病、中风、脑灌注不足、四肢缺血、高血压、血液学病症、感觉缺失等(John A et al.1979；Amiram Eldor et al.2002；Patricia foresto et al.2000)。

RBC的直径大于毛细血管的平均直径，因此RBC必须变形才能像车厢一样一个个地通过毛细血管。然而，RBC聚集物不能通过毛细血管。因此，大量RBC聚集会增加血液粘度并减少重要器官和全身的有效血液灌注。

在正常血液中，在存在足够的剪切力的情况下，RBC聚集是可逆的过程。然而，病理性RBC聚集快速且大量地形成。目前可用的治疗方法或药物仅能提供症状缓解或延缓疾病状态的进一步恶化。将聚集的RBC有效分开和防止RBC再聚集会显著改善微循环，从而有效预防或治疗很多严重疾病，例如心脏病发作、中风、缺血性心脏病、心衰、高血压、四肢缺血、脑灌注不足和创伤愈合，特别是在老年群体中。

发明概述

本公开尤其涉及预防RBC聚集和将各种病理状态中非正常聚集的红细胞恢复为正常的且分散良好的方法，从而降低血液粘度并随之改善身体器官和组织的微循环。

一方面，本发明涉及治疗或预防有需要的哺乳动物个体中RBC聚集的方法，包括给予所述哺乳动物个体有效量的柔毛水杨梅(Geumjaponicum)有机提取物。在一个实施方案中，所述有机提取物是乙醇提取物。在另一个实施方案中，所述有机提取物是甲醇提取物。在一个实施方案中，所述个体是人。在一些实施方案中，所述RBC聚集与糖尿病、疟疾、心衰、缺血性心脏病、中风、脑灌注不足、四肢缺血、高血压、血液学病症或感觉缺失有关。

在一个实施方案中，所述柔毛水杨梅提取物是口服给药。在一个实施方案中，所述柔毛水杨梅提取物是通过皮下注射、肌内注射或静脉输注进行给药。在一个实施方案中，给予的提取物的量为约0.01mg/kg/天至约10000mg/kg/天。在一个实施方案中，所述有效量的提取物是包含所述提取物和药学可接受的载体的制剂形式。

另一方面，本发明提供用于抑制哺乳动物个体中RBC聚集的药物组合物，包含有效量的柔毛水杨梅有机提取物和药学可接受的载体。在一个实施方案中，所述有机提取物是乙醇提取物。在另一个实施方案中，所述有机提取物是甲醇提取物。

附图简要描述

图1是代表性的活血细胞样品的系列暗场相差显微镜图像。图(a)是获自患有头晕、胸闷和手指缺血患者的血液样品。该图像显示了聚集形成不同长串的数十或数百个红细胞。图(b)是获自用提取物治疗1周后的相同患者的血液样品。长串RBC聚集物缩短，超过50％的红细胞良好地分散。图(c)是用提取物治疗后2周的相同患者的血液样品。大部分红细胞良好地分散，并且几乎未观察到钱串样RBC聚集物。

发明详细描述

在各个方面中，本发明提供用于预防或治疗RBC聚集和异常RBC聚集相关疾病的化合物、提取物和方法。本文提供的化合物可以配制为可用于公开的方法的药物组合物和药物。还提供了所述化合物和提取物在制备药物制剂和药物中的用途。

应当理解，为了提供对本发明的实质性理解，下文以不同详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方案、变化和特征。以下术语在全文中按下文所述使用，除非上下文明确指明另外情况。

本文中，试剂或药物对个体的“给药”包括将化合物引入或递送至个体以行使化合物预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、胃肠外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)、直肠或局部给药等。给药包括自给药和由他人给药。还应当理解，所描述的治疗或预防医学疾病状态的各种模式意图表示“实质性的”，其不仅包括完全的治疗或预防，还包括未达到完全的治疗或预防，但实现了一些生物学或医学相关的结果。

本文所用的术语组合物的“有效量”或“药学有效量”或“治疗有效量”是足以实现所需治疗和/或预防效果的量，例如，实现了所治疗疾病相关的症状的预防或减少的量。给予个体的本发明组合物的量将取决于疾病的类型和严重程度以及个体的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。其还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些因素以及其它因素能确定合适的剂量。本发明的组合物也可以与一种或多种其它治疗化合物联合给药。

在没有特别指明的情况下，本发明所用的缩写“OEGJ”表示下文所述的植物柔毛水杨梅的有机溶剂提取物。

本文所用的术语“个体”是指哺乳动物，例如人，但也可以是动物，例如，家畜(例如，狗、猫等)，农畜(例如，牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)。

本文所用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“缓解”是指治疗性处理以及预防性(prophylactic)或预防性(preventative)措施，其目的是预防或延缓(减轻)所针对的病理疾病状态或病症。如果个体按照本发明方法接受治疗后，该个体具体疾病或疾病状态的一种或多种指征和症状表现出可观察到的和/或可测定的改善或痊愈，则认为该个体被成功“治疗”了病症。

本文所用的病症或疾病状态的“预防(prevention)”或“预防(preventing)”是指在统计学样品中，相对于未处理的对照样品，化合物能减少处理的样品中病症或疾病状态的发生，或者相对于未处理的对照样品，化合物能延缓病症或疾病状态的一种或多种症状的发作或降低其严重程度。

本发明的组合物

在一些实施方案中，所述化合物是柔毛水杨梅、仙鹤草(Xian he cao)(龙牙草(Agrimonia pilosa Ledeb.)(蔷薇科))、野百里香(唇形科)的全植物、提取物，所述提取物例如有机提取物。在具体实施方案中，所述化合物是柔毛水杨梅的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。在一些实施方案中，所述化合物是柔毛水杨梅提取物的部位。

本发明提供利用来自多种植物的试剂和/或提取物和化合物以及该化合物的衍生物治疗或预防多种疾病或医学疾病状态的方法，所述植物包括柔毛水杨梅。在一些实施方案中，所述试剂是柔毛水杨梅的提取物，例如柔毛水杨梅的有机提取物。在具体实施方案中，所述试剂是柔毛水杨梅的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。

提供了制备柔毛水杨梅有机提取物的方法。该方法包括以下步骤：(a)用醇提取柔毛水杨梅植物，所述醇选自C1-C4醇。该步骤可以室温下重复3-6次，通常5次。在进行步骤(a)之前，可以将植物材料制成粉末或切成小块。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。通常，添加的醇的重量是待提取的干燥柔毛水杨梅重量的1-10倍。

所述方法还可以包括以下步骤：(b)将获自步骤(a)的提取物干燥为干燥粉末；和(c)用C6烷、EtOAc和选自C1-C4醇的醇相继提取获自步骤(b)的粉末。C6烷包括具有6个碳原子的环状和非环状烷，包括，例如，环己烷、正己烷和新己烷等。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。所用的有机溶剂的重量通常是待进一步提取的粉末或小块重量的1-10倍。

上文所述的方法还可以包括过滤提取物以去除其中的任何不溶性粉末。可以在高于室温的温度下(例如50℃)的减压条件下完成干燥步骤或可以通过电喷雾完成干燥步骤。

为了纯化OEGJ，所述方法可以还包括以下步骤：将粉末施加到色谱柱；并用含有渐增浓度的选自C1-C4醇的醇的水性溶液洗脱柱。例如，可以使用Sephadex或反相柱。所用的醇可以是选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇的任何一种。

通过NMR分析，我们发现OEGJ通常主要含有单宁类和三萜类，所述单宁类包括gemin A、B、C、D、E和F，所述三萜类包括2-羟基齐墩果酸、2-羟基熊果酸、2，19-二羟基-熊果酸、2-α，19-α-二羟基-3-氧代-12-乌索烯-28-酸、熊果酸、epimolic acid、山楂酸、蔷薇酸、委陵菜酸，委陵菜酸的28-β-D-葡糖苷。

在一个实施方案中，本发明的提取物、部位和化合物是利用水和/或有机溶剂从植物原材料提取得到的，包括以下过程：

1.将水和/或有机溶剂添加到植物材料，将整体进行诸如浸泡/浸滤、超声或微波的处理而进行提取；

2.在提取过程之前或之后，利用石油醚、己烷或氯仿类型的溶剂进行脱脂；

3.任选地，利用乙酸乙酯或乙醚类型的有机溶剂对回收的提取物进行进一步提取；

4.任选地，将获得的粗提取物浓缩，并根据需要将其冻干。

一方面，考虑到允许获得的富集的粗提取物可以接受色谱纯化过程。在一个实施方案中，使用离心分配色谱(CPC)。该技术具体描述于A.P.FOUCAULT，Ed.，Centrifugal Partition Chromatography(离心分配色谱)，Chromatographic Science Series，Marcel Dekker Inc.，1995，68或W.D.CONWAY，Ed.，Countercurrent Chromatography apparatus theory andapplications(逆流色谱装置理论和应用)，VCH Publishers Inc.，1990。CPC是基于通过混合两种或更多种溶剂或溶液而制备的两种不混溶液相之间的溶质分配。所述两种相中的一种通过离心力保持静止。溶剂、它们的比例和流速的选择与CPC柱中静止相的稳定性和实际压力密切相关。

因此，本领域技术人员能根据所需纯化的提取物的性质选择最合适的溶剂。这些不同的提取物，即粗提取物或富集的提取物，也在本发明的范围内。实施其它分离过程允许分离这些富集了的一种或多种化合物的提取物。使用合适溶剂的按照适合于所选择的分离比例的混合物，可以对从粗提取物富集的部分或对粗提取物自身进行这些分离。

治疗和预防红细胞聚集和相关病症的方法

病理RBC聚集是高风险并可能致死的症状，其常常伴随衰老、高热量饮食和脑血管疾病。开始时是3-10个或更多个红细胞的聚集。当聚集的RBC簇太大而不能通过毛细血管时，会导致氧输送障碍或甚至血管堵塞，血管堵塞可以引起脑栓塞、心脏病发作、肺栓塞和周围血管栓塞。如果这发生在身体的重要部位，则能引起严重的功能丧失或甚至能威胁生命。

目前可用的抗凝剂(例如华法林)通过抑制凝血因子合成而发挥作用，从而预防血凝块形成。然而，这些抗凝剂对RBC聚集不起作用。在数种疾病状态中，都有报道RBC聚集物造成的微血管闭塞，包括糖尿病视网膜病变、腿部静脉血栓形成、慢性静脉功能不全、视网膜静脉闭塞、肢体末端缺血和巨球蛋白血症。RBC聚集物表现为钱串的形式，其尺寸可以足够大而堵塞小血管。RBC聚集的诱发因素取决于具体的疾病本质。用肝素、华法林、泼尼松和血管舒张剂治疗RBC聚集诱导的堵塞不能提供任何有意义的治疗或无法缓解病情。因此，亟需预防和治疗病理性RBC聚集的药物。

一方面，本公开涉及柔毛水杨梅有机提取物，该提取物能将非正常聚集的红细胞恢复为正常的且分散的形式，从而降低血液粘度并随之改善全身微循环。异常RBC聚集可以导致非正常聚集物结构的形成，其可以由细胞相关因子诱导(降低的膜唾液酸水平)形成，也可以由细胞外因子诱导。在数种病理状态中观察到增加的RBC聚集。例如，由血型糖蛋白的唾液酸化降低引起的RBC增加的聚集，可能是血管性疾病发展和微循环障碍病因中的重要因素。因此，本公开提供通过给予哺乳动物个体有效量的OEGJ来治疗或预防所述个体中的血管性疾病的方法。

在一个实施方案中，本发明组合物对聚集的RBC具有去聚集作用，从而降低血液粘度并明显改善身体的微循环和有效的血液灌注。在一个实施方案中，所述提取物预防RBC聚集，并因此预防心脏病发作、中风(脑发作)、高血压、心脑血管缺血和微循环障碍相关疾病，例如四肢缺血等。在一个实施方案中，所述提取物的去聚集作用增加有效血液灌注并改善微循环来治疗疾病。因此，本发明提供的目的在于抑制血液凝块形成从而预防或治疗与红细胞聚集病症相关的疾病以及抗凝和抗血栓治疗。所述红细胞聚集病症包括例如心肌梗塞、中风、由于周围动脉疾病造成的截肢或肺栓塞。

在一个实施方案中，本发明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以作为与血管扩张剂的联合治疗的一部分进行给药，所述血管扩张剂例如苄环烷、桂利嗪、胞磷胆碱、环扁桃酯、环烟酯、象牙胺(ebumamonine)、phenoxezyl、氟桂利嗪、异丁司特、艾芬地尔、洛美利嗪、naphlole、nikamate、尼麦角林、尼莫地平、罂粟碱、喷替茶碱、nofedoline、长春蔓胺、长春西汀、vichizyl、己酮可可碱、环前列腺素衍生物(例如前列腺素E1和前列腺素I2)、内皮肽受体阻断药(例如博沙坦)、地尔硫卓、尼可地尔和硝酸甘油。

在一个实施方案中，本发明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以作为与另一抗凝剂、溶栓药物或降压药的联合治疗的一部分进行给药。抗凝剂的实例包括肝素(例如肝素钠、肝素钾、达肝素钠、达肝素钙、肝素钙、帕肝素钠(pamaparin sodium)、瑞肝素钠和达那肝素钠)、华法林、依诺肝素、阿加曲班、巴曲酶和柠檬酸钠。抗血小板药的实例包括盐酸噻氯匹定、双嘧达莫、西洛他唑、二十碳五烯酸乙酯、盐酸沙格雷酯、盐酸地拉卓、曲匹地尔、非甾体抗炎药(例如阿司匹林)、贝前列素钠、伊洛前列素和吲哚布芬。溶栓药物的实例包括尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂(例如阿替普酶、替索激酶、那替普酶、帕米普酶、孟替普酶和瑞替普酶)和那沙普酶。降压药的实例包括血管紧张素转化酶抑制剂(例如卡托普利、阿拉普利、赖诺普利、咪达普利、喹那普利、替莫普利、地拉普利、贝那普利、西拉普利、群多普利、依那普利、西罗普利、福辛普利、咪达普利、mobertpril、培哚普利、雷米普利、螺普利和群多普利)、血管紧张素II拮抗剂(例如氯沙坦、坎地沙坦、缬沙坦、依普罗沙坦和伊贝沙坦)、钙通道阻滞剂(例如阿雷地平、依福地平、尼卡地平、巴尼地平、贝尼地平、马尼地平、西尼地平、尼索地平、尼群地平、硝苯地平、尼伐地平、非洛地平、氨氯地平、地尔硫卓、苄普地尔、克仑硫卓、phendilin、戈洛帕米、米贝拉地尔、甲基丁烯胺、司莫地尔、特罗地林、异搏定、西尼地平、依高地平、伊拉地平、拉西地平、乐卡地平、尼莫地平、桂利嗪、氟桂利嗪、利多氟嗪、洛美利嗪、苄环烷、依他苯酮和哌克昔林)、β肾上腺素受体阻断剂(普萘洛尔、吲哚洛尔、茚诺洛尔、卡替洛尔、布尼洛尔、阿替洛尔、醋丁洛尔、美托洛尔、噻吗洛尔、尼普洛尔、喷布洛尔、纳多洛尔、替利洛尔、卡维地洛、比索洛尔、倍他洛尔、塞利洛尔、波吲洛尔、贝凡洛尔、拉贝洛尔、阿普洛尔、氨磺洛尔、阿罗洛尔、苯呋洛尔、布库洛尔、布非洛尔、丁呋洛尔、布拉洛尔、butylidine、丁非洛尔、卡拉洛尔、塞他洛尔、氯拉洛尔、地来洛尔、依泮洛尔、左布诺洛尔、甲吲洛尔、美替洛尔、莫普洛尔、萘肟洛尔、萘比洛尔、氧烯洛尔、普拉洛尔、丙茶洛尔、索他洛尔、sufinalol、他林洛尔、tertalol、托利洛尔、xybenolol和艾司洛尔)、α受体阻断剂(例如氨磺洛尔、哌唑嗪、特拉唑嗪、多沙唑嗪、布那唑嗪、乌拉地尔、酚妥拉明、阿罗洛尔、达哌拉唑、芬司匹利、吲哚拉明、拉贝洛尔、萘哌地尔、尼麦角林、坦索罗辛、妥拉唑林、曲马唑嗪和育亨宾)、交感神经抑制剂(例如氯压定、胍法辛、胍那苄、甲基多巴和利血平)、肼苯哒嗪、托屈嗪、布屈嗪和卡屈嗪。

药物组合物的制剂和剂量

在本发明的各个实施方案中，进行的体外或体内分析来确定本发明试剂(提取物、部位和化合物)的效果以及所述试剂的给药是否适用于治疗个体所患疾病或医学疾病状态。

通常，足以实现治疗或预防效果的本发明组合物的有效量为约0.000001mg/千克体重/天至约10,000mg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约0.01mg/千克体重/天至2000mg/千克体重/天。示例性的治疗方案为每天一次或每周一次或每月一次给药。通常多次给予所述试剂。单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要给药的频率减少。剂量和频率根据试剂在个体中的半衰期而不同。给药的剂量和频率可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，在长期以相对低频率的间隔给予相对低的剂量。某些个体在余生中持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展被延缓或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善。在此之后，可以给予患者预防方案。

毒性

合适的情况下，本文所述的试剂的有效量(例如，剂量)能提供治疗益处，而不会产生对个体的明显毒性。可以通过标准药学程序在细胞培养物或实验动物中确定本文所述的试剂的毒性，例如，通过测定LD₅₀(半数致死量)或LD₁₀₀(绝对致死量)。毒性效应和治疗效果的剂量比是治疗指数。由这些细胞培养分析和动物研究得来的数据可以用于参考制定人类中使用无毒性的剂量范围。合适的情况下，本文所述的试剂的剂量处于包括有效剂量且仅具有很小的毒性或无毒性的循环浓度的范围内。根据所用剂型和给药途径，剂量可以在该范围内变化。确切的制剂、给药途径和剂量可以由医师根据个体的疾病状态来选择。参见，例如，Fingl et al，In：The Pharmacological Basis of Therapeutics，Ch.1(治疗的药理学基础，第一章)(1975)。

根据本发明的方法，可以将所述试剂合并到适于给药的药物组合物中。在一些实施方案中，所述药物组合物可以包含适于对个体进行给药的形式的纯化的或基本纯化的柔毛水杨梅提取物和药学可接受的载体。在其它实施方案中，所述药物组合物所包含的药学可接受的载体在一定程度上由所给予的具体组合物以及用于给予组合物的具体方法决定。因此，适于给予组合物的药物组合物制剂有很多种(参见，例如，Remington′sPharmaceutical Sciences(雷明顿制药科学)，Mack Publishing Co.，Easton，PA 18^th ed.，1990)。通常将药物组合物配制为无菌的、基本上等渗的并且完全符合美国食品与药品管理局的所有良好生产规范(GMP)规程。

当形容组合物、载体、稀释剂和试剂时，术语“药学可接受的”、“生理学容许的”以及其语法变体可交换使用，并且表示该材料能够给予个体，并且不会产生需要禁止组合物给药的程度的不希望的生理学影响。例如，“药学可接受的赋形剂”表示该赋形剂可用于制备通常是安全的，无毒性的且满足需要的药物组合物，并且还包括兽医用途以及人类制药用途能接受的赋形剂。这些赋形剂可以是固体、液体、半固体，或者对于喷雾剂组合物来说，可以是气体。本领域技术人员可容易地确定本发明的具体药物和组合物的合适的给药时机、顺序和剂量。

这些载体或稀释剂的合适的实例包括但不限于，水、盐溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用脂质体和诸如不挥发性油的非水性载体。这些介质和化合物在药学活性物质中的使用是本领域公知的。除了与所述试剂不相容的任何常规介质或化合物之外，其它介质或化合物可用于组合物中。还可以将补充性活性化合物合并到组合物中。

本发明的药物组合物的配制符合其预期的给药途径。本发明的组合物可以通过以下途径给药：胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂。所述试剂可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。

胃肠外、真皮内或皮下施用的溶液或悬液可以包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌化合物，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合化合物，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲液，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的化合物，例如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱调节pH，例如盐酸或氢氧化钠。胃肠外制剂可以装入安瓶、一次性注射器或玻璃或塑料制成的多剂量瓶中。

适于注射使用的药物组合物包括无菌水性溶液(在可溶于水的情况下)或用于临时制备无菌注射液或分散液的分散剂和无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL^TM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲液(PBS)。无论在什么情况下，组合物必须是无菌的，并且其流动性应当易于注射。其在生产和贮存条件下必须稳定，并且必须能抵抗诸如细菌和真菌的微生物的污染活动。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液态聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用诸如卵磷脂的包被、保持需要的颗粒尺寸(在分散液的情况下)和施用表面活性剂来保持合适的流动性。可以利用各种抗菌和抗真菌化合物实现微生物活动的预防，所述抗菌和抗真菌化合物例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸，硫柳汞等。在很多情况下，优选在组合物中包含等渗化合物，例如糖，诸如甘露醇、山梨醇的多元醇，氯化钠。可以通过在组合物中包含延缓吸收的化合物实现注射组合物的持续吸收，所述化合物例如单硬脂酸铝和明胶。

可以通过将所需量的试剂合并入含有一种上文所列成分或上文所列成分的组合的合适的溶剂中然后视情况进行过滤灭菌来制备无菌注射液。通常，通过将结合剂合并到含有基本分散介质和上文所列的所需其它成分的无菌介质中来制备分散剂。对于用于制备无菌注射液的无菌粉末，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从而从之前过滤灭菌的溶液得到活性成分和任何其它所需成分的粉末。可以以积存注射(depot injection)或植入制剂的形式给予本发明的试剂，植入制剂的制备形式能允许活性成分的持续释放或脉冲释放。

口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用的载体。可以将口服组合物封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗给药，结合剂可以与赋形剂合并，并用于片剂、锭剂或胶囊的形式。还可以使用用于漱口水的流体载体来制备口服组合物，其中流体载体中化合物是经口施用、漱口和吐出或吞下。药学相容的结合化合物和/或辅助材料可以作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任何下述成分或具有相似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶态二氧化硅；甜味剂化合物，例如蔗糖或糖精；或调味剂化合物，例如薄荷油、水杨酸甲酯或桔子香精。

在一个实施方案中，所述试剂与能保护所述试剂免于从体内快速清除的载体一起进行制备，例如控释制剂，包括植入物和微胶囊化的递送体系。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对于本领域技术人员是显而易见的。还可以从Alza Corporation和NovaPharmaceuticals，Inc购买所述材料。脂质体悬液(包括靶向于感染细胞的具有针对病毒抗原的单克隆抗体的脂质体)也可用作药学可接受的载体。可以根据本领域已知的方法进行制备，例如，美国专利第4,522,811号中的描述。

实施例

通过以下实施例进一步阐述本技术，但这些实施例不应解释为以任何方式进行限制。

实施例1.用于预防和治疗RBC聚集的活性组合物的制备

本实施例描述了防止RBC聚集和使已聚集的RBC分开成分散良好的细胞群体的活性组合物的鉴定和制备。使用基于生物学分析的策略来筛选植物成分，从而鉴定出表现出这些作用的化合物的组合物。在筛选过程中，分离自柔毛水杨梅的活性部位被鉴定为能有效防止RBC聚集和使已聚集的RBC分散成分散良好的细胞。

简而言之，在七月份从黄山采集成熟柔毛水杨梅，将其干燥。将干燥的植物切成小块，并于室温下用75％乙醇(10倍体积)渗滤6天。将提取物进行电喷雾，得到棕色粉末。

实施例2.人类个体中RBC聚集的治疗

在本实施例中，我们测试了提取物在临床应用中对患有RBC聚集患者的治疗效果。所进行的测试得到了患者的知情及书面同意。患者为58岁，具有头晕、胸闷以及手指突发紫绀和疼痛。该患者无糖尿病史，雷诺氏现象或畏寒。身体检查发现患者手指末梢紫绀。患者外周血涂片的显微镜检查发现长钱串样的重度RBC聚集，所述长钱串由每链或每丛10-100个RBC组成(图1A)。患者感觉头痛、胸闷、头晕、手指发冷和对常规抗凝剂治疗无反应。

然后，在第一位患者完全知情同意的情况下，用实施例1的提取物对他进行2周的治疗(口服，3g/天)。治疗后1周，每链10-100个RBC组成的红细胞长钱串不再形成，聚集物由每个聚集物仅具有2-10个红细胞的短钱串和很多良好分散的红细胞组成(图1B)。用提取物治疗患者2周后，检查发现患者的RBC聚集物被完全分散，几乎所有的红细胞都充分分开，几乎未观察到RBC聚集物(图1C)。同时，2周提取物的治疗为患者的以上缺血症状带来迅速缓解，所述缺血症状例如头晕、头痛和胸闷，他的手指的颜色和温暖感复原。也就是说，RBC聚集的减少导致血液粘度降低，因此对患者所有器官和组织的有效血液灌注和氧合增加，正如所提示的那样，他手指末梢的血液灌注和症状得到显著改善。

其他3名男性患者(55-65岁)报告头晕、胸闷、四肢缺血和血液粘度高。用暗场相差显微镜检查他们外周血涂片时，发现显著程度的RBC聚集(表1)。然后，在他们完全知情和书面同意的情况下，用相同方案治疗(3g/天，治疗2周)。结果显示他们都达到了与第一位患者相似的治疗效果。治疗后1周，钱串样RBC聚集物显著缩短；治疗2周后，红细胞更加良好分散，并且几乎未观察到红细胞聚集现象(表1)。患者临床症状迅速缓解的根本机制可能就在于RBC聚集明显减少而使血液粘度下降。异常RBC聚集伴随明显钱串形成可能引起患者手指缺血、头晕和胸闷。

这些结果表明：用实施例1的活性提取物治疗患者能显著减少患者血液中的RBC聚集。因此，血液粘度降低，这进一步有助于增加有效血液灌注和RBC的氧携带能力。降低的血液粘度和良好分散的RBC会增加能穿过毛细血管的RBC总数。RBC聚集增加低剪切率时的血液粘度，并且这种增加的粘度会导致血液流动停滞和血栓形成的倾向。

因此，我们发现OEGJ在治疗多种微循环相关疾病或疾病状态中是非常有用的，例如脑灌注不足或缺血、缺血性心脏病、肺栓塞、静脉栓塞、外周缺血、心衰、四肢缺血(雷诺氏现象)、糖尿病性神经病和慢性皮肤溃疡。因此，该提取物可用于治疗上述多种微循环相关疾病。

表1

症状	治疗前	治疗后
			头晕	+++至++++	-
胸闷	+至++	-
			手指缺血	++至+++	-
血液粘度高	+++至++++	-至+
			RBC聚集	+++至++++	-

尽管已经展示并描述了某些实施方案，但是应当理解，在不脱离权利要求书所限定的较宽范围中的技术的情况下，本领域技术人员可以在其中做出改变和改动。

本公开不应局限于本申请所述的具体实施方案。在不脱离其实质和范围的情况下，可以进行很多改动和变化，这对于本领域技术人员是显而易见的。本公开范围内除本文所列之外的功能上等同的方法和装置对于阅读了上述描述的本领域技术人员是显而易见的。这些改动和变化意图包括在附加权利要求书的范围内。本公开仅受附加权利要求书的内容以及这些权利要求赋予权力的等同物的全部范围的限制。应当理解，本公开不局限于具体方法、试剂、化合物、组合物或生物体系，上述是必然能够变化的。还应当理解，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案，而并非意图进行限制。

此外，当以马库什组的方式描述本公开的特征或方面时，本领域技术人员应当认识到，还从任何个体成员或马库什组成员的亚组的方式描述了本公开。

本领域技术人员应当理解，为了任何和所有目的，特别是在提供书面描述方面的目的，本文公开的所有范围还包括任何和所有可能的子范围以及子范围的组合。任何列出的范围能容易地被认为充分描述和赋予了同一范围被分解为至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等的情况。作为非限制性实例，本文讨论的每个范围能容易地分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本领域技术人员还应当理解，诸如“多至”、“至少”、“大于”、“少于”等的所有语言包括所记载的数值，并且是指能如上文所讨论随后分解成子范围的范围。最后，本领域技术人员应当理解，一个范围包括每个个体成员。因此，例如，具有1-3个单元的组是指具有1、2或3个单元的组。同样，具有1-5个单元的组是指具有1、2、3、4或5个单元的组，以此类推。

尽管本文中公开了各个方面和实施方案，其他方面和实施方案对于本领域技术人员是显而易见的。本文公开的各个方面和实施方案仅是说明目的，而不是意图进行限制，附加权利要求书表明真正的范围和实质。

参考文献

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Claims (12)

1.治疗或预防有需要的哺乳动物个体中红细胞(RBC)聚集的方法，包括给予所述哺乳动物个体有效量的柔毛水杨梅(Geum japonicum)有机提取物。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述有机提取物是乙醇提取物。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述有机提取物是甲醇提取物。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述RBC聚集与糖尿病、疟疾、心衰、缺血性心脏病、中风、脑灌注不足、四肢缺血、高血压、血液学病症或感觉缺失有关。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述个体是人。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述柔毛水杨梅提取物是口服给药。

7.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述柔毛水杨梅提取物通过皮下注射、肌内注射或静脉输注进行给药。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中给予的所述提取物的量为0.01mg/kg/天至10000mg/kg/天。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述有效量的提取物是包含所述提取物和药学可接受的载体的制剂的形式。

10.用于抑制哺乳动物个体中红细胞聚集的药物组合物，包含有效量的柔毛水杨梅(Geum japonicum)有机提取物和药学可接受的载体。

11.如权利要求10所述的组合物，其中所述有机提取物是乙醇提取物。

12.如权利要求10所述的组合物，其中所述有机提取物是甲醇提取物。

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