BRPI0410456B1 - Compostos inibidores de hepatite c, composição farmacêutica, uso dos mesmos, bem como artigo de fabricação - Google Patents

Abstract

"compostos inibidores de hepatite c, composição farmacêutica, uso dos mesmos, bem como artigo de fabricação". a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (1): em que b, x, r^ 3^, l^ 0^, l^ 1^, l^ 2^, r^ 2^, r^ 1^ e r^ c^ são definidos aqui. os compostos são utilizáveis como inibidores de ns3 protease de hcv para um tratamento de infecção viral de hepatite c.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para COMPOSTOS INIBIDORES DE HEPATITE C, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DOS MESMOS, BEM COMO ARTIGO DE FABRICAÇÃO.

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a compostos, processos para sua síntese, composições e métodos para o tratamento de infecção por vírus de hepatite C- (HCV). Particularmente, a presente invenção prove novos anáiogos de peptideo, composições farmacêuticas contendo estes análogos e métodos para usar estes análogos no tratamento de infecção por HCV. Antecedentes da Invenção

O vírus de hepatite C (HCV) é o agente etiológico principal de hepatite não A não B adquirida pela comunidade e pós-transfusão no mundo todo. Estima-se que acima de 200 milhões de pessoas no mundo todo são infectadas pele, vírus. Uma elevada percentagem de portadores se tornam cronicamente infectados e muitos progridem para doença de fígado crônica, assim chamada hepatite C crônica. Este grupo está, por sua vez, em alto risco para doença séria do fígado como cirrose do fígado, carcinoma hepatocelular, e doença de fígado terminal levando à morte.

O mecanismo pelo qual HCV estabelece persistência viral e causa uma taxa elevada de doença crônica do fígado não foi completamente elucidado. Não se sabe como HCV interage com e evacle no sistema imune do hospedeiro. Além disso, os papéis de respostas imunes celulares e humorais em proteção contra a infecção por HCV e doença ainda não foram estabelecidos. As imurioglobuünas têm sido registradas para profilaxia de hepatite viral associada com transfusão, no entanto, o Center for Disease Contra! não recomenda atualmente tratamento com imunoglobulina para este fim. A falta cie uma resposta imune protetora eficaz está impedindo o desenvolvimento de uma vacina ou medidas de profilaxia pós-exposição adequadas, assim no prazo curto, as esperanças estão finriemente voltadas para inter/encões antivirais.

Vários estudos clínicos foram conduzidos com o objetivo de identificar agentes farmacêuticos capazes de tratar eficazmente a infecção por HCV em pacientes afetados com hepatite C crônica. Estes estudos tern envolvido o uso de interferon-alfa, sozinhos ou em combinação com outros agentes antivirais. Estes estudos tem demonstrado que um número substancial dos participantes não respondem a estas terapias e dentre estes que respondem de modo favorável, uma grande proporção foi verificada 5 como apresentando relapso após o término do tratamento.

Até recentemente, interferon (íFH) era a única terapia disponível que demonstrou benefício aprovado na clínica para pacientes com hepatite C crônica. No entanto, a taxa de resposta prolongada é baixa, e o tratamento com interferem também induz efeitos laterais severos (isto é, retiriopatia, 10 tiroidite, pancreatite aguda, depressão), que diminuem a qualidade de vida dos pacientes tratados. Recentemente, interferon em combinação com ribavirina foi aprovado para pacientes não respondentes a iFN apenas. Nc> entanto, os efeitos colaterais causados por IFN não são aliviados com esta terapia de combinação. As formas peguiladas de interferons como ΡΕΘ15 intron¹' e Pegasys® podem se dirigir, de modo aparentemente parcial, a estes efeitos laterais deletérios rnas as drogas antivirais ainda permanecem a via expressa de escolha para o tratamento oral de HCV.

Assim, existe a necessidade para o desenvolvimento de agentes antivirais eficazes para o tratamento de infecção por HCV que superem as 20 limitações de terapias farmacêuticas existentes.

HCV é um vírus de RNA de filamento positivo enveiopado na família Flaviviridae O genoma de RNA de HCV de filamento único tem aproximadamente 9500 nucleotídeos de comprimento e tem uma matriz de leitura aberta única (ORF) codificando uma poliproteína grande única de 25 cerca de 3000 aminoác.idos Em células infectadas, esta pediproteína é clivada ern sítios múltiplos por proteases celulares e virais para produzir as proteínas estruturais e não estruturais (NS). Nu caso de. HCV, a geração de proteínas não estruturais maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, e NS5B) é efetuada por duas proteases virais. A primeira, como já fracamente 30 caracterizado, oliva na junção NS2-NS3, (a seguir referida como protease NS2/3), a segunda é uma serina protease contida dentro da região Nterminal de NS3 (NS3 protease) e medeia todas as divagem subseqüentes a jusante de NS3, ambas em c/s, no sítio de divagem NS3-NS4A, e em trans, para os sítios NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B restantes. A proteína NS4A aparece como servindo a funções múltiplas, atuando como um cofator para a NS3 protease e possivelmente auxiliando na localização da membrana de MS3 e outros componentes de replicase viral. A formação de complexo da NS3 protease com NS4A parece necessária para os eventos de processamento, melhorando a eficácia proteolítica de todos os sítios. A proteína NS3 também demonstra atividades de nucleosídeo trifosfatase e RNA helicase. NS5B é uma RNA polimerase dependente de RNA que está envolvida na replicação de HQV.

Uma estratégia geral para o desenvolvimento de agentes antivirais é inativar as enzimas viralmenie que são essenciais para a replicação do vírus.

Mais recentemente, a NS3 protease foi verificada como tendo, potencialmente, um impacto adicional por bloqueio da atividade antiviral celular mediada por !FN na célula infectada. (Foy et al., Scierice, 17 Abril 2003). Isto presta uma credencial para uma hipótese de que a NS3/NS4A protease pode representar uma marcação terapêutica dupla, cuja inibição pode tanto bloquear a replicação viral como restaurar a resposta de interferon de células infectadas com HCV.

Em WO 00/09543, compostos da fórmula

R²

R

I

R¹

J tA(CH₂) em quinolinila não são descritos que um significado preferido de R² é um resíduo de substituído ou mono- ou dissubstituído como aqui definido, como inibidores de NS3 protease viral C, uma enzima essencial para a replicação do vírus de hepatite C.

A presente invenção prove compostos de tripeptídeos que tem melhorada potência contra a HÜV NS3 protease. Além disso, são providos compostos que são altamente ativos em cultura de células.

Uma vantagem de um aspecto da presente invenção reside no fato de que os compostos de acordo com a invenção especificamente inibem a NS3 protease e não mostram uma atividade inibidora significante contra 5 outras serina proteases humanas como ieucócito elastase (HLE) humano, ou

c.isteína proteases como catepsina B de fígado humano (Cat B).

Comparado com os compostos como descritos em WO 00/09543, os compostos, como providos por esta invenção, demonstram vantagens inesperadas. Geraímente, eles mostram uma ou mais das 10 seguintes vantagens:

- Menores valores de IC₅o em um teste de NS3-NS4A protease;

- Menores valores EC₅q em um teste de replicação à base de HCV RNA;

- Melhor solubilidade e/ou

- Níveis de plasma maiores guando administrados oralmente no rato.

Sumário da Invenção

Está incluído no escopo da invenção um racemato, diastereoisômero ou um iômero óptico de um composto de fórmula (I):

FT

L¹ u3

I^o L N.

í J t i r>

•3> R¹ | L .R o 'H em que

B é (Cmo) alquila, cicloalquila, cicloalquila, ou (Ci-₄) alquil/Cs-y)

a) em que as referidas alquila, cicloalquila, e alguil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C1-3) alquila; e

b) em que as referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstituída com substituintes selecionados dentre hidrÓÁi e O-(Cm) alquila; e

c) em que cada um dos referidos grupos alquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com halogênio; e

d) em que cada um dos referidos grupos alquila tendo 4, 5, 6 ou 7 membros tendo opcionalmente um (para os 4, 5, 6 ou 7 membros) ou dois (para os 5, 6 ou 7 membros) grupos -CH₂- não diretamente ligados um a cada outro substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ac· grupo X via pelo menos dois átomos C;

X éOouNH;

R²' é (C₂._a) alquila, (C?..?) cicloalquila ou (C-i.₃) alquil-(C3-~) cicloalquila, em que cada um dos referidos grupos alquila, cicloalquila, e alguil-cicloalquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com (Ci..·) alquila;

L° é H, halogênio, (C1..1) alquila, -OH, -O-(C-i-<) alquila, -NH₂,

-NH(Cμ) alquila ou -N((Ci.,_}) alquila) ₂;

L¹, L² são cada independentemente halogênio, ciano, (Ci<) alquila, -O(Cí-j) alquila, -S-(C-m) alquila, -SO-(Cvi) alquila, ou -S0₂-(Cm) alquila, em que cada um dos referidos grupos alquila é opcionalmente substituído com de um a três átomos de halogênio; e ou L' ou L² (mas não ambos ao mesmo 20 tempo ) também podem ser H; ou

L^LI e L¹ ou

L° e L² podem ser covalentemente ligados para formar, juntos com os dois átomos C aos quais eles são ligados, um anel carbocíclico de 5 ou 6 membros em que um ou dois grupos -CH₂- não sendo diretamente ligados um a cada outro podem sei substituídos cada independentemente por -O- ou NR^a em que R^s é H ou (C-i_<) alquiia, e em que o referido anel carbo- ou heterocíclico é opcionalmenie mono- ou dissubstituído com (C-m) alquila; R² é R²⁰, -NR²²COR²⁰, -NR²²COOR²⁰ -NRR²¹ e -NR²²CONR²ⁱR²³, em que R^2u é selecionado dentre alquila, (C3.7) cicloalquila e (C1-1) alquil-(C₃-7) cicloalquila, em que as referidas cicloalquila e alquil-cicloalquiia podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C1-3) alquila;

R~¹ é H ou R²⁰ como definido acima,

R“ e R²³ são independentemente selecionados dentre H e metila,

R¹ é etila ou vinila;

R' é hidróxi ou NHSO?R^s em que R' é (Ci-g) alquila, (C3.7) cicioalquila, (Ci-e.) alquil-íC;,.?) cicioalquila, fenila, naftila, piridinila, (C..j) alquil-fenila, (C-i-j) alquil-naftila ou (.C-w) aiquii-piridinila; cada urna sendo opcionalmente mono-, di- ou trissubstituída com substituintes selecionados dentre halogênio, hidróxi, ciano, ÍC1.4) alquila, O-tCi-g) alquila, -CO-NH?, -CO-NH(Ci-j) alquila, -CO-NííCh-j) alquila) 2, -NH2, -NH(C|..t) alquila e -N((Ci4) alquila) 2, θηι que (C1-4) alquila e O-iCi-e) alquila são opcionalmente substituídas com um a trés átomos de halogênio; e cada uma sendo opcionalmente monossubstituída com mtro:

ou R^£ é -N(R^,JJ) R^IJ1), em que R^,J1 e R^IJ- são independentemente selecionados dentre H, (Cve) alquila, (C3.7) cicioalquila, l.C_?.s) alquil-ÍC?.^) cicioalquila, arila e (Ci-e.) alquil-arila; em que referida (C-i.a) alquila, (C3.7) 15 cicioalquila, (C|.©) alquil-(C3.7) cicioalquila, arila e (Ci-©) alquil-arila são opciunalmente substituídas com um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre halogênio, (C.|__e) alquila, hidróxi, ciano, O-fCi-e) alquila, -NHl·, -NH(Ci-j) alquila, -N((Ci__t) alquila) 2, -CO-NH2, -CO-NH(Ci-j) alquila, -GO-N(|Ci„0 alquila) 2, -COOH, e -COO(Ci-6) alquila;

ou

R^N' e R^N1 são ligados, juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados, para formar um heterociclo saturado ou insaturado, monocíclico, de 3 a 7 membros cu um heterociclo saturado ou insaturado, bicíclico, de 9 ou 10 membros, cada opcionalmente contendo de um a três outros heteroátomos 25 independentemente selecionados dentre N, S e O, e cada um sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre halogênio, (Ci.₆) alquila, hidróxi, ciano, O-ÍC.-s) alquila, NH2, -NH(Ci-4) alquila, -N((Ci^) alquila) ₂, -CO-NH2, -CO-NH(C-m) alquila, -€·0-Ν((0·μ) alquila) 2, -COOH, e -COO(C-).₅) aiquila;

ou um sal farmaceuticamente aceitávei ou um éster do mesmo.

Está incluído no escopo da invenção uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade viralmente eficaz anti-hepatite

C de um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do mesmo, em mistura com pelo menos um meio veículo farmaceuticamente aceitável ou agente auxiliar.

De acordo com um outro aspecto da modalidade a composição farmacêutica de acordo com a invenção ainda compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um outro agente antiviral.

Outro aspecto importante da invenção envolve um método de tratamento ou prevenção uma infecção viral de hepatite C em um mamífero por administração ao mamífero de uma quantidade viralmente eficaz anti10 hepatite C de um composto de fórmula I, um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, ou uma composição como descrito acima, sozinho ou em combinação com pelo menos um outro agente antiviral, administrados juntos ou separadamente.

Também dentro do escopo da invenção está o uso de um 15 composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do mesmo, como aqui descrito, para a fabricação de um medicamento o para um tratamento ou prevenção de infecção viral de hepatite C em mamífero.

Descrição Detalhada das Modalidades Preferidas

Definições

Como usado aqui, as seguintes definições se aplicam, salvo indicado em contrário:

Com referência aos casos onde (R) ou (S) é usado para designar a configuração absoluta de um substituinte ou centro assimétrico 25 de um composto de fórmula I, a designação é feita no contexto do composto total e não no conte?io do substituinte ou centro assimétrico sozinho.

A designação P1, P2, e P3 como usado aqui se refere à posição dos resíduos de aminoácido partindo a extremidade C-término dos análogos do peptídeo e se estendendo para o N-término (isto é, PI refere-se. 30 a posição 1 do C-término, P2: segunda posição do C-término, etc), (ver Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series B257. 249-264 (1970)).

Como usado aqui o termo (1/?, 23) -vinil-ACCA refere-se a um composto de fórmula:

ou seja, ácido (1R, 2S) 1-amino-2-eteniiciclopropanocarboxílico.

O termo (Ci._n) alquila corno usado aqui, ou sozinho ou em combinação com outro substituinte, significa substituintes alquila de cadeia reta ou ramificada, acíclicos, contendo de 1 a n átomos de carbono. (Ch-e) alquila inclui, mas não é limitado à, rnetila, etila, n-propila, n-butila, 1-metiletil (i-propil), 1-metilpropila, 2-metilpropila, 1,1-dimetiletil (terc-butila), pentila e hexila. As abreviaturas Me e Pr denotam um grupo rnetila e n10 propiia respectivamente.

O termo (C3.7) cicloalquila como usado aqui, ou sozinho ou em combinação com outro substituinte, significa substituinte cicloalguila contendo de 3 a 7 átomos de carbono e inclui, mas não é limitado à, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila e cicloheptila.

O termo (Ci-_nj aiquii-íC;·,.?) cicioalquila como usado aqui significa um radica! alquileno contendo 1 a n átomos de carbono ao qual um radical cicloalquila contendo de 3 a 7 átomos de carbono é diretamente ligado; e inclui, mas não é limitado à, ciclopropilmetila, ciclobutilmetila, cictopentilmetila, 1-ciciopentiletila, 2-ciciopentiietiia, ciclohexilmetila, 120 ciclohexitetila, 2-ciciohexiletila e cicloheptilpropila.

O termo arila ou Cg ou C10 arila como usado aqui de modo permutável, ou sozinho ou em combinação com outro radical, significa ou um grupo aromático monocíclico contendo 6 átomos de carbono ou um grupo aromático bicíclico contendo 1ü átomos de carbono. Arila inclui, mas não é 25 limitada â, fenila, 1 -naftila ou 2-naftila.

Como usado aqui, o termo (Cm-J alquil-arila significa um radical alquila contendo de 1 a n átomos de carbono 20 qual uma arila é ligada. Exemplos de (C1-3) alquil-arila incluem, mas não são limitados à, benzil (fenilmetila), 1 -feniletila, 2-feniletila e fenilpropila.

O termo O-(Ci._n) alquila ou (Ci-_n) alcóxi como usado aqui, ou sozinho ou em combinação com outro radical, significa o radical -O-(Ci__n) alquila em que alquiia é como definida acima contendo de I a n átomos de carbono, e inclui metóxi, etóxi, propóxi, 1-metiletózi, butóxi e 1,1 -dimetiletoxi. 5 O último radical é conhecido comumente como ferc-butóxi.

O termo halo ou halogênio como usado aqui significa substituinte halogênio selecionado dentre flúor, cloro, bromo ou iodo.

O termo éster farmaceuticamente aceitáveis como usado aqui, ou sozinho ou em combinação com outro substituinte, significa ésteres do 10 composto de fórmula I em que qualquer uma das funções carboxila da molécula, mas preferivelmente o término carboxi, é substituído por uma função alcoxicarbonila:

O

IJ

- ’ ‘ OR em que a porção R des éster é selecionada dentre alquila (incluindo, mas não limitado à, metila, etila, n-propila, t-butila, n-butila); alcoxialquila (incluindo, 15 mas não limitado á metoximetila); alcoxiacila (incluindo, mas não limitado á acetoximetila); alquil-arila (incluindo, mas não limitado à benzila); ariloxialquila (incluindo, mas não limitado à fenoximetila); arila (incluindo, mas não limitado á fenila), opcionalmente substituído com halogênio, (C-m >

encontrados em Design of prodrugs, Bundgaard, H. Ed. Elsevier (1985). Estes ésteres farmaceuticamente aceitáveis são geralmente hidrolisaclos iri vivo quando injetados em um mamífero e transformados na forma de ácido do composto de fórmula I. Com relação aos ésteres acima descritos, salvo indicado em contrário, qualquer porção alquila presente vantajosamente 25 contém 1 a 16 átomos de carbono, particularmente 1 a 6 átomos de carbono.

Qualquer porção arila presente em tais ésteres vantajosamente compreende um grupo fenila. Particularmente os ésteres podem ser um éster de alquila C-mb alquila, um éster benzílico não substituído ou um éster henzílico substituído com pelo menos um halogênio, Ci-s alquila, C^b alcóxi, nitro ou trifluorometila.

O termo sal farmaceuticamente aceitável significa sal de um composto de fórmula (I) que é, de acordo com o julgamento médico fundamentado, apropriado para uso em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores sem indevida toxicidade, irritação, resposta alérgica e 5 outros, seguindo uma relaçãu de benefício/risco razoável, geralmente água ou solúvel em água ou dispersível, e eficaz para seu uso pretendido. O termo inclui sai de adição de ácido farmaceuticamente aceitável e sal de adição de base farmaceuticamente aceitável. As listas de sais apropriados são encontradas em, por exemplo, S.M. Birge et al., J. Pharm. Sei.. 1977, 10 60, PP· 1-19·

O termo sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável significa os sais que retém a eficácia biológica e propriedades das bases iivres e que não são biologicamente ou de outra forma indesejáveis, formados com ácidos inorgânicos como ácido clorídrico, ácido bromídric.o, 15 ácido suífúrico, ácido sulfâmico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e outros, e ácidos orgânicos como ácido acético, ácido trifluuroacético, ácido adípico ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido benzenossulfõnico, ácido benzóico, ácido butírico, acido canfórico, ácido canforsulfônico, ácido cinâmico, ácido cítrico, ácido digluconico, ácido etanossulfônico. ácido glutâmico, ácido 20 glicóiico, ácido glicerofosfórico, ácido hemissúlfico, ácido hexanóico. ácido fórmico, ácido fumárico, ácido 2-hidroxietanossulfònico (ácido isetiônico), ácido iáctico, ácido hidroximaléico, ácido málico, ácido malónico, acido mandélico, ácido mesitilenossulfónico, ácido metanossulfônico, ácido naftalenossulfõnico, ácido nicotínicu, ácido 2-naftalenossulfõnico, ácido

oxálico, ácido pamóicc, ácido pêctínico ácidr· feriiiacérico, ácido 3-fenilpropiônicc», ácido piválico, ácido propiônico, ácido pirúvico, ácido salicilico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfanílico, ácido taríárico, ácido p-toluenossulfõnico, ácido undecanóico, e outros.

O termo sal de adição de base farmaceuticamente aceitável significa os saís que retém a eficácia biológica e propriedades de ácidos livres e que não são biologicamente ou de outra forma indesejáveis, formados com bases inorgânicas, como amonia, ou hidróxido, carbonato ou

bicarbonato de amònio ou um cátion de metal como sódio, potássio, lítio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio, e outros. São particularmente preferidos os sais de amônio, potássio, sódio, cálcio, e magnésio. Os sais derivados de bases não tóxicas orgânicas farmaceuti5 camente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, compostos de amina quaternária, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, e resinas de troca de íons básicos, como metilamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina, isopropilamina, tripropilamina, tributil10 amina, etanolamina, dieíanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromo, purinas. piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, compostos de tetrametilamônio, compostos de tetraetilamônio, piridina, N,N-dimetilanilina, 15 N-metilpiperidina, N-metiimorfolina, diciclohexilamina, dibenzilamina, N,Ndibenzilfenetilamina, 1-efenamina, Ν,Ν’-dibenziietilenodiamina, resinas de poliamina, e outros. As bases particularmente preferidas não tóxicas orgânicas são isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina, colina, e cafeína.

O termo mamífero, como ele é usado aqui significa englobar seres humanos, assim como mamíferos não humanos que são susceptíveis à infecção por vírus da hepatite C incluindo animais domésticos, como vacas, suínos, cavalos, cachorros e gatos, e animais não domésticos.

O termo agente antiviral como usado aqui significa um agente 25 (composto ou biológico) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação de um vírus em um mamífero. Isto inclui agentes que interferem com ou hospedam mecanismos virais necessários para a formação e/ou replicação de um vírus em um mamífero. Estes agentes podem ser selecionados dentre: outro agente anti-HCV., inibidor de HIV, inibidor de HAV e inibidor de 30 HBV. Agentes antivirais incluem, por exemplo, ribavirina, amantadina, VX497 (merimepodib, Verte:·: Pharmaceuticals), VX-498 (Verte/ Rbarmaceuticals), Levovirin, Viramidina, Geplene (maxamina), XTL-001 e

XTL-002 (XTL Biopharmaceuticals).

O termo outro agente anti-HCV como usado aqui significa os agentes que são eficazes para diminuir ou evitar a progressão de sintomas de doença relacionados com hepatite C. Estes agentes podem ser selecionados dentre: agentes imunomoduladoros, inibidores de NS3 protease de HCV, inibidores de HCV polimerase ou inibidores de outra marcação no cicio de vida de HCV.

O termo agente imunomodulador como usado aqui significa os agentes (compostos ou biológicos) que são eficazes para melhorar ou potenciar a resposta do sistema imune em um mamífero. Agentes imunomoduladoros incluem, por exemplo, interferons classe I, (como α-, β-, δ-,ω- e τ-interferons, interferons de consenso e asialo-interferons), interferons ciasse II (como γ-interferons) e formas peguiladas dos mesmos.

O termo inibidor de NS3 protease de HCV como usado aqui significa um agente (composto ou biológico) que é eficaz para inibir a função de NS3 protease de HCV em um mamífero. Inibidores de NS3 protease de HCV incluem, por exemplo, os compostos descritos ern WO 99/07733, WO 99/07734, WO 00/09553, WO 00/09543, WO 00/59929, WO 03/064416, WO 03/064455, WO 03/064456, WO 02/060926, WO 03/053349, WO 03/099316 ou WO 03/099274, e o candidato a pré-desenvolvimento Verte.·, identificado como VX-950.

O termo inibidor de HCV polimerase como usado aqui significa um agente (composto ou biológico) que é eficaz para inibir a função de uma HCV polimerase em um mamífero. Este inclui, por exemplo, inibidores de HCV NS5B polimerase. Inibidores de HCV polimerase incluem não nucleosídeos, por exemplo, os compostos descritos em:

• Pedido US N* 60/441.674 depositado em 22 de janeiro de 2003, que se incorpora aqui por referencia em sua totalidade (Boehringer Ingelheim), • Pedido US N° 60/441.371 depositado em 22 de janeiro de 2093, que se incorpora aqui por referencia em sua totalidade (Boehringer Ingelheim),

WO 04/005286 (Gilead), WO 04/002977 (Pharmacia), WO 04/002944 (Pharmacia), WO 04/002940 (Pharmacia), WO 03/101993 (Neogenesis), WO

03/099324 (Wyeth), WO 03/099275 (Wyeth), WO 03/099801 (GSK), WO 03/097646 (GSK), WO 03/095441 (Pfizer), WO 03/090674 (Viropharma), WO 03/084953 (B&C Biopharm), WO 03/082265 (Fujisawa), WO 03/082848 (Pfizer), WO 03/062211 (Merck), WO 03/059356 (GSK), EP 1321463 (Shire), WO 03/040112 (Rigel), WO 03/037893 (GSK), WO 03/037894 (GSK), WO 03/037262 (GSK), WO 03/U37895 (GSK)., WO 03/026587 (BMS), WO 03/002518 (Dong Wha), WO 03/000254 (Japan Tobacco), WO 02/100846 Al (Shire), WO 02/100851 A2 (Shire), WO 02/098424 A1 (GSK), WO 02/079187 (Dong Wha), WO 03/02/20497 (Shionogi), WO 02/06246 (Merck), WO 01/47833 (Japan Tobacco), WO 01/85172 Al (GSK), WO 01/85720 (GSK), WO 01/77091 (Tularik), WO 00/18231 (Viropharma), WO 00/13708 (Viropharma), WO U1/10573 (Viropharma), WO 00/06529 (Merck), EP 1 256 628 A2 (Agouron), WO 02/04425 (Boehringer Ingelheim), WO 03/007945 (Boehringer Ingelheim), WO 03/010140 (Boehringer Ingelheim) e WO 03/010141 (Boehringer Ingelheim). Além disso, outros inibidores de HCV polimerase também incluem análogos de nucleosídeos, por exemplo, os compostos descritos em: WO 04/007512 (Merck/lsis), WO 04/003000 (Idenix), WO 04/002999 (Idenix), WO 04/0002422 (Idenix), WO 04/003138 (Merck), WO 03/105770 (Merck), WO 03/105770 (Merck), WO 03/093290 (Genelabs), WO 03/087298 (Biocryst), WO 03/062256 (Ribapharm), WO 03/062255 (Ribapharm), WO 03/061385 (Ribapharm), WO 03/026675 (Idenix), WO 03/026539 (Idenix), WO 03/020222 (Merck). WO 03/000713 (Glaxo), WO 02/100415 (Hoffmann-La Roche), WO 02/1094289 (HoffmannLa Roche), WO 02/051425 (Mitsubishi), WO 02/18404 (Hoffmann-La Roche),

WO 02/069903 (Biocryst Pharmaceuticais Inc.), WO 02/057287 (Merck/lsis),

1/9OÍ2 Í (Idenix), WO 01/60315 (Shire) e

WO 01/32153 (Shire). Exemplos específicos de inibidores de HCV polimerase, incluem JTK-002, JTK-0O3 e JTK-109 ( Japan Tobacco).

O termo inibidor de outra marcação no ciclo de vida de HCV como usado aqui significa um agente (composto ou biológico) que ê eficaz para inibir a formação e/ou replicacão de HCV em um mamífero diferente de uma inibição de uma função da NS3 protease de HCV. Isto inclui agentes

que interferem com ou hospedam os mecanismos virais de HCV necessários para a formação e/ou replicação de HCV em um mamífero. Inibidores de outra marcação no ciclo de vida de HCV incluem, por exemplo, agentes que inibem uma marcação selecionados dentre helicase, NS2/3 protease e sítio de entrada em ribossoma interno (IRES). Exemplos específicos de inibidores de outra marcação no ciclo de vida de HCV incluem ISIS-14803 dSIS Pharmaceuticals).

O termo inibidor de HIV como usado aqui significa um agente (composto ou biológico) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação 10 de HIV em um mamífero. Isto inclui agentes que interferem com ou hospedam mecanismos virais necessários para a formação e/ou replicação de HIV em um mamífero. Os inibidores de HIV incluem, por exemplo, inibidores de nucleosídeos, não inibidores de nucleosídeos, inibidores de protease, inibidores de fusão e inibidores de integrase.

O termo inibidor de HAV como usado aqui significa um agente (composto ou biológico) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação de HAV em um mamífero. Isto inclui agentes que interferem com ou hospedam mecanismos virais necessários para a formação e/ou replicação de HAV em um mamífero. Os inibidores de HAV incluem vacinas para 20 Hepatite A, por exemplo, Havrix® (GlaxoSmithKline), VAQTA® (Merck) e Ava.xinr' (Aventis Pasteur).

O termo inibidor de HBV como usado aqui significa um agente (composto ou biológico) que é eficaz para inibir a formação e/ou replicação of HBV em um mamífero. Isto inclui agentes que interferem com ou 25 hospedam mecanismos virais necessários para a formação e/ou replicação of HBV em um mamífero. Os inibidores de HBV incluem, por exemplo, agentes que inibem a DNA viral polimerase de HBV ou vacinas para HBV. Exemplos específicos de inibidores de HBV incluem Lamivudine (EpivirHBV®), Adefovir Dipivoxil, Entecavir, FTC (Coviracil®), DAPD (DXG), L30 FMAU (Glevudine®), AM365 (Amrad), Ldt (Telbivudine), monoval-LdC (Valtorcitabine), ACH-126.443 (L-Fd4C) (Achillion), MCC478 (Eli Lilly), Racivir (RCV), Flúor-L e D nucleosídeos, Robustaflavone, ICN 2001-3 (ICN),

Bam 205 (Novelos), XTL-001 (XTL), Imino-Sugars (Nonil-DNJ) (Synergy), HepBzyme; e produtos imunomoduladores como: interferon alfa 2b, HE2000 (Hollis-Eden), Theradigm (Epimmune), EHT399 (Enzo Biochem), Thymosin alfa-1 (Zadaxin®), vacina HBV DNA (PowderJect), vacina HBV DNA (Jefferon Center), antígeno de HBV (OraGeri), BayHep B® (Baver), Nabi-HB® (Nabi) e Anti-hepatite B (Cangene); e produtos de vacina HBV como os seguintes: Engerix B, Recombivax HB, GenHevac B, Hepacare, Bio-Hep B, TwinRix, Comvax, Hexavac.

O termo interferon de classe I como usado aqui significa um interferem selecionado dentre um grupo de interferons que ligam todos a tipo de receptor I. Estes incluem interferons de classe I tanto naturais como sintéticos. Exemplos de interferons de classe I incluem α-, β-, δ-, ω- e τinterferons, interferons de consenso, asialo-interferons e formas peguiladas dos mesmos.

O termo interferon de classe ΙΓ como usado aqui significa interferon selecionada dentre um grupo de interferons que ligam todos a tipo de receptor II. Exemplos de interferons de classe II incluem γ-interferons.

Os exemplos preferidos específicos destes agentes são listados abaixo:

^B agentes antivirais: ribavirina ou amaníadina;

agentes imunomoduladores: interferons classe I, interferons classe li ou formas peguiladas dos mesmos;

inibidores de HCV polimerase: análogos de nucleosídeos ou não nucleosídeos;

inibidor de outra marcação no cicio de vida de HCV que inibe uma marcação selecionada dentre: NS3 helicase, NS2/3 protease ou sítio de entrada em ribossoma interno (IRES);

inibidor de HIVs: inibidores nucleosídicos, inibidores não nucleosídicos, inibidores de protease, inibidores de fusão ou inibidores de integrase; ou inibidor de HBV: agentes que inibem a DNA viral polimerase ou é um vacina para HBV.

Como discutido acima, a terapia de combinação é contemplada em que um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é co-administrado com pelo menos urn agente adicional selecionado dentre: agente antiviral, um agente imunomodulador, outro inibidor de NS3 protease de HCV, um inibidor de HCV polimerase, um 5 inibidor de outra marcação no ciclo de vida de HCV, um inibidor de HIV, um inibidor de HAV e um inibidor de HBV. Exemplos destes agentes são providos na seção de definições acima. Estes agentes adicionais podem ser combinados com os «compostos da invenção para criar uma forma de dosagem farmacêutica. Alternativamente, estes agentes adicionais podem 10 ser separadamente administrados ao paciente como uma forma de dosagem múltipla, por exemplo, usando um kit. Estes agentes adicionais podem ser administrados ao paciente antes de, concorrentemente com, ou após a administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Como usado aqui, o termo “tratamento significa a administração de um composto ou composição de acordo com a presente invenção para aliviar ou eliminar sintomas da doença de hepatite C e/ou para reduzir a carga viral em um paciente.

Como usado aqui, o termo prevenção significa a administração 20 de um composto ou composição de acordo com a presente invenção após a exposição do indivíduo ao vírus mas antes do aparecimento de sintomas cia doença, e/ou antes da detecção do vírus no sangue, para evitar o aparecimento de sintomas da doença.

Como usado aqui, a designação pelo que uma ligação a um 25 substituinte R é desenhada como emanando do centro de um anel, como, por exemplo,

significa que o substituinte R pode ser fixado a qualquer posição livre no anel que de outra forma seria substituído com um átomo de hidrogênio, salvo indicado em contrário.

Os seguintes sinais---ou — são usados de modo permutável

nas subfórmulas para indicar a ligação que é conectada ao resto da molécula, como definido.

Modalidades preferidas

Nas seguintes modalidades preferidas, grupos e substituintes dos compostos de acordo com a invenção são descritos em detalhes.

B é preferivelmente selecionado dentre (Cz-s) alquila, (C₃.-) cicloalquila e <C*i_₃) alquil-iCj..?) cicloalquila,

a) em que as referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (Ci-₃) alquila; e

b) em que as referidas alquila, cicloalquila e alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstítuídas com substituintes selecionados dentre hidróxi e O-(C|.j> alquila; e

c) em que cada um dos referidos grupos alquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com flúor ou monossubstituído com cloro ou bromo; e

d) em que em cada um dos referidos grupos cicloalquila tendo 5, 6 ou 7 membros, um ou dois grupos -Chl·- não sendo diretamente ligados um a cada outro pode ser substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C.

Mais preferivelmente, B é selecionado dentre etila, n-propila, i-propila, n-butila, 1-metilpropila, 2-metilprc»pila, terc-hutila, ciclopropila, ciclobutiia, ciclopentíla e ciclohexila,

a) em que cada um dos referidos grupos é opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes selecionados dentre metila e etila;

b) em que cada um dos referidos grupos é opcionalmente monoou dissubstituído com substituintes selecionados dentre hidróxi, metóxi e etóxi; e

c) em que cada um dos referidos grupos alquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com flúor ou monossubstituído com cloro ou bromo; e

d) em que em cada um dos referidos grupos cicioaiquila tendo 5, 6 ou 7 membros, um ou dois grupos -OH?- não sendo diretamente ligados um a cada outro pode ser substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C.

B é ainda mais preferivelmente selecionado dentre etila, 1metiletila, 1,1 -dimetiletila, propila, 1-metilpropila, 2-metilpropila, 1,1dimetilpropila, 1,2-dimetilpropila, 2,2-dimetilpropila, 1,1_:2-trirnetilpropila,

1.2.2- trimetilpropila, 1 -etilpropila, 1-etil-2-metilpropila, 1 -(1 -metiletil) -2metilpropila, 1 -etil-2,2-dimetilpropila, butila, 1 -metilbutila, 2-metiibutiia, 3metilbutila, 1.2-dimetilbutila, 1,1 -dimetilbutila, 1,3-dimetilbutila, 2,2dimetilbutiía, 2,3-dimetilbutila, 3,3-dimetilbutila, 1,2,2-trimetilbutila, 1,2,3trimetilbutila, 2,2,3-trimetilbutila, 2,3,3-trimetilbutila e 2,2,3-trimetilbutila, pelo que estes grupos alquila podem ser substituídos com cloro ou bromo, ou com 1, 2 ou 3 substituintes flúor. Exemplos de grupos alquila fluorados preferidos incluem, mas não são limitados á, 2-fluoroetila, 3-fluoropropila e

3.3.3- trifluoropropila.

Além disso, ainda mais preferivelmente, B é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ou ciclohexila ou é selecionado dentre as seguintes fórmulas, em que um ou dois grupos CH₂- de um grupo cicloalquila é substituído por oxigênio:

A lista acima, os grupos cicloalquila e alquil-cicloalquila opcionalmente compreendendo 1 ou 2 O-átomos são opcionalmente substituídos com 1, 2 ou 3 grupos metila. Especialmente c»s grupos cicloalquila, opcionalmente compreendendo 1 ou 2 O- átomos, são preferidos, ern que o ct-C- átomo é substituído com metila.

Outros exemplos grupos cíclicos preferidos substituídos são

O mais preferivelmente B é selecionado dentre etila, n-propila, terc-butila, 2-metiipropila, 1,2-dimetilpropíla, 1,2,2-trimetilpropila, 2-fluoroetila, 3-fluoropropila, 3,3,3-trifluoropropila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila,

ciclohexila, 1-metilciclopentila e 1-metilciclohexila, e um grupo selecionado dentre:

Ainda mais, o rnais preferivelmente B é selecionado dentre etila, n-propila, ferc-butila, ciclopentila, 1-metilciclopentila, 2-fluoroetila ou 3-flúorpropila.

De acordo com uma modalidade da invenção X é O.

De acordo com outra modalidade da invenção X é NH.

R³ é preferivelmente (C₂^) alquila, (C3-7) cidoalquila ou (C1.3) alquil-(C₃.7) cicloalquila, cada um sendo opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes selecionados dentre (C-m) alquila.

R³ é mais preferivelmente selecionado dentre etila, propila, butila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, ciclopropilmetila, ciclobutilmetila, ciclopentilmetila, ou ciclohexilmetila, cada uma sendo opcionalmente substituída com 1 ou 2 substituintes selecionados dentre metila, etila e propila.

Ainda mais preferivelmente R³ é selecionado dentre 1 -metiletila,

1,1-dimetiletila, 1-metilpropila, 2-metilpropila, 1,1 -dimetilpropila, 1,2-dimetilpropiia, 2,2-dimetiipropila, ciclopentila, cicíohexila, 1-metilciclopeníila, 1-metilciclohexila, ciclopentilmetila, ciclohexilmetila, (1-metilciclopentil) metila e (1-metilciclohexil) metila.

R° é o mais preferivelmente selecionado dentre 1,1 -dimetiletila, ciclopentila, ciclohexila e 1-metilciclohexila.

Ainda mais, R³ é 0 mais preferivelmente selecionado dentre 1,1dimetiletila e ciclohexila.

L'^J é preferivelmente selecionado dentre H, halogenio, CH₃, -OH, -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -OCH(CH₃) 2, -NHCH3, -NHC₂H₅, -NHC3H7, -NHCH(CH₃) 2: -N(CH₃) 2, -N(CH₃) C2H5, -N(CH₃) C3H7 e -N(CH₃) CH(CH₃) 2.

O mais preferivelmente L'³ é selecionado dentre H, -OH, -OCH₃, <25 halogênio e -N(CH₃) 2.

Ainda mais preferivelmente, L° é H, -OH ou -OCH₃.

Ainda, o mais preferivelmente, L° é H ou -OCH₃.

L¹ e L² são preferivelmente cada independentemente selecionados dentre: halogênio, -CH₃, -C2H5, -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, OCH(CH₃) 2, CF₃, -SMe, -SOMe, e SO₂Me pelo que ou L¹ ou L² pode ser H.

Mais preferivelmente ou um dentre L' e L² é -CH₃, -F, -Cl, -Br, OMe, -SMe, ou -SO₂Me e o outro de L¹ e L² é H.

O mais preferivelmente L¹ é CH₃, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO₂Mee L²é H.

Assim, preferivelmente L° é selecionado dentre: H, -OH e -OCH₃; e ou um dentre L¹ e L² é CH_S, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO₂Me e 0 outro de L¹ e L· ê H.

Mais preferivelmente L° é selecionado dentre H, -OH e -OCH_S; L¹ é - CH₃, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO₂Me; e L²é H.

O mais preferivelmente L° é H ou -OCH₃; L¹ é -CH₃, Cl ou Br; e L²é H.

No caso em que L° e L' são covalentemente ligados para formar juntos com os resíduos quinolina aos quais eies são ligados um sistema de

em que

X^b são independentemente selecionados dentre CH₂, O e

NR^a; o mais preferivelmente O;

R^a é cada independentemente H c«u (C1.4) alquila;

R^b é cada independentemente (Ci_j> alquila;

L² é como definido; preferivelmente H ou metila, particularmente H.

No caso em que L° e L² são covalentemente ligados para formar juntos c.om os resíduos quinolina aos quais eles são ligados um sistema de

em que

X^a, X^b são independentemente selecionados dentre CH₂, O e NR^a; o mais preferivelmente O;

R^a é --.803 independentemente H ou (C1.4) alquila;

R^b é cada independentemente (C-i_₄) alquila;

L¹ é como definido; preferivelmente H ou rnetila, particularmente H.

Mais preferivelmente, L° e L¹ são covalentemente ligados para formar, juntos com os resíduos quinolina aos quais eles são ligados, um sistema de anel que é selecionado dentre:

(R^t-U

(R^b)₀.₂

em que cada R^b é independentemente (Ci-₄) alquila e L² é como definido;

preferivelmente H ou rnetila, particularmente H.

O mais preferivelmente, L° e L¹ são covalentemente ligados para formar juntos com os resíduos quinolina aos quais eles são ligados um sistema de anel selecionado dentre

em que L² é H ou -CH₃, preferivelmente H.

R² é preferivelmente R²⁰, -NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰, -NHR²¹ e

-nhconr^2Ir^2í;

em que

R²⁰ é selecionado dentre (Ci-s) alquila, (C3-7) cicioalquila, (C1-3) alquil-íCs.-) cicloalquila. em que as referidas cicioalquila e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituída com (C1-3) alquila;

R²¹ é H ou R²⁰ como definido acima; e

R²³ é H ou metila; o mais preferivelmente H.

Mais preferivelmente, R² é R²⁰, NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰, -NHR²¹

- e -NHCONR²¹R^2?, em que

R²⁰ é selecionado dentre metila, etila, n-propila, /-propila, n-butila, 1-metilpropila, 2-metilpropila, terc-butila, 2,2-dimetilpropila, 1,1 -dimetilpropila, 1,2dimetilpropila, 1,2,2-trimetilpropila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, 15 cicloheÁÍIa, ciclopropil-metila, ciclobutilmetila, oiclopentilmetila, e ciclohexilrnetila, cada um dos referidos grupos cicioalquila e alquii-cicioaiquila sendo opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes selecionados dentre metiia e etila, particularmente metila;

R²¹ é H ou R²⁰ como definido acima; e

R²⁰ é H ou metila; o mais preferivelmente H.

Preferivelmente, R² é selecionado dentre:

a) amino, /V-metilamino, /V-etilamino, /V-propilamino /V-(l-metiieíii) amino,

A/-(1,1-dimetiletil) amino, /V-(2-metilpropil) amino, Λ/-(1 -metilpropil) amino,

N-(2,2-dimetilpropil) amino, N-( 1,2-dimetilpropil) amino, ΛΜΊ ,1-dimetilpropil) amino, AZ-ciclopropilamino, /V-cidobutilamino-, /V-ciclopentilamino-, /V-ciclohexilamino-, A/-(ciclupropiirnetii) amino, /V-(ciclobutilmetil) amino, /V-(ciclopentilmetil) amino, e N-tciclohexilmetil) amino;

b) metilcarbonilamino, etilcarbonilamino, 1-metiletilcarbonilamino, propilcarbonilamino, 2-metilpropilcarbonilarnino, 1-metilprcpilcarbonilamino, 2,2- dimetilpropilcarbonilamino, 1,2-dimetilpropilcarbonilamino, 1,1 -dimetilpropilcarbonilamino, ciclopropilcarbonilamino, ciclobutilcarbonilamino, ciclopentilcarbonilamino, cicloheAÍIcarbonilamino, ciclopropilmetilcarbonilamino, ciclo butilmetilcarbonilamino, ciclopentilmetilcarbonilamino, ciclohexilmetilcarbonilamino; e

c) metoxicarbonilamino, etoxicarbonilamino, l-metiletoxicarbonilamino, propo.xicarbonilamíno, terc-butoxicarbonilamino, ciclopropilo/Jcarbonilamino, ciclobutiloxicarbonilamino, ciclopentiloxicarbonilamino, ciclohexiloxicarbonilamino, ciclopropilmetoxicarbonilamino, ciclobutilmetoxicarbonilamino, ciclopentilmetoxicarbonilamino, ciclohe>dlmeto>jcarbonilamino;

em que todos os referidos grupos cicloalquila ou alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstituídos com metila.

O mais preferivelmente R² é -NHCOR^-0, -NHCOOR²⁰ ou -NHR^J1, em que R²⁰ e R²¹ são como definidos aqui.

Preferivelmente, R²⁰ e R²¹ sã·? independentemente selecionados dentre: metila, etila, n-propila, /-propila, n-butila, 1-metilpropila, 2-metilpropila, terc-butila, 2,2-dimetilpropila, 1,1 -dimetilpropila, 1,2-dimetilpropila, 1,2,2trimetilpropila, ciclopropila, ciclobutila, cic.lopentila, cidohe.xila, ciclopropilmetiia, ciclobutilmetila, cidopentilmetila, ciclohexilmetila, cada um dos referidos grupos cicloalquila ou alquil-cicloalquila opcionalmente sendo mono- ou dissubstituído com metila ou etila.

Mais preferivelmente, R²⁰ e R²¹ são independentemente selecionados dentre: metila, etila, n-propila, /-propila, 2,2-dimeíilpropila, ciclopentila e cidopentilmetila.

PI, o substituinte R e a carbonila tomam uma orientação syn.

Assim, no caso em que R¹ é etila, os átomos de carbono assimétricos no grupo ciclopropila tomam a configuração R,R de acordo ccm a subfórmula:

No caso em que R¹ é vinila, os átomos de carbono assimétricos no grupo ciclopropila tomam a configuração R,S de acordo com a subfórmula:

R¹ é preferivelmente vinila.

R^c é preferivelmente selecionado dentre hidróxi ou NHSOoR* em que R° é metila, etila, n-propila, /-propila, n-butila, 1-metilpropila, 2metilpropila, terc-butila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, c.iclohexila, ciclopropilmetila, ciclobutilmetila, ciclopentilmetila, ciclohexilmetila, fenila, naftila, piridinila, fenilmetil (benzila), naftilmetila ou piridinilmetila;

a) cada um sendo opcionalmente mono-, di- ou trissubstituido com substituintes selecionados dentre flúor e metila; e

b) cada um sendo opcionalmente mono- ou dissubstituído com substituintes selecionados dentre hidróxi, trifluorometila, metóxi e trifluorometóxi; e

c) cada um sendo opcionalmente monossubstituído com substituintes selecionados dentre cloro, bromo, ciano, nitro, -Cü-NH₂, -CO-NHCH3, -CO-N(C;H₃) 2, -NH₂, -NH(CHa) e -N(CH₃) ₂.

Alternativamente preferivelmente, R^c é NHSCAR/ em que R^s é N(Rⁿ-) Rⁿ¹), em que R^U1 e R^ÍJ2 são independentemente selecionados dentre H, tCi.j) alquila, (C:..₇) cicloalquila, (C1.3) alquil-íC?..-) cicloalquila, fenila, e (Ον

3) alquil-fenila; em que as referidas (Ci-₄) alquila, (C_?.₇) cicloalquila, (C1-3) alquil-(C-3-₇) cicloalquila, fenila e (C|_₃) alquil-fenila são opcionalmente substituídas com um, dois ou três subsiituintes independentemente selecionados dentre halogênio, (C-ve) alquila. hidróxi, ciano, O-(Ci-e) alquila, NH₂, -NH(Ci-j) alquila, -Ν((Οι_₄) algnilah, -CO-NH₂, -CO-NH(Ci-₄) alquila, -CO-N((Ci-₄) alquila)₂, -COOH, e -COO(Ci-6) aiguila; ou e R¹¹¹ são iigadc-s, juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados, para formar um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros que pode ser saturado ou insaturado. opcionalmente contendo de um a três outros heteroátomos independentemente selecionados dentre N, S e O, e opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados dentre halogênio, (Ci-g) alquila, hidróxi, ciano, O-(Ci-₆) alquila, -NH₂, -NH(Ci-4) alquila, -N((Ci-₄) alquila) ₂, -CO-NH₂,

-CO-NH(Ci-._;) alquila, -CO-N((Cv₄) alquila) ₂, -COOH, e -COO(C|.₆) alquila. Preferivelmente, o grupo R'*' é hidróxi, NHSO₂-metila, NHSO₂etila, NHSO₂-(1-metÍI) etila, NHSO₂-propila, NHSO₂-ciclc-propila, NHSO₂CH₂-ciclopropila, NHSO₂-ciclobutiia, NHSCL-ciclopentila, ou NHSO₂-fenila.

Mais preferivelmente, R- e hidróxi, ou NHSO₂-ciclopropila.

De acordo com a modalidade mais preferida, o grupo R^c é hidróxi. De acordo com uma modalidade alternativa mais preferida, o grupo R^c é NHSO2-ciclopropila. De acordo com uma outra modalidade alternativa mais preferida, o grupo R^u é NHSO-NíC-H?) 2.

Também englobados dentro do escopo da presente invenção, são compostos de fórmula (I) em que:

B é (Cmo) alquila, (C3.7) cicloalquila, ou (Cm) alquil-fCj^) cicloalquila,

a) em que as referidas cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C 1.3) alquila; e

b) em que as referidas alquila, cicloalquila, e -alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstituídas com substituintes selecionados dentre hidróxi e O-fC^) alquila; e

c) em que todos os referidos grupos alquila podem ser mono-, diou trissubstituídos com halogênio; e

d) em que todos os referidos grupos cic loalquila tendo 4, 5, 6, ou 7 membros tendo opcionalmente um tpara os 4, 5, 6 ou 7 membros) ou dois (para os 5, 6 ou 7 membros) grupos -CH₂- não diretamente ligados um a cada outro substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C;

X é O ou NH;

R³ é (C₂.e) alquila, (C3.7) cicloalquila ou (C1.3) alquil-ÍCj^) cicloalquila, em que os referidos grupos cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídos com (C-m) alquila;

L° é H, -OH, -O-(Ci-j) alquila, -NH₂, -NH(Ci_4) alquila ou -N((Ci_/) alquila) ₂;

L¹, L² são cada independentemente halogênio, (C-i-₄) alquila, -Ο-(Ο-μ) alquila ou -S-(Cm) alquila (em qualquer estado oxidado como SO ou SO₂); e ou L¹ ou L (mas não ambos ao mesmo tempo ) também podem ser H; ou L° e L¹ ou

L° e L² podem ser covalentemente ligados para formar, juntos com os dois átomos C aos quais eles são ligados, um anel carbocíclico de 5 ou 6 membros em que um ou dois grupos -CH₂- não sendo diretamente ligados um a cada outro podem ser substituídos cada independentemente por -O- ou NR^a em que R^a é H ou (Cm) alquila, e em que referido anel carbo- ou heterocíclico é opcionalmente mono- ou dissubstituído com (Ci.₄) alquila;

R² é R²⁰, -NR²²COR²⁰, -NR²²COOR²⁰ -NR²²R²' e -NR²²CONR²¹R²³, em que

R²⁰ é selecionado dentre (Ci._G) alquila, (C3-7) cicloalquila e (C1-4) alquil-fCs.?) cicloalquila, em que a referidas cicloalquila e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituída com (Cm) alquila;

R²' é H ou tem um dos significados de R° como definido acima,

R e R^2J são independentemente selecionados dentre H e metila,

R¹ é etila ou vinila;

R'· é hidróxi ou NHSO₂R^s em que R^& é (C-ι-β) alquila, (C3-7) cicloalquila, íC-|.₆) alquil-ÍCs-?) cicloalquila, fenila, naftila, piridinila, (Cm) alguil-fenila, (Ci-₄) alquil-naftila ou (Ό_κ) alquil-piridinila; todas sendo opcionalmente mono-, di- ou trissubstituídas com substituintes selecionados dentre halogênio, hidróxi, ciano, (Cm) alquila, O-(Ci-g) alquila, -CO-NH₂, -CO-NH(Cm) alquila, -CO-N({Cm) alquila) ₂, -NH₂, -NH(Cm) alquila e -N((Ci-

4) alquila) ₂; e todas sendo opcionalmente monossubstituídos com nitro; ou R^s pode ser ainda selecionado dentre: -NHíCi-g) alquila, NÍ(Ci._e) alquila)₂, -Het,

/	/	\
— I) N—(C^^alquila	—u	0 /
		_____r

ou ou um sal farmaceuticameníe aceitável ou um éster do mesmo.

Preferivelmente,

B é (C2-3) alquila, (C3.7) cicioalquila ou (C1.3) alquil-(C₃.7) cicioalquila,

a) em que as referidas alquila, cicioalquila, e alquil-cicloaiquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C1.3) alquila; e

b) em que as referidas alquila, cicioalquila, e alquil-cicloaiquila podem ser mono- ou dissubstituídas com substituintes selecionados dentre hidróxi e O-(Ci<) alquila; e

c) em que cada um dos referidos grupos alquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com flúor ou monossubstituído com cloro ou bromo; e

d) em que em cada um dos referidos grupos cicioalquila tendo 5, 6 ou 7 membros, um ou dois grupos -CH2- não sendo diretamente ligados um a cada outro pode ser substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C;

X é O ou NH;

R- é (C2.fi) alquila ou ( C3.7) cicioalquila, ambos sendo opcionalmente substituídos com 1 a 3 substituintes selecionados dentre (C|.j) aiquiia;

L° é H, -OH, -OCH3, halogênio ou -N(CH₃) 2;

L¹ e L² são, cada¹ independentemente selecionados dentre: halogênio, -CH₃, -C2H5, -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -OCH(CHj) 2, CF_?, -SMe, -SOMe, e SO₂Me, pelo que ou L¹ ou L² pode ser H;

R² é R²⁰, -NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰, -NHR²¹ e -NHCONR²¹R²³, em que

R²⁰ é selecionado dentre (C1-3) alquila, (C3-7) cicioalquila, (C1.3) alquil-(C-₃-7) cicioalquila, em que cada um dus referidos grupos cicioalquila e alquilcicloaiquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído corn (C1.3) alquila; e R²¹ e H ou R²'·' como definido acima; e

R²³ é H ou metila;

R¹ é etila ou vinila; e

R'·’ é hidróxi, NHSOz-metila, NHSCh-etila, NHSCF-íl-metil) etila,

NHSOs-propila, NHSCh-ciclopropila, NHSO2-CH₂-ciclopropila, NHSO2ciclobutila, NHSCh-ciclopentila ou NHSCh-fenila.

Mais preferivelmente, B é selecionado dentre: etila, n-propila,

íerc-butila, 2-metilpropila, 1,2-dimetilpropila, 1,2,2-trimetilpropila, 2-fluoroetila, 3-fluoropropila, 3,3,3-trifluoropropila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, 1-metilciclopentila e 1-metilciclohexila. e um grupo selecionado dentre:

R³ é selecionado dentre 1,1 -dimetiletila, ciclopentila, ciclohexila e 1-metilciclohexila; L° é H, -OH ou-OCH3; L¹ é CH3, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO₃Me; L“ é H;

R² é -NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰ ou -NHR²¹, em que R²⁰ e R²¹ são índependentemente

metila, etila, n-propila, /-propiia, 2,2dimetilpropila, c iclopentila e cidopentilmetila;

R¹ é vinila; e R' é hidrôci ou NHSOj-ciclopropila.

Mais preferivelmente, B é selecionado dentre etila, n-propila, terc-butila, ciclopentila, 1-metilciclopentila, 2-fluoroetila e 3-fluoropropila; R³ é selecionado dentre 1,1-dimetiletila e ciclohexila; L° é H ou -OCH3; L¹ é -CH3, -Cl, ou -Br; L² é H; e R‘- é hidróxi.

Exemplos modalidades preferidas de acordo com a invenção é cada composto único listado nas seguintes tabelas 1, 2, 3, 4, 5 e 6.

De acordo com uma modalidade alternativa, a composição farmacêutica da invenção pode adicionalmente compreender pelo menos um outro agente anti-HCV. Exemplos de agentes anti-HCV incluem, a- (alfa), β- (beta), δ- (delta), γ- (gama), ω- (omega) ou -- (tau) interferon, a-interferon peguilado, ribavirina e amantadina.

De acordo com outra modalidade alternativa, a composição farmacêutica da invenção pode adicionalmente compreender pelo menos um outro inibidor de NS3 protease de HCV.

De acordo com outra modalidade alternativa, a composição farmacêutica da invenção pode adicionalmente compreendem pelo menos um inibidor de HCV polimerase.

De acordo com ainda outra modalidade alternativa, a composição farmacêutica da invenção pode adicionalmente compreender pelo menos um inibidor de outras marcações no ciclo de vida de HCV, incluindo mas não limitado à, helica.se, NS2/3 protease ou sítio de entrada 5 em ribossoma interno (IRES).

A composição farmacêutica da invenção pode ser administrada oralmente, parenteralmente, ou via um reservatório implantado. A administração oral ou administração por injeção é preferida. A composição farmacêutica da invenção pode conter qualquer veículo farmaceuticamente 10 aceitável não tóxico convencional, adjuvantes ou veículos. Em alguns casos, o pH da formulação pode ser ajustado com ácidos farmaceuticamente aceitáveis, bases, ou tampão para melhorar a estabilidade do composto formulado ou sua forma de distribuição. O termo pareníeral como usado aqui inclui injeção subcutânea, intracutânea, intravenosa, intramuscular, intra15 articular, intra-sinoviai, iníra-esternal, intratecal, a intralesional ou téc nicas de infusão.

A composição farmacêutica pode estar na forma de uma preparação injetável estéril, por exemplo, como uma pasta fluida aquosa ou oleaginosa injetável. Esta pasta fluida pode ser formulada de acordo com as 20 técnicas bem conhecidas dos versados na técnica usando agentes de dispersão ou umectação apropriados (como, por exemplo, Tween 80) e agentes de pasta fluida.

A composição farmacêutica da invenção pode ser oralmente administrada em qualquer forma de dosagem oralmente aceita incluindo, 25 mas não limitada a cápsulas, comprimidos, e pasta fluida e soluções aquosas. No caso de comprimidos para uso oral, os veículos que são comumente usados incluem lactose e amido de miiho. Os agentes lubrificantes, como esíearato de magnésio, são também tipicamente adicionados. Para administração oral em uma forma de cápsula, os diluentes 30 utilizáveis incluem lactose e amido de milho em pó. Ouando suspensões aquosas são administradas oralmente, o ingrediente ativo é combinado com agentes de emulsão e pasta fluida. Se desejado, alguns agentes adoçantes e/ou aromatizantes e/ou colorardes podem ser adicionados.

Outros veículos ou excipientes apropriados para as formulações acima e composições podem ser encontrados em textos de farmácia padrão, por exemplo, em Remingíoris Pharmaceuíical Sciences, The Science and 5 Practice of Pharmacy. 19^th Ed. Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995).

Os níveis de dosagem dentre cerca de 0,01 e de cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia, preferivelmente entre cerca de 0,1 e de cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia do composto inibidor de 10 protease descrito aqui são utilizáveis em uma monoterapia para a prevenção e tratamento de doença mediada por HCV. Tipicamente, a composição farmacêutica da invenção será administrada de cerca de 1 a cerca de 5 vezes por dia ou alternativamente, como uma infusão contínua. Esta administração pode ser usada como uma terapia crônica ou aguda. 15 A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinado com os materiais de veículo para produzir uma forma de dosagem única irá variar dependendo do hospedeiro tratado e o modo de administração particular. Uma preparação típica irá conter de cerca de 5 a cerca de 95%. de composto ativo (peso/peso). Preferivelmente, estas preparações contém de cerca de 20 a 20 cerca de 80% de composto ativo.

Como o versado na técnica irá notar, doses menores ou maiores do que as dadas acima podem ser requeridas. Os regimes de dosagem e tratamento específicos para qualquer paciente em particular irá depender de vários fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a 25 idade, peso corporal, estado de saúde gerai, sexo, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combinação de drogas, a severidade e curso da infecção, a disposição do paciente à infecção e o julgamento do médico. Geralmerite. o tratamento é iniciado com doses pequenas substancialmente menores do que a dose ótima do peptídeo. A seguir, a 30 dosagem & aumentada por incrementos pequenos até um efeito ótimo ser alcançada. Geralmente, o composto é administrado de modo mais desejável a um nível de concentração que irá geralmente dar resultados antiviralmente eficazes sem causar qualquer efeito lateral prejudicial ou deletério.

Quando a composição da invenção compreende uma combinação de um composto de fórmula I e um ou mais agentes terapêuticos ou profiláticos adicionais, tanto o composto como o agente adicional devem estar presentes em níveis de dosagem dentre cerca de 10 a 100% e mais preferivelmente entre cerca de 10 e 30% da dosagem normalmente administrada em um regime de monoterapia.

Quando estes compostos, incluindo seus sais farmaceuticamente aceitáveis e ésteres, são formulados juntos com um veículo farmaceuticamente aceitável, a composição resultante pode ser administrada in vivo a mamíferos, como o homem, para inibir a HCV MSS protease ou para tratar ou evitar a infecção pelo vírus de HCV. Este tratamento também pode ser obtido por um composto desta invenção em combinação com outro agente antiviral. Os outros agentes antivirais preferidos são descritos na seção de Definições e a seção de composições farmacêuticas preferidas de acordo com esta invenção e incluem, mas não são limitados a: σ-, β-, δ-, ω-, γ- ou τ-interferon, ribavirina, amantadina; outros inibidores de NS3 protease de HCV; inibidores de HCV polimerase; inibidores de outras marcações no ciclo de vida de HCV, que incluem mas não são limitados à, helicase, NS2/3 protease, ou sítio de entrada em ribossoma interno (IRES); ou combinações dos mesmos. Os agentes adicionais podem ser combinados com compostos da invenção para criar urna forma de dosagem úniea. Alternativamente, estes agentes adicionais podem ser separadamente administrados a um mamífero como parte de uma forma de dosagem múltipla.

Consequentemente, outra modalidade da invenção provê um método para inibir a NS3 protease de atividade de HCV em um mamífero por administração de um composto da fórmula I, incluindo um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

Em uma modalidade preferida, o método é utilizável para diminuir a atividade de NS3 protease do vírus de hepatite C infectando um mamífero.

Como discutido acima, a terapia de combinação é contemplada em que um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou éster, é co-administrado com pelo menos um agente antiviral adicional. Os agentes antivirais preferidos são descritos acima e exemplos destes agentes são providos r>a seção de Definições. Estes agentes 5 adicionais podem ser combinados com os compostos desta invenção para c.riar uma forma de dosagem farmacêutica única. Alternativamente., estes agentes adicionais podem ser administrados separadamente para o paciente como parte de uma forma de dosagem múltipla, por exemplo, usando um kit. Estes agentes adicionais podem ser administrados ao paciente antes ou 10 concorrente com ou após a administração de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do mesmo.

Um composto de fórmula (I). ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do mesmo, especificado aqui também podem ser usado como um reagente de laboratório. Além disso, um composto da 15 invenção, incluindo um sai farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, também podem ser usado para tratar ou prevenir a contaminação viral de materiais e assim reduzir o risco de infecção viral de pessoal do laboratório ou médico ou pacientes que entrem em contato com estes materiais (por exemplo, sangue, tecido, instrumentos e roupas cirúrgicos, instrumentos e 20 roupas de laboratório e aparelhos de coleta de sangue e materiais).

Um composto de fórmula (I), incluindo um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, especificado aqui também pode ser usado como um reagente de pesquisa. Um composto de fórmula (I), incluindo um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, também pude ser 25 usado como controle positivo para validar os testes â base de células em testes de replicação viral in ' itro ou in

Metodologia

Vários rnodos de realizar a síntese de compostos de fórmula I com diferentes derivados de quinolina são descritos em WO 00/09553. O 30 intermediário de dipeptídeo 15 (Esquema 2) e 2-carbometóxi-4-hidróxi-7metoxiquinolina 9 (Esquema 1) foram sintetizados de acordo com os métodos gerais descritos em WO 00/09543.

Compostos de fórmula I em que R'” é NHSO₂R^s como definido aqui são preparados por copulação do correspondente ácido de formula I (isto é, R·’ é hidróxi) com uma sulfonamida apropriada de formula R^bSO₂NH2 na presença de um agente de copulação sob condições padrão. Apesar dos 5 vários agentes de copulação comumente usados poderem ser empregados,

TBTU e HATU foram verificados como sendo práticos. As sulfonamidas são comercialmente disponíveis ou podem ser preparadas por métodos conhecidos.

Os seguintes esquemas ilustram dois processos convenientes usando métodos conhecidos para preparar os compostos de fórmula 1 quando R¹ é vinila e R‘ é OH.

Esquema 1 , p // , p

4X = O

X = NH

O íí v_Br o

Β. Λ

Brevemente, Síntese de dipeptídeo 3 é realizada por copulação do resíduo P1 para a trans-hidróxi proliria protegida de modo apropriado sob condições padrão. A estereoquímica do grupo hidroxiia é invertida pela reação de Mitsunobu bem conhecida usando ácido para- nitrobenzóico. A copulação de dipeptídeo com a porção P3 (preparada usando metodologia padrão e exemplificada na seção de exemplos) deu o tripeptídeo 6.

A introdução da porção quinolina para o grupo hidroxila do tripeptídeo 7 com inversão de estereoquímica pode ser realizada usando ou a reação de Mitsunobu ou por conversão do grupo hidroxiia livre em um bom grupo de saída (como brosilato) e deslocando o mesmo com o derivado de hidroxil quinolina 9. Para a Síntese dos derivados 2-(2-amino-4-tiazolil), a quinolina usada contém um grupo 2-carbometoxi como mostrado em 9. Conversão do grupo carboxilato no derivado aminotiazol é realizada por metodologia sintética bem conhecida e descrito e exemplificado em WO 00/09543 e WO

00/09593. Finalmente, o éster C-terminal é hidrolisado sob condições básicas aquosas.

Esquema 2 descreve outra seqüência de reação para fazer os compostos de fórmula I. Neste caso, a porção quinolina é introduzida no dipeptídeo em um modo similar como descrito em Esquema 1. Finalmente a porção P3 é copulada sob condições padrão para o dipeptídeo 21. Conversão do resultante tripeptídeo para o final composto é realizada como descrito em Esquema 1.

Síntese de Fragmentos de PI

As porções de P1 de compostos de fórmula (I) foram preparadas usando os protocolos descritos em WO 00/59929, publicados em 12 de outubro de 2000, e WO 00/09543, publicados em 24 de fevereiro de 2000.

Particularmente, referência é feita às páginas 33-35, Exemplo 1 de WOOO/59929 e Paginas 56-69, Exemplo 9 - 20 de WOOO/D9543 para a preparação de porções de P I de ácido l-aminociclopropanocarboAÍlico. Síntese de Substituíntes de P2

Compostos de fórmula 9 podem ser sintetizados a partir de materiais comercialmente disponíveis usando as técnicas descritas em pedidos de patente internacional WO 00/59929, WO 00/09543, WC> 00/09553 e Patente U.S. 6.323.180 BI.

Exemplos de síntese de derivados de 2-carbometóxi-4hidroxiquinoiina diferentes foram realizados como a seguir:

Síntese de derivados de 2-carbometóxi-4-hidróxi-quinolina foi realizada a partir das anilinas correspondentes de acordo com procedimento de: Unangst, P.C.; Connor, D.T. J. Heterocyc. Chem. 29, 5, 1992, 10971100. O procedimento é mostrado no esquema 3 abaixo:

Esquema 3

Οί MeO rs

JJ.

OMe

II heat

240-26Ú°C :d

Legenda calor

Brevernente, as anilinas substituídas de modo apropriado na dicarboxilato de dimetil posição 2, 3 e/ou 4 são deixadas reagir com acetileno e a enamina resultante e aquecida em temperaturas elevadas para efetuar a cicíização.

As anilinas correspondentes são comercialmente disponíveis ou podem requerer transformação química bem conhecida. Por exemplo, pode ser que o riitro seja comercialmente disponível e então convertido na amina correspondente por uso de um agente redutor. Também, quando o ácido

carboxílico é comercialmente disponível, ele pode ser transformado na amina correspondente via um rearranjo de Curtius.

Outros detalhes da invenção são ilustrados nos seguintes exemplos que são entendidos como não limitativos com relação às reivindicações anexas. Outros modos específicos do síntese ou resolução dos compostos desta invenção pedem ser encontrados em WO 00/09543; WO 00/09556 & WO 00/59929 e no pedido co-pendente 09/363.670, que são aqui incorporados por referencia.

Exemplos

As temperaturas são dadas em graus Celsius. As porcentagens em solução expressam uma relação de peso para volume, e relações de solução expressam uma relação de volume para volume, salvo indicado em contrário. Os espectros de ressonância magnética nuclear (RMN) foram gravados em um espectrômetro Bruker de 400 MHz, os deslocamentos químicos (G) são registrados em partes por milhão. A cromatografia instantânea foi realizada em sílica-gel (SiOz) de acordo com a técnica de cromatografia instantânea de Still (W.C. Still et al., J. Org. Chem., (1978), 43, 2923).

Abreviaturas usadas nos exemplos incluem:

BOC ou Boc: fe/v-butiloxicarbonila; DBU: 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno; DCM: diclorometano; DIAD: diisopropilazodicarboxilato; DIEA: diisopropiletilainina; DiPEA: diisopropiletil amina; DMF: N, AZ-dimetilformamida, DMAP: 4-(dimetilamino) piridina; DMSO: dimetilsulfó-jdo; EtOAc: acetato de etiia; HATU: hezafluorofosfato de [O-7-azabenzotriazol-1-ií) -1,1,3,3-tetrametiluronio]; HPLC: cromatografia de líquido de eievado desempenho; EM: espectrometria de massa (MALDI-TOF· ionização de dessorção a laser auxiliada por matriz, - tempo de vôo. FAB: bombardeio de átomo rápido); Me: metila; MeOH: metanol; Ph: fenila; T.A.: temperatura ambiente (13 a 22°); terc-butila ou t-butila: 1,1-dimetiletila; Tbg: ferc-bufila glicina: tercleucina; TBTU: tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il) -1,1,3,3tetrametila urõnio; TEA: trietilamina; TFA: ácido trifluoroacético; e THF: tetrahidrofurano..

Exemplo 1

Síntese de derivados P3

Síntese de carbamato 4a

O c»

THF (350 mL) foi adicionado em um frasco contendo éster de

2,5-diO’ü-pirrolidin-1 -ila de éster cicloperitílico de ácido carbâmico (9,00 g; 39,6 mmoles) e fe/c-butil glicina (6,24 g; 47,5 mmoles) resultando em uma pasta fluida. Água destilada (100 mL) foi adicionada com agitação vigorosa. Uma quantidade pequena de sólido permaneceu não dissolvida. Trietilamina (16,6 mL; 119 mmoles) foi então adicionada resultando em uma solução homogênea que foi agitada em temperatura ambiente. Após 2,5 h, o THF foi evaporado e o resíduo aquoso diluído com água (100 mL). A reação foi tornada básica pela adição de 1 N de NaOH (25 mL - pH final >10). A solução foi lavada com EtOAc (2x 200 mL) e a fase aquosa acidulada com 1 N de HCI (cerca de 70 mL - pH final <2). A solução turva foi extraída com EtOAc (200 + 150 mL). O extrato foi seco (MgSO₄) e evaporado para dar carbamato 4a como um sólido branco (8,68 g).

Preparação de Uréias 5a

5a

Uma solução de sal de cloridrato de éster fe/O-butil glicina benzí

9,89 mmoles) em THF (20 mL) e piridiria (2 ) mL

mmoles) foi resfriada a ü^cC. Cloroformiato de fenila (i mL; 10,19 mmoies) foi adicionado em gotas na solução resfriada. A pasta fluida resultante foi agitada durante 5 minutos a 0°C, então em temperatura ambiente durante

1,5 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, lavada com 10% de ácido cítrico (2x), água (2x), NaHCOj. saturado (2x), água (2x) e salmoura (1x), seca (MgSO.i), filtrada e evaporada para obter o composto bruto como um óleo quase incolor (3,73 g; >100%; considerando 9,89 mmoles). O produto

bruto (1,01 g; 2,97 mmoles) foi dissolvido em DMSO (6,5 mL) e ciclopentilamina foi adicionada em gotas. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 45 minutos e então diluída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com 10% de ácido cítrico (2:-), água (2à), NaHCOs saturado (2,<), água (2x) e salmoura (1<), seca (MgSO₄), filtrada e evaporada para dar produto -Tbg-OBn uréia ciclopentila bruto como um óleo quase incolor. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea com sílica usando hezano:EtOAc 9:1 para remover as impurezas menos molares e 7:3 para eluir o produto purificado como um óleo espesso incolor (936 mg; 95%). O produto éster benzílico (936 mg; 2,82 mmoles) foi desprotegido sob um balão carregado com hidrogênio em temperatura ambiente em uma solução de etanol absoluto (15 mL) por agitação a solução com 10%. de Pd/C (93,6 mg) durante 5,5 horas. A mistura de reação foi filtrada através de um filtro de 0,45 mícron e evaporada até secura para prover uréia 5a como um sólido branco (669 mg; 98%.)

1H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): 3 12,39 (s, 1 H), 6,09 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 5,93 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 3,90 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 3,87 - 3,77 (m, 1 H), 1,34 1,72 (m, 2 Η), 1,63 -1,42 (m, 4 H), 1,30 -1,19 (m, 2 H), 0,89 (s, 9 H).

EM (eletrospray): 241,0 (M-H) ‘ 243,0 iM+H) *. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06%. de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%..

Exemplo 2

Síntese de Tiouréias 8

Síntese de tiouréia 8a:

ΓΛ	ί . I fj ΓΛ	___. fi r\
H ÍJ		p '
	Η H	b - H
		8a
A	uma solução de isotiocianato de	terc-butila (5,0 mL; 39,4
mmoLes) em	DOM (200 mL) foi adicionada ciclo	pentilamina (4,67 mL; 47,3

mmoLes) seguido por DIPEA e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante duas horas. A mistura foi diluída com EtOAc, e lavada com 10% de uma solução aquosa de ácido cítrico (2x), NaHCO₃

saturado (2x), H₂O (2x) e salmoura (1.x). A camada orgânica foi seca sobre MgSO.i anidro, filtrada e evaporada para dar /V-ferc-butil-Af-ciclopentiltiouréia como um sólido branco (3,70 g; 47% de rendimento). O N-terc-bufil-N ciclopentiltiouréia (3,70 g) foi dissolvido em HGI concentrado (46 mL). A solução amarelo-escura foi aquecida a um refluxo suave. Após 41» minutos a mistura de reação foi deixada resfriar em temperatura ambiente e a seguir resfriada em gelo e tomada básica a pH 9,5 com sólido e uma solução aquosa saturada de NaHCO₃. O produto foi extraído em EtOAc (3:-:). Os extratos EtOAc combinados foram lavados com H₂O (2x) e salmoura (1x). A camada orgânica foi seca (MgSOt), filtrada e concentrada para dar um sólido bege (2,46 g bruto). Trituração do material bruto em he.xano/EtOAc: 95 /5 provido, após filtração, a /V-ciclopentiltiouréia 8a como um sólido branco (2,38 g; 90% de rendimento).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): 5 7,58 (bs, 1 H), 7,19 (bs, 1 H), 6,76 (bs, 1 H), 4,34 (bs, 1H), 1,92 - 1,79 (m, 2 H), 1,66 - 1,55 (m, 2 H), 1,55 - 1,30 (m, 4 H). EM; es* 144,9 (Μ + H) *, es: 142.3 (Μ - H)'.

Preparação de Tiouréia 8b

S o I u ₊ u L·

H,H UH.. Cl'

H

8b

Tiouréia (5,0 g, 66 mmoles) foi dissolvida em tolueno (50 mL) e mmoles) foi adicionado. A mistura foi aquecida a refluxo durante 14 horas para dar uma solução amarela. A mistura foi concentrada até secura, e o resíduo dividido entre EtOAc e

NaHCOs saturado. A fase orgânica amarela foi seca sobre MgSO₄, filtrada e concentrada para dar urn sólido amarelo. O sólido foi dissolvido em uma quantidade mínima de EtOAc e triturado com hexano para dar 8b como um solido branco (8,52 g; 75%). EM (eletrospray): 173 (M-H) ’ 175 (M+H) ⁺. Homogeneidade HPLG de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃GN: H₂O): 99%.

Preparação de Tiouréia 8c

H

Usando o procedimento descrito acima mas usando cloreto de ciclopentil acetila comercialmente disponível em vez de cloreto de tercbutilacetila obteve-se tiouréia 8c.

Síntese de Derivados 2-Carbometóxi-4-Hidróxi Quinolina

Exemplo 3A

Síntese de 2-carbometóxi-4-hidróxi-7-metóxi-8-metilquinolina (A5)

Etapa A

Pd/C, 10%

EtC'H

A1 h₂

A uma solução de 2-metil-3-nitro anisol A1 (5,1 g; 30,33 mmoles; requer ~30 minutos para dissolver) em etanol absoluto (85 mL) foi adicionado 10% de catalisador Pd/C (500 mg). A solução foi hidrogenada sob um balão carregado com hidrogênio à pressão atmosférica em temperatura ambiente durante 19 horas. A mistura de reação foi filtrada através de um tampão Celite, enxaguada e evaporada até secura para obter 2-rneiil-3-metoxianilina A2 como um óleo de cor malva profunda (4,1 g; 29,31 mmoles; 98% de rendimento).

EM 137 (MH) Homogeneidade HPLC de fase reversaiô) 220 nm (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%.

Etapa b

A2

Dicarbo> ilato de dimetil acetileno A3 (3,6 mL, 29,23 mmoles) foi adicionado em gotas a uma solução de 2-metil-3-metoxianilina A2 (3,95 g,

23,79 mmoles) em MeOH (100 mL) (a reação é exotérmica). A mistura foi aquecida a um refluxo suave durante 5 horas resfriada e concentrada sob vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea em sílica-gel com hexano: EtOAc. (95: 5) para prover, após evaporação das frações puras, o produto A4 (6,5 g: 23,27 mmoles: 81% de rendimento).

Homogeneidade HPLC de fase reversa^: 220 nm (0,06% de TFA; CH3CN: H₂O): 95%.

Etapa C

C0,Me

240-2G0‘C diphenyl ether

Legenda - éter difenílico

O diéster A4 (6,5 g, 23,27 mmoles) foi dissolvido em éter difenílico (12 mL) e a mistura de reação colocada em um banho de areia preaquecido em uma temperatura de banho de 350 - 400°C. Uma vez atingida uma temperatura interna de 240°G da mistura de reação (observar a evolução de MeOH a 230 - 240^c'C) uma contagem de seis minutos começou antes do banho (ponto de temperatura final: 262’C) foi removido e a reação deixada para resfriar em temperatura ambiente. Um sólido se formou quando do resfriamento que foi diluído com éter, filtrado e seco para dar um sólido marrom castanho (3,43 g bruto). O material bruto foi cromatografado em coluna de sílica-gel com hexano: EtOAc; 5: 5 para remover impurezas, então 2: 8 e então 100%. de EtOAc. para completar a eluição do produto para prover A5, após evaporação, como um solido amarelo-pálido (2,1 g, 37% de rendimento).

EM (Μ + H) ⁺; 246, e (Μ - H) 248,1. Homogeneidade HPLC de fase reversatõ» 220 nm (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%.

Exemplo 3B

Síntese de 2-carbometóxi-8-bromo-4-hidróxi-7-metoxiauinolína (B6)

COOMe

Etapa A

2-Amino-3-nitrofenol BI (5 g; 32,4 mmoles) foi dissolvido em

H₂O (29,5 mL) e 1,4-dioxano (14,7 mL). A mistura foi aquecida a refluxo e ácido bromídrico (48%; 16,7 mL; 147 mmoles) foi adicionado em gotas durante um período de 20 minutos. Ao completar a adição, o refluxo foi mantido um adicional de 15 minutos. A reação foi resfriada a 0°C (banho de gelo), e nitrito de sódio (2,23 g; 32,3 mmoles) em H₂O (20 mL) foi adicionado durante um período de 30 minutos. A agitação foi continuada durante 15 minutos a 0°C, então a mistura foi transferida para um funil de gotejamento com camisa (0°C) e adicionado em gotas na mistura agitada de Cu(l) Br (5,34 g; 37,2 mmoles) em H₂O (29,5 mL) e HBr (48%; 16,7 mL; 147 mmoles) a CrC. A reação foi agitada durante 15 minutos a 0°C, aquecida a 60°C, agitada durante um adicional de 15 minutos, resfriada em temperatura ambiente, e deixado agitar durante a noite. A mistura de reação foi transferida para um funil separador e extraída com éter (3x 150 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura (IX), secas (Na₂SO₄), filtradas e concentradas para dar o produto bruto (7,99 g) como um óleo vermelho-marrom. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea (1:25 sílica-gei ultrapura, 230 - 400 mesh, 40 - 60 mm, angstroms; CH₂CI₂ como o solvente) para dar 2-bromo-3-nitrofenol puro

B2 (45%; 3,16 g) como um sólido laranja-marrom.

EM 217,8 (MH) ’. Homogeneidade por HPLC (TFA) tôj 220 nm: 97%.

Etapa Β

Ο material de partida nitrofenol B2 (3,1 g; 14,2 mmoles) foi dissolvido em DMF (20 mL) e a uma solução foi adicionado carbonato de césio triturado (5,58 g; 17,1 mmoles) seguido por Mel (2,6 mL; 42,5 mmoles). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O DMF foi evaporado, o resíduo tomado em éter (1>. 200 mL), lavado com água (1x 200 mL), salmoura (4x 100 mL), seco (MgSO.i), filtrado e evaporado para dar o 2-bromo-3-nitroanisol bruto B3 (94%; 3,1 g) como um sólido laranja.

EM 234 (M+2H) ⁺; Homogeneidade por HPLC (TFA) iõ> 220 nm: 98%..

Etapa C

2-Bromo-3-nitroanisol B3 (1,00 g; 4,31 mmoles) foi dissolvido em ácido acético glacial (11,0 mL) e etanol (11,0 mL). Para esta solução foi adicionado pó de ferro (0,98 g; 17,5 mmoles). A mistura foi agitada a refluxo durante 3,5 h e trabalhado. A mistura de reação foi diluída com água (35 mL), neutralizada com Na2CO_? sólido e o produto extraído com CH₂CI₂ (3X 50 mL). Os extratos foram secos (Na^SOq), filtrados e concentrados iri vacuo para dar o produto bruto, 2-bromo-3 metoxianilina B4 (91%.; 0,79 g) como um óleo amarelo-pálido.

EM 201,8 (MH) ^: ; Homogeneidade por HPLC (TFA) <g> 220 nm: 95%.

Etapa D

A uma solução de 2-bromc;-3-meto>ianiiina E4 (0,79 g; 3,9 mmoles) em MeOH (7,6 mL) foi adicionado dicarboxilatu de dimeti! acetileno A3 (0,53 mL; 4,3 mmoles) em gotas a 0°C (cuidado: reação é exotérmica). A solução foi aquecida durante a noite a refluxo e trabalhada. O MeOH foi evaporado e o produto bruto seco sob vácuo elevado para dar uma goma vermelha, purificada por cromatografia de coluna instantânea (1:30 sílica-gel ultrapura, 230 - 400 mesh, 40 - 60 mm, 60 angstroms; 4:1 hexano/EtOAc) para dar aduto B5 (86%; 1,16 g) como um sólido amarelo-pálido.

EM 344,0 (MH) +; Homogeneidade por HPLC (TFA) <ã· 220 nm: 72%.

Etaoa E

A um banho de areia preaquecido cerca de 440°C (temperatura externa) foi colocado o aduto diéster B5 (1,1 g; 3,16 mmol) em éter difenílico (3,6 mL). A reação foi agitada entre 230°C - 245 °G (temperatura interna; MeOH começou a evaporar a cerca de 215 ^C'C) durante 7 minutos e subseqüentemente resfriado em temperatura ambiente. À medida que a solução resfriou, o produto cristalizou da mistura de reação. O sólido marrom resultante foi filtrado, lavado com éter e seco sob vácuo elevado para dar o produto bromoquinolina B6 bruto (74%; 0,74 g) como um sólido marrom. RMN revelou que este produto é uma mistura de cerca de 1:1 tautômeros. RMN (DMSO; 400 MHz) ok (1:1 mistura de tautômeros); EM 311,9 (MH) ⁺; Homogeneidade por HPLC (TFA) iã» 220 nm: 96%.

Exemplo 3C

Síntese de 2-carbometóxi-3-cloro-4-hidróxi-7-metoxiquinolina (C6)

Etapa A

2-Amino-3-nitrofenol E1 (5 g

concentrado (75 mL) e 1,4-dioxano (14,7 mL). A mistura foi aquecida a 70°C· até a maior parte dos sólidos estarem em solução. A mistura de reação foi resfriada a 0°G (banho de gelo), e nitrito de sódio (2,23 g; 32,3 mmoles) em H₂O (5,4 mL) foi adicionado durante um período de 3 horas na solução marrom. A temperatura foi mantida abaixo de i0^&G durante a adição e a agitação foi continuada durante um adicional de 15 minutos a ü°G. Este intermediário diazônio foi despejado ern uma solução de Gu(l) Cl (3,8 g; 38,9 mmoles) em H₂O (18,5 mL) e HCI concentrado (18,5 mL) a 0*C. A reação foi agitada durante 15 minutos a 0°C, aquecida a 60°C, e agitada durante um adicional de 15 minutos. A mistura de reação foi então levada em

temperatura ambiente, e deixada agitar durante a noite. A mistura de reação foi transferida para um funil separador e extraída cx>m éter (3X 150 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura (IX), secas (Na -SOd), filtradas e concentradas para dar o produto bruto (5,83 g) como um óleo vermelho-marrom. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea (1:25 sílica-gel ultrapura, 230 - 400 mesh, 40 - 60 mm, 60 angstroms; 3:1 hexano/EtOAc como o solvente) para dar 2-cloro-3nitrofenol puro C2 (48%; 2,7 g) como um sólido laranja.

EM 171.8 (MH)Homogeneidade por HPLC (TFA) ιό¹ 220 nm: 96%. Literatura relevante para a Sandmeyer Reaction: J. Med. Chem, 1982, 25(4), 446 - 451.

Etapa B

O material de partida nitrofenol C2 (1,3 g; 7,49 mmoles) foi dissolvido em DMF (10 mL) e para a solução foi adicionado carbonato de césio triturado (2,92 g; 8,96 mmoles), seguido por Mel (1,4 mL; 22,5 mmoles). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O DMF foi evaporado in vacuo e o resíduo tomado em éter (150 mL), lavado com água (150 mL), salmoura (4x 100 mL), e então seco sobre íMgSCh). A fase orgânica foi filtrada e evaporada para dar o 2-cloro-3-nitroanisol bruto C3 (93%; 1,38 g) como um sólido laranja.

Homogeneidade por HPLC (TFA) <õ>. 220 nm: 93%.

Etapa. Ç

2-Cloro-3-nitroanisol CS (1,38 g; 7,36 mmoles) foi dissolvido e uma mistura de ácido acético glacial (19 mL)/etanol (19 mL). Para a solução foi adicionado pó de ferro (1,64 g; 29,4 mmoles). A mistura foi agitada a refluxo durante 3,5 h e trabalhada. A mistura de reação foi diluída com água (70 mL), neutraiizada com Na2CO_;·. sólido e o produto extraído com CH2CI2 (3X 150 rnL). Os extratos foram combinados e lavados com salmoura saturada e então secos sobre (Ma₂SOj), filtrados e concentrados in vacuo para dar o produto bruto, 2-cloro-3-metoxianilina C4 (100%; 1,2 g) como um óleo amarelo. Este material foi usado como nas seguintes etapas. EM 157,9 (MH) ⁺; Homogeneidade por HPLC (TFA) iã> 220 nrn: 36%.

Etapa D

A uma solução de 2-cloro-3-metoxianilina 04 (1,2 g; 7,61 mmoles) em MeOH (15 mL) foi adicionado dicarboxilato de dimetil acetileno A3 (1,0 mL; 8,4 mmoles) em gotas a 0^r'C (cuidado: a reação é exotérmica). A solução foi aquecida durante a noite a refluxo e trabalhada. O MeOH foi evaporado e o produto bruto seco sob vácuo elevado para dar uma goma vermelha que foi purificada por cromatografia de coluna instantânea (1:30 sílica-gel ultrapura, 230 - 400 mesh, 40 - 60 mm, 60 angstròms; 4:1 hexano/EtOAc) para dar aduto C5 (74%; 1,68 g) como um sólido amarelo. EM 300 (MH) ⁺; Homogeneidade por HPLC (TFA) ιά; 220 nm: 90%.

Etapa E

A um banho de areia preaquecido cerca de 440°C (temperatura externa) foi colocado o aduto diéster C-5 (1,68 g; 5,6 mmoles) em éter difenílico (6,3 mL). A reação foi agitada entre 230°C - 245 °C (temperatura interna; MeOH começou evaporando a cerca de 215 °C) durante 7 minutos e subseqüentemente resfriada cm temperatura ambiente. À medida que a solução resfriou, o produto cristalizou da mistura de reação. O sólido acastanhado resultante foi filtrado, lavado com éter e seco sob vácuo elevado para dar a quinolina C6 (83%; 1,25 g) como um sólido bege. RMN revelou que este produto era uma mistura de cerca de 1:1 tautômeros (formas ceto/fenul).

EM 267,9 (MH) ⁺; Homogeneidade; por HPLC (TFA) rçí! 220 nm: 92%.

Exemplo 3D

Síntese de 2-Garbometóxi-8-flúor-4-hidróxi-7-meto>:iquinc»lina (D5)

D4

Legenda: Comercial de...

Etapa A

Uma solução de ácido 2-flúor-3-metóxi benzóico D1 (1,68 g, 9,87 mmoieses) e DIPEA (2,07 mL. 11,85 mmoles, 1,2 equiv.) em uma mistura de toiueno (8 mL) e t-BuOH (8 mL) foram agitadas sobre peneiras moleculares 4A ativadas durante uma hora seguido por adição de difenil fosforil azida í DPPA, 2,55 mL, 11,85 mmoles) e esta mistura foi refluxada durante a noite. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vácuo, o resíduo foi tomado em EtOAc (50 mL), lavado com H₂O (2x 30 mL) e salmoura (1x 30 mL). A fase orgânica foi seca (MgSO.i), filtrada e concentrada sot> pressão reduzida. O produto bruto D2 (2,38 g. 96%) foi usado como tal na seguinte etapa. Análise EM mostra a perda do grupo Boc: 141,9 ((M+H) -Boc) *, 139,9 ((M-H) -Boc)'.

Etapa B

Composto D2 (2,28 g, 9,45 mmoles) foi tratado com uma solução de 4N de HCI/dioxano (de Aldrich) (10 mL, 40 mmoles) durante 60 minutos e análise HPLC- mostrou que o material de partida tinha sido completamente consumido. A mistura de reação foi concentrada in vácuo, redissolvida em EtOAc e lavada com água, NaHCOj, saturado (aq), e salmoura saturada. A fase orgânica foi seca (MgSO₄), filtrada e concentrada para dar 1,18 g (88%) de D3 como um óleo marrom, que foi usado como na seguinte etapa. EM: 141,9 (Μ + H) ' , 139,9 (Μ - H )

Etapa C

Anilina D3 (1,13 g, 8,36 mmoles) foi combinada com dicarhoxilato de dimetilacetilenc» A3 (1,45 mL, 10,0 mmoles) em metanol (25 mL). A reação foi refluxada durante duas horas antes de ser concentrada até secura. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea aluindo com 9/1 (hexano/EtOAc) para dar o aduto Michael D4 como um óleo amarelo, (1,27 g, 54%).

Etapa D

O aduto Michael D4 foi dissolvido em éter difenílico quente (6 mL) e colocado em um banho de areia previamente aquecido a ~350°C. A temperatura interna da reação foi monitorada e mantida a -245 ^C'C cerca

de 5 minutos (solução se toma marrom). Após resfriamento em temperatura ambiente, a 4-hidroxiquinolina desejada quebrou da solução. O sólido marrom foi filtrado e lavado várias vezes com éter dietílico para dar, após secagem, quinolina D5 como um sólido marrom (0,51 g, 45%). EM: 252 (M + H) ⁺, 249,9 (Μ - H) ’. Mistura de 1:1 tautômeros, 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz) 12,04 (s, I H), 11,02 (s, 1 H), 8 0 (d, 1 H), 7,38 (d, 1 H), 7,65 (m, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 7,32 (m, 1 H), 6,5 (s, 1 H), 4,0 (s, 3 H), 3,98 (s, 3 H), 3,95 (s, 3 H), 3,91 (s, 3 H).

Exemplo 3E

Síntese de 2-carbometóxi-6,8-dimetil-4-hidróxi-7-meto:<iquinolina (Έ8)

Commercial írom Aldrich

Legenda - comercia! de....

Etapa A

A amida E í (5,0 g, 30,63 mmoles) foi dissolvida em uma mistura de ácido acético (5 mL) e ácido sulfúrico (10 mL) e resfriada a 0°C. A mistura de ácido nítrico (70%, 3 mL) e ácido sulfúrico (2 mL) foi adicionado em gotas depois que a solução foi aquecida em temperatura ambiente e agitada durante uma hora. A mistura de reação foi então despejada sobre gelo esmagado e filtrada (após o gelo tinha derretido mas a solução ainda estava fria) para dar o composto desejado E2 (5,3 g, 91%) que foi realizado na próxima reação sem ainda purificação. EM ES⁺ = 209,0, ES' = 206,9. (Ref: Giurnariini, A.G.; Verardo, G.; Polana, M. J. Prak. Chern. 1988, 181).

Etapa B

Composto E2 (5,8 g, 27,86 mmoles) foi tratado com uma solução de 6M de HCI (5 ml_) em MeOH (10 mL) e aquecido a refiuxo durante 48 horas para dar o produto desejado E3 (4,6 g, 99%). P.P-HPLC indica consumo completo de material de partida (R_t (E2) = 2,6 min.; R₍ (Έ3) = 3,9 min.). A mistura foi concentrada e empregada em reação subseqüente sem ainda purificação.

Etapa C

Ácido sulfúrico (18 mL) foi adicionado à solução de anilina E3 (4,20 g, 25,27 mmoles) em água (36 mL) a 0°C seguido pela adição de nitrito de sódio (2,3 g, 33,33 mmoles) em água (6 mL). Em um frasco separado foi colocado uma mistura de água (14 mL) e ácido sulfúrico (1,5 mL). Esta solução foi levada ao refiuxo e então a solução inicial foi adicionada em gotas enquanto mantendo uma fervura. Depois da adição estar completa, a ebulição foi continuada durante 5 minutos e a mistura então despejada sobre uma mistura de gelo/carbonato de sódio enquanto resfriando em um banho de gelo. O produto foi extraído com EtOAc aquoso e concentrado para dar um líquido viscoso marrom-escuro E4 (2,00 g, 47%) que foi empregado na reação subseqüente sem outra purificação. EM ES' = 210,9.

Etapa D

Mel (1,42 mL, 22,74 mmoles) foi adicionado a uma solução de fenol de partida E4 (1,9 q, 11,37 mmoles) e carbonato de potássio (2 g) em DMF (25 mL) em temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 50°C durante duas horas e então resfriada em temperatura ambiente. Foi adicionado EtOAc e a solução foi lavada com água (3x) e a camada aquosa foi então extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas, filtradas e concentradas para dar c éter metíiico desejado E5 (2,9 g, 97%). 1H-RMN (CDCIs, 40Ü MHz) 7,62 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,74 (s, 3 H), 2,48 (s, 3 H), 2,36 (s, 3 H).

Etapa E

Dez por cento (10%) de Pd/C (200 mg) foi adicionado em uma solução de material de partida nitro E5 (2,0 g, 11,04 mmoles) em EtOH e colocado em um agitador Parr sob atmosfera de H₂ a 2,31 kg/cm² (40 psi) durante duas horas. A solução foi filtrada através de um tampão de sílica/Celite, enxaguada com MeOH e concentrada para dar a aniliria desejada E6 (1,5 g, 90%) que foi empregada sem outra purificação.

Etapa F

Anilina E6 (1,9 g, 12,65 mmoles) foi combinada com dicarboxilato de dimetilacetileno A3 (2,32 mL, 18,85 mmoles) em metanol (3 mL). A reação foi aquecida a refluxo durante duas horas antes de ser concentrada até secura. O material bruto foi purificado por cromatografia instantânea (9:1 hexano/EtOAc) para dar o aduto de Michael E7 como um óleo amarelo (2,8 g, 763(.). ¹H-RMN (CDCI_?, 400 MHz) 9,48, (s, br, 1 H), 6,89 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 6,47 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 5,35 (s, 1 H), 3,74 (s, 3 H), 3,70 (s, 3 H), 3,65 (s, 3 H) 2,27 (s, 3 H), 2,24 (s, 3 H).

Etapa G

O aduto de Michael E7 foi dissolvido em éter difenílico quente (10 mL) e colocado em um banho de areia previamente aquecido a ~350°C. A temperatura interna da reação foi monitorada, mantida a -245 °C durante cerca de 5 minutos (solução se torna marrom) e resfriada em temperatura ambiente quando então a 4-hidroxiquinolina desejada precipitou da solução. O sólido marrom foi filtrado e lavado várias vezes com éter dietíiico para dar quinolina E8 como um sólido amarelo-marrom após secagem (1,10 g, 83%). ¹H-RMN (CHCL, 400 MHz) 8,30, is, br, 1 H), 8,06 (s, 1 H), 7,26 (s, 1 H), 6,93

Exemplo 3F

Síntese de 2-carbometóxi-4-hidróxi-7-metóxi-6-metil quinolina (F4):

F1

Pd/C, 10%

EtOH

F2

A uma pasta fluida de 2-metil-5-nitroanisol F1 (1,54 g; 9,21 mmoles) em etanol absoluto (15 mL) foi adicionado 10% de catalisador Pd/C (249 mg). A pasta fluida foi hidrogenada sob um balão cheio com hidrogênio a pressão atmosférica e temperatura ambiente durante 6,5 horas. A mistura de reação foi filtrada através de um filtro Millex de 0,45 mícron e evaporada até secura para prover 4-metil-m-anisidina F2 (1,22 g; 8,39 mmoles; 97% de rendimento).

Etapa B

			CO,Me
		0	1 -
		II .	MfeO.C ·'
H.N. -.. ‘ li	,o. í	.<<< 'Ό	MeOH _ hn . -. Ό
1'	η	li Ί
		1 o	heat II
		A3	·' **
F2			F3

heat = calor

Dicarboxilato de dimetil acetileno A3 (1,1 mL, 8,95 mmoles) foi adicionado em gotas a uma solução de 4-metil-m-anisidina F2 (1,22 g, 8,89 mmoles.) em MeOH (20 mL). Cuidado a reação é exotérmica. A mistura foi aquecida a um refluxo suave durante 4 horas, resfriada e concentrada sob vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea em sílica-gel com hexano: EtOAc (92.5: 7,5) para prover, após evaporação das frações puras, o aduto diéster F3 (1,8 g; 6,44 mmoles; 73%. de rendimento).

Etapa Cdiphenvl ether

F3

240-260^cC

T

ÜH

F4

Legenda - éter difenílico

O diéster F3 (1,3 g, 6,44 mmoles) foi dissolvido em éter difenílico (5 mL) e a mistura de reação colocado em um banho de areia preaquecido a uma temperatura de banho de 350 - 400°C. Uma vez atingida a temperatura interna de 240^c'C da mistura de reação, uma contagem de cinco minutos foi começada antes do banho ser removido e a reação deixada resfriar em

temperatura ambiente durante a noite. O sólido formou no resfriamento que foi diluído com éter, filtrado e seco para dar um sólido marrom (0,97 g bruto) ambos contendo regioisomeros em proporções quase iguais. O rnateriai bruto foi triturado com MeOH e EtOAc, filtrado e seco para prover o regioisômero correto do produto metilquinolina F4 como um sólido amarelo (245 mg, 15% de rendimento). Homogeneidade por HPLC· (TFA) íõ· 220 nm: 90%..

Exemplo 3G

Síntese de 2-carbometóxi-4-hidróxi-[1,31 dioxol [4,5-01 quinolina (G5): Etapa A r~'J /—ô I.

C'. Á -CüôH O A Jk .o. >í —’ t;.T í r

Gí G2

Uma solução de refluxo de ácido 2,3-metilenodioxibenzóico comercialmente disponível G1 (435 mg; 2,92 mmoles) em 1,4-dioxano (8,0 mL) e t-butanol (2,5 mL) foi adicionado TEA (430 pL; 3,08 mmoles) e difenilfosforil azida (DPPA, 630 pL; 2,92 mmoles) e refluxado durante 10 horas. A mistura foi evaporada, diluída com clorofórmio, lavada com 5%. de ácido cítrico (3x), água, bicarbonato de sódio saturado e salmoura, seca (MgSOj), filtrada e evaporada para dar o produto bruto. Purificação de coluna instantânea em sílica-gel com hexano: EtOAc (75: 25) provido o composto Boc-amino puro G2 (257 mg; 37%).

Etapa B /~~O /“Ό

O, \ ,N A. JJH-.

lij ?, Γ O

G3

G2

O material de partida Boc G2 (257 mg; 1,08 mmo!) foi dissolvido em 4M de HCI/dioxano (5,0 mL) e agitado em temperatura ambiente durante uma hora. O solvente foi evaporado e o resíduo diluído com bicarbonato de sódio saturado (alguns mL) e 1 M de NaOH (1 niL), extraído com EtOAc (2x), seco (MgSOj), filtrado e evaporado até secura para prover 2,3-metileno dioxianilina bruto G3 (158 mg; 106%).

Etapa C

G3 °Ύ ,o o

, '0

MeO.C

A3 heat

Legenda: calor

Dicarboxdato de dimetil acetileno A3 (130 pL, 1,06 mmol) foi adicionado em gotas a uma solução de 2,3-metileno dioxianilina bruto G3 (148 mg, 1,08 mmol) em MeOH (2,5 mL). Cuidado a reação é exotérmica. A mistura foi aquecida a refluxo suave durante 3 horas, resfriada e concentrada sob vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea em sílica-gel com hexano: EtOAc (9: 1) para prover, após mg; 0,662 mmol;

evaporação das frações puras, o aduto diéster G4 % de rendimento).

(185

Etapa D

mg, 0,645 mL) e a mistura de reação colocada mmol) foi dissolvido em um banho em éter de areia

Legenda: éter difenílico

O diéster G4 (1t difenílico (2,5 preaquecido a uma temperatura de banho de 350 - 400^cC. Uma vez atingida uma temperatura interna de 250°C da mistura de reaçãoíobservar evolução de MeoH a 220 - 230°C) uma contagem de seis minutos foi começada antes do banho (ponto de temperatura final: 262°C) fc-i removido e a reação deixada resfriar em temperatura ambiente. Um sólido se formou quando do resfriamento que foi diluído com éter, filtrado e seco para dar o dioxiquinolina bruto G5 (125 mg; 78%). Purificação não foi requerida e o material foi usado como nas seguintes reações.

EM (Μ + H) 246, e (M - H) 248,1.

Homogeneidade por HPLC (TFA) iõj 220 nm: 38%.

Exemplo 3H

Síntese de 2-carbometôxi-4-hidróxi-8.9-dihidro-furo [2,3-hl guinolina (H7):

Etapa A

Η1 H2

Trietilamina (5,0 rnL, 35,6 mmoles) foi adicionada a um frasco contendo a amina H1 (2,0 mL, 17,3 mmoles) e diclorometano (100 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio. Os teores foram resfriados em um banho de gelo e cloreto de trimetilacetil (3,3 mL, 26,7 mmoles) foi adicionado em gotas. A reação foi deixada para aquecer lentamente em temperatura ambiente e agitada durante 14 horas nesta temperatura. A reação foi resfriada bruscamente com uma solução de NaHCO?. saturada e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas, filtradas e concentradas seguido por cromatografia de coluna instantânea (4:1 a 1:1 hexano:EtOAc) para dar o produto desejado H2 como um sólido esbranquiçado (3,7 g, 97% de rendimento).

Etapa d

OH I

n-BuLi (15,9 mL, 1,6M, 25,5 mmoles) foi adicionado em gotas a um frasco seco com chama contendo uma solução da amida de partida H2 (1.6 g, 7,72 mmoles) em THF a 0°C sob argônio. Solução ficou de uma cor amarelo/laranja pálido quando n-BuLi foi adicionado. A solução foi deixada para aquecer lentamente em temperatura ambiente e agitada durante 24 horas. A solução foi novamente resfriada a 0°G e óxido de etileno (0,46 mL, 9,26 mmoles) foi adicionado em gotas. A solução foi deixada para aquecer lentamente a 23 °C, resfriada bruscamente com uma solução de NaHCOs saturada, extraída com EtOAc, seca, filtrada e concentrada seguida por cromatografia de coluna instantânea (4:1 to 1:1 hexano:acetato de etila) para

obter o produto desejado H3 (1,94 g, 5,01 mmoles, 65% de rendimento) Homogeneidade por HPLC (TFA) iã; 220 nm: 99%.

Etapa C

OH

H4

Uma solução de BBr₃ (26 mL, 1,0 M, 26,0 mmoles) foi adicionada em gotas para éter metílico H3 em CH-CL a 0°C. A solução foi aquecida lentamente a 23 °C e agitada durante 14 horas em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente com uma solução de 1M de NaOH e extraída com EtOAc e CH₂CI₂ para obter uma mistura do produto desejado H4 e algum diol não ciclizado. Homogeneidade por HPLC (TFA) 220 nm: 99%.

Etapa D

H5

H4

HCi (4,0 mL, 6,0M) foi adicionado a uma solução de amida H4 (0,27 g, 1,22 mmol) em MeOH (4,0 mL) a 23°C. A reação foi então aquecida a refluxo durante 48 horas, NaHCO₃ (saturado, aquoso) foi adicionado e foi extraído com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas, filtradas e concentradas para obter a anilina desejada H5 que foi de pureza suficiente para empregar em outras transformações.

A3

H5

H6

Dicarboxilato de dimetil acetileno A3 (0,16 mL, 1,33 mmol) foi adicionado à solução de anilina H5 (0.18 g, 1,33 mmol) em MeOH (3,0 mL) em temperatura ambiente. A solução foi aquecida a refluxo durante 3 horas, resfriada em temperatura ambiente e uma solução de NaCl saturado foi adicionado. A mistura foi extraída com EtOAc (3<) e as camadas orgânicas combinadas foram então secas, filtradas e concentradas seguido por purificação por cromatografia de coluna instantânea (9:1 a 1:1 hecEtOAc) para dar a olefiria desejada Hõ (0,29 g, 73%.).

Etapa F

CO₂Me

H6

OH

H7

Um frasee- contendo olefina de partida H6 (0,29 g, 1,04 mmol) em éter difenílico (2,0 mL) foi abaixado em um banho de areia preaquecido (350°C). Quando a temperatura interna da reação alcançou 225 °C, o frasco foi aquecido durante 6 - 7 minutos durante este tempo a temperatura interna se elevou a 240^c'C. A mistura de reação foi então removida do banho de areia e deixada resfriar lentamente em temperatura ambiente. Um precipitado se formou quando da permanência. Éter dietílico foi adicionado e a solução foi filtrada e enxaguada com éter dietílico adicional para dar um sólido marrom claro H7 (0,20 g, 77%). EM 246,0 (MH) ⁺.

Exemplo 3J

Síntese de 2-c;arbométóxi-4-hidróxi-8-metiltioquinolina (J3):

Etapa A

/O 43

ÇO,Me

M<?O..C. U /

- γ S MeÜH hn. ...L, heat

J2 ’

Dic arboxilato de dimetil acetileno A3 (5,21 mL, 35,91 mrnoies) foi adicionado em gotas a uma solução de 2-metilmercaptoanilina J1 (5,0 g,

35,91 mmoles) em MeOH (100 mL). Cuidado a reação é exotérmica.

A mistura foi aquecida a um refiuxo suave durante duas horas, resfriada e concentrada sob vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea com hexano: EtOAc (90:10) para prover, após evaporação das frações puras, o aduto dièster J2 (10,53 g; 37,43 mmol; 99% de rendimento).

Homogeneidade por HPLC (TFA) tã* 220 nm: 35%

CO,Me

MeO„C Ί

J2 diphenyl ether

240-260°C

240-260°C diphenyl ether '^xq

°^H J3

Legenda: éter difenilica

Etapa B

O diéster J2 (10,53 g. 37,43 mmoles) foi dissolvido em éter difenilico (35 mL) e a mistura cie reação colocado em um banho de areia preaquecido em uma temperatura de banho de 350 - 400°G. Uma vez a mistura de reação atingiu uma temperatura interna de 245 C. a contagem de seis minutos foi começada antes do banho ser removido e a reação deixada resfriar em temperatura ambiente. Um precipitado se formou, que foi colocado em pasta fluida em éter, filtrado e lavado novamente com éter para dar o produto guinolina C3-SMe J3 (6,15 g; 66%). EM (Μ + H) 250 Homogeneidade por HPLC (TFA) (â; 220 nm: 99%.

Exemplo 3K

Síntese de 7-terc-butilóxi-2-carbometóxi-4-hidróxi-8-mstilquinoÍina (K6) Etapa 1:

Kl

NH

CyclohexHn, THF (2:1)

Legenda: ciclohexano

A uma solução de 2-metil-3-nitrofenc>l K1 (1,1 g; 7,13 mmoles) em THF (13 mL) foi adicionado ciclohexano (27 mL; uma solução foi mantida). Tricioroacetimidato de ferobutila K2 (5,36 mL; 23,73 mmoles) foi adicionado seguido por uma quantidade catalítica de eterato de trifluoreto de bc>ro (143,3 μί: 1,14 mmol) e a reação foi agitada em temperatura ambiente durante 15 horas. A reação foi incompleta (por HPLC analítico) e uma quantidade adicional de tricioroacetimidato de terc-butila (1,4 mL; 7,51 mmoles) foi adicionada (reação permanece em solução). A reação foi

completa após agitação em temperatura ambiente durante 5 horas. Bicarbonatc· de sódio sólido foi adicionado, e a mistura foi filtrada, enxaguada com dicíorornetano e evaporada até secura para prover um sólido branco. O sólido foi triturado com dicíorornetano, o sólido branco filtrado e descartado (= tricloroacetimida). O filtrado foi concentrado e carregado sobre uma coluna instantânea para purificação (hexano: EtOAc 9: 1) para prover o 2-metil-3-ter.>butoxinitrobenzeno puro K3 (1,17 g; 78%). Homogeneidade por HPLC (TFA) <ôi 220 nm: 96%

Etapa 2:

Γι i .3: . . Λ' ,” li J ó i ?.

EtÜH + Pd/C, 10%

A uma solução de 2-metil-3-ferc-butoxinitrobenzeno K3 (1,31 g;

6,26 mmoles) em etanol absoluto (30 mL) foi adicionado 10%. de catalisador Pd/C (130 mg). A solução foi hidrogenada sob um balão carregado com hidrogênio a pressão atmosférica e temperatura ambiente durante 63 horas.

A mistura de reação foi filtrada através de um tampão Celite, enxaguada com EtOH absoluto e evaporada até secura para prover 2-metil-3-fercbutoxianiiina K4 (1,1 g; 6,14 mmoles; 93%. de rendimento). EM 180 (M+H) *. Homogeneidade por HPLC (TFA) 220 nm: 96%,

Legenda, calor

Dicarboxilato de dimetil acetileno A3 (749 pL. 5,97 mmoles) foi adicionado em gotas a uma solução de 2-metil-3-terc-butoxianilina K4 (1,07, 5,97 mmoles) em MeOH (14 mL). A mistura foi aquecida a um refluxo suave durante duas horas, resfriada e concentrada sob vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea com hexano: EtOAc (95:

5) para prover, após evaporação das frações puras, o aduto diéster (1,13 g;

3,52 mmoles; 59% de rendimento). EM 320,0 (M-H) ’ 322,1 (M+H) Homogeneidade por HPLC’· (TFA) iõ> 220 nm: 92’%.

Etapa 4:

	Cn.Me
MeO,C. .				Γϊ 'CA
‘ I HN	I . Jx .0		diphenyl ether	.-N AL ll Ί Ί U
		r
		240-260°C		U J -I i Y °H F.6
	h.5

Legenda: éter difenílico

O diéster K5 (1,13 g, 3,52 mmoles) foi dissolvido em éter difenílico (3,0 mL) e a mistura de reação colocado em um banho de areia preaquecido a uma temperatura de banho de 400 - 440°C. Uma vez atingida temperatura interna de 230°C da mistura de reação (observar evolução de MeOH a 220°C) uma contagem de seis minutos começou antes do banho (ponto de temperatura final: 242^c’C) foi removido e a reação deixada para resfriar em temperatura ambiente. No se formou sólido quando do resfriamento, assim a mistura bruta foi purificada de modo instantâneo com hexano: EtOAc (3: 2 para remover o éter difenílico, então, 4: 6 para eluição completa do produto) para prover o C7-O-terc-Bu,C3-Me quinolina K6 corno um solido bege (838 mg; 62%). EM 283,0 (M-H) ’ 290,0 (M+H) ⁺. Homogeneidade por HPLC (TFAj tô? 220 nm: 99%.

Esta porção de quinolina foi usada para a síntese de compostos 1032 e 1033 da tabela 1. Para a síntese de compostos 1034, 1035, 1057 e 1058, também da tabela 1, quinolina K6 foi usada. Conversão do grupo C7terc-butil-éter para um grupo hidroxila foi feita por tratamento do composto final com 50% de TFA em dicicrometano durante 30 minutos a 0°C então durante 30 minutos em temperatura ambiente, evaporado até secura, diluído com água e liofilizado.

Exemplo 3L

Síntese de 2-carbometóxi-4-hidróxi-8-metoxiqiiinolina (L3):

Etapa A

r Λ I lí :)	O	MeO.CX r γ HN. 4. ' ll Ί
+	Jl o <;' 0 MeOH Ύ'
		,.o ao heaí	II J
L1			L2

Dicarboxilato de dimetil acetileno A3 (5,5 mL, 44,74 mmoles) foi adicionado em gotas a uma solução de o-anisidina L1 (5,0 mL, 44,33 mmoles) em MeOH (100 mL). Cuidado a reação é exotérmica. A mistura foi aquecida a um refluxo suave durante 5 horas, resfriada e concentrada sob vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea com hexano: EtOAc (95: 5 a 90:10) para prover, após evaporação das frações puras, o adutc· diéster L2 (10 g; 37,70 mmoles; 35% de rendimento).

Homogeneidade por HPLC (TFA) fã; 220 nm: 82%.,

Legenda: éter difenílico

Piaria R ——r··^ —

O diéster L2 (10 g. 37,70 mmoles) foi dissolvido em éter difenílico (15 mL) e a mistura de reação colocado em um banho de areia preaguecido a uma temperatura de banho de 350 - 400°C. Uma vez atingida a temperatura interna de 240’C da mistura de reação, a contagem de seis minutos foi começada antes do banho ser removido e a reação deixada resfriar em temperatura ambiente. Não se formou sólido quando do resfriamento, assim, a mistura bruta foi purificada por coluna instantânea com hexano: EtOAc (6: 4 a 5: 5 para remover impurezas, então, 2: 3 para eluição completa) para dar o produto Co-OMe quinolina L3 (4,56 g; 52 %). EM (Μ - H) ’; 231,9 Homogeneidade por HPLC (TFA) iã> 220 nm: 99%.

Exemplo 4

Preparação de Dipeptídeos

Síntese d·- dipeptídeo 1

OH

P2 +

P1

OH s

P2-P1

Uma mistura de Boc-hidroxiprolina P2 (50,0 g, 216 mmoles), éster vinil-ACCA metílico PI (42,25 g, 238 mmoles, 1,1 equiv.), TBTU (76,36 g, 238 mmoles, 1,1 equiv.) e DIPEA (113 mL, 649 mmoles, 3 equiv.) em DMF (800 mL) foi agitada em temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. Após 3,5 h, o solvente foi evaporado e o resíduo extraído com EtOAc. O extrato foi lavado com ácido clorídrico (10%), bicarbonato de sódio saturado e salmoura. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada para dar um óleo. Após secagem durante a noite sob vácuo elevado, dipeptídeo 1 foi obtido como uma espuma amarela (72,U g, 94'%, pureza >95*% por HPLC).

Preparação de dipeptídeo 3 o

r»

Dipeptídeo 1 (72,0 g, 203 mmoles), trifenilfosfina (63,94 g, 243,8 mmoles, 1,2 equiv.) e ácido 4-nitrobenzóico (41,08 g, 245,3 mmoles, 1,2 equiv) foram dissolvidos em THF seco (1,4 L). A solução agitada foi resfriada a 0°C sob uma atmosfera de nitrogênio. Azodicarboxilato de dietil (38,4 mL,

244 mmoles, 1,2 equiv.) foi então adicionado em gotas sobre 45 minutos e a reação deixada para aquecer em temperatura ambiente. Após 4 horas, o solvente foi evaporado. O resíduo foi dividido em quatro porções. Cada um destes foi purificado por cromatografia sobre sílica-gel fina (10 - 40 p.m mesh, 12 cm de diâmetro de coluna, comprimento da coluna 16 cm) usando um gradiente de 2:1 he?<ano/EtOAc a 1:1 hexano/EtOAc para EtOAc puro. Deste modo, o éster Eoc-dipeptídeo 2 foi obtido corno um sólido branco amorfo após evaporação dos solventes e secagem dos resíduos sob vácuo elevado a 70*0 durante uma hora (103,1 g, quantitativo). Uma solução de 4N de cloreto de hidrogênio em dioxano foi adicionado no éster de Bocdipeptídeo 2 (108 g, 243 mmoles) resultando em uma solução incolor. A solução foi agitada ern temperatura ambiente durante uma hora. O solvente foi evaporado e o resíduo colocado sob vácuo elevado durante 3 horas dando o sal cloridrato de composto 3 como um sólido amorfo. O sólido foi usado como tal.

Exemplo 5

Preparação de Tripeptídeos

Síntese de íripeptídeo 6a

Carbamato 4b (6,15 g, 22,5 mmoles) e TBTU (7,72 g, 24,7 mmoles) foram colocados em pasta fluida em DCM e a pasta fluida foi agitada rapidamente. DIPEA (3,92 mL, 22,5 mmoles) foi adicionado em temperatura ambiente e após 10 minutos, a reação foi quase homogênea.

mL) contendo DIPEA (4,11 mL, 23,62 mmoles) foi então despejada na reação. A solução amarela resultante foi deixada para agitar durante 14 horas. O solvente foi então evaporado dando um xarope amarelo que foi

mL), Nas-COs saturado (300 mL) e salmoura (150 mL). Os extratos combinados foram secos sobre MgSOa e evaporados para dar o íripeptídeo

6a como uma espuma arnareio-pálida (15,68 g, quantitativo).

Síntese de tripeptíd

O tripeptídeo 6a (15,63 g) foi dissolvido em THF (200 mL) e água (30 mL) foi adicionada. A solução resultante foi resfriada a 0°C e uma solução de hidróxido de lítio monohidratado (1,13 g, 28,12 mmoles) foi adicionada sobre 3 minutos com agitação vigorosa. Após 3 horas a 0°C·, o excesso de base foi neutralizado com 1N de HCI (pH final cerca de 6) e o THF evaporado, resultando em uma pasta fluida aquosa (goma amarela). A mistura foi extraída com EtOAc (2x 2ÜC) mL) e lavada com NaHCO3 saturado (2x 300 mL). Os extratos combinados foram secos sobre MgSO₄ e evaporados para dar uma espuma amarela pálida. Cromatografia instantânea da espuma sobre sílica-gel usando EtOAc como eluente deu 7a como um sódio amorfo branco (9,77 g, 91%).

Síntese de tripeptídeo 6b

A ciclopentiluréia-Tbg 5 (2,21 g, 9,10 mmoles) e TBTU (3,12 g, 10,0 mmoles) foram dissoividos/colocados em pasta fluida em diclorometano anidro (40 mL) e DIPEA (1 equiv.) foi adicionado. A reação foi agitada em temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio até a solução se tornar quase homogênea (cerca de 10 min). Uma solução de dipeptídeo P1P2 (4,20 g, 9,56 mmoles) em diclorometano anidro (35 mL contendo 1 DIPEA equiv.) foi então adicionado na reação e a solução amarela resultante deixada para agitar durante 14 horas depois a reação foi tornada básica pela adição de DIPEA (cerca de 1,5 mL). O solvente foi evaporado dando um xarope amarelo gue foi extraído com acetato de etil (150 + 50 mL) e lavado

com 0,1N de HCI (150 mL), água (100 mL, emulsão rompida com salmoura), NasCOj saturado (150 mL) e salmoura (100 mL). Os extratos combinados foram então secos sobre MgSCh e evaporados para um sólido amarelopálido 6b (6,21 g, 9570 de pureza HPLC).

Síntese de trípentídeo 7b o₃h-^_W—,'^j

O OH

6b 7b

O éster pNBz bruto 6b preparado acima foi dissolvido em THF (90 mL) e metanol (40 mL) adicionado. 1,0N de uma solução de hidróxido de sódio (12,0 mL; 12,0 mmoles) foi então adicionado com agitação vigorosa sobre 10 minutos (funil de gotejamento) e a hidrólise deixada proceder em temperatura ambiente. Após duas horas, o excesso de base foi neutralizado pela adição cuidadosa de 1 N de HCI (cerca de 1,5 mL, adicionado em gotas até a cor amarela esmaecer; pH final cerca de 6). Os solventes orgânicos foram evaporados e o resíduo aquoso foi extraído com acetato de etil (150 + 50 mL) e lavado com bicarbonato de sódio saturado (3x 150 mL) e salmoura (100 mL). Os extratos combinados foram secos sobre ívigSO.i e evaporados para um amarelo-pálido, sólido amorfo que foi seco sob vácuo elevado 7b (4,11 g, 37% de P3-uréia, 93% de pureza HPLC).

Síntese de derivado Brosilato 7aBrs

7a Brs

A uma solução resfriada (0*C) de tripeplídeo (10 g; 20,85 mmoles), cloreto de brosila (11,19 q; 43,79 mmoles) e dimetilaminopiridina (254 mg; 2,09 mmoles) dissolvido em diclorometano (75 mL), trietilamina (10,2 mL; 72,98 mmoles) foi adicionado em gotas. A solução amarela foi agitada uma hora a 0°C, então foi lentamente deixada para aquecer em temperatura ambiente e agitada 60 horas em temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada até secura, diluída com EtOAc, lavada com uma solução de bicarbonato de sódio saturado, água e salmoura, seca (MgSOd), filtrada e evaporada até secura para obter o produto bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantânea com he/.ano: EtOAc; 60: 40 a 50: 50 para dar o produto puro 7aBrs corno uma espuma branca (11,66 g; 80%.).

EM 698 (M+H)⁺; 700,2 (MH+2) ⁺. Homogeneidade por HPLC (TFA) igj 220 nm: 99%.

Exemplo 6

Introdução de porções guinolina em tripeptídeos:

Síntese de Intermediário 10a via deslocamento de brosilato:

7a Brs 10a

O brosilato 7aBrs (0,5 g; 0,71 mmol), bromoquinolina B6 (234 mg; 0,75 mmol) e carbonato de césio triturado (56 mg; 0,78 mmol) foram todos dissolvidos em l-metil-2-pirrolidinona (7,6 mL), e a solução foi aquecida a 70°C e agitada durante 7 horas. A solução foi subsequentemente resfriada em temperatura ambiente e trabalhada. A mistura de reação foi despejada em EtOAc, lavada com H₂O (1X), NaHCO₃ (saturado; 2X), salmoura (5X), seca, filtrada e concentrada para dar o produto bruto (0,565 g) como um sólido esbranquiçado. Purificação por cromatografia de coluna instantânea (1:30 sílica-gel; 7:3 EtOAc/hexano) deu o produto puro 10a (77%; 0,429 g) como um sólido branco.

EM 775,2 (M+2H) *. Homogeneidade por HPLC (TFA) <çz> 220 nm: 96%.

Síntese de Intermediário 10b via reação de Mitsunobu:

Para o tripeptídeo 7a (i ,55 g; 3,23 mmoles) dissolvido em THF (30 mL), o hidrox.iquinolina A5 (1,08 g; 4,37 mmoles) foi adicionado seguido por 0,5 m de éster trifenilfosfina silílico em THF (13 mL; 6,46 mmoles). Para a pasta fluida amarela, foi adicionado em gotas o reagente DIAD (1,27 mL;

6,46 mmoles) e agitada em temperatura ambiente para duas horas, trabalhado por adição em gotas de uma solução de 1M de TBAF/THF (11,3 mL; 11,31 mmoles) e agitada em temperatura ambiente durante a noite. Por HPLC analítico, é evidente que a divagem do óxido fosfina formou um subproduto (a uma porção solúvel em água) é completa. A reação foi diluída com EtOAc, lavada com uma solução de bicarbonato de sódio saturado (2x), água (2x), 1N de NaOH frio (2x; remover excesso de quinolina), água (2:·:) e salmoura (1x), seca (MgSOt), filtrada e evaporada para obter um sólido bege. O material bruto foi purificado com coluna instantânea com hexano: EtOAc (3: 2) para obter o produto 1Gb como um sólido marfim (1,92 g; 84%). EM 707,4 (M-H) ’ 709,4 (M+H) 3 Homogeneidade por HPLC (TFA) cél· 220 nm: 94%..

Exempio 7

Compound 1007

Legenda: composto

Etapa 1: Monohidrólise seletiva de éster 10b:

I ⁰

MeO^ Λ N

Meü

Z .OMe

Tripeptídeo 10b (149 mg, 0,210 mmol), em 5 mL de uma 1:1 mistura de THF-MeOH, foi resfriada a 0°C para a adição de uma solução de 1N de NaOH aquoso (0,24 mL, 0,240 mmol). A solução resultante foi agitada 15 minutos a 0°C, 1,5 h em temperatura ambiente e encontrada para ser incompleta por HPLC analítico. 1N de NaOH adicional (0,05 mL. 0,05 mmol) foi adicionado e a reação agitada durante uma hora adicional. A mistura foi resfriada bruscamente com 1 M de HCI, evaporada até quase secura, diluída com água, congelada e liofilizada para prover o ácido 11b (material bruto usado na próxima etapa; considerando 0,210 mmol).

Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 39%. Etapa 2: Síntese de diazocetona 12b:

J ⁰

I

H í| 1 “

H ΠΜ_β

- η

Meu

11b

Sal de sódio 11b (considerando 0,210 mmol) foi dissolvido em THF (5 mL), trietilamina (75 μί; 0,533 mmol) foi adicionado e a soiução resfriada a 0*C. Isobutilcloroformiato (45 μ)_; 0,346 mmol) foi adicionado em gotas e a pasta fluida branca foi agitada a 0°C durante 1 hora, seguida pela adição de uma solução de diazometano (1M em éter dietílico; 1 mL; 0,999 mmol). A mistura de reação foi agitada 15 minutos a 0°C, 1 hora em temperatura ambiente e evaporada para prover uma pasta fluida espessa. Esta pasta fluida foi dissolvida em EtOAc, lavada com NaHCOj, saturado (2x), salmoura (1x), seca (MgSO₄), filtrada e evaporada para dar o produto

diazocetona bruto 12b (145 mg, 95%).

EM (eletrospray): 717,4 (M-H) * 719,4 (M+H) Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃GN: H₂O): 85%.

Etapa 3: Síntese de bromocetona 13b:

A 0^c'C, a uma soiução de diazocetona 12b (145 mg, 0,201 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado em gotas em uma solução de HBr (48% aq., 0.1 mL) e a mistura foi agitada durante 1,25 hora. A mistura foi resfriada bruscamente com uma solução de NaHCOs saturado, então o THF foi evaporado. O resíduo foi diluído com EtOAc, lavado com uma solução de NaHCOj. saturado (2-:), salmoura (1x), seco (MgSO.<), filtrado e evaporado para provera bromocetona bruta 13b (139 mg, 89%.).

EM (eletrospray): 773,3 (MH+2) ⁺ 771,3 (M+H) ⁺ 769 (M-H) ’.

Etapa 4: Síntese de trioeptídeo de tiazolila 14b:

α-brornocetona 13b (49 mg, 0,0635 mmoi) e N-neopentiltiouréia 8a (12 mg; 0,0688 mmol) foram dissolvidos em isopropanol (3 mL) e a soiução amarela foi aquecida a 75°C durante uma hora. A solução foi deixada para resfriar em temperatura ambiente e evaporada até secura. O material bruto 14b foi usado na próxima etapa (considerando 0,0635 mmol).

EM (eletrospray): 345,5 (M-H) ’ 347,5 (M+H)⁺.

Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 69% (contém 16% de tiouréia de partida).

3&

Etapa 5: Hidrólise de éster 14b:

A

14b

Compound 1007

Legenda: composto 1007

A uma solução de éster metílico 14b (53 mg, 0,0626 mrnol), em uma mistura de 3,5 mL de THF:H₂O (2,5:1), foi adicionado LiOH sólido monohidratado (27 mg, 0,643 mmol). 0,5 mL de MeOH foi requerido para obter uma solução homogênea. A reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A solução orgânica foi resfriada bruscamente com ácido acético e concentrada para prover uma pasta fluida branca indefinida. O material bruto foi purificado por HPLC preparatório (YMC Combiscreen ODS-AQ, 50 x 20 mm ID S-5 mícron,120 A; λ = 220 nm) usando um gradiente linear e 0,06% de TFA CH₃CN /H₂O. As frações puras foram combinadas, concentradas e liofilizadas para dar o produto 1007 como o sai TF (21 mg; 40% de rendimento).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): cerca de 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmero principal: δ 12,31 (br s, 1 H), 8,56 (s, 1 H), 8,20 - 3.08 (m, 1 H), 3,05 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,46 (br s, 1 H), 7,30 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,99 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 5,79 - 5,66 (m, 1 H), 5,50 - 5,40 (m, 1 H), 5,23 5,14 (m, 1 H), 5,10 - 5,02 (m, 1 H), 4,70 - 4,61 (m, 1 H), 4,43 - 4,33 (m, 2 H),

1,93 (m, 1 H), 1,30

-1,22 (m, 10 H), 1,04 (m, 9 H), 0,97 (s, 9 H).

EM (eietrospray): 831,5 (M-H) ’ 333,5 (M+H) ⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%.

Exemplo 8

Síntese de Composto 5005

Compound 5005

Compound = Composto

Etapa 1:

10c de brosilato 7b Brs (1,89 g, 2,71 mmoles) e mmoles) em 1-metil-2-pirrolidinona (26 mL) foi 2,98 mmoles) em temperatura horas, lavada

1M de

A uma solução quinolina F4 (670 mg, 2,71 adicionado carbonato de césio (971 mg, ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 12 resfriada em temperatura ambiente e diluída com EtOAc (100 mL), com água (2x 50 mL), uma solução de NaHCO₃ saturada contendo

NaOH (i/5 do volume) (50 mL) e salmoura (50 mL). A fase orgânica foi seca sobre MgSO₄, filtrada e concentrada para dar o produto bruto como um óleo amarelo, que foi purificado por cromatografia instantânea sobre coluna de sílica-gel (250 - 400 mesh), eluindo com EtOAc/hexanos (13:7), para dar 1,27 g de um sólido amarelo-pálido (contaminado com 20% de quinolina de partida). O sólido foi dissolvido em THF (15 mL) e a pasta fluida foi tratada com CH?N? (5 mL) em temperatura ambiente durante 12 horas, então concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea sobre coluna de sílica-gel (250 - 400 mesh) eluindo com EtOAc/CHCI₃ (12:6) para dar 0,9 g de 10c. puro corno uma espuma amarela pálida (48%).

Etapa 2:

A conversão do grupo 2-carbometóxi de 10c no grupo 2-(1-oxo2-bromc») etila de 13c foi feita usando a seqüência de reação descrita no exemplo 7, etapas 1,2 e 3.

Etapa 3:

Reação com derivado tiouréia e hidrólise final:

HN^\.

13c Compound 5005

Compound = Composto

A uma solução de 13c (50 mg, 0,065 mmol) em isopropanol (3 mL) foi adicionada isopropiltiouréia 8g (10 mg, 0,685 mmol). A mistura de reação foi agitada a 7O'^:'C durante 45 minutos. HPLC revelou consumo completo do material de partida. Resfriada em temperatura ambiente e diluída com THF (2 mL) e 1,0 N de uma solução de hidróxido de sódio (0,325 mL). Agitada em temperatura ambiente durante 12 horas, a mistura de reação foi concentrada até sec ura. O resíduo foi dissolvido em DMSO (2 mL) e a solução foi injetada sobre uma coluna de HPLC Combi-Prep. As frações puras foram reunidas e liofiiizadas para dar 26,1 mg de composto 5005 como um sólido amarelo amorfo (sal trifluoroacetato) (50% de rendimento). iH-RMN (400 MHz, DMSO-d₆): δ 3,60 e 8,82 (dois s, 1 H), 8,01 - 8,11 (m, 1 H), 7,98 (s, 1 H), 7,36 (s, 1 H), 7,72 e 7,75 (dois s, 1 H), 5,90 -6,03 (m, 1 H), 5,80 - 5,90 (d, J = 16 Hz, 1 H), 5,62 - 5,79 (m, 2 H), 5,15 - 5,26 (m, 1 H), 4,96 - 5,13 (m, 1 H), 4,44 - 4,61 (m, 2 H), 4,16 - 4,23 (m, 2 H), 4,08 - 4,13 (m, 2 H), 3,98 - 4,01 (dois s, 6 H), 3,27 - 3,38 (m, 1 H), 2,53 - 2,70 ím, 1 H), 2,32 e 2,36 (dois s, 3 H), 1,96 - 2,09 (q, J = 9 Hz, 17 Hz, 1 H), 1,31 - 1,67 (m, 7 H), 1,23 - 1,30 (m, 7 H), 1,02 -1,13 (m, 1 H), 0,37 e 0,94 (dois s, 9 H).

Exemplo 9

Síntese de Composto 4004

Compound = Composto

Etapa 1:

Br

ο

de brosilato 7a Brs (0,14 g, 0,20 mmol) e F4

1-metil-2-pirrolidinona (4 mL) foi adicionado g, 0,26 mmol). A mistura foi aquecida a 70^cC e

A uma solução (0,06 g, 0,24 mmol) em carbonato de césio (0,08 agitada durante 7 horas. A mistura de reação foi resfriada, despejada em EtOAc (30 mL), lavada com H₂O (2X 50 mL), NaHCO₃ saturado (2X 50 mL), e salmoura (3X 50 mL). A fase orgânica foi seca, filtrada e concentrada em um óleo amarelo. Este material foi purificado por cromatografia instantânea em uma coluna de sílica-gel (250 - 400 mesh) eluindo com EtOAc/hexano (2:8), para dar 56 mg (40% de rendimento) do produto 10d como um semisólido amarelo-pálido.

Etapa 2:

A conversão do grupo 2-carbometóxi de 10d no grupo 2-(1-oxo2-bromo) etila de 13d foi feita usando a seqüência de reação descrita no Exemplo 7, etapas 1, 2 e 3.

Etapa 3:

Reação com derivado tiouréia e hidrólise final:

13c!

Compound 4094

A uma solução de bromocetona 13d (34 mg, 0,045 mmol) em isopropanol (2 mL) foi adicionado ciclopentiltiouréia 8d (8,4 mg, 0,06 mmol). A mistura de reação foi agitada a 70°C durante 45 minutos, então concentrada até secura e o resíduo foi dissolvido em uma mistura de THF (1,5 mL) e metanol (0,3 mL). Água (0,45 mL) foi adicionada lentamente nesta solução com agitação, seguida por LiOH (10,3 mg, 0,24 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 16 horas. HPLC revelou que a reação prosseguiu até acabar. A mistura de reação foi concentrada, o resíduo foi dissolvido em DMSO e a solução foi injetada em uma coluna de HPLC Combi-prep. As frações puras foram reunidas e liofilizadas para dar 16,5 mg (42% de rendimento) de composto 4004 como um sólido branco amorfo (sal de ácido trifluoroacético).

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de) (mistura de rotâmeros; 8:2): δ 8,59 e 8,71 (2 s,1 H), 3,13 (m, 2 H), 7,83 - 7,69 (m, 2 H), 7,1 (d, J = 8,2 Hz, 0,3 H), 6,46 (d, J = 3,2 Hz, 0,2 H), 5,76 - 5,67 (m, 2H), 5,21 e 5,17 (2 s, 1H), 5,05 (d, J = 11

2,53 (m, 1 H), 2,34 (s, 4 H), 2,07 - 1,98 (m, 3 H), 1,76 - 1,25 (m, 16 H), 0,95 e

0,37 (2s, 9 H).

Exemplo 10

Preparação de Dioeptídeos:

Síntese de Dipeptídeo 3:

I

Br

I

Brs

15a

A uma solução de brosilato 3 Brs (4,2 g, 7,32 mmoles) e a quinolina A5 (1,45 g, 5,86 mmoles) em 1-metil-2-pirrolidinona (25 mL) foi adicionado carbonato de césio (3,1 g, 9,5 mmoles). A mistura foi aquecida a 70°C durante 12 horas. A mistura de reação foi despejada em EtOAc (150 5 mL), lavada com H₂O (2X 150 mL), solução de NaHCO?. saturado (2X 150 mL) e salmoura (2X 150 mL). A fase orgânica foi separada, seca sobre Na-SO,·, filtrada e concentrada para dar o produto bruto como um óleo amarelo. O material foi purificado por cromatografia instantânea sobre coluna de sílica-gel (250 - 400 mesh) eluindo com 65% de EtOAc em hexano 10 para dar 15a (1,8 g, 42%) como um sólido branco.

Exemplo 11

Síntese de Composto 2015

F: = Bn R = H

E11-6

E11-7

OBn

C<

R = BccE11-3

F: = H: HCIE11-4 *— R = PhÜ(CC>)E11-5

A síntese foi feita de acordo com a seguinte seqüência:

[— < = C'Me E11-12 ·'- = OH Compound2015 +

r- F! = CH=O E11-1 ^l-*R = H:HCI ΕΓ1-2

Legenda: Composto 2015

E11-1: Cianureto de potássio (1,43 g, 22,0 mmoles) foi adicionado a uma solução agitada de metilciclopentanol (2,00 g, 20,0 mmoles) em ácido acético glacial (1,00 mL) resultando em uma pasta fluida espessa. Para isto foi adicionado, em gotas, ácido sulfúrico (3 mL, cuidado: exotérmico) a uma taxa em que a temperatura foi mantida a cerca de 30 35°C. Ácido acético adicional (1 mL) foi adicionado para facilitar agitação da pasta espessa. A mistura foi então aquecida a 55 - 6ü°C durante 30 minutos seguida por agitação em temperatura ambiente durante 16 horas. Água gelada (35 mL) foi então adicionada, a mistura extraída com éter etílico (2x 40 mL) e as fases orgânicas combinadas iavadas com 5% de NaHCO?. (5x 30 mL), secas sobre MgSCh e o solvente evaporado para dar um óleo marrom pálido (1,16 g). Ο pH das lavagens aquosas combinadas foi então elevado a pH 11 pela adição de K₂CO_?. sólido e os sólidos resultantes filtrados e lavados com éter etílico (3x 40 mL). O filtrado foi extraído com éter etílico (2.x 40 mL), os extratos combinados secos sobre MgSCh e o solvente evaporado para dar o produto adicional (0,355 g) que foi combinado com o óleo obtido acima (1,52 g, 60 %).

El 1-2: 5N de ácido clorídrico (8 mL) foi adicionado a uma solução de El 1-1 (1,50 g, 11,3 mmoles) em dioxano (8,0 mL) resultando em alguma precipitação. Etanol (4 mL) foi então adicionado e a solução aquecida a refluxo durante 4 horas. A reação foi então resfriada, os solventes orgânicos evaporados e o resíduo aquoso lavado com hexano (40 mL). A camada aquosa foi então evaporada até secura (etanol foi usado para azeotropar os últimos traços de água) e o sólido resultante foi seco sob vácuo elevado para dar o cloridrato de metilciclopentilamina como um sólido bege (1.33 g, 86%).

E11-3: A uma solução resfriada com gelo agitada de Boc-Tbgbenzila (2,83 mL, 23,3 mmoles) sob Lima atmosfera de argônio. DBU (3,88 mL. 25,9 mmoles) foi então adicionado em porções pequenas sobre cerca de 5 minutos. A pasta fluida resultante foi agitada a 0°C durante ainda 30 minutos então deixada para aquecer em temperatura ambiente. Após 3 horas, o solvente foi evaporado e o resíduo extraído com acetato de etil (50 mL), lavado com IN de HCI (2x 25 mL), 5%, de NaHCOs aquoso (3x 25 mL) e salmoura (25 mL), e então seco sobre MgSOj e o solvente evaporado para dar o éster henzílico como um óleo incolor (6,83 g, 98%).

ΕΓ1-4: Ο E11-3 (6,80 g, 21,2 mmoles) foi dissolvido em dioxano (4 mL) e uma solução de 4N de HCI em dioxano (30 mL, 120 mmoles) adicionado. Após agitação em temperatura ambiente durante duas horas, o solvente foi evaporado e o resíduo deixado permanecer sob uma corrente de nitrogênio resultante em solidificação lenta. Este material foi então triturado corn hex.ano (2x 50 mL), filtrado, seco em ar durante 30 minutos então colocado sob vácuo elevado durante 5 dias para dar o sal cloridrato como um sólido branco (4,86 g, 39%.).

E11-5: A uma solução resfriada com gelo agitada de E11-4 (4,85 g, 18,8 mmoles) em tetra hidrofura no (75 mL) foi adicionada diisopropiletilamina (8,20 mL, 47,0 mmoles) seguido pela adição em gotas de cloroformiato de fenila (2,60 mL, 20,7 mmoles) sob uma atmosfera de argonio. Urn precipitada espessa se formou que, quando de agitação vigorosa, se tornou uma pasta fluida final. Apôs 4,5 h, a mistura foi concentrada a dois terços de seu volume original e então extraída com acetato de etil (50 mL) e lavada com água (40 mL), 0,5 M de KHSO₄ (40 mL), 5% de NaHCOs (2x 40 mL) e salmoura (50 mL). A fase orgânica foi seca sobre MgSCA e evaporada para dar o carbamato de fenila como um óleo incolor que foi íeníamente cristalizado sobre um período de dias (6,63 g, quantitativo).

El 1-6: A uma solução de El 1-5 (1 ..00 g, 2,93 mmoles) em DMSO (2,00 mL) contendo acetonitrila (1,00 mL) foi adicionado diisopropiletilamina (817 pL) seguido pela amina E11-2 (477 mg, 3,52 mmoles). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante duas horas e então aquecida 70°C durante 45 minutos. A solução foi então diluída com acetato de etil (30 mL), lavada com 5%. de K₂CO₃ aquoso (4?< 50 mL) e salmoura (50 mL). A fase orgânica foi seca sobre MgSCL, o solvente evaporado e o resíduo purificado por cromatografia instantânea sobre TLC tipo de sílica-gel usando 10:1 a 5:1 (gradiente) hexano /acetato de etila como eluente que deu a uréia E11-6 como um sólido cristalino (798 mg, 79%).

E11-7: A uma solução de uréia E11-6 (780 mg, :^?,25 mmoles) em

etanol absoluto (10 mL) sob uma atmosfera de argônio foi adicionado 10% de catalisador Pd-C (100 mg). O sistema foi purgado três vezes com HL e então agitado vigorosamente sob um balão de hidrogênio. Após 3 horas, o catalisador foi filtrado sobre Celite e o filtrado evaporado. O resíduo foi então dissolvido em metano! (cerca de 10 mL), filtrado através de um filtro de Millipore Millex de 0,45 uM e então evaporado para dar o ácido E i 1-7 como um sólido branco (539 mg, 93%·).

15b: O Boc-dipegtídeo 15a (1,23 g, 2,11 mmoles) foi dissolvido em dioxano seco (2 mL) e uma solução de 4N de HCI em dioxano (10 mL, 40 mmoles) adicionado, resultando em uma solução amarelo brilhante que fc»t deixada permanecer em temperatura ambiente. Após 3 horas, o solvente foi evaporado resultando em um sólido amarelo gumoso que foi triturado com diclorometano (cerca de 10 mL) e evaporado para um pó amarelocanário que foi seco sob vácuo elevado (1,23 g, quantitativo).

E11-3: A uréia El 1-7 (239 mg, 0,932 mmol) e TB7U (3,06 mg, 0,979 mmol) foram dissolvidos/colocados em pasta fluida em diclorometano anidro (4 mL) e diisopropiletilamina (157 pL, 0,900 mmol) adicionado. A reação foi agitada em temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio até a solução se tornou quase homogênea (cerca de 5 minutos). A solução de dipeptideo 15b (494 mg, 0,883 mmol) em diclorometano contendo diisopropiletilamina (314 pL, 1,8. mmol) foi então adicionado e a soiução resultante deixada para agitar durante 3 horas depois a reação foi tornada básica pela adição de diisopropiletilamina adicional (cerca de 0,15 mL). O solvente foi evaporado dando um xarope amarelo que foi extraído com acetato de eíii (2x 50 mL) e lavado com NaHCO$ saturado (2x 50 mL) e salmoura (30 mL). Os extratos combinados foram então secos sobre MgSO₄ e evaporados para dar o tripeptídeo E11-8 como um sólido branco fibroso (650 mg, 97%).

E11-9: O éster E11-8 (645 mg, 0,894 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (16 mL) contendo metanol (8 mL) e 1,0N de uma solução de hidróxido de sódio aquoso (900 mL, 0,900 mmol) então adicionado em gotas com agitação vigorosa em temperatura ambiente. Após 5 horas, a solução

foi evaporado (mantendo a temperatura do banho abaixo de 30 °C) e então colocado sob vácuo elevado durante a noite para dar o sal carboxilato como um sólido amarelo-pálido (725 mg, quantitativo) que foi usado sem ainda purificação (cerca de 10% de diácido presente).

El 1-10: A urna pasta fluida resfriada com gelo agitada de sal de sódio E11-9 (0,394 mmol) em tetra hidrofura no (10 mL) sol) uma atmosfera de argônio foi adicionado trietilamina (240 pL, 1,72 mmol) seguido pela adição em gotas de cloroformiato de isobutila (174 pL, 1.34 mmol). A pasta fluida resultante foi agitada a 0°C durante 3 horas e uma solução de diazometano em éter etílico (0,7M, 10 mL, 7 mmoles) então adicionado. A pasta fluida amarela foi agitada durante 30 minutos a 0°C e então deixada para aquecer em temperatura ambiente. Após 1 h, nitrogênio foi borbuihado através de uma pasta fluida durante 15 minutos para remover o excesso de diazometano e o solvente evaporado. O resíduo foi extraído com acetato de etil (20 mL) e lavado com 5% de NaHCO₃ aquoso (20 mL) e salmoura (20 mL). A fase orgânica foi seca sobre MgSO.i e evaporada para dar o diazocetona E l 1-1u como um sólido amarelo (626 mg (96%).

E11-11: A uma solução fria agitada de diazocetona El 1-10 (620 mg, 0,350 rnmol) em tetrahidrofurano (2 mL) foi adicionado 43% em gotas de ácido bromídrico aquoso (144 pL, 0,350 mmol) e a reação agitada durante 30 minutos. A solução foi então diluída e extraída com acetato de etii (30 mL) e lavada com 5’% de NaHüO₃ aquoso (2.x 20 mL) e salmoura (20 mL). A fase orgânica foi seca sobre MgSOj e evaporada para dar o bromocetona El 1-11 como um sólido amarelo (611 mg, 928(-).

El 1-12: A uma solução de bromocetona E11-11 (75 mg, 0,10 mmol) em isopropano! (0,30 mL) foi adicionado diisopropiletilamina (87 pL, 0,50 mmol) e /V-acetiltiouréia (13 mg, 0,15 mmol). A mistura agitada foi aquecida a 70°C- durante uma hora e então extraída com acetato de etil (30 mL) e lavada com 5% de NaHCO₃ aquoso (20 mL) e salmoura (20 mL). A fase orgânica foi seca sobre MgSCO e evaporada para dar o aminotiazol bruto como um sólido amarelo que foi usado sem ainda purificação.

Composto 2015: O éster E11-12 (0,10 mmol) foi dissolvido em

tetrahidrofurano (0,30 mL) e metanol (0,25 mL) e 1,0 N de hidróxido de lítio (800 pL, 0,30 mmol) adicionado. Após agitação em temperatura ambiente durante 2,5, os solventes orgânicos foram evaporados e o resíduo aquoso resultante foi diluído com DMSO (1 mL) e ácido acético (0,7 mL) e a solução injetada sobre uma coluna de HPLC Combi-Prep. As frações puras foram reunidas e liofilizadas para dar o inibidor final 2015 como um sólido amarelo amorfo (sal trifluoroacetato, 16 mg, 20 %): ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆): δ 0,37 e 0,96 (dois s, 9H), 1,19 e 1,23 (dois s, 3H), 1,24 - 1,90 (m, 9H), 2,03 (app q4, Japp = 8.3 Hz, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,2 - 2,23 (m, 1H), 2,60 (s, 3H). 3,83 - 4,05 (m, 2H), 3,93 (s, 3I-I), 4,19 - 4,23 (m, 2H), 4,36 - 4,46 (m, 3H), 4,81 (app t, Japp = 7 Hz, 0,2H), 5,03 - 5,07 (dois conjuntos de sobreposição dd, 1H), 5,16 - 5,24 (dois conjuntos de sobreposição dd, 1H), 5,33 e 5,42 (dois br. s, 1H), 5,67 - 5,83 (m, 1H), 5,95 - 6,04 (m, 2H), 7,26 (d, J = 9.4 Hz, 0.8H), 7,40 (d, J = 9,4 Hz, 0.2H), 7,43 - 7,55 (br. m, 1H), 7,89 (d, J = 9,2 Hz,

0,2H), 12,37 e 12,42 (dois br. s, 1H).

Exemplo 12

Síntese de Composto 1038

HN

r\

Compountí tuoo

Legenda: Composto 1038

Usando uma seqüência de reação similar ao descrito nas últimas seis etapas de Exemplo 11, mas usando carbamato 4c (Exemplo 15) em vez de uréia 11-7, o seguinte carbamato bromocetona E12-1 foi preparado:

E12-1 Compound 1038

Legenda: Composto 1038

Conversão do bromocetona para composto final foi feita como a seguir:

A uma solução do bromocetona E12-1 (60 mg, 0,076 mmol) em isopropanol (3 mL) foi adicionado isopropiitiouréia 8çj (11,7 mg, 0,99 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 45 minutos. HPLC revelou completo consumo do material de partida. A mistura de reação foi resfriada em temperatura ambiente, diluída com THF (3 mL) e 1,0N de uma solução de hidróxido de sódio (1 mL) foi adicionado. Após agitação em temperatura ambiente durante 12 horas, a mistura de reação foi concentrada até secura. O resíduo foi dissolvido em DMSO (2 mL) e a solução foi injetada sobre uma coluna HPLC Combi-Prep. As frações puras foram reunidas e liofílizadas para dar 9 mg de Composto 1038 como um sólido amarelo amorfo (sal trifluoroacetato) (15% de rendimento).

¹H-RMN. 400 MHz, DMSO-d_s): δ 12,35 (br s, 1H), 8,56 e 3,76 (dois s, 1H).

6,34 (d, J = 9Hz,

- 5,81 (m, 1H), 5,52 (amplo s

(m, 1H), 4,96 - 5,13 (m, 1H), 4,31 - 4,50 (m, 3H),

(dois s, 9H).

Exemplo 13

Síntese de Composto 2013 ^CiMa €·

Ν.

Ε11-5

Compound 2013

Legenda: Composto 2013

Ácido uréia E13-1:

O ácido uréia-P3 foi preparado a partir de terc-butilamina e El 1-5 pela mesma seqüência de reações como descrito no

Exemplo 11.

Éster tripeptídeo E13-2: O ácido uréia-P3 foi copulado com o fragmento P1-P2 15b como descrito no Exemplo 11.

Composto 2013: O inibidor finai foi preparado a partir de El 3-2 por uma seqüência de etapas idênticas ao que foi descrito no Exemplo 11.0 produto da saponificação final fc»i isolado como um pó amarelo amorfo (sal trifluoroacetato, 21 mg, 28 %). ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d_e): 5 0,91 e 0,96 (dois s, 9H), 1,15 e 1,21 (dois s, 9H), 1,26 (dd, J = 5,0, 9.4 Hz, 0,3H), 1,53 (dd, J = 5,0, 7,8 Hz, 0,8H), 1,58 (dd, J = 4,3, 9,2 Hz, 0.2H), 2,03 (app q4, Japp = 8,3 Hz, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,2 - 2,28 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 3,80 - 4,04 (m, 2H), 3,93 e 3,96 (dois s, 3H), 4,13 - 4,20 (m, 2H), 4,35 - 4,45 (m, 3H),

4,83 (app t, Japp = 7 Hz, 0,2H), 5,03 - 5,07 (dois conjuntos de sobreposição dd, 1H), 5,17 - 5,24 (dois conjuntos de sobreposição dd, 1H), 5,36 e 5,42 (dois br. s, 1H), 5,66 - 5,80 (m, 1H), 5,36 - 6,04 (br. m, 2H), 7,25 (d, J = 9,2

Ο η

*.»ΖExemplo 14

Síntese de composto 2013

E14-2 A +

E11-5 +

E14-1

Compound 2018

Legenda: Composto 2013

E14-2: O ácido uréia-P3 E14-2 foi preparado a partir de E11-5 e amina E141 pela mesma seqüência de reações como descrito no Exemplo 11.

E14-3: O ácido uréia-P3 foi copulado com o fragmento P1-P2 15b como descrito no Exemplo 11.

O inibidor final foi preparado a partir de El4-3 por uma seqüência de etapas idênticas às descritas no Exemplo 11.0 produto da saponificação final foi isoiaao como um pó amarelo amorfo (sal trifluoroacetato, 10 mg, 21%).

¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d₆): δ 0,74 - 0,97 (m, 21H), 1,25 (dd, J = 5, 9Hz, 1H), 1,47 (dd, J = 3, 4Hz, 0,2H), 1,53 (dd, J = 8, 5Hz, 0,8H), 2,02 (app q⁴,

J_app = 3Hz, 0,8H), 2,19 (s, 3H), 2,2 - 2,27 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 3,31 - 3,43 (m, 1H), 3,93 e 3,95 (dois s, 3H), 3,98 - 4,02* (m), 4,22 - 4,26' (m), 4,35 4,39 (m), 4,32 (app t, J_app = 7Hz, Ü,2H), 5,01 - 5,06 (dois conjuntos de

.-J -i ü·?

sobreposição dd, 1H), 5,16 - 5,23 (dois conjuntos de sobreposição dd, 1H),

5,35 e 5,41 (dois br, s, 1H), 5,67 - 5,79 (m, 1H), 5,87 (d, J = 9,4Hz, 0,8H),

7,24 - 7,5 (m, 2H), 7,39 (d, J = 9,2Hz, 0,2H), 8,04 - 3,12 (m, 1,8H), 8,54 (s,

0,8H), 8,37 (s, 0,2H), 12,37 e 12,41 (dois s, 1H). obscurecido por sinal

HOD.

Exemplo 15

Biblioteca de permuta:

Ambos bromo cetonas 13a e 18b foram usados em uma biblioteca de permuta para a síntese paralela de compostos como mostrado no seguinte esquema:

18a L^f'= OMe, L'= Br, L-= H 13b L= OMe, L’= Cl, 15= H

R²

1· S=( 8

NI I,

2- SpeedVac

3- TFA/CH-.CL or HCI / Dioxane

4- SpeedVac

4X = O 5 X = NH

6- LiOH / THF, H..O

7- HPLC Purification

Legenda: Dioxano; purificação HPLC·

Etapa 1: Formação do anel aminotiazol

Uma série de frascos 8-rnL foram dispostos em um bloco de reação de um sintetizador ACT496 (de Advanced Chemtech). Em cada frasco foi adicionado o derivado tio (8) de interesse (0,0683 mmol), bromocetona (0,0625 mmol) e isopropanoi (500 pL>. Os frascos fechados foram aquecidos a 70^c'O durante uma hora. O solvente foi então evaporado usando um centrifugador a vácuo (SpeedVac) e foi co-evaporado com 1,2 dicloroetano. Os produtos brutos foram secos sob vácuo elevado durante a noite.

Etapa 2: Remoção do grupo de proteção Boc

Todos os frascos foram tratados com 30% de TFA em DCM (500 pL) durante uma hora. Todos os frascos foram transferidos no centrifugador

a vácuo para remover o material volátil.

Etapa 3: População

Em cada frasco foi adicionado o carbamato correspondente (21c a 21 g) e ácido carbamato (4b a 4k) (0,0875 mmol), HATIJ (0,0875 mmol,

33,27 mg) e DIPEA (0,313 mmol, 55 pL) em 500 pL de DMSO e a mistura de reação foi deixada para proceder durante a noite.

4e

4f

4h 4i 4j

4k

Etapa 4: Saponificação e Purificação

Todas reações foram diluídas com 400 pL de DMSO e 200 pL de

THF. Uma solução de 500 pL de 2N de LiOH aquoso (1 mmol) foi adicionado em cada frasco e deixada para proceder durante a noite após vezes, a mistura foi neutralizada pela adição de 400 pL de AcOH. Todos compostos foram purificados por fase reversa semipreparada HPLC (coluna simetria 5 cm a 19 cm, CHj.CN /H₂O 0,06% de gradiente TFA).

Exemplo 16

Os seguintes compostos foram preparados usando seqüências de reações e metodologias como descrito nos exemplos acima:

Compostos da Tabela 1

Compound 1006

Composto 1006:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal: δ 12,31 (br s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,14 (br s, 1H), 8,06 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,47 (br s, 1H), 7,34 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,4

Hz, 1H), 5,79 - 5,66 (m, 1H), 5,51 - 5,41 (m, 1H), 5,24 - 5,15 (m, 1H), 5,11 5,03 (m, 1H), 4,53 - 4,40 (m, 2H), 4,40 - 4,32 (m, 1H), 4,07 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,04 - 3,92 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,61 (s, 3H), 2,58 - 2,50 (m, 1H), 2,40 (brs, 2H), 2,31 -2,17(m, 1H), 2,12 -1,95 ím, 3H), 1,91 -1,76(m, 2H), 1,71 10 1,39 (m, 3H), 1,31 -1,23 (m, 1H), 1,04 (m, 9H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): 817,4 (Μ-ΗΓ 819,5 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%

Compound 1030

Composto 1030:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 8,56 (s, 1H), 3,14 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,0 0 -7,78 (m, 1H), 7,73 - 7,56 (m, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,37 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,78 - 5,65 (m, 1H), 5,52 - 5,45 (m, 1H), 5,23 - 5,15 (m, 1H), 5,13 - 5,03 (m, 1H), 4,58 - 4,50 (m, 1H), 4,50 - 4,42 (m, 1H), 4,39 - 4,31 (m,

Η), 4,10 - 4,03 (m, 1 Η), 4,01 (s, 3Η), 3,99 - 3,70 (m, sob H2O, 2H), 2,34 2,23 (m, 1H), 2,07 - 1,93 (m, 1H), 1,70 - 1,37 (m, 9H), 1,34 - 1,23 (m, 2H), 1,26 (br d, J = 6,4 Hz, 6H), 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 839 (M-H)' 841,3 (M-H+2)’ 841,3 (M+H)⁺ 843,3 (MH+2).

Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN:H₂O): 98%

Composto 1015:

¹H RMN <400 MHz, DMSO-de): ca, 35:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,32 (br s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,15 - 8,03 (m, 1H),

8,04 (d, J = 9,2 Hz.,

1H), 7,03 (d,

J = 3,6 Hz, 1H), 5,78 - 5,65 (m, 1H), (m, 1H), 5,23- 5,14 (m, 1H),

5,09 - 5,02 (m, 1H), 4,72 - 4,62 (m, 1H), 4,46 - 4,32 (m, 2H), 4,16 - 4,08 (m,

1H), 4,03 - 3,90 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 2,30 - 2,19 (m, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,06 - 1,97 (m, 1H), 1,81 - 1,21 (m, 11H), 0,97 (s, 9H),

EM (eletrospray): 775,4 (M-H)’ 777,5 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA»; CH₃CN: H₂O): 99%

o

Compound 1024

Composto 1024;

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,31 (s, 1H), 3,55 (s, 1H), 8,20 - 3,05 (m, 1H), 8,03 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,54 - 7,40 (m, 1H), 7,38 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,33 (d, J =

9,4 Hz, 1H), 5,79 - 5,66 (m, 1H), 5,49 - 5,41 (m, 1H), 5,23 - 5,15 (m, 1H),

5,09

(m, 1H), 2,07 - 1,93 (m, 1H), 1,57 5 1,51 (m, 1H), 1,31 -1,23 (m, 1H), 1,04 (s, 9H), 1,00 (s, 9H).

EM (eletrospray): 809,4 (M-H)' 311,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH3CN: H₂O): 93%

Composto 1001:

'H RMN (400 MHz, ΟΜΒΟ-όθ): ca, 7:3 mistura de rotâmeros, descrição de 10 rotâmeros principal; 5 8,01 (br s, 1H), 7,92 is, 1H), 7,90 - 7,77 (m, 2H), 7,70 (br s, 1H), 7,31 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,28 - 6,10 (m, 1H), 5,53 - 5,33 (m. 1H), 5,03 - 5,92 (m, 1H), 4,85 - 4,71 (m, 1H), 4,49 - 4,40 (m, 1H), 4,19 - 4,02 (m, 3H), 4,03 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 2,82 - 2,45 (m, 3H),

2,36 - 2,23 (m, 1H), 1,90 - 1,79 (m, 1H), 1,34 (m, 9H), 1,37 - 1,14 (m, 2H),

1,03 (s, 9H), 0.93 (s, 9H).

EM (eletrospray): 835,4 (M-H)' 837,3 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH3CN: H₂O): 99%

Compound 1011

Composto 1011:

Ο ° οο ¹Η RMN (400 ΜΗζ, DMSO-dg): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal: 3 8,53 (s, 1H), 7,92 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,79 - 5,64 (m, 1H), 5,44 - 5,33 (m, 1H), 5,23 - 5,13 (m, 1H), 5,105,00 (m, 1H), 4,31 - 4,70 (m, 1H), 4,45-4,27 (m, 2H), 4,19 - 4,11 (m, TH), 4,04 - 3,91 (m, 1H), 3,87-3,72 (m, 1H), 2,75 (s, 6H), 2,66 (s, 3H), 2,56-2,42 (m, 1H), 2,29 - 2,17 (m, 1H), 2,07 - 1,97 (m, 1H), 1,80 - 1,21 (m, 10H), 1,25 (br d, J = 6,5 Hz, 6H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): 788,4 (M-H)' 790,5 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH3CN: H₂O): 95% o

Compound 1023

Composto 1023:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; 0 12,36 (s, 1H), 3,55 (s, 1H), 8,09 - 7,97 ím, 2H), 7,42 (br s, 1H), 7,29 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,79 - 5,66 (m,

(m, 1H), 4,47 - 4,31 (m, 2H), 4,16 - 4,09 (m, 1H), 4,03 - 3,91 (m, 1H), 3,94 (s,

3H), 3,29 - 3, (m, 2H), 2,60 - 2,43 (m, 1H), 2,30 - 2,18 (m, 1H), 2,20 (s,

(m, 9H), 1,31 - 1,23 (m, 1H), 1,18 (í, J =

7,3 Hz, 3H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): 789,3 (M-H)' 791,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH3CN: H₂O): 98%

Compound 1033

Composto 1033:

'H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 35:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotãmeros principal; 5 12,36 (s, 1H), 3,53 (s, 1H), 3,05 (s, 1H), 7,98 (d, J = 0,0 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,20 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 1H),

5,80-5,65 (m, 1H), 5,44-5,37 (m, 1H), 5,24-5,14 (m, 1H), 5,10-5,01 (m, 1H),

4,85-4,76 (m, 1H), 4,45-4,34 (m, 2H), 4,21-4,10 (m, 1H), 4,04-3,89 (m, 1H),

2,62 (s, 3H), 2,58-2,47 <m, 1H), 2,28-2,18 (m, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,06-1,96 (m, 1H), 1,81-1,38 (m, 9H), 1,39 (s, 9H), 1,29-1,22 (m, 1H), 0,99 (s, 9H).

EM (eletrosprav): 817,4 (M-H)' 819,4 (M+H'/. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CHj.CN: H₂O): 98%

Compound 1037

Composto 1037:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,29 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,19-8,01 (m, 1H), 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,25 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz, 15 1H), 5,78-5,65 (m, 1H), 5,47-5,37 (m, 1H), 5,22-5,13 (m, 1H), 5,08-5,02 (m,

1H), 4,45-4,33 (m, 2H), 4,13-4,06 (m, 1H), 3,93-3,90 (m, 1H), 3,92 (s, 3H),

2,59 (s, 3H), 2,56-2,46 (m, 1H), 2,41-2,36 (m, 2H), 2,28-2,18 (m, 1H), 2,051,96 (m, 1H), 1,93-1,43 (m, 9H), 1,33 (br s, 3H), 1,29-1,22 (m, 1H), 1,03 (s,

9H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): 845,5 (M-H)‘ 847,5 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 96%

Compound 1051

Composto 1051:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotãmeros principal; δ 12,35 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,92 (d, J =

(t, J

1,20 (m, 2H), 1,12 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 0,96 (s, 9H),

EM (eletrospray): 793,3 (M-H)’ 795,3 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase

Compound 1053

Composto 1053:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d_s): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,06 (br s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,12 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,46 (m, 1H), 7,39 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8,6 Hz,

1H), 5,78-5,66 (m, 1H), 5,44-5,38 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,09-5,02 (m, 1H>, 4,65-4,52 (m, 1H), 4,49-4,32 3,99-3,91 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,

1,97 (m. 1H), 1,81-1,37 (m, 8H), 1,37-1,22 (m, 2H), 0,96 (s, 9H),

EM (eletrospray): 811,1 (M-H)' 313,2 (M+H)'. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 96%.

(m. 2H), 4,12-4,05 (m, 1H), 4,01 (s, 3H),

60-2,45 (m, 1H), 2,31-2,20 (m, 1H), 2,07-

Compound 1027

Composto 1027:

’HRMN (400MHz, DMSO-d₆): δ .8,58 (s, 1H), 8,06 (d, J= 9Hz, 1H), 7,91, 7,39 ( 2s, 1H), 7,57 (brs, 1H), 7.40,7,38 (2s, 1H), 7,25 (d, J=9Hz, 1H), 5,57-5,68 (m, 1H), 5,55 (brs, 1H), 5,20 (d, J=16Hz, 1H), 5,06 (d, J= 11Hz, 1H)), 4,69 (brs, 1H), 4,47 (t, J= 9Hz, 1H), 4,30-4,35 (m, 1H), 4,08 (d, J= 9Hz, 2H), 4,053,96 (m, 2H), 3,97 (s,3H), 3,66-3,40 (m, SH), 2,56 (s, 3H), 2,35-2,25 (m, 1H), 2,08-1,98 (m, 1H), 1,60-1,50 (m, 2H), 1,28,1,26 (2s, 6H), 0,97 (s, 9H).

EIMS: (M+H) = 779,3, (M-H) = 777,3

Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06%. de TFA; CH₃CN: Η₂Ο): 99%..

o

Λ

Compound 1041

Composto 1041:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 35:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotãmeros principal; δ 12,33 (br s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,15-8,02 (m, 1H),

8,04 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,49-7,38 (m, 1H), 7,29 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,99 (d,

J = 8,8 Hz, 1H), 5,78-5,66 (m, 1H), 5,46-5,39 (m, 1H), 5,23-5,14 (m, 1H),

5,09-5,02 ím, 1H), 4,71-4,62 (m, 1H), 4,47-4,32 (m, 2H), 4,15-4,09 (m, 1H),

4,03-3,92 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 2,58-2,40 (m, 2H), 2,30-2,20 (m, 1H), 2,07-1,97 (m, 1H), 1,80-1,21 (m, 11H), 1,13 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): 789,4 (M-H)' 791,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH_SCN: H₂O): 98%.

Compound 1026

Composto 1026:

’H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,30 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,09 (br s, 1H), 8,02 (d,

J = 9,0 Hz, 1H), 7,44 (br s, 1H), 7,32

1H). 5,78-5,66 (m,

1H), 4,80-4,72 (m,

1H), 4,05-3,95 (m,

3H), 2,57-2,48 (m, (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 8,6 Hz,

1H), 5,47-5,39 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,10-5,03 (m,

1H), 4,49-4,41 (m, 1H), 4,37-4,29 (m, 1H), 4,15-4,08 (m,

1.Η), 3,95 (s, 3H), 3,80-3,51 (m, sob H2O, 4H), 2,60 (s,

1H), 2,41-2,37 (m, 2H), 2,31-2,21 (m, 1H), 2,07-1,98 (m,

1H), 1,95-1,83 (m, 1H), 1,62-1,46 (m, 2H), 1,31-1,22 (m, 1H), 1,04 (s, 9H),

0,97 (s, 9H), EM (eletrospray): 833,3 (M-H)' 835,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN:H₂O): 99%

3Ά no

Composto 1022:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, de rotãmeros principal; δ 12,32 (s, 1H), í (br s, 1H), 7,29 (d, J = 9,2......

85:15 mistura de rotãmeros, descrição ’ , 8,55 (s, 1H), 8,08-7,97 (m, 2H), 7,42

Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,79-5,66 (m, 1H), 5,44-5,37 (m, 1H), 5.24-5,15 (m, 1H), 5,09-5,02 (m, 1H), 4.75-4,67 (m, 1H), 4,43-4,32 (m, 2H), 4,16-3,95 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,29-3,18 (m, 2H), 2,59-2,48 (m, 1H), 2,34-2,20 (m, 3H), 2,06-1,98 (m, 1H). 1,81-1,16 (m, 19H), 1,18 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,97 (s, 9H),

EM (eletrospray): 857,4 (M-H)’ 859,5 (M+H)¹'. Homogeneidade HPLC d© fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 98% o hn·^i _xoX_xnY^s W

ΓΛ η V γα Ό N Ύ^ν%^ζ

Η o

Compound 1046 / cY

Composto 1046:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d_e): ca, 85:15 mistura de rotãmeros, descrição de rotãmeros principal: δ 11,91 (br s, 1H), 8,56 (s, 1H), 3,08 (br s, 1H), 3,04 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,30 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 15 1H), 5,78-5,66 (m, 1H), 5,46-5,38 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,09-5,03 (m,

1H), 5,03-4,93 (m, 1H), 4,71-4,62 (m, 1H), 4,47-4,32 (m, 2H), 4,15-4,08 (m,

1H), 4,05-3,95 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,59 (s, 3H), 2,58-2,47 (m, 1H), 2,312,20 (m, 1H), 2,07-1,97 (m, 1H), 1,81-1,22 (rn, 10H), 1,29 (d, J = 6,3 Hz, 6H),

0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): <819,4 (M-H)' 821,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TF A; CH₃CN: H₂O): 99%

Compound 1036

Composto 1036:

'H RMN (400 MHz, DMSO-d_f.): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,35 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 3,12-7,93 (m, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,24 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,78-5,64 (m, 1H),

(m, 1H), 2,28-2,17 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 2,06-1,96 (m, 1H), 1,94-1,77 (m,

2H), 1,72-1,43 (m, 7H), 1,34 (s, 3H), 1,29-1,21 (m, 1H), 0,97 (s, 9H),

EM (eletrospray): 789,4 (M-H)’ 791,4 (M+Hf. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 95%

Compound 1056

Composto 1056:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; Ô 12,35 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,17 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,35 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,73-5,66 (m, 1H), 5,46-5,40 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,09-5,03 (m, 1H),

4,63-4,56 (m, 1H), 4,49-4,34 (m, 2H), 4,13-3,90 (m, sob H2O, 2H), 4,01 (s, 3H), 2,60-2,51 (m, 1H), 2,49-2,43 (m, 2H), 2,32-2,21 (m, 1H), 2,07-1,93 (rn, 1H), 1,31-1,37 (m, 9H), 1,36-1,16 (m, 3H), 0,96 (s, 9H), 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 3H),

EM (eletrospray): 369,1 (M-H)' 371,1 (Μ+ΗΓ. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 98%.

HN^\

x. /

Compound 1181

Composto 1181:

’H RMN (400 MHz, DMSO-dc,): δ 8,57 (s, 1H), 3,2-7,96 (m, 1H), 7,88-7,70 (m, 2H), 7,62-7,35 (m, 2H), 7,02 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,73-5,65 (m, 1H), 5,655,55 (m. 1H), 5,19 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,065 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,63-4,52 (m, 1H), 4,50-4,40 (m, 1H), 4,13-4.08 (m, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,98 (bd, J = 10 Hz, 1H), 3,92-3,80 (m, 1H), 2,62-2,53 (m, 1H), 2,33-2,27 (m, 1H), 2,02 (dd, J = 8,6, 8,6 Hz, 1H), 1,69-1,52 (m, 6H), 1,51-1,41 (m, 3H), 1,40-1,31 (m, 1H),

1,27 (d, J = 6,5 Hz, 6H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): (M+H)⁺; 763,4 e (M-H)' 761,3.

Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06%? de TFA; CH₃CN:H₂O): 99%.

Compostos da Tabela 2

Compound 2010

Composto 2010:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 8:2 mistura de rotâmeros, descrição de

39/ rotâmeros principal: δ 3,56 (s, 1H), 3,41 (br s, 1H), 8,04 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,29 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,09-5,99 (m, 1H), 5,97-5,38 (m, 1H), 5,78-5,65 (m, 1H), 5,54-5,48 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,09-5,02 (m, 1H), 4,47-4,33 (m, 2H), 4,27-4,20 (m, 1H), 4,19-3,85 (m, sob H2O, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,13 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,60 (s, 3H), 2,55-2,42 (m, 1H), 2,34-2,23 (m, 1H), 2,09-2,00 (m, 1H), 1,80-1,37 (m, 7H), 1,40 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 1,31-1,05 (m, 3H), 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 745,4 (M-H)' 747,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH_?.CN: H₂O): 96 % o

Compound 2012

Composto 2012:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 3:2 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; õ 12,29 (s, 1H), 3,54 <s, 1H), 8,08 (br s, 1H), 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,44 (br s, 1H), 7,25 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,03-5,90 (m, 2H), 5,805,65 (m, 1H), 5,45-5,37 (m, 1H), 5,22-5,13 (m, 1H), 5,09-5,02 (m, 1H), 4,484,34 (m, 2H), 4,26-4,19 (m, 1H), 4,04-3,90 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 2,68-2,57 (rn, 1H), 2,42-2,35 (m, 2H), 2,28-2,13 (m, 1H), 2,08-1,98 (m, 1H), 1,81-1.21 (m, 10H), 1,19 (s, 3H), 1,04 (s, 9H), 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 844,5 (M-H)' 846,5 (M+H)\ Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,96% de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%

33*

Compound 2002

Composto 2002:

'H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 3:2 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 3,57 (s, 1H), 8,28-7,77 (m, 3H), 7,66-7,30 (m, 2H), 6,09-5,98 (m, 1H), 5,96-5,86 (m, 1H), 5,78-5,66 (m, 1H), 5,61-5,43 (m, 1H),

5,26-5,15 (m, 1H), 5,11-5,03 (m, 1H), 4,53-4,39 (m, 2H), 4,25-4,15 (m,1H),

4,05-3,93 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,92-3,50 (m, sob H2O, 2H), 2,55 (s,3H),

2,59-2,42 (m, 1H), 2,36-2,26 (m, 1H), 2,18-1,99 (m, 1H), 1,80-1,36 (m,7H),

1,27 (d, J = 6,3 Hz, 6H), 1,31-1,05 (m, 3H), 0,95 (s, 9H).

EM (eletrospray): 774,4 (M-H)' 776,5 (M+H)^:. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 94%

Compound 2007

Composto 2007:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 8:2 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; 5 12,38 (s, 1H), 3,55 (s, 1H), 8,09 (br s, 1H), 8,06 (d, J =

9,2 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,28 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,12-6,01 (m, 1H), 5,9815 5,89 (m, 1H), 5,78-5,66 (m, 1H), 5,46-5,38 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,105,01 (m, 1H), 4,47-4,36 (m, 2H), 4,28-4,20 (m, 1H), 4,04-3,92 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,90-3,50 (m, sob H2O, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,55-2,47 (m, 1H), 2,312,22 (m, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,08-1,99 (m, 1H), 1,81-1,38 (m, 7H), 1,31-1,09

(m, 3H), 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 774,4 (M-H)' 776,4 (Μ+ΗΓ. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 94%

Composto 2008:

'H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 8:2 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal: δ 12,34 (br s, 1H), 3,55 (s, 1H), 8,17-8,05 (m, 1H), 8,07 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,50-7,42 (m, 1H), 7,28 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,11-6,01 (m,

1H), 5,98-5,83 (m, 1H), 5,78-5,66 (m, 1H), 5,46-5,38 (m, 1H), 5,24-5,14(m,

1H), 5,10-5,01 (m, 1H), 4,48-4,36 (m, 2H), 4,28-4.20 (m, 1H), 4,07-3,95(m,

1H), 3,94 (s, 3H), 3,80-3,65 (m, sob H2O, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,60-2,50(m,

1H), 2,31-2,20 (m, 2H), 2,08-1,98 (m, 1H), 1,82-1,37 (m, 15H), 1,31-1,07 (m, 5H), 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 842,5 (M-H)' 844,5 (M+H)¹. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 97%

Compostos da Tabela 3

Composto 3002:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-dg): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,33 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,75 (d, J =

8,6 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,19 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,26 (s, 2H), 5,79-5,66 (m, 1H), 5,46-5,38 (m, 1H), 5,23-5,14 (m, 1H), 5,105,01 (m, 1H), 4,76-4,67 (m, 1H), 4,47-4,30 (_m, 2H), 4,11 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,00-3,91 (m, 1H), 2,41-2,36 (m, 2H), 2,29-2,19 (m, 1H), 2,08=1,97 (m, 1H), 1,82-1,22 (m, 11H), 1,03 (s, 9H), 0,96 çs, 9H).

EM (eletrospray): 831,5 (M-H)’ 833,6 (M+Hf. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%

Compound 3007

Composto 3007:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 8,56 (s, 1H), 8,04 (d, J = 8,8 Hz, 1 H>, 7,94-7,64 (m,

3H), 7,49-7,37 (m, 1H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,6 Hz, 1H),

5,80-5,66 (m, 1H), 5,58-5,46 (m, 1H), 5,24-5,14 (m, 1H), 5,11-5,01 (m, 1H),

4,35-4,70 (m, 2H), 4,69-4,58 (m, 1H), 4,49-4,31 (m, 2H), 4,09 (d, J = 8,6 Hz,

1H), 4,00-3,88 (m, 1H), 3,75-3,30 (m, sob H2O, 2H), 2,35-2,22 (m, 1H), 2,07-

EM (eletrospray): 731,3 (M-H)’ 733,3 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 94%

Compound 3010

Composto 3010:

100 ¹H RMN (400 ΜΗζ, DMSO-de): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal: .3 12,37 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,13-7,96 (m, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,05 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,80-5,64 (m. 1H), 5,50-5,37 (m, 1H), 5,24-5,11 (m, 1H), 5,10-4,93 (m, 1H), 4,33-4,63 (m, 3H),

4,47-4

(m, 1H), 3,75-3,30 (m, sob

H2O, 2H), 2,34-2,19 (m, 3H), 2,07-1,97 (m, 1H), 1,82-1,13 (m, 20H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): 841,3 (M-H)' 843,4 (M+H)*. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06%. de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%

Compound 3001

Composto 3001:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal: ô 8,55 (s, 1H), 7,95-7,76 (m, 1H), 7,72 (d, J = 8,8 Hz,

1H), 7,49 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,18 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8,6 Hz,

1H), 6,25 (s, 2H), 5,30-5,65 (m, 1H), 5,52-5,46 (m, 1H), 5,24-5,14 (m, 1H),

5,10-5,01 (m, 1H), 4.75-4,66 (m, 1H), 4,48-4,39 (m, 1H), 4,37-4,27 (m, 1H), 4,17-4,07 (m, 1H), 4,01-3,92 (m, 1H), 3,90-3,75 (m, 1H), 2,62-2,44 (m, 1H),

2,31-2,20 (m, 1H), 2,09-1,97 (m, 1H), 1,81-1,20 (m, 10H), 1,25 (br d, J = 6,4 Hz, 6H), 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 775.5 (M-H)' 777,6 (M+H)*. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 99%

101

Compound 3004

Composto 3004:

Mistura de rotâmeros (aprox. 85:15), ¹H RMN de rotâmero principal dado (400 MHz. DMSO-d,₃): δ 8,57 (s, 1H); 8,10 - 8,13 (m, 1H); 8,08 (d, J = 3,8 Hz,

OO f ,<-’O

7,53 (s, 1H); 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,00 (d, J = «*

1H); 5,57 (s, = 17,0 Hz, 1H); 5,07 (d,

4,63 (m, 1H); 4,35 - 4,47 (m,

2,56 (m, 1H); 2,27-2 (m, 1.H): 1,99 - 2,04 (m, 1H); 1,43

1,65 (m, 4H); 1,28 - 1,30 (m, 1H); 1,26 (d,

J = 6.2 Hz, 6H); 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 775,4 (M+H)⁺, 773,4 (M-H)'.

Homogeneidade (0,06% de TFA; CH_SCN: H₂O): 98,8%

Compostos da Tabela 4

Compound 4005

Composto 4005:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de.): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; 12,36 (br s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,60-8,20 (m, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,68-7,45 (m, 2H), 6,99 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,73-5,66 (m, 1H), 5,665,83 (m, 1H), 5,80-5,50 (m, 1H), 5,23-5,14 (m, 1H), 5,10-5,01 (m, 1H), 4,624,36 (m, 3H), 4,11-3,92 (m, 1H), 2,33 (s, 6H), 2,62-2,51 (m, 1H), 2,47 (s, 3H),

102

2,44-2,38 (m, 2H), 2,36-2,19 (m, 1H), 2,08-1,96 (m, 1H), 1,81-1,20 (m, 10H), 1,03 (s, 9H), 0,96 (s, 9H).

EM (eletrospray): 844,4 (M-H)' 846,5 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH3CN: H₂O): 99%

Composto 4007:

'H RMM (400 MHz, DMSO-de)·. ca, 35:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal: ô. 8,59 (s, 1H), 8,27-3,12 (m, 1H), 8,06-7,97 (m, 1H),

7.89 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 6,99 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,79-5,64 (m,

2H), 5,24-5,14 (m, 1H), 5,10-5,01 (m, 1H), 4,54-4,33 (m, 2H), 4,23-4,08 (m, 10 1H), 4,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,00-3,91 (m, 1H), 3,70-3,30 (m, sob H2O, 1H),

2.90 (s, 6H), 2,64-2,52 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,38-2,26 (m, 1H), 2,07-1,96 (m, 1H), 1,81-1,20 (m, 10H), 1,24 (br d, J = 6,5 Hz, 6H), 0,95 (s, 9H).

EM (eletrospray): 788,4 (M-H)' 790,5 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 98%

Compound 4014

Composto 4014:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-ds): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 8,61 (s, 1H), 8,33-7,60 (m, 4H), 7,33 (s, 1H), 6,95 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,79-5,67 (m, 2H), 5,24-5,16 (m, 1H), 5,10-5,03 (m, 1H), 4,57103

Η2Ο, 1Η), 2,65-2,55 (m, 1H), 2,40-2,23 (m, 1H), 2.03-1,98 (m, 1H), 1,31-1,21 (m, 10H), 1,25 (br d, J = 6,5 Hz, 6H), 0,95 (s, 9H),

EM (eletrospray): 791,3 (M-H)' 793,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH_SCN: H-O). 86%

Compound 4001

Composto 4001:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,40 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,50-3,20 (m, 1H), 7,95 (br s, 1H), 7,72 7,44 (m, 2H), 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,80-5,67 (m, 1H), 5,6710 5,51 (m, 1H), 5,24-5,14 (m, 1H), 5,12-5,02 (m, 1H), 4,63-4,45 (m, 2H), 4,45 •1,99 (s, 3H), 2,64-2,46 (m, 1H), 2,45-2,39

08-1,98 (m, 1H), 1,82-1,23 (m,

10H), 1,04 (s, 9H), 0,97(5, 9H).

833,5 (M+Hf. Homogeneidade HPLC de

EM (eletrospray): 331,4 (M-H)'

Compound 4013

Composto 4013:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal: δ 12,36 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,36-7,96 (m, 1H), 7,70

104

7,42 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 6,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,79-5,66 (m, 1H), 5,635,50 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,10-5,02 (m, 1H), 4,58-4,45 (m, 2H), 4,384,23 (m, 1H), 4,12-3,90 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 2,62-2,52 (m, 1H), 3,37-2,21 (m, 3H), 2,08-1,98 (m, 1H), 1,77-1,14 (m, 19H), 0,97 (s, 9H).

EM (eletrospray): 859,4 (M-H)’ 861,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 92%

Compostos da Tabela 5

Compound 5001

Composto 5001:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-dô): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; 8 8,60 (s, 1H), 8,34-8,19 (m, 1H), 8,04-7,98 (m, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,91-7,81 (m, 1H), 7,73 (s, 1H), 5,99-5,91 (m, 1H), 5,90-5,83 (m, 1H), 5,78-5,66 (m, 2H), 5,25-5,15 (m, 1H), 5,11-5,04 (m, 1H), 4,58-4,46 (m, 2H), 4,15-4,07 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 4,03-3,94 (m, 1H), 3,60-3,15 (m, sob H2O, 1H), 3,05 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 2,63-2,55 (m, 1H), 2,42-2,30 (m, 1H), 2,35 (nv 3H), 2,03-1,99 (m, 1H), 1,80-1,22 (m, 9H), 1,13-1,03 (m, 1H), 0,94 (s, 9H). EM (eletrospray): 746,3 (M-H)' 748,4 (M+H)⁺. Homogeneidade

HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN:H₂O): 99% o ηνΎ /Ο ^S cvXç° ^{H H} °°S o

Compound 5002

Composto 5002:

105 ¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 3:2 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,44 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,52-8,25 (m, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,70-7,46 (m, 2H), 6,03-5,96 (m, 1H), 5,90 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,79-5,66 (m, 1H), 5,64-5,54 (m, 1H), 5,24-5,16 (m, 1H), 5,11-5,04 (m, 1H), 4,55-4,43 (m, 2H), 4,19-4,12 (m, 1H), 4,05-3,94 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,80-3,30 (m, sob H2O, 1H), 2,68-2,54 (m, 1H), 2,39-2,23 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,08-1,99 (m, 1H), 1,80-1,21 (m, 8H), 1,17-1,07 (m, 1H), 1,06-0,95 (m, 1H), 0,95 (s, 9H).

EM (eletrospray): 774,4 (M-H)' 776,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH?,CN: H₂O): 99%

Compound 5004

Composto 5004:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d_e): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 8,60 (s, 1H>, 8,31-8,16 (m, 1H), 8,11-8,02 (m, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,89-7,73 (m, 1H), 7,75-7,67 (m, 1H), 6,00-5,92 (m, 1H), 5,905,83 (m, 1H), 5,80-5,65 (m, 2H), 5,26-5,16 (m, 1H), 5,11-5,04 (m, 1H), 4,58-

2,08-1,99 (m, 1H), 1,80-1,21 (m, 8H), 1,24 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,14-1,02 (rn, 1H), 1,00-0,87 (m, 1H), 0,94 (s, 9H).

EM (eletrospray): 760,4 (M-H)' 762,4 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₃CN: H₂O): 96%

Compostos da Tabela 6

Compound 6016

Composto 6016:

¹H RMN (400 MHz, DMSO-de): ca, 85:15 mistura de rotâmeros, descrição de rotâmeros principal; δ 12,23 (s, 2H); 8,56 (s, 1H); 8,04 (s, 1H) 7,79 (s, 1H);

7,46 (s, 1H); 6,96 - 7,00 (m, 1H); 5,68 - 5,75 (m, 1H); 5,40 (s, br, 1H); 5,19 (d, J = 17,0 Hz, 1H); 5,06 (d, J = 10,1 Hz, 1H); 4,71 - 4,76 (m, 2H); 4,43 (t, J

(q, J = 8,6 Hz, 1H); 1,17 -1,75 (m, 10H); 1,04 (s, 9Hj; 0,98 (s, 9H).

EM (eletrospray): 845,4 (M-H)’ 847,5 (M+H)⁺. Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH₂CN: H₂O): 96,7 %

Síntese de compostos de fórmula I em que R^c é NHSO₂R^!=’:

Exemplo 17A

Síntese de Composto 7001:

« / J'.

17A1

HATU (20 mg, 0,05 mmol) foi adicionado a uma solução de composto 17A1 (Composto 3004, Tabela 3; 20 mg, 0,03 mmol) e DIPEA (0,03 mL, 0,16 mmol) em DMF (1,5 mL) em temperatura ambiente. A solução foi agitada

107 durante uma hora seguido pela adição de DMAP (16 mg, 0,13 mmol) e ciclopropanossulfonamida (7,0 mg, 0,06 mmol). Depois a adição foi completa, a mistura foi deixada para agitar durante 15 minutos e DBU (0,02 mL, 0,14 mmol) foi adicionado em gotas. A solução resultante foi agitada durante 16 horas a 23°C, então diluída com DMSO a 2,5 mL de volume total e purificada por HPLC prep (H2O/CH3CN + 0,06% de TFA). As frações contendo o produto puro foram combinadas e o solventes removidos por liofilização para dar 17A2 como um sólido amarelo (Composto 7001, Tabela 7, 5,4 mg, 23%).

Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06%. de TFA; CHj.CN: H₂O): 98,9% (220 nm), EM: 878,8 (M+H)⁺, 876,4 í M-H)', ¹H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 6 10,47 (s, 1H), 8,82 (s, 1H); 8,06 (s, br, 1H); 7,52 (s, br, 1H); 7,15 (m, 1H); 7,03 (d, J = 8,0 Hz, 1H); 5,58 (m, 2H); 5,20 (d, J = 17,0 Hz, 1H); 5,09 (d, J = 11,5, 1H); 4,79 (m, 2H); 4,64 (m, 1H); 4,36 - 4,52 (m, 2H); 4,06 (d, J = 3,0 Hz, 1H); 4,00 - 4,03 (m, 1H); 2,83 - 2,96 (m, 1H); 2,54 - 2,57 (m, 1H); 2,10 - 2,20 (m, 2H>; 1,32 - 1,71 (m, 11H); 1,24 (dd_: J = 6,3, 1,2 Hz,

6H); 1,00 -1,68 (m, 3 H); 0,97 (s, 9H).

Exemplo 17B

Síntese de Composto 7002:

17B1 17E2

Usando o procedimento de Exemplo 17A mas partindo com composto 17B1 (Composto 6016, Tabela 6), composto 17B2 (Composto 7002, Tabela 7) foi preparado como um sólido amarelo claro (5,4 mg, 16% de rendimento).

Homogeneidade HPLC de fase reversa (0,06% de TFA; CH3CN: H₂O): 93,1% (220 nm).

108

EM: 950,4 (M+H)\ 943,4 (M-H)’, 'H RMN (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12,26 (s, 1H); 10,48 (s, 1H); 8,83 (s, 1H); 8,02 (s, 1H); 7,79 (s. 1H); 7,45 (s, 1H); 6,94 7,00 (m, 1H); 5,56 - 5,65 (m, 1H); 5,40 (s, 1H); 5,19 (d, J = 16,9, 1H); 5,07 (d, J = 11,4, 1H); 4,77 (s, 1H); 4,33 - 4,42 (m, 2H); 4,1 i (d, J = 8,0 Hz, 1H); 3,97 (d, J = 9,6, 1H): 3,76 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 2,88 - 2,96 (m, 1H); 2,66 (s, 3H); 2,53 - 2,60 (m, 1H); 2,31 - 2,33 (m, 1H); 2,11 - 2,19 (m, 2H); 1,33 - 1,70 ím, 12H); 1,22 (s, br, 1H); 1,05 - 1,03 (m, 2H); 1,02 (s, 9H); 0,98 (s, 9H).

Exemplo 17C

Síntese de Composto 7003:

i

17C1

---Ü '

Composto 17C1 (Composto 1027, Tabele 1; 35 mg, 0,045 mmol), Ν,Ν-dimetilsulfamida 17C2 (22,3 mg, 0,180 mmol) DIPEA (39,3 μΙ, 0,225 mmol) e DMAP (22 mg, 0,180 mmol) foram dissolvidos em DMF (2,5 mL) e na mistura foi adicionado DEU ( 23,5 μϊ, 0,203 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 5 minutos, então foi adicionado HATU (18,3 mg,

0,05 mmol). A agitação foi continuada durante 12 horas e o resíduo foi filtrado através de um filtro Millex e purificado por HPLC prep (Cornbiscreen ODS-AQ, 20 λ 5ümm). As frações puras foram reunidas juntas e liofilizadas para dar 14 mg (rendimento, 35%) de composto 17C3 (Composto 7003, Tabela 7) como um solido amarelo.

¹H RMN (400MHz, DMSO-d_s): 5 10,23 ís, 1H), 8,74 (s_; 1H), 8,07 ( d, J=SHz,

(m, 1H), 7,27 (d, J=8Hz, 1H), 5,

-5,49 (m, 2H),

3H), 4,15-4,05 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 2,76 (s, 6H), 2,55 (s,3H), 2,38-2,32 (m,1H), 2,23-2,08 (m, 2H), 1,97-1,81 (m, 1H), 1,75-1,45 (m,4H), 1,32-1,14 (m,9H), 1,04-0,86 (m. 11H),

EIMS: (M+H) = 885,4, (M-H) — 883,4

3%

109

EaEMPLD 18

Teste de NS3-NS4A protease

O teste enzimátíco usado para avaliar o presente composto é descrito em WO 00/09543 e WO 00/59929.

Exemplo 19

Teste de replicação de HCV RNA á base de células

Cultura de células

As células Huh7 gue mantém estavelmente um replicon de HCV sub-genômico foram estabelecidas como previamente descrito (Lohman et 10 al., 1999. Science 285: 110-113) e designadas como a linhagem de células

S22.3, As células S22.3 são mantidas em meio de Earle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% FSS e 1 ng/mL neomicina (meio padrão). Durante o teste, o meio DMEM suplementado com 10% FBS, contendo 0,5% DMSO e faltando neomicina foi usado (Meio de teste). 16 h 15 antes da adição do composto, células S22.3 foram tripsinizadas e diluídas a 5Ü.0ÜÕ células/inL em meio padrão, 200 pL (10.000 células foram distribuídas em cada reservatório de uma placa de 96 cavidades. A placa foi então incubada a 37°C com 5%. CO? até o próximo dia.

Reagentes e Materiais

Produto	Empresa	Catalogo	Amazenamento
DMEM	Wisent Inc.	10013CV	4°C
DMSO	Siqrna	D-2650	T.A.
Dult>eccú's PBS	Gibco-BRL	14190-136	T.A.
Soro bovino fetal	Bio-Whittaker	i4-y0 ÍF	-20°C/4°C
Neornioina (G418)	Gibco-BRL	1IJ 1 J1 -<JZ!	-20°G/4°C
Trvpsin-EDTA	Gibco-BRL	25300-054	-2Ü°C/4°C
placa·? de 96 cavidades	Costa r	3997	T.A.
PVDF 0,22 prn unidade de filtre·	Millipore	SLGV025L S	T.A.
Polipropilen·:· de placa de título de cavidades profundas	Beckrnari	267007	T.A.

110

Preparação do composto de teste pL de composto de teste tem 100% DMSO) foram adicionados a 2 mL de meio de teste para uma concentração de DMSO final de 0,5% e a solução sonicada durante 15 min e filtrada através de uma unidade de filtro Millipore de 0,22 μΜ. 900 μΙ foram transferidos em uma fileira A de Polipropileno de placa de título de cavidades profundas. As fileiras B a H contém alíquotas de 400 pL de meio de teste (contende. 0,5% DMSO) e foram usadas para preparar diluições em série (1/2) por transferência de 400 pL de fileira a fileira (não foi incluído composto na fileira H).

Aplicação de composto de teste às células

O meio de cultura de células foi aspirado da placa de 96 cavidades contendo as células S22.3. 175 pL de meio de teste com a diluição apropriada de composto de teste foi transferido de cada cavidade da placa de composto para a cavidade correspondente da placa de cultura de células (fiieira H foi usada como o controle sern inibição). A placa de cultura de células foi incubada a 37^c’C com 5% CO₂ para 72 h.

Extração de RNA celular total

Após o período de incubação de 72 h, RNA celular total foi extraído das céluias S22.3 da placa de 96 cavidades usando o kit RNeasy 96 kit (Qíagen'~’, RNeasy Handbook. 1999.). Brevemente, o meio de teste foi completamente removido das células e 100 pL de tampão RLT (Qiagen⁰) contendo 143 mM β-mercaptuetanol foram adicionados a cada cavidade da placa de cultura de células de 96 cavidades. A microplaca foi suavemente agitada durante 26 s. 100 pL cie 70% etanol foram então adicionados a cada cavidade de microplaca, e misturados por pipeta. O iisado foi removido e aplicado às cavidades de uma placa RNeasy 96 (Qiageri*) que foi colocada no topo de um bloco de cavidades quadrado Qiagen® Square-Well Block. A placa RNeasy 96 foi selada com urna fita e o bloco com a placa RNeasy 96 foi carregado no suporte e colocado em uma bolsa do rotor de uma centrífuga 4K15C. A amostra foi centrifugada a 6000 rpm (~ 5600 x g) durante 4 min em temperatura ambiente. A fita foi removida da placa e 0,8

3%

111 mL de um tampão RW1 (kit Qiagen® RNeasy 96) foi adicionado a cada cavidade da placa RNeasy 96. A placa RNeasv 96 foi selada com um novo pedaço de fita e centrifugada a 6000 rpm durante 4 min em temperatura ambiente. A placa RNeasy 96 foi colocada no topo de outro bloco de cavidades quadradas, a fita removida e 0.8 mL de tampão RPE (kit Qiagen® RNeasy 96) foi adicionado a cada cavidade da placa RNeasy 96. A placa RNeasy 96 foi vedada com um novo pedaço de fita e centrifugada a 6000 rpm durante 4 min em temperatura ambiente. A fita foi removida e mais 0,8 mL de tampão RPE (kit Qiagen® RNeasy 96) foi adicionado a cada cavidade da placa RNeasy 96. A placa RNeasy 96 foi selada com um novo pedaço de fita e centrifugada a 6000 rpm durante 10 min em temperatura ambiente. A fita foi removida, a placa RNeasy 96 foi colocada no tope.· de uma prateleira contendo microtubos de coleta de 1,2 mL. O RNA foi eluido por derivado de 50 pL de água sem RNase a cada cavidade, selando a placa com um novo pedaço de fita e incubada durante 1 min em temperatura ambiente. A placa foi então centrifugada a 6000 rpm durante 4 min em temperatura ambiente. A etapa de eluição foi repetida com um segundo volume de 50 pL de água sem RNase. Os microtubos com RNA celular total foram armazenados a -70°.

Quantificação de RNA celular total

RNA foi quantificado no sistema STORM® (Molecular Dynamics®) usando o kit de quantificação de RNA RiboGreen® (Molecular Probes®). Brevemente, o reagente RiboGreen foi diluído 200 vezes em TE (10 mM Tris-HCI pH = 7,5, 1 mM EDTA). Geralmente, 50 pl de reagente foram diluídos em Í0 mL TE. Uma curva padrão de RNA ribossômico foi diluída em TE a 2 pg/mL e quantidades pré-oeterminadas (100, 50, 40, 20, 10, 5, 2 e 0 pL), da solução de RNA ribossômico são então transferidos em uma nova placa de 96 cavidades (GOSTAR n^c' 3997) e o volume completado a 100 pL com TE. Geralmerite, a coluna 1 da piaca de 96 cavidades foi usada para a curva padrão e as outras cavidades usada para as amostras de RNA a serem quantificadas. 10 pL de cada amostra de RNA que precisou ser quantificada, foram transferidos para a cavidade correspondente da

112 placa de 96 cavidades e 90 μΙ_ de TE adicionados. Um volume (100 μΙ_) de reagente RiboGreen diluído foi adicionado a cada cavidade da placa de 96 cavidades e incubados durante 2 a 5 min em temperatura ambiente, protegidos da luz (a 10 pL de amostra de RNA em um volume final de 200 μΙ gera uma diluição de 20X). A intensidade de fluorescência de cada cavidade foi medida no sistema STORM® (Molecular Dynamics®). Uma curva padrão foi criada com base nas quantidades conhecidas de RNA ribossòmico e as intensidades de fluorescência resultantes. A concentração de RNA nas amostras experimentais foi determinada da curva padrão e corrigidas para diluição 20X.

^eagentes e Materiais: Produto	Empresa	Catálogo N°	Armazenamento
DEPC	Sigma	E'5758	4°C
ΕΕ'ΤΑ	Sigma	E5134	T.A.
T rizma-Base	Sigma	T8524	T.A.
T rirrna-HC!	Sigma	T714Ô	T.A.
Tiras de tubos de coleta	Qiageri	195'32	T.A.
Kit de quantificação de Ribogreen RNA	Molecular Rrobe	R11490	-20° C
R.neasv 96 Kit	Üiageri	74183	T.A.
Blocos de c avidades quadrados	Qiageri	19573	T.A.

T.A. - PCR em tempo real

T.A. - PCR em tempo real foi realizado no sistema ABI Prism 7700 Sequence Detection System usando o kit TaqMan £Z T.A.-PCR de (Perkin-Elmer Applied Biosystems®). T.A.-PCR foi otimizado para a quantificação de 5' iRES de HCV RNA por uso de tecnologia Taqman (Roche Molecular Diagnostics Systems) similar à técnica previamente descrita (Martell et al., 1999. J. C-lin. Microbiol. 37: 327-332). O sistema explora a atividade 5’-3’ nucleolítica de AmpliTaq DNA polimerase. Brevemente, o método usa uma sonda de hibridização fluorogénica de rótulo dupio (sonda PUTR) que especificamente recombina para o gabarito entre os iniciadores de PCR (iniciadores 3125 e 7028). A extremidade 5’ da sonda

113 contém um repórter fluorescente (6-carboxifluoresceína [FAM]) e a extremidade 3’ contém um resfriador brusco fluorescente (6-carboxitetrametilrhodamina [TAMRA]). O espectro de emissão de repórter FAM foi suprimido pelo resfrioador brusco sobre a sonda de hibridização intacta. A degradação de nuclease da sonda de hibridização libera o repórter, resultando em um aumento na emissão de fluorescência. Q detector de seqüência ABI Prism 7700 mede o aumento na emissão de fluorescência continuamente durante a amplificação PCR de modo que o produto amplificado foi diretamente proporcional ao sinal. O gráfico de amplificação foi analisado antes na reação em um ponto gue representa a fase logarítmica de acúmulo de produto. Um ponto representando um limiar de detecção definida do aumento no sinal de fluorescência associado com o crescimento exponencial do produto PCR para o detector de seqüência foi definido como o limiar do ciclo (Ct). Os valores Ct são inversamente proporcionais à quantidade de HCV RNA de entrada, de modo gue sob condições de PCR idênticas, quanto maior a concentração de partida de HCV RNA, maior o C_T. Uma curva padrão foi criada automaticamente pelo sistema de detecção ABI Prism 7700, por gráfico de Ct contra cada diluição padrão de concentração de HCV RNA conhecido.

As amostras de referência para a curva padrão são incluídas em cada placa de T.A.-PCR. HCV Replicon RNA foi sintetizado (por transcrição de T7) in vitro, purificado e quantificado por OD₂>5c>. Considerando que 1 pg do RNA = 2,15 X 10¹¹ cópias de RNA, diluições são feitas a fim de ter 10⁸, 10', 10/ 10⁵, 10’, 10“ ou 10“ cópias de RNA genômico /5 pL. Total Huh-7 RNA celular foi também incorporado com cada diluição (50 ng /5 pL). 5 pL de cada padrão de referência íCHV Repiicon + Huh-7 RNA) foi combinado com 45 pL de mistura de Reagente, e usados na reação de T.A.-PCR em tempo real.

A reação de T.A.-PCR em tempo real foi configurada para amostras experimentais em placas de cavidades RNeasv 96 por combinação de 5 pL de cada amostra de RNA celular total com 45 μι de mistura de reagente.

114

Reagentes e Materiais:

Produto	EMPRESA	Catálogo N°	Armazenam ente
TaqMan EZ T.A.-kit de PCR	PE Applied Eiosystems	N803-0236	-20°C
Tampa:; ópticas da MicroAmp	PE Applied Biosysterns	N801 -0935	T.A.
Placa de reação de 96 cavidades, da MicroAmp	PE Applied Eiosystems	N801-0560	T.A.

Preparação de mistura de reagentes:

C-ornponerite	Volume para uma amostra tpL)	Volume para uma Placa (pL) (91 arnostras+ Volume morto)	Concentração final
água sem Rnase	16,5	1617
tampão 5 < TaqMan EZ	10	930	1 '
MníúAc) -.(25 rnM)	6	533	3 rnM
dATP (10 rnM)	1,5	147	300 pM
dCTP (10 mM)	1,5	147	300 pM
dGTP (10 mM)	1,5·	147	300 pM
dUTP (20 mM)	i ,5	147	600 pM
iniciador dianteiro (10 μΜ)	1	93	200 nM
Iniciador reverso (10 μΜ)	1	93	200 riM
sonda RUTR (5 pM)	“»	196	200 nM
rTth DNA polimerase (2,5 U/pL)	*»	196	0,1 U/pL
AmpErase IJHG (1U/pL)	0,5	49	0,01 U/pL
Volurne Total	45	4410

Seqüência de iniciador dianteiro (SEQ ID. 1): 5' - ACG CAG AAA GCG TCT

AGC CAT GGC GTT AGT - 3'

Seqüência de iniciador reverso (SEQ ID NO. 2): 5' - TCC CGG GGC ACT

CGC AAG CAC CCT ATC AGG - 3’

Nota Estes iniciadores amplificam uma região de 256-nt presente dentro da

115 região não traduzida 5' de HCV.

Seqüência de sonda PUTR (SEQ ID NO. 3): |6FAM |- TGG TCT GCG GAA CCG GTG AGT ACA CG - jTAMRA

Sem controles de gabarito (NTC): Em cada piaca, 4 cavidades são usados como NTC. Para estes controles, 5 μΙ_ de água são adicionados à cavidade em vez de RNA.

Condições de ciclos térmicos

50°C 2 min

60°C 30 min

95°C 5 min

95°C 15 s p_ara £ ciclos

60° C 1 mirí

Ί

90°C15s Para 40 ciclos

6U°C 1 min

Após a terminação da reação T.A.-PCR, a análise do dados requer a configuração do sinal de fluorescência de iimiar para a placa PCR e uma curva padrão foi construída por gráfico do valor Cr versus número de cópia RNA usado em cada reação de referência. Os valores Cr obtidos para as amostras de teste são usados para interpolar um número de cópia de

RNA com base na cun/a padrão.

Finalmente, o numero de cópias de RNA foi normalizado (com base ern quantificação de RNA RiboGreen do RNA total extraído da cavidade de cultura de células ) e expressado como equivalentes de genoma /pg de RNA total (g.e. /pg).

O número de cópia RNA (g.e./pg) de cada cavidade da placa de cultura de células foi uma medida da quantidade de replicação de HCV RNA na presença de várias concentrações de inibidor. A % de inibição foi calculada com a seguinte equação

100 -frg.e./pg irih) '(g.e./pg ctl) ?< 100].

Uma curva não linear se ajusta com o modelo de Hill foi aplicada aos dados de inibição /concentração e a concentração 50% eficaz (EC₅₀) foi calculada pelo uso de SAS software (Statistical Software System; SAS

116

Institute, Inc. Cary, M.C.).

Quando os compostos da invenção são avaliados nos testes enzimáticos e à base de células precedentes, os compostos são verificados como sendo altamente ativos.

E^VEMPLC' 20

Testes de especificidade

Os testes de especificidade usados para avaliar a seletividade deste composto são descritos em WO 00/09543.

Quando os compostos foram avaliados nos testes de especificidade, os compostos de fórmula 1 foram verificados como sendo seletivos em que eles não mostram uma inibição significante (nenhuma atividade mensurável nas concentrações de até 30 μ,Μ) nos testes de elastase de leucócitos humanos e catepsina B.

Exemplo 21

Propriedades farmacocinéticas

A presente invenção compreende compostos que mostram propriedades farmacocinéticas como níveis de plasma detectáveis no rato em uma hora e duas horas após uma dose oral de 5 mg/kg.

Mais explicitamente, o seguinte teste, como uma tela de absorção oral in vivo é usado para determinai os níveis de plasma de compostos de teste em ratos após a administração oral.

Materiais e métodos:

1. Método usado para reunir os compostos (seleção de cassete)

A seleção de compostos a serem reunidos em um cassete foi baseada em sua similaridade estrutural e propriedades psicoquímicas. Um processo de extração de fase sólida aplicável a todos os compostos selecionados foi estabelecido. Com base no teste inicial onde cada composto foi salpicado no plasma de rato e ciclado através de HPLC e/ou HPLC/ΕΜ em uma concentração de 0,5 μΜ, o tempo de retenção, massa iónica, e a separação possível dentre os compostos por HPLC e/ou HPLC/ΕΜ foram usados como uma base para reunir 3-4 compostos em um cassete.

2. Veículo oral e preparação de composto

Cada cassete contém 3-4 compostos a 5 ou 4 mg/kg para cada composto. Os cassetes furam preparados como uma pasta fluida oral em metil celulose 0,5%. aquoso e 0,3% de monooieato de polioxietileno (20) sorbitano (Tween-80). O volume de dosagem foi de 10 mL/kg via uma sonda oral.

Amostragem de plasma e dosagem

Ratos Sprague Dawley foram deixados em jejum durante a noite em gaiolas individuais, com acesso a 10%. dextrose aquoso. Dois ratos foram dosados com cada cassete. As amostras de plasma (~ 1 mL) foram coletadas a uma hora e duas horas após dosagem dos 2 ratos e reunidos para extração e análise.

4. Análise e extração de composto

A partir de cada cassete, amostras de plasma a 1 e 2 h, plasma em branco, plasma em branco salpicado com todos os compostos a 0,5 pM de cada, foram extraídos pelo processo de exiiação em fase sólida As amostras foram analisadas por HPLC e HPLC/ΕΜ para fim de comparação. As concentrações de plasma foram estimadas com base na concentração única de padrão de 0,5 pM.

Resultados

Quando testados na triagem precedente, alguns compostos desta invenção foram encontrados no piasma em intervalos de uma hora e duas horas após administração oral, com níveis de plasma no sangue de até 1,5 pM.

Tabelas de Compostos

Nos seguintes exemplos, compostos de acordo com a invenção são listados nas TABELAs 1 a 7, em que Me define metila, Et define etila e tBu define ferc-butila. Compostos de acordo com a invenção geraimente mostram valores de IC₅o menores do que cerca de 200 nM e valores EC₅₀ menores do que cerca de 300 nM.

Claims (40)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I):

B

S ,C

R² em que é (C1-10)alquila, (C3-7)cicloalquila, cicloalquila, ou (C1-4)alquil-(C3-7)

a) em que as referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila pode ser mono-, di- ou trissubstituída com (C1-3)alquila; e

b) em que as referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstituída com substituintes selecionados dentre hidróxi e O-(C1-4)alquila; e

c) em que cada um dos referidos grupos alquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com halogênio; e

d) em que cada um dos referidos grupos alquila tendo 4, 5, 6 ou 7 membros tendo opcionalmente um (para os 4, 5, 6 ou 7 membros) ou dois (para os 5, 6 ou 7 membros) grupos -CH2- não diretamente ligados um a cada outro substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C;

X é O ou NH;

R³ é selecionado de 1,1-dimetiletil, ciclopentil, ciclohexil e 1metilciclohexil ;

L⁰ é H, halogênio, (C1-4)alquila, -OH, -O-(C1-4)alquila,

-NH2, -NH(C1-4)alquila ou -N((C1-4)alquil)2;

L¹, L² são cada independentemente halogênio, ciano, (C14)alquila, -O-(C1-4)alquila, -S-(C1-4)alquila, -SO-(C1-4)alquila, ou -SO2Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 4/39 (Ci-4)alquila, em que cada um dos referidos grupos alquila é opcionalmente substituído com de um a três átomos de halogênio; e ou L¹ ou L² (mas não ambos ao mesmo tempo) também podem ser H; ou

L⁰ e L¹ ou

L⁰ e L² podem ser covalentemente ligados para formar, juntos com os dois átomos C aos quais eles são ligados, um anel carbocíclico de 5 ou 6 membros em que um ou dois grupos -CH2- não sendo diretamente ligados um a cada outro podem ser substituídos cada independentemente por -O- ou NR^a em que R^a é H ou (C1-4)alquila, e em que referido anel carboou heterocíclico é opcionalmente mono- ou dissubstituído com (C1-4)alquila;

R² é R²⁰, -NR²²COR²⁰, -NR²²COOR²⁰ -NR²²R²¹ ou

-NR²²CONR²¹R²³, em que

R²⁰ é selecionado dentre (C1-8)alquila, (C3-7)cicloalquila e (C1-4) alquil-(C3-7)cicloalquila, em que referidas cicloalquila e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C1-3)alquila;

R²¹ é H ou R²⁰ como definido acima, R²² e R²³ são independentemente selecionados dentre H e metila,

R¹ é etila ou vinila;

R^C é hidróxi ou NHSO2R^s em que R^S é (C1-6)alquila, (C3-7)cicloalquila, (C1-6)alquil-(C3-7)cicloalquila, fenila, naftila, piridinila, (C1-4) alquil-fenila, (C1-4)alquil-naftila ou (C1-4)alquil-piridinila; cada uma sendo opcionalmente mono-, di- ou trissubstituída com substituintes selecionados dentre halogênio, hidróxi, ciano, (C1-4)alquila, O-(C1-6)alquila, -CO-NH2, -CO-NH(C1-4)alquila, -CO-N((C1-4)alquil)2, -NH2, -NH(C1-4)alquila e -N((C1-4) alquil)2, em que (C1-4)alquila e O-(C1-6)alquila são opcionalmente substituídas com um a três átomos de halogênio; e cada uma sendo opcionalmente monossubstituída com nitro;

ou R^S é -N(R^N2)R^N1), em que R^N1 e R^N2 são independentemente selecionados dentre H, (C1-6)alquila, (C3-7)cicloalquila, (C1-6)alquil-(C3-7) cicloalquila, arila e (C1-6)alquil-arila; em que referida (C1-6)alquila, (C3-7) cicloalquila, (C1-6)alquil-(C3-7)cicloalquila, arila e (C1-6)alquil-arila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 5/39 independentemente selecionados dentre halogênio, (Ci-6)alquila, hidróxi, ciano, O-(C1-6)alquila, -NH2, -NH(C1-4)alquila, -N((C1-4)alquil)2, -CONH2, -CO-NH(C1-4)alquila, -CO-N((C1-4)alquil)2, -COOH, e -COO(C1-6)alquila; ou

R^N2 e R^N1 são ligados, juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados, para formar um heterociclo saturado ou insaturado, monocíclico, de 3 a 7 membros ou um heterociclo saturado ou insaturado, bicíclico, de 9 ou 10 membros, cada opcionalmente contendo de um a três outros heteroátomos independentemente selecionados dentre N, S e O, e cada um sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados dentre halogênio, (C1-6)alquila, hidróxi, ciano, O-(C1-6)alquila, -NH2, -NH(C1-4)alquila, -N((C1-4)alquil)2, -CONH2, -CO-NH(C1-4)alquila, -CO-N((C1-4)alquil)2, -COOH, e -COO(C1-6)alquila;

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do mesmo.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que

B é (C1-10)alquila, (C3-7)cicloalquila, ou (C1-4)alquil-(C3-7) cicloalquila,

a) em que referidas cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C1-3)alquila; e

b) em que referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstituídas com substituintes selecionados dentre hidróxi e O-(C1-4)alquila; e

c) em que todos os referidos grupos alquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídos com halogênio; e

d) em que todos os referidos grupos cicloalquila tendo 4, 5, 6, ou 7 membros tendo opcionalmente um (para os 4, 5, 6 ou 7 membros) ou dois (para os 5, 6 ou 7 membros) grupos -CH2- não diretamente ligados um a cada outro substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C;

X é O ou NH;

R³ é selecionado de 1,1-dimetiletil, ciclopentil, ciclohexil e 1

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 6/39 metilciclohexil;

L⁰ é H, -OH, -O-(Ci-4)alquila, -NH2, -NH(Ci-4)alquila ou -N((Ci-4)alquil)2;

L¹, L² são cada independentemente halogênio, (C1-4)alquila, -O(C1-4)alquila ou -S-(C1-4)alquila (em qualquer estado oxidado como SO ou SO2); e ou L¹ ou L² (mas não ambos ao mesmo tempo ) também podem ser H; ou

L⁰ e L¹ ou

L⁰ e L² podem ser covalentemente ligados para formar, juntos com os dois átomos C aos quais eles são ligados, um anel carbocíclico de 5 ou 6 membros em que um ou dois grupos -CH2- não sendo diretamente ligados um a cada outro podem ser substituídos cada independentemente por -O- ou NR^a em que R^a é H ou (C1-4)alquila, e em que referido anel carboou heterocíclico é opcionalmente mono- ou dissubstituído com (C1-4)alquila;

R² é R²⁰, -NR²²COR²⁰, -NR²²COOR²⁰ -NR²²R²¹ e

-NR²²CONR²¹R²³, em que

R²⁰ é selecionado dentre (C1-8)alquila, (C3-7)cicloalquila e (C1-4) alquil-(C3-7)cicloalquila, em que as referidas cicloalquila e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituída com (C1-3)alquila;

R²¹ é H ou tem um dos significados de R²⁰ como definido acima,

R²² e R²³ são independentemente selecionados dentre H e metila,

R¹ é etila ou vinila;

R^C é hidróxi ou NHSO2R^s em que R^S é (C1-6)alquila, (C3-7)cicloalquila, (C1-6)alquil-(C3-7)cicloalquila, fenila, naftila, piridinila, (C1-4) alquil-fenila, (C1-4)alquil-naftila ou (C1-4)alquil-piridinila; todos sendo opcionalmente mono-, di- ou trissubstituídos com substituintes selecionados dentre halogênio, hidróxi, ciano, (C1-4)alquila, O-(C1-6)alquila, -CO-NH2, -CONH(C1-4)alquila, -CO-N((C1-4)alquil)2, -NH2, -NH(C1-4)alquila e -N((C1-4)alquil)2; e todos sendo opcionalmente monossubstituídos com nitro; ou R^s pode ser ainda selecionado dentre: -NH(C1-6)alquila, N((C1-6)alquil)2, -Het,

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 7/39 \—(Ci_₆)alquila ou ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do mesmo.

3. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo fato de que B é selecionado dentre (C2-8)alquila, (C3-7)cicloalquila e (C1-3)alquil-(C3-7)cicloalquila,

a) em que referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C1-3)alquila; e

b) em que referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstituídas com substituintes selecionados dentre hidróxi e O-(C1-4)alquila; e

c) em que cada um dos referidos grupos alquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com flúor ou monossubstituído com cloro ou bromo; e

d) em que em cada um dos referidos grupos cicloalquila tendo 5, 6 ou 7 membros, um ou dois grupos -CH2- não sendo diretamente ligado um a cada outro pode ser substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que B é selecionado dentre etila, n-propila, terc-butila, 2-metilpropila, 1,2-dimetilpropila, 1,2,2-trimetilpropila, 2-fluoroetila, 3-fluoro propila, 3,3,3-trifluoropropila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila,

1-metilciclopentila e 1-metilciclohexila, e um grupo selecionado dentre:

/ o

O

5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que B é selecionado dentre etila, n-propila, terc-butila, ciclopentila, 1-metilciclopentila, 2-fluoroetila ou 3-fluoropropila.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que X é O.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 8/39 a 6, caracterizado pelo fato de que X é NH.

8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que L⁰ é selecionado dentre H, halogênio, CH3, -OH, -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -OCH(CH3)2, -NHCH3, -NHC2H5, -NHC3H7, -NHCH(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH3)C2H5, -N(CH3)C3H7 e -N(CH3)CH(CH3)2.

9. Composto de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que L⁰ é selecionado dentre H, -OH, -OCH3, halogênio e -N(CH3)2.

10. Composto de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que L⁰ é selecionado dentre H, -OH ou -OCH3.

11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que L¹ e L² são, cada, independentemente selecionados dentre: halogênio, -CH3, -C2H5, -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -OCH(CH3)2, CF3, -SMe, -SOMe, e SO2Me pelo que ou L¹ ou L² pode ser H.

12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que ou um dentre L¹ e L² é -CH3, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO2Me e o outro de L¹ e L² é H.

13. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que L¹ é CH3, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO2Me e L² é H.

14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que L⁰ é selecionado dentre H, -OH e -OCH3; e ou um dentre L¹ e L² é CH3, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO2Me e o outro de L¹ e L² é H.

15. Composto de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que L⁰ é selecionado dentre H, -OH e -OCH3; L¹ é CH3, -F, -Cl, Br, -OMe, -SMe, ou -SO2Me e L² é H.

16. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que L⁰ é selecionado dentre H e -OCH3; L¹ é CH3, -Cl ou -Br e L² é H.

17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que L⁰ e L¹ são covalentemente ligados para

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 9/39 formar, juntos com os resíduos quinolina aos quais eles são ligados, um sistema de anel que é selecionado dentre:

em que cada R^b é independentemente (C1-4)alquila e L² é definido como na reivindicação 1.

18. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que L² é H ou metila.

19. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que R² é R²⁰, -NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰, -NHR²¹ ou -NHCONR²¹R²³, em que

R²⁰ é selecionado dentre (C1-8)alquila, (C3-7)cicloalquila, e (C1-3) alquil-(C3-7)cicloalquila, em que cada um dos referidos grupos cicloalquila e alquil-cicloalquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com (C1-3)alquila; e

R²¹ é H ou R²⁰ como definido acima; e

R²³ é H ou metila.

20. Composto de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que R² é -NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰, ou -NHR²¹.

21. Composto de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que R²⁰ e R²¹ são independentemente selecionados dentre: metila, etila, n-propila, /-propila, n-butila, 1-metilpropila, 2-metilpropila, tercbutila, 2,2-dimetilpropila, 1,1-dimetilpropila, 1,2-dimetilpropila, 1,2,2trimetilpropila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, ciclopropilmetila, ciclobutilmetila, ciclopentilmetila, ciclohexilmetila, cada um dos referidos grupos cicloalquila ou alquil-cicloalquila opcionalmente sendo mono- ou dissubstituído com metila ou etila.

22. Composto de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que R²⁰ e R²¹ são independentemente selecionados dentre metila, etila, n-propila, /-propila, 2,2-dimetilpropila, ciclopentila e

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 10/39 ciclopentilmetila.

23. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que R¹ é vinila.

24. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que R^C é hidróxi, NHSO2-metila, NHSO2etila, NHSO2-(1-metil)etila, NHSO2-propila, NHSO2-ciclopropila, NHSO2-CH2ciclopropila, NHSO2-ciclobutila, NHSO2-ciclopentila ou NHSO2-fenila.

25. Composto de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que R^C é hidróxi.

26. Composto de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que R^C é NHSO2-ciclopropila.

27. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que R^C é NHSO2N(R^N2)R^N1), em que R^N1 e R^N2 são independentemente selecionados dentre H, (C1-4)alquila, (C3-7) cicloalquila, (C1-3)alquil-(C3-7)cicloalquila, fenila, e (C1-3)alquil-fenila; em que referida (C1-4)alquila, (C3-7)cicloalquila, (C1-3)alquil-(C3-7)cicloalquila, fenila e (C1-3)alquil-fenila são opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados dentre halogênio, (C1-6) alquila, hidróxi, ciano, O-(C1-6)alquila, -NH2, -NH(C1-4)alquila, -N((C1-4)alquil)2, -CO-NH2, -CO-NH(C1-4)alquila, -CO-N((C1-4)alquil)2, -COOH, e -COO(C1-6) alquila; ou

R^N2 e R^N1 são ligados, juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados, para formar um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros que pode ser saturado ou insaturado, opcionalmente contendo de um a três outros heteroátomos independentemente selecionados dentre N, S e O, e opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes independentemente selecionados dentre halogênio, (C1-6)alquila, hidróxi, ciano, O-(C1-6)alquila, -NH2, -NH(C1-4)alquila, -N((C1-4)alquil)2, -CONH2, -CO-NH(C1-4)alquila, -CO-N((C1-4)alquil)2, -COOH, e -COO(C1-e)alquila.

28. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que

B é (C2-8)alquila, (C3-7)cicloalquila ou (C1-3)alquil-(C3-7)ciclo

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 11/39 alquila,

a) em que as referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila pode ser mono-, di- ou trissubstituída com (C1-3)alquila; e

b) em que as referidas alquila, cicloalquila, e alquil-cicloalquila podem ser mono- ou dissubstituída com substituintes selecionados dentre hidróxi e O-(C1-4)alquila; e

c) em que cada um dos referidos grupos alquila pode ser mono-, di- ou trissubstituído com flúor ou monossubstituído com cloro ou bromo; e

d) em que em cada um dos referidos grupos cicloalquila tendo 5, 6 ou 7 membros, um ou dois grupos -CH2- não sendo diretamente ligado um a cada outro pode ser substituído por -O- de modo que o átomo O é ligado ao grupo X via pelo menos dois átomos C;

X é O ou NH;

R³ é selecionado de 1,1-dimetiletil, ciclopentil, ciclohexil e 1metilciclohexil;

L⁰ é H, -OH, -OCH3, halogênio ou -N(CH3)2;

L¹ e L² são, cada^, independentemente selecionados dentre: halogênio, -CH3, -C2H5, -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -OCH(CH3)2, CF3, -SMe, -SOMe, e SO2Me, pelo que ou L¹ ou L² pode ser H;

R² é R²⁰, -NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰, -NHR²¹ e -NHCONR²¹R²³, em que

R²⁰ é selecionado dentre (C1-8)alquila, (C3-7)cicloalquila, (C1-3) alquil-(C3-7)cicloalquila, em que referida cicloalquila e alquil-cicloalquila podem ser mono-, di- ou trissubstituídas com (C1-3)alquila; e

R²¹ é H ou R²⁰ como definido acima; e

R²³ é H ou metila;

R¹ é etila ou vinila; e

R^C é hidróxi, NHSO2-metila, NHSO2-etila, NHSO2-(1-metil)etila, NHSO2-propila, NHSO2-ciclopropila, NHSO2-CH2-ciclopropila, NHSO2ciclobutila, NHSO2-ciclopentila ou NHSO2-fenila.

29. Composto de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que

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B é selecionado dentre: etila, n-propila, terc-butila, 2-metilpropila,

1,2-dimetilpropila, 1,2,2-trimetilpropila, 2-fluoroetila, 3-fluoropropila, 3,3,3 trifluoropropila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila,

1-metilciclopentila e 1-metilciclohexila, e um grupo selecionado dentre:

R³ é selecionado dentre 1,1-dimetiletila, ciclopentila, ciclohexila e 1-metilciclohexila; L⁰ é H, -OH ou-OCH3; L¹ é CH3, -F, -Cl, -Br, -OMe, -SMe, ou -SO2Me; L² é H;

R² é -NHCOR²⁰, -NHCOOR²⁰ ou -NHR²¹, em que R²⁰ e R²¹ são independentemente selecionados dentre metila, etila, n-propila, /-propila, 2,2 dimetilpropila, ciclopentila e ciclopentilmetila;

R¹ é vinila; e R^C é hidróxi ou NHSO2-ciclopropila.

30. Composto de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que B é selecionado dentre etila, n-propila, terc-butila, ciclopentila, 1-metilciclopentila, 2-fluoroetila e 3-fluoropropila; R³ é selecionado dentre 1,1-dimetiletila e ciclohexila; L⁰ é H ou -OCH3; L¹ é -CH3, -Cl, ou -Br; L² é H; e R^C é hidróxi.

31. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula

R² em que B, L⁰, L¹ e R² são definidos como na tabela abaixo

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Composto B L⁰ L¹ R² 1001 Λ MeO- MeO- %aa H 1002 MeO- MeO- %aa H 1003 ό MeO- MeO- O / -AA H 1004 C MeO- MeO- %aa H 1005 o MeO- Me- XO H 1006 o MeO- Me- áaA H 1007 ό MeO- Me- 4* H 1008 ό MeO- Me- Ato H 1009 ό Me₂N- Me- O / -AA H 1010 ό Me₂N- Me- A-W H 1011 ό Me₂N- Me- H 1012 ό Me2N- Me- H 1013 ό MeO- Me- sA H 1014 ό MeO- Me- •X H

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Composto B L⁰ L¹ R² 1015 δ MeO- Me- O •<A H 1016 δ MeO- Me- Ά-Α H 1017 δ MeO- Me- H 1018 δ MeO- Me- 'AHj 1019 δ MeO- Me- O N 1020 δ MeO- Et- H 1021 δ MeO- Et- A H 1022 δ MeO- Et- H 1023 δ MeO- Et- O •<A H 1024 Λ F MeO- Me- O / νΆ H 1025 7 F MeO- Me- H 1026 δ MeO- Me- O / νΆ H 1027 δ MeO- Me- H

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Composto B L⁰ L¹ R² 1028 ό MeO- Br- O •<A H 1029 ό MeO- Br- H 1030 ό MeO- Br- H 1031 ό MeO- Br- •<ÂA H 1032 ό tBuO- Me- H 1033 ό tBuO- Me- O H 1034 ό HO- Me- H 1035 ό HO- Me- O •<A H 1036 MeO- Me- O •<A H 1037 MeO- Me- O / -sAA H 1038 MeO- Me- H 1039 MeO- Me- 1040 ό MeO- Me- O

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 16/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1041 ό MeO- Me- O sA H 1042 ό MeO- Cl H 1043 ό MeO- Br O óA H 1044 ό MeO- Cl O <nA/ H 1045 ό MeO- Cl H 1046 ό MeO- Me- O | sAo-A H 1047 ό MeO- Me- O •sA H 1048 ό MeO- Cl O H 1049 ό MeO- Br o I sAA H 1050 ό MeO- Cl o I sAA H 1051 ό MeO- F O óA H 1052 ό MeO- F N H 1053 ό MeO- Cl O •sA H

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Composto B L⁰ L¹ R² 1054 ό MeO- Br O •sAo^z H 1055 ό MeO- Br O Vr 1056 ό MeO- Br O H 1057 ό HO Me H 1058 ό HO Me H 1059 ό H Br H 1060 ό H Br H 1061 ό H Br O á-A H 1062 ό H Br H 1063 ό F Me H 1064 ' ^X^'^C: MeO- Br O H 1065 Α> MeO- Br O H 1066 MeO- Br O H 1067 τ MeO- Br O -^1, H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 18/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1068 O^ L ^O MeO- Br UUO H 1069 ^CF3\ -- ' MeO- Br uxo H 1070 L MeO- Br H 1071 X MeO- Br α,ο H 1072 O L ^O MeO- Br O 1 •>>4a H 1073 ^CF3\. MeO- Br O 1 AkA H 1074 A MeO- Br O 1 A^o^ H 1075 l. MeO- Br AkA H 1076 X MeO- Br O A^O^ H 1077 O^ c O X MeO- Br A^ H 1078 A MeO- Br A^ H 1079 k. MeO- Br A^ H 1080 χ. MeO Br A^ H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 19/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1081 ψ MeO Br O R^^ H 1082 a. H Cl H 1083 a. H Cl •Jio H 1084 a. H Cl O R^^ H 1085 a. H Cl H 1086 a. H Cl O H 1087 a. H Cl O SR 1088 a. H Cl RA H 1089 a. H Cl O H 1090 aí. EtO- Br O H 1091 r. EtO- Br O •\A< H 1092 a. EtO- Br R^ H 1093 a. EtO- Br '^N^O H 1094 r. PrO- Br O á_nA/- H 1095 R PrO- Br O n H

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Composto B L⁰ L¹ R² 1096 a. PrO- Br H 1097 a. PrO- Br H 1098 a>. H Br O •<A H 1099 ^C'^FA\ MeO- Br H 1100 MeO- Cl O H 1101 a. EtO- Me O sA H 1102 a. EtO- Me O X-UH 1103 a. EtO- Me H 1104 a. EtO- Me H 1105 a. MeO- CN H 1106 a. Br MeO- H 1107 a. MeO- CN O H 1108 MeO- Br •<A H 1109 MeO Br H 1110 O->. MeO- Br H 1111 MeO- Br H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 21/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1112 γ>· MeO- Br H 1113 MeO- Br O xL· H 1114 F^>· MeO Br O xL· H 1115 o.>. MeO- Br O •AL· H 1116 MeO Br O •AL· H 1117 K MeO Br O •AL· H 1118 MeO Br dA o H 1119 MeO Br O . H 1120 A 0' MeO Br O . H 1121 MeO Br O . H 1122 A' MeO Br O . H 1123 CA MeO CN O •xAk H 1124 CA MeO CN O -A H 1125 MeO- Cl A^ H 1126 ^CF^z\ MeO- Cl H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 22/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1127 L, MeO Cl H 1128 X MeO Cl H 1129 d' MeO Cl H 1130 MeO Cl H 1131 MeO Cl A-C H 1132 A MeO Cl H 1133 MeO Cl O A H 1134 ^CF3\Z~\.. MeO Cl O A H 1135 u MeO Cl O A- H 1136 X. MeO Cl O A- H 1137 d' MeO Cl O A H 1138 ··-·>-- MeO Cl O A H 1139 MeO Cl O A H 1140 A MeO Cl O A H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 23/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1141 MeO Cl O VA H 1142 MeO Cl O VA H 1143 Y MeO Cl O <ΛΑ H 1144 χ. MeO Cl O <AA H 1145 A MeO Cl O <AA H 1146 MeO Cl O VA H 1147 MeO Cl O <AA H 1148 K MeO Cl O <AA H 1149 MeO Cl O W 1150 ^CF’^^- MeO Cl O H 1151 γ MeO Cl O H 1152 X MeO Cl O H 1153 MeO Cl O H 1154 ^CF’^^- MeO Br O H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 24/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1155 u MeO Br O H 1156 MeO Br O H 1157 X H -SMe O H 1158 H -SMe oco H 1159 X H -SMe O •ςλζ H 1160 X H -SMe χΧ H 1161 X H -SMe O x^X^ H 1162 X H -SMe O xX H 1163 X H -SMe O ΧΛ H 1164 X H -CF3 χΧ H 1165 X H -CF3 O xx H 1166 X H -CF3 O •ςλζ H 1167 X Cl Cl O X H 1168 X Cl Cl O MX H 1169 Cl Cl χΧ H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 25/39

Composto B L⁰ L¹ R² 1170 Cl Cl O H 1171 cx· H -SO2Me H 1172 CX H -SO2Me O ^nA^ H 1173 CX· H Me- O •<A H 1174 CX· H Me- O •V^o- H 1175 CX H Me- O QA H 1176 CX H Me- H 1177 H Me- O H 1178 H Me- O •<AX H 1179 cx· H -SO2Me O •<AX H 1180 CX· H -SO2Me O v°- H 1181 CX· H -OMe A·^ H

32. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 26/39

R²

em que B, L⁰, L¹ e R² são definic os como na tabela abaixo Composto N° B L⁰ L¹ R² 2001 ό MeO- Me- H 2002 ό MeO- Me- N H 2003 ό MeO- Me- *''NH₂ 2004 ό MeO- Me- ^An- H 2005 ό MeO- Me- ^An^\ H 2006 ό MeO- Me- •ÇO H 2007 ό MeO- Me- O N H 2008 ό MeO- e- sW H 2009 ό MeO- e- 2010 ό MeO- e-

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 27/39

Composto N° B L⁰ L¹ R² 2011 δ Me°- e- Ύ 2012 δ Me°- e- ·α°·Λ H 2013 Me°- e- ° N H 2014 Me°- e- A°U> H 2015 δ Me°- e- ° N H 2016 δ Me°- e- ·<ΛΌ H 2017 -δ Me°- r- H 2018 Ά MeO- e- ° N H 2019 Α Me°- e •aVO H 2020 -V ή' ζ° MeO- Me aVO H

33. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 28/39

em que B, W¹, W² e R² são dei finidos como na tabela abaixo Composto N° B W¹ W² R² 3001 ό -O- -O- N H 3002 ό -O- -O- -JX H 3003 ό -CH2- -O- O N H 3004 ό -CH2- -O- N H 3005 ό -CH2- -O- vO H 3006 ό -CH2- -O- H 3007 ό -CH2- -O- Xh₂ 3008 ό -CH2- -O- -JX H 3009 ό -CH2- -O- A^· H 3010 ό -CH2- -O- •sÂX H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 29/39

Composto N° B W¹ W² R² 3011 ό -CH2- -CH2- O sV 3012 ό -CH2- -CH2- H 3013 ό -CH2- -CH2- O N H

34. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula

R² em que B, L⁰, L² e R² são definidos como na tabela abaixo

Composto N° B L⁰ L² R² 4001 ό MeO- Me- H 4002 ό MeO- Me- H 4003 ό MeO- Me- <ΛΌ H 4004 ό MeO- Me- A) H 4005 ό Me2N- Me- O / H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 30/39

Composto N° B L⁰ L² R² 4006 ό Me2N- Me- <N^O H 4007 ó Me2N- Me- N H 4008 ó Me2N- Me- vO H 4009 ó MeO- Me- O N H 4010 ό MeO- Me- H 4011 ό MeO- Me- H 4012 ό MeO- MeO- O N H 4013 ó MeO- MeO- ·<Λό H 4014 ó MeO- MeO- H 4015 ó MeO- MeO- O / -,Λ> H 4016 ό Me- MeO- O N H 4017 ό Me- MeO- H

35. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 31/39

R² em que B, L⁰, L² e R² são definidos como na tabela abaixo

Composto N° B L⁰ L² R² 5001 ό MeO- Me- H 5002 ό MeO- Me- O H 5003 ό MeO- Me- O / N H 5004 ό MeO- Me- H 5005 ό MeO- Me- H 5006 ό MeO- Me- sA H 5007 ό MeO- Me- AbO H

36. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 32/39

R^{2 1}, L² e R² são definidos como na tabela abaixo em que B, L⁰,

Composto N° B L² L⁰ L¹ R² 6001 ό MeO- H Me •<nA H 6002 ό MeO- H Me H ' 6003 ό MeO- H Me O n H 6004 ό MeO- H Me O •SA H 6005 ό Me H Br O N H 6006 ό Me H Br -nM H 6007 ό Me H Br O W 6008 ό Me H Br O 1 <Λλ H 6009 ό Me H Br aW H 6010 ό Me H Br O n H

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 33/39

Composto N° B L² L⁰ L¹ R² 6011 ό Me H Me O n H 6012 ό Me H Me -nM H ' 6013 ό Me H Me O •SA H 6014 ό Me H Me N H 6015 ό Me MeO- Me aW H 6016 ό Me MeO- Me •aUx H 6017 ό Br H Br O n H 6018 ό Br H Br O Vr 6019 ό Br H Cl A^ H 6020 ό Br H Cl O Vr

37. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula

B so— r^s em que B, R^Q e R^S são definidos como na tabela abaixo

Petição 870190033906, de 09/04/2019, pág. 34/39

Composto N° B R^Q R^S 7001 ό HN'^'' 1—\ N=X o Ά 7002 ό O ^h.ⁿAR I nR ' Ά 7003 ό \ o Rr rR A R- N

38. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de fórmula I, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 37, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do 5 mesmo, em mistura com um meio veículo farmaceuticamente aceitável ou agente auxiliar.

39. Uso de um composto de fórmula I, incluindo um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de ser para a

10 fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de infecção viral de hepatite C em um mamífero.

40. Artigo de fabricação, caracterizado pelo fato de que compreende material de embalagem em que está contida uma composição eficaz para tratar uma infecção por HCV ou para inibir a NS3 protease de

15 HCV, e sendo que o material de embalagem compreende um rótulo que indica que a composição pode ser usada para tratar infecção por vírus da hepatite C, e sendo que referida composição compreende um composto de fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 37, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um éster do mesmo.

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