KR100897656B1 - 심장-뇌 혈관 질환들 및 안저 질환들 치료용고들빼기로부터 제조된 주사제 및 그것의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 심장-뇌 혈관 질환들 및 안저 질환들 치료용 한약재인 고들빼기로부터 제조된 주사제 및 그것의 제조방법에 관한 것이다. 상기 주사제는 플라본과 아데노신의 양의 비율은 5㎎: 15㎍ 또는 5㎎: 30㎍인 동결건조 분말이다. 고들빼기로부터 온 상기 플라본과 아데노신은 주사를 위하여 액체보다는 동결건조 형태에서 더욱 안정하고 그리하여 안전하고 효과적인 의약품을 제조하기 위하여 상기 생산물의 품질을 조절하기가 용이하고 저장에도 잇점이 있다.

Description

심장-뇌 혈관 질환들 및 안저 질환들 치료용 고들빼기로부터 제조된 주사제 및 그것의 제조방법{An Injection made from lxeris Sonchifolia Hance for Treatment of Cardio-Cerebral Vascular Diseases and Fundus Diseases and Method of Producing Thereof}

본 발명은 한약재로부터 제조된 주사제 및 그것의 제조방법에 관한 것으로 더욱 상세하게는 심장-뇌 혈관 질환들 및 안저 질환들의 치료를 위한 주사용 고들빼기의 동결건조 분말 및 그것의 제조방법에 관한 것이다.

최근 심장-뇌 혈관 질환들 및 안저 질환들의 치료를 위한 한약재 주사제는 고들빼기 주사제를 포함하고 그것은 임상적 적용을 위하여 국화과의 고들빼기(Ixeris Sonchifolia Hance)로부터 유래하고 전체 식물로부터 시작된 정맥 주사제로 추출된 황갈색 투명 액체이다. 그 정맥 주사제의 주된 약학 조성은 플라본과 아데노신이다. 고들빼기의 파이토-플라본과 -아데노신의 공존은 심장-뇌 혈관 질환들의 치료에 대하여 뛰어난 상보적 효과를 보였고, 그것은 이미 약력학 연구 및 임상적 적용에 의하여 나타냈다. 고들빼기 주사제의 약리학적 효과는 1. 관상 심장 질환들, 협심증, 가슴 압박 및 호흡 곤란의 치료에 유용한 관상동맥 흐름 증가, 심혈관 저항 감소, 심근경색의 저항, 부행 순환(collateral circulation) 증가, 심근 산소 소비 감소 및 심장 미세혈류개량의 효과; 2. 뇌 경색(뇌 혈전증)의 치료에 유용한 혈소판 응고의 감소, 섬유소융해소 활성 증가, 혈전증 감소, 혈장 및 혈청의 점성 감소, 적혈구의 전기영동 속도 증가, 뇌혈관 저항 감소, 뇌혈 용량 증가 및 뉴런 기능의 재생 촉진의 효과; 3. 중심성 망막염, 시신경위축 및 색소성 망막염과 같은 안저 질환들의 치료에 유용한 세균에 의한 미세혈류 질환의 개선, 덱스트란 중합체에 기인한 전신성 미세혈류 질환의 개선 및 안저 미세혈류 개선 및 안저 동맥 팽창의 효과에 있다. 그러나 고들빼기 주사제는 약한 안정성을 나타내고, 단기간 저장만 할 수 있다. 플라본과 아데노신의 양은 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 및 도출방법에 의하여 결정되었고 그것은 아데노신 양은 수용(aqueous) 주사 종결 전에 15.0㎍/㎖에서 종결 후에 6.7㎍/㎖로 감소되는 반면에 플라본은 0.25㎎/㎖에서 0.169㎎/㎖로 각각 미리 정해진 것의 55.3%와 32.4% 손실을 갖는다. 6개월 후의 아데노신 양은 6.5㎍/㎖로 감소한 반면 플라본 양은 0.133㎎/㎖이다. 이것은 또한 고들빼기 수용액 주사제를 대상화하여 입증할 수 있고 여기서 플라본 및 아데노신 양들은 각각 5.07㎎/㎖ 및 24.37㎍/㎖이었고 80℃ 오븐에서 수행된 10일간 강화된 스트레스 실험 후에 양자의 양은 단지 각각 3.16㎎/㎖ 및 12.18㎍/㎖의 플라본과 아데노신이 남았다(표 1). 제조 및 저장 동안에 플라본 및 아데노신의 양 활성 성분의 상당한 손실의 관점에서 상기 주사제의 치료 효과에 상당한 충격이다. 게다가 고들빼기 주사제는 용액의 색이 현저하게 변색된 것을 나타낸다. 스탁 추출물에서 수용액 주사제의 조제 동안 자외선 분광기를 사용하여 400nm에서 측정된 흡광도는 살균 전에 0.338에서 그후에 0.423으로, 6개월 후에는 암색을 갖는 0.443으 로 더욱 증가하였다. 주사제의 HPLC 스펙트럼은 약한 유사상을 나타내는 것에 더 주목하여야 한다. 즉 같은 스탁 추출물에서 제제화된 수용액 주사제의 여러 배치들의 HPLC 스펙트럼 중에는 주된 차이들을 나타낸다. 랜덤 샘플링에 의하여 상용화된 같은 종류의 수용액 주사제(배치 번호 20000303, 20000503,20010120)의 안정성 형태는 플라본 양은 0.27㎎/㎖, 0.51㎎/㎖ 및 0.30㎎/㎖인 반면에 아데노신의 양은 각각 1.11㎍/㎖, 0.147㎍/㎖ 및 0.00㎍/㎖이다.

결론적으로 고들빼기 수용액 주사제는 조제, 저장과 같은 여러 인자들에 예민하고 따라서 질을 조절하기가 어렵고 그것은 고들빼기 주사제의 치료 효과를 크게 손상시킨다.

본 발명의 목적은 고들빼기 수용액 주사제에 존재하는 단점을 극복할 뿐 아니라 안정하고 조절 용이한 품질을 가지며 플라본과 아데노신의 양의 손실이 거의 없고 따라서 더욱 안전하고 효과적인 임상적 용도 및 저장에 잇점을 갖는 심장-뇌 혈관 질환들 및 안저 질환들 치료용 한약재 및 그 제조방법을 제공한다.

본 발명의 목적은 주사용 고들빼기 동결건조 분말의 형태의 특징을 갖는 심장-뇌 혈관 질환들 및 안저 질환들 치료용 한약 주사제에 의하여 달성된다. 여기서 플라본:아데노신의 함량비는 5㎎: 15㎍ 내지 5㎎: 30㎍이다.

본 발명의 따른 한약 주사제의 제조방법은 다음과 같다. 깨끗한 고들빼기에 25-30배 양의 물을 가하고 농축액 1ml가 0.5g의 조 한약재에 해당할 때까지 3시간 동안 달이고, 거르고, 미세하고 여과하고 농축하고; 상기 농축되고 달인 용액을 그 후에 40℃이하로 냉각하고 교반 조건하에서 10% 칼슘 옥사이드 에멀젼을 더하여 pH 10∼11로 맞추고 여과하고 상기 침전물을 무게를 잰다; 상기 침전물을 5.3배의 에탄올에 현탁시키고, 25% 강도의 황산 용액을 가하여 pH 3∼4로 맞추고 교반 및 여과를 수행하고; 40% 수산화 나트륨 용액을 상기 여과물에 가하여 pH 7∼7.5로 맞추고, 여과하고 그 후에 그것으로부터 에탄올을 회수하고 증류에 의하여 제거하고 주사용 물을 조 한약재 4g 당 1ml로 가한 후 -8℃ 이하에서 12시간 동안 냉장시킨후 여과하고; 0.1∼0.2% 활성 탄소를 가하여 15분 동안 가열하고 -5℃에서 24시간 이상 정치한 후 여과하고 pH 7∼7.5로 맞추고, 그 후에 판지 소결된 깔대기 및 미세공 막(0.45㎛의 포어 지름)를 통하여 여과하고, 채운 후에 밀봉하고 살균(115℃, 30분)하고 추출물로 제공한다; 상기 추출물에 안정화제나 차후에 보조제(supporting agent)를 첨가하고 완전한 용해를 위해 교반하고 주사를 위하여 활성 탄소를 더욱 처리하고 여과하고 상기 투명한 비-발열원 용액을 그 후에 바이얼이나 앰플에 충진하고 -40℃에서 -60℃에서 1∼3시간 동안 예비 동결하고 흡입에 의하여 진공화(1∼20Pa의 진공 정도)하고 최종적으로 온도를 최종 25∼40℃로 20∼40시간 동안 증가시켜 건조하여 주사용 고들빼기 동결건조 분말을 얻는다.

본 발명의 장점은 플라본 및 아데노신을 갖는 고들빼기를 주사용 고들빼기의 동결건조 분말로 제제화하여 상기 고들빼기 수용액 주사제가 갖는 불안정한 품질 및 플라본 및 아데노신의 손실의 단점을 극복하고 그 외에 용이한 품질의 조절, 플라본과 아데노신의 양의 손실이 거의 없고 따라서 더욱 안전하고 효과적인 임상적 용도 및 저장에 잇점을 갖는다.

실시예 1:

1kg의 깨끗한 고들빼기를 달이는 용기에 넣고, 이 용기에 25-30배 양의 물을 가하여 3시간 동안 달이고, 달이는 혼합물을 거르고, 미세여과하고, 그 후 1ml가 0.5g의 조 한약재에 해당할 때까지 농축을 위하여 농축기로 전달하였다. 그 후 농축액을 39℃로 냉각하고 교반하고 10% 칼슘 옥사이드 에멀젼을 더하여 pH를 10으로 맞추었다. 여과 후 상기 형성된 침전물을 무게를 잰 후 상기 침전물 자체를 그것의 5.3배의 에탄올 내에 현탁시키고, 25% 강도의 황산 용액을 거기에 가하여 pH를 3으로 맞추고, 그 현탁액을 잘 교반하고 여과하고, 40% 수산화 나트륨 용액을 상기 여과물에 가하여 pH를 7로 맞추었다. 여과 후에 상기 여과물로부터 에탄올을 회수하고 차후에 증류에 의하여 제거하고 그런 후에 주사용 물을 조 한약재 4g 당 1ml에 해당할 때까지 가한 후 -9℃에서 12시간 동안 냉장시킨 후 여과하고; 0.1% 활성 탄소를 가하여 15분 동안 가열하고 -5℃에서 24시간 이상 더 정치하였다. 상기 용액을 더 여과하고 pH 7로 맞추고, 그 후에 판지 소결된 깔대기 및 미세공 막(0.45㎛의 포어 지름)를 통하여 여과하고, 주입한 후에 밀봉하고 살균(115℃, 30분)하고 추출물로 제공하였다. 상기 추출물에 0.005% EDTA 또는 구연산 나트륨을 안정화제로 가하고 완전한 용해를 위해 교반하고 주사를 위하여 0.01% 활성 탄소를 더욱 처리하고 여과하고 상기 투명한 비-발열원 용액을 각 바이얼이나 2ml의 앰플에 충진하고 -40℃에서 3시간 동안 예비 동결하고 흡입에 의하여 진공화(15Pa의 진공 정도)하고 최종적으로 온도를 최종 25℃로 증가시켜 20시간 동안 건조하여 주사용 고 들빼기 동결건조 분말을 제조하였다.

실시예 2:

1kg의 깨끗한 고들빼기를 달이는 용기에 넣고, 이 용기에 25-30배 양의 물을 가하여 3시간 동안 달이고, 달이는 혼합물을 거르고, 미세여과하고, 그 후 1ml가 0.5g의 조 한약재에 해당할 때까지 농축을 위하여 농축기로 전달하였다. 그 후 농축액을 35℃로 냉각하고 교반하고 10% 칼슘 옥사이드 에멀젼을 더하여 pH를 10으로 맞추었다. 여과 후 상기 형성된 침전물을 무게를 잰 후 상기 침전물 자체를 그것의 5.3배의 에탄올 내에 현탁시키고, 25% 강도의 황산 용액을 거기에 가하여 pH를 3.5로 맞추고, 그 현탁액을 잘 교반하고 여과하고, 40% 수산화 나트륨 용액을 상기 여과물에 가하여 pH를 7.3으로 맞추었다. 여과 후에 상기 여과물로부터 에탄올을 회수하고 차후에 증류에 의하여 제거하고 그런 후에 주사용 물을 조 한약재 4g 당 1ml에 해당할 때까지 가한 후 -10℃에서 12시간 동안 냉장시킨 후 여과하고; 0.12% 활성 탄소를 가하여 15분 동안 가열하고 -5℃에서 25 시간 이상 더 정치하였다. 상기 용액을 더 여과하고 pH 7.2로 맞추고, 그 후에 판지 소결된 깔대기 및 미세공 막(0.45㎛의 포어 지름)를 통하여 여과하고, 주입한 후에 밀봉하고 살균(115℃, 30분)하고 추출물로 제공하였다. 상기 추출물에 0.1% 아황산수소 나트륨 또는 피로아황산 나트륨 또는 그것의 혼합물을 안정화제로 가하고 보조제로 3% 만니톨을 가한 후 완전한 용해를 위해 교반하고 주사를 위하여 0.05% 활성 탄소를 더욱 처리하고 여과하고 상기 투명한 비-발열원 용액을 각 바이얼이나 3ml의 앰플에 충진하고 -45℃에서 2.5 시간 동안 예비 동결하고 흡입에 의하여 진공화(18Pa의 진공 정도)하고 최종적으로 온도를 최종 30℃로 증가시켜 30시간 동안 건조하여 주사용 고들빼기 동결건조 분말을 제조하였다.

실시예 3:

1kg의 깨끗한 고들빼기를 달이는 용기에 넣고, 이 용기에 25-30배 양의 물을 가하여 3시간 동안 달이고, 달이는 혼합물을 거르고, 미세여과하고, 그 후 1ml가 0.5g의 조 한약재에 해당할 때까지 농축을 위하여 농축기로 전달하였다. 그 후 농축액을 20℃로 냉각하고 교반하고 10% 칼슘 옥사이드 에멀젼을 더하여 pH를 10.5로 맞추었다. 12시간 동안 방치 후에 상기 침전물을 여과하고 무게를 잰 후 상기 침전물 자체를 그것의 5.3배의 에탄올 내에 현탁시키고, 25% 강도의 황산 용액을 거기에 가하여 pH를 4로 맞추고, 그 현탁액을 잘 교반하고 여과하고, 40% 수산화 나트륨 용액을 상기 여과물에 가하여 pH를 7로 맞추었다. 여과 후에 상기 여과물로부터 에탄올을 회수하고 차후에 증류에 의하여 제거하고 그런 후에 주사용 물을 조 한약재 4g 당 1ml에 해당할 때까지 가한 후 -11℃에서 12시간 동안 냉장시킨 후 여과하고; 0.15% 활성 탄소를 가하여 15분 동안 가열하고 -5℃에서 24 시간 이상 더 정치하였다. 상기 용액을 더 여과하고 pH 7.4로 맞추고, 그 후에 판지 소결된 깔대기 및 미세공 막(0.45㎛의 포어 지름)를 통하여 여과하고, 주입한 후에 밀봉하고 살균(115℃, 30분)하고 추출물로 제공하였다. 상기 얻어진 추출물에 0.05% 황산 나트륨 또는 아스코르빈 산 또는 그것의 혼합물 또는 질소 가스를 안정화제로 가한 후에 보조제로 3% 덱스트란을 가한 후 완전한 용해를 위해 교반하고 주사를 위하여 0.05% 활성 탄소를 더욱 처리하고 여과하고 상기 투명한 비-발열원 용액을 각 바이 얼이나 1ml의 앰플에 충진하고 -50℃에서 2 시간 동안 예비 동결하고 흡입에 의하여 진공화(10Pa의 진공 정도)하고 최종적으로 온도를 최종 35℃로 증가시켜 25시간 동안 건조하여 주사용 고들빼기 동결건조 분말을 제조하였다.

실시예 4:

1kg의 깨끗한 고들빼기를 달이는 용기에 넣고, 이 용기에 25-30배 양의 물을 가하여 3시간 동안 달이고, 달이는 혼합물을 거르고, 미세여과하고, 그 후 1ml가 0.5g의 조 한약재에 해당할 때까지 농축을 위하여 농축기로 전달하였다. 그 후 농축액을 10℃로 냉각하고 교반하고 10% 칼슘 옥사이드 에멀젼을 더하여 pH를 11로 맞추었다. 여과한 후에 상기 침전물을 무게를 잰 후 상기 침전물 자체를 그것의 5.3배의 에탄올 내에 현탁시키고, 25% 강도의 황산 용액을 거기에 가하여 pH를 3으로 맞추고, 그 현탁액을 잘 교반하고 여과하고, 40% 수산화 나트륨 용액을 상기 여과물에 가하여 pH를 7로 맞추었다. 여과 후에 상기 여과물로부터 에탄올을 회수하고 차후에 증류에 의하여 제거하고 그런 후에 주사용 물을 조 한약재 4g 당 1ml에 해당할 때까지 가한 후 -12℃에서 12시간 동안 냉장시킨 후 여과하고; 0.2% 활성 탄소를 가하여 15분 동안 가열하고 -5℃에서 24 시간 이상 더 정치하였다. 상기 용액을 더 여과하고 pH 7.5로 맞추고, 그 후에 판지 소결된 깔대기 및 미세공 막(0.45㎛의 포어 지름)를 통하여 여과하고, 주입한 후에 밀봉하고 살균(115℃, 30분)하고 추출물로 제공하였다. 상기 얻어진 추출물에 0.02% 티오황산 나트륨을 가하고, 보조제로 5% 락토스 또는 포도당 또는 그것의 혼합물을 가한 후 완전한 용해를 위해 교반하고 주사를 위하여 0.01% 활성 탄소를 더욱 처리하고 여과하고 상기 투명한 비-발열원 용액을 각 바이얼이나 4ml 또는 5ml의 앰플에 충진하고 -60℃에서 1 시간 동안 예비 동결하고 흡입에 의하여 진공화(20Pa의 진공 정도)하고 최종적으로 온도를 최종 40℃로 증가시켜 40시간 동안 건조하여 주사용 고들빼기 동결건조 분말을 제조하였다.

수용액 주사제와 동결건조 분말 주사제에서 플라본 및 아데노신 양의 고온하에서의 안정성을 표1에서 비교하였다.

번호	투여 형태	플라본(mg/ml) (테스트 전)	플라본(mg/ml) (테스트 후)	아데노신(ug/ml) (테스트 전)	아데노신(ug/ml) (테스트 후)	외양
1	동결건조 분말 주사제	5.07	5.03	24.37	23.88	물에 녹은 후 황갈색
2	수용액 주사제	5.07	3.16	24.37	12.18	짙은 황갈색

고들빼기의 동결 건조 분말 주사제는 5.07㎎/㎖ 플라본 및 24.37㎍/㎖ 아데노신 양들은 갖는 주사액으로 제제화되어, 80℃ 오븐에서 수행된 10일간 강화된 스트레스 실험을 수행한 후에 양자의 양을 결정하였다. 플라본 및 아데노신의 양은 5.03㎎/㎖ 및 23.88㎍/㎖으로 거의 변하지 않고 유지된 반면에 수용액 주사제는 처음 값의 62.33%와 49.99%가 감소하였다.

임상적 적용 동안 환자 조건의 필요에 따라 여러 다른 열거된 동결건조 분말화된 고들빼기 주사제는 주사용 물에 용해할 수 있고 정맥 주입을 위한 주사제를 위하여 250ml의 염화나트륨 또는 포도당에 더 첨가될 수 있다.

Claims (11)

1. 플라본 대 아데노신 함량비가 5 ㎎: 15 ㎍ 내지 5 ㎎: 30 ㎍인 고들빼기 동결건조 분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 한약 주사제 제형.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 순차적으로 고들빼기에 물을 가하고, 달이고 여과하고 농축하는 단계;

   상기 농축된 용액을 35℃ 내지 40℃로 냉각하고 pH 10∼11로 조절하여 침전물을 형성하는 단계;

   상기 침전물을 에탄올에 현탁시킨 후 pH를 3~4로 조절한 후 여과하는 단계;

   상기 여과물의 pH를 7~7.5로 조절한 후 여과하는 단계;

   상기 여과물의 에탄올을 회수하고 증류에 의하여 제거하고 주사용 물을 가한 후 -4℃ 내지 -8℃에서 냉장시키고 여과하는 단계;

   0.1∼0.2 w/v% 활성 탄소를 가하여 가열하고 -5℃에서 24시간 이상 정치한 후 여과하는 단계;

   상기 결과물의 pH를 7∼7.5로 맞추고 여과한 후, 살균하여 추출물을 제조하는 단계;

   상기 추출물에 안정제 또는 보조제(supporting agent)를 첨가하는 단계;

   주사를 위하여 활성 탄소를 더욱 처리하고 여과하여 투명한 비-발열원(non-pyrogenic) 용액을 얻는 단계; 및

   상기 투명한 비-발열원 용액을 바이얼(vial)이나 앰플에 충진하고 동결 건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는,

   플라본 대 아데노신 함량비가 5㎎: 15㎍ 내지 5㎎: 30㎍인 고들빼기 동결건조 분말을 포함하는 심장-뇌 혈관 치료용 한약 주사제의 제조 방법.
9. 순차적으로 고들빼기에 물을 가하고, 달이고 여과하고 농축하는 단계;

   상기 농축된 용액을 35℃ 내지 40℃로 냉각하고 pH 10∼11로 조절하여 침전물을 형성하는 단계;

   상기 침전물을 에탄올에 현탁시킨 후 pH를 3~4로 조절한 후 여과하는 단계;

   상기 여과물의 pH를 7~7.5로 조절한 후 여과하는 단계;

   상기 여과물의 에탄올을 회수하고 증류에 의하여 제거하고 주사용 물을 가한 후 -4℃ 내지 -8℃에서 냉장시키고 여과하는 단계;

   0.1∼0.2 w/v% 활성 탄소를 가하여 가열하고 -5℃에서 24시간 이상 정치한 후 여과하는 단계;

   상기 결과물의 pH를 7∼7.5로 맞추고 여과한 후, 살균하여 추출물을 제조하는 단계;

   상기 추출물에 안정제 또는 보조제(supporting agent)를 첨가하는 단계;

   주사를 위하여 활성 탄소를 더욱 처리하고 여과하여 투명한 비-발열원(non-pyrogenic) 용액을 얻는 단계; 및

   상기 투명한 비-발열원 용액을 바이얼(vial)이나 앰플에 충진하고 동결 건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는,

   플라본 대 아데노신 함량비가 5㎎: 15㎍ 내지 5㎎: 30㎍인 고들빼기 동결건조 분말을 포함하는 안저 질환 치료용 한약 주사제의 제조 방법.
10. 제8항 또는 제9항에 있어서,

    상기 안정제는 EDTA, 구연산, 구연산나트륨, 아황산수소나트륨, 황산나트륨, 피로아황산나트륨, 티오황산나트륨, 아스코르브산 및 질소로 이루어지는 군에서 선택되는 하나의 물질 또는 둘 이상의 혼합물인 것을 특징으로 하는 한약 주사제의 제조 방법.
11. 제8항 또는 제9항에 있어서,

    상기 보조제는 만니톨, 덱스트란, 락토오스 및 포도당으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나의 물질 또는 둘 이상의 혼합물인 것을 특징으로 하는 한약 주사제의 제조 방법.