CN102548560A

CN102548560A - 用于预防和治疗冠心病的组合物和方法

Info

Publication number: CN102548560A
Application number: CN2010800305033A
Authority: CN
Inventors: 李明; 刘宏伟
Original assignee: Generex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Generex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2009-06-12
Filing date: 2010-06-11
Publication date: 2012-07-04
Anticipated expiration: 2030-06-11
Also published as: AU2017202573B2; EP2440220A1; AU2017202573A1; AU2010258351B2; AU2016202674A1; EP2440223A4; JP2012529488A; AU2010258352A1; CN102548571B; CN102548560B; EP2440212A4; US20120082741A1; JP5689117B2; EP2440222A1; WO2010143058A1; AU2010258356B2; JP2015164966A; EP2440209A4; JP2012529487A; AU2017202572B2

Abstract

本文公开了用于预防或治疗包括冠心病在内的心脏病的化合物和植物提取物以及方法。本文提供的化合物可配制为可用于所公开的方法的药物组合物和药物。还提供了所述化合物和提取物在制备药物制剂和药物中的用途。

Description

用于预防和治疗冠心病的组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2009年6月12日提交的美国临时申请第61/186,709号和于2009年6月17日提交的美国临时申请第61/187,905号的优先权，通过引用将上述申请的全部内容并入本文。

发明背景

提供以下描述是为了有助于阅读者的理解，并不是承认提供的信息或引用的文献是本发明的现有技术。

冠心病(CHD)是由于冠状动脉的闭塞，其引起部分心脏的供血显著减少或中断，导致心肌细胞的损伤或死亡。尽管有效的治疗不断发展，CHD仍然是西方国家发病率和死亡率的主要原因。在美国，CHD是主要死亡原因，约15,000,000名美国人患有CHD并且每年500,000人死于CHD。亚洲的某些发达地区也出现了相似的趋势(在新加坡为第二大死因，在香港和中国为第三大死因)。

CHD的根本病理学原因是部分冠状动脉的变窄或完全阻断，进而引起其所支配区的心肌缺血或心肌梗塞。尽管目前的治疗方法能延缓CHD的进程，但针对CHD病理变化的实质性或根治性治疗的有效治疗形式还是未知。在CHD中，受损心脏的缺血或梗塞区中自身的新血管生成太微不足道，难以满足缺血区心肌组织收缩代偿所需的氧和营养物的需求，更不足以支持代偿肥大心肌的更大的供血需求，特别是沿着梗塞边界区的心肌细胞是具有风险的。对代偿性肥大的心肌细胞的氧和营养物供应的相对缺乏，可能是导致这些代偿肥大的心肌细胞死亡的重要原因，进而导致心肌梗塞区的不断扩大以及纤维化取代的不断扩大。因此，挽救有风险的和代偿肥大的心肌细胞的最直接的方式是在心肌缺血的早期建立新的侧支循环对缺血心肌恢复供血，从而允许氧以及循环干细胞、营养物和生长因子被递送到心肌缺血或梗塞区以进行修复。因此，通过在心肌的缺血区快速血管生成来恢复冠状动脉对缺血区的血供就能为难治性的CHD提供直接并有效的治疗形式。

尽管利用诸如VEGF、aFGF、bFGF或PDGF等等生长因子可以促进血管生成的特性来作为治疗缺血性疾病的可能已进行了深入研究，但由于一是这些生长因子需要数周才能发挥作用，二是它们在心肌缺血区促进新的侧支血管生长的能力得到质疑，也没有得到证实。而，冠状动脉闭塞引起的心肌坏死在约数分钟到数小时内就迅速发生。结果是受影响的心肌组织的迅速坏死和纤维组织的生长，取代梗塞的心脏组织形成纤维瘢痕并为任何新再生的心肌细胞更换只留下了很小的空间。目前，还没有任何可用的药物和治疗方法能促进在心肌的缺血区以新形成侧支循环血管为基础，早期重建受损冠状动脉血管系统。

发明概述

在各方面中，本公开涉及用于治疗冠心病的化合物、组合物和方法。一方面，本发明涉及用于治疗或预防冠心病的化合物、组合物和方法。另一方面，本公开涉及用于诱导缺血心脏中新的侧支血管生成的化合物、组合物和方法，新的侧支血管的生长向心肌缺血/梗塞区恢复供血以提供氧和营养物，所以所述化合物、组合物和方法可用于针对冠心病病理变化的实质性、治愈性治疗。

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防哺乳动物个体中的冠心病的方法，包括给予有需要的个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐；

其中每个R₁独立地选自H、卤素、羟基、羧基、硝基、氨基、腈或取代的或未取代的C₁-C₆烷基、烷氧基、羟烷基、环烷基、环烷基烷基、烯基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基、杂环烷基、羧烷基、烷氧烷基、氨烷基、卤代烷基、卤代烷氧基、烷酰基和烷酰氧基；以及

R₂和R₃各自为H或O-R₁，使得当R₂是H时，R₃是O-R₁，并且当R₂是O-R₁时，R₃是H。

在一个实施方案中，式I的化合物具有式IA，

其中R₂和R₃各自为H或O-R₁，使得当R₂是H时，R₃是O-R₁，并且当R₂是O-R₁时，R₃是H。

在另一个实施方案中，式II的化合物具有式IIA，

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防哺乳动物个体中的冠心病的方法，包括给予有需要的个体有效量的选自以下的组合物：(i)植物金樱子(Fructus Rosae Laevigatae)的有机提取物，(ii)植物金樱子的有机提取物的活性部位；和(iii)式(I)、(IA)、(II)或(IIA)的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

在一些实施方案中，所述方法包括给予有需要的个体有效量的一种或多种以下化合物：式(I)、(IA)、(II)和(IIA)的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

另一方面，本发明提供了促进哺乳动物个体中由缺血性心脏病导致的梗死或受损心脏组织中血管再生的方法，所述方法包括给予个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

另一方面，本发明提供了在有需要的个体中上调许多血管生成因子和其它辅助因子的表达从而诱导缺血性或梗塞性心肌中新的冠状动脉侧支血管生成的方法，所述方法包括给予个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，其中所述血管生成因子是VEGF、VEGFR、EGF和FGF等中的一种或多种。

另一方面，本发明提供了方法治疗哺乳动物个体中缺血性心脏病或四肢缺血的方法，包括给予个体有效量的式(I)或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

在一些实施方案中，所述个体可以是需要血管生成治疗的任何哺乳动物，例如人、狗、猫、牛、羊、猪、马、猴、大鼠、小鼠、兔和豚鼠。在一些实施方案中，所述哺乳动物个体是人。

所述化合物或组合物可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、胃肠外、静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠或局部。在一些实施方案中，所述化合物或组合物通过静脉内给药。在其它实施方案中，所述化合物或组合物通过口服给药。

所给予的化合物和组合物的量能产生所需的效果。在一些实施方案中，所述有效量包括能在哺乳动物个体中预防或治疗冠心病、促进梗死或受损心脏组织中血管再生和/或上调血管生成因子表达的量和剂量。在一些实施方案中，所给予的化合物或组合物的量为0.01mg/kg/天至2000mg/kg/天。在一些实施方案中，所述有效量的化合物或组合物是包含所述化合物或组合物和药学可接受的载体的药物制剂的形式。

一方面，本发明提供用于治疗或预防冠心病的药物组合物，包含药学上可接受的赋形剂和有效量的选自以下的化合物：式I或式II、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐；

在一些实施方案中，所述药物组合物中式I的化合物具有IA结构。在其它实施方案中，所述药物组合物中式II的化合物具有IIA结构。在一些实施方案中，所述药物组合物还可以包含抗心律失常药或心血管药。

附图简要描述

图1是说明从金樱子植物分离式I和II的促血管生成素(angioenhancin)化合物的方法的流程图。

图2展示了一系列显微图像，其显示了式I和II的促血管生成素化合物诱导的血管内皮细胞(HUVEC)分化。图a和b显示介质处理的细胞，其表现出增殖，但没有分化的迹象。图c显示促血管生成素-I(式I的化合物，20μg/ml)治疗所增强的分化，图中显示出变狭长的细胞。图d显示促血管生成素-I(40μg/ml)治疗的细胞，处理的细胞表现出狭长的血管内皮细胞的表型，并形成血管样结构。图e显示促血管生成素-II(式II的化合物，10μg/ml)治疗的细胞，其表现出折光性好且狭长的细胞。图f显示促血管生成素-II(20μg/ml)治疗的细胞，其表现出狭长的血管内皮细胞的表型，具有血管内皮细胞分化的典型特征。促血管生成素-II(40μg/ml)治疗的细胞表现出狭长和环形表型，形成图g所示的血管样结构。

图3展示的数据显示出促血管生成素所诱导的毛细血管样管腔形成。图a显示了对照人大动脉内皮细胞(HAEC)，该细胞是第7代，培养了22小时，形成较少的毛细血管样管腔。图b显示促血管生成素-I(式I的化合物，5μg/ml)所促进的毛细血管样管状结构的生成，其明显多于未处理对照。图c显示促血管生成素-II(式II的化合物)所诱导的毛细血管样管腔生成，其显著多于未处理对照，但少于促血管生成素-I治疗。图D显示不同浓度的式I或式II的促血管生成素化合物处理后毛细血管样管腔的总长度。

图4显示促血管生成素治疗性诱导缺血心肌中的侧支血管生成。C：LAD结扎后2周，介质处理的心脏中的梗塞区，主要显示出纤维化。A-I：LAD结扎后2周，促血管生成素-I(式I的化合物)治疗的心脏中的梗塞区。发现很多新形成的充满了红细胞的有功能的侧支血管。A-II：LAD结扎后2周，促血管生成素-II(式II的化合物)治疗的心脏中的梗塞区，观察到很多新形成的充满了红细胞的血管。C1：LAD部分结扎后2周，未治疗的对照的慢性缺血心脏。A1-I：LAD部分结扎后2周，促血管生成素-I治疗的慢性缺血心脏显示出的血管多于介质处理的心脏(C1)。A1-II：LAD部分结扎后2周，促血管生成素-II治疗2周的慢性缺血心脏显示出的血管多于介质处理的心脏(C1)。促血管生成素-I或II治疗的缺血心脏中的平均血管密度高于介质处理的心脏。

图5展示了实验动物缺血心脏功能的超声心动图评价。A：图as显示了促血管生成素治疗的CHD心脏的收缩末期容积的代表性图像。图ad显示了同一动物的舒张末期容积的代表性超声心动图图像。图cs显示了介质处理的CHD心脏的收缩末期容积的代表性图像。图cd显示了同一动物的舒张末期容积的代表性超声心动图图像。图B显示了促血管生成素-I或II治疗的和介质处理的心脏的LVEF水平(p＜0.001)。图C显示了促血管生成素-I或II治疗的和介质处理的心脏的LVFS水平(p＜0.001)。

发明详细描述

在各方面中，本公开提供用于预防或治疗冠心病的化合物、提取物和方法。本文提供的化合物可以配制为可用于公开的方法的药物组合物和药物。还提供了所述化合物和提取物在制备药物制剂和药物中的用途。

应当理解，为了提供对本发明的实质性理解，下文以不同详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方案、变化和特征。以下术语在全文中按下文所述使用，除非上下文明确指明另外情况。

通常，涉及某种元素时，例如氢或H，意图包括该元素的所有同位素。例如，如果R基被定义为包括氢或H，则它还包括氘和氚。因此，包含诸如氚、¹⁴C、³²P和³⁵S的放射性同位素的化合物也包括在本发明的范围内。根据本文的公开内容，将这些标记插入本发明化合物的方法对于本领域技术人员是显而易见的。

通常，“取代的”是指下文定义的有机基团(例如，烷基)，其包含的一个或多个与氢原子的键被与非氢原子或非碳原子的键所替换。取代的基团还包括这样的基团，其中一个或多个与碳或氢原子的键被一个或多个与杂原子的键(包括双键或三键)所替换。因此，取代的基团被一个或多个取代基所取代，除非另外限定。在一些实施方案中，取代的基团被1、2、3、4、5或6个取代基所取代。取代基的实例包括：卤素(即，F、Cl、Br和I)、羟基、烷氧基、烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、杂环氧基和杂环基烷氧基、羰基(氧代)、羧基、酯、尿烷、肟、羟基胺、烷氧基胺、芳烷氧基胺、硫醇、硫化物、亚砜、砜、磺酰基、磺酰胺、胺、氮氧化物、肼、酰肼、腙、叠氮化物、酰胺、脲、脒、胍、烯胺、酰亚胺、异氰酸酯、异硫氰酸酯、氰酸酯、硫代氰酸酯、亚胺、硝基、腈(即，CN)等。取代的还包括多重取代，例如，双取代的基团，例如二烷基、二芳基等。

诸如取代的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基的取代的环基还包括环和稠合环体系，其中与氢原子的键被与碳原子的键替换。因此，取代的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基还可以被下文所定义的取代的或未取代的烷基、烯基和炔基所取代。

烷基包括具有1至12个碳原子的直链和支链烷基，通常具有1至10个碳，或在一些实施方案中，具有1至8、1至6或1至4个碳原子。直链烷基的实例包括，例如甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。支链烷基的实例包括但不限于，异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、新戊基、异戊基和2，2-二甲基丙基。代表性的取代的烷基可以被取代基取代一次或多次，所述取代基例如上文所列出的取代基并且包括但不限于卤代烷基(例如，三氟甲基)、羟烷基、硫代烷基、氨烷基、羧烷基等。

环烷基包括在环中具有3至14个碳原子的单环烷基、双环烷基或三环烷基，或者在一些实施方案中，具有3至12、3至10、3至8或3、4、5或6个碳原子。示例性的单环环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在一些实施方案中，环烷基具有3至8个环成员，而在其它实施方案中，环碳原子的数量为3至5、3至6或3至7。双环体系和三环体系包括桥接的环烷基和稠合环，所述桥接的环烷基例如但不限于金刚烷基，所述稠合环例如但不限于十氢萘基(decalinyl)等。取代的环烷基可以被上文定义的非氢和非碳基团一次或多次取代。然而，取代的环烷基还包括被上文定义的直链烷基或支链烷基取代的环。代表性的取代的环烷基可以是单取代的或多次取代，例如但不限于2，2-、2，3-、2，4-、2，5-或2，6-双取代的环己基，其可以被例如上文列出的取代基所取代。

环烷基烷基是如上文定义的烷基，其中烷基的氢键或碳键被上文定义的环烷基的键所替代。在一些实施方案中，环烷基烷基具有4至16个碳原子、4至12个碳原子，并通常为4至10个碳原子。取代的环烷基烷基可以在该基团的烷基、环烷基或烷基和环烷基部分被取代。代表性的取代的环烷基烷基可以是单取代的或多次取代，例如，但不限于，被例如上文列出的取代基单取代、双取代或三取代。

烯基包括如上文定义的直链和支链烷基，但至少存在一个存在于两个碳原子之间的双键。因此，烯基具有2至12个碳原子，并通常具有2至10个碳，或者在一些实施方案中，具有2至8、2至6或2至4个碳原子。实例但不限于乙烯基、烯丙基、-CH＝CH(CH₃)、-CH＝C(CH₃)₂、-C(CH₃)＝CH₂、-C(CH₃)＝CH(CH₃)、-C(CH₂CH₃)＝CH₂等。代表性的取代的烯基可以是单取代的或多次取代，例如，但不限于，被例如上文列出的取代基单取代、双取代或三取代。

芳基是不含杂原子的环状芳烃。本文的芳基包括单环体系，双环体系和三环体系。因此，芳基包括但不限于，苯基、薁基、庚搭烯基、联苯基、芴基、菲基、蒽基、茚基、茚满基、戊搭烯基和萘基。在一些实施方案中，芳基在基团的环部分含有6-14个碳，在其它实施方案中，含有6至12或甚至6-10个碳原子。在一些实施方案中，芳基是苯基或萘基。尽管词组“芳基”包括含有稠合环的基团，例如稠合的芳香族-脂肪族环体系(例如，茚满基、四氢萘基等)，但不包括具有与环成员之一键合的诸如烷基或卤代基的其它基团的芳基。而诸如甲苯基的基团被称为取代的芳基。代表性的取代的芳基可以是单取代的或多次取代。例如，单取代的芳基包括但不限于，2-、3-、4-、5-或6-取代的苯基或萘基，其可以被例如上文列出的取代基所取代。

芳烷基是如上文定义的烷基，其中烷基的氢键或碳键被上文定义的芳基的键所替换。在一些实施方案中，芳烷基含有7至16个碳原子、7至14个碳原子或7至12个碳原子。取代的芳烷基可以在该基团的烷基、芳基或烷基和芳基被取代。代表性的芳烷基包括但不限于苯甲基和苯乙基和稠合(环烷基芳基)烷基，例如4-茚满基乙基。代表性的取代的芳烷基可以被例如上文列出的取代基取代一次或多次。

杂环基包括含有3个或更多个环成员的非芳香环化合物，所述环成员中的一个或多个是杂原子，例如，但不限于N、O和S。在一些实施方案中，杂环基含有1、2、3或4个杂原子。在一些实施方案中，杂环基包括具有3至16个环成员的单环、双环和三环，而其它此类基团具有3至6、3至10、3至12或3至14个环成员。杂环基包括部分不饱和的和饱和的环体系，例如，咪唑啉基和咪唑烷基。词组“杂环基”包括稠合环类，包括例如，六氢吡咯烷。该词组还包括含有杂原子的桥接多环体系，例如，但不限于，奎宁基。然而，该词组不包括具有与环成员之一键合的诸如烷基、氧代或卤代基的其它基团的杂环基。而这些基团被称为“取代的杂环基”。杂环基包括但不限于，氮丙啶、吖丁啶基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、噻唑烷基、四氢硫代苯基、四氢呋喃基、二草酰基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑啉基、噻唑啉基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、氧硫杂环已烷、二噻烷基、吡喃基、二氢吡啶基、二氢dithiinyl、二氢二亚硫酰基、高哌嗪基、奎宁基、吲哚啉基、吲嗪基、苯并恶嗪基、苯并dithiinyl、苯并呫吨基、苯并噻嗪基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[1，3]二草酰基、喹嗪基、喹恶啉基、喹唑啉基、噌啉基、二氢苯并噻嗪基、二氢苯并呋喃基、二氢吲哚基、二氢苯并二恶烷基、四氢吲哚基、四氢吲唑基、四氢苯并咪唑基、四氢苯并三唑基、四氢吡咯并吡啶基、四氢吡唑并吡啶基、四氢咪唑并吡啶基、四氢三唑并吡啶基和四氢喹啉基。代表性的取代的杂环基可以是单取代的或多次取代，例如，但不限于，用例如上文列出的各种取代基2-、3-、4-、5-或6-取代的或双取代的吗啉基。

杂芳基是含有5个或更多个环成员的芳香环化合物，其中的一个或多个环成员是杂原子，例如，但不限于N、O和S。杂芳基包括，但不限于，例如吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、硫代苯基、苯并硫代苯基、呋喃基、苯并呋喃基、吲哚基、氮杂吲哚基(吡咯吡啶基)、吲唑基、苯并咪唑基、咪唑并吡啶基(氮杂苯并咪唑基)、吡唑并吡啶基、三唑并吡啶基、苯并三唑基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、咪唑并吡啶基、异恶唑并吡啶基、硫代萘基、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、喹恶啉基和喹唑啉基。杂芳基包括所有环都是芳香环的稠合环化合物，例如吲哚基，并且也包括只有一个环是芳香环的稠合环化合物，例如2，3-二氢吲哚基。尽管词组“杂芳基”包括稠合环化合物，但是该短语不包括具有与环成员之一键合的诸如烷基的其它基团的杂芳基。而具有这样的取代的杂芳基被称为“取代的杂芳基”。代表性的取代的杂芳基可以被例如上文列出的各种取代基取代一次或多次。

杂环烷基是如上文定义的烷基，其中烷基的氢键或碳键被与上文定义的杂环基的键所替代。取代的杂环烷基可以在该基团的烷基、杂环基或烷基和杂环基部分被取代。代表性的杂环烷基包括但不限于，吗啉-4-基-乙基、哌嗪-1-基-甲基、四氢呋喃-2-基-乙基和哌啶基-丙基。代表性的取代的杂环烷基可以被例如上文列出的取代基取代一次或多次。

杂芳烷基是如上文定义的烷基，其中烷基的氢键或碳键被与上文定义的杂芳基的键所替代。取代的杂芳烷基可以在该基团的烷基、杂芳基或烷基和杂芳基部分被取代。代表性的取代的杂芳烷基可以被例如上文列出的取代基取代一次或多次。

在本发明化合物中，使用后缀“ene”命名本文所述具有两个或更多个连接点(即，二价、三价或多价)的基团。例如，二价烷基是烯基，二价芳基是芳烯基，二价杂芳基是二价杂芳烯基，以此类推。具有与本发明化合物的单一连接点的取代的基团不使用“ene”命名。因此，例如，氯乙基在本文中不称为氯乙烯基。

烷氧基和环烷氧基是如下所述的羟基(-OH)，其中与氢原子的键被与上文定义的取代的或未取代的烷基的碳原子的键所替代。线性烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。支链烷氧基的实例包括但不限于异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、异戊氧基、异己氧基等。环烷氧基的实例包括但不限于环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。代表性的取代的烷氧基可以被例如上文列出的取代基取代一次或多次。

术语“芳氧基”和“芳基烷氧基”分别是指与氧原子键合的取代的或未取代的芳基和在烷基处与氧原子键合的取代的或未取代的芳烷基。实例包括但不限于苯氧基、萘氧基和苯甲氧基。代表性的取代的芳氧基和芳基烷氧基可以被例如上文列出的取代基取代一次或多次。

本文所用的术语“羧基(carboxyl)”和“羧基(carboxy)”是指-COOH。

本文所用的术语“酯”是指-COOR³⁰。R³⁰是本文定义的取代的或未取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。

术语“酰胺(amide)”(或“酰胺(amido)”)包括C-酰胺基和N-酰胺基，即，分别为-C(O)NR³¹R³²和-NR³¹C(O)R³²。R³¹和R³²独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。因此，酰胺基包括但不限于胺甲酰基(-C(O)NH₂)和甲酰胺基(-NHC(O)H)。

尿烷基包括N-尿烷基和O-尿烷基，即，分别为-NR³³C(O)OR³⁴和-OC(O)NR³³R³⁴。R³³和R³⁴独立地为本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。R³³还可以是-H。

本文所用的术语“氨基(amine)”(或“氨基(amino)”)是指-NHR³⁵和-NR³⁶R³⁷，其中R³⁵、R³⁶和R³⁷独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。在一些实施方案中，氨基是NH₂、甲氨基、二甲氨基、乙氨基、二乙氨基、丙氨基、异丙氨基、苯氨基或苯甲氨基。

术语“磺酰胺”包括S-磺酰胺基和N-磺酰胺基，即，分别为-SO₂NR³⁸R³⁹和-NR³⁸SO₂R³⁹。R³⁸和R³⁹独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。因此，磺酰胺基包括但不限于氨磺酰(-SO₂NH₂)。

术语“硫醇”是指-SH，而硫化物包括-SR⁴⁰，亚砜包括-S(O)R⁴¹，砜包括-SO₂R⁴²，磺酰基包括-SO₂OR⁴³。R⁴⁰、R⁴¹、R⁴²和R⁴³每个独立地为本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。

术语“脲”是指-NR⁴⁴-C(O)-NR⁴⁵R⁴⁶。R⁴⁴、R⁴⁵和R46独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。

术语“脒”是指-C(NR⁴⁷)NR⁴⁸R⁴⁹和-NR⁴⁷C(NR⁴⁸)R⁴⁹，其中R⁴⁷、R⁴⁸和R49每个独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。

术语“胍”是指-NR⁵⁰C(NR⁵¹)NR⁵²R⁵³，其中R⁵⁰、R⁵¹、R⁵²和R⁵³每个独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。

术语“烯胺”是指-C(R⁵⁴)＝C(R⁵⁵)NR⁵⁶R⁵⁷和-NR⁵⁴C(R⁵⁵)＝C(R⁵⁶)R⁵⁷，其中R⁵⁴、R⁵⁵、R⁵⁶和R⁵⁷每个独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。

术语“酰亚胺”是指-C(O)NR⁵⁸C(O)R⁵⁹，其中R⁵⁸和R⁵⁹每个独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基。

术语“亚胺”是指-CR⁶⁰(NR⁶¹)和-N(CR⁶⁰R⁶¹)，其中R⁶⁰和R⁶¹每个独立地为氢或本文定义的取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基或杂环基，只要R⁶⁰和R⁶¹不同时为氢。

术语“离去基团”是指在化学反应中可以被另一原子或原子基团(例如，亲核剂，例如胺、硫醇、负碳离子等)替代的原子或原子基团。示例性的离去基团是本领域公知的，并且包括但不限于卤素基团(例如，I、Br、F、Cl)，磺酸酯基团(例如，甲磺酸酯、苯甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯)，取代的烷基磺酸酯基团(例如，卤代烷基磺酸酯)；C₆-芳氧基或取代的C₆-芳氧基；酰氧基等。

术语涉及对羟基、胺基、羧基和硫醇基进行“保护”是指能借助于保护基受到保护而不会发生不希望的反应的这些官能团形式。诸如羟基、氨基、羧基和硫醇保护基的保护基对于本领域技术人员是已知的，并且能够使用公知的方法添加或去除，例如Protective Groups in OrganicSynthesis(有机合成中的保护基)，Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.，John Wiley& Sons，New York，NY，(第三版，1999)中所述的保护基。受保护的羟基的实例包括但不限于，硅醚，例如通过使羟基与例如但不限于叔丁基二甲基氯硅烷、三甲基氯硅烷、三异丙基氯硅烷、三乙基氯硅烷的试剂进行反应而获得的硅醚；取代的甲基和乙基醚，例如但不限于甲氧基甲基醚、甲基硫代甲基醚、苯甲氧基甲基醚、叔丁氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氢吡喃基醚、1-乙氧基乙基醚、叔丁基醚、烯丙基醚、苯甲基醚；酯，例如但不限于，苯甲酰、甲酸酯、乙酸酯、三氯乙酸甲酯和三氟乙酸甲酯。

氨基保护基(也称为N保护基)包括酰基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、酞酰基、o-硝基苯氧基乙酰基、a-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等；磺酰基，例如苯磺酰基、对甲苯磺酰基等；氨基甲酸酯形成基团，例如苯甲氧基羰基、对氯苯甲氧基羰基、对甲氧基苯甲氧基羰基、对硝基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、对溴苯甲氧基羰基、3，4-二甲氧基苯甲氧基羰基、3，5-二甲氧基苯甲氧基羰基、2，4-二甲氧基苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基苯甲氧基羰基、3，4，5-三甲氧基苯甲氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苯甲氧基羰基、二苯甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2，2，2，-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、环戊氧基羰基、金刚烷氧基羰基、环己氧基羰基、苯基硫代羰基等；烷基，例如苯甲基、三苯基甲基、苯甲氧基甲基等；和甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基等。典型的氨基保护基包括甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、苯基磺酰基、苯甲基、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔丁氧基羰基(Boc)和苯甲氧基羰基(Cbz)。

受保护的硫醇基的实例包括但不限于，硫醚，例如S-苯甲基硫醚、S-叔丁基硫醚和S-4-甲基吡啶基硫醚；取代的S-甲基衍生物，例如半硫代、二硫代和氨基硫代缩醛；以及其它。

代表性的羧基保护基是C₁-C₈烷基(例如、甲基、乙基或叔丁基等)；卤代烷基，例如trichloryphtye等；烯基，例如烯丙基等；环烷基及其取代的衍生物，例如环己基、环戊基等；环烷基烷基及其取代的衍生物，例如环己基甲基、环戊基甲基等；芳烷基，例如苯乙基或苯甲基及其取代的衍生物，例如烷氧基苯甲基或硝基苯甲基等；芳烯基，例如苯乙烯基等；芳基及其取代的衍生物，例如5-茚满基等；二烷基氨烷基(例如、二甲基氨基乙基等)；酰氧基烷基，例如乙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基甲基、戊酰氧基甲基、异丁酰氧基甲基、异戊酰氧基甲基、1-(丙酰氧基)-1-乙基、1-(新戊酰氧基)-1-乙基、1-甲基-1-(丙酰氧基)-1-乙基、新戊酰氧基甲基、丙酰氧基甲基等；环酰氧基烷基，例如环丙基羰氧基甲基、环丁基羰氧基甲基、环戊基羰氧基甲基、环己基羰氧基甲基等；aroyloxy烷基、例如苯甲酰氧基甲基、苯甲酰氧基乙基等；芳基烷基羰氧基烷基，例如苯甲基羰氧基甲基、2-苯甲基羰氧基乙基等；烷氧基羰基烷基，例如甲氧基羰基甲基、环己氧基羰基甲基、1-甲氧基羰基-1-乙基等；烷氧基羰氧基烷基，例如甲氧基羰氧基甲基、叔丁氧基羰氧基甲基、1-乙氧基羰氧基-1-乙基、1-环己氧基羰氧基-1-乙基等；烷氧基羰基氨烷基，例如叔丁氧基羰基氨基甲基等；烷基氨基羰基氨烷基，例如甲基氨基羰基氨基甲基等；酰基氨烷基，例如乙酰基氨基甲基等；杂环基羰氧基烷基，例如4-甲基哌嗪基羰氧基甲基等；二烷基氨基羰基烷基，例如二甲基氨基羰基甲基、二乙基氨基羰基甲基等；(5-(烷基)-2-氧代-1，3-二氧杂环-4-基)烷基、例如(5-叔丁基-2-氧代-1，3-二氧杂环-4-基)甲基等；和(5-苯基-2-氧代-1，3-二氧杂环-4-基)烷基、例如(5-苯基-2-氧代-1，3-二氧杂环-4-基)甲基等。

本领域技术人员容易、应当理解，本发明的化合物可以表现出互变异构现象、构象异构现象、几何异构现象和/或立体异构现象。因为说明书和权利要求书中的结构式图仅能展示一种可能的互变异构、构象异构、立体异构体或几何异构形式，所以应当理解，本发明包括具有一种或多种本文所述的功效的化合物的任何互变异构、构象异构、立体异构体和/或几何异构形式，以及这些各种不同形式的混合物。

术语“互变异构体”是指化合物在彼此平衡时的异构形式。异构形式的存在和浓度取决于化合物所处的环境，并且可以根据例如该化合物是固体还是处于有机或水性溶液而不同。

本领技术人员应当理解，多种官能团和其它结构可以表现出互变异构现象，并且本文所述的化合物的所有互变异构体都包括在本发明的范围内。

化合物的立体异构体(也称为光学异构体)包括结构的所有手性形式、非对映形式和外消旋形式，除非明确指出具体的立体化学。因此，本发明中所用的化合物包括在任何或所有非对称的原子处密集的或解析的光学异构体，这从描述中可以显而易见地看出。可以分离或合成外消旋和非对映混合物以及单独光学异构体，使其基本脱离于它们的对映或非对映伴侣，并且这些立体异构体都包括在本发明的范围内。

本发明的化合物可以以前药和生物电子等排体的形式存在。本文所用的“前药”是指由于连接一种或多种专门的保护基而产生的化合物的非活性形式，所述保护基是暂时用于改变或消除母体分子中不希望的性质，所述化合物的非活性形式在给予后在身体内(体内)被代谢为或转化为活性化合物。本文所用的术语“生物电子等排体”是指原子或原子群与另一基本相似的原子或原子群交换而得到的化合物。生物电子等排体替换的目的是产生具有与母体化合物相似的生物学性质的新的化合物。生物电子等排体替换可以是基于物理化学的或基于拓扑学的。

本发明的化合物可以以溶剂化物的形式存在，特别是水合物。可以在制备化合物或包含化合物的组合物时形成水合物，或可以由于化合物的吸湿性质而随时间形成水合物。本发明的化合物也可以以有机溶剂化物的形式存在，包括DMF、醚和醇溶剂化物等。任何具体溶剂化物的鉴定和制备是合成有机或药物化学领域的技术人员已知的。

本申请中所用的术语“功能性衍生物”表示本发明化合物的前药、生物电子等排体、N氧化物、药学上可接受的盐或各种异构体，其与母体化合物相比可以具有一方面或多方面的优势。制备功能性衍生物的方法是本领域公知的。制备功能性衍生物的各种高通量化学合成方法是本领域已知的。例如，组合化学已使化合物库快速扩展，当化合物库与各种高效生物筛选技术联合时，可以实现有效发现和分离有用的功能性衍生物。

本文中，试剂或药物对个体的“给药”包括将化合物引入或递送至个体以行使化合物预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、胃肠外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)、直肠或局部给药。给药包括自给药和由他人给药。还应当理解，所描述的治疗或预防医学疾病状态的各种模式意图表示“实质性的”，其不仅包括完全的治疗或预防，还包括未达到完全的治疗或预防，但实现了一些生物学或医学相关的结果。

本文所用的术语组合物的“有效量”或“药学有效量”或“治疗有效量”是足以实现所需治疗和/或预防效果的量，例如，实现了与待治疗疾病相关的症状的预防或减少的量。有效量的一个实例包括产生可接受的毒性和治疗(药学)用途的生物利用度水平的量或剂量，所述治疗(药学)用途包括但不限于治疗或预防包括冠心病在内的心脏病和促进由缺血性心脏病引起的梗死或受损心脏组织中的血管再生。有效量的另一实例包括能上调血管生成因子表达的量或剂量，所述血管生成因子包括VEGF、VEGFR、EGF和FGF等。

给予个体的本发明组合物的量取决于疾病的类型和严重程度以及个体的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。其还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些因素以及其它因素能确定合适的剂量。本发明的组合物也可以与一种或多种其它治疗化合物联合给药。本领域技术人员可容易地确定对于本发明的具体药物和组合物合适的给药时机、顺序和剂量。

本文所用的术语“疾病”或“医学疾病状态”可交换使用，并且包括但不限于表现为一种或多种需要治疗和/或预防的身体和/或心理症状的任何疾病状态或疾病，并且包括之前鉴定出的和新近鉴定出的疾病和其它病症。例如，医学疾病状态可以是冠心病。

本文所用的术语“个体”或“患者”是哺乳动物。通常，所述个体是人，但也可以是动物，例如，家畜(例如狗，猫等)、农畜(例如牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)。

本文所用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“缓解”是指治疗性处理和预防性(prophylactic)或预防性(preventative)措施，其目的是预防或延缓(减轻)所针对的病理疾病状态或病症。如果个体按照本发明的方法接受了本发明方法的治疗剂后，该个体表现出具体疾病或疾病状态的一种或多种指征和症状的可观察到的和/或可测定的减少或缺失，则认为该个体被成功“治疗”了病症。

本文所用的“药学可接受的盐和酯”是指药学可接受的并具有所需药学性质的盐和酯。这类盐包括试剂中存在的酸性质子能够与无机或有机碱反应的情况下形成的盐。合适的无机盐包括与碱金属形成的盐，所述碱金属例如钠和钾、镁、钙和铝。合适的有机盐包括与有机碱形成的盐，所述有机碱例如胺类碱，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等。这类盐还包括与无机酸(例如，盐酸和氢溴酸)和有机酸(例如乙酸、柠檬酸，马来酸以及诸如甲磺酸和苯磺酸的烷基磺酸和芳基磺酸)形成的酸加成盐。药学可接受的酯包括与试剂中存在的羧基、磺酰氧基和膦酰氧基形成的酯，例如，C_1-6烷基酯。当存在两种酸性基团时，药学可接受的盐或酯可以是单酸单盐或酯或二盐或酯；同样，当存在多于两种酸性基团时，部分的或所有的这些基团可以被盐化或酯化。本发明中命名的试剂可以以非盐化或非酯化的形式或盐化和/或酯化的形式存在，并且这些试剂的命名意图包括原始(非盐化的和非酯化的)化合物及其药学可接受的盐和酯。

本文所用的术语“药学可接受的载体”或“药学可接受的赋形剂”意图包括与药学给药相容的任何和所有溶剂、分散介质、包被、抗细菌和抗真菌化合物、等渗和延迟吸收化合物等。

这类载体或稀释剂的实例包括但不限于水、盐溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用脂质体和非水性介质，例如不挥发性油。用于药学活性物质的这些介质和化合物是本领域公知的。在组合物中考虑使用任何常规的介质或化合物，除了它们与试剂不相容。也可以将补充性活性化合物合并入所述组合物中。

用于预防或治疗心脏病的方法和组合物

冠心病(CHD)仍然是人类过早死亡的最常见原因。用新形成的有功能的冠状动脉侧支对受损冠状动脉血管进行重建从而在功能上绕过变窄的/闭塞的动脉就会为CHD提供有效的根治性治疗。

本发明提供用来自多种植物的试剂和/或提取物、活性部位和化合物以及该化合物的衍生物治疗或预防多种疾病或医学疾病状态的方法。一方面，本发明提供治疗或预防有需要的个体中包括CHD在内的心脏病的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的本文所述的化合物、组合物、活性部位或提取物。另一方面，本发明提供用于诱导心肌缺血/梗塞区中向缺血/梗塞心脏组织提供氧和营养物的新的侧支血管生成的方法和组合物，其中所述方法包括给予有需要的个体有效量的本文所述的化合物、组合物、活性部位或提取物。CHD或其症状中待改善的效果可以是以下中的一种或多种：胸痛、呼吸短促、虚弱、突发性眩晕、意识改变、剧痛、夜间阵发性呼吸困难、端坐呼吸、短暂缺血发作和患者经历的其它此类现象。CHD的临床指征还包括例如ECG或超声心动图异常、周围脉搏改变、动脉杂音、异常心声、心率、颈静脉扩张、神经病学改变的发现，以及医师鉴定出得其它此类发现。

本方法中使用的组合物可以包括能治疗或预防包括CHD在内的心脏病的合适的试剂。在一些实施方案中，所述试剂是植物金樱子的提取物，例如，植物金樱子的有机提取物。在示例性的实施方案中，所述试剂是金樱子的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。在一个实施方案中，所述活性部位是FRL-B。在一些实施方案中，所述活性部位是FRL-B-1。在其它实施方案中，所述活性部位是FRL-B-1-1。在其它实施方案中，所述活性部位是FRL-B-1-1-2。。在一个实施方案中，所述活性部位是FRL-E。在一些实施方案中，所述活性部位是FRL-E-3。在某些实施方案中，所述试剂是单宁，包括可水解的单宁类，例如长梗马兜铃素、蛇含鞣质或其衍生物。在一个实施方案中，所述试剂包括具有本文所示的式(I)、(II)、(IA)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)、(IIID)、(IIIE)、(IIIF)、(IIIG)、(IV)、(IVA)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)、(XI)或(XII)的基本上纯的化合物或所述化合物的混合物，以及所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

在一个实施方案中，所述试剂是式(I)的化合物，并具有以下结构，

所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，

在一个实施方案中，所述试剂是式(II)的化合物，并具有以下结构，

其中每个R₁独立地选自H、卤素、羟基、羧基、硝基、氨基、腈或取代的或未取代的C₁-C₆烷基、烷氧基、羟烷基、环烷基、环烷基烷基、烯基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基、杂环烷基、羧烷基、烷氧烷基、氨烷基、卤代烷基、卤代烷氧基、烷酰基和烷酰氧基。

在一个实施方案中，所述试剂是式(IA)的化合物，并具有以下结构，

在一个实施方案中，所述试剂是式(IIA)的化合物，并具有以下结构，

所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

式IA的化合物通常称为长梗马兜铃素，式IIA的化合物通常称为蛇含鞣质或没食子酰基长梗马兜铃素。式I、II、IA和IIA的化合物在下文中被称为“促血管生成素”。

本领域技术人员应当理解，式I和II的骨架化合物可以在不同位置具有上文所述的取代基，并且仍能保持其生物学活性。因此，式I和II的化合物包括骨架化合物本身以及它的具有相似的生物学活性的取代的变体。在一些实施方案中，式I、II、IA和IIA的化合物可以包括立体异构体、互变异构体、溶剂化物、药学可接受的盐和本文所述的其它功能性衍生物。本发明还可以包括式I和式II的化合物的衍生物、前药和生物电子等排体。公开的促血管生成素化合物所属于的单宁类通常被认为是非活性成分，并且在中药学鉴定活性成分的过程中，研究人员通常将单宁类作为杂质弃去。诸如式I、II、IA或IIA的化合物的促血管生成素可以从天然来源分离，特别是从植物分离，或可以使用本领域已知的的合成技术合成它们，并且可以通过全化学合成或半化学合成获得它们。这些化合物通过体外诱导血管内皮细胞的毛细血管样管状结构形成和刺激缺血/梗塞心肌中新的冠状动脉侧支血管的生成和防止心肌细胞进一步缺血死亡而在治疗冠心病中表现出有效治疗效果。因此，这些化合物可用于治疗包括慢性冠心病和心肌梗塞在内的CHD。

在一个实施方案中，所述试剂是式(III)的化合物，并具有以下结构，

在一个实施方案中，所述试剂是式(IIIA)的化合物，并具有以下结构，

在一个实施方案中，所述试剂是式(IIIB)的化合物，并具有以下结构，

在一个实施方案中，所述试剂是式(IIIC)的化合物，并具有以下结构，

在一个实施方案中，所述试剂是式(IIID)的化合物，并具有以下结构，

在一个实施方案中，所述试剂是式(IIIE)的化合物，并具有以下结构，

在一个实施方案中，所述试剂是式(IIIF)的化合物，并具有以下结构，

其中每个R′独立地选自-O-CO-R^a或-COO-R^a，

每个R^a独立地为取代的或未取代的芳基或杂芳基，其可以任选地与相邻的R^a共价键合从而形成取代的或未取代的联苯基。

在一些实施方案中，所述试剂包含式IIIF的化合物的重复单元。例如，在一个实施方案中，所述试剂包含式IIIG的化合物，其由两个式IIIF的化合物单元通过-O-键连接组成并具有以下结构，

其中每个R′独立地选自-O-CO-R^a或-COO-R^a，

在一些实施方案中，所述试剂是式(IV)的化合物，并具有以下结构，

其中每个R、R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自(独立地、共同地或以任何组合地)H、卤素、羟基、羧基、硝基、氨基、腈或取代的或未取代的C₁-C₆烷基、烷氧基、羟烷基、环烷基、环烷基烷基、烯基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基、杂环烷基、羧烷基、烷氧烷基、氨烷基、卤代烷基、卤代烷氧基、烷酰基和烷酰氧基。

在一些实施方案中，所述试剂是式(IVA)的化合物，并具有以下结构，

其中每个R、R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自(独立地、共同地或以任何组合地)H、卤素、羟基、羧基、硝基、氨基、腈或取代的或未取代的C₁-C₆烷基、烷氧基、羟烷基、环烷基、环烷基烷基、烯基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基、杂环烷基、羧烷基、烷氧烷基、氨烷基、卤代烷基、卤代烷氧基、烷酰基和烷酰氧基；并且虚线表示任选的不饱和性。

在一些实施方案中，所述试剂是式(V)的化合物，并具有以下结构，

所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，其中R是氢或葡糖苷。

在一些实施方案中，所述试剂是式(VI)的化合物，并具有以下结构，

在一些实施方案中，所述试剂是式(VII)的化合物，并具有以下结构，

在一些实施方案中，所述试剂是式(VIII)的化合物，并具有以下结构，

在一些实施方案中，所述试剂是式(IX)的化合物，并具有以下结构，

在一些实施方案中，所述试剂是式(X)的化合物，并具有以下结构，

所述化合物的立体异构体，所述化合物的互变异构体，所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，其中R是氢或葡糖苷。

在一些实施方案中，所述试剂是式(XI)的化合物，并具有以下结构，

在一些实施方案中，所述试剂是式(XII)的化合物，并具有以下结构，

所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，其中R是氢或O-葡糖苷。

式I-XII的化合物的骨架可以在不同位置具有取代基，并仍能保持与骨架化合物相似的生物学活性。可以通过有机化学领域已知的方法实现取代。本文所用的术语“式I-XII的化合物”包括式I-XII所示的骨架化合物以及它的具有相似的生物学活性的取代的变体。

一方面，预防或治疗诸如CHD的心脏病的方法包括给予有需要的哺乳动物来自多种植物的试剂、部分和/或提取物和化合物以及该化合物的衍生物，所述植物包括柔毛水杨梅(Geum japonicum)、金樱子、R.imperialis、太平洋独蕊木(Vochysia pacifica)、插田泡(Rubus coreanus)、阿利根黑莓(Rubus allegheniensis)、茅莓(Rubus parviforlius L.)、龙牙草(Agrimonia pilosa)、蛇含委陵菜(Potentilla kleiniana)、台湾马桑(Coriariajaponica)和葡萄籽。在一些实施方案中，所述提取物是获自植物金樱子的有机提取物。在某些实施方案中，所述试剂选自本文所示的式(I)、(II)、(IA)和(IIA)的化合物或所述化合物的混合物。在一些实施方案中，所述试剂选自本文所示的式(III)、(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)、(IIID)、(IIIE)、(IIIF)、(IIIG)、(IV)、(IVA)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)、(XI)或(XII)的化合物或所述化合物的混合物。示例性的试剂包括活性部位FRL-B、FRL-E和单宁类，所述单宁类包括可水解的单宁类，例如长梗马兜铃素、蛇含鞣质或其衍生物。

一方面，本发明提供治疗或预防有需要的个体中的冠心病(CHD)的方法，包括给予所述个体有效量的本文所述的化合物、组合物、活性部位或提取物。CHD或其症状中待改善的效果可以是以下中的一种或多种：胸痛、呼吸短促、虚弱、突发性眩晕、意识改变、剧痛、夜间阵发性呼吸困难、端坐呼吸、短暂缺血发作和患者经历的其它此类现象。CHD的临床指征还包括例如ECG或超声心动图异常、周围脉搏改变、动脉杂音、异常心声、心率、颈静脉扩张、神经病学改变的发现，以及医师鉴定出得其它此类发现。

在一个实施方案中，本公开提供治疗或预防哺乳动物个体中的冠心病的方法，包括给予有需要的个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。在一个实施方案中，所述式I的化合物具有式IA。在另一个实施方案中，所述式II的化合物具有式IIA。

在一个实施方案中，本公开提供治疗或预防哺乳动物个体中的冠心病的方法，包括给予有需要的个体有效量的选自以下的组合物：(i)植物金樱子的有机提取物；(ii)植物金樱子有机提取物的活性部位；和(iii)式(I)、(IA)、(II)或(IIA)的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。在一些实施方案中，所述方法包括给予有需要的个体有效量的式(I)、(IA)、(II)和(IIA)的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐中的一种或多种。

另一方面，本发明提供促进哺乳动物个体中由缺血性心脏病导致的梗死或受损心脏组织中的血管再生的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

另一方面，本发明提供在有需要的个体中上调血管生成因子的表达从而刺激缺血性或梗塞性心肌中新的冠状动脉侧支血管的生长的方法，所述方法包括给予所述个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，其中所述血管生成因子是VEGF、VEGFR、EGF和FGF中的一种或多种。

另一方面，本发明提供治疗哺乳动物个体中缺血性心脏病或四肢缺血的方法，包括给予所述个体有效量的式(I)或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

另一方面，本发明提供治疗或缓解哺乳动物中的病理状态的方法，其中根据医学领域技术人员的判断，所述病理状态可以通过上调诸如VEGF、VEGFR、EGF和FGF等血管生成因子的表达从而刺激缺血性或梗死心肌中新的冠状动脉侧支血管的生成而得到治疗或缓解。所述方法包括给予所述哺乳动物有效量的式I或II的化合物或所述化合物的组合或所述化合物的功能性衍生物的步骤。

另一方面，用于治疗或预防包括CHD在内的心脏病的试剂是含有一种或多种赋形剂、载体或填充剂的药物组合物的一部分。在一个实施方案中，所述药物组合物以单位剂量形式进行包装。所述单位剂量形式能有效改善胸痛、呼吸短促、虚弱、突发性眩晕、意识改变、剧痛、夜间阵发性呼吸困难、端坐呼吸、短暂缺血发作和患者经历的其它此类现象。

在本发明的各种实施方案中，进行合适的体外或体内测定来确定本发明的试剂(提取物、部分和化合物)的效果，以及所述试剂的给药是否适用于治疗或预防个体中的CHD。在一些实施方案中，使用CHD的体内模型来评价试剂对个体的效果。合适的体内模型包括通过完全结扎大鼠的某个主要冠状动脉造成心肌梗塞模型、不完全结扎大鼠的某个主要冠状动脉而造成慢性冠心病以及中毒性心肌病模型，所述中毒性心肌病模型包括给予动物个体阿霉素或蒽环霉素。对试剂在介导动物个体中的心肌梗塞和慢性冠心病的效果进行研究，并与合适的对照进行比较。

在一些实施方案中，本发明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以作为与抗心律失常药的联合治疗的一部分进行给药。按照作用机制通常将抗心律失常药分为四大类：I型-钠通道阻断；II型-β肾上腺素受体阻断；III型-复极化延长；和IV型-钙通道阻断。I型抗心律失常药包括利多卡因、莫雷西嗪、美西律、妥卡尼、普鲁卡因胺、恩卡胺、氟卡尼、妥卡尼、苯妥英、丙胺苯丙酮、奎尼丁、丙吡胺和氟卡尼。II型抗心律失常药包括普萘洛尔和艾司洛尔。III型包括通过延长动作电位的持续时间来发挥作用的试剂，例如胺碘酮、阿替利特、溴苄胺、氯非铵、isobutilide、索他洛尔、阿齐利特、多非利特、决奈达隆、艾生利特、伊布利特、替他沙米和曲西利特。IV型抗心律失常药包括维拉帕米、地尔硫卓、洋地黄、腺苷、氯化镍和镁离子。

在一个实施方案中，本发明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以作为与另一心血管药的联合治疗的一部分进行给药，所述心血管药包括，例如抗心律失常药、抗高血压药、钙通道阻断剂、停搏液、强心剂、溶纤维蛋白剂、硬化溶液、血管收缩剂、血管舒张剂、一氧化氮供体、钾通道阻断剂、钠通道阻断剂、他汀类或利钠剂。

心血管药的实例包括血管舒张剂，例如肼屈嗪；血管紧张素转化酶抑制剂，例如卡托普利；抗心绞痛药，例如硝酸异山梨酯、三硝酸甘油酯和季戊四醇四硝酸酯；抗心律失常药，例如奎尼丁、procainaltide和利诺卡因；强心甙，例如地高辛和洋地黄毒苷；钙拮抗剂，例如维拉帕米和硝苯地平；利尿剂，例如噻嗪类和相关化合物，例如苄氟噻嗪、氯噻嗪、氯噻酮、氢氯噻嗪和其它利尿剂，例如呋塞米和氨苯蝶啶；以及镇静剂，例如，硝基安定、氟西泮和地西泮。

所述方法包括治疗哺乳动物个体。在一些实施方案中，所述个体可以是需要血管生成治疗的任何哺乳动物，例如人、狗、猫、牛、羊、猪、马、猴、大鼠、小鼠、兔和豚鼠。在一些实施方案中，所述哺乳动物个体是人。通常，所述个体是怀疑具有诸如CHD或缺血性心脏病的心脏病的人。

化合物和植物来源

一方面，本公开提供用于治疗心脏病的化合物、提取物和组合物。所述化合物，提取物和组合物可以用于本文所述的方法和心脏病的治疗中。

在一些实施方案中，所述化合物是金樱子、柔毛水杨梅(日本路边青)和仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb)(蔷薇科)的全植物或提取物，例如有机提取物。在一些实施方案中，所述化合物是这些植物在合适的溶剂中的提取物。在一些实施方案中，所述化合物是金樱子的甲醇/乙醇提取物或其活性部位，在一些实施方案中，所述化合物金樱子提取物的活性部位。

植物有机提取物的制备

在一个实施方案中，本发明的提取物、部位和化合物是利用水和/或有机溶剂从植物原材料提取得到的，包括以下过程：

1.将水和/或有机溶剂添加到植物材料，将全部进行诸如浸泡/浸滤、超声或微波的处理而进行提取；

2.在提取过程之前或之后，利用石油醚、己烷或氯仿类型的溶剂进行脱脂；

3.任选地，利用乙酸乙酯或乙醚类型的有机溶剂对回收的提取物进行进一步提取；

4.任选地，将获得的粗提取物浓缩，并如果需要将其冻干。

一方面，考虑到允许获得的富集，粗提取物可以接受色谱纯化过程。在一个实施方案中，使用离心分配色谱(CPC)。该技术具体描述于A.P.FOUCAULT，Ed.，Centrifugal Partition Chromatography(离心分配色谱)，Chromatographic Science Series，Marcel Dekker Inc.，1995，68或W.D.CONWAY，Ed.，Countercurrent Chromatography apparatus theory andapplications(逆流色谱装置理论和应用)，VCH Publishers Inc.，1990。CPC是基于通过混合两种或更多种溶剂或溶液而制备的两种不混溶液相之间的溶质分配。所述两种相中的一种通过离心力保持静止。溶剂、所述化合物的比例和流速的选择与CPC柱中静止相的稳定性和实际压力密切相关

因此，本领域技术人员能根据所需纯化的提取物的性质选择最合适的一种溶剂或多种溶剂。因此，能够使粗提取物和富集部位含有作为主要成分的任何式I-X的化合物。这些不同的提取物，即粗提取物或富集的提取物，也在本发明的范围内。实施其它分离过程允许分离这些富集了一种或多种化合物的提取物。使用按照适合于所选择的分离的比例的混合物的合适溶剂，可以对从粗提取物富集的部分或对粗提取物自身进行这些分离。

一方面，提供了制备植物金樱子的有机提取物的方法。该方法包括以下步骤：(a)用选自C₁-C₄醇的醇提取植物金樱子。该步骤可以在合适的温度下(通常室温)重复数次，通常约3-6次，通常约5次。进行步骤(a)之前，可以将植物材料切成小块或甚至粉末化。所述C₁-C₄醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。通常，添加的醇的重量是待提取的金樱子重量的1-50倍，通常1-10倍。

该方法可以还包括以下步骤：(b)将获自步骤(a)的提取物干燥为干燥粉末；和(c)将获自步骤(b)的粉末悬浮于合适的溶剂(例如水)并用溶剂或溶剂混合物相继提取该粉末，所述溶剂包括含氯溶剂、酯和醇。所述醇可以选自C₁-C₄醇。所述含氯溶剂包括，例如氯仿、二氯甲烷、氯甲烷、四氯化碳等。所述C₁-C₄醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。酯包括乙酸乙酯、乙酸丙酯和乙酸丁酯等。所用有机溶剂的重量通常是待进一步提取的粉末重量的1-10倍。

上文所述的方法还可以包括过滤提取物以去除其中任何不溶性杂质。可以在高于室温的温度下(例如30℃、35℃、40℃或50℃)、在减压下完成干燥步骤。

为了纯化提取物，该方法可以还包括以下步骤：使提取物通过色谱柱；以及用合适的溶剂洗脱柱。例如，可以使用Sephadex或反相柱。合适的洗脱溶剂包括含有渐增浓度的选自C₁-C₄醇的醇或醇与丙酮的组合的水性溶液。所用的醇可以是选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇中的任何一个。还可以使用其它洗脱溶剂，例如醇、酮、酯、醚或其组合。可以利用Mass和NMR分析来确定分离的活性化合物的结构。根据上文所述的合适的提取方法，可以从其它已知植物来源获得本文公开的促血管生成素化合物。

药物组合物

一方面，本发明提供用于治疗或预防冠心病的药物组合物，其包含药学上可接受的赋形剂和有效量的选自式I或式II的化合物。在一些实施方案中，所述药物组合物中式I的化合物具有结构IA。在其它实施方案中，所述药物组合物中式II的化合物具有结构IIA。在一些实施方案中，所述药物组合物还可以包含第二试剂。在一些实施方案中，所述药物组合物还可以包含抗心律失常药或心血管药。

另一方面，本发明的试剂是含有一种或多种赋形剂、载体或填充剂的药物组合物的一部分。在一个实施方案中，所述药物组合物以单位剂量形式进行包装。所述单位剂量形式当给予有需要的个体时能有效改善各种疾病或医学疾病状态。

可以利用制药工业技术人员已知的常规方法将所述药物组合物配制为合适的剂型，例如片剂、胶囊、注射剂、溶液、悬液、粉末，糖浆等，并且以合适的方式给予患有MI的哺乳动物个体。制剂技术不是本发明的一部分，并因此对本发明的范围不产生限制。

所给予的化合物和组合物的量应当能产生所需的效果。在一些实施方案中，所述有效量包括能在哺乳动物个体中预防或治疗冠心病、促进梗死或受损心脏组织中的血管再生和/或上调血管生成因子的表达的量和剂量。在一些实施方案中，所述有效量的化合物或组合物是包含化合物或组合物和药学上合适的载体或赋形剂的药物制剂的形式。有效量的一个实例包括产生可接受的毒性和心脏病治疗中用于治疗(药学)目的的生物利用度水平的量或剂量。

通常，足以实现治疗或预防效果的本发明组合物的有效量为约0.000001mg/千克体重/天至约10,000mg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约0.0001mg/千克体重/天至约1000mg/千克体重/天。对于试剂的给药，剂量范围可以为每周、每两周或每三周约0.0001至1000mg/kg宿主体重，更通常为0.01至500mg/kg宿主体重。示例性的治疗方案为每两周一次或每月一次或每3-6个月一次给药。在一些实施方案中，所给予的化合物或组合物的量为0.001mg/kg/天至10000mg/kg/天。在一些实施方案中，所给予的化合物或组合物的量为0.01mg/kg/天至1000mg/kg/天。通常多次给予所述试剂。单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要给药的频率减少。剂量和频率根据试剂在个体中的半寿期而不同。给药的剂量和频率可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，在长期以相对低频率的间隔给予相对低的剂量。某些个体在余生中持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展降低或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善。在此之后，可以给予患者预防方案。可以根据个体的疾病状态、年龄、体重、一般健康状态、性别和饮食、以及给药间隔、给药途径、排泄率和药物组合来调整具体的剂量。含有有效量的任何上述剂型都包括在常规实验的范围内，并因此包括在本发明的范围内。

毒性

合适的情况下，本文所述的试剂的有效量(例如，剂量)能提供治疗益处，而不会产生对个体的明显毒性。可以通过标准药学程序在细胞培养或实验动物中确定本文所述的试剂的毒性，例如，通过测定LD₅₀(致50％群体死亡的剂量)或LD₁₀₀(致100％群体死亡的剂量)。毒性效应和治疗效果的剂量比是治疗指数。获自这些细胞培养分析和动物研究的数据可以用于制定人类中使用无毒性的剂量范围。优选地，本文所述的试剂的剂量处于包括有效剂量且仅具有很小的毒性或无毒性的循环浓度的范围内。根据所用剂型和给药途径，剂量可以在该范围内变化。确切的制剂、给药途径和剂量可以由医师根据个体的疾病状态来选择。参见，例如，Fingl et al，In：The Pharmacological Basis of Therapeutics，Ch.1(治疗的药理学基础，第一章)(1975)。

根据本发明的方法，可以将所述试剂合并到适于给药的药物组合物中。在一些实施方案中，所述药物组合物可以包含适于对个体进行给药的形式的纯化的或基本纯化的柔毛水杨梅提取物和药学可接受的载体。在其它实施方案中，所述药物组合物所包含的药学可接受的载体在一定程度上由所给予的具体组合物以及用于给予组合物的具体方法决定。因此，适于给予组合物的药物组合物制剂有很多种(参见，例如，Remington′sPharmaceutical Sciences(雷明顿制药科学)，Mack Publishing Co.，Easton，PA 18^th ed.，1990)。通常将药物组合物配制为无菌的、基本上等渗的并且完全符合美国食品与药品管理局的所有良好生产规范(GMP)规程。

本发明的药物组合物的配制符合其预期的给药途径。本发明的组合物可以通过以下途径给药：胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂。所述试剂可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。

胃肠外、真皮内或皮下施用的溶液或悬液可以包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌化合物，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合化合物，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲液，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的化合物，例如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱调节pH，例如盐酸或氢氧化钠。胃肠外制剂可以装入安瓶、一次性注射器或玻璃或塑料制成的多剂量瓶中。

适于注射使用的药物组合物包括无菌水性溶液(在可溶于水的情况下)或用于临时制备无菌注射液或分散液的分散剂和无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL^TM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲液(PBS)。无论在什么情况下，组合物必须是无菌的，并且其流动性应当易于注射。其在生产和贮存条件下必须稳定，并且必须能抵抗诸如细菌和真菌的微生物的污染活动。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液态聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用诸如卵磷脂的包被、保持需要的颗粒尺寸(在分散液的情况下)和施用表面活性剂来保持合适的流动性。可以利用各种抗菌和抗真菌化合物实现微生物活动的预防，所述抗菌和抗真菌化合物例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸，硫柳汞等。在很多情况下，优选在组合物中包含等渗化合物，例如糖，诸如甘露醇、山梨醇的多元醇，氯化钠。可以通过在组合物中包含延缓吸收的化合物实现注射组合物的持续吸收，所述化合物例如单硬脂酸铝和明胶。

可以通过将所需量的试剂合并入含有一种上文所列成分或上文所列成分的组合的合适的溶剂中然后视情况进行过滤灭菌来制备无菌注射液。通常，通过将结合剂合并到含有基本分散介质和上文所列的所需其它成分的无菌介质中来制备分散剂。对于用于制备无菌注射液的无菌粉末，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从而从之前过滤灭菌的溶液得到活性成分和任何其它所需成分的粉末。可以以积存注射(depot injection)或植入制剂的形式给予本发明的试剂，植入制剂的制备形式能允许活性成分的持续释放或脉冲释放。

口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用的载体。可以将口服组合物封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗给药，结合剂可以与赋形剂合并，并用于片剂、锭剂或胶囊的形式。还可以使用用于漱口水的流体载体来制备口服组合物，其中流体载体中化合物是经口施用、漱口和吐出或吞下。药学相容的结合化合物和/或辅助材料可以作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任何下述成分或具有相似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶态二氧化硅；甜味剂化合物，例如蔗糖或糖精；或调味剂化合物，例如薄荷油、水杨酸甲酯或桔子香精。

在一个实施方案中，所述试剂与能保护所述试剂免于从体内快速清除或免于被胃酸降解的载体一起进行制备，例如控释制剂，包括植入物和微胶囊化的递送体系。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对于本领域技术人员是显而易见的。还可以从AlzaCorporation和Nova Pharmaceuticals，Inc购买所述材料。脂质体悬液(包括靶向于感染细胞的具有针对病毒抗原的单克隆抗体的脂质体)也可用作药学可接受的载体。可以根据本领域已知的方法进行制备，例如，美国专利第4,522,811号中的描述。

在本发明的各种实施方案中，进行合适的体外或体内测定来确定本发明的试剂(提取物、部分和化合物)的效果，以及所述试剂的给药是否适用于治疗个体中受影响的疾病或医学疾病状态。在上文中结合具体疾病或医学治疗描述了这些分析的实例。

试剂盒

另一方面，提供了用于治疗或预防哺乳动物个体中的冠心病的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒可以包括本文所述的治疗剂和第二试剂。在一些实施方案中，所述第二试剂可以是抗心律失常药或心血管药。在一些实施方案中，所述试剂盒可以含有药学上可接受的赋形剂。

本公开还提供用于例如上文所述的其它方法的试剂盒。示例性的试剂盒包含：一个或多个容器，其中第一容器含有式I或式II的化合物或所述化合物的混合物；和容纳所述第二试剂的第二容器。在一些实施方案中，可以没有所述第二容器。这些试剂盒还可以包含一个或多个容纳一种或多种补充剂的其它容器，所述补充剂选自药学可接受的载体、赋形剂等。

实施例

通过以下实施例进一步阐述本发明，但这些实施例不应解释为以任何方式进行限制。

实施例1.从金樱子分离促血管生成素

从植物金樱子分离促血管生成素，例如式I和式II的化合物。如图1的流程图所示，在10月份从中国贵州省采集植物，将植物干燥(10kg)，并于室温下用70％乙醇(60L)渗滤，每天一次进行3天。将提取物汇合，并进行电喷雾干燥，得到固体剩余物。将此固体剩余物悬浮在水中(H₂O)(10L)，并用石油醚(10L)、乙酸乙酯(10L)、然后用正丁醇(10L)分别相继萃取3次，产生相应的部分。将正丁醇部分(FRL-B)和乙酸乙酯可溶性部分过滤，并在38℃下、在减压下蒸发。观察到正丁醇和乙酸乙酯可溶性部分都能在细胞培养中促进人大动脉内皮细胞(HAEC)的毛细血管样管腔形成和诱导心肌梗塞或心肌缺血实验动物模型中心脏缺血/梗塞区中的血管生成。将正丁醇可溶性部分施加到用10％甲醇(MeOH)平衡的Sephadex LH-20柱，并用渐增浓度的甲醇水溶液洗脱，分解出7个部分。用约20％甲醇洗脱出的部分1被证明有通过诱导缺血心肌中的血管生成而表现出的生物学活性。将部分1中含有的化合物进一步分离，并在细胞培养中毛细血管样管腔形成测定体系中进行检测。将溶解于20％MeOH的部分1过滤、蒸发并使用Sephadex LH-20柱层析进一步分离，用MeOH和50％丙酮洗脱，从而分离出促血管形成的活性部位(FRL-B-1-1-2)。使用Toyopearl HW-40F层析进一步分离该活性部位，用H₂O-MeOH洗脱，从而分离出促血管形成的单体化合物。通过Mass和NMR分析确定该分离的活性化合物的结构鉴定结果表明，其是式IA的化合物(长梗马兜铃素)，其分子量为784，分子式为C₃₄H₂₄O₂₂。使用ODS(C18)层析、用H₂O-MeOH洗脱从FRL-E部分分离出第二促血管形成的化合物。结构分析将其鉴定为式IIA的化合物(蛇含鞣质或没食子酰基-长梗马兜铃素)，其分子量为936，分子式为C₄₁H₂₈O₂₆。因为这些促血管生成素是天然存在的化合物，所以可以根据本文所述的合适的提取方法从其它已知植物来源获取它们。

实施例2.促血管生成素增强血管内皮细胞的毛细血管样管腔形成

为了证实式I或式II的促血管生成素化合物是否能增强内皮细胞的分化，细胞培养了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，并且评价促血管生成素诱导的HUVEC分化。我们发现，式I或式II的促血管生成素化合物都能以图2所示的剂量依赖形式促进HUVEC分化。我们观察到，介质处理的细胞表现出增殖，但没有分化的迹象。相比之下，式I和式II的促血管生成素化合物的处理以剂量依赖形式增强HUVEC分化。如图2所示，在促血管生成素处理之前，HUVEC表现出小且三角形的表型，而在式I或式II的促血管生成素化合物的存在下，HUVEC分化为狭长的表型，并具有血管内皮细胞分化的典型特征。当培养基中促血管生成素的浓度增加时(40μg/ml)，细胞显著变长并形成数个管样结构。

为了进一步测试促血管生成素化合物的血管生成促进效果，在Ham′sF-12培养基中培养人大动脉内皮细胞(HAEC)，所述培养基中补充了15％FBS、500U/ml青霉素、50μg/ml链霉素和100μg/ml肝素和100μg/ml内皮细胞生长补充剂。在37℃和平衡的95％空气-5％CO₂培养箱中孵育细胞。使用低浓度α-凝血酶(2.5U/ml)，通过纤维蛋白原溶液(5mg纤维蛋白原/ml无血清培养基)的聚合来制备纤维蛋白基质。聚合后，在37℃下，将凝胶浸在含有10％FBS的培养基中2小时来使凝血酶失活。将HAEC接种在96孔板中Ham′s F-12培养基中的三维基质表面，并与不同浓度的式I和式II的促血管生成素化合物在生长培养基中培养22小时。未处理的对照添加了等量的生长培养基。显微镜下照像，并通过计算形成的管腔的总数来计量化合物促血管样管腔生成的性质。

我们发现，用式I和式II的促血管生成素化合物处理的细胞形成的毛细血管样管腔网络显著多于介质处理的细胞(图3A)。随着促血管生成素化合物浓度的逐渐增加，形成的毛细血管样管腔的总长度显著增加。在所有测试浓度中，在促血管生成素浓度为5μg/ml时，达到最大的管腔长度(p＜0.05)(图3B，表1)。

表1.

实施例3.亚临床心肌梗塞动物模型、治疗方案和评价

采用雄性Sprague-Dawley大鼠(300-350g)通过永久结扎心脏左前降支(LAD)冠状动脉产生心肌梗塞(MI)动物模型。腹膜内戊巴比妥(50mg/kg)注射来麻醉实验大鼠、气管插管并用小动物呼吸机进行人工呼吸。结扎后1天，将溶解于水(0.5ml)中的式I或式II的促血管生成素化合物(2mg/kg)口服给予MI大鼠(n＝6)，每天给药持续2周，将等量的水给予介质处理的大鼠(n＝6)。对于假手术的大鼠(n＝5)，进行开胸术而不进行LAD结扎。在最后一次超声心动图测量之后，处死动物。

梗塞心肌内冠状血管侧支循环重建的评价

分别在LAD结扎后第7天和第14天记录超声心动图。实验动物处死后，取出大鼠的心脏，用PBS洗涤。取出实验大鼠的左心室，从心尖至心底切成3个横向组织块，并包埋在石蜡中。为了对梗塞区中血管的密度进行定量，将每个切片上6个随机选择的高倍镜视野(HPF，40倍)中的血管进行计数并取平均值。由两名研究人员以双盲法的方式对每组6个心脏的切片，用上述方法进行血管计数。结果表示为平均值±标准差血管/HPF。结果表明：在梗塞后2周的介质处理的心脏中，结扎位点远侧的区域(直径2-4mm)由于缺血性坏死而表现为白色并心室壁变薄，但促血管生成素治疗的心脏中的对应区域表现为红灰色，并且心室壁的厚度大于介质处理的心室壁。组织学检查表明：实验组心肌梗塞区中的血管密度平均11.78±6.67/HPF(图4)，而介质处理的心脏中心脏梗塞区为6.67±4.32血管/HPF。逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析表明：在促血管生成素治疗的心脏组织和内皮细胞中，与血管生成相关的基因表达，例如VEGF、VEGFR、EGF和FGF等显著增高。

实施例4.亚临床慢性冠心病(cCHD)大鼠模型和治疗方案

按照方法学所述造亚临床cCHD大鼠模型。简而言之，使用体重150-200g的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。适当麻醉后，对动物进行左胸切开。开放心包，并将探针或手术缝线(11-0)沿着LAD置入心外膜。然后，使用8-0丝质缝线将LAD和探针在距其起点1-2mm处结扎，然后轻轻取出探针，这会导致管腔直径平均减少70-85％。在LAD结扎过程中，ECG的ST段短暂升高，取出探针后ST段显著降低。这提示了心肌缺血。选择ST段持续低于0.1mV的实验大鼠，并将其随机分为两组。通过灌胃给药的方式，用溶解于H₂O中的式I或式II促血管生成素化合物以5mg/kg治疗受试组大鼠(n＝6)2周。在相同时间段用等量的H₂O处理介质处理组大鼠(n＝6)。对于假手术组(n＝6)，进行左胸切开并开放心包，但不进行LAD结扎。

心肌缺血区中新生血管的测量

从结扎后第14天处死的大鼠取出左心室，并从心尖至心底切成3个横向组织块。在福尔马林中固定，并包埋在石蜡中。通过使用光学显微镜在高倍镜视野下(HPF)(40倍)对缺血区中的血管数进行计数来确定组织切片样品的血管密度。将心肌缺血区中8个随机且不重叠的HPF分别进行血管计数并取平均值。取每组测量血管数的平均值，并表示为每组实验动物心肌缺血区的血管数。由两名研究人员以双盲法的方式对每组6个心脏的切片，用上述方法进行血管计数。

结合图4，组织学研究表明：在结扎后第14天，在整个缺血区观察到很多填充了血细胞的新形成的血管。促血管生成素治疗的心肌的缺血区中的血管密度平均为每个HPF中12个填充了血细胞的血管(12±3.8)，这是从来自第14天时6个促血管生成素治疗的心脏的3个切片中的每一个切片上的8个随机不重叠的视野中的血管计数计算得出的。相比之下，在结扎后第14天的介质处理的心肌中的缺血区中观察到较少的血管(8±2.1/HPF)，并伴有炎症细胞浸润。

心脏功能的超声心动图评价

在任何实验操作之前，总计12只SD大鼠接受了基线超声心动图。利用配备了PLT-1202S线性阵列换能器S10-MHz相阵换能器的东芝AplioXG超声心动仪，在受控的麻醉下记录实验动物的超声心动图。从胸骨旁心脏长轴和短轴分别记录M模式轨迹和二维(2D)超声心动图图像。短轴视图位于心脏乳头肌水平。通过使用美国超声心动描记术学会的规定惯例，从M模式轨迹测量左心室收缩末期和舒张末期容积以及收缩末期和舒张末期心室壁的厚度。对于每个M模式测量，采集至少3个连续心动周期。在结扎后第2天、第7天和第14天，两个组的所有大鼠都接受超声心动图测量。

为了证明应用促血管生成素治疗缺血心脏，诱导缺血心脏中的新生冠状侧支循环的建立而伴随着的逐渐恢复的心脏功能表现，在治疗的不同期间使用超声心动图来测定实验大鼠的心脏功能表现。我们发现，在用式I和II的促血管生成素化合物治疗的心脏中，由于LAD的不完全结扎引起的心肌缺血而导致的降低的左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)随治疗时间逐渐恢复(图5)。相比之下，介质处理的大鼠中的LVEF和LVFS却逐渐更加降低(图5)。

尽管已经展示并描述了某些实施方案，但是应当理解，在不脱离权利要求书所限定的较宽范围中的技术的情况下，本领域技术人员可以在其中做出改变和改动。

本公开不应局限于本申请所述的具体实施方案。在不脱离其实质和范围的情况下，可以进行很多改动和变化，这对于本领域技术人员是显而易见的。本公开范围内除本文所列之外的功能上等同的方法和装置对于阅读了上述描述的本领域技术人员是显而易见的。这些改动和变化意图包括在附加权利要求书的范围内。本公开仅受附加权利要求书的内容以及这些权利要求赋予权力的等同物的全部范围的限制。应当理解，本公开不局限于具体方法、试剂、化合物、组合物或生物体系，上述是必然能够变化的。还应当理解，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案，而并非意图进行限制。

此外，当以马库什组的方式描述本公开的特征或方面时，本领域技术人员应当认识到，还从任何个体成员或马库什组成员的亚组的方式描述了本公开。

本领域技术人员应当理解，为了任何和所有目的，特别是在提供书面描述方面的目的，本文公开的所有范围还包括任何和所有可能的子范围以及子范围的组合。任何列出的范围能容易地被认为充分描述和赋予了同一范围被分解为至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等的情况。作为非限制性实例，本文讨论的每个范围能容易地分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本领域技术人员还应当理解，诸如“多至”、“至少”、“大于”、“少于”等的所有语言包括所记载的数值，并且是指能如上文所讨论随后分解成子范围的范围。最后，本领域技术人员应当理解，一个范围包括每个个体成员。因此，例如，具有1-3个原子的基团是指具有1、2或3个原子的基团。同样，具有1-5个原子的基团是指具有1、2、3、4或5个原子的基团，以此类推。

尽管本文中公开了各个方面和实施方案，其它方面和实施方案对于本领域技术人员是显而易见的。本文公开的各个方面和实施方案仅是说明目的，而不是意图进行限制，附加权利要求书表明真正的范围和实质。

Claims

1.治疗或预防哺乳动物个体中的冠心病的方法，包括给予有需要的个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，

2.如权利要求1所述的方法，其中式I的化合物具有式IA，

3.如权利要求1所述的方法，其中式II的化合物具有式IIA

4.治疗或预防哺乳动物个体中的冠心病的方法，包括给予有需要的个体有效量的选自以下的组合物：(i)植物金樱子(Fructus RosaeLaevigatae)的有机提取物，(ii)植物金樱子的有机提取物的活性部位；和(iii)式(I)、(IA)、(II)或(IIA)的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

5.如权利要求4所述的方法，包括给予有需要的个体有效量的式(I)、(IA)、(II)和(IIA)的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐中的一种或多种。

6.促进哺乳动物个体中由缺血性心脏病导致的死亡或受损心脏组织中血管再生的方法，所述方法包括给予个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

7.在有需要的个体中上调血管生成因子表达从而刺激缺血性或梗塞性心肌中新的冠状动脉侧支血管的生长的方法，所述方法包括给予个体有效量的式I或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐，其中所述血管生成因子是VEGF、VEGFR、EGF和FGF中的一种或多种。

8.治疗哺乳动物个体中缺血性心脏病或四肢缺血的方法，包括给予个体有效量的式(I)或式II的化合物、所述化合物的混合物、所述化合物的立体异构体、所述化合物的互变异构体、所述化合物的溶剂化物和所述化合物的药学可接受的盐。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物个体是人。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述化合物或组合物通过静脉内给药。

11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述化合物或组合物通过口服给药。

12.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中给予的所述化合物或组合物的量是0.01mg/kg/天至1000mg/kg/天。

13.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述有效量的化合物或组合物是包含化合物或组合物和药学上合适的载体或赋形剂的药物制剂的形式。

14.用于治疗或预防冠心病的药物组合物，包含药学上可接受的赋形剂和有效量的选自式I或式II的化合物，

15.如权利要求14所述的组合物，其中式I的化合物具有结构IA，

16.如权利要求14所述的组合物，其中式II的化合物具有结构IIA

17.如权利要求14所述的组合物，还包含抗心律失常药或心血管药。