JP2003531583A

JP2003531583A - ヒトｆｇｆ−２３遺伝子および遺伝子発現産物

Info

Publication number: JP2003531583A
Application number: JP2001565759A
Authority: JP
Inventors: 信行伊藤; マイケルダブリュー．カバナウ，
Original assignee: カイロンコーポレイション; 京都大学長
Priority date: 2000-03-08
Filing date: 2001-03-07
Publication date: 2003-10-28
Also published as: EP1261638A2; US20020082205A1; WO2001066595A2; WO2001066595A9; AU2001249125A1; WO2001066595A3; EP2075255A1; US20060281679A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヒト線維芽細胞増殖因子（ｈＦＧＦ−２３）、ｈＦＧＦ−２３の切断産物、およびこれらの改変体、ならびにＦＧＦ−２３をコードするポリヌクレオチドに関する。本発明はまた、ポリヌクレオチドおよびタンパク質に関連する診断因子および治療因子（プローブおよび抗体を含む）、ならびに皮膚、脳、および胎盤の疾患および障害を処置する方法、ならびに胸腺機能に関連する状態を処置する方法に関する。本発明はまた、マウス線維芽細胞増殖因子（ｍＦＧＦ−２３）、およびその改変体、ならびにｍＦＧＦ−２３をコードするポリヌクレオチドに関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーのメンバーをコードする
核酸配列、およびこの核酸配列によってコードされるポリペプチドに関する。

【０００２】（発明の背景）原型の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）であるＦＧＦ−１およびＦＧＦ−２は、
脳および下垂体から、線維芽細胞の有糸分裂促進剤として本来単離された。しか
し、ＦＧＦ−１およびＦＧＦ−２は、発生組織および成体組織において広範に発
現され、そしてこれらは、新脈管形成、有糸分裂誘発、細胞分化および組織損傷
の修復を含む複数の生物学的活性を有するポリペプチドである（Ｂａｉｒｄ，Ａ
．ら、ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ３：２３９−２４３（１９９１）；Ｂｕｒｇ
ｅｓｓ，Ｗ．Ｈ．ら，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５８：５７５−６０
６（１９８９））。公開された文献に従うと、現在ＦＧＦファミリーは、少なく
とも１９個のメンバー（ＦＧＦ−１〜ＦＧＦ−１９）からなる。ＦＧＦ−３は、
マウス乳腺癌ウイルスによる活性化の一般的な標的であることが同定された（Ｄ
ｉｃｋｓｏｎら，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：１８−２６（１
９９１）；ＦＧＦ−４〜ＦＧＦ−６は、癌遺伝子産物として同定された（Ｙｏｓ
ｈｉｄａら、Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：２７−３７（１９９１
）；Ｇｏｌｄｆａｒｂら，Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ６３８：３８−５
２（１９９１）；Ｃｏｕｌｉｅｒら，Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８
：５３−６１（１９９１））。ＦＧＦ−１０は、相同性に基づくポリメラーゼ連
鎖反応（ＰＣＲ）によってラット肺から同定された（Ｙａｍａｓａｋｉら、Ｊ
ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７１：１５９１８−１５９２１（１９９６））。ＦＧＦ
−１１〜ＦＧＦ−１４（ＦＧＦ相同性因子（ＦＨＦ）の１〜４）は、ランダムｃ
ＤＮＡ配列決定、データベース検索および相同性に基づくＰＣＲの組み合わせに
よってヒト網膜から同定された（Ｓｍａｌｌｗｏｏｄら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：９８５０−９８５７（１９９６））。ＦＧＦ
−１５は、キメラホメオドメイン癌タンパク質（ｃｈｉｍｅｒｉｃｈｏｍｅｏ
ｄｏｍａｉｎｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）の下流の標的として同定された（Ｍｃ
Ｗｈｉｒｔｅｒら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２４：３２２１−３２３２（１
９９７））。ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−１７、およびＦＧＦ−１８は、それぞれ、
相同性に基づくＰＣＲによって、ラットの心臓および胚から同定された（Ｍｉｙ
ａｋｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４３：
１４８−１５２（１９９８）；Ｈｏｓｈｉｋａｗａら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４４：１８７−１９１（１９９８）；Ｏｈ
ｂａｙａｓｈｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：１８１６１−１８１６４
（１９９８））。近年、ＦＧＦ−１９が、データベース検索によってヒト胎児脳
から同定された（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａ
ｃｔａ１４４４：１４８−１５１（１９９９））。これらは、約３０〜６０％
のアミノ酸同一性を有する保存された約１２０アミノ酸残基のコアを有する。こ
れらのＦＧＦはまた、発生組織および成体組織の両方において重要な役割を果た
すようである。従って、既知のＦＧＦとは異なる機能および活性を有するさらな
るＦＧＦ分子、ならびにヒト疾患に関与する、組織に特異的に発現されるＦＧＦ
分子についての必要性が、当該分野に存在する。

【０００３】（発明の要旨）本発明は、単離されたポリヌクレオチドを含む組成物を提供し、このポリヌク
レオチドは、以下：（ａ）配列番号１または３の少なくとも８個連続するヌクレオチドを含む、ポ
リヌクレオチド；（ｂ）（ａ）のポリヌクレオチドに少なくとも８０％相同性を有する、ポリヌ
クレオチド；および（ｃ）配列番号１または３の配列を有するポリヌクレオチドによって発現され
るタンパク質をコードするポリヌクレオチド、からなる群より選択される。

【０００４】本発明はさらに、診断プローブまたはプライマーとしての、この単離されたポ
リヌクレオチドまたはそのフラグメントの使用を提供する。

【０００５】本発明はまた、ポリペプチドを含む組成物を提供し、ここで、このポリペプチ
ドは、以下：（ａ）配列番号１または３によってコードされる少なくとも６個連続するアミ
ノ酸を含む、ポリペプチド；（ｂ）配列番号１または３を含むポリヌクレオチドによってコードされる、ポ
リペプチド；および（ｃ）配列番号２または４のポリペプチドの改変体、からなる群より選択される。

【０００６】本発明の特定の好ましい実施形態において、ポリヌクレオチドは、発現制御配
列に作動可能に連結される。本発明はさらに、上記ポリヌクレオチドで形質転換
された、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞および哺乳動物細胞を含む宿主細胞を提
供する。本発明はまた、配列番号１または３に対応する全長ｃＤＮＡおよび全長
ポリヌクレオチドを提供する。

【０００７】他の好ましい実施形態において、ＦＧＦ−２３は、切断部位が変異されている
切断不能な変異体である。特定の実施形態において、アミノ酸の１７６位および
１７９位が、置換または欠失されている。他の実施形態において、アミノ酸の１
７６位および１７９位は変更されていないが、１７６位および／または１７９位
付近の１つ以上のアミノ酸が変異されていて、同様に切断不能な形態のＦＧＦ−
２３を生じる。

【０００８】本発明のタンパク質およびポリペプチド組成物はさらに、薬学的に受容可能な
キャリアを含み得る。このようなタンパク質またはポリペプチドと特異的に反応
する抗体を含む組成物がまた、本発明によって提供される。

【０００９】本発明はまた、前駆体細胞もしくは子孫において発現される稀な分子の単離の
ためのｃＤＮＡライブラリーの作製に使用される、別な方法では少量の細胞集団
である細胞の大量産生を提供する；処置によって産生された細胞は、増殖因子ま
たは他の分子を直接発現し得、そして馴化培地は、新規活性に関するアッセイに
おいてスクリーニングされる。

【００１０】本発明はさらに、哺乳動物幹細胞の単離、自己再生、および生存、ならびにそ
の子孫の分化を提供する。

【００１１】本発明はまた、以下を提供する：異常増殖、萎縮、分解、毒素媒介組織損傷、
ならびに手術後組織再生および傷害後組織再生を含むがこれらに限定されない疾
患状態において、皮膚細胞の分解を妨害もしくは遅延する組成物および方法、ま
たは皮膚細胞の数を増加させる組成物および方法；胸腺および免疫系の障害にお
いて、胸腺細胞の分解を妨害もしくは遅延させる組成物および方法、または胸腺
細胞の数を増加させる組成物および方法；そして、パーキンソン病およびアルツ
ハイマー病などにおいて、神経組織の分解を妨害または遅延させる組成物および
方法、または神経細胞の数を増加させる組成物および方法。

【００１２】本発明はまた、疾患状態（例えば、癌）、および胸腺、神経組織、皮膚または
胎盤由来の細胞の増殖障害または分化障害において有用である、ＦＧＦ−２３機
能のインヒビターを同定するための組成物および方法を提供する。

【００１３】（発明の詳細な説明）広範な種々の細胞型および組織型の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）、増殖（ｐｒｏｌｉ
ｆｅｒａｔｉｏｎ）、生存および分化を促進するためのそれらの強力な活性のた
めに、ＦＧＦは、筋骨格状態のような創傷治癒（例えば、骨折、靭帯および組織
修復、腱炎、滑液包炎など）；皮膚状態（例えば、火傷、切断、裂傷、とこずれ
、緩慢潰瘍治癒など）；組織保護、修復、および心筋梗塞および虚血の間の新脈
管形成の誘導、神経学的状態（例えば、神経変性疾患および発作）の処置、黄斑
変性症を含む眼疾患の処置、を含む多数の異なった徴候についての治療剤として
追求され続ける。

【００１４】現在までに同定された線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）タンパク質は、種々の細
胞型の増殖および分化を制御するシグナル分子のファミリーに属する。ヒト生理
学および病理学に対するＦＧＦタンパク質の重要性は、胚形成、血管発達および
増殖および骨増殖におけるそれらの重要な役割に部分的に関する。インビトロ実
験において、内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞、ならびに心筋細胞骨格筋
細胞の細胞増殖および分裂を調節する際のＦＧＦの役割を実証してきた。ＦＧＦ
ファミリーの他のメンバーおよびそれらの生物学的役割は、Ｃｒｏｓｓｌｅｙら
、Ｄｅｖｅｏｐｍｅｎｔ１２１：４３９−４５１（１９９５）；Ｏｈｕｃｈｉ
ら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２４：２２３５−２２４４（１９９７）；Ｇｅ
ｍｅｌら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ３５：２５３−２５７（１９９６）；およびＧｈ
ｏｓｈら、ＣｅｌｌＧｒｏｗｔｈａｎｄＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
７：１４２５−１４３４（１９９６）において記載されている。

【００１５】癌細胞増殖における役割のために、ＦＧＦタンパク質はまた、ヒト健康および
疾患に対して重要である。例えば、ＦＧＦ−８は、乳癌細胞および前立腺癌細胞
におけるアンドロゲン誘導増殖因子として同定された（Ｔａｎａｋａら、ＦＥＢ
ＳＬｅｔｔ．３６３：２２６−２３０（１９９５）およびＰ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８
９：８９２８−８９３２（１９９２））。

【００１６】ＦＧＦファミリーの新しいメンバーが本明細書中に記載され、ここで、ＦＧＦ
タンパク質は、哺乳動物皮膚、胸腺、脳および胎盤において発現される。本発明
のマウスＦＧＦをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１に示される配列を
有する。本発明のヒトＦＧＦをコードするポリヌクレオチドは、配列番号３に示
される配列を有する。マウスポリヌクレオチドを、アミノ酸配列全体の保存され
た領域によって、および既知のＦＧＦタンパク質をコードするポリヌクレオチド
および遺伝子によって共有される相同性の領域によって、ＦＧＦファミリーメン
バーをコードするとして同定した。

【００１７】本発明者らは、ＦＧＦ−２３が、ＦＧＦファミリーの以前に同定されていない
メンバーであると考えている。現在まで、少なくとも２０のヒトＦＧＦタンパク
質が同定されてきた。多数の場合において、他の哺乳動物（特に、マウスおよび
ラット）における相同性タンパク質がまた、同定されてきた。ヒトタンパク質は
、アミノ酸配列、レセプター特異性、組織発現パターン、および生物学的活性の
点において、異なった程度に変化する。

【００１８】２０のヒトＦＧＦ遺伝子（ＦＧＦ−１〜ＦＧＦ−１４およびＦＧＦ−１７〜Ｆ
ＧＦ２２）の染色体局在が報告された（図１０）。ヒトＦＧＦ遺伝子は、第１１
染色体上にタンデムに連結されるＦＧＦ−３およびＦＧＦ−４を除いて、ヒトゲ
ノムの種々の領域に局在する。ヒトＦＧＦ遺伝子の染色体局在の同定は、しばし
ば、ヒト疾患を関連させる際に役に立ち、従って、特に興味がある。本発明に従
って、ヒトＦＧＦ−２３遺伝子は、ヒト第１９染色体ｐ１３．３に局在する（図
１０）。興味深いことに、ヒトＦＧＦ−６遺伝子はまた、同じヒトゲノムＤＮＡ
において見出された。ヒトＦＧＦ−６遺伝子のコード領域は、ＦＧＦ−２３遺伝
子のコード領域から約５．５上流の部位に位置する。

【００１９】本発明のＦＧＦ−２３は、配列において、現在までに刊行物に記載される全て
のＦＧＦタンパク質とは異なる。本明細書中で議論されるように、種々のＦＧＦ
タンパク質によって果たされる役割についての知識は、増加し続けているが、か
なり不完全である。

【００２０】本発明は、配列番号１のＦＧＦが皮膚、脳および胎盤において発現され、そし
てヒトＦＧＦ−２３がこれらの組織の疾患の発症および回復においてある役割を
果たし得ることを開示することによって、この知識に追加する。さらに、ＦＧＦ
−２３はまた、胸腺において発現され、従って、胸腺から誘導される細胞の障害
の発症または回復においてある役割を果たし得る。従って、本発明は、新規な線
維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−２３）の同定、単離および配列決定に基づく。

【００２１】本発明は、さらに、ＦＧＦ−２３切断の産物を提供することによってこの知識
に追加し、ここで、この切断は、例えば、アミノ酸１７９または１７９で生じる
。切断は、発現の間に生じ得、そして２０ｋＤａのタンパク質および７〜１２ｋ
Ｄａのタンパク質の産物を生じ、非切断発現産物は、２８ｋＤａタンパク質であ
る。これらはこの機構によって束縛されないが、本発明者らは、この切断がアミ
ノ酸１７６および１７９を含み、その両方が、ネイティブなヒトＦＧＦ−２３に
おけるアルギニンであると考える。

【００２２】従って、切断は、例えば、ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ２６：３５４−
３４８（２０００）に記載される、リン酸代謝（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｅｔａ
ｂｏｌｉｓｍ）の障害において役割を果たし得る。

【００２３】本発明は、リン酸代謝の障害を処置するための組成物および方法を提供し、こ
こで、この障害が、ＦＧＦ−２３の切断の結果である。この組成物は、ＦＧＦ−
２３、またはＦＧＦ−２３をコードするポリヌクレオチドを含み得、ここで、Ｆ
ＧＦ−２３は、変異されて切断部位を変化するかまたは欠失する。このような変
異のための好ましい部位は、１７６位および１７９位のアルギニンの１つまたは
両方を含む。他の部位は、残基１７６または１７９に近いアミノ酸を含み、ここ
で、変異は、残基１７６または１７９の近くで切断に影響する。

【００２４】本発明に従って、新規マウスＦＧＦをコードするＤＮＡが同定された。全ての
コード領域のヌクレオチド配列が、マウス第６染色体由来のゲノムフラグメント
を使用して決定された。コード領域のヌクレオチド配列は、マウスＦＧＦ（２５
１個のアミノ酸）（図２）の完全なアミノ酸配列の解明を可能にした。このタン
パク質は、仮にＦＧＦ−２３と命名された。２つのシステイン残基は、ＦＧＦフ
ァミリーにおいて十分保存され、そしてこれらのアミノ酸は、マウスＦＧＦ−２
３の残基５１および１１３に対応する。システインは、１１３位において見出さ
れ、そしてチロシンは、５１位において見出された。

【００２５】ＦＧＦ−２３をコードするヒト遺伝子は、ヒト胎盤において同定された。ヒト
ＦＧＦ−２３の全てのコード領域を含むｃＤＮＡは、以下のようなＦＧＦ特異的
プライマーを使用するＰＣＲによって増幅された：センスプライマー：５’ａｇ
ｃａｃｃａｇｃｃａｃｔｃａｇａｇｃａ３’（配列番号５）；アンチセンスプ
ライマー：５’ｃｔｔｃｃａｇｃｇａｃｃｃｔａｇａｔｇａ３’（配列番号６
）。

【００２６】マウス成体組織におけるＦＧＦ−２３ｍＲＮＡの発現を、マウスＦＧＦ−２
３に特異的な正方向プライマーおよび逆方向プライマー、マウスＦＧＦ−２３に
特異的なＴａｑＭａｎプローブ、およびテンプレートとしてのマウス組織ｃＤＮ
Ａ（脳、胸腺、小腸、心臓、肺、肝臓、腎臓、筋肉、皮膚、脾臓、胃および精巣
）を用いて、Ｍｏｄｅｌ７７００ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃｔｏｒによ
るリアルタイム定量的ＰＣＲによって調べた。β−アクチンｍＲＮＡの発現をま
たコントロールとして調べた。製造業者の指示に従って決定されたＦＧＦ−２３
ｃＤＮＡのコピー数を、それぞれの組織におけるβアクチンｃＤＮＡのコピー
数に対して規準化した（図１２）。ＦＧＦ−２３ｍＲＮＡは、脳および胸腺に
おいて主に発現されることが見出された。しかし、ＦＧＦ−２３ｍＲＮＡの発
現レベルは、β−アクチンｍＲＮＡの発現レベルと比較して非常に低い。マウス
ＦＧＦ−２３ｃＤＮＡは、もともと皮膚から単離されたが、皮膚におけるＦＧ
Ｆ−２３ｍＲＮＡの発現は、脳における発現よりもずっと低い。

【００２７】脳におけるＦＧＦ−２３の役割を解明するために、脳における逐次冠状切片に
おけるＦＧＦ−２３ｍＲＮＡの発現を、^３５Ｓ−標識アンチセンスまたはセン
スマウスＦＧＦ−２３ｃＤＮＡプローブを用いるインサイチュハイブリダイゼ
ーションによって調べた。個々の特異的標識は、腹側外側視床核（ｖｅｎｔｒｏ
ｌａｔｅｒａｌｔｈａｌａｍｉｃｎｕｃｌｅｕｓ）においてのみ観測された
（図１３）。試験された他の脳の領域において特異的標識は観測されなかった。
運動系に関連する腹側外側視床核は、深い小脳核から運動皮質への活性について
の主要なリレーである（Ｐｒｉｃｅ，Ｊ．Ｌ．，ＴｈｅＲａｔＮｅｒｖｏｕ
ｓＳｙｓｔｅｍ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ
，ｐｐ．６２９−６４８（１９９５））。腹側外側視床切開が、生理学的振せん
および病理学的振せんの両方の脊柱上の成分に関与する通常の回路を妨害し、こ
れは、腹側外側視床核が生理学的振せんを生成する回路に関係することを示す（
Ｄｕｖａｌら、Ｅｘｐ．ＢｒａｉｎＲｅｓ．１３２：２１６−２２２（２００
０））。ＦＧＦは、近位細胞に対して作用する局所的なシグナル分子である（Ｂ
ｕｒｇｅｓｓら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ５８：５７５−６０６（
１９８９））。従って、ＦＧＦ−２３は、腹側外側視床核において役割を果たす
独特のＦＧＦであることが予期される。

【００２８】本明細書中でＦＧＦ−２３に対する参照は、本明細書中で特徴付けられそして
記載されるＦＧＦ−２３に実質的に相同で、生物学的に等価な任意の起源の増殖
因子を含むと解釈されることを意図する。このような実質的に相同な増殖因子は
、任意の組織または種に対してネイティブであり得、そして同様に、生物学的活
性が、任意の多くの生物学的アッセイ系において特徴付けられ得る。

【００２９】用語「生物学的に等価」とは、本発明の組成物が、本明細書中に記載されるよ
うに単離されたＦＧＦ−２３または本発明の組換え的に産生されたヒトＦＧＦ−
２３と必ずしも同じ程度ではないが、同じ様式で同じ増殖特性のいくらかまたは
全てを示し得る。

【００３０】「実質的に相同」により、任意の種由来のＦＧＦ−２３に対するヒトＦＧＦ−
２３の相同性の程度が、ＦＧＦ−２３とＦＧＦファミリーの任意の以前に報告さ
れたメンバーとの間の相同性の程度よりも大きいことを意味する。

【００３１】配列の同一性または同一性パーセントは、非ヒトＦＧＦ−２３との同一性パー
セントを決定する場合にはヒトＦＧＦを参照して、非ＦＧＦ−２３成長因子との
同一性パーセントを決定する場合にはＦＧＦ−２３を参照して、２つの配列をア
ラインメントする場合はＬａｓｅｒｇｅｎｅバイオコンピュータソフトウェア（
ＤＮＡＳＴＡＲ，ＩＮＣ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）における複数配列アラインメ
ントのＣｌｕｓｔａｌ方法（Ｈｉｇｇｉｎｓら，Ｃａｂｉｏｓ８：１８９−１
９１，１９９２）を用いた、２つの配列間の同じ残基の百分率を意味することが
意図される。この方法において、複数アラインメントは、進行的な様式で実施さ
れ、この様式では、ますます大きなアラインメント群が、一連の対様式のアライ
ンメントから算出した類似性スコアを用いてアセンブリされる。最適な配列アラ
インメントは、最大アラインメントスコアを見出すことにより得られる。最大ア
ラインメントスコアは、所定の進化的間隔にわたって２つの関連するタンパク質
において生じる所定のアミノ酸の変化の確率を示す、残基の重み付け表から決定
された、アラインメントにおける別個の残基間の全てのスコアの平均である。ア
ラインメントにおいてギャップを空けることおよびギャップを伸ばすことについ
てのペナルティーは、スコアに寄与する。このプログラムで用いられるデフォル
トパラメーターは、以下の通りである：複数アラインメントについてのギャップ
ペナルティー＝１０；複数アラインメントについてのギャップの長さのペナルテ
ィー＝１０；対様式でのアラインメントにおけるｋ−タプル値＝１；対様式での
アラインメントにおけるギャップペナルティー＝３；対様式のアラインメントに
おけるウィンドウ値＝５；対様式のアラインメントにおいて保存されるダイアゴ
ナル＝５。アラインメントプログラムのために用いられる残基の重み付け表は、
ＰＡＭ２５０（Ｄａｙｈｏｆｆら，ＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑ
ｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆｆ編，ＮＤＲＦ，Ｗａ
ｓｈｉｎｇｔｏｎ，第５巻，別冊３，３４５頁，１９７８）である。

【００３２】保存パーセントは、２つの残基が保存的置換（ＰＡＭ２５０残基の重み付け表
において０．３以上の対数オッズ値を有すると定義される）を示す位置の百分率
に対して同一性残基の百分率を足すことによって、上記のアラインメントから算
出される。保存は、非ヒトＦＧＦ−２３との保存パーセントを決定する場合はヒ
トＦＧＦ−２３に対して参照され、非ＦＧＦ−２３増殖因子との保存パーセント
を決定する場合はＦＧＦ−２３に対して参照される。この必要条件を満たす保存
的アミノ酸変化は、以下の通りである：Ｒ−Ｋ；Ｅ−Ｄ、Ｙ−Ｆ、Ｌ−Ｍ；Ｖ−
Ｉ、Ｑ−Ｈ。

【００３３】本発明は、１以上の反応性アミノ酸側鎖と共有結合した１以上のポリマーを有
するＦＧＦ−２３タンパク質またはこれらの変異体を提供する。例として、限定
ではないが、これらのポリマーとして、１以上の遊離のシステインスルフヒドリ
ル残基に結合され得るポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられ、これによ
り、ジスルフィド結合およびタンパク質が酸化条件に曝露された場合の凝集の形
成をブロックする。さらに、ＦＧＦ−２３タンパク質および／またはムテインの
ぺグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）は、半減期、溶解性、およびプロテアーゼ耐性
を増加するような改善された特性を提供することが期待される。あるいは、ＦＧ
Ｆ−２３タンパク質および／またはムテインは、遊離アミノ基（例えば、リジン
εまたはＮ末端アミノ基）へのポリマーの共有結合性の付加により改変され得る
。共有結合性の改変のための好ましいシステインおよびリジンは、レセプターも
しくはヘパリン結合中に含まれないものまたは適正なタンパク質の折り畳み中に
含まれないものである。ＦＧＦ−２３の生化学的および／または生物学的活性を
アッセイするための方法が、特定のアミノ酸残基の改変が、所望されるタンパク
質の活性を生じるか否かを決定するために使用され得ることは、当業者に明らか
である。

【００３４】１以上のプロテアーゼ切断部位を改変することによるＦＧＦ−２３の安定性を
改善することは有益であり得る。従って、本発明は、ＦＧＦ−２３改変体を提供
し、このＦＧＦ−２３改変体において、１以上のプロテアーゼ切断部位が（例え
ば、切断部位での１以上のアミノ酸の置換により）改善された安定性を有するＦ
ＧＦ−２３改変体を作製するために変更された。このような改善されたタンパク
質の安定性は、タンパク質生成物および／または治療的使用の間で有益であり得
る。

【００３５】改変のための適切なプロテアーゼ切断部位は、当該分野で周知であり、そして
企図される特定の用途によって変化するようである。例えば、代表的な置換は、
リジンまたはアルギニンと他のアミノ酸（例えば、アラニン）との置換を含む。
活性の喪失（例えば、レセプター結合またはヘパリン結合）は、本明細書中で記
載されるように試験され得る。

【００３６】ＦＧＦ−２３はまた、ハイブリッド形態または改変形態が、ＦＧＦ−２３の生
物学的活性を保持する限り、以下を含むＦＧＦ−２３のハイブリッド形態および
ＦＧＦ−２３改変形態を含む：融合タンパク質；ＦＧＦ−２３フラグメント；特
定のアミノ酸が欠失または置換されたハイブリッド形態および改変形態；１以上
のアミノ酸が改変アミノ酸または異常アミノ酸に変更されたような改変；グリコ
シル化のような改変。融合タンパク質は、本発明のＦＧＦ−２３またはこれらの
フラグメントおよびタンパク質生成物の分泌を促進するための非相同性タンパク
質のシグナル配列から構成され得る。

【００３７】ＦＧＦ−２３を含む融合タンパク質または生物学的に活性なこれらのフラグメ
ントもしくはこれらの免疫原フラグメントは、当該分野で公知の方法を使用して
生成され得る。このような融合タンパク質は、治療的に使用され得、または単離
手順および精製手順を単純化するために生成され得る。ヒスチジン残基は、固定
化金属アフィニティークロマトグラフィー精製を可能にするために組込まれ得る
。残基ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬは、ｍｙｃモノクローナル抗体により認識される免
疫原性決定基を含み得、そしてｍｙｃモノクローナル抗体に基いたアフィニティ
ー精製を可能にするために組込まれ得る。トロンビン切断部位は、選択された部
位で分子の切断を可能にするために組込まれ得る；好ましいトロンビン切断部位
は、残基ＬＶＰＲＧから構成される。分子の精製は、配列（例えば、残基ＳＡＷ
ＲＨＰＱＦＧＧ、これは、常磁性ストレプトアビジンビーズに結合する）を組込
むことにより容易にされ得る。このような実施形態は、参照として援用されるＷ
Ｏ９７／２５３４５に記載される。

【００３８】本発明はまた、ＦＧＦ−２３のフラグメントを含む。配列番号４および配列番
号２の好ましいフラグメントには、以下が挙げられる：約１〜約２５１のアミノ
酸；約２〜約２５１のアミノ酸；約２５〜２５１のアミノ酸；約１〜約２４のア
ミノ酸。このようなフラグメントは、標準的な生化学的方法によってタンパク質
から調製されるか、またはこのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを発
現することによって調製され得る。

【００３９】ＦＧＦ−２３は、Ｎ末端に２４のアミノ酸の代表的なシグナル配列を有し、こ
のことはＦＧＦ−２３は分泌分子であることを示唆する。組換えマウスＦＧＦ−
２３は、このｃＤＮＡを含む組換えバキュロウイルスで感染されたＨｉｇｈＦ
ｉｖｅ昆虫細胞によって効率的に分泌され、ＦＧＦ−２３は分泌分子であること
が確認された。

【００４０】生物学的に活性な部位における変化によりネイティブなＦＧＦ−２３とは異な
るＦＧＦ−２３分子もまた、本発明の範囲内に含まれる。

【００４１】実質的に相同の意味の中にまた含まれるのは、本明細書中に記載されるＦＧＦ
−２３に対する抗体との交叉反応性によって単離され得る、またはゲノムＤＮＡ
、ｍＲＮＡ、もしくはｃＤＮＡを含む、コードヌクレオチド配列が、本明細書中
のＦＧＦ−２３もしくはそのフラグメントのゲノムもしくはサブゲノムのヌクレ
オチド配列もしくはｃＤＮＡの相補的配列とのハイブリダイゼーションによって
単離され得る、任意のＦＧＦ−２３である。縮重ＤＮＡ配列が、ヒトＦＧＦ−２
３をコードし得ることもまた当業者によって認識され、そしてこれらはまた、Ｆ
ＧＦ−２３の哺乳動物の対立遺伝子改変体と同様に、本発明の範囲内に含まれる
ことが意図される。

【００４２】増殖因子は、特異的レセプターに作用すると考えられる。本発明によって、Ｆ
ＧＦ−２３およびこのファミリーの増殖因子の未だ未知のメンバーは、他の増殖
因子ファミリーに関して示されたように、独特な分布を有する特異的レセプター
を介して作用する。

【００４３】本発明の好ましいｈＦＧＦ−２３は、記載された通りに同定された。また、好
ましいのは、組換えＤＮＡ技術により調製されたｈＦＧＦ−２３である。「純粋
な形態」または「精製された形態」または「実質的に精製された形態」によって
、ＦＧＦ−２３組成物が、ＦＧＦ−２３でない他のタンパク質を実質的に含まな
いことを意味する。

【００４４】配列番号１または配列番号３に対して８０％の相同性；好ましくは少なくとも
８５％の相同性、より好ましくは少なくとも９０％の相同性、最も好ましくは９
５％の相同性を有するＤＮＡおよびＲＮＡを含むポリヌクレオチドが、本発明の
範囲内に含まれる。配列番号１または３に対して９６％、９７％、９８％、およ
び９９％の相同性を有するポリヌクレオチドもまた含まれる。相同性パーセント
は、当該分野において公知の方法を使用して計算される。このような方法の非限
定的な例は、１２のギャップオープンペナルティおよび１のギャップエクステン
ションペナルティとともにアフィンギャップサーチ（ａｆｆｉｎｅｇａｐｓ
ｅａｒｃｈ）を用いてＭＰＳＲＣＨプログラム（ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌ
ａｒ）を実行するようなＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズム
である。

【００４５】ＦＧＦ−２３はまた、ハイブリッド形態または改変形態が、ＦＧＦ−２３の生
物学的活性を保持する限り、以下を含むＦＧＦ−２３のハイブリッド形態および
ＦＧＦ−２３改変形態を含む：融合タンパク質；ＦＧＦ−２３フラグメント；特
定のアミノ酸が欠失または置換されたハイブリッド形態および改変形態；１以上
のアミノ酸が改変アミノ酸または異常アミノ酸に変更されたような改変；グリコ
シル化のような改変。生物学的活性を保持することにより、応答性の細胞の増殖
、生存または分化を促進するＦＧＦ−２３の能力が、保存されることを意味する
が、本明細書中に記載される単離されたＦＧＦ−２３または組換えで生成された
ＦＧＦ−２３の能力と同じレベルである必要性はない。

【００４６】本発明はまた、ＦＧＦ−２３の切断産物（約２０ｋＤａ型および約７〜１２ｋ
Ｄａ型を含む）に関する。このような産物は、１７６位または１７９位でのＦＧ
Ｆ−２３の切断によって得られる。非切断型もまた提供され、ここで、１７６位
および／または１７９位のアルギニンは、変異、欠失もしくは置換されるか、ま
たはこれらの部位の近くの１つ以上のアミノ酸は、変異、欠失もしくは置換され
、それによって、これらの部位の１つもしくは両方での切断に影響する。

【００４７】組換えヒトＦＧＦ−２３は、ＦＧＦ−２３をコードするＤＮＡ配列を適切な形
質転換宿主細胞において発現することにより作製され得る。当該分野で周知の方
法を使用して、ＦＧＦ−２３をコードするＤＮＤは、発現ベクターに連結され得
、宿主細胞に形質転換され、そして形質転換細胞によりＦＧＦ−２３の発現に適
切な条件が確立される。

【００４８】ＦＧＦ−２３をコードするＤＮＡは、宿主細胞の好ましいコドンの使用の利益
を受けることにより設計され得る。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏ
ｓａにおけるコドンの使用は、例えば、Ｗｅｓｔら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ
Ｒｅｓ．１１：９３２３〜９３３５（１９８８）に記載される。Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおけるコドンの使用は、例えば、Ｌｌ
ｏｙｄら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２０：５２８９〜５２９５（
１９９２）に記載される。コリネバクテリアの好ましいコドンおよびＥ．ｃｏｌ
ｉの好ましいコドンとの比較は、Ｍａｌｕｂｒｅｓら、Ｇｅｎｅ１３４：１５
〜２４（１９９３）に提供される。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓ
ｔｅｒにおけるコドンの使用は、例えば、Ａｋａｓｈｉ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１
３６：９２７〜９３５（１９９４）に記載される。酵母におけるコドンの使用は
また、図７に示され、ショウジョウバエにおけるコドンの使用は、図８に示され
、そしてＥ．ｃｏｌｉについてのコドンの使用は、図９に示される。

【００４９】任意の適切な発現ベクター（例えば、昆虫細胞で使用するための発現ベクター
）を使用して、組換えヒトＦＧＦ−２３を産生し得る。バキュロウイルス発現系
もまた使用され得る。好ましい方法は、バキュロウイルスベクターを使用する昆
虫細胞（例えば、Ｔｒ５細胞またはＳｆ９細胞）での発現である。

【００５０】本発明は、ヒトＦＧＦ−２３をコードする配列を含む核酸配列を含む。ＦＧＦ
−２３をコードする核酸配列と実質的に同一である配列はまた、本発明の範囲内
に含まれる。このような実質的に同じ配列は、例えば、周知の手順および標準的
な手順により所定の宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）においてより容易に発現
されるコドンで置換され得る。このような改変された核酸配列は、本発明の範囲
内に含まれる。

【００５１】特定の核酸配列は、当業者により改変され得、従って、ＦＧＦ−２３のアミノ
酸配列をコードする全ての核酸配列は、同様にこのように改変され得る。従って
、本発明はまた、適切な場合には、このような核酸、または核酸配列の相補体す
べてとハイブリダイズし、ＦＧＦ−２３の細胞生存、細胞増殖、または細胞分化
活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。本発明はまた、細胞の
生存を促進する活性を有するポリペプチドをコードし、そしてＦＧＦ−２３に結
合する抗体により認識される核酸配列を含む。抗体を惹起するための好ましい方
法およびエピトープは、実施例７に記載される。

【００５２】本発明はまた、本発明の範囲内に含まれる任意の核酸配列に作動可能に連結さ
れた発現調節エレメントを含むベクターを包含する。本発明はまた、本発明の範
囲内に含まれる任意の核酸配列に作動可能に連結された発現調節エレメントを含
むベクターで形質転換された任意の種類の宿主細胞を含む。

【００５３】ＦＧＦ−２３を生成するための方法もまた本明細書中で提供される。調製は、
細胞型がＦＧＦ−２３を生成する限り、種々の細胞型由来の馴化培地からの単離
により行われ得る。第２の、そして好ましい方法は、ＦＧＦ−２３をコードする
核酸配列を単離または獲得し、この配列を適切なベクターおよび適切な細胞型に
適切な調節配列とともに配列をクローニングし、そしてＦＧＦ−２３を生成する
ための配列を発現することによる組換え方法の利用を含む。

【００５４】ＦＧＦ−２３は、皮膚、胸腺、脳、および胎盤における高い発現レベルに基い
て記載されてきたが、この因子は、他の細胞型にも作用し得る。ＦＧＦ−２３は
、細胞で作用し、これらの生存状態、増殖状態、分化状態または機能を促進する
ようである。この予測は、公知の増殖因子の活性に基く。ＦＧＦファミリーのメ
ンバーは、これらの発現が、１つのまたはわずかな組織に限られる場合でさえ、
異なる機能および発生学的起源の多くの細胞型に作用する。

【００５５】本発明者らは、本明細書中で、ＦＧＦ−２３が皮膚で発現されることを同定し
た。これは、例えば、前癌性病変、炎症性疾患、外傷、または毒素関連障害後の
回復、および他の皮膚疾患におけるＦＧＦ−２３の役割を示唆する。さらに、Ｆ
ＧＦ−２３はまた、胸腺で発現される。これは、例えば、細胞（例えば、胸腺由
来の免疫細胞）の障害、例えば、自己免疫障害、白血病およびリンパ腫、免疫不
全状態などにおけるＦＧＦ−２３の役割を示唆する。

【００５６】いくつかのＦＧＦは、脳において発現され、そして好中性因子（ｎｅｕｔｒｏ
ｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ）として重要な役割を果たすことが予期される。ＦＧＦ
−１およびＦＧＦ−２は、脳において大量に存在し（Ｇｏａｐｏｄａｒｏｗｉｃ
ｚ，Ｄ．，ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．１４７：１０６〜１１９（１９８
７）、そして脳の種々の領域からの初代培養物に対する生存増強効果を及ぼす（
Ｗａｌｉｃｋｅ，Ｐ．Ａ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．８：２６１８〜２６２７（
１９９８））。ＦＧＦ−１は、中脳および脳幹の運動神経ならびに感覚神経にお
いて主に発現する（Ｅｌｄｅ，Ｒ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ７：３４９〜３６４（１
９９１））。対照的に、ＦＧＦ−２は、限られた領域（帯状皮質（ｃｉｎｇｕｌ
ａｔｅｃｏｒｔｅｘ）、ｉｎｄｕｓｔｉｕｍｇｒｉｅｕｍ、ｆａｓｃｉｏｌ
ａｃｉｎｅｒｅｒｕｍおよび海馬を含む）におけるニューロンにおいて、なら
びに脳の広範な領域における星状細胞において（Ｅｍｏｔｏ，Ｎ．ら、Ｇｒｏｗ
ｔｈＦａｃｔｏｒ２：２１〜２９（１９８９）、Ｗｏｏｄｗａｒｄ，Ｗ．Ｒ
．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１２：１４２〜１５２（１９９２））、主に発現
する。ＦＧＦ−５は、帯状皮質、海馬および視床において弱く発現する（Ｈａｕ
ｂ，Ｏ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：８０２２
〜８０２６（１９９０））。ＦＧＦ−９およびＦＧＦ−１１からＦＨＦ−１４は
、限られた領域のニューロン（海馬、視床、中脳および脳幹を含む）において発
現する（Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｓら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ
１３９８：３８〜４１（１９９８））。

【００５７】黒質におけるドーパミン作動性ニューロンの変性は、パーキンソン病を引き起
こす（Ｆａｌｌｏｎ，Ｊ．Ｈ．およびＬｏｕｇｈｌｉｎ，Ｓ．Ｅ．ＴｈｅＲａ
ｔＮｅｒｖｏｕｓＳｙｓｔｅｍ、第２版、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，
ＳａｎＤｉａｇｏ，ＣＡ、２１５〜２３８頁（１９９５））。従って、黒質に
おけるドーパミン作動性ニューロンについての神経栄養因子は、実質的な注意を
受けた。ＧＤＮＦ、Ｐｅｒｓｅｐｈｉｎ、Ａｒｔｅｍｉｎ、ＢＤＮＦ、およびＮ
Ｔ−３は、中脳のドーパミン作動性ニューロンの生存を増強する（Ｌｉｎ，Ｌ．
−Ｆ．Ｈ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：１１３０〜１１３２（１９９３）、Ｍ
ｉｌｂｒａｎｄｔ，Ｊら、Ｎｅｕｒｏｎ２０：２４５〜２５３（１９９８）、
Ｂａｌｏｈ，Ｒ．Ｈ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ２１：１２９１〜１３０２（１９９８
）、Ｈｙｍａｎ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ３５０：２３０〜２３２（１９９１）
、Ｈｙｍａｎ，Ｃ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１４：３３５〜３４７（１９９
４））。しかし、これらの発現は黒質に限定されない（Ｐｏｃｈｏｎ，Ｎ．Ａ．
ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．９：４６３〜４７１（１９９７）、Ｍｉｌ
ｂｒａｎｄｔ，Ｊら、Ｎｅｕｒｏｎ２０：２４５〜２５３（１９９８）、Ｂａ
ｌｏｈ，Ｒ．Ｈ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ２１：１２９１〜１３０２（１９９８）、
Ｅｒｎｆｏｒｓ，Ｐ．ら、Ｎｅｕｒｏｎ５：５１１〜５２６（１９９０））。
ＦＧＦ−２３が脳で発現するということは、本発明の非常に重要な知見である。

【００５８】ドーパミンニューロンが、不可逆的な損傷を受ける前に、おそらく何年もの間
、機能不全であると考えられる。従って、ＦＧＦ−２３のような因子は、細胞死
の予防または機能の回復において、有用であり得る（Ｄｕｎｎｅｔｔ，Ｓ．Ｂ．
ら、Ｎａｔｕｒｅ３９９：Ａ３２〜Ａ３９（１９９９））。ＦＧＦ−２３は、
変性をブロックするために、遺伝子移動方法を使用して投与され得る。このよう
な方法は、神経栄養性因子ＧＤＮＦ（グリア細胞株由来神経栄養因子）と共に使
用される。ラットのパーキンソンモデルにおいて、ナノグラム量のＢＤＮＦおよ
びＧＤＮＦが、形質転換細胞から測定され、そして神経保護効果は、黒質のドー
パミンニューロンの４０％〜７０％救出のオーダーであった。従って、本発明の
ＦＧＦ−２３を分泌するように操作された線維芽細胞または線維芽細胞細胞株を
使用する移植は、因子の分泌および黒質のドーパミンニューロンの救出を可能に
し得る。あるいは、ＦＧＦ−２３を有するウイルスベクターを用いた、線条体ま
たは黒質領域の注入もまた、神経保護効果を有する。

【００５９】パーキンソン病では、実質的な黒質中の神経変性は、一般に遅くそして長引く
。これは、おそらくは臨床症状が出現する４〜５年前までの初期介入が、変性プ
ロセスをブロックまたは遅延し得ることを示唆する。線条体ドーパミン機能の衰
えは、臨床症状の出現前にＰＥＴ画像化およびＳＰＥＣＴ画像化により検出され
得、この初期段階における神経保護介入の機会を提供する。

【００６０】本発明のＦＧＦ−２３はまた、アルツハイマー病のような他の神経変性疾患を
処置する際の用途を見出し得る。処置しなければならないさらなる状態としては
、発作、物理的刺激、化学的刺激または環境的刺激に起因する脳の外傷、中枢神
経系に対する毒性傷害、および任意の他のＣＮＳまたは神経学的障害が挙げられ
、ここで、変性プロセスのブッキング、遅延、または逆転がこの疾患または状態
を軽減する。

【００６１】本発明に従って処置され得る他の疾患は、クローン病、腸創傷の治癒、潰瘍、
炎症、損傷および手術吻合、運動性および吸収障害、ならびに腸の先天性奇形で
ある。

【００６２】ＦＧＦ−２３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、本発明に従って決定
された。本発明はまた、実施例２に記載されるように、ＦＧＦ−２３の天然に存
在する切断産物を提供する。ＦＧＦ−２３が天然に切断される能力は、これらの
切断産物が、細胞中の生物学的プロセスにおいて役割を果たし得ることを示す。
１つのこのようなプロセスは、リン酸代謝に関係する。ＦＧＦ−２３切断産物に
関し本明細書中に開示される結果は、常染色体優性低リン酸血症性くる病（ａｕ
ｔｏｓｏｍａｌｄｏｍｉｎａｎｔｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｉｃｒｉ
ｃｋｅｔｓ）（ＡＤＨＲ）が、ＦＧＦ−２３（特に、アルギニン１７６（Ｒ１７
６Ｑ）およびアルギニン１７９（Ｒ１７９Ｗ）における）の変異に関係するとい
う最近の報告（ＴｈｅＡＤＨＲＣｏｎｓｏｒｔｉｕｍ，ＮａｔｕｒｅＧｅ
ｎｅｔｉｃｓ２６：３４５−３４８（２０００））と一致している。それらは
、機構によって束縛されないが、本発明者らは、このような変異が、本明細書中
に開示される切断部位で生じ、そしてＲ１７６またはＲ１７９に変異を有するＦ
ＧＦ−２３では切断されないと、考える。

【００６３】本発明に従って、ＦＧＦ−２３は、バキュロウイルスにおいて発現される場合
、２つの部分に切断される（プロセスされる）。ゲル上の切断産物の見かけのサ
イズに基づいて、推定切断部位は、残基１７６および１７９の付近であると考え
られる。これらのアルギニン、特にＲ１７６は、プロテアーゼ部位と一致する。
従って、本発明はさらに、ＦＧＦ−２３のフラグメントを提供し、このフラグメ
ントには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：配列番号４の約１〜約
１７５のアミノ酸；配列番号４の約１〜約１７８のアミノ酸；配列番号４の約１
７７〜約２５１のアミノ酸；配列番号４の約１８０〜約２５１のアミノ酸；なら
びにこれらのフラグメントをコードするポリヌクレオチド。

【００６４】さらに、ＦＧＦファミリーの他のメンバーに相同的なＦＧＦ−２３の領域は、
これらの残基で正確に終わり、ＦＧＦ−２３遺伝子の残りが、ＢＬＡＳＴ検索に
よって、他のＦＧＦまたは他のタンパク質に対して相同性を有さないＣ末端伸長
である。従って、推定切断部位は、ＦＧＦ相同性フラグメント、およびＣ末端を
生成する。変異は、これらの部位またはこれらの部位の近傍で、ＦＧＦ−２３の
タンパク質分解性プロセシングを防止することによって、骨疾患において役割を
果たし得る。タンパク質分解性切断は、活性を必要とし、そしてこれらの部位の
変異は、機能をなくした（ｌｏｓｓ−ｏｆ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ）表現型を生じ、
そして骨疾患に導く。

【００６５】ＡＤＨＲに加えて、類似のヒト骨疾患、ＸＬＨ（Ｘ−リンク低リン酸血症性く
る病）が存在し、これは、ＰＨＥＸと呼ばれるエンドペプチダーゼにマッピング
されている。ＰＨＥＸの基質は、ＦＧＦ−２３であり得、切断部位で、本明細書
中に開示されるＦＧＦ−２３フラグメントを生じる。

【００６６】従って、本発明は、ＦＧＦ−２３を切断不可能にする、これらの部位に変異を
有するＦＧＦ−２３の改変体を提供し、これらの改変体は、不活性であり、そし
てＦＧＦ−２３も主要なネガティブインヒビターとして使用され得るか、または
異常に活性であり、ＦＧＦ−２３に起因する障害を処置するために使用され得る
かのいずれかである。変異したＦＧＦ−２３が切断を受けないことは、他の障害
に見られるように、くる病の乱されたリン酸代謝をに寄与し得る。あるいは、こ
れらの部位の切断は、ＦＧＦ−２３を不活性化するために必要であり、そしてこ
れらの部位での変異は、機能を得た表現型を生じて、リン酸消費および骨疾患に
導く。

【００６７】本発明はまた、胸腺機能不全によって特徴付けられる免疫障害を含む胸腺疾患
を有する患者を処置するための有効量でＦＧＦ−２３を含む治療剤または薬学的
組成物、ならびにＦＧＦ−２３の治療有効量を投与する工程を包含する方法を包
含する。これらの組成物および方法は、多数の疾患を処置するために有用である
。本明細書中の組成物および方法はまた、変性を予防するため、および／または
他の組織においても同様に生存を促進する（例えば、新脈管形成、ニューロンの
生存創傷治癒などを促進する）ために有用であり得る。当業者は、ＦＧＦ−２３
が特定の細胞型において生存を促進するかまたは機能する際に有用であるか否か
を決定するために、当該分野で公知の種々のアッセイを容易に使用し得る。

【００６８】ＦＧＦ−２３は、皮膚において発現されるので、これは、創傷治癒、および異
常増殖、萎縮症、変性が関係する皮膚の疾患において、または毒性損傷の結果と
して有用である。ＦＧＦ−２３はまた、受胎能、先天性疾患、および胎盤の障害
のような胎盤機能に関連する異常において有用で在り得る。

【００６９】特定の環境では、発現されるＦＧＦ−２３の量を調整するかまたは減少させる
ことが望ましいものであり得る。従って、本発明の別の局面では、ＦＧＦ−２３
アンチセンスオリゴヌクレオチドが作製され得、そして１つ以上のＦＧＦ−２３
アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを包含する方法が、細胞による
ＦＧＦ−２３の発現レベルを減少させるために用いられる。ＦＧＦ−２３アンチ
センスオリゴヌクレオチドとは、ＦＧＦ−２３の発現に関与する特異的な相補的
核酸配列との塩基対合を介して相互作用してＦＧＦ−２３の発現が減少されるヌ
クレオチド配列を有するオリゴヌクレオチドをいう。好ましくは、ＦＧＦ−２３
の発現に関与する特異的核酸配列は、ＦＧＦ−２３をコードするゲノムＤＮＡ分
子またはｍＲＮＡ分子である。このゲノムＤＮＡ分子は、ＦＧＦ−２３遺伝子の
調節領域、または成熟ＦＧＦ−２３タンパク質についてのコード配列を含み得る
。ＦＧＦ−２３アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびそのための方法の背景に
おいて用語「ヌクレオチド配列に対して相補的」は、細胞において、すなわち生
理学的条件下で、その配列に対するハイブリダイゼーションを可能にするように
、このような配列に対して十分に相補的であることを意味する。ＦＧＦ−２３ア
ンチセンスオリゴヌクレオチドは、好ましくは、約８〜約１００ヌクレオチドを
含む配列を含み、そしてより好ましくは、ＦＧＦ−２３アンチセンスオリゴヌク
レオチドは、約１５〜約３０ヌクレオチドを含む。ＦＧＦ−２３アンチセンスオ
リゴヌクレオチドはまた、ヌクレオチド分解（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃｄｅｇ
ｒａｄａｔｉｏｎ）に対する抵抗性を付与する種々の改変（例えば、改変ヌクレ
オシド間連結（ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ、ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｖ
ｉｅｗｓ９０：５４３−５４８１９９０；ＳｃｈｎｅｉｄｅｒおよびＢａｎ
ｎｅｒ，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．３１：３３５（１９９０）、これ
らは、参考として援用される）、改変核酸塩基および／または糖など）を含み得
る。

【００７０】本発明の治療剤または薬学的組成物は、例えば、局所的な、静脈内、皮下、筋
内、経皮、クモ膜下、または脳内を含む、当該分野で公知の任意の適切な経路に
よって投与され得る。投与は、注射によるような迅速なもの、あるいは緩慢な注
入または徐放性処方物の投与によるような一定期間にわたるもののいずれかであ
り得る。

【００７１】ＦＧＦ−２３はまた、所望の薬学的または薬力学特性を提供する薬剤と連結さ
れ得るか、または結合体化され得る。例えば、ＦＧＦ−２３は、血液脳関門を交
差する貫通または輸送を促進することが当該分野で公知の任意の物質（例えば、
トランスフェリンレセプターに対する抗体）にカップリングされ得、そして静脈
内注射によって投与され得る（例えば、Ｆｒｉｄｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５
９：３７３−３７７（１９９３）（これは参考として援用される）を参照のこと
）。さらに、ＦＧＦ−２３は、可溶性、安定性、半減期および他の薬学的に有利
な特性の所望の特性を得るために、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール
）に安定に連結され得る。（例えば、Ｄａｖｉｓら、ＥｎｚｙｍｅＥｎｇ．４
：１６９−７３（１９７８）；Ｂｕｒｎｈａｍ，Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒ
ｍ．５１：２１０−２１８（１９９４）（これらが、参考として援用される）を
参照のこと）。

【００７２】組成物は、通常、薬学的調製物の形態で使用される。このような調製物は、薬
学分野で周知の様式で作製される。１つの好ましい調製物は、生理学的な生理食
塩水溶液のビヒクルを使用するが、他の薬学的に受容可能なキャリア（例えば、
生理学的濃度の他の非毒性塩、５パーセントのグルコース水溶液、滅菌水など）
がまた使用され得ることが、意図される。適切な緩衝液がその組成物中に存在す
ることは、望ましくあり得る。そのような溶液は、所望される場合、凍結乾燥お
よび滅菌アンプル中に保存され得、注射の準備のために滅菌水の添加による再構
成のために準備される。最初の溶媒は、水性であっても、あるいは非水性であっ
てもよい。ＦＧＦ−２３がまた、処置が必要な組織に移植され得る、固体または
半固体の生物学的に適合性のマトリックスに組み込まれ得る。

【００７３】キャリアはまた、ｐＨ、容量オスモル濃度、粘土、清澄さ、色、滅菌性、安定
性、分解速度、または処方物の臭気を改変または維持するために、他の薬学的に
受容可能な賦形剤を含み得る。同様に、キャリアは、血液脳関門を介した放出ま
たは吸収または浸透を改変または維持するために、他の薬学的に受容可能な賦形
剤をなお含み得る。このような賦形剤は、単位投薬量形態もしくは複数用量形態
のいずれかでの非経口投与のためか、または連続的もしくは周期的な注入による
脳脊髄液への直接的な注入のための投薬量を処方するために、通常および慣習的
に使用される物質である。

【００７４】用量投与は、使用される投薬量形態および投与経路の薬物動態学的パラメータ
ーに依存して、反復され得る。

【００７５】ＦＧＦ−２３を含む特定の処方物が経口投与されることがまた、意図される。
このような処方物は、好ましくは、固体投薬量形態中に適切なキャリアとともに
カプセル化され、処方される。適切なキャリア、賦形剤および希釈剤のいくつか
の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マン
ニトール、澱粉、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギナート、珪酸カルシ
ウム、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、ゼラチン、シロ
ップ、メチルセルロース、メチル−およびプロピルヒドロキシベンゾエート、滑
石、マグネシウム、ステアレート、水、ミネラルオイルなどが挙げられる。処方
物はさらに、潤滑剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、保存剤、甘味剤または香味
剤を含み得る。組成物は、当該分野で周知の手順を用いることによって、患者へ
の投与後に活性成分の迅速、徐放性または遅延した放出を提供するように、処方
され得る。処方物はまた、タンパク質分解性の分解を減少し、そして吸収を促進
する物質（例えば、界面活性剤など）を含み得る。

【００７６】意図される処置レジメンに依存して、ＦＧＦ−２３タンパク質またはその改変
体の放出速度を制御することが望ましくあり得、投与頻度を最小化しながら長期
の処置を提供する。このような処置レジメンは、例えば、ＦＧＦ−２３タンパク
質が比較的不安定であり、その結果、効果的なレベルの活性タンパク質の局在化
した濃度が不十分な期間であることが見出される場合に、望ましくあり得る。従
って、例えば、特定の疾患に関して、反復した頻繁な注射を実施することは、望
ましくも実際的でもない。そのような徐放性系の主要な利点としては、一定速度
での薬物の標的化された局所送達、疾患状態を処置するために必要とされる比較
的少ない薬物、可能性のある副作用の最小化、および増強された処置効果が挙げ
られる。また、これらの形態の送達系は、インビボで不安定であり、通常頻繁な
投薬間隔を必要とする薬物を保護し得る。そのような状況下において、徐放性は
、ヘパリン−アルギネート微小球またはＦＧＦ−２３ＰＬＧ微小球の調製物を
形成するためのＦＧＦ−２３結合体化されたヘパリン−セファロースビーズのカ
プセル化のような、当該分野で容易に利用可能な方法のうちの１つによって達成
され得る。

【００７７】ヘパリン−アルギネート微小球は、組織への塩基性線維芽細胞増殖因子の送達
のために好首尾に使用されている（Ｌｏｐｅｚら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｈｅｒａｐｅｕ
ｔｉｃｓ２８２（ｌ）：３８５−３９０（１９９７））。同様に、アルギネー
ト／ヘパリンセファロース微小球およびフィルムは、小用量での放出を制御する
ために、塩基性ＦＧＦ−サポニン結合体の放出を制御するための薬物キャリアと
して使用される。ｂＦＧＦの溶液へのヘパリンの添加は、ｐＨの変化または温度
上昇に伴う活性の損失を回避する。例えば、Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚら、Ｊ
．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２８：４７５−４８４（１９８６）を参照のこ
と。

【００７８】ＦＧＦ−２３のヘパリンへの結合は、インビボ発現もしくは投与の間またはイ
ンビトロでのタンパク質精製の種々の段階の間のいずれかに、その安定性を増強
するために使用され得る。従って、本発明によって、ヘパリンは、ＦＧＦ−２３
溶液に添加され得、そしその活性が本明細書中に開示される方法によってアッセ
イされ得る。

【００７９】ＦＧＦ−２３結合ヘパリン−セファロースビーズは、アルギン酸カルシウム微
小球にカプセル化され、ヘパリン安定化されたＦＧＦ−２３タンパク質の制御さ
れた放出を可能にし得る。例えば、微小球は、アルギン酸ナトリウムとＦＧＦ−
２３結合ヘパリン−セファロースビーズとの混合溶液を、塩化カルシウムの硬化
溶液中に滴下することによって構築され得る。球は、この混合物が硬化溶液に入
れられたときに瞬時に形成される。微小球のサイズは、減少した断面積のシリン
ダーを介して（例えば、皮下注射針を介して）ＦＧＦ−２３結合ヘパリン−セフ
ァロースビーズを通過させることによって調整され得る。

【００８０】カプセル化効率は、カプセル化された増殖因子の量を溶液中に最初に存在した
量と比較することによって決定され得る。例えば、ＦＧＦ−２３は、３ＭＮａ
Ｃｌ溶液を用いてヘパリン−セファロースビーズから剥離され得、そして機能的
活性のアッセイが実施され得る。

【００８１】特定の用量は、患者のおおよその体重もしくは体表面積または占有される体の
空間の容積に従って算出される。この用量はまた、選択される特定の投与経路に
依存して算出される。処置のための適切な投薬量を決定するのに必要とされる計
算のさらなる改善は、当業者によって寛容的になされ得る。このような計算は、
標的細胞のアッセイ調製物において本明細書中に開示される活性の点から、当業
者によって過度の実験を伴わずになわれ得る。正確な投薬量は、標準的な用量応
答研究と組み合わせて決定される。実際に投与される組成物の量が、関連する状
況の点（処置される状態、投与される組成物の選択、個々の患者の年齢、体重お
よび応答、患者の症状の重篤度、ならびに選択された投与経路を含む）から実施
者によって決定されることが理解される。

【００８２】本発明の１つの実施形態において、ＦＧＦ−２３は、ＦＧＦ−２３またはＦＧ
Ｆ−２３前駆体の生物学的な活性形態を産生し得るベクターまたは細胞（すなわ
ち、体によってＦＧＦ−２３の生物学的に活性な形態に容易に変換され得る分子
）を、患者に移植することによって治療的に投与され得る。１つのアプローチに
おいて、ＦＧＦ−２３を分泌する細胞は、患者への移植のための半透性膜にカプ
セル化され得る。この細胞は、通常ＦＧＦ−２３またはその前駆体を発現する細
胞、あるいはＦＧＦ−２３またはその前駆体を発現するために形質転換され得る
細胞であり得る。患者がヒトである場合、ヒト起源の細胞であることおよびＦＧ
Ｆ−２３がヒトＦＧＦ−２３であることが好ましい。しかし、本明細書中の処方
物および方法は、獣医適用ならびにヒト適用のために使用され得、そして用語「
患者」は、本明細書中に使用される場合、ヒト患者および獣医患者を含むことが
意図される。

【００８３】細胞は、患者への移植または植え付けにおける使用のためにエキソビボで増殖
され得る（Ｍｕｅｎｃｈら、Ｌｅｕｋ．＆Ｌｙｍｐｈ．１６：１−１１（１９
９４）（これは、参考として援用される））。本発明の別の実施形態において、
ＦＧＦ−２３は、移植または植え付けのための細胞のエキソビボ拡大を促進する
ために使用される。現在の方法は、エリスロポエチン、コロニー刺激因子、幹細
胞因子、およびインターロイキンのような因子を含むバイオリアクター培養系を
使用して、赤血球、単球、好中球、およびリンパ球のための造血前駆体細胞を拡
大する（Ｖｅｒｆａｉｌｌｉｅ、ＳｔｅｍＣｅｌｌｓ１２：４６６−４７６
（１９９４）（これは、参考として援用される））。これらの幹細胞は、ヒトド
ナーの骨髄から、ヒト末梢血から、または臍帯血細胞から単離され得る。拡大さ
れた血球は、特定の疾患状態の結果としてかまたは悪性腫瘍の処置のための高用
量の化学療法の結果としてこれらの細胞を欠く患者を処置するために使用される
（Ｇｅｏｒｇｅ、ＳｔｅｍＣｅｌｌｓ１２（補遺１）：２４９−２５５（１
９９４）（これは、参考として援用される））。化学療法後の細胞移植の場合、
自家組織の移植が、化学療法の前に骨髄細胞を取り除き、悪性腫瘍細部をパージ
するためにも機能する方法を用いてエキソビボで細胞を拡大し、そしてこの拡大
された細胞を化学療法の後にこの患者に戻して移植することによって、実施され
得る（総説に関しては、ＲｕｍｍｅｌおよびＶａｎＺａｎｔ、Ｊ．Ｈｅｍａｔ
ｏｔｈｅｒａｐｙ３：２１３−２１８（１９９４）（これは、参考として援用
される）を参照のこと）。

【００８４】多数の環境において、患者におけるＦＧＦ−２３のレベルを決定することが所
望される。ＦＧＦ−２３の発現を示す本報告に沿って、ＦＧＦ−２３の同定は、
ＦＧＦ−２３の存在が、細胞の増殖および生存に関連する正常な生理学的機能に
役立つという結論の基礎を提供する。内因的に生成されたＦＧＦ−２３はまた、
特定の疾患状態において役割を果たし得る。

【００８５】ＦＧＦ−２３が、皮膚、脳、胸腺および胎盤において発現されるとすれば、Ｆ
ＧＦ−２３のレベルが、種々の状態において変化し得るようであり、そしてＦＧ
Ｆ−２３レベルの定量が臨床的に有用な情報を提供するようである。さらに、変
性状態、変化した生理学的機能の処置において、または皮膚細胞、脳細胞、およ
び胸腺細胞への損傷からの回復において、あるいは胎盤の状態が関与する妊娠の
間に、ＦＧＦ−２３を含有する組成物が投与され得、そして血清または任意の所
望の組織画分中で特定の標的レベルのＦＧＦ−２３を達成することが所望される
ようである。それゆえ、患者におけるＦＧＦ−２３のレベルをモニタリングし得
ることが有利である。従って、本発明はまた、患者からのサンプルにおけるＦＧ
Ｆ−２３の存在を検出するための方法を提供する。

【００８６】患者においてＦＧＦ−２３の存在を検出する状況において本明細書中で使用さ
れる用語「検出」は、患者におけるＦＧＦ−２３の量のまたはＦＧＦ−２３の量
を発現する能力を決定すること、ＦＧＦ−２３を他の増殖因子から区別すること
、変性疾患の有望な結果および回復の見込みに関する予後を評価すること、この
病的状態の状態の尺度としての一定の期間にわたるＦＧＦ−２３レベルをモニタ
リングすること、ならびに患者についての好ましい治療レジメを決定するための
ＦＧＦ−２３レベルをモニタリングすることを含むことが意図される。

【００８７】患者におけるＦＧＦ−２３の存在を検出するために、サンプルは、患者から入
手される。サンプルは、組織生検サンプル、または血液、血漿、血清、ＣＳＦな
どのサンプルであり得る。皮膚、脳、胸腺または胎盤におけるＦＧＦ−２３のレ
ベルを評価する場合、好ましいサンプルは、これらの組織またはこれらの組織に
流す静脈から採取したサンプルである。

【００８８】いくつかの例では、ＦＧＦ−２３遺伝子が、患者において、または患者内の組
織もしくは細胞株においてインタクトであるか否かを決定することが所望される
。インタクトなＦＧＦ−２３遺伝子とは、遺伝子において変更（例えば、点変異
、欠失、挿入、染色体切断、染色体再配列など）が存在しないことを意味し、こ
こで、このような変更は、ＦＧＦ−２３の生成を変更し得るかまたはその生物学
的活性、安定性などを変更して、疾患プロセスもしくは細胞変性状態に対する感
受性をもたらし得る。従って、本発明の１つの実施形態では、ＦＧＦ−２３遺伝
子における任意の変化を検出および特徴付けする方法が提供される。この方法は
、ＦＧＦ−２３ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはそれらのフラグメントもしく
はそれらの誘導体を含むオリゴヌクレオチドを提供することを含む。オリゴヌク
レオチドの誘導体によって、誘導されたオリゴヌクレオチドが、誘導された配列
が、ＦＧＦ−２３遺伝子にハイブリダイズするように誘導された配列に十分な配
列相補性を有するという点で、誘導された配列と実質的に同じであることを意味
する。誘導されたヌクレオチド配列は、このヌクレオチド配列から必ずしも物理
的に誘導されず、例えば、化学的合成またはＤＮＡ複製または逆転写または転写
を含む任意の様式で生成され得る。

【００８９】代表的には、患者のゲノムＤＮＡは、患者からの細胞サンプルから単離され、
そして１以上の制限エンドヌクレアーゼ（例えば、ＴａｑＩおよびＡｌｕＩなど
）で消化される。当該分野で周知であるサザンブロットプロトコルを用いて、こ
のアッセイにより、患者または患者における特定の組織が、インタクトなＦＧＦ
−２３遺伝子を有するか、またはＦＧＦ−２３遺伝子の異常を有するかを決定す
る。

【００９０】ＦＧＦ−２３遺伝子に対するハイブリダイゼーションは、染色体ＤＮＡを変性
して、一本鎖ＤＮＡを得ること；この一本鎖ＤＮＡをＦＧＦ−２３遺伝子配列に
関連した遺伝子プローブと接触させること；およびハイブリダイズしたＤＮＡプ
ローブを同定して、ヒトＦＧＦ−２３遺伝子の少なくとも一部を含む染色体ＤＮ
Ａを検出することを含む。

【００９１】本明細書中で使用される場合、用語「プローブ」は、標的領域中の配列とのプ
ローブ配列の相補性に起因して、標的配列とハイブリッド構造物を形成するポリ
ヌクレオチドから構成される構造をいう。プローブとして使用するために適切な
オリゴマーは、標的化された配列に相補的な最少で約８〜１２の連続したヌクレ
オチド、好ましくは最少で約２０の連続したヌクレオチドを含み得る。

【００９２】本発明のＦＧＦ−２３遺伝子プローブは、ＤＮＡまたはＲＮＡのオリゴヌクレ
オチドであり得、そして例えば、切り出し、転写または化学的合成のような当該
分野で公知の任意の方法によって作製され得る。プローブは、例えば、放射性標
識もしくは蛍光標識、または酵素マーカーのような、当該分野で公知の任意の検
出可能な標識で標識され得る。プローブの標識化は、当該分野で公知の任意の方
法によって達成され得る。これらの方法としては、ＰＣＲ、ランダムプライミン
グ、末端標識化、ニックトランスレーションなどが挙げられる。当業者はまた、
標識プローブを用いない他の方法を使用してハイブリダイゼーションを決定し得
ることを認識する。ハイブリダイゼーションを検出するために使用され得る方法
の例としては、サザンブロッティング、蛍光インサイチュハイブリダイゼーショ
ン、およびＰＣＲ増幅を用いた一本鎖コンホメーション多型が挙げられる。

【００９３】ハイブリダイゼーションは、代表的に、２５℃〜４５℃で行われ、より好まし
くは３２℃〜４０℃で行われ、そしてより好ましくは、３７℃〜３８℃で行われ
る。ハイブリダイゼーションに必要な時間は、約０．２５〜約９６時間であり、
より好ましくは、約１〜約７２時間であり、そして最も好ましくは約４〜約２４
時間である。

【００９４】ＦＧＦ−２３遺伝子の異常はまた、ＰＣＲ方法、およびＦＧＦ−２３遺伝子に
隣接するかまたはその中に位置するプライマーを使用して検出され得る。ＰＣＲ
方法は、当該分野で周知である。簡潔には、この方法は、標的配列に隣接する核
酸配列にハイブリダイズし得る２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いて行
われ、この標的配列は、ＦＧＦ−２３遺伝子内にあり、そして標的配列を増幅す
る。本明細書中で使用される用語「オリゴヌクレオチドプライマー」とは、約８
〜約３０塩基の長さの範囲にあるＤＮＡまたはＲＮＡの短い鎖をいう。この目的
のために有用なオリゴヌクレオチドプライマーの例は、配列番号５および配列番
号６である。上流および下流のプライマーは、代表的には、長さが約２０〜約３
０塩基対であり、そしてヌクレオチド配列の複製のための隣接領域にハイブリダ
イズする。重合化は、デオキシヌクレオチド三リン酸またはヌクレオチドアナロ
グの存在下でＤＮＡポリメラーゼによって触媒され、二本鎖ＤＮＡ分子を生成す
る。次いで、二本鎖は、物理学的、化学的または酵素的方法を含む任意の変性方
法によって分離される。共通して、物理学的変性方法は、約１〜約１０分間の範
囲の時間にわたり、核酸を代表的には、約８０℃〜１０５℃の温度に加熱するこ
とを含んで使用される。このプロセスは、所望のサイクル数にわたって繰り返さ
れる。

【００９５】プライマーは、増幅されるＤＮＡ鎖に実質的に相補性であるように選択される
。従って、プライマーは、テンプレートの正確な配列を反映する必要はないが、
増幅される鎖と選択的にハイブリダイズするように十分に相補的でなければなら
ない。

【００９６】ＰＣＲ増幅後、次いで、ＦＧＦ−２３またはプレプロＦＧＦ−２３またはそれ
らのフラグメントを含むＤＮＡ配列を、直接配列決定し、そして本明細書中に開
示された配列とこの配列を比較することによって分析し、活性または発現レベル
などを変更し得る改変を同定する。

【００９７】別の実施形態において、ＦＧＦ−２３を検出する方法は、ＦＧＦ−２３遺伝子
を発現する組織の分析に基づいて提供される。この方法は、ＦＧＦ−２３遺伝子
を正常に発現する組織サンプルからのｍＲＮＡに、ポリヌクレオチドをハイブリ
ダイズさせる工程を包含する。このサンプルは、ＦＧＦ−２３遺伝子または特定
の細胞のＦＧＦ−２３遺伝子に異常性を有すると疑われる患者から得られる。

【００９８】ＦＧＦ−２３タンパク質をコードするｍＲＮＡの存在を検出するために、サン
プルを患者から得る。サンプルを血液または組織生検サンプルから獲得し得る。
サンプルを処理して、そこに含まれる核酸を抽出し得る。サンプルから得られる
核酸をゲル電気泳動または他のサイズ分離技術に供する。

【００９９】サンプルのｍＲＮＡを、プローブとして供しているＤＮＡ配列と接触させて、
ハイブリッド二重鎖を形成する。上記で議論したような標識プローブの使用は、
得られた二重鎖の検出を可能にする。

【０１００】ＦＧＦ−２３タンパク質をコードするｃＤＮＡまたはこのｃＤＮＡの誘導体を
プローブとして用いる場合、偽陽性（すなわち、実際は、無傷かつ機能するＦＧ
Ｆ−２３遺伝子が存在しない場合の、ＦＧＦ−２３ヌクレオチド配列のハイブリ
ダイゼーションおよび見かけの検出）を防ぐために高ストリンジェンシー条件を
使用し得る。ＦＧＦ−２３ｃＤＮＡ由来の配列を使用する場合、あまりストリ
ンジェントでない条件が使用され得るが、これは偽陽性の可能性のためにあまり
好ましいアプローチではない。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは
、ハイブリダイゼーションの間および洗浄手順の間の多くの因子によって決定さ
れ、これらの因子としては、温度、イオン強度、時間の長さおよびホルムアミド
の濃度が挙げられる。これらの因子は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，第２
版（１９８９）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹにおいて概説される。

【０１０１】ＦＧＦ−２３タンパク質をコードするｍＲＮＡのサンプル中での検出の感度を
上げるために、逆転写／ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ／ＰＣＲ）の技術を使用し
て、ＦＧＦ−２３タンパク質をコードするｍＲＮＡから転写されたｃＤＮＡを増
幅し得る。ＲＴ／ＰＣＲの方法は、当該分野で周知であり、そして以下のように
行われ得る。総細胞ＲＮＡは、例えば、標準的なグアニジウムイソチオシアネー
ト法によって単離され、そして総ＲＮＡは、逆転写される。逆転写法は、逆転写
酵素および３’末端プライマーを使用する、ＲＮＡのテンプレート上でのＤＮＡ
の合成を包含する。代表的には、プライマーは、オリゴ（ｄＴ）配列を含む。次
いで、このようにして生成されたｃＤＮＡは、ＰＣＲ法およびＦＧＦ−２３特異
的プライマーを使用して増幅される。（Ｂｅｌｙａｖｓｋｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄＲｅｓ．１７：２９１９−２９３２，１９８９；ＫｒｕｇおよびＢｅｒｇ
ｅｒ、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５２：３１６−３２５
，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮＹ、１９８７（これらは、本明細書中に参
考として援用される））。

【０１０２】ポリメラーゼ連鎖反応法は、増幅されるべきＤＮＡセグメントの２つの隣接領
域に実質的に相補性である２つのオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、上
記のように行われる。

【０１０３】増幅後、次いで、ＰＣＲ産物を電気泳動し、そしてエチジウムブロミド染色ま
たはホスホイメージングによって検出する。

【０１０４】本発明は、患者から得たサンプル中のＦＧＦ−２３タンパク質の存在を検出す
る方法をさらに提供する。タンパク質を検出するために当該分野で公知の任意の
方法が使用され得る。このような方法としては、免疫拡散法、免疫電気泳動法、
免疫化学的方法、結合剤−リガンドアッセイ、免疫組織化学的技術、凝集および
相補性アッセイが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｂａｓｉｃ
ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１７−２６２、Ｓｉｔｅ
ｓおよびＴｅｒｒ編（Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，
１９９１を参照のこと（これは、参考として援用される））。抗体をＦＧＦ−２
３タンパク質のエピトープと反応させる工程および標識したＦＧＦ−２３タンパ
ク質またはその誘導体を競合的に置き換える工程を包含する結合剤−リガンドイ
ムノアッセイ法が好ましい。好ましい抗体は、実施例３に従って調製される。

【０１０５】本明細書中で使用されるＦＧＦ−２３タンパク質の誘導体は、特定のアミノ酸
が欠失されているか、あるいは修飾アミノ酸もしくは通常でないアミノ酸と置換
されているかまたは変更しているポリペプチドを含むことが意図される。ここで
ＦＧＦ−２３誘導体は、ＦＧＦ−２３と生物学的に等価であり、そしてこのポリ
ペプチド誘導体は、ＦＧＦ−２３タンパク質に対して惹起された抗体と交差反応
する。交差反応とは、抗体が、その形成を誘導した抗原以外の抗原と反応するこ
とを意味する。

【０１０６】多くの競合および非競合タンパク質結合イムノアッセイが当該分野で周知であ
る。このようなアッセイで使用される抗体は、例えば、凝集試験で使用されるよ
うに非標識であってもよいし、広範な種々のアッセイ方法における使用のために
標識されていてもよい。使用され得る標識としては、ラジオイムノアッセイ（Ｒ
ＩＡ）、酵素イムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ
））、蛍光イムノアッセイなどに使用するための放射性核種、酵素、蛍光剤、化
学発光剤、酵素基質もしくは補因子、酵素インヒビター、粒子、色素などが挙げ
られる。

【０１０７】ＦＧＦ−２３タンパク質またはそのエピトープに対するポリクローナル抗体ま
たはモノクローナル抗体は、当該分野で公知の任意の多くの方法によってイムノ
アッセイに使用するために作製され得る。エピトープによって、ポリペプチドの
抗原決定基が参照される。エピトープは、そのエピトープに特有の空間的コンホ
メーションにおいて３つのアミノ酸を含み得る。一般的に、エピトープは、少な
くとも５つのこのようなアミノ酸からなる。アミノ酸の空間的なコンホメーショ
ンを決定する方法は、当該分野で公知であり、そしてこれらの方法としては、例
えば、Ｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴が挙げられる。

【０１０８】タンパク質に対する抗体を調製する１つのアプローチは、このタンパク質の全
てまたは一部のアミノ酸配列の選択および調製、この配列の化学合成、および適
切な動物（通常は、ウサギまたはマウス）へのその配列の注射である（実施例４
を参照のこと）。

【０１０９】オリゴペプチドは、親水性領域に存在し、従って、おそらく成熟タンパク質に
おいて露出しているオリゴペプチドに基づいて、ＦＧＦ−２３タンパク質に対す
る抗体の生成のための候補物として選択され得る。好ましいオリゴペプチドは、
ＲＲＨＴＲＳＡＥＤＤＳＥＲＤ（配列番号４の残基１７５〜１８９）およびＹＨ
ＬＱＩＨＫＮＧＨＶＤＧＡＰＨＱ（配列番号４の残基５１〜６７）である。さら
なるオリゴペプチドは、例えば、ＡｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙＩｎｄｅｘｏｆ
Ｗｅｌｌｉｎｇ，Ｇ．Ｗら、ＦＥＢＳＬｅｔｔ．１８８：２１５−２１８，
１９８５（本明細書中に参考として援用される）を使用して決定され得る。

【０１１０】他の抗体は、本明細書中に開示されているＦＧＦ−２３の分解産物（例えば、
ＦＧＦ−２３の約２０ｋＤａのフラグメントおよび約７〜１２ｋＤａのフラグメ
ント）に対して惹起され得る。

【０１１１】ＦＧＦ−２３に対する抗体はまた、この抗体が他のファミリーメンバーと交差
反応し得るように、本明細書中で同定される、１つ以上の保存された領域を含む
オリゴペプチドに対して惹起され得る。このような抗体を使用して、他のファミ
リーメンバーを同定および単離し得る。

【０１１２】ＦＧＦ−２３タンパク質またはそのエピトープの調製のための方法は、化学合
成、組換えＤＮＡ技術、または生物学的サンプルからの単離を含むが、これらに
限定されない。ペプチドの化学合成は、例えば、固相ペプチド合成の古典的なＭ
ｅｒｒｉｆｅｌｄ法（Ｍｅｒｒｉｆｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５
：２１４９、１９６３、これは、参考として援用される）またはＲａｐｉｄＡ
ｕｔｏｍａｔｅｄＭｕｌｔｉｐｌｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓシ
ステム（Ｅ．Ｉ．ｄｕＰｏｎｔｄｅＮｅｍｏｕｒｓＣｏｍｐａｎｙ，Ｗ
ｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）（ＣａｐｒｉｎｏおよびＨａｎ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈ
ｅｍ．３７：３４０４，１９７２、これは、本明細書中に参考として援用される
）でのＦＭＯＣストラテジーによって行われ得る。

【０１１３】ポリクローナル抗体は、抗原を注射した後に、適切な間隔で引き続き追加免疫
することによって、ウサギまたは他の動物を免疫して調製され得る。この動物は
、採血され、そして血清は、通常は、ＥＬＩＳＡによって精製したＦＧＦ−２３
タンパク質に対して、または肝臓もしくは他の細胞へのＦＧＦ−２３の作用をブ
ロックする能力に基づくバイオアッセイによってアッセイされる。トリ種（例え
ば、ニワトリ、シチメンチョウなど）を用いる場合、抗体はその卵の卵黄から単
離され得る。モノクローナル抗体は、骨髄腫細胞またはリンパ腫細胞のような連
続的に複製する腫瘍細胞で免疫したマウスからの脾細胞を融合することによるＭ
ｉｌｓｔｅｉｎおよびＫｏｈｌｅｒの方法にならって調製され得る。（Ｍｉｌｓ
ｔｅｉｎおよびＫｏｈｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７、１９７
５；ＧｕｌｆｒｅおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ：ＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ７３：１
−４６、ＬａｎｇｏｎｅおよびＢａｎａｔｉｓ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓ
ｓ、１９８１、これらは、参考として援用される）。次いで、このように形成さ
れたハイブリドーマ細胞は、限界希釈法によりクローニングされ、そして上清を
ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、もしくはバイオアッセイによって抗体生成についてアッセ
イする。

【０１１４】抗体が標的タンパク質を認識し、かつ特異的に結合する特有の能力は、タンパ
ク質の過剰発現を処置するためのアプローチを提供する。従って、本発明の別の
局面は、ＦＧＦ−２３タンパク質の過剰発現を含む疾患を、ＦＧＦ−２３タンパ
ク質に対する特異的な抗体で患者を処置することによって、予防または処置する
方法を提供する。

【０１１５】ＦＧＦ−２３タンパク質に対する特異的な抗体（ポリクローナルまたはモノク
ローナルのいずれか）は、上記で議論されたように、当該分野で公知の任意の適
切な方法によって生成され得る。例えば、マウスまたはヒトのモノクローナル抗
体は、ハイブリドーマ技術によって生成され得るか、あるいはＦＧＦ−２３タン
パク質、もしくはその免疫学的に活性なフラグメント、または抗イディオタイプ
抗体、もしくはそのフラグメントが動物に投与されて、ＦＧＦ−２３タンパク質
を認識し、かつ結合し得る抗体の生成を誘起し得る。このような抗体は、以下に
挙げられるがこれらに限定されない任意の抗体クラスおよび任意の抗体サブクラ
スに由来し得る：ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、またはトリ
種の場合にはＩｇＹ。

【０１１６】本発明のポリヌクレオチドおよび対応する全長遺伝子によってコードされるポ
リペプチドを使用して、ペプチドライブラリー、タンパク質ライブラリー、低分
子ライブラリー、およびファージディスプレイライブラリーをスクリーニングし
得、そしてこのポリペプチドおよび他の公知の方法を使用して、アナログもしく
はアンタゴニストを同定し得る。

【０１１７】ネイティブなＦＧＦポリペプチドは、癌において役割を果たし得る。例えば、
ＦＧＦファミリーメンバーは、ＮＩＨ３Ｔ３細胞の顕著な形態学的形質転換を
誘導し得、そしてヌードマウスにおいて強力な腫瘍形成性を示す。脈管形成性活
性が、ＦＧＦファミリーメンバーによって示された。従って、ＦＧＦのインヒビ
ターを使用して、癌（例えば、前立腺癌）を処置し得る。

【０１１８】ペプチドのライブラリーは、米国特許第５，０１０，１７５号およびＰＣＴ番
号ＷＯ９１／１７８２３において開示される方法に従って、合成され得る。以下
に簡潔に記載されるように、ペプチドの混合物を調製して、次いで、これをスク
リーニングして、所望のシグナル伝達およびレセプター結合活性を示すペプチド
を同定する。’１７５特許の方法に従って、適切なペプチド合成支持体（例えば
、樹脂）は、適切に保護されて活性化されたアミノ酸の混合物にカップリングさ
れる。反応混合物中の各アミノ酸の濃度は平衡化されるか、または産物が、開始
樹脂にカップリングしたアミノ酸の等モル混合物であるように、そのカップリン
グ反応速度に対して逆比例で調整される。次いで、結合したアミノ酸は脱保護さ
れ、そして別の平衡化されたアミノ酸混合物と反応して、全ての可能なジペプチ
ドの等モル混合物を形成する。このプロセスは、所望の長さ（例えば、ヘキサマ
ー）のペプチド混合物が形成されるまで、繰り返される。各工程で全てのアミノ
酸を含む必要はないことに注意のこと：いくつかの工程でわずか１または２アミ
ノ酸を含み得る（例えば、特定のアミノ酸が所定の位置で必須であることが公知
の場合）ために、混合物の複雑性を低減し得る。ペプチドライブラリー合成が完
了した後に、ペプチドの混合物は、選択したポリペプチドに対する結合について
スクリーニングされる。次いで、このペプチドは、活性を阻害または増強する能
力について試験される。次いで、所望の活性を示すペプチドが単離され、そして
配列決定される。

【０１１９】ＰＣＴ番号ＷＯ９１／１７８２３に記載される方法は、類似している。しかし
、合成樹脂と活性化されたアミノ酸の混合物とを反応させる代わりに、樹脂を２
０等分に（または、その工程で添加される異なるアミノ酸の数に対応する多くの
部分に）分けて、そして各アミノ酸を樹脂のその部分に個々にカップリングさせ
る。次いで、この樹脂部分を合わせ、混合し、そして再び第２のアミノ酸との反
応のために多くの等分に分ける。この様式で、各反応を容易に完了させ得る。さ
らに、各工程で全ての樹脂を合わせるのではなく、並行して部分を処理すること
によって、別個の「サブプール」を維持し得る。これは、どのペプチドが任意の
観察されたレセプター結合活性またはシグナル伝達活性を担うかを決定するプロ
セスを簡単にする。

【０１２０】このような場合において、例えば、各々１〜２，０００の候補物を含むサブプ
ールを、本発明の１つ以上のポリペプチドに曝す。次いで、陽性結果を生じる各
サブプールは、例えば、２０〜１００の候補物を含む、より小さなサブプール（
サブ−サブプール）の群として再合成され、そして再アッセイされる。陽性サブ
−サブプールは、個々の化合物として再合成され得、そして最終的にはアッセイ
されて、高結合定数を示すペプチドを決定し得る。これらのペプチドは、ネイテ
ィブな活性を阻害または増強する能力について試験され得る。ＰＣＴ番号ＷＯ９
１／７８２３および米国特許第５，１９４，３９２号（本明細書中に参考として
援用される）に記載される方法は、全ての合成および再合成が数日で行われ得る
ような、並行した自動化された技術によるこのようなプールおよびサブプールの
調製を可能にする。

【０１２１】ペプチドアゴニストまたはアンタゴニストを、任意の利用可能な方法（例えば
、シグナル伝達、抗体結合、レセプター結合、マイトジェンアッセイ）を使用し
てスクリーニングする。アッセイ条件は、理想的には、ネイティブな活性がイン
ビボで示される条件（すなわち、生理的ｐＨ、温度、およびイオン強度の下で）
に似ているべきである。適切なアゴニストまたはアンタゴニストは、被験体で毒
性の副作用を引き起こさない濃度でネイティブな活性の強力な阻害または増強を
示す。ネイティブなポリペプチドへの結合について競合するアゴニストまたはア
ンタゴニストは、ネイティブな濃度以上の濃度を必要とし得るが、一方で、ポリ
ペプチドに不可逆的に結合し得るインヒビターは、ネイティブな濃度の桁におけ
る濃度で添加され得る。

【０１２２】ｈＦＧＦ−２３およびｍＦＧＦ−２３のアベイラビリティは、高スループット
スクリーニング法（ＨＩＳ）の慣用的な適用により、そのレセプターへのＦＧＦ
−２３の結合を阻害する小分子および低分子量化合物の同定を可能にする。ＨＴ
Ｓ法とは一般に、治療的潜在性についてのリード化合物の迅速なアッセイを可能
にする技術をいう。ＨＴＳ技術は、試験材料のロボット操作、ポジティブなシグ
ナルの検出、およびデータの解読を用いる。リード化合物は、放射能の取込みに
よって同定され得るか、または読み出しとして吸光度、蛍光または発光に頼る光
学アッセイによって同定され得る。Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ．Ｅ．ら（１９９８）
Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．９：６２４−６３１。ＦＧＦ分子とＦＧ
Ｆレセプターとの間の相互作用を検出するためのアッセイは、例えば、Ｂｌｕｎ
ｔ，Ａ．Ｇ．ら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３７３３−３７
８８に記載され、そしてこのようなアッセイは、候補分子がＦＧＦ−２３とその
レセプターとの間の相互作用を阻害し得るか否かを決定するために適応され得る
。

【０１２３】例えば、レセプター結合についてＦＧＦ−２３と競合することによって、ＦＧ
Ｆ−２３とそのレセプターとの相互作用を阻害する化合物についての高スループ
ットスクリーニングにおける使用のために適応され得るモデル系が、利用可能で
ある。Ｓａｒｕｂｂｉら、（１９９６）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３７：７
０−７５は、ＩＬ−１レセプターの活性部位への結合について天然のリガンドと
競合する分子を同定するための無細胞非同位体アッセイを記載する。Ｍａｒｔｅ
ｎｓ，Ｃ．ら（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３７：２０−３１は、
一般的な粒子ベースの非放射性方法を記載し、ここで標識リガンドは、粒子上に
固定されたそのレセプターに結合し；この粒子上の標識は、レセプター結合につ
いて標識リガンドと競合する分子の存在を減少させる。

【０１２４】本発明の治療的ＦＧＦ−２３ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子
送達ビヒクルにおいて利用され得る。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源また
は非ウイルス起源であり得る（一般的には、Ｊｏｌｌｙ、ＣａｎｃｅｒＧｅｎ
ｅＴｈｅｒａｐｙ１：５１−６４（１９９４）；Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ
ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ５：８４５−８５２（１９９４）；Ｃｏｎｎｅｌ
ｌｙ、ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ１：１８５−１９３（１９９５
）；およびＫａｐｌｉｔｔ、ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ６：１４８−１
５３（１９９４）を参照のこと）。本発明の治療薬のコード配列を含む構築物の
送達のための遺伝子治療ビヒクルは、局所的にまたは全身的にのいずれかで投与
され得る。これらの構築物は、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターのア
プローチを利用し得る。そのようなコード配列の発現は、内因性の哺乳動物のプ
ロモーターまたは異種のプロモーターの使用により誘導され得る。コード配列の
発現は、構成的であり得るか、または調節され得るかのいずれかである。

【０１２５】本発明は、目的の選択された核酸分子を保有または発現するために構築される
組換えレトロウイルスを利用し得る。利用され得るレトロウイルスベクターは、
以下に記載されているものを含む：ＥＰ０４１５７３１；ＷＯ９０／０
７９３６；ＷＯ９４／０３６２２；ＷＯ９３／２５６９８；ＷＯ９３／２
５２３４；米国特許第５，２１９，７４０号；ＷＯ９３／１１２３０；ＷＯ
９３／１０２１８；ＶｉｌｅおよびＨａｒｔ、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５３：３
８６０−３８６４（１９９３）；ＶｉｌｅおよびＨａｒｔ、ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓ．５３：９６２−９６７（１９９３）；Ｒａｍら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５
３：８３−８８（１９９３）；Ｔａｋａｍｉｙａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒ
ｅｓ．３３：４９３−５０３（１９９２）；Ｂａｂａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒ
ｇ．７９：７２９−７３５（１９９３）；米国特許第４，７７７，１２７号；英
国特許第２，２００，６５１号；およびＥＰ０３４５２４２。好ましい組換
えレトロウイルスは、ＷＯ９１／０２８０５に記載されるものを含む。

【０１２６】前述のレトロウイルスベクター構築物との使用に適したパッケージング細胞株
は、容易に調製され得（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９５／３０７６３およびＷＯ
９２／０５２６６を参照のこと）、そして組換えベクター粒子を生成するため
のプロデューサー細胞株（ベクター細胞株とも呼ばれる）の作製のために用いら
れ得る。本発明の特に好ましい実施形態において、パッケージング細胞株は、ヒ
ト（例えば、ＨＴ１０８０細胞）またはミンク親細胞株から作られ、それによっ
て、ヒト血清中での不活化を生き延び得る、組換えレトロウイルスの産生を可能
にする。

【０１２７】本発明はまた、遺伝子送達ビヒクルとして機能し得る、アルファウイルスを基
礎としたベクターも用いる。そのようなベクターは、例えば、シンドビスウイル
スベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣＶＲ−６７；ＡＴＣＣＶＲ−
１２４７）、ロス川ウイルス（ＡＴＣＣＶＲ−３７３；ＡＴＣＣＶＲ−１２
４６）およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ
ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣＶＲ−１２４９；ＡＴＣＣＶＲ−５３２）を含
む広範な種々のアルファウイルスから構築され得る。そのようなベクター系の代
表的な例としては、米国特許第５，０９１，３０９号、同第５，２１７，８７９
号および同第５，１８５，４４０号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１０
５７８；ＷＯ９４／２１７９２；ＷＯ９５／２７０６９；ＷＯ９５／２７
０４４；およびＷＯ９５／０７９９４に記載されるものが挙げられる。

【０１２８】本発明の遺伝子送達ビヒクルはまた、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター
のようなパルボウイルスを利用し得る。代表的な例は、ＷＯ９３／０９２３９
においてＳｒｉｖａｓｔａｖａ、Ｓａｍｕｌｓｋｉら、Ｊ．Ｖｉｒ．６３：３８
２２−３８２８（１９８９）；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎら、Ｖｉｒｏｌ．１６６：１
５４−１６５（１９８８）；およびＦｌｏｔｔｅら、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９０：１
０６１３−１０６１７（１９９３）により開示されたＡＡＶベクターを含む。

【０１２９】アデノウイルスベクターの代表的な例としては、以下に記載されたものが挙げ
られる：Ｂｅｒｋｎｅｒ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ６：６１６−６２７（
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５
２：４３１−４３４（１９９１）；ＷＯ９３／１９１９１；Ｋｏｌｌｓら、Ｐ
．Ｎ．Ａ．Ｓ．：２１５−２１９（１９９４）；Ｋａｓｓ−Ｅｉｓｌｅｒら、Ｐ
．Ｎ．Ａ．Ｓ．９０：１１４９８−１１５０２（１９９３）；Ｇｕｚｍａｎら、
Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ８８：２８３８−２８４８（１９９３）；Ｇｕｚｍａ
ｎら、Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．７３：１２０２−１２０７（１９９３）；Ｚａｂｎｅｒ
ら、Ｃｅｌｌ７５：２０７−２１６（１９９３）；Ｌｉら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒ．４：４０３−４０９（１９９３）；Ｃａｉｌａｕｄら、Ｅｕｒ．Ｊ
．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：１２８７−１２９１（１９９３）；Ｖｉｎｃｅｎｔら
、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．５：１３０−１３４（１９９３）；Ｊａｆｆｅら、Ｎａ
ｔ．Ｇｅｎｅｔ．１：３７２−３７８（１９９２）；およびＬｅｖｒｅｒｏら、
Ｇｅｎｅ１０１：１９５−２０２（１９９２）。本発明に利用可能な例示的な
アデノウイルス遺伝子治療ベクターとしては、以下に記載されたものもまた挙げ
られる：ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１
；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４およびＷＯ９５／００６５５。
Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．３：１４７−１５４（１９９２）
に記載されるように殺したアデノウイルスに連結したＤＮＡの投与が、利用され
得る。

【０１３０】他の遺伝子送達ビヒクルおよび方法が、利用され得る。これには、以下を含む
：殺した単独のアデノウイルスに連結した、または連結していないポリカチオン
性の濃縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．３：１
４７−１５４（１９９２））；リガンド連結ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ、Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６９８５−１６９８７（１９８９）を参照のこと）；
真核生物細胞送達ビヒクル細胞（例えば、１９９４年５月９日に出願された米国
特許出願第０８／２４０，０３０号および米国特許第６，０１５，６８６号を参
照のこと）；光重合化ヒドロゲル材料の沈着；米国特許第５，１４９，６５５号
に記載された携帯型遺伝子移入粒子銃；米国特許第５，２０６，１５２号および
ＷＯ９２／１１０３３に記載のような電離放射線；核荷電中性化または細胞膜と
の融合。さらなるアプローチが、Ｐｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．
１４：２４１１−２４１８（１９９４）、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：１５８１−１５８５（１９９４）に記載
される。

【０１３１】裸のＤＮＡもまた、利用し得る。裸のＤＮＡの例示的な導入方法が、ＷＯ９０
／１１０９２および米国特許第５，５８０，８５９号に記載される。取り込み効
率が、生物分解性ラテックスビーズの使用により改良され得る。ＤＮＡでコーテ
ィングされたラテックスビーズは、このビーズによるエンドサイトーシスの開始
後、細胞内へ効率的に輸送される。本方法は、疎水性を増すためのビーズの処理
により、さらに改良され得、そしてそれにより、エンドソームの破壊を容易にし
得、そして細胞質内へのＤＮＡの放出を容易にし得る。遺伝子送達ビヒクルとし
て働き得るリポソームが、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴ特許公開番
号ＷＯ９５／１３７９６；ＷＯ９４／２３６９７；ＷＯ９１／１４４４５；およ
びＥＰ０５２４９６８に記載される。

【０１３２】使用に適したさらなる非ウイルス送達は、Ｗｏｆｆｅｎｄｉｎら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１（２４）：１１５８１−１１５８５
（１９９４）に記載されるアプローチのような機械的送達系を含む。さらに、コ
ード配列およびそのようなものの発現産物は、光重合したヒドロゲル物質の沈殿
を通じて送達され得る。コード配列の送達に用いられ得る遺伝子送達の従来の他
の方法は、以下を含む：例えば、米国特許第５，１４９，６５５号に記載される
携帯型遺伝子移入粒子銃の使用；米国特許第５，２０６，１５２号およびＰＣＴ
特許公開番号ＷＯ９２／１１０３３に記載される、移入された遺伝子の活性化の
ための電離放射線の使用。

【０１３３】ＦＧＦは、機能の損失、不適切な機能／数、機能または生存が延長／レスキュ
ーされ得る細胞、組織または器官の異常な機能または死、およびＦＧＦを用いた
治療によって逆転または予防され得る異常によって特徴付けられる疾患に関係づ
けられている。

【０１３４】肺、気管支または肺胞の細胞または機能の損失、肺または気管支の損傷の治癒
、肺不全、肺気腫／慢性閉塞性肺疾患、喘息、感染性疾患または自己免疫疾患の
後遺症、肺動脈または静脈の高血圧の後遺症、肺線維症、未熟児の肺疾患、およ
び嚢胞性線維症、ＦＧＦでの処置が容易な状態である。

【０１３５】虚血性血管疾患は、ＦＧＦ−２３で処置することが容易であり得、ここでこの
疾患は、器官への不適切な血流によって特徴付けられる。処置は、治療的新脈管
形成を誘導し得るか、または細胞の機能／生存を保存し得る（心筋虚血／心筋梗
塞、末梢血管疾患、腎動脈疾患、発作）。心筋細胞または心臓の支持細胞の機能
の損失またはその死によって特徴付けられる心筋症（うっ血性心不全、心筋炎、
心不全、不整脈、弁障害、肥大、先天性欠損、心動脈または冠状動脈の傷害、創
傷、炎症および外科的外傷）はまた、ＦＧＦ−２３を用いて処置され得、骨格筋
細胞、骨細胞または支持細胞の機能の損失、その不適切な機能またはその死によ
って特徴付けられる筋骨格疾患も同様に処置され得る。例としては、骨格ミオパ
シー、骨疾患および関節炎が挙げられる。

【０１３６】ＦＧＦ−２３ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、ＦＧＦ−２３分子また
はその機能の損失に起因する先天性欠損の矯正を補助し得る（肝臓、心臓、肺、
脳、四肢、腎臓など）。

【０１３７】創傷治癒（外傷、疾患、医学的または外科的処置（これらの処置によって枯渇
した細胞集団および組織の再生を含む）のいずれかに起因する）の処置は、ＦＧ
Ｆ−２３ポリペプチドおよびポリヌクレオチドのさらに別の使用である。例とし
ては、肝臓再生、手術の創傷治癒、損傷した血管の再内皮形成（ｒｅ−ｅｎｄｏ
ｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ）、外傷創傷の治癒、血管疾患、代謝性疾患など
に起因する潰瘍の治癒骨折、炎症性疾患に起因する細胞の損失などが挙げられる
。

【０１３８】ＦＧＦ−２３はまた、この分子の過剰活性を含む癌の処置のための薬物を同定
するか、または新たな薬物の同定において有用である新たな標的を同定するスク
リーニングにおいて使用され得る。

【０１３９】全ての前述の実施形態について、臨床科は、特定の状態に基づいて、ＦＧＦ−
２３ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド、ＦＧＦ−２３に対する抗体、また
はペプチドアナログまたはアンタゴニストのような低分子が、処置の最も適した
形態であるか否かを決定する。これらの形態は、全て本発明の範囲内である。

【０１４０】本発明の好ましい実施形態は、以下の実施例において記載される。本明細書中
に記載される特許請求の範囲の範囲内の他の実施形態は、本明細書中に開示され
るように明細書の考慮または本発明の実施から当業者に明らかである。実施例と
共に、本明細書は、例示のみとして考慮され、本発明の範囲および精神が実施例
に続く特許請求の範囲によって示されることが意図される。

【０１４１】（実施例）（実施例１）（マウスＦＧＦ−２３の単離および分析）ＤＮＡを、以下のプライマーを使用して、ＭａｒａｔｈｏｎｃＤＮＡ増幅キ
ット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用してアダプター連結媒介性ＰＣＲによるマウス
皮膚ｃＤＮＡから増幅した：５’ｃｔｇａｔｇａｔｔａｃａｔｃａｇａｇｇａｃ
３’（マウスＦＧＦ−２３のセンスプライマー、配列番号７）；５’ｃａｃｃａ
ｇｇｔａｇｔｇａｔｇｃｔｔｃｔ３’（マウスＦＧＦ−２３のアンチセンスプラ
イマー、配列番号８）；５’ａｔｃｃａｔａｃａａａｇｇａａｃｃｔｔｃｇ３’
（マウスＦＧＦ−２３のアンチセンスプライマー、配列番号９）；５’ｃｃａｔ
ｃｃｔａａｔａｃｇａｃｔｃａｃｔａｔａｇｇｇｃ３’（アダプタープライマー
、配列番号１０）；および５’ａｃｔｃａｃｔａｔａｇｇｇｃｔｃｇａｇｃｇｇ
ｃ３’（アダプタープライマー、配列番号１１）。ＦＧＦのコード領域全体を含
むｃＤＮＡを、プライマー５’ａｃｔｃａｇｔｇｃｔｇｔｇｃａａｔｇｃｔ３’
（マウスＦＧＦ−２３のセンスプライマー）および５’ｇａｃｃｔａｇａｃｇａ
ａｃｃｔｇｇｇａａ３’（マウスＦＧＦ−２３のアンチセンスプライマー）を使
用するＰＣＲによって増幅し、そしてｐＧＥＭ−ＴＤＮＡベクターにクローニ
ングした。ヌクレオチド配列を配列番号１に示し、そして、アミノ酸配列を配列
番号２に示す。タンパク質は、アミノ酸１位〜２４位にシグナル配列を含む２５
１アミノ酸を有する。

【０１４２】（実施例２）（ＨｉｇｈＦｉｖｅ昆虫細胞における組換えマウスＦＧＦ−２３の産生）コード領域の３’末端にＥタグ（ＧＡＰＶＰＹＰＤＰＬＥＰＲ）およびＨｉｓ_６タグ（ＨＨＨＨＨＨ）をコードするＤＮＡフラグメント（７５ｂｐ）を有する
マウスＦＧＦ−２３ｃＤＮＡを、移入ベクターＤＮＡ（ｐＢａｃＰＡＫ９（Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ））中で構築した。タグ配列を有するＦＧＦ−２３ｃＤＮＡを含
む組換えバキュロウイルスを、組換えｐＢａｃＰＡＫ９およびＢｓｕ３６Ｉ消化
発現ベクター（ＢａｃＰＡＫ６（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ））での、Ｓｆ９細胞の同時
トランスフェクションによって得た。ＨｉｇｈＦｉｖｅ昆虫細胞を、得られた
組換えバキュロウイルスで感染し、そしてＥＸ−ＣＥＬＬ４００完全培地（
ＪＲＨＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で２７℃で７２時間インキュベートした。

【０１４３】発現の間、ＦＧＦ−２３は、図１４に概略的に示されるように、切断を受け、
約２０ｋＤａのフラグメントおよび約７〜１２ｋＤａのフラグメントを生じ得る
。フラグメントのサイズは、残基１７６位および１７９位（その両方がアルギニ
ンである）の近くのプロセシングの間のタンパク質切断と一致している。

【０１４４】１７９位と１８０位との間の切断を、図１６によって示されるように、ＳＦ９
細胞から精製されるバキュロウイルス発現タンパク質を分析することによって確
認した。細胞培地は、ｈＦＧＦ−２３のいくつかのフラグメントを含んだ。２つ
のフラグメントは、シグナルペプチドがＮ末端から除去される全長に近い形態を
示し、これは、分泌された分子と一致している。このシグナルペプチドは、Ｐ２
６とＮ２７との間の切断によって除去される。代替的なシグナルペプチド切断部
位は、Ｇ３３とＳ３４との間に存在し、わずかにより小さい分子を生じる。これ
らの改変体の両方について、切断は、Ｒ１７９切断部位で発生し得る。培地はま
た、５１８０−Ｈ２５６からなるＣ末端フラグメントを含んだ。３つの切断産物
を、以下の表１に示し、そしてこれらは、図１６の１７４１４、１６７６１、お
よび８２０４の分子量バンドに相関する。

【０１４５】

【表１】（実施例３）（ウエスタンブロッティング分析による組換えＦＧＦ−２３の検出）組換えバキュロウイルスに感染したＨｉｇｈＦｉｖｅ細胞の培養培地および
細胞溶解物を、還元条件下で、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリ
ルアミドゲル（１２．５％）電気泳動によって分離し、そしてニトロセルロース
膜（Ｈｙｂｏｎｄ−ＥＣＬ，ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔ
ｅｃｈ）に転写した。この膜を、抗Ｅタグ抗体（１：５００）（Ａｍｅｒｓｈａ
ｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）と共にインキュベートした。Ｅタグ
を有するタンパク質を、記載されるように可視化した（Ｈｏｓｈｉｋａｗａら、
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４４：１８７−１
９１（１９９８））。結果を図１１に示す。

【０１４６】（実施例４）（ヒトＦＧＦ−２３の単離および分析）ヒトＦＧＦ−２３遺伝子を染色体１２ｐ１３に位置付けした。配列番号４（図
３）において示されるように、タンパク質は、２５１アミノ酸を含み、そして配
列番号３のポリヌクレオチド配列によってコードされる。ヒトＦＧＦ−２３ｃ
ＤＮＡコード領域の増幅のためのプライマーは、以下のようである：センスプラ
イマー：５’ａｇｃａｃｃａｇｃｃａｃｔｃａｇａｇｃａ３’（配列番号５）；
アンチセンスプライマー：５’ｃｔｔｃｃａｇｃｇａｃｃｃｔａｇａｔｇａ３’
（配列番号６）。タンパク質は、アミノのおよそ１位〜２４位に位置するシグナ
ルペプチドを有する。

【０１４７】（実施例５）（リアルタイム定量的ＰＣＲによるマウス組織におけるＦＧＦ−２３ｍＲＮ
Ａ発現の定量的分析）マウス組織ｃＤＮＡを、モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素、ランダム
ヘキサデオキシヌクレオチドプライマーおよび鋳型としてのマウス組織ＲＮＡ（
５μｇ，ＯｒｉＧｅｎｅ）を含む反応混合液（２０μｌ）中で合成した。マウス
ＦＧＦ−２３ｃＤＮＡを、マウスＦＧＦ−２３ｃＤＮＡに特異的な正方向プ
ライマー、逆方向プライマーおよびＴａｑＭａｎプローブを用いて、Ｍｏｄｅｌ
７７００ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃｔｏｒ（ＰＥＡｐｐｌｉｅｄＢ
ｉｏｓｙｓｔｅｍ）中でｃＤＮＡから増幅した。マウスβアクチンｃＤＮＡをま
た、マウスβアクチンに特異的な正方向プライマー、逆方向プライマーおよびＴ
ａｑＭａｎプローブを用いて増幅した。Ｔｏｋｕｎａｇａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ
ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１４：２８２９（１９９４）。ＦＧＦ−２３およびβアク
チンｃＤＮＡのコピー数を、製造業者の説明書に従って決定した。結果を図１２
に示す。試験された組織（脳、胸腺、小腸、心臓、肺、肝臓、腎臓、筋肉、皮膚
、脾臓、胃、および精巣）のうちで、ＦＧＦ−２３ｍＲＮＡは、脳および胸腺
において主に発現されることが見出された。結果を表２に要約する。

【０１４８】

【表２】（実施例６）（インサイチュハイブリダイゼーション）成体マウスの脳および胸腺を、粉末状ドライアイス中で凍結させ、切片をクリ
オスタットを用いて１６μｍで切断し、ポリ−Ｌ−リジン−コーティングスライ
ドに解凍載置（ｔｈａｗ−ｍｏｕｎｔｅｄ）し、ハイブリダイゼーションまで−
８５℃で保存した。^３５Ｓ標識したマウスＦＧＦ−２３アンチセンスまたはセン
スプローブを、ウリジン５’−α−［^３５Ｓ］チオ三リン酸（約３０ＴＢｑ／ｍ
ｍｏｌ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）を用いて
、それぞれＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼまたはＴ７ＲＮＡポリメラーゼ（ＴａＫ
ａＲａ）を使用して転写した。切片を、記載されるように標識されたプローブを
用いるインサイチュハイブリダイゼーションによって試験した。（Ｙａｍａｓａ
ｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１５９１８−１５９２１（１９９６
））。図１３に示されるように、標識を、腹外側の視床核において検出した（図
１３、矢印）。

【０１４９】（実施例７）（ＦＧＦ−２３ペプチドでのウサギの免疫によるＦＧＦ−２３に対する抗血清
の調製）ヒトＦＧＦ−２３タンパク質の選択された近接するアミノ酸に対応するペプチ
ド配列を合成し、そして記載されるようにキーホールペットリンペットヘモシニ
アン（ＫＬＨ）に結合させた（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，１９８８．ＣｏｌｄＳｐｒ
ｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ）。Ｋ
ＬＨ結合ペプチドを使用して、ウサギを免疫する。抗血清を、ＦＧＦ−２３に対
する特異性、および他のＦＧＦタンパク質との交差反応性について試験した。

【０１５０】例示的なペプチド配列は以下のようである：ＲＲＨＴＲＳＡＥＤＤＳＥＲＤ（配列番号４の残基１７５〜１８９）およびＹ
ＨＬＱＩＨＫＮＧＨＶＤＧＡＰＨＱ（配列番号４の残基５１〜６７）。

【０１５１】（実施例８）（ＯＫ細胞におけるリン酸取り込みアッセイ）オポサム腎細胞によるリン酸取り込みに対するＦＧＦ−２３およびその変異体
またはフラグメントの効果を、本実施例によって記載されるようにアッセイする
。以下の試薬を使用する：ＦＧＦ−２３ＦＧＦ−２（ＰＢＳ中１ｎＭに希釈した）ＰＢＳ中ＰＴＨ（副甲状腺ホルモン、Ｓｉｇｍａ、番号Ｐ３７９６）ストック
１００μｇ／ｍｌ。実験のためにＰＢＳ中１μｇ／ｍｌストックに希釈した。

【０１５２】［^３２Ｐ］正リン酸、ＮＥＮ番号ＮＥＸ０５３１ｍＣｉ／１ｍｌ水。実験の
ためのＰＢＳ中１：１０に希釈する。

【０１５３】トランスフェリンインシュリン取り込み溶液：１３７ｍＭＮａＣｌ５．４ｍＭＫＣｌ１．８ｍＭＣａＣｌ_２１．２ｍＭＭｇＳＯ_４１４ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４洗浄溶液（４℃）：１３７ｍＭＮａＣｌ１４ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４抽出溶液：０．５ＭＮａＯＨ０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００中和溶液：０．５ＭＨＣｌこの方法を以下のように実行する：細胞を、ＤＭＥＭ、３０μｇ／ｍｌトランスフェリン、５μｇ／ｍｌインシュ
リン、５％ＦＢＳおよびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐに維持する。このアッセイを行なう
ために、２４ウェルプレートを、６０，０００細胞／ウェルで播種し、そして６
〜８日にわたってコンフルエントまで増殖させ、３〜４日毎に培地を交換する。
アッセイの前の日、培地を、洗浄し、１ｍｌ／ウェルのＤＭＥＭ、トランスフェ
リン、インシュリン、および１ｍｇ／ｍｌＢＳＡに交換した。

【０１５４】アッセイの日、以下の工程を実施する：（１）細胞を処理する：以下に列挙されるように、ビヒクル、ＦＧＦ−２３、
ＦＧＦ−２またはＰＴＨを添加する。３７℃で３時間インキュベートする。

【０１５５】（２）細胞を洗浄する：予め３７℃まで温めた１〜２ｍｌの取り込み溶液で３
回；１ウェル当り１ｍｌの新鮮な取り込み溶液を添加する；インキュベーター中
に１０分配置する。

【０１５６】（３）標識細胞：１ウェル当り２０μｌ（希釈ストック溶液＝２μＣｉ）の［^３２Ｐ］正リン酸を添加し、回旋によって十分に混合し、タイマーを開始する。
インキュベーターに戻す。

【０１５７】（４）取り込みを終了する：１５分で、氷上に静置することによって取り込み
を終了し、放射性培地を吸引し、１ｍｌ氷冷洗浄溶液で４回洗浄する。吸引する
。１ウェル当り２５０μＬの抽出溶液を添加する。

【０１５８】（５）カウントを抽出する：５〜１０分抽出物をインキュベートした後、Ｅｐ
ｐｅｎｄｏｒｆ遠心チューブに移す。ウェルを、さらに２５０μＬの抽出溶液で
洗浄する。５００μＬの中和溶液をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心チューブに添加する
ことによって中和する。混合するためにボルテックスする。

【０１５９】（６）計数する：５ｍｌシンチレーション液体（^３２Ｐチャネル）中１ウェル
当り１００μＬのアリコートを複製する。

【０１６０】処理は、以下のようであり、各処置を４連で行なう。

【０１６１】セット１：１００μＬ／ウェルのビヒクル（ＰＢＳ）／ウェル。

【０１６２】セット２：１００μＬ／ウェルのＰＴＨ（１μ／ｍｌストック；１００ｎｇ／
ｍｌ最終）。

【０１６３】セット３：１００μＬ／ウェルのＦＧＦ−２（ＰＢＳ中１ｎＭストック；１０
０ｐＭ最終）セット４：１００μＬ／ウェルのＦＧＦ−２３（このＦＧＦ−２３は、全長、
切断産物、および／または切断可能でないＦＧＦ−２３変異体）セット５：バキュロウイルスコントロールスーパー６×ＨｉｓカラムＦｌｏｗ
−ｔｈｒｏｕｇｈ、１００μＬ／ウェル。

【０１６４】セット６：ＦＧＦ−２３バキュロ６×ＨｉｓカラムＦｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ
、１００μＬ／ウェル［ＦＧＦ−２３から切断された］。

【０１６５】ＰＴＨは、これらの細胞においてリン酸取り込みを阻害する（ポジティブコン
トロール）。

【０１６６】ＦＧＦ−２は、リン酸取り込みに対して影響を有さない（ネガティブコントロ
ール）。

【０１６７】ＦＧＦ−２３（その切断産物および切断可能でないＦＧＦ−２３変異体を含む
）で処理された細胞によるリン酸取り込みを、ＦＧＦ−２３の生物学的活性を決
定するために、ＰＴＨおよびＦＧＦ−２で処理した細胞と比較する。

【０１６８】全ての特許、公開された特許出願および本明細書中に引用される刊行物は、本
明細書中に十分に示されるように、参考として援用される。

【０１６９】特定の好ましい実施形態が、本明細書中に記載されているが、このような実施
形態は、上記の特許請求の範囲に示される場合を除き、本発明の範囲を限定する
として解釈されることは意図されない。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ヒトＦＧＦ遺伝子ファミリーの他のメンバーとＦＧＦ−２３の関係を
示す。

【図２】図２は、マウスＦＧＦ−２３のＤＮＡ配列（配列番号１）およびアミノ酸配列
（配列番号２）を示す。

【図３】図３は、ヒトＦＧＦ−２３のＤＮＡ配列（配列番号３）およびアミノ酸配列（
配列番号４）を示す。

【図４】図４は、ヒトＦＧＦ−２３（配列番号４）およびマウスＦＧＦ−２３（配列番
号２）のアミノ酸配列のアライメントを示す。

【図５】図５は、ヒトＦＧＦ−２３およびヒトＦＧＦ−１９のアミノ酸配列の比較を示
す。アスタリスクは、配列の同一のアミノ酸残基を示す。

【図６】図６は、ヒトＦＧＦ−２３およびヒトＦＧＦ−２１のアミノ酸配列の比較を示
す。

【図７】図７は、酵母についてのコドン使用を提供する。表の各列に関する第１の欄の
情報は、アミノ酸についての三文字コードを含む。第２の欄は、そのアミノ酸に
ついての明白なコドンを含む。第３の欄は、この表が編集された遺伝子中のコド
ンの出現数を列挙する。第４の欄は、そのコドン使用が、コドン頻度表において
編集されたものと同一である遺伝子における１，０００コドンあたりのそのコド
ンの推定出現数を列挙する。最後の欄は、その同義のコドンファミリーにおける
コドンの出現の割合を含む。

【図８】図８は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａについてのコドンの使用を提供する。

【図９】図９は、Ｅ．ｃｏｌｉについてのコドンの使用を提供する。

【図１０】図１０は、ヒトＦＧＦファミリーの遺伝子の染色体局在を提供する。

【図１１】図１１は、細胞培養物由来の組換えマウスＦＧＦ−２３およびＦＧＦ−２３
ｃＤＮＡを含む組換えバキュロウイルスに感染したＨｉｇｈＦｉｖｅ細胞の細
胞溶解物の検出を示す。組換えバキュロウイルス感染ＨｉｇｈＦｉｖｅ細胞の
細胞培地および細胞溶解物を、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（１２．５％）
電気泳動によって分離した。組換えマウスＦＧＦ−２３を、抗Ｅタグ抗体を用い
るウェスタンブロッティング分析によって検出した。ＰｒｅｓｔａｉｎｅｄＰ
ｒｏｔｅｉｎＭａｒｋｅｒＢｒｏａｄＲａｎｇｅ（ＮｅｗＥｎｇｌａｎ
ｄＢｉｏｌａｂｓ）を、分子質量標準タンパク質として使用した。

【図１２】図１２は、マウス成体組織におけるＦＧＦ−２３ｍＲＮＡの発現を示す。Ｆ
ＧＦ−２３ｃＤＮＡを、リアルタイム定量的ＰＣＲによってマウス成体組織ｃ
ＤＮＡから増幅した。ＦＧＦ−２３のコピー数をそれぞれのマウス組織における
β−アクチンｃＤＮＡのコピー数に対して規準化した。

【図１３】図１３は、マウス脳におけるＦＧＦ−２３ｍＲＮＡの局在を示す。脳の逐次
冠状切片を、^３５Ｓ−標識マウスＦＧＦ−２３アンチセンス（Ａ）またはセンス
プローブ（Ｂ）とハイブリダイズし、そしてＸ線フィルムに曝露した。矢印は、
腹側外側視床核を示す。

【図１４】図１４は、２０ｋＤａおよび７〜１２ｋＤａのフラグメントを示す、ＦＧＦ−
２３の概略図である。

【図１５】図１５は、ＦＧＦ−２３の推定切断部位を示す、ＦＧＦファミリーのメンバー
のアライメントを提供する。

【図１６】図１６は、ＦＧＦ−２３切断産物の分子量を示すＣｏｏｍａｓｓｉｅ染色ゲル
である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 5/00 ４Ｃ０８５ 48/00 9/10 ４Ｃ０８６Ａ６１Ｐ 5/00 15/00 ４Ｈ０４５ 9/10 17/00 15/00 17/02 17/00 25/00 17/02 25/16 25/00 25/28 25/16 35/00 25/28 35/02 35/00 37/02 35/02 43/00 １０５ 37/02 Ｃ０７Ｋ 14/50 43/00 １０５ 16/24 Ｃ０７Ｋ 14/50 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/24 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｐ 21/02 5/00 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/24 (31)優先権主張番号６０／２５１，６５０ (32)優先日平成12年12月５日(2000．12．5) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA21 CA04 CA12 DA02 EA04 GA11 HA17 4B063 QA01 QQ02 QQ03 QQ53 QQ79 QR32 QR56 QR62 QS25 QS34 QS36 QX01 4B064 AG02 CA10 CA19 CC24 DA01 4B065 AA24X AA26X AA90X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA01 BA08 BA22 BA23 CA18 DB54 MA01 NA14 ZA012 ZA162 ZA182 ZA332 ZA402 ZA812 ZA892 ZB072 ZB212 ZB262 ZC032 4C085 AA13 AA14 CC32 EE01 GG01 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA01 ZA16 ZA18 ZA33 ZA40 ZA81 ZA89 ZB07 ZB21 ZB26 ZC03 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA01 DA76 EA20 EA21 EA28 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】単離された核酸分子であって、該核酸分子は、以下：（ａ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１をコードするポリヌク
レオチド；（ｂ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１をコードするポリヌク
レオチド；（ｃ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４をコードするポリヌクレ
オチド；（ｄ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１をコードするポリヌ
クレオチド；（ｅ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５をコードするポリヌク
レオチド；（ｆ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７８をコードするポリヌク
レオチド；（ｇ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１をコードするポリ
ヌクレオチド；（ｈ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１をコードするポリ
ヌクレオチド；（ｉ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ
）のポリヌクレオチドの相補鎖；および（ｊ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ
）のポリヌクレオチドに少なくとも９０％同一であるポリヌクレオチド、からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。
【請求項２】配列番号３のコード領域由来の２０〜７５３個連続するヌク
レオチドを含む、単離された核酸分子。
【請求項３】配列番号３のコード領域由来の６０〜５００個連続するヌク
レオチドを含む、請求項２に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】配列番号３のコード領域由来の２００〜３００個連続するヌ
クレオチドを含む、請求項３に記載の単離された核酸分子。
【請求項５】単離された核酸分子であって、該核酸分子は、ポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドを含み、該ポリペプチドは、少なくとも１つの保
存的アミノ酸置換以外は、以下：（ａ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、単離された核酸分子。
【請求項６】ＤＮＡである、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項７】組換えベクターを作製する方法であって、該方法は、請求項
１に記載の核酸分子をプロモーターに作動可能な連結でベクター中へ挿入する工
程を包含する、方法。
【請求項８】請求項７に記載の方法によって産生される、組換えベクター
。
【請求項９】請求項８に記載の組換えベクターを宿主細胞に導入する工程
を包含する、組み換え宿主細胞を作製する方法。
【請求項１０】請求項９の方法によって産生される、組換え宿主細胞。
【請求項１１】ポリペプチドを産生する組換え方法であって、該方法は、
該ポリペプチドが発現されるような条件下で、請求項１０に記載の組換え宿主細
胞を培養する工程、および該ポリペプチドを収集する工程を包含する、方法。
【請求項１２】単離されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、以
下：（ａ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるア
ミノ酸を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項１３】単離されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、少
なくとも１つの保存的アミノ酸置換以外は、以下：（ａ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、単離されたポリペプチド。
【請求項１４】単離されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、以
下：（ａ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号４のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号４のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項１５】配列番号４のポリペプチドのエピトープ保有部分。
【請求項１６】配列番号４の１０個と５０個との間の連続するアミノ酸を
含む、請求項１５に記載のエピトープ保有部分。
【請求項１７】アミノ酸ＲＲＨＴＲＳＡＥＤＤＳＥＲＤを含む、請求項１
５に記載のエピトープ保有部分。
【請求項１８】アミノ酸ＹＨＬＱＩＨＫＮＧＨＶＤＧＡＰＨＱを含む、請
求項１５に記載のエピトープ保有部分。
【請求項１９】請求項１２に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項２０】請求項１３に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項２１】請求項１４に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項２２】請求項１２に記載のポリペプチドを薬学的に受容可能なキ
ャリアと組合わせて含む、薬学的組成物。
【請求項２３】細胞のための栄養支持物質が必要な患者に該栄養支持物質
を提供するための方法であって、該方法は、該患者に配列番号４のポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドを含む組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】請求項２３に記載の方法であって、ここで、前記ポリヌク
レオチドは、該ポリヌクレオチドを発現する細胞を前記患者に移植することによ
って投与され、該細胞は、該患者においてＦＧＦ−２３ポリペプチドを発現する
、方法。
【請求項２５】前記移植された細胞が半透膜にカプセル化される、請求項
２３に記載の方法。
【請求項２６】前記患者が皮膚細胞の機能不全または皮膚細胞に対する傷
害によって特徴付けられた状態に罹患している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】前記状態が外傷性傷害である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】前記患者が胎盤細胞の不適性な機能によって特徴付けられ
る状態に罹患している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】請求項２８に記載の方法であって、ここで、前記状態が、
先天性欠損症、不妊症、または異常増殖からなる群より選択される少なくとも１
つの状態である、方法。
【請求項３０】前記患者が胸腺の不適性な機能によって特徴付けられる状
態に罹患している、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】請求項３０に記載の方法であって、ここで、前記状態が、
白血病、リンパ腫、自己免疫疾患、胸腺の増殖性障害、および胸腺の分化障害か
らなる群より選択される少なくとも１つの状態である、方法。
【請求項３２】細胞のための栄養支持物質が必要な患者に該栄養支持物質
を提供するための方法であって、該方法は、該患者に配列番号４のポリペプチド
を含む組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３３】前記患者が中枢神経系障害によって特徴付けられる状態に
罹患している、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】前記状態がパーキンソン病およびアルツハイマー病からな
る群より選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】ヒト患者の脳における疾患状態を緩和する方法であって、ここで、該疾患状態は、該ヒト患者において、機能性神経細胞の分解を遅延さ
せること、機能性神経細胞の機能を回復させること、機能性神経細胞の数を増加
させることからなる群より選択される少なくとも１つの方法によって緩和され、該方法は、該患者に、配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む
薬学的に有効な組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】ヒト患者の胸腺における疾患状態を緩和する方法であって
、ここで、該疾患状態は、該ヒト患者において、機能性胸腺細胞の分解を妨害す
ること、機能性胸腺細胞の分解を遅延させること、機能性胸腺細胞の数を増加さ
せることからなる群より選択される少なくとも１つの方法によって緩和され、該方法は、該患者に、配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む
薬学的に有効な組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３７】ヒト患者の皮膚における疾患状態を緩和する方法であって
、ここで、該疾患状態は、該ヒト患者において、機能性皮膚細胞の分解を妨害す
ること、機能性皮膚細胞の分解を遅延させること、機能性皮膚細胞の数を増加さ
せることからなる群より選択される少なくとも１つの方法によって緩和され、該方法は、該患者に、配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む
薬学的に有効な組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３８】ヒト患者の胎盤における疾患状態を緩和する方法であって
、ここで、該疾患状態は、機能性胎盤細胞の分解を妨害すること、機能性胎盤細
胞の分解を遅延させること、機能性胎盤細胞の数を増加させることからなる群よ
り選択される少なくとも１つの方法によって緩和され、該方法は、該患者に、配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む
薬学的に有効な組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３９】容器中に梱包された、患者由来のサンプルにおいてＦＧＦ
−２３をコードするｍＲＮＡの存在を検出するためのキットであって、該キット
は、請求項３に記載のポリヌクレオチドの少なくとも２０個連続するヌクレオチ
ドを有するポリヌクレオチドを含む、キット。
【請求項４０】前記ポリヌクレオチドが配列番号４の少なくとも６個連続
するアミノ酸をコードする、請求項３９に記載のキット。
【請求項４１】容器中に梱包された、患者由来のサンプルにおいてＦＧＦ
−２３ポリペプチドの存在を検出するためのキットであって、該キットは、請求
項１９に記載の抗体を含む、キット。
【請求項４２】単離された核酸分子であって、該核酸分子は、以下：（ａ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１をコードするポリヌク
レオチド；（ｂ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１をコードするポリヌク
レオチド；（ｃ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４をコードするポリヌクレ
オチド；（ｄ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１をコードするポリヌ
クレオチド；（ｅ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５をコードするポリヌク
レオチド；（ｆ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７８をコードするポリヌク
レオチド；（ｇ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１をコードするポリ
ヌクレオチド；（ｈ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１をコードするポリ
ヌクレオチド；（ｉ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ
）のポリヌクレオチドの相補鎖；および（ｊ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）または（ｈ
）のポリヌクレオチドに少なくとも９０％同一であるポリヌクレオチド、からなる群より選択されるポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。
【請求項４３】配列番号１のコード領域由来の２０〜７５３個連続するヌ
クレオチドを含む、単離された核酸分子。
【請求項４４】配列番号１のコード領域由来の６０〜５００個連続するヌ
クレオチドを含む、請求項４３に記載の単離された核酸分子。
【請求項４５】配列番号１のコード領域由来の２００〜３００個連続する
ヌクレオチドを含む、請求項４４に記載の単離された核酸分子。
【請求項４６】単離された核酸分子であって、該核酸分子は、ポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドを含み、該ポリペプチドは、少なくとも１つの
保存的アミノ酸置換以外は、以下：（ａ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、単離された核酸分子。
【請求項４７】ＤＮＡである、請求項４２に記載の単離された核酸分子。
【請求項４８】組換えベクターを作製する方法であって、該方法は、請求
項４２に記載の核酸分子をプロモーターに作動可能な連結でベクター中へ挿入す
る工程を包含する、方法。
【請求項４９】請求項４８に記載の方法によって産生される、組換えベク
ター。
【請求項５０】請求項４９に記載の組換えベクターを宿主細胞に導入する
工程を包含する、組み換え宿主細胞を作製する方法。
【請求項５１】請求項５０の方法によって産生される、組換え宿主細胞。
【請求項５２】ポリペプチドを産生する組換え方法であって、該方法は、
該ポリペプチドが発現されるような条件下で、請求項５１に記載の組換え宿主細
胞を培養する工程、および該ポリペプチドを回収する工程を包含する、方法。
【請求項５３】単離されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、以
下：（ａ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるア
ミノ酸を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項５４】単離されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、少
なくとも１つの保存的アミノ酸置換以外は、以下：（ａ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、単離されたポリペプチド。
【請求項５５】単離されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、以
下：（ａ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２５１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２〜およそ２５１；（ｃ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ２４；（ｄ）配列番号２のアミノ酸のおよそ２５〜およそ２５１；（ｅ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７５；（ｆ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１〜およそ１７７；（ｇ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１７７〜およそ２５１；および（ｈ）配列番号２のアミノ酸のおよそ１８０〜およそ２５１、からなる群より選択されるアミノ酸を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項５６】配列番号２のポリペプチドのエピトープ保有部分。
【請求項５７】配列番号２の１０個と５０個との間の連続するアミノ酸を
含む、請求項５６に記載のエピトープ保有部分。
【請求項５８】請求項５３に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項５９】請求項５４に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。
【請求項６０】請求項５５に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単
離された抗体。