JP2023525827A

JP2023525827A - 抗ｃｄ７３抗体およびその使用

Info

Publication number: JP2023525827A
Application number: JP2022568976A
Authority: JP
Inventors: ▲リアン▼ 杜; 紅艷張; 理娜金; 亞莉陳; 紀軍袁; 振清張; 小牛 ▲ミアオ▼; 威鋒黄; 云莉賈
Original assignee: Biotheus Inc
Current assignee: Biotheus Inc
Priority date: 2020-05-12
Filing date: 2020-08-28
Publication date: 2023-06-19
Also published as: CA3183102A1; AU2020447878A1; WO2021227307A1; WO2021227306A1; CN115551889A; WO2021227307A8; EP4151652A1; US20230312739A1; KR20230009448A; CN115551888A

Abstract

本発明は、疾患治療および免疫学の分野に関する。具体的には、抗ＣＤ７３抗体またはその抗原結合性断片、それをコードする核酸分子、それを含むイムノコンジュゲート、二重特異性分子および医薬組成物、ならびに免疫応答の増強および／または腫瘍の処置におけるそれらの使用が開示される。

Description

発明の詳細な説明

技術分野
本発明は、疾患処置および免疫学の分野に関し、特に、本発明は、抗ＣＤ７３抗体またはその抗原結合性断片、それをコードする核酸分子、イムノコンジュゲート、二重特異性分子、およびそれを含む医薬組成物、ならびに免疫応答を増強するおよび／または腫瘍を処置するためのそれらの使用に関する。

背景技術
近年、がん免疫療法の急速な発展が、腫瘍生物学および免疫学の良好な理解を科学コミュニティに与えている。腫瘍微小環境は、がん細胞、免疫細胞、線維芽細胞、筋線維芽細胞、サイトカイン、血管および細胞外マトリックスを含む動的な微小環境である。腫瘍は、多くの場合、低酸素状態にあり、その環境は、グルコースおよび他の栄養素も欠乏している。生存するために、がん細胞は、そのような環境において、それらの代謝機構を再編成する。それらのうち、プリン代謝の調節は、非常に重要なステップであり、特に、表面抗原分類７３（ＣＤ７３、細胞外－５’－ヌクレオチダーゼとしても公知）の発現が増加する。ＣＤ７３は、内皮細胞および造血細胞のサブセットにおいて一般に発現されるグリコシルホスファチジルイノシトール固定細胞表面タンパク質である（ＭｉｓｕｍｉＹら、ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９０年；１９１巻（３号）：５６３～９頁）。細胞外で、ＣＤ７３は、ＣＤ３９と一緒に、アデノシンへのアデノシン三リン酸の変換を調節し、アデノシンへのアデノシン一リン酸のＣＤ７３触媒脱リン酸化のこのステップは、前述の変換軸における律速段階である（ＲｅｓｔａＲら、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ１９９８年；１６１巻：９５～１０９頁）。

細胞死および細胞ストレスに応答して、細胞は、ＡＴＰを放出して、免疫応答を活性化する。対照的に、アデノシンへのＡＴＰの加水分解は、負のフィードバック機構として作用し、免疫応答の抑制をもたらす。アデノシンは、Ａｌ、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３を含むいくつかの受容体を介してその生物学的効果を媒介する、広く研究されているシグナル伝達分子である。アデノシンは、多くのがんの増殖および遊走を調節することが知られており、細胞外アデノシンは、がん性組織において蓄積し、腫瘍免疫回避の重要な機構に寄与する（ＢｉｎＺ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ２０１０年；７０巻：６４０７～６４１１頁）。他の効果のうち、腫瘍由来アデノシンは、アデニル酸シクラーゼ活性化Ａ２Ａ受容体を通して浸潤性エフェクターＴ細胞を大いに阻害する。

ＣＤ７３は、黒色腫、結腸がん、肺がん、卵巣がん、膀胱がん、神経膠腫、膠芽腫、甲状腺がん、食道がん、前立腺がんおよび乳がんを含む多くの異なる腫瘍において発現されることが報告されている。ＣＤ７３は、固形腫瘍における強力な予後バイオマーカーであり、ＣＤ７３の過剰発現は、より短い全生存期間またはより短い無増悪生存期間に関連する（ＲｏｎｇＷら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ２０１７年；８巻（３４号）：５７３２７～５７３３６頁）。がんにおけるＣＤ７３発現は、腫瘍細胞の増殖、遊走、新血管新生、侵襲性、転移の増加に関連し、腫瘍細胞におけるｓｉＲＮＡを使用するノックダウンまたはＣＤ７３の過剰発現が、腫瘍の成長および転移をモジュレートし得ることが示されており（ＰａｕｌＢら、ＰＮＡＳ２０１３年；１１０巻（３６号）：１４７１１～１４７１６頁）、ＣＤ７３－／－マウスは、移植されたがんおよび自然発生がんから保護される（ＪｏｈｎＳら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ２０１０年；７１巻：２８９２～２９００頁）。ＣＤ７３による腫瘍細胞における細胞－細胞および細胞－マトリックスの相互作用の報告されている調節に加えて、ＣＤ７３の発現および活性は、減弱されたＴ細胞応答にも関連している（ＤａｃｈｕａｎＪら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１０年；７０巻：２２４５～５５頁）。ＣＤ７３はまた、アントラサイクリンなどの化学療法薬物に対する耐性（Ｌｏｉ，Ｓら、ＰＮＡＳ２０１３年；１１０巻：１１０９１～１１０９６頁）、および腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）によるアポトーシスの誘導に対する耐性を調節した。このようにして、ＣＤ７３は、直接的および間接的な方法の両方でがんの進行を調節することができ、新規治療標的としてのその可能性が強調される。

加えて、がん免疫チェックポイント阻害剤の薬物は、近年、各種のがん患者において有望な有効性を示しているが、かなりの割合の患者が、これらの処置に対して非応答性のままであり、３分の１の患者が、初期応答後に再発し（適応薬物耐性）、これは、複数の免疫抑制機構が腫瘍微小環境に共存していることを示し、これらの薬物の標的が、相乗的にまたは組み合わせて使用することができ、これは、がん免疫学における現在の研究ホットスポットである。

したがって、ＣＤ７３は、単剤としてまたは併用療法としてのいずれかで、抗腫瘍治療標的としてその可能性が示されている。

本発明の内容
本発明の抗体は、腫瘍細胞の表面上の膜結合性ＣＤ７３および非膜結合形態のＣＤ７３に特異的に結合し、ＣＤ７３の酵素活性を阻害し、免疫応答を増強することができ、公知の抗ＣＤ７３抗体と比較して、良好な抗腫瘍活性および良好な機能的特性を有する。したがって、本発明の抗体は、腫瘍を予防するおよび／または処置するための可能性を有し、臨床での腫瘍免疫療法薬物についての選択肢である。

本発明の抗体
したがって、１つの態様において、本発明は、ＣＤ７３に特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、
以下の３つの重鎖可変領域のＣＤＲ：
（ｉ）以下の配列：配列番号３、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号４、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号５、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨＣＤＲ３；
ならびに、以下の３つの軽鎖可変領域のＣＤＲ：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号６、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号７、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号８、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬＣＤＲ３；
を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

ある特定の実施形態において、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれかに記載される置換は、保存的置換である。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣＤ７３、例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３および／または可溶性ヒトＣＤ７３に結合することができる。

別の態様において、本発明は、ＣＤ７３に特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、
以下の３つの重鎖可変領域のＣＤＲ：配列番号１に記載される重鎖可変領域に含有されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびに
以下の３つの軽鎖可変領域のＣＤＲ：配列番号２に記載される軽鎖可変領域に含有されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３
を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

ある特定の実施形態において、重鎖可変領域に含有される３つのＣＤＲ、および軽鎖可変領域に含有される３つのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴの番号付けシステムによって定義される。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号１に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト免疫グロブリンに由来するフレームワーク領域配列を含み、フレームワーク領域は、任意選択で、ヒト残基から対応するマウス残基への１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）の復帰突然変異を含む。ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖生殖細胞系列配列に由来する重鎖フレームワーク領域配列（すなわち、ヒト重鎖生殖細胞系列遺伝子によってコードされるアミノ酸配列）、およびヒト軽鎖生殖細胞系列配列に由来する軽鎖フレームワーク領域配列（すなわち、ヒト軽鎖生殖細胞系列遺伝子によってコードされるアミノ酸配列）を含み、重鎖フレームワーク領域および／または軽鎖フレームワーク領域は、任意選択で、ヒト残基から対応するマウス残基への１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）の復帰突然変異を含む。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖生殖細胞系列配列に由来する重鎖フレームワーク領域配列、および軽鎖生殖細胞系列配列に由来する軽鎖フレームワーク領域配列を含み、重鎖フレームワーク領域および／または軽鎖フレームワーク領域は、任意選択で、ヒト残基から対応するマウス残基への１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）の復帰突然変異を含む。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）免疫グロブリンに由来する定常領域をさらに含んでいてもよい。ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片の重鎖は、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）に由来する重鎖定常領域を含み、抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖は、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）免疫グロブリンに由来する軽鎖定常領域（例えば、κまたはλ）を含む。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の重鎖は、ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）、またはそれが由来する配列と比較して、１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、最高で２０個、最高で１５個、最高で１０個もしくは最高で５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加；例えば、１個、２個、３個、４個もしくは５個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有するそのバリアントを含み、および／あるいは
本発明の抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖は、ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）、またはそれが由来する配列と比較して、最高で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最高で１５個、最高で１０個もしくは最高で５個のアミノ酸の保存的置換；例えば、１個、２個、３個、４個もしくは５個のアミノ酸の保存的置換）有するそのバリアントを含む。

ある特定の実施形態において、定常領域は、本発明の抗体の以下の性質：Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能などの１つまたは複数を変更するアミノ酸の突然変異を含んでいてもよい。機能の変化は、抗体定常領域中の少なくとも１個のアミノ酸残基が異なる残基で置換されることによって生じさせることができ、例えば、エフェクター機能の変化（例えば、減少）は、抗体のエフェクターリガンド（例えば、ＦｃＲまたは補体Ｃ１ｑ）に対する親和性を変化させることによって生じさせることができる。

そのエフェクター機能を変更するために抗体のＦｃ領域におけるアミノ酸残基を置換するための方法は、当技術分野において公知である。抗体のＦｃ領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣ、食作用、ＣＤＣなどを媒介する。いくつかの場合において、これらのエフェクター機能は、治療用抗体のために必要であるが、他の場合において、これらのエフェクター機能は、意図される目的に応じて、不必要であるか、または有害でさえあることがある。

そのため、ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、減少したか、またはさらに排除されたエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性）を有する。そのような実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のバリアントを含んでいてもよく、ここで、それが由来する野生型配列と比較して、バリアントは、以下の置換：Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ（上記で言及されたアミノ酸位置は、ＥＵ番号付けシステムによる位置である）の少なくとも１つ、少なくとも２つまたは３つすべてを有する。例えば、ＡｃｔａＣｒｙｓｔ．（２００８年）．Ｄ６４、７００～７０４頁を参照されたい。

ある特定の例示的な実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト野生型ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。そのような実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性を有する。

そのような例示的な実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のバリアントを含み、ここで、それが由来する野生型配列と比較して、バリアントは、以下の置換：Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ（ＥＵ番号付けシステムによる位置）を有し、例えば、配列番号１５に示される重鎖定常領域である。そのような実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、排除されたまたは減少したＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を有する。

ある特定の好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の重鎖は、ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）のバリアントを含み、ここで、それが由来する野生型配列と比較して、バリアントは、本質的に変化していないエフェクター機能を有する。そのような実施形態において、バリアントは、最高で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最高で１５個、最高で１０個または最高で５個のアミノ酸の保存的置換；例えば、１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸の保存的置換）を有していてもよい。

ある特定の例示的な実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトκ軽鎖定常領域、例えば、配列番号１６に示される軽鎖定常領域を含む。
ある特定の例示的な実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１５に示される重鎖定常領域（ＣＨ）および／または配列番号１６に示される軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体である。ある特定の実施形態において、本発明の抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディおよびシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）からなる群から選択される。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、以下の特徴：
（ａ）膜結合性ヒトＣＤ７３もしくは可溶性ヒトＣＤ７３、またはその両方に結合する；例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３は、腫瘍細胞の表面上で発現される；
（ｂ）ＣＤ７３（例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３または可溶性ヒトＣＤ７３）の酵素活性を阻害するまたは低減する；例えば、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（ＣＴＧ）アッセイ（例えば、実施例６に記載される方法）によって決定されるように、例えば、アデノシンへのアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）のヒトＣＤ７３媒介変換を阻害するまたは低減する；
（ｃ）アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）の存在下で抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞）の増殖を増加させる；例えば、実施例８に記載される方法によって決定される；
（ｄ）抗体媒介性受容体内部移行によって、その表面上でＣＤ７３を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）へのＣＤ７３の内部移行を誘導する；例えば、ＦＡＣＳまたはフローサイトメトリー（例えば、実施例７の方法）によって測定されるように、少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、またはそれより高い）の内部移行レベルで；
（ｅ）約０．０１μｇ／ｍｌ未満、またはそれよりも低いＥＣ５０で可溶性ヒトＣＤ７３に結合する；ＥＣ５０は、ＥＬＩＳＡ技法によって決定される；
（ｆ）約０．５ｎＭ未満、またはそれよりも低いＫＤで可溶性ヒトＣＤ７３に結合する；ＫＤは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定される；
（ｇ）ＣＤ７３発現腫瘍細胞におけるアデノシンレベルを低減する；
（ｈ）免疫応答を刺激する；例えば、腫瘍（例えば、ＣＤ７３を発現する腫瘍）に対する免疫応答を刺激する；
（ｉ）腫瘍（例えば、ＣＤ７３発現腫瘍）を予防するおよび／または処置する
の１つまたは複数を持つ。

ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、１３Ｄ１２、またはその抗原結合性断片、そのキメラ抗体、もしくはそのヒト化抗体、あるいはその機能的バリアントであり、ここで、バリアントは、それが由来する抗体またはその抗原結合性断片の生物学的機能を実質的に保持する。

本発明において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、バリアントを含んでいてもよく、ここで、それが由来する本発明の抗体またはその抗原結合性断片と比較して、バリアントは、１個もしくは複数のアミノ酸残基の保存的置換（例えば、最高で２０個、最高で１５個、最高で１０個または最高で５個のアミノ酸の保存的置換）のみの相違を有するか、またはそれが由来する抗体またはその抗原結合性断片と比較して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％配列同一性を有し、それが由来する抗体またはその抗原結合性断片の上記で言及された生物学的機能を実質的に保持する。

抗体の調製
本発明の抗体は、当技術分野において公知のさまざまな方法によって、例えば、遺伝子操作組換え技法によって、調製することができる。例えば、本発明の抗体の重鎖および軽鎖遺伝子をコードするＤＮＡ分子は、化学合成またはＰＣＲ増幅によって得られる。得られるＤＮＡ分子は、発現ベクターに挿入され、次いで、宿主細胞にトランスフェクトされる。次いで、トランスフェクトされた宿主細胞は、特定の条件下で培養され、本発明の抗体を発現する。

本発明の抗原結合性断片は、インタクト抗体分子の加水分解によって得ることができる（Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２４巻：１０７～１１７頁（１９９２年）およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照されたい）。あるいは、これらの抗原結合性断片は、組換え宿主細胞に直接産生させることもできる（Ｈｕｄｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１巻：５４８～５５７頁（１９９９年）；Ｌｉｔｔｌｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、２１巻：３６４～３７０頁（２０００年）に概説されている）。例えば、Ｆａｂ’断片は、宿主細胞から直接得ることができ、Ｆａｂ’断片を、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）_２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：１６３～１６７頁（１９９２年））。加えて、Ｆｖ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）_２断片は、組換え宿主細胞培養培地から直接単離することもできる。これらの抗原結合性断片を調製するための他の技法は、当業者に周知である。

したがって、別の態様において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、あるいはその重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。ある特定の実施形態において、単離された核酸分子は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、あるいはその重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする。

ある特定の実施形態において、単離された核酸分子は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の重鎖可変領域をコードする第１のヌクレオチド配列、および／あるいは本発明の抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖可変領域をコードする第２のヌクレオチド配列を含む。

ある特定の実施形態において、第１のヌクレオチド配列は、（ａ）配列番号１１に示されるヌクレオチド配列、あるいは（ｂ）（ａ）に示されるヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ａ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれよりも高い配列同一性を有する配列、あるいは（ａ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、１個または複数のヌクレオチドの置換を有する配列）、あるいは（ｃ）（ａ）に示されるヌクレオチド配列と３、６、１５、３０または４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を含み、第２のヌクレオチド配列は、（ｄ）配列番号１２に示されるヌクレオチド配列、あるいは（ｅ）（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれよりも高い配列同一性を有する配列、あるいは（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、１個または複数のヌクレオチドの置換を有する配列）、あるいは（ｆ）（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と３、６、１５、３０または４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列からなる群から選択される配列を含む。

ある特定の実施形態において、第１のヌクレオチド配列は、（ａ）配列番号１３に示されるヌクレオチド配列、あるいは（ｂ）（ａ）に示されるヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ａ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれよりも高い配列同一性を有する配列、あるいは（ａ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、１個または複数のヌクレオチドの置換を有する配列）、あるいは（ｃ）（ａ）に示されるヌクレオチド配列と３、６、１５、３０または４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を含み、第２のヌクレオチド配列は、（ｄ）配列番号１４に示されるヌクレオチド配列、あるいは（ｅ）（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれよりも高い配列同一性を有する配列、あるいは（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と比較して、１個または複数のヌクレオチドの置換を有する配列）、あるいは（ｆ）（ｄ）に示されるヌクレオチド配列と３、６、１５、３０または４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列からなる群から選択される配列を含む。

ある特定の実施形態において、単離された核酸分子は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の重鎖をコードする第１のヌクレオチド配列、および／あるいは本発明の抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖をコードする第２のヌクレオチド配列を含む。

別の態様において、本発明は、本発明の単離された核酸分子を含むベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）を提供する。ある特定の実施形態において、本発明のベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ファージなどである。ある特定の実施形態において、ベクターは、対象（例えば、ヒト）において本発明の抗体またはその抗原結合性断片を発現することができる。

別の態様において、本発明は、本発明の単離された核酸分子または本発明のベクターを含む宿主細胞を提供する。そのような宿主細胞としては、限定されるものではないが、原核細胞、例えば、大腸菌細胞、ならびに真核細胞、例えば、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞および動物細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えば、マウス細胞、ヒト細胞など）が挙げられる。ある特定の実施形態において、本発明の宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－Ｓ、ＣＨＯＤＧ４４）である。

別の態様において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を調製するための方法であって、抗体またはその抗原結合性断片の発現を可能にする条件下で本発明の宿主細胞を培養すること、および培養された宿主の細胞培養物から抗体またはその抗原結合性断片を回収することを含む、方法が提供される。

誘導体化抗体
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、誘導体化することができ、例えば、別の分子（例えば、別のポリペプチドまたはタンパク質）に連結することができる。一般に、抗体またはその抗原結合性断片の誘導体化（例えば、標識化）は、ＣＤ７３へのその結合に有害に影響を及ぼさない。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、そのような誘導体化形態を含むことも意図される。例えば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数の他の分子部分、例えば、別の抗体（例えば、二重特異性抗体を形成するため）、検出試薬、医薬試薬および／あるいは別の分子への抗体または抗原結合性断片の結合を媒介することができるタンパク質またはポリペプチド（例えば、アビジンまたはポリヒスチジンタグ）に機能的に連結することができる（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的付着、またはその他によって）。加えて、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、化学基、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチルもしくはエチル、またはグリコシルを用いて誘導体化することもできる。これらの基を使用して、抗体の生物学的性質を改善する、例えば、血清半減期を増加させることができる。

したがって、ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、検出可能な標識、例えば、酵素、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンを有する。本発明の検出可能な標識は、蛍光、分光学的、光化学的、生化学的、免疫学的、電気的、光学的または化学的手段によって検出可能な任意の物質であり得る。そのような標識は、当技術分野において周知であり、その例としては、限定されるものではないが、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなど）、放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１２５Ｉ、^３５Ｓ、^１４Ｃまたは^３２Ｐ）、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ）、テキサスレッド、ローダミン、量子ドットまたはシアニン誘導体（例えば、Ｃｙ７、Ａｌｅｘａ７５０））、発光物質（例えば、化学発光物質、例えば、アクリジンエステル）、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））、熱量測定標識、例えば、コロイド金もしくはコロイドガラス、またはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）のビーズ、および前述の検出可能な標識で改変されたアビジンに結合するためのビオチン（例えば、ストレプトアビジンなど）が挙げられる。上記に記載される検出可能な標識は、当技術分野において公知の方法によって検出することができる。例えば、放射性標識は、写真用フィルムまたはシンチレーション計算機を使用して検出することができ、蛍光標識は、放射光を検出するための光検出器を使用して検出することができる。酵素標識は、一般に、基質を酵素に提供すること、および基質に対する酵素の作用によって生成した反応生成物を検出することによって検出され、熱量測定標識は、着色した標識を単に可視化することによって検出される。ある特定の実施形態において、そのような標識は、免疫学的検出（例えば、酵素結合免疫吸着測定法、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイなど）における使用のために好適であり得る。ある特定の実施形態において、上記に記載される検出可能な標識は、さまざまな長さのリンカーを介して本発明の抗体またはその抗原結合性断片に付着して、可能性のある立体障害を低減することができる。

二重特異性または多重特異性分子
本発明の抗体またはその抗原結合性断片を使用して、二重特異性または多重特異性分子を形成することができる。本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異性または多重特異性分子の一部であってもよく、二重特異性または多重特異性分子は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片と比較して、異なる結合特異性を有する第２の機能的モジュール（例えば、第２の抗体）を含み、それによって、少なくとも２つの異なる結合部位および／または標的分子に結合することができる。例えば、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、併用療法のための可能性のある標的として使用され得る任意のタンパク質に特異的に結合することができる第２の本発明の抗体またはその抗原結合性断片に連結することができる。そのような二重特異性または多重特異性分子を作成するために、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数の追加の結合性分子（例えば、追加の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合性ミメティック）に連結することができる（例えば、化学的コンジュゲーション、遺伝子融合、非共有結合的会合、またはその他によって）。

したがって、別の態様において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含む二重特異性または多重特異性分子を提供する。

ある特定の実施形態において、二重特異性または多重特異性分子は、ＣＤ７３（例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３および／または可溶性ヒトＣＤ７３）に特異的に結合し、１つまたは複数の追加の標的にさらに特異的に結合する。

ある特定の実施形態において、二重特異性または多重特異性分子は、第２の標的に対する第２の結合特異性を有する少なくとも１種の分子（例えば、第２の抗体）をさらに含む。

イムノコンジュゲート
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、治療剤に連結されて、イムノコンジュゲートを形成することができる。イムノコンジュゲートは、標的組織（例えば、腫瘍関連抗原、例えば、ＣＤ７３発現腫瘍）に１つまたは複数の治療剤を選択的に送達する能力を有し、イムノコンジュゲートは、疾患（例えば、がん）を処置するための本発明の抗体またはその抗原結合性断片の治療有効性を増強することができる。

したがって、別の態様において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、および抗体またはその抗原結合性断片に連結された治療剤を含むイムノコンジュゲートを提供する。

ある特定の実施形態において、イムノコンジュゲートは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。

ある特定の実施形態において、治療剤は、細胞傷害性剤である。本発明において、細胞傷害性剤としては、細胞に有害である（例えば、細胞を死滅させる）任意の薬剤が挙げられる。

ある特定の実施形態において、治療剤は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、およびその任意の組み合わせからなる群から選択される。

本発明のイムノコンジュゲートにおいて使用することができるアルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、ナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、シクロホスファミドなど）、エチレンイミン（例えば、チオテパなど）、サルフェートおよびポリオール（例えば、ブスルファン、ジブルモマンニトール）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、ロムスチンなど）、白金系抗腫瘍剤（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）などが挙げられる。

本発明のイムノコンジュゲートにおいて使用することができる有糸分裂阻害剤の例としては、限定されるものではないが、マイタンシノイド（例えば、マイタンシン、マイタンシノール、マイタンシノールのＣ－３エステルなど）、タキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセルまたはナノ粒子パクリタキセルなど）、ビンカアルカロイド（例えば、硫酸ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチンまたはビノレルビンなど）が挙げられる。

本発明のイムノコンジュゲートにおいて使用することができる抗腫瘍抗生物質の例としては、限定されるものではないが、アクチノマイシン、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシンなど）、カリケアマイシン、デュオカルマイシンなどが挙げられる。

本発明のイムノコンジュゲートにおいて使用することができる代謝拮抗剤の例としては、限定されるものではないが、葉酸アンタゴニスト（例えば、メトトレキサートなど）、ピリミジンアンタゴニスト（例えば、５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、カペシタビン、ゲムシタビンなど）、プリンアンタゴニスト（例えば、６－メルカプトプリン、６－チオグアニンなど）、アデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、クラドリビン、フルダラビン、ネララビン、ペントスタチンなど）が挙げられる。

本発明のイムノコンジュゲートにおいて使用することができるトポイソメラーゼ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、カンプトテシンおよびその誘導体（例えば、イリノテカン、トポテカンなど）、アムサクリン、ダウノマイシン、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エリプチシン、エピルビシン、エトポシド、ロゾキサン（ｒｏｚｏｘａｎｅ）、テニポシドなどが挙げられる。

本発明のイムノコンジュゲートにおいて使用することができるチロシンキナーゼ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマキシニブ、スニチニブ、バンデタニブなどが挙げられる。

本発明のイムノコンジュゲートにおいて使用することができる放射性核種剤の例としては、限定されるものではないが、Ｉ^１３１、Ｉｎ^１１１、Ｙ^９０、Ｌｕ^１７７などが挙げられる。

ある特定の例示的な実施形態において、治療剤は、白金系抗新生物剤、アントラサイクリン、タキサン化合物、ヌクレオシドアナログ、カンプトテシン化合物、およびそのアナログまたはホモログ、ならびにその任意の組み合わせからなる群から選択される。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、任意選択で、リンカーを介して治療剤にコンジュゲートされる。

本発明において、細胞傷害性剤は、当技術分野において利用可能なリンカー技術を使用して、本発明の抗体またはその抗原結合性断片にコンジュゲートすることができる。細胞傷害性剤を抗体にコンジュゲートするために使用されているリンカーの種類の例としては、限定されるものではないが、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィドおよびペプチド含有リンカーが挙げられる。リンカーは、例えば、リソソームコンパートメント内での低ｐＨによるまたはプロテアーゼ（例えば、腫瘍組織において優先的に発現されるプロテアーゼ、例えば、カテプシン、例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）による切断に感受性のものから選択することができる。

細胞傷害性剤の種類、リンカー、および治療剤を抗体にコンジュゲートする方法についてのさらなる議論は、Ｓａｉｔｏ、Ｇ．ら（２００３年）Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５巻：１９９～２１５頁；Ｔｒａｉｌ、Ｐ．Ａ．ら（２００３年）ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２巻：３２８～３３７頁；Ｐａｙｎｅ、Ｇ．（２００３年）ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ３巻：２０７～２１２頁；Ａｌｌｅｎ、Ｔ．Ｍ．（２００２年）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ２巻：７５０～７６３頁；Ｐａｓｔａｎ、Ｉ．およびＫｒｅｉｔｍａｎ、Ｒ．Ｊ．（２００２年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ３巻：１０８９～１０９１頁；Ｓｅｎｔｅｒ、Ｐ．Ｄ．およびＳｐｒｉｎｇｅｒ、Ｃ．Ｊ．（２００１年）Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３巻：２４７～２６４に見ることもできる。

治療的使用および医薬組成物
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ７３の１つまたは複数の生物学的活性をモジュレートする（例えば、増強する、刺激する、増加させる、阻害する、減少させるまたは中和する）ことができる。ある特定の例において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ７３の酵素活性の阻害または低減；アデノシンへのアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）の変換の阻害または低減；およびアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）の存在下で抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞）の増殖の増加の１つまたは複数をもたらす。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、単一薬物として使用して、ＣＤ７３の酵素活性を阻害するまたは低減することによって、腫瘍を予防および／または処置することができる。

加えて、ＣＤ７３を標的にすることで、他の抗がん薬との相乗効果を示し得ることが報告されている。トラスツズマブの活性を評価する前向き無作為化フェーズＩＩＩ臨床試験において、高レベルのＣＤ７３遺伝子発現は、臨床転帰不良に有意に関連し、ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２駆動乳がんの免疫適格性マウスモデルにおいて、腫瘍細胞および宿主細胞によるＣＤ７３発現は、抗ＥｒｂＢ２モノクローナル抗体によって媒介される免疫応答を著しく阻害する（ＭａｒｔｉｎＴら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ２０１７年；７７巻（２０号）；５６５２～６３頁）。加えて、インビトロ実験は、Ａ２Ａ受容体の活性化が、腫瘍浸潤性細胞傷害性Ｔ細胞におけるＰＤ－１の上方調節を調節することができる一方で、抗ＰＤ－１抗体によるＰＤ－１シグナル伝達の遮断が、腫瘍浸潤性細胞傷害性Ｔ細胞におけるＡ２Ａ受容体の発現を上方調節することを示した（ＣｅｋｉｃＣら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１４年；７４巻：７２３９～４９頁）。抗ＣＤ７３抗体は、さまざまなマウス腫瘍モデルにおいて、抗ＣＴＬＡ－４抗体および抗ＰＤ－１抗体の活性を著しく増強することが報告されており、単剤療法および併用療法は両方とも、宿主のインターフェロンγおよび細胞傷害性Ｔ細胞に依存し、腫瘍浸潤性Ｔ細胞に対する細胞外アデノシンの効果は、アデノシンの受容体活性化が、腫瘍特異的細胞傷害性Ｔ細胞およびヘルパーＴ細胞におけるＰＤ－１発現を増強することを示した（ＢｅｒｔｒａｎｄＡら、ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１３年；１９巻（２０号）：５６２６～５６３５頁）。臨床研究は、ＣＤ７３レベルの増加が、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１）で処置された黒色腫患者における疾患の進行と正に相関することを見出した。ＣＤ７３の動的上方調節と抗ＰＤ－１抗体に対する適応耐性との間の関係は、注目に値する（ＲｅｉｎｈａｒｄｔＪら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ２０１７年；７７巻：４６９７～４７０９頁）。別の研究は、高レベルの可溶性ＣＤ７３の酵素活性が、ニボルマブを受けている転移性黒色腫患者における不十分な全生存期間および無増悪生存期間と有意に関連したことを示した。多変量解析において、ＣＤ７３酵素活性は、全生存期間および無増悪生存期間についての最も強い予後因子として浮上し、ニボルマブの開始前のＣＤ７３酵素活性のより高い基礎レベルは、処置応答のより低い割合と関連した（ＳｉｌｖａｎａＭら、ＪＴｒａｎｓｌＭｅｄ２０１７年；１５巻：２４４頁）。それに応じて、ＣＤ７３およびＰＤ－Ｌ１の発現レベルが、非小細胞肺がんを有する患者からの腫瘍試料中で、互いに補完することも見出された。本発明の抗体またはその抗原結合性断片が、腫瘍の予防および処置のために、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍特異的抗体と組み合わせて使用することもできることが分かる。

したがって、別の態様において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、あるいはイムノコンジュゲート、ならびに薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。

ある特定の実施形態において、医薬組成物は、追加の薬学的に活性な薬剤をさらに含んでいてもよい。

ある特定の実施形態において、追加の薬学的に活性な薬剤は、抗腫瘍活性を有する薬物、例えば、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤（例えば、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、タキサン、シスプラチンなど）、抗血管新生剤、サイトカイン（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１など）、分子標的薬（例えば、リツキシマブなどのＣＤ２０抗体、トラスツズマブなどのＨｅｒ抗体、ベバシズマブなどのＶＥＧＦ抗体、セツキシマブなどのＥＧＦＲ抗体など）、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１抗体、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＴＬＡ－４抗体、ＬＡＧ－３抗体など）、腫瘍溶解性ウイルスなどである。

ある特定の実施形態において、追加の薬学的に活性な薬剤は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤）、抗ＣＤ３９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体または抗ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２抗体からなる群から選択される。

ある特定の実施形態において、医薬組成物において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、あるいはイムノコンジュゲート、および追加の薬学的に活性な薬剤は、単離された構成要素として、または混合物として提供される。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、あるいはイムノコンジュゲート、および追加の薬学的に活性な薬剤は、同時に、別々に、または連続して、投与することができる。

ある特定の例示的な実施形態において、医薬組成物は、無菌注射可能液体（例えば、水性または非水性の懸濁液または溶液）を含む。ある特定の例示的な実施形態において、そのような無菌注射可能液体は、注射用水（ＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば、０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌ）、デキストロース溶液（例えば、５％のデキストロース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％のポリソルベート２０）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）、リンゲル液、およびその任意の組み合わせからなる群から選択される。

別の態様において、本発明は、対象（例えば、ヒト）における腫瘍を予防および／または処置するための方法であって、有効量の本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、あるは医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。別の態様において、対象（例えば、ヒト）における腫瘍の予防および／または処置における、あるいは対象（例えば、ヒト）における腫瘍の予防および／もしくは処置のための医薬の製造における、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、あるいは医薬組成物の使用が提供される。

ある特定の実施形態において、腫瘍は、ＣＤ７３を発現する。ある特定の実施形態において、ＣＤ７３は、膜結合性ヒトＣＤ７３および／または可溶性ヒトＣＤ７３であり得る。

ある特定の実施形態において、腫瘍は、ＣＤ７３発現腫瘍細胞を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ７３は、腫瘍細胞の表面上で発現される。

ある特定の実施形態において、腫瘍は、黒色腫、結腸がん、肺がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がん、膀胱がん、神経膠腫、膠芽腫、甲状腺がん、食道がん、前立腺がんおよび乳がんからなる群から選択される。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、第２の治療剤または療法と組み合わせて投与される。第２の治療剤または療法は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の投与の前、それとともに、またはその後に投与することができる。

ある特定の実施形態において、第２の治療剤は、抗腫瘍活性を有する薬物、例えば、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスから選択される。

ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤）、抗ＣＤ３９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体または抗ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２抗体からなる群から選択される治療剤と組み合わせて投与される。

ある特定の例示的な実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１およびＡＭＰ－２２４からなる群から選択される。
ある特定の例示的な実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブおよびＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される。

ある特定の例示的な実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブまたはトレメリムマブから選択される。

ある特定の例示的な実施形態において、ＬＡＧ－３阻害剤は、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ－９８６０１６、ＴＳＲ－０３３、ＭＫ－４２８０およびＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択される。

ある特定の実施形態において、第２の療法は、腫瘍に対して使用されることが公知の任意の療法、例えば、外科手術、化学療法、放射線療法、標的療法、免疫療法、ホルモン療法、遺伝子療法または緩和ケアであってもよい。

別の態様において、本発明は、対象における免疫応答を刺激するための方法であって、有効量の本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、あるいは医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。別の態様において、対象における免疫応答の刺激における、または対象における免疫応答を刺激するための医薬の製造における、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、あるいは医薬組成物の使用が提供される。

ある特定の実施形態において、免疫応答は、Ｔ細胞媒介免疫応答である。

ある特定の実施形態において、免疫応答は、腫瘍（例えば、ＣＤ７３発現腫瘍）に対する免疫応答である。ある特定の実施形態において、対象は、腫瘍（例えば、ＣＤ７３発現腫瘍）を有する。

ある特定の実施形態において、免疫応答は、免疫原に対する免疫応答である。そのような実施形態において、方法は、免疫原を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、免疫原は、腫瘍関連抗原（例えば、タンパク質、ポリペプチドまたは炭水化物分子）、腫瘍細胞、抗原によって感作された樹状細胞、およびその任意の組み合わせから選択される。他の実施形態において、免疫原は、病原体（例えば、ウイルス）に関連する抗原（例えば、タンパク質、ポリペプチドまたは炭水化物分子）、不活性化または弱毒化病原体、抗原によって感作された樹状細胞、およびその任意の組み合わせから選択される。

別の態様において、本発明は、ＣＤ７３発現腫瘍細胞におけるアデノシンレベルを低減する方法であって、細胞を本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、あるいは医薬組成物と接触させることを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態において、方法は、非治療目的のために、インビトロでＣＤ７３発現腫瘍細胞におけるアデノシンレベルを低減するために使用される。別の態様において、ＣＤ７３発現腫瘍細胞におけるアデノシンレベルの低減における、またはＣＤ７３発現腫瘍細胞におけるアデノシンレベルを低減するための医薬の製造における、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、あるいは医薬組成物の使用が提供される。

本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物は、医学分野において公知の任意の剤形、例えば、錠剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ゲル剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、ロゼンジ、坐剤、注射剤（注射剤、注射用無菌粉末および注射用濃縮液剤を含む）、吸入剤、スプレー剤などに製剤化することができる。好ましい剤形は、意図される投与の様式および治療的使用に依存する。本発明の医薬組成物は、製造および保管の条件下で、無菌および安定でなければならない。好ましい剤形は、注射剤である。そのような注射可能調製物は、無菌注射可能溶液であり得る。無菌注射可能溶液は、例えば、必要な量の本発明の抗体を適切な溶媒に、任意選択で他の所望の成分（限定されるものではないが、ｐＨ調整剤、界面活性剤、アジュバント、イオン強度増強剤、等張剤、保存剤、希釈剤、またはその任意の組み合わせを含む）とともに組み込むこと、それに続いて濾過滅菌することによって調製することができる。加えて、無菌注射可能溶液は、保管および使用の容易さのために、無菌凍結乾燥粉末として調製することができる（例えば、真空乾燥または凍結乾燥によって）。そのような凍結乾燥粉末は、好適なビヒクル、例えば、注射用水（ＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば、０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌ）、デキストロース溶液（例えば、５％のデキストロース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％のポリソルベート２０）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）、リンゲル液、およびその任意の組み合わせに分散させることができる。

さらにまた、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物は、投与の容易さのために、単位剤形の医薬組成物中に存在していてもよい。

本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物は、限定されるものではないが、経口、頬側、舌下、眼、局所、非経口、直腸、髄腔内、細胞質内網状組織、鼠径部、嚢内、局所（例えば、粉末、軟膏または滴剤）、または経鼻経路を含む当技術分野において公知の任意の好適な方法によって投与することができる。しかしながら、多くの治療的使用のために、投与の好ましい経路／様式は、非経口（例えば、静脈内またはボーラス注射、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射）である。当業者は、投与の経路／様式が、意図される目的に応じて変わることを理解するであろう。好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物は、静脈内注射またはボーラス注射によって投与される。

本発明の医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の本発明の抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性または多重特異性分子、イムノコンジュゲート、医薬組成物を含んでいてもよい。「予防有効量」は、疾患の開始を防止する、停止する、または遅延させるのに十分な量を指す。「治療有効量」は、疾患を既に患っている患者において、疾患およびその合併症を治癒する、または少なくとも部分的に抑止するのに十分な量を指す。本発明の抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量は、とりわけ、以下の要因：処置される疾患の重症度、患者自身の免疫系の一般的状態、年齢、体重および性別などの患者の一般的状態、薬物の投与の様式、ならびにともに投与される追加の療法に従って変わり得る。

本発明において、投薬レジメンは、興味のある最適な応答（例えば、治療的または予防的応答）を得るために調整することができる。例えば、単一用量が投与されてもよく、複数用量が所定期間にわたって投与されてもよく、あるいは用量は、治療状況の要件に従って比例的に低減または増加されてもよい。

本発明において、対象は、哺乳動物、例えば、ヒトであり得る。

検出使用およびキット
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ７３に特異的に結合することができ、したがって、試料中のＣＤ７３の存在またはレベルを検出するために使用することができる。

したがって、別の態様において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、検出可能な標識を有する。他の実施形態において、キットは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を特異的に認識する第２の抗体をさらに含む。好ましくは、第２の抗体は、検出可能な標識をさらに含む。

ある特定の実施形態において、検出可能な標識は、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンからなる群から選択される。

別の態様において、本発明は、試料中のＣＤ７３の存在または量を検出するための方法であって、
（１）試料を、本発明の抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップ；
（２）抗体またはその抗原結合性断片とＣＤ７３との間の複合体の形成を検出するステップ、あるいは複合体の量を検出するステップ
を含む、
方法を提供する。

複合体の形成は、ＣＤ７３またはＣＤ７３を発現する細胞の存在を示す。

ある特定の実施形態において、試料は、細胞試料、すなわち、細胞（例えば、腫瘍細胞）を含む試料である。そのような実施形態において、好ましくは、複合体は、抗体またはその抗原結合性断片と試料中の細胞によって発現されるＣＤ７３との間で形成される。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、検出可能な標識をさらに有していてもよい。他の実施形態において、ステップ（２）において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、検出可能な標識を有する試薬を使用して検出される。

方法は、診断目的のため、または非診断目的のため（例えば、試料は、患者からの試料よりもむしろ細胞試料である）に使用され得る。ある特定の実施形態において、ＣＤ７３は、ヒトＣＤ７３、例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３および／または可溶性ヒトＣＤ７３である。

別の態様において、試料中のＣＤ７３の存在または量を決定するための、あるいは試料中のＣＤ７３の存在または量を決定するためのキットの製造における、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の使用が提供される。ある特定の実施形態において、ＣＤ７３は、ヒトＣＤ７３、例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３および／または可溶性ヒトＣＤ７３である。

用語の定義
本発明において、他に規定されない限り、本明細書において使用される科学技術用語は、当業者によって通常理解される意味を有する。加えて、本明細書において使用される細胞培養、生化学、核酸化学、免疫学の実験などの手順はすべて、対応する分野において広く使用されるルーチン的なステップである。その一方で、本発明をより良好に理解するために、関連用語の定義および説明を下記に提供する。

本明細書において使用される場合、「表面抗原分類７３」または「ＣＤ７３」という用語は、細胞外－５’－ヌクレオチダーゼも指し、これは、細胞外５’一リン酸ヌクレオシドをヌクレオシドに変換することができる、すなわち、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）は、アデノシンに変換される。ＣＤ７３という用語は、膜結合性形態（膜結合性ＣＤ７３としても公知）または可溶性形態（可溶性ＣＤ７３または非膜結合性ＣＤ７３としても公知）を含む。ＣＤ７３は、それらが天然に発現される細胞または組織から単離することができ、あるいは当技術分野において周知の技法を使用して組換え的に産生することができる。ＣＤ７３の配列は、当技術分野において周知であり、ＮＣＢＩデータベース受入番号ＮＭ＿００２５２６において見出すことができる。

本明細書において使用される場合、「抗体」という用語は、一般に、ポリペプチド鎖の２つの対（それぞれの対は、１つの軽鎖（ＬＣ）および１つの重鎖（ＨＣ）を有する）から構成される免疫グロブリン分子を指す。抗体軽鎖は、κ（カッパ）およびλ（ラムダ）軽鎖として分類することができる。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεとして分類することができ、抗体のアイソタイプは、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして定義することができる。軽鎖および重鎖において、可変領域および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖は、約３個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含有する。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）からなる。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、各種のエフェクター機能を示し、例えば、免疫系のさまざまな細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１構成要素（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介する。ＶＨおよびＶＬ領域は、高多様性の領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる）に細分化することもでき、これは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域で分散される。それぞれのＶ_ＨおよびＶ_Ｌは、以下の順序で配列した３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる：アミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。それぞれの重鎖／軽鎖対の可変領域（ＶＨおよびＶＬ）は、それぞれ、抗原結合部位を形成する。領域またはドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年および１９９１年））、またはＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１～９１７頁；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ３４２巻：８７８～８８３頁による定義に従い得る。

本明細書において使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗原結合の原因となる抗体の可変領域中のアミノ酸残基を指す。重鎖および軽鎖の可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と指定される３つのＣＤＲをそれぞれ含有する。これらのＣＤＲの正確な境界は、当技術分野において公知のさまざまな番号付けシステムに従って、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、公衆衛生局、国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１年）、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステム（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１～９１７頁；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ３４２巻：８７８～８８３頁）、またはＩＭＧＴ番号付けシステム（Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７巻：５５～７７頁、２００３年）に従って、定義することができる。所与の抗体について、当業者は、それぞれの番号付けシステムによって定義されるＣＤＲを容易に特定するであろう。また、異なる番号付けシステム間の対応は、当業者に周知である（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７巻：５５～７７頁、２００３年を参照されたい）。

本発明において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片に含有されるＣＤＲは、当技術分野において公知のさまざまな番号付けシステムに従って決定することができる。ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片に含有されるＣＤＲは、好ましくは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴ番号付けシステムによって決定される。ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片に含有されるＣＤＲは、好ましくは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって決定される。

本明細書において使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基という用語は、上記に定義されるＣＤＲ残基以外の抗体の可変領域中のアミノ酸残基を指す。

「抗体」という用語は、抗体を生成する任意の特定の方法に限定されない。例えば、これは、組換え抗体、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む。抗体は、異なるアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡｌ、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体のものであり得る。

本明細書において使用される場合、抗体の「抗原結合性断片」という用語は、全長抗体が結合する同じ抗原に特異的に結合する能力を保持し、および／または抗原に特異的に結合する全長抗体と競合する、全長抗体の断片を含むポリペプチドを指し、これは、「抗原結合性部分」とも称される。一般に、ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）を参照されたく、これは、すべての目的のために、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。抗体の抗原結合性断片は、組換えＤＮＡ技法によって、またはインタクト抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作成することができる。抗原結合性断片の非限定的な例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、キメラ抗体、線状抗体、ナノボディ（Ｄｏｍａｎｔｉｓからの技術）、およびポリペプチドに特異的抗原結合能力を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部分を含むポリペプチドが挙げられる。操作された抗体バリアントは、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、２００５年；ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２３巻：１１２６～１１３６頁に概説されている。

本明細書において使用される場合、「全長抗体」という用語は、２つの「全長重鎖」および２つの「全長軽鎖」からなる抗体を指す。ここで、「全長重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、重鎖可変領域（ＶＨ）、重鎖定常領域のＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域（ＨＲ）、重鎖定常領域のＣＨ２ドメイン、重鎖定常領域のＣＨ３ドメインからなり；および任意選択で、ＩｇＥアイソタイプの場合において、重鎖定常領域のＣＨ４ドメインをさらに含む、ポリペプチド鎖を指す。好ましくは、「全長重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＶＨ、ＣＨ１、ＨＲ、ＣＨ２およびＣＨ３からなるポリペプチド鎖である。「全長軽鎖」は、Ｎ末端からＣ末端の方向に、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなるポリペプチド鎖である。全長抗体鎖の２つの対は、ＣＬとＣＨ１との間のジスルフィド結合、および２つの全長重鎖のＨＲ間のジスルフィド結合によって一緒に連結される。本発明の全長抗体は、ヒトなどの単一種由来であり得、これはまた、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。本発明の全長抗体は、それぞれ、ＶＨおよびＶＬ対によって形成される２つの抗原結合部位を含み、これは、同じ抗原を特異的に認識／結合する。

本明細書において使用される場合、「Ｆｄ」という用語は、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる抗体断片を指し、「ｄＡｂ断片」という用語は、ＶＨドメインからなる抗体断片を指し（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ３４１巻：５４４～５４６頁（１９８９年））、「Ｆａｂ断片」という用語は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる抗体断片を指し、「Ｆ（ａｂ’）_２断片」という用語は、ヒンジ領域上のジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む抗体断片を指し、「Ｆａｂ’断片」という用語は、Ｆ（ａｂ’）_２断片中の２つの重鎖断片を連結するジスルフィド結合を還元することによって得られ、インタクト軽鎖および重鎖Ｆｄ断片（ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる）からなる断片を指す。

本明細書において使用される場合、「Ｆｖ」という用語は、抗体の１つのアームのＶＬおよびＶＨドメインからなる抗体断片を指す。Ｆｖ断片は、一般に、インタクト抗原結合部位を形成することができる最も小さな抗体断片であると考えられる。一般に、６つのＣＤＲが、抗体に抗原結合特異性を付与すると考えられる。しかしながら、さらに、可変領域（例えば、Ｆｄ断片、これは、３つの抗原特異的ＣＤＲのみを含有する）は、インタクト結合部位よりも多分低い親和性であるが、抗原を認識し、結合することができる。

本明細書において使用される場合、「Ｆｃ」という用語は、第１の重鎖の第２および第３の定常領域が、ジスルフィド結合を介して、第２の重鎖の第２および第３の定常領域に結合されることによって形成される抗体断片を指す。抗体のＦｃ断片は、多くの異なる機能を有するが、抗原結合に関与しない。

本明細書において使用される場合、「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶＬおよびＶＨドメインを含む単一ポリペプチド鎖を指し、ここで、ＶＬおよびＶＨは、リンカーによって連結されている（例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２巻：４２３～４２６頁（１９８８年）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５巻：５８７９～５８８３頁（１９８８年）；およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、ＮｅｗＹｏｒｋ、２６９～３１５頁（１９９４年）を参照されたい）。そのようなｓｃＦｖ分子は、一般構造：ＮＨ_２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨまたはＮＨ_２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨを有し得る。従来技術における好適なリンカーは、反復ＧＧＧＧＳアミノ酸配列またはそのバリアントからなる。例えば、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）_４を有するリンカーおよびそのバリアント（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０巻：６４４４～６４４８頁）を使用することができる。本発明において有用な他のリンカーは、Ａｌｆｔｈａｎら（１９９５年）、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．８巻：７２５～７３１頁、Ｃｈｏｉら（２００１年）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１巻：９４～１０６頁、Ｈｕら（１９９６年）、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５６巻：３０５５～３０６１頁、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９９年）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３巻：４１～５６頁およびＲｏｏｖｅｒｓら（２００１年）、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．によって記載されている。いくつかの場合において、ジスルフィド結合はまた、ｓｃＦｖのＶＨとＶＬとの間に存在していてもよい。

本明細書において使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、そのＶＨおよびＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上で発現されるが、使用されるリンカーが、同じ鎖の２つのドメイン間で対形成を可能にするには短すぎ、これが、ドメインに他の鎖の相補的なドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を作出するものを指す（例えば、ＨｏｌｌｉｇｅｒＰ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０巻：６４４４～６４４８頁（１９９３年）、およびＰｏｌｊａｋＲ．Ｊ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２巻：１１２１～１１２３頁（１９９４年）を参照されたい）。

本明細書において使用される場合、「シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）」という用語は、当業者によって通常理解される意味を有し、これは、全長抗体が結合する同じ抗原に特異的に結合する能力を保持する単一の単量体可変抗体ドメイン（例えば、単一重鎖可変領域）から構成される抗体断片を指す。シングルドメイン抗体は、ナノボディとしても公知である。

前述の抗体断片のそれぞれは、全長抗体が結合する同じ抗原に特異的に結合する能力、および／または抗原に特異的に結合する全長抗体と競合する能力を保持する。
抗体の抗原結合性断片（例えば、上記に記載される抗体断片）は、当業者に公知の従来の技法（例えば、組換えＤＮＡ技法、または酵素的もしくは化学的断片化方法）を使用して所与の抗体（例えば、本明細書に提供される抗体）から得ることができ、抗体の抗原結合性断片は、インタクト抗体について使用されるのと同じ様式で特異性がスクリーニングされる。

ここで、文脈が明確に他を示さない限り、「抗体」という用語が言及される場合、これは、インタクト抗体だけでなく、抗体の抗原結合性断片も含む。

本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」、「ＭｃＡｂ」、「ｍＡｂ」という用語は、同じ意味を有し、互換的に使用され、自発的に生じ得る天然の突然変異を除いて、高度に相同な抗体分子の集団、すなわち、同一の抗体分子の集団からの１つの抗体または抗体の１つの断片を指す。モノクローナル抗体は、抗原上の単一エピトープに非常に特異的である。ポリクローナル抗体は、モノクローナル抗体と比べて、一般に、抗原上の異なるエピトープを一般に認識する少なくとも２つ以上の異なる抗体を含む。さらにまた、「モノクローナル」という修飾語句は、抗体が高度に相同な抗体の集団から得られるとして特徴付けられることのみを示し、抗体を調製するために任意の特定の方法を必要とするとして解釈されるべきではない。

本発明のモノクローナル抗体は、各種の技法、例えば、ハイブリドーマ技術（例えば、ＫｏｈｌｅｒらＮａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁、１９７５年を参照されたい）、組換えＤＮＡ技術（例えば、米国特許出願第４，８１６，５６７号を参照されたい）、またはバクテリオファージ抗体ライブラリー技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３５２巻：６２４～６２８頁、１９９１年、またはＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２巻：５８１～５９７頁、１９９１年を参照されたい）によって調製することができる。

抗体は、周知の技法、例えば、プロテインＡまたはプロテインＧを使用するアフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。その後、または代わりに、特異的抗体（抗体によって認識される標的分子）またはそのエピトープを、カラムに固定化することができ、免疫特異的抗体を、免疫アフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。免疫グロブリンの精製のために、これは、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ、ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．、ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａＰａ．によって発行、１４巻、８号（２０００年４月１７日）、２５～２８頁）を指していてもよい。

本明細書において使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、その軽鎖または／および重鎖の一部分が抗体（特定の種に由来し得るか、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属し得る）に由来し、軽鎖または／および重鎖の別の部分が、別の抗体（同じもしくは異なる種に由来し得るか、または同じもしくは異なる抗体のクラスもしくはサブクラスに属し得る）に由来するが、標的抗原への結合活性を依然として保持している、抗体を指す（Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１巻：６８５１～６８５５頁（１９８４年））。ある特定の実施形態において、「キメラ抗体」という用語は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域が第１の抗体（例えば、マウス抗体）に由来し、抗体の重鎖および軽鎖定常領域が第２の抗体（例えば、ヒト抗体）に由来するそのような抗体（例えば、ヒト－マウスキメラ抗体）を含み得る。

本明細書において使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、一般に、アミノ酸配列が、ヒト抗体の配列に対する相同性を増加させるように改変されている操作された非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体のＣＤＲ領域のすべてまたは一部は、非ヒト抗体（ドナー抗体）に由来し、非ＣＤＲ領域（例えば、可変ＦＲおよび／または定常領域）のすべてまたは一部は、ヒト免疫グロブリン（レセプター抗体）に由来する。典型的には、ヒト化抗体の、通常は３つすべてであるが、少なくとも１つまたは２つのレセプターＣＤＲ（重および／または軽免疫グロブリン鎖のもの）は、ドナーＣＤＲによって置き換えられる。ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンは、「レセプター」と呼ばれる。１つの実施形態において、ドナー免疫グロブリンは、非ヒト（例えば、マウス）抗体であり、レセプターフレームワークは、天然に存在するヒトフレームワーク配列であり得るか、あるいはそれと比較して約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれよりも高い配列同一性を有し得る。ヒト化抗体は、一般に、限定されるものではないが、抗原特異性、親和性、反応性などを含むドナー抗体の予想される性質を保持する。ドナー抗体は、予想される性質（例えば、抗原特異性、親和性、反応性など）を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）の抗体であり得る。

本出願において、本発明の抗体の予想される性質としては、以下が挙げられる：（１）ＣＤ７３（例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３または可溶性ヒトＣＤ７３）に特異的に結合する；（２）ＣＤ７３（例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３または可溶性ヒトＣＤ７３）の酵素活性を阻害するまたは低減する；（３）アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）の存在下で抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞）の増殖を増加させる；（４）ＣＤ７３内部移行を媒介する；（５）ＣＤ７３発現腫瘍細胞におけるアデノシンレベルを低減させる；（６）免疫応答（例えば、腫瘍または免疫原に対する免疫応答）を刺激する；（７）腫瘍（例えば、ＣＤ７３発現腫瘍）を予防するおよび／または処置する。本発明の抗体は、上記に記載される予想される性質の１つまたは複数を持つ。

本発明のキメラ抗体またはヒト化抗体は、上記で調製されるマウスモノクローナル抗体の配列に従って調製することができる。重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡは、標的マウスハイブリドーマから得ることができ、標準的な分子生物学技法を使用して、非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含有するように操作することができる。

キメラ抗体を調製するために、マウス免疫グロブリン可変領域を、当技術分野において公知の方法を使用して、ヒト免疫グロブリン定常領域に連結することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。例えば、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結させて、全長重鎖遺伝子が得られる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野において公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ公開番号９１－３２４２を参照されたい）、これらの領域を含有するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域であってもよいが、一般に、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域が好ましい。例えば、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結させて、全長軽鎖遺伝子（およびＦａｂ軽鎖遺伝子）が得られる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野において公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ公開番号９１－３２４２を参照されたい）、これらの領域を含有するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、κまたはλ定常領域であってもよいが、一般に、κ定常領域が好ましい。

ヒト化抗体を調製するために、マウスＣＤＲ領域を、当技術分野において公知の方法（Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号；Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号；ならびにＬｏ、Ｂｅｎｎｙ、Ｋ．Ｃ．編、ｉｎＡｎｔｉｂｏｄｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：ＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏｃｏｌｓ、２４８巻、ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ、２００４年を参照されたい）を使用して、ヒトフレームワーク配列に挿入することができる。あるいは、免疫後に内因性免疫グロブリンを産生しない完全ヒト抗体レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物を利用することもできる。例えば、内因性抗体の産生は、キメラおよび生殖細胞系列突然変異マウスにおける抗体の重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失によって完全に抑制され得、次いで、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイを、生殖細胞系列突然変異マウスに移入することができ、これが、マウスが抗原刺激の際にヒト抗体を産生し得るのをもたらし得ることが報告されている（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０巻：２５５１頁；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ３６２巻：２５５～２５８頁；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、１９９３年、ＹｅａｒｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ７巻：３３頁；およびＤｕｃｈｏｓａｌら、１９９２年、Ｎａｔｕｒｅ３５５巻：２５８頁を参照されたい）。そのようなトランスジェニック動物の非限定的な例としては、再配列されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列、ならびに追加して内因性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化突然変異をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含有するＨｕＭＡｂマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４年）、Ｎａｔｕｒｅ３６８巻（６４７４号）：８５６～８５９頁を参照されたい）；またはヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖トランス染色体を持つ「ＫＭマウス（商標）」（特許出願ＷＯ０２／４３４７８号を参照されたい）が挙げられる。抗体のヒト化の他の方法としては、ファージディスプレイ技術（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、１９９１年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７巻：３８１頁；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９１年、２２２巻：５８１～５９７頁；Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６年、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ１４巻：３０９頁）も挙げられる。

本明細書において使用される場合、「生殖細胞系列抗体遺伝子」または「生殖細胞系列抗体遺伝子セグメント」という用語は、遺伝子再配列をもたらす成熟プロセスおよび特異的な免疫グロブリンの発現をもたらす突然変異を受けていない生物のゲノム中に存在する免疫グロブリンをコードする配列を指す。本発明において、「重鎖生殖細胞系列遺伝子」という表現は、Ｖ遺伝子（可変）、Ｄ遺伝子（多様）、およびＪ遺伝子（結合）、およびＣ遺伝子（定常）を含む免疫グロブリン重鎖をコードする生殖細胞系列抗体遺伝子または遺伝子断片を指し、同様に、「軽鎖生殖細胞系列遺伝子」という表現は、Ｖ遺伝子（可変）、Ｊ遺伝子（結合）およびＣ遺伝子（定常）を含む免疫グロブリン軽鎖をコードする生殖細胞系列抗体遺伝子または遺伝子断片を指す。本発明において、生殖細胞系列抗体遺伝子または生殖細胞系列抗体遺伝子断片によってコードされるアミノ酸配列は、「生殖細胞系列配列」とも称され、重鎖生殖細胞系列遺伝子によってコードされるアミノ酸配列は、重鎖生殖細胞系列配列と称され、軽鎖生殖細胞系列遺伝子によってコードされるアミノ酸配列は、軽鎖生殖細胞系列配列と称される。生殖細胞系列抗体遺伝子または生殖細胞系列抗体遺伝子断片、およびそれらの対応する生殖細胞系列配列は、当業者に周知であり、専門データベース（例えば、ＩＭＧＴ、ＵＮＳＷＩｇ、ＮＣＢＩまたはＶＢＡＳＥ２）から得ることができるか、または問い合わせることができる。

本明細書において使用される場合、「特異的結合」という用語は、２つの分子間、例えば、抗体とそれに対する抗原との間の無作為ではない結合反応を指す。特異的結合相互作用の強さまたは親和性は、その相互作用についての平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）の用語で表すことができる。本発明において、「Ｋ_Ｄ」という用語は、特異的抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を指し、これは、抗体と抗原との間の結合親和性を記載するために使用される。平衡解離定数が小さくなると、抗体－抗原結合がきつくなり、抗体と抗原のとの間の親和性が高くなる。ある特定の実施形態において、抗原に特異的に結合する抗体（または抗原に特異的な抗体）は、約１０^－９Ｍ未満、例えば、約１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍまたは１０^－１２Ｍ未満、またはそれよりも低い親和性（Ｋ_Ｄ）で抗原に結合する抗体を指す。２つの分子間の特異的結合性質は、当技術分野において周知の方法を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法によって、ＢＩＡＣＯＲＥ装置を使用して、決定することができる。

本明細書において使用される場合、「細胞傷害性剤」という用語は、細胞に有害である（例えば、死滅させる）任意の薬剤を含み、その例としては、化学療法薬、細菌毒素、植物毒素、または放射性同位元素などが挙げられる。

本明細書において使用される場合、「ベクター」という用語は、ポリヌクレオチドが挿入され得る核酸送達ビヒクルを指す。ベクターが、挿入されたポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を発現することができる場合、ベクターは、発現ベクターと呼ばれる。ベクターは、それによって運ばれる遺伝子材料エレメントが宿主細胞において発現され得るように、形質転換、形質導入またはトランスフェクションによって宿主細胞に導入することができる。ベクターは、当業者に周知であり、限定されるものではないが、プラスミド；ファージミド；コスミド；人工染色体、例えば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）；ファージ、例えば、λファージまたはＭ１３ファージ、および動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用することができる動物ウイルスとしては、限定されるものではないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。ベクターは、限定されるものではないが、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択エレメントおよびレポーター遺伝子を含む、発現を制御する各種のエレメントを含有していてもよい。加えて、ベクターはまた、複製開始部位を含有していてもよい。

本明細書において使用される場合、「宿主細胞」という用語は、限定されるものではないが、原核細胞、例えば、大腸菌もしくは枯草菌、真菌細胞、例えば、酵母細胞もしくはアスペルギルス属など、昆虫細胞、例えば、Ｓ２ショウジョウバエ細胞もしくはＳｆ９、または動物細胞、例えば、線維芽細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞もしくはヒト細胞を含む、ベクターが導入され得る細胞を指す。

本明細書において使用される場合、「同一性」という用語は、２つのポリペプチド間または２つの核酸間の一致度を指す。比較のための２つの配列が、ある特定の部位に塩基またはアミノ酸の同じ単量体サブユニットを有する（例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれが、ある特定の部位にアデニンを有する、または２つのポリペプチドのそれぞれが、ある特定の部位にリジンを有する）場合、２つの分子は、その部位で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、比較のための部位の総数に対する２つの配列によって共有される同一の部位の数×１００の関数である。例えば、２つの配列の１０の部位のうちの６つが一致する場合、これらの２つの配列は、６０％の同一性を有する。例えば、ＤＮＡ配列：ＣＴＧＡＣＴおよびＣＡＧＧＴＴは、５０％の同一性を共有する（６つの部位のうち３つが一致する）。一般に、２つの配列の比較は、最大同一性を生じる様式で実行される。そのようなアライメントは、コンピュータープログラム、例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８巻：４４３～４５３頁、１９７０年）の方法に基づくＡｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）を使用することによって実行することができる。２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０加重残基テーブル、１２のギャップ長さペナルティおよび４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４巻：１１～１７頁（１９８８年））のアルゴリズムを使用して決定することもできる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性のパーセンテージは、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ加重および１、２、３、４、５または６の長さ加重を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）におけるＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８巻：４４４～４５３頁（１９７０年））のアルゴリズムによって決定することができる。

本明細書において使用される場合、「保存的置換」という用語は、アミノ酸配列を含むタンパク質／ポリペプチドの意図される性質に有害な影響を及ぼさないまたは変更しないアミノ酸置換を指す。例えば、保存的置換は、当技術分野において公知の標準的な技法、例えば、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発によって導入することができる。保存的アミノ酸置換には、類似の側鎖を有するアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換、例えば、物理的にまたは機能的に類似である残基による対応するアミノ酸残基（例えば、類似のサイズ、形状、電荷、化学的性質を有する、共有結合または水素結合を形成する能力を含むなど）への置換を含む。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニンおよびヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するものが挙げられる。したがって、対応するアミノ酸を、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えることが好ましい。アミノ酸の保存的置換を特定するための方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２巻：１１８０～１１８７頁（１９９３年）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１２巻（１０号）：８７９～８８４頁（１９９９年）およびＢｕｒｋｓら、Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．ＳｅｔＵＳＡ９４巻：４１２～４１７頁（１９９７年）を参照されたく、これらは、参照により本明細書に組み込まれる）。

本明細書において言及される２０の通常のアミノ酸は、通常の使用法に従って記載される。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－ＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、ＳｉｎａｕｅｒＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１年））を参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる。本発明において、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、同じ意味を有し、互換的に使用される。また、本発明において、アミノ酸は、一般に、当技術分野において周知の一文字および三文字の略語によって表される。例えば、アラニンは、ＡまたはＡｌａによって表すことができる。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体および／または賦形剤」という用語は、対象および活性成分と薬理学的および／または生理学的に適合する担体および／または賦形剤を指す。これは、当技術分野において周知であり（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ．ＧｅｎｎａｒｏＡＲ編、第１９版、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、１９９５年を参照されたい）、限定されるものではないが、ｐＨ調整剤、界面活性剤、アジュバント、イオン強度増強剤、希釈剤、浸透圧を維持するための薬剤、吸収を遅延させるための薬剤、保存剤が挙げられる。例えば、ｐＨ調整剤としては、限定されるものではないが、リン酸緩衝液が挙げられる。界面活性剤としては、限定されるものではないが、カチオン性、アニオン性または非イオン性の界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ－８０が挙げられる。イオン強度増強剤としては、限定されるものではないが、塩化ナトリウムが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、さまざまな抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、クロレトン、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。浸透圧を維持するための薬剤としては、限定されるものではないが、糖、ＮａＣｌなどが挙げられる。吸収を遅延させるための薬剤としては、限定されるものではないが、モノステアリン酸塩およびゼラチンが挙げられる。希釈剤としては、限定されるものではないが、水、水性緩衝液（例えば、緩衝生理食塩水）、アルコールおよびポリオール（例えば、グリセロール）などが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、さまざまな抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、チメロサール、２－フェノキシエタノール、パラベン、クロレトン、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。安定剤は、当業者によって通常理解される意味を有し、これは、薬物中の活性成分の所望の活性を安定化させることができ、限定されるものではないが、グルタミン酸ナトリウム、ゼラチン、ＳＰＧＡ、サッカリド（例えば、ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、ラクトース、グルカンまたはグルコース）、アミノ酸（例えば、グルタミン酸、グリシン）、タンパク質（例えば、乾燥ホエー、アルブミンまたはカゼイン）、またはその分解生成物（例えば、ラクトアルブミン加水分解物）などが挙げられる。ある特定の例示的な実施形態において、薬学的に許容される担体または賦形剤としては、無菌注射可能液体（例えば、水性または非水性の懸濁液または溶液）が挙げられる。ある特定の例示的な実施形態において、そのような無菌注射可能液体は、注射用水（ＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、塩化ナトリウム溶液（例えば、０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌ）、デキストロース溶液（例えば、５％のデキストロース）、界面活性剤含有溶液（例えば、０．０１％のポリソルベート２０）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）、リンゲル液、およびその任意の組み合わせからなる群から選択される。

本明細書において使用される場合、「予防」という用語は、対象における疾患または障害または症状（例えば、腫瘍）の出現を予防するまたは遅延させるために行われる方法を指す。本明細書において使用される場合、「処置」という用語は、有利なまたは所望の臨床転帰を得るために行われる方法を指す。本発明の目的のために、有利なまたは所望の臨床転帰としては、限定されるものではないが、検出可能または検出不能にかかわらず、症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患状態の安定化（すなわち、悪化させない）、疾患の進行を遅延させるまたは遅らせる、疾患状態の回復または寛解、および症状の緩和（部分的にまたは全体的に）が挙げられる。加えて、「処置」は、処置を受けていない場合に予想される生存と比較して、生存を延長させることも意味し得る。

本明細書において使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒトを指す。ある特定の実施形態において、対象（例えば、ヒト）は、腫瘍（例えば、ＣＤ７３発現腫瘍）を有するか、または前述の疾患についてのリスクがある。

本明細書において使用される場合、「有効量」という用語は、所望の効果を得るまたは少なくとも部分的に得るのに十分な量を指す。例えば、疾患（例えば、腫瘍）を予防するための有効量は、疾患（例えば、腫瘍）の開始を防止する、抑止するまたは遅延させるのに十分な量を指し、疾患を処置するための有効量は、疾患を有する患者における疾患およびその合併症を治癒するまたは少なくとも部分的に防止するのに十分な量を指す。そのような有効量を決定することは、十分に当業者の能力内である。例えば、治療的使用のための有効量は、処置される疾患の重症度、患者自身の免疫系の一般的状態、年齢、体重および性別などの患者の一般的状態、薬物の投与の様式、ならびに他のともに投与される処置などに依存する。

本明細書において使用される場合、「抗体媒介内部移行」という用語は、抗体が、細胞表面抗原に結合した後に細胞膜を通過する現象を指す。内部移行は、受容体（例えば、ＣＤ７３）の抗体媒介内部移行を含む。

本明細書において使用される場合、「免疫応答」という用語は、免疫細胞（例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞または顆粒球）、および免疫細胞または肝臓によって産生される可溶性高分子（抗体、サイトカインおよび補体などを含む）の作用を指し、これは、侵襲性病原体、病原体感染細胞もしくは組織、がん細胞、または自己免疫性もしくは病原体性炎症状態にある正常なヒト細胞もしくは組織の選択的な損傷、破壊もしくはクリアランスをもたらす。ある特定の実施形態において、免疫応答は、Ｔ細胞に特異的な抗原によるＴ細胞の刺激の際に生じるＴ細胞媒介免疫応答を指す。抗原特異的刺激の際にＴ細胞によって生じる応答の非限定的な例としては、Ｔ細胞の増殖およびサイトカインの産生が挙げられる。

発明の有利な効果
本発明の抗体は、腫瘍細胞の表面上の膜結合性ＣＤ７３および可溶性ＣＤ７３に特異的に結合し、ＣＤ７３の酵素活性を著しく阻害し、免疫応答を増強することができる。したがって、本発明の抗体は、腫瘍、特に、ＣＤ７３発現腫瘍の予防および／または処置のための使用における可能性を有する。加えて、本発明のヒト化抗体は、マウス親抗体の機能および性質を保持するだけでなく、高いヒト化度を有し、その結果、これは、免疫原性応答を誘発することなく、ヒト対象に安全に投与することができる。本発明の抗体が、公知の抗ＣＤ７３抗体と比較して、ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制をより著しく修復し、ＣＤ７３発現腫瘍細胞に対する死滅効果を増強することができることは特に驚くべきことである。したがって、本発明の抗体（特に、ヒト化抗体）は、大きな臨床的価値を有する。

本発明の実施形態を、図面および実施例を参照して下記で詳細に記載するが、当業者は、以下の図面および実施例が、本発明の範囲を限定するのではなく、本発明を説明するためにのみ使用されることを理解するであろう。本発明のさまざまな目的および有利な態様は、添付の図面および以下の好ましい実施形態の詳細な説明から当業者に明らかになるであろう。

図１は、腫瘍細胞の表面上でのＣＤ７３へのマウス抗体１３Ｄ１２の結合曲線を示す。図２は、サルＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞へのマウス抗体１３Ｄ１２の結合散布図を示す。図３は、可溶性組換えＣＤ７３へのヒト化抗体７００２－０１の結合を示す。図４Ａは、肝臓がんを有する患者（Ａ）および黒色腫を有する患者（Ｂ）の血清中のヒト化抗体７００２－０１によるＣＤ７３酵素活性の阻害を示す。図４Ｂは、肝臓がんを有する患者（Ａ）および黒色腫を有する患者（Ｂ）の血清中のヒト化抗体７００２－０１によるＣＤ７３酵素活性の阻害を示す。図５は、ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制に対するヒト化抗体７００２－０１の軽減効果を示す。図６は、ＰＢＭＣによる腫瘍細胞の死滅に対するヒト化抗体７００２－０１の回復効果を示す。

配列情報
本発明に関与する部分配列の情報を下記の通り提供する。

実施例
本発明を、ここに、以下の実施例を参照して記載し、これは、本発明を説明することを意図し、限定することを意図するものではない。

他に規定されない限り、本発明において使用される分子生物学の実験方法およびイムノアッセイは、基本的に、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、第２版、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、１９８９年、およびＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら、ＲｅｆｉｎｅｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、第３版、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９９５年を参照することによって行われ、制限酵素は、生成物の製造業者によって推奨される条件に従って使用した。当業者は、実施例が、例として本発明を記載するものであり、本発明によって保護しようとする範囲を限定することを意図するものではないことを理解する。

実施例１：マウス抗ヒトＣＤ３７抗体の産生
マウス抗ヒトＤ７３抗体を得るために、マウス（Ｂａｌｂ／ｃ、ＳｈａｎｇｈａｉＬｉｎｇｃｈａｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、異なる免疫化戦略（表１）を使用して免疫化した。使用した抗原は以下を含んでいた：ＣＤ７３タンパク質（すなわち、配列番号１７に示される配列を有する組換え的に発現されたヒトＣＤ７３）およびＣＨＯＳ－ヒトＣＤ７３（すなわち、配列番号１７に示される配列を有するＣＤ７３を発現する、ＣＤ７３を過剰発現するＣＨＯＳ細胞株）。アジュバントは以下を含んでいた：フロイント完全アジュバントＣＦＡ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎｃｏｍｐａｎｙ、カタログ番号：ｖａｃ－ｃｆａ－６０）、ＩＦＡ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎｃｏｍｐａｎｙ、カタログ番号：ｖａｃ－ｉｆａ－６０）、ＱｕｉｃｋＡｎｔｉｂｏｄｙ（ＢｅｉｊｉｎｇＢｏａｏｌｏｎｇＩｍｍｕｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ．、カタログ番号：ＫＸ０２１００４１）。投与の経路は以下を含んでいた：腹腔内（ｉｐ）および皮下（ｓｃ）。ブースティング免疫化の３日後、免疫されたマウスの脾臓細胞を、ポリエチレングリコール法を使用して、マウス骨髄種細胞ＳＰ２／０と融合して、抗体を発現することができ、かつインビトロで無制限に増殖することができるＢ細胞を得て、それらを、ＨＡＴ選択培地中で培養した。融合されたハイブリドーマ細胞を、９６ウェル細胞培養プレートに蒔き、一次スクリーニングによって選択された陽性クローンを、２～３ラウンドのサブクローニングに付した。

一次スクリーニング：細胞表面上のＣＤ７３へのクローンの培養上清の結合能力を、ヒトＣＤ７３発現腫瘍細胞株または過剰発現細胞株を使用することによる一次スクリーニングにおいて決定した。上清中の反応性抗体の存在は、二次抗体のＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ａｂｅａｍカタログ番号ａｂ９７０１５）を使用して明らかになり、結合能力を、全分野細胞走査分析器において評価した（実施例２の詳細な実験手順について参照されたい）。二次スクリーニング：ＣＤ７３発現細胞を、ＣＤ７３酵素活性を遮断する能力についてのスクリーニングのために使用して、細胞膜表面上のＣＤ７３酵素活性を遮断する抗体の能力を評価し、ヒト血清可溶性ＣＤ７３を、ＣＤ７３酵素活性を遮断する能力についてのスクリーニングのために使用して、可溶性ＣＤ７３酵素活性を遮断する抗体の能力を評価した（実施例６の詳細な実験手順について参照されたい）。

マウスモノクローナル抗体１３Ｄ１２を、最終的に得られた陽性ハイブリドーマモノクローナル細胞株の培養上清から単離および精製した。

実施例２：マウス抗ＣＤ７３抗体の抗原結合活性の評価
２．１細胞走査分析器によるＣＤ７３陽性細胞へのマウス抗体の結合の検出
使用した細胞：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒトＣＤ７３を内因的に発現する；ヒト乳がん細胞株）、ＳＫ－ＭＥ－Ｓ（ヒトＣＤ７３を内因的に発現する；ヒト肺扁平上皮癌細胞株）、Ｈ２０３０（ヒトＣＤ７３を内因的に発現する；ヒト非小細胞肺がん細胞株）、ＳＫＬＵ１（ヒトＣＤ７３を内因的に発現する；ヒト肺腺癌細胞株）、ＢＴ５４９（ヒトＣＤ７３を内因的に発現する；ヒト乳管癌細胞株）、Ａ３７５（ヒトＣＤ７３を内因的に発現する；ヒト黒色腫細胞株）、Ｃａｌｕ６（ヒトＣＤ７３を内因的に発現する；ヒト変性がん細胞株）、４Ｔ１（マウスＣＤ７３を内因的に発現する；マウス乳がん細胞株）、ＣＨＯＳ－ヒトＣＤ７３（ヒトＣＤ７３でトランスフェクトされた）、およびＣＨＯＳ（ＣＤ７３陰性）細胞。

ＣＤ７３発現ＣＨＯＳ細胞の構築：ヒトＣＤ７３（配列番号１７）を、レンチウイルス感染および抗生物質耐性スクリーニング（ＭＯＩ＝３～１０、５μｇ／ｍｌポリブレン）によって、ＣＨＯＣ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において過剰発現させた。レンチウイルスは、ＳｈａｎｇｈａｉＧｅｎｅｃｈｅｍＣｏ．，Ｌｔｄ．によって提供された。感染の７２時間後、対応する抗生物質を適用し、培養を２～４週間継続し、それに続いて拡大増殖させ、その後の実験のために凍結保存した。

実験方法：１０，０００個細胞を、１００μＬのＤＭＥＭ＋１０％のＦＢＳ／ウェルを有する平底９６ウェルプレートに蒔き、細胞が壁に接着するように終夜培養し、上清を翌日廃棄した。８点の抗体の連続３倍希釈を、２００μＬのＤＭＥＭに総体積（１００μＬ）の１／３を希釈することによって行った。１００μＬの希釈された抗体を細胞プレートの各ウェルに添加し（融合したクローンまたはサブクローンの上清をスクリーニングのために使用した）、１００μＬのＤＭＥＭを対応する陰性対照ウェルに添加し、インキュベーションを室温で１時間行った。上清を廃棄した後、１００μＬの二次抗体（ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９７０１５））を、５μＬ／ｍＬ（ＤＭＥＭに希釈）の濃度で各ウェルに添加し、インキュベーションを室温で０．５時間行った。染色後、上清を廃棄し、それに続いて、ＰＢＳ＋２％のＦＢＳで１回洗浄し、次いで、１００μＬのＰＢＳ＋２％のＦＢＳを各ウェルに添加し、次いで、読み取りを分析器において行った。全分野細胞走査分析器（ＮｅｘｃｅｌｏｍＣｏｍｐａｎｙ、モデルＣｅｌｉｇｏ（登録商標）ＩｍａｇｅＣｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用して、実験プレートの読み取りを測定した。測定の間、ウェル中の細胞の高速走査およびイメージングを、二次抗体に対応する緑色蛍光チャネルおよび明視野チャネルにおいて同時に行った。蛍光チャネルによって得られた画像を使用して、蛍光標識された細胞の形態および蛍光強度についてのパラメーターセットに従って抗体によって結合した細胞をカウントし、明視野チャネルによって得られた画像を使用して、細胞形態についてのパラメーターセットに従って接着細胞をカウントし、細胞の総数のうちの蛍光を有する抗体結合細胞のパーセンテージを、２つのカウント結果を割ることによって得た。ＣＤ７３発現細胞株への抗ＣＤ７３抗体の結合効果を、パーセンテージに従って決定した。ＧｒａｐｈＰａｄをデータ分析のために使用し、ここで、横軸は抗体濃度の対数を示し、縦軸は生存細胞の総数のうちの緑色蛍光を有するＣＤ７３抗体に結合した細胞のパーセンテージを示し、細胞のそれぞれへの抗ＣＤ７３抗体結合のＥＣ５０値を、曲線の当てはめによって得た。

腫瘍細胞のそれぞれへの１３Ｄ１２結合のＥＣ５０値を、表２－１および表２－２に示し、ここで、Ｎ．Ｂ．は、検出のための濃度範囲内で検出されなかったことを表し、いくつかの細胞に対する結合曲線を図１に示した。結果は、１３Ｄ１２が、ＣＤ７３を天然で発現する細胞、およびヒトＣＤ７３を組換え的に発現するＣＨＯＳ細胞に結合することができたが、抗体が、ＣＤ７３を発現しない細胞（ＣＨＯＳ）にもマウスＣＤ７３を発現する細胞（４Ｔ１）にも結合しなかったことを示した。

２．２カニクイザルＴ細胞へのマウス抗体の結合
２頭のドナー（１１３２Ｆおよび１３００Ｍ）からのサル血液試料を、Ｍｅｄｉｃｉｌｏｎから得た。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離システムを使用して単離した。ＰＢＭＣを、試験される抗体とともにインキュベートし、次いで、細胞に結合した抗体を、蛍光色素標識された二次抗体（ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ９７０１５；ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ９７００３）で染色し、ＣＤ３＋およびＣＤ８＋に対する蛍光標識された抗体を使用して、Ｔ細胞を認識した。未染色対照試料および蛍光補償対照試料と一緒に、すべての試料を、フローサイトメーターに流して、カニクイザルＴ細胞への抗体の結合を検出した。

図２は、カニクイザル１１３２ＦのＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞への１３Ｄ１２の結合のフローサイトメトリー散布図を示した。マウス抗体１３Ｄ１２の結合についての平均蛍光強度の倍数変化を、下記の表に示した。結果は、１３Ｄ１２が、カニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞に結合することが可能であったことを示した。

実施例３：マウス抗ＣＤ７３抗体の可変領域配列の決定およびキメラ抗体の調製
ハイブリドーマ細胞を遠心分離によって収集し、５～１０×１０^６個細胞を、１ｍｌのＴＲＩｚｏｌおよび０．２ｍｌのクロロホルムに添加し、１５秒間激しく振とうし、室温で３分間放置した。遠心分離後、水相を収集し、０．５ｍｌのイソプロパノールを添加し、室温で１０分間放置した。沈殿物を収集し、エタノールで洗浄し、乾燥させて、ＲＮＡを得た。鋳型ＲＮＡおよびプライマーを、プライマーおよび鋳型が正しく対形成するように、氷浴中の遠心分離管に添加し、次いで、逆転写およびＰＣＲ増幅を行った。２．５μＬのｄＮＴＰ／ｄｄＮＴＰ混合物を、４つのマイクロ遠心分離管のそれぞれに添加し、混合物を、後の使用のために、３７℃で５分間おいた。空のマイクロ遠心分離管中で、１ｐｍｏｌのＰＣＲ増幅された二本鎖ＤＮＡ、１０ｐｍｏｌのシークエンシングプライマー、および２μｌの５×シークエンシング緩衝液を添加し、２倍の蒸留水を添加して、１０μｌの総体積にし、それに続いて９６℃で８分間加熱し、氷浴中で１分間冷却し、１００００ｇで、４℃で１０秒間遠心分離した。２μｌの事前に冷やした標識混合物（ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ、それぞれについて０．７５μｍｏｌ／Ｌ）、５μＣｉのα－３２Ｐ－ｄＡＴＰ、１μｌの０．１ｍｏｌ／ＬのＤＤＴ、２Ｕのシークエンシング酵素を添加し、水を添加して、１５μｌにし、十分に混合し、次いで新たに合成されたＤＮＡ鎖を標識するために、氷上で２分間放置した。３．５μｌの標識中の反応混合物を、４つの以前に調製されたマイクロ遠心分離管に、３７℃で５分間添加した。４μｌの停止溶液を各管に添加した。試料を、水浴中、８０℃で５分間熱変性させ、２μｌをシークエンシングゲルの各レーンに添加し、断片を電気泳動によって分離して、配列情報を収集した。

マウス抗体１３Ｄ１２のＶＨおよびＶＬ配列を、下記の表に示した。そして、マウスモノクローナル抗体１３Ｄ１２のＣＤＲ配列を、Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、公衆衛生局、国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１年）、６４７～６６９頁）によって記載される方法によってさらに決定する。

上記で言及されたマウス抗体の重鎖および軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列（配列番号１１～１２）を、それぞれ、ヒト抗体の重鎖定常領域（配列番号１５）および軽鎖定常領域（配列番号１６）をコードする配列にライゲーションし、ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）において組換え的に発現させた。培養フラスコ中の抗体クローンを含有する細胞上清を収集し、プロテインＡカラムを使用して精製し、抗体タンパク質を、ｐＨ３の１００ｍＭの酢酸で溶出させた。次いで、精製された抗体タンパク質を、さらなる分離および精製のために、サイズ排除クロマトグラフィーカラムにロードした。単量体に対応する抗体タンパク質を、２０％のグリセロールが補充されたＰＢＳ緩衝液中で製剤化した。このようにして、キメラ抗体ｃｈ１３２Ｄ１２を得た。

実施例４：マウス抗ＣＤ３７抗体のヒト化
候補抗体とヒト抗体との間の配列相同性を改善するため、およびヒトに対する抗体の免疫原性を低減するために、上記の実施例において提供されたマウス抗体のヒト化の設計および調製を行い、ここで、マウスＣＤＲ領域を、当技術分野において公知の方法（Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号；Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号；ならびにＬｏ、Ｂｅｎｎｙ、Ｋ．Ｃ．編、ｉｎＡｎｔｉｂｏｄｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：ＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏｃｏｌｓ、２４８巻、ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ、２００４年を参照されたい）によってヒトフレームワーク配列にグラフトした。

具体的には、マウス抗体１３Ｄ１２の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を、対応するヒト化鋳型のＦＲフレームワークにグラフトし、一連の復帰突然変異を、ヒト化抗体が可能な限りマウス抗体の抗原結合能力を保持するように、ヒト化鋳型のＦＲ領域のアミノ酸残基において行った。上記の方法に従って、本発明者らは、７００２－０１という名称のマウス抗体１３Ｄ１２のヒト化抗体を調製し、得た（その重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ、配列番号９および１０に示した）。抗体の重鎖定常領域は配列番号１５であり、軽鎖定常領域は配列番号１６であった。

実施例５：ヒト化抗ＣＤ７３抗体の抗原結合活性の評価
５．１フローサイトメトリーによるＣＤ７３発現細胞への抗体結合の決定
５００，０００個のＣＤ７３発現細胞（実施例２を参照されたい）を、丸底低吸着９６ウェルプレートにおいて、後の使用のために、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％のＦＢＳ）／ウェル中で蒔いた。抗体試料を、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に総体積（１００μＬ）の１／２を希釈することによって、１２点の連続３倍希釈に付した。１００μＬの希釈された抗体を細胞プレートの各ウェルに添加し、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液を対応する陰性対照ウェルに添加し、インキュベーションを４℃で１時間行った。上清を遠心分離によって廃棄した後、洗浄をＦＡＣＳ緩衝液で２回行い、１００μＬの二次抗体（ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９７０１５；ＤｙＬｉｇｈｔ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９７００３）（５μｇ／ｍＬ、ＦＡＣＳ緩衝液に希釈）を各ウェルに添加し、インキュベーションを４℃でさらに０．５時間行った。染色後、上清を遠心分離によって除去し、洗浄をＦＡＣＳ緩衝液で２回行い、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液を各ウェルに添加して、細胞を再懸濁させ、次いで、読み取りをフローサイトメトリーにおいて行った。プレート中の細胞を、フローサイトメーター（ＢＤ、モデルＡＣＣＵＲＩＣ６ＰＬＵＳ）を使用して測定した。測定の間、細胞を、ＦＣＳおよびＳＳＣに従って最初にゲート開閉し、次いで、二次抗体およびＳＳＣに対応する緑色蛍光チャネル（ＦＩＴＣ）によって分析した。ＧｒａｐｈＰａｄをデータ分析のために使用し、ここで、横軸は抗体濃度の対数を示し、縦軸は平均蛍光強度を示し、抗ＣＤ７３抗体のＥＣ５０値を、曲線の当てはめによって得た。ＣＤ７３を天然で発現する細胞およびヒトＣＤ７３を組換え的に発現する細胞へのヒト化抗体７００２－０１の結合を表５に示し、ここで、Ｎ．Ｄ．は、検出が行われなかったことを表した。結果は、ヒト化抗体７００２－０１が、膜結合性ＣＤ７３に対して良好な結合活性を有していたことを示した。

５．２ＥＬＩＳＡによる可溶性ヒトＣＤ７３タンパク質への抗体結合の決定
１μｇ／ｍｌの組換えヒトＣＤ７３タンパク質（ＢａｉｙｉｎｇＢｉｏ、組換えヒトＣＤ７３タンパク質）を、ＰＢＳ中、４℃で終夜、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄し、非特異的部位を、２００μｌ／ウェルのＰＢＳ＋２％のＢＳＡを添加することによってブロッキングした。勾配希釈の用量範囲の１００μＬの抗ＣＤ７３抗体を、抗原でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、ＨＲＰカップリングヤギ抗ヒトまたはヤギ抗マウスＩｇＧＦｃ断片二次抗体を、室温で１時間添加して、捕捉された抗ＣＤ７３抗体を検出した。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、結合した二次抗体を、ＴＭＢ（ＨＲＰ基質）を添加すること、およびプレートを暗所で室温で５～１０分間インキュベートすることによって、明らかにした。酵素反応を、１Ｍの硫酸溶液を添加することによって停止し、光吸収を４５０ｎｍで測定した。縦軸に吸光度値、および横軸に抗体濃度のｌｏｇ値でグラフをプロットし、ＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを使用して算出した。結果を図３に示し、ヒト化抗体７００２－０１が、可溶性組換えＣＤ７３に対する良好な結合活性を有していたことを示し、そのＥＣ５０は、０．００８１μｇ／ｍｌであった。

５．３Ｂｉａｃｏｒｅによる組換えヒトＣＤ７３タンパク質へのヒト化抗体の親和性の決定
抗体親和性を、２５℃で、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００（ＧＥ）において、ＳＰＲによって測定した。抗体を、ランニング緩衝液の１×ＨＢＳ－ＥＰ＋で１μｇ／ｍｌに希釈し、１０μｌ／分の流速で３０秒間、チップ表面（プロテインＡチップ、ＧＥ、カタログ番号２９１２７５５６）上で捕捉した。次いで、一連の濃度のＣＤ７３タンパク質（ＢａｉｙｉｎｇＢｉｏ、組換えヒトＣＤ７３タンパク質）を、１８０秒の会合のために、３０μｌ／分の流速で抗体チャネルに注入し、それに続いて９００秒間解離した。１０ｍＭのｐＨ１．５のＧｌｙ－ＨＣｌを再生のために使用した。センサーグラムデータを、１：１の動的結合モデルを使用して当てはめた。二価の親和性および動的な会合および解離の速度定数を、下記の表に示した。

実施例６：ＣＤ７３酵素活性に対する抗ＣＤ７３抗体の阻害活性の評価
６．１腫瘍細胞におけるＣＤ７３酵素活性の阻害アッセイ
過剰のＡＭＰは、ＡＴＰ依存性ルシフェラーゼ活性を遮断することが公知である。ＡＭＰをアデノシン＋無機ホスフェートに切断するＣＤ７３は、ＡＭＰを低減することによってルシフェラーゼ活性および光放射を修復する。したがって、ＣＤ７３の酵素活性を遮断する抗体は、光放射を低減するであろう。

ヒトＣＤ７３陽性細胞を回収およびカウントし、１００μＬの完全培地中でウェルあたり２０，０００個細胞を平底９６プレートに播種した。抗体試料を、２００μＬのＤＭＥＭに総体積（１００μＬ）の１／３を希釈することによって、８点の連続３倍希釈に付し、１００μＬの希釈された試料を対応するプレートのウェルに添加し、陰性対照はアイソタイプ対照抗体（ＩＳＯ）であった。３７℃で１時間のインキュベーション後、上清を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。１２５μＭの濃度のＡＭＰの溶液を、不完全培地中で調製し、１００μＬのＡＭＰを各ウェルに添加し、プレートを３７℃でさらに２時間インキュベートした。反応プレートを遠心分離した後、５０μＬの反応溶液を取り出し、別の９６ウェル蛍光プレート（ＯｐｔｉＰｌａｔｅ－９６、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、番号６００５２９０）に添加し、同じ体積の５０μＭのＡＴＰ溶液および５０μＬのＣＴＧ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７２）をウェルごとに添加し、プレートを、暗所で室温で１５分間インキュベートし、蛍光（Ｌｕｍ）を、マイクロプレートリーダーを使用して測定した。ＧｒａｐｈＰａｄをデータ分析のために使用し、横軸は抗体濃度の対数であり、縦軸は阻害率であった。酵素活性阻害曲線を描き、ＩＣ５０を算出した。阻害率は、以下の通り算出した：
阻害率＝１００－（Ｌｕｍ_陽性対照－Ｌｕｍ_抗体）／（Ｌｕｍ_陽性対照－Ｌｕｍ_陰性対照）×１００

異なるヒト腫瘍細胞株における内因性ＣＤ７３を遮断する抗体のＩＣ５０値を下記の表に示した。結果は、ヒト化抗体７００２－０１が、腫瘍細胞の表面上のＣＤ７３の酵素活性を著しく阻害し得ることを示した。

６．２腫瘍患者血清におけるＣＤ７３酵素活性の阻害アッセイ
腫瘍患者血清を、リン酸緩衝液（Ｔｒｉｓ１２５ｍＭ、ＭｇＣｌ_２２５ｍＭ、ＮａＣｌ１２５ｍＭ）に希釈し、１２．５μＬの希釈された血清を、白色平底９６ウェルプレートにおいて、後の使用のために、各ウェルに添加した。抗体試料を、５０μＬのリン酸緩衝液に総体積（１００μＬ）の１／１．５を希釈することによって、および９０μＬのリン酸緩衝液に総体積（１０μＬ）の１／１０を希釈することによって、１０点の連続２～１０倍希釈に付した。１２．５μＬの希釈された抗体を細胞プレートの各ウェルに添加し、１２．５μＬのリン酸緩衝液を陰性対照として添加し、インキュベーションを、遠心分離後、３７℃で１．５時間行った。ＡＭＰをリン酸緩衝液で希釈して、２０μＭの溶液を得、２５μＬのＡＭＰを各ウェルに添加し（陽性対照を除く）、インキュベーションを、遠心分離後、３７℃でさらに１時間行った。反応後、２５μＬのＡＭＰを陽性対照に添加した。２５μＬのＡＭＰ－Ｇｌｏ（商標）試薬Ｉ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｖ５０１２）を各ウェルに直ぐに添加し、プレートを遠心分離し、室温で１時間インキュベートした。５０μＬのＡＭＰ検出溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｖ５０１２）を各ウェルに添加し、遠心分離後、室温で１時間インキュベートした。蛍光（Ｌｕｍ）を、マイクロプレートリーダーを使用して測定した。ＧｒａｐｈＰａｄをデータ分析のために使用し、横軸は抗体濃度の対数であり、縦軸は阻害率であった。酵素活性阻害曲線を描き、ＩＣ５０を算出した。阻害率は、以下の通り算出した：
阻害率＝１００－（Ｌｕｍ_陽性対照－Ｌｕｍ_抗体）／（Ｌｕｍ_陽性対照－Ｌｕｍ_陰性対照）×１００

結果を図４Ａ～４Ｂに示し、抗ＣＤ７３抗体が、肝臓がんを有する患者（Ａ）および黒色腫を有する患者（Ｂ）の血清試料中で、ＣＤ７３によるＡＭＰの脱リン酸化を効果的に阻害し、ＣＤ７３の酵素活性を阻害することができたことを示した。

実施例７：ＣＤ７３の抗ＣＤ７３抗体媒介内部移行
ＣＤ７３の抗ＣＤ７３抗体媒介内部移行をフローサイトメトリーによって試験した。抗体誘導内部移行とインキュベーション時間との間の関係を決定する場合、細胞を、３７℃でさまざまな期間、１０μｇ／ｍＬの抗体とともにインキュベートした。２％のＦＢＳを含有するＰＢＳで数回洗浄した後、１０μｇ／ｍＬの二次抗体を染色のために４℃で３０分間添加し、次いで、細胞のＣＤ７３発現をフローサイトメトリーによって分析した。抗体によって引き起こされる内部移行の度合いの相違を比較する場合、細胞を、４℃および３７℃の両方で並行して２０時間、１０μｇ／ｍＬの抗体とともにインキュベートした。２％のＦＢＳを含有するＰＢＳで数回洗浄した後、１０μｇ／ｍＬの二次抗体を染色のために４℃で３０分間添加し、次いで、細胞のＣＤ７３発現をフローサイトメトリーによって分析した。
ＭＦＩ_３７は３７℃でインキュベートされた試料のＭＦＩ値であり、ＭＦＩ_４は４℃でインキュベートされた試料のＭＦＩ値であり、結合だけが、この条件下で内部移行なしで起こり、ＭＦＩ_{バックグラウンド}は二次抗体のみのＭＦＩであった。細胞表面ＣＤ７３の抗体媒介内部移行のパーセンテージを、以下の式によって算出した：
内部移行したＣＤ７３のパーセンテージ＝１００－１００×（ＭＦＩ_４－ＭＦＩ_３７）／ＭＦＩ_４

結果を表８に示し、抗体が、さまざまな度合いまで腫瘍細胞の表面上のＣＤ７３の内部移行を媒介したことを示した。

実施例８：ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を緩和する抗ＣＤ７３抗体
実験の前に抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で２４時間刺激されたＰＢＭＣ細胞（Ｆｉｃｏｌｌ分離によって新鮮なアフェレーシス試料から得た）を、ＣＤ４＋Ｔ細胞単離キットヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号１３０－０９６－５３３）を使用して収集および選別して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を得て、それに続いて遠心分離して、上清を除去した。ＣＤ４＋Ｔ細胞を、４０μＭのＥＨＮＡおよび１２０ＩＵ／ｍｌのＩＬ２を含有するＡＩＭＶ培地に再懸濁させた（ＥＨＮＡの最終濃度は２０μＭであり、ＩＬ２の最終濃度は６０ＩＵ／ｍｌであった）。２００，０００個のＣＤ４＋細胞を、低吸着丸底９６ウェルプレートに、１００μＬ／ウェルで蒔いた。１０点の連続３倍希釈を、２００μＬのＡＩＭＶ培地に総体積（１００μＬ）の１／３を希釈することによって行った。５０μＬの希釈された抗体を各ウェルに添加し、５０μＬのＡＩＭＶ培地を対応する陰性対照ウェルに添加し、インキュベーションを３７℃で０．５時間行った。４００μＭのＡＭＰを、１００μＭの最終濃度に達するようにＡＩＭＶを用いて調製し、５０μＬの調製されたＡＭＰ溶液を各ウェルに添加した（対照ウェルは、無ＡＭＰ培地を添加した）。遠心分離後、読み取りを分析器において行った。次いで、プレートを３７℃で７２時間インキュベートし、次いで、分析器において再び読み取った。読み取りを、全分野細胞走査分析器（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ、モデルＣｅｌｉｇｏ（登録商標）ＩｍａｇｅＣｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用して、プレート中の細胞において測定した。測定の間、ウェル中の細胞の高速走査イメージングを、明視野チャネルにおいて行った。ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を軽減する抗ＣＤ７３抗体の効果を、クローンクラスターのサイズに基づいて決定した。ＭＥＤＩ９４４７（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）およびＢＭＳ９８６１７９（ＢＭＳ）を参照抗体として使用し、これらは、Ｇｅｎｅｃｈｅｍによって発現および精製された。

Ｔ細胞増殖の４日目における細胞成長を図５に示し、ここで、＃１８は、内部使用のためのＰＢＭＣドナーの数を指し、図における抗体の初期濃度は１００μｇ／ｍＬであり、合計で９点の４倍希釈であった。ヒト化抗体７００２－０１は、ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を効果的に軽減することができ、Ｔ細胞の増殖は著しく回復し、効果は参照抗体ＭＥＤＩ９４４７およびＢＭＳ９８６１７９のものよりも良好であった。

実施例９：抗ＣＤ７３抗体媒介腫瘍細胞死滅
５０００個のＡ３７５細胞を、平底９６ウェルプレートにおいて、１００μＬのＤＭＥＭ＋１０％のＦＢＳ／ウェルに蒔いた。細胞を終夜接着させ、上清を翌日除去した。１０点の連続３倍希釈を、２００μＬのＡＩＭＶに総体積（１００μＬ）の１／３を希釈することによって行った。５０μＬの希釈された抗体を細胞プレートの各ウェルに添加し、５０μＬのＡＩＭＶを対応する陰性対照ウェルに添加し、インキュベーションを３７℃で０．５時間行った。抗ＣＤ３／ＣＤ２８で２４時間刺激されたＰＢＭＣ細胞（Ｆｉｃｏｌｌ分離によって新鮮なアフェレーシス試料から）を収集し、４０μＭのＥＨＮＡおよび１２０ＩＵ／ｍｌのＩＬ２を含有するＡＩＭＶに再懸濁させ（ＥＨＮＡの最終濃度は２０μＭであり、ＩＬ２の最終濃度は６０ＩＵ／ｍｌであった）、各ウェルに５，０００個／１００μＬで添加した。４００μＭのＡＭＰ溶液を、ＡＩＭＶを用いて調製し、５０μＬの溶液を各ウェルに添加して、１００μＭの最終ＡＭＰ濃度にした。遠心分離後、インキュベーションを、３７℃で７２時間行った。１０μＬのＣＣＫ８キット（ＪａｐａｎＤｏｊｉｎｄｏＣｏ．，Ｌｔｄ．、カタログ番号ＣＫ０４）を各ウェルに添加し、３７℃で４時間インキュベートし、次いで、ＯＤ４５０を、マイクロプレートリーダーを使用して測定した。対照ウェルの値に従って、ＯＤ値を阻害パーセンテージに変換し、抗ＣＤ７３抗体媒介腫瘍細胞死滅効果を適切に決定した。パーセンテージが大きくなると、抗ＣＤ７３抗体媒介腫瘍細胞死滅効果が良くなり、パーセンテージが小さくなると、抗ＣＤ７３抗体媒介腫瘍細胞死滅効果が悪くなる。ＧｒａｐｈＰａｄをデータ分析のために使用し、横軸は抗体濃度の対数であり、縦軸は阻害パーセンテージであり、Ａ３７５細胞における抗ＣＤ７３抗体のＩＣ５０値を、曲線の当てはめによって得た。

結果を図６に示し、＃２２は、内部使用のためのＰＢＭＳのドナー数を指す。結果は、ヒト化抗体７００２－０１が、腫瘍細胞に対するＰＢＭＣの死滅効果を効果的に修復することができたことを示した。

本発明の具体的な実施形態を詳細に記載したが、当業者は、さまざまな改変および変更を、公開されているすべての教示を踏まえて詳細に行うことができること、およびこれらの変更がすべて本発明の範囲内であることを理解するであろう。本発明の完全な分割は、添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物によって与えられる。

Claims

ＣＤ７３に特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ａ）以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）：
（ｉ）以下の配列：配列番号３、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨＣＤＲ１、
（ｉｉ）以下の配列：配列番号４、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨＣＤＲ２、および
（ｉｉｉ）以下の配列：配列番号５、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＨＣＤＲ３；
ならびに／あるいは
（ｂ）以下の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：
（ｉｖ）以下の配列：配列番号６、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬＣＤＲ１、
（ｖ）以下の配列：配列番号７、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬＣＤＲ２、および
（ｖｉ）以下の配列：配列番号８、またはそれと比較して１個もしくは複数のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加（例えば、１個、２個もしくは３個のアミノ酸の置換、欠失もしくは付加）を有する配列からなるＶＬＣＤＲ３；
を含み、
好ましくは、（ｉ）～（ｖｉ）のいずれかに記載される前記置換は、保存的置換である、
抗体またはその抗原結合性断片。
ＣＤ７３に特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１に記載される重鎖可変領域に含有されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびに配列番号２に記載される軽鎖可変領域に含有されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み、
好ましくは、前記重鎖可変領域に含有される３つのＣＤＲ、および前記軽鎖可変領域に含有される３つのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴの番号付けシステムによって定義される、
抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号１に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
前記抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト免疫グロブリンに由来するフレームワーク領域配列を含み、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖生殖細胞系列配列に由来する重鎖フレームワーク領域配列、およびヒト軽鎖生殖細胞系列配列に由来する軽鎖フレームワーク領域配列を含む、
請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列、またはそれと比較して少なくとも約８５％、９０％、９５％もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト免疫グロブリンに由来する定常領域をさらに含み、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片の前記重鎖は、ヒト免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）に由来する重鎖定常領域を含み、前記抗体またはその抗原結合性断片の前記軽鎖は、ヒト免疫グロブリンに由来する軽鎖定常領域（例えば、κまたはλ）を含み、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片は、
（１）ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域；
（２）ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のバリアントであって、それが由来する野生型配列と比較して以下の置換：Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓを有し、上記で言及されたアミノ酸位置が、ＥＵ番号付けシステムによる位置である、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のバリアント
からなる群から選択される重鎖定常領域を含み、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１５に示される重鎖定常領域（ＣＨ）を含み、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトκ軽鎖定常領域を含み、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６に示される軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、
請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディおよびシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体である、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体またはその抗原結合性断片は、以下の特徴：
（ａ）膜結合性ヒトＣＤ７３もしくは可溶性ヒトＣＤ７３、またはその両方に結合する；
（ｂ）ＣＤ７３（例えば、膜結合性ヒトＣＤ７３または可溶性ヒトＣＤ７３）の酵素活性を阻害するまたは低減する；
（ｃ）アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）の存在下で抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体によって刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞）の増殖を増加させる；
（ｄ）ＣＤ７３発現腫瘍細胞におけるアデノシンレベルを低減する；
（ｅ）抗体媒介性受容体内部移行によって、細胞（例えば、腫瘍細胞）へのＣＤ７３の内部移行を誘導する
の１つまたは複数を持つ、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、あるいはその重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする単離された核酸分子。
好ましくは、クローニングベクターまたは発現ベクターである、請求項１０に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
請求項１０に記載の単離された核酸分子または請求項１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を調製するための方法であって、前記抗体またはその抗原結合性断片の発現を可能にする条件下で請求項１２に記載の宿主細胞を培養すること、および前記培養された宿主細胞の培養物から前記抗体またはその抗原結合性断片を回収することを含む、方法。
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む二重特異性または多重特異性分子であって、
好ましくは、前記二重特異性または多重特異性分子は、ＣＤ７３に特異的に結合し、１つまたは複数の他の標的にさらに特異的に結合し、
好ましくは、前記二重特異性または多重特異性分子は、第２の標的に対する第２の結合特異性を有する少なくとも１つの分子（例えば、第２の抗体）をさらに含む、
二重特異性または多重特異性分子。
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、および前記抗体またはその抗原結合性断片に連結された治療剤を含むイムノコンジュゲートであって、
好ましくは、前記治療剤は、細胞傷害性剤から選択され、
好ましくは、前記治療剤は、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、およびその任意の組み合わせからなる群から選択され、
好ましくは、前記イムノコンジュゲートは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である、
イムノコンジュゲート。
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、請求項１４に記載の二重特異性または多重特異性分子、あるいは請求項１５に記載のイムノコンジュゲート、ならびに薬学的に許容される担体および／または賦形剤を含む医薬組成物であって、
好ましくは、前記医薬組成物は、追加の薬学的に活性な薬剤をさらに含み、
好ましくは、前記追加の薬学的に活性な薬剤は、抗腫瘍活性を有する薬物、例えば、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスであり、
好ましくは、前記追加の薬学的に活性な薬剤は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤）、抗ＣＤ３９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体または抗ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２抗体からなる群から選択される、
医薬組成物。
請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含むキットであって、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片は、検出可能な標識、例えば、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンを有し、
好ましくは、前記キットは、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を特異的に認識する第２の抗体をさらに含み、好ましくは、前記第２の抗体は、検出可能な標識、例えば、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光物質（例えば、化学発光物質）またはビオチンをさらに含む、キット。
対象（例えば、ヒト）における腫瘍を予防および／または処置するための方法であって、前記方法は、有効量の請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、請求項１４に記載の二重特異性または多重特異性分子、請求項１５に記載のイムノコンジュゲート、あるいは請求項１６に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含み、
好ましくは、前記腫瘍は、ＣＤ７３を発現し、
好ましくは、前記腫瘍は、黒色腫、結腸がん、肺がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がん、膀胱がん、神経膠腫、膠芽腫、甲状腺がん、食道がん、前立腺がんおよび乳がんからなる群から選択され、
好ましくは、前記対象は、ヒトである、
方法。
前記方法は、第２の治療剤を投与することをさらに含み、前記第２の治療剤は、抗腫瘍活性を有する薬物、例えば、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスであり、
好ましくは、前記方法は、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤）、抗ＣＤ３９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体または抗ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２抗体からなる群から選択される薬剤と組み合わせて投与することを含む、
請求項１８に記載の方法。
前記方法は、第２の療法、例えば、外科手術、化学療法、放射線療法、標的療法、免疫療法、ホルモン療法、遺伝子療法または緩和ケアを施すことをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
対象における腫瘍を予防および／または処置するための医薬としての、あるいは対象における腫瘍を予防および／または処置するための医薬の製造における、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、請求項１４に記載の二重特異性または多重特異性分子、請求項１５に記載のイムノコンジュゲート、あるいは請求項１６に記載の医薬組成物の使用であって、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片、前記二重特異性または多重特異性分子、前記イムノコンジュゲート、あるいは前記医薬組成物は、別の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与され、
好ましくは、前記追加の薬学的に活性な薬剤は、抗腫瘍活性を有する薬物、例えば、アルキル化剤、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、放射性核種剤、放射線増感剤、抗血管新生剤、サイトカイン、分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤または腫瘍溶解性ウイルスであり、
好ましくは、前記追加の薬学的に活性な薬剤が、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＬＡＧ－３阻害剤）、抗ＣＤ３９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体または抗ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２抗体からなる群から選択され、
好ましくは、前記腫瘍は、ＣＤ７３を発現し、
好ましくは、前記腫瘍は、黒色腫、結腸がん、肺がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がん、膀胱がん、神経膠腫、膠芽腫、甲状腺がん、食道がん、前立腺がんおよび乳がんからなる群から選択され、
好ましくは、前記対象は、ヒトである、
使用。
対象における免疫応答を刺激するための方法であって、前記方法は、有効量の請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、あるいは請求項１６に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
対象における免疫応答の刺激における、または対象における免疫応答を刺激するための医薬の製造における、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、あるいは請求項１６に記載の医薬組成物の使用。
試料中のＣＤ７３（例えば、ヒトＣＤ７３）の存在または量を検出する方法であって、
（１）前記試料を、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップ；
（２）前記抗体またはその抗原結合性断片とＣＤ７３との間の複合体の形成を検出するステップ、あるいは前記複合体の量を検出するステップ
を含み、
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合性断片は、検出可能な標識を有する、
方法。
試料中のＣＤ７３（例えば、ヒトＣＤ７３）の存在または量を検出するための検出試薬の製造における、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合性断片の使用。