CN114929733A - 调节性t细胞表面抗原的表位和与其特异性结合的抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及存在于调节性T细胞表面的抗原Lrig‑1(富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1)的表位，以及特异性结合该表位的抗体或抗原结合片段。

Description

调节性T细胞表面抗原的表位和与其特异性结合的抗体
技术领域
本发明涉及一种存在于调节性T细胞表面的抗原Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白的表位，以及与其特异性结合的抗体或抗原结合片段。
背景技术
每个正常个体的免疫系统最显着的特性之一是其识别和消除非自身抗原的同时不对自身抗原物质产生有害反应的能力。这种对自身抗原的不反应称为免疫不反应或耐受。通过消除可能具有自身抗原特异性受体的淋巴细胞或通过在与自身抗原接触后使自身反应性淋巴细胞失活时，发生自身耐受。诱导或维持自身耐受的异常会导致针对自身抗原的免疫反应，这可能导致所谓的自身免疫性疾病。
对于自身免疫性疾病的治疗，Gershon在20世纪70年代初首次提出了抑制T细胞的概念，即可能存在能够控制和抑制常规T细胞的效应功能的T细胞(R.K.Gershon和K.Kondo，免疫学，1970，18：723-37)。从那时起，在免疫学许多领域开展了阐明调节性T细胞的生物学特性和功能的研究。
因此，调节性T细胞(Treg)在天然防止过度炎症和免疫反应的发生中发挥着重要作用，但有报道称，当自身免疫性疾病和慢性炎症性疾病发生时，调节性T细胞的功能和数量显著减少。因此，对于患有免疫疾病和炎症性疾病的患者，产生正常水平的调节性T细胞格外重要，这可能是治疗这些疾病的方法之一。
迄今为止，已经对调节性T细胞中特异性存在的基因和蛋白质进行了研究，提示诸如CD25、CTLA4、CD62L、CD38、CD103、GITR和CD45RB等物质可能对应于标记物质。然而，可以单独靶向调节性T细胞的基因或蛋白质尚未有报道。
同时，抗体的可变结构域包括三个高变区，称为互补决定区(下文称为“CDR”)和四个框架区。CDR主要用于结合抗原的抗原决定簇(表位)。每条链的CDR通常称为CDR1、CDR2和CDR3，从N端开始按顺序编号，并且通常也由特定CDR所在的链标识。
发明内容
技术问题
本发明的一个目的是提供存在于调节性T细胞(Treg细胞)表面上的Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白的表位。
本发明的另一个目的是提供能够特异性结合所述表位的抗体或抗原结合片段。
本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其含有能够特异性结合所述表位的抗体或抗原结合片段作为活性成分。
本发明的另一个目的是提供一种抗体-药物偶联物(ADC)，其中药物(例如抗癌药物)与抗体偶联。
本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其含有抗体-药物偶联物作为活性成分。
本发明的另一个目的是提供一种使用能够特异性结合所述表位的抗体或抗原结合片段以及抗体-药物偶联物来预防或治疗癌症的方法。
然而，本发明要实现的目的不限于上述目的，本领域普通技术人员通过以下描述将清楚地理解本文未提及的其他目的。
技术方案
本发明涉及Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白的表位或特异性结合该表位的抗体或抗原结合片段。
在本发明中，“Lrig-1蛋白”是存在于调节性T细胞表面的跨膜蛋白，由富含亮氨酸的重复序列(LRR)和细胞外或管腔侧的三个免疫球蛋白样结构域、一个细胞跨膜序列和一个细胞质尾部区域组成。LRIG基因家族包括LRIG1、LRIG2和LRIG3，构成家族各成员的氨基酸高度保守。LRIG1基因在正常皮肤中高表达，可在基底细胞和毛囊细胞中表达，调节上皮干细胞的增殖。因此，LRIG1基因在维持表皮稳态中发挥重要作用，其缺失可能导致银屑病或皮肤癌。据报道，LRIG1所在的染色体区域3p14.3的缺失很可能会发展成癌细胞。事实上，发现LRIG1的表达在肾细胞癌和皮肤鳞状细胞癌中大大降低。近年来，还发现Lrig-1仅在约20％至30％的癌症中表达。同时，对于本发明的目的，Lrig-1蛋白可以是存在于人或小鼠中的蛋白，但不限于此。
在本发明的一个实施方式中，Lrig-1蛋白可以是来源于哺乳动物的Lrig-1蛋白，所述哺乳动物包括灵长类如人和猴，啮齿类如小鼠和大鼠等。
在本发明的一个实施方式中，Lrig-1蛋白可以是SEQ ID NO:1表示的人源Lrig-1蛋白，其可以由SEQ ID NO:2表示的核酸序列编码，但不限于此。
在本发明的另一个实施方式中，Lrig-1蛋白可以是SEQ ID NO:3表示的小鼠来源的Lrig-1蛋白，其可以由SEQ ID NO:4表示的核酸序列编码，但不限于此。
在本发明的另一个实施方式中，Lrig-1蛋白可以是Lrig-1蛋白的胞外结构域，但不限于此。
本发明中的Lrig-1胞外结构域可以是来源于哺乳动物的Lrig-1蛋白的胞外结构域，所述哺乳动物包括人、猴等灵长类动物，小鼠、大鼠等啮齿类动物。对于本发明的目的，Lrig-1蛋白的胞外蛋白可以是来源于人或小鼠的Lrig-1蛋白的胞外结构域，但不限于此。
在本发明的一个实施方式中，Lrig-1蛋白的胞外结构域可以由SEQ ID NO:5表示，其对应于人源Lrig-1蛋白的氨基酸序列中的35至794位，但不限于此。
在本发明的另一个实施方式中，Lrig-1蛋白的胞外结构域可以由SEQ ID NO:6表示，其对应于小鼠来源的Lrig-1蛋白的氨基酸序列中的35至794位，但不限于此。
以下将对本发明作更详细的说明。
1.Lrig-1蛋白的表位
根据本发明的一个实施方式，Lrig-1蛋白的表位可以由SEQ ID NO：1、3或5表示的Lrig-1蛋白的一些氨基酸(例如，2至50、6至45、或10至44个氨基酸)组成，但不限于此。本发明的另一个实施方式提供了一种Lrig-1蛋白的表位，其包含选自下组的至少一种多肽：由SEQ ID NO：7至70表示的氨基酸序列组成的多肽。
在本发明的一个实施方式中，Lirg-1蛋白的表位可以是包含由SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:72表示的氨基酸序列组成的多肽的表位，但不限于此。
本发明的表位可以是构象表位。
本发明的“构象表位”由不连续的氨基酸序列组成，不同于由连续序列组成的一维线性表位。该构象表位与抗体抗原结合位点的三维结构发生反应。
2.编码Lrig-1蛋白表位的核酸分子
本发明的另一个实施方式提供了一种编码本发明提供的表位的核酸分子。
本发明的核酸分子包括本领域技术人员已知的所有核酸分子，其具有翻译成本发明提供的多肽的氨基酸序列的多核苷酸序列。因此，可以产生各种具有开放阅读框(ORF)的多核苷酸序列，这些多核苷酸序列也都包含在本发明的核酸分子中。
3.插入编码Lrig-1蛋白表位的核酸分子的表达载体
本发明的另一个实施方式提供了一种表达载体，其中插入了本发明提供的分离的核酸分子。
在本发明中，“载体”是能够转运与其连接的另一种核酸的任意核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，它是指可以连接额外DNA片段的环状双链DNA。另一种类型的载体是噬菌体载体。还有另一种类型的载体是病毒载体，其中额外的DNA片段可以被连接到病毒基因组中。某些载体能够在它们已被引入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体是游离型哺乳动物载体)。其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞后整合到宿主细胞的基因组中，并因此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与其有效连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”或简称为“表达载体”。通常，可用于重组DNA技术的表达载体通常是质粒的形式。在本说明书中，术语“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。
本发明中的表达载体的具体实例可以选自商业上广泛使用的pCDNA载体、F、R1、RP1、Col、pBR322、ToL、Ti载体；粘粒；噬菌体，例如lambda、lambdoid、M13、Mu、p1 P22、Qμμ、T-even、T2、T3、T7；和植物病毒，但不限于此。本领域技术人员称为表达载体的任何表达载体均可用于本发明，并且根据靶宿主细胞的性质选择表达载体。载体导入宿主细胞可以通过磷酸钙转染、病毒感染、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质体转染或电穿孔进行，但不限于此，本领域技术人员可以采用适合所使用的表达载体和宿主细胞的导入方法。载体可以优选地包含至少一种选择标记，但不限于此，并且可以使用不包含选择标记的载体进行筛选，这取决于是否产生产物。选择标记的选择取决于靶宿主细胞，其采用本领域技术人员已知的方法进行，因此本发明对此不做限制。
为了促进由本发明的核酸分子编码的蛋白质的纯化，可以将标签序列插入并融合到表达载体中。标签的实例包括但不限于六组氨酸标签、血凝素标签、myc标签或flag标签，并且本领域技术人员已知的促进纯化的任何标签均可用于本发明。
4.用已插入编码Lrig-1蛋白表位的核酸分子的表达载体转化的宿主细胞系
本发明的另一个实施方式提供了一种用本发明提供的表达载体转化的宿主细胞系。
在本发明中，术语“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，它们可能是或已经是整合有多肽插入物的载体的受体。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且由于自然、偶然或有意的突变，后代可能不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态或基因组DNA互补方面)。宿主细胞包括用本发明的多核苷酸在体内转染的细胞。
在本发明中，宿主细胞可以包括哺乳动物、植物、昆虫、真菌或细胞来源的细胞，例如可以是细菌细胞，如大肠杆菌、链霉菌、鼠伤寒沙门氏菌；真菌细胞，如酵母细胞和毕赤酵母；昆虫细胞，如果蝇和斜纹夜蛾Sf9细胞；动物细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、SP2/0(小鼠骨髓瘤)、人淋巴母细胞、COS、NSO(小鼠骨髓瘤)、293T、Bowes黑色素瘤细胞、HT-1080、幼仓鼠肾(BHK)细胞、人胚胎肾(HEK)细胞，或PERC.6(人视网膜细胞)；或植物细胞，但不限于此，本领域技术人员已知的可以用作宿主细胞系的任何细胞类型均可以使用。
本发明的转化方法是任意的将所需载体导入宿主细胞的方法，可以包括能够将载体导入宿主细胞的任意已知的方法。例如，可以使用CaCl2、电穿孔、显微注射、磷酸钙沉淀、电穿孔、脂质体介导的转染、DEAE-葡聚糖处理、基因轰击和使用病毒的转染的方法，但不限于此。
5.抗体或抗原结合片段
本发明的另一个实施方式提供特异性结合本发明表位的抗体或抗原结合片段。
本发明中，所述抗体为全长抗体或抗体的一部分，具有与Lrig-1蛋白结合的能力，包括以与本发明的结合分子竞争的方式结合Lrig-1抗原决定区的任意抗体片段。
在本发明中，术语“抗体”是指充当特异性识别抗原的受体的蛋白质分子，包括与特定抗原具有免疫反应性的免疫球蛋白分子。对于本发明的目的，抗原可以是存在于调节性T细胞表面上的Lrig-1蛋白。优选地，抗体可以特异性识别Lrig-1蛋白的富含亮氨酸的区域或免疫球蛋白样结构域，但不限于此。
在本发明中，“免疫球蛋白”具有重链和轻链，重链和轻链分别包含恒定区和可变区。轻链和重链各自的可变区包含三个高变区，称为互补决定区(下文称为“CDR”)，和四个框架区。CDR主要用于结合抗原的抗原决定簇(表位)。每条链的CDR通常称为CDR1、CDR2和CDR3，从N端开始按顺序编号，并且通常也由特定CDR所在的链标识。
在本发明中，“全长抗体”具有两条全长轻链和两条全长重链的结构，其中每条轻链通过二硫键与重链连接。全长抗体的实例包括IgA、IgD、IgE、IgM和IgG。IgG的亚型包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
此外，如本文所用，术语“抗原结合片段”是指具有抗原结合功能的片段。抗原结合片段的实例包括：(1)由轻链可变区(VL)、重链可变区(VH)、轻链恒定区(CL)和重链恒定区1(CH1)组成的Fab片段；(2)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(3)由单一抗体的VL和VH结构域组成的Fv片段；(4)由VH结构域组成的dAb片段；(5)单独的CDR区域；(6)F(ab')2片段，其为包括两个连接的Fab片段的二价片段；(7)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接头连接在一起，使得两个结构域结合形成抗原结合位点；(8)双特异性单链Fv二聚体；(9)双抗体，其为通过基因融合构建的多价或多特异性片段。当使用蛋白水解酶例如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶时，抗原结合片段可以作为Fab或F(ab')2片段获得，并且抗原结合片段可以通过基因重组技术产生。
此外，在本发明中，抗体可以是但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、二价双特异性分子、微抗体、结构域抗体、双特异性抗体、抗体模拟物、单体、双体、三体、四体或其片段。
此外，如本文所用，术语“单克隆抗体”是指具有单一分子组成的抗体分子，其从基本上相同的抗体群体中获得，并且表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。
在本发明中，“嵌合抗体”是指由小鼠抗体的可变区和人抗体的恒定区重组而成的抗体，与小鼠抗体相比，免疫反应大大提高。
此外，如本文所用，术语“人源化抗体”是指通过修饰非人类物种来源的抗体的蛋白质序列以使该蛋白质序列与人类天然产生的抗体变体相似而获得的抗体。例如，人源化抗体可以通过将小鼠来源的CDR与人抗体来源的FR重组以获得人源化可变区，并将人源化可变区与所需人抗体的恒定区重组来产生。
如本文所用，术语“结合”或“特异性结合”是指本发明的抗体或抗体组合物对抗原的亲和力。在抗原-抗体结合中，通常当解离常数(Kd)小于1×10-5M、小于1×10-6M或小于1×10-7M时，“特异性结合”不同于非特异性背景结合。可以通过本领域已知的方法检测特异性结合，例如ELISA、表面等离子共振(SPR)、免疫沉淀和共沉淀，其中包括可以区分非特异性结合和特异性结合的适当对照。
本发明的抗体或抗原结合片段可以作为多聚体存在，例如二聚体、三聚体、四聚体或五聚体，其包括单体的抗原结合活性的至少一部分。这样的多聚体还包括同多聚体或异多聚体。抗体多聚体含有大量的抗原结合位点，因此与单体相比具有优异的抗原结合活性。抗体多聚体也很容易用于生产多功能(双功能、三功能或四功能)抗体。
如本文所用，术语“多功能”是指具有两种或更多种活性或功能(例如，抗原结合活性、酶活性和配体或受体结合活性)的抗体或抗原结合片段。例如，本发明的抗体可以结合具有酶活性的多肽，例如荧光素酶、乙酰转移酶或半乳糖苷酶。多功能抗体还包括多价或多特异性(例如，双特异性、三特异性等)形式的抗体。
6.含有抗体或抗原结合片段作为活性成分的药物组合物
此外，根据本发明的抗体可以特异性结合存在于调节性T细胞上的表位，其包含SEQ ID NO:7至72中任一项表示的多肽，从而激活、维持或抑制调节性T细胞的功能以调节效应T细胞的活性，从而预防或治疗癌症。
在本发明中，术语“癌症”表示或指通常以哺乳动物中细胞生长失控为特征的生理状况。本发明要预防、改善或治疗的癌症可以是由实体器官中的异常细胞生长产生的团块组成的实体瘤，并且可以是但不限于胃癌、肝癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、结直肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾细胞癌、乳腺癌、转移性癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤或肺癌，具体取决于实体器官的位置。
7.抗体-药物偶联物(ADC)
本发明的另一个实施方式提供了一种抗体-药物偶联物(ADC)，包括：本发明提供的抗体或抗原结合片段；和药物。
如本文所用，术语“抗体-药物偶联物(ADC)”是指药物和抗体彼此化学连接而不降低抗体和药物的生物活性的形式。在本发明中，抗体-药物偶联物是指药物与抗体重链和/或轻链的N端氨基酸残基偶联的形式，具体而言，是指药物偶联至抗体重链和/或轻链的N-末端α-胺基的形式。
如本文所用，“药物”可以是指对细胞具有一定生物学活性的任何物质，其是包括DNA、RNA或肽的概念。药物可以是包含能够与α-胺基反应交联的反应基团的形式，也可以包括与接头连接的形式，其中所述接头含有能与α-胺基反应交联的反应基团。
在本发明中，能够与α-胺基反应和交联的反应基团的实例包括但不限于本领域已知的任何能够与抗体重链或轻链的N末端α-胺基反应和交联的胺反应基团。反应基团可以是例如异硫氰酸酯、异氰酸酯、酰基叠氮化物、NHS酯、磺酰氯、醛、乙二醛、环氧化物、环氧乙烷、碳酸酯、芳基卤化物、亚胺酯、碳二亚胺、酸酐和氟苯基酯中的任一种，但不限于此。
在本发明中，抗体-药物偶联物包含抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段特异性结合本发明的表位，即Lrig-1蛋白的表位，或包含由Lrig-1蛋白质胞外结构域的氨基酸序列的一些氨基酸组成的多肽的表位，或包含由式1表示的氨基酸序列组成的多肽的表位，或包含由SEQ ID NO：48至113中任一项的氨基酸序列表示的多肽的表位，其中所述药物可以是任何能够治疗由Lrig-1抗体靶向的疾病的药物，例如能够治疗癌症的抗癌药，但不限于此。
在本发明的一个实施方式中，抗癌药物可以是但不限于可用于预防、改善或治疗癌症的任何药物。例如，抗癌药物可以选自下组：氮芥、伊马替尼(imatinib)、奥沙利铂(oxaliplatin)、利妥昔单抗(rituximab)、厄洛替尼(erlotinib)、纳拉替尼(neratinib)、纳拉替尼(lapatinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、尼洛替尼(nilotinib)、司马沙尼(semaxanib)、波舒替尼(bosutinib)、阿西替尼(axitinib)、西地那尼(cediranib)、来他替尼(lestaurtinib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、吉非替尼(gefitinib)、索非替尼(bortezomib)、舒尼替尼(sunitinib)、卡铂(carboplatin)、索拉非尼(sorafenib)、贝伐单抗(bevacizumab)、顺铂(cisplatin)、西妥昔单抗(cetuximab)、槲寄生(Viscum album)、天冬酰胺酶(asparaginase)、维甲酸(tretinoin)、羟基尿素(hydroxycarbamide)、达沙替尼(dasatinib)、雌莫司汀(estramustine)、吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、依铂(heptaplatin)、甲基氨基乙酰丙酸、安吖啶(amsacrine)、阿仑单抗(alemtuzumab)、丙卡巴肼(procarbazine)、前列地尔(alprostadil)、硝酸钬壳聚糖(holmium nitrate chitosan)、吉西他滨(gemcitabine)、多西氟哌啶(doxifluridine)、培美曲塞(pemetrexed)、替加氟(tegafur)、卡培他滨(capecitabine)、吉美拉西(gimeracil)、奥替拉西(oteracil)、阿扎胞苷(azacitidine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、尿嘧啶(uracil)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟达拉滨(fludarabine)、恩西他滨(enocitabine)、氟他酰胺(flutamide)、卡培他滨(capecitabine)、地西他滨(decitabine)、巯嘌呤(mercaptopurine)、硫代鸟嘌呤(thioguanine)、克拉屈滨(cladribine)、卡莫呋(carmofur)、拉替曲塞(raltitrexed)、多西他赛(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、伊立替康(irinotecan)、贝洛替康(belotecan)、托泊替康(topotecan)、长春瑞滨(vinorelbine)、依托泊苷(etoposide)、长春碱(vinblastine)、伊达比星(idarubicin)、丝裂霉素(mitomycin)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素(dactinomycin)、吡柔比星(pirarubicin)、阿柔比星(aclarubicin)、培洛霉素(peplomycin)、替莫罗莫司(temsirolimus)、替莫唑胺(temozolomide)、白消安(busulfan)、异环磷酰胺(ifosfamide)、环磷酰胺、(melphalan)、美法仑(altretamine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、噻替帕(thiotepa)、尼莫斯汀(nimustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、米托固醇(mitolactol)、亚叶酸(leucovorin)、维甲酸(tretinoin)、依西美坦(exemestane)、氨基谷氨酰胺(aminogluthetimide)、阿那格雷(anagrelide)、奥拉帕尼(olaparib)、长春瑞滨(navelbine)、法倔唑(fadrozole)、他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、睾内酯(testolactone)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)、沃罗唑(vorozole)、比卡鲁他胺(bicalutamide)、洛莫司汀(lomustine)、5FU(5-氟尿嘧啶)、伏立诺他(vorinostat)、恩提诺特(entinostat)、和卡莫司汀(carmustine)，但不限于此。
8.含有抗体-药物偶联物(ADC)作为活性成分的药物组合物
本发明的另一个实施方式，提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含本发明提供的抗体或抗原结合片段，或抗体-药物偶联物(ADC)作为活性成分。
在本发明中，包含在药物组合物的活性成分中的抗体或抗原结合片段或通过将药物与其偶联而获得的抗体-药物偶联物可以特异性结合包含SEQ ID NO：7至72任一氨基酸序列所示的多肽的表位，从而抑制调节性T细胞的功能并维持或增加效应T细胞的活性，从而非常有效地治疗癌症。
本发明中的癌症可以是由实体器官中的异常细胞生长所产生的团块组成的实体瘤。在一个具体实施方案中，癌症可以是但不限于胃癌、肝癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、结直肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾细胞癌、乳腺癌、转移癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤或肺癌，取决于实体器官的位置。
9.其他
同时，在本发明中，“治疗”可以包括但不限于，任何使用本发明的药物组合物阻断疾病症状、或抑制或延缓疾病症状的行为。
另外，在本发明中，所述“治疗”可以包括但不限于，任何使用本发明的药物组合物减轻或有益地改变疾病症状的行为。
在本发明中，所述药物组合物可以为胶囊、片剂、颗粒剂、注射剂、软膏、粉末或饮品的形式，并且所述药物组合物可用于人体给药。
在本发明中，所述药物组合物可以按照各自的常规方法制成散剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、水性混悬剂等口服制剂、外用制剂、栓剂、无菌注射液等形式，但不限于此。本发明的药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。作为药学上可接受的载体，粘合剂、助溶剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、悬浮剂、颜料、香料等可用于口服给药；缓冲液、防腐剂、疼痛缓解剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等可用于注射；碱、赋形剂、润滑剂、防腐剂等可用于局部给药。此外，通过与如上所述的药学上可接受的载体混合，可以以各种剂型制备本发明的药物组合物。例如，对于口服给药，药物组合物可以以片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、晶片等形式配制。对于注射，药物组合物可以以单位剂量安瓿或多种剂型的形式配制。或者，可以将药物组合物配制成溶液、悬浮液、片剂、胶囊、缓释制剂等。
同时，适于制备制剂的载体、稀释剂或赋形剂的实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶(gum acacia)、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡啶酮、水、羟苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁、和矿物油。另外，还可以包括填料、抗凝血剂、润滑剂、润湿剂、香料、乳化剂、防腐剂等。
本发明的药物组合物的给药途径包括但不限于口服、静脉、肌肉内、动脉内、髓内、硬膜内、心内、经皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、肠道、局部、舌下或直肠途径。优选口服或肠胃外给药。
在本发明中，所述“肠胃外”包括皮下、皮内、静脉、肌肉内、关节内、囊内、胸骨内、硬膜内、皮损内和颅内注射或输液技术。本发明的药物组合物也可以以栓剂的形式用于直肠给药。
本发明的药物组合物可以根据各种因素而变化，包括所使用的具体化合物的活性，患者年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食，给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合，以及待预防或治疗某种疾病的严重程度。药物组合物的剂量取决于患者的病症、体重、疾病严重程度、药物形式、给药途径和持续时间，并且可以由本领域技术人员适当地选择。药物组合物可以以0.0001至50mg/kg/天或0.001至50mg/kg/天施用。给药可以每天一次或每天几次。剂量不旨在任何情况下限制本发明的范围。本发明的药物组合物可以以药丸、糖衣片剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆料或悬浮液的形式配制。
10.治疗方法
本发明的又一个实施方式，提供了一种用于预防或治疗癌症的方法，其包含给予受试者本发明的抗体或抗原结合片段或抗体-药物偶联物(ADC)的步骤。
在本发明中，术语“癌症”表示或指通常以哺乳动物中不受调节的细胞生长为特征的生理状况。本发明中待预防、改善或治疗的癌症可以是由实体器官中的异常细胞生长产生的团块组成的实体瘤，并且可以是但不限于胃癌、肝癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、结直肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾细胞癌、乳腺癌、转移性癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤或肺癌，具体取决于实体器官的位置。
本发明的抗体或抗原结合片段或抗体-药物偶联物可特异性结合包含由SEQ IDNO:7至72中任一项的氨基酸序列表示的多肽的表位，从而抑制调节性T细胞的功能和维持或增加效应T细胞的活性，从而非常有效地治疗癌症。
如本文所用，术语“受试者”是指疑似患有癌症的受试者，并且疑似患有癌症的受试者是哺乳动物，包括人类、小鼠和家畜，其已经发展或可能发展为所讨论的疾病。然而，该术语包括但不限于可以用本发明的抗体或抗体-药物偶联物治疗的任何受试者。
本发明的方法可以包括施用药物有效量的抗体或抗体-药物偶联物。抗体或抗体-药物偶联物的合适的日总剂量可由主治医师或兽医在合理的医学判断范围内确定，并且抗体或抗体-药物偶联物可以施用一次或多次。然而，出于本发明的目的，特定患者的特异性治疗有效量优选地根据各种因素不同地应用，所述因素包括要达到的类型和反应程度，包含上述特异性活性成分的组合物，包括是否视情况与其他药剂一起使用，患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食，给药时间，给药途径，包含上述特异性活性成分的组合物的分泌率，治疗持续时间，以及同时使用的药物或与特定组合物联合使用，以及医学领域中众所周知的类似因素。
同时，用于预防或治疗免疫相关疾病的方法可以是但不限于联合疗法，其进一步包括施用对一种或多种癌症疾病具有治疗活性的化合物或物质。
在本发明中，“联合”应理解为表示同时、单独或顺序给药。在顺序或单独的方式给药的情况下，应间隔施用第二组分，使得不会失去联合的有益效果。
在本发明中，所述抗体或抗体-药物偶联物的剂量可以是但不限于约0.0001μg至500mg每千克患者体重。
有益效果
根据本发明的与Lrig-1蛋白的表位特异性结合的抗体或抗原结合片段可以与存在于调节性T细胞上的本发明的表位特异性结合，从而抑制调节性T细胞的功能和维持或增加效应T细胞的活性。因此，它可以非常有效地用于癌症的预防、改善或治疗。
附图简要说明
图1示出了根据本发明的一个实施方式的Lrig-1蛋白的结构。
图2示出了根据本发明的一个实施方式的Lrig-1蛋白的结构。
图3示出了根据本发明的一个实施例的Lrig-1mRNA的表达水平。
图4示出了根据本发明的一个实施例的Lrig-1mRNA的表达水平。
图5示出了根据本发明的一个实施例的Lrig-1mRNA的表达水平。
图6示出了根据本发明的一个实施例的Lrig-1、Lrig-2和Lrig-3mRNA的表达水平。
图7示出了根据本发明的一个实施例测量的调节性T细胞和非调节性T细胞中Lrig-1蛋白的表达水平的对比结果。
图8示出了根据本发明的一个实施例测量的调节性T细胞表面上的Lrig-1蛋白的表达。
图9示出了根据本发明的一个实施例中抗体(GTC210-01、GTC210-02、GTC210-03、GTC210-04、GTC110-01、GTC110-02、GTC110-03和GTC110-04)对Lrig-1蛋白的结合亲和力的分析结果。
图10示出了根据本发明的一个实施例中Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(GTC210-01、GTC210-02、GTC210-03、GTC210-04、GTC110-01、GTC110-02、GTC110-03和GTC110-04)对调节性T细胞中Lrig-1蛋白诱导的Stat3磷酸化的调节机制的分析结果。
图11示出了根据本发明的一个实施例中使用Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体治疗癌症的实验设计。
图12示出了根据本发明的一个实施例中使用Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(GTC110-01、GTC110-02、GTC110-03和GTC110-04)获得的癌症治疗效果。
图13至图15示出了本发明的一个实施例中的质谱分析条件。
图16和17示出了本发明的一个实施例中使用胰凝乳蛋白酶对Lirg-1蛋白的胞外结构域进行的共价标记质谱(MS)的结果。
图18和19示出了本发明的一个实施例中使用胰蛋白酶对Lirg-1蛋白的胞外结构域进行的共价标记质谱(MS)的结果。
图20和21示出了本发明的一个实施例中使用Asp-N+Lys-C对Lirg-1蛋白的胞外结构域进行的共价标记质谱(MS)的结果。
图22示出了本发明的一个实施例中使用胰凝乳蛋白酶对Lirg-1蛋白的胞外结构域进行的交联质谱(MS)的结果。
图23示出了本发明的一个实施例中使用胰蛋白酶对Lirg-1蛋白的细胞外结构域进行的交联质谱(MS)的结果。
图24示出了本发明的一个实施例中使用Asp-N+Lys-C对Lirg-1蛋白的胞外结构域进行的交联质谱(MS)的结果。
图25示出了本发明的一个实施例中GTC110-04抗体特异性结合的Lrig-1蛋白胞外结构域的表位区。
最佳实施方式
本发明涉及Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白的表位或特异性结合该表位的抗体或抗原结合片段。
在本发明的一个实施方式中，Lrig-1蛋白的胞外结构域可以由SEQ ID NO:5表示，其对应于人源Lrig-1蛋白的氨基酸序列中的35至794位氨基酸，但不限于此。
在本发明的另一个实施例中，Lrig-1蛋白的胞外结构域可以由SEQ ID NO:6表示，其对应于小鼠来源的Lrig-1蛋白的氨基酸序列中的35至794位氨基酸，但不限于此。
具体实施方式
在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明。这些实施例仅用于更详细地描述本发明，对于本领域技术人员显而易见的是，根据本发明的主旨，本发明的范围不受这些实施例的限制。
实施例
[制备实施例1]T细胞亚群细胞培养
为了鉴定Lrig-1蛋白是否仅在调节性T细胞(Treg)中表达，制备了T细胞的亚群Th0、Th1、Th2、Th17和iTreg。iTreg是指在含有下列组合物的培养基中人工诱导分化的细胞，不同于自然分离出来的nTreg。
首先从小鼠脾脏分离初始
Figure BDA0003633704790000141
T细胞，然后在含有10％胎牛血清(FBS；HyClone，洛根市，犹他州)并进一步含有下表1的相应成分的RPMI1640(英杰Gibco，纽约州格兰德岛)营养培养基中，在37℃，5％CO2的培养箱中孵育72小时，诱导分离的细胞分化成各T细胞亚群。
[表1]
分化细胞 组分
Th0 抗CD3，抗CD28
Th1 IL-12，抗IL-4抗体
Th2 IL-4，抗IFNβ
Th17 IL-6，TGFβ，抗IFNβ，抗IL-4
iTreg IL-2，TGFβ
[实施例1]Lrig-1的结构分析
预测Lrig-1蛋白的细胞外结构域的三维空间结构，以产生针对调节性T细胞的表面蛋白即Lrig-1蛋白的特异性抗体。
首先，为了通过分析Lrig-1蛋白的细胞外结构域(ECD)的三维空间结构预测表位(epitope)，使用Uniprot(http://www.uniprot.org)和RCSB蛋白质数据库(http://www.rcsb.org/pdb)的工具来预测三维空间结构，结果如图1和图2所示。
如图1中所示，有总共15个亮氨酸富集区(LRR1至LRR15)存在于Lrig-1蛋白的细胞外结构域的Lrig-LRR结构域(41至494位的氨基酸序列)中。每个LRR结构域由23至27个氨基酸组成，含有3至5个亮氨酸残基。
另外，如图2所示，在Lrig-1蛋白的细胞外结构域中，三种免疫球蛋白样结构域存在于Lrig-1蛋白的氨基酸序列的494-781位处。
[实施例2]鉴定调节性T细胞中Lrig-1 mRNA的特异性表达
验证Lrig-1蛋白是否可以作为调节性T细胞的生物标志物。
对于验证，通过磁体活化的细胞分选(MACS)使用CD4珠子从大鼠的脾脏分离CD4+T细胞。随后，使用CD25抗体通过荧光激活的细胞分选(FACS)分离出调节性T(CD4+CD25+T)细胞和非调节性T(CD4+CD25-T)细胞。对于分离的细胞和在制备实施例1中分化的细胞，使用Trizol提取mRNA，然后根据制造商提供的方案，使用gDNA提取试剂盒(凯杰)从基因组RNA中除去gDNA。通过BDsprint cDNA合成试剂盒(CloneTech)将去除gDNA的mRNA合成为cDNA。
进行实时聚合酶链反应(RT PCR)以定量分析cDNA中Lrig-1mRNA的表达水平。
使用下表2所示的引物，按照供应商提供的实验方案使用SYBR Green(分子探针)进行实时聚合酶链反应，进行40次循环，每次包括95℃下3分钟，61℃下15秒，72℃下30秒。使用ΔCT方法计算相对基因表达水平，并使用HPRT标准化。结果如图3到图6所示。
[表2]
Figure BDA0003633704790000151
如图3中所示，可以看出，调节性T(CD4+CD25+T)细胞中Lrig-1的表达比非调节T(CD4+CD25-T)细胞高出18.1倍。这比Lag3和Ikzf4(先前已知的调节T细胞的标志物)的表达水平高约10倍。
另外，如图4和图5所示，与其他类型的免疫细胞相比，Lrig-1mRNA的表达在调节T细胞中非常高，特别是与诱导的调节性T细胞(iTreg细胞)相比，在天然分离的调节性T细胞(nTreg)中非常高。
另外，如图6所示，在属于LRIG家族的Lrig-1、Lrig-2和Lrig-3中，Lrig-1的表达水平最高。
根据上述结果，可以看出，本发明的Lrig-1蛋白在调节性T细胞，特别是天然存在的调节性T细胞中特异性地表达。
[实施例3]分析调节性T细胞中Lrig-1蛋白的特异性表达
分析了从Lrig-1mRNA表达的Lrig-1蛋白是否仅在调节性T细胞中特异性表达。
使用FOXP3-RFP敲入小鼠，FOXP3-RFP是通过将红色荧光蛋白(RFP)偶联到FOXP3启动子(一种调节性T细胞特异性的转录因子)而获得，使用CD4珠子通过磁体活化细胞分选(MACS)在小鼠的脾脏中分离CD4+T细胞。随后，使用RFP蛋白，通过荧光激活的细胞分选(FACS)分离调节性T(CD4+RFP+T)细胞和非调节性T(CD4+RFP-T)细胞。将分离的细胞用购买的Lrig-1抗体染色，将阴性对照用同种型抗体染色，通过荧光激活的细胞分选来测量Lrig-1的表达水平。结果如图7所示。
如图7中所示，由虚线表示的非调节性T细胞显示出与阴性对照几乎相同的Lrig-1的表达水平，而在调节性T细胞中有大量Lrig-1高水平表达的细胞。
根据上述结果，可以看出，本发明的LRIG-1蛋白在调节性T细胞中特异性地表达。
[实施例4]鉴定Lrig-1蛋白在调节性T细胞表面上的特异性表达
即使当Lrig-1蛋白在调节性T细胞表面表达从而成为细胞治疗的靶点时，也可以更有效地实现靶点治疗。因此，分析了Lrig-1蛋白是否在调节性T细胞的表面上表达。
将制备实施例1的各分化T细胞亚群用抗CD4-APC和抗Lrig-1-PE抗体染色，利用荧光-激活细胞分选(FACS)法测定各亚群表面Lrig-1的表达量。结果示于图8。
如图8中所示，在激活的T细胞、Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和初始T细胞中，Lrig-1的表达量为0.77-15.3，而Lrig-1在分化诱导的T细胞(iTreg细胞)中的表达水平高达83.9。
根据上述结果，可以看出，本发明的Lrig-1蛋白不仅在调节性T(Treg)细胞中特异性表达，而且尤其在Treg细胞表面上以更高水平地表达。
[制备例1-8]Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体的制备
制备根据本发明的Lrig-1蛋白特异性抗体。本发明所产生的抗体是能够与Lrig-1蛋白上的任何位点结合而无需指定特定表位的抗体。
为了制备抗体，制备了表达Lrig-1蛋白的细胞。更具体而言，将对应于SEQ ID NO：2的DNA片段和pcDNA(hygro)用切割酶切割，在37℃温育，使它们彼此连接以产生已插入Lrig-1蛋白的DNA序列的pcDNA。将制备的插入有SEQ ID NO：2的pcDNA通过转染导入L细胞，使Lrig-1蛋白在L细胞表面表达。
从人scFV文库中选择能够结合细胞表面表达的Lrig-1的轻链和重链的氨基酸序列，从而总共选择了八个重链和轻链。
将所选择的重链和轻链的氨基酸序列与mlgG2a Fc区或人IgG1 Fc区融合，以产生单克隆抗体。单克隆抗体的序列示于下表3中。
[表3]
Figure BDA0003633704790000161
Figure BDA0003633704790000171
Figure BDA0003633704790000181
Figure BDA0003633704790000191
Figure BDA0003633704790000201
[实施例5]本发明的抗体对Lrig-1蛋白的结合亲和力的评价
为了检测制备例1-8中制备的本发明的单克隆抗体是否良好地识别Lrig-1，将制备例1-8的各抗体与稳定表达Lrig-1的L细胞结合，然后向其中添加能够识别小鼠抗体的eFlour670-偶联的二抗。接下来，使用FACS分析单克隆抗体对Lrig-1蛋白的结合亲和力。结果示于图9。
如图9所示，可以确定本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体均有效地识别并结合存在于L细胞表面的Lrig-1蛋白。
[实施例6]本发明的抗体对调节性T细胞中信号通路的调节
为了分析在制备例1至8中制备的本发明的单克隆抗体如何通过Lrig-1蛋白影响Treg细胞中的信号转导通路，使用制备例1至8中的抗体处理调节性Treg细胞来刺激存在于调节性Treg细胞表面上的Lrig-1，然后通过磷酸酪氨酸免疫印迹分析存在于被刺激的调节性Treg细胞中的Stat3蛋白的酪氨酸磷酸化水平。结果如图10所示。
如图10所示，可以确认根据本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(GTC210-01、GTC210-02、GTC210-03和GTC210-04)上调Stat3的磷酸化至与Th17细胞中相同的水平。同时，可以证实本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(GTC110-01、GTC110-02、GTC110-03和GTC110-04)持续维持和降低Stat3的磷酸化水平与iTreg细胞中的水平相同。
[实施例7]本发明的抗体GTC110-01、GTC110-02、GTC110-03和GTC110-04的癌症治 疗效果
为了评价制备例5-8中制备的本发明的单克隆抗体(GTC110-01、GTC110-02、GTC110-03和GTC110-04)的实体癌治疗效果，如图11所示，将B16F10黑色素瘤细胞以3×105细胞的量皮下注射到小鼠的背部，然后在第4、8和12天以200ug的量将制备例5至8的各抗体腹膜内注射到小鼠体内。移植黑素瘤细胞后，测量肿瘤体积随时间的变化，测量结果如图12所示。
如图12所示，可以确认与未用抗体处理的阴性对照组相比，当用本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(GTC110-01、GTC110-02、GTC110-03和GTC110-04)处理细胞时，肿瘤体积显著减小。
由此可见，本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体可以抑制多种实体癌细胞的生长，从而有效地预防、改善或治疗此类癌症。
[实施例8]本发明的Lrig-1蛋白的表位鉴定
为了探究制备例8的GTC110-04抗体能够在Lrig-1蛋白质的胞外结构域结合的构象表位，进行了以下实验。
[8-1]共价标记质谱(MS)(CL-MS)
[8-1-1]使用胰凝乳蛋白酶的表位鉴定
通过将制备例8的GTTC110-04抗体与SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域(抗原)以2:1的比例混合并充分反应来制备抗原-抗体偶联物。还制备了Lrig-1蛋白的非抗体结合胞外结构域(抗原)。接着，在各样品中添加DEPC(焦碳酸二乙酯)以使其不超过1％，在37℃下充分反应1分钟后，添加咪唑结束反应。反应完成后，向每个样品中加入甲醇，并通过离心除去上清液。此后，将每个样品重新悬浮在含有8M尿素和0.1M NaCl的溶液中，然后向其中加入胰凝乳蛋白酶以使肽键断裂。
使用Hypersil GOLDTM(1.9μm,1×100mm)柱在30℃和下表4所示的条件下，对如上所述肽键断裂的每个样品进行流体色谱法(VanquishTM Flex Quaternary UHPLC(赛默飞科技))。
[表4]
Figure BDA0003633704790000211
随后，在图13至15所示的条件下进行质谱分析(Q ExactiveTM Plus质谱仪(赛默飞科技))。比较抗原抗体偶联物和抗原的质谱测定值，结果如图16和下表5所示。此外，由测定的质谱值算出抗原-抗体偶联物/抗原的比率，结果示于图17。
[表5]
Figure BDA0003633704790000221
Figure BDA0003633704790000231
由图16、17和表5可知，在SEQ ID NO：4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域中，分别由36至64、105至134、252至254、329至347、529至535、599至612、599至614、599至615、599至624、624至636、700至735、715至727和728至735位的氨基酸构成的多肽，抗原-抗体偶联物/抗原的比率为1.2或更高，表明这些多肽很可能被选为Lrig-1蛋白的表位。此外，确认了由SEQ ID NO:7至13所示的氨基酸序列构成的多肽的实际差异值更显著，被选择为表位的可能性更高。
[8-1-2]使用胰蛋白酶的表位鉴定
以与上述[8-1-1]中相同的方式进行表位鉴定实验，不同之处在于使用胰蛋白酶代替胰凝乳蛋白酶作为酶。结果示于图18和19和下表6中。
[表6]
Figure BDA0003633704790000241
Figure BDA0003633704790000251
由上表18、19和表6可知，在由SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域中，分别由24至37、38至45、46至94、141至154、179至186、216至226、532至540、559至569、614至629、690至694、727至739、740至754位的氨基酸构成的多肽，抗原-抗体偶联物/抗原比为1.2或更高，表明这些多肽很可能被选为Lrig-1蛋白的表位。此外，确认了由SEQ ID NO:14至22所示的氨基酸序列构成的多肽的实际差异值更显著，被选择为表位的可能性更高。
[8-1-3]使用Asp-N+Lys-C的表位鉴定
以与上述[8-1-1]中相同的方式进行表位鉴定实验，不同之处在于使用Asp-N+Lys-C代替胰凝乳蛋白酶作为酶。结果示于图20和21和下表7中。
[表7]
Figure BDA0003633704790000252
Figure BDA0003633704790000261
Figure BDA0003633704790000271
由上表20、21和表7可知，在由SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域中，分别由1至15、16至18、31至45、31至55、289至318、360至361、498至506、507至517、573至600、585至600、601至620、601至626、605至620、611至618、611至620、667至681、695至722、696至709、和696至722位的氨基酸构成的多肽，抗原-抗体偶联物/抗原比为1.2或更高，表明这些多肽很可能被选为Lrig-1蛋白的表位。此外，确认了由SEQ ID NO:23至28所示的氨基酸序列构成的多肽的实际差异值更显著，被选择为表位的可能性更高。
作为以与上述[8-1-1]至[8-1-3]中进行的表位鉴定结果重叠的方式进行额外分析的结果，可以看出，结果中列出的多肽很可能是表位，特别是由SEQ ID NO:29至32表示的氨基酸序列组成的多肽更可能是GTC110-04抗体对Lrig-1蛋白的表位。
[8-2]交联质谱(XL-MS)
[8-2-1]使用胰凝乳蛋白酶的表位鉴定
将制备例8的GTC110-04抗体与SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域(抗原)以2:1的比例混合并使混合物充分反应来制备两种抗原-抗体偶联物样品。接下来，将充分溶解在DMSO(二甲基亚砜)中的DSG(二琥珀酰亚胺基戊二酸，20593，赛默飞)以1:50(样品：DSG)(T％)的比例添加到其中一个样品中，并且仅将DMSO添加到其他样品(C％)。随后，使各样品在25℃充分反应1小时。然后，以与[8-1-1]相同的方式，用胰凝乳蛋白酶处理每个样品并进行LC-MS分析以获得质谱值。
此后，检测添加了DSG的样品(T％)和仅添加了DMSO的样品(C％)之间的质谱值之间的差异。在具有差异的表位中，排除不是表位的结合辅助区域(单型和环型)，最终选择具有10％以下差异的区域。结果示于图22和下表8。
[表8]
Figure BDA0003633704790000281
Figure BDA0003633704790000291
由上图22和表8可知，分别由SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域的472-494(SEQ ID NO:32)、495-511(SEQ ID NO:33)、525-530(SEQ ID NO:34)、560至567(SEQ IDNO:35)、568至579(SEQ ID NO:36)、680至693(SEQ ID NO:37)和745至762(SEQ ID NO:38)位氨基酸组成的多肽，显示了5％或更低或10％或更低的交联水平，表明这些多肽很可能被选为Lrig-1蛋白的表位。
[8-2-2]使用胰蛋白酶的表位鉴定
以与上述[8-2-1]中相同的方式进行表位鉴定实验，不同之处在于使用胰蛋白酶代替胰凝乳蛋白酶作为酶。结果示于图23和下表9。
[表9]
Figure BDA0003633704790000301
Figure BDA0003633704790000311
如图23和表9可知，分别由SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域的1至4(SEQ ID NO：80)、46至92(SEQ ID NO：40)、164至172(SEQ ID NO：41)、264至274(SEQ IDNO:42)、267至274(SEQ ID NO:43)、268至274(SEQ ID NO:44)、275至287(SEQ ID NO:45)、275至303(SEQ ID NO:46)、386至394(SEQ ID NO:47)、395至424(SEQ ID NO:48)、425至441(SEQ ID NO:49)、442至479(SEQ ID NO:50)、480至498(SEQ ID NO:51)、498至531(SEQ IDNO:52)、532至540(SEQ ID NO:53)、541至556(SEQ ID NO:54)和615至629位(SEQ ID NO:55)氨基酸组成的多肽，显示出5％或更低或10％或更低的交联水平，表明这些多肽可能被选为Lrig-1蛋白的表位。
[8-2-3]使用Asp-N+Lys-C的表位鉴定
除了使用Asp-N+Lys-C代替胰凝乳蛋白酶作为酶之外，以与上述[8-2-1]中相同的方式进行表位鉴定实验。结果示于图24和下表10中。
[表10]
Figure BDA0003633704790000312
Figure BDA0003633704790000321
如图24和表10所示，分别由SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域的46至102(SEQ ID NO:56)、93至102(SEQ ID NO:57)、150至163(SEQ ID NO:58)、164至182(SEQID NO:59)、216至226(SEQ ID NO:60)、227至267(SEQ ID NO:61)、268至274(SEQ ID NO:62)、319至361(SEQ ID NO:63)、411至415(SEQ ID NO:64)、456至476(SEQ ID NO:65)、477至498(SEQ ID NO:66)、498至506(SEQ ID NO:67)、538至556(SEQ ID NO:68)、557至572(SEQ ID NO:69)和557至600位(SEQ ID NO:70))氨基酸组成的多肽，显示出5％或更低或10％或更低的交联水平，表明这些多肽可能被选为Lrig-1蛋白的表位。
作为以与上述[8-2-1]至[8-2-3]中进行的表位鉴定结果重叠的方式进行额外分析的结果，可以看出结果中列出的多肽很可能是表位，特别是由SEQ ID Nos:32至36、SEQID NOs:40至42和SEQ ID NOs:64和68中任一个所表示的氨基酸序列组成的多肽，很可能是GTC110-04抗体的Lrig-1蛋白的表位。
[8-3]表位预测
基于上述[8-1]和[8-2]中获得的表位鉴定结果重叠处理得到的特定表位序列的序列，按照上述[8-1]中相同的方法进行表位鉴定实验。结果见下表11和表12。
[表11]
酶 氨基酸位置 抗原 抗原-抗体偶联物 差值 比率
Asp-N Lys-C 31-45 5.01 3.83 1.18 1.31
Asp-N Lys-C 31-55 98.23 74.26 23.98 1.32
胰凝乳蛋白酶 36-64 51.37 40.77 10.60 1.26
胰蛋白酶 38-45 5.70 4.15 1.55 1.37
胰蛋白酶 46-94 91.22 74.75 16.47 1.22
[表12]
酶 氨基酸位置 抗原 抗原-抗体偶联物 差值 比率
胰蛋白酶 24-37 1.67 1.11 0.56 1.51
胰凝乳蛋白酶 26-64 59.56 51.51 8.05 1.16
Asp-N Lys-C 31-49 99.66 95.79 3.87 1.04
胰凝乳蛋白酶 38-64 53.47 46.30 7.16 1.15
Asp-N Lys-C 62-92 65.30 65.51 -0.22 1.00
胰凝乳蛋白酶 65-87 47.90 43.09 4.81 1.11
胰凝乳蛋白酶 88-94 89.93 89.48 0.44 1.00
如表11和12所示，证实了由SEQ ID NO:4表示的Lrig-1蛋白的胞外结构域中的第46至87位或第46至64位氨基酸组成的多肽使用不同的酶获得的结果的比率差异很大。
从上述结果可以看出，GTC110-04抗体可以特异性结合由Lrig-1蛋白胞外结构域氨基酸序列中46-87位或46-64位氨基酸组成的多肽(图25中圈出的区域)。
尽管本发明已在上文中详细描述，但是本发明的范围不限于此，并且对于本领域的普通技术人员显而易见的是，在不背离如所附权利要求中定义的本发明的技术精神的情况下，可以进行各种修改和变化。
工业实用性
根据本发明的与Lrig-1蛋白的表位特异性结合的抗体或抗原结合片段可以与存在于调节性T细胞上的本发明的表位特异性结合，从而抑制调节性T细胞的功能和维持或增加效应T细胞的活性。因此，它可以非常有效地用于癌症的预防、改善或治疗。
序列表
<110> 古德T细胞有限公司
<120> 调节性T细胞表面抗原的表位和与其特异性结合的抗体
<130> POPB204290PCTCN
<150> KR 10-2019-0142251
<151> 2019-11-08
<160> 164
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1093
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Ala Arg Pro Val Arg Gly Gly Leu Gly Ala Pro Arg Arg Ser Pro
1 5 10 15
Cys Leu Leu Leu Leu Trp Leu Val Leu Val Arg Leu Glu Pro Val Thr
20 25 30
Ala Ala Ala Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala
35 40 45
Gly Asp Ser Leu Asp Cys Gly Gly Arg Gly Leu Ala Ala Leu Pro Gly
50 55 60
Asp Leu Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu
65 70 75 80
Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu
85 90 95
Val Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe
100 105 110
Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Val Tyr Leu Asn Asn Asn Glu Leu
115 120 125
Thr Ala Val Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ser Ser His Val Val Ser Leu
130 135 140
Phe Leu Gln His Asn Lys Ile Arg Ser Val Glu Gly Ser Gln Leu Lys
145 150 155 160
Ala Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu Asp Leu Ser Leu Asn Asn Ile Thr
165 170 175
Glu Val Arg Asn Thr Cys Phe Pro His Gly Pro Pro Ile Lys Glu Leu
180 185 190
Asn Leu Ala Gly Asn Arg Ile Gly Thr Leu Glu Leu Gly Ala Phe Asp
195 200 205
Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr Leu Arg Leu Ser Lys Asn Arg Ile
210 215 220
Thr Gln Leu Pro Val Arg Ala Phe Lys Leu Pro Arg Leu Thr Gln Leu
225 230 235 240
Asp Leu Asn Arg Asn Arg Ile Arg Leu Ile Glu Gly Leu Thr Phe Gln
245 250 255
Gly Leu Asn Ser Leu Glu Val Leu Lys Leu Gln Arg Asn Asn Ile Ser
260 265 270
Lys Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly Leu Ser Lys Met His Val Leu
275 280 285
His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val Glu Val Asn Ser Gly Ser Leu Tyr
290 295 300
Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu His Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ala
305 310 315 320
Arg Ile His Arg Lys Gly Trp Ser Phe Cys Gln Lys Leu His Glu Leu
325 330 335
Val Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg Leu Asp Glu Glu Ser Leu Ala
340 345 350
Glu Leu Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg Leu Ser His Asn Ser Ile Ser
355 360 365
His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys Gly Leu Arg Ser Leu Arg Val Leu
370 375 380
Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser Gly Thr Ile Glu Asp Thr Ser Gly
385 390 395 400
Ala Phe Ser Gly Leu Asp Ser Leu Ser Lys Leu Asn Leu Gly Gly Asn
405 410 415
Ala Ile Arg Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Val Lys Met Lys Asn Leu
420 425 430
Lys Glu Leu His Ile Ser Ser Asp Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu
435 440 445
Lys Trp Leu Pro Pro Trp Leu Ile Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val
450 455 460
Thr Ala Thr Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe
465 470 475 480
Ser Val Pro Pro Glu Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Leu Lys Pro Gln
485 490 495
Ile Ile Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Met Val Gly Lys Asp Ile
500 505 510
Arg Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe
515 520 525
Ala Trp Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn
530 535 540
Phe Val His Val His Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr
545 550 555 560
Ile Leu His Leu Arg Gln Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg Tyr Gln
565 570 575
Cys Val Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys Ala Arg
580 585 590
Leu Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Thr Pro His Asp Ile
595 600 605
Thr Ile Arg Thr Thr Thr Val Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala Thr Gly
610 615 620
His Pro Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe
625 630 635 640
Pro Ala Ala Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val
645 650 655
Phe Phe Ile Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Ala Gly Val Tyr Ser Cys
660 665 670
Thr Ala Gln Asn Ser Ala Gly Ser Ile Ser Ala Asn Ala Thr Leu Thr
675 680 685
Val Leu Glu Thr Pro Ser Leu Val Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val
690 695 700
Ser Val Gly Glu Thr Val Ala Leu Gln Cys Lys Ala Thr Gly Asn Pro
705 710 715 720
Pro Pro Arg Ile Thr Trp Phe Lys Gly Asp Arg Pro Leu Ser Leu Thr
725 730 735
Glu Arg His His Leu Thr Pro Asp Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn
740 745 750
Val Val Ala Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Thr
755 760 765
Leu Gly Thr Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Val Leu Pro Ala Ala
770 775 780
Gly Cys Arg Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly Ile Phe Thr Ile Ala Val
785 790 795 800
Val Ser Ser Ile Val Leu Thr Ser Leu Val Trp Val Cys Ile Ile Tyr
805 810 815
Gln Thr Arg Lys Lys Ser Glu Glu Tyr Ser Val Thr Asn Thr Asp Glu
820 825 830
Thr Val Val Pro Pro Asp Val Pro Ser Tyr Leu Ser Ser Gln Gly Thr
835 840 845
Leu Ser Asp Arg Gln Glu Thr Val Val Arg Thr Glu Gly Gly Pro Gln
850 855 860
Ala Asn Gly His Ile Glu Ser Asn Gly Val Cys Pro Arg Asp Ala Ser
865 870 875 880
His Phe Pro Glu Pro Asp Thr His Ser Val Ala Cys Arg Gln Pro Lys
885 890 895
Leu Cys Ala Gly Ser Ala Tyr His Lys Glu Pro Trp Lys Ala Met Glu
900 905 910
Lys Ala Glu Gly Thr Pro Gly Pro His Lys Met Glu His Gly Gly Arg
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Val Val Cys Ser Asp Cys Asn Thr Glu Val Asp Cys Tyr Ser Arg Gly
930 935 940
Gln Ala Phe His Pro Gln Pro Val Ser Arg Asp Ser Ala Gln Pro Ser
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Ala Pro Asn Gly Pro Glu Pro Gly Gly Ser Asp Gln Glu His Ser Pro
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His His Gln Cys Ser Arg Thr Ala Ala Gly Ser Cys Pro Glu Cys Gln
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Gly Ser Leu Tyr Pro Ser Asn His Asp Arg Met Leu Thr Ala Val Lys
995 1000 1005
Lys Lys Pro Met Ala Ser Leu Asp Gly Lys Gly Asp Ser Ser Trp Thr
1010 1015 1020
Leu Ala Arg Leu Tyr His Pro Asp Ser Thr Glu Leu Gln Pro Ala Ser
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Ser Leu Thr Ser Gly Ser Pro Glu Arg Ala Glu Ala Gln Tyr Leu Leu
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Val Ser Asn Gly His Leu Pro Lys Ala Cys Asp Ala Ser Pro Glu Ser
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Thr Pro Leu Thr Gly Gln Leu Pro Gly Lys Gln Arg Val Pro Leu Leu
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Leu Ala Pro Lys Ser
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<210> 2
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<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
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atggcgcggc cggtccgggg agggctcggg gccccgcgcc gctcgccttg ccttctcctt 60
ctctggctgc ttttgcttcg gctggagccg gtgaccgccg cggccggccc gcgggcgccc 120
tgcgcggccg cctgcacttg cgctggggac tcgctggact gcggtgggcg cgggctggct 180
gcgttgcccg gggacctgcc ctcctggacg cggagcctaa acctgagtta caacaaactc 240
tctgagattg accctgctgg ttttgaggac ttgccgaacc tacaggaagt gtacctcaat 300
aataatgagt tgacagcggt accatccctg ggcgctgctt catcacatgt cgtctctctc 360
tttctgcagc acaacaagat tcgcagcgtg gaggggagcc agctgaaggc ctacctttcc 420
ttagaagtgt tagatctgag tttgaacaac atcacggaag tgcggaacac ctgctttcca 480
cacggaccgc ctataaagga gctcaacctg gcaggcaatc ggattggcac cctggagttg 540
ggagcatttg atggtctgtc acggtcgctg ctaactcttc gcctgagcaa aaacaggatc 600
acccagcttc ctgtaagagc attcaagcta cccaggctga cacaactgga cctcaatcgg 660
aacaggattc ggctgataga gggcctcacc ttccaggggc tcaacagctt ggaggtgctg 720
aagcttcagc gaaacaacat cagcaaactg acagatgggg ccttctgggg actgtccaag 780
atgcatgtgc tgcacctgga gtacaacagc ctggtagaag tgaacagcgg ctcgctctac 840
ggcctcacgg ccctgcatca gctccacctc agcaacaatt ccatcgctcg cattcaccgc 900
aagggctgga gcttctgcca gaagctgcat gagttggtcc tgtccttcaa caacctgaca 960
cggctggacg aggagagcct ggccgagctg agcagcctga gtgtcctgcg tctcagccac 1020
aattccatca gccacattgc ggagggtgcc ttcaagggac tcaggagcct gcgagtcttg 1080
gatctggacc ataacgagat ttcgggcaca atagaggaca cgagcggcgc cttctcaggg 1140
ctcgacagcc tcagcaagct gactctgttt ggaaacaaga tcaagtctgt ggctaagaga 1200
gcattctcgg ggctggaagg cctggagcac ctgaaccttg gagggaatgc gatcagatct 1260
gtccagtttg atgcctttgt gaagatgaag aatcttaaag agctccatat cagcagcgac 1320
agcttcctgt gtgactgcca gctgaagtgg ctgcccccgt ggctaattgg caggatgctg 1380
caggcctttg tgacagccac ctgtgcccac ccagaatcac tgaagggtca gagcattttc 1440
tctgtgccac cagagagttt cgtgtgcgat gacttcctga agccacagat catcacccag 1500
ccagaaacca ccatggctat ggtgggcaag gacatccggt ttacatgctc agcagccagc 1560
agcagcagct cccccatgac ctttgcctgg aagaaagaca atgaagtcct gaccaatgca 1620
gacatggaga actttgtcca cgtccacgcg caggacgggg aagtgatgga gtacaccacc 1680
atcctgcacc tccgtcaggt cactttcggg cacgagggcc gctaccaatg tgtcatcacc 1740
aaccactttg gctccaccta ttcacataag gccaggctca ccgtgaatgt gttgccatca 1800
ttcaccaaaa cgccccacga cataaccatc cggaccacca ccatggcccg cctcgaatgt 1860
gctgccacag gtcacccaaa ccctcagatt gcctggcaga aggatggagg cacggatttc 1920
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gatgtgaaaa tagatgacgc aggggtttac agctgtactg ctcagaactc agccggttct 2040
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ctgcccgcag caggctgcag gaaggatggg accacggtag gcatcttcac cattgctgtc 2400
gtgagcagca tcgtcctgac gtcactggtc tgggtgtgca tcatctacca gaccaggaag 2460
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ggtggccctc aggccaatgg gcacattgag agcaatggtg tgtgtccaag agatgcaagc 2640
cactttccag agcccgacac tcacagcgtt gcctgcaggc agccaaagct ctgtgctggg 2700
tctgcgtatc acaaagagcc gtggaaagcg atggagaaag ctgaagggac acctgggcca 2760
cataagatgg aacacggtgg ccgggtcgta tgcagtgact gcaacaccga agtggactgt 2820
tactccaggg gacaagcctt ccacccccag cctgtgtcca gagacagcgc acagccaagt 2880
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gggaaacaga gggtgccact gctgttggca ccaaaaagct ag 3282
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<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
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Met Ala Arg Pro Gly Pro Gly Val Leu Gly Ala Pro Arg Leu Ala Pro
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Arg Leu Leu Leu Trp Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gln Trp Pro Glu Ser
20 25 30
Ala Gly Ala Gln Ala Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr
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Cys Ala Gly Asp Ser Leu Asp Cys Ser Gly Arg Gly Leu Ala Thr Leu
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Pro Arg Asp Leu Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn
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Arg Leu Ser Glu Ile Asp Ser Ala Ala Phe Glu Asp Leu Thr Asn Leu
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130 135 140
Val Leu Asp Leu Ser Ser Asn Asn Ile Thr Glu Ile Arg Ser Ser Cys
145 150 155 160
Phe Pro Asn Gly Leu Arg Ile Arg Glu Leu Asn Leu Ala Ser Asn Arg
165 170 175
Ile Ser Ile Leu Glu Ser Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu
180 185 190
Leu Thr Leu Arg Leu Ser Lys Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Lys
195 200 205
Ala Phe Lys Leu Pro Arg Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg Asn Arg
210 215 220
Ile Arg Leu Ile Glu Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asp Ser Leu Glu
225 230 235 240
Val Leu Arg Leu Gln Arg Asn Asn Ile Ser Arg Leu Thr Asp Gly Ala
245 250 255
Phe Trp Gly Leu Ser Lys Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser
260 265 270
Leu Val Glu Val Asn Ser Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His
275 280 285
Gln Leu His Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ser Arg Ile Gln Arg Asp Gly
290 295 300
Trp Ser Phe Cys Gln Lys Leu His Glu Leu Ile Leu Ser Phe Asn Asn
305 310 315 320
Leu Thr Arg Leu Asp Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser
325 330 335
Ile Leu Arg Leu Ser His Asn Ala Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala
340 345 350
Phe Lys Gly Leu Lys Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu
355 360 365
Ile Ser Gly Thr Ile Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Thr Gly Leu Asp
370 375 380
Asn Leu Ser Lys Leu Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys Ser Val Ala
385 390 395 400
Lys Arg Ala Phe Ser Gly Leu Glu Ser Leu Glu His Leu Asn Leu Gly
405 410 415
Glu Asn Ala Ile Arg Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Ala Lys Met Lys
420 425 430
Asn Leu Lys Glu Leu Tyr Ile Ser Ser Glu Ser Phe Leu Cys Asp Cys
435 440 445
Gln Leu Lys Trp Leu Pro Pro Trp Leu Met Gly Arg Met Leu Gln Ala
450 455 460
Phe Val Thr Ala Thr Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser
465 470 475 480
Ile Phe Ser Val Leu Pro Asp Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Pro Lys
485 490 495
Pro Gln Ile Ile Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Val Val Gly Lys
500 505 510
Asp Ile Arg Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met
515 520 525
Thr Phe Ala Trp Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Ala Asn Ala Asp Met
530 535 540
Glu Asn Phe Ala His Val Arg Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr
545 550 555 560
Thr Thr Ile Leu His Leu Arg His Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg
565 570 575
Tyr Gln Cys Ile Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys
580 585 590
Ala Arg Leu Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Ile Pro His
595 600 605
Asp Ile Ala Ile Arg Thr Gly Thr Thr Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala
610 615 620
Thr Gly His Pro Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr
625 630 635 640
Asp Phe Pro Ala Ala Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp
645 650 655
Asp Val Phe Phe Ile Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Met Gly Val Tyr
660 665 670
Ser Cys Thr Ala Gln Asn Ser Ala Gly Ser Val Ser Ala Asn Ala Thr
675 680 685
Leu Thr Val Leu Glu Thr Pro Ser Leu Ala Val Pro Leu Glu Asp Arg
690 695 700
Val Val Thr Val Gly Glu Thr Val Ala Phe Gln Cys Lys Ala Thr Gly
705 710 715 720
Ser Pro Thr Pro Arg Ile Thr Trp Leu Lys Gly Gly Arg Pro Leu Ser
725 730 735
Leu Thr Glu Arg His His Phe Thr Pro Gly Asn Gln Leu Leu Val Val
740 745 750
Gln Asn Val Met Ile Asp Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser
755 760 765
Asn Pro Leu Gly Thr Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Ile Leu Pro
770 775 780
Thr Pro Gly Cys Arg Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly Ile Phe Thr Ile
785 790 795 800
Ala Val Val Cys Ser Ile Val Leu Thr Ser Leu Val Trp Val Cys Ile
805 810 815
Ile Tyr Gln Thr Arg Lys Lys Ser Glu Glu Tyr Ser Val Thr Asn Thr
820 825 830
Asp Glu Thr Ile Val Pro Pro Asp Val Pro Ser Tyr Leu Ser Ser Gln
835 840 845
Gly Thr Leu Ser Asp Arg Gln Glu Thr Val Val Arg Thr Glu Gly Gly
850 855 860
His Gln Ala Asn Gly His Ile Glu Ser Asn Gly Val Cys Leu Arg Asp
865 870 875 880
Pro Ser Leu Phe Pro Glu Val Asp Ile His Ser Thr Thr Cys Arg Gln
885 890 895
Pro Lys Leu Cys Val Gly Tyr Thr Arg Glu Pro Trp Lys Val Thr Glu
900 905 910
Lys Ala Asp Arg Thr Ala Ala Pro His Thr Thr Ala His Ser Gly Ser
915 920 925
Ala Val Cys Ser Asp Cys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr His Pro Gln Pro
930 935 940
Val Pro Arg Asp Ser Gly Gln Pro Gly Thr Ala Ser Ser Gln Glu Leu
945 950 955 960
Arg Gln His Asp Arg Glu Tyr Ser Pro His His Pro Tyr Ser Gly Thr
965 970 975
Ala Asp Gly Ser His Thr Leu Ser Gly Gly Ser Leu Tyr Pro Ser Asn
980 985 990
His Asp Arg Ile Leu Pro Ser Leu Lys Asn Lys Ala Ala Ser Ala Asp
995 1000 1005
Gly Asn Gly Asp Ser Ser Trp Thr Leu Ala Lys Leu His Glu Ala Asp
1010 1015 1020
Cys Ile Asp Leu Lys Pro Ser Pro Thr Leu Ala Ser Gly Ser Pro Glu
1025 1030 1035 1040
Leu Met Glu Asp Ala Ile Ser Thr Glu Ala Gln His Leu Leu Val Ser
1045 1050 1055
Asn Gly His Leu Pro Lys Ala Cys Asp Ser Ser Pro Glu Ser Val Pro
1060 1065 1070
Leu Lys Gly Gln Ile Thr Gly Lys Arg Arg Gly Pro Leu Leu Leu Ala
1075 1080 1085
Pro Arg Ser
1090
<210> 4
<211> 3276
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 4
atggcgcggc ccggtccggg agtgctcgga gccccgcgcc ttgcgcctcg ccttctgctc 60
tggctgctct tgctgctact gcaatggccg gagtcagcgg gcgcccaggc tcgcccgcgg 120
gccccctgcg cggccgcctg cacttgcgcc gggaactcgc tggactgcag tgggcgcggg 180
ctggcgacgc tgccccggga cctgccctcc tggacgcgca gcctaaacct gagttataac 240
agactctccg agatcgactc tgctgctttt gaggacttga cgaatctgca ggaagtgtac 300
ctcaacagca atgagctgac agccatacca tcactgggca ctgcttccat aggagttgtc 360
tctctctttt tgcagcacaa caagatcctt agtgtggatg ggagccagct gaagtcgtac 420
ctgtccttgg aagtgctgga tctgagttcc aacaacatca cggaaattcg gagctcctgt 480
ttcccgaacg gcctgcgtat aagggaactc aacttggcga gcaaccgcat cagcatcctg 540
gagtctggag catttgatgg tctgtcgcgg tcactgctga ctctccgtct gagcaaaaac 600
aggatcaccc agcttcctgt gaaagcgttc aagctaccca ggctgacaca actagacctg 660
aatcggaatc ggattcggct gattgaaggc ctcacgttcc aggggctcga cagcttagag 720
gtgctgaggc ttcagaggaa caacatcagc aggctgacgg acggggcctt ctgggggctg 780
tctaagatgc acgtgctgca cctggagtac aacagtctgg tggaagtgaa cagtggctcc 840
ctctatggcc tcacagccct gcaccagctg cacctcagca acaactccat ctctcgaatt 900
cagcgtgatg gctggagctt ctgccaaaag ctgcatgagt tgattctgtc cttcaacaac 960
ctcacgcggc tggatgagga gagtctagcg gagttgagca gcctcagtat cctgcgcctc 1020
agtcacaacg ccatcagtca cattgctgaa ggcgccttca agggactcaa gagtctgcgg 1080
gtcttggacc tggaccataa cgagatctcg ggtacaatcg aggataccag tggtgccttt 1140
acggggcttg acaacctcag caagctgact ctgtttggaa acaagatcaa atctgtggct 1200
aagagagcct tctcgggcct ggaaagcctg gaacacctga accttggaga gaatgcaatc 1260
aggtctgtcc agtttgatgc ctttgcaaag atgaagaacc ttaaagagct ctacatcagc 1320
agtgagagct tcctgtgtga ctgccagctc aagtggctgc ccccatggct aatgggtagg 1380
atgctgcagg cctttgtgac agccacctgt gcccatccag agtcgctgaa gggccagagc 1440
attttctcag tgctgccaga cagctttgtg tgtgatgact ttccaaagcc acagatcatc 1500
acccagcctg agacgaccat ggctgtggtg ggcaaggaca tccgtttcac atgctccgca 1560
gccagcagca gcagctcacc aatgaccttc gcctggaaga aggacaatga ggtcctggcc 1620
aatgcagaca tggagaactt tgcccacgtc cgtgcacagg acggcgaagt gatggagtat 1680
accactatcc tgcacctccg tcacgtcacc tttgggcacg agggccgcta ccagtgtatc 1740
atcacaaacc actttggctc cacatactcc cacaaagcca ggctcactgt gaatgtgttg 1800
ccatcattca ctaaaatacc ccatgacatt gccatccgga ctggcaccac agcccgcctc 1860
gagtgtgctg ccacgggcca ccctaaccct cagattgcct ggcagaagga tggaggcacc 1920
gatttcccgg cagctcgtga gcgacgcatg catgttatgc cagacgatga tgtgttcttc 1980
atcactgatg tgaaaataga cgacatgggg gtctacagct gcactgccca gaactcggca 2040
ggctcggttt cagccaacgc taccctcaca gtcttagaaa ctccatcctt ggcagtgcct 2100
ctggaagacc gtgtggtaac tgtgggagaa acagtggcct tccagtgcaa agcaaccggg 2160
agccccacac cacgcatcac ctggcttaag ggaggtcgcc cattgagcct cacagagcgc 2220
caccatttca ctccaggcaa ccagctgctg gttgttcaga atgtgatgat agacgatgca 2280
gggcggtata cctgtgagat gtctaatccc ctgggcactg agcgagcaca tagccagctg 2340
agcattttac ctacccctgg ctgccggaag gatgggacca ccgtaggcat cttcaccatt 2400
gctgtggtgt gcagtattgt cctgacctcg ctggtgtggg tgtgcatcat ctaccagacc 2460
aggaagaaga gcgaggagta cagcgtcact aacacagatg aaaccattgt gcctccagat 2520
gttccaagct acctctcctc tcagggaacc ctttctgacc ggcaggaaac tgtggtcagg 2580
actgagggtg gtcatcaggc caatgggcac attgaaagca atggtgtgtg tctgagagac 2640
ccgagcctct tcccagaggt cgacattcat agcactacat gtaggcagcc caagctgtgt 2700
gttggataca ctagagagcc ctggaaggtg acggagaaag ccgacaggac agctgcccca 2760
catacaacag cacacagtgg ctctgctgta tgtagtgact gcagtactga cacagcctac 2820
catccccagc ctgtgcccag agacagtggg cagccaggca cagcgagcag ccaagagctc 2880
aggcagcatg accgggaata ttctccacac catccttaca gtgggactgc ggatgggtct 2940
cataccctct ctggggggtc cctctatcca agcaaccatg acagaatact gccatccttg 3000
aagaacaagg cggcgtctgc agatgggaac ggagattcct cttggacttt agcaaagtta 3060
catgaagcag actgcataga cctaaagcct tctcctacgt tagcttcagg cagcccagag 3120
ctcatggaag acgccatatc tactgaagcc cagcacttgc ttgtttccaa tggccacctc 3180
cccaaggcct gtgactccag ccctgaatct gtgccactga aagggcagat cactgggaaa 3240
cggaggggac cactgctatt ggcaccgaga agctag 3276
<210> 5
<211> 762
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
Ala Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu Asp Cys Gly Gly Arg Gly Leu Ala Ala Leu Pro Gly Asp Leu
20 25 30
Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu
35 40 45
Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Val Tyr
50 55 60
Leu Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala Val Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ser
65 70 75 80
Ser His Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys Ile Arg Ser Val
85 90 95
Glu Gly Ser Gln Leu Lys Ala Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu Asp Leu
100 105 110
Ser Leu Asn Asn Ile Thr Glu Val Arg Asn Thr Cys Phe Pro His Gly
115 120 125
Pro Pro Ile Lys Glu Leu Asn Leu Ala Gly Asn Arg Ile Gly Thr Leu
130 135 140
Glu Leu Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ser Lys Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Arg Ala Phe Lys Leu
165 170 175
Pro Arg Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg Asn Arg Ile Arg Leu Ile
180 185 190
Glu Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asn Ser Leu Glu Val Leu Lys Leu
195 200 205
Gln Arg Asn Asn Ile Ser Lys Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly Leu
210 215 220
Ser Lys Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val Glu Val
225 230 235 240
Asn Ser Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu His Leu
245 250 255
Ser Asn Asn Ser Ile Ala Arg Ile His Arg Lys Gly Trp Ser Phe Cys
260 265 270
Gln Lys Leu His Glu Leu Val Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg Leu
275 280 285
Asp Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg Leu
290 295 300
Ser His Asn Ser Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys Gly Leu
305 310 315 320
Arg Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser Gly Thr
325 330 335
Ile Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Ser Gly Leu Asp Ser Leu Ser Lys
340 345 350
Leu Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys Ser Val Ala Lys Arg Ala Phe
355 360 365
Ser Gly Leu Glu Gly Leu Glu His Leu Asn Leu Gly Gly Asn Ala Ile
370 375 380
Arg Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Val Lys Met Lys Asn Leu Lys Glu
385 390 395 400
Leu His Ile Ser Ser Asp Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu Lys Trp
405 410 415
Leu Pro Pro Trp Leu Ile Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val Thr Ala
420 425 430
Thr Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe Ser Val
435 440 445
Pro Pro Glu Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Leu Lys Pro Gln Ile Ile
450 455 460
Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Met Val Gly Lys Asp Ile Arg Phe
465 470 475 480
Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe Ala Trp
485 490 495
Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe Val
500 505 510
His Val His Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr Ile Leu
515 520 525
His Leu Arg Gln Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg Tyr Gln Cys Val
530 535 540
Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys Ala Arg Leu Thr
545 550 555 560
Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Thr Pro His Asp Ile Thr Ile
565 570 575
Arg Thr Thr Thr Val Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala Thr Gly His Pro
580 585 590
Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe Pro Ala
595 600 605
Ala Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe
610 615 620
Ile Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Ala Gly Val Tyr Ser Cys Thr Ala
625 630 635 640
Gln Asn Ser Ala Gly Ser Ile Ser Ala Asn Ala Thr Leu Thr Val Leu
645 650 655
Glu Thr Pro Ser Leu Val Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val Ser Val
660 665 670
Gly Glu Thr Val Ala Leu Gln Cys Lys Ala Thr Gly Asn Pro Pro Pro
675 680 685
Arg Ile Thr Trp Phe Lys Gly Asp Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu Arg
690 695 700
His His Leu Thr Pro Asp Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn Val Val
705 710 715 720
Ala Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Thr Leu Gly
725 730 735
Thr Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Val Leu Pro Ala Ala Gly Cys
740 745 750
Arg Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly Ile Phe
755 760
<210> 6
<211> 760
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 6
Ala Gln Ala Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala
1 5 10 15
Gly Asp Ser Leu Asp Cys Ser Gly Arg Gly Leu Ala Thr Leu Pro Arg
20 25 30
Asp Leu Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Arg Leu
35 40 45
Ser Glu Ile Asp Ser Ala Ala Phe Glu Asp Leu Thr Asn Leu Gln Glu
50 55 60
Val Tyr Leu Asn Ser Asn Glu Leu Thr Ala Ile Pro Ser Leu Gly Ala
65 70 75 80
Ala Ser Ile Gly Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys Ile Leu
85 90 95
Ser Val Asp Gly Ser Gln Leu Lys Ser Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu
100 105 110
Asp Leu Ser Ser Asn Asn Ile Thr Glu Ile Arg Ser Ser Cys Phe Pro
115 120 125
Asn Gly Leu Arg Ile Arg Glu Leu Asn Leu Ala Ser Asn Arg Ile Ser
130 135 140
Ile Leu Glu Ser Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Lys Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Lys Ala Phe
165 170 175
Lys Leu Pro Arg Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg Asn Arg Ile Arg
180 185 190
Leu Ile Glu Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asp Ser Leu Glu Val Leu
195 200 205
Arg Leu Gln Arg Asn Asn Ile Ser Arg Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp
210 215 220
Gly Leu Ser Lys Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val
225 230 235 240
Glu Val Asn Ser Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu
245 250 255
His Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ser Arg Ile Gln Arg Asp Gly Trp Ser
260 265 270
Phe Cys Gln Lys Leu His Glu Leu Ile Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr
275 280 285
Arg Leu Asp Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Ile Leu
290 295 300
Arg Leu Ser His Asn Ala Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys
305 310 315 320
Gly Leu Lys Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser
325 330 335
Gly Thr Ile Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Thr Gly Leu Asp Asn Leu
340 345 350
Ser Lys Leu Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys Ser Val Ala Lys Arg
355 360 365
Ala Phe Ser Gly Leu Glu Ser Leu Glu His Leu Asn Leu Gly Glu Asn
370 375 380
Ala Ile Arg Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Ala Lys Met Lys Asn Leu
385 390 395 400
Lys Glu Leu Tyr Ile Ser Ser Glu Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu
405 410 415
Lys Trp Leu Pro Pro Trp Leu Met Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val
420 425 430
Thr Ala Thr Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe
435 440 445
Ser Val Leu Pro Asp Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Pro Lys Pro Gln
450 455 460
Ile Ile Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Val Val Gly Lys Asp Ile
465 470 475 480
Arg Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe
485 490 495
Ala Trp Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Ala Asn Ala Asp Met Glu Asn
500 505 510
Phe Ala His Val Arg Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr
515 520 525
Ile Leu His Leu Arg His Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg Tyr Gln
530 535 540
Cys Ile Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys Ala Arg
545 550 555 560
Leu Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Ile Pro His Asp Ile
565 570 575
Ala Ile Arg Thr Gly Thr Thr Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala Thr Gly
580 585 590
His Pro Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe
595 600 605
Pro Ala Ala Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val
610 615 620
Phe Phe Ile Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Met Gly Val Tyr Ser Cys
625 630 635 640
Thr Ala Gln Asn Ser Ala Gly Ser Val Ser Ala Asn Ala Thr Leu Thr
645 650 655
Val Leu Glu Thr Pro Ser Leu Ala Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val
660 665 670
Thr Val Gly Glu Thr Val Ala Phe Gln Cys Lys Ala Thr Gly Ser Pro
675 680 685
Thr Pro Arg Ile Thr Trp Leu Lys Gly Gly Arg Pro Leu Ser Leu Thr
690 695 700
Glu Arg His His Phe Thr Pro Gly Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn
705 710 715 720
Val Met Ile Asp Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Pro
725 730 735
Leu Gly Thr Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Ile Leu Pro Thr Pro
740 745 750
Gly Cys Arg Lys Asp Gly Thr Thr
755 760
<210> 7
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 7
Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu Ile Asp Pro
1 5 10 15
Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Val Tyr
20 25
<210> 8
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 8
Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu Asp Leu Ser Leu Asn Asn Ile Thr Glu
1 5 10 15
Val Arg Asn Thr Cys Phe Pro His Gly Pro Pro Ile Lys Glu Leu
20 25 30
<210> 9
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 9
His Gln Leu
1
<210> 10
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 10
Asp His Asn Glu Ile Ser Gly Thr Ile Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe
1 5 10 15
Ser Gly Leu
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 11
His Leu Arg Gln Val Thr Phe
1 5
<210> 12
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 12
Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe Pro Ala Ala Arg Glu Arg Arg Met
1 5 10 15
His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe Ile Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Asp Asp Ala Gly Val Tyr
35
<210> 13
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 13
Ser Leu Thr Glu Arg His His Leu Thr Pro Asp Asn Gln Leu Leu Val
1 5 10 15
Val Gln Asn Val Val Ala Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met
20 25 30
Ser Asn Thr Leu
35
<210> 14
<211> 71
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 14
Gly Leu Ala Ala Leu Pro Gly Asp Leu Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu
1 5 10 15
Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu
20 25 30
Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Val Tyr Leu Asn Asn Asn Glu Leu Thr
35 40 45
Ala Val Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ser Ser His Val Val Ser Leu Phe
50 55 60
Leu Gln His Asn Lys Ile Arg
65 70
<210> 15
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 15
Ile Gly Thr Leu Glu Leu Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg
1 5 10
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 16
Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg
1 5
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 17
Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly Leu Ser Lys
1 5 10
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 18
Gln Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg
1 5
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 19
Leu Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys
1 5 10
<210> 20
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 20
Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe Ile Thr Asp Val Lys
1 5 10 15
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 21
Ile Thr Trp Phe Lys
1 5
<210> 22
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 22
Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Thr Leu Gly Thr Glu Arg Ala His Ser
1 5 10 15
Gln Leu Ser Val Leu Pro Ala Ala Gly Cys Arg Lys
20 25
<210> 23
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 23
Ala Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu
<210> 24
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 24
Asp Leu Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu
1 5 10 15
Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu
20 25
<210> 25
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 25
Asp Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg Leu
1 5 10 15
Ser His Asn Ser Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys
20 25 30
<210> 26
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 26
Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe Val His
1 5 10 15
Val His Ala Gln
20
<210> 27
<211> 54
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 27
Asp Ile Thr Ile Arg Thr Thr Thr Val Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala
1 5 10 15
Thr Gly His Pro Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr
20 25 30
Asp Phe Pro Ala Ala Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp
35 40 45
Asp Val Phe Phe Ile Thr
50
<210> 28
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 28
Gly Asp Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu Arg His His Leu Thr Pro Asp
1 5 10 15
Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn Val Val Ala Glu
20 25
<210> 29
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 29
Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu Ile Asp Pro
1 5 10 15
Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Val Tyr
20 25
<210> 30
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 30
Gln Lys
100
<210> 31
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 31
Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe
1 5 10
<210> 32
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 32
Ala Met Val Gly Lys Asp Ile Arg Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe
20
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 33
Ala Trp Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn
1 5 10 15
Phe
<210> 34
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 34
Thr Thr Ile Leu His Leu
1 5
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 35
Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe
1 5
<210> 36
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 36
Thr Lys Thr Pro His Asp Ile Thr Ile Arg Thr Thr
1 5 10
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 37
Cys Lys Ala Thr Gly Asn Pro Pro Pro Arg Ile Thr Trp Phe
1 5 10
<210> 38
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 38
Ser Val Leu Pro Ala Ala Gly Cys Arg Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly
1 5 10 15
Ile Phe
<210> 39
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 39
Ala Gly Pro Arg
1
<210> 40
<211> 47
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 40
Leu Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln
1 5 10 15
Glu Val Tyr Leu Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala Val Pro Ser Leu Gly
20 25 30
Ala Ala Ser Ser His Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys
35 40 45
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 41
Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Arg
1 5
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 42
Ile His Arg Lys Gly Trp Ser Phe Cys Gln Lys
1 5 10
<210> 43
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 43
Lys Gly Trp Ser Phe Cys Gln Lys
1 5
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 44
Gly Trp Ser Phe Cys Gln Lys
1 5
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 45
Leu His Glu Leu Val Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg
1 5 10
<210> 46
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 46
Leu His Glu Leu Val Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg
20 25
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 47
Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Val Lys
1 5
<210> 48
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 48
Met Lys Asn Leu Lys Glu Leu His Ile Ser Ser Asp Ser Phe Leu Cys
1 5 10 15
Asp Cys Gln Leu Lys Trp Leu Pro Pro Trp Leu Ile Gly Arg
20 25 30
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 49
Met Leu Gln Ala Phe Val Thr Ala Thr Cys Ala His Pro Glu Ser Leu
1 5 10 15
Lys
<210> 50
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 50
Gly Gln Ser Ile Phe Ser Val Pro Pro Glu Ser Phe Val Cys Asp Asp
1 5 10 15
Phe Leu Lys Pro Gln Ile Ile Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Met
20 25 30
Val Gly Lys Asp Ile Arg
35
<210> 51
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 51
Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe Ala
1 5 10 15
Trp Lys Lys
<210> 52
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 52
Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe Val His
1 5 10 15
Val His Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr Ile Leu His
20 25 30
Leu Arg
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 53
Gln Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg
1 5
<210> 54
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 54
Tyr Gln Cys Val Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys
1 5 10 15
<210> 55
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 55
His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe Ile Thr Asp Val Lys
1 5 10 15
<210> 56
<211> 57
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 56
Leu Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln
1 5 10 15
Glu Val Tyr Leu Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala Val Pro Ser Leu Gly
20 25 30
Ala Ala Ser Ser His Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys Ile
35 40 45
Arg Ser Val Glu Gly Ser Gln Leu Lys
50 55
<210> 57
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 57
Ile Arg Ser Val Glu Gly Ser Gln Leu Lys
1 5 10
<210> 58
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 58
Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr Leu Arg Leu Ser Lys
1 5 10
<210> 59
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 59
Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Arg Ala Phe Lys Leu Pro Arg Leu
1 5 10 15
Thr Gln Leu
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 60
Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly Leu Ser Lys
1 5 10
<210> 61
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 61
Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val Glu Val Asn Ser
1 5 10 15
Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu His Leu Ser Asn
20 25 30
Asn Ser Ile Ala Arg Ile His Arg Lys
35 40
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 62
Gly Trp Ser Phe Cys Gln Lys
1 5
<210> 63
<211> 43
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 63
Gly Leu Arg Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser
1 5 10 15
Gly Thr Ile Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Ser Gly Leu Asp Ser Leu
20 25 30
Ser Lys Leu Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys
35 40
<210> 64
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 64
Asp Cys Gln Leu Lys
1 5
<210> 65
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 65
Asp Asp Phe Leu Lys Pro Gln Ile Ile Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met
1 5 10 15
Ala Met Val Gly Lys
20
<210> 66
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 66
Asp Ile Arg Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met
1 5 10 15
Thr Phe Ala Trp Lys Lys
20
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 67
Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala
1 5
<210> 68
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 68
Glu Gly Arg Tyr Gln Cys Val Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr
1 5 10 15
Ser His Lys
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 69
Ala Arg Leu Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Thr Pro His
1 5 10 15
<210> 70
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 70
Ala Arg Leu Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Thr Pro His
1 5 10 15
Asp Ile Thr Ile Arg Thr Thr Thr Val Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala
20 25 30
Thr Gly His Pro Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys
35 40
<210> 71
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 71
Leu Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln
1 5 10 15
Glu Val Tyr Leu Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala Val Pro Ser Leu Gly
20 25 30
Ala Ala Ser Ser His Val Val Ser Leu Phe
35 40
<210> 72
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位
<400> 72
Leu Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln
1 5 10 15
Glu Val Tyr
<210> 73
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 正向引物
<400> 73
gacggaattc agtgaggaga acct 24
<210> 74
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 反向引物
<400> 74
caactggtag tggcagcttg tagg 24
<210> 75
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 正向引物
<400> 75
tcacaaggaa cattgtctga acca 24
<210> 76
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 反向引物
<400> 76
gcctgatcta acacatcctc ctca 24
<210> 77
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 正向引物
<400> 77
cagcaccttg agctgaacag aaac 24
<210> 78
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 反向引物
<400> 78
ccagcctttg gtaatctcgg ttag 24
<210> 79
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 正向引物
<400> 79
ctttcaccta tcccaccctt atcc 24
<210> 80
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 反向引物
<400> 80
attcatctac ggtccacact gctc 24
<210> 81
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 正向引物
<400> 81
ggcgtcatgg tgggcatggg 20
<210> 82
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 反向引物
<400> 82
atggcgtggg gaagggcgta 20
<210> 83
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 重链 CDR1
<400> 83
Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Asp
1 5
<210> 84
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 重链 CDR2
<400> 84
Leu Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Asn Lys
1 5
<210> 85
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 重链 CDR3
<400> 85
Ala Arg Asp Ala Gly Leu Ser Trp Ala Gly Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 轻链 CDR1
<400> 86
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 87
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 轻链 CDR2
<400> 87
Ser Asp Ser
1
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 轻链 CDR3
<400> 88
Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Ala Tyr Val
1 5 10
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 重链 CDR1
<400> 89
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 重链 CDR2
<400> 90
Gly Ile Ser Pro Gly Asp Ser Ser Thr
1 5
<210> 91
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 重链 CDR3
<400> 91
Ala Lys Gly Leu Tyr Ser Asn Pro Asn Glu Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 92
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 轻链 CDR1
<400> 92
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 93
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 轻链 CDR2
<400> 93
Asp Asp Ser
1
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 轻链 CDR3
<400> 94
Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Asn Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 95
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-03 重链 CDR1
<400> 95
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-03 重链 CDR2
<400> 96
Gly Ile Ser Pro Asp Gly Ser Asn Ile
1 5
<210> 97
<211> 20
<212> PRT
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1 5 10 15
Gly Met Asp Val
20
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<220>
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<400> 98
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<220>
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Gly Ala Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Ala Tyr Val
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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
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<220>
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Ala Arg Asp Ile Leu Pro Cys Pro Trp Gly Arg Cys Tyr Tyr Asp Tyr
1 5 10 15
Ala Met Asp Val
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Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val
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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
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<223> GTC110-04 重链 CDR3
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Ala Arg Val Ile Ser Asn Cys His Leu Gly Val Cys Tyr Tyr Ser Asn
1 5 10 15
Gly Met Asp Val
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-04 轻链 CDR1
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> GTC110-04 轻链 CDR2
<400> 129
Ser Asp Ser
1
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-04 轻链 CDR3
<400> 130
Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val
1 5 10
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 重链_可变区
<400> 131
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Gly Leu Ser Trp Ala Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-01 轻链_可变区
<400> 132
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 133
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 重链_可变区
<400> 133
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Gly Asp Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Tyr Ser Asn Pro Asn Glu Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-02 轻链_可变区
<400> 134
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 135
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-03 重链_可变区
<400> 135
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Asp Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Leu Arg Cys Arg Tyr Glu Ala Cys Ser Tyr Ala Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-03 轻链_可变区
<400> 136
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 137
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-04 重链_可变区
<400> 137
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu Asp Ala Phe Trp Arg Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 138
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC210-04 轻链_可变区
<400> 138
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Asn Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 139
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-01 重链_可变区
<400> 139
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Trp Ile Ser His Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Gly Leu Cys Lys Thr Gly Leu Cys Tyr Tyr Tyr Asp
100 105 110
Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 140
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-01 轻链_可变区
<400> 140
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 141
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-02 重链_可变区
<400> 141
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser His Asp Ser Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Trp Thr Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 142
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-02 轻链_可变区
<400> 142
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asn Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
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Ile Tyr Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
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Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 143
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-03 重链_可变区
<400> 143
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ile Leu Pro Cys Pro Trp Gly Arg Cys Tyr Tyr Asp Tyr
100 105 110
Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 144
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-03 轻链_可变区
<400> 144
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Asp Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
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Ile Tyr Ala Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
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Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 145
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-04 重链_可变区
<400> 145
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser His Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 146
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-04 轻链_可变区
<400> 146
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
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85 90 95
Ala Arg Asp Ala Gly Leu Ser Trp Ala Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
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Lys
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<210> 156
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> GTC110-01 轻链_小鼠 IgG2 Fc_全序列
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<220>
<223> GTC110-02 重链_小鼠 IgG2 Fc_全序列
<400> 157
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Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro
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Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
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Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
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Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro
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Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly
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Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His
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<210> 158
<211> 217
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<400> 158
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50 55 60
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Asp Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> GTC110-04 重链_人_全序列
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210 215

Claims (12)

1.一种Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白的表位，其包含至少一种选自下组的多肽：由SEQ ID NO:7至70所示的氨基酸序列组成的多肽。
2.一种Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白的表位，其包含由SEQ IDNO:71或SEQ ID NO:72表示的氨基酸序列组成的多肽。
3.一种特异性结合表位的抗体或抗原结合片段，所述表位包含至少一种选自下组的多肽：由SEQ ID NO:7至70所示的氨基酸序列组成的多肽。
4.一种特异性结合表位的抗体或抗原结合片段，所述表位包含由SEQ ID NO:71或SEQID NO:72表示的氨基酸序列组成的多肽。
5.一种编码权利要求1或2所述表位的核酸分子。
6.一种表达载体，其中插入了权利要求5所述的核酸分子。
7.一种用权利要求6所述的表达载体转染的宿主细胞系。
8.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物含有权利要求3或4所述的抗体或抗原结合片段作为活性成分。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述癌症是胃癌、肝癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、结直肠癌、头颈癌、膀胱癌、肾细胞癌、乳腺癌、转移癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤或肺癌。
10.一种抗体-药物偶联物，其包含：权利要求3或4所述的抗体或抗原结合片段；和药物。
11.一种预防或治疗癌症的方法，其包括向受试者施用药学有效量的抗体或抗原结合片段的步骤，所述抗体或抗原结合片段特异性结合表位，所述表位包含至少一种选自下组的多肽：由SEQ ID NO:7至70表示的氨基酸序列组成的多肽。
12.一种预防或治疗癌症的方法，包括向受试者施用药学有效量的抗体或抗原结合片段的步骤，所述抗体或抗原结合片段特异性结合表位，所述表位包含由SEQ ID NO:71或SEQID NO：72表示的氨基酸序列组成的多肽。
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