SK287914B6 - Chimeric monoclonal antibody and its use in the preparation of medicament for the treatment of malignant tumors, cell line and pharmaceutical composition - Google Patents
Chimeric monoclonal antibody and its use in the preparation of medicament for the treatment of malignant tumors, cell line and pharmaceutical composition Download PDFInfo
- Publication number
- SK287914B6 SK287914B6 SK1226-2003A SK12262003A SK287914B6 SK 287914 B6 SK287914 B6 SK 287914B6 SK 12262003 A SK12262003 A SK 12262003A SK 287914 B6 SK287914 B6 SK 287914B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- human
- antibody
- mab
- monoclonal antibody
- sequences
- Prior art date
Links
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title abstract description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract description 22
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 abstract description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 23
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 20
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- PFJKOHUKELZMLE-VEUXDRLPSA-N ganglioside GM3 Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@@H]([C@H](O)/C=C/CCCCCCCCCCCCC)NC(=O)CCCCCCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 PFJKOHUKELZMLE-VEUXDRLPSA-N 0.000 description 11
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 6
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 4
- ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N L-Histidinol Natural products OCC(N)CC1=CN=CN1 ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N L-histidinol Chemical compound OC[C@@H](N)CC1=CNC=N1 ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 4
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 4
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000002743 insertional mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N N-acetylneuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940060155 neuac Drugs 0.000 description 2
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- OOIBFPKQHULHSQ-UHFFFAOYSA-N (3-hydroxy-1-adamantyl) 2-methylprop-2-enoate Chemical compound C1C(C2)CC3CC2(O)CC1(OC(=O)C(=C)C)C3 OOIBFPKQHULHSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- -1 GD3 ganglioside Chemical class 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- SUHQNCLNRUAGOO-UHFFFAOYSA-N N-glycoloyl-neuraminic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(NC(=O)CO)C(O)CC(=O)C(O)=O SUHQNCLNRUAGOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDJKUWYYUZCUJX-UHFFFAOYSA-N N-glycolyl-beta-neuraminic acid Natural products OCC(O)C(O)C1OC(O)(C(O)=O)CC(O)C1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDJKUWYYUZCUJX-KVNVFURPSA-N N-glycolylneuraminic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@](O)(C(O)=O)C[C@H](O)[C@H]1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-KVNVFURPSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229940122277 RNA polymerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001130 anti-lysozyme effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108091092330 cytoplasmic RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000054999 human core Human genes 0.000 description 1
- 108700026469 human core Proteins 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 201000010893 malignant breast melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 208000030925 respiratory syncytial virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7032—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a polyol, i.e. compounds having two or more free or esterified hydroxy groups, including the hydroxy group involved in the glycosidic linkage, e.g. monoglucosyldiacylglycerides, lactobionic acid, gangliosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/739—Lipopolysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/001171—Gangliosides, e.g. GM2, GD2 or GD3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39566—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against immunoglobulins, e.g. anti-idiotypic antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
- C07K16/3084—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated gangliosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
- C07K16/4258—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-receptor Ig
- C07K16/4266—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-receptor Ig against anti-tumor receptor Ig
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
- C12N5/0694—Cells of blood, e.g. leukemia cells, myeloma cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
- G01N33/686—Anti-idiotype
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
- C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7023—(Hyper)proliferation
- G01N2800/7028—Cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
A chimeric monoclonal antibody derived from murine anti-idiotype monoclonal antibody 1E10, which recognizes the MAb P3 and which is produced by the hybridoma cell line with deposit number ECACC 97112901, wherein constant region of heavy chain contains the amino acid sequence of gamma-1 chain and constant region of light chain contains the amino acid sequence of kappa chain, whereby both derived from human immunoglobulins, hypervariable domains of their heavy and light chains comprise specific sequences and framework regions residues FR of their heavy and light chains also contain specific sequences defined in description. Use of the antibody for the manufacture of a medicament for the treatment of malignant tumors, a pharmaceutical composition containing the antibody and a cell line producing thereof.
Description
Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka oblasti biotechnológie, hlavne nových rekombinantných protilátok získaných génovým inžinierstvom, konkrétne chimérických a humanizovaných protilátok získaných z myšej monoklonálnej protilátky P3 (MAb P3) a jej antiidiotypovej myšej monoklonálnej protilátky 1E10 (MAbai 1E10).
Konkrétnejšie sa vynález týka protilátok, ktoré sa viažu na gangliozidy obsahujúce N-glykolylovú kyselinu sialovú, ale neviažu sa s acetylátovými formami gangliozidov ani s neutrálnymi glykolipidmi. Gangliozidy obsahujúce A-glykolylovú kyselinu sialovú sú antigény s početnou expresiou pri rakovine prsníka a melanómoch. Na experimentálnych modeloch bol tiež preukázaný protinádorový účinok MAbai 1E10.
Predložený vynález sa tiež týka použitia tejto protilátky na výrobu lieku na liečbu malígnych nádorov, farmaceutickej kompozície s obsahom tejto protilátky a bunkovej línie, ktorá ju produkuje.
Doterajší stav techniky
Gangliozidy sú glykosfingolipidy, ktoré obsahujú kyselinu sialovú a sú prítomné v plazmatickej membráne buniek stavovcov (Stults a spol. (1989): Glycosphingolipids: structure, biological source and properties, Methods Enzymology, 179: 167 - 214). O niektorých z týchto molekúl sa v literatúre referovalo ako o antigénoch súvisiacich s nádormi alebo markérmi nádora (Hakomori a spol. (1991): Possible functions of tumor associated carbohydrate antigens. Curr. Opin. Immunol., 3: 646 - 653), a preto sa použitie protilátok proti gangliozidom opisovalo ako užitočné pre diagnózu a liečenie rakoviny (Hougton a spol. (1985): Mouse monoclonal antibody IgG3 antibody detecting GD3 ganglioside: to phase I trial in patients with malignant melanoma, PNAS USA, 82: 1242 - 1246; Zhang a spol. (1997): Selection of carbohydrate tumor antigens as targets for immune attack using immunohistochemistry. I. Focus on gangliosides, Int. J. Cancer, Ί2: 42 - 49). Kyseliny sialové častejšie exprimované pri zvieratách sú TV-acetylové (NeuAc) a A'-glykolylové (NeuGc) (Corfield a spol. (1982): Occurrence of sialic acids, Celí. Biol. Monogr., 10: 5 - 50). Všeobecne sa NeuGc neexprimuje v normálnych ľudských a kuracích tkanivách, ale všeobecne sa vyskytuje u iných stavovcov (Leeden a Yu, (1976): Chemistry and analysis of sialic acid. In: Biological Role of Sialic Acid. Rosemberg A. a Shengtrund C. L. (editori). Plénum Press, New York, 1 - 48; Kawai a spol. (1991): Quantitative determination of N-glycolylneuraminic acid expression in human cancerous tissues and avian lymphoma celí lines as a tumor associated sialic acid by gas chromatography-mass spectrometry, Cancer Research, 51: 1242 - 1246). Ale existujú štúdie, ktoré ukazujú, že protilátky proti NeuGc rozpoznávajú určité ľudské nádory a nádorové bunkové línie (Higashi a spol. (1988): Detection of gangliosides as V-glycolylneuraminic acid specific tumorassociated Hanganutziu-Deicher antigén in human retinoblastoma cells, Jpn. J. Cancer Res., 79: 952 až 956; Fukui a spol. (1989): Detection of glycoproteins as tumor associated Hanganutziu-Deicher antigén in human gastric cancer celí line, NUGC4, Biochem. Biophys. Res. Commun., 160: 1149 - 1154). Zvýšené koncentrácie GM3 (NeuGc) gangliozidov sa našli pri ľudskej rakovine prsníka (Marquina a spol. (1996): Gangliosides expressed in human breast cancer, Cancer Research, 56: 5165 - 5171), čím sa tento výsledok stal príťažlivý pre použitie tejto molekuly ako terča pri liečbe rakoviny.
Monoklonálna protilátka (MAb) P3 je myšia monoklonálna protilátka s IgM izotypom, ktorá sa získa, keď sa spoja myšie splenocyty z myši BALB/c imunizovanej lipozómami obsahujúcimi GM3 (NeuGc) a tetanový toxoid s bunkovou líniou P3-X63-Ag8.653; ktorá je myším myelómom. Táto protilátka MAb P3 výrazne reaguje s gangliozidmi, ktoré obsahujú TV-glykolylovú sialovú kyselinu, ale nereaguje s acetylovými formami gangliozidov ani s neutrálnymi glykolipidmi. Pomocou imunocytochemických a imunohistochemických štúdií uskutočnených na bunkových líniách a tkanivách a tkanivách z benígnych a neoplastických nádorov sa preukázalo, že MAb P3 rozpoznáva rakovinu prsníka (Vázquez a spol. (1995): Generation of a murine monoclonal antibody specific for TV-glycolylneuraminic acid-containing gangliosides that also recognizes sulfated glycolipids, Hybridoma, 14: 551 - 556) a melanóm. Monoklonálna protilátka MAb P3 indukovala antiidiotypovú imunitnú odpoveď (Ab2) pri myši BALB/c (syngenetický model), dokonca aj bez adjuvans a proteínového nosiča (Vázquez a spol. (1998): Syngeneic anti-idiotypic monoclonal antibodies to an anti-NeuGc-containing ganglioside monoclonal antibody, Hybridoma, 17: 527 - 534). Úloha elektronegatívnych skupín, sialovej kyseliny (pre gangliozidy) a SO3 (pre sulfatidy), v rozpoznávacích vlastnostiach tejto protilátky bola navrhnutá pomocou imunochemických analýz (Moreno a spol. (1998): Delineation of epitope recognized by an antibody specific for TV-glycolylneuraminic acid-containing gangliosides, Glycobiology, 8: 695 - 705).
Antiidiotypová MAb 1E10 (MAbai 1E10) subtypu IgGl sa získala z myši BALB/c imunizovanej s MAb P3 viazaným na KLH (US patent 6 063 379, bunková línia uložená pod prístupovým číslom ECACC 97112901). MAbai 1E10 rozpoznávala MAb P3 a neviazala iné protilátky IgM proti gangliozidom. Okrem toho MAbai 1E10 inhibovala špecifickú väzbu MAb P3 na GM3 (NeuGc) a na bunkovú líniu MDA-MB-435 získanú z karcinómu prsných kanálikov (pozitívnych na väzbu MAb P3). MAbai 1E10 stimulovala silnú imunitnú odpoveď protilátok Ab3, keď sa imunizovali myši zo syngenetických a alogenetických modelov, pričom tieto protilátky Ab3 nevykazovali rovnakú špecifickosť ako MAb P3, aj keď niesli idiotypy podobné tým, ktoré niesla protilátka Abl (Vázquez a spol. (1998): Syngeneic anti-idiotypic monoclonal antibodies to an anti-NeuGc-containing ganglioside monoclonal antibody, Hybridoma, 17: 527 - 534). MAbai 1E10 stimulovala silný protinádorový účinok pri syngenetickej, ako aj alogenetickej myši. Rast bunkovej línie karcinómu žliaz prsníka F3I1 sa významne znížil opakovanou dávkou MAbai 1E10 viazanej na KLH vo Freundovej adjuvancii, keď sa myš BALB/c vakcinovala. Po vakcinácii sa tiež znížil počet spontánnych pľúcnych metastáz. Intravenózna aplikácia MAbai 1E10 naočkovanej myši C57BL/6, 10 až 14 dní po intravenóznom naočkovaní melanómovými bunkami B16, spôsobilo dramatické zníženie počtu pľúcnych metastáz pri porovnaní s myšou ošetrenou irelevantným IgG. Tieto výsledky naznačujú, že sa spúšťa viacej ako jeden mechanizmus protinádorového účinku (Vázquez a spol. (2000): Antitumor properties of an anti-idiotypic monoclonal antibody in relation to íV-glycolyl-containing gangliosides, Oncol. Rep., 7: 751 - 756). V CA 2308142 je opísaná myšia anti-idiotypická monoklonálna protilátka 1E10, ktorá rozpoznáva monoklonálnu anti-gangliozidovú protilátku P3.
Aj keď sa hybridómová technológia v priebehu 15 rokov rozvinula (Kohler a Milstein (1975): Continuos cultures of fused cells secreting antibody of predefined specifity, Náture, 256: 495 - 497), a keď sú monoklonálne protilátky stále veľmi osožné pri diagnózach, ako aj vo výskume, nepreukázala sa ich terapeutická účinnosť u ľudí. Spôsobuje to hlavne ich krátky polčas života v krvi a to, že myšie efektorové funkcie zlyhávajú pre ľudský imunitný systém a tiež kvôli ľudskej imunitnej odpovedi na myšie protilátky (HAMA odpoveď). Prevrat v eventuálnej užitočnosti MAb spôsobila technológia génového inžinierstva, pretože manipuláciou s génmi imunoglobulínov je možné získať modifikované protilátky so zníženou antigenitou a takisto zlepšiť efektorové funkcie pri liečení alebo diagnózach určitých patológií. Spôsoby zníženia imunogenity imunoglobulínu majú zásadný cieľ zmenšiť rozdiely medzi myšou protilátkou a ľudským imunoglobulínom bez toho, aby sa zmenila špecifickosť rozpoznávania antigénu (Morrison a Oi (1989): Genetically engineered antibody molecules, Adv. Immunol., 44: 65 - 92).
V poslednom čase bolo vyvinutých niekoľko spôsobov humanizácie myších alebo potkanových protilátok, a tým zníženia xenogénnej imunitnej odpovede proti cudzím proteínom, keď sa vpichnú ľuďom. Jedným z prvých prístupov ku zníženiu antigenity boli chimérické protilátky, v ktorých sa variabilné domény myšieho proteínu vložili do konštantných domén ľudských molekúl, ktoré majú rovnakú špecifickosť, ale zníženú imunogenitu pri porovnaní s ich myšími partnermi, pričom sa zachovali ľudské efektorové funkcie chimérických protilátok, (Morrison a spol. (1984): Chimeric human antibody molecules: Mouse antigen-binding domains with human constant región domains, PNAS USA, 81: 6851 - 6855). Aj keď majú chimérické protilátky rovnakú špecifickosť ako myší partneri, bežne sa pozorovala imunitná odpoveď na variabilné oblasti hlodavcov. Pri pokuse o ďalšie zníženie imunogenity chimérických protilátok sa transplantovali len oblasti determinujúce komplementaritu (CDR) z monoklonálnej protilátky hlodavca do oblastí ľudských základných zvyškov a táto hybridná variabilná oblasť sa exprimovala s ľudskými konštantnými oblasťami (Jones a spol. (1986): Replacing the comlemntary-determining regions in a human antibody with those from a mouse, Náture, 321: 522 - 524; Verhoeyen a spol. (1988): Reshaping human antibodies: grafting an antilysozyme activity, Science, 239: 1534 - 1536). Ale tento postup mal niekoľko nedostatkov: výsledná protilátka mala bežne zníženú afinitu a rad základných zvyškov sa musel pre obnovenie väzby spätne mutovať na zodpovedajúce myšie systémy (Rietchmann a spol. (1988): Reshaping human antibodies for therapy, Náture, 332: 323 - 327; Queen a spol. (1989): A humanized antibody that binds to the interleukin 2 receptor, PNAS USA, 86: 10029 - 10033; Tempest a spol. (1991): Reshaping a human monoclonal antibody to inhibit human respirátory syncytial vírus infection in vivo, Biotechnology, 9: 266 - 272). Okrem toho sa bežne pozorovalo, že imunogenita pretrvávala v CDR-očkovaných protilátkach,
Mateo a spolupracovníci (US patent číslo US 5 712 120) opísali spôsob zníženia imunogenity myších protilátok. Podľa tohto spôsobu sa modifikácie obmedzujú na variabilné domény a konkrétne na myšie oblasti základných zvyškov (FR) chimérických protilátok. Okrem toho sa zámena uskutočňuje len v tých oblastiach FR, ktoré majú amfifilické sekvencie, a preto sú možnými epitopmi rozpoznateľnými T bunkami. Spôsob zahrnuje uvážlivú zámenu niekoľkých málo zvyškov aminokyselín lokalizovaných v potenciálnych imunogenitných epitopoch za zodpovedajúce zvyšky z ľudskej sekvencie s najvyššou homológiou. Musia sa však zachovať aminokyseliny, ktoré hlavne zodpovedajú za kánonické štruktúry a tiež zvyšky v bezprostrednom susedstve oblasti CDR alebo vo Vemierovej zóne. Výsledná protilátka si zachováva svoju špecifickosť väzby antigénu a je menej imunogenitná, ako buď jej myší alebo chimérický predchodca (Mateo a spol. (2000): Removal of T celí epitopes from genetically engineered antibodies: Production of modified immunoglobulins with reduced immunogenicity, Hybridoma, 19: 463 - 471), čo sú vlastnosti, ktoré zvyšujú ich terapeutickú užitočnosť. Použitím tohto nového spôsobu sa musí urobiť len niekoľko málo mutácií a samozrejme menej génových manipulácií.
Podstata vynálezu
Predmetom predloženého vynálezu sú všeobecne rekombinantné protilátky získané technológiou génového inžinierstva.
Konkrétnym predmetom vynálezu je chimérická monoklonálna protilátka odvodená z myšej antiidiotypovej monoklonálnej protilátky 1E10, ktorá rozpoznáva myší MAb P3 a ktorá je produkovaná hybridomálnou bunkovou líniou s depozitným číslom ECACC 97112901, kde konštantná oblasť ťažkého reťazca obsahuje sekvenciu aminokyselín gama-1 reťazca a konštantná oblasť ľahkého reťazca obsahuje sekvenciu aminokyselín kapa reťazca, pričom obidve sú odvodené z ľudských imunoglobulínov, hypervariabilné domény ich ťažkých a ľahkých reťazcov obsahujú nasledujúce sekvencie:
ŤAŽKÝ REŤAZEC
CDR1: SYDIN
CDR2: WIFPGDGSTKYNEKFKG
CDR3: EDYYDNSYYFDY
ĽAHKÝ REŤAZEC
CDR1: RASQDISNYLN
CDR2: YTSRLHSG
CDR3: QQGNTLPWT, oblasti základných zvyškov FR ich ťažkých a ľahkých reťazcov obsahujú nasledujúce sekvencie:
ŤAŽKÝ REŤAZEC
FR1: QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT
FR2: WVRQRPEQGLEWIG
FR3: KATLTTDKSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCAR
FR4: WGQGTTLTV a
ĽAHKÝ REŤAZEC
FR1: DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISC
FR2: WYQQKPDGTVKLLIY
FR3: VPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFC
FR4: FGGGTKLESK.
V prednostnom uskutočnení je predmetom vynálezu definovaná monoklonálna protilátka, ktorá pre svoju humanizáciu a zachovanie väzobných vlastností k antigénu vo variabilnej oblasti zahrnuje prinajmenšom jednu z nasledujúcich substitúcií:
ĽAHKÝ REŤAZEC pozícia 7: Thr za Ser pozícia 8: Thr za Pro pozícia 15: Leu za Val
ŤAŽKÝ REŤAZEC pozícia 5: Gin za Val pozícia 40: Arg za Ala pozícia 42: Glu za Gly pozícia 87 (83 podľa Kabatovho číslovania): Thr za Arg.
Predmetom vynálezu je aj bunková línia produkujúca ktorúkoľvek z monoklonálných protilátok podľa vynálezu.
Predmet vynálezu zahŕňa aj farmaceutickú kompozíciu obsahujúcu ktorúkoľvek z monoklonálných protilátok podľa vynálezu v kombinácii s excipientmi.
Predmetom vynálezu je tiež ktorákoľvek z monoklonálných protilátok podľa vynálezu na použitie na liečbu malígnych nádorov prsníka a melanómov, ich metastáz a relapsov alebo na „in vivo lokalizáciu a identifikáciu malígnych nádorov prsníka a melanómov, ich metastáz a relapsov.
Predmetom vynálezu je navyše aj použitie monoklonálnej protilátky podľa vynálezu na výrobu lieku na liečbu malígnych nádorov prsníka a melanómov, ich metastáz a relapsov, ako aj monoklonálna protilátka podľa vynálezu na použitie na liečbu malígnych nádorov prsníka a melanómov, ich metastáz a relapsov.
Syntéza cDNA a amplifikácia génu pomocou PCR (reťazovej polymerázovej reakcie) variabilných oblastí MAb P3 aMAbai 1E10
Cytoplazmatická RNA sa extrahovala asi z 106 buniek hybridómu P3 (myšia IgM MAb, ktorá rozpoznáva GM3 V-glykolový gangliozid) alebo 1E10 (protilátka antiidiotypu proti P3). RNA sa extrahovala s použitím reagencie TRIZOL (GIBCO BRL, Grand Island, NY), podľa inštrukcií výrobcu.
Reakcia syntézy cDNA sa uskutočnila zmiešaním 5 pg RNA, 25 pmolov VH (komplementárne ku konštantnej oblasti myšej IgM pre VH P3 a ku konštantnej oblasti myšej IgGl pre VH 1E10) alebo VK (komplementárnej ku konštantnej myšej kapa oblasti pre obidve protilátky), 2,5 mM každého dNTP, 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 75 mM KC1, 10 mM DTT, 8 mM MgCl2 a 15 jednotiek inhibítora RNA polymerázy v 50 pL reakčnej zmesi. Desať minút sa zmes zahrievala na 70 °C a pomaly sa ochladila na 37 °C. Potom sa pridalo 100 jednotiek enzýmu MLV reverznej transkriptázy a inkubácia pokračovala pri 42 °C jednu hodinu.
Variabilné oblasti VK a VH cDNA sa amplifikovali pomocou PCR. Krátko, 5 pL cADN VH alebo VK sa zmiešalo s 25 pmolami špecifických primérov, 2,5 mM každej dNTP, 5 pL zložiek 10X pufra Taq DNA polymerázy a 1 jednotkou tohto enzýmu. Vzorky sa podrobili 25 teplotným cyklom pri 94 °C, 30 sekúnd; 50 °C 30 sekúnd; 72 °C, 1 minútu a posledná inkubácia pri 72 °C počas 5 minút.
Klonovanie a sekvenovanie amplifikovanej cDNA
PCR produkty VH a VK (z P3 a z 1E10) sa klonovali do TA vektora (TA klonovacia súprava, Promega, USA). Výsledné klony sa sekvenovali pomocou dideoxy spôsobu s použitým T7 DNA polymerázy (T7 sekvenovacia súprava, Pharmacia, Švédsko).
Konštrukcia chimérických génov
Gény VH a VK sa vystrihli z TA vektorov enzymatickou digesciou a klonovali sa do zodpovedajúcich expresných vektorov (Coloma a spol. (1992): Novel vectors for the expression of antibody molecules using variable regions generated by polymerase chain reaction, J. Immunol. Meth., 152: 89 - 104).
Gény VH sa vystrihli z TA vektora pomocou enzymatickej digescie s EcoRV a Nhel a klonovali sa do expresného vektora (PAH 4604), ktorý zahrnoval variabilný región ľudskej IgGl a gény rezistentné k histidinolu. Výsledné konštrukcie boli P3VH-PAH4 604 a 1E10VH-PAH4604. Gény VK sa vystrihli z TA vektora pomocou enzymatickej digescie s EcoRV a Sali a klonovali sa do expresného vektora (PAG4622). Tento vektor obsahoval rezistentné gény ku kyseline mykofenolovej a ľudskú kapa konštantnú oblasť. Výsledné konštrukcie boli P3VK-PAG4622 a 1E10VK-PAG4622.
Expresia chimérických protilátok získaných z MAb P3 a MAbid 1E10
Bunky NS-0 sa podrobili elektroporácii s 10 pg P3VK-PAG4622 alebo 1E10VK-PAG4622, klony exprimujúce ľudské kapa ľahké reťazce sa transfektovali s 10 pg P3VH-PAH4604 alebo 1E10VH-PAH4604.
DNA sa linearizovali digesciou s enzýmom Pvul, vyzrážali etanolom a rozpustili v 50 pL PBS. Odstredenim sa pozbieralo približne 107 buniek a resuspendovali sa v 0,5 mL PBS spoločne s digestovanou DNA v kyvete pre elektroporáciu. Desať minút sa nechali na ľade a potom sa bunky vystavili impulzu 200 Voltov a 960 pF a ponechali sa na ľade ďalších desať minút. Bunky sa distribuovali na 96 jamkovou platničku s D'MEM F12 s 10 % fetálnym teľacím sérom. Po dvoch až štyroch dňoch sa pridalo selektívne médium (D'MEM F12 s 0,45 pg/mL kyseliny mykofenolovej alebo s 10 mM histidinolu). Transfektované klony boli po 14 dňoch viditeľné voľným okom.
Prítomnosť ľudskej protilátky v médiu jamiek obsahujúcich trasfektované klony sa merala pomocou ELISA. Jamky mikrotitračnej platničky sa zmočili kozími protilátkami proti ľudskému kapa ľahkému reťazcu (pre klony produkujúce ľudský kapa reťazec) alebo protilátkami proti ľudskému IgG (špecifický pre gama reťazec) (pre klony produkujúce kompletnú protilátku). Po premytí s PBST (slaný fosfátom tlmený roztok obsahujúci 0,05 % Tweenu 20) sa na jednu hodinu pri 37 °C pridalo do každej mikrotitračnej jamky zriedené kultivačné médium z jamiek obsahujúcich transfektanty. Jamky sa premyli s PBS-T a pridala sa kozia protilátka proti ľudskému kapa ľahkému reťazcu konjugovaná chrenovou peroxidázou alebo kozia anti-ľudská IgG (špecifická pre gama reťazec) konjugovaná alkalickou fosfatázou a jednu hodinu sa inkubovali pri 37 °C. Jamky sa premyli PBS-T a pridal sa substrátový pufor obsahujúci o-fenyléndiamín alebo p-nitrofenylfosfát. Po pol hodine sa merala absorbancia pri 492 alebo 405 nm.
Konštrukcie humanizovaných protilátok P3hu a ÍElOhu pomocou humanizácie epitopov T buniek. Predikcia epitopov T buniek
Sekvencie variabilných oblastí P3 a 1E10 sa analyzovali algoritmom AMPHI (Margalit a spol. (1987): Prediction of immunodominant helper T celí antigenic sites from the primary sequence, J. Immunol., 138: 2213 - 2229). Vyhľadávali sa špirálovité amfifilické segmenty so 7 alebo 11 zvyškami aminokyselín, ktoré boli spojené s T imunogenitou. Program SOHHA tiež predpovedal špirálovité hydrofóbne segmenty. (Elliot a spol. (1987): An hypothesis on the binding of an amphipathic, alpha helical sequence in Ii to the desotope of class II antigén, J. Immunol., 138: 2949 - 2952). Obidva programy predpovedajú, ktoré segmenty zo sekvencií variabilnej oblasti protilátky P3 a 1E10 by mohli byť prezentované T pomocným bunkám v kontexte molekúl MHC triedy II.
Analýza homológie s ľudskými imunoglobulínmi
Sekvencie aminokyselín myších variabilných oblastí sa porovnali so sekvenciami imunoglobulínov v databázach GeneBank a EMBL (prístupných po internete). Pre každú protilátku sa stanovili ľudské variabilné oblasti s najvyššou homológiou. Na vyhľadávanie homológie sekvencií sa použil softvér PC-TWO HIBIO PROSIS 06-00.
Analýza zníženia imunogenity
Cieľom spôsobuje zníženie imunogenity zmiernením alebo humanizáciou potenciálnych imunogenitných T epitopov s minimálnymi zmenami. Spôsob zahrnuje uvážlivé nahradenie niekoľkých málo zvyškov aminokyselín umiestnených v špirálovitých amfifilických segmentoch. Aminokyseliny, ktoré sú hlavne zodpovedné za kánonické štruktúry a tiež zvyšky v bezprostrednom susedstve so sekvenciami CDR alebo vo Vemierovej zóne, sa musia zachovať.
Sekvencie myšej variabilnej oblasti sa podľa tohto spôsobu porovnali s ľudskými sekvenciami s najvyššou homológiou a identifikovali sa rozličné zvyšky aminokyselín v každej pozícii medzi myšou MAb a ľudskou sekvenciou s najvyššou homológiou, pričom sa brali do úvahy len zvyšky vo FR (Kabat a spol. (1991), Sequences ofproteins of immunological interest, piate vydanie, National Inštitúte of Health) a predtým definované zvyšky sa nahradili tými zvyškami, ktoré sa nachádzajú v ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Náhrada sa uskutočňovala riadenými technikami mutagenézie.
Zvyšky zapojené do trojrozmernej štruktúry väzobného miesta sa nemutovali; mohli by ovplyvniť rozpoznanie antigénu. Ďalšie informácie o vplyve náhrad v terciámej štruktúre sa môžu získať molekulárnym modelovaním väzobného miesta antigénu.
Musí sa pamätať na prítomnosť zvyškov prolínu v špirálovitom amfifilickom segmente a na skutočnosť, že určité myšie zvyšky sa neobjavia v rovnakej pozícii v ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou, ale sú početné v ďalších ľudských imunoglobulínoch. Z tohto dôvodu neexistuje jedinečný súbor myších aminokyselín, ktorý by sa vymenil v systémoch. Je možné získať rozličné verzie modifikovanej protilátky s rozličným počtom náhrad. Mutácie sa uskutočňovali prekrývajúcimi sa reakciami PCR.
Klonovanie a expresia humanizovaných protilátok P3hu a ÍElOhu
Genetické konštrukcie zodpovedajúce P3hu a ÍElOhu sa klonovali expresnými vektormi spôsobom opísaným pre chimérické protilátky. Výsledné konštrukcie boli P3VKhu-PAG4622 alebo lE10VKhu-PAG4622 a P3VHhu-PAH4604 a lE10VHhu-PAH4604. Tieto konštrukcie sa transfektovali do buniek NS-O podľa skôr opísaného protokolu pre chimérické protilátky.
Čistenie rekombinantných protilátok
Rekombinantné protilátky sa čistili s použitím afinitnej chromatografie s proteínom A (Pharmacia, Upssala, Švédsko).
Biologická aktivita
Biologická aktivita rekombinantných protilátok sa testovala meraním špecifickej väzby na antigén pomocou ELISA.
Pre rekombinantné MAb P3 sa mikrotitračná platnička zmočila GM3(NeuGc) gangliozidom v metanole. Po jednohodinovom sušení sa nešpecifické väzby blokovali 1 % hovädzím sérovým albumínom (BSA) v Tris-HCl pufre inkubáciou počas jednej hodiny pri 37 °C. Jamky sa premyli PBS a jednu hodinu inkubovali pri 37 °C s vyčistenou rekombinantnou MAb P3. Jamky sa premyli Tris-HCl a pridala sa kozia antiľudská protilátka konjugovaná s alkalickou fosfatázou a jednu hodinu sa inkubovali pri 37 °C. Nakoniec sa jamky premyli a pridal sa substrátový pufor obsahujúci p-nitrofenylfosfát. Po pol hodine sa zmerali absorbancie pri 405 alebo 492 nm.
Pre rekombinantné MAbai 1E10 bola skúška ELISA podobná, s výnimkou, že sa jamky zmočili MAb P3 a premývanie sa uskutočňovalo v PBS s 0,05 % Tweenu 20.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1: VHP3 DNA a dedukované sekvencie aminokyselín. Sekvencie sú zoradené podľa Kabatovho číslovania (Kabat a spol. (1991): Sequences of proteins of immunological interest. piate vydanie, National Inštitúte of Health), príslušné sekvencie CDR sú vyznačené čiarami.
Obr. 2: VKP3 a dedukované sekvencie aminokyselín. Sekvencie sú zoradené podľa Kabatovho číslovania (Kabat a spol. (1991): Sequences of proteins of immunological interest, piate vydanie, National Inštitúte of Health), príslušné sekvencie CDR sú vyznačené čiarami.
Obr. 3: VHP3 sa pridali k ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Amfifílické segmenty sú podčiarknuté a sekvencie CDR sú zvýraznené tučné.
Obr. 4: VKP3 sa pridali k ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Amfifílické segmenty sú podčiarknuté a sekvencie CDR sú zvýraznené tučné.
Obr. 5: Špecifická väzba chimérickej MAb P3 k GM3(NeuGc). Rozličné koncentrácie MAb P3 a MAb Tl (negatívna kontrola) sa testovali pomocou ELISA. Mikrotitračné platničky sa zmočili s gangliozidmi GM3(NeuGc) a GM3(NeuAc) (negatívna kontrola) v metanole a merala sa špecifická väzba. (Značenie bodov: ♦ - GM3-P3, - chimérická GM3(NeuGc)-P3, ▲ - chimérická GM3(NeuGc)- Tl, · - chimérická GM3-Tl)
Obr. 6: VH1E10 DNA a dedukované sekvencie aminokyselín. Sekvencie sú zoradené podľa Kabatovho číslovania (Kabat a spol. (1991): Sequences of proteins of immunological interest, piate vydanie, National Inštitúte of Health), príslušné sekvencie CDR sú vyznačené čiarami.
Obr. 7: VK1E10 a dedukované sekvencie aminokyselín. Sekvencie sú zoradené podľa Kabatovho číslovania (Kabat a spol. (1991): Sequences ofproteins of immunological interest, piate vydanie, National Inštitúte of Health), príslušné sekvencie CDR sú vyznačené čiarami.
Obr. 8: VH1E10 sa pridali k ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Amfifílické segmenty sú podčiarknuté a sekvencie CDR sú zvýraznené tučné.
Obr. 9: VK1E10 sa pridali k ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Amfifílické segmenty sú podčiarknuté a sekvencie CDR sú zvýraznené tučné.
Obr. 10: Špecifická väzba myšej MAb P3 chimérickou MAb 1E10. Rozličné koncentrácie MAb 1E10 a MAb C5 (negatívna kontrola) sa testovali pomocou ELISA. Mikrotitračné platničky sa zmočili s MAb P3 a MAb A3 (negatívna kontrola) a merala sa špecifická väzba. (Značenie bodov: ♦ - chimérická MAb P3-1E10, - chimérická MAb A3-1E10, ▲ - chimérická MAb P3-C5, x - chimérická MAb A3-C5).
Príklady uskutočnenia vynálezu
V nasledujúcich príkladoch sa všetky použité enzýmy, ako aj reagencie a materiály získali z komerčných zdrojov, pokiaľ sa neuvádza niečo iné.
Príklad 1: Získanie chimérickej MAb P3
Syntéza cDNA sa uskutočnila reakciou s enzýmom reverznej transkriptázy, keď sa vychádzalo z RNA z hybridómu, ktorý produkuje MAb P3, ako sa opisuje skôr. Sekvencie špecifických primérov použitých v tejto reakcii boli:
Pre VH:
5' AGGTCTAGAA (CT) CTCCACACACAGG (AG) (AG) CCAGTGGATAGAC 3'
Pre VK:
5' GCGTCTAGAACTGGATGGTGGGAAGATGG 3' cDNA VHP3 a cDNA VKP3 sa amplifikovali pomocou PCR s použitím Taq polymerázy a špecifických primérov. Reštrikčné miesta zahrnuté v priméroch boli ECORV/NHEI pre VH a ECORV/SALI pre VK. Použité sekvencie primérov boli nasledujúce:
Pre VH:
Primér 1 (signálny peptid):
5' GGGGATATCCACCATGG (AG)ATG (CG) AGCTG (TG) GT (CA)AT (CG) CTCTT 3'
Primér 2 (CH1):
5' GGGGCTAGCTGCAGAGACAGTGACCAGAGT 3'
Pre VK:
Primér 1 (signálni peptid):
5' GGGGATATCCACCATGGAG(TA)CACA(GT)(TA)CTCAGGTCTTT(GA)T 3'
Primér 2 (Ck):
5’ AGCGTCGACTTACGTTT(TG)ATTTCCA(GA)CTT(GT)GTCCC 3'
PCR produkty sa klonovali do TA vektora (TA klonovacia súprava, Invitrogen). Dvanásť nezávislých klonov sa sekvenovalo dideoxy spôsobom s použitím T7 DNA Pol (Pharmacia). Analýzou vyhľadávania homológie sa stanovila sekvenčná skupina s najvyššou homológiou pre VHP3 a VKP3. Sekvencie VHP3 a VKP3 (obr. 1 a 2) majú vysokú homológiu so zodpovedajúcimi skupinami IB a V podľa Kabátovej klasifikácie.
Po digescii s reštrikčnými enzýmami ECORV a NHEI pre VHP3 a ECORV a SALI pre VKP3 sa klonovali v expresných vektoroch, ktoré sa predtým digestovali s rovnakými enzýmami, PAH4 604 pre VH a PAG4 622 pre VK. Tieto expresné vektory vhodné pre expresiu imunoglobulínov v bunkách cicavcov boli darom od Sherie Morrison (UCLA, Kalifornia, USA). Vektor PAH 4 604 zahrnoval ľudskú konštantnú oblasť IgGl a vektor PAG 4 622 ľudskú variabilnú oblasť (Coloma a spol. (1992): Novel vectors for the expression of antibody molecules using variable regions generated by polymerase chain reaktion, J. Immunol. Meth., 152: 89 - 104). Výsledné konštrukty boli P3VH-PAH4 604 a P3VK-PAG4 622.
Bunky NA-0 sa transfektovali s 10 pg P3VK-PAG4622, kloň exprimujúci ľahký reťazec sa transfektoval s 10 pg P3VH-PAH4 604, v obidvoch prípadoch sa DNA pred transfekciou linearizovala s Pvul, vyzrážala etanolom a rozpustila v 50 pL PBS.
Približne 107 buniek sa pozbieralo odstredením a resuspendovalo sa v 0,5 mL PBS spoločne s digestovanou DNA v kyvete pre elektroporáciu. Po uložení na desať minút na ľad boli bunky vystavené pulzu 200 V a 960 pF a ponechali sa v ľade ďalších desať minút. Bunky sa rozdelili do 96 jamiek platničky s D'MEM F12 plus s 10 % fetálnym teľacím sérom. Po dvoch alebo štyroch dňoch sa pridalo selektívne médium (D'MEM F12 s 0,45 pg/mL kyseliny mykofenolovej alebo 10 mM histidinolu). Transfektované klony boli viditeľné po 14 dňoch voľným okom.
Prítomnosť ľudskej protilátky v médiu jamiek obsahujúcich trasfektované klony sa merala pomocou ELISA. Jamky mikrotitračnej platničky sa zmočili kozími protilátkami proti ľudskému kapa ľahkému reťazcu (pre klony produkujúce ľudský kapa reťazec) alebo protilátkami proti ľudskému IgG (špecifický pre gama reťazec) (pre klony produkujúce kompletnú protilátku). Po premytí s PBST (slaný fosfátom tlmený roztok obsahujúci 0,05 % Tweenu 20) sa do každej mikrotitračnej jamky na jednu hodinu pri 37 °C pridalo zriedené kultivačné médium z jamiek obsahujúcich transfektanty. Jamky sa premyli PBST a pridala sa kozia protilátka proti ľudskému kapa ľahkému reťazcu konjugovaná chrenovou peroxidázou alebo kozí anti-ľudský IgG (špecifický pre gama reťazec) konjugovaný s alkalickou fosfatázou a jednu hodinu sa inkubovali pri laboratórnej teplote. Jamky sa premyli PBS-T a pridal sa substrátový pufor obsahujúci o-fenyléndiamín alebo p-nitrofenylfosfát. Po pol hodine sa merala absorbancia pri 492 alebo 405 nm.
Príklad 2: Získanie rozličných verzií humanizovanej protilátky P3
Sekvencie myších VHP3 a VKP3 (obr. 1 a 2) sa porovnali s ľudskými sekvenciami. Na obr. 3 a 4 sú ukázané ľudské sekvencie s najvyššou homológiou. Špirálovité amfifilické oblasti alebo potenciálne T bunkové epitopy sa vyhľadávali v sekvenciách myšej P3 variabilnej oblasti a v zhode so spôsobom uvážlivej stratégie sa stanovili náhrady aminokyselín, aby sa narušili alebo humanizovali potenciálne T bunkové epitopy v myších sekvenciách.
Analýza VHP3 poskytla (obr. 3) dva amfifilické segmenty, prvý zahrnoval CDR1, FR2 a niekoľko zvyškov CDR2, druhý zahrnoval koniec FR3 a CDR3. Hlavné rozdiely myších sekvencii pri porovnaní s ľudskými sekvenciami s najvyššou homológiou boli nájdené v sekvenciách CDR alebo vo zvyškoch zapojených do trojrozmernej štruktúry väzobného miesta. Z tohto dôvodu bolo rozhodnuté nenahradzovať žiadnu aminokyselinu v myšom VHP3.
Analýza VKP3 poskytla tiež dva amfifilické segmenty (obr. 4), prvý zahrnoval FR1, druhý zahrnoval CDR2 a niekoľko zvyškov FR3. Bolo rozhodnuté nahradiť zvyšky v pozíciách 8, 9, 10, 11a 13 za zvyšky v rovnakých pozíciách v ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Aminokyseliny His, Lys, Phe, Met a Thr sa nahradili Pro, Ser, Ser, Leu a Ala. Nahradenie sa uskutočnilo prekrývajúcou sa PCR (Kammann a spol. (1989): Rapid insertional mutagenesis of DNA by polymerase chain reaction (PCR), Nucleic Acids Res., 17: 5404) s použitím primérov 1,2, 3, 4, sekvencie ktorých sú nasledujúce:
Primér 1:
5' ATGACCCAGTCTCCTTCTTCTCTTTCCGCGTCAGTAGGAGAC 3'
Primér 2:
5' AGCGTCGACTTACGTTT(TG)ATTTCCA(GA)CTT(GT)GTCCC 3'
Primér 3:
5' GTCTCCTACTGACGCGGAAAGAGAAGAAGGAGACTGGGTCAT 3'
Primér 4:
5'GGGGATATCCACCATGGAG(TA)CACA(GT)(TA)CTCAGGTCTTT(GA)T3'
Body mutácie sa verifikovali sekvenovaním. Výsledný konstrukt bol P3VK.hu a klonoval sa do expresného vektora PAG 4662. Výsledný konštrukt bol P3VKhu-PAG4 622. Pre expresiu humanizovanej protilátky P3 sa bunky NS-0 transfektovali s P3VH-PAH4 604 a P3VKhu-PAG4622.
Protilátka P3hu sa transfektovala podľa rovnakého postupu elektroporácie a detekcie, ako sa opisuje pre chimérické protilátky.
Príklad 3: Biologická aktivita chimérickej MAb P3
Biologická aktivita chimérickej MAb P3 sa testovala meraním špecifickej väzby na antigén pomocou ELISA.
Pre rekombinantnú MAb P3 sa mikrotitračnú platnička zmočila gangliozidom GM3(NeuGc) v metanole. Po jednohodinovom sušení pri 37 °C sa nešpecifické väzby blokovali 1 % hovädzím sérovým albumínom (BSA) v Tris-HCl pufŕe inkubáciou počas jednej hodiny pri 37 °C. Jamky sa premyli PBS a jednu hodinu inkubovali pri 37 °C s vyčistenou rekombinantnou MAb P3. Jamky sa premyli Tris-HCl a pridala sa kozia antiľudská protilátka konjugovaná s alkalickou fosfatázou a jednu hodinu sa inkubovali pri 37 °C. Nakoniec sa jamky premyli s Tris-HCl a pridal sa substrátový pufor obsahujúci p-nitrofenylfosfát. Po pol hodine sa zmerala absorbancia pri 405 nm.
Ako negatívna kontrola sa použila chimérická MAb TI. Špecifickú väzbu chimérickej MAb P3 na antigén ukazuje obr. 5.
Príklad 4: Získanie chimérickej MAb 1E10
Syntéza cDNA sa uskutočnila reakciou s enzýmom reverznej transkriptázy, keď sa vychádzalo z RNA z hybridómu, ktorý produkuje MAb 1E10, ako sa opisuje. Sekvencie špecifických primérov použitých v tejto reakcii boli:
Pre VH:
5' GGGGCTAGCTGAGGAGACTGTGAGAGTGGT 3'
Pre VK:
5' GCGTCTAGAACTGGATGGTGGGAAGATGGA 3' cDNA VH1E10 a cDNA VK1E10 sa amplifikovali pomocou PCR s použitím Taq Pol a špecifických primérov.
Pre VH:
Primér 1 (signálny peptid):
5' GGGGATATCCACCATGG(AG)ATG(CG)AGCTG(TG)GT(CA)AT(CG)CTCTT 3’
Primér 2 (CH 1):
5' GGGGCTAGCTGAGGAGACTGTGAGAGTGGT 3’
Pre VK:
Primér 1 (signálny peptid):
5’ GGGGTTAACCACCATGAGG(GT)CCCC(AT)GCTCAG(CT)T(CT)CT(TG)GG(GA) 3'
Primér 2 (Ck):
5' AGCGTCGACTTACGTTT(TG)ATTTCCA(GA)CTT(GT)GTCCC 3'
PCR produkty sa klonovali do TA vektora (TA klonovacia súprava, Invitrogen). Dvanásť nezávislých klonov sa sekvenovalo (obr. 7 a 8) dideoxy spôsobom s použitím T7 DNA Pol (Pharmacia). Analýzou vyhľadávania homológie sa stanovila sekvenčná skupina s najvyššou homológiou pre VH1E10 a VK1E10. Sekvencie VH1E10 a VK1E10 majú vysokú homológiu so zodpovedajúcimi rôznorodými skupinami a V podľa Kabátovej klasifikácie.
Po digescii s reštrikčnými enzýmami ECORV a NHEI pre VH1E10 a s HincII a SALI pre VK1E10 sa klonovali v expresných vektoroch po predchádzajúcej digescii s rovnakými enzýmami, PAH4 604 pre VH a PAG4 622 pre VK. Tieto expresné vektory vhodné pre expresiu imunoglobulínov v cicavčích bunkách boli darom od Sherie Morrison (UCLA, Kalifornia, USA). Vektor PAH 4604 zahrnoval ľudskú konštantnú oblasť IgGl a PAG 4622 ľudskú variabilnú oblasť (Coloma a spol. (1992): Novel vectors for the expression of antibody molecules using variable regions generated by polymerase chain reaktion, J. Immunol. Meth., 152: 89 - 104). Výsledné konštrukty boli 1E10VH-PAH4604 a 1E10VK-PAG4622.
Bunky NA-0 sa transfektovali s 10 pg 1E10VK-PAG4622, kloň exprimujúci ľahký reťazec sa transfektoval s 10 pg 1E10VH-PAH4604, v obidvoch prípadoch sa DNA pred transfekciou linearizovala s Pvul, vyzrážala etanolom a rozpustila v 50 pL PBS.
Približne 107 buniek sa pozbieralo odstredením a resuspendovalo sa v 0,5 mL PBS spoločne s digestovanou DNA v kyvete pre elektroporáciu. Po uložení na desať minút na ľad sa bunky vystavili pulzu 200 V a 960 pF a ponechali sa v ľade ďalších desať minút. Bunky sa rozdelili do 96 jamiek platničky s D'MEM F12 plus s 10 % fetálnym teľacím sérom. Po dvoch alebo štyroch dňoch sa pridalo selektívne médium (D'MEM F12 s 0,45 pg/mL kyseliny mykofenolovej alebo 10 mM histidinolu). Transfe kto vane klony boli viditeľné po 14 dňoch voľným okom.
Prítomnosť ľudskej protilátky v médiu jamiek obsahujúcich trasfektované klony sa merala pomocou ELISA. Jamky mikrotitračnej platničky sa zmočili kozími protilátkami proti ľudskému kapa ľahkému reťazcu (pre klony produkujúce ľudský kapa reťazec) alebo protilátkami proti ľudskému IgG (špecifický pre gama reťazec) (pre klony produkujúce kompletnú protilátku). Po premytí s PBST (slaný fosfátom tlmený roztok obsahujúci 0,05 % Tweenu 20) sa na jednu hodinu pri 37 °C do každé jamky mikrotitračnej platničky pridalo zriedené kultivačné médium jamiek obsahujúcich transfektanty. Jamky sa premyli PBST a pridala sa kozia protilátka proti ľudskému kapa ľahkému reťazcu konjugovaná chrenovou peroxidázou alebo kozí anti-ľudský IgG (špecifický pre gama reťazec) konjugovaný s alkalickou fosfatázou a jednu hodinu sa inkubovali pri laboratórnej teplote. Jamky sa premyli PBS-T a pridal sa substrátový pufor obsahujúci o-fenyléndiamín alebo p-nitrofenylfosfát. Po pol hodine sa merala absorbancia pri 492 alebo 405 nm.
Príklad 5: Získanie rozličných verzií humanizovanej protilátky 1 El0
Sekvencie myších VH1E10 a VK.1E10 (obr. 6 a 7) sa porovnali s ľudskými sekvenciami. Ľudské sekvencie s najvyššou homológiou ukazujú obr. 8 a 9. Špirálovité amfifilické oblasti alebo potenciálne T bunkové epitopy sa vyhľadávali v sekvenciách myšej 1E10 variabilnej oblasti a v zhode so spôsobom uvážlivej stratégie sa stanovili náhrady aminokyselín, aby sa narušili alebo humanizovali potenciálne T bunkové epitopy v myších sekvenciách.
Analýza VH1E10 poskytla (obr. 8) tri amfifilické segmenty, prvý zahrnoval FR1, druhý zahrnoval FR2 a tretí zahrnoval FR3. Bolo rozhodnuté nahradiť zvyšky v pozíciách 5, 40, 42 a 87 (83 podľa Kabatovho číslovania) zvyškami v rovnakých pozíciách v ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Aminokyseliny Gin, Arg, Glu a Thr sa nahradili Val, Ala, Gly a Arg. Nahradenie sa uskutočnilo prekrývajúcou sa PCR (Kammann a spol. (1989): Rapid insertional mutagenesis of DNA by polymerase chain reaction (PCR), Nucleic Acids Res., 17: 5404) s použitím rozličných súprav primérov.
Priméry pre mutáciu v pozícii 5 ťažkého reťazca boli 1, 2, 3 a 4, sekvencie ktorých sú nasledujúce:
Primér 1:
5' CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCT 3'
Primér 2:
5' GGGGCTAGCTGAGGAGACTGTGAGAGTGGT 3'
Primér 3:
5' AGCTCCAGACTGCACCAGCTGAACCTG 3'
Primér 4:
5' GGGGATATCCACCATGG(AG)ATG(CG)AGCTG(TG)GT(CA)AT(CG)CTCTT 3’
Po overení pomocou sekvencie bodu mutácie v pozícii 5 sa zaviedli mutácie v pozíciách 40 a 42.
Primér pre mutácie v pozíciách 40 a 42 ťažkého reťazca:
Primér 1:
5' TGGGTGAGGCAGGCGCCTGGGCAGGGACTTGAG 3'
Primér 2:
5' GGGGCTAGCTGAGGAGACTGTGAGAGTGGT 3'
Primér 3:
5' CTCAAGTCCCTGCCCAGGCGCCTGCCTCACCCA 3'
Primér 4:
5' GGGGATATCCACCATGG(AG)ATG(CG)AGCTG(TG)GT(CA)AT(CG)CTCTT 3'
Po overení pomocou sekvencie bodu mutácie v pozíciách 40 a 42 sa zaviedla mutácia v pozícii 87 (83 podľa Kabatovho číslovania).
Primér pre mutácie v pozícii 87 (83 podľa Kabatovho číslovania) ťažkého reťazca:
Primér 1:
5' CTCAGCAGGCTGCGGTCTGAGGACTCT 3'
Primér 2:
5' GGGGCTAGCTGAGGAGACTGTGAGAGTGGT 3'
Primér 3:
5' AGAGTCCTCAGACCGCAGCCTGCTGAG 3'
Primér 4:
5' GGGGATATCCACCATGG(AG)ATG(CG)AGCTG(TG)GT(CA)AT(CG)CTCTT 3'
Ďalšie náhrady sa neuskutočnili, pretože zvyšky boli zapojené do trojrozmernej štruktúry väzobného miesta.
Body mutácie sa verifikovali sekvenovaním. Výsledný konštrukt bol lElOVHhu a klonoval sa v PAH4604 expresnom vektore. Výsledný konštrukt bol 1E10VH-PAH4604.
Analýza pre VK1E10 poskytla tiež tri amfifilické segmenty (obr. 9), prvý zahrnoval FR1, druhý zahrnoval CDR1 a tretí zahrnoval FR3. Bolo rozhodnuté nahradiť zvyšky v pozíciách 7, 8 a 15 zvyškami v rovnakých pozíciách v ľudskej sekvencii s najvyššou homológiou. Aminokyseliny Thr, Thr a Leu sa nahradili aminokyselinami Ser, Pro a Val. Nahradenie sa uskutočnilo prekrývajúcou sa PCR (Kammann a spol. (1989): Rapid insertional mutagenesis of DNA by polymerase chain reaction (PCR), Nucleic Acids Res., 17: 5404) s použitím primérov 1, 2, 3 a 4, ktorých sekvencie sú nasledujúce:
Priméry pre mutáciu v pozíciách 7, 8 a 15 ľahkého reťazca:
Primér 1:
5' CAGATGACACAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCCTCTGTGGGAGACAGAGTC 3 '
Primér 2:
5’ AGCGTCGACTTACGTTT(TG)ATTTCCA(GA)CTT(GT)GTCCC 3'
Primér 3:
5' GACTCTGTCTCCCACAGAGGCAGACAGGGAGGAAGGAGACTGTGTCATCTG 3 '
Primér 4:
5'GGGGTTAACCACCATGAGG(GT)CCCC(AT)GCTCAG(CT)T(CT)CT(TG)GG(GA) 3'
Body mutácií sa overili sekvenovaním. Výsledný konštrukt bol lElOVKhu a klonoval sa v expresnom vektore PAG 4622. Výsledný konštrukt bol lE10VKhu-PAG4 662.
Pre expresiu humanizovanej protilátky 1E10 sa bunky NS-0 transfektovali lE10VHhu-PAH4 604 a lE10VKhu-PAG4 662.
Protilátka lElOhu sa transfektovala rovnakým postupom elektroporácie a detekcie, ako sa opísalo pre chimérické protilátky.
Príklad 6: Biologická aktivita chimérickej MAb 1E10
Biologická aktivita chimérickej MAb 1E10 sa testovala meraním špecifickej väzby na antigén pomocou ELISA.
Pre rekombinantná MAb 1E10 sa mikrotitračná platnička zmočila MAb P3. Po premytí s PBST (roztok soľného fosfátového pufra obsahujúci 0,05 % Tweenu 20) sa nešpecifické väzby blokovali 1 % hovädzím sérovým albumínom (BSA) v PBST inkubáciou počas jednej hodiny pri 37 °C. Jamky sa premyli a jednu hodinu inkubovali pri 37 °C s vyčistenou rekombinantnou MAb 1E10. Jamky sa premyli PBST a pridala sa antiľudská kozia protilátka konjugovaná s alkalickou fosfatázou a jednu hodinu sa inkubovali pri 37 °C. Nakoniec sa jamky premyli PBST a pridal sa substrátový pufor obsahujúci /?-nitrofenylfosfát. Po pol hodine sa zmerali zodpovedajúce absorbancie pri 405 nm.
Ako negatívna kontrola sa použila chimérická MAb C5. Špecifickú väzbu chimérickej MAb 1E10 na MAb P3 ukazuje obr. 10.
Claims (1)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Chimérická monoklonálna protilátka odvodená z myšej anti-idiotypovej monoklonálnej protilátky 1E10, ktorá rozpoznáva myší MAb P3 a ktorá je produkovaná hybridomálnou bunkovou líniou s depozitným číslom EC ACC 97112901, kde konštantná oblasť ťažkého reťazca obsahuje sekvenciu aminokyselín gama-1 reťazca a konštantná oblasť ľahkého reťazca obsahuje sekvenciu aminokyselín kapa reťazca, pričom obidve sú odvodené z ľudských imunoglobulínov, hypervariabilné domény ich ťažkých a ľahkých reťazcov obsahujú nasledujúce sekvencie:
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CU2001008420010084A CU23007A1 (es) | 2001-04-06 | 2001-04-06 | Combinaciones inmunoterapéuticas para el tratamiencombinaciones inmunoterapéuticas para el tratamiento de tumores que sobre-expresan gangliósidos to de tumores que sobre-expresan gangliósidos |
PCT/CU2002/000003 WO2002081496A2 (es) | 2001-04-06 | 2002-04-08 | Anticuerpos recombinantes asociados a gangliósidos. su uso en el diagnóstico y tratamiento de tumores |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK12262003A3 SK12262003A3 (sk) | 2004-08-03 |
SK287914B6 true SK287914B6 (sk) | 2012-03-02 |
Family
ID=40291118
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK1216-2003A SK287783B6 (sk) | 2001-04-06 | 2002-04-08 | Imunoterapeutická kombinácia na imunoterapiu nádorov, ktoré nadmerne exprimujú gangliozidy, a jej použitie |
SK1226-2003A SK287914B6 (sk) | 2001-04-06 | 2002-04-08 | Chimeric monoclonal antibody and its use in the preparation of medicament for the treatment of malignant tumors, cell line and pharmaceutical composition |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK1216-2003A SK287783B6 (sk) | 2001-04-06 | 2002-04-08 | Imunoterapeutická kombinácia na imunoterapiu nádorov, ktoré nadmerne exprimujú gangliozidy, a jej použitie |
Country Status (37)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20050069535A1 (sk) |
EP (3) | EP1384726B1 (sk) |
JP (2) | JP4366080B2 (sk) |
KR (3) | KR100863509B1 (sk) |
CN (3) | CN101054417B (sk) |
AR (2) | AR033123A1 (sk) |
AT (3) | ATE477279T1 (sk) |
AU (3) | AU2002308348B2 (sk) |
BG (2) | BG66293B1 (sk) |
BR (3) | BR0208676B1 (sk) |
CA (2) | CA2443372C (sk) |
CU (1) | CU23007A1 (sk) |
CZ (2) | CZ296276B6 (sk) |
DE (2) | DE60223547T2 (sk) |
DK (2) | DK1384726T3 (sk) |
EA (2) | EA006936B1 (sk) |
EC (2) | ECSP034788A (sk) |
ES (2) | ES2296986T3 (sk) |
HK (3) | HK1066818A1 (sk) |
HR (2) | HRP20030806B1 (sk) |
HU (2) | HU228106B1 (sk) |
IL (2) | IL158246A0 (sk) |
IS (2) | IS6965A (sk) |
MX (2) | MXPA03008739A (sk) |
MY (3) | MY145703A (sk) |
NO (2) | NO20034437L (sk) |
NZ (2) | NZ528598A (sk) |
PE (1) | PE20020972A1 (sk) |
PL (2) | PL208109B1 (sk) |
PT (2) | PT1384726E (sk) |
SG (1) | SG161737A1 (sk) |
SI (2) | SI1411064T1 (sk) |
SK (2) | SK287783B6 (sk) |
UA (3) | UA75393C2 (sk) |
UY (2) | UY27242A1 (sk) |
WO (2) | WO2002081496A2 (sk) |
ZA (2) | ZA200307585B (sk) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7297336B2 (en) * | 2003-09-12 | 2007-11-20 | Baxter International Inc. | Factor IXa specific antibodies displaying factor VIIIa like activity |
CN101111260B (zh) * | 2005-02-04 | 2013-03-20 | 萨瓦克公司 | 存活蛋白肽疫苗 |
FI20055398A0 (fi) | 2005-07-08 | 2005-07-08 | Suomen Punainen Risti Veripalv | Menetelmä solupopulaatioiden evaluoimiseksi |
EP2594591B1 (en) * | 2005-08-11 | 2018-06-06 | Arpi Matossian-Rogers | Tcr-v-beta related peptides for treatment and diagnosis of autoimmune disease |
JP5415071B2 (ja) * | 2005-08-19 | 2014-02-12 | ワイス・エルエルシー | Gdf−8に対するアンタゴニスト抗体ならびにalsおよびその他のgdf−8関連障害の処置における使用 |
ITFI20060163A1 (it) * | 2006-06-29 | 2006-09-28 | Menarini Internat Operations Luxembourg Sa | Composizione farmaceutica contenente un anticorpo monoclonale anti idiotipico anti-ca-125 ed alluminio |
TWI434855B (zh) | 2006-11-21 | 2014-04-21 | Hoffmann La Roche | 結合物及其在免疫分析中作為參考標準之用途 |
WO2009104649A1 (ja) * | 2008-02-22 | 2009-08-27 | 片山化学工業株式会社 | 合成糖脂質含有リポソーム |
EP2166085A1 (en) | 2008-07-16 | 2010-03-24 | Suomen Punainen Risti Veripalvelu | Divalent modified cells |
TWI516501B (zh) | 2008-09-12 | 2016-01-11 | 禮納特神經系統科學公司 | Pcsk9拮抗劑類 |
NZ594985A (en) * | 2009-03-10 | 2013-07-26 | Biogen Idec Inc | Anti-bcma (b-cell maturation antigen, cd269, tnfrsf17) antibodies |
SG174992A1 (en) | 2009-04-01 | 2011-11-28 | Genentech Inc | Anti-fcrh5 antibodies and immunoconjugates and methods of use |
CU23736A1 (es) * | 2009-05-04 | 2011-11-15 | Centro Inmunologia Molecular | Anticuerpos que reconocen sulfatidos y proteoglicanos sulfatados y su uso |
WO2011026242A1 (en) * | 2009-09-03 | 2011-03-10 | Vancouver Biotech Ltd. | Monoclonal antibodies against gonadotropin-releasing hormone receptor |
WO2012096994A2 (en) * | 2011-01-10 | 2012-07-19 | Emory University | Antibodies directed against influenza |
CU24070B1 (es) * | 2011-12-27 | 2015-01-29 | Ct De Inmunología Molecular | Composiciones farmacéuticas para el tratamiento de tumores que expresan regf y gangliósidos n-glicolilados gm3 (neugcgm3) |
EP2641916A1 (en) * | 2012-03-23 | 2013-09-25 | Centre National de la Recherche Scientifique (C.N.R.S) | Novel antibodies anti-sPLA2-IIA and uses thereof |
MY177331A (en) | 2012-06-15 | 2020-09-12 | Pfizer | Improved antagonist antibodies against gdf-8 and uses therefor |
AR096687A1 (es) | 2013-06-24 | 2016-01-27 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-fcrh5 |
UA120753C2 (uk) | 2013-12-17 | 2020-02-10 | Дженентек, Інк. | Біспецифічне антитіло до сd3 та cd20 |
JP2017512759A (ja) * | 2014-04-10 | 2017-05-25 | オービーアイ ファーマ インコーポレイテッド | 抗体、前記抗体を産生するハイブリドーマ、前記抗体を含む薬学的組成物及びその用途 |
TWI715587B (zh) | 2015-05-28 | 2021-01-11 | 美商安可美德藥物股份有限公司 | Tigit結合劑和彼之用途 |
CA2986928A1 (en) | 2015-06-16 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Humanized and affinity matured antibodies to fcrh5 and methods of use |
WO2018017864A2 (en) * | 2016-07-20 | 2018-01-25 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Pvrig-binding agents and uses thereof |
CA3044664C (en) | 2016-11-30 | 2022-11-22 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treatment of cancer comprising tigit-binding agents |
CU20170173A7 (es) * | 2017-12-27 | 2019-11-04 | Ct Inmunologia Molecular | Nano-partículas que contienen el gangliósido gm3 como inmunomoduladoras |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2754206B2 (ja) * | 1987-11-17 | 1998-05-20 | メクト株式会社 | α2→3結合を認識するモノクローナル抗体 |
US6051225A (en) * | 1988-10-19 | 2000-04-18 | The Dow Chemical Company | Family of high affinity, modified antibodies for cancer treatment |
EP0586002B1 (en) * | 1992-08-18 | 2000-01-19 | CENTRO de IMMUNOLOGIA MOLECULAR | Monoclonal antibodies recognizing the epidermal growth factor receptor, cells and methods for their production and compositions containing them |
JPH07101999A (ja) * | 1993-10-06 | 1995-04-18 | Hagiwara Yoshihide | 抗癌ヒトモノクローナル抗体に対する抗イデイオタイプ抗体のアミノ酸配列およびそれをコードするdna塩基配列 |
US6063379A (en) * | 1993-12-09 | 2000-05-16 | Centro De Inmunologia Molecular | Anti-idiotypic monoclonal antibodies and compositions including the anti-idiotypic monoclonal antibodies |
CU22702A1 (es) * | 1997-10-21 | 2001-07-31 | Centro Inmunologia Molecular | Anticuerpos monoclonales anti - idiotipo, su uso en la inmunoterapia activa de tumores malignos, hibridoma que los produce y composiciones que los contienen |
EP0657471B1 (en) * | 1993-12-09 | 2001-10-24 | Centro de Inmunologia Molecular | Anti ganglioside monoclonal antibodies and their use in the specific active immunotherapy of malignant tumours |
CU22420A1 (es) * | 1993-12-29 | 1996-01-31 | Centro Inmunologia Molecular | Composicion vacunal para el desarrollo de una respuesta contra gangliosidos n glicolilados y su uso para el tratamiento del cancer |
US6149921A (en) * | 1993-12-29 | 2000-11-21 | Centro De Inmunologia Molecular | Vaccine compositions for eliciting an immune response against N-acetylated gangliosides and their use for cancer treatment |
CU22615A1 (es) * | 1994-06-30 | 2000-02-10 | Centro Inmunologia Molecular | Procedimiento de obtención de anticuerpos monoclonales murinos menos inmunogénicos. anticuerpos monoclonales obtenidos |
CU22731A1 (es) * | 1998-02-05 | 2002-02-28 | Centro Inmunologia Molecular | Anticuerpo monoclonal que reconoce el oligosacárido ácido siálico n´glicolilado-galactosa-glucosa (ngcneu-gal-glu) en tumores malignos y composiciones farmacéuticas que los contienen |
US7442776B2 (en) * | 1999-10-08 | 2008-10-28 | Young David S F | Cancerous disease modifying antibodies |
-
2001
- 2001-04-06 CU CU2001008420010084A patent/CU23007A1/es unknown
-
2002
- 2002-04-05 MY MYPI20081190A patent/MY145703A/en unknown
- 2002-04-05 UY UY27242A patent/UY27242A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-04-05 MY MYPI20021239A patent/MY157372A/en unknown
- 2002-04-05 AR ARP020101264A patent/AR033123A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-04-05 AR ARP020101263A patent/AR033122A1/es unknown
- 2002-04-05 UY UY27243A patent/UY27243A1/es unknown
- 2002-04-05 MY MYPI20021228A patent/MY137078A/en unknown
- 2002-04-08 HU HU0401355A patent/HU228106B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 MX MXPA03008739A patent/MXPA03008739A/es active IP Right Grant
- 2002-04-08 JP JP2002580025A patent/JP4366080B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-08 BR BRPI0208676A patent/BR0208676B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 ES ES02759752T patent/ES2296986T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-08 SK SK1216-2003A patent/SK287783B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 AT AT06076643T patent/ATE477279T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 PL PL371937A patent/PL208109B1/pl unknown
- 2002-04-08 KR KR1020037012938A patent/KR100863509B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 PT PT02759751T patent/PT1384726E/pt unknown
- 2002-04-08 NZ NZ528598A patent/NZ528598A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 SG SG200506530-5A patent/SG161737A1/en unknown
- 2002-04-08 HU HU0401695A patent/HU228105B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 PL PL02371770A patent/PL371770A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-04-08 CA CA2443372A patent/CA2443372C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-08 SI SI200230660T patent/SI1411064T1/sl unknown
- 2002-04-08 CZ CZ20032641A patent/CZ296276B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 CZ CZ2003-2668A patent/CZ304424B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 EP EP02759751A patent/EP1384726B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-08 JP JP2002579482A patent/JP2004528033A/ja active Pending
- 2002-04-08 AU AU2002308348A patent/AU2002308348B2/en not_active Ceased
- 2002-04-08 DK DK02759751T patent/DK1384726T3/da active
- 2002-04-08 US US10/473,978 patent/US20050069535A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-08 DE DE60223547T patent/DE60223547T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-08 KR KR1020037012969A patent/KR100946168B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 EP EP06076643A patent/EP1798243B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-08 AT AT02759751T patent/ATE406386T1/de active
- 2002-04-08 WO PCT/CU2002/000003 patent/WO2002081496A2/es active Application Filing
- 2002-04-08 DK DK02759752T patent/DK1411064T3/da active
- 2002-04-08 CN CN2007101021039A patent/CN101054417B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-08 DE DE60228561T patent/DE60228561D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-08 IL IL15824602A patent/IL158246A0/xx unknown
- 2002-04-08 AT AT02759752T patent/ATE378356T1/de active
- 2002-04-08 WO PCT/CU2002/000002 patent/WO2002081661A2/es active IP Right Grant
- 2002-04-08 PE PE2002000283A patent/PE20020972A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-04-08 ES ES02759751T patent/ES2312610T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-08 EP EP02759752A patent/EP1411064B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-08 CA CA2441845A patent/CA2441845C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-08 PT PT02759752T patent/PT1411064E/pt unknown
- 2002-04-08 SI SI200230766T patent/SI1384726T1/sl unknown
- 2002-04-08 BR BR0208675-1A patent/BR0208675A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 US US10/473,977 patent/US20040253233A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-08 NZ NZ528599A patent/NZ528599A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 CN CNB028086309A patent/CN100349920C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-08 CN CNB028084330A patent/CN1319991C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-08 EA EA200301097A patent/EA006936B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 MX MXPA03008738A patent/MXPA03008738A/es not_active Application Discontinuation
- 2002-04-08 EA EA200301098A patent/EA006310B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 AU AU2002308347A patent/AU2002308347B2/en not_active Ceased
- 2002-04-08 SK SK1226-2003A patent/SK287914B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2002-04-08 BR BRPI0208675-1A patent/BRPI0208675B1/pt unknown
- 2002-08-04 UA UA2003108989A patent/UA75393C2/uk unknown
- 2002-08-04 UA UA2003108988A patent/UA76745C2/uk unknown
-
2003
- 2003-09-23 IS IS6965A patent/IS6965A/is unknown
- 2003-09-23 IS IS6964A patent/IS2701B/is unknown
- 2003-09-29 ZA ZA200307585A patent/ZA200307585B/en unknown
- 2003-09-30 EC EC2003004788A patent/ECSP034788A/es unknown
- 2003-09-30 EC EC2003004787A patent/ECSP034787A/es unknown
- 2003-10-01 ZA ZA2003/07679A patent/ZA200307679B/en unknown
- 2003-10-02 IL IL158246A patent/IL158246A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-10-03 NO NO20034437A patent/NO20034437L/no not_active Application Discontinuation
- 2003-10-03 BG BG108227A patent/BG66293B1/en unknown
- 2003-10-03 NO NO20034436A patent/NO331533B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-10-03 BG BG108228A patent/BG66304B1/bg unknown
- 2003-10-06 HR HR20030806A patent/HRP20030806B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2003-10-06 HR HR20030805A patent/HRP20030805B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-12-14 HK HK04109894A patent/HK1066818A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-04-01 HK HK05102752A patent/HK1070080A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2005-12-20 UA UAA200512270A patent/UA86768C2/ru unknown
-
2007
- 2007-10-26 AU AU2007231687A patent/AU2007231687B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-12-31 HK HK07114311.6A patent/HK1109160A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-08-07 KR KR1020087019420A patent/KR100919617B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-03-19 US US12/407,046 patent/US8758753B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2007231687B2 (en) | Ganglioside-associated recombinant antibodies and the use thereof in the diagnosis and treatment of tumors | |
EP1623997B1 (en) | Recombinant antibodies and fragments recognising ganglioside n-glycolyl-gm3 and use thereof in the diagnosis and treatment of tumours | |
JP5631733B2 (ja) | 抗EpCAM抗体およびその使用 | |
JP4796682B2 (ja) | 抗ガングリオシド抗体を産生するヒトのbリンパ芽腫細胞系 | |
NZ516264A (en) | Cancer antigens CA125 (multiple epitote) recognised by OC125, M11, B43.13, B27.1, where B43.13 is used as a binding agent to elicit host immune response as a vaccination method against cancer | |
CN114929733A (zh) | 调节性t细胞表面抗原的表位和与其特异性结合的抗体 | |
TW201906869A (zh) | 抗globo h之人類化抗體及其於治療癌症之用途 | |
US20220185911A1 (en) | Therapeutic antibodies for treating lung cancer | |
JP2001520034A (ja) | 抗イディオタイプモノクローナル抗体、悪性腫瘍の能動免疫療法におけるそれらの使用、およびそれらを含有する組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20120120 |