CN100496506C - 葛根素注射用制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种葛根素注射液，其主要是由葛根素、丙二醇、碱性氨基酸和烟酰胺制备得到；所述碱性氨基酸为精氨酸和/或赖氨酸；以注射液的总体积计，所用丙二醇的体积比为20～45%；所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12∶1～10∶0.5～8。本发明还提供了一种葛根素注射用冻干粉针剂，包含葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺；所述碱性氨基酸为精氨酸和/或赖氨酸；所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12∶1～10∶0.5～8。本发明提供的葛根素注射用制剂可显著提高葛根素药液的浓度，有利于制备大规格制剂，降低生产成本，同时增加葛根素制剂的稳定性。

Description

葛根素注射用制剂

技术领域

本发明涉及葛根素注射用制剂。

背景技术

葛根素是中药葛根中的主要有效成分，其化学名为8-β-D-葡萄吡喃糖-4′，7-二羟基异黄酮。提取葛根素单一组分，制成注射液，于1993年被批准为国家级四类新药。葛根素的提取工艺不断改进，目前葛根素原料药能达到97％以上。经临床研究表明，葛根素有降低血压、减慢心率、扩张冠脉、增加冠脉和脑的血流量，降低血管阻力，降低心肌氧消耗，改善缺血心肌的代谢，改善微循环，抗心律失常等作用。而且随着葛根素在临床上日益广泛的运用，其临床适应症状也不断拓宽。但葛根素水溶性不好，易降解，在临床上存在发热、过敏反应；暂时腹涨、恶心等消化道反应；偶有头痛、头晕、胸闷、皮肤骚痒等不良反应。

由于上述原因，限制了葛根素的临床应用范围，国内外相关专家正在研究如何解决葛根素的溶解性和易降解问题，并减少临床上发热、过敏反应；暂时腹涨、恶心等消化道反应；偶有头痛、头晕、胸闷、皮肤骚痒等不良反应。

中国专利ZL99100213.X涉及一种治疗冠心病和脑栓塞的药物组合物，其主要成分是葛根素。该药物的制备方法是将葛根素通过不同的药理条件下允许的碱性物质进行调配，制成澄清液，然后按冻干工艺进行冷冻干燥，制成葛根素冻干粉针剂。由于本发明药物组合物不含有丙二醇类有机助溶剂，可以避免由此对人体产生的毒副作用；该药物的剂型为冻干粉针剂，产品质量稳定，有利于贮藏和运输。

中国专利ZL02126319.1涉及一种含有葛根素的药物注射剂及其制备工艺。其中包含葛根素加入药理允许的助溶物质以提高葛根素的溶解度而不改变葛根素本身的酸碱性，使葛根素达到临床要求的药物浓度。制备方法是将葛根素粉与药理允许的助溶物质充分混合均匀得到无热源的澄清液，按水针工艺或冻干工艺制作成葛根素注射剂。本发明方法制得的产品既能减少毒副作用又不会反应成盐，质量稳定、疗效确切。

目前研究表明，葛根素注射液的浓度只能达到50mg/ml，制备大规格制剂只有通过增加量来制备，这样就增加了生产成本；如果解决溶解性，则不能保证稳定性，而如果解决稳定性，则不能解决溶解性。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明人在进行大量的试验时意外的发现，当用一定比例丙二醇、碱性氨基酸(精氨酸和/或赖氨酸)和烟酰胺作为辅料制备葛根素注射液时，葛根素注射液的浓度可以提高到80mg/ml以上，并且降低了副作用，增加了葛根素制剂的稳定性，从而有利于制备大规格制剂。

在本发明中，丙二醇作为一种注射剂赋形剂，毒性和刺激均较小，在体内分解破坏和排泄较快。在较高浓度(>50％)副作用较明显。本注射液没有表现出对机体的毒副作用，并且由于其是一种较价廉的溶剂，因此可以降低生产成本；同时由于提高了葛根素注射液的浓度，当制备大规格制剂时可以减少辅料的用量，使得生产成本进一步得到降低。

本发明还意外的发现，当用一定比例碱性氨基酸(精氨酸和/或赖氨酸)和烟酰胺制备注射用葛根素冻干粉针剂时，可以制备得到120mg/ml以上的高浓度葛根素药液，从而可有利于减少制剂冻干工艺时间和降低生产成本。

因此，本发明的一个目的在于提供一种葛根素注射液，其可以同时提高葛根素制剂的浓度和稳定性，且可降低副作用。

本发明的另一个目的在于提供一种用高浓度葛根素药液制备的葛根素注射用冻干粉针剂。

根据本发明的一方面，本发明提供了一种葛根素注射液，其主要是由葛根素、丙二醇、碱性氨基酸和烟酰胺制备得到；所述碱性氨基酸为精氨酸和/或赖氨酸；以注射液的总体积计，所用丙二醇的体积百分比为20～45％；所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：1～10：0.5～8。

碱性氨基酸及烟酰胺可与葛根素形成络合物，增加其溶解性和稳定性；丙二醇的多羟基也可增加葛根素的溶解性，同时丙二醇可减少含氧量，增加其稳定性；此外，碱性氨基酸及烟酰胺可能有助于降低丙二醇对人体产生的毒副作用。

所述葛根素注射液的制备原料还可进一步包括pH调节剂、注射用水等，葛根素注射液的pH值应为临床上通常可接受的范围。

所述精氨酸可为L—精氨酸、D—精氨酸、和/或D、L—精氨酸。

所述赖氨酸可为L—赖氨酸、D—赖氨酸、和/或D、L—赖氨酸。

优选的，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：2～7：1～5。

更优选的，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：3～5：2～3。

最优选的，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为424：265：106。

所述葛根素注射液中，所述葛根素的浓度可为55～120mg/ml，优选为60～90mg/ml。

所述葛根素注射液的制备方法可为：在反应容器中加入配方量的葛根素、丙二醇、碱性氨基酸、烟酰胺及注射用水，搅拌至澄清，调节pH值，超滤，除菌后分装。

根据本发明的另一方面，本发明提供了一种葛根素注射用冻干粉针剂(有时简称为注射用葛根素)，其包含葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺，所述碱性氨基酸为精氨酸和/或赖氨酸，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：1～10：0.5～8。

所述葛根素注射用冻干粉针剂的制备原料还可进一步包括pH调节剂、注射用水等，所述粉针剂中还可加入其它种类的冻干赋形剂，如甘露醇等。

优选的，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：2～7：1～5。

更优选的，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：3～5：2～3。

最优选的，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为6：5：4。

所述精氨酸可为L—精氨酸、D—精氨酸、和/或D、L—精氨酸。

所述赖氨酸可为L—赖氨酸、D—赖氨酸、和/或D、L—赖氨酸。

注射用葛根素粉针剂的制备方法可为：在反应容器中加入葛根素、碱性氨基酸、烟酰胺和注射用水，搅拌至澄清，调节pH值，得到高浓度药液；超滤后分装药液，自-45℃起分段升温真空冷冻干燥，制得葛根素注射用冻干粉针剂。所述葛根素药液的浓度可为60～150mg/ml，优选为80～120mg/ml。

本发明经过大规格制剂的制备、影响因素试验、加速试验、过敏试验、溶血试验、血管刺激性试验、异常毒试验等证明使用一定比例碱性氨基酸和烟酰胺制备葛根素注射液和注射用葛根素制剂，既解决了葛根素在水中的溶解性，又增加了制剂的稳定性；且减少发热、过敏反应，暂时腹涨、恶心等消化道反应，以及偶有头痛、头晕、胸闷、皮肤搔痒等不良反应。

为了更好地理解本发明的本质，下面通过对本发明较佳实施方式的描述，详细说明但不限制本发明。

具体实施方式

本发明所用试验材料，如无特别说明，均为市售购买产品。

葛根素注射液的制备

【实施例1】葛根素注射液(规格为2ml：100mg)的制备

1、配液：准确称取107.5g葛根素、21.5g精氨酸、860ml丙二醇和21.5g烟酰胺及适量注射用水，加入溶解后，并调解pH值为3.5～5.5，加注射用水补足至21500ml，搅拌均匀，制成50mg/ml的药物溶液。

2、超滤：将上述药液通过截留分子量为8000道尔顿的超滤柱超滤。

3、过滤：将超滤后药液快速通过0.22μm除菌过滤器进行除菌过滤。

4、灌封：将过滤后的药液按2.15ml/支分装于清洁安瓿中，封口。

5、灭菌：采用115℃流通蒸汽灭菌30分钟。

6、其它：灯检，质检，贴标签，包装，入库。

【实施例2】葛根素注射液(规格为5ml：400mg)的制备

1、配液：准确称取424g葛根素、265g精氨酸、1590ml丙二醇和106g烟酰胺及适量注射用水，加入溶解后，并调解pH值为3.5～5.5，加注射用水补足至5300ml，搅拌均匀，制成80mg/ml的药物溶液。

2、超滤：将上述药液通过截留分子量为8000道尔顿的超滤柱超滤。

3、过滤：将超滤后药液快速通过0.22μm除菌过滤器进行除菌过滤。

4、灌封：将过滤后的药液按5.3ml/支分装于清洁安瓿中，封口。

5、灭菌：采用115℃流通蒸汽灭菌30分钟。

6、其它：灯检，质检，贴标签，包装，入库。

葛根素注射用冻干粉针剂的制备

【实施例3】葛根素注射用冻干粉针剂的制备(规格为0.1g/瓶)

1、配液：准确称取100g葛根素、20g精氨酸、10g烟酰胺和适量注射用水，加入溶解后，并调解pH值为7.0～9.0，加注射用水补足至1000ml，搅拌均匀，制成100mg/ml的药物溶液。

2、超滤：将上述药液通过截留分子量为8000道尔顿的超滤柱超滤。

3、过滤：将超滤后药液快速通过0.22μm除菌过滤器进行除菌过滤。

4、灌封：将过滤后的药液按1.0ml/支分装于2ml西林瓶中。

5、冷冻干燥：冻干条件为预冻2.5小时(20℃—-45℃)，升华2.5小时(-45℃—-40℃)+7小时(-40℃—0℃)、干燥7小时(0℃—30℃)+2小时(30℃—35℃)，真空小于0.2Mbar，控制产品温度最高不超过35℃，搁板温度不超过40℃。

6、其它：质检，贴标签，包装，入库。

【实施例4】葛根素注射用冻干粉针剂的制备(规格为0.4g/瓶)

1、配液：准确称取400g葛根素、200g精氨酸、160g烟酰胺和适量注射用水，加入溶解后，并调解pH值为7.0～9.0，加注射用水补足至4000ml，搅拌均匀，制成100mg/ml的药物溶液。

2、超滤：将上述药液通过截留分子量为8000道尔顿的超滤柱超滤。

3、过滤：将超滤后药液快速通过0.22μm除菌过滤器进行除菌过滤。

4、灌封：将过滤后的药液按4.0ml/支分装于7ml西林瓶中。

5、冷冻干燥：冻干条件为预冻3小时(20℃—-45℃)，升华4小时(-45℃—-40℃)+10小时(-40℃—0℃)、干燥8小时(0℃—30℃)+3小时(30℃—35℃)，真空小于0.2Mbar，控制产品温度最高不超过35℃，搁板温度不超过40℃。

6、其它：质检，贴标签，包装，入库。

【实施例5】葛根素注射用冻干粉针剂的制备(规格为0.6g/瓶)

1、配液：准确称取600g葛根素、500g精氨酸、400g烟酰胺和适量注射用水，加入溶解后，并调解pH值为7.0～9.0，加注射用水补足至5000ml，搅拌均匀，制成120mg/ml的药物溶液。

2、超滤：将上述药液通过截留分子量为8000道尔顿的超滤柱超滤。

3、过滤：将超滤后药液快速通过0.22μm除菌过滤器进行除菌过滤。

4、灌封：将过滤后的药液按5.0ml/支分装于10ml西林瓶中。

5、冷冻干燥：冻干条件为预冻4小时(20℃—-45℃)，升华4小时(-45℃—-40℃)+12小时(-40℃—0℃)、干燥10小时(0℃—30℃)+3小时(30℃—35℃)，真空小于0.2Mbar，控制产品温度最高不超过35℃，搁板温度不超过40℃。

6、其它：质检，贴标签，包装，入库。

葛根素用制剂的的稳定性试验

【实施例6】葛根素注射液的影响因素试验

分别取两组葛根素注射液(规格为2ml：100mg)进行影响因素试验。1组辅料为50％体积的丙二醇；2组辅料为35％体积的丙二醇、2％重量的精氨酸和1％重量的烟酰胺，分别进行高温试验和强光照试验。参照中华人民共和国2000年药典，分别检测性状、澄明度、pH值、相关物质和含量。高温试验的条件：60℃；强光照试验条件：4500Lx±500Lx；分别于5天和10天取样检测。

结果见表1、2。结果表明，葛根素注射液2组pH值、有关物质和含量变化比1组小。辅料为35％体积的丙二醇、2％重量的精氨酸和1％重量烟酰胺的2组葛根素注射液性质更稳定。

表1 葛根素注射液1组影响因素考察试验结果

表2 葛根素注射液2组影响因素考察试验结果

【实施例7】葛根素注射用冻干粉针剂的影响因素试验

分别取两组注射用葛根素冻干粉针剂(规格为0.2g)，1组辅料为2％重量的甘露醇，1mol/L氢氧化钠调节溶解；2组辅料为2％重量的甘露醇、4％重量的精氨酸和2％重量的烟酰胺分别进行高温试验、高湿度试验、和强光照试验。分别检测性状、溶液颜色和澄清度、相关物质和含量。高温试验的条件：60℃；高湿度试验条件：25℃，相对湿度90±5％；强光照试验条件：4500Lx±500Lx。分别于5天和10天取样检测。

结果见表3、4。结果表明，注射用葛根素2组在高温试验、高湿度试验、和强光照试验中，pH值、有关物质、含量变化小，稳定性强于1组。

表3 注射用葛根素1组影响因素考察试验结果

表4 注射用葛根素2组影响因素考察试验结果

【实施例8】葛根素注射液的加速试验

按实施例2的制备方法制备葛根素注射液规格为5ml：400mg，在温度为40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，在试验期间第1个月、第2个月、第3个月、第6个月末分别取样一次，按稳定性重点考察项目检测。

检测结果见表5。结果表明，葛根素注射液(规格为5ml：400mg)在加速条件下各项性质是稳定的。

表5 葛根素注射液(规格为5ml：400mg)加速试验

 

时间(月)	澄明度	外观性状	PH值	有关物质(％)	含量(％)
						0	符合规定	微黄色粉末	4.42	1.58	99.8
1	符合规定	微黄色粉末	4.45	1.53	99.7
						2	符合规定	微黄色粉末	4.50	1.62	99.3
3	符合规定	微黄色粉末	4.48	1.67	99.4
						6	符合规定	微黄色粉末	4.56	1.82	99.0

【实施例9】注射用葛根素的加速试验

按实施例4的制备方法制备注射用葛根素规格为0.4g/瓶，在温度为40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，在试验期间第1个月、第2个月、第3个月、第6个月末分别取样一次，按稳定性重点考察项目检测。

检测结果见表6。结果表明，注射用葛根素(规格为0.4g)在加速条件下各项性质是稳定的。

表6 注射用葛根素冻干粉针剂(规格为0.4g)加速试验

 

时间(月)	澄明度	外观性状	PH值	有关物质(％)	含量(％)
						0	符合规定	微黄色粉末	7.92	1.29	100.8
1	符合规定	微黄色粉末	7.95	1.36	100.3
						2	符合规定	微黄色粉末	7.90	1.38	100.5
3	符合规定	微黄色粉末	7.89	1.43	99.8
						6	符合规定	微黄色粉末	7.98	1.46	99.6

葛根素注射液的安全性试验

【实施例10】过敏试验

供试品溶液按实施例2制备的葛根素注射液，用生理盐水配制的供试品溶液0.8mg/ml。

取豚鼠18只，雌雄各半，体重250～350g，随机分为3组，每组6只。试验组腹腔注射供试品溶液1.0mL/只，空白对照组注射等容量0.9％氯化钠注射液，阳性对照组注射1％新鲜蛋清1.0mL/只。隔日一次，共三次。首次给药后14天、21天，每组取3只，试验组由股静脉注射葛根素生理盐水注射液2.0mL/只，空白对照组和阳性对照组分别由股静脉注射0.9％氯化钠注射液和1％新鲜蛋清各2.0mL/只，给药后立即观察动物有无喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克和死亡等过敏反应，观察1小时。

结果见表7。结果表明葛根素注射液无致敏作用。

表7.葛根素注射液过敏试验结果

 

分组	动物数(n)	致敏天数	过敏数	休克数	死亡数	有无过敏
							葛根素注射液	33	1421	00	00	00	(—)(—)
生理盐水	33	1421	00	00	00	(—)(—)

 

1％蛋清

33

1421

33

33

33

(+)(+)

(—)无过敏反应；(+)有过敏反应。

【实施例11】溶血试验

供试品溶液同实施例10。

家兔耳缘静脉采血，以竹签搅拌去纤维蛋白后，用生理盐水洗涤后离心(2000rpm)，除掉上清液，再以生理盐水反复洗涤数次(均离心弃上清)直至上清液无红色，然后按体积比用生理盐水配成2％红细胞混悬液备用。

取试管7支，按表5所示，各管分别加入不同体积的供试品溶液和相同体积的红细胞混悬液，其中第6管不加药，为生理盐水空白对照，第7管加注射用水作完全溶血对照(阳性对照管)。各管轻轻摇匀后，置37℃水浴中温孵4小时，观察0.25小时至4.0小时内各管的溶血程度，按表6标准判断。末次观察后，将各试管置冰箱中冷藏24小时，24小时后观察有无溶血和红细胞凝集现象。

结果见表8、9、10。试验结果表明，葛根素注射液组和生理盐水组各管在0.25～4.0小时内均无溶血现象，注射用水组在各时间点完全溶血，产生红色透明溶液。葛根素注射液组和生理盐水组各管放置24小时后仍无溶血及红细胞凝集现象。

按拟订临床静脉注射给药浓度进行体外溶血试验，结果表明葛根素注射液无溶血作用。

表8 体外溶血试验加样表

表9 溶血结果判断

 

程度	标识	现象
			无溶血	-	红细胞全部下沉，上层液无色透明。
部分溶血	±	溶液澄明红色或棕红色，管底有少量红细胞。
			全溶血	+	溶液澄明红色，管底无细胞残留。
凝集		红细胞聚集成块，摇匀后不分散。

表10 葛根素注射液体外溶血试验结果

【实施例12】血管刺激性试验

供试品溶液同实施例10。

取2.0～2.2kg家兔6只，雌雄各半，按10.0mL/kg剂量耳静脉注射给药，左耳给生理盐水作对照，右耳给供试品溶液，每日一次，连续三日，每日肉眼观察双耳注射部位及周围血管是否有红肿、丘斑等刺激现象。末次注射后24小时，处死动物，分别剪取双耳注射处耳静脉及周围组织约5cm，肉眼观察有无红肿、水肿、丘斑形成，并用10％的甲醛固定后，石蜡切片，HE染色，显微镜下观察其炎性细胞浸润、血管周围组织出血、血栓形成及坏死等情况。

结果葛根素注射液连续给药三天，肉眼观察家兔耳静脉血管及周围组织未见红肿、充血等异常现象。显微镜下观察：生理盐水组血管内皮细胞、血管腔及周围组织在1cm和5cm处均未见异常；葛根素注射液组1cm和5cm处血管内皮连续、完整，未见增生、肿胀；血管周围组织未见炎性细胞浸润及坏死；管腔内无血栓形成。

【实施例13】异常毒性试验

各选择5只体重17～20g的健康小鼠，在试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养。将实施例2制备的葛根素注射液用生理盐水配制溶液浓度分别为0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml，静脉注射，每只小鼠分别给予供试品溶液0.5ml。全部小鼠在48小时内未有死亡。

以上对本发明较佳实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (8)

1、一种葛根素注射液，其特征在于，

主要是由葛根素、丙二醇、碱性氨基酸和烟酰胺制备得到；

所述碱性氨基酸为精氨酸和/或赖氨酸；

以注射液的总体积计，所用丙二醇的体积百分比为20～45％；

所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：1～10：0.5～8；

在所述葛根素注射液中，所述葛根素的浓度为55～120mg/ml。

2、权利要求1所述的葛根素注射液，其特征在于，

所述精氨酸为L—精氨酸、D—精氨酸、和/或D、L—精氨酸；

所述赖氨酸为L—赖氨酸、D—赖氨酸、和/或D、L—赖氨酸。

3、权利要求1所述的葛根素注射液，其特征在于，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：2～7：1～5。

4、权利要求3所述的葛根素注射液，其特征在于，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为424：265：106。

5、一种葛根素注射用冻干粉针剂，其特征在于，

包含葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺；

所述碱性氨基酸为精氨酸和/或赖氨酸；

所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：1～10：0.5～8；

所述葛根素注射用冻干粉针剂是通过下述方法制备得到：

在反应容器中加入葛根素、碱性氨基酸、烟酰胺和注射用水，搅拌至澄清，调节pH值，得到浓度为60～150mg/ml的药液；超滤后分装药液，自-45℃起分段升温真空冷冻干燥，制得葛根素注射用冻干粉针剂。。

6、权利要求5所述的葛根素注射用冻干粉针剂，其特征在于，

所述精氨酸为L—精氨酸、D—精氨酸、和/或D、L—精氨酸；

所述赖氨酸为L—赖氨酸、D—赖氨酸、和/或D、L—赖氨酸。

7、权利要求5所述的葛根素注射用冻干粉针剂，其特征在于，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为12：2～7：1～5。

8、权利要求7所述的葛根素注射用冻干粉针剂，其特征在于，所述葛根素、碱性氨基酸和烟酰胺的重量比依次为6：5：4。