KR20180116924A - 면역 세포 표면 단백질의 항원 결정기인 폴리펩티드 - Google Patents

Abstract

본 발명은 면역 세포, 특히 조절 T 세포의 표면에 존재하는 단백질에 특이적인 항원 결정기(Epitope)인 폴리펩티드(polypeptide)에 관한 것으로, 상기 Lrig-1 단백질의 항원 결정기(Epitope)에 해당하는 폴리펩티드는 면역 세포의 표면에서 특이적으로 존재하기 때문에, 면역 세포, 특히 조절 T 세포를 효과적으로 제조 및 선별할 수 있다.

Description

면역 세포 표면 단백질의 항원 결정기인 폴리펩티드{A POLYPEPTIDE EPITOPE OF EXTRACELLULAR PROTEIN OF IMMUNE CELL}

본 발명은 면역 세포의 표면에 존재하는 단백질의 항원 결정기(Epitope)인 폴리펩티드(Polypeptide)에 관한 것이다.

면역 세포 중 T 세포는 B 세포의 항체 생성을 조정하거나 세포의 면역을 담당하는 세포로, T 림프구라고도 한다. 면역응답에 관여하는 림프구에는 T 세포와 B 세포가 존재하는데, B 세포는 골수에서 생성된 림프구로, 체내에 침입한 세균이나 바이러스에 대해 항체를 만드는 역할을 한다. 반면, 상기 T 세포는 항체를 만들지 않는 대신 B 세포에 정보를 제공하여 항체 생성에 조력자의 역할을 할 뿐만 아니라, 직접 침입된 물질을 파괴하는 면역 기능을 한다.

한편, 모든 정상 개체에 있어서 가장 중요한 특성 중 하나는, 자기(self)를 구성하고 있는 항원 물질에 대해서는 해롭게 반응하지 않는 반면, 자기가 아닌(non-self)항원에 대해서는 이를 인식하고 제거할 수 있는 능력을 갖는 것이다. 이처럼 자기 항원에 대한 생체의 무반응을 면역학적 무반응성(immunologic unresponsiveness) 또는 관용(tolerance)이라 한다. 자기 관용은 자기 항원의 특이적인 수용체를 가지고 있을지 모르는 림프구를 제거함으로써, 또는 자기 항원에 접한 후 스스로 반응하는 기능이 불활성화 됨으로써 발생한다. 자기 관용을 유도하거나 계속 유지하는데 있어서 문제가 생기게 되면 자기 항원에 대하여 면역반응이 일어나게 되고, 이로 인하여 초래되는 질환을 자가면역질환(autoimmune disease)이라 한다.

상기 자가면역질환의 치료를 위하여, 970년 대 초 Gershon에 의해 고식적 T 세포(conventional T cells)의 효과 기능(effector function)을 제어 및 억제할 수 있는 T 세포의 존재 가능성이 있는 억제 T 세포라는 개념을 도입하여, 처음으로 제시된 이래(R. K. Gershon and K. Kondo, Immunology, 1970, 18: 723-37), 면역학의 많은 분야에서 조절 T 세포의 생물학적 특성 및 기능을 규명하기 위한 연구가 이루어져 왔다.

이에, 상기 조절 T 세포(Treg)는 과다한 염증과 면역반응의 발생을 자연적으로 방지하는 중요한 역할을 하지만, 자가면역질환과 만성염증질환이 발생하는 경우 조절 T 세포의 기능과 숫자가 현저하게 줄어드는 것이 보고되었다. 따라서, 면역 질환과 염증 질환이 있는 환자의 경우, 조절 T 세포가 정상적인 수준으로 생성되는 것이 중요하며, 이는 상기 질환의 치료법 중 하나가 될 수 있다.

현재까지 조절 T 세포에 특이적으로 존재하는 유전자 및 단백질에 대한 연구가 진행되어, CD25, CTLA4, CD62L, CD38, CD103, GITR 및 CD45RB 등의 물질이 표지 물질에 해당할 수 있음이 제시되어 왔지만, 현재까지 조절 T 세포만을 단독으로 표적화 할 수 있는 유전자 및 단백질은 존재하지 않는다.

한편, 항원 결정기(Epitope)는 항체가 결합할 수 있는 항원의 특정 부분에 해당하고, 자가 면역 결핍증과 같이 숙주 유래 서열인 경우를 제외하고는 비 자기 단백질인 것이 일반적이다. 상기 항원 결정기는 항체의 파라 토프(Paratope)와 구조 및 상호 작용에 기초하여, 구조적 항원 결정기(Conformational Epitopes)와 선형 항원 결정기(Linear epitopes)로 분류된다. 상기 구조적 항원 결정기는 항원에서 아미노산 서열의 불연속부분으로 구성되며, 이로 인하여 항원의 3차원 표면 특징 및 형태 또는 3차원 구조에 기초한 파라 토프와 상호 작용을 할 수 있다. 반면, 선형 항원 결정기는 그들의 일차 구조에 기초하여 파라 토프와 상호작용을 한다.

본 발명의 일 목적은 면역 세포의 표면에 존재하는 단백질인 Lrig-1 단백질의 항원 결정기 (Epitope)인 폴리펩티드를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질의 항원 결정기인 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 폴리펩티드와 하이브리드 Fc(hybrid Fc)가 융합된 융합 단백질을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명자들은 면역 세포, 특히 조절 T 세포의 표면에 특이적으로 존재하는 Lrig-1 단백질을 발견하고, 상기 단백질의 항원 결정기(Epitope)를 선별하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 일 구현 예에 따르면, 면역세포의 표면 단백질 Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1)의 항원 결정기(Epitope)인 폴리펩티드(polypeptide)를 제공한다. 본 발명의 목적상 상기 면역 세포는 조절 T 세포일 수 있고, 더욱 바람직하게는 상기 조절 T 세포는 CD4⁺ T 세포일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 Lrig-1 단백질은 T 세포, 특히 조절 T 세포의 표면에 존재하는 1091개의 아미노산으로 이루어진 막관통 단백질로서, 세포 외 혹은 루멘 쪽의 루신 반복 서열(Leucine-Rich Repeat(LRR))과 세개의 면역체 유사 도메인(Immunoglobulin-Like Domains), 세포막 관통 서열 및 세포질 꼬리부분으로 구성되어 있다. LRIG 유전자 패밀리는 LRIG1, LRIG2와 LRIG3이 존재하며, 이들 간의 아미노산들은 매우 보전적으로 구성되어 있다. 상기 LRIG1 유전자는 정상 피부에서 높게 발현하고 있으며, 기저와 모낭 세포에 발현하여 상피 줄기세포의 증식을 조절할 수 있다. 따라서, 표피의 항상성 유지에 중요한 역할을 하며, 부존재 시 건선이나 피부암으로 발전할 수 있다. LRIG1이 위치한 염색체 3p14.3 부분이 잘리는 경우에는 암세포로 발전할 가능성이 많은 것으로 보고되어 있으며, 실제로 신장암(Renal cell carcinoma)과 편평상피암(Cutaneous Squamous Cell Carcinoma)에서는 LRIG1의 발현이 매우 감소되어 있는 것으로 확인되었다. 현재, LRIG1은 c-Cbl을 통해 EGFR(Epidermarl Growth Factor Receptor)의 유비퀴틴화를 통해 단백질 분해시킴으로써 그 하위에 존재하고 세포 증식에 관여하는 MAPK 및 AKT의 인산화에 의한 신호전달을 차단하고, 카스파아제(Caspase)-8의 분비를 증가시켜 세포사멸(Apoptosis)을 일으킴으로써 암 억제제로써의 가능성이 제기되고 있다. 본 발명의 목적상 상기 Lrig-1 단백질은 인간 또는 쥐에 존재하는 단백질 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 상기 항체는 Lrig-1 단백질 중에서도 특히 서열번호 1 또는 3으로 표시되는 아미노산의 일부로 구성된 항원 결정기(Epitope) 부분에 특이적으로 결합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명에서 상기 Lrig-1 단백질은 서열번호 2 또는 4로 표시되는 유전자에 의해 코딩된 단백질의 일부로 구성된 항원 결정기(epitope) 부분에 특이적으로 결합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 상기 "항원 결정기(Epitope)"란, 항원 분자에서 항체와 결합하는 부위로, 항체가 인식할 수 있는 부분을 의미한다. 일반적으로 항체는 항원 분자 전체를 인식하는 것이 아니고, 특정의 부분만을 인식하며, 동일한 항원 분자라고 하여도 항체의 종류가 달라지는 경우 다른 항원 결정기 부분을 인식할 수 있다. 본 발명의 목적상 상기 항원 결정기는 Lrig-1 단백질의 세포 외부로 노출되어 있는 부분이 일부가 절단되어 세포 외부로 방출(Secretion)된 경우에도, 남아있는 일부의 도메인과 효과적으로 결합할 수 있는 항체의 항원 결정기를 포함한다.

본 발명에서 상기 항원 결정기인 폴리펩티드는 본 발명에 따른 상기 Lrig-1 단백질에 항체가 결합할 수 있는 부분의 연속 또는 불연속 서열을 모두 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 서열번호 5 내지 34번 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 서열을 포함하는 면역 세포의 표면 단백질의 항원 결정기(Epitope)인 폴리펩티드(Polypeptide)를 제공한다.

본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 서열번호 5 내지 34번 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 각각을 코딩하는 폴리뉴클레오티드(Polynucleotide)를 제공한다.

본 발명에서, 상기 "폴리뉴클레오티드"란 뉴클레오티드 단위체(Monomer)가 공유결합에 의해 길게 사슬모양으로 이어진 뉴클레오티드의 중합체(Polymer)로 일정한 길이 이상의 DNA 또는 RNA 가닥으로서, 상기 변이형 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다.

본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에 따른 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.

또한, 본 발명에서 상기 재조합 벡터는 본 발명의 폴리펩티드를 발현시킬 수 있는 미생물을 만들기 위하여 숙주 세포에 DNA를 도입하여 서열번호 5 내지 34번 중 어느 하나로 표시되는 아미노산을 각각 코딩하는 폴리뉴클레오티드(Polynucleotide)를 발현시키기 위한 수단으로 사용되는 것으로, 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, 박테리오파지 벡터 등 공지의 발현 벡터를 사용할 수 있다. 또한, 상기 벡터는 DNA 재조합 기술을 이용한 임의의 공지된 방법에 따라 당업자가 용이하게 재조할 수 있다. 또한, 본 발명에서 상기 재조합 벡터는 발현 조절 서열이 서열번호 5 내지 34번으로 표시되는 아미노산을 코딩하는 폴리뉴클레오티드(Polynucleotide)를 발현시킬 수 있도록 전사 및 해독이 가능하게 연결된 것을 말하며, 발현 조절 서열의 조절 하에 폴리뉴클레오티드 서열이 발현되어 본 발명에 따른 상기 폴리뉴클레오티드가 코딩하는 폴리펩티드을 생성하도록 정확한 해독 프레임을 유지시키는 것을 포함한다.

본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 서열번호 5 내지 34번 중 어느 하나로 표시되는 아미노산을 각각 코딩하는 폴리뉴클레오티드(polynucleotide)를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 제공한다.

본 발명에서, 상기”재조합 숙주 세포”란, 본 발명에 따른 상기 재조합 벡터로 형질 전환된 미생물을 의미한다.

단, 본 발명에서 상기 “형질 전환”이란, 유전자를 숙주 세포 내에 도입하여 숙주세포 내에서 발현시킬 수 있도록 하는 것을 의미하며, 형질 전환된 유전자는 숙주 세포 내에서 발현될 수 있으며 숙주 세포의 염색체 내 삽입 또는 염색체 외에 위치하고 있는 것이든 제한하지 않고 포함될 수 있다.

또한, 본 발명에서 상기 미생물은 본 발명에 따른 상기 재조합 벡터로 형질전환되어 본 발명에 따른 폴리펩티드를 발현할 수 있는 원핵 미생물 또는 진핵 미생물로, 이에 제한되지 아니하지만, 예를 들면, 에스케리키아 (Escherichia)속, 바실러스 (Bacilus)속, 에어로박터 (Aerobacter)속, 세라티아 (Serratia)속, 프로비덴시아 (Providencia)속, 어위니아 (Erwinia)속, 쉬조사카로마이세스 (Schizosaccharomyces)속, 엔테로박테리아 (enterobacteria)속, 지고사카로마이세스 (Zygosaccharomyces)속, 렙토스피라 (Leptospira)속, 데이노코쿠스 (Deinococcus)속, 피치아 (Pichia)속, 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces)속, 칸디다 (Candida)속, 한세눌라 (Hansenula)속, 데바리오마이세스 (Debaryomyces)속, 뮤코 (Mucor)속, 토룰롭시스 (Torulopsis)속, 메틸로박터 (Methylobacter)속, 살모넬라 (Salmonella)속, 스트렙토마이세스 (Streptomyces)속, 슈도모나스 (Pseudomonas)속, 브레비박테리움 (Brevibacterium)속 및 코리네박테리움 (Corynebacterium)속으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 해당하는 미생물 일 수 있다.

본 발명의 다른 구현 예에서는 본 발명에 따른 상기 폴리펩티드와 하이브리드 Fc(hybrid Fc)가 융합된 융합 단백질을 제공한다.

본 발명에서 상기 하이브리드 Fc는 인간 IgG 서브클래스의 조합 또는 인간 IgD 및 IgG의 조합으로부터 유도될 수 있다. 상기 하이브리드 Fc는 생물학적 활성 분자, 폴리펩티드 등에 결합하는 경우, 생물학적 활성 분자의 혈청 반감기를 증가시킬 뿐만 아니라, Fc-폴리펩타이드 융합 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드가 발현될 때 폴리펩타이드의 발현 수준을 높이는 효과가 있다.

본 발명에서 상기 융합 단백질은 Fc 와 폴리펩티드 사이에 링커(linker)를 가질 수 있다. Fc는 그 N-말단에서 생물학적 활성 분자의 C-말단과 결합될 수 있다.

본 발명에서 상기 링커(linker)는 목적하는 질환의 조직 또는 세포 내에서 과 발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 서열을 포함할 수 있다. 상기와 같이 과 발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 경우에는 Fc 부분으로 인하여 폴리펩티드의 활성이 저하되는 것을 효과적으로 방지할 수 있다.

본 발명의 Lrig-1 단백질의 항원 결정기(Epitope)에 해당하는 폴리펩티드는 면역 세포, 특히 조절 T 세포의 표면에서 특이적으로 존재하기 때문에, 면역 세포, 특히 조절 T 세포를 효과적으로 제조 및 선별할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 구조를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 항원 결정기(epitope)를 예측한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 단백질의 항원 결정기(epitope)를 예측한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 Lrig-1, Lrig-2 및 Lrig-3 mRNA의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 조절 T 세포와 비 조절 T 세포 내 Lrig-1 단백질의 발현량 비교 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 조절 T 세포의 표면에 Lrig-1 단백질의 발현을 나타낸 것이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예

[준비예 1] T 세포 아형 세포 배양

조절 T 세포(Treg)에서만 Lrig-1 단백질이 발현되는지 확인하기 위하여, T 세포의 아형(subset)인 Th0, Th1, Th2, Th17 및 iTreg을 준비하였다. 상기 iTreg은 자연적으로 분리한 nTreg과는 달리 하기 조성을 포함하는 배지에서 분화를 인공적으로 유도한 세포를 의미한다.

T 세포의 아형은 우선, 쥐의 비장으로부터 얻은 나이브(naive) T 세포를 분리한 뒤, 우태아혈청(FBS; hyclone, logan, UT) 10%를 포함하는 RPMI1640(Invitrogen Gibco, Grand Island, NY) 영양 배지에 하기 표 1의 성분을 각각 더 포함하도록 하여, 37℃, 5 % CO₂ 배양기 내에서 72시간 배양을 통해 각각의 세포로 분화 유도 하였다.

분화 세포	조성
Th0	anti-CD3, anti-CD28
Th1	IL-12, anti-IL-4 항체
Th2	IL-4, anti-IFNβ
Th17	IL-6, TGFβ, anti-IFNβ, anti-IL-4
iTreg	IL-2, TGFβ

[실시예 1] Lrig-1 구조 분석

조절 T 세포의 표면 단백질인 Lrig-1 단백질에 특이적인 항체를 제작하기 위하여 Lrig-1 단백질의 세포외 도메인의 3차원 입체 구조를 예측하였다.

우선, 항원 결정기(Epitope) 염기서열 예측을 위해 Lrig-1 단백질의 세포외 도메인(Extracellular domain; ECD)의 구조를 확인하기 위하여 Uniprot(http://www.uniprot.org)과 RCSB Protein Data Bank (http://www.rcsb.org/pdb)툴을 이용하여 3차원 입체 구조를 예측한 뒤, 그 결과를 도 1 및 2에 나타내었다.

도 1에서 보는 바와 같이, Lrig-1 단백질의 세포외 도메인 중 Lrig-LRR 도메인(아미노산 서열 41 ~ 494번) 내에는 LRR1 내지 LRR15의 총 15개의 류신 리치 부위(Leucine rich region)가 존재하였다. 상기 LRR 도메인 각각은 23 내지 27개의 아미노산으로 구성되고, 류신은 3 내지 5개가 존재하였다.

또한, 도 2에서 보는 바와 같이, Lrig-1 단백질의 세포외 도메인 중 Lrig-1 단백질의 아미노산 서열 494 내지 781번에는 면역글로블린 유사 도메인(Immunoglobulin-like domain)이 3개 존재하였다.

[실시예 2] Lrig-1 항원 결정기(epitope) 아미노산 서열 예측

상기 염기서열의 예측은 Lrig-1 단백질의 구조를 기반으로 하는 항원 결정기 예측 소프트웨어(epitope prediction software)인 Ellipro 서버(http://tools.iedb.org/ellipro/)를 이용하였다. 상기 Ellipro 검색 엔진은 현존하는 항원 결정기를 예측하는 알고리즘 중에서 가장 신뢰도가 높다고 알려진 검색엔진에 해당하여 이를 이용하였다.

항원 결정기 예측 소프트웨어에 상기 실시예 1에서 분석된 세포외 도메인을 입력한 뒤, 예측된 항원 결정기의 예측된 연속 또는 불연속 아미노산 서열을 도 3 및 4에 나타내었다.

도 3 및 4에서 보는 바와 같이, 연속된 항원 결정기 아미노산 서열은 서열번호 5 내지 27로 총 22개가 예측되었고, 불연속된 항원 결정기 아미노산 서열은 서열번호 27 내지 34로 총 8개가 예측되었다.

[제조예 1 내지 8] Lrig-1 항체의 제조

본 발명에 따른 Lrig-1 단백질에 특이적인 항체를 제작하였다. 본 항체는 특정 항원 결정기를 정하여 생산하지 않고, Lrig-1 단백질에 어느 부위든지 결합할 수 있는 항체를 생산하였다.

상기 항체를 제작하기 위하여 Lrig-1 단백질이 발현되는 세포를 제작하였다. 서열번호 2에 해당하는 DNA 단편 및 pcDNA(hygro)를 절단 효소로 절단한 뒤, 37도씨에서 배양하여 라이게이션(Lrigation) 하여, Lrig-1 단백질의 DNA 서열이 삽입(insert) 되어 있는 pcDNA를 제작하였다. 상기 제작된 서열번호 2가 삽입된 pcDNA는 L세포에 형질주입(transfection)을 통해 도입되어 L 세포의 표면에 Lrig-1 단백질이 발현될 수 있도록 하였다.

상기 세포 표면에 발현되는 Lrig-1의 에 결합할 수 있는 경쇄(Lright chain) 및 중쇄(heavy chain) 아미노산의 서열을 Human scFv library에서 선별하여, 총 8개의 중쇄 및 경쇄를 선별하였다.

상기 선별된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 mlgG2a Fc region과 융합하여 단일 클론(mono clonal) 항체를 제작하였다. 상기 단일 클론 항체의 서열은 하기 표 2와 같다.

구분	클론	위치	아미노산 서열
제조예 1	A7 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYDMSWV RQAPGKGLEWVSLIYPDSGNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARDAGLSWAGAFDYWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGY FPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPAS STKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVV VDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFK CKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDI YVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHN HHTTKSFSRTPGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVTWY QQLPGTAPKLLIYSDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCGSWDY SLSAYVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKW KIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPI VKSFNRNEC
제조예 2	A8 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYDMSWV RQVPGKGLEWVSWISHGGGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARGLGLCKTGLCYYYDAMDVWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLG CLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCN VAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSP IVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWM SGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTD FMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVV HEGLHNHHTTKSFSRTPGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGNNSVTWY QQLPGTAPKLLIYADNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDS SLSAYVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKW KIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPI VKSFNRNEC
제조예 3	B8 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWV RQAPGKGLEWVSGISHDSGSKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARHWTTFDYWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPV TLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVD KKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSE DDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNN KDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWT NNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTK SFSRTPGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNNVTWY QQLPGTAPKLLIYANSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGAWDY SLSAYVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKW KIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPI VKSFNRNEC
제조예 4	C8 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYYMSWV RQAPGKGLEWVSGISPGDSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCAKGLYSNPNEPFDYWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGY FPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPAS STKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVV VDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFK CKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDI YVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHN HHTTKSFSRTPGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNYVSWY QQLPGTAPKLLIYDDSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDY SLNGYVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKW KIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPI VKSFNRNEC
제조예 5	D9 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWV RQAPGKGLEWVSAIYPGGGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARDILPCPWGRCYYDYAMDVWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLG CLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCN VAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSP IVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWM SGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTD FMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVV HEGLHNHHTTKSFSRTPGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSDSSSNIGSNTVSWY QQLPGTAPKLLIYADNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDY SLSGYVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKW KIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPI VKSFNRNEC
제조예 6	E7 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWV RQAPGKGLEWVSGISPDGSNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCAKVGLRCRYEACSYAYGMDVWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLG CLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCN VAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSP IVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWM SGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTD FMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVV HEGLHNHHTTKSFSRTPGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVSWY QQLPGTAPKLLIYSDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDS SLNGYVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKW KIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPI VKSFNRNEC
제조예 7	G3 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYDMSWVR QAPGKGLEWVSSISPSSGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AKDLDAFWRPSFDYWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPE PVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKV DKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSE DDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNK DLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNN GKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFS RTPGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGNNNVNWYQ QLPGTAPKLLIYSDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGSWDDSL SAYVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKID GSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSF NRNEC
제조예 8	H6 clone	중쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQ APGKGLEWVSVISHGGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR VISNCHLGVCYYSNGMDVWGQGTLVTVSSTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGY FPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASST KVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVS EDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNK DLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNG KTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRT PGK
		경쇄	METDTLLLWVLLLWVPGSTWQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNDVYWYQQ LPGTAPKLLIYSDSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSG YVFGGGTKLTVLRTVAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSE RQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

[실시예 3] Lrig-1 mRNA의 조절 T 세포에서의 특이적 발현 확인

Lrig-1 단백질이 조절 T 세포에 특이적인 바이오마커(biomarker)로 작용할 수 있는지 검증하였다.

상기 검증을 위하여, 쥐의 비장으로부터 CD4 비드를 통해 자석 활성 세포 분류기(magnet-activated cell sorting; MACS)를 이용하여 CD4 ⁺ T 세포를 분리하였다. 이후, CD25 항체를 이용하여 형광 활성 세포 분류기(FACS)를 이용해 조절 T (CD4⁺CD25⁺ T)세포 및 비 조절 T (CD4⁺CD25^- T)세포를 분리하였다. 각각의 세포 및 상기 준비예 1에서 분화된 세포는 트리졸(Trizol)을 이용하여 mRNA를 추출한 뒤, 게노믹 RNA는 gDNA 추출 키트(Qiagen)를 이용하여 업체에서 제공한 프로토콜에 의해 gDNA를 제거하였다. gDNA가 제거된 mRNA는 BDsprint cDNA 합성 키트 (Clonetech)를 통해 cDNA로 합성하였다.

상기 cDRNA에서 Lrig-1 mRNA의 발현량을 정량적으로 확인하기 위하여 실시간 중합효소연쇄반응(real time PCR)을 수행하였다.

상기 실시간 중합효소연쇄반응은 SYBR Green (Molecular Probes)을 이용하여 업체에서 제공한 프로토콜에 의해 95 에서 3분, 61 에서 15초, 72 에서 30초씩 40 사이클의 조건으로, 하기 표 3의 프라이머를 이용하여 수행하였고, 상대적인 유전자 발현량은 ΔCT 방법을 이용하여 계산하였으며, HPRT를 이용하여 일반화(normalization) 하여, 그 결과를 도 5 내지 8에 나타내었다.

프라이머	서열
쥐 Lrig-1	Forward 5' - GAC GGA ATT CAG TGA GGA GAA CCT - 3'
	Reverse 5' - CAA CTG GTA GTG GCA GCT TGT AGG - 3'
쥐 Lrig-2	forward 5' - TCA CAA GGA ACA TTG TCT GAA CCA - 3'
	reverse 5' - GCC TGA TCT AAC ACA TCC TCC TCA - 3'
쥐 Lrig-3	forward 5' - CAG CAC CTT GAG CTG AAC AGA AAC - 3'
	reverse 5' - CCA GCC TTT GGT AAT CTC GGT TAG - 3'
쥐 FOXP3	forward 5' - CTT TCA CCT ATC CCA CCC TTA TCC - 3'
	reverse 5' - ATT CAT CTA CGG TCC ACA CTG CTC - 3'
ACTG1	forward 5' - GGC GTC ATG GTG GGC ATG GG - 3'
	reverse 5' - ATG GCG TGG GGA AGG GCG TA - 3'

도 5에서 보는 바와 같이, 비 조절 T (CD4⁺CD25^- T)세포에 비하여 조절 T((CD4⁺CD25⁺ T) 세포에서 Lrig-1의 발현이 18.1배 높은 것을 알 수 있다. 이는, 기존에 알려져 있는 조절 T 세포의 마커인 Lag3 및 Ikzf4와 비교하였을 때 약 10배 정도 발현양이 높은 수준이었다.

또한, 도 6 및 7에서 보는 바와 같이, 다른 종류의 면역세포에 비하여 조절 T 세포, 특히 유도된 조절 T 세포(iTreg)에 비해 자연적으로 분리한 조절 T 세포(nTreg)에서 Lrig-1 mRNA의 발현이 현저하게 높았다.

또한, 도 8에서 보는 바와 같이, Lrig 패밀리에 해당하는 Lrig-1, Lrig-2 및 Lrig-3 중에서 Lrig-1의 발현이 가장 높았다.

상기 결과를 통해 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질은 조절 T 세포, 특히 자연적으로 존재하는 조절 T 세포에서 특이적으로 발현하는 것을 알 수 있다.

[실시예 4] Lrig-1 단백질의 조절 T 세포에서의 특이적 발현 확인

Lrig-1 mRNA로부터 발현된 Lrig-1 단백질이 조절 T 세포에서만 특이적으로 발현되는지 확인하였다.

조절 T 세포 특이적인 전사 인자인 FOXP3 프로모터에 RFP(Red fluorescence protein)이 결합된 FOXP3-RFP 주입(Knock-in) 쥐를 이용하여, 상기 쥐의 비장으로부터 CD4 비드로 자석 활성 세포 분류기(magnet-activated cell sorting; MACS)를 이용하여 CD4 ⁺ T 세포를 분리하였다. 이후, RFP 단백질을 이용하여, 형광 활성 세포 분류기(FACS)를 통해 조절 T (CD4⁺RFP⁺ T)세포 및 비 조절 T(CD4⁺RFP^- T)를 분리하여 얻었다. 각각의 상기 세포는 구입한 Lrig-1 항체 및 음성 대조군은 아이소타입(isotype)을 통해 염색하여 형광 활성 세포 분류기로 Lrig-1의 발현량을 측정하여, 그 결과를 도 9에 나타내었다.

도 9에서 보는 바와 같이, 점선으로 표시되는 비 조절 T 세포의 경우 음성 대조군과 거의 동일한 Lrig-1의 발현 수준을 보였지만, 조절 T 세포의 경우 Lrig-1의 발현 수준이 높은 세포가 다수 존재하였다.

상기 결과를 통해 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질은 조절 T 세포에서 특이적으로 발현하는 것을 알 수 있다.

[실시예 5] 조절 T 세포 표면에서의 Lrig-1 단백질 특이적 발현 확인

Lrig-1 단백질이 세포 치료의 타겟이 되기 위해서는 조절 T 세포의 표면에 발현 되어야 더욱 효과적으로 타겟 치료를 할 수 있으므로, Lrig-1 단백질이 표면에서의 발현 여부를 확인하였다.

상기 준비예 1의 각각의 분화된 T 세포 아형을 항-CD4-APC 및 항 Lrig-1-PE 항체로 염색하고, 형광 이용 세포 분류기(Fluorescence-Activated Cell Sorter; FACS)를 이용하여 각각의 세포 표면에서 Lrig-1의 발현량을 측정하여, 그 결과를 도 10에 나타내었다.

도 10에서 보는 바와 같이, 활성화된 T 세포(activated T cell), Th1 세포, Th2 세포, Th17 세포 및 나이브(Naive) T 세포에서는 Lrig-1의 발현이 0.77 내지 15.3의 양으로 발현되는 반면, 분화가 유도된 T 세포(iTreg)에서는 83.9로 높게 발현되었다.

상기 결과를 통해 본 발명에 따른 Lrig-1 단백질은 조절 T 세포(Treg) 세포에서 특이적으로 발현될 뿐만 아니라, 특히 조절 T 세포의 표면에서 더욱 높게 발현되는 것을 알 수 있다.

이상에서 본 발명에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.

<110> Good T cells <120> A polypeptide epitope of extracellular protein of Immune cell <130> DPB172435 <160> 34 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 759 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala Gly Asp Ser 1 5 10 15 Leu Asp Cys Gly Gly Arg Gly Leu Ala Ala Leu Pro Gly Asp Leu Pro 20 25 30 Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu Ile 35 40 45 Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Val Tyr Leu 50 55 60 Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala Val Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ser Ser 65 70 75 80 His Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys Ile Arg Ser Val Glu 85 90 95 Gly Ser Gln Leu Lys Ala Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu Asp Leu Ser 100 105 110 Leu Asn Asn Ile Thr Glu Val Arg Asn Thr Cys Phe Pro His Gly Pro 115 120 125 Pro Ile Lys Glu Leu Asn Leu Ala Gly Asn Arg Ile Gly Thr Leu Glu 130 135 140 Leu Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr Leu Arg Leu 145 150 155 160 Ser Lys Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Arg Ala Phe Lys Leu Pro 165 170 175 Arg Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg Asn Arg Ile Arg Leu Ile Glu 180 185 190 Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asn Ser Leu Glu Val Leu Lys Leu Gln 195 200 205 Arg Asn Asn Ile Ser Lys Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly Leu Ser 210 215 220 Lys Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val Glu Val Asn 225 230 235 240 Ser Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu His Leu Ser 245 250 255 Asn Asn Ser Ile Ala Arg Ile His Arg Lys Gly Trp Ser Phe Cys Gln 260 265 270 Lys Leu His Glu Leu Val Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg Leu Asp 275 280 285 Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg Leu Ser 290 295 300 His Asn Ser Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys Gly Leu Arg 305 310 315 320 Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser Gly Thr Ile 325 330 335 Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Ser Gly Leu Asp Ser Leu Ser Lys Leu 340 345 350 Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys Ser Val Ala Lys Arg Ala Phe Ser 355 360 365 Gly Leu Glu Gly Leu Glu His Leu Asn Leu Gly Gly Asn Ala Ile Arg 370 375 380 Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Val Lys Met Lys Asn Leu Lys Glu Leu 385 390 395 400 His Ile Ser Ser Asp Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu Lys Trp Leu 405 410 415 Pro Pro Trp Leu Ile Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val Thr Ala Thr 420 425 430 Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe Ser Val Pro 435 440 445 Pro Glu Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Leu Lys Pro Gln Ile Ile Thr 450 455 460 Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Met Val Gly Lys Asp Ile Arg Phe Thr 465 470 475 480 Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe Ala Trp Lys 485 490 495 Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe Val His 500 505 510 Val His Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr Ile Leu His 515 520 525 Leu Arg Gln Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg Tyr Gln Cys Val Ile 530 535 540 Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys Ala Arg Leu Thr Val 545 550 555 560 Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Thr Pro His Asp Ile Thr Ile Arg 565 570 575 Thr Thr Thr Val Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala Thr Gly His Pro Asn 580 585 590 Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe Pro Ala Ala 595 600 605 Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe Ile 610 615 620 Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Ala Gly Val Tyr Ser Cys Thr Ala Gln 625 630 635 640 Asn Ser Ala Gly Ser Ile Ser Ala Asn Ala Thr Leu Thr Val Leu Glu 645 650 655 Thr Pro Ser Leu Val Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val Ser Val Gly 660 665 670 Glu Thr Val Ala Leu Gln Cys Lys Ala Thr Gly Asn Pro Pro Pro Arg 675 680 685 Ile Thr Trp Phe Lys Gly Asp Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu Arg His 690 695 700 His Leu Thr Pro Asp Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn Val Val Ala 705 710 715 720 Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Thr Leu Gly Thr 725 730 735 Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Val Leu Pro Ala Ala Gly Cys Arg 740 745 750 Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly 755 <210> 2 <211> 2397 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 ggcccgcggg cgccctgcgc ggccgcctgc acttgcgctg gggactcgct ggactgcggt 60 gggcgcgggc tggctgcgtt gcccggggac ctgccctcct ggacgcggag cctaaacctg 120 agttacaaca aactctctga gattgaccct gctggttttg aggacttgcc gaacctacag 180 gaagtgtacc tcaataataa tgagttgaca gcggtaccat ccctgggcgc tgcttcatca 240 catgtcgtct ctctctttct gcagcacaac aagattcgca gcgtggaggg gagccagctg 300 aaggcctacc tttccttaga agtgttagat ctgagtttga acaacatcac ggaagtgcgg 360 aacacctgct ttccacacgg accgcctata aaggagctca acctggcagg caatcggatt 420 ggcaccctgg agttgggagc atttgatggt ctgtcacggt cgctgctaac tcttcgcctg 480 agcaaaaaca ggatcaccca gcttcctgta agagcattca agctacccag gctgacacaa 540 ctggacctca atcggaacag gattcggctg atagagggcc tcaccttcca ggggctcaac 600 agcttggagg tgctgaagct tcagcgaaac aacatcagca aactgacaga tggggccttc 660 tggggactgt ccaagatgca tgtgctgcac ctggagtaca acagcctggt agaagtgaac 720 agcggctcgc tctacggcct cacggccctg catcagctcc acctcagcaa caattccatc 780 gctcgcattc accgcaaggg ctggagcttc tgccagaagc tgcatgagtt ggtcctgtcc 840 ttcaacaacc tgacacggct ggacgaggag agcctggccg agctgagcag cctgagtgtc 900 ctgcgtctca gccacaattc catcagccac attgcggagg gtgccttcaa gggactcagg 960 agcctgcgag tcttggatct ggaccataac gagatttcgg gcacaataga ggacacgagc 1020 ggcgccttct cagggctcga cagcctcagc aagctgactc tgtttggaaa caagatcaag 1080 tctgtggcta agagagcatt ctcggggctg gaaggcctgg agcacctgaa ccttggaggg 1140 aatgcgatca gatctgtcca gtttgatgcc tttgtgaaga tgaagaatct taaagagctc 1200 catatcagca gcgacagctt cctgtgtgac tgccagctga agtggctgcc cccgtggcta 1260 attggcagga tgctgcaggc ctttgtgaca gccacctgtg cccacccaga atcactgaag 1320 ggtcagagca ttttctctgt gccaccagag agtttcgtgt gcgatgactt cctgaagcca 1380 cagatcatca cccagccaga aaccaccatg gctatggtgg gcaaggacat ccggtttaca 1440 tgctcagcag ccagcagcag cagctccccc atgacctttg cctggaagaa agacaatgaa 1500 gtcctgacca atgcagacat ggagaacttt gtccacgtcc acgcgcagga cggggaagtg 1560 atggagtaca ccaccatcct gcacctccgt caggtcactt tcgggcacga gggccgctac 1620 caatgtgtca tcaccaacca ctttggctcc acctattcac ataaggccag gctcaccgtg 1680 aatgtgttgc catcattcac caaaacgccc cacgacataa ccatccggac caccaccgtg 1740 gcccgcctcg aatgtgctgc cacaggtcac ccaaaccctc agattgcctg gcagaaggat 1800 ggaggcacgg atttccccgc tgcccgtgag cgacgcatgc atgtcatgcc ggatgacgac 1860 gtgtttttca tcactgatgt gaaaatagat gacgcagggg tttacagctg tactgctcag 1920 aactcagccg gttctatttc agctaatgcc accctgactg tcctagagac cccatccttg 1980 gtggtcccct tggaagaccg tgtggtatct gtgggagaaa cagtggccct ccaatgcaaa 2040 gccacgggga accctccgcc ccgcatcacc tggttcaagg gggaccgccc gctgagcctc 2100 actgagcggc accacctgac ccctgacaac cagctcctgg tggttcagaa cgtggtggca 2160 gaggatgcgg gccgatatac ctgtgagatg tccaacaccc tgggcacgga gcgagctcac 2220 agccagctga gcgtcctgcc cgcagcaggc tgcaggaagg atgggaccac ggtaggcatc 2280 ttcaccattg ctgtcgtgag cagcatcgtc ctgacgtcac tggtctgggt gtgcatcatc 2340 taccagacca ggaagaagag tgaagagtac agtgtcacca acacagatga aaccgtc 2397 <210> 3 <211> 761 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gln Ala Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala Gly 1 5 10 15 Asp Ser Leu Asp Cys Ser Gly Arg Gly Leu Ala Thr Leu Pro Arg Asp 20 25 30 Leu Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Arg Leu Ser 35 40 45 Glu Ile Asp Ser Ala Ala Phe Glu Asp Leu Thr Asn Leu Gln Glu Val 50 55 60 Tyr Leu Asn Ser Asn Glu Leu Thr Ala Ile Pro Ser Leu Gly Ala Ala 65 70 75 80 Ser Ile Gly Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys Ile Leu Ser 85 90 95 Val Asp Gly Ser Gln Leu Lys Ser Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu Asp 100 105 110 Leu Ser Ser Asn Asn Ile Thr Glu Ile Arg Ser Ser Cys Phe Pro Asn 115 120 125 Gly Leu Arg Ile Arg Glu Leu Asn Leu Ala Ser Asn Arg Ile Ser Ile 130 135 140 Leu Glu Ser Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr Leu 145 150 155 160 Arg Leu Ser Lys Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Lys Ala Phe Lys 165 170 175 Leu Pro Arg Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg Asn Arg Ile Arg Leu 180 185 190 Ile Glu Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asp Ser Leu Glu Val Leu Arg 195 200 205 Leu Gln Arg Asn Asn Ile Ser Arg Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly 210 215 220 Leu Ser Lys Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val Glu 225 230 235 240 Val Asn Ser Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu His 245 250 255 Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ser Arg Ile Gln Arg Asp Gly Trp Ser Phe 260 265 270 Cys Gln Lys Leu His Glu Leu Ile Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg 275 280 285 Leu Asp Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Ile Leu Arg 290 295 300 Leu Ser His Asn Ala Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys Gly 305 310 315 320 Leu Lys Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser Gly 325 330 335 Thr Ile Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Thr Gly Leu Asp Asn Leu Ser 340 345 350 Lys Leu Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys Ser Val Ala Lys Arg Ala 355 360 365 Phe Ser Gly Leu Glu Ser Leu Glu His Leu Asn Leu Gly Glu Asn Ala 370 375 380 Ile Arg Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Ala Lys Met Lys Asn Leu Lys 385 390 395 400 Glu Leu Tyr Ile Ser Ser Glu Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu Lys 405 410 415 Trp Leu Pro Pro Trp Leu Met Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val Thr 420 425 430 Ala Thr Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe Ser 435 440 445 Val Leu Pro Asp Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Pro Lys Pro Gln Ile 450 455 460 Ile Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Val Val Gly Lys Asp Ile Arg 465 470 475 480 Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe Ala 485 490 495 Trp Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Ala Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe 500 505 510 Ala His Val Arg Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr Ile 515 520 525 Leu His Leu Arg His Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg Tyr Gln Cys 530 535 540 Ile Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys Ala Arg Leu 545 550 555 560 Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Ile Pro His Asp Ile Ala 565 570 575 Ile Arg Thr Gly Thr Thr Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala Thr Gly His 580 585 590 Pro Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe Pro 595 600 605 Ala Ala Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe 610 615 620 Phe Ile Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Met Gly Val Tyr Ser Cys Thr 625 630 635 640 Ala Gln Asn Ser Ala Gly Ser Val Ser Ala Asn Ala Thr Leu Thr Val 645 650 655 Leu Glu Thr Pro Ser Leu Ala Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val Thr 660 665 670 Val Gly Glu Thr Val Ala Phe Gln Cys Lys Ala Thr Gly Ser Pro Thr 675 680 685 Pro Arg Ile Thr Trp Leu Lys Gly Gly Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu 690 695 700 Arg His His Phe Thr Pro Gly Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn Val 705 710 715 720 Met Ile Asp Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Pro Leu 725 730 735 Gly Thr Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Ile Leu Pro Thr Pro Gly 740 745 750 Cys Arg Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly 755 760 <210> 4 <211> 2283 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 4 caggctggcc cgcgggcccc ctgcgcggcc gcctgcactt gcgccgggga ctcgctggac 60 tgcagtgggc gcgggctggc gacgctgccc cgggacctgc cctcctggac gcgcagccta 120 aacctgagtt ataacagact ctccgagatc gactctgctg cttttgagga cttgacgaat 180 ctgcaggaag tgtacctcaa cagcaatgag ctgacagcca taccatcact gggcgctgct 240 tccataggag ttgtctctct ctttttgcag cacaacaaga tccttagtgt ggatgggagc 300 cagctgaagt cgtacctgtc cttggaagtg ctggatctga gttccaacaa catcacggaa 360 attcggagct cctgtttccc gaacggcctg cgtataaggg aactcaactt ggcgagcaac 420 cgcatcagca tcctggagtc tggagcattt gatggtctgt cgcggtcact gctgactctc 480 cgtctgagca aaaacaggat cacccagctt cctgtgaaag cgttcaagct acccaggctg 540 acacaactag acctgaatcg gaatcggatt cggctgattg aaggcctcac gttccagggg 600 ctcgacagct tagaggtgct gaggcttcag aggaacaaca tcagcaggct gacggacggg 660 gccttctggg ggctgtctaa gatgcacgtg ctgcacctgg agtacaacag tctggtggaa 720 gtgaacagtg gctccctcta tggcctcaca gccctgcacc agctgcacct cagcaacaac 780 tccatctctc gaattcagcg tgatggctgg agcttctgcc aaaagctgca tgagttgatt 840 ctgtccttca acaacctcac gcggctggat gaggagagtc tagcggagtt gagcagcctc 900 agtatcctgc gcctcagtca caacgccatc agtcacattg ctgaaggcgc cttcaaggga 960 ctcaagagtc tgcgggtctt ggacctggac cataacgaga tctcgggtac aatcgaggat 1020 accagtggtg cctttacggg gcttgacaac ctcagcaagc tgactctgtt tggaaacaag 1080 atcaaatctg tggctaagag agccttctcg ggcctggaaa gcctggaaca cctgaacctt 1140 ggagagaatg caatcaggtc tgtccagttt gatgcctttg caaagatgaa gaaccttaaa 1200 gagctctaca tcagcagtga gagcttcctg tgtgactgcc agctcaagtg gctgccccca 1260 tggctaatgg gtaggatgct gcaggccttt gtgacagcca cctgtgccca tccagagtcg 1320 ctgaagggcc agagcatttt ctcagtgctg ccagacagct ttgtgtgtga tgactttcca 1380 aagccacaga tcatcaccca gcctgagacg accatggctg tggtgggcaa ggacatccgt 1440 ttcacatgct ccgcagccag cagcagcagc tcaccaatga ccttcgcctg gaagaaggac 1500 aatgaggtcc tggccaatgc agacatggag aactttgccc acgtccgtgc acaggacggc 1560 gaagtgatgg agtataccac tatcctgcac ctccgtcacg tcacctttgg gcacgagggc 1620 cgctaccagt gtatcatcac aaaccacttt ggctccacat actcccacaa agccaggctc 1680 actgtgaatg tgttgccatc attcactaaa ataccccatg acattgccat ccggactggc 1740 accacagccc gcctcgagtg tgctgccacg ggccacccta accctcagat tgcctggcag 1800 aaggatggag gcaccgattt cccggcagct cgtgagcgac gcatgcatgt tatgccagac 1860 gatgatgtgt tcttcatcac tgatgtgaaa atagacgaca tgggggtcta cagctgcact 1920 gcccagaact cggcaggctc ggtttcagcc aacgctaccc tcacagtctt agaaactcca 1980 tccttggcag tgcctctgga agaccgtgtg gtaactgtgg gagaaacagt ggccttccag 2040 tgcaaagcaa ccgggagccc cacaccacgc atcacctggc ttaagggagg tcgcccattg 2100 agcctcacag agcgccacca tttcactcca ggcaaccagc tgctggttgt tcagaatgtg 2160 atgatagacg atgcagggcg gtatacctgt gagatgtcta atcccctggg cactgagcga 2220 gcacatagcc agctgagcat tttacctacc cctggctgcc ggaaggatgg gaccaccgta 2280 ggc 2283 <210> 5 <211> 48 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 5 Gly Asp Ser Leu Asp Cys Gly Gly Arg Gly Leu Ala Ala Leu Pro Gly 1 5 10 15 Asp Leu Pro Ser Ser Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu 20 25 30 Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu 35 40 45 <210> 6 <211> 57 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 6 Ser Asp Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu Lys Trp Leu Pro Pro Trp 1 5 10 15 Leu Ile Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val Thr Ala Thr Cys Ala His 20 25 30 Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe Ser Val Pro Pro Glu Ser 35 40 45 Phe Val Cys Asp Asp Phe Leu Lys Ala 50 55 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 7 Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala 1 5 <210> 8 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 8 Asn Ala Ile Arg Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Val Lys Met Lys Asn 1 5 10 15 Leu Lys <210> 9 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 9 Asn Lys Ile Arg Ser 1 5 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 10 Val Glu Val Asn Ser Gly 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 11 Ala Arg Ile His Arg Lys 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 12 Asn Asn Ile Thr Glu Val Arg Asn Thr 1 5 <210> 13 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 13 Ile Arg Leu Ile Glu Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asn Ser 1 5 10 <210> 14 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 14 Ile Ser Lys Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly Leu Ser Lys 1 5 10 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 15 Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Arg Ala Phe Lys Leu 1 5 10 <210> 16 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 16 Lys Ala Tyr Leu Ser Leu 1 5 <210> 17 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 17 Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe Val 1 5 10 15 His Val His Ala Val Met Glu Tyr Thr 20 25 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 18 Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr 1 5 10 <210> 19 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 19 Phe Lys Gly Asp Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu Arg His His Leu Thr 1 5 10 15 Pro Asp <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 20 Gln Leu Ser Val Leu Leu Glu Asn Leu Tyr 1 5 10 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 21 Lys Pro Gln Ile Ile Thr Gln Pro 1 5 <210> 22 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 22 Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val Ser Val Gly Glu Thr Val Ala 1 5 10 15 <210> 23 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 23 His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe 1 5 10 <210> 24 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 24 Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys 1 5 10 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 25 Gln Leu Leu Val Val Gln Asn Val Val Ala Glu Asp Ala Gly Arg 1 5 10 15 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Continuous Epitope <400> 26 His Leu Arg Gln Val Thr Phe Gly 1 5 <210> 27 <211> 101 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 27 Cys Pro Ser Arg Cys Thr Cys Ser Gly Asp Ser Leu Asp Cys Gly Gly 1 5 10 15 Arg Gly Leu Ala Ala Leu Pro Gly Asp Leu Pro Ser Ser Thr Arg Ser 20 25 30 Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu Ile Asp Pro Ala Gly Phe 35 40 45 Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Leu Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala 50 55 60 Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ser Ser His Val His Asn Lys Ile Arg Ser 65 70 75 80 Lys Ala Ala Ala Tyr Ala Leu Ala Ser Ala Leu Ala Pro Ala His Ala 85 90 95 Gly Ala Pro Ala Pro 100 <210> 28 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 28 Asn Asn Ile Thr Glu Arg Asn Thr Asn Arg Ile Gly Thr Glu Leu Gly 1 5 10 15 Ala Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Arg Ala Lys Leu Pro Arg Ile 20 25 30 Leu Glu Gly Leu Thr Gln Gly Leu Asn Ser Ile Ser Lys Thr Asp Gly 35 40 45 Ala Phe Trp Gly Leu Ser Lys Ser Leu Val Glu Val Asn Ser Gly Tyr 50 55 60 Gly Leu Thr Ala Ala Arg Arg Lys Ser Phe Gln Glu Glu Ser Leu Ala 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ala Glu Gly Lys Gly Arg Ser Ser Gly Ser Gly Leu Asp 85 90 95 Ser Ile Lys Lys Gly Leu Glu Gly Glu Asn Ala Ile Arg Ser Val Gln 100 105 110 Phe Asp Ala Val Lys Met Lys Ala Asn Ala Leu Ala Lys Ala Ser Ala 115 120 125 Asp Ala Ser Ala Phe Ala Leu Ala Cys Ala Asp Ala Cys Ala Gln Ala 130 135 140 Leu Ala Lys Ala Trp Ala Leu Ala Pro Ala Pro Ala Trp Ala Leu Ala 145 150 155 160 Ile Ala Gly Ala Arg Ala Leu Ala Gln Ala Ala Ala Phe Ala Val Ala 165 170 175 Thr Ala Ala Ala Thr Ala Cys Ala Ala Ala His Ala Pro Ala Glu Ala 180 185 190 Ser Ala Leu Ala Lys Ala Gly Ala Gln Ala Ser Ala Ile Ala Phe Ala 195 200 205 Ser Ala Val Ala Pro Ala Pro Ala Glu Ala Ser Ala Phe Ala Val Ala 210 215 220 Cys Ala Asp Ala Asp Ala Phe Ala Leu Ala Lys Ala Ala 225 230 235 <210> 29 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 29 Asn Leu Tyr 1 <210> 30 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 30 Lys Pro Gln Ile Ile Thr Gln Pro Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser 1 5 10 15 Pro Met Thr Glu Asn Phe Val His Val His Val Met Glu Ala Tyr Ala 20 25 30 Thr Ala Ile Ala Thr Ala Asn Ala His Ala Phe Ala Gly Ala Ser Ala 35 40 45 Thr Ala Tyr Ala Ser Ala His 50 55 <210> 31 <211> 70 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 31 Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val Ser Val Gly Glu Thr Val Ala Phe 1 5 10 15 Lys Gly Asp Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu Arg His His Leu Thr Pro 20 25 30 Asp Asn Leu Val Ala Val Ala Gln Ala Asn Ala Val Ala Val Ala Ala 35 40 45 Ala Glu Ala Asp Ala Ala Ala Arg Ala Gln Ala Leu Ala Ser Ala Val 50 55 60 Ala Leu Ala Leu Ala Glu 65 70 <210> 32 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 32 Asp Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Ala Asp Ala Met Ala 1 5 10 15 His Ala Arg <210> 33 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 33 Thr Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Ala Val Ala Phe Ala Thr 1 5 10 15 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Discontinuous Epitope <400> 34 Val Gly Lys Gln Val Thr Ala Phe Ala Gly 1 5 10

Claims (5)

1. 면역 세포의 표면 단백질 Lrig-1(leucine-rich and immunoglobulin-like domains 1)의 항원 결정기(Epitope)인 폴리펩티드(polypeptide).
2. 제 1항에 있어서,
   상기 항원 결정기인 폴리펩티드는 서열번호 5 내지 34번 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 1종 이상의 서열을 포함하는 것인, 폴리펩티드.
3. 제 1항에 있어서,
   상기 면역 세포는 조절 T (Regulatory T)세포인 것인, 폴리펩티드.
4. 제 1항에 있어서,
   상기 면역 세포의 표면 단백질은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 폴리펩티드.
5. 서열번호 5 내지 34번 중 어느 하나로 표시되는 아미노산을 각각 코딩하는 폴리뉴클레오티드(polynucleotide)를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포.

Images