CN103505468B - 曲札茋苷在制备改善微循环障碍药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种曲札茋苷在制备改善微循环障碍药物中的应用，以曲札茋苷作为有效活性成分，其结构式为：

Description

曲札茋苷在制备改善微循环障碍药物中的应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种曲札茋苷在制备改善血液微循环障碍药物中的应用。

背景技术

微循环是指微动脉和微静脉之间的血液循环。微循环的基本功能是进行血液和组织液之间的物质交换。正常情况下，微循环的血流量与组织器官的代谢水平相适应，保证各组织器官的血液灌流量并调节回心血量。如果微循环发生障碍，将会直接影响各器官的生理功能。微动脉、后微动脉、毛细血管前括约肌和微静脉的管壁主要含有平滑肌，它们的舒缩活动直接影响到微循环的血流量。由于病变造成微动脉和微静脉收缩及毛细血管网开放数的减少，将阻碍微循环血流的正常流动，造成组织缺血而病变。

微循环障碍是血液成份的改变或血管病变，使管腔狭窄，血液流速或减慢或血栓形成，使局部组织缺血缺氧甚至坏死，引起的一系列临床症状。如果微循环内的血小板、白细胞或纤维蛋白相互粘集形成微血栓，随着血液流向全身，或沉积在血管内膜上，当拴子导致局部血流障碍后就会引起一系列症状，其相应的组织系统或内脏器官就会受到影响而不能发挥正常功能，就容易导致人体的衰老、免疫功能的紊乱以及疾病的发生。研究表明，改善微循环在防治短暂性脑缺血的事实上有较好作用，改善微循环与溶栓、抗氧化、抗兴奋氨基酸毒性、抗钙超载、抗炎、抗凋亡等密切相关。《素问•五脏生成论》中记载：“眼受血而能视，足受血而能步，掌受血而能握，指受血而能摄”，说明器官只有得到健康的血液供应才能发挥正常的功能。俗话说：“微循环通，人不得中风；微循环好，心肌梗塞少；微循环流畅，全身健康。”微循环几乎是百病之源，健全的微循环功能是保证体内重要器官执行正常功能的首要前提。现代医学已证明：人体的衰老，肿瘤的发生，高血压、糖尿病及许多心脑血管等疾病，主要是微循环障碍所致，因此微循环正常与否，是人体是否健康的重要标志。

目前，针对微循环障碍临床主要采用药物治疗和非药物治疗方法。药物主要有：微循环血管保护药，如2,5-二羟基苯磺酸钙、恩必普、递法明等；抗凝血药，如肝素、速碧林、华法林等；溶栓去纤药，如链激酶、尿激酶、组织型纤溶酶原激活物等；抗血小板药，如阿司匹林、潘生丁、噻氯匹定等；血管扩张药，如己酮可可碱、马来酸桂哌齐特、胰激肽原酶等；降低血粘度药，如低分子右旋碳酐、洛伐他汀、辛伐他汀等；中药制剂，如地奥心血康、步长脑心通、复方丹参滴丸、血栓通等。无论是西药，还是中药制剂，大多只能治疗特定部位微循环障碍形成的症状，如脑部、心脏等器官的微循环障碍症状，虽然已有能够改善全身微循环障碍症状的药物，但容易顾此失彼，或者作用不明显，或者毒副作用大。由于微循环障碍大多中早期无症状或症状不明显，一般情况下容易忽略，但形成微循环障碍的诱因又是对整个人体微循环系统都有潜在的影响，只不过部分部位的微循环障碍表征的症状较明显，因此，容易形成“头痛医头、脚痛医脚”的应付式治疗，只有针对整个人体微循环系统都有效的药物，才是治疗和预防微循环障碍的优先选择。

曲札茋苷，化学名为 （E）-1-（3，5-二羟苯基）-2-（3-羟基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苯基）乙烯或3，5，3'，4'-四羟基茋-3'-O-β-葡萄糖苷（又有称3,5,4'-三羟基-茋-3'-O-葡萄糖苷），因其植物来源拉萨大黄根茎，拉萨大黄在藏药中又名曲札（《新修晶珠本草》，罗达尚主编，四川科学技术出版社，2004），故称该化合物为曲札茋苷。安全性研究表明曲札茋苷安全性良好，急性毒性试验中，24小时内给小鼠单次灌胃最大给药量为13.33g/kg.bw，比格犬为5g/kg.bw，未见动物出现毒副反应和死亡。遗传毒性试验中未见致染色体畸变、致突变作用。专利申请号：201010116358.2公开了名称为“曲札茋苷在制备防治心脑缺血疾病制剂中的应用及其制备方法”，认为曲札茋苷能够缩小心肌梗死，抑制血小板聚集，对心肌缺血具有保护作用，同时能够减少大鼠脑梗塞范围；专利申请号：201110166486.2公开了名称为“一种曲札茋苷晶体及其制备方法与应用”，实验表明曲札茋苷能够改善大鼠神经功能障碍和减少脑梗塞范围，并且认为曲札茋苷具有较强的自由基清除活性，对预防和治疗心脑缺血方面具有应用价值；专利申请号：02134928.2公开了名称为“含虎杖甙或其盐的药用组合物及其在药物制备中的用途”，认为虎杖甙或其盐具有治疗和预防微循环障碍的作用。由于曲札茋苷的水溶性较差，因此虽然有曲札茋苷的应用报道，但都没有很好的解决曲札茋苷在药品中及人体吸收过程中的溶解问题。本发明经研究证实，天麻素和/或水溶性环糊精衍生物能够大幅提高曲札茋苷的溶解度，有助于药品的制备过程及人体的溶解吸收。

现有公开资料均指向曲札茋苷等茋类化合物具有抗炎、抗HIV、抗氧化、抗癌和治疗心脑血管疾病等多方面的活性应用，对于心脑血管疾病的预防与治疗，虽然有具体的实验结论，但未见揭示对微循环系统的影响。虽然有虎杖甙或其盐对治疗和预防微循环障碍的应用公开，但对于曲札茋苷对除心脑血管以外的微循环障碍药物中的用途未见报道。

针对目前治疗微循环障碍药物功能单一、疗效差、毒副作用大的缺陷，人们更加关注从传统医学的植物药中寻找、研究和开发治疗微循环障碍的理想药物。虽然近年来也陆续开发了虎杖甙或其盐、三七总皂苷、人参皂苷单体Rb₂、羟苯磺酸钙和葛根黄酮组合物、人参皂苷和灯盏花素组合物等在治疗微循环障碍药物中的用途，但仍然存在临床治疗效果不明显、副作用大、成瘾性难控制等方面的不足。如果能够从中华传统药物中寻找到一种药理明确、治疗效果明显、适应症广、无毒副作用或低毒副作用的化合物，将能够展示中华传统医学的魅力，为预防和治疗微循环障碍开辟新的治疗途径。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有药理明确、治疗效果明显、适应症广、无毒副作用或低毒副作用的曲札茋苷在制备改善微循环障碍药物中的新应用。

本发明的曲札茋苷在制备改善微循环障碍药物中的应用，所述的曲札茋苷为具有如下结构的(E)-1-(3,5-二羟苯基)-2-(3-羟基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苯基)乙烯：

现有技术领域对曲札茋苷治疗心脑血管疾病无确切的药理作用，未见曲札茋苷对治疗除心脑血管疾病以外的微循环障碍药物中的用途报道。经昆明种正常小鼠和人工诱导微循环障碍模型小鼠实验表明，曲札茋苷对正常小鼠的微血管均有明显扩张作用，可明显对抗微循环障碍模型小鼠的微动脉和微静脉收缩及毛细血管网开放数的减少，并能明显对抗血流速度的减慢。因此对曲札茋苷的药理作用已给予了充分说明。已有专利文献中已实验证实，曲札茋苷能够改善大鼠的神经功能障碍和显著较少脑梗塞及急性心肌梗塞的范围；经SD大鼠烧伤性休克实验，曲札茋苷能够显著延长存活时间。经小鼠急性和长期毒性实验，在安全剂量范围内未观察到毒性反映。所以，曲札茋苷对于改善微循环障碍具有药理明确、治疗效果明显、适应症广、无毒副作用或低毒副作用的特点。

具体实施方式

下面对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换，均落入本发明的保护范围。

本发明所述的曲札茋苷在制备改善微循环障碍药物中的应用，所述的曲札茋苷为(E)-1-(3,5-二羟苯基)-2-(3-羟基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苯基)乙烯。

作为优选实施方式：所述的改善微循环障碍药物是包括曲札茋苷和药学上可以接受的一种或多种助剂组成的制剂。

作为优选实施方式：所述的改善微循环障碍药物中曲札茋苷含量按质量比为1：0.1～80。

作为优选实施方式：所述的改善微循环障碍药物中包括曲札茋苷与天麻素和/或水溶性环糊精衍生物或与PEG400和甘露醇。天麻素和/或水溶性环糊精衍生物在药物中起到增溶和稳定曲札茋苷的作用。

天麻素（Gastrodin CAS）为4-羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷半水合物，具有比较稳定的酚苷结构。为白色结晶性粉末，无臭，味苦；熔点：153℃～156℃；在水、甲醇中易溶，在乙醇中溶解，天麻素有镇静、安眠、镇痛作用，且毒性低。从动物的肌内注射给药和静脉注射给药的最大耐受量可以推算人的最大耐受量为33.249g（按60kg计算）。天麻素是苷类中水中溶解度极好，可达到50%以上，其作为增溶剂的研究目前尚未有报道。

作为优选实施方式：所述的水溶性环糊精衍生物包括各种取代度的α-环糊精衍生物、β-环糊精衍生物、γ-环糊精衍生物中的一种或几种的组合。

作为进一步优选实施方式：所述的水溶性环糊精衍生物包括甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、硫醚基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精中的一种或几种的组合。

作为优选实施方式：所述的水溶性环糊精衍生物在药物配制溶液中的浓度为（质量体积比）2%～60%；所述天麻素在药物配制溶液中的浓度为（质量体积比）2%～60%。

作为进一步优选实施方式：所述的水溶性环糊精衍生物在药物配制溶液中的浓度为（质量体积比）3%～45%；所述天麻素在药物配制溶液中的浓度为（质量体积比）3%～50%。

作为优选实施方式：所述的PEG400在药物配制溶液中的浓度为（质量体积比）0.1%～20%；所述的甘露醇在药物配制溶液中的浓度为（质量体积比）1%～20%。

作为优选实施方式：所述的微循环障碍包括脑微血管损伤所致的障碍和/或缺血再灌注损伤所致的障碍和/或白细胞粘附损伤所致的障碍和/或过氧化物所致的障碍。

作为优选实施方式：所述的改善微循环障碍药物剂型为片剂、胶囊、栓剂、膏剂、贴剂、丸剂、颗粒剂、悬浮液、注射液、滴注液或冻干粉针。

作为优选实施方式：所述的曲札茋苷在制备改善人、猴、黑猩猩、狒狒、牛、马、猪、羊、犬、兔、大鼠、小鼠等哺乳动物微循环障碍药物中的应用。

实施例1 ：

配 方	1	2	3	4	5
						曲札茋苷	5g	5g	5g	10g	20g
天麻素	0.5g	80g	400g	80g	200g
						氢氧化钠或盐酸	适量	适量	适量	适量	适量
注射用水	1000ml	1000ml	1000ml	1000ml	1000ml

配制罐中加入配制全量60%的注射用水，加热至95℃微沸，保温至80℃，启动真空同时开启搅拌至10分钟，用氮气将按处方量称取曲札茋苷与天麻素一起带入配制罐中，约5分钟可溶解曲札茋苷，撤除真空和氮气，调整pH至5.0-7.0和含量加水至全量即完成配制过程，接下来按常规过程无菌过滤、灌装，冻干制成注射剂。

实施例2 ：

配方	1	2
			曲札茋苷	25g	50g
天麻素	80g	100g
			羟丙基-β-环糊精	30g	30g
氢氧化钠或盐酸	适量	适量
			注射用水	1000ml	1000ml

配制罐中加入配制全量60%的注射用水，加热至95℃微沸，保温至80℃，启动真空同时开启搅拌至10分钟，用氮气将按处方量称取曲札茋苷与天麻素、羟丙基-β-环糊精一起带入配制罐中，约5分钟可溶解曲札茋苷，撤除真空和氮气，调整pH至6.0-7.0和含量加水至全量即完成配制过程，接下来按常规过程无菌过滤、灌装，冻干制成注射剂。

实施例3 ：

配 方	1	2	3	4
					曲札茋苷	5g	10g	10g	20g
羟丙基-β-环糊精	30g	30g	50g	50g
					氢氧化钠或盐酸	适量	适量	适量	适量
注射用水	1000ml	1000ml	1000ml	1000ml

配制罐中加入配制全量60%的注射用水，加热至95℃微沸，保温至80℃，启动真空同时开启搅拌至10分钟，用氮气将按处方量称取曲札茋苷与羟丙基-β-环糊精一起带入配制罐中，约5分钟可溶解曲札茋苷，撤除真空和氮气，调整pH5.5-7.0和含量加水至全量即完成配制过程，接下来按常规过程无菌过滤、灌装，冻干制成注射剂。

实施例4：

取5份配制罐中加入配制全量60%的注射用水，加热至95℃微沸，保温至80℃，启动真空同时开启搅拌至10分钟，用氮气将按处方量称取曲札茋苷与羟丙基-β-环糊精一起带入配制罐中，约5分钟可溶解曲札茋苷，撤除真空和氮气，分别在5份配制罐中加入维生素C、L-盐酸半胱氨酸盐酸盐、谷胱甘肽钠、亚硫酸氢钠、EDTA2Na，调整pH至6.0-7.0和含量加水至全量即完成配制过程，接下来按常规过程无菌过滤、灌装，制成注射液，作为实验液。同法制作不含抗氧剂的注射液作为对照液。分别加入10%过氧化氢溶液，在85度下加热60小时，取出观察发现含抗氧剂的注射液均为无色澄明液体，而不含抗氧剂的注射液颜色发黄，说明加入抗氧剂可以稳定注射液。

实施例5：

配 方	曲札茋苷	PEG400	甘露醇	氢氧化钠或盐酸	注射用水
						用 量	5.0g	20ml	100g	适量	1000ml

配制罐中加入配制全量60%的注射用水，加热至95℃微沸，保温至80℃，启动真空同时开启搅拌至10分钟，用氮气将按处方量称取曲札茋苷与PEG400、甘露醇一起带入配制罐中，约5分钟可溶解曲札茋苷，撤除真空和氮气，调整pH至5.5-6.5和含量加水至全量即完成配制过程，接下来按常规过程无菌过滤、灌装，冻干制成注射剂。

试验例：溶解度试验

1、试验方法

于容量瓶中分别按下表规定的浓度配制一系列天麻素或羟丙基-β-环糊精或天麻素、羟丙基-β-环糊精混合溶液，加入过量曲札茋苷，置于25±1℃恒温水浴中连续振荡72小时至平衡，精密量取经0.45μm微孔滤膜的溶液，稀释制成每ml含6μg曲札茋苷的供试品溶液；另精密称取适量对照品，用水溶解并稀释制成对照品溶液，取上述两种溶液用紫外分光光度法在319nm波长处测量吸光度，计算既得。溶解度测试结果分别见如下:

2、曲札茋苷在不同浓度天麻素溶液中的溶解度

天麻素%	0	1	3	5	8	10	15
								曲札茋苷（mg/ml）	1.752	3.191	5.097	7.107	9.169	11.438	11.761
天麻素%	25	30	35	40	45	50
								曲札茋苷（mg/ml）	38.378	60.424	87.793	85.117	97.993	105.017

3、曲札茋苷在不同浓度羟丙基-β-环糊精溶液中的溶解度

羟丙基-β-环糊精%	0	1	3	5	8	10	15
								曲札茋苷（mg/ml）	1.752	4.796	10.785	20.028	26.142	34.093	43.264
羟丙基-β-环糊精%	20	25	30	35	40	45	50
								曲札茋苷（mg/ml）	59.198	64.329	116.235	159.444	188.611	180.509	183.10

4、曲札茋苷在不同浓度天麻素、羟丙基-β-环糊精混合溶液中的溶解度

天麻素%	0	1	3	5	8	10	15
								羟丙基-β-环糊精%	3	3	3	3	3	3	3
曲札茋苷（mg/ml）	10.785	14.786	16.215	22.61	30.945	39.811	55.987
								天麻素%	20	25	30	35	40	45	50
羟丙基-β-环糊精%	3	3	3	3	3	3	3
								曲札茋苷（mg/ml）	107.193	126.647	181.272	233.379	197.257	186.789	188.029

实验例1：本发明的曲札茋苷对小鼠实验性微循环障碍的影响

1 实验材料

1.1 样品

实施例5制备的样品，规格10mg/瓶，编号为51#

实施例3第3号配方制备的样品，规格 20mg/瓶；编号为52#

实施例1第2号配方制备的样品，规格10mg/瓶；编号为53#

均为白色冻干制剂，易溶于水，由昆明制药集团药物研究院提供。分别用氯化钠注射液（N.S）配成含药1.0mg/ml浓度的溶液给小鼠静脉注射用。

1.2 试剂

盐酸肾上腺素注射液，国药准字H41021054，1mg/ml，天津药业集团新郑股份有限公司，批号0909102；氯化钠注射液（N.S），500ml/瓶，国药准字H53020723，昆明市宇斯药业有限责任公司，批号10062502；显微镜用香柏油，中国上海标本模型厂，批号20101013。

氨基甲酸乙酯，化学纯，北京化学试剂公司，批号20051007，用氯化钠注射液配成12%的溶液供小鼠麻醉用。

1.3 仪器

AL104型电子天平（称量样品），梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司；JJ2000电子天平（称量动物），常熟市双杰测试仪器厂；WX-6微循环显微仪，重庆天海。

1.4 动物

3～4周龄SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g，由昆明医学院实验动物中心提供，生产许可证：SCXK（滇）2011-0004。

饲养于IVC动物实验室，温度20～25℃（日温差≤3℃），湿度40%～70%，照明12h:12h明暗交替，照度150～300lx，噪音≤60dB，实验动物使用许可证：SYXK（滇）2005-0001。

透明塑料盒群养，雌雄分笼，每箱≤10只，每日喂饲鼠用配合饲料，自由饮水，视情况更换笼具和垫料，饲料生产许可证：SCXK(滇)2011-0005，来源于昆明医学院实验动物中心。

1.5统计学处理

结果用平均数±标准差（±SD）表示，方差齐时组间比较采用LSD检验，方差不齐时组间比较采用Dunnett’s T3检验，偏态分布用秩和检验。P<0.05有统计学意义，P<0.01有显著统计学意义。

方法与结果

2.1对正常小鼠微循环的影响

取18～22g小鼠40只，雌雄各半，按性别和体重随机分为4组：N.S对照组；51～53#样品组；每组10只。将小鼠分别用12%的乌拉坦溶液按10ml/kg.bw的剂量腹腔注射麻醉后，固定耳廓，置于放大100倍的微循环显微仪下，以合适的毛细血管（动、静脉平行，为第三级分支）为观察对象。待动物状况稳定、采集基础值后，分别按剂量于尾静脉注射给药一次，对照组给予同体积的N.S，容积均为10ml/kg.bw。分别采集给药前及给药后5、10、20min的图像，测定以下四个指标：①微动脉管径（A₃）；②微静脉管径（V3）；③毛细血管网计数；④血液流态。以给药前测定的基础值计算各项指标的变化率，与溶媒组比较组间差异的显著性。实验过程中室温控制在22±2℃，并采用平行操作以减小系统误差。结果见表1～4。

由表1～4可见，对照组小鼠尾静脉注射10ml/kg的N.S后，耳廓微动脉和微静脉管径、毛细血管网开放数、血液流速均无明显变化；其余各组小鼠耳廓微动脉和静脉于注射给药后均有不同程度的扩张，但对毛细血管网开放数、血液流速无明显影响。

表1 对正常小鼠耳廓微动脉管径的影响（±SD，n=10）

与对照组相比，*/**P<0.05/0.01；

表2 对正常小鼠耳廓微静脉管径的影响（±SD，n=10）

与对照组相比，*/**P<0.05/0.01

表3 对正常小鼠耳廓毛细血管网开放数的影响（±SD，n=10）

与对照组相比，P>0.05；

表4 对正常小鼠耳廓血液流态的影响（±SD，n=10）

与对照组相比，P>0.05；

2.2对实验性微循环障碍小鼠的影响

上述试验采集给药后20min的图像后，按0.2mg/kg的剂量给小鼠腹腔注射盐酸肾上腺素造成实验性微循环障碍模型，对照组给予同体积的N.S，容积均为10ml/kg.bw。连续采集造模后5、10、20、30min的图像，以给药后20min测定值为基础值计算造模后各项指标的变化率，与溶媒组比较组间差异的显著性。测定指标及实验条件同上。结果见表5～8。

由表5～8可见，模型组小鼠腹腔注射0.2mg/kg.bw盐酸肾上腺素，可使耳廓微动脉和微静脉管明显收缩、毛细血管网开放数明显减少、血液流速明显减慢，表明实验性微循环障碍造模成功；其余各组均可明显对抗肾上腺素所致微循环障碍模型小鼠的微动脉和微静脉收缩及毛细血管网开放数的减少，并能明显对抗血流速度的减慢。

表5 对微循环障碍小鼠耳廓微动脉管径的影响（±SD，n=10）

与模型组相比，*/**P<0.05/0.01

表6 对微循环障碍小鼠耳廓微静脉管径的影响（±SD，n=10）

与模型组相比，*/**P<0.05/0.01

表7 对微循环障碍小鼠耳廓毛细血管网开放数的影响（±SD，n=10）

与模型组相比，*/**P<0.05/0.01

表8 对微循环障碍小鼠耳廓血液流态的影响（±SD，n=10）

与模型组相比，*/**P<0.05/0.01

3小结

3.1 所有样品单次静脉注射给药，对正常小鼠微血管均有扩张作用；

3.2 所有样品单次静脉注射给药，均可明显对抗肾上腺素所致微循环障碍模型小鼠的微动脉和微静脉收缩及毛细血管网开放数的减少，并能明显对抗血流速度的减慢，均对小鼠微循环障碍有改善作用。

实验例2：本发明的曲札茋苷对SD大鼠烧伤性休克的影响

1、SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，体重300～360g，由昆明医学院实验动物中心提供。

2、实验方法：

SD大鼠雌雄各半，随机分成N.S对照组和51～53#样品组，每组10只。乌拉坦-氯胺酮麻醉，80℃水烫伤约占30%体表面积的腰部以下部位30sec，烫伤0.5hr后各组静脉注射：对照组10ml N.S、51#～53#样品组10ml。

3、结论：

所有样品单次静脉注射给药，均能够显著的延长SD大鼠烧伤性休克后的存活时间。

表9 对大鼠烧伤性休克的影响（±SD，n=10）

与模型组相比，*/**P<0.05/0.01

Claims (2)

1.一种天麻素在提高含曲札茋苷药物中曲札茋苷水溶性的应用，其特征在于所述含曲札茋苷药物为曲札茋苷、天麻素，或者为曲札茋苷、天麻素、羟丙基-β-环糊精；所述羟丙基-β-环糊精在药物配制溶液中的浓度为质量体积比2%~50%，所述天麻素在药物配制溶液中的浓度为质量体积比2%~50%；所述曲札茋苷为具有如下结构的(E)-1-(3,5-二羟苯基)-2-(3-羟基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苯基)乙烯：

。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述羟丙基-β-环糊精在药物配制溶液中的浓度为质量体积比3%~45%；所述天麻素在药物配制溶液中的浓度为质量体积比3%~50%。