KR20230125855A - Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도 - Google Patents

Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230125855A
KR20230125855A KR1020237028104A KR20237028104A KR20230125855A KR 20230125855 A KR20230125855 A KR 20230125855A KR 1020237028104 A KR1020237028104 A KR 1020237028104A KR 20237028104 A KR20237028104 A KR 20237028104A KR 20230125855 A KR20230125855 A KR 20230125855A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antibody
amino acid
antibodies
nos
Prior art date
Application number
KR1020237028104A
Other languages
English (en)
Inventor
닐스 론버그
앨런 제이. 코먼
브라이언 씨. 반하트
애런 피. 얌니욱
모한 스리니바산
칼라 에이. 헤닝
밍 레이
이매뉴엘라 세가
앤젤라 굿이너프
마리아 엔. 쥬리-쿤켈
궈둥 천
존 색
리처드 황
마틴 제이. 코벳
조셉 이. 마이어스
량 슈바이처
샌드라 브이. 해처
하이춘 황
핑핑 장
Original Assignee
브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 filed Critical 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Publication of KR20230125855A publication Critical patent/KR20230125855A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6871—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an enzyme
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3015—Breast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/303—Liver or Pancreas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3038—Kidney, bladder
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3046—Stomach, Intestines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3053—Skin, nerves, brain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)

Abstract

본 개시내용은 인간 분화 클러스터 73 (CD73)과 고 친화도로 결합하고; CD73의 활성을 억제하며; 임의로 항체 의존성 CD73 내재화를 매개하는, 단리된 모노클로날 항체, 특히 인간 항체를 제공한다. 본 개시내용의 항체를 코딩하는 핵산 분자, 본 개시내용의 항체를 발현하기 위한 발현 벡터, 숙주 세포 및 방법이 또한 제공된다. 본 개시내용의 항체를 포함하는 면역접합체, 이중특이적 분자 및 제약 조성물이 또한 제공된다. 본 개시내용은 또한, 본 개시내용의 항체를 사용하여 CD73을 발현하는 종양 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공하는데, 이는 각종 암을 치료하는 방법을 포함한다.

Description

CD73에 대항한 항체 및 그의 용도 {ANTIBODIES AGAINST CD73 AND USES THEREOF}
본 출원은 2014년 11월 21일에 "CD73에 대항한 항체 및 그의 용도"란 발명의 명칭으로 출원된 미국 가출원 번호 62/083,056을 우선권 주장하며, 이 가출원의 내용이 본원에 참조로 포함된다.
엑토-5'-뉴클레오티다제 (엑토-5'NT, EC 3.1.3.5)로서 공지되기도 한 분화 클러스터(Cluster of Differentiation) 73 (CD73)은 대부분의 조직에서 발견되는 글리코실-포스파티딜이노시톨 (GPI)-결합 세포 표면 효소이지만, 특히 내피 세포 및 조혈 세포의 서브세트에서 발현된다 (Resta et al., Immunol Rev 1998;161:95-109 and Colgan et al., Prinergic Signal 2006;2:351-60). CD73은 세포외 뉴클레오시드 모노포스페이트를 뉴클레오시드, 예컨대 아데노신으로 탈인산화하는 것을 촉매하는 것으로 공지되어 있다. 아데노신은 A1, A2A, A2B, 및 A3을 포함한 몇 가지 수용체를 통하여 그의 생물학적 효과를 매개하는, 광범위하게 연구되고 있는 시그널링 분자이다. 아데노신은 많은 암의 증식과 이동을 조절하고 항-종양 T 세포의 조절을 통하여 면역억제 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌다 (Zhang et al., Cancer Res 2010;70:6407-11).
CD73은 결장암, 폐암, 췌장암, 난소암, 방광암, 백혈병, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 갑상선암, 식도암, 전립선암 및 유방암을 포함한, 많은 상이한 암 상에서 발현되는 것으로 보고되었다 (Jin et al., Cancer Res 2010;70:2245-55 and Stagg et al., PNAS 2010;107:1547-52). 더욱이, 암에서의 CD73 발현은 증가된 증식, 이동, 신생혈관증식, 침습성, 전이와 더 짧은 환자 생존률과 연관이 있어 왔다. CD73 활성은 또한, 유두상 갑상선 암종에서 예측 마커로서 제안되었다. CD73이 종양 세포 상에서 세포-세포 상호 작용과 세포-매트릭스 상호 작용을 조절하는 것으로 밝혀지긴 하였지만, CD73 발현과 활성은 또한, 저하된 T-세포 반응과 연계되었고 약물 내성과 관련이 있었다 (Spychala et al., Pharmacol Ther 3000;87:161-73). 따라서 CD73은 직접적으로나 간접적으로 암 진행을 조절할 수 있어, 새로운 치료 표적으로서의 그의 잠재력이 강조된다.
암과 같은 질환을 표적화하기 위한 개선된 전략에 대한 지속적인 필요성을 고려해 볼 때, 다중 기전을 통하여 종양 진행을 조절하는 방법뿐만 아니라 CD73 활성을 조절하는 방법 및 관련 치료제가 매우 바람직하다.
본원에는 CD73과 특이적으로 결합하고 바람직한 기능적 특성을 갖는 단리된 항체, 예컨대 모노클로날 항체 (그의 항원 결합성 부분), 특히 인간 모노클로날 항체가 제공된다. 이들 특성은 인간 CD73에 대한 고 친화도 결합성, 원숭이 CD73 [예를 들어, 시노몰구스(cynomolgus) CD73]에 대한 결합성, 및 CD73 효소 활성을 억제할 수 있는 능력을 포함한다. 본원에 기재된 항체를 사용하여 종양 성장을 억제하고, 아데노신 생성을 저하시키며, 면역 반응을 자극하고, 샘플 중의 CD73 단백질을 검출할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 다음 특성 중 적어도 하나를 나타낸다:
(a) CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(b) 시노몰구스 CD73과 결합하는 특성;
(c) CD73을 항체 매개된 내재화에 의해 세포, 예를 들어 종양 세포 내로 내재화하는 특성; 및
(d) 인간 CD73의 아미노산 65-83 및 157-172를 포함하는 입체 형태적 에피토프와 결합하는 특성.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은, 예를 들어 비아코어(BIACORE®) SPR 분석에 의해 측정된 바와 같이 약 10 nM 내지 0.1 nM 이하의 KD로 인간 CD73 (단량체성 및/또는 이량체성 CD73)과 결합하고; 예를 들어, 펄스 추적에 의해 측정된 바와 같고 본 실시예에 기재된 바와 같은, 10분 이하의 T1/2로 종양 세포 내로 내재화된다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 인간 CD73의 영역 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA [서열식별번호 (SEQ ID NO): 96] 및/또는 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97) 내에서 결합되는데, 예를 들어, 여기서 에피토프는 인간 CD73의 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및/또는 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)에 걸쳐있거나 또는 이와 중복된다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 아미노산 잔기 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및/또는 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)의 전부 또는 부분을 포함하는 인간 CD73 (서열식별번호: 1) 상의 에피토프와 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분에 의해 결합된 에피토프는, 예를 들어 HDX-MS 및/또는 결정학에 의해 결정된다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 본원에 기재된 항-CD73 항체의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 쌍, 예컨대 표 35 내의 쇄, 예를 들어, 서열식별번호: 4 및 8; 서열식별번호: 4 및 12; 서열식별번호: 16 및 20; 서열식별번호: 16 및 24; 서열식별번호: 16 및 28; 서열식별번호: 32 및 36; 서열식별번호: 40 및 44; 서열식별번호: 40 및 48; 서열식별번호: 52 및 56; 서열식별번호: 60 및 64; 서열식별번호: 68 및 72; 서열식별번호: 68 및 76; 서열식별번호: 80 및 84; 서열식별번호: 88 및 92; 서열식별번호: 135 및 8; 또는 서열식별번호: 135 및 12 내에 있는 3개의 가변 중쇄 CDR 및 3개의 가변 경쇄 CDR를 포함한다. 예를 들어, 항-CD73 항체는 다음을 포함한다:
(a) 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 9, 10, 및 11을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(b) 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 13, 14, 및 15를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(c) 서열식별번호: 17, 18, 및 19를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 21, 22, 및 23을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(d) 서열식별번호: 17, 18, 및 19를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 25, 26, 및 27을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(e) 서열식별번호: 17, 18, 및 19를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 29, 30, 및 31을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(f) 서열식별번호: 33, 34, 및 35를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 37, 38, 및 39를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(g) 서열식별번호: 41, 42, 및 43을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 45, 46, 및 47을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(h) 서열식별번호: 41, 42, 및 43을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 49, 50, 및 51을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(i) 서열식별번호: 53, 54, 및 55를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 57, 58, 및 59를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(j) 서열식별번호: 61, 62, 및 63을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 65, 66, 및 67을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(k) 서열식별번호: 69, 70, 및 71을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 73, 74, 및 75를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(l) 서열식별번호: 69, 70, 및 71을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 77, 78, 및 79를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(m) 서열식별번호: 81, 82, 및 83을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 85, 86, 및 87을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열; 또는
(n) 서열식별번호: 89, 90, 및 91을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 93, 94, 및 95를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 9, 10, 및 11을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 13, 14, 및 15를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은, 예를 들어 서열식별번호: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 170-177에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 본원에 기재된 항-CD73 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 예를 들어, 서열식별번호: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 또는 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 본원에 기재된 항-CD73 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일하거나, 예를 들어, 적어도 85% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 그 초과하여 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 아미노산 서열: 서열식별번호: 135 및 8; 서열식별번호: 135 및 12; 서열식별번호: 4 및 8; 서열식별번호: 4 및 12; 서열식별번호: 16 및 20; 서열식별번호: 16 및 24; 서열식별번호: 16 및 28; 서열식별번호: 32 및 36; 서열식별번호: 40 및 44; 서열식별번호: 40 및 48; 서열식별번호: 52 및 56; 서열식별번호: 60 및 64; 서열식별번호: 68 및 72; 서열식별번호: 68 및 76; 서열식별번호: 80 및 84; 서열식별번호: 88 및 92; 서열식별번호: 170 및 서열식별번호: 20, 24 및 28 중 어느 하나; 서열식별번호: 171 내지 176 중 어느 하나 및 서열식별번호: 8 또는 12; 또는 서열식별번호: 177 및 36과 적어도 80% 동일하거나, 예를 들어, 적어도 85% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 95% 동일하거나, 적어도 96% 동일하거나, 적어도 97% 동일하거나, 적어도 98% 동일하거나, 또는 적어도 99% 동일하거나 또는 그 초과 (예를 들어, 100%)하여 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 서열식별번호: 135 및 8; 서열식별번호: 135 및 12; 서열식별번호: 4 및 8; 서열식별번호: 4 및 12; 서열식별번호: 16 및 20; 서열식별번호: 16 및 24; 서열식별번호: 16 및 28; 서열식별번호: 32 및 36; 서열식별번호: 40 및 44; 서열식별번호: 40 및 48; 서열식별번호: 52 및 56; 서열식별번호: 서열식별번호: 60 및 64; 서열식별번호: 68 및 72; 서열식별번호: 68 및 76; 서열식별번호: 80 및 84; 서열식별번호: 88 및 92; 서열식별번호: 170 및 서열식별번호: 20, 24 및 28 중 어느 하나; 서열식별번호: 171 내지 176 중 어느 하나 및 서열식별번호: 8 또는 12; 또는 서열식별번호: 177 및 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합성 부분은 서열식별번호: 135에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 8 또는 서열식별번호: 12에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본원에는 본원에 기재된 임의의 항-CD73 항체의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 완전한 길이의 중쇄 및 경쇄 서열, 예를 들어 서열식별번호: 100 및 101; 서열식별번호: 100 및 102; 서열식별번호: 103 및 104; 서열식별번호: 103 및 105; 서열식별번호: 103 및 106; 서열식별번호: 107 및 108; 서열식별번호: 109 및 110; 서열식별번호: 109 및 111; 서열식별번호: 112 및 113; 서열식별번호: 114 및 115; 서열식별번호: 116 및 117; 서열식별번호: 116 및 118; 서열식별번호: 119 및 120; 서열식별번호: 121 및 122; 서열식별번호: 133 또는 189 (C-말단 리신을 수반하지 않음) 및 101; 서열식별번호: 133 또는 189 및 102; 서열식별번호: 189 및 101; 서열식별번호: 189 및 102; 서열식별번호: 184 내지 186 중 어느 하나 및 서열식별번호: 104 내지 106 중 어느 하나; 서열식별번호: 187 내지 207 중 어느 하나 및 서열식별번호: 101 또는 102; 또는 서열식별번호: 208 내지 210 중 어느 하나 및 서열식별번호: 108을 각각 갖는, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공된다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합성 부분은 서열식별번호: 133 또는 189에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 영역 및 서열식별번호: 101 또는 서열식별번호: 102에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 영역을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 항체, 또는 그의 변이체이다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 전술된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 갖는 항체 (예를 들어, 항체 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11)와 동일한, CD73 상의 에피토프와 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은, 예를 들어, N-말단에서 C-말단으로의 순서로 인간 CH1 도메인, 인간 힌지 도메인, 인간 CH2 도메인, 및 인간 CH3 도메인을 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 여기서 적어도 2개의 도메인은 상이한 이소형 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 이소형)의 것이다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 변형된 불변 영역은 인간 IgG2 힌지를 포함하고, CH1, CH2, 및 CH3 도메인 중 적어도 하나는 IgG2 이소형의 것이 아니다. 특정 실시양태에서, CH1은, 예를 들어 아미노산 서열 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV (서열식별번호: 124)을 갖는 인간 IgG2 CH1 도메인이다. 변형된 불변 영역은 인간 IgG2 힌지 도메인, 예를 들어 시스테인 결합에 있어서의 이질성을 저하시켜 주는 인간 IgG2 힌지 도메인, 예를 들어 야생형 인간 IgG2 힌지 도메인 (서열식별번호: 136)과 비교해서 C219에 아미노산 치환, 예를 들어, C219S를 갖는 인간 IgG2 힌지 도메인, 예를 들어, 아미노산 서열 ERKSCVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 123)을 갖는 인간 IgG2 힌지 도메인을 포함할 수 있다. 변형된 불변 영역은 이펙터(effector) 기능을 저하 또는 제거시켜 주는 인간 IgG1 CH2 도메인, 예를 들어 야생형 인간 IgG1 CH2 도메인 (서열식별번호: 137)과 비교해서 아미노산 치환 A330S 및 P331S를 갖는 인간 IgG1 CH2 도메인, 예를 들어, 아미노산 서열 PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAK (서열식별번호: 125)을 포함하는 인간 IgG1 CH2 도메인을 포함할 수 있다. 변형된 불변 영역은, 예를 들어 다음 아미노산 서열을 갖는 야생형 인간 IgG1 CH3 도메인을 포함할 수 있다:
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 128).
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 (i) IgG2 힌지 또는 (ii) IgG2 힌지 및 IgG CH1 도메인을 포함하는 변형된 중쇄 영역을 포함하는데, 단 상기 항체는 IgG2 항체가 아니고, 예를 들어, 항체는 야생형 IgG2 중쇄 불변 영역을 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 본원에 기재된 불변 영역 중 어느 하나, 예를 들어 서열식별번호: 126, 127, 129, 130, 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 중 어느 하나를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 11F11 또는 CD73.4의 VH 및 VL 도메인, 및 IgG2 힌지를 포함하는 중쇄 불변 영역 또는 IgG2 힌지 및 IgG2 CH1 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 IgG2CS-IgG1.1f (서열식별번호: 169) 또는 IgG2CS-IgG1f (서열식별번호: 165)일 수 있는데, 여기서 "CS"는 "C219S"를 지칭한다.
본원에는 제2의 결합 특이성을 갖는 분자와 연결된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 포함하는 이중특이적 분자뿐만 아니라 특정 작용제와 연결된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 포함하는 면역접합체가 제공된다.
항-CD73 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 코딩하는 핵산 분자 뿐만 아니라 이러한 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터, 및 이러한 발현 벡터로 형질전환시킨 세포가 또한 제공된다.
항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 포함하는 조성물 및 키트가 또한 제공된다.
본원에는 본원에 개시된 항-CD73 항체를 특정 세포에서 발현시키는 단계; 및 이러한 세포로부터 상기 항체를 단리하는 단계를 포함하는, 항-CD73 항체의 제조 방법이 제공된다.
본원에 개시된 항-CD73 항체의 사용 방법, 예를 들어 CD73을 발현하는 종양, 예를 들어 종양 세포 중의 또는 이에 의한 아데노신 수준을 감소시키는 방법; 항원-특이적 T 세포 반응을 자극하는 방법; 특정 대상체에서의 면역 반응을 자극하는 방법; 특정 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법; 예를 들어, 면역요법에 의해 암을 치료하는 방법이 또한 제공된다. 특정 실시양태에서, 암은 방광암, 유방암, 자궁/자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 두경부암, 폐암, 위암, 생식 세포암, 뼈암, 간암, 갑상선암, 피부암, 중추 신경계의 신생물, 림프종, 백혈병, 골수종, 육종, 또는 바이러스 관련 암이다. 암은 전이성 암, 불응성 암, 또는 재발성 암일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 하나 이상의 부가 치료제, 예를 들어, 면역 체계를 자극하는 치료제, 예를 들어, PD-1 길항제, CTLA-4 길항제, LAG-3 길항제, GITR 길항제, 및/또는 항-CD39 항체, 항-A2AR 항체, 또는 A2AR의 화학적 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
본 개시내용의 다른 특징 및 이점은 다음의 상세한 설명 및 실시예로부터 명백할 것인데, 이로써 제한되지 않아야 한다.
도 1a는 CD73.4-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 237) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 135)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 5), CDR2 (서열식별번호: 6) 및 CDR3 (서열식별번호: 7) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 1b는 CD73.4-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역 (VK1)의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 140) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 8)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 9), CDR2 (서열식별번호: 10) 및 CDR3 (서열식별번호: 11) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 2a는 CD73.4-2 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 237) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 135)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 5), CDR2 (서열식별번호: 6) 및 CDR3 (서열식별번호: 7) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 2b는 CD73.4-2 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 141) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 12)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 13), CDR2 (서열식별번호: 14) 및 CDR3 (서열식별번호: 15) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 3a는 11F11-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 139) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 4)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 5), CDR2 (서열식별번호: 6) 및 CDR3 (서열식별번호: 7) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 3b는 11F11-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 140) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 8)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 9), CDR2 (서열식별번호: 10) 및 CDR3 (서열식별번호: 11) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 4a는 11F11-2 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 139) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 4)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 5), CDR2 (서열식별번호: 6) 및 CDR3 (서열식별번호: 7) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 4b는 11F11-2 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 141) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 12)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 13), CDR2 (서열식별번호: 14) 및 CDR3 (서열식별번호: 15) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 5a는 4C3-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 142) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 16)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 17), CDR2 (서열식별번호: 18) 및 CDR3 (서열식별번호: 19) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 5b는 4C3-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 143) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 20)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 21), CDR2 (서열식별번호: 22) 및 CDR3 (서열식별번호: 23) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 6a는 4C3-2 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 142) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 16)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 17), CDR2 (서열식별번호: 18) 및 CDR3 (서열식별번호: 19) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 6b는 4C3-2 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 144) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 24)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 25), CDR2 (서열식별번호: 26) 및 CDR3 (서열식별번호: 27) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 7a는 4C3-3 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 142) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 16)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 17), CDR2 (서열식별번호: 18) 및 CDR3 (서열식별번호: 19) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 7b는 4C3-3 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 145) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 28)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 29), CDR2 (서열식별번호: 30) 및 CDR3 (서열식별번호: 31) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 8a는 4D4-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 146) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 32)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 33), CDR2 (서열식별번호: 34) 및 CDR3 (서열식별번호: 35) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 8b는 4D4-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 147) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 36)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 37), CDR2 (서열식별번호: 38) 및 CDR3 (서열식별번호: 39) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 9a는 10D2-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 148) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 40)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 41), CDR2 (서열식별번호: 42) 및 CDR3 (서열식별번호: 43) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 9b는 10D2-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 149) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 44)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 45), CDR2 (서열식별번호: 46) 및 CDR3 (서열식별번호: 47) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 10a는 10D2-2 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 148) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 40)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 41), CDR2 (서열식별번호: 42) 및 CDR3 (서열식별번호: 43) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 10b는 10D2-2 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 150) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 48)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 49), CDR2 (서열식별번호: 50) 및 CDR3 (서열식별번호: 51) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 11a는 11A6-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 151) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 52)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 53), CDR2 (서열식별번호: 54) 및 CDR3 (서열식별번호: 55) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 11b는 11A6-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 152) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 56)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 57), CDR2 (서열식별번호: 58) 및 CDR3 (서열식별번호: 59) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 12a는 24H2-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 153) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 60)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 61), CDR2 (서열식별번호: 62) 및 CDR3 (서열식별번호: 63) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 12b는 24H2-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 154) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 64)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 65), CDR2 (서열식별번호: 66) 및 CDR3 (서열식별번호: 67) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 13a는 5F8-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 155) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 68)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 69), CDR2 (서열식별번호: 70) 및 CDR3 (서열식별번호: 71) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 13b는 5F8-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 156) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 72)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 73), CDR2 (서열식별번호: 74) 및 CDR3 (서열식별번호: 75) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 14a는 5F8-2 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 155) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 68)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 69), CDR2 (서열식별번호: 70) 및 CDR3 (서열식별번호: 71) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 14b는 5F8-2 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 157) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 76)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 77), CDR2 (서열식별번호: 78) 및 CDR3 (서열식별번호: 79) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 15a는 5F8-3 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 155) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 68)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 69), CDR2 (서열식별번호: 70) 및 CDR3 (서열식별번호: 71) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 15b는 5F8-3 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 242) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 238)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 239), CDR2 (서열식별번호: 240) 및 CDR3 (서열식별번호: 241) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 16a는 6E11-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 158) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 80)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 81), CDR2 (서열식별번호: 82) 및 CDR3 (서열식별번호: 83) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 16b는 6E11-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 159) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 84)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 85), CDR2 (서열식별번호: 86) 및 CDR3 (서열식별번호: 87) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 17a는 7A11-1 인간 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 160) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 88)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 89), CDR2 (서열식별번호: 90) 및 CDR3 (서열식별번호: 91) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 17b는 7A11-1 인간 모노클로날 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (서열식별번호: 161) 및 아미노산 서열 (서열식별번호: 92)을 제시한다. CDR1 (서열식별번호: 93), CDR2 (서열식별번호: 94) 및 CDR3 (서열식별번호: 95) 영역이 묘사되고, V, D 및 J 생식세포 계열 유래가 표시된다.
도 18은 항-CD73 항체 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f의 중쇄의 아미노산 서열 (서열식별번호: 189), 및 그의 가변 영역, CDR 1, 2 및 3, CH1, 힌지, CH2 및 CH3 도메인을 제시한다.
도 19는 25℃ 하에 고정화된 단백질 A 표면 상에 포획된 CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f에 대한 600, 200, 66.7, 22.2, 7.4, 및 2.5 nM 인간-CD73-his (굵은 선) 또는 시노-CD73-his (가는 선)의 결합에 관한 SPR 센서그램 데이터를 도시한 것이다.
도 20aa 및 20ab는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 11F11, CD73.4 및 CD73.10 항체의 인간 CD73 양성 Calu6 세포 (인간 폐 선암종 세포주)에 대한 결합성을 도시한 것이다.
도 20ba 및 20bb는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 11F11, CD73.4 및 CD73.10 항체의 인간 CD73 음성 DMS114 세포 (소세포 폐 암종 세포주)에 대한 결합성을 도시한 것이다.
도 20ca 및 20cb는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 11F11, CD73.4 및 CD73.10 항체의 시노 CD73 양성 CHO 세포에 대한 결합성을 도시한 것이다.
도 20da 및 20db는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 11F11, CD73.4 및 CD73.10 항체의 시노 CD73 음성 CHO-K1 세포에 대한 결합성을 도시한 것이다.
도 20e는 공여체 D1 및 D2로부터의 T 세포에 대한 표시된 항체의 결합성을 도시한 것이다.
도 20f는 공여체 D1 및 D2로부터의 T 세포에 대한 표시된 항체의 결합성을 도시한 것이다.
도 21aa 및 21ab는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 항-CD73 항체 11F11, CD73.4 및 CD73.10에 의한, 비드 결합된 인간 CD73 효소 활성의 억제를 도시한 것이다. 모든 항체가 인간 CD73 효소 활성을 억제하였다.
도 21ba 및 21bb는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 항-CD73 항체 11F11, CD73.4 및 CD73.10에 의한, 비드 결합된 시노 CD73 효소 활성의 억제를 도시한 것이다. 모든 항체가 시노 CD73 효소 활성을 억제하였다.
도 22aa 및 22ab는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 11F11, CD73.4 및 CD73.10 항체에 의한 인간 CD73 양성 Calu6 세포 내에서의 CD73 효소 억제를 도시한 것이다. 모든 항체가 이들 세포에서 CD73 효소 활성을 억제하였다.
도 22ba 및 22bb는 표시된 중쇄 불변 영역을 수반한 11F11, CD73.4 및 CD73.10 항체에 의한 인간 CD73 음성 DMS-114 세포 내에서의 CD73 효소 억제를 도시한 것이다.
도 22c는 Calu-6 및 HEK/A2R 세포를 이용하여 cAMP 검정에서 결정된 바와 같이, 11F11 및 11F11 F(ab')2 단편에 의한 내인성 CD73 활성의 억제의 EC50 및 Ymax 값을 도시한 것이다. 도 22c는 또한, Calu-6 내재화 검정에서 11F11 및 11F11 F(ab')2 단편의 EC50 및 Ymax 값을 도시한 것이다. 본 도면은 11F11 Fab 단편이 이들 두 검정에서 불활성이라는 것을 나타낸다.
도 22d는 LC/MS/MS에 의해 측정된 바와 같이, 11F11 또는 4C3 항체로 처리된 Calu6 세포로부터의 아데노신 생성의 시간 과정을 도시한 것인데, 이는 11F11 항체에 의한 CD73 효소 억제가 4C3 항체에 의한 것보다 더 신속하게 일어난다는 것을 표시한다.
도 23a는 H2228 세포에서 다음 항체에 의한 CD73의 항체 매개된 내재화의 동역학을 도시한 것이다: 11F11, 4C3, 6E11, 4C3Vk1 경쇄를 수반한 CD73.3-IgG1.1f ("3-Vh-hHC-IgG1.1f/4C3Vk1"), 11F11 Vk2 경쇄를 수반한 CD73.4-IgG2CS ("4-Vh-hHC-IgG2-C219S/11F11-Vk2"), CD73.10-IgG2CS ("CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S"), CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f ("CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f"), 및 CD73.10-IgG1.1f ("CD73.10-Vh-hHC-IgG1.1f") 항체. 11F11 (IgG2 이소형의 것이다), CD73.4-IgG2CS, CD73.10-IgG2CS 및 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f 항체는 IgG1 이소형의 것인 다른 시험된 항체보다 더 신속하고 더 높은 정도로 내재화된다.
도 23b는 HCC15 세포 (비-소세포 폐 암종 세포주)에서 도 23a에 도시된 것과 동일한 항체의 항체 매개된 CD73 내재화의 동역학을 도시한 것인데, 이는 H2228 세포 (비-소세포 폐 암종 세포주)에서 수득된 것과 유사한 결과를 보여준다.
도 23c는 Calu6 세포에서 도 23a 및 23b에 도시된 것과 동일한 항체 뿐만 아니라 CD73.11-IgG2CS ("11-Vh-hVC-IgG2-C219S")의 항체 매개된 CD73 내재화의 동역학을 도시한 것인데, 이는 H2228 및 HCC15 세포에서 수득된 것과 유사한 결과를 보여준다.
도 23d는 NCI-H2030 세포 (비-소세포 폐 암종 세포주)에서 도 23c에 도시된 것과 동일한 항체의 항체 매개된 CD73 내재화의 동역학을 도시한 것인데, 이는 H2228, HCC15, 및 Calu6 세포에서 수득된 것과 유사한 결과를 보여준다.
도 23e는 유동 세포계수법에 의해 측정된 바와 같이, Calu6 세포에서 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화의 동역학을 도시한 것이다.
도 23f는 유동 세포계수법에 의해 측정된 바와 같이, NCI-H292 세포 (점막표피양 폐 암종 세포주)에서 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화의 동역학을 도시한 것이지만, 상기 세포를 상기 항체와 함께 첫 번째 인큐베이션한 후에는 항체를 워시 아웃하지 않았다.
도 23g는 표시된 항체로 처리된 Calu6 세포에서 내재화된 CD73의 비율 (%)을 도시한 것인데, 이는 시간 경과에 따른 Calu6 세포에서의 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화를 보여준다.
도 23h는 시간 경과에 따라 표시된 항체로 처리된 NCI-H292 세포에서 내재화된 CD73의 비율 (%)을 도시한 것인데, 이는 시간 경과에 따른 NCI-H292 세포에서의 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화를 보여준다.
도 23i는 시간 경과에 따라 표시된 항체로 처리된 SNU-C1 세포 (결장 암종 세포주)에서 내재화된 CD73의 비율 (%)을 도시한 것인데, 이는 시간 경과에 따른 SNU-C1 세포에서의 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화를 보여준다.
도 23j는 시간 경과에 따라 표시된 항체로 처리된 NCI-H1437 세포 (비-소세포 폐 암종 세포주)에서 내재화된 CD73의 비율 (%)을 도시한 것인데, 이는 시간 경과에 따른 NCI-H1437 세포에서의 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화를 보여준다.
도 23k는 시간 경과에 따라 표시된 항체로 처리된 Calu6 세포에서 내재화된 CD73의 비율 (%)을 도시한 것인데, 이는 시간 경과에 따른 Calu6 세포에서의 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화를 보여준다.
도 23l은 시간 경과에 따라 표시된 항체로 처리된 NCI-H292 세포에서 내재화된 CD73의 비율 (%)을 도시한 것인데, 이는 시간 경과에 따른 NCI-H292 세포에서의 표시된 항체의 항체 매개된 CD73 내재화를 보여준다.
도 23m은 0, 5, 15 또는 30분 동안 5 μg/ml의 표시된 항체로 처리된 Calu6 세포의 표면 상의 CD73의 수준을 도시한 것이다.
도 24a는 동물을 대조군 항체로 처리한 지 4일 후에 수거하고 CD73 효소 활성을 알아보기 위하여 염색시킨, 상기 동물로부터의 이종이식편 종양 절편을 도시한 것이다. 이러한 절편은 짙은 갈색을 나타내는데, 이는 CD73 효소 활성을 표시한다.
도 24b는 동물을 11F11 항체로 처리한 지 1일 후에 수거하고 CD73 효소 활성을 알아보기 위하여 염색시킨, 상기 동물로부터의 이종이식편 종양 절편을 도시한 것이다. 이러한 절편은 도 24a에 도시된 대조군 종양 절편과 비교해서 상당히 덜한 갈색을 나타내는데, 이는 처리를 시작한 후 1일 이내에 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f에 의한 CD73 효소 활성의 생체내 억제를 표시한다.
도 24c는 동물을 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f로 처리한 지 2일 후에 수거하고 CD73 효소 활성을 알아보기 위하여 염색시킨, 상기 동물로부터의 이종이식편 종양 절편을 도시한 것이다. 이러한 절편은 도 24a에 도시된 대조군 종양 절편과 비교해서 그리고 동물을 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f로 처리한 지 1일 후의 종양 절편과 비교해서 상당히 덜한 갈색을 나타내는데, 이는 처리를 시작한 후 적어도 2일에 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f에 의한 CD73 효소 활성의 생체내 억제를 표시한다.
도 24d는 동물을 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f로 처리한 지 3일 후에 수거하고 CD73 효소 활성을 알아보기 위하여 염색시킨, 상기 동물로부터의 이종이식편 종양 절편을 도시한 것이다. 이러한 절편은 도 24a에 도시된 대조군 종양 절편과 비교해서 상당히 덜한 갈색을 나타내는데, 이는 처리를 시작한 후 적어도 3일에 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f에 의한 CD73 효소 활성의 생체내 억제를 표시한다.
도 24e는 동물을 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f로 처리한 지 7일 후에 수거하고 CD73 효소 활성을 알아보기 위하여 염색시킨, 상기 동물로부터의 이종이식편 종양 절편을 도시한 것이다. 이러한 절편은 도 24a에 도시된 대조군 종양 절편과 비교해서 상당히 덜한 갈색을 나타내는데, 이는 처리를 시작한 후 적어도 7일에 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1f에 의한 CD73 효소 활성의 생체내 억제를 표시한다.
도 24f는 대조군 (비-CD73) 항체로 처리되거나 또는 1 mg/kg, 3 mg/kg 또는 10 mg/kg CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f로 처리된 이종이식편 마우스에서 SNUC1 종양 내의 인간 CD73의 효소 활성의 시간 과정을 도시한 것인데, 이는 항-CD73 항체가 이종이식편 마우스의 종양 내의 CD73 효소 활성을 효율적으로 저하시킨다는 것을 보여준다.
도 25a는 동계(syngeneic) 4T1 종양 및 대조군 mIgG를 보유하고 있는 Balb/c 마우스로부터의 대조군 종양 절편 내에서의 마우스 CD73 효소 활성의 수준을 도시한 것이다.
도 25b는 항-마우스 CD73 항체 TY23으로 피하 처리된 동계 4T1 종양을 보유하고 있는 Balb/c 마우스의 종양 절편 (4T1 제1일 내지 제7일)을 도시한 것인데, 이는 TY23이 생체 내에서 CD73 효소 활성을 억제한다는 것을 보여준다.
도 26A는 유동 세포계수법에 의해 결정된 바와 같이, 항-CD73 항체 4C3, 7A11, 6E11, 5F8, 4C3, 11F11 및 11A6에 의한 4C3의 교차 차단성 수준을 도시한 것이다.
도 26B는 유동 세포계수법에 의해 결정된 바와 같이, 항-CD73 항체 4C3, 7A11, 6E11, 5F8, 4C3, 11F11 및 11A6에 의한 11F11의 교차 차단성 수준을 도시한 것이다.
도 27a는 인간 CD73의 아미노산 서열 (서열식별번호: 283); 및 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f와의 상호 작용의 영역 (더 어두운 회색으로 나타내었다)을 제시한다. 상호 작용이 더 강할수록, 회색은 더 어두워진다.
도 27b는 이량체성 인간 CD73 단백질과 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f 간의 상호 작용의 모델을 도시한 것이다.
도 28a는 인간 CD73과 11F11Fab' 단편 간의 상호 작용의 결정학적 모델을 도시한 것이다.
도 28b는 11F11과의 2개의 인간 CD73 복합체의 복합 구조의 모델을 도시한 것이다.
도 28c는 인간 CD73과 11F11 항체 간의 상호 작용의 모델을 도시한 것이다.
도 28d는 11F11과 인간 CD73 간의 상호 작용의 모델을 도시한 것이다.
도 29a는 인간 CD73과 항체 복합체에 대한 SEC-MALS 데이터를 제시한다. "CD73.4-혼성체"는 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f를 지칭한다.
도 29b는 인간 CD73과 항체 복합체에 관한 DLS 데이터를 제시한다.
도 30a는 상이한 불변 영역을 함유하는 CD73.4 항체와 hCD73-his의 복합체에 관한 SEC 크로마토그램 데이터를 도시한 것인데, 이는 항체/항원 복합체의 크기에 대한 IgG2 힌지 및 CH1 도메인의 효과를 보여준다.
도 30b는 상이한 불변 영역을 함유하는 CD73.4 항체와 hCD73-his의 복합체에 관한 DLS 데이터를 도시한 것인데, 이는 항체/항원 복합체의 크기에 대한 IgG2 힌지 및 CH1 도메인의 효과를 보여준다.
도 30c는 상이한 불변 영역을 함유하는 CD73.4 항체와 hCD73-his의 복합체에 관한 MALS 데이터를 도시한 것인데, 이는 항체/항원 복합체의 크기에 대한 IgG2 힌지 및 CH1 도메인의 효과를 보여준다.
도 30d는 도 30c에서 MALS-결정된 질량으로부터 유래된 hCD73-his/mAb 복합체의 개략적인 모델을 도시한 것이다.
도 30e는 보다 고 차수의 복합체가 CH1 영역에 의해 영향을 받는다는 것을 도시한 것이다. 히스토그램은 각 구축물에 대하여 그래프로 나타낸, 피크 1 및 2 아래의 % 면적을 나타낸다.
도 31은 각각의 제시된 항체의 부가 후 1, 4 또는 21시간에 항체 매개된 CD73 내재화의 비율 (%)을 도시한 것이다. 각 항체에 대한 막대는 21시간 (왼쪽), 4시간 (중앙) 및 1시간 (오른쪽)의 순서로 도시된다.
도 32a는 상이한 불변 영역 서열을 함유하는 16개의 상이한 CD73.4 항체와 hCD73-his의 1:1 몰 복합체에 대한 SEC 크로마토그램 데이터의 오버레이(overlay)를 도시한 것이다.
도 32b는 도 32a의 크로마토그램의 11분 내지 19.5분으로부터의 크로마토그램 데이터의 확대도인데, 4개의 별개의 용출 종이 표시되었다.
도 32c는 16개의 상이한 항체/CD73-his 복합체에 대하여 플롯된, 도 32b의 피크 2에 대한 UV 크로마토그램 시그널 면적의 비율 (%)을 도시한 것이다. 데이터는 피크 면적이 증가하는 순서로 왼쪽에서 오른쪽으로 정렬된다.
도 33은 항-his Fab 포획된 FcγR-his 단백질에 대한 항체 결합성을 도시한 것이다. 결합 반응은 1:1 mAb:FcγR 결합 화학량론을 고려하여 이론적 Rmax의 비율 (%)로서 플롯된다. 각 항체에 대한 막대는 슬라이드 하단의 색상 범례에 제공된 순서대로 도시된다.
도 34는 항-his Fab 포획된 FcgR-his 단백질에 대한 항체 결합성을 도시한 것이다. 결합 반응은 1:1 mAb:FcγR 결합 화학량론을 고려하여 이론적 Rmax의 비율 (%)로서 플롯된다. 각 항체에 대한 막대는 슬라이드 하단의 색상 범례에 제공된 순서대로 도시된다.
도 35는 각종 항-CD73 항체의 VH 및 VL 서열의 정렬을 도시한 것이다. VH 및 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 볼드체이다.
본원에는 CD73과 특이적으로 결합함으로써, CD73 활성을 저하시키는 단리된 항체, 특히 모노클로날 항체, 예를 들어, 인간 모노클로날 항체 ("길항제 항-CD73 항체")가 기재되어 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 특별한 중쇄 및 경쇄 생식세포 계열 서열로부터 유래되고/되거나 특별한 구조적 특징, 예컨대 특별한 아미노산 서열을 포함하는 CDR 영역을 포함한다. 본원에는 단리된 항체, 이러한 항체의 제조 방법, 상기 항체를 포함하는 면역접합체 및 이중특이적 분자, 및 상기 항체를 함유하도록 제제화된 제약 조성물이 제공된다. 또한 본원에는, 종양 성장을 저하시키기 위한 항체를 단독으로 사용하거나 또는 이를 다른 치료제 (예를 들어, 항체) 및/또는 암 요법과 조합하여 사용하는 방법이 제공된다. 따라서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는, 예를 들어 종양 성장의 억제, 전이의 억제, 및 종양에 대항한 면역 반응의 증강을 포함한, 광범위한 치료 적용에서의 치료에 사용될 수 있다.
정의
본 발명의 설명을 보다 용이하게 이해할 수 있도록 하기 위하여, 특정의 용어를 먼저 정의한다. 부가의 정의는 상세한 설명 전반에 걸쳐 제시된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "분화 클러스터 73" 또는 "CD73"은 세포외 뉴클레오시드 5' 모노포스페이트를 뉴클레오시드로 전환시킬 수 있는, 즉 아데노신 모노포스페이트 (AMP)를 아데노신으로 전환시킬 수 있는 효소 (뉴클레오티다제)를 지칭한다. CD73은 통상적으로, 글리코실포스파티딜이노시톨 (GPI) 연쇄를 통하여 세포막에 앵커링된 이량체로서 발견되고, 엑토-효소 활성을 가지며 시그널 변환에 있어서 일정 역할을 한다. CD73의 주요 기능은 세포외 뉴클레오티드 (예를 들어, 5'-AMP)를 고도로 면역억제성 분자인 아데노신으로 전환시키는 것이다. 따라서, 엑토-5'-뉴클레오티다제는 퓨린 및 피리미딘 리보- 및 데옥시리보뉴클레오시드 모노포스페이트가 상응하는 뉴클레오시드로 탈인산화되는 것을 촉매한다. CD73이 넓은 기질 특이성을 갖고 있긴 하지만, 이는 퓨린 리보뉴클레오시드를 선호한다.
CD73은 또한, 엑토-5'뉴클레아제 (엑토-5'NT, EC 3.1.3.5)로서 지칭된다. 용어 "CD73"은 세포에 의해 자연적으로 발현되는 CD73의 임의의 변이체 또는 이소형을 포함한다. 따라서, 본원에 기재된 항체는 인간 이외의 종으로부터의 CD73 (예를 들어, 시노몰구스 CD73)과 교차 반응할 수 있다. 또 다른 한편으론, 상기 항체는 인간 CD73에 대해 특이적일 수 있고 다른 종과 어떠한 교차 반응성도 나타내지 않을 수 있다. CD73 또는 그의 임의의 변이체 및 이소형은 이를 자연적으로 발현하는 세포 또는 조직으로부터 단리될 수 있거나 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 기술 및/또는 본원에 기재된 기술을 이용하여 재조합적으로 생성될 수 있다.
인간 CD73의 2개의 이소형이 확인되었는데, 둘 다 동일한 N-말단 및 C-말단 부분을 공유하고 있다. 이소형 1 (수탁 번호 NP_002517.1; 서열식별번호: 1)은 574개의 아미노산과 9개의 엑손으로 이루어진 가장 긴 단백질을 나타낸다. 이소형 2 (수탁 번호 NP_001191742.1; 서열식별번호: 2)는 524개의 아미노산으로 이루어지고 아미노산 404 내지 453이 결여된, 더 짧은 단백질을 코딩한다. 이소형 2에는 대체 인 프레임(in-frame) 엑손이 결여되므로, 8개의 엑손만을 수반하지만 동일한 N- 및 C-말단 서열을 갖는 전사체가 생성된다.
시노몰구스 (시노) CD73 단백질 서열은 서열식별번호: 3으로서 제공된다. 용어 시노몰구스 및 시노는 둘 다 마카카 파스시쿨라리스 (Macaca fascicularis) 종을 지칭하고, 본 명세서 전반에 걸쳐 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 전체 항체 및 그의 임의의 항원 결합성 단편 (즉, "항원 결합성 부분") 또는 단일 쇄를 포함할 수 있다. "항체"는 한 실시양태에서, 디술피드 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중쇄 (H)와 2개의 경쇄 (L), 또는 그의 항원 결합성 부분을 포함하는 당단백질을 지칭한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로서 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 특정의 자연 발생적 IgG, IgD 및 IgA 항체에서는, 중쇄 불변 영역이 3개의 도메인, 즉 CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 특정의 자연 발생적 항체에서는, 각 경쇄가 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로서 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, 즉 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 지칭된, 보다 보존된 영역이 산재된 상보성 결정 영역 (CDR)으로 지칭된 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각 VH 및 VL은 아미노 말단에서부터 카르복시 말단까지 다음 순서로 배열된, 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호 작용하는 결합성 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역 체계의 각종 세포 (예를 들어, 이펙터 세포)를 포함한 숙주 조직 또는 인자, 및 전통적인 보체 시스템의 제1 성분 (Clq)에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
항체의 중쇄는 말단 리신 (K), 또는 말단 글리신과 리신 (GK)을 함유할 수 있거나 또는 함유하지 않을 수 있다. 따라서, 본원에 제공된 중쇄 서열 및 중쇄 불변 영역 서열 중 임의의 것은 서열의 마지막 아미노산이 무엇을 제공하는지에 관계없이 GK 또는 G 중 하나에서 종결되거나, 또는 K 또는 GK가 결여될 수 있다. 이는 말단 리신 및 종종 글리신과 리신이 항체의 발현 동안 절단되기 때문이다.
항체는 전형적으로, 10-7 내지 10-11 M 이하의 해리 상수 (KD)로써 반영된 고 친화도로 그의 동족 항원과 특이적으로 결합한다. 약 10-6 M 초과의 임의의 KD가 일반적으로, 비특이적 결합을 표시하는 것으로 간주된다. 본원에 사용된 바와 같은, 특정 항원과 "특이적으로 결합하는" 항체는 이러한 항원 및 실질적으로 동일한 항원과 고 친화도 (이는 10-7 M 이하, 바람직하게 10-8 M 이하, 보다 더 바람직하게 5 x 10-9 M 이하, 및 가장 바람직하게 10-8 M 내지 10-10 M 이하의 KD를 갖는 것을 의미한다)로 결합하지만, 무관한 항원과는 고 친화도로 결합하지 않는 항체를 지칭한다. 특정 항원이 소정의 항원과 높은 정도의 서열 동일성을 나타내는 경우, 예를 들어 소정의 항원의 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 또는 그 초과의 서열 동일성을 나타내는 경우에, 이러한 항원은 소정의 항원과 "실질적으로 동일하다". 한 예로서, 인간 CD73과 특이적으로 결합하는 항체는 또한, 특정의 비-인간 영장류 종 (예를 들어, 시노몰구스 원숭이)으로부터의 CD73과 교차 반응할 수 있지만, 다른 종으로부터의 CD73, 또는 CD73 이외의 항원과는 교차 반응하지 않을 수 있다.
면역글로불린은 IgA, 분비성 IgA, IgG 및 IgM을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 통상적으로 공지된 이소형 중 임의의 것으로부터 유래될 수 있다. IgG 이소형은 특정의 종에서 하위부류로 나눠진다: 인간에서는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 나눠지고, 마우스에서는 IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3으로 나눠진다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 인간 IgG1 또는 IgG2 하위유형의 것이다. 면역글로불린, 예를 들어, 인간 IgG1은 많아 봐야 몇 개의 아미노산에 있어서 서로 상이한 여러 개의 동종이형으로 존재한다. "항체"는 한 예로서, 자연 발생적 항체와 비-자연 발생적 항체 둘 다를 포함할 수 있다: 모노클로날 및 폴리클로날 항체; 키메라 및 인간화 항체; 인간 및 비-인간 항체; 완전한 합성 항체; 및 단일 쇄 항체.
본원에 사용된 바와 같은, 항체의 "항원 결합성 부분"이란 용어는 항원 (예를 들어, 인간 CD73)과 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유하고 있는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합성 기능은 완전한 길이의 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 항체, 예를 들어, 본원에 기재된 항-CD73 항체의 "항원 결합성 부분"이란 용어 내에 포괄된 결합성 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디술피드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (문헌 [Ward et al., (1989) Nature 341:544-546]); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 (vii) 합성 링커에 의해 임의로 연결될 수 있는 2개 이상의 단리된 CDR의 조합물을 포함한다. 더욱이, Fv 단편의 두 도메인 VL 및 VH가 별도의 유전자에 의해 코딩되긴 하지만, 이들은 재조합 방법을 이용하여, VL 영역과 VH 영역이 쌍을 이루어 단일 쇄 Fv (scFv)로서 공지된 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 쇄로서 만들 수 있게 해주는 합성 링커에 의해 연결될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bird et al. (1988) Science 242:423-426]; 및 [Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조). 이러한 단일 쇄 항체는 또한, 항체의 "항원 결합성 부분"이란 용어 내에 포괄되는 것으로 의도된다. 이들 및 다른 잠재적 구축물이 문헌 [Chan & Carter (2010) Nat. Rev. Immunol. 10:301]에 기재되어 있다. 이들 항체 단편은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술을 이용하여 수득되고, 이러한 단편을 대상으로 하여 무손상 항체에 대해서와 동일한 방식으로 유용성에 관하여 스크리닝한다. 항원 결합성 부분은 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 수 있거나, 또는 무손상 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다.
"이중특이적" 또는 "이관능성 항체"는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍을 가지므로, 상이한 항원에 대한 특이성을 지닌 2개의 항원 결합 부위를 생성시키는 인공적 혼성체 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함한 각종 방법에 의해 생성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)]; [Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)] 참조).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 특별한 에피토프에 대한 단일 결합 특이성과 친화성을 디스플레이하는 항체, 또는 모든 항체가 특별한 에피토프에 대한 단일 결합 특이성과 친화성을 디스플레이하는 항체의 조성물을 지칭한다. 전형적으로 이러한 모노클로날 항체는 항체를 코딩하는 단일 세포 또는 핵산으로부터 유래될 것이고, 임의의 서열 변경을 의도적으로 도입하지 않고서도 증식될 것이다. 따라서, 용어 "인간 모노클로날 항체"는 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 임의로 불변 영역을 갖는 모노클로날 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 인간 모노클로날 항체는, 예를 들어 트랜스제닉 또는 트랜스크로모솜(transchromosomal) 비-인간 동물 (예를 들어, 인간 중쇄 트랜스진 및 경쇄 트랜스진을 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 마우스)로부터 수득된 B 세포를 불멸화 세포와 융합시킴으로써 수득된 하이브리도마에 의해 생성된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창출되거나 또는 단리되는 모든 인간 항체, 예컨대 (a) 인간 면역글로불린 유전자에 대하여 트랜스제닉 또는 트랜스크로모솜인 동물 (예를 들어, 마우스), 또는 그로부터 제조된 하이브리도마로부터 단리된 항체, (b) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포, 예를 들어 형질감염세포(transfectoma)로부터 단리된 항체, (c) 재조합의 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (d) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창출되거나 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 특별한 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열을 활용하고 생식세포 계열 유전자에 의해 코딩되지만, 예를 들어 항체 성숙 동안 일어나는 후속 재배열 및 돌연변이를 포함하는 가변 및 불변 영역을 포함한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 (예를 들어, 문헌 [Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9):1117-1125] 참조), 가변 영역은 외래 항원에 대해 특이적인 항체를 형성하기 위해 재배열되는 각종 유전자에 의해 코딩되는 항원 결합성 도메인을 함유한다. 재배열에 더하여, 가변 영역은 외래 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위하여 다수의 단일 아미노산 변화 (체세포 돌연변이 또는 초돌연변이로서 지칭됨)에 의해 추가로 변형될 수 있다. 불변 영역은 항원에 추가로 반응하여 변화될 것이다 (즉, 이소형 전환). 따라서, 항원에 반응하여 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩티드를 코딩하는, 상기 재배열되고 체세포적으로 돌연변이된 핵산 서열은 원래의 생식세포 계열 서열과 동일하지 않을 수 있지만, 대신 실질적으로 동일하거나 또는 유사할 것이다 (즉, 적어도 80% 동일성을 갖는다).
"인간" 항체 (HuMAb)는 프레임워크 영역과 CDR 영역 둘 다가 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 더욱이, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 이러한 불변 영역은 또한, 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본원에 기재된 항체는 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관내에서 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이유발에 의해 도입된 돌연변이 또는 생체 내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간 항체"는 또 다른 포유류 종, 예컨대 마우스의 생식세포 계열로부터 유래된 CDR 서열을 인간 프레임워크 서열 상으로 이식시킨 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 용어 "인간" 항체와 "완전한 인간" 항체는 동의어로 사용된다.
"인간화" 항체는 비-인간 항체의 CDR 도메인 외부의 아미노산 중 일부, 대부분 또는 모두를 인간 면역글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 대체시킨 항체를 지칭한다. 인간화 형태의 항체의 한 실시양태에서, CDR 도메인 외부의 아미노산 중 일부, 대부분 또는 모두는 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산으로 대체시킨 반면, 하나 이상의 CDR 영역 내의 일부, 대부분 또는 모든 아미노산은 변하지 않는다. 아미노산의 작은 부가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형이 허용 가능한데, 단 이들은 특별한 항원과 결합할 수 있는 항체의 능력을 없애지 않아야 한다. "인간화" 항체는 원래의 항체와 유사한 항원 특이성을 보유하고 있다.
"키메라 항체"는 가변 영역이 하나의 종으로부터 유래되고 불변 영역이 또 다른 종으로부터 유래되는 항체, 예컨대 가변 영역이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역이 인간 항체로부터 유래되는 항체를 지칭한다.
"변형된 중쇄 불변 영역"은 불변 도메인 CH1, 힌지, CH2, 및 CH3을 포함하는 중쇄 불변 영역을 지칭하는데, 여기서 불변 도메인 중 하나 이상은 상이한 이소형 (예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4)으로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 변형된 불변 영역은 인간 IgG2 CH1 도메인; 및 인간 IgG1 CH2 도메인 및 인간 IgG1 CH3 도메인과 융합된 인간 IgG2 힌지를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이러한 변형된 불변 영역은 또한, 야생형 아미노산 서열과 비교해서 상기 도메인 중 하나 이상 내에 아미노산 변형을 포함한다.
불변 영역의 실체를 표시하지 않으면서 항체를 "CD73.3" 또는 "CD73.4"로서 본원에 지칭하는 경우에는, 달리 표시되지 않는 한, 본원에 기재된 임의의 불변 영역을 수반한 CD73.3 또는 CD73.4의 가변 영역을 각각 갖는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코딩되는 항체 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE 항체)를 지칭한다.
"동종이형"은 특이적 이소형 군 내의 자연 발생적 변이체를 지칭하는데, 이러한 변이체는 몇 개의 아미노산에 있어서 상이하다 (예를 들어, 문헌 [Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1] 참조). 본원에 기재된 항체는 임의의 동종이형의 것일 수 있다.
본원에 달리 명시되지 않는 한, 모든 아미노산 번호는 카바트(Kabat) 시스템의 EU 지수에 따른다 (Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242).
용어 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 대해 특이적인 항체"는 용어 "항원과 특이적으로 결합하는 항체"와 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하고자 한다 (예를 들어, CD73과 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 CD73 이외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, CD73의 에피토프와 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 상이한 종으로부터의 다른 CD73 단백질과 교차 반응성을 가질 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "CD73을 억제하는" 항체는 CD73의 생물학적 및/또는 효소적 기능을 억제하는 항체를 지칭한다. 이들 기능은, 예를 들어 CD73 효소 활성, 예를 들어, 아데노신의 CD73-조절된 생성 또는 cAMP 생성의 저하를 억제할 수 있는 항체의 능력을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, "내재화되는" 항체는 세포 표면 항원과의 결합시 세포 막을 가로 지르는 항체를 지칭한다. 내재화는 항체 매개된 수용체 (예를 들어, CD73) 내재화를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 약 10분 이하의 T1/2의 비율로 CD73을 발현하는 세포 내로 "내재화"된다.
"이펙터 기능"은 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드 간의 상호 작용, 또는 그로부터 비롯되는 생화학적 현상을 지칭한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 Clq 결합성, 보체 의존성 세포독성 (CDC), Fc 수용체 결합성, FcγR-매개된 이펙터 기능, 예컨대 ADCC 및 항체 의존성 세포-매개된 포식작용 (ADCP), 및 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로, Fc 영역을 결합성 도메인 (예를 들어, 항체 가변 도메인)과 조합시켜야 한다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 면역글로불린의 Fc 영역과 결합하는 수용체이다. IgG 항체와 결합하는 FcR은 FcγR 계열의 수용체를 포함하는데, 이는 대립유전자 변이체 및 대체 스플라이싱된 형태의 이들 수용체를 포함한다. FcγR 계열은 3개의 활성화 수용체 (마우스에서의 FcγRI, FcγRIII, 및 FcγRIV; 및 인간에서의 FcγRIA, FcγRIIA, 및 FcγRIIIA) 및 1개의 억제성 수용체 (FcγRIIB)로 이루어진다. 인간 FcγR의 각종 특성이 표 1에 요약되어 있다. 대다수의 선천 이펙터 세포 유형은 하나 이상의 활성화 FcγR 및 억제성 FcγRIIB를 공동 발현하는 반면, 자연 킬러 (NK) 세포는 1개의 활성화 Fc 수용체 (마우스에서의 FcγRIII 및 인간에서의 FcγRIIIA)를 선택적으로 발현하지만, 마우스 및 인간에서의 억제성 FcγRIIB는 그렇지 못하다. 인간 IgG1은 대부분의 인간 Fc 수용체와 결합하고, 그와 결합하는 활성화 Fc 수용체의 유형을 기준으로 하여 뮤린 IgG2a와 등가인 것으로 간주된다.
<표 1>
인간 FcγR의 특성
"힌지", "힌지 도메인" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역"은 CH1 도메인을 CH2 도메인과 연결시켜 주고 힌지의 상부, 중간 및 하부 부분을 포함하는 중쇄 불변 영역의 도메인을 지칭한다 (Roux et al. J. Immunol. 1998 161:4083). 힌지는 항체의 결합성 영역과 이펙터 영역 간에 다양한 수준의 가요성을 제공하고, 또한 2개의 중쇄 불변 영역 간의 분자간 디술피드 결합을 위한 부위를 제공한다. 본원에 사용된 바와 같은, 힌지는 모든 IgG 이소형에 대하여 Glu216에서 시작하고 Gly237에서 종결된다 (Roux et al., 1998 J Immunol 161:4083). 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 힌지의 서열이 표 2 및 31에 제시된다.
<표 2>
힌지 영역 아미노산
* CH1 도메인의 C-말단 아미노산 서열.
용어 "힌지"는 야생형 힌지 (예컨대, 표 2 및 31에 제시된 것)뿐만 아니라 그의 변이체 (예를 들어, 비-자연 발생적 힌지 또는 변형된 힌지)를 포함한다. 예를 들어, 용어 "IgG2 힌지"는 표 2에 제시된 바와 같은 야생형 IgG2 힌지; 및 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 3, 1 내지 5, 3 내지 5 및/또는 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 돌연변이, 예를 들어, 치환, 결실 또는 부가를 갖는 변이체를 포함한다. 예시적인 IgG2 힌지 변이체는 1, 2, 3개 또는 모든 4개의 시스테인 (C219, C220, C226 및 C229)이 또 다른 아미노산으로 변화되는 IgG2 힌지를 포함한다. 구체적 실시양태에서, IgG2는 C219S 치환을 포함한다. IgG2 힌지는 또한, C220에서의 치환 또는 C219와 C220 둘 다에서의 치환을 포함할 수 있다. IgG2 힌지는 특정 치환을 단독으로 포함할 수 있거나 또는 중쇄 또는 경쇄의 다른 영역에서의 하나 이상의 치환과 함께 포함하여, 항체가 형태 A 또는 B를 취할 수 있게 될 것이다 (예를 들어, 문헌 [Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755] 참조). 특정 실시양태에서, 힌지는 적어도 2개의 이소형으로부터의 서열을 포함하는 혼성체 힌지이다. 예를 들어, 힌지는 하나의 이소형으로부터의 상부, 중간 또는 하부 힌지를 포함할 수 있고, 나머지 힌지는 하나 이상의 다른 이소형으로부터의 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 힌지는 IgG2/IgG1 힌지일 수 있고, 예를 들어, IgG2의 상부 및 중간 힌지 및 IgG1의 하부 힌지를 포함할 수 있다. 힌지는 이펙터 기능을 가질 수 있거나 또는 이펙터 기능이 고갈될 수 있다. 예를 들어, 야생형 IgG1의 하부 힌지가 이펙터 기능을 제공한다.
용어 "CH1 도메인"은 가변 도메인을 중쇄 불변 도메인 내의 힌지와 연결시켜 주는 중쇄 불변 영역을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, CH1 도메인은 A118에서 시작하고 V215에서 종결된다. 용어 "CH1 도메인"은 야생형 CH1 도메인 (예컨대, IgG1의 경우에는 서열식별번호: 98을 갖고 IgG2의 경우에는 서열식별번호: 124를 갖는다) 뿐만 아니라 그의 변이체 (예를 들어, 비-자연 발생적 CH1 도메인 또는 변형된 CH1 도메인)를 포함한다. 예를 들어, 용어 "CH1 도메인"은 야생형 CH1 도메인; 및 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 3, 1 내지 5, 3 내지 5 및/또는 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 돌연변이, 예를 들어, 치환, 결실 또는 부가를 갖는 그의 변이체를 포함한다. 예시적인 CH1 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예컨대 ADCC, CDC 또는 반감기를 변형시키는 돌연변이를 수반한 CH1 도메인을 포함한다. 항체의 생물학적 활성에 영향을 미치는 CH1 도메인에 대한 변형이 본원에 제공된다. CH1 도메인은 치환 C131S를 포함할 수 있는데, 이러한 치환은 IgG2 항체, 또는 IgG2 항체의 적어도 특정 부분, 예컨대 힌지 및/또는 힌지와 CH1을 포함하는 항체가, 항체의 A 형태와 반대로 B 형태를 채택할 수 있게 해준다.
용어 "CH2 도메인"은 힌지를 중쇄 불변 도메인 내의 CH3 도메인과 연결시켜 주는 중쇄 불변 영역을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, CH2 도메인은 P238에서 시작하고 K340에서 종결된다. 용어 "CH2 도메인"은 야생형 CH2 도메인 (예컨대, IgG1의 경우에는 서열식별번호: 137을 갖는다; 표 35) 뿐만 아니라 그의 변이체 (예를 들어, 비-자연 발생적 CH2 도메인 또는 변형된 CH2 도메인)를 포함한다. 예를 들어, 용어 "CH2 도메인"은 야생형 CH2 도메인; 및 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 3, 1 내지 5, 3 내지 5 및/또는 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 돌연변이, 예를 들어, 치환, 결실 또는 부가를 갖는 그의 변이체를 포함한다. 예시적인 CH2 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예컨대 ADCC, CDC 또는 반감기를 변형시키는 돌연변이를 수반한 CH2 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, CH2 도메인은 이펙터 기능을 저하시키는 치환 A330S/P331S를 포함한다. 항체의 생물학적 활성에 영향을 미치는 CH2 도메인에 대한 다른 변형이 본원에 제공된다.
용어 "CH3 도메인"은 중쇄 불변 도메인 내의 CH2 도메인에 대해 C-말단인 중쇄 불변 영역을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, CH3 도메인은 G341에서 시작하고 K447에서 종결된다. 용어 "CH3 도메인"은 야생형 CH3 도메인 (예컨대, IgG1의 경우에는 서열식별번호: 138을 갖는다; 표 35) 뿐만 아니라 그의 변이체 (예를 들어, 비-자연 발생적 CH3 도메인 또는 변형된 CH3 도메인)를 포함한다. 예를 들어, 용어 "CH3 도메인"은 야생형 CH3 도메인; 및 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 3, 1 내지 5, 3 내지 5 및/또는 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 돌연변이, 예를 들어, 치환, 결실 또는 부가를 갖는 그의 변이체를 포함한다. 예시적인 CH3 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예컨대 ADCC, CDC 또는 반감기를 변형시키는 돌연변이를 수반한 CH3 도메인을 포함한다. 항체의 생물학적 활성에 영향을 미치는 CH3 도메인에 대한 변형이 본원에 제공된다.
"CL 도메인"은 경쇄의 불변 도메인을 지칭한다. 용어 "CL 도메인"은 야생형 CL 도메인 및 그의 변이체, 예를 들어, C214S를 포함하는 변이체를 포함한다.
"천연 서열 Fc 영역" 또는 "천연 서열 Fc"는 자연에서 발견된 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역 뿐만 아니라 그의 자연 발생적 변이체를 포함한다. 천연 서열 Fc는 Fc의 각종 동종이형을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1] 참조).
용어 "에피토프" 또는 "항원 결정기"는 면역글로불린 또는 항체와 특이적으로 결합하는 항원 (예를 들어, CD73) 상의 부위를 지칭한다. 단백질 항원 내의 에피토프는 연속되는 아미노산으로부터 형성될 수 있거나 (통상적으로 선형 에피토프) 또는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병렬된 비-연속되는 아미노산으로부터 형성될 수 있다 (통상적으로 입체 형태적 에피토프). 연속되는 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 항상은 아니지만 전형적으로, 변성 용매에 대한 노출시 보유되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로, 변성 용매로의 처리시 상실된다. 에피토프는 전형적으로, 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산을 독특한 공간 입체 형태로 포함한다. 소정의 항체에 의해 결합되는 에피토프가 무엇인지를 결정하는 방법 (즉, 에피토프 맵핑)은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 면역블롯팅 및 면역침전 검정을 포함하는데, 여기서 중복되거나 또는 연속되는 펩티드 (예를 들어, CD73으로부터 유래됨)를 대상으로 하여 소정의 항체 (예를 들어, 항-CD73 항체)와의 반응성에 관하여 시험한다. 에피토프의 공간 입체 형태를 결정하는 방법은 관련 기술분야의 기술 및 본원에 기재된 기술, 예를 들어 x선 결정학, 2차원 핵 자기 공명 및 HDX-MS를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)] 참조).
용어 "에피토프 맵핑"은 항체-항원 인식에 관여한 항원 상의 분자 결정기의 확인 과정을 지칭한다.
2개 이상의 항체와 관련하여 "동일한 에피토프와 결합한다"는 것은 이들 항체가 소정의 방법에 의해 결정된 바와 같이, 아미노산 잔기의 동일한 절편과 결합한다는 것을 의미한다. 항체가 본원에 기재된 항체와 "CD73 상의 동일한 에피토프"와 결합하는 지의 여부를 결정하기 위한 기술은, 예를 들어, 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 x선 분석, 및 수소/중수소 교환 질량 분광분석법 (HDX-MS)을 포함한다. 항원 서열 내의 아미노산 잔기의 변형에 기인한 결합의 상실이 종종 에피토프 성분의 지표로 간주되는, 항원 단편 (예를 들어, 단백 분해성 단편) 또는 항원의 돌연변이된 변이물에 대한 항체의 결합을 모니터링하는 다른 방법이 사용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [alanine scanning mutagenesis - Cunningham & Wells (1985) Science 244:1081]). 또한, 에피토프 맵핑에 대한 전산 조합 방법을 사용할 수도 있다. 이들 방법은 조합 파지 디스플레이 펩티드 라이브러리로부터의 특이적 짧은 펩티드를 친화성 단리시킬 수 있는 관심 항체의 능력에 좌우된다.
"표적과의 결합을 놓고 또 다른 항체와 경쟁하는" 항체는 이러한 표적에 대한 다른 항체의 결합을 (부분적으로 또는 완전히) 억제하는 항체를 지칭한다. 두 항체가 표적과의 결합을 놓고 서로 경쟁하는 지의 여부, 즉 하나의 항체가 표적에 대한 다른 항체의 결합을 억제하는 지의 여부 및 억제 정도는 공지된 경쟁 실험, 예를 들어, 예컨대 본 실시예에 기재된 실험을 이용하여 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체는 표적과의 결합을 놓고 또 다른 항체와 경쟁하고, 표적에 대한 또 다른 항체의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 억제한다. 억제 또는 경쟁의 수준은 어느 항체가 "차단성 항체" (즉, 표적과 처음 인큐베이션되는 차가운 항체)인지에 따라서 상이할 수 있다. 경쟁 검정은, 예를 들어 문헌 [Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277] 또는 [Chapter 11 of "Using Antibodies" by Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999]에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 경쟁하는 항체는 동일한 에피토프, 중복 에피토프 또는 인접한 에피토프와 결합한다 (예를 들어, 입체 장애에 의해 입증된 바와 같음).
다른 경쟁적 결합 검정은 고체 상 직접 또는 간접 방사성 면역검정 (RIA), 고체 상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정 (문헌 [Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)] 참조); 고체 상 직접 비오틴-아비딘 EIA (문헌 [Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)] 참조); 고체 상 직접 표지된 검정, 고체 상 직접 표지된 샌드위치 검정 (문헌 [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)] 참조); I-125 표지를 이용하는 고체 상 직접 표지 RIA (문헌 [Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)] 참조); 고체 상 직접 비오틴-아비딘 EIA (문헌 [Cheung et al., Virology 176:546 (1990)]); 및 직접 표지된 RIA (문헌 [Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)])를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "특이적 결합", "선택적 결합", "선택적으로 결합하는" 및 "특이적으로 결합하는"은 미리 결정된 항원 상의 에피토프와는 결합하지만, 다른 항원 상의 에피토프와는 그렇지 않은 항체를 지칭한다. 전형적으로, 항체는 (i) 예를 들어, 분석물로서 미리 결정된 항원, 예를 들어 재조합 인간 CD73을 사용하고 리간드로서 항체를 사용하여 비아코어® 2000 표면 플라스몬 공명 기기에서 표면 플라스몬 공명 (SPR) 기술에 의해 결정되거나, 또는 항원 양성 세포에 대한 항체의 결합성의 스캐차드(Scatchard) 분석에 의해 결정된 경우에, 대략 10-7 M 미만, 예컨대 대략 10-8 M, 10-9 M 또는 10-10 M 미만 또는 훨씬 더 낮은 평형 해리 상수 (KD)로 결합하고; (ii) 미리 결정된 항원 또는 밀접하게 관련된 항원 이외의 비-특이적 항원 (예를 들어, BSA, 카세인)과의 결합에 대한 그의 친화도보다 적어도 2배 더 큰 친화도로 미리 결정된 항원과 결합한다. 따라서, 달리 표시되지 않는 한, "인간 CD73과 특이적으로 결합하는" 항체는 10-7 M 이하, 예컨대 대략 10-8 M, 10-9 M 또는 10-10 M 미만 또는 훨씬 더 낮은 KD로 가용성 또는 세포 결합된 인간 CD73과 결합하는 항체를 지칭한다. "시노몰구스 CD73과 교차 반응하는" 항체는 10-7 M 이하, 예컨대 10-8 M, 10-9 M 또는 10-10 M 미만 또는 훨씬 더 낮은 KD로 시노몰구스 CD73과 결합하는 항체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 비-인간 종으로부터의 CD73과 교차 반응하지 않는 항체는 표준 결합 검정에서 이들 단백질에 대항하여 본질적으로 검출 가능하지 않는 결합성을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "kassoc" 또는 "ka"는 특별한 항체-항원 상호 작용의 연합 속도 상수를 지칭하는 반면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "kdis" 또는 "kd"는 특별한 항체-항원 상호 작용의 해리 속도 상수를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "KD"는 kd 대 ka의 비 (즉, kd/ka)로부터 수득되고 몰 농도 (M)로서 표현되는 평형 해리 상수를 지칭한다. 항체에 대한 KD 값은 관련 기술분야에 널리 확립된 방법을 이용하여 결정할 수 있다. 항체의 KD를 결정하는 데 바람직한 방법은 표면 플라스몬 공명을 이용하는 것인데, 바람직하게 바이오센서 시스템, 예컨대 비아코어® 표면 플라스몬 공명 시스템 또는 유동 세포계수법 및 스캐차드 분석을 이용하는 것이다.
항체 또는 그의 항원 결합성 단편을 사용하는 시험관내 또는 생체내 검정의 맥락에서 용어 "EC50"은 최대 반응의 50%인 반응을 유도시키는, 즉 최대 반응과 기준선 사이의 중간에 있는 반응을 유도시키는 항체 또는 그의 항원 결합성 부분의 농도를 지칭한다.
항체의 "내재화의 속도" 또는 항체, 예를 들어 항-CD73 항체에 의해 매개된 바와 같은, 수용체, 예를 들어, CD73의 "내재화의 속도"는, 예를 들어 본 실시예에 제시된 바와 같이 내재화의 T1/2로써 나타낼 수 있다. 항-CD73 항체의 내재화의 속도를 적어도 10%, 30%, 50%, 75%, 2배, 3배, 5배 이상 정도 증강시키거나 또는 증가시키면, 항체의 중쇄 불변 영역이 변형된 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG2 힌지 및 IgG2 CH1 도메인을 함유하는 것으로 변화됨으로써 T1/2가 적어도 10%, 30%, 50%, 75%, 2배, 3배, 5배 이상 만큼 감소될 수 있다. 예를 들어, 10분의 T1/2를 갖는 것 대신, 변형된 중쇄 불변 영역은 내재화의 속도를 증가시킴으로써, T1/2를 5분으로 감소시킬 수 있다 (즉, 내재화의 속도가 2배 증가되거나 또는 T1/2가 2배 감소된다). "T1/2"는 항체를 세포에 부가한 시간으로부터 측정된 바와 같이, 최대 내재화의 절반이 달성되는 시간으로서 정의된다. 내재화의 최대 수준은 항체 농도에 대항하여 플롯된 내재화를 나타내는 그래프의 안정기에서의 내재화의 수준일 수 있다. 변형된 중쇄 불변 영역은 항체의 내재화의 최대 수준을 적어도 10%, 30%, 50%, 75%, 2배, 3배, 5배 이상 증가시킬 수 있다. 상이한 항체들의 내재화 효능, 예컨대 변형된 중쇄 불변 영역을 수반한 항체와 변형된 중쇄 불변 영역을 수반하지 않은 동일한 항체의 내재화 효능을 비교하는 또 다른 방식은 소정의 항체 농도 (예를 들어, 100 nM) 하에 또는 소정의 시간 (예를 들어, 2분, 5분, 10분 또는 30분)에서 그들의 내재화 수준을 비교하는 것이다. 내재화의 수준을 비교하는 것은 또한, 내재화의 EC50 수준을 비교함으로써 수행될 수 있다. 하나의 항체의 내재화의 수준은 소정의 (참조) 항체, 예를 들어, 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 11F11 또는 CD73.4-IgG2CS-IgG1 또는 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f의 내재화의 수준과 비교해서 정의될 수 있고, 이는 소정의 (참조) 항체를 이용하여 수득된 값의 %로서 표시될 수 있다. 내재화의 정도는 이들 방법 중 어느 하나에 의해 비교된 바와 같이, 적어도 10%, 30%, 50%, 75%, 2배, 3배, 5배 이상 정도 증강될 수 있다.
특정 연구 대상에게 적용된 바와 같은 본원에 사용된 바와 같은 용어 "자연 발생적"은 연구 대상이 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 지칭한다. 예를 들어, 자연에서의 공급원으로부터 단리될 수 있는 유기체 (바이러스 포함)에 존재하고 실험실에서 사람에 의해 의도적으로 변형시키지 않은 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열이 자연 발생적이다.
"폴리펩티드"는 적어도 2개의 연속적으로 연결된 아미노산 잔기를 포함하는 쇄를 지칭하는데, 이러한 쇄의 길이에 대한 상한치는 없다. 단백질 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 변형, 예컨대 글리코실화, 인산화 또는 디술피드 결합 (이에 제한되지 않는다)을 함유할 수 있다. "단백질"은 하나 이상의 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하고자 한다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, cDNA일 수 있다.
또한, 본원에 기재된 서열식별번호에 제시된 서열의 "보존적 서열 변형", 즉 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되거나 또는 아미노산 서열을 함유하는 항체의 항원에 대한 결합성을 없애지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산 서열 변형이 제공된다. 이러한 보존적 서열 변형은 보존적 뉴클레오티드 및 아미노산 치환뿐만 아니라 뉴클레오티드 및 아미노산 부가 및 결실을 포함한다. 예를 들어, 변형은 관련 기술분야에 공지된 표준 기술, 예컨대 부위 지정 돌연변이유발 및 PCR-매개된 돌연변이유발에 의해 본원에 기재된 서열식별번호 내로 도입될 수 있다. 보존적 서열 변형은 아미노산 잔기를 유사한 측쇄를 갖는 특정 아미노산 잔기로 대체시키는 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 관련 기술분야에 정의되었다. 이들 계열은 염기성 측쇄를 수반한 아미노산 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 수반한 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는 극성 측쇄를 수반한 아미노산 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 수반한 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타 분지된 측쇄를 수반한 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄를 수반한 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, 항-CD73 항체 내의 예상되는 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게, 동일한 측쇄 계열로부터의 또 다른 아미노산 잔기로 대체시킨다. 항원 결합성을 없애지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산 보존적 치환을 확인하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Brummell et al., Biochem. 32:1180-1187 (1993)]; [Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999)]; 및 [Burks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)] 참조).
또 다른 한편으론, 또 다른 실시양태에서, 돌연변이는, 예컨대 포화 돌연변이유발에 의해 항-CD73 항체 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 이로써 생성된 변형된 항-CD73 항체를 대상으로 하여 개선된 결합 활성에 관하여 스크리닝할 수 있다.
핵산에 대하여, 용어 "실질적 상동성"은 두 핵산, 또는 그의 지정된 서열을 최적으로 정렬되고 비교한 경우에, 이러한 두 서열이 적어도 약 80%의 뉴클레오티드, 통상적으로 적어도 약 90% 내지 95%, 및 보다 바람직하게 적어도 약 98% 내지 99.5%의 뉴클레오티드에서 적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실을 수반하면서 동일하다는 것을 표시한다. 또 다른 한편으론, 실질적 상동성은 절편들이 선택적 혼성화 조건 하에 상기 가닥의 보체와 혼성화될 경우에 존재한다.
폴리펩티드에 대하여, 용어 "실질적 상동성"은 두 폴리펩티드, 또는 그의 지정된 서열을 최적으로 정렬되고 비교한 경우에, 이러한 두 서열이 적어도 약 80%의 아미노산, 통상적으로 적어도 약 90% 내지 95%, 및 보다 바람직하게 적어도 약 98% 내지 99.5%의 아미노산에서 적절한 아미노산 삽입 또는 결실을 수반하면서 동일하다는 것을 표시한다.
두 서열 간의 % 동일성은 이러한 두 서열을 최적으로 정렬시킨 경우에 이들 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수인데 (즉, % 상동성 = 동일한 위치의 # / 위치의 총 # x 100), 최적의 정렬은 두 서열의 최적의 정렬을 위하여 도입시킬 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하여 결정된다. 서열의 비교 및 두 서열 간의 % 동일성의 결정은 다음 비제한적 예에 기재된 바와 같은 수학적 알고리즘을 이용하여 달성될 수 있다.
두 뉴클레오티드 서열 간의 % 동일성은 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70, 또는 80의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 중량을 이용하여, GCG 소프트웨어 패키지 (http://www.gcg.com에서 이용 가능함)의 GAP 프로그램을 이용하여 결정될 수 있다. 두 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 % 동일성은 또한, PAM120 중량 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티 및 4의 갭 페널티를 이용하여, ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내로 혼입시킨, 문헌 [E. Meyers and W. Miller, CABIOS, 4:11-17 (1989)]의 알고리즘을 이용하여 결정할 수 있다. 또한, 두 아미노산 서열 간의 % 동일성은 블로섬(Blossum) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 갭 길이를 이용하여, GCG 소프트웨어 패키지 (http://www.gcg.com에서 이용 가능함)의 GAP 프로그램 내로 혼입시킨 문헌 [Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)]의 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있다.
본원에 기재된 핵산 및 단백질 서열은, 예를 들어 관련 서열을 확인하기 위하여 공개 데이터베이스에 대항한 조사를 수행하기 위한 "조회 서열"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 조사는 문헌 [Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램 (버전 2.0)을 이용하여 수행될 수 있다. BLAST 뉴클레오티드 조사는 본원에 기재된 핵산 분자와 상동인 뉴클레오티드 서열을 수득하기 위하여 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 워드길이 = 12를 이용하여 수행될 수 있다. BLAST 단백질 조사는 본원에 기재된 단백질 분자와 상동인 아미노산 서열을 수득하기 위하여 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 워드길이 = 3을 이용하여 수행될 수 있다. 비교 목적을 위해 갭이 있는 정렬을 수득하기 위하여, 문헌 [Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402]에 기재된 바와 같이, 갭이 있는 BLAST를 활용할 수 있다. BLAST 및 갭이 있는 BLAST 프로그램을 활용하는 경우, 각각의 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터를 사용할 수 있다 (www.ncbi.nlm.nih.gov 참조).
핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제되거나 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 기술을 포함한 표준 기술에 의해, 다른 세포성 성분 또는 다른 오염물질, 예를 들어 다른 세포성 핵산 (예를 들어, 염색체의 다른 부분) 또는 단백질로부터 정제 제거시킨 경우에, 핵산은 "단리되거나" 또는 "실질적으로 순수해진다" (문헌 [F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)] 참조).
핵산, 예를 들어, cDNA는 유전자 서열을 제공하는 표준 기술에 따라서 돌연변이될 수 있다. 코딩 서열의 경우, 이들 돌연변이는 원하는 만큼 아미노산 서열에 영향을 미칠 수 있다. 특히, 천연 V, D, J, 불변, 전환물 및 본원에 기재된 다른 상기 서열과 실질적으로 상동이거나 또는 이들 서열로부터 유래된 DNA 서열이 고려된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 그에 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하고자 한다. 한 가지 유형의 벡터가 "플라스미드"인데, 이는 부가의 DNA 절편이 라이게이션될 수 있는 환상의 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터인데, 여기서는 부가의 DNA 절편이 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있다. 특정의 벡터는, 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자율적으로 복제할 수 있다 (예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터). 다른 벡터 (예를 들어, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포 내로의 도입시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있음으로써, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정의 벡터는, 이들과 작동적으로 연결되는 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" (또는 간단히, "발현 벡터")로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 상호 교환적으로 사용될 수 있는데, 이는 플라스미드가 가장 흔히 사용되는 형태의 벡터이기 때문이다. 그러나, 또한 등가의 기능을 제공하는 다른 형태의 발현 벡터, 예컨대 바이러스 벡터 (예를 들어, 복제 결함있는 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노 관련 바이러스)가 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합 숙주 세포" (또는 간단히 "숙주 세포")는 세포에 자연적으로 존재하지 않는 핵산을 포함하는 세포를 지칭하고자 하고, 재조합 발현 벡터를 도입시킨 세포일 수 있다. 이러한 용어는 특별한 대상체 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 지칭하고자 한다는 것을 이해해야 한다. 특정의 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후세대에서 발생할 수 있기 때문에, 그러한 자손이 사실상 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용된 바와 같은 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항원"은 임의의 자연 또는 합성 면역원성 물질, 예컨대 단백질, 펩티드 또는 합텐을 지칭한다. 항원은 CD73 또는 그의 단편일 수 있다.
"면역 반응"은 외래 작용제에 대항한 척추동물 내에서의 생물학적 반응을 지칭하는데, 이러한 반응은 이들 작용제에 대항하여 유기체를 보호해주고 이들에 의해 야기된 질환을 방지시켜 준다. 면역 반응은 면역 체계의 세포 (예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 킬러 (NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 또는 호중구) 및 이들 세포 중 임의의 것 또는 간에 의해 생성된 가용성 거대분자 (항체, 시토카인 및 보체 포함)의 작용에 의해 매개되어, 침입하는 병원체, 병원체에 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 다른 비정상적 세포, 또는 자가 면역 또는 병리학적 염증의 경우에는, 정상적인 인간 세포 또는 조직을 선택적으로 표적화하고/하거나, 이와 결합하고/하거나, 이에 손상을 입히고/입히거나, 이를 파괴하고/하거나 이를 척추동물의 체내로부터 제거한다. 면역 반응은, 예를 들어 T 세포, 예를 들어, 이펙터 T 세포 또는 Th 세포, 예컨대 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화 또는 억제, 또는 Treg 세포의 억제를 포함한다.
"면역조정제" 또는 "면역조절제"는 면역 반응을 조정하거나, 조절하거나 또는 변형시키는 데 관여할 수 있는 작용제, 예를 들어 시그널링 경로의 성분을 지칭한다. 면역 반응을 "조정하거나", "조절하거나" 또는 "변형시키는" 것은 면역 체계의 세포에 있어서의 임의의 변경 또는 이러한 세포 (예를 들어, 이펙터 T 세포)의 활성에 있어서의 임의의 변경을 지칭한다. 이러한 조정은 각종 세포 유형의 수에 있어서의 증가 또는 감소, 이들 세포의 활성 상의 증가 또는 감소, 또는 면역 체계 내에서 일어날 수 있는 임의의 다른 변화로써 분명히 나타날 수 있는 면역 체계의 자극 또는 저해를 포함한다. 억제성 면역조정제와 자극성 면역조정제 둘 다가 확인되었는데, 이들 중 일부는 종양 미세환경에서 증강된 기능을 가질 수 있다. 면역조정제는 T 세포의 표면 상에 위치할 수 있다. "면역조정성 표적" 또는 "면역조절성 표적"은 특정 물질, 작용제, 모이어티(moiety), 화합물 또는 분자에 의한 결합의 표적으로 여겨지고, 그의 활성이 상기 물질, 작용제, 모이어티, 화합물 또는 분자의 결합에 의해 변경되는 면역조정제이다. 면역조정성 표적은, 예를 들어, 세포의 표면 상의 수용체 ("면역조정성 수용체") 및 수용체 리간드 ("면역조정성 리간드")를 포함한다.
면역 반응 또는 면역 체계를 자극할 수 있는 증가된 능력은 T 세포 공동 자극성 수용체의 증강된 효능제 활성 및/또는 억제성 수용체의 증강된 길항제 활성으로부터 비롯될 수 있다. 면역 반응 또는 면역 체계를 자극할 수 있는 증가된 능력은 면역 반응을 측정하는 검정, 예를 들어 시토카인 또는 케모카인 방출, 세포용해 활성 (표적 세포 상에서 직접적으로 결정되거나 또는 CD107a 또는 그랜자임을 검출하는 것을 통하여 간접적으로 결정됨) 및 증식 상의 변화를 측정하는 검정에서 활성의 최대 수준 또는 EC50의 증가 배수로써 반영될 수 있다. 면역 반응 또는 면역 체계 활성을 자극할 수 있는 능력은 적어도 10%, 30%, 50%, 75%, 2배, 3배, 5배 이상 정도 증강될 수 있다.
"면역요법"은 면역 반응을 유도시키거나, 증강시키거나, 저해하거나 또는 달리 변형시키는 것을 포함하는 방법에 의해, 특정 질환을 앓고 있거나, 또는 특정 질환에 걸릴 위험이 있거나 또는 특정 질환의 재발로 인해 고통받고 있는 대상체를 치료하는 것을 지칭한다.
"면역 자극 요법" 또는 "면역 자극성 요법"은, 예를 들어 암을 치료하기 위하여 특정 대상체에서의 면역 반응을 증가 (유도 또는 증강)시켜 주는 요법을 지칭한다.
"내인성 면역 반응을 증강시키는 것"은 특정 대상체에게서 기존의 면역 반응의 유효성 또는 효력을 증가시키는 것을 의미한다. 이러한 유효성 및 효력 상의 증가는, 예를 들어 내인성 숙주 면역 반응을 저해하는 기전을 극복하거나 또는 내인성 숙주 면역 반응을 증강시키는 기전을 자극함으로써 달성될 수 있다.
"T 이펙터" ("Teff") 세포는 세포용해 활성을 지닌 T 세포 (예를 들어, CD4+ 및 CD8+ T 세포)뿐만 아니라 시토카인을 분비하고 다른 면역 세포를 활성화하며 지시하지만, 조절성 T 세포 (Treg 세포)를 포함하지 않는 T 헬퍼(helper) (Th) 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "연결된"은 2개 이상의 분자의 연합을 지칭한다. 이러한 연결은 공유적 또는 비-공유적일 수 있다. 연결은 또한 유전적일 수 있다 (즉, 재조합적으로 융합될 수 있다). 이러한 연결은 관련 기술분야에서 승인된 광범위한 기술, 예컨대 화학적 접합 및 제조합 단백질 생성을 이용하여 달성될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "투여하는"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 각종 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 이용하여, 치료제를 포함하는 조성물을 대상체에게 물리적으로 도입하는 것을 지칭한다. 본원에 기재된 항체에 대한 바람직한 투여 경로는 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로, 예컨대 주사 또는 주입을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "비경구 투여"란 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식, 통상적으로 주사에 의한 투여 방식을 의미하고, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 림프관내, 병변내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 피내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 한편으론, 본원에 기재된 항체는 비-비경구 경로를 통하여, 예컨대 국소, 표피 또는 점막 투여 경로를 통하여, 예를 들어 비내, 경구, 질내, 직장내, 설하 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 투여하는 것은, 예를 들어 1회, 여러 회, 및/또는 하나 이상의 연장된 기간 전반에 걸쳐 수행될 수도 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "T 세포-매개된 반응"은 이펙터 T 세포 (예를 들어, CD8+ 세포) 및 헬퍼 T 세포 (예를 들어, CD4+ 세포)를 포함한 T 세포에 의해 매개된 반응을 지칭한다. T 세포 매개된 반응은, 예를 들어, T 세포 세포독성 및 증식을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "세포독성 T 림프구 (CTL) 반응"은 세포독성 T 세포에 의해 유도된 면역 반응을 지칭한다. CTL 반응은 주로 CD8+ T 세포에 의해 매개된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "억제하다" 또는 "차단하다" (예를 들어, CD73 결합성 또는 활성의 억제/차단을 지칭한다)는 상호 교환적으로 사용되고, 부분적 억제/차단과 완전한 억제/차단 둘 다를 포괄한다.
본원에 사용된 바와 같은, "암"은 체내의 비정상적인 세포의 비제어된 성장을 특징으로 하는 광범위한 질환 군을 지칭한다. 조절되지 않는 세포 분열로 인해, 이웃하는 조직에 침입하고 림프계 또는 혈류를 통하여 신체의 원위 부분으로 전이될 수 있는 악성 종양 또는 세포가 형성될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 특정 질환과 연관된 증상, 합병증, 병태 또는 생화학적 징후의 진행, 발생, 중증도 또는 재발을 역전시키거나, 경감시키거나, 완화시키거나, 억제시키거나 또는 느리게 하거나 또는 방지시킬 목적으로 대상체 상에서 수행된 임의의 유형의 시술 또는 과정, 또는 활성제를 대상체에게 투여하는 것을 지칭한다. 예방은 특정 질환이 발생하지 못하게 하거나 또는 질환이 발생하는 경우에는 그의 효과를 최소화하기 위하여, 아직 질환이 없는 대상체에게 투여하는 것을 지칭한다.
"혈액학적 악성 종양"은 림프종, 백혈병, 골수종 또는 림프성 악성 종양뿐만 아니라 비장 및 림프절의 암을 포함한다. 예시적인 림프종은 B 세포 림프종과 T 세포 림프종 둘 다를 포함한다. B-세포 림프종은 호지킨(Hodgkin's) 림프종과 대부분의 비-호지킨 림프종 둘 다를 포함한다. B 세포 림프종의 비제한적 예는 확산성 대형 B-세포 림프종, 여포성 림프종, 점막 관련 림프 조직 림프종, 작은 세포 림프구성 림프종 (만성 림프구성 백혈병과 중복된다), 외투 세포 림프종 (MCL), 버킷(Burkitt's) 림프종, 종격 대형 B 세포 림프종, 발덴스트롬 매크로글로불린혈증, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 혈관내 대형 B-세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 림프종 모양의 육아종증을 포함한다. T 세포 림프종의 비제한적 예는 림프절외 T 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 악성 대형 세포 림프종, 및 혈관면역모세포성 T 세포 림프종을 포함한다. 혈액학적 악성 종양은 또한, 백혈병, 예컨대 이차 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 및 급성 림프모구성 백혈병을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 혈액학적 악성 종양은 추가로, 골수종, 예컨대 다발성 골수종 및 억제할 수 없는 다발성 골수종을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 다른 혈액학적 및/또는 B 세포 관련 암 또는 T-세포 관련 암이 용어 혈액학적 악성 종양으로써 포괄된다.
용어 "유효 용량" 또는 "유효 투여량"은 목적하는 효과를 달성하거나 또는 적어도 부분적으로 달성하는 데 충분한 양으로서 정의된다. 특정 약물 또는 치료제의 "치료상 유효량" 또는 "치료상 유효 투여량"은 단독으로 사용되거나 또는 또 다른 치료제와 조합하여 사용되는 경우에, 질환 증상의 중증도 상의 감소, 질환 증상이 없는 기간의 지속 기간 및 빈도 상의 증가, 또는 질환의 고통으로 인한 손상 또는 장애의 방지로써 입증된 질환 퇴행을 증진시켜 주는 약물의 임의의 양이다. 약물의 "예방상 유효량" 또는 "예방상 유효 투여량"은 특정 질환이 발생할 위험이 있거나 또는 질환의 재발로 인해 고통받을 위험이 있는 대상체에게 단독으로 투여되거나 또는 또 다른 치료제와 조합하여 투여되는 경우에, 이러한 질환의 발생 또는 재발을 억제시켜 주는 약물의 양이다. 질환 퇴행을 증진시켜 줄 수 있거나 또는 질환의 발생 또는 재발을 억제시켜 줄 수 있는 치료제 또는 예방제의 능력은 전문적인 시술자에게 공지된 각종 방법을 이용하여 평가할 수 있는데, 예컨대 임상 시험 동안 인간 대상체에게서 평가하거나, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서 평가하거나, 또는 시험관내 검정에서 작용제의 활성을 검정함으로써 평가할 수 있다.
한 예로서, 항암제는 특정 대상체에게서 암 진행을 느리게 하거나 또는 암 퇴행을 증진시켜 주는 약물이다. 바람직한 실시양태에서, 약물의 치료상 유효량은 암 제거 시점까지 암 퇴행을 증진시켜 준다. "암 퇴행을 증진시키는 것"은 유효량의 약물을 단독으로 투여하거나 또는 항-신생물제와 조합하여 투여하면, 환자에게서 종양 성장 또는 크기가 감소되거나, 종양이 괴사되거나, 적어도 하나의 질환 증상의 중증도가 감소되거나, 질환 증상이 없는 기간의 지속 기간 및 빈도가 증가되거나, 질환의 고통으로 인한 손상 또는 장애가 방지되거나, 또는 질환 증상이 달리 완화된다는 것을 의미한다. 약리학적 유효성은 환자에게서 암 퇴행을 증진시킬 수 있는 약물의 능력을 지칭한다. 생리학적 안전성은 약물의 투여로부터 비롯되는 세포성, 기관 및/또는 유기체 수준에서의 독성 또는 다른 불리한 생리학적 효과 (부작용)가 허용 가능하게 낮은 수준이라는 것을 지칭한다.
종양을 치료하기 위한 한 예로서, 약물의 치료상 유효량 또는 투여량은 바람직하게, 처리되지 않은 대상체와 비교해서 세포 성장 또는 종양 성장을 적어도 약 20%, 보다 바람직하게 적어도 약 40%, 보다 더 바람직하게 적어도 약 60%, 및 보다 더 바람직하게 적어도 약 80% 만큼 억제한다. 가장 바람직한 실시양태에서, 약물의 치료상 유효량 또는 투여량은 세포 성장 또는 종양 성장을 완전히 억제하는데, 즉 바람직하게 세포 성장 또는 종양 성장을 100% 만큼 억제한다. 종양 성장을 억제할 수 있는 화합물의 능력은 다음에 기재된 검정을 이용하여 평가할 수 있다. 또 다른 한편으론, 이러한 조성물의 특성은 세포 성장을 억제할 수 있는 화합물의 능력을 조사함으로써 평가할 수 있고, 이러한 억제는 전문적인 시술자에게 공지된 검정에 의해 시험관 내에서 측정될 수 있다. 본원에 기재된 다른 바람직한 실시양태에서, 종양 퇴행이 관찰될 수 있고, 적어도 약 20일, 보다 바람직하게 적어도 약 40일, 또는 보다 더 바람직하게 적어도 약 60일의 기간 동안 지속될 수 있다.
용어 "환자" 및 "대상체"는 예방적 또는 치료적 처치를 받아들이는 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법 및 조성물을 이용하여, 암이 있는 대상체를 치료할 수 있다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비-포유류, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 암소, 치킨, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
본원에 기재된 각종 측면이 다음 서브섹션에 추가로 상세히 기재된다.
I. 항-CD73 항체
본원에는 특별한 기능적 특징 또는 특성으로써 명확히 규명되는 항체, 예를 들어, 완전한 인간 항체가 기재되어 있다. 예를 들어, 이러한 항체는 인간 CD73과 특이적으로 결합한다. 부가적으로, 항체는 하나 이상의 비-인간 영장류로부터의 CD73, 예컨대 시노몰구스 CD73과 교차 반응할 수 있다.
가용성 및/또는 막 결합된 인간 CD73과 특이적으로 결합하는 것 이외에도, 본원에 기재된 항체는 다음 기능적 특성 중 하나 이상을 나타낸다:
(a) 아데노신 생성의 저하를 초래하는, CD73 효소 활성의 억제;
(b) 시노 CD73과의 결합성;
(c) 세포, 예를 들어, 종양 세포 내로의 항체 매개된 CD73 내재화; 및
(d) 인간 CD73의 아미노산 65-83 및 157-172를 포함하는 입체 형태적 에피토프와의 결합성.
바람직하게, 항-CD73 항체는 고 친화도, 예를 들어 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 10-10 M 이하, 10-11 M 이하, 10-12 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 또는 10-10 M 내지 10-8 M의 KD로 인간 CD73 (단량체성 또는 이량체성; 이소형 1 또는 2)과 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 비아코어® SPR 분석에 의해 결정된 바와 같이, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M (1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 10-8 M 내지 10-7 M 또는 10-10 M 내지 10-8 M의 KD로 가용성 인간 CD73과 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 본원에 추가로 기재된 바와 같이 결정된 바와 같이, 1 nM 미만의 EC50으로, 결합된 (예를 들어, 세포막 결합된, 예를 들어, Calu6 세포) 인간 CD73과 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 유동 세포계수법 및 스캐차드 플롯에 의해 결정된 바와 같이, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M (1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-8 M, 10-10 M 내지 10-8 M, 10-9 M 내지 10-8 M, 10-11 M 내지 10-9 M, 10-10 M 내지 10-8 M 또는 10-10 M 내지 10-9 M의 KD로, 결합된 인간 CD73, 예를 들어, 세포 막 결합된 인간 CD73과 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M (1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-8 M 또는 10-8 M 내지 10-7 M의 KD로 가용성 인간 CD73과 결합하고; 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M (1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-8 M, 10-10 M 내지 10-8 M, 10-9 M 내지 10-8 M, 10-11 M 내지 10-9 M, 또는 10-10 M 내지 10-9 M의 KD 또는 EC50으로, 결합된 인간 CD73, 예를 들어, 세포 막 결합된 인간 CD73과 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 고 친화도로 시노 CD73과 결합하는데, 예를 들어 상기 항체는 결정된 바와 같이, 예를 들어 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 0.1 nM 내지 10 nM의 EC50, 예컨대 1 nM 미만의 EC50으로, 시노 CD73을 발현하는 CHO 세포와 결합한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 또한, 예를 들어 본 실시예에서 측정된 바와 같이, 100 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하, 100 nM 내지 0.01 nM, 100 nM 내지 0.1 nM, 100 nM 내지 1 nM, 또는 10 nM 내지 0.1 nM의 EC50으로, 시노몰구스 CD73과 결합하는데, 예를 들어 막 결합된 시노몰구스 CD73, 예를 들어 시노 CD73을 발현하는 CHO 세포와 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 SEC에 의해 결정된 바와 같이, 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 99% 단량체성이다. 항-CD73 항체는 또한, 본원에 기재된 항체의 생물 물리학적 특징과 유사하거나, 또는 이러한 생물 물리학적 특징의 범위 내에 있는 생물 물리학적 특징을 가질 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 CD73 비드 결합된 검정에서 결정된 바와 같이, 또는 세포, 예를 들어, Calu6, SKMEL24 또는 H292 세포에서 결정된 바와 같이, 또는 생체내 검정, 예를 들어, 이종이식편 종양 모델에서 결정된 바와 같이, 예를 들어 본 실시예에 추가로 기재된 바와 같이, 인간 및/또는 시노 CD73의 효소 활성을 억제한다. 항-CD73 항체는 본원에 기재된 항체의 억제성 활성과 적어도 유사하거나, 또는 이러한 억제성 활성의 범위 내에 있는 억제성 활성을 가질 수 있다. 예를 들어, 항-CD73 항체는 10 nM 미만 또는 5 nM 미만, 또는 1 내지 10 nM 또는 5 내지 10 nM의 범위의 EC50으로 인간 CD73 (예를 들어, 고체와 결합된 CD73) 효소 활성 (아데노신 생성)을 억제할 수 있다. 항-CD73 항체는 10 nM 미만 또는 1 nM 미만, 또는 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 1 nM 또는 0.1 내지 0.5 nM의 범위의 EC50으로 세포, 예를 들어, Calu6 세포 상에서의 인간 CD73의 활성을 억제할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 고 함량 내재화 검정에서 결정된 바와 같이, 또는 본 실시예에 추가로 기재되는 바와 같은 FACS 또는 유동 세포계수법에 의해 결정된 바와 같이, 그와 결합되는 세포에 의해 내재화된다 (CD73 내재화를 매개한다). 항-CD73 항체는 본 실시예에 기재된 항체의 특징과 적어도 유사하거나 또는 그러한 특징의 범위 내에 있는 내재화 특징 (EC50, T1/2 및 Ymax), 및 안정기에 도달하기까지의 시간을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 고 함량 내재화 검정 (실시예 6A에 기재됨)에서 결정된 바와 같이, 하나 이상의 세포주, 예를 들어 본 실시예에 제시된 세포주에서, 1시간 미만, 예컨대 30분 미만, 15분 미만, 12분 미만, 10분 미만, 7분 미만 또는 심지어 5분 미만인 내재화의 T1/2를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 실시예 6A에 기재된 바와 같은 고 함량 내재화 검정을 이용하거나 또는 예를 들어, 실시예 6B에 기재된 바와 같은 유동 세포계수법을 이용하여 결정된 바와 같이, 10시간 이하, 6시간 이하, 5시간 이하, 4시간 이하, 3시간 이하, 2시간 이하, 1시간 이하, 예를 들어, 10분 내지 10시간, 10분 내지 6시간, 1시간 내지 10시간 또는 1시간 내지 6시간의 범위 이내에 최대 항-CD73 항체 매개된 내재화에 도달된다. CD73의 항-CD73 항체 매개된 내재화의 최대 수준은 세포 유형에 따라서 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 초과일 수 있다. 예를 들어, 본 실시예에 기재된 고 함량 내재화 검정에서 측정된 바와 같이, Calu6 세포에서 CD73의 항-CD73 항체 매개된 내재화의 EC50은 10 nM 미만, 예를 들어, 0.1 내지 10 nM 또는 1 내지 10 nM 또는 1 내지 5 nM일 수 있고, Ymax는 적어도 90% 또는 적어도 95%일 수 있다.
항-CD73 항체, 예를 들어, IgG2 힌지, IgG2 CH1 도메인, 또는 IgG2 힌지 및 IgG2 CH1 도메인을 갖는 항체는, 예를 들어, 실시예 6A에 기재된 바와 같은 고 함량 내재화 검정에서 측정된 바와 같이, 다음 CD73 내재화 특징을 매개할 수 있다:
- 10 nM 이하, 5 nM 이하, 1 nM 이하, 또는 0.1 내지 10 nM 또는 0.1 내지 1 nM의 EC50; Calu6 세포에서 적어도 90%, 95% 또는 98%의 Ymax (내재화의 최대 %) 및 Calu6 세포에서 30분 미만 또는 10분 미만의 T1/2;
- 인간 세포, 예를 들어, Calu6 세포, HCC44 세포, H2030 세포, H2228 세포, HCC15 세포, SKLU1 세포, SKMES1 세포 또는 SW900 세포에서 30분 미만 또는 10분 미만의 T1/2.
항-CD73 항체, 예를 들어, IgG2 힌지, IgG2 CH1 도메인, 또는 IgG2 힌지 및 IgG2 CH1 도메인을 갖는 항체는, 예를 들어, 실시예 6B에 기재된 바와 같은 유동 세포계수법에 의해 측정된 바와 같이, 다음 CD73 내재화 특징을 매개할 수 있다:
- Calu6 세포에서 1시간 이하의 T1/2 및 적어도 70%의 Ymax;
- NCI-H292 세포에서 30분 이하의 T1/2 및 적어도 70%의 Ymax;
- SNUC1 세포에서 2시간 이하의 T1/2 및 적어도 30%의 Ymax; 및/또는
- NCI-H1437 세포에서 30분 이하의 T1/2 및 적어도 60%의 Ymax.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 bin1 항체인데, 즉 이는 인간 CD73과의 결합을 놓고 11F11과는 결쟁하지만, 4C3과는 그렇지 않다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 본 실시예에 추가로 기재된 바와 같은 HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 특정 에피토프, 예를 들어 인간 CD73의 N-말단 부분 내의 입체 형태적 에피토프, 예를 들어 인간 CD73의 아미노산 65-83 (서열식별번호: 96) 내에 위치한 에피토프와 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73의 아미노산 157-172 (서열식별번호: 97)와 결합하거나, 또는 인간 CD73의 아미노산 157-172 (서열식별번호: 97) 내에 위치한 에피토프와 결합한다. 또 다른 한편으론, 항-CD73 항체는, 예를 들어 HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 특정 에피토프, 예를 들어 인간 CD73의 N-말단 부분 내의 불연속 에피토프와 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73의 아미노산 65 내지 83 및 아미노산 157-172와 결합하거나, 또는 인간 CD73 이소형 1 또는 2의 아미노산 65 내지 83 및 아미노산 157-172, 즉 아미노산 서열 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97) 내의 에피토프와 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73의 아미노산 65 내지 83 및 아미노산 157-172의 전부 또는 부분과 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 글리코실화 인간 CD73과 비글리코실화 인간 CD73 둘 다와 결합한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 글리코실화 CD73과만 결합하고, 비글리코실화 CD73과는 결합하지 않는다.
항-CD73 항체는 CD73과의 결합을 놓고, 본원에 기재된 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항-CD73 항체, 예를 들어 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11과 경쟁할 수 있다 (또는 이들의 결합을 억제할 수 있다). 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 인간 CD73에 대한 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11 및/또는 7A11의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 억제한다. 특정 실시양태에서, CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11은 인간 CD73에 대한 항-CD73 항체의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 억제한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 인간 CD73에 대한 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 억제하고, CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11은 인간 CD73에 대한 항-CD73 항체의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 억제한다 (예를 들어, 양 방향에서 경쟁한다). 경쟁 실험은, 예를 들어 본원 (예를 들어, 본 실시예)에 추가로 기재된 바와 같이 수행될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 FcR 결합성을 필요로 하지 않음으로써 결정된 바와 같이, 다가 교차 결합성을 필요로 하지 않으면서 CD73 효소 활성을 억제하고/하거나 세포에 내재화된다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 표 3에 열거된 특성 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11가지를 갖는다.
<표 3>
항-CD73 항체의 잠재적 특성
(1) 예를 들어, 비아코어® SPR 분석에 의해 측정된 바와 같이, 예를 들어 10 nM 이하 (예를 들어, 0.01 nM 내지 10 nM)의 KD로, 인간 CD73, 예를 들어, 비드 결합된 인간 단량체성 및 이량체성 인간 CD73 이소형 1 및 2와 결합하는 특성;
(2) 예를 들어, 1 nM 이하 (예를 들어, 0.01 nM 내지 1 nM)의 EC50으로, 막 결합된 인간 CD73과 결합하는 특성;
(3) 예를 들어, 10 nM 이하 (예를 들어, 0.01 nM 내지 10 nM)의 EC50으로, 시노몰구스 CD73, 예를 들어, 막 결합된 시노몰구스 CD73과 결합하는 특성;
(4) 예를 들어, 10 nM 이하의 EC50으로, 인간 CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(5) 예를 들어, 10 nM 이하의 EC50으로, 시노 CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(6) 10 nM 이하의 EC50으로, Calu6 세포에서 내인성 (세포성) 인간 CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(7) 생체 내에서 인간 CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(8) 예를 들어, 1시간, 30분 또는 10분 미만의 T1/2 및/또는 적어도 70%, 80% 또는 90%의 Ymax로, 세포 내로 내재화, 예를 들어, 항체 매개된 (또는 의존성) CD73 내재화되는 특성;
(9) 아미노산 잔기 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및/또는 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)의 전부 또는 부분을 포함하는, 인간 CD73 상의 입체 형태적 에피토프, 예를 들어 아미노산 서열 (서열식별번호: 1) 내의 불연속 에피토프와 결합하는 특성;
(10) 인간 CD73과의 결합을 놓고 한 방향 또는 양 방향으로 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11과 경쟁하는 특성; 및
(11) X선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, CD73.4와 유사한 패턴으로 인간 CD73과 상호 작용하는 특성.
관련 기술분야에 공지되고 본원에 기재된 방법론에 따라서 결정된 바와 같이 이들 기능적 특성 (예를 들어, 생화학적, 면역화학적, 세포성, 생리학적 또는 다른 생물학적 활성 등) 중 한 가지 이상을 나타내는 항체 활성은, 항체의 부재하에 (예를 들어, 또는 무관한 특이성의 대조군 항체가 존재하는 경우) 관찰된 것과 비교해서 특별한 활성에 있어서의 통계상 유의적 차이에 관한 것임을 이해해야 한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항-CD73 항체는 측정된 파라미터 (예를 들어, 종양 용적, 종양 전이, 아데노신 수준, cAMP 수준)를 적어도 10%, 보다 바람직하게 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 만큼 감소시키고, 특정의 바람직한 실시양태에서는, 92%, 94%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 초과하여 감소시킨다. 반대로, 본원에 개시된 항-CD73 항체는 측정된 파라미터를 적어도 10%, 예컨대 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100% (즉 2배), 3배, 5배, 또는 10배 정도 증가시킨다.
예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯, 및 RIA를 포함한, 각종 종의 CD73에 대한 항체의 결합 능력을 평가하는 표준 검정이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 적합한 검정이 본 실시예에 상세히 기재되어 있다. 항체의 결합 동역학 (예를 들어, 결합 친화도)는 또한, 관련 기술분야에 공지된 표준 검정, 예컨대 비아코어® SPR 분석에 의해 평가될 수 있다. CD73의 기능적 특성 (예를 들어, 아데노신 생성, 종양 성장 및 전이, T 세포 억제)에 대한 상기 항체의 효과를 평가하기 위한 검정이 하기 및 본 실시예에 추가로 상세히 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 천연 항체가 아니거나 또는 자연 발생적 항체가 아니다. 예를 들어, 항-CD73 항체는 더 많은, 더 적은 또는 상이한 유형의 번역 후 변형을 갖는 등 자연 발생적인 항체의 것과 상이한 번역 후 변형을 갖는다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는, 예를 들어 T 세포 표면으로부터 CD73을 제거하고/하거나 그의 효소 활성을 억제함으로써, Teff (T 이펙터) 기능을 자극하고/하거나 Treg 기능을 저하시킨다.
특정 실시양태에서, 항-CD3 항체는 적어도 IgG2 힌지, 및 임의로 또한 IgG2 CH1 도메인, 또는 상기 힌지 및/또는 CH1 도메인의 단편 또는 유도체를 포함하고, 상기 항체는 형태 A를 채택하였다 (예를 들어, 문헌 [Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755] 참조). 특정 실시양태에서, 항-CD3 항체는 적어도 IgG2 힌지, 및 임의로 또한 IgG2 CH1 도메인, 또는 상기 힌지 및/또는 CH1 도메인의 단편 또는 유도체를 포함하고, 상기 항체는 형태 B를 채택하였다 (예를 들어, 문헌 [Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755] 참조). 특정 실시양태에서 조성물은 형태 A를 수반한 항-CD73 항체와 형태 B를 수반한 항-CD73 항체의 혼합물을 포함한다.
본원에는 (i) 11F11에 의해 결합된 것과 유사한 인간 CD73 상의 영역과는 결합하지만, 4C3에 의해 결합된 것과 유사한 영역과는 결합하지 않는 가변 영역을 포함하고 (즉, bin1 항체이다); (ii) 10 nM 이하의 KD로 단량체성 및 이량체성 인간 CD73과 결합하며; (iii) 10 nM 미만의 EC50으로, 예를 들어 세포, 예를 들어, Calu6 세포 상에서의 인간 CD73의 효소 활성 (AMP를 아데노신으로 전환시킴)을 억제하고; (iv) 인간 세포, 예를 들어, Calu6 세포, H2228 세포, HCC15 세포, H2030 세포, SNUC1 세포에서 1시간 이하 (또는 30분 이하, 또는 10분 이하)의 T1/2, 50% 이상 (또는 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상 또는 90% 이상)의 Ymax로 세포에서 항체 의존성 CD73 내재화를 매개하는 항-인간 CD73 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 상기 항체는 IgG2 힌지 또는 IgG2 힌지 및 IgG2 CH1 도메인을 포함한다. 본원에는 (i) 11F11에 의해 결합된 것과 유사한 인간 CD73 상의 영역과는 결합하지만, 4C3에 의해 결합된 것과 유사한 영역과는 결합하지 않는 가변 영역을 포함하고 (즉, bin1 항체이다); (ii) SPR (비아코어)에 의해 결정된 바와 같이, 10 nM 이하의 KD로 단량체성 및 이량체성 인간 CD73과 결합하며; (iii) 10 nM 미만의 EC50으로, 예를 들어 세포, 예를 들어, Calu6 세포 상에서의 인간 CD73의 효소 활성 (AMP를 아데노신으로 전환시킴)을 억제하고; (iv) 실시예 6A에 기재된 고 함량 내재화 검정을 이용하여 결정된 바와 같이, 인간 Calu6, H2228, HCC15 또는 H2030 세포에서 30분 이하의 T1/2, 80% 이상의 Ymax로 세포에서 항체 의존성 CD73 내재화를 매개하는 항-인간 CD73 항체가 제공된다.
바람직한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 상당한 독성이 없다. 예를 들어, 항-CD73 항체는, 예를 들어 임상 시험에서 결정된 바와 같이, 인간의 기관, 예를 들어 간, 신장, 뇌, 폐 및 심장 중 하나 이상에 대해 상당한 독성이 없다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 바람직하지 못한 면역 반응, 예를 들어 자가면역 또는 염증을 상당히 촉발시키지 않는다.
II. 예시적인 항-CD73 항체
항-CD73 항체의 가변 영역
본원에 기재된 특별한 항체는 항체 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11, 7A11, CD73.3-1, -2 또는 -3, CD73.4-1 및 -2, CD73.4-2, CD73.5-1 및 -2, CD73.6-1 및 -2, CD73.7-1 및 -2, CD73.8-1 및 -2, CD73.9-1 및 -2, CD73.10-1 및 -2 및 CD73.11의 CDR 및/또는 가변 영역 서열을 갖는 항체, 예를 들어, 모노클로날 항체뿐만 아니라 그들의 가변 영역 또는 CDR 서열과 적어도 80% 동일성 (예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성)을 갖는 항체이다. 표 4에는 각 항체의 VH 및 VL 영역의 CDR의 서열식별번호뿐만 아니라 VH 및 VL 영역의 서열식별번호가 제시된다. 본 실시예에 추가로 기재되는 바와 같이, 특정의 중쇄는 2개 이상의 경쇄와 함께 존재할 수 있고, 대체 경쇄의 서열식별번호가 다음 표에 또한 제공된다.
<표 4>
본원에는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공되는데, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 및 170-177로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공되는데, 여기서 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92 및 238로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본원에는 다음을 포함하는 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공된다:
(a) 서열식별번호: 135 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(b) 서열식별번호: 135 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(c) 서열식별번호: 4 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(d) 서열식별번호: 4 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(e) 서열식별번호: 16 및 20을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(f) 서열식별번호: 16 및 24를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(g) 서열식별번호: 16 및 28을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(h) 서열식별번호: 32 및 36을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(i) 서열식별번호: 40 및 44를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(j) 서열식별번호: 40 및 48을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(k) 서열식별번호: 52 및 56을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(l) 서열식별번호: 60 및 64를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(m) 서열식별번호: 68 및 72를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(n) 서열식별번호: 68 및 76을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(o) 서열식별번호: 68 및 238을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(p) 서열식별번호: 80 및 84를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(q) 서열식별번호: 88 및 92를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(r) 서열식별번호: 170 및 20을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(s) 서열식별번호: 170 및 24를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(t) 서열식별번호: 170 및 28을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(u) 서열식별번호: 171 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(v) 서열식별번호: 171 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(w) 서열식별번호: 172 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(x) 서열식별번호: 172 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(y) 서열식별번호: 173 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(z) 서열식별번호: 173 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(a2) 서열식별번호: 174 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(b2) 서열식별번호: 174 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(c2) 서열식별번호: 175 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(d2) 서열식별번호: 175 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(e2) 서열식별번호: 176 및 8을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(f2) 서열식별번호: 176 및 12를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는
(g2) 서열식별번호: 177 및 36을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열.
항-CD73 항체는 본원에 기재된 항-CD73 항체, 예를 들어, CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 11F11, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 5F8-3, 6E11 및 7A11의 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 그의 조합물을 포함할 수 있다.
이들 항체 각각이 CD73과 결합하고 항원 결합 특이성이 주로 CDR1, 2 및 3 영역에 의해 제공된다는 것을 고려해 볼 때, VH CDR1, 2 및 3 서열과 VL CDR1, 2 및 3 서열은 "혼합 및 매치"되어 (즉, 상이한 항체로부터의 CDR이 혼합 및 매치될 수 있지만, 각 항체는 VH CDR1, 2 및 3 및 VL CDR1, 2 및 3을 함유해야만 한다), 본원에 기재된 다른 항-CD73 결합성 분자를 창출시킬 수 있다. 이러한 "혼합 및 매치된" 항체의 CD73 결합성은 상기 및 본 실시예에 기재된 결합 검정 (예를 들어, ELISA)을 이용하여 시험할 수 있다. 바람직하게, VH CDR 서열을 혼합 및 매치하는 경우, 특별한 VH 서열로부터의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체시킨다. 마찬가지로, VL CDR 서열을 혼합 및 매치하는 경우, 특별한 VL 서열로부터의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 바람직하게, 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체시킨다. 하나 이상의 VH 및/또는 VL CDR 영역 서열을, 모노클로날 항체 CD73.4-1, CD73.4-2, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11에 대하여 본원에 개시된 CDR 서열로부터의 구조적으로 유사한 서열로 치환시킴으로써 신규 VH 및 VL 서열을 창출시킬 수 있다는 것은 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이다. 본원에 개시된 특이적 항체와 등가이거나 또는 그 보다 탁월한 결합 친화성, 생물 활성 및/또는 다른 특성을 갖는 "혼합 및 매치된" 항체가 본 발명의 방법에 사용하기 위하여 선택될 수 있다.
본원에는 다음을 포함하는 단리된 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공된다:
(a) 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1;
(b) 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2;
(c) 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3;
(d) 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1;
(e) 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 및 94로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및
(f) 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 및 95로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3
(여기서, 상기 항체는 인간 CD73과 특이적으로 결합한다).
특정 실시양태에서, 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역은 서열식별번호: 5-7; 17-19; 33-35; 41-43; 53-55; 61-63; 69-71; 81-83; 또는 89-91을 포함하고;
상기 항체는 인간 CD73과 특이적으로 결합한다.
특정 실시양태에서, 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역은 (a) 서열식별번호: 9-11; 13-15; 21-23; 25-27; 29-31; 37-39; 45-47; 49-51; 57-59; 65-67; 73-75; 77-79; 85-87; 또는 93-95를 포함하고;
상기 항체는 인간 CD73과 특이적으로 결합한다.
특정 실시양태에서, 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서:
(a) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 5-7을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 9-11을 각각 포함하거나;
(b) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 5-7을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 13-15를 각각 포함하거나;
(c) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 17-19를 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 21-23을 각각 포함하거나;
(d) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 17-19를 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 25-27을 각각 포함하거나;
(e) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 17-19를 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 29-31을 각각 포함하거나;
(f) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 33-35를 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 37-39를 각각 포함하거나;
(g) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 41-43을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 45-47을 각각 포함하거나;
(h) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 41-43을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 49-51을 각각 포함하거나;
(i) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 53-55을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 57-59를 각각 포함하거나;
(j) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 61-63을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 65-67을 각각 포함하거나;
(k) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 69-71을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 73-75를 각각 포함하거나;
(l) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 69-71을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 77-79를 각각 포함하거나;
(m) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 81-83을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 85-87을 각각 포함하거나; 또는
(n) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 89-91을 각각 포함하고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 93-95를 각각 포함하는데;
상기 항체는 인간 CD73과 특이적으로 결합하고, 임의로 표 3에 열거된 특징 중 하나 이상, 예를 들어 AMP의 탈인산화를 억제할 수 있는 능력 및 수용체 의존성 CD73 내재화를 매개할 수 있는 능력을 갖는다.
특정 실시양태에서, 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서:
(a) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 5-7로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 9-11로 각각 이루어지거나;
(b) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 5-7로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 13-15로 각각 이루어지거나;
(c) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 17-19로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 21-23으로 각각 이루어지거나;
(d) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 17-19로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 25-27로 각각 이루어지거나;
(e) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 17-19로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 29-31로 각각 이루어지거나;
(f) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 33-35로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 37-39로 각각 이루어지거나;
(g) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 41-43으로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 45-47로 각각 이루어지거나;
(h) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 41-43으로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 49-51로 각각 이루어지거나;
(i) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 53-55로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 57-59로 각각 이루어지거나;
(j) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 61-63으로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 65-67로 각각 이루어지거나;
(k) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 69-71로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 73-75로 각각 이루어지거나;
(l) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 69-71로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 77-79로 각각 이루어지거나;
(m) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 81-83으로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 85-87로 각각 이루어지거나; 또는
(n) 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 89-91로 각각 이루어지고, 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 서열식별번호: 93-95로 이루어지는데;
상기 항체는 인간 CD73과 특이적으로 결합하고, 임의로 표 3에 열거된 특징 중 하나 이상, 예를 들어 AMP의 탈인산화를 억제할 수 있는 능력 및 수용체 의존성 CD73 내재화를 매개할 수 있는 능력을 갖는다.
항-CD73 항체의 중쇄 불변 도메인
본원에 기재된 항-CD73 항체의 중쇄 불변 영역은 임의의 이소형, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 것, 또는 그의 조합물 및/또는 그의 변형물일 수 있다. 항-CD73 항체는 이펙터 기능을 가질 수 있거나 또는 저하된 이펙터 기능을 가질 수 있거나 또는 이펙터 기능을 전혀 갖지 않을 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 이러한 항체에 증강된 특성을 제공해 주는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 본 실시예에 제시된 바와 같이, IgG2 힌지 및 임의로 IgG2 CH1 도메인을 항-CD73 항체, 예컨대 11F11 항체의 가변 영역을 갖는 항체는 동일한 가변 영역을 갖지만 비-IgG2 힌지 또는 CH1을 수반한 항체와 비교해서, 예를 들어 IgG1 힌지 또는 IgG1 힌지 및 IgG1 CH1을 갖는 항체와 비교해서 더 우수하고 더 신속하게 내재화된다. 예를 들어, 11F11 항체의 가변 영역을 포함하고 IgG2 힌지 및 임의로 IgG2 CH1 및 IgG1 CH2 및 IgG1 CH3 도메인을 포함하는 항체는 이펙터 기능을 수반하는지 아닌지에 관계없이, IgG1 힌지 또는 IgG1 힌지 및 IgG1 CH1 도메인을 수반하는 것을 제외하고는 동일한 항체와 비교해서, 세포 막 상의 CD73에 대한 결합시 세포 내로 보다 효율적으로 내재화된다. 본원에 추가로 제시된 바와 같이, IgG2 힌지를 갖고 나머지가 IgG1 이소형의 것인 CD73 항체는, 힌지가 IgG1 이소형의 것인 동일한 항체보다 더 효율적으로 내재화된다. IgG2 힌지 이외에도, IgG2 CH1 도메인을 갖는 항체는, CH1 도메인이 IgG1 CH1 도메인인 동일한 항체보다 훨씬 더 효율적으로 내재화된다. 본원에 추가로 제시된 바와 같이, IgG2 힌지 및 임의로 IgG2 CH1을 수반한 항-CD73 항체는 또한, IgG1 힌지 또는 IgG1 힌지 및 IgG1 CH1을 갖는 항체보다 더 큰 항체/항원 복합체를 형성한다. 증가된 내재화는 증가된 항체/항원 복합체 크기와 상관이 있는 것으로 여겨진다. 본 실시예에 추가로 기재되는 바와 같이, 증강된 내재화는 항체의 더 높거나 더 낮은 친화도와 연관이 있는 것으로 여겨지지 않는다. 따라서, 본원에는 항체 매개된 CD73 내재화를 매개하는 변형된 중쇄 불변 영역을 갖는 항-CD73 항체가 제공되는데, 여기서 이러한 변형된 중쇄 불변 영역을 수반한 항체는, 상이한 중쇄 불변 영역을 수반한 것을 제외하고는 동일한 항체와 유사한 친화도로 CD73과 결합한다.
특정 실시양태에서, CD73 항체는 IgG2 이소형의 힌지 ("IgG2 힌지") 및 CH1, CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 IgG2 힌지 및 CH1, CH2 및 CH3 도메인을 포함하는데, 여기서 CH1, CH2 및 CH3 도메인 중 적어도 하나는 IgG2 이소형의 것이 아니다. 특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 IgG2 이소형의 힌지, IgG2 이소형의 CH1을 포함하는데, 여기서 CH2 및 CH3 도메인 중 적어도 하나는 IgG2 이소형의 것이 아니다. IgG2 힌지는 야생형 IgG2 힌지, 예를 들어, 야생형 인간 IgG2 힌지 (예를 들어, 서열식별번호: 136을 갖는다) 또는 그의 변이체일 수 있는데, 단 이러한 IgG2 힌지는 비-IgG2 힌지 및 임의로 비-IgG2 CH1 도메인을 포함하는 동일한 항체와 비교해서 증강된 활성 (예를 들어, 특정 세포에 의한 증가된 내재화; 효소 활성의 증강된 억제; 증가된 길항제 또는 차단 활성; 항체/항원 가교 결합된 큰 복합체를 형성할 수 있는 능력; 면역 반응을 자극 또는 증강시킬 수 있는 증가된 능력; 및/또는 증가된 항증식 또는 항종양 효과)을 항체에 부여할 수 있는 능력을 보유해야 한다. 특정 실시양태에서, IgG2 힌지 변이체는 야생형 IgG2 힌지와 유사한 강직도 또는 강성도를 보유하고 있다. 힌지 또는 항체의 강직도는, 예를 들어 컴퓨터 모델링, 전자 현미경검사법, 분광분석법, 예컨대 핵 자기 공명 (NMR), X선 결정학 (B-인자), 또는 힌지를 포함하는 항체의 회전 반경을 측정 또는 비교하기 위한 침강 속도 분석 초원심분리 (AUC)에 의해 결정될 수 있다. 힌지를 포함하는 항체가 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 또는 100% 미만에서, 상이한 힌지, 예를 들어, IgG1 힌지를 수반한 동일한 항체의 값과 상이한, 이전 문장에 기재된 시험 중 하나로부터 수득된 값을 갖는 경우에, 이러한 힌지 또는 항체는 또 다른 힌지와 비교해서 더 높거나 유사한 강직도를 가질 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이들 시험 결과를 해석함으로써, 특정 힌지 또는 항체가 또 다른 힌지 또는 항체와 적어도 유사한 강직도를 갖고 있는지의 여부를 상기 시험으로부터 결정할 수 있을 것이다. 예시적인 인간 IgG2 힌지 변이체는 4개의 시스테인 잔기 (즉, C219, C220, C226 및 C229) 중 하나 이상을 또 다른 아미노산으로 치환시킨 것을 포함하는 IgG2 힌지이다. 시스테인이 세린으로 대체될 수 있다. 예시적인 IgG2 힌지는 C219X 돌연변이 또는 C220X 돌연변이를 포함하는 인간 IgG2 힌지인데, 여기서 X는 세린을 제외한 임의의 아미노산이다. 특정 실시양태에서, IgG2 힌지는 C219X 치환과 C220X 치환 둘 다를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, IgG2 힌지는 C219S 또는 C220S를 포함하지만, C219S와 C220S 둘 다를 포함하지는 않는다. 사용될 수 있는 다른 IgG2 힌지 변이체는 C220, C226 및/또는 C229 치환, 예를 들어, C220S, C226S 또는 C229S 돌연변이 (이는 C219S 돌연변이와 조합될 수 있다)를 포함하는 인간 IgG2 힌지를 포함한다. IgG2 힌지는 또한, 힌지의 특정 부분이 또 다른 이소형의 것인 IgG2 힌지일 수 있는데 (즉, 이는 키메라 또는 혼성체 힌지이다), 단 키메라 힌지의 강직도는 야생형 IgG2 힌지의 강직도와 적어도 유사하다. 예를 들어, IgG2 힌지는 하부 힌지 (표 2에 정의된 바와 같음)가 IgG1 이소형의 것이고, 예를 들어, 야생형 IgG1 하부 힌지인 IgG2 힌지일 수 있다.
"혼성체" 또는 "키메라" 힌지는 이러한 힌지의 연속되는 아미노산의 절반 초과가 특이적 이소형으로부터 유래되는 경우에는, 이러한 특이적 이소형의 것으로서 지칭된다. 예를 들어, IgG2의 상부 및 중간 힌지와 IgG1의 하부 힌지를 갖는 힌지가 IgG2 혼성체 힌지인 것으로 간주된다.
특정 실시양태에서, CD73 항체는 다음 힌지 중 하나를 포함하는 IgG2 힌지를 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함한다:
ERKCCVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 348);
ERKSCVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 349);
ERKCSVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 350);
ERKXCVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 351);
ERKCXVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 352);
ERKCCVECPPCPAPPVAGX (서열식별번호: 353);
ERKSCVECPPCPAPPVAGX (서열식별번호: 354);
ERKCSVECPPCPAPPVAGX (서열식별번호: 355);
ERKXCVECPPCPAPPVAGX (서열식별번호: 356);
ERKCXVECPPCPAPPVAGX (서열식별번호: 357);
ERKCCVECPPCPAPELLGG (서열식별번호: 358);
ERKSCVECPPCPAPELLGG (서열식별번호: 359);
ERKCCSVECPPCPAPELLGG (서열식별번호: 360);
ERKXCVECPPCPAPELLGG (서열식별번호: 361);
ERKCXVECPPCPAPELLGG (서열식별번호: 362);
ERKCCVECPPCPAPELLG (서열식별번호: 363);
ERKSCVECPPCPAPELLG (서열식별번호: 364);
ERKCCSVECPPCPAPELLG (서열식별번호: 365);
ERKXCVECPPCPAPELLG (서열식별번호: 366);
ERKCXVECPPCPAPELLG (서열식별번호: 367);
ERKCCVECPPCPAP (서열식별번호: 368);
ERKSCVECPPCPAP (서열식별번호: 369);
ERKCSVECPPCPAP (서열식별번호: 370);
ERKXCVECPPCPAP (서열식별번호: 371); 또는
ERKCXVECPPCPAP (서열식별번호: 372)
(여기서, X는 시스테인을 제외한 임의의 아미노산이다);
또는 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개 또는 1개의 아미노산이 아미노산 잔기 CVE와 CPP 사이에 삽입되는, 상기 서열 중 임의의 것. 특정 실시양태에서, THT 또는 GGG가 삽입된다.
특정 실시양태에서, 힌지는 서열식별번호: 348, 349, 350, 351, 또는 352를 포함하는데, 여기서 1, 2, 3개 또는 4개의 모든 아미노산 P233, V234, A235 및 G237 [C-말단 4개의 아미노산 "PVAG" (서열식별번호: 373)에 상응함]이 결실되거나 또는 또 다른 아미노산, 예를 들어, IgG1 힌지의 C-말단의 아미노산 [ELLG (서열식별번호: 374) 또는 ELLGG (서열식별번호: 375)]으로 치환된다. 특정 실시양태에서, 힌지는 서열식별번호: 348, 349, 350, 351, 또는 352를 포함하는데, 여기서 V234, A235 및 G237이 결실되거나 또는 또 다른 아미노산으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 힌지는 서열식별번호: 348, 349, 350, 351, 또는 352를 포함하는데, 여기서 A235 및 G237이 결실되거나 또는 또 다른 아미노산으로 치환된다. 특정 실시양태에서, 힌지는 서열식별번호: 348, 349, 350, 351, 또는 352를 포함하는데, 여기서 G237이 결실되거나 또는 또 다른 아미노산으로 치환된다. 특정 실시양태에서, 힌지는 서열식별번호: 348, 349, 350, 351, 또는 352를 포함하는데, 여기서 V234 및 A235가 결실되거나 또는 또 다른 아미노산으로 치환된다. IgG2 내의 PVAG (서열식별번호: 373)를 IgG1 힌지의 상응하는 아미노산, 즉 [ELLG (서열식별번호: 374) 또는 ELLGG (서열식별번호: 375)]으로 치환시켜, 예를 들어 상기 제시된 혼성체 힌지를 수득하는 것은 IgG2 힌지의 이점과 IgG1 힌지의 이펙터 기능을 갖는 힌지를 제공한다.
특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 상기 제시된 서열 중 하나, 예를 들어 서열식별번호: 348-372 중 어느 하나로 이루어지거나 또는 본질적으로 이로 이루어지고, 예를 들어 부가의 힌지 아미노산 잔기를 포함하지 않는 힌지를 포함한다.
특정 실시양태에서, 1개 또는 1 내지 2개 또는 1 내지 3개의 아미노산이 힌지와 CH2 도메인 사이에 삽입되는데, 예를 들어, 부가의 글리신이 부가될 수 있다.
특정 실시양태에서 항-CD73 항체는 IgG1 또는 IgG2 불변 영역을 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 여기서 힌지는 1 내지 10개의 아미노산의 결실을 포함한다. 본 실시예에 제시된 바와 같이, 아미노산 잔기 SCDKTHT (S219, C220, D221, K222, T223, H224 및 T225; 서열식별번호: 376)가 결여된 IgG1 항체는 야생형 IgG1 불변 영역을 갖는 동일한 항체보다 더 효과적으로 항체 매개된 CD73 내재화를 부여하였다. 유사하게, IgG2 항체의 맥락에서, 아미노산 잔기 CCVE (C219, C220, V222, 및 E224; 서열식별번호: 377)가 결여된 IgG2 항체는 야생형 IgG1 불변 영역을 갖는 동일한 항체보다 더 효과적으로 항체 매개된 CD73 내재화를 부여하였다. 따라서, 본원에는 힌지가 IgG1 항체의 경우에는 잔기 S219, C220, D221, K222, T223, H224 및 T225로부터 선택되고 IgG2 항체의 경우에는 잔기 C219, C220, V222, 및 E224로부터 선택된, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 아미노산 잔기의 결실을 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역이 제공된다.
특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 IgG1 또는 IgG2 이소형의 야생형 CH1 도메인 (각각 "IgG1 CH1 도메인" 또는 "IgG2 CH1 도메인")인 CH1 도메인을 포함한다. 이소형 IgG3 및 IgG4의 CH1 도메인 (각각 "IgG3 CH1 도메인" 및 "IgG4 CH1 도메인")이 사용될 수도 있다. CH1 도메인은 또한, 야생형 CH1 도메인의 변이체, 예를 들어 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 CH1 도메인의 변이체일 수 있다. CH1 도메인의 예시적인 변이체는 A114C, T173C 및/또는 C131, 예를 들어, C131S를 포함한다.
CH1 도메인, 예를 들어, IgG2 CH1 도메인은 치환 C131S를 포함할 수 있는데, 이러한 치환은 IgG2 항체, 또는 IgG2 CH1 및 힌지를 갖는 항체 상으로 B 형태 (또는 입체 형태)를 부여해준다.
특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 IgG2 이소형의 것인 CH1 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, CH1 도메인은, 예를 들어 아미노산 서열: ASTKGPSVFPLAP C S R STS ES TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS NF GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV (서열식별번호: 378)을 갖는 야생형 IgG2 CH1 도메인이다. 특정 실시양태에서, CH1 도메인은 서열식별번호: 378의 변이체이고, 서열식별번호: 378과 비교해서 1 내지 10개, 1 내지 5개, 1 내지 2개 또는 1개의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다. 본 실시예에 추가로 기재되는 바와 같이, IgG2 CH1 도메인 또는 그의 변이체는 IgG1 항체와 비교해서 증강되거나 또는 변경된 내재화 특성을 항-CD73 항체에 부여해 주고, 항체가 또한 IgG2 힌지를 포함하는 경우에는 훨씬 더 증강되거나 또는 변경된 내재화를 부여해주는 것으로 본원에서 밝혀졌다. 특정 실시양태에서, IgG2 CH1 변이체는 다음 아미노산 잔기: C131, R133, E137 및 S138 중 하나 이상에서 아미노산 치환 또는 결실을 포함하지 않는데, 이러한 아미노산 잔기는 상기 제시된 서열식별번호: 378에 볼드체로 제시되고 밑줄이 그어져 있다. 예를 들어, 변형된 중쇄 불변 영역은 R133, E137 및 S138 중 어느 것도 또 다른 아미노산으로 치환되지 않거나 또는 결실되지 않거나, 또는 C131, R133, E137 및 S138 중 어느 것도 또 다른 아미노산으로 치환되지 않거나 또는 결실되지 않는 IgG2 CH1 도메인을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, C131은 또 다른 아미노산으로 치환되는데 (예를 들어, C131S), 이러한 치환은 항체가 입체 형태 B를 채택하도록 촉발시킨다. 변형된 중쇄 불변 영역을 갖는 입체 형태 A 항체와 입체 형태 B 항체 둘 다는, IgG1 불변 영역을 수반한 동일한 항체와 비교해서 증강된 활성을 갖는 것으로 본원에서 밝혀졌다.
특정 실시양태에서, N192 및/또는 F193 (상기 제시된 서열식별번호: 378에서 이탤릭체로서 제시되고 밑줄친 잔기)는 또 다른 아미노산, 예를 들어, IgG1 내의 상응하는 아미노산으로 치환된다 (즉, N192S 및/또는 F193L).
특정 실시양태에서, IgG2 CH1 도메인의 하나 이상의 아미노산 잔기는 IgG4 내의 상응하는 아미노산 잔기로 치환된다. 예를 들어, N192는 N192S일 수 있고/있거나; F193은 F193L일 수 있고/있거나; C131은 C131K일 수 있고/있거나; T214는 T214R일 수 있다.
항체는 IgG2 CH1 도메인 또는 그의 변이체 및 IgG2 힌지 또는 그의 변이체를 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 이러한 힌지 및 CH1 도메인은 본원에 기재된 임의의 IgG2 힌지와 IgG2 CH1 도메인의 조합물일 수 있다. 특정 실시양태에서, IgG2 CH1 및 힌지는 다음 아미노산 서열 (서열식별번호: 379), 또는 많아 봐야 1 내지 10개의 아미노산에 있어서 그와 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 아미노산 변이체는 상기 힌지 및 CH1 도메인에 대하여 기재된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 항체는 적어도 IgG2 힌지, 및 임의로 또한 IgG2 CH1 도메인, 또는 상기 힌지 및/또는 CH1 도메인의 단편 또는 유도체를 포함하고, 이러한 항체는 형태 (또는 입체 형태) A를 채택하였다 (예를 들어, 문헌 [Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755] 참조). 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 적어도 IgG2 힌지, 및 임의로 또한 IgG2 CH1 도메인, 또는 상기 힌지 및/또는 CH1 도메인의 단편 또는 유도체를 포함하고, 이러한 항체는 형태 B를 채택하였다 (예를 들어, 문헌 [Allen et al. (2009) Biochemistry 48:3755] 참조).
특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소형의 야생형 CH2 도메인 (각각 "IgG1 CH2 도메인", "IgG2 CH2 도메인", "IgG3 CH2 도메인" 또는 "IgG4 CH2 도메인")인 CH2 도메인을 포함한다. CH2 도메인은 또한, 야생형 CH2 도메인의 변이체, 예를 들어 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 CH2 도메인의 변이체일 수 있다. CH2 도메인의 예시적인 변이체는 항체의 Fc 영역의 생물학적 활성, 예컨대 ADCC 또는 CDC를 조정하거나 또는 항체의 반감기 또는 그의 안정성을 조정하는 변이체를 포함한다. 한 실시양태에서, CH2 도메인은 A330S 및 P331S 돌연변이를 수반한 인간 IgG1 CH2 도메인인데, 여기서 이러한 CH2 도메인은 상기 돌연변이를 수반하지 않은 동일한 CH2 도메인과 비교해서 저하된 이펙터 기능을 갖는다. CH2 도메인은 증강된 이펙터 기능을 가질 수 있다. CH2 도메인은 다음 돌연변이: SE (S267E), SELF (S267E/L328F), SDIE (S239D/I332E), SEFF 및 GASDALIE (G236A/S239D/A330L/I332E) 중 하나 이상 및/또는 다음 아미노산: E233, G237, P238, H268, P271, L328 및 A330에서의 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 다른 돌연변이가 본원의 다른 곳에 추가로 제시된다.
특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소형의 야생형 CH3 도메인 (각각 "IgG1 CH3 도메인", "IgG2 CH3 도메인", "IgG3 CH3 도메인" 또는 "IgG4 CH3 도메인")인 CH3 도메인을 포함한다. CH3 도메인은 또한, 야생형 CH3 도메인의 변이체, 예를 들어 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 CH3 도메인의 변이체일 수 있다. CH3 도메인의 예시적인 변이체는 항체의 Fc 영역의 생물학적 활성, 예컨대 ADCC 또는 CDC를 조정하거나 또는 항체의 반감기 또는 그의 안정성을 조정하는 변이체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 IgG2 이소형의 힌지 및 IgG2 이소형의 CH1 영역을 포함한다. 이러한 IgG2 힌지 및 CH1은 야생형 IgG2 힌지 및 CH1 또는 그의 변이체일 수 있는데, 단 이들은 목적하는 생물학적 활성을 가져야 한다. 특정 실시양태에서, 변형된 중쇄 불변 영역은 C219S 돌연변이를 포함하는 IgG2 힌지; 및 야생형일 수 있거나 또는 많아 봐야 1 내지 10개, 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개 또는 1개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있는 IgG2 CH1을 포함한다. 이러한 변형된 중쇄 불변 영역은 야생형 또는 돌연변이된 CH2 및 CH3 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, CD73 항체는 IgG2 CH1 도메인; C219S를 포함할 수 있는 IgG2 힌지; 및 IgG1 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 불변 도메인을 포함할 수 있는데, 여기서 상기 CH2 및 CH3 도메인은 이펙터가 없을 수 있는데, 예컨대 돌연변이 A330S 및 P331S를 포함할 수 있다.
일반적으로, CH1, 힌지, CH2 또는 CH3 도메인의 변이체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과의 돌연변이, 및/또는 많아 봐야 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 돌연변이, 또는 1 내지 10개 또는 1 내지 5개의 돌연변이를 포함할 수 있거나, 또는 상응하는 야생형 도메인 (각각 CH1, 힌지, CH2, 또는 CH3 도메인)과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는데, 단 특이적 변이체를 포함하는 중쇄 불변 영역은 필수 생물학적 활성을 보유하고 있어야 한다.
표 5에는 인간 CH1, 힌지, CH2 및/또는 CH3 도메인을 포함하는 예시적인 인간 중쇄 불변 영역이 제시되는데, 여기서 각 도메인은 중쇄 불변 영역에 목적하는 생물학적 활성을 제공하는 야생형 도메인 또는 그의 변이체이다. 표 5에서 채워지지 않은 낱칸은 그 도메인이 존재하거나 그렇지 않으며, 존재하는 경우에도 임의의 이소형, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 것일 수 있다는 것을 표시한다. 예를 들어, 표 5 내의 중쇄 불변 영역 1을 포함하는 항체는 적어도 IgG2 힌지를 포함하고, 또한 CH1, CH2 및/또는 CH3 도메인을 포함할 수 있는 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체이고, 존재하는 경우 이러한 CH1, CH2 및/또는 CH3 도메인은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소형의 것이다. 표 5를 이해하기 위한 또 다른 예로서, 중쇄 불변 영역 8을 포함하는 항체는 IgG1 CH1 도메인, 및 IgG2 힌지, IgG1 CH2 도메인을 포함하고, CH3 도메인을 포함할 수 있거나 또는 포함하지 않을 수 있는 (이것이 존재하는 경우, 이는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소형의 것일 수 있다) 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체이다.
<표 5>
* 변형된 중쇄 불변 영역
특정 실시양태에서, 표 5에 제시된 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체는 특이적 중쇄 불변 영역을 포함하지 않는 중쇄 불변 영역을 포함하는 동일한 항체와 비교해서 또는 IgG1 불변 영역을 포함하는 동일한 항체와 비교해서 증강된 생물학적 활성을 갖는다.
특정 실시양태에서, 비-IgG2 힌지 및/또는 비-IgG2 CH1 도메인을 포함하는 CD73 항체의 생물학적 활성을 개선시키는 방법은 비-IgG2 힌지 및/또는 비-IgG2 CH1 도메인을 포함하는 항-CD73 항체를 제공하는 단계; 및 이러한 비-IgG2 힌지 및 비-IgG2 CH1 도메인을 각각 IgG2 힌지 및 IgG2 CH1 도메인으로 대체시키는 단계를 포함한다. 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하지 않는 CD73 항체의 생물학적 활성을 개선시키는 방법은 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하지 않는 항-CD73 항체를 제공하는 단계; 및 그의 중쇄 불변 영역을 변형된 중쇄 불변 영역으로 대체시키는 단계를 포함할 수 있다.
항-CD73 가변 영역, 예를 들어, 본원에 기재된 것과 연결될 수 있는 예시적인 변형된 중쇄 불변 영역이 표 6에 제공되는데, 이에는 각각의 도메인의 실체가 제시된다.
<표 6>
특정 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 123, 136, 178, 179, 또는 348-372 또는 그의 변이체를 포함하는 IgG2 힌지, 예컨대 (i) 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 123, 136, 178, 179, 또는 348-372와 상이한 아미노산 서열; (ii) 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 123, 136, 178, 179, 또는 348-372와 상이한 아미노산 서열; (iii) 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개, 2 내지 5개 또는 3 내지 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 123, 136, 178, 179, 또는 348-372와 상이한 아미노산 서열; 및/또는 (iv) 서열식별번호: 123, 136, 178, 179, 또는 348-372와 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG2 힌지를 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 여기서 (i) 내지 (iv) 중 임의의 것에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있고; 변형된 중쇄 불변 영역은 또 다른 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 비-IgG2 힌지를 포함하는 중쇄 불변 영역과 비교해서 또는 비-IgG2 힌지를 포함하는 동일한 변형된 중쇄 불변 영역과 비교해서 증강된 생물학적 활성을 갖는다. 예를 들어, 상기 힌지는 야생형일 수 있거나, 또는 C219S, C220S 또는 C219S 및 C220S 치환을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 98을 포함하는 IgG1 CH1 도메인 또는 서열식별번호: 124를 포함하는 IgG2 CH1 도메인, 또는 서열식별번호: 98 또는 124의 변이체를 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 이러한 변이체는 (i) 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 98 또는 124와 상이하고/하거나; (ii) 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 98 또는 124와 상이하고/하거나; (iii) 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개, 2 내지 5개 또는 3 내지 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 98 또는 124와 상이하고/하거나; (iv) 서열식별번호: 98 또는 124와 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는데, 여기서 (i) 내지 (iv) 중 임의의 것에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있고; 변형된 중쇄 불변 영역은 또 다른 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 비-IgG2 힌지 또는 비-IgG2 힌지 및 CH1 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역과 비교해서 또는 비-IgG2 힌지 또는 비-IgG2 힌지 및 CH1 도메인을 포함하는 동일한 변형된 중쇄 불변 영역과 비교해서 증강된 생물학적 활성을 갖는다. IgG2 CH1 도메인은 IgG2 힌지 및 CH1 함유 항체가 A 또는 B 형태를 채택하도록 유발시키는 C131S 또는 다른 돌연변이를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 137 또는 125, 또는 서열식별번호: 137 또는 125의 변이체를 포함하는 IgG1 CH2 도메인을 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 이러한 변이체는 (i) 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 137 또는 125와 상이하고/하거나; (ii) 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 137 또는 125와 상이하고/하거나; (iii) 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개, 2 내지 5개 또는 3 내지 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 137 또는 125와 상이하고/하거나; (iv) 서열식별번호: 137 또는 125와 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는데, 여기서 (i) 내지 (iv) 중 임의의 것에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있고; 변형된 중쇄 불변 영역은 또 다른 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 비-IgG2 힌지를 포함하는 중쇄 불변 영역과 비교해서 또는 비-IgG2 힌지를 포함하는 동일한 변형된 중쇄 불변 영역과 비교해서 증강된 생물학적 활성을 갖는다.
특정 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 138, 또는 서열식별번호: 138의 변이체를 포함하는 IgG1 CH3 도메인을 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 이러한 변이체는 (i) 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 138과 상이하고/하거나; (ii) 많아 봐야 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 138과 상이하고/하거나; (iii) 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개, 2 내지 5개 또는 3 내지 5개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 138과 상이하고/하거나; (iv) 서열식별번호: 138과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는데, 여기서 (i) 내지 (iv) 중 임의의 것에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있고; 변형된 중쇄 불변 영역은 또 다른 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 비-IgG2 힌지를 포함하는 중쇄 불변 영역과 비교해서 또는 비-IgG2 힌지를 포함하는 동일한 변형된 중쇄 불변 영역과 비교해서 증강된 생물학적 활성을 갖는다.
변형된 중쇄 불변 영역은 또한, 상기 언급된 CH1, 힌지, CH2 및 CH3 도메인의 조합물을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, CD73 항체는 서열식별번호: 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347 중 어느 하나, 또는 서열식별번호: 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347 중 어느 하나의 변이체를 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는데, 이러한 변이체는 (i) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347과 상이하고/하거나; (ii) 많아 봐야 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347과 상이하고/하거나; (iii) 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개, 2 내지 5개, 3 내지 5개, 1 내지 10개, 또는 5 내지 10개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347과 상이하고/하거나; (iv) 서열식별번호: 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347 중 어느 하나와 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는데, 여기서 (i) 내지 (iv) 중 임의의 것에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있고; 변형된 중쇄 불변 영역은 또 다른 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 비-IgG2 힌지 또는 비-IgG2 CH1 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역과 비교해서 또는 비-IgG2 힌지 및/또는 비-IgG2 CH1 도메인을 포함하는 동일한 변형된 중쇄 불변 영역과 비교해서 증강된 생물학적 활성을 갖는다.
변형된 중쇄 불변 영역은 (i) 야생형 중쇄 불변 영역과 비교해서 유사하거나, 저하되거나 또는 증가된 이펙터 기능 (예를 들어, FcγR, 예를 들어, FcγRIIB에 대한 결합성)을 가질 수 있고/있거나 (ii) 야생형 중쇄 불변 영역과 비교해서 유사하거나, 저하되거나 또는 증가된 반감기 (또는 FcRn 수용체에 대한 결합성)을 가질 수 있다.
본원에 기재된 항-CD73 항체의 VH 도메인은 본원에 기재된 중쇄 불변 영역과 연결될 수 있다. 예를 들어, 도 18은 중쇄 불변 영역 IgG2CS-IgG1.1f와 연결된 항체 CD73.4의 아미노산 서열 (서열식별번호: 133 또는 189)을 제시한다. 또한 본원에는 많아 봐야 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1 내지 2개 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f (서열식별번호: 133 또는 189)의 것과 상이하고/하거나 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f (서열식별번호: 133 또는 189)의 중쇄의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체가 포괄된다. 예를 들어, 본원에는 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f (서열식별번호: 133 또는 189)의 중쇄를 포함하는 항체가 포괄되는데, 여기서 C-말단 K 또는 GK 또는 PGK가 결실되거나 또는 존재한다. CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f (서열식별번호: 133 또는 189)의 다른 변이체는 상이한 동종이형의 것인 중쇄를 갖는 것을 포함하고, 여기서 예를 들어, 아미노산 356 및 358이 각각 D 및 L이다. 변이체는 IgG2 힌지에서 돌연변이된 부가의 시스테인, 예를 들어, C220을 갖는 것 (또는 C219S 대신 C220S를 갖는 것), 및 돌연변이 A330S 및/또는 P331S를 갖지 않는 것을 포함한다. CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f (서열식별번호: 133 또는 189)의 변이체는 바람직하게, CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f (서열식별번호: 133 또는 189)와 비교해서 적어도 유사한 생화학적 특성 및/또는 생물학적 활성, 예를 들어, 내재화의 효율, CD73 효소 활성의 억제, 인간 CD73에 대한 친화성, 및 동일하거나 유사한 에피토프에 대한 결합성을 갖는다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 본원에 기재된 불변 영역, 예를 들어 서열식별번호: 126, 127, 129, 130, 162-169, 180-183, 267-282, 및 300-347에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 중 어느 하나를 포함한다.
항-CD73 항체의 경쇄는 서열식별번호: 131, 또는 서열식별번호: 131의 변이체를 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있는데, 이러한 변이체는 (i) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 초과의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 131과 상이하고/하거나; (ii) 많아 봐야 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 131과 상이하고/하거나; (iii) 1 내지 5개, 1 내지 3개, 1 내지 2개, 2 내지 5개, 3 내지 5개, 1 내지 10개, 또는 5 내지 10개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 서열식별번호: 131과 상이하고/하거나; (iv) 서열식별번호: 131과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는데, 여기서 (i) 내지 (iv) 중 임의의 것에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있다. 예시적인 CL 돌연변이는 C124S를 포함한다.
본원에 상세된 바와 같이, 표 35에 제시된 중쇄 또는 경쇄 (또는 그의 가변 영역) 중 임의의 것과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75% 또는 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄가 목적하는 특징, 예를 들어 본원에 추가로 기재된 특징을 갖는 항-인간 CD73 항체를 형성하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 변이체는, 예를 들어 불변 도메인 내에 동종이인자형 변이를 포함하는 것이다. 본원에 기재된 바와 같이, 표 35에 제시된 중쇄 또는 경쇄 (또는 그의 가변 영역) 중 임의의 것과, 많아 봐야 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1 내지 2개 또는 1개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실에 있어서 상이한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄가 목적하는 특징, 예를 들어 본원에 추가로 기재된 특징을 갖는 항-인간 CD73 항체를 형성하기 위해 사용될 수 있다.
각종 실시양태에서, 상기 언급된 항체는 표 3에 열거된 기능적 특성 중 하나 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 또는 모두를 나타낸다.
이러한 항체는, 예를 들어, 인간 항체, 인간화 항체, 또는 키메라 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 글리코실화 (예를 들어, N-연결된 또는 O-연결된 글리코실화) 인간 CD73과 비글리코실화 인간 CD73 둘 다와 결합한다. 특정의 항-CD73 항체는 글리코실화 CD73과는 결합할 수 있지만, 비글리코실화 CD73과는 결합하지 않을 수 있거나 또는 비글리코실화 CD73과는 결합할 수 있지만, 글리코실화 CD73과는 결합하지 않을 수 있다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 입체 형태적 에피토프와 결합한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는, 예를 들어, HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73 (서열식별번호: 1 또는 2)의 아미노산 잔기 65-83에 상응하는, 인간 CD73의 다음 영역 내의 아미노산 잔기:
FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96)와 결합한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는, 예를 들어, HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73 (서열식별번호: 1 또는 2)의 아미노산 잔기 65-83에 상응하는, 인간 CD73 내의 다음 아미노산 잔기: FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96)의 전부 또는 부분과 결합한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는, 예를 들어, HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73 (서열식별번호: 1 또는 2)의 아미노산 잔기 157-172에 상응하는, 인간 CD73의 다음 영역 내의 아미노산 잔기:
LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)와 결합한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는, 예를 들어, HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73 (서열식별번호: 1 또는 2)의 아미노산 잔기 157-172에 상응하는, 인간 CD73 내의 다음 아미노산 잔기: LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)의 전부 또는 부분과 결합한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 인간 CD73 (서열식별번호: 1 또는 2)의 다음 영역 내의 불연속 아미노산 잔기:
FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)와 결합한다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는, 예를 들어, HDX-MS에 의해 결정된 바와 같이, 인간 CD73 (서열식별번호: 1 또는 2)의 아미노산 잔기 65-83 및 157-172에 상응하는, 인간 CD73 (서열식별번호: 1 또는 2)의 다음 영역 내의 불연속 아미노산 잔기의 전부 또는 부분과 결합한다: FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97).
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 X선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, 표 30에 제시된 것에 상응하는 인간 CD73과 상호 작용한다. 항체는 표 30에 제시되는 인간 CD73과의 상호 작용의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%를 공유할 수 있다.
III. 특별한 생식세포 계열 서열을 갖는 항체
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 특별한 생식세포 계열 중쇄 면역글로불린 유전자로부터의 중쇄 가변 영역 및/또는 특별한 생식세포 계열 경쇄 면역글로불린 유전자로부터의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본원에서 입증된 바와 같이, 인간 생식세포 계열 VH 3-33 유전자, VH 3-10 유전자, VH 3-15 유전자, VH 3-16, JH6b 유전자, VH 6-19 유전자, VH 4-34 유전자, 및/또는 JH3b 유전자의 생성물이거나 또는 이로부터 유래되는 중쇄 가변 영역을 포함하는, CD73에 대해 특이적인 인간 항체가 제조되었다. 따라서, 본원에는 VH 3-33, VH 3-10, VH 3-15, VH 3-16, VH 6-19, 및 VH 4-34로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 VH 생식세포 계열 유전자의 생성물이거나 또는 이로부터 유래되는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 CD73에 대해 특이적인 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공된다.
인간 생식세포 계열 VK L6 유전자, VK L18 유전자, VK L15 유전자, VK L20 유전자, VK A27 유전자, JK5 유전자, JK4 유전자, JK2 유전자, 및 JK1 유전자의 생성물이거나 또는 이로부터 유래되는 경쇄 가변 영역을 포함하는, CD73에 대해 특이적인 인간 항체가 제조되었다. 따라서, 본원에는 VK L6, VK L18, VK L15, VK L20, 및 VK A27로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 VK 생식세포 계열 유전자의 생성물이거나 또는 이로부터 유래되는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 CD73에 대해 특이적인 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공된다.
본원에 기재된 바람직한 항체는 상기 열거된 인간 생식세포 계열 VH 유전자 중 하나의 생성물이거나 또는 이로부터 유래되는 중쇄 가변 영역을 포함하고; 또한 상기 열거된 인간 생식세포 계열 VK 유전자 중 하나의 생성물이거나 또는 이로부터 유래되는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것이다.
본원에 사용된 바와 같은, 항체의 가변 영역이 인간 생식세포 계열 면역글로불린 유전자를 이용하는 시스템으로부터 수득되는 경우, 인간 항체는 특별한 생식세포 계열 서열의 "생성물"이거나 또는 "이로부터 유래되는" 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 이러한 시스템은 인간 면역글로불린 유전자를 수반하는 트랜스제닉 마우스를 관심 항원으로 면역시키거나 또는 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리를 관심 항원으로 스크리닝하는 것을 포함한다. 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열의 "생성물"이거나 또는 "이로부터 유래되는" 인간 항체는, 인간 항체의 아미노산 서열을 인간 생식세포 계열 면역글로불린의 아미노산 서열과 비교하고; 서열 상 인간 항체의 서열과 가장 근접한 (즉, 가장 큰 % 동일성) 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열을 선택함으로써 그 자체로 확인할 수 있다. 특별한 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열의 "생성물"이거나 또는 "이로부터 유래되는" 인간 항체는, 예를 들어 자연 발생적 체세포 돌연변이 또는 부위 지정 돌연변이의 의도적인 도입으로 인해, 생식세포 계열 서열과 비교해서 아미노산 차이를 함유할 수 있다. 그러나, 선택된 인간 항체는 전형적으로, 인간 생식세포 계열 면역글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열과 아미노산 서열 상 적어도 90% 동일하고; 다른 종의 생식세포 계열 면역글로불린 아미노산 서열 (예를 들어, 뮤린 생식세포 계열 서열)과 비교한 경우에, 인간 항체를 인간으로서 확인하는 아미노산 잔기를 함유한다. 특정의 경우에, 인간 항체는 생식세포 계열 면역글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열과 아미노산 서열상 적어도 95%, 또는 심지어 적어도 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일할 수 있다. 전형적으로, 특별한 인간 생식세포 계열 서열로부터 유래된 인간 항체는 인간 생식세포 계열 면역글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열과 10개 이하의 아미노산 차이를 디스플레이할 것이다. 특정의 경우에, 상기 인간 항체는 생식세포 계열 면역글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열과 5개 이하, 또는 심지어 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 아미노산 차이를 디스플레이할 수 있다.
IV. 상동 항체
본원에는 본원에 기재된 바람직한 항체의 아미노산 서열과 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 항체가 포괄되는데, 여기서 이러한 항체는 본원에 기재된 항-CD73 항체의 목적하는 기능적 특성을 보유하고 있다.
예를 들어, 단리된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있는데, 여기서:
(a) 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 및 170-177로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 서열식별번호: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 및 170-177로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교해서, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개, 1 내지 5개, 1 내지 10개, 1 내지 15개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 또는 1 내지 50개의 아미노산 변화 (즉, 아미노산 치환, 부가 또는 결실)를 각각 포함하고;
(b) 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92, 및 138로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 서열식별번호: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92, 및 238로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교해서, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개, 1 내지 5개, 1 내지 10개, 1 내지 15개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 또는 1 내지 50개의 아미노산 변화 (즉, 아미노산 치환, 부가 또는 결실)를 각각 포함하며;
(c) 상기 항체는 CD73과 특이적으로 결합하고;
(d) 상기 항체는 표 3에 열거된 기능적 특성 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 또는 전부를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 상기 논의된 [즉, (a)-(d)] % 동일성 및/또는 아미노산 변화 및 기능을 수반한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서 중쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 상기 논의된 [즉, (a)-(d)] % 동일성 및/또는 아미노산 변화 및 기능을 수반한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서 경쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95, 및 241로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93, 및 239로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94, 및 240으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 상기 논의된 [즉, (a)-(d)] % 동일성 및/또는 아미노산 변화 및 기능을 수반한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서 중쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95, 및 241로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93, 및 239로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94, 및 240으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
각종 실시양태에서, 항체는, 예를 들어, 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다.
단리된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함할 수 있는데, 여기서:
(a) 중쇄는 서열식별번호: 100, 103, 107, 109, 112, 114, 116, 119, 121, 133, 184-210으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 서열식별번호: 100, 103, 107, 109, 112, 114, 116, 119, 121, 133, 184-210으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교해서, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개, 1 내지 5개, 1 내지 10개, 1 내지 15개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 또는 1 내지 50개의 아미노산 변화 (즉, 아미노산 치환, 부가 또는 결실)를 포함하고;
(b) 경쇄는 서열식별번호: 101, 102, 104, 105, 106, 108, 110, 111, 113, 115, 117, 118, 120 및 122로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 서열식별번호: 101, 102, 104, 105, 106, 108, 110, 111, 113, 115, 117, 118, 120 및 122로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교해서, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개, 1 내지 5개, 1 내지 10개, 1 내지 15개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 또는 1 내지 50개의 아미노산 변화 (즉, 아미노산 치환, 부가 또는 결실)를 포함하며;
(c) 상기 항체는 CD73과 특이적으로 결합하고;
(d) 상기 항체는 표 3에 열거된 기능적 특성 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 또는 전부를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 상기 논의된 [즉, (a)-(d)] % 동일성 및/또는 아미노산 변화 및 기능을 수반한 중쇄 및 경쇄를 포함하는데, 여기서 중쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 상기 논의된 [즉, (a)-(d)] % 동일성 및/또는 아미노산 변화 및 기능을 수반한 중쇄 및 경쇄를 포함하는데, 여기서 경쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95, 및 241로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93, 및 239로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94, 및 240으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 상기 논의된 [즉, (a)-(d)] % 동일성 및/또는 아미노산 변화 및 기능을 수반한 중쇄 및 경쇄를 포함하는데, 여기서 중쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 중쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역의 CDR3은 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 95, 및 241로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR1은 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 93, 및 239로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며, 임의로 경쇄 가변 영역의 CDR2는 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 94, 및 240으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개, 또는 1 내지 5개의 아미노산 변화 (즉, 아미노산 치환, 부가 또는 결실)에 있어서 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11의 상응하는 CDR과 상이한 VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VLCDR1, VLCDR2, 및/또는 VLCDR3을 포함하는 항-CD73 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 11F11, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11 내의 상응하는 서열과 비교해서, CDR 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 각각에서 1 내지 5개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11 내에서의 CDR과 비교해서 모든 CDR 전반에 걸쳐 총 1 내지 5개의 아미노산 변화를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 CD73.4-1 또는 CD73.4-2의 것으로 이루어진 VH 및 VL CDR을 포함하는데, 여기서 하나 이상의 CDR 내의 아미노산 중 하나 이상은 본원에 개시된 다른 항-CD73 항체 중 하나의 것이다.
항-CD73 항체의 가변 영역 서열 내에서 이루어질 수 있는 돌연변이 (예를 들어, 치환, 부가, 결실)는 다음을 근거로 하여 결정될 수 있다: (i) 본 실시예에 기재된 바와 같이, 항체 내로 도입된 돌연변이; 및 (ii) 본원에 기재된 항-CD73 항체의 가변 도메인 내의 각 위치에서 아미노산 잔기의 비교 (표 35 및 도 35 참조): 항-CD73 항체 내의 특정의 위치에서 상이한 아미노산은, 이러한 위치에서의 아미노산 잔기가 항체의 활성에 상당한 영향을 미치지 않으면서 또 다른 아미노산 잔기로 변화될 수 있다는 것을 표시할 수 있는 반면; 동일한 아미노산 잔기가 여러 개의 또는 모든 항-CD73 항체에서 동일한 위치에서 발견되는 경우에는, 이러한 특별한 아미노산이 보존되어야 하고 또 다른 잔기로 변화되지 않아야 한다는 것을 표시할 수 있다. 예시적인 실시양태가 다음에 제공된다.
특정 실시양태에서, 프레임워크 치환이 본원에 기재된 항-CD73 항체의 중쇄 가변 영역의 위치 25 (11F11 내의 …RLSCA T SGFTF…)에 도입될 수 있다 (예를 들어, 보존적 치환, 예를 들어, S 또는 A로의 치환). 예를 들어, 이러한 위치에서의 아미노산이 T인 경우, A 또는 S로의 치환이 도입될 수 있고; 이러한 위치에서의 아미노산이 A인 경우, S 또는 T로의 치환이 도입될 수 있으며; 이러한 위치에서의 아미노산이 S인 경우, T 또는 A로의 치환이 도입될 수 있다. 항체 24H2, 4D4, 10D2, 6E11, 7A11, 11A6, 및 4C3은 이러한 위치에 A를 가지고, 11F11은 이러한 위치에 T를 가지며, 73.5, 73.7, 및 73.9는 이러한 위치에 S를 갖는다.
유사하게, 특정 실시양태에서, 프레임워크 치환이 중쇄 가변 영역의 아미노산 위치 94 (11F11 내의 …AEDTA V YYCAR…)에 도입될 수 있다 (예를 들어, V에서 L로 또는 L에서 V로 치환된다). 예를 들어, 항체 11F11, 73.3-73.10, 24H2, 4D4, 5F8, 및 10D2는 이러한 위치에 V를 가지며, 6E11, 7A11, 11A6, 및 4C3은 이러한 위치에 L을 갖는다.
특정 실시양태에서, 아미노산 치환은 본원에 개시된 항-CD73 항체의 중쇄 가변 영역 CDR2에 대해 이루어질 수 있다. 예를 들어, 위치 52에서의 아미노산 (11F11 내의 …WVAVI L YDGSN…)은 W로 치환될 수 있거나, 또는 이러한 위치에서의 아미노산이 W인 경우에는, 그 아미노산이 L로 치환될 수 있다 (항체 11F11 및 73.4-73.7은 이러한 위치에 L을 가지며, 항체 73.8-73.10, 24H2, 및 4D4는 이러한 위치에 W를 갖는다).
유사하게, 특정 실시양태에서, 위치 54에서의 아미노산 (11F11 내의 …VILYD G SNKYY…)은 S 또는 E로 치환될 수 있거나, 또는 이러한 위치에서의 아미노산이 S인 경우에는, 그 아미노산이 E로 치환될 수 있다. 항체 11F11, 73.4, 73.5, 24H2, 10D2, 및 5F8은 이러한 위치에 G를 가지며, 항체 73.6-73.9, 6E11, 7A11, 4C3, 및 73.3는 이러한 위치에 S를 가지며, 항체 73.10 및 4D4는 이러한 위치에 E를 갖는다.
가변 영역 내의 다른 허용 가능한 치환은 상기 언급된 바와 유사한 이론적 근거를 이용하여 도 35 내의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열의 정렬에 근거하여 결정될 수 있다.
CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10, CD73.11, 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11 및/또는 7A11의 것과 상동성을 수반한 서열을 갖는, 예를 들어 서열식별번호: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 170-177, 및 서열식별번호: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 92 각각의 VH 및 VL 영역을 갖거나, 또는 서열식별번호: 100, 103, 107, 109, 112, 114, 116, 119, 121, 133, 및 184-210, 및 서열식별번호: 101, 102, 104, 105, 106, 108, 110, 111, 113, 115, 117, 118, 120 및 122 각각의 중쇄 및 경쇄, 또는 CDR을 갖는 항체는, 핵산 분자, 예를 들어, 서열식별번호: 139, 142, 146, 148, 151, 153, 155, 158, 160, 237 및/또는 서열식별번호: 140, 141, 143, 144, 145, 147, 149, 150, 152, 154, 156, 157, 159, 161 또는 서열식별번호: 134, 243, 246, 250, 252, 255, 257, 259, 262, 264, 및/또는 서열식별번호: 244, 245, 247, 248, 249, 251, 253, 254, 256, 258, 260, 261, 263, 265, 266을 돌연변이유발 (예를 들어, 부위 지정 또는 PCR-매개된 돌연변이유발)시킴으로써 수득한 다음, 본원에 기재된 기능적 검정을 이용하여 보유된 기능에 관하여 알아보기 위하여 상기 코딩되고 변경된 항체를 시험할 수 있다.
V. 보존적 변형을 수반한 항체
항-CD73 항체는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있는데, 여기서 이들 CDR 서열 중 하나 이상은 본원에 기재된 바람직한 항체, 예를 들어, CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11, 또는 그의 보존적 변형에 근거하여 명시된 아미노산 서열을 포함하는데, 상기 항체는 본원에 기재된 항-CD73 항체의 목적하는 기능적 특성을 보유하고 있다. 따라서, 단리된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있는데, 여기서:
(a) 중쇄 가변 영역 CDR3 서열은 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및 그의 보존적 변형, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고;
(b) 경쇄 가변 영역 CDR3 서열은 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 및 95의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및 그의 보존적 변형, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하며;
(c) 상기 항체는 CD73과 특이적으로 결합하고;
(d) 상기 항체는 표 3에 열거된 기능적 특성 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 또는 전부를 나타낸다.
바람직한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 CDR2 서열은 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및 그의 보존적 변형, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고; 경쇄 가변 영역 CDR2 서열은 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 및 94의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및 그의 보존적 변형, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 CDR1 서열은 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및 그의 보존적 변형, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고; 경쇄 가변 영역 CDR1 서열은 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 및 93의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및 그의 보존적 변형, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
각종 실시양태에서, 항체는, 예를 들어, 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다.
보존적 아미노산 치환은 또한, CDR 이외의, 또는 CDR에 덧붙여, 상기 항체의 여러 부분에서 이루어질 수 있다. 예를 들어, 보존적 아미노산 변형은 프레임워크 영역 또는 불변 영역, 예를 들어, Fc 영역에서 이루어질 수 있다. 본원에 기재된 치환 중 임의의 것이 보존적 치환일 수 있다. 가변 영역 또는 중쇄 또는 경쇄는 본원에 제공된 항-CD73 항체 서열과 비교해서, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2개, 1 내지 3개, 1 내지 4개, 1 내지 5개, 1 내지 10개, 1 내지 15개, 1 내지 20개, 1 내지 25개, 또는 1 내지 50개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 보존적 아미노산 변형과 비-보존적 아미노산 변형의 조합을 포함한다.
VI. 본원에 기재된 항체와 동일한, CD73 상의 에피토프와 결합하거나 또는 CD73과의 결합을 놓고 본원에 기재된 항체와 경쟁하는 항체
또한, CD73과의 결합을 놓고 본원에 기재된 특별한 항-CD73 항체 (예를 들어, 항체 CD73.4, CD73.3, 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11 및 7A11)와 경쟁하는 항체가 제공된다. 이러한 경쟁하는 항체는 표준 CD73 결합 검정에서 CD73에 대한 모노클로날 항체 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11, 7A11 및/또는 CD73.3 또는 CD73.4 (이들 항체에 대하여 본원에 기재된 임의의 불변 영역 및 경쇄를 수반함) 중 하나 이상의 결합을 경쟁적으로 억제할 수 있는 그들의 능력에 근거하여 확인할 수 있다. 예를 들어, 재조합 인간 CD73 단백질을 플레이트 상에 고정화시키고, 각종 농도의 표지되지 않은 제1 항체를 부가하며, 상기 플레이트를 세척하고, 표지된 제2 항체를 부가하며, 세척하고, 결합된 표지의 양을 측정하는 표준 ELISA 검정 또는 경쟁적 ELISA 검정을 이용할 수 있다. 증가 농도의 표지되지 않은 (제1) 항체 ("차단성 항체"로서 지칭되기도 함)가 표지된 (제2) 항체의 결합을 억제하는 경우, 이러한 제1 항체는 플레이트 상의 표적에 대한 제2 항체의 결합을 억제한다고 하거나, 또는 제2 항체의 결합과 경쟁한다고 한다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 비아코어® SPR 분석을 이용하여, 경쟁할 수 있는 항체의 능력을 평가할 수 있다. CD73에 대한 본원에 기재된 항-CD73 항체의 결합을 억제할 수 있는 시험 항체의 능력은, 이러한 시험 항체가 CD73과의 결합을 놓고 상기 항체와 경쟁할 수 있다는 것을 명확히 보여준다.
또한 본원에는, 예를 들어 이전의 단락에 기재된 검정을 이용하는 등의 ELISA 또는 FACS에 의해 측정된 바와 같이, 세포, 예를 들어, 종양 세포 상의 CD73에 대한 본원에 기재된 항-CD73 항체의 결합을, 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 만큼 억제하고/하거나 세포, 예를 들어, 종양 세포 상의 CD73에 대한 그의 결합이 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 만큼 억제되는 항-CD73 항체가 제공된다.
결합을 놓고 본원에 기재된 항-CD73 항체와 경쟁하는 항체는 관련 기술분야에 공지된 방법을 이용함으로써 확인될 수 있다. 예를 들어, 마우스를 본원에 기재된 바와 같은 인간 CD73으로 면역시킬 수 있고, 하이브리도마를 생성시키며, 이로써 생성되는 모노클로날 항체를 대상으로 하여, CD73과의 결합을 놓고 본원에 기재된 항체와 경쟁할 수 있는 능력에 관하여 스크리닝할 수 있다. 마우스는 또한, 항체와 결합하는 에피토프를 함유하는 CD73의 보다 작은 단편으로 면역시킬 수 있다. 이러한 에피토프 또는 에피토프를 포함하는 영역은, 예를 들어 CD73 전역에 걸친 일련의 중복 펩티드와의 결합에 관하여 스크리닝함으로써 확인할 수 있다. 또 다른 한편으론, 문헌 [Jespers et al., Biotechnology 12:899, 1994]의 방법을 이용하여, 동일한 에피토프를 갖는 항체의 선별을 가이드함으로써, 본원에 기재된 항-CD73 항체와 유사한 특성을 가이드할 수 있다. 파지 디스플레이를 이용하여, 먼저, 항-CD73 항체의 중쇄를 (바람직하게 인간) 경쇄의 레퍼토리와 쌍을 형성하여 CD73-결합성 항체를 선별한 다음, 새로운 경쇄를 (바람직하게 인간) 중쇄의 레퍼토리와 쌍을 형성하여, 본원에 기재된 항-CD73 항체와 동일한 에피토프 또는 에피토프 영역을 갖는 (바람직하게 인간) CD73-결합성 항체를 선별한다. 또 다른 한편으론 본원에 기재된 항체의 변이체는 이러한 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 cDNA의 돌연변이유발에 의해 수득될 수 있다.
본원에 기재된 항체를 이용하여 "CD73 상의 동일한 에피토프"와 결합하는 항체를 결정하기 위한 기술은, 예를 들어, 에피토프 맵핑 방법, 예컨대, 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 x선 분석을 포함한다. 다른 방법은 항원 서열 내의 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 상실이 종종 에피토프 성분의 지표로 간주되는, 항원 단편 또는 돌연변이된 항원의 변이물에 대한 항체의 결합을 모니터링한다. 또한, 에피토프 맵핑에 대한 전산 조합 방법을 사용할 수도 있다. 방법은 또한, 조합 파지 디스플레이 펩티드 라이브러리로부터의 특이적 짧은 펩티드 (천연 3차원 형태 또는 변성 형태)를 친화성 단리시킬 수 있는 관심 항체의 능력에 좌우될 수 있다. 이어서, 상기 펩티드는 펩티드 라이브러리를 스크리닝하기 위해 사용된 항체에 상응하는 에피토프의 정의를 위한 리드로서 간주된다. 에피토프 맵핑을 위해, 입체 형태적 불연속 에피토프를 맵핑하는 것으로 밝혀진 전산 알고리즘이 또한 개발되었다.
문헌 [Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085]에 기재된 바와 같은, CD73 내의 아미노산 잔기의 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 일부 다른 형태의 점 돌연변이유발을 또한 이용하여 항-CD73 항체에 대한 기능적 에피토프를 결정할 수 있다. 그러나, 돌연변이유발 연구는 CD73의 전반적인 3차원 구조에 중요하지만 항체-항원 접촉에 직접 관여하지 않는 아미노산 잔기를 드러낼 수 있으므로, 이러한 방법을 사용하여 결정된 기능적 에피토프를 확증하는 데에는 다른 방법이 필요할 수 있다.
특이적 항체에 의해 결합된 에피토프 또는 에피토프 영역 ("에피토프 영역"은 에피토프를 포함하거나 또는 에피토프와 중복되는 영역이다)은 또한, CD73의 단편, 예를 들어 비-변성되거나 또는 변성된 단편을 포함하는 펩티드에 대한 항체의 결합을 평가함으로써 결정될 수 있다. CD73 (예를 들어, 인간 CD73)의 서열을 포괄하는 일련의 중복 펩티드를 합성할 수 있고, 이를 대상으로 하여, 예를 들어 직접 ELISA, 경쟁적 ELISA (여기서는 미세역가 플레이트의 웰에 결합된 CD73에 대한 항체의 결합을 방지할 수 있는 능력을 알아보기 위하여 상기 펩티드를 평가한다)에서의 결합, 또는 칩 상에서의 결합에 관하여 스크리닝할 수 있다. 이러한 펩티드 스크리닝 방법으로는, 일부 불연속 기능적 에피토프, 즉 CD73 폴리펩티드 쇄의 주요 서열을 따라 연속적이지 않는 아미노산 잔기를 포함하는 기능적 에피토프를 검출할 수 없다.
에피토프는 또한, MS-기반 단백질 풋프린팅(footprinting), 예컨대 수소/중수소 교환 질량 분광분석법 (HDX-MS) 및 단백질의 신속한 광화학적 산화 (FPOP)에 의해 확인될 수 있다. HDX-MS는, 예를 들어 본 실시예 및 문헌 [Wei et al. (2014) Drug Discovery Today 19:95; 그의 방법이 구체적으로 본원에 참조로 포함된다]에 추가로 기재되는 바와 같이 수행될 수 있다. FPOP는, 예를 들어 문헌 [Hambley and Gross (2005) J. American Soc. Mass Spectrometry 16:2057; 그의 방법이 구체적으로 본원에 참조로 포함된다]에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다.
항-CD73 항체에 의해 결합된 에피토프는 또한, 구조적 방법, 예컨대 X-선 결정 구조 결정 (예를 들어, WO2005/044853), 분자 모델링 및 핵 자기 공명 (NMR) 분광법 [유리될 때 및 관심 항체와 복합체를 형성하여 결합될 때, CD73 내의 불안정한 아미드 수소의 H-D 교환률의 NMR 결정을 포함함]에 의해 결정될 수 있다 (Zinn-Justin et al. (1992) Biochemistry 31, 11335-11347; Zinn-Justin et al. (1993) Biochemistry 32, 6884-6891).
X-선 결정학과 관련하여, 결정화는 마이크로배치(microbatch) (예를 들어, 문헌 [Chayen (1997) Structure 5:1269-1274]), 정체 적제 증기 확산 (예를 들어, 문헌 [McPherson (1976) J. Biol. Chem. 251:6300-6303]), 시딩 및 투석을 포함한, 관련 기술분야에 공지된 방법 중 임의의 것을 이용하여 달성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Giege et al. (1994) Acta Crystallogr. D50:339-350; McPherson (1990) Eur. J. Biochem. 189:1-23]). 적어도 약 1 mg/mL 및 바람직하게 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL의 농도를 갖는 단백질 제제를 사용하는 것이 바람직하다. 결정화는 폴리에틸렌 글리콜 1,000-20,000 (PEG; 약 1,000 내지 약 20,000 Da의 범위, 바람직하게 약 5,000 내지 약 7,000 Da, 보다 바람직하게 약 6,000 Da의 평균 분자량)을 약 10% 내지 약 30% (w/v)의 범위의 농도로 함유하는 침전제 용액에서 가장 잘 달성될 수 있다. 단백질 안정화제, 예를 들어 글리세롤를 약 0.5% 내지 약 20%의 범위의 농도로 포함하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 적합한 염, 예컨대 염화나트륨, 염화리튬 또는 소듐 시트레이트가 바람직하게 약 1 mM 내지 약 1,000 mM의 범위의 농도로 침전제 용액에 존재하는 것이 바람직할 수도 있다. 이러한 침전제는 바람직하게, 약 3.0 내지 약 5.0, 바람직하게 약 4.0의 pH로 완충된다. 침전제 용액에 유용한 특이적 완충제는 다양할 수 있고 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Third ed., (1994) Springer-Verlag, New York). 유용한 완충제의 예는 HEPES, 트리스(Tris), MES 및 아세테이트를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 결정은 2℃, 4℃, 8℃ 및 26℃를 포함한 광범위한 온도에서 성장될 수 있다.
항체:항원 결정은 널리 공지된 X-선 회절 기술을 이용하여 연구할 수 있고, 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 X-PLOR (예일 대학, 1992; 몰레쿨라 시뮬레이션, 인크.(Molecular Simulations, Inc.)에 의해 배포됨; 예를 들어, 문헌 [Blundell & Johnson (1985) Meth. Enzymol. 114 & 115, H. W. Wyckoff et al., eds., Academic Press]; 미국 특허 출원 공개 번호 2004/0014194 참조), 및 BUSTER (문헌 [Bricogne (1993) Acta Cryst. D49:37-60; Bricogne (1997) Meth. Enzymol. 276A:361-423, Carter & Sweet, eds.; Roversi et al. (2000) Acta Cryst. D56:1313-1323]; 그의 개시내용의 전문이 본원에 참조로 포함된다)를 이용하여 정제될 수 있다.
항-CD73 항체는 에피토프 맵핑 기술, 예컨대 본원에 기재된 기술에 의해 결정된 바와 같이, 본원에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항-CD73 항체 중 임의의 것과 동일한 에피토프와 결합할 수 있다. 항-CD73 항체는 또한, 인간 CD73과 유사한 상호 작용을 나타낼 수 있는데, 예를 들어 이들은 X-선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, 표 30에 제시된 상호 작용의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 초과를 나타낼 수 있다.
VII. 조작되고 변형된 항체
VH 및 VL 영역
또한 변형된 항체를 조작하기 위하여 출발 물질로서 본원에 개시된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상을 갖는 항체를 이용하여 제조될 수 있는, 조작되고 변형된 항체가 제공되는데, 변형된 항체는 출발 항체로부터 변경된 특성을 가질 수 있다. 항체는 하나 또는 둘 다의 가변 영역 (즉, VH 및/또는 VL) 내의, 예를 들어 하나 이상의 CDR 영역 내의 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 내의 하나 이상의 잔기를 변형시킴으로써 조작될 수 있다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항체는, 예를 들어 항체의 이펙터 기능(들)을 변경시키기 위하여, 불변 영역(들) 내의 잔기를 변형시킴으로써 조작될 수 있다.
수행될 수 있는 한 가지 유형의 가변 영역 조작은 CDR 이식이다. 항체는 주로, 6개의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역 (CDR)에 위치하는 아미노산 잔기를 통하여 표적 항원과 상호 작용한다. 이러한 이유로 인해, CDR 내의 아미노산 서열은 CDR 외부의 서열보다 개개의 항체들 간에 더 다양하다. CDR 서열이 대부분의 항체-항원 상호 작용에 대해 책임이 있기 때문에, 상이한 특성을 지닌 상이한 항체로부터의 프레임워크 서열 상으로 이식된 특이적 참조 항체로부터의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 구축함으로써 특이적 참조 항체의 특성을 모방하는 재조합 항체를 발현시키는 것이 가능하다 (예를 들어, 문헌 [Riechmann, L. et al. (1998) Nature 332:323-327; Jones, P. et al. (1986) Nature 321:522-525; Queen, C. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86:10029-10033]; 미국 특허 번호 5,225,539 (Winter), 및 미국 특허 번호 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 (Queen et al.) 참조).
따라서, 본원에 기재된 또 다른 실시양태는 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89, 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90, 및 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 및 93, 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 및 94, 및 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 및 95로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분에 관한 것이다. 따라서, 이러한 항체는 모노클로날 항체 CD73.4-1, CD73.4-2, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및 7A11의 VH 및 VL CDR 서열을 함유하지만, 이들 항체와 상이한 프레임워크 서열을 함유할 수 있다.
이러한 프레임워크 서열은 생식세포 계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공개 DNA 데이터베이스 또는 공개된 참조물로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식세포 계열 DNA 서열은 "VBase" 인간 생식세포 계열 서열 데이터베이스 (www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase의 인터넷 상에서 이용 가능함)뿐만 아니라 문헌 [Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al. (1992) "The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops" J. Mol. Biol. 227:776-798; and Cox, J. P. L. et al. (1994) "A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur. J. Immunol. 24:827-836; 각각의 내용이 본원에 명백히 참조로 포함된다]에서 찾을 수 있다.
본원에 기재된 항체에 사용하는 데 바람직한 프레임워크 서열은 본원에 기재된 항체에 의해 사용된 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 것이다. VH CDR1, 2 및 3 서열, 및 VL CDR1, 2 및 3 서열은, 그로부터 프레임워크 서열이 유래되는 생식세포 계열 면역글로불린 유전자에서 발견된 것과 동일한 서열을 갖는 프레임워크 영역 상으로 이식될 수 있거나, 또는 CDR 서열은 생식세포 계열 서열과 비교해서 20개 이하, 바람직하게 보존적, 아미노산 치환을 함유하는 프레임워크 영역 상으로 이식될 수 있다. 예를 들어, 특정의 경우에는 항체의 항원 결합 능력을 유지하거나 또는 증강시키기 위해 프레임워크 영역 내의 잔기를 돌연변이시키는 것이 유익한 것으로 밝혀졌다 [예를 들어, 미국 특허 번호 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 (Queen et al) 참조].
본원에 기재된 조작된 항체는, 예를 들어 항체의 특성을 개선시키기 위하여, VH 및/또는 VL 내의 프레임워크 잔기에 대한 변형이 이루어진 항체를 포함한다. 전형적으로 이러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 저하시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 한 가지 접근 방식은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식세포 계열 서열로 "복귀 돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 진행한 항체는, 그로부터 항체가 유래되는 생식세포 계열 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을, 그로부터 항체가 유래되는 생식세포 계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열이 그의 생식세포 계열 입체 배치로 돌아가기 위해서는, 예를 들어, 부위 지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개된 돌연변이유발에 의해 체세포 돌연변이를 생식세포 계열 서열로 "복귀 돌연변이"시킬 수 있다. 이와 같이 "복귀 돌연변이된" 항체가 또한 포괄되는 것으로 간주된다. 또 다른 유형의 프레임워크 변형은 프레임워크 영역 내의, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T 세포 에피토프를 제거함으로써, 항체의 잠재적 면역원성을 저하시키는 것을 포함한다. 이러한 접근 방식은 "탈면역"으로서 지칭되기도 하고, 미국 특허 공개 번호 20030153043 (Carr et al.)에 추가로 상세히 기재되어 있다.
또 다른 유형의 가변 영역 변형은 관심 항체의 하나 이상의 결합 특성 (예를 들어, 친화성)을 개선시키기 위하여 CDR 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시키는 것이다. 부위 지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개된 돌연변이유발을 수행하여 상기 돌연변이(들)를 도입할 수 있고, 항체 결합에 대한 효과, 또는 다른 관심 기능적 특성을 본원에 기재되고 본 실시예에 제공된 바와 같은 시험관내 또는 생체내 검정에서 평가할 수 있다. 바람직하게 보존적 변형 (상기 논의된 바와 같음)을 도입한다. 돌연변이는 아미노산 부가, 결실, 또는 바람직하게 치환일 수 있다. 더욱이, 전형적으로 CDR 영역 내의 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 잔기가 변경된다.
따라서, 또한 (a) 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89와 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1 영역; (b) 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90과 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2 영역; (c) 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91과 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (d) 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 및 93과 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1 영역; (e) 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 및 94로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 및 94와 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 영역; 및 (f) 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 및 95로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 및 95와 비교해서 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항-CD73 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 제공된다.
항체의 CDR 내의 메티오닌 잔기를 산화시키면, 잠재적으로 화학적 분해가 발생하여 항체의 효력이 저하될 수 있다. 따라서, 또한 중쇄 및/또는 경쇄 CDR 내의 하나 이상의 메티오닌 잔기를, 산화적 분해를 진행하지 않은 아미노산 잔기로 대체시킨 항-CD73 항체가 제공된다.
유사하게, 탈아미드화 부위를 항-CD73 항체로부터, 특히 CDR 내에서 제거할 수 있다.
항원 결합성 도메인 내의 잠재적 글리코실화 부위를 제거하여, 항원 결합을 방해할 수 있는 글리코실화를 방지하는 것이 바람직하다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,714,350 참조).
표적화된 항원 결합
각종 실시양태에서, 항원 결합이 해로운 조직 및 환경에서는 항원 결합을 선택적으로 차단시키지만, 항원 결합이 유리한 곳에서는 항원 결합을 허용하도록 본 발명의 항체를 변형시킨다. 한 실시양태에서, 항체의 항원 결합성 표면과 특이적으로 결합하고 항원 결합을 방해하는 차단성 펩티드 "마스크"가 생성되는데, 이러한 마스크는 펩티다제 절단 가능한 링커에 의해 항체의 각각의 결합성 아암에 연결된다 [예를 들어, 미국 특허 번호 8,518,404 (CytomX) 참조]. 이러한 구축물은 프로테아제 수준이 비-종양 조직과 비교해서 종양 미세환경에서 크게 증가되는 암을 치료하는 데 유용하다. 종양 미세환경에서 절단 가능한 링커의 선택적 절단으로 인해, 마스킹/차단성 펩티드가 해리될 수 있어서; 항원 결합이 불필요한 부작용을 유발시킬 수도 있는 말초 조직에서가 아니라 종양에서 선택적으로 항원 결합이 가능해진다.
또 다른 한편으론, 관련 실시양태에서, (2가) 항체의 항원 결합성 표면 둘 다와 결합하고 항원 결합을 방해하는 2개의 항원 결합성 도메인을 포함하는 2가 결합성 화합물 ("마스킹 리간드")이 개발되는데, 이러한 2개의 결합성 도메인 마스크는 절단 가능한 링커, 예를 들어 펩티다제에 의해 절단 가능한 링커에 의해 서로 (항체는 아님) 연결된다 [예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2010/077643 (Tegopharm Corp.) 참조]. 마스킹 리간드는 항체가 결합하고자 하는 항원을 포함하거나 또는 이로부터 유래될 수 있거나, 또는 독립적으로 생성될 수 있다. 이러한 마스킹 리간드는 프로테아제 수준이 비-종양 조직과 비교해서 종양 미세환경에서 크게 증가되는 암을 치료하는 데 유용하다. 종양 미세환경에서 절단 가능한 링커의 선택적 절단으로 인해, 두 결합성 도메인이 서로 해리될 수 있어, 항체의 항원 결합성 표면에 대한 결합 활성도가 저하된다. 이로써 마스킹 리간드가 항체로부터 해리됨으로써, 항원 결합이 불필요한 부작용을 유발시킬 수도 있는 말초 조직에서가 아니라 종양에서 선택적으로 항원 결합이 가능해진다.
Fc 및 변형된 Fc
항원에 대한 항원 결합성 도메인의 결합으로부터 비롯되는 치료용 항체의 활성 (예를 들어, 길항제 항체의 경우에는 동족 리간드 또는 수용체 단백질의 차단, 또는 효능제 항체의 경우에는 유도된 시그널링) 이외에도, 항체의 Fc 부분은 임의의 수의 생물학적 효과를 유도하기 위해 일반적으로 복잡한 방식으로 면역 체계와 상호 작용한다. 면역글로불린의 이펙터 기능, 예컨대 Fc 영역은 많은 중요한 항체 기능, 예컨대 항원 의존성 세포성 세포독성 (ADCC), 보체 의존성 세포독성 (CDC), 및 항체 의존성 세포-매개된 포식작용 (ADCP)에 대해 책임이 있으므로, 상이한 기전이긴 하지만, 표적 세포를 사멸시킨다.
항-CD73 항체는 의도된 용도에 대한 항체의 생물학적 활성 (존재한다면)에 근거하여 선택된, 상이한 Fc 영역을 포함하는 불변 도메인과 함께 본원에 기재된 항체의 가변 도메인을 포함할 수 있다 [Salfeld (2007) Nat. Biotechnol. 25:1369]. 인간 IgG는, 예를 들어, 4가지 하위부류, 즉 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 분류될 수 있고, 이들 각각은 Fcγ 수용체 [활성화 수용체 FcγRI (CD64), FcγRIIA, FcγRIIC (CD32); FcγRIIIA 및 FcγRIIIB (CD16) 및 억제성 수용체 FcγRIIB] 중 하나 이상과의 결합에 대한 독특한 프로파일을 가지며, 보체의 제1 성분 (C1q)에 대한 독특한 프로파일을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 인간 IgG1 및 IgG3은 모든 Fcγ 수용체와 결합하고; IgG2는 FcγRIIAH131과 결합하며, 저 친화도로 FcγRIIAR131 FcγRIIIAV158과 결합하고; IgG4는 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIC, 및 FcγRIIIAV158과 결합하며; 억제성 수용체 FcγRIIB는 모든 다른 Fcγ 수용체 보다 더 낮은, IgG1, IgG2 및 IgG3에 대한 친화도를 갖는다 [Bruhns et al. (2009) Blood 113:3716]. 연구 결과, FcγRI은 IgG2와 결합하지 않고, FcγRIIIB는 IgG2 또는 IgG4와 결합하지 않는 것으로 밝혀졌다 (상기 문헌 참조). 일반적으로, ADCC 활성과 관련하여, 인간 IgG1 ≥ IgG3 ≫ IgG4 ≥ IgG2이다. 그 결과로서, 예를 들어, IgG2 또는 IgG4가 아니라 IgG1 불변 도메인이, ADCC가 요망되는 약물에 사용하도록 선택될 것이고; FcγRIIIA-발현성 NK 세포, 단핵구 또는 대식세포의 활성화가 요망되는 경우에는 IgG3이 선택될 것이며; 알레르기 환자를 탈감작시키기 위해 항체를 사용해야 하는 경우에는 IgG4가 선택될 것이다. 항체에 모든 이펙터 기능이 결여되는 것이 요망되는 경우에는 IgG4가 선택될 수도 있다.
따라서, 본원에 기재된 항-CD73 가변 영역은 임의의 동종이형 또는 이소동종이형, 예를 들어, IgG1의 경우: G1m, G1m1(a), G1m2(x), G1m3(f), G1m17(z); IgG2의 경우: G2m, G2m23(n); IgG3의 경우: G3m, G3m21(g1), G3m28(g5), G3m11(b0), G3m5(b1), G3m13(b3), G3m14(b4), G3m10(b5), G3m15(s), G3m16(t), G3m6(c3), G3m24(c5), G3m26(u), G3m27(v)일 수 있는, Fc, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc와 연결될 수 있다 (예를 들어, 공유적으로 연결되거나 또는 융합될 수 있다) (예를 들어, 문헌 [Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1] 참조). 동종이형의 선택은, 예를 들어 항-약물 항체의 형성을 최소화하기 위하여, 잠재적 면역원성 우려에 의해 영향을 받을 수 있다.
본원에 기재된 가변 영역은 하나 이상의 변형을 포함하는 Fc에 연결되어, 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정화, Fc 수용체 결합성, 및/또는 항원 의존성 세포성 세포독성을 변경시킬 수 있다. 더욱이, 본원에 기재된 항체는 화학적으로 변형될 수 있거나 (예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있다) 또는 그의 글리코실화를 변경시키도록 변형시켜 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경시킬 수 있다. 이들 실시양태 각각이 다음에 추가로 상세히 기재된다. Fc 영역 내의 잔기의 넘버링은 카바트의 EU 지수에 따른다. 본원에 개시된 서열 변이체는 임의로 그 위치에서 자연 발생적 잔기가 선행된 자연 발생적 아미노산 대신에 치환된 아미노산이 뒤따르는 잔기 번호를 참조하여 제공된다. 다수의 아미노산이 소정의 위치에 존재할 수 있는 경우, 예를 들어 자연 발생적 이소형 간에 서열이 상이하거나 또는 그 위치에서 여러 돌연변이가 치환될 수 있다면, 이들은 슬래시로써 분리된다 (예를 들어 "X/Y/Z").
예를 들어, (a) 증가되거나 또는 감소된 항체 의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC), (b) 증가되거나 또는 감소된 보체 매개된 세포독성 (CDC), (c) C1q에 대한 증가되거나 또는 감소된 친화성 및/또는 (d) 모 Fc와 비교해서 Fc 수용체에 대한 증가되거나 또는 감소된 친화성을 수반한 Fc 변이체를 생성하기 위하여 Fc 영역 내에 변형을 만들 수 있다. 이러한 Fc 영역 변이체는 일반적으로, Fc 영역 내에 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함할 것이다. 아미노산 변형을 조합하는 것이 특히 바람직한 것으로 여겨진다. 예를 들어, 변이체 Fc 영역은 그 내부에, 예를 들어 본원에서 확인된 특이적 Fc 영역 위치에 2개, 3개, 4개, 5개 등의 치환을 포함할 수 있다. 예시적인 Fc 서열 변이체가 본원에 개시되고, 또한 미국 특허 번호 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; 6,194,551; 7,317,091; 8,101,720; PCT 특허 공보 WO 00/42072; WO 01/58957; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WO 04/063351; WO 05/070963; WO 05/040217, WO 05/092925 및 WO 06/020114에 제공된다.
이펙터 기능을 저하시킴
ADCC 활성은 Fc 영역을 변형시킴으로써 저하시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, Fc 수용체와의 결합에 영향을 미치는 부위, 바람직하게 재이용(salvage) 수용체 결합 부위 이외의 부위를 제거할 수 있다. 다른 실시양태에서, Fc 영역은 ADCC 부위를 제거하도록 변형될 수 있다. ADCC 부위는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, IgG1 내의 ADCC 부위에 관해서는 문헌 [Sarmay et al. (1992) Molec. Immunol. 29 (5): 633-9]을 참조할 수 있다. 한 실시양태에서, 인간 IgG1의 G236R 및 L328R 변이체는 FcγR 결합을 효과적으로 없앤다 [Horton et al. (2011) J. Immunol. 186:4223 and Chu et al. (2008) Mol. Immunol. 45:3926]. 다른 실시양태에서, FcγR과의 결합성이 저하된 Fc는 아미노산 치환 L234A, L235E 및 G237A를 포함하였다 [Gross et al. (2001) Immunity 15:289].
CDC 활성은 또한, Fc 영역을 변형시킴으로써 저하시킬 수 있다. IgG1 위치 D270, K322, P329 및 P331에서의 돌연변이, 구체적으로 알라닌 돌연변이 D270A, K322A, P329A 및 P331A는 C1q와 결합할 수 있고 보체를 활성화시킬 수 있는 상응하는 항체의 능력을 상당히 저하시킨다 [Idusogie et al. (2000) J. Immunol. 164:4178; WO 99/51642]. IgG1의 위치 331에서의 변형 (예를 들어, P331S)은 보체 결합을 저하시키는 것으로 밝혀졌다 [Tao et al. (1993) J. Exp. Med. 178:661 and Canfield & Morrison (1991) J. Exp. Med. 173:1483]. 또 다른 예에서는, 아미노산 위치 231 내지 239 내의 하나 이상의 아미노산 잔기를 변경시킴으로써, 보체를 고정시킬 수 있는 항체의 능력을 저하시킨다 (WO 94/29351).
일부 실시양태에서, 보체 고정화가 저하된 Fc는 아미노산 치환 A330S 및 P331S를 갖는다 [Gross et al. (2001) Immunity 15:289].
이펙터 기능을 완전히 피해야 하는 용도의 경우, 예를 들어 항원 결합만으로 목적하는 치료 효과를 생성하기에 충분하고, 이펙터 기능이 단지 바람직하지 못한 부작용을 초래하는 경우 (또는 그 위험을 증가시키는 경우), IgG4 항체가 사용될 수 있거나, Fc 영역 또는 그의 상당 부분이 결여된 항체 또는 단편이 고안될 수 있거나, 또는 Fc가 글리코실화를 완전히 제거하도록 돌연변이될 수 있다 (예를 들어, N297A). 또 다른 한편으론, 이펙터 기능이 결여되어, FcγR과 결합할 수 있는 능력이 결여되고 (IgG2와 같음) 보체를 활성화시킬 수 없는 (IgG4와 같음), 인간 IgG2 (CH1 도메인 및 힌지 영역)와 인간 IgG4 (CH2 및 CH3 도메인)의 혼성체 구축물이 생성되었다 [Rother et al. (2007) Nat. Biotechnol. 25:1256]. 또한, 문헌 [Mueller et al. (1997) Mol. Immunol. 34:441; Labrijn et al. (2008) Curr. Op. Immunol. 20:479 (일반적으로 이펙터 기능을 저하시키는 Fc 변형이 논의되어 있다)]을 참조할 수 있다.
다른 실시양태에서, Fc 영역은 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체시켜 항체의 모든 이펙터 기능(들)을 저하시킴으로써 변경시킨다. 예를 들어, 아미노산 잔기 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 및 322로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 상이한 아미노산 잔기로 대체시켜, 항체가 이펙터 리간드에 대한 감소된 친화도를 갖지만, 모 항체의 항원 결합 능력은 보유하도록 할 수 있다. 그에 대한 친화도를 변경시킨 이펙터 리간드는, 예를 들어, Fc 수용체 (잔기 234, 235, 236, 237, 297) 또는 보체의 C1 성분 (잔기 297, 318, 320, 322)일 수 있다 [미국 특허 번호 5,624,821 및 5,648,260 (둘 다 Winter et al.)].
WO 88/007089에는 FcγRI과의 결합을 저하시켜 ADCC를 저하시키거나 (234A; 235E; 236A; G237A) 또는 보체 성분 C1q와의 결합을 차단시켜 CDC를 없애 주는 (E318A 또는 V/K320A 및 K322A/Q) IgG Fc 영역 내의 변형이 제안되었다 (또한, 문헌 [Duncan & Winter (1988) Nature 332:563; Chappel et al. (1991) Proc. Nat'l Acad. Sci.(USA) 88:9036; and Sondermann et al. (2000) Nature 406:267 (FcγRIII 결합에 대한 이들 돌연변이의 효과가 논의되어 있다)] 참조).
이펙터 기능을 저하시키는 Fc 변형은 또한, 위치 234, 235, 236, 237, 267, 269, 325, 및 328에서의 치환, 삽입, 및 결실, 예컨대 234G, 235G, 236R, 237K, 267R, 269R, 325L, 및 328R을 포함한다. Fc 변이체는 236R/328R을 포함할 수 있다. FcyR과 보체 상호 작용을 저하시키기 위한 다른 변형은 치환 297A, 234A, 235A, 237A, 318A, 228P, 236E, 268Q, 309L, 330S, 331S, 220S, 226S, 229S, 238S, 233P, 및 234V를 포함한다. 이들 및 다른 변형이 문헌 [Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 20:685-691]에 고찰된다. 위치 233 내지 236 및 327 내지 331 중 하나 이상에서의 IgG 잔기를 돌연변이시킴으로써, 예컨대 IgG1에서의 E233P, L234V, L235A, 임의로 G236Δ, A327G, A330S 및 P331S; IgG4에서의 E233P, F234V, L235A, 임의로 G236Δ; 및 IgG2에서의 A330S 및 P331S에 의해, 신생아 FcR 결합성은 유지하면서도 (반감기는 유지하면서도) 이펙터 기능 (ADCC와 보체 활성화 둘 다)을 저하시킬 수 있다 (문헌 [Armour et al. (1999) Eur. J. Immunol. 29:2613; WO 99/58572] 참조). 이펙터 기능을 저하시키는 다른 돌연변이는 IgG1에서의 L234A 및 L235A (문헌 [Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537]); IgG2에서의 V234A 및 G237A (문헌 [Cole et al. (1997) J. Immunol. 159:3613]; 또한 미국 특허 번호 5,834,597 참조); 및 IgG4에서의 S228P 및 L235E (문헌 [Reddy et al. (2000) J. Immunol. 164:1925])를 포함한다. 인간 IgG1에서 이펙터 기능을 저하시키기 위한 돌연변이의 또 다른 조합은 L234F, L235E 및 P331S를 포함한다 [Oganesyan et al. (2008) Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 64:700]. 일반적으로, 문헌 [Labrijn et al. (2008) Curr. Op. Immunol. 20:479]을 참조할 수 있다. Fc (IgG1) 융합 단백질 [아바타셉트(abatacept)]의 맥락에서 이펙터 기능을 저하시키는 것으로 밝혀진 부가의 돌연변이는 C226S, C229S 및 P238S이다 (EU 잔기 넘버링) [Davis et al. (2007) J. Immunol. 34:2204].
저하된 ADCC 및/또는 CDC를 갖는 다른 Fc 변이체가 문헌 [Glaesner et al. (2010) Diabetes Metab. Res. Rev. 26:287 (IgG4에서 ADCC 및 ADCP를 저하시키는 F234A 및 L235A); Hutchins et al. (1995) Proc. Nat'l Acad. Sci. (USA) 92:11980 (IgG4에서의 F234A, G237A 및 E318A); An et al. (2009) MAbs 1:572 및 미국 특허 출원 공개 번호 2007/0148167 (IgG2에서의 H268Q, V309L, A330S 및 P331S); McEarchern et al. (2007) Blood 109:1185 (IgG1에서의 C226S, C229S, E233P, L234V, L235A); Vafa et al. (2014) Methods 65:114 (IgG2에서의 V234V, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S)]에 개시된다.
특정 실시양태에서, 본질적으로 이펙터 기능이 없는 Fc가 선택되는데, 즉 FcγR에 대한 감소된 결합성과 감소된 보체 고정화를 갖는다. 이펙터가 없는 예시적인 Fc, 예를 들어, IgG1 Fc는 다음 5개의 돌연변이를 포함한다: L234A, L235E, G237A, A330S 및 P331S [Gross et al. (2001) Immunity 15:289]. 이들 돌연변이를 포함하는 예시적인 중쇄는 표 35에 상세된 바와 같이, 서열 목록에 제시된다. 이들 5개의 치환을 N297A와 조합하여 글리코실화를 또한 없앨 수 있다.
이펙터 기능을 증강시킴
또 다른 한편으론, ADCC 활성은 Fc 영역을 변형시킴으로써 증가시킬 수 있다. ADCC 활성과 관련하여, 인간 IgG1 ≥ IgG3 ≫ IgG4 ≥ IgG2이므로, ADCC가 요망되는 약물에 사용하는 경우에는 IgG2 또는 IgG4가 아닌 IgG1 불변 도메인이 선택될 수도 있다. 또 다른 한편으론, Fc 영역은 다음 위치: 234, 235, 236, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 313, 315, 320, 322, 324, 325, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 433, 434, 435, 436, 437, 438 또는 439에서의 하나 이상의 아미노산을 변형시킴으로써 Fcγ 수용체에 대한 친화도를 증가시키고/시키거나 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 증가시키도록 변형시킬 수 있다 [WO 2012/142515 참조; 또한 WO 00/42072 참조]. 예시적인 치환은 236A, 239D, 239E, 268D, 267E, 268E, 268F, 324T, 332D, 및 332E를 포함한다. 예시적인 변이체는 239D/332E, 236A/332E, 236A/239D/332E, 268F/324T, 267E/268F, 267E/324T, 및 267E/268F/324T를 포함한다. 예를 들어, 임의로 I332E와 조합될 수 있는 G236A 변이체를 포함하는 인간 IgG1Fc는 FcγIIA / FcγIIB 결합 친화도 비를 대략 15배 증가시키는 것으로 밝혀졌다 [Richards et al. (2008) Mol. Cancer Therap. 7:2517; Moore et al. (2010) mAbs 2:181]. FcyR과 보체 상호 작용을 증강시키기 위한 다른 변형은 치환 298A, 333A, 334A, 326A, 247I, 339D, 339Q, 280H, 290S, 298D, 298V, 243L, 292P, 300L, 396L, 305I, 및 396L을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이들 및 다른 변형이 문헌 [Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 20:685-691]에 고찰된다. 구체적으로 언급하면, IgG1의 위치 E333에서의 변화, 예를 들어 E333A에 의해 ADCC와 CDC 둘 다를 증강시킬 수 있다 [Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591]. IgG1에서 이펙터 기능을 증강시키기 위하여 P247I 및 A339D/Q 돌연변이를 사용하는 것이 WO 2006/020114에 개시되고, D280H, K290S ± S298D/V가 WO 2004/074455에 개시된다. K326A/W 및 E333A/S 변이체가 인간 IgG1에서 이펙터 기능을 증가시키고 E333S는 IgG2에서 이펙터 기능을 증가시키는 것으로 밝혀졌다 [Idusogie et al. (2001) J. Immunol. 166:2571].
구체적으로 언급하면, FcγR1, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 대한 인간 IgG1 상의 결합 부위를 맵핑하였고, 개선된 결합성을 지닌 변이체가 보고되었다 [Shields et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604]. 조합 돌연변이체 T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A 및 S298A/E333A/K334A (증강된 FcγRIIIa 결합성 및 ADCC 활성을 갖는다)를 포함한, 위치 256, 290, 298, 333, 334 및 339에서의 특이적 돌연변이가 FcγRIII과의 결합성을 개선시키는 것으로 밝혀졌다. FcγRIIIa와의 결합성이 강력하게 증강된 다른 IgG1 변이체가 확인되었는데, 이는 FcγRIIIa에 대한 친화도 상의 가장 큰 증가를 나타내고, FcγRIIb 결합 상의 저하를 나타내며, 시노몰구스 원숭이에서 강력한 세포독성 활성을 나타내는 S239D/I332E 및 S239D/I332E/A330L 돌연변이를 수반한 변이체를 포함한다 [Lazar et al.(2006) Proc. Nat'l Acad Sci. (USA) 103:4005; Awan et al. (2010) Blood 115:1204; Desjarlais & Lazar (2011) Exp. Cell Res. 317:1278]. 항체, 예컨대 알렘투주맙 (CD52-특이적), 트라스투주맙 (HER2/neu-특이적), 리툭시맙 (CD20-특이적), 및 세툭시맙 (EGFR-특이적) 내로 삼중 돌연변이를 도입하면, 시험관 내에서 크게 증강된 ADCC 활성으로 이어지고, S239D/I332E 변이체는 원숭이에서 B 세포를 고갈시킬 수 있는 증강된 능력을 나타내었다 [Lazar et al.(2006) Proc. Nat'l Acad Sci. (USA) 103:4005]. 또한, B 세포 악성 종양 및 유방암의 모델에서 인간 FcγRIIIa를 발현하는 트랜스제닉 마우스에서 FcγRIIIa와의 증강된 결합성과 이와 동시에 증강된 ADCC 활성을 나타내는 L235V, F243L, R292P, Y300L, V305I 및 P396L 돌연변이를 함유하는 IgG1 돌연변이체가 확인되었다 [Stavenhagen et al. (2007) Cancer Res. 67:8882; 미국 특허 번호 8,652,466; Nordstrom et al. (2011) Breast Cancer Res. 13:R123].
상이한 IgG 이소형은 또한, 차별적 CDC 활성을 나타낸다 (IgG3>IgG1>>IgG2≒IgG4) [Dangl et al. (1988) EMBO J. 7:1989]. 증강된 CDC가 요망되는 용도의 경우, C1q에 대한 결합을 증가시키는 돌연변이를 도입하는 것이 가능할 수도 있다. 보체를 동원할 수 있는 능력 (CDC)은 IgG2 내의 K326 및/또는 E333에서의 돌연변이, 예컨대 K326W (ADCC 활성을 저하시킨다) 및 E333S에 의해 증강되어, 보체 캐스케이드의 제1 성분인 C1q에 대한 결합을 증가시킬 수 있다 [Idusogie et al. (2001) J. Immunol. 166:2571]. S267E / H268F / S324T를 단독으로 또는 조합하여 인간 IgG1 내로 도입하면 C1q 결합성이 증강된다 [Moore et al. (2010) mAbs 2:181]. 문헌 [Natsume et al. (2008) Cancer Res. 68:3863 (도 1)]의 IgG1/IgG3 혼성체 이소형 항체 "113F"의 Fc 영역은 또한 증강된 CDC를 부여한다 (또한, 문헌 [Michaelsen et al. (2009) Scand. J. Immunol. 70:553] 및 [Redpath et al. (1998) Immunology 93:595] 참조).
이펙터 기능을 증가 또는 저하시킬 수 있는 부가의 돌연변이가 문헌 [Dall'Acqua et al. (2006) J. Immunol. 177:1129]에 개시된다. 또한, 문헌 [Carter (2006) Nat. Rev. Immunol. 6:343; Presta (2008) Curr. Op. Immunol. 20:460]을 참조할 수 있다.
억제성 수용체 FcyRIIb에 대한 친화도를 증강시켜 주는 Fc 변이체를 또한 사용하여, 예를 들어 아폽토시스(apoptosis)-유도성 또는 아주반트 활성을 증강시킬 수 있다 [Li & Ravetch (2011) Science 333:1030; Li & Ravetch (2012) Proc. Nat'l Acad. Sci (USA) 109:10966; 미국 특허 출원 공개 2014/0010812]. 이러한 변이체는, 예를 들어 B 세포 및 단핵구를 포함한 FcyRllb+ 세포와 관련된 면역조정성 활성을 항체에 제공할 수 있다. 한 실시양태에서, Fc 변이체는 하나 이상의 활성화 수용체와 비교해서 FcyRllb에 대한 선택적으로 증강된 친화성을 제공한다. FcyRllb에 대한 결합성을 변경시키기 위한 변형은 EU 지수에 따라서 234, 235, 236, 237, 239, 266, 267, 268, 325, 326, 327, 328, 및 332로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서의 하나 이상의 변형을 포함한다. FcyRllb 친화성을 증강시키기 위한 예시적인 치환은 234D, 234E, 234F, 234W, 235D, 235F, 235R, 235Y, 236D, 236N, 237D, 237N, 239D, 239E, 266M, 267D, 267E, 268D, 268E, 327D, 327E, 328F, 328W, 328Y, 및 332E를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 예시적인 치환은 235Y, 236D, 239D, 266M, 267E, 268D, 268E, 328F, 328W, 및 328Y를 포함한다. FcyRllb에 대한 결합성을 증강시키기 위한 다른 Fc 변이체는 235Y/267E, 236D/267E, 239D/268D, 239D/267E, 267E/268D, 267E/268E, 및 267E/328F를 포함한다. 구체적으로 언급하면, 인간 IgG1의 S267E + L328F 이중 변이체를 포함한, S267E, G236D, S239D, L328F 및 I332E 변이체가 억제성 FcyRllb 수용체에 대한 친화성을 특이적으로 증강시키는 데 있어서 특별한 가치가 있다 [Chu et al. (2008) Mol. Immunol. 45:3926; 미국 특허 출원 공개 번호 2006/024298; WO 2012/087928]. FcγRIIb에 대한 증강된 특이성 (FcγRIIaR131과 구별되는 바와 같음)은 P238D 치환을 부가함으로써 수득될 수 있다 [Mimoto et al. (2013) Protein. Eng. Des. & Selection 26:589; WO 2012/115241].
특정 실시양태에서, 항체는 그의 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 각종 접근 방식이 가능하다. 예를 들어, 이는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합 친화성을 증가시킴으로써 수행될 수 있다. 한 실시양태에서, 항체는 미국 특허 번호 5,869,046 및 6,121,022 (Presta et al.)에 기재된 바와 같이, IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 루프로부터 취한 재이용 수용체 결합성 에피토프를 함유하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경된다. FcRn에 대한 결합성을 증가시키고/시키거나 약동학적 특성을 개선시키는 다른 예시적인 Fc 변이체는, 예를 들어 259I, 308F, 428L, 428M, 434S, 434H, 434F, 434Y, 및 434M을 포함한, 위치 259, 308, 및 434에서의 치환을 포함한다. FcRn에 대한 Fc 결합성을 증가시키는 다른 변이체는 250E, 250Q, 428L, 428F, 250Q/428L (문헌 [Hinton et al., 2004, J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216, Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356]), 256A, 272A, 305A, 307A, 311A, 312A, 378Q, 380A, 382A, 434A (문헌 [Shields et al., Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604]), 252F, 252Y, 252W, 254T, 256Q, 256E, 256D, 433R, 434F, 434Y, 252Y/254T/256E, 433K/434F/436H (문헌 [Dall Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, Dall'Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524])를 포함한다 (미국 특허 번호 8,367,805 참조).
IgG Fc에서 특정의 보존된 잔기 (I253/H310/Q311/H433/N434)의 변형, 예컨대 N434A 변이체 (문헌 [Yeung et al. (2009) J. Immunol. 182:7663])가 FcRn 친화성을 증가시켜 순환계 내에서의 항체의 반감기를 증가시키는 방식으로서 제안되었다 (WO 98/023289). M428L 및 N434S를 포함하는 조합 Fc 변이체가 FcRn 결합성을 증가시키고 혈청 반감기를 5배 이하 증가시키는 것으로 밝혀졌다 [Zalevsky et al. (2010) Nat. Biotechnol. 28:157]. T307A, E380A 및 N434A 변형을 포함하는 조합 Fc 변이체가 또한, IgG1 항체의 반감기를 연장시킨다 [Petkova et al. (2006) Int. Immunol. 18:1759]. 또한, M252Y/M428L, M428L/N434H, M428L/N434F, M428L/N434Y, M428L/N434A, M428L/N434M, 및 M428L/N434S 변이체를 포함하는 조합 Fc 변이체가 또한, 반감기를 연장시키는 것으로 밝혀졌다 (WO 2009/086320).
추가로, M252Y, S254T 및 T256E를 포함하는 조합 Fc 변이체가 반감기를 거의 4배 증가시킨다 [Dall'Acqua et al. (2006) J. Biol. Chem. 281:23514]. 증가된 FcRn 친화성을 제공하지만 저하된 pH 의존성을 제공하는, 관련된 IgG1 변형 (M252Y / S254T / T256E / H433K / N434F)을 이용하여, FcRn에 대한 다른 항체의 결합을 방지하기 위한 경쟁자로서 사용하기 위한 IgG1 구축물 ("MST-HN Abdeg")을 창출시켰는데, 이로써 내인성 IgG (예를 들어 자가면역 환경에서)이거나 또는 또 다른 외인성 (치료용) mAb인 그 다른 항체의 클리어런스(clearance)가 증가된다 [Vaccaro et al. (2005) Nat. Biotechnol. 23:1283; WO 2006/130834].
FcRn 결합성을 증가시키기 위한 다른 변형은 문헌 [Yeung et al. (2010) J. Immunol. 182:7663-7671; 6,277,375; 6,821,505; WO 97/34631; WO 2002/060919]에 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, 혼성체 IgG 이소형을 사용하여 FcRn 결합성을 증가시키고, 반감기를 잠재적으로 증가시킬 수 있다. 예를 들어, IgG1/IgG3 혼성체 변이체는 CH2 및/또는 CH3 영역 내의 IgG1 위치를, 2개의 이소형이 상이한 위치에서 IgG3으로부터의 아미노산으로 치환시킴으로써 구축될 수 있다. 따라서, 하나 이상의 치환, 예를 들어, 274Q, 276K, 300F, 339T, 356E, 358M, 384S, 392N, 397M, 422I, 435R, 및 436F를 포함하는 혼성체 변이체 IgG 항체를 구축할 수 있다. 본원에 기재된 다른 실시양태에서, IgG1/IgG2 혼성체 변이체는 CH2 및/또는 CH3 영역 내의 IgG2 위치를, 2개의 이소형이 상이한 위치에서 IgG1로부터의 아미노산으로 치환시킴으로써 구축될 수 있다. 따라서, 하나 이상의 치환, 예를 들어, 다음 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함하는 혼성체 변이체 IgG 항체를 구축할 수 있다: 233E, 234L, 235L, -236G (위치 236에서의 글리신의 삽입을 지칭함), 및 327A (미국 특허 번호 8,629,113 참조). 알려진 대로 혈청 반감기를 증가시키고 발현을 개선시키는 IgG1/IgG2/IgG4 서열의 혼성체가 생성되었다 [미국 특허 번호 7,867,491 (서열 번호 18)].
본 발명의 항체의 혈청 반감기는 또한 PEG화에 의해 증가될 수 있다. 항체를 PEG화하여, 예를 들어 항체의 생물학적 (예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시킬 수 있다. 항체를 PEG화하기 위하여, 항체, 또는 그의 단편을 전형적으로, 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 기가 항체 또는 항체 단편에 부착되는 조건하에, PEG 시약, 예컨대 PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체와 반응시킨다. 바람직하게, PEG화는 반응성 PEG 분자 (또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통하여 수행된다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질, 예컨대 모노 (C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 유도체화하기 위해 사용되어 왔던 PEG의 형태의 임의의 것을 포괄하고자 한다. 특정 실시양태에서, PEG화될 항체는 아글리코실화 항체이다. 단백질을 PEG화하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고 본원에 기재된 항체에 적용할 수 있다 [예를 들어, EP 0154316 (Nishimura et al.) 및 EP 0401384 (Ishikawa et al.) 참조].
또 다른 한편으론, 일부 상황하에서는 본 발명의 항체의 반감기를 증가시키기 보다는 오히려 감소시키는 것이 바람직할 수 있다. 인간 IgG1의 Fc 내의 변형, 예컨대 I253A (문헌 [Hornick et al. (2000) J. Nucl. Med. 41:355]) 및 H435A/R I253A 또는 H310A (문헌 [Kim et al. (2000) Eur. J. Immunol. 29:2819])는, 신속한 클리어런스가 바람직한 상황, 예컨대 의료 영상화에 사용하기 위하여 FcRn 결합성을 감소시키므로, 반감기를 감소시킬 수 있다 (클리어런스를 증가시킨다) [또한, 문헌 [Kenanova et al. (2005) Cancer Res. 65:622] 참조). 클리어런스를 증강시키는 다른 수단은 본 발명의 항원 결합성 도메인을, FcRn와 결합할 수 있는 능력이 결여된 항체 단편, 예컨대 Fab 단편으로서 포맷하는 것을 포함한다. 이러한 변형은 항체의 순환 반감기를 몇 주에서 몇 시간으로 감소시킬 수있다. 이어서, 항체 단편의 선택적 PEG화를 이용하여, 필요한 경우 항체 단편의 반감기를 미세 조정 (증가)시킬 수 있다 [Chapman et al. (1999) Nat. Biotechnol. 17:780]. 항체 단편은 또한, 예를 들어 융합 단백질 구축물 내의 인간 혈청 알부민과 융합시켜 반감기를 증가시킬 수 있다 [Yeh et al. (1992) Proc. Nat'l Acad. Sci. 89:1904]. 또 다른 한편으론, 본 발명의 제1 항원 결합성 도메인, 및 인간 혈청 알부민 (HSA)과 결합하는 제2 항원 결합성 도메인을 수반한 이중특이적 항체를 구축할 수 있다 [국제 특허 출원 공보 WO 2009/127691 및 그 내부에 인용된 특허 참조문헌 참조]. 또 다른 한편으론, 전문화된 폴리펩티드 서열, 예를 들어 "XTEN" 폴리펩티드 서열을 항체 단편에 부가하여 반감기를 증가시킬 수 있다 [Schellenberger et al. (2009) Nat. Biotechnol. 27:1186; 국제 특허 출원 공보 WO 2010/091122].
부가의 Fc 변이체
IgG4 불변 도메인을 사용하는 경우에는, IgG1 내의 힌지 서열을 모방함으로써 IgG4 분자를 안정화시키는, 예를 들어 치료하고자 하는 환자 내에서 내인성 IgG4와 치료용 항체 간의 Fab-아암 교환을 저하시키는 치환 S228P를 포함하는 것이 통상적으로 바람직하다 [Labrijn et al. (2009) Nat. Biotechnol. 27:767; Reddy et al. (2000) J. Immunol. 164:1925].
IgG1 구축물의 힌지 내의 잠재적 프로테아제 절단 부위는 D221G 및 K222S 변형에 의해 제거하여, 항체의 안정성을 증가시킬 수 있다 [WO 2014/043344].
그의 리간드 (Fc 수용체)에 대한 Fc 변이체의 친화성 및 결합 특성은 평형 방법 [예를 들어, 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA), 또는 방사성 면역검정 (RIA)], 또는 동역학 (예를 들어, 비아코어® SPR 분석)을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 관련 기술분야에 공지된 각종 시험관내 검정 방법 (생화학적 또는 면역학적 기반 검정), 및 다른 방법, 예컨대 간접 결합 검정, 경쟁적 억제 검정, 형광 공명 에너지 전이 (FRET), 겔 전기영동 및 크로마토그래피 (예를 들어, 겔 여과)에 의해 결정될 수 있다. 이들 및 다른 방법은 조사되는 하나 이상의 성분 상에 표지를 활용할 수 있고/있거나 발색, 형광성, 발광성 또는 동위원소 표지를 포함하지만 이에 제한되지 않는 각종 검출 방법을 이용할 수 있다. 결합 친화성 및 동역학에 관한 상세한 설명이 문헌 [Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)]에서 찾을 수 있는데, 이 문헌은 항체-면역원 상호 작용에 초점을 맞춘다.
또한 다른 실시양태에서, 이펙터 기능을 증가 또는 저하시키도록 항체의 글리코실화를 변형시킨다. 예를 들어, 위치 297에서의 보존된 아스파라긴 잔기를 돌연변이시켜 (예를 들어 N297A), 보체 및 FcγRI 결합성을 없앰으로써 모든 이펙터 기능을 결여시킨 아글리코실화 항체를 만들 수 있다 [Bolt et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23:403]. 또한 문헌 [Tao & Morrison (1989) J. Immunol. 143:2595 (위치 297에서의 글리코실화를 없애기 위하여 IgG1 내의 N297Q를 이용한다)]을 참조할 수 있다.
아글리코실화 항체에 일반적으로 이펙터 기능이 결여되긴 하지만, 돌연변이를 도입하여 그 기능을 복원시킬 수 있다. 아글리코실화 항체, 예를 들어 N297A/C/D/ 또는 H 돌연변이로부터 비롯되거나 또는 단백질을 글리코실화시키지 않는 시스템 [예를 들어, 이. 콜라이 (E. coli)]에서 생성된 것을 추가로 돌연변이, 예를 들어 S298G 및/또는 T299A/G/ 또는 H (WO 2009/079242), 또는 E382V 및 M428I (문헌 [Jung et al. (2010) Proc. Nat'l Acad. Sci (USA) 107:604])하여 FcγR 결합성을 복원시킬 수 있다.
부가적으로, 증강된 ADCC를 수반한 항체는 글리코실화를 변경시킴으로써 만들 수 있다. 예를 들어, 중쇄 Asn297-연결된 올리고사카라이드로부터 푸코스를 제거하는 것이, FcγRIIIa에 대한 개선된 결합성에 근거하여 ADCC를 증강시키는 것으로 밝혀졌다 [Shields et al. (2002) JBC 277:26733; Niwa et al. (2005) J. Immunol. Methods 306: 151; Cardarelli et al. (2009) Clin. Cancer Res. 15:3376 (MDX-1401); Cardarelli et al. (2010) Cancer Immunol. Immunotherap. 59:257 (MDX-1342)]. 이러한 저 푸코스 항체는, 예를 들어 푸코실트랜스퍼라제 (FUT8)가 결여된 녹아웃 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 (문헌 [Yamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol. Bioeng. 87:614])에서, 또는 아푸코실화 항체를 생성하는 다른 세포에서 생성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Zhang et al. (2011) mAbs 3:289 and Li et al. (2006) Nat. Biotechnol. 24:210 (둘 다에는 당조작된 피치아 파스토리스 (Pichia pastoris)에서의 항체 생성이 기재되어 있다); Mossner et al. (2010) Blood 115:4393; Shields et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733; Shinkawa et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:3466; EP 1176195B1] 참조). ADCC는 또한, 푸코스를 Asn(297)-연결된 탄수화물에 부착시킬 수 있는 능력이 저하된 변이체 CHO 세포주, Lec13의 사용이 개시되어 있는 PCT 공보 WO 03/035835에 기재된 바와 같이 증강시켜, 그러한 숙주 세포에서 발현된 항체의 저푸코실화를 초래할 수도 있다 (또한 문헌 [Shields, R.L. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740] 참조). 또 다른 한편으론, 푸코스 유사체를 항체 생성 동안 배양 배지에 부가하여, 푸코스가 항체 상의 탄수화물 내로 혼입되는 것을 억제할 수 있다 [WO 2009/135181].
항체-연결된 올리고사카라이드 내의 이등분 GlcNac 구조를 증가시키면 ADCC가 또한 증강된다. PCT 공보 WO 99/54342 (Umana et al.)에는 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라제 (예를 들어, 베타(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주가 기재되어 있는데, 이러한 조작된 세포주에서 발현된 항체는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 나타내어 항체의 증가된 ADCC 활성을 초래하도록 한다 (또한 문헌 [Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180] 참조).
갈락토스, 시알산, 푸코스 및 크실로스 잔기가 결여되고 (소위 GNGN 글리코형), 증강된 ADCC 및 ADCP를 나타내지만 저하된 CDC를 나타내는 부가의 글리코실화 변이체뿐만 아니라 시알산, 푸코스 및 크실로스가 결여되고 (소위 G1/G2 글리코형), 증강된 ADCC, ADCP 및 CDC를 나타내는 다른 변이체가 개발되었다 (미국 특허 출원 공개 번호 2013/0149300]. 이들 글리코실화 패턴을 갖는 항체는 임의로, 내인성 크실로스 및 푸코실 트랜스퍼라제 유전자를 녹아웃시킨, 유전적으로 변형된 엔. 벤타미아나 (N. benthamiana) 식물에서 생성된다.
당조작을 또한 이용하여, Fc 영역의 Asn297에 부착된 탄수화물 쇄의 α2,6 시알릴 함량을 변화시킴으로써 IgG 구축물의 소염 특성을 변형시킬 수 있는데, 여기서 α2,6 시알릴화 형태의 비율이 증가되면 소염 효과가 증강된다 (문헌 [Nimmerjahn et al. (2008) Ann. Rev. Immunol. 26:513] 참조). 반대로, 소염 특성을 원하지 않는 경우에는 α2,6 시알릴화 탄수화물을 갖는 항체의 비율이 감소되는 것이 유용할 수 있다. 예를 들어, α2,6 시알릴화 형태의 선택적 정제에 의해 또는 효소적 변형에 의해 항체의 α2,6 시알릴화 함량을 변형시키는 방법이 미국 특허 출원 공개 번호 2008/0206246에 제공된다. 다른 실시양태에서, 예를 들어 F241A 변형을 포함시킴으로써, α2,6 시알릴화의 효과를 모방하도록 Fc 영역의 아미노산 서열을 변형시킬 수 있다 (WO 2013/095966).
VIII. 항체 물리적 특성
본원에 기재된 항체는 경쇄 또는 중쇄 가변 영역에 하나 이상의 글리코실화 부위를 함유할 수 있다. 이러한 글리코실화 부위는 변경된 항원 결합성에 기인하여 항체의 면역원성을 증가시킬 수 있거나 또는 항체의 pK를 변경시킬 수 있다 (Marshall et al. (1972) Annu Rev Biochem 41:673-702; Gala and Morrison (2004) J. Immunol 172:5489-94; Wallick et al. (1988) J Exp Med 168:1099-109; Spiro (2002) Glycobiology 12:43R-56R; Parekh et al. (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al. (2000) Mol Immunol 37:697-706). 글리코실화는 N-X-S/T 서열을 함유하는 모티프에서 발생하는 것으로 공지되어 있다. 일부 경우에, 가변 영역 글리코실화를 함유하지 않는 항-CD73 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이는 가변 영역 내에 글리코실화 모티프를 함유하지 않는 항체를 선택하거나 또는 글리코실화 영역 내의 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 아스파라긴 이성화 부위를 함유하지 않는다. 아스파라긴의 탈아미드화가 N-G 또는 D-G 서열 상에서 일어날 수 있고, 이는 킹크(kink)를 폴리펩티드 쇄 내로 도입할 수 있고 그의 안정성을 저하시킬 수 있는 이소아스파르트산 잔기의 창출을 초래할 수 있다 (이소아스파르트산 효과). 예를 들어, 아미노산 서열 Asp-Gly가 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 CDR 서열에 존재하는 경우, 이러한 서열은 이성화를 진행하지 않는 아미노산 서열로 치환된다. 한 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 6에 제시된 중쇄 가변 영역 CDR2 서열을 포함하지만, 여기서 Asp-Gly 서열 (VILYDGSNKYYPDSVKG; 서열식별번호: 6) 내의 Asp 또는 Gly은 이성화를 진행하지 않는 아미노산 서열, 예를 들어, Asp-Ser 또는 Ser-Gly 서열로 대체된다.
각 항체는 일반적으로 6 내지 9.5의 pH 범위에 속하는 독특한 등전점 (pI)을 가질 것이다. IgG1 항체에 대한 pI는 전형적으로 7 내지 9.5의 pH 범위 내에 속하고, IgG4 항체에 대한 pI는 전형적으로 6 내지 8의 pH 범위 내에 속한다. 정상 범위를 벗어난 pI를 수반한 항체는 생체내 조건하에서 일부 언폴딩 및 불안정성을 가질 수 있다고 추측된다. 따라서, 정상 범위 내에 속하는 pI 값을 함유하는 항-CD73 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이는 정상 범위 내에 속하는 pI 값을 수반하는 항체를 선택하거나 또는 하전된 표면 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
각 항체는 특징적인 융점을 가질 것인데, 융점이 높다는 것은 전반적인 생체내 안정성이 더 크다는 것을 표시한다 (Krishnamurthy R and Manning M C (2002) Curr Pharm Biotechnol 3:361-71). 일반적으로, TM1 (초기 언폴딩 온도)가 60℃ 초과, 바람직하게 65℃ 초과, 보다 더 바람직하게 70℃ 초과인 것이 바람직하다. 항체의 융점은 시차 주사 열량측정법 (문헌 [Chen et al (2003) Pharm Res 20:1952-60; Ghirlando et al (1999) Immunol Lett 68:47-52]) 또는 원편광 이색성 (문헌 [Murray et al. (2002) J. Chromatogr Sci 40:343-9])을 이용하여 측정될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 신속하게 분해되지 않는 항체를 선택한다. 항체의 분해는 모세관 전기영동 (CE) 및 MALDI-MS를 이용하여 측정될 수 있다 (Alexander A J and Hughes D E (1995) Anal Chem 67:3626-32).
또 다른 바람직한 실시양태에서, 원치 않는 면역 반응 및/또는 변경되거나 또는 불리한 약동학적 특성의 촉발을 초래할 수 있는, 최소한의 응집 효과를 갖는 항체를 선택한다. 일반적으로, 항체는 25% 이하, 바람직하게 20% 이하, 보다 더 바람직하게 15% 이하, 보다 더 바람직하게 10% 이하 및 보다 더 바람직하게 5% 이하의 응집이 허용된다. 응집은 크기 배제 칼럼 (SEC), 고 성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 및 광 산란을 포함한 몇 가지 기술에 의해 측정될 수 있다.
IX. 항체의 조작 방법
상기 논의된 바와 같이, 본원에 개시된 VH 및 VL 서열을 갖는 항-CD73 항체를 사용하여, VH 및/또는 VL 서열, 또는 이에 부착된 불변 영역(들)을 변형시킴으로써 새로운 항-CD73 항체를 창출시킬 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 또 다른 측면에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체, 예를 들어 CD73.4, 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11 및/또는 7A11의 구조적 특징을 이용하여, 본원에 기재된 항체의 적어도 하나의 기능적 특성, 예를 들어 인간 CD73 및 시노몰구스 CD73과의 결합성을 보유하는 구조적으로 관련된 항-CD73 항체를 창출시킨다. 예를 들어, 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11 및/또는 7A11의 하나 이상의 CDR 영역, 또는 그의 돌연변이는 공지된 프레임워크 영역 및/또는 다른 CDR과 재조합적으로 조합되어, 상기 논의된 바와 같은 부가의 재조합적으로 조작된 본원에 기재된 항-CD73 항체를 창출시킬 수 있다. 다른 유형의 변형은 이전의 섹션에 기재된 것을 포함한다. 조작 방법에 대한 출발 물질은 본원에 제공된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상, 또는 그의 하나 이상의 CDR 영역이다. 조작된 항체를 창출하기 위해서는, 본원에 제공된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상, 또는 그의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는 항체를 실제적으로 제조 (즉, 단백질로서 발현)하는 것이 필요하지 않다. 오히려, 상기 서열(들) 내에 함유된 정보를 출발 물질로서 사용하여, 원래의 서열(들)로부터 유래된 "차세대" 서열(들)을 창출시킨 다음, 이러한 "차세대" 서열(들)을 단백질로서 제조 및 발현시킨다.
따라서, 본원에는
(a) (i) 서열식별번호: 5, 17, 33, 41, 53, 61, 69, 81, 및 89로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR1 서열, 서열식별번호: 6, 18, 34, 42, 54, 62, 70, 82, 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR2 서열, 및/또는 서열식별번호: 7, 19, 35, 43, 55, 63, 71, 83, 및 91로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 항체 서열; 및 (ii) 서열식별번호: 9, 13, 21, 25, 29, 37, 45, 49, 57, 65, 73, 77, 85, 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR1 서열, 서열식별번호: 10, 14, 22, 26, 30, 38, 46, 50, 58, 66, 74, 78, 86, 및 94로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR2 서열, 및/또는 서열식별번호: 11, 15, 23, 27, 31, 39, 47, 51, 59, 67, 75, 79, 87, 및 95로 이루어진 군으로부터 선택된 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 항체 서열을 제공하는 단계;
(b) 중쇄 가변 영역 항체 서열 및/또는 경쇄 가변 영역 항체 서열 내의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변경시켜 적어도 하나의 변경된 항체 서열을 창출시키는 단계; 및
(c) 이와 같이 변경된 항체 서열을 단백질로서 발현하는 단계
를 포함하는, 항-CD73 항체의 제조 방법이 제공된다.
표준 분자 생물학 기술을 이용하여 상기 변경된 항체 서열을 제조 및 발현할 수 있다.
바람직하게, 상기 변경된 항체 서열(들)에 의해 코딩된 항체는 표 3에 열거된 것을 포함하는, 본원에 기재된 항-CD73 항체의 기능적 특성 중 하나, 일부 또는 전부를 보유하는 것이다.
상기 변경된 항체는 본원에 기재된 기능적 검정을 이용하여 기능적 특성 중 하나 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 또는 모두를 나타낼 수 있다. 상기 변경된 항체의 기능적 특성은 관련 기술분야에서 이용 가능하고/하거나 본원에 기재된 표준 검정, 예컨대 본 실시예에 제시된 것 (예를 들어, ELISA, FACS)을 이용하여 평가될 수 있다.
본원에 기재된 항체를 조작하는 방법의 특정 실시양태에서, 돌연변이는 항-CD73 항체 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 또는 선택적으로 도입될 수 있고, 이로써 생성되는 변형된 항-CD73 항체를 대상으로 하여 본원에 기재된 바와 같은 결합 활성 및/또는 다른 기능적 특성에 관하여 스크리닝할 수 있다. 돌연변이적 방법이 관련 기술분야에 보고되었다. 예를 들어, PCT 공보 WO 02/092780 (Short)에는 포화 돌연변이유발, 합성 라이게이션 어셈블리, 또는 그의 조합을 이용하여 항체 돌연변이를 창출하고 스크리닝하는 방법이 기재되어 있다. 또 다른 한편으론, PCT 공보 WO 03/074679 (Lazar et al.)에는 항체의 물리화학적 특성을 최적화하기 위한 전산 스크리닝 방법을 이용하는 방법이 기재되어 있다.
X. 핵산 분자
본원에 기재된 또 다른 측면은 본원에 기재된 항체를 코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다. 핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제되거나 또는 실질적으로 정제된 형태에 존재할 수 있다. 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 제한 효소, 아가로스 겔 전기영동 및 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 기술을 포함한 표준 기술에 의해, 다른 세포성 성분 또는 다른 오염물질, 예를 들어, 다른 세포성 핵산 (예를 들어, 다른 염색체 DNA, 예를 들어, 자연에서 단리된 DNA와 연결되는 염색체 DNA) 또는 단백질로부터 정제될 때, 핵산은 "단리되거나" 또는 "실질적으로 정제된다" (문헌 [F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York] 참조). 본원에 기재된 핵산은, 예를 들어, DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론성 서열을 함유할 수 있거나 또는 함유하지 않을 수 있다. 특정 실시양태에서, 핵산은 cDNA 분자이다.
본원에 기재된 핵산은 표준 분자 생물학 기술을 이용하여 수득될 수 있다. 하이브리도마 (예를 들어, 다음에 추가로 기재되는 바와 같이 인간 면역글로불린 유전자를 수반하는 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 이러한 하이브리도마에 의해 만든 항체의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 수득될 수 있다. 면역글로불린 유전자 라이브러리로부터 수득된 항체의 경우에는 (예를 들어, 파지 디스플레이 기술을 이용함), 항체를 코딩하는 핵산을 상기 라이브러리로부터 회수할 수 있다.
본원에 기재된 바람직한 핵산 분자는 본원에 기재된 항-CD73 항체, 예를 들어, CD73.4 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11, 7A11, CD73.3 및/또는 CD73.4 모노클로날 항체의 VH 및 VL 서열을 코딩하는 것이다. CD73.4 (CD73.4-1 및 CD73.4-2) 11F11 (11F11-1 및 11F11-2), 4C3 (4C3-1, 4C3-2 및 4C3-3), 4D4, 10D2 (10D2-1 및 10D2-2), 11A6, 24H2, 5F8 (5F8-1 및 5F8-2), 6E11, 7A11, CD73.3 및 CD73.4의 VH 서열을 코딩하는 DNA 서열이 서열식별번호: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 135, 및 170에 각각 제시된다. 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11, 7A11, CD73.3 및/또는 CD73.4의 VL 서열을 코딩하는 DNA 서열이 서열식별번호: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 및 92에 각각 제시된다.
일단 VH 및 VL 절편을 코딩하는 DNA 단편을 수득하면, 이들 DNA 단편을 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작하여, 예를 들어 가변 영역 유전자를 완전한 길이의 항체 쇄 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환시킬 수 있다. 이들 조작에서는, VL- 또는 VH-코딩 DNA 단편이, 또 다른 단백질, 예컨대 항체 불변 영역 또는 가요성 링커를 코딩하는 또 다른 DNA 단편과 작동적으로 연결된다. 이와 관련하여 사용된 바와 같은 용어 "작동적으로 연결된"이란 두 DNA 단편에 의해 코딩된 아미노산 서열이 인 프레임(in-frame)을 유지하도록 이러한 두 DNA 단편을 연결시키는 것을 의미한다.
VH 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 이러한 VH-코딩 DNA를, 중쇄 불변 영역 (힌지, CH1, CH2 및/또는 CH3)을 코딩하는 또 다른 DNA 분자와 작동적으로 연결시킴으로써 완전한 길이의 중쇄 유전자로 전환시킬 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조), 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역, 예를 들어, IgG1 영역일 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-코딩 DNA는 중쇄 CH1 불변 영역만을 코딩하는 또 다른 DNA 분자와 작동적으로 연결될 수 있다.
VL 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 이러한 VL-코딩 DNA를, 경쇄 불변 영역 CL을 코딩하는 또 다른 DNA 분자와 작동적으로 연결시킴으로써 완전한 길이의 경쇄 유전자 (뿐만 아니라 Fab 경쇄 유전자)로 전환시킬 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조), 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 창출하기 위하여, VH- 및 VL-코딩 DNA 단편을, 가요성 링커를 코딩하는, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3을 코딩하는 또 다른 단편과 작동적으로 연결시켜, VH 및 VL 서열이 연속되는 단일 쇄 단백질로서 발현될 수 있도록 하는데, 이러한 VL 영역과 VH 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다 (예를 들어, 문헌 [Bird et al.(1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554] 참조).
또한 본원에는 본원에 기재된 항체, 예를 들어, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11, 7A11, CD73.3 및/또는 CD73.4 모노클로날 항체의 것과 상동인 VH 및 VL 서열 또는 완전한 길이의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 분자가 제공된다. 예시적인 핵산 분자는 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11, 7A11, CD73.3 및/또는 CD73.4 모노클로날 항체의 VH 및 VL 서열 또는 완전한 길이의 중쇄 및 경쇄, 예를 들어 표 35에 제시된 서열을 코딩하는 핵산 분자와 적어도 70% 동일한, 예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 서열을 코딩한다. 예를 들어, 본원에는 서열식별번호: 139 및 서열식별번호: 140 또는 141; 서열식별번호: 237 및 서열식별번호: 140 또는 141; 서열식별번호: 142 및 서열식별번호: 143, 144 또는 145; 서열식별번호: 146 및 서열식별번호: 147; 서열식별번호: 148 및 서열식별번호: 149 또는 150; 서열식별번호: 151 및 서열식별번호: 152; 서열식별번호: 153 및 서열식별번호: 154; 서열식별번호: 155 및 서열식별번호: 156 또는 157 또는 242; 서열식별번호: 158 및 서열식별번호: 159; 서열식별번호: 160 및 서열식별번호: 161과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 VH 쇄 및 VL 쇄를 포함하는 항-CD73 항체가 제공된다. 또한, 서열식별번호: 134, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 243, 266 (중쇄) 및 서열식별번호: 244 또는 245 (경쇄); 서열식별번호: 211, 212, 213 또는 246 및 서열식별번호: 247, 248 또는 249; 서열식별번호: 235, 236 또는 250 및 251; 서열식별번호: 252 및 서열식별번호: 253 또는 254; 서열식별번호: 255 및 서열식별번호: 256; 서열식별번호: 257 및 서열식별번호: 258; 서열식별번호: 259 및 서열식별번호: 260 또는 261; 서열식별번호: 262 및 서열식별번호: 263; 서열식별번호: 264 및 서열식별번호: 265와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-CD73 항체가 제공된다. 또한 본원에는, 예를 들어 코돈 최적화를 위하여 침묵 돌연변이 (즉, 핵산 분자의 번역시 생성되는 아미노산 서열을 변경시키지 않는 염기 변화)를 수반한 핵산 분자가 제공된다.
XI. 항체 생성
본 발명의 각종 항체, 예를 들어 본원에 개시된 항-인간 CD73 항체와 동일한 에피토프와 경쟁하거나 또는 이와 결합하는 항체는 공지된 각종 기술, 예컨대 문헌 [Kohler and Milstein, Nature 256: 495 (1975)]에 기재된 표준 체세포 혼성화 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 체세포 혼성화 과정이 바람직하긴 하지만, 원칙적으로 모노클로날 항체를 생성하기 위한 다른 기술, 예를 들어 B 림프구의 바이러스 또는 발암성 형질전환, 인간 항체 유전자의 라이브러리를 이용하는 파지 디스플레이 기술을 이용할 수 있다.
하이브리도마를 제조하는 데 바람직한 동물 시스템은 뮤린 시스템이다. 마우스에서의 하이브리도마 생성은 매우 널리 정립된 과정이다. 융합을 위해 면역된 비장세포를 단리하기 위한 면역 프로토콜 및 기술이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 융합 파트너 (예를 들어, 뮤린 골수종 세포) 및 융합 과정이 또한 공지되어 있다.
본원에 기재된 키메라 또는 인간화 항체는 상기 언급된 바와 같이 제조된 뮤린 모노클로날 항체의 서열에 근거하여 제조될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 면역글로불린을 코딩하는 DNA는 관심 뮤린 하이브리도마로부터 수득할 수 있고, 표준 분자 생물학 기술을 이용하여 비-뮤린 (예를 들어, 인간) 면역글로불린 서열을 함유하도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 키메라 항체를 창출하기 위하여, 뮤린 가변 영역을 관련 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 인간 불변 영역과 연결시킬 수 있다 [예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 (Cabilly et al.) 참조]. 인간화 항체를 창출하기 위하여, 뮤린 CDR 영역을 관련 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 인간 프레임워크 내로 삽입할 수 있다 [예를 들어, 미국 특허 번호 5,225,539 (Winter), 및 미국 특허 번호 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 (Queen et al.) 참조].
한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 인간 모노클로날 항체이다. CD73에 대항하여 유도된 상기 인간 모노클로날 항체는 마우스 시스템이 아니라 인간 면역 체계의 일부를 수반하는 트랜스제닉 또는 트랜스크로모솜 마우스를 이용하여 생성될 수 있다. 이들 트랜스제닉 및 트랜스크로모솜 마우스는 본원에서 HuMAb 마우스 및 KM 마우스로서 각각 지칭된 마우스를 포함하고, 집합적으로 본원에서 "인간 Ig 마우스"로서 지칭된다.
HuMAb 마우스® [메다렉스, 인크.(Medarex, Inc.)]는 내인성 μ 및 κ 쇄 유전자자리를 불활성화시키는 표적화된 돌연변이와 함께, 재배열되지 않은 인간 중쇄 (μ 및 γ) 및 κ 경쇄 면역글로불린 서열을 코딩하는 인간 면역글로불린 유전자 작은 유전자자리를 함유한다 (예를 들어, 문헌 [Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859] 참조). 따라서, 상기 마우스는 마우스 IgM 또는 κ의 저하된 발현을 나타내고, 면역에 반응하여 도입된 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스진은 부류 전환 및 체세포 돌연변이를 진행하여 고 친화성 인간 IgGκ 모노클로날을 생성시킨다 (Lonberg, N. et al. (1994), 상기 참조; Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13:65-93, and Harding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci. 764:536-546). HuMab 마우스의 제조와 사용, 및 이러한 마우스에 의해 수반된 게놈 변형이 문헌 [Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et al. (1993) International Immunology 5:647-656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-3724; Choi et al.(1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12:821-830; Tuaillon et al.(1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591; and Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851; 이들 모두의 내용은 그 전문이 본원에 구체적으로 참조로 포함된다]에 추가로 기재되어 있다. 추가로, 미국 특허 번호 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,789,650; 5,877,397; 5,661,016; 5,814,318; 5,874,299; 및 5,770,429 (모두 Lonberg and Kay); 미국 특허 번호 5,545,807 (Surani et al.); PCT 공개 번호 WO 92/03918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97/13852, WO 98/24884 및 WO 99/45962 (모두 Lonberg and Kay); 및 PCT 공개 번호 WO 01/14424 (Korman et al.)을 참조할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 트랜스진 및 트랜스크로모솜 상에 인간 면역글로불린 서열을 수반하는 마우스, 예컨대 인간 중쇄 트랜스진 및 인간 경쇄 트랜스크로모솜을 수반하는 마우스를 이용하여 생성된다. 본원에서 "KM 마우스"로서 지칭된 상기 마우스는 PCT 공개 번호 WO 02/43478 (Ishida et al.)에 상세히 기재되어 있다.
또한 추가로, 인간 면역글로불린 유전자를 발현하는 대체 트랜스제닉 동물 시스템은 관련 기술분야에서 이용 가능하고, 본원에 기재된 항-CD73 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 제노마우스(Xenomouse) [앱제닉스, 인크.(Abgenix, Inc.)]로서 지칭된 대체 트랜스제닉 시스템을 사용할 수 있고; 이러한 마우스는, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,939,598; 6,075,181; 6,114,598; 6, 150,584 및 6,162,963 (Kucherlapati et al.)에 기재되어 있다.
더욱이, 인간 면역글로불린 유전자를 발현하는 대체 트랜스크로모솜 동물 시스템은 관련 기술분야에서 이용 가능하고, 본원에 기재된 항-CD73 항체를 생성시키기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, "TC 마우스"로서 지칭된, 인간 중쇄 트랜스크로모솜과 인간 경쇄 트랜스크로모솜 둘 다를 수반하는 마우스를 사용할 수 있고; 이러한 마우스는 문헌 [Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727]에 기재되어 있다. 더욱이, 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스크로모솜을 수반하는 암소가 관련 기술분야에 보고되었고 (문헌 [Kuroiwa et al. (2002) Nature Biotechnology 20:889-894]) 및 본원에 기재된 항-CD73 항체를 생성시키기 위해 사용될 수 있다.
인간 항체, 예를 들어, 인간 항-CD73 항체를 생성하기 위하여 관련 기술분야에 기재된 부가의 마우스 시스템은 (i) 내인성 마우스 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 상동 재조합을 통하여, 내인성 마우스 불변 영역과 작동적으로 연결된 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로 대체시켜, 키메라 항체 (인간 V/마우스 C)가 마우스에서 생성된 다음, 연속해서 표준 재조합 DNA 기술을 이용하여 완전한 인간 항체로 전환되도록 하는 벨록임뮨(VelocImmune®) 마우스 [레제네론 파르마슈티칼즈, 인크.(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)]; 및 (ii) 마우스가 재배열되지 않은 인간 중쇄 가변 영역은 함유하지만, 단일 재배열된 인간 공통 경쇄 가변 영역은 그렇지 않은 메모(MeMo®) 마우스 [메루스 바이오파르마슈티칼즈, 인크.(Merus Biopharmaceuticals, Inc.)]를 포함한다. 이러한 마우스, 및 항체를 생성시키기 위한 그의 용도는, 예를 들어 WO 2009/15777, US 2010/0069614, WO 2011/072204, WO 2011/097603, WO 2011/163311, WO 2011/163314, WO 2012/148873, US 2012/0070861 및 US 2012/0073004에 기재되어 있다.
본원에 기재된 인간 모노클로날 항체는 또한, 인간 면역글로불린 유전자의 라이브러리를 스크리닝하기 위한 파지 디스플레이 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 인간 항체를 단리하기 위한 상기 파지 디스플레이 방법이 관련 기술분야에 정립되었다 [예를 들어: 미국 특허 번호 5,223,409; 5,403,484; 및 5,571,698 (Ladner et al.); 미국 특허 번호 5,427,908 및 5,580,717 (Dower et al.); 미국 특허 번호 5,969,108 및 6,172,197 (McCafferty et al.); 및 미국 특허 번호 5,885,793; 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915 및 6,593,081 (Griffiths et al.) 참조].
본원에 기재된 인간 모노클로날 항체는 또한, 그 내로 인간 면역 세포를 재구성시켜, 면역시 인간 항체 반응이 생성될 수 있도록 한 SCID 마우스를 이용하여 제조할 수 있다. 이러한 마우스는, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,476,996 및 5,698,767 (Wilson et al.)에 기재되어 있다.
면역
CD73에 대한 완전한 인간 항체를 생성하기 위하여, 인간 면역글로불린 유전자를 함유하는 트랜스제닉 또는 트랜스크로모솜 마우스 (예를 들어, HCo12, HCo7 또는 KM 마우스)를, 예를 들어 문헌 [Lonberg et al. (1994) Nature 368(6474):856-859; Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology 14:845-851] 및 WO 98/24884에서 다른 항원에 대하여 기재된 바와 같이, CD73 항원의 정제되거나 또는 강화된 제제 및/또는 CD73을 발현하는 세포로 면역시킬 수 있다. 또 다른 한편으론, 마우스를, 인간 CD73을 코딩하는 DNA로 면역시킬 수 있다. 바람직하게, 상기 마우스는 첫 번째 주입시 6 내지 16주생일 것이다. 예를 들어, 재조합 CD73 항원의 정제되거나 또는 강화된 제제 (5 내지 50 μg)를 사용하여 HuMAb 마우스를 복강내 면역시킬 수 있다. CD73 항원의 정제되거나 또는 강화된 제제를 이용하여 면역시키는 것이 항체를 생성시키지 않는 경우에는, 마우스를 또한, CD73을 발현하는 세포, 예를 들어 세포주로 면역시켜 면역 반응을 증진시킬 수 있다. 예시적인 세포주는 CD73-과발현성 안정적 CHO 및 라지(Raji) 세포주를 포함한다.
각종 항원을 이용한 누적된 경험에 따르면, 리비(Ribi) 아주반트 내의 항원을 이용하여 초기에 복강내 (IP) 또는 피하 (SC) 면역시킨 다음, 리비 아주반트 내의 항원을 이용하여 격주로 IP/SC 면역 (총 10회 이하)시킨 경우에, HuMAb 트랜스제닉 마우스가 가장 잘 반응하는 것으로 밝혀졌다. 눈뒤 출혈에 의해 수득된 혈장 샘플을 이용한 면역 프로토콜 과정 전반에 걸쳐 면역 반응을 모니터링할 수 있다. 이러한 혈장을 대상으로 하여 ELISA 및 FACS (다음에 언급된 바와 같음)에 의해 스크리닝할 수 있고, 충분한 역가의 항-CD73 인간 면역글로불린을 수반한 마우스를 융합에 사용할 수 있다. 희생시켜 비장과 림프절을 꺼내기 3일 전에 마우스를 항원으로 정맥내 부스팅할 수 있다. 각 면역에 대하여 2 내지 3개의 융합을 수행할 필요가 있는 것으로 예상된다. 6마리 내지 24마리의 마우스가 전형적으로, 각 항원에 대해 면역된다. 통상적으로, HCo7, HCo12, 및 KM 계통을 사용한다. 또한, HCo7 트랜스진과 HCo12 트랜스진 둘 다를 함께 번식시켜, 2개의 상이한 인간 중쇄 트랜스진 (HCo7/HCo12)을 갖는 단일 마우스가 되도록 할 수 있다.
CD73에 대한 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마의 생성
본원에 기재된 인간 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마를 생성하기 위하여, 면역시킨 마우스로부터의 비장 세포 및/또는 림프절 세포를 단리하고, 이를 적절한 불멸화 세포주, 예컨대 마우스 골수종 세포주와 융합시킬 수 있다. 이로써 생성된 하이브리도마를 대상으로 하여 항원-특이적 항체의 생성에 관하여 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, 면역시킨 마우스로부터의 비장 림프구의 단일 세포 현탁액을, 50% PEG를 이용하여 Sp2/0 비분비성 마우스 골수종 세포 (ATCC, CRL 1581)와 융합시킬 수 있다. 세포를 평저 미세역가 플레이트 내에 대략 2x105개로 플레이팅한 다음, 10% 태아 클론 혈청, 18% "653" 조건화 배지, 5% 오리젠(origen) (IGEN), 4 mM L-글루타민, 1 mM 소듐 피루베이트, 5 mM HEPES, 0.055 mM 2-메르캅토에탄올, 50 단위/ml 페니실린, 50 mg/ml 스트렙토마이신, 50 mg/ml 젠타마이신 및 1X HAT [시그마(Sigma)]를 함유하는 선택적 배지에서 2주 동안 인큐베이션한다. 대략 2주 후, HAT를 HT로 대체시킨 배지에서 세포를 배양할 수 있다. 이어서, 개개의 웰을 대상으로 하여 인간 모노클로날 IgM 및 IgG 항체에 관하여 알아보기 위해 ELISA에 의해 스크리닝할 수 있다. 일단 광범위한 하이브리도마 성장이 이루어지면, 통상 10 내지 14일 후에 배지를 관찰할 수 있다. 항체 분비성 하이브리도마를 재플레이팅하고, 다시 스크리닝하며, 인간 IgG에 대해 여전히 양성인 경우에는, 상기 모노클로날 항체를 제한 희석함으로써 적어도 2회 서브클로닝하였다. 이어서, 안정한 서브클론을 시험관 내에서 배양하여 조직 배양 배지 중에 소량의 항체를 생성시켜, 이를 특징 확인에 사용할 수 있다.
인간 모노클로날 항체를 정제하기 위하여, 선별된 하이브리도마를, 모노클로날 항체 정제를 위해 2리터 스피너-플라스크에서 성장시킬 수 있다. 상등액을 여과하고 농축시킨 후, 단백질 A-세파로스 [파르마시아 (Pharmacia; 미국 뉴저지주 피스카타웨이)]를 이용하여 친화 크로마토그래피할 수 있다. 용출된 IgG를 겔 전기영동 및 고 성능 액체 크로마토그래피에 의해 검사하여 순도를 보장할 수 있다. 완충제 용액을 PBS로 교환할 수 있고, 그 농도를, 1.43 흡광 계수를 이용하여 OD280에 의해 결정할 수 있다. 모노클로날 항체를 등분하고, 이를 -80℃ 하에 저장할 수 있다.
XII. 항체 제작
CD73에 대한 모노클로날 항체를 생산하는 형질감염세포의 생성
그에 대한 서열이 제공되는 특이적 항체와 다른 관련 항-CD73 항체 둘 다를 포함한 본 발명의 항체는, 예를 들어 관련 기술분야에 널리 공지된 바와 같은 재조합 DNA 기술과 유전자 형질감염 방법의 조합을 이용하여, 숙주 세포 형질감염세포에서 생성될 수 있다 (Morrison, S. (1985) Science 229:1202).
예를 들어, 항체, 또는 그의 항체 단편을 발현하기 위하여, 부분적 또는 완전한 길이의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA를, 표준 분자 생물학 기술 (예를 들어, 관심 항체를 발현하는 하이브리도마를 이용하는 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝)에 의해 수득할 수 있고, 이러한 DNA를 발현 벡터 내로 삽입하여, 유전자가 전사 및 번역 제어 서열과 작동적으로 연결되도록 할 수 있다. 이와 관련하여, 용어 "작동적으로 연결된"이란 항체 유전자가 벡터 내로 라이게이션되어, 이러한 벡터 내의 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 그의 의도된 기능을 제공하도록 하는 것을 의미한다. 발현 벡터와 발현 제어 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 화합성이 되도록 선택된다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별도의 벡터 내로 삽입될 수 있거나 또는 양 유전자는 동일한 발현 벡터 내로 삽입된다. 항체 유전자는 표준 방법 (예를 들어, 항체 유전자 단편 및 벡터 상의 상보성 제한 부위의 라이게이션, 또는 제한 부위가 존재하지 않는 경우에는 평활 말단 라이게이션)에 의해 발현 벡터(들) 내로 삽입된다. 본원에 기재된 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 사용하여, VH 절편이 벡터 내의 CH 절편(들)과 작동적으로 연결되고 VL 절편이 벡터 내의 CL 절편과 작동적으로 연결되도록, 목적하는 이소형의 중쇄 불변 영역과 경쇄 불변 영역을 이미 코딩하는 발현 벡터 내로 삽입함으로써, 임의의 항체 이소형의 완전한 길이의 항체 유전자를 창출시킬 수 있다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터의 항체 쇄의 분비를 촉진시켜 주는 시그널 펩티드를 코딩할 수 있다. 항체 쇄 유전자를 벡터 내로 클로닝하여, 시그널 펩티드가 항체 쇄 유전자의 아미노 말단과 인 프레임 연결되도록 할 수 있다. 이러한 시그널 펩티드는 면역글로불린 시그널 펩티드 또는 이종 시그널 펩티드 (즉, 비-면역글로불린 단백질로부터의 시그널 펩티드)일 수 있다.
항체 쇄 유전자 이외에도, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포 내의 항체 쇄 유전자의 발현을 제어하는 조절성 서열을 수반할 수 있다. 용어 "조절성 서열"은 프로모터, 증강인자, 및 항체 쇄 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 다른 발현 제어 요소 (예를 들어, 폴리아데닐화 시그널)를 포함한다. 이러한 조절성 서열은, 예를 들어 문헌 [Goeddel, Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)]에 기재되어 있다. 조절성 서열의 선별을 포함한, 발현 벡터의 설계는 형질전환시키고자 하는 숙주 세포의 선택, 목적하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 요인에 좌우될 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 것이다. 포유류 숙주 세포 발현에 바람직한 조절성 서열은 포유류 세포에서의 고 수준의 단백질 발현을 지시하는 바이러스 요소, 예컨대 시토메갈로바이러스 (CMV), 원숭이 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스, [예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터 (AdMLP)] 및 폴리오마로부터 유래된 프로모터 및/또는 증강인자를 포함한다. 또 다른 한편으론, 비바이러스 조절성 서열, 예컨대 유비퀴틴 프로모터 또는 β-글로빈 프로모터를 사용할 수 있다. 또한 추가로, 조절성 요소는 인간 T 세포 백혈병 바이러스 유형 1의 장 말단 반복 서열 및 SV40 초기 프로모터로부터의 서열을 함유하는, SRα 프로모터 시스템과 같은 상이한 공급원으로부터의 서열로 구성된다 (Takebe, Y. et al. (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472).
항체 쇄 유전자 및 조절성 서열 이외에도, 재조합 발현 벡터는 부가의 서열, 예컨대 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열 (예를 들어, 복제 기점) 및 선별성 마커 유전자를 수반할 수 있다. 선별성 마커 유전자는 그 내로 벡터가 도입되는 숙주 세포의 선별을 촉진시켜 준다 [예를 들어, 미국 특허 번호 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 (모두 Axel et al.) 참조]. 예를 들어, 전형적으로 선별성 마커 유전자는 그 내로 벡터가 도입되는 숙주 세포 상에 약물, 예컨대 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여해 준다. 바람직한 선별성 마커 유전자는 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 유전자 (메토트렉세이트 선별/증폭을 이용하여 dhfr- 숙주 세포에 사용하기 위함) 및 neo 유전자 (G418 선별을 위함)를 포함한다.
경쇄 및 중쇄의 발현을 위하여, 이러한 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 벡터(들)를 표준 기술에 의해 숙주 세포 내로 형질감염시킨다. 각종 형태의 용어 "형질감염"은 외인성 DNA를 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내로 도입하기 위해 흔히 사용되는 광범위한 기술, 예를 들어, 전기천공, 인산칼슘 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포괄하고자 한다. 본원에 기재된 항체를 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 발현시키는 것이 이론상 가능하긴 하지만, 상기 항체를 진핵 세포, 및 가장 바람직하게 포유류 숙주 세포에서 발현시키는 것이 가장 바람직한데, 이는 이러한 진핵 세포, 및 특히 포유류 세포가 원핵 세포보다, 적당하게 폴딩되고 면역학상 활성인 항체를 더 잘 어셈블리하고 분비할 것으로 예상되기 때문이다. 항체 유전자의 원핵 발현은 활성 항체를 고 수율로 생성하는 데 효과가 없는 것으로 보고되었다 (Boss, M. A. and Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6:12-13). 본 발명의 항체는 또한, 효모 피치아 파스토리스의 당조작된 균주에서 생성될 수 있다 (Li et al. (2006) Nat. Biotechnol. 24:210).
본원에 기재된 재조합 항체를 발현하는 데 바람직한 포유류 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 (CHO 세포) (예를 들어, 문헌 [R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621]에 기재된 바와 같이, DHFR 선별성 마커와 함께 사용된, 문헌 [Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기재된 dhfr- CHO 세포 포함), NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 특히, NSO 골수종 세포와 함께 사용하는 경우에, 또 다른 바람직한 발현 시스템은 WO 87/04462, WO 89/01036 및 EP 338,841에 개시된 GS 유전자 발현 시스템이다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터를 포유류 숙주 세포 내로 도입하는 경우에는, 숙주 세포에서의 항체의 발현을 허용하기에 충분하거나, 또는 보다 바람직하게, 숙주 세포가 성장하는 배양 배지 내로의 항체의 분비를 허용하기에 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 항체를 생성시킨다. 표준 단백질 정제 방법을 이용하여 배양 배지로부터 항체를 회수할 수 있다.
본 발명의 항체 폴리펩티드 쇄의 N- 및 C-말단은 흔히 관찰되는 번역 후 변형으로 인해 예상되는 서열과 상이할 수 있다. 예를 들어, C-말단 리신 잔기가 종종, 항체 중쇄로부터 생략된다 [Dick et al. (2008) Biotechnol. Bioeng. 100:1132]. N-말단 글루타민 잔기, 및 덜한 정도로는 글루타메이트 잔기가 종종, 치료용 항체의 경쇄와 중쇄 둘 다에서 피로글루타메이트 잔기로 전환된다 [Dick et al. (2007) Biotechnol. Bioeng. 97:544; Liu et al. (2011) JBC 28611211; Liu et al. (2011) J. Biol. Chem. 286:11211].
XIII. 검정
본원에 기재된 항체를 대상으로 하여, 예를 들어, 표준 ELISA에 의해 CD73과의 결합성에 관하여 시험할 수 있다. 간략하게 언급하면, 미세역가 플레이트를 PBS 중의 1 내지 2 μg/ml 하의 정제된 CD73으로 코팅한 다음, PBS 중의 5% 소 혈청 알부민으로 차단시킨다. 항체의 희석물 (예를 들어, CD73-면역시킨 마우스로부터의 혈장의 희석물)을 각 웰에 부가하고, 37℃ 하에 1 내지 2시간 동안 인큐베이션한다. 상기 플레이트를 PBS/트윈(Tween)으로 세척한 다음, 37℃ 하에 1시간 동안 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)와 접합된 2차 시약 (예를 들어, 인간 항체의 경우, 염소-항-인간 IgG Fc-특이적 폴리클로날 시약)과 함께 인큐베이션한다. 세척한 후, 상기 플레이트를 ABTS 기질 [모스 인크.(Moss Inc) 생성물: ABTS-1000]로 전개하고, OD 415-495 하에 분광광도계에 의해 분석한다. 이어서, 면역시킨 마우스로부터의 혈청을 대상으로 하여, 인간 CD73을 발현하는 세포주와는 결합하지만, CD73을 발현하지 않는 대조군 세포주와는 결합하지 않는 것에 관하여 유동 세포계수법에 의해 추가로 스크리닝한다. 간략하게 언급하면, 항-CD73 항체의 결합성은 CD73 발현성 CHO 세포를 항-CD73 항체와 함께 1:20 희석도 하에 인큐베이션함으로써 평가한다. 상기 세포를 세척하고, PE-표지된 항-인간 IgG Ab를 이용하여 그 결합을 검출한다. FACScan 유동 세포계수법 [벡톤 디킨슨 (Becton Dickinson; 미국 캘리포니아주 산호세)]을 이용하여 유동 세포계수 분석을 수행한다. 바람직하게, 가장 높은 역가를 발생하는 마우스가 융합에 사용될 것이다.
상기 언급된 바와 같은 ELISA 검정을 이용하여 항체에 관하여 스크리닝할 수 있으므로, CD73 면역원과 양성 반응성을 나타내는 항체를 생산하는 하이브리도마에 관하여 스크리닝할 수 있다. 이어서, 바람직하게 고 친화도로 CD73과 결합하는 항체를 생산하는 하이브리도마를 서브클로닝하고 추가로 그 특징을 규명할 수 있다. 이어서, 세포 은행을 만들고 항체 정제를 위하여, 모 세포의 반응성을 보유하고 있는 각 하이브리도마로부터 1개의 클론을 선택할 수 있다 (ELISA에 의함).
항-CD73 항체를 정제하기 위하여, 선별된 하이브리도마를, 모노클로날 항체 정제를 위해 2리터 스피너-플라스크에서 성장시킬 수 있다. 상등액을 여과하고 농축시킨 후, 단백질 A-세파로스 (파르마시아; 미국 뉴저지주 피스카타웨이)를 이용하여 친화 크로마토그래피할 수 있다. 용출된 IgG를 겔 전기영동 및 고 성능 액체 크로마토그래피에 의해 검사하여 순도를 보장할 수 있다. 완충제 용액을 PBS로 교환할 수 있고, 그 농도를, 1.43 흡광 계수를 이용하여 OD280에 의해 결정할 수 있다. 모노클로날 항체를 등분하고, 이를 -80℃ 하에 저장할 수 있다.
상기 선별된 항-CD73 모노클로날 항체가 독특한 에피토프와 결합하는 지를 결정하기 위해, 각 항체를 시판용 시약 [피어스 (Pierce; 미국 일리노이주 록퍼드)]을 이용하여 비오티닐화할 수 있다. 비오티닐화 mAb 결합은 스트렙타비딘 표지된 프로브를 이용하여 검출할 수 있다. 표지되지 않은 모노클로날 항체 및 비오티닐화 모노클로날 항체를 사용하는 경쟁 연구는 상기 언급된 바와 같은 CD73 코팅된-ELISA 플레이트를 이용하여 수행될 수 있다.
정제된 항체의 이소형을 결정하기 위하여, 특별한 이소형의 항체에 대해 특이적인 시약을 이용하여 이소형 ELISA를 수행할 수 있다. 예를 들어, 인간 모노클로날 항체의 이소형을 결정하기 위하여, 미세역가 플레이트의 웰을 4℃ 하에 밤새 1 μg/ml의 항-인간 면역글로불린으로 코팅할 수 있다. 1% BSA로 차단시킨 후, 상기 플레이트를 주위 온도에서 1 내지 2시간 동안 1 μg /ml 이하의 시험 모노클로날 항체 또는 정제된 이소형 대조군과 반응시킨다. 이어서, 상기 웰을 인간 IgG1 또는 인간 IgM-특이적 알칼리성 포스파타제-접합된 프로브와 반응시킬 수 있다. 플레이트를 상기 언급된 바와 같이 전개하고 분석한다.
CD73을 발현하는 살아있는 세포에 대한 모노클로날 항체의 결합성을 시험하기 위하여, 본 실시예에 기재된 바와 같은 유동 세포계수법을 사용할 수 있다. 간략하게 언급하면, 막 결합된 CD73을 발현하는 세포주 (표준 성장 조건 하에 성장됨)를, 4℃ 하에 1시간 동안 0.1% BSA를 함유하는 PBS 중의 각종 농도의 모노클로날 항체와 혼합한다. 세척 후, 상기 세포를 1차 항체 염색과 동일한 조건하에 플루오레세인-표지된 항-IgG 항체와 반응시킨다. 단일 세포 상에 게이팅하는 광 및 측면 산란 특성을 이용하여 FACScan 기기에 의해 샘플을 분석할 수 있고, 표지된 항체의 결합을 결정한다. 형광 현미경검사를 이용하는 대체 검정이 유동 세포계수법 검정에 덧붙여 또는 유동 세포계수법 검정 대신 사용될 수 있다. 세포는 정확히 상기 언급된 바와 같이 염색할 수 있고 형광 현미경검사에 의해 조사할 수 있다. 이러한 방법은 개개의 세포의 가시화를 허용하지만, 항원의 밀도에 따라서 그 감도가 저하될 수 있다.
항-CD73 항체를 대상으로 하여, 웨스턴 블롯팅에 의해 CD73 항원과의 반응성에 관하여 추가로 시험할 수 있다. 간략하게 언급하면, CD73을 발현하는 세포로부터의 세포 추출물을 제조하고, 이를 소듐 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동시킬 수 있다. 전기영동 후, 분리된 항원을 니트로셀룰로스 막으로 옮기고, 20% 마우스 혈청으로 차단시키며, 시험하고자 하는 모노클로날 항체로 프로빙할 것이다. 항-IgG 알칼리성 포스파타제를 이용하여 IgG 결합을 검출할 수 있고 BCIP/NBT 기질 정제 [시그마 케미칼 캄파니 (Sigma Chem. Co.; 미국 미주리주 세인트 루이스)]로 전개할 수 있다.
각종 항-CD73 항체의 결합 친화성, 교차 반응성, 및 결합 동역학을 분석하는 방법은 관련 기술분야에 공지된 표준 검정, 예를 들어, 비아코어® 2000 SPR 기기 (비아코어 AB; 스웨덴 웁살라)를 이용하는 비아코어® 표면 플라스몬 공명 (SPR) 분석을 포함한다.
XIV. 면역접합체 및 항체 유도체
본원에 기재된 항체는 샘플 시험 및 생체내 영상화를 포함한 진단 목적에 사용될 수 있고, 이러한 목적을 위하여 항체 (또는 그의 결합성 단편)를 적절한 검출 가능한 작용제와 접합시켜 면역접합체를 형성할 수 있다. 진단 목적에 적절한 작용제는 전신 영상화의 경우에는 방사성 동위원소를 포함하고, 샘플 시험의 경우에는 방사성 동위원소, 효소, 형광성 표지 및 다른 적합한 항체 태그를 포함하는 검출 가능한 표지이다.
검출 가능한 표지는 시험관내 진단학 분야에서 현재 사용되고 있는 각종 유형 중 임의의 것일 수 있는데, 이는 금속 졸, 예컨대 콜로이드상 금, 동위원소, 예컨대 예를 들어, N2S2, N3S 또는 N4 유형의 펩티드성 킬레이트제와 함께 제시된 I125 또는 Tc99를 포함한 미립자 표지; 형광성 마커, 비오틴, 발광성 마커, 인광성 마커 등을 포함한 발색단 뿐만 아니라 소정의 기질을 검출 가능한 마커로 전환시켜 주는 효소 표지, 및 폴리머라제 연쇄 반응 등에 의한 증폭 후에 그 모습을 드러내는 폴리뉴클레오티드 태그를 포함한다. 이때 비오티닐화 항체는 아비딘 또는 스트렙타비딘 결합에 의해 검출 가능할 것이다. 적합한 효소 표지는 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 등을 포함한다. 예를 들어, 표지는 1,2 디옥세탄 기질, 예컨대 아다만틸 메톡시 포스포릴옥시 페닐 디옥세탄 (AMPPD), 디소듐 3-(4-(메톡시스피로{1,2-디옥세탄-3,2'-(5'-클로로)트리시클로{3.3.1.1 3,7}데칸}-4-일) 페닐 포스페이트 (CSPD)의 전환 후 화학발광의 존재 또는 형성을 측정함으로써 검출된 효소 알칼리성 포스파타제뿐만 아니라 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 CDP 및 CDP-스타(star®) 또는 다른 발광성 기질, 예를 들어 적합한 란탄 계열 원소, 예컨대 테르븀(III) 및 유로퓸(III)의 킬레이트제일 수 있다. 검출 수단은 선택된 표지에 의해 결정된다. 표지 또는 그의 반응 생성물의 출현은 표지가 미립자이고 적절한 수준으로 축적되는 경우에는 육안을 이용하여 달성될 수 있거나 또는 표준 관례에 따라에 따라서 분광 광도계, 조도계, 형광 측정기 등과 같은 기구를 사용하여 달성될 수 있다.
바람직하게, 접합 방법으로 인해, 실질적으로 (또는 거의) 비-면역원성인 연쇄, 예를 들어, 펩티드- (즉 아미드-), 술피드-, (입체적으로 방해된), 디술피드-, 히드라존-, 및 에테르 연쇄가 생성된다. 이들 연쇄는 거의 비-면역원성이고 혈청 내에서 합리적인 안정성을 나타낸다 (예를 들어, 문헌 [Senter, P. D., Curr. Opin. Chem. Biol. 13 (2009) 235-244]; WO 2009/059278; WO 95/17886 참조).
모이어티 및 항체의 생화학적 성질에 따라서, 상이한 접합 전략을 이용할 수 있다. 모이어티가 50개 내지 500개 아미노산의 자연 발생적 또는 재조합 폴리펩티드인 경우에는, 통상의 기술자에 의해 용이하게 수행될 수 있는, 단백질 접합체의 합성을 위한 화학을 기재하고 있는 교과서 내의 표준 과정이 있다 (예를 들어, 문헌 [Hackenberger, C. P. R., and Schwarzer, D., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 47 (2008) 10030-10074] 참조). 한 실시양태에서, 말레인이미도 모이어티와 항체 또는 모이어티 내의 시스테인 잔기와의 반응을 이용한다. 이는, 예를 들어 항체의 Fab 또는 Fab'-단편이 사용되는 경우에 특히 적합한 커플링 화학이다. 또 다른 한편으론 한 실시양태에서, 항체 또는 모이어티의 C-단말과의 커플링을 수행한다. 단백질, 예를 들어 Fab-단편의 C-말단 변형은 문헌 [Sunbul, M. and Yin, J., Org. Biomol. Chem. 7 (2009) 3361-3371]에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다.
일반적으로 부위 특이적 반응 및 공유 커플링은 자연 아미노산을, 존재하는 다른 관능기의 반응성에 직교하는 반응성을 갖는 아미노산으로 형질전환시키는 것에 근거한다. 예를 들어, 희귀 서열 맥락 내에서의 특이적 시스테인은 알데히드에서 효소적으로 전환될 수 있다 (문헌 [Frese, M. A., and Dierks, T., ChemBioChem. 10 (2009) 425-427] 참조). 소정의 서열 맥락에서 자연 아미노산을 수반한 특정의 효소의 특이적 효소 반응성을 활용함으로써 목적하는 아미노산 변형을 수득하는 것이 또한 가능하다 (예를 들어, 문헌 [Taki, M. et al., Prot. Eng. Des. Sel. 17 (2004) 119-126; Gautier, A. et al. Chem. Biol. 15 (2008) 128-136] 참조). C--N 결합의 프로테아제-촉매된 형성이 문헌 [Bordusa, F., Highlights in Bioorganic Chemistry (2004) 389-403]에 기재되어 있다.
부위 특이적 반응 및 공유 커플링은 또한, 말단 아미노산을 적절한 변형 시약과 선택적으로 반응시킴으로써 달성될 수 있다. N-말단 시스테인과 벤조니트릴의 반응성 (문헌 [Ren, H. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48 (2009) 9658-9662] 참조)을 이용하여 부위 특이적 공유 커플링을 달성할 수 있다. 천연 화학적 라이게이션은 또한, C-말단 시스테인 잔기에 좌우될 수 있다 [Taylor, E. Vogel; Imperiali, B, Nucleic Acids and Molecular Biology (2009), 22 (Protein Engineering), 65-96]. EP 1 074 563에는 양전하를 띤 아미노산의 연장물 내에 위치한 시스테인보다는 음전하를 띤 아미노산의 연장물 내의 시스테인의 더 신속한 반응에 근거하는 접합 방법이 기재되어 있다.
모이어티는 또한, 합성 펩티드 또는 펩티드 모방체일 수 있다. 폴리펩티드가 화학적으로 합성되는 경우, 직교 화학적 반응성을 수반한 아미노산이 이러한 합성 동안 혼입될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [de Graaf, A. J. et al., Bioconjug. Chem. 20 (2009) 1281-1295] 참조). 상당히 다양한 직교 관능기가 문제가 되고 합성 펩티드 내로 도입될 수 있기 때문에, 그러한 펩티드와 링커의 접합은 표준 화학이다.
모노-표지된 폴리펩티드를 수득하기 위해서는, 1:1 화학량론을 수반한 접합체를 크로마토그래피함으로써 다른 접합 부산물로부터 분리할 수 있다. 이러한 과정은 염료 표지된 결합 쌍 구성원과 전하를 띤 링커를 사용함으로써 촉진될 수 있다. 이러한 종류의 표지되고 고도로 음전하를 띤 결합 쌍 구성원을 사용함으로써, 모노 접합된 폴리펩티드를 비-표지된 폴리펩티드 및 2개 이상의 링커를 수반하는 폴리펩티드로부터 용이하게 분리시키는데, 이는 전하 및 분자량 상의 차이를 분리에 이용할 수 있기 때문이다. 표지된 1가 결합제와 같이, 결합되지 않은 성분으로부터 복합체를 정제하는 데에는 형광성 염료가 유용할 수 있다.
한 실시양태에서 항-CD73 항체에 부착된 모이어티는 결합성 모이어티, 표지화 모이어티, 및 생물학상 활성인 모이어티로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 기재된 항체는 또한 치료제와 접합되어 면역접합체, 예컨대 항체-약물 접합체 (ADC)를 형성할 수 있다. 적합한 치료제는 항대사제, 알킬화제, DNA 작은 홈 결합제, DNA 삽입제, DNA 가교 결합제, 히스톤 데아세틸라제 억제제, 핵 수송 억제제, 프로테아솜 억제제, 토포이소머라제 I 또는 II 억제제, 열 쇼크 단백질 억제제, 티로신 키나제 억제제, 항생제, 및 항-유사분열제를 포함한다. ADC에서, 항체 및 치료제는 바람직하게, 절단 가능한 링커, 예컨대 펩티딜, 디술피드, 또는 히드라존 링커를 통하여 접합된다. 보다 바람직하게, 링커는 펩티딜 링커, 예컨대 Val-Cit, Ala-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Pro-Val-Gly-Val-Val (서열식별번호: 219), Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Ala-Ala-Asn, Cit-Cit, Val-Lys, Lys, Cit, Ser, 또는 Glu이다. ADC는 미국 특허 번호 7,087,600; 6,989,452; 및 7,129,261; PCT 공보 WO 02/096910; WO 07/038658; WO 07/051081; WO 07/059404; WO 08/083312; 및 WO 08/103693; 미국 특허 공보 20060024317; 20060004081; 및 20060247295 (그의 개시내용이 본원에 참조로 포함된다)에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 항-CD73 항체에 대한 다른 용도, 예를 들어 단독요법으로서의 용도가 본원의 다른 곳, 예를 들어 조합 치료에 관한 섹션에 제공된다.
보다 구체적으로, ADC에서, 항체는 약물과 접합되는데, 이러한 항체는 암세포와 같은 항원을 발현하는 표적 세포로 ADC를 유도하기 위한 표적화 작용제로서 기능한다. 바람직하게, 항원은 종양 관련 항원, 즉 암세포에 의해 독특하게 발현되거나 또는 과발현되는 것이다. 일단 거기에서, 약물이 치료제로 작용하기 위해 표적 세포 내부 또는 그 근처에서 방출된다. 암 요법에 있어서 ADC의 작용 기전 및 용도에 관한 고찰은 문헌 [Schrama et al., Nature Rev. Drug Disc. 2006, 5, 147]을 참조할 수 있다.
암 치료를 위해서는, 약물이 바람직하게, 표적화된 암세포의 사멸을 유발시키는 세포독성 약물이다. ADC에 사용될 수 있는 세포독성 약물은 다음 유형의 화합물 및 그의 유사체 및 유도체를 포함한다:
(a) 엔디인, 예컨대 칼리케아미신 (예를 들어, 문헌 [Lee et al., J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 3464 and 3466] 참조) 및 운시알라마이신 (예를 들어, Davies et al., WO 2007/038868 A2 (2007) 및 Chowdari et al., US 8,709,431 B2 (2012) 참조);
(b) 투불리신 (예를 들어, Domling et al., US 7,778,814 B2 (2010); Cheng et al., US 8,394,922 B2 (2013); 및 Cong et al., US 2014/0227295 A1 참조);
(c) CC-1065 및 두오카르마이신 (예를 들어, Boger, US 6,5458,530 B1 (2003); Sufi et al., US 8,461,117 B2 (2013); 및 Zhang et al., US 2012/0301490 A1 (2012) 참조);
(d) 에포틸론 (예를 들어, Vite et al., US 2007/0275904 A1 (2007) 및 US RE42930 E (2011) 참조);
(e) 아우리스타틴 (예를 들어, Senter et al., US 6,844,869 B2 (2005) 및 Doronina et al., US 7,498,298 B2 (2009) 참조);
(f) 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 이량체 (예를 들어, Howard et al., US 2013/0059800 A1(2013); US 2013/0028919 A1 (2013); 및 WO 2013/041606 A1 (2013) 참조); 및
(g) 마이탄시노이드, 예컨대 DM1 및 DM4 (예를 들어, Chari et al., US 5,208,020 (1993) 및 Amphlett et al., US 7,374,762 B2 (2008) 참조).
XV. 이중특이적 분자
본원에 기재된 항체는 이중특이적 분자를 형성하기 위해 사용될 수 있다. 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분은 유도체화하거나 또는 또 다른 관능성 분자, 예를 들어, 또 다른 펩티드 또는 단백질 (예를 들어, 특정 수용체에 대한 또 다른 항체 또는 리간드)와 연결시켜, 적어도 2개의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자와 결합하는 이중특이적 분자를 생성시킬 수 있다. 본원에 기재된 항체는 사실상 유도체화할 수 있거나 또는 2개 이상의 다른 관능성 분자와 연결시켜, 2개 초과의 상이한 결합 부위 및/또는 표적 분자와 결합하는 다중특이적 분자를 생성시킬 수 있는데; 이러한 다중특이적 분자가 또한, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "이중특이적 분자"에 포괄되는 것으로 간주된다. 본원에 기재된 이중특이적 분자를 창출하기 위하여, 본원에 기재된 항체를 하나 이상의 다른 결합성 분자, 예컨대 또 다른 항체, 항체 단편, 펩티드 또는 결합성 모방체와 기능적으로 연결시켜 (예를 들어, 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유적 연합 또는 그 밖의 다른 것에 의함), 이중특이적 분자가 생성되도록 할 수 있다.
따라서, 본원에는 CD73에 대한 적어도 하나의 제1 결합 특이성과 제2의 표적 에피토프에 대한 제2의 결합 특이성을 포함하는 이중특이적 분자가 제공된다. 이중특이적 분자가 다중특이적인, 본원에 기재된 특정 실시양태에서, 상기 분자는 제3의 결합 특이성을 추가로 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 이중특이적 분자는 결합 특이성으로서 적어도 하나의 항체, 또는 그의 항체 단편 [예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 또는 단일 쇄 Fv 포함]을 포함한다. 항체는 또한, 경쇄 또는 중쇄 이량체, 또는 그의 임의의 최소 단편, 예컨대 문헌 [Ladner et al. 미국 특허 번호 4,946,778; 그의 내용이 본원에 명백하게 참조로 포함된다]에 기재된 바와 같은 Fv 또는 단일 쇄 구축물일 수 있다.
이중특이적 분자가 그의 특이적 표적과 결합하는 것은 관련 기술분야에서 승인된 방법, 예컨대 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA), 방사성 면역검정 (RIA), FACS 분석, 생물 검정 (예를 들어, 성장 억제), 또는 웨스턴 블롯 검정을 이용하여 확증할 수 있다. 이들 검정 각각은 일반적으로, 관심 복합체에 대해 특이적인 표지된 시약 (예를 들어, 항체)을 이용함으로써, 특별한 관심 단백질-항체 복합체의 존재를 검출한다.
XVI. 조성물
제약상 허용되는 담체와 함께 제제화된, 본원에 기재된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분(들) 중 하나 또는 조합물을 함유하는 조성물, 예를 들어, 제약 조성물이 추가로 제공된다. 이러한 조성물은 본원에 기재된 항체, 또는 면역접합체 또는 이중특이적 분자 중 하나 또는 조합물 (예를 들어, 2개 이상의 상이한 조합물)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 제약 조성물은 표적 항원 상의 상이한 에피토프와 결합하거나 또는 상보적 활성을 갖는 항체 (또는 면역접합체 또는 이중특이적 분자)의 조합물을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 조성물은 항-CD73 항체를 적어도 1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 50 mg/ml, 100 mg/ml, 150 mg/ml, 200 mg/ml, 1 내지 300 mg/ml, 또는 100 내지 300 mg/ml의 농도로 포함한다.
본원에 기재된 제약 조성물은 또한, 조합 요법, 즉 다른 작용제와 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 이러한 조합 요법은 본원에 기재된 항-CD73 항체를 적어도 하나의 다른 항암제 및/또는 T-세포 자극제 (예를 들어, 활성화제)와 조합하여 포함할 수 있다. 조합 요법에 사용될 수 있는 치료제의 예는 본원에 기재된 항체의 용도에 관한 섹션에서 다음에 보다 상세히 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 암의 치료를 위해 사용되는 다른 화합물, 약물, 및/또는 작용제를 포함할 수 있다. 이러한 화합물, 약물, 및/또는 작용제는, 예를 들어 소정의 암에 대한 면역 반응을 자극하는 화학요법 약물, 작은 분자 약물 또는 항체를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 치료 조성물은, 예를 들어 조합 요법에 관한 섹션에 열거된 작용제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "제약상 허용되는 담체"는 생리학적으로 화합성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 바람직하게, 상기 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척수 또는 표피 투여 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의함)에 적합하다. 투여 경로에 따라서, 활성 화합물, 즉 항체, 면역접합체, 또는 이중특이적 분자를, 이러한 화합물을 불활성화시킬 수 있는 산 및 다른 자연 조건의 작용으로부터 상기 화합물을 보호하기 위한 물질로 코팅할 수 있다.
본원에 기재된 제약 화합물은 하나 이상의 제약상 허용되는 염을 포함할 수 있다. "제약상 허용되는 염"은 모 화합물의 목적하는 생물학적 활성을 보유하고 있고 임의의 바람직하지 못한 독성학적 효과를 부여하지 않는 염을 지칭한다 (예를 들어, 문헌 [Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참조). 이러한 염의 예는 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함한다. 산 부가 염은 무독성 무기 산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 아이오드수소산, 아인산 등으로부터 유래된 것뿐만 아니라 무독성 유기 산, 예컨대 지방족 모노- 및 디카르복실산, 페닐-치환된 알칸산, 히드록시 알칸산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 술폰산 등으로부터 유래된 것을 포함한다. 염기 부가 염은 알칼리 토금속, 예컨대 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등으로부터 유래된 것뿐만 아니라 무독성 유기 아민, 예컨대 N,N'-디벤질에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 프로카인 등으로부터 유래된 것을 포함한다.
본원에 기재된 제약 조성물은 또한, 제약상 허용되는 항산화제를 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 항산화제의 예는 다음을 포함한다: (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 중황산나트륨, 소듐 메타비술파이트, 아황산나트륨 등; (2) 지용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등.
본원에 기재된 제약 조성물에 이용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사 가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 코팅 재료, 예컨대 레시틴을 사용하고, 분산제의 경우에 요구되는 입자 크기를 유지하며, 계면활성제를 사용함으로써, 적당한 유동성을 유지할 수 있다.
이들 조성물은 또한, 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 미생물의 존재를 방지하는 것은 멸균 과정 (상기 참조)과 각종 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등의 혼입 둘 다에 의해 보장될 수 있다. 등장제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물 내로 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써, 주사 가능한 제약 형태의 흡수를 연장시킬 수 있다.
제약상 허용되는 담체는 멸균성 수용액 또는 분산액, 및 멸균성 주사 가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균성 분말을 포함한다. 제약상 활성 물질을 위한 상기 매질 및 작용제의 용도가 관련 기술분야에 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가 활성 화합물과 불화합성인 경우를 제외하고는, 본원에 기재된 제약 조성물에서의 그의 용도가 고려된다. 보충되는 활성 화합물이 또한 조성물 내로 혼입될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로, 제작 및 저장 조건하에 멸균성이고 안정적이어야만 한다. 이러한 조성물은 용제, 마이크로에멀션, 리포솜, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제제화될 수 있다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액상 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 예를 들어, 코팅재, 예컨대 레시틴을 사용하고, 분산제의 경우에 요구되는 입자 크기를 유지하며, 계면활성제를 사용함으로써, 적당한 유동성을 유지할 수 있다. 많은 경우에, 등장제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨을 조성물 내에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써, 주사 가능한 조성물의 흡수를 연장시킬 수 있다.
적절한 용매 중의 필요한 양의 활성 화합물을, 필요한 만큼의 상기 열거된 성분들 중 하나 또는 조합물과 함께 혼입시킨 다음, 멸균 미세여과함으로써, 멸균성 주사 가능한 용제를 제조할 수 있다. 일반적으로, 활성 화합물을, 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균성 비히클 내로 혼입시킴으로써 분산제를 제조한다. 멸균성 주사 가능한 용제를 제조하기 위한 멸균성 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 활성 성분에 기존의 멸균-여과된 그의 용액으로부터의 임의의 부가 목적 성분이 부가된 활성 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동 건조 (동결건조)이다.
단일 투여 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료하고자 하는 대상체, 및 특별한 투여 방식에 따라서 다양할 것이다. 단일 투여 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로, 치료 효과를 가져다주는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 이러한 양은 100% 중에서, 제약상 허용되는 담체와 조합되는 활성 성분 약 0.01% 내지 약 99%의 범위, 바람직하게 약 0.1% 내지 약 70%, 가장 바람직하게 약 1% 내지 약 30%의 범위일 것이다.
투여량 요법은 목적하는 최적의 반응 (예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 거환을 투여할 수 있거나, 수 회분 용량으로 나누어 일정 시간에 걸쳐 투여할 수 있거나 또는 용량은 치료 상황의 긴급 상황에 따라 비례하여 감소되거나 또는 증가될 수 있다. 투여의 용이성과 투여량의 균일성을 위해서는 비경구 조성물을 투여 단위 형태로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 바와 같은 투여 단위 형태는 치료하고자 하는 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적 개별 단위를 지칭하는데; 각 단위는 요구되는 제약 담체와 연합하여 목적하는 치료 효과를 가져다주는 것으로 계산된 활성 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다. 본원에 기재된 투여 단위 형태에 대한 명세는 (a) 활성 화합물의 독특한 특징 및 달성하고자 하는 특별한 치료 효과, 및 (b) 개개인에서의 감수성을 치료하기 위하여 이러한 활성 화합물의 배합 기술분야에 내재된 제한사항에 직접적으로 좌우된다.
항체를 투여하는 경우, 그 투여량 범위는 숙주 체중 1 kg당 약 0.0001 내지 100 mg, 및 보다 통상적으로 0.01 내지 5 mg이다. 예를 들어 투여량은 0.3 mg/체중 kg, 1 mg/체중 kg, 3 mg/체중 kg, 5 mg/체중 kg 또는 10 mg/체중 kg 또는 1 내지 10 mg/kg의 범위 이내일 수 있다. 예시적인 치료 요법은 1주 1회, 2주 1회, 3주 1회, 4주 1회, 1개월 1회, 3개월마다 1회 또는 3개월 내지 6개월마다 1회 투여하는 것을 수반한다.
일부 방법에서는, 상이한 결합 특이성을 지닌 2개 이상의 모노클로날 항체를 동시에 투여하는데, 이러한 경우에 투여되는 각 항체의 투여량은 상기 표시된 범위 내에 속한다. 항체는 통상적으로 수회 투여한다. 단일 투여 사이의 간격은, 예를 들어 매주, 매월, 3개월마다 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한, 환자에게서 표적 항원에 대한 항체의 혈액 수준을 측정함으로써 표시된 바와 같이 불규칙적일 수 있다. 일부 방법에서는, 약 1 내지 1,000 μg/ml의 혈장 항체 농도, 및 일부 방법에서는 약 25 내지 300 μg/ml의 혈장 항체 농도를 달성하도록 투여량을 조정한다.
항체는 지속 방출 제형으로서 투여될 수 있는데, 이러한 경우에는 투여 빈도를 줄이는 것이 필요하다. 투여량과 투여 빈도는 환자의 항체 반감기에 따라서 다양하다. 일반적으로, 인간 항체가 가장 긴 반감기를 나타내고, 그 다음이 인간화 항체, 키메라 항체, 및 비-인간 항체의 순서다. 투여량과 투여 빈도는 치료가 예방적인지 아니면 치료적인지에 따라서 다양할 수 있다. 예방적 적용에서는, 비교적 적은 투여량이 장기간에 걸쳐 비교적 드문 간격으로 투여된다. 일부 환자는 그의 나머지 여생 동안 치료를 지속적으로 받는다. 치료적 적용에서는, 질환의 진행이 감소되거나 종결될 때까지, 바람직하게는 환자가 질환 증상의 부분적 또는 완전한 완화를 보일 때까지 비교적 고 투여량을 비교적 짧은 간격으로 투여하는 것이 종종 요구된다. 그 후, 환자에게 예방적 요법을 투여할 수 있다.
본원에 기재된 제약 조성물 중의 활성 성분의 실제적 투여량 수준은 환자에게 독성이 아니면서, 특별한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대한 목적하는 치료 반응을 달성하는 데 유효한 활성 성분의 양을 수득하도록 다양할 수 있다. 선택된 투여량 수준은 이용된 본원에 기재된 특별한 조성물, 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 이용되는 특별한 화합물의 배출 속도, 치료 지속 기간, 이용된 특별한 조성물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받고 있는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적 건강 및 이전의 병력, 및 의학 분야에 널리 공지된 기타 요인들을 포함한 각종 약동학적 요인에 좌우될 것이다.
본원에 기재된 항-CD73 항체의 "치료상 유효 투여량"은 바람직하게, 질환 증상의 중증도를 감소시켜 주거나, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속성을 증가시켜 주거나, 또는 질환의 고통으로 인한 손상 또는 장애를 방지시켜 준다. 암과 관련해서, 치료상 유효 용량은 바람직하게, 암과 연관된 물리적 증상이 추가로 악화되는 것을 방지시켜 준다. 암의 증상은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 검은 점의 외관 (비대칭, 경계, 색상 및/또는 직경 포함) 상의 변화인 특이한 검은 점 특색; 새롭게 착색된 피부 영역, 비정상적인 검은 점, 손톱 밑의 어두운 부분, 유방 덩어리, 젖꼭지 변화, 유방 낭종, 유방 통증, 사망, 체중 감소, 약화, 과도한 피로, 식이 곤란, 식욕 상실, 만성 기침, 심한 호흡 곤란, 혈액 기침, 소변 혈액, 대변 혈액, 오심, 구토, 간 전이, 폐 전이, 뼈 전이, 복부 팽만감, 부어오름, 복강 내 유체, 질 출혈, 변비, 복부 팽만, 결장 천공, 급성 복막염 (감염, 발열, 통증), 통증, 구토 혈액, 지나친 땀흘림, 발열, 고혈압, 빈혈, 설사, 황달, 현기증, 오한, 근육 경련, 결장 전이, 폐 전이, 방광 전이, 간 전이, 뼈 전이, 신장 전이 및 췌장 전이, 삼킴 곤란 등을 포함한다.
치료상 유효 용량은 암의 발병을 방지 또는 지연시킬 수 있는데, 예컨대 질환의 초기 또는 예비 징후가 존재하는 경우에 요망될 수 있다. 암을 진단하는 데 활용된 실험실 시험은 화학 (CD73 수준의 측정 포함), 혈액학, 혈청학 및 방사선학을 포함한다. 따라서, 전술된 것 중 임의의 것을 모니터링하는 임의의 임상적 또는 생화학적 검정을 이용하여, 특별한 치료가 암을 치료하기 위한 치료상 유효 용량인지의 여부를 결정할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 대상체의 크기, 대상체의 증상의 중증도, 및 선택된 특별한 조성물 또는 투여 경로와 같은 요인에 근거하여 상기 양을 결정할 수 있을 것이다.
본원에 기재된 조성물은 관련 기술분야에 공지된 각종 방법 중 하나 이상을 이용하여 하나 이상의 투여 경로를 통하여 투여할 수 있다. 통상의 기술자에 의해 인지되는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라서 다양할 것이다. 본원에 기재된 항체에 대한 바람직한 투여 경로는 정맥내, 근육내, 피내, 복강내, 피하, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 투여 경로를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "비경구 투여"는 장내 및 국소 투여 이외의 투여, 통상적으로 주사에 의한 투여 방식을 의미하고, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 한편으론, 본원에 기재된 항체는 비-비경구 경로를 통하여, 예컨대 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어 비내, 경구, 질내, 직장, 설하 또는 국소적으로 투여될 수 있다.
활성 화합물은 이러한 화합물이 신속하게 방출되지 못하게 하는 담체와 함께, 예컨대 체내 이식제, 경피 패치 및 미세피막화 전달 시스템을 포함한 제어 방출식 제형으로 제조될 수 있다. 생분해성의 생체 적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산을 사용할 수 있다. 이러한 제형을 제조하기 위한 많은 방법이 특허되었거나 또는 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978] 참조).
치료 조성물은 관련 기술분야에 공지된 의료 장치를 이용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 바람직한 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 바늘이 없는 피하 주사 장치, 예컨대 미국 특허 번호 5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824; 또는 4,596,556에 개시된 장치를 이용하여 투여될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD73 항체와 함께 사용하기 위한 것으로 널리 공지된 체내 이식제 및 모듈의 예는 의약을 제어 속도로 투약하기 위한 체내 이식 가능한 미세주입용 펌프가 개시되어 있는 미국 특허 번호 4,487,603; 피부를 통하여 약제를 투여하기 위한 치료 장치가 개시되어 있는 미국 특허 번호 4,486,194; 정확한 주입 속도로 의약을 전달하기 위한 의약 주입용 펌프가 개시되어 있는 미국 특허 번호 4,447,233; 연속적인 약물 전달을 위한 가변 유동 이식 가능한 주입 장치가 개시되어 있는 미국 특허 번호 4,447,224; 다중 챔버 구획을 갖는 삼투압 약물 전달 시스템이 개시되어 있는 미국 특허 번호 4,439,196; 및 삼투압 약물 전달 시스템이 개시되어 있는 미국 특허 번호 4,475,196을 포함한다. 이들 특허는 본원에 참조로 포함된다. 많은 다른 체내 이식제, 전달 시스템 및 모듈이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 생체 내에서 적당한 분포를 보장하도록 제제화될 수 있다. 예를 들어, 혈액-뇌 장벽 (BBB)은 고도로 친수성인 많은 화합물을 배제시킨다. 본원에 기재된 치료 화합물이 (경우에 따라) BBB를 가로지르기 위해서는, 이들을, 예를 들어 리포솜에 제제화시킬 수 있다. 리포솜을 제작하는 방법에 관해서는, 예를 들어 미국 특허 번호 4,522,811; 5,374,548; 및 5,399,331을 참조할 수 있다. 리포솜은 특이적 세포 또는 기관 내로 선택적으로 수송되는 하나 이상의 모이어티를 포함할 수 있으므로, 표적화된 약물 전달을 증강시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685] 참조). 예시적인 표적화 모이어티는 엽산 또는 비오틴 [예를 들어, 미국 특허 5,416,016 (Low et al.) 참조]; 만노시드 (문헌 [Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038]); 항체 (문헌 [P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180]); 계면활성제 단백질 A 수용체 (문헌 [Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134]); p120 (문헌 [Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090])을 포함한다 (또한 문헌 [K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273] 참조).
XVII. 용도 및 방법
본원에 기재된 항체, 항체 조성물 및 방법은 수많은 시험관내 및 생체내 적용을 갖는데, 예를 들어 아데노신 시그널링, 또는 CD73의 검출을 저하시킴으로써, 예를 들어 종양 성장을 억제하거나, 종양 전이를 억제하거나, 면역 반응을 증강시킨다. 바람직한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 인간 항체이다. 예를 들어, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 배양 중인 세포에게, 시험관내 또는 생체외 투여하거나, 또는 인간 대상체에게, 예를 들어 생체내 투여하여 종양 세포 증식을 억제할 수 있다. 따라서, 본원에는 특정 대상체에게 본원에 기재된 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 투여하여, 이러한 대상체에서의 종양 성장을 저하시키도록 하는 것을 포함하는, 상기 대상체에게서 종양 성장을 변형시키는 방법이 제공된다.
특별한 실시양태에서, 상기 방법은 생체 내에서 암을 치료하는 데 특히 적합하다. 종양 성장의 항원-특이적 억제를 달성하기 위하여, 본원에 기재된 항-CD73 항체를 관심 항체와 함께 투여할 수 있거나 또는 이러한 항원이 치료하고자 하는 대상체에 이미 존재할 수 있다 (예를 들어, 종양을 보유하고 있는 대상체). CD73에 대한 항체를 또 다른 작용제와 함께 투여하는 경우, 이들 둘 다는 별개로 또는 동시에 투여될 수 있다.
또한, 특정 샘플 및 대조군 샘플을, 인간 CD73과 특이적으로 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 그의 부분과 인간 CD73 간의 복합체를 형성시킬 수 있는 조건하에, 상기 인간 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 샘플 중에서의 인간 CD73 항원의 존재를 검출하거나 또는 인간 CD73 항원의 양을 측정하는 방법이 포괄된다. 이어서, 상기 복합체의 형성을 검출하는데, 대조군 샘플과 비교해서 상기 샘플 간의 복합체 형성 차이가 이러한 샘플 중에 인간 CD73 항원이 존재한다는 것을 나타낸다. 더욱이, 본원에 기재된 항-CD73 항체를 사용하여 면역친화 정제를 통하여 인간 CD73을 정제할 수 있다.
추가로, 본원에 기재된 항-CD73 항체를 특정 대상체에게 투여하여 이러한 대상체에게서 면역 반응 (예를 들어, 항원-특이적 T 세포 반응)이 자극되도록 하는 것을 포함하는, 상기 대상체에게서 면역 반응 (예를 들어, 항원-특이적 T 세포 반응)을 자극하는 방법이 포괄된다. 바람직한 실시양태에서, 대상체는 종양을 보유하고 있는 대상체이고, 이러한 종양에 대항한 면역 반응이 자극된다. 종양은 고형 종양 또는 액상 종양, 예를 들어, 혈액학적 악성 종양일 수 있다. 특정 실시양태에서, 종양은 면역원성 종양이다. 특정 실시양태에서, 종양은 비-면역원성이다.
본원에 기재된 이들 및 다른 방법이 다음에 추가로 상세히 논의된다.
암
항-CD73 항체에 의해 CD73을 억제하면, 환자에게서 종양 성장 및 전이를 저하시킬 수 있다. 항-CD73 항체에 의해 CD73을 억제하면, 환자에게서 암성 세포에 대한 면역 반응을 증강시킬 수도 있다. 본원에는 암이 있는 대상체에게 본원에 기재된 항-CD73 항체를 투여하여, 이러한 대상체를 치료하도록 하는, 예를 들어 암성 종양의 성장이 억제되거나 또는 저하되고/되거나 종양이 퇴행되도록 하는 것을 포함하는, 상기 암이 있는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 항-CD73 항체를 단독으로 사용하여 암성 종양의 성장을 억제할 수 있다. 또 다른 한편으론, 항-CD73 항체를 또 다른 작용제, 예를 들어 다음에 기재되는 바와 같은, 다른 면역원성 작용제, 표준 암 치료, 또는 다른 항체와 연계해서 사용될 수 있다.
따라서, 본원에는 특정 대상체에게 치료상 유효량의 본원에 기재된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 투여하는 것을 포함하는, 예를 들어 이러한 대상체에게서 종양 세포의 성장을 억제함으로써 암을 치료하는 방법이 제공된다. 항체는 인간 항-CD73 항체 (예컨대, 본원에 기재된 인간 항-인간 CD73 항체 중 임의의 것)일 수 있다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항체는 키메라 또는 인간화 항-CD73 항체, 예를 들어, 본원에 기재된 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 포함하는 키메라 또는 인간화 항-CD73 항체일 수 있다.
그의 성장이 본 발명의 항체를 이용하여 억제될 수 있는 암은 전형적으로 면역요법에 대해 반응성인 암을 포함한다. 치료하기 위한 암의 비-제한적 예는 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 편평 비-소세포 폐암 (NSCLC), 비-NSCLC, 신경교종, 위장암, 신장암 (예를 들어 투명 세포 암종), 난소암, 간암, 결장직장암, 자궁내막암, 신장암 (예를 들어, 신세포 암종 (RCC)), 전립선암 (예를 들어 호르몬 불응성 전립선 선암종), 갑상선암, 신경모세포종, 췌장암, 교모세포종 (다형성 교모세포종), 자궁경부암, 위암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장 암종, 및 두경부암 (또는 암종), 위암, 생식 세포 종양, 소아 육종, 비부비동 자연 킬러, 흑색종 (예를 들어, 전이성 악성 흑색종, 예컨대 피부 또는 안내 악성 흑색종), 뼈암, 피부암, 자궁암, 항문 영역의 암, 고환암, 나팔관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 식도의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연질 조직의 육종, 요도의 암, 남근의 암, 어린이의 고형 종양, 수뇨관의 암, 신우의 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관형성, 척추 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시(Kaposi's) 육종, 유표피암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 환경적으로 유도된 암 (석면에 의해 유도된 암 포함), 바이러스 관련 암 (예를 들어, 인간 유두종 바이러스 (HPV)-관련 종양), 및 2개의 주요 혈액 세포 계통, 즉 골수성 세포주 (과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포 및 비만 세포를 생성한다) 또는 림프성 세포주 (B, T, NK 및 혈장 세포를 생성한다) 중 하나로부터 유래된 혈액학적 악성 종양, 예컨대 모든 유형의 백혈병, 림프종, 및 골수종, 예를 들어, 급성, 만성, 림프구성 및/또는 골수성 백혈병, 예컨대 급성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 및 만성 골수성 백혈병 (CML), 미분화된 AML (M0), 골수모구성 백혈병 (M1), 골수모구성 백혈병 (M2; 세포 성숙화를 수반함), 전골수구성 백혈병 (M3 또는 M3 변이체 [M3V]), 골수단핵구성 백혈병 (M4 또는 호산구 증가증을 동반한 M4 변이체 [M4E]), 단핵구성 백혈병 (M5), 적백혈병 (M6), 거핵모구성 백혈병 (M7), 단리된 과립구성 육종, 및 녹색종; 림프종, 예컨대 호지킨 림프종 (HL), 비-호지킨 림프종 (NHL), B-세포 림프종, T-세포 림프종, 림프혈장세포양 림프종, 단핵구 모양 B-세포 림프종, 점막 관련 림프계 조직 (MALT) 림프종, 악성 (예를 들어, Ki 1+) 대형 세포 림프종, 성인 T-세포 림프종/백혈병, 외투 세포 림프종, 혈관 면역모구성 T-세포 림프종, 혈관중심성 림프종, 장내 T-세포 림프종, 원발성 종격 B-세포 림프종, 전구체 T-림프모구성 림프종, T-림프모구성; 및 림프종/백혈병 (T-Lbly/T-ALL), 말초 T-세포 림프종, 림프모구성 림프종, 이식후 림프증식성 장애, 진성 조직구성 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 원발성 삼출 림프종, 림프모구성 림프종 (LBL), 림프 계통의 조혈 종양, 급성 림프모구성 백혈병, 확산성 대형 B-세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, 확산성 조직구성 림프종 (DHL), 면역모세포성 대형 세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 피부 T-세포 림프종 (CTLC) [균상 식육종 또는 세자리(Sezary) 증후군으로 지칭되기도 함], 및 발덴스트롬 매크로글로불린혈증을 동반한 림프혈장세포양 림프종 (LPL); 골수종, 예컨대 IgG 골수종, 경쇄 골수종, 비-분비성 골수종, 억제할 수 없는 골수종 (무통성 골수종으로 지칭되기도 함), 고립성 형질세포종, 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 모발 세포 림프종; 골수 계열의 조혈 종양, 중간엽 기원의 종양 (섬유육종 및 횡문근육종 포함); 정상피종, 기형암종, 중추 및 말초 신경의 종양 (성상세포종, 신경초종 포함); 중간엽 기원의 종양 (섬유육종, 횡문근육종, 및 골육종 포함); 및 다른 종양, 예를 들어 흑색종, 색소성 건피증, 각화극세포종, 정상피종, 갑상선 여포성 암 및 기형암종, 림프 계열의 조혈 종양, 예를 들어 T-세포 및 B-세포 종양 [T-세포 장애, 예컨대 T-전림프구성 백혈병 (T-PLL) (소세포 및 대뇌모양의 세포 유형 포함)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다]; 바람직하게 T-세포 유형의 대형 과립상 림프구 백혈병 (LGL); a/d T-NHL 간비장 림프종; 말초/흉선 후 T 세포 림프종 (다형성 및 면역모세포성 하위유형); 혈관중심성 (비내) T-세포 림프종; 두경부암, 신장암, 직장암, 갑상선암; 급성 골수성 림프종 뿐만 아니라 상기 암의 임의의 조합을 포함한다. 본원에 기재된 방법은 또한, 전이성 암, 불응성 암 (예를 들어, 기존의 면역요법, 예를 들어 차단성 CTLA-4 또는 PD-1 또는 PD-L1 항체를 이용한 요법에 대해 불응성인 암), 및 재발성 암의 치료를 위해 사용될 수 있다.
상기 방법은 CD73 양성이거나 또는 고 수준의 CD73을 발현하는 종양 또는 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 방법은 먼저, 종양 또는 종양 세포 상의 CD73의 수준을 결정하고; 이러한 종양 또는 세포가 CD73, 예를 들어, 고 수준의 CD73을 발현하는 경우에는, 예를 들어 본원에 기재된 항-CD73 항체를 이용하여 치료하는 것을 포함할 수 있다.
항-CD73 항체는 단독 요법으로서 또는 유일한 면역자극 요법으로서 투여될 수 있다. CD73에 대한 항체, 예를 들어, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 또한, 면역원성 작용제, 예컨대 암성 세포, 정제된 종양 항원 (재조합 단백질, 펩티드, 및 탄수화물 분자 포함), 세포, 및 면역 자극성 시토카인을 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포와 조합될 수 있다 (He et al (2004) J. Immunol. 173:4919-28). 사용될 수 있는 종양 백신의 비-제한적 예는 흑색종 항원의 펩티드, 예컨대 gp100, MAGE 항원, Trp-2, MART1 및/또는 티로시나제의 펩티드, 또는 시토카인 GM-CSF를 발현하도록 형질감염된 종양 세포 (다음에 추가로 논의됨)를 포함한다.
인간에서는, 일부 종양, 예컨대 흑색종이 면역원성인 것으로 밝혀졌다. CD73 억제를 통하여 T 세포 활성화의 역치를 저하시킴으로써, 숙주 내에서의 종양 반응을 활성화시켜, 비-면역원성 종양 또는 제한된 면역원성을 갖는 종양을 치료할 수 있다.
항-CD73 항체, 예를 들어, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 백신접종 프로토콜과 조합될 수 있다. 종양에 대항하여 백신접종하기 위한 많은 실험적 전략이 고안되었다 (문헌 [Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Fifth Edition] 참조). 이들 전략 중 하나에서는, 자가 또는 동종이계 종양 세포를 이용하여 백신을 제조한다. 이들 세포성 백신이, 종양 세포가 GM-CSF를 발현하도록 형질도입되는 경우에 가장 유효한 것으로 밝혀졌다. GM-CSF는 종양 백신접종을 위한 항원 제시의 강력한 활성화제인 것으로 밝혀졌다 (Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43).
각종 종양에서 유전자 발현 및 대규모 유전자 발현 패턴에 관한 연구 결과, 소위 종양 특이적 항원에 관하여 정의하게 되었다 (Rosenberg, S A (1999) Immunity 10:281-7). 많은 경우에 있어서, 이들 종양 특이적 항원은 종양에서 발현된 분화 항원 및 그로부터 종양이 발생되는 세포에서 발현된 분화 항원, 예를 들어 멜라닌 세포 항원 gp100, MAGE 항원, 및 Trp-2이다. 보다 중요하게, 이들 항원 중 많은 수가 숙주에서 발견된 종양 특이적 T 세포의 표적인 것으로 밝혀질 수 있다. CD73 억제를 종양에서 발현된 재조합 단백질 및/또는 펩티드의 컬렉션과 연계해서 사용하여, 이들 단백질에 대한 면역 반응을 생성시킬 수 있다. 이들 단백질은 정상적으로, 면역 체계에 의해 자기 항원으로서 보여지므로, 그들에 대해 내성이 있다. 종양 항원은 염색체의 텔로미어(telomere)의 합성에 필요하고 인간 암의 85% 초과에서 발현되며 제한된 수의 체세포 조직에서만 발현되는 단백질 텔로머라제를 포함할 수 있다 (Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013). 종양 항원은 또한, 단백질 서열을 변경시키거나 또는 2개의 무관한 서열 (즉, 필라델피아 염색체 내의 bcr-abl) 또는 B 세포 종양의 이디오타입(idiotype) 간에 융합 단백질을 생성하는 체세포 돌연변이 때문에 암세포에서 발현된 "신생 항원"일 수 있다.
다른 종양 백신은 인간 암과 관련된 바이러스, 예컨대 인간 유두종 바이러스 (HPV), 간염 바이러스 (HBV 및 HCV) 및 카포시 헤르페스 육종 바이러스 (KHSV)로부터의 단백질을 포함할 수 있다. CD73 억제와 연계해서 사용될 수 있는 또 다른 형태의 종양 특이적 항원은 종양 조직 자체로부터 단리된 정제된 열 쇼크 단백질 (HSP)이다. 이들 열 쇼크 단백질은 종양 세포로부터의 단백질의 단편을 함유하고, 이들 HSP는 종양 면역을 유도시키기 위하여 항원 제시 세포에 전달하는 데 상당히 효율적이다 (Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120).
수지상 세포 (DC)는 항원-특이적 반응을 프라이밍하기 위해 사용될 수 있는 강력한 항원 제시 세포이다. DC는 생체외에서 생성될 수 있고, 각종 단백질 및 펩티드 항원뿐만 아니라 종양 세포 추출물이 부하될 수 있다 (Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4:328-332). DC는 또한, 이들 종양 항원을 또한 발현하는 유전적 수단에 의해 형질도입될 수 있다. DC는 또한, 면역을 위하여 종양 세포에 직접적으로 융합되어 왔다 (Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). 백신접종의 한 방법으로서, DC 면역을 CD73 억제와 효과적으로 조합하여 더 강력한 항-종양 반응을 활성화시킬 수 있다.
CD73 억제는 또한, 표준 암 치료 (예를 들어, 수술, 방사선, 및 화학요법)와 조합될 수 있다. CD73 억제는 화학요법적 요법과 효과적으로 조합될 수 있다. 이들 경우에는, 투여되는 화학요법 시약의 용량을 감소시키는 것이 가능할 수 있다 (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58:5301-5304). 이러한 조합의 한 예는 흑색종을 치료하기 위하여 항-CD73 항체를 데카르바진과 조합하는 것이다. 이러한 조합의 또 다른 예는 흑색종을 치료하기 위하여 항-CD73 항체를 인터류킨-2 (IL-2)와 조합하는 것이다. CD73 억제와 화학요법의 조합 사용 배후의 과학적 근거는 대부분의 화학요법 화합물의 세포독성 작용의 결과인 세포 사멸이 항원 제시 경로에서 종양 항원의 수준을 증가시켜야 한다는 것이다. 세포 사멸을 통해 CD73 억제와 상승 작용을 일으킬 수 있는 다른 조합 요법은 방사선, 수술 및 호르몬 결핍이다. 이들 프로토콜 각각은 숙주에서 종양 항원의 원천을 창출시킨다. 혈관형성 억제제가 CD73 억제와 조합될 수도 있다. 혈관형성의 억제는 종양 항원을 숙주 항원 제시 경로 내로 공급할 수 있는 종양 세포 사멸을 초래한다.
이러한 조합의 또한 또 다른 예는 항-CD73 항체를 항-CD39, 항-A2AR 또는 화학적 억제제, 또는 항-A2BR 항체 또는 화학적 억제제와 조합하는 것이다. CD73 억제와 CD39, A2AR, 또는 A2BR의 억제의 조합 사용 배후의 과학적 근거는 이들 단백질이 CD73 생물학적 기능 및 시그널링과 또한 연계된다는 것이다. 구체적으로 언급하면, CD39는 ATP 또는 ADP를 AMP로 전환시키는 것을 촉매하므로, CD73 효소 활성 (즉, AMP을 아데노신으로 전환시킨다)을 위한 기질 (AMP)을 제공한다. 더욱이, 아데노신은 A1R, A2AR, A2BR, 및 A3을 포함한 4개의 공지된 수용체에 대한 리간드이다. A2AR 및 A2BR은 종양 세포 증식, 성장, 이동, 및 전이를 조절할 뿐만 아니라 cAMP 시그널링을 통하여 종양 환경에서 T-세포 활성화를 조절하는 것으로 밝혀졌다.
본원에 기재된 항-CD73 항체는 또한, Fcα 또는 Fcγ 수용체-발현성 이펙터 세포가 종양 세포를 표적으로 하도록 해주는 이중특이적 항체와 조합하여 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,922,845 및 5,837,243 참조). 이중특이적 항체를 사용하여 2개의 별도의 항원을 표적으로 할 수 있다. 예를 들어 항-Fc 수용체/항종양 항원 (예를 들어, Her-2/neu) 이중특이적 항체를 사용하여 대식세포가 종양 부위를 표적으로 하도록 하였다. 이러한 표적화는 종양 특이적 반응을 보다 효과적으로 활성화시킬 수 있다. 또 다른 한편으론, 종양 항원 및 수지상 세포 특이적 세포 표면 마커와 결합하는 이중특이적 항체를 사용함으로써, 항원을 DC에 직접적으로 전달할 수 있다.
종양은 각종 기전에 의해 숙주의 면역 감시를 피한다. 이들 기전 중 많은 부분이, 종양에 의해 발현되고 면역억제성인 단백질의 불활성화에 의해 극복될 수 있다. 이들은 특히, TGF-β (문헌 [Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163:1037-1050]), IL-10 (문헌 [Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13:198-200]), 및 Fas 리간드 (문헌 [Hahne et al. (1996) Science 274:1363-1365])를 포함한다. 이들 실체 각각에 대한 항체를 항-CD73 항체와 조합하여 사용하여, 면역억제제의 효과를 상쇄시키고 숙주에 의한 종양 면역 반응을 선호할 수 있다.
숙주 면역 반응성을 활성화시키는 다른 항체를 항-CD73 항체와 조합하여 사용할 수 있다. 이들은 DC 기능 및 항원 제시를 활성화시키는 수지상 세포의 표면 상의 분자를 포함한다. 항-CD40 항체는 T 세포 헬퍼 활성을 효과적으로 대체할 수 있고 (문헌 [Ridge et al. (1998) Nature 393:474-478]), 항-CD73 항체와 연계해서 사용될 수 있다. T 세포 공동 자극성 분자, 예컨대 OX-40 (문헌 [Weinberg et al. (2000) Immunol 164:2160-2169]), 4-1BB (문헌 [Melero et al. (1997) Nature Medicine 3:682-685 (1997)]), 및 ICOS (문헌 [Hutloff et al. (1999) Nature 397: 262-266])에 대한 활성화 항체가 또한, 증가된 수준의 T 세포 활성화를 제공할 수 있다. PD1, PD-L1 또는 CTLA-4의 억제제 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,811,097)를 또한, 항-CD73 항체와 연계해서 사용할 수 있다.
본원에 기재된 다른 방법을 이용하여, 특별한 독소 또는 병원체에 노출된 환자를 치료한다. 따라서, 본원에 기재된 또 다른 측면은 특정 대상체에게 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 투여하여, 이러한 대상체의 감염성 질환을 치료하도록 하는 것을 포함하는, 상기 대상체에게서 감염성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항체는 키메라 또는 인간화 항체일 수 있다.
상기 방법 모두에서, CD73 억제는 다른 형태의 면역요법, 예컨대 시토카인 치료 (예를 들어, 인터페론, GM-CSF, G-CSF, IL-2), 또는 종양 항원의 증강된 제시를 제공하는 이중특이적 항체 요법과 조합될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123] 참조).
조합 요법
상기 공급된 조합 요법 이외에도, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 또한, 예를 들어 다음에 기재되는 바와 같이, 암을 치료하기 위하여 조합 요법에 사용될 수 있다.
추가로 본원에는 항-CD73 항체를, 면역 반응을 자극하는 데 유효한 하나 이상의 부가의 작용제, 예를 들어 항체와 공동 투여함으로써, 대상체에게서 면역 반응을 추가로 증강, 자극 또는 상향 조절하는 조합 요법의 방법이 제공된다.
일반적으로, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 (i) 공동 자극성 수용체의 효능제 및/또는 (ii) T 세포 상의 억제성 시그널의 길항제 [둘 다 항원-특이적 T 세포 반응을 증폭시켜 준다 (면역 체크포인트 조절제)]와 조합될 수 있다. 대부분의 공동 자극성 및 공동 억제성 분자는 면역글로불린 슈퍼 패밀리 (IgSF)의 구성원이고, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 IgSF 패밀리의 구성원을 표적으로 하여 면역 반응을 증가시키는 작용제와 함께 투여될 수 있다. 공동 자극성 또는 공동 억제성 수용체와 결합하는 막 결합된 리간드의 한 가지 중요한 패밀리는 B7 패밀리인데, 이는 B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA), 및 B7-H6을 포함한다. 공동 자극성 또는 공동 억제성 수용체와 결합하는 막 결합된 리간드의 또 다른 패밀리는 동족 TNF 수용체 패밀리 구성원과 결합하는 TNF 패밀리의 분자인데, 이는 CD40 및 CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137, GITR, TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, 림포톡신 α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, 림포톡신 α1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Tansey (2009) Drug Discovery Today 00:1] 참조). T 세포 활성화는 또한, 가용성 시토카인에 의해 조절된다. 따라서, 항-CD73 항체는 (i) T 세포 활성화를 억제하는 IgSF 패밀리 또는 B7 패밀리 또는 TNF 패밀리의 단백질의 길항제 (또는 억제제 또는 차단제) 또는 T 세포 활성화를 억제하는 시토카인 (예를 들어, IL-6, IL-10, TGF-ß, VEGF; "면역억제성 시토카인")의 길항제 및/또는 (ii) 면역 반응을 자극하기 위하여, 예를 들어 증식성 질환, 예컨대 암을 치료하기 위하여, T 세포 활성화를 자극하는 시토카인, 또는 IgSF 패밀리, B7 패밀리 또는 TNF 패밀리의 자극성 수용체의 효능제와 조합하여 사용될 수 있다.
예를 들어, T 세포 반응은 본원에 기재된 항-CD73 항체, 예를 들어, CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f와 다음 작용제 중 하나 이상과 조합함으로써 자극될 수 있다:
(1) T 세포 활성화를 억제하는 단백질 (예를 들어, 면역 체크포인트 억제제), 예컨대 상기 언급된 바와 같은, CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, 및 LAG-3, 및 다음 단백질 중 임의의 것의 길항제 (억제제 또는 차단제): TIM-3, 갈렉틴(Galectin) 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, 갈렉틴-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, CD73, PD1H, LAIR1, TIM-1 ,TIM-4, CD39.
(2) T 세포 활성화를 자극하는 단백질, 예컨대 B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, GITR, GITRL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, CD70, CD27, CD40, DR3 및 CD28H의 효능제.
상기 단백질 중 하나를 조정하고; 암을 치료하기 위하여, 길항제 항-CD73 항체, 예를 들어, 본원에 기재된 것과 조합될 수 있는 예시적인 작용제는 예르보이(Yervoy™) [이필리무맙(ipilimumab)] 또는 트레멜리무맙(Tremelimumab) (CTLA-4에 대함), 갈릭시맙(galiximab) (B7.1에 대함), BMS-936558 (PD-1에 대함), CT-011 (PD-1에 대함), MK-3475 (PD-1에 대함), AMP224 (B7DC에 대함), BMS-936559 (B7-H1에 대함), MPDL3280A (B7-H1에 대함), MEDI-570 (ICOS에 대함), AMG557 (B7H2에 대함), MGA271 (B7H3에 대함), IMP321 (LAG-3에 대함), BMS-663513 (CD137에 대함), PF-05082566 (CD137에 대함), CDX-1127 (CD27에 대함), 항-OX40 [프로비던스 헬스 서비스(Providence Health Services)], huMAbOX40L (OX40L에 대함), 아타시셉트(Atacicept) (TACI에 대함), CP-870893 (CD40에 대함), 루카투무맙(Lucatumumab) (CD40에 대함), 다세투주맙(Dacetuzumab) (CD40에 대함), 무로모납(Muromonab)-CD3 (CD3에 대함), 이필루무맙(Ipilumumab) (CTLA-4에 대함)을 포함한다.
암을 치료하기 위하여 길항제 항-CD73 항체와 조합될 수 있는 다른 분자는 NK 세포 상의 억제성 수용체의 길항제 또는 NK 세포 상의 활성화 수용체의 효능제를 포함한다. 예를 들어, 항-CD73 길항제 항체는 KIR의 길항제 [예를 들어, 리릴루맙(lirilumab)]와 조합될 수 있다.
T 세포 활성화는 또한, 가용성 시토카인에 의해 조절되고, 항-CD73 항체는 T 세포 활성화를 억제하는 시토카인의 길항제 또는 T 세포 활성화를 자극하는 시토카인의 효능제와 함께, 예를 들어 암이 있는 대상체에게 투여할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 (i) T 세포 활성화를 억제하는 IgSF 패밀리 또는 B7 패밀리 또는 TNF 패밀리의 단백질의 길항제 (또는 억제제 또는 차단제) 또는 T 세포 활성화를 억제하는 시토카인 (예를 들어, IL-6, IL-10, TGF-ß, VEGF; "면역억제성 시토카인")의 길항제 및/또는 (ii) 면역 반응을 자극하기 위하여, 예를 들어 증식성 질환, 예컨대 암을 치료하기 위하여, T 세포 활성화를 자극하는 시토카인, 또는 IgSF 패밀리, B7 패밀리 또는 TNF 패밀리의 자극성 수용체의 효능제와 조합하여 사용될 수 있다.
조합 요법을 위한 또한 다른 작용제는 대식세포 또는 단핵구를 억제 또는 고갈시키는 작용제를 포함하는데, 이는 CSF-1R 길항제, 예컨대 CSF-1R 길항제 항체, 예를 들어 RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) 또는 FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
항-CD73 항체는 또한, TGF-β 시그널링을 억제하는 작용제와 함께 투여될 수 있다.
항-CD73 항체와 조합될 수 있는 부가의 작용제는 종양 항원 제시를 증강시키는 작용제, 예를 들어, 수지상 세포 백신, GM-CSF 분비성 세포성 백신, CpG 올리고뉴클레오티드, 및 이미퀴모드(Imiquimod), 또는 종양 세포의 면역원성을 증강시키는 요법 (예를 들어, 안트라사이클린)을 포함한다.
항-CD73 항체와 조합될 수 있는 또한 다른 요법은 Treg 세포를 고갈 또는 차단시키는 요법, 예를 들어 CD25와 특이적으로 결합하는 작용제를 포함한다.
항-CD73 항체와 조합될 수 있는 또 다른 요법은 대사 효소, 예컨대 인돌아민 디옥시게나제 (IDO), 디옥시게나제, 아르기나제, 또는 산화질소 신테타제를 억제하는 요법이다.
항-CD73 항체와 함께 사용될 수 있는 또 다른 부류의 작용제는 아데노신의 형성을 억제하거나 또는 아데노신 A2A 수용체를 억제하는 작용제를 포함한다.
암을 치료하기 위하여 항-CD73 항체와 조합될 수 있는 다른 요법은 T 세포 아네르기 또는 고갈을 역전/방지시키는 요법 및 종양 부위에서 염증 및/또는 선천 면역 활성화를 촉발시키는 요법을 포함한다.
항-CD73 항체는 2개 이상의 면역-종양학 작용제와 조합될 수 있고, 예를 들어 면역 경로의 다수 요소를 표적으로 하는 조합 접근 방식, 예컨대 다음 중 하나 이상과 조합될 수 있다: 종양 항원 제시를 증강시키는 요법 (예를 들어, 수지상 세포 백신, GM-CSF 분비성 세포성 백신, CpG 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드); 예를 들어, CTLA-4 및/또는 PD1/PD-L1/PD-L2 경로를 억제하고/하거나 Treg 또는 다른 면역 억제성 세포를 고갈 또는 차단시킴으로써, 음성 면역 조절을 억제하는 요법; 예를 들어, CD-137, OX-40, 및/또는 GITR 경로를 자극하고/하거나 T 세포 이펙터 기능을 자극하는 효능제를 이용하여, 양성 면역 조절을 자극하는 요법; 항-종양 T 세포의 빈도를 전신에 증가시키는 요법; 예를 들어, CD25의 길항제 [예를 들어, 다클리주맙(daclizumab)]를 사용하거나 또는 생체외 항-CD25 비드 고갈에 의해, Treg, 예컨대 종양 내의 Treg를 고갈 또는 억제시키는 요법; 종양 내의 억제인자 골수성 세포의 기능에 영향을 미치는 요법; 종양 세포의 면역원성을 증강시키는 요법 (예를 들어, 안트라사이클린); 유전적으로 변형된 세포, 예를 들어 키메라 항원 수용체에 의해 변형된 세포를 포함한, 입양 T 세포 또는 NK 세포 전달 (CAR-T 요법); 대사 효소, 예컨대 인돌아민 디옥시게나제 (IDO), 디옥시게나제, 아르기나제, 또는 산화질소 신테타제를 억제하는 요법; T 세포 아네르기 또는 고갈을 역전/방지시키는 요법; 종양 부위에서 염증 및/또는 선천 면역 활성화를 촉발시키는 요법; 면역 자극성 시토카인의 투여; 또는 면역억제성 시토카인의 차단.
일반적으로, 본원에 기재된 항-CD73 항체는 양성 공동 자극성 수용체를 라이게이션하는 효능작용제; 억제성 수용체를 통한 시그널링을 약화시키는 차단제; 길항제; 및 항-종양 T 세포의 빈도를 전신에 증가시키는 하나 이상의 작용제; 종양 미세환경 내에서의 별개의 면역 억제성 경로를 극복하는 작용제 [예를 들어, 억제성 수용체 개입 (예를 들어, PD-L1/PD-1 상호 작용)을 차단하거나, Treg를 고갈 또는 억제하거나 (예를 들어, 항-CD25 모노클로날 항체 (예를 들어, 다클리주맙)를 이용하거나 또는 생체외 항-CD25 비드 고갈에 의함), 대사 효소, 예컨대 IDO를 억제하거나, 또는 T 세포 아네르기 또는 고갈을 역전/방지시키는 작용제]; 및 종양 부위에서 염증 및/또는 선천 면역 활성화를 촉발시키는 작용제 중 하나 이상과 함께 사용될 수 있다. 억제성 수용체의 증가된 내재화는 잠재적 억제제의 더 낮은 수준으로 번역될 수 있다 (시그널링이 발생하지 않는다고 가정한다).
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 대상체가 BRAF V600 돌연변이 양성인 경우에, BRAF 억제제와 함께 대상체에게 투여된다.
본원에는 특정 대상체에게 길항제 항-CD73 분자, 예를 들어, 항체, 및 하나 이상의 부가의 면역자극성 항체, 예컨대 항-PD-1 길항제, 예를 들어, 길항제 항체, 항-PD-L1 길항제, 예를 들어, 길항제 항체, 길항제 항-CTLA-4 길항제, 예를 들어, 길항제 항체 및/또는 항-LAG3 길항제, 예를 들어, 길항제 항체를 투여하여, 이러한 대상체에게서 면역 반응이 자극되어, 예를 들어 종양 성장을 억제하거나 또는 항-바이러스 반응을 자극하도록 하는 것을 포함하는, 상기 대상체에게서 면역 반응을 자극하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 대상체에게 길항제 항-CD73 항체 및 길항제 항-PD-1 항체를 투여한다. 한 실시양태에서, 대상체에게 길항제 항-CD73 항체 및 길항제 항-PD-L1 항체를 투여한다. 한 실시양태에서, 대상체에게 길항제 항-CD73 항체 및 길항제 항-CTLA-4 항체를 투여한다. 한 실시양태에서, 항-CD73 항체는 인간 항체, 예컨대 본원에 기재된 항체이다. 또 다른 한편으론, 항-CD73 항체는, 예를 들어, 키메라 또는 인간화 항체 (예를 들어, 마우스 항-CD73 mAb로부터 제조됨), 예컨대 본원에 추가로 기재된 것일 수 있다. 한 실시양태에서, 적어도 하나의 부가의 면역자극성 항체 (예를 들어, 길항제 항-PD-1, 길항제 항-PD-L1, 길항제 항-CTLA-4 및/또는 길항제 항-LAG3 항체)는 인간 항체이다. 또 다른 한편으론, 적어도 하나의 부가의 면역자극성 항체는, 예를 들어, 키메라 또는 인간화 항체 (예를 들어, 마우스 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-CTLA-4 및/또는 항-LAG3 항체로부터 제조됨)일 수 있다.
본원에는 길항제 항-CD73 항체 및 길항제 PD-1 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 과증식성 질환 (예를 들어, 암)의 치료 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 항-PD-1 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 또는 둘 다 치료량 이하의 용량으로 투여된다. 또한 본원에는 항-CD73 항체 및 치료량 이하의 용량의 항-PD-1 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 면역자극성 작용제를 이용하여 과증식성 질환을 치료하는 것과 연관된 부작용을 변경시키는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 인간 서열 모노클로날 항체이고, 항-CD73 항체는 인간 서열 모노클로날 항체, 예컨대 본원에 기재된 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11, 7A11, CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10 또는 CD73.11의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체, 또는 본원에 기재된 또 다른 길항제 항-CD73 항체이다.
본원에 기재된 방법에 사용하기 적합한 PD-1 길항제는 리간드, 항체 (예를 들어, 모노클로날 항체 및 이중특이적 항체), 및 다가 작용제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, PD-1 길항제는 융합 단백질, 예를 들어, Fc 융합 단백질, 예컨대 AMP-244이다. 한 실시양태에서, PD-1 길항제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체이다.
예시적인 항-PD-1 항체는 니볼루맙(nivolumab) (BMS-936558), 또는 WO 2006/121168에 기재된 항체 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 7D3, 5F4 및 4A11 중 하나의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-PD1 항체는 WO2012/145493에 기재된 MK-3475 [람브롤리주맙(Lambrolizumab)]; WO 2012/145493에 기재된 AMP-514; 및 CT-011 (피딜리주맙; 이전명 CT-AcTibody 또는 BAT; 예를 들어, 문헌 [Rosenblatt et al. (2011) J. Immunotherapy 34:409] 참조)이다. 추가의 공지된 PD-1 항체 및 다른 PD-1 억제제는 WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335, WO 2011/066389, WO 2011/161699, WO 2012/145493, 미국 특허 번호 7,635,757 및 8,217,149, 및 미국 특허 공개 번호 2009/0317368에 기재된 것을 포함한다. WO2013/173223에 개시된 항-PD-1 항체 중 임의의 것을 사용할 수도 있다. 결합을 놓고 이들 항체 중 하나와 경쟁하고/하거나 이러한 항체와 동일한, PD-1 상의 에피토프와 결합하는 항-PD-1 항체가 또한, 조합 치료에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 5x10-8 M 이하의 KD로 인간 PD-1과 결합하거나, 1x10-8 M 이하의 KD로 인간 PD-1과 결합하거나, 5x10-9 M 이하의 KD로 인간 PD-1과 결합하거나, 또는 1x10-8 M 내지 1x10-10 M 이하의 KD로 인간 PD-1과 결합한다.
본원에는 길항제 항-CD73 항체 및 길항제 PD-L1 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 과증식성 질환 (예를 들어, 암)의 치료 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 항-PD-L1 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 또는 둘 다 치료량 이하의 용량으로 투여된다. 본원에는 항-CD73 항체 및 치료량 이하의 용량의 항-PD-L1 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 면역자극성 작용제를 이용하여 과증식성 질환을 치료하는 것과 연관된 부작용을 변경시키는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 인간 서열 모노클로날 항체이고, 항-CD73 항체는 인간 서열 모노클로날 항체, 예컨대 본원에 기재된 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11, 7A11, CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10 또는 CD73.11의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체, 또는 본원에 기재된 또 다른 길항제 항-CD73 항체이다.
한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-936559 (WO 2007/005874 및 미국 특허 번호 7,943,743에서 12A4로서 지칭됨), 또는 PCT 공보 WO 07/005874 및 미국 특허 번호 7,943,743에 기재되는 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7 및 13G4의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체이다. 특정 실시양태에서 항-PD-L1 항체는 MEDI4736 (항-B7-H1로서 공지되기도 함) 또는 MPDL3280A (RG7446으로서 공지되기도 함)이다. WO2013/173223, WO2011/066389, WO2012/145493, 미국 특허 번호 7,635,757 및 8,217,149 및 미국 공개 번호 2009/145493에 개시된 항-PD-L1 항체 중 임의의 것을 사용할 수도 있다. 이들 항체 중 임의의 것과 경쟁하고/하거나 이러한 항체와 동일한 에피토프와 결합하는 항-PD-L1 항체가 또한, 조합 치료에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 5x10-8 M 이하의 KD로 인간 PD-L1과 결합하거나, 1x10-8 M 이하의 KD로 인간 PD-L1과 결합하거나, 5x10-9 M 이하의 KD로 인간 PD-L1과 결합하거나, 또는 1x10-8 M 내지 1x10-10 M 이하의 KD로 인간 PD-L1과 결합한다.
본원에는 본원에 기재된 항-CD73 항체 및 CTLA-4 길항제 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 과증식성 질환 (예를 들어, 암)의 치료 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 항-CTLA-4 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 또는 둘 다 치료량 이하의 용량으로 투여된다. 본원에는 항-CD73 항체 및 치료량 이하의 용량의 항-CTLA-4 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 면역자극성 작용제를 이용하여 과증식성 질환을 치료하는 것과 연관된 부작용을 변경시키는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 항-CTLA-4 항체는 예르보이™ (PCT 공보 WO 01/14424에 기재된 이필리무맙 또는 항체 10D1), 트레멜리무맙 (이전명: 티실리무맙, CP-675,206), 모노클로날, 또는 다음 공보 중 임의의 것에 기재된 항-CTLA-4 항체의 군으로부터 선택된 항체이다 (WO 98/42752; WO 00/37504; 미국 특허 번호 6,207,156; 문헌 [Hurwitz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95(17):10067-10071; Camacho et al. (2004) J. Clin. Oncology 22(145): Abstract No. 2505 (antibody CP-675206); and Mokyr et al. (1998) Cancer Res. 58:5301-5304]). WO2013/173223에 개시된 항-CTLA-4 항체 중 임의의 것을 사용할 수도 있다.
특정 실시양태에서, 항-CTLA-4 항체는 5x10-8 M 이하의 KD로 인간 CTLA-4와 결합하거나, 1x10-8 M 이하의 KD로 인간 CTLA-4와 결합하거나, 5x10-9 M 이하의 KD로 인간 CTLA-4와 결합하거나, 또는 1x10-8 M 내지 1x10-10 M 이하의 KD로 인간 CTLA-4와 결합한다.
본원에는 항-CD73 항체 및 항-LAG-3 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 과증식성 질환 (예를 들어, 암)의 치료 방법이 제공된다. 추가 실시양태에서, 항-CD73 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 항-LAG-3 항체는 치료량 이하의 용량으로 투여되거나, 또는 둘 다 치료량 이하의 용량으로 투여된다. 본원에는 항-CD73 항체 및 치료량 이하의 용량의 항-LAG-3 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 면역자극성 작용제를 이용하여 과증식성 질환을 치료하는 것과 연관된 부작용을 변경시키는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 인간 서열 모노클로날 항체이고, 항-CD73 항체는 인간 서열 모노클로날 항체, 예컨대 11F11, 4C3, 4D4, 10D2, 11A6, 24H2, 5F8, 6E11, 7A11, CD73.3, CD73.4, CD73.5, CD73.6, CD73.7, CD73.8, CD73.9, CD73.10 또는 CD73.11의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체, 또는 본원에 기재된 또 다른 길항제 항-CD73 항체이다. 항-LAG3 항체의 예는 미국 특허 공개 번호 US2011/0150892 및 WO2014/008218에 기재되는 항체 25F7, 26H10, 25E3, 8B7, 11F2 또는 17E5의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 BMS-986016이다. 사용될 수 있는, 관련 기술분야에서 승인된 다른 항-LAG-3 항체는 US 2011/007023에 기재된 IMP731을 포함한다. IMP-321을 사용할 수도 있다. 이들 항체 중 임의의 것과 경쟁하고/하거나 이러한 항체와 동일한 에피토프와 결합하는 항-LAG-3 항체가 또한, 조합 치료에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-LAG-3 항체는 5x10-8 M 이하의 KD로 인간 LAG-3과 결합하거나, 1x10-8 M 이하의 KD로 인간 LAG-3과 결합하거나, 5x10-9 M 이하의 KD로 인간 LAG-3과 결합하거나, 또는 1x10-8 M 내지 1x10-10 M 이하의 KD로 인간 LAG-3과 결합한다.
특정 실시양태에서, 항-CD73 항체는 항-GITR 효능제 항체, 예를 들어, 6C8의 CDR 서열을 갖는 항체, 예를 들어 WO2006/105021에 기재된 바와 같은, 6C8의 CDR 서열을 갖는 인간화 항체; WO2011/028683에 기재된 항-GITR 항체의 CDR을 포함하는 항체; JP2008278814에 기재된 항-GITR 항체의 CDR을 포함하는 항체; 또는 PCT/US2015/033991에 기재된 항-GITR 항체의 CDR을 포함하는 항체와 함께 투여된다.
본원에 기재된 항-CD73 항체 및 길항제, 예를 들어, 길항제 항체를 하나 이상의 제2 표적 항원, 예컨대 LAG-3 및/또는 CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1에 투여하면, 환자에게서 암성 세포에 대한 면역 반응을 증강시킬 수 있다. 그의 성장이 본 개시내용의 항체를 사용하여 억제될 수 있는 암은 전형적으로 면역요법에 대해 반응성인 암을 포함한다. 본 개시내용의 조합 요법을 이용하여 치료하기 위한 암의 대표적인 예는 항-CD73 항체를 이용한 단독요법의 논의에서 상기에 구체적으로 열거된 암을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 논의된 치료용 항체의 조합물은 제약상 허용되는 담체 중의 단일 조성물로서 공동으로 투여될 수 있거나, 또는 제약상 허용되는 담체 중의 각 항체를 수반한 별도의 조성물로서 공동으로 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 치료용 항체의 조합물은 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 항-CTLA-4 항체와 항-CD73 항체는 순차적으로 투여될 수 있는데, 예컨대 항-CTLA-4 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여하거나, 또는 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CTLA-4 항체를 투여한다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항-PD-1 항체와 항-CD73 항체는 순차적으로 투여될 수 있는데, 예컨대 항-PD-1 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여하거나, 또는 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-PD-1 항체를 투여한다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항-PD-L1 항체와 항-CD73 항체는 순차적으로 투여될 수 있는데, 예컨대 항-PD-L1 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여하거나, 또는 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-PD-L1 항체를 투여한다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항-LAG-3 항체와 항-CD73 항체는 순차적으로 투여될 수 있는데, 예컨대 항-LAG-3 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여하거나, 또는 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-LAG-3 항체를 투여한다.
더욱이, 2회 이상의 용량의 조합 요법을 순차적으로 투여하는 경우, 이러한 순차적 투여의 순서는 역전될 수 있거나 또는 각 투여 시점에 동일한 순서로 유지될 수 있거나, 순차적 투여를 공동 투여와 조합할 수 있거나, 또는 그의 임의의 조합일 수 있다. 예를 들어, 항-CTLA-4 항체와 항-CD73 항체의 조합의 첫 번째 투여는 공동일 수 있고, 두 번째 투여는 순차적으로, 항-CTLA-4 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여할 수 있으며, 세 번째 투여는 순차적으로, 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CTLA-4 항체를 투여할 수 있다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항-PD-1 항체와 항-CD73 항체의 조합의 첫 번째 투여는 공동일 수 있고, 두 번째 투여는 순차적으로, 항-PD-1 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여할 수 있으며, 세 번째 투여는 순차적으로, 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-PD-1 항체를 투여할 수 있다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항-PD-L1 항체와 항-CD73 항체의 조합의 첫 번째 투여는 공동일 수 있고, 두 번째 투여는 순차적으로, 항-PD-L1 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여할 수 있으며, 세 번째 투여는 순차적으로, 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-PD-L1 항체를 투여할 수 있다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 항-LAG-3 항체와 항-CD73 항체의 조합의 첫 번째 투여는 공동일 수 있고, 두 번째 투여는 순차적으로, 항-LAG-3 항체를 먼저 투여한 다음, 항-CD73 항체를 투여할 수 있으며, 세 번째 투여는 순차적으로, 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음, 항-LAG-3 항체를 투여할 수 있다. 또 다른 대표적인 투여 계획은 순차적으로 항-CD73 항체를 먼저 투여한 다음 항-CTLA-4 항체 (및/또는 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체 및/또는 항-LAG-3 항체)를 투여하는 첫 번째 투여를 포함할 수 있고, 후속 투여는 공동일 수 있다.
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 CD137 (4-1BB) 효능제, 예컨대 효능작용 CD137 항체이다. 적합한 CD137 항체는, 예를 들어, 우렐루맙(urelumab) 또는 PF-05082566을 포함한다 (WO12/32433).
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 OX40 효능제, 예컨대 효능작용 OX40 항체이다. 적합한 OX40 항체는, 예를 들어, MEDI-6383, MEDI-6469 또는 MOXR0916을 포함한다 (RG7888; WO06/029879).
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 CD40 효능제, 예컨대 효능작용 CD40 항체이다. 특정 실시양태에서, 면역-종양학 작용제는 CD40 길항제, 예컨대 길항작용 CD40 항체이다. 적합한 CD40 항체는, 예를 들어, 루카투무맙 (HCD122), 다세투주맙 (SGN-40), CP-870,893 또는 카이 롭(Chi Lob) 7/4를 포함한다.
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 CD27 효능제, 예컨대 효능작용 CD27 항체이다. 적합한 CD27 항체는, 예를 들어, 바를리루맙(varlilumab) (CDX-1127)을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 MGA271 (B7H3에 대함)이다 (WO11/109400).
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 KIR 길항제, 예컨대 리릴루맙이다.
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 IDO 길항제이다. 적합한 IDO 길항제는, 예를 들어, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), 인독시모드(indoximod), NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237) 또는 F001287을 포함한다.
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 톨(Toll) 유사 수용체 효능제, 예를 들어, TLR2/4 효능제 [예를 들어, 바실루스 칼메트 게랑(Bacillus Calmette-Guerin)]; TLR7 효능제 [예를 들어, 힐토놀(Hiltonol) 또는 이미퀴모드]; TLR7/8 효능제 [예를 들어, 레시퀴모드(Resiquimod)]; 또는 TLR9 효능제 (예를 들어, CpG7909)이다.
한 실시양태에서, 면역 체계의 자극으로부터 이득을 얻을 수 있는 질환, 예를 들어 암 또는 감염성 질환이 있는 대상체는 면역-종양학 작용제 및 항-CD73 항체를 이러한 대상체에게 투여함으로써 치료되는데, 여기서 면역-종양학 작용제는 TGF-β 억제제, 예를 들어, GC1008, LY2157299, TEW7197, 또는 IMC-TR1이다.
한 측면에서, 항-CD73 항체는 두 번째 작용제, 예를 들어, 면역-종양학 작용제의 투여 이전에 순차적으로 투여된다. 한 측면에서, 항-CD73 항체는 두 번째 작용제, 예를 들어, 면역학-종양학 작용제와 공동으로 투여된다. 또한 한 측면에서, 항-CD73 항체는 두 번째 작용제의 투여 후에 순차적으로 투여된다. 두 작용제의 투여는, 예를 들어 30분, 60분, 90분, 120분, 3시간, 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 3일, 5일, 7일, 또는 1주 이상 떨어진 시간에 시작할 수 있거나, 또는 두 번째 작용제의 투여는 첫 번째 작용제를 투여한 지, 예를 들어, 30분, 60분, 90분, 120분, 3시간, 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 3일, 5일, 7일, 또는 1주 이상 후에 시작할 수 있다.
특정 측면에서, 항-CD73 항체와 두 번째 작용제, 예를 들어, 면역-종양학 작용제는 동시에 투여되는데, 예를 들어 30 또는 60분의 기간에 걸쳐 환자에게 동시에 주입된다. 항-CD73 항체는 두 번째 작용제, 예를 들어, 면역-종양학 작용제와 함께 공동-제제화될 수 있다.
임의로, 단독 면역요법제로서의 항-CD73, 또는 항-CD73 항체와 하나 이상의 부가의 면역요법용 항체 (예를 들어, 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 봉쇄)의 조합물은 면역원성 작용제, 예컨대 암성 세포, 정제된 종양 항원 (재조합 단백질, 펩티드, 및 탄수화물 분자 포함), 세포, 및 면역 자극성 시토카인을 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포와 추가로 조합될 수 있다 (He et al (2004) J. Immunol. 173:4919-28). 사용될 수 있는 종양 백신의 비-제한적 예는 흑색종 항원의 펩티드, 예컨대 gp100, MAGE 항원, Trp-2, MART1 및/또는 티로시나제의 펩티드, 또는 시토카인 GM-CSF를 발현하도록 형질감염된 종양 세포 (다음에 추가로 논의됨)를 포함한다. 조합된 CD73 억제와 하나 이상의 부가의 항체 (예를 들어, CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄)는 또한, 표준 암 치료와 추가로 조합될 수 있다. 예를 들어, 조합된 CD73 억제와 하나 이상의 부가의 항체 (예를 들어, CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄)는 화학요법적 요법과 효과적으로 조합될 수 있다. 이들 경우에, 본 개시내용의 조합물과 함께 투여되는 다른 화학요법 시약의 용량을 감소시키는 것이 가능하다 (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58:5301-5304). 이러한 조합물의 한 예는 흑색종을 치료하기 위하여 데카르바진과 추가로 조합되는, 부가의 항체, 예컨대 항-CTLA-4 항체 및/또는 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체 및/또는 항-LAG-3 항체를 수반하거나 수반하지 않는 항-CD73 길항제 항체의 조합물이다. 또 다른 예는 흑색종을 치료하기 위하여 인터류킨-2 (IL-2)와 추가로 조합되는, 항-CTLA-4 항체 및/또는 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체 및/또는 LAG-3 항체를 수반하거나 수반하지 않는 항-CD73 항체의 조합물이다. CD73 억제 및 CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄와 화학요법의 조합 사용 배후의 과학적 근거는 대부분의 화학요법 화합물의 세포독성 작용의 결과인 세포 사멸이 항원 제시 경로에서 종양 항원의 수준을 증가시켜야 한다는 것이다. 세포 사멸을 통해 CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄를 수반하거나 또는 수반하지 않는 조합된 CD73 억제와 상승 작용을 일으킬 수 있는 다른 조합 요법은 방사선, 수술 및 호르몬 결핍을 포함한다. 이들 프로토콜 각각은 숙주에서 종양 항원의 원천을 창출시킨다. 혈관형성 억제제가 조합된 CD73 억제와 CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄와 조합될 수도 있다. 혈관형성의 억제는 숙주 항원 제시 경로 내로 공급된 종양 항원의 원천일 수 있는, 종양 세포 사멸을 초래한다.
단독 면역요법제로서의 항-CD73 길항제 항체, 또는 CD73 길항작용 항체와 CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 차단성 항체의 조합물은 또한, Fcα 또는 Fcγ 수용체-발현성 이펙터 세포가 종양 세포를 표적으로 하도록 하는 이중특이적 항체와 조합하여 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,922,845 및 5,837,243 참조). 이중특이적 항체를 사용하여 2개의 별도의 항원을 표적으로 할 수 있다. 이들 반응의 T 세포 아암은 조합된 CD73 억제와 CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄를 이용함으로써 증대될 것이다.
또 다른 예에서, 단독 면역요법제로서의 항-CD73 길항제 항체, 또는 항-CD73 항체와 부가의 면역자극제, 예를 들어, 항-CTLA-4 항체 및/또는 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체 및/또는 LAG-3 작용제, 예를 들어, 항체의 조합물은 항-신생물 항체, 예컨대 리툭산(Rituxan®) (리툭시맙), 헤르셉틴(Herceptin®) (트라스투주맙), 벡사르(Bexxar®) [토시투모맙(tositumomab)], 제발린(Zevalin®) [이브리투모맙(ibritumomab)], 캄파트(Campath®) (알렘투주맙), 림포시드® [엡르투주맙(eprtuzumab)], 아바스틴(Avastin®) [베바시주맙(bevacizumab)], 및 타르세바(Tarceva®) [에를로티닙(erlotinib)] 등과 연계해서 사용될 수 있다. 한 예로서 특정 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 항암 항체 또는 독소와 접합된 항암 항체를 이용하여 치료하면 암세포 (예를 들어, 종양 세포) 사멸이 초래될 수 있는데, 이는 면역자극제, 예를 들어, CD73, CTLA-4, PD-1, PD-L1 또는 LAG-3 작용제, 예를 들어, 항체에 의해 매개된 면역 반응을 증강시킬 것이다. 예시적인 실시양태에서, 과증식성 질환 (예를 들어, 암 종양)의 치료는 항암제, 예를 들어, 항체를, 항-CD73 및 임의로 부가의 면역자극제, 예를 들어, 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 작용제, 예를 들어, 항체와 공동으로 또는 순차적으로 또는 그의 임의의 조합으로 조합하는 것을 포함할 수 있는데, 이는 숙주에 의한 항종양 면역 반응을 증강시킬 수 있다.
종양은 각종 기전에 의해 숙주의 면역 감시를 피한다. 이들 기전 중 많은 부분이 종양에 의해 발현되고 면역억제성인 단백질의 불활성화에 의해 극복될 수 있다. 이들은 특히, TGF-β (문헌 [Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163:1037-1050]), IL-10 (문헌 [Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13:198-200]), 및 Fas 리간드 (문헌 [Hahne et al. (1996) Science 274:1363-1365])를 포함한다. 이들 실체 각각에 대한 항체를, 부가의 면역자극제, 예를 들어, 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 작용제, 예컨대 항체를 수반하거나 또는 수반하지 않는 항-CD73 항체와 추가로 조합하여, 면역억제제의 효과를 상쇄시키고 숙주에 의한 항종양 면역 반응을 선호할 수 있다.
숙주 면역 반응성을 활성화시키기 위해 사용될 수 있는 다른 작용제, 예를 들어, 항체는 부가의 면역자극제, 예컨대 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 항체를 수반하거나 또는 수반하지 않는 항-CD73 항체와 조합하여 추가로 사용될 수 있다. 이들은 DC 기능 및 항원 제시를 활성화시키는 수지상 세포의 표면 상의 분자를 포함한다. 항-CD40 항체 (상기 문헌 [Ridge et al.] 참조)가, 항-CD73 항체 및 임의로 부가의 면역자극제, 예를 들어, 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 작용제, 예를 들어, 항체와 연계해서 사용될 수 있다. T 세포 공동 자극성 분자에 대한 다른 활성화 항체 (상기 문헌 [Weinberg et al.; Melero et al.; Hutloff et al.] 참조)가, 증가된 수준의 T 세포 활성화를 제공할 수도 있다.
상기 논의된 바와 같이, 조혈 기원의 각종 종양을 치료하기 위해 현재 골수 이식이 사용되고 있다. 항-CD73 면역요법을 단독으로 사용하거나 또는 CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄와 조합하여 사용하여 공여자 생착된 종양 특이적 T 세포의 유효성을 증가시킬 수 있다.
몇 가지 실험적 치료 프로토콜은 항원 특이적 T 세포를 생체외 활성화 및 확장하고 이들 세포를 수용자 내로 입양 전달하여, 종양에 대항한 항원-특이적 T 세포를 활성화시키는 것을 포함한다 (Greenberg & Riddell; 상기 참조). 이들 방법은 또한, 감염체, 예컨대 CMV에 대한 T 세포 반응을 활성화시키기 위해 사용될 수 있다. 부가의 면역자극성 요법, 예를 들어, 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 항체를 수반하거나 또는 수반하지 않는 항-CD73의 존재하에서의 생체외 활성화는 입양 전달된 T 세포의 빈도 및 활성을 증가시키는 것으로 예상될 수 있다.
본원에는 치료량 이하의 용량의 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 작용제, 예를 들어, 항체를 수반하거나 또는 수반하지 않는 항-CD73 항체를 특정 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 면역자극성 작용제를 이용하여 과증식성 질환 (예를 들어, 암)을 치료하는 것과 연관된 부작용을 변경시키는 방법이 제공된다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법은 비흡수성 스테로이드를 환자에게 투여함으로써, 면역자극성 치료 항체-유도된 결장염 또는 설사의 발병률을 저하시키는 방법을 제공한다. 본원에 사용된 바와 같은, "비-흡수성 스테로이드"는 간에서의 대사 후, 스테로이드의 생체내 이용 효율이 낮도록, 즉 약 20% 미만이 되도록 광범위한 1차 통과 대사를 나타내는 글루코코르티코이드이다. 본원에 기재된 한 실시양태에서, 비-흡수성 스테로이드는 부데소니드이다. 부데소니드는 경구 투여 후, 주로 간에 의해 광범위하게 대사되는, 국소적으로 작용하는 글루코코르티코스테로이드이다. ENTOCORT EC® [아스트라-제네카(Astra-Zeneca)]는 회장 및 결장 전체에 대한 약물 전달을 최적화하기 위해 개발된 부데소니드의 pH 및 시간 의존성 경구 제형이다. ENTOCORT EC®는 회장 및/또는 상행 결장과 관련된 경증 내지 중등도의 크론병(Crohn's disease)의 치료를 위하여 미국에서 승인되었다. 크론병의 치료를 위한 ENTOCORT EC®의 통상적인 경구 투여량은 1일 6 내지 9 mg이다. ENTOCORT EC®는 흡수되기 전에 장에서 방출되고 소화관 점막에 보유된다. 일단 소화관 점막 표적 조직을 관통하면, ENTOCORT EC®는 간에서의 시토크롬 P450 시스템에 의해 광범위하게 대사되어, 무시할만한 수준의 글루코코르티코이드 활성을 지닌 대사물로 된다. 따라서, 생체내 이용 효율은 낮다 (약 10%). 이러한 부데소니드의 낮은 생체내 이용 효율은 덜 광범위한 1차 통과 대사를 수반한 다른 글루코코르티코이드와 비교해서 개선된 치료 비를 초래한다. 부데소니드는 전신에 작용하는 코르티코스테로이드보다 더 적은 수의 부작용 (시상하부 뇌하수체 억제가 덜하다)을 초래한다. 그러나, ENTOCORT EC®를 만성적으로 투여하면, 전신 글루코코르티코이드 효과, 예컨대 부신피질 항진증 및 부신 억제가 초래될 수 있다 (문헌 [PDR 58th ed. 2004; 608-610] 참조).
또한 추가의 실시양태에서, 비-흡수성 스테로이드와 연계해서, CTLA-4 및/또는 PD-1 및/또는 PD-L1 및/또는 LAG-3 봉쇄를 수반하거나 또는 수반하지 않는 CD73 억제 (즉, 면역자극성 치료 항체 항-CD73 및 임의로 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 항체)가 살리실레이트와 추가로 조합될 수 있다. 살리실레이트는 5-ASA 작용제, 예컨대, 예를 들어: 술파살라진 [AZULFIDINE®, 파르마시아 & 업존(Pharmacia & UpJohn)]; 올살라진 (DIPENTUM®, 파르마시아 & 업존); 발살라지드 [COLAZAL®, 살릭스 파르마슈티칼즈, 인크.(Salix Pharmaceuticals, Inc.)]; 및 메살라민 [ASACOL®, 프로터 앤 갬블 파르마슈티칼즈(Procter & Gamble Pharmaceuticals); PENTASA®, 시레(Shire) US; CANASA®, 악스칸 스칸디파르마, 인크.(Axcan Scandipharm, Inc.); ROWASA®, 솔베이(Solvay)]을 포함한다.
본원에 기재된 방법에 따라서, 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 LAG-3 항체 및 비-흡수성 스테로이드를 수반하거나 또는 수반하지 않는 항-CD73과 조합하여 투여된 살리실레이트는 면역자극성 항체에 의해 유도된 결장염의 발병률을 저하시킬 목적으로 살리실레이트와 비-흡수성 스테로이드의 임의의 중복 또는 순차적 투여를 포함할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본원에 기재된 면역자극성 항체에 의해 유도된 결장염의 발병률을 저하시키는 방법은 살리실레이트와 비-흡수성 스테로이드를 공동으로 또는 순차적으로 투여하거나 (예를 들어, 비-흡수성 스테로이드를 투여한 지 6시간 후에 살리실레이트를 투여한다), 또는 그의 임의의 조합으로 투여하는 것을 포괄한다. 추가로, 살리실레이트와 비-흡수성 스테로이드는 동일한 경로에 의해 (예를 들어, 둘 다 경구 투여한다) 또는 상이한 경로에 의해 (예를 들어, 살리실레이트를 경구 투여하고, 비-흡수성 스테로이드를 직장 투여한다) 투여할 수 있는데, 이는 항-CD73 및 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 및/또는 항-LAG-3 항체를 투여하기 위해 사용된 경로(들)와 상이할 수 있다.
본원에 기재된 항-CD73 항체 및 조합 항체 요법은 또한, 치료하고자 하는 적응증 (예를 들어, 암)에 대항한 그의 특별한 유용성에 대하여 선택되는, 다른 널리 공지된 요법과 연계해서 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD73 항체의 조합물은 공지된 제약상 허용되는 작용제(들)와 순차적으로 사용될 수 있다.
예를 들어, 본원에 기재된 항-CD73 항체 및 조합 항체 요법은 부가의 치료, 예컨대 방사선 조사, 화학요법 [예를 들어, 캄프토테신 (CPT-11), 5-플루오로우라실 (5-FU), 시스플라틴, 독소루비신, 이리노테칸, 파클리탁셀, 젬시타빈, 시스플라틴, 파클리탁셀, 카르보플라틴-파클리탁셀 (Taxol), 독소루비신, 5-fu, 또는 캄프토테신 + apo2l/TRAIL (6X 콤보)을 이용한다], 하나 이상의 프로테아솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉 또는 MG132), 하나 이상의 Bcl-2 억제제 [예를 들어, BH3I-2' (bcl-xl 억제제), 인돌아민 디옥시게나제-1 (IDO1) 억제제 (예를 들어, INCB24360), AT-101 (R-(-)-고시폴 유도체), ABT-263 (작은 분자), GX-15-070 (오바토클락스(obatoclax)), 또는 MCL-1 (골수성 백혈병 세포 분화 단백질-1) 길항제], iAP (아폽토시스 단백질의 억제제) 길항제 [예를 들어, smac7, smac4, 작은 분자 smac 모방체, 합성 smac 펩티드 (문헌 [Fulda et al., Nat Med 2002;8:808-15] 참조), ISIS23722 (LY2181308), 또는 AEG-35156 (GEM-640)], HDAC (히스톤 데아세틸라제) 억제제, 항-CD20 항체 (예를 들어, 리툭시맙), 혈관형성 억제제 (예를 들어, 베바시주맙), VEGF 및 VEGFR을 표적으로 하는 항혈관형성제 (예를 들어, 아바스틴), 합성 트리테르페노이드 (문헌 [Hyer et al., Cancer Research 2005;65:4799-808] 참조), c-FLIP (세포성 FLICE-억제성 단백질) 조정제 [예를 들어, PPARγ (페록시솜 증식화제-활성화된 수용체 γ)의 자연 및 합성 리간드, 5809354 또는 5569100], 키나제 억제제 (예를 들어, 소라페닙), 트라스투주맙, 세툭시맙, 템시롤리무스, mTOR 억제제, 예컨대 라파마이신 및 템시롤리무스, 보르테조밉, JAK2 억제제, HSP90 억제제, PI3K-AKT 억제제, 래날릴도미드, GSK3β 억제제, IAP 억제제 및/또는 유전자독성 약물과 조합하여 (예를 들어, 동시에 또는 별도로) 사용될 수 있다.
본원에 기재된 항-CD73 항체 및 조합 항체 요법은 하나 이상의 항-증식성 세포독성제와 조합하여 추가로 사용될 수 있다. 항-증식성 세포독성제로서 사용될 수 있는 화합물 부류는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다:
알킬화제 (질소 머스타드, 에틸렌이민 유도체, 알킬 술포네이트, 니트로소우레아 및 트리아젠을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다): 우라실 머스타드, 클로르메틴, 시클로포스파미드 (CYTOXAN™) 포스파미드, 멜팔란, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포르아민, 부술판, 카르무스틴, 로무스틴, 스트렙토조신, 데카르바진, 및 테모졸로미드.
항대사제 (엽산 길항제, 피리미딘 동족체, 퓨린 동족체 및 아데노신 데아미나제 억제제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다): 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 시타라빈, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴, 및 젬시타빈.
길항제 항-CD73 항체와 조합하는 데 적합한 항-증식성 작용제: 관련 기술분야에 공지된 다른 마이크로투불린 안정화제 이외에, 제한 없이 탁산, 파클리탁셀 (파클리탁셀은 TAXOL™로서 시판되고 있다), 도세탁셀, 디스코데르몰리드 (DDM), 딕티오스타틴 (DCT), 펠로루시드 A, 에포틸론, 에포틸론 A, 에포틸론 B, 에포틸론 C, 에포틸론 D, 에포틸론 E, 에포틸론 F, 푸라노에포틸론 D, 데스옥시에포틸론 Bl, [17]-데히드로데스옥시에포틸론 B, [18]데히드로데스옥시에포틸론 B, C12,13-시클로프로필-에포틸론 A, C6-C8 브릿지된 에포틸론 A, 트랜스-9,10-데히드로에포틸론 D, 시스-9,10-데히드로에포틸론 D, 16-데스메틸에포틸론 B, 에포틸론 B10, 디스코데로몰리드, 파투필론 (EPO-906), KOS-862, KOS-1584, ZK-EPO, ABJ-789, XAA296A (디스코데르몰리드), TZT-1027 (소블리도틴), ILX-651 (타시도틴 히드로클로라이드), 할리콘드린 B, 에리불린 메실레이트 (E-7389), 헤미아스테를린 (HTI-286), E-7974, 크립토피신, LY-355703, 마이탄시노이드 면역접합체 (DM-1), MKC-1, ABT-751, T1-38067, T-900607, SB-715992 (이스피네십), SB-743921, MK-0731, STA-5312, 엘레우테로빈, 17베타-아세톡시-2-에톡시-6-옥소-B-호모-에스트라-1,3,5(10)-트리엔-3-올, 시클로스트렙틴, 이소라울리말리드, 라울리말리드, 4-에피-7-데히드록시-14,16-디데메틸-(+)-디스코데르몰리드, 및 크립토틸론 1.
본원에 기재된 항-CD73 항체를 이용한 치료와 연계해서 또는 이러한 치료 이전에, 비정상적으로 증식하는 세포를 휴지기로 만드는 것이 바람직한 경우에는, 호르몬 및 스테로이드 (합성 동족체 포함), 예컨대 17a-에티닐에스트라디올, 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 프레드니손, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메게스트롤아세테이트, 메틸프레드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 히드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론아세테이트, 류프롤리드, 플루타미드, 테레미펜, ZOLADEX™을 환자에게 투여할 수도 있다. 본원에 기재된 방법 또는 조성물을 이용하는 경우에는, 임상 환경에서 종양 성장 또는 전이를 조정하는 데 사용된 다른 작용제, 예컨대 항모방제를 원하는 만큼 투여할 수도 있다.
화학요법제를 안전하고 유효하게 투여하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 또한, 그들의 투여가 표준 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 많은 화학요법제의 투여가 문헌 [Physicians' Desk Reference (PDR), e.g., 1996 edition (Medical Economics Company, Montvale, N.J. 07645-1742, USA); 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함된다]에 기재되어 있다.
화학요법제(들) 및/또는 방사선 요법은 관련 기술분야에 널리 공지된 치료 프로토콜에 따라서 투여될 수 있다. 화학요법제(들) 및/또는 방사선 요법의 투여는 치료하고자 하는 질환 및 이러한 질환에 대한 화학요법제(들) 및/또는 방사선 요법의 공지된 효과에 따라서 다양할 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 또한, 통상의 기술자의 지식에 따라서, 치료 프로토콜 (예를 들어, 투여량 및 투여 시간)은 환자에 대하여 관찰된, 투여된 치료제의 효과의 관점에서, 및 투여된 치료제에 대하여 관찰된, 질환의 반응의 관점에서 다양할 수 있다.
예시적인 실시양태
1. 인간 분화 클러스터 73 (CD73)과 결합하고; 다음 특성 중 하나 이상을 나타내는, 단리된 인간 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분:
(a) CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(b) 종양 세포 내로 내재화되는 특성; 또는
(c) 인간 CD73의 아미노산 65-83 및 157-172를 포함하는 입체 형태 에피토프와 결합하는 특성.
2. 항체가 펄스 추적에 의해 측정된 바와 같이, 10분 이하의 T1/2로 종양 세포 내로 내재화되는, 실시양태 1의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
3. 항체가 비아코어® SPR 분석에 의해 측정된 바와 같이 약 0.1 내지 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 CD73과 결합되는, 실시양태 1 또는 2의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
4. 항체가 FACS에 의해 측정된 바와 같이 0.1 내지 10 nM 이하의 EC50으로 인간 CD73과 결합되는, 전술된 실시양태 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
5. 항체가 FACS에 의해 측정된 바와 같이 0.1 내지 10 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 CD73과 결합되는, 전술된 실시양태 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
6. 항체가 아미노산 잔기 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및/또는 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)를 포함하는, 인간 CD73 (서열식별번호: 1) 상의 에피토프와 결합되는, 전술된 실시양태 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
7. 에피토프가 아미노산 잔기 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및/또는 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)에 걸쳐있거나 또는 이와 중복되는, 실시양태 6의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
8. 항체가 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 그의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 전술된 실시양태 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
9. 인간 CD73과 결합하고; 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 쌍 내에 각각 있는 3개의 중쇄 가변 영역 CDR 및 3개의 경쇄 가변 영역 CDR을 포함하는, 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분:
(a) 서열식별번호: 4 및 8
(b) 서열식별번호: 4 및 12;
(c) 서열식별번호: 16 및 20;
(d) 서열식별번호: 16 및 24;
(e) 서열식별번호: 16 및 28;
(f) 서열식별번호: 32 및 36;
(g) 서열식별번호: 40 및 44;
(h) 서열식별번호: 40 및 48;
(i) 서열식별번호: 52 및 56;
(j) 서열식별번호: 60 및 64;
(k) 서열식별번호: 68 및 72;
(l) 서열식별번호: 68 및 76;
(m) 서열식별번호: 80 및 84;
(n) 서열식별번호: 88 및 92;
(o) 서열식별번호: 135 및 8; 및
(p) 서열식별번호: 135 및 12.
10. 인간 CD73과 결합하고; 다음을 포함하는, 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분:
(a) 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 9, 10, 및 11을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(b) 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 13, 14, 및 15를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(c) 서열식별번호: 17, 18, 및 19를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 21, 22, 및 23을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(d) 서열식별번호: 17, 18, 및 19를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 25, 26, 및 27을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(e) 서열식별번호: 17, 18, 및 19를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 29, 30, 및 31을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(f) 서열식별번호: 33, 34, 및 35를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 37, 38, 및 39를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(g) 서열식별번호: 41, 42, 및 43을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 45, 46, 및 47을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(h) 서열식별번호: 41, 42, 및 43을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 49, 50, 및 51을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(i) 서열식별번호: 53, 54, 및 55를 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 57, 58, 및 59를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(j) 서열식별번호: 61, 62, 및 63을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 65, 66, 및 67을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(k) 서열식별번호: 69, 70, 및 71을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 73, 74, 및 75를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(l) 서열식별번호: 69, 70, 및 71을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 77, 78, 및 79를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열;
(m) 서열식별번호: 81, 82, 및 83을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 85, 86, 및 87을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열; 또는
(n) 서열식별번호: 89, 90, 및 91을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 93, 94, 및 95를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열.
11. 항체가 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 9, 10, 및 11을 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는, 실시양태 10의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
12. 항체가 서열식별번호: 5, 6, 및 7을 각각 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및/또는 서열식별번호: 13, 14, 및 15를 각각 포함하는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는, 실시양태 11의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
13. 인간 CD73과 결합하고; 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 4, 16, 32, 40, 52, 60, 68, 80, 88, 및 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
14. 인간 CD73과 결합하고; 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 여기서 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 8, 12, 20, 24, 28, 36, 44, 48, 56, 64, 72, 76, 84, 및 92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
15. 인간 CD73과 결합하고; 각각 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분:
(a) 서열식별번호: 4 및 8
(b) 서열식별번호: 4 및 12;
(c) 서열식별번호: 16 및 20;
(d) 서열식별번호: 16 및 24;
(e) 서열식별번호: 16 및 28;
(f) 서열식별번호: 32 및 36;
(g) 서열식별번호: 40 및 44;
(h) 서열식별번호: 40 및 48;
(i) 서열식별번호: 52 및 56;
(j) 서열식별번호: 60 및 64;
(k) 서열식별번호: 68 및 72;
(l) 서열식별번호: 68 및 76;
(m) 서열식별번호: 80 및 84;
(n) 서열식별번호: 88 및 92;
(o) 서열식별번호: 135 및 8; 및
(p) 서열식별번호: 135 및 12.
16. 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 각각 (a) 내지 (p)로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 가변 영역과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 실시양태 15의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
17. 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 각각 (a) 내지 (p)로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 가변 영역과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 실시양태 16의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
18. 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 각각 (a) 내지 (p)로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 17의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
19. 항체가 서열식별번호: 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 18의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
20. 항체가 서열식별번호: 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 18의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
21. 실시양태 1 내지 20 중 어느 하나의 항체와 동일한, CD73 상의 에피토프와 결합하는, 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
22. 항체가 다음 특성 중 어느 하나를 나타내는, 실시양태 9 내지 21 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분:
(1) 예를 들어, 비아코어® SPR 분석에 의해 측정된 바와 같이, 예를 들어 10 nM 이하 (예를 들어, 0.01 nM 내지 10 nM)의 KD로 가용성 인간 CD73과 결합하는 특성;
(2) 예를 들어, 1 nM 이하 (예를 들어, 0.01 nM 내지 1 nM)의 EC50으로, 막 결합된 인간 CD73과 결합하는 특성;
(3) 예를 들어, 10 nM 이하 (예를 들어, 0.01 nM 내지 10 nM)의 EC50으로, 시노몰구스 CD73, 예를 들어, 막 결합된 시노몰구스 CD73과 결합하는 특성;
(4) 예를 들어, 10 nM 이하의 EC50으로, 인간 CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(5) 예를 들어, 10 nM 이하의 EC50으로, 시노 CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(6) 생체 내에서 인간 CD73 효소 활성을 억제하고; 다가 가교결합을 필요로 하지 않으면서 T 세포 활성화를 유도 또는 증강시키는 특성;
(7) 예를 들어, 10분 미만의 T1/2로, 세포 내로 내재화되는 특성;
(8) 아미노산 잔기 FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96) 및/또는 LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97)를 포함하는, 인간 CD73 상의 입체 형태적 에피토프, 예를 들어 아미노산 서열 (서열식별번호: 1) 내의 불연속 에피토프와 결합하는 특성;
(9) 글리코실화 인간 CD73과는 결합하지만, 비글리코실화 인간 CD73과는 결합하지 않는 특성; 및
(10) 인간 CD73과의 결합을 놓고 한 방향 또는 양 방향으로 CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11A6, 24H2, 5F8-1, 5F8-2, 6E11 및/또는 7A11과 경쟁하는 특성.
23. CD73과 결합하고; 각각 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 서열의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는, 단리된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분:
(a) 각각 서열식별번호: 100 및 101;
(b) 각각 서열식별번호: 100 및 102;
(c) 각각 서열식별번호: 103 및 104;
(d) 각각 서열식별번호: 103 및 105;
(e) 각각 서열식별번호: 103 및 106;
(f) 각각 서열식별번호: 107 및 108;
(g) 각각 서열식별번호: 109 및 110;
(h) 각각 서열식별번호: 109 및 111;
(i) 각각 서열식별번호: 112 및 113;
(j) 각각 서열식별번호: 114 및 115;
(k) 각각 서열식별번호: 116 및 117;
(l) 각각 서열식별번호: 116 및 118;
(m) 각각 서열식별번호: 119 및 120;
(n) 각각 서열식별번호: 121 및 122;
(o) 각각 서열식별번호: 133 및 101; 및
(p) 각각 서열식별번호: 133 및 102.
24. 중쇄 및 경쇄가 (a) 내지 (p)로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 실시양태 23의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
25. 항체가 서열식별번호: 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 실시양태 24의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
26. 항체가 서열식별번호: 135에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 102에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 실시양태 24의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
27. 항체가 다음 특성 중 어느 하나를 나타내는, 실시양태 23 내지 26 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분:
(a) CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
(b) 종양 세포 내로 내재화되는 특성; 또는
(c) 인간 CD73의 아미노산 65-83 및 157-172를 포함하는 입체 형태 에피토프와 결합하는 특성.
28. 항체가 시노몰구스 CD73과 결합되는, 전술된 실시양태 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
29. 항체가 이펙터 없는 Fc를 포함하는, 실시양태 10 내지 22의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
30. 항체가 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 인간 CH1 도메인, 인간 힌지 도메인, 인간 CH2 도메인, 및 인간 CH3 도메인을 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는, 실시양태 1 내지 7 및 9 내지 22의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
31. 변형된 불변 영역이 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 이루어진 이소형의 군으로부터 선택된 상이한 이소형의 적어도 2개의 도메인을 포함하는, 실시양태 30의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
32. 변형된 불변 영역이 인간 IgG2 CH1 도메인을 포함하고, CH2, CH3, 및 힌지 도메인 중 적어도 하나가 IgG2 이소형이 아닌, 실시양태 30 또는 31의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
33. IgG2 CH1 도메인이 아미노산 서열 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV (서열식별번호: 124)을 포함하는, 실시양태 32의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
34. 변형된 불변 영역이 시스테인 결합에 있어서의 이질성을 저하시켜 주는 인간 IgG2 힌지 도메인을 포함하는, 실시양태 30 내지 33 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
35. 힌지 도메인이 야생형 인간 IgG2 힌지 도메인 (서열식별번호: 136)과 비교해서 C219에서의 아미노산 치환을 포함하는, 실시양태 34의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
36. 힌지 도메인이 아미노산 서열 ERKSCVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 123)을 포함하는, 실시양태 35의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
37. 변형된 불변 영역이 이펙터 기능을 저하시키거나 또는 없애주는 인간 IgG1 CH2 도메인을 포함하는, 실시양태 30 내지 36 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
38. CH2 도메인이 야생형 인간 IgG1 CH2 도메인 (서열식별번호: 137)과 비교해서 아미노산 치환 A330S 및 P331S를 포함하는, 실시양태 37의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
39. CH2 도메인이 아미노산 서열 APPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAK (서열식별번호: 125)을 포함하는, 실시양태 38의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
40. 변형된 불변 영역이 인간 IgG1 CH3 도메인을 포함하는, 실시양태 30 내지 39 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
41. CH3 도메인이 다음 아미노산 서열
GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 128)
을 포함하는, 실시양태 40의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
42. 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분이 인간 또는 인간화 항체인, 실시양태 9 내지 29 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
43. CDR 영역 내의 메티오닌 잔기가, 산화를 진행하지 않은 아미노산 잔기로 대체되는, 실시양태 1 내지 8의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분.
44. 제2의 결합 특이성을 갖는 분자와 연결된, 전술된 실시양태 중 어느 하나의 항체를 포함하는 이중특이적 분자.
45. 제2의 상이한 작용제와 연결된, 실시양태 1 내지 43 중 어느 하나에 따르는 항체를 포함하는 면역접합체.
46. 실시양태 1 내지 43 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
47. 실시양태 46의 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
48. 실시양태 47의 발현 벡터로 형질전환된 세포.
49. 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분, 이중특이적 분자 또는 면역접합체; 및 담체를 포함하는 조성물.
50. 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분, 또는 이중특이적 분자 또는 면역접합체; 및 사용 설명서를 포함하는 키트.
51. 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 실시양태 48의 세포에서 발현시키는 단계; 및 이러한 세포로부터 상기 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분을 단리하는 단계를 포함하는, 항-CD73 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분의 제조 방법.
52. CD73을 발현하는 종양 세포를, 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 그의 항원 결합성 부분, 이중특이적 분자 또는 면역접합체와 접촉시켜, 아데노신 수준이 감소되도록 하는 것을 포함하는, 상기 CD73을 발현하는 종양 세포 내의 아데노신 수준을 감소시키는 방법.
53. 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분, 이중특이적 분자 또는 면역접합체의 유효량을 투여하여, CD73을 발현하는 종양 세포에 대항하여 T 세포 반응이 자극되도록 하는 것을 포함하는, CD73을 발현하는 종양 세포에 대항하여 T 세포 반응을 자극시킬 필요가 있는 대상체에게서 이러한 T 세포 반응을 자극하는 방법.
54. 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분, 이중특이적 분자 또는 면역접합체를 특정 대상체에게 투여하여, 이러한 대상체에게서 면역 반응이 자극되도록 하는 것을 포함하는, 상기 대상체에게서 면역 반응을 자극하는 방법.
55. 대상체가 CD73을 발현하는 종양 세포를 갖고 있고, 이러한 종양 세포에 대항하여 면역 반응이 자극되는, 실시양태 54의 방법.
56. 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분, 이중특이적 분자 또는 면역접합체를 특정 대상체에게 투여하여, 이러한 대상체에게서 종양의 성장이 억제되도록 하는 것을 포함하는, 상기 대상체에게서 CD73을 발현하는 종양 세포의 성장을 억제하는 방법.
57. 암을 치료하기 위하여, 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분, 이중특이적 분자 또는 면역접합체의 치료상 유효량을, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법.
58. 암이 방광암, 유방암, 자궁/자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 두경부암, 폐암, 위암, 생식 세포암, 뼈암, 간암, 갑상선암, 피부암, 중추 신경계의 신생물, 림프종, 백혈병, 골수종, 육종, 및 바이러스 관련 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 실시양태 57의 방법.
59. 암이 전이성 암, 불응성 암, 또는 재발성 암인, 실시양태 57 또는 58의 방법.
60. 하나 이상의 부가 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는, 실시양태 53 내지 59 중 어느 하나의 방법.
61. 부가 치료제가 면역증강성 분자 (예를 들어, PD-1 길항제, CTLA-4 길항제, LAG-3 길항제), 항-CD39 항체 또는 항-A2AR 항체인, 실시양태 60의 방법.
62. 특정 샘플을, 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나의 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분과 CD73 간의 복합체의 형성을 허용해 주는 조건하에, 상기 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분과 접촉시키는 단계; 및 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 상기 샘플 중의 인간 CD73의 존재를 검출하는 방법.
본 개시내용은 다음 실시예에 의해 추가로 예시되지만, 이로써 추가로 제한되는 것으로 간주되지 않아야 한다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 도면 및 모든 참고문헌, 유전자은행 서열, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 본원에 명확히 참조로 포함된다. 특히, PCT 공보 WO 09/045957, WO 09/073533, WO 09/073546, WO 09/054863 및 PCT/US2013/072918, 및 미국 특허 공개 번호 2011/0150892의 개시내용이 본원에 명확히 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1: 인간 항-CD73 항체의 생성
인간 항-인간 CD73 모노클로날 항체를, HuMAb® 트랜스제닉 마우스 ["HuMAb"는 메다렉스, 인크. (미국 뉴저지주 프린스턴)의 상표이다]의 Hco7, Hco27, Hco20, Hco12, Hco17, 및 Hc2 계통 및 KM 마우스 (KM 마우스® 계통은 PCT 공보 WO 02/43478에 기재된 바와 같은 SC20 트랜스크로모솜을 함유한다)에서 생성시켰다. HC2/KCo27 HuMAb 마우스 및 KM 마우스를 미국 특허 번호 5,770,429 및 5,545,806 (이의 전체 개시내용이 본원에 참조로 포함된다)에 기재된 바와 같이 생성시켰다.
각종 유전자형의 트랜스제닉 마우스 (예컨대, KM, Hco7, Hco27, Hco20, Hco12, Hco17 및 Hc2)를 포함한 마우스를 상이한 면역 전략 [상이한 항원, 상이한 용량, 지속 기간, 투여 경로 (발바닥 (fp), 복강내 (ip) 및 피하 (sc) 및 아주반트 (CFA/IFA, 리비 및 항체) 등)]으로 면역시켰다. 이러한 마우스로부터의 융합을 수행하고 스크리닝하며, 항체를 이들 융합물로부터 확인하였다. 추가로 특징 규명한 결과, 특별한 관심 항체가 단리된 것으로 나타났는데, 이는 11F11-1, 11F11-2, 4C3-1, 4C3-2, 4C3-3, 4D4-1, 10D2-1, 10D2-2, 11A6-1, 24H2-1, 5F8-1, 5F8-2, 6E11-1, 및 7A11-1로서 지명된 항체를 포함한다. 표 7 (하기)은 각 항체에 대한 중쇄의 IgG 이소형 및 동종이형뿐만 아니라 경쇄의 유형을 제공한다. 경쇄에서만 상이한 항체는 대쉬 다음에 상이한 아라비아 숫자로 표시된다. 예를 들어, 11F11-1은 11F11-2와 동일한 중쇄를 갖지만, 11F11-1은 경쇄 VK1을 갖는 반면, 11F11-2는 경쇄 VK2를 갖는다. 달리 명시되지 않는 한, 다음 표에서 항체의 VH 영역에 근거한 재조합 항체는 우세 경쇄를 이용하여 만들었다.
<표 7>
각 항체의 중쇄 및 경쇄의 완전한 길이의 서열, VH 및 VL 도메인 및 CDR의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열이 서열 목록 및 표 35에 제공된다. VH 및 VL 아미노산 서열이 또한, 도 1a 내지 17b에 제공되고, 각종 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열의 정렬이 도 35에 제공된다 (CDR 서열은 볼드체이다).
실시예 2: 가변 영역 내에서의 아미노산 치환 및 이소형 변이
항체 11F11의 VH 영역의 프레임워크 영역은, 다음 아미노산 잔기에서의 돌연변이 중 하나 이상을 도입함으로써 돌연변이시켰다 (주변 아미노산이 제시되고, 돌연변이된 아미노산에 밑줄이 그어져 있다): T25 (프레임워크 돌연변이; … RLSCATSGFTF…), L52 (CDR2 돌연변이; …WVAVILYDGSN…), G54 (CDR2 돌연변이; …VILYDGSNKYY…) 및 V94 (프레임워크 돌연변이; …AEDTAVYYCAR…). 이들 각각에서의 구축물 및 치환의 명칭이 표 8에 제시된다:
<표 8>
* CD73.11은 4D4이고, 단리된 바와 같은 이들 아미노산 잔기를 함유하였다. 이는 비교 목적을 위해 상기 표에 열거된다.
항체 11F11 및 4D4의 불변 영역은, 이를, C219S 치환을 수반한 IgG2 불변 영역 (CH1, 힌지, CH2 및 CH3) ("IgG2CS"; 서열식별번호: 267); 치환 L234A, L235E, G237A, A330S 및 P331S를 수반한 이펙터 없는 IgG1 불변 영역 ("IgG1.1f"; 서열식별번호: 268); 또는 IgG2 (C219S를 수반함)로부터의 CH1 및 힌지 및 IgG1 (A330S/P331S를 수반함)의 CH2 및 CH3을 함유하는 이펙터 없는 IgG1/IgG2 혼성체 불변 영역 ("IgG2CS-IgG1.1f" 또는 "IgG2C219S-IgG1.1f"; 서열식별번호: 169)으로 전환시킴으로써 변형시켰다. 제조된 구축물이 표 9에 열거된다.
<표 9>
CD73.4-IgG2CS IgG1.1f의 아미노산 서열이 도 18에 제시된다 (서열식별번호: 189).
Ab CD73.3-CD73.11을 다음과 같이 제조하였다. 경쇄 VK2 (서열식별번호: 102)를, 11F11로부터 유래되는 항체 (CD73.4, CD73.6, CD73.8 및 CD73.10)에 사용하였다. 중쇄 및 경쇄를 HEK293-6E 세포에서 발현시키고, 배양 배지를 형질감염 후 5일에 수거하였다.
인간 FcγR에 대한 구축물의 결합을, SPR을 통하여 측정하였다. IgG1.1 및 IgG2 분자에 대한 hCD64 및 hCD32a-H131 결합 데이터는 상이한 Fc에 대하여 예상된 값과 일치하였다. IgG1.1f가 가장 불활성 Fc이다. IgG2 및 IgG2-C219S는 IgG2에 대한 전형적인 FcR 결합성을 보여주었다. 예상된 바와 같이, IgG2-C219S-G1.1f에 대한 데이터는 야생형 IgG1 또는 IgG2보다는 상당히 더 약하게 결합하지만, IgG1.1f와 비교해서는 결합이 증가되었다는 것을 암시한다. IgG2-C219S-G1.1f는 약한 hCD32a-H131 결합성 (2.3 μM의 KD)을 나타내며, 다른 모든 FcγR에 대한 결합 친화도는 5 μM 미만이었다. 시노 FcγR에 대한 IgG2-C219S-G1.1f의 결합 친화도는 5 μM 초과였다. 인간 FcRn에 대한 IgG2-C219S-G1.1f의 결합을 SPR 분석한 결과, pH-의존성 결합인 것으로 밝혀졌다 (pH 6에서는 강한 결합을 나타내고, pH 7.4에서는 약한 결합을 나타내어 신속하게 해리된다).
재조합 제제는 종종 중쇄의 C-말단 Lys가 결여되는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, Ab CD73.4.IgG2-C219S-G1.1f의 중쇄의 97%에 C-말단 리신이 결여되었다. 특정의 제제는 중쇄의 N-말단 Q (글루타민)에 피로-Q를 갖고 있었다. 예를 들어, Ab CD73.4.IgG2-C219S-G1.1f의 중쇄의 N-말단 글루타민의 94%가 피로-Q였다.
실시예 3: 항-CD73 항체의 결합 특징
A. 표면 플라스몬 공명 (SPR)
CD73 결합 동역학 및 친화도는 25℃에서 비아코어 T100 기기 [GE 헬스케어(Healthcare)]를 사용하여 표면 플라스몬 공명 (SPR)에 의해 연구하였다.
한 가지 실험 포맷은 고정화된 단백질 A 표면 상에 포획된 항체에 대한 hCD73의 N-말단 도메인 (인간 CD73의 잔기 26 내지 336으로 이루어지고; N-hCD73으로 명명됨)의 결합성을 시험하였다. 이들 실험을 위하여, 단백질 A (피어스)를, 0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 트윈 20의 실행 완충제 중의 표준 에틸(디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 (EDC)/N-히드록시숙신이미드 (NHS) 화학 (에탄올아민 차단성 수반)을 이용하여, CM5 센서 칩 (GE 헬스케어)의 유동 세포 1 내지 4 상에서 3000 내지 4000 RU의 밀도가 되도록 고정화시켰다. 동역학 실험은 먼저, 10 ul/min 하의 30 s 접촉 시간을 이용하여 단백질 A 표면 상에 항체 (5 내지 10 ug/ml)를 포획함으로써 수행하였는데, 30 ul/min의 유속 하에 180 s 연합 시간 및 360 s 해리 시간을 이용하여 600, 200, 66.7, 22.2, 7.4, 및 2.5 nM N-hCD73-his의 결합을 나타내었다. 이러한 동역학 실험을 위한 실행 완충제는 10 mM 인산나트륨, 130 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.1이었다. 30 μl/min의 유속 하에 10 mM 글리신 pH 1.5의 2회의 30 s 펄스를 이용한 각 주기 후에 표면을 재생시켰다. 센서그램(Sensogram) 데이터를 이중 참조한 다음, 비아코어 T100 평가 소프트웨어 v2.0.4를 사용하여 1:1 랑뮈르(Langmuir) 모델에 피팅하여 연합 속도 상수 (ka), 해리 속도 상수 (kd) 및 평형 해리 상수 (KD)를 결정하였다.
그 결과가 표 10에 제시된다. 이러한 표는 상이한 실험으로부터의 데이터를 편집한 것이다. 그에 대한 2개 이상 세트의 수가 제시된 항체에 대해서, 각 세트는 별도의 실험에서 수득된 데이터에 상응한다.
<표 10>
25℃에서 N-hCD73-his (hCD73(26-336)His)에 대한 CD73 mAb 결합성의 동역학
상기 표 내의 KD는 1가 KD, 즉 인간 CD73의 N-말단 부분 (이는 1가이다)에 대한 항체의 결합성의 KD이다.
G54S 돌연변이가 관용되고, 이는 예측된 DG 이성화 부위를 제거하면서 친화도를 약간 증가시키는 것으로 여겨진다. L52W 돌연변이는 친화도를 대략 10배 만큼 감소시키는 것으로 여겨진다. 4D4 변이체는 독특한 CDR3 서열과 상이한 동역학을 갖는다 (11F11 분자와 비교해서 더 느리게 연합된다).
CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f에 대한 10개의 실험으로부터의 평균 KD는 1.1 ± 0.4 nM이다. 11F11과 비교해서 T25A 돌연변이는 친화도에 영향을 미치지 않는다.
그 결과는 모든 항-CD73 항체가 우수한 친화도로 인간 CD73과 결합하고 느린 해리 속도를 나타낸다는 것을 보여준다.
결합 연구 결과는 일부 항체가 원래의 항체 (즉, 11F11, 4C3 또는 4D4)와 비교해서 저하된 친화도를 나타내긴 하였지만, 11F11, 4C3 또는 4D4 내로의 돌연변이 도입 후 또는 이소형 전환 후에도 결합 활성이 유지되었다는 것을 표시한다. 특히, CD73.10 (T25A,L52W,G54E)은 CD73.4 (T25A) 또는 CD73.11 (4D4)보다 더 신속한 해리 속도를 나타내었다. 모든 IgG2 분자를 비교한 결과, 11F11 및 CD73.4 (11F11-T25A)가 가장 높은 1가 CD73 친화도 (KD = 1.1 nM ± 0.4 nM)를 갖고 있는 것으로 나타났다. CD73.10 (11F11-T25A, L52W, G54E)은 11F11 또는 CD73.4보다 대략 10배 더 낮은 CD73 친화도를 갖고 있었다. 이는 L52W 또는 G54E 또는 둘 다의 돌연변이가, 다른 11F11 서열과 조합될 때 CD73 친화도를 저하시킨다는 것을 암시한다. 4D4 및 CD73.11은 CD73.10과 거의 동등한 수준의 친화도 (KD 약 5 nM)를 갖고 있지만, 그 동역학은 상이하다. 4C3 에피토프는 CD73의 N- 및 C-도메인의 영역을 포함하는 것으로 여겨지므로, 단리된 N-도메인에 대하여 측정된 KD는 약하다 (KD = 100 내지 200 nM).
시노 CD73에 대한 CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f의 결합성을 또한 연구하였다. 시노몰구스 원숭이 CD73과 결합하기 위한 CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f의 특이성을, 25℃ 하에 비아코어 T100 기기 (GE 헬스케어)를 이용하여 표면 플라스몬 공명 (SPR)에 의해 인간 CD73과의 결합 특이성과 비교하였다. 인간 CD73 (His 태그와 연결된 인간 CD73의 잔기 27 내지 547로 이루어지고; hCD73-his로 명명됨) 또는 시노몰구스 CD73 (His 태그와 연결된 시노몰구스 CD73의 잔기 27 내지 547로 이루어지고; cy-CD73-his로 명명됨)의 완전한 길이의 세포외 도메인을 대상으로 하여, 고정화된 단백질 A 표면 상에 포획된 항체와의 결합성에 관하여 시험하였다. 이들 실험을 위하여, 단백질 A (피어스)를, 0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 트윈 20의 실행 완충제 중의 표준 에틸(디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 (EDC)/N-히드록시숙신이미드 (NHS) 화학 (에탄올아민 차단성 수반)을 이용하여, CM5 센서 칩 (GE 헬스케어)의 유동 세포 1 내지 4 상에서 3000 내지 4000 RU의 밀도가 되도록 고정화시켰다. 실험은 먼저, 10 ul/min 하의 30 s 접촉 시간을 이용하여 단백질 A 표면 상에 항체 (5 내지 10 ug/ml)를 포획함으로써 수행하였는데, 30 ul/min의 유속 하에 180 s 연합 시간 및 360 s 해리 시간을 이용하여 600, 200, 66.7, 22.2, 7.4, 및 2.5 nM hCD73-his 또는 시노-CD73-his의 결합을 나타내었다. 이러한 실험을 위한 실행 완충제는 10 mM 인산나트륨, 130 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.1이었다. 30 μl/min의 유속 하에 10 mM 글리신 pH 1.5의 2회의 30 s 펄스를 이용한 각 주기 후에 표면을 재생시켰다.
도 19에 도시되는 그 결과는 CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f가 유사한 친화도 및 동역학으로 시노 및 인간 CD73과 결합한다는 것을 표시한다. CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f는 1 nM 미만의 KD로 완전한 길이의 인간 및 시노 CD73 이량체와 결합한다. 마우스 또는 래트 CD73에 대한 CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f의 유의적 교차 반응성은 관찰되지 않았다.
11F11 항체로부터의 단리된 Fab 단편의 동역학 및 친화도를 또한, SPR에 의해 평가하였다. 이들 실험에서는, 뮤린 항-6xHis 항체로부터의 Fab 도메인을, EDC/NHS를 이용하여 CM5 센서 칩 상에서 고정화시켜 약 3000 RU의 밀도가 되도록 하였다. 완전한 길이의 hCD73-his를, 10 ul/min 하의 30 s 접촉 시간을 이용하여, Fc2 (1 ug/ml hCD73-his) 상에서 10 RU 밀도가 되도록 포획하고, Fc3 (5 ug/ml hCD73-his) 상에서 40 RU 밀도가 되도록 포획하며, Fc4 (20 ug/ml hCD73-his) 상에서 160 RU 밀도가 되도록 포획하였다. 그 다음, 11F11 Fab 단편 (펩신-절단된 L-시스테인-저하된 11F11 항체로부터 정제됨)을 대상으로 하여, 10 mM 인산나트륨, 130 mM 염화나트륨, 0.05% 트윈 20, pH 7.1의 실행 완충제 중에서, 30 ul/min 하에 180 s 연합 시간, 600 s 해리 시간을 이용하여 400, 135, 44.4, 14.8, 4,9, 1.7, 0.55 nM에서의 결합성에 관하여 시험하였다. 30 μl/min의 유속 하에 10 mM 글리신 pH 2.0의 2회의 15 s 펄스를 이용한 각 주기 후에 표면을 재생시켰다. 센서그램 데이터를 이중 참조한 다음, 비아코어 T100 평가 소프트웨어 v2.0.4를 사용하여 1:1 랑뮈르 모델에 피팅하여 연합 속도 상수 (ka), 해리 속도 상수 (kd) 및 평형 해리 상수 (KD)를 결정하였다. 그 결과가 다음 표 11에 제시된다.
<표 11>
25℃ 하에 hCD73-his 표면에 대한 11F11-Fab 결합성의 동역학
따라서, 그 결과는 11F11 Fab 단편이 hCD73에 대한 높은 친화도 (KD 약 0.74 nM)를 갖고 있다는 것을 보여준다.
B. CD73 양성 세포에 대한 CD73 항체의 결합
적정 결합 곡선은 다음 방법을 이용하여, 2차 항체로서 알렉사 플루오르(Alexa Fluor®) 647 염소 항-인간 IgG (H+L) [인비트로젠(Invitrogen) Cat#A-21445]를 사용하여, Calu6 (CD73 내인성 발현인자; 인간 폐 선암종 세포주), DMS114 (CD73 음성; 인간 소세포 폐암 세포주), CHO-시노CD73 (시노CD73-형질감염됨) 및 CHO-K1 (시노CD73 음성) 세포 상에서 CD73 항체를 이용하여 생성시켰다: 웰당 100,000개 세포를 100 uL PBS + 2% FBS에 플레이팅하고 20분 동안 차단시켰다. U자형 바닥 96-심부 웰 플레이트를 이용하여, 항체 및 PBS + 2% FBS의 용적을 다음 표 12에 의해 지시된 바와 같이 합하였다.
<표 12>
8-포인트 일련의 희석은 450 uL PBS + 2% FBS에 용적 (90 uL)의 6분의 1을 희석함으로써 수행하였다. 세포 플레이트를 1500 rpm 하에 5분 동안 침강시켰다. 상기 플레이트의 웰당 100 uL의 희석된 항체를 부가하였다. 100 uL PBS + 2% FBS를 다른 모든 웰에 부가하였다. 상기 플레이트를 45분 동안 얼음 상에서 염색하고, 1500 rpm 하에 5분 동안 침강시키며, 웰당 200 uL PBS + 2% FBS에서 2회 세척하였다. 접합되지 않은 항체가 부여된 웰과 세포주 당 하나의 염색되지 않은 웰을 100 uL APC 항-인간 2차 항체 (20 ug/mL)에 재현탁시켰다. 100 uL PBS + 2% FBS를 다른 모든 웰에 부가하고, 얼음 상에서 45분 동안 염색하였다. 플레이트를 1500 rpm 하에 5분 동안 침강시키고, 웰당 200 uL PBS + 2% FBS에서 세척하였다. 플레이트를 다시 세척하고, 웰당 PBS 중의 200 uL 2% FBS에 재현탁시키며, 샘플을 실행하였다.
도 20aa, 20ab, 20ba, 20bb, 20ca, 20cb, 20da, 20db, 및 표 13에 제시된 결과는 모든 CD73 항체가, 시노 CD73을 발현하도록 형질감염된 CHO 세포 및 CD73을 자연적으로 발현하는 세포 (Calu6 세포)와 결합하지만, CD73을 발현하지 않는 세포 (DMS114 및 CHO-K1)와는 결합하지 않는다는 것을 표시한다. 각 항체에 대하여 수득된 결합의 EC50이 표 13에 제시된다.
<표 13>
인간 종양 세포주에 대한 CD73.4-IgG2-IgG1.1f의 결합의 EC50은 0.5 nM (0.3 내지 0.67 nM의 범위)였다. 시노 CD73 형질감염된 CHO 세포에 대한 CD73.4-IgG2-IgG1.1f의 결합의 EC50은 0.3 nM (0.1 내지 0.5 nM의 범위)였다.
인간 B 및 T 세포에 대한 CD73.4 항체의 결합성을 또한 결정하였다. 2개의 공여체, 즉 D316 및 D329로부터의 인간 혈액을 임뮤노사이언스(Immunsciences), BMS로부터 수득하였다. 림포라이트(Lympholyte)-H 세포 분리 구배 배지를 이용하여 말초혈 단핵 세포 (PBMC)를 단리하였다. PBMC를 일련으로 희석된 FITC-표지된 CD73.4-IgG2, CD73.4-IgG2-IgG1.1f, 또는 CD73.4-IgG1.1f 항체와 함께 인큐베이션하고, CD3 및 CD20에 대한 플루오로크롬-표지된 항체를 이용하여 T 세포 및 B 세포를 확인하였다. 염색되지 않은 샘플 및 FMO (형광에서 하나 빼기) 대조군 샘플에 대하여 양 공여체로부터의 세포를 풀링하였다. 도 20e 및 f 및 표 14에 제시되는 결과는 항체가 인간 B 및 T 세포와 특이적으로 결합한다는 것을 표시한다.
<표 14>
B 및 T 세포에 대한 CD73 항체의 결합의 IC50
실시예 4: 항-CD73 항체의 생물 물리학적 특징
A. 인라인 다중 각도 광 산란 검출기와 커플링된 크기 배제 크로마토그래피 (SEC-MALS)
CD73 mAb의 올리고머성 상태를, 인라인 다중 각도 광 산란 검출기와 커플링된 크기 배제 크로마토그래피 (SEC-MALS)에 의해 조사하였다. 0.5 mL/min 하에 실행되고 0.02% Na 아지드 (0.1 μm 여과됨)를 함유하는, 200 mM K2HPO4, 150 mM NaCl, pH 6.8을 함유하는 완충제 중의 프로미넌스 시마주(Prominence Shimadzu) UFLC와 연결된 쇼덱스(Shodex) 단백질 KW-803 칼럼 상에서 동용매 분리를 수행하였다. SIL-20AC 프로미넌스 시마주 오토샘플러를 이용하여 상기 칼럼 상으로 샘플을 주사하고, 다음과 같이 일련으로 연결된 3개의 온라인 검출기로부터 데이터를 수득하였다: 프로미넌스 SPD-20AD 다이오드 어레이 UV/vis 분광광도계에 이어 와이어트(Wyatt) 미니DAWN™ TREOS 다중 각도 광 산란 검출기 다음에, 와이어트 옵티랩(Optilab) T-rEX 굴절률 검출기. 데이터 (다음 표 15에 제시된 바와 같음)를 수집하고, 아스트라 (와이어트) 및 랩솔루션(Labsolutions) (시마주) 소프트웨어를 이용하여 분석하였다. 그 결과가 표 15에 제시된다.
B. 시차 주사 열량측정법 (DSC)
마이크로칼(MicroCal) 모세관 DSC 기기 (GE 헬스케어)를 이용하여 CD73 mAb의 열 안정성을 결정하였다. 항체를 PBS pH 7.1 중의 0.5 내지 0.75 mg/ml의 농도하에 분석하였다. 상기 DSC 기기 기준선을 안정화시키고 일관된 열 이력을 수득하기 위하여, 샘플 분석에 앞서, 샘플과 참조 세포 둘 다에서의 완충제 단독의 다중 스캔을 기록하였다. 샘플 스캔은 샘플 세포 중에 mAb를 함유하였고 참조 세포 중에 PBS pH 7.1을 함유하였다. 모든 스캔은 5분의 프리-사이클 온도 조절 장치 기간을 이용하고 포스트-사이클 온도 조절 장치 기간 없이 60°/hr의 스캔 속도로 10 내지 110℃에서 실행되었다. 마이크로칼 오리진(Origin) 캡 DSC 분석 소프트웨어를 이용하여 데이터 (하기 표 15에 제시된 바와 같음)를 분석하였다. 적절한 완충제-완충제 블랭크 스캔을 샘플-완충제 데이터로부터 공제하고, 그 데이터를 비-2-상태 모델에 피팅함으로써 전이 중간점 온도 (Tm) 값을 결정하였다. 그 결과가 표 15에 제시된다. Tm1, Tm2 및 Tm3은 항체 내의 상이한 도메인에 대한 Tm이다.
<표 15>
SEC-MALS 및 DSC
그 결과는 모든 항체가 대부분 단량체이고 안정적이라는 것을 보여준다.
실시예 5: 항-CD73 Ab에 의한 효소 활성의 억제
A. 비드-결합된 CD73 효소 활성의 억제
항-CD73 항체에 의한 비드-결합된 CD73 효소 활성 억제를 평가하기 위하여, 다음 물질 및 방법을 사용하였다:
물질
TM 완충제: 수중 25 mM 트리스, 5 mM MgCl2
0.5 mM 인산나트륨 완충제, pH 8.0
세척 완충제 (10 mL 0.5 mM 인산나트륨, pH 8.0; 10 mL 5 M NaCl; 34 mL 물; 10 uL 트윈-20)
아데노신 5'-모노포스페이트 디소듐 염, 시그마 Cat#01930-%G, TM 완충제 중의 300 mM
아데노신 5'-트리포스페이트 디소듐 염 수화물, 시그마 Cat#A6419-1G, TM 완충제 중의 100 mM
rhCD73, 0.781 mg/mL
시노 CD73, 시노 바이오로지칼 인크(Sino Biological Inc) Cat# 90192-C08H
자석 his-태그 비드, 인비트로젠 Cat# 10103D
셀티터-글로(CellTiter-Glo®) 발광성 세포 생육성 검정, 프로메가(Promega) Cat#G7572
CD73과 결합하지 않는 무관한 항체인 mAbO.
방법
표 16에 지시된 바와 같이 용적을 합하고 3배 희석시킴으로써 (225 uL를 450 uL TM 완충제 내로 옮긴다), 표 16에 열거된 항-CD73 항체의 6-포인트 일련의 희석 (최대 농도 10 ug/mL)을 수행하였다. IgG2 힌지를 수반한 모든 항체는 C219S 돌연변이를 함유하였다.
<표 16>
자석 비드 (샘플당 2 ul 비드)를 미세원심분리기 튜브 내의 1 mL 인산나트륨 완충제에서 세척하였다. 비드를 자석으로 끌어내어 400 uL TM 완충제에 재현탁시켰다. CD73의 각 종에 대하여: 별도의 튜브에서, CD73 (샘플당 75 ng)을 TM과 조합하여 400 uL 이하의 용적이 되도록 하였다. 블랭크 비드 (CD73 없음)를 위한 제3의 튜브를 제조하였다. 비드 현탁액을 rhCD73 용액과 조합하고, 실온하에 5분 동안 진탕기 상에서 혼합하였다. 비드를 자석으로 끌어내고, 비드를 1 mL 세척 완충제에서 세척하였다. 비드를 자석으로 끌어내고, TM 완충제 (샘플당 40 uL)에 재현탁시켰다. 이 비드를 PCR 96-웰 플레이트로 옮겼다 (웰당 40 uL). 웰당 200 uL의 일련으로 희석된 CD73 HuMab를 상기 플레이트에 부가하고 잘 혼합하였다. 이 플레이트를 실온하에 30분 동안 인큐베이션하였다. 각각 700 uL의 400 uM ATP (8X) 및 1.2 mM AMP (8X)를 준비하였다. 각각 650 uL를 합하여 4X AMP/ATP 스톡 혼합물을 만들었다. 비드를 끌어내고, 웰당 200 uL TM 완충제로 2회 세척하였다. 비드를 다시 끌어내고 30 uL TM 완충제에 재현탁시켰다. 30 uL 비드를 96 웰 흑색 플레이트에 옮겼다. AMP/ATP의 10 uL의 4x 스톡 용액 (최종 농도 150 uM AMP/50 uM ATP)을 부가하고 혼합하였다. 대조군 웰 (최종 농도 150 uM AMP 및/또는 50 uM ATP)을 40 uL 용적으로 부가하였다. 상기 플레이트를 37℃하에 15분 동안 인큐베이션하였다.
그 결과가 도 21aa, 21ab, 21ba, 및 21bb, 및 표 17에 제시된다.
<표 17>
시노 CD73의 효소 억제의 결과가 표 18에 제시된다.
<표 18>
그 결과는 항체 용량이 인간 CD73의 효소 활성을 의존적으로 억제한다는 것을 보여준다. CD73.4.IgG2-C219S-IgG1.1f는 재조합 인간 CD73 효소 억제 검정에서 2.97 (2.9 내지 3.1 nM의 범위)의 EC50을 갖는다. CD73.4.IgG2-C219S-IgG1.1f는 재조합 시노 CD73 효소 억제 검정에서 3.7 (1.6 내지 12.6 nM의 범위)의 EC50을 갖는다. 따라서, 시험된 CD73에 대한 모든 항체는 비드 결합된 인간 및 시노 CD73 효소 활성을 억제한다.
B. Calu6 세포에서 CD73 효소 활성의 억제
본 실시예에는 항-CD73 항체로의 처리 후 AMP의 CD73 탈인산화에 관하여 Calu6 (CD73 양성) 및 DMS-114 (CD73 음성) 세포를 평가하는 것이 기재되어 있다.
물질:
CD73 항체; 하기 표 참조
MabO 대조군 항체, 5.38 mg/mL
TM 완충제: 수중 25 mM 트리스, 5 mM MgCl2
아데노신 5'-모노포스페이트 디소듐 염, 시그마 Cat#01930-5G, TM 완충제 중의 300 mM
아데노신 5'-트리포스페이트 디소듐 염 수화물, 시그마 Cat#A6419-1G, TM 완충제 중의 100mM
rhCD73, 0.781 mg/mL
셀티터-글로® 발광성 세포 생육성 검정, 프로메가 Cat#G7572.
방법:
U자형 바닥 96-웰 플레이트에서 하기 표 19에 의해 지시된 바와 같이, 정제된 항체 및 PBS의 용적을 조합함으로써 항체를 일련으로 희석시켰다. 항체로 6-포인트 일련의 희석을 수행하고 (최대 농도 25 ug/mL, 300 uL), 5배 희석을 수행한 다음, 60 uL을 240 uL PBS에 옮겼다. IgG2 힌지를 수반한 모든 항체는 C219S 돌연변이를 함유하였다.
<표 19>
베르센(Versene)을 사용하여 세포를 수거하고 계수하였다. 플레이트에 시딩하고, 1500 rpm 하에 5분 동안 침강시키며, 100 uL의 일련으로 희석된 항체에 재현탁시켰다. 다른 모든 웰을 100 uL PBS에 재현탁시켰다. 37℃하에 20분 동안 인큐베이션하였다. AMP의 15 mL의 180 uM 스톡을 TM 완충제에서 제조하였다.
플레이트를 1500 rpm 하에 5분 동안 침강시키고, 200 uL PBS/웰로 1회 세척하였다. 플레이트를 다시 침강시키고, 100 uL AMP에 재현탁시켰다. 다른 모든 웰을 100 uL TM 완충제에 재현탁시켰다. 세포를 37℃하에 60분 동안 AMP와 함께 인큐베이션하였다. TM 완충제 중의 ATP의 7.5 mL 60 uM 스톡을 제조하였다. 플레이트를 1500 rpm 하에 5분 동안 침강시키고, 50 uL의 상등액을 흑색 96-웰 플레이트에 옮겼다. 50 uL의 ATP를 부가하였다. rhCD73을 양성 대조군으로서 웰당 75 ng으로 특정 웰에 부가하였다. rhCD73을 부여받지 못한 웰은 TM 완충제를 이용하여 100 uL 이하가 되도록 하였다. 최종 농도는 90 uM AMP:30 uM ATP였다. 37℃하에 15분 동안 인큐베이션하였다. 셀티터글로 검정 (ATP를 검출한다)을 위해, 웰당 100 uL를 부가하고, 플레이트를 판독하였다.
도 22aa, 22ab, 22ba, 22bb, 및 표 20에 제시되는 결과는 항-CD73 항체가 인간 CD73 양성 Calu6 세포에서 AMP의 탈인산화를 억제하지만 (또는 AMP 프로세싱을 저하시킨다), CD73 음성 DMS114 세포에서는 어떠한 효과도 나타내지 않는다는 것을 표시한다. CD73.4-IgG2S-IgG1.1f 항체의 인간 종양 세포주 Calu6에서의 내인성 세포성 CD73의 봉쇄에 대한 EC50은 0.39 nM (0.31 내지 0.48 nM의 범위)이다. 이들 실험을 NCI-H292 (점막표피양 암종 세포주) 및 SK-MEL-24 (인간 흑색종 세포주) 세포에서 반복하였는데, 그 결과는 유사하였다 (표 20).
<표 20>
1 내인성 CD73 발현을 이용한 Calu6 세포 상에서의 결합 적정. 항체를 2 내지 6개의 독립적인 실험에서 시험하였고, 그 평균 값이 표시된다.
2 본 실시예의 섹션 A로부터의 데이터. 항체를 1 내지 5개의 독립적인 실험에서 시험하였고, 그 평균 값이 표시된다.
3 표시된 세포주에서 세포성 CD73 활성의 억제. 항체를 2 내지 4개의 독립적인 실험에서 시험하였고, 그 평균 값이 표시된다.
C. 이중 세포주 cAMP 검정에서 CD73 효소 활성의 억제
동질적 시간 분해 형광 (HTRF) cAMP 검정
CD73 항체를, 0.2% BSA를 함유하는 PBS 완충제로 일련으로 희석시키고, 384 웰 백색 바닥 프록시플레이트 [펄킨 엘머 (미국 매사추세츠주 월섬)]에서 5 μl/웰로 플레이팅하였다. Calu-6 세포를 수거하고, 이를 0.2% BSA를 함유하는 PBS에 재현탁시킨 다음, 5 μl의 세포 (300개 세포/웰)를 상기 플레이트에 부가하였다. 상기 세포를 37℃ 5% CO2 및 95% 습도하에 10분 동안 항체와 함께 인큐베이션한 다음, 5 μl/웰 80 mM AMP를 부가하였다. 세포를 37℃ 하에 30분 동안 AMP와 함께 추가로 인큐베이션하였다. 이러한 시간 동안, HEK293/A2AR 세포를 수거하고, 0.2% BSA를 함유하는 PBS에서 40만 개/ml가 되도록 희석시켰다. 이를 검정 플레이트 내로 5 μl/웰로 부가하고, 37℃ 하에 1시간 동안 지속적으로 인큐베이션하였다. 제조업자의 지시에 따라서 용해 완충제 중의 10 μl/웰 cAMP-접합된 d2 및 10 μl/웰 유로퓸 크립테이트 접합된 항-cAMP 항체를 부가함으로써, 동질적 시간 분해 형광 (HTRF) 하이레인지(HiRange) cAMP 검출 키트 [시스바이오 (Cisbio; 미국 매사추세츠주 베드포드)]를 이용하여 HRTF 검정을 수행하였다. 플레이트를 실온하에 60분 동안 인큐베이션하고, 엔비젼(EnVision) 플레이트 판독기 (펄킨 엘머; 미국 매사추세츠주 월섬)를 사용하여 형광 공명 에너지 전이 (FRET) 시그널 (665 및 615 nM)을 판독하였다. FRET 시그널은 665 nm (수용체) 및 615 nm (공여체) 채널로부터의 시그널의 비로서 계산하고 이에 10,000을 곱하였다. IC50 및 Ymax를 측정하였다. Ymax는 내부 최대물로서 100 nM 용량의 11F11과 비교함으로써 결정하였다. 모든 계산치는 상기 대조군 (100%로 설정됨)과 비교한 억제의 %로서 결정되었다.
표 21에 제시되는 결과는 항-CD73 mAb가 세포주 공동 배양 시스템을 이용하는 상기 cAMP 검정에서 상이한 효능과 효력을 명확하게 보여주었다는 것을 표시한다. 모든 Ab는 아데노신 생성에 있어서의 일부 저하를 보여주었고, 그 억제 정도는 스크리닝된 대부분의 Ab에 대해서 유사하였다. 가장 큰 억제는 11F11, 11A6, 4C3 및 5F8에 대해서 관찰되었다.
<표 21>
11F11 Fab 및 F(ab')2를 이용하여 효소 억제 검정을 또한 수행하였다. 도 22c에 제시되는 결과는 효소 억제가 F(ab')2 단편을 이용한 경우에는 발생했지만, Fab 단편을 이용한 경우에는 그렇지 않았다는 것을 표시하였다. 따라서, 11F11 효소 억제를 위해서는 Fc 영역이 요구되지 않지만, 2가성은 요구된다.
상기 언급된 cAMP 검정을 이용하여, 표 26에 제시되는, 각종 중쇄 불변 영역을 포함하는 CD73.4 항체에 대하여, Calu6 세포 내에서의 효소 억제를 또한 결정하였다. 배경과 비교한 억제의 수준 ("S:B") 및 EC50의 관점에서의 결과가 표 28의 마지막 두 칼럼에 제공된다. 그 결과는 모든 CD73.4 항체가 Calu6 세포 내의 인간 CD73 효소 활성을 억제한다는 것을 표시한다.
D. CD73 효소 활성 억제의 시간 과정
LC/MS/MS에 의해 아데노신 생성을 평가함으로써, 효소 활성의 억제를 시간 과정에 따라 평가하였다. Calu6 세포를 11F11 또는 4C3과 함께 30분, 2시간 또는 4시간 동안 인큐베이션한 다음, 50 μM AMP를 부가하고, 표준 방법을 이용하여 LC/MS/MS에 의해 아데노신 생성을 평가하였다.
질량 분광분석법 조건 [제보(Xevo) TQ-S]:
기기: 제보 TQ-S [워터스(Waters) 2777C가 장착됨]
도 22d에 도시된 결과는 인큐베이션 시간이 30분 시점에서 차이를 만들고, 11F11에 의한 억제가 4C3에 의한 것보다 더 빠르게 일어난다는 것을 표시한다. 두 항체 모두는 나중 시점에서 등가의 억제를 달성했지만, 11F11 항체는 세포 내에서의 CD73 효소 활성을 더 신속하게 억제한다.
실시예 6: CD73의 항체 매개된 내재화
CD73의 항-CD73 항체 매개된 내재화를 2가지 상이한 검정에서 측정하였다.
A. 고 함량 내재화 검정 (2시간 고정 시간 검정)
항-CD73 항체를 사용하여, 항체 인큐베이션 2시간 후에 세포성 발현을 평가함으로써 Calu6 세포에서 항-CD73 항체 의존성 CD73 내재화를 시험하였다. 20 μl의 완전 배지 [10% 열 불활성화 태아 소 혈청을 수반한 깁코(Gibco) RPMI 배지 1640] 중의 세포 (2,000개 세포/웰)를 384 BD 팔콘(Falcon) 플레이트에 플레이팅하고, 37℃ 5% CO2 및 95% 습도하에 밤새 성장시켰다. 항-CD73 항체를, 0.2% BSA를 함유하는 PBS 완충제로 일련으로 희석시키고, 5 μl/웰로 상기 세포 플레이트 내로 부가하였다. 세포를 37℃ 5% CO2 및 95% 습도 하에 2시간 동안 항체와 함께 인큐베이션한 다음, PBS 완충제로 1회 세척하였다. 이어서, 포름알데히드 (PBS 중의 최종 4%)를 20 ul/웰로 세포 플레이트 내로 부가하고, 이러한 플레이트를 실온하에 10분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 모든 액체를 흡인하고, 세포를 30 ul PBS로 1회 세척하였다. 검출 항체 (2.5 μg/웰의 항-CD73 Ab CD73.10.IgG2C219S)를 15 μg/웰로, 상기 고정된 세포 플레이트 내로 부가하였다. 세포를 4℃하에 밤새 인큐베이션하였다. 그 다음 날, 상기 플레이트를 PBS 완충제로 2회 세척한 다음, 알렉사-488 염소 항 인간 및 DAPI를 함유하는 2차 항체를 부가하고, 실온하에 1시간 동안 염색하였다. PBS 완충제에서 3회 세척한 후, 상기 플레이트를 어레이스캔 Vti [셀로믹스 (Cellomics; 미국 펜실베니아주 피츠버그)] 상에서 영상화하였다. IC50 및 Ymax를 측정하였다. Ymax는 내부 최대물로서 100 nM 용량의 11F11과 비교함으로써 결정하였다. 모든 계산치는 상기 대조군 (100%로 설정됨)과 비교한 내재화의 %로서 결정되었다.
그 결과가 표 22에 제공된다.
<표 22>
ND = 검출되지 않음
NA = 적용 가능하지 않음.
따라서, 그 결과는 인간 CD73 발현성 세포주 Calu6에서 CD73.4.IgG2-C219S-IgG1.1f에 의해 매개된 CD73 내재화의 EC50이 1.2 nM이고 상기 세포주에서의 내재화의 최대 수준이 97.5%였다는 것을 표시한다.
11F11 Fab 및 F(ab')2를 이용하여 내재화 검정을 또한 수행하였다. 도 22c에 도시되는 결과는 내재화가 F(ab')2 단편을 이용한 경우에는 발생했지만, Fab 단편을 이용한 경우에는 그렇지 않았다는 것을 표시한다. 따라서, 11F11 내재화를 위해서는 Fc 영역이 요구되지 않는다.
동역학적 내재화 연구를 수행하여 내재화의 속도를 평가하였다. 20 μl의 완전 배지 (10% 열 불활성화 태아 소 혈청을 수반한 깁코 RPMI 배지 1640) 중의 세포 (2,000개 세포/웰)를 384 BD 팔콘 플레이트에 플레이팅하고, 37℃ 5% CO2 및 95% 습도하에 밤새 성장시켰다. CD73 항체를, 0.2% BSA를 함유하는 PBS 완충제로 희석시켜 10 μg/ml가 되도록 하고, 5 μl/웰을 세포 플레이트에 부가하였다. 상기 세포를 37℃하에 0 내지 2시간의 시간 과정으로 인큐베이션한 다음, PBS 완충제로 1회 세척하였다. 세포를 연속해서, 실온하에 10분 동안 포름알데히드 (PBS 중 최종 4%)로 고정시킨 다음, 30 ul PBS로 1회 세척하였다. 검출 항체 (2.5 μg/웰 항-CD73 Abs CD73.10.IgG2C219S)를, 0.2% BSA를 함유하는 PBS 완충제로 희석시키고, 15 μl/웰을 상기 고정된 세포 플레이트 내로 부가하였다. 플레이트를 4℃하에 밤새 인큐베이션하였다. 그 다음 날, PBS 완충제에서 3회 세척한 후, DAPI를 수반한 2차 항체 알렉사488-염소 항 인간을 부가하였다. 세포를 실온하에 60분 동안 염색시키고, 3회 세척한 후, 어레이스캔 Vti (셀로믹스; 미국 펜실베니아주 피츠버그)를 이용하여 영상을 포착하였다. 그 결과가 도 23a 내지 23d 및 표 23 및 24에 제공된다. 표 24 내의 값은 도 23a-d에 도시된 데이터로부터 유래된다.
<표 23>
<표 24>
4개의 인간 세포주에서 CD73 항체의 T1/2 및 % 내재화
그 결과는 일부 항체가 다른 것보다 더 내재화되긴 하였지만, bin 1 항체 (11F11 및 그의 유도체 CD73.4 및 CD73.10)가 우수한 내재화 EC50 및 최대 값 (97.5%)을 나타내었다는 것을 표시한다. 11F11이 가장 활성적이고 수분 이내에 내재화되어, 30분에 안정기에 도달한 반면, 6E11 (또한 bin 1 항체, IgG1)는 더 느리게 내재화되어, 약 1시간에 안정기에 도달하였다 (도 23a-d). bin 2 항체 (5F8 및 4C3)는 유의적으로 내재화되지 못하였다. 또한, IgG2 힌지 및 CH1 도메인의 존재는 내재화의 속도와 정도를 증강시켰다. 이러한 경향은 몇 가지 세포주에서 관찰되었다 (도 23a-d 및 표 24).
B. 유동 세포계수법에 의해 측정된 내재화
CD73의 항-CD73 항체 매개된 내재화를 또한, 유동 세포계수법에 의해 시험하였다. 표시된 세포를 얼음 상에서 30분 동안 10 μg/mL의 표시된 항체와 함께 인큐베이션하고, 수회 세척한 다음, 표시된 시간 동안 37℃로 옮겼다. 표시된 인큐베이션 시간 후 동일한 시간에 세포를 수거하였다. 세포를 1차 항체 (초기 인큐베이션을 위해 사용된 동일한 항체)로 다시 염색한 다음, 항-인간 2차 항체로 염색하였다. 이어서, 세포를 대상으로 하여 유동 세포계수법에 의해 CD73의 발현에 관하여 검정하였다.
도 23e 및 표 25에 제시되는 결과는 상기 언급된 내재화 검정에서 수득된 것과 일관되고, 이는 IgG2 힌지 및 CH1을 수반한 모든 항체가 신속하고 완전한 내재화를 유도시켰다는 것을 표시한다. CD73 수준은 22시간 포스트 워시 아웃(post wash-out) 후에도 여전히 낮았는데, 이는 내재화가 지속적이라는 것을 표시한다.
도 23f 및 표 25에 제시된 유사한 결과가 NCI-H292 세포주에서 수득되었는데, 여기서는 항체를 인큐베이션 시간 동안 배양 상태를 유지하였다 (워시 아웃 없음). 다시 언급하면, 이들 데이터는 신속하고 유의적인 내재화와 내인성 CD73의 하향 조절의 유지를 표시한다.
인간 SNU-C1 (결장암 세포주) 및 NCI-H1437 (비-소세포 폐 암종 세포주) 세포를 이용하여 내재화 검정을 또한 수행하였다. 도 23i 및 j 및 표 25에 제시되는 결과는 또한, 최대 수준을 동반한 신속한 내재화가 5시간 이내에 도달되었고, SNU-C1 세포에서 CD73.4.IgG2-C219S-IgG1.1f에 대한 내재화의 최대 수준은 약 50%이며, NCI-H1437 세포의 경우에는 60%라는 것을 표시한다. 도 23g 및 h는 Calu6 및 NCI-H292 세포에서 CD73.4.IgG2-C219S-IgG1.1f의 내재화의 유사한 동역학을 도시한 것이다. 내재화된 CD73의 %를 도시하는 그래프의 경우, 이러한 숫자는 다음과 같이 수득되었다:
여기서, 각 항체에 대하여, MFIt=x는 소정의 시점에서의 MFI이고, MFIt=0은 t=0에서의 최대 형광이며, MFI배경은 2차 Ab 단독의 MFI이다.
<표 25>
몇 가지 세포주에서 항체 매개된 CD73 내재화의 EC50
Calu6 및 H292 세포에서 부가의 내재화 검정을 수행하여, 내재화에 대한 이소형의 역할을 추가로 판별하였다. 내재화 검정을 상기 언급된 바와 같이 수행하고 (항체의 워시 아웃 단계를 수반하지 않은 프로토콜), 표 26에 제시된 다양한 혼성체 이소형의 항체를 인큐베이션 시간 동안 10 μg/mL로 배양 중에 유지시켰다. 유동 세포계수법 실험을 위하여, 웰당 50,000개의 세포를 사용하고 96 웰 플레이트 (48 웰 플레이트와 반대임)에서 고 처리량 분석하도록 실시예 6B의 방법을 적응시켰다.
<표 26>
CD73.4의 가변 영역과 함께 시험된 불변 영역:
FcγR 결합이 각 구축물에 대하여 예상된 바와 같은 것으로 나타났는데, 즉 FcγR 결합이 하부 힌지/CH2 영역에 의해 구동된다.
그 결과가 도 23k, l, m 및 표 27 및 28에 제시된다. 표 27에 제시된 데이터는 실시예 6B에 기재된 바와 동일한 프로토콜을 이용하여 생성되었다. 표 28에 제시된 데이터는 실시예 6A에 기재된 바와 동일한 프로토콜을 이용하여 생성되었다.
<표 27>
Calu6 및 NCI-292 세포에서 항체 매개된 CD73 내재화의 Ymax 및 T1/2
<표 28>
Calu6 세포에서 각종 불변 영역을 수반한 CD73.4의 내재화 및 효소 억제 특징
도 23k, l 및 m 및 표 27 및 28은 IgG2 이소형의 힌지 및 CH1 도메인을 갖는 항체가 CD73의 내재화를 구동하는 있어서 가장 효율적인 반면, IgG1 힌지 및 CH1 도메인을 갖는 항체는 상기 도면에서 하부 곡선에 상응하는데, 즉 더 낮은 정도의 내재화를 나타낸다는 것을 표시한다. 또한, IgG2로부터의 힌지만을 수반한 항체는 인간 IgG1 힌지와 비교해서 증가된 내재화를 나타낸다. 따라서, IgG2 이소형의 힌지 및 CH1 도메인을 갖는 항체는 IgG1 이소형을 수반한 항체와 비교해서 탁월한 내재화 특징을 갖는다.
따라서, 항-CD73 항체 mAb-CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f는 시험된 세포주에 의존적인 신속한 내재화를 유도시켰다. 내재화에 대한 T1/2는 수분에서 1시간 미만의 범위였다. 시험된 대부분의 세포주는 10분 미만의 T1/2를 갖는다. 일부 세포주에 대해서는 거의 완전한 내재화가 유도되었고, 시험된 모든 세포주는 표면 CD73 발현에 있어서 적어도 50% 저하를 나타냈는데, 이는 전형적으로, 5시간 정도에, 일부 경우에는 훨씬 더 짧은 시간에 최대 수준에 도달하였다.
SEC-MALS 및 DLS 데이터는 IgG1 힌지 및 CH1 영역을 함유하는 mAb (IgG1.1f)와 비교해서, IgG2 힌지 및 CH1 영역을 함유하는 mAb (IgG2-C219S 또는 IgG2-C219S-IgG1.1f)와 hCD73-his 간에 더 큰 복합체가 형성된다는 것을 입증해준다.
실시예: 7: 이종이식편 동물 모델에서 종양 내에서의 CD73 효소 억제
피하 인간 Calu6 종양을 보유하고 있는 마우스를 성장 7일 후에 CD73.10-IgG1.1, CD73.10-IgG2CS, 또는 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1로 처리하였다. 항체를 10 mg/kg으로 IP 투여하였다. 항체 투여 후 제1일, 제2일, 제3일 및 제7일에 종양을 수거하고, OCT에 매립시키며, 냉각된 이소펜탄에서 급속 냉동시켰다. OCT에 매립된 종양을 5 내지 6 μm 절편으로 커팅하고, 실온하에 밤새 건조시켰다. 종양 절편을 찬 10% 인산염 완충 포르말린과 아세톤의 1:1 혼합물로 2.5분 동안 고정시킨 다음, 2 mM CaCl2 및 0.25 M 수크로스를 함유하는 50 mM 트리스-말레에이트 완충제, pH 7.4에서 실온하에 1시간 동안 미리 인큐베이션하였다. 1시간 후, 미리 인큐베이션한 완충제를 제거하고, 이를 5 mM MnCl2, 2 mM Pb(NO3)2, 2.5% 덱스트란 T200, 2.5 mM 레바미솔, 및 1 mM AMP로 보충시킨 동일한 완충제로 대체하였다. 효소 반응을 37℃하에 1시간 동안 수행하였다. 탈이온수로 세정한 후, 절편을 1% (NH4)2S와 함께 정확히 1분 동안 인큐베이션한 다음, 탈이온수로 신속하게 세정하였다. 절편을 헤마톡실린으로 대조 염색시키고, 탈수한 다음, 크실렌 기반 봉입제를 올려 놓았다. 갈색은 활성 CD73의 존재를 표시하는 반면, 갈색의 결여는 CD73 효소 활성이 항체에 의해 억제되었다는 것을 표시한다.
그 결과는 CD73.10-IgG1.1, CD73.10-IgG2CS, 및 CD73.10-IgG2CS-IgG1.1이 생체내에서 CD73 효소 활성을 억제한다는 것을 표시한다. CD73.10-IgG2CS-IgG1.1 항체로 처리된 마우스로부터의 종양의 대표적인 염색된 절편이 도 24a-e에 도시된다. 다른 2개의 항체로 처리된 마우스로부터의 종양의 염색된 절편은 유사하였다. CD73의 억제 정도는 항체의 혈청 수준과 상관이 있었다. 따라서 제3일 실시예에서 관찰된 약간 더 높은 수준의 CD73 활성은 제7일 실시예보다 더 낮은 항체의 혈청 수준과 상관이 있었다.
상기 언급된 바와 유사한 실험을, 피하 인간 SNUC1 결장 선암종-유래 이종이식편 종양을 보유하고 있고 항-CD73 항체 CD73.4IgG2CS-IgG1.1f로 처리된 마우스 상에서 수행하였다. SNUC1 종양이 있는 마우스를 제0일에 CD73.4IgG2CS-IgG1.1f로 1, 3 및 10 mg/kg IP 처리하였다. 투여 후 24h, 48h, 72h, 96h 및 168h에 종양을 수거하였다. CD73 효소 억제 검정을 상기 언급된 바와 같이 수행하였다. 이미지 프로 프리미어(Image Pro Premier) 소프트웨어 [미디어 사이버네틱스(Media Cybernetics)]를 이용하여 갈색 염색의 정량화를 수행하였다.
도 24f 내의 그래프에 제시되는 그 결과는 CD73 활성이 대조군 항체로 처리된 마우스와 비교해서 항-CD73 항체가 투여된 동물에게서 상당히 저하된다는 것을 보여주는데, 이는 상기 항체의 3가지 농도 모두에서 강력한 CD73 효소 억제가 나타났다는 것을 표시한다. 따라서, 항-CD73 항체 CD73.4CS-IgG1.1f는 생체 내에서 CD73 효소 활성을 효율적으로 억제한다. 항-CD73 항체에 의한 CD73 억제의 동역학을 4T1 동계 종양 모델에서 또한 결정하였다. 4T1 종양 세포 주사 후 제7일에 TY/23 (래트 항-마우스 CD73 항체) 또는 래트 IgG 대조군 (10 mg/kg)을 주사하였다. Ab 처리 후 제1일, 제2일, 제3일, 제6일 및 제7일에 종양, 비장, 백혈구 및 혈청을 수집하였다. 표시된 날로부터 절편에서 상기 언급된 바와 같이 CD73 활성의 억제를 측정하였다. 대표적인 종양 절편이 도 25a 및 b에 도시된다. 그 데이터는 TY/23이 생체 내에서 CD73 활성을 억제한다는 것을 표시한다.
실시예 8: 에피토프 비닝 및 유동 세포계수법 기반 교차 차단성
25℃ 하에 옥텟(Octet) RED 기기 [폴 포르테비오(Pall Fortebio)]를 이용하여 바이오층 간섭계 (BLI)에 의해 에피토프 비닝 연구를 수행하였다. 이들 연구를 위하여, 90 내지 180s 부하 단계를 이용하여 항-펜타-his 센서 상에 20 내지 30 ug/ml hCD73-his를 포획하였다. 소정의 항체 (mAb1)가 180s 동안 hCD73-his 표면과 결합할 수 있도록 한 다음, 180s 동안 제2의 항체 용액 (mAb2)에 바로 노출되도록 함으로써 항체 경쟁을 평가하였다. mAb1의 예비 결합 후 mAb2에 대한 결합 시그널을, 경쟁의 부재 하에서의 mAb2의 것과 비교하여, mAb1과 mAb2가 hCD73-his 표면과의 결합을 놓고 경쟁하는 지의 여부를 결정하였다. 이들 실험을 양 순서로 (mAb1에 이어 mAb2 및 mAb2에 이어 mAb1)로 수많은 mAb 쌍에 대하여 수행하여, 경쟁 프로파일과 에피토프 bin을 정립하였다 (하기 표 29에 요약된 바와 같음).
표 29에 제시된 바와 같이, 에피토프 비닝 분석 결과 2개의 에피토프 bin이 밝혀졌다.
<표 29>
항체를 대상으로 하여 또한, 유동 세포계수법 기반 교차 차단성을 수행하였다. 본 실험은 형광성 표지된 항체 한 세트와 표지되지 않은 항체 제2 세트를 이용하여 다음과 같이 수행하였다: 웰당 100,000개의 NCI-H292 세포를 시딩하였다. 플레이트를 침강시키고, 세포를 웰당 PBS 중 100 uL 2% FBS에 재현탁시켰다. 세포를 얼음 상에서 20분 동안 차단시켰다. 표시된 바와 같은, PBS 중 2% FBS 중의 표지되지 않은 항체를 각 웰에 부가하였다. 플레이트를 침강시키고; FITC와 접합된, 희석되고 표지된 항체 (10 ug/mL), 즉 4C3 또는 11F11의 웰당 100 uL에 상기 세포를 재현탁시켰다. 세포의 6개 웰을 항체 없이 인큐베이션하고, PBS 단독 중의 100 uL 2% FBS에 재현탁시켰다 (대조군의 경우). 이어서, 세포를 얼음 상에서 30분 동안 인큐베션하였다. 세포를 PBS 중 2% FBS로 2회 세척하고, 샘플을 PBS 중 140 uL 2% FBS에 재현탁시키며, 팩스칼리버(FacsCalibur) 유동 세포계수기 (벡톤 디킨슨) 상에서 분석하였다.
도 26A 및 B에 도시된, 유동 세포계수법-기반 교차 차단성의 결과는 상기 제시된 SPR 에피토프 비닝 데이터를 확증시켜 준다. 예를 들어, 7A11은 11F11과 경쟁하지만, 4C3과는 그렇지 않다.
실시예 9: HDX에 의한 에피토프 맵핑
본 실시예에는 CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f와 결합하는 인간 CD73 상의 에피토프의 확인을 위하여 HDX-MS를 사용하는 것이 기재되어 있다.
수소/중수소 교환 질량 분광분석법 (HDX-MS) 방법은 단백질 주쇄 아미드 수소 원자 (프롤린은 제외된다)의 중수소 교환의 속도 및 정도를 모니터링함으로써 용액 중의 단백질 입체 형태 및 입체 형태적 역학을 탐색한다. HDX의 교환 수준은 단백질 용매 접근성 및 수소 결합에 좌우되며, HDX시 단백질의 질량 증가는 MS에 의해 정확하게 측정될 수 있다. 이러한 기술이 효소 소화와 짝을 이루면, 펩티드 수준의 구조적 특성을 분석할 수 있어, 내부에 폴딩된 펩티드와 표면 노출된 펩티드를 구별할 수 있게 된다. 에피토프 맵핑 실험에서는, 중수소 표지화 및 후속 켄칭 실험을 항원 및 항원/mAb 복합체에 대해 병렬로 수행한 다음, 온라인 펩신 소화, 펩티드 분리 및 MS 분석을 수행하였다.
HDX-MS에 의한 CD73에서의 CD73.4-IgG2-CS-IgG1.1f의 에피토프 맵핑에 앞서, 비-중수소화 실험을 수행하여, 재조합 인간 완전한 길이의 ECD 이량체성 CD73에 대한 통상의 소화 펩티드 (12 μM) 및 재조합 인간 CD73과 CD73 mAb의 단백질 복합체 (1:1 몰 비, CD73 mAb에 대한 12 μM)의 목록을 생성시켜, 완전한 길이의 ECD CD73에 대한 88%의 서열 적용 범위를 달성하였다. HDX-MS 실험에서는, 5 μL의 CD73 (서열식별번호: 99) 또는 CD73.4-IgG2-CS-IgG1.1f mAb와 CD73을 55 μL의 D2O 완충제 (10 mM 인산염 완충제, D2O, pD 7.0) 내로 희석시켜, 실온에서 표지화 반응을 시작하였다. 사용된 CD73 단백질은, 또한 다음에 제시된 서열식별번호: 99를 갖는, 글리코실화된 완전한 길이의 이량체성 hCD73이다. 이러한 반응을 20초, 1분, 10분 및 240분의 상이한 기간 동안 수행하였다. 각 표지화 반응 기간에 끝날 무렵, 켄칭 완충제 (4 M GdnCl 및 0.4 M TCEP, pH 2.5를 수반한 100 mM 인산염 완충제, 1:1, v/v)를 부가함으로써 반응물을 켄칭하고, 50 μL의 켄칭된 샘플을, 분석을 위해 워터스 HDX-MS 시스템 내로 주사하였다. 통상의 소화 펩티드의 중수소 흡수 수준을 CD73 mAb의 부재/존재하에 모니터링하였다.
사용된 CD73 단백질은 서열식별번호: 99를 갖는 아미노산 서열을 갖고 있었다.
CD73에서의 CD73 mAb에 대한 HDX-MS 측정은 CD73.4-IgG2-CS-IgG1.1f mAb가 CD73의 N-말단 영역 내의 2개의 펩티드 영역으로 구성된 불연속 에피토프를 인식한다는 것을 표시한다:
펩티드 영역 1 (65-83): FTKVQQIRRAEPNVLLLDA (서열식별번호: 96)
펩티드 영역 2 (157-172): LYLPYKVLPVGDEVVG (서열식별번호: 97).
상호 작용의 3차원적 보기 (도 27b)는 이들 두 영역이 기하학적으로 가깝다는 것을 보여준다. 상호 작용의 상세한 맵은 도 27a에 도시된다.
실시예 10: CD73과 결합하는 11F11의 결정 구조
본 실시예에는 CD73(26-336)His와 결합된 11F11의 Fab'의 결정 구조가 기재되어 있다.
CD73(26-336)His를, 표준 프로토콜을 이용하여 일시적으로 형질감염된 HEK-293 E 세포로부터 정제하고, 그 자체로서 사용하거나, 또는 PNGase F 처리에 의해 탈글리코실화하며, 1.2 mg/ml이 되도록 농축시켰다. 항체 11F11 Fab'는 표준 프로토콜을 이용하여 11F11을 펩신 소화시킴으로써 제조하고, 이를 1.1 mg/ml이 되도록 농축시켰다.
등 용적의 탈글리코실화된 hCD73(26-336)His 및 11F11 Fab'를 4℃ 하에 밤새 인큐베이션함으로써 복합체를 형성시키고, GE 슈퍼덱스(Superdex) 200 26/60 칼럼을 이용하여 정제한 다음, 10k MWCO 스핀 농축기를 이용하여 9.5 mg/ml이 되도록 농축시켰다.
결정을 시팅(sitting) 방울, 증기 확산 실험에서 성장시켰으며, 그 방울은 0.25 uL의 저장고 용액과 혼합된 0.25 uL 단백질이었다. 7100개 이상의 결정화 실험이 설정되었다. 초기 결정 리드는 약 10 μm로 작았다. 최적화된 결정은 그 크기가 200 내지 300 μm이었다. 결정화 최적화는 스크리닝: 첨가제, 세제, 침전제, pH, 온도 및 완충제 유형을 포함한다. 결정 형성을 허용하는 조건은 다음과 같다: 저장고 용액은 34% 폴리프로필렌 글리콜 P400, 0.1 M Na/K PO4 pH 6.5 및 15 μM CYMAL-7로 구성되고; 실온에서 결정화 실험을 설정한 다음, 4℃에 놓아두어 인큐베이션하고; 4℃에서 7일 동안 인큐베이션하였다. 결정 형성은 글리코실화된 CD73 단백질에서만 관찰되었다.
결정을 결정화 방울로부터 직접 수거하고 액체 N2 내로 직접 놓아두었다. 100개 이상의 결정을 대상으로 하여 내부 회절에 관하여 스크리닝하였다.
데이터는 라요닉스(Rayonix) MX-33HS 고속 CCD 검출기로 SER-CAT 빔라인 22ID 상에서 작은 빔, 거의 감쇠 및 나선형 데이터 수집을 이용하여 수집되었다. 데이터 세트는 4.1 Å, 3.8 Å, 3.5 Å, 및 최종적으로 3.05 Å에서 수집되었다. 일상적인 HKL2000 (문헌 [Otwinowski Z., Minor W., Methods in Enzymology 276, 307-326 (1997)])을 이용하여 처리되고 스케일링된 데이터는 3.04 Å의 해상도로 96% 완성되었다.
BLAST (문헌 [Altschul et al. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403-410]) 검색을 이용하여, 분자 교체 검색에 사용될 RCSB 단백질 데이터 뱅크에서 CD73 N-말단 도메인 및 Fc 및 Fv 도메인에 가장 가까운 모델을 발견하였다: CD73 모델은 PDB 항목 4H1S로부터 유래되었다 (Heuts et al. Chembiochem. 2012 Nov 5;13(16):2384-91).
이들은 PHASER (문헌 [McCoy et al. J. Appl. Cryst. (2007). 40, 658-674]) 분자 대체 검색에서 출발 모델로서 사용되었다. CD73 검색 결과, 비대칭 단위에서 5개 분자가 발견되었다. CD73을 고정시킨 상태에서, 중쇄 검색 모델로 검색한 결과, 비대칭 단위에 2개의 분자가 발견되었다. CD73과 중쇄를 고정시킨 상태에서, 경쇄를 이용한 세 번째 PHASER 검색 결과 또한, 비대칭 단위에서 2개의 분자가 발견되었다. 5개의 완전한 복합체의 복합 모델은 5개의 CD73을 중첩하고 중쇄와 경쇄를 매칭시킴으로써 부분 해법으로 만들어졌다. 이것이 BUSTER (문헌 [Bricogne et al. (2011) BUSTER version 2.11.6. Cambridge, United Kingdom: Global Phasing Ltd]) 개선을 위한 출발 모델로서 사용되었다.
11F11 서열을 반영하기 위해 상기 모델이 재구성되었고 아미노산이 변화되었다. 모델은 광범위한 수동 모델 구축 및 개선 작업을 거쳤다. 개선 작업을 완료하기 위해 총 5회의 BUSTER 세분화 주기가 실행되었다. 최종 R-인자는 27,484개의 단백질 원자와 24개의 용매 분자에 대해 20.59% (R-free = 24.58%)이다.
상기 복합체의 결정 구조의 표기가 도 28a-d에 제시되어 있다.
결정 구조는 상호 작용 중 하나를 제외하고는 모두가 CDR 영역 내의 잔기로부터의 것이고, 대부분의 상호 작용은 VH 도메인으로부터의 것인데, 2개의 부가의 상호 작용은 VL 도메인으로부터의 것임을 보여준다 (도 28a). 인간 CD73과 11F11 Fab'의 상호 작용 잔기가 표 30에 제시되어 있다.
<표 30>
CD73 이량체 (PDB 항목 4H1S) 상에 중첩된 2개의 CD73(NDT)/11F11 복합체의 복합 구조를 근거로 한 모델은 11F11이 이량체 계면으로부터 벗어나서 CD73 상의 표면과 결합한다는 것을 제안하는데, 이는 Fab가 이량체 형성을 방해하지 않을 것이란 사실을 암시한다.
HDX-MS 맵핑과 CD73/11F11 복합체에 대한 X-선 결과를 비교한 결과, CD73 상에 유사한 에피토프 (65-83 및 157-172)를 나타내는 것을 기본적으로 동의하고 있음을 알 수 있다. 그러나, X-선 구조는 Met-105 내지 Asp-111의 영역 (Arg-109 및 Tyr-110에 대한 H-결합 포함), Lys-135 내지 Pro-139의 영역, 및 Asp-317 내지 Ile-320의 영역 (Ser-319에 대한 H-결합 포함)에서의 부가의 상호 작용 (6Å 미만)을 나타낸다.
실시예 11: 항체/CD73 복합체의 크기에 대한 상이한 힌지/Fc의 영향력
상기 실시예에 제시된 바와 같이, IgG2 힌지 및 CH1을 수반한 항-CD73 항체는 IgG1 힌지를 수반한 동일한 항체보다, 세포 상에서의 CD73 효소 활성의 더 우수한 억제제이고, 더 우수하게 내재화된다. 이러한 관찰 결과와, IgG2 힌지가 IgG1 힌지보다 더 강성이라는 사실을 근거로 하여, IgG1 힌지를 갖는 항체와 비교하여 IgG2 힌지를 갖는 항체와 항원 간에 더 큰 복합체가 형성된다고 가정하였다. 다음 실험을 수행하여 이러한 가설을 분석하였다.
용액 중의 CD73/항체 복합체의 구조 및 올리고머성 상태를 SEC-MALS 및 DLS에 의해 조사하였다. 이들 연구를 위해, IgG1 또는 IgG2 불변 영역 중 하나를 함유하는 항체를, C-말단 폴리히스티딘 태그를 함유하는 인간-CD73의 완전한 길이의 세포외 도메인 (인간-CD73의 아미노산 잔기 26 내지 546; "hCD73-his"로 명명됨) 또는 인간-CD73의 N-말단 도메인에 상응하는 단편 (아미노산 잔기 26 내지 336; "N-hCD73-his"로 명명됨) 중 하나를 포함하는 재조합 단백질과 다양한 몰 비로 혼합하였다.
CD73/항체 복합체의 올리고머성 상태를, 인라인 다중 각도 광 산란 검출기와 커플링된 크기 배제 크로마토그래피 (SEC-MALS)에 의해 조사하였다. 0.5 mL/min 하에 실행되고 0.02% Na 아지드 (0.1 μm 여과됨)를 함유하는, 200 mM K2HPO4, 150 mM NaCl, pH 6.8을 함유하는 완충제 중의 프로미넌스 시마주 UFLC와 연결된 쇼덱스 단백질 KW-803 칼럼 상에서 동용매 분리를 수행하였다. SIL-20AC 프로미넌스 시마주 오토샘플러를 이용하여 상기 칼럼 상으로 샘플을 주사하고, 다음과 같이 일련으로 연결된 3개의 온라인 검출기로부터 데이터를 수득하였다: 프로미넌스 SPD-20AD 다이오드 어레이 UV/vis 분광광도계에 이어 와이어트 미니DAWN™ TREOS 다중 각도 광 산란 검출기 다음에, 와이어트 옵티랩 T-rEX 굴절률 검출기. 데이터를 수집하고, 아스트라 (와이어트) 및 랩솔루션 (시마주) 소프트웨어를 이용하여 분석하였다.
동적 광 산란 (DLS) 연구를 와이어트 디나프로(Wyatt DynaPro) 플레이트 판독기 상에서 25℃ 하의 384 웰 플레이트에서 수행하였다. 실험 파라미터는 측정 당 각 5s씩 20회 취득하였고, 그 측정치를 사중으로 기록하였는데, 평균 및 표준 편차가 기록되었다. 강도 자기상관 함수는 역학 소프트웨어 (와이어트 테크놀로지)의 "정규화" 알고리즘을 사용하여 피팅되었다.
SEC-MALS 및 DLS의 요약이 도 29a 및 b에 제공된다. 항체 단독을 분석한 결과, 단량체성 모노클로날 항체에 전형적인, 각 항체에 대한 체류 시간 (약 16 내지 17분), 질량 (140 내지 150 kDa), 및 유체역학적 반경 (5.0 내지 5.4 nm)을 나타낸다. hCD73-his 단백질에 대한 데이터는 용액 중의 예상되는 이량체성 구조를 채택하는 단백질과 일치하는데; 특히, SEC-MALS 데이터로부터 결정된 질량 (120 kDa)은 CD73-his 이량체에 대해 예상된 것 (117 kDa)과 일치하고, hCD73-his 단량체에 대해 예상된 것 (58.5 kDa)과는 불일치한다. N-hCD73에 대한 데이터는 용액 중에 단량체성인 재조합 N-도메인 단백질과 일치하는데 (예상된 단량체성 질량 = 35.0 kDa과 비교해서, SEC-MALS 측정된 질량 = 38 kDa), 이는 단백질의 이량체화에 대해 책임이 있는 완전한 길이의 CD73 세포외 도메인의 영역이 N-도메인 잔기의 분포 없이 C-말단 도메인 내에 함유되기 때문인 것으로 예상된다.
소정의 항체와 N-hCD73-his의 등몰량의 혼합물은 SEC에서 단일 종으로서 용출되는 것으로 밝혀졌는데, 이는 상기 항체 또는 N-hCD73-his 단독보다 더 짧은 체류 시간뿐만 아니라 DLS에 의해 더 큰 유체역학적 반경 (Rh)을 나타내고, 이는 복합체의 형성과 일치한다. MALS 데이터는 이들 복합체에 대한 질량이 대략 210 kDa라는 것을 표시한다. 이는 1:2 항체:N-hCD73-his 복합체를 형성하기 위해 소정의 항체의 2개의 Fab 도메인 각각과 결합된 하나의 N-hCD73-his 분자와 일치한다.
항-CD73 항체와 hCD73-his 이량체의 혼합물에 대한 SEC-MALS 데이터는 이러한 혼합물이 hCD73-his 또는 항체 단독 중 하나보다 더 빠르게 용출된다는 것을 보여주는데, 이는 복합체가 형성된다는 것을 암시한다. 동일한 가변 영역을 함유하지만, 상이한 불변 도메인을 함유하는 mAb에 대한 데이터를 비교한 결과, IgG2 불변 도메인 (IgG2-C219S, IgG2-C219S-IgG1.1f)을 함유하는 mAb와 hCD73-his의 복합체에 대한 용출 시간이, IgG1.1f 불변 도메인을 함유하는 mAb와 hCD73-his의 복합체에 대한 용출 시간보다 더 빠른 것으로 나타났다. 또한, IgG2 불변 도메인을 함유하는 mAb와 hCD73-his의 복합체에 대한 MALS-결정된 질량은 IgG1 불변 도메인을 함유하는 mAb와 hCD73-his의 복합체에 대한 질량보다 더 크다. DLS 데이터는 추가로, IgG2 불변 도메인을 함유하는 mAb와 hCD73-his의 복합체의 유체역학적 반경이 IgG1 불변 도메인을 함유하는 mAb와 hCD73-his의 복합체의 유체역학적 반경보다 더 크다는 것을 나타낸다. 예를 들어, 3개의 상이한 불변 영역 (IgG2-C219S, IgG2-C219S-IgG1.1f, 또는 IgG1.1f)을 수반한 CD73.4에 대한 SEC-MALS 및 DLS 데이터가 도 30에 도시된다. 여기서는, IgG2 불변 도메인을 함유하는 CD73.4와 hCD73-his의 복합체가 CD73.4-IgG1.1f와 hCD73-his의 복합체와 비교해서 더 짧은 체류 시간 (도 30a), 더 큰 유체역학적 반경 (도 30b) 및 더 큰 MALS-결정된 질량 (도 30c)을 가지는 것으로 관찰될 수 있다. MALS 질량을 근거로 하여, hCD73-his와 항체 간의 복합체의 구조 및 화학량론에 대한 개략적인 모델이 도 30d에 도시되는데, 여기서 CD73.4-IgG1.1f를 함유하는 복합체는 주로, 더 작은 2:2 (피크 1 = 약 550 kDa) 또는 4:4 mAb/CD73 이량체 복합체 (피크 2 = 약 1300 kDa)를 형성하는 반면, CD73.4-IgG2-C219S 또는 CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f는 hCD73-his와 훨씬 더 큰 복합체 (>3000 kDa)를 형성하는데, 그에 대한 정확한 구조와 화학량론은 자신있게 모델링될 수 없다.
표 26에 제시된 중쇄 불변 영역을 갖는 CD73.4 항체를 대상으로 하여 또한, 복합체 형성의 크기에 관하여 시험하였다. 도 30d에 도시된 바와 같이, 그 결과는 IgG1 CH1 도메인을 갖는 것과 비교해서 IgG2 CH1 도메인을 갖는 항체와 더 고 차수의 복합체가 형성된다는 것을 표시한다.
집합적으로, SEC-MALS 및 DLS 데이터는 IgG1 힌지 및 CH1 영역 (IgG1.1f)을 함유하는 것과 비교해서, IgG2 힌지 및 CH1 영역 (IgG2-C219S 또는 IgG2-C219S-IgG1.1f)을 함유하는 mAb와 hCD73-his 간에 더 큰 복합체가 형성된다는 것을 입증해준다. 또한, IgG2 CH1 도메인을 갖는 항체가 IgG1 CH1 도메인을 갖는 것보다 더 큰 복합체를 형성한다.
실시예 12: 항체 매개된 CD73 내재화를 개선시키는 데 있어서 IgG2 CH1 및 힌지 내의 특정의 아미노산 잔기의 관련성
표 31에 제시된 중쇄 불변 영역을 수반한 항-CD73 항체 (CD73.4)를 제조하고, 이를 상기 언급된 바와 같이 항체 매개된 CD73 내재화 검정에서 시험하였다.
<표 31>
항-CD73 가변 영역과 융합된 중쇄 불변 영역
도 31에 도시된 결과는 CD73 내재화의 맥락에서 다음 정보를 제공한다:
● CH2 도메인은 다음에 제시된 바와 같이 영향을 미치지 않는다:
○ a) 포맷 "KH" [ERKCCVECPPCPAPELLGG (서열식별번호: 22)]를 수반한 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체와 비교해서, 포맷 "AY" [IgG2 힌지 ERKCCVECPPCPAPPVAG (서열식별번호: 8)를 갖는다]를 수반한 변형된 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체 간에는 내재화 능력에 있어서 그 차이가 거의 없는 것으로 관찰되었고 (세트 5, 6 및 7);
○ b) CH2 스왑은 야생형 G1 또는 G2와 거의 동등한 수준이며 (세트 5 및 6);
○ c) 잔기 237는 내재화에 영향을 미치지 않는데: "G" 잔기를 IgG2 힌지에 부가하는 것뿐만 아니라 IgG1 힌지 내의 C 말단 "G"를 결실시키는 것 어느 것도 내재화에 영향을 미치지 않았다 (세트 9).
이는 CH2 도메인이 내재화에 영향을 미치지 않는다는 것을 암시한다 (즉, CH2 도메인은 IgG1 또는 IgG2로부터의 것일 수 있다);
● IgG1 내의 세트 3에 표시된 CH1 영역 (KRGEGSSNLF; KRGEGS; SNLF; ITNDRTPR 및 SNLFPR)을 IgG2의 그것과 스와핑하는 것은 이득이 거의 없는데, 즉 내재화는 여전히 IgG1의 것과 유사하게 유지된다 (세트 3 참조);
● IgG2 내의 세트 4에 표시된 CH1 영역 (RKEGSGNSFL; RKEGSG; NSFL; TIDNTRRP 및 NSFLRP)을 IgG1의 그것과 스와핑하는 것은 가변적 영향을 미치는데: NSFL을 변경하는 것은 영향을 미치지 않는 반면, 다른 2개 영역 (RKEGSG 및 RP)은 영향을 미친다 (세트 4 참조). 세트 3 및 4의 결과를 근거로 하여, CH1 영역과 힌지 간에 상호 작용이 존재하는데, RKEGSG 및 RP 영역이 NSFL 영역보다 더 중요한 것으로 여겨진다;
● 힌지 영역은 내재화에 영향을 미치는데, 즉 IgG2의 힌지는 IgG1의 힌지와 비교해서 더 우수한 내재화를 제공한다 (세트 7 및 8 참조). 또한, 결실을 수반한 IgG1 (G1-delta-힌지)는 IgG1에 비해 내재화를 개선시켜 준다. 결실을 수반한 IgG2 (G2-delta-힌지)는 IgG2 힌지와 비교해서 유사한 수준의 내재화를 제공한다. 이는 힌지 영역이 내재화에 영향을 미치고, 그 효과는 IgG2 CH1에 의해 증강된다는 것을 암시한다 (G2-G1-G2-G2-AY는 G1-G2-G1-G1-AY와 거의 동등한 수준이다);
● IgG2.4 (C220S)는 IgG2.3 (C219S)과 비교해서 유사하거나 또는 저하된 내재화를 나타낸다. IgG2.3/4 (C219S/C220S)는 IgG2.3 또는 IgG2.4 단독과 비교해서 훨씬 저하된 내재화를 나타낸다 (세트 10 참조). 이는 IgG2 힌지 및 C219S를 수반한 항체의 내재화가 C220S를 수반한 IgG2 힌지의 내재화와 대략 동일한데, 이들 둘 다는 C219S와 C220S 둘 다를 수반한 IgG2 힌지보다 훨씬 더 우수하다는 것을 암시한다.
● IgG2.5 (C131S 돌연변이)는 C131을 수반한 구축물과 비교해서 저하된 내재화를 나타낸다 (세트 1, 6 및 7 참조).
따라서, 이들 결과는 CH1 도메인과 힌지 둘 다가 항체 매개된 CD73 내재화와 관련이 있고 이들 도메인으로부터의 IgG2 서열을 갖는 항체가 IgG1로부터의 이들 영역을 갖는 항체와 비교해서 더 우수한 효능으로 내재화된다는 것을 표시한다.
실시예 13: IgG2 힌지 및/또는 CH1 도메인을 갖는 항체는 고분자량 복합체를 형성한다
표 26에 제시된 중쇄 불변 영역을 갖는 CD73.4 항체를 대상으로 하여 또한, 실시예 11에 기재된 바와 같이 SEC-MALS 및 DLS 실험에 의해 고분자량 복합체의 형성에 관하여 시험하였다.
본 연구에서 16개 항체 중 3개가 이전에 시험되었다: CD73.4-IgG1.1f, CD73.4-IgG2-C219S (CD73.4-IgG2.3으로 지칭되기도 함), 및 CD73.4-IgG2-C219S-IgG1.1f (CD73.4-IgG2.3G1.1f-KH로 지칭되기도 함). 항체 단독의 SEC-MALS 및 DLS 데이터는 단량체성 모노클로날 항체에 전형적인, 각 항체에 대한 체류 시간, 질량, 및 유체역학적 반경을 나타내었다. 각 항체 (5.5 uM)와 hCD73-his (5.5 uM)의 등몰 복합체는 항체 또는 hCD73-his 단독과 비교해서 모든 복합체에 대하여 더 느린 체류 시간을 나타냈는데, 이는 복합체의 형성을 표시한다. 16개 복합체 각각에 대한 SEC 크로마토그램 데이터의 오버레이가 도 32a에 도시된다. 크로마토그램 데이터가 4개의 별개의 피크로 나눠질 수 있는데, 이는 도 32b에 도시된다. 피크 1은 가장 큰 종을 함유하는데, MALS-결정된 질량은 4:4 hCD73-his:mAb 복합체보다 더 큰 질량 해당량을 갖는 복합체를 암시한다. 피크 2는 MALS-결정된 질량을 갖는 종을 함유하는데, 이는 약 2:2 hCD73-his:mAb 복합체를 암시한다. 피크 3은 낮은 시그널 및 MALS-결정된 질량을 갖는 소수 종인데, 이는 약 1:1 hCD73-his:mAb 복합체를 암시한다. 피크 4는 유리 항체와 일치하는 MALS-결정된 질량을 갖는 mAb 단독의 용출에 상응한다. 각 종의 상대적 양을 정량화하기 위하여, 각 크로마토그램의 4개 피크를 피크 1 (<12.9분), 피크 2 (12.9 내지 15.1분), 피크 3 (15.1 내지 16.7분), 피크 4 (16.7 내지 19.3분)로서 통합하였다. 이러한 통합은 또한, 무시할 만한 수준인 것으로 밝혀진 임의의 저 분자량 종을 설명하기 위한 피크 5 (> 19.3 분)라는 부가의 통합 범위를 포함하였다 (모든 복합체에서 <3.5 %). 이러한 통합으로부터 각 종의 %가 표 32에 요약된다. 모든 복합체는 유사한 작은 %의 피크 3 (약 6 내지 9%)을 함유하고 있지만, 다른 피크의 양은 다양하였다. 가장 주목할만한 것은 hIgG1로부터의 CH1 도메인을 함유하는 항체와 hCD73-his 간의 모든 복합체가 더 작은 복합체를 상당히 더 큰 %로 갖고 있는 반면 (피크 2), hIgG2로부터의 CH1 도메인을 함유하는 항체와의 복합체는 더 큰 복합체를 더 많은 %로 갖고 있다는 것이다 (피크 1) (표 32 및 도 32c). 이는 보다 고 차수 복합체 형성에 있어서 힌지 영역뿐만 아니라 CH1 도메인도 중요한 역할을 한다는 것을 암시한다.
<표 32>
변형된 중쇄 불변 영역을 수반한 CD73.4 항체의 체류 시간
실시예 14: 조작된 불변 도메인을 수반한 항체에 대한 Fc 수용체 결합성
본 실시예는 IgG2의 CH1 및 힌지를 포함하는 변형된 중쇄 불변 영역을 갖는 항체가, 이것이 IgG1의 CH2 및 CH3 도메인을 함유하는 경우에 FcγR과 결합한다는 것을 입증해 준다.
가변 도메인에 의한 항원 결합 이외에도, 항체는 불변 도메인과의 상호 작용을 통하여 Fc-감마 수용체 (FcgR)에 개입한다. 이들 상호 작용은 이펙터 기능, 예컨대 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 및 항체 의존성 세포성 포식작용 (ADCP)을 매개한다. 이펙터 기능 활성은 IgG1 이소형의 경우에 높지만, IgG2 및 IgG4의 경우에는 극히 낮거나 부재하는데, 이는 이들 이소형의 FcgR에 대한 친화도가 낮기 때문이다. 또한, IgG1의 이펙터 기능은 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 돌연변이를 통하여 변형되어, FcgR 친화성과 선택성을 변경시킬 수 있다.
Fc 감마 수용체 (FcγR 또는 FcgR)에 대한 항체의 결합은 비아코어 표면 플라스몬 공명 (SPR) 및 포르테비오 바이오층 간섭계 (BLI)를 포함한 바이오센서 기술을 이용하여 연구하였다. SPR 연구를 25℃ 하에 비아코어 T100 기기 (GE 헬스케어) 상에서 수행하였다. 뮤린 항-6xHis 항체로부터의 Fab 단편을, EDC/NHS를 이용하여 CM5 센서 칩 상에서 고정화시켜 약 3000 RU의 밀도가 되도록 하였다. 각종 his-태그부착된 FcgR (7 ug/ml)을, 10 ul/min 하의 30 s 접촉 시간을 이용하여 C-말단 his-태그를 통하여 포획하였고, 1.0 μM 항체의 결합성은 10 mM NaPO4, 130 mM NaCl, 0.05% p20 (PBS-T) pH 7.1의 실행 완충제에서 평가하였다. 이들 실험을 위해 사용된 FcgR는 CD64 (FcgRI), CD32a-H131 (FcgRIIa-H131), CD32a-R131 (FcgRIIa-R131), CD32b (FcgRIIb), CD16a-V158 (FcgRIIIa-V158), CD16b-NA1 (FcgRIIIb-NA1), 및 CD16B-NA2 (FcgRIIIb-NA2)를 포함하였다. 10 mM NaPO4, 130 mM NaCl, 0.05% p20 (PBS-T) pH 7.1 중에서 25℃ 하에 BLI 실험을 포르테비오 옥텟 RED 기기 (폴 포르테비오) 상에서 수행하였다. 희석되지 않은 발현 상등액으로부터 항체를 단백질 A 코팅된 센서 상에 포획한 다음, 1 μM hCD32a-H131, hCD32a-R131, hCD32b, hCD16a-V158, 또는 0.1 μM hCD64 분석물을 결합시켰다.
첫째, 치환 S267E (SE) 및 S267E/L328F (SELF)뿐만 아니라 V4, V7, V8, V9 및 V12로서 지칭된, 돌연변이 P238D, P271G, H268D, A330R, G237D, E233D의 각종 조합을 포함한 변형된 IgG1 Fc 도메인을 함유하는 항체를 만들었다. 이들 항체의 결합성은 IgG1f, IgG2.3 (IgG2-C219S) 및 IgG4.1 (IgG4-S228P) 항체뿐만 아니라 모든 FcgR에 대한 결합을 저하시키도록 조작된 IgG1.1f 항체와의 비교를 이용하여 비아코어 SPR에 의해 연구하였다. 도 33에 도시되는 그 결과는 IgG1f, IgG2.3 및 IgG4.1, 및 돌연변이된 IgG1 항체에 대한 예상된 FcgR 결합 특성을 입증해 주는데, 이는 CD32a-H131 및 CD32a-R131과 비교해서 SE 및 SELF에 대한 CD32a-H131, CD32a-R131 및 CD32b 결합성이 증가될 뿐만 아니라 CD32b에 대한 V4, V7, V8, V9 및 V12 돌연변이체의 선택성이 증가되는 것을 포함한다 (도 33).
그 다음 세트의 구축물을 이용하여 이펙터 기능을 조작하여, 그 밖의 다른 이펙터 기능 음성 IgG2 이소형이 되도록 하였다. 이러한 연구를 위하여, 상기 언급된 돌연변이를 IgG2.3 불변 영역, 또는 IgG2.3/IgG1f 혼성체 (IgG2.3G1-AY로 지칭됨)의 맥락에서 도입하였다 (표 33). 항체는 상등액으로서 소규모로 발현되었고, 이를 대상으로 하여 포르테비오 옥텟 바이오층 간섭계 바이오센서 기술을 이용하여 FcgR과의 결합에 관하여 시험하였다. 항체는 상등액에 저 농도로 존재하기 때문에, 단백질 A 코팅된 센서를 이용하여 상등액으로부터 항체를 포획한 다음, 용액 중의 FcgR 분석물을 결합시킴으로써 상기 실험을 수행하였다. 야생형 IgG1, SE, P238D, V4 및 V12 항체를 포함한, 정제된 및 상등액 대조군 IgG1f가 또한, 비교를 위해 포함되었고, 이들 대조군 항체 각각은 예상된 FcgR 결합 특성을 명확하게 보여주었다 (도 34). IgG2.3 항체는 또한, 예상된 결합 프로파일을 명확하게 보여주었는데, CD32a-H131에 대해서만 인지할 만한 수준의 결합을 나타내었다. 그러나, S267E, L328F, P238D, P271G, H268D, A330R, G237D, 또는 E233D 돌연변이를 IgG2.3 내로 도입하는 모든 돌연변이는 상응하는 조작된 IgG1 mAb의 FcgR 친화성을 되풀이하지 못하였다 (도 34). 이와 반대로, IgG2.3G1-AY 구축물은 IgG2.3의 CH1 및 힌지 영역은 보유하면서도, 야생형 IgG1의 FcgR 결합 특성을 완전히 보존할 수 있었다. 또한, S267E, L328F, P238D, P271G, H268D, A330R, G237D, 및 E233D를 함유하는 모든 IgG2.3G1-AY 돌연변이체는, 동일한 돌연변이를 함유하는 IgG1 버전 mAb와 거의 동등한 수준의 FcgR 결합 특성을 명확하게 보여주었다 (도 34). 이는 야생형 또는 돌연변이체 IgG1의 이펙터 기능과 조합하여 IgG2의 CH1 및 힌지 영역을 수반한 항체가 성공적으로 조작되었다는 것을 입증해준다.
<표 33>
조작된 IgG2 구축물
이러한 조작 전략은 IgG2.3G1-AY로 포맷된 다른 항체, IgG2.3G1-AY-S267E (IgG2.3G1-AY-V27)뿐만 아니라 IgG2-B-형태 변이체 (IgG2.5G1-AY 및 IgG2.5G1-AY-V27), 및 IgG1과 IgG2 불변 도메인의 상이한 조합을 함유하는 다른 혼성체 항체를 생성한 다음, 비아코어 SPR 기술을 이용하여 항-his Fab 포획된 his-태그부착된 FcgR에 대한 이들 항체의 결합성을 시험함으로써 추가로 검토하였다. 옥텟 상등액 데이터와 일치하여, SPR 데이터는 IgG2.3G1-AY 및 IgG2.3G1-AY-V27 항체가 A-형태 IgG2 항체 (IgG2.3)의 CH1 및 힌지 영역을 함유함에도 불구하고, IgG1f 및 IgG1f-S267E 각각과 거의 동등한 수준의 FcgR 결합 특성을 갖는 것으로 나타났다 (표 34). IgG2.5G1-AY 및 IgG2.5G1-AY-V27 항체를 사용하여 또한 유사한 데이터를 수득하였는데, 이는 IgG1f 또는 변형된 IgG1f 유사 이펙터 기능을 갖는 B-형태 IgG2 항체 (IgG2.5로 명명된 C131S 돌연변이를 함유함)가 성공적으로 조작되었다는 것을 입증해준다. IgG2.3G1-AY, IgG2.3G1-AY-V27, IgG2.5G1-AY, 또는 IgG2.5G1-AY-V27 불변 영역을 수반하지만, 가변 영역은 상이한 몇 가지 다른 항체에 대한 데이터는 이러한 조작 전략이 가변 도메인과 독립적으로 다른 항체에도 광범위하게 적용 가능하다는 것을 보여주었다 (표 34). IgG1f-유사 FcgR 결합 특성을 명확하게 보여주는 다른 구축물은 IgG1-G2.3G1-AY, 및 IgG1deltaTHT를 포함하는 반면, IgG2.3G1-KH, IgG2.5G1-KH, IgG2.3plusTHT, IgG2.5plusTHT 및 IgG2.3plusGGG 구축물을 포함한, 변형된 불변 영역 구축물 중 몇 가지는 IgG1f-유사 FcgR 결합 특성을 보유할 수 없었다 (표 34).
<표 34>
항-his Fab 포획된 FcgR-his 단백질과 결합하는 1 μM 항체에 대한 % Rmax 값
이들 데이터를 취합해 보면, 힌지 영역 내의 보존된 CPPCPAP (서열식별번호: 380) 모티프에 대한 바로 C-말단에 있는 IgG1 내의 서열이 FcgR-매개된 이펙터 기능을 부여하는 반면, 항체의 힌지의 상부 부분 및 CH1을 IgG2 또는 변형된 IgG2 서열로 대체시켜, IgG1 및 변형된 IgG1의 이펙터 기능을, IgG2 CH1 및/또는 힌지 영역을 함유하는 항체의 탁월한 내재화 또는 시그널링 특성과 잠재적으로 조합할 수 있는 것으로 나타났다.
등가
관련 기술분야의 통상의 기술자는 일상적인 실험만으로도 본원에 기재된 특이적 실시양태의 많은 등가물을 인식하거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 다음 청구범위에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.
서열 목록의 요약
<표 35>
서열 목록은 성숙한 가변 영역 및 중쇄 및 경쇄의 서열을 제공한다 (즉, 서열은 시그널 펩티드를 포함하지 않는다).
SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY LONBERG, Nils KORMAN, Alan J. BARNHART, Bryan C. YAMNIUK, Aaron P. SRINIVASAN, Mohan HENNING, Karla A. LEI, Ming SEGA, Emanuela GOODENOUGH, Angela JURE-KUNKEL, Maria N. CHEN, Guodong SACK, John S. HUANG, Richard CORBETT, Martin MYERS, Joseph E., JR. SCHWEIZER, Liang HATCHER, Sandra V. <120> ANTIBODIES AGAINST CD73 AND USES THEREOF <130> MXI-538PC <140> PCT/US2015/061639 <141> 2015-11-19 <150> US 62/083,056 <151> 2014-11-21 <160> 380 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 574 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(574) <223> Human CD73 isoform 1 <400> 1 Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu 20 25 30 His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser 35 40 45 Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu 50 55 60 Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu 65 70 75 80 Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr 85 90 95 Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala 100 105 110 Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile 115 120 125 Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile 130 135 140 Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro 145 150 155 160 Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr 165 170 175 Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val 180 185 190 Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys 195 200 205 Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu 210 215 220 Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val 225 230 235 240 Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys 245 250 255 Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly 260 265 270 Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly 275 280 285 Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His 290 295 300 Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile 305 310 315 320 Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr 325 330 335 Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser 340 345 350 Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met 355 360 365 Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Thr Asp Glu Met Phe Trp Asn His Val 370 375 380 Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu 385 390 395 400 Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro 405 410 415 Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys 420 425 430 Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu 435 440 445 Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys 450 455 460 Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg 465 470 475 480 Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile 485 490 495 Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys 500 505 510 Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val 515 520 525 Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly 530 535 540 Arg Ile Lys Phe Ser Thr Gly Ser His Cys His Gly Ser Phe Ser Leu 545 550 555 560 Ile Phe Leu Ser Leu Trp Ala Val Ile Phe Val Leu Tyr Gln 565 570 <210> 2 <211> 524 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(524) <223> Human CD73 isoform 2 <400> 2 Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu 20 25 30 His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser 35 40 45 Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu 50 55 60 Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu 65 70 75 80 Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr 85 90 95 Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala 100 105 110 Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile 115 120 125 Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile 130 135 140 Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro 145 150 155 160 Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr 165 170 175 Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val 180 185 190 Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys 195 200 205 Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu 210 215 220 Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val 225 230 235 240 Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys 245 250 255 Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly 260 265 270 Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly 275 280 285 Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His 290 295 300 Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile 305 310 315 320 Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr 325 330 335 Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser 340 345 350 Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met 355 360 365 Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Thr Asp Glu Met Phe Trp Asn His Val 370 375 380 Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu 385 390 395 400 Arg Asn Asn Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys Pro Gly 405 410 415 Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg Val Pro 420 425 430 Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile Leu Pro 435 440 445 Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys Asp Glu 450 455 460 Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val Ser Thr 465 470 475 480 Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly Arg Ile 485 490 495 Lys Phe Ser Thr Gly Ser His Cys His Gly Ser Phe Ser Leu Ile Phe 500 505 510 Leu Ser Leu Trp Ala Val Ile Phe Val Leu Tyr Gln 515 520 <210> 3 <211> 574 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <220> <221> misc_feature <222> (1)..(574) <223> Cynomolgus CD73 <400> 3 Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Val 1 5 10 15 Gly Ala Leu Leu Trp Ser Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu 20 25 30 His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser 35 40 45 Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu 50 55 60 Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu 65 70 75 80 Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr 85 90 95 Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala 100 105 110 Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile 115 120 125 Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile 130 135 140 Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro 145 150 155 160 Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr 165 170 175 Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val 180 185 190 Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys 195 200 205 Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu 210 215 220 Thr Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val 225 230 235 240 Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys 245 250 255 Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly 260 265 270 Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly 275 280 285 Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His 290 295 300 Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile 305 310 315 320 Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr 325 330 335 Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser 340 345 350 Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met 355 360 365 Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Ala Asp Glu Met Phe Trp Asn His Val 370 375 380 Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu 385 390 395 400 Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro 405 410 415 Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys 420 425 430 Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu 435 440 445 Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys 450 455 460 Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg 465 470 475 480 Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Ile Tyr Lys Val Ile 485 490 495 Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys 500 505 510 Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val 515 520 525 Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly 530 535 540 Arg Ile Lys Phe Ser Thr Gly Ser His Cys His Gly Ser Phe Ser Leu 545 550 555 560 Ile Phe Leu Ser Phe Cys Ala Val Ile Phe Val Leu Tyr Gln 565 570 <210> 4 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VH <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VH CDR1 <400> 5 Asn Tyr Gly Met His 1 5 <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VH CDR2 <400> 6 Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VH CDR3 <400> 7 Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK1 <400> 8 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK1 CDR1 <400> 9 Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK1 CDR2 <400> 10 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK1 CDR3 <400> 11 Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Leu Thr 1 5 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK2 <400> 12 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK2 CDR1 <400> 13 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK2 CDR2 <400> 14 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK2 CDR3 <400> 15 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 16 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VH <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VH CDR1 <400> 17 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VH CDR2 <400> 18 Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VH CDR3 <400> 19 Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 20 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK1 <400> 20 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 21 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK1 CDR1 <400> 21 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp 1 5 10 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK1 CDR2 <400> 22 Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK1 CDR3 <400> 23 Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 24 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK2 <400> 24 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK2 CDR1 <400> 25 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK2 CDR2 <400> 26 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK2 CDR3 <400> 27 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 28 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK3 <400> 28 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK3 CDR1 <400> 29 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK3 CDR2 <400> 30 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK3 CDR3 <400> 31 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 32 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VH <400> 32 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VH CDR1 <400> 33 Asn Tyr Gly Met His 1 5 <210> 34 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VH CDR2 <400> 34 Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 35 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VH CDR3 <400> 35 Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 36 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VK1 <400> 36 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 37 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VK1 CDR1 <400> 37 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VK1 CDR2 <400> 38 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VK1 CDR3 <400> 39 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 40 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VH1 <400> 40 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Gly Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 41 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VH1 CDR1 <400> 41 Asn Tyr Gly Leu His 1 5 <210> 42 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VH1 CDR2 <400> 42 Val Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 43 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VH1 CDR3 <400> 43 Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 44 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK1 <400> 44 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK1 CDR1 <400> 45 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK1 CDR2 <400> 46 Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 47 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK1 CDR3 <400> 47 Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Thr 1 5 <210> 48 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK2 <400> 48 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 49 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK2 CDR1 <400> 49 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 50 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK2 CDR2 <400> 50 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 51 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK2 CDR3 <400> 51 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 52 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VH <400> 52 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Asn Asn Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 53 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VH CDR1 <400> 53 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 54 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VH CDR2 <400> 54 Gly Ile Ser Trp Asn Asn Asn Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 55 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VH CDR3 <400> 55 Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 56 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VK1 <400> 56 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 57 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VK1 CDR1 <400> 57 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 58 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VK1 CDR2 <400> 58 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VK1 CDR3 <400> 59 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 60 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VH <400> 60 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 61 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VH CDR1 <400> 61 Asn Tyr Gly Met His 1 5 <210> 62 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VH CDR2 <400> 62 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 63 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VH CDR3 <400> 63 Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 64 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VK1 <400> 64 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 65 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VK1 CDR1 <400> 65 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 66 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VK1 CDR2 <400> 66 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VK1 CDR3 <400> 67 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 68 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VH <400> 68 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Ile Ser Asp Gly Ser Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Phe Ser Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 69 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VH CDR1 <400> 69 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VH CDR2 <400> 70 Arg Ile Ile Ser Asp Gly Ser Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 71 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VH CDR3 <400> 71 Glu Phe Ser Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 72 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK1 <400> 72 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 73 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK1 CDR1 <400> 73 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK1 CDR2 <400> 74 Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK1 CDR3 <400> 75 Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 76 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK2 <400> 76 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 77 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK2 CDR1 <400> 77 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 78 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK2 CDR2 <400> 78 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK2 CDR3 <400> 79 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 80 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VH <400> 80 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Thr Trp Asn Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Trp Leu Leu Phe Asp Asn Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 81 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VH CDR1 <400> 81 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 82 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VH CDR2 <400> 82 Gly Ile Thr Trp Asn Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 83 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VH CDR3 <400> 83 Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Trp Leu Leu Phe Asp Asn 1 5 10 <210> 84 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VK1 <400> 84 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 85 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VK1 CDR1 <400> 85 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 86 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VK1 CDR2 <400> 86 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 87 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VK1 CDR3 <400> 87 Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe Thr 1 5 <210> 88 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VH <400> 88 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asp Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ile Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 89 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VH CDR1 <400> 89 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 90 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VH CDR2 <400> 90 Asp Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ile Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 91 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VH CDR3 <400> 91 Asp Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 92 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VK1 <400> 92 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VK1 CDR1 <400> 93 Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VK1 CDR2 <400> 94 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VK1 CDR3 <400> 95 Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 96 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 epitope #1 <400> 96 Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu 1 5 10 15 Leu Asp Ala <210> 97 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 epitope #2 <400> 97 Leu Tyr Leu Pro Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly 1 5 10 15 <210> 98 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(98) <223> Wildtype IgG1 CH1 <400> 98 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val <210> 99 <211> 553 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: His-tagged CD73 <400> 99 Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu 20 25 30 His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser 35 40 45 Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu 50 55 60 Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu 65 70 75 80 Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr 85 90 95 Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala 100 105 110 Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile 115 120 125 Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile 130 135 140 Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro 145 150 155 160 Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr 165 170 175 Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val 180 185 190 Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys 195 200 205 Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu 210 215 220 Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val 225 230 235 240 Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys 245 250 255 Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly 260 265 270 Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly 275 280 285 Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His 290 295 300 Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile 305 310 315 320 Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr 325 330 335 Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser 340 345 350 Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met 355 360 365 Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Ala Asp Glu Thr Phe Trp Asn His Val 370 375 380 Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu 385 390 395 400 Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro 405 410 415 Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys 420 425 430 Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu 435 440 445 Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys 450 455 460 Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg 465 470 475 480 Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile 485 490 495 Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys 500 505 510 Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val 515 520 525 Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly 530 535 540 Arg Ile Lys His His His His His His 545 550 <210> 100 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 (full length heavy chain) <400> 100 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 101 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 1) <400> 101 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 102 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 2) <400> 102 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 103 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length heavy chain) <400> 103 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 104 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 1) <400> 104 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 105 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 2) <400> 105 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 106 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 3) <400> 106 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 107 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 (full length heavy chain) <400> 107 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 108 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 (full length light chain 1) <400> 108 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 109 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 (full length heavy chain) <400> 109 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Gly Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 110 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 1) <400> 110 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 111 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 2) <400> 111 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 112 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 (full length heavy chain) <400> 112 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Asn Asn Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 113 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 (full length light chain 1) <400> 113 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 114 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 (full length heavy chain) <400> 114 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 115 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 (full length light chain 1) <400> 115 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 116 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 (full length heavy chain) <400> 116 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Ile Ser Asp Gly Ser Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Phe Ser Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 117 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 1) <400> 117 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 118 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 2) <400> 118 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 119 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 (full length heavy chain) <400> 119 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Thr Trp Asn Ser Gly Gly Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Trp Leu Leu Phe Asp Asn Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 120 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 (full length light chain 1) <400> 120 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 121 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 (full length heavy chain) <400> 121 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asp Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ile Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ile Tyr Gly Ser Gly Ser Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 122 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 (full length light chain 1) <400> 122 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 123 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Hinge C219S <400> 123 Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly <210> 124 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(98) <223> IgG2 CH1 (wildtype) <400> 124 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val <210> 125 <211> 103 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1 CH2 + A330S and P331S <400> 125 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 1 5 10 15 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 20 25 30 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 35 40 45 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 50 55 60 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 65 70 75 80 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu 85 90 95 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 100 <210> 126 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(330) <223> Human IgG1 constant region <400> 126 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 127 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(330) <223> Human IgG1 constant region (allotype variant) <400> 127 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 128 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1 CH3 + E356 and M358 <400> 128 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 1 5 10 15 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 20 25 30 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 50 55 60 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 65 70 75 80 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 85 90 95 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 100 105 <210> 129 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1 constant region <400> 129 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 130 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2 constant region <400> 130 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Trp Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr 65 70 75 80 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr 85 90 95 Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Asp Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 131 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(107) <223> Human IgG1 kappa light chain (CL) <400> 131 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 132 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Heavy chain C-terminus <400> 132 Leu Ser Pro Gly Lys 1 5 <210> 133 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f, AA sequence <400> 133 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 134 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.4-IgG2CS-IgG1.1f, NT sequence <400> 134 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 135 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.4 VH (a.a.) <400> 135 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 136 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(18) <223> Wildtype IgG2 hinge <400> 136 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly <210> 137 <211> 103 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(103) <223> Wildtype IgG1 CH2 <400> 137 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 1 5 10 15 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 20 25 30 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 35 40 45 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 50 55 60 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 65 70 75 80 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 85 90 95 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 100 <210> 138 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(107) <223> Wildtype IgG1 CH3 <400> 138 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 1 5 10 15 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 20 25 30 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 50 55 60 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 65 70 75 80 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 85 90 95 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 100 105 <210> 139 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VH - Nucleotide Sequence <400> 139 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tca 363 <210> 140 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 140 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcatctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 141 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 VK2 - Nucleotide Sequence <400> 141 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 142 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VH - Nucleotide Sequence <400> 142 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgt aaaagggtat 300 tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 143 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 143 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccagca gggccactgg catcccagac 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240 gaagattttg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtagct caccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 144 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK2 - Nucleotide Sequence <400> 144 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccag 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 145 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 VK3 - Nucleotide Sequence <400> 145 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 146 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VH - Nucleotide Sequence <400> 146 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300 aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360 tcttca 366 <210> 147 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 147 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 148 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VH1 - Nucleotide Sequence <400> 148 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggcc tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atacggtatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagggggggc 300 agcagctggt acccggacgg tttggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 149 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 149 gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accccacttt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaa 318 <210> 150 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 VK2 - Nucleotide Sequence <400> 150 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 151 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VH - Nucleotide Sequence <400> 151 gaagtgcagc tggtggaatc tgggggaaac ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga ataataatga cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag acctgaggac acggccttgt attattgtgt aaaaggttat 300 tacgttattt tgactggtct tgactactgg ggccagggaa ccccggtcac cgtctcctca 360 <210> 152 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 152 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 153 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VH - Nucleotide Sequence <400> 153 caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaggtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgatgc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360 tca 363 <210> 154 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 154 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 155 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VH - Nucleotide Sequence <400> 155 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attattagtg atgggagtag cacaggttac 180 gcggattccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagagagttt 300 agcagtggct ggtactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357 <210> 156 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 156 gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttagtagtt accctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 157 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK2 - Nucleotide Sequence <400> 157 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacaggt ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 158 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VH - Nucleotide Sequence <400> 158 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attacttgga atagtggtgg cataggctac 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatagg 300 tattacagca gttggctcct ctttgacaac tggggccagg gaattctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 159 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 159 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cattatggta gctcattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 160 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VH - Nucleotide Sequence <400> 160 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaga ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcagat attagttgga atagtgatat tataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tctagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatatt 300 tatggttcgg ggagttcttt ttttgactac tggggccagg gaatcctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 161 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 VK1 - Nucleotide Sequence <400> 161 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gtatattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatcatagtt accctcccac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa a 321 <210> 162 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-IgG2-IgG1f2 (MHCCR) <400> 162 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 163 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-IgG2CS-IgG1f2 (MHCCR) <400> 163 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 164 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2-IgG1f2 (MHCCR) <400> 164 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 165 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2CS-IgG1f2 (MHCCR) <400> 165 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 166 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-IgG2-IgG1.1f (MHCCR) <400> 166 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 167 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-IgG2CS-IgG1.1f (MHCCR) <400> 167 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 168 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2-IgG1.1f (MHCCR) <400> 168 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 169 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2CS-IgG1.1f (MHCCR) <400> 169 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 170 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.3 VH (a.a) <400> 170 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Val Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 171 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.5 VH (a.a) <400> 171 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 172 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.6 VH (a.a) <400> 172 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 173 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.7 VH (a.a) <400> 173 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 174 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.8 VH (a.a) <400> 174 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 175 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.9 VH (a.a) <400> 175 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 176 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.10 VH (a.a) <400> 176 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 177 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.11 VH (a.a) <400> 177 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 178 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2/IgG1 hybrid hinge <400> 178 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gly <210> 179 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2 C219S/IgG1 hybrid hinge <400> 179 Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gly <210> 180 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-IgG2-IgG1f <400> 180 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 181 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-IgG2CS-IgG1f <400> 181 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 182 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2-IgG1f <400> 182 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 183 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2CS-IgG1f <400> 183 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 184 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 184 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 185 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 185 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val 210 215 220 Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 186 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 186 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Tyr Tyr Val Ile Leu Thr Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val 210 215 220 Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 187 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 187 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly 225 230 235 240 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <210> 188 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 188 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 189 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f (identical to SEQ ID NO: 133, except lacks C-terminal lysine) <400> 189 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 190 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 190 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly 225 230 235 240 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <210> 191 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 191 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 192 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 192 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 193 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 193 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly 225 230 235 240 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <210> 194 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 194 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 195 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 195 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 196 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 196 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly 225 230 235 240 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <210> 197 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 197 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 198 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 198 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Leu Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 199 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 199 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly 225 230 235 240 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <210> 200 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 200 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 201 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 201 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 202 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 202 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly 225 230 235 240 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <210> 203 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 203 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 204 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 204 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 205 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 205 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly 225 230 235 240 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly 450 <210> 206 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 206 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 207 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 207 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 208 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 208 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu 225 230 235 240 Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 209 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 209 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 210 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 210 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Glu Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asn Ser Arg Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Ser 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 211 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 211 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc caaagggtat 300 tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 gcgtcgacca agggcccctc cgtgtttcct ctggcccctt ccagcaagtc cacctctggc 420 ggaacagccg ctctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgagcctgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac atctggcgtg cacaccttcc ctgctgtgct gcagtctagc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtcgtgaca gtgccctcca gctctctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaaccc 660 aagtcctgcg acaagaccca tacctgccct ccctgccctg ctcctgaagc tgaaggcgcc 720 cctagcgtgt tcctgttccc tccaaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780 gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtcc cacgaggacc cagaagtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ctagagagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa 960 gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcctagct ccatcgaaaa gaccatctcc 1020 aaggctaagg gccagccccg cgagccccag gtgtacacac tgcctccatc ccgggaagag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacttgc ctcgtgaagg gcttctaccc ctccgatatc 1140 gccgtggaat gggagtccaa cggccagcct gagaacaact acaagaccac ccctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcatt cttcctgtac agcaagctga cagtggataa gtcccggtgg 1260 cagcagggga acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ctctgcacaa ccactacaca 1320 cagaagtccc tgtctctgtc ccctggc 1347 <210> 212 <211> 1337 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 212 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc caaagggtat 300 tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 gcgtcgacca agggcccctc tgtgtttcct ctggcccctt gctcccggtc cacctctgag 420 tctaccgctg ctctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgagcctgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgctctgac ctccggcgtg cacacctttc cagccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ctctgtcctc cgtcgtgacc gtgccctcct ccaacttcgg cacccagacc 600 tacacctgta acgtggacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagac cgtggaacgg 660 aagtcctgcg tggaatgccc tccttgccct gcacctcctg tggctggccc ttccgtgttc 720 ctgttccccc caaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga agtgacctgc 780 gtggtggtgg atgtgtccca cgaggacccc gaggtgcagt tcaattggta cgtggacggc 840 gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggaac agttcaactc caccttccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt ggtgcaccag gactggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960 aaggtgtcca acaagggcct gcctgccccc atcgaaaaga ccatctccaa gacaaagggc 1020 cagccccgcg agcctcaggt gtacacactg cctcccagcc gggaagagat gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgtct ggtcaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140 gagtccaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccccatgct ggactccgac 1200 ggctcattct tcctgtactc caagctgaca gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac 1260 gtgttctcct gctctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320 tccctgagcc ccggcaa 1337 <210> 213 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.3-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 213 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc caaagggtat 300 tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420 agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 600 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 660 aaatcctgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccaagcagc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctatag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtccc cgggtaaa 1338 <210> 214 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 214 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420 ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540 agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660 cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900 aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020 tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140 atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260 tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320 acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350 <210> 215 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 215 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420 gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540 tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660 cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720 ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900 cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020 ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140 tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200 gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320 ctgtccctga gccccggcaa a 1341 <210> 216 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.4-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 216 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 217 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 217 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420 ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540 agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660 cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900 aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020 tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140 atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260 tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320 acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350 <210> 218 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 218 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420 gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540 tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660 cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720 ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900 cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020 ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140 tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200 gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320 ctgtccctga gccccggcaa a 1341 <210> 219 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.5-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 219 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 220 <211> 1254 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 220 ggcatgcact gggtccgcca ggctccaggc aaggggctgg agtgggtggc agttatattg 60 tatgattcca gtaataaata ctatccagac tccgtgaagg gccgattcac catctccaga 120 gacaattcca agaacacgct gtatctgcaa atgaacagcc tgagagccga ggacacggct 180 gtgtattact gtgcgagagg gggcagcagc tggtaccctg attcttttga tatctggggc 240 caaggaacaa tggtcaccgt ctcttcagcg tcgaccaagg gcccctccgt gtttcctctg 300 gccccttcca gcaagtccac ctctggcgga acagccgctc tgggctgcct ggtcaaggac 360 tacttccccg agcctgtgac cgtgtcctgg aactctggcg ccctgacatc tggcgtgcac 420 accttccctg ctgtgctgca gtctagcggc ctgtactccc tgtcctccgt cgtgacagtg 480 ccctccagct ctctgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac 540 accaaggtgg acaagcgggt ggaacccaag tcctgcgaca agacccatac ctgccctccc 600 tgccctgctc ctgaagctga aggcgcccct agcgtgttcc tgttccctcc aaagcccaag 660 gacaccctga tgatctcccg gacccctgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac 720 gaggacccag aagtgaagtt caattggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 780 accaagccta gagaggaaca gtacaactcc acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg 840 ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg 900 cctagctcca tcgaaaagac catctccaag gctaagggcc agccccgcga gccccaggtg 960 tacacactgc ctccatcccg ggaagagatg accaagaacc aggtgtccct gacttgcctc 1020 gtgaagggct tctacccctc cgatatcgcc gtggaatggg agtccaacgg ccagcctgag 1080 aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg gactccgacg gctcattctt cctgtacagc 1140 aagctgacag tggataagtc ccggtggcag caggggaacg tgttctcctg ctccgtgatg 1200 cacgaggctc tgcacaacca ctacacacag aagtccctgt ctctgtcccc tggc 1254 <210> 221 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 221 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420 gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540 tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660 cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720 ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900 cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020 ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140 tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200 gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320 ctgtccctga gccccggcaa a 1341 <210> 222 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.6-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 222 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 223 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 223 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420 ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540 agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660 cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900 aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020 tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140 atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260 tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320 acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350 <210> 224 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 224 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420 gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540 tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660 cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720 ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900 cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020 ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140 tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200 gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320 ctgtccctga gccccggcaa a 1341 <210> 225 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.7-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 225 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 226 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 226 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420 ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540 agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660 cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900 aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020 tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140 atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260 tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320 acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350 <210> 227 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 227 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420 gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540 tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660 cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720 ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900 cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020 ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140 tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200 gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320 ctgtccctga gccccggcaa a 1341 <210> 228 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.8-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 228 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 229 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 229 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420 ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540 agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660 cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900 aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020 tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140 atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260 tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320 acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350 <210> 230 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 230 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420 gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540 tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660 cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720 ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900 cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020 ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140 tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200 gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320 ctgtccctga gccccggcaa a 1341 <210> 231 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.9-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 231 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa gctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg attccagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 232 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 232 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgagagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctccgtgttt cctctggccc cttccagcaa gtccacctct 420 ggcggaacag ccgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgccct gacatctggc gtgcacacct tccctgctgt gctgcagtct 540 agcggcctgt actccctgtc ctccgtcgtg acagtgccct ccagctctct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gcgggtggaa 660 cccaagtcct gcgacaagac ccatacctgc cctccctgcc ctgctcctga agctgaaggc 720 gcccctagcg tgttcctgtt ccctccaaag cccaaggaca ccctgatgat ctcccggacc 780 cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccacgagg acccagaagt gaagttcaat 840 tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900 aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960 aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgccta gctccatcga aaagaccatc 1020 tccaaggcta agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca cactgcctcc atcccgggaa 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgact tgcctcgtga agggcttcta cccctccgat 1140 atcgccgtgg aatgggagtc caacggccag cctgagaaca actacaagac cacccctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tacagcaagc tgacagtgga taagtcccgg 1260 tggcagcagg ggaacgtgtt ctcctgctcc gtgatgcacg aggctctgca caaccactac 1320 acacagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1350 <210> 233 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 233 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgagagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc ctctgtgttt cctctggccc cttgctcccg gtccacctct 420 gagtctaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgagcc tgtgaccgtg 480 tcctggaact ctggcgctct gacctccggc gtgcacacct ttccagccgt gctgcagtcc 540 tccggcctgt actctctgtc ctccgtcgtg accgtgccct cctccaactt cggcacccag 600 acctacacct gtaacgtgga ccacaagccc tccaacacca aggtggacaa gaccgtggaa 660 cggaagtcct gcgtggaatg ccctccttgc cctgcacctc ctgtggctgg cccttccgtg 720 ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgatgatct cccggacccc cgaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgtc ccacgaggac cccgaggtgc agttcaattg gtacgtggac 840 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa ctccaccttc 900 cgggtggtgt ccgtgctgac cgtggtgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 960 tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcctgcc cccatcgaaa agaccatctc caagacaaag 1020 ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcctccca gccgggaaga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtcaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 1140 tgggagtcca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccat gctggactcc 1200 gacggctcat tcttcctgta ctccaagctg acagtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 1320 ctgtccctga gccccggcaa a 1341 <210> 234 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.10-Vh-hHC-IgG2-C219S-IgG1.1f <400> 234 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgagagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggtaa a 1341 <210> 235 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG1.1f <400> 235 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300 aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360 tcttcagcgt cgaccaaggg cccctccgtg tttcctctgg ccccttccag caagtccacc 420 tctggcggaa cagccgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcctgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc cctgacatct ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 540 tctagcggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgacagtgc cctccagctc tctgggcacc 600 cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660 gaacccaagt cctgcgacaa gacccatacc tgccctccct gccctgctcc tgaagctgaa 720 ggcgccccta gcgtgttcct gttccctcca aagcccaagg acaccctgat gatctcccgg 780 acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccacg aggacccaga agtgaagttc 840 aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 900 tacaactcca cctaccgggt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ttggctgaac 960 ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aaggccctgc ctagctccat cgaaaagacc 1020 atctccaagg ctaagggcca gccccgcgag ccccaggtgt acacactgcc tccatcccgg 1080 gaagagatga ccaagaacca ggtgtccctg acttgcctcg tgaagggctt ctacccctcc 1140 gatatcgccg tggaatggga gtccaacggc cagcctgaga acaactacaa gaccacccct 1200 cccgtgctgg actccgacgg ctcattcttc ctgtacagca agctgacagt ggataagtcc 1260 cggtggcagc aggggaacgt gttctcctgc tccgtgatgc acgaggctct gcacaaccac 1320 tacacacaga agtccctgtc tctgtcccct ggc 1353 <210> 236 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: mAb-CD73.11-Vh-hHC-IgG2-C219S <400> 236 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300 aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360 tcttcagcgt cgaccaaggg cccctctgtg tttcctctgg ccccttgctc ccggtccacc 420 tctgagtcta ccgctgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcctgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc tctgacctcc ggcgtgcaca cctttccagc cgtgctgcag 540 tcctccggcc tgtactctct gtcctccgtc gtgaccgtgc cctcctccaa cttcggcacc 600 cagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagaccgtg 660 gaacggaagt cctgcgtgga atgccctcct tgccctgcac ctcctgtggc tggcccttcc 720 gtgttcctgt tccccccaaa gcccaaggac accctgatga tctcccggac ccccgaagtg 780 acctgcgtgg tggtggatgt gtcccacgag gaccccgagg tgcagttcaa ttggtacgtg 840 gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggaacagtt caactccacc 900 ttccgggtgg tgtccgtgct gaccgtggtg caccaggact ggctgaacgg caaagagtac 960 aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct gcccccatcg aaaagaccat ctccaagaca 1020 aagggccagc cccgcgagcc tcaggtgtac acactgcctc ccagccggga agagatgacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 1140 gaatgggagt ccaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc catgctggac 1200 tccgacggct cattcttcct gtactccaag ctgacagtgg acaagtcccg gtggcagcag 1260 ggcaacgtgt tctcctgctc tgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 tccctgtccc tgagccccgg caaa 1344 <210> 237 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.4 (VH) Nucleotide sequence <400> 237 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tca 363 <210> 238 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK3 <400> 238 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 239 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK3 CDR1 <400> 239 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 240 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK3 CDR2 <400> 240 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 241 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK3 CDR3 <400> 241 Gln Gln Arg Ser Asn Trp Trp Thr 1 5 <210> 242 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 VK3 Nucleotide sequence <400> 242 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attattagtg atgggagtag cacaggttac 180 gcggattccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagagagttt 300 agcagtggct ggtactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357 <210> 243 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 (full length heavy chain) NT Seq <400> 243 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa a 1341 <210> 244 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 1) NT Seq <400> 244 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcatctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 245 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11F11 (full length light chain 2) NT Seq <400> 245 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 246 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length heavy chain) NT Seq <400> 246 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga agagtggtag cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgt aaaagggtat 300 tacgttattt tgactggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350 <210> 247 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 1) NT Seq <400> 247 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccagca gggccactgg catcccagac 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240 gaagattttg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtagct caccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 248 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 2) NT Seq <400> 248 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccag 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 249 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4C3 (full length light chain 3) NT Seq <400> 249 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 ttcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctccaac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 250 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 (full length heavy chain) NT Seq <400> 250 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atgaaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgc gagagggtat 300 aacagcaggt ggtaccctga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360 tcttcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 600 cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 660 gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 720 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt caacagcacg 900 ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1020 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320 agcctctccc tgtctccggg taaa 1344 <210> 251 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 4D4 (full length light chain 1) NT Seq <400> 251 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 252 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 (full length heavy chain) NT Seq <400> 252 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggcc tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atacggtatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagggggggc 300 agcagctggt acccggacgg tttggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tcagcttcca ccaagggccc atccgtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacgaag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660 tccaaatatg gtcccccatg cccatcatgc ccagcacctg agttcctggg gggaccatca 720 gtcttcctgt tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gatggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg 900 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020 aaagggcagc cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcagg ctaaccgtgg acaagagcag gtggcaggag 1260 gggaatgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag 1320 agcctctccc tgtctctggg taaa 1344 <210> 253 <211> 639 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 1) NT Seq <400> 253 gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttaatagtt accccacttt cggcggaggg 300 accaaggtgg agatcaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639 <210> 254 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 10D2 (full length light chain 2) NT Seq <400> 254 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 255 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 (full length heavy chain) NT Seq <400> 255 gaagtgcagc tggtggaatc tgggggaaac ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga ataataatga cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag acctgaggac acggccttgt attattgtgt aaaaggttat 300 tacgttattt tgactggtct tgactactgg ggccagggaa ccccggtcac cgtctcctca 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350 <210> 256 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 11A6 (full length light chain 1) NT Seq <400> 256 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 257 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 (full length heavy chain) NT Seq <400> 257 caggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaggtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgatgc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360 tcagcttcca ccaagggccc atccgtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag ccgccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacgaag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagttgag 660 tccaaatatg gtcccccatg cccatcatgc ccagcacctg agttcctggg gggaccatca 720 gtcttcctgt tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gatggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg 900 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020 aaagggcagc cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcagg ctaaccgtgg acaagagcag gtggcaggag 1260 gggaatgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag 1320 agcctctccc tgtctctggg taaa 1344 <210> 258 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 24H2 (full length light chain 1) NT Seq <400> 258 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 259 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 (full length heavy chain) NT Seq <400> 259 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attattagtg atgggagtag cacaggttac 180 gcggattccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagagagttt 300 agcagtggct ggtactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc 360 tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347 <210> 260 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 1) NT Seq <400> 260 gccatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattagc agtgctttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagctc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tttagtagtt accctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 261 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 5F8 (full length light chain 2) NT Seq <400> 261 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacaggt ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 262 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 (full length heavy chain) NT Seq <400> 262 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attacttgga atagtggtgg cataggctac 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatagg 300 tattacagca gttggctcct ctttgacaac tggggccagg gaattctggt caccgtctcc 360 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353 <210> 263 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 6E11 (full length light chain 1) NT Seq <400> 263 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cattatggta gctcattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 264 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 (full length heavy chain) NT Seq <400> 264 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaga ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcagat attagttgga atagtgatat tataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tctagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagatatt 300 tatggttcgg ggagttcttt ttttgactac tggggccagg gaatcctggt caccgtctcc 360 tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420 gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660 cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353 <210> 265 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: 7A11 (full length light chain 1) NT Seq <400> 265 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gtatattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tatcatagtt accctcccac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 266 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73.4.IgG2C219SIgG1.1f Alternative NT Seq <400> 266 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atattgtatg atggaagtaa taaatactat 180 ccagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagggggc 300 agcagctggt accctgattc ttttgatatc tggggccaag gaacaatggt caccgtctct 360 tcagcgtcga ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatcct gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccaagc agcatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ccccgggttg a 1341 <210> 267 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1f <400> 267 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 268 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3 <400> 268 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 269 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY <400> 269 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 270 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-KH <400> 270 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 271 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.5 <400> 271 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 272 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1.1f <400> 272 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 273 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1.1f-KH <400> 273 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 274 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-deltaTHT <400> 274 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 275 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-plusTHT <400> 275 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 276 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-plusGGG <400> 276 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Gly Gly Gly Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 277 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.5G1.1f-KH <400> 277 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 278 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.5G1-AY <400> 278 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 279 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.5G1-KH <400> 279 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 280 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.5-plusTHT <400> 280 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 281 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-G2.3G1-AY <400> 281 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 282 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-G2.3G1-KH <400> 282 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 283 <211> 553 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: CD73 from Figure 27A <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 283 Xaa Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu 20 25 30 His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser 35 40 45 Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu 50 55 60 Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu 65 70 75 80 Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr 85 90 95 Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala 100 105 110 Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile 115 120 125 Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile 130 135 140 Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro 145 150 155 160 Tyr Lys Val Leu Pro Val Gly Asp Glu Val Val Gly Ile Val Gly Tyr 165 170 175 Thr Ser Lys Glu Thr Pro Phe Leu Ser Asn Pro Gly Thr Asn Leu Val 180 185 190 Phe Glu Asp Glu Ile Thr Ala Leu Gln Pro Glu Val Asp Lys Leu Lys 195 200 205 Thr Leu Asn Val Asn Lys Ile Ile Ala Leu Gly His Ser Gly Phe Glu 210 215 220 Met Asp Lys Leu Ile Ala Gln Lys Val Arg Gly Val Asp Val Val Val 225 230 235 240 Gly Gly His Ser Asn Thr Phe Leu Tyr Thr Gly Asn Pro Pro Ser Lys 245 250 255 Glu Val Pro Ala Gly Lys Tyr Pro Phe Ile Val Thr Ser Asp Asp Gly 260 265 270 Arg Lys Val Pro Val Val Gln Ala Tyr Ala Phe Gly Lys Tyr Leu Gly 275 280 285 Tyr Leu Lys Ile Glu Phe Asp Glu Arg Gly Asn Val Ile Ser Ser His 290 295 300 Gly Asn Pro Ile Leu Leu Asn Ser Ser Ile Pro Glu Asp Pro Ser Ile 305 310 315 320 Lys Ala Asp Ile Asn Lys Trp Arg Ile Lys Leu Asp Asn Tyr Ser Thr 325 330 335 Gln Glu Leu Gly Lys Thr Ile Val Tyr Leu Asp Gly Ser Ser Gln Ser 340 345 350 Cys Arg Phe Arg Glu Cys Asn Met Gly Asn Leu Ile Cys Asp Ala Met 355 360 365 Ile Asn Asn Asn Leu Arg His Ala Asp Glu Thr Phe Trp Asn His Val 370 375 380 Ser Met Cys Ile Leu Asn Gly Gly Gly Ile Arg Ser Pro Ile Asp Glu 385 390 395 400 Arg Asn Asn Gly Thr Ile Thr Trp Glu Asn Leu Ala Ala Val Leu Pro 405 410 415 Phe Gly Gly Thr Phe Asp Leu Val Gln Leu Lys Gly Ser Thr Leu Lys 420 425 430 Lys Ala Phe Glu His Ser Val His Arg Tyr Gly Gln Ser Thr Gly Glu 435 440 445 Phe Leu Gln Val Gly Gly Ile His Val Val Tyr Asp Leu Ser Arg Lys 450 455 460 Pro Gly Asp Arg Val Val Lys Leu Asp Val Leu Cys Thr Lys Cys Arg 465 470 475 480 Val Pro Ser Tyr Asp Pro Leu Lys Met Asp Glu Val Tyr Lys Val Ile 485 490 495 Leu Pro Asn Phe Leu Ala Asn Gly Gly Asp Gly Phe Gln Met Ile Lys 500 505 510 Asp Glu Leu Leu Arg His Asp Ser Gly Asp Gln Asp Ile Asn Val Val 515 520 525 Ser Thr Tyr Ile Ser Lys Met Lys Val Ile Tyr Pro Ala Val Glu Gly 530 535 540 Arg Ile Lys His His His His His His 545 550 <210> 284 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> Hinge region amino acid <400> 284 Val Asp Lys Arg Val 1 5 <210> 285 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> Hinge region amino acid <400> 285 Val Asp Lys Thr Val 1 5 <210> 286 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> Hinge region amino acid <400> 286 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 1 5 10 <210> 287 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(12) <223> Hinge region amino acid <400> 287 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr 1 5 10 <210> 288 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> Hinge region amino acid <400> 288 Glu Pro Lys Ser 1 <210> 289 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(7) <223> Hinge region amino acid <400> 289 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 1 5 <210> 290 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> Hinge region amino acid <400> 290 Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 <210> 291 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> Hinge region amino acid <400> 291 Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 <210> 292 <211> 50 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(50) <223> Hinge region amino acid <400> 292 Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys 1 5 10 15 Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro 20 25 30 Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 35 40 45 Cys Pro 50 <210> 293 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(35) <223> Hinge region amino acid <400> 293 Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys 1 5 10 15 Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro 20 25 30 Arg Cys Pro 35 <210> 294 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> Hinge region amino acid <400> 294 Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys 1 5 10 15 Pro Arg Cys Pro 20 <210> 295 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(41) <223> Hinge region amino acid <400> 295 Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys 1 5 10 15 Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp 20 25 30 Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 35 40 <210> 296 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(11) <223> Hinge region amino acid <400> 296 Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 1 5 10 <210> 297 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> Hinge region amino acid <400> 297 Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 <210> 298 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(7) <223> Hinge region amino acid <400> 298 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 1 5 <210> 299 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(6) <223> Hinge region amino acid <400> 299 Ala Pro Pro Val Ala Gly 1 5 <210> 300 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-G1-G1-G1 <400> 300 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 301 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2.5-G1-G1-G1 <400> 301 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 302 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-G2.3-G2-G2 <400> 302 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 303 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-KRGEGSSNLF <400> 303 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 304 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-KRGEGS <400> 304 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 305 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-SNLF <400> 305 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 306 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-ITNDRTPR <400> 306 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 307 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-SNLFPR <400> 307 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 308 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-RKEGSGNSFL <400> 308 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 309 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-RKEGSG <400> 309 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 310 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-NSFL <400> 310 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 311 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2-TIDNTRRP <400> 311 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 312 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-NSFLRP <400> 312 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 313 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-G1-G2-G1-AY <400> 313 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 314 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-G1-G2-G1-KH <400> 314 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 315 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-G2.3-G1-G2-KH <400> 315 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 316 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2.5-G2.3-G1-G2-KH <400> 316 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 317 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-G2.3-G1-G2-AY <400> 317 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 318 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2.5-G2.3-G1-G2-AY <400> 318 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 319 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-G2.3-G1-G1-KH <400> 319 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 320 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-G1-G2-G2-AY <400> 320 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 321 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2.5-G1-G2-G2-AY <400> 321 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 322 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G1-G2-G1-G1-AY <400> 322 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 323 <211> 328 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2-G1-G2-G2-KH <400> 323 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 324 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: G2.5-G1-G2-G2-KH <400> 324 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 325 <211> 323 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-deltaHinge <400> 325 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 100 105 110 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 115 120 125 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 130 135 140 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 145 150 155 160 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 165 170 175 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 180 185 190 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 195 200 205 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 210 215 220 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 225 230 235 240 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 245 250 255 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 260 265 270 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 275 280 285 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 290 295 300 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 305 310 315 320 Pro Gly Lys <210> 326 <211> 322 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2-deltaHinge <400> 326 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 100 105 110 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 115 120 125 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 130 135 140 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 145 150 155 160 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 165 170 175 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 180 185 190 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 195 200 205 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 210 215 220 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 225 230 235 240 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 245 250 255 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 260 265 270 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 275 280 285 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 290 295 300 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 305 310 315 320 Gly Lys <210> 327 <211> 322 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.5-deltaHinge <400> 327 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 100 105 110 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 115 120 125 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 130 135 140 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 145 150 155 160 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 165 170 175 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 180 185 190 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 195 200 205 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 210 215 220 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 225 230 235 240 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 245 250 255 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 260 265 270 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 275 280 285 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 290 295 300 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 305 310 315 320 Gly Lys <210> 328 <211> 328 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG1-deltaG237 <400> 328 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 329 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2-plusG237 <400> 329 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 330 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.4 <400> 330 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 331 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3/4 <400> 331 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 332 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-V13 <400> 332 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 333 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-V14 <400> 333 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 334 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-V15 <400> 334 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 335 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-V16 <400> 335 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 336 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-V17 <400> 336 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 337 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-V18 <400> 337 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 338 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3-V19 <400> 338 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Phe Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 339 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V20 <400> 339 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 340 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V21 <400> 340 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 341 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V22 <400> 341 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 342 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V23 <400> 342 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser His Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 343 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V24 <400> 343 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 344 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V25 <400> 344 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Asp Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 345 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V26 <400> 345 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Asp Leu Leu Gly Asp Asp Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Asp Glu Asp Gly Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Arg Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 346 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V27 <400> 346 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 347 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2.3G1-AY-V28 <400> 347 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Phe 195 200 205 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 348 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 348 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly <210> 349 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 349 Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly <210> 350 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 350 Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly <210> 351 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 351 Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly <210> 352 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 352 Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly <210> 353 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 353 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Xaa <210> 354 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 354 Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Xaa <210> 355 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 355 Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Xaa <210> 356 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 356 Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Xaa <210> 357 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 357 Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Xaa <210> 358 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 358 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gly <210> 359 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 359 Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gly <210> 360 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 360 Glu Arg Lys Cys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 1 5 10 15 Leu Leu Gly Gly 20 <210> 361 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 361 Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gly <210> 362 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 362 Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gly <210> 363 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 363 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly <210> 364 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 364 Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly <210> 365 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 365 Glu Arg Lys Cys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 1 5 10 15 Leu Leu Gly <210> 366 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 366 Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly <210> 367 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 367 Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 1 5 10 15 Leu Gly <210> 368 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 368 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 369 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 369 Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 370 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <400> 370 Glu Arg Lys Cys Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 371 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 371 Glu Arg Lys Xaa Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 372 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Alternative hinge <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 372 Glu Arg Lys Cys Xaa Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 1 5 10 <210> 373 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Portion of hinge <400> 373 Pro Val Ala Gly 1 <210> 374 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Portion of hinge <400> 374 Glu Leu Leu Gly 1 <210> 375 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Portion of hinge <400> 375 Glu Leu Leu Gly Gly 1 5 <210> 376 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Portion of hinge <400> 376 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 1 5 <210> 377 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Portion of hinge <400> 377 Cys Cys Val Glu 1 <210> 378 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: wt IgG2 CH1 domain <400> 378 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val <210> 379 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IgG2 CH1 and hinge <400> 379 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly 115 <210> 380 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Portion of hinge <400> 380 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 1 5

Claims (1)

  1. 인간 분화 클러스터 73 (CD73)과 결합하고; 다음 특성 중 하나 이상을 나타내는, 단리된 인간 항체, 또는 그의 항원 결합성 부분의 용도:
    (a) 10 nM 이하의 KD로 인간 CD73과 결합하는 특성;
    (b) CD73 효소 활성을 억제하는 특성;
    (c) CD73을 항체 매개된 CD73 내재화에 의해 세포, 예를 들어 종양 세포 내로 내재화하는 특성; 및
    (d) 인간 CD73의 아미노산 65-83 및 157-172를 포함하는 입체 형태적 에피토프와 결합하는 특성.
KR1020237028104A 2014-11-21 2015-11-19 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도 KR20230125855A (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462083056P 2014-11-21 2014-11-21
US62/083,056 2014-11-21
KR1020177016541A KR102569813B1 (ko) 2014-11-21 2015-11-19 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도
PCT/US2015/061639 WO2016081748A2 (en) 2014-11-21 2015-11-19 Antibodies against cd73 and uses thereof

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177016541A Division KR102569813B1 (ko) 2014-11-21 2015-11-19 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230125855A true KR20230125855A (ko) 2023-08-29

Family

ID=55022668

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237028104A KR20230125855A (ko) 2014-11-21 2015-11-19 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도
KR1020177016541A KR102569813B1 (ko) 2014-11-21 2015-11-19 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177016541A KR102569813B1 (ko) 2014-11-21 2015-11-19 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도

Country Status (36)

Country Link
US (6) US10100129B2 (ko)
EP (2) EP3725808A1 (ko)
JP (2) JP6805142B2 (ko)
KR (2) KR20230125855A (ko)
CN (2) CN107001474B (ko)
AR (1) AR102698A1 (ko)
AU (2) AU2015349878A1 (ko)
BR (1) BR112017010110A2 (ko)
CA (1) CA2968357A1 (ko)
CL (2) CL2017001296A1 (ko)
CO (1) CO2017005845A2 (ko)
CY (1) CY1123355T1 (ko)
DK (1) DK3221363T3 (ko)
EA (2) EA035766B1 (ko)
ES (1) ES2807182T3 (ko)
HK (1) HK1244817A1 (ko)
HR (1) HRP20201176T1 (ko)
HU (1) HUE050596T2 (ko)
IL (2) IL252353B (ko)
LT (1) LT3221363T (ko)
MA (1) MA40309A1 (ko)
ME (1) ME03806B (ko)
MX (1) MX2017006624A (ko)
MY (1) MY189836A (ko)
NZ (1) NZ731633A (ko)
PE (1) PE20170782A1 (ko)
PH (1) PH12017500918A1 (ko)
PL (1) PL3221363T3 (ko)
PT (1) PT3221363T (ko)
RS (1) RS60631B1 (ko)
SG (2) SG10201913004UA (ko)
SI (1) SI3221363T1 (ko)
TN (1) TN2017000203A1 (ko)
TW (2) TWI711630B (ko)
UY (1) UY36404A (ko)
WO (1) WO2016081748A2 (ko)

Families Citing this family (121)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009095478A1 (en) 2008-01-31 2009-08-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies against human cd39 and use thereof for inhibiting t regulatory cells activity
US10053513B2 (en) 2009-11-30 2018-08-21 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
CA2782218C (en) 2009-11-30 2018-07-31 Janssen Biotech, Inc. Antibody fc mutants with ablated effector functions
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
JP6755866B2 (ja) 2014-11-10 2020-09-16 メディミューン リミテッド Ｃｄ７３特異的結合分子及びその使用
LT3221363T (lt) 2014-11-21 2020-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Antikūnai prieš cd73 ir jų panaudojimas
PT3221346T (pt) 2014-11-21 2020-10-23 Bristol Myers Squibb Co Anticorpos compreendendo regiões constantes de cadeia pesada modificadas
EP3362475B1 (en) 2015-10-12 2023-08-30 Innate Pharma Cd73 blocking agents
CN109069664B (zh) * 2016-01-27 2022-05-13 苏特罗生物制药公司 抗cd74抗体偶联物，包含抗cd74抗体偶联物的组合物以及抗cd74抗体偶联物的使用方法
CA3016187A1 (en) * 2016-03-04 2017-09-08 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy with anti-cd73 antibodies
WO2017211321A1 (zh) * 2016-06-08 2017-12-14 上海交通大学医学院 增强激动型抗体活性的抗体重链恒定区序列
SG11201810509PA (en) 2016-06-20 2018-12-28 Kymab Ltd Anti-pd-l1 antibodies
EP3484518A4 (en) 2016-07-07 2020-04-22 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University ANTIBODY ADJUVANT CONJUGATES
WO2018013611A1 (en) * 2016-07-11 2018-01-18 Corvus Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd73 antibodies
CN107698684B (zh) * 2016-08-03 2021-09-28 广东东阳光药业有限公司 包含突变的免疫球蛋白Fc部分的GLP-1融合蛋白
WO2018039332A1 (en) * 2016-08-23 2018-03-01 The Johns Hopkins University Immunoswitch nanoparticles for reprogrammed t cell responses
EP3510046A4 (en) 2016-09-07 2020-05-06 The Regents of the University of California ANTIBODIES AGAINST OXIDATION-SPECIFIC EPITOPES
TW201825519A (zh) * 2016-10-18 2018-07-16 美商美國禮來大藥廠 TGFβ受體II抗體
MX2019006448A (es) 2016-12-01 2020-02-05 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-pd-l1 radiomarcados para imagenes de inmuno-pet.
CA3046790A1 (en) 2016-12-13 2018-06-21 Bolt Biotherapeutics, Inc. Antibody adjuvant conjugates
CN110072891A (zh) * 2016-12-13 2019-07-30 安斯泰来制药株式会社 抗人cd73抗体
KR20200108915A (ko) * 2017-01-24 2020-09-21 아이-맵 바이오파마 유에스 리미티드 항-cd73 항체 및 이것의 사용
EP3596124A1 (en) 2017-03-16 2020-01-22 Innate Pharma Compositions and methods for treating cancer
CN113603780B (zh) * 2017-03-28 2022-07-01 礼进生物医药科技（上海）有限公司 用于增强肿瘤微环境中免疫应答的治疗剂和方法
US20210107989A1 (en) * 2017-04-04 2021-04-15 Corvus Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cd73hi tumors
US20210284750A1 (en) 2017-04-14 2021-09-16 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugate Synthesis Method
US20200147210A1 (en) * 2017-05-11 2020-05-14 The General Hospital Corporation Methods and compositions of use of cd8+ tumor infiltrating lymphocyte subtypes and gene signatures thereof
CN110753703B (zh) 2017-05-23 2024-04-09 德国亥姆霍兹慕尼黑中心健康与环境研究中心（有限公司） 新的cd73抗体、其制备和用途
KR20200011937A (ko) 2017-05-25 2020-02-04 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 길항작용 cd40 모노클로날 항체 및 그의 용도
WO2018237173A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag ANTIBODY MOLECULES DIRECTED AGAINST CD73 AND CORRESPONDING USES
CN110785187B (zh) * 2017-06-22 2024-04-05 诺华股份有限公司 针对cd73的抗体分子及其用途
EP3661966A4 (en) 2017-07-31 2021-07-21 Tizona Therapeutics ANTI-CD39 ANTIBODIES, COMPOSITIONS INCLUDING ANTI-CD39 ANTIBODIES AND METHODS OF USE OF ANTI-CD39 ANTIBODIES
AU2018346447A1 (en) 2017-10-06 2020-03-19 Innate Pharma Restoration of T cell activity via the CD39/CD73 axis
CA3076872A1 (en) * 2017-11-03 2019-05-09 Novartis Ag Anti-cd40 antibodies for use in treatment of sjogren's syndrome
MX2020005651A (es) 2017-11-30 2020-10-28 Novartis Ag Receptor de antigeno quimerico dirigido a bcma y usos del mismo.
CN112384515A (zh) 2018-02-27 2021-02-19 因赛特公司 作为a2a/a2b抑制剂的咪唑并嘧啶和三唑并嘧啶
CN110240654A (zh) * 2018-03-07 2019-09-17 复旦大学 结合cd73的抗体-药物偶联物
WO2019170131A1 (zh) * 2018-03-07 2019-09-12 复旦大学 靶向cd73的抗体及抗体-药物偶联物、其制备方法和用途
EA202091710A1 (ru) 2018-03-09 2021-02-16 Агенус Инк. Антитела против cd73 и способы их применения
US11299550B2 (en) * 2018-03-09 2022-04-12 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-CD73 antibodies and uses thereof
US10752691B2 (en) * 2018-03-13 2020-08-25 Tusk Therapeutics Ltd. Anti-CD25 antibody agents
EP3774903A1 (en) * 2018-04-04 2021-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Anti-cd27 antibodies and uses thereof
JP2021521182A (ja) * 2018-04-12 2021-08-26 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｄ７３アンタゴニストとｐｄ−１／ｐｄ−ｌ１軸アンタゴニストの組み合わせ治療
CA3100544A1 (en) 2018-05-17 2019-11-21 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates
MX2020012376A (es) 2018-05-18 2021-03-09 Incyte Corp Derivados de pirimidina fusionados como inhibidores de los receptores de adenosina a2a/a2b.
EP3569618A1 (en) * 2018-05-19 2019-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Antagonizing cd73 antibody
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
US20210214459A1 (en) * 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
JP7398396B2 (ja) 2018-06-01 2023-12-14 ノバルティス アーゲー Ｂｃｍａに対する結合分子及びその使用
CA3099893A1 (en) 2018-06-18 2019-12-26 Innate Pharma Compositions and methods for treating cancer
US11034771B2 (en) 2018-07-25 2021-06-15 I-Mab Biopharma Us Limited Anti-CD73 anti-PD-L1 bispecific antibodies
JP2022513306A (ja) 2018-08-29 2022-02-07 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド Ｅｇｆｒを標的とする免疫結合体
CN113039201A (zh) * 2018-09-28 2021-06-25 礼进生物医药科技（上海）有限公司 具有经过工程化的Fc结构域的抗CD137结合分子及其治疗用途
CA3118775A1 (en) * 2018-11-12 2020-05-22 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Anti-cd73 antibody, antigen-binding fragment thereof and application thereof
AR117091A1 (es) 2018-11-19 2021-07-07 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos monoclonales antagonistas contra cd40 y sus usos
CN111434688A (zh) * 2019-01-11 2020-07-21 上海开拓者生物医药有限公司 Cd73抗体及其制备方法和应用
CN111499747B (zh) * 2019-01-11 2022-03-18 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种抗cd73单克隆抗体及其应用
CN109734813B (zh) * 2019-01-28 2022-06-17 广东昭泰体内生物医药科技有限公司 一种嵌合抗原受体及其应用
TWI829857B (zh) 2019-01-29 2024-01-21 美商英塞特公司 作為a2a / a2b抑制劑之吡唑并吡啶及三唑并吡啶
US20220226491A1 (en) 2019-03-15 2022-07-21 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates Targeting PD-L1
KR20220004634A (ko) 2019-03-15 2022-01-11 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드 Her2를 표적으로 하는 면역접합체
US20220226492A1 (en) 2019-03-15 2022-07-21 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates Targeting HER2
WO2020190760A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting cea
WO2020244606A1 (zh) * 2019-06-06 2020-12-10 北京加科思新药研发有限公司 对cd73具有特异性的结合分子及其用途
EP3983082A1 (en) 2019-06-13 2022-04-20 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aminobenzazepine compounds, immunoconjugates, and uses thereof
CN112111008A (zh) * 2019-06-19 2020-12-22 海正生物制药有限公司 抗cd73抗体及其应用
CN112300279A (zh) * 2019-07-26 2021-02-02 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物
CN113454121B (zh) * 2019-08-21 2022-03-08 和铂医药(上海)有限责任公司 抗cd73抗体及其应用
CN112714768A (zh) * 2019-08-27 2021-04-27 科望(苏州)生物医药科技有限公司 新型抗cd39抗体
CA3148694A1 (en) 2019-09-03 2021-03-11 Romas Kudirka Aminoquinoline compounds, immunoconjugates, and uses thereof
EP4025255A1 (en) 2019-09-04 2022-07-13 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugate synthesis method
CN112442132A (zh) * 2019-09-05 2021-03-05 复旦大学 靶向肿瘤的重组双功能融合蛋白及其应用
EP4025605A1 (en) 2019-09-06 2022-07-13 Symphogen A/S Anti-cd73 antibodies
WO2021053559A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 Novartis Ag Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
KR20220077131A (ko) 2019-09-30 2022-06-08 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드 아마이드-연결된 아미노벤즈아제핀 면역접합체 및 이의 용도
WO2021081133A1 (en) * 2019-10-21 2021-04-29 Purdue Research Foundation Engineered natural killer cells and methods for using the same in immunotherapy and autophagy inhibition techniques
CA3155077A1 (en) 2019-10-25 2021-04-29 Romas Kudirka Thienoazepine immunoconjugates, and uses thereof
TW202128768A (zh) * 2020-01-03 2021-08-01 美商英塞特公司 抗ｃｄ７３抗體及其用途
IL294437A (en) 2020-01-03 2022-09-01 Incyte Corp Combination therapy cd73 and a2a/a2b adenosine receptor inhibitors
US20230069055A1 (en) 2020-01-21 2023-03-02 Bolt Biotherapeutics, Inc Anti-pd-l1 antibodies
CA3165337A1 (en) 2020-01-21 2021-07-29 Michael N. ALONSO Anti-pd-l1 antibodies
AU2021226570A1 (en) 2020-02-25 2022-09-29 Bolt Biotherapeutics, Inc. Cancer treatment methods
CN115362176A (zh) * 2020-04-09 2022-11-18 艾普丽尔生物有限公司 用于抑制cd73免疫检查点的单克隆抗体及其抗原结合片段以及其用途
KR20230004725A (ko) * 2020-04-22 2023-01-06 아케소 바이오파마, 인크. 항-cd73 항체 및 이의 용도
IL297432A (en) * 2020-04-22 2022-12-01 Akeso Biopharma Inc Anti-cd73-anti-pd-1 bispecific antibody used
CN115461122A (zh) 2020-05-01 2022-12-09 博尔特生物治疗药物有限公司 抗dectin-2抗体
CA3176626A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 David Dornan Elastase-substrate, peptide linker immunoconjugates, and uses thereof
JP2023525827A (ja) * 2020-05-12 2023-06-19 普米斯生物技術（珠海）有限公司 抗ｃｄ７３抗体およびその使用
WO2021247188A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Bristol-Myers Squibb Company Cd73 antagonist potency assay and methods of use thereof
EP4169948A1 (en) 2020-06-22 2023-04-26 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-cd73 antibody and use thereof
US20230321250A1 (en) * 2020-07-08 2023-10-12 Octagon Therapeutics, Inc. Cancer cell modulators
US20230263903A1 (en) 2020-08-13 2023-08-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Pyrazoloazepine immunoconjugates, and uses thereof
CN114075289A (zh) * 2020-08-17 2022-02-22 中山康方生物医药有限公司 抗cd73的抗体及其用途
CN111944850B (zh) * 2020-08-28 2023-03-31 澳门大学 表达抗cd22嵌合抗原受体和pd-l1阻断蛋白的细胞的制备方法、表达载体及应用
CN112251463B (zh) * 2020-09-30 2023-06-06 广东药康生物科技有限公司 一种cd73人源化小鼠模型的构建方法
CA3199095A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
CN114456268B (zh) * 2020-11-09 2023-08-18 江苏中新医药有限公司 抗胞外-5’-核苷酸酶的抗体序列
JP2023550832A (ja) * 2020-11-27 2023-12-05 エルピサイエンス（スーチョウ）・バイオファーマ，リミテッド ＣＤ３９およびＴＧＦβを標的とする新規のコンジュゲート分子
TW202222840A (zh) * 2020-12-11 2022-06-16 大陸商上海華奧泰生物藥業股份有限公司 Ｃｄ７３的抗原結合蛋白及其應用
WO2022125915A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-her2 immunoconjugates, and uses thereof
US20220195066A1 (en) 2020-12-11 2022-06-23 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-cea immunoconjugates, and uses thereof
US20240091370A1 (en) 2020-12-11 2024-03-21 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-her2 immunoconjugates, and uses thereof
JP2024501453A (ja) 2020-12-11 2024-01-12 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド 抗ｃｅａイムノコンジュゲート、及びそれらの使用
CN116723866A (zh) 2020-12-11 2023-09-08 博尔特生物治疗药物有限公司 抗pd-l1免疫缀合物和其用途
US11883432B2 (en) 2020-12-18 2024-01-30 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity
KR20230157940A (ko) 2020-12-29 2023-11-17 인사이트 코포레이션 A2a/a2b 저해제, pd-1/pd-l1 저해제 및 항-cd73 항체를포함하는 병용 요법
AU2022218137A1 (en) 2021-02-03 2023-08-24 Mozart Therapeutics, Inc. Binding agents and methods of using the same
WO2022178416A1 (en) * 2021-02-22 2022-08-25 Northwestern University Anti-cd73 monoclonal antibodies
EP4299589A1 (en) * 2021-02-24 2024-01-03 Novoprotein Scientififc Inc. Anti-human cd73 antibody and use thereof
TW202304520A (zh) 2021-03-26 2023-02-01 美商博特生物治療公司 ２－胺基－４－羧醯胺－苯并氮呯免疫結合物及其用途
IL306114A (en) 2021-03-26 2023-11-01 Bolt Biotherapeutics Inc 2-amino-4-carboxamide-benzazepine immunoconjugates and uses thereof
WO2022235569A1 (en) * 2021-05-05 2022-11-10 Corvus Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd73 compounds to treat oncovirus-positive cancers
KR20240025638A (ko) 2021-07-01 2024-02-27 에드워즈 라이프사이언시스 코포레이션 심장 판막 보수 장치 및 이를 위한 전달 장치
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
WO2023076599A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bolt Biotherapeutics, Inc. Tlr agonist immunoconjugates with cysteine-mutant antibodies, and uses thereof
WO2023143227A1 (zh) * 2022-01-25 2023-08-03 石药集团巨石生物制药有限公司 抗cd73抗体及应用
WO2023174213A1 (zh) * 2022-03-14 2023-09-21 上海华奥泰生物药业股份有限公司 抗体药物偶联物及其应用
WO2023201267A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
CN116769034B (zh) * 2022-08-12 2024-01-02 南京蓬勃生物科技有限公司 抗cd73抗体或其抗原片段及其应用
WO2024040195A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
CN116813786A (zh) * 2023-08-03 2023-09-29 贝达药业股份有限公司 抗cd73抗体及其应用

Family Cites Families (292)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
EP0401384B1 (en) 1988-12-22 1996-03-13 Kirin-Amgen, Inc. Chemically modified granulocyte colony stimulating factor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
EP1690935A3 (en) 1990-01-12 2008-07-30 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
CA2061703C (en) 1992-02-20 2002-07-02 Rudolf E. Falk Formulations containing hyaluronic acid
CA2061566C (en) 1992-02-20 2002-07-09 Rudolf E. Falk Treatment of disease employing hyaluronic acid and nsaids
ATE275198T1 (de) 1991-12-02 2004-09-15 Medical Res Council Herstellung von antikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken.
JPH07503132A (ja) 1991-12-17 1995-04-06 ジェンファーム　インターナショナル，インコーポレイティド 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
CA2130762C (en) 1994-08-24 1999-07-06 Eva Anne Turley Treatment of disease and conditions associated with macrophage infiltration
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
EP0754225A4 (en) 1993-04-26 2001-01-31 Genpharm Int HETEROLOGIC ANTIBODY-PRODUCING TRANSGENIC NON-HUMAN ANIMALS
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
JPH08507549A (ja) 1993-12-27 1996-08-13 バクスター、インターナショナル、インコーポレイテッド 水溶性の非免疫原性ポリアミド架橋剤
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6548530B1 (en) 1995-10-03 2003-04-15 The Scripps Research Institute CBI analogs of CC-1065 and the duocarmycins
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
US7247302B1 (en) 1996-08-02 2007-07-24 Bristol-Myers Squibb Company Method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO1998042752A1 (en) 1997-03-21 1998-10-01 Brigham And Women's Hospital Inc. Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
DE69833755T2 (de) 1997-05-21 2006-12-28 Biovation Ltd. Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
EP1746107B1 (en) 1998-04-02 2014-12-17 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
EP2261229A3 (en) 1998-04-20 2011-03-23 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
ATE458008T1 (de) 1998-12-23 2010-03-15 Pfizer Humane monoklonale antikörper gegen ctla-4
JP2003512019A (ja) 1999-01-15 2003-04-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 変化したエフェクター機能を有するポリペプチド変異体
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ES2420835T3 (es) 1999-04-09 2013-08-27 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Procedimiento para controlar la actividad de las moléculas inmunofuncionales
US20040031072A1 (en) 1999-05-06 2004-02-12 La Rosa Thomas J. Soy nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription plants and uses thereof for plant improvement
WO2000067796A1 (en) 1999-05-07 2000-11-16 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US20040146516A1 (en) 1999-06-17 2004-07-29 Utah Ventures Ii L.P. Lumen-exposed molecules and methods for targeted delivery
JP4118462B2 (ja) 1999-07-19 2008-07-16 株式会社リコー 携帯電子機器
EP1074563A1 (en) 1999-08-02 2001-02-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimeric polypeptides enhancing dimer formation through electrostatic interactions and disulfide bond, method for production and uses thereof
AU784062B2 (en) 1999-08-23 2006-01-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Novel B7-4 molecules and uses therefor
KR20020047132A (ko) 1999-08-24 2002-06-21 메다렉스, 인코포레이티드 인간 씨티엘에이-4 항체 및 그의 용도
CA2384713A1 (en) 1999-09-29 2001-04-05 Human Genome Sciences, Inc. Colon and colon cancer associated polynucleotides and polypeptides
EP3225632B1 (en) 1999-11-30 2020-05-06 Mayo Foundation for Medical Education and Research Antibodies binding to b7-h1, a novel immunoregulatory molecule
DK1246846T3 (da) 1999-12-23 2008-12-08 Zymogenetics Inc Oplöselig interleukin-20-receptor
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
JP2003535037A (ja) 1999-12-23 2003-11-25 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド 炎症を治療する方法
US20070042392A1 (en) 2000-02-03 2007-02-22 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
CA2399832C (en) 2000-02-11 2011-09-20 Stephen D. Gillies Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
CN1441677A (zh) 2000-03-31 2003-09-10 Idec药物公司 抗细胞因子抗体或拮抗剂与抗－cd20在b细胞淋巴瘤治疗中的联合应用
HUP0002003A3 (en) 2000-05-24 2003-01-28 Pronuk Biotechnologia Kft Process and reagent-kit for determining of 5'-nucleotidase activity
NO20002685A (no) 2000-05-25 2001-10-15 Viggo Wahl Pedersen Spylemekanisme for vannklosett
AU2001273224A1 (en) 2000-07-07 2002-01-21 University Of North Carolina At Chapel Hill Isolated polynucleotides encoding human 5'-nucleotide cn-ia and cn-ib, isolated proteins encoded by the same, and methods utilizing the same
CA2416219C (en) 2000-07-11 2016-10-11 Research Corporation Technologies, Inc. Artificial antibody polypeptides
CN101940189A (zh) 2000-11-30 2011-01-12 米德列斯公司 用于生产人类抗体的转基因转染色体啮齿动物
JP4336498B2 (ja) 2000-12-12 2009-09-30 メディミューン，エルエルシー 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途
DK1366067T3 (da) 2001-03-07 2012-10-22 Merck Patent Gmbh Ekspressionsteknologi for proteiner indeholdende en hybrid isotype-antistof-enhed
EP1421203A4 (en) 2001-05-17 2005-06-01 Diversa Corp NEW ANTIGEN-BINDING MOLECULES FOR THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, PROPHYLACTIC, ENZYMATIC, INDUSTRIAL AND AGRICULTURAL APPLICATIONS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND SCREENING THEREOF
CN1463270A (zh) 2001-05-31 2003-12-24 梅达莱克斯公司 细胞毒素、其有用的前体药物、连接基团和稳定剂
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
US6545530B1 (en) 2001-12-05 2003-04-08 Linear Technology Corporation Circuit and method for reducing quiescent current in a voltage reference circuit
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20040110226A1 (en) 2002-03-01 2004-06-10 Xencor Antibody optimization
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
WO2004016750A2 (en) 2002-08-14 2004-02-26 Macrogenics, Inc. FcϜRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
DK2345671T3 (en) 2002-09-27 2016-02-15 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
DK1562972T3 (da) 2002-10-15 2010-12-06 Facet Biotech Corp Modifikation af FcRn-bindingsaffiniteter eller serumhalveringstider for antistoffer ved mutagenese
AU2004204494B2 (en) 2003-01-09 2011-09-29 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
WO2004079013A1 (en) 2003-03-03 2004-09-16 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Ecto-5’-nucleotidase (cd73) used in the diagnosis and the treatment of pancreatic cancer
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
KR101441358B1 (ko) 2003-05-14 2014-09-24 이뮤노젠 아이엔씨 약물 콘쥬게이트 조성물
CN1829533A (zh) 2003-05-30 2006-09-06 阿莱克申药物公司 包含改造恒定区的抗体和融合蛋白
AU2004257142A1 (en) 2003-05-30 2005-01-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Antibodies and fusion proteins that include engineered constant regions
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US7473531B1 (en) 2003-08-08 2009-01-06 Colora Corporation Pancreatic cancer targets and uses thereof
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
US20060134105A1 (en) 2004-10-21 2006-06-22 Xencor, Inc. IgG immunoglobulin variants with optimized effector function
US8399618B2 (en) 2004-10-21 2013-03-19 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions, and substitutions
US20150071948A1 (en) 2003-09-26 2015-03-12 Gregory Alan Lazar Novel immunoglobulin variants
US8883147B2 (en) 2004-10-21 2014-11-11 Xencor, Inc. Immunoglobulins insertions, deletions, and substitutions
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
EA009746B1 (ru) 2004-01-12 2008-04-28 Эпплайд Молекьюлар Эволюшн, Инк. ВАРИАНТЫ УЧАСТКА Fc
US7329353B2 (en) 2004-01-23 2008-02-12 Amgen Inc. LC/MS method of analyzing high molecular weight proteins
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
US7778814B2 (en) 2004-03-30 2010-08-17 Siemens Aktiengesellschaft Method and device for simulating an automation system
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
EP1747021B1 (en) 2004-05-19 2015-09-09 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Self-immolative linkers and drug conjugates
NZ552480A (en) 2004-07-30 2010-01-29 Rinat Neuroscience Corp Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods of using same
EA012464B1 (ru) 2004-08-04 2009-10-30 Эпплайд Молекьюлар Эволюшн, Инк. Антитело против cd20 и его применение
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
SG156672A1 (en) 2004-10-22 2009-11-26 Amgen Inc Methods for refolding of recombinant antibodies
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
EA010654B1 (ru) 2004-11-23 2008-10-30 Пи Ай Пи Ко., Лтд. Вмонтированная в стену распределительная коробка водоснабжения
WO2006075668A1 (ja) 2005-01-12 2006-07-20 Kirin Beer Kabushiki Kaisha 安定化されたヒトIgG2およびIgG3抗体
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
DK2343320T3 (da) 2005-03-25 2018-01-29 Gitr Inc Anti-gitr-antistoffer og anvendelser deraf
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
DK2161336T4 (en) 2005-05-09 2017-04-24 Ono Pharmaceutical Co Human monoclonal antibodies for programmed death 1 (PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapies
BRPI0608604B8 (pt) 2005-05-10 2021-05-25 Incyte Corp moduladores de 2,3-dioxigenase de indolamina e composição farmacêutica
EP1896503B1 (en) 2005-05-31 2014-10-29 Board of Regents, The University of Texas System IgG1 ANTIBODIES WITH MUTATED Fc PORTION FOR INCREASED BINDING TO FcRn RECEPTOR AND USES TEHEREOF
EP1907424B1 (en) 2005-07-01 2015-07-29 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1)
ES2416136T3 (es) 2005-09-26 2013-07-30 Medarex, Inc. Conjugados de anticuerpo-fármaco y su uso
WO2007038868A2 (en) 2005-10-03 2007-04-12 The University Of British Columbia Novel enediyne compound and uses thereof
DK1940789T3 (da) 2005-10-26 2012-03-19 Medarex Inc Fremgangsmåder og forbindelser til fremstilling af CC-1065-analoger
US20080206246A1 (en) 2006-04-05 2008-08-28 Ravetch Jeffrey V Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
WO2007059404A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
CA2634198C (en) 2005-12-20 2014-06-03 Incyte Corporation N-hydroxyamidinoheterocycles as modulators of indoleamine 2,3-dioxygenase
AR061181A1 (es) 2006-05-25 2008-08-13 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de aziridinil-epotilona
PE20080102A1 (es) 2006-05-25 2008-02-11 Bristol Myers Squibb Co Conjugados de analogos de aziridinil-epotilona y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos
DE102006027624A1 (de) 2006-06-13 2007-12-20 Elexxion Gmbh Handstück für insbesondere medizinische Laseranwendungen
KR101351208B1 (ko) 2006-06-21 2014-01-14 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 Ｆｚｄ10에 대한 종양-표적화 모노클로날 항체 및 이의 용도
US20150030534A1 (en) 2013-07-26 2015-01-29 Rutgers, The State University Of New Jersey Antibody cocktails for breast cancer radioimmunotherapy
EP2078732B1 (en) 2006-07-10 2015-09-16 Fujita Health University Method of identifying a candidate diagnostic or therapeutic antibody using flow cytometry
CL2007002650A1 (es) 2006-09-19 2008-02-08 Incyte Corp Compuestos derivados de heterociclo n-hidroxiamino; composicion farmaceutica, util para tratar cancer, infecciones virales y desordenes neurodegenerativos entre otras.
EP2064207B1 (en) 2006-09-19 2013-11-06 Incyte Corporation N-hydroxyamidinoheterocycles as modulators of indoleamine 2,3-dioxygenase
US8455622B2 (en) 2006-12-01 2013-06-04 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
US8652466B2 (en) 2006-12-08 2014-02-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of disease using immunoglobulins having Fc regions with altered affinities for FcγRactivating and FcγRinhibiting
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
CL2008000510A1 (es) 2007-02-21 2008-08-22 Medarex Inc Compuestos conjugados farmaco-ligandos, que se unen a citotoxinas potentes; composicion farmaceutica; y uso para retardar o detener el crecimiento de un tumor en un mamifero.
JP2008278814A (ja) 2007-05-11 2008-11-20 Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk アゴニスティック抗ヒトｇｉｔｒ抗体による免疫制御の解除とその応用
JP5577243B2 (ja) 2007-05-30 2014-08-20 ポステク アカデミー−インダストリー ファウンデイション 免疫グロブリン融合タンパク質
DK2167128T3 (da) 2007-07-17 2012-12-03 Merck Patent Gmbh Fremstillede anti-alfa-v-integrin hybrid-antistoffer
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
DE102007036200A1 (de) 2007-08-02 2009-02-05 Knorr-Bremse Systeme für Nutzfahrzeuge GmbH Induktiver Weg- oder Drehwinkelsensor mit zwischen zwei Spulen angeordnetem Abschirmblech
CA3128656A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
AU2008298904B2 (en) 2007-09-14 2014-10-16 Amgen Inc. Homogeneous antibody populations
RU2526512C2 (ru) 2007-09-26 2014-08-20 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Модифицированная константная область антитела
RU2505603C2 (ru) * 2007-09-26 2014-01-27 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитело против рецептора il-6
KR20100085067A (ko) * 2007-09-28 2010-07-28 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 혈장 중 반응속도가 개선된 항-글리피칸-3 항체
JP5535074B2 (ja) 2007-10-01 2014-07-02 ブリストル−マイヤーズ スクウィブ カンパニー メソテリンに結合するヒト抗体およびその使用
JP5314033B2 (ja) 2007-10-22 2013-10-16 メルク セローノ ソシエテ アノニム 突然変異ＩｇＧＦｃフラグメントと融合した単一ＩＦＮ−ベータ
FI20070795A0 (fi) 2007-10-24 2007-10-24 Faron Pharmaceuticals Oy Uusi biomarkkeri sairauksien kehittämisen tarkkailuun ja terapioiden tehon arviointiin
US8975081B2 (en) 2007-10-24 2015-03-10 Faron Pharmaceuticals Oy Biomarker for monitoring development of diseases and assessing the efficacy of therapies
CN101918027A (zh) 2007-11-02 2010-12-15 森托科尔奥索生物科技公司 半合成GLP-1肽-Fc融合构造、方法及其用途
EP2227233B1 (en) 2007-11-30 2013-02-13 Newlink Genetics Ido inhibitors
CL2008003527A1 (es) 2007-11-30 2009-10-09 Medarex Inc Conjugado de anticuerpo o porcion de union de antigeno del mismo, que se une a la proteina tirosina quinasa 7 (ptk-7/cck4); composicion que lo comprende; acido nulceico cidificante del anticuerpo; vector y celula huesped; uso del conjugado para tratar o prevenir una enfermedad de celulas tumorales que expresan ptk7
US20110085970A1 (en) 2007-11-30 2011-04-14 Terrett Jonathan A Anti-b7h4 monoclonal antibody-drug conjugate and methods of use
EP2229410A4 (en) 2007-12-05 2012-07-04 Massachusetts Inst Technology AGLYCOSYLATED IMMUNOGLOBULIN MUTANTS
EP3095862B9 (en) 2007-12-05 2021-04-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-nr10 antibody and use thereof
EP4269443A3 (en) 2007-12-26 2023-12-27 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to fcrn
SG10201408158SA (en) 2008-01-03 2015-03-30 Univ Aix Marseille Composition and methods used during anti-hiv treatment
KR101666229B1 (ko) 2008-02-08 2016-10-14 메디뮨 엘엘씨 Ｆｃ 리간드 친화성이 감소된 항-ＩＦＮＡＲ１ 항체
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
US8217140B2 (en) 2008-04-17 2012-07-10 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum proteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same
CN102076865B (zh) 2008-05-02 2016-03-16 西雅图基因公司 用于制造核心岩藻糖基化降低的抗体和抗体衍生物的方法和组合物
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
JP2012511033A (ja) 2008-12-08 2012-05-17 テゴファーム コーポレーション 多価化合物の可逆阻害用マスキングリガンド
PL2376535T3 (pl) 2008-12-09 2017-09-29 F.Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała ANTY-PD-L1 i ich zastosowanie do nasilania działania limfocytów T
MX2011008094A (es) 2009-02-03 2012-02-13 Amunix Operating Inc Polipeptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos.
TWI646193B (zh) 2009-03-19 2019-01-01 中外製藥股份有限公司 抗體恆定區域改變體
WO2010107110A1 (ja) 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
US20110007023A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 Sony Ericsson Mobile Communications Ab Display device, touch screen device comprising the display device, mobile device and method for sensing a force on a display device
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
KR101790802B1 (ko) 2009-09-03 2017-10-27 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-ｇｉｔｒ 항체
US10150808B2 (en) 2009-09-24 2018-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
ES2601226T3 (es) 2009-10-28 2017-02-14 Newlink Genetics Corporation Derivados de imidazol como inhibidores de IDO
JO3437B1 (ar) 2009-10-30 2019-10-20 Esai R & D Man Co Ltd أجسام مضادة محسنة مضادة للفراكتالكين البشري واستخداماتها
SI3279215T1 (sl) 2009-11-24 2020-07-31 Medimmune Limited Usmerjena vezavna sredstva proti B7-H1
CA2782218C (en) 2009-11-30 2018-07-31 Janssen Biotech, Inc. Antibody fc mutants with ablated effector functions
HUE044179T2 (hu) 2009-12-10 2019-10-28 Hoffmann La Roche Elsõsorban humán CSF1R extracelluláris domén 4-et megkötõ antitestek és ezek alkalmazása
DK2509409T3 (en) 2009-12-10 2016-11-14 Regeneron Pharma MICE, WHICH PRODUCES HEAVY CHAIN ANTIBODIES
ME02288B (me) 2010-02-08 2016-02-20 Regeneron Pharma Miš sa zajedničkim lakim lancem
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
PL3053932T3 (pl) 2010-02-19 2021-03-08 Xencor, Inc. Nowe immunoadhezyny CTLA4-IG
JP5889181B2 (ja) 2010-03-04 2016-03-22 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
ES2895480T3 (es) 2010-03-04 2022-02-21 Macrogenics Inc Anticuerpos reactivos con B7-H3, fragmentos inmunológicamente activos de los mismos y usos de los mismos
CA2789076C (en) 2010-03-05 2017-11-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against human colony stimulating factor-1 receptor and uses thereof
BR112012022046A2 (pt) 2010-03-05 2017-02-14 F Hoffamann-La Roche Ag ''anticorpo,composição farmacêutica,ácido nucleico ,vetores de expressão,célula hospedeira e método para a produção de um anticorpo recombinante''.
EP3208281A1 (en) 2010-03-29 2017-08-23 Zymeworks, Inc. Antibodies with enhanced or suppressed effector function
EA022983B1 (ru) 2010-04-13 2016-04-29 Бристол-Майерс Сквибб Компани Белки на основе структурного домена фибронектина, связывающие pcsk9
CN107019804A (zh) 2010-04-15 2017-08-08 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
EP2561088A1 (en) 2010-04-22 2013-02-27 Institut Gustave Roussy Compounds and uses thereof to induce an immunogenic cancer cell death in a subject
WO2011131246A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Institut Gustave Roussy Compounds and uses thereof to induce an immunogenic cancer cell death in a subject
US8865653B2 (en) 2010-04-22 2014-10-21 Institut Gustave Roussy Method of treatment for immunogenic treatment resistant cancer
US8828944B2 (en) 2010-04-22 2014-09-09 Institut Gustave Roussy Compounds and uses thereof to induce an immunogenic cancer cell death in a subject
WO2012007783A1 (en) 2010-07-13 2012-01-19 Institut Gustave Roussy Kits and methods for detecting the ability to induce an immunogenic cancer cell death in a subject
TW201138808A (en) 2010-05-03 2011-11-16 Bristol Myers Squibb Co Serum albumin binding molecules
WO2011140249A2 (en) 2010-05-04 2011-11-10 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies that bind csf1r
RS55037B1 (sr) 2010-06-22 2016-12-30 Regeneron Pharma Hibridni laki lanac imunoglobulina koji ispoljavaju miševi
US8907053B2 (en) 2010-06-25 2014-12-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunosuppression modulating compounds
WO2012012736A2 (en) 2010-07-23 2012-01-26 The Ohio State University Method of treating a viral infection dysfunction by disrupting an adenosine receptor pathway
JP5953303B2 (ja) 2010-07-29 2016-07-20 ゼンコア インコーポレイテッド 改変された等電点を有する抗体
CN107903321A (zh) 2010-07-30 2018-04-13 诺华有限公司 纤连蛋白摇篮分子和其库
WO2012031320A1 (en) 2010-09-06 2012-03-15 Peter Maccallum Cancer Institute Cancer diagnostic
MY162737A (en) 2010-09-09 2017-07-14 Pfizer 4-1bb binding molecules
PL2634194T3 (pl) 2010-10-29 2018-12-31 Perseus Proteomics Inc Przeciwciało przeciwko cdh3 o dużej zdolności do internalizacji
WO2012087928A2 (en) 2010-12-20 2012-06-28 The Rockefeller University Modulating agonistic tnfr antibodies
WO2012104344A1 (en) * 2011-02-01 2012-08-09 Genmab A/S Human antibodies and antibody-drug conjugates against cd74
SG192945A1 (en) 2011-02-25 2013-09-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fcgriib-specific fc antibody
US9469676B2 (en) 2011-04-13 2016-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Fc fusion proteins comprising novel linkers or arrangements
NO2694640T3 (ko) 2011-04-15 2018-03-17
KR101970025B1 (ko) 2011-04-20 2019-04-17 메디뮨 엘엘씨 Ｂ7-ｈ1 및 ｐｄ-1과 결합하는 항체 및 다른 분자들
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
CN103987718A (zh) 2011-09-20 2014-08-13 斯皮罗根有限公司 作为非对称二聚体pbd化合物用于内含在靶向结合物中的吡咯并苯并二氮杂卓
US20130149300A1 (en) 2011-09-27 2013-06-13 Icon Genetics Gmbh MONOCLONAL ANTIBODIES WITH ALTERED AFFINITIES FOR HUMAN FCyRI, FCyRIIIa, AND C1q PROTEINS
ES2402038B1 (es) 2011-10-14 2013-11-25 Josep Ramon Viola Terès Base para palé y palé provisto de esta
JP2015502959A (ja) 2011-12-07 2015-01-29 アムジェン インコーポレイテッド ＩｇＧ２ジスルフィドアイソフォームの分離
CA2853889A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against human csf-1r and uses thereof
IN2014CN04765A (ko) 2011-12-19 2015-09-18 Univ Rockefeller
WO2013112986A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Gliknik Inc. Fusion proteins comprising igg2 hinge domains
MX2014008961A (es) 2012-02-06 2014-10-14 Genentech Inc Composiciones y metodos para utilizar inhibidores de csf1r.
JP6113194B2 (ja) 2012-02-13 2017-04-12 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ エンジイン化合物、その抱合体、ならびにその使用および方法
AR090263A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma
JP2015517490A (ja) 2012-05-11 2015-06-22 ファイブ プライム セラピューティックス インコーポレイテッド コロニー刺激因子１受容体（ｃｓｆ１ｒ）を結合させる抗体を用いて状態を治療する方法
US9856320B2 (en) 2012-05-15 2018-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting PD-1/PD-L1 signaling
AU2013281328B2 (en) 2012-06-27 2017-11-23 Meiragtx Uk Ii Limited Combination for treating an inflammatory disorder
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
EP2890398A4 (en) 2012-08-31 2016-03-09 Five Prime Therapeutics Inc METHODS OF TREATING DISEASES WITH ANTIBODIES THAT BIND COLONY STIMULATING FACTOR RECEIVER 1 (CSF1R)
AU2013315482B2 (en) 2012-09-13 2018-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind to myostatin
DK2956173T3 (en) 2013-02-14 2017-07-17 Bristol Myers Squibb Co TUBULYSIS RELATIONSHIPS, METHODS OF PRODUCING AND USING THEREOF
WO2014153424A1 (en) 2013-03-19 2014-09-25 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Reducing diabetes in patients receiving hmg-coa reductase inhibitors (statins)
KR102049991B1 (ko) 2013-03-28 2019-12-02 삼성전자주식회사 항 c-Met/항 Her2 이중 특이 항체
CN103278634B (zh) * 2013-05-16 2015-01-07 中国科学院近代物理研究所 Cd73作为肾透明细胞癌干细胞表面标志物的应用
MX2016003292A (es) 2013-09-13 2016-06-24 Beigene Ltd Anticuerpos anti-muerte programada 1 y su uso como terapeuticos y diagnosticos.
ES2728578T3 (es) 2013-09-20 2019-10-25 Bristol Myers Squibb Co Combinación de anticuerpos anti-LAG-3 y anticuerpos anti-PD-1 para tratar tumores
AU2014374055B2 (en) 2013-12-30 2018-11-08 Epimab Biotherapeutics Inc. Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof
US11059898B2 (en) 2014-03-24 2021-07-13 Cancer Research Technology Limited Modified antibodies containing modified IGG2 domains which elicit agonist or antagonistic properties and use thereof
JP6657182B2 (ja) 2014-04-25 2020-03-04 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 癌治療用のｃｄ７３阻害剤としてのプリン誘導体
WO2015187835A2 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
JP7037359B2 (ja) 2014-10-10 2022-03-16 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニム Ｃｄ７３遮断
JP6755866B2 (ja) 2014-11-10 2020-09-16 メディミューン リミテッド Ｃｄ７３特異的結合分子及びその使用
US20160129108A1 (en) 2014-11-11 2016-05-12 Medimmune Limited Therapeutic combinations comprising anti-cd73 antibodies and uses thereof
PT3221346T (pt) 2014-11-21 2020-10-23 Bristol Myers Squibb Co Anticorpos compreendendo regiões constantes de cadeia pesada modificadas
LT3221363T (lt) * 2014-11-21 2020-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Antikūnai prieš cd73 ir jų panaudojimas
AU2016356780A1 (en) 2015-11-19 2018-06-28 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR) and uses thereof
CA3016187A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy with anti-cd73 antibodies
CN110719915A (zh) 2017-05-25 2020-01-21 百时美施贵宝公司 包含经修饰的重链恒定区的抗体
JP2020521458A (ja) 2017-05-25 2020-07-27 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 改変ＩｇＧ１ Ｆｃドメインおよび該ドメインと抗ＣＤ４０ドメイン抗体の融合物
KR20200011937A (ko) 2017-05-25 2020-02-04 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 길항작용 cd40 모노클로날 항체 및 그의 용도
JP2021521182A (ja) 2018-04-12 2021-08-26 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｄ７３アンタゴニストとｐｄ−１／ｐｄ−ｌ１軸アンタゴニストの組み合わせ治療
JP2022513653A (ja) 2018-11-28 2022-02-09 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 修飾された重鎖定常領域を含む抗体

Also Published As

Publication number Publication date
TWI758928B (zh) 2022-03-21
US20180127513A1 (en) 2018-05-10
EP3221363B1 (en) 2020-05-06
CY1123355T1 (el) 2021-12-31
US10100129B2 (en) 2018-10-16
JP2021061837A (ja) 2021-04-22
IL252353A0 (en) 2017-07-31
HRP20201176T1 (hr) 2020-11-13
EA202090956A3 (ru) 2020-12-30
LT3221363T (lt) 2020-08-10
IL252353B (en) 2021-06-30
CO2017005845A2 (es) 2017-09-11
MY189836A (en) 2022-03-11
WO2016081748A3 (en) 2016-09-15
CN113773388A (zh) 2021-12-10
CL2018001414A1 (es) 2018-08-24
CA2968357A1 (en) 2016-05-26
DK3221363T3 (da) 2020-08-10
ME03806B (me) 2021-04-20
MX2017006624A (es) 2017-08-21
EA201790986A1 (ru) 2017-10-31
KR20170080699A (ko) 2017-07-10
AR102698A1 (es) 2017-03-15
PL3221363T3 (pl) 2021-01-11
KR102569813B1 (ko) 2023-08-24
EA202090956A2 (ru) 2020-09-30
HK1244817A1 (zh) 2018-08-17
AU2021215286A1 (en) 2021-09-09
JP7235712B2 (ja) 2023-03-08
TW202124451A (zh) 2021-07-01
PE20170782A1 (es) 2017-07-04
EP3221363A2 (en) 2017-09-27
US20160145350A1 (en) 2016-05-26
SG11201703192SA (en) 2017-05-30
WO2016081748A2 (en) 2016-05-26
US20230051701A1 (en) 2023-02-16
EA035766B1 (ru) 2020-08-07
TN2017000203A1 (en) 2018-10-19
BR112017010110A2 (pt) 2018-01-30
US11352440B2 (en) 2022-06-07
US20190055320A1 (en) 2019-02-21
UY36404A (es) 2016-06-01
US20170253665A1 (en) 2017-09-07
CN107001474A (zh) 2017-08-01
IL283965A (en) 2021-07-29
JP2017537620A (ja) 2017-12-21
ES2807182T3 (es) 2021-02-22
TW201625693A (zh) 2016-07-16
CL2017001296A1 (es) 2018-02-16
HUE050596T2 (hu) 2020-12-28
MA40309A1 (fr) 2018-01-31
SG10201913004UA (en) 2020-03-30
CN107001474B (zh) 2021-10-01
RS60631B1 (sr) 2020-09-30
AU2015349878A1 (en) 2017-05-25
PT3221363T (pt) 2020-07-23
JP6805142B2 (ja) 2020-12-23
TWI711630B (zh) 2020-12-01
PH12017500918A1 (en) 2017-11-20
US9605080B2 (en) 2017-03-28
NZ731633A (en) 2022-01-28
SI3221363T1 (sl) 2020-09-30
US20190062456A1 (en) 2019-02-28
US10167343B2 (en) 2019-01-01
EP3725808A1 (en) 2020-10-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102569813B1 (ko) Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도
US20230272100A1 (en) Antibodies against ox-40 and uses thereof
KR102493282B1 (ko) Tim3에 대한 항체 및 그의 용도
CN106459203B (zh) 抗糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(gitr)的抗体及其用途
KR20180118725A (ko) 항-cd73 항체와의 조합 요법
KR102644115B1 (ko) Tigit에 대한 항체
KR20180082563A (ko) 글루코코르티코이드-유도된 종양 괴사 인자 수용체 (gitr)에 대한 항체 및 그의 용도
KR20190137850A (ko) 항-icos 효능제 항체 및 그의 용도
TW202003565A (zh) 抗mica及/或micb抗體及其用途
KR20200108870A (ko) Tim3에 대한 항체 및 그의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent