EA022983B1 - Белки на основе структурного домена фибронектина, связывающие pcsk9 - Google Patents
Белки на основе структурного домена фибронектина, связывающие pcsk9 Download PDFInfo
- Publication number
- EA022983B1 EA022983B1 EA201270761A EA201270761A EA022983B1 EA 022983 B1 EA022983 B1 EA 022983B1 EA 201270761 A EA201270761 A EA 201270761A EA 201270761 A EA201270761 A EA 201270761A EA 022983 B1 EA022983 B1 EA 022983B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- sequences
- sequence
- loop
- optional
- Prior art date
Links
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 title claims abstract 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 196
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title abstract description 185
- 102100038955 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Human genes 0.000 claims abstract description 175
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 108
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 103
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 101
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 91
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 91
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 67
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 67
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 55
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 44
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 24
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000028557 immunoglobulin binding proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108091009323 immunoglobulin binding proteins Proteins 0.000 claims description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 claims description 2
- 101710180553 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Proteins 0.000 claims 3
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims 2
- 101001098868 Homo sapiens Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Proteins 0.000 abstract description 193
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 26
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 abstract description 22
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 12
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 abstract description 10
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 abstract description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 abstract description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 abstract description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 abstract description 7
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 176
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 169
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 169
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 125
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 104
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 103
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 92
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 91
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 82
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 73
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 58
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 54
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 54
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 45
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 42
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 36
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 35
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 31
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 description 30
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 25
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 25
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 24
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 23
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 23
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 22
- 102000053786 human PCSK9 Human genes 0.000 description 22
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 22
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 20
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 19
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 19
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 19
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 18
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 18
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 18
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 18
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 17
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 16
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 16
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 16
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 16
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 15
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 15
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 15
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 15
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 15
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 14
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 13
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 13
- LCDQWAPYDBBYCH-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-[[2-chloro-5-(phenylcarbamoyl)phenyl]sulfonylamino]benzoate Chemical compound C1=CC(C(=O)OCC)=CC=C1NS(=O)(=O)C1=CC(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)=CC=C1Cl LCDQWAPYDBBYCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 13
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 12
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 11
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 11
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000008859 change Effects 0.000 description 10
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 10
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 10
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000234295 Musa Species 0.000 description 9
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 8
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 8
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 7
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 6
- 206010014476 Elevated cholesterol Diseases 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 101001051093 Homo sapiens Low-density lipoprotein receptor Proteins 0.000 description 5
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 5
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 5
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 5
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 5
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 5
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 4
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 4
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 4
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 4
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 4
- 238000000111 isothermal titration calorimetry Methods 0.000 description 4
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 102200120791 rs183974372 Human genes 0.000 description 4
- 102220061390 rs369115472 Human genes 0.000 description 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 4
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 102220504530 Organic solute transporter subunit alpha_V23D_mutation Human genes 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102220488235 Uromodulin-like 1_R25E_mutation Human genes 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 3
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 102200115280 rs121918070 Human genes 0.000 description 3
- 102200067340 rs2272938 Human genes 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 102220501358 Cytosolic iron-sulfur assembly component 3_R23E_mutation Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 101100536354 Drosophila melanogaster tant gene Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- 102000005731 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 2
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 208000000563 Hyperlipoproteinemia Type II Diseases 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 102000017921 NTSR1 Human genes 0.000 description 2
- 101150108752 Ntsr1 gene Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 108010018413 epidermal growth factor precursor Proteins 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000006674 lysosomal degradation Effects 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 102220057738 rs730881360 Human genes 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 1-(2-azaniumylacetyl)pyrrolidine-2-carboxylate Chemical group NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000713842 Avian sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102220603217 Cytohesin-4_L8M_mutation Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 102000002090 Fibronectin type III Human genes 0.000 description 1
- 108050009401 Fibronectin type III Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 102000030595 Glucokinase Human genes 0.000 description 1
- 108010021582 Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 101001003687 Homo sapiens Lipoma-preferred partner Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108700001097 Insect Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710172072 Kexin Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101000941450 Lasioglossum laticeps Lasioglossin-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 101000930477 Mus musculus Albumin Proteins 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 1
- 241001274216 Naso Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 102000001105 Phosphofructokinases Human genes 0.000 description 1
- 108010069341 Phosphofructokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022249 Proprotein Convertase 9 Proteins 0.000 description 1
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000004879 Racemases and epimerases Human genes 0.000 description 1
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 1
- 101000930457 Rattus norvegicus Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- 101710135785 Subtilisin-like protease Proteins 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 102220431365 c.130C>A Human genes 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000000500 calorimetric titration Methods 0.000 description 1
- 238000007707 calorimetry Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000031154 cholesterol homeostasis Effects 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 150000001923 cyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006575 hypertriglyceridemia Diseases 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 101150009573 phoA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000017924 poor diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 102000021127 protein binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091011138 protein binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000013878 renal filtration Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 102220075864 rs199526748 Human genes 0.000 description 1
- 229940102127 rubidium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- RIYNLCMADQUBEM-FYZOBXCZSA-M sodium;(3r)-3,5-dihydroxy-3-methylpentanoate Chemical compound [Na+].OCC[C@](O)(C)CC([O-])=O RIYNLCMADQUBEM-FYZOBXCZSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006203 subcutaneous dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012932 thermodynamic analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000012301 transgenic model Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2318/00—Antibody mimetics or scaffolds
- C07K2318/20—Antigen-binding scaffold molecules wherein the scaffold is not an immunoglobulin variable region or antibody mimetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к белкам на основе структурного домена фибронектина, которые связывают PCSK9. Изобретение также относится к применению данных инновационных белков в терапевтических приложениях для лечения атеросклероза, гиперхолистеринемии и других заболеваний, связанных с повышенным уровнем холестерина. Данное изобретение также относится к клеткам, содержащим данные белки, полинуклеотидам, кодирующим данные белки или их фрагменты, и векторам, содержащим данные полинуклеотиды, кодирующие данные инновационные белки.
Description
изобретение относится к белкам на основе структурного домена фибронектина, которые связывают PCSK9. Изобретение также относится к применению данных инновационных белков в терапевтических приложениях для лечения атеросклероза, гиперхолистеринемии и других заболеваний, связанных с повышенным уровнем холестерина. Данное изобретение также относится к клеткам, содержащим данные белки, полинуклеотидам, кодирующим данные белки или их фрагменты, и векторам, содержащим данные полинуклеотиды, кодирующие данные инновационные белки.
022983
Область техники
Данное изобретение относится к связывающим белок-предшественник конвертазы субтилизин/кексин типа 9 (PCSK9) белкам, содержащим структурный домен фибронектина. Также данное изобретение относится к применению данных оригинальных белков в терапевтических приложениях для лечения атеросклероза, гиперхолистеринемии и других заболеваний, связанных с повышенным уровнем холестерина. Также данное изобретение относится к клеткам, содержащим такие белки, полинуклеотидам, кодирующим такие белки, или их фрагментам и к векторам, содержащим полинуклеотиды, кодирующие данные оригинальные белки.
Введение
Атеросклероз - заболевание артерий, ответственное за развитие ишемической болезни сердца (ИБС), которая является причиной большинства случаев смерти в промышленно развитых странах (Lusis (2000)). В настоящее время некоторые факторы риска развития ИБС хорошо известны: дислипидемии, артериальная гипертензия, сахарный диабет, курение, плохое питание, отсутствие физической нагрузки и стресс. Наиболее клинически значимые и распространенные дислипидемии характеризуются повышением содержания липопротеидов низкой и очень низкой плотности (ЛПНП и ЛПОНП) совместно с гиперхолестеринемией при отсутствии или наличии гипертриглицеридемии (Fredrickson et al. (1967)). Отдельное повышение уровня холестерина в составе ЛПНП является одним из наиболее распространенных факторов риска развития ИБС. Белок PCSK9 (также известный как HCHOLA3, NARC-1 или FH3) является протеазой и подсемейства протеиназы K семейства секреторных субтилаз (Naureckiene et al., Arch. Biochem. Biophy., 420:55-57 (2003)). Показано, что PCSK9 является ключевым регулятором гомеостаза уровня холестерина и уровня циркулирующих липопротеидов низкой плотности. Циркулирующий белок PCSK9 контролирует метаболизм ЛПНП, непосредственно связываясь с рецептором ЛПНП и обеспечивая его деградацию в гепатоцитах. РС8К9-опосредованное снижение представленности и активности рецептора ЛПНП приводит к снижению клиренса ЛПНП из кровотока и повышению уровня ЛПНП. Известно, что некоторые мутантные формы PCSK9, в том числе S127R, N157K, F216L, R218S и D374Y, с S127R, F216L и D374Y связаны с аутосомно-доминантной гиперхолестеринемией (АДГ). Считается, что дикий тип PCSK9 увеличивает скорость обмена рецепторов ЛПНП и обусловливает более низкий клиренс ЛПНП (Maxwell et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 102(6):2069-2074 (2005), тогда как мутации, приводящие к потере функциональности PCSK9, приводят к повышению уровня рецептора липопротеидов низкой плотности (РЛПНП), увеличению клиренса циркулирующих ЛПНП и соответствующему снижению уровня холестерина в плазме (Rashid et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 102(15):5374-5379 (2005)). Таким образом, PCSK9 является потенциальной мишенью для разработки средств лечения атеросклероза, гиперхолестеринемии и других заболеваний, связанных с повышенным уровнем холестерина.
Основанные на последовательности фибронектина структуры представляют собой семейство белков, способных изменять свою структуру таким образом, чтобы связать любое целевое вещество. Белки такого типа, структуры которых обычно образованы на основе фибронектинового домена III типа (Fn3) или Fn3-подобного домена, имеют схожие функциональные свойства со свойствами природных или рекомбинантных антител (поликлональных, моноклональных или одноцепочечных), а также обладают структурными преимуществами. В частности, структура таких миметиков антител создана оптимальной для пространственной укладки, стабильности и растворимости даже в условиях, которые обычно приводят к потере структуры и функции антител. Примером структурных белков на основе фибронектина являются аднектины (Adnexus, Bristol-Myers Squibb R&D Company).
Фибронектиновые домены III типа (Fn3) содержат следующие участки (по порядку от N-конца к Сконцу): бета- или бета-подобный участок А, петля АВ, бета- или бета-подобный участок В, бета- или бета-подобный участок С, петля CD, бета- или бета-подобный участок D, петля DE, бета- или бетаподобный участок Е; петля EF, бета- или бета-подобный участок F; петля FG и бета- или бета-подобный участок G. Любая или все петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG могут принимать участие в связывании целевой молекулы. Петли ВС, DE и FG являются структурными и функциональными аналогами областей определяющих комплиментарность иммуноглобулинов (CDR-участки). В патентной заявке США № 7115396 описываются белки, содержащие домены Fn3, в которых изменения в ВС, DE и FG петлях приводят к высокому сродству при связывании ФНОа. В патентной заявке США № 2007/0148126 описываются белки, содержащие домены Fn3, в которых изменения в ВС, DE и FG петлях приводят к высокому сродству при связывании VEGFR2.
Получение оптимизированных структурных белков, содержащих домены фибронектинового типа, связывающих PCSK9, для терапевтического применения таких белков при лечении атеросклероза, гиперхолистеринемии и других заболеваний, связанных с повышенным уровнем холестерина.
- 1 022983
Сущность изобретения
Настоящее изобретение предлагает аднектины против PCSK9 человека. Одним из объектов данного изобретения являются полипептиды, содержащие домен Fn3, в котором одна или более петель, доступных для растворителя, имеют случайную или мутантную первичную последовательность. В некоторых вариантах исполнения такой Fn3 домен представляет собой модифицированный относительно дикого типа домен Fn3, полученный из десятого модуля фибронектинового домена III типа человека (10Fn3). В некоторых вариантах исполнения такой 10Гп3-полипептид, описанный в данном изобретении, является по меньшей мере на 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или 90% идентичным домену 10Fn3 человека.
В некоторых вариантах исполнения одна или более петель из группы ВС, DE и FG может быть длиннее или короче соответствующей петли фибронектина человека.
В некоторых вариантах исполнения полипептиды, описанные в данном изобретении, содержат десятый фибронектиновый домен III типа (10Fn3), в котором домен 10Fn3 содержит петли АВ, ВС, CD, DE, EF и FG и по меньшей мере одну петлю из группы: ВС, DE и FG с изменением в первичной последовательности относительно последовательности в соответствующей петле домена 10Fn3
человека.
В некоторых вариантах исполнения полипептид, описанный в данном изобретении, содержит домен Fn3, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную последовательности непетлевых участков.
В некоторых вариантах исполнения петля ВС белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей SEQ ID NO: 217, 106-135 и 301-303. В определенных вариантах исполнения петля ВС белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит затемненные участки любой из последовательностей SEQ ID NO: 2-17, 106135 и 301-303, как показано в табл. 3. Например, в одном варианте исполнения, петля ВС содержит последовательность PPPSHGYG (остатки 3-10 последовательности SEQ ID NO: 2), DAPAHAYG (остатки 310 последовательности SEQ ID NO: 5), EPFSRLPGGGE (остатки 3-13 последовательности SEQ ID NO: 106) или DAPADGGYG (остатки 3-11 последовательности SEQ ID NO: 107).
В некоторых вариантах исполнения петля DE белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из следующей группы: SEQ ID NO: 18-27 и 136-141. В определенных вариантах исполнения петля DE белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит затемненные участки любой из последовательностей SEQ ID NO: 18-27 и 136-141, как показано в табл. 3. Например, в одном варианте исполнения петля DE содержит последовательность PGKG (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 18), VGVG (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 27) или VSKS (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 137).
В некоторых вариантах исполнения петля FG белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из следующей группы последовательностей: SEQ ID NO: 28-38 и 142-172. В определенных вариантах исполнения петля DE белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит затененные участки любой из последовательностей SEQ ID NO: 28-38 и 142-172, как показано в табл. 3. Например, в одном варианте исполнения петля FG содержит последовательность EYPYKHSGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 28), EYPYDYSGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 142) или EFDFVGAGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 167).
В некоторых вариантах исполнения домен 10Fn3 может содержать измененные аминокислотные остатки в начале и/или на конце последовательности, а также инсерции или делеции.
В некоторых вариантах исполнения белок, описываемый в данном изобретении, содержит одну из петель ВС SEQ ID NO: 2-17, 106-135 и 301-303; одну из последовательностей петель DE SEQ ID NO: 1827 и 136-141; одну последовательностей петли FG SEQ ID NO: 28-38 и 142-172. В определенных вариантах исполнения белок, описываемый в данном изобретении, содержит одну последовательность петли ВС, включающей затененную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 2-17, 106-135 и 301-303, показанных в табл. 3; одну последовательность петли DE, включающей затененную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 18-27 и 136-141, показанных в табл. 3; и одну последовательность петли FG, включающей затененную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 28-38 и 142-172, показанных в табл. 3.
В некоторых вариантах исполнения белок, описываемый в данном изобретении, содержит аминокислотные последовательности петель ВС, DE и FG, совпадающие по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% с любой из последовательностей SEQ ID NO: 2-38, 106-172 и 301-303. В определенных вариантах исполнения белок, описываемый в данном изобретении, содержит аминокислотные последовательности петель ВС, DE и FG, совпадающие по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% с любой из затененных частей последовательностей петель ВС, DE и FG, показанных в табл. 3, как это описано ранее.
В некоторых вариантах исполнения анти-PCSK9 аднектин содержит аминокислотную последовательность любой из последовательностей SEQ ID NO: 39-76, 173-290 и 304-309.
В некоторых вариантах исполнения последовательность анти-PCSK9 аднектина содержит с 3 по 96 позиции аминокислотной последовательности домена Fn3 любой из последовательностей SEQ ID NO:
- 2 022983
39-76, 173-290 и 304-309.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aHTH-PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью SW(X1)ZX2G (SEQ ID NO: 323), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Z - число от 6 до 9 и Х2 представляет собой Y или Н.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю DE с последовательностью РХ1Х1Х1Х3Т (SEQ ID NO: 324), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, а Х3 является либо G либо S.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4HRP (SEQ ID NO: 325), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, X4 является Y или F, X5 является Y, F или W, X6 является либо S, либо А. В определенных вариантах исполнения Х4 и Х5 представляют собой ароматические остатки, каждый из которых независимо является Y, F, W или Н.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью SW(X1)2X2G (SEQ ID NO: 323), петлю DE с последовательностью РХ1Х1Х1Х3Т (SEQ ID NO: 324) и петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4HRP (SEQ ID NO: 325), как определено в данном изобретении.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью SWEPFSRLPGGGE (SEQ ID NO: 106), петлю DE с последовательностью РХ1Х1Х1Х3Т (SEQ ID NO: 324) и петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4FIRP (SEQ ID NO: 325), как определено в данном изобретении.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью (X1)ZX2G (SEQ ID NO: 449), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Z - число в диапазоне 6-9, а Х2 представляет собой Y или Н.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю DE с последовательностью Х1Х1Х1Х3 (SEQ ID NO: 450), в которой X1 является любой аминокислотой, Х3 представляет собой G или S.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4HR (SEQ ID NO: 451), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, X4 представляет собой Y или F, Х5 представляет собой Y, F, или W, Х6 представляет собой S или А. В определенных вариантах исполнения Х4 и X5 представляют собой остатки ароматических аминокислот, каждая из которых, независимо, может быть Y, F, W или Н.
Одним из объектов, защищаемых настоящим изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью (X1)ZX2G (SEQ ID NO: 449), петлю DE с последовательностью Х1Х1Х1Х3 (SEQ ID NO: 450) и петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4HR (SEQ ID NO: 451), как определено в данном изобретении.
В некоторых вариантах исполнения существует по меньшей мере одна аминокислотная делеция на N-конце последовательности PCSK9 аднектина.
В некоторых вариантах исполнения существует по меньшей мере одна аминокислотная делеция, инсерция или замена на С-конце последовательности PCSK9 аднектина.
В некоторых вариантах исполнения на С-конец последовательности PCSK9 аднектина добавлена линкерная последовательность.
В некоторых вариантах исполнения PCSK9 аднектин может быть конъюгирован с другой молекулой, нежели 10Fn3 , такой как сывороточный альбумин человека (HSA), как это описано в патентных заявках WO 2009/133208 и WO 2009/083804.
В некоторых вариантах исполнения PCSK9 аднектин может содержать мутации в аминокислотных последовательностях петель АВ, CD и EF, как это описано в патентных заявках WO 2009/133208 и WO
2009/083804.
Одним из объектов изобретения является PCSK9 аднектин, содержащий фармакокинетическую группу (PK). В одном варианте исполнения фармакокинетическая группа содержит полиэтиленгликоль (ПЭГ). В отдельных вариантах исполнения фармакокинетическая группа содержит Fc-фрагмент. В некоторых вариантах исполнения фармакокинетическая группа содержит один или несколько аднектинов, связывающих сывороточный альбумин. Примеры слитых белков aнти-PCSK9 аднектин-Fc приведены в табл. 1. Примеры aнти-PCSK9 аднектинов, связывающих сывороточный альбумин, содержат последовательности SEQ ID NO: 618 или 619.
В определенных вариантах исполнения aнти-PCSK9 аднектины, содержащие PK-группу, содержат последовательность, как указана в SEQ ID NO: 322.
Другим объектом изобретения является aнти-PCSK9 аднектин, не содержащий никакой PK-группы (т.е. "свободный" aнти-PCSK9 аднектин). В определенных вариантах исполнения свободный aнти-PCSK9 аднектин может вводиться с такой частотой, которая достаточна для достижения желаемого терапевтического эффекта. В другом варианте исполнения свободный aнти-PCSK9 аднектин может вводиться в виде лекарственной формы с пролонгированным высвобождением (например, лекарственная форма для подкожного введения). В некоторых вариантах исполнения лекарственная форма с пролонгированным
- 3 022983
высвобождением увеличивает длительность фазы абсорбции, или продлевает фармакодинамическое воздействие, или оказывает оба эффекта сразу. В качестве примера, лекарственная форма с пролонгированным высвобождением содержит раствор пропиленгликоля в фосфатном буфере (PBS).
Одним из объектов настоящего изобретения является применение aHTH-PCSK9 аднектина для лечения атеросклероза, гиперхолистеринемии и других заболеваний, связанных с повышенным уровнем холестерина.
Одним из объектов данного изобретения является слитый полипептид, содержащий связывающий сывороточный альбумин десятый домен III типа фибронектина (10Fn3), и aнти-PCSK9 аднектин, в котором связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывается с сывороточным альбумином, например HSA, с Kd 1 мкМ или меньше. В определенных вариантах исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 330. В одном из вариантов исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 содержит петлю ВС с аминокислотной последовательностью, приведенной в последовательности SEQ ID NO: 331, петлю DE с аминокислотной последовательностью, приведенной в последовательности SEQ ID NO: 332, петлю FG с аминокислотной последовательностью, приведенной в последовательности SEQ ID NO: 333. В другом варианте исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 содержит одну или более петель ВС с аминокислотной последовательностью, приведенной в последовательности SEQ ID NO: 331, петель DE с аминокислотной последовательностью, приведенной в последовательности SEQ ID NO: 332, петель FG с аминокислотной последовательностью, приведенной в последовательности SEQ ID NO: 333.
В одном из вариантов исполнения данный связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 из состава слитого полипептида также способен связывать один или несколько альбуминов: сывороточный альбумин макаки-резус (RhSA), сывороточный альбумин яванской макаки (CySA) или сывороточный альбумин мыши (MuSA). В других вариантах исполнения данный связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 не обладает перекрестной реактивностью с одним или несколькими белками среди RhSA, CySA или MuSA.
В определенных вариантах исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 в составе слитого полипептида связывает HSA с Kd 1 мкМ или менее. В некоторых вариантах исполнения данный связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывает HSA с Kd 500 нМ или менее. В других вариантах исполнения данный связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывает HSA с Kd по меньшей мере 200, 100, 50, 20, 10 или 5 нМ.
В других вариантах исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 в составе слитого полипептида связывается с доменами HSA I или II. В одном варианте исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывает оба домена HSA (I и II). В некоторых вариантах исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывает HSA в диапазоне рН от 5,5 до 7,4. В других вариантах исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывает HSA с Kd 200 нМ или менее при рН 5.5. В других вариантах исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывает HSA с Kd по меньшей мере 500, 200, 100, 50, 20, 10 или 5 нМ в диапазоне от рН 5.5 до 7.4. В одном варианте исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 связывает HSA с Kd по меньшей мере 500, 200, 100, 50, 20, 10 или 5 нМ при рН 5.5.
В некоторых вариантах исполнения период полужизни в плазме слитого полипептида в присутствии сывороточного альбумина по меньшей мере в 5 раз больше, чем период полужизни этого полипептида в отсутствие сывороточного альбумина. В определенных вариантах исполнения период полужизни в плазме слитого полипептида в присутствии сывороточного альбумина по меньшей мере в 2, 5, 7, 10, 12, 15, 20, 22, 25, 27 или 30 раз выше, чем период полужизни этого полипептида в отсутствие сывороточного альбумина. В некоторых вариантах исполнения сывороточным альбумином является один из следующих альбуминов: HSA, RhSA, CySA или MuSA.
В определенных вариантах исполнения период полужизни в плазме слитого полипептида в присутствии сывороточного альбумина составляет по меньшей мере 20 ч. В определенных вариантах исполнения период полужизни в плазме слитого полипептида в присутствии сывороточного альбумина составляет по меньшей мере 10, 12, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 90, 100, 110, 120, 130, 150, 170 или 200 ч. В некоторых вариантах исполнения период полужизни слитого полипептида определяется у приматов (например, человек или обезьяна) или у мышей.
В любом из последующих объектов или вариантов исполнения связывающий сывороточный альбумин домен 10Fn3 содержит последовательность, выбранную из группы последовательностей SEQ ID NO:
334, 338, 342, 346 и 348-370.
- 4 022983
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведено выравнивание примера аминокислотной последовательности aHTH-PCSK9 аднектина. Аминокислотные последовательности петель ВС, DE и FG выделены подчеркиванием, курсивом и подчеркиванием или жирным шрифтом и подчеркиванием соответственно.
На фиг. 2 изображена схема анализа "PCSK9: гомологичный домен предшественника эпидермального фактора роста (домен EGFA)" на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET), который был применен для измерения способности PCSK9 аднектинов ингибировать взаимодействие PCSK9:PJ!HPn описано в примере 2.
На фиг. 3 изображена кривая, полученная при FRET-анализе, при измерении ингибирования взаимодействия человеческого PCSK9:EGFA клонами 1459D05, 1784F03, 1813Е02, 1922G04 и 1923В02 (панель А) и клонами 1459D05, 2012А04, 2011Н05 и 2013Е01 (панель В) PCSK9 аднектина, как описано в примере 2.
На фиг. 4 изображена кривая, полученная при FRET-анализе, при измерении ингибирования взаимодействия человеческого PCSK9:ATI000972 клонами 1459D05, 1784F03, 1813Е02, 1922G04 и 1923В02 (панель А) и клонами 2012А04, 2011Н05 и 2013Е01 (панель В) PCSK9 аднектина, как описано в примере 2.
На фиг. 5 показана активность клонов 1459D05, 1784F03, 1813Е02, 1922G04 и 1923В02 (панель А) и клонов 2012А04, 2011Н05 и 2013Е01 (панель В) PCSK9 аднектина, при прямом FRET-анализе связывания PCSK9 человека, как это описано в примере 2.
На фиг. 6 приведено ингибирование активности PCSK9 в клетках линии HepG2, измеренное с помощью метода поглощения DiI-ЛПНП клетками, как это описано в примере 2.
На фиг. 7 показано ингибирование индуцированного PCSK9 снижения количества РЛПНП на поверхности клеток линии HepG2 с помощью PCSK9 аднектина, экспрессируемого клонами 1459D05, 1784F03, 2012А04 и 2011Н05 (панель А) и 2011Н05, 2012А04 и 2013Е01 (панель В), как это описано в примере 2. Показатель ЕС50 (нМ) для клонов 1784F03, 2012А04, 2011Н05 и 2013Е01 составляет 15.98, 7.78, 8.85 и 12.41 соответственно. Процентный уровень ингибирования PCSK9 при концентрации 75 нМ PCSK9 аднектина клонов 1459D05, 1784F03, 2012А04, 2011Н05 и 2013Е01 составляет 66.8, 150.2, 190.1, 177.4 и 152.2 соответственно.
На фиг. 8 демонстрируется эффект введения PCSK9 аднектина ATI000959 (100 мг/кг) на уровень холестерина в плазме (панель А) и на уровень несвязанного hPCSK9 в плазме (панель В) мышам трансгенной линии, экспрессирующим на высоком уровне hPCSK9, как это описано в примере 3. Вариант ATI000959 содержит разветвленный ПЭГ (NOF) массой 40 кДа.
На фиг. 9 демонстрируется эффект введения PCSK9 аднектина ATI001114 (10 или 60 мг/кг) на уровень холестерина в плазме (панель А) и на уровень несвязанного hPCSK9 в плазме (панель В) мышам трансгенной линии, экспрессирующим на высоком уровне hPCSK9, как это описано в примере 3.
На фиг. 10 демонстрируется эффект введения PCSK9 аднектинов ATI000959 (панель А) или ATI001114 (панель В), введенных в количестве 5 мг/кг внутрибрюшинно (i.p.), в однократной дозе, на уровень свободного hPCSK9 в сыворотке мышей трансгенной линии с нормальным уровнем экспрессии hPCSK9 (среднее значение ± SD), как это описано в примере 3.
На фиг. 11 показана дозозависимость эффекта PCSK9 аднектина ATI001114 на уровень свободного hPCSK9 y мышей трансгенной по hPCSK9 линии с нормальным уровнем экспрессии, как это описано в примере 3.
На фиг. 12 показан эффект однократного введения PCSK9 аднектина ATI001114 (5 мг/кг i.v.) на снижение количества ЛПНП-С у яванских макак (среднее +/- SEM, n=3), как это описано в примере 3.
Фиг. 13 - определение аффинности и стехиометрических показателей связывания PCSK9 аднектина с hPCSK9, определенные с помощью ITC. PCSK9 аднектины связываются с hPCSK9 в соотношении 1:1. В левой части фигуры приведены данные для PCSK9 аднектина ATI001081, в правой части для PCSK9 аднектина ATI001174.
Фиг. 14 - ингибирование сигнала PCSK9:EGFA (левая панель) и PCSK9:ATI-972 (правая панель) PCSK9 аднектинами при анализе с помощью FRET.
Фиг. 15 - ингибирование индуцированного PCSK9 снижения количества РЛПНП на поверхности клеток линии HepG2 под влиянием aнти-PCSK9 аднектинов.
Фиг. 16 - ингибирование проникновения PCSK9-AF647 в клетки линии HepG2.
Фиг. 17 - уровень свободного hPCSK9 в плазме у трансгенных мышей при введении PRD460 (вводимого i.p.).
Фиг. 18 - эффект введения PRD460 (15 мг/кг i.v.) на уровень ЛПНП-С и свободного PCSK9 у яванских макак (среднее +/- SEM, n=3).
Фиг. 19 - эффект ATI-1081 (также обозначенного ATI001081) на уровень свободного PCSK9 у яванских макак.
Фиг. 20 - эффект ATI-1081 на уровень ЛПНП-С у яванских макак.
Фиг. 21 - эффект ATI-1081 в PBS при введении трансгенным мышам. На данной фигуре приведены данные об уровне свободного PCSK9 в плазме у трансгенных мышей.
- 5 022983
Фиг. 22 - эффект подкожного введения ATI-1081 в полиэтиленгликоле трансгенным мышам. На данной фигуре приведены данные об уровне свободного hPCSK9 y трансгенных мышей.
Фиг. 23 - время полужизни HSA у мышей (in vivo). HSA вводился бестимусным мышам в дозах 20 мг/кг (левая панель) и 50 мг/кг (правая панель).
Фиг. 24 - определение времени полужизни SABA1.1 (панель A), SABA2.1 (панель В), SABA3.1 (панель С) и SABA4.1 (панель D) при введении мышам.
Фиг. 25 - график, демонстрирующий увеличение времени полужизни SABA1-4 при одновременном введении с HSA мышам.
Фиг. 26 - определение времени полужизни в плазме SABA1.1 (панель А) и SABA5.1 (панель В) у яванского макака.
Фиг. 27 - анализ связывания SABA1.2 с альбуминами человека, мыши и крысы с помощью прямого ИФА. Определение стехиометрических показателей связывания SABA1.1 и HSA. Стехиометрия данного связывания 1:1.
Фиг. 29 - анализ связывания SABA 1.2 с фрагментами рекомбинантного домена HSA с помощью
системы BIACORE®.
Фиг. 30 - профиль фармакокинетики SABA1.2 у яванских макак при введении в дозировках 1 мг/кг и 10 мг/кг.
Фиг. 31 - профиль фармакокинетики SABA1.2 у обезьян при введении внутривенно или подкожно в дозировке 1 мг/кг.
Подобное описание изобретения
Определения.
Под термином "полипептид" подразумевается любая последовательность из двух или более аминокислот, независимо от длины, посттрансляционных модификаций или функции. Термины "полипептид", "пептид" и "белок" используются в данном документе равноправно. Полипептиды могут включать как природные, так и неприродные аминокислоты, такие как описанные в заявке US Patent No. 6559126 и включенные в данное изобретение посредством ссылки. Полипептиды также могут быть модифицированы с помощью любого из разнообразных стандартных химических способов (например, аминокислота может быть модифицирована с помощью защитной группы, С-концевой карбоксил может быть трансформирован в амидную группу, N-концевой аминокислотный остаток может быть модифицирован с помощью различных групп для повышения липофильности, также полипептид может быть химически гликозилирован или модифицирован другим способом для повышения стабильности и времени полужизни in vivo). Модификации полипептидов могут включать присоединение других структур, например циклических соединений или других молекул к полипептиду. Также полипептиды могут содержать один или более аминокислотных остатков с измененной конфигурацией (например, R, или S, или L, или D). Пептиды, описанные в настоящем изобретении, представляют собой модифицированные производные десятого домена III типа фибронектина, измененные таким образом, чтобы специфически связывать PCSK9. Данные пептиды здесь обозначены следующими названиями: "анти-PCSK9 аднектин" или "PCSK9 аднектин".
Термин "PK" является акронимом термина "фармакокинетический" и обозначает различные свойства химического вещества, включая, например, абсорбцию, распределение, обмен и выведение субъектом. Термины "PK модулирующий белок" или "PK-группа" обозначают любой белок, пептид или агент, которые влияют на фармакокинетические свойства биологически активной молекулы, когда они слиты вместе или вводятся в организм совместно с биологически активной молекулой. Примерами PK модулирующих белков или PK-групп являются ПЭГ, вещества, связывающие сывороточный альбумин человека (HSA) (как описано в патентных заявках US Publication No. 2005/0287153 и 2007/0003549, РСТ Publication No. WO 2009/083804 и WO 2009/133208, и молекулы SABA, как описано в данном изобретении), сывороточный альбумин человека, Fc-фрагмент или его части и варианты, и сахара (например, сиаловые кислоты).
"Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности" в данном изобретении определяется как процент аминокислотных остатков кандидатной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам выбранной последовательности, после выравнивания последовательностей и введения, при необходимости, пробелов, для достижения максимального процента идентичности последовательности, и рассмотрения любых консервативных замен как отличающейся части сравниваемых последовательностей. Выравнивание для определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть построено различными способами, известными специалистам в соответствующей области, например, с помощью общедоступных компьютерных программ, таких как BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 или Megalign (DNASTAR®). Специалисты в соответствующей области могут определить подходящие параметры для оценки выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания на протяжении всей длины сравниваемых последовательностей.
Термин "выделенный" применяется для полипептида, который был идентифицирован и выделен из
- 6 022983
состава его природного окружения. Загрязняющие компоненты природного окружения пептида представляют собой вещества, которые могут мешать диагностическим или терапевтическим применениям данного полипептида и могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах исполнения полипептид будет очищен: (1) до более чем 95% по весу, при определении методом Лоури, и в наиболее предпочтительных до более чем 99% по весу; (2) до степени чистоты, достаточной для выявления, по крайней мере, N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности при использовании секвенатора с вращающимся стаканом; или (3) до гомогенности по результатам ДСН-ПААГ электрофореза в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с окрашиванием кумасси синим или, предпочтительно, серебром. Термин "выделенный полипептид" включает полипептид в рекомбинантных клетках in situ, так как по крайней мере один компонент естественного окружения полипептида отсутствует. Обычно, однако, выделенный полипептид получают с применением по меньшей мере одной стадии очистки.
Условное обозначение "mpk", "мг/кг" или "мг на кг" используется для обозначения дозировки вещества на 1 кг веса. Все эти условные обозначений используются равноправно на протяжении всего данного документа.
Термин "время полужизни" аминокислотной последовательности или соединения может быть в целом определен как время, необходимое для снижения концентрации полипептида в сыворотке на 50% in vivo, например, вследствие деградации последовательности или соединения и/или выведения или изоляции последовательности или соединения с помощью естественных механизмов. Время полужизни может быть определено любым известным способом, например, путем фармакокинетического анализа. Подходящие методы известны специалисту в соответствующей области, и могут, например, обычно, включать этапы: введения приматам подходящим способом подходящих доз исследуемой аминокислотной последовательности или соединения, описываемых в настоящем изобретении; регулярный сбор образцов крови или других образцов у указанных приматов; определения уровня или концентрации введенной аминокислотной последовательности или соединения в указанных образцах крови и вычисления, на основе полученных таким образом данных, времени, достаточного для того, чтобы уровень или концентрация аминокислотной последовательности или соединения, описываемых в данном изобретении, была снижена на 50% по сравнению с исходным уровнем при введении. Для примера см. стандартные руководства, например Kenneth, A. et al., Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists и Peters et al., Pharmacokinete Analysis: A Practical Approach (1996). Также см. Gibaldi, M. et al., Pharmacokinetics, 2nd Rev. Edition, Marcel Dekker (1982).
Время полужизни может быть выражено с использованием таких показателей, как t1/2-alpha, t1/2-beta, HL_Lambda_z и площадь под кривой (AUC). В настоящем описании "увеличением времени полужизни" обозначается повышение любого из указанных показателей, любых двух из этих параметров, любых трех из этих параметров или всех четырех параметров. "Увеличение времени полужизни", в частности, обозначает повышение t1/2-beta и/или HL_Lambda_z, либо совместно, либо нет, с повышением t1/2-alpha и/или
AUC.
Обзор.
Данное изобретение описывает аднектины против PCSK9 человека. Для определения специфических антагонистов для PCSK9, молекулы PCSK9 были презентированы для большой синтетической библиотеки аднектинов. Связавшиеся с PCSK9 аднектины были охарактеризованы по связыванию с PCSK9, биофизическим свойствам и ингибиторной активности по отношению к PCSK9. Отобранные пулы аднектинов были подвергнуты мутагенезу и последующим раундам отбора при снижении концентрации связываемого агента и выделения аднектинов с низкой константой диссоциации. После осуществления описанного процесса оптимизации была отобрана группа аднектинов, специфически ингибирующих PCSK9, с желаемыми биохимическими и биофизическими свойствами.
Структуры на основе фибронектина.
Одним из объектов данного изобретения являются полипептиды, содержащие домен Fn3, в котором последовательности одной или нескольких петель, доступных для растворителя, подвергнуты случайному или направленному мутагенезу. В некоторых вариантах исполнения домен Fn3 представляет собой Fn3 домен, полученный из последовательности дикого типа десятого домена III типа фибронектина человека (10Fn3):
VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYGETGGNSPVOEFTVPGSK
STATISGLKPGVDYTITVYAVTGRGDSPASSKPISINYRT (SEQ ID NO: 1).
В указанной последовательности 10Fn3 подчеркнуты петли ВС, DE и FG.
Как описано в данном изобретении, последовательности 10Fn3, не связывающие лиганды, т.е. являющиеся "структурными участками 10Fn3", могут быть изменены в такой степени, чтобы домен 10Fn3 сохранял функции связывания лигандов и/или структурную стабильность. Описано большое количество различных мутантных вариантов структурных участков 10Fn3. В одном из объектов данного изобретения один или более аминокислотных остатков из Asp 7, Glu 9 и Asp 23 заменены на другие аминокислотные остатки, например на неотрицательно заряженные (например, Asn, Lys и др.). Было показано, что такие
- 7 022983
замены повышают стабильность 10Fn3 при нейтральных значениях рН, по сравнению с доменом 10Fn3 дикого типа (см. РСТ Publication No. WO 02/04523). Описано большое количество дополнительных изменений структурных участков домена 10Fn3, которые либо оказывают полезный, либо нейтральный эффект. См., например, Batori et al., Protein Eng., 15(12):1015-1020 (Dec. 2002); Koide et al., Biochemistry, 40(34): 10326-10333 (Aug. 28, 2001).
И мутантный, и дикий тип домена 10Fn3 обладают сходной структурой, описываемой как 7 бетаучастков, обозначаемых буквами от А до G, и 6 петлевых областей (петли АВ, ВС, CD, DE и FG), соединяющих упомянутые бета-участки. Бета-участки, расположенные наиболее близко к N и С-концам молекулы могут принимать бета-подобную конформацию в растворе. В последовательности SEQ ID NO: 1 петле АВ соответствуют остатки 15-16, петле ВС соответствуют остатки 21-30. петле CD соответствуют остатки 39-45, петле DE соответствуют остатки 51-56, петле EF соответствуют остатки 60-66, петле FG соответствуют остатки 76-87 (Xu et al., Chemistry & Biology, 9:933-942 (2002)).
В некоторых вариантах исполнения последовательность полипептида 10Fn3 может быть по меньшей мере на 40, 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или 90% идентична последовательности домена 10Fn3 человека, указанной в последовательности SEQ ID NO: 1. Большая часть вариабельности будет, как правило, приходиться на одну или несколько петель. Последовательности каждого из бета и бета-подобных участков полипептида 10Fn3 могут почти полностью состоять из аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95 или 100% идентична последовательностям соответствующих бета или бета-подобных участков последовательности SEQ ID NO: 1, таким образом, что отличия не нарушают стабильность полипептида при физиологических условиях.
В некоторых вариантах исполнения, данное изобретение включает полипептиды, содержащие десятый домен III типа фибронектина (10Fn3), в котором указанный домен 10Fn3 содержит петлю АВ, петлю ВС, петлю CD, петлю DE, петлю EF и петлю FG, при этом последовательность по крайней мере одной из петель ВС, DE, и FG изменена, относительно последовательности соответствующей петли домена 10Fn3 человека. В некоторых вариантах исполнения изменены последовательности петель ВС и FG, в некоторых вариантах исполнения изменены последовательности петель ВС, DE и FG, т.е. домен Fn3 содержит петли, структура которых отличается от таковых у природного домена. В некоторых вариантах исполнения, изменены последовательности петель АВ, CD и/или EF. Под "изменением" понимается наличие одного или более отличий между данной аминокислотной последовательностью и референсной (соответствующий домен фибронектина человека). Изменение включает в себя вставки, делеции и замены аминокислотных остатков. Изменение аминокислотной последовательности может быть достигнуто через введение направленных, ненаправленных или спонтанных изменений последовательности, как правило, на уровне кодирующей последовательности, и может осуществляться любым способом, например, ПЦР, "ошибочной" ПЦР или химическим синтезом ДНК.
В некоторых вариантах исполнения длина одной или более петель из группы ВС, DE и FG, может отличаться от последовательности соответствующей петли фибронектина человека в большую и меньшую сторону. В некоторых вариантах исполнения длина петли может быть увеличена на 2-25 аминокислотных остатков. В некоторых вариантах исполнения длина петли может быть уменьшена на 1-11 аминокислотных остатков. Таким образом, для оптимизации связывания антигена, длина какой-либо петли домена 10Fn3 может быть изменена по длине, а также по аминокислотной последовательности, для достижения наилучшей возможной гибкости и аффинности при связывании антигена.
В некоторых вариантах исполнения полипептид содержит домен Fn3, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную не петлевым участкам последовательности SEQ ID NO: 1, в которой по крайней мере одна петля из группы ВС, DE и FG является измененной. В некоторых вариантах исполнения измененная последовательность петли ВС содержит до 10 аминокислотных замен, до 4 делеций и до 10 инсерций аминокислотных остатков, или комбинации данных изменений. В некоторых вариантах исполнения измененная последовательность петли DE содержит до 6 аминокислотных замен, до 4 делеций и до 13 инсерций аминокислотных остатков, или комбинации данных изменений. В некоторых вариантах исполнения измененная последовательность петли FG содержит до 12 аминокислотных замен, до 11 делеций и до 25 инсерций аминокислотных остатков, или комбинации данных изменений.
Как описано выше, аминокислотные остатки, соответствующие остаткам в позициях 21-30, 51-56 и 76-87 последовательности SEQ ID NO: 1, соответствуют петлям ВС, DE и FG соответственно. Однако следует понимать, что не каждый аминокислотный остаток в области петли должен быть изменен для того, чтобы получить высокую аффинность 10Fn3 к выбранной мишени (например, к PCSK9).
Например, нет необходимости изменять остатки 21 (S) и 22 (W) петли ВС, как указано в последовательности SEQ ID NO: 1, для связывания с PCSK9. Т.е. домены 10Fn3 с высокой аффинностью связывания PCSK9 могут быть получены при изменении остатков только в позициях 23-30 петли ВС, как она показана в последовательности SEQ ID NO: 1. Это наглядно показано на примерах последовательностей петли ВС, приведенных в табл. 3, где показано, что изменены только аминокислотные остатки в затемненных позициях приведенных последовательностей. Таким образом, в некоторых вариантах исполнения, петля ВС, в соответствии с данным обозначением, содержит затемненную часть любой из последо- 8 022983
вательностей SEQ ID NO: 2-17, 106-135 и 301-303, как это отражено в табл. 3. Например, в одном из вариантов исполнения петля ВС может содержать последовательность PPPSHGYG (остатки 3-10 последовательности SEQ ID NO: 2), DAPAHAYG (остатки 3-10 последовательности SEQ ID NO: 5), EPFSRLPGGGE (остатки 3-13 последовательности SEQ ID NO: 106) или DAPADGGYG (остатки 3-11 последовательности SEQ ID NO: 107).
Сходным образом, нет необходимости изменять аминокислотные остатки в позициях 51 (Р) и 56 (Т) петли DE последовательности SEQ ID NO: 1 для связывания с PCSK9. Т.е. домены 10Fn3 с высокой аффинностью связывания PCSK9 могут быть получены при изменении остатков только в позициях 52-55 петли DE, как она показана в последовательности SEQ ID NO: 1. Это наглядно показано на примерах последовательностей петли DE, приведенных в табл. 3, где показано, что изменены только аминокислотные остатки в затемненных позициях приведенных последовательностей. Таким образом, в некоторых вариантах исполнения, петля DE, в соответствии с данным обозначением, содержит затемненную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 18-27 и 136-141, как это отражено в табл. 3. Например, в одном из вариантов исполнения, петля DE может содержать последовательность PGKG (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 18), VGVG (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 27) или VSKS (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 137).
Сходным образом, нет необходимости изменять аминокислотные остатки в позиции 87 (Р) петли FG последовательности SEQ ID NO: 1 для связывания с PCSK9. Т.е. домены 10Fn3 с высокой аффинностью связывания PCSK9 могут быть получены при изменении остатков только в позициях 76-86 петли FG, как она показана в последовательности SEQ ID NO: 1. Это наглядно показано на примерах последовательностей петли FG, приведенных в табл. 3, где показано, что изменены только аминокислотные остатки в затемненных позициях приведенных последовательностей. Таким образом, в некоторых вариантах исполнения петля FG, в соответствии с данным обозначением, содержит затемненную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 28-38 и 142-172, как это отражено в табл. 3. Например, в одном из вариантов исполнения петля FG может содержать последовательность EYPYKHSGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 28), EYPYDYSGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 142) или EFDFVGAGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 167).
В некоторых вариантах исполнения настоящее изобретение демонстрирует, что петли ВС, DE и FG могут быть в общем виде описаны соответствующими консенсусными последовательностями. Например, петля ВС может быть в общем виде описана с помощью консенсусной последовательности SW(X1)ZX2G (SEQ ID NO: 323), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Z является числом от 6 до 9, Х2 представляет собой Y или Н. Данная консенсусная последовательность представлена в виде примеров последовательностями петель ВС в табл. 3, за исключением петли ВС, определяемой последовательностью SEQ ID NO: 106. В других вариантах исполнения Z является числом от 2 до 5. В определенных вариантах исполнения Х2 является остатком любой ароматической аминокислоты (т.е. Y, F, W или Н).
В другом варианте исполнения петля DE может в общем виде быть выражена с помощью консенсусной последовательности PX1X1X3T (SEQ ID NO: 324), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Х3 представляет собой G или S. Данная консенсусная последовательность представлена в виде примеров последовательностями петель DE в табл. 3.
В другом варианте исполнения петля FG может быть в общем виде выражена с помощью консенсусной последовательности EX4X1X5X1X1X6GYX4HRP (SEQ ID NO: 325), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Х4 представляет собой Y или F, Х5 представляет собой Y, F или W, Х6 представляет собой S или А. В определенных вариантах исполнения X4 и X5 являются остатками ароматических аминокислот, каждый из которых, независимо, может быть Y, F, W или Н. Данная консенсусная последовательность представлена в виде примеров последовательностями петель FG в табл. 3.
Соответственно, в определенных вариантах исполнения настоящее изобретение описывает связывающий PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью SW(X1)ZX2G (SEQ ID NO: 323), петлю DE с последовательностью РХ1Х1Х1Х3Т (SEQ ID NO: 324) и петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4HRP (SEQ ID NO: 325), в соответствии с приведенным выше описанием.
В других вариантах исполнения настоящее изобретение описывает связывающий PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью SWEPFSRLPGGGE (SEQ ID NO: 106), петлю DE с последовательностью PX1X1X1X3T (SEQ ID NO: 324) и петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4HRP (SEQ ID NO: 325), в соответствии с приведенным выше описанием.
В определенных вариантах исполнения последовательность петли ВС может быть в общем виде выражена с помощью консенсусной последовательности (X1)ZX2C (SEQ ID NO: 449), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Z является любым числом от 6 до 9, Х2 представляет собой Y или Н. Данная консенсусная последовательность представлена в виде примеров последовательностями петель ВС в табл. 3, за исключением петли ВС, определяемой последовательностью SEQ ID NO: 106. В других вариантах исполнения Z является любым числом от 2 до 5. В определенных вариантах исполнения Z является любым числом от 10 до 15. В некоторых вариантах исполнения Х2 является остатком любой ароматической аминокислоты (т.е. Y, F, W или Н).
В определенных вариантах исполнения петля DE может в общем виде быть выражена с помощью
- 9 022983
консенсусной последовательности Х1Х1Х1Х3 (SEQ ID NO: 450), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Х3 представляет собой G или S. Данная консенсусная последовательность представлена в виде примеров последовательностями петель DE в табл. 3.
В определенных вариантах исполнения петля FG может в общем виде быть выражена с помощью консенсусной последовательности EX4X1X5X1X1X6GYX4HR (SEQ ID NO: 451), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Х4 представляет собой Y или F, X5 представляет собой Y, F или W, Х6 представляет собой S или А. В определенных вариантах исполнения X4 и Х5 являются остатками ароматических аминокислот, каждый из которых, независимо, может быть Y, F, W или Н. Данная консенсусная последовательность представлена в виде примеров последовательностями петель FG в табл. 3.
Соответственно, в одном варианте исполнения настоящее изобретение описывает связывающий PCSK9 аднектин, содержащий петлю ВС с последовательностью (X1)ZX2G (SEQ ID NO: 449), петлю DE с последовательностью Х1Х1Х1Х3 (SEQ ID NO: 450) и петлю FG с последовательностью EX4X1X5X1X1X6GYX4HR (SEQ ID NO: 451), в соответствии с приведенным выше описанием.
В определенных вариантах исполнения иммуноглобулин-подобные белки, основанные на структурной части 10Fn3, могут быть определены в общем виде следующей последовательностью:
EWAAT(X)aSLLI(X)xYYRITYGE(X)iQEFTV(X)yATI(X)cDYTITVYAV(XySINY RT(SEQ ID N0:328).
В последовательности SEQ ID NO: 328 петля АВ представлена Xa, петля CD представлена Xb, петля EF представлена Хс, петля ВС представлена Хх, петля DE представлена Ху, петля FG представлена Xz. X обозначает любую аминокислоту, индекс X обозначает целое число аминокислотных остатков. В частности, а в любом месте может составлять 1-15, 2-15, 1-10, 2-10, 1-8, 2-8, 1-5, 2-5, 1-4, 2-4, 1-3, 2-3 или 1-2 аминокислотных остатка; b, с, х, у и z, каждый независимо, в любом месте, могут составлять 2-20, 2-15, 2-10, 2-8, 5-20, 5-15, 5-10, 5-8, 6-20, 6-15, 6-10, 6-8, 2-7, 5-7 или 6-7 аминокислотных остатков. В предпочтительных вариантах исполнения а составляет 2 аминокислотных остатка, b составляет 7 аминокислотных остатков, с составляет 7 аминокислотных остатков, х составляет 9 аминокислотных остатков, у составляет 6 аминокислотных остатков, z составляет 12 аминокислотных остатков. Последовательности данных бета участков могут иметь в любом месте от 0 до 10, от 0 до 8, от 0 до 6, от 0 до 5, от 0 до 4, от 0 до 3, от 0 до 2, от 0 до 1 аминокислотной замены, делеции или вставки на протяжении всех 7 структурных областей относительно соответствующих аминокислотных остатков, указанных в последовательности SEQ ID NO: 1. В определенных вариантах исполнения, аминокислотные остатки, составляющие коровую часть, фиксированы и любые замены, консервативные замены, делеции или вставки производятся с любыми другими аминокислотными остатками.
В примерах осуществления петли ВС, DE и FG, представленные последовательностями (Х)х, (Х)у и (X)z соответственно, заменены полипептидами, содержащими последовательности петель ВС, DE и FG любых вариантов белков, связывающих PCSK9, представленных в табл. 3, или затемненные области этих вариантов, или консенсусные последовательности 323-325 или 449-451.
В определенных вариантах исполнения иммуноглобулин-подобные белки на основе структуры 10Fn3 могут быть в общем виде определены следующей последовательностью:
EVVAATPTSLLI(X)xYYRITYGETGGNSPVQEFTV(X)yATISGLKPGVDYTITVYA V(X)ZISINYRT (SEQ Ш N0:329)
В последовательности SEQ ID NO: 329 петля ВС представлена Хх, петля DE представлена Xy, петля FG представлена Xz. X обозначает любую аминокислоту, индекс X обозначает целое число аминокислотных остатков. В частности, х, у и z, каждый независимо, в любом месте, может составлять 2-20, 2-15, 210, 2-8, 5-20, 5-15, 5-10, 5-8, 6-20, 6-15, 6-10, 6-8, 2-7, 5-7 или 6-7 аминокислотных остатков. В предпочтительных вариантах исполнения х составляет 9 аминокислотных остатков, у составляет 6 аминокислотных остатков, z составляет 12 аминокислотных остатков. Последовательности данных бета участков могут иметь в любом месте от 0 до 10, от 0 до 8, от 0 до 6, от 0 до 5, от 0 до 4, от 0 до 3, от 0 до 2, от 0 до 1 аминокислотной замены, делеции или вставки на протяжении всех 7 структурных областей относительно соответствующих аминокислотных остатков, указанных в последовательности SEQ ID NO: 1. В примерах осуществления изобретения последовательности данных бета участков могут иметь в любом месте от 0 до 10, от 0 до 8, от 0 до 6, от 0 до 5, от 0 до 4, от 0 до 3, от 0 до 2, от 0 до 1 консервативной аминокислотной замены на протяжении всех 7 структурных областей относительно соответствующих аминокислотных остатков, указанных в последовательности SEQ ID NO: 1. В определенных вариантах исполнения коровью аминокислотные остатки фиксированы и любые замены, консервативные замены, делеции или вставки производятся с любыми другими аминокислотными остатками. В примерах осуществления петли ВС, DE и FG, представленные последовательностями (Х)х, (Х)у и (Х)& соответственно, заменены полипептидами, содержащими последовательности петель ВС, DE и FG любых вариантов белков, связывающих PCSK9, представленных в табл. 3, или затемненные области этих вариантов, или консенсусные последовательности 323-325 или 449-451.
В определенных вариантах исполнения, анти-PCSK9 аднектин, описанный в данном изобретении,
- 10 022983
может содержать последовательность как указано в SEQ ID NO: 328 или 329, в которой петли ВС, DE и
FG, представленные последовательностями (Х)х, (Х)у и (X)z соответственно, заменены соответствующим набором определенных последовательностей петель ВС, DE и FG от любого из клонов в табл. 3, или последовательности, по меньшей мере на 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентичные последовательностям петель ВС, DE и FG клонов, приведенных в табл. 3. В примерах осуществления изобретения антиPCSK9 аднектин, описанный в данном изобретении, определяется последовательностью SEQ ID NO: 329 и содержит соответствующий набор последовательностей петель ВС, DE и FG из любого из клонов, приведенных в табл. 3. Например, клон 1459D05 в табл. 3 содержит такие же последовательности петель ВС, DE и FG, как в последовательностях SEQ ED NO: 2, 18 и 28 соответственно. Таким образом, анти-PCSK9 аднектин на основе данных петель может содержать последовательность SEQ ID NO: 328 или 329, в которой (Х)х содержит последовательность SEQ ID NO: 2, (Х)у содержит последовательность SEQ ID NO: 18 и (X)z содержит последовательность SEQ ID NO: 28. Схожие конструкции могут быть реализованы с использованием набора петель ВС, DE и FG других клонов, указанных в табл. 3, или консенсусных последовательностей 323-325 или 449-451. Структурные части таких вариантов анти-PCSK9 аднектина могут содержать в любой части от 0 до 20, от 0 до 15, от 0 до 10, от 0 до 8, от 0 до 6, от 0 до 5, от 0 до 4, от 0 до 3, от 0 до 2, от 0 до 1 аминокислотной замены, консервативной аминокислотной замены, делеции или вставки относительно аминокислотных остатков структурной части, указанных в последовательности SEQ ID NO: 1. Такие структурны модификации могут осуществляться до тех пор, пока анти-PCSK9 аднектин способен связывать PCSK9 с желаемой KD.
В некоторых вариантах исполнения петля ВС белка, описываемого в данном изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из следующей группы:
SWPPPSHGYG (SEQ ID NO: 2), SWRPPIHAYG (SEQ ID NO: 3), SWDAPIHAYG (SEQ ID N0:4), SWDAPAHAYG (SEQ ID N0:5) и SWDAPAVTYG (SEQ ID N0:6),
SWSPPANGYG (SEQ ID N0:7), SWTPPPKGYG (SEQ ID N0:8), SWRPPSHAYG (SEQ ID N0:9), SWDPPSHAYG (SEQ Ш N0:10), SWEPPSHAYG (SEQ ID N0:11),
SWSPPSHAYG (SEQ ID N0:12), SWRPPSNGHG (SEQ ID N0:13), SWVPPSDDYG (SEQ ID N0:14), SWVPSSHAYG (SEQ ID N0:15), SWDPSSHAYG (SEQ ID N0:16) и SWEPSSHAYG (SEQ ID N0:17).
В последующих вариантах исполнения петля ВС белка, описываемого в данном изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 106-135 и 301-303. В других вариантах исполнения петля ВС белка, описываемого в изобретении, содержит затемненную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 2-17, 106-135 и 301-303, как показано в табл. 3. Например, в одном из вариантов исполнения петля ВС содержит последовательность PPPSHGYG (остатки 3-10 последовательности SEQ ID NO: 2), DAPAHAYG (остатки 3-10 последовательности SEQ ID NO: 5), EPFSRLPGGGE (остатки 3-13 последовательности SEQ ID NO: 106) или DAPADGGYG (остатки 3-11 последовательности SEQ ID NO: 107).
В некоторых вариантах исполнения петля DE белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из следующей группы:
PPGKGT (SEQ Ш N0:18), PIVEGT (SEQ Ш N0:19), PGSEGT (SEQ Ю N0:20),
PGSKGT (SEQ ID N0:21), PGSKST (SEQ ID N0:22), PVGRGT (SEQ ID N0:23),
PVGEGT (SEQ ID N0:24), PIGKGT (SEQ ID N0:25), PVNEGT (SEQ ID N0:26) и PVGVGT (SEQ ID N0:27).
В последующих вариантах исполнения петля DE белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 136141. В других вариантах исполнения петля DE белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит затемненную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 18-27 и 136-141, как показано в табл. 3. Например, в одном из вариантов исполнения петля DE содержит последовательность PGKG (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 18), VGVG (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 27) или VSKS (остатки 2-5 последовательности SEQ ID NO: 137).
В некоторых вариантах исполнения петля FG белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из следующей группы:
- 11 022983
EYPYKHSGYYHRP (SEQ ID N0:28), EYTFKHSGYYHRP (SEQ ID N0:29),
| EYTYKGSGYYHRP | (SEQ | ID | N0:30), | EYTYNGAGYYHRP | (SEQ | ID | N0:31), |
| EYTYIGAGYYHRP | (SEQ | ID | N0:32), | EYTYEGAGYYHRP | (SEQ | ID | N0:33), |
| EYAYNGAGYYHRP | (SEQ | ID | N0:34), | EYPWKGSGYYHRP | (SEQ | ID | N0:35), |
| EFPFKWSGYYHRP | (SEQ | ID | N0:36), | EFPWPHAGYYHRP I | (SEQ ED | » N0:37) и |
EYAFEGAGYYHRP (SEQ ID N0:38).
В последующих вариантах исполнения петля FG белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 142172. В других вариантах исполнения петля FG белка, описываемого в настоящем изобретении, содержит затемненную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 28-38 и 142-172, как показано в табл. 3. Например, в одном из вариантов исполнения петля FG содержит последовательность EYPYKHSGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 28), EYPYDYSGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 142) или EFDFVGAGYYHR (остатки 1-12 последовательности SEQ ID NO: 167).
В некоторых вариантах исполнения белок, описываемый в настоящем изобретении, содержит одну последовательность петли ВС, выбранную из группы последовательностей ВС, включающих последовательности SEQ ID NO: 2-17, 106-135 и 301-303, или затемненную часть любой одной из последовательностей SEQ ID NO: 2-17, 106-135 и 301-303, как показано в табл. 3; одну последовательность петли DE, выбранную из группы последовательностей петель DE, включающих последовательности SEQ ID NO: 18-27 и 136-141, или затемненную часть любой одной из последовательностей SEQ ID NO: 18-27 и 136141 как показано в табл. 3; и одну последовательность петли FG, выбранную из группы последовательностей FG, включающих последовательности SEQ ID NO: 28-38 и 142-172, или затемненную часть любой одной из последовательностей SEQ ID NO: 28-38 и 142-172, как показано в табл. 3. В некоторых вариантах исполнения белок, описываемый в настоящем изобретении, содержит аминокислотные последовательности петель ВС, DE и FG, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичные любой одной из последовательностей SEQ ID NO: 2-38, 106-172, 301-303. В других вариантах исполнения белок, описываемый в настоящем изобретении, содержит аминокислотные последовательности петель ВС, DE и FG, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичные затемненной части любой из последовательностей SEQ ID NO: 2-38, 106-172, 301-303, как показано в табл. 3.
В некоторых вариантах исполнения аминокислотная последовательность aHTH-PSCK9 аднектина содержит любую из последовательностей SEQ ID NO: 39-76, 173-290 и 304-309. В некоторых вариантах исполнения aнти-PSCK9 аднектин содержит фрагмент аминокислотной последовательности домена Fn3 с 3 по 96 позиции любой из последовательностей SEQ ID NO: 39-76, 173-290 и 304-309. В некоторых вариантах исполнения aнти-PSCK9 аднектин содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 39-76, 173-290 и 304-309.
Фибронектин связывается с интегринами различных типов за счет интегринсвязывающего мотива аргинин-глицин-аспарагиновая кислота (RGD). В некоторых вариантах исполнения белок, описываемый в данном изобретении, содержит домен 10Fn3 без интегринсвязывающего (RGD) мотива. Интегринсвязывающий мотив может быть удален путем видоизменения последовательности RGD за счет аминокислотных замен, делеций или инсерций.
В определенных вариантах исполнения молекулы aнти-PSCK9 аднектина, описываемые в настоящем изобретении, могут быть модифицированы за счет удлинения N- или С-концевых частей. Например, последовательность MG может быть добавлена на N-конец последовательности домена 10Fn3, определяемой последовательностью SEQ ID NO: 1. Добавочная аминокислота M обычно отщепляется, оставляя на N-конце белка аминокислотный остаток G. В другом случае первые 10 аминокислотных остатков последовательности aнти-PSCK9 аднектина, приведенной в табл. 4, могут быть заменены другой Nконцевой последовательностью, называемой в данном документе N-концевым удлинением, как показано в табл. 6 (например, SEQ ID NO: 371-379). Кроме того, M, G или MG могут быть помещены на N-конец любого N-концевого удлинения, SEQ ID NO: 371-379. Анти-PSCK9 аднектины, описанные в данном изобретении, могут также содержать различные С-концевые последовательности, называемые в данном документе С-концевыми удлинениями. Например, последовательность aнти-PSCK9 аднектина, показанная в табл. 4, может быть укорочена после треонина, соответствующего треонину в 94 положении последовательности SEQ ID NO: 1 (т.е. укорочена после последовательности INYRT (SEQ ID NO: 636)). Такой укороченный вариант может быть использован в качестве терапевтической молекулы в укороченной форме, или может быть добавлена другая С-концевая последовательность после остатка треонина. Примеры С-концевых удлиняющих последовательностей приведены в табл. 6 как SEQ ID NO: 380-395. Примеры последовательностей aнти-PSCK9 аднектина, содержащих С-концевые удлинения, приведены в табл. 4. Например, последовательность SEQ ID NO: 49 (клон 1813Е02) содержит естественную Сконцевую удлиняющую последовательность EIDKPSQ (SEQ ID NO: 380) с последующей последователь- 12 022983
ностью His6-T3ra (SEQ ID NO: 637). Однако стоит понимать, что последовательность His6-T3ra полностью необязательна.
В отдельных вариантах исполнения последовательности С-концевого удлинения (также называемые "хвосты"), содержат остатки Е и D и могут быть от 8 до 50, от 10 до 30, от 10 до 20, от 5 до 10 и 2 и 4 аминокислотных остатка длиной. В некоторых вариантах исполнения последовательности "хвостов" включают линкеры на основе ED, в которых последовательность состоит из тандемных повторов ED. В примерах осуществления изобретения "хвосты" содержат 2-10, 2-7, 2-5, 3-10, 3-7, 3-5, 3, 4 или 5 повторов ED. В определенных вариантах исполнения "хвосты" на основе ED также могут включать дополнительные аминокислотные остатки, такие как, например, EI (SEQ ID NO: 385), EID, ES, ЕС, EGS и EGC. Эти последовательности сходны с известными последовательностями "хвостов" аднектина, такими как EIDKPSQ (SEQ ID NO: 380), в которых удалены остатки D и K. В примерах осуществления изобретения, такие ED-хвосты содержат остатки Е, I или EI (SEQ ID NO: 385) перед ED-повторами.
В других вариантах исполнения N- и С-концевые последовательности могут быть комбинированы с последовательностями других известных линкеров (например, SEQ ID NO: 396-419 в табл. 6), если это необходимо при конструировании слитых вариантов aнти-PSCK9 аднектина. Примеры последовательностей aнти-PSCK9 аднектина, содержащих линкерные последовательности, приведены в табл. 4 (например, SEQ ID NO: 53, 55 и 57). В некоторых вариантах исполнения С-концевая последовательность может быть добавлена к последовательности домена 10Fn3 для упрощения прикрепления фармакокинетической группы. Например, цистеин-содержащая линкерная последовательность, такая как GSGC (SEQ ID NO: 77) может быть добавлена на С-конец для сайт-направленного пэгилирования данного остатка цистеина.
Фармакокинетические части.
Одним из объектов, описываемых данным изобретением, является aнти-PCSK9 аднектин, содержащий фармакокинетическую (PK) часть. Улучшенная фармакокинетика может быть желательна в соответствии с имеющейся терапевтической необходимостью. Часто желательно повысить биодоступность и/или увеличить время между введением доз препарата, что возможно за счет увеличения периода времени, когда белок остается доступным в сыворотке крови после введения препарата. В некоторых случаях желательно поддерживать постоянную концентрацию белка в плазме (например, уменьшить различие между концентрацией белка в сыворотке вскоре после введения и незадолго до следующего введения). Анти-PCSK9 аднектин может быть присоединен к определенной группировке, которая снижает скорость выведения полипептида у млекопитающих (например, мышей, крыс или человека) более чем в три раза по сравнению с немодифицированным aнти-PCSK9 аднектином. Другие показатели улучшения фармакокинетики включают в себя время полужизни в плазме, которое часто делится на альфа- и бета-фазу. Показатели каждой или обеих фаз могут быть значительно улучшены путем добавления соответствующей PK-группы.
Молекулы, замедляющие выведение белка из крови, в данном документе называются "PK-группы" и включают полиоксоалкиленовые группы, например полиэтиленгликоль, сахара (например, сиаловая кислота) и хорошо переносимые белковые группы (например, Fc-фрагмент и его части и их варианты, трансферрин, сывороточный альбумин). Анти-PCSK9 аднектин может быть слит с альбумином или с его фрагментом (частью) или с одним из вариантов альбумина, как описано в US Publication No. 2007/0048282. В некоторых вариантах исполнения, aнти-PCSK9 аднектин может быть слит с одним или более аднектином, связывающим сывороточный альбумин, как описано в данном изобретении.
В некоторых вариантах исполнения PK-группой является белок, связывающий сывороточный альбумин, например, такие белки, как описанные в US Publication No. 2007/0178082 и 2007/0269422.
В некоторых вариантах исполнения PK-группой является сывороточный белок, связывающий иммуноглобулины, например, такие белки, как описанные в US Publication No. 2007/0178082.
В некоторых вариантах исполнения aнти-PCSK9 аднектин содержит полиэтиленгликоль (ПЭГ). С помощью реакций с аминами, тиолами или другими подходящими реакционными группами, одна или несколько молекул ПЭГ могут быть соединены с aнти-PCSK9 аднектином в различных положениях. Для этого может быть использована первичная аминогруппа на N-конце белка или боковые группы аминокислотных остатков, таких как лизин или аргинин. В некоторых вариантах исполнения ПЭГ присоединен в одном из положений, выбранных из группы: а) N-конец; b) между N-концом и наиболее близко расположенным к N-концу бета или бета-подобным участком; с) на петле, расположенной на обратной по отношению к сайту связывания поверхности полипептида; d) между С-концом и наиболее близко расположенным к С-концу бета или бета-подобным участком; и е) на С-конце полипептида.
Пэгилирование может осуществляться с помощью сайт-направленного пэгилирования, при котором в белок вводится подходящая реакционная группа для создания сайта, по которому преимущественно будет происходить пэгилирование. В некоторых вариантах исполнения последовательность белка модифицируется введением остатка цистеина в необходимой позиции, что обеспечивает направленное пэгилирование по данному остатку цистеина. ПЭГ различается по молекулярному весу в широких пределах и может быть разветвленным или линейным. В одном варианте исполнения ПЭГ имеет две цепи. В другом варианте исполнения ПЭГ имеет 4 цепи.
В некоторых вариантах исполнения aнти-PCSK9 аднектин слит с иммуноглобулиновым Fc- 13 022983
фрагментом, или его частью, или вариантом фрагмента или части. В примере осуществления изобретения используется Fc-фрагмент иммуноглобулинов подкласса IgG1, однако Fc-фрагменты других подклассов иммуноглобулинов (например, IgG2, IgG3 и IgG4) также могут быть использованы. Ниже приведена последовательность Fc-фрагмента иммуноглобулина IgG1 человека, в которой относительные положения каждой области отмечены в соответствии с номенклатурой Евросоюза (EU):
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCO^YmGFPCPA^EU^G^ SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 315)
Коровая последовательность шарнирной области выделена подчеркиванием, СН1 область выделена курсивом, СН2 и СН3 области указаны обычным шрифтом. Следует понимать, что С-концевой остаток лизина необязателен.
Указанный слитый белок может быть получен путем присоединения последовательности антиPCSK9 аднектина к любому из концов последовательности Fc-домена, т.е. могут быть получены слитые белки Fc^mM-PCS^ аднектин или анти-PCSK9 аднектин-Fc. В определенных вариантах исполнения Fcфрагмент и анти-PCSK9 аднектин соединяются при помощи линкерной последовательности. Примеры линкерных последовательностей включают
AGGGGSG (SEQ ID NO: 310),
GSGSGSGSGSGS (SEQ ID NO: 311), QPDEPGGS (SEQ ID NO: 312), ELQLEESAAEAQDGELD (SEQ ID NO: 313), TVAAPS (SEQ ID NO: 314), К AGGGGSG (SEQ ID NO: 620), KGSGSGSGSGSGS (SEQ ID NO: 621), KQPDEPGGS (SEQ ID NO:
622), KELQLEESAAEAQDGELD (SEQ ID NO: 623), KTVAAPS (SEQ ID NO: 624),
KAGGGGSGG (SEQ ID NO: 625), KGSGSGSGSGSGSG (SEQ ID NO: 626), KQPDEPGGSG (SEQ ID NO: 627), KELQLEESAAEAQDGELDG (SEQ ID NO: 628),
KTVAAPSG (SEQ ID NO: 629) AGGGGSGG (SEQ ID NO: 630), GSGSGSGSGSGSG (SEQ ID NO: 631), QPDEPGGSG (SEQ ID NO: 632), ELQLEESAAEAQDGELDG (SEQ ID NO:
633) и TVAAPSG (SEQ ID NO: 634).
В некоторых вариантах исполнения Fc-домен, входящий в состав слитого белка с анти-PCSK9 аднектином, содержит последовательность шарнирной области Fc-домена. При использовании в данном изобретении термин "шарнирная область" включает коровые аминокислотные остатки шарнирной области молекулы IgG1 в позициях 104-119 последовательности SEQ ID NO: 315 (DKTHTCPPCPAPELLG; SEQ ID NO: 316), соответствующие участку 221-236 по номенклатуре Евросоюза. В определенных вариантах исполнения слитый белок анти-PCSK9 аднектин-Fc мультимеризуется (например, образует димер), частично за счет остатков цистеина внутри шарнирной области в позициях 109 и 112 последовательности SEQ ID NO: 315 (позиции 226 и 229 по номенклатуре Евросоюза соответственно). В других вариантах исполнения шарнирная область, как описывается в данном изобретении, может дополнительно включать аминокислотные остатки областей СН1 и СН2, фланкирующих коровую последовательность шарнирной области, как показано в последовательности SEQ ID NO: 315.
В некоторых вариантах исполнения шарнирная последовательность может содержать замены, придающие желаемые фармакодинамические, биофизические и/или биологические свойства. Некоторые примеры последовательностей шарнирной области включают следующие: EPKSSDKTHTCPPCPAPELLXjGPS (SEQ ID NO: 317; коровая последовательность шарнирной области подчеркнута); EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGSS (SEQ ID NO: 318; коровая последовательность шарнирной области подчеркнута); ЕРКSSGSTHTCPPCPAPELLGGSS (SEQ ID NO: 319; коровая последовательность шарнирной области подчеркнута); BKTHTCPPCPAPELLGGPS (SEQ ID NO: 320; коровая последовательность шарнирной области подчеркнута) и DKTHTCPPCPAPELLGGSS (SEQ ID NO: 321, коровая последовательность шарнирной области подчеркнута). В одном варианте исполнения остаток Р в положении 122 (238 по номенклатуре Евросоюза) последовательности SEQ ID NO: 315 заменен на остаток S для нарушения эффекторной функции Fc-фрагмента. Пример данной замены приведен в любой из последовательностей SEQ ID NO: 318, 319 и 321. В другом варианте исполнения остатки DK в положении 104-105 последовательности SEQ ID NO: 315 (221-222 по номенклатуре Евросоюза) заменены на остатки GS для удаления потенциального сайта сшивки. Пример такой замены показан в последовательности SEQ ID NO: 319. В другом варианте исполнения остаток С в положении 103 последовательности SEQ ID NO: 315 (220 по номенклатуре Евросоюза) заменен на остаток S для предотвращения формирования неправильной ди- 14 022983
сульфидной связи в отсутствие легкой цепи. Пример такой замены приведен в последовательностях SEQ ID NO: 317-319.
В определенных вариантах исполнения слитый белок aHTu-PCSK9 аднектин-Fc может обладать следующими конфигурациями: 1) aнти-PCSK9 аднектин-шарнирная область-Fc, 2) шарнирная областьFc- aнти-PCSK9 аднектин. Таким образом, любой вариант aнти-PCSK9 аднектина, описываемый в настоящем изобретении, может быть введен в состав слитого белка с Fc-доменом, содержащего последовательность шарнирной области, в соответствии с данными конфигурациями. В некоторых вариантах исполнения для соединения модулей aнти-PCSK9 аднектин и шарнирная область-Fc может использоваться линкер. В этом случае, слитый белок может обладать, например, следующей конфигурацией: шарнирная область- aнти-PCSK9 аднектин-линкер-Fc. Кроме того, в зависимости от системы наработки слитых белков, на N-конце слитого белка может располагаться лидерная сигнальная последовательность. Например, если слитый белок продуцируется в клетках млекопитающих, следующая лидерная последовательность может быть введена на N-конец слитого белка: METDTLLLWVLLLWVPGSTG (SEQ ID NO: 326). Если слитый белок продуцируется в системе E. coli, на N-конец слитого белка будет введен остаток метионина.
Пример последовательности слитого белка aнти-PCSK9 аднектин-шарнирная область-Fc, продуцируемого в клетках млекопитающих:
MYYmLLiWVLLLVvVPGSYGGySDVPRDLEWAATPTSLLISmFPSDDYGYYFl ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTA TISGLKPGVDYTITVYA VEFPWPHAGYYHRPISINYRTEI EPKSSGSTHTCPPCPAPELLGGSSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG К (SEQ ID NO: 322).
В данном примере Fc-домен содержит последовательности областей CH1, CH2 и СН3 иммуноглобулинов G1 человека:
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 448)
и шарнирная область последовательности SEQ ID NO: 319. В последовательности SEQ ID NO: 322 последовательность лидерного пептида выделена жирным шрифтом, последовательность aнти-PCSK9 аднектина выделена курсивом, шарнирная область подчеркнута. Следует понимать, что остаток лизина на конце последовательности SEQ ID NO: 322 необязателен. Эффективность слитого полипептида, приведенного в последовательности SEQ ID NO: 322 (также описываемого в данном изобретении как PRD460) показана в примере 4.
Примеры слитых белков PCSK9 аднектин-Fc приведены в табл. 1. Все последовательности могут начинаться с метионина и лидерной сигнальной последовательности клеток млекопитающих (например, SEQ ID NO: 326).
- 15 022983
Таблица 1
Примеры последовательностей слитых белков aHTu-PCSK9 аднектин-Fc
| Клон | Описание | Последовательность | |
| EQ | или | ||
| ID | название |
PCSK9 Аднектин-Xj-Fc С-концевые варианты
| 52 | 1459 D05-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWPPPSH GYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPPGKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYPYKHSGYYHRPISINY RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 53 | 1784F ОЗ-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWRPPIH AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIVEGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTFKHSGYYHRPISINY RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
- 16 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| С-концевой остаток К | |||
| 54 | 1784F 03-ml-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPIH AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSEGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTFKHSGYYHRPISINY RT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 55 | 1784F 03-m2-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDL E WAATPT S L LIS WDAPAH AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTFKH S GYYHRPISINY RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 56 | 1784F 03-m3-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из | GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAV TYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTFKHSGYYHRPISINY RT-Χχ-ΧζVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG |
- 17 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | ||
| 57 | 1813Е 02-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWSPPAN GYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPVGRGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTYKGSGYYHRPISINY RT-X1-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 58 | 1923В 02-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLE WAATPT SLLISWTPPPK GYGYYRITYGE T GGN SPVQEF TVPVGE GTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTYNGAGYYHRPISINY RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK |
| 59 | 1923В 02(N82I)-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWTPPPK GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGEGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTYIGAGYYHRPISINY RT-Xx-X2- |
- 18 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | ||
| 60 | 1923В 02(N82E) -Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWTPPPK GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGEGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYTYEGAGYYHRPISINY RT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLY SKLTVDKSRWQQ GNVF S С SVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 61 | 1923В 02(Т80А) -Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWTPPPK GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGEGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYAYNGAGYYHRPISINY RT-Xx-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
- 19 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
Последовательность
62
1922
G04-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWRPPSH
AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS
GLKPGVDYTIТVYAVEYPWKGS GYYHRPISINY
RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
63
1922 G04(R25D)Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPSH
AYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS
GLKPGVD YT IТ VYAVE YPWKG S G YYHRP ISI NY
RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
64
1922 G04(R25E)Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPPSH
AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEYPWKG S GYYHRPISINY
RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
- 20 022983
| Клон | Описание | Последовательность | |
| EQ ID | или название | шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 1922 | XI является | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWSPPSH | |
| 65 | G04(R25S) - | необязательным и, если | AYGYYRITYGETGGNSPVQEF TVPIGKGTATIS |
| Fc слитый | присутствует, может быть | GLKPGVDYTIТVYAVEYPWKG S GYYHRPISINY | |
| белок | выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | RT-Xi-XsVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | |
| 2012 | XI является | GVS DVPRDL E WAATPT S L LISWRPPSN | |
| 66 | A04-Fc | необязательным и, если | GHGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVNEGTATIS |
| слитый белок | присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GLKPGVDYTITVYAVEFPFKWSGYYHRPISINY RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | |
| 2013Е | XI является | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWVPPSD | |
| 67 | ΟΙ-Fc слитый | необязательным и, если | DYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS |
| белок | присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK | GLKPGVDYTITVYAVEFPWPHAGYYHRPISINY RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
- 21 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| (SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | ||
| 68 | 2011 H05-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLE WAATPT SL LIS WVP S S Н AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGVGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYAFEGAGYYHRPISINY RT-Xi-ХзVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 69 | 2011 H05(V23D)Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLI SWDPSSH AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGVGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYAFEGAGYYHRPISINY RT-Χι-Х2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 2011 | XI является | GVSDVPRDLEWAATPTSLLI SWEPSSH |
- 22 022983
EQ
ID
70
71
72
Клон
или
название
H05(V23E) Fc слитый белок
2381В 02-Fc слитый белок
2381В 04-Fc слитый белок
Описание
необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID
Последовательность
AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGVGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEYAFEGAGYYHRPISINY
RT-Хг-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSR
LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA
ТIS GLKPGVDYTITVYAVEYPYDYS GYYHRPIS
INYRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVS DVPRDLE WAATPT S LLISWEPFSR
LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA
TISGLKPGVDYTITVYAVEYPYEHSGYYHRPIS
INYRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
- 23 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | QKSLSLSPG | ||
| 73 | 2381В 06-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID N0: 384), EIE и EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSR LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA TIS GLKPGVDYTITVYAVEYPYPHS GYYHRPIS INYRT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 74 | 2381В 08-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAD GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEYTFPGAGYYHRPISIN YRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 75 | 2381 D02-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), EIE и | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSR LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA TIS GLKPGVDYTITVYAVEYPYDHSGYYHRPIS INYRT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV |
- 24 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
76
2381
D04-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
77
2381F
11-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
78
2381
G03-Fc
XI является необязательным и, если
Последовательность
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSR
LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA TISGLKPGVDYTITVYAVEFPYDHSGYYHRPIS INYRT-Xi-Х2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVS DVPRDLE WAATPT S L LISWDAPAD
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKSTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEYTFPGAGYYHRPISIN
YRT-X1-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSR
LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA
- 25 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| слитый белок | присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | TISGLKPGVDYTITVYAVEFPYAHSGYYHRPIS INYRT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | |
| 79 | 2381 G09-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAG DGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEFTFPGAGYYHRPISIN YRT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 80 | 2381 H03-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fc- | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSR LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA TIS GLKP GVDYTITVYAVEYPYAH SGYFHRPIS INYRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
- 26 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| фрагмент может включать С-концевой остаток К | |||
| 81 | 2382 AOl-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLEVVAATPTS L LISWAAPAG GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEYDFPGAGYYHRPISIN YRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 82 | 2382В 10-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLEVVAATPT SLLISWDAPAD AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPS SKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYDFPGSGYYHRPISINY RT-Хх-ХгVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 83 | 2382В 09-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), EIE и EIEK (SEQ IDNO: 635); X2 | GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAD AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEF DYPG S GYYHRPISINY RT-X1-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVE VHNAKT KPRE EQ YN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK |
- 27 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
84
2382С 05-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
85
2382С 09-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
86
2382
D03-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть
Последовательность
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVS DVPRDLE WAAT РТ S L LISWDAPAD
GAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEYSFPGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVS DVPRDLEWAATPT SLLISWDAPAE
GYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINY
RT-Xi-XsVFLFPPKPKDTLNISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAD
EAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISIN
- 28 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | YRT-Xi-XsVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | ||
| 87 | 2382 D05-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDN0: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAD GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISIN YRT-Хх-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 88 | 2382 D08-FC слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAD GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFPFPGSGYYHRPISINY RT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
- 29 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| С-концевой остаток К | |||
| 89 | 2382 D09-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLEWAAT PT S L LISWDAPAE GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINY RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 90 | 2382F 02-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLEWAAT PT S LLIS WDAPAG GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISIN YRT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 91 | 2382F ОЗ-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAA DAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEFNFPGAGYYHRPISIN YRT-Xi-XsVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPАРIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG |
- 30 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | ||
| 92 | 2382F O5-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLE WAATPT S L LISWDAPAE AGKHYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA ТIS GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPIS INYRT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 93 | 2382F 08-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLI SWDAPAE AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFTYPGSGYYHRPISINY RT-Xi-XsVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 94 | 2382F 09-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей | GVS DVPRDLE WAAT PT S L LIS WDAPAA AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYDFPGSGYYHRPISINY RT-Xi-X2- |
- 31 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
95
2382
G04-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAG
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
96
2382
HIO-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAG
GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINY RT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
- 32 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
97
2382
Hll-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO. 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAD
GYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPVFKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEFDYPGSGYYHRPISINY
RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLY SKLTVDKSRWQQGNVF S С SVMHEALHNHYT QKSLSLSPG
98
2382
H04-FC слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAA
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEYDFPGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
99
2382
H07-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей
GVSDVPRDLEVVAATPTSLLISWDAPAD
AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINY
RT-Xi-XsVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
- 33 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
00
2382
H09-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT SL LISWDAPAA
AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPS SKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINY
RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
01
2451
A02-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAA
GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFPFPGS GYYHRPISINY RT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
02
245 IB 05-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK
GVS DVPRDL Е WAATPT S L LIS WDAPAG
GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEFDYPGSGYYHRPISINY
RT-Xx-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
- 34 022983
Описание
Последовательность
Клон
или
название
EQ
ID
(SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из
последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
03
2451В 06-Fc слитый белок
(эквивалент
2382D05)
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT S LLIS WDAPAD
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
04
2451C 06-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAG
AASYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT
ISGLKPGVDYTITVYAVEFPFPGAGYYHRPISI
NYRT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
2451
XI является
GVS DVPRDLEWAATPT SLLISWDAPAG
- 35 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| 05 | D05-Fc слитый белок | необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINY RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 06 | 2451F ОЗ-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLEWAATPT SLLISWDPPAE GYGYYRITYGETGGNSPVQEF TVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFNFPGSGYYHRPISINY RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 07 | 2451 G01-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID | GVS DVPRDLEWAATPT S L LISWDAPAG GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPS SKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINY RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT |
- 36 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
Последовательность
08
2451
H07-Fc слитый белок
09
2382E 03-Fc слитый белок
10
2382E 04-Fc слитый белок
N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи
QKSLSLSPG
GITDVPRDLEWAATPTSLLISWNPPDV
NYGYYRITYGETGGNSPLQEFTVPVSKGTATIS
GLKPGVDYTIТVYAVEYPYAHAGYYHRPISINY
RT-Хг-ХгVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAG
DGYGYYRIТYGET GGNS PVQEF ТVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAG
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEFTFPGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
- 37 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последователь ность |
| EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | ||
| 11 | 2382Е O5-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDLEWAATPT SLLISWDAPAE GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISIN YRT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 12 | 2382Е 09-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVS DVPRDL Е WAAT PT SL LI SWDAPAE AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYDFPGSGYYHRPISINY RT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 13 | 2381 A04-Fc | XI является необязательным и, если | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSR LPGGGEYYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTA |
- 38 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
14
15
слитый белок
2381
A08-Fc слитый белок
2381В 10-Fc слитый белок
присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный FcTISGLKPGVDYTITVYAVEYPYPFSGYYHRPIS
INYRT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAD
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEYDFPGAGYYHRPISIN
YRT-Xx-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAG
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEYNFIGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
- 39 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| фрагмент может включать С-концевой остаток К | |||
| 16 | 2381С 08-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAD GAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI SGLKPGVDYTITVYAVEFPYPFAGYYHRPISIN yrt-xx-x2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 17 | 2381 G06-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWSEKLD GKARRGYYRITYGETGGNSPVQQFTVPGSKGTA TISGLKPGVDYTITVYAVEFPYDHSGYYHRPIS INYRT-X1-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 18 | 2381 HOl-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWSPRDS TGLVRRGYYRITYGETGGNSPVQQFTVPGSKGT ATISGLKPGVDYTITVYAVEYPYDHSGYYHRPI SINYRT-Xi-XzVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK |
- 40 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
19
2381
H06-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWGDVRT
NEARQGYYRITYGETGGNSPLQGFTVPGSKGTA
TISGLKPGVDYTITVYAVEYTYEHSGYYHRPIS
INYRT-Xx-XzVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
20
2381
H09-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAAT РТ S L LIS WDAPAG
GGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEFDFVGAGYYHRPISIN
YRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
21
2382В 11-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAA
AYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEYDFAGSGYYHRPISINY
- 41 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
RT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
22
2382В 08-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAD
AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPS SKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFAFPGAGYYHRPISINY
RT-Xx-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
23
2382С 11-Fc слитый белок
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать
GVS DVPRDLE WAATPT SLLISWDAPAG
GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEYDFAGSGYYHRPISINY RT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
- 42 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
24
2382
G03-Fc слитый белок
25
2382
H03-Fc слитый белок
26
2451
AlO-Fc слитый белок
С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из
GVS DVPRDLE WAAT РТ S L LISWDAPAE
AEAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT
IS GLKPGVDYTIТVYAVEYVF PGAGYYHRPISI
NYRT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAE
GAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATI
SGLKPGVDYTITVYAVEYPYPFAGYYHRPISIN
YRT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVT DVPRDME WAATPT S L LIS WQPPAV TYGYYRITYGETGGNSTLQQFTVPVYKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEYPYDHSGYYHRPISINY
RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
- 43 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG | ||
| 27 | 2451В 02-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAA AYGYYRITYGE TGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFDYPGSGYYHRPISINY RT-Xi-XsVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIЕКТISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 28 | 2451C 11-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GIVDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPAG AYGYYRITYGETGGNSPKQQFTVPGYKGTATIS GLKPGVDYTIТVYAVEYPYDH S GYYHRPISINY RT-Xr-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK |
| 29 | 2451 HOl-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей | GVS DVPRDLE WAATPT S L LIS WDAPAA GYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEYDFPGSGYYHRPISINY RT-Xl-X2- |
- 44 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
30
2011В 11-Fc слитый белок
31
2971
A03-Fc слитый белок
группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ГО N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384),Е1Еи EIEK (SEQ ID N0: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ГО N0: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ IDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWAPPSD
AYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEYPYSHAGYYHRPISINY
RT-Xi-X2VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPSD
DYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS
GLKPGVDYTITVYAVEFPWPHAGYYHRPISINY
RT-Xi-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG
- 45 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| 32 | 2971 A09-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQ ID NO: 384), EIE и EIEK (SEQ ID NO: 635); X2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAD DYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS GLKPGVDYTITVYAVEFPWPHAGYYHRPISINY RT-Хг-ХгVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
| 33 | 2971Е 02-Fc слитый белок | XI является необязательным и, если присутствует, может быть выбран из следующей группы: Е, El, EID, EIDK (SEQIDNO: 384), Е1Еи EIEK (SEQ ID NO: 635); Х2 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; данный Fcфрагмент может включать С-концевой остаток К | GVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPSD DYGYYRIТYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS GLKPGVDYTIТVYAVEFPWPHAGYYHRPISINY RT-X!-X2VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG |
Xr-Fc-X^-PCSKP Аднектин N-концевые варианты
| Fc- | XI выбирается из | Χι- | |
| 34 | 1459D05 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
| слитый белок | шарнирной области SEQ ID | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV | |
| NO: 317-321; Х2 | LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK | ||
| выбирается из линкерных | AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG | ||
| последовательностей SEQ | FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF | ||
| ID NO: 310-314 и 620-634; | FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT | ||
| ХЗ является | qkslslspg-x2- |
- 46 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO : 635) | VSDVPRDLEWAATPTSLLISWPPPSHGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPPGKGTATISGLKPGV DYTIТVYAVEYPYKHS GYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 35 | Fc1784F03 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID N0:317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID N0: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWRPPIHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIVEGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYTFKH S GYYHRPISINYRT-X3 |
| 36 | Fc1784F03-ml слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPIHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPGSEGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYTFKHSGYYHRPISINYRT-X, |
- 47 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
Последовательность
37
Fc1784F03-m2 слитый белок
38
Fc1784F03-m3 слитый белок
последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ IDNO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAHAYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPGSKGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEYTFKHSGYYHRPISINYRT-X3
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ
ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAVTYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGV DYTIТVYAVEYTFKH S GYYHRPISINYRT-Х3
- 48 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
39
Fc1813E02 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
Последовательность
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWSPPANGYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPVGRGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEYTYKGSGYYHRPISINYRT-X3
40
Fc1923B02 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWTPPPKGYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPVGEGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYTYNGAGYYHRPISINYRT-X3
FcXI выбирается из
Χι —
- 49 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| 41 | 1923B02(N82 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
| I) слитый | шарнирной области SEQ ID | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV | |
| белок | NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWTPPPKGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVGEGTATISGLKPGV DYTIΤVYAVEΥΤΥIGAGYYHRPISINYRT-X3 | |
| Fc- | XI выбирается из | Xi- | |
| 42 | 1923B02(N82 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
| E) слитый | шарнирной области SEQ ID | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV | |
| белок | NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWTPPPKGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVGEGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYTYEGAGYYHRPISINYRT-X3 | |
| Fc- | XI выбирается из | Xi- | |
| 43 | 1923B02(T80 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
| А)слитый | шарнирной области SEQ ID | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV | |
| белок | NO: 317-321; Х2 | LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK |
- 50 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWTPPPKGYGYYR itygetggnspvqeftvpvgegtatisglkpgv DYTITVYAVEYAYNGAGYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 44 | Fc1922G04 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWRPPSHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYPWKG S GYYHRPISINYRT-X3 |
| 45 | Fc1922G04(R25 D) слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKS RWQQGNVF SC SVMHEALHNHYT |
- 51 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPSHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS GLKPGV D YT IТVYAVEYPWKG S GYYHRPISINYRT-Х3 | ||
| 46 | Fc1922G04(R25 E) слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPPSHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYPWKGSGYYHRPISINYRT-X3 |
| 47 | Fc1922G04(R25 S) слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWSPPSHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATISGLKPGV |
- 52 022983
| Клон | Описание | Последовательность | |
| EQ ID | или название | С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | DYTITVYAVEYPWKGSGYYHRPISINYRT-X3 |
| Fc- | XI выбирается из | Χι- | |
| 48 | 2012А04 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE |
| слитый белок | шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWRPPSNGHGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVNEGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFPFKWSGYYHRPISINYRT-Хз | |
| Fc- | XI выбирается из | Χι- | |
| 49 | 2013Е01 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE |
| слитый белок | шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWVPPSDDYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS GLKPGV DYTITVYAVEFPWPHAGYYHRPISINYRT-X3 |
- 53 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | |||
| 50 | Fc2011Н05 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLE WAATPTS LLISWVPS SHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVGVGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYAFEGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 51 | Fc2011H05(V23 D) слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKF NW YVDG VE VHNAKT KP RE E Q YN S T YRW SV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPSSHAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVGVGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYAFEGAGYYHRPISINYRT-X3 |
- 54 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| 52 | Fc2011H05(V23 E) слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ IDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPSSHAYGYYR itygetggnspvqeftvpvgvgtatisglkpgv DYTITVYAVEYAFEGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 53 | Fc2381B02 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ IDNO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEYPYDYS GYYHRPISINYRTХз |
| 54 | Fc2381В04 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV |
- 55 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| N0: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID N0: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ IDNO: 380-395 и EIEK (SEQ IDNO: 635) | LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEYPYEHSGYYHRPISINYRTХз | ||
| 55 | Fc2381В06 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIЕКТISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEYPYPHSGYYHRPISINYRTХз |
| 56 | Fc2381В08 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIЕКТISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF |
- 56 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTS LLISWDAPADGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEYTFPGAGYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 57 | Fc2381D02 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-XzVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEYPYDHSGYYHRPISINYRTХз |
| 58 | Fc2381D04 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE |
- 57 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEFPYDHSGYYHRPISINYRTХз | ||
| 59 | Fc2381F11 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321;Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID N0:310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO. 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKS RWQQGNVF SC SVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKSTATISGLKPG VDYTITVYAVEYTFPGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 60 | Fc2381G03 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEFPYAHSGYYHRPISINYRTX3 |
- 58 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | |||
| 61 | Fc2381G09 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGDGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFTFPGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 62 | Fc2381Н03 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEYPYAHSGYFHRPISINYRTX3 |
- 59 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| (SEQIDNO: 635) | |||
| 63 | Fc2382А01 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID N0:310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWAAPAGGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEYDFPGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 64 | Fc2382В10 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLE WAATPTS LLIS WDAPADAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYDFPGSGYYHRPISINYRT-X3 |
| 65 | Fc2382В09 | X1 выбирается из последовательностей | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
- 60 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
Последовательность
66
67
слитый белок
Fc2382C05 слитый белок
Fc2382C09 слитый белок
шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635)
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ IDNO: 635)
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADAYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEFDYPGSGYYHRPISINYRT-X3
ΧιVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADGAYGYY
RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG
VDYTITVYAVEYSFPGAGYYHRPISINYRT-X3
ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
- 61 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAEGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTIТVYAVEF DFPG S GYYHRPISINYRT-Х3 | ||
| Fc- | XI выбирается из | Χι- | |
| 68 | 2382D03 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
| слитый белок | шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADEAYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRT-Хз | |
| Fc- | XI выбирается из | Χι- | |
| 69 | 2382D05 | последовательностей | VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE |
| слитый белок | шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является | VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2- |
- 62 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRT-Хз | ||
| 70 | Fc2382D08 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFPFPGSGYYHRPISINYRT-Хз |
| 71 | Fc2382D09 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAEGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRTX3 |
- 63 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
72
Fc2382F02 слитый белок
73
Fc2382F03 слитый белок
последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ IDNO: 380-395 и EIEK (SEQ IDNO: 635)
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635)
ΧχVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGGYGYY
RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG
VDYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINYRT-X3
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ
ΧιVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAADAYGYY
RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG
VDYTITVYAVEFNFPGAGYYHRPISINYRT-X3
- 64 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
74
Fc2382F05 слитый белок
ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAEAGKHYG
YYRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLK
PGVDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRTX·,
75
Fc2382F08 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAEAYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEFTYPGSGYYHRPISINYRT-X3
FcXI выбирается из
- 65 022983
Описание
Последовательность
EQ
ID
Клон
или
название
76
2382F09 слитый белок
последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является
необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635)
77
Fc2382G04 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635)
78
Fc2382H10 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLE WAATPTSLLISWDAPAAAYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEYDFPGSGYYHRPISINYRT-X3
ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGGYGYY
RITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPG
VDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRT-X,
ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
- 66 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKPGV DYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 79 | Fc2382Н11 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ IDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VS DVPRDLE WAATPTS LLIS WDAPADGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVFKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFDYPGSGYYHRPISINYRT-X3 |
| 80 | Fc2382Н04 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVE VHNAKT KPREEQYNS T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT |
- 67 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAAGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEYDFPGAGYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 81 | Fc2382Н07 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPАРIEKTI SK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPGSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINYRT-X3 |
| 82 | Fc2382Н09 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAAAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPGV |
- 68 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | DYTIТVYAVEF DFPG S GYYHRPISINYRT-Х3 | ||
| 83 | Fc2451А02 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAAGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFPFPGSGYYHRPISINYRT-Хз |
| 84 | Fc2451В05 слитый белок | X1 выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFDYPGSGYYHRPISINYRT-X3 |
- 69 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | |||
| 85 | Fc2451В06 слитый белок (эквивалент 2382D05) | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 86 | Fc2451С06 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGAASYGY YRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKP GVDYTITVYAVEFPFPGAGYYHRPISINYRTX3 |
- 70 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| 87 | Fc2451D05 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINYRT-Хз |
| 88 | Fc2451F03 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPAEGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFNF PGS GYYHRPISINYRT-X3 |
| 89 | Fc2451 GO 1 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV |
- 71 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| N0: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIЕКТISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-XzVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFDFPGSGYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 90 | Fc2451Н07 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2ITDVPRDLEWAATPTSLLISWNPPDVNYGYYR ITYGETGGNSPLQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYPYAHAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 91 | Fc2382Е03 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF |
- 72 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID N0:380-395 и EIEK (SEQ IDNO: 635) | FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGDGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 92 | Fc2382Е04 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFTFPGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 93 | Fc2382Е05 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAEGGYGYY |
- 73 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ IDNO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFDFPGAGYYHRPISINYRT-X3 | ||
| 94 | Fc2382Е09 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAEAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYDFPGS GYYHRPISINYRT-X3 |
| 95 | Fc2381А04 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPFSRLPGGGE YYRITYGETGGNSPLQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEYPYPFSGYYHRPISINYRTX3 |
- 74 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| выбранной из последовательностей SEQ IDNO: 380-395 и EIEK (SEQ IDNO: 635) | |||
| 96 | Fc2381А08 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPGSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEYDFPGAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 97 | Fc2381В10 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEYNFIGAGYYHRPISINYRT-X3 |
- 75 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| (SEQ ID NO: 635) | |||
| 98 | Fc2381С08 слиты й белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADGAYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFPYPFAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 99 | Fc2381G06 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWSEKLDGKARRG YYRITYGETGGNSPVQQFTVPGSKGTATISGLK PGVDYTITVYAVEFPYDHSGYYHRPISINYRTХз |
| 00 | Fc2381Н01 | XI выбирается из последовательностей | XiVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPE |
- 76 022983
EQ
ID
Клон
или
название
слитый белок
01
Fc2381H06 слитый белок
02
Fc2381H09 слитый белок
Описание
шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных
Последовательность
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWSPRDSTGLVRR
GYYRITYGETGGNSPVQQFTVPGSKGTATIS GL
KPGVDYTITVYAVEYPYDH S GYYHRPISINYRT
-X3
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
QKSLSLSPG-X2VSDVPRDLE WAATPTS LLIS WGDVRTNEARQG YYRITYGETGGNSPLQGFTVPGSKGTATISGLK
PGVDYTITVYAVEYTYEHSGYYHRPISINYRTX3
ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYT LPP S RDE LT KNQVSL Т С LVKG
- 77 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGGYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEFDFVGAGYYHRPISINYRT-Хз | ||
| 03 | Fc2382В11 слиты й белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAAAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYDFAGSGYYHRPISINYRT-X3 |
| 04 | Fc2382В08 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPG-X2- |
- 78 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADAYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPSSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFAFPGAGYYHRPISINYRT-Хз | ||
| 05 | Fc2382С11 слиты й белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQIDNO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAGGYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYDFAG S GYYHRPISINYRT-X3 |
| 06 | Fc2382G03 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLE WAATPTS LLIS WDAPAEAE AYGY YRITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATIS GLKP GVDYTITVYAVEYVFPGAGYYHRPISINYRT- |
- 79 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | Хз | ||
| 07 | Fc2382Н03 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAEGAYGYY RITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPG VDYTITVYAVEYPYPFAGYYHRPISINYRT-Хз |
| 08 | Fc2451А10 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg~x2VTDVPRDMEWAATPTS LLISWQPPAVTYGYYR ITYGETGGNSTLQQF TVPVYKGTATIS GLKP GV DYTITVYAVEYPYDHSGYYHRPISINYRT-X3 |
- 80 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
09
Fc2451B02 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
10
Fc245101
слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
FcXI выбирается из
Последовательность
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAAAYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEFDYPGSGYYHRPISINYRT-X,
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2IVDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPAGAYGYYR
ITYGETGGNSPKQQFTVPGYKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEYPYDH S GYYHRPISINYRT-X3
Χι- 81 022983
EQ
ID
Клон
или
название
Описание
Последовательность
11
2451Н01 слитый белок
последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является
необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPAAGYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEYDFPGSGYYHRPISINYRT-X3
12
Fc2011B11 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635)
XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF
FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT
qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWAPPSDAYGYYR
ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATISGLKPGV
DYTITVYAVEYPYSHAGYYHRPISINYRT-X,
13
Fc2971A03 слитый белок
XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2
ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE
VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV
LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK
- 82 022983
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| выбирается из линкерных последовательностей SEQ IDNO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPSDDYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATISGLKPGV DYTIТVYAVEFPWPHAGYYHRPISINYRT-Х3 | ||
| 14 | Fc2971А09 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; ХЗ является необязательным и, если присутствует, может быть С-концевой «хвостовой» последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO: 635) | ΧιVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT qkslslspg-x2VSDVPRDLEWAATPTSLLISWDAPADDYGYYR ITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTATISGLKPGV DYTITVYAVEFPWPHAGYYHRPISINYRT-X3 |
| 15 | Fc2971Е02 слитый белок | XI выбирается из последовательностей шарнирной области SEQ ID NO: 317-321; Х2 выбирается из линкерных последовательностей SEQ ID NO: 310-314 и 620-634; | XiVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSV LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT |
- 83 022983
последовательностью, выбранной из последовательностей SEQ
ID NO: 380-395 и EIEK (SEQ ID NO. 635)
В некоторых вариантах исполнения aHTH-PCSK9 аднектин содержит домен Fn3 и PK-группу. В некоторых вариантах исполнения доменом Fn3 является домен 10Fn3. В некоторых вариантах исполнения PK-группа увеличивает время полужизни пептида в сыворотке более чем на 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 200, 400, 600, 800, 1000% или более относительно домена Fn3 без PK-группы.
В некоторых вариантах исполнения PK-группой является полимерный сахар. В некоторых вариантах исполнения PK-группой является полиэтиленгликоль. В некоторых вариантах исполнения PKгруппой является сывороточный альбумин человека. В некоторых вариантах исполнения PK-группой является сывороточный иммуноглобулин-связывающий белок. В некоторых вариантах исполнения PKгруппой является трансферрин.
В некоторых вариантах исполнения PK-группой является другой аднектин, специфичный к сывороточному белку, например к HSA. В настоящем изобретении описываются специфические связывающие сывороточный альбумин молекулы аднектина (или SABA). В определенных вариантах исполнения последовательность слитого белка PCSK9 аднектина с SABA может быть в общем виде представлена как К1-коровая часть PCSK9 аднектина-Х2-Х3-Х4-коровая часть SABA-X5 (SEQ ID NO: 618) или X1-коровaя часть SABA-Х^Х^Х^коровая часть PCSK9 аднектина-Х5 (SEQ ID NO: 619), где X1 и Х4 представляют собой необязательные N-концевые удлинения, Х2 и Х5 представляют собой необязательные С-концевые удлинения, Х3 представляет собой линкер. В одном из вариантов исполнения аднектины (либо РСК9, либо связывающие сывороточный альбумин) последовательностей SEQ ID NO: 618 и 619 включают коровую область аднектина, т.е. коровая последовательность PCSK9 аднектина может быть любой из последовательностей PCSK9 аднектинов, представленных в табл. 4, в которой данные последовательности начинаются с аминокислотного остатка, соответствующего остатку Е8 последовательности SEQ ID NO: 1 и заканчиваются аминокислотным остатком, соответствующим остатку Т94 последовательности SEQ ID NO: 1. Коровая последовательность SABA может быть выбрана из любой из коровых последовательностей SABA, представленных в табл. 6.
В некоторых вариантах исполнения X1 и X4 являются независимо необязательными и, в случае присутствия, являются независимо выбранными из последовательностей SEQ ID NO: 371-379, приведенных в табл. 6. Данные последовательности могут содержать M, G или MG последовательность на N-конце, если такие аминокислотные остатки не включены в последовательность. Для экспрессии в клетках млекопитающих слитые белки могут также содержать на N-конце лидерную сигнальную после довательность, такую как METDTLLLWVLLLWVPGSTG (SEQ ID NO: 326). В некоторых вариантах исполнения Х2 и X5 являются независимо необязательными и, в случае присутствия, являются независимо выбранными из последовательностей SEQ ID NO: 380-395, приведенных в табл. 6. В определенных вариантах исполнения Х3 представляет собой линкерную последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 396-419, приведенных в табл. 6. Последовательности в табл. 2 представляют собой примеры слитых белков aнти-PCSK9 и SABA. Следует понимать, что любая последовательность PCSK9 аднектина и SABA, описанная в данном изобретении, может быть включена в состав таких слитых белков.
- 84 022983
Таблица 2
Примеры последовательностей слитого белка PCSK9 аднектин-SABA
| EQ ID | Клон или название | Описание | Последовательность |
| 16 | PCSK9 АднектинSABA слитый белок | Последовательность PCSK9 Аднектина подчеркнута; последовательность SABA выделена жирным шрифтом. Последовательность PCSK9 Аднектина представляет собой коровую область от клона 2013Е01; | ΧιEWAATPTSLLISWVPPSDDYGYYRITY |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTATISGLKP | |||
| GVDYTITVYAVEFPWPHAGYYHRPISIN | |||
| YRT-X2-X3-X4EWAATPTSLLISWHSYYEQNSYYRITY GETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGLKP GVDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTχ5 | |||
| последовательность SABA взята из SABA 1 (SEQ ID NO: 330) | |||
| 17 | SABAPCSK9 Аднектин слитый белок | Последовательность SABA выделена жирным шрифтом, последовательность PCSK9 Аднектина подчеркнута. Последовательность SABA взята из SABA 1 (SEQ ID NO: 330); последовательность PCSK9 Аднектина представляет собой коровую область от клона 2013Е01 | ΧιEWAATPTSLLISWHS YYEQNS YYRITY GETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGLKP GVDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTХ2-Х3-Х4EWAATPTSLLISWVPPSDDYGYYRITY |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTATIS GLKP | |||
| GVDYTITVYAVEFPWPHAGYYHRPISIN | |||
| YRT-Xs |
Биофизическая и биохимическая характеристика.
Данное изобретение описывает аднектин, содержащий домен Fn3, связывающий PCSK9. Связывание полипептида с целевой молекулой может быть оценено с помощью констант равновесия (например, константы диссоциации, KD) и кинетических констант (например, константы скоростей прямой и обратной реакций, Kon и Koff соответственно). Аднектин, как правило, связывается с целевой молекулой с KD менее чем 500 нМ, 100 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ, 200 пМ, 100 пМ. Однако более высокая KD может быть
приемлема в случае, когда достаточно низка Koff или достаточно высока Kon.
Последовательности петель ВС, DE и FG aHTu-PCSK9 аднектинов (SEQ ID NO), описанных в настоящем изобретении, представлены в табл. 3.
- 85 022983
Петли ВС, DE и FG aHTH-PCSK9 аднектинов
Таблица 3
| ID клона | АФФи нность (Кп. нМ) | ЕС SK9EGFA FRET (Έθη. нМ) | Снижен не количества LDLR ί% ингибиоования npiL.75_HM,.ECsn ГнМП | Петля ВС | SE QID NO | Петл aDE | SEQ ID NO | Петля FG | SEQ ID NO |
| 1459D05 | 14.4f 1.58* 26Л | 4 | 66.8, >200 | SWPPPSH GYG | 2 | PPG KGT | 18 | EYPYKHSGY YHRP | 28 |
| 1784F03 | 3.8Л | 2 | 150.2, 26±13 | SWRPPIH AYG | 3 | PIV EGT | 19 | EYTFKHSGY YHRP | 29 |
| 1784F03 -ml | нд | нд | нд, >2000 | SWDAPIH AYG | 4 | PGS EGT | 20 | EYTFKHSGY YHRP | 29 |
| 1784F03 -m2 | нд | нд | ВД, >2000 | SWDAPAH AYG | 5 | PGS KGT | 21 | EYTFKHSGY YHRP | 29 |
| 1784F03 -m3 | нд | нд | нд, >2000 | SWDAPAV TYG | 6 | PGS KST | 22 | EYTFKHSGY YHRP | 29 |
| 1813Е02 | <2л | 1.3 | нд,16 | SWSPPAN GYG | 7 | PVG RGT | 23 | EYTYKGSGY YHRP | 30 |
| 1923В02 | 0.173* | 2.3 | 178.0, 23±7 | SWTPPPK GYG | 8 | PVG EGT | 24 | EYTYNGAGY YHRP | 31 |
| 1923В02 (N821) | нд | нд | нд, 14 | SWTPPPK GYG | 8 | PVG EGT | 24 | EYTYIGAGY YHRP | 32 |
| 1923В02 (N82E) | нд | нд | нд, 28 | SWTPPPK GYG | 8 | PVG EGT | 24 | EYTYEGAGY YHRP | 33 |
| 1923В02 (Т80А) | нд | НД | нд, 42 | SWTPPPK GYG | 8 | PVG EGT | 24 | EYAYNGAGY YHRP | 34 |
| 1922G04 | 0.09* | 1.2 | 105.1, 10±2 | SWRPPSH AYG | 9 | PIG KGT | 25 | EYPWKGSGY YHRP | 35 |
| 1922G04 (R25D) | нд | 2.5 | нд,29±8 | SWDPPSH AYG | 10 | PIG KGT | 25 | EYPWKGSGY YHRP | 35 |
| 1922G04 (R25E) | нд | 3.5 | ВД, 29±18 | SWEPPSH AYG | 11 | PIG KGT | 25 | EYPWKGSGY YHRP | 35 |
| 1922G04 (R25S) | нд | нд | нд, 21 | SWSPPSH AYG | 12 | PIG KGT | 25 | EYPWKGSGY YHRP | 35 |
| 2012А04 | 0.25* | 2.1 | 144.5, 12±6 | SWRPPSN GHG | 13 | PVN EGT | 26 | EFPFKWSGY YHRP | 36 |
- 86 022983
| ID клона | АФФи | EC | Снижен | Петля ВС | SE | Петл | SEQ | Петля FG | SEQ |
| ННОСТЬ ίΚη. ηΜΙ | SK9EGFA ЕВЫ ffiCso. hM) | не количества LDLR ингибиоования при 75нМ. EC-m (нМП | QID NO | aDE | ID NO | ID NO | |||
| 2013E01 | 1.51f 0.29* | 1.6 | 165.5, 10±4 | SWVPPSD DYG | 14 | PIG KGT | 25 | EFPWPHAGY YHRP | 37 |
| 2011H05 | 0.08* | 2.7 | 197.6, 12±5 | SWVPSSH AYG | 15 | PVG VGT | 27 | EYAFEGAGY YHRP | 38 |
| 2011H05 (V23D) | нд | 5.5 | нд,18±3 | SWDPSSH AYG | 16 | PVG VGT | 27 | EYAFEGAGY YHRP | 38 |
| 2011H05 (V23E) | НД | 7.4 | нд, 12±3 | SWEPSSH AYG | 17 | PVG VGT | 27 | EYAFEGAGY YHRP | 38 |
| 2381B02 (1) | 3.29f | 2.5 | 125.4, нд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EYPYDYSGY YHRP | 142 |
| 2381B04 (1) | 0.527f | 2.4 | 121.6, нд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EYPYEHSGY YHRP | 143 |
| 2381B06 (1) | нд | 3.5 | 119.7, нд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EYPYPHSGY YHRP | 144 |
| 2381B08 | 4.Ilf | 2.6 | 124.8, нд | SWDAPAD GGYG | 10 7 | PSS KGT | 136 | EYTFPGAGY YHRP | 145 |
| 2381D02 (1) | нд | 3.1 | 185.0, нд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EYPYDHSGY YHRP | 146 |
| 2381D04 (1) | 0.237f | 2.9 | 119.2, нд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EFPYDHSGY YHRP | 147 |
| 2381F11 | 1.59f | 4 | 110.2, нд | SWDAPAD GGYG | 10 7 | PVS KST | 137 | EYTFPGAGY YHRP | 145 |
| 2381G03 (1) | нд | 3.4 | 70.2, вд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EFPYAHSGY YHRP | 148 |
| 2381G09 | 1.12f | 3.1 | 133.0, нд | SWDAPAG DGYG | 10 8 | PVS KGT | 138 | EFTFPGAGY YHRP | 149 |
| 2381H03 (1) | нд | 3.4 | 89.8, нд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EYPYAHSGY FHRP | 150 |
| 2382A01 | нд | 12. 9 | 119.8, нд | SWAAPAG GGYG | 10 9 | PVS KGT | 138 | EYDFPGAGY YHRP | 151 |
| 2382B10 | 2.35f | 3 | 100.2, нд | SWDAPAD AYG | 11 0 | PSS KGT | 136 | EYDFPGSGY YHRP | 152 |
87
022983
| ID клона | АФФи | ЕС | Снижен | Петля ВС | SE | Петл | SEQ | Петля FG | SEQ |
| ННОСТЬ (Кп. нМ) | SK9EGFA FRET (ECsh.hM) | ие количества LDLR ингибиоования пои 75нМ. ЕС,η (нМП | QID NO | hDE | ID NO | ID NO | |||
| 2382B09 | 0.656f | 3.8 | 105.0, нд | SWDAPAD AYG | 11 0 | PVS KGT | 138 | EFDYPGSGY YHRP | 153 |
| 2382C05 | 2.49f | 4 | 105.3, нд | SWDAPAD GAYG | 11 1 | PVS KGT | 138 | EYSFPGAGY YHRP | 154 |
| 2382C09 | 0.757f | 3.5 | 121.7, нд | SWDAPAE GYG | 11 2 | PVS KGT | 138 | EFDFPGSGY YHRP | 155 |
| 2382D03 | 1.53f | 3.3 | 80.4, нд | SWDAPAD EAYG | 11 3 | PVS KGT | 138 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2382D05 | 0.3141 | 2.6 | 140.5, нд | SWDAPAD GGYG | 10 7 | PVS KGT | 138 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2382D08 | нд | 3.1 | 106.6, нд | SWDAPAD GYG | 11 4 | PVS KGT | 138 | EFPFPGSGY YHRP | 157 |
| 2382D09 | 0.304f | 2.6 | 109.1, нд | SWDAPAE GYG | 11 2 | PVS KGT | 138 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2382F02 | нд | 2.6 | -6.3, нд | SWDAPAG GGYG | 11 5 | PVS KGT | 138 | EFDFPGSGY YHRP | 155 |
| 2382F03 | НД | 2.7 | 88.6, нд | SWDAPAA DAYG | 11 6 | PVS KGT | 138 | EFNFPGAGY YHRP | 158 |
| 2382F05 | 4.54f | 2.4 | 72.2, вд | SWDAPAE AGKHYG | 11 7 | PVS KGT | 138 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2382F08 | нд | 2.5 | 105.0, нд | SWDAPAE AYG | 11 8 | PVS KGT | 138 | EFTYPGSGY YHRP | 159 |
| 2382F09 | нд | 3.1 | 109.7, нд | SWDAPAA AYG | 11 9 | PVS KGT | 138 | EYDFPGSGY YHRP | 152 |
| 2382G04 | l.llf | 2.9 | 146.1, нд | SWDAPAG GGYG | 11 5 | PSS KGT | 136 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2382H10 | 1.40f | 2.6 | 118.6, нд | SWDAPAG GYG | 12 0 | PVS KGT | 138 | EFDFPGSGY YHRP | 155 |
| 2382H11 | нд | 2.9 | 117.2, нд | SWDAPAD GYG | 11 4 | PVF KGT | 139 | EFDYPGSGY YHRP | 153 |
| 2382H04 | нд | 3.2 | 68.2, нд | SWDAPAA GGYG | 12 1 | PSS KGT | 136 | EYDFPGAGY YHRP | 151 |
- 88 022983
| ID клона | АФФи | ЕС | Снижен | Петля ВС | SE | Петл | SEQ | Петля FG | SEQ |
| нность ίΚη. ηΜΙ | SK9EGFA FRET (ЕС™. нМ1 | ие количества LDLR ί% ингибиоования пои 75нМ. ЕС™ (нМП | QIDNO | hDE | ID NO | ID NO | |||
| 2382H07 | нд | 2.7 | 86.2, нд | SWDAPAD AYG | 11 0 | PGS KGT | 21 | EFDFPGSGY YHRP | 155 |
| 2382H09 | 1.86f | 0.9 | 101.2, нд | SWDAPAA AYG | 11 9 | PSS KGT | 136 | EFDFPGSGY YHRP | 155 |
| 2451A02 | нд | 3.2 | 106.4, нд | SWDAPAA GYG | 12 2 | PVS KGT | 138 | EFPFPGSGY YHRP | 157 |
| 2451B05 | нд | 6.3 | 91.7, нд | SWDAPAG GYG | 12 0 | PSS KGT | 136 | EFDYPGSGY YHRP | 153 |
| 2451B06 | нд | 4.5 | 92.2, нд | SWDAPAD GGYG | 10 7 | PVS KGT | 138 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2451C06 | 1.27| | 1.2 | 89.4, нд | SWDAPAG AASYG | 12 3 | PVS KGT | 138 | EFPFPGAGY YHRP | 160 |
| 2451D05 | нд | 2.8 | 115.0, нд | SWDAPAG AYG | 12 4 | PVS KGT | 138 | EFDFPGSGY YHRP | 155 |
| 2451F03 | НД | 2.8 | 113.2, нд | SWDPPAE GYG | 12 5 | PVS KGT | 138 | EFNFPGSGY YHRP | 161 |
| 2451G01 | НД | 3.8 | 90.8, нд | SWDAPAG GYG | 12 0 | PSS KGT | 136 | EFDFPGSGY YHRP | 155 |
| 2451H07 (2) | 2.08f | 0.2 | 88.8, нд | SWNPPDV NYG | 12 6 | PVS KGT | 138 | EYPYAHAGY YHRP | 162 |
| 2382E03 | 2.94f | 2.4 | 89.5, нд | SWDAPAG DGYG | 10 8 | PVS KGT | 138 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2382E04 | нд | 3 | 61.5, нд | SWDAPAG GGYG | 11 5 | PVS KGT | 138 | EFTFPGAGY YHRP | 149 |
| 2382E05 | 0.604| | 2.8 | 103.5, нд | SWDAPAE GGYG | 12 7 | PVS KGT | 138 | EFDFPGAGY YHRP | 156 |
| 2382E09 | нд | 6.2 | 97.2, вд | SWDAPAE AYG | 11 8 | PVS KGT | 138 | EYDFPGSGY YHRP | 152 |
| 2381A04 (1) | НД | 3.3 | 100.1, нд | SWEPFSR LPGGGE | 10 6 | PGS KGT | 21 | EYPYPFSGY YHRP | 163 |
| 2381A08 | нд | 3.6 | 91.4, нд | SWDAPAD GGYG | 10 7 | PGS KGT | 21 | EYDFPGAGY YHRP | 151 |
- 89 022983
| ID клона | АФФи | ЕС | Снижен | Петля ВС | SE | Петл | SEQ | Петля FG | SEQ |
| ННОСТЬ ГКп, | SK9- | ие количества | QID NO | aDE | ID NO | ID NO | |||
| нМ1 | EGFA | LDLR | |||||||
| FRET | |||||||||
| (ECsoUiM) | ингибиоования | ||||||||
| пои 75нМ. ЕС^п | |||||||||
| (нМП | |||||||||
| 2381В10 | нд | 7.3 | 96.4, нд | SWDAPAG | 11 | PVS | 138 | EYNFIGAGY | 164 |
| GGYG | 5 | KGT | YHRP | ||||||
| 2381С08 | нд | 0.7 | 15.3, нд | SWDAPAD | 11 | PVS | 138 | EFPYPFAGY | 165 |
| GAYG | 1 | KGT | YHRP | ||||||
| 2381G06 | НД | 9 | 57.7, нд | SWSEKLD | 12 | PGS | 21 | EFPYDHSGY | 147 |
| (3) | GKARRG | 8 | KGT | YHRP | |||||
| 2381Н01 | нд | 4 | 22.2, нд | SWSPRDS | 12 | PGS | 21 | EYPYDHSGY | 146 |
| (3) | TGLVRRG | 9 | KGT | YHRP | |||||
| 2381Н06 | нд | 5 | 53.4, нд | SWGDVRT | 13 | PGS | 21 | EYTYEHSGY | 166 |
| (4) | NEARQG | 0 | KGT | YHRP | |||||
| 2381Н09 | 3.23f | 3.4 | 94.4, нд | SWDAPAG | 11 | PVS | 138 | EFDFVGAGY | 167 |
| GGYG | 5 | KGT | YHRP | ||||||
| 23 82В11 | нд | 2.9 | 88.8, нд | SWDAPAA | 11 | PVS | 138 | EYDFAGSGY | 168 |
| AYG | 9 | KGT | YHRP | ||||||
| 2382В08 | нд | 2.9 | 107.2, нд | SWDAPAD | 11 | PSS | 136 | EFAFPGAGY | 169 |
| AYG | 0 | KGT | YHRP | ||||||
| 2382С11 | нд | 3.7 | 82.9, нд | SWDAPAG | 12 | PVS | 138 | EYDFAGSGY | 168 |
| GYG | 0 | KGT | YHRP | ||||||
| 2382G03 | нд | 2.7 | 77.8, нд | SWDAPAE | 13 | PVS | 138 | EYVFPGAGY | 170 |
| AEAYG | 1 | KGT | YHRP | ||||||
| 2382Н03 | 0.677f | 3.4 | 102.1, нд | SWDAPAE | 13 | PVS | 138 | EYPYPFAGY | 171 |
| GAYG | 2 | KGT | YHRP | ||||||
| 2451А10 | нд | 10. | 53.7, нд | SWQPPAV | 13 | PVY | 140 | EYPYDHSGY | 146 |
| (5) | 9 | TYG | 3 | KGT | YHRP | ||||
| 2451В02 | нд | 5.3 | 71.4, нд | SWDAPAA | 11 | PVS | 138 | EFDYPGSGY | 153 |
| AYG | 9 | KGT | YHRP | ||||||
| 2451С11 | нд | 9.7 | 70.3, нд | SWDPPAG | 13 | PGY | 141 | EYPYDHSGY | 146 |
| (6) | AYG | 4 | KGT | YHRP | |||||
| 2451Н01 | нд | 2.8 | 95.8, нд | SWDAPAA | 12 | PVS | 138 | EYDFPGSGY | 152 |
| GYG | 2 | KGT | YHRP | ||||||
| 2011В11 | НД | 1.7 | 144.5, нд | SWAPPSD | 13 | PIG | 25 | EYPYSHAGY | 172 |
| AYG | 5 | KGT | YHRP | ||||||
| 2971А03 | 0.806f | нд | 120.1, нд | SWDPPSD | 30 | PIG | 25 | EFPWPHAGY | 37 |
| DYG | 1 | KGT | YHRP | ||||||
| 2971А09 | 2.79f | нд | 132.3, нд | SWDAPAD | 30 | PIG | 25 | EFPWPHAGY | 37 |
| DYG | 2 | KGT | YHRP | ||||||
| 2971Е02 | 1.78f | нд | 126.2, нд | SWDAPSD | 30 | PIG | 25 | EFPWPHAGY | 37 |
| DYG | 3 | KGT | YHRP |
t KD определены с использованием Octet Red при 37°C; * KD определены с использованием ProteOn при 25°С; Л KD определены с использованием ITC при 37°С; (1) в дополнение к мутациям в петлях, данные клоны также содержат мутации V45L и E47Q; (2) в дополнение к мутациям в петлях, данные клоны также содержат мутации V1I, S2T и V45L; (3) в дополнение к мутациям в петлях, данные клоны также содержат мутацию E47Q; (4) в дополнение к мутациям в петлях, данные клоны также содержат мутации V45L и E47G; (5) в дополнение к мутациям в петлях, данные клоны также содержат мутации S2T, L8M, Р44Т, V45L и E47Q; (6) в дополнение к мутациям в петлях, данные клоны также содержат мутации V1I, S2V, V45K и E47Q.
- 90 022983
SEQ ID NO: последовательностей семейства aHTH-PCSK9 аднектинов, описываемых в настоящем изобретении, представлены в табл. 4
Таблица 4
Семейство аднектинов aнти-PCSK9
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 1459D05 | MGVS DVPRDLE WAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| также | PTSLLISWPPPSHGYGYYRITY | ATCAGCTGGCCGCCGCCGTCTCATGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| обозначенный | GETGGNSPVQEFTVPPGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCGCCTGGTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG |
| какАТЮ00891 | ISGLKPGVDYTITVYAVEYPYK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACAAACATTCTGGTTACTACCATCGT |
| или ΑΤΊ-891 | HSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ |
| НННННН (SEQ ID N0:39) | ID N0:40) | |
| 1784F03 | MGVS DVPRDLE WAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWRPPIHAYGYYRITY | ATCAGCTGGAGGCCGCCGATTCATGCTTACGGGTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPIVEGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGTTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYTFK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATATACATTTAAACATTCCGGTTACTACCATCGT | |
| HSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:41) | ID N0:42) | |
| 1784F03- | MGVS DVPRDLE WAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| ml | PTSLLISWDAPIHAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGATTCATGCTTACGGGTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPGSEGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGGTTCTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYTFK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATATACATTTAAACATTCCGGTTACTACCATCGT | |
| HSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:43) | ID N0:44) | |
| 1784F03- | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| т2 | PTSLLISWDAPAHAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTCATGCTTACGGGTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPGSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYTFK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATATACATTTAAACATTCCGGTTACTACCATCGT | |
| HSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:45) | ID N0:46) | |
| 1784F03- | MGVS DVPRDLE WAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| тЗ | PTSLLISWDAPAVTYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGTTACTTACGGGTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPGSKSTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAATCTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYTFK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATATACATTTAAACATTCCGGTTACTACCATCGT | |
| HSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:47) | ID N0:48) | |
| 1813Е02 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWSPPANGYGYYRITY | ATCAGCTGGTCCCCACCGGCTAACGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVGRGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTGGTAGAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYTYK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTATACCTACAAAGGCTCTGGTTACTACCATCGC | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:49) | ID N0:50) |
- 91 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 1923В02 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWTPPPKGYGYYRITY | ATCAGCTGGACGCCTCCCCCTAAAGGGTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GE TGGN S PVQEF TVPVGE GTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTGGTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| IS GLKPGVDYTITVYAVEYTYN | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACACGTACAACGGTGCCGGTTACTACCACCGG | |
| GAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:51) | ID N0:52) | |
| 1923В02( | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| N821) | PT SL LISWTPPPKGYGYYRITY | ATCAGCTGGACGCCTCCCCCTAAAGGGTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPVGEGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTGGTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYTYI | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACACGTACATTGGTGCCGGTTACTACCACCGG | |
| GAGYYHRPISINYRTGSGSHHH | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTCCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID | |
| HHH (SEQ ID N0:53) | N0:54) | |
| 1923В02( | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| N82E) | PT S LLISWTPPPKGYGYYRITY | ATCAGCTGGACGCCTCCCCCTAAAGGGTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPVGEGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTGGTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYTYE | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACACGTACGAAGGTGCCGGTTACTACCACCGG | |
| GAGYYHRPISINYRTGSGSHHH | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTCCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID | |
| HHH (SEQ ID N0:55) | N0:56) | |
| 1923В02( | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| Т80А) | PTSLLISWTPPPKGYGYYRITY | ATCAGCTGGACGCCTCCCCCTAAAGGGTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPVGEGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTGGTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYAYN | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGCGTACAACGGTGCCGGTTACTACCACCGG | |
| GAGYYHRPISINYRTGSGSHHH | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTCCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID | |
| HHH (SEQ ID N0:57) | N0:58) | |
| 1922G04 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| также | PTSLLISWRPPSHAYGYYRITY | ATCAGCTGGCGGCCGCCATCTCATGCTTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| обозначенный | GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGGAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG |
| здесь как | IS GLKPGVDYTITVYAVEYPWK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTGGAAAGGTTCTGGTTACTACCATCGG |
| ATI001057 или | GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ |
| ATI-105 7 | HHHHHH (SEQ ID N0:59) | ID N0:60) |
| 1922G04( | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| R25D) | PTSLLISWDPPSHAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACCCGCCATCTCATGCTTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGGAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYPWK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTGGAAAGGTTCTGGTTACTACCATCGG | |
| GSGYYHRPISINYRTGSGSHHH | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTCCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID | |
| HHH (SEQ ID N0:61) | N0:62) | |
| 1922G04( | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| R25E) | PTSLLISWEPPSHAYGYYRITY | ATCAGCTGGGAACCGCCATCTCATGCTTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGGAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYPWK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTGGAAAGGTTCTGGTTACTACCATCGG | |
| GSGYYHRPISINYRTGSGSHHH | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTCCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID | |
| HHH (SEQ ID N0:63) | NO:6 4) | |
| 1922G04( | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| R25S) | PTSLLISWSPPSHAYGYYRITY | ATCAGCTGGAGCCCGCCATCTCATGCTTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGGAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYPWK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTGGAAAGGTTCTGGTTACTACCATCGG | |
| GSGYYHRPISINYRTGSGSHHH | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTCCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID | |
| HHH (SEQ ID N0:65) | NO :6 6) | |
| 2012A04 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWRPPSNGHGYYRITY | ATCAGCTGGCGGCCCCCCTCTAATGGTCACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVNEGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTAATGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFPFK | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCCTTCAAGTGGTCGGGCTACTACCATCGA | |
| WSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:67) | ID N0:68) |
- 92 022983
Клон
2013Е01
также
обозначенный как ΑΤΙ001081 или ATI-1081
2011Н05
также
обозначенный как ATI001091 или ATI-1091
2011Н05(
V23D)
2011H05(
V23E)
2381B02
2381B04
Аминокислотная
MGVSDVPRDLEWAAT
PTSLLISWVPPSDDYGYYRITY
GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT
ISGLKPGVDYTITVYAVEFPWP
HAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ НННННН (SEQ ID N0:69)
MGVSDVPRDLEWAAT
PTSLLISWVPSSHAYGYYRITY
GETGGNSPVQEFTVPVGVGTAT
IS GLKPGVDYTITVYAVEYAFE
GAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:71)
MGVSDVPRDLEWAAT
PTSLLISWDPSSHAYGYYRITY
GETGGNSPVQEFTVPVGVGTAT
ISGLKPGVDYTITVYAVEYAFE
GAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:73)
MGVSDVPRDLEWAAT
PTSLLISWEPSSHAYGYYRITY
GETGGNSPVQEFTVPVGVGTAT
ISGLKPGVDYTITVYAVEYAFE
GAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:75) MGVSDVPRDLEWAAT
PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR
ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG
TATISGLKPGVDYTITVYAVEY
PYDYSGYYHRPISINYRTEIDK
PSQHHHHHH (SEQ ID N0:173)
MGVSDVPRDLEWAAT
PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR
ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG
TATISGLKPGVDYTITVYAVEY
PYEHSGYYHRPISINYRTEIDK PSQHHHHHH (SEQ ID N0:175)
Последовательность
Нуклеотидная
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG
ATCAGCTGGGTCCCGCCTTCAGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA
TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG
GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGG CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:70)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG
ATCAGCTGGGTTCCGTCGTCTCATGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA
TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTGGGGGTAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG
GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGCTTTCGAAGGGGCTGGTTACTACCATCGT
CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:72)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG
ATCAGCTGGGACCCGTCGTCTCATGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA
TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTGGGGGTAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG
GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGCTTTCGAAGGGGCTGGTTACTACCATCGT
CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:74)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG
ATCAGCTGGGAACCGTCGTCTCATGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA
TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTGGGGGTAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG
GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGCTTTCGAAGGGGCTGGTTACTACCATCGT
CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:76)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG
ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC
AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC
TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACGACTATTCTGGTTAC
TACCATCGCCCCATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA CCAC (SEQ ID N0:174)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG
ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC
AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC
TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACGAGCATTCTGGGTAC
TATCATCGTCCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA CCAC (SEQ ID N0:176)
- 93 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2381В06 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR | ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATISGLKPGVDYTITVYAVEY | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACCCGCATTCTGGTTAC | |
| PYPHSGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGACCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:177) | CCAC (SEQ ID N0:178) | |
| 2381В08 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PT S LLISWDAPADGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGGAGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPSSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEYTF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACACCTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:179) | (SEQ ID N0:180) | |
| 2381D02 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR | ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATISGLKPGVDYTITVYAVEY | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACGACCATTCTGGTTAC | |
| PYDHSGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGTCCCATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:181) | CCAC (SEQ ID N0:182) | |
| 2381D04 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR | ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATISGLKPGVDYTITVYAVEF | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCGTACGACCATTCTGGTTAC | |
| PYDHSGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGGCCCATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:183) | CCAC (SEQ ID N0:184) | |
| 2381F11 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPADGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGGGGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKSTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAAGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEYTF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACACCTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:185) | (SEQ ID N0:186) | |
| 2381G03 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR | ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATISGLKPGVDYTITVYAVEF | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCGTACGCGCATTCTGGGTAC | |
| PYAHSGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGTCCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:187) | CCAC (SEQ ID N0:188) |
94
022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2381G09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGDGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGACGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCCGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFTF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCACCTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:189) | (SEQ ID N0:190) | |
| 2381Н03 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR | ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATISGLKPGVDYTITVYAVEY | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACGCGCATTCTGGTTAC | |
| PYAH S GYF HRPISINYRT EIDK | TTCCATCGTCCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:191) | CCAC (SEQ ID N0:192) | |
| 2382А01 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWAAPAGGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGCCGCTCCGGCTGGTGGTGGCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEYDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:193) | (SEQ ID N0:194) | |
| 2382В10 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PT S L LISWDAPADAYGYYRITY | ATAAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPSSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| IS GLKPGVDYTITVYAVEYDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCCCCGGCAGCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:195) | ID N0:196) | |
| 2382В09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PT S L LISWDAPADAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFDYP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTACCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:197) | ID N0:198) | |
| 2382С05 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PT S L LISWDAPADGAYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGGGGCATACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAGGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEYSF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACTCCTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRT EIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:199) | (SEQ ID N0:200) |
- 95 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2382С09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAEGYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAGGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| IS GLKPGVDYTITVYAVEFDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| НННННН (SEQ ID N0:201) | ID N0:202) | |
| 2382D03 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPADEAYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGAGGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TIS GLKPGVDYTITVYAVEF DF | CTGGTGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:203) | (SEQ ID N0:204) | |
| 2382D05 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPADGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGGTGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:205) | (SEQ ID N0:206) | |
| 2382D08 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPADGYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGGCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFPFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCCTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:207) | ID N0:208) | |
| 2382D09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAEGYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAAGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| IS GLKPGVDYTITVYAVEFDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCATCGT | |
| GAGYYHRPISINYRTEIDKP SQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:209) | ID N0:210) | |
| 2382F02 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGCGGGGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCGGGCTCCGGTTACTACCAT | |
| PGSGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:211) | (SEQ ID N0:212) |
- 96 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2382F03 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAADAYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCCGATGCTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGE TGGNS PVQE FTVPVSKG ТА | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFNF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCAACTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:213) | (SEQ ID N0:214) | |
| 2382F05 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| РТ S L LISWDAPAEAGKHYGYYR | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAAGCAGGTAAGCACTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPVQEFTVPVSKG | AGGAGGCAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATISGLKPGVDYTITVYAVEF | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCGGGCGCCGGTTAC | |
| DFPGAGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:215) | CCAC (SEQ ID N0:216) | |
| 2382F08 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAEAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAAGCATACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFTYP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCACCTACCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:217) | ID N0:218) | |
| 2382F09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAAAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCAGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:219) | ID N0:220) | |
| 2382G04 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGTGGGGGATACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPSSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:221) | (SEQ ID N0:222) | |
| 2382Н10 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGGYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGGCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| IS GLKPGVDYTITVYAVEFDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:223) | ID N0:224) |
- 97 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2382Н11 | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPADGYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPVFKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEFDYP GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ НННННН (SEQ ID N0:225) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTTTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTACCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:226) |
| 2382Н04 | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPAAGGYGYYRIT YGETGGNSPVQEFTVPSSKGTA TISGLKPGVDYTITVYAVEYDF PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS QHHHHHH (SEQ ID N0:227) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCGGGGGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTATATGCTGTCGAATACGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCAT CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:228) |
| 2382Н07 | MGVSDVPRDLEWAAT PT SL LISWDAPADAYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPGSKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEFDFP GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:229) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGCTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCAGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:230) |
| 2382Н09 | MGVSDVPRDLEWAAT PT S L LISWDAPAAAYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSSKGTAT IS GLKPGVDYTITVYAVEFDFP GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:231) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCGGCTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGC CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:232) |
| 2451А02 | MGVSDVPRDLEWAAT PT SL LISWDAPAAGYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEFPFP GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:233) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCGGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCCTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:234) |
| 2451В05 | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPAGGYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSSKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEFDYP GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:235) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGGATACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTACCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:236) |
- 98 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2451В06 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| (эквивалент | ptslliswdapadggygyyr.it | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGGTGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG |
| 2382D05) | YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC |
| ТISGLKPGVDYTIТVYAVEF DF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:205) | (SEQ ID N0:206) | |
| 2451С06 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGAASYGYYRI | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGCAGCGTCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGG | |
| TYGETGGNSPVQEFTVPVSKGT | AGGCAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTA | |
| ATIS GLKPGVDYTITVYAVEFP | AACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCCTTCCCCGGCGCCGGTTACTAC | |
| FPGAGYYHRPISINYRTEIDKP | CATCGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCA | |
| SQHHHHHH (SEQ ID NO :2 3 7) | C (SEQ ID N0:238) | |
| 2451D05 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGCGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:239) | ID N0:240) | |
| 2451F03 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDPPAEGYGYYRITY | ATCAGCTGGGACCCTCCGGCTGAAGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFNFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCAACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:241) | ID N0:242) | |
| 2451 GO 1 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGGYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGGCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPSSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCGGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GS GYYHRPISINYRTEIDKP SQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:243) | ID N0:244) | |
| 2451Н07 | MGITDVPRDLEWAAT | ATGGGTATCACGGATGTGCCGCGAGACTTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWNPPDVNYGYYRITY | ATCAGCTGGAACCCGCCGGATGTGAATTACGGTTATTATCGCATCACTTACGGGGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPLQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTTTGCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYPYA | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATATCCGTACGCGCACGCTGGTTACTACCATCGT | |
| HAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:245) | ID N0:246) |
- 99 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2382Е03 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGDGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGACGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:247) | (SEQ ID N0:248) | |
| 2382Е04 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGTGGTGGATACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFTF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCACCTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:249) | (SEQ ID N0:250) | |
| 2382Е05 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAEGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAGGGCGGCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRT EIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:251) | (SEQ ID N0:252) | |
| 2382Е09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAEAYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAGGCTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYDFP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT | |
| GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:253) | ID N0:254) | |
| 2381А04 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWEPFSRLPGGGEYYR | ATCAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPLQQFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATIS GLKPGVDYTITVYAVEY | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACCCGTTTTCTGGTTAC | |
| PYPF SGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGTCCCATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:255) | CCAC (SEQ ID N0:256) | |
| 2381А08 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PT S L LISWDAPADGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGGCGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPGSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEYDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| PGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:257) | (SEQ ID N0:258) |
- 100 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2381В10 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGGTGGATACGGTTATTACCGSATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEYNF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACAACTTCATCGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| IGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:259) | (SEQ ID N0:260) | |
| 2381С08 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| РТ S L LISWDAPADGAYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGGTGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFPY | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCCTACCCCTTCGCCGGTTACTACCAT | |
| PFAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:261) | (SEQ ID N0:262) | |
| 2381G06 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWSEKLDGKARRGYYR | ATCAGCTGGTCGGAGAAGTTGGACGGGAAGGCGCGCCGCGGGTATTACCGCATCACATACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPVQQFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTGTCCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATIS GLKPGVDYTITVYAVEF | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCGTACGACCATTCTGGTTAC | |
| PYDHSGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGTCCCATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:263) | CCAC (SEQ ID N0:264) | |
| 2381Н01 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWSPRDSTGLVRRGYY | ATCAGCTGGAGCCCGCGGGACTCCACCGGCTTGGTGAGGCGGGGGTATTACCGCATCACTTACGGCGA | |
| RITYGETGGNSPVQQFTVPGSK | AACAGGAGGCAATAGCCCTGTTCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCG | |
| GTATIS GLKPGVDYTITVYAVE | GCCTTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACGACCATTCTGGT | |
| YPYDHSGYYHRPISINYRTEID | TACTACCATCGGCCCATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCA | |
| KPSQHHHHHH (SEQ ID N0:265) | CCACCAC (SEQ ID N0:266) | |
| 2381Н06 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWGDVRTNEARQGYYR | ATCAGCTGGGGCGACGTCCGGACGAACGAGGCGCGGCAGGGCTATTACCGGATCACTTACGGCGAAAC | |
| ITYGETGGNSPLQGFTVPGSKG | AGGAGGCAATAGCCCTCTCCAGGGGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCC | |
| TATISGLKPGVDYTITVYAVEY | TTAAACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTATACGTACGAGCATTCTGGTTAC | |
| TYEHSGYYHRPISINYRTEIDK | TACCATCGTCCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCA | |
| PSQHHHHHH (SEQ ID N0:267) | CCAC (SEQ ID N0:268) | |
| 2381Н09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPAGGGYGYYRIT | ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGGGGGGGCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG | |
| YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA | CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC | |
| TISGLKPGVDYTITVYAVEFDF | CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCGTCGGCGCCGGTTACTACCAT | |
| VGAGYYHRPISINYRTEIDKPS | CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC | |
| QHHHHHH (SEQ ID N0:269) | (SEQ ID N0:270) |
- 101 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2382В11 | MGVSDVPRDLEWAAT РТ S L LISWDAPAAAYGYYRIТY GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT IS GLKPGVDYTITVYAVEYDFA GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ НННННН (SEQ ID N0:271) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCGGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCGCGGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:272) |
| 2382В08 | MGVSDVPRDLEWAAT РТ S L LISWDAPADAYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPSSKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEFAFP GAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:273) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTAGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTATATGCTGTCGAATTCGCCTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:274) |
| 2382С11 | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPAGGYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT IS GLKPGVDYTITVYAVEYDFA GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:275) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGGAGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCGCGGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:276) |
| 2382G03 | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPAEAEAYGYYRI TYGETGGNSPVQEFTVPVSKGT ATISGLKPGVDYTITVYAVEYV FPGAGYYHRPISINYRTEIDKP SQHHHHHH (SEQ ID N0:277) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAAGCAGAAGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGG AGGCAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTA AACCTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGTCTTCCCCGGCGCCGGTTACTAC CATCGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCA C (SEQ ID N0:278) |
| 2382Н03 | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPAEGAYGYYRIT YGETGGNSPVQEFTVPVSKGTA TISGLKPGVDYTITVYAVEYPY PFAGYYHRPISINYRTEIDKPS QHHHHHH (SEQ ID N0:279) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGAGGGCGCTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGG CAATAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAAC CTGGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCCTACCCCTTCGCCGGTTACTACCAT CGTCCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:280) |
| 2451А10 | MGVTDVPRDMEWAAT PTSLLISWQPPAVTYGYYRITY GETGGN S T LQQF TVPVYKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEYPYD HSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:281) | ATGGGTGTCACCGATGTGCCGCGCGACATGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGCAGCCGCCGGCTGTTACTTACGGTTATTATCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCACTCTCCAGCAGTTCACTGTGCCTGTTTATAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACGACCATTCTGGGTACTACCATCGG CCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:282) |
| 2451В02 | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPAAAYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT IS GLKPGVDYTITVYAVEFDYP GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:283) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCTGCTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTACCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:284) |
| 2451С11 | MG IVDVPRD LE WAAT PTSLLISWDPPAGAYGYYRITY GETGGNSPKQQFTVPGYKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEYPYD HSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:285) | ATGGGTATCGTGGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACCCGCCGGCTGGTGCTTACGGTTATTATCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCAAAGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTATAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACGACCATTCTGGTTACTACCATCGG CCGATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:286) |
| 2451 HOI | MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWDAPAAGYGYYRITY GETGGNSPVQEFTVPVSKGTAT ISGLKPGVDYTITVYAVEYDFP GSGYYHRPISINYRTEIDKPSQ HHHHHH (SEQ ID N0:287) | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG ATCAGCTGGGACGCTCCGGCTGCGGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGACTTCCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGT CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:288) |
- 102 022983
| Клон | Последовательность | |
| Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2011В11 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWAPPSDAYGYYRITY | ATCAGCTGGGCGCCGCCTTCTGATGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEYPYS | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTATTCACATGCTGGTTACTACCATCGT | |
| HAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| НННННН (SEQ ID N0:289) | ID N0:290) | |
| 2971А03 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDPPSDDYGYYRITY | ATCAGCTGGGACCCGCCTTCGGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFPWP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGG | |
| HAGYYHRPISINYRTEIDKPSQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:304) | ID N0:305) | |
| 2971А09 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPADDYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCGCCTGCGGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| ISGLKPGVDYTITVYAVEFPWP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGG | |
| HAGYYHRPISINYRTEIDKP SQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:306) | ID N0:307) | |
| 2971Е02 | MGVSDVPRDLEWAAT | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTG |
| PTSLLISWDAPSDDYGYYRITY | ATCAGCTGGGACGCGCCTTCGGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAA | |
| GETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT | TAGCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTG | |
| IS GLKPGVDYTITVYAVEFPWP | GCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGG | |
| HAGYYHRPISINYRTEIDKP SQ | CCAATTTCCATTAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATCCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ | |
| HHHHHH (SEQ ID N0:308) | ID N0:309) |
SEQ ID NO: последовательностей семейства пэгилированных aHTH-PCSK9 аднектинов, описываемых в данном изобретении, представлены в табл. 5.
Таблица 5
Семейство aнти-PCSK9 аднектинов, мутантных по остатку цистеина для последующего пэглирования *Примечание: некоторые перечисленные белки не были пэглированы, но являются подходящими для пэгилирования за счет присутствия мутантного остатка цистеина. Белки, которые были пэгилированы, отмечены звездочкой
| ATI#/ | Последовательность | |
| Клон# [Описание] | Аминокислотная | Нуклеотидная |
| ΑΊΊ001170 | MGVSDVPRDLEVVA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| [2013Е01-без His- | ATPTSLLISWVPPSDDYGY | CAGCTGGGTCCCGCCTTCAGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC |
| тэга, мутант по | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| Cys] | РIGKGTATISGLKPGVDYT ITVYAVEFPWPHAGYYHRP ISINYRTEIDKPCQ (SEQ ID N0:78) | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGGCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATGCCAGTG (SEQ ID N0:79) |
| ATI001172 | MGVSDVPRDLEVVA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| [2013Е01-без His- | ATPTSLLISWVPPSDDYGY | CAGCTGGGTCCCGCCTTCAGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC |
| тэга, мутант по | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| Cys] | PIGKGTATISGLKPGVDYT ITVYAVEFPWPHAGYYHRP ISINYRTEGSGC (SEQ ID N0:80) | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGGCCAATTTCCAT TAATTACCGAACAGAAGGTAGCGGTTGCTG (SEQ ID N0:81) |
| ATI001174* | MGVSDVPRDLEVVA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| £2013Е01-без His- | ATPTSLLISWVPPSDDYGY | CAGCTGGGTCCCGCCTTCAGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC |
| тэга, мутант по Cys | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| 1 также | PIGKGTATISGLKPGVDYT | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGGCCAATTTCCAT |
| обозначенный как ATI-1174 | ITVYAVEFPWPHAGYYHRP ISINYRTEIEKPCQ (SEQ ID N0:82) | TAATTACCGCACAGAAATTGAGAAACCATGCCAGTG (SEQ ID N0:83) |
- 103 022983
ATI#/
Клон#
[Описание]
ΑΤΊ001114*
£2013Е01де; тант по Cvsl также
обозначенный как
ΑΊΊ-1114
ΑΊΊ000959* [1459D05 мутант по Cys]
ΑΊΊ001063* [1784F03 мутант no Cys]
ΑΊΊ001119* [2012A04 мутант no Cys]
ATI001117* [2011H05 мутант no Cys]
ATI001194* [2011H05(V23D) мутант no Cys]
Аминокислотная
MGVSDVPRDLEVVA
ATPTSLLISWVPPSDDYGY
YRITYGETGGNSPVQEFTV
PIGKGTATISGLKPGVDYT
ITVYAVEFPWPHAGYYHRP
ISINYRTGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:84)
MGVSDVPRDLEVVA
ATPTSLLISWPPPSHGYGY
YRITYGETGGNSPVQEFTV PPGKGTATISGLKPGVDYT
ITVYAVEYPYKHSGYYHRP
ISINYRTEIDKPCQHHHHH H (SEQ ID N0:86)
MGVSDVPRDLEVVA
ATPTSLLISWRPPIHAYGY
YRITYGETGGNSPVQEFTV
PIVEGTATISGLKPGVDYT
ITVYAVEYTFKHSGYYHRP ISINYRTEIDKPCQHHHHH H (SEQ ID N0:88)
MGVSDVPRDLEVVA
ATPTSLLISWRPPSNGHGY
YRITYGETGGNSPVQEFTV
PVNEGTATISGLKPGVDYT
ITVYAVEFPFKWS GYYHRP
ISINYRTGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:90)
MGVSDVPRDLEVVA
ATPTSLLISWVPSSHAYGY
YRITYGETGGNSPVQEFTV
PVGVGTATIS GLKPGVDYT
ITVYAVEYAFEGAGYYHRP
ISINYRTGSGCHHHHHH
(SEQ ID N0:92)
MGVSDVPRDLEVVA
ATPTSLLISWDPSSHAYGY
YRITYGETGGNSPVQEFTV
PVGVGTATISGLKPGVDYT
ITVYAVEYAFEGAGYYHRP
ISINYRTEGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:94)
Последовательность
Нуклеотидная
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT
CAGCTGGGTCCCGCCTTCAGATGATTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC
CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGTAAAGGAACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT
TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAGTTTCCGTGGCCACATGCTGGTTACTATCATCGGCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:85)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT
CAGCTGGCCGCCGCCGTCTCATGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC
CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCGCCTGGTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT
TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTACAAACATTCTGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATGCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:87)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT
CAGCTGGAGGCCGCCGATTCATGCTTACGGGTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC
CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGTTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT
TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATATACATTTAAACATTCCGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATGCCAGCACCATCACCACCACCAC (SEQ ID N0:89)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT
CAGCTGGCGGCCCCCCTCTAATGGTCACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC
CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTAATGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT
TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCCTTCAAGTGGTCGGGCTACTACCATCGACCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:91)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT
CAGCTGGGTTCCGTCGTCTCATGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC
CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTGGGGGTAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT
TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGCTTTCGAAGGGGCTGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:93)
ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT
CAGCTGGGACCCGTCGTCTCATGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC
CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTGGGGGTAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT
TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGCTTTCGAAGGGGCTGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGAAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:95)
- 104 022983
| ATI#/ | Последовательность | |
| Клон# [Описание] | Аминокислотная | Нуклеотидная |
| 2011Н05 | MGVSDVPRDLEWA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| (V23E)-мутант по | ATPTSLLISWEPSSHAYGY | CAGCTGGGAACCGTCGTCTCATGCCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC |
| Cys | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTGGGGGTAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| PVGVGTATISGLKPGVDYT | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACGCTTTCGAAGGGGCTGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCAT | |
| ITVYAVEYAFEGAGYYHRP ISINYRTEGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:96) | TAATTACCGCACAGAAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:97) | |
| ATI001112 | MGVSDVPRDLEWA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| [1923В02 | ATPTSLLISWTPPPKGYGY | CAGCTGGACGCCTCCCCCTAAAGGGTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC |
| мутант по Cys] | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTGGTGAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| PVGEGTATISGLKPGVDYT | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACACGTACAACGGTGCCGGTTACTACCACCGGCCAATTTCCAT | |
| ITVYAVEYTYNGAGYYHRP ISINYRTGS GCHHHHHH (SEQ ID N0:98) | TAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:99) | |
| ΑΊΊ001110 | MGVSDVPRDLEWA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| [1922G04 | ATPTSLLISWRPPSHAYGY | CAGCTGGCGGCCGCCATCTCATGCTTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC |
| мутант по Cys] | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGGAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| PIGKGTATISGLKPGVDYT | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTGGAAAGGTTCTGGTTACTACCATCGGCCAATTTCCAT | |
| ITVYAVEYPWKGSGYYHRP ISINYRTGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:100) | TAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:101) | |
| ATI001128 | MGVSDVPRDLEWA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| [1922G04 мутант | ATPTSLLISWRPPSHAYGY | CAGCTGGCGGCCGCCATCTCATGCTTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAAC7\GGAGGCA7vTAGCC |
| по Cys] | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGGAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| PIGKGTATISGLKPGVDYT | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTGGAAAGGTTCTGGTTACTACCATCGGCCAATTTCCAT | |
| ITVYAVEYPWKGSGYYHRP ISINYRTEIDKPCQHHHHH H (SEQ ID N0:102) | TAATTACCGCACAGAAATTGACAAACCATGCCAGCACCACCACCACCACCAC (SEQ ID N0:103) | |
| АТЮ01184 | MGVSDVPRDLEWA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| * [1922G04(R23E) | ATPTSLLISWEPPSHAYGY | CAGCTGGGAACCGCCATCTCATGCTTATGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC |
| мутант по Cys] | YRITYGETGGNSPVQEFTV | CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTATTGGGAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT |
| PIGKGTATISGLKPGVDYT | TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATACCCGTGGAAAGGTTCTGGTTACTACCATCGGCCAATTTCCAT | |
| ITVYAVEYPWKGSGYYHRP ISINYRTEGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:104) | TAATTACCGCACAGAAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:105) | |
| 2381D04- | MGVSDVPRDLEWA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT |
| Cys | ATPTSLLISWEPFSRLPGG | CAGCTGGGAGCCGTTCAGCCGGTTGCCCGGGGGCGGCGAGTATTACCGGATCACTTACGGCGAAACAGGAG |
| GEYYRITYGETGGNSPLQQ | GCAATAGCCCTCTGCAGCAGTTCACTGTGCCTGGTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCT | |
| FTVPGSKGTATISGLKPGV | GGCGTTGATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCCCGTACGACCATTCTGGTTACTACCATCGGCC | |
| DYTITVYAVEFPYDHSGYY HRPISINYRTGSGCHHHHH H (SEQ ID N0:291) | CATTTCCATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:292) |
- 105 022983
| ATI#/ | Последовательность | ||
| Клон# [Описание] | Аминокислотная | Нуклеотидная | |
| 2382D09- | MGVSDVPRDLEVVA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT | |
| Cys | ATPTSLLISWDAPAEGYGY YRITYGETGGNSPVQEFTV PVSKGTATISGLKPGVDYT ITVYAVEFDFPGAGYYHRP ISINYRTGS GCHHHHHH (SEQ ID N0:293) | CAGCTGGGACGCTCCGGCTGAAGGGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:294) | |
| 2451B06- | MGVSDVPRDLEVVA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT | |
| Cys | ATPTSLLISWDAPADGGYG YYRITYGETGGNSPVQEFT VPVSKGTATISGLKPGVDY TITVYAVEF DF PGAGYYHR PISINYRTGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:295) | CAGCTGGGACGCTCCGGCTGATGGTGGTTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATA GCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTT GATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCGGGCGCCGGTTACTACCATCGTCCAATTTC CATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:296) | |
| 2382E05- | MGVSDVPRDLEVVA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT | |
| Cys | ATPTSLLISWDAPAEGGYG YYRITYGETGGNSPVQEFT VPVSKGTATISGLKPGVDY TITVYAVEF DFPGAGYYHR PISINYRTGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:297) | CAGCTGGGACGCTCCGGCTGAGGGCGGCTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATA GCCCTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTT GATTATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTTCCCCGGCGCCGGTTACTACCATCGTCCAATTTC CATTAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:298) | |
| 2382B09- | MGVSDVPRDLEVVA | ATGGGAGTTTCTGATGTGCCGCGCGACCTGGAAGTGGTTGCTGCCACCCCCACCAGCCTGCTGAT | |
| Cys | ATPTSLLISWDAPADAYGY YRITYGETGGNSPVQEFTV PVSKGTATISGLKPGVDYT ITVYAVEFDYPGSGYYHRP ISINYRTGSGCHHHHHH (SEQ ID N0:299) | CAGCTGGGACGCTCCGGCTGACGCGTACGGTTATTACCGCATCACTTACGGCGAAACAGGAGGCAATAGCC CTGTCCAGGAGTTCACTGTGCCTGTTTCTAAAGGTACAGCTACCATCAGCGGCCTTAAACCTGGCGTTGAT TATACCATCACTGTGTATGCTGTCGAATTCGACTACCCCGGCTCCGGTTACTACCATCGTCCAATTTCCAT TAATTACCGCACAGGTAGCGGTTGCCACCATCACCACCATCAC (SEQ ID N0:300) |
Технология слитой нуклеотидной и белковой последовательностей.
Одним из объектов настоящего изобретения является аднектин, содержащий домен III типа фибронектина, связывающий PCSK9. Одним из способов быстро получения и тестирования доменов Fn3 со специфическими свойствами связывания является технология слитой нуклеотидной и белковой последовательностей подразделения Adnexus, компании Bristol-Myers Squibb R&D Company. В данном изобретении описывается технология экспрессии in vivo и введения tag-последовательностей, называемая PROfusion, в которой используется соединение белков с нуклеиновыми кислотами (слитые последовательности РНК- или ДНК-белок), для идентификации новых полипептидов и аминокислотных мотивов, которые существенны для связывания с белками. Технология слитой нуклеотидной и белковой последовательностей представляет собой технологию ковалентного спаривания белка с нуклеиновой кислотой, кодирующей данный белок. Подробная информация о технологии слитой нуклеотидной и белковой последовательностей и методах скрининга библиотек белков на основе структурного части фибронектина приведена в Szostak et al., US Patent No. 6258558, 6261804, 6214553, 6281344, 6207446, 6518018 и 6818418; и Roberts et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 94:12297-12302 (1997) и включена в данное изобретение посредством ссылки.
Векторы и полинуклеотидные варианты исполнения.
Нуклеиновые кислоты, кодирующие любой из описанных в данном изобретении белков или полипептидов, могут быть синтезированы химическим путем. Использование кодонов может быть оптимизировано для повышения экспрессии продукта в клетке. Частота использования определенных кодонов зависит от выбранного типа клеток. Наборы частот использования кодонов известны для Е. coli и других бактерий, а также клеток млекопитающих, клеток растений, дрожжевых клетки и клеток насекомых. См. Mayfield et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100(2):438-442 (Jan. 21, 2003); Sinclair et al., Protein Expr. Purif, 26(I):96-105 (Oct. 2002); Connell, N.D., Curr. Opin. Biotechnol., 12(5):446-449 (Oct. 2001); Makrides et al., Microbiol. Rev., 60(3):512-538 (Sep. 1996); и Sharp et al., Yeast, 7(7):657-678 (Oct. 1991).
Общие принципы работы с нуклеиновыми кислотами описаны, например, в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) или Ausubel, F. et al., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing and Wiley-Interscience, New York (1987), и в периодически выпускаемых обновлениях, включенных в данное изобретение посредством ссылки. В общем виде, последовательность ДНК, кодирующая полипептид, с помощью определенных манипуляций соединяется с последовательностью подходящих транскрипционных или трансляционных
- 106 022983
регуляторных элементов из генов млекопитающих, вирусов или насекомых. Такие регуляторные элементы включают транскрипционный промотор, необязательную последовательность оператора, для контроля транскрипции, подходящую последовательность для сайта связывания рибосомы на мРНК, последовательности, кодирующие терминацию транскрипции и трансляции. Дополнительно вводятся последовательность ориджина репликации, которая обеспечивает способность конструкции воспроизводиться в клетке-хозяине, и ген, кодирующий селективный признак, облегчающий селекцию трансформированных клеток.
Белки, описаны в данном изобретении, могут быть получены с помощью технологии рекомбинантных ДНК не только в интактном виде, но также в составе слитых полипептидов с гетерологичными полипептидами, которыми предпочтительно являются сигнальные последовательности или другие полипептиды, обладающие специфическими сайтами расщепления на N-конце зрелого белка или полипептида. Выбираемые гетерологичные сигнальные последовательности предпочтительно должны распознаваться и процессироваться (т.е. отщепляться сигнальной пептидазой) клетки-хозяина. Примером Nконцевой сигнальной последовательности для наработки полипептидов в клетках млекопитающих является последовательность METDTLLLWVLLLWVPGSTG (SEQ ID NO: 326), удаляемая клеткой-хозяином после экспрессии полипептида.
Для клеток прокариот, которые не распознают природные сигнальные последовательности, такие последовательности заменяются прокариотическими сигнальными последовательностями, выбранными, например, из группы лидерных последовательностей щелочной фосфатазы, пенициллиназы, LPP или термостабильного энтеротоксина II.
Для секреции во внешнюю среду при наработке полипептида в дрожжевых клетках нативная сигнальная последовательность может быть заменена, например, сигнальной последовательностью дрожжевой инвертазы, факторов (включая лидерные последовательности альфа-факторов Saccharomyces и Kluyveromyces), кислой фосфатазы, глюкозамилазы С. albicans или сигнальными последовательностями, описанным в US Patent No. 5631144. При экспрессии в клетках млекопитающих применяются сигнальные последовательности млекопитающих, а также вирусные сигнальные последовательности для секреции, например сигнальная последовательность вируса простого герпеса gD. Такие последовательности ДНК могут быть лигированы в одной рамке считывания с последовательностью ДНК, кодирующей белок.
Векторные системы для клонирования и экспрессии имеют в своем составе последовательности, обеспечивающие репликацию вектора в одном или нескольких типах клеток-хозяев. В общем случае векторные системы для клонирования содержат последовательность, позволяющую вектору реплицироваться независимо от хромосомной ДНК клетки хозяина, и включают последовательность ориджина репликации или автономно реплицирующиеся последовательности. Такие последовательности хорошо известны для различных бактерий, дрожжей и вирусов. Ориджин репликации плазмиды pBR322 является подходящим для большинства грамотрицательных бактерий, ориджин 2-микронной плазмиды применим для дрожжевых систем, различные вирусные ориджины (SV40, полиомавирус, аденовирус, вирус везикулярного стоматита, папиломавирус быка) применимы для векторов для клонирования, амплифицируемых в клетках млекопитающих.
Векторы для экспрессии и клонирования могут содержать селективные гены, также называемые генами селективных маркеров. Типичные гены селективных маркеров кодируют белки, которые: а) обеспечивают устойчивость к антибиотиками и другим токсинам, например ампициллин, неомицин, метотрексат, трациклин; b) восстанавливают дефект ауксотрофных генов; с) обеспечивают синтез необходимых питательных веществ, недоступных из среды культивирования, например, ген, кодирующий Dаланин рацемазу для бактерий Bacilli.
Векторы для экспрессии и клонирования обычно содержат последовательность промотора, распознаваемую системами клетки-хозяина, и присоединенную непосредственно к последовательности, кодирующей белок, описываемый в настоящем изобретении, например, белок на основе структурной части фибронектина. Промоторные последовательности, применимые для прокариотических систем, включают промотор гена phoA, промотор бета-лактамазной и лактозной систем, промотор щелочной фосфатазы, промотор триптофановой системы (trp), гибридные промоторы, такие как tan-промотор. Впрочем, другие известные бактериальные промоторы также применимы. Промоторы для применения в бактериальных системах также содержат последовательность Шайна-Дельгарно (Shine-Dalgarno, S.D.), присоединенную непосредственно к ДНК, кодирующей белок, описываемый в настоящем изобретении. Последовательности промоторов для эукариотических систем являются известными. Практически все гены эукариот обладают АТ-богатой областью расположенной за 25-30 п.о. до точки инициации транскрипции. Другая последовательность, расположенная за 70-80 п.о. до точки инициации транскрипции многих генов, CNCAAT, в которой N обозначает любой нуклеотид. На 3'-конце большинства генов эукариот расположена последовательность ААТААА, которая, вероятно, является сигналом полиаденилирования (добавления поли-А) на 3'-конец кодирующей последовательности (мРНК). Все эти последовательности подходят для добавления в структуру векторов для экспрессии в клетках млекопитающих.
Примерами применимых последовательностей промоторов для использования в дрожжевых системах, являются промоторы 3-фосфоглицераткиназы или других ферментов гликолиза, таких как енолазы,
- 107 022983
глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы, гексокиназы, пируватдекарбоксилазы, фосфофруктокиназы, глюкозо-6-фосфат изомеразы, 3-фосфоглицерат мутазы, пируваткиназы, триозофосфат изомеразы, фосфоглюкозоизомеразы и глюкокиназы.
Процесс транскрипции с векторов для экспрессии в клетках млекопитающих можно контролировать, например, за счет промоторов из вирусных геномов, таких как полиомавирус, вирус оспы кур, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы быка, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирус, вирус гепатита В и наиболее предпочтительно вируса SV40; за счет гетерологичных промоторов млекопитающих совместимых с клеткой-хозяином, например, актинового или иммуноглобулинового промоторов; за счет промоторов белков теплового шока.
Уровень транскрипции ДНК, кодирующей описываемые в данном изобретении белки, клетками высших эукариот, в большинстве случаев, повышается за счет введения в последовательность вектора специальных энхансерных последовательностей. В настоящее время известны многие последовательности энхансеров генов млекопитающих (глобин, эластаза, альбумин, альфа-фетопротеин, инсулин). Однако, обычно используются вирусные энхансеры. Примеры включают энхансер вируса SV40, расположенный в конце последовательности ориджина репликации (100-270 п.о.), энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер вируса полиомы, расположенный в конце последовательности ориджина репликации, энхансеры аденовируса. См. Yaniv, Nature, 297:17-18 (1982) об энхансерных элементах для активации промоторов эукариот. Энхансеры могут быть введены в последовательность вектора в 5' или 3' положении относительно пептид-кодирующей последовательности, однако, предпочтительным является расположение энхансера в 5' положении относительно его промотора.
Экспрессионные векторы, используемые в клетках эукариот (например, дрожжей, грибов, насекомых, растений, человека или ядерных клеток других многоклеточных организмов) также содержат последовательности, необходимые для терминации транскрипции и стабилизации мРНК в клетке. Такие последовательности обычно имеются в 5'- и, реже, 3'-нетранслируемых областях эукариотических или вирусных ДНК или кДНК. Такие области содержат нуклеотидные сегменты, транскрибируемые как сигналы полиаденилирования в нетранслируемой части мРНК, кодирующей белок, описываемый в данном изобретении. Одной из применимых последовательностей, терминирующих транскрипцию, является последовательность области полиаденилирования бычьего гормона роста. См. WO 94/11026 и экспрессионные вектора, описанные здесь.
Рекомбинантная ДНК также может включать тэг-последовательность любого типа, которая применяется для очистки нарабатываемого белка. Примеры тэг-последовательностей включают, но не ограничиваются, гистидиновый тэг, FLAG-тэг, myc-тэг, НА-тэг, GST-тэг. Соответствующе векторные системы для использования в клетках бактерий, грибов, дрожжей и млекопитающих описаны в Cloning Vectors: A Laboratory Manual (Elsevier, New York (1985)), и соответствующее описание которых включается в данное изобретение посредством ссылки.
Экспрессионный конструкт вводится в клетки методом, соответствующим типу клеток-хозяев, что очевидно для специалистов в данной области. В соответствующей области знаний разработан широкий набор методов введения нуклеиновых кислот в клетки, включая, но не ограничиваясь, метод электропорации; трансфекции с помощью хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE-декстрана или других веществ; баллистическая трансфекция; липофекции; инфекции (когда вектор является инфицирующим агентом).
Подходящими клетками-хозяевами являются клетки прокариот, дрожжей, млекопитающих или бактерий. Подходящими бактериями являются грамположительные или грамотрицательные организмы, например Е. coli или Bacillus spp. Также для наработки полипептидов могут быть использованы клетки дрожжей, преимущественно видов рода Saccharomyces, например S. cerevisiae. Различные культуры клеток млекопитающих или насекомых также могут быть использованы для наработки рекомбинантных белков. Бакуловирусные системы для наработки гетерологичные белков в клетках насекомых рассмотрены в Luckow et al. {Bio/Technology, 6:47 (1988)). Примеры применимых линий клеток млекопитающих включают эндотелиальные клетки, клетки почки обезьяны линии COS-7, CV-1, L клетки, С127, 3Т3, клетки яичника китайского хомячка (СНО), эмбриональные клетки почки человека, HeLa, 293, 293Т и ВНК. Очищенные полипептиды получают путем культивирования клеток подходящей системы вектор/хозяин для наработки рекомбинантного белка. Для большинства приложений небольшой размер многих полипептидов, описанных в данном изобретении, делает предпочтительным наработку продукта в клетках Е. coli. Затем наработанный белок выделяют из среды для культивирования или клеточных экстрактов.
Продукция белка.
Клетки-хозяева трансформируют описанными здесь векторами для экспрессии белка и культивируют в традиционной среде, модифицированной соответствующим образом, для активации промоторов, селекции трансформантов или амплификации генов, кодирующих целевую последовательность. В приведенных здесь примерах для высокопроизводительной наработки белков (НТРР) и среднемасштабной наработки были использованы бактериальные клетки штамма HMS174. Клетки данного штамма для продукции белков, описываемых в данном изобретении, могут культивироваться в различных средах. Для
- 108 022983
клеток данного штамма применимы коммерчески доступные среды, такие как Ham's F10 (Sigma), Minimal Essential Medium ((MEM) (Sigma)), RPMI-1640 (Sigma) и Dulbecco's Modified Eagle's Medium ((DMEM), Sigma)). Кроме того, для культивирования клеток данного штамма может быть использована среда, описанная в Ham et al., Meth. Enzymol., 58:44 (1979), Barites et al., Anal. Biochem., 102:255 (1980), US Patent No. 4767704, 4657866, 4927762, 4560655, 5122469, 6048728, 5672502, или US Patent No. RE 30985. Любая из указанных сред для культивирования может быть дополнена, при необходимости, гормонами и/или другими ростовыми факторами (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид натрия, кальций, магний и фосфат), буферами (таким как HEPES), нуклеотидами (такими как аденозин или тимидин), антибиотиками (такими как гентамицин), следовыми компонентами (определяемыми как неорганические вещества, конечная концентрация которых обычно находится в микромолярном диапазоне), глюкозой или эквивалентным источником энергии. Любые другие необходимые компоненты также могут быть включены в состав среды в подходящих концентрациях, известных специалистам в данной сфере. Условия культивирования, такие как температура, рН и т.п., являются теми же, что используются для клеток-хозяев данного типа и известны специалистам в соответствующей сфере.
Белки, описанные в данном изобретении, могут также быть получены с помощью систем бесклеточной трансляции. Для этого последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, должны быть модифицированы для транскрипции и трансляции in vitro в конкретной бесклеточной системе (эукариотической, такой как бесклеточная система млекопитающих или дрожжей, или прокариотической, такой как бактериальная система бесклеточной трансляции).
Белки, описанные в данном изобретении, также могут быть получены с помощью химического синтеза (например, с помощью методов, описанных в Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, The Pierce Chemical Co., Rockford, EL (1984)). Модификации в данные белки также могут вноситься методами химического синтеза.
Белки, описанные в настоящем изобретении, могут быть очищены общеизвестными методами выделения и очистки белковой химии. Неограничивающие примеры включают экстракцию, перекристаллизацию, высаливание (например, сульфатами аммония или натрия), центрифугирование, диализ, ультрафильтрацию, адсорбционную хроматографию, ионообменную хроматографию, гидрофобную хроматографию, нормально-фазную хроматографию, обратно-фазную хроматографию, гель-фильтрацию, гельпроникающую хроматографию, аффинную хроматографию, электрофорез, противотоковое распределение или любе комбинации данных методов. После очистки полипептиды могут быть переведены в различные буферные растворы и/или сконцентрированы с помощью любого из различных методов, известных в соответствующей области, включая, но не ограничиваясь, фильтрацию и диализ.
Степень очистки полипептида предпочтительно составляет по меньшей мере 85% или предпочтительно по меньшей мере 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 98%. Независимо от точного численного значения степени чистоты, данный полипептид является достаточно очищенным для применения в качестве фармацевтического продукта.
Для получения aHTH-PCSK9 аднектина был использован платформенный метод производства. АнтиPCSK9 аднектин нарабатывается в клетках Escherichia coli (Е. coll). Клетки Е. coli штамма BLR (DE3) были трансформированы экспрессионным вектором (pET9d/ATI001173), кодирующим белок, накапливающийся внутри клетки в растворимой форме. Клетки данного рекомбинантного штамма культивируются при перемешивании в баке ферментера. По окончании процесса ферментации клетки собираются, лизируются, после чего лизат осветляется для дальнейшего процесса очистки. ATI001173 представляет собой вариант ATI001114 без His-тэга. Очищенный aнти-PCSK9 аднектин конъюгируется с разветвленным метоксилПЭГом массой 40 кДа с использованием малеинимидного линкера. Конъюгированный белок подвергается повторной очистке для удаления несвязанных ПЭГ и aнти-PCSK9 аднектина, а также примесей. Контроль качества осуществляется с нерасфасованным лекарственным веществом.
Терапевтические применения in vivo.
Одним из объектов изобретения является применение aнти-PCSK9 аднектина при лечении атеросклероза, гиперхолистеринемии и других заболеваний, связанных с повышенным уровнем холестерина. Данный патент также описывает методы введения aнти-PCSK9 аднектина субъекту. В некоторых вариантах исполнения субъектом является человек. В некоторых вариантах исполнения aнти-PCSK9 аднектин фармацевтически приемлем для млекопитающих, в частности человека. Термин "фармацевтически приемлемый" полипептид относится к полипептидам, при введении которых животным не наблюдаются существенные побочные эффекты. Такими полипептидами могут быть полипептиды, почти свободные от эндотоксина или содержащие очень низкий уровень эндотоксина.
Лекарственная форма и введение.
Данный патент также описывает фармацевтически приемлемые композиции, содержащие антиPCSK9 аднектин или слитые белки с aнти-PCSK9 аднектином, описанные в данном изобретении, в которых данная композиция практически полностью освобождена от эндотоксина. Терапевтические лекарственные формы, содержащие aнти-PCSK9 аднектин или слитые белки с aнти-PCSK9 аднектином, подготавливают для хранения путем смешивания описанного полипептида с нужной степенью чистоты с не- 109 022983
обязательными физиологически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами (Osol, A., Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition (1980)) в форме водных растворов, лиофилизированных или высушенных лекарственных форм. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для субъекта в применяемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный, и на основе других органических кислот; антиоксиданты включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадециидиметилбензил хлорида аммония, хлорид гексаметония, хлорид бензалькония, хлорид бензетония, фенол, бутиловый или бензиловый спирт, алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен, катехол, резорцинол, циклогексанол, 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем 10 аминокислотных остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстраны; хелаторы, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; формирующие соли противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Znпротеиновые комплексы); и/или неионные поверхностно активные вещества, такие как Tween, PLURONIC® или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Лекарственные формы, описываемые в данном изобретении, могут также содержать более чем одно активное вещество, в зависимости от конкретных показаний при применении, предпочтительно обладающие дополняющими активностями и не влияющими нежелательно один на другой. Такие молекулы подходят для комбинирования в количествах, которые эффективны для достижения целей применения.
Лекарственные формы для применения in vivo должны быть стерильны. Это достигается путем фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны.
Квалифицированный персонал должен понимать, что дозировка каждого терапевтического агента будет зависеть от свойств данного агента.
Для терапевтических применений aHTH-PCSK9 аднектин или слитые белки, содержащие антиPCSK9 аднектин, вводятся субъекту фармацевтически приемлемым путем. Он могут быть введены внутривенно в виде болюса или путем продолжительной инфузии в течение определенного периода времени, или подкожно. Подходящие фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества и разбавители хорошо известны и могут быть определены специалистами в данной сфере на основании клинической ситуации. Примеры подходящих носителей, разбавителей и/или вспомогательных веществ включают: (1) фосфатно-солевой раствор Дульбекко, (2) 0.9% солевой раствор (0.9% w/v NaCl), (3) 5% (w/v) декстроза.
Метод, описываемый в данной изобретении, может применяться на практике in vitro, in vivo или ex
vivo.
Введение aнти-PCSK9 аднектина или слитых белков с aнти-PCSK9 аднектином и одного или более дополнительных терапевтических агентов, вводимых либо совместно, либо последовательно, может осуществляться, как описано выше для терапевтических приложений. Подходящие фармацевтически приемлемые носители, разбавители и вспомогательные вещества для совместного введения определяются специалистами в данной сфере в зависимости от свойств конкретных вводимых терапевтических веществ.
В случае водной лекарственной формы, скорее, чем в случае лиофилизованной формы, белок, как правило, будет находиться в концентрации от 0,1 до 100 мг/мл. Однако допустимы вариации в широких пределах от указанного диапазона. При лечении заболевания соответствующая дозировка aнти-PCSK9 аднектина или слитых с aнти-PCSK9 аднектином белков будет зависеть от типа, тяжести и степени прогресса заболевания, по отношению к которому проводится лечение, от курса предшествующей терапии, истории болезни, ответа организма на белок и решения наблюдающего врача независимо от целей введения (профилактика или друге терапевтические цели). Данный белок применим для введения пациенту однократно или для серии введений.
Слитые аднектины, связывающие сывороточный альбумин (SABA).
Другими объектами данного изобретения являются слитые белки, содержащие aнти-PCSK9 аднектин, слитый с Fn3 доменами, связывающими сывороточный альбумин человека (Serum Albumin Binding Adnectin (10Fn3 домен) или SABA). Такие слитые белки обладают более длительным временем полужизни в плазме в присутствии альбумина, по сравнению с неслитыми aнти-PCSK9 аднектинами (например, неконъюгированными с PK-группой).
Вследствие небольшого размера (~10 кДа) домены 10Fn3 быстро выводятся из циркулирующей крови за счет почечной фльтраци и деградации (t1/2=15-45 мин у мышей; 1-3 ч у обезьян). Слияние домена 10Fn3 , такого как aнти-PCSK9.
Аднектин, со вторым полипептидом, содержащим домен Fn3 специфически связывающий сывороточный альбумин, например сывороточный альбумин человека (HSA), может быть использовано для увеличения ti/2 aнти-PCSK9 аднектина.
В определенных вариантах исполнения время полужизни в плазме aнти-PCSK9 аднектина, слитого с SABA, повышается по сравнению со временем полужизни в плазме aнти-PCSK9 аднектина, не конъю- ii0 022983
гированного с SABA. В определенных вариантах исполнения время полужизни в плазме белка слитого с SABA по меньшей мере на 20, 40, 60, 80, 100, 120, 150, 180, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1500, 1800,
1900, 2000, 2500 или 3000% выше по сравнению со временем полужизни в плазме aHTH-PCSK9 аднектина, не конъюгированного с SABA. В других вариантах исполнения время полужизни в плазме белка слитого с SABA по меньшей мере в 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 15, 17, 20, 22, 25, 27, 30, 35, 40 или 50 раз выше по сравнению со временем полужизни в плазме aнти-PCSK9 аднектина, не конъюгированного с SABA. В некоторых вариантах исполнения время полужизни в плазме белка слитого с SABA составляет по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 135, 140, 150, 160 или 200 ч.
В определенных вариантах часть слитого белка, связывающая сывороточный альбумин, связывает HSA с KD менее чем 3 мкМ, 2.5 мкМ, 2 мкМ, 1.5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ, 100 пМ, 50 пМ или 10 пМ. В определенных вариантах исполнения часть слитого белка, связывающая сывороточный альбумин, связывает HSA с KD менее чем 3 мкМ, 2.5 мкМ, 2 мкМ, 1.5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ, 100 пМ, 50 пМ или 10 пМ в диапазоне рН 5,5-7,4 при температуре 25 или 37°С. В определенных вариантах исполнения часть слитого белка, связывающая сывороточный альбумин, связывается с HSA более сильно при рН менее 7,4, по сравнению со связыванием при рН7,4.
Соответственно, слитые с SABA молекулы, описанные в данном изобретении, применимы для повышения времени полужизни в плазме aнти-PCSK9 аднектина путем создания слитых белков антиPCSK9 аднектина с SABA. Настоящее изобретение предполагает применение слитых с SABA молекул при заболеваниях, вызванных дисрегуляцией PCSK9.
Слияние может быть выполнено путем присоединения aнти-PCSK9 аднектина к любому из концов последовательности SABA, т.е. могут быть получены любые конфигурации: SABA-aнти-PCSK9 аднектин или aнти-PCSK9 аднектин-SABA.
У человека концентрация HSA в плазме составляет 600 мкМ, a t1/2 19 дней. Увеличение параметра ti/2, возможно, связано рециркуляцией HSA за счет неонатального Fc-рецептора (FcRn). После эндосомального поглощения клетками эндотелия HSA связывается с FcRn, что приводит к обратному высвобождению HSA в кровоток, минуя лизосомальную деградацию. Данное связывание носит рН-зависимый характер. Рецептор FcRn экспрессируется большим количеством клеток и такой путь рециркуляции HSA считается конститутивным. В большинстве типов клеток почти весь рецептор FcRn находится внутри внутриклеточных сортирующих эндосом. HSA легко интернализуется посредством неспецифического механизма во время пиноцитоза и защищается от деградации в лизосомах за счет взаимодействия с FcRn. В условиях кислого рН внутри эндосомы аффинность связывания HSA с FcRn возрастает (5 мкМ при рН 6.0). Связывание HSA с FcRn отменяет лизосомальную деградацию HSA и приводит к выведению молекулы HSA на поверхность клетки за счет трансцитоза.
В определенных вариантах исполнения часть слитого с SABA белка, связывающая сывороточный альбумин, описанного в данном изобретении, способна связывать сывороточный альбумин обезьян, и/или крыс, и/или мышей. В определенных вариантах исполнения часть слитого с SABA белка, связывающая сывороточный альбумин человека (HSA), описанного в данном изобретении, способна связывать сывороточный альбумин макаки-резус (RhSA) или сывороточный альбумин яванского макака (CySA) с константой KD менее чем 3 мкМ, 2.5 мкМ, 2 мкМ, 1.5 мкМ, 1 мкМ, 500 нМ, 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 1 нМ, 500 пМ или 100 пМ.
В определенных вариантах исполнения часть слитого белка с SABA, связывающая сывороточный альбумин, описанного в данном изобретении, способна связывать домены I и/или II HSA. В одном из вариантов исполнения часть слитого белка с SABA, связывающая HSA не связывается с доменом Ш HSA.
В определенных вариантах исполнения часть слитого белка с SABA, связывающая сывороточный альбумин содержит последовательность, обладающую по меньшей мере 40, 50, 60, 70, 75, 80 или 85% идентичности с доменом 10Fn3 дикого типа (SEQ ID NO: 1). В одном из вариантов исполнения по меньшей мере одна из петель ВС, DE или FG изменена по сравнению с доменом 10Fn3 дикого типа. В другом варианте исполнения по меньшей мере две из петель ВС, DE или FG изменены по сравнению с доменом 10Fn3 дикого типа. В другом варианте исполнения все три петли ВС, DE или FG изменены по сравнению с доменом 10Fn3 дикого типа. В других вариантах исполнения SABA содержит последовательность, обладающую по меньшей мере 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90 или 95% идентичности по отношению к любой из 26 последовательностей SABA, приведенных в табл. 6 (т.е. SEQ ID NO: 334, 338, 342, 346 и 348-370) или к любой из удлиненных последовательностей SABA, приведенных в табл. 6 (т.е. SEQ ID NO: 420447, за исключением 6хНК-тэга).
В определенных вариантах исполнения последовательности связывающих сывороточный альбумин аднектинов на основе структуры домена 10Fn3 могут быть в общем виде выражены как
EWAAT(X)aSLLI(X)xYYRITYGE(X)6QEFTV(X)>ATI(X)cDYTITVYAV(XyS INYRT (SEQ ID N0:328)
- 111 022983
В определенных вариантах исполнения последовательности связывающих сывороточный альбумин
аднектинов на основе структуры домена 10Fn3 могут быть в общем виде выражены как
EWAATPTSLLI(X)xYYRITYGETGGNSPVQEFTV(X)yATISGLKPGVDYTIT VYAV(X)ZISINYRT (SEQ Ш N0:329)
Как описано в данном изобретении для анти-РС8К9 аднектинов, последовательности SEQ ID NO: 328 и 329 могут быть применены к молекулам SABA таким же образом. В примерах реализации изобретения петли ВС, DE или FG, представленные (Х)х, (Х)у и (Х)2, соответственно, замещаются полипептидами, содержащими последовательности петель ВС, DE или FG из любого другого белка, связывающего HSA, последовательности которых приведены в табл. 6 ниже (т.е. SEQ ID NO: 330, 334, 338, 342, 346 и 348-370 в табл. 6). В определенных вариантах исполнения последовательности петель ВС, DE или FG, приведенные в табл. 6, могут содержать один или более аминокислотный остаток, фланкирующий N- или С-конец. В частности, петля ВС может содержать остатки SW на N-конце последовательности петли ВС, приведенной в табл. 6, когда замещает (Х)х в последовательности SEQ ID NO: 328. Сходно, петля DE может содержать остаток Р перед последовательностью петли DE и остаток Т после петли DE, когда замещает (Х)у в последовательности SEQ ID NO: 328. Петля FG может содержать остаток Р после последовательности петли FG, когда замещает (X)z в последовательности SEQ ID NO: 328. Например, в последовательности SEQ ID NO: 330 показано, что петли ВС, DE или FG содержат последовательности HSYYEQNS (SEQ ID NO: 638), YSQT (SEQ ID NO: 639) и YGSKYYY (SEQ ID NO: 640) соответственно. Однако при замещении (Х)х, (Х)у и (Х)2 в последовательности SEQ ID NO: 328, т.е. петель ВС, DE и FG, последовательность (Х)х может быть SWHSYYEQNS (SEQ ID NO: 641), последовательность (Х)у может быть PYSQTT (SEQ ID NO: 642), последовательность (Х)2 может быть YGSKYYYP (SEQ ID NO: 643).
В определенных вариантах исполнения последовательность SABA, используемая для создания слитых белков, описанных в данном изобретении, может содержать последовательности SEQ ID NO: 328 или 329, в которых последовательности петель ВС, DE или FG. представленных соответственно обозначениями (Х)х, (Х)у и (X)2, заменены соответствующим набором последовательностей петель ВС, DE или FG из любой из 26 коровых последовательностей SABA (т.е. SEQ ID NO: 330, 334, 338, 342, 346 и 348370 в табл. 6) или последовательностями, по меньшей мере на 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентичными последовательностям петель ВС, DE или FG 26 коровых последовательностей SABA. В примерах осуществления изобретения последовательность SABA, как описано в данном изобретении, определяется последовательностью SEQ ID NO: 329 и включает набор последовательностей петель ВС, DE или FG из любых из 26 коровых последовательностей SABA (т.е. SEQ ID NO: 330, 334, 338, 342, 346 и 348-370 в табл. 6), опционально с N- или С-концевыми добавлениями к последовательностям петель, как описано выше. Например, SABA1 имеет коровую последовательность, определенную последовательностью SEQ ID NO: 330 и содержит последовательности петель ВС, DE или FG, определенные в последовательностях SEQ ID NO: 331-333 соответственно. Таким образом, последовательность SABA, основанная на коровой последовательности SABA1 может содержать последовательность SEQ ID NO: 328 или 329, в которой (Х)х, содержит последовательность SEQ ID NO: 331, (Х)у содержит последовательность SEQ ID NO: 332, (X)2 содержит последовательность SEQ ID NO: 333. В некоторых вариантах исполнения последовательности, которые заменяют (Х)х, (Х)у, и (X)2 содержат дополнительный аминокислотный остаток(ки) на одном или на двух концах петель, как описано выше. Настоящим изобретением предполагается использование для сходных конструкций данного набора последовательностей петель ВС, DE или FG из других коровых последовательностей SABA. Структурные области такой последовательности SABA могут содержать в любом месте от 0 до 20, от 0 до 15, от 0 до 10, от 0 до 8, от 0 до 6, от 0 до 5, от 0 до 4, от 0 до 3, от 0 до 2 или от 0 до 1 замены, консервативной замены, делеции или вставки относительно структурных аминокислотных остатков последовательности SEQ ID NO: 1. Такие структурные модификации могут вноситься до тех пор, пока полипептид SABA остается способным связывать сывороточный альбумин, например HSA с требуемым значением KD.
В определенных вариантах исполнения последовательность SABA (например, коровая последовательность SABA или последовательность, основанная на ней, как описано выше) может быть изменена и содержать N-концевую удлиняющую последовательность и/или С-концевую удлиняющую последовательность. Примеры удлиняющих последовательностей приведены в табл. 6. Например, последовательность SEQ ID NO: 420 обозначенная как SABA1.1 содержит коровую последовательность SABA1 (SEQ ID NO: 330) с N-концевой последовательностью MGVSDVPRDLE (SEQ ID NO: 371, обозначенной как AdNTl) и С-концевой последовательностью EIDKPSQ (SEQ ID NO: 380, обозначенной как AdCTl). Последовательность SABA1.1 также содержит 6Н18-тэг на С-конце, однако, это должно быть понятно, что последовательность 6Н18-тэга полностью необязательна и может располагаться в любом месте N- и Сконцевых удлиняющих последовательностей, а также может полностью отсутствовать. Любой из примеров N- и С-концевых удлиняющих последовательностей, приведенных в табл. 6 (SEQ ID NO: 371-395), а также любые их варианты, могут быть использованы для модификации коровой последовательности SABA, приведенной в табл. 6.
В определенных вариантах исполнения С-концевые удлиняющие последовательности (также назы- 112 022983
ваемые "хвостами") содержат остатки Е и D и могут быть длиной 8 и 50, 10 и 30, 10 и 20, 5 и 10 и 2 и 4 аминокислотных остатка. В некоторых вариантах исполнения последовательности "хвостов" включают в
себя ED-линкеры, в которых последовательность состоит из тандемных повторов ED. В примерах осуществления изобретения "хвостовые" последовательности содержат 2-10, 2-7, 2-5, 3-10, 3-7, 3-5, 3, 4 или 5 ED-повторов. В определенных вариантах исполнения данные "хвостовые последовательности на основе ED могут также включать дополнительные аминокислотные остатки, такие как, например, EI, EID, ES, ЕС, EGS и EGC. Такие последовательности основаны, в части, на известных "хвостовых" последовательностях аднектина, таких как последовательность EIDKPSQ (SEQ ID NO: 380), в которой остатки D и K удалены. В примерах осуществления изобретения "хвостовые" последовательности, основанные на последовательности ED, содержат остатки Е, I или EI перед повторами ED.
В других вариантах исполнения "хвостовые" последовательности могут быть комбинированы с другими известными ликерными последовательностями (например, SEQ ID NO: 396-419 в табл. 6) в случае необходимости при конструировании слитой с SABA молекулы.
Конъюгация/линкеры.
Слитые белки, содержащие SABA, могут быть соединены ковалентно и нековалентно. В некоторых вариантах исполнения домен 10Fn3, связывающий сывороточный альбумин, может быть ковалентно или нековалентно связан с анти-PCSK9 аднектином посредством полипептидного линкера. Применимыми линкерами для соединения Fn3 доменов являются те, которые позволяют разделить домены, позволяя независимую укладку и формируя пространственную структуру, способную связывать целевую молекулу с высокой аффинностью.
В данном изобретении описывается ряд подходящих линкеров, удовлетворяющих этим критериям, включающий глицин-сериновые линкеры, глицин-пролиновые линкеры, а также линкер с аминокислотной последовательностью PSTSTST (SEQ ID NO: 416). Примеры, описанные в данном изобретении, демонстрируют, что домены Fn3, соединенные посредством полипептидных линкеров, сохраняют свойства связывания целевой молекулы. В некоторых вариантах исполнения линкером является глицинсериновый линкер. Данные линкеры содержат остатки глицина и серина и могут быть длиной между 8 и 50, 10 и 30 и 10 и 20 аминокислотных остатков. Примеры включают линкеры с аминокислотной последовательностью (GS)7 (SEQ ID NO: 403), G(GS)6 (SEQ ID NO: 398) и G(GS)7G (SEQ ID NO: 400). Другие линкеры содержат глутаминовую кислоту и включают, например последовательности (GSE)5 (SEQ ID NO: 405) и GGSE GGSE (SEQ ID NO: 409). Другие примеры глицин-сериновых линкеров включают (GS)4 (SEQ ID NO: 402), (GGGGS)7 (SEQ ID NO: 411), (GGGGS)5 (SEQ ID NO: 412) и (GGGGS)3G (SEQ ID NO: 413). В некоторых вариантах исполнения линкер является глицин-пролиновым. Такие линкеры содержат остатки глицина и пролина и могут быть длиной между 3 и 30, 10 и 30 и 3 и 20 аминокислотных остатков. Примеры таких линкеров включают линкеры с последовательностями (GP)3G (SEQ ID NO: 414), (GP)5G (SEQ ID NO: 415) и GPG. В других вариантах исполнения линкер может быть пролиналаниновым, длиной между 3 и 30, 10 и 30, и 3 и 20 аминокислотных остатков. Примеры пролиналаниновым линкеров включают последовательности, (РА)3 (SEQ ID NO: 417), (РА)6 (SEQ ID NO: 418) и (РА)9 (SEQ ID NO: 419). Настоящим изобретением предполагается, что оптимальная длина и аминокислотный состав линкера могут быть определены с помощью стандартных экспериментов с учетом сведений, приведенных в данном изобретении. В некоторых вариантах исполнения анти-PCSK9 аднектин соединен с SABA посредством полипептидного линкера, содержащего сайт расщепления протеазы, который может быть расщеплен протеазой в крови или ткани. Такие варианты исполнения могут быть использованы для высвобождения анти-PCSK9 аднектина с целью облегчения доставки, улучшения терапевтических свойств или более эффективной наработки.
Дополнительные линкеры или спейсеры могут быть введены на С-конец домена Fn3 между последовательностью домена Fn3 и последовательностью полипептидного линкера. Дополнительные линкеры или спейсеры могут быть введены на N-конец домена Fn3 между последовательностью домена Fn3 и последовательностью полипептидного линкера.
В некоторых вариантах исполнения анти-PCSK9 аднектин может быть прямо или непрямо соединен с SABA посредством полимерного линкера. Полимерные линкеры могут быть использованы для оптимального варьирования расстояния между компонентами слитого белка для создания слитого белка с одной или несколькими следующими характеристиками: 1) сниженным или повышенным стерическим несоответствием связывания одного или более белковых доменов при связывании целевого белка, 2) повышенной стабильностью или растворимостью белка, 3) сниженным уровнем агрегации белка, 4) повышенной общей авидностью или аффинностью белка.
В некоторых вариантах исполнения анти-PCSK9 аднектин соединен с SABA посредством биосовместимого полимера, такого как полимерный сахар. Такой полимерный сахар может включать сайт расщепления, расщепляемый каким-либо ферментом в крови или в целевой ткани. Такие варианты исполнения могут быть использованы для высвобождения анти-PCSK9 аднектина для облегчения доставки, улучшения терапевтических свойств или более эффективной наработки.
- 113 022983
Сводные данные по последовательностям.
Многие последовательности, на которые ссылаются разделы "Слитые белки на основе аднектинов, связывающих сывороточный альбумин (SABA)" и "Конъюгирование/линкеры", собраны в табл. 6 ниже.
Если не указано обратное, все N-концевые удлиняющие последовательности отмечены с помощью одинарного подчеркивания, все С-концевые "хвосты"/удлиняющие последовательности отмечены с помощью двойного подчеркивания, последовательности линкеров заключены в скобки. Области петель ВС, DE и FG затемнены для каждой коровой последовательности SABA. В дополнение к вышеуказанному, данные модификации последовательностей (например, N- или С-концевые удлинения и линкеры) также могут быть использованы для модификации молекул анти-PCSK9 аднектина.
Таблица 6
Сводные данные по примерам последовательностей
| Назван | Описание | Последовательность | |
| EQ | ие | ||
| ID | последователь | ||
| ности |
Примеры Аднектинов, связывающих сывороточный альбумин (SABA)
| 27 | 10Fn3WT коровая последовательн ость | Коровая последовательность дикого типа домена 10Fn3 человека | EWAATPTSLLISWDAPAVTVRYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPGSKSTATISGLKPGVDYTITV YAVTGRGDSPASSKPISINYRT | |
| 28 | 10Fn3v6 | Аналог домена 10Fn3 содержащий 6 вариабельных петель | EWAAT (X) aSLLI (X) XYYRITYGE (X) b QEFTV(X) yATI (X) CDYTITVYAV{X) ZISINYRT | |
| 29 | 10Fn3v3 | Аналог домена 10Fn3 содержащий 3 вариабельных петли | EWAATPTSLLI (X) XYYRITYGETGGNSP VQEFTV (X) yATISGLKPGVDYTITVYAV (X) ZIS INYRT | |
| 30 | SABA1 | Коровая последовательность 1 Аднектина | EWAATPTSLLISWHSYYEQNSYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGLKPGVDYTITV YAVYGSKYYYPISINYRT | |
| 31 | ВС | SABA1 | Коровая последовательность 1 петли ВС | HSYYEQNS |
| 32 | DE | SABA1 | Коровая последовательность 1 петли DE | YSQT |
| 33 | G | SABA IF | Коровая последовательность 1 петли FG | YGSKYYY |
- 114 022983
- 115 022983
SABA6
50
SABA7
51
SABA8
52
петли FG
Коровая
последовательность
Аднектина
Коровая
последовательность
Аднектина
Коровая
последовательность
Аднектина
Последовательность
EDDSYYSR
SDLY
YDVTDLIMHE
EWAATPTSLLISWEDDSYYSRYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVPSDLYTATISGLKPGVDYTITV
YAVTYDVTDLIMHEPISINYRT
EDDSYYSR
SDLY
YDVTDLIMHE
EWAATPTSLLISWYMDEYDVRYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVPNYYNTATISGLKPGVDYTITV
YAVTRIKANNYMYGPISINYRT
EWAATPTSLLISWNHLEHVARYYRITYG
7 ETGGNSPVQEFTVPEYPTTATISGLKPGVDYTITV YAVTITMLKYPTQSPISINYRT
EWAATPTSLLISWGHYRRSGHYYRITYG
8 ETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGLKPGVDYTITV
YAVSKDDYYPHEHRPISINYRT
- 116 022983
| EQ ID | Назван не последователь ности | Описание | Последовательность |
| 53 | SABA9 | Коровая последовательность 9 Аднектина | EWAATPT S LL ISWDASHYERRYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPRYHHTATISGLKPGVDYTITV YAVTQAQEHYQPPISINYRT |
| 54 | SABA 10 | Коровая последовательность 10 Аднектина | EWAATPTSLLISWNSYYHSADYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPYPPTTATISGLKPGVDYTITV YAVYSAKSYYPISINYRT |
| 55 | SABA11 | Коровая последовательность 11 Аднектина | EWAATPTSLLISWSKYSKHGHYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPSGNATATISGLKPGVDYTITV YAVEDTNDYPHTHRPISINYRT |
| 56 | SABA12 | Коровая последовательность 12 Аднектина | EWAATPTSLLISWHGEPDQTRYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPPYRRTATISGLKPGVDYTITV YAVT S GYT GHYQPISINYRT |
| 57 | SABA 13 | Коровая последовательность 13 Аднектина | EWAATPTSLLISWSKYSKHGHYYRITYG ETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGLKPGVDYTITV YAVSKDDYYPHEHRPISINYRT |
| 58 | SABAH | Коровая последовательность 14 Аднектина | EWAATPTSLLISWYEPYTPIHYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPGYYGTATISGLKPGVDYTITV YAVYGYYQYTPISINYRT |
| 59 | SABAH | Коровая последовательность 15 Аднектина | EWAATPTSLLISWSKYSKHGHYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPSGNATATISGLKPGVDYTITV YAVS DDNKYYHQHRPISINYRT |
| 60 | SABAH | Коровая последовательность 16 Аднектина | E WAATPTS LL IS WGHYRRSGHY YRIT YG ETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGLKPGVDYTITV YAVSKDDYYPHEHRPISINYRT |
| 61 | SABA 17 | Коровая последовательность 17 Аднектина | EWAATPTSLLISWSKYSKHGHYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPSGNATATISGLKPGVDYTITV YAVEDTNDYPHTHRPISINYRT |
| 62 | SABAH | Коровая последовательность 18 Аднектина | EWAATPTSLLISWYEPGASVYYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPSYYHTATISGLKPGVDYTITV YAVYGYYEYEPISINYRT |
| 63 | SABA 19 | Коровая последовательность 19 Аднектина | EWAATPTSLLISWQSYYAHSDYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPYPPQTATISGLKPGVDYTITV YAVYAG SSYYPISINYRT |
- 117 022983
EQ
ID
64
65
66
67
68
69
70
Назван
ие
последователь
ности
SABA20
SABA21
SABA22
SABA23
SABA24
SABA25
SABA26
Описание
Коровая
последовательность 20 Аднектина
Коровая
последовательность 21 Аднектина
Коровая
последовательность 22 Аднектина
Коровая
последовательность 23 Аднектина
Коровая
последовательность 24 Аднектина
Коровая
последовательность 25 Аднектина
Коровая
последовательность 26 Аднектина
Последовательность
EWAATPTSLLISWGHYRRSGHYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGLKPGVDYTITV
YAVSKDDYYPHEHRPISINYRT
EWAATPTSLLISWPEPGTPVYYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVPAYYGTATISGLKPGVDYTITV
YAVYGYYDYSPISINYRT
EWAATPTSLLISWYRYEKTQHYYRITYG ETGGNSPVQEFTVPPE S GTATIS GLKPGVDYTITV
YAVYAGYEYPHTHRPISINYRT
EWAATPTSLLISWVKSEEYYRYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVPYYVHTATISGLKPGVDYTITV
YAVTEYYYAGAWSVPISINYRT
EWAATPTSLLISWYDPYTYGSYYRITYG
ЕТ GGN S PVQEFTVGPYT Т ТATISGLKPGVDYTITV YAVS YY YS TQPISINYRT
EWAATPTSLLISWSNDGPGLSYYRITYG
ЕТ GGN S PVQEFTVP SS QT TATIS GLKPGVDYTI TV
YAVSYYTKKAYSAGPISINYRT
EWAATPTSLLISWPDPYYKPDYYRITYG
ETGGNSPVQEFTVPRDYTTATISGLKPGVDYTITV
YAVYSYYGYYPISINYRT
Примеры последовательностей N-концевых удлинений Аднектинов
| 71 | AdNTl | Пример лидерной последовательности | MGVSDVPRDL |
| AdNT2 | Пример | GVSDVPRDL | |
| 72 | лидерной | ||
| последовательности | |||
| AdNT3 | Пример | VSDVPRDL | |
| 73 | лидерной | ||
| последовательности | |||
| AdNT4 | Пример | SDVPRDL | |
| 74 | лидерной | ||
| последовательности |
- 118 022983
| Назван | Описание | Последовательность | |
| EQ ID | не последователь ности | ||
| 75 | AdNT5 | Пример лидерной последовательности | DVPRDL |
| 76 | AdNT6 | Пример лидерной последовательности | VPRDL |
| 77 | AdNT7 | Пример лидерной последовательности | PRDL |
| 78 | AdNT8 | Пример лидерной последовательности | RDL |
| 79 | AdNT9 | Пример лидерной последовательности | DL |
Примеры последовательностей С-концевых удлинений Аднектинов
| 80 | AdCTl | Пример «хвостовой» последовательности | EIDKPSQ |
| 81 | AdCT2 | Пример «хвостовой» последовательности | EIDKPS |
| 82 | AdCT3 | Пример «хвостовой» последовательности | EIDKPC |
| 83 | AdCT4 | Пример «хвостовой» последовательности | EIDKP |
| 84 | AdCT5 | Пример «хвостовой» последовательности | EIDK |
| 85 | AdCT6 | Пример «хвостовой» последовательности | EI |
- 119 022983
- 120 022983
- 121 022983
| EQ ID | Назван не последователь ности | Описание | Последовательность |
| 14 | L19 | (GP)3G | GPGPGPG |
| 15 | L20 | (GP)5G | GPGPGPGPGPG |
| 16 | L21 | p(st)3 | PSTSTST |
| 17 | L22 | (РА)3 | РАРАРА |
| 18 | L23 | (РА)6 | РАРАРАРАРАРА |
| 19 | L24 | (РА)9 | РАРАРАРАРАРАРАРАРА |
Примеры удлинений коровых последовательностей Аднектинов
| 20 | SABA1. 1 | Коровая последовательность 1 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl иAdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHSYYE QNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGL KPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTEIDKPSO НННННН |
| 21 | SABA1. 2 | Коровая последовательность 1 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCT8 | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHSYYE QNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGL KPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTEIEDEDE DEDED |
| 22 | SABA1. 3 | Коровая последовательность 1 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCT9 с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHSYYE QNSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYSQTTATISGL KPGVDYTITVYAVYGSKYYYPISINYRTEIEDEDE DEDEDHHHHHH |
- 122 022983
| EQ | Назван не | Описание | Последовательность | |
| ID | последователь ности SABA2. | Коровая | MGVSDVPRDLEWAATPTS LLIS WPKYDK | |
| 23 | 1 | SAB АЗ. | последовательность 2 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM Коровая | TGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPTRQTTATISGL KPGVDYTITVYAVSKDDYYPHEHRPISINYRTEID KPSOHHHHHH MGVSDVPRDLEWAATPTS LLISWSNDGP |
| 24 | 1 | SABA4. | последовательность 3 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM Коровая | GLSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSQTTATISGL KPGVDYTITVYAVSYYTKKAYSAGPISINYRTEID KPSOHHHHHH MGVSDVPRDLEMVAATPTSLLISWEDDSY |
| 25 | 1 | SABA5. | последовательность 4 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM Коровая | YSRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSDLYTATISGL KPGVDYTITVYAVTYDVTDLIMHEPISINYRTEID KPSQHHHHHH MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEDDSY |
| 26 | 1 | последовательность 5 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | YSRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSDLYTATISGL КРGVDYТIТVYAVTYDVTDLIMHEРISINYRTEID KPSQHHHHHH |
- 123 022983
| EQ ID | Назван не последователь ности | Описание | Последовательность |
| 27 | SABA6. 1 | Коровая последовательность 6 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWYMDEY DVRYYRIТYGET GGNS PVQEF ТVPNYYNTATIS GL KPGVDYTITVYAVTRIKANNYMYGPISINYRTEID KPSOHHHHHH |
| 28 | SABA7. 1 | Коровая последовательность 7 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTS LLIS WNHLEH VARYYRITYGETGGNSPVQEFTVPEYPTTATISGL KPGVDYTITVYAVTITMLKYPTQSPISINYRTEID KPSQHHHHHH |
| 29 | SABA8. 1 | Коровая последовательность 8 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTS LL IS WGHYRR SGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGL KPGVDYTITVYAVSKDDYYPHEHRPISINYRTEID KPSOHHHHHH |
| 30 | SABA9. 1 | Коровая последовательность 9 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDASHY ERRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPRYHHTATISGL KPGVDYTITVYAVTOAOEHYOPPISINYRTEIDKP SQHHHHHH |
- 124 022983
EQ
ID
Назван
не
последователь
ности
SABA10
31
SABA 11
32
SABA 12
33
SABA 13
34
Описание
Коровая
последовательность 10 Аднектина, содержащая концевые
последовательности
AdNTl и AdCTl с
His6-T3roM
Коровая
последовательность 11 Аднектина, содержащая концевые
последовательности
AdNTl и AdCTl с
His6-T3roM
Коровая
последовательность 12 Аднектина, содержащая концевые
последовательности
AdNTl и AdCTl с Кеб-тэгом
Коровая
последовательность 13 Аднектина, содержащая концевые
последовательности
AdNTl и AdCTl с
His6-T3roM
Последовательность
MGVSDVPRDLEWAATPTSLL IS WNS YYH
SADYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYPPTTATISGL KPGVDYTITVYAVYSAKSYYPISINYRTEIDKPSQ
НННННН
MGVSDVPRDLEWAATPTSLL ISWSKYSK
HGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSGNATATISGL
KPGVDYTITVYAVEDTNDYPHTHRPISINYRTEID
KPSOHHHHHH
MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWHGEPD
QTRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPPYRRTATISGL
KPGVDYTITVYAVTSGYTGHYQPISINYRTEIDKP
SQHHHHHH
MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWSKYSK
HGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGL
KPGVDYTITVYAVSKDDYYPHEHRPISINYRTEID
KPSQHHHHHH
- 125 022983
| EQ ID | Назван не последователь ности | Описание | Последовательность |
| 35 | SABA 14 .1 | Коровая последовательность 14 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWYEPYT PIHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPGYYGTATISGL KPGVDYTITVYAVYGYYQYTPISINYRTEIDKPSQ НННННН |
| 36 | SABA 15 .1 | Коровая последовательность 15 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3TOM | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWSKYSK HGHYYRITYGET GGNSPVQEFTVP S GNATATIS GL KPGVDYTITVYAVS DDNKYYHQHRPISINYRTEID KPSQHHHHHH |
| 37 | SABA 16 .1 | Коровая последовательность 16 Аднектина, содержащая концевые последовательности . AdNTl и AdCTl с His6-T3r0M | MGVSDVPRDLEWAATPTS LLIS WGHYRR SGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGL KPGVDYTITVYAVSKDDYYPHEHRPISINYRTEID KPSQHHHHHH |
| 38 | SABA17 .1 | Коровая последовательность 17 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWSKYSK HGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSGNATATISGL KPGVDYTITVYAVEDTNDYPHTHRPISINYRTEID KPSQHHHHHH |
- 126 022983
| EQ ID | Назван не последователь ности | Описание | Последовательность |
| 39 | SABA 18 .1 | Коровая последовательность 18 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с Кеб-тэгом | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWYEPGA SVYYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSYYHTATISGL KPGVDYTITVYAVYGYYEYEPISINYRTEIDKPSO НННННН |
| 40 | SABA19 .1 | Коровая последовательность 19 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с Кэб-тэгом | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWQSYYA HSDYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYPPQTATISGL KPGVDYTITVYAVYAGS SYYPISINYRTEIDKPSO НННННН |
| 41 | SABA20 .1 | Коровая последовательность 20 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3roM | MGVSDVPRDLEWAATPTS LLIS WGHYRR SGHYYRITYGETGGNSPVQEFTVDPSSYTATISGL KPGVDYTITVYAVSKDDYYPHEHRPISINYRTEID KPSOHHHHHH |
| 42 | SABA21 .1 | Коровая последовательность 21 Аднектина, содержащая концевые последовательности AdNTl и AdCTl с His6-T3TOM | MGVSDVPRDLEWAATPTS LL I SWPEPGT PVYYYRITYGETGGNSPVQEFTVPAYYGTATISGL KPGVDYTITVYAVYGYYDYSPISINYRTEIDKPSO НННННН |
- 127 022983
| Назван | Описание | Последовательность | |
| EQ | ие | ||
| ID | последователь | ||
| ности | |||
| SABA22 | Коровая | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWYRYEK | |
| 43 | .1 | последовательность 22 | TQHYYRITYGETGGNSPVQEFTVPPESGTATISGL |
| Аднектина, | KPGVDYTITVYAVYAGYEYPHTHRPISINYRTEID | ||
| содержащая концевые | KPSOHHHHHH | ||
| последовательности | |||
| AdNTl и AdCTl с | |||
| His6-T3roM | |||
| SABA23 | Коровая | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWVKSEE | |
| 44 | .1 | последовательность 23 | YYRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPYYVHTATISGL |
| Аднектина, | KPGVDYTITVYAVTEYYYAGAWSVPISINYRTE1 | ||
| содержащая концевые | DKPSOHHHHHH | ||
| последовательности | |||
| AdNTl и AdCTl с | |||
| His6-T3roM | |||
| SABA24 | Коровая | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWYDPYT | |
| 45 | .1 | последовательность 24 | YGSYYRITYGETGGNSPVQEFTVGPYTTTATISGL |
| Аднектина, | KPGVDYTITVYAVSYYYSTOPISINYRTEIDKPSO | ||
| содержащая концевые | НННННН | ||
| последовательности | |||
| AdNTl и AdCTl с | |||
| His6-T3roM | |||
| SABA25 | Коровая | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWSNDGP | |
| 46 | .1 | последовательность 25 | GLSYYRITYGETGGNSPVQEFTVPSSQTTATISGL |
| Аднектина, | KPGVDYTITVYAVS YYTKKAYSAGPISINYRTEJLD | ||
| содержащая концевые | KPSOHHHHHH | ||
| последовательности | |||
| AdNTl и AdCTl с | |||
| His6-T3roM | |||
| SABA26 | Коровая | MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWPDPYY | |
| 47 | .1 | последовательность 26 | KPDYYRITYGETGGNSPVQEFTVPRDYTTATISGL |
| Аднектина, | KPGVDYTITVYAVYSYYGYYPISINYRTEIDKPSO | ||
| содержащая концевые | НННННН | ||
| последовательности | |||
| AdNTl и AdCTl с | |||
| His6-T3roM |
Примеры
Пример 1.
Материалы и методы, использованные для данного изобретения.
Технология высокопроизводительной наработки белка (НТРР).
Отобранные последовательности, кодирующие связывающие белки, были клонированы в вектор
pET9d и трансформированы в клетки Е. coli штамма HMS174. Далее клетки инокулировали в 5 мл среды LB, содержащей канамицин в концентрации 50 мкг/мл, в 24-луночные планшеты и инкубировали при 37°С в течение ночи. Для подготовки к индукции экспрессии 200 мкл ночной культуры переносили в 5 мл свежей среды LB (50 мкг/мл канамицина) в новой лунке. Культуры растили при 37°С до оптической плотности Л6Оо 0,6-0,9. Затем индуцировали экспрессию внесением изопропил-в-тиогалактозида до кон- 128 022983
центрации 1 мМ и инкубировали при 30°С в тчечение 6 ч, после чего собирали клетки центрифугированием в течение 10 мин при ускорении 2750g и 4°С.
Клетки осадков (в 24-луночном планшете) были лизированы путем добавления 450 мкл лизирующего буфера (50 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 1x Complete Protease Inhibitor Cocktail-EDTA в свободном виде (Roche), ImM PMSF, 10 мМ CHAPS, 40 мМ имидазола, 1 мг/мл лизоцима, 30мкг/мл ДНКазы, 2 мкг/мл апротонина, рН 8.0) и перемешивания при комнатной температуре в течение 1-3 ч. Лизаты осветляли и переводили в 9-луночный формат путем фильтрования при повышенном давлении через 96луночный фильтр Whatman GF/D UNIFILTER® с 96-луночным планшетом для сбора объемом 1,2 мл. Осветленные лизаты переносили в 96-луночный планшет с Ni-хелатирующей смолой, уравновешенной буфером: 50 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 40 мМ имидазола, рН 8.0, и инкубировали в течение 5 мин. Не связавшиеся вещества удаляли под вакуумом. Смолу дважды по 0,3 мл/лунку промывали отмывочным буфером № 1 (50 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 5 мМ CHAPS, 40 мМ имидазола, рН 8.0) под действием вакуума. До элюции в каждую лунку вносили 50 мкл элюирующего буфера (PBS + 20 мМ ЭДТА), инкубировали в течение 5 мин и удаляли при помощи вакуума. Белок элюировали, добавляя дополнительные 100 мкл элюирующего буфера в каждую лунку. После 30 мин инкубации при комнатной температуре планшет(ы) центрифугировали в течение 5 мин при 200 g, при этом элюируемый белок собирали с помощью 96-луночного планшета для сбора, содержащего по 5 мкл 0,5 M MgCl2 на дне лунок. Количество элюированного белка измеряли с помощью стандартного ВСА-анализа, с использованием SGE в качестве стандарта.
Среднемасштабная экспрессия и очистка нерастворимых связывающих белков на основе структурных частей фибронектина.
Для экспрессии последовательностей клонов, продуцирующих нерастворимые белки, последовательности клона(ов) с 6Ш8-тэгом на конце клонируют в вектор pET9d (EMD Bioscience, San Diego, CA) и экспрессируют в клетках Е. coli штамма HMS174. Для этого в 1 л среды LB, содержащей 50 мкг/мл карбенциклина и 34 мкг/мл хлорамфеникола, инокулируют 20 мл культуры клеток (полученной с одной колонии, выращенной рассевом на одной чашке). Культуру инкубируют при 37°С до достижения оптической плотности А60о 0,6-1,0. После индукции экспрессии добавлением 1 мМ изопропил-в-тиогалактозида (IPTG) культуру инкубируют в течение 4 ч при 30°С и собирают клетки центрифугированием в течение 30 мин при ускорении >10,000 g при 4°С. Осадки клеток замораживают при -80°С. Затем клеточные осадки ресуспендируют в 25 мл лизирующего буфера (20 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 1x Complete Protease Inhibitor Cocktail-EDTA в свободном виде (Roche), 1 мМ PMSF, рН 7.4), используя гомогенизатор ULTRA-TURRAX® (IKA) на льду. Лизирование клеток достигают с помощью высокого давления в гомогенизаторе (>18,000 psi), используя Model M-110S MICROFLUTDIZER® (Microfluidics). Нерастворимую фракцию отделяют центрифугированием в течение 30 мин при ускорении 23,300 g при 4°С. Полученный осадок отмывают буфером с 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl, рН 7.4. Затем осадок растворяют в 6,0 M растворе гидрохлорида гуанидина в буфере, содержащем 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl, pH 7.4 при обработке ультразвуком и последующей инкубацией при 37°С в течение 1-2 ч. Растворенный осадок фильтруют через фильтры с размером пор 0,45 мкм и наносят на колонку Histrap, предварительно уравновешенную буфером с 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl/6,0 M гуанидина, рН7.4. После нанесения колонку отмывают 25 объемами колонки буфера для уравновешивания. Связавшийся белок элюируют буфером с 50 мМ имидазола и содержащем 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl/6,0 M гуанидинхлорида, рН7.4. Далее проводят рефолдинг очищенного белка путем диализа против буфера с 50 мМ ацетата натрия/150 мМ NaCl, pH 4,5.
Среднемасштабная экспрессия и очистка растворимых связывающих белков на основе структурных частей фибронектина.
Для экспрессии последовательностей клонов, продуцирующих нерастворимые белки, последовательности клона(ов) с 6His-тэгом на конце были клонированы в вектор pET9d (EMD Bioscience, San Diego, CA) и экспрессированы в клетках Е. coli штамма HMS174. Для этого в 1 л среды LB, содержащей 50 мкг/мл карбенциклина и 34 мкг/мл хлорамфеникола, инокулировали 20 мл культуры клеток (полученной с одной колонии, выращенной рассевом на одной чашке). Культуру инкубировали при 37°С до достижения оптической плотности А600 0,6-1,0. После индукции экспрессии добавлением 1 мМ изопропилβ-тиогалактозида (IPTG) культуру инкубировали в течение 4 ч при 30°С и собирали клетки центрифугированием в течение 30 мин при >10,000 g при 4°С. Осадки клеток замораживали при -80°С. Затем клеточные осадки ресуспендировали в 25 мл лизирующего буфера (20 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 1x Complete Protease Inhibitor Cocktail-EDTA в свободном виде (Roche), 1мМ PMSF, pH 7.4) используя гомогенизатор ULTRA-TURRAX® (IKA) на льду. Лизирование клеток достигали с помощью высокого давления в гомогенизаторе (> 18,000 psi), используя Model M-110S MICROFLUIDIZER® (Microfluidics). Растворимую фракцию отделяли центрифугированием в течение 30 мин при ускорении 23,300 g при 4°С. Полученный супернатант осветляли фильтрованием через фильтр с размером пор 0,45 мкм. Осветленный лизат наносили на колонку Histrap (GE), предварительно уравновешенную буфером с 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl, pH 7.4. После нанесения колонку отмывали 25 объемами колонки буфера для уравно- 129 022983
вешивания, содержащего 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl, pH 7.4, с последующей промывкой 20 объемами буфера, содержащего 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl/25 мМ имидазола, рН7.4, с последующей промывкой 35 объемами буфера, содержащего 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl/40 мМ имидазола, рН7.4. Белок элюировали 15 объемами колонки буфера, содержащего 20 мМ фосфата натрия/500 мМ NaCl/500 мМ имидазола, рН7.4. Фракции объединяли на основе поглощения при длине волны 280 нм и диализовали против буферов 1x PBS, 50 мМ Tris, 150 мМ NaCl. pH 8.5 или 50 мМ NaOAc; 150 мМ NaCl; pH 4.5. Любой осадок удаляли путем фильтрования через фильтр с размером пор 0,22 мкм.
Пример 2.
Доклиническая фармакология in vitro.
Измерение KD методом SPR.
Характеристики связывания были определены методом поверхностного плазмонного резонанаса (SPR). PCSK9 человека и яванского макака были иммобилизованы в отдельных каналах в одном измерении на поверхностях чипа ProteOn XPR (Bio-Rad) и обработаны 6 различными концентрациями 2013Е01
в другом измерении поверхности того же SPR-чипа. Это позволило определить кинетику в отсутствие регенерации. Для определения кинетики PCSK9 человека и яванского макака при 25°С эксперимент проводился в двух повторах. Оценка кинетических параметров была осуществлена с помощью модели взаимодействия Лэнгмюра и постоянных параметров побора кривой по точкам программного обеспечения
ProteOn Manager.
В этих условиях arnu-PCS^ аднектины связываются с PCSK9 человека с константами диссоциации (KD) в диапазоне от 80 до 1,6 нМ и с PCSK9 яванского макака с константами диссоциации (KD) в диапазоне от 8 до 24 нМ (табл. 7). Скорости ассоциации примерно оценивались как 105 M-1-c-1, одновременно со скоростями диссоциации, которые составляли обычно 10-3-10-5 с1. Для некоторых аднектинов скорости диссоциации от PCSK9 человека были низкими (порядка 10-5 с1), что близко к пределу детекции с помощью технологии SPR. Таким образом, возможно, что данные константы диссоциации от PCSK9 человека ниже приводимой оценки.
Таблица 7
Кинетические параметры анти-PCSK9 аднектина по отношению к иммобилизованным напрямую PCSK9 человека и яванского макака, определенные с помощью технологии SPR
| ГО клона | организмисточник PCSK9 | ко„ (Μ'1 s'1) | koff (s’1) | KD (нМ) |
| 14 59D05 | человек | 1.13Е+05 | 1.80Е-04 | 1.58 + 0.176 |
| 20 13Е01 | человек | 7.03 + 0.1 Е+05 | 2.42 + 0.3 Е-05 | 0.292 ± 0.008 |
| 20 13Е01 | яванский макак | 2.19 Е+05 | 1.77 Е03 | 8.1 |
| 19 22G04 | человек | 5.41Е+05 | 5.08Е-05 | 0.094 ± 0.009 |
| 19 22G04 | яванский макак | 4.65Е+05 | 7.00Е-03 | 15.03 |
| 20 11Н05 | человек | 1.18Е+05 | 9.76Е-06 | 0.079 ± 0.038 |
| 20 11Н05 | яванский макак | 1.90Е+05 | 4.40Е-03 | 23.1 |
| 20 12А04 | человек | 2.59Е+05 | 6.47Е-05 | 0.251 ± 0.011 |
| 20 12А04 | яванский макак | 1.95Е+05 | 4.75Е-03 | 24.32 |
Измерения KD методом BLI.
Характеристики связывания аднектинов и PCSK9 человека также определялись методом Bio-Layer Interferometry (BLI). Биотинилированный PCSK9 человека был иммобилизован на сенсорных наконечниках, покрытых суперстрептавидином, который затем погружали в лунки, содержащие разведения аднектина на время, необходимое для связывания. Затем наконечники помещали в лунки, заполненные чистым буферным раствором для наблюдения диссоциации аднектина. Эксперименты проводили при контролируемой температуре, либо при 25°С, либо при 37°С. Установленная частота колебаний составляла 1500 об/мин.
- 130 022983
Анализ связывания проводился с использованием соответствующего программного обеспечения от компании Fortebio (Fortebio Data Analysis Software version 6.3.0.36). Общее соответствие кривой было построено для всех образцов используя модель связывания 1:1. На основе этих общих соответствий была получена пара скоростей ассоциации и диссоциации, которые соответствовали друг другу. Значения аффинности (KD), скоростей ассоциации и диссоциации были усреднены для различных уровней нагрузки, использовавшихся в анализе. При данных условиях аднектины связывают PCSK9 человека с аффинностью в диапазоне от 200 до 7.5 нМ, как показано в табл. 8. Скорости ассоциации варьировали в пределах 104-105 M-1-c-1 и соответствовали диссоциации, которая обычно составляла 10-3-10-5 c-1.
Таблица 8
Кинетические параметры связывания PCSK9 аднектинов с PCSK9 человека, определенные с помощью метода BLI
- 131 022983
| ID клона | konfM'1 c’1) | We’1) | KD |
| или номер ATI | (hM) | ||
| 2381F11 | 3.23E+05 | 5.22E-04 | 1.59 |
| 2971Е02 | 3.55E+05 | 5.55E-04 | 1.78 |
| 2382Н09 | 2.51E+05 | 4.83E-04 | 1.86 |
| 2451Н07 | 4.48E+05 | 9.40E-04 | 2.08 |
| 23 82В10 | 3.94E+05 | 9.77E-04 | 2.35 |
| 2382С05 | 3.68E+05 | 8.79E-04 | 2.49 |
| 2971А09 | 3.99E+05 | 1.05E-03 | 2.79 |
| 2382Е03 | 2.20E+05 | 5.96E-04 | 2.94 |
| 2381Н09 | 1.36E+05 | 4.60E-04 | 3.23 |
| 2381В02 | 2.65E+05 | 8.31E-04 | 3.29 |
| 2381В08 | 2.13E+05 | 9.40E-04 | 4.11 |
| 2382F05 | 2.44E+05 | 1.09E-03 | 4.54 |
| 1.49E±05± | 2.02E-03 ± | 14.4 ± | |
| 1459D05 | 2.5E+04 | 2.0E-03 | 0.2 |
| ATI 1091 | 2.863E+05 | 8.201E-05 | 0.293 |
| ATI001117 | 1.451E+05 | 5.074E-05 | 0.554 |
| ATI001057 | 5.325E+05 | 1.403E-04 | 0.255 |
| ATI001119 | 8.190E+04 | 4.450E-04 | 5.296 |
| ATI001168 1 | 5.829E+05 | 3.335E-04 | 0.586 |
| ATI001175 2 | 6.558E+05 | 3.522E-04 | 0.543 |
| 8.29E+05 ± | 3.49E-04± | 0.479 | |
| ATI 1081 | 8.1E+05 | 3E-04 | ±0.11 |
| ATI891 | 1.08E+05 | 4.03E-04 | 3.56 |
| ATI1114 | 8.072E+04 | 3.952E-04 | 4.876 |
| ATI 1174 | 1.265E+05 | 9.012E-04 | 7.397 |
ATI001168 представляет собой деиммунизированный вариант
1922G04 с заменой R23E.
2 ATI001175 представляет собой деиммунизированный вариант 1922G04 с заменой R23D.
Аффинность в растворе.
KinExA.
Аффинность ATI001081 и ATI001174 к PCSK9 человека в растворе была измерена с использованием Kinetic Exclusion Assay (KinExA). Относительные концентрации несвязанного аднектина были измерены при связывании с твердой подложкой с иммобилизованным hPCSK9 и последующей детекции с помощью флуоресцентно меченых антител, распознающих структурные области аднектина. Вследствие технических ограничений, наименьшая измеряемая концентрация аднектинов составляла 1 нМ. Величина KD для ATI001081 составляла 70 нМ (28-127пМ 95% доверительный интервал), а для ATI001174 - 223 нМ (54-585 нМ 95% доверительный интервал) по результатам общего анализа KD.
- 132 022983
Таблица 9
были охарактеризованы с использованием метода изотермической титрационной калорметрии (ITC). Измерения связывания в растворе проводились в буфере, содержащем 25 мМ HEPES, рН 7.41, 150 мМ NaCl при 37°С. Наблюдали значение средней одномолекулярной константы связывания в диапазоне 1.3±0.2 нМ для ATI001174 и 1.4±0.4 нМ для ATI001081. Подробный термодинамический анализ приведен в табл. 10 и на фиг. 13. Различия в наблюдаемой энтальпии (-3,3 ккал/моль) для двух данных аднектинов предполагают, что снижение величины на порядок происходит вследствие пэгилирования ATI001174, что, по меньшей мере, частично компенсируется соответствующей разницей в энтропии (-10,4 ккал/моль-К).
Таблица 10
| Аднектин | (N) | Стехиометрия | Кд (М·1) | KD (нМ) | АН (ккал/моль) | AS (кал/моль· °C) |
| ΑΊΊ001081 | 0.926 | 7.1Е8 ±2.1Е8 | 1.4 ± 0.4 (±30%) | -26.6 ±0.2 | -45.4 | |
| ATI001174* | 0.857 | 7.5Е8 ± 1.5Е8 | 1.3 ± 0.2 | -29.9 ±0.1 | -55.8 |
* среднее после трех экспериментов.
Анализ на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET).
Были разработаны три системы на основе FRET для определения аффинности связывания и потенциала РС8К9-связывающих аднектинов, адаптированные к общему методу, описанному Maio et al. (See, Miao, В. et al., Meth. Enzymol, 357:180-188 (2002)). FRET-анализ PCSK9:EGFA (фиг. 2 и 3) измерял ингибирование связывания PCSK9 с рецептором липопротеинов низкой плотности (РЛПНП) гомологичным доменом предшественника эпидермального фактора роста (EGFA доменом), с использованием рекомбинантного PCSK9 человека, экспрессированного в бакуловирусной системе, и синтетического 40членного пептида EGFA (биотинилированного). Показано, что EGFA является ключевым доменом взаимодействия РЛПНП с PCSK9 (Kwon, H.J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105(6): 1820-1825 (2008)). В данном анализе использовалось моноклональное антитело (mAb 4Н5), связывающее С-концевой домен PCSK9, меченное Eu-хелатором, для обеспечения FRET-взаимодействия с биотинилированным EGFA за счет комплекса стрептавидин/аллофикоцианиновый флуорофор.
Также были сконструированы два других, похожих, PCSK9-зависимых FRET-системы для анализа. В одной из этих систем количественно измерялось конкурентное замещение биотинилированных аднектинов ATI000972 или ATI001125 аднектинами (результаты для ATI000972 показаны на фиг. 4). ATI000972 представляет собой биотинилированный вариант 1459D05, a ATI001125-биотинилированный вариант ATI001081. В другой системе анализировалось прямое связывание аднектина (с His-тэгом) с PCSK9, с использованием анти-6His-тэг антитела (фиг. 5). В каждой, из данных аналитических FRETсистем концентрация PCSK9 человека составляла 1 или 5 нМ. В некоторых случаях PCSK9 человека был заменен на PCSK9 яванского макака. В табл. 11 представлены сводные данные, полученные с помощью всех трех FRET-систем.
- 133 022983
Таблица 11
Сводные данные по тестированию аднектинов с помощью 3-х FRET-систем, с использованием PCSK9 человека и, в одном случае, PCSK9 яванского макака
- 134 022983
Анализ ингибирования PCSK9 аднектинами активности PCSK9 с помощью культур клеток.
Анализ поглощения DiI-ЛПНП.
Для анализа способности аднектинов ингибировать активность PCSK9 по отношению к РЛПНП были разработаны подходы на основе клеточных культур. Эффективными способами измерения клеточной активности РЛПНП являются способы на основе поглощения меченого ЛПНП, как показано Lagace, T.A. et al. (J. Clin. Invest., 116(11):2995-3005 (2006)). В данной работе адаптирован метод оценки функциональной активности РЛПНП с помощью метода поглощения флуоресцентно-меченого ЛПНП (DiIЛПНП), перенесенного из метода, оригинально разработанного Teupser et al. (Biochim. Biophys. Acta, 1303(3):193-198 (1996)). На начальном этапе, как показано, клетки инкубируют с рекомбинантным PCSK9 человека (10 мг/мл, 135 нМ) в присутствии и в отсутствие аднектинов. Через 2 ч остаточная активность РЛПНП оценивается с помощью инкубации с DiI-ЛПНП (5 мкг) в течение 2 ч и последующей оценки накопленного внутри клеток DiI-ЛПНП с применением флуоресцентной микроскопии высокого разрешения и последующим анализом изображений (Cellomics). На фиг. 6 показан эффект нескольких аднектинов, ингибирующих активность PCSK9 и восстанавливающих функциональную активность РЛПНП в клетках линии HepG2. В данном анализе аднектины, ингибировавшие PCSK9 и восстанавливавшие поглощение DiI-ЛПНП, обладали следующими характеристиками ЕС50: 1459D05, ЕС50 = 190 нМ; 1784F03, 210 нМ; 2012А04, 130 нМ; 2013Е01, 160 нМ.
Анализ снижения количества РЛПНП.
Клетки линии HepG2 растили в полной среде Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM, АТСС®) с 10% FBS (Hyclone) с обработкой 0,25% трипсина (Invitrogen) дважды в неделю. Для индукции повышения уровня экспрессии рецептора ЛПНП клетки инкубировали в течение ночи в среде LPDS [RPMI (АТСС) с 5% безлипопротеиновой сыворотки (Intracel), 100 нМ superstation (BMS) и 50 мкМ мевалоната натрия (Sigma)]. На следующий день клетки короткое время обрабатывали 0,05% трипсина (Invitrogen) и ресуспендировали в количестве 2х106 клеток на 1 мл, а затем отбирали аликвоты по 100 мкл в лунку в 96-луночные планшеты с V-образным дном. Параллельно предварительно инкубировали аднектины с PCSK9 в среде LDPS в течение 1 ч при 37°С. Через 1 ч клетки центрифугировали и ресуспендировали в 100 мкл смеси аднектин/PCSK9 и инкубировали в течение ночи при 37°С. На следующий день клетки метили антителом против рецептора ЛПНП (BAF 2148 jn R&D) с последующей обработкой вторичными антителами, конъюгированными с фикоэритрин (РЕ)-стрептавидином (BD554061 от BD Pharmingen) и анализировали на проточном цитофлуориметре FACS Canton (BD).
Перед добавлением к клеткам линии HepG2 раствор PCSK9 с концентрацией 10 нМ инкубировали с возрастающей концентрацией кандидатных аднектинов. После инкубации в течение ночи уровень РЛПНП измеряли с помощью проточного цитофлюориметра. Процент ингибирования PCSK9опосредованного снижения количества РЛПНП отражался на графике, ЕС50 определяли с помощью PRISM. Клон 1459D05 обладал наименьшей способностью ингибирования (ингибирование не достигало максимума), тогда как другие клоны достигают максимума ингибирования PCSK9 в 150-200% (фиг. 7). Сводные данные по фармакологии PCSK9 аднектина in vitro приведены ниже в табл. 12.
- 135 022983
Таблица 12
| ID | % | Тт | KD | KD | Кросс-реактивность по | PCS | Снижение | ||
| клона | мономерной формы | (°C, DSC) | hPCSK9 (37°С, | hPCSK9 (25 °C, | отношению к белку яванского макака | К9: GFA | количества РЛИНП | ||
| (ВЭЖ Х-гельфильтрация) | Octet Red) (нМ) | ProteOn) (нМ) | Ко CPCSK9 (25 °C, ProteOn) (нМ) | PCSK9 макака: EGFA FRET (ЕС50, нМ) | FRET (ЕС5о, нМ) | % ингибирова ния при 75 нМ | ЕС50 (нМ) | ||
| 14 59D05 | >95 | 63 | 14.4 | 1.58 | >1000 | >1000 | 5.8 | 66.8 | >200 |
| 18 13E02 | >95 | 70 | нд | нд | нд | 118.5 | 2.7 | нд | 16 |
| 17 84F03 | >95 | 65 | нд | нд | нд | 106.5 | 2.01 | 150.2 | 26± 13 |
| 19 23B02 | >95 | 73 | нд | 0.17 | нд | 53.5 | 2.3 | 178 | 23± 7 |
| 19 22G04 | 100 | 83 | нд | 0.09 | 15.0 | 26.6 | 1.2 | 105.1 | 10± 2 |
| 20 13E01 | 100 | 81 | нд | 0.29 | 8.1 | 12.5 | 1.6 | 165.5 | 10± 4 |
| 20 12A04 | 100 | 84 | НД | 0.25 | 24.3 | 70.3 | 2.1 | 144.5 | 12± 6 |
| 20 11H05 | 100 | 76 | нд | 0.08 | 23.1 | 17.2 | 2.7 | 197.6 | 12± 5 |
| 23 82D05 | 97 | 86 | 0.314 | нд | нд | 57.8 | 2.6 | 140.5 | нд |
| 23 82E03 | 96 | 83 | 2.94 | нд | нд | 10.8 | 2.4 | 89.5 | НД |
| 23 82E05 | 95 | 84 | 0.604 | НД | нд | 12.6 | 2.8 | 103.5 | нд |
| 23 81B02 | 96 | 68 | 3.29 | нд | НД | 9.8 | 2.5 | 125.4 | нд |
- 136 022983
| ID клона | % мономерной формы (ВЭЖ Х-гельфильтрация) | Тш (°C, DSC) | KD hPCSK9 (37°С, Octet Red) (нМ) | KD hPCSK9 (25 °C, ProteOn) (нМ) | Кросс-реактивность no отношению к белку яванского макака | PCS К9: GFA FRET (ЕС5о, нМ) | Снижение количества РЛИНП | ||
| KD CPCSK9 (25 °C, ProteOn) (нМ) | PCSK9 макака: EGFA FRET (ЕС50, нМ) | % ингибирова ния при 75 нМ | ЕС50 (нМ) | ||||||
| 23 81B04 | 98 | 77 | 0.527 | НД | нд | 17.3 | 2.4 | 121.6 | нд |
| 23 81B08 | 97 | 78 | 4.11 | НД | НД | 27.1 | 2.6 | 124.8 | нд |
| 23 81D04 | 98 | 70 | 0.237 | нд | нд | 12 | 2.9 | 119.2 | нд |
| 23 81F11 | 95 | 79 | 1.59 | НД | нд | 26.5 | 4 | 110.2 | нд |
| 23 81G09 | 96 | 78 | 1.12 | НД | нд | 25.2 | 3.1 | 133.0 | нд |
| 23 81H09 | 77 | 63 | 3.23 | НД | нд | 20.2 | 3.4 | 94.4 | нд |
| 23 82B09 | 99 | 88 | 0.656 | нд | нд | 37.2 | 3.8 | 105.0 | НД |
| 23 82В10 | 99 | 82 | 2.35 | НД | нд | 18.1 | 3 | 100.2 | нд |
| 23 82С05 | 97 | 85 | 2.49 | НД | нд | 27.2 | 4 | 105.3 | нд |
| 23 82С09 | 96 | 85 | 0.757 | нд | нд | 23.9 | 3.5 | 121.7 | НД |
| 23 82D03 | 97 | 84 | 1.53 | НД | нд | 11.8 | 3.3 | 80.4 | нд |
| 23 82D09 | 93 | 84 | 0.304 | нд | нд | 13.9 | 2.6 | 109.1 | НД |
- 137 022983
| ID | % | Tm | KD | KD | Кросс-реактивность no | PCS | Снижение | ||
| клона | мономерной формы | (°C, DSC) | hPCSK9 (37°C, | hPCSK9 (25 °C, | отношению к белку яванского макака | К9: GFA | количества РЛИНП | ||
| (ВЭЖ Х-гельфильтрация) | Octet Red) (hM) | ProteOn) (hM) | KD CPCSK9 (25 °C, ProteOn) (нМ) | PCSK9 макака: EGFA FRET (ЕС50, нМ) | FRET (ЕС5о, нМ) | % ингибирова ния при 75 нМ | ЕС50 (нМ) | ||
| 23 82F05 | 99 | 83 | 4.54 | нд | НД | 14.6 | 2.4 | 72.2 | нд |
| 23 82G04 | 95 | 81 | 1.11 | НД | НД | 20.1 | 2.9 | 146.1 | нд |
| 23 82H03 | 96 | 85 | 0.677 | НД | НД | 19.8 | 3.4 | 102.1 | нд |
| 23 82H09 | 95 | 81 | 1.86 | нд | НД | 17.9 | 0.9 | 101.2 | нд |
| 23 82H10 | 97 | 87 | 1.40 | нд | НД | 18.2 | 2.6 | 118.6 | нд |
| 24 51B06 | nd | nd | НД | НД | НД | 57.8 | 4.5 | 92.2 | нд |
| 24 51C06 | 96 | 87 | 1.27 | нд | НД | 24.7 | 1.2 | 89.4 | нд |
| 24 51H07 | 97 | 87 | 2.08 | НД | НД | 27.1 | 0.2 | 88.8 | нд |
Пример 3.
Фармакодинамические свойства PCSK9 аднектинов in vivo.
Исследования на моделях трансгенных по PCSK9 человека мышей.
Исследование фармакодинамических свойств PCSK9 аднектинов in vivo проводилось на двух различных трансгенных мышиных моделях. Одна из мышиных моделей экспрессировала PCSK9 человека на высоком уровне, что приводило к гиперхолистеринемии (Lagace, Т.А. et al., J. Clin. Invest., 116(11):2995-3005 (2006)). У мышей другой модели hPCSK9 был встроен в геном (с использованием ВАС), уровень его экспрессии регулировался в печени сходно с PCSK9 мыши, hPCSK9 экспрессровался в плазме на близком к нормальному у человека уровне. Для измерения уровня несвязанного PCSK9 человека в плазме (т.е. hPCSK9 не в комплексе с вводимым аднектином), как показателя количества целевого белка, был разработан ИФА-тест на основе видоспецифических сайт-специфически меченых антител и аднектинов.
Однократные дозы PCSK9 аднектинов в пэгилированной форме были введены внутрибрюшинно мышам трансгенной линии с повышенным уровнем экспрессии hPCSK9, в дозировках, приведенных на фиг. 8-9. В качестве контроля также вводились PBS или образцы диализата. Введение аднектина 1459D05-PEG (100 мг/кг внутрибрюшинно) приводило к быстрому снижению общего уровня холестерина и ЛПНП-С в плазме (фиг. 8А) более чем на 35% ниже базального уровня в течение 4 ч. Уровень холестерина у мышей, которым вводился аднектин, сохранялся ниже уровня в контрольной группе на протяжении 48 ч измерений. Это снижение сопровождалось резким снижением уровня циркулирующего несвязанного hPCSK9 y трансгенных мышей, которым вводился аднектин (фиг. 8В). Вестерн-блоттинг образцов тканей печени, взятых через 6 ч в параллельном исследовании, показал, что уровень РЛПНП был повышен в ~2 раза у мышей, которым вводился аднектин (результаты не приведены). При дальнейших исследованиях на мышах этой трансгенной линии ATI001114 вводился в дозировках 10 или 60 мг/кг. Наблюдалось существенное дозозависимое быстрое снижение уровня холестерина в плазме, сопровождаемое дозозависимым снижением уровня несвязанного hPCSK9 (фиг. 9). Эти исследования являются экспериментальной проверкой in vivo способности PCSK9 аднектинов эффективно снижать уровень холестерина у мышей трансгенной по hPCSK9 линии с гиперхолистеринемией.
Исследования in vivo проводились на линейных трансгенных мышах нормально экспрессирующих hPCSK9. Введение однократных доз 1459D05-PEG или ATI001114 (5 мг/кг) привело к быстрому и выраженному снижению уровня несвязанного hPCSK9 в плазме (фиг. 10). Данный фармакодинамический эффект в отношении несвязанного hPCSK9 был более длительным при введении ATI001114 по сравнению с tol459D05-PEG, поскольку большие степень и длительность эффекта наблюдались для данного аднектина, обладающего большей аффинностью/потенциалом. Дальнейшее исследование зависимости
- 138 022983
эффекта от дозы показало, что ингибирующая на 50% дозировка составляла менее 0,1 мг/кг для ATI001114 в период времени от 3 до 48 ч после введения, как показано на фиг. 11. Полученные на модели трансгенных мышей, экспрессирующих на нормальном уровне hPCSK9, данные показывают, что ингибирующие PCSK9 аднектины оказывают значительные, аффинно- и дозозависимые эффекты на конечные фармакодинамические показатели, которые коррелируют с регуляцией РЛПНП и снижением уровня ЛПНП-холестерина.
Исследования на яванских макаках.
Исследования фармакодинамики проводились на яванских макаках нормального телосложения. Аднектин ATI001114 вводился обезьянам внутривенно в дозировке 5 мг/кг, после чего собирали образцы плазмы через определенные промежутки времени для определения уровня ЛПНП-холестерина и оценки фармакокинетики. Введение однократной дозы ATI001114 быстро приводило к сниженному уровню ЛПНП-С в плазме более чем на 50% по сравнению с базальным уровнем (или по сравнению с контрольной группой, получавшей PBS) на протяжении 48 ч (фиг. 12). Длительность эффекта на уровень ЛПНП-С составляла более недели с последующим обязательным восстановлением до базального уровня за 3 недели. Данный эффект наблюдался для пегилированных двух- и четырехцепочечным ПЭГом массой 40 кДа вариантов aHTH-PCSK9 аднектина (ATI001114 и ATI001211 соответственно). ATI001211 представляет собой вариант ATI001081 с 4-цепочечной ПЭГ (NOF) - группой массой 40 кДа. Уровень общего холестерина изменялся похожим образом, однако никакого эффекта на ЛПВП или другие метаболические параметры не наблюдалось (данные не приведены). Анализ фармакокинетики показал длительность времени полужизни в плазме примерно 80-120 ч, что согласуется с фармакодинамикой снижения ЛПНП у яванских макак. Полученные данные демонстрируют, что PCSK9 аднектин является эффективным и быстродействующим агентом, оказывающим быстрый, значительный и специфический эффект снижения ЛПНП-С на модели яванских макак.
Пример 4.
Фармакологическая оценка in vitro и in vivo слитого белка PCSK9 аднектин-Fc (PRD460).
Наработка PRD460.
Клетки линии НЕК-293 6Е были трансфецированы вектором, кодирующим PRD460, с помощью полиэтиленимина (PEI). Клетки инкубировали 5 дней при 37°С, 80% влажности и 5% CO2. После этого клетки осаждали, супернатант фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и наносили на колонку с белком А. Колонку промывали буфером PBS и элюировали белок буфером, содержащим 20 мМ глицина и 150 мМ NaCl pH 2.8. Препарат элюированного белка концентрировали и пропускали через колонку superdex200 в буфере, содержащем 50 мМ MES, 100 мМ NaCl pH 5.8.
Определение KD PRD460 методом SPR.
Характеристики связывания определялись методом поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Антитело против белков человека иммобилизовали на поверхности подложки BIACORE® chip, после чего белок PRD460 (последовательность указана в SEQ ID NO: 322) был помещен на подложку для связывания. Различные концентрации hPCSK9 вносили в промывающий раствор, используя 3 М раствор MgCl2 для регенерации подложки между циклами. Для сравнения, белок ATI-1081 был связан с подложкой BIACORE® chip с иммобилизованными антителами к 61 Пз-тэгу. Эксперименты для PRD460 проводились дважды в разные дни. Определение кинетики проводилось при 25°С. Оценка кинетических параметров проводилась с использованием программного обеспечения BIACORE® Evaluation и алгоритма связывания 1:1.
В данных условиях ATI-1081 связывался с PCSK9 человека с константой диссоциации (Ко) 6,7 нМ при 25°С. Константа диссоциации (KD) PRD460 с PCSK9 человека в данных условиях составляла 3,29 +/0.55 нМ (табл. 13). Определение скорости диссоциации при использовании данного формата анализа, возможно, имеет ограничения вследствие скорости диссоциации связанного лиганда от иммобилизованного связывающего антитела. Таким образом, формат анализа, при котором применяется прямая иммобилизация PCSK9, является более точным для оценки константы диссоциации (KD) для ATI-1081.
Таблица 13
Кинетические параметры связывания для PRD460 и ATI-1081 с иммобилизованным PCSK9 человека
Анализы связывания PCSK9 на основе FRET.
Для определения в конкурентных условиях связывающего потенциала PRD460 и других аднектинов с hPCSK9 были использованы две системы анализа на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET). Система PCSK9:EGFA измеряет связывание PCSK9 с РЛПНП, используя пептид домена А гомологичного предшественнику растворимого эпидермального фактора роста (EGFA) и рекомбинантный PCSK9 человека. Система PCSK9:ATI972 измеряет конкурентное замещение аднектинами био- 139 022983
тиниллированного аднектина ATI-972 на молекуле PCSK9.
В системе PCSK9:EGFA (при концентрации PCSK9 5 нМ) PRD460 полностью замещал EGFA, связанный с PCSK9, с ЕС50 = 0.7 нМ (фиг. 1, слева). В данном формате анализа PRD460 обладал большей активностью, чем ATI-1174 (ЕС50 = 1.9 нМ) или ATI-1081 (ЕС50 = 3.7 нМ) (фиг. 14). Большая активность PRD460 в данном формате анализа может объясняться бивалентностью связывания аднектина PRD460 с PCSK9 (теоретически) по сравнению с одновалентным (1:1) связыванием у ATI-1081 и ATI1174.
В системе PCSK9:ATI972 (при концентрации PCSK9 5 нМ) PRD460 игибировал связывание с ЕС = 0,3 нМ, по сравнению с 0,8 нМ для ATI-1114 и 2,8 нМ для ATI-1081 (фиг. 15). Эти данные демонстрируют, что PRD460 активно замещает аднектин ATI-972 на его сайтах связывания с PCSK9. Большая активность PRD460 по сравнению с ATI-1081 и ATI-1174 согласуется с бивалентным типом связывания PRD460.
Ингибирование снижения уровня РЛГПНП, индуцированного PCSK9, на клетках линии HepG2.
PCSK9 человека индуцирует снижение представленности РЛПНП на поверхности клеток линии HepG2. Предварительная инкубация PCSK9 с PCSK9 аднектинами ингибирует связывание PCSK9 с РЛПНП и предотвращает снижение представленности РЛПНП на поверхности клеток. Данная система анализа была применена для измерения активности ингибирования ATI-1081, ATI-1174 и PRD460 индуцированного PCSK9 снижения уровня представленности РЛПНП на клеточной поверхности.
Серийные разведения PCSK9 аднектинов инкубировались с PCSK9 человека в концентрации 10 нМ в течение 1 часа при 37°С. Затем в смеси вносились клетки линии HepG2 и смеси инкубировались далее в течение 24 ч. После этого уровень РЛПНП на клеточной поверхности клеток линии HepG2 измерялся с помощью проточной цитофлуориметрии. На графике указывался рассчитанный уровень ингибирования снижения представленности РЛПНП, индуцируемого PCSK9 (фиг. 15). По результатам данного анализа ATI-1081, ATI-1174 и PRD460 ингибировали активность PCSK9 со сравнимыми значениями ЕС50 (9 нМ, 8 нМ и 6 нМ соответственно). Однако для PRD460 неоднократно наблюдался сдвиг данной кривой влево. Указанные значения ЕС50 представляют собой предел измерения для данного анализа.
Анализ PCSK9 клетками линии HepG2.
Связывание PCSK9 с РЛПНП на поверхности гепатоцитов приводит к интернализации комплекса РЛПНП- PCSK9 в ходе эндоцитоза РЛПНП, что приводит к ускоренной деградации РЛПНП. Для измерения опосредованного РЛПНП проникновения внутрь клеток флуоресцентного PCSK9 был разработан специфический анализ. Молекулы PCSK9 человека были ковалентно мечены флуорофором ALEXA
FLUOR®-647(AF647). Полученный PCSK9-AF647 инкубировался с клетками линии HepG2 в присутствии и в отсутствие PCSK9-аднектинов, после чего измерялась внутриклеточная флуоресценция с помощью флуоресцентной микроскопии высокого разрешения и анализа изображений (Cellomics). Зависимость поглощения PCSK9-AF647 клетками от эндоцитоза РЛПНП была показана в предварительных экспериментах. Клетки линии HepG2 инкубировались с PCSK9-AF647, в концентрации 10 нМ, и различными количествами аднектинов в течение 4 ч при 37°С. По результатам данного анализа активное ингибирование внутриклеточной флуоресценции PCSK9-AF647 наблюдалось для PRD460 (ЕС50 = 6 нМ) и для ATI-1174 (EC50 = 10 нМ) (фиг. 16). Эти данные в культуре линии человеческих гепатоцитов демонстрируют эффективное блокирование аднектинами PRD460 и ATI-1174 связывания PCSK9 с РЛПНП на клеточной поверхности, что, таким образом, снижает уровень интернализации PCSK9-AF647 при эндоцитозе РЛПНП.
Исследования in vivo на трансгенных линиях мышей.
Исследования in vivo проводились на трансгенной линии мышей, экспрессирующих hPCSK9 на нормальном уровне. Предполагается, что связывание аднектинов с PCSK9 в плазме крови приводит к снижению измеряемого количества несвязанного (свободного) циркулирующего PCSK9. Данное снижение несвязанного PCSK9 является начальным фармакоднамическим эффектом, который приводит к ингибированию взаимодействия PCSK9 с РЛПНП и снижению уровня холестерина ЛПНП. Введение однократных доз PRD460 (внутрибрюшинно, в дозировках от 0,6 до 1,8 мг/кг) трансгенным мышам приводило к быстрому выраженному снижению уровня несвязанного hPCSK9 в плазме крови (фиг. 17). Наблюдалась дозозависимость данного эффекта с ED50<0,6 мг/кг во временной точек 3 ч. Данные результаты, полученные на трансгенной линии мышей с нормальным уровнем экспрессии hPCSK9, демонстрируют активное и выраженное связывание PRD460 с циркулирующим hPCSK9 in vivo.
Исследования фармакодинамики in vivo на яванских макаках.
Фармакодинамические параметры PCSK9 аднектина PRD460 были определены в исследованиях на яванских макаках нормального телосложения. Для анализа уровня ЛПНП-С и свободного PCSK9, PRD460 вводился обезьянам внутривенно в дозировке 15 мг/кг, после чего собирались образцы плазмы через определенные временные интервалы в течение 4 недель. Однократная доза PRD460 приводила к быстрому снижению уровня ЛПНП-С у обезьян, достигавшему максимального значения в 42% от базового уровня ЛПНП-С (58% снижение, n = 3 обезьяны) на третий день после введения (фиг. 18). Уровень ЛПНП-С был снижен на 50% и более в течение недели после введения, оставаясь значительно сниженным, по сравнению с базовым, на протяжении 3-х недель и достигая базового уровня через 4 недели по- 140 022983
сле введения. Уровень общего холестерина изменялся схожим образом, однако уровень ЛПВП не менялся (данные не приведены). Введение PRD460 приводит к немедленному снижению почти до 0 (ниже предела количественного измерения) уровня несвязанного PCSK9 в свободно форме в плазме (фиг. 18). Уровень свободного PCSK9 сохранялся ниже предела детекции в течение нескольких дней, после чего постепенно увеличивался до базового уровня к концу 4-й недели, что согласуется с данным относительно изменения уровня ЛПНП-С при введении PRD460. Полученные данные демонстрируют, что снижение уровня ЛПНП в плазме отражает падение уровня свободного PCSK9, что согласуется с ингибированием PCSK9, регулирующим функцию РЛПНП, после введения PRD460 in vivo. Анализ фармакокинетики в данных исследованиях на обезьянах показал, что время полужизни в плазме аднектина PRD460 составляло приблизительно 70 ч. Эти данные демонстрируют высокую эффективность и быстродействие слитого белка PCSK9 аднектин-Fc в значительном, специфичном и длительном снижении уровня ЛПНПС в исследовании на яванских макаках.
Фармакологическая оценка немодифицированного PCSK9 аднектина ATI-1081 in vivo.
В дополнение к модифицированным аднектинам, содержащим PK-группу (например, пэгилированным или слитым с Fc-фрагментом аднектинам), может вводиться также немодифицированный ("свободный") PCSK9 аднектин. Стратегии для лечения немодифицированным PCSK9 аднектином включают более частый прием, с учетом более короткого времени полужизни в плазме, или использование лекарственных форм с подкожным пролонгированным высвобождением для увеличения продолжительности абсорбционной фазы и увеличения длительности фармакодинамики. Многие из таких лекарственных форм могут быть разработаны, включая, как простой пример, растворы в системе пропилен гликоль/PBS для снижения скорости абсорбции и увеличения времени экспозиции аднектина в кровотоке.
Немодифицированный аднектин ATI-1081 вводился яванским макакам внутривенно в дозировке 10 мг/кг в PBS. Для сравнения вводился ATI-1114 (пэгилированный вариант того же аднектина) в дозировке 1 мг/кг в PBS. Введение ATI-1081 вызывало быстрое временное снижение уровня несвязанного PCSK9 в кровотоке. В течение 30 мин степень снижения достигала 100% (ниже предела количественного обнаружения) с последующим возвращением к базовому уровню в течение нескольких часов (фиг. 19). Одновременно, наблюдалась тенденция к снижению уровня ЛПНП-С в течение первых 24 ч после введения ATI-1081 обезьянам (фиг. 20).
Немодифицированный аднектин ATI-1081 также вводился мышам трансгенной линии нормальным уровнем экспрессии hPCSK9 с в виде простой подкожной лекарственной формы с пролонгированным высвобождением: смесь 50:50 полипропиленгликоля и PBS, для сравнения с PBS-носителем. Ожидалось, что данная лекарственная форма умеренно снизит скорость абсорбции аднектина и увеличит время экспозиции ATI-1081 в кровотоке, таким образом улучшая фармакодинамику. Введение (внутрибрюшинно) ATI-1081 в дозировке 1 мг/кг в PBS приводило к снижению несвязанного PCSK9 в плазме на 50% через 3 ч, по сравнению с 85%-м снижением при введении ATI-1114 в дозировке 0,3 мг/кг (фиг. 21). В ходе второго эксперимента ATI-1081 вводился трансгенным мышам путем подкожных инъекций с полипропиленгликолевым носителем (PG), что приводило к примерно эквивалентному по сравнению с ATI-1174 снижению несвязанного ЛГШП с увеличенной длительностью данного эффекта на протяжении первых 6 ч исследования (фиг. 22). Эти данные демонстрируют связывание немодифицированного PCSK9 аднектина ATI-1081 с PCSK9 человека in vivo и улучшение изначальной фармакодинамики при введении немодифицированного PCSK9 аднектина ATI-1081 подкожно с простым носителем, обеспечивающим пролонгированное время высвобождения. Зависимость эффекта от времени согласовывалась с увеличением времени высвобождения и длительностью эффекта немодифицированного PCSK9 аднектина.
Пример 5.
Аднектины, связывающие сывороточный альбумин (SABA).
Пример 5А. Поиск и селекция кандидатных аднектинов, связывающих сывороточный альбумин.
Обзор.
Метод селекции, называемый PROfusion (см., например, Roberts et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 94(23): 12297-12302 (1997) и WO 2008/066752)), был применен для библиотек ДНК, содержащих сконструированные вариабельные области в петлях ВС, DE и FG домена Fn3. На основе этих конструкций были созданы библиотеки, содержащие более 10 случайных последовательностей, подвергнутые затем отбору против биотинилированной формы HSA, для отбора кандидатных аднектинов, связывающих сывороточный альбумин (SABA) с требуемыми свойствами связывания.
Процесс получения белков с помощью технологии высокопроизводительной наработки белка (High Throughput Protein Production (HTTP)).
Различные аднектины, связывающие HSA, были получены с помощью технологии высокопроизводительной наработки белков HTTP. Отобранные последовательности, кодирующие связывающие HSA белки, были клонированы в вектор pET9d, содержащий 6И18-тэг, после чего данным вектором были трансформированы клетки Е. coli штамма BL21(DE3) pLysS. Полученные трансформанты были инокулрованы в 5 мл среды LB, содержащей 50 мкг/мл канамицина, в 24-луночных планшетах. Культуры инкубировались при 37°С в течение ночи. После этого готовили следующие культуры для индукции экспрессии путем добавления 200 мкл ночных культур в свежие 5 мл среды LB (50 мкг/мл канамицина) в соот- 141 022983
ветствующие лунки. Культуры инкубировались при 37°С до достижения оптической плотности А600 0,60,9. Индукция экспрессии осуществлялась добавлением к культуре изопропил-в-тиогалактозида (TPTG) до концентрации 1 мМ, после чего культуры инкубировались в течение 4 ч при 30°С. После этого клетки осаждали центрифугированием в течение 10 мин при ускорении 3200g и температуре 4°С. Полученные осадки клеток замораживали при -80°С.
Осадки клеток (в 24-луночном формате) лизировали ресуспендированием в 450 мкл Лизирующего буфера (50 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 1x Complete Protease Inhibitor Cocktail-EDTA в свободной форме^о^), 1 мМ PMSF, 10 мМ CHAPS, 40 мМ Имидазола, 1 мг/мл лизоцима, 30 мкг/мл ДНКазы, 2 мкг/мл апротонина, рН 8.0) и последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 часа. Лизаты осветляли и анализ переводился в 96-ти луночный формат путем переноса лизатов на 96-ти луночный фильтрационный планшет Whatman GF/D UNIFILTER®, совмещенный с планшетом для сбора фильтрата объемом 650 мкл, и последующим центрифугированием в течение 5 мин при ускорении 200g. Осветленные лизаты переносили на 96-луночный планшет с Ni-хелатирующим сорбентом, предварительно уравновешенный буфером для уравновешивания (50 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl,10 мМ CHAPS, 40 мМ имидазола, рН 8.0), и инкубировали в течение 5 мин. Несвязавшееся вещество удаляли. Смола отмывалась дважды по 0,3 мл/лунку отмывочным буфером №1 (50 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 5 мМ CHAPS, 40 мМ имидазола, рН 8.0). Затем трижды промывали смолу по 0,3 мл/лунку PBS. Перед элюцией в каждую лунку вносили по 50 мкл Элюирующего буфера (PBS + 20 мМ ЭДТА). После инкубации в течение 5 мин жидкость удаляли с помощью вакуума. Белок элюировали внесением 100 мкл/лунку Элюирующего буфера. После инкубации в течение 30 мин при комнатной температуре планшет(ты) центрифугировали в течение 5 мин при ускорении 200g. Элюированный белок собирали в 96-ти луночный планшет для сбора, содержавший по 5 мкл 0,5М раствора MgCl2 на дне лунок. Концентрацию эюированного белка измеряли с помощью метода ВСА с использованием в качестве белкового стандарта SGE (контрольный аднектин). SGE аднектин представляет собой 10Fn3 домен дикого типа (SEQ ID NO: 1), в котором интегринсвязывающий домен (аминокислотные остатки RGD в положении 78-80) заменен на остатки SGE.
HAS, RhSA и MuSA белки в прямом ИФА.
Для анализа прямого связывания с HSA на планшеты MaxiSorp plates (Nunc International, Rochester, NY) был сорбирован HSA (Sigma, St. Louis, МО) из концентрации 10 мкг/мл в течение ночи при 4°С. После сорбции сайты неспецифического связывания блокировались с помощью инкубации планшетов с казеиновым блокирующим буфером (Thermo Scientific, Rockford, IL) в течение 1-3 ч при комнатной температуре. Для скрининга по одной точке, очищенный с помощью HTTP аднектин разбавляли в соотношении 1:20 в казеиновом блокирующем буфере и вносили в лунки для связывания с HSA. Планшеты инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. При анализе зависимости связывания от концентрации использовали концентрации в диапазоне от 0,1 нМ до 1 мкМ. После инкубации планшеты отмывали от несвязавшегося аднектина буфером PBST, после чего, для связывания с аднектином с Hisтэгом, в лунки вносили конъюгат анти-His моноклоналных антител с HRP (R&D Systems, MN) в разведении 1:2500 в казеиновом блокирующем буфере и инкубировали планшеты в течение 1 часа при комнатной температуре. Избыток конъюгата удаляли промыванием PBST и детектировали связывание аднектинов с помощью реактивов, содержащих ТМВ (BD Biosciences), в соответствии с рекомендациями производителя.
Измерение степени агрегации с помощью гель-фильтрационной хроматографии.
Гель-фильтрационную хроматографию (Size exclusion chromatography (SEC)) проводили для SABA, полученных с помощью HTTP. Для этого использовались колонки SUPERDEX® 200 5/150 или SUPERDEX® 75 5/150 (GE Healthcare) на системах для ВЭЖХ Agilent 1100 или 1200 с детекцией при А214 нм и А280 нм, а также с системой для детекции флуоресценции (возбуждение при 280 нм, эмиссия при 350 нм). Для хроматографии использовали следующий буфер: 100 мМ сульфата натрия, 100 мМ фосфата натрия, 150 мМ хлорида натрия, рН 6.8; при соответствующей используемым колонкам скорости потока. Для калибровки по молекулярному весу использовались стандарты молекулярных весов для гель-фильтрации (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA).
По результатам гель-фильтрационной хроматографии выделенные и очищенные с помощью HTTP SABA преимущественно являются мономерными и элюируются в области 10 кДа по сравнению с глобулярными стандартами молекулярных весов для гель-фильтрации (BioRad).
Идентификация кандидатных аднектинов, связывающих сывороточный альбумин (SABA).
В результате скрининга, по связыванию с HSA/RhSA/MuSA и биофизическим критериям, были идентифицированы и выбраны для дальнейшей оценки времени полужизни в мышиной модели четыре уникальных аднектина, связывающих сывороточный альбумин (SABA). Для проведения in vitro и in vivo характеристики данные SABA были наработаны в среднемасштабных количествах. В табл. 6 представлены последовательности 26 уникальных коровых последовательностей SABA (обозначены цифрами от 1 до 26), идентифицированных с помощью технологии PROfusion. В последовательности SABA4 перед наработкой в среднемасштабных количествах была зафиксирована мутация в структурной части. Лучшим вариантом структурной части последовательности SABA4 является SABA5. Оба варианта, SABA4 и
- 142 022983
SABA5, имеют идентичные последовательности петель ВС, DE и FG.
Пример 5В. Продукция и лекарственные формы кандидатных SABA.
Среднемасштабная наработка белков SABA.
Отобранные последовательности SABA, описанные в примере 5А, с 6His-t3tom на конце, были клонированы в вектор рЕТ 9d и экспрессированы в клетках Е. coli штамма BL21(DE3) pLysS (в табл. 6 приведены последовательности всех SABA с His-тэтом, обозначенные SABA1.1, SABA2.1, SABA3.1 и SABA5.1). 20 мл культуры клеток (полученных с одной колонии рассеянной на чашке) инокулировали в 1 л среды LB с 50 мкт/мл канамицина. Культуру инкубировали до оптической плотности А600 0,6-1,0 при 37°С. После индукции экспрессии внесением изопропил-в-тиогалактозида (IPTG) до концентрации 1 мМ, культуру инкубировали 4 часа при 30°С, после чето собирали клетки центрифутированием в течение 30 мин при ускорении >10000g и температуре 4°С. Полученные осадки клеток замораживали при -80°С. Осадки клеток ресуспендировали в 25 мл буфера для лизиса (20 mM NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 1x Complete Protease Inhibitor Cocktail-EDTA в свободной форме (Roche), рН 7.4) и лизировали клетки на льду с использованием гомогенизатора ULTRA-TURRAX® (IKA works). Лизис клеток достигался за счет высокого давления при гомогенизации (>18,000 psi) при использовании микрофлюидайзера Model M-110S MICROFLUIDIZER® (Microfluidics). Растворимую фракцию отделяли центрифугированием в течение 30 мин при ускорении 23300 g и температуре 4°С. Полученный супернатант осветляли фильтрованием через фильтр с размером пор 0,45 мкм. Осветленный лизат наносили на колонку HISTRAP® (GE), предварительно уравновешенную буфером, содержащим 20 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, pH 7.4. После нанесения колонку промывали 25 объемами колонки буфера 20 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, pH 7.4, затем 20 объемами буфера 20 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 25мМ имидазола рН 7.4, затем 35 объемами 20 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 40 мМ имидазола рН 7.4. белок элюировали в 15 объемах колонки буфером, содержащим 20 мМ NaH2PO4, 0.5 M NaCl, 500 мМ имидазола рН 7.4. Фракции объединяли на основе значений поглощения при А280, после чего диализовали полученные препараты белков против буфера: 1x PBS, 50 мМ Tris, 150 мМ NaCl рН 8.5 или 50 мМ NaOAc; 150 мМ NaCl; pH 4.5. Выпавший осадок удаляли фильтрованием через фильтр с размером пор 0,22 мкм.
В результате среднемасштабной экспрессии и очистки получали высокоочищенные и активные аднектины, экспрессированные в растворимой форме и очищенные от растворимых фракций бактериального лизата. Анализ с помощью гель-фильтрации на колонках SUPERDEX® 200 или SUPERDEX® 75 10/30GL с подвижной фазой 100 мМ NaPO4, 100 мМ NaSO4, 150 мМ NaCl, pH 6.8 (GE Healthcare) демонстрировал преимущественное присутствие мономерной формы аднектинов.
Лекарственная форма SABA 1.2.
Определенный SABA, SABA1.2 (SEQ ID NO: 411), был выбран для предварительного подбора лекарственной формы. Последовательность SABA1.2 содержит удлинение (ED)5 в "коровой последовательности 1" последовательности 10Fn3 (см. SEQ ID NO: 421 в табл. 6). Для SABA1.2 была определена стабильная лекарственная форма в виде раствора, содержащего 10 мМ сукциновой кислоты, 8% сорбитола, 5% глицина и 5 мг/мл белка SABA1.2, рН 6.0. Температура плавления данного белка в такой лекарственной форме составляла 75°С по результатам определения с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) при концентрации белка 1,25 мг/мл. Данная лекарственная формула обеспечивала удовлетворительные физическую и химическую стабильность при 4 и 25°С с исходным уровнем агрегации 1,2%. Спустя месяц хранения уровень агрегации был очень низок (1.6% при 4°С и 3.8% при 25°С). Белок в указанной лекарственной форме также оставался стабильным после 4 циклов замораживания-оттаивания при отогревании с -80 и -20°С до комнатной температуры. Также в указанной лекарственной форме SABA 1.2 был растворим до концентрации, по меньшей мере, 20 мг/мл при 4°С и комнатной температуре, без образования осадка или повышения количества агрегатов.
Пример 5С. Определение биофизических характеристик кандидатных SABA.
Гель-фльтрационная хроматография.
Образцы кандидатных SABA, наработанных в среднемасштабном количестве, были подвергнуты гель-фильтрационной хроматографии (SEC). Гель-фильтрационная хроматография проводилась на колонках SUPERDEX® 200 10/30 или SUPERDEX® 75 10/30 (GE Healthcare) с использованием систем для ВЭЖХ Agilent 1100 или 1200 и системы детекции поглощения при длинах волн 214 и 280 нм, а также флуоресценции (возбуждение = 280 нм, эмиссия = 350 нм). Для хроматографии использовался буферный раствор следующего состава: 100 мМ сульфата натрия, 100 мМ фосфата натрия, 150 мМ хлорида натрия, рН 6.8. Хроматографию вели на скоростях потока в зависимости от типа колонки. Для калибровки молекулярного веса применяли набор стандартов молекулярных весов (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA).
Результаты гель-фильтрационной хроматографии продемонстрировали, что в исследованных образцах аднектин преимущественно находился в форме мономера и элюировался в примерном диапазоне 10 кДа по сравнению с набором глобулярных стандартов для гель-фильтрации (BioRad).
Термостабильность.
Для определения Tm наработанных в среднемасштабном количестве белков SABA был использован метод дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК, DSC). Растворы с концентрацией 1 мг/мл
- 143 022983
были проанализированы с помощью калориметра N-DSC II (Calorimetry Sciences Corp) в диапазоне температур от 5°С до 95°С, со скоростью изменения 1 градус в минуту и при давлении в 3 атм. Полученные данные сравнивались с контрольным измерением для соответствующего буфера и алгоритма наилучшего соответствия программного обеспечения Orgin (OrginLab Corp). Результаты гель-фильтрационной хроматографии ДСК сведены в табл. 14.
Таблица 14
Сводные данные гель-фильтрационной хроматографии и ДСК для кандидатных вариантов SABA
*пд - предел детекции.
Пример 5D. Характеристика связывания с сывороточным альбумином кандидатного варианта SABA1.
Кинетика связывания выбранных клонов SABA, полученных с помощью технологии HTTP или наработанных в среднемасштабных количествах (описано в примерах 5Аи 5В), была определена с помощью связывания соответствующего сывороточного альбумина (HSA/RhSA/MuSA) на поверхности чипа Biasensor CM5 и пропускания потока растворов с серийными разведениями SABA через ячейку сравнения и ячейку со связанными альбуминами. В дополнение, связывание с альбуминами проводилось при различных рН, в диапазоне от 5,5 до 7,4. Аднектины, связывающие HSA, SABA2.1, SABA3.1, SABA4.1 и SABA1.1, обладали кросс-реактивностью по отношению к RhSA, однако не связывались с MuSA. Связывание SABA2 и SABA4 с HSA явля рН-чувствительным, тогда как связывание с HSA варианта SABA3 устойчиво к снижению рН вплоть до 6,0. Вариант SABA1.1 удовлетворяет биохимическим критериям по рН-стабильности и аффинности/кинетике при снижении рН до 5,5.
Картирование доменов проводилось с помощью BIACORE®. Отобранные клоны SABA, очищенные с помощью технологии HTTP или наработанные в среднемасштабных количествах, были проанализированы с помощью связывания HSA или конструкций, содержащих домены I и II HSA или домен III HSA на поверхности чипа Biasensor СМ5и последующего пропускания растворов с серийными разведениями вариантов SABA через ячейку сравнения и ячейку со связанными альбуминами. Клоны SABA2 и SABA1 связывались с HSA и конструкциями домен I-домен II HSA, но не с доменом III отдельно. Клоны SABA3 и SABA4 связывались с HSA, но ни с одним из вышеуказанных конструктов. Полученные результаты сведены в табл. 15.
- 144 022983
Таблица 15
Аффинность связывания и кинетика кандидатных вариантов SABA (SABA1.1, 2.1, 3.1 и 4.1)
Пример 5Е. Исследование in vivo параметра t1/2 кандидатных вариантов SABA.
Определение параметров HSA-связывающих аднектинов проводили на мышах, поскольку данные аднектины не обладают перекрестным взаимодействием с MuSA. Для этого определяли время полужизни HSA в плазме мышей. 6-недельным самкам мышей линии Ncr nude вводили в хвостовую вену HSA в дозировках 20 мг/кг (фиг. 23А) и 50 мг/кг (фиг. 23В), после чего оценивали с помощью ИФА концентрацию HSA в образцах крови, взятых через определенные интервалы времени после инъекции. Параметр t1/2 введенного HSA определяли для дозировки 20 мг/кг через 24 ч, для дозировки 50 мг/кг через 20 ч после введения.
Определение времени полужизни SABA 1-4 у мышей.
В объеме 1 л культуры Е. coli нарабатывались, выделялись, очищались от примесей и от эндотоксина белки клонов SABA1.1, SABA2.1, SABA3.1 и SABA4.1. Каждый из вариантов SABA вводили в хвостовую вену мышей, после чего оценивали с помощью ИФА концентрацию введенных белков в образцах крови, взятых через определенные интервалы времени после инъекции.
Исследования фармакокинетических профилей каждого из вариантов SABA в присутствии и в отсутствие HSA проводили на 6-недельных самках мышей линии Ncr nude. При введении мышам дополнительно с SABA HSA предварительно готовили смесь HSA с SABA (HSA в 3-4 молярном избытке). Исследуемые клоны SABA были специфичны к HSA и RhSA, но не связывались с MuSA. Время полужизни в плазме мышей белка SABA1.1 (клон 1318Н04) составляло 0,56 часа, тогда как совместная инъекция SABA1.1 с HSA приводила к ~10-кратному повышению времени полужизни, которое составляло 5,6 часа (фиг. 24А). Время полужизни в плазме мышей белка SABA2.1 составляло 0,24 часа, тогда как совместная инъекция SABA2.1 с HSA приводила к ~12-кратному повышению времени полужизни, которое составляло 2,8 ч (фиг. 24В). Время полужизни в плазме мышей белка SABA3.1 (клон 1245Н07) составляло 0,28 ч, тогда как совместная инъекция SABA3.1 с HSA приводила к ~2-кратному повышению времени полужизни, которое составляло 0,53 ч (фиг. 24С). Время полужизни в плазме мышей белка SABA4.1 составляло 0,66 ч, тогда как совместная инъекция SABA4.1 с HSA приводила к ~7-кратному повышению времени полужизни, которое составляло 4,6 ч (фиг. 24D). Сводные данные по приведенным примерам приведены на фиг. 25. В табл. 16 сведены сходные данные для вариантов SABA1.1, SABA2.1, SAB A3.1 и SABA5.1; по возможности дано сравнение со временем полужизни у яванского макака.
- 145 022983
Таблица 16
Определение времени полужизни вариантов SABA 1.1 и SABA5.1 у яванских макак.
Для предварительной оценки фармакокинетики было проведено исследование на 2 яванских макаках для вариантов SABA 1.1 (фиг. 26А) и SABA5.1 (фиг. 26В). Белки вводились однократно внутривенно в дозе 1 мг на кг (мг на кг, mpk). Фармакокнетика оценивалась с использованием количественного анализа на основе ИФА, разработанного для детекции аднектина в образцах плазмы крови. Вариант SABA1.1 имеет время полужизни в диапазоне 96-137 ч (фиг. 26А и табл. 17А). Время полужизни варианта SABA5.1 составляет около 12 ч. Концентрация SABA5.1 в плазме была достоверно измеряема с помощью ИФА только на протяжении 120 ч после инъекции (фиг. 26В). В табл. 17А сведены данные, полученные для варианта SABA 1.1, в табл. 17В - для SABA5.1.
Таблица 17А
SABA1.1
Таблица 17В
SABA5.1
Пример 5F. Характеристики связывания SABA1 с сывороточным альбумином.
SABA1.1 и 1.2 связываются с HAS и RhSA.
SABA1.2 представляет собой "коровую последовательность 1" домена 10Fn3, содержащую удлинение (ED)5 (SEQ ID NO: 421 в табл. 6). SABA1.2 связывался с сывороточным альбумином человека (HSA) при нейтральных значениях рН и температуре 25°С со средней константой скорости ассоциации (ka)
8,21E+03 M-1-c-1 и средней константой скорости диссоциации (kd) 4,34Е-04с-1, с рассчитанной средней Kd 55,3 нМ (табл. 18). Для сывороточного альбумина макаки-резус измеренная константа скорости ассоциации составляла 6.6Е+03 М-1-с-1, константа скорости диссоциации составляла 3.78Е-03 с-1, что давало расчетное среднее значение Kd 580 нМ. Измеряемого взаимодействия между SABA1.2 и сывороточными альбуминами мыши или крысы не наблюдалось вплоть до концентрации 1 мкМ (табл. 18 и фиг. 27). При 37°С значения ka и kd повышались от 2 до 5 раз, что приводило примерно к 2-кратному росту аффинности к HSA и 1/2-кратному росту аффинности к RhSA (табл. 18).
- 146 022983
Таблица 18
Кинетические параметры связывания альбуминов для SABA1.2 в HBS-P буфере
| Альбумин | Тем пература (°C) | ка (1/Мс) | kd (1/с) | KD (нМ) |
| Человек | 25 | 8.21 ± 1.19 Е+03 | 4.43 + 0.65 Е-04 | 55. 3 + 13.7 |
| Макака-резус | 6.60 + 1.18 Е+03 | 3.78 + 0.45 Е-03 | 580 ±62.6 | |
| Мышь | наблюдаемое связывание отсутствует | |||
| Человек | 37 | 3/38Е+04 | 8/15Е-04 | 24/ 1 |
| Макака-резус | 1/89Е+04 | 1/85Е-02 | 977 /4 | |
| Мышь | наблюдаемое связывание отсутствует |
Дополнительно, для определения стехиометрических параметров связывания SABA1 и HSA было проведено калориметрическое титрование. Для данного исследования использовался вариант SABA1.1, представляющий собой "коровую последовательность 1" домена 10Fn3, содержащую удлинение в виде
6His-T3ra (SEQ ID NO: 420 в табл. 6). HSA (10 мкл на впрыск раствора с концентрацией 115 мкМ) вводили в калориметрическую ячейку, содержавшую SABA1.1 в концентрации 8,1 мкМ. Данный эксперимент проводили при 37°С в PBS при рН 7.4. На фиг. 28 приведены данные, демонстрирующие 1:1 стехиометрию связывания SABA1.1 с HSA.
SABA1.2 активно связывается с HSA при низких значениях рН.
Длительное время полужизни альбуминов (например, t1/2 HSA составляет 19 дней) в большой степени связано с тем, что альбумины связываются с неонатальным Fc-рецептором (FcRn) при низких значениях рН внутри эндосомы, что позволяет избежать деградации и приводит к возврату молекулы альбумина в кровоток. Данные в табл. 19 показывают, что вариант SABA1.2 активно связывался с HSA при значении рН5.5, совпадающим с рН в эндосоме, что позволяет предполагать, что t1/2 SABA, связанного с HSA, увеличится за счет рециркуляции молекулы при взаимодействии с FcRn.
Таблица 19
Сравнение кинетики связывания альбумина при pH 7,4 и 5,5 в буфере MES
| Альбумин | рн | ка (1/Мс) | kd (1/с) | KD (нМ) |
| Человек | 7.4 | 9.26 Е+03 | 3.88 Е-04 | 41.9 |
| 5.5 | 9.44 Е+03 | 2.70 Е-04 | 28.6 | |
| Макакарезус | 7.4 | 6.16 Е+03 | 2.95 Е-03 | 479 |
| 5.5 | 7.57 Е+03 | 2.72 Е-03 | 359 |
SABA1.2 связывается с доменами I и II, но не III молекулы HSA.
Сайт связывания SABA1.2 на молекуле альбумина был картирован с использованием рекомбинантных фрагментов HSA. Сайт связывания расположен на конце доменов I или II, тогда как с доменом III связывание не детектируется (фиг. 29). Так как домен III молекулы HSA преимущественно участвует во взаимодействии с FcRn, вероятность конкуренции SAA1.2 при связывании HSA с FcRn невысока, что также повышает вероятность использования механизма рециркуляции за счет FcRn для повышения времени полужизни.
Пример 5G. Фармакология варианта SABA1.2 в исследовании in vivo.
Для оценки фармакокинетики и иммуногенности SABA1.2 на яванских макаках были проведены четырехнедельные предварительные токсикологические исследования, при которых SABA1.2 вводили однократно в 2 концентрациях. Также фармакокинетика и иммуногенность оценивалась в трехнедельных предварительных токсикологических исследованиях, включавших два варианта исследования, при кото- 147 022983
рых белок вводили однократно внутривенно или подкожно. Также фармакокинетика SABA1.2 оценивалась в двух независимых предварительных токсикологических исследованиях при однократном введении белка на яванксих макаках. Детекция SABA1.2 в образцах плазмы проводилась с помощью разработанного количественного анализа на основе ИФА.
SABA1.2 вводили обезьянам в дозировках 1 и 10 мг/кг внутривенно. Для оценки параметров фармакокинетики применялся некомпартментальный анализ с помощью программного обеспечения WINNONLIN®. Как показано на фиг. 30 и по приведенным ниже параметрам, фармакокинетика SABA 1.2 в описанном исследовании имеет дозозависимый характер, что определяется по площади под кривой концентрация-время (AUC). Клиренс (CL) SABA1.2 при 10 мг/кг составлял 0,15 мл/ч/кг, бета фаза времени полу жизни (t1/2) составляла 143 ч, объем распределения (Vz) составлял 30 мл/кг, общая экспозиция лекарственного вещества (AUCall) составляла 5609457 ч-нмоль/л (табл. 20). Клиренс (CL) SAB A1.2 при 1 мг/кг составлял 0,4 мл/ч/кг, бета фаза времени полу жизни (t1/2) составляла 124 ч, объем распределения (Vz) составлял 72 мл/кг, общая экспозиция лекарственного вещества (AUCall) составляла 214636 ч-нмоль/л (табл. 20).
После подкожного или внутривенного введения SABA1.2 профили фармакокинетики бета-фазы были сходны (фиг. 31). Клиренс (CL) SABA1.2 при внутривенном введении 1 мг/кг составлял 0,22 мл/ч/кг, бета фаза времени полужизни (t1/2) составляла 125 ч, объем распределения (Vz) составлял 40 мл/кг, общая экспозиция лекарственного вещества (AUCall) составляла 357993 ч-нмоль/л (табл. 20). Клиренс (CL) SABA1.2 при подкожном введении 1 мг/кг составлял 0,32 мл/ч/кг, бета фаза времени полужизни (t1/2) составляла 134 ч, объем распределения (Vz) составлял 62 мл/кг, общая экспозиция лекарственного вещества (AUCall) составляла 251339 ч-нмоль/л (табл. 20). Относительная биодоступность (F) при подкожном введении по сравнению с внутривенным составляла 0,7.
Таблица 20
Параметры фармакокинетики для SABA1.2 в исследованиях на обезьянах
Claims (21)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Полипептид, содержащий десятый домен типа III фибронектина (10Fn3), в котором FG петля содержит последовательность формулы EX4X1X5X1X1X6GYX4HR (SEQ ID NO: 451), где X1 представляет собой любую аминокислоту, Х4 представляет собой Y или F, X5 представляет собой Y, F или W, X6 представляет собой S или А и где данный полипептид связывает PCSK9 (пропротеин конвертазы субтилизин/кексин типа 9).
- 2. Полипептид по п.1, в котором указанный полипептид связывает PCSK9 с KD менее чем 500 нМ.
- 3. Полипептид по п.1 или 2, в котором FG петля содержит затемненные участки любой из SEQ ID NO: 28-38 и 142-172, как это показано в табл. 3.
- 4. Полипептид по любому из пп.1-3, в котором последовательность FG петли выбирается из SEQ ID NO: 28-38 и 142-172.
- 5. Полипептид по любому из пп.1-4, в котором последовательность петли ВС содержит последовательность формулы (X1)ZX2G (SEQ ID NO: 449), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту, Z представляет собой число от 6-9 и Х2 представляет собой Y или Н.
- 6. Полипептид по любому из пп.1-5, в котором последовательность петли ВС содержит затемненную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 2-17, 107-135 и 301-303, как показано в табл. 3.
- 7. Полипептид по п.5 или 6, в котором последовательность петли ВС выбирается из группы последовательностей SEQ ID NO: 2-17, 107-135 и 301-303.
- 8. Полипептид по любому из пп.1-7, в котором последовательность петли DE содержит последовательность формулы X1X1X1X3 (SEQ ID NO: 450), в которой X1 представляет собой любую аминокислоту,- 148 022983Х3 является G или S.
- 9. Полипептид по любому из пп.1, 2 или 8, в котором последовательность петли DE содержит затемненную часть любой из последовательностей SEQ ID NO: 18-27 и 136-141, как показано в табл. 3.
- 10. Полипептид по любому из пп.8 или 9, в котором последовательность петли DE выбирается из группы последовательностей SEQ ID NO: 18-27 и 136-141.
- 11. Полипептид по любому из пп.1-10, в котором последовательности петель ВС, DE и FG по меньшей мере на 80% идентичны любой из последовательностей SEQ ID NO: 2-38, 106-172 и 301-303.
- 12. Полипептид по п.11, в котором аминокислотные последовательности ВС, DE и FG петель по меньшей мере на 80% идентичны SEQ ID NO: 14, 25 и 37.
- 13. Полипептид по любому из пп.1-12, в котором последовательность полипептида содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 39-76, 173-290 и 304-309.
- 14. Полипептид по п.13, где полипептид содержит аминокислотную последовательность Fn3 домена, представляющую собой фрагмент последовательности с 3 по 96 позиции SEQ ID NO: 69.
- 15. Полипептид по п.1, где 10Fn3 содержит ВС, DE и FG петли и где ВС петля содержит SEQ ID NO: 14, DE петля содержит SEQ ID NO: 25, FG петля содержит SEQ ID NO: 37.
- 16. Полипептид по п.1, где полипептид содержит SEQ ID NO: 82.
- 17. Полипептид по любому из пп.1-16, дополнительно содержащий одну или более фармакокинетических групп (PK), выбранных из группы, содержащей полиэтиленгликоль, сиаловую кислоту, Fcфрагмент, часть Fc-фрагмента, трансферрин, сывороточный альбумин, связывающий сывороточный альбумин белок и связывающий сывороточные иммуноглобулины белок.
- 18. Полипептид по п.17, в котором белок, связывающий сывороточный альбумин, содержит десятый домен III типа фибронектина (10Fn3).
- 19. Полипептид по п.18, в котором домен 10Fn3 связывает HSA.
- 20. Полипептид по п.17, в котором PK-группой является полиэтиленгликоль.
- 21. Фармацевтически приемлемая композиция, содержащая полипептид по любому из пп.1-20, по существу, свободная от эндотоксина.1459D051784F031704FO3-ml1784F03-m21784F03-»31813Е021923В021923Β02_Ν82ϊ_1923Β02Ν82Β"1923В02_Т80А1922G04 '1922G04_R25D1922G04R25E"1922G04__R2SS'2012 АО 4 '2013Е012011Н052011H05V23D2011Н05 V23E1459D051784F031784F03-ml1784Р03-Ю21784РОЗ-ЮЗ1813E021923B021923B02_N82I.1923B02_N82B1923B02_T80a'1922G04 "1922G04_R25D1922G04_R25B_1922G04_R25s"2012A04 ’2013E012011H052011H05_V23D2011H05 V23e"MGVSDVPRDLEWAATPTSLLZSWPPPSHGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPPGKGTAT MGVSDVPRDLEV VAAT PTS LLZ SWRPPIHAYGYYRITYGETGGNS PVQEFTVPZVEGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTS LLZ SWDAPIHAYGYYRITYGETGGMS PVQEFTVPSSBGTAT MGVSDVPRDLE WAAT PTS LLZ SWDAPAHAYGYYR ITYGETGGNS PVQEFTVPGSKGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTS LLZ SWDAPAVTYGYYR ITYGETGGNS PVQEFTVPGSKSTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLZ SWSPPANGYGYYRITYGETGGNS PVQEFTVPVGRGTAT MGVSDVPRDLE WAATPTSLLZSWZPPPKGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGBGTAT MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWTPPPKGYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGBGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLZ SWTPPPKGYGYYRIT YGETGGNS PVQEFTVPVGBGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLI SWTPPPKGYGYYRIT YGETGGNS PVQEFTVPVGBGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWRPPSHAYGYYRITYGETGGNS PVQEFTVPIGKGTAT MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPPSHAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWEPPSHAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPIGKGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLL ISWSPPSHAYGYYRITYGETGGNS PVQEFTVP1GKGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLL ISWRPPSNGHGYYRITYGETGGNS PVQEFTVPVNgGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLL ISWVPPSDDYGYYRIT YGETGGNS PVQEFTVPIGKGYAT MGVSDVPRDLEWAAT PTS LLISWVPSSHAYGY YRIT YGETGGNSPVQEFTVPVGVGTAT MGVSDVPRDLEWAATPTSLLISWDPSSHAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGVGTAT MGVSDVPRDLEWAAT PTSLLISWEPSSHAYGYYRITYGETGGNSPVQEFTVPVGVGTATISGLKPGVDYTITVYAVEYPYKHBGYYHRPISINYRTEIDKPSQHHHHHH (SEQ ISCLKPGVDYTITVYAVBYTFKHBGYYHRPISINYRTEIDKPSQHHHHHH (SEQ ISGLKPGVDYTITVYAVEYTFKHSGYYHRPISINYRTEIDKPSQHHHHHH (SEQ ISGLKPGVDYTI TVYAVEYTFKHSGYYHRP IS INYRTE IDKPSQHHHHHH (SEQ ISGLKPGVDYTITVYAVBYTFKHSGYYHRPISINYRTEIDKPSQHHHHHH (SEQ I SGLKPGVDYTITVYAVBYTYKSSGYYHRP IS INYRTE IDKPSQHHHHHH (SEQ ISGLKPGVDYTITVYAVBYTYNSAGYYHRPISINYRTEIDKPSQHHHHHH (SEQISGLKPGVDYTITVYAVEYTYIGASYYHRPISINYRTG---SGSHHHHHH (SEQI SGLKPGVDYT I TVYAVBYTYSQAgYYHRP ISINYRTG---SGSHHHHHH (SEQISGLKPGVDYTITVYAVEYAYNSASYYHRPISINYRTG---SGSHHHHHH (SEQI SGLKPGVDYT ITVYAVBYPWKGSGY YHRPISINYRTEIDKPSQHHHHHH (SEQ ISGLKPGVDYTITVYAVBYPWKGSGYYHRPIS INYRTG---SGSHHHHHH (SEQI SGLKPGVDYT ITVYAVBYPWKGBGYYHRFIS INYRTG---SG3HHHHHH (SEQI SGLKPGVDYT ITVYAVBYPWKGSGYYHRPISINYRTG---SGSHHHHHH (SEQI SGLKPGVDYT ITVYAVBFPFKWBGYYHRP I SINYRTE I DKPSQHHHHHH (SEQ I SGLKPGVDYT ITVYAVBFPWPHAGYYHRPI SINYRTE IDKPSQHHHHHH (SEQ I SGLKPGVDYT ITVYAVBYAFBGAGYYHRPIS INYRTE IDKPSQHHHHHH (SEQ I SGLKPGVDYT ITVYAVBYAFSGAGYYHRP IS INYRTE IDKPSQHHHHHH (SEQ T SGT iKPGVDYT ITVYAVEYAFSGAGYYHRPIS INYRTE IDKPSQHHHHHH (SEQID N0:39) ID N0:41) ID N0:43) ID N0:45) ID N0:47) ID N0:49) ID N0:51) ID N0:53) ID N0:55) ID N0:57) ID N0:59) ID N0:61) ID N0:63) ID N0:65) ID N0:67) ID N0:69) ID N0:71) ID N0:73) ID N0:75)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US32356210P | 2010-04-13 | 2010-04-13 | |
| US33073110P | 2010-05-03 | 2010-05-03 | |
| PCT/US2011/032231 WO2011130354A1 (en) | 2010-04-13 | 2011-04-13 | Fibronectin based scaffold domain proteins that bind pcsk9 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201270761A1 EA201270761A1 (ru) | 2013-03-29 |
| EA022983B1 true EA022983B1 (ru) | 2016-04-29 |
Family
ID=44065227
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201270761A EA022983B1 (ru) | 2010-04-13 | 2011-04-13 | Белки на основе структурного домена фибронектина, связывающие pcsk9 |
| EA201590910A EA036055B1 (ru) | 2010-04-13 | 2011-04-13 | Применение полипептида, связывающего pcsk9, для лечения атеросклероза или гиперхолистеринемии |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201590910A EA036055B1 (ru) | 2010-04-13 | 2011-04-13 | Применение полипептида, связывающего pcsk9, для лечения атеросклероза или гиперхолистеринемии |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US8420098B2 (ru) |
| EP (2) | EP3424949A1 (ru) |
| JP (4) | JP5876034B2 (ru) |
| KR (1) | KR20130056871A (ru) |
| CN (2) | CN103068843B (ru) |
| AR (1) | AR081454A1 (ru) |
| AU (1) | AU2011240650A1 (ru) |
| BR (1) | BR112012026216B1 (ru) |
| CA (1) | CA2796338C (ru) |
| CL (1) | CL2012002884A1 (ru) |
| DK (1) | DK2558491T3 (ru) |
| EA (2) | EA022983B1 (ru) |
| ES (1) | ES2689875T3 (ru) |
| IL (1) | IL222376A0 (ru) |
| MA (1) | MA34209B1 (ru) |
| MX (3) | MX362632B (ru) |
| PE (1) | PE20130238A1 (ru) |
| SG (1) | SG184220A1 (ru) |
| TN (1) | TN2012000479A1 (ru) |
| TW (1) | TW201141508A (ru) |
| UY (1) | UY33331A (ru) |
| WO (1) | WO2011130354A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201208508B (ru) |
Families Citing this family (95)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2402567C2 (ru) | 2003-12-05 | 2010-10-27 | Бристоль-Майерз Сквибб Компани | Ингибиторы рецепторов фактора роста эндотелия сосудов типа 2 |
| MX2009005466A (es) | 2006-11-22 | 2009-08-17 | Adnexus A Bristol Myers Sqibb | Terapeuticos dirigidos a base de proteinas manipuladas para receptores de tirosina cinasas, incluyendo receptor de factor de crecimiento tipo insulina-i. |
| JOP20080381B1 (ar) | 2007-08-23 | 2023-03-28 | Amgen Inc | بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9) |
| EP2247615B1 (en) | 2008-02-14 | 2014-07-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Targeted therapeutics based on engineered proteins that bind egfr |
| EP2799448A1 (en) | 2008-05-22 | 2014-11-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Multivalent fibronectin based scaffold domain proteins |
| TWI496582B (zh) | 2008-11-24 | 2015-08-21 | 必治妥美雅史谷比公司 | 雙重專一性之ｅｇｆｒ／ｉｇｆｉｒ結合分子 |
| AR081454A1 (es) * | 2010-04-13 | 2012-09-05 | Bristol Myers Squibb Co | Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina que se unen a pcsk9 (proproteina convertasa subtilisina kexina 9) |
| TW201138808A (en) | 2010-05-03 | 2011-11-16 | Bristol Myers Squibb Co | Serum albumin binding molecules |
| US9562089B2 (en) * | 2010-05-26 | 2017-02-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins having improved stability |
| EP3415528B1 (en) | 2011-04-13 | 2021-05-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Fc fusion proteins comprising novel linkers or arrangements |
| EP2709669A1 (en) | 2011-05-17 | 2014-03-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for maintaining pegylation of polypeptides |
| EP2710382B1 (en) | 2011-05-17 | 2017-10-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Improved methods for the selection of binding proteins |
| CN104053670A (zh) | 2011-10-31 | 2014-09-17 | 百时美施贵宝公司 | 具有降低的免疫原性的纤连蛋白结合域 |
| WO2013138338A2 (en) | 2012-03-12 | 2013-09-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods for treating tissue damage associated with ischemia with apoliporotein d |
| US9255154B2 (en) | 2012-05-08 | 2016-02-09 | Alderbio Holdings, Llc | Anti-PCSK9 antibodies and use thereof |
| US9844582B2 (en) | 2012-05-22 | 2017-12-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with extended-PK IL-2 and therapeutic agents |
| MY189682A (en) * | 2012-09-13 | 2022-02-25 | Bristol Myers Squibb Co | Fibronectin based scaffold domain proteins that bind to myostatin |
| WO2014120891A2 (en) | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins |
| EP3406629B1 (en) | 2013-02-06 | 2020-06-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin type iii domain proteins with enhanced solubility |
| ES2751735T3 (es) | 2013-02-12 | 2020-04-01 | Bristol Myers Squibb Co | Métodos de replegado de proteínas a elevado pH |
| US20160152686A1 (en) * | 2013-03-13 | 2016-06-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold domains linked to serum albumin or moiety binding thereto |
| US9045545B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer |
| US9017678B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-04-28 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
| US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
| US8945560B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-02-03 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
| US9034332B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-19 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
| US9045548B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
| US8986691B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
| US9023359B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-05 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
| US8883157B1 (en) | 2013-12-17 | 2014-11-11 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
| US9051378B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-09 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
| US9914769B2 (en) | 2014-07-15 | 2018-03-13 | Kymab Limited | Precision medicine for cholesterol treatment |
| US8986694B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain |
| US8980273B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-17 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
| US8992927B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-31 | Kymab Limited | Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain |
| GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
| AU2015231210B2 (en) | 2014-03-20 | 2019-09-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Stabilized fibronectin based scaffold molecules |
| EA034886B1 (ru) * | 2014-03-20 | 2020-04-02 | Бристол-Майерс Сквибб Компани | Связывающие сывороточный альбумин домены фибронектина iii типа |
| US9139648B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-09-22 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain |
| US9150660B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-10-06 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain |
| US20170216403A1 (en) | 2014-08-12 | 2017-08-03 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and an immune checkpoint blocker |
| US10166273B2 (en) | 2014-08-12 | 2019-01-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Synergistic tumor treatment with antibodies targeting PD-1, PD-L1 or CTLA4 and integrin-binding-Fc-fusion protein |
| US10034892B2 (en) | 2014-08-21 | 2018-07-31 | Srx Cardio, Llc | Composition and methods of use of small molecules as binding ligands for the modulation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9(PCSK9) protein activity |
| JP6805142B2 (ja) | 2014-11-21 | 2020-12-23 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ | Ｃｄ７３に対する抗体およびその使用 |
| EP3702367B1 (en) | 2014-11-25 | 2024-05-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Novel pd-l1 binding polypeptides for imaging |
| SG11201708441RA (en) * | 2015-04-24 | 2017-11-29 | Viiv Healthcare Uk (No 5) Ltd | Polypeptides targeting hiv fusion |
| ES2967078T3 (es) | 2015-09-23 | 2024-04-25 | Bristol Myers Squibb Co | Dominios de fibronectina de tipo III de unión a seroalbúmina con velocidad de disociación rápida |
| EP3353198B1 (en) * | 2015-09-23 | 2020-06-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Glypican-3binding fibronectin based scafflold molecules |
| US11779604B2 (en) | 2016-11-03 | 2023-10-10 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods |
| EP3538140A1 (en) | 2016-11-14 | 2019-09-18 | Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) | Methods and pharmaceutical compositions for modulating stem cells proliferation or differentiation |
| CA3049656A1 (en) | 2017-01-10 | 2018-07-19 | Nodus Therapeutics | Combination tumor treatment with an integrin-binding-fc fusion protein and immune modulator |
| US10350266B2 (en) | 2017-01-10 | 2019-07-16 | Nodus Therapeutics, Inc. | Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein |
| US11485781B2 (en) | 2017-08-17 | 2022-11-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Multiple specificity binders of CXC chemokines |
| MX2020008394A (es) | 2018-02-12 | 2020-09-21 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Tratamiento que usa arn que codifica citoquinas. |
| WO2019222529A1 (en) * | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Lib Therapeutics, Llc | Compositions comprising pcsk9-binding molecules and methods of use |
| US20220275043A1 (en) | 2018-07-17 | 2022-09-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Soluble multimeric immunoglobulin-scaffold based fusion proteins and uses thereof |
| CN112771072A (zh) | 2018-07-24 | 2021-05-07 | 生物技术Rna制药有限公司 | Il2激动剂 |
| WO2020049026A1 (en) | 2018-09-05 | 2020-03-12 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and compositions for treating asthma and allergic diseases |
| EP3856763A1 (en) | 2018-09-28 | 2021-08-04 | Massachusetts Institute of Technology | Collagen-localized immunomodulatory molecules and methods thereof |
| MA54261A (fr) | 2019-01-18 | 2022-04-27 | Astrazeneca Ab | Inhibiteurs de pcsk9 et leurs procédés d'utilisation |
| EP3914289A1 (en) | 2019-01-23 | 2021-12-01 | Massachusetts Institute of Technology | Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade |
| BR112021015455A2 (pt) | 2019-02-08 | 2021-10-19 | Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh | Tratamento envolvendo células t car-concebidas e citocinas |
| MX2021011258A (es) | 2019-03-18 | 2021-12-10 | Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh | Variantes de interleucina-2 (il2) y receptor de interleucina-2 (il2r) para la activacion especifica de celulas efectoras inmunitarias. |
| WO2020200481A1 (en) | 2019-04-05 | 2020-10-08 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Treatment involving interleukin-2 (il2) and interferon (ifn) |
| WO2020209267A1 (ja) | 2019-04-08 | 2020-10-15 | 旭化成メディカル株式会社 | タンパク質含有溶液精製用ポリアミド媒体及びその製造方法 |
| TW202115105A (zh) | 2019-06-24 | 2021-04-16 | 德商拜恩迪克Ｒｎａ製藥有限公司 | Ｉｌ２激動劑 |
| WO2021058091A1 (en) | 2019-09-24 | 2021-04-01 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Treatment involving therapeutic antibody and interleukin-2 (il2) |
| WO2021129927A1 (en) | 2019-12-23 | 2021-07-01 | Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh | Treatment with immune effector cells engineered to express an antigen receptor |
| WO2021129945A1 (en) | 2019-12-27 | 2021-07-01 | Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh | In vitro and in vivo gene delivery to immune effector cells using nanoparticles functionalized with designed ankyrin repeat proteins (darpins) |
| US20230405046A1 (en) | 2020-03-16 | 2023-12-21 | Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh | Antigen-specific t cell receptors and t cell epitopes |
| JP2023520412A (ja) | 2020-03-31 | 2023-05-17 | レパトワー イミューン メディシンズ， インコーポレイテッド | バーコード化可能な交換可能ペプチド－ｍｈｃ多量体ライブラリー |
| WO2021197589A1 (en) | 2020-03-31 | 2021-10-07 | BioNTech SE | Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination |
| WO2022087154A1 (en) | 2020-10-20 | 2022-04-28 | Repertoire Immune Medicines, Inc. | Mhc class ii peptide multimers and uses thereof |
| WO2022135667A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | BioNTech SE | Therapeutic rna for treating cancer |
| TW202245808A (zh) | 2020-12-21 | 2022-12-01 | 德商拜恩迪克公司 | 用於治療癌症之治療性ｒｎａ |
| WO2022135666A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | BioNTech SE | Treatment schedule for cytokine proteins |
| EP4322925A2 (en) | 2021-04-12 | 2024-02-21 | BioNTech SE | Rna compositions comprising a buffer substance and methods for preparing, storing and using the same |
| JP2024517642A (ja) | 2021-04-20 | 2024-04-23 | ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア | ウイルスワクチン |
| CN112979762B (zh) * | 2021-04-26 | 2021-07-27 | 中国医学科学院皮肤病医院(中国医学科学院皮肤病研究所) | 环肽piz及其用途 |
| EP4353772A1 (en) | 2021-05-31 | 2024-04-17 | National University Corporation Gunma University | Sub-micron thin film made of ultra-high molecular weight polyethylene and method for manufacturing same |
| WO2023051926A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | BioNTech SE | Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists |
| AU2021470029A1 (en) | 2021-10-21 | 2024-05-02 | BioNTech SE | Coronavirus vaccine |
| CA3234578A1 (en) | 2021-10-22 | 2023-04-27 | Advait Vijay Badkar | Compositions for administration of different doses of rna |
| WO2023083434A1 (en) | 2021-11-09 | 2023-05-19 | BioNTech SE | Rna encoding peptidoglycan hydrolase and use thereof for treating bacterial infection |
| WO2023126053A1 (en) | 2021-12-28 | 2023-07-06 | BioNTech SE | Lipid-based formulations for administration of rna |
| WO2023165681A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | BioNTech SE | Rna lipid nanoparticles (lnps) comprising a polyoxazoline and/or polyoxazine polymer |
| WO2023193892A1 (en) | 2022-04-05 | 2023-10-12 | BioNTech SE | Nucleic acid compositions comprising an inorganic polyphosphate and methods for preparing, storing and using the same |
| WO2023196995A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Repertoire Immune Medicines, Inc. | T cell receptor multimers and uses thereof |
| US11878055B1 (en) | 2022-06-26 | 2024-01-23 | BioNTech SE | Coronavirus vaccine |
| WO2024017479A1 (en) | 2022-07-21 | 2024-01-25 | BioNTech SE | Multifunctional cells transiently expressing an immune receptor and one or more cytokines, their use and methods for their production |
| WO2024028325A1 (en) | 2022-08-01 | 2024-02-08 | BioNTech SE | Nucleic acid compositions comprising amphiphilic oligo ethylene glycol (oeg)-conjugated compounds and methods of using such compounds and compositions |
| WO2024028445A1 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-08 | BioNTech SE | Rna for preventing or treating tuberculosis |
| WO2024027910A1 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-08 | BioNTech SE | Rna for preventing or treating tuberculosis |
| CN116425836B (zh) * | 2022-12-16 | 2024-04-16 | 中国医学科学院皮肤病医院(中国医学科学院皮肤病研究所) | A+多肽/蛋白质及其应用 |
| WO2024153324A1 (en) | 2023-01-18 | 2024-07-25 | BioNTech SE | Rna formulations for pharmaceutical use |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008125623A2 (en) * | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Novartis Ag | Molecules and methods for modulating proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (pcsk9) |
| WO2009133208A1 (en) * | 2008-05-02 | 2009-11-05 | Novartis Ag | Improved fibronectin-based binding molecules and uses thereof |
Family Cites Families (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE30985E (en) | 1978-01-01 | 1982-06-29 | Serum-free cell culture media | |
| US4560655A (en) | 1982-12-16 | 1985-12-24 | Immunex Corporation | Serum-free cell culture medium and process for making same |
| US4657866A (en) | 1982-12-21 | 1987-04-14 | Sudhir Kumar | Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media |
| US4767704A (en) | 1983-10-07 | 1988-08-30 | Columbia University In The City Of New York | Protein-free culture medium |
| US5672502A (en) | 1985-06-28 | 1997-09-30 | Celltech Therapeutics Limited | Animal cell culture |
| US4927762A (en) | 1986-04-01 | 1990-05-22 | Cell Enterprises, Inc. | Cell culture medium with antioxidant |
| US6048728A (en) | 1988-09-23 | 2000-04-11 | Chiron Corporation | Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity, and product expression |
| FR2646437B1 (fr) | 1989-04-28 | 1991-08-30 | Transgene Sa | Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant |
| US5122469A (en) | 1990-10-03 | 1992-06-16 | Genentech, Inc. | Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins |
| DE69303494T2 (de) | 1992-11-13 | 1997-01-16 | Idec Pharma Corp | Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma |
| US6261804B1 (en) | 1997-01-21 | 2001-07-17 | The General Hospital Corporation | Selection of proteins using RNA-protein fusions |
| RU2233878C2 (ru) | 1997-01-21 | 2004-08-10 | Дзе Дженерал Хоспитал Корпорейшн | Способ отбора желательного белка и нуклеиновой кислоты, средства для его осуществления |
| WO1998056915A2 (en) * | 1997-06-12 | 1998-12-17 | Research Corporation Technologies, Inc. | Artificial antibody polypeptides |
| US6818418B1 (en) | 1998-12-10 | 2004-11-16 | Compound Therapeutics, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
| US7115396B2 (en) | 1998-12-10 | 2006-10-03 | Compound Therapeutics, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
| US20050287153A1 (en) | 2002-06-28 | 2005-12-29 | Genentech, Inc. | Serum albumin binding peptides for tumor targeting |
| WO2001072829A2 (en) | 2000-03-31 | 2001-10-04 | Institut Pasteur | Peptides blocking vascular endothelial growth factor (vegf)-mediated angiogenesis, polynucleotides encoding said peptides and methods of use thereof |
| EP1301538B1 (en) | 2000-07-11 | 2015-12-09 | Research Corporation Technologies, Inc | Artificial antibody polypeptides |
| US6927762B2 (en) | 2002-04-01 | 2005-08-09 | Aiptek International Inc. | Application specific integrated circuit (ASIC) of the electromagnetic-induction system |
| US7696320B2 (en) | 2004-08-24 | 2010-04-13 | Domantis Limited | Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor |
| DK2316852T3 (da) | 2002-11-08 | 2014-06-16 | Ablynx Nv | Stabiliserede enkeltdomæne-antistoffer |
| KR20050120663A (ko) * | 2003-03-24 | 2005-12-22 | 세쿠오이아 파마큐티컬스 인코오퍼레이티드 | 장기간 작용하는 생물학적 활동 컨쥬게이트들 |
| RU2402567C2 (ru) * | 2003-12-05 | 2010-10-27 | Бристоль-Майерз Сквибб Компани | Ингибиторы рецепторов фактора роста эндотелия сосудов типа 2 |
| PL1729795T3 (pl) | 2004-02-09 | 2016-08-31 | Human Genome Sciences Inc | Białka fuzyjne albuminy |
| US20070269422A1 (en) | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding proteins with long half-lives |
| US20080057590A1 (en) * | 2006-06-07 | 2008-03-06 | Mickey Urdea | Markers associated with arteriovascular events and methods of use thereof |
| WO2008057457A2 (en) * | 2006-11-07 | 2008-05-15 | Merck & Co., Inc. | Antagonists of pcsk9 |
| MX2009005466A (es) | 2006-11-22 | 2009-08-17 | Adnexus A Bristol Myers Sqibb | Terapeuticos dirigidos a base de proteinas manipuladas para receptores de tirosina cinasas, incluyendo receptor de factor de crecimiento tipo insulina-i. |
| CA2710835A1 (en) | 2007-12-27 | 2009-07-09 | Novartis Ag | Improved fibronectin-based binding molecules and their use |
| EP2247615B1 (en) * | 2008-02-14 | 2014-07-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Targeted therapeutics based on engineered proteins that bind egfr |
| EP2799448A1 (en) * | 2008-05-22 | 2014-11-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Multivalent fibronectin based scaffold domain proteins |
| TWI516501B (zh) * | 2008-09-12 | 2016-01-11 | 禮納特神經系統科學公司 | Ｐｃｓｋ９拮抗劑類 |
| AR081454A1 (es) * | 2010-04-13 | 2012-09-05 | Bristol Myers Squibb Co | Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina que se unen a pcsk9 (proproteina convertasa subtilisina kexina 9) |
| EP3415528B1 (en) * | 2011-04-13 | 2021-05-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Fc fusion proteins comprising novel linkers or arrangements |
-
2011
- 2011-04-13 AR ARP110101276A patent/AR081454A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-04-13 PE PE2012002018A patent/PE20130238A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-04-13 AU AU2011240650A patent/AU2011240650A1/en not_active Abandoned
- 2011-04-13 UY UY0001033331A patent/UY33331A/es unknown
- 2011-04-13 TW TW100112844A patent/TW201141508A/zh unknown
- 2011-04-13 EA EA201270761A patent/EA022983B1/ru unknown
- 2011-04-13 SG SG2012070579A patent/SG184220A1/en unknown
- 2011-04-13 MX MX2015013632A patent/MX362632B/es unknown
- 2011-04-13 MA MA35263A patent/MA34209B1/fr unknown
- 2011-04-13 ES ES11715372.6T patent/ES2689875T3/es active Active
- 2011-04-13 WO PCT/US2011/032231 patent/WO2011130354A1/en active Application Filing
- 2011-04-13 CN CN201180029216.5A patent/CN103068843B/zh active Active
- 2011-04-13 EP EP18178384.6A patent/EP3424949A1/en active Pending
- 2011-04-13 CN CN201510518646.3A patent/CN105175532B/zh active Active
- 2011-04-13 BR BR112012026216-5A patent/BR112012026216B1/pt active IP Right Grant
- 2011-04-13 EP EP11715372.6A patent/EP2558491B1/en active Active
- 2011-04-13 JP JP2013505079A patent/JP5876034B2/ja active Active
- 2011-04-13 DK DK11715372.6T patent/DK2558491T3/en active
- 2011-04-13 CA CA2796338A patent/CA2796338C/en active Active
- 2011-04-13 US US13/085,864 patent/US8420098B2/en active Active
- 2011-04-13 EA EA201590910A patent/EA036055B1/ru unknown
- 2011-04-13 KR KR1020127029593A patent/KR20130056871A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-04-13 MX MX2012011781A patent/MX2012011781A/es active IP Right Grant
-
2012
- 2012-10-01 TN TNP2012000479A patent/TN2012000479A1/en unknown
- 2012-10-10 MX MX2019001095A patent/MX2019001095A/es unknown
- 2012-10-11 IL IL222376A patent/IL222376A0/en unknown
- 2012-10-12 CL CL2012002884A patent/CL2012002884A1/es unknown
- 2012-11-12 ZA ZA2012/08508A patent/ZA201208508B/en unknown
-
2013
- 2013-03-15 US US13/835,639 patent/US9234027B2/en active Active
-
2015
- 2015-12-02 US US14/956,698 patent/US9856309B2/en active Active
-
2016
- 2016-01-20 JP JP2016008940A patent/JP2016104792A/ja active Pending
-
2017
- 2017-11-21 US US15/819,925 patent/US10947297B2/en active Active
-
2018
- 2018-12-07 JP JP2018229776A patent/JP2019073514A/ja active Pending
-
2021
- 2021-02-16 US US17/177,179 patent/US11858979B2/en active Active
- 2021-02-26 JP JP2021029567A patent/JP2021091702A/ja active Pending
-
2023
- 2023-11-17 US US18/512,487 patent/US20240239870A1/en active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008125623A2 (en) * | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Novartis Ag | Molecules and methods for modulating proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (pcsk9) |
| WO2009133208A1 (en) * | 2008-05-02 | 2009-11-05 | Novartis Ag | Improved fibronectin-based binding molecules and uses thereof |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| DATABASE UniProt [Online], 21 July 1986 (1986-07-21), "RecName: Full=Fibronectin; Short=FN; AltName: Full=Cold-insoluble globulin; Short=CIG;'', XP002640484, retrieved from EBI accession no. UNIPROT:P02751, Database accession no. P02751, abstract * |
| GETMANOVA E.V. ET AL.: "Antagonists to Human and Mouse Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 Generated by Directed Protein Evolution In Vitro", CHEMISTRY AND BIOLOGY, CURRENT BIOLOGY, LONDON, GB, vol. 13, no. 5, 1 May 2006 (2006-05-01), pages 549-556, XP025131847, ISSN: 1074-5521, DOI: DOI:10.1016/J.CHEMBIOL.2005.12.009 [retrieved on 2006-05-01], page 549-556 * |
| PARKER M.H. ET AL.: "Antibody mimics based on human fibronectin type three domain engineered for thermostability and high-affinity binding to vascular endothelial growth factor receptor two", PROTEIN ENGINEERING, DESIGN AND SELECTION, OXFORD JOURNAL, LONDON, GB, vol. 18, no. 9, 1 September 2005 (2005-09-01), pages 435-444, XP002457979, ISSN: 1741-0126, DOI: DOI:10.1093/PROTEIN/GZI050, page 435-444 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11858979B2 (en) | Fibronectin based scaffold domain proteins that bind PCSK9 | |
| US9714281B2 (en) | Fibronectin based scaffold domain proteins that bind IL-23 | |
| CN106687478B (zh) | 新的抗人Tie-2抗体 | |
| TW201323442A (zh) | 低密度脂蛋白相關蛋白６（ｌｒｐ６）－半衰期延長構築體 | |
| JP2015504038A (ja) | 低減した免疫原性を有するフィブロネクチン結合ドメイン | |
| EA044608B1 (ru) | Белки на основе структурного домена фибронектина, связывающие pcsk9 |