JPH06506945A - ペプチド核酸 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ペプチド核酸 関連出願 本出願は下記のデンマーク特許出願の一部継続出願である・９８６／９１号、１ ９９１年５月２４日ｄ１願、９８７／９１号、１９９１年５月２４日出願、およ び５１０／９２号、１９９２年４月１５日出願。各出願明細書の記載全体を本明 細書に参考として引用する。 発明の分野 本発明は、ポリヌクレオチドではないが、相捕的ＤＮＡおよびＲＮＡ鎖に、対応 するＤＮＡより強力に結合する化合物に関するものである。特に本発明は、天然 の核酸塩基または他の核酸塩基結合性部分がポリアミド主鎖に共有結合している 化合物に関するものである。 発明の背景 １００塩基対（］、００ｂｐ）程度の長さのオリゴデオキシリボヌクレオチドは 市販の全自動合成装置を用いて固相法によって一般的に合成される。しかしオリ ゴリボヌクレオチドの化学合成は、これ」；りはるかに−膜性が低い。またオリ ゴリボヌクレオチドはオリゴデオキシリボヌクレオチドよりはるかに安定性が低 い。 これはオリゴデオキシリボヌクレオチドの方が、たとえば遺伝子療法または転写 もしくは翻訳の制御を目的とする医学的および生物学的研究においてより広く用 いられていることに関与する事実である。 遺伝子の機能は、その情報をメツセンシャーＲＮＡ　（ｍＲＮＡ、）に転写し、 これがリポソームコンプレックスとの相互作用により、その配列によりコードさ れる蛋白質の合成を指示することによって開始する。この合成過程は翻訳として 知られている。翻訳には各種の補助因子、およびビルディングプロ・ｌり、アミ ノ酸、およびそれらのトランスファーＲ，ＮＡ　（ｔＲＮＡ）の存在が必要であ り、それらはすべてｉｎ常な細胞内に１７在する。 転写開始には、プ１コモーターＤＮＡ配列かＲＮＡ合成酵素であるＲ　Ｎ　Ａポ リメラーゼによって特異的に認識されることが必要である。原核細胞においては 多くの場合、および恐らく真核細胞においてはすべての場合、この認識に先立っ て蛋白質転写因子がプロモーターに配列特異的に結合する。プロモーターに結合 するが、その結合がＲＮＡボリメラーセの作用を阻害する他の蛋白質は、リプレ ッサーとして知られている。従って遺伝子の活性化は一般に転写因子によって正 に、またリプレッサーによって負に制御されている。 大部分の一般的な薬物は、標的となる１または２以上の内因性蛋白質、たとえば 酵素との相互作用およびその調節により機能する。しかしそれらの薬物は一般に 標的蛋白質に特異的ではなく、他の蛋白質とも相互作用する。従って標的蛋白質 を効果的に調節するためには、かなり大量の薬物を使用しなければならない。 薬物の一般的な１日量は体重のｋｇ肖たり１０”’−１０−巽リモル、すなわち １００ｋｇの人につき１０−’−１０ミリモルである。この調節を、代わりにｍ ＲＮＡとの相互作用およびその不活性化により行うことができれば、薬物の必要 量を劇的に減少させ、それに対応して副作用を減少させることができると思われ る。 このような相互作用を部位特異的なものにすることができれば、いっそうの減少 をもたらすことができるであろう。機能性遺伝子が連続的にｍＲＮＡを産生ずる 場合、遺伝子転写全体を阻止することができればよりいっそう有利になるであろ う。 オリゴデオキシヌクレオチドはこのような機会を提示する。たとえば合成オリゴ デオキシヌクレオチドをアンチセンスプローブとして用いて、ｍＲＮＡをブロッ クし、場合により破壊することができるであろう。こうして合成りＮＡがインビ ボにおける翻訳を抑制することができる。また、たとえばオリゴヌクレオチドま たは他のＤＮＡ認識物質を用いて三重らせんを形成することにより、動物のゲノ ムを調節することも可能であろう。しかし三重らせん形成には多数の欠点が伴う 。 たとえばそれはホモプリン配列にのみ用いることができ、またそれは非生理的な ほど高いイオン濃度および低いｐＨを必要とする。 さらに、修飾されていないオリゴヌクレオチドはインビボ半減期が短Ｘ１ミリグ ラム以上の量で：Ａ製するのは困難であり、従って使用を差し控えるのに十分な ほど高価であり、かつ細胞Ｉｌ！２透過性に乏しいので、アンチセンス法および 三重らせん法の双方において非実用的である。 これらの間開があるため、改良法および代替法が広籟に探求されている。たとえ ば三重らせん形成による二本鎖ＤＮＡ　（ｄｓＤＮＡ）の認識に関連して生じる 問題は、１本の路上のポリプリン配列を認識する賢明な″スイツ升くツク′化学 結合によって軽減され、“スイツチングノくツク″によって他方の鎖を認識する ことができる。たとえばマツカーディー、モールズおよびフレーラー（ＭｃＣｕ ｒｄｙ、　Ｍ。 ｕｌｄｓ、　Ｆｒｏｅｈｌｅｒ）　、　Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　（印刷中）を 参照されたい。また、人工的な塩基を用いることによって良好ならせん形成が達 成され、これによりイオン濃度およびｐＨに関丈る結合条件が改善された。 半減期および１１５！透過性を改善するために、ポリヌクレオチド主鎖における 多数の変更かなされたが、これまでのところ目的とする結果は得られていな０゜ これらの変更には下記のものか含まれる・メチルホスホネート、モノチオホスフ ェート、ンチオホスフェート、ホスホルアミデート、ホスフェートエステル、架 橋ホスホルアミデート、架橋ホスホロチオエート、架橋メチレンホスホネート： シロキサン橋、カーボネート橋、カルボキシメチルエステル橋、アセトアミド橋 、カルバメート橋、チオエーテル、スルホキシ、スルホノ橋、各種“プラスチッ ク″ＤＮＡ、α−アノマー橋を含むヌクレオチド間デホスホ類似体、およびボラ ン誘導体。 国際特許出願公開８６１０５５１８号明細書には、標的塩基配列を含む一重鎖ポ リヌクレオチドに結合するのに有効なポリマー組成物が広範に特許請求されてい る。その組成物は次式の非ホモポリマー系の実質的に立体規則性ポリマー分子か らなると述べられている・ ＲＩ　Ｒ２Ｒｓ　Ｒ・ Ｂ　−Ｂ−Ｂ〜・・・　Ｂ 式中 （ａ）Ｒ＋　Ｒ−はワトソン／クリック対合により標的配列の対応するインシー ケンス（ｉｎ−ｓｅｑｕｅｎｃｅ）塩基に結合するのに有効なプリン、プリン様 、ピリミジンおよびピリミジン様の複素環類から選ばれる認識部分であり。 （ｂ）ｎはポリマー分子と標的配列の間で形成されるワトソン／クリック水素結 ′合の総数が少なくとも約１５になるものであり：（ｃ）Ｂ−Ｂは主として化学 的に安定な、実質的に帯電していない、主としてアキラル結合により結合した主 鎖部分であり：（ｄ）主鎖部分が環式構造を有する場合には主鎖部分の長さは５ −７原子であり、主鎖部分が非環式Ｊｌａを有する場合には主鎖部分の長さは４ −６原子であり：そして （ｅ）主鎖部分は、認識部分と標的配列の対応するインシーケンス塩基との間の ワトソン／クリック塩基対合を可能にする位置に認識部分を支持する。 国際特許出願公開８６１０５５１８号明細書によれば、認識部分は種々の天然核 酸塩基および核酸塩基類似体であり、主鎖部分はフラン環もしくはモルホリン環 からなる環式主鎖部分、または次式の非環式主鎖部分からなる。 式中のＥは一〇〇−または一３Ｏ２−である。その出願明細書には、サブユニッ トの合成に関して、主鎖の結合反応に関して、およびポリマーの観み立て法に関 しては一般的記述がある。しかしその明細書には、特許請求される化合物または 横遺体を天際に製造する例が示されていない。国際特許出願公開８６１０５５１ ８号明細書には、特許請求される組成物が標的配列と結合し、その結果、診断ま たは療法に用いられる可能性のあることが示されているが、特許請求されるポリ マーの結合アフィニティに関してはデータがない。 国際特許出願公開８６１０５５１９号明細書には、国際特許出願公開８６１０５ ５１８号明細書に記載されるポリマーであって、ただし固体状支持体に結合した ものを含む診断用の試薬および系が特許請求されている。国際特許出願公開８６ １０５５１９号明細書には、特許請求される診断試薬の実際の調製に関しても例 がなく、それらの試薬の診断上の有効性を示すデータもはるかに少ない。 国際特許出願公開８９／１２０６０号明細書には、オリゴヌクレオチド類似体を 合成するための６種ビルディングブロック、およびそれらのビルディングブロッ クを定められた配列に結合させることにより形成されるオリゴヌクレオチド類似 体が特許請求されている。それらのビルディングブロックは“硬質″（環を含む ）または″軟質″　（環を含まない）のいずれであってもよい。両方の場合とも ビルディングブロックはヒドロキシル基およびメルカプト基を含み、これらによ りビルディングブロックが結合してオリゴヌクレオチド類似体を形成すると述べ られている。オリゴヌクレオチド類似体の結合部分はスルフィト（−３−）、ス ルホ牛シト＜＝ＳＯ−）およびスルホン（−３Ｏ２−）よりなる群から選ばれる 。国際特許出願公開８９／１２０６０号明細書には、ビルディングプロ・ｙりの 合成、およびオリゴヌクレオチド類似体の合成のための結合反応に関する一般的 記載、ならびにビルディングブロックの製造につき記載した実験例が提示されて いる。 しかしその明細書には、特許請求されるオリゴヌクレオチド類似体の製造に関す る例、およびオリゴヌクレオチド類似体か標的オリゴヌクレオチドに特異的に結 合することを確認する例は示されていない。 さらにオリゴヌクレオチドおよびそれらの類似体は、結合性を改善するために挿 入体（ｉｎｊｅｒｃａｌａｔｏｒ）に、二本鎖および一本鎖ＤＮＡの双方への結 合性を改善するためにポＩＪ　ＩＪレシンたは他の塩基性基、またｍ透過性を改 善するためにペプチドに、連結された。しカルそれらの連結は二本鎖および一本 鎖ＤＮＡのいずれに対しても満足すべき結合性をもたらさなかった。たとえばメ チルホスホネートおよびモノチオホスフェートから生じる他の問題は、キラリテ ィ、不十分な合成収率、または固相法による合成の実施の困難さであった。 大部分の場合、これらのうち数種の修飾法を採用しうるにすぎない。その場合で すら、短い配列−一わずか二量体である場合が多いｍ−またはモノマーが得られ るにすぎない。さらに、実際に製造されたオリゴマーは稀にしかＤＮＡもしくは ＲＮＡに結合しないことが示されたか、または生物学的な試験が行われていない 。 Ｔ、値の測定によりアッセイされるように、これらの主鎖修飾法は大部分が、修 飾されたオリゴヌクレオチドとその相補的な天然オリゴヌクレオチド間で形成さ れるハイブリッドに関する安定性を低下させた。従って一般に当技術分野では、 主鎖の修飾はそれらのハイブリッドを不安定にし、すなわらＴ、値を低下させる ので、最小限にしておくべきであると理解されている。 発明の目的 本発明の目的は、５ｓＤＮＡおよびＲ，Ｎ　Ａ　ｊｌｌと結合して、それらと安 定な／）イブリントを形成する化合物を提供することである。 さらに本発明の目的は、対応するＤＮＡより強固に５ｓＤＮＡおよびＲＮＡ鎖と 結合する化合物を提供することである。 他の目的は、天然の核酸塩基または他の核酸塩基結合性部分かペプチド主鎖に共 有結合した化合物を提供することである。 さらに他の目的は、二本鎖ポリヌクレオチドの一方の鎖と結合し、これにより他 方の鎖と買換しうる、Ｒ，ＮＡ以外の化合物を提供することである。 さらに他の目的は、それらの化合物を用いた治療法および予防法を提供すること である。 発明の概要 本発明は、対応するＤＮＡより強固に相補的５ｓＤＮＡおよびＲＮＡ鎖と結合す る、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と］プＣ知られるｆｉ規な−ｌ！ｆの化合物を提供 する。 本発明化合物は一般に、アザ窒素を介してペプチド主鎖に連結したりガントから なる。代表的リガンドには、適切なリンカ−によりペプチド主鎖に結合した４種 類の主要天然ＤＮＡ塩基（すなわちチミン、シトシン、アデニンまたはグアニン ）、まｔ、：は他の天然核酸塩基（たとえばイノシン、ウラシル、５−メチルシ トシンまたはチオウラシル）または人工的な塩基（たとえばプロモヂミン、アザ アデニンまたはアザグアニンなど）が含まれる。 特定の峰よ（７い形態においては、本発明のペプチド核酸は一般式（１）をもつ 式中 ｎは少なく吉も２であり。 Ｌ’−Ｌ”はそれぞれ、水素、ヒドロキシ、（Ｃ，−Ｃ４）アルカノイル、天然 核酸塩基、非天然核酸塩基、芳香族部分、ＤＮＡ挿入体、核酸塩基結合性基、複 素環式部分、およびリポータ−リガンドよりなる群から別個に選ばれ、少なくと も１個のＬ’−Ｌ“は天然核酸塩基、非天然核酸塩基、ＤＮＡ挿入体、または核 酸塩基結合性基であり。 Ａ’−Ａ”はそれぞれ、単結合、メチレン基、または式（Ｉｌａ）もしくは（Ｉ ｌ　ｂ　）の基であり （工］：ａ）　（工１ｂｌ ［これらの式中 ＸはＯ，Ｓ、、Ｓｅ、ＮＲ’、ＣＸｉ、またはＣ（Ｃ１ｈ）　２ｒ：あり。 Ｙｉ；を単結合、０、ＳまたはＮＲ’であり。 ｐおよびｑはそれぞれセ［１または１−５の整数であり、ｐ　＋　ｑの和１；ｉ ｌ。 を越えず。 ｒおよびＳはそれぞれセロまたＩｔ　ｉ−５の整数であり、ｒ−＋ｓの和は］０ を越えず。 ＲＩおよびＲ９まそれぞれ、水素、ヒトＶ］キン−またはアルコキシ−またはア ルキルチオ−ｉ’ｉ！ｆ換されていてもよいＣＣ＋〜Ｃ，）アル（ル、ヒト「］ キシ、アルコキ入アルキルチオ、アミノおよびハロゲンよりら゛る計から別ｅｔ こ選ばれ、そし−〇 Ｒ３およびＲ′はそれぞれ、水素、（ＣＩ　Ｃ４）アルキル、ヒト「Ｊキシ−８ またはアルコキノ−またはアルキルチオ−置換された（ＣＩ−Ｃ４）アルキル、 とドロキシ、アルコキシ、アルキルチオおよびアミノよりなるｉｔから別個１こ 選はれる］　。 Ｂ’−Ｂ’はそれぞれＮまたはＲ３Ｎ’であり、ここでＴ（３はＦ、Ｂｅに定ｙ ）だものであり。 Ｃ１−Ｃ“はそれぞれＣＲ’Ｒ７、ＣＩＩＲ″ＣＨＲ７またはＣＲ’Ｒ７Ｃ１ｈ であり、ここでＲ６は水素であり、かつＲ′は天然のα−アミノ酸の側鎖よりな る！■ｈ・ら選ばれるか、またはＲ６およびＲ′は、水素、（Ｃ２Ｕｓ）アルキ ル、ｒリール、アルアルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（ＣＩ　Ｃｇ）ア ルコキシ、　（Ｃ，−Ｃｇ）アルキルチオ、ＮＲ３Ｒ４およびＳＲ’［ここでＲ ３およびＲ４は上記に定めたものであり、Ｒ５は水素、（Ｃ＋　Ｃｓ）アルキル 、ヒドロキシ−、アルコ午シーまたはアルキルチオ−直換された（Ｃ＋　Ｃｓ） アルキルである］よりなる群から別個に選ばれるか、またはＲ６とＲ７は一緒に なって脂環式もしくは複素環式の系を完成し。 Ｄ’−Ｄ”はそれぞれＣＲ６Ｒ’、Ｃ）ｈｃＲ’Ｒ７またはＣＨＲ’ＣＨＲ’で あり、ここでＲ１＋およびＲ７は上記に定めたものであり；Ｇ’−Ｇ″−１はそ れぞれ、いずれの向きであってもよい−ＮＲ’　Ｃｏ−１−ＮＲ’Ｃ５−１−Ｎ Ｒ’　ＳＯ−または−ＮＲ’　５Ｏ２−１ここでＲ１は上ｊ占こ定めたものであ り、 Ｑは−ＣＯ２Ｈ１−ＣＯＮＲ’　Ｒ’　、−３Ｏ３Ｈもしくは一８Ｏ２ＮＲ’　 Ｒ″、または−ＣＯｙＨもしくは−３Ｏｓ　ｌ−１の活性化された誘導体であり 、そして■は−ＮＨＲ”Ｒ“′または−ＮＩＩＲ′’Ｃ（０）　Ｒ’“であり、 ここでＲ′、Ｒ＃、Ｒ″′およびＲ″′は、水素、アルキル、アミノ保護基、リ ポータ−リガンド、挿入体、キレータ−（ａｈｃＩ　ａ　ｔ’ｏ　ｒ）　、ペプ チド、蛋白質、炭水化物、指貫、ステロイＦ、オリゴヌクレオチド、ならびに可 溶性および不溶性ポリマーよりなるＵから別個に選ばれる。 本発明のペプチド核酸は、それらの認識部分が主鎖のアミド窒素原子、ヒドラジ ン部分または炭素原子に結合するのではなく、主鎖のアザ窒素原子に結合してい るという点で、国際特許出願公開８６１０５５１８号四重１１１書に記載された ものと異なる。 好ましいペプチド核酸は一般式（［ｌ　Ｉ）を有するＬはそれぞれ、水素、フェ ニル、複素環式部分、天然核酸塩基、非天然核酸塩基よりなる群から別個に選ば れ： Ｒ″はそれぞれ、水素、および天然のα−アミノ酸の側鎖よりなる群から別個に 選ばれ。 ｎは１−６０の整数であり。 ｋ、Ｉおよびｍはそれぞれ別個にゼロまたは１−５の整数であり。 Ｒ″′はＯＨ，Ｎｌ２または−ＮＨＬｙｓＮＨ２であり、そしてＲ’はＨまたは ｃ　ｏ　ＣＨ３である。 特に好ましいものは、式中のしがそれぞれ、核酸塩基チミン（Ｔ）、アデニン（ Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびウラシル（Ｕ）よりなる群から別 個に選ばれ、ｋおよびｍがゼロまたはｌであり、ｎが１−３０．特に４−２０の ！Ｉｅ１である、式（Ｉ　Ｉ　Ｉ）の化合物である。これらの化合物の例は図１ に堤示され、これはそれらの化合物と一本鎖ＤＮＡとの類似性を示す。 本発明のペプチド核酸は、溶液中または同相での標準的なペプチド合成法を適用 することにより合成される。用いられるシンソン（ｓｙｎｔｈｏｎ）は特別にデ ザインされたモノマーアミノ醒またはそれらの活性化された誘導体であり、標準 的な保護基により保護されている。オリゴヌクレオチド類似体も対応するシ酸お よびジアミンを用いて合成することができる。 たとえば本発明による新規なモノマーであるンンソンは、下記一般式のアミノ酸 、シ酸およびジアミンよりなる群から選ばれる式中のＩｌ、Ａ、ＢＳＣおよびＤ は前記に定めたものであり、ただしそれらに含まれるアミン基はいずれもアミン 保護基により保護されていてしよく、ＥはＣＯＯ１−１、Ｃ３ＯＩ−（，５ＯＯ Ｈ１ＳＯ２０Ｈまたはそれらの活性化された誘導体であり。 ＦはＪ’ｔＨＲ３またはＮＰｇＲ３であり、これらにおいてＲ３は前記に定めた ものであり、ｐｇはアミノ保護基である。 本発明による奸ましいシンソンモノマーは、下記構造式（Ｖｌｌ）のアミノ酸二 またはアミノ保護された、および／または酸末端活性化されたそれらの誘導体で あり、式中のしは水素、フェニル、複素環式部分、天然核酸塩基、非天然核酸塩 基、および保護されたそれらの誘導体であり：Ｒ７′は水素、天然のα−アミノ 酸の側鎖よりなる計から別個に選ばれる。特に好ましいものは、式中のＲ７＋が 水素であり、［、が核酸塩基チミン（Ｔ）、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）　 、グアニン（Ｇンおよびウラシル（Ｕ）、ならびに保護されたそれらの誘導体よ りなる群から選ばれる、式（ＶｒＩ）のシンソンである。 意外にもこれらの化合物は１本の鎖と置換し、これにより恐らく他方の鎖と二重 らせんを形成するすることにより、二本鎖ＤＮＡを認識することもできるであろ う。これらの認識は５−６０塩基対の長さのｄｓＤＮＡ配列に対して起こりう− クＤＮＡ配列が見出される範囲だからである。１７−１８塩基を認識する試薬は 特に重要である。これはヒトゲノムのユニーク配列の長さだからである。本発明 の化合物はｄｓＤＮＡと三重らせんをも形成しうるはずである。 本発明化合物は、その結合性が改善されたことによってアンチセンス試薬として ａ効になるはずであるということからみて、この驚くべき予想外のｄｓＤＮＡ挙 動か見出されたため、広範な関連試薬の鎖匠換を引き起こしうろことが予測され る。 従って１１Ｑ点において本発明は、生物の細胞内の特定の遺伝子の発現を阻害す る方法であって、該生物に該遺伝子と特異的に結合する前記試薬を投与すること よりなる方法を提供する。 さらに本発明は、生物に前記Ｅｊ、薬を投与することにより生物の細胞内の特定 の遺伝子の転写および／または復製を阻害する方法、あるいは二本鎖ＤＮＡの特 定の領域の分解を誘発する方法を提供する。 さらにまた本発明は、細胞またはウィルスのゲノムの配列に特異的に結合する前 記試薬とそれらの細胞またはウィルスを接触させることにより、それらの細胞ま たはウィルスを死滅させる方法を提供する。 図面の簡単な説明 添付の図面を参照することによって、本発明の多数の目的および利点がより良く 当業者に理解されるであろう。 図１は、天然のデオキシリボオリゴヌクレオチド（Ａ）および本発明のペプチド 核酸（ＰＮＡ）（Ｂ）を示す。 図２は、ＤＮＡ認識のための天然および非天然の核酸塩基およびリポータ−基の 例を示す。 図３は、下記を模式的に示す：（ａ）Ａｃ　ｒ’−（Ｔａｅｇ）＋６−Ｌｙｓ− ＮＨ３（Ａｃ　ｒ−ＴＩＯ−ＬｙｓＮＨ，）による光分解；（ｂ）Ａｃｒ’−（ Ｔａｅｇ）＋５−Ｌｙ　５−Ｎｌ（２のジアゾ結合アクリジンによるフォトフッ トプリンティング、および奸ましいＫＭｎＯｎ〜開裂７ならびに（ｃ）Ｓ＋−ヌ クレアーゼにより増強された開裂ＩＩｆらびに（ｄ）Ａｃ　ｒ’−（’「ａｅｇ ）　１ｏ−Ｌｙｓ−ＮＨ２結合部位のミクロコツカスヌクレアーゼによる開裂。 図４は、本発明のｌ）　Ｎ　Ａ、モノマーであるンンソンの例を示す。 図５は、Ａｃ：ｒ’リガンド、およびＰ　Ｎ　Ａ、　、すなわちＡｃ　ｒ’　− （Ｔａ　ｅ　ｇ）　ＩＩ）−Ｌ）’５−Ｎｌ−（ｔを示す。 図６は、モノマ−であるノンソノの製造に関する一般式を示す１、図７は、Ａｃ ｒ”Ｊガントの製造に関する一般式を示す。 図８は、保護されていない線状ＰＮＡアミドの製造を説明した、固相Ｐ　Ｎ　Ａ 合成に関する一般式を示す、。 図５３は、下記物質の分析用１１　Ｐ　Ｌ　Ｃり［７７トグラムを示す　（Ａ） Ｉ−ＩＦ−開裂後（／ｉＪ結乾燥前）の零圧製Ｈ−［’Ｔａ　ｅ　ＩＺ］　ｕ　 Ｎ１−１２　；　（Ｂ）　ＨＦ　ＩＪＧｉ＆　（凍結乾Ｑｋ前）の粗製Ａ　［： 　ｒ　’　−［Ｔａ　ｅ　ｇｌ　１ｓ−Ｎｌｈ　：および（Ｃ）精製Ａｃ　ｒ’ 、−（１”ａ　ｅ　ｇｌ　Ｉｓ−’−ＮＨ７ｏ緩衝ｉ＆Ａ、５％　ＣＩ　３（− ：　Ｎ／　９５％　Ｈ，Ｏｌｏ。 ０４４５％　ＴＦＡ、、緩衝液Ｂ、６０％　Ｃｒｔ、ＣＮ／／１０％　Ｈ７０／ 領　０３９０％　］’Ｔ：Ａ、直線勾配、３０分でＯ−１００％のＢ　；　ｌｌ ｉ？ｆ、ｍｃ　１−　、　２　ｍ　ｌ　／分。 カラム、バイダック（Ｖｙｄａ　ｃ）Ｃ１ｇ　（５Ｉ１ｍ、０．４６ｘ２５ｃｍ ）　、。 図１０は、図９の場合と同じ条件を用いた下記物質の分析用Ｈｒ’　Ｌ　Ｃクロ マトグラムを示す　（Ａ）　Ｆａｌｕｌ＋−［Ｔ　ａ　ｃ　ｇｌ　１ｏ−１，ｙ 　５−ＮＩ＋２および（Ｂ：１ＪｕｌＮ　−ＩＴａ　ｅ　ｇｌ　＆　−Ｃａ　ｅ 　ｇ　−［１−ａ　ｅ　ｇｌ　＋−Ｌｙ　ｓ　−Ｎ）ｌ、、。 図１１８および１１Ｆ）は、ｄＡ、、、に対するＡｃｒ−ＴＩＯ−１，ｙｓの結 合性を示す。５’　−”Ｐ−！識オリゴヌクレオチド（］−）　（５’　Ｇ　Ａ 　”「ＣＣＡ　＋。Ｇ）をΔｃｒ−Ｔ、１Ｏ−ＬｙｓＮＨ□の不在下または存在 下で、およびオリゴヌクレオチド（２）　（５’　−Ｇ　Ａ　Ｔ　ＣＣＴ　＋　 ｏ　Ｇ　）の不在下または存在下でインキコ、ベートし、試料をポリアクリルア ミドゲル電気泳動（ＩＭＡＧＥ）およびオートう／オグラフィーにより、′自然 条件″（図１１ａ）または″変性条件′　（図１１ｂ）下で分析した。 図１．２　ａ−ｃは、ｄ　５Ｉ）Ｎ、’１−Ａｃ　ｒ−ＴＩＯ−１−ｙｓＮ］− （ｚ＝Ｉンプレツクスの化学的、光化学的および酵素によるブロービッグを示す 。Ａｃｒ−ＴＩＯ−ＬｙｓＮｌｌｚと、ｄＡ、ｔｏ／ｄ、Ｔ１ｏＦ的配列金倉む Ｕｐ−末端標識ＤＮＡフラグメン）・とのコンブ１ノツクスを、アフィニティ光 開裂法（図１２　ａ　、、、１−３列２図１．２　ｂ、１−：３列）、フォ（・ ）＝、　）−プリンティング法（図１−２ａ、５−６列）　、遇？　、’／カニ 、ノ酸ブロービング法（図１２ｈ、４−６列）、またはブドウ球菌ヌクレアー、 ゼによる（図１２ｂ、８−１．０列）も［バはヌク１ノアーゼＳ１による（図１ ．２　ｃ　）１０−ヒ゛ング法（こよりプＬｊ−ビ５／グし、た１、八−ｌｌ’ ｌ　（図１２ａ）；！：ノコ（、目’−６１’ｌ　（１，２ｂ、ｃ）をプルービ ングした。 図１３（」、保護されたＦ’　Ｎ　Ａ　Ｅ／ンソンの合成法を示す、。 図１−・１は、保護されたアデニンモノマ−ノンソノの合成法を示す。 図１５は、保護されたグアニノモノマ−シンソノの合成法を示す、。 図１（ｉは、、ＰＮＡ丁蛸丁度改変を示す。 図１７ｉ、ｔ、正常ｔｊア〜〕酸にスミ応する＋ｎｑ鎖を備λ−たチミンｅツマ −ン゛５／ソ′５σ。 Ｃ成法苓示す。 図１８？ｉおよび１８１〕は、それぞれチミンモノ−７−ソ゛、／ソンの”アミ ツブ１″ｊビル類似体およびプロピオニル類似体の合１戊法を示す。 ［閾１９は、ナミ１．／ｌノマーノンソ：）のアミノエヂル−β−アラニンＹ口 （以前の合！戊法を示す。 図２０は、ＰＮ　Ａ　−−−１１ｎ、−Ｔ　、Ｃ：および−Ｔ’、Ｃ，が高い配 列特異性で二本鎖ＤＮＡに結合することを１１［明するＰＡＧＥオートラジオグ ラフを示す。 図２１は、二本鎖標的に対するＰ　Ｎ　Ａ　−、、Ｔ　、。結合の反応速度を証 明する、ｌ’ＡＧｌ・］オ・−トラジオグラフのデンントメトり一走査に基づく グラフを示す。 図２２（４、Ａ）、１／′１゛１ｏ二本鎖Ｄ　Ｎ　Ａ　ｆｆｌ的に結合した種々 の長さのＴ）Ｎ　Ａの熱安定性を証明する、Ｉ）へＧＥオートランオグラフのデ ンントメトり一走査に基づくグラフを示す。 閃２３は、Ｐ　Ｎ　Ａか制限酵素３ｊ識部位の（７１近に結合した場合にＩ）　 Ｎ　Ａに対する制＋！ＩＪ酊素活性がｊｌ害されることをＩＦ明する電気々Ｙ動 ゲル染色を示す３゜図２４は、１２５１−漂ＷＰＮへ〜′Ｆｉｏか相補的ｄＡｚ ｏオリゴヌク１ノオチｌ、に結合することを証明するｌ）　Ａ　ｃ　Ｅオー　ト ラジオグラフを示す、３図２５は、本発明によるペプチド核酸を示す。 図２６は、本発明によるペプチド核酸に関する合成の方向を示す。 図２７は、ペプチド核酸の合成における窒素保護基としてのトンル基に関する試 験法を示す。 発明の詳細な記述 本発明によるオリゴヌクレオチド類似体およびモノマージンソノ中において、リ ガンドしは一１′：、とじて天然において見られる位ｍ１すなわぢアデニンまた はグアニンについては９位、チミンまたはントシンについては１位において結合 した、天然の１ｆｉｒｖ＆塩基である。あるいはＬは非天然−核酸塩基（核酸塩 基類似体）、他の塩基結合性部分、芳香族部分、（Ｃ，−Ｃ，）アルカノイル、 ヒドロキシまたは水素であってもよい。若干の代表的な核酸塩基リガントおよび 合成リガンドの例を図２に示す。さらにＬはＤＮＡ挿入体、リポータ−リガンド 、たとえば発蛍光団、放射性標識、スピン標識、ノーブテン、または蛋白質認識 リガンド、たとえばビオチンであってもよい。 モノマーンンソンにおいて、１．は保護基によりブロックされていてもよい。こ れを図４に示す。図中のＰｇＩは、酸、塩基、または水添分解により、もしくは 光化学的に開裂しうる保護基、たとえば【−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、フ ルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、または２−ニトロベンジル（ ２Ｎｂ）である。 リンカ−Ａは多様な群のものであり、たとえば−ＣＲ’Ｒ”Ｃ０−１−ＣＲ’Ｒ ”Ｃ５−１−ＣＲ’Ｒ２Ｃ３ｅ−１−ＣＲＩＲ”ＣＮｌｌＲ３−１−ＣＲ’Ｒ２ Ｃ＝Ｃ１１ｚ−および−ＣＲ’Ｒ′Ｃ＝Ｃ（Ｃ１１３）２−であり、これらの式 中のＲ１、Ｒ′およびＲ３は前記において定めたものである。好ましくはＡはメ チレンカルボニル（、−、ＣＨ３ＣＯ−）である。またへは長鎖部分、たとえば プロパノイル、ブタノイルもしくはペンタノイルであるか、または０か他の意味 のＸで置換された、もしくは連鎖がＲ’Ｒ”で置換された、もしくはＹを含む複 素体である、対応する誘導体であってもよい。さらにＡは、（Ｃ２Ｃｇ）アルキ レン鎖、Ｒ’　Ｒ２で置換された（Ｃ２Ｃｇ）アルキレン鎖であるか、またはＹ を含む複素体てあってもよい。特定の場合、Ａは単結合であってもよい。 本発明の好ましい形態において、Ｂは窒素原子であり、これによりアギツル主鎖 の可能性が提示されるうＢはＲ２Ｈ”であってもよく、この式中のＲ’は前記に おいて定めたちのである。 本発明の好ましい形態において、Ｃは−ＣＲ’Ｒ’−であるが、炭素２個の単位 、ずｆｉｈち〜ＣＩＩＲ’ＣＩ（Ｒ７ｔたｔ；ｉ　ＣＲ’Ｒ’Ｃ１１２であって ｂよく、Ｌ、　Ｊ’Ｌ　ソノ式中のＲ６およびＲ”は前ス占こおいて定めたもの である。Ｒ６およびＲ７はへテロアリール基、たとえばピロリル、フリル、チェ ニル、イミダゾリル、ビリツル、ピリミンニル、インドリルであるが、または− 緒になって脂環式系、たとえば１゜２−ヌクロブタンノイル、１．２−ンクロベ ンタンシイルまたは１．２−ヌク「Ｊヘキサンジイルを完成していでもよい。 本発明の奸ましい形態において、モノマージンソノ中のＥはＣｏｏｌ（またはそ の活性化された誘導体であり、オリゴマー中のＧは−ＣＯＮ　Ｒ，’−である。 前記のように、１号はＣ３ＯＩＩ、５ＯＯＨ１ＳＯ２０Ｈまたはそれらの活性化 された誘導体であってもよく、これによりオリゴマー中のＧはそれぞれ−Ｃ８Ｎ Ｒ１−１−５ＯＮＲ３−および一８Ｏ２ＮＲ１−になる。活性化は、たとえばＥ により表される基中の水素が、生長する主鎖の形成に適した脱離基により置換さ れた、酸無水物またはれ５性エステル誘導体を用いて達成しうる。 主鎖を形成するアミノ酸は同一であっても異種であってもよい。本発明者らは、 ２−アミノエチルグリシンに基づくものが本発明の目的に特に好適であることを 見出した。 場合により、ＰＮＡの結合性を調節するために、いずれかの末端（Ｑ、［）にリ ガンドを結合させることが有刊である。代表的なりガントには、ｄｓＤＮＡの結 合性を改善するＤＮＡ挿入体、または静電相互作用によりＰＮＡの結合を強化す る塩基性基、た占えばリシンもしくはポリリシンが含まれる。負に帯電した基、 たとえばカルボキシおよびスルホ基を減少させるためにリガンドを使用しうる。 メンソノのデザインによれば、さらにこのような曲の部分を非末端位に配置する ことがＦｌ能となる。 本発明の他の観点においては、Ｉ’ＮＡオリゴマーを低分子エフェクターリガン ド、たとえばヌクレアーゼ活性もしくはアルキル化活性をもつりガント、または リポータ−リガンド（蛍光性、スピン標識、ｒｌｉ躬性、蛋白質認識性のりガン ト、たとえばビオチンまたはハプテン）に結合させる。本発明の他の絨点におい ては、ＰＮＡオリゴマーをペプチドまたは蛋白質に結合させ、その際ペプチドは シグナル形成活性を備え、蛋白質はたとえば他の酵素、転写因子または抗体であ る。またＰＮＡを水溶性または水不溶性ポリマーに結合させることができる。本 発明の他の観点においては、■）ＮＡをオリゴヌクレオチドまたは炭水化物に結 合させることができる。妥当な場合には、固体支持体に結合させたある部分（た とえばペプチド鎖、リポータ−１挿入体、または他の種類のりガント含有基）上 にｒ’ＮＡオリゴマーを合成することができる。 これらのコンソＪゲー・トを遺伝子調節（たとえば遺伝子を標的とする薬物）、 ３断、バイオｊクノロシーおよび科学的な目的に用いることができる。 本発明のｔｔｂのｕ点としては、Ｒ，Ｎ　Ａおよび５ｓＤＮＡを標的とするＰＮ Ａを用いて、ｊ“ンチャンス型遺伝子制御部分、ならびに核酸の同定および精製 のためのハイブリダイゼーションブローブの双方を調製することができる。さら にｌ）ＮＡをそれらがｄｓＤＮＡと三重らせんを形１戊しうるように修Ｈｉする ことができる。 ｄｓＩ）ＮＡに対して配列特異的に結合゛４る試薬は、遺伝子を標的とする薬物 と１７で使用される。ごれらは癌、エイズその他のウィルス性感染症の治療に極 めて有用な薬物であると予想され、ある種の１ｉｉ伝子病の治療にも有効である ことが分かるであろう。さらにこれらの試薬は特異的核酸の検出および中１１１ １のための研究および３断にも使用し・）る。 一○−７市らせんの原理はｄｓＤＮＡを配列特異的に認識するだめの当技術分野 で知られている唯一の原理であると考えられる。しかし三重らせんの形成は大部 分がホセブリンーホモピリミシン配列の認識に限定されている。鎖百換法は４種 類の天然塩基の使用によりいかなる配列をも認識（７うるという点で、三重らせ んの認識より優れている。また１″ｊ置換法の場合、認ｍは生理的条件において 、すなわち中性ｐ）［、周囲（２０−４０°Ｃ）温度および中程度の（１，００ −１５０ｍＭ）イオン濃度で容易に起こる。 遺伝子を標的とする薬物は、標的遺伝子の制ｒＢ頭域（プロモーター）に対して 相？＋ｉ的な核酸塩基配列（１０−２０単位を含む）を含むようにデザインされ る。 従ってその薬物の認識に際して、それはこのプロモーターに結合し、ＲＮＡポリ メラーゼがそれに到達するのをブロックする。その結果、ｍＲＮＡが産生されず 、従って遺伝子産物（蛋白質）が産生されない。その標的がウィルスにとって致 ｅ的な遺伝子内にある場合、生存可能なウィルス粒子は産生されないであろう。 あるいは標的がプロモーターから下流にあって、この位置でＲＮＡポリメラーゼ を終止させ、従って機能をもたないトランケートしたｍＲＮＡ／蛋白質を形成さ せることもできる。 塩基相補性ハイブリダイゼーションにょる５ｓＤＮＡの配列特異的認識を、同様 に０異的遺伝子およびウィルスを標的として利用することができる。この場合、 標的配列はｍＲＮＡに含まれ、従って標的に対する薬物の結合がリポソームの作 用を妨害し、結集的にｍＲＮＡから蛋白質への翻訳を妨害するつ本発明のペプチ ド核酸は、それらが相ｈ１的５ｓＤＮΔに対して著しく高いアフィニディをもっ という点で、先行技術の試薬より優れている。またそれらは電荷および水溶性を もたず、これにより細胞への取り込みが容易になり、がっそれらは非生物学的ア ミノ酸のアミドを含み、これによりそれらは生物学的に安定になり、たとえばプ ロテアーゼによる酵素分解に対して抵抗性となる。 ＋）ＮＡオリゴマーの特定の牛化学的／生物学的特性を下記の実験により説明す る。 １、、　ｄｓＤＮＡ水準における配列識別（実施例６３、図２０）８１−ヌクレ アーゼプロービング法を用いて、プラスミドｐ　Ｕ　Ｃ１，９のＢａｍＩＩＩ、 ５ａｉｌまたはＰｓｉ部位内へクローン化した認識配列ＡＨ１Ａ　ｓ　Ｇ　Ａ　 ５（Ａ９Ｇ）お、Ｊ：　Ｕ　Ａ　２　Ｇ　Ａ　２　Ｇ　Ａ　４　（Ａ　ｓ　Ｇ　 ２　）　ヘ０）　Ｔ　＋　ｏ、Ｔ６ＣＴ４　（Ｔ９Ｃ）およびＴ２ＣＴ２ＣＴ４ 　（Ｔａｅｇ）ＰＮＡ（７）結合ノ識別性を分析した。結果（図２０）は、これ ら３種類のＰＮＡがＦ記の相対効率においてそれぞれの認識配列に結合すること を示す　ＰＮＡ−Ｔｏｏ：　Ａ＋ｏ＞ＡｇＧ＞＞ＡｓＧｚ、ＰＮＡ　−Ｔ９Ｃ： 　Ａ９Ｇ＞Ａ＋ｏ−ＡｇＧ２、ＰＮＡ−′「、Ｃ／　Δ、ｌＧ　２　＞　Ａ　ｅ 　Ｇ　＞　＞　Ａ、　＋　ａ　ａ従って３７℃において１０中１個の誤対合は効 率を低下させ（１１（定５−１．ｏ（ａ　、これに対し２個の誤対合は許容され ない。 ２、　ＰＮＡ−Ｔｌｏ−ｄ　ｓ　Ｉ）ＮＡ鎖置換コンプレックス形成の反応速度 （実施例６６、図２１） ＰＮＡと３１’ｌ）−末端標識ｄｓｌ）ＮΔフラグメントを混合したのち種々の 時点におけるコンブ１ノツクス形成を、Ｓｌ−ヌクレアーゼによりブロービング した（図２１）。 ３、　ＰＮＡ−ｄｓＤＮΔコンブ１ノックスの安定性（実施例６７、図２２）ｒ ”　Ｎ　Ａ−Ｔ、と”Ｐ−ｄ　ｓ　ＤＮＡ　（Ａｌｏ／Ｔｏｏ）　ａ的とのコン プレツクスを形成しｔ、＝（６０分、：３７°Ｃ）。次いで、このコンプレック スを苗望する温度で過剰のオリゴ−ｄＡ、。の存在］′−′”Ｃ，ＬＯ５）間イ ンキコへ−１−Ｌ、、室温に冷却し、ＫＭｎＯｌによりブ（＋−５ング１７た。 結果（図２２）は、ＰＮＡオリゴヌクレオチドコンプレックスの鳩安定性か、” １″、″においでＰ　Ｎ　Ａのものを反映することを示す。 ４、　ＰＮＡによる制限酵素開裂のＩＩＪＩ害（実施例６５、図２３）プラスミ ド横１戊体ｐ’　Ｔ　１０は、ｐＵｃ１９内のＢａｍＨ１部位へクローン化され た（ｌΔ１゜／ｄ′「１０トラクトを含む。従ってｐｒｔｏをＢａｍＨＩおよび Ｐｖｕ■］て開裂させると、それぞれ２１１および１］１−ｂｐの小さなりＮＡ フラグメント２例が得られる。Ｐ　Ｎ　Ａ　Ｔ　＋　ｏの存在下ではＰｖｕ　Ｉ 　Ｉのみによる開裂に対応する３３６ｂｐフラグメノトが得られる（図２３）。 このようにＢａｍＨＩによる開裂は、そのｊＧ１１限酵素部位付近に結合したＰ ＮＡにより阻害される。これらの結果は、ＰＮＡ−ｄｓＤＮＡコンプレックスか １００％の収率で形成されることをも示す、ｐＴ８Ｃ２プラスミドおよびＰＮＡ −Ｔ８Ｃ２を用いて、同様な結果が得られた。 ５　オリゴヌクレオチドへの＋２Ｊ　ｆ４識ＰＮＡの結合（実施例６３、図２４ ）Ｎ　ａ　”　Ｉおよびクロラミン−Ｔを用いて、Ｔｙ　ｒ−ＰＮＡ−Ｔｏｏ− Ｌｙｓ　−ＮＩＩ２を１２５Ｉで標識し、ＨＰ　Ｉ−Ｃにより精製した。ｌ”［ −ＰＮＡ−Ｔ、。はオリゴｄＡＩｏに結合することがＰＡＧＥおよびオートラジ オグラフィーにより示された（図２４）。この結合は過剰の変性ウシ胸腺ＤＮＡ により競合された。 ｄｓＤＮＡの配列特異性認識は、１０個のチミン置換２−アミノエチルグリシル 単位を含み、リシンアミドをＣ−末端とし、９−アミノアクリンンリガンドコン プレックスをＮ−末端とするＰＮＡ　（９−Ａｃ　ｒ’−（Ｔａｅｇ）＋ｏ−Ｌ ｙｓ−ＮＨ７，図１１−ａ、１１ｂ）の、ｄ　Ａ　＋　ｏ／　ｄ　Ｔ　ｒ　ｏｅ Ａ的配列配列結合により説明される。標的は２４８ｂｐの３２ｐ−末ｔＷｅＪＤ ＮＡフラグメント中に含まれる。 鎖置換は下記種類の実験により確認された：１）照射に際してのＤＮＡの開裂を 確実にするために４−ニトロベンズアミド基を備えた９−Ａｃｒ’リガンドＣ図 ５）は、ＤＮＡをその結合部位に近接した位置でのみ開裂させると予想される。 ＲＮＡを上記の２４８ｈｐ　ＤＮＡフラグメントと共に照射すると、ｄＡ＋ｏ／ ｄＴ＋ｏ配列における選択的開裂が見られる（図３ａ＞。 ２）いわゆるフォトフットプリンティングアッセイにおいて。この場合に合成ジ アゾ結合アクリジンは、照射下にＤＮＡＵ合性物質性物質下でＤＮＡと相互作用 した際にＤＮＡを開裂させる（ＤＮＡが結合性物質により保護されている場合を 除く）。 このような実験を上記の２４８ｂｐ　ＤＮＡフラグメントにつき実施したところ 、ＰＮＡ結合部位の光開裂に対して明らかな保護が示された（図３ｂ）。 ３）同様な種類の実験において、同様に大部分のＤＮＡ結合性試薬によりその作 用が妨害されるＤＮＡ開裂酵素であるミクロコツカスヌクレアーゼが、Ｔ１゜− 標的において開裂の増大を示した（図３ｄ）。 ４）さらに他の種類の実験においては、周知のとおり過マンガン酸カリウム酸化 に対する一本鎖チミンリガンド（二本鎖チミンリガンドと対比して）の感受性が 高いことを利用した。この試薬の存在下での上記２４８ｂｐの酸化は、標的のＴ 、。−鎖における酸化のみを示した（図３ｂ）。 ５）同様な種類の実験において、Ｓ１ヌクレアーゼの一本鎖特異性は、標的のＴ ９．−鎖のみが攻撃されることを示した（図３ｃ）。 （Ｔａｅｇ）１ｏ、（Ｔ　ａ　ｅ　ｇ）ｔｏ　−Ｌ　ｙ　５−ＮＩＩ２、および Ａｃ　ｒ’−（Ｔａｅｇ）＋ａ−Ｌｙｓ７ＮＩ（、（図１１ａ、ｌ１ｂ）の、対 応するｄＡｌｏへの極めて効果的な結合性を、さらに２方法で説明する・ ■、リガンドーオリゴヌクレオチドコンプレックスは、ポリアクリルアミドゲル 中での電気泳動に際して、裸のオリゴヌクレオチドより低速で泳動するであろう 。従って、Ａｃ　ｒ’−（Ｔａｅｇ）＋ｏ−Ｌｙｓ−ＮＨ，および０ｐ−末端標 識ｄＡｇｏを用いてこのような実験を行った。これは、正常なｄＡｌ。／ｄＴ＋ ｏ二重らせんが安定である条件下で、およびこのような二重らせんが不安定であ る条件下で（変性作用性のゲル）、泳動遅延を示した。Ａｃ　ｒ’　−（Ｔａ　 ｅ　ｇ）　ｔｏ−Ｌｙ　ｓ〜ＮＩｈと３２Ｐ−末端標ｍ　ｄ　Ａ　Ｉ　Ｇの混合 物を用いて対照実験を行ったが、これは上記の条件下で遅延を示さなかった。 ２、一本鎖ＤＮＡからＤＮＡ二重らせん（ｄｓＤＮＡ）が形成される際には吸光 係数が低下する（淡色性）。従って、たとえばＴ１、すなわち５０％の二重らせ んが消失して一本鎖を牛しる温度の関数として吸光度を測定することにより、Ｄ ＮＡの変性を追跡することができる。 一本鎖オリゴデオキシリボヌクレオチドおよび下記のＰＮＡから二重らせんを形 成させた。９０℃に５分間加熱し、室温に冷却させ、３０分間保持し、最後に５ °Ｃの冷蔵庫に少なくとも３０分間保存することにより、一般に０．３　０Ｄｚ ６゜のＴ−に富む鎖が１当量の他方の鎖とハイブリダイズした。用いた緩衝液は すべて、リン酸塩１０ｍＭおよびＥＤＴＡ　１ｍＭであった。低塩緩衝液は塩化 ナトリウムを含有せず、これに対し中塩緩衝液は１．４０ｍＭ　ＮａＣ１を含有 し、高塩緩衝ｒ＆は５００ｒｎＭ　ＮａＣｌを含有していた。すべての緩衝液の ｐｌ＋は７゜２であった。ハイブリッドの融点をギルフォード・レスポンス装置 により測定した。正常なオリゴヌクレオチドおよびＰＮＡの双方につき、下記の 吸光係数を用いた　Ａ　１５．４ｍｌ／μｍｏｌ・ｃｍ；　Ｔ：　８．８　：Ｇ ：　１１．７およびＣニア、３゜融点を０．５℃／／分の段階で記録した。１２ ６０一対一温度のプロットの第１−導関数の最大値から１′、を判定した。 オリゴデオキシリボヌクレオチドのりスト１−　５’−Ａｊ五−Ｎ倶−触 ２．５Ｉ−思一思一思−Ａ ３、　５’−ＴＴＴ−ＴＴＴ−’Ｉ’ｒＴ−Ｔ４．５１−υ講−ＡＡＧ−ＡＪい −Ａ ５、　５’−ＡＡＧ−ＡＡＧ−人入Ａ−人６＋　５１−人入入−ＡＧ入−人人入 −Ａ７、　５１−人入入−ＡＧへ−人Ｇ入−人８、　．５’−ＴＴＴ−ＴＣＴ− ＴＴＴ−Ｔ９、　５’−ＴＴＴ−ＴＣＴ−ＴＣＴ−Ｔ１０、　５’−ＴＴＴ−Ｔ ＴＣ−’１”！？−Ｔ１１、　５〆−ＴｒＴ−ＴＴＣ−ＴＩ’Ｃ−Ｔ１２、　５ ’−ＴＴＣ−ＴＴＣ−ＴＴ’！’−Ｔ１コ、　ｓ’−ｍ−’ｒｒ’ｒ−’ｒｒ’ ｒ−’ｒｒｒ−ｒｒｒ１４、　５１−人入入一人ＡＡ−人ＡＡ−人ＡＡ−人人Ａ ＰＮＡのリスト・ ★　−？一つの別個の融点か県られ１、これは完全変（１の前に局部的融解があ る。：とを示す。 ＲＮＡ−Ａ（ポリｒＡ）とＰ　ＮＡ　’ｒｈｏ　Ｌ　ｙ　ｓ　ＮＩ］１の間に形 成されるノーイブリントは、測定し得ないほど高い４度（＞９０Ｃ）で融解する 。しかしＲＮＡ−Ａ、（Ｇ、ＣおよびＵではなく）との混合によりＡ２６．が大 幅に低■することによって、特異的ハイブリダイヤーン３ンか証明される。実験 は、ＬｍｌのＰＮＡ溶を夜とＬｍｌのＲＮＡ溶液（それぞれＡ２６゜−０，６） を渭合し、次いで２６０ｎｍにおける吸光度を測定することにより行われる。次 いで試料を９０℃に５分間加熱し、室温に冷却させ、この温度に３０分間保持し 、最後に５°Ｃに３０分間保存する。 １１Ｌ［の′五′験から、１詔の結論（出に、１１コができろ。融点曲線カ律察 されろσ丁Ｃ′、塩基スタノｔングがある。ＰＮＡ−■）ＮＡハイ／リント（ま ＩＥ’ｌ達なりＮＡ−４）Ｎへハイブリッドより安定であり、ＰＮＡ−４（ＮＡ ｉｆＪりい−、ぞう安定であＺ）ｏ　ｙＸス・１合は、その誤ス・１合した塩基 がＤ　Ｎ　、Ａ鎖；Ｆ、　！：Ｘ：　ｉ、ｉ））　Ｎ　Ａ鎖のいｌ′ゎ（５：あ ろが（こががオー〕らず、′「、値を著（バ低士さ糧！る１、什常ελ゛オリゴ ヌク１ノオＪドの場合と囮なり、。 ′「７１直はわずかにイオン清廉に依存するにすぎない１、本発明によるＰＮＡ の合成（こっき以Ｆに詳述ｊ７、（−の隙間１に６−Ｆ：ｔｉ、い■）ト１への 一例を示し１、その構造を■］捕的ＤＮＡの構ス貨、Ｉ−比輯“ζる。 ＰＮＡオリゴマーおよびポリマーの合成固体マトリックス・＼の分子の固定の原 理−一化学的変換に際し−Ｃの中間体を説明するのに役立っ−−−は、固相合成 またはメリフィ・−ルド合成と１．て知られ”ｒいる（参照　た吉えばメリフ、 イールド（ｉｔｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）　、Ｊ、＾＠、　Ｃｈｅｖａ、　Ｓｏｃ、 　、　１９６３．８５．２１４９および５ｃｉｅｎｃ（！、　１９８Ｇ、２３２ ．３４１）　、ア；ノ酸からペプチド・＼の段階的またはフラグメント毎の固相 紹み立てのための確立された方法には、普通はわずかに架橋し。 たスチレン−ジビニルベンセンコポリマーのビーズ状マトリックス、すなわち予 めジビニルベンゼン類の混合物が添加されたスチレンモノマーを粒状重合させる ごとにより形成された架橋コポリ７−を使用する。通常は１−２％の水準の架橋 が採用される。このようなマトリックスを本発明による固相ＰＮＡ合成にも用い ることができる（図８）。 固相の川明官能化に関しては、伝統的な固相ペプチド合成に関連して５０以上の 方法が報告されている（参照　たとえばバラニーおよびメリフィールド（Ｂａｒ ａｒａｙ、　１ｉｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）どＴｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ’　Ｖｏｌ 、２．アカデミツク・プレス、ニューヨーク州。 １９７９、　ｐ、　１−２８４．ならびにスチュワードおよびヤング（Ｓｔｅｗ ａｒｔ、　Ｙｏｕｎｇ）　、　’　５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　 ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ’　、第２版、パース・ケミカル・カンパニー、イリノイ州 ）。 クロロメチル官能基導入のための反応（メリフィールド樹脂：クロロメチル　メ チルエーテル／５ｎＣ１４反応による）、アミノメチル官能基（Ｎ−ヒドロキシ メチルフタルイミド反応による：参照・ミッチェル（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ）ら、　 ＴｅＬｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ、　、　１９７６、３７９５参照）およびベン ゾヒドリルアミノ官能基（ビニツタ（Ｐｉｅｔｔａ）ら、　Ｊ、　Ｃｈｅ■、　 ＳＬ′）ｃ、　、　１９７０．６５０）は、最も広く用いられているものである 。官能基の性質に関係なく、その目的は普通はコポリマーである固体支持体とそ の固体支持体に結合させるＣ−末端第１アミノ酸との間に固定のための結合を形 成することである。認識されるように、固定用結合は固体支持体とＮ−末端アミ ノ酸との間にも形成しうる。官能基の１濃度“をｍｍｏｌ／ｇにより表すことが 一般に好都合である。川明に導入された他の反応性官能基には、４−メチルベン ゾヒドリルアミノおよび４−メトキシベンゾヒドリルアミノが含まれる。これら の確立された方法はすべて、原則として本発明に関して有用である。ＰＮＡ合成 のための好ましい方法は、最初の官能基としてアミノメチルを用いる。この場合 、スペーサー形成試薬の一方の末端にあるカルボン酸基に対する本質的に定量的 なアミド結合の形成に関してアミノメチル官能基のアミノ基か反応性であるため 、アミノメチルは″スペーサー″または″ハンドル基の取り込みについて特に有 利である。 多数の適切なスペーサー−またはハンドル−形成性の二官能性試薬（バラニー（ Ｂａｒａｎｙ）ら、　Ｉｎｔ、　ＪＰｃｐｔｉｄｅｒ”ｒｏＬｃｉｎ　Ｒｅｓ、 　、　１９８７．３０．７０５＆’照）、特にアミノメチル官能基中などにある アミノ基に対して反応性である試薬が報告されている。 代表的な二宮能性試ｊ１５には下記のものが含まれる　４−　（ハロアルキル） アＩＪ−ルー低級アルカン酸、たとえば４−（ブロモメチル）フェニル酢酸、ｆ ３ｏｃ−アミノアンルー４−（オキシメチル）アリール−低級アルカン酸、たと えばＢＯＣ−アミノアシル〜、４−　（オキシメチルンフェニル酢酸、Ｎ−Ｄｏ ｃ−ｐ−アシルベンゾヒドリルアミン、たとえばＮ−Ｂｏｃ−ｐ−グルタロイル ベンゾヒドリルアミン、Ｎ−Ｂｏｃ−４’　−低級アルキル−ｐ−アシルベンゾ ヒドリルアミン、たとえばＮ−Ｂｏｃ−４’　−メチル−ｐ−グルタロイルベン ゾヒドリルアミン、Ｎ−Ｂｏａ−４’　−低級アルコキシ−ｐ−アシルベンゾヒ ドリルアミン、たとえばＮ−Ｂｏｃ−４’　−メトキシ−ｐ−グルタロイルベン ゾヒドリルアミン、および４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸。本発明に関し て特に適切な１タイプのスペーサー基はフェニルアセトアミドメチル（Ｐａｍ） ハンドルであり（ミッチェルおよびメリフィールド（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ、　ｌ［ ｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）　、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｔ　、　１９７６、４１． ２０１T）、 これは４−フェニルアセトアミドメチル基の電子吸引効果のため、Ｂｏｃ−アミ ノ脱保護試薬であるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）に対し、古典的ベンジルエステ ル結合より約１００倍安定である。 合成されたＰＮＡＥをＰＮＡ鎖のＣ−末端がアミド形である状態で固体支持体か ら開裂させるために取り込ませることができる特定の官能基（たとえばベンゾヒ ドリルアミノ、４−メチルベンゾヒドリルアミノ、および４−メトキシベンゾヒ ドリルアミノ）は、スペーサー基の導入を必要としない。それらの官能基はいず れも本発明に関して有利に使用しうる。 スペーサーまたはハンドル基の導入に関する他の方法は、いわゆる′プレフォー ムド−ハンドル′法であり（＃照：タム（Ｔａｇ）ら、　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、 　１９７９．９５５−９５７）、これは第１アミ人酸の結合を完全に制御し、ペ プチドまたはＰＮＡの合成に関係ない目的外の官能基の存在により問題が生じる 可能性を排除する。この方法においては、前記と同じ種類のスペーサーまたはハ ンドル基を、固体支持体に結合させたい第１アミノ酸と反応させる。このアミノ 酸はＮ−保護されており、かつ所望により目的のＰＮＡ鎖の生長に関係ない他の 側鎖において保護され一〇いる。従ってスペーサーまたはハンドル基を希望する 場合、固体支持体に結合させる第１アミノ酸を最初に導入された官能基（たとえ ばアミノメチル基）に結合しているスペーサー基の反応性遊離末端に結合させる か、またはスペーサー形成試薬と反応させることができる。次いでスペース形成 試薬を最初に導入された官能基と反応させる。他の有用な固定方式には、′マル チ脱離性（ｍｕ　ｌ　ｔ　ｉ　ｄｅ　Ｌ　ａｃｈａｂｌｃ）″樹脂が含まれ（タ ム（Ｔａｎ）ら、　Ｔｃｔｒａｂｅｄｒｏｎ　１．ｅｔｔ、　、　１９７９．４ ９３５．およびＪ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　、　１９８０．１０２．６１１　 ；タム（Ｔａｍ）　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｗ４．１，９８５．５０．５２X１ ）、これは２以 」二の遊離様式を可能にし、これにより合成デザインに際していっそうの融通性 が可能となる。 Ｎ−保護に適した選択は［−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基（カルピノ（ Ｃａｒｐｉｎｏ）　、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｔ　Ｓｏｃ、　、　１９５７．７ ９．４４２７；マツケイ（ｌｉｃ［ａｙ）らＪ、＾ｍ、　bｈｅｔ　Ｓａｃ、　 。 １９５７、７９．４６８６　、アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）ら、　Ｊ、　 Ａｍ、　Ｃｈｅ＋ｅ、　Ｓｏｃ、　、　１９５７．７９．６P８０）　−− これは普通は側鎖の保護のためのペンシル系基と組み合わせられるー、−および ９−フルオルニルメチルオキシカルボニルＪ．Ａｍ．　Ｃｈｅｗ．　Ｓｃｘ：、 　、　１９７０．　９２．　５７４８、およびＪ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅ＋＊．　 、　１９７２，　３７D　３４０４）　−一これは普 通は側鎖の保護のためのＬ−ブチル（ｔＢｕ）と組み合わせるｍ＝であるが、通 常の同相ペプチド合成法において周知の多数の他の可能性がある。たとえば広範 な他の有用なアミノ保護基があり、それらのうちの幾つかは以下のものであるＡ ｄｏｃ（ハス（■ａｓｓ）ら、Ｊ．ＡｔＣｈｅ＋＊．Ｓｏｃ．、１９６６、８８ ．　１９８８）　、Ｂ　ｐ　ｏ　ｃ　（シーバー　（Ｓｉｅｂｅｒ）　、、ＩＩ ｃｌｖ．Ｃｈｅ＋＊．＾ｃｔａ．．１９６８．５１．６１４）　、Ｍｃ　ｂ　（ ブラデイ（Ｂｒａｄｙ）　AＪ。 Ｏｒｇ．Ｃｂｃｖ．１９７７、４２．１４３）　、Ｂ　ｉ　ｃ　（ケンブ（Ｋｅ ＋＋ｐ）　ら、Ｔｅｔｒａｌ＋ｅｄｒｏｎ．　、　１９７５D　４６２ ４）、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル（Ｎｐｓ）（セルノくス（Ｚｅｒｖａｓ ）らＪ．ＡＩ。 Ｃｈｅ！１．　Ｓｏｃ．　、　１９６３．　８５．　３６６０）　、およびジチ アスクシノイル（Ｄｔｓ）　（／＜ラニー（Ｂａｒａｎｙ）ら、　Ｊ．　Ａｍ． 　Ｃｈｅｗ．　Ｓｏｃ．　、　１９７７、　９９．　７３６３）　、これらのア ミノ保護基、特に広範に用いられるウレタン官能基を基礎とするものは、大部分 のα−アミノ酸の結合に際してラセミ化（容易に形成されるオキ世シリノン（ア ザラクトン）中間体の互変異性化により仲介される（グツドマン（Ｇｏｏｄｍａ ｎ）ら、　Ｊ．　Ａｔ　Ｃｈｅｗ．　Ｓｏｃ．　、　１９６４、８６．２９１８ ）　）を効果的に阻止する。これらのアミノ保護基のほかに、ＰＮＡ分子、特に アキラル単位から形成されるものを組み立てる際には、他の点では“価値のない ″広範な非ウレタン型のアミノ保護基を利用しうる。従って上記のアミノ保護基 （またはこれらの基のいずれかより誘導されたもの）が本発明に関して有用であ るだけでなく、以下の大部分の要件を満たすアミノ保護基は実質的にいずれも有 用である　（１）緩和な酸に対する安定性（カルボキシル基によって著しい攻撃 を受けない）；　（２）緩和な塩基または核剤に対する安定性（当該アミノ基に よって著しい攻撃を受けない）；　（３）アシル化に対する抵抗性（活性化され たアミノ酸によって著しい攻撃を受けない）。さらに、（４）保護基は著しい副 反応なしにほぼ定ｍ的に除去し得なければならず、かつ（５）加入するアミノ酸 がある場合、それの光学的インテグリテイ−は結合に際して高度に保守されるこ とが好ましい。最後に、側鎖官能基の保護基は反復されるアミノ脱保護サイクル の条件に耐えなければならないので、側鎖保護基の選択は一般にアミノ保護基の 選択に依存する。これは、ＰＮＡ分子を化学的に組み立てる全体的方法がたとえ ばアミノ酸と側鎖保護基の酸安定性の差に依存するか（たとえば上記の’Ｂｏｃ ーペンシル″法の場合）、または直交性の（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）、すなわち 化学選択的な保護方式を採用するか（たとえば上記のＦｍｏｃ−ｔＢｕ’法の場 合）に関係なく適用される。 第１アミノ酸の結合ののち、固相合成の次の段階は目的とするＰＮＡ鎖の系統的 な形成である。この形成は、反復される脱係ｍ／結合のサイクルを伴う。最後に 結合したアミノ酸の一時的な保護基、たとえばＢｏｃまたはＦｍｏｃ基が、適切 な処理、たとえばＢｏｃの場合はトリフルオロ酢酸などを用いる酸加水分解、ま たはＦｍｏｃの場合はピペリジンなどを用いる塩基処理によって定量的に除去さ れ、Ｎ−末端アミン官能基を遊離させる。 次いで、次に目的とするＮ−保護されたアミノ酸を最後に結合したアミノ酸のＮ −末端に結合させる。アミノ酸のＣ−末端と最後に結合したアミノ酸のＮ−末端 とのこの結合は、数種の方法で行うことができる。たとえば加入するアミノ酸の カルボキシル基と最後に結合したアミノ酸のＮ−末端とを、縮合反応試薬、たと えばジシクロへ牛ジルカルボジイミド（ＤＣＣ）（ンーハンおよびヘス（Ｓｈｅ ｅｈａｎ．　ｎｅｓｓ）ら、　Ｊ．　Ａｔ　Ｃｂｅｔ　Ｓｏｃ．　、　１９５５ ．　７７、　１０６７）　、およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（ スラーンタキス（Ｓｒａａｎｔａｋｉｓ）ら、口ｉｏｃｈｃｍ．　ｂｉｏｐｈｙ ｓ．　ｒｅｓ．Ｃｔｙａｓｕｎ．　、　１９７６、　７３．　３３６）　、また はそれらの誘導体の補助により、直接に反応させることができる。あるいは加入 するアミノ酸をカルボキシル基が下記を含むｅｌｐｌの方法のいずれかにより活 性化された形で供給することにより、結合させることができる：活性エステル誘 導体、たとえば２．４−トリクロロフェニルエステル（プレス（Ｐｌｅｓｓ）ら 、　、　Ｌｌｅｌｖ、　Ｃｈｅｍ−Ａｃｔａ、　、　１９６３．　／ＩＧ、　１ ６０９）　、フタルイミドエステル（l フケノス（Ｎｅｆｋｅｎｓ）ら、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｔ　Ｓｏｃ、　、　１ ９６１．８３．１２６３）　、ペンタクロロフェニルエステル ペンタクロロフェニルエステル ８５、　１８３）　、ｏ−ニトロフェールエステル（ボダンスキー（Ｒｏｄａｎ ｚｓｋｙ）　、Ｎａｔｕｒｅ。 １９５５、　１７５．　６８５）　、イミダゾールエステル２、７６０８）　、 および３−ヒドロキシ−４−オキソ−３．４−ジヒドロキナゾリン（Ｄｈｂ　ｔ −ＯＨ）−エステル（コーニッヒ（Ｋｏｎｉｇ）ら、　Ｃｈｅｔ　Ｂｃｒ，　、 　１９７３，　１０３．　２０２４および２０３４）の初期形成、または酸無水 物、たとえば対称的な酸無水物の初期形成（ライ−ランド（ｆｉｅｌａｎｄ）ら 、＾ｎｇｅｗ．　Ｃｈｅｗ．　、　Ｉｎｔ．　Ｅｄ．　Ｅｎｇｌ．　、　１９７ １．　１０，　３３U）　。第 二アミノ基を含むＰＮＡ分子を組み立てる場合には、ベンゾトリアゾリル　Ｎ− オキシトリスジメチルアミノホスホニウム　ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯ Ｐ）、すなわち′カスドロ氏試薬′　（リベイル（Ｒｉ．ｖａｉｌｌｅ）ら、　 Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．、１９８０、　３６．　３４１３）が推奨される。最 後に、最近報告されたアミノ酸フッ化物（カルピノ（Ｃａｒｐｉｎｏ）　、Ｊ． Ａｍ．　Ｃｈｅｗ．　Ｓａｃ．　、　１９９０．　１１２．　９６５１）に類似 する活性化されたＰＮＡモノマーも、ＰＮＡ合成に使用しうるかなりの有望性が ある。 保護基を含む状態の目的ＰＮＡｉｌが組み立てられたのち、次の工程は普通はＰ ＮＡ鎖のアミノ酸部分の脱保護、および合成されたＰＮＡを固体支持体から開裂 させることである。これらの過程が実質的に同時に起こり、これにより遊１！ｔ ｌＰＮＡ分子を得ることかできる。あるいは別個に合成された２種類のＰＮＡ鎖 の縮合を行う場合は、合成の開始時に適切なスペーサー基を選ぶことにより、目 的ＰＮＡｆＩｉをそれぞれの固体支持体から開裂させ（両方のペプチド鎖はなお それらのｆＩＩＩＩ鎖保９基を含む）、最後にたとえば２種類の側鎖保護ペプチ ド鎖を結合させてより長いＰＮＡ鎖を形成したのち、側鎖保護基を除去すること ができる。 」−記の’Ｂｏｃーベンンル″保護方式の場合、最終的な（１＋１１鎖の脱保護 、および固体支持体からのＰＮＡ分子の遊離は、強酸、たとえば無水ＨＦ（サカ キＩくう（Ｓａｋａｋｉｂａｒａ）　ら、　ｌｌｕｌｌ．　Ｃｈｅｌｌ．　Ｓｏ ｃ．　Ｊｐｎ．　、　１９６５．　３８．　４９２１）　、ボロント潟X（トリ フ ルオロアセテート）　（プレス（１’ｌｅｓｓ）ら、　、　ｒｌｃｌ．ｖ．　Ｃ ｈｃｍ＾ｃｔａ．　、　１９６３．　４６．　１６０９）、ならびにスルホン酸 、たとえばトリフルオロメタンスルホン酸およびメタンスルホン酸（ヤシ？　（ Ｙａｊｉｍａ）ら、　Ｊ．　Ｃｈｅｗ．　Ｓｏｃ．　、　Ｃｈｅｔ　Ｃｏａｔ　 、　１９７４．　１０７）を用いることにより実施される場合が最も多い。この 一般的な強酸（たとえば無水ＨＦ）脱保護法によれば、ＰＮＡ鎖中の感受性残基 のアルキル化およびアシル化を生じる可能性のある極めて反応性の高いカルボカ チオンが生成する。このような副反応はスキャベンジャ−、たとえばアニソール 、フェノール、ジメチルスルフィドおよびメルカプトエタノールの存在下で部分 的に避けられるにすぎないので、ペプチドおよびＰＮＡ合成においてはスルフィ ドにより補助される酸加水分解式Ｓ＋＋２脱保護法（タム（ＴａＩｌ）らＪ．Ａ ｍ．　Ｃｈｅｗ．　Ｓｏｃ．　、　１，９８３，　１０５．　６４４２およびＪ ．Ａｍ．　Ｃｈｅｓ．@Ｓｏｃ．。 １９８６、　１０８．　５２４２）　、すなわち有害なカルボカチオンの前駆物 質を排除して不活性スルホニウム塩を形成する、いわゆる″低い“方法が、単独 で、゛または″高い′方法と１み合わせて用いられる場合が多い。これより関度 は低いが、特殊な場合に脱保護および／または最終的なＰＮＡ一固体支持体結合 の開裂のために用いられる他の方法は、たとえば下記のものである：塩基触媒に よるアルコーリシス（バートン（Ｂａｒｔｏｎ）ら、Ｊ．＾ｖｒ，　Ｃｈｅｍ． 　Ｓｏｃ．　、　１９７３．　９５．　４５０１　）　、ならび１こアンモノリ シスおよびヒドラジツリシス（ボダンスキー（ｌｋｘｌａｎｚｓｋｙ）　、ら、 　Ｃｈｅｗ．　Ｉｎｄ．　、　１９６４。 １４２３）　、水添分解（ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）　、　Ｔｃｔｒａｈｅｄｒ ｏｎ　Ｌｃｔｔ．　、　１９７７、　２８５３および（シュラフタ−（Ｓｃｈｌ ａｔｔｅｒ）ら、丁ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ．　、　１，９７７、　２ ８（ｉｌ）　、ならびに光分解（リッヒおよびグルワラ（Ｒｉｃｈ．　Ｇｕｒｗ ａｒａ）　、　Ｊ．　Ａｔ　Ｃｈｅｗ．　Ｓｏｒ．、　、　１９７５．　９７． 　１５V５）ａ 最後に、′正常な″ペプチドの化学合成とは異なり、アキラルＰＮＡ，たとえば アミンエチルグリシル主鎖単位を基礎とするものは、結合反応がラセミ化を伴わ ないので、Ｎ−末端またはＣ−末端のいずれから出発することもできる。Ｃ−末 端において開始する合成には一般に保護されたアミン基および遊離または活性化 された酸基を用いるのに対し、Ｎ−末端において開始する合成には一般に保護さ れた５１２基および遊離または活性化されたアミン基を用いることは、当業者に は認識されるであろう。 固＋ＩＪペプチド合成の合成サイクルにおいて大部分の操作は均等である（固相 ＰＮＡＯ成の場合も同様）という認識に基づいて、多数のペプチドの調製を促進 するために、Ｗｒ規なマトリックスであるＰＥＰＳが最近導入された（バーブ（ Ｂｅｒｇ）ら、　Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｒｘ．　ＳＯｃ．　、　１９８９．　１ 　１１．　８０２４および国際特許出願公開９０１０２７４！１号明細早j。 このマトリックスはペンダント長鎖ポリスチレン（ＰＳ）グラフトを備えたポリ エチレン（１０６のオーダーの分子量）フィルムからなる。フィルムの負荷容量 はビーズ状マトリックスの場合と同程度であるが、ＰＥＰＳは多重合成に同時に 適合する由通性をさらに備えている。従って同相ペプチド合成のための新規な形 態において、ＰＥＰＳフィルムはそれぞれが個々のコンパートメントとして作用 する別個のラベル付きシートの形に形成される。合成サイクルの均等な工程すべ てにおいて、これらのシートは単一の反応容器内に一緒に保持され、多数のペプ チドを常法による単一ペプチドの場合に近似する速度で同時に行うことができる 。 その特定の化学に適合するリンカ−またはスペーサー基を含むｒ’ＥＰｓフィル ム状支持体は、多数のＩ’ＮＡ分子の合成に際して特に有用であり、これらは普 通は４個の異なる反応コンバートメン１−、すなわち４種類の″プソイドーヌク レオチド′「上位につきそれぞれ１個が必要とされるにすぎないので、概念的に は合成するのが簡単であると考えられた。従ってＩ）　Ｅ　ｌ）　Ｓフィルム状 支持体を試験したところ、平行して実質的に同時に行われた多数のＰＮＡ合成に おいて有効であった。 ＰＥＰＳから得られた生成物の収率および品質は、伝統的なポリスチレンのビー ズ状支持体を用いて得たものに計数した。また他の幾何学的形状、たとえば不織 フェルト、編成ネット、スティックまたはミクロウェルプレート状のＰＥＰＳポ リマーを用いた実験も、合成効率の制限を示さなかった。 多数のペプチドの同時合成のために提示された他の２方法が、多数の異なるＰＮ Ａ分子の製造にも適用される。これらの方法のうち第１（ゲイセン（Ｇｅｉｓｅ ｎ）ら、　Ｐｒｏｃ．　ＮａｔＬ　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ．　１９８４ ．　８１．　３９９８）は、生長するペプチド鎖を固定化するために、またコン パートメント式合成を行うために、アクリル酸グラフト−ポリエチレンロッドお よび９６−ミクロタイターウェルを利用する。この方法は有効性が高いが、マイ クログラム規桧に適用されるにすぎない。第２（）・ラフテン（ｎａｕｆｔｅｎ ）　、　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｅａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ．　１９８５ ．　８２．　５１３１）は、伝統的に使用■黷■ いるポリマービーズを収容した′ティーバッグ″を利用する。本発明に関する多 数のペプチドまたはＰＮＡの合成のための他の適切な提案には、下記のものが含 まれる．密度の異なる２種類の支持体を同時に使用すること（１〜レギヤー（Ｔ ｒｅｇｅａｒ）　、　’　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ 　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ’中，マイエンホーフｙ　（Ｍｅｉｅｎｈｏｆｃｒ）編，ア ン・アーバー出版は．アシ・アーバー．　１９７２．　ｐ．　１７５−１７８） 　、マニホールドを介して反応容器を結合させること（ボルマン（Ｇｏｒ＠ａｎ ）　、　Ａｎａｌ．　Ｂｉｏｃｈｅｔ　、　１９Ｆ１４、　１３６．　３９７） 　、多重カラム固相合成（たとえばクルシュナク（［ｒｃｈｎａｋ）ら、　ｌｏ ｔ．　Ｊ。 Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉ．ｎ　Ｒｅｓ．　、　１，９８９．　３３，　２ ０９、ならびにホルムおよびメルダール（Ｈｏ１ｍ，　ＭｅｌｄａＬ）どＰｒｏ ｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　２０ｔｈ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｐｅｐｔｉｄ ｅＳｙｍｐｏｓｉｕｍ’　、　ｌング■ よびバイエル（Ｇ．　Ｊｕｎｇ．　Ｅ．　ｎａｙｅｒ）　５２．ウォルター・デ ・グルイタ−・アンド・コ．ベルリン、　１９８９．　ｐ．　２０８−２１０） 　、およびセルロース紙の使用（アイヒラ−　（Ｅｉｃｈｌｅｒ）ら。 Ｃｏｌｌｅｃｔ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｗ．Ｃｏｍｉｕｎ．、１９８９，５４．１ ７４６）　。 通常の架橋スチレン／ジビニルベンゼンコポリマーマ１−リックス、ならびにＰ Ｅ　Ｉ）　Ｓ支持体が現在では固相ＰＮＡ合成に関して好ましいが、限定ではな い固体支持体の適切な例を以下に挙げる：　（］）　Ｎ．　Ｎ’　−ビスアクリ ロイルエチレンシアミン−−一既知侃のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−アラ ニル−Ｎ′−アクリロイルへキサメチレンンアミンを含むｍ−と架橋したジメチ ルアクリルアミドのコポリマーを基礎とする粒子。一般に数種類のスペーサー基 子がβ−アラニル基を介して付加され、次いでアミノ酸残基サブユニットが付加 される。また、β−アラニル含有モノマーを重合中にアクリロイルサルコシンモ ノマーで置換して、樹脂ビーズを形成することができる。重合ののち、ビーズを エチレンジアミンと反応させて、共有結合した官能基として第一アミンを含有す る桐脂粒子を形成する。ポリアクリルアミド系支持体はポリスチレン系支持体の 場合より比較的利水性が高く、通常はジメチルホルムアミド、ジメチルアセトア ミド、Ｎ−メチルピロリドンなとを含めた極性、非プロトン溶剤と共に用いられ る（参照：アサ−トン（Ａｔｂｃｒｔｏｎ）　ら、　Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｗ． 　Ｓｏｃ．　、　１９７５，　９７．　６５８４．　Ｂｉｏｏｒｇ．　Ｃｈｅｗ D　、　１　９７９．　８，　３５１。 ならびにＪ．Ｃ．ＳＪ”ｅｒｋｉｎ　Ｉ　５３８（１９８１））　；　（２）第 ２肝の固体支持体はシリカ含有粒子を基礎とするもの、たとえば多孔質ガラスピ ーズおよびシリカゲルである。 −例はトリクロロ−１，３−（４−クロロメチル）フェニル１プロピルシランと 多孔質ガラスピーズの反応生成物（パルおよびグローマン（Ｐａｒｒ、　Ｇｒｏ ｈ■ａｎ）　、Ａｎｇｅｗ。 Ｃｈｅｔ　、　Ｉｎｔｅｒｎａｌ、　Ｅｄ、　、　１９７２．１１．３１４）− 一商標′ポラシル（ＰＯＲＡＳ　Ｉ　Ｌ）Ｅ”でウォーターズ・アソシェーツ、 米国マサチュセッッ州フレーミンハム、により市販されているｍ−である。同様 に１，４−ジヒドロキシメチルベンゼンのモノエステルおよびシリカ（商標′バ イオバック（Ｂ　ｌ０ＰＡＫ）’でウォーターズ・アソシエーツにより市販され ている）が有用であることが報告されている（＃照・バイエルおよびユング（Ｂ ａｙｅｒ、Ｊｕｎｇ）　、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、１９７０．４ ５０３）　；　（３）第３の種類の有用な固体支持体は２ＮＪ類の主成分、すな わち樹脂および有機合成反応条件に対して同様に実質的に不活性である他の材料 を含有するという点で複合材料と呼ぶことができる。複合材料の一例（参照ニス コツト（Ｓｃｏｔｔ）ら、Ｊ。 Ｃｈｒｏｓ、　Ｓｃｉ、　、　１９７１．９．５７７）は、反応性クロロメチル 基を含む疎水性架橋スチレンポリマーで被覆されたガラス粒子を用いたものであ り、ノースゲート・ラボラトリーズ社、米国コネチカット州ハムデンにより供給 される。他の複合材料の一例はフッ素化エチレンポリマーのコアを有し、これに ポリスチレンがグラフトしている（参照・ゲントおよびメリフィールド（Ｉｃｎ ｔ、　Ｍｅｒｒｉｆｉｃｌｄ）　、　ｌ５ｒａｅｌ　Ｊ−Ｃｈｅｗ、　。 １９７８、１７．２４３、ならびにファン・リートショーテン（ｖａｎ　Ｒｉｅ ｔｓｃｈｏｔｅｎ）Ｉ’ｅｐｔｉｄａｓ　１９７４’　、つ十ルマン（Ｙ、　Ｔ ａ１ＩＩａｎ）［、シラン・ワイリイ・アンド・サンズ、ニューヨーク、　１９ ７５．ｐ、］１３（１６）　；ならびに（４）Ｉ’ＥＰＳ以外の連続固体支持体 、たとえば木綿シート（レブルおよびアイヒラ−（１，ｅｂｌ、　Ｅｉｃｈｌｅ ｒ）　、　ｌ’ｃｐｔｉｄｅ　Ｒｅｓ、　１９８９゜２、２３２）およびヒドロ キシプロピル°ｒクリレート被覆されたポリプロピレンメンブラン（ダ、ニエル ス（Ｄａｎｉｅｌｓ）ら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｆｔ、　、　１９８ ９．４３４５）　ｆｔ（ＰＮＡ合成にも適切である。 手動または自動いずれにより操作する場合でも、本発明に関するＩ）ＮＡ同相合 成は普通はバッチ式で実施される。しかし大部分の合成は連続フル一方式でｔ） 同様に良好に実施することができ、この場合支持体はカラムに充填される（バイ エル（Ｂａｙｅｒ）ら、　Ｔｅｔｒａｂｃｄｒｏｎ　Ｌｅｆｔ、　、　１９７０ ．４５０３．およびスコツト（Ｓｃｏｔｔ）ら、　Ｊ、　Ｃｈｒ潤{ｓａｔ ｏｇｒ、　Ｓｃｉ、　、　１９７１．９．５７７）　、連続フロー固相合成に関 しては、硬質ポリ（ジメチルアクリルアミド）−キーゼルグール支持体（アサ− トン（Ａｔｈｅｒｔｏｎ）ら、　Ｊ、　ＣｈｅｔＳｏｃ、　Ｃｈｅｗ、　Ｃｏ１ １曲、、１９８１．１１５１）が特に有効であると思われるが、他の有用な形態 は標準コポリ（スチレン〜１％−ジビニルベンゼン）支持体につきなされたもの に関連する（タルシュナク（Ｉｒｃｈｎａｋ）ら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　 Ｌｅｔｔ、　、　１９８７．４４６９）。 同相法がＰＮＡ合成に関して現在好ましいが、他の方法またはその組み合わせ、 たとえば固相法との組み合わせも適切である：　（１）ペプチド合成のための古 典的な溶液相法（たとえばボダンスキー（Ｂｃｘｌａｎｓｚｋｙ）　、　’　Ｐ ｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ’　、スプリン ガーーフエルラーク、ベルリン−ニューヨーク、１９８４）　−一段階的組み立 てによるか、またはセグメント／フラグメント縮合によるものｍ−は、特に大規 模生産（グラム、キログラム、さらにはトン）を考慮する場合に適切である。（ ２）いわゆる″液相“法、これは可溶性ポリマー系支持体、たとえば線状ポリス チレン（シェミアキン（Ｓｈｅｍｙａｋｉｎ）ら、　ＴｅＬｒａｈｅｄｒｏｎ　 Ｌｅｔｔ、　、　１９６５．２３２３）を用い、ポリエチレングリコール（ＰＥ Ｇ）（ムラターおよびバイエル（Ｍｕｔｔｅｒ、　Ｂａｙｃｒ）　、　Ａｏｇｅ ｔ　Ｃｈｅｗ、　、　Ｉｎｔ、　Ｅｄ、　Ｅｎｇｌ、　、　１９７４．１３．８ ８）が有用であ驕B（３） 多様な分子量のペプチドまたはＰＮＡ分子の混合物Ｃ多分散体＃）を与えるラン ダム重合（参照・たとえばオディアン（Ｏｄｉａｎ）　、　’　ｒ’ｒｉｎｃｉ ｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ’　、マグロ−ヒル、ニューヨ ーク（１９７０））は、抗ウィルス作用をスクリーニングするために特に適切で ある；　（４）ポリマーに支持されたアミノ酸活性エステルの使用に基づく方法 （フリートキン（Ｆｒｉｄｋｉｎ）ら、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、 　、　１９６５．８７．４６４６）−一時に″逆メリフィールド合成゛または″ 高分子試薬合成′と呼ばれるｍ−は、中間体の単離および精製という利点を与え 、従って中サイズの、所望により保護されたＰＮ八へ子の合成に特に適切な方法 を提供し、次いでこれを７ラグメント縮合に用いて、より大型のＰＮＡ分子とな すことができる；　（５）ＰＮ八へ子は酵素、たとえばプロテアーゼまたは新規 な特異性をもつその誘導体（たとえば工学的な蛋白質合成などの人工的な手段に より得たもの）により酵素的に糺み立てることができると考えられる。また多数 のＰＮＡフラグメントを縮合させて、より大型のＰＮＡ分子となずための”　Ｐ ＮＡリガーゼ′の開発も考慮しうる。（６）実質的にいかなる目的分子に対して も抗体を形成させることができるので、最近開発された触媒性抗体（アブザイム 、ａｂｚｙｍｅ）−−レルナーのグループ（トラマンタノ　（Ｔｒａｍａｎｔａ ｎｏ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ、　１９８Ｇ、　２３４．１５６６）およびシュル ツのグループ（ボラック（ＰｏＬｌａｃｋ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ、　１９８６ ．２３４．１５７０）が同時に発見−一も、ＰＮＡ分子の組み立てのための有効 な候補とみなすべきである。たとえばアシルトランスファー反応をＩＩ！！！媒 するアブザイムの調製にはかなり成功している（たとえばシボカット（Ｓｈｏｋ ａｔ、）ら、　Ｎａｔｕｒｅ、　１９８９．３３８．２６９およびその参考文献 を参照されたい）。最後にスチュワードのグループによってごく最近創始された 完全に人工的な酵素（バーン（ｌｌａｈｎ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ、　１９９０ ．２４８．１５４４）をＰＮＡ合成に適したものに発展させることができる。特 異的な結合反応を仲介しうる酵素、リガーゼおよび触媒性抗体の設計は、′正常 な′ペプチドの合成よりＰＮＡ合威の場合の方が、より容易に１戎されるであろ う。ＰＮＡは、ペプチドを構成する天然（蛋白質原、ｐｒｏｔｃｉｎｏｇｅｎｉ ｃ）アミノ酸２０種類と比較して、わずか１ＩＰＩ類（４種類の天然核酸塩基そ れぞれにつき１種類）の異なるアミノ酸で構成される場合が多いであろう。結論 として、特異的なＰＮＡ分子の合成に完全に適した単一の方法はなく、従って時 には上記方法の組み合わせが良好に作動する可能性かある。 本発明はペプチド核酸についての治療または予防的な使用をも目的とする。可能 性のある治療または予防の標的には、単純ヘルペスウィルス（Ｈ３Ｖ）、ヒト７ Ｌ頭腫ウィルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウィルス（ＩＩＩＶ）、カンジダ・ア ルビカンス、インフルエンザウィルス、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）　、細 胞内付着分子（ＩＣＡＭ）、５−リボキシゲナーセ（５−ＬＯ）、ホスホリパー ゼＡ２（ＰＬＡｚ）、プロティンキナーゼＣ（ＰＫＣ）　、およびＲＡＳオンコ ジーンが含まれる。このような標的法の適用の可能性には下記のものが含まれる 。眼、唇側、性器および全身性の単純ヘルペス■および［Ｉ感染症、性器ゆうぜ い（Ｅｅｌ、いぼ）；子宮頚癌、尋常性ゆうぜい、カボシ肉腫、エイズ、皮膚お よび全身性の真菌感染症：インフルエンザ：肺炎：免疫抑制処置患者における網 膜炎および肺炎、ｌｉ核症、眼、皮膚および全身性の炎症、心臓曲管疾患、癌、 喘息、莞鼾、心膣血管虚脱、心筋梗塞、胃腸疾患；腎臓疾患；変形関節炎、骨関 節炎；急性膵臓炎：敗血症性シシック；ならびにクローン病。 治療または予防処置のために、本発明のペプチド核酸を薬剤組成物中に配合する ことができ、これはキャリヤー、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、防腐剤、界面活性剤 などを含有しうる。薬剤組成物は１種または２種以上の有効成分、たとえば抗微 生物薬、抗炎症薬、麻酔薬などをペプチド核酸のほかに含有してもよい。 薬剤組成物は局所または全身適用のいずれを目的とするか、または処置すべき領 域に応じて多数の方法で投与することができる。投与は局所的に（眼、子宮、直 腸、鼻内を含む）、経口的に、吸入により、または非経口的に、たとえば静脈内 点滴により、または皮下、腹腔内もしくは筋肉内注射により実施することができ る。 局所投与用配合物には軟肯、ローション、クリーム、ゲル、滴剤、平削、スプレ ー、液剤および散剤が含まれる。通常の薬剤用キャリヤー、水性、粉末または油 性の基剤、増粘剤などが必要であり、または望ましい。コーティングしたコンド ームも有用であろう。 ［０投与用組成物には、散剤もしくは顆粒剤、水もしくは非水性媒質中の懸濁剤 もしくは液剤、カプセル剤、サシニー（ｓａｃｈｅｔ）または錠剤が含まれる。 増粘剤、芳香剤、希釈剤、乳化剤、分数助剤または結合剤が望ましい。 非経口投与のための配合物には、無菌水溶液が含まれ、これは緩衝剤、希釈剤お よび他の適切な添加物をも含有しうる。 投薬は処置すべき状態の程度および反応性に依存するが、普通は１日１回または ２回以上であり、処置期間は数日から数カ月間、または治癒するまで、または疾 病状態の軽減が達成されるまで継続される。当業者は最ｊ！ｌ量、投与法および 反復速度を容易に決定することができるであろう。 この種類の処置は、単細胞性の原核および真核生物から多細胞性の真核生物に及 ぶ多様な生物に適用しうる。その遺伝、代謝または細胞性の制御の基本的一部と してＤＮＡ−ＲＮＡ転写またはＲＮＡ−蛋白質翻訳を利用している生物はいずれ も、本発明による治療および／または予防処ｌを施すことができる。多様な生物 、たとえば細菌、酵母、原生動物、藻類、すべての植物、および温血動物を含め たすべての高等動物形態を処置することができると考えられる。さらに多細胞性 真核生物の各細胞はそれらの細胞活性の構成部分としてＤＮＡ−ＲＮＡ転写およ びＲＮＡ４白質翻訳の双方を含むので、それらを処置することができる。さらに 、真核細胞の多くの細胞小器官（たとえばＥ　ｌ−コンドリアおよびクロロプラ スト）も転写および關訳のメカニズムを含む。従って弔−細胞、細胞集団または 細胞小器官も、治療または診断用のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドで処 置することができる。本明細書において用いる治療とは、生物を死滅させること により、または誤った、もしくは有害な細胞増殖もしくは発現を制御することに より、疾病状態を消失させることを含む意味である。 本発明はまた、ＰＮＡ分子を固相生化学に（参照　たとえば”　５ｏｌｉｄ−ｒ ’ｈａｓｅ　Ｂｊｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ａｎｄ　５ｙ ｔｈｅｔｉｃ　Ａｓｐｅｃｔｓ’　、スフ−テン（Ｗ、　Ｉｌ、　５ｃｏｕｔ■ 氏j編。 ジタン・ワイリイ・アンド・サンズ、ニューヨーク、　１９８３）　、殊に固相 バイオシステム、特に相補的核酸の診断検出／定量またはアブィニティ精製（参 照　たとえば’　Ａｆｆｉｎｉｔｙ　Ｃｈｒｏ＋＊ａｔｏｇｒａｐｈｙ−Ａ　Ｐ ｒａｃｔｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ’　、ディーラ、ジョンソンおよびミドル （Ｐ、　Ｄ、　Ｇ、　Ｄｅａｎ、　Ｗ、　Ｓ、　Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｆ、　Ａ、 　Ｍ司ｄｉｅ）編、ＴＲＩ、プレス社、オックスフォード、　１９８６　；　’ 　ＮｕｃＬｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　［（ｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ−＾Ｐｒａｃｔｉ ｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃ■h　。 ハーネスおよびヒギンス（Ｂ、　Ｄ、■ａｒｎｅｓ、　Ｓ、　Ｊ、　ｎｉｇｇｊ 　ｎｓ）編、ＩＲＬブレス社、オックスフォード、　１９８７）に関与するバイ オアッセイまたは固相法に有利に利用することにも関するものである。このよう なバイオアッセイまたはＩＩｊｊｕｔ法を実施するための今日の方法は、はとん ど例外なくビーズ状固体支持体、たとえばセルロース、ガラスビーズーー制御さ れた多孔度をもつものを含む一−＝（ミズタニ（ｉｌｉｚｕｔａｎｉ）ら、　Ｊ 、　Ｃｈｒｏｍｎｔｏｇｒ、　、　１９８６．３５６．２０２）　、’セファデ ックス“、′セファワース″、アガロース、ポリアクリルアミド、多孔質粒状ア ルミナ、ヒドロキシアル牛ルメタクリレートゲル、ジオール結合シリカ、多孔質 セラミックス、または連続材料、たとえばナイロンおよびニトロセルロースのフ ィルターディスクに、物理的に吸着された、または実宵上水久的な固定用共有結 合を介して）六合した″正常な′またはわずかに修飾されたオリゴヌクレオチド を用いる。−例では、ポリＡｔイルを含むｍＲＮＡのアフィニティ単離のために 、セルロースビーズ上でのオリゴ−ｄＴの化学合成を利用した（ギラン（Ｇｉｌ ｈａｔｓ）　、　’　Ｍｃｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｓ＋ｏｌ。 ｇｙ”　、グロスマンおよびモルディプ（Ｌ、　Ｇｒｏｓｓｍａｎｎ、　［、Ｍ ｏ１ｄａｖｅ）　、　ｖｏｌ、　２１．　Ｄ、　ｐ、　１９P゜ アカデミツク・プレス、ニューヨークおよびロンドン、　１９７１）。上記の方 法はすべて本発明に関して利用することができる。しかし可能ならば、共有結合 の方が当該分子の物理的吸着より好ましい。後者の方法は、固定化された分子の 一部がハイブリダイゼーションまたはアフィニティ操作に際して洗い出される（ 脱着される）可能性があるからである。従って、バイオアッセイ／精製操作の過 程で支持体が受ける各種の処理に際して支持体材料の表面に吸着している分子種 が失われる程度を、はとんど制御することかできない。この問題の重大性はもち ろん、吸着された分子種と″遊１！１’　した分子種との間に平衡が成立する速 度に大幅に依存するであろう。場合によっては、許容しうる精度および／または 再現性をもって定量的アッセイを行うことが実質的に不可能であろう。支持体が 体液、水性試薬または洗浄用媒質で処理される際に失われる吸着分子種は、一般 に比較的低分子量の分子種につき殻も顕著であると推定される。オリゴヌクレオ チドと対照的に、ＰＮＡ分子は強力な核および／または電子中心を含むので、固 体支持体に結合させるのがより容易である。さらに、オリゴヌクレオチドを固体 支持体上に直接組み立てるのは、固定される分子の負荷が極めて低いという欠点 をもつ。これは主として、オリゴヌクレオチドの構成に関する現在の技術水準の ホスホルアミダイト化学を有効に利用しうる材料の表面容量が低いことによる（ ビューケージおよびカルサーズ（Ｂｅａｕｃａｇｅ、　Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ）　 、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　、　１９８１．２２．１８５X　＋ カルサーズ（Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ）　、　５ｃｉｅｎｃｅ、　１９８５．２３２ ．２８１）　ｏ高い表面／負荷容量をもつ固体支持体に適した他のホスファイト トリエステル法（レッツィンガーおよびマハデバン（Ｌｃｔｓｉｎｇｅｒ、　Ｍ ａｈａｄｃｖａｎ）　、　Ｊ、　Ａｔ　Ｃｈｅｖ　Ｓｏｃ、　、　！　９７６、 ９８．３６５５）の採pでは 比較的短いオリゴヌクレオチドが得られるにずぎないという事実もある。しかし 通常の同相ペプチド合成法に関しては、後者の支持体は固定化されたＰＮＡ分子 を形成するための優れた材料である（側鎖を固体支持体に保持する固定用結合を 開裂させることなく、合成されたＰＮＡ鎖から側鎖保護基が除去される）。従っ てＰＮＡ種は上記の固相法から、相補的核酸に対するはるかに高い（なおかつ配 列特異的である）結合アフィニチイ、さらに二本鎖構造体中に存在する核酸のユ ニーク配列特異的認識（および核酸への強力な結合）という利益を得る。またそ れらは固体支持体に大近に負荷することもでき、従って同相法の感度／容量がさ らに高まる。さらに、最近報告された′先により指示され、空間的に指定しうる 、平行化掌合１ｉ５．’法（フォダー（Ｆｏｄｏｒ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ、　 １９９１．２５１．７６７）　、すなわち多数の著しく多様な、ただし同定可能 な、永久に固定化された化合物（たとえばペプチド）を実質的に同時に製造する ための、固相化学と写真平板法を組み合わせた技術の採用によって、固相バイオ ケミストリーのｆｌｌ用に関する特定の種類の研究は到達可能となり、容易にな り、または大幅に促進される。 本発明の他の目的、利点および新規な特色は、以下の本発明の実施例を検討する ことにより当業者に自明となるであろう。それらは本発明を限定するためのもの ではない。 モノマー性ビルディングプロ７りの合成モノマーは好ましくは図１３に概説した 一般式により合成される。これは実施例２４−２６に記載するように、保ＷＩ／ 脱保護処理による（＋３ｏｃ　アミノエチル）グリシンのメチルまたはエチルエ ステルの製造を伴う。チミンモノマーの合成は実施例２７−２８に記載され、保 護されたシトシンモノマーの合成は実施例２９に；己載される。 保護されたアデニンモノマーの合５５．（図１４）は、ブロモ酢酸エチルによる アルキル化（実施例３０）、および匝換の位置が目的とする９−位であることの 、Ｘ１５結晶学による証明を伴った。次いでＮ６−アミノ基を、試薬Ｎ−エチル ーペンシルオキシカルポニルイミダゾール　テトラフルオロボレートの使用によ りベンジルオキシカルボニル基で保護した（実施例３１）。生成エステルの簡単 な加水分解により（実施例３２）Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−９−カルボ キシメチルアデニンが得られ、次いでこれを標準法に用いた（実施例３３−３４ 、図１３）。アデニンモノマーは２種類の異なるＰＮＡ−才リゴマ−内に紐み込 まれた（実施例５６．５７．７１および７３）。 保護されたＧ−モノマーの合成を図１−５にＩｌ説する。出発原料であろ２−ア ミノ−６−クロロプリンをブロモ酢酸によりアルキル化（実施例３５）し、次い で塩素原子をベンンルオキシ基で百換した（実施例３６）。得られた酸を試薬１ ）　ｙＢｒｏｐ　（商標）により（Ｂｏｃ　アミノエチル）グリシンメチルエス テル（実施例２６より）に結合させ、得られたエステルを加水分解した（実施例 ３７）。 ＰＮＡオリゴマーの合成に際して、最終）ＩＦ−開裂工程で０６−ペンシル基を 除去した。開裂は、縮合剤としてのジイソプロピルカルボシイミドをＰＮＡオリ ゴマー中へ取り込んだ際に、最終Ｉ）ＮＡオリゴマーの予想量が認められたこと により証明された（実施例５５および７１）。 延長された主鎖 モノマービルディングブロックの合成およびＰＮＡオリゴマーへの取り込みによ り、Ａ、ＣおよびＤ基（図１６）の変化が証明される。 −例においては、Ｄ基はＣＨ（ＣＨｘ）基であった。対応するモノマーの合成を 図１７に概説する。それはＢｏａ保護された１−アミノ−２，３−プロパンジオ ールの製造を伴うものであり（実施例３８）、これが過ヨウ素酸塩により開々し てＢｏｃ　アミノアセトアルデヒドを与え、これがそのまま次の反応に用いられ る。このＢｏｃ　アミノアセトアルデヒドが種々のアミンと縮合しうる：実施例 ３９においては、アラニンエチルエステルが用いられた。実施例４０−４２にお いては、対応するチミンモノマーが製造された。このモノマーがＤＣＣ−結合プ ロトコールにより８量体（実施例６０）中へ取り込まれた（実施例５６および５ ７）。 他の例においては、Ｄ基は（ＣＨ２）ｓ基である。対応するモノマーの合成を図 １８Ａに記載し、実施例４３−４４に概説する。 他の例においては、Ａ基は（ＣＨ２）２ＣＯ基である。対応するチミンモノマー の合成を図１８Ｂおよび実施例４６−４８に櫃脱する。 さらに他の例においては、Ｃ基は（Ｃ）Ｉｆ）　ｚ基である。チミンおよび保護 されたシトシンモノマーの合成を図１９および実施例４９−５４に概説する。１ 単位を含むＰＮＡオリゴマーとのハイブリダイゼーション実験を実施例６１−８ １に記載する。これは有意のアフィニティ低下を示すが、特異性は保持されてい る。 一般的見解 実験例においては下記の略号を用いる：ＤＭＦ、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド 、ＤＣＣ，Ｎ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイミド；ＤＣＵ、Ｎ、Ｎ−ジシク ロヘキシル尿素、ＴＩＩＦ、テトラヒドロフラン；ａｅｇ、Ｎ−アセチル−（２ ′−アミノエチル）グリシン；　ｐ　ｒ　ｐ、ペンタフルオロフェニル；Ｂｏｃ 、ｔ−ブトキシカルボニル：Ｚ、ベンジルオキシカルボニル、ＮＭＲ，核磁気共 鳴、５゜１市項、ｄ、２重項；ｄｄ、２重項の２重項：ｔ、３重項；ｑ、４１項 １ｍ、多重項、ｂ１幅広い、δ、化学シフト。 ＮＭＲスペクトルはＪＥＯＬ　ＦＸ　９０Ｑスペクトロメーター、またはブルー カー（Ｉ３ｒｕｋｅ　ｒ）２５０ＭＨｚにより、テトラメチルシランを内部基準 として記録された。雪量分析は、ｖｃ　ＦＡＢ源およびプローブを備えたマスラ ボ（ＭａｓｓＬａｂ）ＶＣｌ２−２５０四重極計測により実施された。融点はブ チ（Ｂｕｃｈｉ）ＦＭ点測定装置により記録され、補正されなかった。Ｎ、　Ｎ −ジメチルホルムアミドは４人モレキュラーシーブにより乾燥され、蒸留され、 ４人モレキュラーシーブ上に保存された。ピリジン（ＨＰ　Ｌ　Ｃ用）は乾燥さ れ、４人モレキュラーシーブ上に保存された。用いた他の溶剤は入手しうる最高 品宵のものであるか、または使用前に蒸留された。ジオキサンは使用前に塩基性 アルミナに導通された。Ｂｏｃ酸無水物、４−ニトロフェノール、ブロモ酢酸メ チル、ベンジルオキシカルボニルクロリド、ペンタフルオロフェノールはすへて アルドリッヒ・ケミカル・カンパニーから人手された。チミン、シトシン、アデ ニンはすべてシグマから人手された。 薄石クロマトグラフィー（Ｔ’ｌｃ）は下記の溶剤系を用いて実施された　（１ ）クロロホルム　トリエチルアミン　メタノール、７１２．（２）塩化メチレン 　メタノール、９：１；（３）クロロホルム・メタノール：酢酸、８５：１０： ５゜スポットはＵＶ（２５４ｎｍ）により、および／または１２０℃に５分間加 熱したのちニンヒドリン溶液（１−ブタノール１０１００Ｏおよび酢酸３０ｍ１ 中のニンヒドリン３ｇ）を吹付け、そして吹付は後に再度加熱することにより、 視覚化された。 実施例１ 炭酸ナトリウム（２９，１４ｇ＋０．２７５モル）および４−ニトロフェノール （１２，７５ｇ：９１．６ミリモル）をジオキサン（２５０ｎｌ）と混合した。 ＢＯＣ−無水物（２０，０ｇ；９１．６ミリモル）をジオキサン（５０ｍｌ）に 溶解して混合物に加えた。混合物を１時間還流し、０℃に冷却し、濾過して１／ ３に濃縮した後０℃で水（３５０ｎｌ）中に注いだ。１／２時間撹拌後、濾過し て生成物を集め、水で洗浄した後、真空下シカベント上で乾燥させた。収量２１ ．３ｇ　（９７％）。Ｍ、ｐ、７３．０〜７４．５℃（文献値７８．５〜７９， ５℃）。元素分析　Ｃ１１Ｈ１３ＮＯ５として、実測値（計算値）Ｃ：５５．２ ０　（５５，２３）；Ｈ：５．８１　（５，４８）；Ｎ：５．８２改良して合成 された。Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン（１，３，ＯＯｇ；２５４ミリモル ）を水（５０ｍｌ）に溶解し、ジオキサン（５０ｍｌ）を加え、２Ｎ水酸化ナト リウムでｐｌ（を１１．２に調整した。ｔｅｒｔ−ブチル−４−ニトロフェニル カーボネート（７，２９ｇ；３０．５ミリモル）をジオキサン（４０１１）に溶 解し、２時間以上かけて滴下した（その間２Ｎ水酸化ナトリウムによりｐＨは１ １２に維持された）。さらに３時間周期的にｐＨを１１．２に調整した後溶液を 一夜放置した。溶液を０℃に冷却し、０．５Ｍ塩酸にて注意深（ｐＨを３５に調 整した。水性溶液をクロロホルム（３ｘ　２００ｍ１）で洗浄し、２Ｎ水酸化ナ トリウムでｐＨを９５に調整して真空下（１４ｍＩＩＨｇ）溶液を蒸発乾固させ た。残渣をＤＭＦ　（２５＋　２　Ｘ　１０ｍ１）で抽出し、過剰の塩を除去す るため抽出液を濾過した。これにより表記化合物の溶液を約６０％の収率で得、 ｔｌｃにより９５％以上の純度であった（系１およびニンヒドリンで可視化、Ｒ ｆ＝０３）。この溶液はさらに精製することなく次のＢｏｃ−ａｅｇ誘導体の合 成に使用された。 実施例３ この方法は文献の合成法と異なっているが、より容易で、高収率を与え、生成物 中に未反応チミンが残っていない。チミン（３，４０，０ｇ；０．３１７モル） およびｊｌＪＭｈ’Ｊ’）ム（８７，７ｇ　；　０．６３４モル）　のＤＭＦ　 （９００ｎｌ）懸濁液にブロモ酢酸メチル（３０，００ｍ１；０．３１７モル） を加えた。混合物は窒素雰囲気下−夜激しく撹拌した。混合物を濾過し、真空上 蒸発乾固させた。固形残渣に水（３００ｎｌ）および４Ｎ塩酸（１２ｍｌ）を加 え、０℃で１５分間撹拌した後濾過し、水（２Ｘ７５ａ＋ｌ）で洗浄した。沈殿 物に水け２０ｍ１）および２Ｎ水酸化ナトリウム（６０ｍｌ）を加え１０分間煮 沸した。混合物を０℃に冷却して濾過し、４Ｎ塩酸（７０ｍｌ）を添加すること により純粋な表記化合物が沈殿された。シカベント上真空下で乾燥後の収量＋３ ７．１ｇ　（６４％）。 ’Ｈ−ＮＭＲ：　（９０Ｍ）Ｉｔ；ＤＭＳ　Ｏｄｓ　）　’１１、　３３ｐｐｍ （ｓ、ＬＨ，ＮＨ）　；７．　４９　（ｄ、Ｊ＝０．　９２Ｈ＋、ＩＨ。 ＡｒＨ）　；　４．３８　（ｓ、　２Ｈ，ＣＨ２）　；　１．７６　（ｄ、　Ｊ ＝０．９２Ｎ−１−カルボキシメチルチミン（４，１０，０ｇ；５４．３ミリモ ル）およびペンタフルオロフェノール（１０，０ｇ；５４．３ミリモル）をＤＭ Ｆ（１００ｎｌ）に溶解し、氷水中で５℃に冷却した。次にＤＣＣ（１３，４５ ｇ；６５．２ミリモル）を添加した。温度が５℃以下に下がったら水浴を除き、 混合物を３時間室温で撹拌した。沈殿してきたＤＣＵを濾過して除き、ＤＭＦで ２度洗浄した（２／１０ｍｌ）。合併した濾液をエーテル（１４００ａ＋Ｉ）中 に注ぎ、０℃に冷却した。石油エーテル（１４００ｍｌ）を加え混合物を一夜放 置した。 表記化合物は濾過により単離され、十分に石油エーテルで洗浄した。収量：１４ ．８ｇ　（７８％）。生成物は次の反応の実施には十分きれいであったが、分析 用試料は２−プロパツールから再結晶することにより得られた。Ｍ、ｐ。 ２００．５〜２０６℃。元素分析　Ｃ１３Ｈ７Ｆ５　Ｎ２０１として、実測値（ 計算値）Ｃ：４４．７９　（４４，５９）；Ｈ：２．１４　（２，０１）；Ｎ・ ８，１３（８，００）。 ＦＡＢ−ＭＳ　：　４４３　（Ｍ＋１＋グリセロール）　、３５１　（Ｍ＋１） 。 ’ＨＮＭＲ：　（９０ＭＨ！＋ＤＭＳＯｄｓ　）・１１、　５２ｐｐｍ（ｓ、Ｉ Ｈ，Ｎ旦）　；７．６４　（ｓ、ＬＨ，Ａｒ旦）；４、９９　（ｓ、　２Ｈ，Ｃ Ｈ）　；１．７６　（ｓ、　３Ｈ，ＣＨ３）。 前記のＤＭＦ溶液にトリエチルアミン（７，０８ｍ１；５０．８ミリモル）続い てＮ−１−カルボキンメチルチミンペンタフルオロフェニルエステル（５゜４． ４５ｇ；１２．７ミリモル）を加えた。得られた溶液は１時間撹拌した。この溶 液は０℃に冷却し、陽イオン交換物質（“Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ　Ｘ−８”。 ４０ｇ）で２０分間処理した。濾過して陽イオン交換物質を除き、ジクロロメタ ン（２Ｘ１５ｏ＋Ｉ）で洗浄し、ジクロロメタン（１５０ｎｌ）を加えた。得ら れた溶液は飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後、 真空下（最初は水流アスピレータ−で続いて油回転ポンプで）蒸発乾固させた。 残渣を水（５０ｍｌ）と振とうし、蒸発乾固させた。この操作をもう一度繰返す 。残渣は次にメタノール（７５ｍｌ）に溶解させ、エーテル（６００＋Ｉ）およ び石油エーテル（１，４Ａ’）中に注いだ。−夜撹拌後、白色固形物を濾過して 集め、石油エーテルで洗浄した。真空下、シカベント上で乾燥すると、３０．５ ｇ　（７１，７％）得られた。Ｍ、ｐ、１４２〜１４７℃。元素分析　Ｃ１６Ｈ ２４Ｎ４０７として、実測値（計算ｆｉｌ）　Ｃ：４９．　５９　（５０，００ ）　；Ｈ：６．　３４　（６，２９）　；Ｎ１．４．　５８　（１４，５８）。 ’ＨＮＭＲ、’　（２５０ＭＨ＋：ＤＭＳＯｄ６）　二級アミド結合の周りの回 転制限のためいくつかの信号が２１の比で２本にわれた（リスト中、主ピークは ｍ」　により、副ピークはｍ」、により示されている）１２、　７３ｐｐＩＩ（ ｂ、１Ｆ＋、−Ｃｏ２Ｈ）；　１１．２７ｐｐＩＩ（ｓ、ｍ」、、イミド）　； 　１　】、、２５ｐｐｍ（ｓ、ｍ　【、、イミ　ド）　：　７．　３０ｐｐｍ（ ｓ、ｍＬ。 Ａｒ［り　：　７．　２６ｐｐｍ！ｓ、　ｍｉ、、ＡｒＨ）　＋　６．　９２ｐ ｐｌＩｆ未解析ｔ、ｍｊ、、ＢｏｃＮＨ）；６．７３ｐｐａ（未解析、ｔ、ｍｊ 　、ＢｏｃＮＨ）；４、　６４ｐｐｍ（ｓ、ｍｊ、、Ｔ−ＣＨ２−Ｃｏ　−）　 ；　４．　４７ｐｐｍ（ｓ、ｍｉ、。 Ｔ−ＣＨ−Ｃｏ−）＋４．１９ｐｐｍ（ｓ、　ｍｉ、、Ｃ０ＮＲＣ旦２　ＣＯ２ Ｈ）　；３、９７ｐｐＩＩ（ｓ、　ｍｊ、、ｃＯＮＲｃＨ２Ｃｏ２Ｈ）　；　３ ．４１−２．８９ＤＰＩｉ未解析３ｍ、ＣＨ２ＣＨ２−および水１：１．　７５ ｐｐ園（ｓ、３Ｈ，Ｔ　−１６７，４７（Ｃｏ）；１６７、ｏｓ　（Ｃｏ）；１ ６４．２９　（Ｃｏ）；１５０．９　（Ｃ５″）；１４１．９２　（Ｃ６’ｌ： １８０．０４（Ｃ２”）；７７．９５および７７．６８　（Ｔｈｙ−且Ｈ２Ｃ０ ）：４８．９６，４７．４５および４６．７０（−且Ｈ２ＣＨ２−およびＮＣＨ Ｃｏ　Ｈ）；３７．９８　（Ｔｂｙ−ＣＨ３）；２８．０７（ｔ−Ｂｕ）。 ＦＡＢ−ＭＳ：４０７　（Ｍ＋Ｎａ”）；３８５　（Ｍ＋Ｈ）。 実施例６ ｌ−（Ｂｏ　ｃ−ａ　ｅ　ｇ）チミンペンタフルオロフェニルエステル（７，Ｂ ｏＣ−Ｔａｅｇ、０Ｐｆｐ） １　（Ｂｏｃ、ａｅｇ）チミン（６）（２，００ｇ：５．２０ミリモル）をＤＭ Ｆ　（５ｍｌ）に溶解し、メチレンクロリド（１５ｍｌ）を加えた。ペンタフル オロフェノール（１，０５ｇ＋５．７２ミリモル）を加え、溶液は水浴中で０℃ まで冷却した。次にＤＤＣ（１，２９ｇ；６．２４Ｅリモル）を加え、２分後に 水浴を除いた。室温で３時間撹拌後、沈殿したＤＣＵを濾過して除き、メチレン クロリドで洗浄した。合併した濾液は２度炭酸水素ナトリウム水溶液および１度 飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、真空上蒸発乾固 させた。固形残渣をンオキサン（１５０ｎｌ）に溶解し、０℃で水中（２００＋ ＋＋１）に注いた。表記化合物を濾過により単離し、水で洗浄し、て真空下ツカ ペント上で乾燥させた。収量　２．２０ｇ　（７７％）。分析用試料は２−プロ ／（ノールから再結晶することにより寿られた。Ｍ、ｐ、１７４−１７５．５℃ 。元素分析。 Ｃ２２８２３Ｎ、Ｏ□Ｆ５として、実測値（計算値１：ｃ：４８．２２　（４８ ，０１）；４、　６４　（４，２１）　；Ｎ：９．６７　（１０，１，８）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨ＋　、ＣＤ　Ｃ１３）　、二級アミド結合の周りの制 限回転のため、いくつかの信号は６・１で２本にわれた（リスト中、主ピークは ｍ」、副ピークはｍｌ、により示されている）７、　０ｉｐｐｍ（ｓ、　ｒｎｉ 、、ＡｒＨ）　；　６．　９９ｐｐｍ（ａ、　ｍＪ、、ＡｒＨ）　：５、　２７ ｐｐｌ！（未解析、ｔ、ＢｏｃＮＨ）；４．６７９ｐ１１（Ｓ、ｍｊ、。 Ｔ−ＣＨ−Ｃｏ　−）　；　４．６０ｐｐｍ（ｓ、　ｍｉ、、Ｔ−ＣＨ，、−Ｃ ｏ　−）　；４、４５ｐｐｍ（ｓ、　ｍｊ、Ｃ０ＮＲＣＨ−２Ｃｏ２Ｐｆｐ）　 ；　４．４２ｐｐｍ（ｓ、　ｍ　ｉ、、　Ｃ０ＮＲＣ旦２Ｃｏ２Ｐｆｐ）　；３ ．６４ｐｐＨｌｆｔ、　２Ｈ。 Ｂ　ｏ　ｃ　Ｎ　１４　ＣＮ２　ＣＮ２）　；　：（−８７ｐｐｍ（”　Ｑ”　 ２　Ｈ１＋３ｏｃＮＨＣＨ２ＣＨ２−）　＋　１．４４　（ｓ、　９Ｈ１ｔ−Ｂ ｕ、）。 ＦＡＢ−Ｍｓ　：　５５１　（１０：Ｍ＋１）；　４９５　（１０；Ｍ＋１−ｔ Ｂｕ＞　；４５１　（８０；−ＢＯＣ）０ オー、ブンで乾燥させた装置を用い、窒素雰囲気１．０℃にてント・′、・ン（ ３Ｌ２０、ｏｇ：ｏ、１８モ刀のの乾燥ビリンン（１０００１１１）！ｌｌ１ｌ 濁液Ｇこ約１時開力１リーＣベノ、ノルオキ５ノカルボニルクロリド（５２ｎｌ ；０．３６モル）を滴ドした。 溶液は次に一夜撹拌（また後、真空下ピリジン懸濁液を蒸発乾固する。水（２０ ０ｎｌ）および４Ｎ塩酸をｐＨが１に達するまＣ添加（７た。生じる白色沈殿を 濾取し１、水ご洗浄して空気吸引により少し乾燥さゼた。まだ湿ってｔする沈殿 物（ｉ無水エタノール（５００ｎｌ）と１０分間煮沸し、０℃に冷却し、濾過後 士夕）１こエーテルで洗浄して真空上乾燥した。収量２４．７ｇ　（５４％）。 Ｍ　ｐ、＞２５０℃。元素性に：ＣＨＮ　ＯトｊテｌＸ測ｆｉｌ　（計算ｆａ） 　；　Ｃ：　５８．　５９＋２　１１　３　３ （５８，７７）：Ｈ・４．５５　（４，５２）：１７．１７　（１７，１３）。 生成物を溶解させることができなかったのでＮＭＲスペクトルは記録されな力１ つだ。 メチル（７，８２ｍ１；８２．６ミリモル）およびＮ４−ベンジルオキ・ンカル ボニルー＝ントンン（９，２１，０ｇ；８２．６ミリモル〕および炭酸カリウｊ よ（１１，４ｇ；８２．６ミリモル）の乾燥ＤＭＦ　（９００ｎｌ）懸濁液を入 れた。 混合物は一夜激しく撹拌（７、濾過した後真空下蒸発乾固させた。水（３００ｎ ｌ）および４Ｎ塩酸（１０ｍｌ）を加え、混合物を０℃にで１５分間撹拌した後 濾過し、水（２Ｘ７５ｍｌ）で洗浄した。単離された沈殿に水（１２０ｎｌ）　 、２Ｎ水酸化ナトリウノ、（６０ｍｌ）を加えて３０分間撹拌し濾過後、０℃に 冷却して・４Ｎ塩酸（３５Ｉｌｌ）を加えた。表記化合物ｉ；ｌ：ｉｉ１過に誹 り単離され、十分１ご水で洗浄１．ｒ：メタノール（１，０００ｍ１）から再結 晶（７、ニーアルで寸分に洗浄した。こｔｌ、ｌこより７．　７０ｇ　（３１９ ４）の純粋な化合物が得られた。再結晶の母液を２００ｍ１の容量に減少させ０ ℃に冷却した１、−れにＪりさらに２．３０ｇの物質が得られ、それはｔｉｃで 純粋７ｉあったが赤ちやけｔ−色をも−）丁いｆ、：ＯＭ、ｐ２６６＝−２７４ ℃。元素性ｉ：　Ｃ１４８１３Ｎ、（Ｏ，、！：して、実測値（旧弊ｆり：Ｃ１ ５５，４１（５５，４５）：Ｈ：４．２３　（４，３２）＋Ｎ：１４．０４（１ ３，８６）。 ’Ｈ−ｉ’ＪＭＲ（９０壮、Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏｄ　６）８、０２ｐｐｍ（ｄ、　、 Ｉ＝７．　３２Ｈ＋、　ｊ、Ｈ，Ｈ−６）　；　７．　３９（ｓ、５Ｈ，Ｐｈ） 　；７．　０１　（ｄ、Ｊ＝７．　３２１１、ＩＨ，Ｈ−５）；５、１９　（ｓ ＝　２　ＨｌＰ　ｈ　Ｃｌ１２−）　；　４．　！５２　（”＝　２８）。 １岬− ＮＬ−ペラ５．゛ルオキシ力ルボニルーＮ、！、−切ノリリーく一イーも一ノセ ー、−イ［゛イーと恰ソニイールオロソエニルエーステル＜　１．　］−１）Ｎ ４−ベンソノ１趨午ンカルボニル−Ｎ１−カルボキノメナルーントノニベ１０゜ ４．００ｇ；１３．２ニリ七ル）およびベンジルオキ】フームノール（２，ｆｉ ７ｇ；１４５ミリモル）をＤＭＦ　（７０ｍｌ）に混合し、水浴で０°Ｃ１こ冷 ａしてＤＣＣ（訊　２７ｇ；１５．Ｂミリモル）を加えた。３分後１ご水浴を除 き、混合物を・室温で３時間撹拌した。沈殿したＤＣＶを濾過（、て除き、ＤＭ Ｆで洗浄してｉ＊ｉｉｔを真空下（０，２ｍａＨｇ）蒸発乾固させた。固形残渣 ｌこメ升しンク口’、’　Ｆ　（２５０ｍｌ）を加入、１５０間＃（バ撹拌した 後２度炭酸水素（−トリウ１４おコ゛Ｃメ１１ｙ飽和塩イにナトリウム溶液で洗 浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下蒸発乾固させた。固形残渣は２−プ ロパツールから再結晶し、結晶は十分にエーテルで洗浄した。収量３．４０ｇ　 （５５％）。Ｍ、ｐ、２４１〜２４５℃。元素分析：Ｃ２ｏＨＩ２Ｎ３Ｆ５０５ として、実測値（計算値１．ｃ　：　５１．、５６　（５１，１８）　；Ｈ：２ ．７７　（２，５８）；Ｎ・９．２４　（８，９５）。 ’ＨＮＭＲ（９０１１Ｈ！；ＣＤ　Ｃ１３）　ニア、　６６ｐｐｍ（ｄ、Ｊ＝７ ．６３Ｈ＋、ＩＨ，Ｈ−６）　；　７．　３７　（ｓ、　５Ｈ。 Ｐｈ）　；７．　３１　（ｄ、Ｊ＝７．６３Ｈｓ、ｉｆ（、Ｈ−５）　；５．２ １　（ｓ。 ２Ｈ，ＰｈＣ旦２　）　４．９７　（ｓ、　２Ｈ，ＮＣＲ２）。 ＦＡＢ−ＭＳ　：　４７０　（Ｍａｌ）実施例１Ｏ ＮＬ−ベンジルオキ７カルボニルー１−Ｂｏｃ−ａｅｇ−シトシン（１２）（Ｎ −Ｂｏａ−２−アミノエチル）グリシジ（２）のＤＭＦ溶液（前記のようにして 調製）にトリエチルアミン（７，００ｍ１　；　５０．　８　ミリモル）および Ｎ４−ペンジルオキシ力ルボニルーＮ１−カルポキンメチルーントンンベンタフ ルオロフェニルエステル（１１，２，７０ｇ；５．７５ミリモル）を加えた。室 温で溶液を１時間撹拌後、メチレンクコリド（１５０ｍυ、飽和塩化ナトリウム 溶液（２５０ｎｌ）を加え、４Ｎ塩酸でｐＨを約１に調整した。有機層を分離し 、飽和塩化ナトリウム溶液で２度洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後真空下（最 初に水流アスピレータ−で次に油回転ポンプで）蒸発乾固させた。油性残渣（２ ，８０ｇ）はメチレンクロリド（１００ｎｌ）に溶解し、石油エーテル（２５０ ｍ１）を加え、混合物は一夜撹拌した。表記化合物が濾過により単離されるので 石油エーテルで洗浄した。Ｔｌ！　ｃ　（系１）はかなりの量のペンタフルオロ フェノールを示したが、それを除去することはしなかった。収量・１．７２ｇ　 （５９％）。Ｍ、ｐ。 １５６℃（分解）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（２５０１１Ｈ＋、　ＣＤ　Ｃ１３）　’二級アミド結合の周りの 回転制限のためいくつかの信号は２１の比で２本にわれた（リスト中主ピークは ｍ」、副ピークはｍｌ、で示されている）７．８８ｐｐｍ（ｄｄ、１．Ｈ，Ｈ− ６）；　７．３９　（ｍ、５Ｈ，Ｐｈ）；７、００　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｈ−５） 　；６．９２　（ｂ、　ＬＨ，ＢｏｃＮ旦）；ＣＨ３）　；４．８１ｐｕｆｓ、 　ｍｊ、、Ｃｙｔ−ＣＨ２−Ｃｏ　−）　；４、６２ｐｐｍ（ｓ、　ｍｊ、、ｃ ｙｔ−ＣＨ２−Ｃｏ　−）　；４．２３　（ｓ。 ｍｉ、、Ｃ０ＮＲＣＨ２Ｃｏ２　Ｈ）　；　３．　９８ｐｐ−（ｓ、ｍｊ、。 Ｃ０ＮＲＣＩ（２Ｃｏ２Ｈ）；　３．４２−３．０２　（未解析１ｍ。 ＣＦ（２ＣＦｒ　２−および水）；　１．３７　（ｓ、９Ｈ，ｔＢｕ）。 ＦＡＢ−ＭＳ＋　５０４　（Ｍａｌ）；４４Ｂ　（Ｍａｌ−ｔＢｕ）。 Ｎ４−ベンジルオキシカルボニル−１−Ｂｏｃ−ａｅｇ−シトシン（１２゜１． ５０ｇ；２．９８ミリモル）およびペンタフルオロフェノール（５４８■：２． ９８ミリモル）をＤＭＦ　（Ｌｏａｆ）に溶解した。メチレンクロリド（１０ミ リ）を加え、反応混合物を水浴でＯ’Ｃに冷却してＤＣＣ（６７６■；３．２８ ミリモル）を加えた。３分後に水浴を除き、混合物は室温で３時間撹拌した。沈 殿を濾過して分離し、１度メチレンクロリドで洗浄した。沈殿を煮沸ジオキサン （１５０ｎｌ）に溶解し、溶液を１５℃に冷却するとＤＣＵを沈殿した。濾過し てＤＣＵを除き、得られた濾液は０℃て水（２５０ｎｌ）中へ注いだ。表記化合 物が濾過により単離され、水で洗浄され、真空下シカベント上で乾燥された。収 量１．３０ｇ　（６５％）。元素分析二ｃ２９Ｈ２８Ｎ５０８Ｆ、として、実ｍ 値（計算値）；Ｃ：５２．６３　（５２，０２）；Ｈ：４．４１　（４，２２） ；Ｎ：１０．５５　（１０，４６）。 ’Ｈ−ＮＨＲ（２５０ＭＨｘ：ＤＭＳＯ−ｄ６）　多分ニスｆルｂ＜加水分解さ れるため、本質的に上記の酸と同じスペクトルを示した。 ＦＡＢ−ＭＳ　：　６７０　（Ｍａｌ）；　６１４　（Ｍａｌ−ｔＢｕ）。 烹嵐烈工至 ４−りａロカルポキン−９−クロロアクリジン４−カルボキシアクリドン（６， ２５ｇ　；　２６．　１ミリモル）、チオニルクロリド（２５ミリ）および４滴 のＤＭＦをすべての固形物質が溶解するまで窒素通気下縫やかに加熱した。溶液 は次に４０分間還流した。溶液を冷却し、過剰のチオニルクロリドは真空上除去 した。痕跡のチオニルクロリドは２度乾燥ベンゼン（Ｎａ−Ｐｂで乾燥）と共蒸 留することにより除去された。残った黄色粉末は次の反応に直接使用された。 ６−アミノへ牛すン酸メチル塩酸塩（４，７０ｇ；２５．９ミリモル）をメチレ ンクロリド（９０ミリ）に溶解し、０℃に冷却してトリエチルアミン（１５ミリ ）を加え、得られた溶液は直ちに上記の酸クロリドに加えた。酸クロリドを含む 丸底フラスコは水浴中０℃に冷却した。混合物は０℃で３０分、室温で３時間激 しく撹拌した。得られた混合物は濾過して残存する固形物を除き、それはメチレ ンクロリド（２０ミリ）で洗浄した。赤褐色のメチレンクロリド濾液は次に２度 飽和炭酸水素ナトリウム溶液で、１度飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄後硫酸マグ ネシウムで乾燥して真空下蒸発乾固させた。得られる油状物に乾燥ベンゼン（３ ５ミリ）およびリグロイン（６０〜８０℃、Ｎａ−Ｐｂて乾燥）を加えた。混合 物は加熱還流した。活性炭およびセライトを加え混合物を３分間還流させた。濾 過後、表記化合物を磁気撹拌しながら冷却して結晶化させた。濾過して単離し、 石油エーテルで洗浄した。生成物は固体水酸化カリウム上で貯蔵された。収量５ ．０ｇ４−（５−メトキシカルボニルペンチル）アミドカルボニル−９−（６’ 　−（４＃−二トロペンズアミド）へキシルアミノコ−アミノアクリジン４−（ ５−メトキンカルボニルペンチルアミドカルボニル）−９−クロロアクリジン（ １，３０ｇ；３．３８ミリモル）およびフェノ一ル（５ｇ）を窒素雰囲気下８０ ℃にて３０分間加熱した後６−（４′−二トロペンズアミド）−１−ヘキシルア ミン（８９７■；３．３８ミリモル）を加えた。温度が２時間で１２０℃まで上 昇した。反応混合物を冷却し、メチレンクロリド（８０＋＋＋Ｉ）を加えた。 得られた溶液は３度２Ｎ水酸化ナトリウム（６０ミリずつ）および１度水で洗浄 し、硫酸マグネシウムで乾燥した後真空下蒸発乾固させた。得られる赤色油状物 （１８ｇ）をメチレンクロリド（４０ミリ）に溶解し、０℃に冷却した。エーテ ル（１２０ｎｌ）を加え、得られた溶液は一夜撹拌した。これにより固形物質と 油状物の混合物が得られた。固形物は濾過により単離された。固形物および油状 物をメチレンクロリド（８０ミリ）に溶解し、冷エーテル（１５０ｎｌ）に滴下 した。 ２０分撹拌後、表記化合物がオレンジ色結晶の形で濾過により単離された。生成 物はエーテルで洗浄し、水酸化カリウム上真空下で乾燥した。収量１．　６０ｇ （７７％）。Ｍ、ｐ、１４５〜１４７℃。 実施例１５ ４−（５−カルボキシペンチル）アミドカルボニル−９−（６’　−（４’−二 トロペンズアミド）へキンルアミノ〕〜アミノアクリジン４−（５−メトキンカ ルボニルペンチル）アミドカルボニル−９−（６’　−（４′−二トロペンズア ミド）へキンルアミノコアミノアクリジン（５０３■；０．８２ミリモル）をＤ ＭＦ　（３０ｍ１）　（：溶解し、２Ｎ水酸化ナトリウム（３０ミリ）’ｆ−加 えた。１５分撹拌後、０℃１．：て２Ｎ塩酸（３５１ｎｌ）および水（５０ミリ ）を加えた。３０分撹拌後、溶液をデカントして油状物を残し、煮沸メタノール （１５０ｎｌ）に溶解して濾過し、１／３の容量に濃縮した。このメタノール溶 液にエーテル（１２５ｎｌ）および５〜６滴のＨＣＩエタノール液を加えた。０ ℃で１時間撹拌後にこの溶液をデカントした。油状物をメタノール（２５ミリ） に再溶解し、エーテル（１５０ｎｌ）で沈殿を生じさせた。−夜撹拌後、表記化 合物が黄色結晶として単離された。収量４１７■（８０％）。Ｍ、ｐ、１７３℃ （分解）。 前記の酸（３００ｅｇ；０．４８０ミリモル）をＤＭＦ　（２ｍｌ）に溶解しメ チレンクロリド（８ｍｌ）を加えた。ペンタフルオロフェノール（９７■；０． ５３ミリモル）を加えた（２Ｘ２ｎｌのメチレンクロリドで洗い出した）。得ら れた溶液は０℃に冷却した後ＤＣＣ（１２４■；Ｏ，ＳＯミリモル）を続けて加 えた。５分後に水浴を除き、混合物は一夜撹拌した。沈殿してきたＤＣＵは遠心 分離により除き、遠心分離液は真空下（最初に水流アスピレータ−で、次に油ポ ンプにより）蒸発乾固させた。残渣をメチレンクロリド（２０ｍｌ）に溶解し、 濾過後真空下蒸発乾固した。残渣は再びメチレンクロリドおよび石油エーテル（ １５０ａｌ）に溶解した。５Ｍ　ＨＣＩエーテル溶液を１ｍｌ加えた。０℃で３ ０分撹拌後にデカントすることにより溶媒を除去した。残った油状物はメチレン クロリド（１００ａｌ）に溶解した。石油エーテル（１５０ａｌ）を加え、混合 物を一夜撹拌した。次の日、沈殿した黄色結晶性物質を濾過して集め、大量の石 油エーテルで洗浄した。乾燥後の収量３００■（７８％）。Ｍ、ｐ、９７．　５ ℃（分解）。すべての試料は満足すべき元素分析ｌＨ−および”’Ｃ−ＮＭＲお よびマススペクトルを示した。 （ｂ）　図８のＰＮＡ化合物の合成実験材料：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）　 、ベンズヒドリルアミン−コポリ（スチレン１％−ジビニルベンゼン）樹脂（Ｂ ＨＡ樹脂）およびｐ−メチルベンズヒドリルアミン−コポリ（スチレン−１％− ジビニルベンゼン）樹脂（ＭＢ）（Ａ樹脂）はＰｅｎ１ｎｕｌａ　Ｌａｂｏｎｌ ｏ＋ｉｎから購入された。他の試薬および溶媒は：生化学用トリフルオロ酢酸は Ｈ１ｌｏｃｓ＋ｂｏｎ　Ｐｌｏｄσ＋１１からニジイソプロピルエチルアミン（ ９９％；更には蒸留されなかった）およびＮ−アセチルイミダゾール（９８％） は＾＋ｄ＋ｉｃｈから：Ｈ２０は２度蒸留された；無水ＨＦはＵｎｉｏｎ　Ｃｕ ｂｉｄｅから１合成用Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび分析用メチレンクロ リド（更には蒸留されなかった）はＭｅｒｃｋから：ＨＰＬＣ用アセトニトリル はＬａｂ−３ｃｉｎから。 ｐｕｒｕｍ等級アニソール、Ｎ、Ｎ’−ジンクロヘキシル力ルポジイミド、ジイ ソプロピルカルボジイミド、ｐｕｒｉｓｓ等級２．　２．　２−１−リフルオロ エタノールはＦｌａｋａから、およびトリフルオロメタンスルホン酸はＩｌｏυ ＋！ｄからのも特に紀さないかぎり、以下のこ己が応用さオフた。ＰＮＡ化合物 は０一時的ＯＮ−保護のためにＴＦＡ反応活性９．、、、ｅ−ｒ　−３，、、− プチルオキシ力ルボニル（Ｂｏｃ）基（Ｍｅ　ｔ　を山ｅｌｄ、１．　Ａｍ、　 工状１上ｃ、、１９６４．　８６．　３０４１および６恒久的”側鎖保護として より酸に安定なベンジルオキシカルボニル（Ｚ）および２−クロロベンジルオキ シカルボニル（ＣＩ　Ｚ）基を利用する通常のペプチド化学を用いた段階的固相 法（Ｍｅｕｉｌｉｅｌｄ、１．　Ａｔ　ＣｈｅｌＳｏｅ、、１９６３．　８５． ２１４９）により合成された。Ｃ−末端アミドを得るため、ＰＮＡはＨＦ反応活 性ＢＨＡまたはＭＢＨＡ樹脂（ＭＢＨＡ樹脂は非置換ＢＨＡ樹脂に比較すると最 終的ＨＦ切断に対する感受性が増大している、Ｍｓｌ＋ｏ山、　ｅｌ−リ、、Ｐ ｅｐｌｉｄｅｔ　１９８１．　２−、４５）上に組入れられている。すべての反 応（ＨＦ反応を除（）は粗いガラスフリットを取り付けた標準固相反応容器（Ｍ ｅｒｒｉｌｉｅｌｄ、！１１１．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉ＋＋＋！、　１９８２．２ １．５０２０）で手動で実施された。“正常”のアミノ酸を含むペプチドのため に１１ｅ＋＋１ｌｉｅｌｄおよび共同研究者により（Ｓｔａｉｎ、　ｅｔ　ｓｌ 、、＾ｎｍｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１９ｇ１．　ｌ　ｌユ、＋４７１最初に開発 された定量的ニンヒドリン反応（カイザーテスト）がうまく応用でき（表１−ｎ ｌ参照）、個々のカップリングの安全性の決定ならびに増大するペプチド鎖の数 を測定するためすべての残基に対して“通常”有効吸光係数ε＝　：１５０００ 　Ｍ−’ＩＩ−’が使用された。残基数ｎのカップリングによる理論的置換Ｓ。 −１（完全な脱保護およびカップリングならびに合成サイクル間の連鎖終結また はＰＮＡ鎖の喪失を仮定して）は式・−３＋　−Ｉ Ｓ　ｎ　＝Ｓ　×（１＋（Ｓ　ｎ−１ｘΔＭＷＸ　１０　ミリモル１モル））か ら計算され、ここでΔＭＷは分子量の増加分であり（〔ΔＭＷ）＝ｇ１モル）お よびＳ　は前の残基ｎ−１のカップリングによる理論的置換である（（Ｓ）＝ロ ー１ ミリモル／ｇ）。個々のカップリングの程度の推定値（％）は観察された置換と 比較して計算され（Ｓが決定されていない限り）、前のサイクル後に残っている 遊離のアミノ酸の数の補正を含んでいる。ＨＦ反応はＴｏｂｏにｘ＋ｅｉ　（０ ＋ａｋｉ、Ｉ＋ｐｓｎ）よりのＤｉｉｔｌｏｎ　ＨＦ装置中で実施された。Ｖｙ ｄａｃ　Ｃ，８（５ｊｉ、０．４６Ｘ２５ＣＯ１および５ｐｍ、１．　０Ｘ２５ ｃａ）逆相カラ１．が５ｐｓｏｏｏ装置での分析およびセミ分取［（Ｐ　＋−Ｃ に各々使用された。緩衝液Ａはリットル当り４４５νｌのトリフルオロ酢酸を含 む５容量％アセトニトリルの水溶液であり、緩衝液Ｂはリットル当り３９０ａｌ のトリフルオロ酢酸を含６０容量％アセトニトリルの水溶液であった。、直線濃 度勾配置、１３０分で緩衝液ＢがＣｌ−１００％であり、流速は１．会ｍｌ／′ 分（分析）および５ｍｌ／′分（セ１分度）であ−７た。溶出液は２１５％ｍ（ 分析）および２３０帥（セミ分取）でモニターされた。ＰＮＡの分子量は最も存 在割合の多い同位元集の平均から２５２Ｃｆプラズマ脱離飛行時間型質量分析５ １により決定されｔ、。 −（、リ−，，，，，，，−，，Ｑ−，，，２，、、、、−Ｃ−＼〔Ｔ、ａ−− 、’、、、、、、、−，，ｇ〕、、、１５．７．−、ｐ、、SＪ−△臀Ｑ、’ａ ｔ７’２．．ｔＱ！１（ｒ−３−作−ｑ約３：１％ｒ）Ｍ’Ｆ／ＣＭ２Ｃ１，２ 中の３．２当量のＢｏｃＴａｅｇ−ＯＰｆｐを使用づ”６１０カツプリング（° 合成ブτコＩ・二Ｉ−ルー”）を用いて］、、　００　ｗの前も−）て膨〜、ネ （１す）、」び中和ｔ、、、　ｔ：：　Ｂ　ＨＡ樹脂（定量的−゛・ヒドリン！ ｙ応で０，５７ミリモルトｉ　Ｈ、ｌ／””　ｇ　ヲなんでいると決定された） て合成が開始された。個々のメＪソブリ゛２り反応はｆ−動式６ｍｌ標準固相反 応容器で少くとも１２時間振と・）する、こと（７より実施され、未反応のアミ ノ酸は合成中の選択さ第１だ段階゛Ｃアセチル化される５、とに、より窄がｉｔ 　ｊ−、、鎖伸長の進展は定性的、−′・＋：　Ｆ　言Ｊ　／反応にコ、りいく つかの段階で七二つ′−、′（れ′１′５″（表■参照）。５．１０および１５ の残基の組立で後、保護Ｂｏ　ｃ−（Ｔａ　ｅ　ｇ）　、−ＢＨＡ、Ｂｏ　ｃ　 ＣＴａ　ｅ　ｇｌｌ　、、−旧（Ａおよびυ Ｂｏｃ　−ＣＴａｅｇ、コ１「−ＢＨΔ樹脂の一部を各７７取ｌ］出［、メ―。 された、約０．００２ａｌモル成長する鎖）の脱保護ｌＪ続いて、■し−だ。定 性的二／ビドリン反応により判定されるごとく、アクリジン部分の力・ノブリン グはほとんど定量的であった。 （ｃ）　Ｈ−（Ｔａｅｇ）　５二Ｎ旦２の切断、精製および同定チンの前駆体で ある）を除去するため、メチレンクロリド中保護Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｂ ＨＡ樹脂の一部が５０％トリフルオロ酢酸で処理された。中和および洗浄（“合 成プロトコール１”中の工程２〜４の方法と同じ方法で実施された）に続いて真 空下で２時間乾燥し、得られた６７．１■（乾燥重量）のＨ−（Ｔａｅｇ〕５− ＢＨＡ樹脂は５ｍｌのＨＦ：アニソール（９：　１．　ｙ＃ｌと０℃にて６０分 間撹拌させて切断した。ＨＦ除去後、残渣は乾燥ジエチルエーテルと撹拌して（ ４×１５ｍｌ、１５分ずつ）アニソールを除き、重力を利用してフリットしたガ ラス漏斗を通して濾過し乾燥した。ＰＮＡは次に６０ｍ１の１０％酢酸水溶液で 抽出された（４×１５ｍｌ、各々１５分間撹拌）。この溶液の一部は分析用逆相 ＨＰＬＣで分析され、粗ＰＮＡの純度が確かめられた。１３．０分の主ピークは 全吸光度の約９３％であった。残りの溶液は凍結乾燥して約２２．９■の組物質 を得た。最終的に１９．０■の粗生成物が５つのバッチ（各々１ｍｌの５０中に ３．８■を含んでいる）から精製された。主ピークはセミ分取逆相カラムを用い て集められた。アセトニトリルはスピードバックで除去し、残りの溶液は凍結し くドライアイス）続いて凍結乾燥させると１３．１■の９９％以−Ｅの純度のＨ −（Ｔａｅｇ〕５−ＮＦ２を得た。ＰＮＡ分子は容易に水に溶解し、質量スペク トルによる決定に基づいた正しい分子量を持っていた。（Ｍ＋Ｈ）＋とじて計算 されたｍ／′Ｚ値は１３４９．３であり、測定されたｍ／ｚ値は１３４７．８で あった。 （ｄ）　Ｈ（Ｔ　ａ　ｅ　ｇ）　１０　Ｎ旦２の切断、精製および同定保護Ｂｏ ｃ−（Ｔａｅｇ）ｔｏ−ＢＨΔ樹脂の一部が節（Ｃ）に記載したごとく処理され て１８．９＋ｇの乾燥）ト　（ＴａｅｇＥ　、、、−ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断によ り１１．０■の組物質を得た。１５５分の主ピークは全吸光度の約５３％であっ た。約１■の粗生成物か繰返し精製され（下記の理由で）、少くとも８０％しか し多分９９％以上の純度のＨ−ＣＴａｅｇ）、ｏ−ＮＦ２を約０．１■得た。 標的ピーク後のかなり広いテーリング（全吸光度の約２０％）は繰返しの精製で も除去できなかった（わずかに減少した）。正しい分子量Ｈ（Ｔ　ａ　ｅ　ｇ） 　ＩＱ−ＮＦ２の存在のみを確認する質量スペクトルにより判断するとテーリン グ現象は多かれ少かれ標的分子の明瞭な会合／コンホメーション状態に帰着する 。従って、粗生成物は上記の５３％以上の標的分子を含んでいるようである。Ｈ −＋ （Ｔ　ａ　ｅ　ｇｌ　、、−ＮＦ２は容易に水に溶解する。（Ｍ＋Ｈ）　として 計算されたｍ／ｚ値は２６７９．６であり、測定されたｍ／ｚ値は２６８１　５ であった。 （ｅ）　Ｈ（Ｔ　ａ　ｅ　ｇ〕＋ｓ　Ｎ旦２の切断、精製および同定保護Ｂｏｃ −（Ｔａｅｇ）　１５−ＢＨＡ樹脂の一部が節（Ｃ）に記載されているごとく処 理され１３．９．の乾燥Ｈ−（Ｔａ　ｅ　ｇ）　＋５−ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断に より３．２■の粗生成物を得た。２２．６分の主ピークは広いふくらみの中に位 置しており、全吸光度の約６０％であった（図１２ａ）。再び（前節参照）、集 められた“ふくらみ”の質量スペクトル分析は他の分子の存在を有意に示さなか ったので、このふくらみは標的分子Ｈ［Ｔ　ａ　ｅ　ｇ）　＋ｓ　ＮＦ２の会合 ／コンホメーンラン状態に帰着された。粗生成物のすべてが“ふ（らみ”を集め ることにより精製され、約２．８■の物質を得た。（Ｍ＋Ｎａ）　として計算ｍ ／ｚ値は４０３３．９であり、測定されたｍ／ｚ値は４０３２．９であった。 断により１４．３■の組物質を得た。２３．７分の主ピークおよび２９，２分の “ダイマー“　（下記参照）を−緒にすると全吸光度の約４０％であった（図１ ２ｂ）。粗生成物を繰返し精製すると約１■の多分〉９９％の純度のＡｃｒ　− （Ｔａｅｇ）、５−ＮＦ２を得、２７．４分、２９．２分および最後に１００％ 緩衝液Ｂで溶出される非常に幅広いピークとして溶出される自己会合分子が“夾 雑している”　（図１２０）。この説明は酢酸水溶液中で放置すると（焼時間も ）これらのピークが大きくなり、最終的に定量的に沈殿して（るという観察結果 と一致している。（Ｍ＋Ｈ）　として計算ｍ／ｚ値は４５９３．６であり、測定 されたｍ／ｚ値は４５８８．７であった。 （ｇ）　合成プロトコール１ （１）　ＴＦ　Ａ／　ＣＨ２Ｃ１２（１：　１．　ｙ／ｒｌによるＢｏｃ−脱保 護、３ｍ１９３×１分および１×１０分；　（２）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、３ ｍｌ、６Ｘ１分；（３）ＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２　（１・１９．マ／１）による 中和、３ｍ１．３Ｘ２分；（４）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、３ｍｌ、６Ｘ１分お よび排溶媒１分、（５）ＰＮＡ樹脂の試料２〜５■を取り出し、置換を決定する ための定量的ニンヒドリン分析のために十分に乾燥；　（６）１ｍｌのＣＨ２Ｃ ｌ２に溶解した３、２当量（０，１８ミリモル＋１００■）のＢｏ　ｃＴａ　ｅ 　ｇ−ＯＰ　ｆ　ｐを加え、続イテ０．５ｍｌのＤＭＦの添加（ペンタフルオロ フェニルエステルの最終濃度〜０．１２Ｍ）；カップリング反応は全部で１２〜 ２４時間室温で振とうすることにより進行させた；　（７）ＤＭＦにて洗浄、３ ｍｌ、ＩＸ２分、（８）ＣＨ２Ｃ１２にて洗浄、３ｍ１．４Ｘ１分；　（９）Ｄ 　ＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ　２　（１１９、ｙ／ｙ）で中和、３ｍ１．２Ｘ２分、（ １０）ＣＨ２Ｃ１２にて洗浄、３ｍｌ、６×１分；（１１）保護ＰＮＡ樹脂の試 料２〜５■を迅速な定性的ニンヒドリン試験のために取り出し、さらにカップリ ングの程度を決定するための定量的ニンヒドリン試験のために２〜５■を十分に 乾燥させた（サイクル７．１０および１５の後、未反応アミノ基はメチレンクロ リドに溶解したＮ−アセチルイミダゾールでアセチル化することにより塞がれた ）。 ／ｇ）上に定量的なりｏｃ−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）を加えることによりに−ト３． ２当量のＢｏ　ｃＴａ　ｅ　ｇ−ＯＰ　ｆ　ｐを用いる単−力・ツブｌレグ（” 合成プロトコール２”）が保護ＰＮＡ鎖のさらなる伸長に用いられた。サイクツ １１５力１ら１０は約３３％Ｄ　Ｍ　Ｆ　／　ＣＨＣｌ　中の遊離酸ＢｏｃＴａ ｅｇ−ＯＨのエクスドラストレー１−ＤＣＣ（すなわち原位置）カンプリングが 用いら仔た。すべてのカブプリング反応は手動式６ｍｌ標準固相反応容器中で少 くとも１２時間振とうすることにより実施された。未反応アミノ基は実施例１７ て行ったごとく、合成の同じ段階でアセチル化することにより塞がれた。保護Ｂ ｏｃ−（Ｔａｅｇ）＋５−Ｌｙｓ　（Ｃ１Ｚ）−ＢＨＡおよびＢｏｃ−（Ｔａｅ ｇ）、ｏ−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−Ｂ　ＨＡ樹脂は各々５およびｌ０ＰＮＡ残基 の作製後に一部を取り出した。 Ｂｏｃ−［Ｔａｅｇ）Ｈ−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＢＨＡ樹脂からの粗切断生成 物の分析用ＨＰＬＣクロマトグラムから判断すると（節（ｅ）参照）　、ＰＮＡ 残基５から１０の追加の“遊離酸”カップリングは実施例１７中の単カップリン グした残基と比較して有意な合成収量の改良を与えなかった。 Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）ｔｏ−ＬｙＳ　ＣＣＩ　Ｚ）−ＢＨＡ樹脂の一部（推定乾 燥重量は約９０■である；〜０．０１ミリモル成長鎖）の脱保護に続いて、Ｈ− ミリモル）と反応させた。定性的ニンヒドリン反応から判断すると、アクリジン 部分のカップリングはは望定量的であった。 残りのＢｏｃ−（Ｔａｅｇ）、５−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）−ＢＨＡ樹脂（推定乾燥 重量約７０■、〜０．００５ミリモル成長鎖）の脱保護に続いてＨ−（９１■、 ０．１２ミリモル）と反応させた。定性的ニンヒドリン反応で判断するとアクリ ジン部分のカンプリングはほとんど定量的であった。 （ｄ）　ＨＣＴａｅｇ）ｓ　−Ｌｙｓ　ＮＦ２の切断、精製および同定保護Ｂｏ ｃ−（Ｔａｅｇ）５−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＢＨＡ樹脂の一部を実施例１７ｃ のごと（処理すると１９．Ｏ＊の乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇ）　５−ＬｙｓＣＣＩ　Ｚ ）−ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により８．９■の組物質を得た。１２．２分の主ピー ク（１０％酢酸水溶液のかわりに水溶液で注入すると１４．２分に溶出）は全吸 光度の約９０９６であった。約２．２■の粗生成物を精製して約１，５■の９９ ％の純度のＨ−［Ｔａｅｇ）　−Ｌｙｓ−ＮＦ２を得た。 保護Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇｌ　１Ｇ−Ｌｙｓ　（Ｃ７Ｚ）−ＢＨＡ樹脂の一部を実 施Ｎ　１７　ｃのごとく処理すると、７，０■の乾燥Ｈ−（Ｔａ　ｅ　ｇ）　、 ６−Ｔ−ｙ　５（Ｃｊ　Ｚ）−ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により１．７■の粗物質を 得た。１５．１分の主ピーク（１０％酢酸水溶液のかわりに水溶液で注入すると １７．０分に溶出）は全吸光度の約５０％であった。約１．２■の粗生成物を精 製すると約０．２■の〉９５％の純度のＨ−（Ｔａｅｇｌ　−Ｌｙｓ−ＮＨ２を 得た。図１３ａ、（Ｍ＋Ｈ）　としての計算ｍ／ｚ値は２８０７．８であり、実 ＃ｍ／ｚ値は２８０８．２であった。 （乾燥重量）が実施例１７ｃに記載したごとく切断され、４２．２■の粗物質を 得た。２５．３分の主ピーク（１０％酢酸水溶液のかわりに水溶液として注入す ると２３．５分に溶出した）は全吸光度の約４５％であった。８．８７■の粗生 成物を精製すると約５．３■の〉９７％の純度のＨ−（Ｔａｅｇ）、ｏ−Ｌｙｓ −ＮＨ２を得た。（Ｍ＋Ｈ）　として計算ｍ／ｚ値は２８５０．８であり、実測 ｍ／ｚ値は２８４９．８であった。 ７８．７■（乾燥重量）を実施例１節（ｃ）に記載したごとく切断し、３４．８ ■の粗物質を得た。２３．５分の主ピーク（１０％酢酸水溶液のかわりに水溶液 で注入してもほとんど同じ溶出時間）および２８．２分の“ダイマー”は全吸光 度の約３５％であった。約４．５■の粗生成物を精製すると約１．６■のおそら ＜＞９５％の純度のＨ−（Ｔａｅｇ）　−Ｌｙｓ−ＮＨ２を得た。この化合物か ら“ダイマー”ピークを除くことはできず、“ダイマー“ピークは酢酸水溶液中 で放置すると増大した。 ＣＨ２Ｃｌ２による洗浄、３ｍｌ、８部１分および脱溶媒１分；　（５）ＰＮＡ 樹脂の２〜５■の試料をとり、定性的ニンヒドリン分析のために十分に乾燥；　 （６）サイクル１から５およびサイクル１０から１５に対しては、１ｍｌのＣＨ ２Ｃ１２に溶解した３、２当量（０，１８ミリモル；１００■）のＢｏｃＴａｅ ｇ−ＯＰ　ｆ　ｐ、続けて０，５ｍｌのＤＭＦを添加することにより（ペンタフ ルオロフェニルエステルの最終濃度〜０．１２Ｍ）カップリング反応を実施した ；カップリング反応は総計で１２〜２４時間振とうすることにより進行させた； サイクル５から１０　ではＬ　５ｍｌＤＭＦ／ＣＨ２Ｃ１２（１：　２．ｙ＃） 中（７）０．１２ＭＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨのさらなる０、１２Ｍ　ＤＣＣカップ リングを用いた；ＤＭＦで洗浄、３ｍｌ、１部２分；　（８）ＣＨ２Ｃ１２によ る洗浄、３ｎｌ、４部１分；　（９）ＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｊ！２　（１・１９． マ／マ）による中和、３吐　２部２分；　（１０）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、３ ｍｌ、５ｍｌ分；（１１）保護ＰＮＡ樹脂の試料２〜５■を定性的にニンヒドリ ン試験のためにとる（サイクル７．１０および１５後未反応のアミノ基はメチレ ンクロリドに溶解したＮ−アセチルイミダゾールによるアセチル化により塞いだ ）。 ＰＮＡが組入れられた。さらに、一つを除くすべてのサイクルで引続いてカップ リングされていないアミノ基がアセチル化された。以下にその合成を詳細に記載 する。 ミリモル／ｇであった。この値を得るため、６０ｍ１０ＣＨ２ＣＩ　２中の単０ 原位置°カップリング（１，５部リモルＤＣＣ）を用いて、１．５ミリモルのＢ ｏａ−Ｌｙｓ　（ＣＪ　Ｚ）が５．０ｇの中和および前もって膨潤されたＭ［３ ＨＡ樹脂（定量的ニンヒドリン反応により０．６４ミリモルＮ＋−１２／ｇと決 定されている）と結合された。反応は手動式、２２５ｎｉｌの標準固相反応容器 中で３時間振とうすることにより実施された。未反応アミノ基は次に無水酢酸／ ビＩ月シン／′ＣＬＩ２Ｃ１２（１，：　１　：　２．　マ／ｖ／マ）の混合物 で１８時間アセチル化することにより塞がれた。中和樹脂の定員的ニンヒドリン 反応により０．０００９３Ｅリモル／ｇの遊離アミンしか残っていないことが示 された（表Ｉ参照）（すなわぢ、本来のアミノ基の０．　１５９６）　、　Ｒ換 の程度は脱保護および二、ンヒドリン分析により推定され、中和ＨＬｙｓ　ＣＣ Ｉ　Ｚ）　ＭＢＨＡ樹脂に対し０３２ミリモル／ｆであるこ吉が観察された。こ の値は０．３０ミリモルＢ　ｏ　ｃ−１，ｙ　５（ＣＩＺ）／ｇ樹脂の定量的カ ップリングの最大値０２８ミリモル／ｇと比較されたい（表ｎ参＠）。 Ｗｊ　（ａ）で製造ざＦＬｔ、Ｉ＋−１−ｙ　ｓ　（ＣＩ　Ｚ）　−ＭＢＨへの 樹脂の全バッチがＣＨ，ＩＣ！　、中の２．５当置ＢｏｃＴａ　ｅｇ−Ｏｒ’　 ｆ　ｐを利用する単カップリノ・グ（′治成プロトコール３”）によるＢｏｃ　 （Ｔａｅｇ）３　Ｔ、ｙｓ（ＣＩＺ）−Ｍ　Ｂ　ＨＡ樹脂の組）γＣに直接利用 された（同一の反応容器）。定量的ニンヒドリン反応が合成を通し７応用された （表Ｊ］参照）。 約４．５ｇのｉ湖ＢｏＣ−＝−（Ｔａｅｇ３３−Ｌ、ｙｓ　（ＣＩ　Ｚ）−ＭＢ ＨＡ樹脂（・−０，３６：リモル成長鎖１節（ｂ）て製造さ４また９部で・−１ りｇの湿潤樹脂かりとら第１た）を５５ｍ１の５ＰＰＳ反応容器に入れた。Ｂｏ ｃ−（Ｔａｅｇ）　８−１．３’Ｓ　（Ｃ７！　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は約３０％ ＤＭＦ／ＣＨ，，Ｃ＃　２中の２．５当量のＢａ　ｅ　”Ｉ’ａ　ｅ　ｇ−ＯＰ 　ｆ　ｐを利用する単カッブリ゛／グ（”合成プロトコ−・ル４Ｍ＋、１．．Ｊ ：り組立てられた。合成の進行はすへての段階での定量的ニンヒドリン反応によ りモーターされた（表■参照）。 約１．　ｇのａＦＩＢｏｃ−［Ｔａｅｇｌ８−Ｌｙｓ　（（Ｍ　Ｚ）−ＭＢ）Ｉ Ａ樹脂（〜・０．０９Ｅリモル成長鎖；節（Ｃ）で製造された全部で〜４ｇの湿 潤樹脂からとられた）を２０ｍ１の５ｐｐｓ反ｔｔ８ｘ！ごべれた。１３ｏｃ− （Ｔａｅｇｌ　１ｏ−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は、約３０％ＤＭＦ ／ＣＨ２Ｃｌ　２中の２．５当量のＢｏｃＴａｅｇ−ＯＰｆｐを利用する前の節 で用いゆれた半カツプリングプロトコ−・ルにより組立Ｃられた。反応容器は３ ｉ１であ・）た（＃シく振とう）、。 合成（Ａ定量的−〕ノヒドリン反応でモニターされた（表１１１＃＠）、１重量 は約４５ｓ＋ｇである）の脱係）に続いて、樹脂は次に３ｍｌ固相反応容器中、 ２ｍｌの無水酢＃２／ピリジン／Ｃ１−１，ＣＩ　、（］、　：　１　：　２． 　＋／ｌ／ｒｌの混合物で２時間、定量的にアセ天ル化された。 １７ｃｌ：記載したごとく処理し、７６■の乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ （ＣＩ　Ｚ）−ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約２４■の粗物質を得た。１５．２ 分の主ピーク（欠損ペプチドおよび種々の副産物のような不純物を含んでいる） は全吸光度の約７８％であった。主ピークはまた“主ピークに欠損ピークを加え た”吸光度の約８８％とみなされ、それは表■中の個々の収率の統計により得ら れた全推定カップリング収率９０．１％とよく一致している。粗生成物の一部７ ．２■が２つのバッチからセミ分取逆相カラムにより精製された（ドライアイス ／２−プロパツールで冷却したビーカーで主ピークを集めた）。各々１ｍｌの８ ２０中に３．６■含んでいた。凍結溶液を直接（スピードバックでアセトニトリ ルを前もって除去することなく）凍結乾燥して４．２■の８２％の純度のＨ−（ Ｔａｅｇ）　−Ｌｙｓ−ＮＨ２を得た。 四ｇ）　Ａｃ−（Ｔａｅｇ）、ｏ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の切断、精製および同定Ａｃ −（Ｔａｅｇ）ｔｏ−Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ）−ＢＨＡ樹脂の一部４００．０■（ 乾燥重量）が実施例１７ｃに記載したごとくして（ＴＦＡ処理を除く）切断され 、１１．９■の粗物質を得た。１５，８分の主ピークは全吸光度の約７５％とみ なせた。粗生成物の一部４．８■を精製して約３５■の〉９５％の純度のＡｃ− （Ｔａｅｇ）　−Ｌｙｓ−ＮＨ２を得た。（Ｍ＋Ｈ）　として計算ｍ／ｚ値＝２ ８４９．８であり、実測ｍ／ｚ値＝２８４８．８であった。 （１１）　合成プロトコール３ （１）ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２　（１：　１．マ／マ）によるＢｏｃ脱保護、１０ ０ｍ１゜３ｘ１分および】×３０分：　（２）ＣＨ２ＣＩ２にて洗浄、１００＋ ｎ１．６ＸＬ分：（３）　Ｄ　Ｉ　ＥＡ／’ＣＨ）　Ｃ１２（１、Ｌ　９．マ／ マ）による中和、１００ｍ１．３ｘ２分；　（４）ＣＨ２Ｃｉ　２にて洗浄、１ ００ｍ１．６ｘ１分および脱溶媒１分、（５）置換を決定する定量的ニノヒドリ ７分析のためＰＮＡ樹脂の試料２〜５■をとり、十分に乾燥；　（６）３５ｍｌ のＣＨ２Ｃｌ２に溶解した２、５当量（３，７５ミリモル；２．０６４ｇ）のＢ ｏｃＴａｅｇ−ＯＰｆｐを加える（ペンタフルオロフェニルエステルの最終１度 〜Ｏ，１Ｍ）；カップリング反応は振とうしながら全部て２０〜２４時間進行さ せる。（７）ＤＭＦにて洗浄、１００ｍ１゜１ｘ２分（ＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨの 沈殿を除くため）＋　（８）ＣＨ２Ｃ１，、にて洗浄、１００ｍ１．４ｘ１分： 　（９）　Ｄ　Ｉ　Ｅ　Ａ／　ＣＨ２Ｃ１２（１’　Ｌ　９　、ｔ／ｌ）で中和 、１００ｍ１．２ｘ２分；　（１０）ＣＨ２Ｃ１２で洗浄、１００＋ａｌ、６ｘ １分：（１１）迅速定性的ニンヒドリン試験のため保護ＰＮＡ樹脂試料２〜５■ をとり、さらにカップリングの程度を決定するための定量的ニンヒドリン分析の ために２〜５■を十分に乾燥させる；　（１２）１００ｍｌの無水酢酸／ピリジ ン／ＣＨ２（Ｊ２　（１：１：２．マ／マ／マ）の混合物で２時間アセチル化す ることにより未反応のアミノ基を塞ぐ；　（１３）ＣＨ２Ｃ１２にて洗浄、１０ ０　ｍｌ。 ６ｘ１分；　（１４）２ｘ２〜５■の保護ＰＮＡ樹脂をとり、定性的および定量 的ニンヒドリン分析のためにＤ　Ｉ　ＥＡ／ＣＨ２Ｃｔ　２（１：　１９．　ｔ ／マ）で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄する。 （１）　合成プロトコール４ （１）　ＴＦ　Ａ／　ＣＨ２ＣＩ　（１：　１．ｔ／ｙｌによるＢｏａ脱保護、 ２５ｍ１．３ｘ１分および１ｘ３０分；　（２）ＣＨｃｌによる洗浄、２５ａ＋ ｌ、５ｘ１分：　（３）ＤＩ　ＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ　２　（，１：１９．マ／マ） による中和、２５ｍ１．３ｘ２分；　（４）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、２５＋ａ ｌ、６ｘ１分および脱溶媒１分；　（５）置換を決定するための定量的ニンヒド リン分析のためＰＮＡ樹脂試料を２〜５ｍｇとり十分に乾燥；　（６）６ｍｌ、 ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した２、５当量（０，９２ミリモル；０．５０６ｇ）のＢｏ 　ｃＴａ　ｅ　ｇ−ＯＰ　ｆ　ｐの添加に続いて３ｍｌのＤＭＦを加える（ペン タフルオロフェニルエステルの最終濃度〜Ｏ，Ｌｍ）；力・ツブリング反応は振 とうしながら総計で２０〜２４時間進行させた；　（７）ＤＭＦＩこよる洗浄、 ２５ｍ１．ＩＸ２分；　（８）ＣＨ２Ｃｆ２による洗浄、２５ｍ１．４ｘ１分； （９）ＤＩＥＡ／ＣＨＣ１（１：１９．マ／マ）による中和、２５ｍ１，２ｘ２ 分；（１０）ＣＨＣｔ’　による洗浄、２５ｍ１．６ｘ１分；（１１）迅速な定 量的二ンヒドリン試験のために保護ＰＮＡ樹脂の試料２〜５ｍｇをとり、カップ リングの程度を決定するための定性的ニンヒドリン分析のためさらに２〜５■を 十分１こ乾燥させる＋　（１２）２５ｍｌの無水酢酸／ピリジン／ｃＨ２Ｃ／２ 　（１：１：２゜Ｖ／マ／マ）の混合物で２時間アセチル化することにより未反 応のアミノ基を塞ぐ（最初のサイクル後を除いて）：　（１３）ＣＨ２Ｃ１２に よる洗浄、２５ｍ１，６ｘ１分；　（１４）定性的および定量的ニンヒドリン分 析のため２Ｘ２〜５■の保護ＰＮＡ樹脂の試料をとり、ＤＩＥＡ／引（、、Ｃｉ 　、、（１：　１９．　ｖ／ｖ）で中和し、（ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂の段階 的作製的２．５ｇの湿［Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ〕５−Ｌｙｓ−ＣＣＩＺ）−ＭＢＨ Ａ樹脂（残っている総計で約１６ｇの湿潤樹脂の〜１／６．〜０．７５ｇ乾燥樹 脂、〜０．１５ミｌＪモル成長鎖）を６ｍｌの５ｐｐｓ反応容器に入れた。Ｂｏ ａ−（Ｔａｅｇ）　−Ｃａｅｇ　−［Ｔａｅｇｌ　４−Ｌｙｓ　−（Ｃｊ！　Ｚ ）　−ｔｖｌＢＨＡ樹脂は２．５ｍｌの約３０％ＤＭＦ／′ＣＨ２Ｃｌ２中の通 常の２．５当量のＢｏＣＴａｅｇ−ＯＰｆｐを利用するすべてのＴａｅｇ残基の 復力・ツブリングにより作製された（ただし最初の残基は単カップリングによる ）。Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−残基の組込みはＴ　Ｆ　Ｅ／”ＣＨ２ＣＨ２（’Ｊ−：　 ２．ｖ／’）中の２．０当量のＢｏｃＣ（Ｚ）ａｅｇ−ＯＰｆｐの結合により達 成された。合成の進行はすべての段階にお（＼て定量的ニンヒドリン反応により モニターされた（表■参照）。 保護Ｂｏａ−（Ｔａｅｇ〕５−Ｃａｅｇ−（Ｔａｅｇｌ　４−Ｌｙｓ−（Ｃｆ　 Ｚ）−ＢＨＡ樹脂の一部が実施例節（Ｃ）に記載されたごとく処理され、６６． ９■の乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇ）　−Ｃａｅｇ−（Ｔａｅｇ〕４−Ｌｙｓ−＜ＣＩ　 Ｚ）−ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約１４．４■の粗物質を得た。１４．５分の 主ピークは全吸収度の〉５０％とみなされた。粗生成物の一部１０００■を精製 すると（８つのバッチ、各々１ｍｌのＨＯに溶解されて０る）約９．１■の９６ ％の純度のＨ−（Ｔａｅｇ）５−Ｃａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　−Ｌｙｓ−ＮＨ２を （尋た（図１３ｂ）。（Ｍ＋Ｈ）　として計算ｍ／ｚ値＝２７９３．８であり、 実測ｍ／ｚ値＝２７９０．６であった。 末端標識オリゴヌクレオチド（ｄ（ＧＡ、ＴＣＣＡ、ｏＧ）］　と室温で１５分 インキュベートした。試料は水中で冷却しく１５分）、ポリアクリルアミド（Ｐ ＡＧＥ）でのゲル電気泳動により分析した。１０μｌの試料に２ｊｌの５０％の グリセロール５７ＢＥ　（ＴＢＥ＝９０ｓＭトリス−ホウ酸、１ｍＭ　ＥＤＴＡ 、Ｉ）Ｈ８，３）を加え、試料はＴＢＥ緩衝液中４℃にてＰＡＧＥ　（１５％ア クリルアミド、０．５％ビサクリルアミド）により分析された。試料の１．０ｘ ｌを凍結乾燥し、Ｌｏｌｌの８０％ホルムアミドＩＴＢＥに再溶解して９０℃に 加熱しく５分）、ＴＢＥ中尿素／ＰＡＧＥ　（１５％アクリルアミド、０．５％ ビサクリルアミド、７Ｍ尿素）により分析した。〔３２Ｐ〕含有ＤＮＡバンドは 増感板およびＡｇｆａＣｕｒＩｘ　ＲＰＩ　Ｘ線フィルムを用い、−８０’Ｃで ２時間暴露するオートラジオグラフィーにより可視化された。 オリゴヌクレオチドはＢｉｏｓｅａｒｃｈ７５００ＤＮＡ合成機で合成され、７ 　（３２Ｐ）　Ａ　Ｔ　Ｐ　（Ａｍｅｔ山ｔｉ、　５０ＧＧＣｉ／　ミ！Ｊ　モ ル）　オヨＵホ！Ｊ　ヌクＬ／オチトキｆ−ゼにより標識され、常法を用いてＰ ＡＧＥにより精製された（Ｍ１ａｉｓｌ目ξｆＪ１（１９８６）　実験室マニア ル、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈ＊ｔｂｏ＋　Ｌ！ｂｏｔｒｔｔｈｔｉｅ＋） 。 プラスミドＤＮＡ配列内に含まれたｄＡ、ｏ−ｄＴ、ｏ標的配列は常法により（ Ｍ＊ｎ１ｘｌｉ＋　ｃｌ　ｉｌ、、１９８６１大腸菌ＪＪＯＩ株を使用し、ｐＵ ｃ１９のＢａｍＨ工制限部位内へ２つのオリゴヌクレオチド（ｄ（ＧＡＴＣＣＡ 、ｏＧ）＋ｄ（ＧＡＴＣＣＴ、ｏＧ））をクローン化することにより作製された 。生しるクローンの１つから所望のプラスミド（ｐＴｌｏと称された）が単離さ れ、アルカリ抽出法およびＣ５（Ｊ遠心分離により（１１！旧２１旧１　＋１． 、　１９８６）精製された。ａ　Ａ　ｔ　ｏ　／　ａ　Ｔ　ｌ　Ｏ標的配列ヲ含 ム２４８ｂｐノ３’　−（”Ｐ〕末端ｆｆ１ＲＤＮＡ断片１！、ｐＴＩＯＤＮＡ を制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＰｖｕＩＴで切断腰大腸閑ＤＮＡポリメラーゼのク レノー断片（Ｂｏ＋ｈ＋ｉｎｇｅ＋　Ｍ、ｎｎｈｅｉｎ）を用いる切断ＤＮＡの ａ　（”Ｐ〕−ｄＡＴＰ　（４０００Ｃｉ／′ミリモル、ＡＩＩｅ＋＋ｈｕ＋） 　Ｉ：よる標識、およびＰＡＧＥ　（５％アクリルアミド、０．０６％ビサクリ ルアミド、ＴＢＥＩ衝液）により精製することにより得られた。ＥｃｏＲＩ切断 ｐＴ１０プラスミドの細菌アルカリ性ホスファターゼ（Ｂｏｅｈ＋ｉｎｇｅ＋　 Ｍｉｎｎｂｅｉ■）による処理、低融点アガロース中のゲル電気泳動によるプラ スミドＤＮＡの精製、およびγ（３２Ｐ〕ＡＴＰおよびポリヌクレオチドキナー ゼによる標識によりこの断片は５′末端での〔３２Ｐ〕末端標識物として得られ た。ＰｖｕＩＩで処理すると２４８ｂｐＤＮＡ断片は上記のごとく精製された。 標識２４８ｂｐ断片おＪｉヒｙ、５ｇｇノウシ胸腺ＤＮＡを１００ｊｌの緩衝液 中３７℃にて６０分インキュベートすることにより形成された。 （ａ）　スタフィロコッカスヌクレアーゼ（図１２ｂ）！１１換複合体ハ前記ノ コと＜２５ａ＋Ｍ）’ＪスーＨＣ１，ｌｄ　ＭｇＣ１゜０、ｌｄ　ＣａＣｌ２． ｐＨ７，４中で形成された。複合体は７５０Ｕ／＋＋＋１のスタフィロコッカス ヌクレアーゼ（Ｂｏｅｈ＋ｉｎｇｕ　Ｍｓｕｈｅｉｍ）で２０℃にて５分処理さ れ、２５ｍＭまでのＥＤＴＡの添加により反応を停止させた。２容量のエタノー ル、２％酢酸カリウムでＤＮＡを沈殿させ、８０％ホルムアミド、ＴＢＥに再溶 解して９０℃に加熱しく５分）、高分解能ＰＡＧＥ　（１０％アクリルアミド、 ０．３％ビサクリルアミド、７Ｍ尿素）およびオートラジオグラフィーにより分 析した。 （ｂ）　アフィニティ光切断（図１２ａ＋１２ｂ）複合体はＴＥ緩？ｆｒＪ＆中 で形成させた。エソベンドルフチューブに含まれている試料に約３００ｎｍ以上 を３０分照射した（Ｐｈｉｌｉｐｓ　ＴＬ２０Ｗ／１２蛍光チューブ、２４１ｍ −２ｓ−’）。前記のごと＜ＤＮＡを沈殿させ、ＬＭビベリジシにとり、９０℃ に２０分加熱した。凍結乾燥後前記のごと＜　ＰＡＧＥによりＤＮＡを分析した 。 （Ｃ）　過マンガン酸カリウム（図１２ｈ）１００ｐｌのＴＦ中で複合体を形成 させ、２０１ＭＫ　Ｍ　ｎ　Ｏ４を加えた。２０℃で１５秒後、５０μｌの１． ５Ｍ酢酸す）・リウム、ｐＨ７，０，１Ｍ２−メルカプトエタノールを加えて反 応を停止させた。ＤＮＡを沈殿させ、前記のごとくピペリジノで処理して分析し た。 （ｃｆ）　フナトフットプリンティング（図１２ｂ）ＩＱＯｌ／のＴＦ中で複合 体が形成され、ジアゾ結合アクリジン（０，１ｇｇ／ｘｉ）（ＤＨＡ、　Ｎ１ｅ ｌ＋ｅＩｌｅｌ　Ｊ＋、　（１９１ｇ）　Ｎａｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ　ＲｅＩ、１ ６．３８７７−８１１）が使用された。試料に３６５１を３０分照射しくＰｈ１ ｌｉｐｓ　ＴＬ２０Ｗ１０９Ｎ。 ２２４ｍ−２ｓ　−’）　“アフィニティ光切断”に記載したように処理した。 アミノエチルグリシン（５２，８６ｇ；０．４４７モル）を水（９００ｎｌ）に 溶解し、ジオキサン（９００ｎｌ）を加えた。２Ｎ　ＮａＯＨでｐＨを１１．２ ｉ：調整した。ｔｅｒｔ−ブチル−ｐ−ニトロフェニルカーボネート（１２８， ４ｇ；０．５３７モル）をジオキサン（７２０ｎｌ）に溶解し、ｐＨを１１．２ に保ちながら、２時間以上かけて滴下した。さらに少くとも３時間ｐＨを１１． ２に保ち、その後−夜撹拌した。黄色溶液を０℃に冷却し、２Ｎ　ＨＣｌでｐＨ を３．５に調整した。混合物をクロロホルムで洗浄しく４Ｘ１００ｍｌ）、水相 のｐＨを０℃にて２Ｎ　ＮａＯＨを用いて９．５に再調整した。ベンンルオキシ カルボニルクロリド（７３，５ｍｌ；０．５１５モル）を３０分以上かけて添加 し、その間ｐ　Ｈは２Ｎ　ＮａＯＨにて９．５に保たれた。続いての４時間ｐＨ をしばしば調整した後溶液を一夜撹拌した。次の日、溶液をエーテルで洗浄しく ３Ｘ６００ｎｉｌ）、その後Ｏ℃にて溶液のｐ＋−１を２Ｎ　Ｈ（Ｊ’で１５に 調整した。表記化合物は酢酸エチルによる抽出（５ＸＩＱＱＯｒｎｌ）により単 離された。酢酸エチル溶液は硫酸マグネシウムで乾燥し、真空上蒸発乾固させた 。１３８ｇの物質が得られ、エーテル（３００ｎｌ）に溶解し、石油エーテル（ １８００ｍｌ）を加えて沈殿させた。収量１２４．７ｇ　（７９％）。Ｍ、ｐ、 ６４．　５〜８５℃。元素分析Ｃ１□［（２４Ｎ２０６として、実測値（計算値 ）　Ｃ・５８．４０　（５７，９４）；Ｈニア、０２　（６，８６）；Ｎ・７． ９４　（７，９５）。 ’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨＩ　、　ＣＤ　Ｃ１３）７．３３＆７．３２　（５Ｈ， Ｐｈ）：　５．１５＆５．１２（２Ｈ，ＰｈＣ旦２）　；　４．、０３＆４．０ １　（２１−Ｔ、　ＮＣ旦２ＣＯ２Ｉ］）；３、４６　（ｂ、　２　ＨｌＢ　ｏ 　ｃ　ＮＨＣＨ２ＣＨ２）　；　３．２８（ｂ、２Ｈ，ＢｏｃＮＨＣ旦２Ｃ旦２ ）；１．４３＆１．４０（９Ｈ，Ｂυ）。 ＨＰＬＣ（２６０Ｉｌａ＋）２０．７１分（８０，２％）および２１．５７分（ １９，８％）。 ＵＶスペクトルは同一で副ピークがビス−Ｚ−ＡＥＧから成っていることを示Ｎ −ペンジルオキシ力ルボニルーＮ’−（ｂｏｃアミノ］−チル）グリシン（６０ ，０ｇ；０．１７０モル）およびＮ、　Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（６ ，、ＯＯｇ）を無水エタノール（５００ｎｌ）に溶解し、ＤＣＣ（４２，２ｇ　 ；０．２０４モル）の添加に先だって０℃に冷却した。５分後に水浴を除き、さ らに２時間撹拌を続（プた。濾過して沈殿（、たＤＣＩＪ（３２ｇ、乾燥）を除 き、ニーデルで洗浄した（３　Ｘ　］、　Ｏ０ｍ１）　、合併した濾液は希硫酸 水素カリウム（２×４００ａ＋Ｉ）、希炭酸水素すトリウム（２Ｘ４００ｍｌ） および飽和塩化すトリウムＵ、　Ｘ　４００ｍ１）の順で洗浄した。有機相を濾 過して硫酸マグネシラノ２．で乾燥（７、真空上蒸発乾固させると、６Ｇ、１ｇ の少量のＤＣＵを含んだ油状物を得た。 油状物を無水エタノール（６００ｍりに溶解（，１０％パラジウム炭素（６，６ ｇ）を加えた。溶液は大気圧で水素化し、溜めは２Ｎ水酸化光トリウ１１を満た した。４時間後、理論量の４．２Ｌのうち３．３Ｌが消費された。反応混合物は セライトを通して濾過（５、真空上蒸発乾固させると３９．５ｇ　（９４％）の 油状物を得た。油状物の一部１３ｇがノリ力ゲル（６００ｇＳ　ｉ　０２　）ク ロ′７トグラフイーにより精製された。３００ｉ１の２０％石油エーテル／メチ レ゛ツクロリドで溶出後、表記化合物が１７００ｉ１の５％メタノール／メチＬ ノンク口リドで溶出された。満足すべき純度の分画の溶媒を真空上除去すると８ ．４９ｇの収量であった。もしくは組物質の１０ｇがクーゲルロール蒸留により 精製された。 ’ＨＮＭ　Ｒ（２５０ＭＨｘ、　ＣＤ　３０　Ｄ）　：４、７７　（ｂ、ｓ、　 ＮＨ）　；４．　１８　（Ｑ、　２Ｈ，ＭｅＣ旦２−）。 ３、３８　（ｓ、　２Ｈ，ＮＣＣＨ２ＣＯ２Ｅ　Ｄ　；　３−１６（ｔ、２Ｈ， ＢｏｃＮＨＣ旦２ＣＨ２）；２．６８（ｔ、　２Ｈ，ＢｏｃＮ）ＩＣＨ２ＣＨ， 、）　；１．４３　（ｓ、　９Ｈ，Ｂｕ）７８．３（（ＣＨ）　Ｃ）；５９．９ （ＣＨ２）；４９．０（ＣＨ２）；４８．１　（ＣＨ）；３９．０　（ＣＨ２） ；２６．９　（ＣＨ２）およびエタノールをメタノールにかえて前記の方法が用 いられた。最終生成物はカラム精製により精製された。 実施例２７ １−　（Ｂｏｃ−ａｅｇ）チミンエチルエステルＮ’−Ｂｏｃ−アミノエチルグ リジンエチルエステル（１３，５ｇ；５４．８ミリモル）　、Ｄ＋１ｂ　ｔＯＨ （９，８４ｇ　：　６０．３ミリモル）および１−カルボキンメチルチミン（１ １，１ｇ；６０．３ミリモル）をＤＭＦ　（２１０ｎｌ）に溶解した。次にメチ レンクロリド（２１０ｎｌ）を加えた。溶液をエタノール／氷浴中で０℃に冷却 し、ＤＣＣ（１３，６ｇ：ｓｓ、８ミリモル）を加えた。１時間後に水浴を除き 、室温でさらに２時間撹拌を続けた。濾過により沈殿したＤＣＵを除去し、メチ レンクロリドで２回洗浄した（２Ｘ７５ｍｌ）。合併した濾液にさらにメチレン クロリド（６５０ｎｌ）を加えた。溶液を希炭酸水素ナトリウム（３Ｘ５００ｍ ｌ）、希硫酸水素ナトリウム（２Ｘ５００ｍｌ）および飽和塩化ナトリウム（Ｉ Ｘ５００ｍｌ）の順で洗浄した。濾過して少量の沈殿物を有機相から除去した。 有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空上蒸発乾固させた。油状残渣をメチレ ンクロリド（１５０ｎｌ）に溶解して濾過し、０℃で石油エーテル（３５０ｎｌ ）を加えると表記化合物が沈殿した。メチレンクロリド／石油エーテル工程をも う一度繰返した。これにより、ＨＰＬＣで９９％以上の純度の物質１６．０ｇ（ ７１％）を得た。 前実施例の物質をＴＨＦに懸濁しく１９４ｍ１．０．２Ｍ溶液）、１Ｍ水酸化リ チウム水溶液（１１６ｎｌ）を加えた。混合物は室温で４５分間撹拌した後濾過 して残りのＤＣＵを除いた。溶液に水（４００１１）を加え、次にメチレンクロ リド（３００ｎｌ）で洗浄した。さらに水（３０ｎｌ）を加え、アルカリ溶液を もう一度メチレンクロリド（１５０ｎｌ）で洗浄した。水性溶液を０℃に冷却し 、ｌＮＨＣｌを滴下して（約１１０ｍ１）ｐＨを２に調整した。表記化合物を酢 酸エチルで抽出しく９Ｘ２００ｍｌ）、合併した抽出液は硫酸マグネシウムで乾 燥した後真空下蒸発乾固させた。残渣に一度メタノールを加え蒸発させ、−夜乾 燥すると無色のガラス状固形物を得る。収量９．５７ｇ　（６４％）。ＨＰＬＣ ＞９８％Ｒ＝１４．　８分。元素分析：ＣＨＮ　０　・０．２５Ｈ２０として実 測値Ｔ　Ｉ６　２４　４　７ （計算値）：Ｃ：４９．２９　（４９，４２）；Ｈ：５，５２　（６，３５；Ｎ ：１４．１１　（１４，４１）。二級アミドの周りの制限回転のためいくつかの 信号は２，１の比で２本にわれた（リスト中主ピークがｍｊ、および副ピークが ｍｌ。 で示されている）。 ’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、　ＤＭＳ　Ｏ−ｄ６）　；１２、７５　（ｂ、　ｓ 、＝　Ｌ　Ｈ２Ｃ０２Ｈ）　：　１１−２８（ｓ、”ｌ　Ｈ”　、　ｍ　ｉ、、 イミド　ＮＨ）　；１１．２６（ｓ、”ＬＨ”、　ｍｉ、、イミド　ＮＨ）　； ７．３０（ｓ、”ＬＨ”、ｍｊ、、Ｔ　Ｈ−６）　ニア、２６（ｓ、”ＬＨ”、 ｍｉ、、Ｔ　Ｈ−６）；６．９２（ｂ、ｔ、、”Ｌ［（”　、ｍｊ、、ＢｏｃＮ Ｈ）；　６．７３（ｂ、ｔ、、“ＩＨ”、ｍｉ、、ＢｏｃＮＨ）；４．６４（ｓ 、”２Ｈ”、　ｍｊ、、ＣＨ２Ｃ０Ｎ）　；４．４６（ｓ、”２Ｈ”、　ｍｊ、 、ＣＨ２Ｃ０Ｎ）　；４．１９（ｓ、“２Ｈ′、旧、Ｃ且２Ｃｏ２Ｈ）　；　３ ．９７（ｓ、　”２Ｈ”　、　ｍｊ、、ｃＨ２Ｃｏ２Ｈ）　；　３．６３−３． ０１（未解析ｍ、水を含む、ＣＨ，ＣＨ，）；　１．７５　（ｓ、３Ｈ，ＣＨ３ ）および１．　３８　（ｓ、９Ｈ，’ＢＵ）。 Ｎ’−Ｂｏｃ−アミノエチルグリジンエチルエステル（５，００ｇ；２０．３ミ リモル）　、ＤｈｂｔＯＨ（３，６４ｇ；２２．３ミリモル）およびＮ４−ベン ジルオキ７カルボニルー１−カルボキンメチルシトシン（６，７７ｇ；２２．３ ミリモル）をＤＭＦ　（１００ｍ１）に懸濁した。続いてメチレンクロリド（１ ００５Ｉ）を加えた。溶液を０℃に冷却し、ＤＣＣ（５，０３ｇ；２４．４ミリ モル）を加えた。２時間後に水浴を除き、さらに１時間室温で撹拌を続けた。次 に反応混合物は真空上蒸発乾固させた。残渣をエーテル（１００ｎｌ）に懸濁し 、３０分激しく撹拌した。濾過により固形物を単離し、エーテル洗浄工程を二度 繰返した。 この物質は次に希炭酸水素ナトリウム（約４％溶液、１００ｍ１）と１５分激し く撹拌し、濾過し、水で洗浄した。この工程をもう一度繰返すと、乾燥後１７． Ｏｇの黄色がかった固形物を得た。固形物はジオキサン（２００ｎｌ）と煮沸し 、熱時濾過した。冷却後水（２ｏｏｍ＋）を加えた。沈殿した物質を濾過により 単離し、水で洗浄して乾燥させた。ＨＰＬＣ（２６０ｎｍで観察）によると、こ の物質は９９％より高い純度を持っていた（ほかにＤＣＵ）。エステルは次にＴ ＨＦ（１０ｆ）ｍｌ）に＠濁し、０℃に冷却し、ＩＮ　ＬｉＯＨ（６０ｎｌ）を 加えた。 １５分撹拌後、混合物を濾過し、濾液はメチレンクロリドで洗浄した（２×１５ ０ｍ１）。アルカリ溶液は次に０℃に冷却し、ＩＮ　ＨＣＩによりｐＨを２、　 ０に調整した。表記化合物が濾過により単離され、水で一度洗浄すると乾燥後１ １．３ｇの白色粉末が残った。この物質はメチレンクロリド（３００ｎｌ）に懸 濁し１石油エーテル（３００ｎｌ）を加えた。濾過洗浄して乾燥すると７．１ｇ （６９％）の生成物を得た。ＨＰ　Ｌ　Ｃは９９％の純度を示しＲ工＝１９．５ 分、Ｚ−脱係護七ノマーらしい少量の不純物を１２．６分（約１％）に示した。 元素分析”２３Ｈ２９Ｎ５０８として実測値（計算値１１（：：５４．　１６　 （５４，８７）　；Ｈ：５．　７６　（５，１）　；およびＮ：１３．６５　（ １３，９１）。 ’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨ＋、　ＤＭＳＯｄ６）　；１　ｏ、７８　（ｂ、ｓ、Ｌ 　Ｈ，ＣＯ２Ｈ）　；　’７．　８８　（２つの重なったダブレッｈ、ＩＨ，Ｃ ｙｔ　Ｈ−５）；７．４１−７．３２（ｍ、５Ｈ，Ｐｈ）；　７．０１　（２つ の重なったダブレット、ＩＨ。 Ｃｙｔ　Ｈ−６）；６．９４＆６．７８　（未解析、トリブレット、ＩＨｌＢｏ ｃＮＨ）；５．１９　（ｓ、２Ｈ，ＰｈＣＨ２）；４．８１＆４．６２（ｓ、　 ２Ｈ，ＣＨ２Ｃ０Ｎ）　；　４．１７＆３．９８　（ｓ、２Ｈ１ＣＨ２Ｃｏ２Ｈ ）；　３．４２−３．０３　（ｍ、水を含む、ＣＨ２Ｃ旦、）および１．３８＆ １．３７　（ｓ、９Ｈ，ＢＵ）。 ”’Ｃ−ＮＭＲ１５０，８８ｉ１２８．５２；１２８．１８；１２７．９６；９ ３．９０；６６．５３；４９．５８および２８．２２゜ＩＲ：波数ｃ１１−’　 （強度）。 ３４２３　（２６，４）；３０３５　（５３，２）；２９７８　（４１，４）； １７３６　（１７，３）；１６５８　（３，８）；　１５６３　（２３，０）； １５０１　（６，８）および１４５６　（２６，４）。 アデニン（１０，０ｇ；７４ミリモル）および炭酸カリウム（１０，２９ｇ；７ ４．０ミリモル）をＤＭＦに懸濁し、ブロモ酢酸エチル（８，２４ｍ１；７４ミ リモル）を加えた。窒素上室温で懸濁液を２．５時間撹拌し、濾過した。固形残 渣は３回ＤＭＦ　（１０ｎｌ）で洗浄した。合併した濾液は真空上蒸発乾固させ た。 黄−オレンジ色の固形物を水中（２００ａ＋Ｉ）に注ぎ、４Ｎ　ＨＣＩをｐＨ− ６になるまで添加した。０℃で１０分間撹拌後、固形物を濾取し、水で洗浄し、 ９６％エタノール（１５０ｎｌ）から再結晶した。表記化合物が濾過により単離 され、エーテルで十分に洗浄した。収量３．４ｇ（２０％）。Ｍ、ｐ。 ２１５５〜２２０℃。元素分析：Ｃ９Ｈ１１Ｎ５０２として、実測値（計算値） 。 Ｃ：４８．８６　（４８，６５）；Ｈ：５．０１　（４，９１）；Ｎ：３１．６ ６（３１，４２）。 ’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｘ、　ＤＭＳ　Ｏｄｓ　）　；（ｓ、　２Ｈ，Ｈ２＆Ｈ ８）　；　７．２５　（ｂ、　ｓ、、　２Ｈ，ＮＨ２）　：５、０６　（ｓ、　 ２Ｈ，ＮＣＨ２）　；　４．１７（Ｑ、２Ｈ，Ｊ　＝７．　１　ＬＨ＋、０ＣＨ ２）　；および１．２１（ｔ、　３Ｈ，Ｊ　＝７．１３Ｈ！、　ＮＣＨ２）。 １３Ｃ−ＮＭＲ１５２，７０；１４１．３０；６１．４１；４３．９７および１ ４．０７゜ ３８５５　（５４，３）；３２７４　（１０，４）；３２４６　（１４，０）； ３１１７　（５，３）；２９８９　（２２，３）；２９４０　（３３，９）；２ ８７ｇ　（４３，４）；２７５３　（４９，０）：２３４６　（５６，１）；２ １０６　（５７，１）；１８９９　（５５，７）；１７６２　（１４，２）；１ ７４２　（１４，２）＋１７４２　（Ｌ、Ｏ）；１６７１　（ｔ、８）；１６４ ４　（１０，９）；１６０６　（０，６）；１５８２　（７，１）；１５２２　 （４３，８）；１４７７　（７，２）；１４４５　（３５，８）；および１４２ ２　（８，６）。 アルキル化の位置は９６％エタノールから再結晶することにより得られた結晶の Ｘ線結晶学により確認された。 もしくは、９−カルボキシメチルアデニンエチルエステルは下記の方法によって も製造することができる。窒素導入口、機械的撹拌機および滴下ロートを備えた ２Ｌの３Ｅフラスコ中のアデニン（５０，０ｇ：０．３７モル）のＤＭＦ（１１ ００ｍ１）　ｖ濁液にヘキサンで洗浄された水素化ナトリウム−鉱油分散液１６ ．４ｇ　（０，４０７モル）を加えた。混合物を２時間激しく撹拌した後、３時 間以上かけてブロモ酢酸エチル（７５ミリ；０．６７モル）を滴下した。混合物 をさらに１時間撹拌すると、アデニンの完全な変換がｔｌｃにより示された。混 合物をｌ　Ｉｌｍ）Ｉｇで蒸発乾固させ、油状残渣に水（５０ＱＩＩＩｌ）を添 加すると、表記化合物の結晶化が起こった。固形物は９６％エタノール（６００ ｍｌ）から再結晶された。乾燥後収量５３．７ｇ　（６５，６％）　。ＨＰＬＣ （２１５ｎｍ）純度〉９９．５％。 ９−カルボキシメチルアデニンエチルエステル（３，４０ｇ；１５．４ミリモル ）を緩かに加熱することにより乾燥ＤＭＦ　（５０ミリ）に溶解し、２０℃に冷 却し、さらに水浴で冷却しなからＮ−エチル−ベンジルオキシカルボニルイミダ ゾールテトラフルオロボレート（６２ミリモル）のメチレンクロリド（５０ミリ ）溶液を１５分以上かけて添加した。少量の沈殿物が観察された。水浴を除き、 溶液を一夜撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム（１００ｍｌ）を加 えた。 １０分撹拌後、相を分離し、有機相を一容量の水、希硫酸水素ナトリウム（２回 ）、および飽和塩化ナトリウムの順で洗浄した。溶液を硫酸マグネシウムで乾燥 し、真空下蒸発乾固させると、ｌ１ｇの油状物を得た。この物質をメチレンクロ リド（２５ミリ）に溶解し、０℃に冷却して石油エーテル（５０ミリ）で沈殿さ せた。この工程をもう一度繰返すと３．４５ｇ　（６３％）の表記化合物が得ら れた。Ｍ、ｐ、ｉ３２　〜３５℃。元素分析・Ｃ１□Ｈ１７Ｎ５０４として、実 測値（計算値）：Ｃ：５６．９５　（５７，４６）；Ｈ：４．７１　（４，８２ ）；Ｎ：１９．３５　（１９，７１）。 ’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨ＋、　ＣＤ　Ｃ１３）　：８、　７７　（ｓ、ＩＨ，Ｈ −２またはＨ−８）；７．９９（ｓ、１１４．　Ｈ−２またはＨ−８）；７．４ ５−７．２６（ｍ、　５Ｈ，Ｐｈ）　；　５．３１　（ｓ、２Ｈ−Ｎ　ＣＲ２） 　：４、９６　（ｓ、　２Ｈ，Ｐ　ｈ　ＣＨ２）　；　４．２７（ｑ、２Ｈ，Ｊ ＝７．　１５１１＋、　Ｃ旦２ＣＨ３）および１．３０（ｔ、３Ｈ，Ｊ”’７． １５１ｈ、　ＣＨ２ＣＩ（３）。 １３Ｃ−ＮＭＲ１５３，０９，１４３，１１；１２８．６６；６７、８４；６２ ．５１４４．２４および１４゜０９゜ＩＲ波数ａｍ−１（強度）。 ３４２３　（５２，１）；３１８２　（５２，８）：３１１５　（５２，１）； ３０３１　（４７，９）；２９８１　（３８，６）；１７４７　（１，１）：１ ６１７　（４，８）＋１５８７　（８，４）；１５５２　（２５，２）；１．５ １１　（４５，２）；　１４９２　（３７，９）；　１４６５　（１４，０）お よび１．４１３　（３７，３）。 Ｎ６−ペンジルオキソカルボニル−９−カルボキンメチルアデニンエチルエステ ル（３，２０ｇ；９．０１ミリモル）とメタノール（５０ｉ１）を混合し、０℃ に冷却した。水酸化＋　トＩＪ　”＋ム溶液（５０ｉｌ　；　２　Ｎ）を加える とすみやかに溶解した。０℃３０分後、アルカリ溶液をメチレンクロリド（２Ｘ ５０ｍｌ）で洗浄した。アルカリ溶液を０℃で４Ｎ　Ｈ（ＪによりｐＨ１，０に 調整すると表記化合物が沈殿１、た。濾過し、水で洗浄し乾燥した後の収量は３ ．０８ｇ　（１０４％）であった。生成物は塩を含んでおり、元素分析はそれを 反映して−た。元素分析’Ｈ−−ＮＭＲ（２５０Ｍ）Ｉｔ　、　ＤＭＳＯｄｓ　 ）　；８、　７０　（ｓ、２Ｈ，Ｈ−２またはＨ−８）；７、　５０−７．　３ ５　（ｍ、５Ｈ，Ｐｈ）　：　５．　２７（ｓ、２Ｈ，Ｎ−ＣＨ）および５、ｉ 　５　（ｓ、２Ｈ，Ｐ　ｈ　Ｃ其２）。 １３Ｃ−ＮＭＲ１６８，７７；１５２．５４；１５１．３６；１４８．７５；１ ４５．１３＋１２８．５１，１２８．１７．１２７．９８゜６６．７６および４ ４．　６７゜ ＩＲ（ＫＢｒ）： ３４８４　（１８，３）；３１０９　（１５，９）＋３０８７　（１５，０）： ２９６６　（１７，１）；２９２７　（１９，９）＋２３８３　（５３，８）＋ １９６０　（６２，７）；１７３９　（２，５）；１６８８　（５，２）；１６ ５５　（０，９）；１５９４　（１１，７）；１５６０　（１２，３）；１５３ ０　（２６，３）；１４９９　（３０，５）；　１４７５　（１０，４）　、１ ４５５　（１４，０）：１４２９　（２４，５）および１４１１　（２３，６） 。 ＦＡＢ−ＭＳ　３２８（Ｍｌ　）および２８４（ＭＩ（−Ｃｏ２）。 ＨＰＬＣ，系１：１５．１８分。少量の不純物は全部で２％未満。 Ｎ’−Ｂｏｃ−アミノエチルグリノンエチルエステル（２，ＯＯｇ；８．１２ミ リモル）、ＤｈｂｔＯＨ（１，４６ｇ；８．９３ミリモル）およびＮ６−ベノジ ルオキシカルボニルー９−カルボキンメチルアデニン（２，９２ｇ；８．９３ミ リモル）をＤＭＦ　（１５ミリ）に溶解した。次にメチレンクロリド（１５ミリ ）を加えた。溶液はエタノール／水浴中て０℃に冷却した。ＤＣＣ（２，０１ｇ 。 ９．７４ミリモル）を添加（、た。２５時間後水浴を除き、室温でさらに１．５ 時間撹拌を続けた。沈殿したＤＣＵを濾過して除去し、ＤＭＦ　（１５ａ＋ｌ） で−回、メチレンクロリドで皿回（２ｘ　１５ｍ１）　ｅ、浄した。合併した濾 液にさらにメチレンクロリド（１００ｍｌ）を加えた。溶液は希炭酸水素ナトリ ウム（２Ｘ］、００ｍ１）、希硫酸水素ナトリウム（２Ｘ　１．００ｍ１）およ び飽和塩化すトリウム（ＬＸｌｏｏｍｌ）の順て洗浄した。有機相を真空下蒸発 乾固させると３．　２８ｇ　（７３％）の黄色がかった油状物を与えた。粗生成 物のＨＰ　Ｌ　Ｃは６６％の純度を示した（主ピ、−りより極性の高いおよび低 いいくつかの不純物を含んでいる）。油状物を無水エタノール（５０ミリ）に溶 解し、活性炭を加えた。５分撹拌後、溶液を濾過した。濾液を水（３０ミリ）と 混色し一夜撹拌（５て放置した。次の口、白色沈殿物を濾過し、水で洗浄して乾 燥させるとＨＰＬＣで９８％より高い純度を持つ１１６ｇ（２６％）の物質が得 られた。母液に水を加えるとさらに約９５％の純度の物質０５３ｇを得た。元素 分析　Ｃ２６Ｈ３３Ｎ７０７　・Ｈ２Ｏとして、実測値（計算値）：Ｃ：５５． ０１　（５４，４４）；Ｈ：６．８５　（６，１５）およびＮ＋　１６．４７　 （１７，０９）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（２５０Ｍｔｌ＋　、ＣＤＣｌ３　）：８．７４　（ｓ、ＩＨ，Ａ ｄｅ　Ｈ−２）：８．１８（ｂ、ｓ、ＬＨ，ＺＮＨ）：８．１０＆８．０４　（ ｓ、ＩＨ，Ｈ−８）；７、　４６−７、　３４　（ｍ、５Ｈ，Ｐｈ）　；　５． 　６３　（未解析、ｔ、１）１゜ＢｏｃＮＨ）；５．３０　（ｓ、２Ｈ，ＰｈＣ Ｈ２）；５．１６＆５．００（ｓ、　２Ｈ，Ｃ旦２　Ｃ０Ｎ）　；　４．２９＆ ４．０６　（ｓ、２Ｈ０ＣＨＣｏ　Ｈ）　；４．２０　（ｑ、　２Ｈ，ＱＣ旦２ ＣＨ３）；３．６７−３．２９　（ｍ、　４Ｈ，Ｃ旦２Ｃ旦２）；１．４２（Ｌ 　９Ｈ，ＢＵ）および１．２７　（ｔ、３Ｈ，０ＣＨ２Ｃ旦３）。 スペクトルは痕跡のエタノールおよびＣＣＵを示した。 実施例３４ ＮＬ−ペンジルオキシ力ルボニル−１−（Ｂｏａ−ａｅｇ）アデニンＮ６ペンジ ルオキ７カルボニルー１−　（ＢｏＣ−ａｅｇ）アデニンエチルエステル（１， ４８ｇ：２．６６ミリモル）をＴＨＦ　（１３ａｆ）に懸濁し、混合物は０℃に 冷却した。水酸化リチウム（８ミリ；ＩＮ）を加えた。１５分撹拌後、反応混合 物を濾過し、さらに水（２５ａｆ）を加えて、メチレンクロリドで洗浄した（２ Ｘ２５ｍｌ）。水溶液のｐＨはｌＮ　Ｈ（Ｊにより２．０に調整された。 沈殿を濾過して分離し、水で洗浄して乾燥すると、０．８２ｇ　（５８％）の生 物を得た。生成物をメチレンクロリド／石油エーテルで２回再沈殿させると乾燥 後に０．７７ｇ　（５５％）の生成物を得た。Ｍ、ｐ、１１９℃（分解）。 元素分析：　Ｃ２４Ｈ２９Ｎ７０□　・Ｈ２Ｏとして実測値（計算値）：Ｃ：５ ３．３２（５２，８４）：Ｈ・５．７１　（５，７３１Ｎ・１７．６８　（１７ ，９７）。 ＦＡＢ−ＭＳ　５２８．　５　（ＭＨ）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（２５０Ｍ）Ｉｔ、　ＤＭＳ　Ｏｄ６）　：１２．７５（非常にす 、ＩＨ，Ｃｏ２Ｈ）＋　１０．６５（ｂ、ｓ、ＬＨ，ＺＮＨ）；８．５９　（ｄ 、ＬＨ０Ｊ＝２．１４Ｈ＋。 Ａｄｅ　Ｈ−２）；８．３１　（ｓ、ＩＨ，Ａｄｅ　Ｈ−８）；７．４９−７． ３１　（ｍ、５Ｈ１Ｐｈ）＋７．０３＆６．７５　（未解析。 ｔ、ＩＦｔ、ＢｏｃＮＨ）＋　５．３３＆５．１６　（ｓ、２Ｈ。 ＣＩ（Ｃ０Ｎ）；５．２２　（ｓ、２Ｈ，ＰｈＣ且２）；４．３４　３．９９　 （ｓ、２Ｈ，ＣＨ２ＣＯ２Ｈ）＋３．５４　３．０３（ｍ’　ｓ、水を含む、Ｃ 旦２Ｃ旦２）および１．３９＆１３７（ｓ、９Ｈ，’ＢＵ）。 ＋３ｃｍＮＭＲ１７０，４；１６６．６；１５２．３；１５１．５；１４９．５ ＋１４５．２；１２８．５；１２８．０．１２７．９；６６．３２．４７．６３ ；４７．０３；４３．８７および２８．　２４゜Ｘ施典ｌ旦 ２−アミノ−６−クロロ−９−カルボキシメチルプリン２−アミノ−６−クロロ プリン（５，０２ｇ；２９．６ミリモル）および炭酸カリウム（１２，９１ｇ； ９３．５ミリモル）のＤＭＦ　（５０ａｆ）懸濁液にブロモ酢酸（４，７０ｇ１ ２゜８ミリモル）を加えた。混合物は窒素下２０時間激しく撹拌した。水（１５ ０ｏｆ）を加え、溶液をセライトを通して濾過すると透明な黄色溶液が得られた 。この溶液は４Ｎ塩酸でｐＨ３の酸性とした。沈殿を濾過し、真空下シカベント 上で乾燥した。収量（３，０２ｇ；４４．８％）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｓ　）　；　ｄ−４，８８ｐｐｍ＋（ｓ、２Ｈ）； ６．９５　（ｓ、２Ｈ）；８．１０　（ｓ、ＩＨ）。 犬施何ユ旦 ２−アミノ−６−ペンシルオキシ−９−カルボキシメチルプリンナトリウム（２ ，０ｇ；８７．Ｏミリモル）をベンジルアｌレコール（２Ｃ１ｄ）に溶解し、１ ３０°Ｃに２時間加熱した。０℃に冷却後、２−アミノ−６〜クロロ９−カルボ キシメチルプリン（４，０５ｇ；１８．Ｏミリモル）のＤＭＦ（８５ｆＩＮ）溶 液を徐々に加え、得られた懸濁液は２０°Ｃで一夜撹拌した。水酸化ナトリウム 溶Ｆｌ！　（ＩＮ　：　１００ａ＋ｆ）を加え、透明化した溶液は酢酸エチルで 洗浄した（３Ｘ１００ｍｌ）。水相を４Ｎ塩酸でｐ　Ｈ３の酸性とした。沈殿を 酢酸エチル（２００１Ｉｌりにとり、水相は酢酸エチルで抽出した（２　Ｘ　１ ００ｄ）。合併した有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄しく２　ｘ　７５＋ ｎｆｆ１）　、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空上蒸発乾固させた。残渣はエ タノール（３００ｍｆ）から再結晶した。真空下シカベント上で乾燥後の収量　 ２．７６ｇ　（５２％）。Ｍ、ｐ、１５９〜６５℃。元素分析　（実測値、計算 値）Ｃ（５６，１８；５５．９７）　１Ｈ（４，３８＋４．　３２）　；Ｎ　（ ２３，４；２３．　１０）　。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｓ　）：　４．８２ｐｐｍ（ｓ、２Ｈ）；５．５１ 　（ｓ、２Ｈ）；６．４５　（ｓ、２Ｈ）；７．４５（ｍ、５［−１）；７．８ ２（ｓ、ＬＨ）。 実施例１１ Ｎニュ１スニヱ且又二旦コヘシンンルオキシープ仄２二旦二ｆｆｉニアセチル） −Ｎ−２−Ｂｏｃ−アミノ千４ｋｙニノ：リンン　ＢｏｃＧａｅ　−ＯＨモノマ 二と ＤＭＦ　（２ミリ）中、２−アミノ−６−ヘンンルオキシー９−カルボキンメチ ル−プリン（０，５０ｇ：１．ロアミリモル）、メチル−Ｎ（［ｔｅｒｔ−ブト キンカルボニルアミノ ンイソプロビルエチルアミン（０．５４ｇ；４．１９ミリモル）およびブロモ− ］・リリス−ビロリンノーホスホニウムへキサフルオロ−ホスフェート（ＰｙＢ ｒｏＰ乃　（０．７９８ｇ；１．７１ミリモル）を４時間撹拌した。透明な溶液 を炭酸水素ナトリウムの水冷溶液（Ｉ　Ｎ　：　４　０ｍＮ）中へ注ぎ、酢酸エ チルで抽出した（３Ｘ４０ｍ□。何機層を硫酸水素ナトリウム溶液（ＩＮ；２Ｘ ４Ｑ＋ｎＮ）、炭酸水素ナトリウム溶液（ＩＮ＋ＩＸ４０ｍｌりおよび飽和塩化 ナトリウムｆ８液（６０ａｆ）で洗浄した。無水硫酸すｌ−ＩＪウムで乾燥させ て真空下蒸発させた後、固形残渣を酢酸エチル／ヘキサン（２０ａｆ（２　：　 １））から再結晶するとメチルエステルを６３％の収率て得た（ＭＳ−ＦＡＢ； ５１４　（Ｍ４−１））。 エステルを濃水酸化ナトリウム（１ミリりを含むエタノール／水（３０ｍｌ！（ １２））に溶解させることにより加水分解か達成された。２時間撹拌後、溶液を 濾過し、４Ｎ塩酸の添加によりｐＨ３の酸性に調整した。表記化合物は濾過によ り得られた。収量　３７０ｎ＋ｇ（加水分解に対して７２％）。Ｈ　Ｐ　Ｌ　Ｃ による純度は９９％以上であった。二級アミ］・の周りの回転制限のため、いく つかの信号は２１の比で二重に現れた（リスト中、主ピークはｍｊ．および副ピ ークはｍｌ。 で示されている）。 ’Ｈ−ＮＭＲ　（２５０Ｍｔｌｚ．ＤＭＳＯ−ｄ，　）　；　ｄ＝１．　４ｐｐ ｍ（ｓ．　９Ｈ）　：　３．　２　（ｍ．　２Ｈ）　；　３．　６　（ｍ．　２ Ｈ）　、４、１　（Ｓ．ｍｊ．、ｃＯＮＲｃＨ２ＣＯＯＨ）；４．４（ｓ，　ｍ ｉ．、ＣＯＮＲＣＦ（２ＣＯＯＨ）　；　５．　０（ｓ，ｍｉ．、Ｇｕａ−Ｃ旦 ２Ｃｏ−）；５．２（ｓ．ｍｊ．、Ｇｕａ−Ｃ旦２　Ｃｏ　）　；　５．６　（ ｓ，２Ｈ）　；　６．５（ｓ，　２Ｈ）　：６．　９　（ｍ，　ｍｉ．、Ｂｏｃ ＮＨ）　；７．　１（ｍ，　ｍｊ．、ＢｏｃＮＨ）　；７．　５　（ｍ．、３Ｈ ）　；７．　８　（ｓ，　ＬＨ）　；１２、８　（ｓ，　ＬＨ）。 ”’（、ＮＭＲ　１？０．　９５；１７０．　５２；１６７、　２９；１６６、 　８５；１６０、０３；１５９．７８；１５５．８４；１５４．８７；１４０、 ６３；１３６．７６；１２８．４９；１２８．１０；１１３、０４；７８．１９ ；７７、８６；６６、９５；４９．２２；４７、７０＋４６．９４；４５．９６ ；４３．６２；４３．３１および２８．２５。 ３−アミノ−１．２−プロパンジオール（４０．００ｇ；０．４４０モル；１　 ０当量）を水（１０００ｉ１）に溶解し０℃に冷却した。ジーｔｅｒｔーブチル ジカルボン酸（１１５．０ｇ；０．５２６モル；１．２当量）を一度に加えた。 反応混合物は撹拌しながら水浴で室温まで加熱した。ｐＨは水酸化ナトリウム（ １７．５６ｇ；０．４４０モル；１．ｏ当量）の水（１２０ｍｌ）溶液で１０、 ５に維持された。水酸化ナトＩＪ　Ｏム水溶液の添加が完了したら、反応混合物 は室温で一夜撹拌した。次に反応混合物に酢酸エチル（７５０ｍｌ）を加え、続 いて０℃に冷却した。激しく撹拌しながら４Ｎ硫酸でｐＨを２．５に調整した。 相を分離し、水相を新しい酢酸エチルで洗浄した（６Ｘ３５０ｍｌ）。有機相の 容量は減圧下のエバポレーションにより９　０　０　ｍｌに減少させた。次に有 機相を硫酸水素カリウムの飽和水溶液を２＠に希釈した液（１×１ｏｏｏ信１） および飽和塩化±トリウム水溶液（ｌＸ５００ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥 しくＭｇＳＯ　）、減圧下蒸発させると５０．１２ｇ　（６０％）の表記化合物 が碍られた。メチレンクロリド溶液を蒸発させ続いて冷凍すると生成物を固形化 できた。 ’Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣｌ　３／ＴＭＳ）　：ｄ＝１．４３（ｓ、９Ｈ，Ｍｅ　Ｃ ）；３．２５（ｍ、２Ｈ，ＣＨ２）；３、５７　（ｍ、　２Ｈ，ＣＨ２）　；　 ３．７３　（ｍ、　ＬＨ，ＣＨ）。 １３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ（Ｊ　３／ＴＭＳ）実施例３９ モル；１当量）を水（１５０Ｉｌｌ）に懸濁した。ｍ−過ヨウ素酸カリウム（２ ４，９７ｇ；０．１０９モル；１．０当量）を加え、反応混合物は窒素上室温で ２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、水相をクロロホルムで抽出した（６Ｘ２ ５０Ｉ！ｌ）。有機相を乾燥しくＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ４）　、蒸発させるとほとんど 定量的にＢｏｃ−アミノアセトアルデヒドを黒色油状物として得、それはさらに 精製することなく以下の工程で使用された。 パラジウム炭素（１０％；０．８ｇ）をＭｅ　ＯＨ（２５０ｍ１）に窒素下で加 え、ＮａＯＨを滴下し、ｐＨを８．　０に調整した。水層をメチレンクロリドで 抽出した（４　Ｘ　２５０ｍ１）。有機相を乾燥しくＭｇ５Ｏ，）　、セライト を通して濾過し、減圧上蒸発させると６．３６ｇ　（９４％）の表記化合物を透 明でわずかに黄色の油状物として得た。 ＭＳ　（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ　（％）＝２４７（１００，Ｍ＋１．１！Ｈ（ ９０）；１４７　（１８）。 ’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨ＋　、　ＣＤＣｊ　３　）　：１、１８　（ｄ、　Ｊ＝ ７．０Ｈｚ、　３Ｈ，Ｍｅ）　；　１．３６　（ｓ、　９Ｈ。 Ｍｅ３Ｃ）　；１．８９　（ｂ、　ＬＨ，ＮＨ）　；２．５１　（ｍ、　ＬＨ。 ＣＨ２）　；　２．６６　（ｍ、ＬＨ，ＣＨ２）　；　３．１０　（ｍ、２Ｈ９ ＣＨ２）　；　３．２７　（ｑ、Ｊ　＝７．０１（ｘ、　ＬＨ，ＣＨ）　；　３ ．６４（ｓ、３Ｈ，ＯＭｅ）：５．０６　（ｂ、ＩＨ，カーバメートＮＨ）。 １３Ｃ−ＮＭＲ： ｄ−１８，８（Ｍｅ）　；　２８．２　（Ｍｅ３Ｃ）　；　４０．　ｌ　；４７ 、０　（ＣＨ２）　；　５１−６　（ＯＭｅ）　；　５６．Ｏ（ＣＨ）　；１５ ５．８（カーバメーｈ　Ｃ＝Ｏ）；１．７５．８　（エステル　ｃ＝ｏ）。 Ｂｏａ−アミノエチル−（Ｌ）−アラニンメチルエステル（１，２３ｇ；５、Ｏ ミ’Ｊモル）　のＤＭＦ　（１０ｍｌ）溶液にＤｈｂ　ｔ−ＯＨ（０，９０ｇ　 ；５．５２ミリモル）および１−チミニル酢酸（１，０１ｇ＋５．４８ミリモル ）を加えた。１−チミニル酢酸が溶解された時ジクロロメタン（１０ｍｌ）を加 え溶液を水浴上で冷却した。反応混合物が０℃に達した後にＤＣＣ（１，２４ｇ ；６、ＯＬミリモル）を加えた。添加後５分以内にＤＣＵの沈殿が観察された。 さらに５分後水浴を取り除いた。２時間後、ＴＬＣ分析は反応が終了しているこ とを示した。混合物を濾過し、沈殿をジクロロメタン（１００＋＋＋１）で洗浄 した。 得られた溶液は５％炭酸水素ナトリウム水溶液（１５０ｎｉ）で２回、および飽 和硫酸水素カリウム（２５ｉ１）に水（１０（ｌｏｌ）を加えた液で２回抽出し た。最後に飽和塩化ナトリウム（１５０ｎｉ）で抽出した後、溶液を硫酸マグネ シウムで乾燥し蒸発させると白色あわ状物を得た。あわ状物はメタノールの濃度 勾配をつけたジクロロメタンを溶出液として使用するシリカゲルでのカラムクロ マトグラフィーにより精製した。それにより純粋な化合物（〉９９％、ＨＰＬＣ により）が得られた（１　０８ｇ；５２．４％）。 ＦＡ、Ｂ−ＭＳ　４１３　（Ｍ＋１．）および４３１（Ｍ＋１＋水）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＩ）Ｃ１ｓ）： ４．５２（ｓ、２Ｈ，ＣＨ’ｚ）：３．７３（ｓ、３Ｈ，ＯＭｅ）：３、　２− ３．　６　（ｍ、４Ｈ，：ｒ−チル　ＣＨ２）　：　１．９０　（ｓ、３Ｈ。 Ｍｅ　Ｔ中）；　１．４９　（ｄ、３Ｈ，Ｍｅ　Ａｌａ中　Ｊ＝７．　３Ｈｚ） 　；１、４４　（ｓ、　９Ｈ，Ｂｏｃ）。 １．５０−１．４０　（ｍ、１２Ｈ，Ｍｅ　Ａｌａ＋Ｂｏｃ中）。 加えた。添加後５分以内にＤＣＵの沈殿が観察された。３５分後に水浴を取り除 いた。３．５時間後に反応混合物を濾取し、沈殿をメチレノクロリド（２００ｎ ｉ）で洗浄（７た。得られた溶液は５％炭酸水素ナトリウム（２００ｎｉ）で２ 回、飽和硫酸水素カリウム水溶液（１，００ｍｌ）で２回洗浄した。最後に飽和 塩化ナトリウム（２５０ｎｉ）で洗浄した後、溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し 蒸発させると油状物を得られた。油状物はメタノール濃度勾配をつけたメチレン クロリドを溶出液として用いる短いカラムのシリガゲルクロマトグラフィーによ り精製された。 これにより９６％の純度（Ｉ（ＰＬＣによる）の化合物が石油エーテルによる沈 殿化後に得られた（１．０５ｇ；２５．３％）。 ＦＡＢ−ＭＳ　４１３　（Ｍ＋１）。 ’ＨＮＭ’Ｒ，（ＣＤ　Ｃ１３）　１ ５．６４　（ｔ、　ＬＨ，ＢｏｃＮＨ，Ｊ＝５．８９８＋）；４．５６（ｄ、　 ２Ｈ，ＣＨ’　２）　；４．３５　（ｑ、　ＬＨ，ＣＨＡ７’、２中Ｊ＝７．　 ２５ｆｌ）　；３．　７４　（ｓ、３Ｈ，ＯＭｅ）　；３．　６４−３．　２７ （ｍ、４Ｈ，エチル　Ｈ’　ｓ）　；１．　９０　（ｓ、３Ｈ，Ｍｅ　Ｔ中の） ；１、　５２−１．　４４　（ｔ、１２Ｈ，Ｂｏｃ＋Ｍｅ　Ａ、ｌａ　中の）。 表記化合物のメチルエステル＜１．５７ｇ；３．８１ミリモル）メタノール（１ ００ｎｉ）に溶解し、水浴上で冷却した。水酸化ナトリウム（１００ｍｌ　；　 ２Ｍ）を加えた。１０分撹拌後、４Ｍ塩酸で混合物のｐＨを３に調整した。次に 溶液を酢酸エチルで抽出した（３　Ｘ　１００ｍ１）。合併した有機抽出液は硫 酸マグネシウムで乾燥した。エバボレージョン後油状物は酢酸エチル（２００ｎ ｉ）に溶解させた。沈殿が生し始めるまで石油エーテルを加えられた（総量で６ ００＋ｕｌ）。 −２０℃で一夜放置後、沈殿を濾取した。これにより１．０２ｇ（６７，３％） の表記化合物が得られ、ｉ（Ｐ　Ｌ　Ｃによると９・１％の純度であった。 ＦＡＢ−ＭＳ　３９９　（Ｍ＋１．）。 ’Ｈ−ＮＭＲ；　１１．３４　（ｓ、　ＩＨ，Ｃ００Ｈ）；７．４２（ｓ、１τ ４＝　”　）　；４．６９　（ｓ、　２Ｈ，ＣＨ’　２）　；４、　４０　（Ｑ 、ＩＨ，ＣＨＡｉａ　中、Ｊ＝７．　２０ｔｌｘ）　、Ｌ　８３　（ｓ、３Ｈ， Ｍｅ　Ｔ中）　；Ｌ、５２−１．　４０（ｍ、１２Ｈ，Ｂｏｃ＋Ｍｅ　Ａｌａ　 中）。 実施例４３ Ｎ−（Ｎ’　−Ｂｏｃ−３’−アミノプロピル）−Ｎ−（（１−チミニル）アセ チル〕グリシンメチルエステル Ｎ−（Ｎ’　−Ｂｏｃ−３’−アミノプロピル）グリシンメチルエステル（２， ８４ｇ；０．０１１５モル〕をＤＭＦ　（３５ｍｌ）に溶解し、続いてＤｈｂｔ −ＯＨ（２，０７ｇ；０．０１２７モル）および１−チミニル酢酸（２，３４ｇ ；０．０１２７モル）を加えた。メチレンクロリドを加え、混合物は水浴上で０ ℃に冷却した。ＤＣＣ（２，８５ｇ；０．０１３８モル）添加後、混合物は０℃ で２時間、続いて室温で１時間撹拌した。沈殿したＤＣＵを濾過して除き、メチ レンクロリド（２５ｍｌ）で洗浄し、さらに濾液に１５０ｍ１のメチレンクロリ ドを加えた。有機相を炭酸水素ナトリウム（１容量の飽和液を１容量の水で希釈 、６×２５０ｍｌ）、硫酸力ＩＪ’＋ム液（１容量の飽和液を４容量の水で希釈 、３×２５０ｍｌ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（ＩＸ２５０ｍｌ）で洗浄 し、硫酸マグネシウムで乾燥させて真空上蒸発乾固させた。固形残渣をメチレン クロリド（３５ｍｌ）に懸濁し、１時間撹拌した。沈殿したＤＣＵを濾過して除 き、メチレンクロリド（２５ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空上蒸発乾固させ、残 渣をメタノールおよびメチレンクロリド混合物（メチレンクロリド中３〜７％の メタノール濃度勾配）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー１こより 精製した。これにより表記化合物が白色固形物として得られた（３．０５ｇ；６ ４％）。Ｍ、９．　７６〜７９℃（分解）。元素分析：Ｃｌ８Ｈ２８Ｎ４０７と して、ＮＭＲスペクトルを示した。 Ｎ　−（Ｎ’　−Ｂｏａ−３’−アミノプロピル）−Ｎ−（（１−チミニル）ア セチル〕グリシンメチルエステル（３，０２ｇ；０．００７３２モル）をメタノ ール（２５ｍｌ）に溶解し、２Ｍ水酸化ナトリウム（２５ｍｌ）と１．５時間撹 拌した。 真空上蒸発させてメタノールを除去し、０℃で４Ｍ塩酸にてｐＨを２に調整した 。 濾過により生成物が白色結晶として単離され、水で洗浄して（３×１０ｍｌ）真 空下、シカベント上で乾燥した。収量２．１９ｇ　（７５％）。元素分析：Ｃ１ ７Ｈ２６Ｎ４０□　・Ｈ２Ｏとして実測値（計算値’）　：Ｃ：４９．　９５　 （４９，０３）；Ｈ：６．４７　（６，２９）；Ｎ：１３．４３　（１３，４５ ）。この化合物は満足すべき　Ｈおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。 実施例４５ ３−（１−チミニル）プロパン酸メチルエステルチミン（１４，０ｇ；０．１１ モル）をメタノールに懸濁した。触媒量の水酸化ナトリウムと一緒にアクリル酸 メチル（３９，６ａ＋Ｉ；０．４４モル）を加えた。 溶液は暗所で４５時間還流した後真空下蒸発乾固させ、残渣を加熱しながらメタ ノール（８ｍｌ）に溶解した。水浴上で冷却後、エーテル（２０ｍｌ）を添加す ると生成物が沈殿するので濾過して単離し、真空下シカベント上で乾燥した。収 量１１．２３ｇ（４８％）。Ｍ、ｐ、１１２〜１１９℃。元素分析：Ｃ９Ｈ１２ Ｎ２０４として実測値（計算値）：Ｃ：５１．１４　（５０，９４）；Ｈ：５． ７８　（５，７０）；Ｎ：１１．５２　（１３，２０）。この化合物は満足すべ き　Ｈおよび’Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。 ３−（１−チミニル）−プロパン酸メチルエステル（１，０ｇ；０．００４７モ ル）を２Ｍ水酸化ナトリウム（１５ｍｌ）に懸濁し、１０分間魚沸した。濃塩酸 でｐＨを０．　３に調整した。この溶液は酢酸エチルで抽出された（１０ｘ２５ ｍｌ）。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥 した後、真空上蒸発乾固させると表記化合物が白色固形物として得られた（０． 　６６　ｇ　；　７１％）。Ｍ、ｐ、１１８〜１２１℃。元素分析。 Ｃ３Ｈ１ｏＮ２ｏ４として実＋１１１１１１（計算値）：ｃ　４ｓ、３８　（４ ８，４９）；Ｈ５，０９（５，０９）；Ｎ：１３．９３　（１４，１４）。この 化合物は満足すべきＩＨおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した。 実施例４７ Ｎ−（Ｎ’−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−（（１−チミニル）プロパノイル〕 グリシンエチルエステル Ｎ−（Ｎ’−Ｂｏａ−アミノエチル）グリシンエチルエステル（Ｌ、Ｏｇ；０． ００４１モル）をＤＭＦ　（１２ｍｌ）に溶解した。Ｄｈｂ　ｔＯＨ（０，７３ ｇ　；０．００４５モル）および３−（１−チミニル）−プロパン酸（０，８９ ｇ；０．００４５モル）を添加した。メチレンクロリド（１２ｍｌ）を次に加え 、混合物は水浴上で０℃に冷却した。ＤＣＣ（１，Ｏｌｇ；０．００４９モル） 添加後、混合物は０℃で２時間、続いて室温で１時間撹拌した。沈殿したＤＣＵ は濾過して除き、メチレンクロリド（２５ｍｌ）で洗浄し、濾液にさらに５０ｍ １のメチレンクロリドを加えた。有機相は炭酸水素ナトリウム（１容量の飽和液 を１容量の水で希釈、６×１００ｍ１）、硫酸カリウム（１容量の飽和液を４容 量の水で希釈、３×１００ｍｌ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（ＩＸｌｏｏ ｍｌ）で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空上蒸発乾固した。固形残 渣はメチレンクロリド（１５ｍｌ）に懸濁し、１時間撹拌した。沈殿したＤＣＵ は濾過して除き、メチレンクロリドで洗浄した。濾液を真空上蒸発乾固させ、残 渣はメタノールおよびメチレンクロリドの混合物（メチレンクロリド中１〜６％ のメタノール濃度勾配をつけて）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィ ーにより精製した。これにより表記化合物を白色固形物として得た（１．０２ｇ ；５９％）。元素分析・Ｃ１９Ｈ３ＯＮ４０７として、実測値（計算値）：Ｃ： ５３．１５　（５３，５１）：Ｈ：６．９０　（７，０９）；Ｎ＋１２．７６　 （１３，１３）。この化合物は満足すべきＩＨおよび’Ｃ−ＮＭＲスペクトルを 示した。 実施例４８ Ｎ−（Ｎ’−Ｂｏｃ−７ミノエチル）−Ｎ−（（１−チミニル）プロパノイル〕 グリシン Ｎ　（Ｎ’−Ｂｏｃ−アミノエチル）−Ｎ−［：（１−チミニル）プロパノイル 〕グリシンエチルエステル（０，８３ｇ；０．００１９５モル）をメタノール（ ２５ｍｌ）に溶解した。水酸化ナトリウム（２５ｍｌ　；　２Ｍ）を加えた。溶 液を１時間撹拌した。真空下メタノールを蒸発させ、０℃で４Ｍ塩酸によりｐｉ （を調整した。生成物を濾過により単離し、エーテルで洗浄しく３×１５ｍｌ） 、真空下シカベント上で乾燥した。収量０．７６９ｇ　（９９％）。Ｍ、Ｉ）、 ２１３℃（分解）。 ０．０４１８モル）をＤＭＦ　（５０ｍｌ）に溶解し、エチレンジアミン（２７ ，９ｍｌ；０．４１８モル）のＤＭＦ　（５０ｉ１）溶液に３０分以上かけて滴 下し、−夜撹拌した。混合物は真空上蒸発乾固させ、得られた油状物は水（２５ ０ｎｌ）に溶解した。０℃に冷却後４Ｍ塩酸にてｐＨを３．５に調整した。次に 溶液を濾過し、クロロホルムで抽出した（３×２５０ｍｌ）。０℃で２Ｍ水酸化 ナトリウムにてｐＨを１２に調整し、水性溶液をメチレンクロリドで抽出した（ ３　Ｘ　３００＋ａｌ）。 飽和塩化ナトリウム水溶液（２５０ｎｌ）で処理した後メチレンクロリド溶液を 硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、真空上蒸発乾固させると４．　２２ｇ　 （６３％）の生成物（油状物）が得られた。 ’Ｈ−ＮＭＲ（９０ＭＨ＋、　ＣＤ（Ｊ　３）６１、　４４　（ｓ、９Ｈ）　； ２．　８７　（ｔ、２Ｈ）　；　３．　Ｌ　（Ｑ、２Ｈ）　；モノーＢｏｃ−エ チレンジアミン（２）（１６，２８ｇ、０．１０２モル）をアセトニトリル（４ ００ｎｌ）に溶解し、アクリル酸メチル（９１，５０ｍ１；１．０２モル）のア セトニトリル（２００ｎｌ）溶液を加えた。溶液はアクリル酸メチルの重合化を 避けるために窒素上暗所にて一夜還流した。真空上蒸発乾固させ、水およびエー テルの混合物（２００＋２００ｍ１）を加え、溶液を濾過した後激しく撹拌した 。水相をもう一度エーテルで抽出した後凍結乾燥すると黄色固形物が得られた。 酢酸エチルから再結晶すると１３．０９ｇ　（４６％）の表記化合物を得た。Ｍ 、ｐ、１３８〜１４０℃。元素分析・Ｃ１１Ｈ２３Ｎ２０４　ＣＩとして、実測 値（計算値）Ｃ：４６．４９　（４６，７２）；Ｈ：８．ａｓ　（８，２０）； Ｎ：９．ｓａ　（９，９１）；（Ｊ　：１２．４５　（１２，５４）。 ”Ｈ−ＮＭＲ：　（９０Ｍｆｌ＋；ＤＭＳＯδ６）　：δ１．　３９　（ｓ、９ Ｈ）　；２．　９　（ｍ、８Ｈ）　；３．　６４　（ｓ、３Ｈ）。 （Ｎ−Ｂｏｃ−アミノエチル）−β−アラニンメチルエステル、ＨＣｌ　（３） （２，０ｇ；０．００７１モル）および１−チミニル酢酸ペンタフルオロフェニ ルエステル（５）（２，８２８ｇ：０．００８１２モル）をＤＭＦ　（５０ａｌ ）に溶解した。トリエチルアミン（１，１２ａｌ；０．００８１２モル）を加え 、混合物は一夜撹拌した。メチレンクロリド（２００ｎｌ）を加えた後有機相を 炭酸水素ナトリウム水溶液（３×２５０ｍｌ）、半乾和硫酸水素カリウム（３× ２５０ｍｌ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（２５０ｎｌ）で抽出し、硫酸マ グネシウムで乾燥した。濾過および真空下の蒸発乾固により２．９ｇ（９９％） の生成物（油状物）を得た。 ’）Ｉ−Ｎ　Ｍ　Ｒ（２５０１１ｔｌ＋　；　ＣＤ　Ｃ１３）　二級アミドの周 りの回転制限のためいくつかの信号は２本にわれだ。 δ１．　４３　（ｓ、９Ｈ）　；　１．　８８　（ｓ、３Ｈ）　；　２．　６３ 　（ｔ、ＩＨ）　；２．７４　（ｔ、ＬＨ）；３．２５−３．５５　（４ｘｔ、 ８Ｈ）；３、　６５　（２Ｘｔ、２Ｈ）　：３．　６６　（ｓ、１．　５）　； ３．　７２（ｓ、１．　５）　：　４．　６１　（ｓ、ＩＨ）　：　４．　７２ 　（ｓ、２Ｈ）　：５、　５９　（ｓ、０．　５８）　；５．　９６　（ｓ、０ ．　５Ｈ）　；７．１１　（ｓ、ＩＨ）；　１０．３３　（ｓ、ＩＨ）。 実施例５２ Ｎ−（（１−チミニル）アセチル］　−Ｎ’　−Ｂｏｃ−アミノエチル−β−ア ラＮ−（（１−チミニル）アセチル）−Ｎ’　−Ｂｏｃ−アミノエチル−β−ア ラニンメチルエステル（３，０ｇ；０．００７３モル）を２Ｍ水酸化ナトリウム （３０ａｌ）に溶解し、４Ｍ　ＨＣＩにてｐＨを２に調整し、２時間撹拌した。 沈殿物を濾過して単離し、３回冷水で洗浄後真空下シカベント上で乾燥した。収 量２．２３ｇ　（７７％）。Ｍ、ｐ、１７０〜１７６℃。 元素分析、Ｃ１□Ｈ２６Ｎ４０７　・Ｈ２Ｏとして、実測値（計算値）Ｃ：４９ ．４９（４９，０３）；Ｈ：６．３１　（６，７８）；Ｎ：１３．８４　（１３ ，４５）。 ’ＨＮＭＲ（９０！ｊｆｌ＋；ＤＭＳ　Ｏｄａ　）・６１．３８　（ｓ、９Ｈ） ；１．７６　（ｓ、３Ｈ）；　２．４４および３．２９　（ｍ、８Ｈ）；４．５ ５　（ｓ、２Ｈ）；７．３　（ｓ、ＬＨ）；１１．２３　（３，ＩＨ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　：　３９９　（Ｍ＋　１）。 （Ｎ−ＢｏＣ−アミノエチル）−β−アラニンメチルエステル、ＨＣＩ　（３） （２，’　Ｏｇ　：　０．００７１モル）および１−　（Ｎ−４−Ｚ）−シトシ ル酢酸ペンタフルオロツエルニエステル（５）（３，３１９ｇ；０．００７１モ ル）をＤＭＦ（５０ａｌ）に溶解した。トリエチルアミン（０，９９ｍ１；０． ００７１モル）を加え混合物は一夜撹拌した。メチレンクロリド（２００ｎｌ） を加えた後有機相を炭酸水素ナトリウム水溶液（３×２５０ｍｌ）、半乾和硫酸 水素カリウム水溶ｆｉ（３×２５０ｍｌ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（２ ５０ｎｉｌ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過および真空下の蒸発 乾固により３．３６ｇの固形化合物を得、それはメタノールから再結晶された。 収量２．４２ｇ（６４％）。Ｍ、り、１５８〜１６１℃。元素分析　Ｃ２５Ｈ３ ３Ｎ５０８として、実測値（計算値）Ｃ：５５．１．９　（５６，４９）；Ｈ： ６．１９　（６，２６）　：Ｎ：　１２．８６　（１３，１８）。 ’Ｈ−ＮＭ　Ｒ（２５０ＭＨ＋、ＣＤ　Ｃ１３）　二級アミドの周りの回転制限 のためいくつかの信号は２本にわれだ。 δ１．　４３　（ｓ、９Ｈ）　；２．　５７　（ｔ、ＩＨ）　；３．　６０−３ ．　２３（ｍ’　ｓ、６Ｈ）　：　３．　６０　（ｓ、１．　５Ｈ）　；　３． 　６６　（ｓ。 １．５Ｈ）；４．８０（ｓ、ＩＨ）；４．８８（ｓ、ＬＨ）；５．２０（ｓ、２ Ｈ）；７．８０−７．２５　（ｍ’　ｓ、７Ｈ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　：　５３２　（Ｍ＋１）。 Ｎ−（（１−（Ｎｉ−Ｚ）−ントンル）アセチル：］　−Ｎ’　−Ｂｏｃ−アミ ノエチル−β−アラニンメチルエステル（０，６２１ｇ；０．００１２モル）を ２Ｍ水酸化ナトリウム（８，５ｍ１）に溶解し２時間撹拌した。次に０℃で４Ｍ 塩酸にてｐＨを２に調整し、２時間撹拌した。沈殿物を濾過により単離し、３回 冷水で洗浄し、真空下シカベント上て乾燥した。収量０．３２６ｇ　（５４％） 。白色固形物は２−プロパツールから再結晶し、石油エーテルで洗浄した。Ｍ、 ｌ）。 １６３℃（分解）。元素分析　Ｃ２４Ｈ３Ｎ５０８として、実測値（計算値）Ｃ ４９，４９（４９，０３）；Ｈ・６．３１　（６，７８）　：Ｎ：１３．８４い くつかの信号は２本にわれた。 δ１．　４０　（ｓ、９Ｈ）　；２．　５７　（ｔ、ＩＨ）　：２．　６５　（ ｔ、ＬＨ）　；３、　６０−３．　３２　（ｍ’　ｓ、６Ｈ）　：４．　８５　 （ｓ、ＬＨ）　；４、　９８　（ｓ、ＬＨ）　；５．　２１　（ｓ、２Ｈ）　＋ ５．　７１　（ｓ、ＬＨ。 ブロード）；７．９９−７．２５　（ｍ’　ｓ、７Ｈ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　：　５１８　（Ｍ＋１）。 保護ＰＮＡは約０．１５ミリモル／ｇの置換で（定量的ニンヒドリン反応により 決定された）Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）修飾ＭＢＨＡ樹脂に組入れられた。非 結合アミノ基のキャッピングはＢｏｃＧａｅｇ−ＯＨモノマーの組込み前に実施 合成は１０２■（乾燥重量）の前もって膨潤され（ＤＣＭで一夜）中和されたＢ ｏａ−Ｌｙｓ　＜ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂から開始された。実施された工程は 以下のようである。 （１）ＴＦＡ／ＤＣＭ　（１：　１．ｖ／ｗ）によるＢｏｃ脱保護、１×２分お よび１×１／２時間、３ｍｌ；　（２）ＤＣＭにて洗浄、４×２０秒、３ｍｌ； ＤＭＦにて洗浄、２×２０秒、３ｍｌ；ＤＣＭにて洗浄、２×２０秒、３ｍｌ、 および脱溶媒３０秒；　（３）Ｄ　Ｉ　ＥＡ／ＤＣＭ　（１：　１９．　マ／マ ）による中和、２×３分、３ｍｌ。 （４）ＤＣＭにて洗浄、４×２０秒、３ｍｌ、脱溶媒１分；　（５）４当量のジ イソプロピルカルボジイミド（０，０６ミリモル：９．７＃＋）および０．　６ ４１のＤＣＭ／ＤＭＦ　（１：　１．　ｙ／ｖｌに溶解した４当量のＢｏｃＴａ ｅｇ−ＯＨ（０，０６ミリモル；２４＋ｇ）またはＢｏｃＧａｅｇ−ＯＨ（０， ０６ミリモル：３０＊）の添加（モノマーの最終濃度０．１Ｍ）、カップリング 反応は室温で１／２時間振とうすることにより進行させた。（６）脱溶媒２０秒 ；　（７）ＤＭＦにて洗浄、２×２０秒および１×２分、３ｍｌ；ＤＣＭにて洗 浄、４×２０秒、３＋＊Ｉ；　（８）ＤｒＥＡ／ＤＣＭ　（１：　１９．ｙ＃ｌ にて中和、２×３分、３ｎｌ；　（９）ＤＣＭＩ：て洗浄、４×２０秒、３ｍｌ および脱溶媒１分；（１０）定性的Ｋａｉｓｅｒ試験；（１１）ｋｉ　２０／ピ ’Ｊ　シン／ＤＣＭ　（１：　１　：　２．　ｖ／ｗ）でのアセチル化による未 反応アミノ基の遮断、１×１／２時間、３ｎｌ；および（１２）ＤＣＭにて洗浄 、４×２０秒、２ｘ２分および２×１０秒、３ｍｌ。所望の配列が得られるまで 工程１〜１２を繰返した。すべての定性的Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性であり（淡黄 色、ビーズの着色なし）はとんど１００％のカップリング収率を示している。Ｐ ＮＡ−才リゴマ−は切断され通常の方法で精製された。 ＦＡＢ−ＭＳ　：　２８３２．１１　（Ｍ　＋１）（計算値２８３２．１５）。 約０．３ｇの湿＃Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）ｇ　−Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ 樹脂を３ｍｌの５ｐｐｓ反応容器に入れた。Ｂｏｃ−Ｔａｅｇ−Ａ　（Ｚ）ａｅ ｇ−（Ｔａｅｇ）　８−Ｌｙ　ｓ　（、ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡは２．５ｍｌの５ ｏ％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した０、１９ＭのＢｏｃＡ　（Ｚ）ａｅｇ−Ｏ Ｈと０．１５ＭのＤＣＣを利用するＡ（Ｚ）ａｅｇ残基の原位置ＤＣＣカップリ ング（単）およびＣＨ２Ｃｌ２中の０．１５Ｍ　ＢｏｃＴａｅｇ−ＯＰｆｐとの 単カップリングにより作製された（“合成プロトコール５°）。合成は定量的ニ ンヒドリン反応によりモニターされ、約５０％のＡ（Ｚ）ａｅｇの取り込みおよ び約９６％のＴａｅｇの取り込みが示された。 保護Ｂｏｃ−Ｔａｅｇ−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−ＣＴａｅｇ）Ｂ　−Ｌｙｓ　（ＣＩ Ｚ）−ＢＨＡ樹脂が実施例４０ｃに記載したごとく処理され、５３．１■の乾燥 Ｈ−Ｔａｅｇ−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ〕８−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）−ＢＨ Ａ樹脂のＨＦ切断により約１５．６■の組物質を得た。１４．４分の主ピークは 全吸光度の５０％未満しかなかった。組物質の一部０．５■を精製すると約０． １■のＨ−Ｔａｅｇ−Ａａｅｇ−［Ｔａｅｇ］　−Ｌｙｓ−ＮＨ２が得られた。 （Ｍ＋Ｈ）＋の計算ｍ／ｚ値は２８１６．１６であり実測ｍ／ｚ値は２８１６． ２８で（１）ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ　２　（１：　１．ｖ／ｒ）によるＢｏｃ脱保 護、２５ｍｌ。 ３×１分および１×３０分；　（２）ＣＨ２Ｃｅ　２１：よる洗浄、２．　５ｍ ｌ、６×１分；　（３）ＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２　（１：１９．ｖ／ｖｌによる 中和、２．　５ｎ１．　３×２分；　（４）ＣＩ−（２Ｃ１２による洗浄、２． 　Ｆ５ｍｌ、５×１分および脱溶媒１分。 （５）置換を決定するための定量的ニンヒドリン分析のため、ＰＮＡ樹脂試料２ 〜５■を取り出し、十分に乾燥；　（６）１．２５ｍ１のＤＭＦに溶解した０、 ４７ミリモル（０，２５ｇ）のＢｏｃＡ　（Ｚ）ａｅｇ−ＯＨを加え、続いて１ ．２５ｍ１のＣＨ２Ｃｌ２に溶解した０、４７ミリモル（０，１ｇ）のＤＣＣま たは２．５ｍｌのＣＨ２０１２に溶解した０、３６ミリモル（０，２０ｇ）のＢ ｏ　ｃＴａ　ｅ　ｇ−ＯＰ　ｆ　ｐを加えた；カップリング反応は総計で２０〜 ２４時間振とうすることにより進行させた；　（７）ＤＭＦによる洗浄、２．　 ５Ｉｌｌ。 １×２分；　（８）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、２．５ｍｌ、４ＸＬ分、ＤｒＥＡ ／ＣＨ，，Ｃ１２（１：１９．ｖ／ｖｌによる中和、２．５ｍｌ、２×２分ｉ　 （１０）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、２．５ａ＋ｌ、６ｘｔ分；（１１）カップリ ングの程度を決定する定量的ニンヒドリン分析のため、保護ＰＮＡ樹脂試料の２ 〜５■を取り出し、十分に乾燥口１２）２５ミリの無水酢酸／ピリジン／ＣＨ２ Ｃｌ　２　（１：ｔ：２．ｖ／マ／マ）の混合物での２時間のアセチル化による 未反応アミノ基の遮断（最終サイクル後を除＜）；　（１３）およびＣＨ２Ｃｌ ２による洗浄、２．　５ｍｌ。 ６×１分；　（１４）ニンヒドリン分析のため保護ＰＮＡ樹脂の試料２×２〜５ ■を取り出し、Ｄ　Ｉ　ＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ　２　（１：　１９．マ／マ）で中和 し、ＣＨ２Ｃｌ２（、ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂の段階的組立て約０．５ｇの湿 潤Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）５−Ｌｙｓ−（Ｃｊ’　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂を５ｍｌの ５ｐｐｓ反応容器に入れた。Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）　２−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−（ Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は０．１５Ｍから０．　 ２Ｍの保護ＰＡＮモノマー（遊離酸）と−緒に当量のＤＣＣ（２ｍｌ、ＣＨ２Ｃ ｌ２　）を利用するＡ（Ｚ）ａｅｇおよびＴａｅｇの両方の残基の原位置ＤＣＣ カップリングにより組立てられた（″合成プロトコール６”）。合成は定量的ニ ンヒドリン反応によりモニターされ、３回カップリング後にＡ（Ｚ）ａｅｇの約 ８２％の取り込み（最初のカップリングで約５０％の取り込みを得、５０％ＤＭ Ｆ／ＣＨ２Ｃｌ２中の４回目のカップリングは有意に全カップリング収量を増加 させなかった）およびＴａｅｇ残基の定量的な取り込み（単カップリング）を示 した。 Ｊｂ）■］二（、Ｔａ１３Ｌ２二卸ビ−ｇ二…土す檎−仝１づ但２四保護Ｂｏｃ −（Ｔａｅｇ）　−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−ＣＴａｅｇ）５−Ｌ７＋　（ＣＩＺ）− Ｂ　ＨＡ樹脂が実施例４０ｃに記載したごとく処理され、１０２．５■の乾燥Ｈ −［：Ｔａｅｇ）　−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　（ＣＪ　 Ｚ）−ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約】６２■の組物質を得た。組物質を小量精 製した。（Ｍ−１−Ｈ）　として計算ｍ／ｚ値は２０’５０．８５であり、実測 ｍ／ｚ値は２０５０．９０であった。 する定量的ニンヒドリン分析のため、ＰＮＡ樹脂試料を２〜５■取り出し、十分 に乾燥＋　（６）　１．５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した０　４４ミリモル（０ ，２３ｇ）のＢｏｃＡ　（Ｚ）ａｅｇ−ＯＨの添加に続いての０．５ｍｌのＣＨ ２Ｃｌ２に溶解した０、４４ミリモル（０，０９ｇ）のＤＣＣの添加または１． ５ｍｌのＣＨ，、Ｃ／２に溶解（、た０　３３ミリモル（０，１３ｇ）のＢｏｃ Ｔａｅｇ−ＯＨの添加に続いての０．５ｍｌのＣＨ，、ＣＩ、、に溶解した０、 ３３Ｅリモル（０，０７ｇ）のＤＣＣの添加、カップリング反応は総計で２０〜 ２４時間振とうすることにより進行させた：　（７）ＤＭＦによる洗浄、２ｍｌ 、ｉＸ２分。 （８）ＣＨ２ｃｉ　２による洗浄、２ｍ１．４Ｘｉ分：ｆ９）Ｄ　［ＥＡ、／Ｃ Ｈ２Ｃ１！　２（１：　ｌ　９．＋／ｖ）による中和、２ｍ１．２×２分；　（ １０）ＣＨ２Ｃｅ２による洗浄、２ｍｌ、６×１−分＋（１１，）カップリング の程度を決定するための定量的ニンヒドリン分析のため保護ＰＮＡ樹脂試料を２ 〜５■取り出し、十分に乾燥；（１２）２５ミリの無水酢酸／ビリ；＞ｙｃ＋（ 。Ｃ１，（１：］−：２．マ／ｙ／マ）の混合物による２時間のアセチル化によ る未反応のアミノ基の遮断（Ｒ終のすＤＩＥＡ／ＣＨ２Ｃｌ２　（１：１９．マ ／マ）で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２により洗浄。 実施例５８ ＰＮＡ−才リゴマ−Ｈ−Ｔ　ＣＴＣＴ−ＬｙｓＮＨ２は実施例９３に記載し４ま たごとく合成された。この配列のハイブリダイゼーション実験は配向の結果を解 決するはずである（なぜなら、それは全く非対称である）。そのような実験はま たＴｍのｐＨ依存性および形成された複合体の化学量論の結果も解決するはずで ある。 ＰＮＡオリゴ７−Ｈ−Ｔ　ＣＴＣＴＣ−ＬｙｓＮＨ２によるハイブリダイゼ一ノ ヨン実験は以下のごと〈実施された９−ＵＶ混合曲線により化学量論が決定され たｍ＝決定されていない これらの結果は真に混合された配列がはっきり決められた融解曲線を生じること を示している。ＰＮＡ−オリゴマーはＮ−末端１５′　−配向が優先するが両方 の配向で実際に結合できる（列１および４を比較せよ）。ＴまたはＣの一つの不 適正相対塩基の導入はｐＨ７，２で１６℃以上のＴｍの低下を起こした：ｐＨ５ 、０ではＴｍ値は２７℃以上低下した。このことは非常に高い度合いの配列選択 性が存在し、それはすべてのＰＮＡ　Ｃ／Ｔ配列の一般的特色にちがいないこと を示している。 上に示したごとく、Ｔｍ値の非常に強いｐＨ依存性が存在しており、ノルイブリ ッドの形成にフーグスティーン型塩基対形成が重要であることを示している。従 って、化学量論が２１であることが観察されたことは驚くべきことではない。 配列中の対称性の欠除および不適正対が存在した場合の非常に大きなＴｍの低下 は相ＷＤＮＡに結合された時にワトソンークリック鎖およびファーグステイーン 鎖が匹敵していることを示している。このことは両方の配向くすなわち、５′／ Ｎ末端および３′／Ｎ末端）に対して真実である。 実施例５９ Ｈ−Ｔ　ＧＴ　−Ｌｙｓ−ＮＨ２とのハイブリダイゼーション実験の結果は以下 のごとくである 列１．３および６と列２．　４．　５および７を比較することにより示されるご とく、Ｇはこの様式でＤＮＡ鎖中のＣ／ＡおよびＣ／Ｔを区別できる（すなわち 配列区別が観察された）。ＵＶ！合曲線曲線り列３の複合体は２ＰＮＡ：ｌＤＮ Ａ複合体であることがさらに決定された。 実施例６０ ＦＡＢ質量スペクトル分光法により決定されたいくつかの合成ＰＮＡＮオーゴマ −の買置は以下のごとくである： 伸長バックボーン（β−アラニン修飾）を一つのユニットに持つＰＮＡ−オリゴ マーに対するハイブリダイゼーションのデータは以下のごとくである融解温度は 減少しているが、データは塩基特異的認識は保たれていることを示している。 実施例６２ “塩基なしの”置換の例。 実施例６３ Ｔ（５０ｆｆｉＭアセトニトリル溶液）を加える。溶液は２０℃で１０分間放置 した後０．　５Ｘ５＋１１のセファデックスＧＩＯカラムを通す。放射活性を含 む最初の２ＰＮＡはＰＮＡピークのすぐ後に溶出する。溶媒は減圧上除去される 。 ＥｃｏＲＩ−Ｐｖｕ１１断片（ＥｃｏＲＩ部位の３′末端が標識されたラージフ ラグメント）、０．５μｇの担体ウノ胸腺ＤＮＡおよび３００ｎｇのＰＮＡの混 合物３７℃にて１２０分インキュベートした。ヌクレオチドＳ【の５０単位を加 え、２０℃で５分インキュベートした。３ａ／のＱ、５Ｍ　ＥＤＴＡを添加して 反応を停止させ、２５０ｊ＋の２％酢酸カリウムエタノール溶液を添加すること によりＤＮＡを沈殿させた。１０％ポリアクリルアミドンークエンンングゲル中 で電気泳動し、オートラジオグラフィーにより放射標ｍＤＮＡバンドを可視化す ることによりＤＮＡを分析した。 標的プラスミドは適当なオリゴヌクレオチドをｐＵｃ１９内へクローニングＡ　 ＴＧＣＡおよびＧＴ４ＣＴ２ＣＴ２ＣＴＧＣＡを旦ｓｔＩ部位内へクローン化し た（プラスミドｐＴ８Ｃ２）。ゲル中の標的の位置は左の棒線により示されてい る。Ａ／Ｇは標的ＰＬＯのＡ＋Ｇ配列ラダーである。 プラスミドｐＴ１０の２■を２０μのＴＥ緩衝液（１０１Ｍトリス−ＨＣｌ、１ ｍ１ｌ　ＥＤＴＡ、ｐＨ７，４）に溶解した指定された量のＰＮＡ　Ｔｏｏと混 合し、３７℃で１２０分インキュベートした。２メ１１０×緩衝液（１０ａｉｌ ｌ−リス−ＨＣｌ、　ｐＨ７，５，１０ｍＭ　ＭｇＣｌ２．５０５Ｍ　ＮａＣ１ ，１ｍＭ　ＤＴＴ）。 Ｐｖｕｎ（２単位）およびＢａｍＨＩ　（２単位）を加え、インキュベージラン を６０分間続けた。ＤＮＡは５％ポリアクリルアミド中のゲル電気泳動により分 析され、ＤＮＡはエチジウムプロミド染色により可視化された。 ＬＯＯｇｌの緩衝液（２００ｄ　ＮａＣＣ５０ｍ１ｌ酢酸ナトリウム、ｐＨ４， ５゜１　ｍＭ　Ｚ　ｎ　Ｓ　Ｏ４）に溶解した２　００　ｃｐ＋のｐｒｔｏの　 Ｐ標識ＥｃｏＲＩ−ＰｖｕＩ［断片（ＥｃｏＲ１部位の３′末端が標識されたラ ージフラグメント）、０、　５Ｍｇの担体ラン胸腺ＤＮＡおよび３００口ｇのＰ ＮＡ−Ｔ、ｏ−ＬｙｓＮＨ２の混合物を３７℃でインキュベートした。指定され た時間に５０ＵのＳｔヌクレアーゼを７つの試料に各々加え、インキュベージラ ンを２０℃で５分続けた。次に２５０ｊｌの２％酢酸カリウムのエタノール溶液 を添加することによりＤＮＡを沈殿させ、１０％ポリアクリルアミドンークエン ンングゲル中での電気泳動により分析した。鎖置換複合体の量は、オートラジオ グラフの光学密度計測スキャン二／グにより測定した標的配列でのＳｌ−切断の 強度から計算された。 ２００＋ｐ＋　”’Ｐ−ｐＴＩＯ断片、０．　５Ｍｇつ／＠腺ＤＮＡおよび３ｏ ｏｎｇの所望のＰＮＡ　（Ｔ、ｏ−ＬｙＳＮＨ２，Ｔ８−ＬｙｓＮＨ２またはＴ ６−ＬｙｓＮ　Ｅ（２）を１ｏｃｊｌの緩衝液（２００１ｎＭ　ＮａＣＣ５０ｄ 酢酸ナトリウム。 ｐ［（４，５，１ｍＭ　Ｚｎ５Ｏ４）中３７℃で６０分インキュベートした。２ ｇｇのオリゴヌクレオチドＧＡＴＣＣＡ、ｏＧを加え、各々の試料を指定された 温度で１０分間加熱し、水中で１０分間冷却した後２０℃に暖めた。５０ＵのＳ １ヌクレアーゼを加え、試料を処理、分析し、結果を定量化した。 １５１１の１０ｗＭトリス−ＨＣｌ、１膳ｉｆ　ＥＤＴＡ、ｐＨ７，４中、１０ ００ｇのプラスミドＤＮＡ　（制限酵素ｐｖｕＩＩで切断されている、下記参照 ）および１１００ｎのＰＮＡを３７℃で６０分インキュベートした。続いて４＃ １の５×濃縮緩衝液（０，２Ｍトリス−ＨＣｌ　（ｐＨ８，０）　、４０ｄ　Ｍ ｇＣｌ２−　１０ｍＭスペルミジン、１２５１ｉｌ　ＮａＣ４）をＬｘｌのＮＴ Ｐ！合物（１０＋ＩＩ　ＡＴＰ。 １０ｄ　ＣＴＰ、　ＬＯＩＩＭ　ＧＴＰ、ＬａＭ　ＵＴＰ、　０．１μＣｉ／爪 ３２Ｐ−ＵＴＰ、５ＭＭ　ＤＴＴ、２Ｍｇ／ｍｌ　ｔ　ＲＮＡ、１μｇ／ｍｌヘ パリン）および３単位のＲＮＡポリメラーゼと混合した。インキュベーションを ３７℃で１０分間続けた。次に一２０℃で６０ｊ（の２％酢酸カリウムを含む９ ６％エタノールを添加してＲＮＡを沈殿させ、８％ポリアクリルアミドシークエ ンンングゲル中での電気泳動により分析した。ＲＮＡ転写体はオートラジオグラ フィーにより可視化した。 次のプラスミドが使用された＋　ｐＴ８Ｃ２−ＫＳ／ｐＡ８Ｇ２−ＫＳ　：オリ ゴヌクレオチドＧＡ　ＧＡ　ＧＡ　ＧＴＧＡＣおよびＧＴ４ＣＴ２ＣＴ２ＣＴＧ ＣＡがｐブルースクリプト−ＫＳ　のＰｓｔＩ部位内へのクローン化された。ｐ Ｔｌｏ−ＫＳ／ｐＡ１０−ＫＳ　（両方の配向の挿入体が得られた）。ｐＴ１０ Ｕｖ５　オリゴヌクレオチドＧＡＴＣＣＡ　ＧおよびＧＡＴＣＣＴ、ｏＧが、Ｌ ａｃＵＶ５大腸菌プロモーターがＥｃｏＲ１部位にクローン化されているｐＵＣ １８誘導体（Ｉｅｐｐｅｕｎ　Ｎ　ｈし　Ｎｕｃｌｅｉｃ＾ｃ山Ｒｕ、、１９８ ｇ、１６．　９５４５）のＢａｍＨＩ部位内へクローン化された。 Ｔ　−ＲＮＡポリメラーゼを用いると、転写延長停止は鋳型鏡上にＰＮＡ認識認 識列を持つＰＮＡ−Ｔ　Ｃ−ＬｙｓＮＨ２およびｐＡ８Ｇ２−Ｋｓプラスミドで は得られたが、非鋳型路上にＰＮＡ認識配列を持つｐ７８ｃｌ−に２では得られ なかった。同様の結果がＰＮＡ−Ｔ　−ＬｙｓＮＨ２およびプラスミドｐＡ１０ −ＫＳおよびｐＨ０−ＫＳで得られた（図２５参照）。大腸菌ＲＮＡポリメラー ゼおよびｐＴ１０ＵＶ５プラスミド（鋳型鏡上にＡ１ｏ配列）を用いると、転写 延長停止はＰ　Ｎ　Ａ　Ｔ　Ｌ　ｙ　ｓ　Ｎ　Ｈ２で得られた。 ４０ｇ１の５０１ｎ１１トリス−ＨＣｌ、、ｐＨ７，４中、Ｐ　Ｎ　Ａ　Ｔ　５ 　（１０ｍｇ）および対照の“正常”ペプチド（ＬｏＩｌｇ）の混合物を種々の 量のブタ腸粘膜からのベプ升ダーセまたはストレブトマイセスケスピトスス（Ｓ ｌｒｌｐｔｏｍ２ｅｅｉ　ｅａｕｐｉｔｏ＋ｕｔ）からのプロテアーゼで１０分 間３７℃にて処理した。ＰＮＡおよびペプチドの量はＨＰ　Ｌ　Ｃ分析により決 定された（逆相Ｃ−１８カラム、０〜６０９６アセト二トリル （Ｉ（ＰＬＣでピークなし）ペプチダーゼ／′プロテアーゼ濃度でもＰＮＡはま た無傷であー〕た。 パピローマウィルスのＥ　２　ｍ　Ｒ　Ｎ　Ａの発現を阻害するペプチド核酸の 能力を試験する好適なアッセイはよく知られているＥ２のトう，ノス活性化の性 質に基づいている。ＳｐａｌｈｏｌＨ．　！リー；−．　去−ｙ±−：虹．　１ ９８７．　６１．　２１２８−２１３７。レポータープラスミド（Ｅ２ＲＥＣＡ Ｔ）はＥ２依存エンハンサーとして機能するＥ２応答性要素を含むように作製さ れた。Ｅ２ＲＥＣＡＴはまたＳＶ４０初期プロモー・ター、初期ｆリアデニル化 信号およびクロラムフエ二，コーノ１ノアセチノトトラノスフェラーセ遺伝丁（ ＣＡＴ）も含んでいる。このプラスミドとの関係内にお（１てはＣＡＴ発現１． １：　Ｅ　２の発現に依存（７ている。Ｅ２依存に依存するＣＡＴ発現かＢＰＶ −１で形質転換されたＣ１２７細胞中へのこのレプラスミドのトランスフエクシ ヨン、非感染Ｃ１２７細胞およびＥ２ＲＥＣＡ’ｒおよびＥ２発現ベクターて同 時トランスフェクトされたＣ１２７細胞で試験された。 Ａ．、ＢＰＶ．−Ｉ　Ｅ２発現阻阻 害　Ｐ　Ｖ−１形質転換Ｃ１２７細胞を１２ウエルプレートにまく。Ｅ２ＲＥ１ によるトランスフエクノヨンの２４時間前に、５．１５および３０ｍＭの最終濃 度になるように増殖培地にアンチセンスＰＮＡを添加することにより細胞を前処 理した。次の日、リン酸カルシウム沈殿によりＬｏｌｇのＥ２ＲＥＩＣＡＴで細 胞をトランスフエクトした。１０マイクログラムのＥ２ＲＥＩＣＡＴおよび１０ ｊｇの担体ＤＮＡ　（ＰＵＣｌ．９）を６２ｊｌの２Ｍ　ＣａＣｌ　と混合し２ ５０ｊ１の８２０の最終容量とし、続いて２５０ｊｌの２　ｘ　Ｈ　Ｂ　Ｓ　Ｐ 　（１．　５■Ｍ　Ｎ　ａ２Ｐ　０２　。 １０ａｉｌ　ＫＣｌ．２８０ｒａＭ　ＮａＣ１．１２ｄグルコースおよび５０ａ ｉｌ［−（ＥＰＥＳ．ｐＨ７．０）を加え、室温で３０分インキュベートした。 この溶液の１００マイクロリツトルを各々の試験ウェルに加え、３７℃で４時間 インキュベートした。インキュベート後、１５％のグリセロールを含む０．７５ ｄＮａ２ＰＯ２，５ｍＭ　ＫＣＩ，１４０ｍＭ　ＮａＣ１，６ｍＭグルコースお よび２５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ．ｐＨ７．０で細胞にグリセロール衝撃を１分間与え た。衝撃を与えた後、細胞を２回血清を含まないＤＭＥＭで洗浄し、再び】、０ ％ウシ胎児血清および本来の濃度のアンチセンスオリゴヌク１７オ千ドを含むＤ ＭＥＭを与えた。 ４８時間後、細胞を採取し、ＣＡＴ活性を検定した。 ＣＡＴ活性決定のため、細胞を２回リン酸緩衝化塩溶液で洗浄（７、こすり取る ことにより集めた。細胞は１００Ｅｌの２５０ｄｈリス−ＨＣｌ，ｐＨ８．０に 再懸濁させ、３回の凍結融解により破壊した。各々のアソセ・イに２４マイクロ リツトルの細胞抽出液が使用された。各々のアｙセイのため以下のものが１　５ ｍｌのエッペンドルフチューブ中に一緒に混合され、３７℃で１時間インキュベ ートされた：２５μの細胞抽出液、５μｌの４ｄアセチル補酵素Ａ，１８＊ｆの Ｈ２Ｏおよび１．ａｌの１４Ｃ−クロラムフエ．ーコール、４　０〜６　０ｍＣ 　ｉ　／ｍＭ，インキュベージラン後、クロラム７−Ｌニフール（アセチル化お よび非アセチル化形）が酢酸エチルで抽出され、蒸発乾固された。試料を２５ｊ ｌの酢酸エチル中に再懸濁し，、ＴＩ、Ｃリブレート上にスポットされ、クロロ ホルム、メタノール（１　９　：　１）でクロマトグラフィーを行った。クロマ トグラフはオートラジオグラフィーにより分析された。アセチル化および非アセ チル化１４Ｃークロラムフエニコールに対応するスポットをＴＬＣプレートから 切り出し、ＣＡＴ活性の定量のため液体シンチレーンランにより計数した。ペプ チド核酸はＣＡＴ活性を用量依存様式で制御し、陽性と考えられた。 Ｂ、ＨＰＶ　Ｅ２発現阻害 ペプチド核酸によるヒトパピローマウィルス（ＨＰＶ）Ｅ２の阻害のためのアッ セイはＢＰＶ−Ｉ　Ｅ２の方法と本質的に同じである。ＨＰＶアッセイのため、 上記のリン酸カルシウム法を用いて、ＨＰＶはＰＳＶ２ＮＥＯとＣＶ−１または Ａ４３１細胞内へ同時にトランスフェクトされた。ＤＮＡを組込んだ細胞は抗生 物質Ｇ４１８を含む培地中で培養して選択した。０４１８耐性細胞は続いてＨＰ Ｖ　ＤＮＡおよびＲＮＡが分析された。Ｅ２を発現する細胞がアンチセンス研究 のための標的細胞として使用された。各々のＰＮＡに対し細胞は上記のごとく前 処理され、Ｅ２ＲＥＩＣＡＴでトランスフェクトされ、上記のごと＜ＣＡＴ活性 が分析された。ＣＡＴ活性を用量依存様式で制御できるならペプチド核酸は陽性 の効果を持っていると考えられた。 実施例７１ 天然に存在する核酸塩基を含有するＰＮＡ１５−ｍｅｒの合成；Ｈ−（Ｔａｅｇ ）−［Ａａｅｇ）　−（Ｇａｅｇ〕−［Ｔａｅｇｌ−（Ｔａｅｇ）−［Ａａｅｇ ］−［Ｔａｅｇ）−（Ｃａｅｇ）−（Ｔａｅｇｌ　−（Ｃａｅｇ）（Ｔａｅｇ） −（Ａａｅｇ〕−（Ｔａｅｇ）−（Ｃａｅｇ）−（Ｔａｅｇ）Ｍ　Ｂ　ＨＡ樹脂 に組入れられた。未反応アミン基のキャッピングはＢｏｃＧａｅｇ−ＯＨモノマ ーの取り込み前にのみ実施された。 合成はＤＣＭで一夜前もって膨潤されている１００■（乾燥重量）の中和Ｂｏｃ −Ｌｙｓ　＜ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂上で開始された。モノマーの取り込みは 実施例３２のプロトコールに従ったが、ただしＢｏｃＡａｅｇ−ＯＨモノマーの 取り込みのための工程５は除外される。本合成のための工程５では、４当量のノ イソプロビルカルボノイミド（０，０６ミリモル、９．７μｌ）および０．　６ １１のＤＣＭ／ＤＭＦ　（１：Ｌ　ｙ／ｒ）に溶解した４当量のＢｏｃＡａｅｇ −ＯＨ（０，０６ミリモル、３２■）が添加された（モノマーの最終濃度０．１ Ｍ）。 カップリング反応はｌＸ１５分および１×６０分（再カップリング）４行させた 。 すべての定性的Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性であった（淡黄色、ビーズの着色なし） 。ＰＮＡ−才リゴマ−は常法により切断および精製された。 ＦＡＢ−ＭＳ平均質量実測値（計算値）（Ｍ＋）Ｔ）＋４１４５．１　（４１４ ６，１）。 ｐＨ７，２から９，０にかわってもＴｍの損失がほとんどないということはフー グスティーン型塩基対形成が含まれていないことを示している。平行配向に対し ７２から５へいくとＴｍの増加が大きく、多分２１複合体の形成のためである。 ワトソンークリソク結合モチーフ中の最も好ましい配向は３′／Ｎ配向であり、 フーグスティーンモチーフ中では５′／Ｎ配向が最も安定であると信じられてい る。従って、最も安定な複合体は２つのＰＮＡ鎖が逆平行である場合であろう。 フーグスティーン鎖の平行配向に対する非常に強い優先性が明らかである。この ことはｐＨ９でさえも５′／配向の２：１複合体が観察されることで説明される であろう。さらに、ｐＨが７．２から９へいくと３′／Ｎが少量域ることも説明 している（これは多分１：１複合体であるので）。 ／ｇ）樹脂を５ｍｌの５ＰＰＳ反応容器に入れた。Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）　２− Ａ（Ｚ）ａｅｇ−ＴａｅＨ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ （Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ｌｙｓ　＜ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹 脂は、２、Ｏｍｌの５０％ＤＭＦ／′ＣＨ２Ｃｌ２中の０．１６ＭのＢｏｃＣ（ Ｚ）−ＯＨ。 ＢｏｃＴａｅ　ｇ−ＯＨまたはＢｏｃＡ　（Ｚ）ａｅｇ−ＯＨと共に０．１６Ｍ のＤＣＣを利用する最初の５つの残基の原位置ＤＣＣカップリング（゛合成プロ トコール９”）により、および最後の５つの残基の類似の原位置ＤＩＣ力・ツブ リング（“合成プロトコール１０″）により組立てられた。各々の力・ツブリン グ反応は総計で２０〜２４時間振とうして進行させた。合成はニンヒドリン反応 によりモニターされ、最初のＡ（Ｚ）ａｅｇ残基を除く（２回カップリングしな ければならなかった）すへての残基の取り込みはほとんど定量的であったことを 示した。 全カップリング収率は約９６％であった（最初のカップリング、約８９％の効率 ）。 Ａ　（Ｚ）ａ　ｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ− Ｌｙｓ　（ＣＩ　Ｚ）　ＭＢＨΔ樹脂が実施例１７ｃに記載したごとく処理され 、１６６．１■の乾燥、Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇｌｌ　２−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−Ｔａ ｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ａ　（Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅ ｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ｌｙｓ　（ＣＪ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約 ５３．４■の組物質を得た。組物質（５３，４■）を精製すると１８．３■のＨ −て、計算ｍ／ｚ値＝２７８０．１７および実測ｍ／ｚ値＝２７８０．０７゜表 記化合物が以下のオリゴヌクレオチドとハイブリダイズされた：＋低ハイポクロ ミズム性 ２つの平行な一連の塩基が一緒に結び合わされたＰＮＡの合成ＭＢＨＡ樹脂（装 填０．　６ミリモル／ｇ）の３７５■をジクロロメタン（ＤＣＭ）中で一夜膨潤 させた。ＤＭＦ／ＤＣＭ中で１時間後、５％ジイソプロピルエルチアミンのＤＣ Ｍ溶液で２回洗浄（２分）することにより樹脂を中和し、続けてＤＣＭで洗浄し た（２ｍｌ：６Ｘ１分）。２ｍｌのＤＭＦに溶解したＮ、Ｎ’−ノ〜ＢｏＣ−ア ミノエチルグリジン（４１，９■；０．１３２ミリモル）を樹脂に加え、続けて １ｍｌのＤＣＭに溶解したＤＣＣ（６４，９■；ｏ、ａｔ５ミリモル）を加えた 。２．５時間後、樹脂をＤＭＦで３回（１分）およびＤＣＭで１回（１分）洗浄 した。未反応のアミン基は無水詐酸／ＤＣＭ／ピリジン（１ｍｌ／　２　ｎｌ／ 　２ｍ１）で７２時間処理することによりキャッピングした。 ＤＣＭで洗浄後、（２ｍｌ；４Ｘ１分）、Ｋａｉｓｅｒ試験はアミノ基が存在し ないことを示した。樹脂は前記のごとく脱保護され洗浄された。続いてＤＭＦ／ ＤＣＭ　１　：　１　（４ｍｌ）に溶解した６−（Ｂｏｃアミノ）−ヘキサン酸 ＤＨＢＴエステル（２５５，８■；ロアミリモル）と−夜反応させた。洗浄およ び中和後、Ｋａｉｓｅｒ試験およびイサチン試験が実施された。両方とも陰性で あった。 キャッピング後、ＤＣＣカップリングのための常法に従ってＰＮＡ鎖の伸長が実 施された。カップリング反応後に実施されたすべてのＫａｉｓｅｒ試験は陰性で あった（黄色）。ＰＮＡユニット番号１．　２．　４および６の脱保護後に定性 的Ｋａｉｓｅｒ試験が行われた。各々の試験は青色であった。ＰＮＡオリゴマー は常法により切断および精製された。 各々のカップリングに使用されたモノマーおよびＤＣＣの量は以下のようであっ た（総容量４．　５ｍ１）　・ 構造式（７０）（式中Ｒ７ｏ＝Ｔ６）を持つＰＮＡに対しては２４．５■の粗生 成物が得られ、精製後は６９■となった。Ｒ＋　＝　Ｔ　ｓであるＰＮＡに対し ては２８８■の粗生成物が１）られ精製後は２．８■となった。１■／　ｍ１以 上の濃度で室温で数時間後の複雑なｌ（Ｐ　Ｌ　Ｃクロマトグラムにより示され るごとく、生成物は会合する高い傾向を持っていた。ＰＮＡ（Ｔ６）２およびＰ ＮＡ−（Ｔ　）　各々（ｄＡ、）　および（ｄＡ）８とハイブリダイズされ各々 ４２℃および５９℃のＴｍが記録された。 重量）のＭＢＨＡ樹脂上に組立てられた。定量的ニンヒドリン反応により決定さ れたごとく樹脂は最初に約０．１５ミリモル／ｇ　ＢｏＣ−Ｌｙｓ（ＣｊＺ）で 置換されていた。オリゴマーの段階的合成は、各々のカップリングに２．Ｏｍｌ の５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した０、０７７ｇ　（０’、２ミリモル） にＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨおよび３１．３ｇ１　（０，２ミリモル）のジイソプロ ピルカルボジイミドを用いて実施例３２に記載した合成プロトコールに従った。 各々の工程の脱保護前に未反応アミノ基のキャッピングが実施された。すべての Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性であり１００％近いカップリング収率を示している。 への約１７４を用いて開始された。ＢｏＣ−（ａｐｇＴ）−ＯＨおよびＢｏｃＴ ａｅｇ−ＯＨ両方の原位置ジイソプロピルカルボジイミド（Ｄ　Ｉ　Ｃ）カップ リングは１．２ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、各々０．　０４８ｇ　（ ０，１２ミリモル）および０．０４６ｇ　（０，１２ミリモル）モノマーおよび １８．７μｌ（０，１２ミリモル）のジイソプロピルカルボジイミドを各々のカ ップリングに用いて実施された。すべての定性的Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性であり 、１００９ｆｉ近いカップリング収率を示している。ＰＮＡオリゴマーは常法に より切断および精製された。（Ｍ＋Ｈ）＋とじて、計算ｍ／ｚ値は２８２０．１ ５であり、実測ｍ／ｚ値は２８２０．９２であった。 Ａ樹脂の約１／４を用いて開始された。ＢｏｃＴａｅｇ−０［（の原位置ジイソ プロピルカルボジイミドカップ１ルグは１．２ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃ１ 、、中、０．０４６ｇ　（０，１２ミリモル）のモノマーおよび１８．　７ｊｌ 　（０，１２ミリモル）のジイソプロピルカルボジイミドを各々のカップリング に用いて実施さレタ。溶解性の問題のため、ＢｏＣ−（ｐ　ｒｏＴ）　−０８０ ，０４８ｇ（０，１２ミリモル）はカップリングに先立って２．５ｍｌの５０％ ＤＭＦ／Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏに懸濁（２、懸濁液を濾過し、約２ｍｌの濾過液を終夜 の力・ツブリングに使用した。 すべての定性的Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性であり、１００％近い力・ツブリング収 率を示した。Ｐ　Ｎ　Ａオリゴマーは常法により切断および精製された。 ＭＢＨＡＩＩ脂上で組立てられた。樹脂は始めに約０．２５ミリモル／ｇのＢｏ ｃ−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）で１換されているのが定量的ニンヒドｌル反応喜こよ り決定されている。オリゴマーの段階的合成は、０．０２３ｇ　（０，０６Ｅｉ モル）のＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨ１０，０６２ＨのＢｏｃｂｃ　（Ｚ）−ＯＦ（お よび０．０１２ｇ　（０，０６ミリモル）のＤＣＣの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ ２溶液（１，２ｍ１）を各々のカップリングに用いる合成プロトコール９に従っ た。未反応アミノ基のキャッピングは各々の工程の脱保護前に実施された。すべ ての定性的Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性であり、１００％近いカップリング収率を示 した。 ＰＮＡ−オリゴマーは常法により切断および精製された。 Ｈ−ＣＴａｅｇ３−　（Ｔａｅｇ）　（Ｔａｅｇ）　−（Ｔａｅｇ）−（Ａａｅ ｇ）ＣＴａｅｇ）−［Ｔａｅｇ）−（Ｔａｅｇ）−（Ｔａｅｇ）−（Ｔａｅｇ） −ＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂（実施例７６から）上で開始された。この樹脂は 約１００■（乾燥重量）のＢｏＣ−Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂（装填 ０．１５ミリモル／ｇ）と似ていた。モノマーの取り込みは工程５（ＢｏｃＡ（ Ｚ）ａｅｇ−ＯＨモノマーの取り込みを除いて実施例５５のプロトコールに従っ た。新工程５　（Ａ　（Ｚ）ａｅｇの取り込み）には、０，６ｍｌのＤＣＭ／［ ）ＭＦ　（１・Ｌ、ｒ／ｒｌに溶解された４当量のジイソプロピルカルボジイミ ド（０，０６ミリモル；９．　７５１）および４当量のＢｏｃＡ　（Ｚ）ａｅｇ −ＯＨ（０，０６ミリモル、３２■）の添加（モノマーの最終濃度０．１Ｍ）が 含まれていた。カップリング反応は１ｘ１５分および１ｘ６０分（再カップリン グ）進行させた。 未反応アミノ基のキャッピングはＢｏｃＡ　（Ｚ）ａｅｇ−ＯＨモノマーの取り 込みの前にのみ実施された。カップリング反応は定性的ニンヒドリン反応（Ｋａ ｉｓｅｒ試験）によりモニターされた。すべてのＫａｉｓｅｒ試験は陰性であっ た（淡黄色でビーズの着色はなかった）。ＰＮＡオリゴマーは常法により切断お よび精製された。 飾ＭＢＨＡ樹脂上に組み立てられた。モノマーの取り込みは実施例３２のプロト コールに従ったがキャｙビング工程１１および洗浄工程１２は省略された。第１ ゜Ｉ！２および第４のＧ　（Ｂｚｌ）ａｅｇ−モノマーの取り込みおよび脱保護 後に樹脂を適当に膨潤させる点でいくつかの難点があった。ＤＣＭ中で３時間振 とうすることで受け入れられる膨潤を得た。残基Ｔａｅｇ−４，Ｇ　（Ｂｚ／） ａｅｇ−６およびＴａｅｇ−７からＴａｅｇ−１０の取り込みでは定量的に近い カップリング収率を得るには再カップリングが必要であった。Ｔａｅｇ４（２ｘ ５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ中）　、Ｇａｅｇ６　（２ｘ５（）％ＤＭＦ／ＤＣＭ中） 、Ｔａｅｇ７　（２ｘ５０％ＤＭＦ／、ＤＣＭ中、１ｘ５０％ＮＭＰ／ＤＣＭ中 お！びｌｘＤｃＭ中）　、Ｔａｅｇ３　（１ｘ５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ中および２ ＸＤＣＭ中）　、Ｔａｅｇ９　（２ｘ５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ中）　、Ｔａｅｇ（ ｏ（２ｘ５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ中）。すべての定性的Ｋａｉｓｅｒ試験は陰性で あった（淡黄色、ビーズの着色なし）。ＰＮＡオリゴマーは常法により切断およ び精製された。 約９ｇの湿ＭＢｏｃ−（Ｔａｅｇ）　３−Ｌｙｓ　（ＣＪ　Ｚ）−ＭＢＨＡ　（ 実施例１９ｂ参照）を６０１Ｉｌの５ＰＰＳ反応容器に入れた。Ｂｏａ−（Ｔａ ｅｇｌ　５−Ｌｙｓ　（ＣＺ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は１０ｍ１のＣ［（２ｃ１２ 中０．１５ＭのＢｏｃＴａｅｇ〜０Ｐｆｐと両方の残基の単カップリングにより 組立てられた（″合成プロトコール８”）。両方のカップリング反応とも一夜進 行させた。合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、両方の残基の定量的に 近い取り込みを示した。 Ｎ末端Ｂｏｅ基の脱保護後、約４．５ｇのＨ−（Ｔａ　ｅ　ｇ〕−−Ｌｙｉ　（ （Ｊ　Ｚ）　−プ ＭＢＨＡを２０ｍ１の５ｐｐｓ反応容器に入れ、７．５ｍｌのＣＨ２ＣＩ　２中 、０．２ＭのＢｏ　ｃＴ　ａ　ｅ　ｇ−ＯＨならびに０．２ＭのＤＣＣと一夜お くすべての残基（はとんど定量的、ただし残基番号８を除く）の単原位置ＤＣＣ カップリングによりＢｏｃ−（Ｔａ　ｅ　ｇｌ　Ｂ−ＬｙＳ　（ＣＩＺ）−ＭＢ ＨＡへ伸長させた（“合成プロトコール９”）。Ｔａｅｇ残基７番および８番の カップリング前に各々Ｈ−（Ｔａ　ｅ　ｇｌ　６−Ｌｙｉ　＜ＣＩ　Ｚ）　−Ｍ ＢＨＡおよびＨ−１：Ｔａ　ｅ　ｇ）　７−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡの 一部をＨＦ切断のために取り出した。 Ｔａｅｇ残基番号８番は２度カップリングすると（−夜）定量的に近い取り込み を与えた。Ｎ末端Ｂｏｃ基の脱保護後、Ｈ−（Ｔａｅｇ）　８−Ｌｙｓ　（（Ｊ 　Ｚ）−Ｍ　Ｂ　ＨＡの大部分がＨＦ切断のために取り出された。Ｂｏｃ−（Ｔ ａｅｇｌ　、。 Ｌｙ　ｓ　（Ｃｊ！　Ｚ）　ＭＢＨＡは２．０ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ ２中、０．１６ＭのＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨ（０，１６ＭのＤＣＣと共に）の２回 の原位置ＤＣＣカップリングにより組立てられた（°合成プロトコール９”）。 最後の残基のカップリングの前に、Ｈ−（Ｔａｅｇ）　９−Ｌｙｓ　ＣＣＩＺ） −ＭＢＨＡを少量ＨＦ切断のために取り出した。 Ｍ　Ｂ　ＨＡ樹脂のＨＦ切断により約１４，０■の組物質を得た。粗生成物は精 製されなかった（約９９％の純度）。 のごとく処理され、５２．４■の乾燥Ｈ−ＣＴａｅｇ〕７−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約５．２■の組物質を得た。 Ｍ　Ｂ　ＨＡ樹脂のＨＦ切断により約１１４■の組物質を得た。 のごとく処理され、８１．ｏ■の乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇ）、−Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約１９．３■の組物質を得た。 記載したごとく処理され、約４１７■の乾燥Ｈ［Ｔａ　ｅ　ｇ〕ｉ０−”’　（ 、ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂から約１４１■の組物質を得た。 を決定するためのニンヒドリン分析のため、ＰＮＡ樹脂試料２〜５■を取り出し 、十分に乾燥；　（５）Ｂｏｃ保護ＰＮＡモノマー（Ｐｆｐエステル）の添加； カップリング反応は総計でＸ時間振とうすることにより進行させた；　（７）取 り出し十分に乾燥；（１２）合成のいくつかの段階で無水酢酸／ピリジン／ニン ヒドリン分析。 約１ｇの湿ｆｉＢｏｃ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹 脂を５ｍｌの５ｐｐｓ反応容器に加えた。Ｂｏｃ−［Ｔａｅｇ）４−Ｃ（Ｚ）ａ ｅｇ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は２．０ｍｌの ５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１６Ｍ　ＤＣＣと共に０．１６ＭのＢｏｃ Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−ＯＨまたは２．０ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０． １６Ｍ　ＤＣＣと共に０．１６ＭのＢｏ　ｃＴ　ａ　ｅ　ｇ−ＯＨを利用するす べての残基の原位置ＤＣＣカップリングにより組立てた（“合成プロトコール９ °）。各々のカップリング反応は総計で２０〜２４時間振とうして進行させた。 合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、Ｃ（Ｚ）ａｅｇの取り込みは約９ ８％およびすべてのＴａｅｇ残基の取り込みは定量的に近いことが示された。 保護Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）　−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｒｓ　（ ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂が実施例１７ｃに記載したごとく処理され、１２８． ２■の乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇｌ　−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　 （（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約２２．５■の粗物質を得た。粗 物質（５，８■）を精製すると３．１■のＨ−（Ｔａｅｇ）　−Ｃａｅｇ−（Ｔ ａｅｇ）　５−Ｌ７＋（１）ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ　２　（１：　１．マ／マ）に よるＢＯＣ脱保護、３×１分および１×３０分；　（２）ＣＨ２（ＪＺによる洗 浄、６×１分；　（３）Ｄ［ＥＡ／ＣＨＣ１（１：　１９．　ｖ／ｖｌによる中 和、３×２分；　（４）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、６×１分および脱溶媒、１分 ；　（５）合成のいくつかの段階で、置換の決定のためのニンヒドリン分析のた めＰＮＡ樹脂の試料２〜５■を取り出し十分に乾燥；　（６）　ＸｍｌのＤＭＦ に溶解したＢｏａ−保護ＰＮＡモノマー（ａ離液）の添加、続いてＸｍｌのＣＨ ２Ｃｌ２に溶解したＤＣＣの添加；カップリング反応は総計でＹ時間振とうする ことにより進行させた；　（７）ＤＭＦによる洗浄、１×２分；　（８）ＣＨ２ Ｃ１２による洗浄、４Ｘ１分；　（９）Ｄ［ＥＡ／　ＣＨ２Ｃ１２（１：　１９ １ｗ／Ｉ）　ｆ＝よる中和、２８２分；　（１０）ＣＨ２Ｃ１２による洗浄、６ ×１分：　（１１）時折、カップリングの程度を決定するためのニンヒドリン分 析のため保護ＰＮＡ樹脂試料の２〜５■を取り出し、十分に乾燥；（１２）合成 のいくつかの段階で、無水酢酸／ピリジン／ｃＨ２ｃ！２　（１：１：２、マ／ マ／マ）の混合物による２時間のアセチル化により未反応アミノ基を塞ぎ、続い てＣＨ２Ｃｌ２により洗浄、６×１分、および時折二ンヒド１ル分析。 約１ｇの湿潤Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）５−Ｌｙｓ　（Ｃｊ！　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂 を５ｍｌの５ｐｐｓ反応容器に加えた。Ｂｏａ−（Ｔａｅｇ）　４−　（ＮＢａ ｅｇ）−（Ｔ　ａ　ｅ　ｇ）　ｓ　Ｌ　ｙ　ｓ　（Ｃｊ！　Ｚ）　ＭＢＨＡ樹脂 は２．ＯＩｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した０、１６Ｍ　Ｂｏｃ　（ＮＢａｅｇ）− ０Ｔ（ならびに０．１６Ｍ　ＤＣＣまたは２．０ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃ ｌ２中、０．１６Ｍ　ＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨと共に、０．１６Ｍ　ＤＣＣを利用 する原位置ＤＣＣカップリングにより組立てられた（“合成プロトコール９“） 。各々のカップリング反応は振とうしながら総計で２０〜２４時間進行させた。 ＮＢａｅｇ残基は３回結合され、Ｔａｅｇ残基はすべて１回結合された。合成は ニンヒドリン反応によりモニターされ、〉９９％のＮＢａｅｇの総計の取り込み （最初のカップリング後は約８８％および２回目のカップリング後は約９３％） およびすべてのＴａｅｇ残基のほとんど定量的取り込みが示された。 保護されたＢｏａ−（Ｔａｅｇ）　−（ＮＢａｅｇ）−（Ｔａｅｇｌ　５　Ｌｙ ｓ（ＣＩ　Ｚ）−ＭＢ［（Ａ樹脂を実施例１７ｃに記載のごとく処理し、１０８ ．　９■の乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇｌ　−（ＮＢａｅｇ）−（Ｔａｅｇ）５−Ｌｙ＋ 　＜ＣＩＺ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約３３．６■の粗物質を得た。粗 生成物（２０，６ｍｇ）を精製して４．６■のＨ−（Ｔａｅｇｌ４−　（ＮＢａ ｅｇ）−（Ｔａｅｇ）　−Ｌｙｓ−ＮＨ２を得た。（Ｍ＋Ｈ）　として、計算ｍ ／ｚ値は２６８３．１．２であり、実測ｍ／ｚ値は２６８３．０９であった。 約１ｇのｉｌ、たＢｏｃ−ＣＴａ　ｅｇｌ　５−Ｌｙ＋ＣＣ１！Ｚ）　−ＭＢＨ Ａ樹脂を５ｍ１ｉｓｐｐｓ反応容器に加えた。Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）　−ａｅｇ −（Ｔａｅｇ）　５−Ｌ、ｙ　ｓ　（（’Ｊ　Ｚ）　−ＭＢＨＡ樹脂は（１）２ ．０ｍｌの５０％Ｄ　ｉｖｉ　Ｆ　／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１６Ｍ　Ｂｏｃａｅ ｇ−ＯＨと共に０．１６Ｍ　ＤＣＣを、または（２）２．０ｍｌの５０％ＤＭＦ ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．Ｊ、、６ＭＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨと共に０．１６Ｍ　Ｄ ＣＣを利用するすべての残基の原位置ＤＣＣ単カップリングにより組立てられた （“合成ブロー・コール９°）。各々のカンプリング反応は振とうしながら総計 で２０〜２４時間進行させた。合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、す べての残基の取り込みが定量的に近（１ことが示された。 保護されたＢｏｃ−［Ｔａｅｇｌ４−　ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）５−ＬＴＩ　（Ｃ ｊ’　Ｚ）Ｍ　Ｂ　ＨＡ、樹脂が実施例１７ｃに記載し７たように処理され、１ ．２６．０■の乾燥１（−（Ｔａｅｇ〕　−ａｅｇ−［Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ 　（（Ｊ　Ｚ）−Ｍ１３ＨＡ樹脂のＨＦ切断により約２２．２■の粗物質を得た 。粗生成物（２２，２■）を精製して、７．６■のＨ−（Ｔａｅｇ）　４−ａｅ ｇ−［Ｔａｅｇ３５−Ｌｙｓ−Ｎ［（を得た。（Ｍ＋Ｈ）”　に対し計算ｍ　／ ”　ｚ値は２６４１．１１であり、実測ｍ／ｚｆｉｌｌは２６４１．１６であっ た。 約１ｇの湿１１ＢＯｃ−（Ｔａｅｇｌ５−Ｌｒｓ　＜ＣＩ　Ｚ）　−ＭＢＨＡ樹 脂を５ｍｌの５ＰＰＳ反応容器に加えた。Ｂｏａ−（Ｔａｅｇ）　−Ｇｌｙ−（ Ｔａｅｇ）５−Ｌｙ　ｓ　（ＣＩ　Ｚ）−ＭＢ、ＨＡ樹脂は（１）２．（１＋ｌ の５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１６Ｍ　ＢｏｃＧｌｙ−ＯＨと共に０． １６Ｍ　ＤＣＣを、または（’２）２．０ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中 、０．１６ＭのＢｏａＴａｅｇ−Ｏ）Ｉと共に０．１６Ｍ　ＤＣＣを利用するす べての残基の原位置ＤＣＣ単カップリングにより組立てられた（“合成プロトコ ール９”）。各々のカップリング反応は振とうしながら総計で２０〜２４時間進 行させた。合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、すべて残基の取り込み が定量的に近いことが示された。 保護されたＢｏｃ−［Ｔａｅｇｌ　−Ｇｌｙ−（Ｔａｅｇｌ５−ＬＴＩ−（（Ｊ Ｚ）−Ｍ　Ｂ　ＨＡ樹脂が実施例１８ｃに記載したごとく処理され、１２４．１ ■の乾燥Ｈ−ＣＴａｅｇ）　−Ｇｌｙ−（Ｔａｅｇ）５−ＬＴＩ−（ＣＪ　Ｚ） −ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約４５．０■の粗物質の得た。粗生成物（４０ ，４■）を精製して、８．２■のＨ−（Ｔａｅｇｌ４−Ｇｌｒ　［Ｔａｅｇ）ｓ 　−Ｌ７＋−ＮＨ２約１ｇの湿ｍＦ３０Ｃ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　ＣＣＩ 　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂を５ｍｌの５ＰＰＳ反応容器に加えた。Ｂｏｅ−（Ｔａｅ ｇ）４−　（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）２−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）　ａｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ （Ｚ）　ａｅｇ−Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は（１）２０ｍｌの５０ ％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．　１６ＭＢｏｃＧｌｙ−Ｏｔ（と共に０．１６ Ｍ　ＤＣＣを、または（２）２．０ｎｌの５０られた（“合成プロトコール９″ ）。各々のカップリング反応は振とうしながら総計で２０〜２４時間進行させた 。合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、すべての残基の取り込みが定量 的に近いことが示された。 −ＭＢＨＡ樹脂が実施例１７ｃに記載のごとく処理され、１５６．６■の乾燥Ｈ 製して、７．８■のＨ−（Ｔａｅｇ〕　−Ｇｌｙ２−　（Ｔａｅｇ）Ｓ　−Ｌｙ ｓ−Ｎ　Ｈ２を得た。（Ｍ＋Ｈ）　に対し計算ｍ／ｚ値は２６５５．０９であり 実測ｍ／ｚ値は２６５５．３７であった。 約１．５ｇの湿潤Ｂｏｃ−Ｌｙ＋　（Ｃｊ’　Ｚ）−ＭＢＨＡ　（０，２８ミリ モルＬｙ＋／ｇ）樹脂を５ｍｌの５ｐｐｓ反応容器に加えた。ＢｏＣ−（Ｔａｅ ’ｇ）ｊ　（ｃ中、０１６ＭのＢｏｃＣ（Ｚ）−ＯＨと共に０．１６Ｍ　ＤＣＣ を、または（２）　２．　ｆ）ｍｌの５０％ｏＭＦ／ＣＨ２Ｃｔ　２中、Ｑ、１ ６Ｍ　ＢａｃＴａｅｇ−ＯＨと共に０．１６Ｍ　ＤＣＣを利用するすべての残基 の原位置ＤＣＣ単カップリングにより組立てられた（゛合成プロトコール９”） 。各々のカンプリング反応は振とうしながら総計で２０〜２４時間進行させた。 合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、すべての残基の取り込みが定量的 に近いことが示された。 （Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ｌｙ＋　ＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹 脂が実２７４６．７８であった。 せた。合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、すべての残基の取り込み力 （定量的に近いことが示された。 の乾燥Ｈ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−Ｔａｅｇ−（ＣのＢｏ ｃＣ（Ｚ）−ＯＨと共にＯ，１６Ｍ　ＤＣＣを、または（２）　３．　０ｍｌの ５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１６Ｍ　ＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨと共に０． １６Ｍ　ＤＣＣを利用するすべての残基の原位置ＤＣＣ単カップリングにより組 立てられた（“合成プロトコール９”）。各々のカップリング反応は振とうしな がら総計で２０〜２４時間進行させた。合成はニンヒドリン反応によりモニター され、すべての残基の取り込みが定量的に近いことが示された。Ｎ末端ＢＯｃ基 の脱保護後、ＰＮＡ樹脂の半分はＴｙｒ　（ＢｒＺ）−ＯＨに定量的に結合され 、ごく一部はもう一つのＣａｅｇ残基に定量的に結合された。両方のカップリン グとも上記の合成プロトコールを用いた。 に記載したごとく処理され、１８２．　５１ｇの乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇ）　２−　 （Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　−（Ｔａｅｇｌ　−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ：１２−Ｌｙｓ（（ ＪＺ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約５０．９■の組物質を得た。粗生成物 算ｍ／ｚ＠は２４６６．０４であった；ｍ／ｚ値は測定されなかった。 実施例１７ｃに記載したごとく処理され、１８８．８■の乾燥Ｈ−Ｔｙｒ■の組 物質を得た。粗生成物（６０，８■）を精製して２０，７■のＨ−Ｔｙｒ」旦Σ −」七ゴトし［亀二」工３！」↓−２に儂咽先見及しＬ二匹王土ヱエＬＬニ保護 されたＢｏｃ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　２−　（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）３− 　（Ｔａｅｇ）　２−　（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　２−Ｌｙｓ　（（ＪＺ）−ＭＢＨ Ａ樹脂が実施例１７ｃに記載したごとく処理され、４２．　ＯＩＩｇの乾燥Ｈ− Ｃ（Ｚ）ａｅｇ　−（Ｔａｅｇ）　２−　（Ｃ（Ｚ）　ａｅｇ）　３−　（Ｔａ ｅｇ３２−’（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　２−Ｌｙｓ　（ＣＩ　Ｚ）　−ＭＢＨＡ樹脂 のＨＦ切断により約１１．７■の粗物質を得た。粗生成物（１１，６■）を精製 して３．１■のＨ−Ｃａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　２−（Ｃａｅｇ）３−（Ｔａｅｇ ）２−（Ｃａｅｇ）２−ＬｙｓＮＨ２を得た。（Ｍ十Ｈ）　として計算ｍ／ｚ値 は２７１７．１５であった：ｍ／ｚ値は測定されていない。 約３ｇの湿潤ＢＯ（−Ｌｙ＋　（ＣＡ’　Ｚ）−ＭＢＨＡ　（０，２８ミリモル Ｌ　Ｆｌ／ｇ）樹脂を２０ｍ１の５ｐｐｓ反応容器に加えた。Ｂｏｃ　−（Ｔａ 　ｅ　ｇ３２−　（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ〕３−（Ｔａｅｇ〕２−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ） ２−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）−Ｍ１３Ｆ（Ａ樹脂は（１ン３０ｍｌの５０％ＤＭＦ／ ＣＨ２Ｃ１２中、０．１６ＭのＢｏｃＣ（Ｚ）−ＯＨと共に０．１６Ｍ　ＤＣＣ を、または（２）　３．　０ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃ１２中、０．１６Ｍ のＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨと共に０．１６Ｍ　ＤＣＣを利用するすべての残基の原 位置ＤＣＣ単カップリングにより組立てられた（“合成プロトコール９”）。各 々のカップリング反応は振とうしながら総計で２０〜２４時間進行させた。合成 はニンヒドリン反応によりモニターされ、ｔべての残基の取り込みが定量的に近 いことが示された。Ｎ末端Ｂｏｃ基の脱保護後、ＰＮＡ樹脂の半分はＴｙ　ｒ　 （Ｂ　ｒ　Ｚ）　−ＯＨに定量的に結合され、ごく一部がもう一つのＴａｅｇ残 基と定量的に結合された。両方のカップリングとも上記の合成プロトコールを用 いた。 保護されたＢｏａ−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　２−　（Ｔａｅｇ）　２−　（Ｃ（Ｚ ）ａｅｇ）３−　（Ｔａｅｇ）２−Ｌｙｓ　（Ｃ／　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は実施 例１７ｃに記載されたごとく処理され、１７２．７ｗの乾燥Ｈ（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ ）２−（Ｔａｅｇ〕２−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ〕３−（Ｔａｅｇ）２−Ｌｙｓ　（Ｃ ｊＺ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約５７．６■の粗物質を得た。粗生成物 （５７，６＊）を精製して２６．３■のＨ−（Ｃａｅｇ）　２−　（Ｔａｅｇ） 　２−［Ｃａｅｇ）３−　（Ｔａｅｇ）　２−Ｌｙｓ−ＮＨ２を得た。（Ｍ＋Ｈ ）＋に対して計算ｍ／ｚ値は２４６６．０４であった；　ｍ　／　ｚ値は測定さ れていない。 保護されたＢｏｃ−Ｔｒｔ−（ＢｒＺ）−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　２−　（Ｔａｅ ｇ）２−　（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　３−　（Ｔａｅｇ〕２−ＬＹＳ　（Ｃ４Ｚ）− ＭＢＨＡ樹脂は実施例１７ｃに記載のごとく処理され、１７２．７■の乾燥Ｈ− Ｔｙｒ−（ＢｒＺ）（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）２−（Ｔａｅｇ）２−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ ）３−（Ｔａｅｇ）２　ｔｙｓ　（ＣＩＺ）　ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約 ５７．６■の粗物質を得た。粗生成物（４７，１■）を精製して１３．４■のＨ −Ｔｙｒ−（Ｃａｅｇ）２−（Ｔａｅｇ〕２−（Ｃａｅｇ：１３−（Ｔａｅｇ） ２−ＬｙｓＮ　Ｈ２を辱た。（Ｍ＋Ｈ）　に対し、計算ｍ／ｚｌｉｉｉは２６２ ９．１１であり、実測ｍ／ｚ値は２６２９．１１であった。 （ｄ）　Ｈ−Ｔ’−ａｅｇ　−ＥＣ（Ｚ）　ａｅｇＥ　２−（Ｔａｅｇ）　２　 二（Ｃ（Ｚ）（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　−（Ｔａｅｇ）　２−１、ｙｓ　（ＣＩＺ） 　ＭＢＨＡ樹脂が実施例１７　ｃ　１．：　ｇｉＥ載ｃｉｑご乏り°処理さｔｌ 、４２４■の乾燥Ｈ−Ｔａｅｇ−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　−（Ｔａｅｇ：１２−（ Ｃ（Ｚ）ａｅｇ１３−（Ｔａｅｇ）２−Ｌｙｓ　（Ｃ／　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂の ＨＦ切断により約５３４４■の粗物質を得た。 粗生成物（１］、、９ｑ）を精製して４３■のＨ−Ｔａ　ｅ　ｇ　−（Ｃａ　ｅ 　ｇ〕２−　［Ｔａｅｇ）　−［：Ｃａｅｇ］　３−　（Ｔａｅｇ〕２−Ｌｙｓ −ＮＨ２を得た。 （Ｍ＋Ｈ）’　に対し、計算ｍ／′ｚ値は２７３２．１５であった　ｍｌｚ値は 測定されなかった。（Ｃ）合成プロトコ・−ル１０（一般的プロー・コ・−ル） “合成プロトコール９”と同しプロトコール、ただしＤＣＣはＤＩＣに置き代え られている。 （ａ）　（ｂ　ｏ　ｃアミノ）アセトアルデヒドの製造３−アミノ−１，２−プ ロパンツオール（８０，０ｇ；０．８８モル）を水（１５００ａ＋１）に溶解し 、溶液を４℃に冷却した後Ｂｏａ無水物（２３０ｇ；１．０５モル）を一度に加 えた。溶液は水浴で緩やかに室温まで加熱した。水酸化光トリウムを滴下するこ とによりｐＨは１０．５に保たれた。反応終了までに総計で４８０ＫＢ＋の水に 溶解した７０．２ｇのＮａＯＨが加えられた。−夜撹拌後、酢酸エチル（１００ ０ｍｌ）を加え、混合物を０℃に冷却し、４Ｎ塩酸の添加によりｐＨを２．５に 調整した。酢酸エチル層を除き、酸性水溶液はさらに酢酸エチルで抽出された（ ８　Ｘ　５００ｍ１）。合併した酢酸エチル溶液の容量は回転エバポレーターを 用いて１５００ｍｌに減量した。得られた溶液は半乾和硫酸水素カリウム（１５ ００ｍｌ）続いて飽和塩化ナトリウムで洗浄した。次に硫酸マグネシウムで乾燥 させ、真空上蒸発乾固させた。収量１４５．３．（８６％）。 ３−Ｂｏｃアミノ−１，２−プロパンジオール（１４４，７ｇ；０．７５７モル ）を水（７５０ｎｌ）に墾濁し、過ヨウ素カリウム（１９１，５ｇ；０．８３３ モル〕を加えた。混合物は窒素下で２５時間撹拌し、沈殿したヨウ素酸カリウム を濾過して除去し一度水（１００ｎｌ）で洗浄した。水相をクロロホルムで抽出 した（６Ｘ４００ｍｌ）。クロロホルム抽出液を乾燥し、真空上蒸発乾固させた 。 油状物の収量１０２ｇ（９３％）。（ｂｏｃアミノ〕アセトアルデヒドは２つに 分けて８４℃、Ｑ、３ｍＩＩＨｇでクーゲルロール蒸留することにより精製され た。無色油状物の収量７９ｇ（７７％）。 （ｂ）　（Ｎ’−ｂｏｃアミノエチル）グリシンメチルエステルの製造０℃にて パラジウム炭素（１０％；２．００ｇ）を（ｂｏｃアミン）アセトアルデヒド（ １０、Ｏｇ；６８．９ミリモルのメタノール（１５０ｎｌ）溶液を加えた。酢酸 ナトリウム（１１，３ｇ；１３８ミリモル）のメタノール（１５０ｎ＋１）溶液 およびグリシンメチルエステル塩酸塩（８，６５ｇ；６８．９ミリモル）のメタ ノール（７５ｍｌ）溶液を次に加えた。混合物は大気圧で２．５時間水素化した 後、セライトを通して濾過し、真空上蒸発乾固させた１、これにより１４．１ｇ （８８％）の（Ｎ’−ｂｏｃアミノエチル）グリシンメチルエステルを得た。粗 生成物を１２０℃、Ｑ、５ｉＩＩＪでクーゲルロール蒸留により精製すると１１ ．３ｇ（７０％）の無色油状物を得た。ｔ１ｃ分析（１０％メタノールを含むメ チレンクロリド）によるとこの生成物は実施例２６で製造された物よりも高い純 度を持っていた。 もしくは、収率は低いが（４２％）水素（ｐｄ（ｃ）と共に触媒として）のかわ りに還元剤としてンアノ水素化ホウ素ナトリウムが使用できる。 （ｃ）　（Ｎ’−ｂｏｃアミノエチル）グリシンメチルエステルの製立表記化合 物はグリシンメチルエステル塩酸塩をグリシンメチルエステル塩酸塩にかえ、前 記の方法で製造された。また使用された溶媒はエタノールであった。 収率は７８％であった。 約０．２ｇの湿ｍＢｏｃ−（Ｔａｅｇ）　１ｏ−Ｌｎ　ＣＣＩＺ）−ＭＢＨＡ樹 脂を５ｍｌの５ｐｐｓ７応容器に加えた。Ｂｏｃ−Ｔｙｒ　（ＢｒＺ）　−（Ｔ ａｅｇ）、ｏ−Ｌｙｓ　（Ｃｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は、３．０　ｍｌ　’）　 ＣＨ２Ｃｉ’　２中の０．３２Ｍ（７）ＢｏｃＣＴｙｒ　（ＢｒＺ）−ＯＨと共 に０．３２ＭのＤＣＣを利用して一夜行う標準原位置ＤＣＣカップリングにより 組立てられた。ニンヒドリン反応はＢｏａＴｙｒ（ＢｒＺ）の約９７％の取り込 みを示した。 ］ニュづ〃ニュと工、≦ＬヒせＬ聾Ｌ」但辺町保護されているＢｏａ−Ｔｙｒ　 （ＢｒＺ）−（Ｔａｅｇ〕、Ｇ−Ｌｙｓ　＜ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は実施例 １７ｃに記載されたごとく処理され、２０．７■の乾燥ＨＴｙｒ　（ＢｒＺ）　 ＣＴａｅｇ）ｔｏ　Ｌｙｓ　ＣＣＩ　Ｚ）　ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約５ ．５■の組物質を得た。粗生成物を精製して２．５■のＨ−Ｔｙｒ−（Ｔａｅｇ ）、ｏ−Ｌｙｓ−ＮＯ３を得た。 約０．３ｇのａ潤Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）、ｏ−Ｌ７＋　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＪ３Ｈ Ａ樹脂を５１１の５ｐｐｓ反応容器に加えた。ダンツルー（Ｔａ　ｅ　ｇ’Ｊ　 、ｏ−Ｌｙ＋　（Ｃ１’　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は２．０ｍｌのビリンンに溶解し た０、５Ｍダンシル−ｃｌと一夜結合させることにより組立てられた。ニンヒド リン反応はダンツルの約９５％が取り込まれたことを示した。 は実施例１７ｃに記載されたごとく処理され、７１．３■乾燥ダンンルー（Ｔａ 　ｅｇ）１０　１−’ｌ　ｓ　（ＣＩＺ）　ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約１ ２■の組物質を得た。粗生成物を精製して５４■のダンツルー（Ｔ　ａ　ｅ　ｇ ）　、ｏ−Ｌ７ｉ約０．０５ｇのＢｏ　ｃ　−［Ｔａ　ｅ　ｇ〕＋、Ｇ−Ｌ３’ 　＋！　（、ＣＩ　Ｚ）　−ＭＢＨＡ樹脂を５ｍｌの５ｐｐｓ反応容器に加えた 。Ｂｏａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｆ（ｉｓ　（Ｔｏｓ）ｉ　カップリングは２５％Ｄ ＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ　２中前もって形成された対称的無水物（０，１Ｍ）を用いて 行われた。すべてのカップリングは一夜実施され、ニンヒドリン反応は実施され なかった。 保護されているＢｏａ−Ｇａｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉ　ｓ　（Ｔｏｓ）−（Ｔａｅｇ） １Ｇ−ＬＪＩ　（ＣＩＺ）−ＭＢＨＡ樹脂は実施例１７ｃに記載されているごと く処理され、３４．５■の乾燥Ｂｏｃ−Ｇ１７−Ｇ１７−Ｈｉ＋　（Ｔｏ　ｓ） 　−（Ｔａ　ｅ　ｇ）　、ｏ−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）　−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切 断により約１０．３■の組物質（約４０％の純度）を得た。粗生成物の少量（凍 結乾燥前に取り出した）を精製して０．１ＭのＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−［Ｔａ ｅｇ〕　−Ｌｙｓ−ＮＯ３を得た。 約０．２ｇのＭＢＨＡ樹脂を３ｍｌの５ＰＰＳ反応容器へ入れ中和した。負荷は 約０．６４ミリモル／ｇであることが決定された。２．５ｍｌの２５％フェノ− であることを示した。残存するアミノ基は通常のようにアセチル化された。 および残っている残基に対してＣＨ２Ｃｌ　２中の０．１３Ｍ　ＢｏｃＴａｅｇ −ＯＰｆｐとのカップリングにより（′合成プロトコール８”）組立てられた。 各々のカップリング反応は一夜振とうすることにより進行させた。合成はニンヒ ドリン反応でモニターされ、すべての残基の取り込みは定量的に近いことかで２ ．０■のＨ−（Ｔａｅｇ）　−（Ｃａｅｇ）　−ＨＮ２　（＞９９％の純度）の カップリング反応は一夜振とうすることにより進行させた。合成はニンヒドＭＢ ＨＡ樹脂は実施例１７Ｃに記載されているごとく処理され、約１２３■て３．６ ■のＨ−（Ｔａｅｇ）　３−Ｃａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　４−ＮＯ３を得た。 約０．３ｇの湿＃Ｂｏｃ−（Ｔａｅｇ）ｇ　−Ｌｙｓ　（ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ 樹脂を３ｍｌの５ＰＰＳ反応容器へ入れた。ＢｏＣ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ 　−より（“合成プロトコール９“）にンヒドリン分析により判断された取り込 みは約８０％であった。残りの遊離アミノ基はアセチル化された）、および２． ５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ　２中、０．１５Ｍ　ＢｏｃＴａｅｇ−ＯＰｆｐとＴａｅｇ 残基の一夜のカップリングにより（はとんど定量的）組立てられた。 保護されているＢｏＣ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　８−Ｌｙｓ ＣＣＩＺ）ＭＢＨＡ樹脂は実施例１７ｃに記載されているごと（処理され、約７ ６．５■の乾燥Ｈ−Ｔａｅｇ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　８−Ｌｙｓ（（ Ｊ　Ｚ）ＭＢＨＡ樹脂はＨＦ切断により約２２．３■の組物質を得た。粗生成物 （６，７ｍｇ）を精製して２．６■のＨ−Ｔａｅｇ−Ｃａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　 ８−ＬｙｓＮＨ２を得た。（Ｍ＋Ｈ）　に対する計算ｍ／ｚ値は２７９２．１５ であり、実測ｍ／ｚ値は２７９２．　２１であった。 を５ｍｌの５ｐｐｓ反応容器へ入れた。Ｂｅｅ　−［Ｔａ　ｅ　ｇ）　２−Ｃ（ Ｚ）　ａ　ｅ　ｇ　−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂 は、（１）３．０ｍｌの５０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１２ＭのＢｏｃＣ （Ｚ）ａｅｇ−ＯＨと共に０．１２Ｍ　ＤＣＣを、または（２）３．０ｍｌの５ ０％ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１２ＭのＢｏｃＴａｅｇ−ＯＨと共に０．１ ２Ｍ　ＤＣＣを利用するすべての残基の原位１！［ＤＣＣ単カップリングにより 組立てられた（“合成プロトコール９”）。各々のカップリング反応は振とうし ながら一夜進行させた。合成はニンヒドリン反応によりモニターされ、すべての 残基の取り込みは定量的に近いことが示された。合成の間、少量のＨ−Ｃ（Ｚ） ａｅｇ−（Ｔａｅｇ’ｌ　５　ＬｙｓＣＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂がＨＦ切断の ため取り出された。 保護されているＢｏｃ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ〕５−Ｌｙｓ　（ＣＡ’　 Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は実施例１７ｃに記載されているごとく処理され、３７．５ ■の乾燥Ｈ−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）　−Ｍ ＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約３．０■の粗物質を得た。約０．　７■の粗生成 物を精製して約０．５■のＨ−Ｃａｅｇ−（Ｔａｅｇ〕５−Ｌｙｓ−ＮＨ２を得 た。 保護されているＢｏｃ−ＣＴａｅｇ）　２−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ）５− Ｌｙｓ　（Ｃ／　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂は実施例１７ｃに記載されているごとく処 理され、１１８．６．の乾燥Ｈ−（Ｔａｅｇ〕２−Ｃ（Ｚ）ａｅｇ−（Ｔａｅｇ ）５−Ｌｙ　ｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約３７．　７Ｅ １ｇのｔｘｔ物質を得た。 約５ｇの湿潤Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂（置換＝０．３ミリ モルＬｙｓ／ｇ）を３０ｍ１の５ＰＰＳ反応容器へ入れた。Ｂｏａ−（Ｃ（Ｚ） ａｅＨ３、ｏ−Ｌ３／　Ｓ　（ＣＩＺ）−ＭＢＨＡ樹脂は、１０ｍ１の５０％Ｄ ＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２中、０．１ＭのＢｏｃＣ（Ｚ）ａｅｇ−ＯＨとＯ，ＬＭ　Ｄ ＣＣによる最初の３つの残基の原位置ＤＣＣ単カップリングにより（“合成プロ トコール９”）、および１０１１の５０％ＤＭＦ／ＣＨ，，Ｃ１２中、０．１Ｍ のＢｏｃＣ（Ｚ）ａｅｇ−ＯＨとＯ，ＬＭ　ＤＩＣによる残りの７つの残基の原 位置ＤＩＣ単カップリングにより（“合成プロトコール１０゛）組立てられた。 すべてのカップリング反応は一夜進行させた。合成はニンヒドリン反応によりモ ニターされ、すべての残基の取り込みは定量的に近いことが示された。合成の間 、より短い断片Ｈ（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）ｓ　Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　ＭＢＨＡ樹脂、 Ｈ−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　６−Ｌｙｓ　（、ＣＩ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂、Ｈ−（ Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　−Ｌｙｓ　（（Ｊ　Ｚ）−ＭＢＨＡ樹脂、Ｈ（Ｃ（Ｚ）　ａ 　ｅ　ｇｊｇ−Ｌｙ　ｓ　（ＣＩＺ）−ＭＢＨＡ樹脂およびＨ−（Ｃ（Ｚ）ａｅ ｇ）　９−Ｌｙｓ（ＣＩＺ）−ＭＢＨＡ樹脂の一部をＨＦ切断のために取り出し た。 保護されているＢｏｃ−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）５−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）ＭＢＨＡ樹 脂は実施例１７ｃに記載したごとく処理され、６０．１■の乾燥Ｈ−［：Ｃ（Ｚ ）ａｅｇ）　５−Ｌｙｓ　（ＣＩ　Ｚ）　−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断により約１ ０．８■の粗物質を得た。 保護されているＢｏｃ−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　６−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）　−ＭＢ ＨＡ樹脂は実施例Ｌ１ｃに記載したごとく処理し、５６．２■の乾燥Ｈ−，−〔 Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　６−Ｌｙｓ　（ＣＡ’　Ｚ）　−ＭＢＨＡ樹脂のＨＦ切断に より約１３．４■の粗物質を得た。 」遵−入−［：４二〔Ｓ−リｇｒ−，−ｇ　、＝山−ヱーさ一二ｙ見２省契獣］ ！製十法ｇＩゆ実保護されているＢｏＣ−（Ｃ（Ｚ）ａｅｇ）　８−Ｌｙｓ　（ ＣＩＺ）　−ＭＩ３ｔ（Ａ樹脂は実施例Ｌ１ｃに記載したごとく処理し５．６５ ．６■の乾燥Ｈ−１：Ｃ（Ｚ）ａｅ　ｇｊ　８−Ｌｙｓ　（Ｃｆｆ　Ｚ）−ＭＢ ＨＡ樹脂のｉ（Ｆ切断により約１６．８ｍｇの粗物質を帯た。 一部し、、　、　Ｈ訂、、、、＋５．、、、−ａ、、、、、、、ｅ　ｆＫ、、、 、、’１．．．１　ｏ−ｐ−■甚−Ｎ、　！（２ｐ切町、　狽pｔＪ−ｉ、４Ｈ ，％；戸戸 体保護れＣいる＋３＋）ｃ　〔Ｃ（Ｚ）　ａ　ｅ　ｇ′）１ｇ−Ｌｙ　”　（Ｃ ＩＺ）　−ＭＢｆ（Ａ樹脂は実施例１１（に記載、したごとく処理（７，４４１ １１ｇの乾燥Ｈ−（Ｃ（Ｚ）ａｅｙ０１３−ＬＭ９　（Ｃ７！　Ｚ）−Ｍｌｌ） （Ａ樹脂の［訃切詣により約１４２．４ｒ、＋４の組物Ｗを得た。。 ｌ玉）−Ｆン−−−、、、（、；ｊｌ　、ｉ入りじ−１−リ　）胃−（、、Ｈ； 、−ｐ　、Ｚ−）、、、　＞、１１３−リ−７へ□（９（−■■潟^：隅−空Ｉ 木島ム゛？゛ ［３ｎｃ−（Ｔ　ａ　ｃ　ｇｊ、−Ｃ（Ｚ）ａ　ｆＩｇ　−じｒ’　ａ　ｃ　ｇ ’）　ｔ　Ｌ−ｖｓ　（ＣＡ　Ｚ）　−応容器に入わな１、とＩ；の残基を：′ ）回カーブリフ′ｆした後、８７％σ）Ｒｏ　ｃ　Ｃ：（Ｚ）ａｅＨの全取り込 みが（＄１ｂれた１、５回の＜＠Ｂ＋−カノーゾｊ月ノグは名々２ｍｌのＴ　Ｆ 　Ｅ／”’Ｃ８２ＣＩ　？　（１５シ　Ｖｈ）　、　１２ｍ１　のｒ　Ｆｌ：　 バエ１２　Ｃｌ　２　（１，２。 ＋／ｖ）、／オギサハ２．＠およ（ＦＤＩＥＡ２ｍＸ加バー弓〕ｍｌの′目：’ Ｅ／’ＣＨ２Ｃ７！　、。 （１２，ｊ／マ）、（＝　ｔｙ）・ギ・イ２イは数バー（・、・ｉ・の力・ノー ｆす、・グ収率苓↑−げる）、２ｍｌのＴＦ″Ｅｉ”ＬＨ，ＣＩ　、、（１：　 ２．、　ｖ７ｖ）に０　、　５　ｑ−、”−ノ　ルを加λる、お、おび１ｍｌの に正ｃＩ、＋ニーｏ、４　ｇの７丁ノー５ノー、・λ・加えた溶媒中の０．１８ Ｍ１うａｃ（’；　（ＩＸ）ａｅｇ−ＯＰｆｌ：＋により実施されｆ″、２−） の最後のＴ　ａ　ｅ　ｇ残基は２５％−７０，ノール％Ｃ［（、Ｃｆ、に、容解 またＱ　、’ｉ　５　Ｍ　Ｂ　ｏ　ｃ　Ｔａ　ｅ　ｇＯＰ　ｆ　ｐの複カップリ ングによりほとんど定量的に取り込まれｊ１５１．す・＼ての力・ノブリングは 一夜進「テさせた。 （Ｚ）ａｅｇ−ＣＴａｅｇｌ　４−１−＋ｔ　＜Ｃ：ｅ　Ｚ）−ＭＩＩＨＡ樹脂 は実施例１７（。 に記載（、たごとく処理さ才；、８０．７Ｗの乾ｍＨ〔Ｔ　ａ　ｅ　ｇｊ２　Ｃ （Ｚ）ａｅ　ｇ−−一　（１’ａ　ｅ　ｇ）　−（じ　（Ｚ）　ａｅ　ｇ−（Ｔ ａｅｇ、ｌ　、−１４＋　（Ｃ／　Ｚ）　−Ｍ　ｆ３　ＨＡ樹脂のＨＦぜ１断に より約−／　ｍｇの粗物質を得た。粗生成物を精製１、てり、、２！１ｇのＨ− （Ｔ’ａｅｇ）　−ＣａｅＨ−（Ｔａｅｇ）２−ｃａｅｇ　−（Ｔａｅｇ］　− １，、ｙｓ−ＮＨ２（リ−９９，９％の純１′、−）を得た。 保護されたＰＮ八がＢｏｒ−Ｔ　ｙｔ　（Ｃ１，Ｚ）修飾Ｍ　Ｂ　ｉＩＡ樹脂十 に約０．３０２リモル／ｇの置換で組み入れｌ：＋　ＩＩだ。、＋１−結合下λ ノ基のべ；ヤソピングはＢｏＣＧａｅｇ−ＯＨモノマーの取り込み萌にのみ刈施 された、１．００ｇ（乾燥を区）の前もって膨潤させ（Ｄ　ＣＭ中−夜）中和さ れたＢｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｃ／　Ｚ）　−Ｍ　Ｂ　）ｉ　Ａ樹脂で名代か開始され ｌ、−０Ｅ、／マーの取り込みｌｉ実施例３２および実施例゛１１のブｏＪ・ｊ −＝ル１．＆“った。カッブリンク“反応は定性１二〉ヒドリン試験（Ｋａｉｓ ｐｒ試験）（こ′よりモニターＪ５れた５、陽性ｒ；）Ｋａ　ｉ　ｓ　ｅ　ｒ試 験の場名、試験がビーズの着色を示さなくなるまでカーブリング反応を繰退（た 。最終的脱保護、支持体からの切断および精製１ジ“阜ｔｊ−：ｌニー従って実 施された。。 ラムのベンノルアルコール（］、０００ｍ１溶液にｔｏ、７５ｇ　（０，０６３ モル）の２−アミノ−６−クロロプリノを加λた。１混合物は１２０℃で１２時 間撹拌した。溶液を室温まで冷却して酢酸で中和し、５０１１００．２Ｎ水酸化 ナトリウムで１０回抽出した。集めた水酸化ナトリウム相を１００ｍ１のジブチ ルエーテルで洗浄し、酢酸で中和すると沈殿が生じた。溶液を０℃に冷却し、黄 色沈殿物を濾過して集めた。エタノールから再結晶して１４．２ｇ　（９２％） の標的化合物の純粋な白色結晶を得た。 ’Ｈ−ＮＭＲ（２５０Ｍ日＋、ＤＭＳＯ−ｄ６　）　ｄ　ｐａｌ　：８−Ｈ，７ ，９２；ベンジル芳香族、７．６０−７．４０；（０，０２０７モル）の２−ア ミノ−６−０−ベンジル−プリン、３０ｍ１のＤＭＦおよび２．９ｇ　（０，０ ２１モル）の炭酸カリウムの混合物を室温で撹拌した。ブロモ酢酸メチル（３， ２ｇ　；　１．　９ａ＋Ｉ　；　０．　０２０９モル）を滴下した。 ４時間後溶液を濾過し、減圧下溶媒を除去した（４１１−Ｈｔ４０℃）。残渣を ２回酢酸エチルから再結晶して３．７ｇ（５７％）の標的化合物を得た。 ’ＨＮＭＲ（２５０Ｍ）＋！、　ＤＭＳＯｄ６）　ｄ　ｐρ儒：８−４（，７， ９３；ベンジル芳香族、７．　４−７．　６゜２　ＮＨ２、６，６１：ベンジル ＣＨ２，５，０３；ＣＨ５，５９；ＯＣＨ３，３，７８゜ ２′ （２Ｎ−ｐ−１−ルエンスルホンアミドー６−０−ベンジルプリニル）メチルエ タノアート： ０、　５ｇ　（１，６ミリモル）の（２−アミノ−６−０−ベンジルプリニル） メチルエタノアートのメチレンクロリド（２５ｍｌ）溶液に０．５３ｇ　（１， ６２ミリモル）のｐ−トルエンスルホン酸無水物および０．２２ｇ　（１，６２ Ｅリモル）の炭酸カリウムを加えた。混合物は室温で撹拌した。混合物を濾過し 、溶媒を減圧上除去した（１５ｍｍ１１ｇ、４　Ｑ℃）。ノエチルエーテルを油 状残渣に加えた。得られた溶液を一夜撹拌すると標的化合物（０，Ｌ４５ｇ：５ ５％）が沈殿し、濾過により集められた。 ’ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｔ　：　ＤＭＳ　Ｏｄ６）　ｄ　９９ｍ　：８−８．８ ．９７：芳香族７．　２−７．　８；ベンジルＣＨ２，５，Ｏｆ　；ＣＨ４，２ ４：ＯＣＨ３，３，７３；ＣＨ３，２，４３゜２゛ （ｂ）　ＴＦＡおよびＨＦ中でのトンル保護塩基残基の安定性試験材料を標準脱 保護条件（ＴＦＡ−脱保護）およびＨＦによる最終的切断条件においた。生成物 は４μＲＣＭ８Ｘ１ＯＮｏｖａ　ｐａｃｋカラムおよび２ｍ１Ｚ分の流速で下記 の時間濃度勾配に従うＡ（０，１％ＴＦＡ水溶液）およびＢ（０，１％アセトニ トリル）の溶媒を用いるＨＰＬＣ分析を行った。 時間　％Ａ　％Ｂ 次の保持時間が観察された：　（ａ）化合物１：３０．７７分；　（ｂ）化合物 ２：２４．２２分、および（Ｃ）化合物３：１１．７５分。この分析により０６ −ベンジル基はＴＦＡおよびＨＦの両方で除去され、一方、トシル基はＴＦＡ中 では切断されないが標準切断条件下のＨＦ中では定量的に除去されることが示さ れた。 ５−ブロモウラシル（５，００ｇ；２６．２ミリモル）および炭酸カリウム（７ ，２３ｇ；５２．３ミリモル）をＤＭＦ　（７５ｍｌ）に懸濁した。５分以上か けてブロモ酢酸メチル（２，４８ｎ＋ｌ；２６．１ミリモル）を添加した。懸濁 液は室温で２時間撹拌した後濾過した。固形残渣は２度ＤＭＦで洗浄し、合併し た濾液は真空下蒸発乾固させた。残渣は表記化合物、ＤＭＦおよび未同定の不純 物を含む油状物であった。加水分解前に表記化合物を精製する必要はない。 ’Ｆ（ＮＭＲ（ＤＭＳ　Ｏｄ６．２５０ＭＨＩ　：８．５５（不純物）、訳　２ ７　（ＣＢｒ＝ＣＨＮ）；　８．０２　（不純物）：４．７６（不純物）；４． ７０（不純物）　；４．　６２（ＮＣＨＣ００ＣＨ３）；３．７８　（ＣＯＯＣ 且３）；２．９６（ＤＭＦ）；　２．８０　（ＤＭＦ）。 １３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６．２５０１ＪＩＬ＋）　；１６８、８　（Ｇｏ　Ｏ ＣＨ３）　：　Ｌ　７２．５　（ＣＨ＝　ＣＢ　ｒ　Ｃ０Ｎ）　：１６１．６　 （ＤＭＦ）；　１５１．９　（ＮＣＯＮ）；１４５．０（Ｃｏ−ＣＢｒ＝ＣＨＮ ）；９５．６　（ＣＯＣＢｒ＝ＣＦ（Ｎ）；５２．６（不純物）　＋５２．　５ 　（Ｏ且Ｆ（３）　；４９．　７　（不純物）；４８．８（Ｃ＝Ｏ，Ｃ０ＮＨ） ；１４３８ｖｓ　（θＣＨ，Ｃ）（３０）　；ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰属） ：　２６５／２６３　（Ｍ＋Ｈ）。 実施例１１０ （５−ブロモウラシル）酢酸 実施例１０９の粗生成物の油状物に水（３０ｍｌ）を加え、混合物は水酸化ナト リウム（２Ｍ、６０ｍ１）を加えることにより溶解された。０℃で１０分撹拌後 、ｐＨ２になるまで塩酸（４Ｍ、４５ｍ１）を加えると表記化合物が沈殿した。 ５０分後、固形残渣が濾過により単離され、一度冷水で洗浄して真空下シカベン ト上で乾燥させた。収量：２．４６ｇ　（３８％）Ｍ、ｐ、２５０〜２５１℃。 元素分析　Ｃ６Ｈ３ＢｒＮ２０４として、実測値（計算Ｍ）：Ｃ：２８．７８（ ２８，９４）；Ｈ：２．００　（２，０２）；Ｂｒ：３２．１８　（３２，０９ ）；Ｎ：　１１．２９　（１１，２５）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭ　Ｓ　Ｏｄ　６．２５０１１１１＋）　；１２．５５　（Ｌ Ｈ，ｓ、Ｃ００Ｈ）＋１１．９７　（ＬＨ，ｓ、ＮＨ）；８、３０　（１８，ｓ 、　Ｃ＝ＣＨ）　；　４．４９　（２Ｈ１ｓ、　ＮＣＨ２Ｃ００Ｈ）。 １３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳ　Ｏｄｓ　、２５０Ｍ１ｌ＋ｌ　：　１６９．４　（Ｃ ＯＯＨ）　：１４５．８　（ＣＯＣＢｒ＝ＣＨＮ）；　９４．６　（ＣＯＣＢｒ ＝ＣＨＮ）；４８、８　（Ｎ且Ｈ２Ｃ０ＯＨ）。 Ｕｖ（メタノール；　ｌ１１）；　２２６．２７８゜＋１１１ １Ｒ（ＫＢｒ；ｃｍ−’）；３１８７ｓ　（ＮＨ）；（ｄｃＨ，Ｂｒ−Ｃ＝Ｃ− Ｈ）。 ＦＡＢ　ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰属、相対強度）；　２５１／２４９　（Ｍ＋Ｈ，５ ）。 実施例１１１ Ｎ−（Ｂｏａ−アミノエチル）−Ｎ−（５−ブロモウラシル）メチレンカルボノ イルグリシンエチルエステル Ｂｏａ−アミノエチルグリシンエチルエステル（１８０ｇ；７．３０ミリモル） をＤＭＦ　（１０ｍｌ）に溶解した。Ｄｈｂ　ｔ−ＯＨ（１，３１ｇ；８．０３ ミリモル）を加えると沈殿が形成した。沈殿が溶解するまでＤＭＦが加えられた （２Ｘ１０ｍｌ）。実施例１１０の生成物（２、ＯＯｇ；８．０３ミリモル）を 沈殿を避けるため徐々に加えた。メチレンクロリド（３０ｍｌ）を加え、混合物 を０℃に冷却した後濾過した。沈殿物（Ｄ　ＣＵ）は２回メチレンクロリドで洗 浄した。 合併した濾液にさらにメチレンクロリド（ＬＯＯｍｌ）を加えた。混合物は半乾 和グネシウムで乾燥して濾過し、真空下蒸発乾固させた（約１５ｕ＋Ｈｇ、続い て約１ｆｆｉｍＪ）。残渣をメチレンクロリド（３５ｍｌ）に懸濁し、室温で４ ５分撹拌した後濾過した（沈殿はＤＣＵであった）。０℃にて濾液に石油エーテ ル（２容量）を篇下すると油状物が沈んだ。液をデカントして捨て残った油状物 はメチレンクロリド（２０〜５０ｍ１）に溶解した。石油エーテル（２容量）を 加えると沈殿が生した。この操作を不純物が除去されるまで５回繰返した。不純 物は１０％固形化が起こった。収量：　２．０３ｇ　（５８％）。Ｍ、９．８７ 〜９０℃。 元素分析ＩＣ１７Ｈ２５ＢｒＮ４０７として、実測値（計算値）＋Ｃ：４２．３ ３（４２，７８）；Ｈ：５．１５　（５，２８）；Ｂｒ：１７．２０　（１６， ７４）；Ｎ：１１．６９　（１１，７４）。 ’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｓ　、２５　（］Ｍｌｌ！、　ＪＨ＋）　；１．９３＆ １１．９２　（ＩＨ，ｓ、Ｃ＝ＯＮＨＣ＝Ｏ）；８．０９＆８、０７　（ＬＨ， ｓ、　Ｃ＝Ｃ一旦）　；　７．　ＯＯ＆６．８０　（１，Ｈ，ｔ、　ｂ。 ＢｏｃＮＨ）；４．８０＆４．６２　（２Ｈ，ｓ、ＮＣＨ２Ｃ０Ｎ）；４、３５ 　＆４．２４　（２Ｈｌｓ、ＮＣＨ２Ｃｏ　ＯＥ　ｔ）　；　４．２７−４．１ ５　（２Ｈ，ｍ’　ｓ、Ｃ００Ｃ旦２ＣＨ３０）；３．４７−３．４３（２Ｈ， ｍ’　ｓ、ＢｏｃＮＨＣＨ２Ｃ旦２Ｎ）＋　３．２８−３．２５＆３．１２−３ ．０９　（２Ｈ，ｍ’　ｓ、ＢｏｃＮＨＣＨ２ＣＨｒＮ）；１．４６＆１．４５ 　（９Ｈ，ｓ、　Ｂｕ）；１．２６＆１．３２　（３Ｈ１１６９，３＆１６９． ０　（ＢｕＯＣ＝Ｏ）；１６７．４＆１６７．１（ＣＯＯＥｔ）；１５９．８　 （Ｃ＝Ｃ−ｃＯＮ）、１５５．９（ＮＣＨ２見ＯＮ）　；　１５０．４　（Ｎ旦 ＯＮ）　、１４５．９（ＣＯＣＢｒ−ＣＨＮ）＋９４．５　（ＣＯＣＢｒ＝ＣＨ Ｎ）；７８．２（Ｍ　ｅ　３　Ｃ）　；　６１３　＆　６　ｏ、　７　（ＣＯＣ Ｈ２ＣＨ３）　：　４９．］、、　＆４８゜Ｏ（ＮＣＨＣ００Ｈ）　；　４８． ０＆４７、Ｏ（ＮＣＨ２ＣＯＮ）　。 ３８．６　（ＢｏｃＮＨＣＩ−（２見Ｈ２Ｎ）　；　３８，２（Ｂ　ｏ　ｃ　Ｎ 　ＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ）　；　２６　、３　（ＣｊＣＨ３）　３　）　：　１４　 、　ＩＩＲ（ＫＢｒ　；Ｃｍ’）；３２００ｍ５　ブロード（Ｎ）（）；１．６ ８ＶＳ、非常に幅広（Ｃ＝Ｃ，Ｃ０ＯＨ，Ｃ０ＮＨ）＋　１２５０ｓ（Ｃ−０， Ｃ００Ｅｔ）：１１７０ｓ　（Ｃ−０，Ｃｏｏ　Ｂｕ）；８５９ｍ　（ｄｃＥ（ 、Ｂｒ−Ｃ＝Ｃ−１（）　。 ＦＡ、Ｂ−ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰属、相対強度）；　４７９／４７７　（Ｍ＋Ｈ， ５）；４２３／４２１　（Ｍ＋２Ｈ−’Ｂｕ、８）；３７９／３７７　（Ｍ＋２ Ｈ−Ｂｏｃ、１００）；２３３／２３１　（Ｍ−バックボーン、２０）。 実施例１１１の生成物（１，９６ｇ；４．１１ミリモル）を加熱することにより メタノール（３０ｎｌ）に溶解させ、続いて０℃に冷却した。水酸化ナトリウム （２Ｍ、３０ｍ１）を加え、混合物を３０分撹拌した。ｐＨ’＝２．　０になる までＨＣｌを加えた（ＬＭ、７０ｍ１）。水相を酢酸エチルで抽出した（３Ｘ６ ５ｍｌ＋７Ｘ４０ｍｌ）。合併した酢酸エチル抽出液は飽和ＮａＣ１溶液（５０ ０ｍｌ）で洗浄した。酢酸エチル相は硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過後真空下 で蒸発乾固させた。収量：　１．７７ｇ　（９６％）。Ｍ、ｐ、９２〜９７℃。 元素分析。 Ｃ１ｓ　Ｈ２ｔ　Ｂ　ｒ　Ｎ　４０　ｙとして実測値（計算値）：Ｃ：４０．７ ９　（４０，１０）；Ｈ：５．１５　（４，７１）；Ｂｒ：１４．６４　（１７ ，７０）；Ｎｕｌｌ、３５（１２，４７）。 ’ＨＮＭＲ（ＤＭＳ　Ｏｄａ　、２５０ＭＨｚ　、　Ｊ　Ｈ＋）　；（２Ｈ，ｓ 、ＮＣＣ２０Ｃ０Ｎ）　；　４．３７＆４．２５　（２Ｈ，ｓ。 ＮＣ旦２ＣＯＯＨ）　：　３．４６−３−３９　（２Ｈ，ｍ’　ｓ。 ＢｏｃＮＨＣΣ１（２Ｃ旦２Ｎ）：３．２６−３．２３＆３．１２−３．０９（ ２Ｈ，ｍ’　ｓ、ＢｏｃＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ）；１．４６　（９Ｈ，ｓ。 （Ｃ＝Ｃ−ＣＯＮ）；１５５．８　（ＮＣＨ２ＣＯＮ）；　１５０，４（ＣＯＣ Ｂ　ｒ−ＣＨＮ）　：　７８．１　（Ｍ　ｅ　３　Ｃ）　；　４９−１　＆　４ ８０（ＮＣＨ２ＣＯＯＨ）　；　４７．７＆４７．８　（ＮＣ−８２ＣＯＮ）　 、３８、６　（Ｂ　ｏ　ｃ　ＮＨＣ２Ｃ８２Ｎ）　：　３　ｓ、　１（ＢＯＣＮ ＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ）　；　２８．２　（Ｃ（ＣＨ３）　３　）。 ＵＶ（メタ／−ル１　ｎａ＋）；２２６；２７８゜ｍ暑！ ＋Ｒ（ＫＢｒ　；＋ｍ−’）；　３１９４ｍ５、幅広（ＮＨ）。 １６８６ｖｓ、非常に幅広（ＣｍＯＣＯＯＨ，Ｃ０ＮＨ）；　１２５０ｓ８６３ ｍ（θＣＨ，Ｂ　ｒ−Ｃ＝Ｃ−Ｈ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰属、相対強度）；４４９／４５１　（Ｍ＋Ｈ，７０ ）；３４９／３５１　（Ｍ＋２Ｈ−ＢｏＣ，１００）；２３１／２３３（Ｍ−バ ックボーン、２０）。 ウラシル（１０，０ｇ；８９．２ミリモル）および炭酸カリウム（２４，７ｇ。 １７８ミリモル）をＤＭＦ　（２５０ｍ１）に懸濁した。５分以上刃１番すてブ ロモ酢酸メチル（８，４５ｍ１：８９．２Ｅリモル）を添加した。懸濁液（よ窒 素下室温で一夜撹拌した後濾過した。ＴＬＣ（１０％メタノールを含むメチレノ クロ著ノド）（よウラノルの不完全な変換を示した。固形残渣を２回ＤＭＦて洗 浄し、合併した濾液は真空上蒸発乾固させた。沈殿を水（６０ｎｌ）ｌこ懸濁し 、ｐＨ＝２までＨＣＡ’（２，５ｍｌ　；　４Ｍ）を加えた。懸濁液は０℃で３ ０分撹拌した後濾過した。沈殿した表記化合物は水で洗浄し、真空下シカベント 上で乾燥した。収量＋９．９１ｇ（６０％）。Ｍ、ｐ、１８２〜１８３℃。元素 分析　Ｃｓ　Ｈ８Ｎ２０４として実測値（計算値）：Ｃ：４５．３８　（４５， ６６）；Ｈ：４．２９　（４，３８）　。 Ｎ：１５．ｏｏ　（１５，２１）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｈ６，２５０Ｍｔｌ＋　、Ｊｔｌ＋）；１、　４７　 （ＬＨ，ｓ、Ｎ旦）　；　７．　６８　（ＩＨ，ｄ、Ｊ、、−、。−、＝７．　 ９゜ＣＨ”ＣＨＮ）　：　５．６９　（ＩＨ，ｄ、Ｊ、、−、ｃ−Ｈ＝７．９． 　Ｃ旦＝ＣＨＮ）　＋　４．　５９　（２Ｈ，ｓ、Ｎ　Ｃ）（２ＣＯＯＭ　ｅ） 　：　３．　７６　（３Ｈ。 （ＣＯＣＨ＝ＣＨＮ）；５２．５　（ＣＯＯＣＨ，）；４８．７ｖｓ（θＣＨ， ＣＨ３０）；１２４３ｖｓ　（Ｃ−０，ＣＯＯＭｅ）；７０１ｍ（θＣＨ，Ｈ− Ｃ＝Ｃ−Ｈ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰属）；　１８５　（Ｍ＋Ｈ）。 実施例１１３の生成物（８，７６ｇ；４７．５ミリモル）に水（９０ｎｌ）、続 いて水酸化ナトリウム（２Ｍ、４０ｍ１）を加えた。すべてのメチルエステルが 反応するまで混合物を加熱した（４０分）。０℃で１５分撹拌した後、Ｉ）Ｈ＝ ２０まで塩酸を加えた（４Ｍ、２５ｍ１）。表記化合物が沈殿し、２〜３時間後 に濾過した。沈殿は母液で１回および冷水で２回洗浄し、真空下シカベント上で 乾燥した。収量６．６６ｇ　（８２％）。Ｍ、ｐ、２８８〜２８９℃。元素分析 ；Ｃ６Ｈ６Ｎ２Ｏ４として実測値（計算値）：Ｃ：４２．１０　（４２，３６） ：旧３．４３　（３，５５）；Ｎ：１６．２５　（１６，４７）。 ’ＨＮＭＲ（ＤＭＳ　Ｏｄ　６．２５０ＭＨ＋　、　Ｊ　Ｈ＋）１３．１９　（ ＬＨ，ｓ、Ｃ００Ｈ）；　１１．４１　（ＬＨ，’ｓ、Ｎ旦）；７、６９　（Ｌ Ｈ，ｄ、　ＪＨ−ｃ：、Ｈ＝７．８．　ＪＨ−ｃ−〇−■、　＝２．０゜１００ ．９　（Ｃ０ＣＨ＝ＸＨＮ）；４８．７ＮＣＨ２ＣＯＯＨ０ＵＶ（メタ／−ル； 　ａｍ）；２４６；２６３゜ＩＲ（ＫＢｒ　；ｃｓ’）　；　３１２２ｓ　（Ｎ Ｈ）　；１７０３ｖｓ　（Ｃ＝Ｃ，Ｃ００Ｈ）；１６９８ｖｓ、１６９２ｖｓ（ Ｃ＝Ｃ，Ｃ０ＮＨ）；１２０５ｓ　（Ｃ−０，Ｃ００Ｈ）；６７６（θＣＨ，Ｈ −Ｃ＝Ｃ−Ｈ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰Ｉｔ）　；　１７１　（Ｍ＋Ｈ）。 モル）をＤＭＦ　（１０ｍｌ）に溶解した。Ｄｈｂｔ−ＯＨ（Ｌ　４６ｇ；８． ９３ミリモル）を加えると沈殿が生成した。すべてが溶解するまでＤＭＦを加え たに懸濁し、室温で３５分、および０℃で３０分撹拌した後濾過した。沈殿物メ チレンクロリド（２０ｍｌ）に溶解し、石油エーテル（２容量）を加えることに 得られた油状物はメチレンクロリド（２０ｍｌ）に溶解し、真空下蒸発乾固する と表記化合物の固形化を起こした。収量＋　１．７１ｇ　（５３％）。Ｍ、ｐ。 ６８．５〜７５．５℃。元素分析”ｌ？Ｈ２６Ｎ４０７として、実測値（計算値 ）；Ｃ＋５０．６１　（５１，２５）；Ｈ：６．４８　（６，５８）：Ｎ：１３ ．３３（１４，０６）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６．２５０ｉ１１１寡、　ＨＩＤ）　；１１．３６ 　（ＩＨ，ｓ、Ｃ＝ＱＮＨＣ＝Ｏ）；７．５１＆７．４７（ＩＨ，ｄ、Ｊ　＋６ ．１；Ｃ０ＣＨ＝Ｘ＝Ｈ）；７．ＯＯ＆Ｈ−Ｃ＝Ｃ−１４− ６，８０（ＩＨ，ｔ、ｂ、ＢｏｃＮ旦）　；５．　８３＆５．８６　（ＩＨ，ｄ 。 ３．４９−３．４６　（２Ｈ，ｍ’　ｓ、ＢｏｃＮＨＣＨ２Ｃ旦２ｎ）。 １．３９−１．２３　（３Ｈ，ｍ’　ｓ、Ｃ００ＣＨ２Ｃ旦３）。 Ｉ３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　２５０９Ｍ！（ｔｌ　；６゛１ １６９．４＆１６９．０　（ＢｕＯＣ＝Ｏ）；１６７．６＆１６７、　３（Ｂ　 ｏ　ｃ　ＮＨ旦Ｈ２ＣＨ２Ｎ）；２８．２　（Ｃ（ＣＨ３）　３）；　１４．Ｉ ＩＲ（ＫＢｒ　；ｃ＋ｅ−’）　；　３０５３ｍ　（ＮＨ）　；１６８５ｖｓ非 常に幅広（Ｃ＝Ｃ，Ｃ０ＯＨ，Ｃ０ＮＨ）；Ｌ２５３ｓ７１８ｗ　（ｄｃＨ，Ｃ −Ｃ−Ｃ−Ｈ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰属、相対強度）；　３９９　（Ｍ＋Ｈ，３５）；３ ４３　（Ｍ＋２８−　Ｂｕ、１００）；２９９　（Ｍ＋２Ｈ−Ｂｏｃ。 １００）；　１５３　（Ｍ−バックボーン、３０）。 値１：ｃ：４５．６８　（４８，６５１；Ｈ：６．０３　（５，９９）；Ｎ；ｉ 、６１４、７６　＆　４−５８　（２Ｈ，ｓ、　ＮＣＨ２ＣＯＮ）　；４、２６ １４０５　（２Ｈ１ｓ、Ｎ　ＣＨ２ＣＯＯ［（）　：３、４６　３−３９　（２ Ｈ９ｍ’　ｓ、　Ｂ　ｏ　ｃ　Ｎ　ＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ）　；（Ｃ＝Ｃ−ＣＯＮ） ；１５５．８　（ＮＣＨ２ＣＯＮ）；１５１．１（ＮＣＯＮ）；　１４６．４　 （ＣＯＣＨ＝Ｃ）ｆＮ）；　１００．８（ＣＯＣＨ＝ＣＨＮ）　；　７８．１（ Ｍｅ　３Ｃ）　：　４９−１　＆　４１−８（Ｂ　ｏ　ｃ　ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ ）　；　２８−２　（Ｃ（ＣＨ３）　３）。 ＵＶ　ＣＪ９／−ル；　ａｓ）；　２２６　；　２６４゜＠１！ ＩＲ（ＫＢｒ；ｃｍ’）；３１９０　（ＮＨ）；８８２ｗ（θＣ１（、Ｈ−Ｃ＝ Ｃ−Ｈ）。 ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　（帰属、相対強度）；３７１　（Ｍ＋Ｈ，２５）；２７ １　（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏａ、１００）。 はハイブリダイゼーン３ン研究のためには十分にきれいであった。５’　−（ｄ Ａ）１０および［（−０１０間のハイブリッドは６７．５℃のＴｍを持っていた 。 度“ＴＦＭＳＡ法が以下のように実施された；５ｍｌのＴＦＡ−ＤＭＳ−Ｍ−ク レゾール（２６・２．マ／ｙ／萱）を含む保存溶液（Ａ）およびＴＦＡ−ＴＦＭ ＳＡ（８：　２．マ／マ）を含む保存溶液（Ｂ）が調製された。次に以下の工程 が実施された。（３）反応容器中のＰＮＡ樹脂に１ｍｌの保存溶液（Ａ）を加え る。振とう２分間、脱溶媒なし；　（４）１０分毎に２００１１の保存溶液（Ｂ ）（氷／水で冷却）を４０分にわたって加え、さらに５０分振とうを続ける；　 （５）脱溶媒し１００％ＴＦＡで洗浄、５×１分、脱溶媒。 （ｂ）　“高酸度”ＴＦＭＳＡ−ＴＦＡＳ法による樹脂の切断樹脂から上記の脱 保護されたＰＮＡを切断するために、いわゆる°高酸度”ＴＦＭＳＡ法が以下の ように実施された：ｍ−クレゾールーＴＦＡ　（２：　８゜マ／マ）を含む保存 溶液（Ｃ）が調製されＩ；。次に以下の工程が実施された。（６）ｓｐｐｓ容器 中の脱保護されたＰＮＡ樹脂に１ｍｌの保存溶液（Ｃ）が加えられた。 振とうしながら、２分：　（７）１ｍｌの保存溶液（Ｂ）（氷／水で冷却）を３ ０分以上かけて２００ｊ／ずつ加え、さらに１５０分振とうを続ける。（５）反 応容器中の２ｍｌ溶液はフィルターを通してドライアイス／イソプロパツールで 冷却した２０ｍ１のジエチルエーテル内へ゛吹き出させる”。沈殿過程を完全に するため酸−エーテル混合物へ２００μＩの無水ピリジンを滴下する：　（８） ３０００＋ｐ−で５分間遠心分離：　（ａ）上澄液をデカントし、沈殿を３回冷 ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥して水に溶解させ凍結乾燥する。 フィールはｔ、（−（Ｃａｅｇ”、　−Ｌｙｓ−ＮＨ２の）ＩＦ切断から得られ たものとＧ はとんど同し２であったが、ただし、当然クロマトグラムの初期に溶出するピリ ジンのＴＦＭＳＡ塩に起因する追付のピークがあった。精製および同定は通常の 方法により実施された。 当業者は本発明の好適な実施態様に多くの変形および修正ができることを理解す るであろうし、そのような変形および修正は本発明の精神から離れることなくで きるであろう。従って１ｒ随する請求の範囲は本発明の真の精神および範囲にあ るすべてのそのような均等な変形を含むつもりである。 Ｈ −一エ２＝ンシ１．１（Ａ） 峯 ↓ −ム畝６９ −ｆ々、　ｉ。 ３２Ｐ−ｏｌｉｇｏ　１　１　１　１　１　１　２２２ｏ１ｉｇｏ２　−　−　 −　十　＋＋−−−ＡｃｒＴｌｏＬｙｓ　Ｏ＋　＋＋　０　＋　＋＋　Ｏ＋　＋ ＋ＦＩＧ、１ＩＡ ３２Ｐ−ｏｌｉｑｏ　１　１　１　１　１　１２２２ＦＩＧ、　Ｉ　ＩＢ Ｓ、７７−４７−ゼＯ，ｉ　ｌ　１００．１１　１０アミノエチルグ１ルン　β −アラニン し 〇 −こ勾Ｊ９ ＰＮ、Ａ　Ｉ：　Ｔ、、　ＰＮＡ　２＋　匂ゴ、　ＰＮＡ　３：　Ｔ、ＣＴ、（ ７４ＦＩＧ、　２０ 解離温度 −ム勾、２２ ＰＮＡ７ＤＮＡ　０　０．００６０．０２０．０６０．２０．６ＰＮＡ凛的 ＢａｍＨＩ　ＢａｍＨｌ ＣＴ−ＤＮＡ１０１ｉｇｏ　０　０３１　３　１０３０　ｔｏｏ　３００化合物 −りで、２７ 手　続　補　正　書 平成６年　３月／ｇ幅、）

Claims (33)

【特許請求の範囲】
1. １．主鎖中に位置するアザ窒素原子に別個に結合した複数のリガンドを保有する ポリアミド主鎖からなる化合物であって、それらのリガンドのうち少なくとも１ 個は天然核酸塩基、非天然核酸塩基、ＤＮＡ挿入体、または核酸塩基結合性基で ある化合物。
2. ２．アザ窒素原子が主鎖中において４−６個の介在原子により互いに分離されて いる、請求の範囲第１項に記載の化合物。
3. ３．下記構造式を有する化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中： ｎは少なくとも２であり； Ｌ１−Ｌｎはそれぞれ、水素、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルカノイル、天然 核酸塩基、非天然核酸塩基、芳香族部分、ＤＮＡ挿入体、核酸塩基結合性基、複 素環式部分、およびリポーターリガンドよりなる群から別個に選ばれ、少なくと も１個のＬ１−Ｌｎは天然核酸塩基、非天然核酸塩基、ＤＮＡ挿入体、または核 酸塩基結合性基であり； Ａ１−Ａｎはそれぞれ、単結合、メチレン基、または次式の基であり：▲数式、 化学式、表等があります▼もしくは▲数式、化学式、表等があります▼［これら の式中： ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ３、ＣＨ２またはＣ（ＣＨ３）２であり；Ｙは単結合、 Ｏ、ＳまたはＮＲ４であり；ｐおよびｑはそれぞれゼロまたは１−５の整数であ り、ｐ＋ｑの和は１０を越えず； ｒおよびｓはそれぞれゼロまたは１−５の整数であり、ｒ＋ｓの和は１０を越え ず； Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、水素、ヒドロキシ−またはアルコキシ−またはアル キルチオ−置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ、アルコ キシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンよりなる群から別個に選ばれ；そし て Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ−また はアルコキシ−またはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒド ロキシ、アルコキシ、アルキルチオおよびアミノよりなる群から別個に選ばれる ］； Ｂ１−ＢｎはそれぞれＮまたはＲ３Ｎ＋であり、ここでＲ３は上記に定めたもの であり； Ｃ１−ＣｎはそれぞれＣＲ６Ｒ７、ＣＨＲ６ＣＨＲ７またはＣＲ６Ｒ７ＣＨ２で あり、ここでＲ６は水素であり、かつＲ７は天然のα−アミノ酸の側鎖よりなる 群から選ばれるか、またはＲ６およびＲ７は、水素、（Ｃ２−Ｃ６）アルキル、 アリール、アルアルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコ キシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルチオ、ＮＲ３Ｒ４およびＳＲ５［ここでＲ３およ びＲ４は上記に定めたものであり、Ｒ５は水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒド ロキシ−、アルコキシ−またはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキ ルである］よりなる群から別個に選ばれるか、またはＲ６とＲ７は一緒になって 脂環式もしくは複素環式の系を完成し； Ｄ１−ＤｎはそれぞれＣＲ６Ｒ７、ＣＨ２ＣＲ６Ｒ７またはＣＨＲ６ＣＨＲ７で あり、ここでＲ６およびＲ７は上記に定めたものであり；Ｇ１−Ｇｎ−１はそれ ぞれ、いずれの向きであってもよい−ＮＲ３ＣＯ−、−ＮＲ３ＣＳ−、−ＮＲ３ ＳＯ−または−ＮＲ３ＳＯ７−であり、ここでＲ３は上記に定めたものであり； Ｑは−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯＮＲ′Ｒ′′、−ＳＯ３Ｈもしくは−ＳＯ２ＮＲ′Ｒ′ ′、または−ＣＯ７Ｈもしくは−ＳＯ３Ｈの活性化された誘導体であり；そして Ｉは−ＮＨＲ′′′Ｒ′′′′または−ＮＨＲ′′′Ｃ（Ｏ）Ｒ′′′′であり 、ここでＲ′、Ｒ′′、Ｒ′′′およびＲ′′′′は、水素、アルキル、アミノ 保護基、リポーターリガント、挿入体、キレーター、ペプチド、蛋白質、炭水化 物、脂質、ステロイド、オリゴヌクレオチド、ならびに可溶性および不溶性ポリ マーよりなる群から別個に選ばれる。
4. ４．下記構造式を有する、請求の範囲第３項に記載の化合物：▲数式、化学式、 表等があります▼ 式中： Ｌはそれぞれ、水素、フェニル、複素環式部分、天然核酸塩基、非天然核酸塩基 よりなる群から別個に選ばれ： Ｒ７′はそれぞれ、水素、および天然のα−アミノ酸の側鎖よりなる群から別個 に選ばれ； ｎけ１−６０の整数であり； ｋおよびｍはそれぞれ別個にゼロまたは１であり；１はそれぞれゼロまたは１− ５の整数であり；ＲｈはＯＨ、ＮＨ２または−ＮＨＬｙｓＮＨ２であり；そして Ｒ１はＨまたはＣＯＣＨ３である。
5. ５．下記構造式を有する、請求の範囲第４項に記載の化合物：▲数式、化学式、 表等があります▼ 式中： しはそれぞれ、核酸塩基チミン、アデニン、シトシン、グアニンおよびウラシル よりなる群から別個に選ばれ； Ｒ７′はそれぞれ水素であり；そして ｎは１−３０の整数である。
6. ６．下記構造式のいずれかを有する化合物：▲数式、化学式、表等があります▼ または▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等がありま す▼式中： Ｌは水素、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルカノイル、天然核酸塩基、非天然核 酸塩基、芳香族部分、ＤＮＡ挿人体、核酸塩基結合性基、複素環式部分、および リポーターリガンドよりなる群から選ばれ、その際：少なくとも１個のＬ１−Ｌ ｎは天然核酸塩基、非天然核酸塩基、ＤＮＡ挿入体、または核酸塩基結合性基で あり；そしてアミノ基は所望によりアミノ保護基により保護されており；Ａは単 結合または次式の基であり： ▲数式、化学式、表等があります▼もしくは▲数式、化学式、表等があります▼ しこれらの式中： ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ３、ＣＨ２またはＣ（ＣＨ３）２であり；Ｙは革結合、 Ｏ、ＳまたはＮＲ４であり；ｐおよびｑはそれぞれゼロまたは１−５の整数であ り、ｐ＋ｑの和は１０を越えず； ｒおよびｓはそれぞれゼロまたは１−５の整数であり、ｒ＋ｓの和は１０を越え ず； Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ−また はアルコキシ−またはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒド ロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンよりなる群から別個 に選ばれ；そして Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ−また はアルコキシ−またはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒド ロキシ、アルコキシ、アルキルチオおよびアミノよりなる群から別個に選ばれる ］； ＢはＮまたはＲ３Ｎ＋であり、ここでＲ３は上記に定めたものであり；Ｃはそれ ぞれＣＲ６Ｒ７、ＣＨＲ６ＣＨＲ７またはＣＲ６Ｒ７ＣＨ２であり、ここでＲ６ は水素であり、かつＲ７は天然のα−アミノ酸の側鎖よりなる群から選ばれるか 、またはＲ６およびＲ７は、水素、（Ｃ２−Ｃ６）アルキル、アリール、アルア ルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ ６）アルキルチオ、ＮＲ３Ｒ４およびＳＲ５［ここでＲ３およびＲ４は上記に定 めたものであり、Ｒ５は水素、または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ−、 アルコキシ−もしくはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである ］よりなる群から別個に選ばれるか、またはＲ６とＲ７は一緒になって脂環式も しくは複素環式の系を完成し； ＤはそれぞれＣＲ６Ｒ７、ＣＨ２ＣＲ６Ｒ７またはＣＨＲ６ＣＨＲ７であり、こ こでＲ６およびＲ７は上記に定めたものであり；Ｅはそれぞれ−ＣＯＯＨ、ＣＳ ＯＨ、ＳＯＯＨ、ＳＯ２ＯＨまたはそれらの活性化もしくは保護された誘導体で あり；そしてＦはそれぞれＮＨＲ３またはＮＰｇＲ３であり、これらにおいてＲ ３は前記に定めたものであり、Ｐｇはアミノ保護基である。
7. ７．下記構造式を有する、請求の範囲第６項に記載の化合物：▲数式、化学式、 表等があります▼ 式中： Ｌはそれぞれ、水素、フェニル、複素環式部分、天然核酸塩基、非天然核酸塩基 よりなる群から別個に選ばれ； Ｒ７′はそれぞれ、水素、および天然のα−アミノ酸の側鎖よりなる群から別個 に選ばれ；そして ｋ、ｌおよびｍはそれぞれ別個にゼロまたは１−５の整数である。
8. ８．下記構造式を有する、請求の範囲第７項に記載の化合物：▲数式、化学式、 表等があります▼ 式中： Ｌは核酸塩基チミン、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、５−メチルシ トシン、６−チオグアニンまたは５−ブロモウラシル、およびそれらの保護され た誘導体よりなる群から選ばれ； Ｒ７′は水素であり； ＥはＣＯＯＨまたはその活性化もしくは保護された誘導体であり；そしてＦはＮ Ｈ２またはＮＨＰｇであり、ここでＰｇはアミノ保護基である。
9. ９．下記構造式を有する化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中： Ｌはそれぞれ、水素、フェニル、複素環式部分、天然核酸塩基、非天然核酸塩基 よりなる群から別個に選ばれ： Ｒ７′はそれぞれ、水素、および天然のα−アミノ酸の側鎖よりなる群から別個 に選ばれ； ｎは１−６０の整数であり； ｋ、ｌおよびｍはそれぞれ別個にゼロまたは１−５の整数であり；ＲｈはＯＨ、 ＮＨｚまたは−ＮＨＬｙｓＮＨ２であり；そしてＲ１はＨまたはＣＯＣＨ３であ る。
10. １０．下記工程を含む、請求の範囲第１項に記載の化合物の製造方法：Ａ）ポリ マー系支持体を用意し、該ポリマーはアミノ酸との固定用結合を形成しうる化学 基により官能化されており；Ｂ）固定用結合を介して該ポリマーを第１アミノ酸 と結合させ、該第１アミノ酸は構造式（ＩＶ）を有するものであり：▲数式、化 学式、表等があります▼（ＩＶ）｛式中： Ｌは天然核酸塩基、非天然核酸塩基、芳香族部分、ＤＮＡ挿入体、核酸塩基結合 性基、複素環式部分、およびリポーターリガンドよりなる群から選ばれ、これら においてアミノ基は所望によりアミノ保護基により保護されており；Ａは単結合 または次式の基であり： ▲数式、化学式、表等があります▼もしくは▲数式、化学式、表等があります▼ ［これらの式中： ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ３、ＣＨ２またはＣ（ＣＨ３）２であり：Ｙは単結合、 Ｏ、ＳまたはＮＲ４であり；ｐおよびｑはゼロまたは１−５の整数であり、ｐ＋ ｑの和は１０を越えず；ｒおよびｓはゼロまたは１−５の整数であり、ｒ＋ｓの 和は１０を越えず；Ｒ１およびＲ２は、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロ キシ−またはアルコキシ−またはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ４）アル キル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンよりなる 群から別個に選ばれ；そして Ｒ３およびＲ４は、水素、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ−またはアルコ キシ−またはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、ヒドロキシ、 アルコキシ、アルキルチオおよびアミノよりなる群から別個に選ばれる］；Ｂは ＮまたはＲ３Ｎ＋であり、ここでＲ３は上記に定めたものであり；ＣはＣＲ６Ｒ ７、ＣＨＲ６ＣＨＲ７またはＣＲ６Ｒ７ＣＨ２であり、ここでＲ６は水素であり 、かつＲ７は天然のα−アミノ酸の側鎖よりなる群から選ばれるか、またはＲ６ およびＲ７は、水素、（Ｃ２−Ｃ６）アルキル、アリール、アルアルキル、ヘテ ロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル チオ、ＮＲ３Ｒ４およびＳＲ５［ここでＲ３およびＲ４は上記に定めたものであ り、Ｒ５は水素、または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヒドロキシ−、アルコキシ− もしくはアルキルチオ−置換された（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである］よりなる群 から別個に選ばれるか、またはＲ６とＲ７は一緒になって脂環式もしくは複素環 式の系を完成し；ＤはＣＲ６Ｒ７、ＣＨ２ＣＲ６Ｒ７またはＣＨＲ６ＣＨＲ７で あり、ここでＲ６およびＲ７は上記に定めたものであり； ＥはＣＯＯＨまたはその活性化もしくは保護された誘導体であり；そしてＦはＮ ＰｇＲ３であり、ここでＲ３は前記に定めたものであり、Ｐｇはアミノ保護基で ある｝； Ｃ）結合した第１アミノ酸からアミノ保護基を除去して遊離アミノ基を生成させ ；そして Ｄ）この遊離アミノ基を式（ＩＶ）の第２アミノ酸と反応させて、ペプチド鎖を 形成する。
11. １１．さらに下記の工程を含む、請求の範囲第１０項に記載の方法：Ｅ）第２ア ミノ酸からアミノ保護基を除去して、ペプチド鎖上に末端遊離アミノ基を生成さ せ；そして Ｆ）ペプチド鎖上の遊離アミノ基をさらに式（ＩＶ）のアミノ酸と反応させて、 ペプチド鎖を延長する。
12. １２．工程ＥおよびＦが多数回実施される、請求の範囲第１１項に記載の方法。
13. １３．さらに、ペプチド鎖のアミノ酸部分に残存する少なくとも１個の保護基を 除去することを含む、請求の範囲第１１項に記載の方法。
14. １４．さらに、ペプチド鎖を実質的に分解することなく固定用結合を開裂させる ことを含む、請求の範囲第１０項に記載の方法。
15. １５．ポリマー系支持体がポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリカ、複合材 料、木綿、またはそれらの誘導体を含有する、請求の範囲第１０項に記載の方法 。
16. １６．固定用結合を形成しうる化学基が、クロロ−、プロモーおよびヨード−直 換アルキル、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキル、 アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキル、ヒドロキシ−置換アルキル、 またはポリペプチドを実質的に分解することな（開裂しうるスペーサー基を有す るそれらの誘導体である、請求の範囲第１０項に記載の方法。
17. １７．クロロ−置換アルキルがクロロメチルであり、アミノ−置換アルキルがア ミノメチルであり、アミノ−およびアルキル−置換アリールがα−アミノベンジ ルであり、アミノ−およびアルキルアリール−置換アルキルがα−アミノ−３− およびα−アミノ−４−メチルベンジルよりなる群から選ばれ、ヒドロキシ−置 換アルキルがヒドロキシメチルである、請求の範囲第１６項に記載の方法。
18. １８．化学基が、アミノ−置換アルキル、アミノ−およびアリール−置換アルキ ル、ならびにアミノ−およびアルキルアリール−置換アルキルより選ばれるアミ ノ含有部分から誘導され：そして 化学基が、４−（ハロアルキル）アリール−低級アルカン酸、Ｂｏｃ−アミノァ シル−４−（オキシメチル）アリール−低級アルカン酸、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｐ−アシ ルベンゾヒドリルアミン、Ｎ−Ｂｏｃ−４′−（低級アルキル）−ｐ−アシルベ ンゾヒドリルアミン、Ｎ−Ｂｏｃ−４′−（低級アルコキシ）−ｐ−アシルベン ゾヒトリルアミン、および４−ヒドロキシメチルフェノキシ−低級アルカン酸よ りなる群から誘導されるスペーサー基を含有する、請求の範囲第１６項に記載の 方法。
19. １９．二本鎖ポリヌクレオチドの配列特異性認識法であって、天然ＲＮＡと異な り、かつ該ポリヌクレオチドの一方の鎖と結合し、これにより他方の鎖と置換す る化合物に、該ポリヌクレオチドを接触させることよりなる方法。
20. ２０．化合物が均質または不均質な主鎖からなるオリゴマーであり、これにポリ ヌクレオチド鎖中の少なくとも１個の天然核酸塩基に水素結合により別個に結合 する天然核酸塩基、非天然核酸塩基、または他のリガンドが結合したものである 、請求の範囲第１９項に記載の方法。
21. ２１．化合物が請求の範囲第１項に記載の化合物である、請求の範囲第２０項に 記載の方法。
22. ２２．化合物が請求の範囲第４項に記載の化合物である、請求の範囲第２０項に 記載の方法。
23. ２３．生物の遺伝子の発現を調節する方法であって、該遺伝子から誘導されるＤ ＮＡまたはＲＮＡに特異的に結合する請求の範囲第１項に記載の化合物を該生物 に投与することよりなる方法。
24. ２４．化合物が請求の範囲第１項に記載の化合物である、請求の範囲第２３項に 記載の方法。
25. ２５．化合物が請求の範囲第４項に記載の化合物である、請求の範囲第２３項に 記載の方法。
26. ２６．調節が該遺伝子の転写を阻害することを含む、請求の範囲第２３項に記載 の方法。
27. ２７．調節が該遺伝子の複製を阻害することを含む、請求の範囲第２３項に記載 の方法。
28. ２８．生物における望ましくない蛋白質産生に伴う状態を処置する方法であって 、該蛋白質産生を制御する遺伝子から誘導されるＤＮＡまたはＲＮＡに特異的に 結合する、有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物に、該生物を接触させるこ とよりなる方法。
29. ２９．化合物が請求の範囲第１項に記載の化合物である、請求の範囲第２８項に 記載の方法。
30. ３０．化合物が請求の範囲第４項に記載の化合物である、請求の範囲第２８項に 記載の方法。
31. ３１．生物の細胞中におけるＤＮＡまたはＲＮＡの分解を誘発する方法であって 、該ＤＮＡまたはＲＮＡに特異的に結合する請求の範囲第１項に記載の化合物を 該生物に投与することよりなる方法。
32. ３２．細胞またはウイルスを死滅させる方法であって、該細胞またはウイルスの ゲノムの一部に特異的に結合する請求の範囲第１項に記載の化合物に、該細胞ま たはウイルスを接触させることよりなる方法。
33. ３３．請求の範囲第１項に記載の化合物、および少なくとも１種の薬剤学的に有 効なキャリヤー、結合剤、増粘剤、希釈剤、緩衝剤、防腐剤または界面活性剤を 含む薬剤組成物。