PT2711375T

PT2711375T - Proteínas humanas de ligação a antigénios que se ligam a beta-klotho, recetores fgf e os seus complexos

Info

Publication number: PT2711375T
Application number: PT131838468T
Authority: PT
Inventors: Sylvia Hu Shaw-Fen; Foltz Ian; T King Chadwick; Li Yang; Arora Taruna
Original assignee: Amgen Inc
Priority date: 2009-12-07
Filing date: 2010-12-03
Publication date: 2017-06-22
Also published as: AU2010328444B2; EP3202787A1; UY39124A; EA033405B1; IL220048A0; TWI693234B; TW201805308A; KR20180063373A; ES2633810T3; RS56016B1; CN102858802B; EP2711375A1; JP5840619B2; TWI600761B; CN102858802A; ES2631135T3; MY173097A; IL261585B; KR101865974B1; BR112012013876B1

Description

DESCRIÇÃO "PROTEÍNAS HUMANAS DE LIGAÇÃO A ANTIGÉNIOS QUE SE LIGAM A BETA-KLOTHO, RECETORES FGF E OS SEUS COMPLEXOS"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente divulgação refere-se a moléculas de ácidos nucleicos codificando proteínas de ligação a antigénio que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. A presente divulgação também proporciona proteínas de ligação a antigénio que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, incluindo proteínas de ligação a antigénio que induzem sinalização tipo FGF21, bem como composições farmacêuticas compreendendo proteínas de ligação a antigénio que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, incluindo proteínas de ligação a antigénio que induzem sinalização tipo FGF21 e métodos para tratar distúrbios metabólicos que utilizam utilizando tais ácidos nucleicos, polipéptidos ou composições farmacêuticas. São também proporcionados métodos de diagnóstico que utilizam as proteínas de ligação a antigénio.

ANTECEDENTES 0 Fator de Crescimento de Fibroblastos 21 (FGF21) é um polipéptido segregado que pertence a uma subfamília de Fatores de Crescimento de Fibroblastos (FGF), que inclui FGF19, FGF21 e FGF23 (Itoh et al., (2004) Trend Genet. 2_0:563-69) . O FGF21 é um FGF atípico pelo facto de ser independente da heparina e funcionar como uma hormona na regulação do metabolismo da glucose, dos lípidos e da energia. É altamente expresso no fígado e pâncreas e é o único membro da família FGF a ser expresso principalmente no fígado. Os ratinhos transgénicos expressando FGF21 em quantidade elevada exibem fenótipos metabólicos de taxa de crescimento lento, níveis baixos de glucose e triglicéridos no plasma e uma ausência de diabetes tipo 2, hiperplasia dos ilhéus e obesidade associados à idade. A administração farmacológica da proteína FGF21 recombinante em modelos de roedores e de primatas resulta em níveis normalizados de glucose plasmática, níveis reduzidos de triglicéridos e colesterol e tolerância à glucose e sensibilidade à insulina melhoradas. Além disso, o FGF21 reduz o peso corporal e a gordura corporal, aumentando o gasto energético, a atividade física e a taxa metabólica. A pesquisa experimental proporciona suporte para a administração farmacológica de FGF21 para o tratamento da diabetes tipo 2, obesidade, dislipidémia e outros estados ou distúrbios metabólicos em humanos. O FGF21 é uma hormona endócrina derivada do fígado que estimula a captação de glicose nos adipócitos e a homeostase lipídica através da ativação de seu recetor. Curiosamente, além do recetor FGF canónico, o recetor FGF21 também compreende ο β-

Klotho associado à membrana como um cofator essencial. A ativação do recetor FGF21 conduz a múltiplos efeitos numa variedade de parâmetros metabólicos.

Nos mamíferos, os FGF medeiam a sua ação através de um conjunto de quatro recetores FGF, FGFRl-4, que, por sua vez, são expressos em múltiplas variantes ligadas, e. g., FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Cada recetor FGF contém um domínio tirosina cinase intracelular que é ativado por ligação do ligando, conduzindo a vias de sinalização a jusante que envolvem MAPK (Erkl/2), RAFl, AKTl e STATs. (Kharitonenkov et al. , (2008)

BioDrugs 2_2:37-44). Vários relatos sugeriram que as variantes "c"-repórter ligadas de FGFRl-3 exibem afinidade específica para β-Klotho e podiam atuar como recetor endógeno para o FGF21 (Kurosu et al., (2007) J. Biol. Chem. 282:26687-26695) ; Ogawa et al., (2007) Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 104:7432-7437);

Kharitonenkov et al., (2008) J. Cell Physiol. 215:1-7) . No fígado, o qual expressa abundantemente β-Klotho e FGFR4, o FGF21 não induz a fosforilação de MAPK, apesar da ligação forte do FGF21 ao complexo β-Κΐοίύο-ΕΟΕΡ4. Em células 3T3-L1 e no tecido adiposo branco, o FGFRl é, de longe, o recetor mais abundante e é, portanto, mais provável que os principais recetores funcionais dos FGF21s neste tecido sejam os complexos β-Klotho/FGFRlc. A presente divulgação proporciona uma proteína humana (ou humanizada) de ligação a antigénio, tal como um anticorpo monoclonal que induz a sinalização tipo FGF21, e. g., um anticorpo agonista que imita a função do FGF21. Um tal anticorpo é uma molécula com atividade e seletividade tipo FGF21 mas com características terapêuticas desejadas adicionais, típicas para um anticorpo, tais como estabilidade de proteína, falta de imunogenicidade, facilidade de produção e semi-vida longa in vivo. 0 documento WO2008/123625 divulga uma substância capaz de aumentar ou inibir o β-klotho ou a atividade do β-klotho, como um agente para regular a atividade do FGF21 através do recetor FGF e contendo a substância como um ingrediente ativo.

RESUMO A presente invenção proporciona as seguintes formas de realização: 1. Um anticorpo isolado ou seu fragmento que é capaz de se ligar a um complexo compreendendo β-Klotho e FGFRlc e induz a sinalização mediada pelo FGF21 e compreende as seguintes CDR: a) CDRHl: SEQ ID N°: 122; b) CDRH2: SEQ ID N°: 133; c) CDRH3: SEQ ID N°: 148; d) CDRLl: SEQ ID N°: 166; e) CDRL2: SEQ ID N°: 176; e f) CDRL3: SEQ ID N°: 188; 2. Um anticorpo isolado ou seu fragmento que é capaz de se ligar a um complexo compreendendo β-Klotho e FGFRlc e induz a sinalização mediada pelo FGF21, em que o referido anticorpo isolado ou seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N°: 50 e compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N°: 68. 3. O anticorpo isolado ou seu fragmento da forma de realização 2, em que o referido anticorpo isolado ou seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N°: 50 e compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N°: 68. 4. O anticorpo isolado ou seu fragmento da forma de realização 3, em que o referido anticorpo isolado ou seu fragmento compreende as SEQ ID N°: 50 e SEQ ID N°: 68. 5. Um anticorpo isolado ou seu fragmento que é capaz de se ligar a um complexo compreendendo β-Klotho e FGFRlc e induz a sinalização mediada pelo FGF21, em que o referido anticorpo isolado ou seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N°: 14 e compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N°: 32. 6. O anticorpo isolado ou seu fragmento da forma de realização 5, em que o referido anticorpo isolado ou seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N°: 14 e compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N°: 32. 7. O anticorpo isolado ou seu fragmento da forma de realização 6, em que o referido anticorpo isolado ou seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 98% idêntica à SEQ ID N°: 14 e compreende uma sequência de aminoácidos 98% idêntica à SEQ ID N°: 32. 8. 0 anticorpo isolado ou seu fragmento da forma de realização 1, em que o referido anticorpo ou seu fragmento compreende as SEQ ID N°: 14 e SEQ ID N°: 32 9. Uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo isolado ou seu fragmento de qualquer forma de realização anterior em mistura com um seu veiculo farmaceuticamente aceitável.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1A-1B é um alinhamento que demonstra a homologia da Sequência entre o FGFRlc humano (N° de Acesso GenBank P11362; SEQ ID N°: 356) e FGFRlc murino (N° de Acesso GenBank NP_034336; SEQ ID N°: 357); são destacadas várias caracteristicas, incluindo o péptido de sinal, a sequência transmembranar e a região de ligação à heparina e é proporcionada uma sequência de consenso (SEQ ID N° : 358). A Figura 2a-2c é um alinhamento demonstrando a homologia da Sequência entre o β-Klotho humano (N° de Acesso GenBank NP_783864; SEQ ID N°: 359) e o β-Klotho murino (N° de Acesso GenBank NP_112457; SEQ ID N°: 360); são destacadas várias caracteristicas, incluindo a sequência transmembranar e dois domínios de glicosil-hidrolase e é proporcionada uma sequência de consenso (SEQ ID N°: 361). A Figura 3 é um perfil de citometria de fluxo de células coradas com FGF21-Alexa 647 que foram utilizadas como um imunogénio para produzir proteínas de ligação a antigénio; a figura demonstra o nivel de expressão de um FGF21R (um complexo compreendendo FGFRlc e β-Klotho) e ligação a FGF21. A Figura 4 é uma sequência (SEQ ID N° : 362) demonstrando uma proteína Fc de fusão que foi utilizada como um imunogénio para produzir proteínas de ligação a antigénio; o imunogénio compreende o domínio extracelular (ECD) de FGFRlc humano fundido a um Fc de IgGl através de um ligando Glis (SEQ ID N° : 379); o componente FGFRlc está em maiúsculas, o ligando em itálico e sublinhado e o Fc está em letras minúsculas. A Figura 5 é uma sequência (SEQ ID N°: 363) que demonstra uma proteína Fc de fusão que foi utilizada como um imunogénio para produzir proteínas de ligação a antigénio; o imunogénio compreende o domínio extracelular (ECD) de β-Klotho humano fundido a um Fc de IgGl através de um ligando Glys (SEQ ID N°: 379); o componente β-Klotho está em maiúsculas, o vinculador em itálico e sublinhado e o Fc está em letras minúsculas. A Figura 6 é um gel SDS PAGE demonstrando o nível de pureza obtido de preparações de um complexo de recetor FGF21 solúvel compreendendo FGFRlc ECD-Fc e β-Klotho ECD-Fc, o qual foi utilizado como imunogénio para produzir proteínas de ligação a antigénio. A Figura 7 é uma série de gráficos produzidos de um ensaio repórter ELK-luciferase, como aqui descrito, realizado no clone CHO recombinante 2E10, demonstrando a capacidade de algumas das proteínas de ligação a antigénio para induzir a sinalização tipo FGF21 em células CHO recombinantes que expressem um complexo recetor FGF21 compreendendo FGFRlc e β-Klotho. A Figura 8 é uma série de gráficos produzidos a partir de um ensaio de fosforilação ERKl/2, como aqui descrito, que demonstram a capacidade de algumas das proteínas de ligação a antigénio para induzir a sinalização tipo FGF21 em células L6 de rato. 0 eixo do X é as concentrações das proteínas de ligação a antigénio e o eixo do Y é a percentagem de ERKl/2 fosforilado do ERKl/2 total. A Figura 9 é uma série de gráficos produzidos de um ensaio de fosforilação ERKl/2, como aqui descrito, que demonstram que a sinalização tipo FGF21 mediada pela proteína de ligação a antigénio em células L6 é específica para FGFRlc/β-Klotho. A Figura 10 é uma série de gráficos produzidos de um ensaio de fosforilação ERK, como aqui descrito, que demonstram que algumas proteínas de ligação a antigénio são capazes de induzir a sinalização tipo FGF21 em células de adipócito humano. A Figura 11a é uma série de sensogramas de ligação (unidades de resposta vs tempo) que demonstram que algumas das proteínas de ligação a antigénio que induzem a sinalização mediada pelo FGF21 se ligam ao β-Klotho humano em dois locais de ligação diferentes, mas parcialmente sobrepostos, representados por 24H11 (Grupo A) e 17D8 (Grupo B) , enquanto que as proteínas de ligação a antigénio que não induzem a sinalização mediada pelo FGF21 (2G10, 1A2) não se ligam a estes locais. A Figura lib é uma série de sensogramas de ligação (unidades de resposta vs tempo) que demonstram um terceiro local de ligação ao β-Klotho humano que foi identificado para as proteínas de ligação a antigénio do Grupo C, representadas por 39F7. A Figura 12 é uma série de sensogramas de ligação (unidades de resposta vs tempo) que demonstram que algumas das proteínas de ligação a antigénio (12E4, 24H11, 17C3, 18B11) que induzem a sinalização mediada pelo FGF21 interferem com a ligação do β-Klotho ao FGF21, enquanto que outras proteínas de ligação a antigénio (21H2, 17D8, 18G1) não. A Figura 13 é um alinhamento das regiões variáveis de algumas das proteínas de ligação a antigénio que foram produzidas; as regiões de estrutura e CDR estão identificadas. A Figura 13 divulga as SEQ ID N°: 364, 59, 365, 60, 366, 61, 367, 62, 368, 57, 369, 55, 51-52, 56, 56, 53-54, 63-65, 370, 58, 371, 50, 50, 49, 48, 372, 78, 373, 66-69, 79, 374, 76, 81, 375, 70, 73, 73, 71-72, 376, 83, 82, 84, 377, 80, 378, 75 e 74, respetivamente, por ordem de aparência. A Figura 14 é um diagrama representando graficamente o desenho do estudo para um estudo de 68 dias realizado em macacos cynomolgus obesos. A Figura 15 é um gráfico representando os efeitos do veículo e da 16H7 sobre a ingestão de alimentos em refeições da manhã da população dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 16 são dois gráficos representando os efeitos do veiculo e da 16H7 sobre a ingestão de frutos e a ingestão de alimentos da tarde dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 17 é um gráfico representando os efeitos do veiculo e da 16H7 sobre o peso corporal dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 18 é um gráfico demonstrando os efeitos do veiculo e da 16H7 no indice de massa corporal (IMC) dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 19 é um gráfico demonstrando os efeitos do veiculo sobre a circunferência abdominal (AC) dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 20 é um gráfico demonstrando os efeitos do veiculo e da 16H7 na espessura da dobra da pele (SFT) dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 21 é um gráfico demonstrando os efeitos do veiculo e da 16H7 nos níveis de glucose durante os testes de tolerância à glucose dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 22 é um gráfico demonstrando os efeitos do veículo e da 16H7 nos níveis de insulina no plasma durante os testes de tolerância à glucose dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 23 é um gráfico demonstrando os efeitos do veículo e da 16H7 nos níveis de glicemia em jejum dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 24 é um gráfico demonstrando os efeitos do veiculo e da 16H7 nos níveis de insulina plasmática em jejum dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 25 é um gráfico demonstrando os efeitos do veículo e da 16H7 nos níveis de glucose no plasma após alimentação dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 26 é um gráfico demonstrando os efeitos do veículo e da 16H7 nos níveis de insulina plasmática após alimentação dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 27 é um gráfico demonstrando os efeitos do veículo e da 16H7 nos níveis de triglicéridos plasmáticos em jejum dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 28 é um gráfico demonstrando os efeitos do veículo e da 16H7 nos níveis de triglicéridos no plasma após alimentação dos macacos cynomolgus obesos estudados. A Figura 29 é um esquema representando quimeras humano-ratinho de β-Klotho que foram construídas e utilizadas para estudar a ligação de proteínas de ligação a antigénio. A Figura 30 é um esquema representando as quimeras humano-ratinho de β-Klotho que foram construídas e também inclui dados de ligação qualitativa para FGF21, 16H7, 37D3 e 39F7.

As Figuras 31A-C são uma série de gráficos representando dados de ligação para oito das variantes 16H7 e 22H5 que foram construídas, bem como para as 22H5 e 16H7.

As Figuras 32A-C são uma série de gráficos representando os resultados dos ensaios ELISA que foram utilizados para demonstrar que várias das variantes 22H5 e 16H7 têm capacidade de ligação. A Figura 33 é um gráfico de barras comparando as taxas de desvio para várias variantes 22H5 e 17H7 que foram produzidas. A Figura 34 são dois gráficos representando curvas de ligação para a 39F11 quando titulada com FGF21 e para FGF21 quando titulada com 39F11; as parcelas demonstram um efeito aditivo. A Figura 35 são dois gráficos representando curvas de ligação para a 16H7 quando titulada com 39F11 e 39F11 quando titulada com 16H7; as parcelas demonstram um efeito aditivo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

Os cabeçalhos de secção aqui utilizados são apenas para fins organizacionais e não devem ser interpretados como limitativos do assunto descrito. A menos que aqui definido de outra forma, os termos científicos e técnicos utilizados relacionados com o presente pedido, devem ter os significados que são normalmente entendidos pelos especialistas na técnica. Além disso, a não ser que seja exigido pelo contexto, os termos singulares incluirão o plural e os termos plurais incluirão o singular.

Geralmente, as nomenclaturas utilizadas em ligação com, e técnicas de, cultura de células e tecidos, biologia molecular, imunologia, microbiologia, genética e química de proteínas e ácidos nucleicos e hibridação aqui descritas são as bem conhecidas e vulgarmente utilizadas na técnica. Os métodos e técnicas do presente pedido são geralmente realizados de acordo com métodos convencionais bem conhecidos na técnica e como descrito em várias referências gerais e mais específicas que são citadas e discutidas ao longo da presente descrição a menos que indicado de outra forma. Ver, e. g., Sambrook et ai., Clonagem Molecular: Um Manual de Laboratório, 3a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.I. (2001), Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), e Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.I. (1990) . As reações enzimáticas e técnicas de purificação são realizadas de acordo com as especificações do fabricante, como vulgarmente realizado na técnica ou como aqui descrito. A terminologia utilizada em ligação com, e os procedimentos e técnicas laboratoriais de, química analítica, química orgânica sintética e química medicinal e farmacêutica aqui descritos são os bem conhecidos e vulgarmente utilizados na técnica. As técnicas padrão podem ser utilizadas para sínteses químicas, análises químicas, preparação farmacêutica, formulação e distribuição e tratamento de doentes.

Deve ser entendido que a presente divulgação não está limitada à metodologia, protocolos e reagentes particulares, etc., aqui descritos e como tal podem variar. A terminologia aqui utilizada destina-se apenas a descrever formas de realização particulares e não pretende limitar o âmbito da presente divulgação.

Exceto nos exemplos operacionais, ou quando indicado de outra forma, todos os números que expressem quantidades de ingredientes ou condições de reação aqui utilizados devem ser entendidos como modificados em todos os casos pela expressão "cerca de". A expressão "cerca de" quando utilizado em conexão com porcentagens pode significar ±5%, e. g. , 1%, 2%, 3% ou 4%.

I. DEFINIÇÕES

Tal como aqui utilizado, os termos "a" e "um" significam "um ou mais", a menos que especificamente indicado em contrário.

Uma "proteína de ligação a antigénio" é uma proteína compreendendo uma porção que se liga a um antigénio ou alvo e, opcionalmente, uma porção de suporte ou estrutura que permita que a porção de ligação a antigénio adote uma conformação que promova a ligação da proteína de ligação a antigénio. Exemplos de proteínas de ligação a antigénio incluem um anticorpo humano, um anticorpo humanizado; um anticorpo quimérico; um anticorpo recombinante; um anticorpo de cadeia simples; um diacorpo; um triacorpo; um tetracorpo; um fragmento Fab; um fragmento F(ab')2; um anticorpo IgD; um anticorpo IgE; um anticorpo IgM; Um anticorpo IgGl; Um anticorpo IgG2; Um anticorpo IgG3; ou um anticorpo IgG4, e seus fragmentos. A proteína de ligação a antigénio pode compreender, por exemplo, uma proteína suporte alternativa ou um suporte artificial com CDR ou derivados de CDR enxertados. Esses suporte s incluem, mas não estão limitados a, suporte s derivados de anticorpos compreendendo mutações introduzidas para, por exemplo, estabilizar a estrutura tridimensional da proteína de ligação a antigénio, assim como suporte s totalmente sintéticos compreendendo, por exemplo, um polímero biocompatível. Ver e. g. , Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 53(1) : 121-129 (2003); Roque et al. , Biotechnol. Prog. 2_0: 639-654 (2004). Além disso, podem ser utilizados miméticos de anticorpos peptídicos ("PAMs"), bem como suporte s baseados em miméticos de anticorpos utilizando componentes de fibronectina como suporte.

Uma proteína de ligação a antigénio pode ter, por exemplo, a estrutura de uma imunoglobulina de ocorrência natural. Uma "imunoglobulina" é uma molécula tetramérica. Numa imunoglobulina de ocorrência natural, cada tetrâmero é composto por dois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, cada par, possuindo uma cadeia "leve" (cerca de 25 kDa) e uma cadeia "pesada" (cerca de 50-70 kDa) . A porção amino terminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos que são os principais responsáveis pelo reconhecimento do antigénio. A porção carboxilo terminal de cada cadeia define uma região constante primariamente responsável pela função efetora. As cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves kappa e lambda. As cadeias pesadas são classificadas como mu, delta, gama, alfa ou épsilon e definem o isótipo do anticorpo IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respetivamente. Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes são unidas por uma região "J" de cerca de 12 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada incluindo também uma região "D" de cerca de 10 aminoácidos mais. Ver geralmente, Imunologia Fundamental, Cap. 7 (Paul, W., ed., 2a ed. Raven Press, N.I. (1989)) (incorporado por referência na sua totalidade para todos os efeitos). As regiões variáveis de cada par de cadeia leve/pesada formam o local de ligação do anticorpo de modo que uma imunoglobulina intacta tenha dois locais de ligação.

As cadeias de imunoglobulina de ocorrência natural exibem a mesma estrutura geral de regiões de estrutura relativamente conservadas (FR) unidas por três regiões hipervariáveis, também chamadas regiões determinantes de complementaridade ou CDR. Do terminal N até ao terminal C, as cadeias leve e pesada compreendem os domínios FRl, CDRl, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A atribuição de aminoácidos a cada domínio pode ser feita de acordo com as definições de Rabat et al., em Sequências de Proteínas de Interesse Imunológico, 5a Ed., Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA, PHS, NIH, Publicação NIH N° 91-3242, 1991. Como desejado, as CDR podem também ser redefinidas de acordo com um esquema de nomenclatura alternativa, tal como o de Chothia (ver Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883 ou Honegger & Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309:657-670).

No contexto da presente divulgação, diz-se que uma proteína de ligação a antigénio "liga-se especificamente" ou "liga-se seletivamente" ao seu antigénio alvo, quando a constante de dissociação (KD) é <10~8 Μ. O anticorpo liga-se especificamente ao antigénio com "afinidade elevada" quando o KD é <5xl0~9 M e com "afinidade muito alta" quando o KD é <5xlO~10 M. Numa forma de realização, os anticorpos irão ligar-se a FGFRlc, β-Klotho, a ambos FGFRlc e β-Klotho ou a um complexo compreendendo FGFRlc e β-Klotho, incluindo FGFRlc humano, β-Klotho humano ou ambos FGFRlc humano e β-Klotho humano, com um KD de entre cerca de 10~7 M e 10~12 M, e, ainda noutra forma de realização, os anticorpos ligam-se com um KD<5xl0~9.

Um "anticorpo" refere-se a uma imunoglobulina intacta ou a uma sua porção de ligação a antigénio que compete com o anticorpo intacto por ligação especifica, a menos que especificado de outra forma. As porções de ligação a antigénio podem ser produzidas por técnicas de ADN recombinante ou por clivagem enzimática ou quimica de anticorpos intactos. As porções de ligação a antigénio incluem, inter alia, Fab, Fab', F {ah')2, Fv, anticorpos de domínio (dAb), fragmentos incluindo regiões determinantes de complementaridade (CDR), anticorpos de cadeia simples (scFv), anticorpos quiméricos, diacorpos, triacorpos, tetracorpos e polipéptidos que contêm, pelo menos, uma porção de uma imunoglobulina que é suficiente para conferir ligação a antigénio específica para o polipéptido.

Um fragmento Fab é um fragmento monovalente possuindo os domínios VL, VH, CL e CH1; um fragmento F(ab')2 é um fragmento bivalente com dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfureto na região dobradiça; um fragmento Fd possui os domínios VH e CH1; um fragmento Fv possui os domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo; e um fragmento dAb possui um domínio VH, um domínio VL, ou um fragmento de ligação a antigénio de um domínio VH ou VL (Pat. US N°. 6846634, 6696245, Pub. do

Ped. US N° 05/0202512, 04/0202995, 04/0038291, 04/0009507, 03/0039958, Ward et al., Nature 341:544-546 (1989)).

Um anticorpo de cadeia simples (scFv) é um anticorpo no qual uma região VL e uma VH são unidas através de um ligando (e. g., uma sequência sintética de resíduos de aminoácidos) para formar uma cadeia de proteína contínua em que o ligando é suficientemente longo para permitir que a cadeia de proteína se dobre sobre si mesmo e forme um local de ligação de antigénio monovalente (ver, e. g. , Bird et al. , Science 242:423-26 (1988) e Huston et al. , 1988, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 85:5879-83 (1988)). Os diacorpos são anticorpos bivalentes compreendendo duas cadeias polipeptídicas, em que cada cadeia polipeptídica compreende domínios VH e VL ligados por um ligando que é demasiado curto para permitir o emparelhamento entre dois domínios na mesma cadeia, permitindo assim que cada domínio se emparelhe com um domínio complementar sobre outra cadeia polipeptídica (ver, e. g. , Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 90:6444-48 (1993), e Poljak et al., Structure 2:1121-23 (1994)) . Se as duas cadeias polipeptídicas de um diacorpo forem idênticas, então um diacorpo resultante do seu emparelhamento terá dois locais idênticos de ligação a antigénio. Podem ser utilizadas cadeias polipeptídicas com sequências diferentes para produzir um diacorpo com dois locais de ligação a antigénio diferentes. De um modo semelhante, os tricorpos e os tetracorpos são anticorpos compreendendo três e quatro cadeias polipeptídicas, respetivamente, e formando três e quatro locais de ligação a antigénio, respetivamente, os quais podem ser iguais ou diferentes.

As regiões determinantes de complementaridade (CDR) e as regiões estruturais (FR) de um determinado anticorpo podem ser identificadas utilizando o sistema descrito por Rabat et al., em Sequências de Proteínas de Interesse Imunológico, 5a Ed., Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA, PHS, NIH, Publicação NIH N° . 91-3242, 1991. Como desejado, as CDR podem também ser redefinidas de acordo com um esquema de nomenclatura alternativa, tal como o de Chothia (ver Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342 :878-883 ou Honegger & Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309:657-670. Uma ou mais CDR podem ser incorporadas numa molécula, de modo covalente ou não covalente, para se tornar uma proteína de ligação a antigénio. Uma proteína de ligação a antigénio pode incorporar a(s) CDR como parte de uma cadeia polipeptídica maior, pode ligar covalentemente a(s) CDR a outra cadeia polipeptídica, ou pode incorporar a(s) CDR não covalentemente. As CDR permitem que a proteína de ligação a antigénio se ligue especificamente a um antigénio particular de interesse.

Uma proteína de ligação a antigénio pode ter um ou mais locais de ligação. Se houver mais do que um local de ligação, os locais de ligação podem ser idênticos um ao outro ou podem ser diferentes. Por exemplo, uma imunoglobulina humana de ocorrência natural normalmente possui dois locais de ligação idênticos, enquanto que um anticorpo "biespecífico" ou "bifuncional" tem dois locais de ligação diferentes. A expressão "anticorpo humano" inclui todos os anticorpos que possuem uma ou mais regiões variáveis e constantes derivadas da SEQuências de imunoglobulina humana. Numa forma de realização, todos os domínios variáveis e constantes, são derivados da SEQuências de imunoglobulinas humanas (um anticorpo completamente humano). Estes anticorpos podem ser preparados de vários modos, exemplos dos quais são descritos abaixo, incluindo através da imunização com um antigénio de interesse de um ratinho que é geneticamente modificado para expressar anticorpos derivados de genes codificadores de cadeia pesada e/ou leve humana, tal como um ratinho derivado de um sistema Xenomouse®, UltiMab™ ou Velocimmune®. Podem também ser utilizadas abordagens baseadas em fagos.

Um anticorpo humanizado possui uma sequência que difere da sequência de um anticorpo derivado de uma espécie não humana, por uma ou mais substituições, deleções e/ou adições de aminoácidos, de tal modo que o anticorpo humanizado é menos provável de induzir uma resposta imunitária e/ou induz uma resposta imunitária menos grave, quando comparada com o anticorpo de espécie não humana, quando é administrada a um indivíduo humano. Numa forma de realização, determinados aminoácidos nos domínios estruturais e constantes das cadeias pesadas e/ou leves do anticorpo de espécies não humanas são mutados para produzir o anticorpo humanizado. Noutra forma de realização, o(s) domínio(s) constante(s) de um anticorpo humano estão fundidos com o(s) domínio(s) variável(s) de uma espécie não humana. Noutra forma de realização, um ou mais resíduos de aminoácidos numa ou mais sequências CDR de um anticorpo não humano são alterados para reduzir a probabilidade de imunogenicidade do anticorpo não humano quando é administrado a um indivíduo humano, em que os resíduos de aminoácidos alterados, ou não são críticos para a ligação imunoespecífica do anticorpo ao seu antigénio, ou as alterações da sequência de aminoácidos que são feitas são alterações conservadoras, de tal forma que a ligação do anticorpo humanizado ao antigénio não é significativamente pior do que a ligação dos anticorpos não humano ao antigénio. Exemplos de como produzir anticorpos humanizados podem ser encontrados nas Pat. US N°. 6054297, 5886152 e 5877293. A expressão "anticorpo quimérico" refere-se a um anticorpo que contém uma ou mais regiões de um anticorpo e uma ou mais regiões de um ou mais outros anticorpos. A expressão "cadeia leve" inclui uma cadeia leve de comprimento completo e seus fragmentos, possui uma sequência de região variável suficiente para conferir especificidade de ligação. Uma cadeia leve de comprimento completo inclui um domínio de região variável, VL, e um domínio de região constante, CL. O domínio da região variável da cadeia leve está no terminal amino do polipéptido. As cadeias leves incluem cadeias kappa ("κ") e cadeias lambda ("λ"). A expressão "cadeia pesada" inclui uma cadeia pesada de comprimento completo e seus fragmentos, possuindo uma sequência de região variável suficiente para conferir especificidade de ligação. Uma cadeia pesada de comprimento completo inclui um domínio de região variável, VH, e três domínios de região constante, CH1, CH2, e CH3. 0 domínio VH está no terminal amino do polipéptido e os domínios CH estão no terminal carboxilo, com o Ch3 estando mais próximo do terminal carboxilo do polipéptido. As cadeias pesadas podem ser de qualquer isótipo, incluindo IgG (incluindo os subtipos IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4), IgA (incluindo os subtipos IgAl e IgA2), IgM e IgE. 0 termo "fragmento imunologicamente funcional" (ou simplesmente "fragmento") de uma proteína de ligação a antigénio, e. g. , uma cadeia de anticorpo ou de imunoglobulina (cadeia pesada ou leve), tal como aqui utilizado, é uma proteína de ligação a antigénio compreendendo uma porção (independentemente de como essa porção é obtida ou sintetizada) de um anticorpo que carece de, pelo menos, alguns dos aminoácidos presentes numa cadeia de comprimento completo, mas que é capaz de se ligar especif icamente a um antigénio. Tais fragmentos são biologicamente ativos por se ligarem especificamente ao antigénio alvo e podem competir com outras proteínas de ligação a antigénio, incluindo anticorpos intactos, para ligação específica a um dado epítopo. Num aspeto, tal fragmento reterá pelo menos uma CDR presente na cadeia leve ou pesada de comprimento total, e em algumas formas de realização compreenderá uma única cadeia pesada e/ou cadeia leve ou sua porção. Estes fragmentos biologicamente ativos podem ser produzidos por técnicas de ADN recombinante ou podem ser produzidos por clivagem enzimática ou química de proteínas de ligação a antigénio, incluindo anticorpos intactos. Os fragmentos de imunoglobulina imunologicamente funcionais incluem, mas não estão limitados a, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, anticorpos de domínio e anticorpos de cadeia simples, e podem ser derivados de qualquer fonte de mamífero, incluindo, mas não se limitando a, humano, ratinho, rato, camelídeo ou coelho. Está ainda contemplado que uma porção funcional das proteínas de ligação a antigénio aqui reveladas, por exemplo, uma ou mais CDR, poderia ser ligada covalentemente a uma segunda proteína ou a uma molécula pequena para criar um agente terapêutico dirigido a um alvo particular no corpo, possuindo propriedades terapêuticas bifuncionais ou possuindo uma semi-vida prolongada no soro.

Uma região "Fc" contém dois fragmentos de cadeia pesada compreendendo os domínios CH2 e CH3 de um anticorpo. Os dois fragmentos de cadeia pesada são mantidos unidos por duas ou mais ligações dissulfureto e por interações hidrofóbicas dos domínios CH3 .

Um "fragmento Fab" contém uma cadeia leve e uma porção de uma cadeia pesada que contém o domínio VH e o domínio CH1 e também a região entre os domínios CH1 e CH2, de modo que uma ligação dissulfureto intercadeias pode ser formada entre as duas cadeias pesadas de dois fragmentos Fab' para formar uma molécula F(ab')2·

Um "fragmento F(ab')2" contém duas cadeias leves e duas cadeias pesadas contendo uma porção da região constante entre os domínios CH1 e CH2, de tal modo que se forma uma ligação dissulfureto intercadeias entre as duas cadeias pesadas. Um fragmento F(ab')2 é assim composto por dois fragmentos Fab' que são mantidos unidos por uma ligação dissulfureto entre as duas cadeias pesadas. A "região Fv" compreende as regiões variáveis de ambas as cadeias pesada e leve, mas não possui as regiões constantes.

Um "anticorpo de domínio" é um fragmento de imunoglobulina imunologicamente funcional contendo apenas a região variável de uma cadeia pesada ou a região variável de uma cadeia leve. Em alguns casos, duas ou mais regiões VH são ligadas covalentemente com um ligando peptídico para criar um anticorpo de domínio bivalente. As duas regiões VH de um anticorpo de domínio bivalente podem apontar aos mesmos ou diferentes antigénios.

Um "hemicorpo" é uma construção de imunoglobulina imunologicamente funcional compreendendo uma cadeia pesada completa, uma cadeia leve completa e uma segunda região Fc de cadeia pesada emparelhada com a região Fc da cadeia pesada completa. Um ligando pode, mas não necessariamente, ser utilizado para se juntar à região Fc da cadeia pesada e à segunda região Fc da cadeia pesada. Em formas de realização particulares, um hemicorpo é uma forma monovalente de uma proteína de ligação a antigénio aqui divulgada. Noutras formas de realização, podem ser empregues pares de resíduos carregados para associar uma região Fc com a segunda região Fc. A segunda região Fc da cadeia pesada pode compreender, por exemplo, a SEQ ID N°: 441 e pode ser ligada à cadeia leve através de um ligando (e. g. , SEQ ID N°: 440) . Uma cadeia pesada de hemicorpo exemplar compreende a sequência SEQ ID N°: 453.

Uma "proteína bivalente de ligação a antigénio" ou "anticorpo bivalente" compreende dois locais de ligação a antigénio. Em alguns casos, os dois locais de ligação têm as mesmas especificidades antigénicas. As proteínas bivalentes de ligação a antigénio e os anticorpos bivalentes podem ser biespecíficos, como aqui descrito.

Uma "proteína multiespecífica de ligação a antigénio" ou "anticorpo multiespecí fico" é uma que aponta a mais do que um antigénio ou epítopo.

Uma proteína ou anticorpo "biespecífico", "duploespecífico" ou "bifuncional" de ligação a antigénio é uma proteína ou anticorpo híbrido de ligação a antigénio, respetivamente, possuindo dois locais de ligação ao antigéio diferentes. As proteínas e anticorpos biespecíficos de ligação a antigénio são uma espécie de proteína multiespecífica de ligação a antigénio ou anticorpo muitiespecífico e podem ser produzidos por uma variedade de métodos incluindo, mas não limitados a, fusão de hibridomas ou ligação de fragmentos Fab'. Ver, e. g. ,

Songsivilai e Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321; Kostelny et al. , 1992, J. Immunol. 148:1547-1553. Os dois locais de ligação de uma proteína ou anticorpo biespecífico de ligação a antigénio ligar-se-ão a dois epítopos diferentes, os quais podem residir nos mesmos ou diferentes alvos proteicos.

As expressões "sinalização tipo FGF21" e "induz a sinalização tipo FGF21", quando aplicadas a uma proteína de ligação a antigénio da presente divulgação, significam que a proteína de ligação a antigénio imita, ou modula, um efeito biológico in vivo induzido pela ligação de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 e induz uma resposta biológica que, de outra forma resultaria da ligação in vivo de FGF21 a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Na avaliação da ligação e especificidade de uma proteína de ligação a antigénio, e. g., um anticorpo ou um seu fragmento imunologicamente funcional, considera-se que um anticorpo ou fragmento induz uma resposta biológica quando a resposta é igual ou superior a 5% e, de um modo preferido, igual ou superior a 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95% da atividade de um padrão de FGF21 tipo selvagem compreendendo a forma madura da SEQ ID N°: 2 (i. e.f a forma madura da sequência FGF21 humana) e tem as seguintes propriedades: exibindo um nível de eficácia igual ou superior a 5% de um padrão FGF21, com uma EC50 igual ou inferior a 100 nM, e. g. , 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM ou 10 nM em (1) o ensaio de células repórter de luciferase mediada pelo recetor FGF21 recombinante do Exemplo 5; (2) fosforilação ERK no ensaio de células mediadas pelo recetor FGF21 recombinante do Exemplo 5; e (3) fosforilação ERK em adipócitos humanos como descrito no Exemplo 7. A "potência" de uma proteína de ligação a antigénio é definida como exibindo uma EC50 igual ou inferior a 100 nM, e. g. , 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM e, de um modo preferido, menos do que 10 nM da proteína de ligação a antigénio nos seguintes ensaios: (1) o ensaio de células repórter de luciferase mediada pelo recetor FGF21 recombinante do Exemplo 5; (2) a fosforilação ERK no ensaio de células mediadas pelo recetor FGF21 recombinante do Exemplo 5; e (3) fosforilação ERK em adipócitos humanos como descrito no Exemplo 7.

Note-se que nem todas as proteínas de ligação a antigénio da presente divulgação induzem a sinalização mediada pelo FGF21, nem esta propriedade é desejável em todas as circunstâncias. No entanto, as proteínas de ligação a antigénio que não induzem aspetos de forma de sinalização mediada por FGF21 da presente divulgação e podem ser úteis como reagentes de diagnóstico ou outras aplicações.

Como aqui utilizado, o termo "FGF21R" significa um complexo recetor multimérico que o FGF21 é conhecido por ou suspeito de formar in vivo. Em várias formas de realização, FGF21R compreende (i) um FGFR, e. g. , FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4, e (ii) β-Klotho. 0 termo "polinucleótido" ou a expressão "ácido nucleico" incluem os polímeros de nucleótidos de cadeia simples e de cadeia dupla. Os nucleótidos compreendendo o polinucleótido podem ser ribonucleótidos ou desoxirribonucleótidos ou uma forma modificada de qualquer tipo de nucleótido. As referidas modificações incluem modificações de bases, tais como derivados de bromouridina e de inosina, modificações de ribose, tais como 2' , 3' -didesoxirribose e modificações de ligação internucleotídica tais como fosforotioato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiselenoato, fosforoiltioato, fosforaniladato e fosforoamidato. 0 termo "oligonucleótido" significa um polinucleótido compreendendo 200 nucleótidos ou menos. Em algumas formas de realização, os oligonucleótidos têm 10 a 60 bases de comprimento. Noutras formas de realização, os oligonucleótidos têm 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 a 40 nucleótidos de comprimento. Os oligonucleótidos podem ser de cadeia simples ou de cadeia dupla, e. g., para utilização na construção de um gene mutante. Os oligonucleótidos podem ser oligonucleótidos codificantes ou não codificantes. Um oligonucleótido pode incluir um marcador, incluindo um marcador radioativo, um marcador fluorescente, um hapteno ou um marcador antigénico, para ensaios de deteção. Os oligonucleótidos podem ser utilizados, por exemplo, como iniciadores de PCR, iniciadores de clonagem ou sondas de hibridização.

Uma "molécula de ácido nucleico isolada" significa um ADN ou ARN de origem genómica, ARNm, ADNc ou sintética ou alguma combinação destes que não está associada com a totalidade ou com uma porção de um polinucleótido no qual o polinucleótido isolado é encontrado na natureza, ou é ligado a um polinucleótido ao qual não está ligado na natureza. Para os fins desta divulgação, entende-se que "uma molécula de ácido nucleico compreendendo" uma sequência de nucleótidos particular não abrange cromossomas intactos. As moléculas de ácido nucleico isoladas "compreendendo" as sequências de ácido nucleico especificadas podem incluir, além das sequências especificadas, sequências de codificação para até dez ou mesmo até cerca de vinte outras proteínas ou as suas porções, ou podem incluir sequências reguladoras ligadas operacionalmente que controlam a expressão da região codificadora das sequências de ácido nucleico citadas e/ou podem incluir sequências vetor. A menos que indicado de outro modo, a extremidade esquerda de qualquer sequência polinucleotídica de cadeia simples aqui discutida é a extremidade 5' ; a direção da esquerda das sequências polinucleotídicas de cadeia dupla é referida como a direção 5' . A direção da adição 5' a 3' de transcritos de ARN a nascente é referida como a direção de transcrição; as regiões da

Sequência na cadeia de ADN possuindo a mesma sequência que o transcrito de ARN que são 5' para a extremidade 5' do transcrito de ARN são referidas como "sequências a montante"; as regiões da Sequência na cadeia de ADN possuindo a mesma sequência que o transcrito de ARN que são 3' para a extremidade 3' do transcrito de ARN são referidas como "sequências a jusante". A expressão "sequência de controlo" refere-se a uma sequência polinucleotidica que pode afetar a expressão e o processamento das sequências codificantes às quais está ligada. A natureza dessas sequências de controlo pode depender do organismo hospedeiro. Em formas de realização particulares, as sequências de controlo para procariotas podem incluir um promotor, um local de ligação ribossómico e uma sequência do terminal da transcrição. Por exemplo, as sequências de controlo para eucariotas podem incluir promotores compreendendo uma pluralidade de locais de reconhecimento para fatores de transcrição, sequências promotoras da transcrição e sequência do terminal da transcrição. As "sequências de controlo" podem incluir sequências lideres e/ou sequências de parceiros de fusão. 0 termo "vetor" significa qualquer molécula ou entidade (e. g. , ácido nucleico, plasmídeo, bacteriófago ou virus) utilizada para transferir informação de codificação de proteínas numa célula hospedeira. A expressão "vetor de expressão" ou "construção de expressão" refere-se a um vetor que é adequado para transformação de uma célula hospedeira e contém sequências de ácidos nucleicos que dirigem e/ou controlam (em conjunto com a célula hospedeira) a expressão de uma ou mais regiões codificadoras heterólogas operativamente ligadas a estas. Uma construção de expressão pode incluir, mas não se limita a, sequências que afetam ou controlam a transcrição, tradução e, se os intrões estão presentes, afetam a união de ARN de uma região de codificação operacionalmente ligada a esta.

Como aqui utilizado, "operacionalmente ligado" significa que os componentes aos quais a expressão é aplicada estão numa relação que lhes permite desempenhar as suas funções inerentes, sob condições adequadas. Por exemplo, uma sequência de controlo num vetor que está "operacionalmente ligado" a uma sequência codificadora de proteína, é ligada a ela de modo a que a expressão da sequência codificadora de proteína seja conseguida em condições compatíveis com a atividade transcricional das sequências de controlo. A expressão "célula hospedeira" significa uma célula que foi transformada, ou é capaz de ser transformada, com uma sequência de ácidos nucleicos e, deste modo, expressa um gene de interesse. A expressão inclui a descendência da célula progenitora, quer a descendência seja, ou não, idêntica na morfologia ou na composição genética à célula original, desde que o gene de interesse esteja presente. 0 termo "transdução" significa a transferência de genes de uma bactéria para outra, geralmente por bacteriófagos. "Transdução" refere-se também à aquisição e transferência da SEQuências celulares eucarióticas por retrovirus defeituosos na replicação. 0 termo "transfeção" significa a captação de ADN estranho ou exógeno por uma célula, e uma célula foi "transfetada" quando o ADN exógeno foi introduzido dentro da membrana celular. Uma série de técnicas de transfeção são bem conhecidas na técnica e são aqui divulgadas. Ver, e. g. , Graham et al. , (1973) Virology _52_:456; Sambrook et al. , (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual,, supra; Davis et al. , (1986) Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier; Chu et al. , (1981) Gene JL3_:197. Tais técnicas podem ser utilizadas para introduzir uma ou mais porções de ADN exógeno em células hospedeiras adequadas. O termo "transformação" refere-se a uma alteração nas caracteristicas genéticas de uma célula, e uma célula foi transformada quando foi modificada para conter novo ADN ou ARN. Por exemplo, uma célula é transformada onde é geneticamente modificada do seu estado natural, através da introdução de novo material genético via transfeção, transdução ou outras técnicas. Após transfeção ou transdução, o ADN de transformação pode recombinar com o da célula ao ser integrado fisicamente num cromossoma da célula, ou pode ser mantido transientemente como um elemento episomal sem ser replicado, ou pode replicar-se independentemente como um plasmídeo. Considera-se que uma célula foi "transformada estavelmente" quando o ADN de transformação é replicado com a divisão da célula.

Os termos "polipéptido" ou "proteína" são aqui utilizados de modo intercambiável para se referirem a um polímero de resíduos de aminoácidos. Os termos também se aplicam a polímeros de aminoácidos nos quais um ou mais resíduos de aminoácidos é um análogo ou mimético de um aminoácido correspondente que ocorre naturalmente, bem como a polímeros de aminoácidos que ocorrem naturalmente. Os termos também podem abranger polímeros de aminoácidos que foram modificados, e. g. , pela adição de resíduos de hidratos de carbono para formar glicoproteínas ou fosforilados. Os polipéptidos e proteínas podem ser produzidos por uma célula natural e não recombinante, ou os polipéptidos e proteínas podem ser produzidos por uma célula geneticamente modificada ou recombinante. Os polipéptidos e proteínas podem compreender moléculas possuindo a sequência de aminoácidos de uma proteína natural ou moléculas com deleções de, adições a e/ou substituições de um ou mais aminoácidos da sequência natural. Os termos "polipéptido" e "proteína" abrangem proteínas de ligação a antigénio que se ligam a, especificamente ou seletivamente, (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, ou sequências que têm deleções de, adições a e/ou substituições de um ou mais aminoácidos de uma proteína de ligação a antigénio que se ligam a, especificamente ou seletivamente (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. A expressão "fragmento polipeptídico" refere-se a um polipéptido que tem uma deleção no terminal amino, uma deleção no terminal carboxilo e/ou uma deleção interna quando comparada com a proteína de comprimento total. Tais fragmentos podem também conter aminoácidos modificados em comparação com a proteína de comprimento total. Em determinadas formas de realização, os fragmentos têm cerca de cinco a 500 aminoácidos de comprimento. Por exemplo, os fragmentos podem ter, pelo menos, 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400 ou 450 aminoácidos de comprimento. Os fragmentos polipeptídicos úteis incluem fragmentos de anticorpos imunologicamente funcionais, incluindo domínios de ligação. No caso de uma proteína de ligação a antigénio que se liga a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, os fragmentos úteis incluem, mas não estão limitados a, uma região CDR, um domínio variável de uma cadeia pesada ou leve, uma porção de uma cadeia de anticorpo ou apenas a sua região variável incluindo duas CDR, e semelhantes. A referida expressão "proteína isolada" significa que uma proteína individual (1) está livre de pelo menos algumas outras proteínas com as quais seria normalmente encontrada, (2) está essencialmente isenta de outras proteínas da mesma fonte, e. g. , da mesma espécie, (3) é expressa por uma célula de uma espécie diferente, (4) foi separada de, pelo menos, cerca de 50 por cento de polinucleótidos, lípidos, hidratos de carbono ou outros materiais com os quais está associado na natureza, (5) está operativamente associado (por interação covalente ou não covalente) com um polipéptido com o qual não está associado na natureza, ou (6) não ocorre na natureza. Normalmente, uma "proteína isolada" constitui, pelo menos, cerca de 5%, pelo menos, cerca de 10%, pelo menos, cerca de 25%, ou pelo menos, cerca de 50% de uma dada amostra. O ADN genómico, ADNc, ARNm ou outro ARN, de origem sintética, ou qualquer sua combinação podem codificar tal proteína isolada. De um modo preferido, a proteína isolada está substancialmente isenta de proteínas ou polipéptidos ou outros contaminantes que se encontram no seu ambiente natural, que possam interferir com a sua utilização terapêutica, diagnóstica, profilática, de investigação ou outra.

Uma "variante" de um polipéptido (e. g. , uma proteína de ligação a antigénio ou um anticorpo) compreende uma sequência de aminoácidos em que um ou mais resíduos de aminoácidos são inseridos em, deletados de e/ou substituídos na sequência de aminoácidos relativamente a outra sequência polipeptídica. As variantes incluem proteínas de fusão.

Um "derivado" de um polipéptido é um polipéptido (e. g. , uma proteína de ligação a antigénio ou um anticorpo) que foi quimicamente modificado de alguma forma distinta das variantes de inserção, deleção ou substituição, e. g. , por conjugação a outra porção química. A expressão "ocorrência natural" como utilizada ao longo da descrição, em ligação com materiais biológicos tais como polipéptidos, ácidos nucleicos, células hospedeiras e semelhantes, refere-se a materiais que são encontrados na natureza. A "região de ligação a antigénio" significa uma proteína, ou uma porção de uma proteína, que se liga especificamente a um antigénio especificado, e. g. , FGFRlc, β-Klotho ou ambos FGFRlc e β-Klotho. Por exemplo, a porção de uma proteína de ligação a antigénio, que contém os resíduos de aminoácidos que interagem com um antigénio e conferem à proteína de ligação a antigénio a sua especificidade e afinidade para o antigénio, é referida como "região de ligação a antigénio". Uma região de ligação a antigénio normalmente inclui uma ou mais "regiões de ligação complementares" ("CDR"). Determinadas regiões de ligação a antigénio incluem também uma ou mais regiões "estruturais". Uma "CDR" é uma sequência de aminoácidos que contribui para a especificidade e afinidade de ligação a antigénio. As regiões "estruturais" podem ajudar a manter a conformação adequada das CDR para promover a ligação entre a região de ligação a antigénio e um antigénio.

Em determinados aspetos, são proporcionadas proteínas de ligação a antigénio recombinante que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e urn de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Neste contexto, uma "proteína recombinante" é uma proteína produzida utilizando técnicas recombinantes, i. e. , através da expressão de um ácido nucleico recombinante, como aqui descrito. Os métodos e técnicas para a produção de proteínas recombinantes são bem conhecidos na técnica. 0 termo "competir" quando utilizado no contexto de proteínas de ligação a antigénio (e. g. , proteínas neutralizantes de ligação a antigénio, anticorpos neutralizantes, proteínas agonistas de ligação a antigénio, anticorpos agonistas e proteínas de ligação que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4) que competem pelo mesmo epítopo ou local de ligação num alvo, significa competição entre proteínas de ligação a antigénio, como determinado por um ensaio no qual a proteína de ligação a antigénio (e. g., anticorpo ou seu fragmento imunologicamente funcional), em estudo, previne ou inibe a ligação específica de uma molécula de referência (e. g., um ligando de referência ou proteína de ligação a antigénio de referência, tal como um anticorpo de referência) a um antigénio comum (e. g. , FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, FGFR4, β-Klotho ou um seu fragmento). Podem ser utilizados numerosos tipos de ensaios de ligação competitiva para determinar se uma molécula de teste compete com uma molécula de referência para ligação. Exemplos de ensaios que podem ser empregues incluem radioimunoensaio direto ou indireto em fase sólida (RIA), imunoensaio enzimático direto ou indireto em fase sólida (EIA), ensaio de competição em sanduíche (ver, e. g. , Stahli et al. , (1983) Methods in Enzymology _9:242-253); EIA biotina-avidina direta de fase sólida (ver, e. g., Kirkland et al. , (1986) J. Immunol. 137:3614-3619); ensaio marcado direto em fase sólida, ensaio em sanduíche marcado direto em fase sólida (ver, e. g., Harlow and Lane, (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press); RIA direto de fase sólida utilizando o marcador 1-125 (ver, e. g. , Morei et al. , (1988) Molec. Immunol. 2_5:7-15); EIA biotina-avidina direta de fase sólida (ver, e. g., Cheung, et al., (1990) Virology 176:546-552); e RIA direto marcado (Moldenhauer et al. , (1990) Scand. J. Immunol. 32:77-82) .

Normalmente, tal ensaio envolve a utilização de um antigénio purificado ligado a uma superfície sólida ou células contendo uma proteína de teste de ligação a antigénio, não marcada, ou uma proteína de referência de ligação a antigénio, marcada. A inibição competitiva é medida pela determinação da quantidade de marcador ligado à superfície sólida ou células na presença da proteína de teste de ligação a antigénio. Normalmente, a proteína de teste de ligação a antigénio está presente em excesso. As proteínas de ligação a antigénio identificadas por ensaio de competição (proteínas competidoras de ligação a antigénio) incluem proteínas de ligação a antigénio ligadas ao mesmo epítopo como as proteínas de referência de ligação a antigénio e proteínas de ligação a antigénio ligadas a um epítopo adjacente, suficientemente proximal ao epítopo ligado pela proteína de referência de ligação a antigénio para ocorrer obstrução estérica. Os detalhes adicionais sobre métodos para determinar a ligação competitiva são proporcionados nos exemplos aqui apresentados. Normalmente, quando uma proteína concorrente de ligação a antigénio está presente em excesso, esta irá inibir a ligação específica de uma proteína de referência de ligação a antigénio a um antigénio comum em pelo menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ou 75%. Em alguns casos, a ligação é inibida em pelo menos 80%, 85%, 90%, 95% ou 97% ou mais. 0 termo "antigénio" refere-se a uma molécula ou uma porção de uma molécula capaz de ser ligada por um agente de ligação seletivo, tal como uma proteína de ligação a antigénio (incluindo, e. g., um anticorpo ou um seu fragmento imunologicamente funcional) e também pode ser capaz de ser utilizado num animal para produzir anticorpos capazes de se ligarem a esse antigénio. Um antigénio pode possuir um ou mais epítopos que são capazes de interagir com diferentes proteínas de ligação a antigénio, e. g. , anticorpos. 0 termo "epítopo" significa os aminoácidos de uma molécula alvo que são contactados por uma proteína de ligação a antigénio (por exemplo, um anticorpo) quando a proteína de ligação a antigénio está ligada à molécula alvo. 0 termo inclui qualquer subconjunto da lista completa de aminoácidos da molécula alvo que são contactados quando uma proteína de ligação a antigénio, tal como um anticorpo, está ligada à molécula alvo. Um epítopo pode ser contíguo ou não contíguo (e. g., (i) num polipéptido de cadeia simples, os resíduos de aminoácidos que não são contíguos uns aos outros na sequência polipeptídica mas que dentro do contexto da molécula alvo estão ligados pela proteína de ligação a antigénio, ou (ii) num recetor multimérico compreendendo dois ou mais componentes individuais, e. g., (i) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4, e (ii) β-Klotho, resíduos de aminoácidos que estão presentes num ou mais dos componentes individuais, mas que ainda estão ligados pela proteína de ligação a antigénio). Em determinadas formas de realização, os epítopos podem ser miméticos pelo facto de compreenderem uma estrutura tridimensional que é semelhante a um epítopo antigénico utilizado para produzir a proteína de ligação a antigénio, contudo não compreendem nenhuns ou apenas alguns dos resíduos de aminoácidos encontrados no epítopo utilizado para produzir a proteína de ligação a antigénio. Na maioria das vezes, os epítopos residem em proteínas, mas em alguns casos podem residir em outros tipos de moléculas, tais como ácidos nucleicos. Os determinantes do epítopo podem incluir agrupamentos superficiais quimicamente ativos de moléculas, tais como aminoácidos, cadeias laterais de açúcares, grupos fosforilo ou sulfonilo e podem ter características estruturais tridimensionais específicas e/ou características de carga específicas. Geralmente, as proteínas de ligação a antigénio específicas para uma molécula alvo particular reconhecerão, de um modo preferido, um epítopo na molécula alvo numa mistura complexa de proteínas e/ou macromoléculas. 0 termo "identidade" refere-se a uma relação entre as sequências de duas ou mais moléculas polipeptídicas ou duas ou mais moléculas de ácidos nucleicos, como determinado por alinhamento e comparação das sequências. "Percentagem de identidade" significa a percentagem de resíduos idênticos entre os aminoácidos ou nucleótidos nas moléculas comparadas e é calculada com base no tamanho da menor das moléculas que estão a ser comparadas. Para esses cálculos, as lacunas nos alinhamentos (se houver) devem ser abordadas por um determinado modelo matemático ou programa de computador (i. e.f um "algoritmo"). Os métodos que podem ser utilizados para calcular a identidade dos ácidos nucleicos ou polipéptidos alinhados incluem os descritos em Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), (1988) Nova Iorque: Oxford University Press; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, Nova Iorque: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Parte I, (Griffin, A. M., e Griffin, H.G., eds.), 1994, Nova Jérsia: Human Press; Von Heinje, G., (1987) Sequence Analysis in

Molecular Biology, Nova Iorque: Academic Press; Sequence

Analysis Primer, (Gribskov, M. e Devereux, J., eds.), 1991, Nova

Iorque: M. Stockton Press; e Carillo et al. , (1988) SIAM J.

Applied Math. 48:1073.

No cálculo da percentagem de identidade, as sequências que estão a ser comparadas estão alinhadas de uma maneira que dá a maior correspondência entre as sequências. O programa de computador utilizado para determinar percentagem de identidade é o pacote de programas GCG, que inclui GAP (Devereux et al., (1984) Nucl. Acid Res. 1_2:387; Genetics Computer Group, Universidade de Wisconsin, Madison, WI) . O algoritmo de computador GAP é utilizado para alinhar os dois polipéptidos ou polinucleótidos para os quais a percentagem de identidade da Sequência deve ser determinada. As sequências são alinhadas para correspondência ideal dos seus respetivos aminoácidos ou nucleótidos (o "intervalo correspondente", conforme determinado pelo algoritmo). Uma penalidade de abertura do intervalo (que é calculada como 3x a diagonal média, em que a "diagonal média" é a média da diagonal da matriz de comparação que está a ser utilizada, a "diagonal" é a pontuação ou o número atribuído a cada correspondência de aminoácidos perfeita pela matriz de comparação particular) e uma penalidade de extensão de intervalo (que é geralmente 1/10 vezes a penalidade de abertura do intervalo) , bem como uma matriz de comparação, tal como PAM 250 ou BLOSUM 62, são utilizados em conjunto com o algoritmo. Em determinadas formas de realização, uma matriz de comparação padrão (Ver, Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure _5:345-352 para a matriz de comparação PAM 250; Henikoff et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 8_9:10915-10919 para a matriz de comparação BLOSUM 62) também é utilizado pelo algoritmo.

Os parâmetros recomendados para determinar a percentagem de identidade para polipéptidos ou sequências de nucleótidos utilizando o programa GAP são os seguintes:

Algoritmo: Needleman et al. , 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453;

Matriz comparativa: BLOSUM 62 de Henikoff et al., 1992, supra;

Penalidade do intervalo: 12 (mas sem penalidade para as lacunas de fim)

Penalidade de Comprimento do Intervalo: 4

Limiar de semelhança: 0

Determinados esquemas de alinhamento para alinhar duas sequências de aminoácidos podem resultar na correspondência de apenas uma região curta das duas sequências, e esta pequena região alinhada pode ter uma identidade da Sequência muito elevada, embora não exista uma relação significativa entre as duas sequências de comprimento completo. Consequentemente, o método de alinhamento selecionado (e. g. , o programa GAP) pode ser ajustado, se desejado, para resultar num alinhamento que abranja, pelo menos, 50 aminoácidos contíguos do polipéptido alvo.

Tal como aqui utilizado, "substancialmente puro" significa que a espécie de molécula descrita é a espécie predominante presente, isto é, numa base molar é mais abundante do que qualquer outra espécie individual na mesma mistura. Em determinadas formas de realização, uma molécula substancialmente pura é uma composição em que a espécie objeto compreende, pelo menos, 50% (numa base molar) de todas as espécies macromoleculares presentes. Noutras formas de realização, uma composição substancialmente pura compreenderá pelo menos 80%, 85%, 90%, 95% ou 99% de todas as espécies macromoleculares presentes na composição. Noutras formas de realização, a espécie objeto é purificada até à homogeneidade essencial em que espécies contaminantes não podem ser detetadas na composição, por métodos de deteção convencionais e, assim, a composição consiste numa única espécie macromolecular detetável.

Os termos "tratar" e "tratando" referem-se a qualquer indício de sucesso no tratamento ou melhoria de uma lesão, patologia ou condição, incluindo qualquer parâmetro objetivo ou subjetivo, tal como redução; remissão; diminuição dos sintomas ou tornar a lesão, patologia ou condição mais tolerável para o doente; abrandamento da taxa de degeneração ou declínio; tornar o ponto final de degeneração menos debilitante; melhorar o bem-estar físico ou mental de um doente. O tratamento ou melhoria dos sintomas pode ser baseado em parâmetros objetivos ou subjetivos; incluindo os resultados de um exame físico, exames neuropsiquiátricos e/ou uma avaliação psiquiátrica. Por exemplo, determinados métodos aqui apresentados podem ser empregues para tratar diabetes tipo 2, obesidade e/ou dislipidémia, quer profiláticamente, quer como tratamento agudo, para diminuir os níveis de glucose no plasma, para diminuir os níveis de triglicéridos em circulação, para diminuir os níveis de colesterol circulante e/ou melhorar um sintoma associado com diabetes tipo 2, obesidade e dislipidémia.

Uma "quantidade eficaz" é geralmente uma quantidade suficiente para reduzir a gravidade e/ou frequência dos sintomas, eliminar os sintomas e/ou a causa subjacente, prevenir a ocorrência de sintomas e/ou a sua causa subjacente e/ou melhorar ou remediar os danos que resultam de ou estão associados a diabetes, obesidade e dislipidémia. Em algumas formas de realização, a quantidade eficaz é uma quantidade terapeuticamente eficaz ou uma quantidade profilática eficaz. Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" é uma quantidade suficiente para remediar um estado de doença (e. g. , diabetes, obesidade ou dislipidémia) ou sintomas, particularmente um estado ou sintomas associados ao estado da doença, ou de outra forma prevenir, impedir, retardar ou inverter a progressão do estado da doença ou qualquer outro sintoma indesejável associado à doença de qualquer maneira. Uma "quantidade profilática eficaz" é uma quantidade de uma composição farmacêutica que, quando administrada a um indivíduo, terá o efeito profilático pretendido, e. g., prevenir ou retardar o aparecimento (ou reincidência) de diabetes, obesidade ou dislipidémia, ou reduzir a probabilidade do aparecimento (ou recidiva) de diabetes, obesidade ou dislipidémia, ou sintomas associados. 0 efeito terapêutico ou profilático completo não ocorre necessariamente pela administração de uma dose e pode ocorrer apenas após a administração de uma série de doses. Assim, uma quantidade terapêutica ou profiláticamente eficaz pode ser administrada numa ou mais administrações. "Aminoácido" tem o seu significado normal na técnica. Os vinte aminoácidos que ocorrem naturalmente e as suas abreviaturas seguem a utilização convencional. Ver, Immunology -A Synthesis, 2a Edição, (E.S. Golub e D.R. Green, eds.), Sinauer Associates: Sunderland, Mass. (1991), aqui incorporado como referência para qualquer finalidade. Os estereoisómeros (e. g. , D-aminoácidos) dos vinte aminoácidos convencionais, os aminoácidos não naturais, tais como aminoácidos a, a-dissubstituidos, N-alquilaminoácidos e outros aminoácidos não convencionais, podem também ser componentes adequados para os polipéptidos e estão incluídos no termo "aminoácido". Exemplos de aminoácidos não naturais (que podem ser substituídos por qualquer aminoácido de ocorrência natural encontrado em qualquer sequência aqui revelada, conforme desejado) incluem: 4-hidroxiprolina, γ-carboxiglutamato, ε-Ν,N,N-trimetilisina, ε-Ν-acetilisina, 0-fosforosina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina, 5-hidroxilisina, o-N-metilarginina e outros aminoácidos e iminoácidos semelhantes (e. g., 4-hidroxiprolina). Na definição de polipéptido aqui utilizada, a direção do lado esquerdo é a direção do terminal amino e a direção do lado direito é a direção do terminal carboxilo, de acordo com a utilização e convenção padrão. As listas não limitativas de exemplos de aminoácidos, que não ocorrem naturalmente, os quais podem ser inseridos numa sequência de proteína de ligação a antigénio ou substituídos por um resíduo de tipo selvagem numa sequência de ligação a antigénio, incluem β-aminoácidos, homoaminoácidos, aminoácidos cíclicos e aminoácidos com cadeias laterais derivadas. Os exemplos incluem (na forma L ou na forma D; abreviada como entre parêntesis) : citrulina (Cit), homocitrulina (hCit), Na-metilcitrulina (NMeCit), Na-metil-homocitrulina (Να-MeHoCit), ornitina Na-metilornitina (Να-MeOrn ou NMeOrn), sarcosina (Sar), homolisina (hLis ou hK), homoarginina (hArg ou hR), homoglutamina (hQ), Να-metilarginina (NMeR), Να-metileucina (Να-MeL ou NMeL), N-metil-homolisina (NMeHoK), Na-metilglutamina (NMeQ), norleucina (Nle), norvalina (Nva), 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina (Tie), ácido octa-hidroindole-2-carboxílico (Oic) 3-(1-naftil)alanina (1-Nal), 3-(2-naftil)alanina (2-Nal), 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina (Tic), 2-indanilglicina (Igl) para-iodofenilalanina (pl-Phe), para-aminofenilalanina (4AmP ou 4-Amino-Fen), 4-guanidinofenilalanina (Guf), glicilisina (abreviado "K(Νε-glicilo)" ou "K(glicilo)" ou "K(glicol)"), nitrofenilalanina (nitrofen), aminofenilalanina (aminofen ou Amino-Fen), benzilfenilalanina (benzilfen), ácido γ-carboxiglutâmico (γ-carboxiglu), hidroxiprolina (hidroxipro), p-carboxi-fenilalanina (Cpa), ácido α-aminoadípico (Aad), Na-metilvalina (NMeVal), N-a-metileucina (NMeLeu), Na-metilnorleucina (NmeNle), ciclopentilglicina (Cpg), ciclo-hexilglicina (Chg), acetilarginina (acetilarg), ácido a,β-diaminopropionóico (Dpr), ácido a,γ-diaminobutirico (Dab), ácido diaminopropionóico (Dap), ciclo-hexilalalina (Cha), 4-metilfenilalanina (MePhe), β,β-difenilalanina (BiPhA), ácido aminobutirico (Abu), 4-fenilfenilalanina (ou bifenilalanina; 4Bip), ácido α-aminoisobutírico (Aib), beta-alanina, ácido beta-aminopropiónico, ácido piperidinico, ácido aminocaprióico, ácido aminoheptanóico, ácido aminopimélico, desmosina, ácido diaminopimélico, N-etilglicina, N-etilaspargina, hidroxilisina, allo-hidroxilisina, isodesmosina, allo-isoleucina, N-metilglicina, N-metilisoleucina, N-metilvalina, 4- hidroxiprolina (Hyp), γ-carboxiglutamato, ε-Ν,N,N-trimetilisina, ε-Ν-acetilisina, 0-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina, 5- hidroxilisina, ω-metilarginina, ácido 4-amino-0-ftálico (4APA) e outros aminoácidos semelhantes e formas derivadas de qualquer dos especificamente listados.

II. RESUMO GERAL

Uma propriedade única das proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas é a natureza agonista destas proteínas, especificamente a capacidade de imitar in vivo o efeito do FGF21 e induzir a sinalização do tipo FGF21. Mais notavelmente e especificamente, algumas das proteínas de ligação a antigénio aqui reveladas induzem sinalização tipo FGF21 em vários ensaios in vitro baseados em células, incluindo o ensaio repórter ELK-luciferase do Exemplo 5, nas seguintes condições: (1) a ligação e a atividade do recetor FGF21 é dependente de β-Klotho; (2) a atividade é seletiva para o complexo FGFRlc/β-Klotho; (3) a ligação ao FGFRlc/β-Klotho desencadeia vias de sinalização tipo FGF21; e (4) a potência (EC50) é comparável a um padrão FGF21 de tipo selvagem, compreendendo a forma madura da SEQ ID N°: 2, tal como medido nos seguintes ensaios baseados em células: (1) o ensaio celular repórter de luciferase mediado pelo recetor FGF21 recombinante do Exemplo 5; (2) a fosforilação ERK no ensaio celular mediado pelo recetor FGF21 recombinante do Exemplo 5; e (3) fosforilação ERK em adipócitos humanos como descrito com maior detalhe no Exemplo 7. Espera-se que as proteínas de ligação a antigénio divulgadas que exibam atividades in vivo sejam consistentes com a função biológica natural do FGF21. Esta propriedade torna as proteínas de ligação a antigénio divulgadas terapêuticas viáveis para o tratamento de doenças metabólicas, tais como diabetes tipo 2, obesidade, dislipidémia, NASH, doença cardiovascular, síndrome metabólico e, amplamente, qualquer doença ou estado em que é desejável imitar ou aumentar os efeitos in vivo do FGF21.

Em algumas formas de realização da presente descrição, as proteínas de ligação a antigénio proporcionadas podem compreender polipéptidos nos quais uma ou mais regiões determinantes complementares (CDR) podem ser incorporadas e/ou unidas. Nessas proteínas de ligação a antigénio, as CDR podem ser incorporadas numa região de "estrutura", a qual orienta a(s) CDR de modo a obter as propriedades de ligação a antigénio da(s) CDR adequadas. Em geral, tais proteínas de ligação a antigénio que são proporcionadas podem facilitar ou aumentar a interação entre FGFRlc e β-Klotho, e podem induzir substancialmente a sinalização tipo FGF21.

Determinadas proteínas de ligação a antigénio aqui descritas são anticorpos ou são derivadas de anticorpos. Em determinadas formas de realização, a estrutura polipeptídica das proteínas de ligação a antigénio é baseada em anticorpos, incluindo, mas não se limitando a, anticorpos monoclonais, anticorpos biespecíficos, minicorpos, anticorpos de domínio, anticorpos sintéticos (por vezes referidos aqui como "miméticos de anticorpos"), anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos, fusões de anticorpos (por vezes aqui referidos como "conjugados de anticorpos") , hemicorpos e seus fragmentos. As várias estruturas são aqui descritas adicionalmente mais adiante.

Foi demonstrado que as proteínas de ligação a antigénio aqui proporcionadas se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, e particularmente a (i) β-Klotho humano; (ii) FGFRlc humano, FGFR2c humano, FGFR3c humano ou FGFR4 humano; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho humano e um de FGFRlc humano, FGFR2c humano, FGFR3c humano e FGFR4 humano. Tal como descrito e ilustrado nos Exemplos aqui apresentados, com base nos resultados de Western Blot, os anticorpos anti^-Klotho ou anti-FGFRlc, comercialmente disponíveis, ligam-se a β-Klotho ou FGFRlc desnaturado enquanto que a proteína de ligação a antigénio (anticorpos agonistas) não. Por outro lado, as proteínas de ligação a antigénio proporcionadas reconhecem a estrutura natural do FGFRlc e do β-Klotho na superfície celular, enquanto que os anticorpos comerciais não o fazem, com base nos resultados FACS proporcionados. Ver Exemplo 9. As proteínas de ligação a antigénio que são proporcionadas imitam, portanto, a atividade biológica in vivo do FGF21. Como consequência, as proteínas de ligação a antigénio aqui proporcionadas são capazes de ativar a atividade de sinalização tipo FGF21. Em particular, as proteínas de ligação a antigénio divulgadas podem ter uma ou mais das seguintes atividades in vivo: indução de vias de transdução de sinal tipo FGF21, diminuição dos níveis de glucose no sangue, diminuição dos níveis de lípidos circulantes, melhoria dos parâmetros metabólicos e outros efeitos fisiológicos induzidos in vivo pela formação do complexo ternário de FGFRlc, β-Klotho e FGF21, por exemplo, em estados tais como diabetes tipo 2, obesidade, dislipidémia, NASH, doença cardiovascular e síndrome metabólico.

As proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, que são aqui divulgadas, têm uma variedade de utilidades. Algumas das proteínas de ligação a antigénio, por exemplo, são úteis em ensaios de ligação específica, na purificação por afinidade de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (ill) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, incluindo as formas humanas destas proteínas divulgadas e em ensaios de rastreio para identificar outros agonistas da atividade de sinalização tipo FGF21.

As proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, as quais são aqui divulgadas, podem ser utilizadas numa variedade de aplicações de tratamento, como aqui explicado. Por exemplo, determinadas proteínas de ligação a antigénio são úteis para o tratamento de condições associadas a processos de sinalização tipo FGF21 num doente, tais como redução, alívio ou tratamento da diabetes tipo 2, obesidade, dislipidémia, NASH, doença cardiovascular e síndrome metabólico. Outras utiliações para as proteínas de ligação a antigénio incluem, por exemplo, o diagnóstico de doenças ou estados associados com β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, FGFR4 ou FGF21 e ensaios de rastreio para determinar a presença ou ausência destas moléculas. Algumas das proteínas de ligação a antigénio aqui descritas podem ser úteis no tratamento de estados, sintomas e/ou patologias associadas com a atividade de sinalização tipo FGF21 diminuída. Exemplos de estados incluem, mas não estão limitados a, diabetes, obesidade, NASH e dislipidémia. FGF21

As proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas induzem a sinalização mediada pelo FGF21, como aqui definido. In vivo, a forma madura do FGF21 é a forma ativa da molécula. A sequência de nucleótidos codificando o FGF21 de comprimento completo é proporcionada; os nucleótidos codificando a sequência sinal estão sublinhados. ATG GAC TCG GAC GAG ACC GGG TTC GAG CAC TCA GGA CTG TGG GTT TCT GTG CTG GCT GGT CTT CTG CTG GGA GCC. TGC CAG GCA CAC CCC ATC CCT GAC TCC AGT CCT CTC CTG CAA TTC GGG GGC C.AA GTC CGG CAG CGG TAG CTC TAG ACA GAT GAT GCC CAG CAG ACA GAA GCC CAC CTG GAG ATC AGG GAG GAT GGG ACG GTG GGG GGC GCT GCT GAC CAG AGC CCC GAA AGT CTC CTG CAG CTG AAA GCC TTG AAG CCG GGA GTT ATT CAA ATC TTG GGA GTC AAG ACA TCC AGG TTC CTG TGC CAG CGG CCA GAT GGG GCC CTG TAT GGA TCG CTC CAC TTT GAC CCT GAG GCC TGC AGC TTC CGG GAG CTG CTT CTT GAG GAC GGA TAC AAT GTT TAC CAG TCC GAA GCC CAC GGC CTC CCG CTG CAC CTG CCA GGG AAC AAG TCC CCA CAC CGG GAC CCT GCA CCC CGA GGA CCA GCT CGC TTC CTG CCA CTA CCA GGC CTG CCC CCC GCA CCC CCG GAG CCA CCC GGA ATC CTG GCC CCC CAG CCC CCC GAT GTG GGC I CC TCG GAC CCT CTG AGC ATG GTG GGA CCT I CC CAG GGC CGA AGC CCC AGC TAC GCT TCC TGA (SEQ ID N° : 1) A sequência de aminoácidos do FGF21 de comprimento completo é proporcionada; os aminoácidos que compõem a sequência sinal estão sublinhados:

MDSDETGFEHSGLWVSVLAGLLLGACOA HPIPDSSPLLQFGGQ

VRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKA

LKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGA LY GSLHFDPEACSFRELLLE

DGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPP APPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYASl (SEQ ID N°: 2) FGFRlc

As proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas ligam-se ao FGFRlc, em particular ao FGFRlc humano, quando associadas a β-Klotho. A sequência de nucleótidos codificando o FGFRlc humano (Número de Acesso GenBank NM_023110) é proporcionada:

ATGTGGAGCTGGAAGTGCCTCCTCTTCTGGGCTGTGCTGGTCACAGCC

ACACTCTGCACCGCTAGGCCGTCCCCGACCTTGCCTGAACAAGCCCAG

CCCTGGGGAGCCCCTGTGGAAGTGGAGTCCTTCCTGGTCCACCCCGGT

GACCTGCTGCAGCTTCGCTGTCGGCTGCGGGACGATGTGCAGAGCATC

AACTGGCTGCGGGACGGGGTGC AGC1GGCGGAAAGCAACCGC ACCCG CATCACAGGGGAGGAGGTGGAGGTGCAGGACTCCGTGCCCGCAGACT

CCGGCCTCTATGCTTGCGTAACCAGCAGCCCCTCGGGCAGTGACACCA

CCTACTTCTCCGTCAATGTTTCAGATGCTCTCCCCTCCTCGGAGGATGA

TGATGATGATGATGACTCCTCTTCAGAGGAGAAAGAAACAGATAACA

CCAAACCAAACCGTATGCCCGTAGCTCCATATTGGACATCACCAGAAA

AGATGGAAAAGAAATTGCATGCAGTGCCGGCTGCCAAGACAGTGAAG

TTCAAATGCCCTTCCAGTGGGACACCAAACCCAACACTGCGCTGGTTG

AAAAATGGCAAAGAA1TCAAACCTGACCACAGAATTGGAGGCTACAA

GGTCCG i TATGCCACC i GGAGC A i CATAA i'GGACTCTGTGGTGCCC i C

TGACAAGGGCAACTACACCTGCATTGTGGAGAATGAGTACGGCAGCA

TCAACCAC AC A1ACCAGCTGGA i G i CGTGGAGCGG i CCCCTCACCGGC

CCATCCTGCAAGCAGGGTTGCCCGCCAACAAAACAGTGGCCCTGGGT

AGCAACGTGGAGTTCATGTGTAAGGTGTACAGTGACCCGCAGCCGCAC

ATCCAGTGGCTAAAGCACATCGAGGTGAATGGGAGCAAGATTGGCCC

AGACA ACCTGCCTT ATGTCC AGATCTTGA AGACTGCTGGAGTT A AT AC

CACCGACAAAGAGATGGAGGTGCTTCACTTAAGAAATGTCTCCTTTGA

GGACGCAGGGGAGTATACGTGCTTGGCGGGTAACTCTATCGGACTCTC

CCATCACTCTGCATGGTTGACCGTTCTGGAAGCCCTGGAAGAGAGGCC

GGCAGTGATGACCTCGCCCCTGTACCTGGAGATCATCATCTATTGCAC

AGGGGCCTTCCTCATCTCCTGCATGGTGGGGTCGGTCATCGTCTACAA

GATGAAGAGTGGTACCAAGAAGAGTGACTTCCACAGCCAGATGGCTG

TGCACAAGCTGGCCAAGAGCATCCCTCTGCGCAGACAGGTAACAGTG

TCTGCTGACTCCAGTGCATCCATGAACTCTGGGGTTCTTCTGGTTCGGC

CATCACGGCTCTCCTCCAGTGGGACTCCCATGCTAGCAGGGGTCTCTG

AG ΓΑ1GAGC Γ1CCCGAAGACCC1CGCIGGGAGC1GCCICGGGAC AGAC

TGGTCTTAGGCAAACCCC i GGGAGAGGGC i GCTTTGGGCAGGTGG i GT

1GGCAGAGGC1A i'CGGGC 1GGACAAGGACAAACCCAACCG i'G IGACC

AAAGTGGCTGTGAAGATGTTGAAGTCGGACGCAACAGAGAAAGACTT

GTCAGACCTGATCTCAGAAATGGAGATGATGAAGATGATCGGGAAGC

ATAAGAATATCATCAACCTGCTGGGGGCCTGCACGCAGGATGGTCCCT

TGTATGTCATCGTGGAGTATGCCTCCAAGGGCAACCTGCGGGAGTACC

TGCAGGCCCGGAGGCCCCCAGGGCTGGAATACTGCTACAACCCCAGC

CACAACCCAGAGGAGCAGCTCTCCTCCAAGGACCTGGTGTCCTGCGCC

TACCAGGTGGCCCGAGGCATGGAGTATCTGGCCTCCAAGAAGTGCATA

CACCGAGACCTGGCAGCCAGGAATGTCCTGGTGACAGAGGACAATGT

GATGAAGATAGCAGACTTTGGCCTCGCACGGGACATTCACCACATCGA

CTACTATAAAAAGACAACCAACGGCCGACTGCCTGTGAAGTGGATGG

CACCCGAGGCATTATTTGACCGGATCTACACCCACCAGAGTGATGTGT

GGTCTTTCGGGGTGCTCCTGTGGGAGATCTTCACTCTGGGCGGCTCCCC

ATACCCCGGTGTGCCTGTGGAGGAACTTTTCAAGCTGCTGAAGGAGGG

TCACCGCATGGACAAGCCCAGTAACTGCACCAACGAGCTGTACATGAT

GATGCGGGACTGCTGGCATGCAGTGCCCTCACAGAGACCCACCTTCAA

GCAGCTGGTGGAAGACCTGGACCGCATCGTGGCCTTGACCTCCAACCA ggagtacctggacctgtccatgcccctggaccagtactcccccagctt TCCCGACACCCGGAGCTCTACGTGCTCCTCAGGGGAGGATTCCGTCTT CTCTCATGAGCCGCTGCCCGAGGAGCCCTGCCTGCCCCGACACCCAGC CCAGCTIGCCAAIGGCGGACrCAAACGCCGCIGA i (SEQ ID N° : 3). A sequência de aminoácidos do FGFRlc humano (Número de Acesso GenBank NP_075598) é proporcionada:

MWSWKCI .1,1'WA VI ΛΊ ΛΊΊ .CTARPSPTI .PEQAQPWGAPVEVESFEVHPG

DLLQLRCRLRDDVQS1NWLRDGVQLAESNRTR1TGEEVEVQDSVPADSGL

YACVTSSPSGSDTTYFSVNVSDALPSSEDDDDDDDSSSEEKETDNTKPNR

MPVAPYWTSPEKMEKKLHAVPAAKTVKFKCPSSGTPNPTLRWLKNGKEF

KPDHRIGGYKVRY ATWSTIMDS VVPSDKGNYTCTVENEYGSTNHTYQI .DV

VERSPHRPILQAGLPANKTVALGSNVEFMCKVYSDPQPHIQWLKHIEVNG

SKIGPDNLPYV QILKT AGVNTTDKEMEVLEILRNVSFED AGEYTCLAGNSI

GLSHHSAWLTVLEALEERPAVMTSPLYLEIIIYCTGAFLISCMVGSVIVYK

MKSGTKKSDEIISQMAVIIKLAKSIPLRRQVTVS ADSSASMNSG VLLVRPS

RI.SSSGTPMIAGVSEYEIPEDPRWRIPKDKI VIGKPIGEGCFGQVVIAEA

IGLDKDKPNRVTKVAVKMLKSDATEKDLSDLISEMEMMKMIGKHKNIIN

LLGACTQDGPLYVIVEYASKGNLREYLQARRPPGLEYCYNPSHNPEEQLS

SKDLVSCAYQVARGMEYLASKKCIHRDLAARNVLVTEDNVMKIADFGL

ARD1HH1D Y Y KKTTN GRLP V K WM APE ALRDRIY THQSD V W S EG V LLWEI

rTLGGSPYPGVPVEELFKLLKEGIIRMDKPSNCTNELYMMMRDCWIIAVP

SQRPiEKQLVEDLDRlVALrSNQEYLDLSMPLDQYSPSEPDrRSSrCSSGE DSVESIIEPLPEEPCLPRIIPAQLANGGLKRR (SEQ ID N° : 4).

As proteínas de ligação a antigénio aqui descritas ligam-se à porção extracelular do FGFRlc. Um exemplo de uma região extracelular do FGFRlc é:

MWSWKCLLFWAVLVTATLCTARPSPTLPEQAQPWGAPVEVESFLVHPGDLLQL

RCRLRDDVQSINWLRDGVQLAESNRTRITGEEVEVQDSVPADSGLYACVTSSPS

GSDTTYFSVNVSDAEPSSEDDDDDDDSSSEEKETDNTKPNRMPVAPYWTSPEKM

EKKLHAVPAAKTVKFKCPSSGTPNPTLRWLKNGKEFKPDHRIGGYKVRYATWSI

IMDSVVPSDKGNYTCIVENEYGSINHTYQLDVVERSPHRPILQAGLPANKTVALG

SNVEFMCKVYSDPQPHIQWLKHIEVNGSKIGPDNLPYVQILKTAGVNTTDKEME

VLHLRNVSFEDAGEYTCLAGNSIGLSHHSAWLTVLEALEERPAVMTSPLY (SEQ ID N°: 5).

Como aqui descrito, as proteínas FGFRlc também podem incluir fragmentos. Como aqui utilizado, os termos são utilizados indiferentemente para significar um recetor, em particular e a menos que indicado de outro modo, um recetor humano, que por associação com β-Klotho e FGF21 induz atividade de sinalização tipo FGF21. 0 termo FGFRlc inclui também modificações pós-traducionais da sequência de aminoácidos FGFRlc, por exemplo, possíveis locais de glicosilação ligados ao N. Assim, as proteínas de ligação a antigénio podem ligar-se a ou ser produzidas a partir de proteínas glicosiladas numa ou mais das posições. β-Klotho

As proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas ligam-se a β-Klotho, em particular β-Klotho humano. A sequência de nucleótidos codificando β-Klotho humano (Número de Acesso GenBank NM_175737) é proporcionada: ATGAAGCCAGC iCTGTGCC iC IC’AC iClAIC "ICC 'Λ( i(i( ΐΛΛΓ( ΐΛΛΓ( ί( ί ΑΙΓΓΙΧ ’

TTCAGCACTGATGAAATAACCACACGCTATAGGAATACAATGTCCAAC gggggattgcaaagatctgtcatcctgtcagcacttattctgctacga

GCTGTTACTGGATTCTCTGGAGATGGAAGAGCTATATGGTCTAAAAAT

CCTAATTTTACTCCGGTAAATGAAAGTCAGCTGTTTCTCTATGACACTT

TCCCTAAAAACTTTTTCTGGGGTATTGGGACTGGAGCATTGCAAGTGG

AAGGGAGTTGGAAGAAGGATGGAAAAGGACCTTCTATATGGGATCAT

TTCATCCACACACACCTTAAAAATGTCAGCAGCACGAATGGTTCCAGT

GAGTTTCTTTTTATCAATTTTCAATTTCCTGGCCAAGGCTTTTCCCCGAT

GGAATAGTAACAGTTGCCAACGCAAAAGGTCTGCAGTACTACAGTACT

CTTCTGGACGCTCT AGTGCTT AGA A ACATTGA ACCT AT AGTT ACTTT AT

ACCACTGGGATTTGCCTTTGGCACTACAAGAAAAATATGGGGGGTGGA

AAAATGATACCATAATAGATATCTTCAATGACTATGCCACATACTGTT

TCCAGATGTTTGGGGACCGTGTCAAATATTGGATTACAATTCACAACC

CATATCTAGTGGCTTGGCATGGGTATGGGACAGGTATGCATGCCCCTG

GAGAGAAGGGAAATTTAGCAGCTGTCTACACTGTGGGACACAACTTG

ATCAAGGCTCACTCGAAAGTTTGGCATAACTACAACACACAITTCCGC

CCACATCAGAAGGGTTGGTTATCGATCACGTTGGGATCTCATTGGATC

GAGCCAAACCGGTCCÍGAAAACACGATGGATATATTCAAATGTCAACA

ATCCATGGTTTCTGTGCTTGGATGGTTTGCCAACCCTATCCATGGGGAT

GGCGACTATCCAGAGGGGATGAGAAAGAAGTTGTTCTCCGTTCTACCC

ATTTTCTCTGAAGCAGAGAAGCATGAGATGAGAGGCACAGCTGATTTC

TTTGCCTTTTCTTTTGGACCCAACAACTTCAAGCCCCTAAACACCATGG

CTAAAATGGGACAAAATGTTTCACTTAATTTAAGAGAAGCGCTGAACT

GGATTAAACTGGAATACAACAACCCTCGAATCTTGATTGCTGAGAATG

GCTGGTTCACAGACAGTCGTGTGAAAACAGAAGACACCACGGCCATC

TACATGATGAAGAATTTCCTCAGCCAGGTGCTTCAAGCAATAAGGTTA

GATGA A AT ACGAGTGTTTGGTT AT ACTGCCTGGTCTCTCCTGGATGGCT

ITGAAIGGC AGGAIGCn ACACCA rCCGCCGAGGAil ΑΙΤΊΊ AIGIGG

ATTTTAACAGTAAACAGAAAGAGCGGAAACCTAAGTCTTCAGCACACT

ACT AC A A ACAGATC AT AC.GAGA A A ATGGTTTTTCTTT A AA AGAGTCC A

CGCCAGATGTGCAGGGCCAGTTTCCCTGTGACTTCTCCTGGGGTGTCA

CTGAATCTGTTCTTAAGCCCGAGTCTGTGGCTTCGTCCCCACAGTTCAG

CGATCCTCATCTGTACGTGTGGAACGGCACTGGGAACAGACTGTTGCA

CCGAG i GGAAGGGG i GAGGC i GAA AACACGACCCGC i'CA A i GCAC AG

ATTTTGTAAACATCAAAAAACAACTTGAGATGTTGGGAAGAATGAAA

G 1CACCCAC IACCGG Γ Γ1GC 1C 1GGA Γ1GGGCCI CGG ICC Γ i CCCAC 1G

GCAACCTGTCCGCGGTGAACCGACAGGCCCTGAGGTACTACAGGTGC

GTGGTCAGTGAGGGGCTGAAGCTTGGCATCTCCGCGATGGTCACCCTG

T ATT ATCCGACCC ACGCCC ACCT AGGCCTCCCCGAGCCTCTGTTGC AT

GCCGACGGGTGGCTGAACCCATCGACGGCCGAGGCCTTCCAGGCCTA

CGCTGGGCTGTGCTTCCAGGAGCTGGGGGACCTGGTGAAGCTCTGGAT CACCATCAACGAGCCTAACCGGCTAAGTCtACATCTACAACCGCTCTCtCt

CAACGACACCTACGGGGCGGCCiCACAACCTGCTGGTGGCCCACGCCC

TGGCCTGGCGCCTCTACGACCGGCAGTTCAGGCCCTCACAGCGCGGGG

CCGTGTCGCTGTCGCTGCACGCGGACTGGGCGGAACCCGCCAACCCCT

ATGCTGACTCGCACTGGAGGGCGGCCGAGCGCTTCCTGCAGTTCGAGA

TCGCCTGGTTCGCCGAGCCGCTCTTCAAGACCGGGGACTACCCCGCGG

CCATGAGGGAATACATTGCCTCCAAGCACCGACGGGGGCTTTCCAGCT

CGGCCCTGCCGCGCCTCACCGAGGCCGAAAGGAGGCTGCTCAAGGGC

ACGGTCGAC1TCTGCGCGCTCAACC ACTTCACC ACTAGGTTCGTGATG

CACG AGCAGCIGGCCGGC AGCCGCIACG AC ICGG AC AGGG ACA1CCA

G Γ ΓICIGCAGGAC A I’CACCCGCC 1GAGCI CCCCCACGCGCCIGGCIGI

GATTCCCTGGGGGGTGCGCAAGCTGCTGCGGTGGGTCCGGAGGAACT

ACGGCGACATGGACATTTACATCACCGCCAGTGGCATCGACGACCAG

GCTCTGGAGGATGACCGGCTCCGGAAGTACTACCTAGGGAAGTACCTT

CAGGAGGTGCTGAAAGCATACCTGATTGATAAAGTCAGAATCAAAGG

CTATTATGCATTCAAACTGGCTGAAGAGAAATCTAAACCCAGATTTGG

ATTCTTCACATCTGATTTTAAAGCTAAATCCTCAATACAATTTTACAAC

AAAGTGATCAGCAGCAGGGGCTTCCCTTTTGAGAACAGTAGTTCTAGA

TGCACtTCAGACCCAAGAAAATACAGAGTGCACTGTCTGCTTATTCCTT

GTGCAGAAGAAACCACTGATATTCCTGGGTTGTTGCTTCTTCTCCACCC

TGGTTCTACTCTTATCAATTGCCATTTTTCAAAGGCAGAAGAGAAGAA

AGTTTTGGAAAGC AAAAAACTTACAAC ACATACC ATTAAAGAAAGGC AAGAGAGTTGTTAGCTAA (SEQ ID N°: 6) . A sequência de aminoácidos de β-Klotho humano de comprimento completo (Número de Acesso GenBank NP_783864) é proporcionada:

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAVT

GFSGDGRAIWSKNPNFPPVNFSQLELYDTFPKNFFWGIGTGALQVFGSWK

KDGKGPSIWDIIFIIITIILKNV SSTNGSSDS YIFLEKDLS ALDFIG VSFY QFSI

SWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPLALQ

EKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY WITIHNP YLV A WHGY GT GMHAPGEKGNEAAVYTVGHNUKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWESITI.

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLF

SVLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREA T NWTKT EYNNPRTT lAENGWFTDSRVKTEDTTATYMMKNFT ,SQVT ,QATRT,

DEIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHY

Y KQ11RFN GFSLKFSTPD V QGQFPCDES WG VTES V LKPFS V AS SPQFSDPH

LYV WNATGNRLLIIRVEG VRLKTRPAQCTDEVNIKKQLEMLARMKVTIIY

RFALDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTH

AHLGLPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNR

I,SDIYNRSGNDTYGAAHNIJ.VAÍIAEAWkl.YDRQFRPSQRGAVSI SIJIAD

WAEPANPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKH

RRGLSSSALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSD

RDIQFLQDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQ

ALEDDRLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFF

TSDFKAKSS1QEYNKV1SSRGFPEFNSSSRCSQTQFNTFCTVCLFLVQKKPL

IFLGCCFFSTLVLLLSIAIEQRQKRRKFWKAKNLQIIIPLKKGKRVVS (SEQ ID N°: 7).

As proteínas de ligação a antigénio aqui descritas ligam-se à porção extracelular de β-Klotho. Um exemplo de uma região extracelular de β-Klotho é:

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAVTGFSG

DGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSWKKDGKGPSI

WDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFTGVSFYQFSISWPRLFPDGIVTV

ANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPLALQEKYGGWKNDTIIDIFNDY

ATYCFQMFGDRVKYWTTIHNPYLVAWHGYGTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNL

IKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITLGSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVL

GWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFSVLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPL

NTMAKMGQNVSLNLREALNWIKLEYNNPRILIAENGWFTDSRVKTEDTTAIYM

MKNFLSQVLQAIRLDEIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKE

RKPKSSAHYYKQTIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQF

SDPHLYVWNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHY

RFALDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG

LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDIYNRSG

NDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDRQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPANPYADSH

WRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSSSALPRLTEAERR

LLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFLQDITRLSSPTRLAVIPW

GVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDDRLRKYYLGKYLQEVLKAYLI

DKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFKAKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCS

QTQENTECTVCLFLVQKKP (SEQ ID N°: 8). A forma murinica de β-Klotho e os seus fragmentos e subsequências, podem ser úteis no estudo e/ou na construção das moléculas aqui proporcionadas. A sequência de nucleótidos codificando β-Klotho murinico (Número de Acesso GenBank NM_031180) é proporcionada:

ATGAAGACAGGCTGTGCAGCAGGGTCTCCGGGGAATGAATGGATTTTCTTCA

GCTCTG ATG A AAG A A AC AC ACGCTCT A G G A AAACAATGTCC AAC AGGGC ACT

GCAAAGATCTGCCGTGCTGTCTGCGTTTGTTCTGCTGCGAGCTGTTACCGGCT

TCTCCGGAGACGGGAAAGCAATATGGGATAAAAAACAGTACGTGAGTCCGG

TAAACCCAAGTCAGCTGTTCCTCTATGACACTTTCCCTAAAAACTTTTCCTGG

GGCGTTGGGACCGGAGCATTTCAAGTGGAAGGGAGTTGGAAGACAGATGGA

AGAGGACCCTCGATCTGGGATCGGTACGTCTACTCACACCTGAGAGGTGTCA

ACGGCACAGACAGATCCACTGACAGTTACATCTTTCTGGAAAAAGACTTGTT

GGCTCTGGATTTTTTAGGAGTTTCTTTTTATCAGTTCTCAATCTCCTGGCCACG

GTTGTTTCCCAATGGAACAGTAGCAGCAGTGAATGCGCAAGGTCTCCGGTAC

TACCGTGCACTTCTGGACTCGCTGGTACTTAGGAATATCGAGCCCATTGTTAC

CTTGTACCATTGGGATTTGCCTCTGACGCTCCAGGAAGAATATGGGGGCTGG

AAAAATGCAACTATGATAGATCTCTTCAACGACTATGCCACATACTGCTTCCA

GACCTTTGGAGACCGTGTCAAATATTGGATTACAATTCACAACCCTTACCTTG

TTGCTTGGCATGGGTTTGGGACAGGTATGGATGCAGCAGGAGAGAAGGGAAA

TTTAACAGCTGTCTACACTGTGGGACACAACCTGATCAAGGCACATTCGAAA

GTGTGGCATAACTACGACAAAAACTTGCGCCGTCATCAGAAGGGTTGGCTCT

CCATCACCTTGGGGTCCCATTGGATAGAGCCAAACAGAACAGACAACATGGA

GGAGGTGATGAACTGCGAGGACTCCATGTCCTCTGTGCTTGGATGGTTCGGCA

ACCCCATCCACGGGGACGGCGACTACCCTGAGTTCATGAAGACGGGCGCCAT

GATCCCCGAGTTCTCTGAGGCAGAGAAGGAGGAGGTGAGGGGCACGGCTGA

TTTCTTTGCCTTTTCCTTCGGGCCCAACAACTTCAGGCCCTCAAACACCGTGG

TCtAAAATCtCtCtACAAAATCtTATCACTCAACTTAAGGCACtCtTGCTGAACTGGAT

TAAACTGGAATACGATGACCCTCAAATCTTGATTTCGGAGAACGGCTGGTTC

ACAGATAGCTATATAAAGACAGAGGACACCACGGCCATCTACATGATGAAG

AATTTCCTAAACCAGGTTCTTCAAGCAATAAAATTTGATGAAATCCGCGTGTT

TGGTTATACGGCCTGGACTCTCCTGGATGGCTTTGAGTGGCAGGATGCCTATA

CGACCCGACGAGGGCTGTTTTATGTGGACTTTAACAGTGAGCAGAAAGAGAG

GAAACCCAAGTCCTCGGCTCATTACTACAAGCAGATCATACAAGACAACGGC

TTCCCTTTGAAAGAGTCCACGCCAGACATGAAGGGTCGGTTCCCCTGTGATTT

CTCTTGGGGAGTCACTGAGTCTGTTCTTAAGCCCGAGTTTACGGTCTCCTCCC

CGCAGTTTACCGATCCTCACCTGTATGTGTGGAATGTCACTGGCAACAGATTG

CICIACCGAGIGGAAGGGGIAAGGCIGAAAACAAGACCAICCCAGIGCACA

GATTATGTGAGCATCAAAAAACGAGTTGAAATGTTGGCAAAAATGAAAGTCA

CCCACi'ACCAG'ni GC'i'C'I'GGACIGGACC i'C'i'A I’CCI "i'CCC ACI’GGCAA I’C I’G

TCCAAAGTTAACAGACAAGTGTTAAGGTAGTATAGGTGTGTGGTGAGGGAAG

GACTGAAGC1GGGCG1CTTCCCCATGG1GACGT TGTACCACCCAACCCAC1CC

C A I’C 1CGGCCICCCCCIGCC AC Γ 1C IGAGC AGIGGGGGGIGGC Γ A A AC A IGA

ACACAGCCAAGGCCTTCCAGGACTACGCTGAGCTGTGCTTCCGGGAGTTGGG

GGACTTGGTGAAGCTCTGGATCACCATCAATGAGCCTAACAGGCTGAGTGAC

ATGTACAACCGCACGAGTAATGACACCTACCGTGCAGCCCACAACCTGATGA

TCGCCCATGCCCAGGTCTGGCACCTCTATGATAGGCAGTATAGGCCGGTCCA

GCATGGGGCTGTGTCGCTGTCCTTACATTGCGACTGGGCAGAACCTGCCAAC

CCCTTTGTGGATTCACACTGGAAGGCAGCCGAGCGCTTCCTCCAGTTTGAGAT

CGCCTGGTTTGCAGATCCGCTCTTCAAGACTGGCGACTATCCATCGGTTATGA

AGGAATACATCGCCTCCAAGAACCAGCGAGGGCTGTCTAGCTCAGTCCTGCC

GCGCTTCACCGCGAAGGAGAGCAGGCTGGTGAAGGGTACCGTCGACTTCTAC

GCACTGAACCACTTCACTACGAGGTTCGTGATACACAAGCAGCTGAACACCA

ACCGCTCAGTTGCAGACAGGGACGTCCAGTTCCTGCAGGACATCACCCGCCT

AAGCTCGCCCAGCCGCCTGGCTGTAACACCCTGGGGAGTGCGCAAGCTCCTT

GCGTGGATCCGGAGGAACTACAGAGACAGGGATATCTACATCACAGCCAATG

GCATCGATGACCTGGCTCTAGAGGATGATCAGATCCGAAAGTACTACTTGGA

GAAGTATGTCCAGGAGGCTCTGAAAGCATATCTCATTGACAAGGTCAAAATC

AAAGGCTACTATGCATTCAAACTGACTGAAGAGAAATCTAAGCCTAGATTTG

GATTTTTCACCTCTGACTTCAGAGCTAAGTCCTCTGTCCAGTTTTACAGCAAG

CTGATCAGCAGCAGTGGCCTCCCCGCTGAGAACAGAAGTCCTGCGTGTGGTC

AGCCTGCGGAAGACACAGACTGCACCATTTGCTCATTTCTCGTGGAGAAGAA

ACCACTCATCTTCTTCGGTTGCTGCTTCATCTCCACTCTGGCTGTACTGCTATC

CATCACCGTTTTTCATCATCAAAAGAGAAGAAAATTCCAGAAAGCAAGGAAC

TTACAAAATATACCATTGAAGAAAGGCCACAGCAGAGTTTTCAGCTAA (SEQ ID N°: 469) . A sequência de aminoácidos de β-Klotho murinico de comprimento completo (Número de Acesso GenBank NP 112457) é proporcionada: MKTGCAAGSPGNEWIFFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRA VTGFS GDGKAIWDKKQ Y VSPVNPS QLFL YDTFPKNFS W G V GTG AFQ VEG SWKTDGRGPSLWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSF YQFSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYHWDL PLTLQEE Y GGWKN ATMIDLFND Y ATY CFQTFGDR V KY WITIHNP YL V A W HGFGTGMHAPGEKGNLTAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKG WLSTTLGSH WIEPN RTDNMEDVINCQHSMS S VLGWFANPIHGDGDYPEF MKTGAMIPEFSEAEKEEVRGTADFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLN LRQ VLN WIKLE YDDPQILIS EN G WFTD S YIKTEDTT AIYMMKNFLN Q VLQ AIKFDEIRVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSS AHYYKQIIQDNGFPLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPEFTVSSPQFT DPHLYVWNVTGNRLLYRVEGVRLKTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKV THY QFALD WTSILPTGNLSKVNRQVLR YYRC VVSEGLKLGVFPM VTLYH PTHSHLGLPLPLLSSGGWLNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWITINE PNRLSDMYNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLS LHCDWAEPANPFVDSHWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYI ASKNQRGLSSSVLPRFTAKESRLVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNR SVADRDVQFLQDITRLSSPSRLAVTPWGVRKLLAWIRRNYRDRDIYITAN GLDDLALEDDQIRKY YLEKY V QE ALKAYLIDK VKIKG Y Y AFKLTEEKS KP RFGFFTSDFRAKSSVQFYSKLISSSGLPAENRSPACGQPAEDTDCTICSFLV EKKPLIFFGCCFISTLAVLLSITVFHHQKRRKFQKARNLQNIPLKKGHSRVF S(SEQ ID N°: 468).

Como aqui descrito, as proteínas β-Klotho também podem incluir fragmentos. Como aqui utilizado, os termos são utilizados indiferentemente para significar um co-recetor, em particular e a menos que indicado de outro modo, um co-recetor humano, o qual, por associação com FGFRlc e FGF21, induz atividade de sinalização tipo FGF21. 0 termo β-Klotho também inclui modificações pós-traducionais da sequência de aminoácidos de β-Klotho, por exemplo, possíveis locais de glicosilação ligados ao N. Assim, as proteínas de ligação a antigénio podem ligar-se a ou ser produzidas a partir de proteínas glicosiladas numa ou mais das posições.

Proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a um ou mais de β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, FGFR4c São proporcionadas uma variedade de agentes de ligação seletiva úteis para modular a sinalização tipo FGF21. São ilustradas, por exemplo, proteínas de ligação a antigénio que contêm um domínio de ligação a antigénio (e. g. , anticorpos de cadeia simples, anticorpos de domínio, hemicorpos, imunoadesões e polipéptidos com uma região de ligação a antigénio) e que se ligam especificamente a FGFRlc, β-Klotho; ou ambos FGFRlc e β-Klotho, em particular FGFRlc humano e β-Klotho humano. Alguns dos agentes, por exemplo, são úteis na imitação do efeito de sinalização produzido in vivo pela associação de FGFRlc com β-Klotho e com FGF21 e podem, assim, ser utilizados para aumentar ou modular uma ou mais atividades associadas com a sinalização tipo FGF21.

Em geral, as proteínas de ligação a antigénio que são ilustradas compreendem, normalmente, uma ou mais CDR, como aqui descrito (e. g. , 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 CDR) . As proteínas de ligação a antigénio podem ser expressas naturalmente por clones, enquanto que noutras formas de realização, a proteína de ligação a antigénio pode compreender (a) uma estrutura estrutural polipeptídica e (b) uma ou mais CDR que são inseridas a e/ou ligadas à estrutura estrutural polipeptídica. Em algumas destas formas de realização, uma CDR forma um componente de cadeias pesadas ou leves expressas pelos clones aqui descritos; noutras formas de realização uma CDR pode ser inserida numa estrutura em que a CDR não é expressa naturalmente. Uma estrutura de estrutura polipeptídica pode tomar uma variedade de formas diferentes. Por exemplo, uma estrutura de estrutura polipeptídica pode ser, ou compreender, a estrutura de um anticorpo que ocorre naturalmente ou um seu fragmento ou variante, ou pode ser completamente sintética na sua natureza. Exemplos de várias estruturas de proteína de ligação a antigénio são ainda descritos abaixo.

Em algumas formas de realização, em que a proteína de ligação a antigénio compreende (a) uma estrutura de estrutura polipeptídica e (b) uma ou mais CDR que são inseridas a e/ou ligadas à estrutura de estrutura polipeptídica, a estrutura de estrutura polipeptídica de uma proteína de ligação a antigénio é um anticorpo ou é derivada de um anticorpo, incluindo, mas não estando limitada a, anticorpos monoclonais, anticorpos biespecíficos, minicorpos, anticorpos de domínio, anticorpos sintéticos (por vezes referidos aqui como "miméticos de anticorpos") , anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, fusões de anticorpos (por vezes referidos aqui como "conjugados de anticorpo") e porções ou fragmentos de cada um, respetivamente. Em alguns casos, a proteína de ligação a antigénio é um fragmento imunológico de um anticorpo (e. g. , um Fab, um Fab', um F(ab')2, ou um scFv).

Algumas das proteínas de ligação a antigénio, como aqui proporcionadas, ligam-se especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho; e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, incluindo as formas humanas destas proteínas. Numa forma de realização, uma proteína de ligação a antigénio liga-se especificamente ao FGFRlc humano, compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID N°: 5 e a β-Klotho humano compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID N° : 8 e, noutra forma de realização, uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente ao FGFRlc humano, compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID N°: 5 e a β-Klotho humano, possuindo a sequência de aminoácidos da SEQ ID N°: 8 e induz a sinalização tipo FGF21. Uma proteína de ligação a antigénio induz a sinalização tipo FGF21.

Estrutura da Proteína de Ligação a antigénio

Algumas das proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, incluindo as formas humanas destas proteínas que são proporcionadas aqui, têm uma estrutura normalmente associada com anticorpos que ocorrem naturalmente. As unidades estruturais destes anticorpos compreendem normalmente um ou mais tetrâmeros, cada composto por dois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, embora algumas espécies de mamíferos também produzam anticorpos possuindo apenas uma única cadeia pesada. Num anticorpo típico, cada par ou dupla inclui uma cadeia "leve" de comprimento completo (em determinadas formas de realização, cerca de 25 kDa) e uma cadeia "pesada" de comprimento completo (em determinadas formas de realização, cerca de 50-70 kDa) . Cada cadeia de imunoglobulina individual é composta por vários "domínios de imunoglobulina", cada, consistindo, aproximadamente, de 90 a 110 aminoácidos e expressando um padrão de dobra característico. Estes domínios são as unidades básicas dos quais os polipéptidos de anticorpo são compostos. A porção do terminal amino de cada cadeia, inclui nomralmente um domínio variável que é responsável pelo reconhecimento do antigénio. A porção do terminal carboxilo é mais conservada evolutivamente do que a outra extremidade da cadeia e é referida como a "região constante" ou a "região C". As cadeias leves humanas são geralmente classificadas como cadeias leves kappa ("κ") e lambda ("λ") , e cada uma delas contém um domínio variável e um domínio constante. As cadeias pesadas são normalmente classificadas como cadeias mu, delta, gama, alfa ou epsilon, e estas definem o isótipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respetivamente. A IgG tem vários subtipos, incluindo, mas não estando limitadas a, IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4. Os subtipos IgM incluem IgM e IgM2. Os subtipos de IgA incluem IgAl e IgA2. Em humanos, os isótipos IgA e IgD contêm quatro cadeias pesadas e quatro cadeias leves; os isótipos IgG e IgE contêm duas cadeias pesadas e duas cadeias leves; e o isótipo IgM contém cinco cadeias pesadas e cinco cadeias leves. A região C de cadeia pesada compreende normalmente um ou mais domínios que podem ser responsáveis pela função efetora. O número de domínios da região constante da cadeia pesada dependerá do isótipo. As cadeias pesadas de IgG, por exemplo, contêm cada, três domínios da região C conhecidos como CH1, Ch2 e CH3. Os anticorpos que são proporcionados podem ter qualquer um destes isótipos e subtipos. Em determinadas formas de realização, uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a um ou mais de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho; e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 é um anticorpo do subtipo IgGl, IgG2 ou IgG4.

Em cadeias leves e pesadas de comprimento total, as regiões variável e constante são ligadas por uma região "J" de cerca de doze ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada incluindo também uma região "D" de cerca de dez aminoácidos mais. Ver, e. g. , Fundamental Immunoligy, 2a ed., Cap. 7 (Paul, W., ed.) 1989, Nova Iorque: Raven Press. As regiões variáveis de cada par de cadeia leve/pesada normalmente formam o local de ligação a antigénio.

Um exemplo de um domínio constante pesado de IgG2 de um anticorpo monoclonal exemplar que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 tem a sequência de aminoácidos: ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVIjQvSSGI YST ASVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER KCCVECPPCP APPV AGPS VFIPPPKPKDTI .MISRTPEVTC VVVD VSFTEDPE VQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHY PQKSLSLSPGK (SEQ ID N° : 9).

Um exemplo de um domínio leve constante de kapa de um anticorpo monoclonal exemplar que se liga a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (ill) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 tem a sequência de aminoácidos: RT V AAPS V E1EPPSDEQLKS GTAS V VCLLN N FY PREAK VQ WK V DNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SENRGEC (SEQ ID N°: 10) .

Um exemplo de um domínio leve constante de lambda de um anticorpo monoclonal exemplar que se liga a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (ill) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 tem a sequência de aminoácidos: GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVK AGVETTKPSKQSNNKYA ASS YI aSETPEQWKSETRS YSCQVTHEGSTVEKT VAPTECS (SEQ ID N° : 11) .

As regiões variáveis de cadeias de imunoglobulina exibem geralmente a mesma estrutura global, compreendendo regiões de estrutura relativamente conservadas (FR) unidas por três regiões hipervariáveis, mais frequentemente designadas por "regiões determinantes de complementaridade" ou CDR. As CDR das duas cadeias de cada par de cadeia pesada/cadeia leve, mencionadas acima, são normalmente alinhadas pelas regiões estruturais para formar uma estrutura que se liga especificamente com um epítopo específico na proteína alvo (e. g.r (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4). De regiões N-terminais a C-terminais, as regiões variáveis de cadeia leve e pesada de ocorrência natural, estão normalmente em conformidade com a seguinte ordem destes elementos: FRl, CDRl, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. Foi concebido um sistema de numeração para atribuir números a aminoácidos que ocupam posições em cada destes domínios. Este sistema de numeração é definido em Sequências Rabat de Proteínas de Interesse Imunológico (1987 e 1991, NIH, Bethesda, MD). Como desejado, as CDR podem também ser redefinidas de acordo com um esquema de nomenclatura alternativa, tal como o de Chothia (ver Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883 ou Honegger & Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309:657-670.

As várias regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve das proteínas de ligaçãoo ao antigigéno aqui proporcionadas estão representadas na Tabela 2. Cada uma destas regiões variáveis pode ser ligada às regiões constantes de cadeia pesada e leve acima para formar uma cadeia pesada e leve de anticorpo completa, respectivamente. Além disso, cada uma das sequuências de cadeias pesada e leve assim produzidas pode ser combinada para formar uma estrutura completa de anticorpo. Deve ser entendido que as regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve aqui proporcionadas podem também ser ligadas a outros domínios constantes com sequências diferentes das sequências exemplificativas listadas acima.

Os exemplos específicos de algumas das cadeias leves e pesadas de comprimento total dos anticorpos que são proporcionados e as suas correspondentes sequências de aminoácidos, estão resumidos nas Tabelas IA e IB. A Tabela IA apresenta sequências exemplificativas de cadeia leve, e a Tabela 1B apresenta sequências exemplificativas de cadeia pesada.

Tabela ΙΑ - Sequências Exemplares de Cadeia Leve de Anticorpo

Tabela IB - Sequências Exemplares de Cadeia Pesada de Anticorpo

De novo, cada das cadeias pesadas exemplares (Hl, H2, H3, etc.) listadas na Tabela IB e 6A, infra, pode ser combinada com qualquer das cadeias leves exemplares apresentadas nas Tabelas IA e 6A, infra, para formar um anticorpo. Exemplos de tais combinações incluem Hl combinado com qualquer de Ll a L18; H2 combinado com qualquer de Ll a L18; H3 combinado com qualquer de Ll a L18, e assim por diante. Em alguns casos, os anticorpos incluem, pelo menos, uma cadeia pesada e uma cadeia leve daquelas listadas nas Tabelas IA, IB e 6A, infra; L7 com H5, L6 com H5, L6 com H6, L7 com H7, L8 com H8, L9 com H9, LIO com H10, Lll com Hll, L12 com H12, L13 com H13, L14 com H14, L15 com H15, L16 com H16, L17 com H17 e L18 com H18. Para além das proteínas de ligação a antigénio compreendendo uma cadeia pesada e uma cadeia leve do mesmo clone, uma cadeia pesada de um primeiro clone pode ser emparelhada com uma cadeia leve de um segundo clone (e. g. , uma cadeia pesada de 46D11 emparelhada com uma cadeia leve de 16H7 ou uma cadeia pesada de 16H7 emparelhada com uma cadeia leve de 46D11). Geralmente, tais emparelhamentos podem incluir VL, com 90% ou mais homologia, pode ser emparelhado com a cadeia pesada do clone que ocorre naturalmente. Em alguns casos, os anticorpos compreendem duas cadeias pesadas diferentes e duas cadeias leves diferentes listadas nas Tabelas IA, IB e 6A, infra. Noutros casos, os anticorpos contêm duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas. Como exemplo, um anticorpo ou fragmento imunologicamente funcional pode incluir duas cadeias pesadas Hl e duas cadeias leves Ll, ou duas cadeias pesadas H2 e duas cadeias leves L2, ou duas cadeias pesadas H3 e duas cadeias leves L3 e outras combinações semelhantes de pares de cadeias leves e pares de cadeias pesadas tal como listado nas

Tabelas IA, IB e 6A, infra.

Noutro aspeto da presente descrição, são proporcionados "hemicorpos". Um hemicorpo é uma proteína de ligação a antigénio monovalente compreendendo (i) uma cadeia leve intacta, e (ii) uma cadeia pesada fundida a uma região Fc (e. g. , uma região Fc de IgG2 da SEQ ID N°: 441), opcionalmente através de um ligando, o ligando pode ser um ligando (G4S)X onde "x" é um inteiro não-zero (e. g., G4S)s; SEQ ID N°: 440) . Os hemicorpos podem ser construídos utilizando os componentes da cadeia pesada e leve proporcionados. Exemplos específicos de hemicorpos são divulgados no Exemplo 14.

Outras proteínas de ligação a antigénio que são proporcionadas são variantes de anticorpos formados por combinação das cadeias pesada e leve apresentadas nas Tabelas IA, IB e 6A, infra e compreendem cadeias leves e/ou pesadas, onde cada uma tem, pelo menos, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com as sequências de aminoácidos destas cadeias. Em alguns casos, tais anticorpos incluem, pelo menos, uma cadeia pesada e uma cadeia leve, enquanto que noutros casos as formas variantes contêm duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas.

Domínios Variáveis de Proteínas de Ligação a antigénio São também proporcionadas proteínas de ligação a antigénio que contêm uma região variável de cadeia pesada de anticorpo selecionada do grupo consistindo de VH1, VH2, VH3, VH4, VH5, VH6, Vh7, Vh8 , Vh9, Vh10, Vh11, Vh12, Vh13, Vh14, Vh15, Vh16, Vh17 e VH18 como mostrado na Tabela 2B e/ou uma região variável de cadeia leve de anticorpo selecionada do grupo consistindo de VliVl2, VL3, Vl4 , Vl5 , VL6, Vl7 , Vl8 , VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14, VL15, VL16, Vl17 e VL18 como mostrado na Tabela 2A, e fragmentos, derivados, muteínas e variantes imunologicamente funcionais destas regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada.

Tabela 2A-Cadeias Leves Variáveis (VL) Exemplares de Anticorpo

Tabela 2B- Cadeias Pesadas Variáveis (VH) Exemplares de Anticorpo

Tabela 2C-Sequência de Codificação para Cadeias Leves Variáveis (VL) de Anticorpo

Tabela 2D-Sequência de Codificação para Cadeias Pesadas Variáveis (VH) de Anticorpo

As formas de realização da invenção são definidas nas reivindicações.

Cada das regiões variáveis de cadeia pesada listadas na Tabela 2B pode ser combinada com qualquer das regiões variáveis de cadeia leve apresentadas na Tabela 2A para formar uma proteína de ligação a antigénio. Exemplos de tais combinações incluem VH1 combinado com qualquer de VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, VL6, Vl7, Vl8 , VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14, VL15, VL16, VL17 ou

Vl18; Vh2 combinado com qualquer de VLi, VL2, VL3, VL4, VL5, VL6,

Vl7, Vl8 , VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14, VL15, VL16, VL17 ou

Vl18; Vh3 combinado com qualquer de VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, VL6,

Vl7, Vl8 , VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14, VL15, VL16, VL17 ou

Vl18; e assim por diante.

Em alguns casos, a proteína de ligação a antigénio inclui pelo menos uma região variável de cadeia pesada e/ou uma região variável de cadeia leve das listadas nas Tabelas 2A e 2B. Em alguns casos, a proteína de ligação a antigénio inclui pelo menos duas regiões variáveis de cadeia pesada e/ou regiões variáveis de cadeia leve diferentes das listadas na Tabela 2B. Um exemplo de tal proteína de ligação a antigénio compreende (a) um VH1, e (b) um de VH2, VH3, VH4, VH5, VH6, VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, Vh12 , VH13, VH14, VH15, VH16, VH17 ou VH18. Outro exemplo compreende (a) um VH2, e (b) um de VH1, VH3, VH4, VH5, VH6, VH7,

Vh8, Vh9, Vh10, Vh11, Vh12, Vh13, Vh14, Vh15, Vh16, Vh17 ou VHi8.

Mais uma vez, outro exemplo compreende (a) um VH3, e (b) um de VH1, Vh2 , Vh4, Vh5 , VH6, VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, VH12, VH13, VH14, Vh15 VH16, Vh17 ou VH18, etc

Novamente, outro exemplo de uma tal proteína de ligação a antigénio compreende (a) um VL1, e (b) uma de VL2, VL3, VL4, VL5,

Vl6, Vl7, Vl8 , VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14, VL15, VL16, VL17, ou Vl18. Novamente, outro exemplo de uma tal proteína de ligação a antigénio compreende (a) um VL2, e (b) uma de VL1, VL3, VL4, Vl5, Vl6, Vl7, Vl8, Vl9, Vl10, Vl11 ou Vl12. Novamente, outro exemplo de uma tal proteína de ligação a antigénio compreende (a) um Vl3, e (b) uma de VL1, VL2, VL4, VL5, VL6, VL7, VL8, VL9, VL10, VL11, Vl12 , VL13, VL14, VL15, VL16, VL17, ou VL18, etc.

As várias combinações de regiões variáveis de cadeia pesada podem ser combinadas com qualquer das várias combinações de regiões variáveis de cadeia leve.

Noutras formas de realização, uma proteína de ligação a antigénio compreende duas regiões variáveis de cadeia leve idênticas e/ou duas regiões variáveis de cadeia pesada idênticas. Como exemplo, a proteína de ligação a antigénio pode ser um anticorpo ou um seu fragmento imunologicamente funcional, que inclua duas regiões variáveis de cadeia leve e duas regiões variáveis de cadeia pesada, em combinações de pares de regiões variáveis de cadeia leve e pares de regiões variáveis de cadeia pesada, tal como listado nas Tabelas 2A e 2B.

Algumas proteínas de ligação a antigénio que são proporcionadas compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos que difere da sequência de um domínio variável de cadeia pesada selecionado de VH1, Vh2 , Vh3 , Vh4, Vh5 , VH6, VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, VH12, VH13, Vh14, Vh15, Vh16, Vh17 e VH18 em apenas 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 resíduos de aminoácidos, em que cada uma dessas diferenças da Sequência é, independentemente, uma deleção, inserção ou substituição de um aminoácido, com as deleções, inserções e/ou substituições resultando em não mais de 15 alterações de aminoácidos em relação às sequências de domínio variável precedentes. A região variável da cadeia pesada em algumas proteínas de ligação a antigénio compreende uma sequência de aminoácidos como definido nas reivindicações.

Determinadas proteínas de ligação a antigénio compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos que difere da sequência de um domínio variável de cadeia leve selecionado de VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, VL6, VL7, VL8, Vl9, Vl10, Vl11, Vl12, VL13, VL14, VL15, VL16, VL17 e VL18 em apenas 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 resíduos de aminoácidos, em que cada uma dessas diferenças da Sequência é, independentemente, uma deleção, inserção ou substituição de um aminoácido, com as deleções, inserções e/ou substituições resultando em não mais de 15 alterações de aminoácidos em relação às sequências de domínio variável anteriores. A região variável da cadeia leve em algumas proteínas de ligação a antigénio compreende uma sequência de aminoácidos como definido nas reivindicações.

Em casos adicionais, as proteínas de ligação a antigénio compreendem os seguintes pares de domínios variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada: VL1 com VH1, VL2 com VH2, VL2 com VH3, VL3 com VH4, Vl4 com VH5, VL5 com VH6, VL6 com VH7, VL7 com VH8, VL8 com

Vh8 , Vl9 com VH9, VL9 com VH10, VL10 com VH11, VL11 com VH11, VL12 com Vh12, Vl13 com VH13, VL14 com VH14, VL15 com VH15, VL16 com Vh16, Vl17 com Vh17 e VL18 com VH18. Em alguns casos, as proteínas de ligação a antigénio, nos pares acima, podem compreender sequências de aminoácidos que possuem identidade da Sequência de 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com os domínios variáveis especificados. As formas de realização da invenção são definidas nas reivindicações.

Ainda outras proteínas de ligação a antigénio, e. g. , anticorpos ou fragmentos imunologicamente funcionais, incluem formas variantes de uma cadeia pesada variante e uma cadeia leve variante como agora descrito. CDR de Proteínas de Ligação a antigénio

Em várias formas de realização, as proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas podem compreender polipéptidos, nos quais uma ou mais CDR são enxertadas, inseridas e/ou unidas. Uma proteína de ligação a antigénio pode possuir 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 CDR. Uma proteína de ligação a antigénio pode assim ter, por exemplo, uma CDRl de cadeia pesada ("CDRHl") e/ou uma CDR2 de cadeia pesada ("CDRH2") e/ou uma CDR3 de cadeia pesada ("CDRH3") e/ou uma CDRl de cadeia leve ("CDRLl") e/ou uma CDR2 de cadeia leve ("CDRL2") e/ou uma CDR3 de cadeia leve ("CDRL3") . Algumas proteínas de ligação a antigénio incluem um CDRH3 e um CDRL3. As CDR de cadeias pesada e leve específicas são identificadas nas Tabelas 3A e 3B, respetivamente e na Tabela 6C, infra.

As regiões determinantes de complementaridade (CDR) e as regiões estruturais (FR) de um dado anticorpo podem ser identificadas utilizando o sistema descrito por Rabat et ai., em Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed., US Dept, of Health and Human Services , PHS, NIH, NIH Publicação n° . 91-3242, 1991. Como desejado, as CDR podem também ser redefinidas de acordo com um esquema de nomenclatura alternativa, tal como o de Chothia (ver Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342 :878-883 ou Honegger & Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309:657-670).

Determinados anticorpos que são aqui divulgados compreendem uma ou mais sequências de aminoácidos que são idênticas ou têm uma identidade da Sequência substancial com as sequências de aminoácidos de uma ou mais das CDR apresentadas na Tabela 3A (CDRH) , na Tabela 3B (CDRL) e na Tabela 6C, infra.

Tabela 3A-Sequências de CDRH Exemplares

Tabela 3B-Sequências CDRL Exemplares

Tabela 3C-Sequências de Codificação para CDRH

Tabela 3D-Sequência de Codificação para CDRL

A estrutura e propriedades das CDR dentro de um anticorpo que ocorre naturalmente foi descrita, supra. Resumidamente, num anticorpo tradicional, as CDR estão incorporadas numa estrutura na região variável da cadeia pesada e leve, onde constituem as regiões responsáveis pela ligação e reconhecimento do antigénio. Uma região variável compreende, pelo menos, três CDR de cadeia pesada ou leve, ver, supra (Rabat et al., 1991, equences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD; ver também Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917 ; Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883), dentro de uma região estrutural (designadas regiões estruturais 1-4, FRl, FR2, FR3 e FR4, por Rabat et al. , 1991; ver também

Chothia e Lesk, 1987, supra). As CDR aqui proporcionadas, no entanto, podem não só ser utilizadas para definir o dominio de ligação a antigénio de uma estrutura de anticorpo tradicional, mas podem ser incorporadas numa variedade de outras estruturas polipeptidicas, como aqui descrito.

As CDR ilustradas são (a) uma CDRH selecionada do grupo consistindo de (i) uma CDRHl selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N° : 121-131; (ii) uma CDRH2 selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N°: 132-144; (iii) uma CDRH3 selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N° : 145-157; e (iv) uma CDRH de (i) , (ii) e (iii) que contém uma ou mais substituições, deleções ou inserções de aminoácidos não superiores a cinco, quatro, três, dois ou um aminoácido; (b) uma CDRL selecionada do grupo consistindo de (i) um CDRLl selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N°: 158-170; (ii) um CDRL2 selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N° : 171-179; (iii) um CDRL3 selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N°: 180-194; e (iv) um CDRL de (i) , (ii) e (iii) que contém uma ou mais substituições, deleções ou inserções de aminoácidos não superiores a 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos.

Uma proteína de ligação a antigénio compreende 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 formas variantes das CDR listadas nas Tabelas 3A e 3B e na Tabela 6C, infra, cada, possuindo uma identidade da Sequência de, pelo menos, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência CDR listada nas Tabelas 3A, 3B e Tabela 6C, infra. Algumas proteínas de ligação a antigénio compreendem 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 das CDR listadas nas Tabelas 3A e 3B e na Tabela 6C, infra, cada, diferindo em não mais de 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos das CDR listadas nestas tabelas.

Uma proteina de ligação a antigénio inclui as associações seguintes de CDRLl, CDRL2 e CDRL3: SEQ ID N° : 167, 176 e 190; SEQ ID N°: 167, 176 e 189, SEQ ID N° : 166, 176 e 188; SEQ ID N°: 166, 176 e 188; SEQ ID N°: 161, 174 e 183; SEQ ID N°: 162, 173 e 184; SEQ ID N°: 162, 173 e 186; SEQ ID N°: 164, 173 e 186; SEQ ID N°: 160, 173 e 182; SEQ ID N°: 163, 173 e 185; SEQ ID N°: 163, 173 e 185; SEQ ID N°: 159, 172 e 181; SEQ ID N°: 165, 175 e 187; SEQ ID N°: 158, 171 e 180; SEQ ID N°: 168, 171 e 191; SEQ ID N°: 169, 177 e 192; SEQ ID N°: 170, 178 e 193; SEQ ID N°: 163, 173 e 194; SEQ ID N°: 163, 173 e 194; e SEQ ID N°: 163, 179 e 194.

Uma proteina de ligação a antigénio inclui as seguintes associações de CDRHl, CDRH2 e CDRH3: SEQ ID N° : 122, 133 e 146; SEQ ID N°: 122, 133 e 147; SEQ ID N°: 122, 133 e 148; SEQ ID N°: 122, 134 e 148; SEQ ID N°: 124, 136 e 150; SEQ ID N°: 124, 138 e 152; SEQ ID N°: 124, 139 e 152; SEQ ID N°: 124, 137 e 151; SEQ ID N°: 124, 137 e 151; SEQ ID N°: 131, 140 e 153; SEQ ID N°: 125, 140 e 153; SEQ ID N°: 123, 135 e 149; SEQ ID N°: 123, 135 e 149; SEQ ID N°: 121, 132 e 145; SEQ ID N°: 126, 133 e 154; SEQ ID N°: 130, 144 e 157; SEQ ID N°: 127, 135 e 155; SEQ ID N°: 129, 142, e 156; SEQ ID N°: 128, 141 e 156; E SEQ ID N°: 128, 143 e 156.

Uma proteina de ligação a antigénio inclui as associações seguintes de CDRLl, CDRL2 e CDRL3 com CDRHl, CDRH2 e CDRH3: SEQ ID N°: 167, 176 e 190; SEQ ID N°: 167, 176 e 189, SEQ ID N°: 166, 176 e 188; SEQ ID N°: 166, 176 e 188; SEQ ID N°: 161, 174 e 183; SEQ ID N°: 162, 173 e 184; SEQ ID N°: 162, 173 e 186; SEQ ID N°: 164, 173 e 186; SEQ ID N°: 160, 173 e 182; SEQ ID N°: 163, 173 e 185; SEQ ID N°: 163, 173 e 185; SEQ ID N°: 159, 172 e 181; SEQ ID N°: 165, 175 e 187; SEQ ID N°: 158, 171 e 180; SEQ ID N°: 168, 171 e 191; SEQ ID N°: 169, 177 e 192; SEQ ID N°: 170, 178 e 193; SEQ ID N°: 163, 173 e 194; SEQ ID N°: 163, 173 e 194; SEQ ID N°: 163, 179 e 194 com SEQ ID N°: 122, 133 e 146; SEQ ID N°: 122, 133 e 147; SEQ ID N°: 122, 133 e 148; SEQ ID N°: 122, 134 e 148; SEQ ID N°: 124, 136 e 150; SEQ ID N°: 124, 138 e 152; SEQ ID N°: 124, 139 e 152; SEQ ID N°: 124, 137 e 151; SEQ ID N°: 124, 137 e 151; SEQ ID N°: 131, 140 e 153; SEQ ID N°: 125, 140 e 153; SEQ ID N°: 123, 135 e 149; SEQ ID N°: 123, 135 e 149; SEQ ID N°: 121, 132 e 145; SEQ ID N°: 126, 133 e 154; SEQ ID N°: 130, 144 e 157; SEQ ID N°: 127, 135 e 155; SEQ ID N°: 129, 142, e 156; SEQ ID N°: 128, 141 e 156; e SEQ ID N°: 128, 143 e 156.

Sequências de Consenso

Ainda noutro aspeto, as CDR aqui divulgadas incluem sequências de consenso derivadas de grupos de anticorpos monoclonais relacionados. Como aqui descrito, uma "sequência de consenso" refere-se a sequências de aminoácidos possuindo aminoácidos conservados, comuns entre várias sequências, e aminoácidos variáveis que variam dentro de uma dada sequência de aminoácidos. As sequências de consenso das CDR proporcionadas incluem CDR correspondentes a cada CDRHl, CDRH2, CDRH3, CDRLl, CDRL2 e CDRL3.

As sequências de consenso foram determinadas utilizando análises padrão das CDR correspondentes ao VH e VL dos anticorpos divulgados, alguns dos quais se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. As sequências de consenso foram determinadas mantendo as CDR contíguas dentro da mesma sequência correspondendo a uma VH ou VL.

Cadeia Leve de CDR3

Grupo 1 LQHNSYPLT (SEQ ID N°: 267)

Grupo 2 MQSLQTPFT (SEQ ID N°: 268)

Grupo 3 QQYNNWPPT (SEQ ID N°: 269)

Grupo 4 MQSIQLPRT (SEQ ID N°: 270)

Grupo 5 QQANDFPIT (SEQ ID N°: 271) MQALQTPCS (SEQ ID N°: 272)

Grupo 6

Grupo 7 QVWD G N SDHVV (SEQ ID N°: 273) QVWD N T SDHVV (SEQ ID N°: 274) QVWD S S SDHVV (SEQ ID N°: 275) QVWD Χχ X2 SDHVV (SEQ ID N° : 276) em que Xi é G, S ou N e X2 é S, T ou N.

Grupo 8 QQ CGSSPLT (SEQ ID N°: 277) QQ YGGSPLT (SEQ ID N°: 278) QQ Y G S A P T (SEQ ID N°: 279) QQ Y G S S F T (SEQ ID N°: 280) QQ YGSSPLT (SEQ ID N°: 281) QQ SGSSPLT (SEQ ID N°: 282) QQ X3 G X4 X5 X6 X7 T (SEQ ID N° : 283) em que X3 é C, Y ou S, X4 é S ou G, X5 é S ou A, X6 é P ou F e X7 é L ou está ausente.

Cadeia Leve de CDR2

Grupo 1 AASSLQS (SEQ ID N°: 284)

Grupo 2 GVSTRAT (SEQ ID N°: 285)

Grupo 3 DDSDRPS (SEQ ID N°: 286)

Grupo 4 EVSNRFS (SEQ ID N°: 287)

Grupo 5 L G S N R A S (SEQ ID N°: 288) L G S D R A S (SEQ ID N°: 289) L G S X27 R A S (SEQ ID N° : 290) em que X27 é N ou D.

Grupo 6 G A S S RAT (SEQ ID N°: 291) G T S S RAT (SEQ ID N°: 292) G A S F RAT (SEQ ID N°: 293) G X8 S X28 RAT (SEQ ID N°: 2 94) em que X8 é A ou T e X28 é S ou F.

Cadeia Leve de CDR1

Grupo 1 RASQSVNSNLA (SEQ ID N°: 295)

Grupo 2 RASQDIRYDLG (SEQ ID N°: 296)

Grupo 3 RASQGISIWLA (SEQ ID N°: 297)

Grupo 4 KSSQSLLQSDGKTYLY (SEQ ID N°: 298)

Grupo 5 RASQ N F D S S S LA (SEQ ID N°: 299) RASQ N F D S S Y LA (SEQ ID N°: 300) RASQ S V S G N Y LA (SEQ ID N°: 301) RASQ S V S G T Y LA (SEQ ID N°: 302) RASQ N F D S N Y LA (SEQ ID N°: 303) RASQ X9 Xio Xn Xi2 Xi3 Xi« LA (SEQ ID N° : 304) em que X9 é A ou S, Xio é V ou F, Xn é D ou S, Xn é G ou S, X13 é S, N ou T, e X14 é S ou Y.

Grupo 6 GGNNIGS E SVH (SEQ ID N°: 305) GGNNIGS Q SVH (SEQ ID N°: 306) GGNNIGS Xis SVH (SEQ ID N° : 307) em que Χχ5 é E ou Q.

Grupo 7 RSSQSLL Y Y NG F T Y LD (SEQ ID N°: 308) RSSQSLL H S NG Y N F LD (SEQ ID N°: 309) RSSQSLL X29 X30 NG X31 X32 X33 LD (SEQ ID N° : 310) em que X29 é Y ou H, X30 é Y ou S, X31 é F ou Y, X32 é T ou N e X33 é Y ou F.

CDR3 PESADA

Grupo 1 IVVVPAAIQSYYYYYGMGV (SEQ ID N°: 311)

Grupo 2 DPDGDYYYYGMDV (SEQ ID N°: 312)

Grupo 3 TYSSGWYVWDYYGMDV (SEQ ID N°: 313)

Grupo 4 DRVLSYYAMAV (SEQ ID N°: 314)

Grupo 5 VRIAGDYYYYYGMDV (SEQ ID N° : 315)

Grupo 6 ENIVVIPAAIFAGWFDP (SEQ ID N° : 316)

Grupo 7 DRAAAGLHYYYGMDV (SEQ ID N°: 317)

Grupo 8 I L L L G A YYY Y GMDV (SEQ ID N°: 318) I L L V G A YYY C GMDV (SEQ ID N°: 319) V V T G G YYY D GMDV (SEQ ID N°: 320) S V V T G G YYY D GMDV (SEQ ID N°: 321) X34 Xi6 X17 Xi8 G X19 YYY X20 GMDV (SEQ ID N° : 322) em que X34 é I, V ou S, Xi6 é L ou V, Xi7 é L, T ou V, Xi8 é L, V, G ou T, X19 é A, G ou ausente e X2o é Y, C ou D. SLIVV I VY A LD H (SEQ ID N°: 323)

Grupo 9 SLIVV I VY A LD Y (SEQ ID N°: 324) SLIVV M VY V LD Y (SEQ ID N°: 325) SLIVV X2i VY X22 LD X23 (SEQ ID N° : 326) em que X2i é I ou M, X22 é A ou V e X23 é H ou Y.

CDR2 PESADA

Grupo 1 GFDPEDGETIYAQKFQG (SEQ ID N°: 327)

Grupo 2

Riksk T DGGTTDYAAPVKG (SEQ ID N°: 328)

Riksk DGGTTDYAAPVKG (SEQ ID N°: 330)

Riksk X42 DGGTTDYAAPVKG (SEQ ID N°: 483) em que X42 é T ou ausente.

Grupo 3 HIFSNDEKSYSTSLK S (SEQ ID N°: 331) HIFSNDEKSYSTSLK N (SEQ ID N°: 332) HIFSNDEKSYSTSLK X24 (SEQ ID N° : 333) em que X24 é S ou N. G ISGSGVST H YADSVKG (SEQ ID N°: 334)

Grupo 4 G ISGSGVST Y YADSVKG (SEQ ID N°: 335) A ISGSGVST Y YADSVKG (SEQ ID N°: 336) A ISGSGVST N YADSVKG (SEQ ID N°: 337) X25 ISGSGVST X26 YADSVKG (SEQ ID N° : 338) em que X25 é G ou A e X26 é Η, Y ou N.

Grupo 5 VIWYDGS D KYY A DSVKG (SEQ ID N°: 339) VIWYDGS I KYY G DSVKG (SEQ ID N°: 340) VIWYDGS X35 KYY X36 DSVKG (SEQ ID N° : 341) em que X35 é D ou I e X36 é A ou G.

Grupo 6 N IY Y SGST Y YNPSLKS (SEQ ID N° : 342) R IY T SGST Y YNPSLKS (SEQ ID N° : 343) R IY T SGST N YNPSLKS (SEQ ID N° : 329) X37 IY X38 SGST X4i YNPSLKS (SEQ ID N° : 344) em que X37 é N ou R, X33 é Y ou T e X41 é Y ou N.

CDR1 PESADA

Grupo 1 DLSMH (SEQ ID N°: 345)

Grupo 2 DAWMS (SEQ ID N°: 346)

Grupo 3 TYAMS (SEQ ID N°: 347)

Grupo 4 SYFWS (SEQ ID N°: 348)

Grupo 5 SGGYNWS (SEQ ID N°: 349)

Grupo 6 NARMGV S (SEQ ID N° : 350) NARMGV N (SEQ ID N°: 351) NARMGV X39 (SEQ ID N° : 352) em que X39 é S ou N.

Grupo 7 S YGIH (SEQ ID N°: 353) N YGIH (SEQ ID N°: 354) X40 YGIH (SEQ ID N° : 355) em que X40 é S ou N.

Em alguns casos, uma proteína de ligação a antigénio compreende, pelo menos, uma cadeia pesada CDRl, CDR2 ou CDR3 possuindo uma das sequências consenso acima. Em alguns casos, uma proteína de ligação a antigénio compreende, pelo menos, uma CDRl, CDR2 ou CDR3 de cadeia leve possuindo uma das sequências consenso acima. Noutros casos, a proteína de ligação a antigénio compreende, pelo menos, duas CDR de cadeia pesada, de acordo com as sequências consenso acima e/ou, pelo menos, duas CDR de cadeia leve, de acordo com as sequências de consenso acima. Ainda noutros casos, a proteína de ligação a antigénio compreende pelo menos três CDR de cadeia pesada de acordo com as sequências consenso acima e/ou, pelo menos, três CDR de cadeia leve de acordo com as sequências de consenso acima.

Ilustração de Proteínas Exemplares de Ligação a antigénio

Uma proteína de ligação a antigénio isolada, compreendendo (a) uma ou mais regiões de determinação complementares de cadeia pesada (CDRH) selecionadas do grupo consistindo de: (i) uma CDRHl selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N°: 121-131; (ii) uma CDRH2 selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N° : 132-144; (iii) uma CDRH3 selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N°: 145-157; e (iv) uma CDRH de (i), (ii) e (iii) que contém uma ou mais substituições, deleções ou inserções de aminoácidos não superiores a 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos; (b) uma ou mais regiões determinantes complementares de cadeia leve (CDRL) selecionadas do grupo consistindo de: (i) um CDRLl selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N°: 158-170; (ii) um CDRL2 selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N° : 171-179; (iii) um CDRL3 selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N°: 180-194; e (iv) um CDRL de (i) , (ii) e (iii) que contém uma ou mais substituições, deleções ou inserções de aminoácidos não superiores a cinco, quatro, três, quatro, dois ou um aminoácido; ou (c) uma ou mais CDRH de cadeia pesada de (a) e um ou mais CDRLs de cadeia leve de (b).

As CDRH têm uma identidade da Sequência de pelo menos 7 0%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N° : 121-157 e/ou os CDRL têm pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade da Sequência com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N°: 158-194. O VH é selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N° : 121-157 e/ou o VL é selecionado do grupo consistindo da SEQ ID N°: 158-194.

Uma proteína isolada de ligação a antigénio compreendendo (a) uma ou mais cadeias pesadas variáveis (VH) selecionadas do grupo consistindo de: (i) SEQ ID N°: 121-157; e (ii) uma VH de (i) que contém uma ou mais substituições, deleções ou inserções de aminoácidos não superiores a cinco, quatro, três, quatro, dois ou um aminoácido; (b) uma ou mais cadeias leves variáveis (VLs) selecionadas do grupo consistindo de: (i) SEQ ID N° : 158-194, e (ii) uma VL de (i) que contém uma ou mais substituições de aminoácidos, deleções ou inserções de não mais de cinco, quatro, três, quatro, dois ou um aminoácido; ou (c) uma ou mais cadeias pesadas variáveis de (a) e uma ou mais cadeias leves variáveis de (b). A cadeia pesada variável (VH) tem uma identidade da Sequência de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N°: 121-157 e/ou a cadeia leve variável (VL) tem pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%. 98% ou 99% de identidade da Sequência com uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo da SEQ ID N°: 158-194.

Está também ilustrada uma proteína de ligação a antigénio que se liga especif icamente a um epítopo compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos de FGFRlc, FGRF2c, FGFR3c e FGFR4.

Está também ilustrada uma proteína de ligação a antigénio que se liga especif icamente a um epítopo compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos de β-Klotho.

Está também ilustrada uma proteína isolada de ligação a antigénio que se liga especificamente a um epítopo compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos tanto de β-Klotho como de um ou mais resíduos de aminoácidos de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4. A proteína isolada de ligação a antigénio aqui descrita compreende uma primeira sequência de aminoácidos compreendendo, pelo menos, uma das sequências de consenso de CDRH aqui divulgadas e uma segunda sequência de aminoácidos compreendendo, pelo menos, uma das sequências de consenso de CDRL aqui divulgadas. A primeira sequência de aminoácidos compreende, pelo menos, duas das sequências de consenso de CDRH e/ou a segunda sequência de aminoácidos compreende, pelo menos, duas das sequências de consenso de CDRL. Em determinadas formas de realização, a primeira e a segunda sequência de aminoácidos estão ligadas covalentemente uma à outra. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 146, a CDRH2 da SEQ ID N° : 133 e a CDRHl da SEQ ID N° : 122 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 19, o CDRL2 da SEQ ID N°: 176 e o CDRLl da SEQ ID N°: 167. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N° : 147, a CDRH2 da SEQ ID N° : 133 e a CDRHl da SEQ ID N° : 122 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 189, o CDRL2 da SEQ ID N°: 176 e o CDRLl da SEQ ID N°: 167. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 148, a CDRH2 da SEQ ID N° : 133 e a CDRHl da SEQ ID N° : 122 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 188, o CDRL2 da SEQ ID N°: 176 e o CDRLl da SEQ ID N°: 166. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 148, a CDRH2 da SEQ ID N° : 134 e a CDRHl da SEQ ID N° : 122 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N° : 188, o CDRL2 da SEQ ID N°: 176 e o CDRLl da SEQ ID N°: 166. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligaçãoo ao antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N° : 150, a CDRH2 da SEQ ID N° : 136 e a CDRHl da SEQ ID N° : 124 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N° : 183, o CDRL2 da SEQ ID N°: 174 e o CDRLl da SEQ ID N°: 161. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 152, a CDRH2 da SEQ ID N° : 138 e a CDRHl da SEQ ID N° : 124 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N° : 184, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173 e o CDRLl da SEQ ID N°: 162. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 152, a CDRH2 da SEQ ID N° : 139 e a CDRHl da SEQ ID N° : 124 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 186, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173 e o CDRLl da SEQ ID N°: 162. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 151, a CDRH2 da SEQ ID N° : 137 e a CDRHl da SEQ ID N° : 124 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 186, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173 e o CDRLl da SEQ ID N°: 164. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 151, a CDRH2 da SEQ ID N° : 137 e a CDRHl da SEQ ID N° : 124 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 182, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173 e o CDRLl da SEQ ID N°: 160. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 153, a CDRH2 da SEQ ID N° : 140 e a CDRHl da SEQ ID N° : 131 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 185, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173 e o CDRLl da SEQ ID N°: 163. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 153, a CDRH2 da SEQ ID N° : 140 e a CDRHl da SEQ ID N° : 125 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 185, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173, e o CDRLl da SEQ ID N°: 163. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 149, a CDRH2 da SEQ ID N° : 135 e a CDRHl da SEQ ID N° : 123 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 181, o CDRL2 da SEQ ID N°: 172 e o CDRLl da SEQ ID N°: 159. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 149, a CDRH2 da SEQ ID N° : 135 e a CDRHl da SEQ ID N° : 123 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N° : 187, o CDRL2 da SEQ ID N°: 175 e o CDRLl da SEQ ID N°: 165. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 145, a CDRH2 da SEQ ID N° : 132 e a CDRHl da SEQ ID N° : 121 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N° : 180, o CDRL2 da SEQ ID N°: 171 e o CDRLl da SEQ ID N°: 158. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 154, a CDRH2 da SEQ ID N° : 133 e a CDRHl da SEQ ID N° : 126 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N° : 191, o CDRL2 da SEQ ID N°: 171 e o CDRLl da SEQ ID N°: 168. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 157, a CDRH2 da SEQ ID N° : 144 e a CDRHl da SEQ ID N° : 130 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 192, o CDRL2 da SEQ ID N°: 177 e o CDRLl da SEQ ID N°: 169. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 155, a CDRH2 da SEQ ID N° : 135 e a CDRHl da SEQ ID N° : 127 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 193, o CDRL2 da SEQ ID N°: 1178 e o CDRLl da SEQ ID N°: 170. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 156, a CDRH2 da SEQ ID N° : 142 e a CDRHl da SEQ ID N° : 129 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 194, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173, e o CDRLl da SEQ ID N°: 163. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 156, a CDRH2 da SEQ ID N° : 141 e a CDRHl da SEQ ID N° : 128 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 194, o CDRL2 da SEQ ID N°: 173 e o CDRLl da SEQ ID N°: 163. A primeira sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende a CDRH3 da SEQ ID N°: 156, a CDRH2 da SEQ ID N° : 143 e a CDRHl da SEQ ID N° : 128 e/ou a segunda sequência de aminoácidos da proteína isolada de ligação a antigénio compreende o CDRL3 da SEQ ID N°: 194, o CDRL2 da SEQ ID N°: 179 e o CDRLl da SEQ ID N°: 163. A proteína de ligação a antigénio compreende, pelo menos, duas sequências de CDRH das sequências de cadeia pesada Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15, H16, H17 ou H18, como mostrado na Tabela 4A. De novo numa outra forma de realização, a proteína de ligação a antigénio compreende, pelo menos, duas sequências de CDRL das sequências de cadeia leve Ll, L2, L3, L4, L5, L6, L7, L8, L9, LIO, Lll, L12, L13, L14, L15, L16, L17 ou L18, como mostrado na Tabela 4B. Ainda noutra forma de realização, a proteína de ligação a antigénio compreende, pelo menos, duas sequências de CDRH das sequências de cadeias pesadas Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15, H16, H17 ou H18, como ilustrado na Tabela 4A e, pelo menos, dois CDRL das sequências de cadeia leve Ll, L2, L3, L4, L5, L6, L7, L8, L9, LIO, Lll, L12, L13, L14, L15, L16, L17 ou L18, como mostrado na Tabela 4B. A proteína de ligação a antigénio compreende as sequências CDRHl, CDRH2 e CDRH3 das sequências da cadeia pesada Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15, H16, H17 ou H18, como mostrado na Tabela 4A. Ainda noutra forma de realização, a proteína de ligação a antigénio compreende as sequências CDRLl, CDRL2 e CDRL3 das sequências de cadeia leve Ll, L2, L3, L4, L5, L6, L7, L8, L9.L10, Lll, L12, L13, L14, L15, L16, L17 ou L18, como mostrado na Tabela 4B. A proteína de ligação a antigénio compreende todas as seis CDR de Ll e Hl, ou L2 e H2, ou L3 e H3, ou L3 e H4, ou L4 e H5, ou L5 e H6, ou L6 e H7, ou L7 e H8, ou L8 E H7, ou L9 e H9, ou L9 e H10, ou LIO e Hll, ou Lll e Hll, ou L12 e H12, ou L13 e H13, ou L14 e H14, ou L15 e H15, ou L16 e H16, ou L17 e H17, ou L18 e H18, como mostrado nas Tabelas 4A e 4B. 16H7 é o anticorpo preferido da invenção.

As proteínas isoladas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 aqui proporcionados pode ser um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo recombinante, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, um anticorpo multiespecífico ou um seu fragmento de anticorpo. 0 fragmento de anticorpo das proteínas isoladas de ligação a antigénio aqui proporcionadas pode ser um fragmento Fab, um fragmento Fab', um fragmento F(ab')2/ um fragmento Fv, um diacorpo ou uma molécula de anticorpo de cadeia simples.

Uma proteína isolada de ligação a antigénio que especificamente (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 aqui proporcionado é um anticorpo humano e pode ser do tipo IgGl, IgG2-IgG3 ou IgG4.

Uma proteína isolada de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 compreende um polipéptido de cadeia leve ou pesada, como mostrado nas Tabelas 1A-1B. Em algumas formas de realização, uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 compreende um domínio variável leve ou variável pesado, tal como os listados nas Tabelas 2A-2B. Ainda noutras formas de realização, uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e urn de

FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 compreende um, dois ou três CDRH ou um, dois ou três CDRLs como mostrado nas Tabelas 3A-3B, 4A-4B e Tabela 6C, infra. Tais proteínas de ligação a antigénio e, de facto, qualquer das proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas, podem ser PEGuiladas com uma ou mais moléculas de PEG, por exemplo, moléculas de PEG com um peso molecular selecionado do grupo consistindo de 5K, 10K, 20K, 40K, 50K, 60K, 80K, 100K ou superior a 100K.

Qualquer protína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 aqui proporcionados podem ser acoplados a um grupo de marcação e podem competir pela ligação à porção extracelular de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 com uma proteína de ligação a antigénio de uma das proteínas isoladas de ligação a antigénio aqui proporcionadas. A proteína isolada de ligação a antigénio aqui ilustrada pode reduzir os níveis de glucose no sangue, diminuir os níveis de triglicéridos e de colesterol ou melhorar outros parâmetros glicémicos e fatores de risco cardiovascular, quando administrados a um doente.

Como será apreciado, para qualquer proteína de ligação a

antigénio compreendendo mais do que um CDR, proporcionado nas Tabelas 3A-3B e 4A-4B, qualquer combinação de CDR

independentemente selecionada das sequências representadas pode ser útil. Assim, podem ser produzidas proteínas de ligação a antigénio com um, dois, três, quatro, cinco ou seis CDR selecionados independentemente. No entanto, tal como será apreciado pelos especialistas na técnica, formas de realização específicas utilizam geralmente combinações de CDR que não são repetitivas, e. g. , as proteínas de ligação a antigénio não são geralmente feitas com duas regiões CDRH2, etc.

Algumas das proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, que são proporcionados aqui, são discutidos em mais detalhe abaixo.

Proteínas de Ligação a antigénio e Epítopos de Ligação e Domínios de Ligação

Quando se diz que uma proteína de ligação a antigénio liga um epítopo em (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (ill) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, ou o domínio extracelular de β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4, por exemplo, o que se quer dizer é que a proteína de ligação a antigénio se liga especificamente a uma porção especifica de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (ill) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Em algumas formas de realização, e. g. , em determinados casos em que a proteína de ligação a antigénio liga apenas FGFRlc ou β-Klotho, a proteína de ligação a antigénio pode ligar-se especificamente a um polipéptido consistindo de resíduos especificados (e. g., um segmento especificado de β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4, tal como os resíduos descritos no Exemplo 14). E. g., em determinados casos em que uma proteína de ligação a antigénio interage com β-Klotho e um ou mais de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, a proteína de ligação a antigénio pode ligar resíduos, sequências de resíduos ou regiões tanto em β-Klotho como em FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4, dependendo do recetor que a proteína de ligação a antigénio reconhece. A proteína de ligação a antigénio ligar-se-á a resíduos, sequências de resíduos ou regiões de um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, por exemplo, FGFRlc.

Em qualquer das formas de realização anteriores, tal proteína de ligação a antigénio não necessita de contactar cada resíduo de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, ou o domínio extracelular das proteínas ou complexos citados. Nem todas as substituições ou exclusões de aminoácidos dentro (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo βκίοίΐοο; e um dos FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, ou o domínio extracelular das proteínas ou complexos citados, necessariamente afetam significativamente a afinidade de ligação. A especificidade do epítopo e o(s) domínio(s) de ligação de uma proteína de ligação a antigénio podem ser determinados por uma variedade de métodos. Alguns métodos, por exemplo, podem utilizar porções truncadas de um antigénio. Outros métodos utilizam o antigénio mutado em um ou mais resíduos específicos, tal como empregando uma abordagem de rastreio de alanina ou de tipo rastreio de arginina ou pela produção e estudo de proteínas quiméricas nas quais vários domínios, regiões ou aminoácidos são trocados entre duas proteínas (e. g., formas de ratinho e humanas de um ou mais dos antigénios ou proteínas alvo) ou por ensaios de proteção de proteases.

Proteínas Competitivas de Ligação a antigénio

Noutro aspeto, são ilustradas as proteínas de ligação a antigénio que competem com um dos anticorpos exemplificados ou fragmentos funcionais para ligação a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho; e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Tais proteínas de ligação a antigénio podem também ligar-se ao mesmo epítopo como uma das proteínas de ligação a antigénio aqui exemplificadas, ou um epítopo sobreposto. Pensa-se que as proteínas de ligação a antigénio e os fragmentos que competem com ou se ligam ao mesmo epítopo, como as proteínas de ligação a antigénio exemplificadas, apresentem propriedades funcionais semelhantes. As proteínas e fragmentos de ligação a antigénio exemplificados incluem aqueles com as cadeias pesada e leve H1-H18 e L1-L18, domínios de região variável VL1-VL18 e VH1-VH18, e CDR aqui proporcionadas, incluindo aqueles nas Tabelas 1, 2, 3 e 4. Assim, como um exemplo específico, as proteínas de ligação a antigénio que são proporcionadas incluem aquelas que competem com um anticorpo compreendendo: (a) 1, 2, 3, 4, 5 ou todas as 6 das CDR listadas para um anticorpo listado nas Tabelas 3A e 3B, 4A e 4B e Tabela 6C, infra; (b) um VH e um VL selecionado de VL1-V18 e VH1-VH18 e listados para um anticorpo listado nas Tabelas 2A e 2B; ou (c) duas cadeias leves e duas cadeias pesadas como especificado para um anticorpo listado nas Tabelas IA e 12B e na

Tabela 6A, infra.

Assim, a presente divulgação ilustra proteínas de ligação a antigénio que competem pela ligação a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho; e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 com um anticorpo de referência, em que o anticorpo de referência compreende uma combinação de cadeias leves e cadeias pesadas de domínio variável, selecionadas do grupo consistindo de LlHl, L2H2, L3H3, L3H4, L4H5, L5H6, L6H7, L7H8, L8H8, L9H9, L9H10, L10H11, L11H11, L12H12, L13H13, L14H14, L15H15, L16H16, L17H17 ou L18H18. Noutra forma de realização, a presente divulgação proporciona anticorpos humanos que competem pela ligação a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 com um anticorpo de referência, em que o anticorpo de referência é 17C3, 22H5, 16H7, 24H11, 18G1, 17D8, 26H11, 12E4, 12C11, 21H2, 21B4, 18B11.1, 18B11.2, 20D4, 46D11, 40D2, 37D3, 39F7, 39F1 ou 39G5. É ilustrado um anticorpo humano isolado que se liga a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 com substancialmente o mesmo Kd que um anticorpo de referência; inicia a sinalização tipo FGF21 num ensaio ELK-luciferase in vitro, ao mesmo grau que um anticorpo de referência; diminui a glicemia; diminui os níveis séricos de lipídos; e/ou compete para a ligação com o referido anticorpo de referência a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho; e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, em que o anticorpo de referência é selecionado do grupo consistindo de 17C3, 22H5, 16H7, 24H11, 18G1, 17D8, 26H11, 12E4, 12C11, 21H2, 21B4, 18B11.1, 18B11.2, 20D4, 46D11, 40D2, 37D3, 39F7, 39F1 ou 39G5. A capacidade de competir com um anticorpo pode ser determinada utilizando qualquer ensaio adequado, tal como o descrito no Exemplo 8, no qual as proteínas de ligação a antigénio 17C3, 22H5, 16H7, 24H11, 18G1, 17D8, 26H11, 12E4, 12C11, 21H2, 21B4, 18B11.1, 18B11.2, 20D4, 46D11, 40D2, 37D3, 39F7, 39F1 ou 39G5 podem ser utilizadas como o anticorpo de referência.

Anticorpos Monoclonais

As proteína de ligação a antigénio que são proporcionadas incluem anticorpos monoclonais que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, e induz a sinalização tipo FGF21 a vários graus. Os anticorpos monoclonais podem ser produzidos utilizando qualquer técnica conhecida na técnica, e. g., por imortalização de células de baço colhidas do animal transgénico, após a conclusão do calendário de imunização. As células do baço podem ser imortalizadas utilizando qualquer técnica conhecida na técnica, e. g. , por fusão com células de mieloma para produzir hibridomas. As células de mieloma para utilização em processos de fusão que produzem hibridomas são, de um modo preferido, não produtoras de anticorpos, têm elevada eficiência de fusão e deficiências enzimáticas que as tornam incapazes de crescer em determinados meios seletivos que suportam o crescimento apenas das células fundidas desejadas (hibridomas). Exemplos de linhas celulares adequadas para utilização em fusões de ratinho incluem Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NSl/l.Ag 4 1, Sp210-Agl4, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1,7 e S194/5XXO Bui; exemplos de linhas celulares utilizadas em fusões de ratos incluem R210.RCY3, Y3-Ag 1,2,3, IR983F e 4B210. Outras linhas celulares úteis para fusões de células são U-266, GM1500-GRG2, LICR-L0N-HMy2 e UC729-6.

Em alguns casos, uma linha celular de hibridoma é produzida imunizando um animal (e. g. , um animal transgénico com sequências de imunoglobulina humana) com um imunogénio FGFRlc, β-Klotho ou FGFRlc e/ou β-Klotho (e. g., um complexo solúvel compreendendo os domínios extracelulares de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4 e/ou β-Klotho como mostrado nos Exemplos 2 e 3; membranas nas quais os domínios extracelulares de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4 e/ou β-Klotho são expressos, como mostrado nos Exemplos 1 e 3; ou células inteiras que expressam FGFRlc e/ou β-Klotho, como mostrado nos Exemplos 1 e 3); recolha de células do baço do animal imunizado; fusão das células de baço colhidas a uma linha de células de mieloma, produzindo assim células de hibridoma; estabelecimento de linhas de células de hibridoma das células de hibridoma e identificação de uma linha de células de hibridoma que produz um anticorpo que se liga a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 (e. g. , como descrito no Exemplo 4) e pode induzir sinalização tipo FGF21 (e. g. , como descrito nos Exemplos 5-7). Tais linhas de células de hibridoma e os anticorpos monoclonais produzidos por estas, formam aspetos da presente divulgação.

Os anticorpos monoclonais secretados por uma linha celular de hibridoma podem ser purificados utilizando qualquer técnica conhecida na técnica. Os hibridomas ou mAbs podem ser adicionalmente rastreados para identificar mAbs com propriedades particulares, tal como a capacidade de induzir a sinalização tipo FGF21. Exemplos destes rastreios são aqui proporcionados.

Anticorpos Quiméricos e Humanizados

Podem ser facilmente produzidos anticorpos quiméricos e humanizados com base nas sequências anteriores. Um exemplo é um anticorpo quimérico, o qual é um anticorpo composto de segmentos de proteína de diferentes anticorpos que estão ligados covalentemente para produzir cadeias leves ou pesadas de imunoglobulina funcional, ou porções imunologicamente funcionais dos mesmos. Geralmente, uma porção da cadeia pesada e/ou da cadeia leve é idêntica ou homóloga a uma sequência correspondente em anticorpos derivados de uma espécie particular ou pertencentes a uma classe ou subclasse de anticorpo particular, enquanto que o resto da(s) cadeia(s) é/são idênticas ou homólogas a uma sequência correspondente em anticorpos derivados de outra espécie ou pertencentes a outra classe ou subclasse de anticorpos. Para métodos relacionados com anticorpos quiméricos, ver, e. g., Patente US N° 4816567; e Morrison et al. , 1985, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:6851-6855, 0 enxerto de CDR é descrito, por exemplo, na Patente US N° 6180370, N° 5693762, N° 5693761, N°. 5585089 e N° 5530101.

Geralmente, o objetivo de produzir um anticorpo quimérico é criar uma quimera, na qual o número de aminoácidos do doente pretendido/espécie destinatária é maximizado. Um exemplo é o anticorpo "enxertado com CDR", no qual o anticorpo compreende uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDR) de uma espécie particular ou pertencente a uma classe ou subclasse particular de anticorpo, enquanto que o restante da(s) cadeia(s) é/são idênticas ou homólogas a uma sequência correspondente em anticorpos derivados de outra espécie ou pertencentes a outra classe ou subclasse de anticorpos. Para utilização em humanos, a região variável ou CDR selecionadas de um anticorpo de roedor são muitas vezes enxertadas num anticorpo humano, substituindo as regiões variáveis de ocorrência natural ou CDR do anticorpo humano.

Um tipo útil de anticorpo quimérico é um anticorpo "humanizado". Geralmente, um anticorpo humanizado é produzido de um anticorpo monoclonal criado inicialmente num animal não humano. Determinados resíduos de aminoácidos neste anticorpo monoclonal, normalmente de porções do anticorpo que não reconhecem antigénio, são modificados para serem homólogos aos resíduos correspondentes num anticorpo humano do isótipo correspondente. A humanização pode ser realizada, por exemplo, utilizando vários métodos substituindo, pelo menos, uma porção de uma região variável de roedor para as regiões correspondentes de um anticorpo humano (ver, e. g., Patente US N° . 5585089 e N° 5693762; Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-21; Verhoeyen et al. , 1988, Science 239:1534-1536) .

Num aspeto, as CDR das regiões variáveis de cadeia leve e pesada dos anticorpos aqui proporcionados (e. g. , nas Tabelas 3 e 4) são enxertadas em regiões estruturais (FRs) de anticorpos da mesma espécie, ou de uma espécie filogenética diferente. Por exemplo, as CDR das regiões variáveis de cadeia pesada e leve VH1, Vh2, Vh3, Vh4, Vh5, Vh6, Vh7, Vh8, Vh9, Vh10, Vh11, Vh12, Vh13, VH14, VH15, VH16, VH17 ou VH18 e/ou VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, VL6,

Vl7, Vl8 , VL9, VL10, VL11, VH12, VL13, VL14, VL15, VL16, VL17 ou

Vl18 podem ser enxertadas em FRs humanas de consenso. Para criar FRs humanos consensuais, as FRs de várias sequências de aminoácidos de cadeias pesadas ou de cadeias leves humanas podem ser alinhadas para identificar uma sequência de aminoácidos consensual. Noutras formas de realização, as FRs de uma cadeia pesada ou cadeia leve, aqui descritas, são substituídas pelas FRs de uma cadeia pesada ou cadeia leve diferente. Num aspeto, os aminoácidos raros nas FR das cadeias pesada e leve de uma proteína de ligação a antigénio (e. g. , um anticorpo) que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 não são substituídos, enquanto que o resto dos aminoácidos FR é substituído. Um "aminoácido raro" é um aminoácido específico que está numa posição em que este aminoácido particular não é normalmente encontrado numa FR. Alternativamente, as regiões variáveis enxertadas de uma cadeia pesada ou leve podem ser utilizadas com uma região constante, que é diferente da região constante daquela cadeia pesada ou leve particular, como aqui divulgado. Noutras formas de realização, as regiões variáveis enxertadas são parte de um anticorpo Fv de cadeia simples.

Em determinadas formas de realização, podem ser utilizadas regiões constantes de espécies diferentes da humana com a(s) região(s) variável(s) humana para produzir anticorpos híbridos.

Anticorpos Totalmente Humanos

Os anticorpos totalmente humanos são também proporcionados pela presente divulgação. Estão disponíveis métodos para produzir anticorpos totalmente humanos específicos para um determinado antigénio sem expor seres humanos ao antigénio ("anticorpos totalmente humanos"). Um meio específico proporcionado para implementar a produção de anticorpos completamente humanos é a "humanização" do sistema imunitário humoral do ratinho. A introdução de loci de imunoglobulina humana (Ig) em ratinhos, em que os genes de Ig endógenos foram inativados, é um meio de produzir anticorpos monoclonais (mAbs) totalmente humanos em ratinho, um animal que pode ser imunizado com qualquer antigénio desejável. Utilizar anticorpos totalmente humanos pode minimizar as respostas imunogénicas e alérgicas que podem, por vezes, ser causadas pela administração de mAbs derivados de ratinho ou rato a seres humanos, como agentes terapêuticos.

Os anticorpos totalmente humanos podem ser produzidos por imunização de animais transgénicos (normalmente ratinhos) que são capazes de produzir um repertório de anticorpos humanos na ausência de produção endógena de imunoglobulina. Os antigénios para este fim têm normalmente seis ou mais aminoácidos contíguos e, opcionalmente, são conjugados com um veículo, tal como um hapteno. Ver, e. g., Jakobovits et al.r (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 9_0:2551-2555; Jakobovits et ai., (1993) Nature 362:255-258; e Bruggermann et al. , (1993) Year in Immunol. Ί_:33. Num exemplo de um tal método, os animais transgénicos são produzidos por incapacitação dos loci endógenos de imunoglobulina de ratinho codificando as cadeias de imunoglobulina pesada e leve do ratinho e inserir, no genoma de ratinho, grandes fragmentos de ADN do genoma humano contendo loci codificando cadeias de proteínas pesada e leve humanas. Os animais parcialmente modificados, que têm menos do que o complemento completo do loci de imunoglobulina humana, são então cruzados para obter um animal com todas as modificações do sistema imunitário desejadas. Quando administrado um imunogénio, estes animais transgénicos produzem anticorpos que são imunoespecíficos para o imunogénio mas têm sequências de aminoácidos humanas em vez de murínicas, incluindo as regiões variáveis. Para mais detalhes de tais métodos, ver, e. g. , documentos W096/33735 e W094/02602. Métodos adicionais relacionados com ratinhos transgénicos para a produção de anticorpos humanos estão descritos nas Patentes US N° 5545807; N° 6713610; N° 6673986; N° 6162963; N° 5545807; N° 6300129; N° 6255458; N° 5877397; N° 5874299 e N° 5545806; em Publicações PCT WO91/1074, W090/04036 e no documento EP546073B1 e EP546073A1.

Os ratinhos transgénicos descritos acima, aqui referidos como ratinhos "HuMab", contêm um minilocus do gene de imunoglobulina humana codificando sequências de imunoglobulinas de cadeias pesadas ( [μ, mu] e [γ, gama] ) humanas não rearranjadas, e sequências de imunoglobulina de cadeia leve [k, kappa], em conjunto com mutações direcionadas, que inativam os loci endógenos da cadeia μ [mu] e κ [kappa] (Lonberg et ai., 1994, Nature 368:856-859). Em conformidade, os ratinhos exibem uma expressão reduzida de IgM ou [κ, kappa] de ratinho e em resposta à imunização e os transgenes de cadeia pesada e leve humanos introduzidos sofrem mudança de classe e mutação somática para produzir anticorpos monoclonais de IgG [κ, kappa] de elevada afinidade (Lonberg et ai., supra.; Lonberg e Huszar, (1995) Intern. Rev. Immunol. jL3_: 65-93; Harding e Lonberg, (1995) Ann. N.Y Acad. Sci. 764:536-546) . A preparação de ratinhos HuMab é descrita em detalhe em Taylor et al., (1992) Nucleic Acids Research 2_0: 6287-6295; Chen et al. , (1993) International Immunology _5: 647-656; Tuaillon et al., (1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Lonberg et al. , (1994) Nature 368:856-859; Lonberg, (1994) Handbook of Exp. Pharmacology 113:49-101; Taylor et al. , (1994) International Immunology 6:579-591; Lonberg e Huszar, (1995) Intern. Rev. Immunol. jL3_: 65-93; Harding e Lonberg, (1995) Ann. N.Y Acad. Sci. 764:536-546; Fishwild et al. , (1996) Nature Biotechnology 1_4 :845-851. Ver ainda as Patentes US N° 5545806; N° 5569825; N° 5625126; N°.5633425; N° 5789650; N° 5877397; N° 5661016; N° 5814318; N° 5874299; e N° 5770429; assim como Patente US N°. 5545807; Publicações Internacionais N° W093/1227; W092/22646; e WO92/03918. As tecnologias utilizadas para produzir anticorpos humanos nestes ratinhos transgénicos são também divulgadas no documento W098/24893, e Mendez et al., (1997) Nature Genetics L5:146-15 6. Para exemplo, as estirpes de ratinhos transgénicos HCo7 e HCol2 podem ser utilizadas para produzir proteínas de ligação a antigénio (e. g. , anticorpos) que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (ill) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 e pode induzir sinalização tipo FGF21. Mais detalhes sobre a produção de anticorpos humanos utilizando ratinhos transgénicos são proporcionados nos exemplos abaixo.

Utilizando tecnologia de hibridoma, podem ser produzidos mAbs humanos específicos de antigénio com a especificidade desejada e selecionados de ratinhos transgénicos, tal como os descritos acima. Tais anticorpos podem ser clonados e expressos utilizando um vetor adequado e uma célula hospedeira, ou os anticorpos podem ser colhidos de células de hibridoma cultivadas.

Os anticorpos totalmente humanos podem também ser derivados de bibliotecas de exibição em fagos (como divulgado em

Hoogenboom et al., (1991) J. Mol. Biol. 227:381; e Marks et al., (1991) J. Mol. Biol. 222:581) . As técnicas de exibição de fago imitam a seleção imunitária através da apresentação de repertórios de anticorpos na superfície de bacteriófagos filamentosos e subsequente seleção de fagos pela sua ligação a um antigénio de escolha. Uma dessas técnicas é descrita na Publicação PCT N° WO99/10494, a qual descreve o isolamento de alta afinidade e de anticorpos agonistas funcionais para os recetores MPL e msk, utilizando tal abordagem.

Proteínas Biespecíficas ou Bifuncionais de Ligação a antigénio São também proporcionados anticorpos biespecíficos e bifuncionais que incluem uma ou mais CDR ou uma ou mais regiões variáveis, como descrito acima. Um anticorpo biespecífico ou bifuncional, em alguns casos, pode ser um anticorpo híbrido artificial possuindo dois pares de cadeias pesadas/leves diferentes e dois locais de ligação diferentes. Os anticorpos biespecíficos podem ser produzidos por uma variedade de métodos incluindo, mas não estando limitados a, fusão de hibridomas ou ligação de fragmentos Fab' . Ver, e. g. , Songsivilai e Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 7_9:315-321; Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547-1553. Quando uma proteína de ligação a antigénio da presente divulgação se liga a (i) tanto β-Klotho como um ou mais de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (ii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, a ligação pode levar à ativação da atividade tipo FGF21, como medida pelos ensaios funcionais e de sinalização tipo FGF21 descritos nos Exemplos 5-7; quando uma tal proteína de ligação a antigénio é um anticorpo, é referido como um anticorpo agonista. Várias Outras Formas

Algumas das proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, que são proporcionados na presente divulgação, incluem formas variantes das proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas (e. g. , aqueles com as sequências listadas nas Tabelas 1-4).

Em várias formas de realização, as proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas podem compreender um ou mais aminoácidos que não ocorrem naturalmente. Por exemplo, algumas das proteínas de ligação a antigénio têm uma ou mais substituições de aminoácidos que não ocorrem naturalmente numa ou mais das cadeias pesadas ou leves, regiões variáveis ou CDR listadas nas Tabelas 1-4. Exemplos de aminoácidos não naturais (que podem ser substituídos com qualquer aminoácido de ocorrência natural encontrado em qualquer sequência aqui divulgada, conforme desejado) incluem: 4-hidroxiprolina, γ-carboxiglutamato, ε-Ν,N,N-trimetilisina, ε-Ν-acetilisina, 0-fosfosserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metil-histidina, 5-hidroxilisina, o-N-metilarginina e outros aminoácidos e iminoácidos semelhantes (e. g. , 4-hidroxiprolina). Na notação de polipéptido aqui utilizada, a direção do lado esquerdo é a direção do terminal amino e a direção do lado direito é a direção do terminal carboxilo, de acordo com a utilização e convenção padrão. As listas não limitativas de exemplos de aminoácidos que não ocorrem naturalmente, que podem ser inseridos numa sequência de proteina de ligação a antigénio ou substituídos com um resíduo de tipo selvagem numa sequência de ligação a antigénio, incluem β-aminoácidos, homoaminoácidos, aminoácidos cíclicos e aminoácidos com cadeias laterais derivadas. Os exemplos incluem (na forma L ou na forma D, abreviada como entre parêntesis) : citrulina (Cit), homocitrulina (hCit), Να-metilcitrulina (NMeCit), Na-metil-homocitrulina (Να-MeHoCit), ornitina (Orn), Na-metilornitina (Να-MeOrn ou NMeOrn), sarcosina (Sar), homolisina (hLis ou hK) , homoarginina (hArg ou hR) , homoglutamina (hQ), Να-metilarginina (NMeR), Na-metileucina (Να-MeL ou NMeL), N-metil-homolisina (NMeHoK), Na-metilglutamina (NMeQ), norleucina (Nle), norvalina (Nva), 1.2.3.4- tetra-hidroisoquinolina (Tie), ácido octa-hidroindole-2-carboxílico (Oic), 3-(1-naftil)alanina (1-Nal), 3-(2-naftil)alanina (2-Nal), 1.2.3.4- tetra-hidroisoquinolina (Tie), 2-indanilglicina (Igl), para-iodofenilalanina (pI-Fen), para-aminofenilalanina (4AmP ou 4-Amino-Fen) , 4-guanidinofenilalanina (Guf), glicilisina (abreviado K(Νε-glicilo) ou K(glicilo) ou K(Gli)), nitrofenilalanina (nitrofe), aminofenilalanina (aminofen ou Amino-Fen), benzilfenilalanina (benzilfen), ácido γ-carboxiglutâmico (γ-carboxiglu) , hidroxiprolina (hidroxipro), p-carboxifenilalanina (Cpa), ácido α-aminoadípico (Aad), Na-metilvalina (NMeVal), N-a-metileucina (NMeLeu), Na-metilnorleucina (NMeNle), ciclopentilglicina (Cpg), ciclo-hexilglicina (Chg), acetilarginina (acetilarg), ácido a, β-diaminopropionóico (Dpr), ácido a, γ-diaminobutírico (Dab), ácido diaminopropiónico (Dap), ciclo-hexilalanina (Cha), 4-metil-fenilalanina (MeFen), β,β-difenil-alanina (BiPhA), ácido aminobutírico (Abu), 4-fenil-fenilalanina (ou bifenilalanina; 4Bip), ácido α-amino-isobutírico (Aib), beta-alanina, ácido beta-aminopropiónico, ácido piperidínico, ácido aminocapióico, ácido amino-heptanóico, ácido aminopimélico, desmosina, ácido diaminopimélico, N-etilglicina, N-etilaspargina, hidroxilisina, allo-hidroxilisina, isodesmosina, allo-isoleucina, N-metilglicina, N-metilisoleucina, N-metilvalina, 4- hidroxiprolina (Hyp), γ-carboxiglutamato, ε-Ν,N,N-trimetilisina, ε-Ν-acetilisina, 0-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metil-histidina, 5- hidroxilisina, co-metilarginina, ácido 4-amino-0-f tálico (4APA) e outros aminoácidos semelhantes e formas derivadas de qualquer dos especificamente listados.

Adicionalmente, as proteínas de ligação a antigénio podem ter uma ou mais substituições conservadoras de aminoácidos numa ou mais das cadeias pesadas ou leves, regiões variáveis ou CDR listadas nas Tabelas 1-4. Os aminoácidos que ocorrem naturalmente podem ser divididos em classes com base nas propriedades da cadeia lateral comum: 1) Hidrofóbico: norleucina, Met, Ala, Vai, Leu, lie; 2) Neutro hidrofílico: Cis, Ser, Thr, Asn, Gin; 3) Acídico: Asp, Glu; 4) Básico: His, Lis, Arg; 5) Resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gli, Pro; e 6) Aromático: Trp, Tir, Fen.

As substituições conservadoras de aminoácidos podem envolver a troca de um membro de uma destas classes com outro membro da mesma classe. As substituições conservadoras de aminoácidos podem abranger resíduos de aminoácidos que não ocorrem naturalmente, os quais são normalmente incorporados por síntese química de péptidos, em vez de por síntese em sistemas biológicos. Ver Tabela 5, infra. Estes incluem peptidomiméticos e outras formas revertidas ou invertidas de porções de aminoácidos.

As substituições não conservadoras podem envolver a troca de um membro de uma das classes acima para um membro de outra classe. Tais resíduos substituídos podem ser introduzidos em regiões do anticorpo que são homólogas com anticorpos humanos ou nas regiões não homólogas da molécula.

Ao fazer tais alterações, de acordo com determinadas formas de realização, o índice hidropático de aminoácidos pode ser considerado. 0 perfil hidropático de uma proteína é calculado atribuindo a cada aminoácido um valor numérico ("índice de hidropatia") e depois repetidamente fazendo a média destes valores ao longo da cadeia peptídica. A cada aminoácido foi atribuído um índice hidropático com base nas suas características de hidrofobicidade e carga. São eles: isoleucina (+4,5); valina (+4,2); leucina (+3,8); fenilalanina (+2,8); cisteína/cistina (+2,5); metionina (+1,9); alanina (+1,8); glicina (-0,4); treonina (-0,7); serina (-0,8); triptofano (-0,9); tirosina (-1,3); prolina (-1,6); histidina (-3,2); glutamato (-3,5); glutamina (-3,5); aspartato (-3,5); asparagina (-3,5); lisina (-3,9); e arginina (-4,5). A importância do perfil hidropático na conferência de função biológica interativa numa proteína é compreendida na técnica (ver, e. g. , Kyte et al. , 1982, J. Mol. Biol. 157:105-131) . Sabe-se que determinados aminoácidos podem ser substituídos por outros aminoácidos com um índice ou pontuação hidropática semelhante e ainda retêm uma atividade biológica semelhante. Ao fazer alterações com base no índice hidropático, em determinadas formas de realização, está incluída a substituição de aminoácidos cujos índices hidropáticos estão dentro de ±2. Em alguns aspetos, aqueles que estão dentro de ±1 são incluídos, e em outros aspetos, aqueles dentro de ±0,5 são incluídos.

Também se compreende na técnica que a substituição de aminoácidos semelhantes pode ser feita eficazmente com base na hidrofilicidade, particularmente onde a proteína, ou péptido biologicamente funcional criado deste modo, se destina a ser utilizado em formas de realização imunológicas, como no presente caso. Em determinadas formas de realização, a maior hidrofilicidade média local de uma proteína, tal como governada pela hidrofilicidade dos seus aminoácidos adjacentes, correlaciona-se com a sua imunogenicidade e ligação a antigénio ou imunogenicidade, isto é, com uma propriedade biológica da proteína.

Os seguintes valores de hidrofilicidade foram atribuídos a estes resíduos de aminoácidos: arginina (±3,0); lisina (±3,0); aspartato (+3,0 ±1); glutamato (+3,0 ±1); serina (+0,3); asparagina (+0,2); glutamina (+0,2); glicina (0); treonina (-0,4); prolina (-0,5 ±1); alanina (-0,5); histidina (—0,5); cisteína (-1,0); metionina (-1,3); valina (-1,5); leucina (-1,8); isoleucina (-1,8); tirosina (-2,3); fenilalanina (-2,5) e triptofano (-3,4) . Na realização de alterações com base em valores de hidrofilicidade semelhantes, em determinadas formas de realização, a substituição de aminoácidos cujos valores de hidrofilicidade estão dentro de ±2 é incluída, noutras formas de realização, estão incluídas aquelas que estão dentro de ±1 e, noutras formas de realização, aquelas dentro de ±0,5 estão incluídas. Em alguns casos, pode-se também identificar epítopos das sequências de aminoácidos primárias com base na hidrofilicidade. Estas regiões são também referidas como "regiões nucleares epitópicas".

As substituições conservadoras de aminoácidos exemplares estão apresentadas na Tabela 5.

Tabela 5

Substituições Conservadoras de Aminoácidos

Um especialista na técnica será capaz de determinar variantes adequadas de polipéptidos, como aqui estabelecido, utilizando técnicas bem conhecidas juntamente com a informação aqui proporcionada. Um especialista na técnica pode identificar áreas adequadas da molécula que podem ser alteradas sem destruir atividade por direcionamento de regiões que não se acredita serem importantes para a atividade. 0 especialista na técnica também será capaz de identificar resíduos e porções das moléculas que são conservadas entre polipéptidos semelhantes. Em outras formas de realização, mesmo as áreas que podem ser importantes para a atividade biológica ou para a estrutura podem ser sujeitas a substituições conservadoras de aminoácidos sem destruir a atividade biológica ou sem afetar adversamente a estrutura polipeptídica.

Adicionalmente, um especialista na técnica pode rever os estudos de estrutura-função que identificam resíduos em polipéptidos semelhantes que são importantes para a atividade ou estrutura. Em vista de tal comparação, pode-se prever a importância dos resíduos de aminoácidos numa proteína que corresponde a resíduos de aminoácidos importantes para a atividade ou estrutura em proteínas semelhantes. Um especialista na técnica pode optar por substituições de aminoácidos quimicamente semelhantes para esses resíduos de aminoácidos importantes previstos.

Um especialista na técnica pode também analisar a estrutura tridimensional e a sequência de aminoácidos, em relação a essa estrutura, em polipéptidos semelhantes. Considerando essas informações, um especialista na técnica pode prever o alinhamento dos resíduos de aminoácidos de um anticorpo em relação à sua estrutura tridimensional. Um especialista na técnica pode optar por não fazer alterações radicais aos resíduos de aminoácidos que se pensa que estejam na superfície da proteína, uma vez que tais resíduos podem estar envolvidos em interações importantes com outras moléculas. Além disso, um especialista na técnica pode produzir variantes de teste contendo uma única substituição de aminoácido em cada resíduo de aminoácido desejado. Estas variantes podem então ser rastreadas utilizando ensaios para sinalização tipo FGF21, (ver os Exemplos aqui proporcionados) proporcionando assim informação sobre quais aminoácidos podem ser alterados e os que não devem ser alterados. Por outras palavras, com base nas informações recolhidas de tais experiências de rotina, um especialista na técnica pode prontamente determinar as posições de aminoácidos em que outras substituições devem ser evitadas sozinhas ou em combinação com outras mutações. Várias publicações cientificas têm sido dedicadas à previsão da estrutura secundária. Ver, Moult, (1996) Curr. Op. in Biotech. 7_:422-427; Chou et al., (1974) Biochem. 13:222-245;

Chou et al. , (1974) Biochemistry 113:211-222; Chou et al., (1978) Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. _47_: 45-148; Chou et al. , (1979) Ann. Rev. Biochem. 4J_: 251-276; e Chou et al. , (1979) Biophys. J. 2_6:367-384. Além disso, programas de computador estão atualmente disponíveis para auxiliar na previsão da estrutura secundária. Um método para prever a estrutura secundária é baseado na modelação de homologia. Por exemplo, dois polipéptidos ou proteínas que têm uma identidade da sequência superior a 30% ou semelhança superior a 40% podem ter topologias estruturais semelhantes. O crescimento da base de dados estrutural de proteínas (PDB) proporcionou uma maior previsibilidade da estrutura secundária, incluindo o número potencial de dobras dentro da estrutura de um polipéptido ou proteína. Vejo, Holm et al., (1999) Nucl. Acid. Res. 27:244-247.

Foi sugerido (Brenner et al., (1997) Curr. Op. Struct. Biol. Ί_: 369-376) que existe um número limitado de dobras num determinado polipéptido ou proteína e que, uma vez que um número crítico de estruturas tenha sido resolvido, a previsão estrutural tornar-se-á dramaticamente mais precisa. Métodos adicionais de predição da estrutura secundária incluem "enroscar" (Jones, (1997) Curr. Opin. Struct. Biol. 2:377-387; Sippl et al. , (1996) Structure _4;15-19), "análise de perfil" (Bowie et al., (1991) Science 253:164-170; Gribskov et al. , (1990) Meth. Enzym. 183:146-159; Gribskov et al., (1987)

Proc. Nat. Acad. Sci. 8_4:4355-4358) e "ligação evolutiva" (ver,

Holm, (1999) supra; e Brenner, (1997) supra).

Em algumas formas de realização, são feitas substituições de aminoácidos que: (1) reduzem a suscetibilidade à proteólise, (2) reduzem a suscetibilidade à oxidação, (3) alteram a afinidade de ligação para formar complexos de proteínas, (4) alteram as afinidades de ligando ou de ligação a antigénio e/ou (4) conferem ou modificam outras propriedades físico-químicas ou funcionais sobre tais polipéptidos. Por exemplo, podem ser feitas substituições de aminoácidos únicas ou múltiplas (em determinadas formas de realização, substituições conservadoras de aminoácidos) na sequência que ocorre naturalmente. Podem ser feitas substituições na porção do anticorpo que se encontra fora do(s) domínio(s) que formam contatos intermoleculares) . Em tais formas de realização, podem ser utilizadas substituições conservadoras de aminoácidos que não alterem substancialmente as características estruturais da sequência progenitora (e. g. , um ou mais aminoácidos de substituição que não perturbam a estrutura secundária que caracteriza a proteína de ligação a antigénio original ou progenitor). Exemplos de estruturas polipeptídicas secundárias e terciárias reconhecidas na técnica são descritas em Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed.), 1984, W. H. Nova Iorque: Freeman and Company; Introduction to Protein Structure (Branden e Tooze, eds.), 1991, Nova Iorque: Garland Publishing; e Thornton et al., (1991) Nature 354:105.

As variantes de anticorpo preferidas adicionais incluem variantes de cisteína em que um ou mais resíduos de cisteína na sequência de aminoácidos progenitora ou natural são eliminados ou substituídos com outro aminoácido (e. g. , serina) . As variantes de cisteína são úteis, inter alia, quando os anticorpos têm de ser novamente dobrados numa conformação biologicamente ativa. As variantes de cisteina podem ter menos residuos de cisteina do que o anticorpo natural e normalmente têm um número par para minimizar as interações resultantes de cisteinas não emparelhadas.

As cadeias pesadas e leves, domínios de regiões variáveis e CDR que são divulgados podem ser utilizados para preparar polipéptidos que contêm uma região de ligação a antigénio que se pode ligar especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 e pode induzir sinalização tipo FGF21. Por exemplo, uma ou mais das CDR listadas nas Tabelas 3 e 4 podem ser incorporadas numa molécula (e. g. , um polipéptido) covalente ou não covalentemente para fazer uma imunoadesão. Uma imunoadesão pode incorporar a(s) CDR como parte de uma cadeia polipeptídica maior, pode ligar covalentemente a(s) CDR a outra cadeia polipeptídica, ou pode incorporar a(s) CDR não covalentemente. A(s) CDR permitem que a imunoadesão se ligue especificamente a um antigénio particular de interesse (e. g. , (I) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho; e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 ou um seu epítopo).

As cadeias pesadas e leves, domínios de regiões variáveis e CDR que são divulgados podem ser utilizados para preparar polipéptidos que contêm uma região de ligação a antigénio que se pode ligar especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 e pode induzir sinalização tipo FGF21. Por exemplo, uma ou mais das CDR listadas nas

Tabelas 3 e 4 podem ser incorporadas numa molécula (e. g., um polipéptido) que é estruturalmente semelhante a um anticorpo "metade" compreendendo a cadeia pesada, a cadeia leve de uma proteína de ligação a antigénio emparelhada com um fragmento Fc, de modo que a região de ligação a antigénio seja monovalente (como um fragmento Fab) mas com um fração dimérica de Fc. São também proporcionados miméticos (e. g. , "miméticos de péptidos" ou "peptidomiméticos") com base nos domínios de região variável e CDR que são aqui descritos. Estes análogos podem ser péptidos, não péptidos ou combinações de regiões peptídicas e não peptídicas. Fauchere, 1986, Adv. Drug Res. L5:29; Veber e Freidinger, 1985, TINS p. 392; e Evans et ai., 1987, J. Med. Chem. 3_0:1229. Podem ser utilizados miméticos peptídicos que são estruturalmente semelhantes a péptidos terapeuticamente úteis para produzir um efeito terapêutico ou profilático semelhante. Tais compostos são frequentemente desenvolvidos com o auxílio de modelação molecular computadorizada. Geralmente, os peptidomiméticos são proteínas que são estruturalmente semelhantes a um anticorpo exibindo uma atividade biológica desejada, tal como, aqui, a capacidade de se ligar especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, mas têm uma ou mais ligações peptídicas opcionalmente substituídas por uma ligação selecionada de: -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH-CH- (cis e trans) , -COCH2-, -CH (OH) CH2- e -CH2SO-, por métodos bem conhecidos na técnica. A substituição sistemática de um ou mais aminoácidos de uma sequência de consenso com um D-aminoácido do mesmo tipo (e. g., D-lisina em vez de L-lisina) pode ser utilizado em determinadas formas de realização para produzir proteínas mais estáveis. Além disso, os péptidos restritos compreendendo uma sequência de consenso ou uma variação da Sequência de consenso substancialmente idêntica podem ser produzidos por métodos conhecidos na técnica (Rizo e Gierasch, 1992, Ann. Rev. Biochem. 6JL:387), por exemplo, por adição de residuos de cisteina internos capazes de formar pontes dissulfureto intramoleculares que ciclizam o péptido. São também proporcionados derivados das proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 que são aqui descritos. As proteínas derivadas de ligação a antigénio podem compreender qualquer molécula ou substância que confira uma propriedade desejada ao anticorpo ou fragmento, tal como semi-vida aumentada, numa utilização particular. A proteína derivada de ligação a antigénio pode compreender, por exemplo, uma porção detetável (ou marcação) (e. g. , uma molécula radioativa, colorimétrica, antigénica ou enzimática, uma esfera detetável (tal como um polímero magnético ou electrodenso (e. g. , ouro), ou uma molécula que se liga a outra molécula (e. g. , biotina ou estreptavidina)), uma porção terapêutica ou de diagnóstico (e. g., uma porção radioativa, citotóxica ou farmaceuticamente ativa), ou uma molécula que aumenta a adequação da proteína de ligação a antigénio para uma utilização particular (e. g. , administração a um indivíduo, tal como um indivíduo humano, ou outras utilizações in vivo ou in vitro) . Exemplos de moléculas que podem ser utilizadas para derivar uma proteína de ligação a antigénio incluem albumina (e. g. , albumina de soro humano) e polietilenoglicol (PEG). Os derivados ligados a albumina e derivados PEGuilados de proteínas de ligação a antigénio podem ser preparados utilizando técnicas bem conhecidas na técnica. Determinadas proteínas de ligação a antigénio incluem um polipéptido de cadeia simples PEGuilado como aqui descrito. Numa forma de realização, a proteína de ligação a antigénio é conjugada ou ligada, de outra forma, a transtiretina (TTR) ou a uma variante de TTR. A variante TTR ou TTR pode ser quimicamente modificada com, por exemplo, um produto químico selecionado do grupo consistindo de dextrano, poli(n-vinilpirrolidona), polietilenoglicóis, homopolímeros de propropilenoglicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polióis polioxietilados e álcoois polivinílicos.

Outros derivados incluem conjugados covalentes ou agregados das proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho; e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 que são aqui divulgados com outras proteínas ou polipéptidos, tais como por expressão de proteínas de fusão recombinantes compreendendo polipéptidos heterólogos fundidos com o terminal N ou com o terminal C de uma proteína de ligação a antigénio que induz sinalização tipo FGF21. Por exemplo, o péptido conjugado pode ser um polipéptido de sinal heterólogo (ou líder), por exemplo, o líder de fator alfa de levedura, ou um péptido, tal como um marcador de epítopo. Uma proteína de fusão contendo a proteína de ligação a antigénio da presente divulgaçãoo pode compreender péptidos adicionados para facilitar a purificação ou identificação de uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 (e. g., um marcador poli-His) e que pode induzir a sinalização tipo FGF21. Uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 também pode ser ligada ao péptido FLAG tal como descrito em Hopp et al. , 1988,

Bio/Technology _6:1204; e Patente US N° . 5011912. O péptido FLAG é altamente antigénico e proporciona um epítopo ligado de forma reversível por um anticorpo monoclonal específico (mAb), permitindo um ensaio rápido e uma fácil purificação da proteína recombinante expressa. Os reagentes úteis para preparar proteínas de fusão em que o péptido FLAG está fundido com um determinado polipéptido estão comercialmente disponíveis (Sigma, St. Louis, MO) .

Os multímeros que compreendem uma ou mais proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 formam outro aspeto da presente divulgação. Os multímeros podem assumir a forma de dímeros, trímeros ou multímeros superiores ligados covalentemente ou ligados não covalentemente. Os multímeros compreendendo duas ou mais proteínas de ligação a antigénio que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 e que pode induzir sinalização tipo FGF21 são contemplados para utilização como terapêutica, diagnóstico, bem como para outras utilizações, com um exemplo de tal multímero sendo um homodímero. Outros multímeros exemplares incluem heterodímeros, homotrímeros, heterotrímeros, homotetrâmeros, heterotetrâmeros, etc.

Uma forma de realização é dirigida a multímeros compreendendo proteínas múltiplas de ligação a antigénios que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 unidos via interações covalentes ou não covalentes entre frações peptídicas fundidas com uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Tais péptidos podem ser ligandos peptídicos (espaçadores), ou péptidos que têm a propriedade de promover a multimerização. Os fechos de leucina e determinados polipéptidos derivados de anticorpos estão entre os péptidos que podem promover a multimerização de proteínas de ligação a antigénio ligadas a estes, como descrito aqui em maior detalhe.

Em formas de realização particulares, os multímeros compreendem de duas a quatro proteínas de ligação a antigénio que se ligam a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. As porções de proteína de ligação a antigénio do multímero podem estar em qualquer das formas descritas acima, e. g. , variantes ou fragmentos. De um modo preferido, os multímeros compreendem proteínas de ligação a antigénio que têm a capacidade de se ligar especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4.

Numa forma de realização, um oligómero é preparado utilizando polipéptidos derivados de imunoglobulinas. Foi descrita a preparação de proteínas de fusão compreendendo determinados polipéptidos heterólogos fundidos com várias porções de polipéptidos derivados de anticorpos (incluindo o domínio Fc) e. g., por Ashkenazi et al. , (1991) Proc. Natl.

Acad. Sei. USA 8_8:10535; Byrn et al., (1990) Nature 344:677; e

Hollenbaugh et al., 1992 "onstruction of Immunoglobulin Fusion Proteins", em Current Protocols in Immunology, Supl. 4, páginas 10.19.1-10.19.11.

Uma forma de realização compreende um dimero compreendendo duas proteínas de fusão criadas por fusão de uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 à região Fc de um anticorpo. O dímero pode ser produzido, por exemplo, inserindo uma fusão de genes codificando a proteína de fusão num vetor de expressão apropriado, expressando a fusão de genes em células hospedeiras transformadas com o vetor de expressão recombinante e permitindo que a proteína de fusão expressa se agrupe muito como moléculas de anticorpo, após se formarem ligações dissulfureto intercadeias entre as porções Fc para originar o dímero. A expressão "polipéptido Fc", tal como aqui utilizada, inclui formas naturais e muteínicas de polipéptidos derivados da região Fc de um anticorpo. São também incluídas formas truncadas de tais polipéptidos contendo a região de charneira que promove a dimerização. As proteínas de fusão compreendendo porções Fc (e oligómeros formados delas) oferecem a vantagem de uma purificação fácil por cromatografia de afinidade sobre as colunas de Proteína A ou Proteína G.

Um polipéptido Fc adequado, descrito no Pedido PCT WO93/10151 e Patente US N° 5426048 e N° 5262522, é um polipéptido de cadeia simples que se estende desde a região de charneira do terminal N até ao terminal C natural da região Fc de um anticorpo IgGl humano. Outro polipéptido Fc útil é a muteína Fc descrita na Patente US N°. 5457035 e em Baum et al. , (1994) EMBO J. _13_: 3992-4001. A sequência de aminoácidos desta muteina é idêntica à da sequência Fc natural apresentada no documento WO93/10151, exceto que o aminoácido 19 foi alterado de Leu para Ala, o aminoácido 20 foi alterado de Leu para Glu e o aminoácido 22 foi alterado de Gli para Ala. A muteina exibe afinidade reduzida para os recetores Fc.

Noutras formas de realização, a porção variável das cadeias pesada e/ou leve de uma proteína de ligação a antigénio, como aqui descrita, pode ser substituída pela porção variável de uma cadeia pesada e/ou leve de um anticorpo.

Alternativamente, o oligómero é uma proteína de fusão compreendendo proteínas múltiplas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, com ou sem ligandos peptídicos (péptidos espaçadores) . Entre os ligandos peptídicos adequados estão aqueles descritos na Patente US N° 4751180 e N° 4935233.

Outro método para preparar derivados oligoméricos compreendendo proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 envolve a utilização de um fecho de leucina. Os domínios do fecho de leucina são péptidos que promovem a oligomerização das proteínas nas quais são encontrados. Os fechos de leucina foram inicialmente identificados em várias proteínas de ligação ao ADN (Landschulz et al. , (1988) Science 240:1759) e, desde então, foram encontrados numa variedade de proteínas diferentes. Entre os fechos de leucina conhecidos estão os péptidos que ocorrem naturalmente e os seus derivados que dimerizam ou trimerizam. Exemplos de domínios de fecho de leucina adequados para a produção de proteínas oligoméricas solúveis são descritos em Pedido PCT W094/10308 e o fecho de leucina derivado da proteína D tensioativa pulmonar (SPD) descrita em Hoppe et al. , (1994) FEBS Letters 344:191. A utilização de um fecho de leucina modificado que permite a trimerização estável de uma proteína heteróloga fundida a esta é descrita em Fanslow et al. , (1994)

Semin. Immunol. _6:267-278. Numa abordagem, as proteínas de fusão recombinantes compreendendo um fragmento ou derivado de proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 é fundido com um péptido de fecho de leucina são expressos em células hospedeiras adequadas e os fragmentos ou derivados da proteína oligoméricas solúveis de ligação a antigénio que se formam são recuperados do sobrenadante da cultura.

Em determinadas formas de realização, a proteína de ligação a antigénio tem uma KD (afinidade de ligação de equilíbrio) inferior a 1 pM, 10 pM, 100 pM, 1 nM, 2 nM, 5 nM, 10 nM, 25 nM ou 50 nM.

Noutro aspeto, a presente divulgação proporciona uma proteína de ligação a antigénio com uma semi-vida in vitro ou in vivo de, pelo menos, um dia (e. g. , quando administrado a um indivíduo humano). Numa forma de realização, a proteína de ligação a antigénio tem uma semi-vida de, pelo menos, três dias. Noutra forma de realização, o anticorpo ou parte dele tem uma semi-vida de quatro dias ou mais. Noutra forma de realização, o anticorpo ou sua porção tem uma semi-vida de oito dias ou mais. Noutra forma de realização, o anticorpo ou sua porção tem uma semi-vida de dez dias ou mais. Noutra forma de realização, o anticorpo ou sua porção tem uma semi-vida de onze dias ou mais. Noutra forma de realização, o anticorpo ou sua porção tem uma semi-vida de quinze dias ou mais. Noutra forma de realização, o anticorpo ou a sua porção de ligação a antigénio é derivado ou modificado de tal modo que tem uma semi-vida mais longa quando comparada com o anticorpo não derivado ou não modificado. Noutra forma de realização, uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 contém mutações pontuais para aumentar a semi-vida no soro, tal como descrito no documento WO00/09560, publicado em 24 de Fev. de 2000.

Glicosilação

Uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 pode ter um padrão de glicosilação que é diferente ou alterado do encontrado nas espécies naturais. Como é conhecido na técnica, os padrões de glicosilação podem depender tanto da sequência da proteína (e. g., a presença ou ausência de resíduos de aminoácidos de glicosilação particulares, discutidos abaixo), ou a célula ou organismo hospedeiro no qual a proteína é produzida. Os sistemas de expressão particulares são discutidos abaixo. A glicosilação de polipéptidos é normalmente ligada ao N ou ligada ao 0. Ligado a N refere-se à ligação da porção de hidrato de carbono à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências tripeptídicas asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, em que X é qualquer aminoácido exceto a prolina, são as sequências de reconhecimento para ligação enzimática da porção de hidrato de carbono à cadeia lateral de asparagina. Assim, a presença de qualquer uma destas sequências tripeptídicas num polipéptido cria um potencial local de glicosilação. A glicosilação ligada ao 0 refere-se à ligação de um dos açúcares N-acetilgalactosamina, galactose ou xilose, a um hidroxiaminoácido, mais vulgarmente serina ou treonina, embora também se possa utilizar 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina. A adição de locais de glicosilação à proteína de ligação a antigénio é convenientemente conseguida alterando a sequência de aminoácidos, tal que contém uma ou mais das sequências tripeptídicas acima descritas (para locais de glicosilação ligados ao N). A alteração pode também ser feita pela adição ou substituição por um ou mais resíduos de serina ou treonina à sequência de partida (para locais de glicosilação ligados ao 0). Para facilidade, a sequência de aminoácidos da proteína de ligação a antigénio pode ser alterada através de alterações ao nível do ADN, particularmente por mutação do ADN codificando o polipéptido alvo em bases pré-selecionadas, de modo que se produzam codões que se traduzirão nos aminoácidos desejados.

Outro meio de aumentar o número de porções de hidrato de carbono na proteína de ligação a antigénio é por acoplamento químico ou enzimático de glicósidos à proteína. Estes procedimentos são vantajosos pelo facto de não exigirem a produção da proteína numa célula hospedeira que possua capacidades de glicosilação para a glicosilação ligada ao N e ao 0. Dependendo do modo de acoplamento utilizado, o ou os açúcares podem ser ligados a (a) arginina e histidina, (b) grupos carboxilo livres, (c) grupos sulfidrilo livres tais como os de cisteina, (d) grupos hidroxilo livres, tais como os de serina, treonina ou hidroxiprolina, (e) resíduos aromáticos tais como os da fenilalanina, tirosina ou triptofano, ou (f) o grupo amida de glutamina. Estes métodos são descritos no documento W087/05330 e em Aplin e Wriston, (1981) CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306. A remoção de porções de hidrato de carbono presentes na proteína de partida de ligação a antigénio pode ser realizada quimicamente ou enzimaticamente. A desglicosilação química requer a exposição da proteína ao composto ácido trifluorometanossulfónico, ou um composto equivalente. Este tratamento resulta na clivagem da maioria, ou de todos, os açúcares exceto o açúcar de ligação (N-acetilglucosamina ou N-acetilgalactosamina), deixando o polipéptido intacto. A desglicosilação química é descrita por Hakimuddin et al., (1987) Arch. Biochem. Biophys. 259:52 e por Edge et al., (1981) Anal. Biochem. 118:131. A clivagem enzimática de porções de hidrato de carbono em polipéptidos pode ser conseguida pela utilização de uma variedade de endo- e exo-glicosidases, como descrito por Thotakura et al., (1987) Meth. Enzymol. 138:350. A glicosilação em locais de glicosilação potenciais pode ser prevenida pela utilização do composto tunicamicina tal como descrito por Duskin et al. , (1982) J. Biol. Chem. 257:3105. A tunicamicina bloqueia a formação de ligações proteína-N-glicósido.

Assim, aspetos da presente divulgação incluem variantes de glicosilação de proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 em que o número e/ou tipo de local (s) de glicosilação foi alterado em comparação com as sequências de aminoácidos do polipéptido progenitor. Em determinadas formas de realização, as variantes de proteína de anticorpo compreendem um número maior ou menor de locais de glicosilação ligados ao N do que o anticorpo natural. Um local de glicosilação ligado ao N é caracterizado pela sequência: Asn-X-Ser ou Asn-X-Thr, em que o resíduo de aminoácido designado por X pode ser qualquer resíduo de aminoácido, exceto a prolina. A substituição de resíduos de aminoácidos para criar esta sequência, proporciona um potencial novo local para a adição de uma cadeia de hidratos de carbono ligada ao N. Alternativamente, as substituições que eliminam ou alteram esta sequência impedirão a adição de uma cadeia de hidratos de carbono ligada ao N, presente no polipéptido natural. Por exemplo, a glicosilação pode ser reduzida pela deleção de um Asn ou por substituição do Asn por um aminoácido diferente. Noutras formas de realização, são criados um ou mais novos locais ligados ao N. Os anticorpos têm, normalmente, um local de glicosilação ligado ao N na região Fc. Rótulos e Grupos Efetivos

Em algumas formas de realização, uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 compreende um ou mais marcadores. A expressão "grupo de rotulagem" ou o termo "marcador" significam qualquer marcador detetável. Exemplos de grupos de marcação adequados incluem, mas não estão limitados a, os seguintes: radioisótopos ou radionuclídeos (e. g. , 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, ιηΙη, 125I, 1 o 1 I), grupos fluorescentes (e. g. , FITC, rodamma, fosforos de lantanídeos), grupos enzimáticos (e. g. , peroxidase de rábano, β-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), grupos quimioluminescentes, grupos biotinilo ou epítopos polipéptidos predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (e. g. , sequências de pares de fechos de leucina, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metais, marcadores de epítopo) . Em algumas formas de realização, o grupo de marcação é acoplado à proteína de ligação a antigénio via braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial impedimento estérico. Vários métodos para rotular proteínas são conhecidos na técnica e podem ser utilizados como se considera adequado. A expressão "grupo efetor" significa qualquer grupo acoplado a uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a um (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 que atua como um agente citotóxico. Exemplos de grupos efetores adequados são radioisótopos ou radionuclídeos (e. g. , 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, OO i 1 ί 10c: -j q i

Tc, In, I, I) . Outros grupos adequados incluem toxinas, grupos terapêuticos ou grupos quimioterapêuticos. Exemplos de grupos adequados incluem caliqueamicina, auristatinas, geldanamicina e cantansina. Em algumas formas de realização, o grupo efetor é acoplado à proteína de ligação a antigénio via braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial impedimento estérico.

Em geral, os rótulos caem numa variedade de classes, dependendo do ensaio no qual eles serão detetados: a) rótulos isotópicos, que podem ser radioativos ou isótopos pesados; b) rótulos magnéticos (e. g. , partículas magnéticas); c) porções redox ativas; d) corantes ópticos; grupos enzimáticos (e. g. , peroxidase de rábano, β-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina); e) grupos biotinilados; e f) epítopos polipeptídicos predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (e. g., sequências de pares de fechos de leucina, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação a metais, marcadores de epítopo, etc.). Em algumas formas de realização, o grupo de marcação é acoplado à proteína de ligação a antigénio via braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial impedimento estérico. Vários métodos para rotular proteínas são conhecidos na técnica.

Os rótulos específicos incluem corantes óticos, incluindo, mas não se limitando a, cromóforos, fósforos e fluoróforos, sendo este último específico em muitos casos. Os fluoróforos podem ser fluorescentes de "molécula pequena" ou fluorescentes proteináceas.

Por "marcador fluorescente" entende-se qualquer molécula que possa ser detetada via suas propriedades fluorescentes inerentes. Os marcadores fluorescentes adequados incluem, mas não estão limitados a, fluoresceína, rodamina, tetrametilrodamina, eosina, eritrosina, cumarina, metilcumarinas, pireno, verde de Malacite, estilbeno, Amarelo Lucifer, Azul Cascata, Vermelho Texas, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, Vermelho LC 640, Cy 5, Cy 5,5, Vermelho LC 705, Verde Oregon, os corantes Alexa Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa

Fluor 594, Alexa Fluor 633 , Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), Azul Cascade, Amarelo Cascade e R-ficoeritrina (PE) (Molecular Probes, Eugene, OR) , FITC, Rodamina e Vermelho Texas (Pierce, Rockford, IL) Cy5, Cy5.5, Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA) . Os corantes óticos adequados, incluindo fluoróforos, estão descritos em Molecular Probes Handbook por Richard P. Haugland.

Os rótulos proteináceos fluorescentes adequados também incluem, mas não estão limitados a, proteína verde fluorescente, incluindo espécies de GFP Renilla, Ptilosarcus ou Aequorea (Chalfie et al., (1994) Science 263:802-805), EGFP (Clontech Labs., Inc., Número de Acesso Genbank U55762), proteína fluorescente azul (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc., Quebec, Canadá; Stauber, (1998) Biotechniques 2_4:462-471 Heim et al., (1996) Curr. Biol. _6:178-182), proteína fluorescente amarela aumentada (EYFP, Clontech Labs., Inc.), luciferase (Ichiki et al. , (1993) J. Immunol. 150:5408-5417) , β-galactosidase (Nolan et al. , (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 85:2603-2 607) E Renilla (documentos W092/15673, WO95/07463, WO98/14605, W098/26277, WO99/49019, Patentes US N°. 5292658, N°. 5418155, N°. 5683888, N° . 5741668, N° . 5777079, N° . 5804387, N° . 5874304, N° . 5876995, N°. 5925558) .

Preparação de Proteínas de Ligação a antigénio

Os anticorpos não humanos que são proporcionados podem ser, por exemplo, derivados de qualquer animal produtor de anticorpos, tais como ratinho, rato, coelho, cabra, burro ou primata não humano (tais como macaco e. g., Cynomolgus ou macaco Rhesus) ou macaco (e. q., chimpanzé)). Os anticorpos não humanos podem ser utilizados, por exemplo, em cultura in vitro de células e aplicações baseadas na cultura de células, ou qualquer outra aplicação em que uma resposta imunitária ao anticorpo não ocorra ou seja insignificante, possa ser prevenida, não seja uma preocupação ou seja desejada. Em determinadas formas de realização, os anticorpos podem ser produzidos por imunização com β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4 (Exemplo 1) completos, com o domínio extracelular de β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4 (Exemplo 2), ou duas de β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 (Exemplo 1), com células inteiras expressando FGFRlc, β-Klotho ou ambos FGFRlc e β-Klotho (Exemplo 1 e 3) , com membranas preparadas de células expressando FGFRlc, β-Klotho ou ambos FGFRlc e (β-Klotho (Exemplo 1 e 3) , com proteínas de fusão, e. g. , fusões Fc compreendendo FGFRlc, β-Klotho ou FGFRlc e β-Klotho (ou os seus domínios extracelulares) fundidas a Fc (Exemplo 2 e 3) e outros métodos conhecidos na técnica, e. g. , como descrito nos Exemplos aqui apresentados. Alternativamente, determinados anticorpos não humanos podem ser aumentados por imunização com aminoácidos que são segmentos de um ou mais de β-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4 que fazem parte do epítopo ao qual se ligam determinados anticorpos aqui proporcionados. Os anticorpos podem ser policlonais, monoclonais ou podem ser sintetizados em células hospedeiras por expressão de ADN recombinante.

Os anticorpos totalmente humanos podem ser preparados como descrito acima, por imunização de animais transgénicos contendo loci de imunoglobulina humana ou por seleção de uma biblioteca de exibição de fagos que está a expressar um repertório de anticorpos humanos.

Os anticorpos monoclonais (mAbs) podem ser produzidos por uma variedade de técnicas, incluindo a metodologia de anticorpo monoclonal convencional, e. g. , a técnica padrão de hibridização de células somáticas Kohler e Milstein, (1975) Nature 256:495. Alternativamente, podem ser empregues outras técnicas para a produção de anticorpos monoclonais, por exemplo, a transformação virai ou oncogénica de linfócitos B. Um sistema animal adequado para a preparação de hibridomas é o sistema murino, o qual é um procedimento muito bem estabelecido. Os protocolos e técnicas de imunização para o isolamento de esplenócitos imunizados para fusão são conhecidos na técnica. Para tais procedimentos, as células B imunizadas de ratinhos são fundidas com um parceiro de fusão imortalizado adequado, tal como uma linha celular de mieloma murino. Se desejado, os ratos ou outros mamíferos podem ser imunizados em vez de ratinhos e as células B destes animais podem ser fundidas com a linha celular de mieloma murino para formar hibridomas. Alternativamente, pode ser utilizada uma linha celular de mieloma de uma fonte diferente de ratinho. Os procedimentos de fusão para a preparação de hibridomas também são bem conhecidos. A tecnologia SLAM também pode ser empregue na produção de anticorpos.

Os anticorpos de cadeia simples que são proporcionados podem ser formados ligando fragmentos de domínio variável de cadeia pesada e leve (região Fv) via uma ponte de aminoácidos (ligando peptídico curto), resultando numa única cadeia polipeptídica. Estes Fv de cadeia simples (scFv) podem ser preparados por fusão de ADN codificando um ligando peptídico entre ADN codificando os dois polipéptidos de domínio variável (VL e VH) . Os polipéptidos resultantes podem voltar a dobrar-se sobre si próprios para formar monómeros de ligação a antigénio, ou podem formar multímeros (e. g. , dímeros, trímeros ou tetrâmeros), dependendo do comprimento de um ligador flexível entre os dois domínios variáveis (Kortt et al., (1997) Prot.

Eng. 1_0:423; Kortt et al., (2001) Biomol. Eng. 18: 95-108) .

Combinando diferentes polipéptidos compreendendo VL e VH, pode-se formar scFv multiméricos que se ligam a diferentes epítopos (Kriangkum et al. , (2001) Biomol. Eng. l_8:31-40). As técnicas

desenvolvidas para a produção de anticorpos de cadeia única incluem as descritas na Pat. US N° 4946778; Bird, (1988) Science 2 42:423; Huston et al. , (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 8_5:5879; Ward et al., (1989) Nature 334:544, De Graaf et al., (2002) Methods Mol Biol. 178:379-387. Os anticorpos de cadeia única derivados de anticorpos aqui proporcionados incluem, mas não estão limitados a scFv compreendendo as combinações de domínio variável das regiões variáveis de cadeia pesada e leve ilustradas na Tabela 2 ou combinações de domínios variáveis de cadeia leve e pesada que incluem CDR ilustradas nas Tabelas 3 e 4.

Os anticorpos aqui proporcionados que são de uma subclasse podem ser alterados para anticorpos de uma subclasse diferente utilizando métodos de comutação de subclasse. Assim, os anticorpos IgG podem ser derivados de um anticorpo IgM, por exemplo, e vice-versa. Tais técnicas permitem a preparação de novos anticorpos que possuem as propriedades de ligação a antigénio de um determinado anticorpo (o anticorpo progenitor) , mas também exibem propriedades biológicas associadas a um isótipo ou subclasse de anticorpo diferente do do anticorpo progenitor. Podem ser empregues técnicas de ADN recombinante. O ADN clonado codificando polipéptidos de anticorpos particulares pode ser utilizado nestes procedimentos, e. g. , ADN codificando o domínio constante de um anticorpo do isótipo desejado. Ver, e. g. , Lantto et al., (2002) Methods Mol. Biol. 178:303-316.

Em conformidade, os anticorpos que são proporcionados incluem aqueles compreendendo, por exemplo, as combinações de dominio variável descritas, supra, com um isótipo desejado (por exemplo, IgA, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgE e IgD) bem como os seus fragmentos Fab ou F(ab')2· Além disso, se for desejada uma IgG4, também pode ser desejada a introdução de uma mutação pontual (CPSCP-> CPPCP (SEQ ID N°: 380-381, respetivamente, por ordem de aparência)) na região de dobradadiça, como descrito em Bloom et al., (1997) Protein Science _6:407) para aliviar uma tendência para formar ligações dissulfureto intra-H que podem levar a heterogeneidade nos anticorpos IgG4.

Além disso, técnicas para derivar anticorpos com propriedades diferentes (i. e., diferentes afinidades para o antigénio ao qual se ligam) são também conhecidos. Uma tal técnica, referida como encadeamento de cadeia, envolve a apresentação de repertórios de genes de dominio variável de imunoglobulina na superfície do bacteriófago filamentoso, frequentemente referido como exibição de fagos. A mistura de cadeias foi utilizada para preparar anticorpos de elevada afinidade para o hapteno 2-feniloxazol-5-ona, como descrito por Marks et al., (1992) Biotechnology 10:779.

Podem ser feitas modificações conservadoras nas regiões variáveis de cadeia pesada e leve descritas na Tabela 2, ou nas CDR descritas nas Tabelas 3A e 3B, 4A e 4B e na Tabela 6C, infra (e modificações correspondentes aos ácidos nucleicos de codificação) para produzir uma proteína de ligação a antigénio possuindo características funcionais e bioquímicas. Os métodos para alcançar tais modificações são descritos acima.

As proteínas de ligação a antigénio que se ligam especif icamente a um ou mais de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 podem ser ainda modificados de vários modos. Por exemplo, se pretendem ser utilizados para fins terapêuticos, podem ser conjugados com polietilenoglicol (PEGuilado) para prolongar a semi-vida no soro ou para aumentar a libertação de proteínas. Alternativamente, a região V dos anticorpos objeto ou os seus fragmentos pode ser fundida com a região Fc de uma molécula de anticorpo diferente. A região Fc utilizada para este fim pode ser modificada para que não se ligue ao complemento, reduzindo assim a probabilidade de indução da lise celular no doente quando a proteína de fusão é utilizada como agente terapêutico. Além disso, os anticorpos em questão, ou os seus fragmentos funcionais, podem ser conjugados com albumina de soro humano para aumentar a semi-vida no soro do anticorpo ou seu fragmento. Outro parceiro de fusão útil para as proteínas de ligação a antigénio ou os seus fragmentos é a transtirretina (TTR). A TTR tem a capacidade de formar um tetrâmero, assim uma proteína de fusão anticorpo-TTR pode formar um anticorpo multivalente que pode aumentar a sua avidez de ligação.

Alternativamente, modificações substanciais nas características funcionais e/ou bioquímicas das proteínas de ligação a antigénio aqui descritas podem ser conseguidas criando substituições na sequência de aminoácidos das cadeias pesada e leve que diferem significativamente no seu efeito na manutenção (a) da estrutura do esqueleto molecular na área da substituição, por exemplo, como uma conformação em folha ou helicoidal, (b) a carga ou hidrofobicidade da molécula no local alvo, ou (c) o volume da cadeia lateral. Uma "substituição conservadora de aminoácidos" pode envolver uma substituição de um resíduo de aminoácido natural com um resíduo não natural que tem pouco ou nenhum efeito na polaridade ou carga do resíduo de aminoácido nessa posição. Ver, Tabela 5, supra. Além disso, qualquer resíduo natural no polipéptido pode também ser substituído com alanina, tal como foi anteriormente descrito para a mutagénese de varrimento de alanina.

As substituições de aminoácidos (conservadoras ou não conservadoras) dos anticorpos em questão podem ser implementadas pelos especialistas na técnica aplicando técnicas de rotina. As substituições de aminoácidos podem ser utilizadas para identificar resíduos importantes dos anticorpos aqui proporcionados, ou para aumentar ou diminuir a afinidade destes anticorpos para um ou mais de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 ou para modificar a afinidade de ligação de outras proteínas de ligação a antigénio aqui descritas. Métodos de Expressão de Proteínas de Ligação a antigénio São também aqui proporcionados sistemas de expressão e construções na forma de plasmídeos, vetores de expressão, cassetes de transcrição ou expressão que compreendem, pelo menos, um polinucleótido como descrito acima, bem como células hospedeiras compreendendo tais sistemas ou construções de expressão.

As proteínas de ligação a antigénio aqui proporcionadas podem ser preparadas por qualquer uma de várias técnicas convencionais. Por exemplo, as proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 podem ser produzidas por sistemas de expressão recombinantes, utilizando qualquer técnica conhecida na técnica. Ver, e. g. , anticorpos monoclonais, hibridomas: uma nova dimensão em análises biológicas, Rennet et al., (Eds.) Plenum Press, Nova Iorque (1980); e Antibodies: A Laboratory Manual , Harlow e Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.I. (1988) .

As proteínas de ligação a antigénio podem ser expressas em linhas celulares de hibridoma (e. g. , em particular anticorpos podem ser expressos em hibridomas) ou em linhas celulares diferentes de hibridomas. As construções de expressão codificando os anticorpos podem ser utilizadas para transformar uma célula hospedeira de mamífero, de inseto ou microbiana. A transformação pode ser realizada utilizando qualquer método conhecido para a introdução de polinucleótidos numa célula hospedeira, incluindo, por exemplo, empacotamento do polinucleótido num vírus ou bacteriófago e transdução de uma célula hospedeira com a construção por processos de transfeção conhecidos na técnica, como exemplificado pelas Patentes US N° 4399216; N° 4912040; N° 4740461; N° 4959455. O procedimento de transformação ótimo utilizado dependerá do tipo de célula hospedeira que está a ser transformada. Os métodos para a introdução de polinucleótidos heterólogos em células de mamífero são bem conhecidos na técnica e incluem, mas não estão limitados a, transfeção mediada por dextrano, precipitação com fosfato de cálcio, transfeção mediada por polibreno, fusão de protoplastos, eletroporação, encapsulação do(s) polinucleótido (s) em lipossomas, mistura de ácido nucleico com lípidos carregados positivamente e microinjeção direta do ADN em núcleos.

As construções de expressão recombinante compreendem normalmente uma molécula de ácido nucleico codificando um polipéptido compreendendo um ou mais dos seguintes: um ou mais CDR aqui proporcionados; uma região constante de cadeia leve; uma região variável de cadeia leve; uma região constante de cadeia pesada (e. g. , CH1, CH2 e/ou CH3) ; e/ou outra porção de suporte de uma proteína de ligação a antigénio. Estas sequências de ácido nucleico são inseridas num vetor de expressão apropriado utilizando técnicas de ligação convencionais. Numa forma de realizaçção, a região constante da cadeia pesada ou leve é anexada ao terminal C da cadeia pesada ou leve específica de anti^-Klotho, -FGFRlc, -FGFR2c, -FGFR3c, -FGFR4 ou β-Klotho e FGFRlc variável e é ligada num vetor de expressão. 0 vetor é normalmente selecionado para ser funcional na célula hospedeira particular empregue (i. e., o vetor é compatível com a maquinaria da célula hospedeira, permitindo que a amplificação e/ou a expressão do gene possam ocorrer). Em algumas formas de realização, são utilizados vetores que empregam ensaios de complementação de fragmentos de proteínas utilizando repórteres de proteínas, tal como di-hidrofolato redutase (ver, por exemplo, Pat. US N° 6270964). Os vetores de expressão adequados podem ser adquiridos, por exemplo, da Invitrogen Life

Technologies ou da BD Biosciences (anteriormente denominada "Clontech"). Outros vetores úteis para clonagem e expressão dos anticorpos e fragmentos incluem os descritos em Bianchi e McGrew, (2003) Biotech. Biotechnol. Bioeng. 8_4:439-44. Os vetores de expressão adicionais adequados são discutidos, por exemplo, em Methods Enzymol. , Vol. 185 (D. V. Goeddel, ed.), 1990, Nova Iorque: Academic Press.

Normalmente, os vetores de expressão utilizados em qualquer das células hospedeiras conterão sequências para a manutenção do plasmídeo e para a clonagem e expressão da SEQuências de nucleótidos exógenas. Tais sequências, referidas coletivamente como "sequências flanqueadoras", em determinadas formas de realização, normalmente incluirão uma ou mais das seguintes sequências nucleotídicas: um promotor, uma ou mais sequências intensificadoras, uma origem de replicação, uma sequência do terminal de transcrição, uma sequência de intrão completa contendo uma série que codifica uma sequência líder para a secreção de polipéptidos, um local de ligação de ribossoma, uma sequência de poliadenilação, uma região de poli-ligação para inserir o ácido nucleico codificando o polipéptido a ser expresso e um elemento marcador selecionável. Cada uma destas sequências é discutida abaixo.

Opcionalmente, o vetor pode conter uma sequência de codificaçãoo "tag" i. e., uma molécula oligonucleotídica localizada na extremidade 5' ou 3' de uma sequência codificadora de proteína de ligação a antigénio; a sequência oligonucleotídica codifica poliHis (tal como hexaHis (SEQ ID N° : 382)), ou outra "marca", tal como FLAG, HA (vírus da gripe hemaglutinina) ou myc, para os quais existem anticorpos comercialmente disponíveis. Este rótulo é normalmente fundido ao polipéptido após expressão do polipéptido e pode servir como um meio para purificação por afinidade ou deteção da proteína de ligação a antigénio da célula hospedeira. A purificação por afinidade pode ser realizada, por exemplo, por cromatografia em coluna utilizando anticorpos contra o marcador como uma matriz de afinidade. Opcionalmente, o marcador pode, subsequentemente, ser removido da proteína de ligação a antigénio purificada por vários meios, tais como a utilização de determinadas peptidases para clivagem.

As sequências flanqueadoras podem ser homólogas (i. e., da mesma espécie e/ou estirpe que a célula hospedeira), heteróloga (i. e.f de uma espécie diferente da espécie ou estirpe da célula hospedeira), híbrido (i. e., uma combinação da sequências flanqueadoras de mais de uma fonte), sintética ou natural. Como tal, a fonte de uma sequência flanqueadora pode ser qualquer organismo procariótico ou eucariótico, qualquer organismo vertebrado ou invertebrado, ou qualquer planta, desde que a sequência flanqueadora seja funcional e possa ser ativada pela maquinaria da célula hospedeira.

As sequências flanqueadoras úteis nos vetores podem ser obtidas por qualquer um dos vários métodos bem conhecidos na técnica. Normalmente, as sequências flanqueadoras úteis neste documento terão sido previamente identificadas por mapeamento e/ou por digestão com endonucleases de restrição e podem assim ser isoladas da fonte de tecido apropriada, utilizando as endonucleases de restrição apropriadas. Em alguns casos, a sequência completa de nucleótidos de uma sequência flanqueadora pode ser conhecida. Aqui, a sequência flanqueadora pode ser sintetizada utilizando os métodos aqui descritos para síntese ou clonagem de ácidos nucleicos.

Se a totalidade ou apenas uma porção da sequência flanqueadora é conhecida, pode ser obtida utilizando a reação em cadeia com polimerase (PCR) e/ou rastreando uma biblioteca genómica com uma sonda adequada, tal como um oligonucleótido e/ou fragmento da sequência flanqueadora da mesma ou outra espécie. Quando a sequência flanqueadora não é conhecida, um fragmento de ADN contendo uma sequência flanqueadora pode ser isolado de um pedaço maior de ADN que pode conter, por exemplo, uma sequência codificadora ou mesmo outro gene ou genes. 0 isolamento pode ser conseguido por digestão com endonucleases de restrição para produzir o fragmento de ADN apropriado seguido de isolamento utilizando purificação em gel de agarose, Qiagen® (Chatsworth, CA) , ou outros métodos conhecidos do especialista na técnica. A seleção de enzimas adequadas para realizar este objetivo será prontamente evidente para um especialista na técnica.

Uma origem de replicação é normalmente uma parte dos vetores de expressão procarióticos adquiridos comercialmente e a origem ajuda na amplificação do vetor numa célula hospedeira. Se o vetor de escolha não contiver um local de origem de replicação, pode-se sintetizar quimicamente com base numa sequência conhecida, e ligar-se ao vetor. Por exemplo, a origem da replicação do plasmideo pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA) é adequada para a maioria das bactérias gram-negativas e várias origens virais (e. g. , SV40, polioma, adenovirus, virus da estomatite vesicular (VSV) ou papilomavírus, tais como HPV ou BPV) são úteis para clonagem de vetores em células de mamífero. Geralmente, a origem do componente de replicação não é necessária para vetores de expressão de mamíferos (por exemplo, a origem de SV40 é frequentemente utilizada apenas porque também contém o promotor precoce do vírus).

Uma sequência do terminal da transcrição é normalmente localizada a 3' da extremidade de uma região codificadora de polipéptido e serve para terminar a transcrição. Normalmente, uma sequência do terminal da transcrição em células procarióticas é um fragmento rico em G-C seguido por uma sequência poli-T. Embora a sequência seja facilmente clonada de uma biblioteca ou mesmo adquirida comercialmente como parte de um vetor, também pode ser prontamente sintetizada utilizando métodos para sintese de ácidos nucleicos, tal como os aqui descritos.

Um gene marcador selecionável codifica uma proteína necessária para a sobrevivência e crescimento de uma célula hospedeira cultivada num meio de cultura seletivo. Os genes marcadores de seleção típicos codificam proteínas que (a) conferem resistência a antibióticos ou outras toxinas, e. g. , ampicilina, tetraciclina ou canamicina para células hospedeiras procarióticas; (b) complementar as deficiências auxotróficas da célula; ou (c) proporcionar nutrientes críticos não disponíveis de meios complexos ou definidos. Os marcadores seletivos específicos são o gene de resistência à canamicina, o gene de resistência à ampicilina e o gene de resistência à tetraciclina. Vantajosamente, um gene de resistência à neomicina pode também ser utilizado para seleção em células hospedeiras procarióticas e eucarióticas.

Outros genes selecionáveis podem ser utilizados para amplificar o gene que será expresso. A amplificação é o processo em que os genes que são necessários para a produção de uma proteína crítica para o crescimento ou a sobrevivência das células são reiterados em conjunto dentro dos cromossomas de sucessivas gerações de células recombinantes. Exemplos de marcadores seleccionáveis adequados para células de mamífero incluem di-hidrofolato redutase (DHFR) e genes de timidina-cinase sem promotor. Os transformantes de células de mamífero são colocados sob pressão de seleção em que apenas os transformantes são adaptados de forma única para sobreviver em virtude do gene selecionável presente no vetor. A pressão de seleção é imposta pela cultura das células transformadas sob condições em que a concentração do agente de seleção no meio é sucessivamente aumentada, conduzindo assim à amplificação do gene selecionável e do ADN codificando outro gene, tal como uma proteína de ligação a antigénio que se liga a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Como resultado, as quantidades aumentadas de um polipéptido tal como uma proteína de ligação a antigénio são sintetizadas do ADN amplificado.

Um local de ligação ao ribossoma é normalmente necessário para a iniciação da tradução do ARNm e é caracterizado por uma sequência Shine-Dalgarno (procariotas) ou uma sequência Kozak (eucariotas). 0 elemento está normalmente localizado a 3' do promotor e 5' da sequência codificante do polipéptido a ser expressa.

Em alguns casos, como onde a glicosilação é desejada num sistema de expressão de células hospedeiras eucarióticas, pode-se manipular as várias pré ou pro-sequências para melhorar a glicosilação ou rendimento. Por exemplo, pode-se alterar o local de clivagem de peptidase de um péptido de sinal particular, ou adicionar prosequências, que também podem afetar a glicosilação. 0 produto proteico final pode ter, na posição 1 (em relação ao primeiro aminoácido da proteína madura), um ou mais aminoácidos adicionais incidentes na expressão, os quais podem não ter sido totalmente removidos. Por exemplo, o produto proteico final pode ter um ou dois resíduos de aminoácidos encontrados no local de clivagem da peptidase, ligado ao terminal amino. Alternativamente, a utilização de alguns locais de clivagem enzimática pode resultar numa forma ligeiramente truncada do polipéptido desejado, se a enzima cortar nessa área dentro do polipéptido maduro. A expressão e clonagem conterão normalmente um promotor que é reconhecido pelo organismo hospedeiro e operacionalmente ligado à molécula codificando uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Os promotores são sequências não transcritas localizadas a montante (i. e.r 5') do codão de iniciação de um gene estrutural (geralmente dentro de cerca de 100 a 1000 pb) que controlam a transcrição do gene estrutural. Os promotores são convencionalmente agrupados numa das duas classes: promotores indutíveis e promotores constitutivos. Os promotores indutíveis iniciam níveis aumentados de transcrição do ADN sob o seu controlo, em resposta a alguma alteração nas condições de cultura, tais como a presença ou ausência de um nutriente ou uma alteração na temperatura. Os promotores constitutivos, por outro lado, transcrevem uniformemente um gene ao qual estão ligados funcionalmente, isto é, com pouco ou nenhum controlo sobre a expressão genética. Um grande número de promotores, reconhecidos por uma variedade de potenciais células hospedeiras, são bem conhecidos. Um promotor adequado está operacionalmente ligado ao ADN codificando a cadeia pesada ou cadeia leve compreendendo uma proteína de ligação a antigénio removendo o promotor do ADN de origem por digestão com enzimas de restrição e inserindo a sequência promotora desejada no vetor.

Os promotores adequados para utilização com hospedeiros de levedura são também bem conhecidos na técnica. Os intensificadores de levedura são vantajosamente utilizados com promotores de levedura. Os promotores adequados para utilização com células hospedeiras de mamíferos são bem conhecidos e incluem, mas não estão limitados a, aqueles obtidos dos genomas de vírus, tais como vírus de polioma, vírus de varíola, adenovirus (tal como Adenovirus 2), vírus de papiloma bovino, vírus de sarcoma aviário, citomegalovírus, retrovirus, vírus da hepatite B e vírus Simian 40 (SV40). Outros promotores mamíferos adequados incluem promotores de mamíferos heterólogos, por exemplo, promotores de choque térmico e o promotor de actina.

Os promotores adicionais que podem ser de interesse incluem, mas não estão limitados a: promotor precoce de SV40 (Benoist e Chambon, (1981) Nature 290:304-310); Promotor CMV (Thornsen et al. , (1984) Proc. Natl. Acad. USA 8_1:659-663) ; o promotor contido na repetição do terminal longo 3' do vírus do sarcoma de Rous (Yamamoto et al. , (1980) Cell 22:787-797); promotor da timidina cinase de herpes (Wagner et al., (1981) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 7_8:1444-1445) ; promotor e sequências reguladoras do gene da metalotionina (Prinster et al., (1982) Nature 296:39-42); e promotores procarióticos, tais como o promotor de beta-lactamase (Villa-Kamaroff et al., (1978) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 7_5:3727-3731) ; ou o promotor tac (DeBoer et al. , (1983) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 8_0:21-25). Igualmente interessantes são as seguintes regiões de controlo de transcrição animal, as quais exibem especificidade tecidular e foram utilizadas em animais transgénicos: a região de controlo do gene da elastase I que é ativa em células acinares pancreáticas (Swift et al. , (1984) Cell 3_8:639-646; Ornitz et al., (1986) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409;

MacDonald, (1987) Hepatology 1_: 425-515); a região de controlo do gene da insulina que é ativa nas células beta pancreáticas (Hanahan, (1985) Nature 315:115-122) ; a região de controlo do gene da imunoglobulina que é ativa nas células linfóides (Grosschedl et al. , (1984) Cell 3_8: 647-658; Adames et al. , (1985) Nature 318:533-538; Alexander et al., (1987) Mol. Cell. Biol. 1_: 1436-1444) ; a região de controlo do virus de tumor mamário de ratinho que é ativa em células testiculares, de mama, linfóides e mastócitos (Leder et al. , (1986) Cell _45g 485-495) ; a região de controlo do gene da albumina que é ativa no fígado (Pinkert et al. , (1987) Genes and Devei. JL:268-276); a região de controlo do gene da alfa-feto-proteína que é ativa no fígado (Krumlauf et al. , (1985) Mol. Cell. Biol. _5:1639-1648; Hammer et al., (1987) Science 253:53-58); a região de controlo do gene da alfa 1-antitripsina que é ativa no fígado (Kelsey et al., (1987) Genes and Devei. JL:161-171); a região de controlo do gene da beta-globina que é ativa nas células mielóides (Mogram et al. , (1985) Nature 315:338-340; Kollias et al., (1986) Cell 4_6: 89-94); a região de controlo do gene da proteína básica da mielina que é ativa em células oligodendrócitas no cérebro (Readhead et al. , (1987) Cell _48_: 703-712) ; a região de controlo do gene da cadeia leve 2 da miosina que é ativa no músculo esquelético (Sani, (1985) Nature 314:283-286); e a região de controlo do gene da hormona libertadora gonadotrófica que é activa no hipotálamo (Mason et al., (1986) Science 234:1372-1378) .

Uma sequência potenciadora pode ser inserida no vetor para aumentar a transcrição de ADN codificando a cadeia leve ou cadeia pesada compreendendo uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 por eucariotas superiores, e. g. , uma proteína de ligação a antigénio humano que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e urn de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Os potenciadores são elementos que atuam em cis de ADN, normalmente cerca de 10-300 pb de comprimento, os quais atuam sobre o promotor para aumentar a transcrição. Os intensificadores são relativamente orientadores e independentes da posição, tendo sido encontrados nas posições 5' e 3' da unidade de transcrição. São conhecidas várias sequências potenciadoras disponíveis de genes de mamíferos (e. g. , globina, elastase, albumina, alfa-feto-proteína e insulina). Normalmente, contudo, é utilizado um intensificador de um vírus. O intensificador de SV40, o estimulador do promotor precoce de citomegalovírus, o potenciador de polioma e os intensificadores de adenovirus, conhecidos na técnica, são elementos de reforço exemplares para a ativação de promotores eucarióticos. Embora um intensificador possa ser posicionado no vetor ou 5' ou 3' para uma sequência de codificação, está normalmente localizado num local 5' do promotor. Uma sequência codificando uma sequência de sinal apropriada natural ou heteróloga (sequência líder ou péptido sinal) pode ser incorporada num vetor de expressão, para promover a secreção extracelular do anticorpo. A escolha do péptido sinal ou líder depende do tipo de células hospedeiras nas quais o anticorpo deve ser produzido e uma sequência sinal heteróloga pode substituir a sequência sinal nativa. Exemplos de péptidos de sinal que são funcionais em células hospedeiras de mamífero incluem o seguinte: a sequência de sinal para interleucina-7 (IL-7) descrita na Patente US N° 4965195; a sequência de sinal para o recetor de interleucina-2 descrito em Cosman et al., (1984) Nature 312:768; o péptido sinal recetor de interleucina-4 descrito na Patente EP N° 0367566; o péptido de sinal recetor de interleucina-1 tipo I descrito na Patente US N° . 4968607; o

péptido de sinal do recetor de interleucina-1 de tipo II descrito na Patente EP N° 0460846.

Os vetores de expressão que são proporcionados podem ser construídos de um vetor de partida tal como um vetor comercialmente disponível. Tais vetores podem, mas não necessitam, conter todas as sequências flanqueadoras desejadas. Quando uma ou mais das sequências flanqueadoras aqui descritas não estão já presentes no vetor, podem ser individualmente obtidas e ligadas no vetor. Os métodos utilizados para obter cada uma das sequências flanqueadoras são bem conhecidos dos especialistas na técnica.

Depois do vetor ter sido construído e uma molécula de ácido nucleico codificando uma cadeia leve, uma cadeia pesada, ou uma cadeia leve e uma cadeia pesada compreendendo uma proteína de ligação a antigénio que se liga especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 foi inserido no local apropriado do vetor, o vetor completado pode ser inserido numa célula hospedeira adequada para amplificação e/ou expressão de polipéptido . A transformação de um vetor de expressão para uma proteína de ligação a antigénio numa célula hospedeira selecionada, pode ser realizada por métodos bem conhecidos incluindo transfeção, infeção, co-precipitação de fosfato de cálcio, electroporação, microinjeção, lipofeção, transfeção mediada por DEAE-dextrano ou outras técnicas conhecidas. O método selecionado será, em parte, uma função do tipo de célula hospedeira a ser utilizada. Estes métodos e outros métodos adequados são bem conhecidos dos especialistas na técnica e são apresentados, por exemplo, em Sambrook et ai., (2001), supra.

Uma célula hospedeira, quando cultivada sob condições apropriadas, sintetiza uma proteína de ligação a antigénio que pode ser subsequentemente recolhida do meio de cultura (se a célula hospedeira segrega no meio) ou diretamente da célula hospedeira que a produz (se não for segregada) . A seleção de uma célula hospedeira apropriada dependerá de vários fatores, tais como os níveis de expressão desejados, modificações de polipéptidos que são desejáveis ou necessários para a atividade (tais como glicosilação ou fosforilação) e facilidade de dobramento numa molécula biologicamente ativa.

As linhas celulares de mamífero disponíveis como hospedeiros para expressão são bem conhecidas na técnica e incluem, mas não estão limitadas a, linhas celulares imortalizadas disponíveis da American Type Culture Collection (ATCC), incluindo, mas não estando limitadas a, células de ovário de hamster chinês (CHO), células HeLa, células de rim de hamster bebé (BHK), células de rim de macaco (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (e. g. , Hep G2), e um número de outras linhas celulares. Em determinadas formas de realização, as linhas celulares podem ser selecionadas através da determinação de quais linhas celulares têm níveis de expressão elevados e produzem constitutivamente proteínas de ligação a antigénio com propriedades de ligação desejáveis (e. g., a

capacidade de se ligar a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4). Noutra forma de realização, pode ser selecionada uma linha celular da linhagem de células B que não produz o seu próprio anticorpo mas tem capacidade para produzir e segregar um anticorpo heterólogo. A capacidade de induzir a sinalização tipo FGF21 pode também formar um critério de seleção.

Utilizações de Proteínas de Ligação a antigénio para Fins de Diagnóstico e Terapêuticos

As proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas são úteis para detetar (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 em amostras biológicas e identificação de células ou tecidos que produzem um ou mais de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Por exemplo, as proteínas de ligação a antigénio aqui divulgadas podem ser utilizadas em ensaios de diagnóstico, e. g., ensaios de ligação para detetar e/ou quantificar (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 expresso num tecido ou célula. Podem ser utilizadas proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 no tratamento de doenças relacionadas com a sinalização tipo FGF21 num doente com necessidade, tais como diabetes tipo 2, obesidade, dislipidémia, NASH, doença cardiovascular e síndrome metabólico. Formando um complexo de sinalização compreendendo uma proteína de ligação a antigénio, e (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, a atividade in vivo de FGF21, o qual se associa in vivo com FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, FGFR4 e β-Klotho para iniciar a sinalização, pode ser imitado e/ou melhorado, levando a efeitos terapêuticos.

Indicações

Uma doença ou estado associado com FGF21 humano inclui qualquer doença ou condição cujo inicio num doente seja causado, pelo menos em parte, pela indução da sinalização tipo FGF21, iniciada in vivo pela formação de um complexo compreendendo FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4 e β-Klotho e FGF21. A gravidade da doença ou estado também pode ser diminuído pela indução de sinalização tipo FGF21. Exemplos de doenças e estados que podem ser tratados com as proteínas de ligação a antigénio incluem diabetes tipo 2, obesidade, dislipidémia, NASH, doença cardiovascular e síndrome metabólico.

As proteínas de ligação a antigénio aqui descritas podem ser utilizadas para tratar diabetes tipo 2, obesidade, dislipidémia, NASH, doença cardiovascular e síndrome metabólico, ou podem ser utilizadas como tratamento profilático administrado, por exemplo, diariamente, semanalmente, quinzenalmente, mensalmente, bimestralmente, bianualmente, etc., para prevenir ou reduzir a frequência e/ou a gravidade dos sintomas, por exemplo, níveis elevados de glucose no plasma, níveis elevados de triglicéridos e colesterol, proporcionando assim um perfil glicémico e de risco cardiovascular melhorado. Métodos de diagnóstico

As proteínas de ligação a antigénio aqui descritas podem ser utilizadas para fins de diagnóstico para detetar, diagnosticar ou monitorizar doenças e/ou condições associadas a FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, FGFR4, β-Klotho, FGF21 ou suas combinações. São também proporcionados métodos para a deteção da presença de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 numa amostra utilizando métodos imuno-histológicos clássicos conhecidos dos especialistas na técnica (e. g. , Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassay, Vol. 15 (Eds R.H. Burdon e P.H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdsou); Zola, (1987) Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc.); Jalkanen et al. , (1985) J. Cell. Biol. 101:976-985; Jalkanen et al., (1987) J. Cell Biol. 105:3087-3096) . Pode ser realizada a deteção de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e urn de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 in vivo ou in vitro.

As aplicações de diagnóstico aqui proporcionadas incluem a utilização das proteínas de ligação a antigénio para detetar a expressão de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 e/ou ligação a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Exemplos de métodos úteis na deteção da presença de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 incluem imunoensaios, tais como o ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA) e o radioimunoensaio (RIA).

Para aplicações de diagnóstico, a proteina de ligação a antigénio normalmente será marcada com um grupo de marcação detetável. Os grupos de marcação adequados incluem, mas não estão limitados a, os seguintes: radioisótopos ou radionuclideos (e. g., 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, ιηΙη, 25I, 131I), grupos fluorescentes (e. g. , FITC, rodamina, fósforos de lantanideos), grupos enzimáticos (e. g. , peroxidase de rábano, β-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), grupos quimioluminescentes, grupos biotinilo ou epitopos polipéptidos predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (e. g. , sequências de pares de fechos de leucina, locais de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metais, marcadores de epítopo) . Em algumas formas de realização, o grupo de marcação é acoplado à proteína de ligação a antigénio via braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial impedimento estérico. Vários métodos para rotular proteínas são conhecidos na técnica e podem ser utilizados.

Noutro aspeto, uma proteína de ligação a antigénio pode ser utilizada para identificar uma célula ou células que expressam (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Numa forma de realização específica, a proteína de ligação a antigénio é marcada com um grupo de marcação e a ligação da proteína de ligação a antigénio marcada é detetada (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4. Numa forma de realização específica adicional, a ligação da proteína de ligação a antigénio a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 detetados in vivo. Numa forma de realização específica adicional, a proteína de ligação a antigénio é isolada e medida utilizando técnicas conhecidas na técnica. Ver, e. g., Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual,, Nova Iorque: Cold Spring Harbor (ed. 1991 e suplementos periódicos); John E. Coligan, ed., (1993) Current Protocols In Immunology, Nova Iorque: John Wiley & Sons.

Outro aspeto proporciona a deteção da presença de uma molécula de teste que compete para a ligação a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 com as proteínas de ligação a antigénio proporcionadas, tal como aqui descrito. Um exemplo de um tal ensaio pode envolver a deteção da quantidade de proteína de ligação a antigénio livre numa solução contendo uma quantidade de um ou mais de (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 na presença ou ausência da molécula de teste. Um aumento na quantidade de proteína de ligação a antigénio livre (i. e., a proteína de ligação a antigénio não ligada a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 indicariam que a molécula de teste é capaz de competir pela ligação a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 com a proteína de ligação a antigénio. Numa forma de realização, a proteína de ligação a antigénio é marcada com um grupo de marcação. Alternativamente, a molécula de teste é marcada e a quantidade de molécula de teste livre é monitorizada na presença e ausência de uma proteína de ligação a antigénio.

Formulações Farmacêuticas e Vias de Administração São também ilustrados métodos de utilização das proteínas de ligação a antigénio. Em alguns métodos, é proporcionada uma proteína de ligação a antigénio a um doente. A proteína de ligação a antigénio induz a sinalização tipo FGF21. São também proporcionadas composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ou uma pluralidade das proteínas de ligação a antigénio e um diluente, veículo, solubilizante, emulsionante, conservante e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. Além disso, são ilustrados métodos de tratamento de um doente através da administração de tal composição farmacêutica. 0 termo "doente" inclui doentes humanos.

Os materiais de formulação aceitáveis são não tóxicos para os recetores nas dosagens e concentrações utilizadas. Em formas de realização específicas, são proporcionadas as composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de proteínas de ligação a antigénio humano que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4.

Em determinadas formas de realização, os materiais de formulação aceitáveis, de um modo preferido, são não tóxicos para os recetores nas dosagens e concentrações utilizadas. Em determinadas formas de realização, a composição farmacêutica pode conter materiais de formulação para modificar, manter ou preservar, por exemplo, o pH, osmolaridade, viscosidade, clareza, cor, isotonicidade, odor, esterilidade, estabilidade, taxa de dissolução ou libertação, adsorção ou penetração da composição. Em tais formas de realização, os materiais de formulação adequados incluem, mas não estão limitados a, aminoácidos (tais como glicina, glutamina, asparagina, arginina ou lisina); antimicrobianos; antioxidantes (tais como ácido ascórbico, sulfito de sódio ou hidrogeno-sulfito de sódio); tampões (tais como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos ou outros ácidos orgânicos); agentes de volume (tais como manitol ou glicina); agentes quelantes (tal como ácido etilenodiaminotetracético (EDTA)); agentes complexantes (tais como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina ou hidroxipropil-beta-ciclodextrina); enchimentos; monossacáridos; dissacáridos; e outros hidratos de carbono (tais como glicose, manose ou dextrinas); proteínas (tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas); corantes, aromatizantes e diluentes; agentes emulsionantes; polímeros hidrofílicos (tal como polivinilpirrolidona); polipéptidos de baixo peso molecular; contra-iões formadores de sais (tal como sódio); conservantes (tais como cloreto de benzalcónio, ácido benzóico, ácido salicílico, timerosal, álcool fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clor-hexidina, ácido sórbico ou peróxido de hidrogénio); solventes (tais como glicerina, propilenoglicol ou polietilenoglicol); álcoois de açúcar (tais como manitol ou sorbitol); agentes de suspensão; tensioativos ou agentes molhantes (tais como Pluronics, PEG, ésteres de sorbitano, polissorbatos, tais como polissorbato 20, polissorbato, tritão, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); agentes que melhoram a estabilidade (tais como sacarose ou sorbitol); agentes intensificadores da tonicidade (tais como halogenetos de metal alcalino, de um modo preferido cloreto de sódio ou potássio, manitol sorbitol); veículos de entrega; diluentes; excipientes e/ou adjuvantes farmacêuticos. Ver, Remington's Pharmaceuticals Sciences, 18a Edição, (A.R. Gennaro, ed.), 1990, Mack Publishing Company.

Em determinadas formas de realização, a composição farmacêutica ótima será determinada por um especialista na técnica, dependendo, por exemplo, da via de administração pretendida, do formato de entrega e da dosagem desejada. Ver, e. g., Remington's Pharmaceuticals Sciences, supra. Em determinadas formas de realização, tais composições podem influenciar o estado físico, estabilidade, taxa de libertação in vivo e taxa de libertação in vivo das proteínas de ligação a antigénio divulgadas. Em determinadas formas de realização, o veículo primário ou veículo numa composição farmacêutica pode ser de natureza aquosa ou não aquosa. Por exemplo, um veículo ou veículo adequados pode ser água para injeção, solução salina fisiológica ou fluido cerebrospinal artificial, possivelmente suplementado com outros materiais comuns em composições para administração parentérica. A solução salina tamponada neutra ou a solução salina misturada com albumina de soro são outros veículo exemplificativos. Em formas de realização específicas, as composições farmacêuticas compreendem tampão Tris, de cerca de pH 7,0-8,5, ou tampão acetato, de cerca de pH 4,0-5,5, e podem ainda incluir sorbitol ou um substituto adequado. Em determinadas formas de realização, as composições compreendendo proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 podem ser preparadas para armazenamento por mistura da composição selecionada tendo o grau de pureza desejado com agentes de formulação opcionais (Remington's Pharmaceuticals Sciences, supra) sob a forma de um bolo liofilizado ou uma solução aquosa. Além disso, em determinadas formas de realização, a proteína de ligação a antigénio que se liga a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 pode ser formulada como um liofilizado utilizando excipientes apropriados, tal como sacarose.

As composições farmacêuticas podem ser selecionadas para administração parentérica. Alternativamente, as composições podem ser selecionadas para inalação ou para distribuição através do trato digestivo, tal como por via oral. A preparação de tais composições aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico está dentro do conhecimento da técnica.

Os componentes da formulação estão, de um modo preferido, presentes em concentrações que são aceitáveis para o local de administração. Em determinadas formas de realização, utilizam-se tampões para manter a composição a pH fisiológico ou a um pH ligeiramente inferior, normalmente dentro de um intervalo de pH de cerca de 5 a cerca de 8.

Quando a administração parentérica é contemplada, as composições terapêuticas podem ser proporcionadas na forma de uma solução aquosa parentericamente aceitável por pirogénio compreendendo a proteína de ligação a antigénio desejada num veículo farmaceuticamente aceitável. Um veículo particularmente adequado para injeção parentérica é água destilada estéril na qual a proteína de ligação a antigénio é formulada como uma solução isotónica estéril, adequadamente preservada. Em determinadas formas de realização, a preparação pode envolver a formulação da molécula desejada com um agente, tal como microesferas injetáveis, partículas bio-erodiveis, compostos poliméricos (tais como ácido polilático ou ácido poliglicólico), esferas ou lipossomas, as quais podem proporcionar libertação do produto que pode ser entregue via injeção de depósito. Em determinadas formas de realização, pode também ser utilizado ácido hialurónico, o qual pode ter o efeito de promover duração prolongada na circulação. Em determinadas formas de realização, os dispositivos de administração de fármaco implantáveis podem ser utilizados para introduzir a proteina de ligação a antigénio desej ada.

Determinadas composições farmacêuticas são formuladas para inalação. Em algumas formas de realização, as proteínas de ligação a antigénio que se ligam a ((i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 são formuladas como um pó seco, inalável. Em formas de realização específicas, as soluções de inalação de proteínas de ligação a antigénio podem também ser formuladas com um propulsor para distribuição de aerossol. Em determinadas formas de realização, as soluções podem ser nebulizadas. A administração pulmonar e os métodos de formulação, por conseguinte, estão descritos adicionalmente no Pedido de Patente Internacional W094/020069, o qual descreve a administração pulmonar de proteínas quimicamente modificadas. Algumas formulações podem ser administradas oralmente. As proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente ((i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4, os quais são administrados deste modo, podem ser formulados com ou sem veículos habitualmente utilizados na composição de formas de dosagem sólidas, tais como comprimidos e cápsulas. Em determinadas formas de realização, uma cápsula pode ser concebida para libertar a porção ativa da formulação no ponto no trato gastrointestinal quando a biodisponibilidade é maximizada e a degradação pré-sistémica é minimizada. Podem ser incluídos agentes adicionais para facilitar a absorção de uma proteína de ligação a antigénio. Podem também ser utilizados diluentes, aromas, ceras de baixo ponto de fusão, óleos vegetais, lubrificantes, agentes de suspensão, agentes de desintegração de comprimidos e ligandos.

Algumas composições farmacêuticas compreendem uma quantidade eficaz de uma ou várias proteínas de ligação a antigénio humano que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 numa mistura com excipientes não tóxicos que são adequados para o fabrico de comprimidos. Por dissolução dos comprimidos em água estéril, ou outro veículo apropriado, as soluções podem ser preparadas na forma de dose unitária. Os excipientes adequados incluem, mas não estão limitados a, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato ou bicarbonato de sódio, lactose ou fosfato de cálcio; ou agentes ligantes, tais como amido, gelatina ou acácia; ou agentes lubrificantes tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco.

As composições farmacêuticas adicionais serão evidentes para os especialistas na técnica, incluindo formulações envolvendo proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 em formulações de entrega sustentada ou controlada. As técnicas para a formulação de uma variedade de outros meios de entrega sustentada ou controlada, tais como veículos de lipossomas, micropartícuias bio-erodíveis ou contas porosas e injeções de depósito, são também conhecidas pelos especialistas na técnica. Ver, et al. , patente internacional WO93/015722, o qual descreve a libertação controlada de micropartícuias poliméricas porosas para distribuição de composições farmacêuticas. As preparações de libertação prolongada podem incluir matrizes poliméricas semipermeáveis na forma de artigos moldados, et al. , filmes, ou microcápsulas. As matrizes de libertação sustentada podem incluir poliésteres, hidrogeles, polilátidos (como divulgado na Patente US N° 3773919 e Publicação do Pedido de Patente Europeia N° EP058481), copolímeros de ácido L-glutâmico e gama-etil-L-glutamato (Sidman et al. , 1983, Biopolymers 2_: 547-556), poli (2-hidroxietil-insetacrilato) (Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. L5: 167-277 e Langer, 1982, Chem. Tech. 1_2:98), acetato de etileno vinilo (Langer et al. , 1981, supra) ou ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico (Publicação de Pedido de Patente Europeia N°. EP133988). As composições de libertação prolongada também podem incluir lipossomas que podem ser preparados por qualquer um dos vários métodos conhecidos na técnica. Ver, e. g., Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 8_2:3688-3692; Publicações de Pedidos de Patente Europeia N°. EP036676; EP088046 e EP143949,

As composições farmacêuticas utilizadas in vivo são normalmente proporcionadas como preparações estéreis. A esterilização pode ser realizada por filtração através de membranas de filtração estéril. Quando a composição é liofilizada, a esterilização utilizando este método pode ser conduzida antes ou depois da liofilização e reconstituição. As composições para administração parentérica podem ser armazenadas em forma liofilizada ou numa solução. As composições parentéricas são geralmente colocadas num recipiente que tem uma porta de acesso estéril, por exemplo, um saco ou frasquinho para solução intravenosa com uma rolha que pode ser perfurada por uma agulha de injeção hipodérmica.

Em determinadas formas de realização, as células que expressam uma proteína de ligação a antigénio recombinante, como aqui divulgada, são encapsuladas para distribuição (ver, Invest. Ophthalmol Vis Sci (2002) _43_: 32 92-32 98 e Proc. Natl. Acad. Sciences USA (2006) 103 : 3896-3901) .

Em determinadas formulações, uma proteína de ligação a antigénio tem uma concentração de pelo menos 10 mg/mL, 20 mg/mL, 30 mg/mL, 40 mg/mL, 50 mg/mL, 60 mg/mL, 70 mg/mL, 80 mg/mL, 90 mg/mL, 100 mg/mL ou 150 mg/mL. Algumas formulações contêm um tampão, sacarose e polissorbato. Um exemplo de uma formulação é uma contendo 50-100 mg/mL de proteína de ligação a antigénio, acetato de sódio 5-20 mM, sacarose 5-10% p/v e polissorbato 0,002-0,008% p/v. Determinadas formulações, por exemplo, contêm 65-75 mg/mL de uma proteína de ligação a antigénio em tampão acetato de sódio 9-11 mM, sacarose 8-10% p/v e polissorbato 0,005-0,006% p/v. O pH de determinadas formulações deste tipo está no intervalo de 4,5-6. Outras formulações têm um pH de 5,0-5,5 (e. g.r pH de 5,0, 5,2 ou 5,4).

Assim que a composição farmacêutica tenha sido formulada, esta pode ser armazenada em frasquinhos estéreis como uma solução, suspensão, gel, emulsão, sólido, cristal, ou como um pó desidratado ou liofilizado. Tais formulações podem ser armazenadas numa forma pronta a utilizar ou numa forma (e. g. , liofilizado) que é reconstituído antes da administração. São também proporcionados kits para produzir uma unidade de administração de dose única. Determinados kits contêm um primeiro recipiente contendo uma proteína seca e um segundo recipiente com uma formulação aquosa. Em determinadas formas de realização, kits contendo seringas pré-cheias de câmara única e múltiplas (e. g. , seringas líquidas e lioseringas) . A quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica contendo uma proteína de ligação a antigénio a ser utilizada dependerá, por exemplo, do contexto terapêutico e dos objetivos. Um especialista na técnica entenderá que os níveis de dosagem apropriados para o tratamento irão variar dependendo, em parte, da molécula administrada, da indicação para a qual está a ser utilizada a proteína de ligação a antigénio, da via de administração e do tamanho (peso corporal, superfície corporal ou tamanho do órgão) e/ou condição (idade e estado geral de saúde) do doente. Em determinadas formas de realização, o clínico pode avaliar a dosagem e modificar a via de administração para obter o efeito terapêutico óptimo.

Uma dosagem típica pode variar desde cerca de 1 pg/kg até cerca de 30 mg/kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima. Em formas de realização específicas, a dosagem pode variar de 10 pg/kg até cerca de 30 mg/kg, opcionalmente de 0,1 mg/kg até cerca de 30 mg/kg, alternativamente de 0,3 mg/kg até cerca de 20 mg/kg. Em algumas aplicações, a dosagem é de 0,5 mg/kg a 20 mg/kg. Em alguns casos, uma proteína de ligação a antigénio é doseada a 0,3 mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg ou 20 mg/kg. O esquema de dosagem em alguns regimes de tratamento é a uma dose de 0,3 mg/kg qW, 0,5 mg/kg qW, 1 mg/kg qW, 3 mg/kg qW, 10 mg/kg qW ou 20 mg/kg qW. A frequência de dosagem dependerá dos parâmetros farmacocinéticos da proteína de ligação a antigénio particular na formulação utilizada. Normalmente, um clínico administra a composição até ser atingida uma dosagem que alcança o efeito desejado. A composição pode portanto ser administrada como uma dose única, ou como duas ou mais doses (que podem mas não necessitam conter a mesma quantidade da molécula desejada) ao longo do tempo, ou como uma infusão contínua via um dispositivo de implantação ou catéter. As dosagens apropriadas podem ser determinadas através da utilização de dados dose-resposta apropriados. Em determinadas formas de realização, as proteínas de ligação a antigénio podem ser administradas a doentes ao longo de um período de tempo prolongado. A administração crónica de uma proteína de ligação a antigénio minimiza a resposta imunitária ou alérgica adversa comumente associada com proteínas de ligação a antigénio que não são totalmente humanas, por exemplo, um anticorpo criado contra um antigénio humano num anticorpo animal não humano ou anticorpo não humano produzido numa espécie não humana. A via de administração da composição farmacêutica está de acordo com métodos conhecidos, por exemplo, por via oral, por injeção por via intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal), intracerebroventricular, intramuscular, intra-ocular, intra-arterial, intraportal ou intralesional; por sistemas de libertação sustentada ou por dispositivos de implantação. Em determinadas formas de realização, as composições podem ser administradas através de injeção em bólus ou continuamente por infusão ou através de dispositivo de implantação. A composição também pode ser administrada localmente via implantação de uma membrana, esponja ou outro material apropriado sobre o qual a molécula desejada foi absorvida ou encapsulada. Em determinadas formas de realização, em que é utilizado um dispositivo de implantação, o dispositivo pode ser implantado em qualquer tecido ou órgão adequado, e a libertação da molécula desejada pode ser via difusão, bolo de libertação temporizada ou administração continua.

Também pode ser desejável utilizar composições farmacêuticas de proteina de ligação a antigénio ex vivo. Em tais casos, as células, tecidos ou órgãos que foram removidos do doente são expostos a composições farmacêuticas de proteínas de ligação a antigénio após as quais as células, tecidos e/ou órgãos são, subsequentemente ,implantados de volta para o doente.

Em particular, as proteínas de ligação a antigénio que se ligam especificamente a (i) β-Klotho; (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4; ou (iii) um complexo compreendendo β-Klotho e um de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c e FGFR4 podem ser administrados por implantação de determinadas células que foram geneticamente modificadas, utilizando métodos tais como os aqui descritos, para expressar e segregar o polipéptido. Em determinadas formas de realização, tais células podem ser células animais ou humanas, e podem ser autólogas, heterólogas ou xenogénicas. Em determinadas formas de realização, as células podem ser imortalizadas. Noutras formas de realização, a fim de diminuir a possibilidade de uma resposta imunológica, as células podem ser encapsuladas para evitar a infiltração dos tecidos circundantes. Em outras formas de realização, os materiais de encapsulação são normalmente caixas ou membranas poliméricas semi-permeáveis biocompatíveis que permitem a libertação do(s) produto(s) proteico(s), mas impedem a destruição das células pelo sistema imunitário do doente ou por outros fatores prejudiciais dos tecidos circundantes.

Terapias Combinadas

Noutro aspeto, a presente descrição ilustra um método de tratamento de um indivíduo para diabetes com uma proteína terapêutica de ligação a antigénio da presente descrição, tal como os anticorpos terapêuticos totalmente humanos aqui descritos, em conjunto com um ou mais outros tratamentos. Numa forma de realização, tal terapia de combinação alcança um efeito aditivo ou sinérgico. As proteínas de ligação a antigénio podem ser administradas em combinação com um ou mais dos tratamentos de diabetes tipo 2 ou de obesidade atualmente disponíveis. Estes tratamentos para diabetes incluem biguanida (metaformina) e sulfonilureias (tais como gliburida, glipizida). Os tratamentos adicionais dirigidos a manter a homeostase da glucose incluem agonistas gama PPAR (pioglitazona, rosiglitazona) ; glinidas (meglitinida, repaglinida e nateglinida); inibidores da DPP-4 (Januvia® e Onglyza®) e inibidores da alfa glucosidase (acarbose, voglibose).

Os tratamentos combinados adicionais para diabetes incluem tratamentos injetáveis, tais como insulina e miméticos de incretina (Byetta®, Exenatide®) , outros análogos de GLP-1 (péptido semelhante a glucagon) tais como liraglutida, outros agonistas de GLP-1R e Symlin® (pramlintida).

Os tratamentos combinados adicionais dirigidos à perda de peso incluem Meridia® e Xenical®.

EXEMPLOS

Os seguintes exemplos, incluindo as experiências conduzidas e os resultados obtidos, são proporcionados apenas para fins ilustrativos e não devem ser interpretados como limitativos. EXEMPLO 1

PREPARAÇÃO DE FGFRlc SOBRE CÉLULAS EXPRESSAS PARA UTILIZAÇÃO COMO ANTIGÉNIO

As sequências de ácidos nucleicos codificando o polipéptido FGFRlc humano de comprimento completo (SEQ ID N° : 4, Figuras 1A-1B) e uma sequência separada codificando o polipéptido β-Klotho humano de comprimento completo (SEQ ID N° : 7, Figuras 2A-2C) foram subclonadas em vetores de expressão de células de mamífero adequados (e. g., PcDNA3.1 Zeo, pcDNA3.1 Hyg (Invitrogen, Carlsbad, CA) ou pDSRa20. 0 vetor pDSRa20 contém promotor/intensificador precoce de SV40 para expressar o gene de interesse e uma cassete de expressão de DHFR de ratinho para seleção em células hospedeiras de CHO DHFR(-), tal como AMI CHO (um derivado de DG44, CHO DHFR(-)).

As células CHO AM-1 foram semeadas a l,5xl06 células por prato de 100 mm. Após 24 horas, as células foram co-transfetadas com ADN linearizados de pDSRa20/huFGFRlc e pDSRa20/hup-Klotho com FuGene6 (Roche Applied Science). As células transfetadas foram tripsinizadas 2 dias após transfeção e semeadas em meio de crescimento seletivo CHO DHFR contendo 10% de FBS dialisado e sem suplemento de hipoxantina/timidina. Após 2 semanas, as colónias transfetadas resultantes foram tripsinizadas e reunidas.

As células HEK293T foram transfetadas com o huFGFRlc de comprimento completo e ό^β-Κίο^ο na série pcDNA3.1 ou o vetor pTTl4 (um vetor de expressão desenvolvido por Durocher, NRCC, com promotor de CMV e EBi ori, semelhante ao pTT5 e um marcador de seleção de puromicina) com os fármacos correspondentes seguindo um procedimento semelhante ao da transfeção e seleção de CHO. O FGF21R (i. e.r FGFRlc e β-Klotho) foram rastreados repetidamente utilizando FGF21 marcado com Alexa 647. Como reagente de coloração da superfície celular, o FGF21 foi marcado com Alexa 647-NHS seguindo o método recomendado pelo fabricante (Molecular Probes, Inc. Cat A 2006) . O FGF21 marcado com Alexa 647 apresentou coloração específica das células que expressam o recetor FGF21R e não das células progenitoras não transfetadas (Figura 3). As células de expressão elevada foram recolhidas no final da triagem final, expandidas e congeladas em frascos. As células AM-l/huFGF2lR foram preparadas para imunização e as células 293T/huFGF2IR foram utilizadas para titulação de soros de ratinho por FACS após imunização e em ecrãs de ligação dos sobrenadantes de hibridoma por FMAT (ver Exemplo 4). EXEMPLO 2

PREPARAÇÃO DE UM COMPLEXO SOLÚVEL DE FGFRlc/β-KLOTHO PARA UTILIZAÇÃO COMO ANTIGÉNIO

As construções de recetor FGF21 solúvel foram produzidas em vetores de expressão pTTl4 ou pcDNA3.1. A construção ECD-Fc de FGFRlc (SEQ ID N°: 362, Figura 4) compreende o domínio extracelular Terminal N de FGFRlc (resíduos de aminoácidos N° 1-374; SEQ ID N°: 5) fundido a Fc (SEQ ID N°: 384). A construção β-Klotho ECD-Fc (SEQ ID N° : 363, Figura 5) compreende o domínio extracelular Terminal N de β-Klotho (resíduos de aminoácidos N° 1-996; SEQ ID N°: 8) fundido a Fc (SEQ ID N°: 384) .

As células HEK293 (293F, Invitrogen) foram transfetadas com huFGFRlc ECD-Fc/pTT5, h^-Klotho ECD-Fc/pTTl4-puro e dGFP/pcDNA3.1-Neo e selecionadas na presença dos fármacos correspondentes seguidos por FACS na expressão de dGFP. As células foram crescidas em meio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) sem soro suplementado com aminoácidos não essenciais em HyperFlasks (Corning) , durante 4 dias, e meios condicionados (CM) recolhidos para purificação. 0 293 CM foi concentrado 6 vezes e aplicado a Proteína A FF equilibrada em PBS. A proteína foi eluída com tampão de eluição Pierce Gentle Ag/Ab. 0 conjunto de Proteína A foi dialisado contra Tris-HCl 20 mM, pH 7, NaCl 10 mM e aplicado a SP HP a pH 7,0. O ECD-Fc de FGFRlc estava presente no fluxo (FT) e o heterodímero foi eluído com gradiente linear de 0-0,4 M de NaCl, 20 mM de Tris-HCl a pH 7,0. A sequenciação de aminoácidos do terminal N verificou que o FGF21R solúvel purificado era um heterodímero composto por uma proporção (1:1) de FDFlc ECD-Fc e β-Klotho ECD-Fc. 0 FGF21R-Fc solúvel purificado (Figura 6) foi utilizado como antigénio para imunização. EXEMPLO 3

PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS

As imunizações foram realizadas utilizando uma ou mais formas adequadas de antigénio de recetor FGF21, incluindo: (1) recetor ligado a células de transfetantes CHO expressando FGFRlc humano de comprimento completo e β-Klotho na superfície celular, obtidos transfetando células CHO com ADNc codificando um polipéptido totalmente humano (ver também Figuras 1A-B) e ADNc codificando um polipéptido β-Klotho humano da SEQ ID N° : 7 (ver também as Figuras 2a-c); (2) extrato de membrana das células acima mencionadas que expressam o complexo recetor FGF21R; ou (3) o recetor de FGF21R solúvel que pode ser obtido por coexpressão do domínio extracelular do terminal N (ECD) de FGFRlc (SEQ ID N°: 5, ver também a Figura 4) e o domínio extracelular do terminal N (ECD) de β-Klotho (SEQ ID N°: 8, ver também a Figura 5) ou (4) as suas combinações.

Uma quantidade adequada de imunogénio (í. e.f 10 yg/ratinho de FGF21R solúvel ou 3-4xl06 células/ratinho de células CHO transfetadas de forma estável ou 150 yg/ratinho de membranas de FGF21R purificadas preparadas de células CHO expressando de forma estável FGF21R) para imunização inicial em XenoMouse™, de acordo com os métodos divulgados nos Pedidos de Patente Internacionais N° W098/24893 e WO00/76310. Seguindo a imunização inicial, subsequentes imunizações de imunogénio (5 yg/ratinho de FGF21R solúvel ou l,7xl06 células transfetadas com FGF2lR/ratinho ou 75 yg de membranas FGF21R purificadas) foram administradas num calendário e durante a duração necessária para induzir um título adequado anti-FGF2lR nos ratinhos. Os títulos foram determinados por um método adequado, por exemplo, por imunoensaio enzimático, seleção de células ativadas por fluorescência (FACS) ou por outros métodos (incluindo combinações de imunoensaios enzimáticos e FACS).

Os animais que exibem títulos adequados foram identificados e os linfócitos foram obtidos da drenagem dos gânglios linfáticos e, se necessário, agrupados para cada coorte. Os linfócitos foram dissociados do tecido linfóide por trituração num meio adequado (por exemplo, meio de Eagle modificado por Dulbecco, DMEM, obtido de Invitrogen, Carlsbad, CA) para libertar as células dos tecidos e suspensas em DMEM. As células B foram selecionadas e/ou expandidas utilizando métodos padrão e fundidas com parceiros de fusão adequados, por exemplo, células P3X63Ag8.653 de mieloma não secretório (American Type Culture Colletion CRL 1580; Kearney et ai., J. Immunol., 1979,123:1548-1550), utilizando técnicas que eram conhecidas na técnica.

Num método de fusão adequado, os linfócitos foram misturados com células parceiras de fusão numa proporção de 1:4. A mistura celular foi gentilmente sedimentada por centrifugação a 400xg, durante 4 minutos, o sobrenadante foi decantado e a mistura celular foi misturada suavemente (por exemplo, utilizando uma pipeta de 1 mL). A fusão foi induzida com PEG/DMSO (polietilenoglicol/dimetilsulfóxido, obtido de Sigma-Aldrich, St. Louis MO, 1 mL por milhão de linfócitos). Adicionou-se PEG/DMSO lentamente, com agitação suave, ao longo de um minuto seguido, por um minuto de mistura. Adicionou-se então IDMEM (DMEM sem glutamina, 2 mL por milhão de células B) , durante 2 minutos, com agitação suave, seguido por IDMEM adicional (8 mL por milhão de células B) que foi adicionado durante 3 minutos.

As células fundidas foram sedimentadas (400xg, 6 minutos) e ressuspensas em 20 mL de meio de seleção (por exemplo, DMEM contendo Azaserina e Hipoxantina [HA] e outros materiais suplementares conforme necessário) por milhão de células B. As células foram incubadas durante 20-30 minutos, a 37 °C, e, em seguida, ressuspensas em 200 mL de meios de seleção e cultivadas durante três a quatro dias em frascos T175, antes da plaquetação com 96 poços.

As células foram distribuídas em placas de 96 poços utilizando técnicas padrão para maximizar a clonalidade das colónias resultantes. Após vários dias de cultura, os sobrenadantes foram recolhidos e submetidos a ensaios de rastreio como detalhado nos exemplos abaixo, incluindo confirmação da ligação ao recetor de FGF21 humano, especificidade e/ou reatividade entre espécies. As células positivas foram ainda selecionadas e submetidas a clonagem convencional e técnicas de subclonagem. As linhas clonais foram expandidas in vitro, e os anticorpos humanos secretados obtidos para análise.

Desta forma, os ratinhos foram imunizados com células ou membranas que expressam células FGF21R de comprimento total ou domínios extracelulares solúveis de FGF21R, com um intervalo de 11-17 imunizações, ao longo de um período de, aproximadamente, um a três meses e meio. Obtiveram-se várias linhas celulares que segregam anticorpos específicos para FGF21R e os anticorpos foram ainda caracterizados. As suas sequências são aqui apresentadas na Listagem de sequências e são proporcionados resultados de vários testes utilizando estes anticorpos. EXEMPLO 4

SELEÇÃO DE ANTICORPOS DE LIGAÇÃO PELA FMAT

Após 14 dias de cultura, os sobrenadantes de hibridoma foram rastreados para anticorpos monoclonais específicos para FGF21R através de Tecnologia de Ensaio de Microvolume Fluorometric (FMAT) por rastreio contra a linha celular CHO AMl/huFGF2lR ou células HEK293 recombinantes que foram transfetadas com FGF21R humano e contra-rastreio contra CHO progenitoras ou células HEK293. Resumidamente, as células em meio Freestyle (Invitrogen) foram semeadas em placas FMAT de 384 poços num volume de 50 pL/poço a uma densidade de 4000 células/poço para os transfetantes estáveis, e a uma densidade de 16000 células/poço para as células progenitoras, e as células foram incubadas, de um dia para o outro, a 37 °C. Adicionaram-se então 10 pL/poço de sobrenadante e as placas foram incubadas durante, aproximadamente, uma hora, a 4 °C, após o que foram adicionados 10 pL/poço de anticorpo secundário IgG-Cy5 anti-humano a uma concentração de 2,8 pg/mL (concentração final de 400 ng/mL). As placas foram então incubadas durante uma hora, a 4 °C, e a fluorescência foi lida utilizando um Sistema de Deteção Celular FMAT (Applied Biosystems).

No total, foram identificados mais de 3000 sobrenadantes de hibridoma como estandop ligados às células que expressam o recetor FGF21 mas não às células progenitoras pelo método FMAT. Estes sobrenadantes foram então testados nos ensaios funcionais de FGF21, como descrito abaixo. EXEMPLO 5 SELEÇÃO DE ANTICORPOS QUE INDUZEM A SINALIZAÇÃO TIPO FGF21

As experiências foram realizadas para identificar anticorpos funcionais que imitam a atividade de FGF21 de tipo selvagem (e. g. , a capacidade de induzir sinalização tipo FGF21) utilizando um ensaio repórter FGF21 adequado. O ensaio repórter FGF21 divulgado mede a ativação da sinalização FGFR através de uma leitura da via MAPK. O β-Klotho é um co-recetor para a sinalização de FGF21, e embora se acredite que não tenha qualquer capacidade de sinalização inerente devido ao seu domínio citoplasmático muito curto, é necessário que o FGF21 induza sinalização através de FGFRs.

Exemplo 5.1

Ensaio Repórter ELK-Luciferase

Os ensaios de ELK-luciferase foram realizados utilizando uma célula de rim humano 293T recombinante ou sistema de células CHO. Especificamente, as células hospedeiras foram manipuladas para sobreexpressar as construções repórter de β-Klotho e luciferase. As construções repórter contêm sequências codificando GAL4-ELK1 e 5xUAS-Luc, um repórter de luciferase conduzido por um promotor contendo cinco cópias em tandem do local de ligação de Gal4. A ativação do complexo do recetor FGF21 nestas linhas de células repórter recombinantes induz a transdução de sinal intracelular, o qual por sua vez conduz à fosforilação de ERK e ELK. A atividade da luciferase é regulada pelo nivel de ELK fosforilado e é utilizada para monitorizar e quantificar indiretamente a atividade de FGF21.

Num exemplo, as células CHO foram transfetadas sequencialmente utilizando o reagente de transfeção de Lipofectamina 2000 (Invitrogen) de acordo com o protocolo do fabricante com as construções recetoras que expressam β-Klotho, FGFRlc e os plasmideos repórter: 5x Gal4-Luciferase (promotor TK mínimo com locais de ligação 5xGal4 a montante da luciferase) e Gal4-ELK1. A Gal4-ELK1 liga-se aos locais de ligação Gal4 e ativa a transcrição quando é fosforilada por ERK. A transcrição da luciferase e, deste modo, a atividade enzimática correspondente neste contexto é regulada pelo nível de ELKl fosforilado e é utilizada para monitorizar e quantificar indiretamente a atividade de FGF21. O clone 2E10 foi selecionado como a linha de células repórter de luciferase FGF21 com base na janela de ensaio ótima de 10-20 vezes com FGF21 natural exibindo uma EC50 no intervalo de nM único.

Para o ensaio, as células repórter ELK-luciferase foram plaqueadas em placas de ensaio de 96 poços e deixadas sem alimentação de soro, de um dia para o outro. Foram adicionados FGF21 ou amostras de teste durante 6 horas, a 37 graus. As placas foram então deixadas arrefecer, até à temperatura ambiente, e a atividade de luciferase nos lisados celulares foi medida com Bright-Glo (Promega).

Exemplo 5.2

Ensaio de ERK-Fosforilação

As linhas de células hospedeiras alternativas especificamente L6 (uma linha celular mioblástica de rato) foi desenvolvida e aplicada para identificar anticorpos com atividade de sinalização tipo FGF21. A linha de células L6 de ratinho é uma linha de células hospedeiras desejável para o ensaio de atividade porque é sabido que expressa níveis mínimos de recetores de FGF endógenos. As células L6 não respondem ao FGF21 mesmo quando transfetadas com o vetor de expressão β-Klotho e, por conseguinte, proporcionam um fundo mais limpo. (Kurosu et ai., (2007) J. Biol. Chem. 282:26687-26695).

As células L6 foram mantidas em meio Eagle modificado por Dulbecco suplementado com 10% de soro fetal bovino e penicilina/estreptomicina. As células foram transfetadas com plasmídeos expressando β-Klotho e FGFR individual utilizando o reagente de transfeção de Lipofectamina 2000 (Invitrogen) de acordo com o protocolo do fabricante. A análise da sinalização de FGF em células L6 foi realizada como descrito na literatura (Kurosu et al., (2007) J. Biol. Chem. 282:26687-2 6695) . As culturas de células ou moléculas de teste foram recolhidas 10 minutos após o tratamento de FGF21 e congeladas instantaneamente em azoto líquido, homogeneizadas no tampão de lise e submetidas a análise de Western blot utilizando um anticorpo anti-fosfo-p44/42 MAP quinase (ERKl/2), um anticorpo anti-ERK (Cell Signaling). A percentagem de ERK fosforilado versus proteina ERK total foi determinada deste modo.

Além disso, também pode ser desenvolvido e aplicado o ensaio de proliferação baseado em células BaF3 de ratinho dependente do fator utilizado frequentemente para recetores de citocinas.

Entre os sobrenadantes de hibridoma testados no ensaio repórter de ELG-luciferase de FGF21 ELK humano baseado em células CHO (clone 2E10), mais de 30 foram identificados como positivos (>5% da atividade de FGF21) quando comparados com 20 nM de FGF21 como controlo positivo. Os anticorpos foram então purificados dos meios condicionados das culturas de hibridomas destes positivos e testados novamente no ensaio repórter de ELK-luciferase baseado em células CHO. A (Figura 7) apresentou os anticorpos representativos no ensaio de potência de resposta à dose com EC50 estimada inferior a 1 yg/mL (ou 6,7 nM) . As atividades foram confirmadas no ensaio de ERKl/2-fosforilação com base em células L6 (Figura 8) com EC50 inferior a 10 nM que é consistente com o ensaio ELK-luciferase na linha de células estáveis CHO 2E10. EXEMPLO 6

INDUÇÃO DA SINALIZAÇÃO TIPO FGF21 É ESPECÍFICA PARA O COMPLEXO FGFR1c/β-KLOTHO 0 FGF21 foi relatado como sinal através de múltiplos complexos recetores incluindo FGFRlc, 2c, 3c e 4 quando emparelhado com μ-Klotho. A seletividade dos anticorpos agonistas FGF21 foi testada nas células L6 mioblásticas de rato transfetadas com vetores que expressam os respetivos FGFRs e β-Klotho. Os resultados apresentados na Figura 9 demonstram que a atividade foi mediada seletivamente e exclusivamente através de FGFRlc e não através de FGFR2c, 3c ou 4 quando estes foram emparelhados com β-Klotho, porque não foi detetada atividade nos últimos recetores até 100 nM dos anticorpos agonistas. Esta seletividade única sugere fortemente que a ação destes anticorpos é dependente de β-Klotho, mas deve também envolver especificamente o componente FGFRlc do complexo de sinalização. EXEMPLO 7

ATIVIDADE EM ADIPÓCITOS HUMANOS PRIMÁRIOS O FGF21 estimula a captação de glucose e a lipólise em adipócitos em cultura e os adipócitos são considerados como sendo mais fisiologicamente relevantes do que o sistema de células repórter recombinante.

Demonstrou-se que um painel dos anticorpos exibia atividade de fosforilação Erk tipo FGF21 no ensaio de adipócitos humanos (Figura 10) com uma EC50 estimada inferior a 10 nM. EXEMPLO 8

LIGAÇÃO COMPETITIVA E LIGAÇÃO DE EPÍTOPO

Para comparar a semelhança dos locais de ligação dos anticorpos no recetor FGF21, realizou-se uma série de experiências de ligação à competição e mediu-se por Biacore. Num exemplo (e como mostrado na Figura 11), dois anticorpos agonistas representativos do recetor FGF21 (24H11 e 17D8) e um anticorpo não funcional de ligação ao recetor FGF21 (1A2.1) foram imobilizados na superfície do chip sensor. Foi então capturado o complexo ECD-Fc de FGFRlc/β-Klotho humano solúvel ou o β-Klotho nas superfícies de anticorpo imobilizadas. Finalmente, vários dos anticorpos do teste FGF21 recetor foram injetados individualmente sobre o recetor FGF21 humano solúvel capturado ou β-Klotho. Se o anticorpo injetado reconhecer um local de ligação distinto em relação ao reconhecido pelo anticorpo imobilizado, será observado um segundo evento de ligação. Se os anticorpos reconhecerem locais de ligação muito semelhantes, não será observada mais ligação.

Conforme ilustrado na (Figura 11A), existem dois locais de ligação distintos mas parcialmente sobrepostos para os anticorpos agonistas testados. Um local é coberto por 24H11, 21H2, 18B11.1 e 17C3 (Grupo A) e o outro local coberto por 17D8, 12E4 e 18G1 (Grupo B) . Os dois anticorpos não funcionais 2G10 e 1A2, ligam-se a locais diferentes um do outro e são distintos dos dois locais cobertos pelos anticorpos agonísticos nos Grupos A e B. Outros anticorpos funcionais que se ligam ao epítopo do Grupo A incluem 20D4, 22H5, 16H7, 40D2 e 46D11. Dois outros anticorpos funcionais 26H11 e 37D3 foram demonstrados por este método para ligar o mesmo local coberto pelos anticorpos do Grupo B. Adicionalmente, foi identificado um terceiro local de ligação para anticorpos funcionais para 39F11, 39F7 e 39G5 (grupo C) que pareceu ser distinto dos locais de ligação do

Grupo A e B (Figura 11B).

Outra análise Biacore foi realizada com FGF21 biotinilado imobilizado no chip sensor. Foi então passado 10 nM de β-Klotho solúvel sobre o chip, sozinho ou misturado com os anticorpos de teste individuais, a 100 nM. A (Figura 12) mostrou que vários anticorpos agonistas no grupo A (24H11, 18B11, 17C3) e anticorpo 12E4 (do grupo B) competiam significativamente com FGF21 na ligação ao β-Klotho solúvel ao passo que os anticorpos não funcionais 2G10 e 1A2 e vários outros funcionais não mostraram ligação competitiva com FGF21. A Figura 11C resume os resultados de ligação obtidos. EXEMPLO 9

RECONHECIMENTO DAS ESTRUTURAS NATURAIS E DESNATURADAS

Foi investigada a capacidade das proteínas de ligação a antigénio divulgadas para reconhecer estruturas não naturais e desnaturadas. O procedimento e os resultados foram os seguintes.

Exemplo 9.1

Anticorpos Agonistas do Recetor FGF21 não reconhecem estruturas desnaturadas, como mostrado por FACS

Os lisados celulares de células CHO expressando de forma estável células recetoras FGF21 (FGFRlc e β-Klotho) ou células CHO progentitoras foram diluídos com tampão de amostra sem beta-mercaptoetanol (condições não redutoras). Carregou-se 20 pL de lisado celular por linha em linhas adjacentes separadas com uma linha de marcadores de peso molecular em 4-20% de géis de SDS-PAGE. Após eletroforese, os géis foram transferidos para filtros de nitrocelulose de 0,2 pm. As transferências foram tratadas com solução salina tamponada com Tris/Triton-X (TBST) mais 5% de leite sem gordura (tampão de bloqueio), durante 30 minutos. As transferências foram então cortadas ao longo das linhas de marcador de peso molecular. As tiras foram então sondadas com anticorpos agonistas do recetor FGF21 (12C3, 26H11, 12E4, 21H2, 18B11 ou 20D4) e β-Klotho anti-murino de cabra ou anti-huFGFRl ratinho comercial (R & D Diagnostics) em TBST/5% de leite. Os poços foram incubados com os anticorpos, durante uma hora, à temperatura ambiente, seguidos por três lavagens com TBST+1% de leite. As transferências foram então sondadas com anticorpos secundários IgG-HRP anti-humano ou anti-cabra durante 20 min. Foram dadas aos poços três lavagens de 15 min. com TBST seguido por tratamento com o reagente de desenvolvimento Pierce Supersignal West Dura (1 min.) e exposição ao filme de raios-X Kodak Biomax.

Os anticorpos anti-p-Klotho e anti-FGFRl comerciais detetaram as proteínas recetoras correspondentes na SDS-PAGE indicando que se ligam a proteínas recetoras desnaturadas. Em contraste, nenhum dos anticorpos agonistas do recetor FGF21 testado detetou as espécies de proteína correspondentes sugerindo que se ligam ao epítopo conformacional natural distinto dos anticorpos comerciais que se ligam a sequências desnaturadas.

Exemplo 9.2

Anticorpos Agonistas do Recetor FGF21 Ligam-se à Estrutura do Recetor Natural, Conforme Demonstrado por FACS

Realizou-se um ensaio de ligação a FACS com vários anticorpos FGFRlc e β-Klotho comercialmente disponíveis, e vários dos anticorpos agonistas do recetor FGF21 divulgados. As experiências foram realizadas como se segue.

As células CHO que expressam de modo estável o recetor FGF21 foram tratadas com anticorpos anti-huFGFRl de ratinho R&D Systems, β-Klotho anti-mu de cabra ou anticorpos 24H11, 17C3, 17D8, 18G1 ou 2G10 do recetor FGF21 (1 yg por lxlO6 em 100 yL de PBS/BSA a 0,5%). As células foram incubadas com os anticorpos, a 4 °C, seguido por duas lavagens com PBS/BSA. As células foram então tratadas com anticorpos secundários marcados com FITC, a 4 °C, seguido por duas lavagens. As células foram ressuspensas em 1 mL de PBS/BSA e a ligação do anticorpo foi analisada utilizando um instrumento FACS Calibur.

De acordo com os resultados de Western blot, todos os anticorpos agonistas do recetor FGF21 testados ligam-se bem ao recetor FGF21 da superfície celular em FACS, enquanto que os anticorpos anti^-Klotho ou anti-FGFRl comerciais não. Esta observação confirmou ainda que os anticorpos agonistas do recetor FGF21 reconhecem a estrutura natural enquanto que os anticorpos comerciais para os componentes do recetor não o fazem. EXEMPLO 10

DIGITALIZAÇÃO DE ARGININAS

Como descrito acima, as proteínas de ligação a antigénio que se ligam a FGF21R humano, e. g. , FGFRlc, β-Klotho ou FGFRlc e β-Klotho, foram criados e caracterizados. Para determinar os determinantes de neutralização em FGFRlc e/ou β-Klotho humanos que estas várias proteínas de ligação a antigénio ligam, podem ser construídas várias proteínas FGFRlc e/ou β-Klotho mutantes, possuindo substituições de arginina em resíduos de aminoácidos selecionados de FGFRlc humano e/ou β-Klotho. A varredura com arginina é um método reconhecido na técnica de avaliar onde os anticorpos, ou outras proteínas, se ligam a outra proteína, ver, e. g. , Nanevicz et al., (1995) J. Biol. Chem., 270:37, 21619-21625 e Zupnick et al., (2006) J. Biod. Chem., 281:29, 20464-20473. Em geral, a cadeia lateral de arginina é carregada positivamente e é relativamente volumosa em comparação com outros aminoácidos, o que pode interromper a ligação do anticorpo a uma região do antigénio onde a mutação é introduzida. A varredura com arginina é um método que determina se um resíduo é parte de um determinante neutralizante e/ou um epítopo. Vários aminoácidos distribuídos ao longo dos domínios extracelulares FGFRlc e/ou β-Klotho humanos podem ser selecionados para mutação em arginina. A seleção pode ser polarizada em relação aos aminoácidos carregados ou polares para maximizar a possibilidade de o resíduo estar na superfície e reduzir a probabilidade da mutação resultar em proteínas mal dobradas. Utilizando técnicas convencionais conhecidas na técnica, os oligonucleótidos sentido e anti-sentido contendo os resíduos mutados podem ser concebidos com base nos critérios proporcionados por Stratagene Quickchange® II (Stratagene/Agilent, Santa Clara, CA) . A mutagénese das sequências do tipo selvagem (WT) FGFRlc e/ou β-Klotho pode ser realizada utilizando uma Quickchange® II (Stratagene). As construções quiméricas podem ser manipuladas para codificar uma marca FLAG-histidina (seis histidinas (SEQ ID N°: 382)) no terminal carboxilo do domínio extracelular para facilitar a purificação através do rótulo poli-His.

Podem ser realizadas análises de multiplex utilizando a estação de trabalho Bio-Plex e o software (BioRad, Hercules, CA) para determinar determinantes de neutralização em FGFRlc e/ou β-Klotho humanos por análise de ligação diferencial de mAb FGFRlc e/ou β-Klotho humano a mutantes de arginina contra FGFRlc de tipo selvagem e/ou proteínas β-Klotho. Pode ser utilizado qualquer número de códigos de esferas de esferas revestidas com pentaHis ("penta-His" divulgado como SEQ ID N°: 383) (Qiagen, Valencia, CA, ver wwwl.qiagen.com) para capturar a proteína marcada com histidina. Os códigos de esferas podem permitir a multiplexação de mutantes de FGFRlc e/ou de β-Klotho arginina e FGFRlc e/ou β-Klotho humanos de tipo selvagem.

Para preparar as esferas, foram ligados 100 μΐ de sobrenadantes mutantes de FGFRlc e/ou de β-Klotho e FGFRlc e/ou de β-Klotho arginina da cultura de expressão transitória, a esferas revestidas com penta-His ("penta-His" divulgada como SEQ ID N° : 383), de um dia para o outro, a 4 °C, ou 2 horas, à temperatura ambiente, com agitação vigorosa. As esferas são então lavadas de acordo com o protocolo do fabricante e o conjunto de esferas é reunido e dividido em alíquotas em duas ou três colunas de uma placa de filtro de 96 poços (Millipore,

Bellerica, MA, produto n° MSBVN1250) para pontos de ensaio duplicados ou triplicados, respetivamente. Adicionam-se aos poços 100 μΐ de anticorpos anti-FGFRlc e/ou anti-p-Klotho em diluições de 4 vezes, incuba-se durante 1 hora, à temperatura ambiente, e lava-se. São adicionados 100 μΐ de uma diluição de 1:100 de Fc de IgG anti-humana conjugada com PE (Jackson Labs., Bar Harbor, ME, produto N° 109-116-170), a cada poço, incubados durante 1 hora, à temperatura ambiente, e lavados. As esferas são ressuspensas em BSA a 1%, agitados durante 3 minutos e lidos na estação de trabalho Bio-Plex. A ligação do anticorpo a FGFRlc e/ou à proteina mutante de β-Klotho arginina é comparada com a ligação do anticorpo ao FGFRlc humano e/ou ao β-Klotho de tipo selvagem do mesmo conjunto. Pode ser realizada uma titulação do anticorpo com uma escala de aproximadamente 5 log. A intensidade de fluorescência média (MFI) de proteínas mutantes de FGFRlc e/ou β-Klotho arginina pode ser representada graficamente como uma percentagem do sinal FGFRlc humano e/ou β-Klotho de tipo selvagem. Os mutantes para os quais o sinal de todos os anticorpos estão abaixo de um valor de corte, e. g. , 30% de FGFRlc de tipo selvagem e/ou de β-Klotho podem ser considerados como sendo uma concentração de proteína demasiado baixa na esfera devido à expressão fraca ou possivelmente deformada na cultura transitória e podem ser excluídas da análise. As mutações (i. e., substituições de arginina) que aumentam a EC50 para o mAb FGFRlc e/ou β-Klotho por um valor de corte, e. g. , 3 vezes ou mais (como calculado por, e. g. , GraphPad Prism®) pode ser considerado como tendo afetado negativamente a ligação de mAb FGFRlc e/ou β-Klotho. Através destes métodos, são elucidados os determinantes e epítopos neutralizantes para vários anticorpos FGFRlc e/ou β-Klotho. EXEMPLO 11

CONSTRUÇÃO DE RECETORES QUIMÉRICOS

Num outro método de determinação dos determinantes de ativação em FGFRlc e/ou β-Klotho humanos, a que estas várias proteínas de ligação a antigénio se ligam, podem ser construídas proteínas FGFRlc e/ou β-Klotho quiméricas, específicas entre espécies humanas e de ratinho, expressas em células 293 ou CHO transitórias ou estáveis, tal como descrito antes e testado. Por exemplo, um recetor FGF21 quimérico pode ser construído compreendendo FGFRlc, FGFR2C, FGFR3c ou FGFR4 humano natural, num exemplo FGFRlc, emparelhado com β-Klotho quimérico de humano/ratinho em que regiões ou sequências selecionadas no β-Klotho humano são sistematicamente substituídas pelos correspondentes resíduos específicos de ratinho (ver, e. g., Figura 2A-2C). De forma semelhante, o β-Klotho humano natural emparelhado com FGFRl, FGFR2c, FGFR2c, FGFR3c ou FGFR4 quimérico de humano/ratinho, num exemplo FGFRlc em que regiões selecionadas ou sequências no FGFRlc humano são sistematicamente substituídas com os resíduos correspondentes específicos de ratinho (ver, e. g. , os alinhamentos das Figuras 1A-1B) . As sequências críticas envolvidas na ligação e/ou atividade das proteínas de ligação a antigénio podem ser derivadas através de ensaios de ligação ou medidas de atividade descritas nos Exemplos 4, 5, 6 e 7 anteriores com base nos recetores FGF21 quiméricos.

Exemplo 11.1 Construção de Quimeras Especificas

As quimeras de β-Klotho de humano-ratinho foram construídas utilizando a metodologia descrita no Exemplo 14. Um esquema das quimeras construídas é mostrado na Figura 29; resumidamente, as quimeras produzidas compreendem (do terminal N para C) uma fusão de uma sequência de β-Klotho humana fundida com uma sequência de β-Klotho murínica fundida com uma sequência de β-Klotho humana. 0 β-Klotho humano (SEQ ID N° : 8) foi utilizado como um enquadramento em que foram inseridas regiões de β-Klotho murínico (sequência de comprimento completo apresentada em SEQ ID N°: 468). As regiões de β-Klotho murínico que foram inseridas foram as seguintes:

Resíduos Murínicos 82P-520P

PKNFSWGVGTGAFQVEGSWKTDGRGPSIWDRYVYSHFRGVNGTDRSTDSYIFFEKDFE

ALDFLGVSFYQFSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYIIWDLP 1 .TI .QEEYGGWKN ATMIDI .FND Y ATY CFQTFGDR VK YWTTIHNPYI .V A WHGFGTGMH A PGEKGNLTAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITLGSHWIEPNRTDNM EDVINCQHSMSSVLGWFANPIHGDGDYPEFMKTGAMIPEFSEAEKEEVRGTADFFAFSF GPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNWIKLEYDDPQILISENGWFTDSYIKTEDTTAIY MMKNFFNQVFQAIKFDF1RVFG YTAWTFFDGFFWQDAYTTRRGFFY VDFNSFQKFRKP KSSAHYYKQIIQDNGFPFKESTPDMKGRFP (SEQ ID N°: 470).

Resíduos Murínicos 506F-1043S FPI .KFSTPDMKGRFPCDFS WGVTFSVI .KPFFTVSSPQFTDPHI .YVWNVTGNRIJ .YR VFG VRFKTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFALDWTSILPTGNFSKVNRQVLRYYR CVVSEGLKEGVFPMVTLYHPTHSHLGLPLPLESSGGWLNMNTAKAFQDYAELCFREEG DEVKEWITINEPNRESDMYNRTSNDTYRAAIINEMIAIIAQVWIIEYDRQ YRPV QIIG AVS LSLIICD WAEPANPFVDSIIWKAAERFLQFEIA WADPLFKTGD YPS VMKEYIASKNQRG FSSSVFPRFTAKESRFVKGTVDFYAFNHPTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFLQD1TRFS SPSRFA VTP WG V RKLFA WIRRN Y RDRDIY ΙΡΑΝ GIDDEALEDDQ1RKY Y LFKY V QFAFK AYFIDKVKIKGYYAFKETEEKSKPRFGFFTSDFRAKSSVQFYSKFISSSGFPAENRSPACG QPAEDTDCTICSFFVEKKPEIFFGCCFISTEAVFFSITVFHHQKRRKFQKARNFQNIPFKK GHSRVFS(SEQ ID N°: 471)

Resíduos Murínicos 1M-193L MKTGCAAGSPGNFWIFFSSDERNTRSRKTMSNRAFQRSAVESAFVEERAVTGFSGDGK AIWDKKQYVSPVNPSQLFLYDTFPKNFS WGVGTGAFQVEGS WKTDGRGPSIWDRYVY S HLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQFSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYY RALLDSLVLRNIEPIVTL (SEQ ID N° : 472)

Resíduos Murínicos 82P-302S PKNFSWGVGTGAFQVEGSWKTDGRGPS1WDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSY1FLEKDLL AI,DFI.GVSFYQFSTSWPRIPPNGTVAAVNAQGI,RYYRAI I,I)SI,VT,RNIEPIVTI YIIWDT P LTLQEEYGG WKNATMIDLFND YATYCFQTFGDRVKYWITIIINPYLV AWIIGFGTGMI IA PGEKGNLTAVYTVGHNL1KAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSIFLGS (SEQ ID N° : 473)

Resíduos Murínicos 194Y-416G

YHWDLPLTLQEE YGGWKNA PMIDLFND YATYCFQ PFGDRVKY WIP1HNP YLVAWHGF GTGMHAPGEKGNLTAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITLGSHWIEP NRTDNMEDVINCQHSMSSVFGWEANPIHGDGDYPEFMKTGAMIPFFSEAEKFFVRGTA DFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNWIKLEYDDPQILISENG (SEQ ID N°: 474)

Resíduos Murínicos 302S-506F SI IWIEPNRTDNMEDVINCQIISMSS VLG WFANPIIIGDGDYPEFMKTG AMIPEFSEAEKEE VRGTADFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNWIKLEYDDPQILISENGWFT DSYIKTEDTTAIYMMKNFLNQVLQAIKFDEIRVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTRRGLFY VDENSEQKERKPKSSAIIYYKQIIQDNGFi(SEQ ID N° : 475)

Resíduos Murínicos 416G-519P GWFTDSYIKTEDTTAIYMMKNFLNQVLQAIKFDEIRVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTR RGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQIIQDNGFPLKESTPDMKGRF (SEQ ID N°: 476)

Resíduos Murínicos 507P-632G PI .KESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVI .KPEFTVSSPQFTDPHIAVWNVTGNRII .YRVEGV RLKTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFALDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRC VVSEGLKLG i (SEQ ID N° : 477)

Resíduos Murínicos 520P-735A

PCDFS WGVTES VI KPE1TVSSPQFTDPHI YVWNVTGNRI,1 ,YRVRGVRI K I RPSQCTDY VSIKKRVEMLAKMKVTHYQFALDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGVFP MVTLYHPTHSHLGLPLPLLS SGGWLNMNTAKAEQD Y AELCERELGDLVKLWITINEPNR LSDMYNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGA (SEQ ID N° : 478)

Resíduos Murínicos 632G-849Q GV1 PMVTLYIlPTIlSIlLGLPLPLLSSGGWLNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWrnN EPNRLSDMYNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLSLHCDWAE PANPFVDSHWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSSvSVLPRFT AKESRLVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFLQ (SEQ ID N°: 47 9)

Resíduos Murínicos 735A-963S AVSLSLIICDWAEPANPEVDSIIWKAAERFLQIEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKJN QRGLSS S V LPRFT AKESRL V KGP VDFY ALN HFTPRFVIHKQLNTN RS V ADRD V QFLQDIT RLSSPSRLAVrPWGVRKLLAWlRRNYRDRDlYrrANGlDDLALEDDQlRKYYLEKYVOE ALK A YL1DK VKIKG Y Y AFKLTEEKS KPRFGFFTSDFRAKS S VQF Y S KL1SS S 1 (SEQ ID N°: 480)

Resíduos Murínicos 1M-81F MK'IGCAAGSPGNEWIFFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRAVTGFSGDGK AIWDKKQYVSPVNPSQLFLYDTF (SEQ ID N° : 481)

Resíduos Murínicos 82P-193L PKNRSWCtVCtTGAFQVEGvSWKTDCtRCtPSIWDRYVYSHERCtVNGTDRSTDSYIFEEKDIJ. ALDFLG V SFY QFSIS WPRLFPNGT V A A VN AQGLRY YRALLD SLVLRNIEPIVTL (SEQ ID N°: 482)

As quimeras produzidas utilizando as sequências de β-Klotho murínicas compreendem os seguintes componentes:

As quimeras produzidas compreendem as seguintes sequências de aminoácidos: (i) huBeta_Klotho (1-81, 523-1044) (muBetaKLOTHO 82-520)

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV

TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGSW

KTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ

FSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYHWDLPL

TLQEEYGGWKNATMIDLFNDYATYCFQTFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGF

GTGMIIAPGEKGNLTAVYTVGIINLIKAIISKVWIINYDKNERPIIQKG WLSITL

GSIIWIEPNRTDNMED VINCQIISMSS VLG WFANPIIIGDGD YPEFMKTG AMI

PEFSEAFKEEVRGTADFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNW

IKLEYDDPQILISENGWPTDSYIKTEDTTAIYMMKNELNQVLQAIKEDEI RVFGY lAWiFFDGFEWQDAY ri’RRGFFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQl

IQDNGFPLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHLYV

WNATGNREEHRVEGVREKTRPAQCTDFVNIKKQEEMEARMKVTHYRFAED

WASVFPTGNFSAVNRQAFRYYRCVVSEGFKEGISAMVTEYYPTHAHFGFP

EPFFHADGWENPSTAEAFQAYAGFCFQEFGDEVKEWITINEPNRFSDIYN

RSGNDTYGAAHNLLVAHALAWREYDQQFRPSQRGAVSLSEHADWAEPANP

Y ADSHWR A AERFLQFEIA WFAEPLFKT GD YP A AMRE YI AS KHRRGLS S S A

I .PRETEAERRI .1XGTVDFC AI .NHFTTR FVMHEQIAGSRYDSDRDTQFI .QD

ITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDDRL

RKYYIΓτΚΥΙ QEVT,ΚΛΥΙJDKVRTKGYYAFKIAEEKSKPRFGFFTSDFKAK

SSTQFYNKVTSSRGFPFENSSSRCSQTQENTFCTVCI .11 VQKKP1 JFI ,GC CFFSTEVLLESTAIFQRQKRRKFWKAKNEQHIPEKKGKRVVS (SEQ TD NO:455) (ii) huBeta_Klotho (1-507) (muBetaKLOTHO 506F-1045S) MKPGCAAGSPGNEW1FFSTDE1TTRYRNTMSNGGLQRSVILSAL1LLRAV TGESGDGRAlWSKNPNFrPVNESQLFLYDTEPKNEEWGlGTGALQVEGSW KKDGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY WITIHNP YL V A WHGY GTGMHAPGEKGNFAAVYTVGHNFIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWFSITF GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVEGWFANPIHGDGDYPEGMRKKEFS VLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL NWTKT.F.YNNPRTT.TAF.NGWFTDSRVKTP.nTTATYMMKNFTSQVT QATRED FTRVFGYT AWSII ,DGFE WQD A YTTRRGI. 1 Y VI) 1 N S KQ K FR K PK S S Λ11Y Y K QIIRENGFPLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHL YVWN VTGNRLLYRVEGVRLKTRPSQCTD Y V SIKKR VEMLAKMKVTHY QFA LDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGVFPMVTLYHPTHSHLG LPLPLLSSGGWLNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWITINEPNRLSDM YNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLSLHCDWAEPA NPFVDSHWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSS SVEPRFT AKESREVKGTVDFY AI .NHFTTRFVIHKQI .NTNRSV ADRDVQFI, QDITRLSSPSRLAVTPWGVRKLLAWIRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDD QIRKYYLEKYVQEALKAYLIDKVKIKGYYAFKLTEEKSKPRFGFFTSDFR AKSSVQFYSKLISSSGLPAENRSPACGQPAEDTDCTICSFLVEKKPLIFF GCCEISTLAVLLSITVFIIIIQKRRKEQKARNLQNIPLKKGIISRVES (SEQ ID NO:456) (iii) huBeta_Klotho (194-1044) (muBetaKLOTHO 1-L193) MKTGCAAGSPGNEWIFFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRAV TGFSGDGKAIWDKKQYVSPVNPSQLFLYDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGSW KTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ FSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY WITIHNP YL V AWHGY GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS VI.PIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPI NTMAKMGQNVSI ,NI .RI-.AI. NWIKIEYNNPRTIJAENGWFTDSRVKTEDTTATYMMKNFI ,SQVI QAIRI.I)

EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK

QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL

YVWNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFA

LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG

LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI

YNRSGNDTYG AAIINLLVAIIALAWRLYDQQFRPSQRG AVSLSLIIADWAEPA

NPYADSIIWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKIIRRGLSS

SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL

QDITRLSSPTRLA V1PWG V RKLLRW VRRN Y GDMD1YITASGIDDQALEDD

RLRKY YLG KYLQEVLKA YLIDKVRIKG YY AFKLAEEKS KPRFG FFT SDEK

AKSSIQEYNKVISSRGEPEENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIEL GCCEFSILVLLLS1A1EQRQKRRKFWKAKNLQH1PLKKGKRVVS (SEQ ID NO:457) (iv) huBeta_Klotho (1-81, 303-1044) (muBetaKLOTHO 82P-302S)

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV

TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGSW

KTDGRGPSIWDRYVYSIILRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ

FS IS WPRLFPN GTVAAVNAQG LR Y YR ALLD SL VLRNIEPIVTL YIIWD LPL

TLQEEYGGWKNATM1DLFNDYATYCFQTFGDRVKYW1T1I1NPYLVAWI1GF

GlGMHAPGEKGNL'I'AVY'I'VGHNLlKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSrrL

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS

VLPIFSEAEKIIEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL

NWIKLEYNNPRILIAENGWFTDSRVK'I'EDITAIYMMKNFLSQVLQAIRLD

EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK

QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL

Y V WNA'I'GN RLLHR VEG V RLK I'RPAQC i’DF V N1KKQLEMLARMK VIH YRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SAIPR ITEAERRIJ.KGTVDFCALNHFTTRFVMHEQI AGSRYDSDRDIQI I, QDTTRIASPTRIΛVTPWGVRKI4 ,R WVRRN YGDMDTYIT ASGIDDQ AI .1:1)1) RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFESTLVLLLSIAIFQRQKRRKEWKAKNLQIIIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:458) (v) huBeta_Klotho (1-193, 419-1044) (muBetaKLOTHO Y194-416G)

MKPGCAAGSPGNEWTFFSTDEITTRYRNTMSNGGI.QRSVII,SAI II I.RAV

TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQIYI YD I’l ΡΚΝ1Ί WGIGTGAFQVFGSW

KKDGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ

FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL

TLQEEYGGWKNATMIDLFNDYATYCFQTFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGF

GTGMHAPGEKGNLTAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITL

GSHWIEPNRTDNMEDVINCQHSMSSVLGWFANPIHGDGDYPEFMKTGAMI

PEFSEAEKEEVRGTADEEAESEGPNNERPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNW

IKLEYDDPQILISENGWFTDSRVKTEDTTAIYMMKNELSQVLQAIRLDEI

RVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYKQI

IRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHLYV

WN A PGNRLLHRVEGVRLK I’RPAQC rDFVNIKKQLEMLARMKVl'HYRFALD

WASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLGLP

EPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDIYN

RSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPANP Y ADSHWR A AERFLQFEIA WFAEPLFKT GD YP A AMRE YI AS KHRRGLS S S A LPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFLQD ITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDDRL RKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFKAK SSIQFYNKVLSSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFLGC CFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:459) (vi) huBeta_Klotho (1-301, 509-1044) (muBetaKLOTHO S302-F506)

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV

TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW

KKDGKGPSIWDIIFIIITIILKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ

FS IS WPRLEPDGIVTV ANAKGLQYY S TLLD ALVLRNIEPIVTLYIIWDLPL

ALQEK YGG W KN DT1ID11N D Y ATYCl fQMl fGDR V K Y WITH 1NPYLVAWI1GY

GTGMHAPGEK.GNLAAVYTVGHNL1KAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLS1TL

GSHWIEPNRTDNMEDVINCQHSMSSVLGWFANPIHGDGDYPEFMKTGAMI

PEFSEAEKEEVRGTADFFAFSFGPNNERPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNW 1KLEYDDPQ1L1SENGWPTDSY1KTEDTTA1YMMK.NFLNQVLQA1KFDE1

RVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQI

IQDNGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHLYV

WNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFALD

WASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLGLP

EPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDIYN

RSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPANP Y ADSHWR A AERFLQFEIA WFAEPLFKT GD YP A AMRE YI AS KFIRRGLS S S A I PRFTFAERRI.1XGTVDFCAI.NHFTTRFVMHEQI AGSRYDSDRDIQI I.QD ITRIASPTRI. AVIPWGVRKIJ ,R WVRRNYGDMDIYTTASGTDDQAFFDDRI. RKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFKAK SSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFLGC CFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQIIIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:460) (vii) huBeta_Klotho (1-417, 522-1044) (muBetaKLOTHO G416-F519)

MKPGC A AGSPGNEWTFFSTDEITTRYRNTMSNGGI .QRSVIIA A Eli I ,RAV

TGFS GDGR AIWS KNPNFTP VNE SQI YI .YDTFPKNFFWGIGTGAI .QVFCiSW

KKDGKGPSrWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ

FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL

ALQEKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY WITIHNP YL V AWHGY

GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS

VLPIFSEAEKIIEMRGTADEEAESFGPNNEKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL

NWTKT EYNNPRTT TAENGWETDSYTKTEDTTATYMMKNFT NQVT QATKFD

EIRVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYK

QllQDNGFPLKESIPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL Y V WN AIGN RLLHR VEG V RLK I'RP AQC PDF V N1KKQLEML ARMK VTH YRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RERKYYT GKYT -OEVT KAYT JDKVRTKGYYAFKT -AEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVLSSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:461) (viii) huBeta_Klotho (1-507, 635-1044) (muBeta KLOTHO F06-G632)

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV

TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW

KKDGKGPSIWDIIFIIITIILKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ

FS IS WPRLFPDGIVTV ANAKGLQYY S TLLD ALVLRNIEPIVTLYIIWDLPL

ALQEK YGG W KN DT1ID11N D Y A'i'YCl fQMl fGDR V K Y WITH 1NPYLVAWI1GY

GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWIINYNTIIFRPHQKGWLSITL

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS

VLPIESEAEKIIEMRGTADEEAFSFGPNNEKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL

NW1KLEYNNPR1L1AENGW1TDSRVK.TEDITAIYMMKNFLSQVLQA1RLD

EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK

QIIRENGFPLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHL

YVWNVTGNRLLYRVEGVRLKTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFA

LDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG

LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI

YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA

NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SAIPR ITEAERRIJ.KGTVDFC AENHFTTRFVMHEQI AGSRYDSDRDIQI T, QDTTRI.SSPTRIΛVTPWGVRKI4 ,R WVRRN YGDMDTYIT ASGIDDQ AI .1:1)1) RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQIIIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:462) (ix) huBeta_Klotho (1-521, 738-1044) (muBeta KLOTHO 520P-735A)

MKPGC A A GS PGNE WTFFS TDEITTR YRNTMS N GGI QRSVI1 SAMI 4 ,RAV

TGFS GDGR AIWS KNPNFTP VNE SQI .FI .YDTFPKNFFWGIGTGAI QVIXiSW

KKDGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ

FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL

ALQEKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY WITIHNP YL V AWHGY

GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS

VLPIFSEAEKIIEMRGTADEEAESFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL

NWTKT .FYNNPRTT TAENGWETDSRVKTEDTTATYMMKNFT ,SQVT QATRFD

EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK

QllRENGFSLKESIPDVQGQFPCDFSWGVIESVLKPEFTVSSPQFTDPHL

YVWNVI'GNRLLYRVEGVRLKTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFA

LDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGVFPMVTLYHPTHSHLG

LPLPLLSSGGWLNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWITINEPNRLSDM

YNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLSLHADWAEPA

NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS

SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL

QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD

RFRKYYTGKYTQF.VT KAYT JDKVRTKGYYAFKT-AFFKSKPRFGFFTSDFK

AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:463) (x) huBeta Klotho (1-633, 852-1044) (muBeta KLOTHO 632G-849Q)

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV

TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW

KKDGKGPSIWDIIFIIITIILKNVSSTNG SSDS YIFLEKDLS ALDFIG VSFYQ

ES IS WPRLEPDGIVTV ANAKGLQYY S TLLD ALVLRNIEPIVTLYIIWDLPL

ALQEKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY W1TIHNP YL V A WHGY

GTGMIIAPGEKGNLA AVYTVGIINLIKAIISKVWIINYNTIIERPIIQKG WLSITL

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS

VLPIFSEAEKIIEMRGTADFFAESEGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL

NW1KLEYNNPR1L1AENGWFTDSRVKTEDITAIYMMKNFLSQVLQA1RLD

ETRVFGYTAWSEEDGFEWQDAYTTRRGEFYVDFNSKQKERKPKvSSAErYYK

QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL

YVWNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFA

LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGVFPMVTLYHPTHSHLG

LPLPLLSSGGWLNMNTAKAFQDYAELCERELGDLVKLWITINEPNRLSDM

YNRTSNDTYRAAIINLMIAIIAQVWIILYDRQ YRPVQIIG AVSLSLIICDWAEPA

NPFVDSIIWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSS

SVLPRFTAKESRLVKGTVDEYALNHETTREVIHKQLNTNRSVADRDVQEL

QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD

RLRKY YLGKYLQEVLKA YLIDKVRIKGYY AFKLAEEKS KPRFGFFT SDFK

AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTFVLLFSIAIFQRQKRRKFWKAKNFQHIPFKKGKRVVS (SEQ ID NO:464) (xi) huBeta_Klotho (1-736, 967-1044) (muBeta KLOTHO 735A-963S)

MKPGC A AGSPGNEWIFFSTDETTTRYRNTMSNGGI.QRSVII SAMI I.RAV TGFSGDGR AIWS KNPNFTPVNESQI .FI .YDTFPKNFFWGIGTGAI QVFC iSW KKDGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY WITIHNPYLV AWHGY GTGMI IAPGEKGNLA AVYTVGI INLIKAI ISKVWI INYNTI IFRPI IQKG WLSITL GSIIWIEPNRSENTMDIEKCQQSMVS VLG WEANPIIIGDGD YPEGMRKKLES

V LPIFSEAEKHEMRG TAD LEAFS FGPN N FKPLNTM AKMGQN V SLN LRE AL NWTKT EYNNPRTT TAENGWFTDSRVKTFDTTATYMMKNFT ,SQVT QATRFD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK Q11RFNGFSLKFSTPDVQGQFPCDFSWGVTFSVLKPFSVASSPQFSDPHL Y V WN AI'GN RLLHR VEG V RLK I'RP AQC PDF V N1KKQLEML ARMK VTH YRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHCDWAEPA NPFVDSHWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSS SVLPRFTAKESRLVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFL QDITRLSSPSRLAVTPWGVRKLLAWIRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDD QIRKYYLEKYVQEALKAYLIDKVKIKGYYAFKLTEEKSKPRFGFFTSDFR AKSSVQFYSKLISSSGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:465) (xii) huBeta_Klotho (82-1044) (muBeta KLOTHO 1-81F)

MKTGCAAGSPGNEW1FFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRAV

TGFSGDGKAIWDKKQYVSPVNPSQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW

KKDGKGPSIWDIIFIIITIILKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ

FS IS WPRLFPDGIVTV ANAKGLQYY S TLLD ALVLRNIEPIVTLYIIWDLPL

ALQEK YGG W KN DT1ID11 N D Y ATYCl fQMl fGDR V K Y WITH 1NPYLVAWI1GY

GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNL1KAHSKVWHNYNTIIFRPHQKGWLS1TL

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS

VLPIFSEAEKIIEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL

NW1KLEYNNPR1L1AENGWPTDSRVK.TEDITAIYMMKNFLSQVLQA1RLD

EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK

QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL

Y V WNA'l'GN RLLFIR VEG V RLKTRPAQCTDF V N1KKQLEMLARMK V1Ή YRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SAIFRTTEAERRIJ.KGTVDFCALNHFTTRFVMHEQI AGSRYDSDRDIQI T, QDTTRI .SSPTRIΛVTPWGVRKIJ ,R WVRRN YGDMDTYTT ASGTDDQ AI FDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQIIIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:466) (xiii) huBeta_Klotho (1-81, 194-1044) (muBeta KLOTHO 82P-193L)

MKPGC A A GS PGNE WTFFS TDEITTR YRNTMS N GGI .QRSVII SAMI λ ,RAV

TGFSGDGR AIWSKNPNFTPVNESQI FI .YDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGSW

KTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ

FSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYHWDLPL

ALQEKY GGWKNDTIIDIFND Y AT Y CFQMFGDRVKY WITIHNP YL V AWHGY

GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL

GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS

VLPIFSEAEKIIEMRGTADEFAESFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL

NWTKT FYNNPRTT TAENGWFTDSRVKTEDTTATYMMKNFT ,SQVT QATRT D

EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK

QllRENGFSLKESIPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL Y V WN ATGN RLLHR VEG V RLK I'RP AQC IDE V N1KKQLEML ARMK VIH YRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RT-RKYYTGKYT-OF.VT KAYT JPKVRTKGYYAFKT-AFFKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVLSSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:467)

Foram testadas várias proteínas de ligação a antigénio aqui proporcionadas, assim como FGF21 humano, para a capacidade de ativar as quimeras em células L6. A Figura 30 correlaciona os resultados observados com cada molécula testada.

Estes dados indicam que enquanto o FGF21 humano era capaz de ativar FGFRlc combinado com todas as quimeras de β-Klotho humano/ratinho (o sinal "+" indica atividade no recetor), as substituições da SEQuências de ratinho em β-Klotho humano afetaram as atividades de 16H7, 37D3 e 39F7. Consulte a Figura 30. Estes resultados sugerem que as sequências de β-Klotho 1-81, 302-522 e 849-1044 são importantes para as atividades de proteínas agonistas de ligação a antigénio e podem representar um epitopo importante para a sua função. EXEMPLO 12

ANÁLISE DA PROTEÇÃO DA PROTEASE

As regiões do recetor FGF21 humano ligado pelas proteínas de ligação a antigénio, que se ligam ao recetor FGF21 humano, e. g. , o FGFRlc, o β-Klotho ou o o complexo FGFRlc e β-Klotho podem ser identificados por fragmentação do recetor FGF21 humano em péptidos com proteases específicas, e. g., AspN, Lis-C, quimotripsina ou tripsina. A sequência dos péptidos do recetor FGF21 humano resultante (i. e., tanto fragmentos peptídicos contendo dissulfureto como não contendo dissulfureto das porções FGFRlc e β-Klotho). Num exemplo, as formas solúveis de um recetor FGF21 humano, e. g. , um complexo compreendendo o heterodímero ECD-Fc FGFRlc e β-Klotho aqui descrito, pode ser digerido com AspN (que cliva depois do ácido aspártico e de alguns resíduos de ácido glutâmico na extremidade amino) por incubação de cerca de 100 pg de recetor FGF21 solúvel, a 1,0 mg/mL em fosfato de sódio 0,1 M (pH 6,5), durante 20 horas, a 37 °C, com 2 yg de AspN.

Um perfil peptidico das digestões de AspN pode então ser produzido por cromatografia de HPLC enquanto se espera que uma digestão de controlo com uma quantidade semelhante de anticorpo seja essencialmente resistente à endoprotease AspN. Um ensaio de proteção da protease pode então ser realizado para determinar a digestão proteolítica do recetor FGF21 humano na presença das proteínas de ligação a antigénio. O princípio geral deste ensaio é que a ligação de uma proteína de ligação a antigénio ao recetor FGF21 pode resultar na proteção de determinados locais específicos de clivagem de proteases e esta informação pode ser utilizada para determinar a região ou porção do recetor FGF21 onde a proteína de ligação a antigénio se liga.

Resumidamente, as digestões de péptidos podem ser sujeitas a mapeamento de péptidos de HPLC; os picos individuais são recolhidos e os péptidos são identificados e mapeados por análises LC-MS (ESI-LC-MS) de ionização por electropulverização em linha e/ou por sequenciação do terminal N. As análises de HPLC para estes estudos podem ser realizadas utilizando uma coluna C18 de fase reversa de orifício estreito (Agilent Technologies) para análise sem ligação de dados e utilizando uma coluna C18 de fase reversa capilar (The Separation Group) para LC-MS. O mapeamento de péptidos de HPLC pode ser realizado com um gradiente linear de ácido trifluoroacético a 0,05% (fase móvel A) a 90% de acetonitrilo em ácido trifluoroacético a 0,05%. As colunas podem ser desenvolvidas a uma taxa de fluxo desejável para HPLC de orifício estreito para análises de LC-MS sem ligação de dados ou com ligação de dados e para HPLC capilar para análises de LC-MS em linha.

As análises da SEQuências podem ser conduzidas por LC-MS/MS em linha e por sequenciação de Edman nos picos peptídicos recuperados de HPLC. As análises em linha de ESI LC-MS da digestão de péptidos podem ser realizadas para determinar a massa e sequência precisas dos péptidos que são separados por HPLC. As identidades dos péptidos selecionados presentes nos picos peptídicos da digestão com protease podem ser assim determinadas. EXEMPLO 13

ESTUDO DO MACACO CYNOMOLGUS

Uma construção codificando a proteína de ligação a antigénio, aqui designada como 16H7, foi produzida utilizando a metodologia descrita nos Exemplos 1-3. 0 16H7 foi expresso, purificado e caracterizado como descrito nos Exemplos 1-5 e foi estudado in vivo em macacos cynomolgus obesos. 0 16H7 é um anticorpo IgGl inteiramente humano e é descrito pelas sequências proporcionadas nas Tabelas 1-4, supra.

Exemplo 13.1

Desenho de estudo 0 estudo foi conduzido em macacos Cynomolgus. Os macacos tinham 8-19 anos de idade. Os pesos corporais variaram de 7 a 14 kg e o IMC variou de 36 a 74 kg/m2. Os macacos foram aclimatados durante 6 semanas antes do início da administração do composto. Durante o período de aclimatação, os macacos foram familiarizados com os procedimentos relacionados com o estudo, incluindo retenção da cadeira, injeção subcutânea (PBS, 0,1 mL/kg), lavagem (água, 10 mL/kg) e sangue extraído para amostras OGTT e não-OGTT. Após 4 semanas de treino, mediu-se o OGTT basal e os parâmetros metabólicos plasmáticos. 20 macacos foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em dois grupos de tratamento para obter níveis basais semelhantes de peso corporal, perfis de OGTT de glucose e níveis de glicose e triglicéridos no plasma. O estudo foi conduzido de forma cega. Tranasportador (n=10), 16H7 (n=10) . O composto foi administrado uma vez por semana (5 mg/kg). Na semana em que os animais não foram injetados com 16H7, receberam injeção de veículo em vez disso. Após 2 injeções de 16H7, os animais foram monitorizados durante mais 6 semanas para a lavagem do composto e recuperação dos tratamentos. A ingestão de alimentos, peso corporal, química clínica e OGTT foram monitorados ao longo do estudo. A ingestão de alimentos foi medida em cada refeição. O peso corporal foi medido semanalmente. As amostras de sangue foram recolhidas em dias diferentes em estado de jejum ou alimentado para medir os níveis de glucose, insulina e triglicéridos. Os OGTT foram realizados a cada duas semanas após o início do estudo. O dia que inicia o tratamento é designado como 0 e o plano de estudo detalhado é mostrado na Figura 14.

Os resultados apresentados neste Exemplo representam os dados recolhidos ao longo dos 68 dias do estudo.

Exemplo 13.2

Efeito do 16H7 na Ingestão de Alimentos

Os animais foram alimentados duas vezes ao dia, com cada animal recebendo 120 g de alimento formulado, estabelecido durante o período de aclimatação. O restante alimento foi removido e pesado após cada refeição para calcular a ingestão de alimentos. Os tempos de alimentação foram das 8:00 h às 8:30 h (±30 minutos) e depois das 4:30 h às 5:00 h da tarde (±30 minutos) . A fruta (150 g) foi proporcionada a cada animal das 11:30 às 12:30 h (±30 minutos) todos os dias.

Em comparação com o veículo, ο 16H7 reduziu a ingestão de alimentos nos macacos. O efeito diminuiu e a ingestão de alimentos retornou para perto dos níveis basais ou de controlo após cerca de 21 dias de tratamento. Ο 16H7 não teve um efeito significativo sobre a ingestão de alimentos de manhã (Figura 15) e apenas reduziu modestamente a ingestão de alimentos na refeição de tarde, durante o tratamento (Figura 16). Observou-se um aumento da ingestão alimentar de manhã após o dia 49 (Figura 15) . Ao longo do estudo (e mesmo durante o período de aclimatação), a ingestão de frutas pareceu menor no grupo 16H7 em comparação com o grupo veículo. Globalmente, ο 16H7 mostrou um efeito significativo na inibição da ingestão de alimentos.

Exemplo 13.3

Efeito do 16H7 Sobre o Peso Corporal 0 peso corporal foi monitorizado semanalmente ao longo do estudo. Ao longo dos tratamentos de 4 semanas, o peso corporal dos animais tratados com o veículo permaneceu constante, enquanto que o peso corporal dos animais tratados com 16H7 diminuiu progressivamente. 0 peso corporal não retornou ao basal no final do período de lavagem de 6 semanas (Figura 17).

Exemplo 13.4

Efeito do 16H7 no índice de Massa Corporal (IMC), Circunferência Abdominal (AC) e Espessura de Dobra da Pele (SFT) 0 IMC, AC e SFT foram monitorizados semanalmente ao longo do estudo, tanto antes como depois da administração do composto de teste quando o peso corporal foi medido. 0 IMC é definido como o peso corporal do indivíduo dividido pelo quadrado da sua altura. 0 SFT é a espessura de uma camada dupla de pele e a gordura abaixo dela, medida com um compasso de calibre. As BMI, SFT e AC são medidas relativamente precisas, simples e baratas, da composição corporal, particularmente indicativas de gordura subcutânea. Os animais tratados com veículo apresentaram BMI, SFT e AC relativamente estáveis ao longo do estudo. Os animais tratados com 16H7 mostraram níveis diminuídos de IMC, AC e SFT ao longo do estudo de 4 semanas, sugerindo que o composto 16H7 resultou na redução da massa gorda. Os resultados são apresentados nas Figuras 18-20, respetivamente. Estes parâmetros medidos não voltaram aos valores basais no final do período de lavagem de 6 semanas.

Exemplo 13.5

Efeito do 16H7 sobre o Teste de Tolerância Oral à Glucose (OGTT)

Os OGTT foram conduzidos antes e depois do início dos tratamentos. Antes das injeções de 16H7, os valores basais para os níveis de glucose e insulina foram medidos através da OGTT (Figuras 21 e 22, respetivamente) e não foram estatisticamente significativos entre os grupos veículo e 16H7. Os OGTT pós-dose foram realizados a cada duas semanas, durante o período de tratamento e após 3 semanas de período de lavagem. 0 16H7 melhorou ligeiramente a tolerância à glucose após 4 semanas de tratamento e 3 semanas de período de lavagem. 0 modelo animal utilizado não é intolerante à glucose, explicando os modestos efeitos observados (Figura 21). Os níveis de insulina foram estatisticamente diminuídos nos animais tratados com 16H7 (significância observada no tempo 0 durante o OGTT realizado após 2 semanas de tratamento, no tempo 0 e 15 minutos durante o OGTT realizado após 4 semanas de tratamento e no tempo 0 e 60 minutos durante a OGTT realizada após 2 semanas de tratamento) (Figura 22).

Exemplo 13.6

Efeito do 16H7 nos Níveis no Sangue de Glucose e Insulina em Jejum e Alimentado 0 sangue foi recolhido de animais em jejum de um dia para o outro ou em condições de alimentação após a alimentação de manhã. Nas condições de jejum, o sangue foi extraído semanalmente 5 dias após cada injeção. Nas condições alimentadas, o sangue extraído foi conduzido nos dias 2, 11, 16, 25 e 46 após a primeira injeção. 0 16H7 não reduziu os níveis de glucose no sangue em jejum ou alimentados (Figuras 23 e 25). Não se observou hipoglicémia em nenhum dos macacos tratados com 16H7. 0 16H7, contudo, resultou numa diminuição estatisticamente significativa nos níveis de insulina no plasma em jejum e alimentados (Figuras 24 e 26).

Exemplo 13.7

Efeito do 16H7 nos Níveis de Triglicéridos

As medições foram feitas das mesmas amostras recolhidas para medições de glucose e insulina. Os níveis de triglicéridos foram significativamente reduzidos em animais tratados com 16H7 quando medidos em jejum ou alimentados (Figuras 27 e 28).

Exemplo 13.8

Conclusões

Num estudo conduzido em macacos cynomolgus machos obesos, os animais tratados com 16H7 apresentaram parâmetros metabólicos melhorados. 0 peso corporal foi reduzido e a composição corporal foi melhorada. A redução de curto prazo da ingestão de alimentos foi observada e o efeito diminuiu a ingestão de alimentos recuperados para níveis basais ou de controlo aos 21 dias de estudo. Os níveis de insulina e triglicérides em jejum também foram reduzidos com 16H7. Os níveis de insulina medidos durante a OGTT também foram melhorados. EXEMPLO 14

FORMAS VARIANTES DAS PROTEÍNAS 16H7* E 22H5 DE LIGAÇÃO A ANTIGÉNIO

As proteínas de ligação a antigénio 16H7 e 22H5, que são aqui descritas nas Tabelas 1-4, foram mutadas para conferir propriedades diferentes à molécula, tais como alterações na solubilidade, pi, carga global, imunogenicidade em seres humanos e em modelos animais, estabilidade, etc. As mutações compreendiam adições, deleções ou substituições na cadeia leve (designada por "LC", SEQ ID N°: 14) ou pela cadeia pesada (designada por "HC", SEQ ID N°: 32) da molécula. As mutações de ponto único reveladas foram feitas individualmente ou duas ou mais mutações foram combinadas. * Anticorpo preferido da invenção

Exemplos de mutações e combinações de mutações que foram introduzidas nas sequências de cadeia pesada e leve de 16H7 incluem o seguinte: I83K (em cadeia pesada 16H7) (SEQ ID N°: 396) E16Q (em cadeia pesada 16H7) + V24F (em cadeia pesada 16H7) + I83T (em cadeia pesada 16H7) + S100I (em cadeia pesada 16H7) + T119L (em cadeia pesada 16H7) (SEQ ID N°: 395) D109S (em cadeia pesada 16H7) (SEQ ID N°: 401) A deleção de Y107 (em cadeia pesada 16H7) (SEQ ID N°: 400) A inserção de um resíduo Y no terminal N de Y107 (em cadeia pesada 16H7) (SEQ ID N°: 405) D88R + P89A + V90E (em cadeia pesada 16H7) (SEQ ID N°: 398) D49Y (em cadeia leve 16H7) (SEQ ID N°: 386) D49A (em cadeia leve 16H7) (SEQ ID N°: 387) D91A (em cadeia leve 16H7) (SEQ ID N°: 388) D49A (em cadeia leve 16H7) + D91A (em cadeia leve 16H7) (SEQ ID N°: 389) Q16K (em cadeia leve 16H7) (SEQ ID N°: 385)

Exemplos de mutações e combinações de mutações que foram introduzidas nas sequências de cadeia pesada e leve 22H5 incluem o seguinte: N92Q (em cadeia leve 22H5) (SEQ ID N°: 402) S94A (em cadeia leve 22H5) (SEQ ID N°: 403) C109S (em cadeia pesada de 22H5) (SEQ ID N°: 404)

Resumidamente, as proteínas de ligação a antigénio produzidas compreendem os seguintes pares de cadeias pesadas e leves de 16H7: (i) cadeia leve 16H7 (SEQ ID N°: 14) emparelhada com uma cadeia pesada 16H7 compreendendo I83K (SEQ ID N°: 396); (ii) cadeia leve 16H7 (SEQ ID N°: 14) emparelhada com uma cadeia pesada 16H7 compreendendo E16Q, V24F, I83T, S100I, T119L (SEQ ID N°: 395); (iii) cadeia leve 16H7 (SEQ ID N°: 14) emparelhada com uma

cadeia pesada 16H7 compreendendo D109S (SEQ ID N°: 401) ; (iv) cadeia leve 16H7 (SEQ ID N°: 14) emparelhado com uma cadeia pesada 16H7 compreendendo a deleção de Y107 (SEQ ID N°: 400); (v) cadeia leve 16H7 (SEQ ID N° : 14) emparelhada com uma cadeia pesada 16H7 compreendendo a inserção de um resíduo Y no terminal N de Y107 (SEQ ID N°: 405); (vi) cadeia leve 16H7 (SEQ ID N° : 14) emparelhada com uma cadeia pesada 16H7 compreendendo D88R, P89A, V90E, (SEQ ID N°: 398) ; (vii) cadeia pesada 16H7 (SEQ ID N°: 32) emparelhada com uma cadeia leve 16H7 compreendendo D49Y (SEQ ID N°: 386); (viii) cadeia pesada 16H7 (SEQ ID N°: 32) emparelhada com uma cadeia leve 16H7 compreendendo D49A (LC) (SEQ ID N°: 387); (xi) cadeia pesada 16H7 (SEQ ID N°: 32) emparelhada com uma cadeia leve 16H7 compreendendo D91A (SEQ ID N°: 388); (ix) cadeia pesada 16H7 (SEQ ID N°: 32) emparelhada com uma cadeia leve 16H7 compreendendo D49A, D91A (SEQ ID N° : 389) ; (x) cadeia pesada 16H7 (SEQ ID N°: 32) emparelhada com uma cadeia leve 16H7 compreendendo Q16K (LC) (SEQ ID N°: 385) ; e os seguintes pares da SEQuências de cadeias pesada e leve de 22H5: (xi) cadeia pesada 22H5 (SEQ ID N°: 31) emparelhado com uma cadeia leve 22H5 compreendendo N92Q (LC) (SEQ ID N°: 402) ; (xii) cadeia pesada 22H5 (SEQ ID N°: 31) emparelhada com uma cadeia leve 22H5 compreendendo S94A (LC) (SEQ ID N°: 403) ; (xiii) cadeia leve 22H5 (SEQ ID N° : 13) emparelhada com uma cadeia pesada 22H5 compreendendo C109S (HC) (SEQ ID N°: 404); (xiv) cadeia leve 22H5 (SEQ ID N°: 13) em paridade com uma cadeia pesada 22H5 compreendendo uma inserção de um residuo de tirosina na posição 107 (SEQ ID N°: 405).

As sequências de aminoácidos para as variantes de cadeia leve produzidas são apresentadas na Tabela 6:

Tabela 6A

Sequências de Aminoácidos das Variantes 16H7 e 22H5

Tabela 6B

Sequências de Ácidos Nucleicos das Variantes 16H7 e 22H5

Tabela 6C

Sequências de Variantes de Aminoácidos CDR

Tabela 6D

Sequências das Variantes CDR de Ácido Nucleico

Adicionalmente, um "hemicorpo" foi produzido e estudado. Esta estrutura compreendia a cadeia leve 16H7 (L3; SEQ ID N° : 50), a qual foi emparelhada com uma forma manipulada da cadeia pesada 16H7; a cadeia pesada manipulada compreendia a cadeia pesada 16H7 (SEQ ID N°: 32) unida através de um ligando (G4S) 8 (SEQ ID N°: 440) a uma sequência Fc de IgG2 (SEQ ID N° : 441), a qual se emparelhou com a sequência Fc da cadeia pesada 16H7. As partes componentes do hemicorpo têm as seguintes sequências:

Cadeia pesada 16H7

MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCQVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV

SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTISKDTSKSQVVLIMTNMDPVDTATYY

CARSVVTGGYYYDGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKP

SNTKVDKTVERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED

PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKG

LPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP

ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (SEQ ID N°: 32)

Ligando GGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (Seq ID N°: 440)

IgG2 Fc

ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYV

DGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTIS

KTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP

MLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID N°: 441) A cadeia pesada completa do hemicorpo tinha a sequência de aminoácidos apresentada abaixo:

MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCQVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV

SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTISKDTSKSQVVLIMTNMDPVDTATYY

CARSVVTGGYYYDGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK

DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKP

SNTKVDKTVERKSSYECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED

PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKG

LPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP

ENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP

GGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSERKSSVECPPCPAPPV

AGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREE

QFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPP

SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID N° : 453) a qual é codificada pela seguinte sequência: ATGGACATGAGGGTGCCCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTGCTGTGGCTGAGAGGT GCGCGCTGTCAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTGTGCTGGTGAAACCCACAGAG accctcaggctgacctgcaccgtgtctgggttctcactcaacaatgctagaatgggt

TCGAATGACGAAAAAIX X Ί ACAGCACATCTCTGAAGAGCAGGCTC ACCATCTCCA A GGACACCTCCAAAAGCCAGGTGGTCCTAATTATGACCAACATGGACCCTGTGGACA CAGCC ACAT ATTACTGTGCACGGTCAGT AGTAÀCTGGCGGCT ACTACTACGACGGT A TGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCTAGTGCCAGCACCAAGGGC ccctccgtgttccctctggccccctgcagcagaaggaccagcgagagcacagccgcc

CTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCTTGGAACAGC GGAGCGCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTTGCAGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCT GTACAGCCl G AGC AGCG'1 GG'I’CACCG'1 G( XX: AC iC AC i( ΆΑ( ΊΊΧ XX X \A(X ΧΆ( ί AC !CT ACACCTG EAACXirlGGA( X'ACtAACXXX’AGCAACACX’AAGGTGGAC’AAGACAGTGGA GCGGAAG'lCX'ACiCXi IXXiACi 1ΧΧΧΧΊΧ C"nCi 1CX’ ΙΧΧΧΧΧΊΧΧ’ΙΧΠΧΧΧ CXXíACXTAG

CGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGA

AGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATT

GGTACGTGGACGGGGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAACA

GTTCAACAGCACCTTCCGGGTGGTGTCCGTCCTCACCGTGGTGCACCAGGACTGGCT

GAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCCATCG

AGAAAACCATCAGCAAGACCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTG

CCCCCCAGCCGGGAGGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTCGTGAA

GGGCTTCT ACCCC AGCGAT ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGC AACGGCC AGCCCGAGA

ACAACTACAAGACCACCCCCCCCATGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACT

CCAAACTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGTAGC

GTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGAGCCTGTCTCCT

GGCGGAGGCGGAGGATCTGGCGGCGGAGGAAGTGGAGGGGGCGGATCTGGTGGTG

GAGGCAGCGGCGGAGGTGGAAGTGGCGGTGGAGGATCCGGTGGAGGCGGCTCAGG

TGGCGGCGGAAGCGAGAGAAAGTCCTCCGTGGAGTGTCCACCATGCCCTGCTCCAC

CAGTGGCTGGCCCTTCCGTCTTTCTCTTTCC ACCT AAACCT AAGGAT AC ACTC ATGAT

CTCCAGAACTCCAGAGGTCACATGTGTGGTCGTCGATGTCAGTCATGAGGATCCTGA

AGTCC AGTTT AACTGGT ATGTGGATGGCGTCGAAGTCC AT AATGCT AAGAC AAAACC

TCGCGAAGAAC AGTTT AACTCC ACCTTT AGAGTCGTGAGCGTGCTGAC AGTCGTCC A

TCAGGATTGGCTCAATGGGAAAGAATACAAATGTAAAGTCTCTAACAAAGGACTGC

CCGCTCCTATCGAAAAGACCATCTCCAAAACAAAGGGGCAGCCCAGAGAGCCCCAG

GTCTACACACTCCCACCCTCCAGAGAAGAGATGACAAAAAATCAGGTGTCACTCAC

CTGTCTGGTCAAGGGGTTTTACCCCTCCGACATTGCCGTGGAATGGGAATCCAATGG

GCAGCCTGAA AACA ATT AT AAGACT AC ACCTCCTATGCTCGACTCTGATGGG AGTTT

CTTTCTCTACTCTAAACTCACAGTGGATAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAATGTCTT

TTCCTGCTCCGTC ATGC ATGAAGCTCTCCACAATC ATT AT ACAC AGAAGTCTTTGTCC CTGTCCCCCGGCAAG (SEQ ID N° : 454)

Exemplo 14.1 ELISA de Ligação a β-Klotho Para Anticorpos Manipulados

As formas manipuladas de 16H7 e 22H5 foram testadas para a ligação de β-Klotho, utilizando um ensaio ELISA. As condições para o ELISA foram as seguintes.

Incubaram-se placas Maxisorp revestidas com estreptavidina com 2 pg/mL de β-Klotho, de um dia para o outro, a 4 graus. Os anticorpos foram adicionados em diluições em série de 3 vezes começando a 1 μΜ, durante 1 hora, à temperatura ambiente. Utilizou-se Fc anti-humano conjugado com HRP como o anticorpo detetor. 0 sinal foi desenvolvido com Lumiglo e lido em Envision.

Os resultados do ensaio ELISA são apresentados na Figura 32A-32C e indicam que a maior parte das variantes de 16H7 se ligam ao β-Klotho humano, com exceção de um mutante portador de inserção de tirosina na posição 107.

Exemplo 14.2

Variantes de Manipulação de 16H7 e 22H5 Vinculam-se à Estrutura do Recetor Natural, como Demonstrado por FACS

Realizou-se um ensaio de ligação FACS com várias das formas manipuladas de 16H7 e 22H5. As experiências foram realizadas como se segue.

As células CHO que expressam de forma estável o recetor FGF21 foram tratadas com o anticorpo progenitor 16H7 e 22H5 e também com as suas variantes manipuladas (1 yg por lxlO6 em 100 yL de PBS/0,5% de BSA) . As células foram incubadas com os anticorpos, a 4 °C, seguido por duas lavagens com PBS/BSA. As células foram então tratadas com anticorpos secundários marcados com FITC, a 4 °C, seguido por duas lavagens. As células foram ressuspensas em 1 mL de PBS/BSA e a ligação do anticorpo foi analisada utilizando um instrumento FACS Calibur.

Consistente com os resultados de ELISA, a maioria das variantes manipuladas de anticorpos agonistas do recetor FGF21 testado ligam-se bem ao recetor FGF21 de superfície celular em FACS. Esta observação confirmou ainda que a manipulação dirigida dos anticorpos agonistas do recetor FGF21 mantém a ligação à estrutura natural. Num mutante, em que a CDR3 foi manipulada para incluir uma tirosina na posição Y107, observou-se uma perda completa da ligação ao recetor de superfície celular, o que é semelhante aos resultados de ELISA. Esta observação aponta para o papel do ciclo CDR3 na ligação à conformação natural.

Exemplo 14.3

Atividade das Variantes 16H7 e 22H5 em Adipócitos Humanos Primários O FGF21 estimula a captação de glucose e a lipólise em adipócitos cultivados e, por conseguinte, os adipócitos são frequentemente considerados como sendo um ensaio fisiologicamente relevante. demonstrou-se que um painel das variantes manipuladas de 16H7 e 22H5 exibia atividade de fosforilação Erk tipo FGF21, no ensaio de adipócitos humanos, com uma EC50 estimada inferior a 10 nM, como mostrado na Tabela 7 .

Tabela 7

Atividade de Variantes no Ensaio de Adipócitos Humanos

Exemplo 14.4

Experiências de Ligação Biacore e Medida de Dissociação A ligação de variantes 16H7 e 22H5 a β-Klotho humano foi testada utilizando ensaios Biacore. Resumidamente, o anticorpo anti-His de ratinho (Qiagen, Valência, CA) foi imobilizado num chip CM5 utilizando reagentes de acoplamento de amina (General Electronics, Piscataway, NJ) . 0 β-Klotho recombinante humano marcado com His foi capturado na segunda célula de fluxo para -100RU. A primeira célula de fluxo foi utilizada como um controlo de fundo. Os mAbs a 100 nM foram diluídos em PBS mais 0,1 mg/mL de BSA, 0,005% de P20 e injetados sobre o β-Klotho capturado na superfície do anticorpo anti-His. Para a medição cinética, injetaram-se mAbs de 0,78-100 nM diluídos em PBS mais 0,1 mg/mL de BSA, 0,005% de P20, sobre a superfície de β-Klotho.

As variantes testadas estão resumidas na Tabela 8:

Tabela 8

Variantes Estudadas em Experiências de Ligação e Medidas de Dissociação

Entre os mAbs manipulados testados, a maioria deles demonstrou uma ligação estreita ao β-Klotho humano, exceto o #15 que não demonstrou ligação. A Tabela 9 abaixo mostra mAbs a 100 nM ligando ao β-Klotho capturado em anti-His. A Figura 33 mostra a comparação com a medida de Dissociação.

Tabela 9

Ligação ao β-Klotho

EXEMPLO 15

Combinações de Proteínas de Ligação ao Antigeno Demonstram um Efeito Aditivo

As proteínas de ligação a antigénio que representam diferentes caixas de ligação (Fig. 11a e b) foram selecionadas e testadas em ensaios repórter em pares, para determinar se o par de moléculas se comportaria de uma forma aditiva. Os ensaios foram executados como se segue.

No primeiro dia, o clone FGFRlc+p-Klotho Luc AM-l/D foi semeado numa placa de 96 poços a 20K células/poço em DMEM+10% de meio FBS. A placa foi incubada de um dia para o outro. No dia seguinte, o meio foi substituído por meio de ensaio (DMEM+0,2% de FBS) e incubado de um dia para o outro. De um material de trabalho de anticorpo (1 mg/mL em PBS), cada anticorpo em estudo foi preparado a uma diluição de 2 pg/mL em meio de ensaio.

Combinaram-se 100 pL de cada anticorpo a ser testado numa placa de fundo em U. O meio de ensaio foi removido das células e 50 pL das misturas de anticorpos foram transferidos para as células. As misturas de anticorpos foram incubadas nas células durante 5 h. Por fim, cada amostra foi lida com reagente SteadyGlo Luciferase (50 pl/poço), de acordo com as especificações do fabricante. A Tabela 10 abaixo é um resumo da atividade (% da atividade de FGF21 do ensaio repórter) observada do estudo; a Tabela 11 expressa as atividades observadas relativamente às caixas.

Tabela 10

Atividade de Combinação de Anticorpos (%)

Tabela 11

Combinações de Anticorpos Expressas em Termos de Caixas

Surpreendentemente, vários pares de moléculas demonstraram um efeito aditivo. Conforme ilustrado nas Figuras 34 e 35, respetivamente, os 39F11 e FGF21 demonstraram um efeito aditivo quando medido no ensaio repórter do Exemplo 5, tal como ο 16H7 e ο 39H11.

Resumindo os dados deste conjunto de experiências, observou-se que as proteína de ligação a antigénio da mesma caixa de ligação, e. g., 16H7 quando emparelhado com 20D4 (ambos do Grupo A), a atividade somada não era aditiva. Isto também foi observado quando ο 12E4 foi emparelhado com ο 26H11 (ambos do Grupo B) . Adicionalmente, as proteína de ligação a antigénio, emparelhadas de caixas sem sobreposição, demonstraram atividades aditivas, e. g. , ο 16H7 (Grupo A) emparelhado com ο 26H11 ou o 12E4 (Grupo B) ou emparelhado com o 39F7 (Grupo C) . Além disso, as proteínas de ligação a antigénio 26H11 e 12E4 (Grupo B) apresentaram efeito aditivo quando combinadas com Abs do Grupo A mas não do Grupo C, sugerindo que pode haver alguma sobreposição entre os locais de ligação do Grupo B e do Grupo C e/ou que as conformações de ativação induzida pelas proteínas de ligação a antigénio do Grupo B e do Grupo C, não são mutuamente compatíveis. Finalmente, como esperado, quando uma proteína funcional de ligação a antigénio está emparelhada com uma proteína não funcional de ligação a antigénio (e. g. , 2G10) que se liga a um local de ligação distinto e não sobreposto do Grupo A, B ou C, não existe efeito sobre a atividade da proteína funcional de ligação a antigénio do Grupo A, B ou C.

Coletivamente, estes dados sugerem que as proteínas de ligação a antigénio divulgadas podem ser co-administradas para aumentar o efeito que uma determinada proteína de ligação a antigénio pode proporcionar por si só. A presente descrição não deve ser limitada no âmbito das formas de realização específicas aqui descritas, que se destinam a ser ilustrações de aspetos individuais da divulgação, e métodos e componentes funcionalmente equivalentes que formam aspetos da divulgação. De facto, várias modificaçõees da divulgação, para além das apresentadas e descritas aqui, tornar-se-ão evidentes para os especialistas na técnica da descrição precedente e dos desenhos anexos.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> AMGEN INC.

<120> PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A ANTIGÉNIOS HUMANOS QUE SE LIGAM A BETA-KLOTHO, RECETORES FGF E OS SEUS COMPLEXOS <130> EP82365IHV2101pa <140> ainda não atribuído <141> 2010-12-03 <150> EP10788204.5 <151> 2010-12-03 <150> PCT/US2010/058984 <151> 2010-12-03 <150> US 61/267321 <151> 2009-12-07 <150> US 61/381846 <151> 2010-09-10 <160> 483 <170> Patentin versão 3.5 <210> 1 <211> 630

<212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 1 atggactcgg acgagaccgg gttcgagcac tcaggactgt gggtttctgt gctggctggt 60 cttctgctgg gagcctgcca ggcacacccc atccctgact ccagtcctct cctgcaattc 120 gggggccaag tccggcagcg gtacctctac acagatgatg cccagcagac agaagcccac 180 ctggagatca gggaggatgg gacggtgggg ggcgctgctg accagagccc cgaaagtctc 240 ctgcagctga aagccttgaa gccgggagtt attcaaatct tgggagtcaa gacatccagg 300 ttcctgtgcc agcggccaga tggggccctg tatggatcgc tccactttga ccctgaggcc 360 tgcagcttcc gggagctgct tcttgaggac ggatacaatg tttaccagtc cgaagcccac 420 ggcctcccgc tgcacctgcc agggaacaag tccccacacc gggaccctgc accccgagga 480 ccagctcgct tcctgccact accaggcctg ccccccgcac ccccggagcc acccggaatc 540 ctggcccccc agccccccga tgtgggctcc tcggaccctc tgagcatggt gggaccttcc 600 cagggccgaa gccccagcta cgcttcctga 630 <210> 2 <211> 209

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 2

Met Âsp Ser Asp Glu Thr Gly Phe Glu His Ser Gly Leu Tip Val Ser :1 5 It 15

Val Leu Ala Sly Leu Leu Leu Sly Ala Cys Sin Ala His: Pi© Lie Pi© 20 25 30

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Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Sin Sin Thr Glu Ala His Leu Glu lie Arg 50 55 m

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<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 5

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<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 7

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Met Ala Lys Met ©ly ©1® Asn val Ser Let Asn Lea Arg ©la Ala Leu 3.8.5 .......... 390 .......... 3.95. ' 4-01

Asn Trp lie Lys Leu ©la Tyr Asn Asn Pro Arg lie Lea lie Ala ©la 405 410 415

As® Sly Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr ©la Asp Thr Thr Ala 420 425 430 lie Tyr Met Met Lys As® Phe Leu Ser ©In Val Leu Gin Ala lie Arg 435 440 445

Leu Asp ©la lie Arg Val Phe ©ly Tyr Thr Ala Trp Ser Lea Lea Asp 450 455 460

Sly Phe Giu Trp ©In Asp Ala Tyr Thr lie Arg Arg Sly Lea Phe Tyr

465 470 475 48 O

Val Asp Phe Asn Ser Lys Sin Lys Giu Arg Lys Pro Lys Ser Ser Ala 485 490 495

Sis Tyr Tyr Lys Gin lie lie Arg Glu Asn Gly Phe Ser Lea Lys Gin 500 505 510

Sen Thr Pro Asp ¥al Gin Gly Gin Phe Pro Gys Asp Phe Ser Trp Gly 515 520 525

Val Thr Gla Ser Vai Léu Lys Pro Gin Ser Val Alá Ser Ser Pro Gin 530 535 pO

Phe Ser Asp Pro Hls Leu Tyr Val Trp Asn Ala Thr Gly Asn Arg Leu 545 550 555 560

Leu His Arg Val Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ala Gin Gys 565 570 575

Thr Asp Phe val Asn lie Lys Lys Gin Lea Gin Mete Lea Ala Arg Mete 580 585 590

Lys Val Thr His Tyr Arg Phe Ala Lea Asp Trp Ala Ser Val Lea Pro 595 600 605

Thr Gly Asn Lea Ser Ala Val Asn Arg Gin Ala Lea Arg Tyr Tyr Arg 610 615 620

Cys Vál Val Ser Gin Gly Leu Lys Lea Gly lie Ser Ala Met Val Thr 625 63Θ 635 640

Leu Tyr Tyr Pro Thr His Ala His Leu Gly Lea Pro Gla Pro Leu Lea 645 650 655

His Ala Asp Gly Trp Leu Asn Pro Ser Thr Ala Gla Ala Phe Gin Ala 660 665 670

Tyr Ala Gly Leu Gys Phe Gin Glu Lea Gly Asp Lea Val Lys Leu Trp 675 680 685 lie Thr lie Asn Glu Pro Asn Arg Lea Ser Asp He Tyr Asn Arg Ser 690 695 700

Gly Asn Asp Thr Tyr Sly Ala Ala His; Asn Lew Leu Val Ala His Ala 705 710 715 720

Lew Ala Trp Arg Leu Tyr Asp Arg Gin Phe Arg Pro Ser Gin Arg Gly 725 730 735

Ala Val Ser Leu Ser Leu His Ala Asp Trp Ala Glu Pro: Ala Asn Pro 740 745 750

Tyr Ala Asp Ser His: Trp Arg Ala Ala Glw Arg Phe Lew Gin Phe Glw 755 760 7|f lie Ala Trp Phe Ala Glw Pro Lew Phe Ays Thr Cly Asp Tyr Pro Ala 770 775 780

Ala .Met Arg Glw Tyr He Ala Ser Lys His Arg Arg Gly Lew Ser Ser 785 790 795 800

Ser Ala Lew Pro Arg Lew Thr Glw Ala Glu Arg Arg Leu Lew Lys Gly 805 810 815

Thr Val Asp Phe Cys Ala Lew Asa His Phe Thr Thr Arg Phe Val Met 820 825 830

His Glw Gin Leu Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg Asp Tie Gin 835 840 845

Phe Lew Gin Asp Tie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Thr Arg Leu Ala Val 850 855 860

He Pro Trp Gly Val Arg Lys Lew Lew Arg Trp Val Arg Arg Asa Tyr 865 870 875 880

Gly Asp Met Asp lie Tyr Tie Thr Ala Ser Gly Tie Asp Asp Gin Ala 885 890 895

Lew Glw Asp Asp Arg Lew Arg Lys Tyr Tyr Lew Gly Lys Tyr Leu Gin 900 905 910

Glu Vai Leu Lys Ala Tyr Leu He Asp Lys Vai Arg Ile Lys Gly Tyr 915 925 " 925

Tyr Ala Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

Ph© Thr Ser Asp Phe LyS· Ala Lys Ser Ser Ile Gin Phe Tyr Asn Lys· 945 95Q 955 960

Vai He Ser Ser Arg Gly Phe Pr© Phe Glu Asn Ser Ser Ser Arg Cys 965 9?Q 975

Ser Gin Thr Gin Glu Asn Thr Glu Cys Thr Vai CyS lèu Phe Léu Vai 980 985 990

Gin Lys Lys Pr© Leu Ile Phe Leu Gly Cys Cys Phe Phe Ser Thr Leu 995 1000 1005 vai Leu Lev Leu ser He Ala He :;ph© Gin .Arg· Gin Lys Arg Arg 1010 1015 1020

Lys Phe Trp Lys Ala Lys Asn Leu Gin His ile Pr© Leu Lys Lys 1525 1030 1035

Gly Lys Arg vai vai Ser 1040 <210> 8 <211> 996

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 8

Mete Lys Pro &ly Cys Ala Ala; Sly Sea Pro Sly Asa Glu Trp lie Pile 1 5 10 15

Phe Ser Thr Asp Glu. He Thr Thr Arg Tyr Arg Asa Thr Mete Ser Asa 20 25 30

Sly Sly· Lew ©ΙΑ Arg Séa Val .lie Leu Sea· Ala Lea III lea. Leu Aag 35: 40 AS:

Ala "Val Thr Gly Phe Sea Gly Asp Gly Aag Ala III Tap Sea Lys Asa 50 55 60

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65 70 75 SO

Phe Pro Lys Asa Phe Phe Tap Sly lie Gly Thr Sly Ala Lea Gin Val 85 9C 95

Glu Sly Sea Tap. Lys Lys Asp Sly Lys Sly Pro: Sea: Lie" Tap: Asp His 100 105 110

Phe He His Thr His Leu Lys Asa Val Ser Ser Thr Asn Sly Ser Ser 115 120 125

Asp Ser Tyr He Phe Lea Sla Lys Asp Lea Ser Ala Lea Asp Phe He 130 135 140

Sly Val Ser Phe Tyr Sla Phe Ser He Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro

145 150 155 ISO

Asp Sly He Val Thr Val Ala Asn Ala Lys Sly Leu Sin Tyr Tyr Ser 165 170 175

Thr Leu Leu Asp Ala Leu Val Leu Arg Asa He Slu Pro He Val Thr 180 185 190 Lèu Tyr HiS Tap Asp Leu Pao Lea Ala Lèu Sla Glu Lys Tyr Sly Sly lis 200 205

Trp Lys Asn Asp Thr lie lie Asp lie Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Me£ Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp lie Thr lie: His 225 230 235 240

Ash Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Tyr Gly Thr Gly Met His Ala 2-4.5- 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asn Leu Alia Ala Val Tyr Thr Val Gly His Asn 260 ' 255 270

Leu lie Lys Ala His Ser Lys Val Trp His Asn Tyr Asn Thr His Phe 275 280 285

Arg Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Ser lie Thr Leu Gly Ser His Trp 250 255 300 lie Glu Pro Asn Arg Ser Glu Asn Thr Met Asp He Phe Lys Cys Gin 305 311 313 32®

Gin Ser Met Val Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro He His Gly 325- 330 335:

Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Gly Met Arg Lys Lys Leu Phe Ser Val Leu 340 345 350

Pro He Phe Ser Glu Ala Glu Lys His Glu Met Arg Gly Thr Ala Asp 355 360 365

Phe: phe Ala ;Phe Ser -Phe Gly -Pro Asn Asn Phe Lys Pro: Leu Asn Thr 370 375 380

Met Ala Lys Met Gly Gin Asn Val Ser Leu Asn Leu Arg Glu Ala Leu -3#5 3-:50 355 400

Asn Tip Hi Lys Leu Glu Tyr Asn ASn Pro Arg He Leu He Ala Glu 405 410 415

Asn Sly Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp th» Thr Ala 420 425 430 lie Tyr Met Met lys Assn Phe Leu Ser Gin val Leu. Gin Ala lie Arg 435 440 445

Leu Asp Glu lie Arg Val Phe Sly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Leu Asp 450 455 460

Gly Phe Glu Trp Gin Asp Ala Tyr Thr lie Arg Arg Gly Leu Phe Tyr

465 4*70 475 4SO

Val Asp Phe:· Asn. Ser Lys Gin. Lys Glu. Arg Lys- Pro Lys: Ser Ser Ala 485 490 495

HiS Tyr Tyr Lys Gin lie Lie Arg Glu Asn Sly Phe Ser Léu Lys Glu 500 505 510

Ser Thr Pro Asp Val Gin Gly Gin Phe Pro Cys Asp Phe Ser Trp Gly 515 520 525

Val Thr Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Ser Val Ala Ser Ser Pro Gin 530 535 540

Phe Ser Asp Pro His Leu Tyr val Trp Ash Ala Thr Gly Ash Arg Leu 545 550 555 5:60

Leu His Arg val Glu Gly val Arg Leu Lys Thr Arg pro Ala Gin Gys 565 570 575

Thr Asp Phe Val Asn lie Lys Lys Gin Leu Glu Met Leu Ala Arg Met 580. 585 590

Lys Val Thr His Tyr Arg Phe Ala Leu Asp Trp Ala Ser Val Leu Pro 595 6Q0 605

Thr Gly Asn Leu Ser Ala Val Asn Arg Gin Ala Leu Arg Tyr Tyr Arg §10 §15 620

Cys Vai Vai Ser Glu Gly leu Lys Leu Gly Ile Ser Ala Met Vai Thr 625 630 635 640 léu Tyr Tyr iro Thr His Ala His leu Gly leu Pré Glu Pré leu léu 645 650 655

His Ala Asp Gly Trp lèu Asn Pré Ser Thr Ala Glu Ala Phe Gin Alá 660 665 670

Tyr Ala Gly léu cys Phe Gin Glu leu Gly Asp leu vai lys leu Trp 675 680 685 lie Thr ile Asn Giu Pré Asn Arg léu :Sér: Asp Xlé Tyr Aéh Arg Ser 690 695 700

Gly Asn Asp Thr Tyr Gly Ala Ala His Asn leu leu Vai Ala His Ala 705 710 715 720 leu Ala Trp Arg leu Tyr Asp Arg Gin Phe Arg Pro Ser Gin Arg Gly 725 730 735

Ala Vai Ser leu Ser leu His Ala Asp Trp Ala Glu Pro Ala Asn Pro 740 745 750

Tyr Ala Asp Ser His Trp Arg Ala Ala Glu Arg Phe leu Gin Phe Glu /55 760 765

He Ala Trp Phe Ala Glu Pro leu Phe lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ala 770 775 780

Ala Mel Arg Glu Tyr Ile Ala Ser lys His Arg Arg Gly leu Ser Ser 785 790 795 800

Ser Ala leu Pr© Arg leu Thr Glu Ala Glu Arg Arg leu leu lys Gly 805 810 815

Thr Vai Asp Phe Cys Ala ieu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Vai Met. 820 825 830

His Glu Gin Leu Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg Asp lie Sin 835 140 845

Phe Leu Gin Asp Tie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Thr Arg Leu Ala Val 850 855 860

He Pro Trp Sly Val Arg Lys Leu Leu Arg Trp Val Arg Arg Asa Tyr 865 810 875 880

Sly Asp Met Asp lie Tyr lie Thr Ala Her Sly lie Asp Asp Gin Ala 885 890 895

Leu Glu Asp Asp Arg Leu Arg Lys Tyr Tyr Leu Gly Lys Tyr Leu Gin 900 905 910

Glu Val Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Arg lie Lys Gly Tyr 915 920 925

Tyr Ala Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

Phe Thr Ser Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser lie Gin Phe Tyr Asn Lys 945 950 955 960

Val lie Ser Ser Arg Gly Phe pro Phe Glu Asn Ser Ser Ser Arg Cys 965 970 975

Ser Gin Thr Sin Glu Asn Thr Glu Cys Thr Val Cys Leu Phe Leu Val 980 985 990

Gin Lys Lys Pro 995 <210> 9 <211> 326

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 9

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Thr val Glu Arg Lys cys Cys val Glu cys Pro pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Pro val Ala Gly Pro Ser val Phe Leo Phe pro Pro Lys pro Lys Asp 115 120 125

Thr Leu Met lie Ser Àrg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp: 130 135 140 val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gift Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gift Phe Asn 165; 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205

Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Ljs Gly Gin Pro Arg Glu 210 215 220

Pro Gin Val Tyr Thr Lew Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr lys Asn 225 230 235 240

Glh Val Sér Leu Thr Cys Leu 'Val Lys "Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 2:45 2:50 255

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Ash Asn Tyr Lys Thr 260 265 270

Thr Pro Pro Met Leu Asp Sér Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300

Ser val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu 305 310 315 320 Sér Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 10 <211> 107

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 10

Arg Thr' Val; Alá· Ala Pro Ser "Val She Tie She Pro Pro Ser Asp Glu, 1 5 10 15

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser val val Cys Leu Leu Asn Ash Phe 20 25 30

Tyr Pro Arg (31¾ Ala Ays Val Gin Trp Ays Val Asp Asn Ala Leu Gin 35 40 45

Ser Gly Asa Ser Gin (31¾ Ser Val Thr Glu Gin Asp: Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys val Tyr Ala. Gys Glu val Thr sis Glu Gly Leu Ser Ser 85' SO 95

Pro val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 11 <211> 106

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 11

Gly Gin Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15

Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Gys Leu lie Ser Asp 2Q 25 30

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser pro 35 40 45

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn 50 55 60

Lys Tyr Ala Ala Sér Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys 65 70 75 80

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 103 <210> 12 <211> 214

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 12

Ser Tyr Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Gin Ser Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pr© Val Léu Vàl Val Tyr 35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg- pro· Ser Gly lie Pro· Glu Arg phe ser Gly Ser 50 55 60

Asn per Gly Ash: Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Arg. 'Val Glu Ala Gly 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin val Trp: Asp -Ser Ser Ser Asp His: 85 90 95

Val Vai Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Vai Léu Gly Gin Pç© Lys 10d 105 110

Alá Asn Pro Thr Vai Thr lev Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr léu Vai Gys Leu Ila Ser Asp Phé Tyr Puo Gly 130 135 140

Ala Vãl Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Sér Pro Vai Lys Ala Gly 145 150 155 1:60 val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn aso Lys Tyr Ala Ala 165 110 175

Ser -Ser' Tyr Leu. Sé* Léu. -Thr P*o Glu Gin Trp Lys. Sér His Arg Sé* 110 185 190

Tyr Se* Cys Gin Val Thr His Glu Gly Sé* Th* Val Glu Lys Th* Val 195 200 205 :Ála P*o. Thr Glu Cys: Se*· 210 <210> 13 <211> 214

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético Polipéptido <4 Ο 0> 13

Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Pro Pro Ser Vai Ser Vai Ala Pro Gly Gin 1 5 10 15

Thr Ala Arg He Thr Cys Gly Gly Asn Asn Tie Sly Ser Gin Ser Vai " 20 25 30

His Trp Tyr SIή Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Vai Sen Vai Vai Tyr 35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg· Pro Ser· Gly Tie Pro Gin Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 6:0

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr He Ser Arg Vai Glu Ala Gly 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Gys Gin Vai Trp Asp Asn Thr Ser Asp His 85 90 95 'Vai Vai Phè: 'Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Vai. Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Asn Pro "Thr Vai· 'Thr Leu· Phe Pro- .Pro Ser Ser Glu· Glu Leu. Gin 115 126 125

Ala Asn Lys Alà Thr Léu Vai Cys Leu He Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 146

Ala vai Thr vai Ala Trp Lys Ala asp Gly ser pr© vai Lys Ala Gly 145 156 155 160

Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 196

Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 14 <211> 214

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético Polipéptido <4 0 0> 14

Ser :Tyr Val .léu; Thr Gin Pro Pro Ser Val: Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 5 10 IS

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Glu Ser Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin LyS: Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val val Tyr 35 40 45

Ásp Asp Ser Asp Arg Pro; Ser Gly I'le Pro 'Glu 'Arg Phe Ser Gly Ser SO 55 SO

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr leu Thr lie Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 SO

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Val Trp Asp Gly Asn Ser Asp His S5 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Alá Asn Pro Thr Vai Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125 .Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Vâl Thr- Vai Ala Trp Lys Ala .Asp: Gly Ser Pró Vai Lys Ala Gly 145 150 155 160

Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 IV0 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser Mis Arg Ser 180 185 190

Tyr Ser Cys Gin Vai Thr His Glu Gly Ser Thr Vai Glu Lys Thr Vai 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 15 <211> 215

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 15

Glu Tie Vai Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15

Glu Argr Ala Thr Léu Ser -Cys Arg Ala Ser' Gin Asn Phê Asp Ser Ser 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin, Cln Lys Pro Gif Gin Ala Pro Arg Leu Lett 35 40 45 lie Tyr Gif Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly lie Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Asn Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro· Glu Asp Phe Ala Mefc Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Gly ser Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gla Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val. Val Cys Leu Leu Asa Asa Phe Tyr Pro Arg Glu HO 135 140

Ala Lys val Gla Trp Ly® Val Asp Asa Ala Leu Gla Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 16 <211> 215

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 16

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Gly Asn 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ala Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

Sin Glu Sen Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 17 <211> 215

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 17

Glu Ile Vai Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys. Arg Ala. Ser Gin. Ser Vai Ser Gly Asn 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Léu Leu 35 40: 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phé Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95

Lea Τίϊιί Pile Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu lie Lye Arg Thr Val Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lye Ser 115 120 125

Sly Thr Ala Ser Val Val Sys Leu Leu Asn Asti Phe Tyr Pro Arg Glu 1-3.0 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160

Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 18 <211> 215

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 18

Glu lie Vai Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Asn 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Asn Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys Arg Thr Vai Ala 100 105 110

Ala Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Vai Gin. Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 150

Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Hxs Lys Vai 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His; Sin Sly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 MO Í05 Sén Phe Asn Arg Sly Glu Cys 21Q 215 <210> 19 <211> 215

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 19

Glu lie dal Leu Thr Gin Ser Pro Sly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15

Glu Arg' Ala Thr Leu Ser' Cys Arg Ala Ser' Gin Asn Phe Asp:· Ser Ser 20 25 30

Ser Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser SO 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Cys Gly Ser Ser pro 85 #0 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys dal Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 105 Ho

Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125

Gly Thr Ala; Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Pile Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 1#0

Gin Gin Ser Val Thr Gin Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser' 'Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp· Tyr Glu. Lys His Lys; Val ISO 185 ISO

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<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 21

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Tyr 20 25 30

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<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 23

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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser lie Trp 20 25 30

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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp phê Thr Leu Thr lie Ser Sèr' Léu Gin Pro 65 70 75 80

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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn ÂSH Ph< Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

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Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 25 <211> 219

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 25

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Tyr Ala Gys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

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Glu lie Vai Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr 'Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser· Vai Ser Ser thr 20 25 30

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Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asm Asm Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140

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Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 30 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 30

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15

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Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415

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Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 31 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 31 ©In Val The Leu Lys ©lu See Gly Pro Val Leu 'Vail Lys Pro The Glu 1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Gys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

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Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Gys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270

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Asn Ala Lys Thr Lys Pro: Arg Glu Slu Sin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 285 300

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Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ash Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335

Lys Thr He Ser Lys Thr Lys Gly Gin pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Slu Slu Met Thr Lys Asn Sin Val Ser Leu 355 300 365

Thr Cys Leu Val Lys Sly Phe Tyr pro Ser Asp lie Ala Val Slu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Sly Sin Pro: Slu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met MS 390 305 400

Leu Asp Ser Asp G y Sec Phe phe Leu Tyr Ser Lys Leu The val Asp 405 410 415

Lys Sec Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Sec Gys S#r Val Mete His 420 425 430

Glu Ala Leu His Asti Bis Tyr The Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser pro 435 440: 445

Sly Lys 450 <210> 32 <211> 450

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Thr Leu Thr Leu The Cys The Val Se^ Gly Phe See Leu Asn Asn Ala 20 25 30

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LeU Lys Ser Arg Leu Thr Lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu He Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 30 95

Cys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Mete Asp 100 105 110

Val Trp Sly Sin Sly Thr Thr Val Thr Val Sex Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Sly Pro Ser Val She Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Slu 130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu. Gly Sya Leu Val Lye Asp Tyr Phe Pro sip pro 145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asa Ser Sly Ala Leu Thr Ser Sly Val His Thr 165 170 175

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Pro ser val Phe Leu phe pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu val Thr Cys val Val Val Asp Val ser His slu 260 265 270

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Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Sly Lys ,305 310 ,315 "" 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn, Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glia Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Gin Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 36:5

Thr Gys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val GlU Trp 310 315 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr lys Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430

Glu Ala Leu His Asia His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 33 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 33

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser (Sly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg ©In Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 .55; #

Leu Lys ASh Arg Leu Thr lie Ser Lys ASp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu lie Met Thr Asn Met Asp Pro val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Gys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser val Phe Pro Léu Ala Pro Gys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 130 135 140 .Ser Thr Ala .Ala: .Leu Gly Gys Leu Val. Lys Asp Tyr 'Phe Pro.· Glu Pro 145 ISO 155 160

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Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Gys Asn 195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220

Lys Gys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240 pro; Ser Val Phe lieu Phe Pro; pro Ays Pro Ays Asp Thr Aeu Met He 245 250 -25:5

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Gys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 250 255 210

Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285

Asn Ala Ays Thr Ays Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300

Val Val Ser Val Aeu Thr Val Val His Gin Asp Trp Aeu Asn Gly Ays 305 310 315 320

Glu Tyr Ays Gys Ays Val Ser Asn Ays Gly Aeu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335

Ays Thr lie Ser Ays Thr AyS Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Aeu Pro pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Ays Ash Gin val set Aeu 355 360 365

Thr Cys Aeu Val Ays Gly Phe Tyr pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380

Glu Her Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Ays Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400

Aeu Asp set asp Gly Ser phe Phe Aeu Tyr set Ays Aeu Thr val asp 405 410 415

Ays Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Gys Ser Val Met His 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gift Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 4j5 440 445

Gly LyS 450 <210> 34 <211> 447

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 34

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu vial Glu Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Gys Ala Ala Ser Arg Ptte Thr Phe Ser Thr Tyr m 25 30

Ala Met Ser Trp val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp val G5: 40. 45

Ser Gly He Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asu Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 SO 95

Ala Lys Ser Leu Lie Val Val lie Val Tyr Alá Leu Asp His Trp Sly 100 105 110

Gift Gly Thr Left Val Thr Val Ser SeV Ala Ser The Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pico left Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Gift Ser Thr Ala ISO 135 140

Ala leti Gly Cys leu Val lys Asp Tyr Phe Pro Gift Pro Val Thr Val 145 150 155 100:

Ser Trp Asa Ser Gly Ala leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val left Gin. Her Her Gly leu.. Tyr Ser 'leu Her Ser Val Val Thr Val. 180 185 ISO

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 :200 205 lys Pro Ser Asn Thr lys Val Asp lys Thr Val Glu Arg lys Gys Cys 210 215 220

Val Glu Cys Pro pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe leu Phe Pro Pro lys Pro lys Asp Thr leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255 pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala lys 275 280 285

Thr lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val leu Thr Val Val His Gin Asp Trp leu Asn Gly lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly lieu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu. Glu Met. Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Vâl Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 3 SO

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Ser phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Argr 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe: Ser: GyS Ser Val Met Sis Glu .Ala Léu 420 425 430

His Ash His Tyr Thr Gin lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 35 <211> 447

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 35

Glu Vai Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Vai Gin Pro Gly Gly 1. 5 10 15

Tyr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Eh# Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30

Ala 'Met Sèt Trp Vai :Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly -Leu Glu Trp Vai 3f 40 45.

Ser Ala Ile Sèr Gly Sèr Gly Vai Ser Thr Tyr Tyr Alá Asp Ser Vai 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp ASA Ser Lys ASA Thr leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Léu Arg .Ala Glu .Asp Thr ,Ala vai Tyr Tyr Cys 85 90 95:

Ala Lys Ser Leu lie Vai Vai Met Vai Tyr Vai Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Sèr Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pró Glu Pro Vai Thr Vai 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 1:90

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Vai Asp His 195 200 205 :Lys: Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Cys Cys 21D 215 220

Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 22:5 230 235 240

Pile Leu Phe Pro pro Lys pro Lys Asp Thr Leu Met lie Per Arg Thr 245 ' 250 255

Pro Glu 'Val Thr; cys Val. Val -val Asp Val Ser His Glu Asp pro Glu 2 SO 265 270

Val Gift Phe Asn Trp Tyr Vâl Asp Gly Val Glu Val His Asft Ala LyS 275 .280' 215

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asa Ser Thr Phe Arg val val Ser 290 295 3.0V

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Sér Asn Lys Gly Lôu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr Tie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lye Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 3SS

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 37:5 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 890 395 400

Asp Gly Ser phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Léu Ser Pro GLy Lys 435 440 445 <210> 36 <211> 447

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 36

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Tyr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Ays Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ser Ala tie ser Gly ser sly val ser Thr Asn Tyr Ala Asp ser val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Ash Ser Lys Ash Thr Lew Tyr 65 70 75 80 LéW Gin Met Asn Sér LeW Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 30 35

Ala Lys Ser Leu lie Val Val Met Val Tyr Val Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin. Gly Thr Leu Val Thr Val. Ser Ser Ala Ser Thr Ly® Gly Pro: Ser 115 121 125

Val Pile Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Seif Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Sly Cys Leu Val lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 130 175

Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

Pro Ser· Ser Asn Phe Gly 'Thr Gin Thr Tyr 'Thr Gys· Asn Val .Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Gys Gys 210 215 220 val Glu Gys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Lev Met· He Ser Arg Thr 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys 235 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Tip Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Gys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 330: 335

Ser Lys Thr Lys Sly Sin Pro Arg Glu Pro Sin Val Tyr Thr leu. Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Gin Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365

Val LyS Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Alá Val Glu Trp Clu Ser Asn 3?Q 375 3S0

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 ASp Gly- ..Set Phe Phe Leu Tyr Ser" -lys Leu Thr' Vail Asp Lys .Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asti Val Phe Ser Gys Se* val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser pro Gly Lys 435 440 445 <210> 37 <211> 447

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 37

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly LéU Val Glh Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Gys Ala Ala. Ser Arg Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Vai. Arg· Gin Alã Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 'Vai 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Vai Ser Thr Tyr lyr Ala Asp Ser Vai 50 55 60

Lys 'Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn. ThP Leu Tyr 65 70 75 80

Lew: Gin Met Asa Ser Leu Arg Ala. Glu Asp Thr Ala.· Vai. Tyr Tyr Gys 85 90 S5

Ala Lys Ser Leu lie Vâl Vai He Vai Tyr Ala. Lett Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu V&l Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 12d

Vai Phe Pro Lem Ala Pro Gys Ser Atg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 110 135 140

Ala Leu Gly Gys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai 145 ISO 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai Hxs Thr Phe Pro Ala 165 170 175:

Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Set Ser Vai Vai Thr Vai 180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Gys Asn Vai Asp His 195 2 0:0 2 0 5

Lys Pr© Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg Lys Cys Gys 210 215 220

Vai Glu Cys Pr© Pro Cys Pro Ala Pro Pro Vai Ala Gly Pro Ser Vai 225 230 2-55 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 255 pro Glu Val Thr cys val. Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Sin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 2#0 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin. Phe Asn Ser Thr Phe Arg val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu pro Ala pro lie Glu Lys Thr He 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu •3SÍ 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Alá Val Glu Trp Glu Sér Ash 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400

Asp Gly Set phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Gys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 38 <211> 447

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 38

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Arg lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Val Thr Met Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 SO S5

Arg Asp Pro Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Lem Sly Elys Lem Val Lys Asp Tyr Phe Pro Sim Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asa Ser Gly Ala Lem Thr Ser Sly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Lem sla Her Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190

PpO Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205

Lys Pro Ser Asa Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210; 215 220 'Val Sim: Cys Pro. Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly" Pro Ser Val. 221 230 2:35 :2-40:

Phe Lem Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Lem Met Tie Ser Arg Thr 24.5 25:0- 2.55

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gla Phe Asa Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asa Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 510: 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Sly Lem Pro Ala Pro Tie Glu Lys Thr Tie 325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg 61m Glu Met· Thr Ly& Asn Gin Val Ser Lem Thr Cys Lem 355 360 365

Val Lys Sly PLe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asm 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asm Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Lem Asp Ser 385 350 353 400

Asp Gly Ser phe Phe Lem Tyr Ser Lys Lem Thr val Asp Lys ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asrt Val Phe Set Cys Ser Val Met His Glu Alà Leu 420 425 430

His Asn His 'Tyr Thr Gin Lys .set: Lem. Ser Lem. Her Pto Gly Lys 435 440 445 <210> 39 <211> 447

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 39

Gift val Gin Lem Gift Glu Ser Gly Pro Gly Lem val Lys Pro Set Glm 1 s. ' 1:0..... ' 15 'Thr Lem. Set Leu- 'Thr cys. Tkt Val, Ser Sly Gly Ser Tie Ser Ser Tyr' 20 25 30

Phe Trp Ser Trp Tie Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Lem Glm Trp lie 35 40 45

Sly Arg lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 ·55 60

Ser Arg Val Thr Met Ser lie Asp Thr Ser Lys Asn, Sin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Lett Ser Ser val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Asp Pro Asp Sly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Sly Met Asp Val Trp Sly 100 105 110

Sin Sly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Sly Pro Ser 115 180 185

Val Phe Pro Leu Ala Pro Sys Ser Arg Ser Thr Ser Slu Ser Thr Ala 130 135 140

Ala Leu Sly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Slu Pro Val Thr Val 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Sly Ala Leu Thr Ser Sly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175

Val Leu Sin Ser Ser Sly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 pro·· Ser Ser Asn, Phe, Sly Thr Sin. Thr; Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 800 805

Lys Pro Ser Asn Thr Ays Val Asp Lys Thr Val Slu Arg Lys Cys Cys 210 215 220

Val Slu Cys Pro Pro Cys Pro Ala pro Pro Val Ala Sly Pro Ser Val 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 245 250 2.55;

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Sec His Glu Asp Pro Glu 260 265 270

Val Gin Phe Asa Tyx Val Asp Gly Val Glu Val His Asa Ala lys 275 280 285

Tin? lys PCb Arg Glu Glv Gin Phe Ash Ser Thai Phe Arg Val Val Ser· 230 '235 30:0

Val Leti The Val Val His Glh Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320

Gys Lys Val Sec Asa Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 325 3:30 335

See Lys Thr Lys Gly Glh Pro Arg Glu Pro Gin Val T^r Thr Leu Pro 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Gys Leu 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380

Gly Gin Pro Glu Asa Asa Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met: Leu Asp Ser 385 390 335 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415

Trp Gin Gin Gly Asa Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430

His Asa His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 40 <211> 453

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 40

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala 20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Arg lie Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60

Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 55

Phe Cys Thr. Ser' Thr: Tyr Ser· Ser Gly Trp. Tyr Val Trp .Asp. Tyr Tyr 100 105 110

Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125

Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leo ftla Pro Cys Ser Arg Ser 130 135 140

Thr Ser Slu Ser Thr Ala Ala Lea Sly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 145 150 155 160

Pro Gila Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Sly Ala Leu Thr Ser Sly 165 170 175

Val His Thr Phe Pre Ala Val Leu Sin Ser Ser Sly Leu Tyr Ser Leu ISO 185 ISO

Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Sly Thr Sin Thr Tyr 195 200 2Ó5

Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Sèr ASn Thr Lys Val Asp Lys Thr 210 215 220

Val Glu Arg LyS CyS Cys Val Slu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 225 230 235 240 val. .ΑΙΑ siy Pro ser val Phe Leu Phe- Pro pro Lys pro Lys Asp Thr· 245 250 '255

Leu Met 11« Ser Arg Thr Pro Slu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Sly Val 275 280 285

Slu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Slu Glu Gin Phe Asn Ser 29C 295 300

Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp; Leu 305 310 315 320

Ash Sly Lys Slu Tyr Lys Cvs Lys Val Ser Ash Lys Sly Leu Pro Ala 525 330 5:35

Pro lie Slu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Sly Sin Pro Arg Slu Pro 540 345 5501

Sin Val Tyr Thr Leu pro Pro Ser Arg Slu Slu Met Thr Lys Asn Sin 355 360 365

Val Seif leu Thr Cys Leu Val Lys Sly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala 370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Sly Sin Pro Glu Asn Asn Tyr lys Thr Thr 385 390 395 400

Pro Pro Met' leu Asp Ser Asp Sly Ser phe: Phe leu Tyr Ser lys leu, 405 410 415

Thr Val Asp lys Ser Arg Trp Sin Sin Sly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430

Val Met His Glu Ala leu His Asn His Tyr Thr Gin lys Ser leu Ser 435 440 445 leu Ser Pro Gly lys 450 <210> 41 <211> 454

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 41

Gin Val Gin leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val lys lys pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val lys Val Ser Cys lys Val Sen Gly Tyr Thr leu Thr Asp leu 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly lys Gly leu Glu Trp Met 35 40 4.5

Sly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Sly Glu The lie Tyr Ala Sin Lys: Phe 50 55 60 ©In ©ly Arg lie Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Slu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 SO: 95

Ala Ser He val wl val Pro Ala Ala He Sin Ser Tyr Tyr Tyr Tyr 100 105 110

Tyr Sly Met Sly Val Trp Sly Gin Sly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

.Ala 'Ser Thr- Lys Sly Pro Ser· Val Phe: Pro Leu- Ala Pro- Cys Ser Arg 130 135 1AQ

Ser Thr Ser Slu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 135 150 155 160 phe Pro Slu pro Val Thr Val Ser Trp Asa Ser Gly Ala Leu Thr Ser 165 170 175

Sly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Sin Ser Ser Sly Leu Tyr Ser 180 185 ISO

Leu Ser Ser Val val Thr Val Pro Ser Ser Asa Phe: Sly Thr Gla Thr 195 200 205

Tyr Thr Cys Asa Val Asp His Lys Pro Ser Asa Thr Lys Val Asp Lys 210 215 220

Thr Val Slu Arg Lys Cys Cys Val Slu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 230

Pro Val Ala Sly Pro Ser Val Phe: Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 235 250 255

Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 26C 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Glu Pile Asa Trp Tyr Val Asp Sly 275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Glu Phe Asn Zm 295 300

Ser Thr Phe Arg val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp 305 310 315 320;

Leu Asa Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asa Lys Gly Leu Pro 325 330 335

Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gla Pro Arg Glu 340 345 350

Pro Gla Val Tyr Thr Leu Pro Pro ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365

Gla val Ser Leu Phr Cys Leu val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He 370 ’ 375 ....... 380 .Ala Val Glu Trp Glu .Ser ,Asa. Gly Glu. Or©: Glu. Asa .Asn. Tyr Lys Thr 385 330: 395 400:

Thr Pro Pro Met. Leu Asp Ser Asp Gly· Ser Phe: Phe Leu. Tyr Ser Lys 405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Glu Glu Gly Asu Val Pne Ser Cys 420 425 430

Ser Val Met His; Glu Ala Leu His Asu His Tyr Thr Glu Lys Ser Leu 435 440 445

Ser Leu Ser· pro. Gly Lys 450 <210> 42 <211> 451

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 42

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ala Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

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Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

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<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 43

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<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 44

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<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético Polipéptido <4 0 0> 45

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<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 48

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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 53 <211> 108

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 53

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Gly Asn 20 25 30

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 54 <211> 108

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 54

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Asn 20 25 30

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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 55 <211> 108

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 55

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Ser 20 25 30

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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 56 <211> 107

<212> PRT <213> S equência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 56

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Thr 20 25 30

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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Glu lie Lys 100 105 <210> 57 <211> 112

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Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Ser 85 90 95

Leu Gin Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 110 <210> 58 <211> 107

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Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Asn Ser Asn 20 25 30

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Tyr Gly Val Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Arg Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 59 <211> 107

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 59

Asp lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser lie Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Tyr Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Glu 100 105 <210> 60 <211> 107

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 60

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser lie Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Asp Phe Pro lie 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 61 <211> 112

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 61

Asp Phe Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gin Pro Ala Ser lie Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Gin Ser 20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 40 45

Pro His Leu Leu lie Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Ser 85 90 95 lie Gin Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 <210> 62 <211> 112

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Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asp Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Met Gin Ala 85 90 95

Leu Gin Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 63 <211> 108

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 63

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Thr 20 25 30

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Gly Ser Ser Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Glu lie Lys 100 105 <210> 64 <211> 108

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 64

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Thr 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Ser Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 65 <211> 108

<212> P RT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 65

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Thr 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Phe Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Gly Ser Ser Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 66 <211> 124

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 6 6

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg lie Leu Leu Leu Gly Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 67 <211> 124

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Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg lie Leu Leu Val Gly Ala Tyr Tyr Tyr Cys Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 68 <211> 124

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 6 8

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu lie Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 69 <211> 124

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 6 9

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Asn Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu lie Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 70 <211> 121

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 70

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Gly lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Ser Leu lie Val Val lie Val Tyr Ala Leu Asp His Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 71 <211> 121

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 71

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Tyr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ala lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Ser Leu lie Val Val Met Val Tyr Val Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 72 <211> 121

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 72

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Tyr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ala lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Ser Leu lie Val Val Met Val Tyr Val Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 73 <211> 121

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> D escrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 73

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Gly lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Ser Leu lie Val Val lie Val Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 74 <211> 121

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 74

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Arg lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Val Thr Met Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Asp Pro Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 75 <211> 121

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 75

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Phe Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Arg lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Val Thr Met Ser lie Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Asp Pro Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 76 <211> 127

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 76

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala 20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Arg lie Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60

Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95

Phe Cys Thr Ser Thr Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Val Trp Asp Tyr Tyr 100 105 110

Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 77 <211> 127

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 77

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala 20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Arg lie Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60

Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95

Phe Cys Thr Ser Thr Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Val Trp Asp Tyr Tyr 100 105 110

Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 78 <211> 128

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 78

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asp Leu 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr lie Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg lie Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80

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Ala Ser lie Val Val Val Pro Ala Ala lie Gin Ser Tyr Tyr Tyr Tyr 100 105 110

Tyr Gly Met Gly Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 79 <211> 125

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 79

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ala Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Asn Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Val Arg lie Ala Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 80 <211> 127

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 80

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Gly Tyr Asn Trp Ser Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Asn lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Glu Asn lie Val Val lie Pro Ala Ala lie Phe Ala Gly 100 105 110

Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 81 <211> 122

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 81

Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ala Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Ala 20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gin. Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Arg lie Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60

Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Glu Tyr 85 90 95

Tyr Cys lie Thr Asp Arg Val Leu Ser Tyr Tyr Ala Met Ala Val Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 82 <211> 124

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 82

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Arg Ala Ala Ala Gly Leu His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 124

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 83

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Arg Ala Ala Ala Gly Leu His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 84 <211> 124

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 84

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Arg Ala Ala Ala Gly Leu His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 85 <211> 324

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido

Sintético <4 0 0> 85 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggtcagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtcag agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tcctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt ccta 324 <210> 86 <211> 324

Sintético <4 Ο 0> 8 6 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtcaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tcctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gataatacta gtgatcatgt ggtattcggc 300 ggggggacca aactgaccgt ccta 324 <210> 87 <211> 324

Sintético <4 0 0> 87 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtgaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatggtaata gtgatcatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt ccta 324 <210> 88 <211> 324

<212> ADN <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido <22 0>

Sintético <4 0 0> 88 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gaattttgac agcagttact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctccccggct cctcatctat ggtacatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcattgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcaa cagactggag 240 cctgaagatt ttgcaatgta ttactgtcag cagtatggtg gctcaccgct cactttcggc 300 ggagggaccg aggtggaaat caaa 324 <210> 89 <211> 324

Sintético <4 0 0> 89 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc ggcaactact tggcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttattgtcag cagtatggta gcgcaccgct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggaaat caaa 324 <210> 90 <211> 324

Sintético <4 0 0> 90 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc ggcaactact tggcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacagattca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcaatgta ttattgtcag cagtatggta gctcaccgct cactttcggc 300 ggagggtcca aggtggagat caaa 324 <210> 91 <211> 324

Sintético <4 Ο 0> 91 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gaatttcgac agcaactact tagcctggta ccagcagaag 120 cctggccagg ctccccggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaacttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcaatgta ttactgtcag cagtatggta gttcaccgct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggaaat caaa 324 <210> 92 <211> 324

Sintético <4 0 0> 92 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagggccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gaattttgac agcagctcct tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctccccggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcaatgta ttactgtcag cagtgtggta gctcaccgct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggaaat caaa 324 <210> 93 <211> 321

Sintético <4 0 0> 93 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agtacctact tagcctggca ccagcagaaa 120 cctggccagg gtcttaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc ttaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggaa gctcattcac tttcggcgga 300 gggaccaggg tggagatcaa a 321 <210> 94 <211> 336

Sintético <4 Ο 0> 94 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tattataatg gattcaccta tttggattgg 120 ttcctgcaga agccagggca gtctccacat ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt gtttcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattattgca tgcagtctct gcaaactcca 300 ttcactttcg gccctgggac caaagtggat atcaaa 336 <210> 95 <211> 321

Sintético <4 0 0> 95 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttaac agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catttatggt gtatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatccgcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 96 <211> 321

Sintético <4 0 0> 9 6 gacatacagc tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctataggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca ggacattaga tatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccttca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca cagtcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcga a 321 <210> 97 <211> 321

Sintético <4 Ο 0> 97 gacatccaga tgacccagtc tccctcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc atctggttag cctggtatca gcagaaacct 120 gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacgatt tcccgatcac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa a 321 <210> 98 <211> 336

Sintético <4 0 0> 98 gattttgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca gagcctccta cagagtgatg gaaagaccta tttgtattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gcctccacat ctcctgatct atgaagtttc caaccgattc 180 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaagtat acagcttcct 300 cggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa 336 <210> 99 <211> 336

Sintético <4 0 0> 99 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaactt tttggattgg 120 tacctacaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc tgatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagagtttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttgggctt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300 tgcagttttg gccaggggac caagctggag atcaaa 336 <210> 100 <211> 324

Sintético <4 Ο 0> 100 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agcacctatt tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagtctggta gctcaccgct cactttcggc 300 ggagggaccg aggtggagat caaa 324 <210> 101 <211> 324

Sintético <4 0 0> 101 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcacctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccagtct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaggatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtctggta gctcacctct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggagat caaa 324 <210> 102 <211> 324

Sintético <4 0 0> 102 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcacctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcct tcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaggatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtctggta gctcacctct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggagat caaa 324 <210> 103 <211> 372

Sintético <4 Ο 0> 103 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tctctgggtt ctcactcagc aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtccttacca tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggata 300 ttattactgg gagcttacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 104 <211> 372

Sintético <4 0 0> 104 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tctctgggtt ctcactcagc aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtccttacca tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggata 300 ttattagtgg gagcttacta ctactgcggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 105 <211> 372

Sintético <4 0 0> 105 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tctctgggtt ctcactcaac aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtcctaatta tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggtca 300 gtagtaactg gcggctacta ctacgacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 106 <211> 372

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0>

Sintético <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido <4 Ο 0> 106 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tctctgggtt ctcactcagc aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagaa caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtccttatta tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggtca 300 gfcagfcgactg gcggctacta Gtacgaeggt atggacgtct ggggccaagg gaccaeggtc 360 SGegtetcGt ca 372 <210> 107 <211> 363

Sintético <4 0 0> 107 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggg ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctagatt cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtgtcag cacacactac 180 yCS-ycLCtCCy tycLclyyyCCy yttC5.CC5.tC tCC5y5y5C5 5ttCC55y55 C5CyCty15t 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatccctc 300 attgtagtaa tagtatatgc ccttgaccac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 108 <211> 363

Sintético <4 0 0> 108 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggta cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacgtttagt acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct atcagtggta gtggtgttag cacatactac 180 yC3y3CuCCy uy 33y y y CCy yuuC3.CC3.uC uCC3y3y3C3 3.tuCC33.y33 C3.CyCuyu.3u 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatccctt 300 attgtagtaa tggtgtatgt ccttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 109 <211> 363

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0>

Sintético <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido <4 Ο 0> 109 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggta cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacgtttagc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct attagtggca gtggtgtgag cacaaactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatccctt 300 attgtagtaa tggtgtatgt ccttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 110 <211> 363

Sintético <4 0 0> 110 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggg ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctagatt cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtgttag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatccctt 300 attgtagtaa tagtatatgc ccttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 111 <211> 363

Sintético <4 0 0> ill caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120 gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatacca gtgggagcac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgggt caccatgtca aaagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgaggt ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatccggac 300 ggtgactact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggacctcggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 112 <211> 363

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0>

Sintético <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido <4 Ο 0> 112 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttacttct ggagctggat ccggcagccc 120 gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatacca gtgggagcac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatgtca atagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagtt ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatccggac 300 ggtgactact actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 113 <211> 381

<212> ADN <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido

Sintético <4 0 0> 113 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 ÇaCtaCÇCt^ CaCCC^tÇaa aÇÇCaÇattC aCCatCtCaa ÇaÇat^attC 333333C3Ct 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtattt ttgtacctct 300 aegtatagea gtggctggta cgtatgggac tactacggta tggacgtctg gggccaaggg 360 accacggtca ccgtctcctc a 381 <210> 114 <211> 384

Sintético <4 0 0> 114 caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg tttcgggata caccctcact gatttatcca tgcactgggt gcgacaggct 120 cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagatggtga aacaatctac 180 gcacagaagt tccagggcag aatcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aagtattgta 300 gtagtcccag ctgctataca gagttactac tactactacg gtatgggcgt ctggggccaa 360 gggaccacgg tcaccgtctc ctcc 384 <210> 115 <211> 375

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0>

Sintético <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido <4 Ο 0> 115 caggtcacct tgaaggaggc tggtcctgtg ttggtgaaac ccacagagac cctcacgttg 60 acctgcaccg tctctgggtt ctcactcagc aatgctagaa tgggtgtgaa ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtccttacca tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacgggtt 300 cgtatagcag gtgattacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 116 <211> 381

Sintético <4 0 0> 116 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt acaactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggaacatct attacagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagatctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagag 300 aatattgtag taataccagc tgctatattc gegggttggfe tcgacccatg gggeeagggâ 360 accctggtca ccgtctcctc a 381 <210> 117 <211> 366

Sintético <4 0 0> 117 gaggtgcacc tggtggagtc tgggggaggc ttggcaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcaga aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccaggaaagg ggctggaatg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 y3Ct3CyCty C3CCCyty33 3y y C3y 3tt C 3CC3tCtCy3 y3.y3ty3.ttC 33.3333C3.Cy 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgagtatta ctgtatcaca 300 gatcgggtgc taagctacta cgctatggcc gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 118 <211> 372

<212> ADN <213> S equência Artificial <22 0>

Sintético <223> Descrição de Sequência Artificial: Polinucleótido <4 Ο 0> 118 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca ttcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtat taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatagg 300 gcagcagctg gtctccacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 119 <211> 372

Sintético <4 0 0> 119 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tccactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggaatg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtga taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctacaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatagg 300 gcagcagctg gtctccacta ttattacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 120 <211> 372

Sintético <4 0 0> 120 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag tgtctggatt caccttcagt agctatggca tccactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggaatg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtga taaatactat 180 ggagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctacaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatagg 300 gcagcagctg gtctccacta ttattacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 121 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 121

Asp Leu Ser Met His 1 5 <210> 122 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 122

Asn Ala Arg Met Gly Val Ser 1 5 <210> 123 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 123

Asp Ala Trp Met Ser 1 5 <210> 124 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 124

Thr Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 125 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 125

Ser Tyr Phe Trp Ser 1 5 <210> 126 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 126

Asn Ala Arg Met Gly Vai Asn 1 5 <210> 127 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 127

Asn Ala Trp Met Ser 1 5 <210> 128 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 128

Ser Tyr Gly lie His 1 5 <210> 129 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <400> 129

Asn Tyr Gly Ile His 1 5 <210> 130 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 130

Ser Gly Gly Tyr Asn Trp Ser 1 5 <210> 131 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 131

Ser Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 132 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 132

Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr lie Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210> 133

<211> 16 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 133

His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 134

<211> 16 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 134

His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Asn 15 10 15 <210> 135 <211> 19

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 135

Arg lie Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro 15 10 15

Val Lys Gly <210> 136 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 136

Gly lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 137 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 137

Gly lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 138 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 138

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Vai Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai Lys 15 10 15

Gly <210> 139 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 139

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Vai Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Vai Lys 15 10 15

Gly <210> 140

<211> 16 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 140

Arg lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 141 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 141

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 142 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 142

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 143 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 143

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 144 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição da Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 144

Asn lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 145 <211> 19

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 145 lie Val Val Val Pro Ala Ala lie Gin Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 15 10 15

Met Gly Val <210> 146 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 146 lie Leu Leu Leu Gly Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 <210> 147 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 147 lie Leu Leu Val Gly Ala Tyr Tyr Tyr Cys Gly Met Asp Val 15 10 <210> 148 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 148

Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr: Tyr Asp Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 149 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 149

Thr 'Tyr gar Ser Gly Trp Tyr 'Val Trp Asp Tyr 'Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 150 <211> 12

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 150

Ser Leu lie Val Val lie Val Tyr Ala Leu Asp His 15 10 <210> 151 <211> 12

<212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 151

Ser Leu lie Val Val lie Val Tyr Ala Leu Asp Tyr 15 10 <210> 152

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 152

Ser Leu lie Vai Vai Met Vai Tyr Vai Leu Asp Tyr 15 10 <210> 153 <211> 13

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 153

Asp Pro Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Vai 15 10 <210> 154 <211> 15

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 154

Vai Arg lie Ala Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 155 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 155

Asp Arg Val Leu Ser Tyr Tyr Ala. Met Ala Val 1 5 10 <210> 156 <211> 15

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 156

Asp Arg Ala Ala Ala Gly Leu His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 157 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 157

Glu Asn He Val Val lie Pro Ala Ala He Phe Ala Gly Trp Phe Asp 15 10 15

Pro <210> 158 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 158

Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Tyr Asp Leu Gly 15 10 <210> 159

<211> 16 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 159

Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Tyr Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Asp 15 10 15

<210> 160 <211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 160

Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Ser Ser Leu Ala 15 10

<210> 161 <211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 161

Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Ser Tyr Leu Ala 15 10

<210> 162 <211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 162

Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Gly Asn Tyr Leu Ala 15 10 <210> 163

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 163

Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Thr Tyr Leu Ala 15 10 <210> 164

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 164

Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Asn Tyr Leu Ala 15 10 <210> 165 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Peptídeo Sintético <4 0 0> 165

Arg Ala Ser Gin Ser Val Asn Ser Asn Leu Ala 15 10 <210> 166 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 166

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Glu Ser Vai His 15 10 <210> 167

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Peptídeo Sintético <4 0 0> 167

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Gin Ser Vai His 15 10 <210> 168 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 168

Arg Ala Ser Gin Gly íle Ser lie Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 169 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 169

Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Gin Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr 15 10 15 <210> 170 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 170

Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Phe Leu Asp 15 10 15 <210> 171 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 171

Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> 172 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 172

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 173 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 173

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 174 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 174

Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 175 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 175

Gly V&l Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 176 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 176

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 177 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <400> 177

Glu Val 'Ser Asn Arg Phe -Ser 1 5 <210> 178 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 178

Leu Gly Ser Asp Arg Ala Ser 1 5 <210> 179 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 179

Gly Ala Ser Phe Arg Ala Thr 1 5 <210> 180 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 180

Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 181 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 181

Met Gin Ser Leu Gin Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 182 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 182

Gin Gin Cys Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 183 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 183

Gin Gin Tyr Gly Gly Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 184 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 184 GLn Gin Tyr Gly Ser Ala Pro Leu Thr 1 5 <210> 185

<211> 8 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 185

Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Phe Thr 1 5 <210> 186 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 186

Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 187 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 187

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Thr 1 5

<210> 188 <211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 188

Gin Val Trp Asp Gly Asn Ser Asp His Val Val 15 10 <210> 189 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 189

Gin Val Trp Asp Asn Thr Ser Asp His Val Val 15 10 <210> 190

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 190 <22 0>

Gin Vai Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Vai Vai 15 10 <210> 191 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 191

Gin Gin Ala Asn Asp Phe Pro lie Thr 1 5 <210> 192 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 192

Met Gin Ser lie Gin Leu Pro Arg Thr 1 5 <210> 193 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 193

Met Gin Ala Leu Gin Thr Pro Cys Ser 1 5 <210> 194 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 194

Gin Gin Ser Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 195 <211> 15

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido

Sintético <4 0 0> 195 gatttatcca tgcac 1.5; <210> 196 <211> 21

Sintético <4 0 0> 196 aatgctagáa tgggtgtgag c '21 <210> 197 <211> 15

Sintético <4 0 0> 197 gacgcctgga tgagc 15 <210> 198 <211> 15

Sintético <4 0 0> 198 :âeetafegeesà tgagc 15 <210> 199 <211> 15

Sintético <4 0 0> 199 ggagc 15

<210> 200 <211> 21 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido

Sintético <4 0 0> 200 aatgctagaa tgggtgtgaa c 21 <210> 201 <211> 15

Sintético <4 0 0> 201

aasgcGfegga tgagc IS <210> 202 <211> 15

Sintético <4 0 0> 202 agctatggca tccac 15 <210> 203 <211> 15

Sintético <4 0 0> 203 aactatggca feteac 15 <210> 204

<211> 21 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido

Sintético <4 0 0> 204 âgtggfeggtt acaactggag e 21 <210> 205 <211> 51

Sintético <4 0 0> 205

ggttttgatc ctgaagatgg tgaaacaatc tacgcacaga agttccaggg c SI <210> 206 <211> 48

Sintético <4 0 0> 206 caeafcfettfcfe cgaatgacga aaaatcctac agcacatctc tgaagagc 48 <210> 207 <211> 48

Sintético <4 0 0> 207 cacatttttt cgaatgacga aaaatcctac agcacatctc tgaagaac -48 <210> 208 <211> 57

Sintético <4 0 0> 208 cgtattaaaa gcaaaactga tggtgggaca. aeagactacg ctgcacccgt gaaaggc 57 <210> 209 <211> 51

Sintético <4 0 0> 209 ggtattagtg gtagtggtgt cagcaGacac tacgcagacf ccgtgaaggg c 51 <210> 210 <211> 51

Sintético <4 0 0> 210 ggtattagtg gtagtggtgt tagcaeatac taegcagact ccgtgaaggg c 51 <210> 211 <211> 51

Sintético <4 0 0> 211 gctatcagtg gtagtggtgt tagcaeatac taegeagact ccgtgaaggg c 51 <210> 212 <211> 51

<212> ADN <213> Sequência Artificial 22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido

Sintético <4 0 0> 212 gctattagtg gcagtggtgt gagcacaaac tacgcagact ccgtgaaggg c 51 <210> 213 <211> 48

Sintético <4 0 0> 213 egfeateefcatsa ccagtgggag caccaactac aaccccfcca tcaagagt 48 <210> 214 <211> 51

Sintético <4 Ο 0> 214 gttatatggt atgatggaag tgataaatac tatgcagact ccgtgaaggg G 51 <210> 215 <211> 51

Sintético <4 0 0> 215 gttatatggt atgatggaag tattaaatac tatgcagact ccgtgaaggg c 51 <210> 216 <211> 51

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido Sintético <4 0 0> 216 gttatatggt atgatggaag tgataaatac tatggagact cagtgaaggg e 51 <210> 217 <211> 48

<212> ADN <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido

Sintético <4 0 0> 217 aacatctatt acagt.gggag cacctactac aacccgtccc tcaagagt 48: <210> 218 <211> 57

Sintético <4 0 0> 218 attgtàgtag tcccagctgc tatacagagt tact act act actacggtat gggcgtc 57 <210> 219 <211> 42

Sintético <4 0 0> 219 áfeâttattae tgggagctta ctactactac ggtatggacg fee 42 <210> 220 <211> 4 2

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido Sintético <4 0 0> 220 afcãfefeâtta.g tgggagctta ctactactgc ggtatggacg tc 42 <210> 221 <211> 42

Sintético <4 0 0> 221 teagtagtaa ctggcggcta ctactacgac ggtatggacg te 42 <210> 222 <211> 48

Sintético <4 0 0> 222 aegtatagca gtggctggta cgtatgggac tactacggfa tggacgtc 48 <210> 223 <211> 36

Sintético <4 0 0> 223 tSsGfceãfctgr tagtaatagt atatgccctt gaccac 36 <210> 224 <211> 36

<212> ADN <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido <22 0>

Sintético <4 0 0> 224 tcGcttattg tagtaatagt atatgccett gactac. 36 <210> 225 <211> 36

Sintético <4 0 0> 225 fcseéfctafcfcg tagtaatggt gtatgtcctt giaetâc 36 <210> 226 <211> 39

Sintético <4 Ο 0> 226 gatccggacg gtgactacta ctactacggt atggacgtc 39 <210> 227 <211> 45 ADN <212> <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido

Sintético <4 0 0> 227 gttcgtatag caggtgatta ctactacrac fcaeggtatgg aegte 45 <210> 228 <211> 33

Sintético <4 0 0> 228 gatcgggtge taagctaeta eg^afcggec gtc 33 <210> 229 <211> 45

Sintético <4 0 0> 229 gatagggcag cagctggtct ccactattat tacggtatgg acgtc 45 <210> 230 <211> 51

Sintético <4 0 0> 230

gagaatattg tagtaatacc agctgctata ttcgcgggtt ggttcgaccc c M <210> 231 <211> 33

Sintético <4 0 0> 231 cgggcaagtc aggacabtag atatgattta ggc 33 <210> 232 <211> 48

Sintético <4 0 0> 232 aggtctagtc agagcctcct gtattataat ggattcacct atttggat 48 <210> 233 <211> 36

Sintético <4 Ο 0> 233 agggccagtc agaattttga Gagcagctcc ttagcc 36 <210> 234 <211> 36

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético

Oligonucleótido <4 0 0> 234 agggeeagte agaattttga cagcagttac ttagcc 36 <210> 235 <211> 36

Sintético <4 0 0> 235 agggccagtc agagtgttag cggcaactae 'ttggcc 36 <210> 236 <211> 36

Sintético <4 0 0> 236 agggccagtc agagtgtgag cagtacctac ttagec 36 <210> 237 <211> 36

Sintético <4 0 0> 237 agggccagtc agaatttcga cagcaactac ttagcc 36 <210> 238 <211> 33

Sintético <4 0 0> 238 gLgç^éGágtc!.· agagtgttaa cagcaactta gcç. S3 <210> 239 <211> 33

Sintético <4 0 0> 239 gggggaáãcã acattggaag tgaaagtgtg cac 33 <210> 240 <211> 33

Sintético <4 0 0> 240 gggggaaaca acattggaag tcaaagtgtg cac 33 <210> 241 <211> 33

Sintético <4 0 0> 241 cgggcgagtc agggtattag catetggtta gcc 33 <210> 242 <211> 48

Sintético <4 0 0> 242 aagtctagtc agagcctcct acagagtgat ggaaagacct atttgtat 48 <210> 243 <211> 48

Sintético <4 0 0> 243 aggtctagtc agagccfccct gcatagtaat ggatacaact ttttggat 48 <210> 244

Sintético <4 0 0> 244 gcfegeateca gtttgcaaag t 21 <210> 245

<211> 21 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0>

Sintético <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido <4 Ο 0> 245 ttgggttcta atcgggcctc c 21 <210> 246 <211> 21

Sintético <4 0 0> 246 ggtgcateea gcagggccac t 21 <210> 247 <211> 21

Sintético <4 0 0> 247 ggt.aca.tcca gcagggccac t 21 <210> 248

Sintético <4 0 0> 248 ggtgtatcca ccagggccac t 21 <210> 249

Sintético <4 0 0> 249 gàfcgã&agcg aecggccctc a 21 <210> 250

<211> 21 <212> ADN <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido <22 0>

Sintético <4 0 0> 250 gaagtttcea accgattctc -t 21 <210> 251

Sintético <4 0 0> 251 tfcgggfcfcefcg atcgggcctc c 21 <210> 252 <211> 27

Sintético <4 0 0> 252 ctacagcata afcàgttaGGG tctcact 27 <210> 253 <211> 27

Sintético <4 0 0> 253 atgcagtctc tgcaaactcc attcact 27 <210> 254 <211> 27

Sintético <4 0 0> 254

gageagfcglif gtagctcacc gctcact ;2'T <210> 255 <211> 27

Sintético <4 0 0> 255 cagcagtatg gtggctcace gctcact 27 <210> 256 <211> 27

Sintético <4 0 0> 256 eagcagtntg gtagcgcacc gctcact 27 <210> 257 <211> 24

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0>

Sintético <223> Descrição de Sequência Artificial: Oligonucleótido <4 Ο 0> 257 <3ag-c9.gpjfea.fcg gaagttcatt cact 24 <210> 258 <211> 27

Sintético <4 0 0> 258 eagoagtatg gtagctcacc getcact 27 <210> 259 <211> 27

Sintético <4 0 0> 259 cagcagtata ataactggcc teegaeg 27 <210> 260 <211> 33

Sintético <4 0 0> 260 caggtgtggg atggtaatag tgatcatgtg gta 33 <210> 261 <211> 33

Oligonucleótido <4 0 0> 261 osggtgtggg ataatactag tgatcatgtg gta .33 <210> 262 <211> 33

<212> ADN <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético <22 0>

Oligonucleótido <4 0 0> 262 caggtgtggg atagtagtag tgatcatgtg gta 33 <210> 263 <211> 27

Oligonucleótido <4 0 0> 263 caâsaggota acgatttcce gatcacc 27 <210> 264 <211> 27

Oligonucleótido <4 0 0> 264 atgcaaagta tacagcttcc tcggacg 27 <210> 265 <211> 27

<212> ADN <213> S equência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético

Oligonucleótido <4 0 0> 265 atgcaagctc tacaaactcc gtgcagt 27 <210> 266 <211> 27

Oligonucleótido <4 0 0> 266 cageagtctg gtagctcacc tctcact 27 <210> 267 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 267

Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 268 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 268

Met Gin Ser Leu Gin Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 269 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 269

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Thr 1 5 <210> 270 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 270

Met Gin Ser lie Gin Leu Pro Arg Thr 1 5 <210> 271 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 271

Gin Gin Ala Asn Asp Phe Pro lie Thr 1 5 <210> 272 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 272 <22 0>

Met Gin Ala Leu Gin Thr Pro Cys Ser 1 5 <210> 273

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 273

Gin Vai Trp Asp Gly Asn Ser Asp His Vai Vai 1 5 10 <210> 274 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 274

Gin Val Trp Asp Asn Thr Ser Asp His Val Val 1 5 10 <210> 275 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 275

Gin Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val 15 10 <210> 276 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0> <221> M0D_RES <222> (5) .. (5) <223> Gly, Ser ou Asn <22 0> <221> MOD_RES <222> (6) .. (6) <223> Ser, Thr ou Asn <4 0 0> 276

Gin Val Trp Asp Xaa Xaa Ser Asp His Val Val 15 10 <210> 277 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 277

Gin Gin Cys Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 278 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 278

Gin Gin Tyr Gly Gly Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 279 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 279

Gin Gin Tyr Gly Ser Ala Pro Leu Thr 1 5 <210> 280 <211> 8

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 280

Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Phe Thr 1 5 <210> 281 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 281

Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 282 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 282

Gin Gin Ser Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 283 <211> 9

<212> PRT <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0> <22 0> <221> MOD_RES <222> (3) . . (3) <223> Cys, Tyr ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (5) .. (5) <223> Ser ou Gly <220> <221> MOD_RES <222> (6) . . (6) <223> Ser ou Ala <22 0> <221> MOD_RES <222> (7) . . (7) <223> Pro ou Phe <22 0> <221> MOD_RES <222> (8) .. (8) <223> Leu ou ausente <4 0 0> 283

Gin Gin Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Thr 1 5 <210> 284 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 284

Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> 285 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 285 :Gl·^ Val Ser Thr Arg Ala Thr 1. " 5: "" <210> 286 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 286

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 287 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 287

Glu Vai Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 288 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 288

Lea Gly Ser Asrt Arg Ala Ser 1 5 <210> 289 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 289

Leu Gly Ser Asp Arg Ala Ser 1 5 <210> 290 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0>

<221> MOD_RES <222> ( 4) .. (4) <223> Asn ou Asp <4 0 0> 290

Leu Gly Ser Xaa Arg Ala Ser 1 5 <210> 291 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 291

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 292 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 292

Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 293 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 293

Gly Ala Ser Phe Arg Ala Thr 1 5 <210> 294 <211> 7

<221> MOD_RES <222> (2) . . (2) <223> Ala ou Thr <22 0> <221> MOD_RES <222> (4) . . (4) <223> Ser ou Phe <4 0 0> 294

Gly- Xaa Ser Xaa Arg Ala Thr

1 S <210> 295

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 295

Arg Ala Ser Gin Ser Val Asn Ser Asn Leu Ala 15 10 <210> 296

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 296

Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Tyr Asp Leu Gly 15 10 <210> 297

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 297

Arg Ala Ser Gin Gly Ile Ser Zle Trp Leu Ala 15 10 <210> 298

<211> 16 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 298

Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Gin Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr 15 10 15 <210> 299

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 299

Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Ser Ser Leu Ala 15 10 <210> 300

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 300

Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Ser Tyr Leu Ala 15 10 <210> 301

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 301 .Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Gly Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 302

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 302 <22 0>

Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Gly Thr Tyr Leu Ala 15 10 <210> 303

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 303

Arg Ala Ser Gin Asn Phe Asp Ser Asn Tyr Leu Ala 15 10 <210> 304

<211> 12 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0>

<221> MOD_RES <222> ( 5) .. (5) <223> Asn ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (6) . . (6) <223> Vai ou Phe <22 0>

<221> MOD_RES <222> (7) . . (7) <223> Asp ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (8) .. (8) <223> Gly ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (9) . . (9) <223> Ser, Asn ou Thr <22 0>

<221> MOD_RE S <222> (10) . . (10) <223> Ser ou Tyr <4 0 0> 304

Arg Ala Ser Gin Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Ala 15 10 <210> 305

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 305

Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Glu Ser Val His 15 10 <210> 306 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 306

Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Gin Ser Val His 15 10 <210> 307

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0> <22 0> <221> MOD_RES <222> (8) . . (8) <223> Glu ou Gin <4 0 0> 307

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Xaa Ser Vai His 15 10 <210> 308 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 308

Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Tyr Asn Gly Phe Thr Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 309 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 309

Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Phe Leu Asp 15 10 15 <210> 310 <211> 16

<221> MOD_RES <222> (8) . . (8) <223> Tyr ou His <22 0> <221> MOD_RES <222> (9) .. (9) <223> Tyr ou Ser <22 0> <221> MOD_RES <222> (12) . . (12) <223> Phe ou Tyr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (13) .. (13) <223> Thr ou Asn <22 0>

<221> MOD_RES <222> (14) . . (14) <223> Tyr ou Phe <4 0 0> 310

Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Xaa Xaa Asn Gly Xaa Xaa Xaa Leu Asp 15 10 15 <210> 311 <211> 19

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 311 lie Val Val Val Pro Ala Ala lie Gin Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 15 10 15

Met Gly Val <210> 312 <211> 13

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 312

Asp Pro Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 <210> 313 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 313

Thr Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Val Trp Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 314 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 314

Asp Arg Val Leu Ser Tyr Tyr Ala Met Ala Val 15 10 <210> 315 <211> 15

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 315

Val Arg lie Ala Gly Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 316 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 316

Glu Asn lie Val Val lie Pro Ala Ala lie Phe Ala Gly Trp Phe Asp 15 10 15

Pro <210> 317 <211> 15

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 317

Asp Arg Ala Ala Ala Sly Leu Bis Tyr Tyr Tyr Sly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 318 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 318 lie Leu Leu Leu Gly Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 <210> 319 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 319 lie Leu Leu Vai Gly Ala Tyr Tyr Tyr Cys Gly Met Asp Vai 15 10 <210> 320 <211> 13

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 320

Vai Vai Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Vai 1: "5. '' Id ' <210> 321 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 321

Ser Vai Vai Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Vai 15 10 <210> 322 <211> 14

<221> MOD_RES <222> (1) . . (1) <223> lie, Val ou Ser <220>

<221> MOD_RES <222> 2) .. (2) <223> Leu ou Val <22 0>

<221> MOD_RES <222> (3) . . (3) <223> Leu, Thr ou Val <22 0> <221> MOD_RES <222> (4) . . (4) <223> Leu, Val, Gly ou Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (6) .. (6) <223> Ala, Gly ou ausente <22 0>

<221> MOD_RES <222> ( 10) .. (10) <223> Tyr, Cys ou Asp <4 0 0> 322

Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Tyr Tyr Tyr Xaa Gly Met Asp Val 15 10 <210> 323 <211> 12

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 323

Ser Leu lie Val Val lie Val Tyr Ala Leu Asp His 15 10 <210> 324 <211> 12

<212> PRT <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 324 <22 0>

Ser Leu lie Vai Vai lie Vai Tyr Ala Leu Asp Tyr 15 10 <210> 325 <211> 12

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 325

Ser Leu lie Vai Vai Met Vai Tyr Vai Leu Asp Tyr 15 10 <210> 326 <211> 12

<212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0>

<221> MOD_RES <222> (6) . . (6) <223> lie ou Met <22 0>

<221> MOD_RES <222> (9) .. (9) <223> Ala ou Val <22 0>

<221> MOD_RES <222> (12) . . (12) <223> Seu ou Tyr <400> 326

Ser Leu lie Val Val Xaa Val Tyr Xaa Leu Asp Xaa 15 10 <210> 327 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 327

Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr lie Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210> 328 <211> 19

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 328

Arg lie Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro 15 10 15

Val Lys Gly <210> 329 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 329

Arg lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 330 <211> 18

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 330

Arg lie Lys Ser Lys Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val 15 10 15

Lys Gly <210> 331 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 331

His lie Phe Ser Ash Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 332 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 332

His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Asn 15 10 15 <210> 333 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0> <221> M0D_RES <222> (16) . . (16) <223> Ser ou Asn <4 0 0> 333

His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Xaa 15 10 15 <210> 334 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 334

Gly lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 335 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 335

Gly lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 336 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 336

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Vai Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai Lys 15 10 15

Gly <210> 337 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 337

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Vai Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Vai Lys 15 10 15

Gly <210> 338 <211> 17

<221> MOD_RES <222> (1) .. (1) <223> Gly ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> His, Tyr ou Asn <4 0 0> 338

Xaa lie Ser Gly Ser Gly Val Ser Thr Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 339 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 339

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 340 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 340

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 341 <211> 17

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (8) . . (8) <223> Asp ou lie <22 0> <221> MOD_RES <222> (12) .. (12) <223> Ala ou Gly <4 Ο 0> 341

Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Xaa Lys Tyr Tyr Xaa Asp Ser Val Lys 15 10 15

Gly <210> 342 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 342

Asn lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 343 <211> 16

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 343

Arg lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 344

<211> 16 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1) .. (1) <223> Asn ou Arq <22 0>

<221> MOD_RES <222> (4) . . (4) <223> Tyr ou Thr <22 0> <221> MOD_RES <222> (9) . . (9) <223> Tyr ou Asn <4 0 0> 344

Xaa lie Tyr Xaa Ser Gly Ser Thr Xaa Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 345 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 345

Asp Leu Ser Met His 1 5 <210> 346 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 346

Asp Ala Trp Met Ser 1 5 <210> 347 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 347

Thr Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 348 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 348

Ser Tyr Phe Trp Ser 1 5 <210> 349 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 349

Ser Gly Gly Tyr Asn Trp Ser 1 5 <210> 350 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 350

Asn Ala Arg Met Gly Val Ser 1 5 <210> 351 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 351

Asn Ala Arg Met Gly Val Asn 1 5 <210> 352 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (7) . . (7) <223> Ser ou Asn <4 0 0> 352

Asn Ala Arg Met Gly Vai Xaa 1 5 <210> 353 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 353

Ser Tyr Gly Ile His 1 5 <210> 354 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 354

Asn Tyr Gly Ile His 1 5 <210> 355 <211> 5

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <22 0> <221> MOD_RES <222> (1) . . (1) <223> Ser ou Asn <4 0 0> 355

Xaa Tyr Gly Ile His 1 5 <210> 356

<211> 822 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο 0> 356

Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 15 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gin Ala Gin 20 25 30 pro ϋ rp Gly Ala prp Val Glu Val Glu Sat Phe Leu Val His Pro Gly 35 40 45

Asp Lett Leu Gin Lett Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gin Ser lie 50 55 60

Asa Trp Leo Arg Asp Gly val Gin Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg 65 70 75 80 lie Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gin Asp Ser Val Pro Ala Asp Sê® 85 SO m

Gly Lett: Tyr Ala Cys Val. Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr 100 105 110

Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp 115 120 125

Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr 130 135 140

Lys Pro Asn Arg Met Pro val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys 145 150 155 160

Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe 165 170 175

Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys ISO 185 190

Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Ays Vai 195 200 205

Arg Tyr Ala Thr Trp Ser lie lie Met Asp Ser Vai Vai Pro Se* Asp 210 215 220

Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Vai Gli Asft Glu Ty* Gly Ser Ile Asn 225 230 235 240

His Thr Ty* Gin Leu Asp Vai Vai Glu Arg Ser Pro Bis Arg Pro lie 245 250 255

Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr vai Ala Leu Gly Ser Asn 260 265 270

Vai Glu Phe Mèt Cys Lys Vai Tyr Ser Asp Pro Gin Pro His lie Gift 275 280 285

Trp Leu Lys Bis Ile Glu Vai Asn Gly Ser Lys lie Gly Pro Asp Asn 290 295 300

Leu Pro Tyr Vai Gin lie Leu Lys Thr Ala Gly Vai Asn Thr Thr Asp 305 310 315 320

Lys Glu Mete Glu Vai Leu Bis Leu .Arg' Asn Vai Ser Phe Glu Asp Ala 325 ' 330 335

Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser Bis His 340 345 350

Ser Ala Trp Leu Thr Vai Leu Glu Ala Leu Gift Glu Arg pro Ala Vai 355 360 365

Met Thr Ser pro Leu Tyr Leu Glu Ile Ile Ile Tyr Cys Thr Gly Ala 370 375 380

Phe Leu Ile Ser Cys Met Vai Gly Ser Vai Ile Vai Tyr Lys Met Lys 385 390 395 400

Ser Sly Thr Lys Lys Ser Asp Phe His Ser Sin Mist Âla Val His Lys 405 410 415

Leu Ala Lys Ser lie Pro Lew Arg Arg Sin Val Thr ’Val Ser Ala Asp 420 425 430

Ser Ser Ala Ser Met Asa Ser Sly Val Leu Leu Val Arg Pro Ser Arg 435 440 445

Leu Ser Ser Ser Sly Thr Pro Mèh Leu Ala Sly Val Ser Glu Tyr Glu 450 455 450

Leu Pro Slu Asp Pro Arg Trp Glu Leu Pro Arg Asp Arg Leu Val Leu 465 470 475 480

Giy Lys Pro Leu Giy slu sly Cys Phe Giy Gin val val Leu Ala slu 485 490 495

Ala Lie Sly Leu Asp Lys Asp Lys 'Pro Asn Arg val Thr Lys val -Ala: 500 "" " 505 510 val Lys Met Leu Lys' Ser Asp -Ala Thr Glu Lys -Asp Leu Ser Asp Leu 515 520 .525 lie Ser Slu Met Slu Met Met Lys Met lie Sly Lys His Lys Asa lie 530 535 540 lie Asn Létt Leu Giy Ala Cys Thr Gin Asp Giy Pro Leu Tyr Val lie 545 550 555 560

Val Slu Tyr Ala Ser Lys Sly Asa Leu Arg Glu Tyr Leu Gin Ala Arg 565 570 575

Arg Pro Pro Giy Leu Glu Tyr Cys Tyr Asa Pro Ser His Asn Pro Glu 580 585 590

Glu Gin Leu Ser Ser Lys Asp Leu Val Ser Gys Ala Tyr Gin Val Ala 595 600 605

Arg Gly Met Glu Tyr Leu Ala Sér LyS Lys Cys lie His Arg Asp Léu 610 615 620

Ala Ala Aug Asa Val Leu Va.1 Thr Glu Asp Asn Val Met LyS He Ala 625 630 635 640

Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp lie His His He Asp Tyr Tyr Lys Lys 645 650 655

Thr Thr Asa Sly Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Slu Alá Leu 660 665 670

Phe Asp Arg lie Tyr Thr His Glu Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val 675 680 685

Leu Leu Trp Glu lie Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Val 690 695 700

Pro Val Slu Slu Leu Phe Lys Leu Leu Lys Glu Sly His Arg Met Asp 705 710 715 720

Lys; Pro Ser Asa Cys Thr Asa Slu Leu Tyr Met Met Met Arg Asp Cys 725 730 73:5

Trp His Ala Val Pro Ser Slu Arg Pro Thr Phe Lys Slu Leu Val Glu 740 745 750

Asp Leu Asp Arg He Val Ala Leu Thr Ser Asn Glu Glu Tyr Leu Asp 755 760 765

Leu Ser Met Pro Leu Asp Sin Tyr Ser Pro Ser Phe Pro Asp Thr Arg 770 775 780 •Ser Ser 'Thr Cys Ser Ser· Gly Glu Asp Ser Val Phe· Ser His Slu Pr©; 785 790 795 800

Leu Pro Slu Glu Pro Cys Leu Pro Arg His Pro Ala Gin Leu Ala A.sn 805 810 815

Sly Gly Leu Lys Arg Arg 820 <210> 357

<211> 822 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 357

Met Trp Gly Trp Lys Cys Leu Leu Fhe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 1 I 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ala Pro Thr Leu Pro Slu Sin Ala Sin 20 25 30

Pro Trp Sly Val Pro Val Slu Val Slu Ser Lem Leu Val Bis Pro Sly 35 40 45

Asp Leu Leu Sin Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Sin Ser Tie

50 55 6Q

Asn Trp Léu Arg ASp Gly Val Gif! Léu Val Slu Sap ASi! Arg Thr Arg 65 70 75 80 lie Thr Sly Glu Slu Val Slu val Arg Asp Seri lie Pro Ala Asp Set 85 "" SO 55'' :Sly Léu.: Ty-r Ala Cys Val: Thr Ser Ser Ppo: Ser Sly Sér Asp·· Thr Thr 100 105 110

Tyr Phe Ser Val Ash val Ser Asp Ala Léu Pro Sei Ser Glu Asp ASp 115 120 125 asp Asp Asp asp asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr asp asn Thr 130 135 1:40

Lys Pro asn Arg Are Pro Val Ala pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys 145 150 155 160

Met Glu Lys Lys Leu His ala "Vai Pro ala ala Lys Thr yal Lys Phe 165 170 175

Lys Cys Pro Sêr Ser Gly Thr Pro asn pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys 180 185 190 asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro asp His arg lie Gly Gly Tyr Lys val 195 200 205

Arg Tyr Ala Thr Trp Ser lie lie Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp 210 215 220

Lys Gly Asn Tyr Thr Cys lie Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser lie Asn 225 230 215 240

His Thr Tyr Gin Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Tie 245 250 255

Leu Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn mo 265 270

Val Glu Phe Met Gys Lys Val Tyr ser Asp Pro Gin Pro His He Gin 275 280 285

Trp Leu Lys His Tie Glu \al Asn Gly Ser Lys lie Gly Pro Asp Asn 290 295 300

Leu Pro Tyr Val Gin lie Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp 305 310 315 320

Lys Glu Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala 325 330 335

Gly ©la Tyr Thr Cys tea Ala Gly Asti: Sear lie Gly tea Ser His His 34 0 345. 350

Sea Ala Trp tea Thr vai tea Giu Ala tea ©la ©la Arg pro Ala Val 355 360 365

Met Thr Ser Pro tea Tyr tea ©la lie lie lie Tyr Cys Thr ©ly Ala 370 375 380

Phe tea lie Ser ©ys: Met tea ©ly Ser val He lie Tyr tys Met tys 385 ISO 335 400

Ser Sly Thr tys Lys Ser Asp Phe His Ser ©In Met Ala Val His tys 405 410 415 tea Ala Lys Ser lie Pro tea Arg Arg Gin Val Thr Val Ser Ala Asp 420 425 430

Ser Ser Ala Ser Met Asn Ser ©ly Vat Lea. tea Val Arg Pro Ser Arg' 433: 440 4.43 tea Ser Ser Ser ©ly Thr Pro Met tea Ala ©ly Val Ser ©la Tyr ©la 430 455 460

Lea Pro ©la Asp Pro Arg Trp ©la tea Pro Arg Asp Arg tea Val Lea 465 470 473 480 ©ly Lys Pro Lea ©ly ©la ©ly ©ys Phe: Sly ©in Val Val Lea Ala ©la 485 430 435

Ala lie ©ly Lea Asp Lys Asp Lys Pro Asn Arg Val Thr Lys Val Ala 500 505 510 yal Lys Met Leu tys; Ser Asp Ala Thr ©la tys: Asp Leu Ser Asp Leu 515 520 525

He Ser Slu Met ©la Met Met Lys Met He Sly Lys His Lys Asn He 530 53h 540 lie Asn Leu Leu Sly Ala CyS Thu Sin Asp Sly Pro Leu Tyr Val lie 545 550 5:55 560

Val Glu Tyr Ala Ser Lys Sly Asn Leu Arg Glu Tyr Leu Sin Ala Arg 565 570 575

Arg Par© Pro Sly Leu Slu Tyr Cys Tyr Asn Pro Ser His Asn Pro· Slu 580 585 590

Slu Sin Leu Ser Ser Lys Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Sin Val Ala 5:95 €00 805

Arg Gly Met Slu Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Cys lie His Arg Asp Leu 610 615 620

Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Thr Slu Asp Asn Val Met Lys Lie Ala 625 630 635 640

Asp Phe Sly Leu Ala Arg Asp lie His His lie Asp Tyr Tyr Lys Lys 845 650 655

Thr Thr Asn tly Arg Leu Pro val Lys Trp Met Ala Pr© Glu Ala Leu 660 685 670

Phe Asp Arg lie Tyr Thr His Gin Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val 675 680 685

Leu Leu Trp Glu lie Phe Thr Leu Sly Sly Ser Pro Tyr Pro sly Val 690 695 700

Pro Val Slu Glu Leu Phe Lys Leu Leu Lys Glu Gly His Arg Met Asp 705 710 715 720

Lys Pr© Ser Asn Cys Thr Asn Glu Leu Tyr Met Met Met Arg Asp Cys 725 730 735

Trp HiS Ala Val Pro Ser Gin Arg Pro Thr Phe Lys Gin Leu Val Glu 740 745 750

Asp lieu Asp Arg lie Vai Ala Leu Thr Se» Asti ©In Glu Tyr Leu Asp 755 760 765

Leu Se» lie Pro Leu Asp ©In Tyr Ser Pro Ser Phe Pro Asp Thr Arg 770 775 780

Ser Ser "Thr €γ» Ser Ser Gly Glu .Asp Ser Vai Phe Ser His. ©lu Pro 785 7SO 795 800

Leu Pro ©lu Glu Pro Cys Leu Pro Arg His Pro Thr ©In Leu Ala Asn 805 810 815

Ser ©ly Leu Lys Arg Arg 820 <210> 358 <211> 822

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético Consenso <22 0>

<221> M0D_RES <222> (3) . . (3) <223> Ser ou Gly <22 0>

<221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> Ala ou Vai

<221> MOD_RE S <22 0> <222> (43) . . (43) <223> Phe ou Leu <22 0> <221> MOD_RES <222> (74) . . (74) <223> Ala ou Val <22 0> <221> MOD_RES <222> (89) .. (89) <223> Gin ou Arg <22 0> <221> MOD_RES <222> (149) .. (149) <223> Met ou Arg <22 0> <221> MOD_RES <222> (812) . . (812) <223> Ala ou Thr <22 0> <221> MOD_RES <222> (817)..(817) <223> Gly ou Ser <4 Ο 0> 358

Met Trp Xaa Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 15 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ala Pro Thr Leu Pro Glu Gin Ala Gin 20 25 30

Pro Trp Gly Xaa Pro Val Glu Val Glu Ser Xaa Leu Val His Pro Gly 35 40 45

Asp Leu Leu Gin Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gin Ser lie 50 55 60

Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gin Leu Xaa Glu Ser Asn Arg Thr Arg 65 70 75 80 lie Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Xaa Asp Ser lie Pro Ala Asp Ser 85 90 95

Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr 100 105 110

Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp 115 120 125

Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr 130 135 140

Lys Pro Asn Arg Xaa Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys 145 150 155 160

Met Glu Lys Lys Leix His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe 165 17f 175

Lys 'Cys; Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asa Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys 180 185 190

Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg lie Gly Gly Tyr Lys Val 195 200 205

Arg Tyr Ala Thr Trp Ser He lie Met Asp Sex Val Val pro .Ser Asp 210 215 220

Lys (Sly Asn Tyr Thr Cys lie Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser lie Asn 225 230 235 240

His Thr Tyr Gin Leu Asp Val Val Glu Arg Ser pro His Arg Pro He :245 250 255

Lev Gin Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn 260 265 270

Val Glu Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro: Gin Pro His He Gin 275 280 285

Trp Leu Lys His He Glu Val Ash Gly Ser Lys He Gly Pro asp Asa 2#Q 295 300

Leu Pro Tyr Val Gin He Lew Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp 305 310 315 320

Lys GlU Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala 325 330 335

Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser He Gly Leu Ser His His 340 345 350

Set Ala Trp Leu Thr val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val .355: 350 .3:6:5

Met Thr Ser Pro Leu Tyr Leu Glu lie He He Tyr Cys Thr Gly Ala 370 375 380

Phe Leu He Ser Cys Met Leu Gly Ser Val lie He Tyr Lys Met Lys 385 390 395 400

Ser Gly Thr Lys Lys Ser Asp Phe His Se Gin Met Ala Val His Lys 405 410 415

Leu Ala Lys Ser lie Pro Leu Arg Arg Gin Val Thr Val Ser Ala Asp 420 425 430

Ser Ser Ala Ser Met Asa Ser Gly val Leu Leu val Arg Pro Ser Arg 435 440 445

Leu Ser Ser Ser Sly Thr Pro Met Léu Ala Sly Val Ser Slu Tyr Glu 450 455 460

Leu Pro Glu Asp Pro Arg Trp Slu Leu Pro Arg Asp Arg Leu Val Leu

465 470 475 4SQ

Sly Lys Pro Leu Gly Glu Sly Sys Phe Gly Sin Val Val Leu Ala Glu 485 490 495

Ala lie Sly Leu Asp Lys Asp Lys Pro Asn Arg Val Thr Lys Val Ala 500 505 510

Val Lys Met Leu Lys Ser Asp Ala Thr Slu Lys Asp Leu Ser Asp Leu 515 ' 520 52® lie Ser Glu Met Glu Met Met Lys Met Tie Sly Lys His Lys Asn He 530 535 540 lie Asn Leu Leu Sly Ala Sys Thr Gin Asp Gly Pro Leu Tyr Val He 545 550 555 560

Val Slu Tyr Ala Ser Lys Sly Asn Leu Arg Slu Tyr Leu SI® Ala Arg 565 570 575

Arg Pró Pro Gly Leu Slu Tyr GyS Tyr Asn Pro Ser His Asn Pró Glu 580 585 590

Glu Slu Leu Ser Ser Lys Asp Leu Val Her GyS Ala Tyr Gin Val Ala 595 600 605

Arg Gly Met Slu Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Cys lie His Arg Asp Leu 610 615 620

Ala Ala Arg Asn val Leu val Thr Glu Asp Asn val Met Lys lie Ala 625 630 635 640

Asp Pile Gly Leu Ala Arg Asp ii# His His lie Asp Tyr Tyr Lys LyS 645 650 655

Thr Thr ASU Gly Arg Leu Pro Val Lys Tip, Met Ala Pro Glu Ala Lea 660 615 6*70

Phe Asp Arg lie Tyr Thr His Gin Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val 675 680 685

Leu Leu Trp Glu ill Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Val 690 695 700

Pro ''Val Glu Glu. Leu Phe· Lys Leu Leu Lys Glu Gly :h1s Arg Met Asp 705 710 715 720

Lys Pro Ser Asn Cys Thr Ash Glu Lea Tyr Met Met Met Arg Asp Gys 725 730 735

Trp His Ala val Pro Ser Glu Arg Pro Thr Phe Lys Glu Leu Val Glu 740 745 750

Asp Leu Asp Arg lie Val Alâ Leu Thr Sér Asn Glu Glu Tyr Léu Asp 755 760 765

Leu Ser He Pro Leu Asp Gin Tyr ser Pro Ser Phe Pro Asp Thr Arg 770 775 780

Ser Ser Thr Gys Ser Ser Gly Glu Asp Ser Val Phe Ser His Glu Pro 785 790 795 800

Leu Pro Glu Glu Pro Gys Leu Pro Arg His Pro xaa Glu Leu Ala Asn 805 810 815

Xaa Gly Leu Lys Arg Arg 820 <210> 359 <211> 1044

<212> PRT <213> Homo sapiens <4 0 0> 359

Met Lys Pro Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp He Phe 15 10 15

Phe Ser Thr Asp Glu lie Thr Thr Arg Tyr Arg Asn Thr Met Ser Asn 20 25 30

Gly Gly Leu Gin Arg Ser Val He Leu Ser Ala Leu He Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Arg Ala He Trp Ser Lys Asn 50 55 60

Pro Asn Phe Thr pro Val Asn Glu Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe Pro Lys Asn Phe Phe Trp Gly He Gly Thr Gly Ala Leu Gin Val 85 90 95

Glu Gly Ser Trp Lys Lys Asp Gly Lys Gly Pro Ser He Trp Asp His 100 105 110 phe Lie His Thr' :HLs Leu Lys Asn Val· Ser Ser Thr Asn Gly Ser Ser" 115 Ito 125

Asp Ser Tyr He Phe Leu Glu Lys Asp Leu Ser Ala Leu ASP Phe IIS 130 135 140

Gly Val Ser Phe: Tyr Gin Phe ser Tie SPr Trp pré Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asp Gly lie Val Thr Val Ala Asa Ala Lys Gly Lea Gin Tyr Tyr Sea 165 170 175

Thr leu Leu Asp Ala Leu Val Leu Arg Asa lie Glu Pro He Val Thr ISO 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Ala Leu Gin Glu Lys Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys Asa Asp Thr lie He Asp He Phe Asa Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Met Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp He Thr He His 225 230 235 240

Asa pro Tyr Leu val Ala Trp His Gly Tyr Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asa Leu Ala Ala Val Tyr Thr Val Gly His Asa 260 265 270 Léu He Lys Ala His Sér Lys Val Trp HiS Asa Tyr Asn Thr His Phe 275 280 285

Arg Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Sér Hé Thr Leu Glv Ser His Trp 290 295 300

Lie Glu Pro Ash Arg Sér Glu Asa. Thr Met Asp lie phe Lys Cys Gin 305 310 315 320

Gin Ser Met Val Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asa Pro He His Gly 325 530 335

Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Gly Met Arg Lys Lys Léu Phé Sér Val Léu 340 345 350

Pro Hé Phé Sér Glu Ala Glu Lys His Glu Met Arg Gly Thr Ala Asp 355 360 365

Phe Phe Ala Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Lys Pro Leu Asn Thr 370 375 380

Met Ala Lys Met Gly Gin Asn Val Ser Leu Asn Leu Arg Glu Ala Leu 385 390 395 400

Asn Trp lie Lys Leu Glu Tyr Asn Asn Pro Arg lie Leu lie Ala Glu 405 410 415

Asn Gly Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala 420 425 430 lie Tyr Met Met Lys Asn Phe Leu Ser Gin Val Leu Gin Ala lie Arg 435 440 445

Leu Asp Glu lie Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Leu Asp 450 455 460

Gly Phe Glu Trp Gin Asp Ala Tyr Thr lie Arg Arg Gly Leu Phe Tyr 465 470 475 480

Val Asp Phe Asn Ser Lys Gin Lys Glu Arg Lys Pro Lys Ser Ser Ala 485 490 495

His Tyr Tyr Lys Gin lie lie Arg Glu Asn Gly Phe Ser Leu Lys Glu 500 505 510

Ser Thr Pro Asp Val Gin Gly Gin Phe Pro Cys Asp Phe Ser Trp Gly 515 520 525

Val Thr Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Ser Val Ala Ser Ser Pro Gin 530 535 540

Phe Ser Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asn Ala Thr Gly Asn Arg Leu 545 550 555 560

Leu His Arg Val Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ala Gin Cys 565 570 575

Thr Asp Phe Val Asn lie Lys Lys Gin Leu Glu Met Leu Ala Arg Met 580 585 590

Lys Val Thr His Tyr Arg Phe Ala Leu Asp Trp Ala Ser Val Leu Pro 595 600 605

Thr Gly Asn Leu Ser Ala Val Asn Arg Gin Ala Leu Arg Tyr Tyr Arg 610 615 620

Cys Val Val Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly lie Ser Ala Met Val Thr 625 630 635 640

Leu Tyr Tyr Pro Thr His Ala His Leu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Leu 645 650 655

His Ala Asp Gly Trp Leu Asn Pro Ser Thr Ala Glu Ala Phe Gin Ala 660 665 670

Tyr Ala Gly Leu Cys Phe Gin Glu Leu Gly Asp Leu Val Lys Leu Trp 675 680 685 lie Thr lie Asn Glu Pro Asn Arg Leu Ser Asp lie Tyr Asn Arg Ser 690 695 700

Gly Asn Asp Thr Tyr Gly Ala Ala His Asn Leu Leu Val Ala His Ala 705 710 715 720

Leu Ala Trp Arg Leu Tyr Asp Arg Gin Phe Arg Pro Ser Gin Arg Gly 725 730 735

Ala Val Ser Leu Ser Leu His Ala Asp Trp Ala Glu Pro Ala Asn Pro 740 745 750

Tyr Ala Asp Ser His Trp Arg Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu 755 760 765 lie Ala Trp Phe Ala Glu Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ala 770 775 780

Ala Met Arg Glu Tyr lie Ala Ser Lys His Arg Arg Gly Leu Ser Ser 785 790 795 800

Ser Ala Leu Brp Arg Leu Thr Glu Ala Glu Arg Arg Leu Leu Lys Gly #05 810 815

Thr Vai Asp Phe Cys Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Vai Met 820 825 830

His Glu Gin Leu Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg Asp Ile Gin 835 840 845

Phe Leu Gin Asp Ile Thr Arg Leu Ser Ser Pro Thr Arg Leu Ala Vai 850 855 860 lie Pro Trp Gly Vai Arg Lys Leu Leu Arg Trp Vai Arg Arg Asn Tyr 865 870 875 880

Gly Asp Met Asp Ile Tyr Ile Thr Ala Ser Gly Ile Asp Asp Gin Ala 885 890 895

Leu Glu Asp Asp Arg Leu Arg Lys Tyr Tyr Leu Gly Lys Tyr Leu Gin 900 905 910

Glu Vai Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Vai Arg Ile Lys Gly Tyr 915 920 925

Tyr Ala Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

Phe Thr Ser Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser Ile Gin Phe Tyr Asn Lys 945 950 955 960

Vai Ile Ser Ser Arg Gly Phe Pro Phe Glu Asn Ser Ser Ser Arg Cys 965 970 975

Ser Gin Thr Gin Glu Asn Thr Glu Cys Thr Vai Cys Leu Phe Leu Vai 980 985 990

Gin Lys Lys Pro Leu Ile Phe Leu Gly Cys Cys Phe Phe Ser Thr Leu 995 1000 1005

Vai Leu Lev Leu Sar Ile Ala lie Phe Gin Arg Gin Lys Aig Arg 1010 1015 1020

Lys Phe Trp Lys Alá Lys Asn Leu Gin His lie Pro Leu Lys Lys 1025 1030 1035

Gly Lys Arg vai vai Ser 1040 <210> 360 <211> 1043

<212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 360

Met Lys Thr Gly 6ys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp Ile Phe 1 5 10 15

Phe Ser Ser Asp Glu Arg Asn Thr Arg Ser Arg Lys Thr Met Ser Asn 20 25 30

Arg Ala Leu Gin Arg Ser Ala Vai Leu Ser Ala Phe Vai Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Vai Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Lys Ala lie Trp Asp Lys Lys 50 55 #0

Gin Tyr Vai Ser Pro Vai Asn Pro Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe. Pr© Lys Asn phe Ser Trp· Gly Vai Gly Thr Gly Alã. Phé Gin Vai |5 90 95

Glu Gly Ser Trp Lys Thr Asp Gly Arg Gly Pr© Ser He Trp Asp Arg 100 105 110

Tyr Vai Tyr Ser His Leu Arg Gly Val Asn Gly Thr Asp Arg Ser Thr 115 120 125

Asp Ser Tyr lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu 130 135 140

Gly Val Ser Phe Tyr Gin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asn Gly Thr Val Ala Ala Val Asn Ala Gin Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg 165 170 175

Ala Leu Leu Asp Ser Leu Val Leu Arg Asn lie Glu Pro lie Val Thr 180 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Thr Leu Gin Glu Glu Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys Asn Ala Thr Met lie Asp Leu Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Thr Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp lie Thr lie His 225 230 235 240

Asa Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asa Leu Thr Ala Val Tyr Thr Val Gly His Asa 260 265 27Q Léu Ili Lys Ala His Sèr Lys Val Trp HiS Asn Tyr Asp Lys Asa Phe 275 280 285

Arg Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Ser lie Thr Leu Gly Ser His Trp 290 295 300 lie Glu Pro Asa Arg Thr Asp Asa Met Glu Asp Val lie Asa Cys Gin 305 310 315 320

His Ser Met Ser Ser Vai Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro lie His Gly 325 330 335

Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Phe Met Lys Thr Gly Ala Met lie Pro Glu 340 345 350

Phe Ser Glu Ala Glu Lys Glu Glu Val Arg Gly Thr Ala Asp Phe Phe 355 360 365

Ala Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Arg Pro Ser Asn Thr Val Val 370 375 380

Lys Met Gly Gin Asn Val Ser Leu Asn Leu Arg Gin Val Leu Asn Trp 385 390 395 400 lie Lys Leu Glu Tyr Asp Asp Pro Gin lie Leu lie Ser Glu Asn Gly 405 410 415

Trp Phe Thr Asp Ser Tyr lie Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala lie Tyr 420 425 430

Met Met Lys Asn Phe Leu Asn Gin Val Leu Gin Ala lie Lys Phe Asp 435 440 445

Glu lie Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Thr Leu Leu ASp Gly Phe 450 455 460

Glu Trp Glh Asp Ala Tyr Thr Thr Arg Arg Gly Leu Phe Tyr Val Asp 465 470 475 480

Phe Asn Ser Glu Gin Lys Glu Arg Lys Pro Lys Ser Ser Ala His Tyr 485 490 495

Tyr Lys Gin He lie Gin Asp Asn Gly Phe Pro Leu Lys Glu Ser Thr 500 505 510 pro Asp Met Lys Gly Arg phe Pro Gys Asp She Ser Trp Gly val Thr 515 520 525

Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Phe Thr Val Ser Ser pro Gin phe Thr 530 535 540

Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asn Val Thr Gly Asn Arg Leu Leu Tyr 545 550 555 560

Arg Val Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ser Gin Cys Thr Asp 565 570 575

Tyr Val Ser lie Lys Lys Arg Val Glu Met Leu Ala Lys Met Lys Val 580 585 590

Thr His Tyr Gin Phe Ala Leu Asp Trp Thr Ser lie Leu Pro Thr Gly 595 600 605

Asn Leu Ser Lys Val Asn Arg Gin Val Leu Arg Tyr Tyr Arg Cys Val 610 615 620

Val Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly Val Phe Pro Met Val Thr Leu Tyr 625 630 635 640

His Pro Thr His Ser His Leu Gly Leu Pro Leu Pro Leu Leu Ser Ser 645 650 655

Gly Gly Trp Leu Asn Met Asn Thr Ala Lys Ala Phe Gin Asp Tyr Ala 660 665 670

Glu Leu Cys Phe Arg Glu Leu Gly Asp Leu Val Lys Leu Trp lie Thr 675 680 685 lie Asn Glu Pro Asn Arg Leu Ser Asp Met Tyr Asn Arg Thr Ser Asn 690 695 700

Asp Thr Tyr Arg Ala Ala His Asn Leu Met lie Ala His Ala Gin Val 705 710 715 720

Trp His Leu Tyr asp Arg Gin Tyr Arg Pro Val Gin His Gly Ala val 725 730 735

Ser Leu Ser Leu Hie Cys Asp Trp Ala Glu Pro Ala Asn Pro Phe Val 740 745 750

Asp Ser His Trp Lys Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu lie Ala 755 760 765

Trp Phe Ala Asp Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ser Val Met 770 775 780

Lys Glu Tyr lie Ala Ser Lys Asn Gin Arg Gly Leu Ser Ser Ser Val 785 790 795 800

Leu Pro Arg Phe Thr Ala Lys Glu Ser Arg Leu Val Lys Gly Thr Val 805 810 815

Asp Phe Tyr Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Val lie His Lys 820 825 830

Gin Leu Asn Thr Asn Arg Ser Val Ala Asp Arg Asp Val Gin Phe Leu 835 840 845

Gin Asp lie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Ser Arg Leu Ala Val Thr Pro 850 855 860

Trp Gly Val Arg Lys Leu Leu Ala Trp lie Arg Arg Asn Tyr Arg Asp 865 870 875 880

Arg Asp lie Tyr lie Thr Ala Asn Gly lie Asp Asp Leu Ala Leu Glu 885 890 895

Asp Asp Gin lie Arg Lys Tyr Tyr Leu Glu Lys Tyr Val Gin Glu Ala 900 905 910

Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Lys He Lys Gly Tyr Tyr Ala 915 920 925

Phe Lys Leu Thr Glu Glu Lys Ser Lys Pré Arg She Gly Phe Phe Thr 930 935 940

Ser Asp Phe Arg Ala Lys Ser Ser Val Gin Phe Tyr Ser Lys Leu He 945 950 955 9€0

Ser Ser Sei; Gly Leu Pró Ala Glu Asn Arg Sei? Pifô Ala Cys Gly Gin 965 910 975

Pro Ala Glu Asp Thr Asp Cys Thr lie Cys Sèr Phè Leu Vai Glu Lys 980 985 990

Lys Pro Leu Zle Phe Phe Gly Cys Cys Phe Zle Ser Thr Leu Ala Vai 995 1000 1005

Leu Leu Ser Ile Thr Vai Phe His His Gin Lys Arg Arg Lys Phe 1010 1015 1020

Gin Lys Ala Arg Asn Leu Gin Asn Zle Pro Leu Lys Lys Gly His 1025 1030 1035

Ser Arg Vai Phe Ser 1040 <210> 361 <211> 1045

<221> M0D_RES <222> (3) . . (3) <223> Pro ou Thr

<221> MOD_RES <222> (22) . . (22) <22 0> <223> lie ou Arg <22 0> <221> MOD_RES <222> (23) .. (23) <223> Thr ou Asn <22 0>

<221> MOD_RES <222> (26) . . (26) <223> Tyr ou Ser <220>

<221> MOD_RES <222> (28) . . (28) <223> Asn ou Lys <22 0> <221> MOD_RES <222> (33)..(33) <223> Gly ou Arg <22 0> <221> MOD_RE S <222> (39)..(39) <223> Val ou Ala

<221> MOD_RES <222> (44) . . (44) <22 0> <223> Leu ou Phe <22 0>

<221> MOD_RES <222> (62) .. (62) <223> Ser ou Asp <22 0> <221> MOD_RES <222> (64) . . (64) <223> Asn ou Lys <220> <221> MOD_RES <222> (65) .. (65) <223> Pro ou Gin <22 0> <221> MOD_RES <222> (66) .. (66) <223> Asn ou Tyr <22 0> <221> MOD_RES <222> (67) . . (67) <223> Phe ou Val

<221> MOD_RES <222> (72) . . (72) <22 0> <223> Glu ou Pro <22 0>

<221> MOD_RES <222> (86) .. (86) <223> Phe ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (94) . . (94) <223> Leu ou Phe <220>

<221> MOD_RES <222> (102) . . (102) <223> Lys ou Thr <22 0> <221> MOD_RES <222> (112) . . (112) <223> His ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (120) . . (120) <223> Asn ou Gly

<221> MOD_RES <22 0> <222> (122) . . (122) <223> Ser ou Asn <22 0>

<221> MOD_RES <222> (123) .. (123) <223> Ser ou Gly <220>

<221> MOD_RES <222> (125)..(125) <223> Asn ou Asp <220>

<221> MOD_RES <222> (126)..(126) <223> Gly ou Arg <220>

<221> MOD_RES <222> (139) .. (139) <223> Ser ou Leu <22 0>

<221> MOD_RES <222> (161) . . (161) <223> Asp ou Asn

<221> MOD_RES <22 0> <222> (163)..(163) <223> lie ou Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (165) .. (165) <223> Thr ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (166) . . (167) <223> Val ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (170) .. (170) <223> Lys ou Gin <22 0>

<221> MOD_RES <222> (173) . . (173) <223> Gin ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (176) . . (176) <223> Ser ou Arg

<221> MOD_RES <22 0> <222> (177)..(177) <223> Thr ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (201) .. (201) <223> Ala ou Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (205)..(205) <223> Lys ou Glu <220>

<221> MOD_RES <222> (212) .. (212) <223> Asp ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (228) . . (228) <223> Met or Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (264) . . (264) <223> Ala ou Thr

<221> MOD_RES <222> (285)..(285) <22 0> <223> Asn ou Asp <22 0>

<221> MOD_RES <222> (286) . . (286) <223> Thr ou Lys <22 0>

<221> MOD_RES <222> (287) . . (287) <223> Seu ou Asn <220> <221> MOD_RES <222> (313)..(313) <223> Thr ou Met <22 0> <221> MOD_RES <222> (314) . . (314) <223> Met ou Glu <22 0> <221> MOD_RES <222> (317) . . (317) <223> Phe ou lie

<221> MOD_RES <22 0> <222> (318) .. (318) <223> Lys ou Asn <22 0>

<221> MOD_RES <222> (321) .. (321) <223> Gin ou His <22 0>

<221> MOD_RES <222> (324) . . (324) <223> Val ou Ser <220>

<221> MOD_RES <222> (343) .. (343) <223> Gly ou Phe <22 0>

<221> MOD_RES <222> (346)..(346) <223> Lys ou Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (347)..(347) <223> Lys ou Gly

<221> MOD_RES <22 0> <222> (348)..(348) <223> Leu ou ausente <22 0>

<221> MOD_RES <222> (349) .. (349) <223> Phe ou ausente <22 0>

<221> MOD_RES <222> (354) . . (354) <223> lie ou glu <220>

<221> MOD_RES <222> (361) .. (361) <223> His ou Glu <22 0>

<221> MOD_RE S <222> (382) . . (382) <223> Leu ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> ( 386) .. (386) <223> Ala ou Val

<221> MOD_RES <222> (398)..(398) <22 0> <223> Glu ou Gin <22 0>

<221> MOD_RES <222> (399)..(399) <223> Ala ou Val <22 0>

<221> MOD_RES <222> (408)..(409) <223> Asn ou Asp <220>

<221> MOD_RES <222> (411) . . (411) <223> Arg ou Gin <22 0> <221> MOD_RES <222> (424) . . (424) <223> Arg ou Tyr <22 0> <221> MOD_RES <222> (441) . . (441) <223> Ser ou Asn

<221> MOD_RES <22 0> <222> (449)..(449) <223> Leu ou Phe <220>

<221> MOD_RES <222> (474) . . (474) <223> lie ou Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (486)..(486) <223> Lys ou Glu <22 0>

<221> MOD_RES <222> (504) .. (504) <223> Arg ou Gin <22 0>

<221> MOD_RES <222> (509) . . (509) <223> Ser ou Pro <220>

<221> MOD_RES <222> (518) . . (518) <223> Gin ou Lys

<221> MOD_RES <222> (520) . . (520) <22 0> <223> Gin ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (538) .. (538) <223> Ser ou Phe <22 0>

<221> MOD_RES <222> (539) . . (539) <223> Val ou Thr <22 0> <221> MOD_RES <222> (540) . . (540) <223> Ala ou Val <22 0> <221> MOD_RES <222> (555) . . (555) <223> Ala ou Val <220> <221> MOD_RES <222> (581)..(581) <223> Asn ou Ser

<221> MOD_RES <22 0> <222> (585)..(585) <223> Gin ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (598) .. (598) <223> Arg ou Gin <22 0>

<221> MOD_RES <222> (604) . . (604) <223> Ala ou Thr <220>

<221> MOD_RES <222> (614) .. (614) <223> Ala ou Lys <22 0>

<221> MOD_RES <222> (619) .. (619) <223> Ala ou Val <22 0>

<221> MOD_RES <222> (636) .. (636) <223> Ser ou Phe

<221> MOD_RES <22 0> <222> (637) . . (637) <223> Ala ou Pro <22 0>

<221> MOD_RES <222> (653) .. (653) <223> Glu ou Leu <22 0>

<221> MOD_RES <222> (657) . . (657) <223> His or Ser <220>

<221> MOD_RES <222> (659) .. (659) <223> Asp ou Gly <22 0>

<221> MOD_RES <222> (664) . . (664) <223> Pro ou Met 22 0>

<221> MOD_RES <222> (665)..(665) <223> Ser ou Asn

<221> MOD_RES <22 0> <222> (668) .. (668) <223> Glu ou Lys <22 0>

<221> MOD_RES <222> (672) .. (672) <223> Ala ou Asp <22 0>

<221> MOD_RES <222> (675)..(675) <223> Gly ou Glu <220>

<221> MOD_RES <222> (679)..(679) <223> Gin ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (705) . . (705) <223> Gly ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (710) . . (710) <223> Gly ou Arg

<221> MOD_RES <22 0> <222> (721)..(721) <223> Leu ou Gin <22 0>

<221> MOD_RES <222> (722) .. (722) <223> Ala ou Val <22 0>

<221> MOD_RES <222> (724) . . (724) <223> Arg ou His <220>

<221> MOD_RES <222> (733) .. (733) <223> Ser ou Val <22 0>

<221> MOD_RES <222> (735) . . (735) <223> Arg ou His <22 0>

<221> MOD_RES <222> (744) . . (744) <223> Ala ou Cys

<221> MOD_RES <222> (754)..(754) <22 0> <223> Ala ou Val <22 0> <221> MOD_RES <222> (785)..(785) <223> Ala ou Val <22 0> <221> MOD_RES <222> (794)..(794) <223> Seu ou Asn <22 0> <221> MOD_RES <222> (795)..(795) <223> Arg ou Gin <22 0>

<221> MOD_RES <222> (802)..(802) <223> Ala ou Val <22 0>

<221> MOD_RES <222> (806)..(806) <223> Leu ou Phe

<221> MOD_RES <22 0> <222> (808) .. (808) <223> Glu ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (809)..(809) <223> Ala ou Lys <220>

<221> MOD_RES <222> (811) . . (811) <223> Arg ou Ser <220>

<221> MOD_RES <222> (821) .. (821) <223> Cys ou Tyr <220>

<221> MOD_RES <222> (834) . . (834) <223> Glu ou Lys <22 0>

<221> MOD_RES <222> (837) . . (837) <223> Ala ou Asn

<221> MOD_RES <222> (838) .. (838) <22 0> <223> Gly ou Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (839)..(839) <223> Ser ou Asn <22 0> <221> MOD_RES <222> (841) . . (841) <223> Tyr ou Ser <220> <221> MOD_RES <222> (842) . . (842) <223> Asp ou Val <22 0> <221> MOD_RE S <222> (865) . . (865) <223> He ou Thr <22 0> <221> MOD_RES <222> (874)..(874) <223> Arg ou Ala

<221> MOD_RES <22 0> <222> (881) .. (881) <223> Gly ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (883)..(883) <223> Met ou Arg <220>

<221> MOD_RES <222> (890) .. (890) <223> Ser ou Asn <220>

<221> MOD_RES <222> (895)..(895) <223> Gin ou Leu <22 0>

<221> MOD_RES <222> (901) . . (901) <223> Arg ou Gin <22 0>

<221> MOD_RES <222> (908) . . (908) <223> Gly ou Glu

<221> MOD_RES <22 0> <222> (914) . . (914) <223> Val ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (934)..(934) <223> Ala ou Thr <22 0>

<221> MOD_RES <222> (959)..(959) <223> Asn ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (965) .. (965) <223> Arg ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (967) . . (967) <223> Phe ou Leu <22 0>

<221> MOD_RES <222> (969) .. (969) <223> Phe ou Ala

<221> MOD_RES <22 0> <222> (972) . . (972) <223> Ser ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (974) .. (974) <223> Ser ou Pro <22 0>

<221> MOD_RES <222> (975)..(975) <223> Arg ou Ala <220>

<221> MOD_RES <222> (977) .. (977) <223> Ser ou Gly <22 0>

<221> MOD_RES <222> (979) . . (979) <223> Thr ou Pro <22 0>

<221> MOD_RES <222> (980) .. (980) <223> Gin ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (982) . . (982) <223> Asn ou Asp <22 0>

<221> MOD_RES <222> (989)..(989) <223> Leu ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (993) .. (993) <223> Gin ou Glu <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1000) .. (1000) <223> Leu ou Phe <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1005)..(1005) <223> Phe ou lie <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1009) .. (1009) <223> Val ou Ala <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1015)..(1015) <223> Ala ou Thr <22 0> <221> MOD_RES <222> (1018) .. (1018) <223> Gin ou His <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1019) . . (1019) <223> Arg ou His <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1026)..(1026) <223> Trp ou Gin <22 0> <221> MOD_RES <222> (1033) .. (1033) <223> Seu ou Asn <22 0> <221> MOD_RES <222> (1040) . . (1040) <223> Lys ou His

<221> MOD_RES <22 0> <222> (1041) . . (1041) <223> Arg ou Ser <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1042) .. (1042) <223> Val ou Arg <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1044) . . (1044) <223> Ser ou Phe <22 0>

<221> MOD_RES <222> (1045) .. (1045) <223> Ser ou ausente <4 0 0> 361

Met Lys Xaa Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asa Glu Trp lie Pile 1 5 10 15

Phe Ser Ser Asp. Glu Xaa, Xââ Thr Arg Xaa Arg Xaa. Thr Met Ser Asn 21 m:' 31

Xaa Ala Leu Gin Arg Ser Xaa lie leu Ser Ala Xaa lie Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Lys Ala lie Trp Xaa Lys Xaa 50 55 60

Xaà Xaa Xaa Ser Pro Vai Asn Xaa Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe Pro Lys Asn Phe Xaa Trp Gly Ile Gly Thr Gly Ala Xaa Gin Vai 85 90 95

Glu Gly Ser Trp Lys Xaa Asp Gly Lys Gly Pro Ser He rrp Asp Xaa 100 105 110

Phe He His Ser His Leu Lys Xaa Vai xaa Xaa Thr xaa Xaa Ser Ser 115 120 125

Asp Ser Tyr ile phe Leu·: Glu Lys Asp Leu ias Ala Leu .Asp' 'Phe lie? 130 135 140

Gly Vai Ser Phe Tyr Gin Phe Ser Ile Ser Trp Pr© Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160 Xãa Gly Xãà vai Xaa Xeâ: Xaa Ash. Ala Xaa Gly Leu Xaa Tyr Tyr Xaa 165 170 175

Xaa Leu Leu Asp Ala Leu vai Léu Arg Asa He Glu Pro lie Vai Thr ISO 185 190 Léu Tyr·' Bis Trp· Asp Leu Pro Leu Xaa Leu- Gla Glu. xaa Tyr· Gly Gly· 135 200 205

Trp Lys Asa Xaa Thr lie Tie Asp He Phe Asa Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Xaa Phe Gly Asp Arg Vâl Lys Tyr Trp Ile Thr Ile Hxs 225 230 235 240

Asn Pro Tyr Leu Vai Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asa Leu xaà Ala vai Tyr Thr vai Gly His Asn 260 265 270

Leu lip Lys M.a His Ser Lys Val Tip His Asn Tyi Xãã Xãa Xãà Phe 275 280 285

Arg Pro His Gin Lys Gly Tip Lett Ser lie Thr Leu Gly Ser His Tip 290 295 300 lie. Glu Pie·: Àsn Aig' Her Asp: Asn Xaa. Xãa Asp tie Xaa. Xaa Cys Gin 105 HO 315 320

Xaa Ser Met Xaa Ser val Leu Sly Tip Phe Ala Asn Pro He His Gly 325 330 335

Asp Gly Asp Tyi Pro Glu Xaa Met Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Met lie 340 345 350 pro Xaa Phe Set Glu Ala Glu Lys Xaa Glu Met Arg Gly Thr Ala Asp 355 360 365

Phe Phe Ala Phe Her Phe Gly Pro Asn Asn Phe Lys Pro Xaa Asn Thr 370 375 380

Met Xaa Lys Met Gly Gin Asn Val Ser Leu Asa Lett Aig Xaa Xaa Leu 385 390 395 400

Asn Trp He Lys Leu Glu Tyr Xaa Xaa Pro Xaa He Leu He Ala Glu 405 410 415

Asn Gly Trp Phe Thi ASP Set Xaa He LyS Thr Glu ASp Thr Thi Ala 420 425 430

He Tyi Met Met Lys Asn Phe Leu xaa Gin val Leu Gin Ala He Lys 435 440 445

Xaa Asp Glu He Aig Val Phe Gly Tyi Thi Ala Trp Ser Leu Leu Asp 450 455 460

Gly Phe Glu Tip Gin Asp Ala Tyi Thi Xaa Arg Aig Gly Leu Phe Tyi 465 470 475 480

Vai ASp Pie Asn Ser Xaa Gin Lys Glu Arg Lys Pro Ays Ser Ser Ala 485 490 495

His Ayr Tyr Lys Gin lie lie Xaa Asp Asn Gly pie Xaa Leu Eys Glu 500 505 510

Ser Tir Pr© Asp Met Xaa Gly Xaa Pie Pr© Cys Asp Pie Ser Trp Gly 515 520 525

Vai Tir Glu Ser Vál Lea Lys Pro Glu Xaa Xaa xaa Ser Ser Pr© Gin 510 535 540:

Pie Ser Asp Pro His Leu Tyr Vai Trp Asn Xaa Tir Gly Asn Arg Léu 545 550 555 560

Leu His Arg Vai Glu Gly Vai Arg Leu Lys Tir Arg Pro Ala Gin Cys 56:5 570 575 tir Asp Pie Vai Xaa lie Lys Lys Xáà Léu Glu Met Leu Ala Lys Met 510 585 590

Lys Vai Tir Hxs Tyr Xaa Pie Ala Leu Ásp Trp Xaa Ser Lie Leu Pro 595 600 605

Tir Gly Asn Leu Ser Xaa Vai Asn Arg Gin Xaa Leu Arg Tyr Tyr Arg IlO 615 620

Cys Vai Vai Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly lie Xaa Xaa Met Vai Tir 625 630 635 640

Leu Tyr His Pro Tir His Ala His Leu Gly Leu Pro Xaa Pro Leu Leu 645 650 655

Xaa Ala Xaa -Gly Trp Leu Asn Xaa Xaa Tir Ala. Xaa Ala: .pie Gin -Xaa 660 665 670

Tyr Ala Xaa Leu Cvs Pile Xaa Glu Leu Sly Asp Leu Val Lys Leu Trp 675 68Q 685 I'le Thr lie Asn Glu Pro Asn Arg Leu Ser Asp lie Tyr Asn Aug Ser 65Θ 695 700

Xaa Asn Asp Thr Tyr Xaa Ala Ala His Asn Leu Leu lie Ala His Ala 705 710 715 720 Xã»: Xaa Trp Xaa Leu Tyr Asp: Arg Gin Phe Arg Pro Xaa Gin Xaa: Gly 725 730 735

Aia: ’'Val: 'Ser· Leu Gen Leu His xaa .asp tup .Ala Gin Pro Ala asu Pro 740 745 750 phe xaa Asp Ser His Trp Lys Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu 755 760 765 lie Ala Trp Phe Ala Asp Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ala 77® 775 780

Xaa Met Lys Glu Tyr lie Ala Ser Lys Xaa Xaa Arg Gly Leu Ser Ser 785 790 795 800

Ser Xaa Leu Pro Arg Xaa Thr Xaa Xaa Glu Xaa Arg Leu Leu Lys Gly 805 810 815

Thr Val Asp Phe Xaa Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Val lie 820 825 830

His Xaa Gin Leu Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Xaa Ala Asp Arg Asp He Gin 835 840 845

Phe Leu Gin Asp He Thr Arg Leu Ser Ser pro Ser Arg Leu Ala Val 850 855 860

Xaa Pro Trp Gly Val Arg Lys Leu Leu Xaa Trp lie Arg Arg Asn Tyr 865 870 875 880

Xaa Asp Xaa Asp lie Tyr lie Thr Ala Xas Gly lie Asp Asp Xaa Ala 885 890 895

Leu Glu Asp Asp Xaa He Arg Lys Tyr Tyr Leu Xaa Lys Tyr Leu Gin 900 905 910

Glu Xaa Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Lys lie Lys Gly Tyr 315 ' 920 925

Tyr Ala Phe Ays Leu Xaa Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

Phe Thr Ser Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser lie Gin Phe Tyr Xaa Lys 945 950 955 960

Leu lie Ser Ser Xaa Gly Xaa Pro Xaa Glu Asn Xaa Ser Xaa Xaa Cys 965 970 975

Xaa Gin Xaa Xaa Glu Xaa Thr Asp Cys Thr lie Cys Xaa Phe Leu Val 980 985 990

Xaa Lys Lys Pro Leu lie Phe Xaa Gly Cys Cys Phe Xaa Ser Thr Leu 995 1000 1005

Xaa Leu Leu Leu Ser lie Xaa lie Phe Xaa Xaa Gin Lys Arg Arg 1010 1015 1020

Lys Phe Xaa Lys Ala Lys Asn Leu Gin Xaa lie Pro Leu Lys Lys 1025 1030 1035

Gly Xaa Xaa Xaa Val Xaa Xaa 1040 1045 <210> 362 <211> 585

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético Polipéptido <4 0 0> 362

Asp Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gin Ala Gin Pro Trp Gly Ala Pro 15 10 15

Vai Glu Vai Glu Ser Phe Leu Vai His Pro Gly Asp Leu Leu Gin Leu 20 25 30

Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Vai Gin Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45

Gly Vai Gin Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu 50 55 60

Vai Glu Vai Gin Asp Ser Vai Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80

Vai Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Vai Asn 85 90 95

Vai Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 100 IÕS 110

Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Arg Met 115 120 125

Pro Vai Ala Ptg Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu 130 135 140

His Ala Vai Pro Alá Ala Lys Thr Vai Lys Phe Lys Cys Pro Ser Sier 145 150 155 160

Gly Thr Pró Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe 165 170 175

Lys Pro Asp His Arg lie Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp 180 185 190

Ser lie He Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asa Tyr Thr 195 200 205

Cys lie Val Glu Asa Glu Tyr Gly Ser lie Asa His Thr Tyr Gin Leu 210 215 220

Asp Val Val Gin Arg Ser Pro Hi® Arg Pro lie Leu Gin Ala Gly Leu 225 230 235 240

Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asa Val Glu Phe Met Cys 245 250 255

Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gin Pro His lie Gin Trp Leu Lys His He 250 265 270

Glu Val Asn Gly Ser Lys lie Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gin 275 280 285

He Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val 290 295 300

Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys 305 310 315 320

Leu Ala Gly Asn Ser He Gly Leu Ser His His Ser Alá Trp Leu Thr 325 330 335

Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr Ser Pro Leu 340 345 350

Tyr Gly Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 355 360 365

Ala Pro Glu Leu leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro- Pro Lys 370 375 380

Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 385 390 395 400

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 405 410 415

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 420 425 430

Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 435 440 445

Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 450 455 460

Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 465 470 475 480

Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 485 490 495

Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 500 505 510

Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 515 520 525

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 530 535 540

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val 545 550 555 560

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin 565 570 575 <210> 363 <211> 1176

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético Polipéptido <4 0 0> 363

Phe Ser Sly Asp Sly Arg Ala lie Trp Ser Lys Asn Pro Asn Phe Thr

1 5 10 IS

Pro Val Asn Slu Ser Gin lieu Phe Leu Tyr Asp Thr Phe Pro Lys Ash 20 25 30

Phe Phe Trp Sly lie Sly Thr Sly Àlâ Leu Sin Val Slu Sly Ser Trp 35 40 45

Lys Lys Asp Sly Lys Sly Pro Ser lie Trp Asp His Phe lie His Thr 50 55 €0

His Leu Lys Asn Val Ser Ser Thr Asn Sly Ser Ser Asp Ser Tyr lie ¢5 f0 75 80

Phe Leu Slu Lys Asp Leu Ser Ala Leu Asp Phe lie Sly Val Ser Phe 85 90 95

Tyr Sin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro Asp Sly lie Val 100 105 110

Thr Val Ala Asn Ala Lys Sly Leu Sin Tyr Tyr Ser Thr Leu Leu Asp 115 120 125

Ala Leu Val Lem Arg Asn lie Glu Pro lie Val Thr Leu Tyr His Trp 130 135 140

Asp Lem Pro Leu Ala Leu Gin Glu Lys Tyr Gly Gly Trp lys Asn Asp 145 150 155 150

Thr He lie Asp lie Phe Asn asp Tyr Ala Thr Tyr cys Phe Gin Met 165 170 175

Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp lie Thr lie His Asn Pro Tyr Leu 180 185 100

Val Ala Trp His Gly Tyr Gly Thr Gly Met His Ala Pro Gly Glu Lys 195 200 205

Gly Asn Leu Ala Ala Val Tyr Thr Val Gly His Asn Leu lie Lys Ala 210 215 220

His Her Lys Val Trp His Asn Tyr Asn Thr His Phe Arg Pro His Gin 225 230 235 240

Lys Gly Trp Leu Ser lie Thr Leu Gly Ser His Trp lie Glu Pro Asn 245 250 255

Arg Ser Glu Asn Thr Met Asp He Phe Lys Cys Gin Gin Ser Met Val 260 265 270

Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro lie His Gly Asp Gly ASp Tyr 275 280 285

Pro Glu -Gly Met Arg Lys Lys Léu Phe Ser Vã! Leu Pro Lie ’Phe Sèr 200 29^ 300

Glu Ala Glu Lys His Glu Met Arg Gly Thr Ala Asp Phe Phe Ala Phe 305 310 315 320 Sèr Phe Gly Pro Asn Asn Phe Lys Pro Leu Ash Thr Met Ala Lys Met 325 330 335

Gly Gin Asn Val Ser Leu Asn Leu Arg Glu Ala Leu Asn Trp lie Lys 340 345 350

Leu Glu Tyr Asn Asn Pro Arg lie Leu lie Ala Glu Asn Gly Trp Phe 355 360 365

Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala lie Tyr Met Met 370 375 380

Lys Asn Phe Leu Ser Gin Val Leu Gin Ala lie Arg Leu Asp Glu lie 385 390 395 400

Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Leu Asp Gly Phe Glu Trp 405 410 415

Gin Asp Ala Tyr Thr lie Arg Arg Gly Leu Phe Tyr Val Asp Phe Asn 420 425 430

Ser Lys Gin Lys Glu Arg Lys Pro Lys Ser Ser Ala His Tyr Tyr Lys 435 440 445

Gin lie lie Arg Glu Asn Gly Phe Ser Leu Lys Glu Ser Thr Pro Asp 450 455 460

Val Gin Gly Gin Phe Pro Cys Asp Phe Ser Trp Gly Val Thr Glu Ser 465 470 475 480

Val Leu, Lys Pro Glu Ser 'Val Ala Seri Ser Pro Gin. .Phe Ser Asp Pró: 415 490 495

His Leu Tyr Val Trp Asn Ala Thr Gly Asn Arg Leu Leu His Arg Val 500 505 510

Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ala Gin Gys Thr Asp Phe Val 515 520 525

Asn lie Lys Lys Gin Leu Glu Met Leu Ala Arg Met Lys Val Thr His 530 535 540

Tyr Arg Phe Ala Leu Asp Trp Ala Ser Val Leu Pro Thr Gly Asn Leu 545 550 555 560

Ser Ala Val Asn Arg Gin Ala Leu Arg Tyr Tyr Arg Cys Val Val Ser 565 570 575

Glu Gly Leu Lys Leu Gly lie Ser Ala Met Val Thr Leu Tyr Tyr Pro 580 585 590

Thr His Ala His Leu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Leu His Ala Asp Gly 595 600 605

Trp Leu Asn Pro Ser Thr Ala Glu Ala Phe Gin Ala Tyr Ala Gly Leu 610 615 620

Cys Phe Gin Glu Leu Gly Asp Leu Val Lys Leu Trp lie Thr lie Asn 625 630 635 640

Glu Pro Asn Arg Leu Ser Asp lie Tyr Asn Arg Ser Gly Asn Asp Thr 645 650 655

Tyr Gly Ala Ala His Asn Leu Leu Val Ala His Ala Leu Ala Trp Arg 660 665 670

Leu Tyr Asp Arg Gin Phe Arg Pro Ser Gin Arg Gly Ala Val Ser Leu 675 680 685

Ser Leu His Ala Asp Trp Ala Glu Pro Ala Asn Pro Tyr Ala Asp Ser 690 695 700

His Trp Arg Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu lie Ala Trp Phe 705 710 715 720

Ala Glu Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ala Ala Met Arg Glu 725 730 735

Tyr lie Ala Ser Lys His Arg Arg Gly Leu Ser Ser Ser Ala Léu Pró 740 745 750

Arg Leu Thr Glu Ala Glu Arg Arg Leu Leu Lys Gly Thr Val Asp Phe 755 760 765

Cys Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Val Met His Glu Gin Leu 770 775 780

Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg Asp lie Gin Phe Leu Gin Asp 785 790 795 800 lie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Thr Arg Leu Ala Val lie Pro Trp Gly 805 810 815

Val Arg Lys Leu Leu Arg Trp Val Arg Arg Asn Tyr Gly Asp Met Asp 820 825 830 lie Tyr lie Thr Ala Ser Gly lie Asp Asp Gin Ala Leu Glu Asp Asp 835 840 845

Arg Leu Arg Lys Tyr Tyr Leu Gly Lys Tyr Leu Gin Glu Val Leu Lys 850 855 860

Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Arg lie Lys Gly Tyr Tyr Ala Phe Lys 865 870 875 880

Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe Phe Thr Ser Asp 885 890 895

Phe Lys Ala Lys Ser Ser lie Gin Phe Tyr Asn Lys Val lie Ser Ser 900 905 910

Arg Gly Phe Pro Phe Glu Asn Ser Ser Ser Arg Cys Ser Gin Thr Gin 915 920 925

Glu Asn Thr Glu Cys Thr Val Cys Leu Phe Leu Val Gin Lys Lys Pro 930 935 940

Gly Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 945 950 955 960

Pro Glu Lea Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 965 970 975

Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 980 985 990

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr V 995 1000 1005

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 1010 1015 1020

Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 1025 1030 1035

His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 1040 1045 1050

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He Ser Lys Ala 1055 1060 1065

Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 1070 1075 1080

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 1085 1090 1095

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 1100 1105 1110

Gly Gift' Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr· Thr Pr© Pro 'Val Leu Asp- 1115 1120 1125

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 1130 1135 1140

Ser Arg Trp Glu Gin Gly Asn val Phe Ser Cys Ser val Met His 1145 1150 1155 ©Ill Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu See Leu See 1160 1165 1170

Pro Gly Lys 1175 <210> 364 <211> 88

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 364

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 <210> 365 <211> 88

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 365

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 <210> 366 <211> 93

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 366

Asp lie Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Ser Vai Thr Pro Gly 15 10 15

Gin Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Glu Vai Ser Ser Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80

Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys 85 90 <210> 367 <211> 93

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Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 <210> 368 <211> 93

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Asp IIs val Met Thr Gin ser pro Leu Ser Leu Pro val Thr Pro Gly 1 S 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu LeU His Ser 20 25 30

Asn ©ly Tyr Asn Tyr leu Asp Trp TyP 1®» Gin Lys Pro Gly Glii Sér 35 40 45

Pro Gin Leu lieu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Sep Gly Val Pro 50 55 60

Asp Apg phe fer Gly ser Gly Ser Gly Thi Asp Phe tap Leu Ays He 65: 70 :7S 80

Ser Arg ml Glu Ale Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 85 90 <210> 369 <211> 89

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Glu He Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser pro Gly 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Typ Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly He Pro Asp Arg PKê Sep 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp: Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85 <210> 370 <211> 88

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Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80 <210> 371 <211> 87

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Ser Tyr Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val lie Tyr 35 40 45

Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 85 <210> 372 <211> 98

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 372

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 m .. m .. -tv -rv λ-*ί ,. ·λ m .. m .. mi» .» x i m...» tv i — m » τ _ _ nu- vjiy rue m. vj vjiu as^j uxy uiu j.iix xxts iyi ax cl oxii xiys rim 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Thr <210> 373 <211> 99

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Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg <210> 374 <211> 100

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Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Gys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30

Trp Msl; Ser Trp Vai Arg Gin Ala Pró Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 40 45

Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 iO

Pro Vai Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 TO 15 80 Léu Tyr Leu Gin Met Asn .Sé® Leu LyS 111® Glu Asp- Thr Ala VUl Tyr 85 .90 95

Tyr Gys Thr Thr 100 <210> 375 <211> 98

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Glu Vai Gin Léu Leu Glu Sé® Gly Gly Gly Leu Vai Gin Pró Gly Gly 1 5 10 15

Se® Leu. Arg Léu· Sé® Gys Ala Ala Sé® Gly Phe Th® Phe Ser Sé® Ty® 10 25 30

Ala Met Se® Trp Vai Arg Gin Ala P®o Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai JS 40 45

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65 70 35 SO

Leu. Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Gita Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys <210> 376 <211> 98

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Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

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Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg <210> 377 <211> 99

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Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

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Ser Le» Lys Leu Ser Ser Vai Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 iSS

Cys Ala Arg· <210> 378 <211> 97

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Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Arg

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 <210> 379 <211> 5

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Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 <210> 381 <211> 5

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Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 <210> 382

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His His His His His His 1 5 <210> 383 <211> 5

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HiS His HiS HiS HiS 1 5 <210> 384 <211> 227

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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 15 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie 100 105 110

Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser 130 135 140

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Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175

Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai 180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met 195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220

Pro Gly Lys 225 <210> 385 <211> 214

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Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Pro Pro Ser Vai Ser Vai Ala Pro Gly Lys 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Glu Ser Vai 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Vai Leu Vai Vai Tyr 35 40 45

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Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Val Trp Asp- Sly Asn Ser Asp His 85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

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Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Set His Arg Set 180 185 190

Tyr Set Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Set 210 <210> 386 <211> 214

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Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Pro Pro Ser Vai Ser Vai Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Glu Ser Vai 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Vai Leu Vai Vai Tyr 35 40 45

Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Vai Glu Ala Gly 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Gys. Gin Vai Trp Asp Gly Asn Ser Asp His 85 00 95

Vai Vai Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Vai Lew Gly Gin Pro Lys lõí) 105 110

Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Alá ASO LyS Ala Thr Leu Val Cys Léu lie Ser Asp Phe Tyr Pró Gly ISO 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Ash Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser ISO 185 190

Tyr Ser Cys Sin Val Thr His Glu Sly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 100 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 387 <211> 214

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Ser Tyr Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Glu Ser Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Sly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Arg val Glu Ala Sly

65 70 75 SO

Asp; Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Sin Val Trp Asp Sly Asn Ser Asp His S.5: 90 .95

Val Val Phe Sly Sly Sly Thr Lys Leu Thr Val Leu Sly Sin Pro: Lys 100 105 110

Ala Asn Pro TM Vai Thr teu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Léu, Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Alà TM Leu Vai Cys Leu He Ser Asp Phe Tyr pro Gly 130 135 140

Ala Vai Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Lys Ala ©ly

145 ISO 155 ISO val Glu Thr -Thr Lys Pro Ser- Lys Gin Ser Asn A-sn Lys Tyr Ala. Ala 1S5 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pr© Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser ISO 185 ISO

Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys TM Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 388 <211> 214

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 388 Sêr Tyr Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 1 ' ,5 10 .........15 ' -Thr Alâ Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn .Ash. lie Gly Ser Glu Ser 'Val 2:0 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Glíi Alá Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Val Trp Ala Gly Asn Ser Asp His 85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190

Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 389 <211> 214

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Ser Tyr Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Glu Ser Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ash Ser Gly Asa Thr Ala Thr Lea Thr lie Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Val Trp Ala Gly Ash Ser Asp His 85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr val Leu Gly Gin Pro Lys 100 103 110

Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 120 125

Ala Ash Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Ays Ala Asp Sly Ser Pro Val Ays Ala Sly 145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Ays Sin Ser Asn Asn Ays Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Aeu Ser Aeu Thr Pro Sin Sin Trp Ays Ser His Arg Ser ISO 185 lfQ

Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Gin Ays Thr Val 195 J0Ó M5

Ala Pro Thr Sin Cys Ser 210 <210> 390 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 390

Gin Val Thr Aeu Ays Glu Ser Gly Pro Val Aeu Val Ays Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Me% Gly Val Ser Tigs He Arg Gin Pro Pro Gly Ays Ala Aeu Glu .30'....... 40 " ’ ÁM............

Trp Leu Ala Els. lie Phe Se» Asa. Àsp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser SO 55 60

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65 70 75 SO val Leu lie Met Thr Asa Met Asp Pro val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Ser Val Val Thr ©ly ©ly Tyr Tyr Tyr Asp ©ly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly ©la Sly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Sly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser ©la 130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu ©ly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Slu Pro 145 ISO 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asa Ser ©ly Ala Leu Thr Ser ©ly Val His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu ©la Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190

Val Thr val Pro Ser Ser Asa Phe ©ly Thr ©la Thr Tyr Thr Cys Asa 195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220

Lys Cys Cys val ©lu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala ©ly 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pró Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250: 255

Ser Keg Thr Pro (flu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu 260 265 dlO

Asp Pro Glo Vai Gin Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His 27S 280 285

Asn Ala Lys Thr Ays Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 2i© 295 3QG

Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 31© 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr 340 343 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp 370 375 380

Glu Ser AsA Gly Gin Pró Glu Ash Asn Tyr Lys Th® Th® Pré Pro Met 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp 405 410 415

Lys Se® Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Mat His 420 425 430

Gly Ly s 450

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glíi Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 391 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 391

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu IS 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50: 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 8 5 00 95

Cys Ala Arg Ser Val val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Val Tpp Gly Gift Gly Thr Thr Val Thr Vàl Sèr Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lysi Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 143 ISO 153 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Alá Leu Thr Ser Gly Val His Thr 1#S 170 175

Phe pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser ser Vál 180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 223 230 233 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 243 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys: Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270

Asp Pro Glu Val Girt Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 2S5

Asn Ala Lys Thr Lys pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn ser Thr Phe Arg 290 295 300 val val Ser val Leu Thr val val His Gin Asp Trp Leu Asa Gly Lys 305 310 315 32®

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Sér Asa Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu 325 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Sly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu val Lys Gly Phe Tyr pro Ser Asp He Ala val Glu Trgs 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr pro pro Met 385 380 335 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Lèu Thr Val Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gin Gin Sly Asn Val Phe Ser Gys Ser Val Met His 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 392 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 392

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His He Phe -Ser Asn Asp Gin Lys Ser1 Tyr Ser Thr Ser' 50 55 60

Lea Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Glh Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Ash Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Glh Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val ISO 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asa Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Gys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 26Ú MB 210

Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyt Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 2f5

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val val His Gin Asp Trp Leu Ash Gly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Gys Lys Val ser Ash Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie G Lu 325 330 335

Lys Thr He ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glia Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu .355' " 360 355

Thr Cy& Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vâl Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn. Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430

Glu Ai:a: Leu Hie Asn His Tyr Thr Gin Lys Sap Leu. Sep Leu. SeP Pro 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 393 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 393

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala. Leu Glu 35 40 45

Trp: Leu Ala His: He Phe Ser' Asn Asp: Glu Lys Her Tyr Ser· Thr· Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80 Vál Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Àla Arg Ser Val Val Thr Sly Sly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Mat Asp 100 105 110 val Trp Sly Gin Sly Thr Thr Val Thr Val Her Ser Ala Her Thr Ays 115 12Q 125

Sly Pro Ser Val Phe Pro Ls>u. Ala Pro cys Ser Arg Ser Thr Ser Slv 130 135 140

Sar Thr Ala Ala Lev Gly Cys Lav Val Lys Asp Tyr phe Pro Slv Pro

145 150 155 ISO

Val Thr Val Sar Trp ash Sar Gly Ala Lav Thr Sar Sly Val His Thr 165 110 115 phe Pro Ala Val Lev Gin Ser Ser Gly Lev Tyr Ser Lev Ser Ser Val 180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ash Phe Sly Thr Gin Thr Tyr :Thr Cys Asn 195 200 205

Val Asp HiS LyS Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Slu Arg 210 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240

Pro Ser val Pha Leu Pha Pro pro Lys pro Lys Asp Thr Lev Met lie 245 250 255

Ser Arg Thr Ere Slv val Thr Cys val val val Asp val Ser His Glu 260 265 270

Asp Pro Slu Val Sin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Sly Val Slu val His 275 28:0 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg VS® 295. 300:

Vai Vai Set Vai Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 31Q 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Set Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu 325 330 335

Lys Thr 11e Set Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr 340 345 35:0

Thr Leu Pro Pro Set Arg Glu Glu Met- Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu 355 360 36^

Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400

Leu Asp Ser· Asp Gly Ser Phé Phe Léu Tyr ser- Lys Léu Thr Vai Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn vai phe Ser Çys Ser vai Met His 420 425 430

Glú Ala Leu His Asn HiS Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 394 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 394

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45:

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser SO Si 60

Leu Lys Sèr Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Glri Val

65 70 75 SO

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 SO 95

Cys Ala Arg Ser Val Val Thr Sly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 1:30 135 140

Ser Thr Ala .Ala: .Leu Gly Gys Leu Val Lys Asp Tyr' Phe Pro Glu Pro 145 150 ' 1.55 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190

Vai Thr Vai Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 195 200 205

Lys Cys Cys Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gls 225 230 235 240

Pro .Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met, lie 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270

Asp Pro; Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala pro He Glu 325 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Léu 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp 370 175 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 J90 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Lew Thr Val Asp 405 410 415

Glu Ala Léu KiS Aèh KiS Tyr Thr Gin Ly«s Ser Leu Ser Léu Ser Pro 435 440 445

Gly LyS 450 <210> 395 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 395

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met. Gly Val Ser Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr He Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg lie Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Sly Met Asp 100 105 11Õ

Val Trp Gly Glri Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Ash Ser Gly Ala Leu Thr Ser Sly Val His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala val Leu Gin ser Ser. Gly Lev Tyr Ser. Leu Ser Ser val 180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ash Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Ash 195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 243 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Pis Glu 260 265 270

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe: Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300 gal gal Ser gal Leu Thr gal gal His Gin Asp: Trp Leu Asn Sly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys gal Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 32:5 330 335

Lys Thr lie Ser Lys: Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin gal Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Sim Glu Met Thr LyS Asn Gin gal Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu gal Lys Gly Phé: Tyr Pro Ser Asp He Ala gal Glu Trp 370 375 380

LeU Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Léu Tyr Ser Lys Leu Thr gal Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gin: Gin Gly Asri gal Phe Ser Cys Ser gal Met His 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys ser Leu Ser Leu Ser Pm 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 396 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 396

Gin Vai Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Vai Leu Vai Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Vai Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly vai Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Lèu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His lie Ph« Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 10

Leu Lys Ser .Arg· Leu Thr' Ile Ser Lys .Asp· Thr Ser :Lfs: Ser: Gin Vai €5 70 75 80

Vai Leu Lys Met Thr Asn Met Asp Pro Vai Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Ser Vai Vai Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 ISO:

Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vãl His Thr 105 170 175 phe Pr© Ala vai Leu Gin Ser Ser Gly Léu Tyr Ser Leu Ser Ser vai 180 185 190

Vai Thr Vai Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gift Thr Tyr Thr Gys Asft 195 200 205

Vai Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg 210 215 220 lys GyS Gys Vai Glu Cys Pro Pro Cys Pr© Ala Pró Pro- Vai. Ala Gly 225 230 235 240

Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Gys Vai Vai Vai Asp vai Ser His Glu 260 265 270

Asp Pro Glu Vai Gin Phe Asa Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vacl His 275 280 285

Asn Ala Lys Th® Lys Pro Arg Gift Gift Gift Phe Asn Se® Th® Phe Arg 290 295 300

Vai Vai Sé® Vai Leu Thr Vai Vai His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320

Lys Th® He Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Gift Pro Gin vai Tyr 340 345 350

Th® Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Se® Leu 355 360 365

Th® Gys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Se® Asp íle Ala Vai Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Th® Th® Pro Pro Met 385 390 395 400

Leu Asp: Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Sei? Lys Leu Thr Vai Asp 405 410 415

Lys; Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 397 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 397

Gin Vai Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Vai Leu Vai Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Vai Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Vai Ser Trp Ile Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His Lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin vai 65 70 75 §0

Vai Leu lie Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg lie Val Val Thr Sly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 12Q 125

Gly Pro .:Ser ’Val phe Pro- Leu .Ala: Pro Cys Ser :Arg Ser Thr ser Glu 130 .............. 135 ......... ..... 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160

Val Thr val Ser Trp Ash Ser Gly Ala Leu Thr Ser Sly Val His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ash Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Ash 195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Ash Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu phe pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270

Asp pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val Hi® 275 2|0 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu. Θΐή Phe Asn Ser Thr Phe .Arg 290 295 300

Vai Vai Ser Vai Leu Tbr Vai Vai Hls Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn LyS Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Prõ Arg Glu Pro Gin Vai Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Vai Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser she Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Gys Ser Vai Met His 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 4|5 440 445

Gly Lys 450 <210> 398 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 398

Gin Vai Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Vai Leu Vai Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Vai Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Gly Vai Ser Trp lie Árg Gin Pro Pro Gly Lys Sia Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Vai 65 70 7 5 80 Vâl Léu lie Met Thr Asn Met Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Gye Ala Arg Ser Vai Vâl Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met AS# 100 105 110

Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser Vâl Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 110 135 140

Ser Thr Alã. Ala Leu .Gly Cys. Leu Vai. Lys: Asp Tyr Phé: Pro Glu Prô 145 150 155 160 Vâl Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai 180 185 190

Vai Thr Vai Ftp Ser Set· Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 195 200 205 Vãl Asp His Lys Pro: Saí Asn Thr Lys Vai Asp Lys Thr Vai Glu Arg 210 215 220 L·ys Cys Cys Vãl Glu Cys Pro Pres Çys Pres Ala Pro Pro Vãl Ala Gly 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Ásp Thr Leu Met He 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270

Asp Pro Glu Vãl Glu Phe Asn Trp Tyr Vãl Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pres Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 290 295 300

Val Vãl Ser Vãl Leu Thr Vãl Vãl His Glh Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pres lie Glu 325:..... 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vãl Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Alã Vãl Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu AsU Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 390 395 400

Leu. Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Sin Sin Sly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430

Sin Ala Leu His Asn His Tyr Thr Sin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 44S

Sly Lys 450 <210> 399 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 399

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Hfei Sly Val Ser Trp lie Arg Sin Pro Pro Sly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu, Ala His lie Phe: Ser Asn· Asp Glu .Lys· Ser" Tyr Ser· Thr Ser: 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Sin Val 65 70 75 80

Vai Leu lie Met Thr Asn. Met Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85: 90 95

Cys Ala Arg lie Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 10Q 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ber Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160

Val Thr val Ser Trp Ash Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala val Leu Gin ser ser Gly leu Tyr ser Leu Ser ser val 180 185 190 val Thr val pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Girl Thr Tyr Thr Cys Ash 195 200 205 val Asp Hl@ Lys Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr val Glu Arg 21:0 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 2”0

Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val Bis 275 280 285

Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Se® Asn Lys Gly Leu ft®0 Ala Pro lie Glu 325 330 335

Th® Leu Pro Pro Se® A®g Glu Glu Met Th® Lys Asn Gin Val Se® Leu 355 360 365

Th® Cys Leu Val Lys Gly Phe Ty® Pro Se® Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Ash Gly Gin ftr© Glu Ash As® Ty® Lys Th® Th® ftr© ftr© Met 385 390 395 400 Léu Asp Ser Asp Gly Se® fthe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415

Lys Se® Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe So® Cys Ser Val Met HiS 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Ty® Th® Gin Lys Se® Leu Se® Leu Se® Pro 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 400 <211> 449

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 400

Gin Vai Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Vai Leu Vai Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Vai Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Trp Leu Ala His rle Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gin Vàl 65 70 75 80

Vai Leu Tie Met Thr Asn Met Asp Pro Vai Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 81 10 95

Gys Ala Arg Ser Vai Vai Thr Gly Gly Tyr Tyr Asp Gly Mèt Asp Vai 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 121

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Lèu Val Lys Asp Tyr Phe: Pro Glu Pro Val 145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Lèu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175

Pro .Alá: Val Lèu Gin Sér Ser Gly Leu Tyr Ser LèU Her Sen val Val ISO 185 190

Thr val pro Ser Sèr Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr cys Asn val 195 200 205

Asp His Lys Pro Sér Asn Thr Lys val Asp Lys Thr Vàl Glú Arg Lys 210 215 220

Arg Thr Pro Glu Val Thr Gys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270

Ala Lys Thr lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295 300

Val Ser Val leu Thr Val Val His Gin Asp Trp leu Asn Gly lys Glu 305 310 315 320

Tyr lys Gys lys Val Ser Asn lys Gly leu Pro Ala Pro He Glu lys 325 330 335

Thr He Ser lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Glu Val Tyr Thr 340 345:· 355:

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365

Gys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380

Ser Asn Gly Gin pro Glu Ash Ash Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu #85 390 395 408

Ser Arg Trp Gin Gin. Gly Asn Val Phe Ser Gys Ser Val Met Hxs Glu 420 425 430

Ala Lea His Asn His Tyr Thr Sin Lys Her Leu Ser Leu Ser Pro Sly 435 440 445

Lys <210> 401 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 401

Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30

Arg Met Sly Val Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Sly Lys Ala Leu Glu 3S 40 45

Trp Leu Ala His lie Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr He Ser Lys Asp Thr Her Lys Ser Gin val |5 70 75 80

Val Leu He Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 15

CyS Alá Arg- Ser: Val Val. Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Ser- Gly Met Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Vál Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125

Gly Pro Ser "Val Pile Pro Leu Ala Pro Cys Her Arg Ser Thr Ser Glu 130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175

Phe Pro Ala val Léu Gla Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 val Thr val pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 195 200 205 val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 210 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270

Asp Pro Glu val Gla Phe Asa Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285

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Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 1:2:5 330 335

Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 M5 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Gin GJu Met Thr Lys Ash Gin val Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Yal Glu Trp 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 385 330 355 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Gys Ser Val Met His 420 425 430

Glu Ala Leu His: Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser LAu Ser Pro: 435 440 445

Gly Lys 450 <210> 402 <211> 214

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 402

Ser Tyr Vai Leu Thr Gin Pro Pro Ser Vai Ser Vai Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Gin Ser Vai 20 25 30

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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Vai Glu Ala Gly 65 70 75 80

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Vai Vai Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Vai Leu Gly Gin Pro Lys 100 105 110

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Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140

Ala Vai Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Vai Lys Ala Gly 145 150 155 160

Vai Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190

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Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 403 <211> 214

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 403

Ser Tyr Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Gys Gly Sly Asn Ash lie Sly Ser Sin Ser Val JO 25 30

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Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys 10® 105 110

Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin 115 12® 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Vai Cys Leu Ile Ser Asp Phé Tyr Pro Sly 130 135 140

Ala Vai Thr Vai Ala Trp Lys Ala Asp Giy Ser Pro VAl Lys Ala Gly 145 150 155 160

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Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 404 <211> 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 404

Gin Vai Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Vai Leu Vai Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr cys Thr Vai Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30

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Gly Lys 450

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 405 G1A Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Lett- Val Lys Pre Thr Glu 1 5 10 15

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ISO 1Ó5 ISO

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Sintético <4 Ο 0> 406 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggaaagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtgaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatggtaata gtgaccatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt cctaggtcag cccaaggcca accccactgt cactctgttc 360 ccgccctcct ctgaggagct ccaagccaac aaggccacac tagtgtgtct gatcagtgac 420 ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480 gtggagacca ccaaaccctc caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540 agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642 <210> 407 <211> 642

Sintético <4 0 0> 407 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg teagtggcce eâggacagãe ggccaggatt 60 acetgtgggg gaaacaacat tggaagtgaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctattatgat agcgatcggc cctcagggat ccetgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgãágceggg: 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatggtaata gtgaccatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt cctaggtcag cccaaggcca accccactgt cactctgttc 360 ccgccctcct ctgaggagct ccaagccaac aaggccaeac tagtgtgtct gateagtgac 420 ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480 gtggagacca esaaaeeete eaaaeagage aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540 agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt Gacgcatgaa 600 gggagcaecg tggagaagac agtggGGCct acagaatgtt ca 642 <210> 408 <211> 642

Sintético <4 0 0> 408 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtgaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgctgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatggtaata gtgaccatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt cctaggtcag cccaaggcca accccactgt cactctgttc 360 ccgccctcct ctgaggagct ccaagccaac aaggccacac tagtgtgtct gateagtgac 420 ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480 gtggagacca ccaaaccctc caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540 agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600 gggagcaecg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642 <210> 409 <211> 642

Sintético <4 0 0> 409 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtgaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gctggtaata gtgaccatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt cctaggtcag cccaaggcca accccactgt cactctgttc 360 ccgccctcct ctgaggagct ccaagccaac aaggccacac tagtgtgtct gatcagtgac 420 ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480 gtggagacca ccaaaccctc caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540 agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642 <210> 410 <211> 642

Sintético <4 0 0> 410 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtgaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgctgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gctggtaata gtgaccatgt ggtattcggc 300 a λλρλ a λ λ a a 4— a a o I o ia 4- a ^τ<·ι I ia a λτ >a o ia a a λγλτλa ia a a ia λ o ia a λ 4— <« I ia a ia 4- ia 4— tmm I 4- ía O d Λ uuuaa^^uua awuuwawk.^L. uaucuL.^UL.w juv; ccgccctcct ctgaggagct ccaagccaac aaggccacac tagtgtgtct gatcagtgac 420 ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480 gtggagacca ccaaaccctc caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540 agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642 <210> 411 <211> 1350

Sintético <4 Ο 0> 411 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcacct tctctgggtt ctcactcaac aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtcctaatta tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggtca 300 gtagtaactg gcggctacta ctacgacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcta gtgcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420 agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600 ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900 agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350 <210> 412 <211> 1350

Sintético <4 0 0> 412 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tgtctgggtt ctcactcaac aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtcctaacca tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggtca 300 gtagtaactg gcggctacta ctacgacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcta gtgcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420 agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600 ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900 agSaegtfega. gtgtggteag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagçcc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc fegcccccatc ccgggaggag 1080

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Sintético <4 0 0> 413

GaggfccaseO tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac cGaGagagãc cefcacgctg 60: acctgcacct tctctgggtt ctcactcaac aatgctagaa tgggtgtgag GtggatcGgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 taGagcasat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacetccaa aagccaggtg 240 gteetaaeca tgaccaacat ggaccctgtg gaeaeageea catattactg tgcaeggtca 300 gtagtaactg gcggctacta etacgacggt atggaegtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcta gtgGeteeac caagggccca tcggtcttce ccGtggegcc ctgetecagg 420 agGaGcfeGeg agagGaGagG ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ecccgaacGf 480 gtgaaggtgt cgtggaaGtc aggegctctg -aecagcggeg tgaaeaectt cccagctgtc 540

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Sintético <4 0 0> 414

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Sintético <4 0 0> 415 caggtcaGGt tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg 6' acctgcacct tctctgggtt efceactcaaG aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 12( cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 16( tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtcctaacca tgaccaacat ggaeeetgtg gacacagcca catattactg tgcacggtGa 300 gtagtaactg gcggctacta ctacgacggt atggacgtct ggggccaagg gaccctggtc 360 accgtctcta gtgcetceâe caãgggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420 agcacctceg agãgGaGágc ggccctgggc tgectggtca aggactactt Gcccgaáceg 480 gtgacggtgt egtggaaete aggogetGtg aGcagcggcg tgcacacGtt cccagctgtc 540

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Sintético <4 0 0> 421 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tgtctgggtt ctcactcaac aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtcctaatta tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggtca 300 gtagtaactg gcggctacta cgacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctctagtg cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 420 acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 600 acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 660 gttgagcgGa aatgttgtgt egagtgccca ecgtgcecag caccacctgt ggcaggaccg 720 teagtefcfcee tcttcccccc aaaacccaag gacaccetca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagacceeg aggtccagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 900 acgfetccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gfegcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 %ãGaagtgea aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tegagaaaac catctccaaa 1020 ascaaaggge agccccgaga acoacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 10:80 aeeaagaaeè aggtcagc.ct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccecag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagceggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 eaggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320· aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347 <210> 422 <211> 1350

Sintético <4 0 0> 422 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tgtctgggtt ctcactcaac aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtcctaatta tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggtca 300 gtagtaactg gcggctacta ctacagcggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcta gtgcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420 agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600 ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900 agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350 <210> 423 <211> 642

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gagggeeeteg tcetggtcgt et at gat gat agcgaccggc cctcagggat cc:ctgagcga ISO ttGfcGtggfct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca •tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatcagacta gtgatcatgt ggtattcggc 300 ggggggacca agctgaccgt cctaggtcag cccaagcjcca aceccactgt çactctgttc 260 ccgcectect ctgaggaget ccaagccaac aaggceacac tagtgtgtct gatcagtgac 420 ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480 gtggagacca ccaaaccctc caaaeagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacatg 540 agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcceac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642 <210> 424 <211> 642

Sintético <4 0 0> 424 tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtcaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tcctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggtt ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gataatactg ctgatcatgt ggtattcggc 300 ggggggacca agctgaccgt cctaggtcag cccaaggcca accccactgt cactctgttc 360 ccgccctcct ctgaggaget ccaagccaac aaggccacac tagtgtgtct gatcagtgac 420 ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480 gtggagacca ccaaaccctc caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540 agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600 gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642 <210> 425 <211> 1350

Sintético <4 0 0> 425 caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60 acctgcaccg tgtctgggtt ctcactcagc aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 tacagcacat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aagccaggtg 240 gtccttacca tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggata 300 ttattagtgg gagcttacta ctacagcggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcta gtgcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420 agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600 ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900 agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350 <210> 426 <211> 1353

Sintético <4 0 0> 426 eaggtcacct tgaaggagfcc tggtcctgtg c.tggtgaaac ccaeagagae cctcacgctg 60 aeefcgcaceg tgtetgggfct ctcactcaac aatgctagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120 cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180 taeagcaGafc Gtctgaagag caggctcacc atctccaagg acacctccaa aageeaggtg 240 gfeéétaafelia: tgaccaaca.t ggaccctgtg gacacagcca cat at t act g tgcacggtca :300 gtagtaactg gcggctacta ttactacgac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360

gtcaccgtct ctagtgcctc caccaagggG ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc 42Q aggagcaçct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct GfegâGoágGg gcgtgcacac cttcccagct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagagtgg fegaccgtgcc GtccagGaac 600 ttcggcaccc agacctacac etgeaâegta gatcacaagç ccagcaacac caaggtggac 660 aagaGagtfcg agGgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaGcgt geecagcacc acafcgtggaa 720 ggaccgtcag tcttcctctt GGCGeGaaaa GCGaaggaea ccctcatgat ctcccggacc 780 cctgaggtca cgtgcgtggt ggbggaegtg agccacgaag accccgaggt ccagtfeGaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgc.ataat gccaagacaa ageGaGggga ggagcagttc 900 aaeagGaGgfc tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggaetg gctgaacggc 960 aaggagfeaca agtgcaaggt Gtccaaaaaa ggcctcccag GGeccafeega gaaaaacatc 1020 tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca Gaggtgtaca ccctgcccce atcccgggag 10:80 gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc 1200 atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353 <210> 427 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 427

Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 428 <211> 7

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 428

Ala Asp Ser Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 429 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <400> 429

Gin Val Trp Ala Gly Asn Ser Asp His Val Val 1 5 10 <210> 430

<211> 11 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 Ο 0> 430

Gin Val Trp Ala Gly Asn Ser Asp His Val Val 15 10 <210> 431 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 431 lie Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Val 15 10 <210> 432 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 432 lie Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Val 15 10 <210> 433 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 433 lie Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Val 15 10 <210> 434 <211> 13

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 434

Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Val 15 10 <210> 435 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 435 <22 0>

Ser Vai Vai Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Vai 15 10 <210> 436 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 436

Gin Vai Trp Asp Gin Thr Ser Asp His Vai Vai 15 10 <210> 437 <211> 11

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 437

Gin Vai Trp Asp Asn Thr Ala Asp His Vai Vai 15 10 <210> 438 <211> 14

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 438 lie Leu Leu Val Gly Ala Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val 15 10 <210> 439 <211> 15

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Péptido Sintético <4 0 0> 439

Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 440 <211> 40

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 440

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 15 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 20 25 30

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 35 40 <210> 441 <211> 228

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 441

Glu Arg Lys 'Ser: Ser· Val Glu Cys Pro .Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 S 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr 65 70 75 80

Sly Lys Si u Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asa Lys Sly Leu Pro Ala Pro 100 105 110 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 130 135 140

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 145 150 155 " 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175

Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220

Ser Pro Gly Lys 225 <210> 442 <211> 21

<212> ADN <213> Sequência Artificial < <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético 22 0>

Oligonucleótido <4 0 0> 442 tatgatagcg accggccctc a 21 <210> 443

<211> 21 <212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético

Oligonucleótido <4 0 0> 443 gctgatagcg accggcccte a 21 <210> 444

Oligonucleótido <4 Ο 0> 444 gctgatagcg accggccctc a 21 <210> 445 <211> 33

Oligonucleótido <4 0 0> 445 saggfagtggg ctggtaatag tgaccatgtg gta 33 <210> 446 <211> 42

<212> ADN <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sintético Oligonucleótido <4 0 0> 446 .afcegfeagt«a ctggcggcta ctactacgae ggtatggacg ig 43 <210> 447 <211> 39

Oligonucleótido <4 0 0> 447 tcagtagtaa ctggcggcta ctacgacggt atggacgtc 39 <210> 448 <211> 42

Oligonucleótido <4 0 0> 448 teagtagtaa ctggcggcta ctaetaeage ggtatggaeg fee. 42 <210> 449 <211> 33

Oligonucleótido <4 0 0> 449 caggtgtggg atcagactag tgatcatgtg gta 23 <210> 450 <211> 33

Oligonucleótido <4 0 0> 450 caggtgtggg ataatactgc tgatcatgtg gta 33 <210> 451 <211> 42

Oligonucleótido <4 Ο 0> 451 atattattag tgggagctta ctactacagc ggtatggacg te 42 <210> 452 <211> 45

Oligonucleótido <4 0 0> 452 tcagtagtaa ctggcggcta ctattactac gacggtatgg acgtc 45 <210> 453 <211> 739

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 453

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15

Leu Arg Gly Ala Arg Gys Gin Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Μ 25: 30

Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Léu Thr Gys Thr Val Ser Gly 35 40 45

Phe Ser Leu Asn Asn Ala Arg Met Gly Val Ser rrp lie Arg Gin Pro 50 55 60

Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His lie Pile Ser Asn Asp Glu 65 7 0 75 80

Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser Lys Asp 85 90 95

Thr Ser Lys Ser Gin. Val Val Leu He Met Thr Asn Met Asp Pro Val 100 105 110

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Gys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr 115 120 125

Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 130 135 140

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Gys 145 150 155 160

Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Gys Leu Val Lys 165 170 175

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 180 185 190

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 195 200 205

Tyr Ser Leu Ser- Ser val Val Thr Val Pro ser Ser Asn Phe Gly Thr 210 215 220

Gin Thr Tyr Thr Gys Asn Val Asp His LyS Pro Ser Asn Thr Lys Val 225 230 235 240

Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 245 250 255

Alá Pro Pjfo Val Alá Gly Pro Ser Val Phe Asia. Phe Pro Pro Lys Pro 260 265 270

Lys Asp Thr Lea Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 275 280 285

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300

Asp Gly Val Glu Val His Asn Alá Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 305 310 315 320

Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin 325 330 '335

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 340 345 350

Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro 355 310 365

Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gltt Met Thr 370 375 380

Lys .ASh 'Gin Val .ser Leu Thr Cys Leu val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser #35 350 -335 400

Asp He Alá Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin pro Glu Asn Asn Tyr 405 410 415

Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser A®p Gly Ser Phe Phe Leu Typ 420 425 430

Ser Lys Leu Thr val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn val Phe 435 440 445

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin -Lys 450 455 460

Ser Leu Set Leu Set Pro Gly Gly Gly Gly Gly Set Gly Gly Sly Gly 465 470 475 480

Ser -Gly Gly- Gly Gly Ser Gly -Gly Gly -Gly Ser -Gly Gly Gly Gly- Ser 485 4SO 495

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 50:0 505 510

Arg Lys Ser' Ser Val Glu Cys Pro pro- Gys Pro Aim Pro: Pro Val Ala 515 520 525

Sly Pro: Ser VaX Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro .Lys- Asp Thr Leu Met 530 535 540

He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 545 550 555 560

Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly Val Glu Val 565 570 575

His: Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe 580 585 590

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Ash Gly 595 600 605

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Aim Pro Lie 610 615 620

Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 625 630 635 640

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser 645 650 655

Leu Thr Cys Leu fal Bys Sly She Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Slu 6SO 665 670

Trp Slu Ser As» Sly Sin Pro Slu As» As» Tyr Bys Thr Thr Pro Pro 675 680 685

Met: Leu Asp Ser Asp Sly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr val 690 695 700

Asp Lys Ser Arg Trp Sin Sin Sly Asn Val Phe Ser Gys Ser Val Met 70S 710 715 720

His Slu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Sin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 725 730 735

Pro Sly· 'Lys <210> 454 <211> 2217

Sintético <4 0 0> 454 afrggacatga gggtgcccgc tcagcteetg gggctcctgc tgctgtggct gagaggtgcg 60 cgctgtcagg tcaccttgaa ggagtctggt cetgtgcfcgg tgâaacccaG agagaccctc 120

acgGfcgacct gcaccgtgtc tgggttGtca ctcaacaatg efcagaatggg tgfcgagetgg ISO atccgtcagc ccccagggaa ggGcctggag hggehtgeaC acattttttc gaatgacgaa 240 aaatcctaca gcacatctct gaagagcagg ctcaccatct eGaaggaeae ctccaaaagc 300 eaggtggteGg taattatgac caacatggac cctgtggaca cagccaçata ttactgtgea 360 cggtcagtag taactggcgg ctactactac gacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 420 acggtcaccg tctctagtgc cagcaccaag ggcccctccg tgttccctct ggacccctga 480 agcagaagca ccagcgagag cacagccgcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 340 gagcecgtígà ccgtgtcttg gaaeageggã gccctgacca gcggcgtgca caectttcca 600 ggegtggfcgej agagcagcgg cctgtacagc ctgagcagcg tggtcaccgt gaccagcagc 660 aaçttecggea cccagaccta cacctgtaac gtggaccaca agcccagcaa caccaaggtg 720 gagaagagag tggagcggaa gtccagcgtg gagtgccctc cittgtcctgc ccGtcctgtg 780 gccggaccta gegtgttcct gttcccccca aagcccaagg acaccctgat gatcagccgg 840 aGgcçggaag tgacctgcgt ggtggtggac gtgtcccacg aggaccccga ggtgcagttc 900 aattggtacg tggacggggt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagccccg ggaggaacag 960 ttcaacagca ccttccgggt ggtgtccgtc ctcaccgtgg tgcaccagga cfcggctgaac 1020 ggeaaagagt acaagtgcaa ggtctccaac aagggcctgc ctgeGeeeat cgagaaaaee 1080 afeGiageaag»· ccaagggcca gcctcgggag cctcaggtgt acaccctgcc cc.ccagccgg 1140 gaggaaatga ecaagaaGea ggtgteectg aGGtgccteg tgaagggcfct ctaccccagc 1200 gatatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1260 cccatgctgg acagogacgg cagcttcttc ctgtactcca aactgaccgt ggaeaagage 1320 cggtggcagc agggcaacgt gttcagctgt àgcgtgatge aogaggecct gcacaaccac 1380 tacacccaga agtccctgag cctgtctcct ggeggaggGg gaggatGtgg sggcggagga 1440 agtggagggg gcggatctgg tggtggaggc ag egg egg a g gtggaagfegg cggtggágga 1300 tccggtggag gcggetcagg tggcggcgga agegagagaa agtcctccgt ggagtgtcea 1360 ccatgccctg GfcGcâGeâgfc ggctggccct tccgtcttte tctfctcGacc taaacctaag 1620 gatacactca tgatctccag aactccagag gtcacatgtg tggtcgtcga tgtcagtcat 1680 gaggatcctg aagfcGeagtt: taactggtat gtggafcggGg fccgââgfc&eã fcaatgctaag 1740 acaaaacctc gcgaagaaca gtttaactcc acctttagag tcgtgagcgt gctgacagtc 1800 gtccatcagg attggctcaa tgggaaagaa tacaaatgta aagtctctaa caaaggactg 1860 cccgctccta tcgaaaagac catctccaaa acaaaggggc agcccagaga gccccaggtc 1920 tacacactcc caccctccag agaagagatg acaaaaaatc aggtgtcact cacctgtctg 1980 gtcaaggggt tttacccctc cgacattgcc gtggaatggg aatccaatgg gcagcctgaa 2040 aacaattata agactacacc tcctatgctc gactctgatg ggagtttctt tctctactct 2100 aaactcacag tggataagtc tagatggcag caggggaatg tcttttcctg ctccgtcatg 2160 catgaagctc tccacaatca ttatacacag aagtctttgt ccctgtcccc cggcaag 2217 <210> 455 <211> 1042

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 455

Met Lys Pro Sly Gys Ala Ala Sly Ser Pro Sly Asn Glu Trp lie Phe 1 5 10 15

Pile Sér Thr Asp Glu lie Thr Thr Arg Tyr Atg Ass Thr Met Sêr Ass SO 25 30

Sly Sly lieu Sis Arg Ser Val lie leu Ser Ala Leu lie leu leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Sly Phe Ser Gly Asp Sly Arg Ala lie Trp Ser Lys ash 50 55 SO

Pro Asa Phe Thr Piro Val Asa Glu Sér Gla Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 7¾ 75 m

Glu Gly Ser Trp Lys Thr Asp Gly Arg Gly Pro Ser Ile Trp Asp Arg 100 105 110

Tyr Val Tyr Ser His Leu Arg Gly Vai Asa Gly Thr Asp Arg Ser Thr 115 120 125

Asp Ser Tyr He Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu 130 135 140

Gly Val Ser Phe Tyr Gin Phe Ser Ile Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asa Gly Thr Val Ala Ala Val Asa Alá Gla Gly Léu Arg Tyr Tyr Arg 165 170 175

Ala Leu Leu Asp Ser Leu Val Leu Arg Asa lie Glu Pro lie Val Thr 180 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Thr Leu Gla Glu Glu Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys Asa Ala Thr Met lie Asp leu Phe Asa. Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gla Thr Phe Gly Asp Arg val Lys Tyr Trp ile Thr Ile His 225 230 235 240

Asa Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asa Leu Thr Ala Vai Tyr Thr Val Gly His Asa 260 265 270

Leu Ile Lys Ala His Ser Lys Val Trp His Asa Tyr Asp Lys Asa Phe 275 280 285

Arg Pro His Sin lys Sly Trp lea Ser lie Thr lea Sly Sep His Trp 290 295 300 lie Glu Pro Asn Arg Thr Asp Asn Met Glu Asp Val lie Ash Gys Gin 305 310 315 320

His Ser Met Ser Ser Val leu Gly Trp Phe Ale Asn Pro lie His Sly 32.5. ' 330 335:.

Asp Sly Asp Tyr Pró Glu Phè Met lys Thr Sly Ala Met lie Pro Glu 340 345 350

Phe Ser Gla Ala Gla lys Gla Glu Val Arg Gly Thr Ala Asp Phe Phe 355 360 365

Ala Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Arg Pro Ser Asn Thr Val Val 370 375 380 lys Met Gly Gin Asn Val Ser lea Asn lea Arg Gin Val lea Asn Trp 385 390 395 400: lie lys lea Gla Tyr Asp Asp Pro Gin lie lea He Ser Gla Asn Gly 405 410 415

Trp Phe Thr Asp Ser Tyr lie lys Thr Gla Asp Thr Thr Ala He Tyr 420 425 430

Met Met lys Asn Phe leu Asn Gin Val lea Gin Ala He lys Phe Asp 435 440 445

Glu He Arg Val· Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Thr lea lea Asp Gly Phe 450 455 460

Gla Trp Gla Asp Ala Tyr Thr Thr Arg Arg Gly lea Phe Tyr val Asp 465 470 475 480

Phe Asn. Ser Gla Gin lys Glu Arg lys Pro lys Ser Ser Ala His Tyr 485 490 495

Pro Asp Met Lys Gly Arg Phe Pro Cys Asp Phe Ser Trp Gly Val Thr 515 ' 520 525

Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Ser Val Ale Ser Ser Pro Gin Phe Ser 530 535 540

Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asn Ala Thr Gly Asn Arg Leu Leu His 545 550 555 560

Arg Val Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ala Gin Cys Thr Asp 565 570 575

Phe val Asn He Lys Lys Gin Leu Glu Met Leu Ala Arg Met Lys val 580 585 590

Thr His Tyr Arg Phe Ala Leu Asp Trp Ala Ser Val Léu Pro Thr Gly 595 600 605

Agn Leu Ser Ala val ASH Arg Gin Ala Leu Arg Tyr Tyr Arg ©ys val 610 615 620 al Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly lie Ser Ala Met Val Thr Leu Tyr 625 630 635 640

Tyr Pro Thr His Ala His Leu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Leu His Ala 645 650 655

Asp Gly Trp Leu Asn Pro Ser Thr Ala Glu Ala Phe Gin Ala Tyr Ala 660 665 670

Gly Leu Cys Phe Gin Glu Leu Gly Asp Leu Val Lys Leu Trp lie Thr 675 610 685 lie Asn Glu Pro Asn Arg Leu Ser Asp He Tyr Asn Arg Ser Gly Asn 650 695 700

Asp Thr Tyr Gly Ala Ala His Asn Lea Leu Val Ala Hi# Ala Leu Ala 705 710 715 720

Trp Arg Leu Tyr Asp Gin Gin gha Arg Pro Ser Gin Arg Gly Ala Val 725 730 735

Asp Ser His Trp Arg Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu lie Ala 755 760 765

Trp Pile Ala Glu Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ala Ala Met 770 775 780

Arg Glu Tyr He Ala Ser Lys His Arg Arg Gly Leu Ser Ser Ser Ala 785 790 795 800

Leu Pro Arg Leu Thr Glu Ala Glu Arg Arg Leu Leu Lys Gly Thr Val 805 81Ò 815

Asp She Cys Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Val Met His Glu 820 825 830

Gin Leu Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg Asp lie Gin Phe Leu 835 840 845

Gin Asp lie Thr Arg Leu Ser Ser pro Thr Arg Leu Ala Val He Pro 850 855 860

Met Asp He Tyr lie Thr Ala Ser sly lie Asp Asp Gin Ala Leu Glu 885 800 895

Asp Asp Arg Leu Arg Lys Tyr Tyr Leu Gly Lys Tyr Leu Gin Glu Val 900 905 910

Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Arg lie Lys Gly Tyr Tyr Ala 915 920 925

Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe Phe Thr 930 935 940

Ser Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser lie Gin Phe Tyr Asn Lys Val lie 945 950 955 960

Ser Ser Arg Gly Phe Pro Phe Glu Asn Ser Ser Ser Arg Cys Ser Gin 965 970 975

Thr Gin Glu Asn Thr Glu Cys Thr Val Cys Leu Phe Leu Val Gin Lys 980 985 990

Lys Pro Leu lie Phe Leu Gly Cys Cys Phe Phe Ser Thr Leu Val Leu 995 1000 1005

Leu Leu Ser lie Ala lie Phe Gin Arg Gin Lys Arg Arg Lys Phe 1010 1015 1020

Trp Lys Ala Lys Asn Leu Gin His lie Pro Leu Lys Lys Gly Lys 1025 1030 1035

Arg Val Val Ser 1040 <210> 456 <211> 1045

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 456

Met Lys Pro Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp lie Phe 15 10 15

Phe Ser Thr Asp Glu lie Thr Thr Arg Tyr Arg Asn Thr Met Ser Asn 20 25 30

Gly Gly Leu Gin Arg Ser Val lie Leu Ser Ala Leu lie Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Arg Ala lie Trp Ser Lys Asn 50 SB 60

Pro Asn Phe Thr Pro Val Asn Glu Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe Pro Lys Âsn Phe Phe Trp Gly lie Gly Thr Gly Ala Leu Gin Pal 85 90 95

Glu Gly Ser Trp Lys Lys Asp Gly Lys Gly Pro Ser lie Trp Asp His 100 105 110

Phe lie His Thr His leu Lys Asn Val Ser Ser Thr Asn Gly Ser Ser 115 120 125

Asp: Ser Tyr' lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Ser Ala Leu. Asp Phe Lie ISO 135 140

Gly Val Ser Phe Tyr Gin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160:

Asp Gly lie Val Thr Val Ala Asn Ala Lys Gly Leu Gin Tyr Tyr Ser 165 170 175

Thr Leu Leu Asp Ala Leu Val Leu Arg Asn Lie Glu Pro Lie Val Thr 180 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Ala Leu Gin Glu Lys Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys ASS Asp Thr lip lie Asp lie Phe Asn Asp Tyr Alá Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Met Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp lie Thr lie His 225 230 235 240

Asn Pro Tyr Leu Val Ala Tip HiS Gly Tyr Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asn Leu Ala Ala val Tyr Thr val Gly His Asn 260 265 270

Leu Tie Lys Ala His Her Lys val Trp His Asn Tyr Asn Thr His Phe 275 280 285

Arg Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Her Tie Thr Leu Gly Her His Trp 290 295 300 lie Glu Pro Asn Arg Her Glu Asn Thr Met Asp Tie Phe Lys Gys Gin 305 310 315 320

Gin Ser Met Val Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro Tie His Gly 325 330 335

Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Gly Met Arg Lys Lys Leu Phe Ser Val Leu 340 345 350

Pro lie Phe Ser Glu Ala Glu Lys His Glu Met Arg Gly Thr Ala Asp 355 360 363

Phe Phe Ala Phe Ser Phe Gly Pro Ass Asn Phe Lys Pro Leu Asn Thr 370 375 380

Met Ala Lys Met Sly Gin Asn Val Ser leu Asn leu Arg Glu Ala Leu 385 390 395 400

Asn Trp lie lys Leu Glu Tyr Asn Asn Pro Arg lie leu He Ala Glu 405 410 415

Asn Sly Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala 420 425 430 lie Tyr Met Met Lys Asn Phe Leu Ser Gin Val Leu Gin Ala lie Arg 435 440 4.45

Leu Asp Glu lie Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu leu Asp 450 455 460

Gly Phe Glu Trp Gin Asp Ala Tyr Thr lie Arg Arg Gly Leu Phe Tyr 465 470 475 480

Val AS-p Phe Ash Ser LyS GLh lys Glu Arg LyS Pro. Lys Ser Ser Ala 485 490 495

His Tyt Tyr Lys Gin XL® He Arg Glu Asn Gly Phe Pro Leu Lys Glu 500 505 510

Ser Thr Pro Asp Met Lys Gly Arg Phe Pro Cys Asp Phe Ser Trp Gly 515 520 525

Val Thr Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Phe Thr Val Ser Ser Pro Gin 530 535 540

Phe Thr Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asn Val Thr Gly Asn Arg Leu 545 550 555 560

Leu Tyr Arg val Glu Gly val Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ser Gin Cys 5i'S ’ ' 570 575

Thr Asp Tyr Val Ser lie Lys lys Arg Val Glu Met Leu Ala Lys Met 580 585 590

LyS: Val Thr His Tyr Sin Phe Ala lien Asp Trp Thr Sen lie Leu Pro 555 500 605

Thr Sly Asn Leu Ser Lys Val Asn Arg Gin Val Leu Arg Tyr Tyr Arg 610 615 620

Cys Val Val Ser Glu Sly Leu Lys Leu Sly Val Phe Pro Met Val Thr 625 630 635 640

Leu Tyr His Pro Thr His Ser His Leu Sly Leu Pro Leu Pro Leu Leu 645' 650 655'

Ser Ser Gly Gly Trp Leu Ash Met Asn Thr Alá Lys Ala Phe Slh Asp 660 665 670

Tyr Ala Glu Leu Cys Phe Arg Glu Leu Sly Asp Leu Val LyS Leu Tip 675 680 685 lie Thr lie Ash Glu; -Pro Ash Arg Leu: ser ASP Met Tyr Ash Arg Thr 650 655 700

Ser Ash Asp Thr Tyr Arg Ala Ala Hi@ Ash Leu Met lie Ala His Ala 705 710 715 720

Gin Val Trp His ueu Tyr Asp Arg Glu Tyr Arg Pro Val Gin His Gly 725 730: 735

Ala Val Ser· Leu Ser· Leu His 'Cys Asp Trp Ala Glu Pro. Àla Asn Pro 740 745 750

Phe Val Asp Ser His Trp Lys Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu 755 760 765 lie Ala Trp Phe Ala Asp Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ser 770 775 76Q; val Met Lys Glu Tyr lie Ala Ser Lys Asn Gin Arg Gly Leu Ser Ser 785 750 795 800

Ser Val Leu Pro Arg Phe Thr Ala Lys Glu Ser Arg Leu Val Lys Gly 605 810 615

Thr Val Asp Phe Tyr Ala Leu Asli His Phe Thr Thr Arg Phe val lie 820 825 830

His Lys Gin Leu Asn Thr Asn Arg Ser Val Ala Asp Arg Asp Val Gin 835 840 845

Phe Leu Gin Asp; lie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Ser Arg Leu Ala Val 850 855 860

Thr Pro Trp Sly Val Arg Lys Leu Leu Ala Trp :Ile Arg Arg Asn Tyr 865 870 875 880

Arg Asp Arg Asp lie Tyr lie Thr Ala Asn Gly He Asp Asp Leu Ala 885 880 885

Leu Slu Asp Asp Gin lie Arg Lys Tyr Tyr Leu Slu Lys Tyr Val Sin 900 905 910

Glu Ala Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Lys He Lys Sly Tyr 915 920 925

Tyr Ala She ;LyS Léu Thr Glu Slu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Sly Phe; 930 935 940

Phe Thr Ser Asp Phe Arg Ala Lys Ser Ser Val Slh Phe Tyr Ser LyS 945 950 955 960

Leu He Ser Ser Ser Gly Leu Pro Ala Glu Asn Arg Ser Pro Ala Cys 965 970 975

Gly Gin Pro Ala Glu Asp Thr Asp Cys Thr lie Cys: Ser Phe Leu val 980 985 990

Glu Lys Lys pro Leu lie Phe Phe Sly Cys Cys pit# He Ser Thr Leu 995 1000 1005

Ala Val Leu Leu Ser lie Thr Val Phe His His Gin Lys Arg Arg 1010 1015 1020 <210> 457 <211> 1044

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 457

Met Lys· Thr Gly Cys Ala Ala Gly Set Pro Gly Asa Glu Trp lie Phe 1 5 10 15

Phe -Sea Set Asp' Glu Arg Asa Thr Arg Set Arg Ays Tht Met Set Ash.

20 25 SO

Arg Ala Leu Gin Arg Set Ala Val Leu Set Ala Phe Val Leu Leu Atg 35 40 45

Ala Val Tht Gly Phe Set Gly Asp Gly Lys Ala lie Tip Asp Ays Ays 50 55 SO

Gin Tyr Val Set Pro Val Asa Pro Set Gin leu Phe Leu Tyr Asp Tht

m 70 75 SO

Gly Vai Ser Phe Tyr Gin Phe Seif lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asn Gly Thr Val Ala Ala Val Asn Ala Gin Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg 165 170 175

Ala Leu Leu Asp Ser Leu Val Leu Arg Asn lie Glu Pro Tie Val Thr 180 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro leu Ala Leu Gin Glu Lys Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys Asn Asp Thr He He Asp He Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Met Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp He Thr He His 225 230 235 240

Asn Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Tyr Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Ash Leu Ala Ala Val Tyr Thr Val Gly His Ash 260 265 270

Leu He Lys Ala His Ser L>s Val Trp His Asn Tyr Asn Thr His Phe 275 280 285

Arg Pro His Gin Lys Gly Trp Lea Ser He Thr Leu Gly Ser His Trp 290 295 300

He Glu Pro Asn Arg Ser Glu Asn Thr Met Asp lie Phe Lys Cys Gin 305 310 315 320

Gin Ser Met Val Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro He His Gly 325 330 335

Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Gly Met Arg Lys Lys Leu Phe Ser Val Leu 340 345 350

Pro lie Phe Sèr Glu Ala Glu Lys His Glu Met Arg Gly Thr Ala Asp 355 ISO 365

Phe Phe Al a Phe Seas Phe Gly P ro As π Asa Phe Ly s Pro Leu Asa Thr 310 375 380

Met Ala Lys Met Gly Glu Asa Val Ser Lea Asa Leu Arg Glu Ala Leu 385 390 395 400

Asa Trp He Lys Leu Glu Tyr Asa Asa Pro Arg lie Leu Lie Ala Glu 405 410 415

Asa Sly Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala 420 425 430 lie Tyr Met Met Lys Asa Phe Leu Ser Gla Val Leu Gla Ala He Arg 435 440 445

Leu Asp Glu He Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Leu Asp 450 455 460

Gly Phe Glu Trp Sin Asp Ala Tyr Thr He Arg Arg Gly Leu Phe Tyr 465 470 475 480

Val Asp· Phe Asa Ser Lys Gla Lys Glu Arg Lys Pro Lys Ser ser Ale 485 490 495

His Tyr Tyr Lys Gla He lie Arg Glu Asa Gly Phe Ser Leu Lys Glu 500 505 510

Ser Thr Pro Asp Val Gla Gly Gla Phe Pro Cys Asp Phe Ser Trp Gly 515 520 525

Val Thr Glu Ser Val Léu Lys Pro Glu Ser Val Ala Ser Ser Pro Gla 530 535 540

Phe Ser Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asa Ala thr Gly Asa Arg Leu 545 550 555 560 leia His Arg Vai Glu Gly Vai Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ala Gin Cys 565 570 575

Thr Asp Phe Vâl Asia Ile Lys Lys Gin Leu Glu Mete Leu Ala Arg Mete 580 585 590

Lys Vai Thr His Tyr Arg Phe Ala Leu Asp Trp Ala Ser Vai Leu Pro 595 600 60S

Thr Gly Asn Leu Ser Ala Vai Asn Arg Gin Ala Leu Arg Tyr Tyr Arg 61Q 615 620

Cys Vai Vai Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly Ile Ser Ala Mete Vai Thr 625 €30 635 640

His Ala Asp Gly Trp Leu Asn Pro Ser Thr Ala Glu Ala Phe Gin Ala 660 665 670

Tyr Ala Gly Leu Cys Phe Gin Glu Leu Gly Asp Leu Vai Lys Leu Trp 675 680 685

Ile Thr He Asn Glu Pro Asn Arg Leu Se* Asp Ile Tyr AStt Arg Ser 690 695 700

Gly Ash Asp Thr Tyr Gly Ala Ala His Asn Leu Léu Vai Ala His Ala 705 710 715 720

Tyr Ala Asp Ser His Trp Arg Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu 755 760 765 lie Aim Trp Phe Ala Glu Pro Leu Ehe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ala 770 775 780

Ala Met Arg Glu Tyr lie Ala Ser Ays His Arg Arg Gly Leu Her Ser 785 790 795 800

Ser Ala Leu Pro Arg Leu Thr Glu Ala Glu Arg Arg Leu Leu Lys Gly 805 810 815

Thr Val Asp Ehe Gys Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Ehe Val Met 820 825 830

His Glu Gin Leu Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg Asp He Gin 835 840 845

Phe Leu Gift Asp lie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Thr Arg Leu Ala Val 850 855 860

He pro Trp Gly val Arg Lys Leu Léu Arg Trp val Arg Arg Asa Tyr 865 870 875 880

Gly Asp Met Asp He Tyr lie Thr Ala Ser Gly lie ASP Asp Gin Ala 885 890 895

Leu Glu Asp Asp Arg Left Arg Lys Tyr Tyr Leu Gly Lys Tyr Léu Gin 900 905 910

Glu: Val Leu 'Lys Ala Tyr Leu lie Asp 'Lys Val. .Arg' ílè: .Lys Gly Tyr 915 920 925

Tyr Ala Phe: Lys Leu .Ala Glu 'Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

Phe Thr Ser Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser He Gin Phe Tyr Asn Lys 945 950 955 960

Val lie Ser Ser Arg Gly Phe Pro Phe Glu Asn Ser Ser Ser Arg Cys 965 970 975

Ser Gin Thr Gin Glu Asn Thr Glu Cys Thr Val Cys Leu Phe Leu Val 980 985 990

Gin Lys Lys Pro Leu lie Phe Leu Gly Cys Cys Phe Phe Ser Thr Leu 995 1000 1005

Val Leu Leu Leu Ser lie Ala lie Phe Gin Arg Gin Lys Arg Arg 1010 1015 1020

Lys Phe Trp Lys Ala Lys Asn Leu Gin His lie Pro Leu Lys Lys 1025 1030 1035

Gly Lys Arg Val Val Ser 1040 <210> 458 <211> 1044

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 458

Welt Lys Pro Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp lie Phe 1 5 10 15

Phe Ser Thr Asp Glu Tie Thr Thr Arg Tyr Arg Asn Thr Met Ser Asn 2® 25 30

Gly Gly Leu Gin Arg Ser Val He Leu Ser Ala Léu He Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Sly Phe Ser Gly Asp Sly Arg Ala lie Trp Sec Lys Asn 50 55 60

Tyr Val Tyr Ser His Leu Arg Sly Val Asn Sly Thr Asp Acg Ser Thr 115 12$: 125

Asp Ser Tyr lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu 130 135 140

Sly Val Ser Phe Tyr Sin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asn Sly Thr Val Ala Ala Val Asn Ala Sin Sly Leu Arg Tyr Tyr Arg 1®5 170 173

Ala Leu Lew Asp Ser Leu Val Leu Arg Asn he Glu Pro lie Val Thr 180 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu pro Leu Thr Leu Sin Glu Glu Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys Asn Ala The Met lie Asp Leu phe Asn Asp: Tyr- Ala. Thr Tyr 210 215 220

Cys Phè Gin Thr Phe Gly Asp Acg val Lys Tyr Trp Lie The He His 225 230 235 240

Asn Pro TyC Leu Val Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255 pro Gly Glu Lys Gly Asn Leu Thr Ala val Tyr The val Gly His Asn 260 265 270

Leu lie Lye Ala HÍS Set Lys Val Trp His Asn Tyr Asp LyS Asn Phe 275 280 285

Arg Pro His Sin Lys Sly Trp Leu Ser lie Thr Leu Sly Ser His Trp 290 295 300 lie Glu Pro Asn Arg Ser Glu Asn Thr Met Asp He Phe Lys Sys Gin

305 310 315 j2Q

Gin Ser Met. Val Ser Val Leu Sly Trp Phe Ala Asn Pro lie His Sly 325 330 335

Asp Sly Asp Tyr Pro Glu Sly Met Arg Lys Lys Leu Phe Ser Val Leu •*40 345 350

Pro Lie Pie Ser Glu Ala Glu Lys Hi® Glu Met Arg Gly Thr Ala Asp 355 360 365

Phe phe Ala Phe ser Phe Gly Pro Asn Asn phe Lys Pro Leu Asn Thr 370 375 38®

Met Ala Lys Met Gly Gin Asn Val Ser Leu Asn Leu Arg Glu Ala Leu 385 390 395 400

Asn Trp lie Lys Leu Gin Tyr Asn Asn Pro Arg He Leu He Ala Glu 405 410 415

Asn Gly Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala 420 425: 43® lie Tyr Met. Met Lys Asn Phe Leu Ser Gin Val Leu Gin Ala He Arg 435 440 445

Leu Asp Glu He Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Leu Asp 450 455 460

Gly Phe Glu Trp Gin Asp Ala Tyr Thr Lie Arg Arg Gly Leu Phe Tyr 465 470 473 480

Val Asp Phe Asn Ser Lys Gin Lys Glu Arg Lys Pro Lys Ser Ser Ala 485 490 495

His Tyr Tyr Lys Slit lie lie Arg Glu Asn Gly Phe Ser Leu Lys Glu 500 505 510

Ser Thr Pro Asp Val Gl|i Gly Gin Phe PiO Cys Asp Phe Ser Trp Gly 515 520 525 'Val Tht Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Ser Val Ala: Ser Set Prc Gin 530 535 540

Phe Ser Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asn Ala Thr Giy ASh Arg Leu 545 550 555 560

Leu His: Arg Val Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ala Gin Cys 565 570 575

Thr Asp Phe val Asa He Lys Lys Gin Leu Glu Met Leu Ala Arg Met 580 585 530

Lys Val Thr His Tyr Arg Phe Ala Leu Asp Trp Ala Ser Val Leu Pro 535 600 605

Thr Gly Asn Leu Ser Ala Val Asn Arg Gin Ala Leu Arg Tyr Tyr Arg 610 615 620

Cys Val Val Her Glu Gly Leu Lys Leu Gly lie Ser Ala Met Val Thr 625 630 635 640

Leu Tyr Tyr Pro Thr His Ala His leu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Leu 645 650 655

HiS Ala Asp Gly Trp Leu Asn Pro Ser Thr Ala Glu Ala Phe Gin Ala 660 665 670

Tyr Alâ Gly Leu Cys Phe Gin Glu Leu Gly Asp léu Val Lys Leu Trp 675 680 685 lie Thr lie Asn Glu Pro Asn Arg Léu Ser Asp lie Tyr Asn Arg Ser 630 635 700

Gly Asn Asp Thr Tyr Gly Ala Ala HiS Asn leu leu Val Ala His Ala 705 710 715 720 leu Ala Tip Arg leu Tyr Asp Gin. Gin Phe Arg Pig Ser Gin Arg Gly 725 730 735

Ala·: 'Val Ser leii Ser .leu His Ala Asp Tip Ala Glu Pro Ala Asp Pro 740 745 750

Tyr Ala Asp Ser His Tip Arg Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu 755 7:60 765 lie Ala Trp Ph# Ala Glu Pro leu Phe lys Thr Gly Asp Tyr pro Ala 770 775 780

Ala Met Arg Glu Tyr He Ala Ser lys His Arg Arg Gly leu Ser Ser

785 790 795 SOS

Ser Ala leu Pro Arg Leu Thr Glu Ala Glu Arg Arg leu leu lys Gly 805 SIS 815

Thr Val Asp Phe Gys Ala leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Val Met 820 825 830

His Glu Gin leu Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ser Asp Arg Asp He Gin 835 840 845

Phe Leu Gin Asp He Thr Arg leu Ser Ser Pro Thr Arg leu Ala Val 850 855 860 lie Pro Trp Gly Val Arg Lys: leu Leu Arg Trp Val Arg Arg Asn Tyr 865 870 875 880

Gly Asp Met Asp He Tyr He Thr Ala Ser Gly He Asp Asp Gin Ala 885 890 895 leu Glu Asp Asp Arg Leu Arg lys Tyr Tyr leu Gly lys Tyr leu Gin 900 905 910

Glu Vai Leu Lys Ala. Tyr Leu lie Asp Lys Vai Arg Ile Lys Gly Tyr 915 920 925

Tyr Ala Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

Phe Thr Ser Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser Ile Glu Phe Tyr Asn Lys 945 #50 955 ###

Vai Ile Ser Ser Arg Gly Phe Pro .Phe Glu Asn Ser Sêr Ser Arg Cys 365 #70 975

Ser Glu Thr Gin Glu Asn Thr Glu Cys Thr Vai Cys Léu Phe Leu Vai 380 985 990

Glri Lys Lys Pro Leu He Phe Leu Gly Cys Gys Phe Phe Ser Thr Leu 935 1000 1005 vai Léu Leu Leu Ser ile Ala- ile Phe Glu Arg Glu Lys. -Arg Arg 1010 1015 1020

Lys Phe Trp Lys Ala Lys asu Leu Glu His il# Pro Leu Lys Lys 1025 1030 1035

Gly Lys Arg Vai Vai Ser 1040 <210> 459 <211> 1042

<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 Ο 0> 459

Met Lys Pro Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp lie Phe 15 10 15

Phe Ser Thr Asp Glu lie Thr Thr Arg Tyr Arg Asn Thr Met Ser Asn 20 25 30

Gly Gly Leu Gin Arg Ser Val lie Leu Ser Ala Leu lie Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Arg Ala lie Trp Ser Lys Asn 50 55 60

Pro Asn Phe Thr Pro Val Asn Glu Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe Pro Lys Asn Phe Phe Trp Gly lie Gly Thr Gly Ala Leu Gin Val 85 90 95

Glu Gly Ser Trp Lys Lys Asp Gly Lys Gly Pro Ser lie Trp Asp His 100 105 110

Phe lie His Thr His Leu Lys Asn Val Ser Ser Thr Asn Gly Ser Ser 115 120 125

Asp Ser Tyr lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Ser Ala Leu Asp Phe lie 130 135 140

Gly Val Ser Phe Tyr Gin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asp Gly lie Val Thr Val Ala Asn Ala Lys Gly Leu Gin Tyr Tyr Ser 165 170 175

Thr Leu Leu Asp Ala Leu Val Leu Arg Asn lie Glu Pro lie Val Thr 180 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Thr Leu Gin Glu Glu Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys Asn Ala Thr Met lie Asp Leu Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Thr Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp lie Thr lie His 225 230 235 240 ASn Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asn Leu Thr Ala Val Tyr Thr Val Gly His A.sri 260 265 270

Leu lie Lys Ala His Ser Lys Val Trp His Asn Tyr Asp Lys Asn Phe 275 280 285

Arg Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Ser lie Thr Leu Gly Ser His Trp 290 295 300 lie Glu Pro Asn ATg Thr Asp Asn Met Glu Asp Val lie Asn Cys Gin 305 310 315 320

His Ser Met Ser Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro lie His Gly 325 330 335

Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Phe Met LyS Thr Gly Ala Met lie Pro Glu 340 345 350

Phe Ser Glu Ala Glu Lys Glu Glu Val Arg Gly Thr Ala Asp Phe Phe 355 360 365

Ala Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Arg Pro Ser Asn Thr Val Val 370 375 380

Trp Phe Thr Asp Ser Arg Val Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala lie Tyr 420 425 430

Met Met Lys Asn Phe Leu Ser Gin Val Leu Gin Ala lie Arg Leu Asp 435 440 445

Glu lie Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Ser Leu Leu Asp Gly Phe 450 455 460

Glu Trp Gin Asp Ala Tyr Thr lie Arg Arg Gly Leu Phe Tyr Val Asp 465 470 475 4S0

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Gly Asp Met Asp lie Tyr lie Thr Ala Ser Gly lie Asp Asp Gin Ala. 885 890 895 Léu Glu Asp Asp Arg Leu Arg Lys Tyr Tyr Leu Gly Lys Tyr Leu Gin 900 905 910

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Tyr Ala Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

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Ser Gin Thr Gin Glu Asn Thr Glu Cys Thr Val Cys Leu Phe Leu Val 980 985 990

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<212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Descrição de Sequência Artificial: Polipéptido Sintético <4 0 0> 463

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Tyr Ala Phe Lys Leu Thr Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940

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Tyr Ala Phe Lys Leu Ala Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 930 935 940 phe Thr Set Asp Phe Lys Ala Lys Ser Ser He Gin Phe Tyr Asn Lys 945 950 955 960

Tal lie Ser ser Arg Gly she Pro Phe Glu Ash ser Ser ser Arg Cys 965 970 975

Ser Gin Thr Gin Glu Asa Thr Glu Cys Thr Tal Çys Leu Phe Leu Tal 980 985 99Θ

Tal Leu Leu Leu Ser Tie Ãla Tie Phe Gin Arg Gin Lys Árg Arg 1010 1015 wm

Lys Phe Trp Lys Ala Lys Asn Leu Gin Bis Tie Pro Leu Lys Lys 1025 1030 1035

Gly Lys Arg Tal Tal Ser 1Q40 <210> 468 <211> 1043

<212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 468

Met Lys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp Ile Phe 15 10 15

Phe Ser Ser Asp Glu Arg Asn Thr Arg Ser Arg Lys Thr Met Ser Asn 20 25 30

Arg Ala Leu Gin Arg ser Ala Tal Leu Ser Ala Phe vai Léu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Lys Ala lie Trp Asp Lys Lys 50 55 60

Gin Tyr Val Ser Pro Val Asn Pro Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe Pro Lys Asn Phe Ser Trp Gly Val Gly Thr Gly Ala Phe Gin Val 85 90 95

Glu Gly Ser Trp Lys Thr Asp Gly Arg Gly Pro Ser lie Trp Asp Arg 100 105 110

Tyr Val Tyr Ser His Leu Arg Gly Val Asn Gly Thr Asp Arg Ser Thr 115 120 125

Asp Ser Tyr lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu 130 135 140

Gly Val Ser Phe Tyr Gin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asn Gly Thr Val Ala Ala Val ASn Ala Gin Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg 165 170 175

Ala Leu Leu Asp Ser Leu Val Leu Arg Asn lie Glu Pro lie Val Thr 180 185 190

Leu Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Thr Leu Gin Glu Glu Tyr Gly Gly 195 200 205

Trp Lys Asn Ala Thr Met He Asp Leu Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr 210 215 220

Cys Phe Gin Thr Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp He Thr He His 225 230 235 240

Asn Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala 245 250 255

Pro Gly Glu Lys Gly Asn Leu Thr Ala Val Tyr Thr val Gly His Asn 260 265 270

Leu lie Lys Ala His Ser Lys Val Trp His Asn Tyr Asp Lys Asn Phe 275 280 285

His Ser Met Ser Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro lie His Gly 325 330 335

Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Phe Met Lys Thr Gly Ala Met lie Pro Glu 340 345 350

Phe Ser Glu Ala Glu Lys Glu Glu Val Arg Gly Thr Ala Asp Phe Phe 355 360 365

Ala Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Arg Pro Ser Asn Thr Val Val 370 375 380

Trp Phe Thr Asp Ser Tyr lie Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala lie Tyr 420 425 430

Met Met Lys Asn Phe Leu Asn Gin Val Leu Gin Ala lie Lys Phe Asp 435 440 445

Glu lie Arg Vai Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Thr Léu Leu Asp Gly Phe 450 455 460

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Phe Asn Ser Glu Gin Lys Glu Arg Lys Pro Lys Ser Ser Ala His Tyr 485 490 495

Tyr Lys Gin lie lie Gin Asp Asn Gly Phe Pro Leu Lys Glu Ser Thr 500 505 510

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Asp Pro His Leu Tyr Vai Trp Asn Vai Thr Gly Asn Arg Leu Leu Tyr 545 550 555 560

Arg Vai Glu Gly Vai Arg Leu Lys Thr Arg Pro Ser Gin Cys Thr Asp 565 570 575

Tyr Vai Ser Ile Lys Lys Arg Vai Glu Met Leu Ala Lys Met Lys Vai 580 585 590

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Asn Leu Ser Lys Vai Asn Arg Gin Vai Leu Arg Tyr Tyr Arg Cys Vai 610 615 620

Vai Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly Vai Phe Pro Met Vai Thr Leu Tyr 625 630 635 640

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Asp Ser His Trp Lys Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu lie Ala 755 760 765

Trp Phe Ala Asp Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ser Val Met 770 775 780

Lys Glu Tyr lie Ala Ser Lys Asn Gin Arg Gly Leu Ser Ser Ser Val 785 790 795 800

Leu Pro Arg Phe Thr Ala Lys Glu Ser Arg Leu Val Lys Gly Thr Val 805 810 815

Asp Phe Tyr Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Val lie His Lys 820 825 830

Gin Leu Asn Thr Asn Arg Ser Val Ala Asp Arg Asp Val Gin Phe Leu 835 840 845

Gin Asp lie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Ser Arg Leu Ala Val Thr Pro 850 855 860

Trp Gly Val Arg Lys Leu Leu Ala Trp lie Arg Arg Asn Tyr Arg Asp 865 870 875 880

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Asp Asp Gin He Arg Lys Tyr Tyr Leu Glu Lys Tyr Val Gin Glu Ala 900 905 910

Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Lys lie Lys Gly Tyr Tyr Ala 915 920 925

Phe Lys Leu Thr Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe Phe Thr 930 935 940

Ser Asp Phe Arg Ala Lys Ser Ser Val Gin Phe Tyr Ser Lys Leu He 945 950 955 960

Ser Ser Ser Gly Leu Pro Ala Glu Asn Arg Ser Pro Ala Cys Gly Gin 965 970 975

Pro Ala Glu Asp Thr Asp Cys Thr He CyS Ser Phe Leu Val Glu Lys 980 985 990

Lys Pro Leu He Phe Phe Gly Cys Cys Phe He Ser Thr Leu Ala Val 995 1000 1005

Leu Leu Ser He Thr Val Phe His His Gin Lys Arg Arg Lys Phe 1010 1015 1020

Gin Lys Ala Arg Asn Leu Gin Asn He Pro Leu Lys Lys Gly His 1025 1030 1035

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<212> ADN <213> Mus musculus <4 Ο 0> 469 atgaagacag gctgtgcagc agggtctccg gggaatgaat ggattttctt cagctctgat 60 gaaagaaaca cacgctctag gaaaacaatg tccaacaggg cactgcaaag atctgccgtg 120 ctgtctgcgt ttgttctgct gcgagctgtt accggcttct ccggagacgg gaaagcaata 180 tgggataaaa aacagtacgt gagtccggta aacccaagtc agctgttcct ctatgacact 240 ttccctaaaa acttttcctg gggcgttggg accggagcat ttcaagtgga agggagttgg 300 aagacagatg gaagaggacc ctcgatctgg gatcggtacg tctactcaca cctgagaggt 360 gtcaacggca cagacagatc cactgacagt tacatctttc tggaaaaaga cttgttggct 420 ctggattttt taggagtttc tttttatcag ttctcaatct cctggccacg gttgtttccc 480 aatggaacag tagcagcagt gaatgcgcaa ggtctccggt actaccgtgc acttctggac 540 tcgctggtac ttaggaatat cgagcccatt gttaccttgt accattggga tttgcctctg 600 acgctccagg aagaatatgg gggctggaaa aatgcaacta tgatagatct cttcaacgac 660 tatgccacat actgcttcca gacctttgga gaccgtgtca aatattggat tacaattcac 720 aacccttacc ttgttgcttg gcatgggttt ggcacaggta tgcatgcacc aggagagaag 780 ggaaatttaa cagctgtcta cactgtggga cacaacctga tcaaggcaca ttcgaaagtg 840 tggcataact acgacaaaaa cttccgccct catcagaagg gttggctctc catcaccttg 900 gggtcccatt ggatagagcc aaacagaaca gacaacatgg aggacgtgat caactgccag 960 cactccatgt cctctgtgct tggatggttc gccaacccca tccacgggga cggcgactac 1020 cctgagttca tgaagacggg cgccatgatc cccgagttct ctgaggcaga gaaggaggag 1080 gtgaggggca cggctgattt ctttgccttt tccttcgggc ccaacaactt caggccctca 1140 aacaccgtgg tgaaaatggg acaaaatgta tcactcaact taaggcaggt gctgaactgg 1200 attaaactgg aatacgatga ccctcaaatc ttgatttcgg agaacggctg gttcacagat 1260 agctatataa agacagagga caccacggcc atctacatga tgaagaattt cctaaaccag 1320 gttcttcaag caataaaatt tgatgaaatc cgcgtgtttg gttatacggc ctggactctc 1380 ctggatggct ttgagtggca ggatgcctat acgacccgac gagggctgtt ttatgtggac 1440 tttaacagtg agcagaaaga gaggaaaccc aagtcctcgg ctcattacta caagcagatc 1500 atacaagaca acggcttccc tttgaaagag tccacgccag acatgaaggg tcggttcccc 1560 tgtgatttct cttggggagt cactgagtct gttcttaagc ccgagtttac ggtctcctcc 1620 ccgcagttta ccgatcctca cctgtatgtg tggaatgtca ctggcaacag attgctctac 1680 cgagtggaag gggtaaggct gaaaacaaga ccatcccagt gcacagatta tgtgagcatc 1740 aaaaaacgag ttgaaatgtt ggcaaaaatg aaagtcaccc actaccagtt tgctctggac 1800 4- (Vl*» ^ λ4- ^ 4— /**/**/4 44^^4- i*r 4 4 41*« I 4- 4 4/4 4 <*r4/444 /« I /4 I ^44 Λτ/4 I -4 /4« 1 Ο £ Λ k>uuaaa^k.k>o aua^auoa^ u ^k.k.aa^<^uaw χυυν tataggtgtg tggtgagcga aggactgaag ctgggcgtct tccccatggt gacgttgtac 1920 cacccaaccc actcccatct cggcctcccc ctgccacttc tgagcagtgg ggggtggcta 1980 aacatgaaca cagccaaggc cttccaggac tacgctgagc tgtgcttccg ggagttgggg 2040 gacttggtga agctctggat caccatcaat gagcctaaca ggctgagtga catgtacaac 2100 cgcacgagta atgacaccta ccgtgcagcc cacaacctga tgatcgccca tgcccaggtc 2160 tggcacctct atgataggca gtataggccg gtccagcatg gggctgtgtc gctgtcctta 2220 cattgcgact gggcagaacc tgccaacccc tttgtggatt cacactggaa ggcagccgag 2280 cgcttcctcc agtttgagat cgcctggttt gcagatccgc tcttcaagac tggcgactat 2340 ccatcggtta tgaaggaata catcgcctcc aagaaccagc gagggctgtc tagctcagtc 2400 ctgccgcgct tcaccgcgaa ggagagcagg ctggtgaagg gtaccgtcga cttctacgca 2460 ctgaaccact tcactacgag gttcgtgata cacaagcagc tgaacaccaa ccgctcagtt 2520 gcagacaggg acgtccagtt cctgcaggac atcacccgcc taagctcgcc cagccgcctg 2580 gctgtaacac cctggggagt gcgcaagctc cttgcgtgga tccggaggaa ctacagagac 2640 agggatatct acatcacagc caatggcatc gatgacctgg ctctagagga tgatcagatc 2700 cgaaagtact acttggagaa gtatgtccag gaggctctga aagcatatct cattgacaag 2760 gtcaaaatca aaggctacta tgcattcaaa ctgactgaag agaaatctaa gcctagattt 2820 ggatttttca cctctgactt cagagctaag tcctctgtcc agttttacag caagctgatc 2880 agcagcagtg gcctccccgc tgagaacaga agtcctgcgt gtggtcagcc tgcggaagac 2940 acagactgca ccatttgctc atttctcgtg gagaagaaac cactcatctt cttcggttgc 3000 tgcttcatct ccactctggc tgtactgcta tccatcaccg tttttcatca tcaaaagaga 3060 agaaaattcc agaaagcaag gaacttacaa aatataccat tgaagaaagg ccacagcaga 3120 gttttcagct aa 3132 <210> 470 <211> 439 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 470

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Gly Ser Trp Lys Thr Asp Gly Arg Gly Pro Ser lie Trp Asp Arg Tyr 20 25 30

Val Tyr Ser His Leu Arg Gly Val Asn Gly Thr Asp ArÇT Ser Thr Asp 35 40 45

Ser Tyr lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu Gly 50 55 60

Val Ser Phe Tyr Gin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro Asn 65 70 75 80

Gly Thr Val Ala Ala Val Asn Ala Gin Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg Ala 85 90 95

Leu Leu Asp Ser Leu Val Leu Arg Asn lie Glu Pro lie Val Thr Leu 100 105 110

Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Thr Leu Gin Glu Glu Tyr Gly Gly Trp 115 120 125

Lys Asn Ala Thr Met lie Asp Leu Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr Cys 130 135 140

Phe Gin Thr Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp lie Thr lie His Asn 145 150 155 160

Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala Pro 165 170 175

Gly Glu Lys Gly Asn Leu Thr Ala Val Tyr Thr Val Gly His Asn Leu 180 185 190 lie Lys Ala His Ser Lys Val Trp His Asn Tyr Asp Lys Asn Phe Arg 195 200 205

Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Ser lie Thr Leu Gly Ser His Trp lie 210 215 220

Glu Pro Asn Arg Thr Asp Asn Met Glu Asp Val lie Asn Gys Gin His 225 230 235 240

Ser Met Ser Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro lie His Gly Asp 245 250 255

Giy Asp Tyr Pro Glu Phe Met Lys Thr Gly Ala Met Tie Pro Glu Phe 260 265 270

Ser Glu Ala Glu Lys Glu Glu Val Arg Gly Thr Ala Asp Phe Phe Ala 275 280 285

Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Arg Pro Ser Asn Thr Val VAL Lys 290 295 300

Met Gly Gin Asn val Ser Leu Asn Leu Arg Gin Val Leu Asn Trp lie 305 310 315 ^20

Lys Leu Glu Tyr Asp Asp Pro Gin lie Leu Tie Ser Glu Asn Gly Trp 325 330 335

Phe Thr Asp Ser Tyr lie Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala lie Tyr Met 340 345 350

Met Lys Asn Phe Leu Asn Gin Val Leu Gin Ala lie Lys Phe Asp Glu 355 360 365 lie Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Thr Leu Leu Asp Gly Phe Glu 370 375 380

Trp Gin Asp Ala Tyr Thr Thr Arg Arg Gly leu Phe Tyr Val Asp Phe 385 390 395 400

Asn Sec Slu Gin Lys Glu Aug Lys Pro Lys Ser Ser Ala His Tyr Tyr 405 410 415 lys Gin lie Tie Gin Asp Asn Gly Phe Pro LeU lys Glu Ser Thr Pro 420 425: 430

Asp Met lys Gly Arg Phe Pro: 435· <210> 471 <211> 538 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 471

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Lys Ala Phe Gin Asp Tyr Ala Glu Leu CyS Phe Arg Glu Leu Gly Asp 165 170 175

Leu Val Lys Leu Trp lie Thr lie Asn Glu Pro Asn Arg Léu Ser Asp 180 185 190

Met Tyr Asn Arg Thr Ser Asn Asp Thr Tyr Arg Ala Ala His Asn Leu 195 200 205

Met lie Ala His Ala Gin Val Trp His Leu Tyr Asp Arg Gin Tyr Arg 210 215 220

Pro Val Gin His Gly Ala Val Ser Leu Ser Leu His Cys Asp Trp Ala 225 230 235 240

Glu Pro Ala Asn Pro Phe Val Asp Ser His Trp Lys Ala Ala Glu Arg 245 250 255

Phe Leu Gin Phe Glu lie Ala Trp Phe Ala Asp Pro Leu Phe Lys Thr 260 265 270

Gly Asp Tyr Pro Ser Val Met Lys Glu Tyr lie Ala Ser Lys Asn Gin 275 280 285

Arg Gly Leu Ser Ser Ser Val Leu Pro Arg Phe Thr Ala Lys Glu Ser 290 295 300

Arg Lèu Val Lys Gly Thr Val Asp Phe Tyr Ala Leu Asn His Phe Thr 305 310 315 320

Thr Arg Phe Val He His Lys Gin Leu Asn Thr Asn Arg Ser Val Ala 325 330 335

Asp Arg Asp Val Gin Phe Leu Gin Asp lie Thr Arg Leu Ser Ser Pro 340 345 350

Ser Arg Leu Ala Val Thr Pro Trp Gly Val Arg Lys Leu Leu Ala Trp 355 360 365

He Arg Arg Asn Tyr Arg Asp Arg Asp He Tyr He Thr Ala Asn Gly 370 375 380 lie Asp Asp Leu Ala Leu Glu Asp Asp Gin lie Arg Lys Tyr Tyr Leu 385 390 395 400

Glu Lys Tyr Val Gin Glu Ala Leu Lys Ala Tyr Leu He Asp Lys Val 405 410 415

Lys He Lys Gly Tyr Tyr Ala Phe Lys Leu Thr Glu Glu Lys Ser Lys 420 425 430

Pro Arg Phe Gly Phe Phe Thr Ser Asp Phe Arg Ala Lys Ser Ser Val 435 440 445

Gin Phe Tyr Ser Lys Leu He Ser Ser Ser Gly Leu Pro Ala Glu Asn 450 455 460

Arg Ser Pro Ala Cys Gly Gin Pro Ala Glu Asp Thr Asp Cys Thr He 465 470 475 480

Cys Ser Phe Leu Val Glu Lys Lys Pro Leu He Phe Phe Gly Cys Cys 485 490 495

Phe lie Ser Thr Leu Ala Val Leu Leu Ser lie Thr Val Phe His His 500 505 510

Gin Lys Arg Arg Lys Phe Gin Lys Ala Arg Asn Leu Gin Asn lie Pro 515 520 525

Leu Lys Lys Gly His Ser Arg Val Phe Ser 530 535 <210> 472 <211> 193 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 472

Met Lys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp lie Phe 15 10 15

Phe Ser Ser Asp Glu Arg Asn Thr Arg Ser Arg Lys Thr Met Ser Asn 20 25 30

Arg Ala Leu Gin Arg Ser Ala Val Leu Ser Ala Phe Val Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Lys Ala lie Trp Asp Lys Lys 50 55 60

Gin Tyr Val Ser Pro Val Asn Pro Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe Pro Lys Asn Phe Ser Trp Gly Val Gly Thr Gly Ala Phe Gin Val 85 90 95

Glu Gly Ser Trp Lys Thr Asp Gly Arg Gly Pro Ser lie Trp Asp Arg 100 105 110

Tyr Vai Tyr Ser His Leu Arg Gly Val Asn Gly Thr Asp Arg Ser Thr 115 120 125

Asp Ser Tyr lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu 130 135 140

Gly Val Ser Phe Tyr Gin Phe Ser lie Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro 145 150 155 160

Asn Gly Thr Val Ala Ala Val Asn Ala Gin Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg 165 170 175

Ala Leu Leu Asp Ser Leu Val Leu Arg Asn lie Glu Pro lie Val Thr 180 185 190

Leu <210> 473 <211> 221 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 473

Pro Lys Asn Phe Ser Trp Gly Val Gly Thr Gly Ala Phe Gin Val Glu 1 5 10 15

Gly Ser Trp Lys Thr Asp Gly Arg Gly Pro Ser lie Trp Asp Arg Tyr 20 25 30

Val Tyr Ser His Leu Arg Gly Val Asn Gly Thr Asp Arg Ser Thr Asp 35 40 45

Ser Tyr lie Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu Gly 50 55 60 vai Ser Phe Tyr Gin Phe Ser Ile Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro Asn 65 70 75 80

Gly Thr Vai Ala Ala Vai Asn Ala Gin Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg Ala 85 90 95

Leu Leu Asp Ser Leu Vai Leu Arg Asn lie Glu Pro lie Vai Thr Leu 100 105 110

Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Thr Leu Gin Glu Glu Tyr Gly Gly Trp 115 120 125

Lys Asn Ala Thr Met lie Asp Leu Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr Cys 130 135 140

Phe Gin Thr Phe Gly Asp Arg Vai Lys Tyr Trp Ile Thr Ile His Asn 145 150 155 160

Pro Tyr Leu Vai Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala Pro 165 170 175

Gly Glu Lys Gly Asn Leu Thr Ala Vai Tyr Thr Vai Gly His Asn Leu 180 185 190

Ile Lys Ala His Ser Lys Vai Trp His Asn Tyr Asp Lys Asn Phe Arg 195 200 205

Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Ser Ile Thr Leu Gly Ser 210 215 220 <210> 474 <211> 223 <212> PRT <213> Mus musculus <4 Ο 0> 474

Tyr His Trp Asp Leu Pro Leu Thr Leu Gin Glu Glu Tyr Gly Gly Trp 1 5 10 15

Lys Asn Ala Thr Met lie Asp Leu Phe Asn Asp Tyr Ala Thr Tyr Cys 20 25 30

Phe Gin Thr Phe Gly Asp Arg Val Lys Tyr Trp lie Thr lie His Asn 35 40 45

Pro Tyr Leu Val Ala Trp His Gly Phe Gly Thr Gly Met His Ala Pro 50 55 60

Gly Glu Lys Gly Asn Leu Thr Ala Val Tyr Thr Val Gly His Asn Leu 65 70 75 80 lie Lys Ala His Ser Lys Val Trp His Asn Tyr Asp Lys Asn Phe Arg 85 90 95

Pro His Gin Lys Gly Trp Leu Ser He Thr Leu Gly Ser His Trp lie 100 105 110

Glu Pro Asn Arg Thr Asp Asn Met Glu Asp Val He Asn Cys Gin His 115 120 125

Ser Met Ser Ser Val Leu Gly Trp Phe Ala Asn Pro He His Gly Asp 130 135 140

Gly Asp Tyr Pro Glu Phe Met Lys Thr Gly Ala Met lie Pro Glu Phe 145 150 155 160

Ser Glu Ala Glu Lys Glu Glu Val Arg Gly Thr Ala Asp Phe Phe Ala 165 170 175

Phe Ser Phe Gly Pro Asn Asn Phe Arg Pro Ser Asn Thr Val Val Lys 180 185 190

Met Gly Gin Asn Val Ser Leu Asn Leu Arg Gin Val Leu Asn Trp lie 195 200 205

Lys Leu Glu Tyr Asp Asp Pro Gin lie Leu lie Ser Glu Asn Gly 210 215 220 <210> 475 <211> 205 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 475

Ser His Trp lie Glu Pro Asn Arg Thr Asp Asn Met Glu Asp Val He 1 5 10 15

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He His Gly Asp Gly Asp Tyr Pro Glu Phe Met Lys Thr Gly Ala Met 35 40 45

He Pro Glu Phe Ser Glu Ala Glu Lys Glu Glu Val Arg Gly Thr Ala 50 55 60

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Leu Asn Trp He Lys Leu Glu Tyr Asp Asp Pro Gin He Leu He Ser 100 105 110

Glu Asn Gly Trp Phe Thr Asp Ser Tyr He Lys Thr Glu Asp Thr Thr 115 120 125

Ala He Tyr Met Met Lys Asn Phe Leu Asn Gin Val Leu Gin Ala lie 130 135 140

Lys Phe Asp Glu He Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Thr Leu Leu 145 150 155 160

Asp Gly Phe Glu Trp Gin Asp Ala Tyr Thr Thr Arg Arg Gly Leu Phe 165 170 175

Tyr Val Asp Phe Asn Ser Glu Gin Lys Glu Arg Lys Pro Lys Ser Ser 180 185 190

Ala His Tyr Tyr Lys Gin He He Gin Asp Asn Gly Phe 195 200 205 <210> 476 <211> 104 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 476

Gly Trp Phe Thr Asp Ser Tyr He Lys Thr Glu Asp Thr Thr Ala He 15 10 15

Tyr Met Met Lys Asn Phe Leu Asn Gin Val Leu Gin Ala He Lys Phe 20 25 30

Asp Glu He Arg Val Phe Gly Tyr Thr Ala Trp Thr Leu Leu Asp Gly 35 40 45

Phe Glu Trp Gin ASp Ala Tyr Thr Thr Arg Arg Gly Leu Phe Tyr Val 50 55 60

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Tyr Tyr Lys Gin lie lie Gin Asp Asn Gly Phe Pro Leu Lys Glu Ser 85 90 95

Thr Pro Asp Met Lys Gly Arg Phe 100 <210> 477 <211> 126 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 477

Pro Leu Lys Glu Ser Thr Pro Asp Met Lys Gly Arg Phe Pro Cys Asp 15 10 15

Phe Ser Trp Gly Val Thr Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu Phe Thr Val 20 25 30

Ser Ser Pro Gin Phe Thr Asp Pro His Leu Tyr Val Trp Asn Val Thr 35 40 45

Gly Asn Arg Leu Leu Tyr Arg Val Glu Gly Val Arg Leu Lys Thr Arg 50 55 60

Pro Ser Gin Cys Thr Asp Tyr Val Ser lie Lys Lys Arg Val Glu Met 65 70 75 80

Leu Ala Lys Met Lys Val Thr His Tyr Gin Phe Ala Leu Asp Trp Thr 85 90 95

Ser lie Leu Pro Thr Gly Asn Leu Ser Lys Val Asn Arg Gin Val Leu 100 105 110

Arg Tyr Tyr Arg Cys Val Val Ser Glu Gly Leu Lys Leu Gly 115 120 125 <210> 478 <211> 216 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 478

Pro Cys Asp Phe Ser Trp Gly Val Thr Glu Ser Val Leu Lys Pro Glu 15 10 15

Phe Thr Val Ser Ser Pro Gin Phe Thr Asp Pro His Leu Tyr Val Trp 20 25 30

Asn Val Thr Gly Asn Arg Leu Leu Tyr Arg Val Glu Gly Val Arg Leu 35 40 45

Lys Thr Arg Pro Ser Gin Cys Thr Asp Tyr Val Ser lie Lys Lys Arg 50 55 60

Val Glu Met Leu Ala Lys Met Lys Val Thr His Tyr Gin Phe Ala Leu 65 70 75 80

Asp Trp Thr Ser lie Leu Pro Thr Gly Asn Leu Ser Lys Val Asn Arg 85 90 95

Gin Val Leu Arg Tyr Tyr Arg Cys Val Val Ser Glu Gly Leu Lys Leu 100 105 110

Gly Val Phe Pro Met Val Thr Leu Tyr His Pro Thr His Ser His Leu 115 120 125

Gly Leu Pro Leu Pro Leu Leu Ser Ser Gly Gly Trp Leu Asn Met Asn 130 135 140

Thr Ala Lys Ala Phe Gin Asp Tyr Ala Glu Leu Cys Phe Arg Glu Leu 145 150 155 160

Gly Asp Leu Val Lys Leu Trp lie Thr lie Asn Glu Pro Asn Arg Leu 165 170 175

Ser Asp Met Tyr Asn Arg Thr Ser Asn Asp Thr Tyr Arg Ala Ala His 180 185 190

Asn Leu Met lie Ala His Ala Gin Val Trp His Leu Tyr Asp Arg Gin 195 200 205

Tyr Arg Pro Val Gin His Gly Ala 210 215 <210> 479 <211> 218 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 479

Gly Val Phe Pro Met Val Thr Leu Tyr His Pro Thr His Ser His Leu 15 10 15

Gly Leu Pro Leu Pro Leu Leu Ser Ser Gly Gly Trp Leu Asn Met Asn 20 25 30

Thr Ala Lys Ala Phe Gin Asp Tyr Ala Glu Leu Cys Phe Arg Glu Leu 35 40 45

Gly Asp Leu Val Lys Leu Trp lie Thr lie Asn Glu Pro Asn Arg Leu 50 55 60

Ser Asp Met Tyr Asn Arg Thr Ser Asn Asp Thr Tyr Arg Ala Ala His 65 70 75 80

Asn Leu Met lie Ala His Ala Gin Val Trp His Leu Tyr Asp Arg Gin 85 90 95

Tyr Arg Pro Val Gin His Gly Ala Val Ser Leu Ser Leu His Cys Asp 100 105 110

Trp Ala Glu Pro Ala Asn Pro Phe Val Asp Ser His Trp Lys Ala Ala 115 120 125

Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu lie Ala Trp Phe Ala Asp Pro Leu Phe 130 135 140

Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ser Val Met Lys Glu Tyr lie Ala Ser Lys 145 150 155 160

Asn Gin Arg Gly Leu Ser Ser Ser Val Leu Pro Arg Phe Thr Ala Lys 165 170 175

Glu Ser Arg Leu Val Lys Gly Thr Val Asp Phe Tyr Ala Leu Asn His 180 185 190

Phe Thr Thr Arg Phe Val lie His Lys Gin Leu Asn Thr Asn Arg Ser 195 200 205

Val Ala Asp Arg Asp Val Gin Phe Leu Gin 210 215 <210> 480 <211> 229 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 480

Ala Val Ser Leu Ser Leu His Cys Asp Trp Ala Glu Pro Ala Asn Pro 15 10 15

Phe Val Asp Ser His Trp Lys Ala Ala Glu Arg Phe Leu Gin Phe Glu 20 25 30 lie Ala Trp Phe Ala Asp Pro Leu Phe Lys Thr Gly Asp Tyr Pro Ser 35 40 45

Val Met Lys Glu Tyr lie Ala Ser Lys Asn Gin Arg Gly Leu Ser Ser 50 55 60

Ser Val Leu Pro Arg Phe Thr Ala Lys Glu Ser Arg Leu Val Lys Gly 65 70 75 80

Thr Val Asp Phe Tyr Ala Leu Asn His Phe Thr Thr Arg Phe Val lie 85 90 95

His Lys Gin Leu Asn Thr Asn Arg Ser Val Ala Asp Arg Asp Val Gin 100 105 110

Phe Leu Gin Asp lie Thr Arg Leu Ser Ser Pro Ser Arg Leu Ala Val 115 120 125

Thr Pro Trp Gly Val Arg Lys Leu Leu Ala Trp lie Arg Arg Asn Tyr 130 135 140

Arg Asp Arg Asp lie Tyr lie Thr Ala Asn Gly lie Asp Asp Leu Ala 145 150 155 160

Leu Glu Asp Asp Gin He Arg Lys Tyr Tyr Leu Glu Lys Tyr Val Gin 165 170 175

Glu Ala Leu Lys Ala Tyr Leu lie Asp Lys Val Lys lie Lys Gly Tyr 180 185 190

Tyr Ala Phe Lys Leu Thr Glu Glu Lys Ser Lys Pro Arg Phe Gly Phe 195 200 205

Leu lie Ser Ser Ser 225

Phe Thr Ser Asp Phe Arg Ala Lys Ser Ser Val Gin Phe Tyr Ser Lys 210 215 220 <210> 481 <211> 81

<212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 481

Met Lys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp lie Phe 15 10 15

Phe Ser Ser Asp Glu Arg Asn Thr Arg Ser Arg Lys Thr Met Ser Asn 20 25 30

Arg Ala Leu Gin Arg Ser Ala Val Leu Ser Ala Phe Val Leu Leu Arg 35 40 45

Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Lys Ala lie Trp Asp Lys Lys 50 55 60

Gin Tyr Val Ser Pro Val Asn Pro Ser Gin Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80

Phe <210> 482 <211> 112

<212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 482

Pro Lys Asn Phe Ser Trp Gly Val Gly Thr Gly Ala Phe Gin Val Glu 15 10 15

Gly Ser Trp Lys Thr Asp Gly Arg Gly Pro Ser lie Trp Asp Arg Tyr 20 25 30

Vai Tyr Ser His Leu Arg Gly Vai Asn Gly Thr Asp Arg Ser Thr Asp 35 40 45

Ser Tyr Ile Phe Leu Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Phe Leu Gly 50 55 60

Vai Ser Phe Tyr Gin Phe Ser Ile Ser Trp Pro Arg Leu Phe Pro Asn 65 70 75 80

Gly Thr Vai Ala Ala Vai Asn Ala Gin Gly Leu Arg Tyr Tyr Arg Ala 85 90 95

Leu Leu Asp Ser Leu Vai Leu Arg Asn lie Glu Pro lie Vai Thr Leu 100 105 110 <210> 483 <211> 19

<221> M0D_RES <222> (6)..(6) <223> Thr ou ausente <4 0 0> 483

Arg Ile Lys Ser Lys Xaa Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Vai 15 10 15

Lys Gly

Lisboa, 8 de junho de 2017

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo isolado ou o seu fragmento que é capaz de se ligar a um complexo compreendendo β-Klotho e FGFRlc e induz a sinalização mediada pelo FGF21 e compreende as seguintes CDR: a) CDRH1: SEQ ID N2 : 122; b) CDRH2: SEQ ID N2: 133; c) CDRH3: SEQ ID N2: 148; d) CDRL1: SEQ ID N2: 166; e) CDRL2: SEQ ID N2: 176; e f) CDRL3: SEQ ID N2: 188;
2. Anticorpo isolado ou o seu fragmento que é capaz de se ligar a um complexo compreendendo β-Klotho e FGFRlc e induz a sinalização mediada pelo FGF21, em que o referido anticorpo isolado ou seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N2: 50 e compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N2: 68.
3. Anticorpo isolado ou seu fragmento, de acordo com a reivindicação 2, em que o referido anticorpo isolado ou um seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N2: 50 e compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N2 : 68.
4. Anticorpo isolado ou o seu fragmento, de acordo com a reivindicação 3, em que o referido anticorpo isolado ou o seu fragmento compreende a SEQ ID Ns: 50 e a SEQ ID N2 : 68.
5. Anticorpo isolado ou o seu fragmento que é capaz de se ligar a um complexo compreendendo β-Klotho e FGFRlc e induz a sinalização mediada pelo FGF21, em que o referido anticorpo isolado ou o seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N2: 14 e compreende uma sequência de aminoácidos 90% idêntica à SEQ ID N2: 32 .
6. Anticorpo isolado ou o seu fragmento, de acordo com a reivindicação 5, em que o referido anticorpo isolado ou o seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N2: 14 e compreende uma sequência de aminoácidos 95% idêntica à SEQ ID N2: 32.
7. Anticorpo isolado ou o seu fragmento, de acordo com a reivindicação 6, em que o referido anticorpo isolado ou o seu fragmento compreende uma sequência de aminoácidos 98% idêntica à SEQ ID N2: 14 e compreende uma sequência de aminoácidos 98% idêntica à SEQ ID N2: 32.
8. Anticorpo isolado ou o seu fragmento, de acordo com a reivindicação 1, em que o referido anticorpo ou o seu fragmento compreende a SEQ ID N2: 14 e a SEQ ID N2: 32
9. Composição farmacêutica compreendendo o anticorpo isolado ou o seu fragmento, de qualquer reivindicação anterior, em mistura com um seu veiculo farmaceuticamente aceitável.