EA009295B1 - Соединения в качестве ингибиторов вируса гепатита с - Google Patents

Abstract

Соединения формулы (I), где В, X, R, L, L, L, R, Rи Rимеют значения, определенные в настоящем описании. Соединения можно использовать в качестве ингибиторов протеазы NS3 вируса гепатита С для лечения инфекции вируса гепатита С.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, способам их синтеза и композициям и к способам лечения инфекции вируса гепатита С. Прежде всего настоящее изобретение относится к новым аналогам пептидов, фармацевтическим композициям, содержащим такие аналоги, и к способам применения таких аналогов для лечения инфекции вируса гепатита С человека (ВГС).

Предпосылки создания изобретения

Вирус гепатита С (ВГС) является основным этиологическим фактором, вызывающим широко распространенные во всем мире гепатит после переливания крови и домашний гепатит (в отличии от гепатита А и гепатита В). Известно, что во всем мире около 200 млн человек инфицированы этим вирусом. Высокий процент носителей этой инфекции страдают от хронической инфекции, а у большинства развивается хроническое заболевание печени, так называемый хронический гепатит С. Эти больные в свою очередь относятся к группе высокого риска тяжелых заболеваний печени, таких как цирроз печени, гепатоцеллюлярный рак и терминальное заболевание печени, которые приводят к летальному исходу.

Механизмы, по которым развивается персистенция вируса и высокая частота хронических заболеваний печени до конца не изучены. В настоящее время не известно, каким образом ВГС взаимодействует с иммунной системой организма хозяина и происходит инвазия вируса. Кроме того, до сих пор не изучена роль клеточной и гуморальной иммунной системы при защите от инфекции ВГС и связанных с ней заболеваний. Установлено, что иммуноглобулины можно использовать для профилактики вирусного гепатита, связанного с переливанием крови, однако, в настоящее время иммуноглобулины не рекомендованы Центром по контролю заболеваемости для лечения указанных заболеваний. Отсутствие эффективной защитной реакции иммунной системы препятствует созданию вакцины или проведению соответствующих мероприятий вторичной профилактики, и таким образом в настоящее время существует острая необходимость в разработке новых противовирусных средств.

В последнее время проводятся различные клинические испытания для выявления фармацевтических агентов, обладающих эффективностью при лечении инфекции ВГС у пациентов, пораженных хроническим гепатитом С. Были исследованы α-интерферон в отдельности и в комбинации с другими противовирусными агентами. Установлено, что значительное число добровольцев не чувствительны к такому лечению, а у пациентов, на которых указанные агенты оказывали благоприятное действие, наблюдался рецидив заболевания после прекращения лечения.

До настоящего времени единственным испытанным в клинике средством, оказывающим благоприятное действие при лечении пациентов, страдающих от хронического гепатита С, является интерферон. Однако при лечении интерфероном наблюдается низкая степень пролонгированной ответной реакции и тяжелые побочные действия (например, ретинопатия, тироидит, острый панкреатит, депрессия), что снижает качество жизни пациентов, проходящих курс лечения. Недавно было установлено, что интерферон действует в комбинации с рибавирином на пациентов, не чувствительных к лечению одним интерфероном, но при такой комбинационной терапии не снижаются побочные действия интерферона. ПЭГилированные формы интерферонов, такие как ΡΕΟ-Ιηίτοη и Редакук частично снижают указанные отрицательные побочные действия, однако, проблема выбора противовирусных лекарственных средств для перорального введения при лечении ВГС все еще остается актуальной.

Следовательно, в настоящее время существует необходимость в разработке эффективных противовирусных агентов для лечения ВГС, которые помогут исключить существующие ограничения при медикаментозном лечении.

ВГС является РНК-вирусом семейства Е1ау1ушбае и включает положительную цепь РНК с оболочкой. Одноцепочечная вирусная РНК генома ВГС включает приблизительно 9500 нуклеотидов и единственную открытую рамку считывания (ОКЕ), кодирующую один белок-предшественник, содержащий приблизительно 3000 аминокислотных остатков. В инфицированных клетках этот белок расщепляется по многочисленным связям клеточными и вирусными протеазами с образованием структурных и неструктурных (N8) белков. В случае ВГС зрелые неструктурные белки (N82, N83, Ν84Α, Ν84Β, Ν85Α и Ν85Β) образуются при действии двух вирусных протеаз. Первая протеаза, в настоящее время мало изученная, расщепляет связь Ν82-Ν83 (названная протеазой N82/3), вторая протеаза является сериновой протеазой, расположенной в Ν-концевом фрагменте N83 (протеаза N83), и опосредует расщепление N83 на всех последующих стадиях, как в цис-конформации участков расщепления Ν83-Ν84Α, так и в трансконформации остальных участков расщепления Ν84Α-Ν84Β, Ν84Β-Ν85Α, Ν85Α-Ν85Β. Ν84Α является многофункциональным белком, то есть действует в качестве кофактора протеазы N83 и возможно способствует локализации N83 и других компонентов вирусной репликазы в мембране. Предполагается, что образование комплекса протеазы N83 с белком Ν84Α необходимо для процессинга, причем комплекс повышает протеолитическую эффективность расщепления всех участков расщепления. Белок N83 проявляет также активность нуклеозидтрифосфатазы и РНК геликазы. Белок Ν85Β является РНК-зависимой РНК-полимеразой, которая включена в процесс репликации ВГС.

Основным подходом при создании противовирусных агентов является инактивация кодируемых вирусом ферментов, играющих важную роль при репликации вируса.

Сравнительно недавно установлено, что протеаза Ν83 проявляет дополнительное действие, а имен

- 1 009295 но блокирует опосредованную интерфероном противовирусную активность клеток в инфицированных клетках (Еоу и др., 8сюпсс. 17 апреля (2003)). В связи с этим можно предположить, что протеаза Ν83/Ν84Α представляет собой двойную терапевтическую мишень, при ингибировании которой можно блокировать вирусную репликацию и поддерживать ответную реакцию на интерферон в инфицированных ВГС клетках.

В заявке АО 00/09543 описаны соединения формулы

где Я² предпочтительно означает незамещенный или моно- или дизамещенный хинолинильный остаток, определенный в данном контексте, причем указанные соединения являются ингибиторами протеазы N83 ВГС, то есть основного фермента, ответственного за репликацию ВГС.

В настоящем изобретении предлагаются производные трипептида, характеризующиеся повышенной активностью в отношении протеазы N83 ВГС. Более того, соединения проявляют высокую активность в клеточных культурах.

Один предпочтительный объект настоящего изобретения относится к соединениям по настоящему изобретению, которые специфически ингибируют протеазу N83 и практически не ингибируют другие вирусные сериновые протеазы, такие как эластаза из лейкоцитов человека (НЬЕ) или цистеиновые протеазы, такие как катепсин В из печени человека (са! В).

По сравнению с соединениями, описанными в заявке АО 00/09543, соединения по настоящему изобретению обладают наожиданными преимуществами. В основном они характеризуются одним или более следующими преимуществами:

более низкие значения Ю50 по данным определения активности протеазы Ν83-Ν84Α, более низкие значения ЕС50 по данным анализа репликации РНК ВГС с использованием клеток, более высокая растворимость и/или более высокий уровень в плазме после перорального введения крысам.

Краткое описание изобретения

В объем настоящего изобретения включены рацемат, диастереоизомер или оптический изомер соединения формулы (I)

где В означает (С1-Сю)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил или (С1-С4)алкил(С₃-С₇)циклоалкил,

а) где указанный алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил являются моно-, ди- или тризамещенным группой (С1-С₃)алкил и

б) где указанный алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил являются моно- или дизамещенным группой, которую выбирают из групп гидрокси и О-(С1 -С₄)алкил и

в) где указанный алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил являются моно-, ди- или тризамещенным атомами водорода и

г) где каждая из указанных циклоалкильных групп означает 4-, 5-, 6- или 7-членное кольцо, необязательно содержащее одну (в случае 4-, 5-, 6- или 7-членных колец) или две (в случае 5-, 6- или 7членных колец) -СН₂-групп, соединенных друг с другом не напрямую и разделенных группой -О- таким образом, что атом кислорода соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода;

X означает О или ΝΗ;

В³ означает (С₂-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил или (С1-С₃)алкил(С₃-С₇)циклоалкил, где указанный алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил являются моно-, ди- или тризамещенными группой (С1-С₄)алкил;

Ь° означает Н, галоген, (С1-С₄алкил, -ОН, -О-(С1-С₄)алкил, -ΝΗ₂, -1\1Н(С1-С₄)алкил или -Ν((ΟιС₄)алкил)₂;

Ь¹, Ь², каждый независимо, означает галоген, циано, (С1-С₄)алкил, -О-(С1-С₄)алкил, -8-(С1-С₄)алкил, -8О-(С1-С₄)алкил или -8О₂-(С1-С₄)алкил, где каждая из указанных алкильных групп необязательно замещена от 1 до 3 атомов галогена и Ь¹ или Ь² (но не оба одновременно) означают Н; или

-2009295 т 0 Т 1

Ь и Ь или

Ь⁰ и Ь² связаны ковалентно и вместе с двумя атомами углерода, к которым они присоединены, образуют 5- или 6-членное карбоциклическое кольцо, в котором одна или две -СН2-группы связаны друг с другом не напрямую, и независимо разделены группами -О- или ΝΚ.'¹. где Е^а означает Н или (С1-4)алкил и где указанное карбо- или гетероциклическое кольцо необязательно является моно- или дизамещенным группой (С₁-С₄)алкил;

Е² означает Е²⁰, -МЕ²²СОЕ²⁰, -\Н СООЕ , -ΝΚ²²Κ²¹ и -ΝΚ²²ΟΘΝΚ²¹Κ²³, где Е²⁰ выбирают из группы, включающей (С₁-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил или (С₁-С₄)алкил(С₃-С₇)циклоалкил, причем указанный циклоалкил и алкилциклоалкил являются моно-, ди- или тризамещенными группой (С_1-С₃)алкил;

Е²¹ означает Н или К²⁰, как определено выше,

Е²² и Е²³ независимо выбирают из группы, включающей водород и метил,

Е¹ означает этил или винил;

Е^с означает гидрокси или ЫН8О2Е⁸, где Е⁸ означает (С1-С₆)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С₁С₆)алкил(С₃-С₇)циклоалкил, фенил, нафтил, пиридинил, (С₁-С₄)алкилфенил, (С₁-С₄)алкилнафтил или (С₁С₄)алкилпиридинил, каждый из которых необязательно является моно-, ди- или тризамещенным группами, которые выбирают из группы, включающей галоген, гидрокси, циано, (С₁-С₄)алкил, О-(С₁-С₆)алкил, -СО-ЯН₂, -СО-ХН^-СДалкил, -СО-Ы((С₁-С₄)алкил)₂, -ΝΗ₂, ^Н(С|-С₄)алкил и -Ы((С₁-С₄)алкил)₂, причем (с1-с4)алкил и О-(С1-С6)алкил необязательно замещены от 1 до 3 атомов галогена и каждый из которых необязательно монозамещен нитрогруппой; или

Е⁸ означает -Ы(Е^№)Е^№, где Е^ж и Е^№ независимо выбирают из группы, включающей Н, (С₁С₆)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С₁-С₆)алкил(С₃-С₇)циклоалкил, арил и (С_1-6)алкиларил; причем указанные (С₁-С₆)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С₁-С₆)алкил(С₃-С₇)циклоалкил, арил и (С₁-С₆)алкиларил необязательно замещены одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген, (С₁-С₆)алкил, гидрокси, циано, О-(С₁-С₆)алкил, -ΝΗ₂, -ХН^-СДалкил 1, -Ы((С₁-С₄)алкил)₂, -СОΝΗ₂, -СО-МЩС^СДалкил, -СО-Ы((С_1-4)алкил)₂, -СООН и -СОО(С₁-С₆)алкил; или

Е^№ и Е^№ соединены и вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 3-7-членный моноциклический насыщенный или ненасыщенный гетероцикл или 9-10-членный бициклический, насыщенный или ненасыщенный гетероцикл, каждый из которых необязательно содержит от 1 до 3 дополнительных гетероатомов, которые независимо выбирают из Ν, 8 и О и каждый из которых необязательно замещен одним или более заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген, (С₁-С₆)алкил, гидрокси, циано, О-(С₁-С₆)алкил, -ΝΗ₂, -ЫН(С₁-С₄)алкил, -Ы((С₁-С₄)алкил)₂, -СО-ХН₂, -СО-ХН^-СДалкил, -СО-Ы((С₁-С₄)алкил)₂, -СООН и -СОО(С₁-С₆)алкил;

или его фармацевтически приемлемых солей или сложных эфиров.

В объем настоящего изобретения включена фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество соединения формулы I, оказывающее противовирусное действие на вирус гепатита С, или его фармацевтически приемлемой соли или эфира в смеси по крайней мере с одним фармацевтически приемлемым носителем или вспомогательным агентом.

Другой объект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, которая, кроме того, включает терапевтически эффективное количество по крайней мере одного другого противовирусного агента.

Еще один важный объект настоящего изобретения относится к способу лечения или профилактики инфекции вируса гепатита С у млекопитающего, причем способ включает введение млекопитающему эффективного количества соединения формулы I в отношении вируса гепатита С, или его фармацевтически приемлемой соли или эфира, или композиции, описанной выше, отдельно или в комбинации по крайней мере с одним другим противовирусным агентом, который вводят отдельно или в комбинации с указанным соединением.

Настоящее изобретение включает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемых соли или эфира, как описано выше, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики инфекции вируса гепатита С у млекопитающих.

Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения

Определения.

В настоящем описании используются следующие определения, если не указано иное.

Символы (Е) или (8), использованные в названии соединений, означают абсолютную конфигурацию заместителя или асимметрического центра соединения формулы I, при этом эти символы относятся к соединению в целом, а не к заместителю или асимметическому центру соединения в отдельности.

Символы «Р1, Р2 и Р3», использованные в данном контексте, означают номера аминокислотных остатков, начиная с С-концевого фрагмента пептидных аналогов по направлению к Ν-концевому фрагменту (т.е. Р1 означает аминокислотный остаток 1 от С-концевого фрагмента, Р2 означает аминокислотный остаток 2 от С-концевого фрагмента и т.п.) (см. статью Вегдег А. и 8с11сс111сг I., Тгапкасйопк о£ 111е Еоуа1 8ос1е1у Ьопбоп кепек В257, 249-264 (1970)).

Термин «(1Е,28)-винил-АССА», использованный в данном контексте, означает соединение формулы

- 3 009295

О а именно (1 Я,28) 1-амино-2-этенилциклопропанкарбоновую кислоту.

Термин <<(С1-С_п)алкил», использованный в данном контексте отдельно или в комбинации с другим заместителем, означает ациклический, прямой или разветвленный алкильный заместитель, содержащий от 1 до и атомов углерода.

Термин <<(С1-Сб)алкил» включает, без ограничения перечисленным, метил, этил, н-пропил, н-бутил, 1-метилэтил (изопропил), 1-метилпропил, 2-метилпропил, 1,1-диметилэтил (трет-бутил), пентил и гексил. Сокращения Ме и Рг означают метильную и н-пропильную группы соответственно.

Термин <<(Сз-С7)циклоалкил», использованный в данном контексте отдельно или в комбинации с другим заместителем, означает циклоалкильный заместитель, содержащий от 3 до 7 атомов углерода, и включает, без ограничения перечисленным, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

Термин «(С1-С_п)алкил(Сз-С7)циклоалкил», использованный в данном контексте, означает алкиленовый радикал, содержащий от 1 до и атомов углерода, к которому напрямую присоединен циклоалкильный радикал, содержащий от 3 до 7 атомов углерода, и включает, без ограничения перечисленным, цикло пропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил, 1-циклопентилэтил, 2-циклопентилэтил, циклогексилметил, 1-цикло гексилэтил, 2-цикло гексилэтил и цикло те птилпропил.

Термин «арил» или «Се или Сюарил», использованный в данном контексте взаимозаменяемо, отдельно или в комбинации с другим заместителем, означает ароматическую моноциклическую группу, содержащую 6 атомов углерода, или ароматическую бициклическую группу, содержащую 10 атомов углерода. Термин арил включает, без ограничения перечисленным, фенил, 1-нафтил или 2-нафтил.

Термин «(С1-С_п)алкиларил», использованный в данном контексте, означает алкильный радикал, содержащий от 1 до и атомов углерода, к которому присоединен арил. Примеры радикалов (С1Сз)алкиларил включают, без ограничения перечисленным, бензил(фенилметил), 1-фенилэтил, 2-фенилэтил и фенилпропил.

Термин «О-(С1-С_п)алкил» или «(С|-С_м)алкокси». использованный в данном контексте отдельно или в комбинации с другим заместителем, означает радикал -О-(С1-Сп)алкил, где алкил имеет значения, определенные выше, содержит от 1 до и атомов углерода и включает метокси, этокси, пропокси, 1метилэтокси, бутокси и 1,1-диметилэтокси. Последний радикал обычно называется трет-бутокси.

Термин «галоген», использованный в данном контексте, означает заместитель, который выбирают из группы, включающей фтор, хлор, бром или иод.

Термин «фармацевтически приемлемый сложный эфир», использованный в данном контексте отдельно или в комбинации с другим заместителем, означает сложные эфиры соединения формулы I, в которых любые карбоксильные функциональные группы, предпочтительно концевые карбоксильные группы, заменены на алкоксикабонильную группу

О

где остаток Я в составе эфира выбирают из группы, включающей алкил (включая, без ограничения перечисленным, метил, этил, н-пропил, трет-бутил, н-бутил), алкоксиалкил (включая, без ограничения перечисленным, метоксиметил), алкоксиацил (включая, без ограничения перечисленным, ацетоксиметил), алкиларил (включая, без ограничения перечисленным, бензил), арилоксиалкил (включая, без ограничения нижеперечисленным, феноксиметил), арил (включая, без ограничения нижеперечисленным, фенил), необязательно замещенные группами галоген, (С1-С₄)алкил или (С1-С₄)алкокси. Другие пригодные эфиры пролекарств описаны в книге Όεδίβη о£ ргобгидк, Виибдаагб, Η. Εά. ΕΗενίετ (1985). Такие фармацевтически приемлемые эфиры обычно гидролизуются ίη νίνο при введении их млекопитающему и превращаются в кислотную форму соединения формулы I. При описании упомянутых выше эфиров, если не указано иное, все алкильные группы преимущественно содержат от 1 до 16 атомов углерода, прежде всего от 1 до 6 атомов углерода. Все арильные группы в таких эфирах преимущественно включают фенильную группу. Прежде всего эфиры включают С1-С1₆алкиловый эфир, незамещенный бензиловый эфир или бензиловый эфир, замещенный по крайней мере одним атомом галогена, одной группой (Д-Свалкил, С]Сбалкокси, нитро или трифторметил.

Термин «фармацевтически приемлемая соль» означает соль соединения формулы I, которая является пригодной при использовании в медицине при контактировании с тканями человека и животных и не оказывает отрицательного действия, т.е. не обладает токсичностью, не вызывает раздражения и аллергической реакции и т.п., соответствует достаточно высокому соотношению выгода/риск, причем указанная соль образует раствор или дисперсию в воде или масле и оказывает предназначенное действие. Термин включает фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли и фармацевтически приемлемые

-4009295 основно-аддитивные соли. Список пригодных солей приведен в литературе, например, в статье 8.М. В1где и др., 1. Рйагт. 8сг, 66, сс. 1-19 (1977).

Термин «фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли» означает соли, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных оснований и которые не оказывают отрицательного действия в биологическом или ином отношении, причем указанные соли образуются при взаимодействии с неорганическими кислотами, такими как хлористо-водородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п., и с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, трифторуксусная кислота, адипиновая кислота, аскорбиновая кислота, аспарагиновая кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, бутановая кислота, камфорная кислота, камфорсульфоновая кислота, коричная кислота, лимонная кислота, диглюконовая кислота, этансульфоновая кислота, глутаминовая кислота, гликолевая кислота, глицерофосфорная кислота, гемисерная кислота, гексановая кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота (изетионовая кислота), молочная кислота, гидроксималеиновая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, миндальная кислота, мезитиленсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, нафталинсульфоновая кислота, никотиновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, щавелевая кислота, памоевая кислота, пектиновая кислота, фенилуксусная кислота, 3фенилпропионовая кислота, пиваловая кислота, пропионовая кислота, пировиноградная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, янтарная кислота, сульфаниловая кислота, винная кислота, паратолуолсульфоновая кислота, ундекановая кислота и т.п.

Термин «фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли» означает соли, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных кислот и которые не оказывают отрицательного действия в биологическом или ином отношении, причем указанные соли образуются при взаимодействии с неорганическими основаниями, такими как аммиак или гидроксид, карбонат или бикарбонат аммония, или катион металла, такого как натрий, калий, литий, кальций, магний, железо, цинк, медь, марганец, алюминий и т.п. Прежде всего предпочтительными являются соли аммония, калия, натрия, кальция и магния. Соли фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, соединения четвертичного амина, замещенные амины, которые включают природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, такие как метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, изопропиламин, трипропиламин, трибутиламин, этаноламин, диэтаноламин, 2-диметиламиноэтанол, 2диэтиламиноэтанол, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, N этилпиперидин, соединения тетраметиламмония, соединения тетраэтиламмония, пиридин, NN диметиланилин, Я-метилпиперидин. Я-метилморфолин. дициклогексиламин, дибензиламин, NN дибензилфенетиламин, 1-эфенамин, N,N'-дибензилэтилендиамин, полиаминовые смолы и т.п. Прежде всего предпочтительные органические нетоксичные основания включают изопропиламин, диэтиламин, этаноламин, триметиламин, дициклогексиламин, холин и кофеин.

Термин «млекопитающее», использованный в данном контексте, означает человека, а также других млекопитающих, чувствительных к инфекции вируса гепатита С (ВГС), включая домашних животных, таких как коровы, свиньи, лошади, собаки и кошки, а также недомашних животных.

Термин «противовирусный агент», использованный в данном контексте, означает агент (химический или биологический), который эффективно ингибирует формирование и/или репликацию вируса в организме млекопитающего. Такие агенты включают агенты, которые блокируют механизмы в организме хозяина или механизмы вируса, необходимые для формирования и/или репликации вируса в организме млекопитающего. Такие агенты выбирают из группы, включающей другой противовирусный агент в отношении ВГС, ингибитор ВИЧ, ВГА и ВГВ. Противовирусные агенты включают, например, рибавирин, амантадин, УХ-497 (меримеподиб, фирмы Уейех Рйагтасеийсак), УХ-498 (фирмы Уейех Рйагтасеибсак), левовирин, вирамидин, цеплен (максамин), ХТЬ-001 и ХТЬ-002 (фирмы ХТЬ Вюрйагтасеийсак).

Термин «другой противовирусный агент», использованный в данном контексте, означает агенты, которые проявляют эффективность за счет снижения интенсивности или профилактики симптомов заболевания, связанного с развитием вируса ВГС. Такие агенты выбирают из группы, включающей иммуномодуляторы, ингибиторы протеазы N83 ВГС, ингибиторы полимеразы ВГС или ингибиторы другой мишени жизненного цикла ВГС.

Термин «иммуномодуляторы», использованный в данном контексте, означает такие агенты (химические или биологические), которые проявляют эффективность за счет увеличения или потенциирования ответной реакции иммунной системы в организме млекопитающего. Иммуномодуляторы включают, например, интерфероны класса I (такие как α-, β-, δ- , ω- и τ-интерфероны, консенсус-интерфероны и асиалоинтерфероны), интерфероны класса II (такие как γ-интерфероны) и их ПЭГ илированные формы.

Термин «ингибитор протеазы N83 ВГС», использованный в данном контексте, означает агент (химический или биологический), который проявляет эффективность при ингибировании функции протеазы

- 5 009295

N83 ВГС в организме млекопитающего. Ингибиторы протеазы N83 ВГС включают, например, соединения, описанные в заявках №0 99/07733, №0 99/07734, №0 00/09558, №0 00/09543, №0 00/59929, №0 03/064416, №0 03/064455, №0 03/064456, №0 02/060926, №0 03/053349, №0 03/099316 или №0 03/099274, и препарат фирмы Уейех (сокращенное обозначение УХ-950), находящийся на стадии предварительных испытаний.

Термин «ингибитор полимеразы ВГС», использованный в данном контексте, означает агент (химический или биологический), который проявляет эффективность при ингибировании функции полимеразы ВГС в организме млекопитающего. Такие ингибиторы включают, например, ингибиторы полимеразы Ν85Β ВГС. Ингибиторы полимеразы ВГС включают ненуклеотидные соединения, например, соединения, описанные в следующих документах:

заявка на выдачу патента США №60/441674, поданная 22 января 2003 г, включенная в настоящее описание в виде ссылки (Воекппдег ШдеШет), заявка на выдачу патента США №60/441871, поданная 22 января 2003 г, включенная в настоящее описание в виде ссылки (Воекппдет ШдеШет), заявки №0 04/005286 (Сйеаб), №0 04/002977 (Ркаттас1а), №0 04/002944 (Ркаттас1а), №0 04/002940 (Ркаттааа), №0 03/101993 ^еоуепемч). №0 03/099824 (№уе!к), №0 03/099275 (№уе!к), №0 03/099801 (С8К), №0 03/097646 (С8К), №0 03/095441 (Рйгег), №0 03/090674 (Упоркатта), №0 03/084953 (В&С Вюркатт), №0 03/082265 (Ещйата), №0 03/082848 (Рй/ет), №0 03/062211 (Мегск), №0 03/059356 (С8К), ЕР 1321463 (8к1ге), №0 03/040112 (В1де1), №0 03/037893 (С8К), №0 03/037894 (С8К), №0 03/037262 (С8К), №0 03/037895 (С8К), №0 03/026587 (ВМ8), №0 03/002518 (Эопд №ка), №0 03/000254 Царап Токассо), №0 02/100846 А1 (8к1ге), №0 02/100851 А2 (8к1ге), №0 02/098424 А1 (С8К), №0 02/079187 (Эопд №ка), №0 03/02/20497 (8кюпод1), №0 02/06246 (Мегск), №0 01/47883 Царап Токассо), №0 01/85172 А1 (С8К), №0 01/85720 (С8К), №0 01/77091 (Ти1апк), №0 00/18231 (Упоркатта), №0 00/13708 (Упоркатта), №0 01/10573 (Упоркатта) №0 00/06529 (Мегск), ЕР 1256628 А2 (Адоигоп), №0 02/04425 (Воекппдет 1пде1ке1т), №0 03/007945 (Воекппдет 1пде1ке1т), №0 03/010140 (Воекппдет 1пде1ке1т) и №0 03/010141 (Воекппдет 1пде1ке1т). Более того, другие ингибиторы полимеразы ВГС включают также аналоги нуклеозидов, например, соединения, описанные в заявках №0 04/007512 (Метск/йй), №0 04/003000 (1бешх), №0 04/002999 (1бешх), №0 04/0002422 (1бешх), №0 04/003138 (Мегск), №0 03/105770 (Мегск), №0 03/105770 (Мегск), №0 03/093290 (6епе1ак§), №0 03/087298 (Вюсгук!), №0 03/062256 (В1каркагт), №0 03/062255 (В1каркагт), №0 03/061385 (В1каркагт), №0 03/026675 (Иешх), №0 03/026589 (1бешх), №0 03/020222 (Мегск), №0 03/000713 (С1ахо), №0 02/100415 (НоРРтапп-Ьа Воске), №0 02/1094289 (НоРРтапп-Ьа Воске), №0 02/051425 (М1йиккЫ), №0 02/18404 (НоРРтапп-Еа Воске), №0 02/069903 (В1осгу81 Ркаттасеийсай 1пс.), №0 02/057287 (Метск/йк), №0 02/057425 (Метск/йй), №0 01/90121 (1бешх), №0 01/60315 (8кле) и №0 01/32153 (8кле). Примеры ингибиторов полимеразы ВГС включают ТТК-002, ТТК-003 и ТТК-109 (1арап Токассо).

Термин «ингибитор другой мишени жизненного цикла ВГС», использованный в данном контексте, означает агент (химический или биологический), который проявляет эффективность при ингибировании формирования и/или репликации вируса ВГС в организме млекопитающего, по другому механизму в отличие от ингибирования функции протеазы N83 ВГС. Такие агенты включают агенты, которые блокируют механизмы в организме хозяина или механизмы вируса ВГС, необходимые для формирования и/или репликации вируса в организме млекопитающего. Ингибиторы другой мишени жизненного цикла ВГС включают, например, агенты, ингибирующие мишень, которую выбирают из группы, включающей геликазу, протеазу N82/3 и внутренний входной участок рибосом (1ВЕ8). Примеры ингибиторов другой мишени жизненного цикла вируса ВГС включают Ι8Ι8-14803 (Ι8Ι8 Ркаттасеийсай).

Термин «ингибитор ВИЧ», использованный в данном контексте, означает агент (химический или биологический), который проявляет эффективность при ингибировании формирования и/или репликации вируса ВИЧ в организме млекопитающего. Такие агенты включают агенты, которые блокируют механизмы в организме хозяина или механизмы вируса, необходимые для формирования и/или репликации вируса ВИЧ в организме млекопитающего. Ингибиторы ВИЧ включают, например, нуклеозидные ингибиторы, ненуклеозидные ингибиторы, ингибиторы протеазы, ингибиторы слияния, ингибиторы интегразы.

Термин «ингибитор ВГА», использованный в данном контексте, означает агент (химический или биологический), который проявляет эффективность при ингибировании формирования и/или репликации вируса ВГА в организме млекопитающего. Такие агенты включают агенты, которые блокируют механизмы в организме хозяина или механизмы вируса, необходимые для формирования и/или репликации вируса ВГА в организме млекопитающего. Ингибиторы ВГА включают вакцины против вируса гепатита А, например, Наупх (фирмы 61ахо8шйкКкпе), УАЦТА (фирмы Мегск) и Ауах1т® (фирмы АуеШк Ра§1еиг).

Термин «ингибитор ВГВ», использованный в данном контексте, означает агент (химический или биологический), который проявляет эффективность при ингибировании формирования и/или репликации вируса ВГВ в организме млекопитающего. Такие агенты включают агенты, которые блокируют механизмы в организме хозяина или механизмы вируса, необходимые для формирования и/или репликации

- 6 009295 вируса ВГВ в организме млекопитающего. Ингибиторы ВГВ включают, например, агенты, которые ингибируют ДНК полимеразу вируса ВГВ, или вакцины против ВГВ. Примеры ингибиторов ВГВ включают ламивудин (Ερίνίτ-ΗΒν®), адефовир дипивоксил, энтекавир, ГТС (СоуйасИ®). ΌΑΡΌ (ΌΧΟ), ЬГМАИ (С1еуиб1пе®), АМ365 (Аштаб), Йб1 (ТеПлуибше), моновал-ЬбС (УаЙогсйаЬте), АСН-126443 (ЬГ64С АсЫШоп), МСС478 (фирмы ЕН Е111у), расивир (ИСУ). нуклеозиды фтор-Ь и -Ό. робустафлавон, ΙΟΝ 2001-3 (ΙΟΝ), бам 205 (Νονείοκ), ХТЬ-001 (ХТЬ), иминосахара (ΝοηνΙ-ΌΝΙ 8упсгду). НсрВ/утс и иммуномодуляторы, такие как интерферон альфа 2Ь, НЕ2000 (Но1Й8-Ебеи), терадигм (Ер1иш1иие), ЕНТ899 (фирмы Εηζο Вюсйет), тимозин альфа-1 (Ζηώιχίη®). вакцина НВУ ΌΝΑ (фирмы Ро\убег1ес1), вакцина НВУ ΌΝΑ (фирмы ЗеПетои СеШет), антиген НВУ (фирмы ОтаСеи), ВауНер В® (фирмы Вауег), №1ЫНВ® (фирмы №1Ы) и АиН-йераННк В (фирмы Саидеие); а также вакцины НВУ, такие как: Еидепх В, РссошЫуах НВ, беиНеуас В, Нерасаге, Βίο-Нер В, ΤχνίηΚίχ, Сошуах, Нехауас.

Термин «интерферон класса I», использованный в данном контексте, означает интерферон, который выбирают из группы интерферонов, которые связываются с рецептором типа I. Такие интерфероны включают природные и синтетические интерфероны класса I. Примеры интерферонов класса I включают α-, β, δ-, ω- и τ-интерфероны, консенсус-интерфероны, асиало-интерфероны и их ПЭГилированные формы.

Термин «интерферон класса II», использованный в данном контексте, означает интерферон, который выбирают из группы интерферонов, которые связываются с рецептором типа II. Примеры интерферонов класса II включают γ-интерфероны.

Наиболее предпочтительные примеры некоторых из указанных агентов перечислены ниже: противовирусные агенты: рибавирин или амантадин, иммуномодуляторы: интерфероны класса I, интерфероны класса II или их ПЭГилированные формы, ингибиторы полимеразы ВГС: нуклеозидные аналоги и ненуклеозидные соединения, ингибитор другой мишени жизненного цикла ВГС, который ингибирует мишень, которую выбирают из группы, включающей геликазу N83, протеазу N82/3 или внутренний входной участок рибосомы (ΙΚΕ8), ингибиторы ВИЧ: нуклеозидные ингибиторы, ненуклеозидные ингибиторы, ингибиторы протеаз, ингибиторы слияния или ингибиторы интегразы или ингибиторы ВГВ: агенты, ингибирующие ДНК полимеразу, или вакцины против ВГВ.

Как описано выше, комбинационная терапия означает введение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли одновременно по крайней мере с одним дополнительным агентом, который выбирают из группы, включающей противовирусный агент, иммуномодулятор, ингибитор протеазы N83 ВГС, ингибитор полимеразы ВГС, ингибитор другой мишени жизненного цикла ВГС, ингибитор ВИЧ, ингибитор ВГА и ингибитор ВГВ. Примеры таких агентов представлены в разделе «Определения» выше. Такие дополнительные агенты можно смешивать с соединениями по настоящему изобретению и получать единую фармацевтическую лекарственную форму. В другом варианте такие дополнительные агенты вводят пациенту отдельно как часть многокомпонентной лекарственой формы, например, при использовании набора лекарственных форм. Такие дополнительные агенты вводят пациенту перед, одновременно или после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Термин «лечение», использованный в данном контексте, означает введение соединения или композиции по настоящему изобретению для снижения интенсивности или устранения симптомов гепатита С и/или снижения содержания вируса в организме пациента.

Термин «профилактика», использованный в данном контексте, означает введение соединения или композиции по настоящему изобретению после инфицирования субъекта вирусом, но до появления симптомов заболевания и/или до обнаружения вируса в крови для предотвращения появления симптомов заболевания.

Связь с заместителем К изображена как линия, выходящая из центра кольца, такая как, например,

Р или которая означает, что заместитель К может быть присоединен в любое свободное положение в кольцо, которое в другом варианте будет замещено водородом, если не указано иное.

Символ — или —> используют взаимозаменяемо при изображении связи, с помощью которой остаток присоединен к молекуле.

-7 009295

Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения

В данном разделе подробно описаны предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, группы и заместители соединений по настоящему изобретению.

В предпочтительно выбирают из группы, включающей (С₂-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил и (С]Сз)алкил(С₃-С₇)циклоалкил,

а) где указанные алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил являются моно-, ди- или тризамещенными группой (С1-С₃)алкил, и

б) где указанные алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил являются моно- или дизамещенными заместителями, которые выбирают из группы, включающей гидрокси и О-(С1-С4)алкил, и

в) где каждая из указанных алкильных групп является моно-, ди- или тризамещенной атомами фтора или монозамещенной атомами хлора или брома, и

г) где каждая из указанных циклоалкильных групп означает 5-, 6- или 7-членное кольцо, в котором одна или две -СН₂-группы не связаны напрямую друг с другом, замещены группой -О- таким образом, что атом О соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода.

Более предпочтительно В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, трет-бутил, цикло пропил, циклобутил, цикло пентил и цикло гексил,

а) где каждая из указанных групп необязательно замещена 1-3 заместителями, которые выбирают из группы, включающей метил и этил, и

б) где каждая из указанных групп необязательно моно- или дизамещена заместителями, которые выбирают из группы, включающей гидрокси, метокси и этокси, и

в) где каждая из указанных алкильных групп является моно-, ди- или тризамещенной атомами фтора или монозамещеной атомами хлора или брома, и

г) где каждая из указанных циклоалкильных групп означает 5-, 6- или 7-членное кольцо, в котором одна или две -СН₂-группы не связаны напрямую друг с другом и замещены группой -О- таким образом, что атом О соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода.

Еще более предпочтительно В выбирают из группы, включающей этил, 1-метилэтил, 1,1диметилэтил, пропил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2диметилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,2,2-триметилпропил, 1-этилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1(1-метилэтил)-2-метилпропил, 1-этил-2,2-диметилпропил, бутил, 1-метилбутил, 2-метилбутил, 3метилбутил, 1,2-диметилбутил, 1,1-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 2,3диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 1,2,2-триметилбутил, 1,2,3-триметилбутил, 2,2,3-триметилбутил, 2,3,3триметилбутил и 2,2,3-триметилбутил, причем данные алкильные группы замещены атомами хлора, или брома, или 1, 2 или 3 атомами фтора. Примеры предпочтительных фторированных алкильных групп включают, без ограничения перечисленным, 2-фторэтил, 3-фторпропил и 3,3,3-трифторпропил.

Еще более предпочтительно В означает циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил или заместитель В выбирают из следующих формул, где одна или две СН₂-группы в составе циклоалкильной группы заменены на кислород:

> » □ ? > ϊ ϊ а’

Из приведенного выше списка циклоалкильная и алкилциклоалкильная группы, необязательно включающие 1 или 2 атома кислорода, необязательно замещены 1, 2 или 3 метильными группами. Прежде всего предпочтительными являются циклоалкильные группы, необязательно включающие 1 или 2 атома кислорода, где атом углерода в α-положении замещен метильной группой. Другие примеры предпочтительных замещенных циклических групп включают

Наиболее предпочтительно В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, 2метилпропил, 1,2-диметилпропил, 1,2,2-триметилпропил, 2-фторэтил, 3-фторпропил, 3,3,3трифторпропил, цикло пропил, циклобутил, цикло пентил, циклогексил, 1-метилцикло пентил, 1метилциклогексил и группу, которую выбирают из

-8009295

Еще более предпочтительно В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, циклопентил, 1-метилциклопентил, 2-фторэтил или 3-фторпропил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения X означает О.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения X означает ΝΗ.

В³ предпочтительно означает (С₂-Сб)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил или (С1-С₃)алкил(С₃-С₇)циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен 1-3 заместителями (С1-С4)алкил.

В³ более предпочтительно выбирают из группы, включающей этил, пропил, бутил, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил или циклогексилметил, каждый из которых необязательно замещен 1 или 2 заместителями, которые выбирают из группы, включающей метил, этил и пропил.

Еще более предпочтительно В³ выбирают из группы, включающей 1-метилэтил, 1,1-диметилэтил, 1метилпропил, 2-метилпропил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, циклопентил, цикло гексил, 1-метилциклопентил, 1-метилцикло гексил, циклопентилметил, циклогексилметил, (1метилциклопентил)метил и (1-метилциклогексил)метил.

Наиболее предпочтительно В³ выбирают из группы, включающей 1,1-диметилэтил, цикло пентил, цикло гексил и 1-метилцикло гексил.

Еще более предпочтительно В³ выбирают из группы, включающей 1,1-диметилэтил и циклогексил.

Ь° предпочтительно выбирают из группы, включающей Н, галоген, СН₃, -ОН, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇, -ОСН(СН₃)₂, -ΝΗΟΗ₃, -ΝΗΟ₂Η₅, -ΝΗΟ₃Η₇, -ΝΗΟΗ(ΟΗ₃)₂, -Ν(ΟΗ₃)₂, -Ы(СН₃)С₂Н₅, -Ν(ΟΗ₃)Ο₃Η₇ π -Ν(ΟΗ₃)ΟΗ(ΟΗ₃)₂.

Ь° более предпочтительно выбирают из группы, включающей Н, -ОН, -ОСН₃; галоген и -Ы(СН₃)₂.

Еще более предпочтительно Ь° выбирают из группы, включающей Н, -ОН или -ОСН₃.

Наиболее предпочтительно Ь° выбирают из группы, включающей Н или -ОСН₃.

Ь¹ и Ь² независимо друг от друга предпочтительно выбирают из группы, включающей галоген, -СН₃, -С₂Н₅, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇, -ОСН(СН₃)₂, СБ₃, -8Ме, -8ОМе, и 8О₂Ме, причем Ь¹ или Ь² может означать Н.

Более предпочтительно один из заместителей Ь¹ и Ь² означает -СН₃, -Б, -С1, -Вт, -ОМе, -8ше или -8О₂Ме, а другой из заместителей Ь¹ и Ь² означает Н.

Наиболее предпочтительно Ь означает СН₃, -Б, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме, или -8О₂Ме, а Ь² означает Н.

Таким образом, предпочтительно Ь⁰ выбирают из группы, включающей Н, -ОН и -ОСН3; один из заместителей Ь¹ и Ь² означает СН3, -Б, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме или -8О₂Ме, а другой из заместителей Ь¹ и Ь² означает Н.

Более предпочтительно Ь⁰ выбирают из группы, включающей Н, -ОН и -ОСН3; Ь¹ означает -СН3, -Б, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме, или -8О₂Ме, а Ь² означает Н.

Наиболее предпочтительно Ь° означает Н или -ОСН₃, Ь¹ означает -СН₃, -С1 или -Вт; а Ь² означает Н.

Если Ь⁰ и Ь¹ ковалентно связаны и вместе с хинолиновым остатком, к которому они присоединены, образуют циклическую систему, причем указанную циклическую систему предпочтительно выбирают из следующих групп:

* 1 1 где Х^а, Х^ь независимо выбирают из группы, включающей СН₂, О и ΝΚ.'¹: наиболее предпочтительно О;

В³, каждый независимо, означает Н или (С|-С |)алкил:

В^ь, каждый независимо, означает (С1-С₄)алкил;

Ь² определен выше, предпочтительно означает Н или метил, прежде всего Н.

Если Ь° и Ь² ковалентно связаны и вместе с хинолиновым остатком, к которому они присоединены, образуют циклическую систему, то указанную циклическую систему предпочтительно выбирают из следующих групп:

-9009295

где Х^а, Х^ь независимо выбирают из группы, включающей СН₂, О и ΝΚ³; наиболее предпочтительно О;

К³, каждый независимо, означает Н или (С1-С₄)алкил;

Я^ь, каждый независимо, означает (С1-С₄)алкил;

Ь¹ определен выше, предпочтительно означает Н или метил, прежде всего Н.

Более предпочтительно Ь° и Ь¹ ковалентно связаны и вместе с хинолиновым остатком, к которому они присоединены, образуют циклическую систему, которую выбирают из следующих групп:

где каждый заместитель К незачисимо означает (С1-С₄)алкил, а Ь² определен выше, предпочтительно означает Н или метил, прежде всего Н.

Наиболее предпочтительно Ь° и Ь¹ ковалентно связаны и вместе с хинолиновым остатком, к которому они присоединены, образуют циклическую систему, которую выбирают из следующих групп:

где Ь² означает Н или -СН₃, предпочтительно Н.

К² предпочтительно означает К²⁰, -ΝΗΟΟΚ²⁰, -ΝΗΟΟΟΚ²⁰, -ΝΗΚ²¹ и -ΝΗΟΟΝΚ²¹ К²³, где

К²⁰ выбирают из группы, включающей (С1-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С1-С₃)алкил-(С₃С₇)циклоалкил, причем указанные циклоалкил и алкилциклоалкил моно-, ди- или тризамещены группой (С1-С₃)алкил, и

Я²¹ означает Н или Я²⁰, как определено выше, а

Я²³ означает Н или метил, наиболее предпочтительно Н.

Более предпочтительно Я² означает Я²⁰, ЫНСОЯ²⁰, -ИНСООЯ²⁰, -ΝΗΚ²¹ и -ΝΗΟΌΝΚ²¹ Я²³, где

Я²⁰ выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, трет-бутил, 2,2-диметилпропил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 1,2,2триметилпропил, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил и циклогексилметил, при этом каждая из указанных циклоалкильных и алкилциклоалкильных групп необязательно замещена 1-3 заместителями, которые выбирают из группы, включающей метил и этил, прежде всего метил, и

Я²¹ означает Н или Я²⁰, как определено выше, а

Я²³ означает Н или метил, наиболее предпочтительно Н.

Предпочтительно Я выбирают из группы, включающей

а) амино, Ν-метиламино, Ν-этиламино, Ν-пропиламино, №(1-метилэтил)амино, N-(1,1-диметилэтил)амино, №(2-метилпропил)амино, №(1-метилпропил)амино, №(2,2-диметилпропил)амино, N-(1,2диметилпропил)амино, №(1,1-диметилпропил)амино, Ν-циклопропиламино, Ν-циклобутиламино, Νциклопентиламино, Ν-циклогексиламино, Х-(циклопропилмстил)амино. №(циклобутилметил)амино, Ν(циклопентилметил)амино и Х-(циклогсксилмстил)амино:

б) метилкарбониламино, этилкарбониламино, 1-метилэтилкарбониламино, пропилкарбониламино, 2-метилпропилкарбониламино, 1-метилпропилкарбониламино, 2,2-диметилпропилкарбониламино, 1,2диметилпропилкарбониламино, 1,1-диметилпропилкарбониламино, циклопропилкарбониламино, цикло

-10009295 бутилкарбониламино, циклопентилкарбониламино, циклогексилкарбониламино, циклопропилметилкарбониламино, циклобутилметилкарбониламино, циклопентилметилкарбониламино, циклогексилметилкарбониламино и

в) метоксикарбониламино, этоксикарбониламино, 1-метилэтоксикарбониламино, пропоксикарбониламино, трет-бутоксикарбониламино, циклопропилоксикарбониламино, циклобутилоксикарбониламино, циклопентилоксикарбониламино, цикло гексилоксикарбониламино, циклопропилметоксикарбониламино, циклобутилметоксикарбониламино, циклопентилметоксикарбониламино и циклогексилметоксикарбониламино , причем все указанные циклоалкильные или алкилциклоалкильные группы моно- или дизамещены метильной группой.

Наиболее предпочтительно К² означает -ΝΗΟΟΚ²⁰, -ΝΗΟΟΟΚ²⁰ или -ΝΗΚ²¹, где К²⁰ и К²¹ определены выше.

Предпочтительно К²⁰ и К²¹ независимо выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, трет-бутил, 2,2-диметилпропил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 1,2,2-триметилпропил, цикло пропил, циклобутил, цикло пентил, циклогексил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил и циклогексилметил, при этом каждая из указанных циклоалкильных или алкилциклоалкильных групп необязательно моно- или дизамещена заместителями, которые выбирают из группы, включающей метил и этил.

Более предпочтительно К²⁰ и К²¹ независимо выбирают из группы, включающей метил, этил, нпропил, изопропил, 2,2-диметилпропил, циклопентил и циклопентилметил.

Заместитель К¹ и карбонильная группа в составе остатка Р1 характеризуются син-ориентацией. Таким образом, если К означает этил, то асимметричные атомы углерода в циклопропильной группе характеризуются конфигурацией К,К, как показано ниже:

если К¹ означает винил, то асимметричные атомы углерода в циклопропильной группе характеризуются конфигурацией Я,8, как показано ниже:

К¹ предпочтительно означает винил.

Я^с предпочтительно выбирают из группы, включающей гидрокси или ΝΗ8Ο₂Κ⁸. где Я⁸ означает метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, трет-бутил, цикло пропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил, циклогексилметил, фенил, нафтил, пиридинил, фенилметил(бензил), нафтилметил или пиридинилметил,

а) причем каждый заместитель необязательно моно-, ди- или тризамещен заместителями, которые выбирают из группы, включающей фтор и метил, и

б) причем каждый заместитель необязательно моно- или дизамещен заместителями, которые выбирают из группы, включающей гидрокси, трифторметил, метокси и трифторметокси, и

в) причем каждый заместитель необязательно монозамещен заместителями, которые выбирают из группы, включающей хлор, бром, циано, нитро, -0Ό-ΝΗ₂. -0Ό-ΝΗ0Ή₃. -0Ό-Ν(0Ή₃)₂. -ΝΗ₂, -ΝΗ(0Ή₃) и -М(СН₃)₂.

В другом варианте предпочтительно Я означает ΝΗ8Ο₂Β⁸. где Я⁸ означает -Ы(Я^№)Я^№, где Я^№ и Я^№ независимо выбирают из группы, включающей Н, (С1-С₄)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С1-С₃)алкил(С₃С₇)циклоалкил, фенил и (С1-С₃)алкилфенил; причем указанные (С1-С₄)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С1С₃)алкил(С₃-С₇)циклоалкил, фенил и (С1-С₃)алкилфенил необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген, (С1-Сб)алкил, гидрокси, циано, О(С1-С₆)алкил, -ΝΗ₂, -МН(С1-С₄)алкил, -М((С1-С₄)алкил)₂, -€Ό-ΝΗ₂. -СО-НН(С1-С₄)алкил, -СО-Ы((С1С₄)алкил)₂, -СООН и -СОО(С1-С₆)алкил, или

Я^№ и К?'¹ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5- или 6-членный моноциклический гетероцикл, который является насыщенным или ненасыщенным, необязательно содержащим от 1 до 3 дополнительных гетероатомов, которые независимо выбирают из Ν, 8 и О, и необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, которые независимо выбирают из группы, включающей галоген, (С1-С₆)алкил, гидрокси, циано, О-(С1-С₆)алкил, -ΝΗ₂, -1\1Н(С1-С₄)алкил, -Ы((С1-С₄)алкил)₂, -СО-ИН₂, -СОИН(С1-С₄)алкил, -СО-Ы((С1-С₄)алкил)₂, -СООН и -СОО(С1-С₆)алкил.

Группа Я^с предпочтительно означает гидрокси, ΝΗ80₂-μοτιι.ι. ΝΗ8Ο₂-3τιι.ι. ΝΗ8Ο₂-( 1-метил)этил, ΝΗ8Ο₂-προππ4, НН8О₂-циклопропил, НН8О₂-СН₂-циклопропил, 1\1Н8О₂-циклобутил, 1\1Н8О₂-цикло

-11 009295 пентил или ΝΗ80₂-(|ιοηιι.ι.

Более предпочтительно Я^с означает гидрокси или НН8О₂-циклопропил.

В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения группа Я^с означает гидрокси. В другом наиболее предпочтительном варианте группа Я^с означает НН8О2-циклопропил. В самом предпочтительном варианте группа Я^с означает ΝΗ8Ο2Ν(0Ή₂,)₂.

В объем настоящего изобретения включены также соединения формулы (I), где

В означает (С1-Сю)алкил, (Сз-С₇)циклоалкил или (С1-С4)алкил(Сз-С₇)циклоалкил,

а) причем указанные циклоалкил и алкилциклоалкил моно-, ди- или тризамещены группой (С1С₃)алкил, и

б) причем указанные алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил моно- или дизамещены заместителями, которые выбирают из группы, включающей гидрокси и О-(С1_₄)алкил, и

в) причем все указанные алкильные группы моно-, ди- или тризамещены атомами галогена, и

г) причем все указанные циклоалкильные группы означают 4-, 5-, 6- или 7-членное кольцо, в котором необязательно одна (в случае 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца) или две (в случае 5-, 6-, 7-членного кольца) -СН₂-группы не связаны напрямую друг с другом, и замещены группой -О- таким образом, что атом О соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода;

X означает О или ΝΗ;

Я³ означает (С₂-С₈)алкил, (Сз-С₇)циклоалкил или (С1-Сз)алкил(Сз-С₇)циклоалкил, где указанные циклоалкильные группы моно-, ди- или тризамещены группой (С1-С₄)алкил;

Ь° означает Н, -ОН, -О-(С1-С₄)алкил, -ΝΗ₂, -1\1Н(С1-С₄)алкил или -Ы((С1-С₄)алкил)₂;

Ь¹ , I? каждый независимо означает галоген, (С1-С₄)алкил, -О-(С1-С₄)алкил или -8-(С1-С₄)алкил (в любом окисленном состоянии, таком как §0 или 8О₂); а Ь¹ или Ь² (но не оба одновременно) означают Н; или

Ь иЬ или

Ь° и Ь² ковалентно соединены и вместе с двумя атомами углерода, к которым они присоединены, образуют 5- или 6-членное карбоциклическое кольцо, в котором одна или две -СН2-группы напрямую не связаны друг с другом и каждая независимо заменена на группы -О- или ΝΚ.'¹. где Я^а означает Н или (С]С4)алкил, причем указанное карбо- или гетероциклическое кольцо необязательно моно- или дизамещено группой (С1-С₄)алкил;

Я² означает Я²⁰, -Ш²²ССЖ^2и. -МЯ²²СООЯ²⁰, -Ш^::РГ' и -Ш^::С0Ш^:|Я²³, где Я²⁰ выбирают из группы, включающей (С1-С₈)алкил, (Сз-С₇)циклоалкил и (С1-С₄)алкил(Сз-С₇)циклоалкил, причем указанные циклоалкильная и алкилциклоалкильная группы моно-, ди- или тризамещены группой (С1-Сз)алкил,

Я²¹ означает Н или имеет одно из значений группы Я²⁰, как определено выше,

Я²² и Я²³ независимо выбирают из группы, включающей Н и метил,

Я¹ означает этил или винил;

Я^с означает гидрокси или ΝΗ8Ο;Ε³. где Я⁸ означает (С1-С6)алкил, (Сз-С₇)циклоалкил, (С]С₆)алкил(Сз-С₇)циклоалкил, фенил, нафтил, пиридинил, (С1-С₄)алкилфенил, (С1-С₄)алкилнафтил или (С]С₄)алкилпиридинил; причем все указанные заместители необязательно моно-, ди- или тризамещены заместителями, которые выбирают из группы, включающей галоген, гидрокси, циано, (С1-С₄)алкил, О-(С]С₆)алкил, -0Ό-ΝΗ_;. -СО-МН(С1-С₄)алкил, -СО-1\Г((С1-С₄)алкил)₂, -ΝΗ₂, -1\1Н(С1-С₄)алкил и -Ν((ϋιС₄)алкил)₂, и каждый из которых необязательно монозамещен нитрогруппой, или Я⁸ выбирают из группы, включающей -МН(С1-С₆)алкил, М((С1-С₆)алкил)₂, -Не!, —г/ \ —(С₁₄₁)а1ку1 или

—N О или их фармацевтически приемлемые соли или эфиры. Предпочтительно

В означает (С₂-С₈)алкил, (Сз-С₇)циклоалкил или (С1-Сз)алкил(Сз-С₇)циклоалкил,

а) где указанные алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил моно, ди- или тризамещены группой (С1С₃)алкил, и

б) где указанные алкил, циклоалкил и алкилциклоалкил моно- или дизамещены заместителями, которые выбирают из группы, включающей гидрокси и О-(С1-С₄)алкил, и

в) где каждая из указанных алкильных групп моно-, ди- или тризамещена атомами фтора или монозамещена атомами хлора или брома, и

г) где каждая из указанных циклоалкильных групп означает 5-, 6- или 7-членное кольцо, в котором одна или две -СН₂-группы не связаны напрямую друг с другом, и заменены на группу -О- таким образом, что атом О соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода;

X означает О или ΝΗ;

Я³ означает (С₂-С₆)алкил или (Сз-С₇)циклоалкил, каждый из которых необязательно замещен 1-3

-12009295 заместителями (С1-С₄)алкил;

Ь означает Н, -ОН, -ОСН₃, галоген или (СН₃)₂,

Ь¹ и Ь², каждый независимо, выбирают из группы, включающей галоген, -СН₃, -С₂Н₅, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇, -ОСН(СН₃)₂, -СР₃, -8Ме, -8ОМе, и 8О₂Ме;

причем Ь¹ или Ь² означает Н,

К² означает К²⁰, -ΝΗΟΟΚ²⁰, -ΝΗΟΟΟΚ²⁰, -ΝΗΚ²¹ и -ΝΗΟΟΝΚ²¹Κ²³, где

К²⁰ выбирают из группы, включающей (С1-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С1-С₃)алкил(С₃С₇)циклоалкил, где каждая из указанных циклоалкильных и алкилциклоалкильных групп моно-, ди- или тризамещена группой (С1-С₃)алкил, и

К²¹ означает Н или К²⁰, как определено выше, и

К²³ означает Н или метил,

К¹ означает этил или винил; а

К^с означает гидрокси, ΝΗ8Ο₂Μετππ, ΝΗδΟρτππ, КН8О₂(1-метил)этил, ΝΗ8Ο₂προπππ, КН8О₂циклопропил, 1\1Н8О₂-СН₂циклопропил, ИНЗОщиклобутил, 1\1Н8О₂цикло пентил или КН8О₂фенил.

Более предпочтительно В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, 2метилпропил, 1,2-диметилпропил, 1,2,2-триметилпропил, 2-фторэтил, 3-фторпропил, 3,3,3трифторпропил, цикло пропил, циклобутил, цикло пентил, цикло гексил, 1-метилцикло пентил и 1метилциклогексил, группу, которую выбирают из следующих формул:

К выбирают из группы, включающей 1,1-диметилэтил, цикло пентил, цикло гексил, и 1метилциклогексил,

Ь означает Н, -ОН или -ОСН₃;

Ь¹ означает СН₃, -Р, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме, или -8О₂Ме; а

I? означает Н;

К² означает -ΝΗΟΟΚ²⁰, -ΝΗΟΟΟΚ²⁰ или -ΝΗΚ²¹, где К²⁰ и К²¹ независимо выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, 2,2-диметилпропил, циклопентил и циклометилпентил,

К¹ означает винил, а К^с означает гидрокси или 1\1Н8О₂-циклопропил.

Наиболее предпочтительно В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, циклопентил, 1-метилциклопентил, 2-фторэтил, 3-фторпропил, К выбирают из групп 1,1-диметилэтил и циклогексил, Ь° означает Н или -ОСН₃; Ь¹ означает СН₃, -С1 или -Вт, Ь² означает Н, а К^с означает гидрокси.

Примеры предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения включают отдельные соединения, перечисленные в табл. 1, 2, 3, 4, 5 и 6.

В другом варианте фармацевтическая композиция по настоящему изобретению дополнительно включает по крайней мере один другой противовирусный агент в отношении ВГС. Примеры противовирусных агентов в отношении ВГС включают а- (альфа), β- (бета), δ- (дельта), γ- (гамма), ω- (омега) или т- (тау) интерфероны, ПЭГилированный ос-интерферон, рибавирин или амантадин.

В одном варианте фармацевтическая композиция по настоящему изобретению дополнительно включает по крайней мере один другой ингибитор протеазы N83 ВГС.

В другом варианте фармацевтическая композиция по настоящему изобретению дополнительно включает по крайней мере один ингибитор полимеразы ВГС.

В еще одном варианте фармацевтическая композиция по настоящему изобретению дополнительно включает по крайней мере один ингибитор других мишеней жизненного цикла ВГС, которые включют, без ограничения перечисленным, геликазу, протеазу N82/3 или внутренний входной участок рибосомы (ΙΚΕ8).

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят пероральным, парентеральным способом или с использованием имплантированного резервуара. Предпочтительным является пероральное введение или введение с использованием инъекций. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит любые стандартные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты или наполнители. В некоторых случаях рН состава доводят с использованием фармацевтически приемлемых кислот, оснований или буферных растворов с целью повышения устойчивости соединения или формы, в которой его вводят.

Термин «парентеральное введение», использованный в данном контексте, включает подкожное, внутрикожное, внутривенное, внутримышечное, интраартикулярное, внутрисуставное, внутриподложечное, подоболочечное введение и введение в очаг патологического изменения или вливание.

Фармацевтические композиции получают в виде стерильных растворов для инъекций, например, в виде стерильных водных растворов или масляных суспензий для инъекций. Такие суспензии получают

-13 009295 по стандартным методикам, известным в данной области техники, с использованием пригодных диспергирующих или смачивающих агентов (таких как, например, Твин-80) и суспендирующих агентов.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят перорально в любой пероральной пригодной лекарственной форме, включая, без ограничения перечисленным, капсулы, таблетки, водные суспензии и растворы. В случае таблеток для перорального введения используют стандартные носители, включая лактозу и кукурузный крахмал. Используют также замасливатели, такие как стеарат магния. В случае капсул для перорального введения используемые разбавители включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. При пероральном введении водных суспензий активный компонент смешивают с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При необходимости добавляют соответствующие подсластители, и/или ароматизаторы, и/или красители.

Другие пригодные наполнители или носители для указанных выше составов композиций описаны в известных фармацевтических изданиях, например, в книге ВстшдЮп'з Рйаттасеи(1са1 Бсюпссз. Т11С 8с1еисе аиб Ргасбсе о£ РЬагтасу, 19 Еб. Маск РиЫкЫпд Сотрапу, ЕазЮп, Репп., (1995).

При монотерапии для профилактики и лечения заболеваний, вызванных ВГС, используют дозы в интервале от приблизительно 0,01 до приблизительно 100 мг/кг массы тела в сутки, предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 50 мг/кг массы тела в сутки ингибитора протеазы, описанного в данном контексте. Прежде всего, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят от приблизительно 1 до приблизительно 5 раз в сутки или, в другом варианте, в виде непрерывного вливания. Такое введение используют при лечении хронических или острых заболеваний. Количество активного компонента, который смешивают с материалами носителя с образованием единой лекарственной формы, зависит от состояния организма хозяина, который нуждается в лечении и, прежде всего, от конкретного способа введения. Стандартная лекарственная форма содержит от приблизительно 5 до приблизительно 95% (мас./мас.) активного соединения. Такие препараты предпочтительно содержат от приблизительно 20 до приблизительно 80% активного соединения.

Специалистам в данной области техники представляется очевидным, что при необходимости можно использовать более низкие или более высокие дозы по сравнению с указанными выше. Дозировка и курс лечения для каждого конкретного пациента зависят от ряда факторов, включая активность используемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, режим питания, время введения, скорость выведения, комбинацию лекарственных средств, тяжесть и развитие инфекции, чувствительность пациента к инфекции и квалификацию лечащего врача. В основном, лечение начинают с небольших доз, значительно меньших по сравнению с оптимальной дозой пептида. Затем дозу повышают с небольшим приростом до достижения оптимального эффекта в конкретной ситуации. В основном, соединения наиболее предпочтительно вводят в концентрации, при которой наблюдается эффективное противовирусное действие без любых отрицательных или опасных побочных явлений.

Если композиция по настоящему изобретению включает комбинацию соединения формулы I и одного или более дополнительных терапевтических или профилактических агентов, то доза как соединения, так и дополнительного агента находится в интервале от приблизительно 10 до 100% и более предпочтительно от приблизительно 10 до 80% от дозы, которую обычно вводят при монотерапии.

Если указанные соединения, включая их фармацевтически приемлемые соли и эфиры, включены в композицию в смеси с фармацевтически приемлемым носителем, то полученную композицию можно вводить ш νίνο млекопитающим, таким как человек, для ингибирования протеазы N83 ВГС или лечения или профилактики вирусной инфекции ВГС. Такое лечение проводят также с использованием соединения по настоящему изобретению в комбинации с другим противовирусным агентом. Предпочтительные другие противовирусные агенты описаны в разделе «Определения» и в разделе предпочтительных фармацевтических композиций по настоящему изобретению и включают, без ограничения перечисленным, α-, β-, δ-, ω-, γ- или τ-интерфероны, рибавирин, амантадин, другие ингибиторы протеазы N83 ВГС, ингибиторы полимеразы ВГС, ингибиторы других мишеней жизненного цикла ВГС, включая, без ограничения перечисленным, геликазу, протеазу N82/3 или внутренний входной участок рибосомы (1КЕ8), или их комбинации. Дополнительные агенты смешивают с соединениями по настоящему изобретению и получают единую лекарственную форму. В другом варианте такие дополнительные агенты вводят млекопитающим в отдельности в составе многокомпонентной лекарственной формы.

Соответственно в другом варианте осуществления настоящего изобретения предлагается способ ингибирования активности протеазы N83 ВГС у млекопитающих при введения соединения формулы I, включая его фармацевтически приемлемую соль или эфир.

В предпочтительном варианте данный способ используют для снижения активности протеазы N83 ВГС в организме инфицированного млекопитающего.

Как описано выше, комбинационная терапия включает совместное введение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или эфира в смеси по крайней мере с одним дополнительным противовирусным агентом. Предпочтительные противовирусные агенты описаны в данном контексте и примеры таких агентов перечислены в разделе «Определения». Такие дополнительные агенты смешивают с соединениями по настоящему изобретению и получают единую лекарственую форму. В другом варианте такие дополнительные агенты вводят пациенту в отдельности в виде части многокомпо

- 14 009295 нентной лекарственной формы, например, при использовании набора лекарственных форм. Такие дополнительные агенты вводят пациенту перед, одновременно или после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или эфира.

Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль или эфир, описанные в данном контексте, используют также в качестве лабораторного реагента. Более того, соединение по настоящему изобретению, включая его фармацевтически приемлемые соль или эфир, используют также для обработки или предотвращения от вирусного загрязнения различных материалов и, следовательно, для снижения риска вирусной инфекции лабораторного или медицинского персонала или пациентов, контактирующих с такими материалами (например, кровь, ткани, хирургические инструменты и материалы, лабораторные инструменты и материалы, а также устройства и материалы для отбора крови).

Соединение формулы (I), включая его фармацевтически приемлемую соль или эфир, описанные в данном контексте, используют также в качестве реагента для исследований. Соединение формулы (I), включая его фармацевтически приемлемую соль или эфир, описанные в данном контексте, используют также в качестве положительного контроля для подтверждения результатов анализа с использованием заменителей клеток или анализа вирусной репликации ίη νίίτο или ίη νίνο.

Методы.

Некоторые способы синтеза соединений формулы I с использованием различных производных хинолина описаны в патенте АО 00/09558. Промежуточное производное дипептида 15 (схема 2) и 2карбометокси-4-гидрокси-7-метоксихинолин 9 (схема 1) синтезировали по общим методикам, описанным в патенте АО 00/09543.

Соединение формулы I, где Я^с означает ΝΗ8Ο2Β⁸. как определено выше, получали при конденсации соответствующей кислоты формулы I (например, Я означает гидрокси) с соответствующим сульфонамидом формулы Β⁸§Ο2ΝΗ₂ в присутствии конденсирующего агента в стандартных условиях. Несмотря на то, что можно использовать различные стандартные конденсирующие агенты, наиболее пригодными являются ТВТи и НАТСГ. Сульфонамиды являются коммерческими продуктами или их получают по стандартным методикам. На показанных ниже схемах представлено два стандартных способа с использованием стандартных методик для получения соединений формулы 1, где

Я¹ означает винил и Я^с означает ОН.

Синтез дипептида 3 проводили при конденсации остатка Р1 с соответственно защищенным трансСхема 1

X = О

Χ=ΝΗ

гидроксипролином в стандартных условиях.

Стереохимическую конформацию гидроксильной группы изменяли в условиях реакции Мицунобу в присутствии паранитробензойной кислоты. При конденсации дипептида с остатком РЗ (полученного с использованием стандартных методик и описанного в разделе «Примеры») получали трипептид 6. Введение хинолинового остатка по гидроксильной группе трипептида 7 с одновременным стереохимическим обращением можно проводить в условиях реакции Мицунобу или при превращении свободной гидроксильной группы в эффективную уходящую группу (такую как парабромбензолсульфогруппа, Вга) и замене ее на гидроксильное производное хинолина 9. При синтезе 2-(2-амино-4-тиазолил)производных используют хинолин, содержащий 2-карбометоксигруппу, как показано в соединении 9. Превращение

-15 009295 карбоксилатной группы в производное аминотиазола проводили по стандартной методике, которая описана в заявках XVО 00/09543 и XVО 00/09598. И наконец, С-концевой эфир гидролизовали в основноводных условиях.

Схема 2

о к^{3 В}'Х^Лн\^он н о

X = О, ΝΗ

4ог5

На схеме 2 показана другая последовательность реакций для получения соединений формулы I. В данном случае хинолиновый остаток вводили в дипептид аналогично тому, как показано на схеме 1. Наконец, остаток РЗ конденсировали с дипептидом 21 в стандартных условиях. Превращение полученного трипептида в конечное соединение проводили, как показано на схеме 1.

Синтез фрагментов Р1.

Фрагменты Р1 соединений формулы (I) получали по методикам, описанным в заявках XVО 00/59929, поданной 12 октября 2000 г., или XVО 00/09543, поданной 24 февраля 2000 г. Прежде всего методики описаны на стр. 33-35, пример 1, заявки XVО 00/59929 и на стр. 56-69, примеры 9-20 заявки XVО 00/09543, в которых описано получение фрагментов 1-аминоциклопропанкарбоновой кислоты Р1.

Синтез фрагментов Р2.

Соединения формулы 9 синтезировали из коммерческих материалов по методикам, описанным в заявках \νθ 00/59929, \νθ 00/09543, \νθ 00/09558 и патенте И8А 6323180 В1.

Примеры синтеза различных производных 2-карбометокси-4-гидроксихинолина описаны ниже.

Синтез производных 2-карбометокси-4-гидроксихинолина проводили с использованием соответствующих анилинов по методике, описанной в работе ипаидк! Р.С, Соппог ϋ.Τ., 1. НсЮгосус. СНет. 29, 5, 1097-1100 (1992). Методика показана ниже на схеме 3.

Схема 3

Соответственно замещенные анилины в положениях 2, 3 и/или 4 конденсировали с диметилацетилендикарбоксилатом и полученный енамин нагревали при высокой температуре, при которой происходит циклизация.

Соответствующие анилины являются коммерческими продуктами или их получают по стандартным методикам. Например, нитропроизводное является коммерческим продуктом, который затем превращают в соответствующий амин в присутствии восстановителя. Если карбоновая кислота также является коммерческим продуктом, то ее превращают в соответсвующий амин в условиях перегруппировки Курциуса.

Более подробно настоящее изобретение описано в следующих примерах, которые не ограничивают его объем, как определено в пунктах формулы изобретения. Другие специальные методы синтеза или разделения соединений по настоящему изобретению, описаны в заявках XVО 00/09543, XVО 00/09558 и

-16009295 №0 00/59929, а также в одновременно поданной заявке 09/368670, которые включены в настоящее изобретение в виде ссылок.

Примеры

Если не указано иное, процентная концентрация растворов означает отношение массы к объему, объемная концентрация растворов означает отношение объема к объему. Спектры ядерно го магнитного резонанса (ЯМР) получены на спектрометре фирмы Вгикег 400 МГц, величина химического сдвига (5) выражена в част./млн. Экспресс-хроматографию проводили на силикагеле (8Ю₂) по методу Стилла (XV.С. 8Й11 и др., I. Ог§. СЬет., 43, 2923, (1978)).

Сокращения, использованные в примерах:

ВОС или Вос означает трет-бутилоксикарбонил, ЭЕЮ означает 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, ДХМ означает дихлорметан, Э1АЭ означает диизопропилазодикарбоксилат, ϋΙΡΕΑ означает диизопропилэтиламин, ДМФА означает Ν,Ν-диметилформамид, ЭМАР означает 4-(диметиламино)пиридин, ДМСО означает диметилсульфоксид, ЕЮАс означает этилацетат, НАТО означает гексафторфосфат О-(7азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония, ЖХВР означает жидкостную хроматографию высокого разрешения, МС означает масс-спектр (получен методом ионизации лазерной десорбции в матрице с времяпролетным масс-анализатором (МАЬО1-ТОЕ), ЕАВ означает бомбардировку быстрыми атомами), Ме означает метил, МеОН означает метанол, РЬ означает фенил, КТ означает комнатную температуру (от 18 до 22°С), трет-бутил означает 1,1-диметилэтил, ТЬ§ означает трет-бутилглицин (трет-лейцин), ТВТО означает тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония, ТЭА означает триэтиламин, ТФУ означает трифторуксусную кислоту, а ТГФ означает тетрагидрофуран.

Пример 1. Получение производных РЗ.

Получение карбамата 4а.

о о но

4а

ТГФ (350 мл) добавляли в колбу, содержащую циклопентиловый, 2,5-диоксопирролидин-1-иловый диэфир карбоновой кислоты (9,00 г, 39,6 ммоль) и трет-бутилглицин (6,24 г, 47,5 ммоль), при этом получали суспензию. Затем при интенсивном перемешивании добавляли дистиллированную воду (100 мл), при этом в смеси оставалось небольшое количество твердого вещества. Затем добавляли триэтиламин (16,6 мл, 119 ммоль), при этом получали гомогенный раствор, который перемешивали при КТ. Через 2,5 ч ТГФ упаривали, а водный остаток разбавляли водой (100 мл). Реакционную смесь подщелачивали до рН >10 добавлением 1н. ЯаОН (25 мл). Полученный раствор промывали ЕЮАс (2 раза по 200 мл), водную фазу подкисляли до рН<2 добавлением 1н. НС1 (приблизительно 70 мл). Мутный раствор экстрагировали ЕЮАс (200+150 мл). Экстракт сушили (М§80₄) и упаривали, при этом получали карбамат 4а в виде твердого вещества белого цвета (8,68 г).

Получение мочевины 5а.

5а

Раствор гидрохлорида бензилового эфира трет-бутилглицина (2,55 г, 9,89 ммоль) в ТГФ (20 мл) и пиридине (2,0 мл, 24,73 ммоль) охлаждали до 0°С. Затем к холодному раствору по каплям добавляли фениловый эфир хлормуравьиной кислоты (1,30 мл, 10,19 ммоль). Полученную суспензию перемешивали в течение 5 мин при 0°С, затем при КТ в течение 1,5 ч. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс, промывали 10% лимонной кислотой (2 раза), водой (2 раза), насыщенным раствором ЯаНСО₃ (2 раза), водой (2 раза) и солевым раствором (1 раз), сушили (М§80₄), фильтровали и упаривали, при этом получали неочищенный продукт в виде почти бесцветного масла (3,73 г, >100%, приблизительно 9,89 ммоль). Неочищенный продукт (1,01 г, 2,97 ммоль) растворяли в ДМСО (6,5 мл) и добавляли по каплям циклопентиламин. Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 45 мин, затем разбавляли ЕЮАс. Органическую фазу промывали 10% лимонной кислотой (2 раза), водой (2 раза), насыщенным раствором ЯаНСО₃ (2 раза), водой (2 раза) и солевым раствором (1 раз), сушили (М§80₄), фильтровали и упаривали, при этом получали неочищенное ТЬ§-ОВи-производное циклопентилмочевины в виде почти бесцветного масла. Неочищенный продукт очищали методом экспресс-хроматографии на колонке с силикагелем, менее полярные примеси удаляли смесью гексан/ЕЮАс (9:1), очищенный продукт элюировали смесью гексан/ЕЮАс (7:3), при этом получали вязкое бесцветное масло (936 мг, 95%). Защитные бензиловые группы в полученном продукте (936 мг, 2,82 ммоль) удаляли при гидрировании водородом, подаваемым из баллона, при КТ в абсолютном этаноле (15 мл) при перемешивании в присутствии 10% Ρά/С (93,6 мг) в течение 5,5 ч. Реакционную смесь фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и упаривали досуха, при этом получали мочевину 5а в виде твердого вещества белого цвета (669 мг, 98%).

- 17009295

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб): δ 12,39 (δ, ΙΗ), 6,09 (ά, 1=7,4 Гц, ΙΗ), 5,93 (ά, 1=9,4 Гц, ΙΗ), 3,90 (ά, 1=9,4 Гц, ΙΗ), 3,87-3,77 (ш, ΙΗ), 1,84-1,72 (ш, 2Η), 1,63-1,42 (ш, 4Η), 1,30-1,19 (ш, 2Н), 0,89 (δ, 9Н).

МС (Е8, электроспрей): 241,0 (М-Н) 243,0, (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СТЬСИ/ЕГО) гомогенность продукта составляла 99%.

Пример 2. Получение производных тио моче вины 8.

Получение тиомочевины 8а.

А

8а

К раствору трет-бутилизотиоцианата (5,0 мл, 39,4 ммоля) в ДХМ (200 мл) добавляли циклопентиламин (4,67 мл, 47,3 ммоль), ΌΙΡΕΑ и реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч. Смесь разбавляли ЕЮАс, промывали 10% водным раствором лимонной кислоты (2 раза), насыщенным раствором №НС О₃ (2 раза), Н₂О (2 раза) и солевым раствором (1 раз). Органический слой сушили над безводным Мд8О |. фильтровали и упаривали, при этом получали П-трет-бутил-1\Г-циклопентилтиомочевину в виде твердого вещества белого цвета (3,70 г, выход 47%). М-трет-Бутил-М'-циклопентилтиомочевину (3,70 г) растворяли в конц. НС1 (46 мл). Раствор темно-желтого цвета нагревали при слабом кипении растворителя с обратным холодильником. Через 40 мин реакционную смесь охлаждали до КТ, затем охлаждали на ледяной бане и подщелачивали до рН 9,5 добавлением твердого ΝηΕΚΌ₃ и насыщенного водного раствора. Продукт экстрагировали ЕЮАс (3 раза). Слои ЕЮАс объединяли, промывали Н₂О (2 раза) и солевым раствором (1 раз). Органический слой сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали, при этом получали твердое вещество бежевого цвета (2,46 г, неочищенный продукт). Неочищенный продукт растирали в смеси гексан/ЕЮАс (95:5) и фильтровали, при этом получали Ν-циклопентилтиомочевину 8а в виде твердого вещества белого цвета (2,38 г, выход 90%).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆): δ 7,58 (ушир. δ, 1Н), 7,19 (ушир. δ, 1Н), 6,76 (ушир. δ, 1Н), 4,34 (ушир. δ, 1Н), 1,92-1,79 (ш, 2Н), 1,66-1,55 (ш, 2Н), 1,55-1,30 (ш, 4Н).

МС (Е8⁺): 144,9 (М+Н)⁺, МС (Е8 ): 142,8 (М-Н)’.

Получение тио моче вины 8Ь.

8Ь

Тиомочевину (5,0 г, 66 ммоль) растворяли в толуоле (50 мл) и добавляли трет-бутилацетилхлорид (8,88 г, 66 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 14 ч, при этом получали раствор желтого цвета. Смесь упаривали досуха, остаток распределяли между ЕЮАс и насыщенным раствором ΝηΕΚΌ,. Органическую фазу желтого цвета сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, при этом получали твердое вещество желтого цвета. Твердое вещество растворяли в минимальном количестве ЕЮАс и растирали в гексане, при этом получали соединение 8Ь в виде твердого вещества белого цвета (8,52 г, 75%).

МС (Е8): 173 (М-Н)', 175 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, Ε’ΕΕΧ’Ν/ΕΕΟ) гомогенность продукта составляла 99%.

Получение тиомочевины 8с.

С1

Н ^Η·,№. ,Ν

Тио мочевину 8с получали по методике, описанной выше, но при замене трет-бутилацетилхлорида на коммерческий циклопентилацетилхлорид. Получение производных 2-карбометокси-4-гидроксихинолина.

Пример ЗА. Получение 2-карбометокси-4-гидрокси-7-метокси-8-метилхинолина (А5).

Стадия А.

Н.

А2

К раствору 2-метил-3-нитроанизола А1 (5,1 г, 30,33 ммоль, требуется —30 мин на растворение) в абсолютном этаноле (85 мл) добавляли катализатор (10% Ρά/С, 500 мг). Раствор гидрировали водородом (подается из баллона) при атмосферном давлении и комнатной температуре в течение 19 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, промывали и упаривали досуха, при этом получали 2-метил-3

-18009295 метоксианилин А2 в виде масла розовато-лилового цвета (4,1 г, 29,81 ммоль, выход 98%).

МС: 137 (МН)⁺.

По данным обращенно-фазовой ЖХВР (λ=220 нм, элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СМ/Н₂О) гомогенность продукта составляла 99%.

Стадия В.

Диметилацетилендикарбоксилат АЗ (3,6 мл, 29,28 ммоль) добавляли по каплям к раствору 2-метил3-метоксианилина А2 (3,95 г, 28,79 ммоль) в МеОН (100 мл, экзотермическая реакция). Смесь нагревали при слабом кипении растворителя с обратным холодильником в течение 5 ч, охлаждали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали на колонке с силикагелем методом экспрессхроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 95:5), фракции, содержащие чистый продукт, упаривали, при этом получали соединение А4 (6,5 г, 23,27 ммоль, выход 81%).

По данным обращенно-фазовой ЖХВР (λ=220 нм, элюент: 0,06% ТФУ, СН₃С1\Г/Н₂О) гомогенность продукта составляла 95%.

Стадия С.

Диэфир А4 (6,5 г, 23,27 ммоль) растворяли в дифениловом эфире (12 мл) и реакционную смесь помещали в песчаную баню, предварительно нагретую до температуры 350-400°С. После того как температура реакционной смеси достигала 240°С (при 230-240°С наблюдалось выделение МеОН) смесь нагревали еще в течение 6 мин (реакцию останавливали при температуре 262°С), баню удаляли, а смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество, полученное после охлаждения, разбавляли эфиром, фильтровали и сушили, при этом получали твердое вещество желто-коричневого цвета (3,48 г, неочищенный продукт). Неочищенный продукт очищали хроматографией на колонке с силикагелем. Примеси удаляли смесью гексан/ЕЮАс (5:5), продукт элюировали смесью гексан/ЕЮАс (2:8), а затем 100% ЕЮ Ас, после упаривания получали соединение А5 в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (2,1 г, выход 37%).

МС: 246 (М+Н)⁺, 248,1 (М-Н)'. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (λ=220 нм, элюент: 0,06% ТФУ, ΟΗ₃ΟΝ/Η₂0) гомогенность продукта составляла 99%.

Пример ЗВ. Получение 2-карбометокси-8-бром-4-гидрокси-7-метоксихинолина (В6).

В2 ВЗ

Стадия А.

2-Амино-З-нитрофенол В1 (5 г, 32,4 ммоль) растворяли в Н₂О (29,5 мл) и 1,4-диоксане (14,7 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником и добавляли по каплям в течение 20 мин бромистоводородную кислоту (48%, 16,7 мл, 147 ммоль). Затем смесь нагревали с обратным холодильником в течение еще 15 мин. Реакционную смесь охлаждали до 0°С (ледяная баня), затем добавляли в течение 30 мин нитрит натрия (2,23 г, 32,3 ммоль) в Н₂О (20 мл) и перемешивали в течение еще 15 мин при 0°С, затем смесь переносили в капельную воронку с рубашкой (0°С) и добавляли при 0°С по каплям в перемешиваемую смесь Си(1)Вт (5,34 г, 37,2 ммоль) в Н₂О (29,5 мл) и НВт (48%, 16,7 мл, 147 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°С, нагревали до 60°С и перемешивали в течение еще 15

-19009295 мин, охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь переливали в делительную воронку и экстрагировали эфиром (3 раза по 150 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (1 раз), сушили (Να₂8Ο₄), фильтровали и концентрировали, при этом получали неочищенный продукт (7,99 г) в виде масла красно-коричневого цвета. Неочищенный продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (ультрачистый силикагель 1:25, 230-400 меш, 4060 мм, 60А, элюент: СН₂С1₂), при этом получали чистый 2-бром-3-нитрофенол В2 (45%, 3,16 г) в виде твердого вещества оранжево-коричневого цвета.

МС: 217,8 (МН)^-. По данным ЖХВР (λ-220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 97%.

Стадия В.

Нитрофенол В2 (3,1 г, 14,2 ммоль) растворяли в ДМФА (20 мл) и к раствору добавляли измельченный карбонат цезия (5,58 г, 17,1 ммоль) и Ме1 (2,6 мл, 42,5 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ДМФА упаривали, остаток переносили в эфир (1 раз, 200 мл), промывали водой (1 раз, 200 мл), солевым раствором (4 раза по 100 мл), сушили (Мд8О₄), фильтровали и упаривали, при этом получали неочищенный 2-бром-3-нитроанизол В3 (94%, 3,1 г) в виде твердого вещества оранжевого цвета.

МС: 234 (М+2Н)⁺, по данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 98%.

Стадия С.

2-Бром-3-нитроанизол В3 (1,00 г, 4,31 ммоль) растворяли в ледяной уксусной кислоте (11,0 мл) и этаноле (11,0 мл). К полученному раствору добавляли порошкообразное железо (0,98 г, 17,5 ммоль). Смесь перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 3,5 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (35 мл), нейтрализовали добавлением твердого №-ьСО₃,. продукт экстрагировали СН₂С1₂ (3 раза по 50 мл). Экстракты сушили (Να₂8Ο₄), фильтровали и концентрировали в вакууме, при этом получали неочищенный 2-бром-3-метоксианилин В4 (91%, 0,79 г) в виде масла бледно-желтого цвета.

МС: 201,8 (МН)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 95%.

Стадия Ό.

К раствору 2-бром-3-метоксианилина В4 (0,79 г, 3,9 ммоль) в МеОН (7,6 мл) добавляли по каплям диметилацетилендикарбоксилат А3 (0,53 мл, 4,3 ммоль) при 0°С (осторожно, экзотермическая реакция!). Раствор нагревали с обратным холодильником в течение ночи. МеОН упаривали, а неочищенный продукт сушили в высоком вакууме, при этом получали смолу красного цвета. Продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (ультрачистый силикагель 1:30, 230-400 меш, 40-60 мм, 60А, элюент: гексан/Е1ОАе, 4:1), при этом получали аддукт В5 (86%, 1,16 г) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета.

МС: 344,0 (МН)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 72%.

Стадия Е.

В песчаную баню, предварительно нагретую до температуры приблизительно 440°С (температура бани), помещали диэфир В5 (1,1 г, 3,16 ммоль) в дифениловом эфире (3,6 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре от 230 до 245°С (температура реакционной смеси, при приблизительно 215°С наблюдалось выделение МеОН) в течение 7 мин, а затем охлаждали до комнатной температуры. При охлаждении раствора продукт кристаллизовался из реакционной смеси. Полученное твердое вещество коричневого цвета фильтровали, промывали эфиром и сушили в высоком вакууме, при этом получали неочищенный бромхинолин В6 (74%, 0,74 г) в виде твердого вещества коричневого цвета. По данным ЯМР полученный продукт содержал смесь таутомеров в соотношении приблизительно 1:1.

ЯМР (ДМСО, 400 МГц, смесь таутомеров, 1:1), МС: 311,9 (МН)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 96%.

Пример 3С.

Получение 2-карбометокси-8-хлор-4-гидрокси-7-метоксихинолина (С6).

- 20 009295

Стадия А.

2-Амино-З-нитрофенол В1 (5 г, 32,4 ммоль) растворяли в конц. НС1 (75 мл) и 1,4-диоксане (14,7 мл). Смесь нагревали при 70°С до практически полного растворения твердых веществ. Реакционную смесь охлаждали до 0°С (ледяная баня) и к раствору коричневого цвета добавляли нитрит натрия (2,23 г, 32,3 ммоль) в Н₂О (5,4 мл) в течение 3 ч при температуре не выше 10°С, затем смесь перемешивали при 0°С в течение еще 15 мин. Полученное промежуточное производное диазония выливали в раствор Си(1)С1 (3,8 г, 38,9 ммоль) в Н₂О (18,5 мл) и конц. НС1 (18,5 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°С, нагревали до 60°С и перемешивали в течение 15 мин. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь переносили в делительную воронку и экстрагировали эфиром (3 раза по 150 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором (1 раз), сушили (№ьЗО|). фильтровали и концентрировали, при этом получали неочищенный продукт (5,83 г) в виде масла красно-коричневого цвета. Неочищенный продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (ультрачистый силикагель 1:25, 230-400 меш, 40-60 мм, 60 А, элюент: гексан/ЕЮАс, 3:1), при этом получали чистый 2-хлор-3 -нитрофенол С2 (48%, 2,7 г) в виде твердого вещества оранжевого цвета.

МС: 171,8 (МН)'. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 96%.

Методика описана в работе Заибшеует Веасбои, 1. Меб. Сйст. 25 (4), 446-451, (1982).

Стадия В.

Нитрофенол С2 (1,3 г, 7,49 ммоль) растворяли в ДМФА (10 мл) и к полученному раствору добавляли измельченный карбонат цезия (2,92 г, 8,96 ммоль), а затем Ме1 (1,4 мл, 22,5 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ДМФА упаривали в вакууме, остаток переносили в эфир (150 мл), промывали водой (150 мл), солевым раствором (4 раза по 100 мл), затем сушили (МдЗОд). Органическую фазу фильтровали и упаривали, при этом получали неочищенный 2-хлор-3 -нитроанизол СЗ (98%, 1,38 г) в виде твердого вещества оранжевого цвета.

По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 93%.

Стадия С.

2-Хлор-З-нитроанизол СЗ (1,38 г, 7,36 ммоль) растворяли в смеси ледяная уксусная кислота (19 мл)/этанол (19 мл). К полученному раствору добавляли порошкообразное железо (1,64 г, 29,4 ммоль). Смесь перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 3,5 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (70 мл), нейтрализовали добавлением твердого №₂СОз и продукт экстрагировали СН_2С1₂ (3 раза по 150 мл). Экстракты объединяли и промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили (Νη₂8Ο|), фильтровали и концентрировали в вакууме, при этом получали неочищенный 2-хлор3-метоксианилин С4 (100%, 1,2 г) в виде масла желтого цвета. Полученный продукт использовали на следующих стадиях без дополнительной очистки.

МС: 157,9 (МН)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 86%.

Стадия Ό.

К раствору 2-хлор-З-метоксианилина С4 (1,2 г, 7,61 ммоль) в МеОН (15 мл) добавляли по каплям диметилацетилендикарбоксилат АЗ (1,0 мл, 8,4 ммоль) при 0°С (осторожно, экзотермическая реакция!). Раствор нагревали с обратным холодильником в течение ночи. МеОН упаривали, неочищенный продукт сушили в высоком вакууме, при этом получали смолу красного цвета, которую очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (ультрачистый силикагель 1:30, 230-400 меш, 40-60 мм, 60 А, элюент: гексан/ЕЮАс, 4:1), при этом получали аддукт С5 (74%, 1,68 г) в виде твердого вещества желтого цвета.

МС: 300 (МН)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 90%.

Стадия Е.

В песчаную баню, предварительно нагретую до температуры приблизительно 440°С (температура бани), помещали диэфир С5 (1,68 г, 5,6 ммоль) в дифениловом эфире (6,3 мл). Реакционную смесь пере

-21 009295 мешивали при температуре от 230 до 245°С (температура реакционной смеси, при приблизительно 215°С наблюдалось выделение МеОН) в течение 7 мин, затем охлаждали до комнатной температуры. При охлаждении раствора продукт кристаллизовался из реакционной смеси. Полученное твердое вещество коричневатого цвета фильтровали, промывали эфиром и сушили в высоком вакууме, при этом получали хинолин С6 (83%, 1,25 г) в виде твердого вещества бежевого цвета. По данным ЯМР полученный продукт содержал смесь таутомеров (кето/фенольные формы, соотношение таутомеров приблизительно 1:1).

МС: 267,9 (МН)⁺. По данным ЖХВР (λ-220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 92%.

Пример 3ϋ.

Получение 2-карбометокси-8-фтор-4-гидрокси-7-метоксихинолина (ϋ5).

Стадия А.

Раствор 2-фтор-З-метоксибензойной кислоты ϋΐ (1,68 г, 9,87 ммоль) и ϋΙΡΕΑ (2,07 мл, 11,85 ммоль, 1,2 экв.) в смеси толуола (8 мл) и трет-ВиОН (8 мл) перемешивали с активированными молекулярными ситами (4 А) в течение 1 ч, затем добавляли дифенилфосфорилазид (ϋΡΡΑ, 2,55 мл, 11,85 ммоль) и полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали, фильтрат концентрировали в вакууме, остаток переносили в ЕЮАс (50 мл), промывали Н₂О (2 раза по 30 мл) и солевым раствором (1 раз, 30 мл). Органическую фазу сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт Ό2 (2,38 г, 96%) использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

По данным МС наблюдается отщепление Вос группы, МС: 141,9 ((М+Н)-Вос)⁺, 139,9 ((М-Н)-Вос)'.

Стадия В.

Соединение Э2 (2,28 г, 9,45 ммоль) обрабатывали 4н. раствором НС1 в диоксане (А1бпс11. 10 мл, 40 ммолей), по данным ЖХВР через 60 мин наблюдалось полное потребление исходного материала. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, остаток растворяли в ЕЮАс и промывали водой, насыщенным раствором №НСС)з (водный раствор) и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили (Мд§О₄), фильтровали и концентрировали, при этом получали 1,18 г (88%) соединения ϋ3 в виде масла коричневого цвета, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

МС: 141,9 (М+Н)⁺, 139,9 (М-Н)’.

Стадия С.

Анилин ϋ3 (1,18 г, 8,36 ммоль) смешивали с диметилацетилендикарбоксилатом АЗ (1,45 мл, 10,0 ммоль) в метаноле (25 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч, затем упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали методом экспресс-хроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 9:1), при этом получали аддукт Михаэля ϋ4 в виде масла желтого цвета (1,27 г, 54%).

Стадия ϋ.

Аддукт Михаэля ϋ4 растворяли в теплом дифениловом эфире (6 мл) и помещали в песочную баню, предварительно нагретую до ~350°С. Температуру реакционной смеси поддерживали на уровне ~245°С в течение приблизительно 5 мин, при этом получали раствор коричневого цвета. После охлаждения до КТ из раствора выпадал осадок в виде требуемого 4-гидроксихинолина. Твердое вещество коричневого цвета фильтровали и промывали несколько раз диэтиловым эфиром. После высушивания получали хинолин ϋ5 в виде твердого вещества коричневого цвета (0,51 г, 45%).

МС: 252 (М+Н)⁺, 249,9 (М-Н)’. Смесь таутомеров (1:1).

Ή ЯМР (ДМСО-бб, 400 МГц): 12,04 (8, 1Н), 11,02 (δ, 1Н), 8,0 (ά, 1Н), 7,88 (б, 1Н), 7,65 (ш, 1Н), 7,39 (δ, 1Н), 7,32 (ш, 1Н), 6,5 (δ, 1Н), 4,0 (δ, ЗН), 3,98 (δ, ЗН), 3,95(8, ЗН), 3,91 (δ, ЗН).

Пример ЗЕ. Получение 2-карбометокси-6,8-диметил-4-гидрокси-7-метоксихинолина (Е8).

-22009295

Стадия А.

Амид Е1 (5,0 г, 30,63 ммоля) растворяли в смеси уксусной кислоты (5 мл) и серной кислоты (10 мл), охлаждали до 0°С. Затем добавляли по каплям смесь азотной кислоты (70%, 3 мл) и серной кислоты (2 мл), раствор нагревали до КТ и перемешивали в течение 1 ч. Затем реакционную смесь выливали в ледяную крошку, холодный раствор фильтровали (после полного таяния льда), при этом получали требуемое соединение Е2 (5,8 г, 91%), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

МС (Е8⁺): 209,0, МС (Е8^_): 206,9.

Методика описана в работе Сшшашш А.С., Усгагбо С., Ро1аиа Μ., 1. Ртак. Скейт, 181, (1988). Стадия В.

Соединение Е2 (5,8 г, 27,86 ммоль) обрабатывали 6М раствором НС1 (5 мл) в МеОН (10 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 48 ч, при этом получали требуемый продукт ЕЗ (4,6 г, 99%). По данным обращенно-фазовой ЖХВР наблюдалось полное потребление исходного материала (время удерживания (ву) (Е2)=2,6 мин, ву (Е3)=3,9 мин). Смесь концентрировали и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия С.

Серную кислоту (18 мл) добавляли в раствор анилина ЕЗ (4,20 г, 25,27 ммоль) в воде (36 мл) при 0°С, затем добавляли нитрит натрия (2,3 г, 33,33 ммоль в 6 мл воды). В отдельном сосуде готовили раствор серной кислоты (1,5 мл) в воде (14 мл). Полученный раствор нагревали с обратным холодильником, затем при постоянном кипении по каплям добавляли смесь исходных реагентов. После завершения добавления реагентов полученную смесь кипятили в течение еще 5 мин, затем выливали в смесь лед/карбонат натрия и охлаждали на ледяной бане. Продукт экстрагировали водным ЕЮАс и концентрировали, при этом получали соединение Е4 в виде вязкой жидкости темно-коричневого цвета (2,00 г, 47%), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

МС (Е8 ): 210,9.

Стадия ϋ.

Ме1 (1,42 мл, 22,74 ммоль) добавляли при КТ в раствор фенола Е4 (1,9 г, 11,37 ммоль) и карбоната калия (2 г) в ДМФА (25 мл). Смесь нагревали при 50°С в течение 2 ч, затем охлаждали до КТ, добавляли ЕЮАс и промывали водой (3 раза), затем водный слой экстрагировали ЕЮАс. Органические слои объединяли и сушили, фильтровали и концентрировали, при этом получали требуемый метиловый эфир Е5 (2,0 г, 97%).

Ή ЯМР (СОС1₃, 400 МГц): 7,62 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,13 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 3,74 (8, ЗН), 2,48 (б, ЗН), 2,36 (8, ЗН).

Стадия Е.

К раствору нитропроизводного Е5 (2,0 г, 11,04 ммоль) в ЕЮН добавляли 10% Рб/С (200 мг) и переносили в аппарат Парра. Реакцию проводили в атмосфере Н₂ под давлением 40 фунтов/кв. дюйм в течение 2 ч. Раствор фильтровали через слой диоксида кремния/целит, промывали МеОН и концентрировали, при этом получали требуемый анилин Е6 (1,5 г, 90%), который использовали без дополнительной очист ки.

Стадия Е.

Анилин Е6 (1,9 г, 12,65 ммоль) добавляли в раствор диметилацетилендикарбоксилата АЗ (2,32 мл, 18,85 ммоль) в метаноле (3 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч, затем упаривали досуха. Неочищенный продукт очищали методом экспресс-хроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 9:1), при этом получали соединение Е7 (аддукт Михаэля) в виде масла желтого цвета (2,8 г,

-23 009295

76%).

Ή ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) 9,48 (ушир. 8, 1Н), 6,89 (ά, 1=7,9 Гц, 1Н), 6,47 (ά, 1=7,9 Гц, 1Н), 5,35 (δ, 1Н), 3,74 (δ, ЗН), 3,70 (δ, ЗН), 3,65 (δ, ЗН), 2,27 (δ, ЗН), 2,24 (δ, ЗН).

Стадия С.

Соединение Е7 (аддукт Михаэля) растворяли в теплом дифениловом эфире (10 мл) и помещали в песочную баню, предварительно нагретую до ~350°С. Температуру реакционной смеси поддерживали на уровне ~245°С в течение приблизительно 5 мин, при этом получали раствор коричневого цвета. После охлаждения до КТ из раствора выпадал осадок в виде требуемого 4-гидроксихинолина. Твердое вещество коричневого цвета фильтровали и промывали несколько раз диэтиловым эфиром. После высушивания получали хинолин Е8 в виде твердого вещества желто-коричневого цвета (1,10 г, 88%).

Ή ЯМР (СНС1₃, 400 МГц): 8,80 (ушир. δ, 1Н), 8,06 (δ, 1Н), 7,26 (δ, 1Н), 6,93 (δ, 1Н), 4,04 (δ, ЗН), 3,80 (8, ЗН), 2,45 (8, ЗН) 2,39 (δ, ЗН).

Пример ЗГ. Получение 2-карбометокси-4-гидрокси-7-метокси-6-метилхинолина (Г4).

Стадия А.

Рб/С, 10%

ЕЮН

В суспензию 2-метил-5-нитроанизола Г1 (1,54 г, 9,21 ммоль) в абсолютном этаноле (15 мл) добавляли 10% Ρά/С (249 мг) в качестве катализатора. Суспензию гидрировали водородом, подаваемым из баллона, при атмосферном давлении и комнатной температуре в течение 6,5 ч. Реакционную смесь фильтровали через фильтр Μίΐΐεχ с диаметром пор 0,45 мкм и упаривали досуха, при этом получали 4метил-мета-анизидин Е2 (1,22 г, 8,89 ммоль, выход 97%).

Стадия В.

Диметилацетилендикарбоксилат АЗ (1,1 мл, 8,95 ммоль) добавляли по каплям в раствор 4-метилмета-анизидина Е2 (1,22 г, 8,89 ммоль) в МеОН (20 мл). Осторожно, экзотермическая реакция. Смесь нагревали при слабом кипении растворителя с обратным холодильником в течение 4 ч, охлаждали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали на колонке с силикагелем методом экспрессхроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 92,5:7,5), фракции, содержащие чистый продукт, упаривали, при этом получали аддукт, диэфир ГЗ (1,8 г, 6,44 ммоль, выход 73%).

Стадия С.

Диэфир ГЗ (1,8 г, 6,44 ммоль) растворяли в дифениловом эфире (5 мл) и реакционную смесь помещали в песчаную баню, предварительно нагретую до 350-400°С. После того, как температура реакционной смеси достигала 240°С, смесь нагревали еще в течение 5 мин, затем баню удаляли, а смесь охлаждали до комнатной температуры в течение ночи. Твердое вещество, полученное после охлаждения, смешивали с эфиром, фильтровали и сушили, при этом получали неочищенный продукт (0,97 г), содержащий региоизомеры в приблизительно равном соотношении, в виде твердого вещества коричневого цвета. Неочищенный продукт растирали в МеОН и ЕЮ Ас, фильтровали и сушили, при этом получали требуемый региоизомер метилхинолина (продукт Г4) в виде твердого вещества желтого цвета (245 мг, выход 15%).

По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 90%.

Пример 36. Получение 2-карбометокси-4-гидрокси[1,3]диоксоло[4,5-11]хинолина (65).

Стадия А.

-24009295

К раствору 2,3-метилендиоксибензойной кислоты 61 (коммерческий препарат, 485 мг, 2,92 ммоль) в 1,4-диоксане (8,0 мл) и трет-бутаноле (2,5 мл), при кипячении с обратным холодильником, добавляли ТЭА (430 мкл, 3,08 ммоль) и дифенилфосфорил азид (ϋΡΡΑ, 630 мкл, 2,92 ммоль) и нагревали с обратным холодильником в течение 10 ч. Смесь упаривали, разбавляли хлороформом, промывали 5% лимонной кислотой (3 раза), водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором, сушили (Мд§О₄), фильтровали и упаривали, при этом получали неочищенный продукт, который очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (силикагель, элюент: гексан/ЕЮАс, 75:25), при этом получали чистое Вос-аминопроизводное С2 (257 мг, 37%).

Стадия В.

сз

Вос-Производное 62 (257 мг, 1,08 ммоль) растворяли в 4М НС1/диоксан (5,0 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель упаривали, а остаток разбавляли насыщенным раствором бикарбоната натрия (несколько мл) и 1М №10 Η (1 мл), экстрагировали ЕЮАс (2 раза), сушили (Мд§О₄), фильтровали и упаривали досуха, при этом получали неочищенный 2,3-метилендиоксианилин 63 (158 мг, 106%).

Стадия С.

Диметилацетилендикарбоксилат АЗ (130 мкл, 1,06 ммоль) добавляли по каплям в раствор неочищенного 2,3-метилендиоксианилина 63 (148 мг, 1,08 ммоль) в МеОН (2,5 мл). Осторожно, экзотермическая реакция. Смесь нагревали при слабом кипении с обратным холодильником в течение 3 ч, охлаждали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали на колонке с силикагелем методом экспресс-хроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 9:1), фракции, содержащие чистый продукт упаривали, при этом получали диэфир 64 (185 мг, 0,662 ммоль, выход 61%).

Стадия ϋ.

Диэфир 64 (180 мг, 0,645 ммоль) растворяли в дифениловом эфире (2,5 мл) и реакционную смесь помещали в песчаную баню, предварительно нагретую до 350-400°С. После того как температура реакционной смеси достигала 250°С (при 220-230°С наблюдалось выделение МеОН), смесь нагревали еще в течение 6 мин (реакцию останавливали при температуре 262°С), затем баню удаляли, а смесь охлаждали до комнатной температуры. Твердое вещество, полученное после охлаждения, смешивали с эфиром, фильтровали и сушили, при этом получали неочищенный диоксихинолин 65 (125 мг, 78%). Полученное соединение использовали на следующих стадиях без дополнительной очистки.

МС: 246 (М+Н)⁺, 248,1 (М-Н)'. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 88%.

Пример ЗН. Получение 2-карбометокси-4-гидрокси-8,9-дигидрофуро[2,3-11]хинолина.

Стадия А.

Триэтиламин (5,0 мл, 35,6 ммоль) добавляли в колбу, содержащую амин Н1 (2,0 мл, 17,8 ммоль) и дихлорметан (100 мл) в атмосфере азота. Смесь охлаждали на ледяной бане, затем по каплям добавляли триметилацетилхлорид (3,3 мл, 26,7 ммоль). Реакционную смесь медленно нагревали до КТ и перемешивали в течение 14 ч при КТ. Реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора №1НС0;, и экстрагировали ЕЮАс. Органические слои объединяли и сушили, фильтровали и концентрировали, продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (элюент: градиент гексан/ЕЮАс от 4:1 до 1:1),

-25 009295 при этом получали требуемый продукт Н2 в виде твердого вещества грязно-белого цвета (3,7 г, выход 97%).

Стадия В.

Н2

п-ВиЫ (15,9 мл, 1,6М, 25,5 ммоль) добавляли по каплям в колбу (высушенную на пламени), содержащую амид Н2 (1,6 г, 7,72 ммоля) в ТГФ при 0°С в атмосфере аргона. После добавления и-ВиЫ раствор приобретал светло-желто-оранжевый цвет. Раствор медленно нагревали до КТ и перемешивали в течение 24 ч. Затем раствор охлаждали до 0°С и добавляли по каплям этиленоксид (0,46 мл, 9,26 ммоль). Раствор медленно нагревали до 23 °С, реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора ΝηΗίΌ,. продукт экстрагировали ЕЮАс, сушили, фильтровали и концентрировали, затем очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (элюент: градиент гексан/этилацетат от 4:1 до 1:1), при этом получали требуемый продукт НЗ (1,94 г, 5,01 ммоль, выход 65%) По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 99%. Стадия С.

г

Раствор ВВгз (26 мл, 1,0М, 26,0 ммоль) добавляли по каплям к метиловому эфиру НЗ в СН₂С1₂ при 0°С. Раствор медленно нагревали до 23 °С и перемешивали в течение 14 ч при КТ. Реакцию останавливали добавлением 1М ΝηΟΗ. продукт экстрагировали ЕЮАс и СН₂С1₂, при этом получали смесь требуемо го продукта Н4 и некоторого количества нециклического диола. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 99%.

Стадия ϋ.

НС1 (6М)

МеОН

Н5

Раствор НС1 (4,0 мл, 6,ОМ) добавляли в раствор амида Н4 (0,27 г, 1,22 ммоль) в МеОН (4,0 мл) при 23°С. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 48 ч, затем добавляли №1НС0з (насыщенный водный раствор) и экстрагировали ЕЮАс. Органические слои объединяли и сушили, фильтровали и концентрировали, при этом получали требуемый анилин Н5, который использовали на следующих стадиях без дополнительной очистки.

Стадия Е.

Диметилацетилендикарбоксилат АЗ (0,16 мл, 1,33 ммоль) добавляли в раствор анилина Н5 (0,18 г, 1,33 ммоль) в МеОН (3,0 мл) при КТ. Раствор нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч, охлаждали до КТ и добавляли насыщенный раствор №С1. Смесь экстрагировали ЕЮАс (3 раза), органические слои объединяли и сушили, фильтровали и концентрировали, продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (элюент: градиент гексан/ЕЮАс от 9:1 до 1:1), при этом получали требуемый олефин Н6 (0,29 г, 78%).

Стадия Г.

Колбу, содержащую олефин Н6 (0,29 г, 1,04 ммоль) в дифениловом эфире (2,0 мл) помещали в пес-26009295 чаную баню, предварительно нагретую до 350°С. После того как температура реакционной смеси достигала 225°С, колбу нагревали в течение еще 6-7 мин, при этом температура реакционной смеси достигала 240°С. Затем баню удаляли, а реакционную смесь медленно охлаждали до КТ, при этом получали продукт в виде осадка. Затем добавляли диэтиловый эфир, раствор фильтровали и промывали диэтиловым эфиром, при этом получали продукт Н7 (0,20 г, 77%) в виде твердого вещества светло-коричневого цвета.

МС: 246,0 (МН)⁺.

Пример 31. Получение 2-карбометокси-4-гидрокси-8-метилтиохинолина (13).

Стадия А.

Диметилацетилендикарбоксилат АЗ (5,21 мл, 35,91 ммоль) добавляли по каплям в раствор 2метилмеркаптоанилина Л (5,0 г, 35,91 ммоль) в МеОН (100 мл). Осторожно, экзотермическая реакция. Смесь нагревали при слабом кипении растворителя с обратным холодильником в течение 2 ч, охлаждали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали на колонке методом экспрессхроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 90:10), фракции, содержащие чистый продукт, упаривали, при этом получали диэфир 12 (10,53 г, 37,43 ммоль, выход 99%).

По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 85%.

Стадия В.

Диэфир 12 (10,53 г, 37,43 ммоль) растворяли в дифениловом эфире (35 мл) и реакционную смесь помещали в песчаную баню, предварительно нагретую до 350-400°С. После того, как температура реакционной смеси достигала 245°С смесь нагревали в течение еще 6 мин, затем баню удаляли, а смесь охлаждали до комнатной температуры. Полученный осадок суспендировали в эфире, фильтровали и промывали эфиром, при этом получали хинолин С8-8Ме, 13 (6,15 г, 66%).

МС: 250 (М+Н)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 99%.

Пример ЗК. Получение 7-трет-бутилокси-2-карбометокси-4-гидрокси-8-метилхинолина (Кб).

Стадия 1.

В раствор 2-метил-3-нитрофенола К1 (1,1 г, 7,18 ммоль) в ТГФ (13 мл) добавляли циклогексан (27 мл, раствор выдерживали в течение некоторого времени). Затем добавляли трет-бутилтрихлорацетимид К2 (5,36 мл, 28,73 ммоль) и каталитическое количество эфирата трифторида бора (143,8 мкл, 1,14 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч, при этом по данным аналитической ЖХВР реакция не завершена. Затем добавляли дополнительное количество третбутилтрихлорацетимида (1,4 мл, 7,51 ммоль), при этом не наблюдалось выпадение осадка. Реакция завершалась после перемешивания при комнатной температуре в течение 5 ч.

Затем добавляли твердый бикарбонат натрия и смесь фильтровали, промывали дихлорметаном и упаривали досуха, при этом получали твердое вещество белого цвета. Полученное твердое вещество растирали в дихлорметане, твердое вещество белого цвета (трихлорацетимид) удаляли фильтрованием. Фильтрат концентрировали, продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографин (элюент: гексан/ЕЮАс, 9:1), при этом получали чистый 2-метил-З-трет-бутоксинитробензол КЗ (1,17 г, 78%).

По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 96%.

-27009295

Стадия 2.

В раствор 2-метил-З-трет-бутоксинитробензола КЗ (1,31 г, 6,26 ммоль) в абсолютном этаноле (30 мл) добавляли 10% Рс1/С (130 мг) в качестве катализатора. Раствор гидрировали в атмосфере водорода, подаваемого из баллона, при атмосферном давлении и комнатной температуре в течение 63 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, промывали абсолютным ЕЮН и упаривали досуха, при этом получали 2-метил-З-трет-бутоксианилин К4 (1,11 г, 6,14 ммоль, выход 98%).

МС: 180 (М+Н)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 96%.

Стадия 3.

Диметилацетилендикарбоксилат АЗ (749 мкл, 5,97 ммоль) добавляли по каплям в раствор 2-метил3-трет-бутоксианилина К4 (1,07, 5,97 ммоль) в МеОН (14 мл). Смесь нагревали при слабом кипении растворителя с обратным холодильником в течение 2 ч, охлаждали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 95:5), фракции, содержащие чистый продукт, упаривали, при этом получали диэфир (1,13 г, 3,52 ммоль, выход 59%).

МС: 320,0 (М-Н)', 322,1 (М+Н)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 92%.

Стадия 4.

Диэфир К5 (1,13 г, 3,52 ммоль) растворяли в дифениловом эфире (3,0 мл) и реакционную смесь помещали в песчаную баню, предварительно нагретую до 400-440°С. После того как температура реакционной смеси достигала 230°С (при 220°С наблюдалось выделение МеОН), смесь нагревали в течение 6 мин (реакцию останавливали при температуре 242°С), затем баню удаляли, а смесь охлаждали до комнатной температуры. После охлаждения выделение осадка не наблюдалось, продукт выделяли из неочищенной смеси экспресс-хроматографией, дифениловый эфир элюировали смесью гексан/ЕЮАс, 8:2, а продукт элюировали смесью гексан/ЕЮАс, 4:6, при этом получали хинолин С7-О-трет-Ви,С8-Ме, Кб (838 мг, 82%) в виде твердого вещества бежевого цвета.

МС: 288,0 (М-Н)', 290,0 (М+Н)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 99%.

Полученный хинолин Кб использовали для синтеза соединений 1032 и 1033 представленных в табл. 1, а также для получения соединений 1034, 1035, 1057 и 1058, также представленных в табл. 1. С7-третБутилэфирную группу превращали в гидроксильную группу при обработке конечного соединения 50% ТФУ в дихлорметане в течение 30 мин при 0°С, затем в течение 30 мин при КТ, затем продукт упаривали досуха, разбавляли водой и лифиолизовали.

Пример ЗЬ. Получение 2-карбометокси-4-гидрокси-8-метоксихинолина (БЗ).

Стадия А.

Диметилацетилендикарбоксилат АЗ (5,5 мл, 44,74 ммоль) добавляли по каплям в раствор ортоанизидина Ь1 (5,0 мл, 44,33 ммоль) в МеОН (100 мл). Осторожно, экзотермическая реакция. Смесь нагревали при слабом кипении с обратным холодильником в течение 5 ч, охлаждали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (элюент: гради

-28009295 ент гексан/ЕЮАс от 95:5 до 90:10), фракции, содержащие чистый продукт, упаривали, при этом получали диэфир Ь2 (10 г, 37,70 ммоль, выход 85%).

По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 82%. Стадия В.

Диэфир Ь2 (10 г, 37,70 ммоль) растворяли в дифениловом эфире (15 мл) и реакционную смесь помещали в песчаную баню, предварительно нагретую до 350-400°С. После того, как температура реакционной смеси достигала 240°С смесь нагревали в течение 6 мин, затем баню удаляли, а смесь охлаждали до комнатной температуры. После охлаждения выделение осадка не наблюдалось, продукт выделяли из неочищенной смеси на колонке методом экспресс-хроматографией. Примеси элюировали в градиенте гексан/ЕЮАс от 6:4 до 5:5, затем продукт элюировали смесью гексан/ЕЮАс, 2:8, при этом получали хинолин С8-ОМе, ЬЗ (4,56 г, 52%).

МС: 231,9 (М-Н)'. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 99%.

Пример 4. Получение дипептидов.

Получение дипептида 1.

Смесь Вос-гидроксипролина Р2 (50,0 г, 216 ммоль), метилового эфира винил-АССА Р1 (42,25 г, 238 ммоль, 1,1 экв.), ТВТи (76,36 г, 238 ммоль, 1,1 экв.) и ΌΙΡΕΑ (113 мл, 649 ммоль, 3 экв.) в ДМФА (800 мл) перемешивали при КТ в атмосфере азота. Через 3,5 ч растворитель упаривали и остаток экстрагировали ЕЮАс. Экстракт промывали соляной кислотой (10%), насыщенным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. Затем органическую фазу сушили над сульфатом магния, фильтровали и упаривали, при этом получали масло. Продукт сушили в высоком вакууме в течение ночи, при этом получали дипептид 1 в виде пены желтого цвета (72,0 г, 94%, по данным ЖХВР чистота продукта >95%).

Получение дипептида 3.

Дипептид 1 (72,0 г, 203 ммоль), трифенилфосфин (63,94 г, 243,8 ммоль, 1,2 экв.) и 4нитробензойную кислоту (41,08 г, 245,8 ммоль, 1,2 экв.) растворяли в безводном ТГФ (1,4 л). Раствор охлаждали до 0°С при перемешивании в атмосфере азота. Затем по каплям добавляли диэтилазо дикарбоксилат (38,4 мл, 244 ммоль, 1,2 экв.) в течение 45 мин и реакционную смесь нагревали до КТ. Через 4 ч растворитель упаривали. Остаток разделили на четыре части. Каждую часть очищали хроматографией (тонкодисперсный силикагель, 10-40 мкм (меш), диаметр колонки 12 см, высота колонки 16 см, элюент: градиент гексан/ЕЮАс от 2:1 до 1:1, затем до чистого ЕЮАс). Затем растворитель упаривали, остаток сушили в высоком вакууме при 70°С в течение 1 ч, при этом получали эфир Вос-дипептида 2 (108,1 г, количественный выход) в виде аморфного твердого вещества белого цвета. К эфиру Вос-дипептида 2 (108 г, 243 ммоль) добавляли 4н. раствор хлористого водорода в диоксане, при этом получали бесцветный раствор. Раствор перемешивали при КТ в течение 1 ч. Растворитель упаривали и остаток сушили в высоком вакууме в течение 3 ч, при этом получали соединение 3 в виде гидрохлорида (твердое аморфное вещество), которое использовали без дополнительной очистки.

Пример 5. Получение трипептидов.

Получение трипептида 6а.

-29009295

Карбамат 4Ь (6,15 г, 22,5 ммоль) и ТВТи (7,72 г, 24,7 ммоль) суспендировали в ДХМ и суспензию интенсивно перемешивали. Затем при КТ добавляли ΌΙΡΕΑ (3,92 мл, 22,5 ммоль) и через 10 мин получали практически гомогенный раствор. Затем в реакционную смесь добавляли раствор дипептида 3 (10,39 г, 23,6 ммоль) в безводном ДХМ (100 мл), содержащий ΌΙΡΕΑ (4,11 мл, 23,62 ммоль). Полученный раствор желтого цвета перемешивали в течение 14 ч. Затем растворитель упаривали, при этом получали сироп желтого цвета, который экстрагировали ЕЮ Ас (300 + 150 мл) и промывали 0,05н. НС1 (2 раза по 200 мл), насыщенным раствором №₂СС)₃ (300 мл) и солевым раствором (150 мл). Экстракты объединяли, сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали трипептид 6а в виде пены светло-желтого цвета (15,68 г, количественный выход).

Получение трипептида 7а.

Трипептид 6а (15,68 г) растворяли в ТГФ (200 мл) и добавляли воду (30 мл). Полученный раствор охлаждали до 0°С и добавляли раствор гидроксида лития (моногидрат, 1,18 г, 28,12 ммоль) в течение 3 мин при интенсивном перемешивании. Смесь инкубировали в течение 3 ч при 0°С, затем избыток основания нейтрализовали добавлением 1н. НС1 (рН приблизительно 6) и ТГФ упаривали, при этом получали продукт в виде водной суспензии (смола желтого цвета). Смесь экстрагировали ЕЮ Ас (2 раза по 200 мл) и промывали насыщенным раствором №НСС)₃ (2 раза по 300 мл). Экстракты объединяли, сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали пену бледно-желтого цвета. Продукт очищали экспрессхроматографией (силикагель, элюент ЕЮАс), при этом получали соединение 7а в виде твердого аморфного вещества белого цвета (9,77 г, 91%).

Получение трипептида 6Ь.

(2,21 г, 9,10 ммоль) и ТВТЛ (3,12 г, 10,0 ммоль) растворяЦиклопентилмочевину-ТЬд ли/суспендировали в безводном дихлорметане (40 мл) и добавляли ΌΙΡΕΑ (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение приблизительно 10 мин, при этом получали практически гомогенный раствор. К реакционной смеси добавляли раствор дипептида Р1Р2 (4,20 г, 9,56 ммоль) в безводном дихлорметане (35 мл, 1 экв. ΌΙΡΕΑ) и полученную смесь желтого цвета перемешивали в течение 14 ч, затем подщелачивали добавлением ΌΙΡΕΑ (приблизительно 1,5 мл). Растворитель упаривали, при этом получали сироп желтого цвета, который экстрагировали этилацетатом (150 + 50 мл) и промывали 0,1н. НС1 (150 мл), водой (100 мл, эмульсию разрушали солевым раствором), насыщенным раствором Ма₂СО₃ (150 мл) и солевым раствором (100 мл). Экстракты объединяли, сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали соединение 6Ь в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (6,21 г, по данным ЖХВР чистота продукта 95%).

Получение трипептида 7Ь.

Неочищенный ρΝΒζ-эфир 6Ь, полученный, как описано выше, растворяли в ТГФ (90 мл) и добавля-30009295 ли метанол (40 мл). Затем при интенсивном перемешивании добавляли 1,0н. раствор гидроксида натрия (12,0 мл, 12,0 ммоль) в течение 10 мин (капельная воронка), и гидролиз проводили при комнатной температуре. Через 2 ч избыток основания осторожно нейтрализовали добавлением 1н. НС1 (добавляли по каплям приблизительно 1,5 мл до рН приблизительно 6 и до исчезновения желтой окраски раствора). Органические растворители упаривали, а водный остаток экстрагировали этилацетатом (150 + 50 мл) и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (3 раза по 150 мл) и солевым раствором (100 мл). Экстракты объединяли, сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали твердое аморфное вещество бледно-желтого цвета, которое сушили в высоком вакууме, при этом получали продукт 7Ь (4,11 г, 87% в расчете на РЗ-мочевину, по данным ЖХВР чистота продукта 93%).

Получение парабромбензолсульфопроизводного 7аВг5.

7а аг

0=5=0 I С1

ТЭА

ОМАР

СН_гС1₂

К холодному раствору (0°С) трипептида (10 г, 20,85 ммоль), парабромбензолсульфохлорида (ВгаС1, 11,19 г, 43,79 ммоль) и диметиламинопиридина (254 мг, 2,09 ммоль), растворенному в дихлорметане (75 мл), добавляли по каплям триэтиламин (10,2 мл, 72,98 ммоль). Раствор желтого цвета перемешивали в течение 1 ч при 0°С, затем медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 60 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали досуха, разбавляли ЕЮАс, промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и солевым раствором, сушили (Мд§О₄), фильтровали и упаривали досуха, при этом получали неочищенный продукт, который очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (элюент: градиент гексан/ЕЮАс от 60:40 до 50:50), при этом получали чистый продукт 7аВг5 в виде пены белого цвета (11,66 г, 80%).

МС: 698 (М+Н)⁺, 700,2 (МН+2)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 99%.

Пример 6. Введение остатков хинолина в трипептиды.

Получение производных 10а по реакции замещения парабромбензолсульфохлоргруппы.

7а Вга Юа

Соединение 7аВг§ (0,5 г, 0,71 ммоль), бромхинолин Вб (234 мг, 0,75 ммоль) и измельченный карбонат цезия (56 мг, 0,78 ммоль) растворяли в 1-метил-2-пирролидиноне (7,6 мл), раствор нагревали до 70°С и перемешивали в течение 7 ч. Затем раствор охлаждали до комнатной температуры, выливали в ЕЮАс, промывали Н₂О (1 раз), №1НССЬ (насыщенный раствор, 2 раза), солевым раствором (5 раз), сушили, фильтровали и концентрировали, при этом получали неочищенный продукт (0,565 г) в виде твердого вещества грязно-белого цвета. Продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (силикагель 1:30, элюент: ЕЮАс/гексан, 7:3), при этом получали чистый продукт 10а (77%, 0,429 г) в виде твердого вещества белого цвета.

МС: 775,2 (М+2Н)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 96%.

Получение промежуточного соединения 10Ь по реакции Мицунобу.

7а

К трипептиду 7а (1,55 г, 3,23 ммоль), растворенному в ТГФ (30 мл) добавляли гидроксихинолин А5 (1,08 г, 4,37 ммоль), затем добавляли 0,5 мл силилового эфира трифенилфосфина в ТГФ (13 мл, 6,46 ммоль). К суспензии желтого цвета добавляли по каплям Э1АЭ (1,27 мл, 6,46 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем по каплям добавляли 1М раствор ТВАР/ТГФ (11,3 мл,

-31 009295

11,31 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. По данным аналитической ЖХВР образующийся побочный продукт (оксид фосфина) полностью расщепляется с образованием водно-растворимого соединения. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс, промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 раза), водой (2 раза), холодным раствором 1н. ΝηΟΗ (2 раза, для удаления избытка хинолина), водой (2 раза) и солевым раствором (1 раз), сушили (М§§0₄), фильтровали и упаривали, при этом получали твердое вещество бежевого цвета. Неочищенный продукт очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (элюент: гексан/ЕЮАс, 8:2), при этом получали продукт 10Ь в виде твердого вещества цвета слоновой кости (1,92 г, 84%).

МС: 707,4 (М-Н)', 709,4 (М+Н)⁺. По данным ЖХВР (λ=220 нм, элюент: ТФУ) гомогенность продукта составляла 94%.

Пример 7. Получение соединения 1007.

Соединение 1007.

Стадия 1. Селективный моно гидролиз эфира 10Ь.

Трипептид 10Ь (149 мг, 0,210 ммоль) в 5 мл смеси ТГФ/МеОН (1:1) охлаждали до 0°С, затем добавляли 1н. водный раствор ΝηΟΗ (0,24 мл, 0,240 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин при 0°С, и в течение 1,5 ч при КТ (по данным аналитической ЖХВР реакция не завершена). Затем добавляли дополнительную порцию 1н. ΝηΟΗ (0,05 мл, 0,05 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 1 ч. Реакцию останавливали добавлением 1М НС1, упаривали практически досуха, разбавляли водой, замораживали и лифиолизовали, при этом получали кислоту 11Ь (неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки, приблизительно 0,210 ммоль).

По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СМ/Н₂О) гомогенность продукта составляла 89%.

Стадия 2. Получение диазо кето на 12Ь.

Натриевую соль соединения 11Ь (приблизительно 0,210 ммоль) растворяли в ТГФ (5 мл), затем добавляли триэтиламин (75 мкл, 0,538 ммоль) и раствор охлаждали до 0°С. К смеси добавляли по каплям изобутилхлорформиат (45 мкл, 0,346 ммоль) и суспензию белого цвета перемешивали при 0°С в течение 1 ч, затем добавляли раствор диазометана (1М в диэтиловом эфире, 1 мл, 0,999 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°С, в течение 1 ч при КТ и упаривали, при этом получали вязкую суспензию. Полученную суспензию растворяли в ЕЮАс, промывали насыщенным раствором №1НС 0з (2 раза), солевым раствором (1 раз), сушили (М§§0₄), фильтровали и упаривали, при этом получали неочищенный диазокетон 12Ь (145 мг, 95%).

МС (Е§): 717,4 (М-Н)', 719,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΤΉ₃Τ’Ν/Η₂Ο) гомогенность продукта составляла 85%.

Стадия 3. Получение бромкето на 13Ь.

-32009295

В раствор диазокетона 12Ь (145 мг, 0,201 ммоль) в ТГФ (4 мл) при 0°С добавляли по каплям раствор НВт (48% водный раствор, 0,1 мл) и смесь перемешивали в течение 1,25 ч. Реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора №1НСС)₃. затем ТГФ упаривали. Остаток разбавляли ЕЮ Ас, промывали насыщенным раствором №НСО₃ (2 раза), солевым раствором (1 раз), сушили (Мд8О₄), фильтровали и упаривали, при этом получали неочищенный бромкетон 13Ь (139 мг, 89%).

МС (Е8): 773,3 (МН+2)⁺, 771,3 (М+Н)⁺, 769 (М-Н)'.

Стадия 4. Получение тиазолилтрипептида 14Ь.

α-Бромкетон 1ЗЪ (49 мг, 0,0635 ммоль) и Ν-неопентилтиомочевину 8а (12 мг, 0,0688 ммоль) растворяли в изо пропаноле (3 мл) и раствор желтого цвета нагревали при 75°С в течение 1 ч. Раствор охлаждали до КТ и упаривали досуха. Полученный неочищенный продукт 14Ь использовали не следующей стадии без дополнительной очистки (приблизительно 0,0635 ммоль).

МС (Е8): 845,5 (М-Н); 847,5 (М+Н)⁺.

По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ί'Ή ,ί’Ν/ΕΕΟ) гомогенность продукта составляла 69%, содержание исходной тио мочевины 16%.

Стадия 5. Гидролиз эфира 14Ь.

Соединение 1007.

В раствор метилового эфира 14Ь (53 мг, 0,0626 ммоль) в 3,5 мл смеси ТГФ/Н₂О (2,5:1) добавляли твердый моногидрат ЬЮН (27 мг, 0,643 ммоль). Затем добавляли 0,5 мл МеОН, при этом получали гомогенный раствор. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию останавливали добавлением уксусной кислоты, продукт концентрировали, при этом получали суспензию грязно-белого цвета. Неочищенный продукт очищали методом препаративной ЖХВР (колонка УМС СотЫхсгссп Οϋδ-Αζ), 50x20 мм, ГО 8-5 мкм, 120 Α, λ=220 нм, элюент: линейный градиент 0,06% ТФУ ί'Ή,ί'Ν/ΕΓΟ). Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли, концентрировали и лифиолизовали, при этом получали продукт 1007 в виде трифторацетата (21 мг, выход 40%).

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-с1б): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 2,31 (ушир. δ, 1Н), 8,56 (δ, 1Н), 8,20-8,08 (ш, 1Н), 8,05 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,46 (ушир. δ, 1Н), 7,30 (ά, 1=9,0 Гц, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,79-5,66 (ш, 1Н), 5,50-5,40 (ш, 1Н), 5,23-5,14 (ш, 1Н), 5,10-5,02 (ш, 1Н), 4,70-4,61 (ш, 1Н), 4,48-4,33 (ш, 2Н), 4,16-4,08 (ш, 1Н), 4,04-3,93 (ш, 1Н), 3,95 (δ, ЗН), 2,60 (δ, ЗН), 2,582,49 (ш, 1Н), 2,40 (ушир. δ, 2Н), 2,32-2,21 (ш, 1Н), 2,08-1,98 (ш, 1Н), 1,80-1,22 (ш, ЮН), 1,04 (ш, 9Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е8): 831,5 (М-Н); 833,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ί'Ή₃ί.’Ν/Η₂Ο) гомогенность продукта составляла 99%.

-33 009295

Пример 8. Получение соединения 5005.

Соединение 5005.

о

В раствор соединения 7ЬВг8 (1,89 г, 2,71 ммоль) и хинолина Е4 (670 мг, 2,71 ммоль) в 1-метил-2пирролидиноне (26 мл) добавляли при комнатной температуре карбонат цезия (971 мг, 2,98 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 70°С в течение 12 ч, охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЕЮ Ас (100 мл), промывали водой (2 раза по 50 мл), насыщенным раствором ХаНСО₃ (50 мл), содержащим 1М ΝηΟΗ (1/5 объема) и солевым раствором (50 мл). Органическую фазу сушили над МдЗО₄, фильтровали и концентрировали, при этом получали неочищенный продукт в виде масла желтого цвета, который очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (силикагель, 250-400 меш, элюент: ЕЮАс/гексан, 13:7), при этом получали 1,27 г твердого вещества бледно-желтого цвета, содержащего 20% исходного хинолина. Твердое вещество растворяли в ТГФ (15 мл), суспензию обрабатывали ί.Ή₂Ν₂ (5 мл) при КТ в течение 12 ч, затем концентрировали. Остаток очищали на колонке методом экспрессхроматографии (силикагель, 250-400 меш, элюент: ЕЮАс/СНС1₃, 12:6), при этом получали 0,9 г чистого соединения 10с в виде пены светло-желтого цвета (43%).

Стадия 2.

Соединение 13с получали из соединения 10с с использованием последовательности реакций, описанной в примере 7, стадии 1, 2 и 3, при этом 2-карбометоксигруппу превращали в 2-(1-оксо-2бром)этильную группу.

Стадия 3. Взаимодействие с производным тио мочевины и завершающая стадия гидролиза.

Соединение 5005.

В раствор соединения 13с (50 мг, 0,065 ммоль) в изопропаноле (3 мл) добавляли изопропилтиомочевину 8д (10 мг, 0,085 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 45 мин (по данным ЖХВР наблюдалось полное потребление исходного материала). Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ТГФ (2 мл) и 1,0н. раствором гидроксида натрия (0,325 мл). Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч и упаривали досуха. Остаток растворяли в ДМСО (2 мл), продукт очищали на колонке СошЫ-Ргер методом ЖХВР. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лифиолизовали, при этом получали 26,1 мг соединения 5005 в виде трифторацетата (твердое аморфное вещество желтого цвета, выход 50%).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 8,60 и 8,82 (2δ, 1Н), 8,01-8,11 (ш, 1Н), 7,98 (δ, 1Н), 7,86 (δ, 1Н), 7,72 и 7,75 (2δ, 1Н), 5,90-6,03 (ш, 1Н), 5,80-5,90 (б, 1=16 Гц, 1Н), 5,62-5,79 (ш, 2Н), 5,15-5,26 (ш, 1Н), 4,96-5,13

-34009295 (ш, ΙΗ), 4,44-4,61 (ш, 2Н), 4,16-4,23 (ш, 2Н), 4,08-4,13 (ш, 2Н), 3,98-4,01 (2δ, 6Н), 3,27-3,38 (ш, 1Н), 2,532,70 (ш, 1Н), 2,32 и 2,36 (2δ, ЗН), 1,96-2,09 (^ 1=9 Гц, 17 Гц, 1Н), 1,31-1,67 (ш, 7Н), 1,23-1,30 (ш, 7Н), 1,02-1,13 (ш, 1Н), 0,87 и 0,94 (28, 9Н).

Пример 9. Получение соединения 4004.

Соединение 4004.

К раствору соединения 7аВгз (0,14 г, 0,20 ммоль) и соединения Г4 (0,06 г, 0,24 ммоль) в 1-метил-2пирролидиноне (4 мл) добавляли карбонат цезия (0,08 г, 0,26 ммоль). Смесь нагревали до 70°С и перемешивали в течение 7 ч. Реакционную смесь охлаждали, выливали в ЕЮАс (30 мл), промывали Н₂О (2 раза по 50 мл), насыщенным раствором №1НССУ, (2 раза по 50 мл) и солевым раствором (3 раза 50 мл). Органическую фазу сушили, фильтровали и концентрировали, при этом получали масло желтого цвета. Полученный материал очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (силикагель, 250-400 меш, элюент: ЕЮАс/гексан, 2:8), при этом получали 56 мг продукта 1 Об в виде полутвердого вещества светложелтого цвета (выход 40%).

Стадия 2.

Соединение 136 получали из соединения 106 с использованием последовательности реакций, описанной в примере 7, стадии 1, 2 и 3, при этом 2-карбометоксигруппу превращали в 2-(1-оксо-2бром)этильную группу.

Стадия 3. Взаимодействие с производным тио мочевины и завершающая стадия гидролиза.

Соединение 4004.

В раствор бромкетона 136 (34 мг, 0,045 ммоль) в изопропаноле (2 мл) добавляли цикло пентилтиомочевину 86 (8,4 мг, 0,06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 45 мин, затем концентрировали досуха и остаток растворяли в смеси ТГФ (1,5 мл) и метанола (0,3 мл). В полученный раствор медленно при перемешивании добавляли воду (0,45 мл), а затем ЬЮН (10,3 мг, 0,24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 16 ч (по данным ЖХВР наблюдается полное потребление исходного материала). Реакционную смесь концентрировали, остаток растворяли в ДМСО и продукт очищали на колонке СошЫ-Ргер методом ЖХВР. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лифиолизовали, при этом получали 16,5 мг (выход 42%) соединения 4004 в виде трифторацетата (твердое аморфное вещество белого цвета).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб, смесь ротамеров, 8:2): δ 8,59 и 8,71 (2δ, 1Н), 8,13 (ш, 2Н), 7,83-7,69 (ш, 2Н), 7,1 (6,1=8,2 Гц, 0,8Н), 6,46 (6,1=8,2 Гц, 0,2Н), 5,76-5,67 (ш, 2Н), 5,21 и 5,17 (2δ, 1Н), 5,05 (6,1=11 Гц, 1Н), 4,53-4,49 (ш, 2Н), 4,25 (ушир. 8,1Н), 4,04-3,99 (ш, 5Н), 2,66-2,53 (ш, 1Н), 2,34 (δ, 4Н), 2,07-1,98 (ш,

-35 009295

ЗН), 1,76-1,25 (ш, 16Н), 0,95 и 0,87 (2δ, 9Н). Пример 10. Получение дипептидов. Получение дипептида 3.

К раствору соединения ЗВг5 (4,2 г, 7,32 ммоль) и хинолина А5 (1,45 г, 5,86 ммоль) в 1-метил-2пирролидиноне (25 мл) добавляли карбонат цезия (3,1 г, 9,5 ммоль). Смесь нагревали при 70°С в течение 12 ч. Реакционную смесь выливали в ЕЮАс (150 мл), промывали Н₂О (2 раза по 150 мл), насыщенным раствором №1НС 0з (2 раза по 150 мл) и солевым раствором (2 раза по 150 мл). Органическую фазу отделяли, сушили над Νη₂5>0 |. фильтровали и концентрировали, при этом получали неочищенный продукт в виде масла желтого цвета. Полученный материал очищали на колонке методом экспресс-хроматографии (силикагель, 250-400 меш, элюент: 65% ЕЮАс в гексане), при этом получали соединение 15а (1,8 г, 42%) в виде твердого вещества белого цвета.

Пример 11. Получение соединения 2015.

Требуемое соединение получали с использованием последовательности реакций, описанной ниже.

Р = Вл К = Н

Е11-6

Е11-7

Соединение 2015

X = Оме X = ОН г- К = СН=О Е11-1 — К = Н; НС! Е11-2

Е11-3

I-- Ц“|!. НЧ<1 Е11*4

I— Н = РЮ(СО) Е11-5 £11-1

В раствор метилциклопентанола (2,00 г, 20,0 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (1,00 мл) при перемешивании добавляли цианид калия (1,43 г, 22,0 ммоль), при этом получали вязкую суспензию. В полученную суспензию при перемешивании добавляли по каплям серную кислоту (3 мл, осторожно, экзотермическая реакция), со скоростью, при которой температура смеси составляла приблизительно от 30 до 35°С. Затем добавляли дополнительную порцию уксусной кислоты (1 мл, для более эффективного перемешивания вязкой пасты). Смесь нагревали при 55-60°С в течение 30 мин и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем добавляли ледяную воду (35 мл), смесь экстрагировали этиловым эфиром (2 раза по 40 мл), органические фазы объединяли, промывали 5% ИаНСОэ (5 раз по 30 мл), сушили над Мд§О₄ и растворитель упаривали, при этом получали масло бледно-коричневого цвета (1,16 г). Объединенную водную фазу подщелачивали до рН 11 добавлением твердого К₂СО₃, полученный осадок отделяли фильтрованием и промывали этиловым эфиром (3 раза 40 мл). Фильтрат экстрагировали этиловым эфиром (2 раза по 40 мл), экстракты объединяли, сушили над Мд§О₄ и растворитель упаривали, при этом получали дополнительное количество продукта (0,355 г), которое объединяли с маслом,

-36009295 полученным ранее. Суммарный выход продукта 60% (1,52 г).

Е11-2.

В раствор соединения Е11-1 (1,50 г, 11,8 ммоль) в диоксане (8,0 мл) добавляли 5н. раствор соляной кислоты (8 мл), при этом наблюдалось выпадение некоторого количества осадка. Затем добавляли этанол (4 мл) и раствор нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали, органические растворители упаривали и водный остаток промывали гексаном (40 мл). Затем водный слой упаривали досуха (добавляли этанол и следы воды удаляли в виде азеотропной смеси), полученное твердое вещество сушили в высоком вакууме, при этом получали гидрохлорид метилциклопентиламина в виде твердого вещества бежевого цвета (1,38 г, 86%).

Е11-3.

К охлажденному льдом раствору Вос-ТЬд-ОН (5,00 г, 21,6 ммоль) в ацетонитриле (75 мл) при перемешивании в атмосфере аргона добавляли бензилбромид (2,83 мл, 23,8 ммоль). Затем небольшими порциями в течение приблизительно 5 мин добавляли ΌΒυ (3,88 мл, 25,9 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°С в течение 30 мин, затем нагревали до комнатной температуры. Через 3 ч растворитель упаривали и остаток экстрагировали этилацетатом (50 мл), промывали 1н. НС1 (2 раза по 25 мл), 5% водным раствором NаНСОз (3 раза по 25 мл) и солевым раствором (25 мл), затем сушили над Мд8О₄ и растворитель упаривали, при этом получали бензиловый эфир в виде бесцветного масла (6,83 г, 98%).

Е11-4.

Соединение Е11-3 (6,80 г, 21,2 ммоль) растворяли в диоксане (4 мл) и добавляли 4н. раствор НС1 в диоксане (30 мл, 120 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем растворитель упаривали и остаток выдерживали в потоке азота, при этом наблюдалось медленное отверждение. Затем полученный материал растирали в гексане (2 раза по 50 мл), фильтровали, сушили на воздухе в течение 30 мин, затем сушили в высоком вакууме в течение 5 сут, при этом получали гидрохлорид в виде твердого вещества белого цвета (4,86 г, 89%).

Е11-5.

В охлажденный льдом раствор соединения Е11-4 (4,85 г, 18,8 ммоль) в тетрагидрофуране (75 мл) при перемешивании добавляли диизопропилэтиламин (8,20 мл, 47,0 ммоль), затем в атмосфере аргона по каплям добавляли фенилхлорформиат (2,60 мл, 20,7 ммоль), при этом образовывался плотный осадок. Смесь интенсивно перемешивали, при этом получали мелкодисперсную суспензию. Через 4,5 ч смесь концентрировали до 1/3 исходного объема, затем экстрагировали этилацетатом (50 мл) и промывали водой (40 мл), 0,5М КН8О₄ (40 мл), 5% NаНСОз (2 раза по 40 мл) и солевым раствором (50 мл). Органическую фазу сушили над Мд8О4 и упаривали, при этом получали фенилкарбамат в виде бесцветного масла, которое медленно кристаллизовалось в течение нескольких дней (6,63 г, количественный выход).

Е11-6.

В раствор соединения Е11-5 (1,00 г, 2,93 ммоль) в ДМСО (2,00 мл), содержащий ацетонитрил (1,00 мл), добавляли диизопропилэтиламин (817 мкл), а затем амин Е11-2 (477 мг, 3,52 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем нагревали при 70°С в течение 45 мин. Затем раствор разбавляли этилацетатом (30 мл), промывали 5% водным раствором К₂СО₃ (4 раза по 50 мл) и солевым раствором (50 мл). Органическую фазу сушили над Мд8О4, растворитель упаривали, остаток очищали экспресс-хроматографией (силикагель для ТСХ, элюент: градиент гексан/этилацетат от 10:1 до 5:1), при этом получали мочевину Е11-6 в виде кристаллов белого цвета (798 мг, 79%).

Е11-7.

В раствор мочевины Е11-6 (780 мг, 2,25 ммоль) в абсолютном этаноле (10 мл) в атмосфере аргона добавляли 10% Рб/С в качестве катализатора (100 мг). Реакционную смесь продували Н₂ (3 раза), затем интенсивно перемешивали в атмосфере водорода, подаваемого из баллона. Через 3 ч катализатор удаляли фильтрованием через слой целита и фильтрат упаривали. Затем остаток растворяли в метаноле (приблизительно 10 мл), фильтровали через фильтр М1Шроге МШех с диаметром пор 0,45 мкм и упаривали, при этом получали кислоту Е11-7 в виде твердого вещества белого цвета (539 мг, 93%).

15Ь.

Вос-дипептид 15а (1,23 г, 2,11 ммоль) растворяли в безводном диоксане (2 мл), затем добавляли 4н. раствор НС1 в диоксане (10 мл, 40 ммоль), при этом получали раствор ярко-желтого цвета, который инкубировали при комнатной температуре. Через 3 ч растворитель упаривали, при этом получали смолообразное твердое вещество желтого цвета, которое растирали в дихлорметане (приблизительно 10 мл) и упаривали, при этом получали порошок ярко-желтого цвета, который сушили в высоком вакууме (1,23 г, количественный выход).

Е11-8.

Мочевину Е11-7 (239 мг, 0,932 ммоль) и ТВТи (3,06 мг, 0,979 ммоль) растворяли/суспендировали в безводном дихлорметане (4 мл), затем добавляли диизопропилэтиламин (157 мкл, 0,900 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота, при этом получали практически гомогенный раствор (приблизительно 5 мин). Затем добавляли раствор дипептида 15Ь (494 мг, 0,888 ммоль) в дихлорметане, содержащий диизопропилэтиламин (314 мкл, 1,8 ммоль), полученный раствор перемешивали в течение 3 ч, затем подщелачивали добавлением диизопропилэтиламина (приблизитель

- 37 009295 но 0,15 мл). Растворитель упаривали, при этом получали сироп желтого цвета, который экстрагировали этилацетатом (2 раза по 50 мл), промывали насыщенным раствором №1НС<Э;, (2 раза по 50 мл) и солевым раствором (30 мл). Экстракты объединяли, сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали трипептид Е11-8 в виде волокнистого твердого вещества белого цвета (650 мг, 97%).

Е11-9.

Эфир Е11-8 (645 мг, 0,894 ммоль) растворяли в тетрагидро фуране (16 мл), содержащем метанол (8 мл), затем при интенсивном перемешивании при комнатной температуре по каплям добавляли 1,0н. водный раствор гидроксида натрия (900 мл, 0,900 ммоль). Через 5 ч раствор упаривали (температура бани не превышала 30°С), остаток сушили в высоком вакууме в течение ночи, при этом получали карбоксилат в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (725 мг, количественный выход), который использовали без дополнительной очистки (приблизительно 10% дикислоты в качестве примеси).

Е11-10.

К охлажденной льдом суспензии соединения Е11-9 в виде натриевой соли (0,894 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) в атмосфере аргона при перемешивании добавляли триэтиламин (240 мкл, 1,72 ммоль), затем по каплям добавляли изобутилхлорформиат (174 мкл, 1,34 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°С в течение 3 ч, затем добавляли раствор диазометана в этиловом эфире (0,7М, 10 мл, 7 ммоль). Суспензию желтого цвета перемешивали в течение 30 мин при 0°С, затем нагревали до комнатной температуры. Через 1 ч через суспензию продували азотом в течение 15 мин, при этом удаляли избыток диазометана, затем растворитель упаривали. Остаток экстрагировали этилацетатом (20 мл), промывали 5% водным раствором №1НС0з (20 мл) и солевым раствором (20 мл). Органическую фазу сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали диазокетон Е11-10 в виде твердого вещества желтого цвета (626 мг, 96%).

Е11-11.

В раствор диазокетона Е11-10 (620 мг, 0,850 ммоль) в тетрагидро фуране (2 мл), охлажденный льдом, при перемешивании по каплям добавляли 48% водный раствор бромисто-водородной кислоты (144 мкл, 0,850 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Затем раствор разбавляли и экстрагировали этилацетатом (30 мл), промывали 5% водным раствором ХаНСО₃ (2 раза по 20 мл) и солевым раствором (20 мл). Органическую фазу сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали бромкетон Е11 -11 в виде твердого вещества желтого цвета (611 мг, 92%).

Е11-12.

В раствор бромкетона Е11-11 (75 мг, 0,10 ммоль) в изопропаноле (0,30 мл) добавляли диизопропилэтиламин (87 мкл, 0,50 ммоль) и Ν-ацетилтиомочевину (18 мг, 0,15 ммоль). Смесь нагревали при перемешивании при 70°С в течение 1 ч, затем экстрагировали этилацетатом (30 мл), промывали 5% водным раствором №1НС 0з (20 мл) и солевым раствором (20 мл). Органическую фазу сушили над Мд§О₄ и упаривали, при этом получали неочищенный аминотиазол в виде твердого вещества желтого цвета, который использовали без дополнительной очистки.

Соединение 2015.

Эфир Е11-12 (0,10 ммоль) растворяли в тетрагидро фуране (0,80 мл) и метаноле (0,25 мл), затем добавляли 1,0н. гидроксид лития (800 мкл, 0,80 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5, затем органические растворители упаривали, полученный водный остаток разбавляли ДМСО (1 мл) и уксусной кислотой (0,7 мл), продукт очищали на колонке СошЫ-Ртер методом ЖХВР. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лифиолизовали, при этом получали конечный ингибитор 2015 в виде трифторацетата (твердое аморфное вещество желтого цвета, 16 мг, 20%).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 0,87 и 0,96 (2δ, 9Н), 1,19 и 1,28 (28, ЗН), 1,24-1,90 (ш, 9Н), 2,03 (кажущийся С|⁴. Д каж.=8,8 Гц, 1Н), 2,20 (δ, ЗН), 2,2-2,28 (ш, 1Н), 2,60 (8, ЗН), 3,83-4,05 (ш, 2Н), 3,93 (8, ЗН), 4,19-4,23 (ш, 2Н), 4,36-4,46 (ш, ЗН)_; 4,81 (калящийся 1,1 каж.=7 Гц, 0,2Н), 5,03-5,07 (две серии перекрывающихся άά, 1Н), 5,16-5,24 (две серии перекрывающихся άά, 1Н), 5,38 и 5,42 (два ушир. 8, 1Н), 5,67-5,83 (ш, 1Н), 5,95-6,04 (ш, 2Н), 7,26 (ά, 1=9,4 Гц, 0,8Н), 7,40 (ά, 1=9,4 Гц, 0,2Н), 7,43-7,55 (ушир. ш, 1Н), 7,89 (ά, 1=9,2 Гц, 0,2 Н), 8,04 (ά, 1=9,2 Гц, 0,8Н), 8,08 (ушир. 8, 1Н), 8,54 (δ, 0,8Н), 8,87 (δ, 0,2Н), 12,37 и 12,42 (два ушир. δ, 1Н).

Пример 12. Получение соединения 1038.

Соединение 1038.

Карбаматбромкетон Е12-1 получали с использованием последовательности реакций, как описано в

-38009295 примере 11 (последние шесть стадий), но при замене мочевины 11-7 на карбамат 4с (пример 15).

Е12-1

Соединение 1038.

Бромкетон превращали в конечное соединение по следующей методике.

В раствор бромкетона Е12-1 (60 мг, 0,076 ммоль) в изопропаноле (3 мл) добавляли изопропилтиомочевину 8д (11,7 мг, 0,99 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 70°С в течение 45 мин (по данным ЖХВР наблюдается полное потребление исходного материала). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли ТГФ (3 мл) и добавляли 1,0н. раствор гидроксида натрия (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, затем упаривали досуха. Остаток растворяли в ДМСО (2 мл), продукт очищали на колонке СошЫ-Ргер методом ЖХВР. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лифиолизовали, при этом получали 9 мг соединения 1038 в виде трифторацетата (твердое аморфное вещество желтого цвета, выход 15%).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 12,35 (ушир. 8, 1Н), 8,56 и 8,76 (2δ, 1Н), 7,72-8,27 (ш, 2Н), 7,23-7,68 (ш, 2Н), 6,68-6,95 (ά, 1= 9 Гц, 0,8Н), 6,18-6,34 (ά, 1=9 Гц, 0,2Н), 5,61-5,81 (ш, 1Н), 5,52 (ушир. 8, 1Н), 5,135,27 (ш, 1Н), 4,96-5,13 (ш, 1Н), 4,31-4,50 (ш, ЗН), 3,74-4,17 (ш, 8Н), 2,53-2,60 (ш, ЗН), 2,20-2,36 (ш, 1Н), 1,95-2,09 (ш, 1Н), 1,70-1,91 (ш, 2Н), 1,95-2,09 (ш, 1Н), 1,37-1,61 (ш, 6Н), 1,18-1,32 (ш, 9Н), 0,87 и 0,96 (28, 9Н).

Пример 13. Получение соединения 2013.

Соединение 2013.

Уреидокис лота Е13 -1.

Уреидо-РЗ-кислоту получали из трет-бутиламина и соединения Е11-5 с использованием последовательности реакций, как описано в примере 11.

Эфир трипептида Е13-2.

Уреидо-РЗ-кислоту конденсировали с Р1-Р2-фрагментом 15Ь аналогично тому, как описано в примере 11.

Соединение 2013.

Конечный ингибитор получали из соединения Е13-2 с использованием последовательности реакций, как описано в пример 11. Продукт омыления получали в виде трифторацетата (аморфный порошок желтого цвета, 21 мг, 28%).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 0,91 и 0,96 (2δ, 9Н), 1,15 и 1,21 (2δ, 9Н), 1,26 (άά, 1=5,0, 9,4 Гц,

-39009295

0,8Н), 1,53 (бб, 1=5,0, 7,8 Гц, 0,8Н), 1,58 (бб, 1=4,3, 9,2 Гц, 0,2Н), 2,03 (кажущийся д⁴,1 каж.=8,8 Гц, 1Н), 2,20 (8, ЗН), 2,2-2,28 (ш, 1Н), 2,58 (δ, ЗН), 3,80-4,04 (ш, 2Н), 3,93 и 3,96 (2δ, ЗН), 4,18-4,20 (ш, 2Н), 4,354,45 (ш, ЗН), 4,83 (кажущийся 1,1 каж.=7 Гц, 0,2Н), 5,03-5,07 (две серии перекрывающихся бб, 1Н), 5,175,24 (две серии перекрывающихся бб, 1Н), 5,36 и 5,42 (два ушир. 8, 1Н), 5,66-5,80 (ш, 1Н), 5,86-6,04 (ушир. ш, 2Н), 7,25 (б, 1=9,2 Гц, 0,8Н), 7,40 (б, 1=9,2 Гц, 0,2Н), 7,4-7,50 (ушир. ш, 1Н), 7,88 (б, 1=9,0 Гц, 0,2 Н), 8,03-8,15 (ушир. ш, 1,8Н), 8,54 (δ, 0,8Н), 8,89 (δ, 0,2Н), 12,38 и 12,42 (два ушир. δ, 1Н).

Пример 14. Получение соединения 2018.

Е11-5 +

Е14-1

Соединение 2018.

Е14-2.

Уреидо-РЗ-кислоту (соединение Е14-2) получали из соединения Е11-5 и амина Е14-1 с использованием последовательности реакций, как описано в примере 11.

Е14-3.

Уреидо-РЗ-кислоту конденсировали с Р1-Р2-фрагментом 15Ь аналогично тому, как описано в примере 11.

Конечный ингибитор получали из соединения Е14-3 с использованием последовательности реакций, как описано в примере 11. Продукт омыления получали в виде трифторацетата (аморфный порошок желтого цвета, 10 мг, 21%).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 0,74-0,97 (ш, 21Н), 1,25 (бб, 1=5, 9 Гц, 1Н), 1,47 (бб, 1=8,4 Гц, 0,2Н), 1,53 (бб, 1=8, 5 Гц, 0,8Н), 2,02 (кажущийся д⁴, 1 каж.=8 Гц, 0,8Н), 2,19 (δ, ЗН), 2,2-2,27 (ш, 1Н), 2,59 (δ, ЗН), 3,31-3,43 (ш, 1Н), 3,93 и 3,95 (28, ЗН), 3,98-4,02* (ш), 4,22-4,26* (ш), 4,35-4,39* (ш), 4,82 (кажущийся 1, 1 каж.=7 Гц, 0,2Н), 5,01-5,06 (две серии перекрывающихся бб, 1Н), 5,16-5,23 (две серии перекрывающихся бб, 1Н), 5,35 и 5,41 (два ушир. δ, 1Н), 5,67-5,79 (ш, 1Н), 5,87 (б, 1=9,4 Гц, 0,8Н), 5,91 (б, 1=9,4 Гц, 0,2Н), 6,07 (б, 1=8,6 Гц, 0,8Н), 6,14 (б, 1=9,2 Гц, 0,2Н), 7,24-7,5 (ш, 2Н), 7,89 (б, 1=9,2 Гц, 0,2Н), 8,04-8,12 (ш, 1,8Н), 8,54 (δ, 0,8Н), 8,87 (δ, 0,2Н), 12,37 и 12,41 (2δ, 1Н). * перекрывание с сигналом ΗΟϋ.

Пример 15. Получение серии соединений.

Бромкетоны 18а и 18Ь использовали в качестве исходных соединений в параллельном синтезе и получали серию соединений.

18а Б°=ОМе, и=Вг, 1Л=Н

18Ь 1»=ОМе,и=С1, Б^г=н

6. ЫОНЛГФ, Н₂О

7. очистка методом ЖХВР

-40009295

Стадия 1. Получение аминотиазольного кольца.

Серию флаконов объемом 8 мл помещали в реакционный блок синтезатора АСТ496 (фирма Ас1уапссс! С11ст1сс11). в каждый флакон добавляли требуемое тиопроизводное 8 (0,0688 ммоль), бромкетон (0,0625 ммоль) и изопропанол (500 мкл). Закрытые флаконы нагревали при 70°С в течение 1 ч. Растворитель удаляли в вакууме на центрифуге 8рссс1Уас. затем добавляли 1,2-дихлорметан и снова упаривали на центрифуге 8рссс1Уас. Неочищенные продукты сушили в высоком вакууме в течение ночи.

Стадия 2. Удаление Вос-защитной группы.

Для удаления Вос-защитной группы во все флаконы добавляли 30% ТФУ в ДХМ (500 мкл) и инкубировали в течение 1 ч. Все флаконы помещали в центрифугу 8рссс1Уас и упаривали летучие соединения.

Стадия 3. Конденсация.

В каждый флакон добавляли соответствующий карбамат (21с-21д) и карбаминовую кислоту (4Ь-4к) (0,0875 ммоль), НАТО (0,0875 ммоль, 33,27 мг) и ΩΙΡΕΑ (0,313 ммоль, 55 мкл) в 500 мкл ДМСО. Реакцию проводили в течение ночи.

О.1Х, н 2	:гпг н }	'--' О N СО.Н Н 2
4К	4ί	4]
	Г ' О N СО.Н Н 1
Стадия 4. Омыление и очистка.	4к

Все реакционные смеси разбавляли 400 мкл ДМСО и 200 мкл ТГФ. Затем в каждый флакон добавляли 500 мкл 2н. водного раствора ЫОН (1 ммоль) и реакционные смеси инкубировали в течение ночи, затем смесь нейтрализовали добавлением 400 мкл АсОН. Все соединения очищали обращенно-фазовой полупрепаративной ЖХВР (колонка 8упипе1гу, 5 смх19 см, элюент: градиент ΤΉ ,Τ’Ν/ΙΤΟ. 0,06% ТФУ).

Пример 16. Следующие соединения получали по методикам, описанным выше в примерах. Характеристика соединений, представленных в табл. 1.

Соединение 1006.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-ср): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 2,31 (ушир. 8, 1Н), 8,56 (8, 1Н), 8,14 (ушир. 8, 1Н), 8,06 (6,1=9,0 Гц, 1Н), 7,47 (ушир. δ, 1Н), 7,34 (6,1-9,0

-41 009295

Гц, ΙΗ), 7,11 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,79-5,66 (ш, 1Н), 5,51-5,41 (ш, 1Н), 5,24-5,15 (ш, 1Н), 5,11-5,03 (ш, 1Н), 4,53-4,40 (ш, 2Н), 4,40-4,32 (ш, 1Н), 4,07 (ά, 1=8,6 Гц, 1Н), 4,04-3,92 (ш, 1Н), 3,96 (δ, ЗН), 2,61 (δ, ЗН), 2,582,50 (ш, 1Н), 2,40 (ушир. 8, 2Н), 2,31-2,17 (ш, 1Н), 2,12-1,95 (ш, ЗН), 1,91-1,76 (ш, 2Н), 1,71-1,39 (ш, ЗН), 1,31-1,23 (ш, 1Н), 1,04 (ш, 9Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 817,4 (М-Н)', 819,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СМ/Н₂О) гомогенность продукта составляла 99%.

Соединение 1030.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-άβ): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 856 (δ, 1Н), 8,14 (ά, 1=9,0 Гц, 1Н), 8,00-7,78 (ш, 1Н), 7,73-7,56 (ш, 1Н), 7,52 (δ, 1Н), 7,37 (а, 1-9,2 Гц, 1Н),

6,97 (ф 1=8,6 Гц, 1Н), 5,78-5,65 (ш, 1Н), 5,52-5,45 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,13-5,03 (ш, 1Н), 4,58-4,50 (ш, 1Н), 4,50-4,42 (ш, 1Н), 4,39-4,31 (ш, 1Н), 4,10-4,03 (ш, 1Н), 4,01 (δ, ЗН), 3,99-3,70 (ш, Н₂О, 2Н), 2,342,23 (ш, 1Н), 2,07-1,98 (ш, 1Н), 1,70-1,37 (ш, 9Н), 1,34-1,23 (ш, 2Н), 1,26 (ушир. а, 1=6,4 Гц, 6Н), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е8): 839 (М-Н)’, 841,3 (М-Н+2)’, 841,3 (М+Н)⁺, 843,3 (МН+2)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СЛ/Н₂О) гомогенность продукта составляла 98%.

Соединение 1015.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 2,32 (ушир. δ, 1Н), 8,57 (δ, 1Н), 8,15-8,03 (ш, 1Н), 8,04 (а, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,47-7,37 (ш, 1Н), 7,29 (а, 1-8,8 Гц, 1Н), 7,03 (ф 1=8,6 Гц, 1Н), 5,78-5,65 (ш, 1Н), 5,45-5,38 (ш, 1Н), 5,23-5,14 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,72-4,62 (ш, 1Н), 4,46-4,32 (ш, 2Н), 4,16-4,08 (ш, 1Н), 4,03-3,90 (ш, 1Н), 3,94 (δ, ЗН), 2,60 (δ, ЗН), 2,302,19 (ш, 1Н), 2,20 (8, ЗН), 2,06-1,97 (ш, 1Н), 1,81-1,21 (ш, 11Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е8): 775,4 (М-Н)', 777,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΓΉ₃Γ’Ν/Η₂Ο) гомогенность продукта составляла 99%.

Соединение 1024

Соединение 1024.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 2,31 (δ, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,20-8,05 (ш, 1Н), 8,03 (а, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,54-7,40 (ш, 1Н), 7,38 (а, 1=8,6 Гц, 1Н), 7,33 (а, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,79-5,66 (ш, 1Н), 5,49-5,41 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,773,85 (ш, 8Н), 3,95 (δ, ЗН), 2,60 (δ, ЗН), 2,58-2,47 (ш, 1Н), 2,43-2,36 (ш, 2Н), 2,31-2,20 (ш, 1Н), 2,07-1,98 (ш, 1Н), 1,57-1,51 (ш, 1Н), 1,31-1,23 (ш, 1Н), 1,04 (δ, 9Н), 1,00 (δ, 9Н).

МС (Е§): 809,4 (М-Н)', 811,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ,

-42009295

ΟΉ ,Ο’Ν/ΕΕΟ) гомогенность продукта составляла 98%.

Соединение 1001.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-сЦ): смесь ротамеров (приблизительно 7:3), спектр основного ротамера, δ 801 (ушир. δ, 1Н), 7,92 (δ, 1Н), 7,90-7,77 (ш, 2Н), 7,70 (ушир. δ, 1Н), 7,31 (ά, 1=9,4 Гц, 1Н), 6,72 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,28-6,10 (ш, 1Н), 5,53-5,33 (ш, 1Н), 5,03-5,92 (ш, 1Н), 4,85-4,71 (ш, 1Н), 4,49-4,40 (ш, 1Н), 4,194,02 (ш, ЗН), 4,03 (δ, ЗН), 3,93 (δ, ЗН), 2,82-2,45 (ш, ЗН), 2,36-2,23 (ш, 1Н), 1,90-1,79 (ш, 1Н), 1,34 (ш, 9Н), 1,37-1,14 (ш, 2Н), 1,03 (δ, 9Н), 0,98 (δ, 9Н).

МС (Е§): 835,4 (М-Н)', 837,3 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СНзСЛ/НгО) гомогенность продукта составляла 99%.

Соединение 1011.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 853 (δ, ΙΗ), 7,92 (ά, 1=8,8 Гц, ΙΗ), 7,69 (ά, 1=7,4 Гц, ΙΗ), 7,46 (δ, ΙΗ), 7,39 (δ, ΙΗ), 7,25 (ά, 1=9,0 Гц, ΙΗ), 6,99 (ά, 1=8,8 Гц, ΙΗ), 5,79-5,64 (ш, ΙΗ), 5,44-5,33 (ш, ΙΗ), 5,23-5,13 (ш, ΙΗ), 5,10-5,00 (ш, ΙΗ), 4,81-4,70 (ш, ΙΗ), 4,45-4,27 (ш, 2Η), 4,19-4,11 (ш, ΙΗ), 4,04-3,91 (ш, ΙΗ), 3,87-3,72 (ш, ΙΗ), 2,75 (δ, 6Η), 2,66 (δ, 3Η), 2,56-2,42 (ш, ΙΗ), 2,29-2,17 (ш, ΙΗ), 2,07-1,97 (ш, ΙΗ), 1,80-1,21 (ш, ЮН), 1,25 (ушир. ά, 1=6,5 Гц, 6Η), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 788,4 (М-Н)', 790,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СИзСЛ/НгО) гомогенность продукта составляла 95%.

Соединение 1023

Соединение 1023.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-ср): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 2,36 (δ, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,09-7,97 (ш, 2Н), 7,42 (ушир. δ, 1Н), 7,29 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,79-5,66 (ш, 1Н), 5,45-5,38 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,75-4,66 (ш, 1Н), 4,47-4,31 (ш, 2Н), 4,16-4,09 (ш, 1Н), 4,03-3,91 (ш, 1Н), 3,94 (δ, ЗН), 3,29-3,18 (ш, 2Н), 2,60-2,43 (ш, 1Н), 2,30-2,18 (ш, 1Н), 2,20 (8, ЗН), 2,07-1,97 (ш, 1Н), 1,81-1,33 (ш, 9Н), 1,31-1,23 (ш, 1Н), 1,18 (ΐ, 1=7,3 Гц, ЗН), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 789,3 (М-Н)', 791,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СИзСЛ/НгО) гомогенность продукта составляла 98%.

-43 009295

О

Соединение 1033.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСС)-й₍,): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 2,36 (δ, 1Н), 8,53 (δ, 1Н), 8,05 (δ, 1Н), 7,98 (й, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,46 (δ, 1Н), 7,20 (й, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,04 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,80-5,65 (ш, 1Н), 5,44-5,37 (ш, 1Н), 5,24-5,14 (ш, 1Н), 5,10-5,01 (ш, 1Н), 4,85-4,76 (ш, 1Н), 4,45-4,34 (ш, 2Н), 4,21-4,10 (ш, 1Н), 4,04-3,89 (ш, 1Н), 2,62 (б, ЗН), 2,58-2,47 (ш, 1Н), 2,28-2,18 (ш, 1Н),

2,20 (8, ЗН), 2,06-1,96 (ш, 1Н), 1,81-1,38 (ш, 9Н), 1,39 (δ, 9Н), 1,29-1,22 (ш, 1Н), 0,99 (δ, 9Н).

МС (Е8): 817,4 (М-Н)', 819,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ,

6Ή₃Χ.’Ν/Η₂Ο) гомогенность продукта составляла 98%.

Соединение 1037

Соединение 1037.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,29 (δ, 1Н), 8,54 (δ, 1Н), 8,19-8,01 (ш, 1Н), 8,04 (й, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,44 (δ, 1Н), 7,25 (й, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,79 (й, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,78-5,65 (ш, 1Н), 5,47-5,37 (ш, 1Н), 5,22-5,13 (ш, 1Н), 5,08-5,02 (ш, 1Н), 4,45-4,33 (ш, 2Н), 4,13-4,06 (ш, 1Н), 3,98-3,90 (ш, 1Н), 3,92 (б, ЗН), 2,59 (б, ЗН), 2,56-2,46 (ш, 1Н), 2,41-2,36 (ш, 2Н), 2,28-2,18 (ш, 1Н), 2,05-1,96 (ш, 1Н), 1,93-1,43 (ш, 9Н), 1,33 (ушир. 8, ЗН), 1,29-1,22 (ш, 1Н), 1,03 (δ, 9Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е8): 845,5 (М-Н)', 847,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06 % ТФУ, ΕΉ₃Χ.’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 96%.

Соединение 1051.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 2,35 (δ, 1Н), 8,54 (δ, 1Н), 8,03 (δ, 1Н), 7,92 (й, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,47 (δ, 1Н), 7,38 (1, 1=8,3 Гц, 1Н), 6,98 (й, 1=8,7 Гц, 1Н), 5,78-5,65 (ш, 1Н), 5,47-5,38 (ш, 1Н), 5,23-5,13 (ш, 1Н), 5,09-5,00 (ш, 1Н), 4,69-4,60 (ш, 1Н), 4,48-4,30 (ш, 2Н), 4,14-3,90 (ш, 2Н), 3,98 (б, ЗН), 2,60-2,39 (ш, ЗН), 2,30-2,20 (ш, 1Н), 2,06-1,97 (ш, 1Н), 1,80-1,37 (ш, 8Н), 1,37-1,20 (ш, 2Н), 1,12 (1,1=7,5 Гц, ЗН), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е§): 793,3 (М-Н)', 795,3 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06 % ТФУ, 6Ή₃Χ’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 98%.

-44009295

Соединение 1053

Соединение 1053.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,06 (ушир. 8, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,12 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 8,05 (δ, 1Н), 7,46 (ш, 1Н), 7,39 (б, 1=9,3 Гц, 1Н),

6,98 (б, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н), 5,44-5,38 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,65-4,52 (ш, 1Н), 4,49-4,32 (ш, 2Н), 4,12-4,05 (ш, 1Н), 4,01 (δ, ЗН), 3,99-3,91 (ш, 1Н), 3,78 (δ, ЗН), 2,60-2,45 (ш, 1Н),

2,31-2,20 (ш, 1Н), 2,07-1,97 (ш, 1Н), 1,81-1,37 (ш, 8Н), 1,37-1,22 (ш, 2Н), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е8): 811,1 (М-Н)', 813,2 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ίΉ ,Τ’Ν/ΕΕΟ) гомогенность составляла 96%.

Соединение 1027.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 8,58 (δ, ΙΗ), 8,06 (б, 1=9 Гц, 1Н), 7,91, 7,89 (2δ, 1Н), 7,57 (ушир., 1Н), 7,40, 7,38 (2δ, 1Н), 7,25 (б, 1=9 Гц, 1Н), 5,57-5,68 (ш, 1Н), 5,55 (ушир. δ, 1Н), 5,20 (б, 1=16 Гц, 1Н), 5,06 (б, 1=11 Гц, 1Н), 4,69 (ушир. δ, 1Н), 4,47 (1, 1=9 Гц, 1Н), 4,30-4,35 (ш, 1Н), 4,08 (б, 1=9 Гц, 2Н), 4,053,96 (ш, 2Н), 3,97 (8, ЗН), 3,66-3,40 (ш, 8Н), 2,56 (δ, ЗН), 2,35-2,25 (ш, 1Н), 2,08-1,98 (ш, 1Н), 1,60-1,50 (ш, 2Н), 1,28, 1,26 (2δ, 6Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (ΕΙ): (М+Н) 779,3, (М-Н) 777,3. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ; ΓΉ ,Τ’Ν/ΕΕΟ) гомогенность составляла 99%.

Соединение 1041

Соединение 1041.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,33 (ушир. δ, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,15-8,02 (ш, 1Н), 8,04 (б, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,49-7,38 (ш, 1Н), 7,29 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,99 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,73-5,66 (ш, 1Н), 5,46-5,39 (ш, 1Н), 5,23-5,14 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,71-4,62 (ш, 1Н), 4,47-4,32 (ш, 2Н), 4,15-4,09 (ш, 1Н), 4,03-3,92 (ш, 1Н), 3,94 (δ, ЗН), 2,60 (δ, ЗН), 2,582,40 (ш, 2Н), 2,30-2,20 (ш, 1Н), 2,07-1,97 (ш, 1Н), 1,80-1,21 (ш, 11Н), 1,13 (1,1=7,5 Гц, ЗН), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 789,4 (М-Н)', 791,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΓΉ ,Γ’Ν/ΕΕΟ) гомогенность составляла 98%.

-45 009295

Соединение 1026.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-с1б): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,30 (8, 1Н), 8,56 (δ, 1Н), 8,09 (ушир. δ, 1Н), 8,02 (ά, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,44 (ушир. δ, 1Н), 7,32 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,24 (ά, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н), 5,47-5,39 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,10-5,03 (ш, 1Н), 4,804,72 (ш, 1Н), 4,49-4,41 (ш, 1Н), 4,37-4,29 (ш, 1Н), 4,15-4,08 (ш, 1Н), 4,05-3,95 (ш, 1Н), 3,95 (δ, ЗН), 3,803,51 (ш, Н₂О, 4Н), 2,60 (δ, ЗН), 2,57-2,48 (ш, 1Н), 2,41-2,37 (ш, 2Н), 2,31-2,21 (ш, 1Н), 2,07-1,98 (ш, 1Н), 1,95-1,83 (ш, 1Н), 1,62-1,46 (ш, 2Н), 1,31-1,22 (ш, 1Н), 1,04 (δ, 9Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 833,3 (М-Н)', 835,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃С1\Г/Н₂О) гомогенность составляла 99%.

Соединение 1022.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера; δ 12,32 (δ, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,08-7,97 (ш, 2Н), 7,42 (ушир. δ, 1Н), 7,29 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,79-5,66 (ш, 1Н), 5,44-5,37 (ш, 1Н), 5,24-5,15 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,75-4,67 (ш, 1Н), 4,434,32 (ш, 2Н), 4,16-3,95 (ш, 2Н), 3,94 (δ, ЗН), 3,29-3,18 (ш, 2Н), 2,59-2,48 (ш, 1Н), 2,34-2,20 (ш, ЗН), 2,06-

1,98 (ш, 1Н), 1,81-1,16 (ш, 19Н), 1,18 (1,1=7,2 Гц, ЗН), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 857,4 (М-Н)', 859,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ; СН₃С1\Г/Н₂О) гомогенность составляла 98%.

Соединение 1046

Соединение 1046.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 11,91 (ушир. δ, 1Н), 8,56 (δ, 1Н), 8,08 (ушир. δ, 1Н), 8,04 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,43 (δ, 1Н), 7,30 (ά, 1=9,0 Гц, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н), 5,46-5,38 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,09-5,03 (ш, 1Н), 5,034,93 (ш, 1Н), 4,71-4,62 (ш, 1Н), 4,47-4,32 (ш, 2Н), 4,15-4,08 (ш, 1Н), 4,05-3,95 (ш, 1Н), 3,94 (δ, ЗН), 2,59 (δ, ЗН), 2,58-2,47 (ш, 1Н), 2,31-2,20 (ш, 1Н), 2,07-1,97 (ш, 1Н), 1,81-1,22 (ш, ЮН), 1,29 (ά, 1=6,3 Гц, 6Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 819,4 (М-Н)', 821,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазной ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ; ΤΉ₃Τ’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 99%.

-46009295

Соединение 1036

Соединение 1036.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-ср): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,35 (δ, 1Н), 8,53 (δ, 1Н), 8,12-7,98 (ш, 2Н), 7,41 (δ, 1Н), 7,24 (ά, 1-9,2 Гц, 1Н), 6,79 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,78-5,64 (ш, 1Н), 5,44-5,34 (ш, 1Н), 5,22-5,13 (ш, 1Н), 5,08-5,01 (ш, 1Н), 4,46-4,33 (ш, 2Н), 4,15-4,06 (ш, 1Н), 4,04-3,95 (ш, 1Н), 3,92 (δ, ЗН), 2,59 (δ, ЗН), 2,57-2,47 (ш, 1Н), 2,28-2,17 (ш, 1Н), 2,19 (δ, ЗН), 2,06-1,96 (ш, 1Н), 1,94-1,77 (ш, 2Н), 1,72-1,43 (ш, 7Н), 1,34 (δ, ЗН), 1,29-1,21 (ш, 1Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 789,4 (М-Н)', 791,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΕΗ ,ΕΝ/ΕΓΟ) гомогенность составляла 95%.

Соединение 1056.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМС.’О-с1б): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,35 (δ, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,17 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 8,05 (δ, 1Н), 7,47 (δ, 1Н), 7,35 (ά, 1=9,4 Гц, 1Н), 6,98 (ά, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н), 5,46-5,40 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,09-5,03 (ш, 1Н), 4,63-4,56 (ш, 1Н), 4,49-4,34 (т, 2Н), 4,13-3,90 (ш, Н₂О, 2Н), 4,01 (δ, ЗН), 2,60-2,51 (ш, 1Н), 2,49-2,43 (ш, 2Н), 2,32-2,21 (ш, 1Н), 2,07-1,98 (т, 1Н), 1,81-1,37 (ш, 9Н), 1,36-1,16 (ш, ЗН), 0,96 (δ, 9Н), 0,93 (1,1=7,4 Гц, ЗН).

МС (Е§): 869,1 (М-Н)', 871,1 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ;

Соединение 1181

Соединение 1181.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 8,57 (δ, ΙΗ), 8,2-7,96 (ш, ΙΗ), 7,88-7,70 (ш, 2Н), 7,62-7,35 (ш, 2Н), 7,02 (ά, 1=7,2 Гц, 1Н), 5,78-5,65 (ш, 1Н), 5,65-5,55 (ш, 1Н), 5,19 (ά, 1=17,2 Гц, 1Н), 5,065 (ά, 1=11,9 Гц, 1Н), 4,63-4,52 (т, 1Н), 4,50-4,40 (ш, 1Н), 4,13-4,08 (ш, 2Н), 4,06 (δ, ЗН), 3,98 (ушир. ά, 1=10 Гц, 1Н), 3,92-3,80 (т, 1Н), 2,62-2,53 (т, 1Н), 2,38-2,27 (ш, 1Н), 2,02 (άά, 1=8,6, 8,6 Гц, 1Н), 1,69-1,52 (ш, 6Н), 1,51-1,41 (ш, ЗН), 1,40-1,31 (т, 1Н), 1,27 (ά, 1=6,5 Гц, 6Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 763,4 (М+Н)⁺ и 761,3 (М-Н)'. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ; ΤΉ₃Τ’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 99%. Соединения (табл. 2).

-47009295

Соединение 2010

Соединение 2010.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-сЦ): смесь ротамеров (приблизительно 8:2), спектр основного ротамера, δ 8,56 (δ, 1Н), 8,41 (ушир. 8, 1Н), 8,04 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,55 (δ, 1Н), 7,29 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,09-5,99 (ш, 1Н), 5,97-5,88 (ш, 1Н), 5,78-5,65 (ш, 1Н), 5,54-5,48 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,47-4,33 (ш, 2Н), 4,27-4,20 (ш, 1Н), 4,19-3,85 (ш, Н₂О, 2Н), 3,94 (б, ЗН), 3,13 (с[, 1=7,5 Гц, 2Н), 2,60 (б, ЗН), 2,55-2,42 (ш, 1Н), 2,34-2,23 (ш, 1Н), 2,09-2,00 (ш, 1Н), 1,80-1,37 (ш, 7Н), 1,40 (!, 1=7,5 Гц, ЗН), 1,31-1,05 (ш, ЗН), 0,96 (б, 9Н).

МС (Е§): 745,4 (М-Н)', 747,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ίΉ,Τ’Ν/ΗΌ) гомогенность составляла 96%.

Соединение 2012

Соединение 2012.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-сЦ): смесь ротамеров (приблизительно 8:2), спектр основного ротамера, δ 12,29 (δ, 1Н), 8,54 (δ, 1Н), 8,08 (ушир. 8, 1Н), 8,04 (ά, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,44 (ушир. 8, 1Н), 7,25 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,08-5,90 (ш, 2Н), 5,80-5,65 (ш, 1Н), 5,45-5,37 (ш, 1Н), 5,22-5,13 (ш, 1Н), 5,09-5,02 (ш, 1Н), 4,48-4,34 (ш, 2Н), 4,26-4,19 (ш, 1Н), 4,04-3,90 (ш, 1Н), 3,93 (б, ЗН), 2,60 (б, ЗН), 2,68-2,57 (ш, 1Н), 2,42-2,35 (ш, 2Н), 2,28-2,18 (ш, 1Н), 2,08-1,98 (ш, 1Н), 1,81-1,21 (ш, ЮН), 1,19 (б, ЗН), 1,04 (δ, 9Н), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е§): 844,5 (М-Н)', 846,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ίΉ,Τ’Ν/ΗΌ) гомогенность составляла 99%.

Соединение 2002.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-сЦ): смесь ротамеров (приблизительно 8:2), спектр основного ротамера, δ

8,57 (δ, 1Н), 8,28-7,77 (ш, ЗН), 7,66-7,30 (ш, 2Н), 6,09-5,98 (ш, 1Н), 5,96-5,86 (ш, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н),

5,61-5,48 (ш, 1Н), 5,26-5,15 (ш, 1Н), 5,11-5,03 (ш, 1Н), 4,53-4,39 (ш, 2Н), 4,25-4,15 (ш, 1Н), 4,05-3,93 (ш,

1Н), 3,97 (8, ЗН), 3,92-3,50 (ш, Н₂О, 2Н), 2,55 (б, ЗН), 2,59-2,42 (ш, 1Н), 2,36-2,26 (ш, 1Н), 2,18-1,99 (ш,

1Н), 1,80-1,36 (ш, 7Н), 1,27 (ά, 1=6,3 Гц, 6Н), 1,31-1,05 (ш, ЗН), 0,95 (δ, 9Н).

МС (Е§): 774,4 (М-Н)', 776,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ίΉ,Τ’Ν/ΗΌ) гомогенность составляла 94%.

-48009295

Соединение 2007

Соединение 2007.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): смесь ротамеров (приблизительно 8:2), спектр основного ротамера, δ 12,38 (8, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,09 (ушир. δ, 1Н), 8,06 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,44 (δ, 1Н), 7,28 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,12-6,01 (ш, 1Н), 5,98-5,89 (ш, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н), 5,46-5,38 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,10-5,01 (ш, 1Н), 4,47-4,36 (ш, 2Н), 4,28-4,20 (ш, 1Н), 4,04-3,92 (ш, 1Н), 3,94 (δ, ЗН), 3,90-3,50 (ш, Н₂О, 1Н), 2,60 (δ, ЗН), 2,55-2,47 (ш, 1Н), 2,31-2,22 (ш, 1Н), 2,20 (δ, ЗН), 2,08-1,99 (ш, 1Н), 1,81-1,38 (ш, 7Н), 1,31-1,09 (ш, ЗН), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е§): 774,4 (М-Н)', 776,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΤΉ,Τ’Ν/ΗΌ) гомогенность составляла 94%.

Соединение 2008

Соединение 2008.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): смесь ротамеров (приблизительно 8:2), спектр основного ротамера, δ 12,34 (ушир. δ, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 8,17-8,05 (ш, 1Н), 8,07 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 7,50-7,42 (ш, 1Н), 7,28 (б, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,11-6,01 (ш, 1Н), 5,98-5,88 (ш, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н), 5,46-5,38 (ш, 1Н), 5,24-5,14 (ш, 1Н), 5,105,01 (ш, 1Н), 4,48-4,36 (ш, 2Н), 4,28-4,20 (ш, 1Н), 4,07-3,95 (ш, 1Н), 3,94 (δ, ЗН), 3,80-3,65 (ш, Н₂О, 1Н), 2,60 (8, ЗН), 2,60-2,50 (ш, 1Н), 2,31-2,20 (ш, 2Н), 2,08-1,98 (ш, 1Н), 1,82-1,37 (ш, 15Н), 1,31-1,07 (ш, 5Н), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е§): 842,5 (М-Н)', 844,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΤΤΓΤ’Ν/ΕΓΟ) гомогенность составляла 97%.

Соединения (табл. 3)

Соединение 3002

Соединение 3002.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектры основного ротамера, δ 12,33 (δ, 1Н), 8,55 (δ, 1Н), 7,98 (δ, 1Н), 7,75 (б, 1=8,6 Гц, 1Н), 7,40 (δ, 1Н), 7,19 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,99 (б, 1=8,6 Гц, 1Н), 6,26 (δ, 2Н), 5,79-5,66 (ш, 1Н), 5,46-5,38 (ш, 1Н), 5,23-5,14 (ш, 1Н), 5,10-5,01 (ш, 1Н),

4,76-4,67 (ш, 1Н), 4,47-4,30 (ш, 2Н), 4,11 (б, 1=8,8 Гц, 1Н), 4,00-3,91 (ш, 1Н), 2,41-2,36 (ш, 2Н), 2,29-2,19 (ш, 1Н), 2,08-1,97 (ш, 1Н), 1,82-1,22 (ш, 11Н), 1,03 (δ, 9Н), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е§): 831,5 (М-Н)', 833,6 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ,

ΤΤΓΤ’Ν/ΕΓΟ) гомогенность составляла 99%.

-49009295

Соединение 3007

Соединение 3007.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 8,56 (δ, 1Н), 8,04 (6, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,94-7,64 (ш, ЗН), 7,49-7,37 (ш, 1Н), 7,09 (6, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,00 (6, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,80-5,66 (ш, 1Н), 5,58-5,46 (ш, 1Н), 5,24-5,14 (ш, 1Н), 5,11-5,01 (ш, 1Н), 4,85-4,70 (ш, 2Н), 4,69-4,58 (ш, 1Н), 4,49-4,81 (ш, 2Н), 4,09 (6,1=8,6 Гц, 1Н), 4,00-3,88 (ш, 1Н), 3,75-3,30 (ш, Н₂О, 2Н), 2,352,22 (ш, 1Н), 2,07-1,97 (ш, 1Н), 1,81-1,20 (ш, 11Н), 0,97 (з, 9Н).

МС (Е§): 731,3 (М-Н)', 733,3 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΓΉ ,Γ’Ν/ΕΕΟ) гомогенность составляла 94%.

Соединение ЗОЮ.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,37 (δ, 1Н), 8,56 (δ, 1Н), 8,13-7,96 (ш, 2Н), 7,43 (з, 1Н), 7,05 (6, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,00 (6, 1=8,6 Гц, 1Н), 5,80-5,64 (ш, 1Н), 5,50-5,37 (ш, 1Н), 5,24-5,11 (ш, 1Н), 5,10-4,98 (ш, 1Н), 4,83-4,63 (ш, ЗН), 4,47-4,30 (ш, 2Н), 4,19-4,05 (ш, 1Н), 4,04-3,86 (ш, 1Н), 3,75-3,30 (ш, Н₂О, 2Н), 2,34-2,19 (ш, ЗН), 2,07-1,97 (ш, 1Н), 1,821,13 (т, 20Н), 0,97 (з, 9Н).

МС (Е§): 841,3 (М-Н)', 843,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ; ΓΉ ,Γ’Ν/ΕΕΟ) гомогенность составляла 99%.

Соединение 3001.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 8,55 (з, 1Н), 7,95-7,76 (ш, 1Н), 7,72 (6,1=8,8 Гц, 1Н), 7,49 (з, 1Н), 7,41 (з, 1Н), 7,18 (6,1=8,6 Гц, 1Н), 6,98 (б, 1=8,6 Гц, 1Н), 6,25 (8, 2Н), 5,80-5,65 (ш, 1Н), 5,52-5,46 (ш, 1Н), 5,24-5,14 (ш, 1Н), 5,10-5,01 (ш, 1Н), 4,75-4,66 (ш, 1Н), 4,48-4,39 (ш, 1Н), 4,37-4,27 (ш, 1Н), 4,17-4,07 (ш, 1Н), 4,01-3,92 (ш, 1Н), 3,90-3,75 (ш, 1Н), 2,62-2,44 (ш, 1Н), 2,31-2,20 (ш, 1Н), 2,09-1,97 (ш, 1Н), 1,81-1,20 (ш, ЮН), 1,25 (ушир. б, 1=6,4 Гц, 6Н), 0,96 (8, 9Н).

МС (Е§): 775,5 (М-Н)', 777,6 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΓΉ ,Γ’Ν/ΕΕΟ) гомогенность составляла 99%.

-50009295

Соединение 3004

Соединение 3004.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-ск): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), δ 8,57 (8, 1Н), 8,10-8,13 (ш, 1Н), 8,08 (ά, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,86-7,88 (ш, 2Н), 7,53 (δ, 1Н), 7,14 (ά, 1=8,5 Гц, 1Н), 7,00 (ά, 1=8,5 Гц, 1Н), 5,68-5,78 (ш, 1Н), 5,57 (δ, 1Н), 5,19 (ά, 1=17,0 Гц, 1Н), 5,07 (ά, 1=11,9 Гц, 1Н), 4,78-4,82 (ш, 2Н), 4,58-4,63 (ш, 1Н), 4,35-4,47 (ш, 2Н), 3,87-4,08 (ш, 8Н), 3,58-3,62 (ш, 2Н), 2,53-2,56 (ш, 1Н), 2,27-2,33 (ш, 1Н), 1,992,04 (ш, 1Н), 1,43-1,65 (ш, 4Н), 1,28-1,30 (ш, 1Н), 1,26 (ά, 1=6,2 Гц, 6Н), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е§): 775,4 (М+Н)⁺, 773,4 (М-Н)'. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СМ/Н₂О) гомогенность составляла 98,8%. Соединения (табл. 4).

Соединение 4005

Соединение 4005.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-ск): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера; δ 2,36 (ушир. δ, 1Н), 8,57 (δ, 1Н), 8,60-8,20 (ш, 1Н), 7,90 (δ, 1Н), 7,68-7,45 (ш, 2Н), 6,99 (ά, 1=8,3 Гц, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 1Н), 5,66-5,83 (ш, 1Н), 5,80-5,50 (ш, 1Н), 5,23-5,14 (ш, 1Н), 5,10-5,01 (ш, 1Н), 4,62-4,36 (ш, ЗН), 4,11-3,92 (ш, 1Н), 2,88 (δ, 6Н), 2,62-2,51 (ш, 1Н), 2,47 (б, ЗН), 2,44-2,38 (ш, 2Н), 2,36-2,19 (ш, 1Н), 2,08-1,96 (ш, 1Н), 1,81-1,20 (ш, ЮН), 1,03 (δ, 9Н), 0,96 (δ, 9Н).

МС (Е§): 844,4 (М-Н)', 846,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СМ/Н₂О) гомогенность составляла 99%.

Соединение 4007.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-άβ): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектры основного ротамера, δ 8,59 (δ, 1Н), 8,27-8,12 (ш, 1Н), 8,06-7,97 (ш, 1Н), 7,89 (δ, 1Н), 7,73 (δ, 1Н), 7,64 (δ, 1Н), 6,99 (ά, 1=8,5

Гц, 1Н), 5,79-5,64 (ш, 2Н), 5,24-5,14 (ш, 1Н), 5,10-5,01 (ш, 1Н), 4,54-4,38 (ш, 2Н), 4,23-4,08 (ш, 1Н), 4,02 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,00-3,91 (ш, 1Н), 3,70-3,30 (ш, Н₂О, 1Н), 2,90 (δ, 6Н), 2,64-2,52 (ш, 1Н), 2,46 (δ, ЗН),

2,38-2,26 (ш, 1Н), 2,07-1,96 (ш, 1Н), 1,81-1,20 (ш, ЮН), 1,24 (ушир. ά, 1=6,5 Гц, 6Н), 0,95 (δ, 9Н).

МС (Е§): 788,4 (М-Н)', 790,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ,

ΓΉ₃Γ’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 98%.

-51 009295

Соединение 4014.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектры основного ротамера, δ 8,61 (δ, 1Н), 8,33-7,60 (ш, 4Н), 7,33 (δ, 1Н), 6,95 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,79-5,67 (ш, 2Н), 5,24-5,16 (ш, 1Н), 5,10-5,03 (ш, 1Н), 4,57-4,32 (ш, 2Н), 4,20-3,88 (ш, ЗН), 3,99 (δ, ЗН), 3,93 (δ, ЗН), 3,65-3,30 (ш, Н₂О, 1Н), 2,65-2,55 (ш, 1Н), 2,40-2,28 (ш, 1Н), 2,08-1,98 (ш, 1Н), 1,81-1,21 (ш, ЮН), 1,25 (ушир. б, 1=6,5 Гц, 6Н),

0,95 (δ, 9Н).

МС (Е§): 791,3 (М-Н)', 793,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ,

СНзСМ/Н₂О) гомогенность составляла 86%.

Соединение 4001

Соединение 4001.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,40 (δ, 1Н), 8,58 (δ, 1Н), 8,50-8,20 (ш, 1Н), 7,95 (ушир. δ, 1Н), 7,72-7,44 (ш, 2Н), 7,00 (б, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,80-5,67 (ш, 1Н), 5,67-5,51 (ш, 1Н), 5,24-5,14 (ш, 1Н), 5,12-5,02 (ш, 1Н), 4,63-4,45 (ш, 2Н), 4,45-4,36 (ш, 1Н), 4,14-3,93 (ш, 2Н), 3,99 (δ, ЗН), 2,64-2,46 (ш, 1Н), 2,45-2,39 (ш, 2Н), 2,35 (δ, ЗН), 2,39-2,28 (ш, 1Н), 2,08-1,98 (ш, 1Н), 1,82-1,23 (ш, ЮН), 1,04 (δ, 9Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 831,4 (М-Н)', 833,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, €’Η₃Χ’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 99%.

Соединение 4013.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,36 (δ, 1Н), 8,59 (δ, 1Н), 8,36-7,96 (ш, 1Н), 7,70-7,42 (ш, 2Н), 7,32 (δ, 1Н), 6,94 (б, 1=8,2 Гц, 1Н), 5,795,66 (ш, 1Н), 5,63-5,50 (ш, 1Н), 5,23-5,15 (ш, 1Н), 5,10-5,02 (ш, 1Н), 4,58-4,45 (ш, 2Н), 4,38-4,28 (ш, 1Н), 4,12-3,90 (ш, 2Н), 3,97 (δ, ЗН), 3,91 (δ, ЗН), 2,62-2,52 (ш, 1Н), 2,37-2,21 (ш, ЗН), 2,08-1,98 (ш, 1Н), 1,771,14 (т, 19Н), 0,97 (δ, 9Н).

МС (Е§): 859,4 (М-Н)', 861,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΤΉ₃Τ’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 92%.

Соединения (табл. 5).

-52009295

Соединение 5001

Соединение 5001.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-с1б): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 8,60 (δ, 1Н), 8,34-8,19 (ш, 1Н), 8,04-7,98 (ш, 1Н), 7,97 (δ, 1Н), 7,91-7,81 (ш, 1Н), 7,73 (δ, 1Н), 5,99-5,91 (ш, 1Н), 5,90-5,83 (ш, 1Н), 5,78-5,66 (ш, 2Н), 5,25-5,15 (ш, 1Н), 5,11-5,04 (ш, 1Н), 4,58-4,46 (ш, 2Н), 4,15-4,07 (ш, 1Н), 4,00 (8, ЗН), 4,03-3,94 (ш, 1Н), 3,60-3,15 (ш, Н₂О, 1Н), 3,05 (ά, 1=4,3 Гц, ЗН), 2,63-2,55 (ш, 1Н), 2,42-2,30 (ш, 1Н), 2,35 (ш, ЗН), 2,08-1,99 (ш, 1Н), 1,80-1,22 (ш, 9Н), 1,13-1,03 (ш, 1Н), 0,94 (δ, 9Н).

МС (Е§): 746,3 (М-Н)', 7484 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СЫ/Н₂О) гомогенность составляла 99%.

Соединение 5002

Соединение 5002.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-сЦ): смесь ротамеров (приблизительно 85:2), спектр основного ротамера, δ 12,44 (δ, 1Н), 8,59 (δ, 1Н), 8,52-8,25 (ш, 1Н), 7,97 (δ, 1Н), 7,70-7,46 (ш, 2Н), 6,03-5,96 (ш, 1Н), 5,90 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,79-5,66 (ш, 1Н), 5,64-5,54 (ш, 1Н), 5,24-5,16 (ш, 1Н), 5,11-5,04 (ш, 1Н), 4,55-4,43 (ш, 2Н), 4,19-4,12 (ш, 1Н), 4,05-3,94 (ш, 1Н), 3,99 (δ, ЗН), 3,80-3,30 (ш, Н₂О, 1Н), 2,68-2,54 (ш, 1Н), 2,39-2,28 (ш, 1Н), 2,35 (8, ЗН), 2,23 (δ, ЗН), 2,08-1,99 (ш, 1Н), 1,80-1,21 (ш, 8Н), 1,17-1,07 (ш, 1Н), 1,06-0,95 (ш, 1Н), 0,95 (δ, 9Н).

МС (Е§): 774,4 (М-Н)', 776,4 (М+Н)⁺ . По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ί'Ή₃ί.’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 99%.

Соединение 5004.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-с1б): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 8,60 (δ, 1Н), 8,31-8,16 (ш, 1Н), 8,11-8,02 (ш, 1Н), 7,97 (δ, 1Н), 7,89-7,78 (ш, 1Н), 7,75-7,67 (ш, 1Н), 6,005,92 (ш, 1Н), 5,90-5,83 (ш, 1Н), 5,80-5,65 (ш, 2Н), 5,26-5,16 (ш, 1Н), 5,11-5,04 (ш, 1Н), 4,58-4,46 (ш, 2Н), 4,11 (ά, 1=9,2 Гц, 1Н), 4,05-3,94 (ш, 1Н), 4,00 (δ, ЗН), 3,65-3,15 (ш, Н₂О, ЗН), 2,69-2,54 (ш, 1Н), 2,42-2,30 (ш, 1Н), 2,35 (8, ЗН), 2,08-1,99 (ш, 1Н), 1,80-1,21 (ш, 8Н), 1,24 (1,1=7,0 Гц, ЗН), 1,14-1,02 (ш, 1Н), 1,00-0,87 (ш, 1Н), 0,94 (δ, 9Н).

МС (Е§): 760,4 (М-Н)^-, 762,4 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ί'Ή₃ί.’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 96%.

Соединения (табл. 6).

-53 009295

Соединение 6016.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-ср): смесь ротамеров (приблизительно 85:15), спектр основного ротамера, δ 12,28 (8, 2Н), 8,56 (δ, 1Н), 8,04 (δ, 1Н), 7,79 (δ, 1Н), 7,46 (δ, 1Н), 6,96-7,00 (ш, 1Н), 5,68-5,75 (ш, 1Н), 5,40 (ушир. δ, 1Н), 5,19 (ά, 1=17,0 Гц, 1Н), 5,06 (ά, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,71-4,76 (ш, 2Н), 4,43 (1, 1=8,3, 1Н), 4,324,34 (ш, 1Н), 4,13 (ά, 1=8,3 Гц, 1Н), 3,96-4,03 (ш, 1Н), 3,77 (δ, ЗН), 2,67 (δ, ЗН), 2,40 (ά, 1=4,1 Гц, ЗН), 2,242,36 (ш, ЗН), 2,03 (ф 1=8,6 Гц, 1Н), 1,17-1,75 (ш, ЮН), 1,04 (δ, 9Н), 0,98 (δ, 9Н).

МС (Е§): 845,4 (М-Н)', 847,5 (М+Н)⁺. По данным обращенно-фазной ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, СН₃СХ/Н₂О) гомогенность составляла 96,7%.

Синтез соединений формулы I, где В означает ΝΗ§Ο₂Β⁸.

Пример 17А.

Синтез соединения 7001.

В раствор соединения 17А1 (соединение 3004, табл. 3, 20 мг, 0,03 ммоль) и ϋΙΡΕΑ (0,03 мл, 0,16 ммоль) в ДМФА (1,5 мл) при КТ добавляли НАТО (20 мг, 0,05 ммоль). Раствор перемешивали в течение 1 ч, затем добавляли ОМАР (16 мг, 0,13 ммоль) и циклопропансульфонамид (7,0 мг, 0,06 ммоль). После завершения добавления реагентов смесь перемешивали в течение 15 мин и по каплям добавляли ϋΒυ (0,02 мл, 0,14 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 16 ч при 23°С, затем разбавляли ДМСО до общего объема 2,5 мл и очищали препаративной ЖХВР (элюент: Η₂0/ΟΗ₃ΟΝ + 0,06% ТФУ). Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и растворители удаляли лиофилизацией, при этом получали соединение 17А2 в виде твердого вещества желтого цвета (соединение 7001, табл. 7, 5,4 мг, 23%).

По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ΤΉ₃Τ’Ν/Η₂Ο) гомогенность составляла 98,9 % (220 нм).

МС: 878,8 (М+Н)⁺, 876,4 (М-Н)'.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ 10,47 (δ, ΙΗ), 8,82 (δ, ΙΗ), 8,06 (ушир.8, ΙΗ), 7,52 (ушир.8, ΙΗ), 7,15 (ш, ΙΗ), 7,03 (ά, 1=8,0 Гц, ΙΗ), 5,58 (ш, 2Η), 5,20 (ά, 1=17,0 Гц, ΙΗ), 5,09 (ά, 1=11,5, ΙΗ), 4,79 (ш, 2Η), 4,64 (ш, ΙΗ), 4,36-4,52 (ш, 2Η), 4,06 (ά, 1=8,0 Гц, ΙΗ), 4,00-4,03 (ш, ΙΗ), 2,88-2,96 (ш, ΙΗ), 2,54-2,57 (ш, ΙΗ), 2,10-2,20 (ш, 2Η), 1,32-1,71 (ш, 11Η), 1,24 (άά, 1=6,3, 1,2 Гц, 6Η), 1,00-1,08 (ш, 8Η), 0,97 (δ, 9Η).

Пример 17В. Синтез соединения 7002.

17В1 17В2

-54009295

Соединение 17В2 (соединение 7002, табл. 7) получали в виде твердого вещества светло-желтого цвета (5,4 мг, выход 16%) по методике, как описано в примере 17А, но с использованием в качестве исходного материала соединения 17В1 (соединение 6016, табл. 6).

По данным обращенно-фазовой ЖХВР (элюент: 0,06% ТФУ, ίΉ,Γ’Ν/ΗΌ) гомогенность составляла 93,1% (220 нм).

МС: 950,4 (М+Н)⁺, 948,4 (М-Н)’.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-6₆): δ 12,26 (8, 1Н), 10,48 (8, 1Н), 8,83 (δ, 1Н), 8,02 (δ, 1Н), 7,79 (δ, 1Н), 7,45 (δ, 1Н), 6,94-7,00 (ш, 1Н), 5,56-5,65 (ш, 1Н), 5,40 (δ, 1Н), 5,19 (6, 1=16,9, 1Н), 5,07 (6, 1=11,4 Гц, 1Н), 4,77 (δ, 1Н), 4,33-4,42 (ш, 2Н), 4,11 (6,1=8,0 Гц, 1Н), 3,97 (6,1=9,6, 1Н), 3,76 (δ, ЗН), 2,88-2,96 (ш, 1Н), 2,66 (8, ЗН), 2,53-2,60 (ш, 1Н), 2,31-2,33 (ш, 1Н), 2,11-2,19 (ш, 2Н), 1,33-1,70 (ш, 12Н), 1,22 (ушир.8, 1Н), 1,051,08 (ш, 2Н), 1,02 (δ, 9Н), 0,98 (δ, 9Н).

Пример 17С. Синтез соединения 7003.

Соединение 17С1 (соединение 1027, табл. 1, 35 мг, 0,045 ммоль), Ν,Ν-диметилсульфамид 17С2 (22,3 мг, 0,180 ммоль), ΩΙΡΕΑ (39,3 мкл, 0,225 ммоль) и ΩΜΑΡ (22 мг, 0,180 ммоль) растворяли в ДМФА (2,5 мл) и в смесь добавляли ϋΒυ (28,5 мкл, 0,203 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин, затем добавляли НАТи (18,8 мг, 0,05 ммоль). Перемешивание продолжали в течение 12 ч, остаток фильтровали через фильтр МШех и очищали препаративной ЖХВР (колонка СошЬЕсгссп ΟΩ8-ΑΟ. 20x50 мм). Фракции, содержащие чистое соединение, объединяли и лиофилизовали, при этом получали 14 мг (выход 35%) соединения 17СЗ (соединение 7003, табл. 7) в виде твердого вещества желтого цвета.

Ή ЯМР (400МГц, ДМСО-6₆): δ 10,23 (δ, ΙΗ), 8,74 (δ, ΙΗ), 8,07 (ά, 1=8 Гц, ΙΗ), 7,59 (δ, ΙΗ), 7,45-7,30 (ш, ΙΗ), 7,27 (ά, 1=8 Гц, ΙΗ), 5,53-5,49 (ш, 2Η), 5,20 (ά, 1=17 Гц, ΙΗ), 5,10 (ά, 1=12 Гц, ΙΗ), 4,70 (ушир. δ, ΙΗ), 4,50-4,30 (ш, 3Η), 4,15-4,05 (ш, 2Η), 3,97 (δ, 3Η), 2,76 (δ, 6Η), 2,55 (δ, 3Η), 2,38-2,32 (ш, ΙΗ), 2,23-2,08 (ш, 2Η), 1,97-1,81 (ш, ΙΗ), 1,75-1,45 (ш, 4Η), 1,32-1,14 (ш, 9Η), 1,04-0,86 (ш, 11Н).

МС (ΕΙ): (М+Н) 885,4, (М-Н) 883,4.

Пример 18. Определение активности протеазы Ν83-Ν84Α.

Для оценки соединений по настоящему изобретению использовали анализ ферментативной активности, как описано в заявках №0 00/09543 и №0 00/59929.

Пример 19. Анализ репликации РНК ВГС с использованием клеток.

Культура клеток.

Клеточную линию Ни117, названную 822.3 (клеточную линию, в который содержится устойчивый субгеномный репликон ВГС), получали, как описано ранее (Ьокшап и др., 8с1еисе 285: 110-113 (1999)). Клетки 822.3 выдерживали в среде ΩΜΕΜ (ОиЬе1со'8 тосНПсс! Еат1е тесНит), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) и 1 мг/мл неомицина (стандартная среда). В процессе анализа использовали среду ΩΜΕΜ. содержащую 10% ЭТС, 0,5% ДМСО и не содержащую неомицин (среда для анализа). За 16 ч перед добавлением соединения клетки 822.3 трипсинизировали и разбавляли стандартной средой до плотности 50000 клеток/мл. Затем клетки переносили в 96-луночный планшет по 200 мкл (10000 клеток) в каждую лунку. Планшет инкубировали при 37°С и 5% СО₂ в течение ночи.

Реагенты и материалы.

Материалы	Фирма	Номер по каталогу	Условия хранения
Среда ЭМЕМ	№кеп11пс.	10013СУ	4°С
ДМСО	8щта	Ώ-2650	КТ
Среда Ои1Ьессо'8 РВ8	О1Ьсо-ВК.Ь	14190-136	кт
Эмбриональная телячья сыворотка (ЭТС)	ΒΪΟ№Ъ111акег	14-901Р	-20°С/4°С
Неомицин (0418)	О1Ьсо-ВКЬ	10131-027	-20°С/4°С
Трипсин-ЭДТУ	О1Ьсо-ВКЬ	25300-054	-20°С/4°С
96-луночные планшеты	Сок4аг	3997	КТ
Фильтр ΡνϋΡ 0,22 мкм	МИНроге	8Г6У025Г8	кт
Полипропиленовые планшеты с глубокими лунками	Весктап	267007	кт

-55 009295

Получение исследуемого соединения.

мкл исследуемого соединения (в 100% ДМСО) добавляли в 2 мл среды для анализа при конечной концентрации ДМСО 0,5% и раствор озвучивали в течение 15 мин, затем фильтровали через фильтр М11йроте с диаметором пор 0,22 мкм. В ряд А полипропиленового планшета с глубокими лунками добавляли по 900 мкл указанного раствора, а в ряды В-Н добавляли по 400 мкл среды для анализа (содержащей 0,5% ДМСО) и эти лунки использовали для серийных разведений (1:2), то есть переносили по 400 мкл из ряда в ряд, причем в ряд Н соединение не добавляли.

Добавление исследуемого соединения к клеткам.

Клеточную культуру отбирали из 96-луночного планшета, содержащего клетки §22.3. Из каждой лунки планшета, содержащего исследуемые соединения, переносили по 175 мкл раствора исследуемого соединения в среде для анализа с соответствующим разведением в соответствующую лунку планшета с клеточной культурой (ряд Н использовали в качестве контроля «без ингибитора»). Планшет с клеточной культурой инкубировали при 37°С и 5% СО₂ в течение 72 ч.

Экстракция общей клеточной РНК.

Общую клеточную РНК экстрагировали после инкубации в течение 72 ч из клеток §22.3, которые отбирали из 96-луночного планшета с использованием набора для экстракции РНК КЛеазу 96 кй (фирма 01адеп. КЛеазу НаибЬоок, 1999). Среду для анализа полностью отделяли от клеток и в каждую лунку 96луночного планшета для культивирования клеток добавляли по 100 мкл буферного раствора КТЬ (фирмы Цхадеи), содержащей 143 мМ β-меркаптоэтанол. Микропланшет встряхивали при малой скорости в течение 20 с. В каждую лунку микропланщета добавляли по 100 мкл 70% этанола и перемешивали с помощью пипетки. Лизат удаляли и переносили в лунки планшета КЛеазу 96 (фирма Цхадеи), который устанавливали в верхнюю часть блока Ц1адеи §диаге-Ае11 В1оск. Планшет КЛеазу 96 закрывали пленкой и блок §с.|иаге-Ае11 с планшетом Киеазу 96 устанавливали в держатель и в ротор центрифуги 4К15С. Образец центрифугировали при 6000 об./мин (~5600хд) при комнатной температуре в течение 4 мин. Пленку снимали и в каждую лунку планшета КЛеазу 96 добавляли по 0,8 мл буферного раствора КА1 (из набора Ц1адеи КЛеазу 96). Указанный планшет закрывали новой пленкой и центрифугировали при 6000 об./мин при комнатной температуре в течение 4 мин. Планшет Киеазу 96 устанавливали в верхнюю часть нового чистого блока Ц1адеи §диаге-Ае11 В1оск, пленку снимали и в каждую лунку планшета Киеазу 96 добавляли по 0,8 мл буферного раствора КРЕ (из набора КЛеазу 96 кй, фирмы Ц1адеи). Указанный планшет закрывали новой пленкой и центрифугировали при 6000 об/мин в течение 4 мин при комнатной температуре. Пленку снимали и в каждую лунку планшета Киеазу 96 добавляли по 0,8 мл буферного раствора КРЕ (из набора КЛеазу 96 кй, фирмы Ц1адеи). Планшет Киеазу 96 закрывали новой пленкой и центрифугировали при 6000 об./мин в течение 10 мин при комнатной температуре. Пленку снимали и планшет КЛеазу 96 устанавливали в верхнюю часть штатива, содержащего микропробирки для сбора фракций объемом 1,2 мл. РНК элюировали при добавлении в каждую лунку по 50 мкл не содержащей РНК-азы воды, планшет закрывали новой пленкой и инкубировали в течение 1 мин при комнатной температуре. Затем планшет центрифугировали при 6000 об./мин в течение 4 мин при комнатной температуре и повторяли стадию элюции при добавлении второй порции по 50 мкл не содержащей РНК-азы воды. Микропробирки, содержащие образцы общей клеточной РНК, хранили при -70°С.

Расчет количества общей клеточной РНК.

Количество РНК определяли в системе §1отш (фирмы Мо1еси1аг Эуиатюз) с использованием набора для количественного определения РНК ШЬоОгееи ЦиаиЦйсаЦои (фирмы Мо1еси1аг РгоЬез). Реагент К1ЬоОтееи разбавляли в 200 раз буферным раствором ТЕ (10 мМ трис-НС1, рН 7,5, 1 мМ ЭДТУ). В основном 50 мкл реагента разбавляли в 10 мл ТЕ. Рибосомальную РНК для стандартных кривых разбавляли буферным раствором ТЕ до концентрации 2 мкг/мл и предварительно определенные объемы раствора рибосомальной РНК (100, 50, 40, 20, 10, 5, 2 и 0 мкл) переносили в новый 96-луночный планшет (фирмы Соз1ат, № по каталогу 3997) и объем в каждой лунке доводили до 100 мкл буферным раствором ТЕ. В основном, столбец 1 в 96-луночном планшете использовали для стандартной кривой, а другие лунки использовали для количественного определения РНК в образцах. 10 мкл каждого образца, в котором требуется определить количество РНК, переносили в соответствующую лунку 96-луночного планшета и добавляли 90 мкл буферного раствора ТЕ. Затем в каждую лунку 96-луночного планшета добавляли один объем (100 мкл) разбавленного реагента К1ЬоОтееи и планшет инкубировали в течение 2-5 мин при комнатной температуре, защищали от света (10 мкл образца РНК в 200 мкл конечного объема соответствует 20-кратному разведению). Интенсивность флуоресценции в каждой лунке измеряли в системе §1отш (Мо1еси1аг Эупатюз). Стандартную кривую строили с использованием известного количества рибосомальной РНК и соответствующей интенсивности флуоресценции. Концентрацию РНК в экспериментальных образцах определяли по стандартной кривой с учетом 20-кратного разведения.

- 56 009295

Реагенты и материалы.

Материалы	Фирма	Номер по каталогу	Условия хранения
ΌΕΡΟ	8щта	Ό5758	4°С
ЭДТУ	8щта	Е5134	КТ
Основание Тпгта	8щта	Т8524	КТ
Тпгта-НС!	8щта	Τ7149	КТ
Полоски с пробирками для сбора фракций	Ц1а§еп	19562	кт
Набор ВдЬоСггееп для количественного определения РНК	Мо1еси1аг РгоЪе	ВТ 1490	-20°С
Набор Кпсазу 96	ф|адеп	74183	кт
Блоки 8циаге-ЗУеП	О1а£вп	19573	кт

Анализ ОТ-ПЦР в реальном времени.

Анализ ОТ-ПЦР проводили в генетическом анализаторе ΑΒΙ Ргйт 7700 8сс|испсс ΌοΙοοΙίοη ΞνδΙοιη с использованием набора для ОТ-ПЦР ТадМаи ΕΖ (фирмы Регкш-Е1шег АррНеб Вюкуйетк). Анализ ОТПЦР оптимизировали для количественного определения фрагментов 5'-1КЕ§ в РНК ВГС с использованием технологии ТадМаи (фирмы Воске Мо1еси1ат О1ади08ЙС8 8у51ст5) по известной методике, как описано ранее (Майей и др., 1. С1ш. М1сгоЬю1. 37: 327-332 (1999)). В системе используется 5’-З'-нуклео литическая активность полимеразы АшрНТад ΌΝΑ. В данном методе анализа используют флуорогенный гибридизационный зонд с двойной меткой (зонд РиТК), в присутствии которого проходит специфический отжиг с матрицей, расположенной между двумя праймерами (праймеры 8125 и 7028). В 5'-концевом фрагменте зонда содержится флуоресцентная репортерная группа (6-карбоксифлуоресцеин, ЕАМ), а в 3'-концевом фрагменте содержится гаситель флуоресценции (6-карбокситетраметилродамин, ТАМКА). В исходном гибридизационном зонде спектр испускания репортерной группы ЕАМ подавляется гасителем. При деградации гибридизационного зонда под действием нуклеазы высвобождается репортерная группа, что приводит к увеличению флуоресцентного испускания. Детектор анализатора ΑΒΙ Ргйт 7700 непрерывно регистрирует увеличение испускания флуоресценции в ходе амплификации ПЦР, и таким образом количество продукта амплификации прямо пропорциально интенсивности сигнала.

График амплификации анализируют на ранней стадии реакции в логарифмической фазе накопления продукта амплификации. Момент достижения определенного порога детектирования при возрастании флуоресцентного сигнала связан с экспоненциальной фазой накопления продукта ПЦР, который определяют для данного детектора как порог цикла (С_т). Величина С_т обратно пропорциональна исходному количеству РНК ВГС (входной сигнал) и таким образом, в идентичных условиях ПЦР, чем больше исходная концентрация РНК ВГС, тем меньше величина С_т. В системе анализатора ΑΒΙ Ргйт 7700 автоматически создается стандартная кривая зависимости величины Ст от каждого разведения стандарта, то есть известной концентрации РНК.

В каждый планшет ОТ-ПЦР добавляют стандартные образцы для создания стандартной кривой. Репликой РНК ВГС синтезировали ίη ν Иго (с использованием транскрипции Т7), очищали и определяли его количество по поглощению при 260 нм. С учетом того, что 1 мкг данной РНК содержит 2,15х10^п копий РНК, готовили разведения с содержанием 10⁸, 10⁷, ΙΟ⁶, ΙΟ⁵, ΙΟ⁴, 10³ или 10² копий геномной РНК в 5 мкл. В каждое разведение добавляли общую клеточную РНК Ни11-7 (50 нг/5 мкл). 5 мкл каждого стандарта (репликон ВГС + РНК Ни11-7) смешивали с 45 мкл смеси реагентов РсадсгИ Μίχ и использовали в реакции ОТ-ПЦР в реальное время.

Реакцию ОТ-ПЦР проводили в реальное время для экспериментальных образцов, которые очищали в 96-луночных планшетах ΡΝοοδν. при смешивании 5 мкл каждого образца общей клеточной РНК с 45 мкл смеси реагентов РсадсЩ Μίχ.

Реагенты и материалы.

Материалы	Фирма	Номер по каталогу	Условия хранения
Набор для ОТ-ПЦР Та§Мап ΕΖ	РЕ АррНеб В1о8уз(етз	N808-0236	-20°С
Оптические крышки М1сгоАтр	РЕ АррНеб Вюзу51етз	N801-0935	кт
96-Луночный оптический реакционный планшет МкгоАтр	РЕ АррНеб В1озу81етз	N801-0560	кт

-57009295

Получение смеси реагентов.

Компонент	Объем на один образец (мкл)	Объем на один планшет (мкл) (91 образец+запасной объем)	Конечная концентрация
Вода, не содержащая РНКазу	16,5	1617
Буферный раствор ТадМап ΕΖ 5Х	10	980	IX
Мп(ОАс)2, 25 мМ	6	588	3 мМ
ОАТФ, 10 мМ	1,5	147	300 мкМ
ОЦТФ, 10 мМ	1,5	147	300 мкМ
άΓΤΦ, 10 мМ	1,5	147	300 мкМ
0УТФ, 20 мМ	1,5	147	600 мкМ
Прямой праймер, 10 мкМ	1	98	200 нМ
Обратный праймер, 10 мкМ	1	98	200 нМ
Зонд ΡΙΠΈ, 5 мкМ	2	196	200 иМ
ДНК полимераза гТ1Ь, 2,5 Ед./мкл	2	196	0,1 Ед./мкл
АтрЕгазе ΙΙΝΟ, 1 Ед./мкл	0,5	49	0,01 Ед./мкл
Общий объем	45	4410

Последовательность прямого праймера (8Εζ) ГО ΝΟ. 1): 5'-АСССАСАААСССТСТАСССАТССС СТТАСТ-3'.

Последовательность обратного праймера (8Εζ) ГО N0. 2): 5'-ТССССССССАСТСССААССАСССТ АТСАСС-3'.

Примечание. Указанные праймеры амплифицируют фрагмент 256-ηΐ, расположенный в нетранслируемом 5'-участке ВГС.

____Последовательность зонда РИТК. (8ЕЦ ГО N0. 3): I №АМ |-ТСтСтТСТСтССтСтА АСССтСтТСтАСтТАСАСС[ГЛМКА[

Контроли, не содержащие матрицу (ΝΤΟ): в каждом планшете используют 4 лунки для контроля ΝΤΟ, в которые вместо РНК добавляют по 5 мкл воды.

Условия термического цикла:

50°С 2 мин

60°С 30 мин

95°С 5 мин

95°С 15 с Для двух циклов

60°С 1 мин

90°С 15 с Для 40 циклов

60°С 1 мин

После завершения реакции ОТ-ПЦР для анализа данных требуется установить порог сигнала флуоресценции для планшета ПЦР и создать стандартную кривую зависимости величины Ст от числа копий РНК в каждой лунке стандарта. Величины Ст, полученные для исследуемых образцов, используют для интерполяции числа копий РНК с учетом стандартной кривой.

И, наконец, число копий РНК нормализуют (на основании количества общей РНК, экстрагированной из лунки с клеточной культурой, которое определяют с использованием красителя ШЬоСгееи) и представляют в виде геномных эквивалентов в 1 мкг общей РНК (г.э./мкг).

Число копий РНК (г.э./мкг) в каждой лунке планшета с клеточной культурой является мерой количества репликационных РНК ВГС в присутствии различных концентраций ингибитора. Процент ингибирования рассчитывают по следующему уравнению:

100-[(г.э./мкг инг.)/(г.э./мкг контр. )х 100]

Данные ингибирования в зависимости от концентрации обрабатывали с использованием нелинейной модели Хилла и определяли 50% эффективную концентрацию (ЕС50) с использованием программного обеспечения 8А8 (§(а(18Нса1 8оП\\агс Буйеш, 8А8 Иъоипс. 1ис.Сагу, КС.).

По данным предварительного определения ферментативной активности и клеточного анализа соединения по настоящему изобретению обладают высокой активностью.

Пример 20. Определение специфичности.

Специфичность определяли для оценки селективности соединений, как описано в заявке XVО 00/09543. По данным указанного анализа соединения формулы 1 характеризуются селективностью, то есть не проявляют значительное ингибирующее действие (отсутствие измеряемого уровня активности

-58009295 при концентрации вплоть до 30 мкМ), как показано при анализе с использованием эластазы из лейкоцитов человека и катепсина В.

Пример 21. Фармакокинетические свойства.

В настоящем изобретении предлагаются соединения, которые обладают фармакокинетическими свойствами, то есть обеспечивают детектируемый уровень в плазме у крыс через 1 и 2 ч после перорального введения дозы 5 мг/кг.

Следующий анализ, оценку пероральной абсорбции, использовали для определения уровня в плазме исследуемых соединений в плазме крыс после перорального введения.

Материалы и методы.

1. Методика отбора соединений («кассетный отбор»).

Отбор соединений в «кассету» основан на их структурном родстве и физико-химических свойствах. Для экстракции всех отобранных соединений использовали метод твердофазной экстракции. Для отбора 3-4 соединений в одну «кассету» использовали данные предварительного анализа, то есть анализ каждого соединения, добавленного в плазму крысы при концентрации 0,5 мкМ, методами ЖХВР или МСЖХВР, время удерживания, ионную массу и график фракционирования соединений.

2. Получение пероральных препаратов носителя и соединения.

Каждая «кассета» включала 3-4 соединения в дозе 5 или 4 мг/кг для каждого соединения. Препараты «кассет» получали в виде пероральной суспензии в 0,5% водной метилцеллюлозе и 0,3% моноолеате полиоксиэтилен(20)сорбитана (твин 80). Объем дозы составлял 10 мл/кг через желудочный зонд.

3. Дозировка и отбор образцов плазмы.

Самцов крыс 8ргадие Эа\у1еу содержали в индивидуальных клетках и не кормили в течение ночи, при этом обеспечивали свободный доступ к 10% водному раствору декстрозы. Двум крысам вводили каждый образец кассеты. Образцы плазмы (~1 мл) отбирали у двух крыс через 1 и 2 ч после введения дозы и использовали для экстракции и анализа.

4. Экстракция соединения и анализ.

Соединение из каждой кассеты экстрагировали методом твердофазной экстракции из образцов плазмы, отобранных через 1 и 2 ч, из образцов контрольной плазмы и контрольной плазмы, в которую добавляли 0,5 мкМ каждого из всех исследуемых соединений. Для сравнения образцы анализировали методами ЖХВР и ЖХВР/МС. Концентрацию соединения в плазме определяли с учетом 0,5 мкМ концентрации стандарта.

Полученные результаты.

Результаты описанного выше анализа свидетельствуют о том, что некоторые соединения по настоящему изобретению содержатся в плазме через 1 и 2 ч после перорального введения, то есть содержание в плазме составляет вплоть до 1,5 мкМ.

Таблицы, в которых представлена характеристика соединений.

Примеры соединений по настоящему изобретению представлены в табл. 1-7, где Ме означает метил, ΕΙ означает этил и 1Ви означает трет-бутил. Соединения по настоящему изобретению обычно характеризуются величинами 1С₅₀ приблизительно менее 200 нМ и ЕС₅₀ приблизительно менее 300 нМ.

- 59 009295

Таблица 1

Соединение	В	1?	ь'		ш/ζ (М+Н)+ (МН+2)+
1001		МеО-	МеО-	Ч-Ос н	837,3
1002	δ	МеО-	МеО-	аал н	835,3
1003	δ	МеО-	МеО-	н	849,3
1004	ό	МеО-	МеО-	н	863,4
1005	δ	МеО-	Ме-	ОО н	831,4
1006	δ	МеО-	Ме-	аЛЛ н	819,5
1007	δ	МеО-	Ме-	.„АЛ	833,5
Ϊ008~	δ	МеО-	Ме-	н	845,5

-60009295

1009	δ	Μΐ3Ν-	Ме-	«ДА	846,5
1010	δ	Με3Ν-	Мс-	н	858,5
ΙΟΙ ι	δ	Μο2Ν-	Ме-	н	790,5
1012	δ	Μβ2Ν-	Ме-	Ύθ	816,5
1013	δ	МеО-	Ме-		777,5
1014	δ	МеО-	Ме-	Ч'-О н	803,5
1015	δ	МеО-	Ме-	о <А н	777,5
1016	δ	МеО-	Ме-	н	763,5
1017	δ	МеО-	Ме-	н	749,5
1018	δ	МеО-	Ме-	νη5	735,4
1019 _	δ	МеО-	Ме-		819,4

-61 009295

1020	δ	МеО-	Е1-		847,5
1021	δ	МеО-	Е1-	•<вл	791,4
1022	δ	МеО-	Ει-	н	859,5
1023	δ	МеО-	ΕΙ-	н	791,4
1024	Γ	МеО-	Ме-	н	811,4
1025	Ρ	МеО-	Ме-	н	755,5
1026	δ	МеО-	Ме-	н	835,4
1027	δ	МеО-	Ме-	V-	779,3
1028	δ	МеО-	8т-	О •<л н	841,3 843,2
1029	δ	МеО-	Вг-	чЬО н	911.3 909.3

-62009295

1030	δ	МеО-	Вг-	н	841.3 843.3
1031	δ	МеО-	Вг-	«ΑΑ н	897.3 899.3
1032	δ	(ΒιιΟ-	Ме-	н	819,4
1033	δ	ΙΒιιΟ-	Ме-	<Л н	819,4
1034	δ	НО-	Ме-	н	763,4
1035	δ	НО-	Ме-	о ·<νΑ. н	763,3
1036	δ	МеО-	Ме-	О <А н	791,4
1037	δ	МеО-	Ме-	н	847,5
1038	δ	МеО-	Ме-	-А н	791,5
1039	δ	МеО-	Ме-		859,5
1040	δ	МеО-	Ме-	Л	805,4

-63 009295

1041	δ	δβο-	Ме-	н	791,4
1042	δ	МеО-	С1	<νΑ н	797,4 799,3
1043	δ	МеО-	Вг	н	855.2 857.2
1044	δ	МеО-	С1	о н	811.3 813.3
1045	δ	МеО-	С1	о ''''Ν^δχ'δ/ Η	865.4 867.4
1046	δ	МеО-	Ме-	чЛЛ Η	821,4
1047	δ	МеО-	Ме-	9 ι Η	821,4
1048	δ	МеО-	Ме-	<Λ- Η	793,4
1049	δ	МеО-	С1	чА-. Η	825.3 827.3
1050	δ	МеО-	Вг	·<ΛΛ Η	885.3 887.3
1051	δ	МеО-	С1	·<Αλ Η	841.3 843.3

-64009295

1052	δ	МеО-	Г	О АЛ'-/ н	795,3
1053	δ	МеО-	Р	н	781,3
1054	δ	МеО-	С1	о Н	813.2 815.2
1055	δ	МеО-	Вг	<Лн	857.2 859.2
1056	δ	МеО-	Вг		86 871,1
1057	δ	НО	Ме	<ЛА н	819,2
1058	δ	НО	Ме	н	831,2
1059	δ	Н	Вг	н	867 869
1060	δ	Н	Вг	чХО н	879 881
1061	δ	Н	Вг	н	825 827
1062	δ	Н	Вг	<А	811 813

-65 009295

1063	δ	Ρ	Ме	н	821,3
1064		МеО-	Вг	И	883,2 885, 2
1065		МеО-	Вг	А-Ъ н	869.3 871.3
1066		МеО-	Вг	н	815.2 817.2
1067	τ	МеО-	Вг	<Ан	843.3 845.3
1068	δ.	МеО-	Вт	н	955.3 957.3
1069		МеО-	Вг	.<ДА> н	937.3 939.3
1070	ς.	МеО-	Вг	О г-'Х н	869.3 871.3
1071	τ	МеО-	Вг	иш н	897.3 899.3
1072	δ.	МеО-	Вг	•<ЛА н	931.3 933.3

-66009295

1073		МеО-	Вг	•<АА н	913.2 915.2
1074	<Α	МеО-	Вг	<АА н	899.3 901.3
1075	ς	МеО-	Вг	<ЛА н	845.2 847.2
1076	X	МеО-	Вг	о 1 н	873.3 875.3
1077		'ο	МеО-	Вг	н	887.2 889.2
1078	<Α	МеО-	Вг	<А н	855.2 857.2
1079	ς	МеО-	Вг	<А н	801,2 803,2
1080	X	МеО	Вг	<А н	829.2 831.2
1081	0^	0 X,·	МеО	Вт	чА И	901.3 903.3
1082	<Α	Н	С1	чЛА н	823.3 825.3

-67009295

1083	α	Η	С1	н	835.3 837.3
1084	<λ	Η	С1	дХ-	781.2 783.2
1085	α	Η	С!	7- ΙΖ к	767.2 769.2
1086	<λ	Η	С1	о н	795.2 797.2
1087	α	Η	С1	-Л-	795.2 797.2
1088	α	Η	С1	•<АЛ н	811,2 813,2
1089	α	Η	С1	<Ао- н	783,2
1090	α	ЕЮ-	Вг		869.2 871.2
1091	α	ЕЮ-	Вг	<Лг	883.2 885.2
1092	ο>	ЕЮ-	Вг	н	855.2 857.2

-68009295

1093		ЕЮ-	Вг	0 1 ааЛн	899.2 901.2
1094	<λ	РЮ-	Вг	Α-ν н	883.2 885.2
1095	о>	ΡγΟ-	Вг		897.2 899.2
1096	<λ	ΡγΟ-	Вг	н	869.2 871.2
1097	α	РЮ-	Вг	аа^ н	913.2 915.2
1098	α.	Η	Вг	О <νΑ н	811 813
1099	СРз	МеО-	Вг	н	869,2 871,1
1100	о>	МеО-	С1	эЛс	825.2 827.2
1101	ο>	ЕЮ-	Ме	0 АЛ н	791,2
1102		ЕЮ-	Ме	аЪ н	805,2

-69009295

1103	<Д	ЕЮ-	Ме	<А н	791,2
1104	α	ЕЮ-	Ме	АА н	835,3
1105	α	МеО-	ΟΝ	н	786,2
1106	<λ	Вг	МеО-	<А н	841.2 843.2
1107	ο>	МеО-	ΟΝ	чА н	800,2
1108		МеО-	Вг	аА н	819.1 821.1
1109		МеО	Вг	н	833.1 835.2
1110	<Χ	МеО-	Вг	н	843.2 845.2
1111		МеО-	Вг	н	815.2 817.2
1112	Ϋ>	МеО-	Вг	Ч-Х н	843.2 845.2

-70009295

1113		МеО-	Вг	0 ,ЧА, м	833.1 835.1
1114		МеО	Вг	чЬ н	847.2 849.2
1115	<А	МеО-	Вг	аЛ н	857.2 859.2
1116		МеО	Вг	•чЬ н	829.2 831.2
1117	Н	МеО	Вг	О н	857.2 859.2
1118		МеО	Вг	ч1А н	863.2 865.2
1119		МеО	Вг	ч1А н	877.2 879.2
1120	<А	МеО	Вг	чЛА н	887.2 889.2
1121		МеО	Вг	0 1 чЛА н	859.2 861.2
1122	Н‘	МеО	Вг	чАА н	887.2 889.2

-71 009295

1123	СД	МеО	ΟΝ	аДд н	842,2
1124	СД	МеО	ΟΝ	•<Л н	786,2
1125	д^>	МеО-	С1	н	775,4 777,3
1126	СД^,._	МеО-	С1	аД н	825.4 827.4
1127	и	МеО	С1	<Д н	757.4 759.4
1128	X	МеО	С1	•<А н	785.4 787.4
1129	ςΓ	МеО	С1	аД н	799.3 801.3
ИЗО		МеО	С1	аД н	771.3 773.3
1131		МеО	С1	ανΧ н	789.3 791.3
1132	Я	МеО	С1	АД н	799,5 801,4
1133	ί	МеО	С1	аЛ н	789.4 791.4

-72009295

1134		МеО	С1	О X н	839.4 841.4
1135	А	МеО	С1	X н	771.4 773.4
1136	X	МеО	С1	X н	799.4 801.4
1137	0	МеО	С1	X н	813.3 815.3
1138	''--А	МеО	С1	X н	785.3 787.3
1139	р	МеО	С1	X н	803.3 805.3
1140	я	МеО	С1	X н	813,5 815,4
1141		МеО	С1	Ха н	819.4 821.4
1142		МеО	С1	Ха н	869.4 871.4
1143	А-	МеО	С1	Ха н	801.4 803.4
1144	X	МеО	С1	Ха н	829,35 831,5

-73 009295

1145	X	МеО	С1	ха н	843,4 845,3
1146		МеО	С1	ХА н	815.3 817.3
1147		МеО	С1	ХА н	833.3 835.3
1148	X	МеО	С1	X н	843.5 845.5
1149		МеО	С1	Л	803.2 805.2
1150		МеО	С1		853.2 855.2
1151		МеО	С1	хХ	785,2
1152	X	МеО	С1	лЛг	813.3
1153		МеО	С1		817,2
1154	Χζ\	МеО	Вг	Хг	897,3 899,2

-74009295

1155	ς.	МеО	Вг	/-V	829.2 831.2
1156		МеО	Βγ	/•V	847,3 849,2
1157	СД	Η	-8Ме	а,ЛА н	835,4
1158		Η	-8Ме	чЬО н	847.4
1159	ο-	Η	-8Ме	н	779,3
1160	ο-	Η	-5Ме	аД н	779,3
1161	ο>	Η	-8Ме	н	807,3
1162		Η	-8Ме	/V	807,3
1163		Η	-8Ме	аДА н	823,3
1164	ο>	Η	-СР3	н	801,4

-75 009295

1165		н	-СР3	ХА н	845,4
1166		н	-СР3	X н	815,4
1167	о-	С1	С1	0 •<Д н	801.3 803.3 805.3
1168	о-	С1	С1	X н	857,2
1169		С1	С1	хХ н	801,3
1170	сх	С1	С1	X н	815.3 817.3 819.3
1171	сч	н	-8О2Ме	хХ н	811,3
1172	сц	н	-ЗО2Ме	X	839,3
1173		н	Ме-	X н	747,3
1174	о.	н	Ме-	X 1-1	761,4

-76009295

1175	О-	Ме-	•<„АА н	803,4
1176	О-:	н	Ме-	А-Х н	747,4
1177	СК	н	Ме-	тАр	775,4
1178	о.	н	Ме-	Да н	791,4
1179	А	н	-8О2Ме	<ЛА н	855,3
ИЗО	О-	н	-5О2Мс	.<х н	825,2
1181		н	-ОМе	-<НА н	763,4

Таблица 2

-77009295

Соединение	В	ί°	Ь1	к2	т/ζ (Μ+Η)+ (ΜΗ+2)+
2001	δ	МеО-	Ме-	АЛЛ н	832,6
2002	δ	МеО-	Ме-	н	776,5
2003	δ	МеО-	Ме-	'''νη2	734,4
2004	δ	МеО-	Ме-	ΛΝ- Η	748,5
2005	δ	МеО-	Ме-	Η	762,5
2006	δ	МеО-	Ме-	Η	802,5
2007	δ	МеО-	Ме-	0 \Α Η	776,4
2008	δ	МеО-	Ме-	Η	844,5
2009	δ	МеО-	Ме-	'^СН3	733,4

-78009295

2010	δ	МеО-	Ме-	</	747,4
2011	δ	МеО-	Ме-	А	761,4
2012	δ	МеО-	Ме-	АА н	846,5
2013		МеО-	Ме-	О аА н	764,4
2014		МеО-	Ме-		832,5
2015	δ	МеО-	Ме-	<Л н	790,4
2016	δ	МеО-	Ме-	н	858,5
2017	4	МеО-	Вг-	н	854.3 856.3
2018	А	МеО-	Ме-	о δΑ н	792,4
2019	Λ	МеО-	Ме		876,5
2020	А	МеО-	Ме	Αχ: н	890,5

Таблица 3

-79009295

Соединение	В	Ψ1	у	В2	т/ζ (М+Н)+ (МН+2)+
3001	δ	-0-	-о-	·<νΑ н	777,6
3002	δ	-Ο-	-о-	н	833,6
3003	δ	-сн2-	-0-	АЛ н	775,4
3004	δ	-сн2-	-о-	А н	775,4
3005	δ	-сн2-	-О-	н	801,4
3006	δ	-СН2-	-О-	Н	747,3
3007	δ	-сн2-	-о-	•'-ΝΗ;	733,3
3008	δ	-СН2-	-О-	<Лл н	831,5
3009	δ	-сн2-	-о-	Н	761,5
ЗОЮ	δ	-сн2-	-о-	ΑΛΌ н	843,3
ЗОИ	δ	-сн2-	-сн2-	Ул	801,5
3012	δ	-сн2-	-сн2-	-Чт н	745,4
3013	δ	-сн2-	-сн2-	О <Л н	773,4

-80009295

Таблица 4

Соединение	В	I?	I,2	К2	ιη/ζ (М+Н)+ (МН+2)+
4001	δ	МеО-	Ме-	•<ЯЛ№	833,5
4002	δ	МеО-	Ме-	н	777,5
4003	δ	МеО-	Ме-	аЛТС н	845.5
4004	δ	МеО-	Ме-	н	803,5
4005	δ	Με2Ν-	Ме-	н	846,5
4006	δ	Με2Ν-	Ме-	н	858,5
4007	δ	Με;Ν-	Ме-	н	790,5

-81 009295

4008	δ	Μβ2Ν-	Ме-	н	816,5
4009	δ	МеО-	Ме-	о АЛ н	777,4
4010	δ	МеО-	Ме-	Н	749,4
4011	δ	МеО-	Ме-		763,4
4012	δ	МеО-	МеО-	О АА н	793,3
4013	δ	МеО-	МеО-	ΑΑΑ3 н	861,4
4014	δ	МеО-	МеО-	н	793,4
4015	δ	МеО-	МеО-	н	849,4
4016	δ	Ме-	МеО-	О АА н	777,4
4017	δ	Ме-	МеО-	н	777,5

Таблица 5

-82009295

Соединение	В	I?	I?	К2	т/ζ (М+Н)+ (МН+2)+
5001	δ	МеО-	Ме-	V	748,4
5002	δ	МеО-	Ме-	X н	776
5003	δ	МеО-	Ме-	о /	832,5
5004	δ	МеО-	Ме-	Н	762
5005	δ	МеО-	Ме-	X	776,5
5006	δ	МеО-	Ме-	νο н	802,5
5007	δ	МеО-	Ме-	αΑΌ н	844,5

Таблица 6

-83 009295

Соединение	в	I?	I?	ь’	Кг	ηι/ζ (М+Н}+ (МН+2)’
6001	ъ	МеО-	н	Ме	•<мХ н	777,3
6002	ъ	МеО-	н	Ме	.<х Η λ	833,4
6003	ъ	МеО-	н	Ме	X н	791,3
6004	δ	МеО-	н	Ме	X	777,2
6005	δ	Ме	н	Вг	X н	839.2 841.2
6006	δ	Ме	н	Вг	ХА	881,2 883,2
6007 I	δ	Ме	11	Вг	Хг	853.2 855.2

-84009295

6008	δ	Ме	Н	Вг	«ДА н	869.2 871.2
6009	δ	Ме	н	Вг	чАО н	893.2 895.2
6010	δ	Ме	н	Вг	•чА. н	853.2 855.2
6011	δ	Ме	н	Ме	чА н	775,3
6012	δ	Ме	н	Ме	чАД	817,3
6013	δ	Мс	и	Мс	чД н	761,3
6014	δ	Ме	н	Ме	н	761,4
6015	δ	Ме	МеО-	Ме	Ац-ОЭ	859,5
6016	δ	Ме	МеО-	Ме	«ДА	847,5
6017	δ	Вг	н	Вг	чА н	905,2
6018	δ	Вг	н	Вг		919,2
6019	δ	Вг	н	С1	чА н	861,2
6020	δ	Вг	н	С1		875,2

Таблица 7

-85 009295

Соединение	В	А	κ5	т/ζ (Μ+Η)+ (ΜΗ+2)+
7001	δ	ΗΝ'δ ,-------. Фт'У5	Α	878,8
7002	δ	, .Α 'χχΑ	Α	950,4
7003	ό	η / ι Ν·β=\	4-	885,4

Перечень последовательностей <110> Фирма Бёрингер Ингельхайм Интернациональ ГмбХ <12 0> Ингибиторы гепатита С <130> 13/119 НО <140> 60/472709 <141> 2003-05-21 <160> 3 <170> Програмное обеспечение ЕазВЗЕО для Иапйоиз версии 4.0 <210> 1 <211> 30 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Прямой праймер <400> 1 асдсадааад сдВсВадсса ВддсдВВадВ 30 <210> 2 <211> 30 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<22 3> Обратный праймер <400> 2

Всссддддса сЬсдсаадса сссёавсадд 30 <210> 3 <211> 26 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Зонд ΡϋΤΗ <400> 3

ВддЬсСдсдд аассддрдад Васасс 26

Claims (32)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Рацемат, диастереоизомер или оптический изомер соединения формулы (I)

   -86009295 где В означает (С1-Сю)алкил или (С₃-С₇)циклоалкил,

   а) где указанный алкил и циклоалкил может быть моно-, ди- или тризамегценным группой (С1С₃)алкил и

   б) где указанный алкил может быть моно- или дизамегценным группой О-(С|-С |)алкил и

   в) где указанный алкил может быть моно-, ди- или тризаме щен атомами галогена и

   г) где каждая из указанных циклоалкильных групп означает 4-, 5-, 6- или 7-членное кольцо, необязательно содержащее одну (в случае 4-, 5-, 6- или 7-членных колец) или две (в случае 5-, 6- или 7членных колец) -СН₂-групп, соединенных друг с другом не напрямую и замещенных группой -О- таким образом, что атом кислорода соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода;

   X означает О или ΝΗ;

   Я³ означает (С₂-С₈)алкил, который может быть моно-, ди- или тризамегценным группой (С1С₄)алкил;

   Ь° означает Н, галоген, (С1-С₄)алкил, -ОН, -О-(С1-С₄)алкил, -ЫН₂, -1\1Н(С1-С₄)алкил или -Ν((ΟιС₄)алкил)₂;

   Ь¹ означает галоген, циано, (С1-С₄)алкил, -О-(С1-С₄)алкил, -8-(С1-С₄)алкил, -8О-(С1-С₄)алкил или -8О₂-(С1-С₄)алкил, где каждая из указанных алкильных групп необязательно замещена от 1 до 3 атомов галогена, и

   I? означает галоген, (С1-С₄)алкил- или -О-(С1-С₄)алкил, и Ь¹ или Ь² (но не оба одновременно) могут означать Н; или Ь° и Ь¹ могут быть связаны ковалентно и вместе с двумя атомами углерода, к которым они присоединены, образуют 5- или 6-членное карбоциклическое кольцо, в котором одна или две -СН₂группы связаны друг с другом не напрямую, и независимо разделены -О-;

   Я² означает (С1-С8)алкил, -ЫЯ²²СОЯ²⁰, -ЫЯ²²СООЯ²⁰ или -ИЯ²²Я²¹, где Я²⁰ выбирают из группы, включающей (С1-С8)алкил и (С1-С₄)алкил(С₃-С₇)циклоалкил;

   Я²¹ означает Н или выбран из группы, включающей (С1-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил и (С1С₄)алкил(С₃-С₇)циклоалкил,

   Я²² выбирают из группы, включающей водород и метил,

   Я¹ означает этил или винил;

   Я^с означает гидрокси или ΝΗ8Ο2Α. где Я⁸ означает (С3-С₇)циклоалкил; или Я⁸ означает -Ы(Я^Н2)Я^№), где Я^№ и Я^№ независимо выбирают из группы, включающей (С1-С₆)алкил; или его фармацевтически приемлемая соль или сложный эфир.
2. 2. Соединение по п.1, где В означает (С1-Сю)алкил или (С₃-С₇)циклоалкил,

   а) где указанный циклоалкил может быть моно-, ди- или тризамещен группой (С1-С₃)алкил, и

   б) где указанный алкил может быть моно- или дизамещен О-(С1_₄)алкилом; и

   в) где все указанные алкильные группы могут быть моно-, ди- или тризамещены атомами галогена, и

   г) где все указанные циклоалкильные группы означают 4-, 5-, 6- или 7-членное кольцо, в котором необязательно одна (в случае 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца) или две (в случае 5-, 6- или 7-членного кольца) -СН₂-группы не связаны напрямую друг с другом и замещены группой -О- таким образом, что атом О соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода;

   X означает О или ΝΗ;

   Я³ означает (С₂-С₈)алкил, который может быть моно-, ди- или тризамещен группой (С1-С₄)алкил;

   Ь° означает Н, -ОН, -О-(С1-С₄)алкил, -ΝΗ₂, -1\1Н(С1-С₄)алкил или -Ы((С1-С₄)алкил)₂;

   Ь¹ означает галоген, (С1-С₄)алкил, -О-(С1-С₄)алкил или -8-(С1-С₄)алкил (в окисленном состоянии, такой как 80 или 8О₂), и

   I? означает галоген, (С1-С₄)алкил- или -О-(С1-С₄)алкил, и

   Ь¹ или I? (но не оба одновременно) могут означать Н; или

   Ь° и Ь¹ могут быть связаны ковалентно и вместе с двумя атомами углерода, к которым они присоединены, образуют 5- или 6-членное карбоциклическое кольцо, в котором одна или две -СН₂-группы связаны друг с другом не напрямую, и независимо разделены -О-;

   Я² означает (С1-С₈)алкил, -Ш²²ССЖ^2и. -МЯ²²СООЯ²⁰ или -ЫЯ²²Я²¹, где

   Я²⁰ выбирают из группы, включающей (С1-С₈)алкил и (С1-С₄)алкил(С₃-С₇)циклоалкил;

   Я²¹ означает Н или выбран из группы, включающей (С1-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил и (С1-87009295

   С₄)алкил(С₃-С₇)циклоалкил,

   Я²² выбирают из группы, включающей водород и метил,

   Я¹ означает этил или винил;

   Я^с означает гидрокси или ΝΗ8Ο2Ρ⁸. где Я⁸ означает (С3-С₇)циклоалкил; или Я⁸ может быть дополнительно выбран из -М((С1-Сб)алкил)₂;

   или его фармацевтически приемлемая соль или эфир.
3. 3. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где В выбирают из группы, включающей (С₂-С₈)алкил- и (С₃-С₇)циклоалкил,

   а) где указанные алкил и циклоалкил могут быть моно-, ди- или тризамещены группой (С1С₃)алкил, и

   б) где указанный алкил может быть моно- или дизамещен -О-(С1-С₄)алкилом, и

   в) где каждая из указанных алкильных групп может быть моно-, ди- или тризамещена атомами фтора или монозамещена атомами хлора или брома, и

   г) где каждая из указанных циклоалкильных групп означает 5-, 6- или 7-членное кольцо, в котором одна или две -СН₂-группы не связаны напрямую друг с другом и заменены на группу -О- таким образом, что атом О соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода.
4. 4. Соединение по п.З, где В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, 2метилпропил, 1,2-диметилпропил, 1,2,2-триметилпропил, 2-фторэтил, 3-фторпропил, 3,3,3-трифторпропил, цикло пропил, циклобутил, цикло пентил, циклогексил, 1-метилцикло пентил и 1-метилциклогексил, и группу, которую выбирают из следующих формул:
5. 5. Соединение по п.4, где В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, циклопентил, 1-метилциклопентил, 2-фторэтил или 3-фторпропил.
6. 6. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где X означает О.
7. 7. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где X означает ΝΗ.
8. 8. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Я³ означает (С₂-Сб)алкил, который необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из (С1-С₄)алкила.
9. 9. Соединение по п.8, где Я³ представляет собой 1,1-диметилэтил.
10. 10. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Ь° выбирают из группы, включающей Н, галоген, СН₃, -ОН, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇, -ОСН(СН₃)₂, -ΝΗΡΉ,. -ΝΗΟ₂Η₂. -ΝΗΟ,Η-. -ΝΗΟΗ(ΟΗ₃)₂, -Ν(ΟΗ₃)₂, -Ν(ΟΗ₃)Ο₂Η₅, -Ν(ΟΗ₃)Ο₃Η₇ и -Ν(ΟΗ₃)ΟΗ(ΟΗ₃)₂.
11. 11. Соединение по π. 10, где Ь° выбирают из группы, включающей Н, -ОН, -ОСН₃ галоген и -М(СН₃)₂.
12. 12. Соединение по π. 11, где Ь° выбирают из группы, включающей Н, -ОН или -ОСН₃.
13. 13. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Ь¹ выбирают из группы, включающей галоген, -СН₃, -С₂Н₅, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇, -ОСН(СН₃)₂, СР₃, -8Ме, -8ОМе и 8О₂Ме, и I? выбирают из группы, включающей галоген, -СН₃, -С₂Н₅, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇, -ОСН(СН₃)₂, где Ь¹ или Ь² может означать Н.
14. 14. Соединение по п.13, где или Ь¹ означает -СН3, -Р, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме или -8О2Ме; или Ь² означает -СН3, -Р, -С1, -Вт или -ОМе; а другой из заместителей Ь¹ и Ь² означает Н.
15. 15. Соединение по п. 14, где Ь¹ означает СН₃, -Р, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме или -8О₂Ме, а Ь² означает Н.
16. 16. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Ь° выбирают из группы, включающей Н, -ОН и -ОСН₃; и/или Ь¹ означает -СН3, -Р, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме или -8О2Ме; или Ь² означает -СН3, -Р, -С1, -Вт или -ОМе; а другой из заместителей Ь¹ и Ь² означает Н.
17. 17. Соединение по п. 16, где Ь° выбирают из группы, включающей Н, -ОН и -ОСН₃; Ь¹ означает -СН₃, -Р, -С1, -Вт, -ОМе, -8Ме или -8О₂Ме, а Ь² означает Н.
18. 18. Соединение по п.17, где Ь° выбран из Н или -ОСН₃, Ь¹ означает -СН₃, -С1 или -Вт; а Ь² означает Н.
19. 19. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Ь° и Ь¹ ковалентно связаны и вместе с хинолиновым остатком, к которому они присоединены, образуют циклическую систему, которую выбирают из следующих групп: где I? имеет значения, как определено в π. 1.

    -88009295
20. 20. Соединение по и. 19, где Ь² означает Н или метил.
21. 21. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Я² означает (С1-С₈)алкил, -ИНСОЯ²⁰, -ИНСООЯ²⁰ или -МНЯ²¹, где

    Я²⁰ выбирают из группы, включающей (С1-С₈)алкил и (С1-Сз)алкил(Сз-С₇)циклоалкил, и

    Я²¹ означает Н или выбран из группы, включающей (С1-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил и (С1С₃)алкил(С₃-С₇)циклоалкил.
22. 22. Соединение по п.21, где Я² означает -МНСОЯ²⁰, -МНСООЯ²⁰ или -МНЯ²¹.
23. 23. Соединение по п.21, где Я²⁰ выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил и циклогексилметил,

    Я²¹ выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил и циклогексилметил.
24. 24. Соединение по и.23, где Я²⁰ выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил и циклопентилметил,

    Я²¹ выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, циклопентил и циклопентилметил.
25. 25. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Я¹ означает винил.
26. 26. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Я^с означает гидрокси, ΝΗ8Ο₂циклопропил, ХН8О₂-циклобутил или 1\1Н8О₂-циклопентил.
27. 27. Соединение по п.26, где Я^с означает гидрокси.
28. 28. Соединение по п.26, где Я^с означает 1\1Н8О₂-циклопропил.
29. 29. Соединение по одному или более предыдущих пунктов, где Я^с означает ΝΗ8Ο2Ν^^Ν2^^ν1), где Я^№ и Я^№ независимо выбирают из (С1-С4)алкила.
30. 30. Соединение по п.1, где В означает (С₂-С₈)алкил или (С₃-С₇)циклоалкил,

    а) где указанный алкил и циклоалкил могут быть моно-, ди- или тризамещены группой (С]С₃)алкил; и

    б) где указанный алкил может быть моно- или дизамещенным группой О-(С1-С₄)алкил; и

    в) где каждая из указанных алкильных групп может быть моно-, ди- или тризамещена атомами фтора или монозамещена атомами хлора или брома; и

    г) где каждая из указанных циклоалкильных групп означает 4-, 5-, 6- или 7-членное кольцо, необязательно содержащее одну (в случае 4-, 5-, 6- или 7-членных колец) или две (в случае 5-, 6- или 7членных колец) -СН₂-групп, соединенных друг с другом не напрямую и разделенных группой -О- таким образом, что атом кислорода соединен с группой X по крайней мере через два атома углерода;

    X означает О или ΝΗ;

    Я³ означает (С₂-Сб)алкил, который может быть моно-, ди- или тризамещенными группой (С1С₄)алкил;

    Ь° означает Н, -ОН, -ОСН₃, галоген или -Ы(СН₃)₂;

    Ь¹ означает галоген, -СН₃, -С₂Н₅, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇, -ОСН(СН₃)₂, -СР₃, -8Ме, -8ОМе и 8О₂Ме;

    I? означает означает галоген, -СН₃, -С₂Н₅, -ОСН₃, -ОС₂Н₅, -ОС₃Н₇ и -ОСН(СН₃)₂, где Ь¹ или I? могут означать Н;

    Я² означает (С1-С₈)алкил, -ИНСОЯ²⁰, -ХНСООЯ²⁰ или -ΝΗΚ²¹. где

    Я²⁰ выбирают из группы, включающей (С1-С₈)алкил и (С1-С₃)алкил(С₃-С₇)циклоалкил;

    Я²¹ означает Н или выбран из группы, включающей (С1-С₈)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил и (С1С₃)алкил(С₃-С₇)циклоалкил,

    Я¹ означает этил или винил;

    Я^с означает гидрокси, 1\1Н8О₂циклопропил, 1\1Н8О₂циклобутил или 1\1Н8О₂циклопентил.
31. 31. Соединение по п.30, где В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, 2метилпропил, 1,2-диметилпропил, 1,2,2-триметилпропил, 2-фторэтил, 3-фторпропил, 3,3,3трифторпропил, цикло пропил, циклобутил, цикло пентил, цикло гексил, 1-метилцикло пентил и 1метилциклогексил и группу, которую выбирают из следующих формул:

    Я³ выбирают из группы, включающей 1,1-диметилэтил, Ь° означает Н, -ОН или -ОСН3; Ь¹ означает СН3, -Р, -С1, -Вг, -ОМе, -8Ме или -8О₂Ме; а Ь² означает Н;

    Я² означает -ЫНСОЯ²⁰, -МНСООЯ²⁰ или -ΝΗΒ²¹. где Я²⁰ выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил и циклометилпентил;

    Я²¹ выбирают из группы, включающей метил, этил, н-пропил, изопропил, циклопентил и циклометилпентил,

    -89009295

    Я¹ означает винил, а Я означает гидрокси или МНБОг-циклопропил.
32. 32. Соединение по п.31, где В выбирают из группы, включающей этил, н-пропил, трет-бутил, циклопентил, 1-метилциклопентил, 2-фторэтил и 3-фторпропил, Я³ представляет собой 1,1-диметилэтил, Ь° означает Н или -ОСН₃;