KR20210049106A - 항-siglec-5 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

항-siglec-5 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 일반적으로 Siglec-5 단백질, 예를 들어, 인간 Siglec-5에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어, 단클론성, 키메라, 인간화된 항체, 항체 단편 등을 포함하는 조성물, 및 이들이 필요한 개체에서 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료함에 있어서 이러한 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

항-SIGLEC-5 항체 및 이의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 7월 27일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/711,405호의 유익을 주장하며, 이 기초출원은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
ASCII 텍스트 파일 상의 서열목록의 제출
ASCII 텍스트 파일 상의 다음의 제출 내용은 그의 전문이 본 명세서에 참조에 의해 포함된다: 서열목록의 컴퓨터 판독 가능한 형태(CRF)(파일명: 735022002740SEQLIST.TXT, 저장 날짜: 2019년 7월 25일, 용량: 106KB).
기술분야
본 개시내용은 항-Siglec-5 항체 및 이러한 항체의 치료적 용도에 관한 것이다.
시알산-결합 Ig-유사 렉틴-5(Sialic acid-binding Ig-like lectin-5: Siglec-5)은 성숙 골수성 세포, 예컨대 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 호중구 및 미세아교세포뿐만 아니라 림프구 세포를 포함하는 면역 및 조혈 세포 상에서 발현되는 1형, 면역글로불린-유사, 막관통 단백질이다(Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; Macauley et al. (2014) Nat. Rev. Imm. 14: 653-666; Cornish et al (1998) Blood 92(6): 2123-2132; Yamanaka et al. (2009) Glycobiology. 19:841-846). Siglec-5는 당단백질 및 당지질의 시알산 잔기에 결합하는 렉틴의 Siglec 패밀리의 구성원이다. Siglec 단백질에 대한 하나의 잠재적 결합 표적은 강글리오사이드이며; 이는 시알산화된 글리칸에 연결된 세라마이드로 이루어진 당지질이다. 대부분의 강글리오사이드는 통상적인 락토-세라마이드 코어 및 하나 이상의 시알산 잔기를 공유한다. Siglec 리간드의 다양성은 분지 또는 말단의 상이한 결합에서 다른 중성 당 및 시알산의 첨가, 및 시알산 그 자체의 변형에 의해 생성된다.
시알산-결합 부위를 포함하는 아미노-말단 V-세트 도메인을 포함하는 2 내지 17개의 세포외 Ig 도메인으로 구성된 14종의 Siglec 단백질이 인간에서 동정되었고, 9종이 마우스에서 동정되었다. 시알산-결합 영역은 모든 Siglec에서 고도로 보존된 2개의 방향족 잔기 및 하나의 알기닌 모티프를 포함하는 V-세트 Ig-유사 도메인 상에 위치된다(Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82; May et al. (1998) Mol. Cell 1:719-728; Crocker et al. (1999) Biochem J. 341:355-361; 및 Crocker and Varki (2001) Trends Immunol. 2:337-342). 시알산화된 리간드에 대한 결합 부위는 결합된 리간드가 있는 그리고 결합된 리간드가 없는 결정 구조에 의해 맵핑되었다(Attrill et al., (2006) J. Biol. Chem. 281 32774-32783; Alphey et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:5 3372-3377; Varki et al., Glycobiology , 16 pp. 1R-27R, May et al. (1998) Mol. Cell 1:5:719-728, Zhuravleva et al (2008) J. Mol. Biol. 375:437-447). 세포막은 시알산이 풍부하기 때문에, Siglec에 의한 리간드 결합은 시스로 그리고 트랜스로 생기는데, 이들 둘 다 그들의 기능적 특성에 영향을 미칠 수 있다. 각각의 Siglec은 포유류 세포의 표면 상에서 발견되는 다양한 유형의 시알산화된 글리칸에 결합을 위한 별개의 선호도를 가진다(Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266;). 대부분의 Siglec는 그들의 세포질 꼬리에서 하나 이상의 면역수용체 타이로신-기반 저해 모티프(ITIM) 서열을 포함하는데, 이는 그들을 타이로신 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원을 통해 저해 수용체로서 그리고 면역 기능의 음성 조절자로서 작용하는 것을 가능하게 한다(Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; 및 Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82). 특정 Siglec은 그들의 세포질 꼬리에서 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프(ITAM) 서열을 포함하는데, 이는 그들을 비장 타이로신 키나제(Syk)의 예측된 동원을 통해 면역 기능의 활성화 수용체 및 양성 조절제로서 작용하게 한다(Macauley SM. et al., (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666). Siglec 단백질 패밀리는 자가면역, 감염에 대한 감수성, 림프종을 포함하는 다양한 유형의 암, 백혈병 및 급성 골수성 백혈병, 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 신경퇴행성 장애, 천식, 알레르기, 패혈증, 만성 폐쇄성 폐질환, 이식편대 숙주병, 호산구 증가증 및 골다공증을 포함하는 다양한 인간 질환과 관련된다(Macauley SM. et al., (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666).
Siglec-5는 세포외 N-말단의 Ig-유사(면역글로불린-유사) V-형 도메인, Ig-유사 C2-세트 도메인뿐만 아니라 이의 세포질 도메인에서의 공통 ITIM 모티프를 포함한다. COS 세포에서의 Siglec-5의 발현은 말단의 α2-3 또는 α2-6 시알산 결합에 의해 매개되는 적혈구에 의해 매개된 적혈구의 시알산-의존적 결합을 입증하였다(Cornish et al. (1998) Blood 92 (6): 2123-2132). Siglec-5의 N-말단의 V-세트 Ig-유사 도메인 내의 리간드 결합은 고도로 가변적인 GG' 링커 및 CC' 루프 영역에 맵핑되었다. 결합된 시알산 리간드가 있고 결합된 리간드가 없는 제1 Ig-C 세트 도메인 및 Ig-V의 결정 구조를 이용하여 리간드 상호작용이 연구되었다(Zhuravleva et al. (2008) J. Mol. Biol. 375; 437-447). 그룹 B 스트렙토코커스(Streptococcus)는 세포벽-고정 β 단백질에 의해 매개되는 Sia-독립적 방식으로 인간 호중구 상의 Siglec-5에 결합하는 것으로 나타났다(Carlin et al (2009) J. Exp. Med. 206(8)1691-1699). Siglec-5에 대한 GBS β 단백질 결합은 SHP 포스파타제의 보충을 초래하고, 식세포작용, 산화적 폭발(oxidative burst), 및 세포외 트랩 생산과 같은 작용을 저해한다(Carlin et al (2009) J. Exp. Med. 206(8)1691-1699).
Siglec-5는 타이로신 포스파타제 SHP-1 및 SHP-2를 보충하여, 저해 수용체로서의 작용을 매개하는 타이로신 키나제에 의한 Tyr-520 및 Tyr-544의 인산화를 겪는다(Avril et al., (2005) J. Biol. Chem. 280: 19843-19851). ITIM 도메인에서 근위의 Tyr-520 상의 인산화 후에, Siglec-5는 SHP-2/PTPN11 및 SHP-1/PTPN6에 결합한다. Siglec-5는 KIR(살해 Ig-유사 수용체)로 불리는 저해 수용체 부류를 특성규명하기 위해 이전에 사용된 랫트 호염기성 백혈병 세포에서 FcεRI-매개 활성을 저해하는 것으로 나타났다(Avril et al., (2005) J. Biol. Chem. 280: 19843-19851). 포스파타제 활성은 ITAM 모티프, 패턴 인식 수용체, Toll-유사 수용체 및 손상-관련 분자 패턴(DAMP) 수용체를 포함하는 것을 비롯한 인접한 활성화 수용체 상의 신호전달 분자의 탈인산화를 통해 부분적으로, 감소된 세포내 칼슘 동원(mobilization), 및 다수의 단백질 상에서 감소된 타이로신 인산화(Ulyanova, T., et al., (1999) Eur J lmmunol 29, 3440-3449; Paul, S.P., et al., (2000). Blood 96, 483-490)뿐만 아니라 신호 형질도입 및 면역반응의 차단과 관련된다. Siglec-5의 일부 저해 작용은 타이로신 인산화의 부재 하에 일어나는 것으로 나타났다. Siglec-5는 저해 신호전달에 충분할 수 있는 포스포타이로신 독립적 방식에서 SHP-1 또는 SHP-2를 활성화시킬 수 있다(Avril et al., (2005) J. Biol. Chem. 280: 19843-19851).
Siglec 리간드 또는 항체-매개 수용체 결찰은 다수의 Siglec 패밀리 구성원의 내포작용을 유도하는데, 이는 이 그룹의 수용체의 일반적 생물학적 특징임을 시사한다(Tateno et al., (2007) Mol. Cell. Bio. 27(16): 5699-5710, Macauley SM. et al., (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666). 리간드-유도 수용체 내포작용 및 후속적 분해의 유사한 메커니즘은 타이로신 키나제 수용체(Monsonego-Oran et al., (2002) Febs letters 528, 83-89; 및 Fasen et al., (2008) Cell & Molecular Biology 9. 251-266)뿐만 아니라 스테로이드 수용체(Callige et al., (2005) Mol. Cell. Biol. 25. 4349-4358; 및 Pollenz et al., (2006) Chemico-Biological Interactions. 164. 49-59)에 대해 보고되었다.
Siglec-5에 대한 항체는, 예를 들어, WO2007120815, 미국 특허 공개 제20070244038호, WO2002008257, 문헌[Erickson-Miller et al. (2003) Exp. Hemat. 31: 382-388, 및 Cornish et al (1998) Blood 92(6): 2123-2132]에 기재되어 있다.
따라서, 목적으로 하지 않는 Siglec-5 활성과 관련된 하나 이상의 질환, 장애 및 병태를 치료하기 위해 세포 표면 상에서 Siglec-5와 특이적으로 결합하고 Siglec-5 발현을 감소시키고/시키거나, 하나 이상의 Siglec-5 활성을 감소시키는 치료적 항체에 대한 필요가 있다.
특허, 특허 출원 및 간행물을 포함하는 본 명세서에 인용된 모든 참고문헌은 본 명세서에 그의 전문이 참고로 포함된다.
본 개시내용은 일반적으로 항-Siglec-5 항체, 및 이러한 항-Siglec-5 항체를 이용하는 방법에 관한 것이다. 본 명세서에 제공된 방법은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 고형암 및 혈액암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, Siglec-5 및/또는Siglec-5 리간드를 발현시키는 종양, 갑상선 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마(Trypanosome) 감염, 크루지(Cruzi) 감염, 슈도모나스 에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 감염, 리슈마니아 도노반(Leishmania donovani) 감염, 그룹 B 스트렙토코커스(Streptococcus) 감염, 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni) 감염, 네이세리아 메닌기디티스(Neisseria meningiditis) 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenza)를 예방하거나, 이들의 위험을 감소시키거나, 또는 이들을 갖는 개체를 치료함에 있어서의 용도를 발견한다. 본 명세서에 제공된 방법은 또한 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식을 유도하거나 또는 촉진이 필요한 개체에서 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식을 유도하거나 또는 촉진시킴에 있어서의 용도를 발견한다. 본 명세서에 제공된 방법은 활성, 작용성, 또는 조절 T 세포의 생존, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 호중구, 자연살해(NK) 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 호중구, NK 세포, 급성 골수성 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포, 또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포를 감소가 필요한 개체에서 이들을 감소시킴에 있어서의 용도를 추가로 발견한다. 본 명세서에 제공된 방법은 또한 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 것에서의 용도를 발견한다.
본 개시내용의 특정 양상은 세포, 예컨대 인간 원발성 면역 세포 및 Siglec-5-발현 세포주 상에서 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시킬 수 있으며, Siglec-5에 대한 Siglec-5 리간드의 결합을 저해 또는 차단하고, Siglec-14와 교차 반응하지 않으며, 활성 산소종(reactive oxygen species: ROS) 생산을 유도할 수 있고, 호중구 세포외 트랩(neutrophil extracellular trap: NET) 형성을 유도할 수 있고/있거나, 대식세포에서의 식세포작용 활성을 증가시키는 항-Siglec-5 항체의 식별에 적어도 부분적으로 기반한다.
따라서, 본 개시내용의 특정 양상은 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이되, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시킨다. 본 개시내용의 다른 양상은 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이되, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해한다. 본 개시내용의 다른 양상은 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이되, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고, Siglec-14에 결합하지 않는다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시키고, Siglec-5의 세포 내 수준을 감소시키며, Siglec-5의 총 수준을 감소시키거나, 또는 이들의 임의의 조합이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 분해, Siglec-5 절단, Siglec-5 내재화, Siglec-5 쉐딩(shedding), Siglec-5 발현의 하향조절, 또는 이들의 임의의 조합을 유도한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 시험관내 Siglec-5의 세포 수준을 감소시킨다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 생체내 Siglec-5의 세포 수준을 감소시킨다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 호중구에서 활성 산소종(ROS) 생산을 유도한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 호중구에서 호중구 세포외 트랩(NET) 형성을 유도한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 호중구에서 호중구 활성화를 유도한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 대식세포에서 식세포작용 활성을 증가시킨다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 세포 표면 수준을 증가시킨다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 세포 표면 수준을 증가시킨다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 선형 Siglec-5 에피토프에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 불연속적 또는 입체구조적 Siglec-5 에피토프에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 경쟁한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 동일 또는 중복되는 에피토프에 결합한다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278 내의 하나 이상의 아미노산 잔기 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 LSWFQGSPALN(서열번호221) 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 서열번호 1의 아미노산 잔기 226 내지 244 내의 하나 이상의 아미노산 잔기 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 226 내지 244에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 QTITIFRNGIALEILQNTS(서열번호 220) 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238 내의 하나 이상의 아미노산 잔기 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238에 대응하는 아미노산 잔기에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 ITIFRNGIALE(서열번호 219)에 결합한다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 경쇄 가변 도메인, 중쇄 가변 도메인, 또는 둘 다는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 단클론성 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 HVR을 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, (a) HVR-L1은 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (b) HVR-L2는 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (c) HVR-L3은 서열번호 153 내지 163으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (d) HVR-H1은 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (e) HVR-H2는 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (f) HVR-H3은 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서: (a) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (b) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; (c) HVR-H1은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하며; (d) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하며; (e) HVR-H1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하며; (f) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하며; (g) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하며; (h) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하며; (i) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하며; (j) HVR-H1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하며; (k) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하며; (l) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (m) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 (n) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194 내지 211로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및/또는 서열번호 174 내지 193으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 경쇄 가변 도메인; 및/또는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
본 개시내용의 다른 양상은 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이되, 항-Siglec-5 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 경쇄 가변 도메인, 중쇄 가변 도메인, 또는 둘 다는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 HVR을 포함한다. 일부 실시형태에서, (a) HVR-L1은 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (b) HVR-L2는 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (c) HVR-L3은 서열번호 153 내지 163으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (d) HVR-H1은 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; (e) HVR-H2는 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (f) HVR-H3은 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서: (a) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (b) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; (c) HVR-H1은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하며; (d) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하며; (e) HVR-H1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하며; (f) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하며; (g) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하며; (h) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하며; (i) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하며; (j) HVR-H1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하며; (k) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하며; (l) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (m) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 (n) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용의 다른 양상은 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이되, 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194 내지 211로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및/또는 서열번호 174 내지 193으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 개시내용의 다른 양상은 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이되, 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 경쇄 가변 도메인; 및/또는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 개시내용의 다른 양상은 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이되, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 경쟁한다. 본 개시내용의 다른 양상은 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체와 본질적으로 동일한 Siglec-5 에피토프에 결합하는 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다.
본 개시내용의 다른 양상은 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기, 서열번호 1의 아미노산 잔기 226 내지 244 또는 서열번호 1 아미노산 잔기 226 내지 244에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기, 및 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합하는 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 아미노산 서열 LSWFQGSPALN(서열번호 221), 아미노산 서열 QTITIFRNGIALEILQNTS(서열번호 220), 및 아미노산 서열 ITIFRNGIALE(서열번호 219)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합하는 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 IgG 분류, IgM 분류 또는 IgA 분류를 가진다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 가진다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 저해 Fc 수용체에 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB(FcγIIB)이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서: (a) 항-Siglec-5 항체는 인간 또는 마우스 IgG1 아이소타입을 갖고, N297A, D265A, D270A, L234A, L235A, G237A, P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E, P331S, S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, T394D, E430G, V263L, V266L, V273C, V273E, V273F, V273L, V273M, V273S, V273Y, V305K, V305W, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치에서 Fc 영역 내 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나, 글리신 236에 대응하는 위치에서 Fc 영역 내 아미노산 결실을 포함하거나; (b) 항-Siglec-5 항체는 IgG1 아이소타입을 갖고, IgG2 아이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함하되, 선택적으로 IgG2 아이소타입 CH1 및 힌지 영역은 ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVERKCCVECPPCP(서열번호 218)의 아미노산 서열을 포함하고, 선택적으로 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환 또는 둘 다, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 포함하되, 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; (c) 항-Siglec-5 항체는 IgG2 아이소타입을 가지며, P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, V309L, A330S, P331S, C214S, C232S, C233S, S267E, L328F, M252Y, S254T, T256E, H268E, N297A, N297Q, A330L, C127S, E430G 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; (d) 항-Siglec-5 항체는 인간 또는 마우스 IgG4 아이소타입을 가지고, L235A, G237A, S228P, L236E, S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, T256E, E233P, F234V, L234A/F234A, S228P, S241P, L248E, T394D, N297A, N297Q, L235E, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; 또는 (e) 항-Siglec-5 항체는 혼성체 IgG2/4 아이소타입을 가지고, 선택적으로 상기 항체는 인간 IgG2의 아미노산 118 내지 260 및 인간 IgG4의 아미노산 261 내지 447을 포함하는 아미노산 서열을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 또는 카바트 넘버링에 따른다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서: (a) 항-Siglec-5 항체는 인간 또는 마우스 IgG1 아이소타입을 가지며, N297A, N297Q, D270A, D265A, L234A, L235A, C226S, C229S, P238S, E233P, L234V, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, L234F, L235E, P331S, T394D, A330L, M252Y, S254T, T256E 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; (b) 항-Siglec-5 항체는 IgG2 아이소타입을 가지며, P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y, S254T, T256E, C127S, E430G, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; (c) 항-Siglec-5 항체는 IgG4 아이소타입을 가지며, E233P, F234V, L234A/F234A, L235A, G237A, E318A, S228P, L236E, S241P, L248E, T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A, N297Q, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서: (a) 상기 Fc 영역은 A330L, L234F; L235E, P331S 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 더 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르고; (b)상기 Fc 영역은 M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 더 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르고 또는(c)상기 Fc 영역은 EU 넘버링에 따른 S228P 아미노산 치환을 추가로 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 IgG4 아이소타입을 가진다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 잔기 위치 228에서 S228P 아미노산 치환, 잔기 위치 234에서 F234A 아미노산 치환, 및 잔기 위치 235에서 L235A 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, Siglec-5 단백질은 포유류 단백질 또는 인간 단백질이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, Siglec-5 단백질은 야생형 단백질이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, Siglec-5 단백질은 천연 유래 변이체이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, Siglec-5 단백질은 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 호중구, 인간 NK 세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 B 세포, 인간 T 세포, 인간 T 헬퍼 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구 및 인간 미세아교세포로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 세포 상에서 발현된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5 단백질에 특이적으로 결합한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5 상에 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체 단편이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5, 인간 Siglec-5의 천연 유래 변이체, 및 인간 Siglec-5의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 항체 단편이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체 단편은 인간 Siglec-5, 인간 Siglec-5의 천연 유래 변이체, 및 인간 Siglec-5의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 제2 항체 단편에 가교된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 뮤린 항체이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간화된 항체, 이중특이성 항체, 다가 항체, 접합된 항체, 또는 키메라 항체이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식하는 이중특이성 항체이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 제1 항원은 Siglec-5이고, 제2 항원은: (a) 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원; (b) 트랜스페린 수용체(TR), 인슐린 수용체(HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGFR), 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 1 및 2(LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, 라마 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페너트라틴, 폴리-알기닌 펩타이드, 안지오펩 펩타이드 및 ANG1005로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원; (c) 질환-원인 펩타이드 또는 단백질 또는, 질환-원인 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환-원인 제제로서, 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA이고, 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는, 상기 질환-원인 제제; (d) 면역 세포 상에서 발현된 리간드 및/또는 단백질로서, 상기 리간드 및/또는 단백질은 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, CD73 및 포스파티딜세린으로 이루어진 군으로부터 선택된, 상기 리간드 및/또는 단백질; 및 (e) 하나 이상의 종양 세포 상에서 발현된 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 접합된 항체이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 리신, 리신 A-쇄, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 브롬화에티듐, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 다이하이드록시 안트라신 다이온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소(PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 쿠리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피치날리스(Saponaria officinalis) 저해제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무스, 콤브레스타틴, 듀오카마이신, 돌라스타틴, cc1065 및 시스플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 독소에 접합된다. 임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우(Tau), IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환-원인 단백질에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여; 또는 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, CD73, TREM1, TREM2, CD33, Siglec-6, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-10, Siglec-11, 포스파티딜세린, 질환-원인 핵산, 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역조절 단백질에 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여 사용된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 대한 해리 상수(KD)가 약 0.42nM 내지 약 79nM, 약 79nM 내지 약 61nM, 약 15nM 내지 약 5.3nM, 또는 약 1.7nM 내지 약 0.42nM 범위이되, KD는 대략 25℃의 온도에서 결정된다.
본 개시내용의 다른 양상은 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 임의의 앞의 실시형태의 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 임의의 앞의 실시형태의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 항-Siglec-5 항체가 생성되도록 임의의 앞의 실시형태의 숙주를 배양시키는 단계를 포함하는, 항-Siglec-5 항체를 생성하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 숙주 세포에 의해 생성된 항-Siglec-5 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함한다. 본 개시내용의 다른 양상은 임의의 앞의 실시형태의 방법에 의해 생성된 단리된 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 개시내용의 다른 양상은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, Siglec-5를 발현시키는 종양, 하나 이상의 Siglec-5 리간드를 발현시키는 종양, 갑상선 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및 헤모필루스 인플루엔자로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료가 필요한 개체에게, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 치료적 유효량의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 이들 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, Siglec-5를 발현시키는 종양, 하나 이상의 Siglec-5 리간드를 발현시키는 종양, 갑상선 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및 헤모필루스 인플루엔자로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 이들 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 데 사용하기 위한 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, Siglec-5를 발현시키는 종양, 하나 이상의 Siglec-5 리간드를 발현시키는 종양, 갑상선 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및 헤모필루스 인플루엔자로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 이들 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료하기 위한 의약의 제조에서 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항-Siglec-5 항체의 용도에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염, 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료가 필요한 개체에게 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 치료적 유효량의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 이들 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염, 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 또는 치료하는 데 사용하기 위한 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항- Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염, 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 또는 치료하기 위한 의약의 제조에서 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항- Siglec-5 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체이다.
본 개시내용의 다른 양상은 개체에게 치료적 유효량의 단리된 항-Siglec-5 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 하나 이상의 세포 상의 Siglec-5의 세포 수준 감소가 필요한 개체에서 세포 상의 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 Siglec-5의 세포 수준의 감소가 필요한 개체에서, 하나 이상의 세포 상에서 Siglec-5의 세포 수준을 감소시킴에 있어서 사용하기 위한 단리된 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 Siglec-5의 세포 수준의 감소가 필요한 개체에서, 하나 이상의 세포 상에서 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키기 위한 의약의 제조에서 단리된 항-Siglec-5 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체이다.
본 개시내용의 다른 양상은 치료적 유효량의 단리된 항-Siglec-5 항체를 활성 산소종(ROS) 생산의 유도가 필요한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이들 개체에서 하나 이상의 호중구에서 활성 산소종 생산을 유도하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 활성 산소종(ROS)의 생산 유도가 필요한 개체에서의 하나 이상의 호중구에서 활성 산소종 생산을 유도하는 데 사용하기 위한 단리된 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 활성 산소종(ROS)의 생산 유도가 필요한 개체에서의 하나 이상의 호중구에서 활성 산소종 생산을 유도하기 위한 의약의 제조에서 단리된 항-Siglec-5 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체이다.
본 개시내용의 다른 양상은 치료적 유효량의 단리된 항-Siglec-5 항체를 호중구 세포외 트랩(NET) 형성의 유도가 필요한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이들 개체에서 하나 이상의 호중구에서 활성 산소종 형성을 유도하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 호중구 세포외 트랩(NET) 형성 유도가 필요한 개체에서의 하나 이상의 호중구에서 호중구 세포외 트랩 형성을 유도하는 데 사용하기 위한 단리된 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 호중구 세포외 트랩(NET) 형성 유도가 필요한 개체에서의 하나 이상의 호중구에서 호중구 세포외 트랩 형성을 유도하기 위한 의약의 제조에서 단리된 항-Siglec-5 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체이다.
본 개시내용의 다른 양상은 치료적 유효량의 단리된 항-Siglec-5 항체를 호중구 활성화의 유도가 필요한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이들 개체에서 하나 이상의 호중구 활성화를 유도하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 호중구 활성화 유도가 필요한 개체에서의 하나 이상의 호중구에서 호중구 활성화를 유도하는 데 사용하기 위한 단리된 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 호중구 활성화 유도가 필요한 개체에서의 하나 이상의 호중구에서 호중구 활성화를 유도하기 위한 의약의 제조에서 단리된 항-Siglec-5 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체이다.
본 개시내용의 다른 양상은 치료적 유효량의 단리된 항-Siglec-5 항체를 면역억제된 호중구의 완화가 필요한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이들 개체에서 하나 이상의 면역억제된 호중구를 완화시키는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 면역억제된 호중구의 완화가 필요한 개체에서의 하나 이상의 면역억제된 호중구를 완화시키는 데 사용하기 위한 단리된 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 면역억제된 호중구의 완화가 필요한 개체에서의 하나 이상의 면역억제된 호중구를 완화하기 위한 의약의 제조에서 단리된 항-Siglec-5 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 임의의 앞의 실시형태의 항-Siglec-5 항체이다.
본 개시내용의 다른 양상은 치료적 유효량의 단리된 항-Siglec-5 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대식세포에서의 식세포작용 활성 증가가 필요한 개체에서 식세포작용 활성을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 방법은 개체에게 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법을 투여하는 단계를 더 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자(checkpoint molecule)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항-B- 및 T-림프구 감쇠기(B- and T-lymphocyte attenuator: BTLA) 항체, 항-살해 저해 수용체(Killer inhibitory receptor: KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM-1 항체, 항-TIM3 항체, 항-TIM-4 항체, 항-A2AR 항체, 항-CD39 항체, 항-CD73 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-CD30 항체, 항-TNFa 항체, 항-CD33 항체, 항-Siglec-6 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-10 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타너셉트 요법, 입양 세포 전달(adoptive cell transfer: ACT) 요법, 키메라 항원 수용체 T 세포 전달(chimeric antigen receptor T cell transfer: CAR-T) 요법, 백신 요법 및 사이토카인 요법으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 방법은 개체에게 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 더 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 방법은 개체에게 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 항체는 작용제 항-CD40 항체, 작용제 항-OX40 항체, 작용제 항-ICOS 항체, 작용제 항-CD28 항체, 작용제 항-TREM1 항체, 작용제 항-TREM2 항체, 작용제 항-CD137/4-1BB 항체, 작용제 항-CD27 항체, 작용제 항-글루코코티코이드-유도 TNFR-관련 단백질 GITR 항체, 작용제 항-BTLA 항체, 작용제 HVEM 항체, 작용제 항-CD30 항체, 작용제 항-CD2 항체, 작용제 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 방법은 개체에게 적어도 하나의 자극 사이토카인을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 IFN-□4, IFN-□, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
도 1a는 인간 Siglec-5(서열번호 1)와 사이노몰거스 원숭이 Siglec-5(서열번호 2) 사이의 아미노산 서열 배열을 도시한 도면. 별표("*")는 단일의, 완전히 보존된 잔기를 갖는 위치를 나타내고; 콜론(":")은 강하게 유사한 특성(Gonnet PAM 250 행렬에서 0.5 초과의 스코어링)의 그룹 사이의 보존을 나타내고; 마침표(".")는 약하게 유사한 특성(Gonnet PAM 250 행렬에서 0.5 이하의 스코어링) 사이의 보존을 나타낸다. 도 1b는 인간 Siglec-5(서열번호 1)와 인간 Siglec-14(서열번호3) 사이의 아미노산 서열 정렬을 도시한 도면. 별표("*")는 단일의, 완전히 보존된 잔기를 갖는 위치를 나타내고; 콜론(":")은 강하게 유사한 특성(Gonnet PAM 250 행렬에서 0.5 초과의 스코어링)의 그룹 사이의 보존을 나타내고; 마침표(".")는 약하게 유사한 특성(Gonnet PAM 250 행렬에서 0.5 이하의 스코어링) 사이의 보존을 나타낸다.
도 2a는 재조합 인간 Siglec-5 또는 재조합 인간 Siglec-14를 발현시키는 CHO 세포에 대한 항-Siglec-5 항체의 FACS 분석 결과를 도시한 도면. 도 2b는 아이소타입 대조군에 비교한, 1차 인간 호중구에 대한 항-Siglec-5-특이적 항체의 FACS 분석 결과를 도시한 도면. 도 2a 및 도 2b에서, 항체 1A5는 인간 Siglec-5와 인간 Siglec-14를 둘 다 인식한다.
도 3은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 적혈구 상의 고정된 Siglec-5-Fc 단백질과 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 차단하지 않는다는 것을 입증하는 결과를 도시한 도면.
도 4a는 CHO-S5 형질감염 세포 상의 세포 표면 Siglec-5 수용체의 항-Siglec-5 항체-의존적 하향 조절을 도시한 도면. 도 4b는 Siglec-14 널(null) 공여자로부터의 인간 1차 B 세포 상의 세포 표면 Siglec- 5 수용체의 Siglec-5 항체-의존적 하향조절을 도시한 도면. 도 4c는 항-Siglec-5 특이적 항체의 존재 하에 분화된 인간 대식세포 M0, M1 및 M2a에서의 Siglec-5의 하향조절을 도시한 도면.
도 5는 항-Siglec-5 항체의 존재 하에 인간 1차 호중구에서의 활성 산소종(ROS) 생산 유도를 도시한 도면.
도 6은 항-Siglec-5 항체와 함께 인큐베이션한 인간 1차 호중구에 의한 호중구 세포외 트랩(NET)의 형성을 도시한 도면.
도 7은 항-Siglec-5 특이적 항체의 존재 하에 시험관내 분화된 인간 대식세포에 의한 표적 세포의 식세포 작용을 도시한 도면.
도 8은 인간 Siglec-5에 대한 유전자 이식 마우스로부터 단리된 혈액에서 그리고 종양에서 면역 세포 상의 Siglec-5의 발현을 도시한 도면.
도 9는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 재조합 인간 Siglec-5를 발현시키는 CHO 세포에 결합하지만(CHO-S hSiglec-5), Siglec-5를 발현시키지 않는 모 CHO 세포(CHO-S Parental) 또는 재조합 인간 Siglec-14를 발현시키는 CHO 세포(CHO-S hSiglec-14)에 결합하지 않는다는 것을 도시한 도면. CHO 세포는 각각의 플롯의 x-축 상에 나타낸 바와 같이 항-Siglec-5 항체 농도를 증가시키면서 인큐베이션시켰다. 이어서, CHO 세포 표면에 대한 항-Siglec-5 항체의 결합은 FACS에 의해 측정되었다. y-축은 hIgG1 아이소타입 대조군 항체에 비한 CHO 세포에 대한 각각의 표시된 항-Siglec-5 항체의 결합을 제공한다. S5-174-H2L1은 항체 S5-174-H3을 지칭하고; S5-174-H3L1은 항체 S5-174-H5를 지칭하며; S5-174-H3L2는 항체 S5-174-H6을 지칭하고; S5-174-H4L1은 항체 S5-174-H7을 지칭하며; S5-174-H4L2는 항체 S5-174-H8을 지칭하고; S5-G03-H2L1은 항체 S5-G-03-H4를 지칭하며; S5-G03-H2L2는 항체 S5-G-03-H5를 지칭하고; S5-G03-H3L1은 항체 S5-G-03-H7을 지칭하며; S5-G03-H3L2는 항체 S5-G-03-H8을 지칭하고; S5-G03-H3L3은 항체 S5-G-03-H9를 지칭한다.
도 10은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 시험관내 Siglec-5의 세포 표면 수준을 하향조절한다는 것을 도시한 도면. Siglec-5를 발현시키는 CHO 세포(CHO-S5)를 16 내지 24시간 동안 각각의 플롯의 x-축 상에 나타낸 바와 같이 항-Siglec-5 항체의 농도를 증가시키면서 인큐베이션시켰다. 이어서, 세포 표면 상의 Siglec-5의 발현은 FACS 분석에 의해 측정하였다. 남아있는 Siglec-5의 세포 표면 발현%는 플롯의 y-축 상에 제공하고(대조군의 hSiglec-5%), 식: (시험 항체의 존재 하의 1A5-PE의 MFI)/(시험 항체의 부재 하의 1A5-PE의 MFI)*100%에 따라 계산하였고, 여기서 MFI는 평균 형광 강도이며, 1A5-PE는 항-Siglec-5-PE, 즉, 클론 1A5(Biolegend)를 지칭하며, 시험 항체는 시험 중인 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 지칭한다. hIgG1은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하며; S5-174-H2L1은 항체 S5-174-H3을 지칭하고; S5-174-H3L1은 항체 S5-174-H5를 지칭하며; S5-174-H3L2는 항체 S5-174-H6을 지칭하고; S5-174-H4L1은 항체 S5-174-H7을 지칭하며; S5-174-H4L2는 항체 S5-174-H8을 지칭하고; S5-G03-H2L1은 항체 S5-G-03-H4를 지칭하며; S5-G03-H2L2는 항체 S5-G-03-H5를 지칭하고; S5-G03-H3L1은 항체 S5-G-03-H7을 지칭하며; S5-G03-H3L2는 항체 S5-G-03-H8을 지칭하고; S5-G03-H3L3은 항체 S5-G-03-H9를 지칭한다.
도 11은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 1차 인간 골수 유래 억제 세포에서 CD86 발현을 증가시킨다는 것을 도시한 도면. 2명의 인간 혈액 공여자(공여자 849 및 공여자 851)로부터 얻은 인간 골수 유래 억제 세포(MDSC)를 48시간 동안 플롯의 x-축 상에(최대 10㎍/㎖) 나타낸 바와 같이 항-Siglec-5 항체의 농도를 증가시키면서 처리하였다. 이어서, MDSC 상의 CD86의 발현을 항-CD86(IT2.2) 항체를 이용하여 FACS에 의해 정량화하였다. 중위 CD86 평균 형광 강도(Mean Fluorescence Intensity: MFI)를 플롯의 y-축 상에 제공한다. mIgG1 및 hIgG1은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하고; S5-174-H3L2는 항체 S5-174-H6을 지칭하며; S5-G03-H3L1은 항체 S5-G-03-H7를 지칭하고; S5-7A5.3 및 S5-8A1.3은 각각 항체 7A5 및 8A1을 지칭한다.
도 12는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 1차 인간 골수 유래 억제 세포에서 CCL4 발현을 증가시킨다는 것을 도시한 도면. 2명의 인간 혈액 공여자(공여자 849 및 공여자 851)로부터 얻은 인간 골수 유래 억제 세포(MDSC)를 플롯의 x-축 상에(최대 10㎍/㎖) 나타낸 바와 같이 항-Siglec-5 항체의 농도를 증가시키면서 처리하였다. 항체 치료의 48시간 후에 조건화된 배지를 CCL4의 발현에서의 변화에 대해 평가하였다. CCL4의 발현 수준을 제조업자의 프로토콜에 따라 Quantikine ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하거나 또는 인간 케모카인 Legendplex(Biolegend)에 의해 측정하고, y-축(pg/㎖) 상에 제공한다. mIgG1 및 hIgG1은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하고; S5-174-H3L2는 항체 S5-174-H6을 지칭하며; S5-G03-H3L1은 항체 S5-G-03-H7을 지칭하고; S5-7A5.3 및 S5-8A1.3은 각각 항체 7A5 및 8A1을 지칭한다.
도 13은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 1차 인간 골수 유래 억제 세포에서 CD86 발현을 증가시킨다는 것을 도시한 도면. 2명의 인간 혈액 공여자(공여자 910 및 공여자 911)로부터 얻은 인간 골수 유래 억제 세포(MDSC)를 48시간 동안 x-축 상에 표시한 항-Siglec-5 항체(10㎍/㎖)로 처리하였다. 공여자 910로부터의 MDSC를 이용하여 항체 처리가 없는 대조군을 수행하였다("처리 없음"). 이어서, MDSC 상의 CD86의 발현을 항-CD86(IT2.2) 항체를 이용하여 FACS에 의해 정량화하였다. 중위 CD86 평균 형광 강도(MFI)를 플롯의 y-축 상에 제공한다. mIgG1, mIgG2a 및 hIgG1은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하고; S5-7A5.3 및 S5-8A1.3은 각각 항체 7A5 및 8A1을 지칭하며; S5-1A5는 Siglec-5와 Siglec-14(BioLegend) 둘 다에 결합하는 항체이다.
도 14는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 1차 인간 골수 유래 억제 세포에서 CCL4 발현을 증가시킨다는 것을 도시한 도면. 2명의 인간 혈액 공여자(공여자 910 및 공여자 911)로부터 얻은 인간 골수 유래 억제 세포(MDSC)를 48시간 동안 x-축 상에 표시한 항-Siglec-5 항체(10㎍/㎖)로 처리하였다. 항체 처리가 없는 대조군을 수행하였다("처리 없음"). 항체 치료의 48시간 후에 조건화된 배지를 CCL4의 발현에서의 변화에 대해 평가하였다. CCL4의 발현 수준을 제조업자의 프로토콜에 따라 Quantikine ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하거나 또는 인간 케모카인 Legendplex(Biolegend)에 의해 측정하고, y-축(pg/㎖) 상에 제공한다. mIgG1, mIgG2a 및 hIgG1은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하고; S5-7A5.3 및 S5-8A1.3은 각각 항체 7A5 및 8A1을 지칭하며; S5-1A5는 Siglec-5와 Siglec-14(BioLegend) 둘 다에 결합하는 항체이다.
일반 기법
본 명세서에 기재하거나 또는 언급한 기술 및 절차는 일반적으로 잘 이해되고, 당업자에 의한 통상적인 방법, 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)]에 기재된 널리 이용되는 방법을 이용하여 통상적으로 사용된다.
정의
본 명세서에 기재된 용어 "방지하는"은 개체에서 특정 질환, 장애 또는 병태의 발생 또는 재발에 대해 예방을 제공하는 것을 포함한다. 개체는 특정 질환, 장애 또는 병태의 성향이 있거나 또는 의심의 여지가 있거나 또는 이러한 질환, 장애 또는 병태가 발생할 위험에 있을 수 있지만, 질환, 장애 또는 병태로 아직 진단되지 않았다.
본 명세서에서 사용되는 특정 질환, 장애 또는 병태가 발생할 "위험"에 있는 개체는 검출 가능한 질환 또는 질환 증상을 가질 수도 있거나 또는 갖지 않을 수도 있고, 본 명세서에 기재된 치료 방법 전에 검출 가능한 질환 또는 질환 증상을 나타낼 수도 있거나 또는 나타내지 않을 수도 있다. "위험에 있는"은 개체가 당업계에 공지된 바와 같은 특정 질환, 장애 또는 병태의 발생과 상관관계가 있는 측정 가능한 매개변수인 하나 이상의 위험 인자를 가진다는 것을 나타낸다. 이들 위험 인자 중 하나 이상을 갖는 개체는 이들 위험 인자 중 하나 이상 없이 개체보다 특정 질환, 장애 또는 병태가 발생할 더 높은 확률을 가진다.
본 명세서에 기재된 용어 "치료"는 임상 병리 과정 동안 처리 중인 개체의 자연적 과정을 변경시키도록 설계된 임상 개입을 지칭한다. 바람직한 치료 효과는 병리학적 상태의 진행 속도의 감소, 개선 또는 완화, 및 특정 질환, 장애 또는 병태의 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 예를 들어, 특정 질환, 장애 또는 병태와 관련된 하나 이상의 증상이 완화되거나 또는 제거된다면, 개체는 성공적으로 "치료된다".
"유효량"은 목적하는 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투약량으로 그리고 시간 기간 동안 적어도 유효한 양을 지칭한다. 유효량은 1회 이상의 투여로 제공될 수 있다. 본 명세서의 유효량은 질환 상태, 연령, 성별 및 개체의 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 유발하기 위한 치료 능력과 같은 인자에 따라 다를 수 있다. 유효량은 또한 임의의 독성 또는 유해한 치료 효과가 치료적으로 유리한 효과보다 더 큰 양이다. 예방적 용도를 위해, 유리한 또는 목적하는 결과는 질환의 발생 동안 제시되는 질환, 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상을 포함하는, 질환의 위험의 제거 또는 감소, 질환의 중증도의 감소 또는 질환 개시의 지연과 같은 결과를 포함한다. 치료적 용도를 위해, 유리한 또는 목적하는 결과는 질환으로부터 초래되는 하나 이상의 증상의 감소, 질환으로 고통받는 것의 삶의 질 증가, 질환을 치료하는 데 필요한 다른 의약 용량의 감소, 예컨대 질환을 표적화, 진행의 지연 및/또는 생존 연장을 통해 다른 의약 효과의 향상과 같은 임상 결과를 포함한다. 유효량의 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물은 직접적으로 또는 간접적으로 예방 또는 치료적 처치를 달성하는 데 충분한 양이다. 임상 관련하여 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물의 유효량은 다른 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물과 함께 달성될 수도 있거나 또는 달성되지 않을 수도 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제를 투여하는 것과 관련하여 고려될 수 있고, 단일 제제는 하나 이상의 다른 제제와 함께, 목적하는 결과가 달성될 수 있다면 유효량으로 주어지도록 고려될 수 있다.
"치료적 유효량"은 적어도 특정 질환, 장애 또는 병태의 측정 가능한 개선을 달성하는 데 필요한 최소 농도이다. 본 명세서의 치료적 유효량은 환자의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적으로 하는 반응을 유발하기 위한 Siglec-5 단백질 길항체의 능력과 같은 인자에 따라 다를 수 있다. 치료적 유효량은 또한 Siglec-5 단백질 길항제의 임의의 독성 또는 유해 효과가 치료적으로 유리한 효과보다 더 큰 것이다.
본 명세서에서 사용되는 다른 화합물 또는 조성물과 "함께" 투여는 동시 투여 및/또는 상이한 시간에 투여를 포함한다. 함께 투여는 또한 상이한 투약 빈도 또는 간격에서, 그리고 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 이용하는 것을 포함하는 공동 제형으로서의 투여 또는 별개의 조성물로서의 투여를 포함한다.
위험의 치료, 예방 또는 감소의 목적을 위한 "개체"는 인간, 가축 및 농장 동물, 동물원, 스포츠 또는 반려 동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 게르빌루스, 마우스, 페릿, 랫트, 고양이 등을 포함하는 포유류로서 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 개체는 인간이다.
용어 "면역글로불린"(Ig)은 본 명세서의 "항체"와 상호 호환적으로 사용된다. 본 명세서의 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 그들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 적어도 2개의 무손상 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 단클론성 항체, 다클론성 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체)를 특이적으로 아우른다.
기본 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경(L) 쇄 및 2개의 동일한 중(H) 쇄로 구성된 이형사량체 당단백질이다. VH와 VL의 쌍은 단일 항원-결합 부위를 함께 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해, 예를 들어, 문헌[Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 페이지 71 및 Chapter 6] 참조.
임의의 척추동물 종으로부터의 L 쇄는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 카파("κ") 및 람다("λ")로 불리는 2개의 분명하게 별개인 유형 중 하나가 부여될 수 있다. 중쇄(CH)의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 면역글로불린은 상이한 분류 또는 아이소타입이 부여될 수 있다. 5가지 부류의 면역글로불린이 있다: 알파("α"), 델타("δ"), 엡실론("ε"), 감마 ("γ") 및 뮤("μ")로 각각 표기되는 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM. γ 및 α 분류는 CH 서열 및 기능의 상대적으로 약간의 차이에 기반하여 하위분류(아이소타입)으로 추가로 나뉘어지며, 예를 들어, 인간은 다음의 하위분류를 발현시킨다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2. 상이한 분류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 입체배치는 잘 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000)]에서 일반적으로 기재된다.
"천연 항체"는 보통 2개의 동일한 경(L) 쇄 및 2개의 동일한 중(H) 쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이형사량체 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 이황화 결합의 수는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄 중에서 변한다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규치적으로 이격된 쇄 내의 이황화 브릿지를 가진다. 각각의 중쇄는 하나의 말단에서 가변 도메인(VH) 다음에 다수의 불변 도메인을 가진다. 각각의 경쇄는 하나의 말단(VL)에서 가변 도메인 및 그의 말단에서 불변 도메인을 가지고; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인에 맞추어 조정되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인에 맞추어 조정된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.
"단리된" 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 그의 생성 환경의 성분으로부터 (예를 들어, 자연적으로 또는 재조합적으로) 동정되고/되거나, 분리되고/되거나 회수된 것이다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩타이드는 그의 생성 환경으로부터의 모든 다른 오염 성분과의 회합이 없다. 그의 생성환경으로부터의 오염 성분, 예컨대 재조합 형질감염 세포로부터 초래된 것은 항체에 대한 연구, 진단 또는 치료 용도를 전형적으로 방해하지 않는 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 폴리펩타이드는: (1) 예를 들어, 로리법(Lowry method)에 의해 결정하여 항체의 95중량% 초과까지, 그리고 일부 실시형태에서, 99중량% 초과까지; (2) 스피닝 컵 시퀀서의 사용에 의해 N-말단의 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마씨 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 이용하는 비-환원 또는 환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의한 균질성에 대해 정제될 것이다. 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 제시되지 않을 것이기 때문에 단리된 항체는 재조합 T 세포 내에서 인시추로 항체를 포함한다. 그러나, 보통 단리된 폴리펩타이드 또는 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인", 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노 말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"로서 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 (동일한 부류의 다른 항체에 비해) 항체의 대부분의 가변 부분이며, 항원 결합 부위를 포함한다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 세그먼트가 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 중의 서열에서 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고, 그의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 전체 폭에 걸쳐 균일하게 분포되지 않는다. 대신에, 이는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 둘 다에서 초가변 영역(HVR)으로 불리는 3개의 세그먼트에서 집중된다. 가변 도메인의 더 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 베타-시트 구조를 연결하고 그리고 일부 경우에 부분을 형성하는 루프를 형성하는 3개의 HVR에 의해 연결되는 베타-시트 입체배치를 대체로 채택하는 4개의 영역을 포함한다. 각각의 쇄에서 HVR은 FR 영역에 의해 그리고 다른 쇄로부터의 HVR에 의해 근접하게 함께 보유되고, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에서 직접적으로 수반되지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예컨대 항체-의존적-세포 독성에서 항체의 참여를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 얻은 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개개 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 유래 돌연변이 및/또는 번역후 변형(예를 들어, 이성질체화, 아마이드화)를 제외하고 동일하다. 단클론성 항체는 고도로 특이적이며, 하나 이상의 항원 부위로 향한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단클론성 항체는 이중특이성 항체일 수 있다. 상이한 결정소(에피토프)로 향하는 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론성 항체 제제와 대조적으로, 각각의 단클론성 항체는 하나 이상의 항원 부위 상의 단일 결정소로 향한다. 변형어 "단클론성"은 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 얻어지는 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의해 항체의 생성을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라 사용될 단클론성 항체는, 예를 들어, 파지-디스플레이 기법을 포함하는 다양한 기법(예를 들어, 문헌[Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 101(34):12467-472(2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004)]), 하이브리도마 방법(예를 들어, 문헌[Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3):253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2d ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]), 재조합 DNA 방법(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호), 및 인간 면역글로불린 좌위의 부분 또는 모두 또는 인간 면역글로불린 서열을 암호화하는 유전자를 갖는 동물에서 인간 또는 인간 유사 항체를 생성하기 위한 기법에 의해 이루어질 수 있다(예를 들어, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; 문헌[Jakobovits et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호; 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)].
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 또는 "전체 항체"는 항체 단편과 대조적으로 실질적으로 무손상 형태로 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체와 같은 항체를 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용된다. 구체적으로 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 무손상 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 가질 수 있다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 및/또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 다이어바디; 선형 항체(미국 특허 제5,641,870호, 실시예 2; 문헌[Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995)] 참조); 단일쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 파파인 분해는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 항원 결합 단편, 및 잔여 "Fc" 단편을 생성하며, 표기는 용이하게 결정화하는 능력을 반영한다. Fab 단편은 H 쇄(VH)의 가변 영역 도메인, 및 하나의 중쇄(CH1)의 제1 불변 도메인과 함께 전체 L 쇄로 이루어진다. 각각의 Fab 단편은 항원 결합에 대해 1가이고, 즉, 이는 단일 항원-결합 부위를 가진다. 항체의 펩신 처리는 상이한 항원-결합 활성을 갖는 2개의 이황화 연결된 Fab 단편에 거의 대응하고 여전히 항원을 가교할 수 있는 단일의 거대한 F(ab')2 단편을 수득한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카복시 말단에서 소수의 추가적인 잔기를 가짐으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올기를 보유하는 Fab'에 대한 본 명세서의 표기이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 Fab' 단편의 쌍으로서 생성되는데, 이 단편의 쌍 사이에 시스테인 힌지를 가진다. 항체 단편의 다른 화학적 결합이 또한 공지되어 있다.
Fc 단편은 이황화물에 의해 함께 보유되는 H 쇄 둘 다의 카복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 효과기 기능은 Fc 영역에서 서열에 의해 결정되는데, 이 영역은 또한 특정 유형의 세포 상에서 발견되는 Fc 수용체(FcR)에 의해 인식된다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 -결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 단단한, 비공유 회합에서 하나의 중쇄- 및 하나의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 이루어진다. 이들 두 도메인의 폴딩으로부터 항원 결합에 대한 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 대해 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프(각각 H쇄 및 L쇄로부터 3개의 루프)가 나온다. 그러나, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도에도 불구하고, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 단지 3개의 HVR을 포함하는 Fv의 절반)조차도 항원을 인식하고 결합하는 능력을 가진다.
또한 "sFv" 또는 "scFv"으로서 약칭되는 "단일쇄 Fv"는 단일 폴리펩타이드 쇄에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩타이드는 sFv가 항원 결합에 대해 목적하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH와 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다. sFv의 검토를 위해, 문헌[Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994)] 참조.
항체, 예컨대, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 "작용성 단편"은 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역 또는 변형된 FcR 결합 능력을 보유하거나 또는 갖는 항체의 F 영역을 일반적으로 포함하는, 무손상 항체의 부분을 포함한다. 항체 단편의 예는 선형 항체, 단일쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
용어 "다이어바디"는 V 도메인의 쇄간이지만 쇄내 짝짓기가 달성되지 않음으로써, 2가 단편, 즉, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편을 초래하도록 VH와 VL 도메인 사이의 짧은 링커(약 5 내지 10개) 잔기를 갖는 sFv 단편(앞 단락을 참조)을 구성함으로써 제조된 작은 항체 단편을 지칭한다. 이중특이성 다이어바디는 2개의 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩타이드 쇄 상에 존재하는 2개의 "크로스오버(crossover)" sFv 단편의 이형이량체이다. 다이어바디는, 예를 들어, 유럽 특허 제404,097호; WO 93/11161; 문헌[Hollinger et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA90:6444-48(1993)]에서 더욱 상세하게 기재된다.
본 명세서에서 사용되는 "키메라 항체"는 그들이 목적하는 생물학적 활성을 나타낸다면, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래된 또는 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 대응하는 서열과 동일하거나 또는 상동성인 반면, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 유래되거나 또는 다른 항체 부류 또는 하위부류뿐만 아니라 이러한 항체의 단편에 속하는 항체에서의 대응하는 서열과 동일하거나 또는 상동성인 항체(면역글로불린), 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 지칭한다(미국 특허 제4,816,567호; 문헌[Morrison et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 81:6851-55(1984)] 참조). 본 명세서의 관심 대상의 키메라 항체는 프리마티제드(PRIMATIZED)® 항체를 포함하되, 항체의 항원-결합 영역은, 예를 들어, 관심 대상의 항원을 이용하여 마카크 원숭이를 면역화함으로써 생성된 항체로부터 유래된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은, "인간화된 항체"는 "키메라 항체"의 서브세트로 사용된다.
비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체, 예컨대, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 "인간화된" 형태는, 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다. 일 실시형태에서, 인간화된 항체는 수용자(recipient)의 HVR로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및/또는 능력을 갖는 비-인간 종(공여자(donor) 항체), 예컨대 마우스, 랫트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 HVR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 FR 잔기는 대응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 더 나아가, 인간화된 항체는 수용자 항체에서 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능, 예컨대 결합 친화도를 추가로 개선하기 위해 이루어질 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 하나의, 전형적으로 2개의 가변 도메인 중 실질적으로 모두를 포함하는데, FR 영역이 항체 성능, 예컨대 결합 친화도, 이성질체화, 면역원성 등을 개선시키는 하나 이상의 개개 FR 잔기 치환을 포함할 수 있다고 해도, 초가변 루프의 모두 또는 실질적으로 모두는 비-인간 면역글로불린 서열의 초가변 루프에 대응하고, FR 영역의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 서열의 FR 영역이다. FR에서 이들 아미노산 치환의 수는 전형적으로 H 쇄에서 6개 이하, 그리고 L 쇄에서 3개 이하이다. 인간화된 항체는 선택적으로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가 상세한 설명을 위해, 예를 들어, 문헌[Jones et al., Nature 321:522-525(1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596(1992)] 참조. 또한, 예를 들어, 문헌[Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115(1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433(1994)]; 및 미국 특허 제6,982,321호 및 제7,087,409호 참조.
"인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 대응하는 아미노산 서열을 갖고/갖거나 본 명세서에 개시된 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기법을 이용하여 이루어진 것이다. 인간 항체의 이런 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 구체적으로 제외한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기법을 이용하여 생성될 수 있다. 문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.,222:581(1991)] 참조. 또한 인간 단클론성 항체의 제조를 위해 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95(1991)]에 기재된 방법을 이용 가능하다. 또한 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001)] 참조. 인간 항체는 항원 시험감염에 반응하여 이러한 항체를 생성하도록 변형되지만, 이의 내인성 좌위가 망가진 유전자이식 동물, 예컨대, 면역화된 제노마우스(xenomice)에 대해 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(예를 들어, 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기법에 관해 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호 참조). 또한 인간 B-세포 혼성 기법을 통해 생성된 인간 항체에 대해, 예를 들어, 문헌[Li et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)] 참조.
본 명세서에서 사용될 때 용어 "초가변 영역", "HVR" 또는 "HV"는 서열에서 초가변이고/이거나 구조적으로 한정된 루프를 형성하는 항체-가변 도메인의 영역, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 항체 가변 도메인 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH에서 3개(H1, H2, H3), 및 VL에서 3개(L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR의 최고의 다양성을 나타내고, 특히 H3은 항체의 미세한 특이성을 부여함에 있어서 고유한 역할을 하는 것으로 여겨진다. 예를 들어, 문헌[Xu et al., Immunity 13:37-45(2000); Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003))] 참조. 사실, 중쇄만으로 이루어진 천연 유래 낙타 항체는 경쇄의 부재 하에서 작용성이고 안정하다. 예를 들어, 문헌[Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993) 및 Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736(1996)] 참조.
다수의 HVR 정의를 사용 중이며, 본 명세서에 포함된다. EU 또는 Kabat 상보성-결정 영역(CDR)인 HVR은 서열 가변성에 기반하며, 가장 통상적으로 사용된다(Kabat et al., 상기 참조). 대신에 코티아는 구조적 루프의 위치를 지칭한다(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)). AbM HVR은 EU 또는 카바트 CDR과 코티아 구조적 루프 사이의 절충을 나타내고, 옥스포드 몰레큘러 AbM 항체-모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody-modeling software)에 의해 사용된다. "접촉" HVR은 이용 가능한 복합 결정 구조의 분석에 기반한다. 각각의 이들 HVR로부터의 잔기를 이하에서 주목한다.
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HVR은 다음과 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2), 및 89-97 또는 89-96(L3), 및 VH에서 26-35(H1), 50-65 또는 49-65(바람직한 실시형태)(H2), 및 93-102, 94-102 또는 95-102(H3). 가변-도메인 잔기는 각각의 이들 연장된-HVR 정의에 대해 문헌[Kabat et al., 상기 참조]에 따라 넘버링된다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본 명세서에 정의된 HVR 잔기 이외의 해당 가변-도메인 잔기이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "억셉터(acceptor) 인간 프레임워크"는 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크로부터 유래된 VL 또는 VH 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크"로부터 유래된" 억셉터 인간 프레임워크는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 사전 존재하는 아미노산 서열 변화를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 사전 존재하는 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하 또는, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하 또는 2개 이하이다. 사전 존재하는 아미노산 변화가 VH에 존재하는 경우, 바람직한 해당 변화는 위치 71H, 73H 및 78H 중 단지 3, 2 또는 1개에서 생기며; 예를 들어, 해당 위치에서 아미노산 잔기는 71A, 73T 및/또는 78A일 수 있다. 일 실시형태에서, VL 억셉터 인간 프레임워크는 VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 공통 프레임워크 서열에 대한 서열에서 동일하다.
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 통상적으로 생기는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위그룹으로부터 유래된다. 일반적으로, 서열의 하위그룹은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에서와 같은 하위그룹이다. 예는 VL을 포함하며, 하위 그룹은 문헌[Kabat et al., 상기 참조]에서와 같은 하위그룹 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV일 수 있다. 추가적으로, VH에 대해, 하위그룹은 문헌[Kabat et al., 상기 참조]에서와 같은 하위그룹 I, 하위그룹 II 또는 하위그룹 III일 수 있다.
예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 구체화된 위치에서 "아미노산 변형"은 구체화된 잔기의 치환 또는 결실, 또는 구체화된 잔기에 인접한 적어도 하나의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 구체화된 잔기에 "인접한" 삽입은 이의 1 내지 2개의 잔기 내의 삽입을 의미한다. 삽입은 구체화된 잔기에 대해 N-말단 또는 C-말단일 수 있다. 본 명세서의 바람직한 아미노산 변형은 치환이다.
"친화도-성숙" 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 해당 변경(들)을 갖지 않는 모 항체에 비해 항원에 대한 항체 친화도의 개선을 초래하는 하나 이상의 HVR에서 하나 이상의 변경을 갖는 것이다. 일 실시형태에서, 친화도-성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화도를 가진다. 친화도-성숙 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 생성된다. 예를 들어, 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH- 및 VL-도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은, 예를 들어: 문헌[Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155(1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896(1992)]에 의해 기재된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "특이적으로 인식하는" 또는 "특이적으로 결합하는"은 생물학적 분자를 포함하는 분자의 이종성 집단의 존재 하에서 표적의 존재를 결정하는, 표적과 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 사이의 끌어당김 또는 결합과 같은 측정 가능하고 재현 가능한 상호작용을 지칭한다. 예를 들어, 표적 또는 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 그것이 다른 표적 또는 표적의 다른 에피토프에 결합하는 것 보다 더 큰 친화도, 아비디티로 더 용이하게 그리고/또는 더 큰 지속기간으로 이 표적 또는 에피토프에 결합하는 항체이다. 또한 이 정의를 읽음으로써, 예를 들어, 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체(또는 모이어티)는 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수도 있거나 또는 결합하지 않을 수도 있는 것으로 이해된다. 이렇게 해서, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 (그것이 배타적 결합을 포함할 수는 있지만) 배타적 결합을 반드시 필요로 하지는 않는다. 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 적어도 약 103M-1 또는 104M-1, 때때로 약 105M-1 또는 106M-1, 다른 예에서 약 106M-1 또는 107M-1, 약 108M-1 내지 109M-1 또는 약 1010M-1 내지 1011M-1 이상의 해리 상수를 가질 수 있다. 다양한 면역분석 형식은 특정 단백질과 특이적으로 면역반응성인 항체를 선택하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 단백질과 특이적으로 면역반응성인 단클론성 항체를 선택하기 위해 고체상 ELISA 면역분석이 일상적으로 사용된다. 특이적 면역반응성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 면역분석 형식 및 조건의 설명을 위해, 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York] 참조.
본 명세서에서 사용되는 Siglec-5 단백질과 제2 단백질 사이의 "상호작용"은, 제한 없이, 단백질-단백질 상호작용, 물리적 상호작용, 화학적 상호작용, 결합, 공유 결합 및 이온 결합을 포함한다. 항체가 두 단백질 사이의 상호작용을 파괴하거나, 감소시키거나 또는 완전히 제거할 때 두 단백질 사이에서 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 항체가 "상호작용을 저해한다". 본 개시내용의 항체 또는 이의 단편은 항체 또는 이의 단편이 두 단백질 중 하나에 결합할 때 두 단백질 사이의 "상호작용을 저해한다".
"작용제" 항체 또는 "활성화" 항체는 항체가 항원에 결합한 후에 항원의 하나 이상의 활성 또는 기능을 유도하는(예를 들어, 증가시키는) 항체, 예컨대 본 개시내용의 작용제인 항-Siglec-5 항체이다.
"차단" 항체, "길항제" 항체, 또는 "저해" 항체는 항체가 항원에 결합한 후에 하나 이상의 리간드에 대한 항원 결합을 저해하거나 또는 감소시키는(예를 들어, 줄이는) 그리고/또는 항체가 항원에 결합한 후 항원의 하나 이상의 활성 또는 작용을 저해하거나 또는 감소시키는(예를 들어, 줄이는) 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체이다. 일부 실시형태에서, 차단 항체, 길항제 항체, 또는 저해 항체는 하나 이상의 리간드에 대한 항원 결합 및/또는 항원의 하나 이상의 활성 또는 작용을 실질적으로 또는 완전히 저해한다.
항체 "효과기 기능"은 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 해당 생물학적 활성을 지칭하고, 항체 아이소타입에 따라 다르다.
본 명세서의 용어 "Fc 영역"은 천연-서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단의 영역을 정하기 위해 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 변할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 보통 위치 Cys226에서 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 이의 카복실 말단까지 신장하는 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단의 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들어, 항체의 생성 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 또는 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 항체에서 사용하기 위한 적합한 천연-서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다.
"천연 서열 Fc 영역"은 천연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 동종이인자형); 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이의 천연 유래 변이체를 포함한다.
"변이체 Fc 영역"은 적어도 하나의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환(들) 때문에 천연 서열 Fc 영역과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역에 비해 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역에 비해 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어, 천연 서열 Fc 영역에서 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역에서 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 가진다. 본 명세서의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역과 그리고/또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 가장 바람직하게는 그와 적어도 약 90% 상동성, 더 바람직하게는 그와 적어도 약 95% 상동성을 가질 것이다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 게다가, 바람직한 FcR은 IgG 항체(감마 수용체)에 결합하고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류의 수용체(이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함)를 포함하는 것이며, FcγRII 수용체는 주로 이의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("저해 수용체")를 포함한다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프("ITAM")를 포함한다. 저해 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에서 면역수용체 타이로신-기반 저해 모티프("ITIM")를 포함한다(예를 들어, 문헌[M.
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, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234(1997)] 참조). FcR은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41(1995)]에서 검토된다. 장래에 동정되는 것을 포함하는 다른 FcR은 본 명세서의 용어 "FcR"에 의해 포함된다. FcR은 또한 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다.
생체내 FcRn에 대한 결합 및 인간 FcRn 고친화도 결합 폴리펩타이드의 혈청 반감기는, 예를 들어, 인간 FcRn을 발현시키는 유전자이식 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주에서, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩타이드가 투여되는 영장류에서 분석될 수 있다. WO 2004/42072(Presta)는 FcR에 대해 개선된 또는 감소된 결합을 갖는 항체 변이체를 기재한다. 또한 예를 들어, 문헌[Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604(2001)] 참조.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 항체 서열에 대해 "아미노산 서열 동일성 백분율(%)" 및 "상동성"은, 필요하다면, 최대 백분율 서열 동일성을 달성하기 위해 서열 및 도입 갭을 정렬시킨 후에, 서열 동일성의 부분으로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고, 특정 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열에서 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내 아미노산 잔기의 백분율을 지칭한다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하는 목적을 위한 정렬은 당업계의 기술 내의 다양한 방법, 예를 들어, 공공연하게 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGN™(DNASTAR) 소프트웨어로 달성될 수 있다. 당업자는 비교 중인 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 당업계에 공지된 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다.
"단리된" 세포는 그것이 생성된 환경에서 그것이 본래 관련된 적어도 하나의 오염물질 세포로부터 동정되고 분리된 분자 또는 세포이다. 일부 실시형태에서, 단리된 세포는 생성 환경과 관련된 모든 성분과 관련이 없다. 단리된 세포는 천연에서 발견된 형태 또는 상황이 아닌 형태이다. 단리된 세포는 조직, 기관 또는 개체에서 자연적으로 존재하는 세포와 구별된다. 일부 실시형태에서, 단리된 세포는 본 개시내용의 숙주 세포이다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 "단리된" 핵산 분자는 그것이 생성된 환경에서 그것이 본래 관련된 적어도 하나의 오염 핵산으로부터 동정되고 분리된 핵산 분자이다. 바람직하게는, 단리된 핵산은 생성 환경과 관련된 모든 성분과 관련이 없다. 본 명세서의 폴리펩타이드 및 항체를 암호화하는 단리된 핵산 분자는 그것이 자연에서 발견되는 형태 또는 상황이 아닌 형태이다. 따라서 단리된 핵산 분자는 세포에서 자연적으로 존재하는 본 명세서의 폴리펩타이드 및 항체를 암호화하는 핵산과 구별된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하는 것으로 의도된다. 한 가지 유형의 벡터는 "플라스미드"인데, 이는 추가적인 DNA 세그먼트가 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA를 지칭한다. 다른 유형의 벡터는 파지 벡터이다. 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이되, 추가적인 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈 내로 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 그들이 도입된 숙주 세포에서 자율적 복제를 할 수 있다(예를 들어, 박테리아 복제 기점 및 에피솜 포유류 벡터를 갖는 박테리아 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포 내로 도입 시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있고, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 게다가, 특정 벡터는 그들이 조작 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터" 또는 단순하게, "발현 벡터"로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에서 효용의 발현 벡터는 종종 플라스미드 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 플라스미드가 가장 통상적으로 사용되는 벡터 형태이기 때문에 상호 호환적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에서 상호 호환적으로 사용되는 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오타이드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오타이드는 데옥시리보뉴클레오타이드, 리보뉴클레오타이드, 변형된 뉴클레오타이드 또는 염기 및/또는 그들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합효소에 의해 또는 합성 반응에 의해 중합체에 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오타이드 및 그들의 유사체를 포함할 수 있다. 존재한다면, 뉴클레오타이드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전에 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비-뉴클레오타이드 성분에 의해 방해될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 합성 후에 이루어진 변형(들), 예컨대 표지에 대한 접합을 포함할 수 있다. 다른 유형의 변형은, 예를 들어, "캡", 천연 유래 뉴클레오타이드 중 하나 이상의 유사체로의 치환, 뉴클레오타이드간 변형, 예를 들어, 비하전 연결을 갖는 것(예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트라이에스터, 포스포아미데이트, 카바메이트 등) 및 하전된 연결을 갖는 것(예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로다이티오에이트 등), 현수 모이어티를 포함하는 것, 예를 들어, 단백질(예를 들어, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩타이드, 폴리-L-라이신 등), 삽입제를 갖는 것(예를 들어, 아크리딘, 소랄렌 등), 킬레이터를 포함하는 것(예를 들어, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등), 알킬화제를 함유하는 것, 변형된 결합을 갖는 것(예를 들어, 알파 방향족 핵산 등)뿐만 아니라 폴리뉴클레오타이드(들)의 비변형 형태를 포함한다. 추가로, 당 내에 보통 존재하는 임의의 하이드록실기는, 예를 들어, 포스포네이트기, 포스페이트기로 대체될 수 있거나, 표준 보호기로 보호되거나, 또는 추가적인 뉴클레오타이드에 대한 추가적인 결합을 만들도록 활성화되거나, 또는 고체 또는 반고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단의 OH는 인산화되거나 또는 아민 또는 1 내지 20개의 탄소 원자의 유기 캡핑기 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 하이드록실은 또한 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 또한 일반적으로 당업계에 공지된 리보스 또는 데옥시 리보스 당의 유사체 형태(예를 들어, 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴-, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 탄소환식 당 유사체, α-방향족 당, 에피머 당, 예컨대 아라비노스, 자일로스 또는 릭소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비환식 유사체, 및 염기성 뉴클레오사이드 유사체, 예컨대 메틸 리보스를 포함)를 포함할 수 있다. 하나 이상의 포스포다이에스터 결합은 대안의 연결기로 대체될 수 있다. 이들 대안의 연결기는 포스페이트가 P(O)S("티오에이트"), P(S)S("다이티오에이트"), (O)NR2("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH2("폼아세탈")로 대체되는 실시형태를 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 이때 각각의 R 또는 R'은 독립적으로 (-O-) 결합, 아릴, 알켄일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일 또는 아랄딜 중 하나를 선택적으로 포함하는 치환 또는 비치환 알킬(1-20 C) 또는 H이다. 폴리뉴클레오타이드의 모든 결합은 동일할 필요가 없다. 앞의 설명은 RNA 및 DNA를 포함하는 본 명세서에서 언급되는 모든 폴리뉴클레오타이드에 적용된다.
"숙주 세포"는 폴리뉴클레오타이드 삽입물의 혼입을 위한 벡터(들)에 대한 수용자일 수 있거나 또는 수용자인 개개 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하고, 자손은 천연, 우연적 또는 의도적인 돌연변이에 기인하여 본래의 모 세포와 (형태 또는 게놈 DNA 상보체가) 완전히 동일할 필요는 없다. 숙주 세포는 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드(들)에 의해 생체내에서 형질감염된 세포를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 "담체"는 사용되는 투약량 및 농도에서 그것이 노출되는 세포 또는 포유류에 대해 비독성인 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정제를 포함한다. 종종 생리적으로 허용 가능한 담체는 수성 pH 완충 용액이다. 생리적으로 허용 가능한 담체의 예는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산; 아스코르브산을 포함하는 항산화제; 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 알기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물(글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함); 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 솔비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 플루로닉스(PLURONICS)™를 포함한다.
본 명세서에 기재된 용어 "세포자멸사" 세포내 세포 파괴의 유전자 관련 과정을 지칭한다. 세포자멸사는 괴사와 별개이며, 이는 세포골격 파괴, 세포질 수축 및 축합, 세포막 외면 상에서 포스파티딜세린의 발현 및 기포형성을 포함하여 세포막 결합 소포 또는 세포자멸사 몸체의 형성을 초래한다. 상기 과정은 또한 "세포예정사"로 지칭된다. 세포자멸사 동안, 특징적 현상, 예컨대 곡선 세포 표면, 핵 염색질의 축합, 염색체 DNA의 단편화 및 미토콘드리아 기능의 상실이 관찰된다. 세포자멸사를 검출하기 위해 다양한 공지된 기법, 예컨대 아넥신 V, 요오드화 프로피듐, DNA 단편화 분석 및 YO-PRO-1(인비트로젠(Invitrogen))을 이용하는 세포 염색이 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 아넥신 V 및 요오드화 프로피듐을 이용하는 염색이 사용될 수 있고, 아넥신 V+/PI+, 아넥신 V+/PI- 및 아넥신 V-/PI+ 집단의 조합된 백분율은 사멸 세포로서 고려된다.
본 명세서에 기재된 용어 "Siglec-5의 세포 수준을 감소시키거나, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 둘 다인 제제"는 시험관내, 인시추 및/또는 생체내에서 Siglec-5(포유류, 예컨대 인간 Siglec-5) 생물학적 활성을 감소시키거나(상당히 포함), 줄이거나, 차단시키거나, 저해하거나 또는 방해하는 분자를 지칭한다. 용어 "제제"는 어떤 것이든 생물학적 작용의 특정 메커니즘을 나타내지 않으며, 직접적이든 또는 간접적이든 Siglec-5와의 모든 가능한 약학적, 생리적 및 생화학적 상호작용, 및 Siglec-5, 그의 리간드 중 하나 이상과의, 또는 다양하게 상이한 그리고 화 화학적으로 다양한 조성물에 의해 달성될 수 있는 다른 메커니즘 및 그의 결과를 통해, 상호작용하는지의 여부를 명백하게 포함한다. 예시적인 제제는 Siglec-5에 특이적으로 결합하는 항-Siglec-5 항체, 가용성 Siglec-5 수용체 단백질, 가용성 Siglec-5-Fc 융합 단백질(예를 들어, Siglec-5 면역접합체(immunoadhesin)), Siglec-5 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, Siglec-5 리간드에 결합하는 Siglec-Fc 융합 단백질(예를 들어, Siglec 면역접합체), Siglec-5를 암호화하는 핵산에 관한 안티센스 분자, Siglec-5를 암호화하는 핵산에 관한 짧은 간섭 RNA("siRNA") 분자, Siglec-5 저해 화합물, Siglec-5에 결합하는 RNA 또는 DNA 앱타머, 및 Siglec-5 구조적 유사체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 저해제(예를 들어, 항체)는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키거나, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 둘 다인 제제에 결합하고(물리적으로 상호작용하고), Siglec-5 리간드에 결합하고/하거나, Siglec-5 합성 또는 생성을 저해한다(감소시킨다). 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 저해제 제제는 Siglec-5에 결합하고, 그의 리간드 중 하나 이상에 대한 그의 결합을 방지한다. 또 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 제제는 Siglec-5의 발현(즉, 전사 또는 번역)을 감소시키거나 또는 제거한다. Siglec-5의 세포 수준을 감소시키거나, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 둘 다인 제제 유형의 예가 본 명세서에 제공된다.
본 명세서에 기재된 용어 "Siglec-5에 결합하거나 또는 이와 상호작용하는 제제"는 Siglec-5 단백질과 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 분자를 지칭한다. 용어 "제제"는 어떤 것이든 생물학적 작용의 특정 메커니즘을 나타내지 않으며, 직접적이든 또는 간접적이든 Siglec-5와의 모든 가능한 약학적, 생리적 및 생화학적 상호작용, 및 Siglec-5와의, 또는 다양하게 상이한 그리고 화 화학적으로 다양한 조성물에 의해 달성될 수 있는 다른 메커니즘 및 그의 결과를 통해, 상호작용하는지의 여부를 명백하게 포함한다. 예시적인 제제는 Siglec-5에 특이적으로 결합하는 항-Siglec-5 항체를 포함하지만, 이것으로 제한되지 않는다.
본 명세서에 기재된 용어 "RNA 간섭" 또는 "RNAi"는 일반적으로 이중 가닥 RNA 분자 또는 짧은 헤어핀 RNA 분자가 이중 가닥 또는 짧은 헤어핀 RNA 분자와 실질적인 또는 전체 상동성을 공유하는 핵산 서열의 발현을 감소시키거나 또는 저해하는 과정을 지칭한다. 용어 "짧은 간섭 RNA" 또는 "siRNA" 또는 "RNAi 제제"는 RNA 간섭을 유발하는 RNA 서열을 지칭한다. 크루저(Kreutzer) 등의 WO 00/44895; 제르니카-코에츠(Zernicka-Goetz) 등의 WO 01/36646; 파이어(Fire)의 WO 99/32619; 멜로 및 파이어(Mello and Fire)의 WO 01/29058 참조. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, siRNA 분자는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드 및 비-뉴클레오타이드를 포함하는 RNA 분자를 포함한다. 용어 "ddRNAi 제제"는 외인성 벡터로부터 전사된 DNA-관련 RNAi 제제를 지칭한다. 용어 "짧은 헤어핀 RNA" 또는 "shRNA"는 이중가닥 영역 및 루프 영역을 갖는 RNA 구조를 지칭한다. 특정 실시형태에서, ddRNAi 제제는 초기에 shRNA로서 발현된다.
본 명세서에 기재된 용어 "앱타머"는 목적으로 하는 분자 표적에 단단하게 그리고 특이적으로 결합할 수 있는 이종성 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 통상적인 대사 보조인자(예를 들어, 조효소 A, S-아데노실 메티오닌 등), 단백질(예를 들어, 상보체 단백질 C5, 항체 등), 또는 핵산 분자에서 보존된 구조적 요소(예를 들어, 전사 인자 등의 결합에 중요한 구조)를 지칭한다. 앱타머는 전형적으로 길이가 약 10 내지 약 100개의 뉴클레오타이드, 길이가 약 10 내지 약 75개의 뉴클레오타이드, 길이가 약 10 내지 약 50개의 뉴클레오타이드, 길이가 약 10 내지 약 35개의 뉴클레오타이드 및 길이가 약 10 내지 약 25개의 뉴클레오타이드의 범위인 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 합성 DNA 또는 RNA 올리고뉴클레오타이드는 표준 고체상 포스포르아미다이트 방법 및 기기를 이용하여, 예컨대, 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)(캘리포니아주 포스터 시티에 소재)로부터 입수 가능한 3900 고처리율 DNA 합성기(3900 High Throughput DNA Synthesizer™)를 이용함으로써 제조될 수 있다. 앱타머는 뉴클레아제에 대한 저항, 결합 아비디티를 증가시키기 위해, 또는 다르게는 그들의 약동학적 특성을 변경시키기 위해 골격 또는 연결 변형(예를 들어, 펩타이드 핵산(PNA) 또는 포스포티오에이트 결합)을 포함하는 DNA 및 RNA(예를 들어, A, G, C 및 T/U)에서 발견되는 통상적으로 생기는 뉴클레오타이드의 유도체 또는 유사체를 빈번하게 혼입한다. 예시적인 변형은 미국 특허 제6,455,308호; 제4,469,863호; 제5,536,821호; 제5,541,306호; 제5,637,683호; 제5,637,684호; 제5,700,922호; 제5,717,083호; 제5,719,262호; 제5,739,308호; 제5,773,601호; 제5,886,165호; 제5,929,226호; 제5,977,296호; 제6,140,482호; 및 WIPO 공개 WO00/56746 및 WO01/14398에서 제시된다. 이러한 유사체 또는 유도체를 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 합성하는 방법은, 예를 들어, 상기 인용한 특허 공보에서, 그리고 미국 특허 제6,455,308호; 제5,614,622호; 제5,739,314호; 제5,955,599호; 제5,962,674호; 제6,117,992호; 및 WO 00/75372에 개시된다.
본 명세서에 사용된 용어 "약"은 당업자에게 용이하게 알려진 각각의 값에 대한 보통의 오차 범위를 지칭한다. 본 명세서의 "약" 값 또는 매개변수에 대한 언급은 특정 값 또는 매개변수에 관한 실시형태를 포함한다(그리고 기재한다).
본 명세서에서 사용되고 첨부하는 청구 범위에서, 단수의 형태는 문맥에서 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 하나 내지 다수의 항체, 예컨대 몰량에 대한 언급이며, 당업자에게 공지된 동등물 등을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 개시내용의 양상 및 실시형태는 "포함하는", "이루어진" 및 "본질적으로 이루어진" 양상 및 실시형태를 포함한다는 것이 이해된다.
개요
본 개시내용은 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나, 호중구에서 활성 산소종(ROS) 생산을 유도 또는 증가시키고/시키거나, 호중구에서 호중구 세포외 트랩(NET) 형성을 유도 또는 증가시키고/시키거나, 대식세포에서 식세포작용 활성을 증가시키고/시키는 항-Siglec-5 항체; 이러한 항-Siglec-5 항체를 제조 및 또는 이용하는 방법; 이러한 항-Siglec-5 항체를 함유하는 약제학적 조성물; 이러한 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 핵산); 및 이러한 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 핵산을 함유하는 숙주 세포에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 분해, 하향 조절, 절단, 수용체 탈민감성, 및/또는 Siglec-5의 리소좀 표적화를 유도함으로써 Siglec-5의 세포 발현(예를 들어, 세포 표면 발현)을 감소시키는 항체의 능력에 적어도 부분적으로 기인하는 하나 이상의 길항적 활성을 가질 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체-유도 Siglec-5 활성은 Siglec-5에 노출된 항체 밀도를 증가시키기 위해 전장 항-Siglec-5 항체의 플레이트-결합을 시험하는 것, 2차 항체와 항-Siglec-5 항체를 가교시키는 것, 하나 이상의 Fcg 수용체(예를 들어, FcgRIIB)를 발현시키는 세포와 항-Siglec-5 항체를 가교시키는 것, 용액 중의 Siglec-5 항체를 이용하는 것, 및 Siglec-5 항체의 Fab 단편을 이용하는 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 본 명세서에 개시된 임의의 기법에 의해 시험관내에서 결정되거나 또는 시험될 수 있다.
본 개시내용의 특정 양상은, 적어도 부분적으로, 하나 이상의 Siglec-5 활성의 감소, 중화, 예방 또는 커빙(curbing)을 초래하는 세포 상의 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시키는 능력을 나타내는 항-Siglec-5 항체의 식별에 기반한다. 예시적인 Siglec-5 활성은 Src 패밀리 타이로신 키나제, 예컨대 Syk, LCK, FYM 및/또는 ZAP70에 의한 Tyr-520 및 Tyr-544의 인산화; 타이로신-특이적 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 보충 및 이에 대한 결합; Dynamini-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 보충 및 이에 대한 결합; SH2-도메인 함유 단백질(예를 들어, Crkl)의 보충 및 이에 대한 결합; 비장 타이로신 키나제 Syk의 보충 및 이에 대한 결합; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합 단백질 2(Grb2)의 보충 및 이에 대한 결합; 다중 SH2-함유 단백질의 보충 및 이에 대한 결합; 하나 이상의 전-염증 사이토카인, 예컨대 IFN-α4, IFN-베타, IL-1β, IL-1알파, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, CRP, MCP-1 및 MIP-1-베타의 조절된 발현; 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구 및 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 전-염증 사이토카인의 조절된 발현; 하나 이상의 항-염증 사이토카인, 예컨대 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체의 증가된 발현; 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구 및 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 항-염증 사이토카인의 조절된 발현; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX 및 PYCARD로부터 선택된 하나 이상의 단백질의 조절된 발현; 세포외 신호-조절된 키나제(ERK) 인산화의 저해; 하나 이상의 세포 단백질 상의 타이로신 인산화 감소(선택적으로, 하나 이상의 세포 단백질이 ZAP-70을 포함하고, 타이로신 인산화가 ZAP-70의 Tyr-319 상에서 일어남); C-C 케모카인 수용체 7(CCR7)의 조절된 발현; CCL19-발현 및 CCL21-발현 세포에 대한 미세아교세포의 세포 주화성 저해; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, 단핵구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, M2 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구 및 M2 NK 세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에 의해 유도된 T 세포 증식의 감소; 파골세포 생산의 저해, 파골세포형성 속도 감소, 또는 둘 다; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포 생존의 감소; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포 증식의 감소; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포 이동의 저해; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 하나 이상의 기능 저해; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 성숙 저해; 세포자멸사 뉴런 클리어런스, 신경 조직 파편 클리어런스, 기능장애 시냅스 클리어런스, 비-신경 조직 파편 클리어런스, 박테리아 클리어런스, 기타 이물질 클리어런스, 질환-원인 단백질 클리어런스, 질환-원인 펩타이드 클리어런스 및 종양 세포 클리어런스로부터 선택된 한 가지 이상의 유형의 클리어런스의 저해; (선택적으로 여기서 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로부터 선택되고, 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암으로부터 선택된 암으로부터 유래됨); 세포자멸사 뉴런, 신경 조직 파편, 기능장애 시냅스, 비-신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산 또는 종양 세포의 하나 이상의 식세포 작용의 저해; (선택적으로 여기서 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA이고, 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로부터선택되며, 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 또는 갑상선 암; 종양 세포 상에서 Siglec-5 리간드에 대한 결합으로부터 선택된 암으로부터 유래됨); 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, 대식세포 및 NK 세포로부터 선택된 세포 상의 Siglec-5 리간드에 대한 결합; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 증식 활성의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포; 하나 이상의 ITAM 모티프 포함 수용체의 저해 중 하나 이상의 항-종양 세포 전이 활성의 저해(선택적으로 여기서, 하나 이상의 ITAM 모티프 포함 수용체는 TREM1, TREM2, SIRPB1, FcgR, DAP10 및 DAP12로부터 선택됨); 하나 이상의 패턴 인식 수용체(PRR)에 의한 신호전달의 저해(선택적으로 하나 이상의 PRR은 병원균-관련 분자 패턴(PAMP)을 동정하는 수용체, 손상-관련 분자 패턴(DAMP)을 동정하는 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택됨); 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I(서열번호 4)를 포함하는 하나 이상의 수용체의 저해; 하나 이상의 Toll-유사 수용체에 의한 신호전달의 저해; JAK-STAT 신호전달 경로의 저해; 활성화된 B 세포의 핵인자 카파-경쇄 인핸서(NFκB)의 저해; ITAM 모티프 포함 수용체의 탈인산화; 하나 이상의 염증 수용체의 조절된 발현, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 면역 세포 상에서 발현된 수용체, (선택적으로 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질, 및/또는 면역 세포 상에서 발현된 수용체는 CD86, C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, 및/또는 PYCARD를 포함하고, 및 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질, 및/또는 면역 세포 상에서 발현된 수용체는 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상 상에서 발현됨); 하나 이상의 Siglec-5-의존적 유전자의 발현 증가; 붕괴된 Siglec-5-의존적 유전자 발현의 정상화; 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자의 발현 감소(선택적으로 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자는 활성화된 T 세포(NFAT) 전사 인자의 핵 인자에 의해 활성화됨); 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 기능 촉진 또는 구조(rescuing); 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양 내로의 침윤 증가; 종양 내, 말초 혈액 또는 다른 림프계 기관 내 종양-촉진성 골수/과립구 면역-억제 세포 수 증가; 골수-유래 억제자 세포의 종양-촉진 활성 향상; 종양 내 또는 말초 혈액 내 종양-촉진성 사이토카인의 발현 증가(선택적으로 종양-촉진성 사이토카인은 VEGF, TGF-베타, 또는 IL-10임); 종양-촉진성 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤 증가; 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 종양-촉진 활성 향상; 조절 B 세포의 종양-촉진 활성 향상; 면역억제자 호중구의 종양-촉진 활성 향상; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구 활성화 감소; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 NK 세포의 침윤 감소; NK 세포의 종양 사멸 가능성 감소; 면역 반응을 향상시킬 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구 침윤 감소; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 침윤 감소; 종양 용적 증가; 종양 성장 속도 증가; 전이 증가; 종양 재발률 증가; 항-종양 T 세포 반응을 조절하는 하나 이상의 면역 요법의 효능 감소(선택적으로 하나 이상의 요법은 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, TREM1, TREM2, CD39, CD73, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된, 또는 하나 이상의 암 백신의 하나 이상의 표적 단백질을 표적화하는 면역 요법임); PLCγ/PKC/칼슘 동원의 저해; 및 PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 저해를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 제제, 예컨대 Siglec-5 차단 항체를 이용하는 암의 치료는: (i) 종양에서, 말초 혈액에서, 그리고 암 환자의 림프 기관에서 축적되는 종양-촉진 골수성/과립구 면역-억제 세포의 생존, 증식, 성숙, 분화 및/또는 작용성을 직접적으로 또는 간접적으로 감소시키고; (ii) 종양에서, 말초 혈액에서, 그리고 암환자의 다른 림프 기관에서 종양-촉진 골수성/과립구 면역-억제 세포 수의 감소시키며; (iii) 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 종양-촉진 활성 차단하고; (iv) 암 환자의 종양에서, 말초 혈액에서, 그리고 다른 림프 기관에서 종양-촉진성 조절 B 세포의 수를 감소시키며; (v) 종양에서 그리고 암 환자의 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인, 예컨대 TGF-베타 및 IL-10의 발현 감소시키고; (vi) 종양에서 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구 침윤 감소시키며; (vii) 종양 사멸 잠재력을 갖는 T 림프구의 침윤 및 활성화 증가시키고; (viii) 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 NK 세포의 침윤 증가시키며; (ix) NK 세포의 종양 사멸 잠재력 증가시키고; (x) 면역반응을 향상시키는 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구의 침윤 증가시키며; (xi) 종양 용적 감소시키고; (xii) 종양 성장 속도 감소시키며; (xiii) 전이의 감소 및/또는 저해시키고; (xiv) 종양 재발률을 감소시키며; (xv) 항-종양 T 세포 반응, 예컨대 PD1/PDL1, CTLA4, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, KIR, GAL9, CD2, CD5, CD39, CD73, CD30, TIGIT, VISTA, TIM1, TIM3, TIM4 및 암 백신을 조절하는 면역 요법 효능 증가, (xvi) PLCγ/PKC/칼슘 가동을 유도, 활성화 또는 달리 증가시키고; 그리고 (xvii) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달을 유도, 활성화 또는 달리 증가시킨다.
면역억제자 세포는 때때로 또한 골수-유래 억제자 세포(MDSC)로서 지칭된다. 인간에서, MDSC는 마커의 다음의 조합 중 하나에 의해 정해질 수 있다: (1) CD14+ HLA-DRlow/-, (2) CD14+ IL4Rα+, (3) CD14+ HLA-DR- IL4Rα+, (4) CD34+ CD14+ CD11b+ Siglec-5+, (5) CD11b+ CD14+ Siglec-5+, (6) Siglec-5+ HLA-DR-, (7) Lin- HLA-DR-, (8) Lin- HLA-DR- Siglec-5+, (9) Lin- HLA-DR- Siglec-5+ CD11b+, (10) Lin- Siglec-5+ CD11b+ CD15+, (11) Lin- HLA-DR- Siglec-5+ CD11b+ CD14- CD15+, (12) CD11b+ CD14- Siglec-5+, (13) CD11b+ CD14- HLA-DR- Siglec-5+ CD15+, (14) Siglec-5+ HLA-DR- CD15+, (15) CD15+ IL4Rα+, (16) CD11b+ CD15+ CD66b+, (17) CD15+ FSClow SSChigh, (18) CD15high Siglec-5+, (19) CD11b+ CD14- CD15+, (20) CD66b+ SSChigh, 및 (21) CD11b+ CD15+(또한 문헌[Solito S et al. Annals of the NY Academy of Sciences, 2014] 참조). 마우스에서, MDSC는 CD45+, CD11b+, Gr1+ 및/또는 Il4Ra+의 표면 마커의 발현에 의해 정해질 수 있다. 추가적인 예시적 면역억제성 단핵구 계통은 CD45+, CD11b+, Gr1low; 및 CD45+, CD11c+이다.
본 개시내용은 추가로 Siglec-5에 결합하거나 이와 상호작용하는 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시키고, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않는다. 특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Sigelc-5에 결합하고, 인간 Siglec-14에는 결합하지 않는다. 특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 결합하지만, 사이노(cyno) Siglec-5에는 결합하지 않는다.
Siglec-5 단백질
일 양상에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 Siglec-5 단백질 내에서 영역, 예컨대 에피토프와 상호작용하거나 또는 달리 결합하는 항체, 예컨대 단리된(예를 들어, 단클론성) 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 단백질에 결합하고, Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 하나 이상의 Siglec-5 활성, 예를 들어, 세포 내에서 Siglec-5 발현과 관련된 활성을 조절한다. 본 개시내용의 Siglec-5 단백질은 포유류 Siglec-5 단백질, 인간 Siglec-5 단백질, 마우스 Siglec-5 단백질, 및 랫트 Siglec-5 단백질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
Siglec-5는 Siglec-5 분자, 시알산-결합 Ig-유사 렉틴 5, CD170 항원, CD170, OBBP2, CD33L2 및 OB-BP2로서 다양하게 지칭된다.
Siglec-5는 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 수지상 세포, 파골세포, 단핵구 및 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 면역 세포 상에서 주로 발현되는 면역글로불린-유사 수용체이다. 일부 실시형태에서, Siglec-5는 CD64와 수용체-신호전달 복합체를 형성한다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 신호전달은 PI3K 또는 다른 세포내 신호의 하류 저해를 초래한다. 골수 세포 상에서, Toll-유사 수용체(TLR) 신호는, 예를 들어, 감염 반응과 관련하여, Siglec-5 활성의 저해에 중요하다. TLR은 또한 병적 염증 반응, 예를 들어, 대식세포, 호중구, NK 세포 및 수지상 세포에서 발현되는 TLR에서 중요한 역할을 한다.
인간 Siglec-5, 사이노몰거스 원숭이 Siglec-5, 및 마우스 Siglec-5를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 다양한 Siglec-5 상동체가 공지되어 있다. 인간 Siglec-5의 아미노산 서열은 이하에서 서열번호 1로서 제시된다:
Figure pct00003
일부 실시형태에서, Siglec-5는 신호 서열을 포함하는 프레단백질(preprotein)이다. 일부 실시형태에서, Siglec-5는 성숙 단백질이다. 일부 실시형태에서, 성숙 Siglec-5 단백질은 신호 서열을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 성숙 Siglec-5 단백질은 세포 상에서 발현된다. 일부 실시형태에서, 성숙 Siglec-5 단백질은, 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 호중구, 인간 B 세포, 인간 T 세포, 인간 헬퍼 T 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구 및 인간 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 세포, 예컨대 세포 표면 상에서 발현된다. 본 개시내용의 제제, 예컨대, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 본 명세서에 개시된 임의의 세포 상에서 발현되는 임의의 본 개시내용의 Siglec-5 단백질에 결합할 수 있다.
본 개시내용의 Siglec-5 단백질, 예컨대 인간 Siglec-5는 서열번호 1의 아미노산 잔기 1 내지 16에 위치된 신호 서열, 서열번호 1의 아미노산 잔기 19 내지 136에 위치된 세포외 면역글로불린-유사 가변-유형(IgV) 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 146 내지 229 및 236 내지 330에 위치된 2개의 Ig-유사 C2-유형 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 442 내지 462에 위치된 막관통 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 518 내지 523에 위치된 ITIM 모티프 1, 및 서열번호 1의 아미노산 잔기 542 내지 547에 위치된 SLAM-유사 모티프를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 몇몇 도메인을 포함한다. 당업자가 인식하는 바와 같이, 본 개시내용의 도메인의 시작 및 종결 잔기는 도메인을 결정하기 위해 사용되는 컴퓨터 모델링 또는 사용되는 방법에 따라서 다를 수 있다.
본 개시내용의 특정 양상은 인간 Siglec-5에 결합하는 항-Siglec-5 항체를 제공한다. 본 개시내용의 특정 양상은 인간 Siglec-5에 결합하지만, 사이노 Siglec-5에는 결합하지 않는 항-Siglec-5 항체를 제공한다.
따라서, 본 명세서에서 사용하는 바와 같은 본 개시내용의 "Siglec-5" 단백질은 포유류 Siglec-5 단백질, 인간 Siglec-5 단백질, 및 영장류 Siglec-5 단백질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가적으로, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 포유류 Siglec-5 단백질, 인간 Siglec-5 단백질 및 영장류 Siglec-5 중 하나 이상 내의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다.
일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 pH 의존적 방식으로 Siglec-5에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 중성 pH에서 Siglec-5에 결합할 수 있고, Siglec-5 단백질로부터 해리되는 일 없이 내재화될 수 있다. 대안적으로, 산성 pH에서 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 일단 그들이 내재화되고, 이어서 엔도좀/라이소좀 경로에 의해 분해된다면, Siglec-5로부터 해리될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 5.5 내지 8.0, 5.5 내지 7.5, 5.5 내지 7.0, 5.5 내지 6.5, 5.5 내지 6.0, 6.0 내지 8.0, 6.5 내지 8.0, 7.0 내지 8.0, 7.5 내지 8.0, 6.0 내지 7.5, 6.0 내지 7.0, 6.5 내지 7.5 범위의 pH에서 Siglec-5에 결합한다. 특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 6.0 미만, 5.5 미만, 5.0 미만, 4.5 미만, 4.0 미만, 3.5 미만, 3.0 미만, 2.5 미만 또는 2.0 미만의 pH에서 Siglec-5로부터 해리된다.
일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키거나, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않거나, 또는 Siglec-5, 예컨대, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 결합하거나 또는 상호작용하는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 야생형 본 개시내용의 Siglec-5 단백질, 이의 천연 유래 변이체 및/또는 이의 질환 변이체에 결합한다.
일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5의 변이체에 결합한다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-14에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 사이노 Siglec-5에 결합하지 않는다.
일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 NK 세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 호중구, 인간 B 세포, 인간 T 세포, 인간 T 헬퍼 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구 및 인간 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 세포 표면 상에서 발현되는 Siglec-5 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포 표면 상에서 발현된 Siglec-5 단백질에 결합하고, 표면 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후에 본 개시내용의 적어도 하나의 Siglec-5 활성을 조절한다(예를 들어, 유도 또는 저해한다). 본 개시내용의 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 단백질에 특이적으로 결합한다.
Siglec-5 리간드
예시적인 Siglec-5 리간드는 시알산, 시알산-함유 당지질, 시알산-함유 당단백질, 당지질을 함유하는 알파-2,8-다이시알릴, 분지된 알파-2,6-연결 시알산-함유 당단백질, 말단의 알파-2,6-연결 시알산-함유 당지질, 말단의 알파-2,3-연결 시알산-함유 당단백질, 다이시알로강글리오사이드(예를 들어, 시알산화 글리칸에 연결된 세라마이드를 함유하는 강글리오사이드 또는 당지질), 분비된 뮤신, 적혈구 상에서 발현된 Siglec-5 리간드,박테리아 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 세포자멸사 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 신경 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 신경교 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 미세아교세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 성상세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 종양 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 바이러스 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 수지상 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 베타 아밀로이드 플라크에 결합된 Siglec-5 리간드, 타우 단백질 엉킴에 결합된 Siglec-5 리간드, 질환-원인 단백질 상의 Siglec-5 리간드, 질환-원인 펩타이드 상의 Siglec-5 리간드, 대식세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 호중구 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 단핵구 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 단핵구 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, T 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, T 헬퍼 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 세포독성 T 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, B 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 종양-포매 면역억제자 대식세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 골수-유래 억제자 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드, 및 조절 T 세포 상에서 발현된 Siglec-5 리간드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 Siglec-5 리간드는 강글리오사이드(예를 들어, 다이시알로강글리오사이드)이다. 다이시알로강글리오사이드 일반적으로 통상적인 락토-세라마이드 코어 및 하나 이상의 시알산 잔기를 공유한다.
적합한 강글리오사이드(예를 들어, 다이시알로강글리오사이드) 리간드의 추가적인 예를 표 A에 열거한다. 일반적으로, 강글리오사이드(예를 들어, 다이시알로강글리오사이드)는 당쇄 상에 연결된 하나 이상의 시알산(예를 들어, n-아세틸-네우라민산, NANA)과 함께 글리코스핑고지질로 구성된 분자이다.
[표 A]
Figure pct00004
항-Siglec-5 항체
본 개시내용의 특정 양상은 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 분해, 하향 조절, 절단, 수용체 탈민감성, 및/또는 Siglec-5의 리소좀 표적화를 유도함으로써 Siglec-5의 세포 발현(예를 들어, 세포 표면 발현)을 감소시키는 항-Siglec-5 항체의 능력에 적어도 부분적으로 기인하는 하나 이상의 활성을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 시험관내 Siglec-5의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 생체내 Siglec-5의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 재조합 인간 Siglec-5를 발현시키는 세포(예를 들어, CHO 세포)에서 Siglec-5의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 1차 면역 세포(예를 들어, B 세포)를 포함하는 면역 세포에서 Siglec-5의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 대식세포에서(예를 들어, 인간 대식세포에서) Siglec-5의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 양극화된 대식세포에서(예를 들어, 양극화된 인간 대식세포에서) Siglec-5의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 M0 대식세포에서, M1 대식세포에서, 그리고/또는 M2a 대식세포에서 Siglec-5의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하지 않는다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하지 않는다. 본 개시내용의 다른 양상은 호중구에서 활성 산소종(ROS) 생산을 유도하고/하거나 호중구에서 호중구 세포외 트랩(NET) 형성을 유도하는 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 본 개시내용의 다른 양상은 호중구에서 활성 산소종(ROS) 생산을 줄이거나 감소시키고/시키거나 호중구에서 호중구 세포외 트랩(NET) 형성을 줄이거나 감소시키는 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다.
본 명세서에 개시된 바와 같은 Siglec-5는 세포 상에서 구성적으로 재순환될 수 있고, 이렇게 해서 세포 표면 상에서 Siglec-5에 결합하는 임의의 제제(예를 들어, 항체)를 세포 내로 재순환시킬 수 있다(예를 들어, 내포작용). 그러나, 이러한 내포작용은 Siglec-5의 세포 수준(예를 들어, 세포 표면 수준)의 감소를 야기하지 않을 수도 있다. 급성 골수성 백혈병(AML) 세포가 표면-발현된 Siglec-5에 결합된 항-Siglec-5 항체의 내포작용을 매개할 수 있는 것으로 나타났지만, Siglec-5의 세포 수준 감소는 입증되지 않았다. 따라서, 본 개시내용의 특정 양상은 세포 표면-발현된 Siglec-5에 결합할 뿐만 아니라, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항-Siglec-5 항체에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포 표면-발현된 Siglec-5에 결합하고, 추가로 세포 내로의 내포작용이 일어난다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포 내로의 내포작용이 일어나는 일 없이 세포 표면-발현된 Siglec-5에 결합한다.
Siglec-5의 세포 수준은, 제한 없이, Siglec-5의 세포 표면 수준, Siglec-5의 세포내 수준 및 Siglec-5의 총 수준을 지칭할 수 있다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준의 감소는 Siglec-5의 세포 표면 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-Siglec-5 항체는, 그것이 Siglec-5의 세포 표면 수준을 측정하기 위해 본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 분석 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정하여, 예를 들어, 유세포 분석, 예컨대 형광-활성화 세포 분류(FACS)를 이용하여, Siglec-5의 세포 표면 수준에서 20% 이상의 감소를 유도한다면 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준의 감소는 Siglec-5의 세포내 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-Siglec-5 항체는, 그것이 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 적합한 생체내 모델, 예를 들어 면역염색, 웨스턴 블롯 분석, 공동면역침전 및 세포측정법에 의해 측정하여 Siglec-5의 세포내 수준의 20% 이상의 감소를 유도한다면, Siglec-5의 세포 내 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준의 감소는 Siglec-5의 총 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-Siglec-5 항체는, 그것이 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 적합한 생체내 모델, 예를 들어 면역염색, 웨스턴 블롯 분석, 공동면역침전 및 세포측정법에 의해 측정하여 Siglec-5의 총 수준의 20% 이상의 감소를 유도한다면, Siglec-5의 총 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 분해, Siglec-5 절단, Siglec-5 내재화, Siglec-5 쉐딩, 및/또는 Siglec-5 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준은 1차 세포(예를 들어, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포 및 대식세포) 상에서 또는 시험관내 세포 분석을 이용하는 세포주 상에서 측정된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 항체의 부재 하에서 Siglec-5의 세포 수준에 비해 적어도 20%, 적어도 21%, 적어도 22%, 적어도 23%, 적어도 24%, 적어도 25%, 적어도 26%, 적어도 27%, 적어도 28%, 적어도 29%, 적어도 30%, 적어도 31%, 적어도 32%, 적어도 33%, 적어도 34%, 적어도 35%, 적어도 36%, 적어도 37%, 적어도 38%, 적어도 39%, 적어도 40%, 적어도 41%, 적어도 42%, 적어도 43%, 적어도 44%, 적어도 45%, 적어도 46%, 적어도 47%, 적어도 48%, 적어도 49%, 적어도 50%, 적어도 51%, 적어도 52%, 적어도 53%, 적어도 54%, 적어도 55%, 적어도 56%, 적어도 57%, 적어도 58%, 적어도 59%, 적어도 60%, 적어도 61%, 적어도 62%, 적어도 63%, 적어도 64%, 적어도 65%, 적어도 66%, 적어도 67%, 적어도 68%, 적어도 69%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 이상만큼 Siglec-5의 세포 수준을 감소시킨다.
본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 분석 또는 적합한 생체내 모델은 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)의 저해를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 결합하고, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-Siglec-5 항체는, 본 명세서에 기재되거나 또는 당업계에 공지된 임의의 시험관내 분석 또는 세포 기반 배양 분석을 이용하여 그것이 포화 항체 농도에서 20% 미만만큼 Siglec-5에 대한 리간드 결합을 감소시킨다면, Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재되거나 또는 당업계에 공지된 임의의 시험관내 분석 또는 세포 기반 배양 분석을 이용하여 포화 항체 농도에서 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만만큼 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, Siglec-5의 수준은 Siglec-5를 암호화하는 유전자의 발현 수준; Siglec-5를 암호화하는 하나 이상의 전사체의 발현 수준; Siglec-5 단백질의 발현 수준; 및/또는 세포 내의 그리고/또는 세포 표면 상에 존재하는 Siglec-5 단백질의 양을 지칭할 수 있다. 유전자 발현, 전사, 번역 및/또는 단백질 존재비 또는 국소화 수준을 측정하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법은 Siglec-5 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
추가적으로, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및/또는 암을 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식의 유도 또는 촉진이 필요한 개체에서 이들을 유도하거나 또는 촉진시키기 위해; 또는 조절 B 세포, 조절 T 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 골수-유래 억제자 세포, 종양-연관 대식세포, 급성 골수성 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포, 및/또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포의 활성, 작용성 또는 생존의 감소가 필요가 필요한 개체에서 이들의 감소를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 단클론성 항체이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준(예를 들어, 세포 표면 수준, 세포내 수준 및/또는 총 수준)을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 절단을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 내재화를 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 쉐딩을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 분해를 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 탈감작을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5를 일시적으로 활성화시키기 위해 리간드 모방체로서 작용한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, Siglec-5의 세포 수준 감소를 유도하기 전에 Siglec-5를 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, Siglec-5의 분해를 유도하기 전에 Siglec-5를 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, Siglec-5의 절단을 유도하기 전에 Siglec-5를 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, Siglec-5의 내재화를 유도하기 전에 Siglec-5를 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, Siglec-5의 쉐딩을 유도하기 전에 Siglec-5를 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, Siglec-5 발현의 하향조절을 유도하기 전에 Siglec-5를 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, Siglec-5의 탈감작을 유도하기 전에 Siglec-5를 일시적으로 활성화시킨다.
특정 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않는 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 결합하거나 이와 물리적으로 상호작용하는 항-Siglec-5 항체이다. 항-Siglec-5 항체는 표적 항원(예를 들어, Siglec-5)에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화도를 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체의 kd는 약 10pM 내지 약 100nM이다. 예를 들어, 항체의 Kd는 임의의 약 100nM, 약 50nM, 약 10nM, 약 1nM, 약 900pM, 약 800pM, 약 790pM, 약 780pM, 약 770pM, 약 760pM, 약 750pM, 약 740pM, 약 730pM, 약 720pM, 약 710pM, 약 700pM, 약 650pM, 약 600pM, 약 590pM, 약 580pM, 약 570pM, 약 560pM, 약 550pM, 약 540pM, 약 530pM, 약 520pM, 약 510pM, 약 500pM, 약 450pM, 약 400pM, 약 350 pM, 약 300pM, 약 290pM, 약 280pM, 약 270pM, 약 260pM, 약 250pM, 약 240pM, 약 230pM, 약 220pM, 약 210pM, 약 200pM, 약 150pM, 약 100pM, 약 50pM, 약 40pM, 약 30pM, 또는 약 20pM, 또는 약 15 pM 내지 임의의 약 1pM, 약 2pM, 약 3pM, 약 4pM, 약 5pM, 약 6pM, 약 7pM, 약 8pM, 약 9pM, 약 10pM, 약 11pM, 약 12pM, 약 13pM 또는 약 14pM이다. Siglec-5에 대한 특이성에 의해 상호작용하고/하거나 결합하는 항체의 제조 및 선택 방법이 본 명세서에 기재된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 뮤린 항체이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체는 인간 항체, 인간화된 항체, 이중특이성 항체, 단클론성 항체, 다가 항체, 또는 키메라 항체이다. 이러한 항체의 예시적인 설명은 본 개시내용 전체적으로 발견된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 결합하지만, Siglec-14에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 결합하지만, 인간 Siglec-14에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 결합하지만, 사이노 Siglec-5에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 대한 리간드 결합을 차단하지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 유도 또는 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 시험관내 세포에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 유도 또는 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 생체내 세포에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 유도 또는 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 호중구에서, 1차 호중구에서, 인간 호중구에서 그리고/또는 1차 인간 호중구에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 유도 또는 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 시험관내 세포에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 생체내 세포에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 호중구에서, 1차 호중구에서, 인간 호중구에서 그리고/또는 1차 인간 호중구에서 활성 산소종(ROS)의 생산을 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 유도 또는 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 시험관내 세포에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 유도 또는 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 생체내 세포에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 유도 또는 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 호중구에서, 1차 호중구에서, 인간 호중구에서 그리고/또는 1차 인간 호중구에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 유도 또는 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 시험관내 세포에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 생체내 세포에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 호중구에서, 1차 호중구에서, 인간 호중구에서 그리고/또는 1차 인간 호중구에서 호중구 세포외 트랩(NET)의 생산 또는 형성을 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현을 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 대식세포에서 식세포작용 활성을 유도 또는 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 대식세포에서 식세포작용 활성을 유도 또는 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 1차 인간 대식세포에서 식세포작용 활성을 유도 또는 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 M0 대식세포에서, M1 대식세포에서, 그리고/또는 M2a 대식세포에서 식세포작용 활성을 유도 또는 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 시험관내 대식세포에서 식세포작용 활성을 유도 또는 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 생체내 시험관내 대식세포에서 식세포작용 활성을 유도 또는 향상시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포 표면 상에서 발현된 본 개시내용의 Siglec-5 단백질에 결합하는 작용제 항체 또는 길항제 항체이며, 표면-발현된 Siglec-5 단백질에 결합 후에 본 개시내용의 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절한다(예를 들어, 유도하거나 또는 저해한다). 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 비활성 항체이다.
분석
Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항-Siglec-5 항체는 당업계에 잘 공지된 방법, 예를 들어, 방사성 표지된 저해제 분석, 광학 분석, 단백질 결합 분석, 생화학적 선별 분석, 면역분석, 질량 변화 측정 분석, 형광 분석 및/또는 형광 펩타이드 절단 분석을 이용하여 확인되고/되거나 특성규명될 수 있다.
결합 분석 및 기타 분석
특정 실시형태에서, Siglec-5에 결합하고 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 항-Sigelc-5 항체는 항-Siglec-5 항체 후보 상호작용 존재 및/또는 Siglec-5에 대한 결합 친화도를 검출하기 위한 당업계에 잘 공지된 기법에 의해 확인될 수 있다.
특정 실시형태에서, Siglec-5와 상호작용하는 항-Siglec-5 항체는 방사성표지 저해제 분석을 이용하여 확인될 수 있다. 예를 들어, 알려진 양의 방사성표지된 제제 후보는 알려진 양의 고정된 Siglec-5 및 완충제와 함께 인큐베이션될 수 있다. 후속적으로, 고정된 Siglec-5는 완충제로 세척될 수 있고, 고정된 Siglec-5는, 예를 들어, 감마 상대와 같은 당업계에 공지된 기법을 이용하여 방사성표지된 항-Siglec-5 항체 후보의 남아있는 존재에 대해 측정될 수 있다. 방사성표지된 물질의 존재를 나타내는 측정은 방사성표지된 항체 후보가 Siglec-5와 상호작용하고/하거나 결합할 수 있다는 것을 나타낼 수 있다.
특정 실시형태에서, Siglec-5와 상호작용하는 항체는 광학 기법을 이용하여 동정될 수 있다. Siglec-5 항체를 검출하기 위한 예시적인 광학 기법은, 예를 들어, 비색 공명 접합면(colorimetric resonant grafting surface)에 대한 Siglec-5의 부착을 포함할 수 있으며, 이에 의한 광학 경로에서의 변화에 기인하는 반사광의 파장의 이동을 취하고, 후속적으로 후보 제제가 Siglec-5와 상호작용하도록 허용될 때 반사광의 파장의 추가적인 변화를 측정하여야 한다. 예를 들어, 제제를 Siglec-5와 함께 인큐베이션할 때 반사광의 측정된 파장의 변화 없음은 제제 후보가 Siglec-5와 상호작용할 수 없다는 것을 나타낼 수 있다. 제제 후보를 Siglec-5와 함께 인큐베이션할 때 반사광의 측정된 파장의 변화는 항체 후보가 Siglec-5에 결합하고/하거나 상호작용할 수 있다는 것을 나타낼 수 있다.
특정 실시형태에서, Siglec-5와 상호작용하는 항체는 단백질-결합 분석을 이용하여 확인될 수 있다. Siglec-5 항체를 검출하기 위한 예시적인 단백질-결합 분석은, 예를 들어, 항체 후보의 존재 하에 Siglec-5의 공동면역침전을 포함할 수 있다. 예를 들어, Siglec-5는 완충제 중에서 항체 후보와 함께 인큐베이션될 수 있고, 후속적으로 Siglec-5, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체를 포획하는 데 특이적인 고정 분자는 항체 후보의 존재 하에 Siglec-5를 포획하기 위해 사용될 수 있고, 당업계에 공지된 세척 절차 동안 잠재적으로 상호작용 항체 후보와 함께 Siglec-5에 결합한다. 후속적으로, 잠재적으로 상호작용 항체 후보와 함께 Siglec-5는 방출될 수 있고, 항체 후보의 존재는, 예를 들어, 질량 분석법 및/또는 웨스턴 블롯과 같은 기법에 의해 항체 후보 특징에 기반하여 검출될 수 있다.
특정 실시형태에서, Siglec-5와 상호작용하는 항체는 당업계에 잘 공지된 생화학적분석 및/또는 면역분석을 이용하여 동정될 수 있다. 예시적인 기법은, 예를 들어, 웨스턴 블롯, 면역염색 및 공동면역침전과 같은 기법을 이용하여, 예를 들어, Siglec-5 농도 및/또는 단백질 반감기의 변화를 정량적으로 측정하는 분석을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 후보는 Siglec-5, 예컨대 세포 발현 Siglec-5를 함유하는 샘플과 함께 인큐베이션될 수 있고, 후속적으로 Siglec-5 단백질 양 및/또는 세포 수준은 시간 과정 연구 동안의 시점에서 측정될 수 있다. 대조군 처리에 비해 단백질 양, 세포 수준 및/또는 단백질 반감기의 변화는 Siglec-5 항체 후보가 Siglec-5 반감기 및/또는 활성을 변경시킬 수 있다는 것을 나타낼 수 있다.
특정 실시형태에서, 질량 변화 측정 분석은 Siglec-5와의 상호작용하는 항체를 동정하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 질량 변화 측정 분석은, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 질량 분석기와 같은 기기를 이용함으로써, 예를 들어 항체 후보가 Siglec-5와 상호작용할 때 Siglec-5 질량의 변화를 측정하는 것에 의해 강하게 그리고/또는 공유적으로 결합된 Siglec-5 항체의 존재를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 질량 변화 분석은 항체 후보 상호작용의 특성에 따라서 전체 단백질 및/또는 펩타이드 기반 분석에서 수행될 수 있다. Siglec-5에 대한 상기 항체 후보의 첨가와 상관 관계가 있는 질량 이동의 검출은 항체 후보가 Siglec-5와 상호작용하거나 또는 달리 저해할 수 있다는 것을 나타낼 수 있다. 추가적으로, 예시적인 질량 이동 측정 분석은, 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명과 같은 기법을 이용하여, 예를 들어 항체 후보가 Siglec-5와 상호작용할 때, 각각의 항체 후보 질량과 상호 연관되는 Siglec-5에 대한 질량의 첨가를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 광 굴절률의 변화가 측정될 수 있고, 센서 표면에 부착된 Siglec-5의 질량 변화와 상호 연관지을 수 있다.
특정 실시형태에서, 화학적 가교 분석은 Siglec-5와 상호작용하는 Siglec-5 제제를 동정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 후보는 Siglec-5와 상호작용하는 항체 후보를 상기 Siglec-5 분자에 공유 결합시킬 수 있는 분자 가교제를 이용하여 생체내 또는 시험관내에서 Siglec-5와 함께 인큐베이션될 수 있다. 후속적으로, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 질량분석법 및/또는 웨스턴 블롯과 같은 기법은 Siglec-5와 상호작용하거나 또는 달리 저해할 수 있는 항체 후보를 동정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 제제 후보와 공유적으로 가교되는 Siglec-5의 검출은 항체 후보가 Siglec-5와 상호작용하거나 또는 달리 저해할 수 있다는 것을 나타낼 수 있다.
특정 실시형태에서, Siglec-5와 상호작용하는 항체는 형광 분석을 이용하여 동정될 수 있다. 예를 들어, 알려진 양의 형광 항체 후보는 알려진 양의 고정된 Siglec-5 및 완충제와 함께 인큐베이션될 수 있다. 후속적으로, 고정된 Siglec-5는 완충제로 세척될 수 있고, 당업계에 공지된 기법, 예컨대, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 형광 검출을 이용하여 고정된 Siglec-5는 형광 Siglec-5 항체 후보의 남아있는 존재에 대해 측정될 수 있다. 형광 물질의 존재를 나타내는 측정은 형광 항체 후보가 Siglec-5와 상호작용하고/하거나 결합할 수 있다는 것을 나타낼 수 있다.
Siglec-5와 상호작용하거나, 이에 결합하는 본 개시내용의 항체를 확인하기 위해 위에 기재한 분석은 또한 Siglec-14와 상호작용 또는 결합하지 않는 항-Siglec-5 항체를 확인하는 데 사용될 수 있다.
활성 분석
본 개시내용의 Siglec-5 항체의 생물학적 활성을 동정하고 시험하기 위해 당업계에 공지되고/되거나 본 명세서에 기재된 분석이 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절하기 위한 Siglec-5 항체의 능력을 시험하기 위한 분석이 제공된다.
항-Siglec-5 항체-결합 영역
본 개시내용의 특정 양상은 인간 Siglec-5의 아미노산 잔기 17 내지 441, 19 내지 360, 19 내지 330, 19 내지 229, 19 내지 136, 146 내지 229, 또는 236 내지 330(서열번호 1) 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 17 내지 441, 19 내지 360, 19 내지 330, 19 내지 229, 19 내지 136, 146 내지 229 또는 236 내지 330에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합하는 항-Siglec-5 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 63 내지 71 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 63 내지 71에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 63 내지 71, 83 내지 92 및 125 내지 132 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 63 내지 71, 83 내지 92 및 125 내지 132에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 65 내지 71 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 65 내지 71에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 65 내지 71 및 81 내지 87 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 65 내지 71 및 81 내지 87에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 65 내지 71, 77 내지 84 및 119 내지 127 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 65 내지 71, 77 내지 84 및 119 내지 127에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 65 내지 73 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 65 내지 73에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 77 내지 84 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 77 내지 84에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 81 내지 87 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 81 내지 87에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 83 내지 92 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 83 내지 92에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 119 내지 127 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 119 내지 127에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 125 내지 132 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 125 내지 132에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 352 내지 358 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 352 내지 358에 대응하는 Siglec-5 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다.
본 개시내용의 특정 양상은 인간 Siglec-5의 아미노산 잔기 268 내지 278, 226 내지 244 또는 228 내지 238(서열번호 1) 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278, 226 내지 244 또는 228 내지 238에 대응하는 Siglec-5 단백질, 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합하는 항-Siglec-5 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 268 내지 278 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278에 대응하는 Siglec-5 단백질, 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 LSWFQGSPALN(서열번호 221) 내의 하나 이상의 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 226 내지 244 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 226 내지 244에 대응하는 Siglec-5 단백질, 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 QTITIFRNGIALEILQNTS(서열번호 220) 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 아미노산 잔기 228 내지 238 내의, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238에 대응하는 Siglec-5 단백질, 상동체 또는 오솔로그 상의 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 ITIFRNGIALE(서열번호 219) 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 입체배좌적 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 불연속 Siglec-5 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 불연속 Siglec-5 에피토프는 2개 이상의 펩타이드, 3개 이상의 펩타이드, 4개 이상의 펩타이드, 5개 이상의 펩타이드, 6개 이상의 펩타이드, 7개 이상의 펩타이드, 8개 이상의 펩타이드, 9개 이상의 펩타이드, 또는 10 개 이상의 펩타이드를 가질 수 있다. 본 명세서에 개시하는 바와 같이, Siglec-5 에피토프는 서열번호 1의 아미노산 서열의 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 11개 이상, 12개 이상, 13개 이상, 14개 이상, 15개 이상, 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열번호 1의 아미노산 서열에 대응하는 포유류 Siglec-5 단백질 상에서 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 11개 이상, 12개 이상, 13개 이상, 14개 이상, 15개 이상, 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 하나 이상의 펩타이드를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 표 2, 표 3, 표 6 및 표 7에 열거된 임의의 항체로부터 선택된 적어도 하나의 항체의 결합을 경쟁적으로 저해한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 적어도 하나의 항체의 결합을 경쟁적으로 저해한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 표 2, 표 3, 표 6 및 표 7에 열거된 임의의 항체로부터 선택된 적어도 하나의 항체에 의해 결합된 Siglec-5 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 Siglec-5의 에피토프에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 적어도 하나의 항체에 의해 결합된 Siglec-5 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 Siglec-5의 에피토프에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 표 2, 표 3, 표 6 및 표 7에 열거된 임의의 항체로부터 선택된 적어도 하나에 의해 결합된 본질적으로 동일한 Siglec-5 에피토프에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 적어도 하나의 항체에 의해 결합된 본질적으로 동일한 Siglec-5 에피토프에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하기 위한 상세한 예시적인 방법은 문헌[Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에서 제공된다.
일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체의 부재 하의 Siglec-5에 대한 결합에 비해 항-Siglec-5 항체가 약 50% 내지 100% 범위의 양만큼 Siglec-5에 대한 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체의 결합을 감소시킬 때, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체가 항-Siglec-5 항체의 부재 하의 Siglec-5에 대한 결합에 비해 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 Siglec-5에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체의 결합을 감소시킬 때, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체의 Siglec-5에 대한 결합을 100%만큼 감소시키는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 항체가 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체의 Siglec-5에 대한 결합을 필수로 경쟁적으로 차단한다는 것을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체 및 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체는 항-Siglec-5 항체 대 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체 10:1 비, 9:1 비, 8:1 비, 7:1 비, 6:1 비, 5:1 비, 4:1 비, 3:1 비, 2:1 비, 1:1 비, 0.75:1 비, 0.5:1 비, 0.25:1 비, 0.1:1 비, 0.075:1 비, 0.050:1 비, 0.025:1 비, 0.01:1 비, 0.0075: ratio,0.0050:1 비, 0.0025:1 비, 0.001: 비, 0.00075:1 비, 0.00050:1 비, 0.00025:1 비, 0.0001: 비, 1:10 비, 1:9 비, 1:8 비, 1:7 비, 1:6 비, 1:5 비, 1:4 비, 1:3 비, 1:2 비, 1:0.75 비, 1:0.5 비, 1:0.25 비, 1:0.1 비, 1:0.075 비, 1:0.050 비, 1:0.025 비, 1:0.01 비, 1:0.0075 비, 1:0.0050 비, 1:0.0025 비, 1:0.001 비, 1:0.00075 비, 1:0.00050 비, 1:0.00025 비 또는 1:0.0001 비에 대응하는 양으로 존재한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체의 양에 비해 약 1.5-배 내지 100배,또는100배 초과 범위의 양만큼 과량으로 존재한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체의 양에 비해 약 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배, 40배, 45배, 50배, 55배, 60배, 65배, 70배, 75배, 80배, 85배, 90배, 95배 또는 100배 과량의 양으로 존재한다.
임의의 적합한 경쟁 분석 또는 당업계에 공지된 Siglec-5 결합 분석, 예컨대 비아코어(BIAcore) 분석, ELISA 분석 또는 유세포분석은 Siglec-5에 대한 결합에 대해 항-Siglec-5 항체가 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 경쟁하는지의 여부를 결정하기 위해 이용될 수 있다. 예시적인 경쟁 분석에서, 세포 표면 상에서 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포는 Siglec-5에 결합하는 제1 표지 항체(예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류) 및 Siglec-5에 대한 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 능력에 대해 시험 중인 제2 비표지 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포는 제1 표지 항체를 포함하지만, 제2 비표지 항체는 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이션된다. Siglec-5에 대한 제1 항체의 결합에 허용적인 조건 하에서 인큐베이션 후에, 과량의 비결합 항체가 제거되고, 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 측정된다. 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된다면, 제2 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)] 참조.
항-Siglec-5 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 (a) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190,S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 항체 중 임의의 하나의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 (b) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 항체 중 임의의 하나의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 (i) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (ii) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; (iii) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; (iv) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (v) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (vi) S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3은 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 항체로부터의 EU 또는 카바트(Kabat) CDR, 코티아(Chothia) CDR 또는 컨택트(Contact) CDR 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 경쇄 가변 도메인은 (a) 서열번호 103 내지 115로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열번호 127 내지 135로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열번호 153 내지 163로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 중 하나 이상을 포함하고; 그리고/또는 중쇄 가변 도메인은 (a) 서열번호 20 내지 28로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 39 내지 51로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열번호 70 내지 79로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하되, (a) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (b) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; (c) HVR-H1은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하며; (d) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하며; (e) HVR-H1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하며; (f) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하며; (g) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하며; (h) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하며; (i) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하며; (j) HVR-H1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하며; (k) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하며; (l) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (m) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 (n) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체 중 임의의 하나의 경쇄 가변 영역; 및/또는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체 중 임의의 하나의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 표 2, 표 3, 표 6 및 표 7에 열거되거나 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체 중 임의의 하나의 경쇄 가변 영역; 및/또는 표 2, 표 3, 표 6 및 표 7에 열거되거나, S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체 중 임의의 하나의 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194 내지 211 중 임의의 것으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 서열번호 174 내지 193 중 임의의 것으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 194의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 195의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 175의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 177의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 179의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 181의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 182의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 183의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체가 제공되되, 항체는 위에서 제공한 임의의 실시형태에서와 같은 VH 및 위에서 제공한 임의의 실시형태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 및 193으로부터 선택된 VH 서열; 및 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 및 211로부터 선택된 VL 서열을 포함하며, 해당 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체의 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 또는 193의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 또는 193의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 비해 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 포함하지만, 해당 서열을 포함하는 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시형태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 또는 193에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 총 1 내지 5개의 아미노산이 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 또는 193에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 HVR 외부의 영역에서(즉, FR에서) 일어난다. 선택적으로, 항-Siglec-5 항체는 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 또는 193의 VH 서열을 포함하며, 해당 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH는 (a) 표 2 및/또는 표 6에 나타낸 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 2 및/또는 표 6에 나타낸 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 2 및/또는 표 6에 나타낸 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 또는 211의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 또는 211의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 비해 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 포함하지만, 해당 서열을 포함하는 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 결합하는 능력을 보유한다. 일부 실시형태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 또는 211에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 총 1 내지 5개의 아미노산이 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 또는 211에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 HVR 외부의 영역에서(즉, FR에서) 일어난다. 선택적으로, 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 또는 211의 VL 서열을 포함하며, 해당 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 실시형태에서, VL은 (a) 표 3 및/또는 표 7에 나타낸 HVR-L1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 3 및/또는 표 7에 나타낸 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 표 3 및/또는 표 7에 나타낸 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-172이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-175이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-176이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-182이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-183이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-190이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-202이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-07이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-10이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-172-H1이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-172-H2이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-172-H3이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-172-H4이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-172-H5이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-172-H6이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H1이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H2이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H3이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H4이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H5이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H6이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H7이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-174-H8이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-Siglec-5 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H1이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H2이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H3이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H4이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H5이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H6이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H7이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H8이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항-Siglec-5 단클론성 항체 S5-G-03-H9이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 대한 결합에 대해, 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 및 193으로부터 선택된 VH 서열; 및 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 및 211로부터 선택된 VL 서열을 포함하는 항체와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항체와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 대한 결합에 대해, HVR-H1, HVR-H2 및/또는 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 HVR-L1, 및 HVR-L2, 및/또는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-Siglec-5 항체와 경쟁하되, (a) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (b) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; (c) HVR-H1은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하며; (d) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하며; (e) HVR-H1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하며; (f) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하며; (g) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하며; (h) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하며; (i) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하며; (j) HVR-H1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하며; (k) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하며; (l) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (m) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 (n) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 대한 결합에 대해 서열번호 194의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 195의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 175의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 182의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 183의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 및/또는 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 서열번호 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192 및 193로부터 선택된 VH 서열; 및 서열번호 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210 및 211로부터 선택된 VL을 포함하는 항-Siglec-5 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 Siglec-5의 에피토프에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항-Siglec-5 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일하거나 중복된 인간 Siglec-5의 에피토프에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 HVR-H1, HVR-H2 및/또는 HVR-H2를 포함하는 가변 중쇄 도메인 및 HVR-L1, HVR-L2 및/또는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 도메인을 포함하는 항-Siglec-5 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 Siglec-5의 에피토프에 결합하되, (a) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (b) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; (c) HVR-H1은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하며; (d) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하며; (e) HVR-H1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하며; (f) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하며; (g) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하며; (h) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하며; (i) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하며; (j) HVR-H1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하며; (k) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하며; (l) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하며; (m) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 (n) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 195의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 175의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 182의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 183의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 ; 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인; 및/또는 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항-Siglec-5 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 Siglec-5의 에피토프에 결합한다.
본 개시내용의 임의의 항-Siglec-5 항체는 세포주에 의해 생성될 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포주는 포유류 세포주일 수 있다. 특정 실시형태에서, 세포주는 하이브리도마 세포주일 수 있다. 다른 실시형태에서, 세포주는 효모 세포주일 수 있다. 항체 생성에 적합한 당업계에 공지된 임의의 세포주는 본 개시내용의 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 항체 생성을 위한 예시적인 세포주는 본 개시내용 전체적으로 기재된다.
일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 단클론성 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 항-Siglec-5 단클론성 항체이다. 특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 길항제 항체이다. 특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 작용제인 항체 또는 비활성 항체이다.
항-Siglec-5 항체 결합 친화도
인간 Siglec-5, 포유류 Siglec-5 또는 둘 다에 대한 항-Siglec-5 항체의 해리 상수(KD)는 100nM 미만, 75nM 미만, 50nM 미만, 25nM 미만, 20nM 미만, 15nM 미만, 10nM 미만, 9nM 미만, 8nM 미만, 7nM 미만, 6nM 미만, 5nM 미만, 4nM 미만, 3nM 미만, 2nM 미만, 1nM 미만, 0.95nM 미만, 0.9nM 미만, 0.85nM 미만, 0.8nM 미만, less than 0.75nM 미만, 0.70nM 미만, 0.69nM 미만, 0.68nM 미만, 0.67nM 미만, 0.66nM 미만, 0.65nM 미만, 0.64nM 미만, 0.63nM 미만, 0.62nM 미만, 0.61nM 미만, 0.6nM 미만, 0.59nM 미만, 0.58nM 미만, 0.57nM 미만, 0.56nM 미만, 0.55nM 미만, 0.54nM 미만, 0.53nM 미만, 0.52nM 미만, 0.51nM 미만, 0.50nM 미만, 0.49nM 미만, 0.48nM 미만, 0.47nM 미만, 0.46nM 미만, 0.45nM 미만, 0.44nM 미만, 0.43nM 미만, 0.42nM 미만, 0.41nM 미만, 0.4nM 미만, 0.39nM 미만, 0.38nM 미만, 0.37nM 미만, 0.36nM 미만, 0.35nM 미만, 0.34nM 미만, 0.33nM 미만, 0.32nM 미만, 0.31nM 미만, 0.3nM 미만, 0.29nM 미만, 0.28nM 미만, 0.27nM 미만, 0.26nM 미만, 0.25nM 미만, 0.24nM 미만, 0.23nM 미만, 0.22nM 미만, 0.21nM 미만, 0.2nM 미만, 0.19nM 미만, 0.18nM 미만, 0.17nM 미만, 0.16nM 미만, 0.15nM 미만, 0.14nM 미만, 0.13nM 미만, 0.12nM 미만, 0.11nM 미만, 0.1nM 미만, 0.09nM 미만, 0.08nM 미만, 0.07nM 미만, 0.06nM 미만, 0.05nM 미만, 0.04nM 미만, 0.03nM 미만, 0.02nM 미만 또는 0.01nM 미만(즉, 10pM)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 Siglec-5, 포유류 Siglec-5, 또는 둘 다에 대한 해리 상수(KD)가 80nM 미만 내지 0.4nM 미만의 범위이다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 Siglec-5에 대해 해리 상수(KD)가 약 400nM 내지 약 80nM의 범위이다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 Siglec-5에 대한 해리 상수(KD)가 약 0.42nM, 약 0.85nM, 약 1.1nM, 약 1.5nM, 약 1.7nM, 약 5.3nM, 약 7.1nM, 약 15nM, 약 31nM, 약 61nM, 또는 약 79nM이다.
본 명세서에 제공된 임의의 항체의 일부 실시형태에서, 항체는 해리 상수(KD)가 < 1μM, < 100nM, < 10nM, < 1nM, < 0.1nM, < 0.01nM, 또는 < 0.001nM(예를 들어, 10-8M 이하, 예를 들어, 10-8M 내지 10-13M, 예를 들어, 10-9M 내지 10-13M)이다. 해리 상수는 임의의 생화학적 또는 생물리학적 기법, 예컨대 ELISA, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 생체층 간섭계법(예를 들어, 문헌[Octet System by ForteBio] 참조), 등온 적정형 열량계(ITC), 시차주사 열량측정법(DSC), 원이색성(CD), 유동 정지 분석, 및 비색 또는 형광 단백질 용융 분석을 포함하는 임의의 분석 기법을 통해 결정될 수 있다. 일 실시형태에서, KD는 방사성표지된 항원 결합 분석(RIA)에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, RIA는, 예를 들어, 문헌[Chen et al. J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)]에 기재된 바와 같이 관심 대상의 항체 및 이의 항원의 Fab 형태에 의해 수행된다. 일부 실시형태에서, KD는 BIACORE 표면 플라즈몬 공명 분석을 이용하여 측정되며, 예를 들어, BIACORE-2000 또는 BIACORE-3000(BIAcore, Inc., 뉴너지주 피츠카타웨이에 소재)을 이용하는 분석은 25℃에서 대략 10 반응 단위(RU)에서 고정된 항원 CM5 칩에 의해 수행된다. 일부 실시형태에서, KD는, 예를 들어, 본 명세서의 실시예에 논의하는 바와 같이 ForteBio Octet® Red384 시스템(ForteBio, 캘리포니아주 먼로 파크에 소재)을 이용하여 측정된다. 일부 실시형태에서, KD는 대략 25℃의 온도에서 결정된다.
추가적인 항-Siglec-5 항체, 예를 들어, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체는 당업계에 공지된 다양한 분석에 의해 그들의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 동정되고/되거나 선별되고/되거나 특성규명될 수 있다.
Fc 감마 수용체에 결합할 수 있는 항-Siglec-5 항체
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 Fc 감마 수용체에 결합하는 능력을 보유한다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 그들이 수용체 활성화와 양립 가능한 정확한 에피토프 특이성을 가질 때 그들을 클러스터링하고 일시적으로, 예를 들어, Siglec-5 수용체를 자극하게 할 수 있는 특징을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 후속적으로 Siglec-5 분해, Siglec-5 탈감작, Siglec-5 절단, Siglec-5 내재화, Siglec-5 쉐딩, Siglec-5 발현의 하향조절, 및/또는 Siglec-5의 라이소좀 분해를 유도함으로써 Siglec-5 발현의 및/또는 Siglec-5 단백질의 하나 이상의 활성의 더 장기간의 저해제로서 작용할 수 있다.
생체내, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 다중 잠재적 메커니즘 중 임의의 하나 이상에 의해 수용체를 클러스터링하고, 일시적으로 Siglec-5를 활성화시킬 수 있다. 인간 항체, 예컨대 IgG2의 일부 아이소타입은 그들의 고유한 구조에 기인하여 수용체를 클러스터링하는 본래의 능력을 가지거나 또는 클러스터링된 입체배치로 수용체를 보유함으로써, Fc 수용체에 대한 결합 없이 Siglec-5와 같은 수용체를 일시적으로 활성화시킨다(예를 들어, 문헌[White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148]).
일부 실시형태에서, 다른 항체는 인접한 세포 상의 Fcg 수용체에 대한 결합에 의해 수용체(예를 들어, Siglec-5)를 클러스터링할 수 있다. 일부 실시형태에서, Fcg 수용체에 대한 항체의 불변 IgG Fc 영역의 결합은 항체의 응집을 야기할 수 있고, 항체는 결국 그들이 그들의 가변 영역을 통해 결합하는 수용체에 응집할 수 있다(Chu et al (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933; 및 Wilson et al., (2011) Cancer Cell 19, 101-113). 일부 실시형태에서, 사이토카인 분비, 산화적 파열, 증가된 식세포작용 및 향상된 항체-의존적, 세포-매개 세포독성(ADCC)을 유발하지 않는 저해 Fcg 수용체 FcgR(FcgRIIB)에 대한 결합이 생체내 항체를 클러스터링하는 바람직한 방법인데, FcgRIIB에 대한 결합이 유해한 면역반응 효과와 관련되지 않기 때문이다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 수용체를 클러스터링할 수 있는 다른 메커니즘이 있다. 예를 들어, 함께 가교되는 항체 단편(예를 들어, Fab 단편)은 상기 기재되는 Fcg 수용체에 결합하는 Fc 영역을 갖는 항체와 유사한 방식으로 수용체(예를 들어, Siglec-5)를 클러스터링하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 가교 항체 단편(예를 들어, Fab 단편)은, 그들이 세포 표면 상에서 수용체 클러스터링을 유도하고 표적(예를 들어, Siglec-5) 상의 적절한 에피토프에 결합한다면, 작용제인 항체로서 일시적으로 작용할 수 있다.
따라서, 일부 실시형태에서, Siglec-5 단백질에 결합하는 본 개시내용의 항체는 그들의 에피토프 특이성에 기인하여, 그들이, 예를 들어, Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나, (예를 들어, Siglec-5의 감소된 세포 수준으로 인한) 하나 이상의 Siglec-5 활성을 저해하고/하거나 (예를 들어, Siglec-5의 감소된 세포 수준으로 인한) Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하기 전에, Siglec-5에 결합하고, 하나 이상의 Siglec-5 활성을 일시적으로 활성화시키는 작용제 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 Siglec-5 상의 리간드-결합 부위에 결합할 수 있고, 천연 리간드의 작용을 일시적으로 모방할 수 있다. 대안적으로 이러한 항체는 리간드-결합 부위가 아닌 하나 이상의 도메인에 대한 결합에 의해 신호를 전달하기 위해 표적 항원을 자극할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 리간드 결합을 방해하지 않을 것이다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 상의 리간드-결합 부위에 결합하거나 또는 결합하지 않는지의 여부와 상관없이, Siglec-5 분해, Siglec-5 탈감작, Siglec-5 절단, Siglec-5 내재화, Siglec-5 쉐딩, Siglec-5 발현의 하향조절, 및/또는 Siglec-5의 라이소좀 분해를 유도함으로써 항체는 후속적으로 Siglec-5 발현 및/또는 Siglec-5 단백질의 하나 이상의 활성의 더 장기간 저해제로서 작용할 수 있다.
예시적인 항체 Fc 아이소타입 및 변형은 이하의 표 B에 제공한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체에 결합할 수 있는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 이하의 표 B에 열거되는 Fc 아이소타입을 가진다.
[표 B]
Figure pct00005
Figure pct00006
표 B에 기재한 아이소타입에 추가로, 이론으로 구속되는 일 없이, 인간에서 Fcg 수용체 I, IIA, IIC, IIIA, IIIB 및/또는 마우스에서 Fcg 수용체 I, III 및 IV에 결합하는 인간 IgG1 또는 IgG3 아이소타입 및 이의 돌연변이체를 갖는 항체(예를 들어, Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 2009, 20:685-691)는 또한 일시적 작용제 항체로서 작용할 수 있다는 것이 생각된다.
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG 부류, IgM 부류 또는 IgA 부류이다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 가진다.
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG2 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG2 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 저해 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시형태에서, 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB(FcγIIB)이다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 V234A(Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A(Cole et al. (1999) Transplantation,68:563-571),H268Q,V309L,A330S,P331S(US2007/0148167; Armour et al. (1999) Eur J Immunol 29: 2613-2624; Armour et al. (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27; Armour et al. (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27), C232S, 및/또는 C233S(White et al.(2015) Cancer Cell 27, 138-148), S267E, L328F(Chu et al., (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933), M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택되고, 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 C127S 아미노산 치환을 포함하는 중쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소타입을 가지며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다(문헌[White et al.,(2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762]; 및 WO2008079246).
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 C214S 아미노산 치환을 포함하는 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소타입을 가지며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다(문헌[White et al.,(2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762]; 및 WO2008079246).
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG1 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 저해 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시형태에서, 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB(FcγIIB)이다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 N297A(Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D265A(Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276,6591-6604), D270A, L234A, L235A(Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A(Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200:16-26), P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E(McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P331S(Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA2008, 105:20167-20172), C127S, V263L, V266L, S267E, V273C, V273E, V273F, V273L, V273M, V273S, V273Y, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, V305K, V305W, A327Q, A327G, P329A, K322A, T394D 및/또는 E430G로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
일부 실시형태에서, 항체는 IgG2 아이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함한다(White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148). 특정 실시형태에서, IgG2 아이소타입 CH1 및 힌지 영역은 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP(서열번호 218)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환, 또는 둘다, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 포함하며, 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG4 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 저해 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시형태에서, 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB(FcγIIB)이다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 L235A, G237A, S228P, L236E(Reddy et al., (2000) J Immunol,164:1925-1933), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 S228P, F234A 및 L235A로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 Fc 잔기 위치 228에서 S228P, Fc 잔기 위치 234에서 F234A 및 Fc 잔기 위치 235에서 L235A로부터 선택되며, 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 혼성체 IgG2/4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체 인간 IgG2의 EU 또는 카바트 넘버링에 따른 아미노산 118 내지 260 및 인간 IgG4의 EU 또는 카바트 넘버링에 따른 아미노산 261 내지 447(WO 1997/11971; WO 2007/106585)을 포함한다.
특정 실시형태에서, 상기 항체는 마우스 IgG4 불변 영역을 포함한다(Bartholomaeus, et al. (2014). J. Immunol. 192, 2091-2098).
일부 실시형태에서, Fc 영역은 EU 또는 카바트 넘버링에 따른 A330L, L234F; L235E 또는 P331S로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환; 및 이들의 임의의 조합을 추가로 포함한다.
길항제 항-Siglec-5 항체
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 제3 부류는 길항제 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 단백질에 결합하는 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 Siglec-5 단백질의 하나 이상의 활성을 저해하는 길항제 항체를 포함할 수 있다. 이러한 항체는 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 방지함으로써(예를 들어, 예컨대 Siglec-5 세포 수준을 감소시킴으로써 간접적으로) 또는 하나 이상의 Siglec-5 리간드의 존재 하에서 세포질 내로 Siglec-5의 세포외 도메인으로부터의 신호 형질도입을 방지함으로써 Siglec-5 단백질의 하나 이상의 활성을 저해한다. 길항제 항체는 또한 Siglec-5 분해, Siglec-5 탈감작, Siglec-5 절단, Siglec-5 내재화, Siglec-5 쉐딩, Siglec-5 발현의 하향조절, 및/또는 Siglec-5의 라이소좀 분해를 유도함으로써 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시킴으로써 Siglec-5 단백질의 하나 이상의 활성을 저해할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 길항제 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5를 일시적으로 활성화하지 않을 수도 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 본 개시내용의 일시적 작용제 항-Siglec-5 항체의 에피토프 특이성을 가질 수 있지만, Fcg 수용체와 결합할 수 없고, 따라서, 예를 들어, Siglec-5를 일시적으로 클러스터 및 활성화시킬 수 없는 Fc 도메인을 가진다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 다음의 활성 중 하나 이상을 갖지만, 이들로 제한되지 않는다: Siglec-5 단백질에 대한 사이토카인 신호전달(SOCS) 단백질(예를 들어, SOCS3 단백질)의 억제자의 결합을 감소시키는 능력, Siglec-5 단백질의 프로테아좀 분해를 증가시키는 능력, 순환 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, T 세포 및/또는 미세아교세포의 표면 상에서 Siglec-5의 작용성 발현을 감소시키는 능력, Src 패밀리 타이로신 키나제, 예컨대 Syk, LCK, FYM 및/또는 ZAP70에 의한 Tyr-520 및 Tyr-544의 인산화를 감소시키거나 또는 저해하는 능력; 타이로신-특이적 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 동원 및 이에 대한 결합을 저해하는 능력; Dynamini-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 보충 및 이에 대한 결합을 저해하는 능력; SH2-도메인 포함 단백질(예를 들어, Crkl)의 동원 및 이에 대한 결합을 저해하는 능력; 비장 타이로신 키나제 Syk의 동원 및 이에 대한 결합을 저해하는 능력; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합 단백질 2(Grb2)의 동원 및 이에 대한 결합을 저해하는 능력; 다중 SH2-함유 단백질의 동원 및 이에 대한 결합을 저해하는 능력; 하나 이상의 전염증성 사이토카인의 발현을 조절하는 능력(선택적으로 여기서, 하나 이상의 항-염증 사이토카인은 IFN-α4, IFN-베타, IL-1β, IL-1알파, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-33, MCP-1, 및 MIP-1-베타로부터 선택됨); 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구 및 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 전염증성 사이토카인의 발현을 조절하는 능력; 하나 이상의 항-염증 사이토카인의 발현을 조절하는 능력(선택적으로 여기서 하나 이상의 항-염증 사이토카인은 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체로부터 선택됨); 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구 및 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 항-염증 사이토카인의 발현을 조절하는 능력; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX 및 PYCARD로부터 선택된 하나 이상의 단백질의 발현을 조절하는 능력; 세포외 신호-조절 키나제(ERK) 인산화의 저해에 대응하는 능력; 하나 이상의 세포 단백질 상에서 감소된 타이로신 인산화를 방지하는 능력(선택적으로 여기서, 하나 이상의 세포 단백질은 ZAP-70을 포함하고, 타이로신 인산화는 ZAP-70의 Tyr-319 상에서 생김); C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 발현을 조절하는 능력; CCL19-발현 및 CCL21-발현 세포에 대한 미세아교세포 주화성의 저해를 방지하는 능력; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, 단핵구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, M2 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구 및 M2 NK 세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에 의해 유도된 T 세포 증식 감소를 방지하는 능력; 파골세포 생성의 저해를 방지하는 능력, 감소된 비율의 파골세포형성을 방지하는 능력, 또는 둘 다; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 감소된 생존을 방지하는 능력; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 감소된 증식을 방지하는 능력; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 이동을 향상시키는 능력; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 하나 이상의 기능 감소를 방지하는 능력; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 성숙을 향상시키는 능력; 세포자멸사 뉴런 클리어런스, 신경 조직 파편 클리어런스, 기능장애 시냅스 클리어런스, 비-신경 조직 파편 클리어런스, 박테리아 클리어런스, 다른 이물질 클리어런스, 질환-원인 단백질 클리어런스, 질환-원인 펩타이드 클리어런스, 및 종양 세포 클리어런스로부터 선택된 클리어런스의 한 가지 이상의 유형을 향상시키는 능력(선택적으로 상기 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암으로부터 선택됨); 세포자멸사 뉴런, 신경 조직 파편, 기능장애 시냅스, 비-신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산 또는 종양 세포의 하나 이상의 식세포작용의 저해; (선택적으로 여기서 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA이고, 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로부터 선택되며, 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 또는 갑상선 암으로부터 선택된 암으로부터 유래됨); 종양 세포 상에서 Siglec-5 리간드에 대한 결합; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, 대식세포 및 NK 세포로부터 선택된 세포 상에서 Siglec-5 리간드에 대한 결합; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 증식 활성의 활성화; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 전이 활성을 향상시키는 능력; 하나 이상의 ITAM 모티프 포함 수용체의 활성을 향상시키는 능력(선택적으로 여기서, 하나 이상의 ITAM 모티프 포함 수용체는 TREM1, TREM2, SIRPB1, Fc 감마 수용체(FcgR), DAP10 및 DAP12로부터 선택됨); 하나 이상의 패턴 인식 수용체(PRR)에 의해 신호전달을 향상시키는 능력(선택적으로 하나 이상의 PRR은 병원균-관련 분자 패턴(PAMP)을 동정하는 수용체, 손상-관련 분자 패턴(DAMP)을 동정하는 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택됨); 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I(서열번호 4)를 포함하는 하나 이상의 수용체의 활성을 향상시키는 능력; 하나 이상의 Toll-유사 수용체에 의한 신호전달을 향상시키는 능력; JAK-STAT 신호전달 경로를 향상시키는 능력; 활성화된 B 세포의 핵인자 카파-경쇄 인핸서(NFκB)의 활성을 향상시키는 능력; ITAM 모티프 포함 수용체의 인핸서를 증가시키는 능력; 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 면역 세포 상에서 발현된 수용체의 발현을 증가시키는 능력(선택적으로 여기서, 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 면역 세포 상에서 발현된 수용체는 CD86, C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, 및/또는 PYCARD을 포함하고, 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 면역 세포 상에서 발현된 수용체는 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에서 발현됨); 하나 이상의 Siglec-5-의존적 유전자의 발현을 감소시키는 능력; 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자의 발현을 향상시키는 능력(선택적으로 여기서, 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자는 활성화된 T 세포(NFAT) 전사 인자의 핵 인자에 의해 활성화됨); 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수성 유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 분화를 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 작용성을 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양 내로의 침윤을 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 종양에서, 말초 혈액에서 또는 다른 림프 기관에서 종양-촉진 골수성/과립구 면역-억제 세포 수를 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 조절 B 세포의 종양-촉진 활성을 감소시키거나 달리 저해하는 능력; 종양에서 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인, 예컨대 TGF-베타 또는 IL-10의 발현을 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤을 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 종양-촉진 활성을 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 종양 사멸 잠재력을 갖는 대식세포의 활성을 증가시키거나 달리 향상시키는 능력; 종양 사멸 잠재력을 갖는 항-종양 대식세포의 종양 침윤을 증가시키거나 달리 향상시키는 능력; 종양 사멸 잠재력을 갖는 호중구의 활성을 증가시키거나 달리 향상시키는 능력; 종양 사멸 잠재력을 갖는 항-종양 호중구의 종양 침윤을 증가시키거나 달리 향상시키는 능력; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구를 증가시키거나 달리 향상시키는 능력; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 NK 세포의 침윤을 증가시키거나 달리 향상시키는 능력; NK 세포의 종양 사멸 잠재력을 증가시키거나 또는 달리 향상시키는 능력; 면역반응을 향상시키기 위한 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구의 침윤을 증가시키거나 또는 달리 향상시키는 능력; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 침윤을 증가시키거나 또는 달리 향상시키는 능력; 종양 용적을 감소시키는 능력 종양 성장 속도를 감소시키는 능력; 전이를 감소시키거나 또는 달리 저해하는 능력; 종양 재발 속도를 감소시키는 능력; 항-종양 T 세포 반응을 조절하는 하나 이상의 면역-요법의 효능을 증가시키거나 또는 달리 향상시키는 능력(선택적으로 한 가지 이상의 면역-요법은 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, TREM1, TREM2, CD39, CD73, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 표적 단백질을 표적화하는 면역-요법, 또는 하나 이상의 암 백신임); PLCγ/PKC/칼슘 동원을 증가시키거나 또는 달리 향상시키는 능력; 및 PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달을 증가시키거나 또는 달리 향상시키는 능력.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 하나 이상의 Fc 감마 수용체에 대해 감소된 결합을 나타내는 Fc 영역을 가진다. 이러한 Fc 영역 및 변형의 예는 이하의 표 C에서 제공된다. 일부 실시형태에서, 항체는 이하의 표 C에 열거된 Fc 아이소타입을 가진다.
Fc 감마 수용체에 대해 감소된 결합을 갖는 항체 Fc 아이소타입
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체에 대해 감소된 결합을 갖는 항-Siglec-5 항체는 이하의 표 C에 열거된 Fc 아이소타입을 가진다.
[표 C]
Figure pct00007
Figure pct00008
특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 IgG1 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 N297A, N297Q (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D270A, D265A, L234A, L235A (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), C226S, C229S (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P238S (Davis et al., (2007) J Rheumatol, 34:2204-2210), E233P, L234V (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P238A, A327Q, A327G, P329A (Shields RL. et al., (2001) J Biol Chem. 276(9):6591-604), K322A, L234F, L235E(Hezareh, et al., (2001) J Virol 75,12161-12168; Oganesyan et al., (2008). Acta Crystallographica 64, 700-704), P331S(Oganesyan et al., (2008) Acta Crystallographica 64, 700-704), T394D(Wilkinson et al. (2013) MAbs 5(3): 406-417), A330L, M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다. 특정 실시형태에서, Fc 영역은 EU 넘버링 협약에 따라 글리신 236에 대응하는 위치에서 아미노산 결실을 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 EU 넘버링 협약에 따라 C220S 아미노산 치환을 포함하는 중쇄 불변 영역을 갖는 IgG1 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 EU 넘버링 협약에 따라 A330L, L234F; L235E, 및/또는 P331S로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 IgG2 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG2 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, V309L, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다(Vafa O. et al., (2014) Methods 65:114-126).
특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 IgG4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG4 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 E233P, F234V, L235A, G237A, E318A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984), S228P, L234A/F234A, L236E, S241P, L248E(Reddy et al., (2000) J Immunol,164:1925-1933; Angal et al., (1993) Mol Immunol. 30(1):105-8; US 8614299 B2; Vafa O. et al., (2014) Methods 65:114-126), T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A 및/또는 N297Q로부터 선택되고, 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
일부 실시형태에서, Fc 영역은 M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 추가로 포함하며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
추가적인 IgG 돌연변이
일부 실시형태에서, 상보체 활성화를 제거하기 위해 본 명세서에 기재된 IgG1 변이체 중 하나 이상은 A330L 돌연변이(Lazar et al., (2006) Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010), 또는 L234F, L235E, 및/또는 P331S 돌연변이 중 하나 이상(Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172)와 조합될 수 있으며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 IgG 변이체는 인간 혈청에서 항-Siglec-5 항체 반감기를 향상시키기 위해 하나 이상의 돌연변이와 조합될 수 있다(예를 들어, EU 넘버링 협약에 따라 M252Y, S254T, T256E 돌연변이)(Dall'Acqua et al., (2006) J Biol Chem, 281:23514-23524; 및 Strohl e al., (2009) Current Opinion in Biotechnology, 20:685-691).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 IgG4 변이체는 항체 안정화를 향상시키기 위해 EU 넘버링 협약에 따른 S228P 돌연변이(Angal et al., (1993) Mol Immunol, 30:105-108) 및/또는 문헌[Peters et al., (2012) J Biol Chem. 13;287(29):24525-33]에 기재된 하나 이상의 돌연변이와 조합될 수 있다.
이중특이성 항체
본 개시내용의 특정 양상은 본 개시내용의 Siglec-5 단백질 상의 하나 이상의 도메인 및 제2 항원에 결합하는 이중특이성 항체에 관한 것이다. 이중특이성 항체를 생성하는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있고, 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 이중특이성 항체는 본 개시내용의 Siglec-5 단백질의 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 인간 Siglec-5(서열번호 1)의 하나 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 이중특이성 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식한다. 일부 실시형태에서, 제1 항원은 Siglec-5 단백질 또는 이의 천연 유래 변이체이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 또한 Siglec-5 단백질, 또는 이의 천연 유래 변이체이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 혈액-뇌-장벽에 걸쳐 수송을 용이하게 하는 항원이다(예를 들어, 문헌[Gabathuler R., Neurobiol. Dis. 37(2010)48-57] 참조). 이러한 제2 항원은 트랜스페린 수용체(TR), 인슐린 수용체(HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGFR), 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 1 및 2(LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, 라마 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페너트라틴, 폴리-알기닌 펩타이드, 안지오펩(Angiopep) 펩타이드, 예컨대 ANG1005(예를 들어, 문헌[Gabathuler, 2010] 참조), 및 혈액-뇌 장벽 내피 세포 상에서 풍부한 다른 세포 표면 단백질(예를 들어, 문헌[Daneman et al., PLoS One. 2010 Oct 29;5(10):e13741] 참조)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 질환-원인 단백질이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, CD73 및 포스파티딜세린을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 면역 세포 상에서 발현되는 하나 이상의 리간드 및/또는 단백질이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 하나 이상의 종양 세포 상에서 발현되는 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질이다.
항체 단편
본 개시내용의 특정 양상은 본 개시내용의 Siglec-5 단백질, Siglec-5 단백질의 천연 유래 변이체, 및 Siglec-5 단백질의 질환 변이체 중 하나 이상에 결합하는 항체 단편에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.
일부 실시형태에서, 항체 단편은 제2 Siglec-5 항체와 및/또는 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 질환-원인 단백질에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하거나; 또는 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, CD73, 포스파티딜세린, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 면역조절 단백질에 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여 사용된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 단편은 임의의 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 작용성 단편일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 단편은 항-Siglec-5 항체 또는 본 개시내용의 항체 단편의 대응하는 전장 항체의 동일한 에피토프를 갖지만, 훨씬 더 작은 분자량을 갖는 미니어처 형태이다. 이러한 미니어처 항-Siglec-5 항체 단편은 영상화 및 진단 효용에 유리한 더 양호한 뇌 침투 능력 및 더 짧은 반감기를 가질 수 있다(예를 들어, 문헌[
Figure pct00009
S et al., Bioconjug Chem. 2014 Feb 19;25(2):335-41;
Figure pct00010
R et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Jan 21;111(3):1108-13; 및 Wiehr S et al., Prostate. 2014May;74(7):743-55] 참조). 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 단편은 그들의 대응하는 전장 항체에 비해 더 양호한 뇌 침투를 가지고/가지거나 그들의 대응하는 전장 항체에 비해 더 짧은 반감기를 가진다.
항체 프레임워크
본 명세서에 기재된 임의의 항체는 추가로 프레임워크를 포함한다. 일부 실시형태에서, 프레임워크는 인간 면역글로불린 프레임워크이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 항체(예를 들어, 항-Siglec-5 항체)는 임의의 상기 실시형태에서와 같은 HVR을 포함하고, 추가로 억셉터 인간 프레임워크, 예를 들어, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 인간 면역글로불린 프레임워크는 인간 항체의 부분일 수 있거나, 또는 비-인간 항체는 하나 이상의 내인성 프레임워크를 인간 프레임워크 영역(들)으로 대체함으로써 인간화될 수 있다. 인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "베스트-핏(best-fit)" 방법을 이용하여 선택된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285(1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙(체세포 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]); 및 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684(1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618(1996)] 참조)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 항체는 본 개시내용의 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 표 5에 나타내는 바와 같은 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3 또는 4개를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 개시내용의 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 표 4에 나타내는 바와 같은 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3 또는 4개를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 개시내용의 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 표 5에 나타내는 바와 같은 경쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3 또는 4개를 포함하고, 본 개시내용의 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 표 4에 나타내는 바와 같은 중쇄 프레임워크 영역 중 1, 2, 3 또는 4개를 추가로 포함한다.
항체 제제
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 다클론성 항체, 단클론성 항체, 인간화된 및 키메라 항체, 인간 항체, 항체 단편(예를 들어, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv 및 F(ab')2), 이중특이성 및 다중특이성 항체, 다가 항체, 이형접합체 항체, 접합된 항체, 라이브러리 유래 항체, 변형된 효과기 작용을 갖는 항체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위, 예컨대 본 개시내용의 Siglec-5 단백질의 아미노산 잔기를 갖는 에피토프(항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체 및 공유 변형된 항체를 포함)를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 입체배치를 포함할 수 있다. 항-Siglec-5 항체는 인간, 뮤린, 랫트, 또는 임의의 다른 유래(키메라 또는 인간화된 항체를 포함)일 수 있다.
(1) 다클론성 항체
다클론성 항체, 예컨대 다클론성 항-Siglec-5 항체는 일반적으로 적절한 항원 및 애주번트의 다중 피하(sc) 또는 복강내(ip) 주사에 의해 동물에서 상승된다. 2작용성 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스터(시스테인 잔기를 통한 접합), N-하이드록시숙신이미드(라이신 잔기를 통해), 글루타르알데하이드, 숙신 무수물, SOCl2 또는 R1N=C=NR(여기서, R 및 R1은 독립적으로 저급 알킬기임)을 이용하여 면역화될 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들어, 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin: KLH), 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 저해제에 적절한 항원(예를 들어, 정제된 또는 본 개시내용의 재조합 Siglec-5 단백질)을 접합하는 데 유용할 수 있다. 사용될 수 있는 애주번트의 예는 프로인트 완전 애주번트 및 MPL-TDM 애주번트(모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로스 다이코리노마이콜레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험 없이 당업자에 의해 선택될 수 있다.
동물은, 예를 들어, 100㎍(토끼에 대해) 또는 5㎍(마우스에 대해)의 단백질 또는 3 용적의 프로인트 완전 애주번트와의 접합체를 조합함으로써 그리고 다중 부위에서 용액을 진피내로 주사함으로써 목적하는 항원, 면역원성 접합체, 또는 유도체에 대해 면역화된다. 1개월 후에, 동물을 다중 부위에서 피하 주사에 의해 프로인트 완전 애주번트 중의 펩타이드 또는 접합체의 본래의 양의 1/5 내지 1/10을 이용하여 부스팅한다. 7 내지 14일 후에, 동물을 방혈시키고, 항체 역가에 대해 혈청을 분석한다. 역가 안정기까지 동물을 부스팅한다. 접합체는 또한 단백질 융합으로서 재조합 세포 배양물 중에서 이루어질 수 있다. 또한, 응집제, 예컨대 명반은 면역반응을 향상시키는 데 적합하다.
(2) 단클론성 항체
단클론성 항체, 예컨대 단클론성 항-Siglec-5 항체는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 얻어지며, 즉, 집단을 포함하는 개개 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 유래 돌연변이 및/또는 번역후 변형(예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 "단클론성"은 별개의 항체의 혼합물이 아닌 항체의 특징을 나타낸다.
예를 들어, 단클론성 항-Siglec-5 항체는 문헌[Kohler et al., Nature, 256:495(1975)]에 의해 처음 기재된 하이브리도마 방법을 이용하여 이루어질 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 이루어질 수 있다(미국 특허 제4,816,567호).
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터는 면역화를 위해 사용되는 단백질(예를 들어, 정제된 또는 재조합 본 개시내용의 Siglec-5 단백질)에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 또는 생성할 수 있는 림프구를 유발하도록 본 명세서에서 상기 기재된 바와 같이 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 이어서, 림프구는 하이브리도마 세포를 형성하기 위해 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 골수종 세포와 융합된다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)).
면역화제는 전형적으로 항원 단백질(예를 들어, 본 개시내용의 정제된 또는 재조합 Siglec-5 단백질) 또는 이의 융합 변이체를 포함할 것이다. 인간 유래의 세포가 요망된다면, 일반적으로 말초 혈액 림프구("PBL")가 사용되는 반면, 비-인간 포유류 공급원이 요망된다면, 비장 또는 림프절 세포가 사용된다. 이어서, 림프구는 하이브리도마 세포를 형성하기 위해 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 불멸 세포주와 융합된다. 문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103] 참조.
불멸 세포주는 보통 형질전환된 포유류 세포, 특히 설치류, 소 또는 인간 유래의 골수종 세포이다. 보통, 랫트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 파종되고, 바람직하게는 비융합, 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 성장된다. 예를 들어, 모 골수종 세포가 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 없다면, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 전형적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지하는 물질인 하이포크산틴, 아미노프테린, 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 것이다.
바람직한 불멸 골수종 세포는 선택된 항체-생성 세포에 의해 항체의 안정한 고수준 생성을 효율적으로 뒷받침하고, HAT 배지와 같은 배지에 민감한 것이다. 이들 중에서, 뮤린 골수종 계통, 예컨대 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것(미국 캘리포니아주 샌디에이고에 소재한 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)로부터 입수 가능)뿐만 아니라 SP-2 세포 및 이의 유도체(예를 들어, X63-Ag8-653)(미국 버지니아주에 소재한 미국 미생물 보존센터(American Type Culture Collection)로부터 입수 가능)이 바람직하다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이형골수종 세포주는 또한 인간 단클론성 항체의 생성을 위해 기재되었다(Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
하이브리도마 세포가 성장 중인 배양 배지는 항원(예를 들어, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질)과 관련된 단클론성 항체의 생성에 대해 분석된다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성되는 단클론성 항체의 결합 특이성은 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대 방사면역측정법(RIA) 또는 효소-연결 면역흡착 분석(ELISA)에 의해 결정된다.
하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 목적하는 항원(예를 들어, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질)의 존재에 대해 분석될 수 있다. 바람직하게는, 단클론성 항체의 결합 친화도 및 특이성은 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대 방사면역측정법(RIA) 또는 효소-연결 분석(ELISA)에 의해 결정될 수 있다. 이러한 기법 및 분석은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 결합 친화도는 문헌[Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 스캐차드(Scatchard) 분석에 의해 결정될 수 있다.
목적하는 특이성, 친화도, 및/또는 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포가 동정된 후에, 클론은 희석 절차를 제한함으로써 서브클로닝되고, 표준 방법에 의해 성장될 수 있다(Goding, 상기 참조). 본 목적을 위한 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 추가로, 하이브리도마 세포는 포유류에서 종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.
서브클론에 의해 분비되는 단클론성 항체는 통상적인 면역글로불린 정제 절차, 예를 들어, 단백질A-세파로스 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 친화도 크로마토그래피 및 상기 기재한 바와 같은 다른 방법에 의해 배양 배지, 복수액, 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
항-Siglec-5 단클론성 항체는 또한 재조합 DNA 방법, 예컨대 미국 특허 제4,816,567호에 개시한 것 및 상기 기재한 것에 의해 생성될 수 있다. 단클론성 항체를 암호화하는 DNA는 용이하게 단리되고, 통상적인 절차를 이용하여(예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용함으로써) 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 작용한다. 일단 단리되면, DNA는 이후에, 숙주 세포, 예컨대 이콜라이(E. coli) 세포, 시미안 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 면역글로불린 단백질을 달리 생성하지 않는 골수종 세포로 형질감염되는 발현 벡터 내에 위치되어 이러한 재조합 숙주 세포에서 단클론성 항체를 합성할 수 있다. 항체를 암호화하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 대한 검토 논문은 문헌[Skerra et al., Curr. Opin. Immunol., 5:256-262 (1993) 및
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, Immunol. Rev. 130:151-188(1992)]을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 파지 라이브러리로부터 각각 뮤린 및 인간 항체의 단리를 기재한 문헌[McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990). Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에 기재된 기법을 이용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 후속적 정제는 쇄 셔플링(chain shuffling)(Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992))뿐만 아니라 매우 큰 파지 라이브러리를 구성하기 위한 전략으로서 조합적 감염 및 생체내 재조합(Waterhouse et al., Nucl. Acids Res.,21:2265-2266(1993))에 의해 고친화도(나노몰("nM") 범위) 인간 항체의 생성을 기재한다. 따라서, 이들 기법은 목적하는 특이성의 단클론성 항체(예를 들어, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질에 결합하는 것)의 단리를 위한 전통적인 단클론성 항체 하이브리도마 기법에 대한 실행 가능한 대안이다.
항체를 암호화하는 DNA 또는 이의 단편은 또한, 예를 들어, 상동성 뮤린 서열 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 암호 서열을 대체함으로써(미국 특허 제4,816,567호; Morrison, et al., Proc. NatlAcad. Sci. USA, 81:6851 (1984)), 또는 면역글로불린 암호 서열에 비-면역글로불린 폴리펩타이드에 대한 암호 서열의 모두 또는 일부를 공유 결합시킴으로써 변형될 수 있다. 전형적으로 이러한 비-면역글로불린 폴리펩타이드는 또는 항체의 불변 도메인으로 치환되거나, 또는 그들은 항원에 대한 특이성을 갖는 하나의 항원-조합 부위 및 상이한 항원에 대해 특이성을 갖는 다른 항원-조합 부위를 포함하는 키메라 2가 항원을 생성하기 위해 항체의 하나의 항원-조합 부위의 가변 도메인으로 치환된다.
본 명세서에 기재된 단클론성 항체(예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 또는 이의 단편)는 1가일 수 있으며, 이의 제조는 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 하나의 방법은 면역글로불린 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현을 수반한다. 중쇄는 일반적으로 중쇄 가교를 방지하기 위해 Fc 영역 내 임의의 지점에서 절단된다. 대안적으로, 적절한 시스테인 잔기는 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있거나 또는 가교를 방지하기 위해 결실된다. 시험관내 방법은 또한 1가 항체를 제조하는데 적합하다. 항체의 단편, 특히 Fab 단편을 생성하기 위한 항체의 분해는 일상적인 당업계에 공지된 기법을 이용하여 달성될 수 있다.
키메라 또는 혼성 항-Siglec-5 항체는 또한 가교제를 수반하는 것을 포함하는 합성 단백질 화학에서 공지된 방법을 이용하여 시험관내에서 제조될 수 있다. 예를 들어, 면역독소는 이황화물 교환 반응을 이용하여 또는 티오에터 결합을 형성함으로써 구성될 수 있다. 본 목적을 위한 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트를 포함한다.
(3) 인간화된 항체
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 또는 이의 항체 단편은 인간화된 또는 인간 항체를 추가로 포함할 수 있다. 비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화된 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편(예컨대, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)이다. 인간화된 항체는 수용자의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 랫트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)을 포함한다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 대응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 인간화된 항체는 또한 수용자 항체에서도 또는 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역이 비-인간 면역글로불린의 그것에 대응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역이 인간 면역글로불린 공통 서열의 그것에 대응하는 실질적으로 모든 적어도 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이다. 인간화된 항체는 최적으로는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 문헌[Jones et al., Nature 321: 522-525(1986); Riechmannet al., Nature 332: 323-329(1988) 및 Presta,Curr. Opin. Struct. Biol. 2: 593-596(1992)] 참조.
비-인간 항-Siglec-5 항체를 인간화하는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 비-인간인 공급원으로부터의 아미노산 잔기 내로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 가진다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입" 잔기로서 지칭되는데, 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 취해진다. 인간화는 본질적으로 윈터(Winter) 및 공동작업자, 문헌[Jones et al., Nature 321:522-525(1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)]의 방법에 따라, 또는 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 인간 항체의 대응하는 서열로 치환하는 것을 통해 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화된" 항체는 키메라 항체이되(미국 특허 제4,816,567), 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적게 비인간 종으로부터의 대응하는 서열로 치환되었다. 실행에서, 인간화된 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체 내 유사한 부위로부터의 잔기로 치환된 인간 항체이다.
인간화된 항체를 생성하는 데 사용될 인간 가변 도메인(경쇄와 중쇄 둘 다)의 선택은 항원성을 감소시키는 데 매우 중요하다. 소위 "베스트-핏" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인 서열은 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 선별된다. 이어서, 설치류의 서열에 가장 근접한 인간 서열은 인간화된 항체에 대한 인간 프레임워크(FR)로서 수용된다. 문헌[Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)] 참조. 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 특정 프레임워크를 사용한다. 동일한 프레임워크는 몇몇 상이한 인간화된 항체에 대해 사용될 수 있다. 문헌[Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285(1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623(1993)].
더 나아가, 항체가 항원 및 다른 바람직한 생물학적 특성에 대해 높은 친화도를 보유하여 인간화되는 것은 중요하다. 이 목표를 달성하기 위해, 바람직한 방법에 따르면, 모체 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 이용하여 모체 서열 및 다양한 개념적 인간화 산물을 분석하는 과정에 의해 인간화된 항체가 제조된다. 3차원 면역글로불린 모델이 통상적으로 이용 가능하며, 당업자에게 친숙하다. 컴퓨터 프로그램은 선택된 후보 면역글로불린 서열의 개연성 있는 3차원 입체배좌 구조를 설명하고, 나타낸다. 이들 디스플레이의 조사는 후보 면역글로불린 서열의 작용화에서 잔기의 가능성 있는 역할의 분석, 즉, 후보 면역글로불린이 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이런 방법으로, 목적하는 항체 특징, 예컨대 표적 항원 또는 항원들(예를 들어, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질)에 대해 증가된 친화도가 달성되도록 FR 잔기가 수용자 및 유입 서열로부터 선택되고, 조합될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는 데 직접적으로 그리고 가장 실질적으로 연루된다.
인간화된 항-Siglec-5 항체의 다양한 형태가 상정된다. 예를 들어, 인간화된 항-Siglec-5 항체는 면역접합체를 생성하기 위해 하나 이상의 세포독성제(들)와 선택적으로 접합되는 항체 단편, 예컨대 Fab일 수 있다. 대안적으로, 인간화된 항-Siglec-5 항체는 무손상 항체, 예컨대 무손상 IgG1 항체일 수 있다.
(4) 인간 항체
대안적으로, 인간 항-Siglec-5 항체가 생성될 수 있다. 예를 들어, 이제 내인성 면역화 시, 면역글로불린 생성의 부재 하에서 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 유전자이식 동물(예를 들어, 마우스)을 생성할 수 있다. 키메라 및 생식계열 돌연변이체 마우스에서 항체 중쇄 결합 영역(JH) 유전자의 동형 결실은 내인성 항체 생성의 완전한 저해를 초래한다. 이러한 생식계열 돌연변이체 마우스에서 인간 생식계열 면역글로불린 유전자 배열의 전달은 항원 시험감염 시 인간 항체의 생성을 초래할 것이다. 예를 들어, 문헌[Jakobovits et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immunol., 7:33 (1993)]; 미국 특허 제5,591,669호 및 WO 97/17852 참조.
대안적으로, 파지 디스플레이 기법은 비면역화 공여자로부터의 면역글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 시험관내 인간 항-Siglec-5 항체 및 항체 단편을 생성하기 위해 사용될 수 있다. 문헌[McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990); Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227: 381(1991)] 참조. 본 기술에 따르면, 항체 V 도메인 유전자는 프레임내에서 섬질 박테리오파지, 예컨대 M13 또는 fd의 주요 또는 소량의 외피 단백질 내로 클로닝되고, 파지 입자의 표면 상에서 작용제 항체 단편으로서 나타난다. 섬질 입자는 파지 게놈의 단일 가닥 DNA 복제물을 포함하기 때문에, 항체의 작용성 특성에 기반한 선택은 또한 해당 선택을 나타내는 항체를 암호화하는 유전자의 선택을 초래한다. 따라서, 파지는 B-세포의 일부 특성을 모방한다. 파지 디스플레이는, 예를 들어, 문헌[Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Curr. Opin Struct. Biol. 3:564-571(1993)]에서 검토되는 다양한 형식으로 수행될 수 있다. V-유전자 세그먼트의 몇몇 공급원은 파지 디스플레이에 대해 사용될 수 있다. 문헌[Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)]은 면역화된 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 작은 무작위 조합 라이브러리로부터의 다양한 항-옥사졸론 항체를 단리시켰다. 비면역화된 인간 공여자로부터의 V 유전자의 레퍼토리가 구성될 수 있고, 다양한 항원(자가항원을 포함)에 대한 항체는 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597(1991), 또는 Griffith et al., EMBO J. 12:725-734(1993)]에 의해 기재된 기법에 따라 본질적으로 단리될 수 있다. 또한 미국 특허 제5,565,332호 및 제5,573,905호 참조. 추가적으로, 효모 디스플레이 기법은 시험관내 인간 항-Siglec-5 항체 및 항체 단편을 생성하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, WO 2009/036379; WO 2010/105256; WO 2012/009568; 미국 특허 제2009/0181855호; 미국 특허 제2010/0056386호; 및 문헌[Feldhaus and Siegel (2004) J. Immunological Methods 290:69-80]). 다른 실시형태에서, 리보솜 디스플레이 기법은 시험관내 인간 항-Siglec-5 항체 및 항체 단편을 생성하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Roberts and Szostak (1997) Proc Natl Acad Sci 94:12297-12302; Schaffitzel et al. (1999) J. Immunolical Methods 231:119-135; Lipovsek and
Figure pct00012
(2004) J. Immunological Methods 290:51-67] 참조).
문헌[Cole et al., 및 Boerner et al.]의 기법은 또한 인간 항-Siglec-5 단클론성 항체의 제조를 위해 이용 가능하다(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) 및 Boerner et al., J. Immunol. 147(1):86-95(1991). 유사하게, 인간 항-Siglec-5 항체는 유전자이식 동물, 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 비활성화된 마우스 내로 인간 면역글로불린 좌위를 도입함으로써 생성될 수 있다. 시험감염 시, 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 포함하는 모든 측면에서 인간에서 보이는 것과 거의 유사한 인간 항체 생성이 관찰된다. 이 접근은, 예를 들어, 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호, 제5,569,825호, 제5,625,126호, 제5,633,425호, 제5,661,016호에서 그리고 다음의 과학 간행물에서 기재된다: 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-13 (1994), Fishwild et al., Nature Biotechnology 14: 845-51 (1996), Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996) 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93(1995)].
최종적으로, 인간 항-Siglec-5 항체는 또한 활성화된 B-세포에 의해 시험관내에서 생성될 수 있다(미국 특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호).
(5) 항체 단편
특정 실시형태에서 전체 항-Siglec-5 항체보다는 항-Siglec-5 항체 단편을 이용하는 것이 유리하다. 더 작은 단편 크기는 빠른 클리어런스 및 더 양호한 뇌 침투를 허용한다.
항체 단편의 생성을 위한 다양한 기법이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질 분해를 통해 유래된다(예를 들어, 문헌[Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Method. 24:107-117 (1992); 및 Brennan et al., Science 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 이들 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해, 예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 핵산을 이용하여 생성될 수 있다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두 이콜라이에서 발현되고, 매우 다량의 이들 단편의 간단한 생성을 허용한다. 항-Siglec-5 항체 단편은 또한 상기 논의한 바와 같은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 이콜라이로부터 직접 회수될 수 있고, 화학적으로 결합되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). 다른 접근에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab')2 항체 단편의 생성은 미국 특허 제5,869,046호에 기재되어 있다. 다른 실시형태에서, 선택된 항체는 단일쇄 Fv 단편(scFv)이다. WO93/16185; 미국 특허 제5,571,894호 및 미국 특허 제5,587,458호 참조. 항-Siglec-5 항체 단편은 미국 특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 이러한 선형 항체 단편은 단일특이성 또는 이중특이성일 수 있다.
(6) 이중특이성 및 다중특이성 항체
이중특이성 항체(BsAb)는 동일한 또는 다른 단백질(예를 들어, 하나 이상의 본 개시내용의 Siglec-5 단백질) 상의 항체를 포함하여, 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 항체이다. 대안적으로, BsAb의 일 부분은 표적 Siglec-5 항원에 결합하도록 아암(arm)이 형성될 수 있고, 다른 부분은 제2 단백질에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이러한 항체는 전장 항체 또는 항체 단편(예를 들어, F(ab')2 이중특이성 항체)로부터 유래될 수 있다.
이중특이성 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 이중특이성 항체의 전통적인 생성은 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동발현에 기반하며, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 가진다. 문헌[Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)]. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류 때문에, 이들 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생성하는데, 이 중 하나만이 정확한 이중특이성 구조를 가진다. 친화도 크로마토그래피 단계에 의해 보통 행해지는 정확한 모듈의 정제는 다소 어려우며, 생성물 수율은 낮다. 유사한 절차가 WO 93/08829에서 그리고 문헌[Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에서 개시된다.
상이한 접근에 따르면, 목적하는 결합 특이성(항체-항원 조합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인이 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 바람직하게는 힌지, CH2, 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 가진다. 융합 중 적어도 하나에 존재하는 경쇄 결합에 필요한 부위를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역(CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합 및 원한다면, 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA는 별개의 발현 벡터 내로 삽입되고, 적합한 숙주 유기체 내로 공동형질감염된다. 이는 구성에서 사용되는 3개의 폴리펩타이드 쇄의 동일하지 않은 비가 최적의 수율을 제공할 때의 실시형태에서 3개의 폴리펩타이드 단편의 상호 비율을 조절함에 있어서의 큰 유연성을 제공한다. 그러나, 동일한 비로 적어도 2개의 폴리펩타이드 쇄의 발현이 고수율로 초래될 때 또는 상기 비가 특정 유의성이 없을 때 하나의 발현 벡터에서 2개 또는 모두 3개의 폴리펩타이드쇄에 대해 암호 서열을 삽입하는 것이 가능하다.
본 접근의 바람직한 실시형태에서, 이중특이성 항체는 하나의 아암에서 제1 결합 특이성을 갖는 혼성 면역글로불린 중쇄, 및 다른 아암에서 혼성 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제2 결합 특이성을 제공)으로 구성된다. 이중특이성 분자의 단지 절반에서 면역글로불린 경쇄의 존재가 용이한 분리 방법을 제공하기 때문에, 이 비대칭 구조가 원치않는 면역글로불린 쇄 조합으로부터 목적하는 이중특이성 화합물의 분리를 용이하게 한다는 것이 발견되었다. 이 접근은 WO 94/04690에서 개시된다. 이중특이성 항체를 생성하는 추가적인 상세한 설명에 대해, 예를 들어, 문헌[Suresh et al., Methods in Enzymology 121: 210(1986)] 참조.
WO 96/27011 또는 미국 특허 제5,731,168호에 기재된 다른 접근에 따르면, 항체 분자 쌍 사이의 계면은 재조합 세포 배양물로부터 회수된 이형이량체 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄는 더 큰 측쇄(예를 들어, 타이로신 또는 트립토판)로 대체된다. 거대 측쇄(들)와 동일 또는 유사한 크기의 상보성 "캐비티"가 거대 측쇄를 작은 측쇄(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 제2 항체의 계면 상에서 생성된다. 이는 다른 원치않는 최종 생성물, 예컨대 동종이량체 이상으로 이형이량체 수율을 증가시키기 위한 메커니즘을 제공한다.
항체 단편으로부터 이중특이성 항체를 생성하기 위한 기법이 문헌에 기재되었다. 예를 들어, 이중특이성 항체는 화학적 결합을 이용하여 제조될 수 있다. 문헌[Brennan et al., Science 229:81 (1985)]은 무손상 항체가 F(ab')2 단편을 생성하기 위해 단백질 분해적으로 절단되는 절차를 기재한다. 이들 단편은 인근의 다이티올을 안정화시키기 위해, 그리고 분자간 이황화물 형성을 방지하기 위해 다이티올 복합화제 아비산나트륨의 존재 하에서 환원된다. 이어서, 생성되는 Fab' 단편은 티오나이트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된다. 이어서, Fab'-TNB 유도체 중 하나는 Fab'-TNB 유도체로 다시 전환되어 이중특이성 항체를 형성한다. 생성된 이중특이성 항체는 효소의 선택적 고정을 위한 제제로서 사용될 수 있다.
Fab' 단편은 이콜라이로부터 직접 회수될 수 있고, 화학적으로 결합되어 이중특이성 항체를 형성할 수 있다. 문헌[Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225(1992)]은 완전히 인간화된 이중특이성 항체 F(ab')2 분자의 생성을 기재한다. 각각의 Fab' 단편은 이콜라이로부터 분리되어 분비되고, 지시된 화학적 결합이 시험관내에서 처리되어 이중특이성 항체를 형성한다. 이렇게 형성된 이중특이성 항체는 ErbB2 수용체 및 정상 인간 T 세포를 과발현시키는 세포에 결합할 뿐만 아니라 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용혈 활성을 촉발시킬 수 있다.
재조합 세포 배양물로부터 직접적으로 2가 항체 단편을 제조하고 단리시키기 위한 다양한 기법이 또한 기재되었다. 예를 들어, 2가 이형이량체는 류신 지퍼를 이용하여 생성되었다. 문헌[Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)]. Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 두 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결되었다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성하고, 이어서, 재산화되어 항체 이형이량체를 형성한다. 문헌[Hollinger et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)]에 의해 기재된 "다이어바디" 기법은 이중특이성/2가 항체 단편에 대한 대안의 메커니즘을 제공하였다. 상기 단편은 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 짝짓기를 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결되는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보성 VL 및 VH 도메인과 짝지어 짐으로써 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일쇄 Fv(sFv) 이량체의 사용에 의한 이중특이성/2가 항체 단편을 생성하기 위한 다른 전략이 또한 보고되었다. 문헌[Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조.
2 초과의 결합가를 갖는 항체가 또한 상정된다. 예를 들어, 삼중 특이성 항체가 생성될 수 있다. 문헌[Tutt et al., J. Immunol. 147:60(1991)] 참조.
예시적인 이중특이성 항체는 주어진 분자(예를 들어, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질) 상에서 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, Siglec-5 신호전달 성분을 표적화하는 아암은 특정 단백질을 발현시키는 세포에 대해 세포 방어 메커니즘을 집중시키기 위해 백혈구, 예컨대 T 세포 수용체 분자(예를 들어, CD2, CD3, CD28 또는 B7), 또는 IgG(FcγR)에 대한 Fc 수용체, 예컨대 FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FcγRIII(CD16) 상에서 촉발 분자에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 특정 단백질을 발현시키는 세포에 대해 세포독성제를 국소화하기 위해 이중특이성 항체가 사용될 수 있다. 이러한 항체는 단백질-결합 아암 및 세포독성제 또는 방사성핵종 킬레이터, 예컨대 EOTUBE, DPTA, DOTA 또는 TETA에 결합하는 아암을 가진다. 관심 대사의 다른 이중특이성 항체는 관심 대상의 단백질에 결합하고, 조직 인자(TF)에 추가로 결합한다.
(7) 다가 항체
다가 항체는 항체가 결합되는 항원을 발현시키는 세포에 의해 2가 항체보다 더 빠르게 내재화(및/또는 이화작용)될 수 있다. 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 또는 이의 항체 단편은 항체의 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖는 다가 항체(IgM 부류 이외의 항체)(예를 들어, 4가 항체)일 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 바람직한 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다. 이 시나리오에서, 항체는 Fc 영역 및 Fc 영역에 대해 3개 이상의 항원 결합 부위 아미노-말단을 포함할 것이다. 본 명세서의 바람직한 다가 항체는 3 내지 약 8개, 그러나 바람직하게는 4개의 항원 결합 부위를 포함한다. 다가 항체는 적어도 하나의 폴리펩타이드 쇄(및 바람직하게는 2개의 폴리펩타이드 쇄)를 포함하되, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄는 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄는 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있되, VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이며, Fc는 Fc 영역의 하나의 폴리펩타이드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩타이드를 나타내며, n은 0 또는 1이다. 유사하게, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄는 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 쇄; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본 명세서의 다가 항체는 바람직하게는 추가로 적어도 2개의(바람직하게는 4개의) 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 포함한다. 본 명세서의 다가 항체는, 예를 들어, 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 본 명세서에 상정된 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 선택적으로, 추가로 CL 도메인을 포함한다. 다가 항체는 Siglec-5 항원뿐만 아니라, 제한 없이, 추가적인 항원 A 베타 펩타이드, 항원 또는 알파 시뉴클레인 단백질 항원 또는, 타우 단백질 항원 또는, TDP-43 단백질 항원 또는, 프리온 단백질 항원 또는, 헌팅턴 단백질 항원, 또는 RAN, 번역 산물 항원(글리신-알라닌(GA), 글리신-프롤린(GP), 글리신-알기닌(GR), 프롤린-알라닌(PA) 또는 프롤린-알기닌(PR), 인슐린 수용체, 인슐린 유사 성장 인자 수용체, 트랜스페린 수용체, 또는 혈액 뇌 장벽을 가로지르는 항체 전달을 용이하게 하는 임의의 다른 항원으로 구성된 다이펩타이드 반복부(DPR 펩타이드)를 포함)을 인식할 수 있다.
(8) 이형접합체 항체
이형접합체 항체가 또한 본 개시내용의 범주 내이다. 이형접합체 항체는 2개의 공유 결합된 항체(예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 또는 이의 항체 단편)로 구성된다. 예를 들어, 이형접합체에서 항체 중 하나는 아비딘에 결합되고, 다른 것은 바이오틴에 결합될 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어, 원치않는 세포에 면역계 세포를 표적화하도록 제안되었고(미국 특허 제4,676,980), HIV 감염을 치료하기 위해 사용되었다. 국제 특허 공개 WO 91/00360, WO 92/200373 및 유럽 특허 제0308936호. 가교제를 수반하는 것을 포함하는 합성 단백질 화학에서 공지된 방법을 이용하여 항체가 시험관내에서 제조될 수 있다는 것이 상정된다. 예를 들어, 면역독소는 이황화물 교환 반응을 이용하여 또는 티오에터 결합을 형성함으로써 구성될 수 있다. 이 목적을 위한 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토뷰티르이미데이트 및, 예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호에 개시된 것을 포함한다. 임의의 편리한 가교 방법을 이용하여 이형접합체 항체가 생성될 수 있다. 적합한 가교제는 당업계에 잘 공지되어 있고, 다수의 가교 기법에 따라 미국 특허 제4,676,980호에서 개시된다.
(9) 효과기 작용 조작
또한 효과기 작용을 변형시키기 위해 그리고/또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 불변 영역 상의 Fc 수용체 결합 부위는 특정 Fc 수용체, 예컨대 FcγRI, FcγRII, 및/또는 FcγRIII에 대한 결합 친화도를 제거하거나 또는 감소시키기 위해 변형되거나 또는 돌연변이될 수 있다. 일부 실시형태에서, 효과기 작용은 항체의 (예를 들어, IgG의 CH2 도메인에서) Fc 영역의 N-글리코실화를 제거함으로써 손상된다. 일부 실시형태에서, 효과기 작용은 PCT WO 99/58572 및 문헌[Armour et al., Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy et al., J. Immunology 164:1925-1933 (2000)]에 기재된 바와 같은 인간 IgG의 영역, 예컨대 233-236, 297, 및/또는 327-331을 변형시킴으로써 손상된다.
항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어, 미국 특허 제5,739,277호에 기재된 바와 같은 항체(특히, 항체 단편) 내로 구조(salvage) 수용체 결합 에피토프를 혼입할 수 있다. 본 명세서에 기재된 용어 "구조 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기 증가를 초래하는 IgG 분자(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.
(10) 다른 아미노산 서열 변형
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체, 또는 이의 항체 단편의 아미노산 서열 변형이 또한 상정된다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체 또는 항체 단편의 아미노산 서열 변이체는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 핵산 내로 적절한 뉴클레오타이드 변화를 도입함으로써, 또는 펩타이드 합성에 의해 제조된다. 이러한 변형은, 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실 및/또는 잔기 내로의 삽입 및/또는 잔기의 치환을 포함한다. 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합은 최종 작제물에 도달하도록 이루어지며, 단, 최종 작제물은 목적하는 특징(즉, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질과 결합하거나 또는 물리적으로 상호작용하는 능력)을 갖는다. 아미노산 변화는 또한 항체의 번역 후 과정, 예컨대 글리코실 부위의 수 또는 위치의 변화를 변경시킬 수 있다.
돌연변이유발을 위한 바람직한 위치인 항-Siglec-5 항체의 특정 잔기 또는 영역의 동정을 위한 유용한 방법은 문헌[Cunningham and Wells in Science, 244:1081-1085(1989)]에 의해 기재된 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 여기서, 잔기 또는 표적 잔기의 그룹이 동정되고(예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys, 및 glu), 천연 또는 음으로 하전된 아미노산(가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어 표적 항원과 아미노산의 상호작용에 영향을 미친다. 이어서, 치환에 대한 작용 민감성을 보여주는 해당 아미노산 위치는 치환 부위에서 또는 치환 부위에 대해 추가적인 또는 다른 변이체를 도입함으로써 개선된다. 따라서, 아미노산 서열 변화를 도입하기 위한 부위가 사전결정되지만, 특히 돌연변이 특성은 사전결정될 필요가 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이 성능을 분석하기 위해, 알라닌 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발이 표적 코돈 또는 영역에서 수행되고, 발현된 항체 변이체는 목적하는 활성에 대해 선별된다.
아미노산 서열 삽입은 길이가 하나의 잔기로부터 1백개 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩타이드의 범위로 아미노- ("N") 및/또는 카복시- ("C") 말단의 융합뿐만 아니라, 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단의 메티오닐 잔기를 갖는 항체 또는 세포독성 폴리펩타이드에 융합된 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩타이드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합을 포함한다.
다른 유형의 변이체는 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체는 상이한 잔기로 대체되는 항체 분자에서 적어도 하나의 아미노산 잔기를 가진다. 치환 돌연변이유발을 위한 가장 큰 관심 대상의 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경이 또한 상정된다. 보존적 치환은 표제 "바람직한 치환" 하에서 이하의 표 D에 나타낸다. 이러한 치환이 생물학적 활성에서 생물학적 활성의 변화를 초래한다면, 표 D에서 "예시적인 치환"으로 명명되거나 또는 아미노산 분류에 대해 이하에 추가로 기재하는 바와 같은 더 실질적인 변화가 도입될 수 있고, 생성물이 선별된다.
[표 D]
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항체의 생물학적 특성의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어, 시트 또는 나선 입체배좌로서, 치환 영역에서 폴리펩타이드 골격의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지함에 있어서 그들의 효과가 상당히 다른 치환을 선택함으로써 달성된다. 천연 유래 잔기는 통상적인 측쇄 특성에 기반하여 그룹들로 나뉘어진다:
(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류로 교환하는 것을 수반한다.
분자의 산화적 안정성을 개선시키기 위해 그리고 비정상 가교를 방지하기 위해 항체의 적절한 입체배좌를 유지하는 데 수반되지 않는 임의의 잔기는 또한 일반적으로 세린으로 치환될 수 있다. 대조적으로, 시스테인 결합(들)은 그의 안정성을 개선시키기 위해 항체에 첨가될 수 있다(특히, 여기서 항체는 항체 단편, 예컨대 Fv 단편임).
특히 바람직한 유형의 치환 변이체는 모 항체(예를 들어, 인간화된 또는 인간 항-Siglec-5 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반한다. 일반적으로, 추가적인 연구를 위해 선택된 얻어진 변이체(들)는 그들이 생성된 모 항체에 비해 개선된 생물학적 특성을 가질 것이다. 이러한 치환 변이체를 생성하기 위한 편리한 방법은 파지 디스플레이를 이용하는 친화도 성숙을 수반한다. 간략하게, 몇몇 초가변 영역 부위(예를 들어, 6 내지 7개 부위)는 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노산 치환을 생성하도록 돌연변이된다. 이렇게 생성된 항체 변이체는 각각의 입자 내에서 패키징된 M13의 유전자 III 산물에 대한 융합으로서 섬질 파지 입자로부터 1가 방식으로 나타난다. 이어서, 파지-디스플레이된 변이체는 본 명세서에 개시된 바와 같은 그들의 생물학적 활성(예를 들어, 결합 친화도)에 대해 선별된다. 변형을 위해 후보 초가변 영역 부위를 동정하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발이 수행되어 항원 결합에 상당히 기여하는 초가변 영역 잔기를 동정할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 항체와 항원(예를 들어, 본 개시내용의 Siglec-5 단백질) 사이의 접점을 동정하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 데 유리할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃하는 잔기는 본 명세서에 상세히 기재된 기법에 따르는 치환에 대한 후보이다. 일단 이러한 변이체가 생성된다면, 변이체의 패널에 본 명세서에 기재된 바와 한은 선별이 실시되고, 하나 이상의 적절한 분석에서 우수한 특성을 갖는 항체는 추가 연구를 위해 선택될 수 있다.
항체의 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 본래의 글리코실화 패턴을 변경한다. 변경은 항체에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 모이어티의 결실, 및/또는 항체에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 첨가를 의미한다.
항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결이다. N-연결은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. 트라이펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌(여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 효소 부착에 대한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드에서 이들 트라이펩타이드 서열 중 하나의 존재는 잠재적 글리코실화 부위를 생성한다. O-연결 글리코실화는, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신이 또한 사용될 수 있지만, 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나의 하이드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 대한 부착을 지칭한다.
항체에 대한 글리코실화 부위의 첨가는 그것이 (N-연결 글리코실화 부위에 대해) 상기 기재한 트라이펩타이드 서열을 포함하도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성된다. 변경은 또한 (O-연결 글리코실화 부위에 대해) 본래의 항체의 서열에 대해 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 첨가 또는 치환에 의해 이루어질 수 있다.
항-IgE 항체의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 생성된다. 이들 방법은, (천연 유래 아미노산 서열 변이체의 경우에) 천연 공급원으로부터의 단리 또는 올리고뉴클레오타이드-매개(또는 부위 지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 초기 생성된 변이체 또는 항체의 비-변이체 형태(예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체) 또는 항체 단편의 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
(11) 항체 접합체
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체, 또는 이의 항체 단편은 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합될 수 있다. 항체에 분자, 예컨대 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제를 접합하기 위한 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다.
예를 들어, 약물 접합은 생물학적 활성 세포독성(항암) 페이로드 또는 약물의 특정 종양 마커(예를 들어, 이상적으로는 종양 세포에서 또는 종양 세포 상에서만 발견되는 단백질)를 특이적으로 표적화하는 항체에 대한 결합을 수반한다. 항체는 신체에서 이들 단백질 하향을 추적하고, 그들 자체를 암세포의 표면에 부착한다. 항체와 표적 단백질(항원) 사이의 생화학적 반응은 신호 종양에서 세포를 촉발하는데, 이는 세포독소와 함께 항체를 흡수하거나 또는 내재화한다. ADC가 내재화된 후에, 세포독성 약물이 방출되고, 암을 사멸한다. 이런 표적화에 기인하여, 이상적으로 약물은 더 낮은 부작용을 가지며, 다른 화학치료제보다 더 넓은 치료적 창을 제공한다. 항체에 접합하기 위한 기법은 개시되어 있고, 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Jane de Lartigue, OncLive July 5, 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; 및 Ducry et al., (2010). Bioconjugate Chemistry 21 (1): 5-13)] 참조.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 리신, 리신 A-쇄, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 브롬화에티듐, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 다이하이드록시 안트라신 다이온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소(PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 쿠리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피치날리스 저해제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무스, 콤브레스타틴, 듀오카마이신, 돌라스타틴, cc1065, 및 시스플라틴으로부터 선택된 독소에 접합될 수 있다.
(12) 기타 항체 변형
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체, 또는 이의 항체 단편은 당업계에 공지되고 용이하게 이용 가능한 추가적인 비-단백질성 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 바람직하게는, 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체이다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1, 3-다이옥솔란, 폴리-1,3,6-트라이옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(동종중합체 또는 무작위 공중합체 중 하나), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 중합체(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 수 중에서의 그의 안정성에 기인하여 제조하는 데 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지 또는 비분지될 수 있다. 항체에 부착되는 중합체의 수는 다를 수 있고, 한 개 이상의 중합체가 부착된다면, 그들은 동일 또는 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화를 위해 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은, 개선될 항체의 특정 특성 또는 작용, 항체 유도체가 정해진 조건 등 하에서 요법에서 사용될지의 여부를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 고려사항에 기반하여 결정될 수 있다. 이러한 기법 및 다른 적합한 제형은 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)]에 개시된다.
결합 분석 및 기타 분석
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, ELISA, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 웨스턴 블롯 등과 같은 공지된 방법에 의해 항원 결합 활성에 대해 시험될 수 있다.
일부 실시형태에서, 경쟁 분석은 표 2, 표 3, 표 6 및 표 7에 열거되거나, S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 임의의 항체와 경쟁하는 항체를 확인하는 데 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 이러한 경쟁 항체는 표 2, 표 3, 표 6 및 표 7에 열거되거나, S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로부터 선택된 임의의 항체에 의해 결합된 동일한 에피토프(예를 들어, 선형 또는 입체구조적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하기 위한 상세한 예시적인 방법은 문헌[Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에서 제공된다.
예시적인 경쟁 분석에서, 세포 표면 상에서 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포는 Siglec-5에 결합하는 제1 표지 항체(예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류) 및 Siglec-5에 대한 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 능력에 대해 시험 중인 제2 비표지 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포는 제1 표지 항체를 포함하지만, 제2 비표지 항체는 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이션된다. Siglec-5에 대한 제1 항체의 결합에 허용적인 조건 하에서 인큐베이션 후에, 과량의 비결합 항체가 제거되고, 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 측정된다. 고정된 Siglec-5 또는 Siglec-5를 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된다면, 제2 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)] 참조.
핵산, 벡터 및 숙주 세포
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같은 재조합 방법 및 조성물을 이용하여 생성될 수 있다. 일부 실시형태에서, 임의의 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항-Siglec-5 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 암호화할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 일부 실시형태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 일부 실시형태에서, 숙주 세포는 하기를 포함한다(예를 들어, 하기에 의해 형질도입되었다): (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제2 벡터. 일부 실시형태에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들어 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프구 세포(예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 제조 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 본 개시내용의 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 후속적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수된다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 재조합 생성에 대해, 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 핵산이 단리되고, 숙주 세포에서 추가적인 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터 내로 삽입된다. 이러한 핵산은 통상적인 절차를 이용하여 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에게 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용함으로써) 용이하게 단리되며, 서열분석된다.
본 명세서에 기재된 임의의 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체, 또는 이의 단편 폴리펩타이드(항체를 포함)를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 적합한 벡터는, 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 적합한 클로닝 벡터는 표준 기법에 따라 구성될 수 있거나, 또는 당업계에서 입수 가능한 매우 다수의 클로닝 벡터로부터 선택될 수 있다. 선택된 클로닝 벡터는 사용될 것으로 의도되는 숙주 세포에 따라 다를 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자가복제되는 능력을 가지고, 특정 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 가질 수 있고/있거나 벡터를 포함하는 클로닝을 선택함에 있어서 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 운반할 수 있다. 적합한 예는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 예를 들어, pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript)(예를 들어, pBS SK+) 및 그의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터, 예컨대 pSA3 및 pAT28을 포함한다. 이들 및 다수의 다른 클로닝 벡터는 상업적 공급업자, 예컨대 바이오라드(BioRad), 스트레이트겐(Strategene) 및 인비트로젠(Invitrogen)으로부터 입수 가능하다.
발현 벡터는 일반적으로 본 개시내용의 핵산을 포함하는 복제 가능한 폴리뉴클레오타이드 작제물이다. 발현 벡터는 숙주 세포에서 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 통합 부분으로서 복제 가능할 수 있다. 적합한 발현 벡터는 플라스미드, 바이러스 벡터(아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 레트로바이러스, 코스미드, 및 PCT 공개 WO 87/04462에 개시된 발현 벡터(들)를 포함)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 벡터 성분은 다음의 신호 서열; 복제 기점; 하나 이상의 마커 유전자; 적합한 전사 제어 요소(예컨대, 프로모터, 인핸서 및 종결자) 중 하나 이상을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 발현(즉, 번역)을 위해, 또한 보통 하나 이상의 번역 제어 요소, 예컨대 리보솜 결합 부위, 번역 개시 부위 및 중단 코돈이 필요하다.
관심 대상의 핵산을 포함하는 벡터는 전기천공법, 염화칼슘, 염화루비듐, 인산칼슘, DEAE-덱스트란 또는 기타 물질을 사용하는 형질감염; 미립자 총(microprojectile bombardment); 리포펙션; 및 감염(예를 들어, 벡터가 감염제, 예컨대 백시니아 바이러스인 경우)을 포함하는 임의의 다수의 적절한 수단에 의해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 벡터 또는 폴리뉴클레오타이드를 도입하는 선택은 종종 숙주 세포의 특징에 따를 것이다. 일부 실시형태에서, 상기 벡터는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 핵산을 포함한다.
항체-암호화 벡터의 클로닝 또는 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 작용이 필요하지 않을 때 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편 및 폴리펩타이드(예를 들어, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호, 및 제5,840,523호; 및 문헌[Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254], 이콜라이에서 항체 단편의 발현을 설명). 발현 후에, 항체는 가용성 분획에서 박테리아 세포에서 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고, 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 추가로, 진핵 미생물, 예컨대 섬질 진균 또는 효모는 또한 부분적으로 또는 완전한 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생성을 초래하는 글리코실화 경로가 "인간화된" 진균 및 효모 균주를 포함하는 항체-암호화 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다(예를 들어, Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004); 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215(2006)).
글리코실화된 항체의 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수 있다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 동정되었다. 식물 세포 배양물은 또한 숙주(예를 들어, 미국 특허 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호 및 제6,417,429호, 유전자이식 식물에서 항체를 생성하기 위한 플랜티바디즈(PLANTIBODIES™ 기법))로서 이용될 수 있다.
척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액 중에서 성장하는 데 적합한 포유류 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 다른 예는 SV40(COS-7)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통; 인간 배아 신장 계통(예를 들어, 문헌[Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977))]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포; 새끼 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(문헌[Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]에서 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 그린 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK; 버팔로 랫트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유방 종양(MMT 060562); 예를 들어, 문헌[Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에서 기재되는 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유류 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0를 포함하는, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유류 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)] 참조.
Siglec-5 활성
PI3K 활성화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 Siglec-5 제제, 예컨대, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현되는 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후에 PI3K 활성화를 유도할 수 있다.
PI3K는 포스파티딜이노시톨(PtdIns)의 이노시톨 고리의 3-위치 하이드록실기를 인산화할 수 있는 관련된 세포내 신호 형질도입 키나제의 패밀리이다. PI3K 패밀리는 1차 구조, 조절 및 시험관내 지질 기질 특이성에 기반하여 3가지의 상이한 부류(클래스 I, 클래스 II 및 클래스 III)로 나뉘어진다.
활성화된 PI3K는 PtdIns3P, PtdIns(3,4)P2, PtdIns(3,5)P2 및 PtdIns(3,4,5)P3을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다양한 3-인산화 포스포이노시타이드를 생성한다. 이들 3-인산화된 포스포이노시타이드는 신호전달 단백질이 다양한 세포막에 동원되는 메커니즘에서 작용한다. 이들 신호전달 단백질은 PX 도메인, 플렉스트린 상동 도메인(PH 도메인) 및 FYVE 도메인을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 도메인을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 포스포이노시타이드-결합 도메인을 포함한다. PI3K 활성화를 결정하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 대한 Siglec-5 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 PI3K 활성의 감소된 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
사이토카인의 조절된 발현
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포 표면 상에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 뇌에서 전염증 매개체를 조절(예를 들어, 증가 또는 감소)할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 사이토카인(예를 들어, 전염증성 매개체)의 발현을 조절하고/하거나 세포에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후에 항-염증 매개체의 발현을 감소시킨다.
염증은 해로운 자극, 예컨대 병원균, 손상된 세포 및 자극물에 대한 혈관 조직의 복잡한 생물학적 반응의 부분이다. 급성 염증의 분류적 징후는 통증, 발열, 발적 및 종창이다. 염증은 손상 부위를 제한함으로써 또는 면역계의 세포를 동원하고 활성화시키는 것에 의해 감염을 클리어런스함으로써 유기체를 보호하는 면역반응이다. 염증 반응은 유기체에 대해 손상을 야기하는 것을 피하기 위해 그의 지속기간 및 중증도에서 단단히 조절되고 제한된다. 염증은 급성 또는 만성으로서 분류될 수 있다. 급성 염증은 선천성 면역반응에 의해 유발되는데, 이는 초기에 유해한 자극을 인식하고, 혈액으로부터 손상 조직 내로 백혈구를 동원한다. 사이토카인 및 케모카인 방출을 포함하는 생화학적 사건의 캐스케이드는 국소 혈관계, 면역계 및 손상 조직 내의 다양한 세포와 연루된 염증 반응을 전파한다. 만성 염증은 연장되고, 지속적인데, 이는 염증 반응에 참여하는 면역 세포 유형에서 진행성 이동을 야기한다. 만성 염증은 염증 과정의 결과로서 조직의 진행성 파괴 및 섬유증을 특징으로 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-염증 매개체는 염증 반응을 감소시키거나, 저해하거나 또는 비활성화시키는 메커니즘에서 직접적으로 또는 간접적으로(예를 들어, 항염증 신호전달 경로에 의해) 연루된 단백질이다. 항-염증 매개체를 동정하고 특성규명하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 항-염증 매개체의 예는 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, IFN-알파, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF-알파 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 항-염증 매개체의 예는 사이토카인, 예컨대 IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1 및 MIP-1-베타를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 사이토카인, 예컨대 IL-1b, IL-8 및 TNF-a의 발현을 조절(예를 들어, 증가 또는 감소)할 수 있다. 특정 실시형태에서, 사이토카인의 조절된 발현은 대식세포, 호중구, 자연살해(NK) 세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포에서 생긴다. 조절된 발현은 유전자 발현의 증가, 전사 발현의 증가, 또는 단백질 발현의 증가를 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 유전자, 전사체(예를 들어, mRNA) 및/또는 단백질 발현을 결정하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 노던 블롯 분석은 사이토카인 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR은 사이토카인 전사 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있으며, 웨스턴 블롯 분석은 사이토카인 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체로 치료되는 대상체의 하나 이상의 세포에서의 이의 발현이 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상체의 하나 이상의 세포에서 발현되는 동일한 사이토카인의 발현에 비해 조절된다면, 사이토카인은 조절된 발현을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 하나 이상의 세포에서의 사이토카인 발현에 비해, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상체의 하나 이상의 세포에서의 사이토카인 발현을 조절할 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상의 하나 이상의 세포에서의 사이토카인 발현에 비해, 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체의 하나 이상의 세포의 사이토카인 발현을 조절한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 하나 이상의 전-염증 매개체의 비정상 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유용하다.
전염증성 매개체의 조절된 발현
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 전염증 매개체의 발현을 조절(예를 들어, 증가 또는 감소)시킬 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 전염증성 매개체는 염증 반응을 유도하거나, 활성화시키거나, 촉진하거나 또는 달리 증가시키는 메커니즘에서 직접적으로 또는 간접적으로(예를 들어, 전염증성 신호전달 경로에 의해) 연루된 단백질이다. 전염증성 매개체를 동정하고 특성규명하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다.
전염증 매개체의 예는 사이토카인, 예컨대 I형 및 II형 인터페론, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-20 패밀리 구성원, IL-33, LIF, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18 및 CRP를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 전염증 매개체, 예컨대 I형 및 II형 인터페론, IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1 및 MIP-1-베타의 기능성 발현 및/또는 분비를 조절할 수 있다. 특정 실시형태에서, 전염증성 매개체의 조절된 발현은 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포에서 생긴다. 조절된 발현은 조절된 유전자 발현, 조절된 전사 발현 또는 조절된 단백질 발현을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 유전자, 전사체(예를 들어, mRNA) 및/또는 단백질 발현을 결정하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 노던 블롯 분석은 전염증성 매개체 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR은 전염증성 매개체 전사 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, 웨스턴 블롯 분석은 전염증성 매개체 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
특정 실시형태에서, 전염증성 매개체는 염증 사이토카인을 포함한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 하나 이상의 염증 사이토카인의 분비를 조절할 수 있다. 분비가 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의해 조절될 수 있는 염증 사이토카인의 예는, 예컨대 I형 및 II형 인터페론, IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1 및 MIP-1-베타를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
특정 실시형태에서, 전염증 매개체는 면역 세포 상에서 발현된 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 수용체를 포함한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 면역 세포 상에서 발현된 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 수용체의 발현을 조절할 수 있다. 발현이 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의해 조절될 수 있는 면역 세포 상에서 발현된 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 수용체의 예는 CD86, CD80, CD83, C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX 및 PYCARD를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, Siglec-5 제제, 예컨대 본 개시내용의 작용제 항-Siglec-5 항체로 치료되는 대상의 하나 이상의 세포에서의 발현이 작용제 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상의 하나 이상의 세포에서 발현되는 동일한 전염증성 매개체의 발현에 비해 조절(예를 들어, 증가 또는 감소)된다면, 전염증성 매개체는 조절된 발현을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상체의 하나 이상의 세포에서의 전염증성 매개체 발현에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상체의 하나 이상의 세포에서 전염증성 매개체 발현을 조절할 수 있다. 다른 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상체의 하나 이상의 세포에서의 전염증성 매개체 발현에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체의 하나 이상의 세포에서 전염증성 매개체 발현을 조절할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 골수 세포에서 CD86 발현에 비해, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 120%, 적어도 130%, 적어도 140%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 적어도 200%, 적어도 210%, 적어도 220%, 적어도 230%, 적어도 240%, 적어도 250%, 적어도 260%, 적어도 270%, 적어도 280%, 적어도 290%, 적어도 300% 또는 적어도 310%만큼 골수 유래 억제 세포에서 CD86 발현을 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 골수 세포에서 CD86의 발현에 비해 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.4배, 적어도 1.6배, 적어도 1.8배, 적어도 2배, 적어도 2.2배, 적어도 2.4배, 적어도 2.6배, 적어도 2.8배, 적어도 3배, 적어도 3.2배, 적어도 3.4배, 적어도 3.6배, 적어도 3.8배, 적어도 4배 또는 적어도 4.2배만큼 골수 유래 억제 세포에서의 CD86 발현을 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의한 치료 후 약 24시간, 약 36시간, 약 48시간, 약 60시간, 또는 약 72시간에 결정된다. 일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의한 치료 후 약 48시간에 결정된다.
일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현은 단백질의 발현 수준을 측정하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용하여 결정된다. 단백질의 발현 수준을 측정하기 위한 방법의 예는 유세포분석 또는 형광-활성화 세포 분류(FACS), 웨스턴 블롯 및 현미경 검사 방법(예를 들어, 형광 현미경 검사)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현은 FACS에 의해 결정된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 골수 세포에서 CCL4 발현에 비해, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 120%, 적어도 130%, 적어도 140%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 적어도 200%, 적어도 210%, 적어도 220%, 적어도 230%, 적어도 240%, 적어도 250%, 적어도 260%, 적어도 270%, 적어도 280%, 적어도 290%, 적어도 300%, 적어도 310% 이상만큼 골수 유래 억제 세포에서 CCL4 발현을 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 골수 세포에서 CCL4의 발현에 비해 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.4배, 적어도 1.6배, 적어도 1.8배, 적어도 2배, 적어도 2.2배, 적어도 2.4배, 적어도 2.6배, 적어도 2.8배, 적어도 3배, 적어도 3.2배, 적어도 3.4배, 적어도 3.6배, 적어도 3.8배, 적어도 4배, 적어도 4.2배 이상만큼 골수 유래 억제 세포에서의 CCL4 발현을 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의한 치료 후 약 24시간, 약 36시간, 약 48시간, 약 60시간, 또는 약 72시간에 결정된다. 일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의한 치료 후 약 48시간에 결정된다.
일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의한 치료 후 약 24시간, 약 36시간, 약 48시간, 약 60시간, 또는 약 72시간에 세포 성장 배지에서 CCL4의 발현을 측정함으로써 결정된다. 일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체에 의한 치료 후 약 48시간에 세포 성장 배지에서 CCL4의 발현을 측정함으로써 결정된다.
일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현은 단백질의 발현 수준을 측정하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용하여 결정된다. 단백질의 발현 수준을 측정하기 위한 방법의 예는 유세포분석 또는 형광-활성화 세포 분류 (FACS), ELISA, 웨스턴 블롯, 상업적 키트, 예컨대 Quantikine ELISA 키트(R&D Systems) 또는 인간 Chemokine Legendplex(Biolegend) 및 현미경 검사 방법(예를 들어, 형광 현미경 검사)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서의 CCL4의 발현은 Quantikine ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하거나 또는 Human Chemokine Legendplex(Biolegend)에 의해 결정된다. 특정 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서의 CCL4의 발현은 ELISA를 이용하여, 예컨대 Quantikine ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, 골수 유래 억제 세포에서의 CCL4의 발현은 유세포분석에 의해, 예컨대 Human Chemokine Legendplex(Biolegend)를 이용하여 결정된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 일부 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 하나 이상의 전-염증 매개체의 비정상 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유용할 수 있다.
ERK 인산화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 세포외 신호-조절된 키나제(ERK) 인산화를 유도할 수 있다.
세포외-신호-조절 키나제(ERK)는, 예를 들어, 감수분열, 유사분열 및 분화된 세포에서 분열 작용의 조절에 수반된 크게 발현된 단백질 키나제 세포내 신호전달 키나제이다. 다양한 자극, 예컨대 성장 인자, 사이토카인, 바이러스 감염, 이형삼량체 G 단백질-결합 수용체에 대한 리간드, 형질전환제, 및 발암물질은 ERK 경로를 활성화시킨다. ERK의 인산화는 그들의 키나제 활성의 활성화를 야기한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 ERK 인산화의 감소된 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
Syk 인산화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후에 비장 타이로신 키나제(Syk) 인산화를 유도할 수 있다.
비장 타이로신 키나제(Syk)는 몇몇 기질을 인산화시켜서, 세포의 활성화 및 염증 과정을 야기하는 신호전달 복합체의 형성을 용이하게 함으로써 Siglec-5의 하류에서 작용하는 세포내 신호전달 분자이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 Syk 인산화의 감소된 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
Siglec-5 인산화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 Src 패밀리 타이로신 키나제, 예컨대 Src, Syk, Fyn, Fgr, Lck, Hck, Blk, Lyn 및 Frk에 의한 Tyr-520 및 Tyr-544의 Siglec-5 인산화를 일시적으로 유도할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 Siglec-5 인산화의 감소된 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
ITAM 모티프 포함 수용체의 인산화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 ITAM 모티프-포함 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, SIRPB1, FcgR, DAP10 및 DAP12의 인산화를 유도할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 ITAM 모티프-포함 수용체 인산화의 감소된 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
C-C 케모카인 수용체 7의 조절된 발현
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 발현을 조절할 수 있다. 조절된(예를 들어, 증가 또는 감소된) 발현은 유전자 발현에서의 조절, 전사 발현에서의 조절 또는 단백질 발현에서의 조절을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 유전자, 전사체(예를 들어, mRNA) 및/또는 단백질 발현을 결정하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 노던 블롯 분석은 항-염증 매개체 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR 은 항-염증 매개체 전사 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있으며, 웨스턴 블롯 분석은 항-염증 매개체 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
C-C 케모카인 수용체 7(CCR7)은 G 단백질-결합 수용체 패밀리의 구성원이다. CCR7은 다양한 림프구 조직에서 발현되며, B 세포 및 T 세포를 활성화시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, CCR7은 2차 림프 기관, 예컨대 림프절에 대한 기억 T 세포의 이동을 조절할 수 있다. 다른 실시형태에서, CCR7은 수지상 세포 성숙을 자극할 수 있다. CCR7은 케모카인(C-C 모티프) 리간드 CCL19/ELC 및 CCL21에 결합할 수 있는 수용체 단백질이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, CCR7은, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체로 치료되는 대상체의 하나 이상의 세포에서의 발현이 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상체의 하나 이상의 세포에서 발현되는 CCR7의 발현에 비해 조절된다면, 조절된(예를 들어, 증가된 또는 감소된) 발현을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상체의 하나 이상의 세포에서의 CCR7 발현에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상체의 하나 이상의 세포에서 CCR7 발현을 조절할 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상의 하나 이상의 세포에서의 CCR7 발현에 비해, 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체의 하나 이상의 세포의 CCR7 발현을 조절한다.
일부 실시형태에서, CCR7의 증가된 발현은 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 및/또는 미세아교세포에서 일어난다. CCR7의 증가된 발현은 케모카인 CCL19 및 CCL21을 발현시키는 세포에 대해 미세아교세포 주화성을 유도할 수 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 CCL19 및 CCL21 발현 세포에 대해 미세아교세포 주화성을 유도할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, CCR7의 비정상 수준과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유용하다.
항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력의 향상 또는 정규화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현되는 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후에 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력을 향상시키고/시키거나 정규화할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포를 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력을 향상시키고/시키거나 정규화할 수 있다. 다른 실시형태에서, 길항제 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력을 향상시키고/시키거나 정규화시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 감소된 또는 조절 장애가 있는 능력과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
파골세포 생성
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포에서 발현되는 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후에 파골세포 생성을 유도하고/하거나 파골세포형성 속도를 증가시킬 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 파골세포는 그의 무기염화된 기질을 제거함으로써 그리고 유기체 뼈(예를 들어, 뼈 재흡수)를 파괴함으로써 뼈 조질을 제거할 수 있는 뼈 세포의 유형이다. 파골세포는 골수 계통의 세포의 융합에 의해 형성될 수 있다. 일부 실시형태에서, 파골세포는 타르타르산 내성산 포스파타제(TRAP) 및 카텝신 K의 고발현을 특징으로 할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 길항제 항-Siglec-5 항체로 치료된 대상체에서의 파골세포형성 속도가 Siglec-5 제제로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서의 파골세포형성 속도보다 더 크다면, 파골세포형성 속도는 증가될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서의 파골세포형성 속도에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상체에서의 파골세포형성 속도를 증가시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서의 파골세포형성 속도에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체에서 파골세포형성 속도를 증가시킬 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 작용제 항-Siglec-5 항체로 처리한 대상체에서의 파골세포형성 속도가 항-Siglec-5 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서의 파골세포형성 속도보다 더 작다면, 파골세포형성 속도는 감소될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서의 파골세포형성 속도에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상체에서의 파골세포형성 속도를 감소시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료받지 않은 대응하는 대상체에서의 파골세포형성 속도에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체에서 파골세포형성 속도를 감소시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 골밀도의 병리학적 감소와 관련된 골다공증 및 골밀도의 병리학적 증가와 관련된 골다공증 질환을 포함하는 비정상적 뼈 형성 및 유지와 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
Siglec-5-발현 세포의 증식 및 생존
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포 상에서 발현된 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후 수지상 세포, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, Kupffer 세포, T 세포 및 미세아교세포의 증식, 생존 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 대식세포는 M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포 및 M2 대식세포(예를 들어, M2a 대식세포)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 호중구는 M1 호중구, 활성화된 M1 호중구 및 M2 호중구를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 자연살해(NK) 세포는 M1 NK 세포, 활성화된 M1 NK 세포 및 M2 NK 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 미세아교세포는 M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
미세아교세포는 뇌 및 척수의 체류 대식세포인 신경아교세포의 유형이고, 따라서, 중추신경계(CNS)에서 활성 면역 방어의 처음의 그리고 주된 형태로서 작용한다. 미세아교세포는 뇌 내의 총 신경아교세포 집단의 20%를 구성한다. 미세아교세포는 플라크, 손상된 뉴런 및 감염제에 대해 CNS를 끊임없이 포집한다. 뇌 및 척수는 대부분의 병원균이 약한 신경 조직에 도달하는 것을 방지하는 혈액-뇌 장벽으로서 알려진 일련의 내피 세포에 의해 신체의 나머지로부터 분리된다는 점에서 "면역 특권" 기관으로 고려된다. 감염제가 뇌에 직접 도입되거나 또는 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 경우에, 미세아교세포는 그들이 민감한 신경조직을 손상시키기 전에 염증을 제한하고 감염제를 파괴하도록 빠르게 반응하여야 한다. 신체의 나머지로부터의 항체의 비가동률에 기인하여(소수의 항체는 혈액 뇌 장벽을 가로지르기에 충분히 작음), 미세아교세포는 이물질을 인식하고, 그들을 삼키며, 항원-제시 세포 활성화 T 세포로서 작용할 수 있어야 한다. 이 과정이 잠재적으로 치명적인 손상을 방지하기 위해 빠르게 행해져야 하기 때문에, 미세아교세포는 CNS에서의 심지어 작은 병리적 변화에 대해서도 극도로 민감하다. 그들은 세포외 칼륨의 심지어 작은 변화에 대해서도 반응하는 고유 칼륨 채널을 가짐으로써 부분적으로 이런 민감성을 달성한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, 호중구, NK 세포, 및/또는 미세아교세포에 대한 CD80, CD83 및/또는 CD86의 발현을 증가시킬 수 있다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체로 치료된 대상체에서의 수지상 세포, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용이 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용보다 크다면, 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 수지상 세포, 단핵구, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용은 증가된 발현을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료하지 않은 대응하는 대상체에서의 수지상 세포, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, Kupffer 세포, T 세포 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 기능에 비해, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 수지상 세포, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, Kupffer 세포, T 세포 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 항-Siglec-5 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서의 수지상 세포, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, Kupffer 세포, T 세포 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 기능에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 수지상 세포, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, Kupffer 세포, T 세포 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 수지상 세포, 호중구, 대식세포, 호중구, B 세포, NK 세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, Kupffer 세포, T 세포 및/또는 미세아교세포의 증식 감소, 생존, 증가된 세포자멸사 및/또는 기능과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 저해하거나, 치료하는 데 유리하다.
클리어런스 및 식세포작용
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 뉴런의 세포자멸사, 신경계의 신경 조직 파편, 기능장애 시냅스, 신경계의 비-신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산 또는 종양 세포 중 하나 이상의 세포에서 발현되는 Siglec-5 단백질에 대한 결합 후에 클리어런스 및/또는 식세포작용을 유도할 수 있다. 특정 실시형태에서, 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포자멸사 뉴런 클리어런스, 신경 조직 파편 클리어런스, 기능장애 시냅스 클리어런스, 비- 신경 조직 파편 클리어런스, 박테리아 또는 다른 이물질 클리어런스, 질환-원인 단백질 클리어런스, 질환-원인 펩타이드 클리어런스, 질환-원인 핵산 클리어런스 및 종양 세포 클리어런스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 클리어런스 중 하나 이상의 유형을 유도할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 세포자멸사 뉴런, 신경 조직 파편, 기능장애 시냅스, 비-신경 조직 파편, 박테리아, 다른 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산 및/또는 종양 세포 중 하나 이상의 식세포작용을 유도할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 대식세포증식자극인자(M-CSF)의 감소된 수준의 조건 하에서 호중구, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 단핵구, 및/또는 미세아교세포에 의한 식세포작용을 증가시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, Siglec-5을 발현시키는 종양, 갑상선 암을 포함하는 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV, 및 헤모필루스 인플루엔자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 세포자멸사 뉴런, 신경계의 신경 조직 파편, 신경계의 비-신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 이를 치료하는 데 유리하다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 Siglec-5 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 세포자멸사 뉴런, 신경계의 신경 조직 파편, 비-신경계의 신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질과 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
Siglec-5-의존적 유전자 발현
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5-의존적 유전자의 활성 및/또는 발현을 감소시킬 수 있고, 면역계를 활성화시키는 신호전달 캐스케이드와 관련된 유전자 발현, 예컨대 ITAM 포함 수용체, 패턴 인식 수용체와 관련된, Toll-유사 수용체의, 손상-관련 분자 패턴(DAMP) 수용체, 예컨대 전사 인자의 활성화된 T 세포(NFAT) 패밀리의 핵 인자의 하나 이상의 전사 인자의 유전자 발현을 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 고수준의 Siglec-5-의존적 유전자와 연관된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
T 세포의 Siglec-5-의존적 활성화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 세포독성 T 세포 헬퍼 T 세포 또는 둘 다의 활성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 본 개시내용의 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암과 같은 고형 종양을 포함하는 종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 세포독성 T 세포 헬퍼 T 세포, 또는 둘 다의 감소된 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
호중구의 Siglec-5-의존적 저해
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제 항-Siglec-5 항체는 호중구 활성을 감소시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제 항-Siglec-5 항체는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암과 같은 고형 종양을 포함하는 종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 자연 살해 세포, 호중구 또는 둘 다의 활성의 감소된 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
자연살해(NK) 세포에 의한 Siglec-5-의존적 향상된 세포 사멸
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 NK 세포의 사멸 활성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암과 같은 고형 종양을 포함하는 종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 자연 살해 세포, 호중구 또는 둘 다의 활성의 감소된 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
종양-연관 면역 세포의 Siglec-5-의존적 저해
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제 항-Siglec-5 항체는 활성을 감소시키고/시키거나, 증식을 감소시키고/시키거나, 생존을 감소시키고/시키거나, 작용성을 감소시키고/시키거나, 종양 또는 림프 기관(예를 들어, 비장 및 림프절)에 대한 침윤을 감소시키고/시키거나 T-조절 세포 또는 저해 종양-포매 면역억제자 수지상 세포 또는, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 종양-연관 조절 B 세포 또는, 골수-유래 억제자 세포의 세포자멸사를 촉진시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제인 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5를 발현시키지 않는 고형 종양, 예컨대 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 갑상선 암, 및 혈액 Siglec-5를 발현시키는 종양, 예컨대 백혈병 세포를 포함하는 종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 유형의 면역 억제자 세포의 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
약제학적 조성물
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 제제를 적절한 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 조합함으로써 치료적 투여를 위한 다양한 제형에 혼입될 수 있고, 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제제로 제형화될 수 있다. 이러한 제형의 예는 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 주사, 흡입제, 겔, 미소구체 및 에어로졸을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 약제학적 조성물은 목적하는 제형에 따라서 동물 또는 인간 투여를 위한 약제학적 조성물을 제형화하기 위해 통상적으로 사용되는 비히클인, 약제학적으로-허용 가능한, 비-독성 담체의 희석제를 포함할 수 있다. 조성물의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않도록 희석제가 선택된다. 이러한 희석제의 예는 증류수, 완충수, 생리 식염수, PBS, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 행크스 용액을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용의 약제학적 조성물 또는 제형은 다른 담체, 애주번트, 또는 비-독성, 비치료적, 비면역원성 안정제, 부형제 등을 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 또한 생리학적 조건에 근접하도록 추가적인 물질, 예컨대 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제, 습윤제 및 세정제를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물은 또한, 예를 들어, 임의의 다양한 안정제, 예컨대 항산화제를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물이 폴리펩타이드를 포함할 때, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 생체내 안정성을 향상시키는 다양한 잘 공지된 화합물과 복합체화될 수 있거나, 또는 다르게는 그의 약학적 특성을 향상시킨다(예를 들어, 폴리펩타이드의 반감기를 감소시키고, 그의 독성을 감소시키며, 용해도 또는 흡수를 향상시킨다). 이러한 변형 또는 복합체화제의 예는 황산염, 글루콘산염, 시트르산염 및 인산염을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 조성물의 폴리펩타이드는 또한 그들의 생체내 속성을 향상시키는 분자와 복합체화될 수 있다. 이러한 분자는, 탄수화물, 폴리아민, 아미노산, 다른 펩타이드, 이온(예를 들어, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 망간) 및 지질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
다양한 유형의 투여에 적합한 제형의 추가적인 예는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985)]에서 찾을 수 있다. 약물 전달을 위한 방법의 간략한 검토를 위해, 문헌[Langer, Science 249:1527-1533 (1990)]을 참조한다.
경구 투여를 위해, 활성 성분은 고체 투약 형태, 예컨대 캡슐, 정제 및 분말로 또는 액체 투약 형태, 예컨대 엘릭시르, 시럽 및 현탁액으로 투여될 수 있다. 활성 성분(들)은 비활성 성분 및 분말 담체, 예컨대 글루코스, 락토스, 수크로스, 만니톨, 전분, 셀룰로스 또는 셀룰로스 유도체, 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 사카린 나트륨, 활석, 탄산마그네슘과 함께 젤라틴 캡슐에 캡슐화될 수 있다. 바람직한 색, 맛, 안정성, 완충 능력, 분산 또는 다른 알려진 바람직한 특징을 제공하기 위해 첨가될 수 있는 추가적인 비활성 성분의 예는 적색 산화철, 실리카겔, 라우릴황산나트륨, 이산화티타늄 및 식용 백색 잉크이다. 압축 정제를 제조하기 위해 유사한 희석제가 사용될 수 있다. 몇 시간의 기간에 걸쳐 의약의 지속적인 방출을 제공하기 위해 지속 방출 제품으로서 정제와 캡슐이 둘 다 제조될 수 있다. 압축 정제는 임의의 불쾌한 맛을 가리기 위해 그리고 대기로부터 정제를 보호하기 위해 당 코팅 또는 필름 코팅될 수 있거나, 또는 위장관에서의 선택적 붕괴에 대해 장용 코팅될 수 있다. 경구 투여를 위한 액체 투약 형태는 환자 수용을 증가시키기 위해 색 및 맛을 포함할 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제형은 수성 및 비수성, 등장성 멸균 주사용액을 포함하는데, 이는 항산화제, 완충제, 정균제, 및 의도된 수용자의 혈액과 등장성인 제형을 제공하는 용질, 및 현탁제, 가용화제, 증점제, 안정제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 현탁액을 함유할 수 있다.
약제학적 조성물을 제형화하기 위해 사용되는 성분은 바람직하게는 고순도이며, 잠재적으로 유해한 오염물질(예를 들어, 적어도 국가 식품(National Food: NF) 등급, 일반적으로 적어도 분석 등급, 및 더 전형적으로는 적어도 약제 등급)이 실질적으로 없다. 게다가, 생체내 사용을 위해 의도된 조성물은 보통 멸균이다. 주어진 화합물이 사용 전에 합성되어야 하는 정도로, 얻어진 생성물은 전형적으로 합성 또는 정제 과정 동안 존재할 수 있는 임의의 잠재적으로 독성인 제제, 특히 임의의 내독소가 실질적으로 없다. 비경구 투여를 위한 조성물은 또한 멸균이고, 실질적으로 등장성이며, GMP 조건 하에서 제조된다.
제형은 뇌 또는 중추신경계에서 체류 및 안정화를 위해 최적화될 수 있다. 제제가 두개골 구획 내로 투여될 때, 제제는 구획 내에 보유되며, 확산되지 않거나 또는 다르게는 혈액 뇌 장벽을 가로지르지 않는 것이 바람직하다. 안정화 기법은 분자량의 증가를 달성하기 위해 폴리에틸렌 글리콜, 폴리아크릴아마이드, 중성 단백질 담체 등과 같은 기에 대한 가교, 다량체화 또는 연결을 포함한다.
체류를 증가시키기 위한 다른 전략은 생분해성 또는 생부식성 이식물에서 본 개시내용의 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 제제의 폐색을 포함한다. 치료적 활성제의 방출 속도는 중합체 기질을 통한 수송 속도, 및 이식물의 생분해에 의해 제어된다. 중합체 장벽을 통한 약물의 수송은 또한 화합물 용해도, 중합체 친수성, 중합체 가교 정도, 중합체 장벽을 약물에 대해 더 침투성으로 만들기 위해 물 흡수 시 중합체의 확장, 이식물의 기하구조 등에 의해 영향받을 것이다. 이식물은 이식 부위로서 선택된 영역의 크기 및 형상에 비례한 치수를 가진다. 이식물은 입자, 시트, 패치, 플라크, 섬유, 마이크로캡슐 등일 수 있고, 삽입의 선택 부위에 적합한 임의의 크기 또는 형상을 가질 수 있다.
이식물은 단일체일 수 있으며, 즉, 중합체 기질을 통해 균일하게 분포되거나 또는 캡슐화된 활성제를 가지며, 여기서, 활성제의 저장소는 중합체 기질에 의해 캡슐화된다. 사용될 중합체 조성물의 선택은 투여 부위, 요망되는 치료 기간, 환자 내약성, 치료될 질환의 특성 등에 따라 다를 것이다. 중합체의 특징은 이식 부위에서의 생분해성, 관심 대상의 제제와의 양립 가능성, 캡슐화의 용이함, 생리적 환경에서의 반감기를 포함할 것이다.
사용될 수 있는 생분해성 중합체 조성물은 분해될 때 단량체를 포함하는 생리적으로 허용 가능한 분해 생성물을 초래하는 유기 에스터 또는 에터일 수 있다. 무수물, 아마이드, 오쏘에스터 등은 단독으로 또는 다른 단량체와 조합하여 용도를 발견할 수 있다. 중합체는 축합 중합체일 것이다. 중합체는 가교되거나 또는 비가교될 수 있다. 하이드록시지방족 카복실산, 동종- 또는 공중합체 및 다당류의 중합체에 특히 관심이 있다. 관심 대상의 폴리에스터 중에 D-락트산, L-락트산, 라세미 락트산, 글리콜산, 폴리카프로락톤 및 조합물의 중합체가 포함된다. L-락테이트 또는 D-락테이트를 사용함으로써, 중합체를 서서히 생분해시키는 것이 달성되는 한편, 분해는 라세미체에 의해 실질적으로 향상된다. 글리콜산과 락트산의 공중합체는 특히 관심이 있으며, 생분해 속도는 글리콜산 대 락트산의 비에 의해 제어된다. 가장 빠르게 분해되는 공중합체는 거의 동일한 양의 글리콜산 및 락트산을 가지며, 여기서 동종중합체는 분해에 대해 더 저항성이다. 글리콜산 대 락트산의 비는 또한 이식물의 취성에 영향을 미치는데, 여기서 더 가요성의 이식물이 더 큰 기하구조에 대해 바람직할 수 있다. 관심 대상의 다당류 중에 알긴산칼슘, 작용화된 셀룰로스가 있으며, 특히 카복시메틸셀룰로스 에스터는 수용성이며, 분자량이 약 5kD 내지 500kD 등인 것을 특징으로 한다. 생분해성 하이드로겔이 또한 본 개시내용의 이식물에서 사용될 수 있다. 하이드로겔은 전형적으로 공중합체 물질이며, 액체를 흡수하는 능력을 특징으로 한다. 사용될 수 있는 예시적인 생분해성 하이드로겔은 문헌[Heller in: Hydrogels in Medicine and Pharmacy, N. A. Peppes ed., Vol. III, CRC Press, Boca Raton, Fla., 1987, pp 137-149]에 기재되어 있다.
약제학적 투약량
본 개시내용의 Siglec-5 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 함유하는 본 개시내용의 약제학적 조성물은 공지된 방법, 예컨대 일정 시간의 기간에 걸쳐 볼루스로서 또는 연속 주입에 의한 정맥내 투여, 근육내, 복강내, 뇌척수액내, 두개내, 척수관, 피하, 관절내, 활액내, 척추강내, 경구, 국소 또는 흡수 경로에 따라 Siglec-5 제제에 의한 치료가 필요한 개체, 바람직하게는 인간에게 투여될 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물의 투약량 및 목적하는 약물 농도는 생각되는 특정 용도에 따라 다를 것이다. 적절한 투약량 또는 투여 경로의 결정은 당업자의 기술 내에서 용이하다. 동물 실험은 인간 요법에 대한 유효 용량의 결정을 위한 신뢰 가능한 가이드를 제공한다. 유효 용량의 종간 규모 조정은 문헌[Mordenti, J. and Chappell, W. "The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics," In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds, Pergamon Press, New York 1989, pp.42-46]에 기재된 원칙에 따라 수행될 수 있다.
임의의 Siglec-5 본 개시내용의 제제, 예컨대 임의의 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 생체내 투여를 위해, 정상 투약량은 투여 경로에 따라서 약 10 ng/㎏ 내지 약 100㎎/㎏ 또는 그 이상의 개체의 체중/일, 바람직하게는 약 1㎎/㎏/일 내지 10㎎/㎏/일로 다를 수 있다. 치료될 질환, 장애 또는 병태의 중증도에 따라서 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복된 투여를 위해, 치료는 증상의 목적하는 억제가 달성될 때까지 지속된다.
예시적인 투약 요법은 2㎎/㎏의 본 개시내용의 Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체의 초기 용량 다음에 격주로 약 1㎎/㎏의 1주 유지 용량을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 의사가 달성하기를 바라는 약동학적 붕괴 패턴에 따라서 다른 투약 요법이 유용할 수 있다. 예를 들어, 개체에게 1주에 1 내지 21회의 투약이 본 명세서에서 상정된다. 특정 실시형태에서, 약 3㎍/㎏ 내지 약 2㎎/㎏(예컨대, 약 3㎍/㎏, 약 10㎍/㎏, 약 30㎍/㎏, 약 100㎍/㎏, 약 300㎍/㎏, 약 1㎎/㎏, 및 약 2㎎/㎏) 범위의 투약량이 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 투약 빈도는 1일당 3회, 1일당 2회, 1일당 1회, 격일에 1회, 1주 1회, 2주에 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회 또는 1개월에 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회 또는 더 길다. 요법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다. 투여되는 Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체를 포함하는 투약 요법은 사용되는 용량과 독립적으로 시간에 따라 변할 수 있다.
특정 Siglec-5 제제, 예컨대 특정 항-Siglec-5 항체에 대한 투약량은 Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체의 하나 이상의 투여가 제공된 개체에서 경험적으로 결정될 수 있다. 개체에게 Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체의 증분적 용량이 제공된다. Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체의 효능을 평가하기 위해, 본 개시내용의 임의의 질환, 장애 또는 병태(예를 들어, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 발작, 망막이영양증, 외상성 뇌 손상, 척수손상, 장기간 우울증, 아테롬성 동맥 경화증 혈관 질환 및 정상 노화의 바람직하지 않은 증상)의 증상이 모니터링될 수 있다.
Siglec-5 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체의 투여는, 예를 들어, 수용자의 생리적 조건, 투여 목적이 치료적인지 또는 예방적인지의 여부, 및 당업자에게 공지된 다른 인자에 따라서 연속적이거나 또는 간헐적일 수 있다. Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체의 투여는 사전 선택된 일정 시간에 걸쳐 본질적으로 연속적일 수 있거나 또는 일련의 간격이 있는 용량일 수 있다.
특정 투약량 및 전달 방법에 관한 가이드는 문헌에 제공된다; 예를 들어, 미국 특허 제4,657,760호; 제5,206,344호; 또는 제5,225,212호를 참조. 상이한 제형이 상이한 치료 및 상이한 장애에 대해 유효하다는 것, 그리고 특정 기관 또는 조직을 치료하도록 의도되는 투여는 상기 특정 기관 또는 조직으로부터 다른 기관 또는 조직까지 상이한 방식으로 전달을 필요로 할 수 있다는 것은 본 개시내용의 범주 내에 있다. 게다가, 투약량은 하나 이상의 별개의 투여에 의해, 또는 연속적 주입에 의해 투여될 수 있다. 병태에 따라 며칠 또는 더 장기간에 걸쳐 반복된 투여를 위해, 치료는 질환 증상의 목적하는 억제가 일어날 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투약 요법이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다.
치료적 용도
본 개시내용의 추가 양상은 치료적 유효량의 본 개시내용의 Siglec-5 제제, 예컨대 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 이러한 조절이 필요한 개체에게 투여함으로서, 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)하는, Src 패밀리 타이로신 키나제, 예컨대 Syk, LCK, FYM 및/또는 ZAP70에 의한 Tyr-520 및 Tyr-544의 하나 이상의 인산화에 대응하는 본 개시내용의 Siglec-5 단백질의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 타이로신-특이적 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 보충 및 이에 대한 결합; Dynamini-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 보충 및 이에 대한 결합; SH2-도메인 함유 단백질(예를 들어, Crkl)의 보충 및 이에 대한 결합; 비장 타이로신 키나제 Syk의 보충 및 이에 대한 결합; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합 단백질 2(Grb2)의 보충 및 이에 대한 결합; 다중 SH2-함유 단백질의 보충 및 이에 대한 결합; 하나 이상의 전-염증 사이토카인의 발현 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)(선택적으로 여기서, 하나 이상의 항-염증 사이토카인은 IFN-α4, IFN-베타, IL-1β, IL-1알파, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-33, MCP-1 및 MIP-1-베타로부터 선택됨); 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구 및 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 전-염증 사이토카인의 발현 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 하나 이상의 항-염증 사이토카인의 발현 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)(선택적으로 하나 이상의 항-염증 사이토카인은 IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체로부터 선택됨); 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구 및 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 항-염증 사이토카인의 발현(예를 들어, 활성화 또는 저해) 조절; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX 및 PYCARD로부터 선택된 하나 이상의 단백질의 발현 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 세포외 신호-조절된 키나제(ERK) 인산화 활성화; 하나 이상의 세포 단백질 상의 타이로산 인산화 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)(선택적으로, 하나 이상의 세포 단백질은 ZAP-70을 포함하고, 타이로신 인산화는 ZAP-70의 Tyr-319 상에서 일어남); C-C 케모카인 수용체 7(CCR7)의 발현 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); CCL19-발현 및 CCL21-발현 세포에 대한 미세아교세포 주화성 활성화; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, M2 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구 및 M2 NK 세포로부터 선택된 하나 이상의 세포에 의해 유도된 T 세포 증식의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 파골세포 생산 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해), 파골세포형성 속도 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해) 또는 둘 다; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 생존 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 증식 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 이동 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 하나 이상의 기능 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 조절 B 세포, 혈장 세포, M1 대식세포, M1 호중구, M1 NK 세포, 활성화된 M1 대식세포, 활성화된 M1 호중구, 활성화된 M1 NK 세포, M2 대식세포, M2 호중구, M2 NK 세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 호중구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포로부터 선택된 하나 이상의 세포의 성숙 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 세포자멸사 뉴런 클리어런스, 신경 조직 파편 클리어런스, 역기능 시냅스 클리어런스, 비신경 조직 파편 클리어런스, 박테리아 클리어런스, 또는 다른 이물질 신체 클리어런스, 질환-원인 단백질 클리어런스, 질환-원인 펩타이드 클리어런스 및 종양 세포 클리어런스로부터 선택된 클리어런스의 하나 이상의 유형의 활성화; 선택적으로 상기 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암으로부터 선택됨; 세포자멸사 뉴런, 신경 조직 파편, 기능장애 시냅스, 비-신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산 또는 종양 세포의 하나 이상의 식세포작용의 활성화; (선택적으로 여기서 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA이고, 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로부터 선택되며, 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 또는 갑상선 암으로부터 선택된 암으로부터 유래됨); 종양 세포 상의 Siglec-5 리간드에 대한 결합 저해; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, 대식세포 및 NK 세포로부터 선택된 세포 상의 Siglec-5 리간드에 대한 결합 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, B 세포, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 활성화; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 증식 활성 활성화; 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 전이 활성화; 하나 이상의 ITAM 모티프 포함 수용체의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)(선택적으로 하나 이상의 ITAM 모티프 포함 수용체는 TREM1, TREM2, SIRPB1, FcgR, DAP10 및 DAP12로부터 선택됨); 하나 이상의 패턴 인식 수용체(PRR)에 의한 신호전달의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)(선택적으로 하나 이상의 PRR은 병원균-관련 분자 패턴(PAMP)을 확인하는 수용체, 손상-관련 분자 패턴(DAMP)을 확인하는 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택됨); 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I(서열번호 4)를 포함하는 하나 이상의 수용체의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 하나 이상의 Toll-유사 수용체에 의한 신호전달의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); JAK-STAT 신호전달 경로의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 활성화된 B 세포의 핵 인자 카파-경쇄-인핸서(NFκB)의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); ITAM 모티프 포함 수용체의 인산화; 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 수용체의 발현 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)(선택적으로 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 수용체는 CD86, C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX 및/또는 PYCARD를 포함하고, 하나 이상의 염증 수용체, 보체 캐스케이드의 단백질 및/또는 수용체는 미세아교세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, B 세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에서 발현됨); 하나 이상의 Siglec-5-의존적 유전자 발현의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해); 붕괴된 Siglec-5-의존적 유전자 발현의 정상화; 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자 발현의 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해)(선택적으로 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자는 활성화된 T 세포 핵 인자(NFAT) 전사 인자에 의해 활성화됨); 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 기능성 구조; 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양 내로의 침윤 감소; 종양에서, 말초 혈액 또는 다른 림프 기관에서 종양-촉진성 골수/과립구 면역-억제 세포 수의 증가; 종양 내 또는 말초 혈액 내 종양-촉진성 사이토카인의 발현 증가(선택적으로 종양-촉진성 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10임); 종양-촉진성 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤 증가; 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 종양-촉진 활성의 향상; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구 활성화 감소; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 NK 세포 침윤의 감소; NK 세포의 종양 사멸 가능성 감소; 조절 B 세포의 종양-촉진 활성 향상; 조절 B 세포의 종양 침윤 증가; 면역 반응을 향상시킬 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구의 종양 침윤 감소; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 종양 침윤 감소; 종양 용적 증가; 종양 성장 속도 증가; 전이 증가; 종양 재발률 증가; 항-종양 T 세포 반응을 조절하는 하나 이상의 면역 요법의 효능 감소(선택적으로 하나 이상의 면역-요법은 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, TREM1, TREM2, CD39, CD73, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된, 또는 하나 이상의 암 백신의 하나 이상의 표적 단백질을 표적화하는 면역 요법임); PLCγ/PKC/칼슘 동원의 저해; 및/또는 PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 저해를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 Siglec-5 활성 조절(예를 들어, 활성화 또는 저해) 방법을 제공한다.
Siglec-5에 결합하고 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 본 명세서에 개시된 바와 같은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및/또는 암을 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 항체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, Siglec-5 면역접합체, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, Siglec-Fc 융합 단백질, Siglec 면역접합체, 안티센스 분자, siRNAs, 소분자 저해제, 단백질 및 펩타이드로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 항체는 작용제 항체이다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 항체는 비활성 항체이다. 일부 실시형태에서, Siglec-5 항체는 길항제 항체이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 치료적 유효량의 본 개시내용의 제제를 치료가 필요한 개체에게 투여함으로써, 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및/또는 암을 예방하거나, 위험을 낮추거나, 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 제제는 항체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, Siglec-5 면역접합체, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, Siglec-Fc 융합 단백질, Siglec 면역접합체, 안티센스 모듈, siRNA, 소분자 저해제, 단백질, 및 펩타이드로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 제제는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 치료적 유효량의 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 본 개시내용의 제제를 암의 예방, 위험 감소, 또는 치료가 필요한 개체에게 투여함으로써 암을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 제제는 항체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, Siglec-5 면역접합체, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, Siglec-Fc 융합 단백질, Siglec 면역접합체, 안티센스 모듈, siRNA, 소분자 저해제, 단백질, 및 펩타이드로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 제제는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체이다. 일부 실시형태에서, 제제는, (a) 면역억제자수지상 세포, 면역억제자대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자NK 세포, B 세포, 골수 유래 억제 세포, 종양 연관 대식세포, 종양-관련 억제자 호중구, 종양-관련 억제자 NK 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화 및/또는 기능을 촉진시키는 것; (b) 면역억제자수지상 세포, 면역억제자대식세포, 면역억제자 호중구, 면역억제자 NK 세포, 골수 유래 억제 세포, 종양-연관 대식세포, 종양-관련 억제자 호중구, 종양-관련 억제자 NK 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양 내로의 침윤 향상; (c) 종양에서, 말초 혈액, 또는 다른 림프 기관에서 종양-촉진 골수성/과립구 면역-억제 세포 수의 증가; (d) 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 종양-촉진 활성의 향상); (e) 종양에서 또는 말초 혈액에서 종양-촉진 사이토카인의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 종양-촉진 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10인, 종양-촉진 사이토카인의 발현의 증가; (f) 종양-촉진 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤의 증가; (g) 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 활성화 감소; (h) 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 침윤 감소; (i) 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 NK 세포의 침윤 감소; (j) NK 세포의 종양 사멸 잠재력 감소; (k) 면역반응을 향상시키는 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구의 침윤 감소; (l) 면역 반응을 향상시킬 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구의 활성화 감소; (m) 종양 용적의 증가; (n) 종양 성장 속도의 증가; (o)전이 증가; (p) 종양 재발 속도의 증가; (q) 항-종양 T 세포 반응을 조절하는 하나 이상의 면역 요법의 효능 감소(선택적으로 하나 이상의 면역-요법은 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, TREM1, TREM2, CD39, CD73, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합 또는 암 백신으로부터 선택된 하나 이상의 표적 단백질을 표적화하는 면역 요법임); (r) PLCγ/PKC/칼슘 가동의 저해; 및(s) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 저해로부터 선택된 하나 이상의 Siglec-5 활성을 저해한다. 일부 실시형태에서, 제제는 (a) 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 비-종양형성골수 유래 억제 세포, 종양-관련 대식세포, 비-종양형성CD14+ 골수 세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화 및/또는 기능의 촉진; (b) 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 비-종양형성골수 유래 억제 세포, 종양-관련 대식세포, 조절 B 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양 내로의 침윤 향상; (c) 종양에서, 말초 혈액 또는 다른 림프 기관에서 종양-촉진성 골수/과립구 면역-억제 세포 및/또는 비-종양형성CD14+ 골수 세포 수의 증가; (d) 비-종양형성골수-유래 억제자 세포 및/또는 비-종양형성CD14+ 골수 세포의 종양-촉진 활성 향상; (e) 종양 내 또는 말초 혈액 내 종양-촉진성 사이토카인의 발현 증가(선택적으로 종양-촉진성 사이토카인은 TGF-베타 또는 IL-10임); (f) 종양-촉진성 FoxP3+ 조절 T 림프구의 종양 침윤 증가; (g) 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 활성화 감소; (h) 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 침윤 감소; (i) 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 NK 세포의 침윤 감소; (j) NK 세포의 종양 사멸 가능성 감소; (k) 면역 반응을 향상시킬 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구의 침윤 감소; (l) 면역 반응을 향상시킬 가능성을 갖는 종양-특이적 B 림프구의 활성화 감소; (m) 종양 용적 증가; (n) 종양 성장 속도 증가; (o) 전이 증가; (p) 종양 재발률 증가; (q) 하나 이상의 PD-1 리간드의 발현 증가; (r) 항-종양 T 세포 반응을 조절하는 하나 이상의 면역 요법의 효능 감소(선택적으로 하나 이상의 면역-요법은 C PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, CD73, TREM1, TREM2, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된, 또는 하나 이상의 암 백신의 하나 이상의 단백질을 표적화하는 면역 요법임); (s) PLCγ/PKC/칼슘 동원의 저해; (t) PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 저해; 및 (u) 하나 이상의 화학요법제의 효능 감소(선택적으로 하나 이상의 화학요법제는 겜시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신(Adriamycin®), 에피루비신(Ellence®), 탁산, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 5-플루오로유라실(5-FU), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 카보플라틴(Paraplatin®), 및 이들의 임의의 조합임)로부터 선택된 하나 이상의 Siglec-5 활성을 저해한다. 일부 실시형태에서, 제제는 (a) 종양 침윤성 CD3+ T 세포 수의 증가; (b) 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 대한 Siglec-5 결합의 증가; (c) 말초 면역 세포에서 Siglec-5의 세포 수준의 감소 (d) 비-종양형성 CD14+ 골수성 세포 수의 감소(선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수성 세포는 종양 침윤성 세포이거나 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수성 세포는 혈액 중에 존재함; (e) 비-종양형성 CD14+ 골수성 세포 수의 감소(선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수성 세포는 종양 침윤성 세포이거나 또는 선택적으로 상기 비-종양형성 CD14+ 골수성 세포는 종양 중에 존재함; (f) 하나 이상의 세포에서 PD-L1 수준의 감소(선택적으로 상기 하나 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임); (g) 하나 이상의 세포에서 PD-L2 수준의 감소(선택적으로 상기 하나 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임); (h) 하나 이상의 세포에서 CD11b 수준의 감소(선택적으로 상기 하나 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임); (i) 하나 이상의 세포에서 B7-H3 수준의 감소(선택적으로 상기 하나 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임); (j) 하나 이상의 세포에서 CD200R 수준의 감소(선택적으로 상기 하나 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임); (k) 하나 이상의 세포에서 CD163 수준의 감소(선택적으로 상기 하나 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임); (l) 하나 이상의 세포에서 CD206 수준의 감소(선택적으로 상기 하나 이상의 세포는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임); (m) 고형 종양의 종양 성장 속도의 감소; (n) 종양 용적의 감소; (o) 하나 이상의 PD-1 저해제의 효능 증가; (p) 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능 증가(선택적으로 상기 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적화함; (q)분화, 생존, 및/또는 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 하나 이상의 작용 저해); (r) 하나 이상의 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 세포사 유도; 및 (s) 비-종양형성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 존재 하에 T 세포 증식의 증가)로부터 선택된 하나 이상의 활성을 나타낸다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 질환, 장애 또는 손상은 암이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 질환, 장애 또는 손상은 암이고, 암은 Siglec-5 또는 하나 이상의 Siglec-5 리간드를 발현시킨다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 제제는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML) 및/또는 다발성 골수종을 예방하거나, 위험을 낮추거나, 치료하는 데 유리하다.
본 명세서에 개시하는 바와 같이, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 또한 하나 이상의 면역 세포(예를 들어, 선천성 면역 세포 또는 적응성 면역 세포)의 생존 성숙, 작용성, 이동 또는 증식을 유도하고/하거나 촉진시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 개체에게 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 치료적 유효량의 본 개시내용의 제제를 투여함으로써 이러한 치료가 필요한 개체에서 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식을 유도하거나 또는 촉진시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 제제는 항체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, Siglec-5 면역접합체, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, Siglec-Fc 융합 단백질, Siglec 면역접합체, 안티센스 모듈, siRNA, 소분자 저해제, 단백질, 및 펩타이드로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 제제는 단리된 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 면역 세포는 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 미세아교세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
본 개시내용의 다른 양상은 Siglec-5에 결합하거나 이와 상호작용하는 제제에 대해 이것이 필요한 대상체의 반응을 평가하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은: a. 대상체에게 항-Siglec-5 항체를 투여하기 전에 대상체로부터 얻은 혈액 샘플에서 비-종양원성 골수성 세포에 대한 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계; b. 대상체에게 치료적 유효량의 제제를 투여하는 단계; 및 c. 항-Siglec-5 항체 투여 후에 대상체로부터 얻은 혈액 샘플에서 비-종양원성 골수성 세포에 대한 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하되, 항-Siglec-5 항체의 투여 후에 비-종양원성 골수성 세포에 대한 CD45+ CD14+ 수준의 감소는 대상체가 제제에 반응한다는 것을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 반응성을 평가하는 방법은 1회 이상의 추가적인 치료적 유효량의 제제를 투여하는 단계를 더 포함한다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 제제는 항체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, Siglec-5 면역접합체, 가용성 Siglec 수용체, Siglec-Fc 융합 단백질, Siglec 면역접합체, 안티센스 모듈, siRNA, 소분자 저해제, 단백질, 및 펩타이드로부터 선택된다. 샘플, 예컨대 혈액 샘플을 얻기 위한 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 반응성을 평가하는 방법은 1회 이상의 추가적인 치료적 유효량의 제제를 투여하는 단계를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 제제는 항체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, Siglec-5 면역접합체, Siglec-Fc 융합 단백질, Siglec 면역접합체, 안티센스 모듈, siRNA, 소분자 저해제, 단백질, 및 펩타이드로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 제제는 단리된 항-Siglec-5 항체 또는 항-Siglec-5 항체 접합체이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포(예를 들어, 세포 표면, 세포내, 또는 총) 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 분해를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 절단을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 내재화를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 쉐딩을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, Siglec-5의 분해를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, Siglec-5의 절단을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, Siglec-5의 내재화를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, Siglec-5의 쉐딩을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, Siglec-5 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, Siglec-5의 감소된 발현을 유도한다. 특정 실시형태에서, 개체는 Siglec-5 변이체 대립유전자를 가진다.
본 명세서에 개시된 바와 같은, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 추가로 조절 T 세포, 조절 B 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 종양-포매 면역억제자 호중구, 종양-포매 면역억제자 NK 세포, 골수성 유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 급성 골수성 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포, 및/또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포의 활성, 작용성 또는 생존을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 조절 T 세포, 조절 B 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 종양-포매 면역억제자 호중구, 종양-포매 면역억제자 NK 세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 종양-관련 호중구, 종양-관련 NK 세포, 급성 골수성 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포, 또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포의 활성, 작용성 또는 생존의 감소가 필요한 개체에서 치료적 유효량의, 항-Siglec-5 항체와 결합하거나 또는 상호작용과 결합하거나 또는 상호작용하는 제제를 개체에게 투여함으로써 이들 세포의 활성, 작용성 또는 생존을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 항체는 길항제 항체, 비활성 항체 및 작용제인 항체로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체 또는 항-Siglec-5 항체 접합체이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체 접합체는 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된 항-Siglec-5 항체를 포함한다.
본 명세서에 개시되는 바와 같은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 적혈구, 박테리아 세포, 세포자멸사 세포, 신경 세포, 신경아교 세포, 미세아교세포, 성상세포, 종양 세포, 바이러스, 수지상 세포, 베타 아밀로이드 플라크에 결합된 Siglec-5 리간드, 타우 단백질 엉킴에 결합된 Siglec-5 리간드, 질환-원인 단백질 상의 Siglec-5 리간드, 질환-원인 펩타이드 상의 Siglec-5 리간드, 대식세포, 호중구, 자연 살해 세포, 단핵구, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, B 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 및/또는 조절 T 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 시험관내 또는 생체내에서 하나 이상의 세포 상의 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 Siglec-5와 결합하거나 또는 상호작용하는 치료적 유효량의 제제를 개체에게 투여함으로써, 하나 이상의 세포 상의 Siglec-5의 세포 수준의 감소가 필요한 개체에서 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 제제는 항체, 길항제 항체, 비활성 항체, 작용제 항체, Siglec-5 리간드, Siglec-5 리간드 작용제 단편, Siglec-5 면역접합체, Siglec-5 리간드 모방체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 Siglec-Fc 융합 단백질, 및 소분자 화합물로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 제제는 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체 또는 항-Siglec-5 항체 접합체이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체 접합체는 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된 항-Siglec-5 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 세포는 적혈구, 박테리아 세포, 세포자멸사 세포, 신경 세포, 신경아교세포, 미세아교세포, 성상세포, 종양 세포, 바이러스, 수지상 세포, 베타 아밀로이드 플라크에 결합되는 Siglec-5 리간드, 타우 단백질 엉킴에 결합되는 Siglec-5 리간드, 질환-원인 단백질 상의 Siglec-5 리간드, 질환-원인 펩타이드 상의 Siglec-5 리간드, 대식세포, 호중구, 자연 살해 세포, 단핵구, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, B 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 조절 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
Siglec-5의 세포 수준은, 제한 없이, Siglec-5의 세포 표면 수준, Siglec-5의 세포내 수준 및 Siglec-5의 총 수준을 지칭할 수 있다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준의 감소는 Siglec-5의 세포 표면 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-Siglec-5 항체는, 그것이 본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 분석 또는 적합한 생체내 모델에 의해 측정하여, Siglec-5의 세포 표면 수준에서 21% 이상의 감소를 유도한다면 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준의 감소는 Siglec-5의 세포내 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-Siglec-5 항체는, 그것이 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 적합한 생체내 모델에 의해 측정하여 Siglec-5의 세포내 수준의 21% 이상의 감소를 유도한다면, Siglec-5의 세포 내 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준의 감소는 Siglec-5의 총 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 항-Siglec-5 항체는, 그것이 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 적합한 생체내 모델에 의해 측정하여 Siglec-5의 총 수준의 20% 이상의 감소를 유도한다면, Siglec-5의 총 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 분해, Siglec-5 절단, Siglec-5 내재화, Siglec-5 쉐딩, 및/또는 Siglec-5 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, Siglec-5의 세포 수준은 1차 세포(예를 들어, 수지상 세포, B 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포 및 대식세포) 상에서 또는 시험관내 세포 분석을 이용하는 세포주 상에서 측정된다.
본 명세서에 개시된 바와 같 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는, 예를 들어, 시험관내 또는 생체내 하나 이상의 호중구에서 활성 산소종(ROS) 생산 및/또는 세포외 트랩(NET) 형성을 유도함으로써, 호중구 활성화를 유도하고/하거나 면역억제된 호중구를 완화시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 Siglec-5에 결합하거나 이와 상호작용하는 치료적 유효량의 제제를 개체에게 투여함으로써 하나 이상의 호중구에서의 활성 산소종(ROS) 생산 유도가 필요한 개체에서 이를 유도하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 Siglec-5에 결합하거나 이와 상호작용하는 치료적 유효량의 제제를 개체에게 투여함으로써 하나 이상의 호중구에서의 세포외 형성(NET) 형성 유도가 필요한 개체에서 이를 유도하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 Siglec-5에 결합하거나 이와 상호작용하는 치료적 유효량의 제제를 개체에게 투여함으로써 하나 이상의 호중구에서의 호중구 활성화 유도가 필요한 개체에서 이를 유도하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 Siglec-5에 결합하거나 이와 상호작용하는 치료적 유효량의 제제를 개체에게 투여함으로써 하나 이상의 면역억제된 호중구 완화가 필요한 개체에서 이를 완화시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 제제는 항체, 길항제 항체, 비활성 항체, 작용제 항체, Siglec-5 리간드, Siglec-5 리간드 작용제 단편, Siglec-5 면역접합체, Siglec-5 리간드 모방체, 가용성 Siglec-5 수용체, Siglec-5-Fc 융합 단백질, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 가용성 Siglec 수용체, 하나 이상의 Siglec-5 리간드에 결합하는 Siglec-Fc 융합 단백질, 및 소분자 화합물로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 제제는 본 개시내용의 단리된 항-Siglec-5 항체 또는 항-Siglec-5 항체 접합체이다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체 접합체는 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된 항-Siglec-5 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 세포는 적혈구, 박테리아 세포, 세포자멸사 세포, 신경 세포, 신경아교세포, 미세아교세포, 성상세포, 종양 세포, 바이러스, 수지상 세포, 베타 아밀로이드 플라크에 결합되는 Siglec-5 리간드, 타우 단백질 엉킴에 결합되는 Siglec-5 리간드, 질환-원인 단백질 상의 Siglec-5 리간드, 질환-원인 펩타이드 상의 Siglec-5 리간드, 대식세포, 호중구, 자연 살해 세포, 단핵구, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, B 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 조절 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서 개체는 Siglec-5의 이형접합 변이체를 가진다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 추가로 항-Siglec-5 항체 또는 이중특이성 항-Siglec-5 항체, 패턴 인식 수용체에 결합하는 항체, Toll-유사 수용체에 결합하는 항체, 손상-관련 분자 패턴(DAMP) 수용체에 항체, 및/또는 사이토카인에 결합하는 항체 또는 인터류킨에 대한 항체의 공동투여의 수반할 수 있다).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 저해 관문 분자, 및/또는 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항-B- 및 T-림프구 감쇠기(BTLA) 항체, 항-살해 저해 수용체(KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM-1 항체, 항-TIM3 항체, 항-TIM-4 항체, 항-A2AR 항체, 항-CD39 항체, 항-CD73 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-CD30 항체, 항-TNFa 항체, 항-CD33 항체, 항-Siglec-6 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-10 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 항-TIGIT 항체, 항-VISTA 항체, 항-CD2 항체, 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타너셉트 요법, 입양 세포 전달(ACT) 요법, 키메라 항원 수용체 T 세포 전달(CAR-T) 요법, 백신 요법, 및 사이토카인 요법으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 항체는 Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 항체는 작용제 항-CD40 항체, 작용제 항-OX40 항체, 작용제 항-ICOS 항체, 작용제 항-CD28 항체, 작용제 항-TREM1 항체, 작용제 항-TREM2 항체, 작용제 항-CD137/4-1BB 항체, 작용제 항-CD27 항체, 작용제 항-글루코코티코이드-유도 TNFR-관련 단백질 GITR 항체, 작용제 항-BTLA 항체, 작용제 HVEM 항체, 작용제 항-CD30 항체, 작용제 항-CD2 항체, 작용제 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 적어도 하나의 자극 사이토카인을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 Siglec-5 제제, 예컨대 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
치매
치매는 정상 노화로부터 예상될 수 있는 것 이상으로 이전에 손상되지 않은 사람에서 전반적 인지 능력의 심각한 손실로서 존재하는 비-특이적 증후군(즉, 일련의 징후 및 증상)이다. 치매는 독특한 전반적 뇌 손상의 결과로서 정적일 수 있다. 대안적으로, 치매는 신체 내 손상 또는 질환에 기인하여 장기간 쇠퇴를 야기하는 진행성일 수 있다. 치매는 노인병 집단에서 훨씬 더 흔하지만, 이는 또한 65세 이전에 생길 수 있다. 치매에 의해 영향받는 인지 영역은, 기억, 주의 범위, 언어 및 문제 해결을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일반적으로, 증상은 개체가 치매로 진단되기 전에 적어도 6개월 동안 존재하여야 한다.
예시적인 치매 형태는, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 의미론적 치매 및 루이소체 치매를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 치매를 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 치매를 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
전두측두엽 치매
전두측두엽 치매(FTD)는 뇌의 전두엽의 진행성 악화로부터 초래되는 병태이다. 시간에 따라, 악화는 측두엽으로 진행될 수 있다. 유병률이 알츠하이머병(AD) 다음인, FTD는 초로기 치매 사례의 20%를 차지한다. FTD의 임상 특징은 기억 손상, 행동이상, 인격변환 및 언어 손상을 포함한다(Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24:186-194 (2008); Neary, D., et al., Neurology 51:1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. & Hodges, J. R., Neurology 58:1615-1621 (2002)).
FTD 사례의 실질적인 부분은 상염색체 우성 방식으로 유전되지만, 하나의 패밀리에서조차, 증상은 거동 장애를 갖는 FTD로부터, 1차 진행성 실어증까지, 피질-기저 신경절퇴화까지의 범위로 확장될 수 있다. 대부분의 신경퇴행성 질환과 같이 FTD는 병에 걸린 뇌에서 특정 단백질 응집물의 병리학적 존재를 특징으로 할 수 있다. 조직학적으로, FTD의 첫 번째 설명은 신경섬유매듭 또는 피크소체에서 과인산화된 타우 단백질의 신경세포내 축적의 존재를 인식하였다. 단백질 타우와 관련된 미세소관에 대한 원인 역할은 몇몇 패밀리에서 타우 단백질을 암호화하는 유전자에서 돌연변이의 동정에 의해 뒷받침되었다(Hutton, M., et al., Nature 393:702-705(1998). 그러나, 대다수의 FTD 뇌는 초인산화된 타우의 축적을 나타내지 않지만, 유비퀴틴(Ub) 및 TAR DNA 결합 단백질(TDP43)에 대한 면역반응성을 나타낸다(Neumann, M., et al., Arch. Neurol. 64:1388-1394(2007)). Ub 포함의 대다수의 해당 FTD 사례(FTD-U)는 프로그래뉼린(Progranulin) 유전자에서 돌연변이를 운반하는 것으로 나타났다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 FTD를 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 FTD를 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
알츠하이머병
알츠하이머병(AD)은 가장 통상적인 치매 형태이다. 상기 질환에 대한 치료법은 없으며, 그것이 진행됨에 따라 악화되고, 종국적으로 사망에 이르게 된다. 가장 흔하게는, AD는 65세 초과의 사람에서 진단된다. 그러나, 덜-우세한 조기 개시 알츠하이머는 훨씬 더 빨리 일어날 수 있다.
알츠하이머병의 통상적인 증상은 거동 증상, 예컨대 최근 사건 기억의 어려움; 인지 증상, 착란상태, 이노성 및 공격성, 기분의 두드러진 변화, 언어 곤란 및 장기간 기억 상실을 포함한다. 질환이 진행됨에 따라 신체 기능은 상실되고, 궁극적으로 사망을 야기한다. 알츠하이머병은 완전히 명확하게 되기 전에 알려지지 않은 그리고 가변적 양의 시간에 대해 진행되고, 몇년 동안 진단되지 않고 진행될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 알츠하이머병을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 알츠하이머병을 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
파킨슨병
특발성 또는 원발성 파킨슨증, 운동기능감퇴경직 증후군(HRS) 또는 전신마비로서 지칭될 수 있는 파킨슨병은 운동계 제어에 영향을 미치는 신경퇴행성 뇌 장애이다. 뇌에서 도파민-생성 세포의 진행성 사멸은 파킨슨병의 주요 증상을 야기한다. 가장 흔하게는, 파킨슨병은 50세 이상의 사람에서 진단된다. 파킨슨병은 대부분의 사람에서 특발성(알려진 원인 없음)이다. 그러나, 유전적 인자는 또한 질환에서 어떤 역할을 한다.
파킨슨병의 증상은 손, 팔, 다리, 턱 및 안면의 떨림, 사지 및 몸통의 근경직, 움직임 둔화(운동완서), 자세 불안정, 보행 장애, 신경정신병적 문제, 말하기 또는 거동의 변화, 우울증, 불안, 통증, 정신병, 치매, 환각 및 수면 문제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 파킨슨병을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 파킨슨병을 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
근위축성 측삭경화증(ALS)
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 근위축성 측삭경화증(ALS) 또는, 운동 뉴런 질환 또는 루게릭병은 상호 호환적으로 사용되고, 빠르게 진행성인 쇠약, 근위축증 및 갑작스런 경련, 근경직, 말하기의 곤란함(구음 장애), 연하의 곤란(연하곤란) 및 호흡의 곤란함(호흡곤란)을 특징으로 하는 다양한 병인을 갖는 쇠약성 질환을 지칭한다.
프로그래뉼린은 ALS에서 어떤 역할을 하며(Schymick, JC et al., (2007) J Neurol Neurosurg Psychiatry.;78:754-6) TDP-43과 같은 단백질을 야기하는 ALS에 의해 원인이 되는 손상을 또한 보호한다(Laird, AS et al., (2010). PLoS ONE 5: e13368)는 것이 나타났다. 또한 프로-NGF는 희소돌기신경교 및 척수손상 후 피질척수 뉴런의 p75 매개 사멸을 유도한다는 것이 입증되었다(Beatty et al., Neuron (2002),36, pp. 375-386; Giehl et al, Proc. Natl. Acad. Sci USA (2004),101, pp6226-30).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 ALS를 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 근위축성 축삭경화증을 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
헌팅턴병
헌팅턴병(HD)은 헌팅턴 유전자(HTT)에서 상염색체 우성 돌연변이에 의해 야기되는 유전 신경퇴행성 질환이다. 헌팅턴 유전자 내의 사이토카인-아데닌-구아닌(CAG) 삼중 반복부의 확장은 유전자에 의해 암호화된 헌팅턴 단백질(Htt)의 돌연변이 형태의 생성을 초래한다. 이 돌연변이 헌팅턴 단백질(mHtt)은 독성이고, 뉴런 사멸에 기여한다. 헌팅턴병의 증상은 그들이 임의의 연령에 나타날 수 있다고 해도, 가장 흔하게는 35 내지 44세에 나타난다.
헌팅턴병의 증상은 운동 제어 문제, 격동, 무작위 움직임(무도병), 비정상적 안구 운동, 손상된 균형, 발작, 씹는 것의 곤란함, 연하의 곤란함, 인지 문제, 말하기의 변화, 기억 손상, 사고의 곤란함, 불면, 피로, 치매, 성격의 변화, 우울, 불안 및 강박 행동을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 헌팅턴병(HD)을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 헌팅턴병을 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
타우병증
타우병증 또는 타우병은 뇌에서의 미세소관-관련 단백질 타우의 응집에 의해 야기되는 신경퇴행성 질환의 부류이다. 알츠하이머병(AD)은 가장 잘 알려진 타우병증이고, 불용성 신경섬유매듭(NFT)의 형태로 뉴런 내에서 타우 단백질의 축적을 수반한다. 다른 타우병증 및 장애는 진행성 핵상안근 마비, 권투선수 치매(크롬산 외상성 뇌병증), 전두측두엽 치매 및 염색체 17에 관련된 파킨슨증, 리티코-보딕 질환(Lytico-Bodig disease)(괌의 파킨슨-치매 복합), 매듭-우세 치매, 신경절교종 및 신경절신경종, 수막혈관종증, 아급성 경화성 범뇌염, 납중독증, 결정성 경화증, 할러포르텐-스파츠병, 지질갈색소증, 픽병, 피저기질퇴화, 은친화성 입자병(AGD), 헌팅턴병 및 전두측두엽 퇴화를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 타우병증을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 타우병증을 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
다발성 경화증
다발성 경화증(MS)은 또한 파종 경화증 또는 다발 경화증으로서 지칭될 수 있다. MS는 뇌 및 척수의 액손 주위의 지방 미엘린초가 손상되어, 탈수초화 및 흉터뿐만 아니라 광범위한 징후 및 증상을 야기하는 염증 질환이다. MS는 서로 효과적으로 상호 연락하는 뇌 및 척수에서의 신경 세포의 능력에 영향을 미친다. 신경 세포는 활동전위로 불리는 전기 신호를 미엘린으로 불리는 절연 물질 내에 포함된 액손으로 불리는 긴 섬유 아래로 보냄으로써 상호 연락한다. MS에서, 신체 자신의 면역계는 미엘린을 공격하고 손상시킨다. 미엘린이 손상될 때, 액손은 더 이상 신호를 효과적으로 전도할 수 없다. MS 개시는 보통 젊은 성인에서 생기며, 여성에서 더 흔하다.
MS의 증상은 감각의 변화, 예컨대 민감성 또는 아린감의 상실; 따끔따끔함 또는 무감각, 예컨대 감각저하 및 손발저림; 근력저하; 간헐성 경련; 근경련; 이동의 곤란함; 협응 및 균형의 곤란함, 예컨대 운동실조; 말하기의 곤란함, 예컨대 구음 장애, 연하의 어려움, 예컨대 연하곤란; 시각적 문제, 예컨대 안진, 눈섬광 및 복시를 포함하는 시신경염; 피로; 급성 또는 만성 통증; 및 방광 및 장 문제; 다양한 정도의 인지 손상; 우울증 또는 불안정한 분위기의 감정 증상; 보통의 주위 온도보다 더 고온에 대한 노출에 기인하는 현존하는 증상의 악화인 우토프(Uhthoff) 현상; 및 목을 구부릴 때 등 아래쪽으로 실행되는 전기적 감각인 레미트사인(Lhermitte's sign)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 다발성 경화증을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-Siglec-5 항체를 투여하는 것은 다발성 경화증을 갖는 개체에서 하나 이상의 Siglec-5 활성을 조절할 수 있다.
암
본 개시내용의 추가적인 양상은 암의 예방, 암 위험의 감소, 암 치료가 필요한 개체에게 치료적 유효량의 단리된 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여함으로써 암을 예방하거나, 암 위험을 감소시키거나, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 임의의 본 개시내용의 단리된 항체는 이들 방법에서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 작용제인 항체이다. 다른 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 길항제 항체이다. 다른 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 비활성 항체이다. 다른 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 항체 접합체이다.
본 명세서에 개시하는 바와 같이, 종양 미세환경은 T 림프구, B 림프구, 대식세포, 호중구, NK 세포, 및 골수성/과립구 계통의 세포를 포함하는 이종성 면역 침윤물을 함유하는 것으로 알려져 있다. 종양 내 T-조절 세포, 조절 B 세포, 종양-포매 면역억제자 골수성 세포, 및/또는 M2-대식세포, M2-호중구, 및/또는 M2-NK 세포의 존재 및 활성은 불량한 예후와 관련된다. 대조적으로, 세포독성 T 세포의 존재 및 활성은 암 치료에 유리하다. 세포독성 T 세포의 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 향상시키고, 다양한 면역억제자 세포의 수 및 활성을 감소시키는 요법은 상당한 치료적 이점을 제공하는 것으로 예상된다. 정액의 전임상 연구는 면역억제자 세포(예를 들어, CSF1/CSF1R 차단 항체)를 표적화하는 약물과 세포독성 T 세포를 활성화하는 면역 관문 차단 항체 사이의 상승효과를 나타내었는데, 이는 세포 유형을 둘 다 조작하는 것이 개개 요법이 불량하게 효과적인 종양 모델에서 효능을 나타낸다는 것을 나타낸다(Zhu Y; Cancer Res. 2014Sep15; 74(18):5057-69). 따라서, 일부 실시형태에서, 골수성 세포, 호중구, B 세포, T 세포의 서브세트, 및 종양-연관 면역 세포 상에서 발현되는 Siglec-5의 차단은 유리한 항-종양 면역반응을 자극하여, 치료적 항-종양 면역반응을 초래할 수 있다.
일부 실시형태에서, 암을 갖는 개체에서 암을 예방하거나, 암의 위험을 감소시키거나 또는 암을 치료하기 위한 방법은 추가로 개체에게 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 항체의 예는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항-B- 및 T-림프구 감쇠기(BTLA) 항체, 항-살해 저해 수용체(KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM-1 항체, 항-TIM3 항체, 항-TIM-4 항체, 항-A2AR 항체, 항-CD39 항체, 항-CD73 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-CD30 항체, 항-TNFa 항체, 항-CD33 항체, 항-Siglec-6 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-10 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 항-TIGIT 항체, 항-VISTA 항체, 항-CD2 항체, 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 본 개시내용의 Siglec-5 제제, 예컨대 본 개시내용의 길항제 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 방법에 의해 예방되거나 또는 치료되는 암은 편평 세포암(예를 들어, 상피 편평 세포암), 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포암종을 포함하는 폐암, 복막암, 간세포암, 위암 또는 위장암(위장관암을 포함) 및 위장관 기질 암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 요로암, 간세포암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁암종, 침샘 암종, 신장 또는 신세포암, 전립선암, 음문암, 갑상선 암, 간세포 암종, 항문 암종, 음경 암종, 흑색종, 표재 확산 흑색종, 악성 검정 사마귀 흑색종, 말단 흑색점 흑색종, 결절성 흑색종, 다발성 골수종 및 B 세포 림프종; 만성 림프구성 백혈병(CLL); 급성 림프아구 백혈병(ALL); 모발세포 백혈병; 만성 골수아구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 질환(PTLD)뿐만 아니라 모종증과 관련된 비정상 혈관 증식, 부종(예컨대, 뇌 종양과 관련), 메이그 증후군, 뇌뿐만 아니라 두경부 암, 및 관련된 전이를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시형태에서, 암은 비-소세포 폐암, 교모세포종, 신경아세포종, 신세포 암종, 방광암, 난소암, 흑색종, 유방암종, 위암 및 간세포 암종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 삼중-음성 유방 암종이다. 일부 실시형태에서, 암은 초기암 또는 후기암일 수 있다. 일부 실시형태에서, 암은 원발성 종양일 수 있다. 일부 실시형태에서, 암은 임의의 상기 유형의 암으로부터 유래된 제2 부위에서의 전이성 종양일 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 방광암 유방암, 결장 및 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 암을 예방하거나, 암의 위험을 감소시키거나 또는 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 개체에게 치료적 유효량의 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 투여함으로써 암을 갖는 개체에서 암을 예방하거나, 암의 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 저해성 면역 관문 분자, 및/또는 다른 표준 또는 연구 항-암 요법에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항-B- 및 T-림프구 감쇠기(BTLA) 항체, 항-살해 저해 수용체(KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM-1 항체, 항-TIM3 항체, 항-TIM-4 항체, 항-A2AR 항체, 항-CD39 항체, 항-CD73 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-CD30 항체, 항-TNFa 항체, 항-CD33 항체, 항-Siglec-6 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-10 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 항-TIGIT 항체, 항-VISTA 항체, 항-CD2 항체, 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 표준 또는 연구 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화 요법, 이마티닙(Gleevec®), 트라스투주맙(Herceptin®), 입양 세포 전달(ACT), 키메라 항원 수용체 T 세포 전달(CAR-T), 백신 요법, 및 사이토카인 요법으로부터 선택된 하나 이상의 요법이다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 자극 면역 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제 항체는 작용제 항-CD40 항체, 작용제 항-OX40 항체, 작용제 항-ICOS 항체, 작용제 항-CD28 항체, 작용제 항-TREM1 항체, 작용제 항-TREM2 항체, 작용제 항-CD137/4-1BB 항체, 작용제 항-CD27 항체, 작용제 항-글루코코티코이드-유도 TNFR-관련 단백질 GITR 항체, 작용제 항-BTLA 항체, 작용제 HVEM 항체, 작용제 항-CD30 항체, 작용제 항-CD2 항체, 작용제 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 적어도 하나의 자극 사이토카인을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
키트/제조 물품
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 Siglec-5 제제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체) 또는 이의 기능성 단편을 포함하는 키트 및/또는 제조물품을 제공한다. 본 개시내용의 키트 및/또는 제조물품은 본 개시내용의 정제된 항체를 포함하는 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 키트 및/또는 제조물품은 본 개시내용의 방법에 따른 사용을 위한 설명서를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 이들 설명서를 본 개시내용의 임의의 방법에 따른 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 갖는 개체에서 예방, 위험 감소 또는 치료를 위한 본 개시내용의 Siglec-5 제제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)의 투여의 설명을 포함한다.
일부 실시형태에서, 설명서는, 예를 들어 개체에서, 조직 샘플에서 또는 세포에서 Siglec-5 단백질을 검출하는 방법의 설명을 포함한다. 키트 및/또는 제조물품 상기 개체가 질환 및 질환의 병기를 갖는지의 여부를 동정하는 것에 기반하여 치료에 적합한 개체를 선택하는 설명을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 키트 및/또는 제조물품은 본 개시내용의 다른 항체(예를 들어, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체, 및/또는 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체) 및/또는 적어도 하나의 자극 사이토카인을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 키트 및/또는 제조물품은 본 개시내용의 Siglec-5 제제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)와 조합하여 항체 및/또는 자극 사이토카인을 이용하기 위한 설명서, 항체 및/또는 자극 사이토카인과 조합한 본 개시내용의 Siglec-5 제제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)를 이용하기 위한 설명서, 또는 본 개시내용의 Siglec-5 제제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체) 및 본 개시내용의 임의의 방법에 따른 항체 및/또는 자극 사이토카인을 이용하기 위한 설명서를 추가로 포함할 수 있다.
설명서는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투약량, 투약 스케줄 및 투여 경로를 포함한다. 용기는 단위 용량, 벌크 패키지(예를 들어, 다회 용량 패키지) 또는 하위-단위 용량일 수 있다. 본 개시내용의 키트 및/또는 제조물품에서 공급되는 설명서는 전형적으로 라벨 또는 포장 삽입물(예를 들어, 키트 내에 포함된 종이 시트) 상에 기재된 설명서이지만, 기계로 판독 가능한 설명서(예를 들어, 자기 또는 광학 저장 디스크 상에서 운반되는 설명서)가 또한 허용 가능하다.
라벨 또는 포장 삽입물은 조성물이, 예를 들어, 본 개시내용의 질환을 치료하기 위해 사용된다는 것을 나타낸다. 설명서는 본 명세서에 기재된 임의의 방법을 실행하기 위해 제공될 수 있다.
본 개시내용의 키트 및/또는 제조물품은 적합한 패키징에 있다. 적합한 패키징은 바이알, 보틀, 병, 가요성 패키징(예를 들어, 밀봉된 마일러(Mylar) 또는 비닐백) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 또한 특정 장치, 예컨대 흡입기, 비강 투여 장치(예를 들어, 분무기) 또는 주입 장치, 예컨대 미니펌프와 조합하여 사용하기 위한 포장이 상정된다. 키트 및/또는 제조물품은 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백(bag) 또는 바이알일 수 있다). 용기는 또한 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물 중의 적어도 하나의 활성제는 본 개시내용의 Siglec-5 제제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)이다. 용기는 제2의 추가로 약제학적 활성제를 포함할 수 있다.
키트 및/또는 제조물품은 선택적으로 추가적인 성분, 예컨대 완충제 및 해석적 정보를 제공할 수 있다. 정상적으로는, 키트는 용기 및 용기 상의 또는 용기와 관련된 라벨 또는 포장 삽입물(들)을 포함한다.
진단 용도
Siglec-5 본 개시내용의 제제, 예컨대 본 개시내용의 단리된 항체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)는 또한 진단적 효용을 가진다. 따라서 본 개시내용은 개체에서 또는 개체로부터 유래된 조직 샘플에서 진단적 목적을 위해 Siglec-5 단백질의 검출과 같은 본 개시내용의 항체 또는 이의 작용성 단편을 이용하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시형태에서, 개체는 본 개시내용의 질환, 장애 또는 손상으로 고통받거나 또는 질환, 장애 또는 손상이 발생할 위험에 있는 인간 환자이다. 일부 실시형태에서, 진단 방법은 생물학적 샘플, 예컨대 생검 표본, 조직 또는 세포에서 Siglec-5 단백질을 검출하는 단계를 수반한다. 본 개시내용의 Siglec-5 제제(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)는 생물학적 샘플과 접촉되고, 항원-결합 항체가 검출된다. 예를 들어, 생검 표본은 질환-관련 세포를 검출하기 위해 그리고/또는 정량화하기 위해 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체로 염색될 수 있다. 검출 방법은 항원-결합 항체의 정량화를 수반할 수 있다. 생물학적 샘플에서 항체 검출은 면역형광 현미경, 면역세포화학, 면역조직화학, ELISA, FACS 분석, 면역침전, 또는 마이크로-양전자 방출 단층촬영술을 포함하는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 일어날 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는, 예를 들어 18F로 방사성표지되고, 후속적으로 마이크로-양전자 방출 단층촬영술 분석을 이용하여 검출된다. 항체-결합은 또한 비-침습적 기법, 예컨대 양전자 방출 단층촬영술(PET), X-선 컴퓨터 단층촬영술, 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영술(SPECT), 컴퓨터 단층촬영술(CT), 및 컴퓨터 축 단층촬영술(CAT)에 의해 환자에서 정량화될 수 있다.
다른 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)는, 예를 들어, 전임상 질환 모델(예를 들어, 비-인간 질환 모델)로부터 취한 뇌 표본에서 미세아교세포를 검출하기 위해 그리고/또는 정량화하기 위해 사용될 수 있다. 이렇게 해서, 본 개시내용의 단리된 항체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5 항체)는 대조군에 비해 신경계 질환 또는 손상, 예컨대 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 발작, 망막이영양증, 아테롬성 동맥 경화증 혈관 질환, 나수-하코라병 또는 다발성 경화증에 대한 모델에서 치료 후에 치료적 반응을 평가하는 데 유용할 수 있다.
본 개시내용은 다음의 실시예를 참고로 하여 더 완전하게 이해될 것이다. 그러나, 그들은 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 개시내용 전체적으로 모든 인용은 본 명세서에 명확하게 참고로 포함된다.
실시예
실시예 1: Siglec-5에 특이적인 항체의 생성
본 개시내용은 Siglec-5에 결합하는 항체를 제공한다. 일부 양상에서, 본 개시내용은 Siglec-5에 결합하지만, Siglec-14에는 결합하지 않는 항체인, Siglec-5에 고도로 상동성인 단백질을 제공한다.
인간 Siglec-5의 아미노산 서열은 이하에서(서열번호 1)로서 제시된다. 인간 Siglec-5는 서열번호 1의 아미노산 잔기 1 내지 16에 위치된 신호 서열, 아미노산 잔기 17 내지 441에 위치된 세포외 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 19 내지 136에 위치된 세포외 면역글로불린-유사 가변-유형(IgV) 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 146 내지 229 및 236 내지 330에 위치된 2개의 Ig-유사 C2-유형 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 442 내지 462에 위치된 막관통 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 518 내지 523에 위치된 ITIM 모티프 1, 및 서열번호 1의 아미노산 잔기 542 내지 547에 위치된 SLAM-유사 모티프를 포함한다. 사이노몰거스 Siglec-5 상동체(서열번호 2)와 함께 인간 Siglec-5의 아미노산 서열(서열번호 1)의 정렬을 도 1a에 나타낸다. 인간 Siglec-5(서열번호 1) 및 인간 Siglec-14(서열번호 4)의 아미노산 서열 정렬을 도 1b에 나타낸다.
Siglec-5 아미노산 서열(서열번호 1):
Figure pct00014
도 1b에 나타낸 바와 같이, 인간 Siglec-5 및 인간 Siglec-14는 이들의 세포외 도메인에서 고도로 상동성이고, 이들의 세포외 도메인의 전체에 걸쳐 80% 동일성을 공유하지만, 이들의 세포외 도메인의 처음 237개의 아미노산에서 99% 초과의 동일성을 공유한다.
문헌[Adler, et al. mAbs. 2017 "Rare, high-affinity mouse anti-PD-1 antibodies that function in checkpoint blockade, discovered using microfluidics and molecular genomics"]에 기재된 바와 같은 분자 게놈 접근을 이용하여 Siglec-5에 특이적인 항체를 생성하였다. 10마리의 마우스(5마리의 SJ/L 마우스 및 5마리의 Balb/c 마우스)를 다중 부위에서의 3주 반복 면역화(RIMMS) 프로토콜을 이용하여 인간 Siglec-5의 세포외 도메인을 포함하는 His-태그된 Siglec-5 단백질로 면역화시켰다. 10마리의 동물 중 9마리는 면역원에 대해 강한 역가가 발생되었다. 이들 마우스로부터 림프절 및 비장을 채취하고, 음성 선택에 의해 이들로부터 B 세포를 단리시켰다.
각각의 동물로부터의 림프절 및 비장 B 세포를 모으고, 각 동물로부터의 106개의 B 세포를 10% Optiprep(Sigma)과 함께 PBS에서 재현탁시켜 단세포 에멀션 점적을 생성하고, 이 후에, 문헌[Adler, et al.]에 기재된 바와 같이 중쇄 및 경쇄를 유리 미세유체 칩 상에서 RT-PCR에 의해 증폭시켰다. 간단하게, 맞춤 설계된 공동 유동 에멀션 점적 유리 미세유체 칩을 세포 용해 완충제에서 단세포 현탁액 및 올리고-dT 비드를 함유하는 대략 45㎛ 직경 점적의 에멀션을 생성하는 데 사용하여 폴리(A)+ mRNA를 포획하였다. 이어서, 2× 1단계 RT-PCR 완충제, Superscript III 역전사효소, 백금 태그(ThermoFisher), 및 IgK C 영역, IgG C 영역, 및 모든 V 영역으로 향하는 프라이머의 혼합물을 함유하는, 중복-연장 RT-PCR 혼합에서 mRNA-결합 비드를 재현탁시켰다. 중복 영역은 Gly-Ser 풍부 scFv 서열을 암호화하는 DNA 서열이었다. 비드 혼합물을 광유계 계면활성제 혼합물과 함께 유리 Telos 점적 에멀션 미세유체칩에 주사하여 27㎛ 점적을 생성하였다. 이 과정은 단세포로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 증폭 및 결합시켜, 연결된 scFv를 형성하였다.
RT-PCR 반응 후에, RT-PCR 산물을 아가로스 겔 상에서 정제하고, 네스티드 PCR(nested PCR) 반응을 수행하여 심층 서열분석 또는 효모 디스플레이를 위한 어댑터를 추가하였다. 효모에서의 서열분석 또는 클로닝 전에 네스티드 PCR 산물을 겔 정제하였다. 효모 클로닝 벡터(pYD)는 GAL1/10 프로모터, Aga2 세포벽 테더, 및 C-말단의 c-Myc 태그를 포함하였다. 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 겔-정제된 PCR 산물을 이용하여 전기천공하고, 상동성 재조합을 위해 pYD 벡터를 선형화시켰다.
Siglec-5에 결합하지만, Siglec-14에는 결합하지 않는 항체를 선택하기 위해 효모-기반 항체 플랫폼을 사용하였다. Siglec-5에 결합하는 scFv-발현 세포를 확인하기 위해, 효모 세포를 바이오틴일화된 His-태그된 Siglec-5-Fc 단백질(70nM)로 염색하고, 이어서, PE-스트렙타비딘으로 염색하였다. Siglec-14에 결합하는 scFv 세포를 확인하기 위해, 효모 세포를 Siglec-14-Fc(70nM, R&D)로 염색하였고, APC-접합 항-인간 IgG로 염색하였다. 효모를 항-c-Myc로 염색한 후에, AF-488-접합 2차 항체로 염색하여, 세포 표면 scFv 발현을 확인하였다. Siglec-5에 결합하지만 Siglec-14에는 결합하지 않는 scFv를 발현시키는 효모 세포를 AF488+/PE+/APC- 집단 상에서 분류함으로써 선택하였다.
FACS 분류로부터 회수한 효모로부터 플라스미드 미니프렙을 준비하였다. 꼬리-말단 PCR을 사용하여 심층 항체 서열분석을 위한 플라스미드 라이브러리에 일루미나(Illumina) 어댑터를 더하였다. 정량적 PCR Illumina Library Quantification 키트(KAPA)를 이용하여 서열분석 라이브러리를 정량화하였다. 제조업자의 설명서에 따라 500 주기 MiSeq Reagent Kit v2를 이용하여 MiSeq(Illumina) 상에서 라이브러리를 서열분석하였다. 각 라이브러리로부터 대략 100,000 내지 150,000회의 서열 판독을 얻었다. 라이브러리 내의 scFv의 분류 전 및 분류 후 빈도를 비교하여 분류 후 특정 항체의 배수-풍부도(fold-enrichment)를 수득한다. 적어도 4-배 풍부도를 갖는 11가지 항체를 전체 항체로서 포유류 세포에서 발현시켰고, 시험관내에서 특성규명하였다(표 1).
Figure pct00015
실시예 2: 항-Siglec-5 항체의 인간화
다음의 연구 목적은 마우스 항-인간 Siglec-5 항체: S5-172, S5-174 및 S5-G-03의 인간화된 변이체를 생성하는 것이었다.
마우스 항체에 대해 서열 내에서 가까운 인간 생식계열 프레임워크에 각각의 모 마우스 항체의 CDR을 접합시킴으로써 뮤린 항-Siglec-5 항체를 인간화시켰다. 하나 이상의 프레임워크 역돌연변이를 갖는 항체를 또한 생성하였다. 전체적으로, S5-172의 6개의 인간화된 항-Siglec-5 항체(S5-172-H1 내지 S5-172-H6)를 생성하고; S5-174의 8개의 인간화된 항-Siglec-5 항체(S5-174-H1 내지 S5-174-H8)를 생성하고; S5-G-03의 9개의 인간화된 항-Siglec-5 항체(S5-G-03-H1 내지 S5-G-03-H9)를 생성하였다.
항체의 중쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 2에 나타낸다. 항체의 경쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 3에 나타낸다. 항체의 중쇄 프레임워크 영역의 서열을 이하의 표 4에 나타낸다. 항체의 경쇄 프레임워크 영역의 서열을 이하의 표 5에 나타낸다. 항체의 중쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 6에 나타낸다(HVR 서열은 밑줄표시됨). 항체의 경쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 7에 나타낸다(HVR 서열은 밑줄표시됨).
Figure pct00016
Figure pct00017
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실시예 3: 항-Siglec-5 항체 결합의 특성규명
다음의 연구 목적은 상기 기재한 바와 같이 생성한 항-Siglec-5 항체의 결합 친화도를 측정하는 것 및 Siglec-5 발현 세포 상의 이들의 결합을 평가하는 것이었다.
항-Siglec-5 항체의 겉보기 결합 친화도를 표준 기법에 따라 어레이 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정하였다(Abdiche, et al. (2016) MAbs8:264-277). 간단하게, 항-Siglec-5 항체를 10㎍/㎖, 2.5㎍/㎖, 0.63㎍/㎖ 및 0.16㎍/㎖의 항체 농도에서 4가지 상이한 밀도로 HC 30M 칩 상에 고정시켰다. 이어서, 다양한 농도(0 내지 500nM)의 히스티딘-태그된 인간 Siglec-5 또는 사이노몰거스 Siglec-5(NovoProtein)를 HBS-EP+/1 ㎎/㎖ BSA 실행 완충제에서 포획된 항-Siglec-5 표면(5분 주사 시간, 15분 해리 시간)에 결합하였다. 각각의 항체에 대해 결합 및 해리 속도 상수(각각 ka 및 kd)를 추출하기 위해 Carterra 소프트웨어를 이용하여 동력학 분석을 수행하였다. kd/ka 비로부터 겉보기 친화도 상수(KD)를 계산하였다. 인간 Siglec-5에 대한 항-Siglec-5 항체의 결합에 대한 친화도 결과를 이하의 표 8에 나타낸다. 항-Siglec-5 항체 중 어느 것도 사이노몰거스 Siglec-5 단백질에 결합되지 않았다.
Figure pct00035
항-Siglec-5 항체를 인간 Siglec-5(CHO-S5) 또는 인간 Siglec-14(CHO-S14)로 안정하게 형질감염시킨 CHO 세포에 결합하는 능력에 대해 평가하였다. 항-Siglec-5 항체를 또한 1차 인간 호중구에 결합하는 능력에 대해 평가하였다. 암실 내 얼음에서 세포를 항-Siglec-5 항체의 다양한 희석물과 함께 30분 동안 인큐베이션시킨 후에, 형광 접합된 항-인간 IgG 2차 항체와 함께 30분 인큐베이션시켰다. FACS 완충제(PBS +2% FBS, 2mM EDTA) 중에서 세포를 2회 세척하고 나서, BD FACS 칸토 상에서 유세포 분석을 수행하였다. FlowJo 소프트웨어(오리건주 애슐랜드(Ashland))를 이용하여 데이터를 분석하였다. 결과를 도 2a 및 도 2b에 나타낸다. 도면에서, "hIgG1" 및 "mIgG1"은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하며, "S5/14 1A5"는 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 상업적으로 입수 가능한 항체(BioLegend, 클론 1A5)를 지칭한다.
모든 항-Siglec-5 항체는 CHO-S5 세포 및 호중구에 결합되었지만; 그러나, 상업적 항체 1A5만이 CHO-S14에 대한 실질적인 결합을 나타내었다. 항-Siglec-5 항체 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07 및 S5-G-10은 CHO-S14에 대한 실질적인 결합을 나타내지 않았다. 이들 결과는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 Siglec-5에 결합하지만, Siglec-14에는 결합하지 않는다는 것을 나타내었다. 종합하면, 이들 결과는 본 개시내용의 항-Sigelc-5 항체가 Siglec-5에 특이적이며 Siglec-14를 인식하지 않는다는 것을 나타내었다.
실시예 4: 항-Siglec-5 항체의 에피토프 비닝(epitope binning)
다음의 연구 목적은 항-Siglec-5-특이적 항체 및 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 항체를 에피토프 비닝하는 것이었다.
항-Siglec-5 항체의 에피토프 빈(epitope bin)을 표준 기법에 따라 어레이 SPR에 의해 결정하였다(Abdiche, et al. (2014) PLoS One 9:e92451). 간단하게, 항-Siglec-5 항체를 항원에 대한 강한 결합을 초래하기 위해 이미 결정된 밀도에서 HC 30M 칩 상에 고정하였다. His-태그된 인간 Siglec-5(50nM)를 경쟁자 항체(200nM)와 미리 혼합하고, 이 후에 HBS-EP+/1㎎/㎖ BSA 실행 완충제에서 5분 동안 어레이 상에 주입하였다. 고정된 항체에 대한 항원:경쟁자 항체의 결합은 고정된 항체 및 경쟁자 항체가 두 상이한 에피토프 빈에 속한다는 것을 나타낸다. 항원:경쟁자 항체의 결합 결여는 고정된 항체 및 경쟁자 항체가 동일한 에피토프 빈에 속한다는 것을 나타낸다.
항-Siglec-5 항체를 에피토프 비닝하는 것으로부터의 결과를 이하의 표 9에 나타낸다. 표 9에서, "7A5" 및 "8A1"은 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 항체를 지칭한다. 항체 7A5는 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 가진다. 항체 8A1은 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 가진다. "1A5", "194128", "REA393", "C2" 및 "E1"은 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 상업적으로 입수 가능한 항체(BioLegend, 클론 1A5; R&D Systems, 클론 194128; Miltenyi, 클론 REA393; Santa Cruz, 클론 C-2 및 E-1)를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 항-Siglec-5-특이적 항체는 에피토프 빈 3, 4 및 5에 속한다. Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 항체는 상이한 에피토프 빈 1 및 2에 결합한다.
Figure pct00036
항-Siglec-5 항체를 Siglec-5 수용체에 대한 리간드 결합과 경쟁하는 능력에 대해 추가로 평가하였다. Siglec-5의 리간드 결합 도메인은 Siglec-5 및 Siglec-14의 아미노산 서열에 거의 동일한 영역인 처음 2개의 Ig-유사 도메인 내에 포함된다(Angata, et al., FASEB Journal, 2006). Siglec-5에 대한 리간드 결합과의 항-Siglec-5 항체 경쟁을 측정하기 위해, 적혈구(RBC) 고체 접착 분석을 표준 프로토콜에 따라 수행하였다(Kelm et al., Current Biology, 1994). 시알산을 함유하는 당단백질을 이용하여 적혈구(RBC)를 매우 장식하고; 따라서, 고정된 Siglec-5에 대한 RBC 결합을 차단하는 항-Siglec-5 항체의 능력을 사용하여 리간드 간섭을 결정할 수 있다. 간단하게, 5㎍/㎖ Siglec-5-Fc를 96-웰 Immunolon 플레이트에서 밤새 실온에서 코팅시키고, PBS로 세척하고, 이어서, 1시간 동안 결합 완충제(0.25% BSA 1mM CaCl2를 함유하는 PBS)로 차단시켰다. 항-Siglec-5 항체(0.5㎍/㎖ 또는 1.0㎍/㎖)를 1시간 동안 실온에서 부드럽게 흔들면서 결합시켰다. 비결합 항체의 제거 후에, 적혈구를 ㎖당 3.0 x106개 세포의 농도로 각각의 웰에 첨가하고 나서, 1시간 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 이어서, 비결합 RBC를 PBS로 조심해서 3× 세척하고 나서, 결합된 RBC의 저장성 용해를 위해 각각의 웰에 물을 첨가하였다. 플레이트를 10분 동안 -80℃로, 이어서, 37℃까지 15분 동안 옮겼다. 페록시다제 활성에 의해 결합된 RBC를 검출한 후에, 반응을 중단시키기 위해 2N 황산을 이용하였다. 450㎚에서 신호를 검출하였다. 항체의 부재 하에서 플레이트 결합된 Siglec-5-Fc에 대한 RBC 결합%로서 데이터를 계산하였다.
리간드 경쟁 분석의 결과를 도 3에 도시한다. 도 3에서, "RBC 단독"은 항체와 함께 인큐베이션시키지 않은 적혈구를 지칭하고; "mIgG1" 및 "hIgG1"은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하며; S5/14 1A5는 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 상업적으로 입수 가능한 항체(BioLegend, 클론 1A5)를 지칭한다. 항체 2G5는 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 항체를 지칭한다. 항체 2G5는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가진다.
본 개시내용의 항-Siglec-5-특이적 항체(S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07 및 S5-G-10)는 시험한 항체 농도 중 하나에서 Siglec-5에 대한 리간드 결합을 차단하지 않았다. 대조적으로, Siglec-5 및 Siglec-14에 결합하는 항체는 둘 다 시험한 항체 농도 둘 다에서 리간드 결합을 차단하였다. 이들 결과는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 Siglec-5에 대한 리간드 결합을 차단하지 않는다는 것을 나타내었다.
실시예 5: 시험관내 Siglec-5의 세포 표면 수준에서 항-Siglec-5 항체-유도 감소
다음 연구의 목적은 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 시험관내 세포 상에서 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시키는지의 여부를 시험하는 것이었다 vitro.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 Siglec-5로 안정하게 형질감염된 CHO 세포(CHO-S5) 표면 상에서 Siglec-5 수준을 감소시키는 이들의 능력에 대해 시험하였다. CHO-S5 세포를 16 내지 24시간 동안 37℃에서 5% CO2와 함께 항-Siglec-5 항체(0.25㎍/㎖)와 함께 인큐베이션시키고, 이후에 Siglec-5의 세포 표면 발현을 FACS 분석에 의해 검출하였다. 세포를 암실에서 얼음 상에서 30분 동안 검출 항체인 항-Siglec-5-PE, 클론 1A5(Biolegend)와 함께 인큐베이션시켰다. FACS 완충제(PBS +2% FBS, 2mM EDTA) 중에서 세포를 2× 세척하고 나서, BD FACS 칸토 상에서 유세포 분석을 수행하였다. FlowJo 소프트웨어를 이용하여 데이터를 분석하였다. 다음의 식을 이용하여 남아있는 Siglec-5의 세포 표면 발현%를 계산하였다: (시험 항체의 존재 하의 1A5-PE의 MFI)/(시험 항체의 부재 하의 1A5-PE의 MFI)*100%. 이들 연구 결과를 도 4a에 나타낸다. 도 4a에 나타낸 바와 같은, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 재조합 Siglec-5와 함께 안정하게 형질감염된 CHO 세포 표면 상에서 Siglec-5 수준을 감소시켰다.
항-Siglec-5 항체를 1차 인간 면역 세포 표면 상에서 Siglec-5를 감소시키는 능력에 대해 추가로 평가하였다. B 세포를 문헌[Yamanaka, et al. (2009) Glycobiology 19:841-6]에 기재한 바와 같이 Siglec-14 널 다형성에 대한 동형 접합체로서 확인한 건강한 인간 공여자로부터 단리시켰다. 세포를 항-Siglec-5 항체(0.016㎍/㎖)와 함께 16 내지 24시간 동안 인 인큐베이션시키고, 이 후에 세포 표면 상에 남아있는 Siglec-5의 양을 세포 표면 상에 남아있는 유세포분석에 의해 정량화하였다. 이들 연구 결과를 도 4b에 나타낸다. 도 4b에 나타낸 바와 같이, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 시험관내 인간 B 세포 표면 상에서 Siglec-5 수준을 감소시켰다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 M0-유사, M1-유사 또는 M2a-유사로서 양극화된 1차 인간 대식세포 표면 상의 Siglec-5 수준을 감소시키는 능력에 대해 추가로 평가하였다. 간단하게, 단핵구를 건강한 인간 공여자로부터 얻은 신선한 혈액으로부터 단리시켰고, 7일 동안 0.1㎍/㎖ rHuM-CSF를 이용하여 대식세포로 분화시켰다. 제7일에, 대식세포를 0.1㎍/㎖ rHuM-CSF에서 배양시키거나, M1(10ng/㎖ LPS+20ng/㎖ IFN감마의 존재 하에) 또는 M2a(50ng/㎖ IL-4의 존재 하에)로 2일 동안 양극화시켰다. 양극화된 대식세포를 항-Siglec-5 항체(10㎍/㎖) 18시간 동안 처리하였고, 이 후에 세포 표면 상에 남아있는 Siglec-5의 양을 상기 기재한 바와 같이 유세포분석에 의해 정량화하였다. 이들 연구 결과를 도 4c에 나타낸다. 도 4c에 나타낸 바와 같이, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 시험관내 인간 대식세포 표면 상에서 Siglec-5 수준을 감소시켰다. 추가적으로, 결과는 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 M0 대식세포, M1 대식세포 및 M2a 대식세포 표면 상에서 Siglec-5 수준을 감소시켰다는 것을 나타내었다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 세포 표면 상에서 Siglec-5 수준을 감소시키는 능력이 다르다는 것을 나타내었다. 항-Siglec-5 항체 S5-172, S5-174, S5-176, S5-190 및 S5-G-03은 CHO-S5 형질감염체 상에서 그리고 1차 면역 B 세포 상에서 Siglec-5 수준을 감소시켰으며; 항-Siglec-5 항체 S5-G-03이 시험한 다른 항-Siglec-5 항체에 의해 관찰된 것에 비해 B 세포 상에서 Siglec-5의 가장 큰 감소를 나타내었다. 다른 항-Siglec-5 항체, 예컨대 S5-175 및 S5-202는 Siglec-5의 세포 표면 수준을 더 적은 수준으로 감소시켰다. 몇몇 항-Siglec-5 항체, 예컨대 S5-182 및 S5-183은 Siglec-5 세포 표면 수준의 보통의 감소만을 나타내었다. 항-Siglec-5 항체 S5-172, S5-174 및 S5-G-03은 모두 3개의 대식세포 서브유닛: M0, M1 및 M2a 상에서 Siglec-5 세포 표면 수준을 감소시키는 유사한 능력을 나타내었다. 종합하면, 이들 결과는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키거나 줄이고 Siglec-5에 대한 리간드 결합을 차단시키는 Siglec-5와 Siglec-14를 둘 다 인식하는 항체와 달리, 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체가 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키거나 줄이지만, Siglec-5에 대한 리간드 결합을 차단시키지 않는다는 것을 나타내었다.
실시예 6: 시험관내 항-Siglec-5 항체의 존재 하에 ROS 생산의 특성규명
다음의 연구 목적은 인간 1차 호중구에 의한 활성 산소종(ROS)의 생산에 대해 본 개시내용의 항-Siglec-5 항체 효과를 평가하는 것이었다.
ROS 생산을 평가하기 위해, EasySep™ 직접 인간 호중구 키트(STEMCELL Technologies)를 이용하는 단리의 2 내지 4시간 전에 호중구를 인간 혈액 샘플로부터 단리시켰다. 0.5% Hyclone 소태아 혈청(GE Healthcare Life Sciences)으로 보충한 RPMI 1640(Mediatech)을 이용하여 96-웰 플레이트(Thermo Scientific)에서 호중구를 100,000개의 세포/웰로 플레이팅하였다. 항-Siglec-5 항체를 1㎍/㎖로 첨가하고, 37℃에서 5% CO2와 함께 10분 동안 인큐베이션시켰다. CM-H2DCFDA(Life Technologies)를 DMSO를 이용하여 1mM로 재구성하고, PBS에서 10μM로 희석시켰다. 검출 용액을 2μM CM-H2DCFDA의 최종 농도로 배지 내 호중구에 첨가하였다. 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 후, Synergy H1 마이크로플레이트 판독기(BioTek) 또는 SpectraMax i3x 마이크로플레이트 판독기(Molecular Devices)를 이용하여, 여기 파장: 495㎚ 및 방출 파장: 530㎚에서의 형광 강도를 측정하였다. 모든 2회 샘플에 대한 형광 강도 값을 평균내었다. 첨가한 항체가 없는 샘플의 형광 강도값을 모든 샘플로부터 차감하였다.
ROS 생산 분석 결과를 도 5에 나타낸다. 도 5에서, "hIgG1"은 아이소타입 대조군 항체를 지칭한다.
도 5의 결과는 본 개시내용의 특정 항-Siglec-5 항체, 예컨대 S5-172, S5-174 및 S5-176이 호중구에 의해 생산된 ROS 수준을 증가시켰다는 것을 나타낸다. 다른 항-Siglec-5 항체, 예컨대 S5-175, S5-182, S5-183, S5-190 및 S5-202는 아이소타입 대조군 항체에 의해 관찰된 것에 비해 호중구에 의해 생성된 ROS 수준 감소를 나타내었다.
실시예 7: 시험관내 항-Siglec-5 항체의 존재 하에 NET 형성의 특성규명
다음의 연구의 목적은 항-Siglec-5 항체의 존재 하에 인간 1차 호중구에 의한 호중구 세포외 트랩(NET) 형성을 평가하는 것이었다.
NET 형성을 평가하기 위해, EasySep™ 직접 인간 호중구 키트(STEMCELL Technologies)를 이용하는 단리의 2 내지 4시간 전에 호중구를 인간 혈액으로부터 단리시켰다. 0.5% Hyclone 소태아 혈청(GE Healthcare Life Sciences)으로 보충한 RPMI 1640(Mediatech)을 이용하여 96-웰 플레이트(Thermo Scientific)에서 호중구를 100,000개의 세포/웰로 플레이팅하였다. Siglec-5 항체를 1㎍/㎖로 첨가하고, 37℃에서 5% CO2와 함께 밤새 인큐베이션시켰다. SYTOX 그린 핵산 염색(SYTOX Green Nucleic Acid Stain)(Life Technologies)을 PBS 중에서 25μM로 희석시켰다. 검출 용액을 5μM SYTOX® 그린 핵산 염색의 최종 농도로 배지 내 호중구에 첨가하였다. 37℃에서 5분 동안 인큐베이션 후, Synergy H1 마이크로플레이트 판독기(BioTek) 또는 SpectraMax i3x 마이크로플레이트 판독기(Molecular Devices)를 이용하여, 여기 파장: 495㎚ 및 방출 파장: 530㎚에서의 형광 강도를 측정하였다. 모든 2회 샘플에 대한 형광 강도 값을 평균내었다. 첨가한 항체가 없는 샘플의 형광 강도값을 모든 샘플로부터 차감하였다.
NET 형성 분석 결과를 도 6에 나타낸다. 도 6에서, "hIgG1"은 아이소타입 대조군 항체를 지칭한다.
도 6의 결과는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-182 및 S5-183을 포함하는 본 개시내용의 특정 항-Siglec-5 항체가 아이소타입 대조군 항체에 의해 관찰된 것 이상으로 호중구 세포외 트랩 형성을 증가시켰다는 것을 나타낸다. 본 개시내용의 다른 항-Siglec-5 항체, 예컨대 S5-176, S5-190 및 S5-202는 호중구 세포외 트랩의 형성 감소를 야기하였다.
실시예 8: 시험관내 항-Siglec-5 항체에 의한 식세포작용의 자극
다음의 연구 목적은 1차 인간 대식세포에서 시험관낸 식세포작용을 자극하거나 유도하는 항-Siglec-5 항체의 능력을 평가하는 것이었다.
상기 기재한 바와 같이 유래된 1차 인간 대식세포는 항-Siglec-5 항체와 함께 밤새 인큐베이션시킨 후에, 3:1 대식세포:Raji 세포의 비로 항-CD20-옵소닌화된 CFSE-표지 Raji 세포를 첨가하였다. 24시간 후에, 식세포작용 Raji 세포를 갖는 대식세포를 나타낸 CD14+FITC+ 세포를 유세포분석에 의해 정량화하였다.
식세포작용 분석 결과를 도 7에 나타낸다. 항-Siglec-5 항체 S5-G-03로 처리한 M0 대식세포, M1 대식세포, 및 M2a 대식세포는 아이소타입 대조군 항체로 처리할 때보다 유의하게 더 큰 식세포작용을 나타내었다. 항-Siglec-5 항체 S5-174는 M0 대식세포 및 M1 대식세포에서 향상된 식세포작용을 나타내었다. 항-Siglec-5 항체 S5-172는 M0 대식세포 및 M2a 대식세포에서 식세포작용의 보통의 향상을 야기하였다. 이들 결과는 본 개시내용의 항-Siglec-5 특이적 항체가 대식세포에 의한 표적 세포의 식세포작용을 향상시킬 수 있다는 것을 나타내었다.
실시예 9: 인간 Siglec-5에 대한 유전자이식 마우스에서의 Siglec-5 발현의 특성규명
다음의 연구 목적은 인간 Siglec-5에 대한 유전자이식 마우스에서의 면역 세포 상의 Siglec-5의 발현을 평가하는 것과 순환 면역 세포 및 종양-침윤성 면역 세포 상의 Siglec-5 발현과 비교하는 것이다.
다음의 연구에서, Siglec-5를 암호화하는 인간 게놈 좌위에 대한 유전자이식 마우스를 사용하였다. Siglec-5 유전자이식 마우스 및 대조군 야생형 마우스는 MC38 동질유전자 종양 계통을 측접하는 우측 옆구리에 접종하였다. 종양이 대략 200 내지 250㎣에 도달되었을 때, 혈액 및 종양을 채취하고, Siglec-5의 발현에 대해 분석하였다. 간단하게, Miltenyi 종양 분리 키트를 이용하여 종양을 분리시키고, 이 후에 세포를 70㎛ 세포 염색기를 통과시키고 나서, PBS + 2% FBS로 세척하였다. 혈액 세포 및 분리된 종양 세포을 마우스 CD11b, 마우스 Gr1, 마우스 CD11c, 마우스 NK1.1, 마우스 CD3, 마우스 CD8, 마우스 CD19 및 Siglec-5-특이적 항체(S5-190)로 30분 동안 암실 내 얼음 상에서 염색하였다. FACS 완충제(PBS +2% FBS, 2mM EDTA) 중에서 세포를 2× 세척하고 나서, BD Fortessa 상에서 유세포 분석을 수행하였다. FlowJo 소프트웨어를 이용하여 데이터를 분석하였다.
이들 연구 결과를 도 8에 나타낸다. 유전자이식 마우스(TG)로부터의 세포 상의 항-Siglec-5 항체의 평균 형광 강도(MFI)를 야생형 마우스(WT)로부터의 세포 상의 MFI에 의해 정한 배경과 비교한다.
순환 혈액 세포 내에서, CD11bhiGr1hi(호중구 및 과립구) 세포 집단은 상당한 수준의 Siglec-5를 발현시켰다. 순환 CD11bhiGr1mid(단핵구), CD11c+ 수지상 세포, 또는 NK1.1+ NK 세포 상에서 Siglec-5 발현은 거의 관찰되지 않았다. 대조적으로, 종양-침윤성 면역 세포는 상당히 더 많은 Siglec-5 발현을 나타내었다. 종양-침윤성 CD11bhiGr1hi(MDSC), CD11bhiGr1mid(단핵구, 대식세포) CD11bmidGr1hi 및 CD11c+ 수지상 세포는 또한 배경에 대해 유의한 Siglec-5 발현을 나타내었고; 대조적으로, 종양-침윤성 NK 세포는 유의한 수준의 Siglec-5를 발현시키지 않았다. 이들 결과는 Siglec-5가 종양 미세환경에서 상향조절되고, 암 병리에 기여할 가능성이 있다는 것을 나타내었다.
실시예 10: Siglec-5 항체의 에피토프 맵핑
항-Siglec-5 항체를 전체 인간 Siglec-5 아미노산 서열에 걸쳐 있는 15량체 또는 25량체 펩타이드에 결합하는 능력에 대해 시험하였다. 항-Siglec-5 항체를 또한 그들의 Siglec-5 결합 영역을 결정함으로써 기준 Siglec-5 항체와 비교하였다.
항-Siglec-5 항체의 에피토프 비닝을, 예를 들어, BiaCore T200 기기 상에서 수행한다. 비아코어 T200 평가 소프트웨어, 버전 2.0을 이용하여 데이터 분석을 수행한다. HBS-EP+(10mM HEPES, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20, pH 7.4)를 실행 완충제로서 그리고 시약을 준비하는데 사용한다. 항-인간 Fc IgG를 고정시킨 CM5 센서 칩(GE Healthcare) 상에서 인간 Siglec-5, Fc 키메라(10nM; R&D Systems)를 포획한다(60s 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 0 s 안정화 시간). 이어서, 샘플 마우스 항-Siglec-5 항체(100nM)를 포획된 Siglec-5 표면(60s 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 0s 해리 시간), 다음에 기준 마우스 항-Siglec-5 항체(100nM, 60s 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 30s 해리 시간)에 대해 유동시킨다. 10mM 글리신-HCl, pH 1.7를 이용하여 주기 사이에서 칩 표면을 재생한다(60초 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 60초 안정화 시간). 블랭크 유동 세포 상에서 수행한 측정으로부터의 반응 차이로서 얻어진 SPR 신호를 얻는다. 0-리간드 대조군(0nM 항원 + 100nM IgG)은 센서 칩 표면에 대한 항체의 유의한 비특이적 결합을 나타내지 않는다.
선형 15-량체 펩타이드를 14개의 잔기 중복을 갖는 인간 Siglec-5(서열번호 1)에 기반하여 합성한다. 추가로, 선형 25량체 펩타이드를 단일 잔기 이동을 갖는 인간 Siglec-5의 서열(서열번호 1)에 기반하여 합성한다. 각각의 합성된 펩타이드에 대한 항-Siglec-5 항체의 결합을 ELISA 기반 방법에서 시험한다. 이 분석에서, 펩타이드 어레이를 1차 항체 용액(4℃에서 밤새)과 함께 인큐베이션시킨다. 세척 후에, 펩타이드 어레이를 항체 페록시다제 접합체(SBA, cat. nr.2010-05)의 1/1000 희석물과 함께 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션시킨다. 세척 후에, 페록시다제 기질 2,2'-아지노-다이-3-에틸벤즈티아졸린 설포네이트(ABTS) 및 2㎕/㎖의 3% H2O2를 첨가한다. 1시간 후에, 색상 전개를 측정한다. 색상 전개를 전하결합소자(CCD) 카메라 및 화상 처리 시스템을 이용하여 정량화한다.
대안적으로, 표적 모듈의 에피토프를 재구성하기 위해, 루프 및 조합 펩타이드의 라이브러리를 합성한다. 등록상표가 붙은 친수성 중합체 제형과 접합시킨 다음에 다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC)와 함께 N-하이드록시벤조트라이아졸(HOBt)을 이용하는 t-뷰틸옥시카본일-헥사메틸렌다이아민(BocHMDA)과의 반응 및 트라이플루오로아세트산(TFA)을 이용하는 Boc-기의 후속적 절단에 의해 아미노 작용화된 폴리프로필렌 지지체를 얻는다. 표준 Fmoc-펩타이드 합성을 사용하여 관례적으로 변형된 JANUS 액체 조절 스테이션(Perkin Elmer)에 의해 아미노-작용화된 고체 지지체 상의 펩타이드를 합성한다.
Pepscan의 등록상표인 스캐폴드 상에 화학적으로 연결된 펩타이드(Chemically Linked Peptides on Scaffold: CLIPS) 기법을 이용하여 구조적 모방체의 합성을 행한다. CLIPS 기법은 펩타이드를 단일 루프 및 이중 루프 내로 구조화하도록 허용한다. CLIPS 주형을 시스테인 잔기에 결합시킨다. 펩타이드 내 다중 시스테인의 측쇄를 1 또는 2개의 CLIPS 주형에 결합시킨다. 예를 들어, mP2 CLIPS(2,6-비스(브로모메틸)피리딘)의 0.5mM 용액을 중탄산암모늄(20mM, pH 7.8)/아세토나이트릴(1:3(v/v)) 중에 용해시킨다. 이 용액을 펩타이드 어레이 상에 첨가한다. CLIPS 주형을 펩타이드 어레이의 고체상 결합 펩타이드(3㎕ 웰을 갖는 455 웰 플레이트)에서 존재하는 2개의 시스테인의 측쇄에 결합할 것이다. 30 내지 60분 동안 용액 중에서 펩타이드 어레이를 부드럽게 진탕시키는 한편, 용액 중에서 완전히 뒤덮는다. 최종적으로, 펩타이드 어레이를 과량의 H2O로 광범위하게 세척하고, 70℃에서 30분 동안 PBS(pH 7.2) 중의 1% SDS/0.1% β-머캅토에탄올을 함유하는 파괴-완충제 중에서 음파 처리하여, 다른 45분 동안 H2O 중에서 음파 처리하였다. 3개의 시스테인을 이용하는 것을 제외하고 위에서 기재한 것과 유사한 방식으로, 펩타이드를 운반하는 T3 CLIPS(2,4,6-트리스(브로모메틸)피리딘)을 생성한다.
루프 펩타이드: 17개 아미노산 길이의 제한된 펩타이드. 위치 2 내지 16은 표적 서열로부터 유래된 15-량체이다. 천연 Cys 잔기를 아세트아미도메틸기(ACM)에 의해 보호한다. 위치 1 및 17은 mP2 CLIPS 모이어티에 의해 연결되는 Cys이다. 조합 펩타이드(불연속 모방체): 길이 33의 제한된 펩타이드. 위치 2 내지 16 및 18 내지 32는 ACM에 의해 보호된 천연 Cys 잔기를 갖는 표적 서열로부터 유래된 15량체 펩타이드이다. 위치 1, 17 및 33은 T3 CLIPS 모이어티에 의해 연결된 Cys이다.
각각의 합성된 펩타이드에 대한 항체의 결합을 펩스캔(PEPSCAN)-기반 ELISA에서 시험한다. 펩타이드 어레이를 시험 항체 및 차단 용액(예를 들어, 4% 말 혈청, PBS/1% 트윈80(Tween80) 중의 5% 오브알부민(w/v))의 실험적으로 최적화된 농도로 구성된 시험 항체 용액과 함께 인큐베이션시킨다. 펩타이드 어레이를 4℃에서 밤새 시험 항체 용액과 함께 인큐베이션시킨다. 세척 완충제(1×PBS, 0.05% 트윈80)을 이용하는 광범위 세척 후에, 펩타이드 어레이를 25℃에서 1시간 동안 적절한 항체 페록시다제 접합체의 1/1000 희석물과 함께 인큐베이션시킨다. 세척 완충제를 이용하는 세척 후에, 페록시다제 기질 2,2'-아지노-다이-3- 에틸벤즈티아졸린 설포네이트(ABTS) 및 2㎕/㎖의 3% H2O2를 첨가한다. 1시간 후에, 색상 전개를 측정한다. 색상 전개를 전하결합소자(CCD) 카메라 및 화상 처리 시스템을 이용하여 정량화한다.
대안적으로 질량분석법 방법을 사용하여 입체배좌적 에피토프를 동정한다. 항-Siglec-5 항체가 고 분해능으로 항체/항원 복합체에 결합하는 Siglec 5 단백질 상의 입체배좌적 에피토프의 중요한 잔기를 결정하기 위해 중수소화된 가교제와 함께 인큐베이션시키고 나서, 다중-효소 단백질 분해 절단을 실시하였다. 가교 펩타이드의 농축 후에, 샘플을 고분해능 질량분석법(nLC-오비트랩(Orbitrap) MS)에 의해 분석하고 나서, 생성된 데이터를 XQuest 소프트웨어를 이용하여 분석한다. 구체적으로는, Siglec-5 항원과 항체의 등몰 용액(각각 5㎕ 중의 4μM)을 혼합함으로써 Siglec 5 ECD/항체 복합체를 생성한다. 얻어진 1㎕의 혼합물을 아세토나이트릴/물(1:1, v/v) 중의 재결정화된 시냅핀산 기질(10㎎/㎖), TFA 0.1%(K200 말디 키트(MALDI Kit))로 구성된 1㎕의 기질과 혼합한다. 혼합 후에, 1㎕의 각각의 샘플을 MALDI 플레이트(SCOUT 384) 상에 스팟팅한다. 실온에서 결정화 후에, 플레이트를 aMALDI 질량 분석기에 도입하고 나서, 즉시 분석한다. 분석을 3회 반복한다. 단량체 항체, 항원, 항체와 항원/항체 복합체를 나타내는 피크를 예측한 분자량에서 검출한다.
이어서, 입체배좌적 결합에서 에피토프가 단백질분해에 의해 생성된 비구조화된 C1q 펩타이드와 경쟁하는지의 여부를 결정한다. 구체적으로는, 항-Siglec-5 세포외 도메인(ECD)/항체 복합체가 선형 펩타이드와 경쟁할 수 있는지를 결정하기 위해, 고정 펩신을 이용하여 Siglec-5 ECD 항원을 분해시킨다. 10μM의 농도를 갖는 25㎕의 항원을 고정된 펩신 5μM과 혼합하고 나서, 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 시간 후에, 샘플을 원심분리하고 나서, 상청액을 피펫팅한다. 단백질 분해의 완료를 선형 방식으로 고질량 MALDI(High-Mass MALDI) 질량분석법에 의해 제어한다. 1000 내지 3500 Da 범위에서 다량의 펩타이드를 얻기 위해 펩신 단백질 분해를 최적화한다. 다음에, 단백질 분해에 의해 생성된 5㎕의 항원 펩타이드를 5㎕의 항체(8μM)와 혼합하고 나서, 37℃에서 6시간 동안 인큐베이션시켰다. Siglec-5 항원 펩타이드와 함께 항체의 인큐베이션 후에, 5㎕의 혼합물을 5㎕의 무손상 Siglec-5 항원(4μM)과 혼합하고, 따라서 최종 혼합물은 2μM/2μM/2.5μM의 Siglec-5/항체/Siglec-5 항원 펩타이드를 함유한다. 표준 질소 레이저를 이용하고 0 내지 2000 kDa 범위의 상이한 질량에 중점을 두는 CovalX's HM3 상호작용 모듈을 이용하여 MALDI ToF MS 분석을 수행한다.
분석을 위해, 다음의 매개변수를 질량 분석기에 적용한다: 선형 및 양성 방식; 이온 공급원 1: 20㎸; 이온 공급원 2: 17㎸; 펄스 이온 추출: 400ns; HM3에 대해: 이득 전압: 3.14㎸; 이득 전압: 3.14㎸; 가속 전압: 20㎸. 기기를 교정하기 위해, 인슐린, BSA 및 IgG의 클러스터를 이용하는 외부 교정을 적용한다. 각각의 샘플에 대해, 3개의 스팟을 분석한다(스팟당 300회의 레이저 샷). 제시된 스펙트럼은 300회의 레이저 샷의 합에 대응한다. 복합체 추적기(Complex Tracker) 분석 소프트웨어 버전 2.0(코발엑스 인코포레이티드(CovalX Inc))을 이용하여 MS 데이터를 분석한다. 항-Siglec-5 항체에 대한 Siglec-5 결합에 대한 입체배좌적 에피토프를 동정하기 위해, (화학적 가교를 이용하여), 고질량 MALDI 질량분석법 및 nLCOrbitrap 질량분석법, 항원과 항체 사이의 상호작용으로, 계면 다음의 절차에 따른다. 5㎕의 샘플 항원(농도 4μM)을 최종 농도 2μM/2μM을 갖는 항체/항원 혼합을 얻기 위해 5㎕의 샘플 항체(농도 4μM)와 혼합한다. 혼합물을 37℃에서 180분 동안 인큐베이션시킨다. 제1 단계에서, 1㎎의 다이숙신이미딜수베레이트 H12(DSS-H12) 가교제를 1㎎의 다이숙신이미딜수베레이트 D12(DSS-D12) 가교제와 혼합한다. DSS H12/D12의 2㎎/㎖ 용액을 얻기 위해 제조한 2㎎를 1 ml의 DMF와 혼합하였다. 앞서 제조한 10㎕의 항체/항원 혼합물을 제조한 가교제 d0/d12(2 ㎎/㎖)의 1㎕의 용액과 혼합하였다. 가교 반응을 달성하기 위해 실온에서 180분 동안 용액을 인큐베이션시킨다.
단백질 분해를 용이하게 하기 위해, 단백질 중에 존재하는 이황화 결합을 감소시키는 것이 필요할 수 있다. 가교 샘플을 20㎕의 중탄산암모늄(25mM, pH 8.3)과 혼합한다. 혼합 후에, 2.5㎕의 DTT(500mM)를 용액에 첨가한다. 이어서, 혼합물을 1시간 동안 55℃에서 인큐베이션시킨다. 인큐베이션 후에, 2.5㎕의 아이오다이오아세트아마이드(1M)를 첨가한 후 암실 내 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시킨다. 인큐베이션 후에, 단백질 분해를 위해 사용한 120㎕의 완충제를 첨가함으로써 용액을 1/5로 희석시킨다. 145㎕의 환원/알킬 가교 샘플을 2㎕의 트립신(Sigma, T6567)과 혼합한다. 단백질 분해 혼합물을 밤새 37℃에서 인큐베이션시킨다. a-키모트립신 단백질 분해를 위해, 단백질 분해의 완충제는 트리스-HCL 100mM, CaCl2 10mM, pH 7.8이다. 145㎕의 환원/알킬 가교 복합체를 2㎕의 α-키모트립신 200μM과 혼합하고 나서, 밤새 30℃에서 인큐베이션시킨다. 이 분석을 위해, 오비트랩(Orbitrap) 질량분석법과 조합하여 nLC를 사용한다. 엑스퀘스트 버전 2.0(Xquest version 2.0) 및 스타브록스(stavrox) 소프트웨어를 이용하여 가교제 펩타이드를 분석한다. 이어서, 펩타이드 및 가교 아미노산을 동정한다.
실시예 11: 인간화된 항-Siglec-5 항체는 재조합 Siglec-5를 발현시키는 CHO 세포에 결합한다
다음의 연구는 재조합 Siglec-5 또는 재조합 Siglec-14를 발현시키는 CHO 세포 상에서 본 개시내용의 인간화된 항-Siglec-5 항체의 결합 동력학을 시험하였다.
본 개시내용의 다양한 항-Siglec-5 항체를 인간 Siglec-5(CHO-S5) 또는 인간 Siglec-14(CHO-S14)로 안정하게 형질감염시킨 CHO 세포에 결합하는 능력에 대해 평가하였다. 암실 내 얼음에서 세포를 항-Siglec-5 항체의 다양한 희석물과 함께 30분 동안 인큐베이션시킨 후에, 형광 접합된 항-인간 IgG 2차 항체와 함께 30분 인큐베이션시켰다. 이어서, FACS 완충제(PBS +2% FBS, 2mM EDTA) 중에서 세포를 2회 세척하고 나서, BD FACS 칸토 상에서 유세포 분석을 수행하였다. FlowJo 소프트웨어(오리건주 애슐랜드(Ashland))를 이용하여 데이터를 분석하였다. 이들 연구 결과를 도 9에 나타낸다. 도 9에서, hIgG1은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하며; S5-174-H2L1은 항체 S5-174-H3을 지칭하고; S5-174-H3L1은 항체 S5-174-H5를 지칭하며; S5-174-H3L2는 항체 S5-174-H6을 지칭하고; S5-174-H4L1은 항체 S5-174-H7을 지칭하며; S5-174-H4L2는 항체 S5-174-H8을 지칭하고; S5-G03-H2L1은 항체 S5-G-03-H4를 지칭하며; S5-G03-H2L2는 항체 S5-G-03-H5를 지칭하고; S5-G03-H3L1은 항체 S5-G-03-H7을 지칭하며; S5-G03-H3L2는 항체 S5-G-03-H8을 지칭하고; S5-G03-H3L3은 항체 S5-G-03-H9를 지칭한다.
도 9에 나타낸 바와 같이, 시험한 모든 인간화된 항-Siglec-5 항체는 CHO-S5 세포에 결합되었고; 시험한 인간화된 항-Siglec-5 항체 중 어느 것도 CHO-S14에 또는 대조군 CHO 세포에 결합되지 않았다. 인간화된 항-Siglec-5 항체는 모(비-인간화) 항-Siglec-5 항체를 이용하여 관찰된 것과 유사한 정도로 CHO-S5 세포에 결합되었다. 이들 결과는 본 개시내용의 인간화된 항-Siglec-5 항체가 Siglec-5에 결합하지만, 인간 Siglec-14에는 결합하지 않는다는 것을 나타내었다. 종합하면, 이들 결과는 본 개시내용의 인간화된 항-Siglec-5 항체가 Siglec-5에 대한 결합 특이성을 유지한다는 것을 나타내었다.
실시예 12: 인간화된 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 세포 표면 수준을 하향조절한다
다음의 연구는 본 개시내용의 인간화된 항-Siglec-5 항체가 시험관내 세포 상의 Siglec-5 세포 표면 수준을 감소시키는지의 여부를 시험하였다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체를 Siglec-5로 안정하게 형질감염된 CHO 세포(CHO-S5) 표면 상에서 Siglec-5 수준을 감소시키는 이들의 능력에 대해 시험하였다. CHO-S5 세포를 16 내지 24시간 동안 37℃에서 5% CO2와 함께 항-Siglec-5 항체와 함께 인큐베이션시키고, 이후에 Siglec-5의 세포 표면 발현을 FACS 분석에 의해 검출하였다. 세포를 암실에서 얼음 상에서 30분 동안 별개의 빈으로부터의 검출 항체인 항-Siglec-5-PE, 클론 1A5(Biolegend)과 함께 인큐베이션시켰다. FACS 완충제(PBS +2% FBS, 2mM EDTA) 중에서 세포를 2× 세척하고 나서, BD FACS 칸토 상에서 유세포 분석을 수행하였다. FlowJo 소프트웨어를 이용하여 데이터를 분석하였다. 다음의 식을 이용하여 남아있는 Siglec-5의 세포 표면 발현%를 계산하였다: (시험 항체의 존재 하의 1A5-PE의 MFI)/(시험 항체의 부재 하의 1A5-PE의 MFI)*100%.
이들 연구 결과를 도 10에 나타낸다. 도 10에서, hIgG1은 아이소타입 대조군 항체를 지칭하며; S5-174-H2L1은 항체 S5-174-H3을 지칭하고; S5-174-H3L1은 항체 S5-174-H5를 지칭하며; S5-174-H3L2는 항체 S5-174-H6을 지칭하고; S5-174-H4L1은 항체 S5-174-H7을 지칭하며; S5-174-H4L2는 항체 S5-174-H8을 지칭하고; S5-G03-H2L1은 항체 S5-G-03-H4를 지칭하며; S5-G03-H2L2는 항체 S5-G-03-H5를 지칭하고; S5-G03-H3L1은 항체 S5-G-03-H7을 지칭하며; S5-G03-H3L2는 항체 S5-G-03-H8을 지칭하고; S5-G03-H3L3은 항체 S5-G-03-H9를 지칭한다. 도 10에 나타난 바와 같이, 본 개시내용의 인간화된 항-Siglec-5 항체는 본래의 모 항-Siglec-5 항체에 대해 비슷한 정도로 CHO Siglec-5 세포 표면 상의 Siglec-5 수준을 감소시켰다.
실시예 13: 항-Siglec-5 항체는 CD86 및 CCL4 발현을 유도한다.
본 개시내용의 항-Siglec-5 항체는 1차 인간 골수 유래 억제 세포(MDSC) 표면 상에서 CD86을 증가시키는 능력에 대해 추가로 평가하였다. 간단하게, 단핵구를 2명의 건강한 인간 공여자로부터 얻은 신선한 혈액으로부터 단리시켰고, 7일 동안 0.1㎍/㎖ rHuGM-CSF 및 rHuIL-6를 이용하여 대식세포로 분화시켰다. 제7일에, MDSC를 항-Siglec-5 항체(다양한 농도, 최대 10㎍/㎖)로 48시간 동안 처리하고, 이 후에 항-CD86(IT2.2) 항체를 이용하여 MDSC 상의 전염증 마커인 CD86의 발현을 정량화하였다.
이들 연구 결과를 도 11(CD86) 및 도 12(CCL4)에 나타낸다. 도 11 및 도 12에서, S5-174-H3L2는 항체 S5-174-H6을 지칭하고; S5-G03-H3L1은 항체 S5-G-03-H7을 지칭하며; S5-7A5.3 및 S5-8A1.3은 각각 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 항체 7A5 및 8A1을 지칭한다.
도 11에 나타낸 바와 같이, 항-Siglec-5 항체 S5-G-03-H7은 MDSC에서 CD86의 발현을 유도하였다. 추가로, 48시간의 항체 처리 후에 조건화된 배지를 NK 세포, 단핵구 및 기타 면역 세포에 대한 화학주성인자인 CCL4의 발현 변화에 대해 평가하였다. Quantikine ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하여 또는 인간 케모카인 Legendplex(Biolegend)에 의해 제조업자의 프로토콜에 따라 CCL4 발현을 측정하였다. 이들 연구 결과를 도 12에 나타낸다. 도 12에 나타낸 바와 같이, 항-Siglec-5 항체 S5-G-03-H7은 또한 이들 세포에서의 CCL4 발현을 유도하였다.
별개 시리즈의 실험에서, 상기 기재한 것과 유사한 프로토콜을 이용하여 MDSC 상의 이들의 활성에 대해 추가적인 항-Siglec-5 항체를 시험하였다. 이들 연구 결과를 도 13 및 도 14에 나타낸다. 도 13 및 도 14에서, S5-7A5.3 및 S5-8A1.3은 각각 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 항체 7A5 및 8A1을 지칭하고; S5-1A5는 Siglec-5와 Siglec-14(BioLegend) 둘 다에 결합하는 항체이다.
도 13 및 도 14에 나타낸 바와 같이, 항-Siglec-5 항체 S5-G10은 각각 CD86 및 CCL4의 발현을 유도한 반면, 다른 항-Siglec 5 또는 다른 항-Siglec 5/14 항체는 효과가 없었다. CD86 및 CCL4 발현에 대한 S5-G10의 효과는 S5-G10의 에피토프 빈과 연관된 독특한 특성으로 인한 것일 수 있었다.
실시예 14: 항-Siglec-5 항체 에피토프
본 개시내용의 Siglec-5 항체를 전체 인간 Siglec-5 세포외 도메인에 걸쳐 있는 15 또는 25량체 펩타이드에 결합하는 능력에 대해 시험하였다. Siglec-5 항체를 또한 그들의 Siglec-5 결합 영역을 결정함으로써 기준 Siglec-5 항체와 비교하였다.
항체의 에피토프 비닝을 BiaCore T200 기기 상에서 수행하였다. 비아코어 T200 평가 소프트웨어, 버전 2.0을 이용하여 데이터 분석을 수행하였다. HBS-EP+(10mM HEPES, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20, pH 7.4)를 실행 완충제로서 그리고 시약을 준비하는데 사용하였다. 항-인간 Fc IgG를 고정시킨 CM5 센서 칩(GE Healthcare) 상에서 인간 Siglec-5, Fc 키메라(10nM; R&D Systems)를 포획하였다(60s 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 0 s 안정화 시간). 이어서, 샘플 마우스 항-Siglec 5 항체(100nM)를 포획된 Siglec 5 표면(60s 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 0s 해리 시간), 다음에 기준 마우스 항-Siglec 5 항체(100nM, 60s 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 30s 해리 시간)에 대해 유동시켰다. 10mM 글리신-HCl, pH 1.7를 이용하여 주기 사이에서 칩 표면을 재생하였다(60초 접촉 시간, 30㎕/분 유속, 60초 안정화 시간). 블랭크 유동 세포 상에서 수행한 측정으로부터의 반응 차이로서 얻어진 SPR 신호를 얻었다. 0-리간드 대조군(0nM 항원 + 100nM IgG)은 센서 칩 표면에 대한 항체의 유의한 비특이적 결합을 나타내지 않았다.
선형 15-량체 펩타이드를 14개의 잔기 중복을 갖는 인간 Siglec-5(서열번호 1)에 기반하여 합성하였다. 추가로, 선형 25-량체 펩타이드를 단일 잔기 이동을 갖는 인간 Siglec-5의 서열(서열번호 1)에 기반하여 합성하였다. 각각의 합성된 펩타이드에 대한 Siglec-5 항체의 결합을 ELISA 기반 방법에서 시험하였다. 이 분석에서, 펩타이드 어레이를 1차 항체 용액(4℃에서 밤새)과 함께 인큐베이션시켰다. 세척 후에, 펩타이드 어레이를 항체 페록시다제 접합체(SBA, cat. nr. 2010-05)의 1/1000 희석물과 함께 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 세척 후에, 페록시다제 기질 2,2'-아지노-다이-3-에틸벤즈티아졸린 설포네이트(ABTS) 및 2㎕/㎖의 3% H2O2를 첨가하였다. 1시간 후에, 색상 전개를 측정하였다. 색상 전개를 전하결합소자(charge coupled device: CCD) 카메라 및 화상 처리 시스템을 이용하여 정량화하였다.
대안적으로, 표적 모듈의 에피토프를 재구성하기 위해, 루프 및 조합 펩타이드의 라이브러리를 합성하였다. 등록상표가 붙은 친수성 중합체 제형과 접합시킨 다음에 다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC)와 함께 N-하이드록시벤조트라이아졸(HOBt)을 이용하는 t-뷰틸옥시카본일-헥사메틸렌다이아민(BocHMDA)과의 반응 및 트라이플루오로아세트산(TFA)을 이용하는 Boc-기의 후속적 절단에 의해 아미노 작용화된 폴리프로필렌 지지체를 얻었다. 표준 Fmoc-펩타이드 합성을 사용하여 관례적으로 변형된 JANUS 액체 조절 스테이션(퍼킨 엘머(Perkin Elmer))에 의해 아미노-작용화된 고체 지지체 상의 펩타이드를 합성하였다.
펩스캔(Pepscan)의 등록상표인 스캐폴드 상에 화학적으로 연결된 펩타이드(Chemically Linked Peptides on Scaffold: CLIPS) 기법을 이용하여 구조적 모방체의 합성을 행하였다. CLIPS 기법은 펩타이드를 단일 루프 및 이중 루프 내로 구조화하도록 허용한다. CLIPS 주형을 시스테인 잔기에 결합시킨다. 펩타이드 내 다중 시스테인의 측쇄를 1 또는 2개의 CLIPS 주형에 결합시킨다. 예를 들어, mP2 CLIPS(2,6-비스(브로모메틸)피리딘)의 0.5mM 용액을 중탄산암모늄(20mM, pH 7.8)/아세토나이트릴(1:3(v/v)) 중에 용해시킨다. 이 용액을 펩타이드 어레이 상에 첨가한다. CLIPS 주형을 펩타이드 어레이의 고체상 결합 펩타이드(3㎕ 웰을 갖는 455 웰 플레이트)에서 존재하는 2개의 시스테인의 측쇄에 결합할 것이다. 30 내지 60분 동안 용액 중에서 펩타이드 어레이를 부드럽게 진탕시키는 한편, 용액 중에서 완전히 뒤덮는다. 최종적으로, 펩타이드 어레이를 과량의 H2O로 광범위하게 세척하고, 70℃에서 30분 동안 PBS(pH 7.2) 중의 1% SDS/0.1% β-머캅토에탄올을 함유하는 파괴-완충제 중에서 음파 처리하여, 다른 45분 동안 H2O 중에서 음파 처리하였다. 이제 3개의 시스테인을 이용하는 것을 제외하고 유사한 방식으로, 펩타이드를 운반하는 T3 CLIPS(2,4,6-트리스(브로모메틸)피리딘)을 생성하였다.
루프 펩타이드: 길이 17의 제한된 펩타이드. 위치 2 내지 16은 표적 서열로부터 유래된 15-량체이다. 천연 Cys 잔기를 아세트아미도메틸기(ACM)에 의해 보호한다. 위치 1 및 17은 mP2 CLIPS 모이어티에 의해 연결되는 Cys이다. 조합 펩타이드(불연속 모방체): 길이 33의 제한된 펩타이드. 위치 2 내지 16 및 18 내지 32는 ACM에 의해 보호된 천연 Cys 잔기를 갖는 표적 서열로부터 유래된 15량체 펩타이드이다. 위치 1, 17 및 33은 T3 CLIPS 모이어티에 의해 연결된 Cys이다.
각각의 합성된 펩타이드에 대한 항체의 결합을 PEPSCAN-기반 ELISA에서 시험한다. 펩타이드 어레이를 시험 항체 및 차단 용액(예를 들어, 4% 말 혈청, PBS/1% 트윈80 중의 5% 오브알부민(w/v))의 실험적으로 최적화된 농도로 구성된 시험 항체 용액과 함께 인큐베이션시킨다. 펩타이드 어레이를 4℃에서 밤새 시험 항체 용액과 함께 인큐베이션시킨다. 세척 완충제(1×PBS, 0.05% 트윈80)을 이용하는 광범위 세척 후에, 펩타이드 어레이를 25℃에서 1시간 동안 적절한 항체 페록시다제 접합체의 1/1000 희석물과 함께 인큐베이션시킨다. 세척 완충제를 이용하는 세척 후에, 페록시다제 기질 2,2'-아지노-다이-3- 에틸벤즈티아졸린 설포네이트(ABTS) 및 2㎕/㎖의 3% H2O2를 첨가한다. 1시간 후에, 색상 전개를 측정한다. 색상 전개를 전하결합소자(CCD) 카메라 및 화상 처리 시스템을 이용하여 정량화한다.
이하의 표 10에 나타내는 바와 같이, 항체 S5-G-10, S5-G-07, S5-PN202, S5/14 C2, S5/14-8A1.3, S5/14-REA383은 Siglec-5의 세포외 도메인(IgV 도메인을 포함하고, 제2 Ig-유사 C2-형 도메인에 근위임) 내에서 선형 펩타이드에 대해 강한 결합을 나타내었다. 표 10에 나타낸 바와 같이, 항체 S5/14-REA383에 의해 인식되는 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 잔기 73 내지 88에 대응하고, PETQGRF(서열번호 224)의 아미노산 서열을 가진다. 항체 S5/14-8A1.3에 의해 인식되는 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 잔기 28 내지 42에 대응하고, 아미노산 서열 PCSFSYPWRSWYSS(서열번호 223)를 가진다. 항체 S5/14-C2에 의해 인식되는 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 잔기 136 내지 142에 대응하고, 아미노산 서열 DIHFLEP(서열번호 222)를 가진다.
항-Siglec-5 항체 S5-PN 202에 의해 인식된 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278에 대응하고, 아미노산 서열 LSWFQGSPALN(서열번호 221)을 가진다. 항-Siglec-5 항체 S5-G-07에 의해 인식되는 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 잔기 226 내지 244에 대응하고, 아미노산 서열 QTITIFRNGIALEILQNTS(서열번호 220)를 가진다. 항-Siglec-5 항체 S5-G-10에 의해 인식된 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238에 대응하고, 아미노산 서열 ITIFRNGIALE(서열번호 219)를 가진다. 종합하면, 이들 결과는 본 개시내용의 Siglec-5 특이적 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5와 Siglec-14 둘 다에 결합하는 항체의 Siglec-5 내의 영역과 별개인 Siglec-5 내 영역에 결합한다는 것을 나타낸다.
Figure pct00037
Figure pct00038
SEQUENCE LISTING <110> Alector LLC <120> ANTI-SIGLEC-5 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> WO/2020/023920 <140> PCT/US2019/043758 <141> 2019-07-26 <150> US 62/711,405 <151> 2018-07-27 <160> 225 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 551 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Leu Pro Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Gly Gly Ser Leu Gln 1 5 10 15 Glu Lys Pro Val Tyr Glu Leu Gln Val Gln Lys Ser Val Thr Val Gln 20 25 30 Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Ser Phe Ser Tyr Pro Trp Arg 35 40 45 Ser Trp Tyr Ser Ser Pro Pro Leu Tyr Val Tyr Trp Phe Arg Asp Gly 50 55 60 Glu Ile Pro Tyr Tyr Ala Glu Val Val Ala Thr Asn Asn Pro Asp Arg 65 70 75 80 Arg Val Lys Pro Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Val 85 90 95 Gln Lys Lys Asn Cys Ser Leu Ser Ile Gly Asp Ala Arg Met Glu Asp 100 105 110 Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Val Glu Arg Gly Arg Asp Val Lys Tyr 115 120 125 Ser Tyr Gln Gln Asn Lys Leu Asn Leu Glu Val Thr Ala Leu Ile Glu 130 135 140 Lys Pro Asp Ile His Phe Leu Glu Pro Leu Glu Ser Gly Arg Pro Thr 145 150 155 160 Arg Leu Ser Cys Ser Leu Pro Gly Ser Cys Glu Ala Gly Pro Pro Leu 165 170 175 Thr Phe Ser Trp Thr Gly Asn Ala Leu Ser Pro Leu Asp Pro Glu Thr 180 185 190 Thr Arg Ser Ser Glu Leu Thr Leu Thr Pro Arg Pro Glu Asp His Gly 195 200 205 Thr Asn Leu Thr Cys Gln Met Lys Arg Gln Gly Ala Gln Val Thr Thr 210 215 220 Glu Arg Thr Val Gln Leu Asn Val Ser Tyr Ala Pro Gln Thr Ile Thr 225 230 235 240 Ile Phe Arg Asn Gly Ile Ala Leu Glu Ile Leu Gln Asn Thr Ser Tyr 245 250 255 Leu Pro Val Leu Glu Gly Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Asp Ala Pro 260 265 270 Ser Asn Pro Pro Ala His Leu Ser Trp Phe Gln Gly Ser Pro Ala Leu 275 280 285 Asn Ala Thr Pro Ile Ser Asn Thr Gly Ile Leu Glu Leu Arg Arg Val 290 295 300 Arg Ser Ala Glu Glu Gly Gly Phe Thr Cys Arg Ala Gln His Pro Leu 305 310 315 320 Gly Phe Leu Gln Ile Phe Leu Asn Leu Ser Val Tyr Ser Leu Pro Gln 325 330 335 Leu Leu Gly Pro Ser Cys Ser Trp Glu Ala Glu Gly Leu His Cys Arg 340 345 350 Cys Ser Phe Arg Ala Arg Pro Ala Pro Ser Leu Cys Trp Arg Leu Glu 355 360 365 Glu Lys Pro Leu Glu Gly Asn Ser Ser Gln Gly Ser Phe Lys Val Asn 370 375 380 Ser Ser Ser Ala Gly Pro Trp Ala Asn Ser Ser Leu Ile Leu His Gly 385 390 395 400 Gly Leu Ser Ser Asp Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Trp Asn Ile Tyr 405 410 415 Gly Ser Gln Ser Gly Ser Val Leu Leu Leu Gln Gly Arg Ser Asn Leu 420 425 430 Gly Thr Gly Val Val Pro Ala Ala Leu Gly Gly Ala Gly Val Met Ala 435 440 445 Leu Leu Cys Ile Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Leu Ile Val Lys Ala 450 455 460 Arg Arg Lys Gln Ala Ala Gly Arg Pro Glu Lys Met Asp Asp Glu Asp 465 470 475 480 Pro Ile Met Gly Thr Ile Thr Ser Gly Ser Arg Lys Lys Pro Trp Pro 485 490 495 Asp Ser Pro Gly Asp Gln Ala Ser Pro Pro Gly Asp Ala Pro Pro Leu 500 505 510 Glu Glu Gln Lys Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Ser Phe Ser Glu Met 515 520 525 Lys Ser Arg Glu Pro Lys Asp Gln Glu Ala Pro Ser Thr Thr Glu Tyr 530 535 540 Ser Glu Ile Lys Thr Ser Lys 545 550 <210> 2 <211> 601 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 2 Met Pro Lys Phe Ser Phe Cys Leu Gln Pro Gln Phe Ser Leu Thr His 1 5 10 15 Arg Leu Pro Val Gly Ala Ser Ser Ala Pro Pro His Ile Trp Gly Ile 20 25 30 Ser Phe Pro Asp Arg Gly Thr Trp Asp Arg Ala Gly Ala Leu Ala Asp 35 40 45 Gly Asp Met Leu Ala Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Gly Gly Ser 50 55 60 Leu Gln Glu Lys Pro Gly Tyr Glu Leu Gln Val Gln Lys Ser Val Thr 65 70 75 80 Val Gln Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Ser Phe Ser Tyr Pro 85 90 95 Gly Asn Ser Trp Tyr Ser Pro Ser Pro Leu Tyr Val Tyr Trp Phe Pro 100 105 110 Asn Gly Glu Ser Pro Tyr Phe Gly Glu Pro Val Ala Thr Asn Asn Pro 115 120 125 Asn Arg Lys Val Lys Ser Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly 130 135 140 Asp Val Trp Lys Lys Asn Cys Ser Leu Ser Ile Gly Asp Ala Arg Met 145 150 155 160 Gly Asp Thr Gly Asn Tyr Tyr Phe Arg Val Glu Arg Gly Arg Asn Val 165 170 175 Lys Tyr Thr Tyr Leu Gln Asn Lys Leu Asn Leu Glu Val Thr Ala Leu 180 185 190 Thr Glu Lys Pro Asp Val His Phe Leu Glu Pro Leu Glu Ser Gly Arg 195 200 205 Pro Thr Arg Leu Ser Cys Ser Leu Pro Gly Ser Cys Glu Ala Gly Arg 210 215 220 Pro Leu Thr Phe Ser Trp Thr Gly Asp Val Leu Ser Pro Leu Asp Pro 225 230 235 240 Glu Thr Thr Gly Ser Ser Glu Leu Thr Leu Thr Pro Arg Pro Glu Asp 245 250 255 His Gly Thr Asn Leu Thr Cys His Val Lys Arg Gln Gly Ala Gln Val 260 265 270 Thr Thr Glu Arg Thr Val Gln Leu Asn Val Ser Tyr Ala Pro Gln Asn 275 280 285 Ile Thr Ile Phe Arg Asn Gly Thr Ala Leu Glu Ile Leu His Asn Thr 290 295 300 Ser Thr Leu Leu Val Leu Glu Gly Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Glu 305 310 315 320 Ala Pro Ser Asn Pro Pro Ala His Leu Ser Trp Phe Gln Ala Ser Ser 325 330 335 Ala Pro Asn Ala Thr Pro Ile Ala Asp Thr Gly Ile Leu Glu Leu Pro 340 345 350 Arg Val Glu Phe Ala Lys Glu Gly Val Phe Thr Cys His Ala Gln His 355 360 365 Pro Leu Gly Ser Leu His Ile Phe Leu Asn Leu Ser Val Tyr Ser Leu 370 375 380 Pro Gln Leu Leu Gly Pro Ser Cys Ser Trp Glu Ala Glu Ser Leu His 385 390 395 400 Cys Ser Cys Ser Phe Arg Ala Trp Pro Ala Pro Ser Leu Cys Trp Trp 405 410 415 Leu Gly Glu Lys Pro Leu Glu Gly Asn Ser Ser Gln Gly Ser Phe Lys 420 425 430 Val Asn Ser Ser Ser Ala Gly Leu Trp Ala Asn Ser Ser Leu Ile Leu 435 440 445 His Gly Gly Leu Thr Ser Gly Leu Lys Val Ser Cys Lys Gly Trp Asn 450 455 460 Thr Tyr Gly Ser Gln Ser Asp Ser Val Val Leu Leu Gln Gly Arg Leu 465 470 475 480 Asn Leu Arg Thr Gly Val Val Pro Ala Ala Leu Gly Gly Ala Gly Val 485 490 495 Met Ala Leu Leu Cys Ile Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Leu Ile Val 500 505 510 Lys Val Arg Arg Lys Gln Ala Ala Gly Arg Pro Glu Lys Met Asp Asp 515 520 525 Glu Asp Pro Ile Met Gly Thr Val Ser Trp Asp Ser Arg Lys Lys Pro 530 535 540 Trp Pro Asp Ser Pro Gly Asp Gln Ala Ser Pro Ala Gly Asp Thr Pro 545 550 555 560 Pro Leu Gly Glu Gln Gln Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Ser Phe Ser 565 570 575 Glu Met Lys Ser Arg Glu Pro Lys Asp Gln Glu Ala Pro Ser Thr Thr 580 585 590 Glu Tyr Ser Glu Val Lys Thr Asn Lys 595 600 <210> 3 <211> 395 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Leu Pro Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Gly Gly Ser Leu Gln 1 5 10 15 Glu Lys Pro Val Tyr Glu Leu Gln Val Gln Lys Ser Val Thr Val Gln 20 25 30 Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Ser Phe Ser Tyr Pro Trp Arg 35 40 45 Ser Trp Tyr Ser Ser Pro Pro Leu Tyr Val Tyr Trp Phe Arg Asp Gly 50 55 60 Glu Ile Pro Tyr Tyr Ala Glu Val Val Ala Thr Asn Asn Pro Asp Arg 65 70 75 80 Arg Val Lys Pro Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Val 85 90 95 Gln Lys Lys Asn Cys Ser Leu Ser Ile Gly Asp Ala Arg Met Glu Asp 100 105 110 Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Val Glu Arg Gly Arg Asp Val Lys Tyr 115 120 125 Ser Tyr Gln Gln Asn Lys Leu Asn Leu Glu Val Thr Ala Leu Ile Glu 130 135 140 Lys Pro Asp Ile His Phe Leu Glu Pro Leu Glu Ser Gly Arg Pro Thr 145 150 155 160 Arg Leu Ser Cys Ser Leu Pro Gly Ser Cys Glu Ala Gly Pro Pro Leu 165 170 175 Thr Phe Ser Trp Thr Gly Asn Ala Leu Ser Pro Leu Asp Pro Glu Thr 180 185 190 Thr Arg Ser Ser Glu Leu Thr Leu Thr Pro Arg Pro Glu Asp His Gly 195 200 205 Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Arg Gln Gly Ala Gln Val Thr Thr 210 215 220 Glu Arg Thr Val Gln Leu Asn Val Ser Tyr Ala Pro Gln Asn Leu Ala 225 230 235 240 Ile Ser Ile Phe Phe Arg Asn Gly Thr Gly Thr Ala Leu Arg Ile Leu 245 250 255 Ser Asn Gly Met Ser Val Pro Ile Gln Glu Gly Gln Ser Leu Phe Leu 260 265 270 Ala Cys Thr Val Asp Ser Asn Pro Pro Ala Ser Leu Ser Trp Phe Arg 275 280 285 Glu Gly Lys Ala Leu Asn Pro Ser Gln Thr Ser Met Ser Gly Thr Leu 290 295 300 Glu Leu Pro Asn Ile Gly Ala Arg Glu Gly Gly Glu Phe Thr Cys Arg 305 310 315 320 Val Gln His Pro Leu Gly Ser Gln His Leu Ser Phe Ile Leu Ser Val 325 330 335 Gln Arg Ser Ser Ser Ser Cys Ile Cys Val Thr Glu Lys Gln Gln Gly 340 345 350 Ser Trp Pro Leu Leu Thr Leu Ile Arg Gly Ala Leu Met Gly Ala Gly 355 360 365 Phe Leu Leu Thr Tyr Gly Leu Thr Trp Ile Tyr Tyr Thr Arg Cys Gly 370 375 380 Gly Pro Gln Gln Ser Arg Ala Glu Arg Pro Gly 385 390 395 <210> 4 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Asp or Glu <220> <221> VARIANT <222> 2, 3 <223> Xaa = Any Amino Acid, and up to 2 can be present or absent <220> <221> VARIANT <222> 5, 6 <223> Xaa = Any Amino Acid <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 18 <223> Xaa = Any Amino Acid, and up to 2 can be present or absent <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = Leu or Ile <400> 4 Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 5 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr 20 25 30 <210> 6 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 7 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr 20 25 30 <210> 8 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr 20 25 30 <210> 9 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 10 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Val Thr 20 25 30 <210> 11 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Leu Thr 20 25 30 <210> 12 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 13 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 13 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 14 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr 20 25 30 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr 20 25 30 <210> 16 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 17 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 <210> 18 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 18 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 19 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 19 Glu Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 20 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 20 Asp Tyr Asn Met Tyr 1 5 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 21 Asn Tyr Trp Met His 1 5 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 23 Asp Tyr Asn Ile Tyr 1 5 <210> 24 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 Ser Tyr Trp Leu His 1 5 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 25 Ser Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 Thr Tyr Gly Met Ser 1 5 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 27 Ser Tyr Thr Met Tyr 1 5 <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Glu Tyr Thr Ile His 1 5 <210> 29 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 29 Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 30 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 30 Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 <210> 31 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 31 Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 32 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly 1 5 10 <210> 33 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 33 Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val Ala 1 5 10 <210> 34 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 34 Trp Val Lys Gln Arg Ser Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 35 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 35 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 36 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 <210> 37 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 37 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 38 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val Ala 1 5 10 <210> 39 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 39 Tyr Ile Asp Ser Tyr Asn Gly Gly Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 40 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 Glu Ile Asp Pro Ser Asp Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Gln Asn Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 41 Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 42 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 42 Tyr Phe Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 43 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 43 Met Ile His Pro Asn Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Arg Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 44 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 44 Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Asp Leu Ile Ser 1 5 10 15 <210> 45 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 45 Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile Ser 1 5 10 15 <210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 46 Thr Ile Asn Ser Asn Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 47 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 47 Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 48 Trp Phe Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 49 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 49 Tyr Ile Asp Ser Tyr Asn Gly Gly Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 50 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 50 Glu Ile Asp Pro Ser Asp Gly Tyr Val Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 51 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 51 Thr Ile Asn Ser Asn Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 52 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 52 Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met His 1 5 10 15 Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 53 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 53 Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly 20 25 30 <210> 54 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 54 Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Val Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Pro 20 25 30 <210> 55 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 55 Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln 1 5 10 15 Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 56 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 56 Lys Ala Thr Leu Ile Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 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<220> <223> Synthetic Construct <400> 205 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Phe Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 206 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 206 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Phe Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 207 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 207 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 208 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 208 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 209 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 209 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 210 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 210 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 211 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 211 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 212 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 212 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Thr Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 213 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 213 Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Tyr Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Thr Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Phe Tyr Gly Phe Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Ser 100 105 110 Leu Val Ala Val Ser Ala 115 <210> 214 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 214 Asp Ile Val Met Ile Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 215 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 215 Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Tyr Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys 85 90 95 Ala Phe Tyr Tyr Gly Tyr Tyr Gly Val Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 216 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 216 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Tyr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 217 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 217 Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asn Ile Tyr Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Thr Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Met Lys Val Gly Tyr Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 218 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 218 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 100 105 110 <210> 219 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 219 Ile Thr Ile Phe Arg Asn Gly Ile Ala Leu Glu 1 5 10 <210> 220 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 220 Gln Thr Ile Thr Ile Phe Arg Asn Gly Ile Ala Leu Glu Ile Leu Gln 1 5 10 15 Asn Thr Ser <210> 221 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 221 Leu Ser Trp Phe Gln Gly Ser Pro Ala Leu Asn 1 5 10 <210> 222 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 222 Asp Ile His Phe Leu Glu Pro 1 5 <210> 223 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 223 Pro Cys Ser Phe Ser Tyr Pro Trp Arg Ser Trp Tyr Ser Ser 1 5 10 <210> 224 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 224 Pro Glu Thr Gln Gly Arg Phe 1 5 <210> 225 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 225 Gly Gly Cys Cys Cys Cys 1 5

Claims (93)

  1. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고, 상기 항체는 Siglec-14에 결합하지 않는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  2. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키고, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5와 하나 이상의 Siglec-5 리간드 사이의 상호작용을 저해하지 않는, 항-Siglec-5 항체.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5의 세포 표면 수준을 감소시키거나, Siglec-5의 세포 내 수준을 감소시키거나, Siglec-5의 총 수준을 감소시키거나, 또는 이들의 임의의 조합인, 항-Siglec-5 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5 분해, Siglec-5 절단, Siglec-5 내재화, Siglec-5 쉐딩(shedding), Siglec-5 발현의 하향조절, 또는 이들의 임의의 조합을 유도하는, 항-Siglec-5 항체.
  6. 제1항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 생체내 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는, 항-Siglec-5 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 호중구에서 활성 산소종(reactive oxygen species: ROS) 생산을 유도하는, 항-Siglec-5 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 호중구에서 호중구 세포외 트랩(neutrophil extracellular trap: NET) 형성을 유도하는, 항-Siglec-5 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 대식세포에서 식세포작용 활성을 증가시키는, 항-Siglec-5 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CD86의 발현을 증가시키는, 항-Siglec-5 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 골수 유래 억제 세포에서 CCL4의 발현을 증가시키는, 항-Siglec-5 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 하나 이상의 Siglec-5 활성을 저해하는, 항-Siglec-5 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Siglec-5의 세포 수준은 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, 대식세포, 호중구, B 세포 및 NK 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 1차 세포 상에서 또는 세포주 상에서 측정되되, 상기 Siglec-5의 세포 수준은 시험관내 세포 분석을 이용하여 측정되는, 항-Siglec-5 항체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec5에 대한 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 경쟁하는, 항-Siglec-5 항체.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기, 서열번호 1의 아미노산 잔기 226 내지 244 또는 서열번호 1 아미노산 잔기 226 내지 244에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기, 및 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합하는, 항-Siglec-5 항체.
  16. 제1항 내지 제15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 LSWFQGSPALN(서열번호 221), 아미노산 서열 QTITIFRNGIALEILQNTS(서열번호 220), 및 아미노산 서열 ITIFRNGIALE(서열번호 219)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합하는, 항-Siglec-5 항체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인, 상기 중쇄 가변 도메인, 또는 둘 다는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 HVR을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  18. 제17항에 있어서,
    (a) 상기 HVR-L1은 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
    (b) 상기 HVR-L2는 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며;
    (c) 상기 HVR-L3은 서열번호 153 내지 163으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
    (d) 상기 HVR-H1은 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며;
    (e) 상기 HVR-H2는 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며;
    (f) 상기 HVR-H3은 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서,
    (a) 상기 HVR-L1은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고;
    (b) 상기 HVR-L1은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 128의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 21의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고;
    (c) 상기 HVR-L1은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 129의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고;
    (d) 상기 HVR-L1은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 23의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 342의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하고;
    (e) 상기 HVR-L1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 130의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 24의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하고;
    (f) 상기 HVR-L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 131의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 25의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고;
    (g) 상기 HVR-L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고;
    (h) 상기 HVR-L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 132의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 25의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하고;
    (i) 상기 HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 133의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 26의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고;
    (j) 상기 HVR-L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 134의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 27의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고;
    (k) 상기 HVR-L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 135의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 28의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하고;
    (l) 상기 HVR-L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고;
    (m) 상기 HVR-L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 128의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 21의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고; 또는
    (n) 상기 HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 133의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 26의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  20. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은,
    (a) 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1;
    (b) 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및
    (c) 서열번호 153 내지 163로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 153 내지 163으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고,
    상기 중쇄 가변 도메인은
    (a) 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1;
    (b) 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및
    (c) 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  21. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194 내지 211로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및/또는 서열번호 174 내지 193으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  22. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 경쇄 가변 도메인, 및/또는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  23. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인, 상기 중쇄 가변 도메인, 또는 둘 다는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 HVR을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  24. 제23항에 있어서,
    (a) 상기 HVR-L1은 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
    (b) 상기 HVR-L2는 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며;
    (c) 상기 HVR-L3은 서열번호 153 내지 163으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고;
    (d) 상기 HVR-H1은 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며;
    (e) 상기 HVR-H2는 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하며;
    (f) 상기 HVR-H3은 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서,
    (a) 상기 HVR-L1은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고;
    (b) 상기 HVR-L1은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 128의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 21의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고;
    (c) 상기 HVR-L1은 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 129의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 22의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고;
    (d) 상기 HVR-L1은 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 23의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하고;
    (e) 상기 HVR-L1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 130의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 24의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하고;
    (f) 상기 HVR-L1은 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 131의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 25의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하고;
    (g) 상기 HVR-L1은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고;
    (h) 상기 HVR-L1은 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 132의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 25의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하고;
    (i) 상기 HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 133의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 26의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하고;
    (j) 상기 HVR-L1은 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 134의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 27의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하고;
    (k) 상기 HVR-L1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 135의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 28의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하고;
    (l) 상기 HVR-L1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 127의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 20의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하고;
    (m) 상기 HVR-L1은 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 128의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 21의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하고; 또는
    (n) 상기 HVR-L1은 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-L2는 133의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-L3은 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H1은 26의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HVR-H2는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HVR-H3은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  26. 제24항 또는 제25 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은,
    (a) 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1;
    (b) 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및
    (c) 서열번호 153 내지 163로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 153 내지 163으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고,
    상기 중쇄 가변 도메인은
    (a) 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1;
    (b) 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및
    (c) 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  27. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 서열번호 194 내지 211로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및/또는 서열번호 174 내지 193으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  28. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 경쇄 가변 도메인; 및/또는 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  29. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 Siglec-5에 대한 결합에 대해 S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8, 및 S5-G-03-H9, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 경쟁하는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  30. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, S5-172, S5-174, S5-175, S5-176, S5-182, S5-183, S5-190, S5-202, S5-G-03, S5-G-07, S5-G-10, S5-172-H1, S5-172-H2, S5-172-H3, S5-172-H4, S5-172-H5, S5-172-H6, S5-174-H1, S5-174-H2, S5-174-H3, S5-174-H4, S5-174-H5, S5-174-H6, S5-174-H7, S5-174-H8, S5-G-03-H1, S5-G-03-H2, S5-G-03-H3, S5-G-03-H4, S5-G-03-H5, S5-G-03-H6, S5-G-03-H7, S5-G-03-H8 및 S5-G-03-H9로 이루어진 군으로부터 선택된 단클론성 항체와 본질적으로 동일한 Siglec-5 에피토프에 결합하는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  31. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 268 내지 278에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기, 서열번호 1의 아미노산 잔기 226 내지 244 또는 서열번호 1 아미노산 잔기 226 내지 244에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기, 및 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기 228 내지 238에 대응하는 Siglec-5 단백질 상의 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합하는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  32. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 아미노산 서열 LSWFQGSPALN(서열번호 221), 아미노산 서열 QTITIFRNGIALEILQNTS(서열번호 220), 및 아미노산 서열 ITIFRNGIALE(서열번호 219)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산 잔기에 결합하는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  33. 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체로서, 상기 항-Siglec-5 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 상기 경쇄 가변 도메인은,
    (a) 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 103 내지 115로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1;
    (b) 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 127 내지 135로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및
    (c) 서열번호 153 내지 163로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 153 내지 163으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하고,
    상기 중쇄 가변 도메인은,
    (a) 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 20 내지 28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1;
    (b) 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 39 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및
    (c) 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 70 내지 79로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는, 단리된 단클론성 항-Siglec-5 항체.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG 부류, IgM 부류 또는 IgA 부류인, 항-Siglec-5 항체.
  35. 제34항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 갖는, 항-Siglec-5 항체.
  36. 제35 항에 있어서, 상기 항체는 저해 Fc 수용체에 결합하는, 항-Siglec-5 항체.
  37. 제36항에 있어서, 상기 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)인, 항-Siglec-5 항체.
  38. 제37항에 있어서,
    (a) 상기 항-Siglec-5 항체는 인간 또는 마우스 IgG1 아이소타입을 갖고, N297A, D265A, D270A, L234A, L235A, G237A, P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E, P331S, S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, T394D, E430G, V263L, V266L, V273C, V273E, V273F, V273L, V273M, V273S, V273Y, V305K, V305W, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치에서 Fc 영역 내 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나, 글리신 236에 대응하는 위치에서 Fc 영역 내 아미노산 결실을 포함하거나;
    (b) 상기 항-Siglec-5 항체는 IgG1 아이소타입을 갖고, IgG2 아이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함하되, 선택적으로 상기 IgG2 아이소타입 CH1 및 힌지 영역은 ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVERKCCVECPPCP(서열번호 218)의 아미노산 서열을 포함하고, 선택적으로 상기 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환 또는 둘 다, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (c) 상기 항-Siglec-5 항체는 IgG2 아이소타입을 가지며, P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, V309L, A330S, P331S, C214S, C232S, C233S, S267E, L328F, M252Y, S254T, T256E, H268E, N297A, N297Q, A330L, C127S, E430G 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (d) 상기 항-Siglec-5 항체는 인간 또는 마우스 IgG4 아이소타입을 가지고, L235A, G237A, S228P, L236E, S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, T256E, E233P, F234V, L234A/F234A, S228P, S241P, L248E, T394D, N297A, N297Q, L235E, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르고; 또는
    (e) 상기 항-Siglec-5 항체는 혼성체 IgG2/4 아이소타입을 가지고, 선택적으로 상기 항체는 인간 IgG2의 아미노산 118 내지 260 및 인간 IgG4의 아미노산 261 내지 447을 포함하는 아미노산 서열을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르는, 항-Siglec-5 항체.
  39. 제38항에 있어서,
    (a) 상기 항-Siglec-5 항체는 인간 또는 마우스 IgG1 아이소타입을 가지며, N297A, N297Q, D270A, D265A, L234A, L235A, C226S, C229S, P238S, E233P, L234V, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, L234F, L235E, P331S, T394D, A330L, M252Y, S254T, T256E 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르고;
    (b) 상기 항-Siglec-5 항체는 IgG2 아이소타입을 가지며, P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y, S254T, T256E, C127S, E430G, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (c) 상기 항-Siglec-5 항체는 IgG4 아이소타입을 가지며, E233P, F234V, L234A/F234A, L235A, G237A, E318A, S228P, L236E, S241P, L248E, T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A, N297Q, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르는, 항-Siglec-5 항체.
  40. 제39항에 있어서,
    (a) 상기 Fc 영역은 A330L, L234F; L235E, P331S, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 더 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르고;
    (b) 상기 Fc 영역은 M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 더 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르고 또는;
    (c) 상기 Fc 영역은 EU 넘버링에 따른 S228P 아미노산 치환을 추가로 포함하는, 항-Siglec-5 항체.
  41. 제1항 내지 제35 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG4 아이소타입을 갖는, 항-Siglec-5 항체.
  42. 제41항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 잔기 위치 228에서 S228P 아미노산 치환, 잔기 위치 234에서 F234A 아미노산 치환, 및 잔기 위치 235에서 L235A 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르는, 항-Siglec-5 항체.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Siglec-5 단백질은 포유류 단백질 또는 인간 단백질인, 항-Siglec-5 항체.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Siglec-5 단백질은 야생형 단백질인, 항-Siglec-5 항체.
  45. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Siglec-5 단백질은 천연 유래 변이체인, 항-Siglec-5 항체.
  46. 제1항 내지 제45 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Siglec-5 단백질은 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 호중구, 인간 NK 세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 T 세포, 인간 T 헬퍼 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구 및 인간 미세아교세포로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 세포 상에서 발현되는, 항-Siglec-5 항체.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5 단백질에 특이적으로 결합하는, 항-Siglec-5 항체.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5 단백질 상에서 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체 단편인, 항-Siglec-5 항체.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5, 인간 Siglec-5의 천연 유래 변이체, 및 인간 Siglec-5의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 항체 단편인, 항-Siglec-5 항체.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, 상기 항체 단편은 인간 Siglec-5, 인간 Siglec-5의 천연 유래 변이체, 및 인간 Siglec-5의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 제2 항체 단편에 가교되는, 항-Siglec-5 항체.
  51. 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편인, 항-Siglec-5 항체.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 뮤린 항체인, 항-Siglec-5 항체.
  53. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 인간화된 항체, 이중특이성 항체, 다가 항체, 접합된 항체, 또는 키메라 항체인, 항-Siglec-5 항체.
  54. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식하는 이중특이성 항체인, 항-Siglec-5 항체.
  55. 제54항에 있어서, 상기 제1 항원은 Siglec-5이고, 상기 제2 항원은 하기(a) 내지 (e)인, 항-Siglec-5 항체:
    (a) 상기 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
    (b) 트랜스페린 수용체(TR), 인슐린 수용체(HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGFR), 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 1 및 2(LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, 라마 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페너트라틴, 폴리-알기닌 펩타이드, 안지오펩 펩타이드 및 ANG1005로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
    (c) 질환-원인 펩타이드 또는 단백질 또는 질환-원인 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환-원인 제제(상기 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA이고, 상기 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우(Tau), IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택됨);
    (d) 면역 세포 상에서 발현된 리간드 및/또는 단백질(상기 리간드 및/또는 단백질은 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, CD73 및 포스파티딜세린으로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및
    (e) 하나 이상의 종양 세포 상에서 발현된 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질.
  56. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 접합된 항체인, 항-Siglec-5 항체.
  57. 제56항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합되는, 항-Siglec-5 항체.
  58. 제57항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 리신, 리신 A-쇄, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 브롬화에티듐, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 다이하이드록시 안트라신 다이온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소(PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 쿠리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피치날리스(Saponaria officinalis) 저해제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무스, 콤브레스타틴, 듀오카마이신, 돌라스타틴, cc1065 및 시스플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 독소에 접합되는, 항-Siglec-5 항체.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 항-Siglec-5 항체는 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환-원인 단백질에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여; 또는 PD1/PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, CD73, TREM1, TREM2, CD33, Siglec-6, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-10, Siglec-11, 포스파티딜세린, 질환-원인 핵산, 안티센스 GGCCCC(G2C4)(서열번호 225) 반복부-확장 RNA, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역조절 단백질에 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여 사용된, 항-Siglec-5 항체.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5 및 포유류 Siglec-5에 대한 해리상수(KD)가 약 0.42nM 내지 약 79nM 범위이되, 상기 KD는 대략 25℃의 온도에서 결정된, 항-Siglec-5 항체.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-Siglec-5 항체는 인간 Siglec-5에 대한 해리 상수(KD)가 약 79nM 내지 약 61nM, 약 15nM 내지 약 5.3nM, 또는 약 1.7nM 내지 약 0.42nM의 범위이되, 상기 KD는 대략 25℃의 온도에서 결정된, 항-Siglec-5 항체.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 단리된 핵산.
  63. 제62항의 핵산을 포함하는 벡터.
  64. 제63항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  65. 항-Siglec-5 항체의 생성 방법으로서, 상기 항-Siglec-5 항체가 생성되도록, 제64항의 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함하는, 방법.
  66. 제65 항에 있어서, 상기 숙주 세포에 의해 생성된 상기 항-Siglec-5 항체를 회수하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  67. 제65 항 또는 제66항의 방법에 의해 생성된 단리된 항-Siglec-5 항체.
  68. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체 및 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  69. 치매, 전측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 방법으로서, 상기 질환, 장애 또는 손상의 예방, 위험의 감소 또는 치료가 필요한 개체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  70. 제69항에 있어서, 상기 암은 Siglec-5 또는 하나 이상의 Siglec-5 리간드를 발현시키는, 방법.
  71. 제69항 또는 제70항에 있어서, 상기 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML) 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
  72. 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식의 유도 또는 촉진이 필요한 개체에서 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식을 유도 또는 촉진시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  73. 제72항에 있어서, 상기 하나 이상의 면역 세포는 수지상 세포, 대식세포, 호중구, NK 세포, 미세아교세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  74. 조절 T 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 급성 골수성 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포, 또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포의 활성, 작용성 또는 생존의 감소가 필요한 개체에서 상기 활성, 작용성 또는 생존을 감소시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  75. 하나 이상의 세포 상에서 Siglec-5의 세포 수준의 감소가 필요한 개체에 있어서 하나 이상의 세포 상에서 Siglec-5의 세포 수준을 감소시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 단리된 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  76. 하나 이상의 호중구에서 활성 산소종(reactive oxygen species: ROS) 생산의 유도가 필요한 개체에 있어서 하나 이상의 호중구에서 ROS 생산을 유도하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  77. 하나 이상의 호중구에서 호중구 세포외 트랩(neutrophil extracellular trap: NET) 형성의 유도가 필요한 개체에 있어서 하나 이상의 호중구에서 NET 형성을 유도하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  78. 하나 이상의 호중구에서 호중구 활성화가 필요한 개체에 있어서 하나 이상의 호중구에서 호중구 활성화를 유도하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  79. 하나 이상의 면역억제된 호중구 제거가 필요한 개체에 있어서 하나 이상의 면역억제된 호중구를 제거하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  80. 대식세포에서의 식세포작용 활성 증가가 필요한 개체에 있어서 대식세포에서의 식세포작용 활성을 증가시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항의 항-Siglec-5 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  81. 제69항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 저해 관문 분자, 및/또는 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  82. 제81항에 있어서, 상기 저해 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 상기 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여되는, 방법.
  83. 제81항 또는 제82항에 있어서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 상기 적어도 하나의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠기(B- and T-lymphocyte attenuator: BTLA) 항체, 항-살해 저해 수용체(Killer inhibitory receptor: KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM-1 항체, 항-TIM3 항체, 항-TIM-4 항체, 항-A2AR 항체, 항-CD39 항체, 항-CD73 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-CD30 항체, 항-TNFa 항체, 항-CD33 항체, 항-Siglec-6 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-10 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
  84. 제81항에 있어서, 상기 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타너셉트 요법, 입양 세포 전달(adoptive cell transfer: ACT) 요법, 키메라 항원 수용체 T 세포 전달(chimeric antigen receptor T cell transfer: CAR-T) 요법, 백신 요법 및 사이토카인 요법으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
  85. 제69항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  86. 제85 항에 있어서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 상기 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여되는, 방법.
  87. 제85 항 또는 제86항에 있어서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 상기 적어도 하나의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  88. 제69항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 작용제 항체를 상기 개체에게 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  89. 제88항에 있어서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 상기 적어도 1종의 작용제 항체는 상기 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여되는, 방법.
  90. 제88항 또는 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 상기 적어도 하나의 작용제 항체는 작용제 항-CD40 항체, 작용제 항-OX40 항체, 작용제 항-ICOS 항체, 작용제 항-CD28 항체, 작용제 항-TREM1 항체, 작용제 항-TREM2 항체, 작용제 항-CD137/4-1BB 항체, 작용제 항-CD27 항체, 작용제 항-글루코코티코이드-유도 TNFR-관련 단백질 GITR 항체, 작용제 항-BTLA 항체, 작용제 HVEM 항체, 작용제 항-CD30 항체, 작용제 항-CD2 항체, 작용제 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
  91. 제69항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에게 적어도 1종의 자극 사이토카인을 투여하는 단계를 더 포함하는 방법.
  92. 제91항에 있어서, 상기 적어도 1종의 자극 사이토카인은 항-Siglec-5 항체와 조합하여 투여되는, 방법.
  93. 제91항 또는 제92항에 있어서, 상기 적어도 1종의 자극 사이토카인은 IFN-□4, IFN-□, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
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