JP2003516731A

JP2003516731A - ヒトｆｇｆ−２１遺伝子および遺伝子発現産物

Info

Publication number: JP2003516731A
Application number: JP2001538519A
Authority: JP
Inventors: 信行伊藤; ダブリュー．マイケルカバナウ，
Original assignee: カイロンコーポレイション; 京都大学長
Priority date: 1999-11-18
Filing date: 2000-11-16
Publication date: 2003-05-20
Also published as: EP1232264B1; ES2335386T3; DE60043197D1; CA2392103A1; PT1232264E; AU1922101A; ATE446365T1; WO2001036640A2; EP1232264A2; EP2163626A1; WO2001036640A3

Abstract

(57)【要約】この発明は、ヒト線維芽細胞増殖因子（ｈＦＧＦ−２１）、ならびにその改変体およびＦＧＦ−２１をコードするポリヌクレオチドに関する。本発明はまた、プローブおよび抗体を含む、ポリヌクレオチドおよびタンパク質に関連した診断剤および治療剤、ならびに肝硬変および癌のような肝臓疾患を処置する方法、胸腺機能に関連する状態を処置する方法、および精巣の状態を処置する方法に関する。本発明はまた、マウス線維芽細胞増殖因子（ｍＦＧＦ−２１）、ならびにその改変体およびｍＦＧＦ−２１をコードするポリヌクレオチドに関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーのメンバーをコードする
核酸配列、およびこの核酸配列によってコードされるポリペプチドに関する。

【０００２】（発明の背景）原型の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ−１およびＦＧＦ−２を線維芽
細胞についての分裂促進因子として脳および下垂体から本来単離した。しかし、
ＦＧＦ−１およびＦＧＦ−２は、発育組織および成体組織において広範に発現さ
れ、そして、新脈管形成、有糸分裂誘発、細胞分化および組織損傷の修復を含む
複数の生物学的活性を有するポリペプチドである（Ｂａｉｒｄ，Ａ．ら、Ｃａｎ
ｃｅｒＣｅｌｌｓ３：２３９−２４３（１９９１）；Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｗ．
Ｈ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５８：５７５−６０６（１９８９
））。公開された文献によると、ＦＧＦファミリーは、現在少なくとも１９のメ
ンバー（ＦＧＦ−１〜ＦＧＦ−１９）からなる。ＦＧＦ−３は、マウス乳房腫瘍
ウイルスによる活性化の共通の標的であることが同定された（Ｄｉｃｋｓｏｎら
、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：１８−２６（１９９１））；Ｆ
ＧＦ−４〜ＦＧＦ−６は、オンコジーン産物として同定された（Ｙｏｓｈｉｄａ
ら、Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：２７−３７（１９９１）；Ｇｏ
ｌｄｆａｒｂら、Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ６３８：３８−５２（１９
９１）；Ｃｏｕｌｉｅｒら、Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：５３−
６１（１９９１））。ＦＧＦ−１０は、相同性ベースのポリメラーゼ連鎖反応（
ＰＣＲ）によってラット肺から同定された（Ｙａｍａｓａｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７１：１５９１８−１５９２１（１９９６））。ＦＧＦ−１１〜
ＦＧＦ−１４（ＦＧＦ相同性因子（ＦＨＦ）１〜４）をランダムｃＤＮＡ配列決
定、データベース検索および相同性ベースのＰＣＲの組み合わせによって、ヒト
網膜から同定した（Ｓｍａｌｗｏｏｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ９３：９８５０−９８５７（１９９６））。ＦＧＦ−１５は、キメ
ラホメオドメイン腫瘍性タンパク質の下流標的として同定された（ＭｃＷｈｉｒ
ｔｅｒら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２４：３２２１−３２３２（１９９７）
）。ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−１７、およびＦＧＦ−１８は、それぞれ、相同性ベ
ースのＰＣＲによって、ラット心臓および胚から同定された（Ｍｉｙａｋｅら、
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４３：１４８−１
５２（１９９８）；Ｈｏｓｈｉｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４４：１８７−１９１（１９９８）；Ｏｈｂａｙａｓ
ｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：１８１６１−１８１６４（１９９８
））。最近、ＦＧＦ−１９が、データベース検索によってヒト胎児脳から同定さ
れた（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１
４４４：１４８−１５１（１９９９））。これらは、約３０〜６０％のアミノ酸
同一性を有する保存された約１２０アミノ酸残基コアを有する。これらのＦＧＦ
はまた、発育組織および成体組織の両方において重要な役割を果たしているよう
である。従って、当該分野で既知のＦＧＦと異なる機能および活性を有するさら
なるＦＧＦ分子、そしてヒト疾患に関与する組織において特異的に発現されるＦ
ＧＦ分子についての必要性が存在する。

【０００３】（発明の要旨）本発明は、以下からなる群から選択される単離されたポリヌクレオチドを含む
組成物を提供する：（ａ）配列番号１または３に記載の少なくとも８個連続したヌクレオチドを含
むポリヌクレオチド；（ｂ）（ａ）に記載のポリヌクレオチドに少なくとも８０％の相同性を有する
ポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号１または３に記載の配列を有するポリヌクレオチドによって発
現されるタンパク質をコードするポリヌクレオチド。

【０００４】本発明は、診断プローブまたはプライマーとして、単離されたポリヌクレオチ
ドまたはそのフラグメントの使用をさらに提供する。

【０００５】本発明はまた、ポリペプチドを含む組成物を提供し、ここで、前記ポリペプチ
ドは、以下からなる群から選択される：（ａ）配列番号１または３によってコードされる少なくとも６個連続したアミ
ノ酸を含むポリペプチド；（ｂ）配列番号１または３を含むポリヌクレオチドによってコードされたポリ
ペプチド；および（ｃ）配列番号２または４に記載のポリペプチド改変体。

【０００６】本発明の特定の好ましい実施形態において、ポリヌクレオチドは、発現制御配
列に作動可能に連結されている。本発明は、ポリヌクレオチド配列で形質転換さ
れた、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞および哺乳動物細胞を含む宿主細胞をさら
に提供する。本発明はまた、配列番号１または３に対応する全長ｃＤＮＡおよび
全長ポリヌクレオチドを提供する。

【０００７】本発明のタンパク質およびポリペプチド組成物は、薬学的に受容可能なキャリ
アをさらに含み得る。このようなタンパク質またはポリペプチドと特異的に反応
する抗体を含む組成物もまた、本発明によって提供される。

【０００８】本発明はまた、前駆細胞または子孫において発現されるまれな分子の単離のた
めのｃＤＮＡライブラリーの作成のために使用される細胞の大量の（さもなけれ
ば少量の）細胞集団の生成を提供する；処置によって産生された細胞は、増殖因
子または他の分子を直接発現し得、そして培養上清を新規の活性についてのアッ
セイでスクリーニングした。

【０００９】本発明は、哺乳動物幹細胞の単離、自己再生および生存、ならびにそれらの子
孫の分化をさらに提供する。

【００１０】本発明はまた、肝硬変、肝炎、および手術後および手術中の組織変性を含むが
これらに限定されない疾患状態における、肝細胞の変性を防止もしくは遅らせる
かまたは肝細胞の数を増加する組成物および方法；不妊症および不能のような疾
患状態における精巣中の細胞の変性を防止もしくは遅らせるかまたは細胞の数を
増加する組成物および方法、ならびに胸腺および免疫系の疾患における胸腺の細
胞変性を防止もしくは遅らせるかまたは細胞の数を増加する組成物および方法を
提供する。

【００１１】本発明はまた、肝臓および精巣癌、または白血病、リンパ腫あるいは他の癌の
ような疾患状態、ならびに胸腺由来の細胞の増殖障害または分化障害において有
用であるＦＧＦ−２１機能のインヒビターを同定するための組成物および方法を
提供する。

【００１２】（発明の詳細な説明）広範な種々の細胞型および組織型の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉ
ｆｅｒａｔｉｏｎ）、生存および分化を促進するためのそれらの強力な活性のた
めに、ＦＧＦは、筋骨格状態のような創傷治癒（例えば、骨折、靭帯および組織
修復、腱炎、滑液包炎など）；皮膚状態（例えば、火傷、切断、裂傷、とこずれ
、緩慢潰瘍治癒など）；組織保護、修復、および心筋梗塞および虚血の間の新脈
管形成の誘導、神経学的状態（例えば、神経変性疾患および発作）の処置、黄斑
変性症を含む眼疾患の処置、を含む多数の異なった徴候についての治療剤として
追求され続ける。

【００１３】現在までに同定された線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）タンパク質は、種々の細
胞型の増殖および分化を制御するシグナル分子のファミリーに属する。ヒト生理
学および病理学に対するＦＧＦタンパク質の重要性は、胚形成、血管発達および
増殖および骨増殖におけるそれらの重要な役割に部分的に関する。インビトロ実
験において、内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞、ならびに心筋細胞骨格筋
細胞の細胞増殖および分裂を調節する際のＦＧＦの役割を実証してきた。ＦＧＦ
ファミリーの他のメンバーおよびそれらの生物学的役割は、Ｃｒｏｓｓｌｅｙら
、Ｄｅｖｅｏｐｍｅｎｔ１２１：４３９−４５１（１９９５）；Ｏｈｕｃｈｉ
ら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２４：２２３５−２２４４（１９９７）；Ｇｅ
ｒｍｅｌら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ３５：２５３−２５７（１９９６）；およびＧ
ｈｏｓｈら、ＣｅｌｌＧｒｏｗｔｈａｎｄＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏ
ｎ７：１４２５−１４３４（１９９６）において記載されている。

【００１４】癌細胞増殖における役割のために、ＦＧＦタンパク質はまた、ヒト健康および
疾患に対して重要である。例えば、ＦＧＦ−８は、乳癌細胞および前立腺癌細胞
におけるアンドロゲン誘導増殖因子として同定された（Ｔａｎａｋａら、ＦＥＢ
ＳＬｅｔｔ．３６３：２２６−２３０（１９９５）およびＰ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８
９：８９２８８−８９３２（１９９２））。

【００１５】通常の発達におけるＦＧＦの役割は、ＦＧＦレセプターの研究を介して部分的
に解明されている。Ｗｉｌｌｋｅ，Ｔ．ら、Ｄｅｖ．Ｄｙｎａｍ．２１０：４１
−５２（１９９７）は、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、およびＦＧＦＲ３転写物が、
ニワトリにおける胚発生の間、頭の特定の領域に局在化することを検出した。こ
の発現パターンは、クルゾン症候群（異常な膜内骨形成の状態）におけるヒトＦ
ＧＦＲ変異によって影響される領域と相関していた。Ｂｅｌｌｕａｒｄｏ，Ｎ．
ら、Ｊｏｕｒ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒ．３７９：２２６−２４６（１９９７）は、
ラット脳におけるＦＧＦＲ１、２、および３ｍＲＮＡの局在化を研究し、そし
て、いくつかの能領域における細胞特異性を見出した。さらに、ＦＧＦＲ１およ
びＦＧＦＲ２ｍＲＮＡは、脳損傷後の大グリア反応細胞において発現され、脳
疾患および損傷における特定のＦＧＦの役割を支持する。Ｏｚａｗａ，Ｋ．ら、
Ｍｏｌ．ＢｒａｉｎＲｅｓ．４１：２７９−２８８（１９９６）は、ＦＧＦ１
およびＦＧＦ−５発現が出生後に増加したが、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ
−７およびＦＧＦ−８遺伝子は、出生後段階よりも胎児段階後半におけるより高
い発現を示した。

【００１６】ＦＧＦファミリーの新しいメンバーが本明細書中に記載され、ここで、ＦＧＦ
タンパク質は、種々の組織において発現されるが、肝臓において最も大量に発現
される。本発明のマウスＦＧＦをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１に
示される配列を有する。本発明のヒトＦＧＦをコードするポリヌクレオチドは、
配列番号３に示される配列を有する。マウスポリヌクレオチドをアミノ酸配列全
体の保存された領域によって、および既知のＦＧＦタンパク質をコードするポリ
ヌクレオチドおよび遺伝子によって共有される相同性の領域によって、ＦＧＦフ
ァミリーメンバーをコードするとして同定した。

【００１７】本発明者らは、ＦＧＦ−２１が、ＦＧＦファミリーの以前に同定されていない
メンバーであると考えている。現在まで、１９を超えるヒトＦＧＦタンパク質が
同定されてきた。多数の場合において、他の哺乳動物（特に、マウスおよびラッ
ト）における相同性タンパク質がまた、同定されてきた。ヒトタンパク質は、ア
ミノ酸配列、レセプター特異性、組織発現パターン、および生物学的活性の点に
おいて、異なった程度に変化する。

【００１８】本発明のＦＧＦ−２１は、刊行物において現在までに記載されたすべてのＦＧ
Ｆタンパク質と配列において異なる。本明細書中に記載されるように、種々のＦ
ＧＦタンパク質によって果たされる役割についての知識は、増加し続けているが
、はるかに不十分である。

【００１９】本発明は、配列番号１のＦＧＦが肝臓において高度に発現され、そしてヒトＦ
ＧＦ−２１が、肝疾患の発症および肝疾患からの回復における役割を果たし得る
ことを開示することによって、この知識を加える。さらに、ＦＧＦ−２１はまた
、精巣および胸腺において発現され、従って、精巣機能または胸腺由来の細胞の
機能の障害の発生および障害からの回復における役割を果たし得る。従って、本
発明は、新しい線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−２１）の同定、単離および配列決
定に基づいている。

【００２０】（ＦＧＦ−２１をコードするマウスｃＤＮＡの単離および分析）本発明により
、新規マウスＦＧＦをコードするＤＮＡが同定された。全てのコード領域のヌク
レオチド配列が、マウス胚ｃＤＮＡをテンプレートとして使用するアダプター−
ライゲーション媒介ポリメラーゼ連鎖反応により決定された。コード領域のヌク
レオチド配列は、マウスＦＧＦ（２１０個のアミノ酸）（図４）の完全なアミノ
酸配列の解明を可能にした。このタンパク質は、仮にＦＧＦ−２１と命名された
。

【００２１】（ＦＧＦ−２１をコードするヒトｃＤＮＡの単離および分析）ＦＧＦ−２１を
コードするヒト遺伝子は、推定のヒトα−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子の
５’側隣接領域に位置される。ヒトＦＧＦ−２１の完全なコード領域をコードす
るｃＤＮＡは、以下のようなＦＧＦ特異的プライマーを使用するＰＣＲによって
胎児脳ｃＤＮＡから増幅された：センスプライマー：５’ａｇｃｃａｔｔｇａｔ
ｇｇａｃｔｃｇｇａｃ３’（配列番号５）；アンチセンスプライマー：５’ｔｇ
ｇｃｔｔｃａｇｇａａｇｃｇｔａｇｃｔ３’（配列番号６）。

【００２２】（成体マウス組織におけるＦＧＦ−２１ｍＲＮＡの発現）ＦＧＦ−２１ｍＲＮ
Ａの発現はポリメラーゼ連鎖反応により脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、肺、
胸腺、精巣、筋、皮膚、および小腸を含む成体マウスの主要な組織で調べられた
。ＦＧＦ−２１ｍＲＮＡの発現は、肝臓において高レベルで検出された（図３）
。発現は、精巣および胸腺でも見られた。マウス組織におけるＦＧＦ−２１ｍＲ
ＮＡの発現を確認するために、マウス組織（Ａ）⁺ＲＮＡは、³²Ｐ−標識化ラッ
トＦＧＦ−２１ｃＤＮＡプローブを使用してノーザンブロッド分析により調べら
れた。結果は、マウス肝臓で高いレベルの発現を確認した。発現はまた、胸腺で
も見られた；より大きな転写物が精巣組織で見られた。

【００２３】本明細書中のＦＧＦ−２１に対する参照は、本明細書中で特徴付けられ、そし
て記載されたＦＧＦ−２１と実質的に相同であり、そして生物学的に等価である
成長因子の任意の起源を誘導することが解釈されることが意図される。このよう
な実質的に相同な成長因子は、任意の組織または種に対してネイティブであり得
、そして同様に生物学的活性が、任意の多数の生物学的アッセイ系において特徴
付けられ得る。

【００２４】用語「生物学的に等価」は、本発明の組成物が、るように単離されるＦＧＦ−
２１または組換えにより生成される本発明のヒトＦＧＦ−２１とかならずしも同
じ程度までではなく、類似の様式で同じ増殖特性のいくつかまたは全てを示し得
ることを意味することが意図される。

【００２５】「実質的に相同」により、任意の種由来のＦＧＦ−２１に対するヒトＦＧＦ−
２１の相同性が、ＦＧＦ−２１とＦＧＦファミリーのメンバー間の以前に報告さ
れた相同性よりも大きいことが意味される。

【００２６】配列の同一性または同一性パーセントは、非ヒトＦＧＦ−２１との同一性パー
セントを決定する場合にはヒトＦＧＦを参照して、非ＦＧＦ−２１成長因子との
同一性パーセントを決定する場合にはＦＧＦ−２１を参照して、２つの配列をア
ラインメントする場合はＬａｓｅｒｇｅｎｅバイオコンピュータソフトウェア（
ＤＮＡＳＴＡＲ，ＩＮＣ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）における複数配列アラインメ
ントのＣｌｕｓｔａｌ方法（Ｈｉｇｇｉｎｓら，Ｃａｂｉｏｓ８：１８９−１
９１，１９９２）を用いた、２つの配列間の同じ残基の百分率を意味することが
意図される。この方法において、複数アラインメントは、進行的な様式で実施さ
れ、この様式では、ますます大きなアラインメント群が、一連の対様式のアライ
ンメントから算出した類似性スコアを用いてアセンブリされる。最適な配列アラ
インメントは、最大アラインメントスコアを見出すことにより得られる。最大ア
ラインメントスコアは、所定の進化的間隔にわたって２つの関連するタンパク質
において生じる所定のアミノ酸の変化の確率を示す、残基の重み付け表から決定
された、アラインメントにおける別個の残基間の全てのスコアの平均である。ア
ラインメントにおいてギャップを空けることおよびギャップを伸ばすことについ
てのペナルティーは、スコアに寄与する。このプログラムで用いられるデフォル
トパラメーターは、以下の通りである：複数アラインメントについてのギャップ
ペナルティー＝１０；複数アラインメントについてのギャップの長さのペナルテ
ィー＝１０；対様式でのアラインメントにおけるｋ−タプル値＝１；対様式での
アラインメントにおけるギャップペナルティー＝３；対様式のアラインメントに
おけるウィンドウ値＝５；対様式のアラインメントにおいて保存されるダイアゴ
ナル＝５。アラインメントプログラムのために用いられる残基の重み付け表は、
ＰＡＭ２５０（Ｄａｙｈｏｆｆら，ＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑ
ｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆｆ編，ＮＤＲＦ，Ｗａ
ｓｈｉｎｇｔｏｎ，第５巻，別冊３，３４５頁，１９７８）である。

【００２７】保存パーセントは、２つの残基が保存的置換（ＰＡＭ２５０残基の重み付け表
において０．３以上の対数オッズ値を有すると定義される）を示す位置の百分率
に対して同一性残基の百分率を足すことによって、上記のアラインメントから算
出される。保存は、非ヒトＦＧＦ−２１との保存パーセントを決定する場合はヒ
トＦＧＦ−２１に対して参照され、非ＦＧＦ−２１増殖因子との保存パーセント
を決定する場合はＦＧＦ−２１に対して参照される。この必要条件を満たす保存
的アミノ酸変化は、以下の通りである：Ｒ−Ｋ；Ｅ−Ｄ、Ｙ−Ｆ、Ｌ−Ｍ；Ｖ−
Ｉ、Ｑ−Ｈ。

【００２８】本発明は、１以上の反応性アミノ酸側鎖と共有結合した１以上のポリマーを含
むＦＧＦ−２１タンパク質またはこれらの変異体を提供する。方法の例として、
これらのポリマーとして、１以上の遊離のシステインスルフヒドリル残基に結合
され得るポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられ（限定ではない）、これ
により、ジスルフィド結合およびタンパク質が酸化条件に曝露された場合の凝集
の形成をブロックする。さらに、ＦＧＦ−２１タンパク質および／またはムテイ
ンのぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）は、半減期、溶解性、およびプロテアーゼ
耐性を増加するような改善された特性を提供することが期待される。あるいは、
ＦＧＦ−２１タンパク質および／またはムテインは、遊離アミノ基（例えば、リ
ジンεまたはＮ末端アミノ基）へのポリマーの共有結合性の付加により改変され
得る。共有結合性の改変のための好ましいシステインおよびリジンは、レセプタ
ーもしくはヘパリン結合中に含まれないものまたは適正なタンパク質の折り畳み
中に含まれないものである。例えば、ｃｙｓ２７およびｃｙｓ１０４は、改変さ
れ得る。ＦＧＦ−２１の生化学的および／または生物学的活性をアッセイするた
めの方法が、特定のアミノ酸残基の改変が、所望されるタンパク質の活性を生じ
るか否かを決定するために使用され得ることは、当業者に明らかである。

【００２９】１以上のプロテアーゼ切断部位を改変することによるＦＧＦ−２１の安定性を
改善することは有益であり得る。従って、本発明は、ＦＧＦ−２１改変体を提供
し、このＦＧＦ−２１改変体において、１以上のプロテアーゼ切断部位が（例え
ば、切断部位での１以上のアミノ酸の置換により）改善された安定性を有するＦ
ＧＦ−２１改変体を作製するために変更された。このような改善されたタンパク
質の安定性は、タンパク質生成物および／または治療的使用の間で有益であり得
る。好ましい部位は、プロリンの２つの残基（例えば、配列番号４の近接の残基
１６０）内の一塩基部位である。

【００３０】改変のための適切なプロテアーゼ切断部位は、当該分野で周知であり、そして
企図される特定の用途によって変化するようである。例えば、代表的な置換は、
リジンまたはアルギニンと他のアミノ酸（例えば、アラニン）との置換を含む。
活性の喪失（例えば、レセプター結合またはヘパリン結合）は、本明細書中で記
載されるように試験され得る。

【００３１】ＦＧＦ−２１はまた、ハイブリッド形態または改変形態が、ＦＧＦ−２１の生
物学的活性を保持する限り、以下を含むＦＧＦ−２１のハイブリッド形態および
ＦＧＦ−２１改変形態を含む：融合タンパク質；ＦＧＦ−２１フラグメント；特
定のアミノ酸が欠失または置換されたハイブリッド形態および改変形態；１以上
のアミノ酸が改変アミノ酸または異常アミノ酸に変更されたような改変；グリコ
シル化のような改変。融合タンパク質は、本発明のＦＧＦ−２１またはこれらの
フラグメントおよびタンパク質生成物の分泌を促進するための非相同性タンパク
質のシグナル配列から構成され得る。

【００３２】ＦＧＦ−２１を含む融合タンパク質または生物学的に活性なこれらのフラグメ
ントもしくはこれらの免疫原フラグメントは、当該分野で公知の方法を使用して
生成され得る。このような融合タンパク質は、治療的に使用され得、または単離
手順および精製手順を単純化するために生成され得る。ヒスチジン残基は、固定
化金属アフィニティークロマトグラフィー精製を可能にするために組込まれ得る
。残基ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬは、ｍｙｃモノクローナル抗体により認識される免
疫原性決定基を含み得、そしてｍｙｃモノクローナル抗体に基いたアフィニティ
ー精製を可能にするために組込まれ得る。トロンビン切断部位は、選択された部
位で分子の切断を可能にするために組込まれ得る；好ましいトロンビン切断部位
は、残基ＬＶＰＲＧから構成される。分子の精製は、配列（例えば、残基ＳＡＷ
ＲＨＰＱＦＧＧ、これは、常磁性ストレプトアビジンビーズに結合する）を組込
むことにより容易にされ得る。このような実施形態は、参照として援用されるＷ
Ｏ９７／２５３４５に記載される。

【００３３】本発明はさらに、ＦＧＦ−２１とケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）間のキメ
ラ分子を含む（Ｒｅｉｃｈ−Ｓｌｏｔｋｙ，Ｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
７０：２９８１３〜２９８１８（１９９５））。このキメラ分子は、ＦＧＦ−２
１およびＫＧＦ分子の１つまたは両方の特異的領域またはフラグメント（例えば
、以下に記載されるＦＧＦ−２１フラグメント）を含み得る。

【００３４】本発明はまた、ＦＧＦ−２１のフラグメントを含む。配列番号４および２の好
ましいフラグメントとしてそれぞれ：約１〜約２０９のアミノ酸（配列番号２に
ついては２１０）；約２〜２０９のアミノ酸（配列番号２については２１０）；
約１〜約１７７のアミノ酸；配列番号２について約４０〜約１７７のアミノ酸が
挙げられる。このようなフラグメントは、標準的な生化学的方法、またはフラグ
メントをコードするポリヌクレオチドを発現することによりタンパク質から調製
され得る。

【００３５】ＦＧＦ−２１、またはこれらのフラグメントは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ
）またはこれらの一部を含む融合タンパク質として生成され得る。このような融
合構築物は、ＦＧＦ−２１、またはこれらのフラグメントの真核生物宿主細胞に
おける発現を増強するのに適している。模範的なＨＳＡ部分として、本明細書中
に参考として援用される米国特許第５，７６６，８８３号、および開示ＷＯ９
７／２４４４５に開示されるＮ末端ポリペプチド（アミノ酸１〜３６９、１〜４
１９、およびアミノ酸１で始まる中間の長さ）が挙げられる。他のキメラポリペ
プチドとして、ＨＳＡのＣ末端およびＮ末端のそれぞれに結合されるＦＧＦ−２
１またはこれらのフラグメントを有するＨＳＡタンパク質が挙げられる。このよ
うなＨＳＡ構築物は、本明細書中で参考として援用される米国特許番号５，８７
６，９６９に開示される。

【００３６】ネイティブなＦＧＦ−２１と異なるＦＧＦ−２１分子はまた、生物学的活性部
位における変更の効力により本発明の範囲に含まれる。

【００３７】増殖因子は、特定のレセプターで作用すると考えられる。本発明によると、Ｆ
ＧＦ−２１および増殖因子のこのファミリーのまだ未知のメンバーが、他の増殖
因子について示された明確な区分を有する特定のレセプターを介して作用する。

【００３８】本発明の好ましいｈＦＧＦ−２１が、同定された。組換えＤＮＡ技術により調
製されたｈＦＧＦ−２１はまた好ましい。配列番号１または配列番号３に対して
８０％の相同性；好ましくは少なくとも８５％の相同性、より好ましくは少なく
とも９０％の相同性、最も好ましくは９５％の相同性を有するＤＮＡおよびＲＮ
Ａを含むポリヌクレオチドが、本発明の範囲内に含まれる。配列番号１または３
に対して９６％、９７％、９８％、および９９％の相同性を有するポリヌクレオ
チドもまた含まれる。相同性パーセントは、当該分野において公知の方法を使用
して計算される。このような方法の例（限定ではない）は、１２のギャップオー
プンペナルティおよび１のギャップエクステンションペナルティとともにアフィ
ンギャップサーチ（ａｆｆｉｎｅｇａｐｓｅａｒｃｈ）を用いてＭＰＳＲＣ
Ｈプログラムを実行するようなＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴ
リズムである。

【００３９】ＦＧＦ−２１はまた、ハイブリッド形態または改変形態が、ＦＧＦ−２１の生
物学的活性を保持する限り、以下を含むＦＧＦ−２１のハイブリッド形態および
ＦＧＦ−２１改変形態を含む：融合タンパク質；ＦＧＦ−２１フラグメント；特
定のアミノ酸が欠失または置換されたハイブリッド形態および改変形態；１以上
のアミノ酸が改変アミノ酸または異常アミノ酸に変更されたような改変；グリコ
シル化のような改変。生物学的活性を保持することにより、応答性の細胞の増殖
、生存または分化を促進するＦＧＦ−２１の能力が、保存されることを意味する
が、本明細書中に記載される単離されたＦＧＦ−２１または組換えで生成された
ＦＧＦ−２１の能力と同じレベルである必要性はない。

【００４０】抗体と本明細書中に記載されたＦＧＦ−２１またはゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡま
たはｃＤＮＡを含むヌクレオチド配列との相互反応性の効力によって単離され得
る任意のＦＧＦ−２１が、ゲノムヌクレオチド配列またはサブゲノムヌクレオチ
ド配列または本明細書中のＦＧＦ−２１のｃＤＮＡまたはこれらのフラグメント
の相補的配列とのハイブリダイゼーションによって単離され得ることはまた、実
質的に相同であるという意味の中に含まれる。変性ＤＮＡ配列が、ヒトＦＧＦ−
２１をコードし得、変性ＤＮＡ配列はヒトＦＧＦ−２１をコードし得、そしてこ
れらはまた、ＦＧＦ−２１の対立遺伝子変異体であるとして本発明内に含まれる
ことが意図される。

【００４１】組換えヒトＦＧＦ−２１は、ＦＧＦ−２１をコードするＤＮＡ配列を適切な形
質転換宿主細胞において発現することにより生成され得る。当該分野で周知の方
法を使用して、ＦＧＦ−２１をコードするＤＮＤは、発現ベクターに連結され得
、宿主細胞に形質転換され、そして形質転換細胞によりＦＧＦ−２１の発現に適
切な条件が確立された。

【００４２】ＦＧＦ−２１をコードするＤＮＡは、宿主細胞の好ましいコドンの使用の利益
を受けることにより設計され得る。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏ
ｓａにおけるコドンの使用は、例えば、Ｗｅｓｔら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ
Ｒｅｓ．１１：９３２３〜９３３５（１９８８）に記載される。Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおけるコドンの使用は、例えば、Ｌｌ
ｏｙｄら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２０：５２８９〜５２９５（
１９９２）に記載される。コリネバクテリアの好ましいコドンおよびＥ．ｃｏｌ
ｉの好ましいコドンとの比較は、Ｍａｌｕｂｒｅｓら、Ｇｅｎｅ１３４：１５
〜２４（１９９３）に提供される。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓ
ｔｅｒにおけるコドンの使用は、例えば、Ａｋａｓｈｉ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１
３６：９２７〜９３５（１９９４）に記載される。酵母におけるコドンの使用は
また、図７に示され、ショウジョウバエにおけるコドンの使用は、図８に示され
、そしてＥ．ｃｏｌｉについてのコドンの使用は、図９に示される。

【００４３】任意の適切な発現ベクター（例えば、昆虫細胞で使用するための発現ベクター
）を使用して、組換えヒトＦＧＦ−２１を産生し得る。バキュロウイルウ発現系
もまた使用され得る。好ましい方法は、バキュロウイルスベクターを使用する昆
虫細胞（例えば、Ｔｒ５細胞またはＳｆ９細胞）での発現である。

【００４４】本発明は、ヒトＦＧＦ−２１をコードする配列を含む核酸配列を含む。ＦＧＦ
−２１をコードする核酸配列のように実質的に同一である配列はまた、本発明の
範囲内に含まれる。このような実質的に同じの配列は、例えば、周知の手順およ
び標準的な手順により所定の宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）においてより容
易に発現されるコドンで置換され得る。このような改変された核酸配列は、本発
明の範囲内に含まれる。

【００４５】特定の核酸配列は、当業者により改変され得、従って、ＦＧＦ−２１のアミノ
酸配列をコードする全ての核酸配列は、同様にこのように改変され得る。従って
、本発明はまた、適切な場合には、このような核酸、または核酸配列の相補体す
べてとハイブリダイズし、ＦＧＦ−２１の細胞生存、細胞増殖、または細胞分化
活性を有するポリペプチドをコードする核酸を含む。本発明はまた、細胞の生存
を促進する活性を有すポリペプチドをコードし、そしてＦＧＦ−２１に結合する
抗体により認識される核酸配列を含む。抗体を惹起するための好ましい方法およ
びエピトープは、実施例４に記載される。

【００４６】本発明はまた、本発明の範囲内に含まれる任意の核酸配列に作動可能に連結さ
れた発現調節エレメントを含むベクターを包含する。本発明はまた、本発明の範
囲内に含まれる任意の核酸配列に作動可能に連結された発現調節エレメントを含
むベクターで形質転換された（任意の種類の）宿主細胞を含む。

【００４７】ＦＧＦ−２１を生成するための方法もまた本明細書中で提供される。調製は、
細胞型がＦＧＦ−２１を生成する限り、種々の細胞型からの馴化培地からの単離
により行われ得る。第２の、そして好ましい方法は、ＦＧＦ−２１をコードする
核酸配列を単離または獲得し、この配列を適切なベクターおよび適切な細胞型に
適切な調節配列とともに配列をクローニングし、そしてＦＧＦ−２１を生成する
ための配列を発現することによる組換え方法の利用を含む。

【００４８】ＦＧＦ−２１は、肝臓における高い発現レベルに基いて記載されてきたが、こ
の因子は、他の細胞型でも作用し得る。ＦＧＦ−２１は、非肝臓細胞で作用し、
これらの生存状態、増殖状態、分化状態または機能を促進するようである。この
予測は、公知の増殖因子の活性に基く。ＦＧＦファミリーのメンバーは、これら
の発現が、１つのまたはわずかな組織に限られる場合でさえ、異なる機能および
発生学的起源の多くの細胞型に作用する。

【００４９】発明者は、本明細書中で、ＦＧＦ−２１が肝臓で高いレベルで発現されること
を同定した。これは、例えば、前癌性病変、ヘパトーム、肝硬変、炎症性疾患か
らの回復、外傷または他の型の傷害、および他の肝臓疾患におけるＦＧＦ−２１
の役割を示唆する。さらに、ＦＧＦ−２１はまた、胸腺および精巣で発現される
。これは、例えば、不妊症、テストステロン産生の制御、精巣または関連する細
胞の癌、および他の精巣の障害、ならびに細胞（例えば、胸腺由来の免疫細胞）
の障害、例えば、自己免疫障害、白血病およびリンパ腫、免疫不全状態などにお
けるＦＧ２１の役割を示唆する。

【００５０】本発明はまた、肝臓疾患、精巣疾患、または胸腺疾患を有する患者を処置する
ためのＦＧＦ−２１の有効量を含む治療的組成物または薬学的組成物、およびＦ
ＧＦ−２１の治療的有効量を投与する工程を包含する方法を含む。これらの組成
物および方法は、多くの疾患を処置するために有用であり得る。本明細書中の組
成物および方法はまた、変性を予防し、そして／または他の非肝臓組織において
も生存を促進する（例えば、血管新生、神経細胞の生存、創傷治癒などを促進す
る）ために有用であり得る。当業者は、ＦＧＦ−２１が、特定の細胞型の生存ま
たは機能を促進することにおいて有用であるか否かを決定するための当該分野で
公知の種々のアッセイを容易に使用し得る。神経細胞の生存の促進は、神経系の
疾患および状態（パーキンソン病、アルツハイマー病、神経への外傷性傷害、お
よび神経系の変性疾患を含む）の処置において有用である。

【００５１】特定の環境では、ＦＧＦ−２１の発現量を調節または減少することが所望され
得る。従って、本発明の別の局面にでは、ＦＧＦ−２１アンチセンスオリゴヌク
レオチドが作製され得、そして細胞によるＦＧＦ−２１発現のレベルを減少する
ために、１以上のＦＧＦ−２１アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程
を包含する方法が利用され得る。ＦＧＦ−２１アンチセンスオリゴヌクレオチド
により、塩基対合を介して、ＦＧＦ−２１の発現に関与する特異的な相補的核酸
配列と相互作用し、その結果、ＦＧＦ−２１の発現が減少する、ヌクレオチド配
列を有するオリゴヌクレオチドが参照される。好ましくは、ＦＧＦ−２１の発現
に関与する特異的核酸配列は、ＦＧＦ−２１をコードする、ゲノムＤＮＡ分子ま
たはｍＲＮＡ分子である。このゲノムＤＮＡ分子は、ＦＧＦ−２１遺伝子の調節
領域、または成熟ＦＧＦ−２１タンパク質についてのコード配列を含み得る。Ｆ
ＧＦ−２１アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびそのための方法の状況におい
て、用語、ヌクレオチド配列に対して相補的は、細胞において、すなわち、生理
学的条件下で、その配列へのハイブリダイゼーションを可能にするに十分に、こ
のような配列に対して相補的であることを意味する。ＦＧＦ−２１アンチセンス
オリゴヌクレオチドは、好ましくは、約８〜約１００のヌクレオチドを含む配列
を含み、より好ましくはＦＧＦ−２１アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１
５〜約３０のヌクレオチドを含む。ＦＧＦ９８アンチセンスオリゴヌクレオチド
はまた、核酸分解（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）への耐
性を付与する種々の改変（例えば、改変されたヌクレオシド間結合（参考として
援用される、ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ，ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｖｉ
ｅｗｓ９０：５４３−５４８１９９０；ＳｃｈｎｅｉｄｅｒおよびＢａｎｎ
ｅｒ，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．３１：３３５，１９９０）、改変さ
れた核酸塩基、および／または糖など）を含み得る。

【００５２】本発明の治療的または薬学的組成物は、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、経皮
、髄腔内、または大脳内を含む、当該分野で公知の任意の適切な経路によって投
与され得る。投与は、注射によるように迅速であるか、またはゆっくりとした注
入または徐放処方物の投与によるようにある期間にわたってかのいずれかであり
得る。

【００５３】ＦＧＦ−２１はまた、所望の薬学的または薬力学的特性を提供する薬剤と連結
または結合体化され得る。例えば、ＦＧＦ−２１は、血液脳関門を横切る透過ま
たは輸送を促進する、当該分野で公知の任意の物質（例えば、トランスフェリン
レセプターに対する抗体）にカップリングされ得、そして静脈内注射によって投
与され得る（例えば、参考として援用される、Ｆｒｉｄｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５９：３７３−３７７，１９９３を参照のこと）。さらに、ＦＧＦ−２１は
、ポリエチレングリコールのようなポリマーに安定に連結されて、溶解度、安定
性、半減期、および他の薬学的に有利な特性という所望の特性を獲得し得る（例
えば、参考として援用される、Ｄａｖｉｓら，ＥｎｚｙｍｅＥｎｇ．４：１６
９−７３，１９７８；Ｂｕｒｎｈａｍ，Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．５１
：２１０−２１８，１９９４を参照のこと）。

【００５４】組成物は、通常、薬学的調製物の形態で用いられる。このような調製物は、製
薬の分野で周知の様式で作製される。１つの好ましい調製物は、生理学的食塩水
溶液であるビヒクルを利用するが、他の薬学的に受容可能なキャリア（例えば、
生理学的濃度の他の非毒性塩、５％グルコース水溶液、滅菌水など）もまた使用
され得る。適切な緩衝液が組成物中に存在することもまた所望され得る。このよ
うな溶液は、所望であれば、凍結乾燥され、そして迅速な注射のために滅菌水の
添加により再構成されるように用意された滅菌アンプル中で保存され得る。一次
溶媒は、水性、あるいは非水性であり得る。ＦＧＦ−２１はまた、処置を必要と
する組織中に移植され得る、固体または半固体の生物学的に適合性のマトリック
ス中に取り込まれ得る。

【００５５】キャリアはまた、ｐＨ、容量オスモル濃度、粘度、清澄性、色、滅菌度、安定
性、溶解速度、または処方物の臭いを変更または維持するための他の薬学的に受
容可能な賦形剤を含み得る。同様に、キャリアは、血液脳関門を横切る、放出、
または吸収または透過を変更または維持するための、なお他の薬学的に受容可能
な賦形剤を含み得る。このような賦形剤は、単位投薬量形態もしくは多回用量形
態のいずれかで非経口投与のための、または連続注入もしくは定期的注入による
脳脊髄液への直接注入のための投薬を処方する通常そして慣用的に用いられる物
質である。

【００５６】用量投与は、投薬処方物の薬物動態学的パラメータおよび使用される投与経路
に依存して繰り返され得る。

【００５７】ＦＧＦ−２１を含有する特定の処方物が、経口投与されることもまた意図され
る。このような処方物は、好ましくは、カプセル化され、そして固体投薬形態で
適切なキャリアと共に処方される。適切なキャリア、賦形剤、および希釈剤のい
くつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール
、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギナート、
ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、
ゼラチン、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエートおよび
プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウム、ステアレート、水、
鉱油などが挙げられる。処方物は、滑沢剤、湿潤剤、乳化および懸濁剤、保存剤
、甘味剤、または矯味矯臭剤をさらに含み得る。組成物は、当該分野で周知の手
順を用いることによって、患者に投与された後の活性成分の迅速な、持続性の、
または遅延した放出を提供するように処方され得る。処方物はまた、タンパク質
分解性分解を減少させ、そして吸収を促進する物質（例えば、界面活性剤など）
を含み得る。

【００５８】意図される処置レジメンに依存して、投与の頻度を最小化した上で長期の処置
を提供するために、ＦＧＦ−２１タンパク質またはその改変体の放出速度を制御
することが望ましくあり得る。このような処置レジメンは、例えば、活性タンパ
ク質の局所濃度が不十分な期間だけ有効なレベルであるように、このＦＧＦ−２
１タンパク質が比較的不安定であることが見出される場合に所望され得る。従っ
て、例えば、特定の疾患について、繰り返し注入および頻繁な注入を行うことは
望ましくないかまたは現実的ではないかもしれない。このような徐放系の主な利
点はとしては、ある濃度の薬物の標的化された局所送達、この疾患状態を処置す
るために必要とされる少ない薬物、起こり得る副作用の最小化、および処置の効
力の増大が挙げられる。また、これらの形態の送達系は、インビボで不安定であ
り、そして頻繁な投薬間隔を通常必要とする薬物を保護し得る。このような状況
下で、徐放は、当該分野で容易に利用可能な方法（例えば、ヘパリン−アルギナ
ートミクロスフェアを形成するための、ＦＧＦ−２１複合化ヘパリン−セファロ
ースビーズのカプセル化、またはＦＧＦ−２１ＰＬＧミクロスフェアの調製）
のうちの１つによって達成され得る。

【００５９】ヘパリン−アルギナートミクロスフェアは、組織に塩基性線維芽細胞成長因子
を送達するために首尾よく利用されてきた（Ｌｏｐｅｚら、Ｊｏｕｒｎａｌｏ
ｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃｓ２８２（１）：３８５−３９０（１９９７））。同様に、ア
ルギナート／ヘパリン−セファロースのミクロスフェアおよびフィルムは、アル
ギナート／ヘパリン−セファロースミクロスフェアおよびフィルムが、小用量で
のその放出を制御するために、塩基性ＦＧＦ−サポニン結合体の放出を制御する
ための薬物キャリアとして使用されている。ｂＦＧＦの溶液へのヘパリンの添加
によって、ｐＨの変化または温度の上昇を伴う、活性の損失を防ぐ。例えば、Ｇ
ｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２８：４７５
〜４８４（１９８６）を参照のこと。

【００６０】ヘパリンへのＦＧＦ−２１の結合が、インビボでの発現もしくは投与の間、ま
たはインビトロでのタンパク質精製の種々の段階の間のいずれかでのその安定性
を増強するために使用され得る。従って、本発明により、ヘパリンがＦＧＦ−２
１の溶液に添加され得、そしてその活性が本明細書中で開示される方法によって
、アッセイされ得る。

【００６１】ＦＧＦ−２１結合ヘパリン−セファロースビーズが、アルギン酸カルシウムミ
クロスフェア中にカプセル化されて、ヘパリン安定化ＦＧＦ−２１タンパク質の
制御された放出を可能にし得る。例えば、ミクロスフェアは、ＦＧＦ−２１結合
ヘパリン−セファロースビーズとのアルギン酸ナトリウム混合溶液を、塩化カル
シウムの硬化（ｈａｒｄｅｎｉｎｇ）溶液中に落とすことによって、構築され得
る。球が、この混合物がこの硬化溶液に入るとすぐに形成される。このミクロス
フェアのサイズは、ＦＧＦ−２１結合ヘパリン−セファロースビーズを減少した
断面積のシリンダー（例えば、皮下針）に通すことによって、調整され得る。

【００６２】カプセル化の効率は、カプセル化された増殖因子の量を、溶液中に最初に存在
する量と比較することによって決定され得る。例えば、ＦＧＦ−２１が、３Ｍ
ＮａＣｌの溶液を用いてこのヘパリン−セファロースビーズから剥がされ得、そ
して機能的活性アッセイが、実施され得る。

【００６３】特定の用量は、患者のおおよその体重もしくは体表面積、または占められる身
体空間の容積に従って算出される。用量はまた、選択される特定の投与経路に依
存して算出され得る。処置の適切な投薬量を決定するために必要な算出のさらな
る改善は、当業者によって慣用的に行われる。このような算出は、標的細胞のア
ッセイ調製物において、本明細書中に開示される活性を考慮して、当業者によっ
て過度の実験を伴うことなく行われ得る。正確な投薬量は、標準的な用量応答研
究に関連して決定される。実際に投与される組成物の量が、関連する状況（処置
されるべき状態、投与されるべき組成物の選択、個々の患者の年齢、体重、およ
び応答、患者の症状の重篤度、ならびに選択される投与経路を含む）を考慮して
、実施者によって決定されることが理解される。

【００６４】本発明の１つの実施形態では、ＦＧＦ−２１は、生物学的に活性な形態のＦＧ
Ｆ−２１またはＦＧＦ−２１の前駆体（すなわち、身体によって生物学的に活性
な形態のＦＧＦ−２１へと容易に変換され得る分子）を生成し得るベクターまた
は細胞を患者に移植することにより治療的に投与され得る。１つのアプローチで
は、ＦＧＦ−２１を分泌する細胞は、患者への移植のために半透膜中にカプセル
化され得る。細胞は、ＦＧＦ−２１もしくはその前駆体を通常発現する細胞、ま
たはＦＧＦ−２１もしくはその前駆体を発現するように形質転換され得る細胞で
あり得る。患者がヒトである場合、細胞がヒト起源であること、およびＦＧＦ−
２１がヒトＦＧＦ−２１であることが好ましい。しかし、本明細書中の処方物お
よび方法は、獣医学的適用ならびにヒトでの適用に用いられ得、そして本明細書
中で用いられる用語「患者」は、ヒト患者および獣医学的患者を含むことが意図
される。

【００６５】細胞は、患者への移植または植付けにおける使用のためにエキソビボで増殖さ
せ得る（参考として援用される、Ｍｕｅｎｃｈら，Ｌｅｕｋ．＆Ｌｙｍｐｈ．
１６：１−１１，１９９４）。本発明の別の実施形態では、ＦＧＦ−２１を用い
て、移植または植付けのために細胞のエキソビボ増殖を促進し得る。現在の方法
は、因子（例えば、エリスロポエチン、コロニー刺激因子、幹細胞因子、および
インターロイキン）を含有するバイオリアクター培養系を用いて、赤血球、単球
、好中球、およびリンパ球についての造血前駆細胞を増殖させた（参考として援
用される、Ｖｅｒｆａｉｌｌｉｅ，ＳｔｅｍＣｅｌｌｓ１２：４６６−４７
６，１９９４）。これらの幹細胞は、ヒトドナーの骨髄、ヒト末梢血、または臍
帯血細胞から単離され得る。増殖させた血球を用いて、特定の疾患状態の結果と
して、または悪性疾患の処置のための高用量の化学療法の結果として、これらの
細胞を欠く患者を処置する（参考として援用される、Ｇｅｏｒｇｅ，Ｓｔｅｍ
Ｃｅｌｌｓ１２（別冊１）：２４９−２５５，１９９４）。化学療法後の細胞
移植の場合、化学療法の前に骨髄細胞を取り出し、これらの細胞を、悪性細胞を
除去するようにも機能する方法を用いてエキソビボで増殖させ、そして増大した
細胞を化学療法後に患者に移植し戻すことにより、自己移植が実施され得る（概
説については、参考として援用されるＲｕｍｍｅｌおよびＶａｎＺａｎｔ，Ｊ
．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒａｐｙ３：２１３−２１８，１９９４を参照のこと）
。ＦＧＦ−２１は、肝細胞において発現されるので、ＦＧＦ−２１が機能して、
肝細胞における肝硬変変化の進行を予防または遅くし、そして損傷後または疾患
に起因する肝臓の一部の外科的除去後の、肝細胞の再生を促進し得ると考えられ
る。

【００６６】多数の環境において、患者におけるＦＧＦ−２１のレベルを決定することが所
望される。ＦＧＦ−２１の発現を示す本報告に加えて、ＦＧＦ−２１の同定は、
ＦＧＦ−２１の存在が、細胞の増殖および生存に関連する正常な生理学的機能に
役立つという結論の基礎を提供する。内因性に生成されたＦＧＦ−２１はまた、
特定の疾患状態において役割を果たし得る。

【００６７】ＦＧＦ−２１が、肝臓組織、胸腺組織および精巣組織において発現されるとす
れば、ＦＧＦ−２１のレベルが、種々の状態において変化し得るようであり、そ
してＦＧＦ−２１レベルの定量が臨床的に有用な情報を提供するようである。さ
らに、変性状態、変化した生理学的機能の処置において、あるいは肝細胞、精巣
細胞または胸腺細胞への損傷からの回復において、ＦＧＦ−２１を含有する組成
物が投与され得、そして血清または任意の所望の組織画分中で特定の標的レベル
のＦＧＦ−２１を達成することが所望されるようである。それゆえ、患者におけ
るＦＧＦ−２１のレベルをモニタリングし得ることが有利である。従って、本発
明はまた、患者からのサンプルにおけるＦＧＦ−２１の存在を検出するための方
法を提供する。

【００６８】患者においてＦＧＦ−２１の存在を検出する状況において本明細書中で使用さ
れる用語「検出」は、患者におけるＦＧＦ−２１の量のまたはＦＧＦ−２１の量
を発現する能力を決定すること、ＦＧＦ−２１を他の増殖因子から区別すること
、変性疾患の有望な結果および回復の見込みに関する予後を評価すること、この
病的状態の状態の尺度としての一定の期間にわたるＦＧＦ−２１レベルをモニタ
リングすること、ならびに患者についての好ましい治療レジメを決定するための
ＦＧＦ−２１レベルをモニタリングすることを含むことが意図される。

【００６９】患者におけるＦＧＦ−２１の存在を検出するために、サンプルは、患者から入
手される。サンプルは、組織生検サンプル、または血液、血漿、血清、ＣＳＦな
どのサンプルであり得る。ＦＧＦ−２１は、実施例２において考察するように、
肝臓組織において発現される。ＦＧＦ−２１を検出するためのサンプルは、これ
らの組織のいずれかから採取され得る。肝臓、胸腺または精巣におけるＦＧＦ−
２１のレベルを評価する場合、好ましいサンプルは、これらの組織またはこれら
の組織に流す静脈から採取したサンプルである。

【００７０】いくつかの例では、ＦＧＦ−２１遺伝子が、患者において、または患者内の組
織もしくは細胞株においてインタクトであるか否かを決定することが所望される
。インタクトなＦＧＦ−２１遺伝子によって、遺伝子において変更（例えば、点
変異、欠失、挿入、染色体切断、染色体再配列など）が存在しないことを意味し
、ここで、このような変更は、ＦＧＦ−２１の生成を変更し得るかまたはその生
物学的活性、安定性などを変更して、疾患プロセスもしくは細胞変性状態に対す
る感受性をもたらし得る。従って、本発明の１つの実施形態では、ＦＧＦ−２１
遺伝子における任意の変化を検出および特徴付けする方法が提供される。この方
法は、ＦＧＦ−２１ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはそれらのフラグメントも
しくはそれらの誘導体を含むオリゴヌクレオチドを提供することを含む。オリゴ
ヌクレオチドの誘導体によって、誘導されたオリゴヌクレオチドが、誘導された
配列が、ＦＧＦ−２１遺伝子にハイブリダイズするに十分な配列相補性を誘導前
の配列に対して有するという点で、誘導前の配列と実質的に同じであることを意
味する。誘導されたヌクレオチド配列は、このヌクレオチド配列から必ずしも物
理的に誘導されず、例えば、化学的合成またはＤＮＡ複製または逆転写または転
写を含む任意の様式で生成され得る。

【００７１】代表的には、患者のゲノムＤＮＡは、患者からの細胞サンプルから単離され、
そして１以上の制限エンドヌクレアーゼ（例えば、ＴａｑＩおよびＡｌｕＩなど
）で消化される。当該分野で周知であるサザンブロットプロトコルを用いて、こ
のアッセイは、患者または患者における特定の組織が、インタクトなＦＧＦ−２
１遺伝子を有するか、またはＦＧＦ−２１遺伝子の異常を有するかを決定する。

【００７２】ＦＧＦ−２１遺伝子に対するハイブリダイゼーションは、染色体ＤＮＡを変性
して、一本鎖ＤＮＡを得ること；この一本鎖ＤＮＡをＦＧＦ−２１遺伝子配列に
関連した遺伝子プローブと接触させること；およびハイブリダイズしたＤＮＡプ
ローブを同定して、少なくとも一部のヒトＦＧＦ−２１遺伝子を含む染色体ＤＮ
Ａを検出することを含む。

【００７３】本明細書中で使用される場合、用語「プローブ」は、標的領域中の配列とのプ
ローブ配列の相補性に起因して、標的配列とハイブリッド構造物を形成するポリ
ヌクレオチドから構成される構造をいう。プローブとして使用するために適切な
オリゴマーは、標的された配列に相補的な最少で約８〜１２の連続したヌクレオ
チド、好ましくは最少で約２０の連続したヌクレオチドを含み得る。

【００７４】本発明のＦＧＦ−２１遺伝子プローブは、ＤＮＡまたはＲＮＡのオリゴヌクレ
オチドであり得、そして例えば、切り出し、転写または化学的合成のような当該
分野で公知の任意の方法によって作製され得る。プローブは、例えば、放射性標
識もしくは蛍光標識、または酵素マーカーのような、当該分野で公知の任意の検
出可能な標識で標識され得る。プローブの標識化は、当該分野で公知の任意の方
法によって達成され得る。これらの方法としては、ＰＣＲ、ランダムプライミン
グ、末端標識化、ニックトランスレーションなどが挙げられる。当業者はまた、
標識プローブを用いない他の方法を使用してハイブリダイゼーションを決定し得
ることを認識する。ハイブリダイゼーションを検出するために使用され得る方法
の例としては、サザンブロッティング、蛍光インサイチュハイブリダイゼーショ
ン、およびＰＣＲ増幅を用いた一本鎖コンホメーション多型が挙げられる。

【００７５】ハイブリダイゼーションは、代表的に、２５℃〜４５℃で行われ、より好まし
くは３２℃〜４０℃で行われ、そしてより好ましくは、３７℃〜３８℃で行われ
る。ハイブリダイゼーションに必要な時間は、約０．２５〜約９６時間であり、
より好ましくは、約１〜約７２時間であり、そして最も好ましくは約４〜約２４
時間である。

【００７６】ＦＧＦ−２１遺伝子の異常はまた、ＰＣＲ方法、およびＦＧＦ−２１遺伝子に
隣接するかまたはその中に位置するプライマーを使用して検出され得る。ＰＣＲ
方法は、当該分野で周知である。簡潔には、この方法は、標的配列に隣接する核
酸配列にハイブリダイズし得る２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いて行
われ、この標的配列は、ＦＧＦ−２１遺伝子内にあり、そして標的配列を増幅す
る。本明細書中で使用される用語「オリゴヌクレオチドプライマー」とは、約８
〜約３０塩基の長さの範囲にあるＤＮＡまたはＲＮＡの短い鎖をいう。上流およ
び下流のプライマーは、代表的には、長さが約２０〜約３０塩基対であり、そし
てヌクレオチド配列の複製のための隣接領域にハイブリダイズする。重合化は、
デオキシヌクレオチド三リン酸またはヌクレオチドアナログの存在下でＤＮＡポ
リメラーゼによって触媒され、二本鎖ＤＮＡ分子を生成する。次いで、二本鎖は
、物理学的、化学的または酵素的方法を含む任意の変性方法によって分離される
。共通して、物理学的変性方法は、約１〜約１０分間の範囲の時間にわたり、核
酸を代表的には、約８０℃〜１０５℃の温度に加熱することを含んで使用される
。このプロセスは、所望のサイクル数にわたって繰り返される。

【００７７】プライマーは、増幅されるＤＮＡ鎖に実質的に相補性であるように選択される
。従って、プライマーは、テンプレートの正確な配列を反映する必要はないが、
増幅される鎖と選択的にハイブリダイズするように十分に相補的でなければなら
ない。

【００７８】ＰＣＲ増幅後、次いで、ＦＧＦ−２１またはプレプロＦＧＦ−２１またはそれ
らのフラグメントを含むＤＮＡ配列を、直接配列決定し、そして本明細書中に開
示された配列とこの配列を比較することによって分析し、活性または発現レベル
などを変更し得る改変を同定する。

【００７９】別の実施形態において、ＦＧＦ−２１を検出する方法は、ＦＧＦ−２１遺伝子
を発現する組織の分析に基づいて提供される。特定の組織（例えば、以下の実施
例２で同定されるような組織）は、ＦＧＦ−２１遺伝子を発現することが見出さ
れた。この方法は、ＦＧＦ−２１遺伝子を正常に発現する組織サンプルからのｍ
ＲＮＡに、ポリヌクレオチドをハイブリダイズさせる工程を包含する。このサン
プルは、ＦＧＦ−２１遺伝子または特定の細胞のＦＧＦ−２１遺伝子に異常性を
有すると疑われる患者から得られる。

【００８０】ＦＧＦ−２１タンパク質をコードするｍＲＮＡの存在を検出するために、サン
プルを患者から得る。サンプルを血液または組織生検サンプルから獲得し得る。
サンプルを処理して、そこに含まれる核酸を抽出し得る。サンプルから得られる
核酸をゲル電気泳動または他のサイズ分離技術に供する。

【００８１】サンプルのｍＲＮＡを、プローブとして供しているＤＮＡ配列と接触させて、
ハイブリッド二重鎖を形成する。上記で議論したような標識プローブの使用は、
得られた二重鎖の検出を可能にする。

【００８２】ＦＧＦ−２１タンパク質をコードするｃＤＮＡまたはこのｃＤＮＡの誘導体を
プローブとして用いる場合、偽陽性（すなわち、実際は、無傷かつ機能するＦＧ
Ｆ−２１遺伝子が存在しない場合の、ＦＧＦ−２１ヌクレオチド配列のハイブリ
ダイゼーションおよび見かけの検出）を防ぐために高ストリンジェンシー条件を
使用し得る。ＦＧＦ−２１ｃＤＮＡ由来の配列を使用する場合、あまりストリ
ンジェントでない条件が使用され得るが、これは偽陽性の可能性のためにあまり
好ましいアプローチではない。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは
、ハイブリダイゼーションの間および洗浄手順の間の多くの因子によって決定さ
れ、これらの因子としては、温度、イオン強度、時間の長さおよびホルムアミド
の濃度が挙げられる。これらの因子は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，第２
版（１９８９）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹにおいて概説される。

【００８３】ＦＧＦ−２１タンパク質をコードするｍＲＮＡのサンプル中での検出の感度を
上げるために、逆転写／ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ／ＰＣＲ）の技術を使用し
て、ＦＧＦ−２１タンパク質をコードするｍＲＮＡから転写されたｃＤＮＡを増
幅し得る。ＲＴ／ＰＣＲの方法は、当該分野で周知であり、そして以下のように
行われ得る。総細胞ＲＮＡは、例えば、標準的なグアニジウムイソチオシアネー
ト法によって単離され、そして総ＲＮＡは、逆転写される。逆転写法は、逆転写
酵素および３’末端プライマーを使用する、ＲＮＡのテンプレート上でのＤＮＡ
の合成を包含する。代表的には、プライマーは、オリゴ（ｄＴ）配列を含む。次
いで、このようにして生成されたｃＤＮＡは、ＰＣＲ法およびＦＧＦ−２１特異
的プライマーを使用して増幅される。（Ｂｅｌｙａｖｓｋｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄＲｅｓ．１７：２９１９−２９３２，１９８９；ＫｒｕｇおよびＢｅｒｇ
ｅｒ、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５２：３１６−３２５
，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮＹ、１９８７（これらは、本明細書中に参
考として援用される））。

【００８４】ポリメラーゼ連鎖反応法は、増幅されるべきＤＮＡセグメントの２つの隣接領
域に実質的に相補性である２つのオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、上
記のように行われる。

【００８５】増幅後、次いで、ＰＣＲ産物を電気泳動し、そしてエチジウムブロミド染色ま
たはホスホイメージングによって検出する。

【００８６】本発明は、患者から得たサンプル中のＦＧＦ−２１タンパク質の存在を検出す
る方法をさらに提供する。タンパク質を検出するために当該分野で公知の任意の
方法が使用され得る。このような方法としては、免疫拡散法、免疫電気泳動法、
免疫化学的方法、結合剤−リガンドアッセイ、免疫組織化学的技術、凝集および
相補性アッセイが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｂａｓｉｃ
ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１７−２６２、Ｓｉｔｅ
ｓおよびＴｅｒｒ編（Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，
１９９１を参照のこと（これは、本明細書中に参考として援用される））。抗体
をＦＧＦ−２１タンパク質のエピトープと反応させる工程および標識したＦＧＦ
−２１タンパク質またはその誘導体を競合的に置き換える工程を包含する結合剤
−リガンドイムノアッセイ法が好ましい。好ましい抗体は、実施例４に従って調
製される。

【００８７】本明細書中で使用されるＦＧＦ−２１タンパク質の誘導体は、特定のアミノ酸
が欠失されているか、あるいは修飾アミノ酸もしくは通常でないアミノ酸と置換
されているかまたは変更しているポリペプチドを含むことが意図される。ここで
ＦＧＦ−２１誘導体は、ＦＧＦ−２１と生物学的に等価であり、そしてこのポリ
ペプチド誘導体は、ＦＧＦ−２１タンパク質に対して惹起された抗体と交差反応
する。交差反応によって、抗体が、その形成を誘導した抗原以外の抗原と反応す
ることが意味される。

【００８８】多くの競合および非競合タンパク質結合イムノアッセイが当該分野で周知であ
る。このようなアッセイで使用される抗体は、例えば、凝集試験で使用されるよ
うに非標識であってもよいし、広範な種々のアッセイ方法における使用のために
標識されていてもよい。使用され得る標識としては、ラジオイムノアッセイ（Ｒ
ＩＡ）、酵素イムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ
））、蛍光イムノアッセイなどに使用するための放射性核種、酵素、蛍光剤、化
学発光剤、酵素基質もしくは補因子、酵素インヒビター、粒子、色素などが挙げ
られる。

【００８９】ＦＧＦ−２１タンパク質またはそのエピトープに対するポリクローナル抗体ま
たはモノクローナル抗体は、当該分野で公知の任意の多くの方法によってイムノ
アッセイに使用するために作製され得る。エピトープによって、ポリペプチドの
抗原決定基が参照される。エピトープは、そのエピトープに特有の空間的コンホ
メーションにおいて３つのアミノ酸を含み得る。一般的に、エピトープは、少な
くとも５つのこのようなアミノ酸からなる。アミノ酸の空間的なコンホメーショ
ンを決定する方法は、当該分野で公知であり、そしてこれらの方法としては、例
えば、Ｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴が挙げられる。

【００９０】タンパク質に対する抗体を調製する１つのアプローチは、このタンパク質の全
てまたは一部のアミノ酸配列の選択および調製、この配列の化学合成、および適
切な動物（通常は、ウサギまたはマウス）へのその配列の注射である（実施例４
を参照のこと）。

【００９１】オリゴペプチドは、親水性領域に存在し、従って、おそらく成熟タンパク質に
おいて露出しているオリゴペプチドに基づいて、ＦＧＦ−２１タンパク質に対す
る抗体の生成のための候補物として選択され得る。好ましいオリゴペプチドは、
ＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＡＨ（配列番号４の残基４６〜６１）およびＨＬ
ＰＧＮＫＳＰＨＲＤＰＡＰＲ（配列番号４の残基１４６〜１６０）である。さら
なるオリゴペプチドは、例えば、ＡｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙＩｎｄｅｘｏｆ
Ｗｅｌｌｉｎｇ，Ｇ．Ｗら、ＦＥＢＳＬｅｔｔ．１８８：２１５−２１８，
１９９５（本明細書中に参考として援用される）を使用して決定され得る。

【００９２】ＦＧＦ−２１に対する抗体はまた、この抗体が他のファミリーメンバーと交差
反応し得るように、本明細書中で同定される、１つ以上の保存された領域を含む
オリゴペプチドに対して惹起され得る。このような抗体を使用して、他のファミ
リーメンバーを同定および単離し得る。

【００９３】ＦＧＦ−２１タンパク質またはそのエピトープの調製のための方法は、化学合
成、組換えＤＮＡ技術、または生物学的サンプルからの単離を含むが、これらに
限定されない。ペプチドの化学合成は、例えば、固相ペプチド合成の古典的なＭ
ｅｒｒｉｆｅｌｄ法（Ｍｅｒｒｉｆｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５
：２１４９、１９６３、これは、本明細書中に参考として援用される）またはＲ
ａｐｉｄＡｕｔｏｍａｔｅｄＭｕｌｔｉｐｌｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔ
ｈｅｓｉｓシステム（Ｅ．Ｉ．ｄｕＰｏｎｔｄｅＮｅｍｏｕｒｓＣｏｍ
ｐａｎｙ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）（ＣａｐｒｉｎｏおよびＨａｎ、Ｊ
ＯｒｇＣｈｅｍ３７：３４０４，１９７２、これは、本明細書中に参考とし
て援用される）でのＦＭＯＣストラテジーによって行われ得る。

【００９４】ポリクローナル抗体は、抗原を注射した後に、適切な間隔で引き続き追加免疫
することによって、ウサギまたは他の動物を免疫して調製され得る。この動物は
、採血され、そして血清は、通常は、ＥＬＩＳＡによって精製したＦＧＦ−２１
タンパク質に対して、または肝臓もしくは他の細胞へのＦＧＦ−２１の作用をブ
ロックする能力に基づくバイオアッセイによってアッセイされる。トリ種（例え
ば、ニワトリ、シチメンチョウなど）を用いる場合、抗体はその卵の卵黄から単
離され得る。モノクローナル抗体は、骨髄腫細胞またはリンパ腫細胞のような連
続的に複製する腫瘍細胞で免疫したマウスからの脾細胞を融合することによるＭ
ｉｌｓｔｅｉｎおよびＫｏｈｌｅｒの方法にならって調製され得る。（Ｍｉｌｓ
ｔｅｉｎおよびＫｏｈｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７、１９７
５；ＧｕｌｆｒｅおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ：ＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ７３：１
−４６、ＬａｎｇｏｎｅおよびＢａｎａｔｉｓ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓ
ｓ、１９８１、これらは、参考として援用される）。次いで、このように形成さ
れたハイブリドーマ細胞は、限界希釈法によりクローニングされ、そして上清を
ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、もしくはバイオアッセイによって抗体生成についてアッセ
イする。

【００９５】抗体が標的タンパク質を認識し、かつ特異的に結合する特有の能力は、タンパ
ク質の過剰発現を処置するためのアプローチを提供する。従って、本発明の別の
局面は、ＦＧＦ−２１タンパク質の過剰発現を含む疾患を、ＦＧＦ−２１タンパ
ク質に対する特異的な抗体で患者を処置することによって、予防または処置する
方法を提供する。

【００９６】ＦＧＦ−２１タンパク質に対する特異的な抗体（ポリクローナルまたはモノク
ローナルのいずれか）は、上記で議論されたように、当該分野で公知の任意の適
切な方法によって生成され得る。例えば、マウスまたはヒトのモノクローナル抗
体は、ハイブリドーマ技術によって生成され得るか、あるいはＦＧＦ−２１タン
パク質、もしくはその免疫学的に活性なフラグメント、または抗イディオタイプ
抗体、もしくはそのフラグメントが動物に投与されて、ＦＧＦ−２１タンパク質
を認識し、かつ結合し得る抗体の生成を誘起し得る。このような抗体は、以下に
挙げられる任意の抗体クラスおよび任意の抗体サブクラスに由来し得るが、それ
らに限定されない：ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、またはト
リ種の場合にはＩｇＹ。

【００９７】本発明のポリヌクレオチドおよび対応する全長遺伝子によってコードされるポ
リペプチドを使用して、ペプチドライブラリー、タンパク質ライブラリー、低分
子ライブラリー、およびファージディスプレイライブラリーをスクリーニングし
得、そしてこのポリペプチドおよび他の公知の方法を使用して、アナログもしく
はアンタゴニストを同定し得る。

【００９８】ネイティブなＦＧＦポリペプチドは、癌において役割を果たし得る。例えば、
ＦＧＦファミリーメンバーは、ＮＩＨ３Ｔ３細胞の顕著な形態学的形質転換を誘
導し得、そしてヌードマウスにおいて強力な腫瘍形成性を示す。脈管形成性活性
が、ＦＧＦファミリーメンバーによって示された。従って、ＦＧＦのインヒビタ
ーを使用して、癌（例えば、前立腺）を処置し得る。

【００９９】ペプチドのライブラリーは、米国特許第５，０１０，１７５号およびＰＣＴ番
号ＷＯ９１／１７８２３において開示される方法に従って、合成され得る。以下
に簡潔に記載されるように、ペプチドの混合物を調製して、次いで、これをスク
リーニングして、所望のシグナル伝達およびレセプター結合活性を示すペプチド
を同定する。’１７５特許の方法に従って、適切なペプチド合成支持体（例えば
、樹脂）は、適切に保護され、活性化されたアミノ酸の混合物にカップリングさ
れる。反応混合物中の各アミノ酸の濃度は平衡化されるか、または産物が、開始
樹脂にカップリングしたアミノ酸の等モル混合物であるように、そのカップリン
グ反応速度に対して逆比例で調整される。次いで、結合したアミノ酸は脱保護さ
れ、そして別の平衡化されたアミノ酸混合物と反応して、全ての可能なジペプチ
ドの等モル混合物を形成する。このプロセスは、所望の長さ（例えば、ヘキサマ
ー）のペプチド混合物が形成されるまで、繰り返される。各工程で全てのアミノ
酸を含む必要はないことに注意のこと：いくつかの工程でわずか１または２アミ
ノ酸を含み得る（例えば、特定のアミノ酸が所定の位置で必須であることが公知
の場合）ために、混合物の複雑性を低減し得る。ペプチドライブラリー合成が完
了した後に、ペプチドの混合物は、選択したポリペプチドに対する結合について
スクリーニングされる。次いで、このペプチドは、活性を阻害または増強する能
力について試験される。次いで、所望の活性を示すペプチドが単離され、そして
配列決定される。

【０１００】ＰＣＴ番号ＷＯ９１／１７８２３に記載される方法は、類似している。しかし
、合成樹脂と活性化されたアミノ酸の混合物とを反応させる代わりに、樹脂を２
０等分に（または、その工程で添加される異なるアミノ酸の数に対応する多くの
部分に）分けて、そして各アミノ酸を樹脂のその部分に個々にカップリングさせ
る。次いで、この樹脂部分を合わせ、混合し、そして再び第２のアミノ酸との反
応のために多くの等分に分ける。この様式で、各反応を容易に完了させ得る。さ
らに、各工程で全ての樹脂を合わせるよりむしろ、並行して部分を処理すること
によって、別個の「サブプール」を維持し得る。これは、どのペプチドが任意の
観察されたレセプター結合活性またはシグナル伝達活性を担うかを決定するプロ
セスを簡単にする。

【０１０１】このような場合において、例えば、各々１〜２，０００の候補物を含むサブプ
ールを本発明の１つ以上のポリペプチドに曝す。次いで、陽性結果を生じる各サ
ブプールは、例えば、２０〜１００の候補物を含む、より小さなサブプール（サ
ブ−サブプール）の群として再合成され、そして再アッセイされる。陽性サブ−
サブプールは、個々の化合物として再合成され得、そして最終的にはアッセイさ
れて、高結合定数を示すペプチドを決定し得る。これらのペプチドは、ネイティ
ブな活性を阻害または増強する能力について試験され得る。ＰＣＴ番号ＷＯ９１
／７８２３および米国特許第５，１９４，３９２号（本明細書中に参考として援
用される）に記載される方法は、全ての合成および再合成が数日で行われ得るよ
うな、並行した自動化された技術によるこのようなプールおよびサブプールの調
製を可能にする。

【０１０２】ペプチドアゴニストまたはアンタゴニストを、任意の利用可能な方法（例えば
、シグナル伝達、抗体結合、レセプター結合、マイトジェンアッセイ）を使用し
てスクリーニングする。アッセイ条件は、理想的には、ネイティブな活性がイン
ビボで示される条件（すなわち、生理的ｐＨ、温度、およびイオン強度の下で）
に似ているべきである。適切なアゴニストまたはアンタゴニストは、被験体で毒
性の副作用を引き起こさない濃度でネイティブな活性の強力な阻害または増強を
示す。ネイティブなポリペプチドへの結合について競合するアゴニストまたはア
ンタゴニストは、ネイティブな濃度以上の濃度を必要とし得るが、一方で、ポリ
ペプチドに不可逆的に結合し得るインヒビターは、ネイティブな濃度の桁におけ
る濃度で添加され得る。

【０１０３】ｈＦＧＦ−２１およびｍＦＧＦ−２１の有効性は、高スループットスクリーニ
ング方法（ＨＴＳ）の慣例的な適用を介して、そのレセプターへのＦＧＦ−２１
の結合を阻害する低分子および低分子量化合物の同定を可能にする。ＨＴＳ方法
は一般的に、治療的可能性についての主要な化合物の迅速なアッセイを可能にす
る技術に関する。ＨＴＳ技術は、試験物質、ポジティブシグナルの検出、および
データの解釈のロボット処理を使用する。主な化合物は、放射線の取り込みを介
してか、または、吸光度、蛍光または読出しのようなルミネセンスに依存する光
学的アッセイを介して、同定され得る（Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ．Ｅ．ら（１９９
８）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６２４−６３１）。ＦＧＦ分子
とＦＧＦレセプターとの間の相互作用を検出するためのアッセイは、例えば、Ｂ
ｌｕｎｔ，Ａ．Ｇ．ら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３７３３
−３７３８に記載され、そして、このようなアッセイは、候補分子がＦＧＦ−２
１とそのレセプターとの間の相互作用を阻害するか否かを決定するために適合さ
れ得る。

【０１０４】例えば、レセプター結合についてＦＧＦ−２１と競合することによって、ＦＧ
Ｆ−２１とそのレセプターとの相互作用を阻害する化合物のための高スループッ
トスクリーニングにおける使用のために適合され得るモデル系が、利用可能であ
る。Ｓａｒｕｂｂｉら（１９９６）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３７：７０−
７５は、ＩＬ−１レセプターの活性部位に結合するための天然リガンドと競合す
る分子を同定するための無細胞非同位体アッセイを記載する。Ｍａｒｔｅｎｓ，
Ｃ．ら（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７３：２０−３１は、標識さ
れたリガンドが粒子上に固定されたそのレセプターに結合する；レセプター結合
についての標識されたリガンドと競合する分子の存在下で、粒子上の標識が減少
する、一般的な粒子ベースの非放射性方法を記載する。

【０１０５】本発明の治療的ＦＧＦ−２１ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子
送達ビヒクルにおいて利用され得る。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源また
は非ウイルス起源であり得る（一般的には、Ｊｏｌｌｙ、ＣａｎｃｅｒＧｅｎ
ｅＴｈｅｒａｐｙ１：５１−６４（１９９４）；Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ
ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ５：８４５−５８２（１９９４）；Ｃｏｎｎｅｌ
ｌｙ、ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ１：１８５−１９３（１９９５
）；およびＫａｐｌｉｔｔ、ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ６：１４８−１
５３（１９９４）を参照のこと）。本発明の治療薬のコード配列を含む構築物の
送達のための遺伝子治療ビヒクルは、局所的にまたは全身的にのいずれかで投与
され得る。これらの構築物は、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターのア
プローチを利用し得る。そのようなコード配列の発現は、内因性の哺乳動物のプ
ロモーターまたは異種のプロモーターの使用により誘導され得る。コード配列の
発現は、構成的であり得るか、または調節され得る。

【０１０６】本発明は、目的の選択された核酸分子を、保有または発現するために構築され
る組換えレトロウイルスを利用し得る。利用され得るレトロウイルスベクターは
、以下に記載されているものを含む：ＥＰ０４１５７３１；ＷＯ９０／
０７９３６；ＷＯ９４／０３６２２；ＷＯ９３／２５６９８；ＷＯ９３／
２５２３４；米国特許第５，２１９，７４０号；ＷＯ９３／１１２３０；ＷＯ
９３／１０２１８；ＶｉｌｅおよびＨａｒｔ、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５３：
３８６０−３８６４（１９９３）；ＶｉｌｅおよびＨａｒｔ、ＣａｎｃｅｒＲ
ｅｓ．５３：９６２−９６７（１９９３）；Ｒａｍら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．
５３：８３−８８（１９９３）；Ｔａｋａｍｉｙａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．
Ｒｅｓ．３３：４９３−５０３（１９９２）；Ｂａｂａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕ
ｒｇ．７９：７２９−７３５（１９９３）；米国特許第４，７７７，１２７号；
ＧＢ特許第２，２００，６５１号；およびＥＰ０３４５２４２。好ましい組
換えレトロウイルスは、ＷＯ９１／０２８０５に記載されるものを含む。

【０１０７】前述のレトロウイルスベクター構築物との使用に適したパッケージング細胞株
は、容易に調製され得（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９５／３０７６３およびＷＯ
９２／０５２６６を参照のこと）、そして組換えベクター粒子を産生するため
のプロデューサー細胞株（ベクター細胞株とも呼ばれる）の作製のために用いら
れ得る。本発明の特に好ましい実施態様において、パッケージング細胞株は、ヒ
ト（例えば、ＨＴ１０８０細胞）またはミンク親細胞株から作られ、それによっ
て、ヒト血清中での不活化を生き延び得る、組換えレトロウイルスの産生を可能
にする。

【０１０８】本発明はまた、遺伝子送達ビヒクルとして機能し得る、アルファウイルスを基
礎としたベクターも用いる。そのようなベクターは、例えば、シンドビスウイル
スベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣＶＲ−６７；ＡＴＣＣＶＲ−
１２４７）、ロス川ウイルス（ＡＴＣＣＶＲ−３７３；ＡＴＣＣＶＲ−１２
４６）およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ
ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣＶＲ−１２４９；ＡＴＣＣＶＲ−５３２）を含
む広範な種々のアルファウイルスから構築され得る。そのようなベクター系の代
表的な例としては、米国特許第５，０９１，３０９号、同第５，２１７，８７９
号および同第５，１８５，４４０号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１０
５７８；ＷＯ９４／２１７９２；ＷＯ９５／２７０６９；ＷＯ９５／２７
０４４；およびＷＯ９５／０７９９４に記載されるものが挙げられる。

【０１０９】本発明の遺伝子送達ビヒクルはまた、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター
のようなパルボウイルスを利用し得る。代表的な例は、ＷＯ９３／０９２３９
のＳｒｉｖａｓｔａｖａ、Ｓａｍｕｌｓｋｉら、Ｊ．Ｖｉｒ．６３：３８２２−
３８２８（１９８９）；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎら、Ｖｉｒｏｌ．１６６：１５４−
１６５（１９８８）；およびＦｌｏｔｔｅら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ９０：１０６１３
−１０６１７（１９９３）により開示されたＡＡＶベクターを含む。

【０１１０】アデノウイルスベクターの代表的な例としては、以下に記載されたものが挙げ
られる：Ｂｅｒｋｎｅｒ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ６：６１６−６２７（
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５
２：４３１−４３４（１９９１）；ＷＯ９３／１９１９１；Ｋｏｌｌｓら、Ｐ
．Ｎ．Ａ．Ｓ．：２１５−２１９（１９９４）；Ｋａｓｓ−Ｅｉｓｌｅｒら、Ｐ
．Ｎ．Ａ．Ｓ．９０：１１４９８−１１５０２（１９９３）；Ｇｕｚｍａｎら、
Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ８８：２８３８−２８４８（１９９３）；Ｇｕｚｍａ
ｎら、Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．７３：１２０２−１２０７（１９９３）；Ｚａｂｎｅｒ
ら、Ｃｅｌｌ７５：２０７−２１６（１９９３）；Ｌｉら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．４：４０３−４０９（１９９３）；Ｃａｉｌａｕｄら、Ｅｕｒ．Ｊ
．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：１２８７−１２９１（１９９３）；Ｖｉｎｃｅｎｔら
、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．５：１３０−１３４（１９９３）；Ｊａｆｆｅら、Ｎａ
ｔ．Ｇｅｎｅｔ．１：３７２−３７８（１９９２）；およびＬｅｖｒｅｒｏら、
Ｇｅｎｅ１０１：１９５−２０２（１９９２）。本発明に利用可能な例示的な
アデノウイルス遺伝子治療ベクターとしては、以下に記載されたものもまた挙げ
られる：ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１
；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４およびＷＯ９５／００６５５。
Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．３：１４７−１５４（１９９２）
に記載されるように殺したアデノウイルスに連結したＤＮＡの投与が、利用され
得る。

【０１１１】他の遺伝子送達ビヒクルおよび方法が、利用され得る。これには、以下を含む
：殺した単独のアデノウイルスに連結した、または連結していないポリカチオン
性の濃縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．３：１
４７−１５４（１９９２））；リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ、Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６９８５−１６９８７（１９８９）を参照のこと）；
真核生物細胞送達ビヒクル細胞（例えば、１９９４年５月９日に出願された米国
特許出願第０８／２４０，０３０号および米国特許出願第０８／４０４，７９６
号を参照のこと）；光重合化ヒドロゲル材料の沈着；米国特許第５，１４９，６
５５号に記載された携帯型遺伝子移入パーティクルガン；米国特許第５，２０６
，１５２号およびＷＯ９２／１１０３３に記載のような電離放射線；核荷電中性
化または細胞膜との融合。さらなるアプローチが、Ｐｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ．Ｃｅ
ｌｌＢｉｏｌ．１４：２４１１−２４１８（１９９４）、およびＷｏｆｆｅｎ
ｄｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：１５８１−１５８５（
１９９４）に記載される。

【０１１２】裸のＤＮＡもまた、利用し得る。裸のＤＮＡの例示的な導入方法が、ＷＯ９０
／１１０９２および米国特許第５，５８０，８５９号に記載される。取り込み効
率が、生物分解性ラテックスビーズの使用により改良され得る。ＤＮＡでコーテ
ィングされたラテックスビーズは、このビーズによるエンドサイトーシスの開始
後、細胞内へ効率的に輸送される。本方法は、疎水性を増すためのビーズの処理
により、さらに改良され得、そしてそれにより、エンドソームの破壊を容易にし
得、そして細胞質内へのＤＮＡの放出を容易にし得る。遺伝子送達ビヒクルとし
て働き得るリポソームが、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴ特許公開Ｗ
Ｏ９５／１３７９６；ＷＯ９４／２３６９７；ＷＯ９１／１４４４５；およびＥ
Ｐ０５２４９６８に記載される。

【０１１３】使用に適したさらなる非ウイルス送達は、Ｗｏｆｆｅｎｄｉｎら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１（２４）：１１５８１−１１５８５
（１９９４）に記載されるアプローチのような機械的送達系を含む。さらにコー
ド配列およびそのようなものの発現産物は、光重合したヒドロゲル物質の沈殿物
を通じて送達され得る。コード配列の送達に用い得る遺伝子送達の従来の他の方
法は、以下を含む：例えば、米国特許第５，１４９，６５５号に記載される携帯
型遺伝子移入パーティクルガンの使用；米国特許第５，２０６，１５２号および
ＰＣＴ特許公開ＷＯ９２／１１０３３に記載される、移入された遺伝子の活性化
のための電離放射線の使用。

【０１１４】ＦＧＦは、機能の損失、不適切な機能／数、機能または生存が延長／レスキュ
ーされ得る細胞、組織または器官の異常な機能または死、およびＦＧＦを用いた
治療によって逆転または予防され得る異常によって特徴づけられる疾患に関係づ
けられている。

【０１１５】肺、気管支もしくは肺胞細胞または肺、気管支もしくは肺胞機能の喪失、肺ま
たは気管支創傷の治癒、肺亀裂骨折、肺気腫／慢性閉塞性肺疾患、喘息、感染性
疾患または自己免疫疾患の続発症、肺動脈または静脈性高血圧の続発症、肺線維
症、未熟な肺疾患、および嚢胞性繊維症は、ＦＧＦの処置を受け入れやすい症状
である。

【０１１６】虚血性血管疾患は、ＦＧＦ−２１で処置することが容易であり得、ここでこの
疾患は、器官への不適切な血流によって特徴づけられる。処置は、治療的新脈管
形成を誘導し得るか、または細胞の機能／生存を保存し得る（心筋虚血／心筋梗
塞、末梢血管疾患、腎動脈疾患、卒中）。心筋細胞または心臓の支持細胞の機能
の損失またはその死によって特徴づけられる心筋症（うっ血性心不全、心筋炎）
はまた、ＦＧＦ−２１を用いて処置され得、骨格筋細胞、骨細胞または支持細胞
の機能の損失、その不適切な機能またはその死によって特徴づけられる筋骨格疾
患も同様に処置され得る。例としては、骨格ミオパシー、骨疾患および関節炎が
挙げられる。

【０１１７】ＦＧＦ−２１ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、ＦＧＦ−２１分子また
はその機能の損失に起因する先天性欠損の矯正を補助し得る（肝臓、心臓、肺、
脳、四肢、腎臓など）。

【０１１８】創傷治癒（外傷、疾患、医学的または外科的処置（これらの処置によって枯渇
した細胞集団および組織の再生を含む）のいずれかに起因する）の処置は、ＦＧ
Ｆ−２１ポリペプチドおよびポリヌクレオチドのさらに別の使用である。例とし
ては、肝臓再生、手術の創傷治癒、損傷した血管の再内皮形成（ｒｅ−ｅｎｄｏ
ｔｈｅｌｉｌｉｚａｔｉｏｎ）、外傷創傷の治癒、血管に起因する潰瘍の治癒、
代謝性疾患など、骨折、炎症性疾患に起因する細胞の損失などが挙げられる。

【０１１９】ＦＧＦ−２１はまた、この分子の過剰活性を含む癌の処置のための薬物を同定
する、または新たな薬物の同定において有用である新たな標的を同定するスクリ
ーニングにおいて使用され得る。

【０１２０】前述の実施態様の全てについて、臨床医は、特定の条件に基づいて、ＦＧＦ−
２１ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、ＦＧＦ−２１に対する抗体、また
はペプチドアナログもしくはアンタゴニストのような低分子が処置の最も適切な
形態であるか否かを決定する。これらの形態は、全て本発明の範囲内である。

【０１２１】本発明の好ましい実施態様は、以下の実施例に記載される。本明細書中の特許
請求の範囲内の他の実施態様は、本明細書中に開示されるように、本発明の明細
書または実施の考慮事項から当業者に明らかである。実施例とともに、本明細書
は、例示としてのみ見なされ、本発明の範囲およびその思想は、実施例に続く特
許請求の範囲によって示されることが意図される。

【０１２２】（実施例）（実施例１）（マウスＦＧＦ−２１の単離および分析）ＤＮＡをマウス胚ｃＤＮＡから調
製した。それぞれヒトＦＧＦ−１９（ＲＰＹＤＧＹＮおよびＬＰＭＬＰＭ）のア
ミノ酸配列に対応するすべてのあり得るコドンを示すセンスおよびアンチセンス
変性プライマーの各々を含む２５μｌの反応混合液中で３０サイクル間、ポリメ
ラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、マウス胚ｃＤＮＡからＤＮＡを増幅した。
それぞれヒトＦＧＦ−１９（ＲＰＹＤＧＹＮおよびＬＰＭＬＰＭ）のアミノ酸配
列に対応するすべてのあり得るコドンを示すセンスおよびアンチセンス変性プラ
イマーの各々を用いるＰＣＲによって、増幅された増幅産物をさらに増幅した。
予想されたサイズ（約１２０塩基対）の増幅されたＤＮＡをクローン化した。ク
ローン化されたＤＮＡのヌクレオチド配列を決定することによって、新規のマウ
スＦＧＦ（ＦＧＦ−２１）ｃＤＮＡを同定した。新規のＦＧＦｃＤＮＡの全コ
ード領域を決定するために、ＭａｒａｔｈｏｎｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎ
ｔｅｃｈ，ＰａｌｏＡｌｔｏ，Ｃａｒｌｉｆｏｒｎｉａ）およびＦＧＦについ
て特異的なプライマーを使用して、アダプター−ライゲーション媒介ＰＣＲによ
って、コード領域をマウス胚ｃＤＮＡから増幅した。５’および３’非コード配
列を含むＦＧＦ特異的プライマーを使用するＰＣＲによって、ＦＧＦの全コード
領域をコードするｃＤＮＡをマウス胚ｃＤＮＡから増幅し、そして、ｐＧＥＭ−
ＴＤＮＡベクターにクローン化した。このヌクレオチド配列を配列番号１に示
し、そして、アミノ酸配列を配列番号２に示す。

【０１２３】（実施例２）（マウス組織におけるＦＧＦ−２１の発現）マウス組織由来のポリ（Ａ）⁺
ＲＮＡ（１０μｇ）をホルムアルデヒドを含む変性アガロースゲル（１％）上に
溶解し、そして、一晩２０×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ：０．１５ＭＮａＣｌ／０．
０１５Ｍクエン酸ナトリウム）中で、ニトロセルロース膜に転写した。³²Ｐ標識
したＦＧＦ−２１ｃＤＮＡプローブ（約６５０塩基対）をランダムプライマー
標識キット（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄ
ｅｎ）およびデオキシシチジン５’［α−³²Ｐ−］３リン酸（約１１０ＴＢｑ／
ｎｍｏｌ）（ＩＣＮＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓＩｎｃ．，ＣｏｓｔａＭｅｓ
ａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて標識した。記載されているように、標識さ
れたプローブを含むハイブリダイゼーション溶液中で、この膜をインキュベート
し（Ｈｏｓｈｉｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ
ｍｕｎ．２４４：１８７−１９１（１９９８））、そして、放射線画像分析機（
ＢＡＳ２０００、富士フイルム株式会社、東京、日本）を用いて分析した。図
３に示されるように、ＦＧＦ−２１発現は、肝臓において最も顕著であり、発現
はまた精巣および胸腺においても見出される。

【０１２４】（実施例３）（ヒトＦＧＦ−２１の単離および分析）ヒトＦＧＦ−２１遺伝子を推定のヒ
トα１，２−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子の５’隣接領域に位置する。ヒ
トＦＧＦ−２１の全コード領域をコードするｃＤＮＡを、５’および３’非コー
ド領域配列を含むＦＧＦ特異的プライマーを使用するＰＣＲによる胎児脳ｃＤＮ
Ａから増幅し、そして、ｐＧＥＭ−ＴＤＮＡベクターにクローン化した。この
タンパク質は、配列番号４に示されるように２０９アミノ酸を含み（図５）、そ
して配列番号３のポリヌクレオチド配列によってコードされる。ｃＤＮＡコード
領域を含むヒトＦＧＦ−２１ｃＤＮＡの増幅のためのプライマーは以下のよう
である：ＦＧＦ−２１についてのセンスプライマー：５’ａｇｃｃａｔｔｇａｔ
ｇｇａｃｔｃｇｇａｃ３’；ＦＧＦ−２１についてのアンチセンスプライマー：
５’ｔｇｇｃｔｔｃａｇｇａａｇｃｇｔａｇｃｔ３’。

【０１２５】（実施例４）（ＦＧＦ−２１ペプチドを使用するウサギの免疫によるＦＧＦ−２１に対する
抗血清の調製）ヒトＦＧＦ−２１タンパク質の選択された近接するアミノ酸に
対するペプチド配列を合成し、そして、記載されるようにキーホールリンペット
ヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合する（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ，Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，１９８８．Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ
）。ＫＬＨ結合ペプチドを使用してウサギを免疫する。抗血清をＦＧＦ−２１に
対する特異性について、および他のＦＧＦタンパク質との交差反応性について試
験した。

【０１２６】代表的なペプチド配列は：１．ＲＱＲＹＬＹＤＤＡＱＱＴＥＡＨ（配列番号４の残基４６〜６１）２．ＨＬＰＧＮＫＳＰＨＲＤＰＡＰＲ（配列番号４の残基１４６〜１６０）本明細書中に引用された全ての特許、公開された特許出願および刊行物は、本
明細書中で十分に開示されるように、参考として援用される。

【０１２７】特定の好ましい実施形態が、本明細書中で記載されているが、これは、上記の
特許請求の範囲に開示されることを除き、このような実施形態が、本発明の範囲
の制限として解釈されることを意図するものではない。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ヒトＦＧＦ−２１とマウスＦＧＦ−１５とのアミノ酸配列比較を示す
。アスタリスクは配列の同一のアミノ酸残基を示す。

【図２】図２は、ヒトＦＧＦ−２１およびヒトＦＧＦ−１９のアミノ酸配列比較を示す
。アスタリスクは配列の同一のアミノ酸残基を示す。

【図３】図３は、マウス組織におけるＦＧＦ−２１の発現を示す。

【図４Ａ】図４Ａは、マウスＦＧＦ−２１のＤＮＡ配列（配列番号１）およびアミノ酸配
列（配列番号２）を示す。

【図４Ｂ】図４Ｂは、マウスＦＧＦ−２１のＤＮＡ配列（配列番号１）およびアミノ酸配
列（配列番号２）を示す。

【図５Ａ】図５Ａは、ヒトＦＧＦ−２１のＤＮＡ配列（配列番号３）およびアミノ酸配列
（配列番号４）を示す。

【図５Ｂ】図５Ｂは、ヒトＦＧＦ−２１のＤＮＡ配列（配列番号３）およびアミノ酸配列
（配列番号４）を示す。

【図６】図６は、ヒト（配列番号４）およびマウス（配列番号２）ＦＧＦ−２１のアミ
ノ酸配列の整列を示す。

【図７Ａ】図７Ａは、酵母についてのコドン使用を提供する。表の各列に関する第１の欄
の情報は、アミノ酸についての三文字コードを含む。第２の欄は、そのアミノ酸
についての明白なコドンを含む。第３の欄は、この表が編集された遺伝子中のコ
ドンの出現数を列挙する。第４の欄は、そのコドン使用が、コドン頻度表におい
て編集されたものと同一である遺伝子における１，０００コドンあたりのそのコ
ドンの推定出現数を列挙する。最後の欄は、コドンファミリーにおけるその同義
コドンの出現の割合を含む。

【図７Ｂ】図７Ｂは、酵母についてのコドン使用を提供する。表の各列に関する第１の欄
の情報は、アミノ酸についての三文字コードを含む。第２の欄は、そのアミノ酸
についての明白なコドンを含む。第３の欄は、この表が編集された遺伝子中のコ
ドンの出現数を列挙する。第４の欄は、そのコドン使用が、コドン頻度表におい
て編集されたものと同一である遺伝子における１，０００コドンあたりのそのコ
ドンの推定出現数を列挙する。最後の欄は、コドンファミリーにおけるその同義
コドンの出現の割合を含む。

【図８Ａ】図８Ａは、ショウジョウバエについてのコドン使用を提供する。

【図８Ｂ】図８Ｂは、ショウジョウバエについてのコドン使用を提供する。

【図９Ａ】図９Ａは、Ｅ．ｃｏｌｉについてのコドン使用を提供する。

【図９Ｂ】図９Ｂは、Ｅ．ｃｏｌｉについてのコドン使用を提供する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 1/16 Ａ６１Ｐ 35/00 ４Ｃ０７６ 15/08 35/02 ４Ｃ０８４ 35/00 37/02 ４Ｃ０８７ 35/02 43/00 １０１４Ｈ０４５ 37/02 １０７ 43/00 １０１Ｃ０７Ｋ 14/50 １０７ 16/22 Ｃ０７Ｋ 14/50 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/22 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｈ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＣ１２Ｐ 21/02 33/50 ＺＣ１２Ｑ 1/68 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/15 Ｍ 33/50 33/566 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/00 Ａ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/24 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 2G045 AA40 BA11 BB50 DA12 DA13 DA14 DA36 FB02 4B024 AA01 BA03 CA04 CA09 DA02 DA06 EA04 GA11 GA18 GA19 HA03 HA14 4B063 QA01 QA12 QA18 QQ02 QQ53 QR32 QR38 QR55 QR80 QR82 QS20 QS25 QS34 QS39 QX02 4B064 AG13 CA02 CA10 CA19 CC24 DA01 4B065 AA26X AA90X AA93Y AB01 AC14 CA24 CA44 4C076 AA53 AA95 CC07 CC09 CC26 CC27 CC29 4C084 AA01 AA02 AA06 AA07 AA13 BA22 CA53 DB54 MA01 NA14 ZA312 ZA752 ZA812 ZB072 ZB222 ZB262 ZB272 4C087 AA01 AA02 BB33 MA01 ZA31 ZA75 ZA81 ZB07 ZB22 ZB26 ZB27 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA76 DA86 EA20 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】以下からなる群から選択されるポリヌクレオチドを含む単離
された核酸分子：（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約２０９をコードするポリヌクレオチ
ド；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸約２〜約２０９をコードするポリヌクレオチ
ド；（ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約１７７をコードするポリヌクレオチ
ド；（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約２０９をコードするポリヌクレオ
チド；（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約１７７をコードするポリヌクレオ
チド；（ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）に記載のポリヌクレオチド
相補体；および（ｇ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）に記載のポリヌクレオチド
に少なくとも９０％同一のポリヌクレオチド。
【請求項２】配列番号３のコード領域由来の２０〜６００個連続したヌク
レオチドを含む、単離された核酸分子。
【請求項３】配列番号３のコード領域由来の６０〜４００個連続したヌク
レオチドを含む、請求項２に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】配列番号３のコード領域由来の２００〜３００個連続したヌ
クレオチドを含む、請求項３に記載の単離された核酸分子。
【請求項５】ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む単離され
た核酸分子であって、少なくとも１つの保存的なアミノ酸置換を除き、該ポリペ
プチドが以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、単離された核酸
分子：（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約２０９；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸約２〜約２０９；（ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約１７７；（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約２０９；および（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項６】ＤＮＡである、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項７】請求項１に記載の核酸分子を、プロモーターに作動可能に連
結して、ベクター中に挿入する工程を包含する、組換えベクターを作製する方法
。
【請求項８】請求項７に記載の方法によって作製された、組換えベクター
。
【請求項９】請求項８に記載の組換えベクターを宿主細胞中に導入する工
程を包含する、組換え宿主細胞を作製する方法。
【請求項１０】請求項９に記載の方法によって作製された、組換え宿主細
胞。
【請求項１１】ポリペプチドを産生するための組換え方法であって、該方
法が、該ポリペプチドが発現される条件下で、請求項１０に記載の組換え宿主細
胞を培養する工程および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方法。
【請求項１２】以下からなる群から選択されるアミノ酸に少なくとも９５
％同一のアミノ酸を含む単離されたポリペプチド：（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約２０９；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸約２〜約２０９；（ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約１７７；（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約２０９；および（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項１３】少なくとも１つの保存的なアミノ酸置換を除き、以下から
なる群から選択されるアミノ酸配列を有する、単離されたポリペプチド：（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約２０９；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸約２〜約２０９；（ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約１７７；（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約２０９；および（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項１４】以下からなる群から選択されるアミノ酸を含む単離された
ポリペプチド：（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約２０９；（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸約２〜約２０９；（ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸約１〜約１７７；（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約２０９；および（ｅ）配列番号４に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項１５】配列番号４に記載のポリペプチドのエピトープ保有部分。
【請求項１６】配列番号４に記載の１０〜５０個連続したアミノ酸を含む
、請求項１５に記載のエピトープ保有部分。
【請求項１７】アミノ酸ＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＡＨ（配列番号７
）を含む、請求項１５に記載のエピトープ保有部分。
【請求項１８】アミノ酸ＨＬＰＧＮＫＳＰＨＲＤＰＡＰＲ（配列番号８）
を含む、請求項１５に記載のエピトープ保有部分。
【請求項１９】請求項１２に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項２０】請求項１３に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項２１】請求項１４に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項２２】薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせた、請求項１２
に記載のポリペプチドを含む薬学的組成物。
【請求項２３】栄養補助を必要とする患者中の細胞に栄養補助を提供する
ための方法であって、該方法が、配列番号４に記載のポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドを含む組成物を該患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項２４】請求項２３に記載の方法であって、前記ポリヌクレオチド
が、前記ポリヌクレオチドを発現する細胞を前記患者に移植することによって投
与され、前記細胞が該患者中でＦＧＦ−２１ポリペプチドを発現する、方法。
【請求項２５】前記移植された細胞が半透膜中にカプセル化される、請求
項２３に記載の方法。
【請求項２６】前記患者が、不適当な数の肝細胞によって特徴付けられる
状態に罹患する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】前記状態が肝硬変である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】前記患者が、不適当な機能または数の精巣細胞によって特
徴付けられる状態に罹患する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】前記状態が、不妊症、不能、および精巣癌からなる群から
選択される少なくとも１つの状態である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】前記患者が胸腺の不適当な機能によって特徴付けられる状
態に罹患する、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】請求項３０に記載の方法であって、前記状態が、白血病、
リンパ腫、自己免疫疾患、胸腺の増殖性障害、および胸腺の分化障害からなる群
から選択される少なくとも１つの状態である、方法。
【請求項３２】栄養補助を必要とする患者中の細胞に栄養補助を提供する
ための方法であって、該方法が、配列番号４に記載のポリペプチドを含む組成物
を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３３】前記患者が、不適当な数の肝細胞によって特徴付けられる
状態に罹患する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】前記状態が肝硬変である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】ヒト患者の肝臓における疾患状態を軽減する方法であって
、該疾患状態は、該ヒト患者中の機能的な肝細胞の変性を遅らせること、機能的
な肝細胞の機能を回復すること、および機能的な肝細胞の数を増加させることか
らなる群から選択される少なくとも１つの方法によって軽減され、該方法が、配
列番号４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む薬学的に有効な組成
物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】ヒト患者の胸腺における疾患状態を軽減する方法であって
、該疾患状態は、該ヒト患者中の機能的な胸腺細胞の変性を防止すること、機能
的な胸腺細胞の変性を遅らせること、および機能的な肝細胞の数を増加させるこ
とからなる群から選択される少なくとも１つの方法によって軽減され、該方法が
、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む薬学的に有効な
組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３７】ヒト患者の精巣における疾患状態を軽減する方法であって
、該疾患状態は、該ヒト患者中の機能的な胸腺細胞の変性を防止すること、機能
的な胸腺細胞の変性を遅らせること、および機能的な精巣細胞の数を増加させる
ことからなる群から選択される少なくとも１つの方法によって軽減され、該方法
が、配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む薬学的に有効
な組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３８】患者由来のサンプル中のＦＧＦ−２１をコードするｍＲＮ
Ａの存在を検出するためのキットであって、該キットは、容器にパッケージ化さ
れた、請求項３に記載のポリヌクレオチドの少なくとも２０個連続したヌクレオ
チドを有するポリヌクレオチドを含む、キット。
【請求項３９】前記ポリヌクレオチドが、配列番号４に記載の少なくとも
６個連続したアミノ酸をコードする、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】患者由来のサンプル中のＦＧＦ−２１ポリペプチドの存在
を検出するためのキットであって、該キットが、容器にパッケージ化された、請
求項１９に記載の抗体を包含する、キット。
【請求項４１】以下からなる群から選択されるポリヌクレオチドを含む単
離された核酸分子：（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約２１０をコードするポリヌクレオチ
ド；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸約２〜約２１０をコードするポリヌクレオチ
ド；（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約１７７をコードするポリヌクレオチ
ド；（ｄ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約２１０をコードするポリヌクレオ
チド；（ｅ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約１７７をコードするポリヌクレオ
チド；（ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）に記載のポリヌクレオチド
相補体；および（ｇ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）に記載のポリヌクレオチド
に少なくとも９０％同一のポリヌクレオチド。
【請求項４２】配列番号１のコード領域由来の２０〜６００連続したヌク
レオチドを含む、単離された核酸分子。
【請求項４３】配列番号１のコード領域由来の６０〜４００連続したヌク
レオチドを含む、請求項４２に記載の単離された核酸分子。
【請求項４４】配列番号１のコード領域由来の２００〜３００連続したヌ
クレオチドを含む、請求項４３に記載の単離された核酸分子。
【請求項４５】少なくとも１つの保存的なアミノ酸置換を除き、以下から
なる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドを含む、単離された核酸分子：（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約２１０（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸約２〜約２１０（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約１７７（ｄ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約２１０；および（ｅ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項４６】ＤＮＡである、請求項４１に記載の単離された核酸分子。
【請求項４７】請求項４１に記載の核酸分子をプロモーターに作動可能に
連結して、ベクター中に挿入する工程を包含する、組換えベクターを作製する方
法。
【請求項４８】請求項４７に記載の方法によって作製された、組換えベク
ター。
【請求項４９】請求項４８に記載の組換えベクターを宿主細胞中に導入す
る工程を包含する、組換え宿主細胞を作製する方法。
【請求項５０】請求項４９に記載の方法によって作製された、組換え宿主
細胞。
【請求項５１】ポリペプチドを産生するための組換え方法であって、該方
法が、該ポリペプチドが発現される条件下で請求項５０に記載の組換え宿主細胞
を培養する工程および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方法。
【請求項５２】以下からなる群から選択されるアミノ酸に少なくとも９５
％同一のアミノ酸を含む単離されたポリペプチド：（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約２１０；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸約２〜約２１０；（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約１７７；（ｄ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約２１０；および（ｅ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項５３】少なくとも１つの保存的なアミノ酸置換を除き、以下から
なる群から選択されるアミノ酸配列を有する、単離されたポリペプチド：（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約２１０；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸約２〜約２１０；（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約１７７；（ｄ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約２１０；および（ｅ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項５４】以下からなる群から選択されるアミノ酸を含む単離された
ポリペプチド：（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約２１０；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸約２〜約２１０；（ｃ）配列番号２に記載のアミノ酸約１〜約１７７；（ｄ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約２１０；および（ｅ）配列番号２に記載のアミノ酸約４０〜約１７７。
【請求項５５】配列番号２に記載のポリペプチドのエピトープ保有部分。
【請求項５６】配列番号２に記載の１０〜５０個連続したアミノ酸を含む
、請求項５５に記載のエピトープ保有部分。
【請求項５７】請求項５２に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項５８】請求項５３に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項５９】請求項５４に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。