KR20210070986A - 항-cd33 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

항-cd33 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 일반적으로 CD33 폴리펩타이드, 예를 들어, 포유류 CD33 또는 인간 CD33에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어, 단클론성, 항체, 항체 단편 등을 포함하는 조성물, 및 이들이 필요한 개체에서 예방하거나, 위험을 감소시키거나 치료함에 있어서 이러한 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

항-CD33 항체 및 이의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 8월 31일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/726,053호의 유익을 주장하며, 이 기초출원은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
ASCII 텍스트 파일 상의 서열목록의 제출
ASCII 텍스트 파일 상의 다음의 제출 내용은 그의 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용된다: 서열목록의 컴퓨터 판독 가능한 형태(CRF)(파일명: 735022002840SEQLIST.TXT, 저장 날짜: 2019년 8월 26일, 용량: 112KB).
기술분야
본 개시내용은 항-CD33 항체 및 이러한 항체의 치료적 용도에 관한 것이다.
Siglec-3으로도 알려진 골수성 세포 표면 항원 CD33 전구체(CD33)는 미숙 및 성숙 골수성 세포, 수지상 세포 및 미세아교 세포를 포함하는, 면역 및 조혈 세포 상에서 발현되는 1형, 면역글로불린-유사, 막관통 단백질이다. (문헌[Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82; Handgretinger et al. (1993) Immunol Lett. 37:223-228; 및
Figure pct00001
-Caselles et al. (2006) J LeukocBiol. 79:46-58] 참조). CD33은 Ig-유사 C2-형(면역글로불린-유사) 및 Ig-유사 V-형(면역글로불린-유사) 세포외 도메인뿐만 아니라 이의 세포질 도메인에서 2개의 ITIM-유사 모티프를 포함한다. CD33M으로 명명되는 보다 고분자량의 변이체 및 Ig-유사 V-형 도메인(리간드-결합 부위)을 결여하는 보다 작은 아이소폼 CD33m, 및 V 및 C 도메인을 연결하는 이황화 결합을 포함하는, CD33의 3개의 대안적으로 스플라이싱된 형태(아이소폼)가 확인되었다.
연장된 코호트(예를 들어, 수천명의 개체) 상에서 수행되는 게놈 연관 연구(Genome-wide association study: GWAS)는 후기 발병 알츠하이머병(AD)에 대한 위험의 유전적 조절자로서 CD33에서 단일 뉴클레오타이드 다형성(SNP) rs3865444 CC (AKA rs3826656) 및 rs3865444 AA 를 확인하였다. 종양학에서, CD33의 발현 감소를 야기하는 CD33 변이체는 소아 급성 골수성 백혈병(AML)으로부터의 개선된 생존율과 관련되는 것으로 나타났다. 관해로부터의 3세의 전체 생존율은 rs3865444 AA 변이체와 강한 결합 불균형에 있는 변이체 rs35112940 GG 를 운반하는 것에 대해 84%+/- 8%인데, 이는 CD33의 보다 낮은 전장 발현과 관련된다. 비-보호 대립유전자에 대한 관해율은 68%+/- 15%이다. 보호 대립유전자의 운반체는 또한 보다 낮은 재발 위험 및 우수한 무질환 생존기간을 가진다. 마찬가지로, 전장 CD33의 46% 초과의 낮은 발현과 관련되는 rs12459419의 부수적 변이체 대립유전자(TT)에 대해 동형인 환자는 변이체 CC 및 CT의 운반체보다 바람직한 질환 결과(52% 대 31%)를 가질 가능성이 높으며, 다른 유전자형보다 유의하게 더 낮은 진단적 아세포 CD33 발현을 가진다. 이는 항-CD33 항체 및 독성 칼리케아마이신-감마 유도체에 의한 치료를 받고 있는 환자에서조차도 그렇다(Mortland et al., (2013) Clin Cancer Res; 1-8). 전장 CD33 발현의 25% 초과의 감소를 나타내는 2459419 TT 대립유전자의 운반체뿐만 아니라 rs12459419 CT 대립유전자의 운반체는 또한 감소된 알츠하이머병 위험을 나타낸다(Malik M. et al. (2015) Human MolecularGenetics,1-14). 이는 CD33의 감소된 발현 또는 기능성이 알츠하이머병 및 암에서 유리할 수 있다는 것을 시사한다.
CD33에 대한 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제7,342,110호, 미국 특허 제7,557,189호, 미국 특허 제8,119,787호, 미국 특허 제8,337,855호, 미국 특허 제8,124,069호, 미국 특허 제5,730,982호, WO2012/074097, WO2004/043344, WO1993/020848, WO2012/045752, WO2007/014743, WO2003/093298, WO2011/036183, WO1991/009058, WO2008/058021, WO2011/038301, WO2016/201389, WO2016/201388, 문헌[Hoyer et al (2008) Am J Clin Pathol, 129:316-323, Rollins-Ravel and Roth (2012) Histopathology 60:933-942, Perez-Olivia et al (2011) Glycobiol 21:757-770, Ferlasso et al (2000) Eur J Immunol 30:827-833, Vitale et al (2001) Proc Natl Acad Sci USA 98:5764-5769, Jandus et al (2011) Biochem Pharmacol 82:323-332, O'Reilly and Paulson (2009) Trends Pharmcol Sci 30:240-248, Jurcic (2012) Curr Hematol Malig Rep 7:65-73, 및 Ricart (2011) Clin Cancer Res 17:6417-6427]에 기재되어 있다.
따라서, 원치않는 CD33 활성과 관련되는 질환, 장애 및 병태를 치료하기 위한 치료적 항-CD33 항체에 대한 필요가 있다.
특허, 특허 출원 및 간행물을 포함하는 본 명세서에 인용된 모든 참고문헌은 본 명세서에 이들의 전문이 참조에 의해 원용된다.
본 개시내용은 일반적으로 인간 CD33에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어, 단클론성, 키메라, 인간화된 항체, 항체 단편 등을 포함하는 조성물, 및 이러한 조성물을 이용하는 방법에 관한 것이다.
본 개시내용의 특정 양상은 개선되고/되거나 향상된 기능적 특징을 갖는 항-CD33 항체의 식별에 적어도 부분적으로 기반한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)에 비해 하나 이상의 개선되고/되거나 향상된 기능적 특징을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33(예를 들어, 인간 CD33)에 대한 친화도가 기준 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 친화도보다 더 높다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 절반-최대 유효 농도(EC50)보다 더 낮은 절반-최대 유효 농도로, 인간 세포, 예컨대 인간 1차 수지상 세포에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 항체(예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 절반-최대 유효 농도(EC50)보다 더 낮은 절반-최대 유효 농도로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다(예를 들어, 세포 표면 수준을 감소시키거나 줄인다).
따라서, 일 양상에서, 본 개시내용은 CD33 단백질에 결합하는 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 8 내지 30으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열번호 39 내지 40으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호 53 내지 55로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호 58 내지 62로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33 단백질에 결합하는 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33 단백질에 결합하는 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 경쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33 단백질에 결합하는 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 또는 6C7H54의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33 단백질에 결합하는 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 중쇄 가변 영역을 포함하고; 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33 단백질에 결합하는 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 서열번호 68 내지 93으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 서열번호 97 내지 103으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33 단백질에 결합하는 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 중쇄 가변 영역을 포함하고; 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33에 결합하는 단리된 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하며; 경쇄 가변 영역은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33에 결합하는 단리된 항체에 관한 것이되, 상기 항체는 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 CD33에 결합하는 단리된 항체에 관한 것이되, 상기 항체는:
(a) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(b) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 VH FR1, VH FR2, VH FR3 및 VH FR4로부터 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하되, VH FR1은 서열번호 5 내지 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; VH FR2는 서열번호 31 내지 32로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; VH FR3은 서열번호 34 내지 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 그리고 VH FR4는 서열번호 41의 서열을 포함하며; 경쇄 가변 영역은 VL FR1, VL FR2, VL FR3 및 VL FR4로부터 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하고, VL FR1은 서열번호 42 내지 46으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; VL FR2는 서열번호 48 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; VL FR3은 서열번호 56 내지 57로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 그리고 VL FR4는 서열번호 63 내지 64로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함한다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 IgG 분류, IgM 분류 또는 IgA 분류를 가진다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgG 부류를 갖고, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgG4 아이소타입을 갖고, 잔기 위치 228에서 S228P 아미노산 치환, 잔기 위치 234에서 F234A 아미노산 치환, 및 잔기 위치 235에서 L235A 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, 항체는 C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치에서 Fc 영역에서의 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 L234A, L235A 및 P331A에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 L234A, L235A, P331A 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 K322A 및 E430G에서 아미노산 위치를 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 A330S, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 K322A, A330S 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 K322A, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 A330S, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 S267E 및 L328F에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; Fc 영역은 위치 C127S에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; 또는 Fc 영역은 위치 E345R, E430G 및 S440Y에서 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, CD33 단백질은 포유류 단백질 또는 인간 단백질이다. 일부 실시형태에서, CD33 단백질은 야생형 단백질이다. 일부 실시형태에서, CD33 단백질은 천연 유래 변이체이다. 임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, CD33 단백질은 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 호중구, 인간 T 세포, 인간 T 헬퍼 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구 및 인간 미세아교세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 세포 상에서 발현된다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 인간 CD33 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 CD33 단백질에 결합하고, 다른 종으로부터의 CD33 오솔로그 또는 상동체와 교차 반응하지 않는다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 인간 CD33 또는 포유류 CD33 단백질 상에서 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체 단편이다. 임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 유래 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 항체 단편이다. 일부 실시형태에서, 항체 단편은 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 유래 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 제2 항체 단편에 가교된다. 일부 실시형태에서, 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.
임의의 앞의 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 인간화된 항체, 이중 특이성 항체, 단클론성 항체, 다가 항체, 접합된 항체, 또는 키메라 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식하는 이중특이성 항체이다. 일부 실시형태에서, 제1 항원은 CD33이고, 제2 항원은 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원; 트랜스페린 수용체(TR), 인슐린 수용체(HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGFR), 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 1 및 2(LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, 라마 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페너트라틴, 폴리-알기닌 펩타이드, 안지오펩 펩타이드 및 ANG1005로부터 선택된 혈액 뇌 장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원이며; 질환-원인 펩타이드 또는 단백질 및 질환-원인 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택된 질원 원인 제제로서, 질환-원인 펩타이드 또는 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우(Tau), IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4) 반복부-확장 RNA; 면역 세포 상에서 발현되는 리간드 및/또는 단백질이며, 리간드 및/또는 단백질은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, CSF1-수용체, 및 포스파티딜세린; 및 하나 이상의 종양 세포 상에서 발현되는 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 항체는 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 단백질, 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, 슈퍼옥사이드 디스무타제(SOD), S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환-원인 제제에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여; 또는 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR3, DR5, CD39, CD70, CD73, LAG3, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, CSF1-수용체, 포스파티딜세린, 질환-원인 핵산, 안티센스 GGCCCC(G2C4) 반복부-확장 RNA, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역조절 단백질에 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여 사용된다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 항체는 인간 CD33에 대한 해리 상수(KD)가 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체보다 적어도 1.8배 더 낮되, KD는 생물층 간섭측정(BioLayer Interferometry)에 의해 결정된다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 항체는 인간 CD33에 대한 해리 상수(KD)가 약 2nM 내지 약 200pM, 또는 약 200pM 미만 범위이되, KD는 생물층 간섭 측정에 의해 결정된다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 상기 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, CD33은 인간 수지상 세포의 표면 상에서 발현된다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 시험관내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 유세포분석에 의해 측정할 때 40pM 미만인 절반의 최대 유효 농도(EC50)로 시험관내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 하나 이상의 질환-관련 미세아교세포(DAM) 마커의 발현을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 DAM 마커는 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, 또는 이들의 임의의 조합이다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 인간 CD33에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로 이루어진 군으로부터 선택된 항체와 본질적으로 동일하거나 중복되는 CD33 에피토프에 결합한다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 Fc 영역을 가진다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하되, 여기서 (a) HVR-H1은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (b) HVR-H1은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (c) HVR-H1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (d) HVR-H1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (e) HVR-H1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (f) HVR-H1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (g) HVR-H1은 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (h) HVR-H1은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (i) HVR-H1은 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (j) HVR-H1은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (k) HVR-H1은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (l) HVR-H1은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (m) HVR-H1은 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (n) HVR-H1은 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (o) HVR-H1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (p) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (q) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (r) HVR-H1은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (s) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (t) HVR-H1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (u) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (v) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (w) HVR-H1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (x) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (y) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; (z) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (aa) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하며; (bb) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (cc) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; (dd) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (ee) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하며; (ff) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (gg) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (hh) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (ii) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (jj) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (kk) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; (ll) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하며; (mm) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 (nn) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 앞서 언급한 실시형태와 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 94 내지 103 중 임의의 것으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 서열번호 65 내지 93 중 임의의 것으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 98의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 99의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 임의의 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산에 관한 것이다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 임의의 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 벡터는 발현 벡터 및/또는 디스플레이 벡터이다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 임의의 핵산 또는 본 명세서에 기재된 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포에 관한 것이다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 항체가 생성되도록 본 명세서에 기재된 임의의 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함하는 CD33에 결합하는 항체를 생성하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 세포에 의해 생성된 항체를 회수하는 단계를 추가로 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 임의의 방법에 의해 생성된 항체에 관한 것이다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 임의의 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 의약의 제조를 위한 본 명세서에 기재된 임의의 항체의 용도에 관한 것이다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염, 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상의 예방, 위험 감소 또는 치료가 필요한 개체에게 치료적 유효량의 본 명세서에 기재된 임의의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 이들 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 질환, 장애 또는 손상은 암이다. 일부 실시형태에서, 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML) 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염, 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 데 유용한 의약의 제조를 위한 본 명세서에 기재된 임의의 항체의 용도에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 질환, 장애 또는 손상은 암이다. 일부 실시형태에서, 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML) 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에 기재된 다양한 실시형태의 특성 중 하나, 일부 또는 모두는 조합되어 본 발명의 다른 실시형태를 형성할 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 본 발명의 이들 및 기타 양상은 당업자에게 분명하게 될 것이다. 본 발명의 이들 및 기타 실시형태는 다음의 상세한 설명에 의해 추가로 기재된다.
도 1은 본 개시내용의 항-CD33 항체가 1차 인간 수지상 세포에 결합한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 2는 본 개시내용의 항-CD33 항체가 인간 수지상 세포에서 CD33 세포 표면 수준을 하향조절한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 3은 본 개시내용의 항-CD33 항체가 1차 인간 수지상 세포에 결합한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 4는 본 개시내용의 항-CD33 항체가 인간 CD33 및 cyno CD33 단백질에 결합한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 5는 본 개시내용의 항-CD33 항체가 인간 수지상 세포에서 CD33의 세포 표면 수준을 하향 조절한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 6A 및 도 6B는 본 개시내용의 항-CD33 항체가 재조합 인간 CD33에 결합한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 7은 본 개시내용의 항-CD33 항체가 1차 인간 수지상 세포에 결합한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 8A 및 도 8B는 본 개시내용의 다양한 항-CD33 항체에 의한 수지상 세포에서의 CD33의 세포 표면 수준 감소를 비교하는 데이터를 제시한 도면.
도 9는 1차 인간 수지상 세포에 대한 본 개시내용의 항-CD33 항체 변이체를 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 10A 및 도 10B는 본 개시내용의 항-CD33 항체 변이체가 인간 CD33 및 cyno CD33 단백질에 각각 결합한다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 11은 본 개시내용의 항-CD33 항체 변이체가 1차 인간 수지상 세포에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
도 12A, 도 12B 및 도 12C는 Fc 변이체와 함께 항-CD33 항체 변이체가 1차 인간 수지상 세포에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킨다는 것을 나타내는 데이터를 제시한 도면.
본 개시내용은 항-CD33 항체(예를 들어, 단클론성 항체); 이러한 항체를 제조하고 이용하는 방법; 이러한 항체를 포함하는 약제학적 조성물; 이러한 항체를 암호화하는 핵산; 및 이러한 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
본 명세서에 기재되거나 언급된 기법 및 절차는 일반적으로 당업자에 의한 통상적인 방법, 예를 들어, 문헌[Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)]에 기재된 것과 같은 널리 이용되는 방법을 이용하여 잘 이해되고 통상적으로 사용된다.
I. 정의
용어 " CD33 " 또는 " CD33 폴리펩타이드 "는, 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에서 영장류(예를 들어, 인간 및 cyno) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 CD33을 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다. 일부 실시형태에서, 상기 용어는 야생형 서열과 천연 유래 변이체 서열, 예를 들어, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 둘 다 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 용어는 "전장", 미가공 CD33뿐만 아니라 세포에서 가공으로부터 초래되는 CD33의 임의의 형태를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD33은 인간 CD33 아이소폼 1(NCBI 참조 서열: NP_001763.3)이다. 일부 실시형태에서, 예시적인 인간 CD33의 아미노산 서열은 서열번호 1이다. cyno CD33의 아미노산 서열은 서열번호 2(NCBI 참조 서열: XP_005590138.1)이다.
용어 " 항-CD33 항체 ", " CD33에 결합하는 항체 " 및 " CD33에 특이적으로 결합하는 항체 "는 CD33를 표적화함에 있어서 항체가 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 CD33에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일 실시형태에서, 관련없는, 비-CD33 폴리펩타이드에 대한 항-CD33 항체의 결합 정도는, 예를 들어, 방사면역측정법(RIA)에 의해 측정할 때, CD33에 대한 항체 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시형태에서, CD33에 결합하는 항체는 해리 상수(KD)가 < 1μM, < 100nM, < 10nM, < 1nM, < 0.1nM, < 0.01nM, 또는 < 0.001nM(예를 들어, 10-8M 이하, 예를 들어, 10-8M 내지 10-13M, 예를 들어, 10-9M 내지 10-13M)이다. 특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 상이한 종으로부터의 CD33 중에서 보존된 CD33의 에피토프에 결합한다.
표적 분자에 대한 항체의 결합에 관해, 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 " 특이적 결합 " 또는 " 특이적으로 결합하는 " 또는 " 에 특이적 "이라는 용어는 비특이적 상호작용과 측정 가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들어, 대조군 분자의 결합에 비교되는 분자 결합을 결정함으로써, 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적, 예를 들어, 과량의 비표지 표적과 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 특이적 결합은 표지된 표적의 프로브에 대한 결합이 과량의 비표지 표적에 의해 경쟁적으로 저해되는지의 여부를 나타낸다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 대한 "특이적 결합" 또는 "에 특이적으로 결합하는" 또는 "에 특이적인"이라는 용어는, 예를 들어, 약 10-4M 이하, 10-5M 이하, 10-6M 이하, 10-7M 이하, 10-8M 이하, 10-9M 이하, 10-10M 이하, 10-11M 이하, 10-12M 이하 중 어느 것의 표적에 대한 KD 또는 10-4M 내지 10-6M 또는 10-6M 내지 10-10M 또는 10-7M 내지 10-9M 범위의 KD를 갖는 분자에 의해 나타날 수 있다. 당업자에 의해 인식될 바와 같이, 친화도 및 KD 값은 반비례 관계이다. 항원에 대한 높은 친화도는 낮은 KD 값으로 측정된다. 일 실시형태에서, 용어 "특이적 결합"은 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않고 분자가 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다.
용어 " 면역글로불린 "(Ig)은 본 명세서의 " 항체 "와 상호 호환적으로 사용된다. 본 명세서의 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 구체적으로는 단클론성 항체, 다클론성 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체)를 아우르며, 적어도 2개의 무손상 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 것을 포함한다.
" 천연 항체 "는 보통 2개의 동일한 경("L") 쇄 및 2개의 동일한 중("H") 쇄로 구성된 약 150,000달톤의 이형사량체 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 이황화 결합의 수는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄 중에서 변한다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄 내의 이황화 브리지를 가진다. 각각의 중쇄는 하나의 말단에서 가변 도메인(VH) 다음에 다수의 불변 도메인을 가진다. 각각의 경쇄는 하나의 말단(VL)에서 가변 도메인 및 그의 말단에서 불변 도메인을 가지고; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인에 맞추어 조정되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인에 맞추어 조정된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.
상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 페이지 71 및 6장]을 참조한다.
임의의 척추동물 종으로부터의 경쇄는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 카파("κ") 및 람다("λ")로 불리는 2개의 분명하게 별개인 유형 중 하나가 부여될 수 있다. 중쇄(CH)의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 면역글로불린은 상이한 분류 또는 아이소타입이 부여될 수 있다. 5가지 부류의 면역글로불린이 있다: 알파("α"), 델타("δ"), 엡실론("ε"), 감마("γ") 및 뮤("μ")로 각각 표기되는 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM. γ 및 α 분류는 CH 서열 및 기능의 상대적으로 약간의 차이에 기반하여 하위분류(아이소타입)으로 추가로 나뉘어지며, 예를 들어, 인간은 다음의 하위분류를 발현시킨다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2. 상이한 분류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 입체배치는 잘 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000)]에 일반적으로 기재되어 있다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인", 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노 말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"로서 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 (동일한 부류의 다른 항체에 비해) 항체의 대부분의 가변 부분이며, 항원 결합 부위를 포함한다.
용어 " 가변 "은 가변 도메인의 특정 세그먼트가 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체 중의 서열에서 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. 가변 도메인은 항원 결합을 매개하고, 그의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 전체 폭에 걸쳐 균일하게 분포되지 않는다. 대신에, 이는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 둘 다에서 초가변 영역(HVR)으로 불리는 3개의 세그먼트에서 집중된다. 가변 도메인의 더 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 베타-시트 구조를 연결하고 그리고 일부 경우에 부분을 형성하는 루프를 형성하는 3개의 HVR에 의해 연결되는 베타-시트 입체배치를 대체로 채택하는 4개의 FR 영역을 포함한다. 각각의 쇄에서 HVR은 FR 영역에 의해 그리고 다른 쇄로부터의 HVR에 의해 근접하게 함께 보유되고, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에서 직접적으로 수반되지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예컨대 항체-의존적-세포 독성에서 항체의 참여를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 얻은 항체, 예컨대 본 개시내용의 단클론성 항-CD33 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개개 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 유래 돌연변이 및/또는 번역후 변형(예를 들어, 이성질체화, 아마이드화 등)을 제외하고 동일하다. 단클론성 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위로 향한다. 상이한 결정소(에피토프)로 향하는 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론성 항체 제제와 대조적으로, 각각의 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정소로 향한다. 이들의 특이성에 추가로, 단클론성 항체는 이들이 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 배양물에 의해 합성된다는 점에서 유리하다. 수식어 "단클론성"은 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 얻어지는 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의해 항체의 생성을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라 사용될 단클론성 항체는 다음의 방법, DNA(들), 바이러스-유사 입자, 폴리펩타이드(들), 및/또는 세포(들) 중 하나 이상을 이용하는 랫트, 마우스, 토끼, 기니피그, 햄스터 및/또는 닭을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 동물의 면역화 방법, 하이브리도마 방법, B-세포 클로닝 방, 재조합 DNA 방법, 및 인간 면역글로불린 서열을 암호화하는 인간 면역글로불린 좌위 또는 유전자의 일부 또는 모두를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생성하는 기술 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다양한 기법에 의해 생성될 수 있다.
용어 " 전장 항체 ", " 무손상 항체 " 또는 " 전체 항체 "는 항체 단편과 대조적으로 실질적으로 무손상 형태로 본 개시내용의 항-CD33 항체와 같은 항체를 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용된다. 구체적으로 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 무손상 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 가질 수 있다.
" 항체 단편 "은 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 일부를 포함하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 다이어바디; 선형 항체(미국 특허 제5641870호, 실시예 2; 문헌[Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995)] 참조); 단일쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 파파인 분해는 " Fab " 단편으로 불리는 2개의 항원 결합 단편, 및 잔여 " Fc " 단편을 생성하며, 표기는 용이하게 결정화하는 능력을 반영한다. Fab 단편은 중쇄(VH)의 가변 영역 도메인, 및 하나의 중쇄(CH1)의 제1 불변 도메인과 함께 전체 경쇄로 이루어진다. 각각의 Fab 단편은 항원 결합에 대해 1가이고, 즉, 이는 단일 항원-결합 부위를 가진다. 항체의 펩신 처리는 상이한 항원-결합 활성을 갖는 2개의 이황화 연결된 Fab 단편에 거의 대응하고 여전히 항원을 가교할 수 있는 단일의 거대한 F(ab')2 단편을 수득한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카복시 말단에서 소수의 추가적인 잔기를 가짐으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올기를 보유하는 Fab'에 대한 본 명세서의 표기이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 Fab' 단편의 쌍으로서 생성되는데, 이 단편의 쌍 사이에 사이에 시스테인 힌지를 가진다. 항체 단편의 다른 화학적 결합이 또한 공지되어 있다.
Fc 단편은 이황화물에 의해 함께 보유되는 중쇄 둘 다의 카복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 효과기 기능은 Fc 영역에서 서열에 의해 결정되는데, 이 영역은 또한 특정 유형의 세포 상에서 발견되는 Fc 수용체(FcR)에 의해 인식된다.
항체, 예컨대, 본 개시내용의 항-CD33 항체의 " 작용성 단편 "은 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역 또는 변형된 FcR 결합 능력을 보유하거나 또는 갖는 항체의 Fc 영역을 일반적으로 포함하는, 무손상 항체의 부분을 포함한다. 항체 단편의 예는 선형 항체, 단일쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
용어 " 다이어바디 "는 가변 도메인의 쇄간이지만 쇄내 짝짓기가 달성되지 않음으로써, 2가 단편, 즉, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편을 초래하도록 VH와 VL 도메인 사이의 짧은 링커(약 5 내지 10개) 잔기를 갖는 sFv 단편(앞 단락을 참조)을 구성함으로써 제조된 작은 항체 단편을 지칭한다. 이중특이성 다이어바디는 2개의 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩타이드 쇄 상에 존재하는 2개의 "크로스오버(crossover)" sFv 단편의 이형이량체이다.
본 명세서에서 사용되는 " 키메라 항체 "는 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타낸다면, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래된 또는 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 대응하는 서열과 동일하거나 또는 상동성인 반면, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 유래되거나 또는 다른 항체 부류 또는 하위부류뿐만 아니라 이러한 항체의 단편에 속하는 항체에서의 대응하는 서열과 동일하거나 또는 상동성인 항체(면역글로불린), 예컨대 본 개시내용의 키메라 항-CD33 항체를 지칭한다. 본 명세서의 관심 대상의 키메라 항체는 프리마티제드(PRIMATIZED)® 항체를 포함하되, 항체의 항원-결합 영역은, 예를 들어, 관심 대상의 항원을 이용하여 마카크 원숭이를 면역화함으로써 생성된 항체로부터 유래된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은, "인간화된 항체"는 "키메라 항체"의 서브세트로 사용된다.
비인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 " 인간화된 " 형태, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 인간화된 형태는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체이다. 특정 실시형태에서, 인간화된 항체는 적어도 1개, 전형적으로는 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이며, 이때 HVR(예를 들어, CDR)의 모두 또는 실질적으로 모두는 비-인간 항체의 이것들에 대응하며, FR의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 항체의 이것들에 대응한다. 인간화된 항체는 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 일부를 선택적으로 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어, 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 인간화를 겪는 항체를 지칭한다.
" 인간 항체 "는 인간에 의해 생성된 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체에 대응하는 아미노산 서열을 갖고/갖거나 본 명세서에 개시된 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기법을 이용하여 이루어진 것이다. 인간 항체의 이런 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 구체적으로 제외한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리 및 효모 디스플레이 라이브러리를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기법을 이용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 항원 시험감염에 반응하여 이러한 항체를 생성하도록 변형되지만, 이의 내인성 좌위가 망가진 유전자이식 동물, 예컨대, 면역화된 제노마우스(xenomice)에 대해 항원을 투여함으로써 제조될 수 있을 뿐만 아니라 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된다.
본 명세서에서 사용될 때 용어 " 초가변 영역 ", " HVR " 또는 " HV "는 서열에서 초가변이고/이거나 구조적으로 한정된 루프를 형성하는 항체-가변 도메인의 영역, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체의 항체 가변 도메인 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH에서 3개(H1, H2, H3), 및 VL에서 3개(L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR의 최고의 다양성을 나타내고, 특히 H3은 항체의 미세한 특이성을 부여함에 있어서 고유한 역할을 하는 것으로 여겨진다. 중쇄만으로 이루어진 천연 유래 낙타 항체는 경쇄의 부재 하에서 작용성이고 안정하다.
다수의 HVR 정의를 사용 중이며, 본 명세서에 포함된다. 일부 실시형태에서, HVR은 서열 가변성에 기반하는 EU 또는 카바트(Kabat) 상보성-결정 영역(CDR)일 수 있으며, 가장 통상적으로 사용된다(Kabat et al., 상기 참조). 일부 실시형태에서, HVR은 코티아(Chothia) CDR일 수 있다. 대신에 코티아는 구조적 루프의 위치를 지칭한다(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)). 일부 실시형태에서, HVR은 AbM HVR일 수 있다. AbM HVR은 카바트 CDR과 코티아 구조적 루프 사이의 절충을 나타내고, 옥스포드 몰레큘러 AbM 항체-모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody-modeling software)에 의해 사용된다. 일부 실시형태에서, HVR은 " 컨택트 " HVR일 수 있다. "컨택트" HVR은 이용 가능한 복합 결정 구조의 분석에 기반한다. 각각의 이들 HVR로부터의 잔기를 이하에서 주목한다.
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HVR은 다음과 같이 " 연장된 HVR "을 포함할 수 있다: VL에서 24 내지 36 또는 24 내지 34(L1), 46 내지 56 또는 50 내지 56(L2), 및 89 내지 97 또는 89 내지 96(L3), 및 VH에서 26 내지 35(H1), 50 내지 65 또는 49 내지 65(바람직한 실시형태)(H2), 및 93 내지 102, 94 내지 102 또는 95 내지 102(H3). 가변-도메인 잔기는 각각의 이들 연장된-HVR 정의에 대해 문헌[Kabat et al., 상기 참조]에 따라 넘버링된다.
" 프레임워크 " 또는 " FR " 잔기는 본 명세서에 정의된 HVR 잔기 이외의 해당 가변-도메인 잔기이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 " 억셉터(acceptor) 인간 프레임워크 "는 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크로부터 유래된 VL 또는 VH 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크"로부터 유래된" 억셉터 인간 프레임워크는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 사전 존재하는 아미노산 서열 변화를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 사전 존재하는 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하 또는, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하 또는 2개 이하이다. 사전 존재하는 아미노산 변화가 VH에 존재하는 경우, 바람직한 해당 변화는 위치 71H, 73H 및 78H 중 단지 3, 2 또는 1개에서 생기며; 예를 들어, 해당 위치에서 아미노산 잔기는 71A, 73T 및/또는 78A일 수 있다. 일 실시형태에서, VL 억셉터 인간 프레임워크는 VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 공통 프레임워크 서열에 대한 서열에서 동일하다.
" 인간 공통 프레임워크 "는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 통상적으로 생기는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위그룹으로부터 유래된다. 일반적으로, 서열의 하위그룹은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에서와 같은 하위그룹이다. 예는 VL을 포함하며, 하위 그룹은 문헌[Kabat et al., 상기 참조]에서와 같은 하위그룹 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV일 수 있다. 추가적으로, VH에 대해, 하위그룹은 문헌[Kabat et al., 상기 참조]에서와 같은 하위그룹 I, 하위그룹 II 또는 하위그룹 III일 수 있다.
예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체의 구체화된 위치에서 " 아미노산 변형 "은 구체화된 잔기의 치환 또는 결실, 또는 구체화된 잔기에 인접한 적어도 하나의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 구체화된 잔기에 "인접한" 삽입은 이의 1 내지 2개의 잔기 내의 삽입을 의미한다. 삽입은 구체화된 잔기에 대해 N-말단 또는 C-말단일 수 있다. 본 명세서의 바람직한 아미노산 변형은 치환이다.
" 친화도-성숙 " 항체, 예컨대 본 개시내용의 친화도 성숙된 항-CD33 항체는 해당 변경(들)을 갖지 않는 모 항체에 비해 항원에 대한 항체 친화도의 개선을 초래하는 하나 이상의 HVR에서 하나 이상의 변경을 갖는 것이다. 일 실시형태에서, 친화도-성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화도를 가진다. 친화도-성숙 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 생성된다. 예를 들어, 문헌[Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH- 및 VL-도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은, 예를 들어: 문헌[Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155: 1994-2004 (1995); Jackson et al. J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896(1992)]에 의해 기재된다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 -결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 단단한, 비공유 회합에서 하나의 중쇄- 및 하나의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 이루어진다. 이들 두 도메인의 폴딩으로부터 항원 결합에 대한 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 대해 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프(각각 H쇄 및 L쇄로부터3개의 루프)가 나온다. 그러나, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도에도 불구하고, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 단지 3개의 HVR을 포함하는 Fv의 절반)조차도 항원을 인식하고 결합하는 능력을 가진다.
또한 "sFv" 또는 "scFv"으로서 약칭되는 " 단일쇄 Fv "는 단일 폴리펩타이드 쇄에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩타이드는 sFv가 항원 결합에 대해 목적하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH와 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다.
항체 " 효과기 기능 "은 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 해당 생물학적 활성을 지칭하고, 항체 아이소타입에 따라 다르다.
본 명세서의 용어 " Fc 영역 "은 천연-서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단의 영역을 정하기 위해 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 변할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 보통 위치 Cys226에서 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 이의 카복실 말단까지 신장하는 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단의 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들어, 항체의 생성 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 또는 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 항체에서 사용하기 위한 적합한 천연-서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다.
" 천연 서열 Fc 영역 "은 천연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역(비-A 및 A 동종이인자형); 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이의 천연 유래 변이체를 포함한다.
" 변이체 Fc 영역 "은 적어도 하나의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환(들) 때문에 천연 서열 Fc 영역과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역에 비해 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역에 비해 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어, 천연 서열 Fc 영역에서 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역에서 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 가진다. 본 명세서의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역과 그리고/또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 가장 바람직하게는 그와 적어도 약 90% 상동성, 더 바람직하게는 그와 적어도 약 95% 상동성을 가질 것이다.
" Fc 수용체 " 또는 " FcR "은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 게다가, 바람직한 FcR은 IgG 항체(감마 수용체)에 결합하고, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류의 수용체(이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함)를 포함하는 것이며, FcγRII 수용체는 주로 이의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("저해 수용체")를 포함한다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인 내에 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프("ITAM")를 포함한다. 저해 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에서 면역수용체 타이로신-기반 저해 모티프("ITIM")를 포함한다. 장래에 동정되는 것을 포함하는 다른 FcR은 본 명세서의 용어 "FcR"에 의해 포함된다. FcR은 또한 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 항체 서열에 대해 " 아미노산 서열 동일성 백분율(%) " 및 " 상동성 "은, 필요하다면, 최대 백분율 서열 동일성을 달성하기 위해 서열 및 도입 갭을 정렬시킨 후에, 서열 동일성의 부분으로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고, 특정 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열에서 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내 아미노산 잔기의 백분율을 지칭한다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하는 목적을 위한 정렬은 당업계의 기술 내의 다양한 방법, 예를 들어, 공중이 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGN™(DNASTAR) 소프트웨어로 달성될 수 있다. 당업자는 비교 중인 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 당업계에 공지된 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다.
동일한 에피토프와 경쟁하는 항체(예를 들어, 중화 항체)와 관련하여 사용될 때 용어 " 경쟁하다 "는 공통 항원(예를 들어, CD33 또는 이의 단편)에 대한 기준 분자(예를 들어, 리간드 또는 기준 항체)의 특이적 결합을 방지하거나 저해하는(예를 들어, 감소시키는) 분석에 의해 결정되는 바와 같은 항체 간의 경쟁을 의미한다. 항체가 다른 것과 경쟁하는지의 여부를 결정하기 위해 수많은 유형의 경쟁적 결합 분석, 예를 들어, 고체상 직접 또는 간접 방사면역측정법(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소 면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(예를 들어, 문헌[Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(예를 들어, 문헌[Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619] 참조) 고체상 직접 표지 분석, 고체상 직접 표지 샌드위치 분석(예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); 1-125 표지를 이용하는 고체상 직접 표지 RIA(예를 들어, 문헌[Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(예를 들어, 문헌[Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552] 참조); 및 간접 표지 RIA(Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)가 사용될 수 있다. 전형적으로, 이러한 분석은 고체 표면 또는 이들 중 하나를 보유하는 세포, 비표지 시험 항체 및 표지된 기준 항체에 결합된 정제된 항체의 사용을 수반한다. 경쟁 저해는 시험 항체의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합되는 표지의 양을 결정함으로써 측정된다. 보통, 시험 항체는 과량으로 존재한다. 경쟁 분석에 의해 확인되는 항체(경쟁 항체)는 입체 장애가 일어나도록 기준 항체에 의해 결합되는 에피토프에 충분히 근위인 인접한 에피토프에 결합하는 기준 항체 및 항체들과 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 경쟁적 결합을 결정하기 위한 방법에 관한 추가적인 상세한 설명은 본 명세서에 제공된다. 보통, 경쟁 항체가 과량으로 존재할 때, 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97.5%, 및/또는 거의 100%만큼 공통 항원에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 저해할 것이다(예를 들어, 감소시킬 것이다).
본 명세서에서 사용되는 CD33 폴리펩타이드와 제2 폴리펩타이드 사이의 " 상호작용 "은, 제한 없이, 단백질-단백질 상호작용, 물리적 상호작용, 화학적 상호작용, 결합, 공유 결합 및 이온 결합을 포함한다. 항체가 두 폴리펩타이드 사이의 상호작용을 파괴하거나, 감소시키거나 또는 완전히 제거할 때 두 폴리펩타이드 사이에서 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 항체가 "상호작용을 저해한다". 본 개시내용의 항체는, 이의 항체가 두 폴리펩타이드 중 하나에 결합할 때 두 폴리펩타이드 사이의 " 상호작용을 저해한다 ". 일부 실시형태에서, 상호작용은 적어도 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97.5% 및/또는 거의 100% 중 어느 것에 의해 저해될 수 있다.
용어 " 에피토프" 는 항체에 의해 결합될 수 있는 임의의 결정소를 포함한다. 에피토프는 해당 항원을 표적화하는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이며, 항체가 폴리펩타이드일 때, 항체와 직접 접촉되는 특정 아미노산을 포함한다. 가장 흔하게는, 에피토프는 폴리펩타이드 상에 존재하지만, 일부 예에서, 다른 종류의 분자, 예컨대 핵산 상에 존재할 수 있다. 에피토프 결정소는 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹화, 예컨대 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설폰일기를 포함할 수 있으며, 특정 3차원 구조적 특징 및/또는 특정 전하 특징을 가질 수 있다. 일반적으로, 특정 표적 항원에 특이적인 항체는 폴리펩타이드 및/또는 거대분자의 복합체 혼합물에서 표적 항원 상의 에피토프를 우선적으로 인식할 것이다.
" 작용제 " 항체 또는 " 활성화 " 항체는 항체의 항원이 결합한 후에 항원의 하나 이상의 활성 또는 기능을 유도하는(예를 들어, 증가시키는) 항체이다.
" 길항제 " 항체 또는 " 차단 " 항체 또는 "저해" 항체는 항체가 항원에 결합한 후에 하나 이상의 리간드에 대한 항원 결합을 감소시키고/시키거나, 저해하고/하거나 제거하고(예를 들어, 감소시키고) 그리고/또는 항체가 항원에 결합한 후에 하나 이상의 활성 또는 기능을 감소시키고/시키거나, 저해하고/하거나 제거하는(예를 들어, 감소시키는) 항체이다. 일부 실시형태에서, 길항제 항체, 또는 차단 항체, 또는 저해 항체는 하나 이상의 리간드에 대한 항원 결합 및/또는 항원의 하나 이상의 활성 또는 작용을 실질적으로 또는 완전히 저해한다.
"단리된" 항체, 예컨대 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 그의 생성 환경의 성분으로부터 (예를 들어, 자연적으로 또는 재조합적으로) 동정되고/되거나, 분리되고/되거나 회수된 것이다. 바람직하게는, 단리된 항체는 그의 생성 환경으로부터의 모든 다른 오염 성분과의 회합이 없다. 그의 생성환경으로부터의 오염 성분, 예컨대 재조합 형질감염 세포로부터 초래된 것은 항체에 대한 연구, 진단 또는 치료 용도를 전형적으로 방해하지 않는 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 항체는 정제될 것이다: (1) 예를 들어, 로리법(Lowry method)에 의해 결정하여 항체의 95중량% 초과까지, 그리고 일부 실시형태에서, 99중량% 초과까지; (2) 스피닝 컵 시퀀서의 사용에 의해 N-말단의 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마씨 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 이용하는 비-환원 또는 환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의한 균질성에 대해 정제될 것이다. 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 제시되지 않을 것이기 때문에 단리된 항체는 재조합 T-세포 내에서 인시추로 항체를 포함한다. 그러나, 보통 단리된 폴리펩타이드 또는 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-CD33 항체를 암호화하는 " 단리된 " 핵산 분자는 이것이 생성된 환경에서 그것이 본래 관련된 적어도 하나의 오염 핵산으로부터 동정되고 분리된 핵산 분자이다. 바람직하게는, 단리된 핵산은 생성 환경과 관련된 모든 성분과 관련이 없다. 본 명세서의 폴리펩타이드 및 항체를 암호화하는 단리된 핵산 분자는 그것이 자연에서 발견되는 형태 또는 상황이 아닌 형태이다. 따라서 단리된 핵산 분자는 세포에서 자연적으로 존재하는 본 명세서의 폴리펩타이드 및 항체를 암호화하는 핵산과 구별된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 " 벡터 "는 그것이 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하는 것으로 의도된다. 한 가지 유형의 벡터는 "플라스미드"인데, 이는 추가적인 DNA 세그먼트가 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA를 지칭한다. 다른 유형의 벡터는 파지 벡터이다. 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이되, 추가적인 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈 내로 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 그들이 도입된 숙주 세포에서 자율적 복제를 할 수 있다(예를 들어, 박테리아 복제 기점 및 에피솜 포유류 벡터를 갖는 박테리아 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포 내로 도입 시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있고, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 게다가, 특정 벡터는 그들이 조작 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터" 또는 단순하게, "발현 벡터"로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에서 효용의 발현 벡터는 종종 플라스미드 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 플라스미드가 가장 통상적으로 사용되는 벡터 형태이기 때문에 상호 호환적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에서 상호 호환적으로 사용되는 " 폴리뉴클레오타이드 " 또는 " 핵산 "은 임의의 길이의 뉴클레오타이드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오타이드는 데옥시리보뉴클레오타이드, 리보뉴클레오타이드, 변형된 뉴클레오타이드 또는 염기 및/또는 그들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합효소에 의해 또는 합성 반응에 의해 중합체에 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다.
" 숙주 세포 "는 폴리뉴클레오타이드 삽입물의 혼입을 위한 벡터(들)에 대한 수용자일 수 있거나 또는 수용자인 개개 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하고, 자손은 천연, 우연적 또는 의도적인 돌연변이에 기인하여 본래의 모 세포와 (형태 또는 게놈 DNA 상보체가) 완전히 동일할 필요는 없다. 숙주 세포는 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드(들)에 의해 생체내에서 형질감염된 세포를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 " 담체 "는 사용되는 투약량 및 농도에서 그것이 노출되는 세포 또는 포유류에 대해 비독성인 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정제를 포함한다.
본 명세서에 기재된 용어 " 방지하는 "은 개체에서 특정 질환, 장애 또는 병태의 발생 또는 재발에 대해 예방을 제공하는 것을 포함한다. 개체는 특정 질환, 장애 또는 병태의 성향이 있거나 또는 의심의 여지가 있거나 또는 이러한 질환, 장애 또는 병태가 발생할 위험에 있을 수 있지만, 질환, 장애 또는 병태로 아직 진단되지 않았다.
본 명세서에서 사용되는 특정 질환, 장애 또는 병태가 발생할 " 위험에 있는 " 개체는 검출 가능한 질환 또는 질환 증상을 가질 수도 있거나 또는 갖지 않을 수도 있고, 본 명세서에 기재된 치료 방법 전에 검출 가능한 질환 또는 질환 증상을 나타낼 수도 있거나 또는 나타내지 않을 수도 있다. "위험에 있는"은 개체가 당업계에 공지된 바와 같은 특정 질환, 장애 또는 병태의 발생과 상관관계가 있는 측정 가능한 매개변수인 하나 이상의 위험 인자를 가진다는 것을 나타낸다. 이들 위험 인자 중 하나 이상을 갖는 개체는 이들 위험 인자 중 하나 이상 없이 개체보다 특정 질환, 장애 또는 병태가 발생할 더 높은 확률을 가진다.
본 명세서에 기재된 용어 " 치료 "는 임상 병리 과정 동안 처리 중인 개체의 자연적 과정을 변경시키도록 설계된 임상 개입을 지칭한다. 바람직한 치료 효과는 병리학적 상태의 진행 속도의 감소, 개선 또는 완화, 및 특정 질환, 장애 또는 병태의 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 예를 들어, 특정 질환, 장애 또는 병태와 관련된 하나 이상의 증상이 완화되거나 또는 제거된다면, 개체는 성공적으로 "치료된다".
" 유효량 "은 목적하는 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투약량으로 그리고 시간 기간 동안 적어도 유효한 양을 지칭한다. 유효량은 1회 이상의 투여로 제공될 수 있다. 본 명세서의 유효량은 질환 상태, 연령, 성별 및 개체의 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 유발하기 위한 치료 능력과 같은 인자에 따라 다를 수 있다. 유효량은 또한 임의의 독성 또는 유해한 치료 효과가 치료적으로 유리한 효과보다 더 큰 양이다. 예방적 용도를 위해, 유리한 또는 목적하는 결과는 질환의 발생 동안 제시되는 질환, 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상을 포함하는, 질환의 위험의 제거 또는 감소, 질환의 중증도의 감소 또는 질환 개시의 지연과 같은 결과를 포함한다. 치료적 용도를 위해, 유리한 또는 목적하는 결과는 질환으로부터 초래되는 하나 이상의 증상의 감소, 질환으로 고통받는 것의 삶의 질 증가, 질환을 치료하는 데 필요한 다른 의약 용량의 감소, 예컨대 질환을 표적화, 진행의 지연 및/또는 생존 연장을 통해 다른 의약 효과의 향상과 같은 임상 결과를 포함한다. 유효량의 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물은 직접적으로 또는 간접적으로 예방 또는 치료적 처치를 달성하는 데 충분한 양이다. 임상 관련하여 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물의 유효량은 다른 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물과 함께 달성될 수도 있거나 또는 달성되지 않을 수도 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제를 투여하는 것과 관련하여 고려될 수 있고, 단일 제제는 하나 이상의 다른 제제와 함께, 목적하는 결과가 달성될 수 있다면 유효량으로 주어지도록 고려될 수 있다.
위험의 치료, 예방 또는 감소의 목적을 위한 " 개체 "는 인간, 가축 및 농장 동물, 동물원, 스포츠 또는 반려 동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 게르빌루스, 마우스, 페릿, 래트, 고양이 등을 포함하는 포유류로서 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 개체는 인간이다.
본 명세서에서 사용되는 다른 화합물 또는 조성물과 " 함께 " 투여는 동시 투여 및/또는 상이한 시간에 투여를 포함한다. 함께 투여는 또한 상이한 투약 빈도 또는 간격에서, 그리고 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 이용하는 것을 포함하는 공동 제형으로서의 투여 또는 별개의 조성물로서의 투여를 포함한다. 일부 실시형태에서, 공동 투여는 동일한 치료 요법의 부분으로서의 투여이다.
본 명세서에 사용된 용어 " 약 "은 당업자에게 용이하게 알려진 각각의 값에 대한 보통의 오차 범위를 지칭한다. 본 명세서의 "약" 값 또는 매개변수에 대한 언급은 특정 값 또는 매개변수에 관한 실시형태를 포함한다(그리고 기재한다).
본 명세서에서 사용되고 첨부하는 청구 범위에서, 단수의 형태는 문맥에서 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 하나 내지 다수의 항체, 예컨대 몰량에 대한 언급이며, 당업자에게 공지된 동등물 등을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 개시내용의 양상 및 실시형태는 "포함하는", "이루어진" 및 "본질적으로 이루어진" 양상 및 실시형태를 포함한다는 것이 이해된다.
개요
본 개시내용은, 부분적으로, 예를 들어, CD33의 세포 표면 수준을 감소시키고/시키거나 개선/향상된 동력학으로 CD33에 결합할 수 있는 항체; 이러한 항체를 제조하고 이용하는 방법; 이러한 항체를 함유하는 약제학적 조성물; 이러한 항체를 암호화하는 핵산; 및 이러한 항체를 암호화하는 핵산을 함유하는 숙주 세포를 포함하는, (예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체에 비해) 하나 이상의 개선된 그리고/또는 향상된 기능적 특징을 나타내는 항-CD33 항체에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 적어도 부분적으로, CD33과 하나 이상의 천연 글리칸 리간드 사이의 상호작용을 저해하는 항체의 능력으로 인한 하나 이상의 활성을 가진다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 분해, 하향 조절, 절단, 수용체 탈민감성, 및/또는 CD33의 리소좀 표적화를 유도함으로써 CD33의 세포 발현(예를 들어, 세포 표면 발현)을 감소시키는 항체의 능력에 적어도 부분적으로 기인하는 하나 이상의 활성을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다: a) 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체의 해리 상수(KD)보다 더 낮은 인간 CD33에 대한 해리 상수를 가짐; b) 인간 세포, 예컨대 1차 인간 수지상 세포에 결합함; c) 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체의 최대 유효 농도(EC50)보다 더 낮은 절반의 최대 유효 농도로 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킴(예를 들어, 시험관내 1차 인간 수지상 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킴); d) 예를 들어, KD가 표면 플라스몬 공명 또는 생물층 간섭 측정에 의해 결정될 때, 약 0.061nM 내지 약 0.40nM 범위일 수 있는 인간 CD33에 대한 해리 상수(KD)를 가짐; 및/또는 e. 예를 들어, EC50이 시험관내 유세포분석에 의해 결정될 때, 약 78pM 내지 약 40pM 범위일 수 있는 절반의 최대 유효 농도(EC50)로 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킴(예를 들어, 시험관내 1차 인간 수지상 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킴). 본 명세서에 개시된 바와 같은 절반-최대 유효 농도(EC50)는 본 개시내용의 항-CD33 항체가 세포 상에서 또는 세포 내에서 CD33의 세포 수준을 비처리 세포 수준의 절반으로 감소시키는 농도, 또는 항체가 세포 상의 CD33에 대한 절반-최대 결합을 달성하는 농도를 지칭한다.
유리하게는, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 대조군 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 대조군 항-CD33 항체)에 비해 CD33의 세포 표면 발현을(예를 들어, 최대 대략 1.6배 또는 최대 18배로) 더 강력하게(예를 들어, 더 낮은 EC50으로) 감소시킨다(예를 들어, 실시예 3 참조). 유리하게는, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 대조군 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 대조군 항-CD33 항체)에 비해 CD33에 대해 더 높은 친화도로(예를 들어, 최대 대략 7배 더 높은 친화도로)(예를 들어, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정할 때 더 낮은 KD 값으로) 감소시킨다. 놀랍게도, CD33에 대한 더 높은 친화도는 CD33의 세포 표면 발현 감소 능력 또는 효능의 증가와 반드시 상관관계가 있지는 않다.
본 개시내용의 특정 양상은, 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교세포의 세포 성장 감소; 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, M2 미세아교세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및/또는 M2 대식세포에 유도되는 T 세포 증식의 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포 생존의 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포 증식의 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포 이동의 저해; 호중구, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 하나 이상의 기능의 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포 증식의 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 전반적 기능성의 감소; 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 급성 골수 백혈병, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암으로 선택되는 다양한 유형에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 본태성진전, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 및 다발성 경화증으로부터 선택되는 다양한 유형의 신경학적 장애에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 종양 세포 상의 CD33 리간드에 대한 결합; 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, T 세포, 호중구 및/또는 대식세포 상의 CD33 리간드에 대한 결합; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 증식 활성의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 전이 활성의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수 유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상 상에서 발현된 하나 이상의 염증 수용체, 예컨대 CD86의 조절된 발현; 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 골수 유래 억제 세포, 종양-관련 대식세포, 면역억제자 호중구, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양 내로의 침윤 향상; 종양에서, 말초 혈액, 또는 기타 림프계 기관에서 종양-촉진성 골수/과립구 면역-억제 세포 수의 증가; 골수-유래 억제 세포의 종양-촉진 활성 향상; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 활성화 감소; 종양 사멸 가능성을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 침윤 감소; 종양 성장률 증가; 종양 재발률의 증가; 항-종양 T 세포 반응을 조절하는 하나 이상의 면역 요법의 효능 감소를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 CD33 활성의 감소, 중화, 방지 또는 제어를 초래하는, 세포 상에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 개선/향상된 능력을 비롯한 (예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체에 비해) 하나 이상의 개선되고/되거나 향상된 특징을 나타내는 항-CD33 항체의 확인에 적어도 부분적으로 기반하되, 선택적으로 한 가지 이상의 면역요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD39, CD70, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD447, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 단백질을 표적화하는 면역요법, 또는 1종 이상의 화학요법제 및/또는 1종 이상의 암 백신이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-CD33 항체를 이용하는 암 치료는: (i) 종양 침윤성 CD3+ T 세포 수의 증가; (ii) 비-종양원성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준 감소, 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 종양 침윤성 세포이거나 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 혈액 중에 존재하지 않음; (iii) 비-종양원성 CD14+ 골수 세포 수의 감소, 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 종양 침윤성 세포이거나 또는 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 혈액에 존재하지 않음; (iv) 하나 이상의 세포에서 PD-L1, PD-L2, B7-H7, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 수준의 감소, 선택적으로 하나 이상의 세포는 비-종양원성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임; (v) 고형 종양의 종양 성장 속도 감소; (vi) 종양 용적의 감소; (vii) 1종 이상의 PD-1 저해제의 효능 증가; (viii) 1종 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능 증가, 선택적으로 1종 이상의 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적화함; (ix) 1종 이상의 화학치료제의 효능 증가, 선택적으로 1종 이상의 화학치료제는 겜시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신(Adriamycin®), 에피루비신(Ellence®), 탁산, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 5-플루오로유라실(5-FU), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 카보플라틴(Paraplatin®), 및 이들의 임의의 조합; (x) 비-종양형성성 골수-유래 억제 세포(MDSC)의 존재 하에 T 세포의 증식 증가; (xi) 비-종양형성성 골수-유래 억제 세포(MDSC)의 분화, 생존 및/또는 하나 이상의 기능의 저해; 및 (xii) 화학적 또는 방사성 독성과 접합될 때 고형 종양 및 결합된 혈관에서 CD33-발현 면역억제자 비-종양형성성 골수성 세포 및/또는 비-종양형성성 CD14-발현 세포의 사멸일 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 골수성 세포는 CD45+CD14+ 골수성 세포, CD14+ 골수성 세포 및 골수-유래 억제 세포(MDSC)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 골수성 세포는 비-종양형성성 골수성 세포이다. 면역억제자 세포는 때때로 또한 골수-유래 억제자 세포(MDSC)로서 지칭된다. 인간에서, MDSC는 마커의 다음의 조합 중 하나에 의해 정해질 수 있다: (1) CD14+ HLA-DRlow/-, (2) CD14+ IL4Rα+, (3) CD14+ HLA-DR- IL4Rα+, (4) CD34+ CD14+ CD11b+ CD33+, (5) CD11b+ CD14+ CD33+, (6) CD33+ HLA-DR-, (7) Lin- HLA-DR-, (8) Lin- HLA-DR- CD33+, (9) Lin- HLA-DR- CD33+ CD11b+, (10) Lin- CD33+ CD11b+ CD15+, (11) Lin- HLA-DR- CD33+ CD11b+ CD14- CD15+, (12) CD11b+ CD14- CD33+, (13) CD11b+ CD14- HLA-DR- CD33+ CD15+, (14) CD33+ HLA-DR- CD15+, (15) CD15+ IL4Rα+, (16) CD11b+ CD15+ CD66b+, (17) CD15+ FSClow SSChigh, (18) CD15high CD33+, (19) CD11b+ CD14- CD15+, (20) CD66b+ SSChigh, 및 (21) CD11b+ CD15+(또한 문헌[Solito S et al. Annals of the NY Academy of Sciences, 2014] 참조). 마우스에서, MDSC는 CD45+, CD11b+, Gr1+ 및/또는 Il4Ra+의 표면 마커의 발현에 의해 정해질 수 있다. 추가적인 예시적 면역억제성 단핵구 계통은 CD45+, CD11b+, Gr1low; 및 CD45+, CD11c+이다.
CD33 단백질
일 양상에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 CD33 단백질 내에서 영역, 예컨대 에피토프와 상호작용하거나 또는 달리 결합하는 항체, 예컨대 단리된(예를 들어, 단클론성) 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 항체는, (예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체에 비해) 개선된/향상된 동력학으로 본 개시내용의 CD33 단백질 내에서, 영역, 예컨대 에피토프와 상호작용하거나 또 다르게는 이에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는, (예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체에 비해) 대조군 항체의 절반의 최대 유효 농도(EC50)보다 더 낮은 절반의 최대 유효 농도로 인간 세포, 예컨대 수지상 세포 상의 CD33 단백질 내에서, 영역, 예컨대 에피토프와 상호작용하거나 또 다르게는 이에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33 단백질에 결합하고, CD33 단백질에 대한 결합 후 하나 이상의 CD33 활성, 예를 들어, 세포 상의 CD33 발현과 관련된 활성을 조절한다. 본 개시내용의 CD33 단백질은 포유류 CD33 단백질, 인간 CD33 단백질, 마우스 CD33 단백질, 및 래트 CD33 단백질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
CD33은 CD33 분자, Siglec3, Siglec-3, CD33 항원 (Gp67), P67, Gp67, 시알산-결합-Ig-유사 렉틴 3, 골수성 세포 표면 항원 CD33 또는 FLJ00391로서 다양하게 지칭된다.
CD33은 대식세포, 수지상 세포, 파골세포, 단핵구 및 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 골수 계통 세포 상에서 주로 발현되는 면역글로불린-유사 수용체이다. 일부 실시형태에서, CD33은 CD64와의 수용체-신호전달 복합체를 형성한다. 일부 실시형태에서, CD33 신호전달은 PI3K 또는 기타 세포내 신호의 하류의 저해를 초래한다. 골수성 세포 상에서, Toll-유사 수용체(TLR) 신호는, 예를 들어, 감염 반응과 관련하여 CD33 활성의 저해에 중요하다. TLR은 또한 병적 염증 반응, 예를 들어, 대식세포 및 수지상 세포에서 발현되는 TLR에서 중요한 역할을 한다.
인간 CD33의 아미노산 서열은 이하에서 서열번호 1로서 제시된다:
Figure pct00003
cyno CD33의 아미노산 서열은 이하에서 서열번호 2로서 제시된다:
Figure pct00004
일부 실시형태에서, CD33은 신호 서열을 포함하는 프레단백질(preprotein)이다. 일부 실시형태에서, CD33은 성숙 단백질이다. 일부 실시형태에서, 성숙 CD33 단백질은 신호 서열을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 성숙 CD33 단백질은 세포 상에서 발현된다. 일부 실시형태에서, 성숙 CD33 단백질은, 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 호중구, 인간 T 세포, 인간 T 헬퍼 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구 및 인간 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 세포, 예컨대 세포 표면 상에서 발현된다. 본 개시내용의 항-CD33 항체는 본 명세서에 개시된 임의의 세포 상에서 발현되는 임의의 본 개시내용의 CD33 단백질에 결합할 수 있다.
본 개시내용의 CD33 단백질, 예컨대 인간 CD33은 서열번호 1의 아미노산 잔기 1 내지 17에 위치된 신호 서열, 서열번호 1의 아미노산 잔기 19 내지 135에 위치된 세포외 면역글로불린-유사 가변-유형(IgV) 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 145 내지 228에 위치된 Ig-유사 C2형 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 260 내지 282에 위치된 막관통 도메인, 서열번호 1의 아미노산 잔기 338 내지 343에 위치된 ITIM 모티프 1, 및 서열번호 1의 아미노산 잔기 356 내지 361에 위치된 ITIM 모티프 2를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 몇몇 도메인을 포함한다. 당업자가 인식하는 바와 같이, 본 개시내용의 도메인의 시작 및 종결 잔기는 도메인을 결정하기 위해 사용되는 컴퓨터 모델링 또는 사용되는 방법에 따라서 다를 수 있다.
본 개시내용의 특정 양상은 포유류 CD33 단백질 및 다른 종으로부터의 CD33 오솔로그를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 인간 CD33, 또는 이의 상동체에 결합하는 항-CD33 항체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 (예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체에 비해) 개선된/향상된 결합 동력학 및/또는 개선된 활성, 예컨대 CD33의 감소된 세포 수준으로 인간 CD33, 또는 이의 상동체에 결합한다.
따라서, 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 "CD33" 단백질은 포유류 CD33 단백질, 인간 CD33 단백질, 영장류 CD33 단백질, 마우스 CD33 단백질, 및 랫트 CD33 단백질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가적으로, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33 단백질 또는 영장류 CD33 단백질 내의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 cyno CD33에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33 및 cyno CD33에 결합할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체는 pH 의존적 방식으로 CD33에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체는 중성 pH에서 CD33에 결합할 수 있고, CD33 단백질로부터 해리되지 않고 내재화될 수 있다. 대안적으로, 산성 pH에서 본 개시내용의 항체는 일단 그들이 내재화되고, 이어서 엔도좀/라이소좀 경로에 의해 분해된다면, CD33으로부터 해리될 수 있다. 특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 5.5 내지 8.0, 5.5 내지 7.5, 5.5 내지 7.0, 5.5 내지 6.5, 5.5 내지 6.0, 6.0 내지 8.0, 6.5 내지 8.0, 7.0 내지 8.0, 7.5 내지 8.0, 6.0 내지 7.5, 6.0 내지 7.0, 6.5 내지 7.5 범위의 pH에서 CD33에 결합한다. 특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 6.0 미만, 5.5 미만, 5.0 미만, 4.5 미만, 4.0 미만, 3.5 미만, 3.0 미만, 2.5 미만 또는 2.0 미만의 pH에서 CD33으로부터 해리된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체는 본 개시내용의 야생형 CD33 단백질, 이의 천연 유래 변이체 및/또는 이의 질환 변이체에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체는 인간 CD33의 변이체에 결합하되, 변이체는 (C) 뉴클레오타이드를 갖는 단일 뉴클레오타이드 다형성(SNP) rs3865444C를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 CD33에 결합하거나 상호작용하는 본 개시내용의 항체는 인간 CD33의 변이체에 결합하되, 변이체는 (A) 뉴클레오타이드를 갖는 SNP rs3865444를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33의 변이체에 결합하되, 변이체는 SNP rs3865444 AC 또는 rs3865444 CC 를 포함한다.
일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 CD33에 결합 또는 상호작용하는 본 개시내용의 항체는 인간 CD33의 변이체에 결합하되, 변이체는 GG 뉴클레오타이드, AA 뉴클레오타이드, 또는 AG 뉴클레오타이드를 갖는 SNP rs35112940을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 CD33에 결합 또는 상호작용하는 본 개시내용의 항체는 인간 CD33의 변이체에 결합하되, 변이체는 CC, CT 또는 TT 유전자형을 갖는 SNP rs12459419를 포함한다. 특정 실시형태에서, 대상체는 GG 뉴클레오타이드, CG 뉴클레오타이드 또는 CC 뉴클레오타이드를 갖는 rs1803인 암호화 SNP에 대해 동형접합체 또는 이형접합체를 가진다.
일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 CD33에 결합 또는 상호작용하는 본 개시내용의 항체는 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 호중구, 인간 T 세포, 인간 T 헬퍼 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구, 및 인간 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 세포 표면 상에서 발현되는 CD33 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준을 감소시키고/시키거나 CD33에 결합 또는 상호작용하는 본 개시내용의 항체는 세포 표면 상에서 발현되는 CD33 단백질에 결합하고, 표면 발현된 CD33 단백질에 대한 결합 후 본 개시내용의 적어도 하나의 CD33 활성을 조절한다(예를 들어, 유도 또는 저해한다). 본 개시내용의 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33 단백질에 특이적으로 결합한다. 본 개시내용의 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 추가로 적어도 하나의 추가적인 Siglec 단백질에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 적어도 하나의 추가적인 Siglec 단백질의 또는 적어도 하나의 추가적인 Siglec 단백질을 발현시키는 세포의 한 가지 이상의 활성을 조절한다.
CD33 리간드
본 개시내용의 CD33 단백질은 하나 이상의 CD33 리간드와 상호작용(예를 들어, 결합)할 수 있다.
예시적인 CD33 리간드는 시알산, 시알산-함유 당지질, 시알산-함유 당단백질, 알파-2,6-연결 시알산-함유 당지질, 알파-2,6-연결 시알산-함유 당단백질, 알파-2,3-연결 시알산-함유 당지질, 알파-2,3-연결 시알산-함유 당단백질, 알파-1-산 당단백질(AGP), CD24 단백질, 강글리오사이드(예를 들어, 시알산화된 글리칸에 연결된 세라마이드를 함유하는 당지질), 분비된 뮤신, 적혈구 상에서 발현되는 CD33 리간드, 박테리아 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포자멸사 세포 상에서 발현되는 CD33, 종양 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 바이러스 상에서 발현되는 CD33, 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 신경 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 신경교 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 미세아교세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 성상세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 베타 아밀로이드 플라크 상의 CD33 리간드, 타우(Tau) 엉킴 상의 CD33 리간드, 질환-원인 단백질 상의 CD33 리간드, 질환-원인 펩타이드 상의 CD33 리간드, 대식세포 상의 CD33 리간드, 자연 살해 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 헬퍼 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포독성 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, B 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-함입 면역억제자 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양-함입 면역억제자 대식세포 상에서 발현되는 CD33, 골수-유래 억제 세포 상에서 발현되는 CD33 및 조절 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 CD33 리간드는 강글리오사이드이다. 강글리오사이드는 일반적으로 통상적인 락토-세라마이드 코어 및 하나 이상의 시알산 잔기를 공유한다.
적합한 강글리오사이드 리간드의 추가적인 예를 표 A에 열거한다. 일반적으로, 강글리오사이드는 당쇄 상에 연결된 하나 이상의 시알산(예를 들어, n-아세틸-네우라민산, NANA)과 함께 글리코스핑고지질로 구성된 분자이다.
[표 A]
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항-CD33 항체
본 개시내용의 특정 양상은 하나 이상의 개선되고/되거나 향상된 기능성 특징으로 이루어진 항-CD33 항체에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 또는 대조군 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)에 비해 하나 이상의 개선되고/되거나 향상된 기능적 특징을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33(예를 들어, 인간 CD33)에 대한 친화도가 기준 도는 대조군 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 친화도보다 더 높다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 또는 대조군 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 절반-최대 유효 농도(EC50)보다 더 낮은 절반-최대 유효 농도로, 인간 세포, 예컨대 인간 1차 수지상 세포에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 또는 대조군 항체(예를 들어, 서열번호 3의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 절반-최대 유효 농도(EC50)보다 더 낮은 절반-최대 유효 농도로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다(예를 들어, 세포 표면 수준을 감소시키거나 줄인다).
CD33의 세포 수준은, 제한 없이, CD33의 세포 표면 수준, CD33의 세포내 수준 및 CD33의 총 수준을 지칭할 수 있다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준의 감소는 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준(예를 들어, CD33의 세포 표면 수준)을 감소시키는 본 개시내용의 항-CD33 항체는 다음의 특징 중 하나 이상을 가진다: (1) 하나 이상의 CD33 활성을 저해하거나 또는 감소시킴; (2) CD33의 그의 리간드 중 하나 이상의 결합을 저해하거나 또는 감소시키는 능력; (3) CD33-발현 세포에서 CD33 발현을 감소시키는 능력; (4) CD33 단백질과 상호작용하거나, 결합하거나 또는 인식하는 능력; (5) CD33 단백질과 특이적으로 상호작용하거나 또는 결합하는 능력; 및 (6) 본 명세서에 기재되거나 또는 상정된 질환 또는 장애의 임의의 양상을 치료하거나, 개선시키거나 또는 예방하기 위한 능력.
본 개시내용의 항-CD33 항체는 표적 항원(예를 들어, 인간 CD33)에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화도를 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체의 해리 상수(KD)는 약 0.001nM 내지 약 100nM이다. 특정 실시형태에서, 항체의 KD는 약 0.01 내지 약 10nM이다. 특정 실시형태에서, 항체의 KD는 약 0.23 내지 약 3.88nM이다. 일부 실시형태에서, 항체의 KD는 약 100nM, 90nM, 80nM, 70nM, 60nM, 50nM, 40nM, 30nM, 20nM, 10nM, 9.5nM, 9nM, 8.5nM, 8nM, 7.5nM, 7nM, 6.5nM, 6nM, 5.5nM, 5nM, 4.5nM, 4nM, 3.5nM, 3nM, 2.5nM, 2nM, 1.5nM, 1nM, 0.9nM, 0.8nM, 0.7nM, 0.6nM, 0.5nM, 0.4nM, 0.3nM, 0.2nM, 0.1nM, 0.05nM, 0.01nM, 또는 0.005nM 이하이다. 일부 실시형태에서, 항체의 KD는 약 0.40nM 미만이다. 일부 실시형태에서, 항체의 KD는 약 0.30nM 미만이다. 일부 실시형태에서, 항체의 KD는 약 0.20nM 미만이다. 일부 실시형태에서, KD는 약 0.10nM 미만이다. 일부 실시형태에서, 항체의 KD는 약 0.061nM이다. 일부 실시형태에서, 항체의 KD는 약 0.001nM, 0.005nM, 0.01nM, 0.05nM, 0.1nM, 0.2nM, 0.3nM, 0.4nM, 0.5nM, 0.6nM, 0.7nM, 0.8nM, 0.9nM, 1nM, 1.5nM, 2nM, 2.5nM, 3nM 3.5nM, 4nM, 4.5nM, 5nM, 5.5nM, 6nM, 6.5nM, 7nM, 7.5nM, 8nM, 8.5nM, 9nM, 9.5nM, 10nM, 20nM, 30nM, 40nM, 50nM, 60nM, 70nM, 80nM 또는 90nM 이상이다. 즉, 항체의 KD는 약 100nM, 90nM, 80nM, 70nM, 60nM, 50nM, 40nM, 30nM, 20nM, 10nM, 9.5nM, 9nM, 8.5nM, 8nM, 7.5nM, 7nM, 6.5nM, 6nM, 5.5nM, 5nM, 4.5nM, 4nM, 3.5nM, 3nM, 2.5nM, 2nM, 1.5nM, 1nM, 0.9nM, 0.8nM, 0.7nM, 0.6nM, 0.5nM, 0.4nM, 0.3nM, 0.2nM, 0.1nM, .05nM, 0.01nM, 또는 0.005nM의 상한, 및 약 0.001nM, 0.005nM, 0.01nM, 0.05nM, 0.1nM, 0.2nM, 0.3nM, 0.4nM, 0.5nM, 0.6nM, 0.7nM, 0.8nM, 0.9nM, 1nM, 1.5nM, 2nM, 2.5nM, 3nM 3.5nM, 4nM, 4.5nM, 5nM, 5.5nM, 6nM, 6.5nM, 7nM, 7.5nM, 8nM, 8.5nM, 9nM, 9.5nM, 10nM, 20nM, 30nM, 40nM, 50nM, 60nM, 70nM, 80nM, 또는 90nM의 독립적으로 선택된 하한을 갖는 임의의 친화도 범위일 수 있되, 하한은 상한 미만이다. 일부 실시형태에서, 항체의 KD는 약 10nM, 약 9nM, 약 8nM, 약 7nM, 약 6nM, 약 5nM, 약 4nM, 약 3nM, 약 2nM, 약 1nM, 약 900pM, 약 800pM, 약 700pM, 약 600pM, 약 500pM, 약 400pM, 약 300pM, 약 200pM, 또는 약 100pM 중 어느 것이다. 예를 들어, 표면 플라스몬 공명 또는 생물층 간섭 측정을 이용하는 것을 포함하는, 항체 친화도를 측정하는 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 이하의 실시예 3 참조). 일부 실시형태에서, CD33에 대한 KD는 대략 25℃의 온도에서 결정된다. 일부 실시형태에서, CD33에 대한 KD는 대략 4℃의 온도에서 결정된다. 일부 실시형태에서, KD는 1가 항체(예를 들어, Fab) 또는 1가 형태로 전장 항체를 이용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, KD는 2가 항체 및 단량체 재조합 CD33 단백질을 이용하여 결정된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)보다 CD33에 대해 더 낮은 해리 상수(KD)를 가진다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표적에 대한 기준 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 KD 보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 99% 더 낮은 표적(예를 들어, 인간 CD33)에 대한 KD를 가진다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표적에 대한 기준 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 KD보다 적어도 약 1-배, 적어도 약 1.1-배, 적어도 약 1.5-배, 적어도 약 2-배, 적어도 약 3-배, 적어도 약 4-배, 적어도 약 5-배, 적어도 약 6-배, 적어도 약 7-배, 적어도 약 8-배, 적어도 약 9-배, 적어도 약 10-배, 적어도 약 12.5-배, 적어도 약 15-배, 적어도 약 17.5-배, 적어도 약 20-배, 적어도 약 22.5-배, 적어도 약 25-배, 적어도 약 27.5-배, 적어도 약 30-배, 적어도 약 50-배, 또는 적어도 약 100-배 더 낮은 표적(예를 들어, 인간 CD33)에 대한 KD를 가진다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체보다 적어도 7배 더 큰 인간 CD33에 대한 KD를 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-CD33 항체보다 적어도 1.8배 더 큰 인간 CD33에 대한 KD를 갖는다. 일부 실시형태에서, 친화도는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 친화도는 대략 25℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, 친화도는 대략 4℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, 친화도는 이하의 실시예에 기재하는 바와 같은 실험 접근을 이용하여 측정된다.
본 개시내용의 항-CD33 항체는 (예를 들어, 1차 인간 수지상 세포를 이용하여 시험관내에서 측정될 때) 피코몰 범위로 절반의 최대 유효 농도(EC50)로 CD33의 세포 수준(예를 들어, 세포 표면 수준)을 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체의 EC50은 약 0.1pM 내지 약 500pM이다. 특정 실시형태에서, 항체의 EC50은 약 1pM 내지 약 250pM이다. 특정 실시형태에서, 항체의 EC50은 약 27pM 내지 약 40pM이다. 특정 실시형태에서, 항체의 EC50은 약 78pM 내지 약 40pM이다. 일부 실시형태에서, 항체의 EC50은 약 500pM, 400pM, 300pM, 250pM, 225pM, 200pM, 175pM, 150pM, 125pM, 100pM, 75pM, 50pM, 25pM, 10pM, 1pM, 또는 0.5pM 이하이다. 일부 실시형태에서, 항체의 EC50은 약 74.3pM 이하이다. 일부 실시형태에서, 항체의 EC50은 약 0.1pM, 0.5pM, 1pM, 10pM, 25pM, 50pM, 75pM, 100pM, 125pM, 150pM, 175pM, 200pM, 225pM, 250pM, 300pM, 또는 400pM 이상이다. 즉, 항체의 EC50은 약 500pM, 400pM, 300pM, 250pM, 225pM, 200pM, 175pM, 150pM, 125pM, 100pM, 75pM, 50pM, 25pM, 10pM, 1pM, 또는 0.5pM의 상한, 및 약 0.1pM, 0.5pM, 1pM, 10pM, 25pM, 50pM, 75pM, 100pM, 125pM, 150pM, 175pM, 200pM, 225pM, 250pM, 300pM 또는 400pM의 독립적으로 선택된 하한을 갖는 임의의 범위일 수 있되, 하한은 상한 미만이다. 일부 실시형태에서, 항체의 EC50은 임의의 약 1pM, 2pM, 3pM, 4pM, 5pM, 6pM, 7pM, 8pM, 9pM, 10pM, 15pM, 20pM, 25pM, 30pM, 35pM, 40pM, 45pM, 50pM, 55pM, 60pM, 65pM, 70pM, 75pM, 80pM, 85pM, 90pM, 95pM, 100pM, 105pM, 110pM, 115pM, 120pM, 125pM, 130pM, 135pM, 140pM, 145pM, 150pM, 155pM, 160pM, 165pM, 170pM, 175pM, 180pM, 185pM, 190pM, 195pM 또는 200pM이다. 예를 들어, 유세포분석을 포함하는, 항체 EC50 값을 측정하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 이하의 실시예 3 참조). 일부 실시형태에서, EC50은 1차 인간 수지상 세포를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 1차 인간 단핵구를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 1차 인간 대식세포를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 인간 CD33으로 형질감염된 배양 세포를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 대략 4℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 대략 25℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 대략 35℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 대략 37℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 1가 항체(예를 들어, Fab) 또는 1가 형태로 전장 항체를 이용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 향상된 Fc 수용체 결합을 보여주는 불변 영역을 함유하는 항체를 이용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 감소된 Fc 수용체 결합을 보여주는 불변 영역을 함유하는 항체를 이용하여 결정된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)보다 더 낮은 EC50(예를 들어, 1차 인간 수지상 세포를 이용하여 시험관내에서 측정한 바와 같음)로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 EC50보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 99% 더 낮은 EC50으로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다(예를 들어, 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다). 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 기준 항-CD33 항체(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체)의 EC50보다 적어도 약 1-배, 적어도 약 1.1-배, 적어도 약 1.5-배, 적어도 약 2-배, 적어도 약 3-배, 적어도 약 4-배, 적어도 약 5-배, 적어도 약 6-배, 적어도 약 7-배, 적어도 약 8-배, 적어도 약 9-배, 적어도 약 10-배, 적어도 약 12.5-배, 적어도 약 15-배, 적어도 약 17.5-배, 적어도 약 20-배, 적어도 약 22.5-배, 적어도 약 25-배, 적어도 약 27.5-배, 적어도 약 30-배, 적어도 약 50-배, 또는 적어도 약 100-배 더 낮은 EC50로 CD33의 세포 수준을 감소시킨다(예를 들어, 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시킨다). 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체보다 적어도 1.2-배 내지 1.6-배 또는 1.1-배 내지 1.6배 더 낮은 EC50을 가진다. 일부 실시형태에서, EC50은 1차 인간 수지상 세포를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 1차 인간 단핵구를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 1차 인간 대식세포를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 인간 CD33으로 형질감염된 배양 세포를 이용하여 시험관내에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 유세포분석에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 대략 25℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 대략 35℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 대략 37℃의 온도에서 측정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 향상된 Fc 수용체 결합을 보여주는 불변 영역을 함유하는 항체를 이용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 감소된 Fc 수용체 결합을 보여주는 불변 영역을 함유하는 항체를 이용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, EC50은 이하의 실시예 3에 기재하는 바와 같은 실험 접근을 이용하여 측정된다.
본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 임의의 시험관내 세포 기반 분석 또는 적합한 생체내 모델은 CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)의 저해를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 본 명세서에 기재된 또는 당업계에 공지된 임의의 시험관내 분석 또는 세포 기반 배양 분석을 이용하여 포화 항체 농도에서 적어도 21%, 적어도 22%, 적어도 23%, 적어도 24%, 적어도 25%, 적어도 26%, 적어도 27%, 적어도 28%, 적어도 29%, 적어도 30%, 적어도 31%, 적어도 32%, 적어도 33%, 적어도 34%, 적어도 35%, 적어도 36%, 적어도 37%, 적어도 38%, 적어도 39%, 적어도 40%, 적어도 41%, 적어도 42%, 적어도 43%, 적어도 44%, 적어도 45%, 적어도 46%, 적어도 47%, 적어도 48%, 적어도 49%, 적어도 50%, 적어도 51%, 적어도 52%, 적어도 53%, 적어도 54%, 적어도 55%, 적어도 56%, 적어도 57%, 적어도 58%, 적어도 59%, 적어도 60%, 적어도 61%, 적어도 62%, 적어도 63%, 적어도 64%, 적어도 65%, 적어도 66%, 적어도 67%, 적어도 68%, 적어도 69%, 적어도 70%, 적어도 71%, 적어도 72%, 적어도 73%, 적어도 74%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 77%, 적어도 78%, 적어도 79%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 그 이상만큼 CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33의 세포 표면 클러스터링을 저해한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 Src 패밀리 타이로신 키나제, 예컨대 LCK 및 FYN에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 인산화 중 하나 이상에 대응; 타이로신-특이적 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 보충 및 이에 대한 결합; Dynamini-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 보충 및 이에 대한 결합; SH2-도메인 함유 단백질(예를 들어, Crkl)의 보충 및 이에 대한 결합; 비장 타이로신 키나제 Syk의 보충 및 이에 대한 결합; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합 단백질 2(Grb2)의 보충 및 이에 대한 결합; 다중 SH2-함유 단백질의 보충 및 이에 대한 결합; 단백질 키나제 C에 의한 Ser-307 및 Ser-342의 인산화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 호중구, 및/또는 미세아교세포에서 하나 이상의 항-염증 사이토카인, IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체의 조절된 발현; 세포내 칼슘 동원의 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포에서 하나 이상의 전-염증 사이토카인 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1 및 MIP-1-베타의 조절된 발현; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로부터 선택되는 1종 이상의 단백질의 조절된 발현; 세포외 신호-조절된 키나제(ERK) 인산화의 저해; 다중 세포 단백질 상의 타이로신 인산화 감소; C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 조절된 발현; CCL19 및 CCL21 발현 세포에 대한 미세아교세포 세포 주화성의 저해; 포스포이노시타이드 3-키나제의 활성화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교세포의 세포 성장 감소; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, M2 미세아교세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및/또는 M2 대식세포에 의해 유도된 T 세포 증식의 감소; 파골세포 생성의 저해, 파골세포형성 속도 감소, 또는 둘 다; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 생존 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 증식 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 이동 저해; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 하나 이상의 기능의 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포 성숙의 저해; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 세포사 및 세포자멸사 증가; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 식세포 활성 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 증식 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 전반적 기능성의 감소, ITAM 함유 수용체의 인산화; ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화; 패턴 인식 수용체 활성화의 감소; Toll-유사 수용체의 활성화 감소; 세포 및 단백질 파편의 클리어런스의 손상-연관 활성화 감소; CD33과 이의 하나 이상의 리간드 간의 상호작용; CD33과 공-수용체, 예컨대 CD64 간의 상호작용; 세포자멸사 뉴런 클리어런스, 신경 조직 파편 클리어런스, 역기능 시냅스 클리어런스, 비신경 조직 파편 클리어런스, 박테리아 또는 다른 이물질 신체 클리어런스, 질환-원인 단백질 클리어런스, 및 종양 세포 클리어런스로부터 선택된 클리어런스의 하나 이상의 유형의 감소; 세포자멸사 뉴런, 신경 조직 파편, 비신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산, 질환-원인 지질 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식세포작용의 저해; 질환-원인 핵산의 클리어런스 저해, 예컨대 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4) 반복부-확장 RNA임; 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로부터 선택되는 질환-원인 단백질의 클리어런스 활성화; 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 급성 골수 백혈병, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암으로 선택되는 다양한 유형에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 본태성진전, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 및 다발성 경화증으로부터 선택되는 다양한 유형의 신경학적 장애에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증 및 골파제트병으로부터 선택되는 상이한 유형의 염증 및 감염성 장애에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 종양 세포 상의 CD33 리간드에 대한 결합; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, T 세포, 호중구, 및/또는 대식세포 상의 CD33 리간드에 대한 결합; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 증식 활성의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 전이 활성의 저해; 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-연관 대식세포, 또는 조절 T 세포의 촉진; 하나 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10 및 DAP12의 저해; 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I(서열번호 104)을 함유하는 하나 이상의 수용체의 저해; 하나 이상의 패턴 인식 수용체(PRR), 예컨대 병원균-연관 분자 패턴(PAMP)을 확인하는 수용체, 및 손상-연관 분자 패턴(DAMP)을 확인하는 수용체; 하나 이상의 Toll-유사 수용체에 의한 신호전달의 저해; JAK-STAT 신호전달 경로의 저해; 활성화된 B 세포의 핵 인자 카파-경쇄 인핸서(NFκB)의 저해; PLCγ/PKC/칼슘 동원의 저해; PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에서 발현되는 하나 이상의 염증 수용체, 예컨대 CD86의 감소된 발현; 하나 이상의 CD33-의존적 유전자의 발현 증가; 붕괴된 CD33-의존적 유전자 발현의 정상화; 및 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자, 예컨대 NFAT 전사 인자의 발현 감소를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 저해한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 종양 침윤성 CD3+ T 세포 수의 증가; 혈액 중에 존재하는 CD14+골수성 세포, 예컨대 종양 침윤성 CD14+ 골수성 세포 및 CD14+ 골수성 세포에서 CD33의 세포 수준의 감소; CD14+ 골수성 세포, 예컨대 종양 침윤성 CD14+ 골수성 세포 및 혈액 중에 존재하는 CD14+ 골수성 세포의 감소; 하나 이상의 세포, 예컨대 골수-유래 억제 세포(MDSC)에서 PD-L1, PD-L2, B7-H7, B7-H3, CD200R, CD163, 및/또는 CD206 수준의 감소; 고형 종양의 종양 성장률의 감소; 종양 용적의 감소; 1종 이상의 PD-1 저해제 효능의 증가; 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 관문 저해제 요법 및/또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3 중 하나 이상, 또는 이들의 임의의 조합을 표적화하는 면역-조절 요법의 효능 증가; 1종 이상의 화학치료제의 효능 증가를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 나타내되, 선택적으로 화학치료제 중 하나 이상은 겜시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신(Adriamycin®), 에피루비신(Ellence®), 탁산, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 5-플루오로유라실(5-FU), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 카보플라틴(Paraplatin®), 옥살리플라틴(Elotaxin®), 류코보린, 테마졸라마이드(Temodar®), 및 이들의 임의의 조합; 골수-유래 억제 세포(MDSC)의 존재 하에 T 세포 증식의 증가; 골수-유래 억제 세포(MDSC)의 분화, 생존 및/또는 하나 이상의 기능의 저해; 및 화학적 또는 방사성 독소에 접합될 때 고형 종양 및 결합된 혈관에서의 CD33-발현 면역억제자 비-종양형성성 골수성 세포 및/또는 비-종양형성성 CD14-발현 세포의 사멸이다.
일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 적혈구 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 박테리아 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포자멸사 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 바이러스 상에서 발현되는 CD33 리간드, 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 신경 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 신경교 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 미세아교세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 성상세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 베타 아밀로이드 플라크 상에서 발현되는 CD33 리간드, 타우 엉킴 상의 CD33 리간드, 질환-원인 단백질 상의 CD33 리간드, 질환-원인 펩타이드 상의 CD33 리간드, 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 자연 살해 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, T 헬퍼 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 세포독성 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, B 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양 포매된 면역억제자 수지상 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 종양 포매된 면역억제자 대식세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 골수-유래 억제자 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 조절 T 세포 상에서 발현되는 CD33 리간드, 분비된 뮤신, 시알산, 시알산-함유 당지질, 시알산-함유 당단백질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,6-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당지질, 알파-2,3-연결된 시알산-함유 당단백질, 알파-1-산 당단백질(AGP), CD24 단백질, 및 강글리오사이드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 CD33 리간드와 본 개시내용의 CD33 단백질 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포 표면 상에서 발현된 본 개시내용의 CD33 단백질에 결합하고, 네이키드 항체는 CD33 단백질과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 CD33 단백질에 결합하는 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포 표면 상에서 또는 세포 내부에서 이들 단백질과 상호작용하도록 이용 가능한 CD33의 유효한 수준을 감소시킴으로써 CD33 단백질과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 CD33 단백질에 결합하는 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33의 분해를 유도함으로써 CD33 단백질과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, CD33의 수준은 CD33을 암호화하는 유전자의 발현 수준; CD33을 암호화하는 하나 이상의 전사체의 발현 수준; CD33 단백질의 발현 수준; 및/또는 세포 내의 그리고/또는 세포 표면 상에 존재하는 CD33 단백질의 양을 지칭할 수 있다. 유전자 발현, 전사, 번역 및/또는 단백질 존재비 또는 국소화 수준을 측정하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법은 CD33 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
추가적으로, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암을 포함하는 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마(Trypanosome) 감염, 크루지(Cruzi) 감염, 슈도모나스 에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 감염, 리슈마니아 도노반(Leishmania donovani) 감염, 그룹 B 스트렙토코커스(Streptococcus) 감염, 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni) 감염, 네이세리아 메닌기디티스(Neisseria meningiditis) 감염, I형 HIV 및/또는 헤모필루스 인플루엔자를 예방하거나, 이의 위험을 감소시키거나 또는 이를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식의 유도 또는 촉진이 필요한 개체에서 이들을 유도하거나 또는 촉진시키기 위해; 또는 조절 T 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-연관 대식세포, 급성 골수성 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포, 및/또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포의 활성, 작용성 또는 생존의 감소가 필요가 필요한 개체에서 이들의 감소를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 단클론성 항체이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준(예를 들어, 세포 표면 수준, 세포내 수준 및/또는 총 수준)을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 절단을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 내재화를 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 쉐딩(shedding)을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 분해를 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33의 탈감작을 유도한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 CD33을 일시적으로 활성화시키기 위해 리간드 모방체로서 작용한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, CD33의 세포 수준의 감소 및/또는 CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)의 저해를 유도하기 전에 CD33을 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, CD33의 분해를 유도하기 전에 CD33을 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, CD33의 절단을 유도하기 전에 CD33을 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, CD33의 내재화를 유도하기 전에 CD33을 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, CD33의 쉐딩을 유도하기 전에 CD33을 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, CD33 발현의 하향조절을 유도하기 전에 CD33을 일시적으로 활성화시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 리간드 모방체로서 작용하고, CD33의 탈감작을 유도하기 전에 CD33을 일시적으로 활성화시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체는 인간 항체, 인간화된 항체, 이중 특이성 항체, 단클론성 항체, 다가 항체, 또는 키메라 항체이다. 이러한 항체의 예시적인 설명은 본 개시내용 전체적으로 발견된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 포유류 CD33 단백질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 인간 CD33 또는 이의 상동체에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33에 결합하며, CD33 오솔로그 또는 다른 종으로부터의 상동체와 교차반응하지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33에 결합하지만, cyno CD33에는 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 인간 CD33과 cyno CD33 둘 다에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포 표면 상에서 발현된 본 개시내용의 CD33 단백질에 결합하며, 표면-발현된 CD33 단백질에 결합 후에 본 개시내용의 하나 이상의 CD33 활성을 조절한다(예를 들어, 유도하거나 또는 저해한다). 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 비활성 항체이다.
항-CD33 항체 결합 영역
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 입체구조적 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 불연속 CD33 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 불연속 CD33 에피토프는 2개 이상의 펩타이드, 3개 이상의 펩타이드, 4개 이상의 펩타이드, 5개 이상의 펩타이드, 6개 이상의 펩타이드, 7개 이상의 펩타이드, 8개 이상의 펩타이드, 9개 이상의 펩타이드, 또는 10 개 이상의 펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하나 이상의 펩타이드를 하나 이상의 펩타이드를 포함하는 CD33 에피토프에 결합할 수 있다. 본 명세서에 개시하는 바와 같이, CD33 에피토프는 서열번호 1의 아미노산 서열의 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 11개 이상, 12개 이상, 13개 이상, 14개 이상, 15개 이상, 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열번호 1의 아미노산 서열에 대응하는 포유류 CD33 단백질 상에서 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 11개 이상, 12개 이상, 13개 이상, 14개 이상, 15개 이상, 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 하나 이상의 펩타이드를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체에 의해 결합되는 CD33 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 CD33의 에피토프에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체에 의해 결합되는 동일한 CD33 에피토프에 본질적으로 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체의 결합을 경쟁적으로 저해한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33(예를 들어, 인간 CD33)에 대한 결합에 대해 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표 7, 8, 9, 10, 11 및 표 12에 열거된 임의의 항체로부터 선택된 적어도 하나의 항체의 결합을 경쟁적으로 저해한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 적어도 하나의 항체, 및 이들의 임의의 조합의 결합을 경쟁적으로 저해한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체가 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합의 CD33에 대한 결합을 항-CD33 항체의 부재 하의 CD33에 대한 결합에 비해 약 50% 내지 100% 범위의 양만큼 감소시킬 때, 본 개시내용의 항-CD33항체는 CD33에 대한 결합에 대해 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합과 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체가 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합의 CD33에 대한 결합을 항-CD33 항체의 부재 하의 CD33에 대한 결합에 비해 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100%만큼 감소시킬 때, 본 개시내용의 항-CD33항체는 CD33에 대한 결합에 대해 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합과 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합 CD33에 대한 결합을 100%만큼 감소시키는 본 개시내용의 항-CD33항체는 항-CD33 항체가 본질적으로 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합의 CD33에 대한 결합을 경쟁적으로 차단시킨다는 것을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체 및 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합은 항-CD33 항체 대 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합의 10:1 비, 9:1 비, 8:1 비, 7:1 비, 6:1 비, 5:1 비, 4:1 비, 3:1 비, 2:1 비, 1:1 비, 0.75:1 비, 0.5:1 비, 0.25:1 비, 0.1:1 비, 0.075:1 비, 0.050:1 비, 0.025:1 비, 0.01:1 비, 0.0075: 비, 0.0050:1 비, 0.0025:1 비, 0.001: 비, 0.00075:1 비, 0.00050:1 비, 0.00025:1 비, 0.0001: 비, 1:10 비, 1:9 비, 1:8 비, 1:7 비, 1:6 비, 1:5 비, 1:4 비, 1:3 비, 1:2 비, 1:0.75 비, 1:0.5 비, 1:0.25 비, 1:0.1 비, 1:0.075 비, 1:0.050 비, 1:0.025 비, 1:0.01 비, 1:0.0075 비, 1:0.0050 비, 1:0.0025 비, 1:0.001 비, 1:0.00075 비, 1:0.00050 비, 1:0.00025 비, 또는 1:0.0001비에 대응하는 양으로 존재한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합의 양에 비해 약 1.5-배 내지100-배 또는 100-배 초과의 범위의 양만큼 과량으로 존재한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합의 양에 비해 약 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 15-배, 20-배, 25-배, 30-배, 35-배, 40-배, 45-배, 50-배, 55-배, 60-배, 65-배, 70-배, 75-배, 80-배, 85-배, 90-배, 95-배 또는 100-배 과량으로 존재한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 열거된 임의의 항체로부터 선택된 적어도 하나의 항체에 의해 결합된 CD33 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 CD33의 에피토프에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 적어도 하나의 항체에 의해 결합된 CD33 에피토프와 동일하거나 중복되는 인간 CD33의 에피토프에 결합한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 열거된 임의의 항체로부터 선택된 적어도 하나의 항체에 의해 결합되는 본질적으로 동일한 CD33 에피토프에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 적어도 하나의 항체에 의해 결합되는 본질적으로 동일한 CD33 에피토프에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하기 위한 상세한 예시적인 방법은 문헌[Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에서 제공된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33(예를 들어, 인간 CD33)에 대한 결합에 대해 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합과 경쟁한다.
항-CD33 항체가 CD33에 대한 결합에 대해 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 하나 이상의 항체, 및 이들의 임의의 조합과 경쟁하는지의 여부를 결정하기 위해 당업계에 공지된 임의의 적합한 경쟁 분석 또는 CD33 결합 분석, 예컨대 BIAcore 분석, ELISA 분석 또는 유세포분석이 이용될 수 있다. 예시적인 경쟁 분석에서, 세포 표면 상에서 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포는 CD33에 결합하는 제1 표지 항체(예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류) 및 CD33에 대한 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 능력에 대해 시험 중인 제2 비표지 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포는 제1 표지 항체를 포함하지만, 제2 비표지 항체는 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이션된다. CD33에 대한 제1 항체의 결합에 허용적인 조건 하에서 인큐베이션 후에, 과량의 비결합 항체가 제거되고, 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 측정된다. 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된다면, 제2 항체는 CD33에 대한 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)] 참조.
항-CD33 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 (표 7에 나타낸 바와 같이) HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로부터 선택되는 하나 이상의(예를 들어, 하나 이상, 둘 이상 또는 모두 셋의) HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 (표 7에 나타낸 바와 같이) HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 (표 8에 나타낸 바와 같이) HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3으로부터 선택되는 하나 이상의(예를 들어, 하나 이상, 둘 이상 또는 모두 셋의) HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 (표 8에 나타낸 바와 같이) HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 (a) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 6C7H54으로부터 선택된 항체 중 임의의 하나, 및 이들의 임의의 조합의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 6C7H54로부터 선택된 항체 중 임의의 하나, 및 이들의 임의의 조합의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 (i) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (ii) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; (iii) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; (iv) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (v) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (vi) 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 및 6C7H54로부터 선택된 항체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 HVR을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3은 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터의 EU 또는 카바트 CDR, 코티아 CDR, 또는 컨택트 CDR 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 경쇄 가변 도메인은 (a) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열번호 52 내지 55으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열번호 58 내지 62로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 중 하나 이상을 포함하고; 그리고/또는 중쇄 가변 도메인은 (a) 서열번호 8 내지 30으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열번호 38 내지 40으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 중 하나 이상을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하되, (a) HVR-H1은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (b) HVR-H1은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (c) HVR-H1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (d) HVR-H1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (e) HVR-H1은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (f) HVR-H1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (g) HVR-H1은 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (h) HVR-H1은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (i) HVR-H1은 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (j) HVR-H1은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (k) HVR-H1은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (l) HVR-H1은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (m) HVR-H1은 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (n) HVR-H1은 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (o) HVR-H1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (p) HVR-H1은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (q) HVR-H1은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (r) HVR-H1은 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (s) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (t) HVR-H1은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (u) HVR-H1은 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (v) HVR-H1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (w) HVR-H1은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (x) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하며; (y) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; (z) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (aa) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하며; (bb) HVR-H1은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (cc) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; (dd) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (ee) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하며; (ff) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (gg) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (hh) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (ii) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하며; (jj) HVR-H1은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하며; (kk) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; (ll) HVR-H1은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하며; (mm) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하며; 그리고 (nn) HVR-H1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-H2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-H3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L1은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하며, HVR-L2는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하고, HVR-L3은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역; 및/또는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 표 11에 열거되거나 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역; 및/또는 표 12에 열거되거나 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 94 내지 103 중 임의의 것으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및/또는 서열번호 65 내지 93 중 임의의 것으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 98의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 99의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; 중쇄 가변 도메인은 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-CD33 항체가 제공되되, 항체는 상기 제공된 임의의 실시형태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시형태에서와 같은 VL을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 항-CD33 항체가 제공되되, 항체는 상기 제공된 임의의 실시형태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시형태에서와 같은 VL을 포함한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 및 93으로부터 선택되는 VH 서열; 및 서열번호 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 및 103으로부터 선택된 VL 서열을 포함하며; 해당 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체의 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 항-CD33 항체가 제공되되, 항체는 상기 제공된 임의의 실시형태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시형태에서와 같은 VL을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 및 93으로부터 선택되는 VH 서열; 및 서열번호 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 및 103으로부터 선택된 VL 서열을 포함하며; 해당 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33항체는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 항체의 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 또는 93의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH) 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 또는 93의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 대해 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 포함하지만, 해당 항-CD33 항체는 CD33에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시형태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열번호 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 또는 93에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열번호 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 또는 93에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 HVR 외부의 영역에서(즉, FR에서) 일어난다. 선택적으로, 항-CD33 항체는 서열번호 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 또는 93의 VH 서열을 포함하며, 해당 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH는 (a) 표 7에 나타낸 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 7에 나타낸 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 7에 나타낸 HVR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 서열번호 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 또는 103의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 서열번호 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 또는 103의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 대해 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 포함하지만, 해당 항-CD33 항체는 CD33에 결합하는 능력을 보유한다. 일부 실시형태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열번호 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 또는 103에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열번호 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 또는 103에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시형태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 HVR 외부의 영역에서(즉, FR에서) 일어난다. 선택적으로, 항-CD33 항체는 서열번호 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 또는 103의 VL 서열을 포함하고, 해당 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 특정 실시형태에서, VL은 (a) 표 8에 나타낸 HVR-L1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 표 8에 나타낸 HVR-L2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 표 8에 나타낸 HVR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H1이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H2이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H3이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H4이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H5이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H6이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H7이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H8이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H9이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H10이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H11이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H12이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H13이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H14이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H15이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H16이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H17이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H18이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H19이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H20이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H21이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H22이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H23이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H24이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H25이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H26이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H27이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H28이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H29이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H30이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H31이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H39이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H49이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H32이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H40이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H43이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H33이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H41이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H50이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H34이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H42이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H44이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H35이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H36이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H37이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H38이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H45이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H46이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H47이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H48이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H51이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H52이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H53이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-CD33 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항-CD33 단클론성 항체 6C7H54이다.
본 명세서에서 항-CD33 항체가 제공된다. 제공된 항체는, 예를 들어, CD33-매개 및/또는 CD33-관련 질환, 병태 또는 장애의 진단 또는 치료에 유용하다.
일부 실시형태에서, 임의의 상기 실시형태에 따른 항-CD33 항체는 인간화 및/또는 인간 항체를 포함하는, 단클론성 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항체 단편, 예를 들어, Fv, Fab, Fab', scFv, 다이어바디 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 실질적으로 전장 항체, 예를 들어, IgGl 항체, IgG2a 항체 또는 본 명세서에 규정되는 바와 같은 기타 항체 부류 또는 아이소타입이다.
일부 실시형태에서, 상기 실시형태 중 어느 것에 따른 항-CD33 항체는 이하에 기재하는 바와 같이, 임의의 특징을 단일로 또는 조합하여 포함할 수 있다:
항-CD33 항체 결합 친화도
본 명세서에 제공된 항체 중 어느 것의 일부 실시형태에서, 항체는 해리 상수(Kd)가 < 1μM, < 100nM, < 10nM, < 1nM, < 0.1nM, < 0.01nM, 또는 < 0.001nM(예를 들어, 10-8M 이하, 예를 들어, 10-8M 내지 10-13M, 예를 들어, 10-9M 내지 10-13M)이다. 해리 상수는 임의의 생화학적 또는 생물리학적 기법, 예컨대 ELISA, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 생체층 간섭계법(예를 들어, 문헌[Octet System by ForteBio] 참조), 등온 적정형 열량계(ITC), 시차주사 열량측정법(DSC), 원이색성 (CD), 유동 정지 분석, 및 표색 또는 형광 단백질 용융 분석을 포함하는 임의의 분석 기법을 통해 결정될 수 있다. 일 실시형태에서, Kd는 방사성표지된 항원 결합 분석(RIA)에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, RIA는, 예를 들어, 문헌[Chen et al. J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)]에 기재된 바와 같은 관심 대상의 항체 및 이의 항원의 Fab 형태를 이용하여 수행된다. 일부 실시형태에서, Kd는 BIACORE 표면 플라즈몬 공명 분석을 이용하여 측정되고, 예를 들어, BIACORE -2000 또는 BIACORE -3000(BIAcore, Inc., 뉴저지주 피스카타웨이에 소재)를 이용하는 분석은 25℃에서 대략 10 반응 단위(RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 이용하여 수행된다. 일부 실시형태에서, KD는 1가 항체(예를 들어, Fab) 또는 전장 항체를 이용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, KD는 1가 형태로 전장 항체를 이용하여 결정된다.
항체 단편
본 명세서에 제공된 임의의 항체의 일부 실시형태에서, 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편 및 이하에 기재하는 기타 단편을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌[Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134(2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어, WO 93/16185; 및 미국 특허 제5571894호 및 제5587458호를 참조한다. 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 검토논의를 위해, 미국 특허 제5869046호를 참조한다.
다이어바디는 2가 또는 이중특이성일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, 유럽 특허 제404097호; WO 1993/01161; 문헌[Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134(2003)] 참조. 트라이어바디 및 테트라바디가 또한 문헌[Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134(2003)]에 기재된다. 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 모두 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 모두 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시형태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다(예를 들어, 미국 특허 제6248516호 참조).
항체 단편은 본 명세서에 기재된 바와 같이, 무손상 항체의 단백질 분해뿐만 아니라 재조합 숙주 세포(예를 들어, 이콜라이(E. coli ) 또는 파지)에 의한 생성을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다양한 기법에 의해 생성될 수 있다.
키메라 및 인간화된 항체
본 명세서에 제공된 임의의 항체의 일부 실시형태에서, 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제4816567호에 기재되어 있다. 일례에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역(예를 들어, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체로부터 변화된 "부류 전환" 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
본 명세서에 제공된 임의의 항체의 일부 실시형태에서, 항체는 인간화된 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 인간에 대한 면역원서을 감소시키도록 인간화된 한편, 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 보유한다. 특정 실시형태에서, 인간화된 항체는 인간에서 실질적으로 비면역원성이다. 특정 실시형태에서, 인간화된 항체는 표적에 대한 친화도가 인간화된 항체가 유래된 다른 종으로부터의 항체와 실질적으로 동일하다. 예를 들어, 미국 특허 제5530101호, 제5693761호; 제5693762호; 및 제5585089호 참조. 특정 실시형태에서, 항원 결합 도메인의 고유 친화도를 감소시키면서 이의 면역원성을 감소시키는 일 없이 변형될 수 있는 항체 가변 도메인의 아미노산이 확인되었다. 예를 들어, 미국 특허 제5766886호 및 제5869619호 참조. 일반적으로, 인간화된 항체는 HVR(또는 이의 일부)가 비-인간 항체로부터 유래되고, FR(또는 이의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체 선택적으로 또한 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시형태에서, 인간화된 항체에서 일부 FR 잔기는 항체 특이성 또는 친화도를 회복 또는 개선하기 위해 비-인간 항체(예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 대응하는 잔기로 치환된다.
인간화된 항체 및 이의 제조 방법은, 예를 들어, 문헌[Almagro et al. Front. Biosci. 13:161 9-1633 (2008)]에서 검토되며, 예를 들어, 미국 특허 제5821337호, 제7527791호, 제6982321호 및 제7087409호에 추가로 기재되어 있다. 인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "베스트-핏(best-fit)" 방법을 이용하여 선택된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙(체세포 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Baca et al. J. Biol. Chem. 272:10678-10684(1997) 및 Rosok et al. J. Biol. Chem. 271:22611-22618(1996)] 참조)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
인간 항체
본 명세서에 제공된 임의의 항체의 일부 실시형태에서, 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 다양한 기법을 이용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌[van Dijk et al. Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001) 및 Lonberg Curr. Opin. Immunol. 20:450-459(2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 항원 시험감염에 반응하여 무손상 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 무손상 항체를 생성하도록 변형된 유전자이식 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 마우스가 마우스 항체의 부재 하에 인간 항체를 생성하는 것으로 예상되는 인간 Ig 좌위의 거대 단편을 갖는 마우스 항체 생성에서 결여된 마우스 균주를 조작할 수 있다. 거대 인간 Ig 단편은 거대 가변 유전자 다양성뿐만 아니라 항체 생성 및 발현의 적절한 조절을 보존할 수 있다. 항체 다양성 및 선택에 대한 마우스 기작 및 인간 단백질에 대한 면역원성 내성의 결여를 이용함으로써, 이들 마우스 균주에서 재생된 인간 항체 레퍼토리는 인간 항원을 포함하는 관심 대상의 임의의 항원에 대해 고친화도의 완전 인간 항체를 수득할 수 있다. 하이브리도마 기술을 이용하여, 목적하는 특이성을 갖는 항원-특이적 인간 MAb가 생성되고 선택될 수 있다. 특정 예시적 방법은 미국 특허 제5545807호, 유럽 특허 제546073호 및 유럽 특허 제546073호에 기재되어 있다. 예를 들어, XENOMOUSE™ 기술을 설명하는 미국 특허 제6075181호 및 제6150584호; HUMAB® 기술을 설명하는 미국 특허 제5770429호; K-M MOUSE® 기술을 설명하는 미국 특허 제7041870호, 및 VELOCIMOUSE® 기술을 설명하는 미국 특허 공개 제2007/0061900호를 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은, 예를 들어, 상이한 인간 불변 영역과 조합함으로써 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다ㄴ. 인간 단클론성 항체의 생성을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이형골수종 세포주가 기재되었다. (예를 들어, 문헌[Kozbor J. Immunol. 133:3001(1984) 및 Boerner et al. J. Immunol. 147:86(1991)] 참조). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌[Li et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1 03:3557-3562(2006)]에 기재되어 있다. 추가적인 방법은, 예를 들어, 미국 특허 제7189826호(하이브리도마 세포주로부터의 단클론성 인간 IgM 항체 생성을 기재함)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌[Vollmers et al. Histology and Histopathology 20(3): 927-937 (2005) 및 Vollmers et al. Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다. 인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리시킴으로써 생성될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 목적하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기법이 이하에 기재된다.
본 명세서에 제공된 임의의 항체의 일부 실시형태에서, 항체는 시험관내 방법에 의해 그리고/또는 목적하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대한 조합 라이브러리 선별에 의해 단리된 인간 항체이다. 적합한 예는 파지 디스플레이(CAT, Morphosys, Dyax, Biosite/Medarex, Xoma, Symphogen, Alexion(formerly Proliferon), Affimed) 리보솜 디스플레이(CAT), 효모 디스플레이(Adimab) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 중합효소 연쇄 반응(PCR)에서 별개로 클로닝되고, 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합되고, 이어서, 문헌[Winter et al. Ann. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같은 항원-결합 파지에 대해 선별될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 목적하는 결합 특징을 갖는 항체에 대해 이러한 라이브러리를 선별하기 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 문헌[Sidhu et al. J. Mol. Biol. 338(2): 299-310, 2004; Lee et al. J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093,2004; Fellouse Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472(2004); 및 Lee et al. J. Immunol. Methods 284(-2):1 19-132(2004)] 참조. 파지는 전형적으로 단일쇄 Fv(scFv) 단편으로서 또는 Fab 단편으로서 항원 단편을 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마 작제의 보충 없이 면역원에 대해 고친화도의 항체를 제공한다. 대안적으로, 천연 레퍼토리가 (예를 들어, 인간으로부터) 클로닝되어 문헌[Griffiths et al. EMBO J. 12: 725-734 (1993)]에 의해 기재된 바와 같은 임의의 면역화 없이 다양한 비-자기 및 또한 자기-항원에 항체의 단일 공급원을 제공한다. 최종적으로, 천연 라이브러리는 또한 문헌[Hoogenboom et al. J. Mol. Biol., 227: 381-388, 1992]에 기재된 바와 같이 줄기 세포로부터의 비배열 V-유전자 세그먼트를 클로닝함으로써, 고도로 가변적인 HVR3 영역을 암호화하는 무작위 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 이용하여 그리고 시험관내 재배열을 달성하도록 합성에 의해 생성될 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 설명하는 특허 간행물은, 예를 들어, 미국 특허 제5750373호, 및 미국 특허 공개 제2007/0292936호 및 제2009/0002360호를 포함한다. 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체는 본 명세서에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
Fc 영역을 포함하는 불변 영역
특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 길항제 항체이다. 특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 작용제인 항체 또는 비활성 항체이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 IgG 부류, IgM 부류 또는 IgA 부류를 가진다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 IgG 부류를 갖고, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 가진다. 본 명세서에 제공된 임의의 항체의 일부 실시형태에서, 항체는 Fc를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc는 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및/또는 IgG4 아이소타입이다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgG 부류, IgM 부류 또는 IgA 부류이다.
특정 실시형태에서, Fc 영역은 이하의 표 E에 열거된 Fc 변이체를 포함한다. Fc 변이체는 표 E에 나타낸 바와 같은 C-말단의 라이신 잔기가 있을 수도 있고 또는 없을 수도 있다.
[표 E]
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
추가적인 항-CD33 항체, 예를 들어, 본 개시내용의 CD33 단백질에 특이적으로 결합하는 항체는 당업계에 공지된 다양한 분석에 의해 그들의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 동정되고/되거나 선별되고/되거나 특성규명될 수 있다.
Fc 감마 수용체에 결합할 수 있는 항- CD33 항체
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 Fc 감마 수용체에 결합하는 능력을 보유한다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 그들이 수용체 활성화와 양립 가능한 정확한 에피토프 특이성을 가질 때 그들을 클러스터링하고 일시적으로, 예를 들어, CD33 수용체를 자극하게 할 수 있는 특징을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 후속적으로 CD33 분해, CD33 탈감작, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 쉐딩, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 CD33의 라이소좀 분해를 유도함으로써 CD33 발현의 및/또는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성의 더 장기간의 저해제로서 작용할 수 있다.
생체내, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 다중 잠재적 메커니즘 중 임의의 하나 이상에 의해 수용체를 클러스터링하고, 일시적으로 CD33을 활성화시킬 수 있다. 인간 항체, 예컨대 IgG2의 일부 아이소타입은 그들의 고유한 구조에 기인하여 수용체를 클러스터링하는 본래의 능력을 가지거나 또는 클러스터링된 입체배치로 수용체를 보유함으로써, Fc 수용체에 대한 결합 없이 CD33과 같은 수용체를 일시적으로 활성화시킨다(예를 들어, 문헌[White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148] 참조).
일부 실시형태에서, 다른 항체는 인접한 세포 상의 Fcg 수용체에 대한 결합에 의해 수용체(예를 들어, CD33)를 클러스터링할 수 있다. 일부 실시형태에서, Fcg 수용체에 대한 항체의 불변 IgG Fc 영역의 결합은 항체의 응집을 야기할 수 있고, 항체는 결국 그들이 그들의 가변 영역을 통해 결합하는 수용체에 응집할 수 있다(Chu et al (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933; 및 Wilson et al., (2011) Cancer Cell 19, 101-113). 일부 실시형태에서, 사이토카인 분비, 산화적 파열, 증가된 식세포작용 및 향상된 항체-의존적, 세포-매개 세포독성(ADCC)을 유발하지 않는 저해 Fcg 수용체 FcgR(FcgRIIB)에 대한 결합이 생체내 항체를 클러스터링하는 바람직한 방법인데, FcgRIIB에 대한 결합이 유해한 면역반응 효과와 관련되지 않기 때문이다.
본 개시내용의 항-CD33 항체가 수용체를 클러스터링할 수 있는 다른 메커니즘이 있다. 예를 들어, 함께 가교되는 항체 단편(예를 들어, Fab 단편)은 상기 기재되는 Fcg 수용체에 결합하는 Fc 영역을 갖는 항체와 유사한 방식으로 수용체(예를 들어, CD33)를 클러스터링하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 가교 항체 단편(예를 들어, Fab 단편)은, 이들이 세포 표면 상에서 수용체 클러스터링을 유도하고 표적(예를 들어, CD33) 상의 적절한 에피토프에 결합한다면, 작용제인 항체로서 일시적으로 작용할 수 있다.
따라서, 일부 실시형태에서, CD33 단백질에 결합하는 본 개시내용의 항체는 그들의 에피토프 특이성으로 인해, 이들이, 예를 들어, CD33의 세포 수준을 감소시키고/시키거나, 하나 이상의 CD33 활성을 저해하고/하거나 CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하기 전에, CD33에 결합하고, 하나 이상의 CD33 활성을 일시적으로 활성화시키는 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 CD33 상의 리간드-결합 부위에 결합하고, 천연 리간드의 작용을 일시적으로 모방하거나, 또는 리간드-결합 부위가 아닌 하나 이상의 도메인에 대한 결합에 의해 신호를 도입하는 표적 항원을 자극할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는 리간드 결합을 방해하지 않을 것이다. 일부 실시형태에서, 항체가 CD33 상의 리간드-결합 부위에 결합하는지 아닌지의 여부와 상관없이, 항체는 후속적으로 CD33 분해, CD33 탈감작, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 쉐딩, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 CD33의 라이소좀 분해를 유도함으로써 CD33 발현의 및/또는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성의 더 장기간의 저해제로서 작용할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 일시적으로 유도하는 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 세포에서 발현되는 CD33 단백질에 대한 결합 후에 하나 이상의 활성을 일시적으로 유도한다. 일부 실시형태에서, CD33 단백질은 세포 표면 상에서 발현된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체에 의해 일시적으로 유도되는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성은 Src 패밀리 타이로신 키나제, 예컨대 LCK 및 FYN에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 인산화; 타이로신-특이적 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 보충 및 이에 대한 결합; Dynamini-1에 대한 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자로서 작용하는 PLC-감마1의 보충 및 이에 대한 결합; SH2-도메인 함유 단백질(예를 들어, Crkl)의 보충 및 이에 대한 결합; 비장 타이로신 키나제 Syk의 보충 및 이에 대한 결합; SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합 단백질 2(Grb2)의 보충 및 이에 대한 결합; 다중 SH2-함유 단백질의 보충 및 이에 대한 결합; 단백질 키나제 C에 의한 Ser-307 및 Ser-342의 인산화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 호중구, 및/또는 미세아교세포에서 하나 이상의 항-염증 사이토카인, IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-베타, IL-1Ra, G-CSF, 및 TNF, IFN-베타1a, IFN-베타1b, 또는 IL-6에 대한 가용성 수용체의 조절된 발현; 세포내 칼슘 동원의 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포에서 하나 이상의 전-염증 사이토카인 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1 및 MIP-1-베타의 조절된 발현; C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, 및 CCR2로부터 선택되는 1종 이상의 단백질의 조절된 발현; 세포외 신호-조절된 키나제(ERK) 인산화의 저해; 다중 세포 단백질 상의 타이로신 인산화 감소; C-C 케모카인 수용체 7 (CCR7)의 조절된 발현; CCL19 및 CCL21 발현 세포에 대한 미세아교세포 세포 주화성의 저해; 포스포이노시타이드 3-키나제의 활성화; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교세포의 세포 성장 감소; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, M2 미세아교세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, 및/또는 M2 대식세포에 의해 유도된 T 세포 증식의 감소; 파골세포 생성의 저해, 파골세포형성 속도 감소, 또는 둘 다; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 생존 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 증식 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 이동 저해; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포의 하나 이상의 기능의 감소; 호중구, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 대식세포, M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포, M2 대식세포, 단핵구, 파골세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 과립구, 미세아교세포, M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포, 및/또는 M2 미세아교세포 성숙의 저해; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 세포사 및 세포자멸사 증가; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 식세포 활성 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 증식 감소; 단핵구, 대식세포, T 세포, 수지상 세포, 호중구 및/또는 미세아교세포의 전반적 기능성의 감소, ITAM 함유 수용체의 인산화; ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화; 패턴 인식 수용체 활성화의 감소; Toll-유사 수용체의 활성화 감소; 세포 및 단백질 파편의 클리어런스의 손상-연관 활성화 감소; CD33과 이의 하나 이상의 리간드 간의 상호작용; CD33과 공-수용체, 예컨대 CD64 간의 상호작용; 세포자멸사 뉴런 클리어런스, 신경 조직 파편 클리어런스, 역기능 시냅스 클리어런스, 비신경 조직 파편 클리어런스, 박테리아 또는 다른 이물질 신체 클리어런스, 질환-원인 단백질 클리어런스, 및 종양 세포 클리어런스로부터 선택된 클리어런스의 하나 이상의 유형의 감소; 세포자멸사 뉴런, 신경 조직 파편, 비신경 조직 파편, 박테리아, 기타 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산, 질환-원인 지질 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식세포작용의 저해; 질환-원인 핵산의 클리어런스 저해, 예컨대 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4) 반복부-확장 RNA임; 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로부터 선택되는 질환-원인 단백질의 클리어런스 활성화; 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 급성 골수 백혈병, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암으로 선택되는 다양한 유형에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 본태성진전, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 및 다발성 경화증으로부터 선택되는 다양한 유형의 신경학적 장애에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증 및 골파제트병으로부터 선택되는 상이한 유형의 염증 및 감염성 장애에 대한 유리한 면역 반응의 저해; 세포자멸사 뉴런, 신경 조직 파편, 기능장애 시냅스, 비-신경 조직 파편, 박테리아, 다른 이물질, 질환-원인 단백질, 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 핵산 또는 종양 세포 중 하나 이상의 식세포작용의 저해, 여기서, 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4) 반복-확장부 RNA, 질환-원인 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드를 포함할 수 있으며, 종양 세포는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 또는 갑상선암으로부터 선택된 암일 수 있음; 종양 세포 상의 CD33 리간드에 대한 결합; 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, T 세포, 호중구, 및/또는 대식세포 상의 CD33 리간드에 대한 결합; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포, 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에 의한 종양 세포 사멸의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 증식 활성의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상의 항-종양 세포 전이 활성의 저해; 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-연관 대식세포, 또는 조절 T 세포의 촉진; 하나 이상의 ITAM 모티프 함유 수용체, 예컨대 TREM1, TREM2, FcgR, DAP10 및 DAP12의 저해; 모티프 D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I(서열번호 104)을 함유하는 하나 이상의 수용체의 저해; 하나 이상의 패턴 인식 수용체(PRR), 예컨대 병원균-연관 분자 패턴(PAMP)을 확인하는 수용체, 및 손상-연관 분자 패턴(DAMP)을 확인하는 수용체; 하나 이상의 Toll-유사 수용체에 의한 신호전달의 저해; JAK-STAT 신호전달 경로의 저해; 활성화된 B 세포의 핵 인자 카파-경쇄 인핸서(NFκB)의 저해; PLCγ/PKC/칼슘 동원의 저해; PI3K/Akt, Ras/MAPK 신호전달의 저해; 미세아교세포, 대식세포, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 호중구, T 세포, T 헬퍼 세포 또는 세포독성 T 세포 중 하나 이상에서 발현되는 하나 이상의 염증 수용체, 예컨대 CD86의 조절된 발현; 하나 이상의 CD33-의존적 유전자의 발현 증가; 붕괴된 CD33-의존적 유전자 발현의 정상화; 및 하나 이상의 ITAM-의존적 유전자, 예컨대 NFAT 전사 인자의 발현 감소를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용의 항-CD33 항체는 임의의 적합한 기법 또는 당업계에 공지되고 본 명세서에 개시된 분석을 이용하여 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 일시적으로 유도하는 그들의 능력에 대해 시험될 수 있다. 이러한 항체가 일시적으로 유도하는 활성과 상관없이, 이러한 항체는 후속적으로 CD33 분해, CD33 탈감작, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 쉐딩, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 CD33의 라이소좀 분해를 유도함으로써 CD33 발현의 및/또는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성의 더 장기간의 저해제로서 작용할 수 있다. 일부 실시형태에서, CD33 항체는 Fc 수용체에 대한 결합과 독립적으로 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 일시적으로 유도한다.
예시적인 항체 Fc 아이소타입 및 변형은 이하의 표 B에 제공한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체에 결합할 수 있는 본 개시내용의 항-CD33 항체는 이하의 표 B에 열거되는 Fc 아이소타입을 가진다.
[표 B]
Figure pct00009
Figure pct00010
표 B에 기재한 아이소타입에 추가로, 이론으로 구속되는 일 없이, 인간에서 Fcg 수용체 I, IIA, IIC, IIIA, IIIB 및/또는 마우스에서 Fcg 수용체 I, III 및 IV에 결합하는 인간 IgG1 또는 IgG3 아이소타입 및 이의 돌연변이체를 갖는 항체(예를 들어, Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 2009, 20:685-691)는 또한 일시적 작용제 항체로서 작용할 수 있다는 것이 생각된다.
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG 부류, IgM 부류 또는 IgA 부류이다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항체는 C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y를 임의의 조합(EU 넘버링에 따른 잔기 위치)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 잔기 위치에서 Fc 영역에서 하나 이상의(예를 들어, 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 11개 이상, 12개 이상 또는 모두 13개의) 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 L234A, L235A 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 L234A, L235A, P331A에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 K322A 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 A330S, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 K322A, A330S 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 K322A, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 A330S, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 S267E 및 L328F에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 C127S에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E345R, E430G 및 S440Y에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 P331S에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 L234A, L235A 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 S267E 및 L328F에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 아미노산 치환의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다.
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG2 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG2 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 저해 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시형태에서, 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB(FcγIIB)이다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 V234A(Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A(Cole et al. (1999) Transplantation, 68:563-571), H268Q, V309L, A330S, P331S(미국 특허 공개 제2007/0148167호; Armour et al. (1999) Eur J Immunol 29: 2613-2624; Armour et al. (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27; Armour et al. (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27), C232S, 및/또는 C233S(White et al.(2015) Cancer Cell 27, 138-148), S267E, L328F(Chu et al., (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933), M252Y, S254T 및/또는 T256E로부터 선택되고, 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 C127S 아미노산 치환을 포함하는 중쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소타입을 갖고, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다(문헌[White et al.,(2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762]; 및 WO2008079246).
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 C214S 아미노산 치환을 포함하는 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 아이소타입을 갖고, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다(문헌[White et al.,(2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762]; 및 WO2008079246).
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG1 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 저해 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시형태에서, 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB(FcγIIB)이다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 N297A(Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D265A(Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276,6591-6604),D270A,L234A,L235A(Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A(Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol,200:16-26), P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G,A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E(McEarchern et al., (2007) Blood,109:1185-1192), P331S(Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA2008,105:20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, 및/또는 T394D로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
일부 실시형태에서, 항체는 IgG2 아이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함한다(White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148). 특정 실시형태에서, IgG2 아이소타입 CH1 및 힌지 영역은 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP (서열번호 105)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 Fc 영역은 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환, 또는 둘다, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 포함하며, 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 IgG4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG4 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 저해 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시형태에서, 저해 Fc 수용체는 저해 Fc-감마 수용체 IIB(FcγIIB)이다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 L235A, G237A, S228P, L236E (Reddy et al., (2000) J Immunol,164:1925-1933), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
특정 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체는 혼성체 IgG2/4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체-결합 항체 인간 IgG2의 EU 넘버링에 따른 아미노산 118 내지 260 및 인간 IgG4의 EU 넘버링에 따른 아미노산 261 내지 447(WO 1997/11971; WO 2007/106585)을 포함한다.
특정 실시형태에서, 상기 항체는 마우스 IgG4 불변 영역을 포함한다(Bartholomaeus, et al. (2014). J. Immunol. 192,2091-2098).
일부 실시형태에서, Fc 영역은 EU 넘버링에 따른 A330L, L234F; L235E 또는 P331S; 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 추가로 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체는 C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 잔기에서 Fc 영역 내 하나 이상의 아미노산 치환을 함유하되, 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G, L234A, L235A 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G 및 K322A에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G, A330S 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G, K322A, A330S 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G, K322A 및 A330S에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E430G, K322A 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 S267E 및 L328F에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 C127S에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 위치 E345R, E430G 및 S440Y에서 아미노산 치환을 포함하며, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시형태에서, 상기 Fc 영역은 위치 L234A, L235A 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따른다.
비활성 항체
본 개시내용의 항-CD33 항체의 다른 부류는 비활성 항체를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, "비활성" 항체는 그들의 표적 항원(예를 들어, CD33)에 특이적으로 결합하지만, 항원 작용을 조절(예를 들어, 감소/저해 또는 활성화/유도)하지않는 항체를 지칭한다. 예를 들어, CD33의 경우에, 비활성 항체는 CD33의 세포 수준을 조절하지 않거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 조절하지 않거나, 또는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 조절하지 않는다. 일부 실시형태에서, 세포 표면 상의 CD33을 클러스터링하는 능력을 갖지 않는 항체는, 그들이 수용체 활성화와 양립 가능한 에피토프 특이성을 가진다고 해도, 비활성 항체일 수 있다.
일부 실시형태에서, CD33 단백질에 결합하는 항체는 CD33에 결합하는 항체를 포함할 수 있지만, 그들의 에피토프 특이성 또는 특징에 기인하여, CD33의 세포 수준을 감소시키지 않고/않거나 CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하지 않는다. 일부 실시형태에서, 이러한 항체는, 예를 들어, 종양 세포 내로 독소(예를 들어, 화학치료제)를 수송하기 위한 화물(cargo)로서 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체는 CD33에 결합하지만 CD33의 세포 수준을 감소시킬 수 없거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해할 수 없거나 또는 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 유도할 수 없는 비활성 항체이다.
세포 상에서 CD33의 세포 수준을 감소시키거나 또는 감소시키지 않는 항체는 하나 이상의 Fcg 수용체에 대해 감소된 결합을 나타내는 비활성 Fc 영역과 조합될 수 있다. 이러한 Fc 영역 및 변형의 예는 이하의 표 C에서 제공된다. 일부 실시형태에서, 비활성 Fc 영역을 갖는 항체는 이하의 표 C에 열거된 Fc 아이소타입을 가진다.
저해 항-CD33 항체
본 개시내용의 항-CD33 항체의 제3 부류는 한 가지 이상의 CD33 활성을 차단하거나 달리 저해하는 항체를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD33 단백질에 결합하는 항체는 CD33의 세포 수준(예를 들어, CD33의 세포 표면 수준)을 감소시키고, CD33 및/또는 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해하고, CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 저해하는 항체를 포함할 수 있다. 이러한 항체는 CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 방지함으로써 또는 하나 이상의 CD33 리간드의 존재 하에서 세포질 내로 CD33의 세포외 도메인으로부터의 신호 형질도입을 방지함으로써 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 저해한다. 항체는 또한 CD33 분해, CD33 탈감작, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 쉐딩, CD33 발현의 하향조절, 및/또는 CD33의 라이소좀 분해를 유도함으로써 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킴으로써 CD33 단백질의 하나 이상의 활성을 저해할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 항-CD33 항체는 CD33을 일시적으로 활성화하지 않을 수도 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 본 개시내용의 일시적 작용제 항-CD33 항체의 에피토프 특이성을 가질 수 있지만, Fcg 수용체와 결합할 수 없고, 따라서, 예를 들어, CD33을 일시적으로 클러스터 및 활성화시킬 수 없는 Fc 도메인을 가진다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 다음의 활성 중 하나 이상을 갖지만, 이들로 제한되지 않는다: 하나 이상의 CD33 리간드에 대한 CD33 단백질, 예컨대 시알산-함유 당지질 또는 시알산-함유 당단백질의 결합을 감소시키는 능력, CD33 단백질에 대한 사이토카인 신호전달(SOCS) 단백질(예를 들어, SOCS3 단백질)의 억제자의 결합을 감소시키는 능력, CD33 단백질의 프로테아좀 분해를 증가시키는 능력, 순환 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, T 세포, 및/또는 미세아교세포 표면 상에서 CD33의 기능성 발현을 감소시키는 능력, Src 패밀리 타이로신 키나제, 예컨대 LCK 및 FYN에 의한 Tyr-340 및 Tyr-358의 인산화를 감소시키는 능력, 타이로신-특이적 단백질 포스파타제 SHP1 및 SHP2의 보충을 감소시키고 이에 대한 결합을 감소시키는 능력, Dynamin-1에 대한 교환 인자인 구아닌 뉴클레오타이드로서 작용하는 PLC-g1의 보충을 감소시키고 이에 대한 결합을 감소시키는 능력, Crkl의 보충을 감소시키고 이에 대한 결합을 감소시키는 능력, 비장 타이로신 키나제 Syk의 보충을 감소시키고 이에 대한 결합을 감소시키는 능력, SH3-SH2-SH3 성장 인자 수용체-결합 단백질 2(Grb2)의 보충을 감소시키고 이에 대한 결합을 감소시키는 능력, 다중 SH2 함유 단백질의 보충을 감소시키고 이에 대한 결합을 감소시키는 능력, 세포내 칼슘 동원을 증가시키는 능력, 전염증 사이토카인 IL-1β, IL-8 및 TNF-α의 생성을 조절하는 능력, 포스포이노시타이드 3-키나제의 활성화를 감소시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 성장을 증가시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포 및/또는 미세아교세포의 생존을 증가시키는 능력, 다중 세포 단백질에 대한 타이로신 인산화를 증가시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 및/또는 미세아교세포의 식세포 활성을 증가시키는 능력, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 세포 증식을 증가시키는 능력, ITAM 신호전달을 매개하는 신호전달 분자의 인산화를 증가시키는 능력, 패턴 인식 수용체의 기ˆŠ을 증가시키는 능력, Toll-유사 수용체의 기능을 증가시키는 능력, 손상-연관 분자 패턴(DAMP) 수용체 기능을 증가시키는 능력, C-C 케모카인 수용체 7(CCR7)의 발현을 조절하는 능력 및 세포 및 단백질 파편의 클리어런스를 증가시키는 능력.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 하나 이상의 Fcg 수용체에 대해 감소된 결합을 나타내는 Fc 영역을 가진다. 이러한 Fc 영역 및 변형의 예는 이하의 표 C에서 제공된다. 일부 실시형태에서, 항체는 이하의 표 C에 열거된 Fc 아이소타입을 가진다.
Fc 감마 수용체에 대해 감소된 결합을 갖는 항체 Fc 아이소타입
일부 실시형태에서, Fc 감마 수용체에 대해 감소된 결합을 갖는 항-CD33 항체는 이하의 표 C에 열거된 Fc 아이소타입을 가진다.
[표 C]
Figure pct00011
특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 IgG1 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 N297A, N297Q (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D270A, D265A, L234A, L235A (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), C226S, C229S (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P238S(Davis et al., (2007) J Rheumatol, 34:2204-2210), E233P, L234V (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P238A, A327Q, A327G, P329A(Shields RL., et al., (2001) J Biol Chem. 276(9):6591-604), K322A, L234F, L235E(Hezareh, et al., (2001) J Virol 75, 12161-12168; Oganesyan et al., (2008). Acta Crystallographica 64, 700-704), P331S(Oganesyan et al., (2008) Acta Crystallographica 64, 700-704), T394D(Wilkinson et al. (2013) MAbs 5(3): 406-417), A330L, M252Y, S254T 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다. 특정 실시형태에서, Fc 영역은 EU 넘버링 협약에 따라 글리신 236에 대응하는 위치에서 아미노산 결실을 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 EU 넘버링 협약에 따라 C220S 아미노산 치환을 포함하는 중쇄 불변 영역을 갖는 IgG1 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 EU 넘버링 협약에 따라 A330L, L234F; L235E, 및/또는 P331S로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 IgG2 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG2 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, V309L, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y, S254T 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다(Vafa O. et al., (2014) Methods 65:114-126).
특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 IgG4 아이소타입을 가진다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 인간 IgG4 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Fc 영역은 (예를 들어, 동일한 아이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 E233P, F234V, L235A, G237A, E318A(Hutchins et al. (1995) ProcNatlAcadSci USA,92:11980-11984), S228P, L234A/F234A, L236E, S241P, L248E(Reddy et al., (2000) JImmunol,164:1925-1933; Angal et al., (1993) Mol Immunol. 30(1):105-8; 미국 특허 제8614299 B2호; Vafa O. et al., (2014) Methods 65:114-126), T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A, 및/또는 N297Q로부터 선택되고, 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgG4 아이소타입을 갖고, 잔기 위치 228에서 S228P 아미노산 치환, 잔기 위치 234에서 F234A 아미노산 치환, 및 잔기 위치 235에서 L235A 아미노산 치환을 포함한다(잔기 위치는 EU 넘버링에 따름).
일부 실시형태에서, Fc 영역은 M252Y, S254T 및/또는 T256E로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환을 추가로 포함하며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다.
추가적인 IgG 돌연변이
일부 실시형태에서, 상보체 활성화를 제거하기 위해 본 명세서에 기재된 IgG1 변이체 중 하나 이상은 A330L 돌연변이(Lazar et al., (2006) Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010), 또는 L234F, L235E, 및/또는 P331S 돌연변이 중 하나 이상(Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172)와 조합될 수 있으며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 협약에 따른다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 IgG 변이체는 인간 혈청에서 항-CD33 항체 반감기를 향상시키기 위해 하나 이상의 돌연변이와 조합될 수 있다(예를 들어, EU 넘버링 협약에 따라 M252Y, S254T, T256E 돌연변이)(Dall'Acqua et al., (2006) J Biol Chem, 281:23514-23524; 및 Strohl e al., (2009) Current Opinion in Biotechnology, 20:685-691).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 IgG4 변이체는 항체 안정화를 향상시키기 위해 EU 넘버링 협약에 따른 S228P 돌연변이(Angal et al., (1993) Mol Immunol, 30:105-108) 및/또는 문헌[Peters et al., (2012) J Biol Chem. 13;287(29):24525-33]에 기재된 하나 이상의 돌연변이와 조합될 수 있다.
이중 특이성 항체
본 개시내용의 특정 양상은 본 개시내용의 CD33 단백질 상의 하나 이상의 도메인 및 제2 항원에 결합하는 이중특이성 항체에 관한 것이다. 이중 특이성 항체를 생성하는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있고, 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 이중 특이성 항체는 본 개시내용의 CD33 단백질의 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 인간 CD33(서열번호 1)의 하나 이상의 아미노산 잔기, 또는 서열번호 1의 아미노산 잔기에 대응하는 CD33 단백질 상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 이중 특이성 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식한다. 일부 실시형태에서, 제1 항원은 CD33 단백질 또는 이의 천연 유래 변이체이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 또한 CD33 단백질, 또는 이의 천연 유래 변이체이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 혈액-뇌-장벽에 걸쳐 수송을 용이하게 하는 항원이다(예를 들어, 문헌[Gabathuler R., Neurobiol. Dis. 37(2010)48-57] 참조). 이러한 제2 항원은 트랜스페린 수용체(TR), 인슐린 수용체(HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGFR), 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 1 및 2(LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, 라마 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페너트라틴, 폴리-알기닌 펩타이드, 안지오펩(Angiopep) 펩타이드, 예컨대 ANG1005(예를 들어, 문헌[Gabathuler, 2010] 참조), 및 혈액-뇌 장벽 내피 세포 상에서 풍부한 다른 세포 표면 단백질(예를 들어, 문헌[Daneman et al., PLoS One. 2010 Oct 29;5(10):e13741] 참조)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 질환-원인 단백질이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, CSF1-수용체, CD3 및 포스파티딜세린을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 면역 세포 상에서 발현되는 하나 이상의 리간드 및/또는 단백질이다. 일부 실시형태에서, 제2 항원은 하나 이상의 종양 세포 상에서 발현되는 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질이다.
항체 단편
본 개시내용의 특정 양상은 본 개시내용의 CD33 단백질, CD33 단백질의 천연 유래 변이체, 및 CD33 단백질의 질환 변이체 중 하나 이상에 결합하는 항체 단편에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.
일부 실시형태에서, 항체 단편은 제2 CD33 항체와 및/또는 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 질환-원인 단백질에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체와; 또는 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, CD47, CSF-1 수용체, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, 포스파티딜세린, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역조절 단백질에 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여 사용된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 단편은 임의의 본 개시내용의 항-CD33 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 작용성 단편일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 단편은 항-CD33 항체 또는 본 개시내용의 항체 단편의 대응하는 전장 항체의 동일한 에피토프를 갖지만, 훨씬 더 작은 분자량을 갖는 미니어처 형태이다. 이러한 미니어처 항-CD33 항체 단편은 영상화 및 진단 효용에 유리한 더 양호한 뇌 침투 능력 및 더 짧은 반감기를 가질 수 있다(예를 들어, 문헌[
Figure pct00012
S et al., Bioconjug Chem. 2014 Feb 19;25(2):335-41;
Figure pct00013
R et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Jan 21;111(3):1108-13; 및 Wiehr S et al., Prostate. 2014 May;74(7):743-55] 참조). 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체 단편은 그들의 대응하는 전장 항체에 비해 더 양호한 뇌 침투를 가지고/가지거나 그들의 대응하는 전장 항체에 비해 더 짧은 반감기를 가진다.
항체 프레임워크
본 명세서에 기재된 임의의 항체는 추가로 프레임워크를 포함한다. 일부 실시형태에서, 프레임워크는 인간 면역글로불린 프레임워크이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 항체(예를 들어, 항-CD33 항체)는 임의의 상기 실시형태에서와 같은 HVR을 포함하고, 추가로 억셉터 인간 프레임워크, 예를 들어, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 포함한다. 인간 면역글로불린 프레임워크는 인간 항체의 부분일 수 있거나, 또는 비-인간 항체는 하나 이상의 내인성 프레임워크를 인간 프레임워크 영역(들)으로 대체함으로써 인간화될 수 있다. 인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "베스트-핏(best-fit)" 방법을 이용하여 선택된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙(체세포 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684(1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618(1996)] 참조)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
전장 항체
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 상기 기재한 가변 중쇄 서열을 포함하는 전장 중쇄 및 상기 기재한 가변 경쇄 서열을 포함하는 전장 경쇄를 포함한다. 특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 서열번호 120 또는 121의 전장 중쇄 서열, 및 서열번호 122의 전장 경쇄 서열을 포함한다.
CD33 활성
면역-관련 단백질의 조절된 발현
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포에서 발현되는 CD33 단백질에 대한 결합 후에 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206의 발현을 조절할 수 있다. 조절된(예를 들어, 증가 또는 감소된) 발현은 유전자 발현에서의 조절, 전사 발현에서의 조절 또는 단백질 발현에서의 조절을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 유전자, 전사체(예를 들어, mRNA) 및/또는 단백질 발현을 결정하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 노던 블롯 분석은 항-염증 매개체 유전자 발현 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있고, RT-PCR은 항-염증 매개체 전사 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있으며, 웨스턴 블롯 분석은 항-염증 매개체 단백질 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료되는 대상의 하나 이상의 세포에서 그의 발현이 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상의 하나 이상의 세포에서 발현되는 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206의 발현에 비해 조절된다면, PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206은 조절된(예를 들어, 증가된 또는 감소된) 발현을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 항체로 치료되지 않는 대응하는 대상의 하나 이상의 세포에서의 PD-L1, PD-L2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상의 하나 이상의 세포에서 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현을 조절할 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않는 대상체의 하나 이상의 세포에서의 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현에 비해, 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체의 하나 이상의 세포에서 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206 발현을 조절한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암을 포함하는 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및 헤모필루스 인플루엔자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD200R, CD163 및/또는 CD206의 비정상 수준과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유용하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 신경퇴행성 질환과 관련된 하나 이상의 2기 미세아교세포 유형(질환-관련 미세아교세포 (DAM) 마커)의 발현을 조절(예를 들어, 증가)할 수 있다. 질환-관련 미세아교세포는 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2의 증가된 발현, 및 휴지 또는 비활성화 미세아교세포에 비해 미세아교세포 항상성 분자 Cx3crl 및 P2ry12 또는 P2ry13의 감소된 발현을 나타내는 미세아교세포를 지칭한다.
따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대응하는 개체의 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 DAM 마커, 예컨대 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, 및 이들의 임의의 조합의 발현에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%만큼 개체의 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 DAM 마커 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, 또는 이들의 임의의 조합의 발현을 증가시킬 수 있다. 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용되는 문헌[Keren-Shaul et al. Cell 169:1276-1290 (2017)] 참조. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항-CD33 항체로 치료되지 않은 대응하는 개체의 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 DAM 마커, 예컨대 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, 및 이들의 임의의 조합의 발현에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5 배, 또는 적어도 10배만큼 개체의 하나 이상의 세포에서 하나 이상의 DAM 마커, 예컨대 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, Trem2, 및 이들의 임의의 조합의 발현을 조절한다(예를 들어, 증가시킨다). 일부 실시형태에서, DAM 마커는 Cst7이다. 일부 실시형태에서, DAM 마커는 Ccl6이다. 일부 실시형태에서, DAM 마커는 Itgax이다. 일부 실시형태에서, 조절은 증가된 발현이다. 일부 실시형태에서, DAM 또는 이의 발현 수의 증가는 염증 활성 없이 미세아교세포 탐식능의 증가를 포함하는, 미세아교세포 탐식능의 증가와 관련된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 적어도 하나의 미세아교세포 관문 분자에 의해 미세아교세포 면역 활성에 부과된 제한을 풀거나 피함으로써 DAM의 수 또는 발현 증가를 야기한다.
추가로 본 명세서에: (a) 처리 전에 개체로부터 얻은 개체로부터의 샘플에서 신경퇴행성 질환(DAM) 마커, 예컨대 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, 및 이들의 임의의 조합과 관련된 하나 이상의 2기 미세아교세포 유형 수준을 측정하는 단계, (b) 제1 처리 후 상기 시점으로부터 얻은 개체로부터의 샘플에서 신경퇴행성 질환(DAM) 마커, 예컨대 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, 및 이들의 임의의 조합과 관련된 하나 이상의 2기 미세아교세포 유형 수준을 측정하는 단계, 및 (c) 단계 ii)에서 측정된 수준을 단계 i)에서 측정된 수준과 비교하는 단계를 포함하는 항-CD33 항체 처리에 대해 개체가 반응자인지 또는 비반응자인지의 여부를 결정하는 방법이 제공되되, 상기 수준 간의 차이는 상기 개체가 반응자인지 또는 비반응자인지를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 상기 수준 간의 차이는 증가이며, 상기 개체가 반응자라는 것을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 상기 수준 간의 차이는 감소이며, 상기 개체가 비반응자라는 것을 나타낸다. 일부 실시형태에서, DAM 마커는 Cst7이다. 일부 실시형태에서, DAM 마커는 Ccl6이다. 일부 실시형태에서, DAM 마커는 Itgax이다.
항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력의 향상 또는 정규화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포에서 발현되는 CD33 단백질에 대한 결합 후에 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력을 향상시키고/시키거나 정규화할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포를 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력을 향상시키고/시키거나 정규화할 수 있다. 다른 실시형태에서, 길항제 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 대상체의 하나 이상의 골수-유래 수지상 세포에서 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 능력을 향상시키고/시키거나 정규화시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암을 포함하는 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및 헤모필루스 인플루엔자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 항원-특이적 T 세포 증식을 유도하는 골수-유래 수지상 세포의 감소된 또는 조절이상 능력과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
CD33-발현 세포의 증식 및 생존
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 세포 상에서 발현된 CD33 단백질에 대한 결합 후에 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼 세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포 및 미세아교세포 세포의 증식, 생존 및/또는 기능을 증가시킬 수 있다.
미세아교세포는 뇌 및 척수의 체류 대식세포인 신경아교세포의 유형이고, 따라서, 중추신경계(CNS)에서 활성 면역 방어의 처음의 그리고 주된 형태로서 작용한다. 미세아교세포는 뇌 내의 총 신경아교세포 집단의 20%를 구성한다. 미세아교세포는 플라크, 손상된 뉴런 및 감염제에 대해 CNS를 끊임없이 포집한다. 뇌 및 척수는 대부분의 병원균이 약한 신경 조직에 도달하는 것을 방지하는 혈액-뇌 장벽으로서 알려진 일련의 내피 세포에 의해 신체의 나머지로부터 분리된다는 점에서 "면역 특권" 기관으로 고려된다. 감염제가 뇌에 직접 도입되거나 또는 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 경우에, 미세아교세포는 그들이 민감한 신경조직을 손상시키기 전에 염증을 제한하고 감염제를 파괴하도록 빠르게 반응하여야 한다. 신체의 나머지로부터의 항체의 비가동률에 기인하여(소수의 항체는 혈액 뇌 장벽을 가로지르기에 충분히 작음), 미세아교세포는 이물질을 인식하고, 그들을 삼키며, 항원-제시 세포 활성화 T 세포로서 작용할 수 있어야 한다. 이 과정이 잠재적으로 치명적인 손상을 방지하기 위해 빠르게 행해져야 하기 때문에, 미세아교세포는 CNS에서의 심지어 작은 병리적 변화에 대해서도 극도로 민감하다. 그들은 세포외 칼륨의 심지어 작은 변화에 대해서도 반응하는 고유 칼륨 채널을 가짐으로써 부분적으로 이런 민감성을 달성한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 대식세포는 M1 대식세포, 활성화된 M1 대식세포 및 M2 대식세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 본 개시내용의 미세아교세포는 M1 미세아교세포, 활성화된 M1 미세아교세포 및 M2 미세아교세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 수지상 세포, 단핵구 및/또는 대식세포 상의 CD80, CD83 및/또는 CD86의 발현을 증가시킬 수 있다.
본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료된 대상체에서의 수지상 세포, 대식세포, 호중구, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용이 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 호중구, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용보다 크다면, 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 단핵구, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용은 증가된 발현을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서의 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식속도, 생존 및/또는 작용에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상체에서 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용을 증가시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서의 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼, 대상체에서의 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식 속도, 생존 및/또는 작용을 증가시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암을 포함하는 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및 헤모필루스 인플루엔자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 수지상 세포, 호중구, 대식세포, 단핵구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, T 세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 증가된 세포자멸사 및/또는 작용의 감소와 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 데 유리하다.
면역 세포의 CD33-의존적 활성화
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포 또는 둘 다의 활성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암과 같은 고형 종양을 포함하는 종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 세포독성 T 세포 헬퍼 T 세포, 또는 둘 다의 감소된 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수의 증가를 유도할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 존재 하에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수의 증가를 유도한다.
본 개시내용의 항-CD33 항체로 치료한 대상체에서의 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수 비율이 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수 비율보다 크다면, 본 명세서에 사용되는 바와 같은, T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존 활성 및/또는 수의 비율은 증가된 비율을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서의 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수의 수준에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190%, 또는 적어도 200%만큼 대상체에서의 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수를 증가시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수의 수준에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 T 세포, 세포독성 T 세포, CD3+ T 세포, 헬퍼 T 세포, 수지상 세포, 대식세포, 단핵구, 호중구, 파골세포, 피부의 랑게르한스 세포, 쿠퍼세포, 및/또는 미세아교세포의 증식, 생존, 활성 및/또는 수를 증가시킬 수 있다.
종양-연관 면역 세포의 CD33-의존적 저해
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제인 항-CD33 항체는 활성을 감소시키고/시키거나, 증식을 감소시키고/시키거나, 생존을 감소시키고/시키거나, 작용성을 감소시키고/시키거나, 종양 또는 림프 기관(예를 들어, 비장 및 림프절)에 대한 침윤, CD14+ 골수 세포 수를 감소시키고/시키거나, 종양 성장 속도를 감소시키고/시키거나, 종양 용적을 감소시키고/시키거나, 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 분화, 생존 및/또는 하나 이상의 기능을 감소시키거나 저해하고/하거나, T-조절 세포 또는 저해 종양-함입된 면역억제자 수지상 세포 또는 종양-연관 대식세포 또는 골수-유래 억제자 세포의 세포자멸사를 촉진시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 작용제인 항-CD33 항체는 CD33을 발현시키지 않는 고형 종양, 예컨대 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 갑상선 암, 및 혈액 CD33을 발현시키는 종양, 예컨대 백혈병 세포를 포함하는 종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 유형의 면역 억제자 세포의 활성과 관련된 병태 및/또는 질환을 예방하거나, 이의 위험을 낮추거나 또는 치료하는 데 유리하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 CD14+ 골수 세포 수를 감소시키고/시키거나, 종양 성장 속도를 감소시키고/시키거나, 종양 용적을 감소시키고/시키거나, 또는 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 분화, 생존 및/또는 하나 이상의 기능을 감소시키거나 저해할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서의 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 분화, 생존 및/또는 하나 이상의 기능의 CD14+ 골수 세포 수, 종양 성장 속도, 종양 용적, 또는 수준에 비해, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 대상체에서의 CD14+ 골수 세포 수를 감소시키거나, 종양 성장 속도를 감소시키거나, 종양 용적을 감소시키거나 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 분화, 생존 및/또는 하나 이상의 기능을 감소시키거나 저해할 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 대응하는 대상체에서 CD14+ 골수성 세포 수, 종양 성장 속도, 종양 용적, 또는 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 분화, 생존, 및/또는 하나 이상의 작용의 수준에 비해, 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배, 또는 적어도 10배만큼 대상체에서 CD14+ 골수 세포 수를 감소시키거나, 종양 성장 속도를 감소시키거나, 종양 용적을 감소시키거나 골수-유래 억제자 세포(MDSC)의 분화, 생존 및/또는 하나 이상의 기능을 감소시키거나 저해할 수 있다.
관문 저해제 요법의 증가된 효능
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 저해제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적화하는 요법의 효능을 증가시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 이러한 하나 이상의 요법은 받은 대응하는 대상체에서의 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 저해제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적화하는 요법의 유효성 수준에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 이러한 하나 이상의 요법을 받은 대상체에서의 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 저해제, 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적화하는 요법의 효능을 증가시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 이러한 하나 이상의 요법을 받은 대응하는 대상체에서의 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 저해제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적화하는 요법의 유효성 수준에 비해, 이러한 하나 이상의 요법을 받은 대상체에서 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 하나 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법, 예컨대 PD-1 저해제 또는 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, 및/또는 LAG3 중 하나 이상을 표적화하는 요법의 효능을 증가시킬 수 있다.
화학치료제의 증가된 효능
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체는 1종 이상의 화학요법제, 예컨대 겜시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신(Adriamycin®), 에피루비신(Ellence®), 탁산, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 5-플루오로유라실(5-FU), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 카보플라틴(Paraplatin®), 옥살리플라틴(Elotaxin®), 류코보린, 및/또는 테모졸로마이드(Temodar®) 효능을 증가시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 이러한 한 가지 이상의 요법을 받은 대응하는 대상체에서의 1종 이상의 화학치료제의 유효성 수준에 비해, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 적어도 150%, 적어도 160%, 적어도 170%, 적어도 180%, 적어도 190% 또는 적어도 200%만큼 이러한 한 가지 이상의 요법을 받은 대상체에서의 1종 이상의 화학치료제의 효능을 증가시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 항체로 치료되지 않은 이러한 한 가지 이상의 요법을 받은 대응하는 대상체에서의 1종 이상의 화학치료제의 유효성 수준에 비해 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배, 적어도 2.0배, 적어도 2.1배, 적어도 2.15배, 적어도 2.2배, 적어도 2.25배, 적어도 2.3배, 적어도 2.35배, 적어도 2.4배, 적어도 2.45배, 적어도 2.5배, 적어도 2.55배, 적어도 3.0배, 적어도 3.5배, 적어도 4.0배, 적어도 4.5배, 적어도 5.0배, 적어도 5.5배, 적어도 6.0배, 적어도 6.5배, 적어도 7.0배, 적어도 7.5배, 적어도 8.0배, 적어도 8.5배, 적어도 9.0배, 적어도 9.5배 또는 적어도 10배만큼 이러한 한 가지 이상의 요법을 받은 대상체에서의 1종 이상의 화학치료제의 효능을 증가시킬 수 있다.
항체 제제
본 개시내용의 항-CD33 항체는 다클론성 항체, 단클론성 항체, 인간화된 및 키메라 항체, 인간 항체, 항체 단편(예를 들어, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv 및 F(ab')2), 이중특이성 및 다중특이성 항체, 다가 항체, 이형접합체 항체, 접합된 항체, 라이브러리 유래 항체, 변형된 효과기 작용을 갖는 항체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위, 예컨대 본 개시내용의 CD33 단백질의 아미노산 잔기를 갖는 에피토프(항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체 및 공유 변형된 항체를 포함)를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 입체배치를 포함할 수 있다. 항-CD33 항체는 인간, 뮤린, 래트, 또는 임의의 다른 유래(키메라 또는 인간화된 항체를 포함)일 수 있다.
(1) 다클론성 항체
다클론성 항체, 예컨대 다클론성 항-CD33 항체는 일반적으로 적절한 항원 및 애주번트의 다중 피하(sc) 또는 복강내(ip) 주사에 의해 동물에서 상승된다. 2작용성 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스터(시스테인 잔기를 통한 접합), N-하이드록시숙신이미드(라이신 잔기를 통해), 글루타르알데하이드, 숙신 무수물, SOCl2 또는 R1N=C=NR(여기서, R 및 R1은 독립적으로 저급 알킬기임)을 이용하여 면역화될 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들어, 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin: KLH), 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 저해제에 적절한 항원(예를 들어, 정제된 또는 본 개시내용의 재조합 CD33 단백질)을 접합하는 데 유용할 수 있다. 사용될 수 있는 애주번트의 예는 프로인트 완전 애주번트 및 MPL-TDM 애주번트(모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로스 다이코리노마이콜레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험 없이 당업자에 의해 선택될 수 있다.
동물은, 예를 들어, 100㎍(토끼에 대해) 또는 5㎍(마우스에 대해)의 단백질 또는 3 용적의 프로인트 완전 애주번트와의 접합체를 조합함으로써 그리고 다중 부위에서 용액을 진피내로 주사함으로써 목적하는 항원, 면역원성 접합체, 또는 유도체에 대해 면역화된다. 1개월 후에, 동물을 다중 부위에서 피하 주사에 의해 프로인트 완전 애주번트 중의 펩타이드 또는 접합체의 본래의 양의 1/5 내지 1/10을 이용하여 부스팅한다. 7 내지 14일 후에, 동물을 방혈시키고, 항체 역가에 대해 혈청을 분석한다. 역가 안정기까지 동물을 부스팅한다. 접합체는 또한 단백질 융합으로서 재조합 세포 배양물 중에서 이루어질 수 있다. 또한, 응집제, 예컨대 명반은 면역반응을 향상시키는 데 적합하다.
(2) 단클론성 항체
단클론성 항체, 예컨대 단클론성 항-CD33 항체는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 얻어지며, 즉, 집단을 포함하는 개개 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 유래 돌연변이 및/또는 번역후 변형(예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 "단클론성"은 별개의 항체의 혼합물이 아닌 항체의 특징을 나타낸다.
예를 들어, 단클론성 항-CD33 항체는 문헌[Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 처음 기재된 하이브리도마 방법을 이용하여 이루어질 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 이루어질 수 있다(미국 특허 제4,816,567호).
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터는 면역화를 위해 사용되는 단백질(예를 들어, 정제된 또는 재조합 본 개시내용의 CD33 단백질)에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 또는 생성할 수 있는 림프구를 유발하도록 본 명세서에서 상기 기재된 바와 같이 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 이어서, 림프구는 하이브리도마 세포를 형성하기 위해 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 골수종 세포와 융합된다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)).
면역화제는 전형적으로 항원 단백질(예를 들어, 본 개시내용의 정제된 또는 재조합 CD33 단백질) 또는 이의 융합 변이체를 포함할 것이다. 인간 유래의 세포가 요망된다면, 일반적으로 말초 혈액 림프구("PBL")가 사용되는 반면, 비-인간 포유류 공급원이 요망된다면, 비장 또는 림프절 세포가 사용된다. 이어서, 림프구는 하이브리도마 세포를 형성하기 위해 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 불멸 세포주와 융합된다. 문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103].
불멸 세포주는 보통 형질전환된 포유류 세포, 특히 설치류, 소 또는 인간 유래의 골수종 세포이다. 보통, 래트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 파종되고, 바람직하게는 비융합, 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 성장된다. 예를 들어, 모 골수종 세포가 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 없다면, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 전형적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지하는 물질인 하이포크산틴, 아미노프테린, 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 것이다.
바람직한 불멸 골수종 세포는 선택된 항체-생성 세포에 의해 항체의 안정한 고수준 생성을 효율적으로 뒷받침하고, HAT 배지와 같은 배지에 민감한 것이다. 이들 중에서, 뮤린 골수종 계통, 예컨대 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것(미국 캘리포니아주 샌디에이고에 소재한 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)로부터 입수 가능)뿐만 아니라 SP-2 세포 및 이의 유도체(예를 들어, X63-Ag8-653)(미국 버지니아주에 소재한 미국 미생물 보존센터(American Type Culture Collection)로부터 입수 가능)이 바람직하다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이형골수종 세포주는 또한 인간 단클론성 항체의 생성을 위해 기재되었다(Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
하이브리도마 세포가 성장 중인 배양 배지는 항원(예를 들어, 본 개시내용의 CD33 단백질)과 관련된 단클론성 항체의 생성에 대해 분석된다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성되는 단클론성 항체의 결합 특이성은 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대 방사면역측정법(RIA) 또는 효소-연결 면역흡착 분석(ELISA)에 의해 결정된다.
하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 목적하는 항원(예를 들어, 본 개시내용의 CD33 단백질)의 존재에 대해 분석될 수 있다. 바람직하게는, 단클론성 항체의 결합 친화도 및 특이성은 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대 방사면역측정법(RIA) 또는 효소-연결 분석(ELISA)에 의해 결정될 수 있다. 이러한 기법 및 분석은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 결합 친화도는 문헌[Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 스캐차드(Scatchard) 분석에 의해 결정될 수 있다.
목적하는 특이성, 친화도, 및/또는 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포가 동정된 후에, 클론은 희석 절차를 제한함으로써 서브클로닝되고, 표준 방법에 의해 성장될 수 있다(Goding, 상기 참조). 본 목적을 위한 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 추가로, 하이브리도마 세포는 포유류에서 종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.
서브클론에 의해 분비되는 단클론성 항체는 통상적인 면역글로불린 정제 절차, 예를 들어, 단백질A-세파로스 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 친화도 크로마토그래피 및 상기 기재한 바와 같은 다른 방법에 의해 배양 배지, 복수액, 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
항-CD33 단클론성 항체는 또한 재조합 DNA 방법, 예컨대 미국 특허 제4,816,567호에 개시한 것 및 상기 기재한 것에 의해 생성될 수 있다. 단클론성 항체를 암호화하는 DNA는 용이하게 단리되고, 통상적인 절차를 이용하여(예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용함으로써) 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 작용한다. 일단 단리되면, DNA는 이후에, 숙주 세포, 예컨대 이콜라이(E. coli) 세포, 시미안 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 면역글로불린 단백질을 달리 생성하지 않는 골수종 세포로 형질감염되는 발현 벡터 내에 위치되어 이러한 재조합 숙주 세포에서 단클론성 항체를 합성할 수 있다. 항체를 암호화하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 대한 검토 논문은 문헌[Skerra et al., Curr. Opin. Immunol., 5:256-262 (1993) 및
Figure pct00014
, Immunol. Rev. 130:151-188(1992)]을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항-CD33 항체는 파지 라이브러리로부터 각각 뮤린 및 인간 항체의 단리를 기재한 문헌[McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990). Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에 기재된 기법을 이용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 후속적 정제는 쇄 셔플링(chain shuffling)(Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992))뿐만 아니라 매우 큰 파지 라이브러리를 구성하기 위한 전략으로서 조합적 감염 및 생체내 재조합(Waterhouse et al., Nucl. Acids Res.,21:2265-2266(1993))에 의해 고친화도(나노몰("nM") 범위) 인간 항체의 생성을 기재한다. 따라서, 이들 기법은 목적하는 특이성의 단클론성 항체(예를 들어, 본 개시내용의 CD33 단백질에 결합하는 것)의 단리를 위한 전통적인 단클론성 항체 하이브리도마 기법에 대한 실행 가능한 대안이다.
항체를 암호화하는 DNA 또는 이의 단편은 또한, 예를 들어, 상동성 뮤린 서열 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 암호 서열을 대체함으로써(미국 특허 제4,816,567호; 문헌[Morrison, et al., Proc. NatlAcad. Sci. USA, 81:6851 (1984)]), 또는 면역글로불린 암호 서열에 비-면역글로불린 폴리펩타이드에 대한 암호 서열의 모두 또는 일부를 공유 결합시킴으로써 변형될 수 있다. 전형적으로 이러한 비-면역글로불린 폴리펩타이드는 또는 항체의 불변 도메인으로 치환되거나, 또는 그들은 항원에 대한 특이성을 갖는 하나의 항원-조합 부위 및 상이한 항원에 대해 특이성을 갖는 다른 항원-조합 부위를 포함하는 키메라 2가 항원을 생성하기 위해 항체의 하나의 항원-조합 부위의 가변 도메인으로 치환된다.
본 명세서에 기재된 단클론성 항체(예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이의 단편)는 1가일 수 있으며, 이의 제조는 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 하나의 방법은 면역글로불린 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현을 수반한다. 중쇄는 일반적으로 중쇄 가교를 방지하기 위해 Fc 영역 내 임의의 지점에서 절단된다. 대안적으로, 적절한 시스테인 잔기는 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있거나 또는 가교를 방지하기 위해 결실된다. 시험관내 방법은 또한 1가 항체를 제조하는데 적합하다. 항체의 단편, 특히 Fab 단편을 생성하기 위한 항체의 분해는 일상적인 당업계에 공지된 기법을 이용하여 달성될 수 있다.
키메라 또는 혼성 항-CD33 항체는 또한 가교제를 수반하는 것을 포함하는 합성 단백질 화학에서 공지된 방법을 이용하여 시험관내에서 제조될 수 있다. 예를 들어, 면역독소는 이황화물 교환 반응을 이용하여 또는 티오에터 결합을 형성함으로써 구성될 수 있다. 본 목적을 위한 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트를 포함한다.
(3) 인간화된 항체
본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이의 항체 단편은 인간화된 또는 인간 항체를 추가로 포함할 수 있다. 비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화된 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편(예컨대, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)이다. 인간화된 항체는 수용자의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)을 포함한다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 대응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 인간화된 항체는 또한 수용자 항체에서도 또는 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역이 비-인간 면역글로불린의 그것에 대응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역이 인간 면역글로불린 공통 서열의 그것에 대응하는 실질적으로 모든 적어도 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이다. 인간화된 항체는 최적으로는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 문헌[Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329(1988) 및 Presta,Curr. Opin. Struct. Biol. 2: 593-596(1992)] 참조.
비-인간 항체를 인간화하는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 비-인간인 공급원으로부터의 아미노산 잔기 내로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 가진다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입" 잔기로서 지칭되는데, 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 취해진다. 인간화는 본질적으로 윈터(Winter) 및 공동작업자, 문헌[Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)]의 방법에 따라, 또는 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 인간 항체의 대응하는 서열로 치환하는 것을 통해 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화된" 항체는 키메라 항체이되(미국 특허 제4,816,567호), 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적게 비인간 종으로부터의 대응하는 서열로 치환되었다. 실행에서, 인간화된 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체 내 유사한 부위로부터의 잔기로 치환된 인간 항체이다.
인간화된 항체를 생성하는 데 사용될 인간 가변 도메인(경쇄와 중쇄 둘 다)의 선택은 항원성을 감소시키는 데 매우 중요하다. 소위 "베스트-핏" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인 서열은 공지된 인간 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 선별된다. 이어서, 설치류의 서열에 가장 근접한 인간 서열은 인간화된 항체에 대한 인간 프레임워크(FR)로서 수용된다. 문헌[Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)] 참조. 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 특정 프레임워크를 사용한다. 동일한 프레임워크는 몇몇 상이한 인간화된 항체에 대해 사용될 수 있다. 문헌[Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623(1993)].
더 나아가, 항체가 항원 및 다른 바람직한 생물학적 특성에 대해 높은 친화도를 보유하여 인간화되는 것은 중요하다. 이 목표를 달성하기 위해, 바람직한 방법에 따르면, 모체 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 이용하여 모체 서열 및 다양한 개념적 인간화 산물을 분석하는 과정에 의해 인간화된 항체가 제조된다. 3차원 면역글로불린 모델이 통상적으로 이용 가능하며, 당업자에게 친숙하다. 컴퓨터 프로그램은 선택된 후보 면역글로불린 서열의 개연성 있는 3차원 입체구조 구조를 설명하고, 나타낸다. 이들 디스플레이의 조사는 후보 면역글로불린 서열의 작용화에서 잔기의 가능성 있는 역할의 분석, 즉, 후보 면역글로불린이 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이런 방법으로, 목적하는 항체 특징, 예컨대 표적 항원 또는 항원들(예를 들어, 본 개시내용의 CD33 단백질)에 대해 증가된 친화도가 달성되도록 FR 잔기가 수용자 및 유입 서열로부터 선택되고, 조합될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는 데 직접적으로 그리고 가장 실질적으로 연루된다.
인간화된 항-CD33 항체의 다양한 형태가 상정된다. 예를 들어, 인간화된 항-CD33 항체는 면역접합체를 생성하기 위해 하나 이상의 세포독성제(들)와 선택적으로 접합되는 항체 단편, 예컨대 Fab일 수 있다. 대안적으로, 인간화된 항-CD33 항체는 무손상 항체, 예컨대 무손상 IgG1 항체일 수 있다.
(4) 항체 단편
특정 실시형태에서 전체 항-CD33 항체보다는 항-CD33 항체 단편을 이용하는 것이 유리하다. 더 작은 단편 크기는 빠른 클리어런스 및 더 양호한 뇌 침투를 허용한다.
항체 단편의 생성을 위한 다양한 기법이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질 분해를 통해 유래된다(예를 들어, 문헌[Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Method. 24:107-117 (1992); 및 Brennan et al., Science 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 이들 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해, 예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 암호화하는 핵산을 이용하여 생성될 수 있다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두 이콜라이에서 발현되고, 매우 다량의 이들 단편의 간단한 생성을 허용한다. 항-CD33 항체 단편은 또한 상기 논의한 바와 같은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 이콜라이로부터 직접 회수될 수 있고, 화학적으로 결합되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). 다른 접근에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab')2 항체 단편의 생성은 미국 특허 제5,869,046호에 기재되어 있다. 다른 실시형태에서, 선택된 항체는 단일쇄 Fv 단편(scFv)이다. WO93/16185; 미국 특허 제5,571,894호 및 미국 특허 제5,587,458호 참조. 항-CD33 항체 단편은 미국 특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 이러한 선형 항체 단편은 단일특이성 또는 이중특이성일 수 있다.
(5) 이중특이성 및 다중특이성 항체
이중 특이성 항체(BsAb)는 동일한 또는 다른 단백질(예를 들어, 하나 이상의 본 개시내용의 CD33 단백질) 상의 항체를 포함하여, 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 항체이다. 대안적으로, BsAb의 일 부분은 표적 CD33 항원에 결합하도록 아암(arm)이 형성될 수 있고, 다른 부분은 제2 단백질에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이러한 항체는 전장 항체 또는 항체 단편(예를 들어, F(ab')2 이중 특이성 항체)로부터 유래될 수 있다.
이중 특이성 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 이중 특이성 항체의 전통적인 생성은 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동발현에 기반하며, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 가진다. 문헌[Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)]. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류 때문에, 이들 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생성하는데, 이 중 하나만이 정확한 이중특이성 구조를 가진다. 친화도 크로마토그래피 단계에 의해 보통 행해지는 정확한 모듈의 정제는 다소 어려우며, 생성물 수율은 낮다. 유사한 절차가 WO 93/08829에서 그리고 문헌[Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에서 개시된다.
상이한 접근에 따르면, 목적으로 하는 결합 특이성(항체-항원 조합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인이 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 바람직하게는 힌지, CH2, 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 가진다. 융합 중 적어도 하나에 존재하는 경쇄 결합에 필요한 부위를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역(CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합 및 원한다면, 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA는 별개의 발현 벡터 내로 삽입되고, 적합한 숙주 유기체 내로 공동형질감염된다. 이는 구성에서 사용되는 3개의 폴리펩타이드 쇄의 동일하지 않은 비가 최적의 수율을 제공할 때의 실시형태에서 3개의 폴리펩타이드 단편의 상호 비율을 조절함에 있어서의 큰 유연성을 제공한다. 그러나, 동일한 비로 적어도 2개의 폴리펩타이드 쇄의 발현이 고수율로 초래될 때 또는 상기 비가 특정 유의성이 없을 때 하나의 발현 벡터에서 2개 또는 모두 3개의 폴리펩타이드쇄에 대해 암호 서열을 삽입하는 것이 가능하다.
본 접근의 바람직한 실시형태에서, 이중 특이성 항체는 하나의 아암에서 제1 결합 특이성을 갖는 혼성 면역글로불린 중쇄, 및 다른 아암에서 혼성 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제2 결합 특이성을 제공)으로 구성된다. 이중특이성 분자의 단지 절반에서 면역글로불린 경쇄의 존재가 용이한 분리 방법을 제공하기 때문에, 이 비대칭 구조가 원치않는 면역글로불린 쇄 조합으로부터 목적하는 이중특이성 화합물의 분리를 용이하게 한다는 것이 발견되었다. 이 접근은 WO 94/04690에서 개시된다. 이중특이성 항체를 생성하는 추가적인 상세한 설명에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Suresh et al., Methods in Enzymology 121: 210(1986)]을 참조한다.
WO 96/27011 또는 미국 특허 제5,731,168호에 기재된 다른 접근에 따르면, 항체 분자 쌍 사이의 계면은 재조합 세포 배양물로부터 회수된 이형이량체 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄는 더 큰 측쇄(예를 들어, 타이로신 또는 트립토판)로 대체된다. 거대 측쇄(들)와 동일 또는 유사한 크기의 상보성 "캐비티"가 거대 측쇄를 작은 측쇄(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 제2 항체의 계면 상에서 생성된다. 이는 다른 원치않는 최종 생성물, 예컨대 동종이량체 이상으로 이형이량체 수율을 증가시키기 위한 메커니즘을 제공한다.
항체 단편으로부터 이중 특이성 항체를 생성하기 위한 기법이 문헌에 기재되었다. 예를 들어, 이중 특이성 항체는 화학적 결합을 이용하여 제조될 수 있다. 문헌[Brennan et al., Science 229:81 (1985)]은 무손상 항체가 F(ab')2 단편을 생성하기 위해 단백질 분해적으로 절단되는 절차를 기재한다. 이들 단편은 인근의 다이티올을 안정화시키기 위해, 그리고 분자간 이황화물 형성을 방지하기 위해 다이티올 복합화제 아비산나트륨의 존재 하에서 환원된다. 이어서, 생성되는 Fab' 단편은 티오나이트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된다. 이어서, Fab'-TNB 유도체 중 하나는 Fab'-TNB 유도체로 다시 전환되어 이중 특이성 항체를 형성한다. 생성된 이중 특이성 항체는 효소의 선택적 고정을 위한 제제로서 사용될 수 있다.
Fab' 단편은 이콜라이로부터 직접 회수될 수 있고, 화학적으로 결합되어 이중 특이성 항체를 형성할 수 있다. 문헌[Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992)]은 완전히 인간화된 이중 특이성 항체 F(ab')2 분자의 생성을 기재한다. 각각의 Fab' 단편은 이콜라이로부터 분리되어 분비되고, 지시된 화학적 결합이 시험관내에서 처리되어 이중 특이성 항체를 형성한다. 이렇게 형성된 이중 특이성 항체는 ErbB2 수용체 및 정상 인간 T 세포를 과발현시키는 세포에 결합할 뿐만 아니라 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용혈 활성을 촉발시킬 수 있다.
재조합 세포 배양물로부터 직접적으로 2가 항체 단편을 제조하고 단리시키기 위한 다양한 기법이 또한 기재되었다. 예를 들어, 2가 이형이량체는 류신 지퍼를 이용하여 생성되었다. 문헌[Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)]. Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 두 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결되었다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성하고, 이어서, 재산화되어 항체 이형이량체를 형성한다. 문헌[Hollinger et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)]에 기재된 "다이어바디" 기법은 이중특이성/2가 항체 단편에 대한 대안의 메커니즘을 제공하였다. 상기 단편은 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 짝짓기를 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결되는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보성 VL 및 VH 도메인과 짝지어 짐으로써 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일쇄 Fv (sFv) 이량체의 사용에 의한 이중특이성/2가 항체 단편을 생성하기 위한 다른 전략이 또한 보고되었다. 문헌[Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조.
2 초과의 결합가를 갖는 항체가 또한 상정된다. 예를 들어, 삼중 특이성 항체가 생성될 수 있다. 문헌[Tutt et al., J. Immunol. 147:60(1991)] 참조.
예시적인 이중 특이성 항체는 주어진 분자(예를 들어, 본 개시내용의 CD33 단백질) 상에서 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, CD33 신호전달 성분을 표적화하는 아암은 특정 단백질을 발현시키는 세포에 대해 세포 방어 메커니즘을 집중시키기 위해 백혈구, 예컨대 T 세포 수용체 분자(예를 들어, CD2, CD3, CD28 또는 B7), 또는 IgG(FcγR)에 대한 Fc 수용체, 예컨대 FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FcγRIII(CD16) 상에서 촉발 분자에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 특정 단백질을 발현시키는 세포에 대해 세포독성제를 국소화하기 위해 이중 특이성 항체가 사용될 수 있다. 이러한 항체는 단백질-결합 아암 및 세포독성제 또는 방사성핵종 킬레이터, 예컨대 EOTUBE, DPTA, DOTA 또는 TETA에 결합하는 아암을 가진다. 관심 대사의 다른 이중 특이성 항체는 관심 대상의 단백질에 결합하고, 조직 인자(TF)에 추가로 결합한다.
(6) 다가 항체
다가 항체는 항체가 결합되는 항원을 발현시키는 세포에 의해 2가 항체보다 더 빠르게 내재화(및/또는 이화작용)될 수 있다. 본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이의 항체 단편은 항체의 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖는 다가 항체(IgM 부류 이외의 항체)(예를 들어, 4가 항체)일 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 바람직한 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다. 이 시나리오에서, 항체는 Fc 영역 및 Fc 영역에 대해 3개 이상의 항원 결합 부위 아미노-말단을 포함할 것이다. 본 명세서의 바람직한 다가 항체는 3 내지 약 8개, 그러나 바람직하게는 4개의 항원 결합 부위를 포함한다. 다가 항체는 적어도 하나의 폴리펩타이드 쇄(및 바람직하게는 2개의 폴리펩타이드 쇄)를 포함하되, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄는 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄는 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있되, VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이며, Fc는 Fc 영역의 하나의 폴리펩타이드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩타이드를 나타내며, n은 0 또는 1이다. 유사하게, 폴리펩타이드 쇄 또는 쇄는 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 쇄; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본 명세서의 다가 항체는 바람직하게는 추가로 적어도 2개의(바람직하게는 4개의) 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 포함한다. 본 명세서의 다가 항체는, 예를 들어, 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 본 명세서에 상정된 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 선택적으로, 추가로 CL 도메인을 포함한다. 다가 항체는 CD33 항원뿐만 아니라, 제한 없이, 추가적인 항원 A 베타 펩타이드, 항원 또는 알파 시뉴클레인 단백질 항원 또는, 타우 단백질 항원 또는, TDP-43 단백질 항원 또는, 프리온 단백질 항원 또는, 헌팅턴 단백질 항원, 또는 RAN, 번역 산물 항원(글리신-알라닌(GA), 글리신-프롤린(GP), 글리신-알기닌(GR), 프롤린-알라닌(PA) 또는 프롤린-알기닌(PR), 인슐린 수용체, 인슐린 유사 성장 인자 수용체, 트랜스페린 수용체, 또는 혈액 뇌 장벽을 가로지르는 항체 전달을 용이하게 하는 임의의 다른 항원으로 구성된 다이펩타이드 반복부(DPR 펩타이드)를 포함)을 인식할 수 있다.
(7) 이형접합체 항체
이형접합체 항체가 또한 본 개시내용의 범주 내이다. 이형접합체 항체는 2개의 공유 결합된 항체(예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체 또는 이의 항체 단편)로 구성된다. 예를 들어, 이형접합체에서 항체 중 하나는 아비딘에 결합되고, 다른 것은 바이오틴에 결합될 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어, 원치않는 세포에 면역계 세포를 표적화하도록 제안되었고(미국 특허 제4,676,980호), HIV 감염을 치료하기 위해 사용되었다. 국제 특허 공개 WO 91/00360, WO 92/200373 및 유럽 특허 제0308936호. 가교제를 수반하는 것을 포함하는 합성 단백질 화학에서 공지된 방법을 이용하여 항체가 시험관내에서 제조될 수 있다는 것이 상정된다. 예를 들어, 면역독소는 이황화물 교환 반응을 이용하여 또는 티오에터 결합을 형성함으로써 구성될 수 있다. 이 목적을 위한 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토뷰티르이미데이트 및, 예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호에 개시된 것을 포함한다. 임의의 편리한 가교 방법을 이용하여 이형접합체 항체가 생성될 수 있다. 적합한 가교제는 당업계에 잘 공지되어 있고, 다수의 가교 기법에 따라 미국 특허 제4,676,980호에서 개시된다.
(8) 효과기 작용 조작
또한 효과기 작용을 변형시키기 위해 그리고/또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해 본 개시내용의 항-CD33 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 불변 영역 상의 Fc 수용체 결합 부위는 특정 Fc 수용체, 예컨대 FcγRI, FcγRII 및/또는 FcγRIII에 대한 결합 친화도를 제거하거나 또는 감소시키기 위해 변형되거나 또는 돌연변이될 수 있다. 일부 실시형태에서, 효과기 작용은 항체의 (예를 들어, IgG의 CH2 도메인에서) Fc 영역의 N-글리코실화를 제거함으로써 손상된다. 일부 실시형태에서, 효과기 작용은 PCT WO 99/58572 및 문헌[Armour et al., Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy et al., J. Immunology 164:1925-1933 (2000)]에 기재된 바와 같은 인간 IgG의 영역, 예컨대 233 내지 236, 297 및/또는 327 내지 331을 변형시킴으로써 손상된다.
항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어, 미국 특허 제5,739,277호에 기재된 바와 같은 항체(특히, 항체 단편) 내로 구조(salvage) 수용체 결합 에피토프를 혼입할 수 있다. 본 명세서에 기재된 용어 "구조 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기 증가를 초래하는 IgG 분자(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.
(9) 다른 아미노산 서열 변형
본 개시내용의 항-CD33 항체, 또는 이의 항체 단편의 아미노산 서열 변형이 또한 상정된다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체 또는 항체 단편의 아미노산 서열 변이체는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 핵산 내로 적절한 뉴클레오타이드 변화를 도입함으로써, 또는 펩타이드 합성에 의해 제조된다. 이러한 변형은, 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실 및/또는 잔기 내로의 삽입 및/또는 잔기의 치환을 포함한다. 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합은 최종 작제물에 도달하도록 이루어지며, 단, 최종 작제물은 목적하는 특징(즉, 본 개시내용의 CD33 단백질과 결합하거나 또는 물리적으로 상호작용하는 능력)을 갖는다. 아미노산 변화는 또한 항체의 번역 후 과정, 예컨대 글리코실 부위의 수 또는 위치의 변화를 변경시킬 수 있다.
돌연변이유발을 위한 바람직한 위치인 항-CD33 항체의 특정 잔기 또는 영역의 동정을 위한 유용한 방법은 문헌[Cunningham and Wells in Science, 244:1081-1085 (1989)]에 기재된 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 여기서, 잔기 또는 표적 잔기의 그룹이 동정되고(예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys 및 glu), 천연 또는 음으로 하전된 아미노산(가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어 표적 항원과 아미노산의 상호작용에 영향을 미친다. 이어서, 치환에 대한 작용 민감성을 보여주는 해당 아미노산 위치는 치환 부위에서 또는 치환 부위에 대해 추가적인 또는 다른 변이체를 도입함으로써 개선된다. 따라서, 아미노산 서열 변화를 도입하기 위한 부위가 사전결정되지만, 특히 돌연변이 특성은 사전결정될 필요가 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이 성능을 분석하기 위해, 알라닌 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발이 표적 코돈 또는 영역에서 수행되고, 발현된 항체 변이체는 목적하는 활성에 대해 선별된다.
아미노산 서열 삽입은 길이가 하나의 잔기로부터 1백개 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩타이드의 범위로 아미노- ("N") 및/또는 카복시- ("C") 말단의 융합뿐만 아니라, 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단의 메티오닐 잔기를 갖는 항체 또는 세포독성 폴리펩타이드에 융합된 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩타이드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합을 포함한다.
다른 유형의 변이체는 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체는 상이한 잔기로 대체되는 항체 분자에서 적어도 하나의 아미노산 잔기를 가진다. 치환 돌연변이유발을 위한 가장 큰 관심 대상의 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경이 또한 상정된다. 보존적 치환은 표제 "바람직한 치환" 하에서 이하의 표 D에 나타낸다. 이러한 치환이 생물학적 활성에서 생물학적 활성의 변화를 초래한다면, 표 D에서 "예시적인 치환"으로 명명되거나 또는 아미노산 분류에 대해 이하에 추가로 기재하는 바와 같은 더 실질적인 변화가 도입될 수 있고, 생성물이 선별된다.
[표 D]
Figure pct00015
항체의 생물학적 특성의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어, 시트 또는 나선 입체구조로서, 치환 영역에서 폴리펩타이드 골격의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지함에 있어서 그들의 효과가 상당히 다른 치환을 선택함으로써 달성된다. 천연 유래 잔기는 통상적인 측쇄 특성에 기반하여 그룹들로 나뉘어진다:
(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류로 교환하는 것을 수반한다.
분자의 산화적 안정성을 개선시키기 위해 그리고 비정상 가교를 방지하기 위해 항체의 적절한 입체구조를 유지하는 데 수반되지 않는 임의의 잔기는 또한 일반적으로 세린으로 치환될 수 있다. 대조적으로, 시스테인 결합(들)은 그의 안정성을 개선시키기 위해 항체에 첨가될 수 있다(특히, 여기서 항체는 항체 단편, 예컨대 Fv 단편임).
특히 바람직한 유형의 치환 변이체는 모 항체(예를 들어, 인간화된 또는 인간 항-CD33 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반한다. 일반적으로, 추가적인 연구를 위해 선택된 얻어진 변이체(들)는 이들이 생성된 모 항체에 비해 개선된 생물학적 특성을 가질 것이다. 이러한 치환 변이체를 생성하기 위한 편리한 방법은 파지 디스플레이를 이용하는 친화도 성숙을 수반한다. 간략하게, 몇몇 초가변 영역 부위(예를 들어, 6 내지 7개 부위)는 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노산 치환을 생성하도록 돌연변이된다. 이렇게 생성된 항체 변이체는 각각의 입자 내에서 패키징된 M13의 유전자 III 산물에 대한 융합으로서 섬질 파지 입자로부터 1가 방식으로 나타난다. 이어서, 파지-디스플레이된 변이체는 본 명세서에 개시된 바와 같은 그들의 생물학적 활성(예를 들어, 결합 친화도)에 대해 선별된다. 변형을 위해 후보 초가변 영역 부위를 동정하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발이 수행되어 항원 결합에 상당히 기여하는 초가변 영역 잔기를 동정할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 항체와 항원(예를 들어, 본 개시내용의 CD33 단백질) 사이의 접점을 동정하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하는 데 유리할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃하는 잔기는 본 명세서에 상세히 기재된 기법에 따르는 치환에 대한 후보이다. 일단 이러한 변이체가 생성된다면, 변이체의 패널에 본 명세서에 기재된 바와 한은 선별이 실시되고, 하나 이상의 적절한 분석에서 우수한 특성을 갖는 항체는 추가 연구를 위해 선택될 수 있다.
항체의 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 본래의 글리코실화 패턴을 변경한다. 변경은 항체에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 모이어티의 결실, 및/또는 항체에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 첨가를 의미한다.
항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결이다. N-연결은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. 트라이펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌(여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 효소 부착에 대한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드에서 이들 트라이펩타이드 서열 중 하나의 존재는 잠재적 글리코실화 부위를 생성한다. O-연결 글리코실화는, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신이 또한 사용될 수 있지만, 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스 중 하나의 하이드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 대한 부착을 지칭한다.
항체에 대한 글리코실화 부위의 첨가는 그것이 (N-연결 글리코실화 부위에 대해) 상기 기재한 트라이펩타이드 서열을 포함하도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성된다. 변경은 또한 (O-연결 글리코실화 부위에 대해) 본래의 항체의 서열에 대해 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 첨가 또는 치환에 의해 이루어질 수 있다.
항-IgE 항체의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 생성된다. 이들 방법은, (천연 유래 아미노산 서열 변이체의 경우에) 천연 공급원으로부터의 단리 또는 올리고뉴클레오타이드-매개(또는 부위 지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 초기 생성된 변이체 또는 항체의 비-변이체 형태(예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체) 또는 항체 단편의 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
(10) 항체 접합체
본 개시내용의 항-CD33 항체, 또는 이의 항체 단편은 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합될 수 있다. 항체에 분자, 예컨대 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제를 접합하기 위한 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다.
예를 들어, 약물 접합은 생물학적 활성 세포독성(항암) 페이로드 또는 약물의 특정 종양 마커(예를 들어, 이상적으로는 종양 세포에서 또는 종양 세포 상에서만 발견되는 단백질)를 특이적으로 표적화하는 항체에 대한 결합을 수반한다. 항체는 신체에서 이들 단백질 하향을 추적하고, 그들 자체를 암세포의 표면에 부착한다. 항체와 표적 단백질(항원) 사이의 생화학적 반응은 신호 종양에서 세포를 촉발하는데, 이는 세포독소와 함께 항체를 흡수하거나 또는 내재화한다. ADC가 내재화된 후에, 세포독성 약물이 방출되고, 암을 사멸한다. 이런 표적화에 기인하여, 이상적으로 약물은 더 낮은 부작용을 갖고, 다른 화학치료제보다 더 넓은 치료적 창을 제공한다. 항체에 접합하기 위한 기법은 개시되어 있고, 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Jane de Lartigue, OncLive July 5, 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; 및 Ducry et al., (2010). Bioconjugate Chemistry 21 (1): 5-13)] 참조).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 리신, 리신 A-쇄, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 브롬화에티듐, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 다이하이드록시 안트라신 다이온, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소(PE) A, PE40, 아브린, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 쿠리신, 크로틴, 칼리키아마이신, 사포나리아 오피치날리스(Saponaria officinalis) 저해제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무스, 콤브레스타틴, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, cc1065, 및 시스플라틴으로부터 선택된 독소에 접합될 수 있다.
(11) 기타 항체 변형
본 개시내용의 항-CD33 항체, 또는 이의 항체 단편은 당업계에 공지되고 용이하게 이용 가능한 추가적인 비-단백질성 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 바람직하게는, 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체이다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1, 3-다이옥솔란, 폴리-1,3,6-트라이옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(동종중합체 또는 무작위 공중합체 중 하나), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 중합체(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 수 중에서의 그의 안정성으로 인해 제조하는 데 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지 또는 비분지될 수 있다. 항체에 부착되는 중합체의 수는 다를 수 있고, 한 개 이상의 중합체가 부착된다면, 그들은 동일 또는 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화를 위해 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은, 개선될 항체의 특정 특성 또는 작용, 항체 유도체가 정해진 조건 등 하에서 요법에서 사용될지의 여부를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 고려사항에 기반하여 결정될 수 있다. 이러한 기법 및 다른 적합한 제형은 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)]에 개시된다.
결합 분석 및 기타 분석
본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, ELISA, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 웨스턴 블롯 등과 같은 공지된 방법에 의해 항원 결합 활성에 대해 시험될 수 있다.
일부 실시형태에서, 경쟁 분석은 본 명세서에 기재된 임의의 항체와 경쟁하는 항체를 동정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 경쟁 분석은 CD33에 대한 결합에 대해 표 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 열거되거나 또는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 임의의 항체와 경쟁하는 항체를 확인하게 위해 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 이러한 경쟁 항체는 표 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 열거되거나 또는 6C7H1, 6C7H2, 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7, 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로부터 선택된 임의의 항체에 의해 결합되는 동일한 에피토프(예를 들어, 선형 또는 입체구조적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하기 위한 상세한 예시적인 방법은 문헌[Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에서 제공된다.
예시적인 경쟁 분석에서, 세포 표면 상에서 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포는 CD33에 결합하는 제1 표지 항체(예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류) 및 CD33에 대한 결합을 위해 제1 항체와 경쟁하는 능력에 대해 시험 중인 제2 비표지 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포는 제1 표지 항체를 포함하지만, 제2 비표지 항체는 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이션된다. CD33에 대한 제1 항체의 결합에 허용적인 조건 하에서 인큐베이션 후에, 과량의 비결합 항체가 제거되고, 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 측정된다. 고정된 CD33 또는 CD33을 발현시키는 세포와 관련된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된다면, 제2 항체는 CD33에 대한 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)] 참조.
핵산, 벡터 및 숙주 세포
본 개시내용의 항-CD33 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같은 재조합 방법 및 조성물을 이용하여 생성될 수 있다. 일부 실시형태에서, 임의의 본 개시내용의 항-CD33 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항-CD33 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 암호화할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 일부 실시형태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 일부 실시형태에서, 숙주 세포는 하기를 포함한다(예를 들어, 하기에 의해 형질도입되었다): (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제2 벡터. 일부 실시형태에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들어 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프구 세포(예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 본 개시내용의 숙주 세포는 또한 단리된 세포, 시험관내 배양 세포 및 생체외 배양 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 개시내용의 항-CD33 항체의 제조 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 항-CD33 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 본 개시내용의 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 후속적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수된다.
본 개시내용의 항-CD33 항체의 재조합 생성에 대해, 항-CD33 항체를 암호화하는 핵산이 단리되고, 숙주 세포에서 추가적인 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터 내로 삽입된다. 이러한 핵산은 통상적인 절차를 이용하여 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에게 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용함으로써) 용이하게 단리되며, 서열분석된다.
본 명세서에 기재된 임의의 본 개시내용의 항-CD33 항체, 또는 이의 단편 폴리펩타이드(항체를 포함)를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 적합한 벡터는, 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 적합한 클로닝 벡터는 표준 기법에 따라 구성될 수 있거나, 또는 당업계에서 입수 가능한 매우 다수의 클로닝 벡터로부터 선택될 수 있다. 선택된 클로닝 벡터는 사용될 것으로 의도되는 숙주 세포에 따라 다를 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자가복제되는 능력을 갖고, 특정 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 가질 수 있고/있거나 벡터를 포함하는 클로닝을 선택함에 있어서 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 운반할 수 있다. 적합한 예는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 예를 들어, pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript)(예를 들어, pBS SK+) 및 그의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터, 예컨대 pSA3 및 pAT28을 포함한다. 이들 및 다수의 다른 클로닝 벡터는 상업적 공급업자, 예컨대 바이오라드(BioRad), 스트레이트겐(Strategene) 및 인비트로젠(Invitrogen)으로부터 입수 가능하다.
항체-암호화 벡터의 클로닝 또는 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 작용이 필요하지 않을 때 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편 및 폴리펩타이드에 대해(예를 들어, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호). 발현 후에, 항체는 가용성 분획에서 박테리아 세포에서 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고, 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 추가로, 진핵 미생물, 예컨대 섬질 진균 또는 효모는 또한 부분적으로 또는 완전한 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생성을 초래하는 글리코실화 경로가 "인간화된" 진균 및 효모 균주를 포함하는 항체-암호화 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다(예를 들어, 문헌[Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004); 및 Li et al. Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]).
글리코실화된 항체의 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수 있다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 동정되었다. 식물 세포 배양물은 또한 숙주(예를 들어, 미국 특허 공개 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호 및 제6,417,429호, 유전자이식 식물에서 항체를 생성하기 위한 플랜티바디즈(PLANTIBODIES™ 기법))로서 이용될 수 있다.
척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액 중에서 성장하는 데 적합한 포유류 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 다른 예는 SV40(COS-7)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통; 인간 배아 신장 계통(예를 들어, 문헌[Graham et al. J. Gen Virol. 36:59 (1977))]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포; 새끼 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(문헌[Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 그린 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK; 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유방 종양(MMT 060562); 예를 들어, 문헌[Mather et al. Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재되는 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유류 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포(Urlaub et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0를 포함하는, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포를 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유류 숙주 세포주의 검토에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
약제학적 조성물/제형
본 명세서에서 본 개시내용의 항-CD33 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물 및/또는 약제학적 제형이 제공된다.
일부 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 담체는 바람직하게는 사용되는 투약량 및 농도에서 수용자에 대해 비독성이다. 본 명세서에 기재된 항체는 고체, 반고체, 약체 또는 기체 형태의 제제로 제형화될 수 있다. 이러한 제형의 예는 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 주사, 흡입제, 겔, 미소구체 및 에어로졸을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 목적하는 제형에 따라서 동물 또는 인간 투여를 위한 약제학적 조성물을 제형화하기 위해 통상적으로 사용되는 비히클인, 약제학적으로-허용 가능한, 비-독성 담체의 희석제를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 약제학적 조성물은, 예를 들어, pH, 삼투몰농도, 점성도, 투명도, 색, 등장성, 냄새, 멸균 상태, 안정성, 해리 또는 방출 속도, 조성물의 흡착 또는 침투를 변형, 유지 또는 보존하기 위한 제형 물질을 포함할 수 있다.
특정 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 담체는 아미노산(예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 알기닌 또는 라이신); 항미생물제; 항산화제(예컨대 아스코브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충제(예컨대 붕산염, 중탄산염, Tris-HCl, 시트르산염, 인산염 또는 기타 유기산); 증량제(예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이트제(예컨대 에틸렌다이아민 테트라아세트산(EDTA)); 착화제(예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 기타 탄수화물(예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질(예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체(예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩타이드; 염-형성 반대이온(예컨대 나트륨; 보존제(예컨대 염화벤즈알코늄, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 펜에틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 솔브산 또는 과산화수소); 용매(예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올(예컨대 만니톨 또는 솔비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대 플루로닉스(pluronics), PEG, 솔비탄 에스터, 폴리솔베이트, 예컨대 폴리솔베이트 20, 폴리솔베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 티록사팔(tyloxapal)); 안정성 향상제(예컨대 수크로스 또는 솔비톨); 등장성 향상제(예컨대 알칼리 금속 할로겐화물, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 솔비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약제학적 보조제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 다양한 유형의 투여에 적합한 제형의 추가적인 예는 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Pharmaceutical Press 22nd ed. (2013)]에서 찾을 수 있다. 약물 전달을 위한 방법의 간략한 검토를 위해, 문헌[Langer, Science 249:1527-1533 (1990)]을 참조한다.
비경구 투여에 적합한 제형은 수성 및 비수성, 등장성 멸균 주사용액을 포함하는데, 이는 항산화제, 완충제, 정균제, 및 의도된 수용자의 혈액과 등장성인 제형을 제공하는 용질, 및 현탁제, 가용화제, 증점제, 안정제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 현탁액을 포함할 수 있다.
제형은 뇌 또는 중추신경계에서 체류 및 안정화를 위해 최적화될 수 있다. 제제가 두개골 구획 내로 투여될 때, 제제는 구획 내에 보유되며, 확산되지 않거나 또는 다르게는 혈액 뇌 장벽을 가로지르지 않는 것이 바람직하다. 안정화 기법은 분자량의 증가를 달성하기 위해 폴리에틸렌 글리콜, 폴리아크릴아마이드, 중성 단백질 담체 등과 같은 기에 대한 가교, 다량체화 또는 연결을 포함한다.
체류를 증가시키기 위한 다른 전략은 생분해성 또는 생부식성 이식물에서의 본 개시내용의 항-CD33 항체와 같은 항체의 포집을 포함한다. 치료적 활성제의 방출 속도는 중합체 기질을 통한 수송 속도, 및 이식물의 생분해에 의해 제어된다. 이식물은 입자, 시트, 패치, 플라크, 섬유, 마이크로캡슐 등일 수 있고, 삽입의 선택 부위에 적합한 임의의 크기 또는 형상을 가질 수 있다. 사용될 수 있는 생분해성 중합체 조성물은 분해될 때 단량체를 포함하는 생리적으로 허용 가능한 분해 생성물을 초래하는 유기 에스터 또는 에터일 수 있다. 무수물, 아마이드, 오쏘에스터 등은 단독으로 또는 다른 단량체와 조합하여 용도를 발견할 수 있다. 중합체는 축합 중합체일 것이다. 중합체는 가교되거나 또는 비가교될 수 있다. 하이드록시지방족 카복실산, 동종- 또는 공중합체 및 다당류의 중합체에 특히 관심이 있다. 관심 대상의 폴리에스터 중에 D-락트산, L-락트산, 라세미 락트산, 글리콜산, 폴리카프로락톤 및 조합물의 중합체가 포함된다. 관심 대상의 다당류 중에 알긴산칼슘, 작용화된 셀룰로스가 있으며, 특히 카복시메틸셀룰로스 에스터는 수용성이며, 분자량이 약 5kD 내지 500kD 등인 것을 특징으로 한다. 생분해성 하이드로겔이 또한 본 개시내용의 이식물에서 사용될 수 있다. 하이드로겔은 전형적으로 공중합체 물질이며, 액체를 흡수하는 능력을 특징으로 한다. 사용될 수 있는 예시적인 생분해성 하이드로겔은 문헌[Heller in: Hydrogels in Medicine and Pharmacy, N. A. Peppes ed., Vol. III, CRC Press, Boca Raton, Fla., 1987, pp 137-149]에 기재되어 있다.
약제학적 투약량
본 개시내용의 항-CD33 항체를 함유하는 본 개시내용의 약제학적 조성물은 공지된 방법, 예컨대 일정 시간의 기간에 걸쳐 볼루스로서 또는 연속 주입에 의한 정맥내 투여, 근육내, 복강내, 뇌척수액내, 두개내, 척수관, 피하, 관절내, 활액내, 척추강내, 경구, 국소 또는 흡수 경로에 따라 항체에 의한 치료가 필요한 개체, 바람직하게는 인간에게 투여될 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물의 투약량 및 목적하는 약물 농도는 생각되는 특정 용도에 따라 다를 것이다. 적절한 투약량 또는 투여 경로의 결정은 당업자의 기술 내에서 용이하다. 동물 실험은 인간 요법에 대한 유효 용량의 결정을 위한 신뢰 가능한 가이드를 제공한다. 유효 용량의 종간 규모 조정은 문헌[Mordenti, J. and Chappell, W. "The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics," In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds, Pergamon Press, New York 1989, pp.42-46]에 기재된 원칙에 따라 수행될 수 있다.
임의의 본 개시내용의 항-CD33 항체의 생체내 투여를 위해, 정상 투약량은 투여 경로에 따라서 약 10ng/㎏ 내지 약 100㎎/㎏ 또는 그 이상의 개체의 체중/일, 바람직하게는 약 1㎎/㎏/일 내지 10㎎/㎏/일로 다를 수 있다. 치료될 질환, 장애 또는 병태의 중증도에 따라서 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복된 투여를 위해, 치료는 증상의 목적하는 억제가 달성될 때까지 지속된다.
예시적인 투약 요법은 2㎎/㎏의 항-CD33 항체의 초기 용량 다음에 격주로 약 1㎎/㎏의 1주 유지 용량을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 의사가 달성하기를 바라는 약동학적 붕괴 패턴에 따라서 다른 투약 요법이 유용할 수 있다. 예를 들어, 개체에게 1주에 1 내지 21회의 투약이 본 명세서에서 상정된다. 특정 실시형태에서, 약 3㎍/㎏ 내지 약 2㎎/㎏(예컨대, 약 3㎍/㎏, 약 10㎍/㎏, 약 30㎍/㎏, 약 100㎍/㎏, 약 300㎍/㎏, 약 1㎎/㎏, 및 약 2/㎎/㎏) 범위의 투약량이 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 투약 빈도는 1일당 3회, 1일당 2회, 1일당 1회, 격일에 1회, 1주 1회, 2주에 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회 또는 1개월에 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회 또는 더 길다. 요법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다. 투여되는 항-CD33 항체를 포함하는 투약 요법은 사용되는 용량과 독립적으로 시간에 따라 변할 수 있다.
특정 항-CD33 항체에 대한 투약량은 항-CD33 항체의 1회 이상의 투여가 제공된 개체에서 경험적으로 결정될 수 있다. 개체에게 항-CD33 항체의 증분적 용량이 제공된다. 항-CD33 항체의 효능을 평가하기 위해, 본 개시내용의 임의의 질환, 장애 또는 병태(예를 들어, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 발작, 망막이영양증, 외상성 뇌 손상, 척수손상, 장기간 우울증, 아테롬성 동맥 경화증 혈관 질환 및 정상 노화의 바람직하지 않은 증상)의 증상이 모니터링될 수 있다.
본 개시내용의 항-CD33 항체의 투여는, 예를 들어, 수용자의 생리적 조건, 투여 목적이 치료적인지 또는 예방적인지의 여부, 및 당업자에게 공지된 다른 인자에 따라서 연속적이거나 또는 간헐적일 수 있다. 항-CD33 항체의 투여는 사전 선택된 일정 시간에 걸쳐 본질적으로 연속적일 수 있거나 또는 일련의 간격이 있는 용량일 수 있다.
특정 투약량 및 전달 방법에 관한 가이드는 문헌에 제공된다; 예를 들어, 미국 특허 공개 제4,657,760호; 제5,206,344호; 또는 제5,225,212호 참조. 상이한 제형이 상이한 치료 및 상이한 장애에 대해 유효하다는 것, 그리고 특정 기관 또는 조직을 치료하도록 의도되는 투여는 상기 특정 기관 또는 조직으로부터 다른 기관 또는 조직까지 상이한 방식으로 전달을 필요로 할 수 있다는 것은 본 개시내용의 범주 내에 있다. 게다가, 투약량은 하나 이상의 별개의 투여에 의해, 또는 연속적 주입에 의해 투여될 수 있다. 병태에 따라 며칠 또는 더 장기간에 걸쳐 반복된 투여를 위해, 치료는 질환 증상의 목적하는 억제가 일어날 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투약 요법이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다.
치료적 용도
본 명세서에 개시된 바와 같은, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 다양한 질환 및 장애를 예방하거나, 위험을 감소시키거나 치료하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 본 개시내용의 항-CD33 항체는 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암을 포함하는 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및/또는헤모필루스 인플루엔자를 예방하거나, 이의 위험을 감소시키거나 또는 이를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, CD33 항체는 작용제 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 비활성 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 길항제 항체이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 CD33의 세포 수준을 감소시키거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 둘 다인 치료적 유효량의 본 개시내용의 항체를 이러한 치료가 필요한 개체에게 투여함으로써 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 암, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV, 및/또는 헤모필루스 인플루엔자를 예방하거나, 이들의 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 CD33의 세포 수준을 감소시키거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 둘 다인 치료적 유효량의 본 개시내용의 항체를 이러한 치료가 필요한 개체에게 투여함으로써 암을 예방하거나, 암의 위험을 감소시키거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 항체는 하기로부터 선택되는 하나 이상의 CD33 활성을 저해한다: (a) 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 비-종양원성 골수성 유래 억제자 세포, 종양-연관 대식세포, 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 증식, 성숙, 이동, 분화 및/또는 작용성을 촉진시키는 것; (b) 면역억제자 수지상 세포, 면역억제자 대식세포, 면역억제자 호중구, 비-종양원성 골수 유래 억제자 세포, 종양-연관 대식세포, 및 조절 T 세포 중 하나 이상의 종양 내로의 침윤을 향상시키는 것; (c) 종양, 말초 혈액 또는 다른 림프 기관에서 종양-촉진성 골수/과립구 면역억제 세포 및/또는 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포 수를 증가시키는 것; (d) 종양 사멸 잠재력을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 활성화 감소; (e) 종양 사멸 잠재력을 갖는 종양-특이적 T 림프구의 침윤 감소; (f) 종양 용적의 증가; (g) 종양 성장 속도의 증가; (h) 전이 증가; (i) 종양 재발 속도의 증가; (j) 하나 이상의 PD-1 리간드의 발현 증가; (k) 항-종양 T 세포 수용체를 조절하는 하나 이상의 면역 요법 또는 하나 이상의 암 백신의 감소, 선택적으로 면역 요법은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, CSF-1 수용체, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질을 표적화하는 면역 요법임; 및 (l) 1종 이상의 화학치료제의 효능 감소, 선택적으로 1종 이상의 화학치료제는 겜시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신(Adriamycin®), 에피루비신(Ellence®), 탁산, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 5-플루오로유라실(5-FU), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 카보플라틴(Paraplatin®), 옥살리플라틴(Elotaxin®), 류코보린, 테모졸마이드(Temodar®), 및 이들의 임의의 조합임. 일부 실시형태에서, 항체는 하기로부터 선택되는 한 가지 이상의 활성을 나타낸다: (a) 종양 침윤성 CD3+ T 세포 수의 증가; (b) 비-종양원성 CD14+골수 세포에서 CD33의 세포 수준 감소, 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 종양 침윤성 세포이거나 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 혈액 중에 존재하지 않음; (c) 비-종양원성 CD14+ 골수 세포 수의 감소, 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 종양 침윤성 세포이거나 또는 선택적으로 비-종양원성 CD14+ 골수성 세포는 혈액에 존재하지 않음; (d) 하나 이상의 세포에서 PD-L1 수준의 감소, 선택적으로 하나 이상의 세포는 비-종양원성 골수-유래 억제자 세포(MDSC)임; (e) 고형 종양의 종양 성장 속도 감소; (f) 종양 용적의 감소; (g) 1종 이상의 PD-1 저해제의 효능 증가; (h) 1종 이상의 관문 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법의 효능 증가, 선택적으로 1종 이상의 저해제 요법 및/또는 면역-조절 요법은 CTL4, 아데노신 경로, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 표적화함; (i) 1종 이상의 화학치료제의 효능 증가, 선택적으로 1종 이상의 화학치료제는 겜시타빈, 카페시타빈, 안트라사이클린, 독소루비신(Adriamycin®), 에피루비신(Ellence®), 탁산, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 5-플루오로유라실(5-FU), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®), 카보플라틴(Paraplatin®), 옥살리플라틴(Elotaxin®), 류코보린, 테모졸마이드(Temodar®), 및 이들의 임의의 조합임; 및 (j) 화학적 또는 방사성 독소에 접합될 때 고형 종양 및 연관된 혈관에서의 CD33-발현 면역억제자 골수성 세포 및/또는 CD14-발현 세포의 사멸.
본 명세서에 개시하는 바와 같이, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 또한 하나 이상의 면역 세포(예를 들어, 선천성 면역 세포 또는 적응성 면역 세포)의 생존 성숙, 작용성, 이동 또는 증식을 유도하고/하거나 촉진시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 개체에게 CD33의 세포 수준을 감소시키거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 둘 다인 치료적 유효량의 본 개시내용의 항체를 투여함으로써 이러한 치료가 필요한 개체에서 하나 이상의 면역 세포의 생존, 성숙, 작용성, 이동 또는 증식을 유도하거나 또는 촉진시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 면역 세포는 수지상 세포, 대식세포, 호중구, 미세아교세포, T 세포, T 헬퍼 세포, 세포독성 T 세포, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 항체는 작용제 항-CD33 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 초기에 작용제로서 작용하고, 이어서, 장기간 길항제 항체로서 작용할 수 있는 본 개시내용의 일시적인 작용제인 항-CD33 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 비활성 항-CD33 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 길항제 항-CD33 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33의 세포(예를 들어, 세포 표면, 세포내, 또는 총) 수준을 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33의 분해를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33의 절단을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33의 내재화를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33의 쉐딩을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용(예를 들어, 결합)을 저해한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, CD33의 분해를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, CD33의 절단을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, CD33의 내재화를 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, CD33의 쉐딩을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, CD33 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 일시적으로 활성화하고, 이어서, CD33의 감소된 발현을 유도한다. 특정 실시형태에서, 개체는 단일 뉴클레오타이드 다형성(SNP) rs3865444 CC 또는 AC를 갖는 CD33 변이체 대립유전자를 가진다. 특정 실시형태에서, 개체는 단일 뉴클레오타이드 다형성(SNP) 2459419 CC 또는 CT를 갖는 CD33 변이체 대립유전자를 가진다.
본 명세서에 개시된 바와 같은, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 추가로 조절 T 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 골수-유래 억제자 세포, 종양-연관 대식세포, 급성 골수 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포 및/또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포의 활성, 작용성 또는 생존을 감소시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 조절 T 세포, 종양-포매 면역억제자 수지상 세포, 종양-포매 면역억제자 대식세포, 골수성-유래 억제자 세포, 종양-관련 대식세포, 급성 골수성 백혈병(AML) 세포, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 세포, 또는 만성 골수성 백혈병(CML) 세포의 활성, 작용성 또는 생존의 감소가 필요한 개체에서, 개체에게 CD33에 결합하거나 또는 이와 상호작용하는 치료적 유효량의 항체를 투여함으로써, 이러한 세포의 활성, 작용성 또는 생존을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 항체는 길항제 항체, 비활성 항체 또는 작용제인 항체로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항체는 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체 또는 항-CD33 항체 접합체이다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체 접합체는 검출 가능한 마커, 독소, 또는 치료제에 접합된 항-CD33 항체를 포함한다.
본 명세서에 개시된 바와 같은 본 개시내용의 항-CD33 항체는 CD33의 세포 수준을 감소시키거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 시험관내 또는 생체내에서 하나 이상의 세포에 대해 두 경우 모두를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 개체에게 치료적 유효량의 본 개시내용의 단리된 항-CD33 항체를 투여함으로써 치료가 필요한 개체에서 CD33의 세포 수준을 감소시키거나, CD33과 하나 이상의 CD33 리간드 사이의 상호작용을 저해하거나, 또는 하나 이상의 세포에 대해 상기 둘 다의 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 생체내 CD33의 세포 수준을 감소시킨다.
본 명세서에 개시된 바와 같은, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, T 세포 및 대식세포, 및/또는 세포주를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 세포 상의 CD33의 세포 수준을 감소시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 하나 이상의 세포 상의 CD33의 세포 수준의 감소가 필요한 개체에서, 치료적 유효량의 본 개시내용의 항-CD33을 개체에게 투여함으로서 CD33의 세포 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 세포는 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, T 세포 및 대식세포, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 생체내 CD33의 세포 수준을 감소시킨다. CD33의 세포 수준은, 제한 없이, CD33의 세포 표면 수준, CD33의 세포내 수준 및 CD33의 총 수준을 지칭할 수 있다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준의 감소는 CD33의 세포 표면 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 CD33의 세포 표면 수준은 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 본 명세서에 기재되거나 또는 당업계에 공지된 적합한 생체내 모델에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준의 감소는 CD33의 세포내 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 CD33의 세포내 수준은 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 본 명세서에 기재되거나 또는 당업계에 공지된 적합한 생체내 모델에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준의 감소는 CD33의 총 수준의 감소를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 CD33의 총 수준은 임의의 시험관내 세포-기반 분석 또는 본 명세서에 기재되거나 또는 당업계에 공지된 적합한 생체내 모델에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 CD33 분해, CD33 절단, CD33 내재화, CD33 쉐딩 및/또는 CD33 발현의 하향조절을 유도한다. 일부 실시형태에서, CD33의 세포 수준은 1차 세포(예를 들어, 수지상 세포, 골수-유래 수지상 세포, 단핵구, 미세아교세포, T 세포 및 대식세포) 상에서 또는 시험관내 세포 분석을 이용하는 세포주 상에서 측정된다.
본 개시내용의 다른 양상은 항-CD33 항체에 의한 치료가 필요한 대상체를 선택하는 방법에 관한 것이되, 상기 방법은: a. 대상체로부터 샘플(예를 들어, 혈액 샘플)을 얻는 단계; b. 대상체에 존재하는 CD33 대립유전자를 검출하는 단계; 및 c. 하나 이상의 CD33 대립유전자를 갖는 대상체에서 CD33에 결합하거나 이와 상호작용하는 항체에 의한 치료를 위한 대상체를 선택하는 단계를 포함하되, 하나 이상의 CD33 대립유전자는 rs3865444 AC 및 rs3865444 CC 로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 개시내용의 다른 양상은 CD33에 결합하거나 이와 상호작용하는 항체에 대해 이것이 필요한 대상체의 반응을 평가하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은: a. 대상체에게 항-CD33 항체를 투여하기 전에 대상체로부터 얻은 혈액 샘플에서 비-종양원성 골수성 세포에 대한 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계; b. 대상체에게 치료적 유효량의 항체를 투여하는 단계; 및 c. 항-CD33 항체 투여 후에 대상체로부터 얻은 혈액 샘플에서 비-종양원성 골수성 세포에 대한 CD45+ 및 CD14+의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하되, 항-CD33 항체의 투여 후에 비-종양원성 골수성 세포에 대한 CD45+ CD14+ 수준의 감소는 대상체가 제제에 반응한다는 것을 나타낸다. 샘플, 예컨대 혈액 샘플을 얻기 위한 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 추가로, CD33 변이체 및/또는 대립유전자, 예컨대 SNP 분석을 검출하는 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 일부 실시형태에서, 반응성을 평가하는 방법은 1회 이상의 추가적인 치료적 유효량의 항체를 투여하는 단계를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시형태에서 개체는 CD33의 변이체를 가진다. 일부 실시형태에서, 변이체는: (a) SNP rs3865444 AC ; (b) SNP rs3865444 CC ; (c) SNP rs35112940GG, AA, AG; 및 (d) SNP rs12459419 CC, CT 또는 TT; 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 다형성을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 추가로 항-CD33 항체 또는 이중특이성 항-CD33 항체, 패턴 인식 수용체에 결합하는 항체, Toll-유사 수용체에 결합하는 항체, 손상-관련 분자 패턴(DAMP) 수용체에 항체, 및/또는 사이토카인에 결합하는 항체 또는 인터류킨에 대한 항체의 공동투여의 수반할 수 있다).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 저해 관문 모듈, 및/또는 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠자(BTLA) 항체, 항-살해 저해 수용체(KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-TNFa 항체, 항-Siglec-5 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항적 항-TREM1 항체, 길항적 항-TREM2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 한 가지 이상의 표준 또는 연구 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화된 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타너셉트 요법, 입양 세포 전달(ACT) 요법, 키메라 항원 수용체 T 세포 전달(CAR-T) 요법, 백신 요법, 및 사이토카인 요법으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체는 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체는 작용제인 항-CD40 항체, 작용제인 항-OX40 항체, 작용제인 항-ICOS 항체, 작용제인 항-CD28 항체, 작용제인 항-TREM1 항체, 작용제인 항-TREM2 항체, 작용제인 항-CD137/4-1BB 항체, 작용제인 항-CD27 항체, 작용제인 항-글루코코르티코이드-유도 TNFR-관련 단백질 GITR 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 상기 방법은 개체에게 적어도 하나의 자극 사이토카인을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-감마, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 대상체 또는 개체는 포유류이다. 포유류는 가축 동물(예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 대상체 또는 개체는 인간이다.
치매
치매는 정상 노화로부터 예상될 수 있는 것 이상으로 이전에 손상되지 않은 사람에서 전반적 인지 능력의 심각한 손실로서 존재하는 비-특이적 증후군(즉, 일련의 징후 및 증상)이다. 치매는 독특한 전반적 뇌 손상의 결과로서 정적일 수 있다. 대안적으로, 치매는 신체 내 손상 또는 질환에 기인하여 장기간 쇠퇴를 야기하는 진행성일 수 있다. 치매는 노인병 집단에서 훨씬 더 흔하지만, 이는 또한 65세 이전에 생길 수 있다. 치매에 의해 영향받는 인지 영역은, 기억, 주의 범위, 언어 및 문제 해결을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일반적으로, 증상은 개체가 치매로 진단되기 전에 적어도 6개월동안 존재하여야 한다.
예시적인 치매 형태는, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 의미론적 치매 및 루이소체 치매를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 치매를 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체는 치매를 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
전두측두엽 치매
전두측두엽 치매(FTD)는 뇌의 전두엽의 진행성 악화로부터 초래되는 병태이다. 시간에 따라, 악화는 측두엽으로 진행될 수 있다. 유병률이 알츠하이머병(AD) 다음인, FTD는 초로기 치매 사례의 20%를 차지한다. FTD의 임상 특징은 기억 손상, 행동이상, 인격변환 및 언어 손상을 포함한다(Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24:186-194 (2008); Neary, D., et al., Neurology 51:1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. & Hodges, J. R., Neurology 58:1615-1621 (2002)).
FTD 사례의 실질적인 부분은 상염색체 우성 방식으로 유전되지만, 하나의 패밀리에서조차, 증상은 거동 장애를 갖는 FTD로부터, 1차 진행성 실어증까지, 피질-기저 신경절퇴화까지의 범위로 확장될 수 있다. 대부분의 신경퇴행성 질환과 같이 FTD는 병에 걸린 뇌에서 특정 단백질 응집물의 병리학적 존재를 특징으로 할 수 있다. 조직학적으로, FTD의 첫 번째 설명은 신경섬유매듭 또는 피크소체에서 과인산화된 타우 단백질의 신경세포내 축적의 존재를 인식하였다. 단백질 타우와 관련된 미세소관에 대한 원인 역할은 몇몇 패밀리에서 타우 단백질을 암호화하는 유전자에서 돌연변이의 동정에 의해 뒷받침되었다(Hutton, M., et al., Nature 393:702-705 (1998). 그러나, 대다수의 FTD 뇌는 초인산화된 타우의 축적을 나타내지 않지만, 유비퀴틴(Ub) 및 TAR DNA 결합 단백질(TDP43)에 대한 면역반응성을 나타낸다(Neumann, M., et al., Arch. Neurol. 64:1388-1394(2007)). Ub 포함의 대다수의 해당 FTD 사례(FTD-U)는 프로그래뉼린(Progranulin) 유전자에서 돌연변이를 운반하는 것으로 나타났다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 FTD를 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체를 투여하는 것은 FTD를 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
알츠하이머병
알츠하이머병(AD)은 가장 통상적인 치매 형태이다. 상기 질환에 대한 치료법은 없으며, 그것이 진행됨에 따라 악화되고, 종국적으로 사망에 이르게 된다. 가장 흔하게는, AD는 65세 초과의 사람에서 진단된다. 그러나, 덜-우세한 조기 발병 알츠하이머는 훨씬 더 빨리 일어날 수 있다.
알츠하이머병의 통상적인 증상은 거동 증상, 예컨대 최근 사건 기억의 어려움; 인지 증상, 착란상태, 이노성(irritability) 및 공격성, 기분의 두드러진 변화, 언어 곤란 및 장기간 기억 상실을 포함한다. 질환이 진행됨에 따라 신체 기능은 상실되고, 궁극적으로 사망을 야기한다. 알츠하이머병은 완전히 명확하게 되기 전에 알려지지 않은 그리고 가변적 양의 시간에 대해 진행되고, 몇 년 동안 진단되지 않고 진행될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 알츠하이머병을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체를 투여하는 것은 알츠하이머병을 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
파킨슨병
특발성 또는 원발성 파킨슨증, 운동기능감퇴경직 증후군(HRS) 또는 전신마비로서 지칭될 수 있는 파킨슨병은 운동계 제어에 영향을 미치는 신경퇴행성 뇌 장애이다. 뇌에서 도파민-생성 세포의 진행성 사멸은 파킨슨병의 주요 증상을 야기한다. 가장 흔하게는, 파킨슨병은 50세 이상의 사람에서 진단된다. 파킨슨병은 대부분의 사람에서 특발성(알려진 원인 없음)이다. 그러나, 유전적 인자는 또한 질환에서 어떤 역할을 한다.
파킨슨병의 증상은 손, 팔, 다리, 턱 및 안면의 떨림, 사지 및 몸통의 근경직, 움직임 둔화(운동완서), 자세 불안정, 보행 장애, 신경정신병적 문제, 말하기 또는 거동의 변화, 우울증, 불안, 통증, 정신병, 치매, 환각 및 수면 문제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 파킨슨병을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체를 투여하는 것은 파킨슨병을 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
근위축성 측삭경화증(ALS)
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 근위축성 측삭경화증(ALS) 또는, 운동 뉴런 질환 또는 루게릭병은 상호 호환적으로 사용되고, 빠르게 진행성인 쇠약, 근위축증 및 갑작스런 경련, 근경직, 말하기의 곤란함(구음 장애), 연하의 곤란(연하곤란) 및 호흡의 곤란함(호흡곤란)을 특징으로 하는 다양한 병인을 갖는 쇠약성 질환을 지칭한다.
프로그래뉼린은 ALS에서 어떤 역할을 하며(Schymick, JC et al., (2007) J Neurol Neurosurg Psychiatry.;78:754-6) TDP-43과 같은 단백질을 야기하는 ALS에 의해 원인이 되는 손상을 또한 보호한다(Laird, AS et al., (2010). PLoS ONE 5: e13368)는 것이 나타났다. 또한 프로-NGF는 희소돌기신경교 및 척수손상 후 피질척수 뉴런의 p75 매개 사멸을 유도한다는 것이 입증되었다(Beatty et al., Neuron (2002), 36, pp. 375-386; Giehl et al, Proc. Natl. Acad. Sci USA (2004),101, pp6226-30).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 ALS를 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체를 투여하는 것은 근위축성 측삭경화증을 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
헌팅턴병
헌팅턴병(HD)은 헌팅턴 유전자(HTT)에서 상염색체 우성 돌연변이에 의해 야기되는 유전 신경퇴행성 질환이다. 헌팅턴 유전자 내의 사이토카인-아데닌-구아닌(CAG) 삼중 반복부의 확장은 유전자에 의해 암호화된 헌팅턴 단백질(Htt)의 돌연변이 형태의 생성을 초래한다. 이 돌연변이 헌팅턴 단백질(mHtt)은 독성이고, 뉴런 사멸에 기여한다. 헌팅턴병의 증상은 그들이 임의의 연령에 나타날 수 있다고 해도, 가장 흔하게는 35 내지 44세에 나타난다.
헌팅턴병의 증상은 운동 제어 문제, 격동, 무작위 움직임(무도병), 비정상적 안구 운동, 손상된 균형, 발작, 씹는 것의 곤란함, 연하의 곤란함, 인지 문제, 말하기의 변화, 기억 손상, 사고의 곤란함, 불면, 피로, 치매, 성격의 변화, 우울, 불안 및 강박 행동을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 헌팅턴병(HD)을 예방하고/하거나 이의 위험을 감소시키고/시키거나 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체를 투여하는 것은 헌팅턴병을 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
타우병증
타우병증 또는 타우병은 뇌에서의 미세소관-관련 단백질 타우의 응집에 의해 야기되는 신경퇴행성 질환의 부류이다. 알츠하이머병(AD)은 가장 잘 알려진 타우병증이고, 불용성 신경섬유매듭(NFT)의 형태로 뉴런 내에서 타우 단백질의 축적을 수반한다. 다른 타우병증 및 장애는 진행성 핵상안근 마비, 권투선수 치매(크롬산 외상성 뇌병증), 전두측두엽 치매 및 염색체 17에 관련된 파킨슨증, 리티코-보딕 질환(Lytico-Bodig disease)(괌의 파킨슨-치매 복합), 매듭-우세 치매, 신경절교종 및 신경절신경종, 수막혈관종증, 아급성 경화성 범뇌염, 납중독증, 결정성 경화증, 할러포르텐-스파츠병, 지질갈색소증, 픽병, 피저기질퇴화, 은친화성 입자병(AGD), 헌팅턴병 및 전두측두엽 퇴화를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 타우병증을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체를 투여하는 것은 타우병증을 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
다발성 경화증
다발성 경화증(MS)은 또한 파종 경화증 또는 다발 경화증으로서 지칭될 수 있다. MS는 뇌 및 척수의 액손 주위의 지방 미엘린초가 손상되어, 탈수초화 및 흉터뿐만 아니라 광범위한 징후 및 증상을 야기하는 염증 질환이다. MS는 서로 효과적으로 상호 연락하는 뇌 및 척수에서의 신경 세포의 능력에 영향을 미친다. 신경 세포는 활동전위로 불리는 전기 신호를 미엘린으로 불리는 절연 물질 내에 포함된 액손으로 불리는 긴 섬유 아래로 보냄으로써 상호 연락한다. MS에서, 신체 자신의 면역계는 미엘린을 공격하고 손상시킨다. 미엘린이 손상될 때, 액손은 더 이상 신호를 효과적으로 전도할 수 없다. MS 발병은 보통 젊은 성인에서 일어나며, 여성에서 더 흔하다. http://en.wikipedia.org/wiki/Multiple_sclerosis - cite_note-pmid18970977-1
MS의 증상은 감각의 변화, 예컨대 민감성 또는 아린감의 상실; 따끔따끔함 또는 무감각, 예컨대 감각저하 및 손발저림; 근력저하; 간헐성 경련; 근경련; 이동의 곤란함; 협응 및 균형의 곤란함, 예컨대 운동실조; 말하기의 곤란함, 예컨대 구음 장애, 연하의 어려움, 예컨대 연하곤란; 시각적 문제, 예컨대 안진, 눈섬광 및 복시를 포함하는 시신경염; 피로; 급성 또는 만성 통증; 및 방광 및 장 문제; 다양한 정도의 인지 손상; 우울증 또는 불안정한 분위기의 감정 증상; 보통의 주위 온도보다 더 고온에 대한 노출에 기인하는 현존하는 증상의 악화인 우토프(Uhthoff) 현상; 및 목을 구부릴 때 등 아래쪽으로 실행되는 전기적 감각인 레미트사인(Lhermitte's sign)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여하는 것은 다발성 경화증을 예방하고/하거나 치매 위험을 감소시키고/시키거나 치매를 치료할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-CD33 항체를 투여하는 것은 다발성 경화증을 갖는 개체에서 하나 이상의 CD33 활성을 조절할 수 있다.
암
본 개시내용의 추가적인 양상은 암의 예방, 암 위험의 감소, 암 치료가 필요한 개체에게 치료적 유효량의 단리된 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여함으로써 암을 예방하거나, 암 위험을 감소시키거나, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 임의의 본 개시내용의 단리된 항체는 이들 방법에서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 작용제인 항체이다. 다른 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 길항제 항체이다. 다른 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 비활성 항체이다. 다른 실시형태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 항체 접합체이다.
본 명세서에 개시하는 바와 같이, 종양 미세환경은 T 림프구, 대식세포 및 골수성/과립구 계통의 세포를 포함하는 이종성 면역 침윤물을 함유하는 것으로 알려져 있다. 종양 내 T-조절 세포, 종양-포매 면역억제자 골수성 세포, 및/또는 M2-대식세포의 존재 및 활성은 불량한 예후와 관련된다. 대조적으로, 세포독성 T 세포의 존재 및 활성은 암 치료에 유리하다. 세포독성 T 세포의 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 향상시키고, 다양한 면역억제자 세포의 수 및 활성을 감소시키는 요법은 상당한 치료적 이점을 제공하는 것으로 예상된다. 정액의 전임상 연구는 면역억제자 세포(예를 들어, CSF1/CSF1R 차단 항체)를 표적화하는 약물과 세포독성 T 세포를 활성화하는 면역 관문 차단 항체 사이의 상승효과를 나타내었는데, 이는 세포 유형을 둘 다 조작하는 것이 개개 요법이 불량하게 효과적인 종양 모델에서 효능을 나타낸다는 것을 나타낸다(Zhu Y; Cancer Res. 2014 Sep15; 74(18):5057-69). 따라서, 일부 실시형태에서, 골수성 세포, T 세포의 서브세트, 및 종양-연관 면역 세포 상에서 발현되는 CD33의 차단은 유리한 항-종양 면역반응을 자극하여, 치료적 항-종양 면역반응을 초래할 수 있다.
일부 실시형태에서, 암을 갖는 개체에서 암을 예방하거나, 암의 위험을 감소시키거나 또는 암을 치료하기 위한 방법은 추가로 개체에게 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 항체의 예는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항-BTLA 항체, 항- GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 본 개시내용의 길항제 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 방법에 의해 예방되거나 또는 치료되는 암은 편평 세포암(예를 들어, 상피 편평 세포암), 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포암종을 포함하는 폐암, 복막암, 간세포암, 위암 또는 위장암(위장관암을 포함) 및 위장관 기질 암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 요로암, 간세포암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁암종, 침샘 암종, 신장 또는 신세포암, 전립선암, 음문암, 갑상선 암, 간세포 암종, 항문 암종, 음경 암종, 흑색종, 표재 확산 흑색종, 악성 검정 사마귀 흑색종, 말단 흑색점 흑색종, 결절성 흑색종, 다발성 골수종 및 B 세포 림프종; 만성 림프구성 백혈병(CLL); 급성 림프아구 백혈병(ALL); 모발세포 백혈병; 만성 골수아구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 질환(PTLD)뿐만 아니라 모종증과 관련된 비정상 혈관 증식, 부종(예컨대, 뇌 종양과 관련), 메이그 증후군, 뇌뿐만 아니라 두경부 암, 및 관련된 전이를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시형태에서, 암은 비-소세포 폐암, 교모세포종, 신경아세포종, 신세포 암종, 방광암, 난소암, 흑색종, 유방암종, 위암 및 간세포 암종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 삼중-음성 유방 암종이다. 일부 실시형태에서, 암은 초기암 또는 후기암일 수 있다. 일부 실시형태에서, 암은 원발성 종양일 수 있다. 일부 실시형태에서, 암은 임의의 상기 유형의 암으로부터 유래된 제2 부위에서의 전이성 종양일 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항-CD33 항체는 방광암 유방암, 결장 및 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종 및 갑상선 암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 암을 예방하거나, 암의 위험을 감소시키거나 또는 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 개체에게 치료적 유효량의 본 개시내용의 항-CD33 항체를 투여함으로써 암을 갖는 개체에서 암을 예방하거나, 암의 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 저해성 면역 관문 분자, 및/또는 다른 표준 또는 연구 항-암 요법에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 본 개시내용의 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 관문 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠자(BTLA) 항체, 항- 살해 저해 수용체(KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 표준 또는 연구 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화된 요법, 이마티닙(Gleevec®), 트라스투주맙(Herceptin®), 입양 세포 전달(ACT), 키메라 항원 수용체 T 세포 전달(CAR-T), 백신 요법, 및 사이토카인 요법으로부터 선택된 하나 이상의 요법이다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 본 개시내용의 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 자극 면역 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체는 본 개시내용의 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체는 작용제인 항-CD40 항체, 작용제인 항-OX40 항체, 작용제인 항-ICOS 항체, 작용제인 항-CD28 항체, 작용제인 항-CD137/4-1BB 항체, 작용제인 항-CD27 항체, 작용제인 항-글루코코르티코이드-유도 TNFR-관련 단백질 GITR 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 추가로 개체에게 적어도 하나의 자극 사이토카인을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 본 개시내용의 항-CD33 항체와 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 자극 사이토카인은 TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, OSM, CNTF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-8, CRP, IFN-α, IFN-β, IL-2, IL-18, GM-CSF, G-CSF, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 대상체 또는 개체는 포유류이다. 포유류는 가축 동물(예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 대상체 또는 개체는 인간이다.
본 명세서에 제공된 항체(및 임의의 추가적인 치료제)는 비경구, 폐내, 비강내, 병변내 투여, 뇌척수내, 두개내, 척수내, 활액내, 척추강내, 경구, 국소 또는 흡입 경로를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 일정 기간에 걸쳐 볼루스로서 또는 지속적 주입에 의한 근육내, 정맥내 투여, 동맥내, 관절내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 실시형태에서, 투여는 정맥내 투여이다. 일부 실시형태에서, 투여는 피하이다. 투약은 투여가 잠시동안인지 만성인지의 여부에 부분적으로 의존하여 임의의 적합한 경로, 예를 들어, 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하에 의할 수 있다. 다양한 시점, 볼루스 투여 및 펄스 주입에 걸친 단일 또는 다회 투여를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다양한 투약 스케줄이 본 명세서에 상정된다.
본 명세서에 제공된 항체는 양호한 의학적 실행과 일치되는 방식으로 제형화, 투약 및 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려되는 인자는 치료 중인 특정 장애, 치료 중인 특정 포유류, 개개 환자의 임상적 병태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄 및 의료인에게 공지되어 있는 기타 인자를 포함한다. 항체가 필요하지는 않지만, 선택적으로 당해 장애를 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 1종 이상의 제제와 함께 제형화된다. 유효량의 이러한 기타 제제는 제형 중에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료 유형 및 상기 논의한 기타 인자에 따른다. 이들은 일반적으로 동일한 투약량으로 그리고 본 명세서에 기재된 바와 같은 투여 경로로, 또는 본 명세서에 기재된 투약량의 약 1 내지 99%로, 또는 임의의 투약량으로 그리고 경험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정되는 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 본 개시내용의 항체의 적절한 투약량은 (단독으로 1종 이상의 다른 추가적인 치료제와 조합하여) 치료될 질환 유형, 항체 유형, 질환의 중증도 및 과정, 항체가 예방적 또는 치료적 목적을 위해 투여되는지 여부, 이전의 요법, 환자의 임상 병력 및 항체에 대한 반응, 및 담당의사의 재량에 따를 것이다. 항체는 1시간에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다.
질환의 유형 및 중증도에 따라, 약 1㎍/㎏ 내지 15㎎/㎏(예를 들어, 0.1㎎/㎏ 내지 10㎎/㎏)의 항체는, 예를 들어, 하나 이상의 별개의 투여에 의하든, 또는 지속적 주입에 의하든 환자에 투여하기 위한 초기 후보 투약량일 수 있다. 한 번의 전형적인 1일 투약량은 상기 언급한 인자에 따라서 약 1㎍/㎏ 내지 100㎎/㎏ 이상의 범위이다. 병태에 따라 며칠 또는 더 장기간에 걸쳐 반복된 투여를 위해, 치료는 일반적으로 질환 증상의 목적하는 억제가 일어날 때까지 지속될 것이다. 한 번의 예시적인 항체 투약량은 약 0.05㎎/㎏ 내지 약 10㎎/㎏의 범위일 것이다. 따라서, 약 0.5㎎/㎏, 2.0㎎/㎏, 4.0㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏(또는 이들의 임의의 조합)의 1회 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 (예를 들어, 환자가 약 2 내지 약 20회 또는, 예를 들어, 약 6회 용량의 항체를 투여받도록) 간헐적으로, 예를 들어, 매주 또는 3주마다 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 투약 빈도는 1일당 3회, 1일당 2회, 1일당 1회, 격일에 1회, 1주 1회, 2주에 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회 또는 1개월에 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회 또는 더 길다. 초회의 보다 높은 부하 용량, 다음에 1회 이상의 보다 낮은 용량이 투여될 수 있다. 그러나, 다른 투약 요법이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다.
진단 용도
임의의 항체의 일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 임의의 항-CD33 항체는 샘플 또는 개체에서의 CD33의 존재를 검출하는 데 유용하다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. 본 명세서에서 진단 목적을 위해 본 개시내용의 항체를 이용하는 방법, 예컨대 개체에서의 또는 개체로부터 유래된 조직 샘플에서의 CD33의 검출이 제공된다. 일부 실시형태에서, 개체는 인간이다.
검출 방법은 항원-결합 항체의 정량화를 수반할 수 있다. 생물학적 샘플에서 항체 검출은 면역형광 현미경, 면역세포화학, 면역조직화학, ELISA, FACS 분석, 면역침전, 또는 마이크로-양전자 방출 단층촬영술을 포함하는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 일어날 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는, 예를 들어 18F로 방사성표지되고, 후속적으로 마이크로-양전자 방출 단층촬영술 분석을 이용하여 검출된다. 항체-결합은 또한 비-침습적 기법, 예컨대 양전자 방출 단층촬영술(PET), X-선 컴퓨터 단층촬영술, 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영술(SPECT), 컴퓨터 단층촬영술(CT), 및 컴퓨터 축 단층촬영술(CAT)에 의해 환자에서 정량화될 수 있다.
키트/제조 물품
본 명세서에서 본 명세서에 기재된 항-CD33 항체를 포함하는 제조 물품(예를 들어, 키트)가 제공된다. 제조물품은 본 명세서에 기재된 항체를 포함하는 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 용기는 바이알, 보틀, 단지, 가요성 패키징(예를 들어, 밀봉 마일러(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 임의의 적합한 패키징일 수 있다. 용기는 단위 용량, 벌크 패키지(예를 들어, 다회 용량 패키지) 또는 하위-단위 용량일 수 있다.
일부 실시형태에서, 키트는 제2 제제를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 제2 제제는 주사용 정균수(BWFI), 인산염-완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 약제학적으로-허용 가능한 완충제 또는 희석제이다. 일부 실시형태에서, 제2 제제는 약제학적 활성제이다.
임의의 제조 물품의 일부 실시형태에서, 제조 물품은 본 개시내용의 방법에 따른 사용을 위한 설명서를 추가로 포함한다. 설명서는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투약량, 투약 스케줄 및 투여 경로를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이들 설명서는 개시내용의 임의의 방법에 따라 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상뇌압수두증, 근위축성 측삭경화증, 헌팅턴병, 타우병증, 나수-하코라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 대장염, 류마티스 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장질환, 궤양성 대장염, 비만, 말라리아, 본태성진전, 중추신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이소체 치매, 다계통 위축증, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상안근 마비, 대뇌 피질 기저핵 변성, 급성 파종뇌척수염, 육아종성 장애, 유육종증, 노화 질환, 발작, 척수손상, 외상성 뇌 손상, 나이 관련 황반변성, 녹내장, 망막색소변성증, 망막 변성, 호흡기 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 저골밀도, 골다공증, 골형성, 골화석증, 골파제트병, 및 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 다발성 골수종, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 증가증, 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 원발성 또는 특발성 골수경화증, 골수-유래 종양, CD33을 발현시키는 종양, 갑상선 암을 포함하는 암, 감염, CNS 헤르페스, 기생충 감염, 트리파노소마 감염, 크루지 감염, 슈도모나스 에루기노사 감염, 리슈마니아 도노반 감염, 그룹 B 스트렙토코커스 감염, 캄필로박터 제주니 감염, 네이세리아 메닌기디티스 감염, I형 HIV 및 헤모필루스 인플루엔자로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 갖는 개체에서 상기 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 이의 위험을 감소시키거나 또는 이를 치료하기 위한 본 개시내용의 단리된 항체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-CD33 항체)의 투여의 설명을 포함한다. 일부 실시형태에서, 설명서는 항-CD33 항체 및 제2 제제(예를 들어, 제2 약제학적 활성제)의 사용을 위한 설명서를 포함한다.
일부 실시형태에서, 설명서는, 예를 들어 개체에서, 조직 샘플에서 또는 세포에서 CD33 단백질을 검출하는 방법의 설명을 포함한다. 키트 및/또는 제조물품 상기 개체가 질환 및 질환의 병기를 갖는지의 여부를 동정하는 것에 기반하여 치료에 적합한 개체를 선택하는 설명을 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 키트 및/또는 제조물품은 본 개시내용의 다른 항체(예를 들어, 저해 관문 모듈에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체, 저해 사이토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체, 및/또는 자극 관문 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 작용제인 항체) 및/또는 적어도 하나의 자극 사이토카인을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 키트 및/또는 제조물품은 본 명세서에 기재된 항-CD33 항체와 조합하여 항체 및/또는 자극 사이토카인을 이용하기 위한 설명서, 항체 및/또는 자극 사이토카인과 조합한 본 명세서에 기재된 항-CD33 항체를 이용하기 위한 설명서, 또는 본 명세서에 기재된 항-CD33 항체 및 본 개시내용의 임의의 방법에 따른 항체 및/또는 자극 사이토카인을 이용하기 위한 설명서를 추가로 포함할 수 있다.
설명서는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투약량, 투약 스케줄 및 투여 경로를 포함한다. 용기는 단위 용량, 벌크 패키지(예를 들어, 다회 용량 패키지) 또는 하위-단위 용량일 수 있다. 본 개시내용의 키트 및/또는 제조물품에서 공급되는 설명서는 전형적으로 라벨 또는 포장 삽입물(예를 들어, 키트 내에 포함된 종이 시트) 상에 기재된 설명서이지만, 기계로 판독 가능한 설명서(예를 들어, 자기 또는 광학 저장 디스크 상에서 운반되는 설명서)가 또한 허용 가능하다.
라벨 또는 포장 삽입물은 조성물이, 예를 들어, 본 개시내용의 질환을 치료하기 위해 사용된다는 것을 나타낸다. 설명서는 본 명세서에 기재된 임의의 방법을 실행하기 위해 제공될 수 있다.
본 개시내용의 키트 및/또는 제조물품은 적합한 패키징에 있다. 적합한 패키징은 바이알, 보틀, 병, 가요성 패키징(예를 들어, 밀봉된 마일러(Mylar) 또는 비닐백) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 또한 특정 장치, 예컨대 흡입기, 비강 투여 장치(예를 들어, 분무기) 또는 주입 장치, 예컨대 미니펌프와 조합하여 사용하기 위한 포장이 상정된다. 키트 및/또는 제조물품은 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백(bag) 또는 바이알일 수 있다). 용기는 또한 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물 중의 적어도 하나의 활성제는 본 명세서에 기재된 항-CD33 항체이다. 용기는 제2의 추가로 약제학적 활성제를 포함할 수 있다.
키트 및/또는 제조물품은 선택적으로 추가적인 성분, 예컨대 완충제 및 해석적 정보를 제공할 수 있다. 정상적으로는, 키트는 용기 및 용기 상의 또는 용기와 관련된 라벨 또는 포장 삽입물(들)을 포함한다.
본 개시내용은 다음의 실시예를 참고로 하여 더 완전하게 이해될 것이다. 그러나, 그들은 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 개시내용 전체적으로 모든 인용은 본 명세서에 명확하게 참고로 포함된다.
실시예
실시예 1: 뮤린 항-CD33 항체의 인간화, 및 이러한 인간화된 변이체의 결합 파라미터
다음의 실시예의 목적은 마우스 항-인간 CD33 항체인 6C7의 인간화된 변이체를 생성하고, CD33에 대한 인간화된 항체의 결합을 특성규명하는 것이었다. 마우스 6C7 항체는 서열 EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVGSGFTFSNYCMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNNYVTNYVESVKGRFTISRDDSKSRVYLQMNNLRGEDTGFYYCTRDGYYVPFAYWGQGTLVTVSA (서열번호 3)을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 QLVLTQSSSASFSLGASAKLTCTLSSQHSTYTIEWYQQQPLKPPKYVMELKKDGSHSTGD GIPDRFSGSSSGADRYLSISNIQPEDEAIYICGVGDTIKEQFVYVFGGGTKVTVL (서열번호4)의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하였다. 항-CD33 항체 6C7은 WO2016/201388에 이미 개시되어 있되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 65에 의해 암호화되고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 242에 의해 암호화되었다.
마우스 항체에 대해 서열 내에서 가까운 인간 생식계열 프레임워크에 모 마우스 항체의 CDR을 접합시킴으로써 항-CD33 항체 6C7을 인간화시켰다. 하나 이상의 프레임워크 역돌연변이를 갖는 항체를 또한 생성하였다. 전체로서, 항-CD33 항체 6C7의 7개의 인간화된 항체가 생성되었다: 6C7H1 내지 6C7H7. 항-CD33 항체의 중쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 11에 도시한다. 항-CD33 항체의 경쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 12에 도시한다.
6C7의 7개의 인간화된 항-CD33 항체를 유세포분석에 의한 1차 수지상 세포에 대한 결합에 대해 평가하였고, 결합은 항-CD33 항체 6C7의 가변 중쇄 서열 및 가변 경쇄 서열을 포함한 항-CD33 6C7 키메라 항체의 결합과 비교하였다. RosetteSep™ 단핵구 단리 항체 칵테일(스템셀 테크놀로지즈(StemCell Technologies))를 이용하여 건강한 인간 공여자로부터의 혈액으로부터 단핵구를 단리시켰다. 100ng/㎖ GM-CSF 및 100ng/㎖ IL-4(페프로테크(Peprotech))를 이용하여 단리된 단핵구를 수지상 세포로 분화시켰다. 암실 내 얼음에서 수지상 세포를 항-CD33 항체의 희석물과 함께 30분 동안 인큐베이션시킨 후에, 형광 접합된 항-인간 IgG 2차 항체와 함께 30분 인큐베이션시켰다. FACS 완충제(PBS + 2% FBS, 2mM EDTA) 중에서 세포를 2회 세척하고 나서, BD FACS 칸토 상에서 유세포 분석을 수행하였다. 플로우조 소프트웨어(FlowJo software)(오리건주 애슐랜드 소재)를 이용하여 데이터를 분석하였다. 결과를 도 1에 나타낸다.
수지상 세포에 대한 결합에 대해 시험한 7개의 인간화된 항체 중에서, 항체 중 5개만이 세포에 결합되었다: 6C7H3, 6C7H4, 6C7H5, 6C7H6 및 6C7H7. 항-CD33 항체 6C7H1 및 6C7H2는 이들 실험에서 수지상 세포에 결합되지 않았다.
실시예 2: 인간화된 항-CD33 항체에 의한 CD33 세포 표면 하향조절
다음의 실시예의 목적은 인간화된 항-CD33 6C7 항체(상기 실시예 1에 기재한 바와 같음)가 1차 인간 수지상 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킬 수 있는지의 여부를 시험하는 것이었다.
RosetteSep™ 단핵구 단리 항체 칵테일(스템셀 테크놀로지즈(StemCell Technologies))를 이용하여 건강한 인간 공여자로부터의 혈액으로부터 단핵구를 단리시켰다. 100ng/㎖ GM-CSF 및 100ng/㎖ IL-4(페프로테크(Peprotech))를 이용하여 단리된 단핵구를 수지상 세포로 분화시켰다. 웰당 100,000개의 세포로 96-웰 플레이트에서, ㎖당 200,000개의 세포로 24-웰 플레이트에서 또는 10% 하이클론(Hyclone) FBS, 2mM 글루타민, 페니실린/스트렙토마이신 및 비-필수 아미노산으로 보충한 2㎖의 RPMI 중의 500,000개 세포로 6-웰 접시에서 수지상 세포 샘플을 플레이팅하였다. 항-CD33 항체, 또는 아이소타입 대조군 항체를 웰에 첨가하고, 37℃에서 24시간 동안 5% CO2와 함께 인큐베이션시켰다. 세포 표면 수용체 발현을 표준 기법에 따른 FACS 분석에 의해 검출하였다. 간략하게, 세포를 암실에서 30분 동안 항-CD33-FITC 클론 HIM3-4(BD Biosciences)와 함께 인큐베이션시켰다. FACS 완충제(PBS + 2% FBS, 2mM EDTA) 중에서 세포를 2회 세척하고 나서, BD FACS 칸토 상에서 유세포 분석을 수행하였다. 플로우조 소프트웨어(오리건주 애슐랜드 소재)를 이용하여 데이터를 분석하고, 항체의 부재 하에 발현에 대한 수용체의 백분율로서 CD33 표면 발현을 계산하였다. 결과를 도 2에 나타낸다.
시험한 모두 4개의 인간화된 항-CD33 항체(6C7H3, 6C7H5, 6C7H6, 6C7H7)뿐만 아니라 항-CD33 키메라 항체 6C7는 수지상 세포 표면 상에서 CD33의 세포 표면 수준을 감소시킬 수 있었고, 항-CD33 항체 6C7H5는 인간화된 항체 중 가장 강력하였다.
실시예 3: 항-CD33 항체 6C7H5의 조작 및 이러한 변형 항체의 특성규명
다음의 실시예의 목적은 항체 불안정을 초래하는 서열을 제거한 항-CD33 항체 6C7H5의 변이체를 생성하고 특성규명하는 한편, 항-CD33 항체 6C7H5의 결합 및 다른 바람직한 기능적 특성을 유지한다.
인간화된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에서의 표적화된 돌연변이에 의해 항-CD33 항체 6C7H5의 조작을 수행하였고, 이 후에 항체 변이체를 포유류 세포에서 발현시키고, 추가 분석을 위해 정제하였다. HVR H3 및 HVR L2에서의 변형을 포함한 6C7H5의 24개의 변이체 항체를 생성하였다. ELISA에 의해 재조합 CD33에 대한 결합에 대해 이들 24개의 항체를 시험하였고, 24개의 항체 중 1개만이 배경 수준을 초과하는 결합을 나타냈다(데이터 미제시). 본 연구의 항체인 6C7H8의 중쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 7에 도시한다. 본 항체의 경쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 8에 도시한다. 본 항체의 중쇄 프레임워크 영역을 이하의 표 9에 도시한다. 본 항체의 경쇄 프레임워크 영역을 이하의 표 10에 도시한다. 본 항체의 중쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 11에 도시한다. 본 항체의 경쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 12에 도시한다.
수지상 세포 및 사이노몰거스 CD33에 대한 결합
항-CD33 항체 6C7H8을 2㎍/㎖의 항체 농도로 상기 실시예 1에 기재한 방법을 이용하여 유세포 분석에 의해 포유류 세포에 대한 결합에 대해 시험하였다. 결과를 도 3에 나타낸다.
항-CD33 항체 6C7H8은 모 인간화된 항체, 항-CD33 항체 6C7H5 및 항-CD33 항체 6C7 키메라 항체와 유사한 수준으로 수지상 세포에 결합하는 것을 발견하였다.
ELISA에 의해 사이노몰거스 CD33에 대한 결합에 대해 항-CD33 항체 6C7H8을 또한 평가하였다. 간략하게, ELISA 플레이트를 재조합 인간 CD33 단백질(Sino Biologicals) 또는 재조합 사이노몰거스 CD33 단백질(NovoProtein)로 밤새 코팅하고, 이 후에 항체를 첨가하고, 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 결합된 항체를 겨자무과산화효소-접합 항-인간 IgG 항체(Jackson Immunoresearch)로 검출하고, TMB를 이용하여 연구하였다. 결과를 도 4에 나타내고, 이하의 표 4에 요약한다.
항체 6C7H8, 이의 모 항체, 6C7H5, 및 6C7 키메라 항체는 모두 인간 CD33에 유사하게 결합되었다. 대조적으로, 항체 6C7H5 및 6C7 키메라 항체는 사이노몰거스 CD33에 대한 보통의 결합을 나타내지만, 항-CD33 항체 6C7H8는 사이노몰거스 CD33에 대한 결합을 거의 또는 전혀 나타내지 않았다.
표면 CD33의 하향조절
상기 실시예 2에 기재한 방법을 이용하여 수지상 세포 표면에 대한 CD33 수준을 감소시키는 능력에 대해 항-CD33 항체 6C7H8을 평가하였다. 결과를 도 5에 나타내고, 이하의 표 1에 요약한다.
Figure pct00016
항-CD33 항체 6C7H8은 수지상 세포 표면 상에서 CD33의 수준을 감소시켰지만, 모 인간화된 항체(항체 6C7H5) 및 6C7 키메라 항체에 비해 다소 감소된 효능을 나타냈다.
인간화된 6C7H8의 변이체
항체 6C7H5를 포함하였지만 항체 6C7H8에서 감소된 결합 및 다른 기능적 특성을 회복하기 위해 항-CD33 항체 6C7H8 상에서 추가적인 단백질 조작을 수행하였다. 항체 6C7H8의 중쇄 내 HVR H1, HVR L2, 및 프레임워크 1 및 프레임워크 2의 표적화된 돌연변이유발을 수행하였고, 이로부터 35개의 추가적인 항-CD33 항체를 생성하였다. 별도의 조작 접근에서, 표적화된 돌연변이유발에 의한 항체 6C7H8에서 HVR H1의 표적화된 돌연변이유발은 19개의 추가적인 변이체 항-CD33 항체를 수득하였다. ELISA에 의해 재조합 CD33에 대한 결합에 대해 항-CD33 항체를 시험하였다. 결과를 도 6A 및 도 6B에 나타낸다.
HVR H1 및 HVR L2에서 변형을 포함하는 35개의 항-CD33 항체 중에서, 3개의 항체만이 배경 수준 초과의 CD33에 대한 결합을 나타냈다. CD33에 대한 이들 3개 항-CD33 항체(6C7H9, 6C7H10 및 6C7H11)의 결합을 도 6A에 나타낸다. HVR H1, 항체 변이체 6C7H12 내지 6C7H30에서 변형을 포함하는 19개의 항-CD33 항체는 CD33에 대한 다양한 결합을 나타냈고, 항체 6C7H25는 가장 강한 결합 및 6C7H13, 6C7H19, 6C7H27 및 6C7H30을 비롯한 일부 항체가 도 6B에 나타낸 바와 같은 배경 수준 초과의 보통의 결합만을 나타낸다는 것을 나타낸다. 항체 변이체 6C7H9 내지 6C7H30의 중쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 7에 도시한다. 본 항체의 경쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 8에 도시한다. 항체의 중쇄 프레임워크 영역을 이하의 표 9에 도시한다. 본 항체의 경쇄 프레임워크 영역을 이하의 표 10에 도시한다. 항체의 중쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 11에 도시한다. 항체의 경쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 12에 도시한다.
인간화된 6C7H8의 변이체 친화도 파라미터
인간 CD33에 대한 항체 변이체의 친화도 파라미터를 표준 기법에 따라 ForteBio 분석에서 생물층 간섭측정에 의해 측정하였고(Estep et al. (2013) MAbs 5(2): 270-8), 모 항체(항체 6C7H8) 및 모 인간화된 항체(항체 6C7H5)의 친화도와 비교하였다. 간략하게, 항체를 항-인간 Fc 바이오센서(폴 포르테바이오(Pall ForteBio)) 상에서 포획하였다. 이어서, 재조합 인간 CD33(10nM, Sino Biologicals)을 포획된 항-CD33 표면(200s 결합 시간, 1200s 해리 시간)에 결합하였다. 각각의 항체에 대한 결합 및 해리 속도 상수(특히 ka 및 kd)를 추출하기 위해 국소 적합화를 사용하였다. kd/ka 비로부터 겉보기 친화도 상수(KD)를 계산하였다. 결과를 이하의 표 2에 나타낸다.
Figure pct00017
인간화된 6C7H8의 변이체 수지상 세포 결합
항체 변이체를 2㎍/㎖의 항체 농도로 실시예 1에 기재한 방법에 따라 1차 인간 수지상 세포에 대한 결합에 대해 평가하였다. 결과를 도 7에 나타낸다.
HVR H1 및 HVR L2에서 변형을 갖는 3개의 항체 변이체 중에서, 2개의 항체인 6C7H10 및 6C7H11만이 모 항체(6C7H8), 모 인간화된 항체(6C7H5), 또는 6C7 키메라 항체와 유사한 수준에서 수지상 세포에 결합하였다. 6C7H9 항체 변이체는 수지상 세포에 대해 실질적으로 감소된 결합을 나타냈다. HVR1에서 변형을 갖는 19개의 항-CD33 항체 변이체 중에서, 14개의 항체가 모 항체(6C7H8), 모 인간화된 항체(6C7H5) 또는 6C7 키메라 항체와 유사한 수준으로 수지상 세포에 결합하였다. 5개의 항-CD33 항체(6C7H13, 6C7H19, 6C7H22, 6C7H27 및 6C7H30)는 임의의 모 항체 결합의 60% 미만인 결합을 나타냈다. 이들 5개의 항-CD33 항체의 겉보기 친화도 상수(KD)는 모 항체의 10배 이내였지만, 세포에 대해 감소된 결합을 나타낸 모두 5개의 항-CD33 항체는 가장 빠른 해리 속도 상수를 가졌다.
인간화된 6C7H8의 변이체 표면 CD33의 하향조절
항-CD33 항체 변이체 6C7H9 내지 6C7H30은 실시예 2에 기재된 방법에 따라 수지상 세포 표면 상에서 이들이 CD33 수준을 감소시키는 능력에 대해 평가하였다. 항-CD33 항체 변이체를 모 항체(6C7H8), 모 인간화된 항체(6C7H5), 및 6C7 키메라 항체와 비교하였다. CD33의 절반의 최대 유효 농도(EC50) 및 최대 감소를 이하의 표 3에 요약한다. 항 CD33 항체 변이체 중 11개(6C7H10, 6C7H13, 6C7H17, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25 및 6C7H30)에 대한 이들 연구 결과를 도 8A 및 도 8B에 나타내고; 본 명세서에서, 이들을 모 6C7H8 항체, 모 6C7H5 인간화된 항체, 및 6C7 키메라 항체와 비교한다.
Figure pct00018
항체는 수지상 세포 표면 상에서 CD33 수준을 감소시키기 위한 다양한 효력을 나타냈다. 예상한 바와 같이, 6C7H13, 6C7H19, 6C7H22, 6C7H27 및 6C7H30에 의해 예시되는 세포에 대해 실질적으로 감소된 결합을 나타낸 항-CD33 항체는 CD33을 하향조절함에 있어서 실질적으로 감소된 효력을 가졌다. 10개의 추가적인 항-CD33 항체는 또한 세포 표면 CD33 수준을 감소시킴에 있어서 감소된 효력을 나타냈다(예를 들어, 모 인간화된 항체 6C7H5에 의해 관찰된 것에 비해 세포 표면 CD33 수준을 감소시킴에 있어서 효력의 0.1- 내지 0.3-배 개선). 4개의 항-CD33 항체(6C7H17, 6C7H20, 6C7H21 및 6C7H25)는 세포 표면 CD33 수준을 감소시킴에 있어서 유사한 또는 약간 개선된 효력을 나타냈고, 모 인간화된 항-CD33 항체 6C7H5에 의해 관찰된 것에 비해 0.8- 내지 1.6-배 개선되었다. 놀랍게도, 유사한 또는 개선된 효력 항-CD33 항체 중 몇몇의 친화도는 항체 6C7H10, 6C7H14, 6C7H16, 6C7H18, 6C7H24, 6C7H26 및 6C7H28에 의해 예시된 바와 같이, CD33을 하향조절함에 있어서 감소된 효력을 나타내는 항체의 친화도와 유사하였다. 따라서, 항-CD33 항체의 이의 표적에 대한 친화도는 세포 표면 상에서 항-CD33 항체가 CD33을 하향조절하는 능력을 예측하지 못하였다.
항-CD33 항체 6C7H17, 6C7H20, 6C7H21 및 6C7H25는 모 인간화된 항체(6C7H5) 및 6C7 키메라 항체에 의해 관찰된 것에 비해 CD33을 하향조절함에 있어서 유사한 또는 약간 개선된 효력을 갖지만, 유사한 또는 개선된 효력을 갖는 항-CD33 항체 변이체는 CD33 수준의 광범위한 최대 감소를 나타내지 않았다.
추가적인 항체 변이체
개선된 결합 및 기능적 활성을 갖는 항체를 얻기 위해, 본 개시내용의 항-CD33 항체의 추가적인 조작을 HVR H1, HVR H3, HVR L2, HVR L3, 중쇄 프레임워크 1, 중쇄 프레임워크 2, 중쇄 프레임워크 3, 경쇄 프레임워크 1 및 경쇄 프레임워크 2에서 표적화된 돌연변이유발에 의해 수행하여, 24개의 추가적인 항-CD33 항체 변이체(6C7H31 내지 6C7H54)를 수득하였다. 항-CD33 항체 변이체 6C7H31 내지 6C7H54의 중쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 7에 도시한다. 본 항체의 경쇄 가변 영역 HVR 서열을 이하의 표 8에 도시한다. 항체의 중쇄 프레임워크 영역을 이하의 표 9에 도시한다. 본 항체의 경쇄 프레임워크 영역을 이하의 표 10에 도시한다. 항체의 중쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 11에 도시한다. 항체의 경쇄 가변 영역 서열을 이하의 표 12에 도시한다.
추가적인 항체 변이체: 수지상 세포 및 사이노몰거스 CD33에 대한 결합
항-CD33 항체 변이체 6C7H31 내지 6C7H54를 1㎍/㎖의 항체 농도로 실시예 1에 기재한 방법에 따라 유세포 분석에 의해 1차 인간 수지상 세포에 대한 결합에 대해 평가하였다. 항-CD33 항체 변이체를 모 인간화된 항체(6C7H5) 및 6C7 키메라 항체와 비교하였다. 이들 연구 결과를 도 9에 나타낸다.
수지상 세포에 대한 결합에 대해 시험한 24개의 항-CD33 항체 변이체 중에서, 18개의 항-CD33 항체 변이체는 모 인간화된 항체(6C7H5) 및 6C7 키메라 항체에 의해 관찰된 것과 유사한 1차 인간 수지상 세포에 대한 결합을 나타냈다. 6개의 항-CD33 항체(6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H42 및 6C7H43)는 이들 세포에 대해 다소 감소된 결합을 나타냈다.
항-CD33 항체 변이체는 상기 기재한 방법에 따라 ELISA 분석에서 이들이 사이노몰거스 CD33에 결합하는 능력에 대해 추가로 평가하였다. 항-CD33 항체 변이체를 모 인간화된 항체(6C7H5) 및 6C7 키메라 항체와 비교하였다. 결과를 이하의 표 4에 요약하고, 항-CD33 항체 변이체 중 8개에 대한 결합 데이터를 도 10A 및 도 10B에 나타낸다.
Figure pct00019
시험한 26개의 항-CD33 항체 변이체 중에서, 19개는 모 인간화된 항체(6C7H5) 또는 6C7 키메라 항체에 의해 관찰된 것에 비해, 사이노몰거스 CD33에 대한 결합이 전혀 없거나 또는 실질적으로 감소된 결합을 나타냈다. 3개의 항-CD33 항체(6C7H36, 6C7H37 및 6C7H38)는 모 인간화된 항체(6C7H5) 및 6C7 키메라 항체에 의해 관찰된 것과 유사하게 사이노몰거스 CD33에 결합하였다. 4개의 항-CD33 항체(6C7H47, 6C7H48, 6C7H52 및 6C7H54)는 사이노몰거스 CD33에 대해 실질적으로 개선된 결합을 나타냈다. 1개의 항-CD33 항체인 6C7H54는 놀랍게도 개선된 효력 및 사이노몰거스 CD33에 대한 가장 강한 최대 결합을 둘 다 나타냈다.
추가적인 항체 변이체: 친화도 파라미터
인간 CD33 및 사이노몰거스 CD33에 대한 항-CD33 항체 6C7H54의 친화도 파라미터를 상기 기재한 방법에 따라 ForteBio 분석에서 생물층 간섭측정에 의해 측정하였다. 결과를 이하의 표 5에 요약한다.
Figure pct00020
항-CD33 항체 6C7H54는 모 인간화된 항체(6C7H5) 또는 6C7 키메라 항체에 의해 관찰된 것에 비해 인간 CD33에 대해 예상치 못하게 개선된 친화도를 갖는 것을 발견하였다(표 2 참조). 게다가, 사이노몰거스 CD33에 대한 항체 6C7H54의 결합 친화도는 인간 CD33에 대한 이 항체의 결합 친화도의 3배 이내인 것이 발견되었다.
추가적인 항체 변이체: 표면 CD33의 하향조절
24개의 항-CD33 항체 변이체(6C7H31 내지 6C7H54)는 상기 실시예 2에 기재한 방법에 따라, 이들이 수지상 세포 표면 상의 CD33 수준을 감소시키는 능력에 대해 추가로 평가하였다. 항-CD33 항체 변이체를 이들이 인간 수지상 세포 상에서 CD33 세포 표면 수준을 감소시키는 능력에 대해 모 인간화된 항체, 6C7H5 및 6C7 키메라 항체와 비교하였다. 절반-최대 유효 농도(EC50)를 이하의 표 6에 요약하고, 항-CD33 변이체 중 셋(6C7H38, 6C7H47 및 6C7H54)에 대한 결과를 도 11에 나타내며, 여기서 이들을 모 6C7H5 인간화된 항체 및 6C7 키메라 항체와 비교한다.
Figure pct00021
항-CD33 항체 모두 수지상 세포 표면 상에서 CD33을 감소시켰고, 모 인간화된 항체(6C7H5) 및 6C7 키메라 항체에 의해 관찰된 것의 2배 이내인 효력을 나타냈다. 사이노몰거스 CD33(6C7H47 및 6C7H54)에 대해 가장 강한 결합을 나타낸 2개의 항-CD33 항체 중에서, 항체 6C7H54는 CD33을 하향조절함에 있어서 가장 강하였고, 이들 세포 상의 CD33의 세포 표면 수준을 줄이거나 감소시키는 데 모 인간화된 항체(6C7H5)와 6C7 키메라 항체 둘 다보다 더 강력하였다. 항체 모두는 CD33에서 유사한 최대 감소를 나타냈다(도 11 및 데이터 미제시). 상기 기재한 조작 방법을 이용하여 생성한 24개의 항-CD33 항체 변이체 중에서, 그리고 4개의 조작 캠페인을 통해 생성된 총 102개의 항-CD33 항체 변이체 중에서, 항-CD33 항체 6C7H54는 CD33의 강력한 하향조절과 세포 표면 CD33 수준의 최대 감소를 나타냈고; 추가적으로, 이 항-CD33 항체는 모 인간화된 항체(6C7H5) 및 6C7 키메라 항체에 의해 관찰된 것에 비해 인간 CD33과 사이노몰거스 CD33 둘 다에 대해 예상치 못하게 개선된 친화도를 나타냈다.
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
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Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
실시예 4: 내재화 항-CD33 항체에 대한 Fc 영역의 영향의 특성규명
본 실시예의 목적은 시험관내 및 생체내 1차 골수성 세포 상에서 항-CD33 항체가 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는 능력에 대한 Fc의 영향을 평가하는 것이었다.
항체의 Fc 영역은 세포 및 골수 표면 상에서 발현되는 Fcγ 수용체와 상호작용할 수 있고, CD33을 내인성으로 발현시키는 기타 면역 세포는 또한 다중 Fcγ 수용체를 발현시킨다. 따라서, 항체의 Fc와 세포-표면 Fcγ 수용체 사이의 상이한 인간 IgG 아이소타입의 상호작용의 영향 및 수용체를 내재화하는 항체의 능력에 대한 항체의 클러스터링 능력을 시험하였다.
6C7H8, 6C7H10, 또는 6C7H54 가변 영역 및 상이한 인간 IgG 변이체를 포함하는 항-CD33 항체를 생성하였다. 시험한 Fc는 모든 Fcγ 수용체에 결합하는 IgG1; C1q에 대해 감소된 결합을 나타내지만 모든 Fcγ 수용체에 대해 결합하는 P331S 돌연변이를 포함하는 IgG1 P331S; S267E 및 L328F 돌연변이를 포함하고, CD32B 및 CD32A의 R131 변이체에 대해 향상된 결합을 나타내는 IgG1 IgG1 SELF; CD32A에 대해서만 실질적인 결합을 나타내는 IgG2; 및 L234A, L235A 및 P331S 돌연변이를 포함하고, 임의의 Fcγ 수용체에 대한 결합을 거의 또는 전혀 나타내지 않는 IgG1 LALAPS를 포함하였다. 실시예 2에 기재한 방법에 따라 1차 인간 수지상 세포 상에서 세포 표면 CD33 수준을 감소시키는 이들의 능력에 대해 항체를 평가하였다. 데이터를 도 12A, 도 12B, 및 도 12C에 나타내고, 표 13은 절반의 최대 유효 농도(EC50) 및 항체에 의한 최대 CD33 하향조절을 요약한다.
Figure pct00034
상이한 Fc 변이체를 이용하여 작제한 항-CD33 항체는 수지상 세포 표면 상에서 CD33 수준을 감소시키는 다양한 능력을 나타냈다. IgG1 SELF 상의 항체 6C7H10이 CD33을 하향조절함에 있어서 항체 6C7H10 IgG1 항체보다 25.8배 더 강력하기 때문에 IgG1 SELF 아이소타입은 가장 강한 효력을 전하였고, 두 항체는 CD33 감소의 유사한 최대 수준을 나타냈다. 놀랍게도, 항체 6C7H8 IgG1 LALAPS 및 항체 6C7H10 IgG1 LALAPS 항체는 CD33를 이들의 동족 야생형 IgG1 항체보다 하향조절하는 데 실질적으로 덜 효과적이었고, IgG1 LALAPS 항체는 둘 다 40% 미만만큼 CD33 수준을 감소시킨다. 항체 6C7H10 IgG2 및 항체 6C7H54 IgG2 항체는 이들의 야생형 IgG1 상대와 효력이 유사하였다. 항체 6C7H10 IgG2 항체는 항체 6C7H10 IgG1과 유사한 수준으로 CD33을 최대로 감소시켰지만, 항체 6C7H54 IgG2 항체는 항체 6C7H54 IgG1 보다 더 광범위한 최대 CD33 감소를 나타냈다. 대조적으로, 항체 6C7H54 IgG1 PS는 항체 6C7H54 IgG1에 의해 관찰된 것에 비해 CD33을 하향조절함에 있어서 약간 개선된 효력을 나타내었지만, 두 항체는 유사한 최대 CD33 감소를 나타냈다. 이들 데이터는 Fc 영역이 항-CD33 항체에 의한 효력 및 최대 수용체 감소 둘 다에 강하게 영향을 미쳤다는 것을 나타내었는데, 이는 수용체 하향조절이 항체와 하나 이상의 Fcγ 수용체와의 상호작용에 의해 향상된다는 것을 시사한다.
Figure pct00035
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Figure pct00055
SEQUENCE LISTING <110> ALECTOR LLC <120> ANTI-CD33 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> WO/2020/047374 <140> PCT/US2019/048994 <141> 2019-08-30 <150> US 62/726,053 <151> 2018-08-19 <160> 122 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 364 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala 1 5 10 15 Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln 20 25 30 Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro 35 40 45 Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly 50 55 60 Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln 65 70 75 80 Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro 85 90 95 Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp 100 105 110 Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser 115 120 125 Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg 130 135 140 Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn 145 150 155 160 Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile 165 170 175 Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr 180 185 190 His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr 195 200 205 Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu 210 215 220 Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr 225 230 235 240 Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly 245 250 255 Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala 260 265 270 Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg Lys 275 280 285 Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr Gly 290 295 300 Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser Lys Leu His Gly Pro Thr 305 310 315 320 Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro Thr Val Glu Met Asp Glu 325 330 335 Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His Gly Met Asn Pro Ser Lys 340 345 350 Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg Thr Gln 355 360 <210> 2 <211> 379 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 2 Met Asp Gly Glu His Leu Lys Gly Arg Asn Gln Gly Ala Gln Glu Thr 1 5 10 15 Ser Ala Ser Asp Met Pro Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly 20 25 30 Ala Leu Ala Met Asp Pro Arg Val Arg Leu Glu Val Gln Glu Ser Val 35 40 45 Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His 50 55 60 Pro Val Pro Tyr His Thr Arg Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe 65 70 75 80 Arg Glu Gly Ala Ile Val Ser Leu Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys 85 90 95 Leu Asp Gln Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu 100 105 110 Gly Asp Pro Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg 115 120 125 Arg Arg Asp Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Lys Gly Ser Thr 130 135 140 Lys Tyr Ser Tyr Lys Ser Thr Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu 145 150 155 160 Thr His Arg Pro Gln Ile Leu Ile Pro Gly Ala Leu Asp Pro Asp His 165 170 175 Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr 180 185 190 Pro Pro Ile Phe Ser 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Acid <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Leu or Ile <220> <221> VARIANT <222> 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 <223> Xaa = Any Amino Acid, and up to two can be present or absent <220> <221> VARIANT <222> 17, 18 <223> Xaa = Any Amino Acid <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = Leu or Ile <400> 104 Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa <210> 105 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 105 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 100 105 110 <210> 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305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 119 <211> 325 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 119 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 120 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 120 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val 210 215 220 Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 121 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 121 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val 210 215 220 Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 122 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 122 Gln Leu Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Glu Leu Lys Lys Glu Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly His 85 90 95 Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 100 105 110 Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro 115 120 125 Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 130 135 140 Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp 145 150 155 160 Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln 165 170 175 Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu 180 185 190 Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly 195 200 205 Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 220

Claims (63)

  1. CD33에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 8 내지 30으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열번호 39 내지 40으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3, 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호 53 내지 55로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호 58 내지 62로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는, 단리된 항체.
  2. CD33에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 상기 중쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는, 단리된 항체.
  3. CD33에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 상기 경쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는, 단리된 항체.
  4. CD33에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 상기 중쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53, 또는 6C7H54의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는, 단리된 항체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 중쇄 가변 영역을 포함하고; 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 VH FR1, VH FR2, VH FR3 및 VH FR4로부터 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하되, VH FR1은 서열번호 5 내지 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; VH FR2는 서열번호 31 내지 32로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; VH FR3은 서열번호 34 내지 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 그리고 VH FR4는 서열번호 41의 서열을 포함하며; 경쇄 가변 영역은 VL FR1, VL FR2, VL FR3 및 VL FR4로부터 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하고, VL FR1은 서열번호 42 내지 46으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; VL FR2는 서열번호 48 내지 51로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; VL FR3은 서열번호 56 내지 57로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 그리고 VL FR4는 서열번호 63 내지 64로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 68 내지 93으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 서열번호 97 내지 103으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  8. 제7항에 있어서, 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 중쇄 가변 영역을 포함하고; 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  9. CD33에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 서열번호 68 내지 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 97 내지 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  10. 제9항에 있어서, 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 중쇄 가변 영역을 포함하고; 상기 항체는 항체 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 또는 6C7H54의 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체인, 단리된 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG 부류, IgM 부류 또는 IgA 부류를 갖는, 단리된 항체.
  13. 제12항에 있어서, 상기 항체는 IgG 부류를 갖고, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입을 갖는, 단리된 항체.
  14. 제13항에 있어서, 상기 항체는 C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 위치에서 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기의 넘버링은 EU 넘버링에 따르는, 단리된 항체.
  15. 제13항에 있어서, 상기 항체는 IgG4 아이소타입을 갖고, 상기 항체는 잔기 위치 228에서 S228P 아미노산 치환, 잔기 위치 234에서 F234A 아미노산 치환, 및 잔기 위치 235에서 L235A 아미노산 치환을 포함하되, 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르는, 단리된 항체.
  16. 제15항에 있어서,
    (a) 상기 Fc 영역은 위치 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (b) 상기 Fc 영역은 위치 L234A, L235A 및 P331A에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (c) 상기 Fc 영역은 위치 L234A, L235A, P331A 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (d) 상기 Fc 영역은 위치 K322A 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (e) 상기 Fc 영역은 위치 P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (f) 상기 Fc 영역은 위치 A330S, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (g) 상기 Fc 영역은 위치 K322A, A330S 및 P331S에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (h) 상기 Fc 영역은 위치 K322A, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (i) 상기 Fc 영역은 위치 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (j) 상기 Fc 영역은 위치 A330S, P331S 및 E430G에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (k) 상기 Fc 영역은 위치 S267E 및 L328F에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르고;
    (l) 상기 Fc 영역은 위치 C127S에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (m) 상기 Fc 영역은 위치 E345R, E430G 및 S440Y에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나;
    (n) 상기 Fc 영역은 위치 P331S에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르거나; 또는
    (o) 상기 Fc 영역은 위치 L234A, L235A, P331S에서 아미노산 치환을 포함하되, 상기 잔기 위치의 넘버링은 EU 넘버링에 따르는, 단리된 항체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 포유류 단백질 또는 인간 단백질인, 단리된 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 야생형 단백질인, 단리된 항체.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 천연 유래 변이체인, 단리된 항체.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD33 단백질은 인간 수지상 세포, 인간 대식세포, 인간 단핵구, 인간 파골세포, 인간 호중구, 인간 T 세포, 인간 T 헬퍼 세포, 인간 세포독성 T 세포, 인간 과립구 및 인간 미세아교세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 세포 상에서 발현되는, 단리된 항체.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33 단백질에 특이적으로 결합하는, 단리된 항체.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33 또는 포유류 CD33 단백질 상에서 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체 단편인, 단리된 항체.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 유래 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 항체 단편인, 단리된 항체.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 항체 단편은 인간 CD33, 인간 CD33의 천연 유래 변이체, 및 인간 CD33의 질환 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 인간 단백질에 결합하는 제2 항체 단편에 가교된, 단리된 항체.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편인, 단리된 항체.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간화된 항체, 이중 특이성 항체, 단클론성 항체, 다가 항체, 접합된 항체 또는 키메라 항체인, 단리된 항체.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체인, 단리된 항체.
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 제1 항원 및 제2 항원을 인식하는 이중특이성 항체인, 단리된 항체.
  29. 제28항에 있어서, 상기 제1 항원은 CD33이고, 상기 제2 항원은,
    (a) 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
    (b) 트랜스페린 수용체(TR), 인슐린 수용체(HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGFR), 저밀도 지방단백질 수용체 관련 단백질 1 및 2(LPR-1 및 2), 디프테리아 독소 수용체, CRM197, 라마 단일 도메인 항체, TMEM 30(A), 단백질 형질도입 도메인, TAT, Syn-B, 페너트라틴, 폴리-알기닌 펩타이드, 안지오펩 펩타이드 및 ANG1005로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
    (c) 질환-원인 펩타이드 또는 단백질 또는 질환-원인 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환-원인 제제(상기 질환-원인 펩타이드 또는 단백질은 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우(Tau), IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 질환-원인 핵산은 안티센스 GGCCCC(G2C4) 반복부-확장 RNA임); 및
    (d) 면역 세포 상에서 발현된 리간드 및/또는 단백질(상기 리간드 및/또는 단백질은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, CSF1-수용체 및 포스파티딜세린으로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및
    (e) 하나 이상의 종양 세포 상에서 발현된 단백질, 지질, 다당류, 또는 당지질
    인, 단리된 항체.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 질환-원인 펩타이드, 질환-원인 단백질, 아밀로이드 베타, 올리고머 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 단편, 타우, IAPP, 알파-시뉴클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72(염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅턴, 칼시토닌, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이소체, 심방나트륨이뇨인자, 췌도 아밀로이드 폴리펩타이드, 인슐린, 아포지방단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스타이레틴, 라이소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 면역글로불린 경쇄 AL, 슈퍼옥사이드 디스무타제(SOD), S-IBM 단백질, 반복부-관련 비-ATG(RAN) 번역 산물, 다이펩타이드 반복부(DPR) 펩타이드, 글리신-알라닌(GA) 반복부 펩타이드, 글리신-프롤린(GP) 반복부 펩타이드, 글리신-알기닌(GR) 반복부 펩타이드, 프롤린-알라닌(PA) 반복부 펩타이드, 유비퀴틴, 및 프롤린-알기닌(PR) 반복부 펩타이드, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환-원인 제제에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여; 또는 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR3, DR5, CD39, CD70, CD73, LAG3, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, CSF1-수용체, 포스파티딜세린, 질환-원인 핵산, 안티센스 GGCCCC(G2C4) 반복부-확장 RNA, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역조절 단백질에 결합하는 하나 이상의 항체와 조합하여 사용되는, 단리된 항체.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33에 대한 해리 상수(KD)가 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체보다 적어도 1.8배 더 낮되, 상기 KD는 생물층 간섭측정(BioLayer Interferometry)에 의해 결정되는, 단리된 항체.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33에 대한 해리 상수(KD)가 약 2nM 내지 약 200pM, 또는 약 200pM 미만의 범위이고, 상기 KD는 생물층 간섭 측정에 의해 결정되는, 단리된 항체.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는, 단리된 항체.
  34. 제33항에 있어서, 상기 CD33은 인간 수지상 세포의 표면 상에서 발현되는, 단리된 항체.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 항체는 시험관내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는, 단리된 항체.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 유세포분석에 의해 측정할 때 40pM 미만인 절반의 최대 유효 농도(EC50)로 시험관내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는, 단리된 항체.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하나 이상의 질환-관련 미세아교세포(DAM) 마커의 발현을 증가시키는, 단리된 항체.
  38. 제37항에 있어서, 상기 하나 이상의 DAM 마커는 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 항체.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항체와 CD33에 대한 결합에 대해 경쟁하는, 단리된 항체.
  40. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 6C7H8, 6C7H9, 6C7H10, 6C7H11, 6C7H12, 6C7H13, 6C7H14, 6C7H15, 6C7H16, 6C7H17, 6C7H18, 6C7H19, 6C7H20, 6C7H21, 6C7H22, 6C7H23, 6C7H24, 6C7H25, 6C7H26, 6C7H27, 6C7H28, 6C7H29, 6C7H30, 6C7H31, 6C7H32, 6C7H33, 6C7H34, 6C7H35, 6C7H36, 6C7H37, 6C7H38, 6C7H39, 6C7H40, 6C7H41, 6C7H42, 6C7H43, 6C7H44, 6C7H45, 6C7H46, 6C7H47, 6C7H48, 6C7H49, 6C7H50, 6C7H51, 6C7H52, 6C7H53 및 6C7H54로 이루어진 군으로부터 선택된 항체와 본질적으로 동일하거나 중복되는 CD33 에피토프에 결합하는, 단리된 항체.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 Fc 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  42. CD33에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하며; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는, 단리된 항체.
  43. CD33에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  44. CD33에 결합하는 단리된 항체로서,
    (a) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    (b) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄
    를 포함하는, 단리된 항체.
  45. 제41항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33 단백질에 특이적으로 결합하는, 단리된 항체.
  46. 제41항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33에 대한 해리 상수(KD)가 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-CD33 항체보다 적어도 1.8배 더 낮되, 상기 KD는 생물층 간섭측정에 의해 결정되는, 단리된 항체.
  47. 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 CD33에 대한 해리 상수(KD)가 약 2nM 내지 약 200pM, 또는 약 200pM 미만의 범위이고, 상기 KD는 생물층 간섭 측정에 의해 결정되는, 단리된 항체.
  48. 제41항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는, 단리된 항체.
  49. 제48항에 있어서, 상기 CD33은 인간 수지상 세포의 표면 상에서 발현되는, 단리된 항체.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, 상기 항체는 시험관내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는, 단리된 항체.
  51. 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 유세포분석에 의해 측정할 때 40pM 미만인 절반의 최대 유효 농도(EC50)로 시험관내 CD33의 세포 표면 수준을 감소시키는, 단리된 항체.
  52. 제41항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하나 이상의 질환-관련 미세아교세포(DAM) 마커의 발현을 증가시키는, 단리된 항체.
  53. 제52항에 있어서, 상기 하나 이상의 DAM 마커는 ApoE3, Tyrobp, B2m, Trem2, Cst7, Ctsl, Lpl, Cd9, Axl, Csf1, Ccl6, Itgax, Clec7a, Lilrb4, Timp2, 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 항체.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산.
  55. 제54항의 핵산을 포함하는 벡터.
  56. 제55항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  57. CD33에 결합하는 항체의 생성 방법으로서, 상기 항체가 생성되도록 제56항의 세포를 배양시키는 단계를 포함하는, 항체의 생성 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 세포에 의해 생성된 상기 항체를 회수하는 단계를 더 포함하는, 항체의 생성 방법.
  59. 제57항 또는 제58항의 방법에 의해 생성된 CD33에 결합하는 단리된 항체.
  60. 제1항 내지 제53항 및 제59항 중 어느 한 항의 항체 및 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  61. 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합형 치매, 타우병증, 감염 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환, 장애 또는 손상을 예방하거나, 위험을 감소시키거나 또는 치료하는 방법으로서, 상기 질환, 장애 또는 손상의 예방, 위험 감소 또는 치료가 필요한 개체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제53항 및 제59항 중 어느 한 항의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  62. 제61항에 있어서, 상기 질환, 장애 또는 손상은 암인, 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신세포암, 신우암, 백혈병, 폐암, 흑색종, 비호지킨 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 섬유육종, 급성 림프아구 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML) 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JOP20190248A1 (ar) 2017-04-21 2019-10-20 Amgen Inc بروتينات ربط مولد ضد trem2 واستخداماته
CN110662765B (zh) 2017-08-03 2023-09-29 艾利妥 抗cd33抗体及其使用方法
WO2023081898A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Alector Llc Soluble cd33 as a biomarker for anti-cd33 efficacy
WO2024026318A2 (en) * 2022-07-25 2024-02-01 Rhode Island Hospital Diagnosis, prognosis and treatment of malignant neoplasms
CN115724959B (zh) * 2022-11-11 2023-06-20 杭州华葵金配生物科技有限公司 靶向甲型流感病毒核蛋白的抗体及其应用

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5730A (en) 1848-08-22 Improvement in steam cotton-presses
US8124A (en) 1851-05-27 mcfarlan
US982A (en) 1838-10-16 Stove fob -warming and cooking
US69A (en) 1836-10-27 Machine eor picking or breaking wool and ginned or seedless cotton
US4657760A (en) 1979-03-20 1987-04-14 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and compositions using monoclonal antibody to human T cells
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5206344A (en) 1985-06-26 1993-04-27 Cetus Oncology Corporation Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
EP0308936B1 (en) 1987-09-23 1994-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Antibody heteroconjugates for the killing of HIV-infected cells
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
EP0739904A1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
CA2072017A1 (en) 1989-12-14 1991-06-15 David A. Scheinberg Therapeutic uses of the hypervariable region of monoclonal antibody m195 and constructs thereof
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
ATE204902T1 (de) 1990-06-29 2001-09-15 Large Scale Biology Corp Melaninproduktion durch transformierte mikroorganismen
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
JP4157160B2 (ja) 1991-12-13 2008-09-24 ゾーマ テクノロジー リミテッド 改変抗体可変領域の調製のための方法
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
DE69334255D1 (de) 1992-02-06 2009-02-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Marker für Krebs und biosynthetisches Bindeprotein dafür
ZA932523B (en) 1992-04-10 1994-10-08 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against cd33 related surface antigens
WO1994004690A1 (en) 1992-08-17 1994-03-03 Genentech, Inc. Bispecific immunoadhesins
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
AU7378096A (en) 1995-09-28 1997-04-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Porcine cell interaction proteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
BR9813365A (pt) 1997-12-05 2004-06-15 Scripps Research Inst Método para produção e humanização de um anticorpo monoclonal de rato
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
WO2001025454A2 (en) 1999-10-04 2001-04-12 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes in the presence of nitrogen
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
US20030206916A1 (en) 2002-05-03 2003-11-06 Rush-Presbyterian-St. Luke's Medical Center Immunogenic peptides
ZA200503075B (en) 2002-11-07 2006-09-27 Immunogen Inc Anti-CD33 antibodies and method for treatment of acute myeloid leukemia using the same
ES2527292T3 (es) 2004-03-31 2015-01-22 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-TGF-beta humanizados
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
TW200726776A (en) 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
KR20140057635A (ko) 2006-03-15 2014-05-13 알렉시온 파마슈티칼스, 인코포레이티드 보체의 저해물질로 발작성 야간혈색뇨증 환자의 치료
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
EP2084527A4 (en) 2006-11-02 2011-07-27 Seattle Genetics Inc METHOD FOR TREATING NEOPLASIA, AUTOIMMUNE AND INFLAMMATORY DISEASES
UY30776A1 (es) 2006-12-21 2008-07-03 Medarex Inc Anticuerpos cd44
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
FR2945538B1 (fr) 2009-05-12 2014-12-26 Sanofi Aventis Anticorps humanises specifiques de la forme protofibrillaire du peptide beta-amyloide.
EP3187877A1 (en) 2009-09-25 2017-07-05 XOMA Technology Ltd. Screening methods
DE102009045006A1 (de) 2009-09-25 2011-04-14 Technische Universität Dresden Anti-CD33 Antikörper und ihre Anwendung zum Immunotargeting bei der Behandlung von CD33-assoziierten Erkrankungen
UA112062C2 (uk) 2010-10-04 2016-07-25 Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх Cd33-зв'язувальний агент
WO2012074097A1 (ja) 2010-12-03 2012-06-07 協和発酵キリン株式会社 抗ｃｄ３３抗体
US20130309223A1 (en) * 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
WO2016201388A2 (en) * 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
WO2016201389A2 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof

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