JP2011177193A - 宿主クローンの識別方法、抗体混合物の生産方法、組換え宿主細胞の作出方法、トランスジェニック非ヒト動物またはトランスジェニック植物、抗体の混合物、薬学的組成物、および抗体の混合物の使用 - Google Patents
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- Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials
Abstract
【解決手段】抗体の混合物を単一の宿主細胞クローンから生産するための方法を提供する。それに加え、軽鎖を暗号化する核酸配列、及び異なる重鎖を暗号化する核酸配列を、組換え宿主細胞において発現する。本発明に従う混合物における抗体は、軽鎖に対合可能な異なる重鎖に対合する同一の軽鎖を適切に含み、それによって、機能的な抗原結合ドメインが形成される。抗体の混合物を、また、本発明によって提供する。かかる混合物は様々な分野で用いることができる。
【選択図】なし
Description
B-リンパ球は、細菌、ウイルス及びそれらの有毒な生産物のような生物学的物質への暴露に反応して抗体を生産することができる。抗体は、一般に、エピトープ特異性であり、及びこれらのエピトープを保有する物質に強く結合する。雑種細胞腫技術[kohler(ケーラー)及びMilstein(ミルスタイン)1975年]は、B-細胞の能力を用い、特異的な抗原に対する単クローン抗体を生産し、及び次いで、興味のある抗原に曝したマウスからのB-細胞を、不死化したネズミ形質細胞に融合させることによって、これらの単クローン抗体を生産する。この技術は、雑種細胞腫のものによって生産される単クローン抗体を、研究、診断及び治療において用い、癌及び自己免疫関連疾患のような異なる種類の疾病を処置できるという理解をもたらした。
マウスの雑種細胞腫のものにおいて生産される抗体がヒトにおいて強い免疫反応を誘導するので、ヒトの好首尾な処置のために求められる抗体が、より一層少ない免疫原性か、又は好ましくは非-免疫原性である必要があることは、この技術において認められている。このため、ネズミの抗体を、まず、ネズミの定常領域をヒトの定常領域に置き換えることによって設計する(キメラ抗体と称される)。次いで、可変ドメイン、いわゆるフレームワーク領域における相補性決定領域(CDRs)の間のドメインが、それらのヒト対応物によって置き換えられた(ヒト化抗体と称される)。このヒト化処理における最終段階は、十分なヒト性の(fully human)抗体の生産であった。
十分なヒト性の抗体を提供するための代わりとなる方法は、ヒトの免疫グロブリンのレパートリーを暗号化する遺伝材料を含むトランスジェニックマウスを用いる[Fishwild(フィッシュウィルド)等、1996年; Mendez(メンデス)等、1997年]。かかるマウスは、標的抗原で免疫化することができ、及び得られる免疫反応は十分にヒト性の抗体を生産する。これらの抗体の配列は、組換え生産方法において用いることができる。
組換え宿主細胞において、少なくとも1種の軽鎖及び前記少なくとも1種の軽鎖と対合可能な少なくとも3種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列(sequence)、又は核酸配列群(sequences)を発現させる工程。本発明の更なる局面は、予め選定される重鎖-軽鎖の組合せを用いることによる、潜在的に非-機能的な軽鎖-重鎖の対合の生成の排除である。単一の軽鎖及び多くの異なる重鎖から構築されるファージ提示ライブラリが、著しく明確な結合特性を有する抗体断片を暗号化できることが認識されている。この特色を用い、同じ軽鎖を持つが、同じ標的か、又は異なる標的に対するもので、そこでは、標的はその全体の抗原又はエピトープであり得る、異なる重鎖を持たない抗体を見出すことができる。かかる異なる標的は、例えば、同じ表面上(例えば、細胞か、又は組織)にあってよい。ファージ提示により得られるかかる抗体断片は、望ましい形式、例えば、IgG、IgA又はIgMのためのベクタ中にクローン化することができ、及びこれらの形式を暗号化する核酸配列を用いて、宿主細胞に形質移入することができる。1種のアプローチでは、H鎖及びL鎖を異なる構築物により暗号化することができ、それは、細胞への形質移入に際し、そこでそれらが発現し、無傷のIg分子を生じさせる。異なるH鎖の構築物が、単一のL鎖の構築物を用いて細胞中に形質移入されるとき、H-鎖及びL-鎖が組み立てられ、すべての可能な組合せを形成する。しかし、異なる軽鎖が、二重特異性抗体の生産のためのように発現されるアプローチと対照をなして、この方法は機能的な結合領域しかもたらさない。それは、宿主、例えば、単一の細胞株が組換え抗体の許容可能なレベルを発現でき、前記細胞において、抗体を暗号化する核酸配列を最初に増幅させる必要のないときに、特に、有用である。利点は、前記核酸の限られたコピー数だけを有する細胞株が遺伝学的により一層安定と考えられることであり、その理由は、多数のこれらのコピーが存在する細胞株においてよりも、重鎖を暗号化する配列の間により一層少ない組換えしかないからである。本発明に従う方法において用いるのに適切な細胞株は、ヒト細胞株PER.C6TMである。この方法を用いて、確定された(defined)特異性を有する抗体の混合物を、単一細胞クローンから、安全で、制御された、及び一貫した様式において、生産することができる。
本発明の目的は、抗体の混合物を組換え宿主において生産するための方法を提供することであり、この方法は次の工程を含む:組換え宿主細胞において、少なくとも1種の軽鎖及び前記少なくとも1種の軽鎖と対合可能な少なくとも3種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列又は核酸配列群を発現させる工程。本発明に従って、軽鎖及び重鎖は、対合するとき、機能的抗原結合ドメインを形成する。機能的抗原結合ドメインは、抗原に対し特異的に結合可能である。
本発明に従う1種の局面において、本発明に従う抗体の混合物を生産するための方法は、更に、細胞か、又は宿主細胞培養物から抗体を回収する工程を含み、更なる使用にとって適切な抗体の混合物を得る。本発明の1具体例では、方法を、抗体の混合物の生産のために提供し、この方法は次の工程を含む:組換え宿主細胞において、共通の軽鎖を暗号化する核酸配列及び前記共通の軽鎖と対合可能な少なくとも3種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列又は配列群を発現させる工程であり、そのようにして、生産される抗体が共通の軽鎖を含む。1種の局面において、共通の軽鎖は、各軽鎖/重鎖の対において同一である。
本発明に従う“宿主細胞”は、組換えDNA分子を発現することができる任意の宿主細胞であり得、Eschericia(エシェリキア属)[例えば、E. coli(大腸菌)]、Enterobocter(エンテロバクター属)、Salmonalla(サルモネラ属)、Bacillus(バシラス属)、Pseudomonas(シュードモナス属)、Streptomyces(ストレプトマイセス属)のような細菌、S. cerevisiae(サッカロマイセス・セレヴィシエ、出芽酵母)、K. lactis(ケー.ラクティス)、P. pastoris(ピー.パストリス)のような酵母、Candida(カンジダ属)、又はyarrowia(ヤロワイア)、Neurospora(ニューロスポラ属、パンカビ属)、Aspergillus oryzae(アスペルギルス・オリザ、コウジカビ)、Aspergillus nidulans(アスペルギルス・ニドランス、偽巣性コウジ菌)及びAspergillus niger(アスペルギルス・ニガ、クロカビ)のような糸状菌類、Spodoptera frugiperda(スポドプテラ・フルギペルタ)のSF-9又はSF-21細胞のような昆虫細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、BHK細胞、SP2/0細胞及びNS-0骨髄腫細胞を含むマウス細胞のような哺乳類細胞、COS及びVero細胞のような霊長類細胞、MDCK細胞、BRL 3A細胞、雑種細胞腫(ハイブリドーマ)、腫瘍-細胞、不死化一次細胞(primary cell)、W138、HepG2、HeLa(ヒーラ)、HEK293、HT1080のようなヒト細胞又はPER.C6TMのような胚性網膜細胞、及び同種のものを包含する。発現系の選択には、哺乳類細胞の発現ベクタ及び抗体が適切にグリコシル化されるような宿主が包含されることが多い。ヒト細胞株、好ましくは、PER.C6TMを有利に用い、完全なヒト性のグリコシル化パターンを有する抗体を得ることができる。細胞を成長させるか、又は増殖させるための条件[例えば、Tissue Culture(組織培養)、Academic Press(アカデミックプレス社)、Kruse(クルーズ)及びPaterson(パターソン)、editors (編)(1973年)を参照]及び組換え生産物の発現のための条件は、幾分か異なってよく、及び通常、処理の最適化が行われ、当業者に一般に知られる方法に従って、生産物の収率及び/又は細胞の増殖が互いに関して高められる。概して、哺乳類細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコル、及び実用的な技術は、Mammalian Cell Biotechnnology(哺乳類細胞生物工学):a Practical Approach(実用的なアプローチ)[M. Butler(バトラー)、ed. (編)、IRL Press(出版社)、1991年]に見出すことができる。組換え宿主細胞における抗体の発現は、この技術において広く記述されている(例えば、EP 0120694号;EP 0314161号;EP 0481790号;EP 0523949号;US patent 4816567号;WO 00/63403号を参照)。軽鎖及び重鎖を暗号化する核酸分子は染色体外コピーとして存在し、及び/又は宿主細胞の染色体中に安定して組み込まれることができる。生産の安定性に関して、後者が好ましい。
特に好ましい具体例では、本発明に従う組成物は、前記組成物において存在する各々の個々の単一特異性抗体の効果よりも大きい効果を持つ。前記効果は機能的アッセイにおいて測定することができる。本発明にかかる“機能的アッセイ”は、アッセイ条件の支配下に、抗体のか、又は抗体の混合物の1又はそれよりも多い種類の望ましいパラメータを定めるのに用いることができるアッセイである。適切な機能的アッセイは、結合アッセイ(binding assay)、アポトーシスアッセイ、抗体依存性細胞障害活性(ADCC)アッセイ、補体依存性細胞障害性(CDC)アッセイ、細胞成長又は増殖の抑制(細胞分裂停止効果)アッセイ、細胞殺滅(cell killing)(細胞毒性効果)アッセイ、細胞情報伝達(cell signaling)アッセイ、標的細胞に対する病原体の結合の抑制を測定するためのアッセイ、血管内皮増殖因子(VEGF)の分泌又は他の分泌分子を測定するアッセイ、静菌、殺菌性の活性、ウイルスの中和についてのアッセイ、インシトゥの雑種形成方法、標識化方法が含まれる、抗体が結合する部位に対する免疫系の成分の誘引力を測定するアッセイ、及び同種のものでよい。明らかに、また、マウスの腫瘍モデルを含む、動物モデルのようなインビボのアッセイ、自己免疫病のモデル、ウイルス-感染か、又は細菌-感染させた齧歯動物又は霊長類モデル、及び同種のものを、この目的のために用いることができる。本発明に従う抗体の混合物の有効性は、かかるモデルにおいて、一般に当業者に知られる方法によって、個々の抗体と比較することができる。
上述のような機能的アッセイに関係なく、本発明は、また、クローンによって発現される抗体の同一性を、等電点電気泳動(iso-electric focusing)(IEF)、質量分析法(MS)、及び同種のものを用いることによって定める方向を教示する。したがって、本発明のある局面は、本発明に従い抗体の混合物を発現するクローンの選定におけるMS及び/又はIEFの使用を提供する。
単クローン抗体が組換え宿主細胞によって生産されるとき、通常、選別の工程を、発生した個々のクローンの発現レベルを評価するために行う。抗体を生産するためにより一層多くの重鎖を添加することは、抗体の生産に対してあるレベルの複雑さを加える。宿主細胞を、望ましい抗体の混合物を形成する軽鎖及び重鎖を暗号化する核酸分子を用いて形質移入するとき、独立したクローンが生じ、同じ遺伝情報を含むかもしれないが、それにもかかわらず、発現レベルで異なり、それにより、暗号化された抗体の異なった比率が生産され、同じ遺伝的レパートリから抗体の異なる混合物がもたらされる。本発明に従う方法は、一定の目的のための最適な混合物を生産するクローンを識別するのに有用である。
本発明のもう一つの局面は、標的に対する抗体の混合物を生産するための方法を提供することであり、この方法は次の工程を含む:i)抗体又は抗体断片を含む抗体提示ライブラリを、標的を含む物質と接触させる工程、ii)前記標的に結合する抗体又は抗体断片を選定する少なくとも1種の工程、iii)前記標的に結合する少なくとも2種の抗体又は抗体断片を識別する工程であり、ここで、前記少なくとも2種の抗体又は抗体断片が共通の軽鎖を含み、iv)軽鎖を暗号化する核酸配列及び前記少なくとも2種の抗体の重鎖を暗号化する核酸配列又は核酸配列群を宿主細胞中に導入する工程、v)クローンの前記宿主細胞を前記核酸配列の発現を助長する条件下で培養する工程。抗体提示ライブラリは、ファージ提示ライブラリ、リボゾーム提示ライブラリ、mRNA提示ライブラリ、又は酵母提示ライブラリでよい。工程i)及びii)は、随意に、1又はそれより多い回数繰り返すことができる。
ファージ提示、リボゾーム提示又は酵母提示方法によって得られる核酸配列は、当業者に知られる標準的な分子クローン化方法及び手段を用いて、宿主細胞中に導入する前に、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgD、IgEのような任意の望ましい抗体の形式を暗号化するように変換することができる(例えば、Boel等、2000年において記述される)。
当業者にとって、1種の軽鎖しか示さないライブラリが本発明に照らし合わせて特に有用であることは明確であり、その理由は、かかるライブラリから得ることができるすべての抗体が標的抗原の各々の重鎖との結合において機能的な共通の軽鎖を持つからである。言い換えれば、本発明の方法に従い、非機能的な軽鎖-重鎖二量体の形成が避けられる。広汎なH鎖レパートリを持つファージ抗体提示ライブラリ、及び独特な、又は極めて少ないL鎖配列が、この技術において開示されている[Nissim(ニッシム)等、1994年;Vaughan(ボーガン)等、1996年]。概して、抗体の特異性は、その重鎖によって大部分について定められると思われる。抗体の結合にあまり貢献しない軽鎖について選別し及び識別することは可能であり、そこで、軽鎖を、また、本発明に従い適切に用いることができる。また、本発明の教示に従うが、1種の重鎖を用い、及び軽鎖を変えることも可能な場合がある。しかし、共通の軽鎖及び異なる重鎖の使用は好ましいと思われ、次の観察は、抗体の特異性がその重鎖配列によって支配されるようであるという考えを支持する。受容体編集(editing)の処理において、B-細胞の機構が、それらの免疫グロブリン受容体が潜在的に有害な自己抗体を暗号化する場合を監視し、自己抗体を発現するB-細胞が、発現した重鎖を、発現した軽鎖を保持しながら別の重鎖と置き換える。したがって、新しい抗体の特異性を発生させ、これは自己抗体を暗号化しない。これは、単一の軽鎖が多数の重鎖と好首尾に二量体化し、異なる抗体の特異性を形成することを示す[Nemazee(ネマゼ)、2000年;Casellas(カセラス)等、2001年]。単一の重鎖遺伝子を異なる軽鎖遺伝子と共に用いる一連の形質移入した細胞株が報告されており、生産される抗体は、軽鎖にかかわらず、大部分についてそれらの特異性が維持される[Radic(ラディチ)等、1991年]。異なる抗体は、単一の軽鎖を用いて構築されるライブラリから得られる(Nissim等、1994年)。本発明者は、De Kruif等により記述されるライブラリ(1995年)からいくつかの抗体を得たが、それは、7種の軽鎖を用いて構築され、それは同じ軽鎖であるが、異なる特異性を持つ(例えば、例1:EpCAMに対して及びCD46に対して結合する抗体、WO 01/48485号及びWO 02/18948号において、それぞれ記述されるを参照)。標的に対するファージライブラリの選別の他に、また、ファージ提示のような、当業者に知られる方法に従い、既にその利点が証明されている抗体から始め、及びこの抗体の軽鎖を、この特定の軽鎖のみと組み合わせる重鎖のライブラリの調製において用いることも可能である。この戦略を用いて、単クローン抗体を用い、本発明に従う抗体の混合物を得ることができ、これは、同じターゲットに対する多クローン性又は少クローン性の抗体に機能的に類似する。代わりに、機能的な齧歯類の抗体に基づくヒト抗体を得るために、Jespers(イェスペルス)等(1994年)により記述されている方法によく似た方法を用いることができる。非-ヒト起源の既知抗体の重鎖を、まずクローン化し、及びファージ提示において用いるために、鋳型鎖として、ヒト軽鎖のレパートリと対合され、しかる後、ファージを抗原又は抗原の混合物への結合について選定する。選定される軽鎖を、順に、ファージ上に表示されるヒト重鎖のレパートリと対合し、及びファージを、再び選定して、軽鎖と対合するとき、興味のある抗原又は抗原の混合物に結合可能ないくつかの重鎖が見出される。これは、これまでに非-ヒト単クローン抗体しか記述されていない標的に対するヒト抗体の混合物を創出することを可能にする。個々の抗体が標的のための高い親和性を持たないとき、本発明に従う混合物が既に有利な機能的効果を持つことは可能であるが、一方、高い親和性が、有効であるべき単クローン抗体にとって求められることが多い。これは、親和性の成熟が、本発明に従う方法及び混合物について、単クローン抗体でのアプローチが予想されるときよりも、少ない例において求められ得るという利点を持つ。
/翻訳又はインビトロの翻訳系を用いることも可能である。当業者にとって、本発明の教示が、軽鎖及び重鎖を暗号化する組換え核酸を導入し、及び発現させることができる系において、抗体の混合物を生産させることは明確である。好ましくは、かかる系は、前記核酸配列の増幅を用いることなく、前記核酸配列によって暗号化される抗体を生産することができる。本発明の別の局面において、本発明に従うトランスジェニック非-ヒト動物又はトランスジェニック植物からの細胞を提供する。かかる細胞を用い、核移植又は単一の細胞から全生物体をクローン化する他の既知方法のような、当業者に知られている技術を用いて、本発明に従う動物又は植物を生成させることができる。本発明に従う細胞は、また、軽鎖及び少なくとも2種の重鎖配列を、非-ヒト動物又は植物の分離された細胞中に導入することによって得ることができ、それらの細胞はトランスジェニック動物又は植物の部分になることができる。かかる目的のために特に有用なのは、胚性幹細胞である。これらは、生殖系列(germ line)に寄与し、及び従って、かかる細胞中に導入される遺伝情報は将来の世代に引き継がれ得る。加えて、ワタ、トウモロコシ、トマト、ダイズ、ポテト、ペチュニア、及びタバコの植物細胞培養は、軽鎖及び重鎖を暗号化する核酸分子を用いて形質転換するとき、例えば、植物トランスフォーミング細菌のAgrobacterium tumefaciens(アグロバクテリウム・ツメファシエンス)を用いることによるか、又は微粒子銃(particle bombardment)によってか、又は組換え植物ウイルスでの感染によって、宿主として用いられる。
腫瘍-反応性(tumor-reactive)単クローン抗体のホモ二量体化が、腫瘍細胞の増殖抑制又はアポトーシスを引き起こすそれらの能力を著しく高めることが記述されている[Ghetie(ゲーティ)等、1997年]。おそらく、受容体、又は腫瘍細胞又は感染性微生物のような標的細胞上の他の表面抗原に対する抗体が、本発明に従って生産されるとき、本発明に従う混合物において存在する二重特異性抗体が、また、標的細胞の表面上の異なる受容体又は他の抗原を架橋結合することができ、したがって、かかる混合物は、かかる細胞を死滅させるのに極めて適切であり得る。代わりに、二重特異性抗体があまり好ましくないとき、本発明はまた、主として、単一特異性抗体を含む抗体の混合物を組換え的に生産する方法を提供する。抗-CD59抗体が加えられるとき、RituximabTM(抗-CD20単クローン抗体)での処置の有効性が高められることが記述されている[Herjunpaa(ヘルジャンパ)等、2000年]。したがって、抗体を認識するB-細胞受容体の形態において抗-腫瘍抗体を含む、本発明に従う混合物におけるCD59に対する抗体の包含が、腫瘍細胞の補体の攻撃に対する感受性を高めることが期待される。また、抗-CDl9、抗-CD22、及び抗-CD38-サポリン(saporin)の免疫毒素の三重の組合せのカクテルが免疫不全マウスモデルにおけるヒトB-細胞リンパ腫の処置において、個々の成分よりもはるかに有効であることが示されている[Flavell(フラベル)等、1997年]。また、多くの他の組合せも可能であり得、及び、当業者により設計することができる。概して、多重の(multiple)B-細胞エピトープを認識可能な抗体混合物の使用は、多分、回避変異体の発生を減らす。
もう一つの可能な標的は、貫膜チロシンキナーゼ受容体であり、Her-2/Neu(ErbB2)プロトオンコジーンによって暗号化される(例えば、抗-Her2抗体について、US patents 5,772,997号及び5,783,186号を参照)。Her-2は、非常に高い悪性の乳癌の30%で過剰発現され、及びこの標的に対する好首尾の抗体は、HerceptinTM(Trastuzumab)の名称の下で販売され、開発されている。多重Her-2エピトープを単クローン抗体の混合物で標的にすることは、インビトロ及びインビボのヒト乳癌細胞株の増進された反増殖(antigrowth)活性をもたらすことが示されている[Spiridon(スピリドン)等、2002年]。したがって、Her-2は、本発明に従う抗体の混合物のための良好な標的であり得る。この目的のために有用な抗体は、抗体提示方法を含む、本発明において記載する方法によって得ることができる。
次の例は、本発明を例証するために提供し、及び本発明の範囲を制限するものと解釈されるべきではない。本発明の実践は、特に示さない限り、この技術の習熟内にある、免疫学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、及び組換えDNAの慣習的な技術を採用する。例えば、Sambrook, Fritsch及びManiatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, 1989; Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel FM, et al, Eds, 1987; the series Methods in Enzymology(Academic Press, Inc.); PCR2: A Practical Approach、Macpherson(マクファーソン)MJ, Hams(ハムス)BD, Taylor(テイラ)GR, eds, 1995; Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow(ハーロウ)及びLane(レーン), eds, 1988年を参照。
クローンUBS-54及びクローンK53を、結腸直腸の細胞株SW40(Huls等1999年)上での、及び多発性骨髄腫を患う患者の単核細胞の異種混合物(WO 02/18948号)上での、それぞれの選定により、半合成ライブラリ(de Kruif, 1995b)を用いることによって、予め分離した。更なる調査は、クローンUBS-54及びK53が、EP-CAM(カム)ホモタイプの接着分子(Huls等、1999年)及び膜補助因子タンパク質CD46(WO 02/18948号)に、それぞれ結合することを明らかにした。クローンのDNA配列決定は、それらが重鎖CDRsにおいて独特であること、しかし、それらが同一の軽鎖配列を含んでいることを明らかにした(図3)。クローンのUBS-54及びK53のVH及びVLを、本質的に記述されているような方法(Boel等、2000年)によって、HAVT20リーダ配列及びKappa(カッパー)の軽鎖を有するヒトのIgG1の定常ドメインのためのすべてのコード配列を含む発現ベクタ中に挿入し、それらは、プラスミドpUBS3000Neo及びpCD46_3000(Neo)をもたらした(図4)。これらのプラスミドを、単独で又は組合せで、PER.C6TM細胞において、一過性に発現させた。簡単には、各々の80cm2のフラスコを、140μLのリポフェクタミン+10μgのDNA[pUBS3000Neo、pCD46_3000(Neo)のいずれか、又は双方の10μg]を用い、4時間、無-血清DMEM培地において37℃で、インキュベートすることによって形質移入した。4時間後、これを、DMEM+10%FBSで置き換え、及び細胞を一昼夜37℃で増殖させた。次いで、細胞をPBSで洗浄し、及び培地をExcell(エクセル) 525培地[JRH Bioscience(バイオサイエンス社)]で置き換えた。細胞を、37℃で6日間増殖させ、しかる後、細胞培養上清を収集した。ヒトIgG特異的ELISA分析(WO 00/63403号で記述)は、発現プラスミドを含むすべてのフラスコについて、およそ10μg/mLでIgGが存在することを示した。IgG1は、発現プラスミドで形質移入されない対照フラスコにおいて存在しなかった。各上清からのヒトIgGを、次いで、標準的方法に従うプロテインAアフィニティクロマトグ
ラフィ[Hightrap Protein(ハイトラップ・プロテイン) A HP、cat. no. 1-040203]を用い、製造者(Amersham Biosciences)の推薦に従って精製した。溶出後、試料をMicrocon YM30濃縮機[Amicon(アミコン社)]において濃縮し、及び10mMリン酸ナトリウム、pH6.7に緩衝液交換した。次いで、12μgの精製したIgGを、等電点電気泳動ゲル[Serva Pre-casut(セルバ・プレ‐キャスト)IEFゲル、pH範囲3〜10、cat. no. 42866]上で分析した。試料を低いpH側上に負荷し、及び集束後にコロイド性ブルーを用いて染色した(図5)。レーン1は一過性に発現したK53を示し、レーン2は一過性に発現したUBS-54を示し、及びレーン3は細胞のIgG試料を示し、そこでは、双方の抗体が同時‐形質移入された。明瞭に、K53及びUBS-54 はそれぞれ独特なpIプロファイルを持ち、及び試料は、他の独特のイソ型を示す同時形質移入を形成し、K53及びUBS-54のそれらの間においてpIを持つ、主要なイソ型を有する。これは、また、Expasy(エクパシー)のホームページ[http://www.expasy.ch; Appel(アペル)等、1994年]で提供されるProtParam tool(プロトパラム用具)を用いて算出されるとき、理論的なpIに基づいて予想される。K53及びUBS-54は、それぞれ、8.24及び7.65の理論的なpIを持つが、1種のUBS-54重鎖及び1種のK53重鎖のヘテロ二量体を表すイソ型は、8.01の理論的なpIを持つ。かかるヘテロ二量体の組立体は、単一細胞がK53の重鎖及びUBS-54の重鎖の双方を翻訳するときにだけ生じ得、及びこれらを、共通の軽鎖と一緒に完全な長さのIgG 分子に組み立てる。
したがって、この実験は、2種の独特なヒトIgG分子を単一細胞において発現させることが可能であること、及びこれらの2種の独特な結合特異性からなるヘテロ二量体が、また、効率的に形成されることを示す。
本発明に従う抗体の混合物を生産するための方法は、組換え宿主細胞における、単一の軽鎖及び単一の軽鎖に対合可能で機能的な抗体を形成する3種の異なる重鎖の発現を用いるが、これは、ここにおいて実証し、及び図6において模式的に示す。ヒトB-細胞上に存在するタンパク質、即ち、CD22、CD72及び主要組織適合複合体(MHC)クラスII(更に、HLA-DRと称される)に結合可能な抗体を暗号化するファージを、予め、半-合成ファージライブラリ[de Kruif等、1995年;van der Vuurst de Vries(ファン・デア・ビュルスト・デ・フリース)及びLogtenberg(ログテンベルグ)、1999年]から分離した。ファージクローンB28(抗-CD22)、クローンI-2(抗‐HLA-DR)及びクローンII-2(抗-CD72)のVH及びVL配列のDNA配列決定は、それらがすべて独特なVH配列を含むが、同一のCDR領域を有する共通の軽鎖配列(Vλ3)を含むことを明らかにした(図7)。
クローンB28、I-1及びII-2のVH及びVL配列は、重鎖を含む発現プラスミドのHAVT20リーダ配列の後方でクローン化される。かかるプラスミドの例は、ECACCで、第03041601号の下で寄託したような、pCRU-K01である(カッパ重鎖配列を含み、それは容易にラムダ重鎖配列と、所望の場合、当業者によって容易に交換することができる)。クローン化は、CD22、CD72及びHLA-DRについての結合特異性を有する完全な長さのヒトIgG1を暗号化するプラスミドを生じさせる。これらのプラスミドは、更に、それぞれ、pCRU-CD22 、pCRU-CD72及びpCRU-HLA-DRと称される。
安定なPER.C6TM誘導細胞株を当業者に知られる方法に従い発生させ(例えば、WO 00/63403号を参照)、これらの細胞株は、いずれかの、pCRU-CD22、pCRU-CD72又はpCRU-HLA-DR上の遺伝情報によって暗号化される抗体を発現し、及びある細胞株はすべての3種のプラスミドによって暗号化される抗体を発現する。したがって、PER.C6TM細胞を、組織培養皿(10cmの直径)又はT80フラスコにおいて10%のFBSを加えたDMEM中、1皿につきおよそ2.5×106個の細胞を用いて、播種し、及び一昼夜、それらの正常な培養条件下(10%のCO2濃度及び37℃)で保つ。翌日、形質移入を、別々の皿において、37℃で、リポフェクタミン[Invitrogen Life Technologies(インビトロゲン・ライフ・テクノロジー社)]を用いて、製造者により提供される標準的なプロトコルに従い、いずれかの、1〜2μgのpCRU-CD22、1〜2μgのpCRU-CD72、1〜2μgのpCRU-HLA-DR又は1μgの混合物のpCRU-CD22、pCRU-CD72及びpCRU-HLA-DRを用いて、実行する。形質移入の効率のための制御として、少数の皿を、LacZ調節ベクタを用いて形質移入する一方、少数の皿を形質移入させず、及び陰性対照として働かせる。
4から5時間までの後に、細胞を、DMEMで2回洗浄し、選定を伴わない新しい培地を再び与える。翌日、培地を500μg/mLのG418を含む新しい培地で置き換える。細胞を、同じ濃度のG418を含む培地で2又は3日毎にリフレッシュする。播種後、約20〜22日で、多数のコロニが現れ、及び各形質移入から少なくとも300を採集し、及び96-ウェル及び/又は24-ウェルを介し、6-ウェルの平板を介しT25フラスコまで増殖させる。この段階で、細胞を凍らせ(サブ-培養コロニ当たり少なくとも1つであるが、通常は4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1に特異的なELISAを用いて定める(WO 00/63403号に記述)。また、この段階で、G418を培養培地から除去し、及び決して再び再適用しない。コロニの代表的な数のために、より一層大きい容量で培養し、馴化上清(conditioned supernatant)から、組換えヒトIgG1画分を、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用いて、標準法に従い精製する。種々のクローンから精製したヒトIgG1を、SDS−PAGE、等電点電気泳動法(IEF)上での分析、及び標的のCD22、CD72及びHLA-DRへの結合性を、細胞の形質移入体で、それらの細胞表面上にこれらのヒト抗原を発現するものを用いて分析する(CD72及びHLA-DRを発現する形質移入体は、van der Vuurst-de Vries及びLogtenbergによって記述されている、1999年;CD22形質移入体は、PER.C6TMにおける同様な標準法に従い調製される)。pCRU-CD22、pCRU-CD72及びpCRU-HLA-DRでの同時-形質移入から得られるコロニを、3種の構築物のそれぞれの存在又は不存在についてのゲノムDNA上のPCRによって選別する。PCR生成物の同一性をDNA配列決定によって更に確認する。
次に、クローン細胞株が3種の結合特異性のそれぞれの生産を説明することが例証され、すなわち、単一細胞が2種よりも多い機能的なヒトIgGの混合物を生産できることを証明する。したがって、限られた数のコロニが、3種の結合特異性のそれぞれの生産について陽性で選別されるが(DNAレベルでのPCRによって並びにCD22、CD72及びHLA-DRに対する特定された結合アッセイにおいて双方で)、蛍光標示式細胞分取器(fluorescence activated cell sorter)(FACS)[Becton & Dickinson(ベクトン・ディキンソン)FACS VANTAGE SE(バンテージ・エスイー)]を用いる単一細胞の仕分けにかけられる。代わりに、コロニを0.3細胞/ウェルで播種し、クローンの成長を保証する。以後サブ-クローンと称するクローン細胞集団を、新鮮培地で週に1回リフレッシュする。サブ-クローンを増殖させ、及び96ウェルから24-及び6-ウェル平板を介してT25フラスコに移す。この段階で、サブ-クローンを凍らせ(サブ-クローン当り少なくとも1、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG1抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1特異的ELISAを用いて定める。サブ-クローンの代表的な数について、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgGl画分を、馴化上清から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用い、標準的手法に従い精製する。
次いで、種々のサブ-クローンから精製したヒトIgG1を、親クローンから得るヒトIgG1について、上述のように、すなわち、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及び標的CD22、CD72及びHLA-DRに対する結合性によって分析する。また、サブ-クローンを、3種の構築物pCRU-CD22 、pCRU-CD72及びpCRU-HLA-DRのそれぞれの存在又は不存在についてのゲノムDNA上のPCRによって選別する。さらに、PCR生成物の同一性を、DNA配列決定によって確認する。
また、サザンブロット及び/又はFISHのような他の方法を用い、3種の構築物のそれぞれがクローン細胞株において存在するかどうか定めることができる。
3種の構築物のそれぞれについてトランスジェニックであると証明されたサブ-クローンを、広範囲に及ぶ期間培養し、導入遺伝子の存在が安定かどうか、及び抗体混合物の発現が同じに残るかどうか、発現レベルについてのみならず、細胞から分泌される種々の抗体のイソ型の間の比率について定める。したがって、サブ-クローン培養を、少なくとも25の集団倍加数の時間の間、付着培養又は浮遊培養のいずれかとして維持する。4〜6の集団倍加数毎に、特異的な生産の試験を、ヒトIgG特異的ELISAを用いて行い、及びより一層大きい容量を培養し、細胞ペレット及び上清を得る。細胞ペレットを用い、ゲノムDNAにおける3種の構築物の存在を、PCR、サザンブロット及び/又はFISHによって評価する。上清を用い、上記のように組換えヒトIgG1画分を精製する。種々の集団倍加数で得られる精製されたヒトIgG1を、記述されているように、すなわち、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及び標的CD22、CD72及びHLA-DRに対する結合を、これらの抗原を発現する細胞の形質移入体を用いることによって分析する。
抗体混合物の機能性を細胞に基づくアッセイにおいて分析し、ヒトIgG1混合物が、例えば、Ramos(ラモス)のようなB-細胞株の増殖を抑制するか、及び/又はアポトーシスを誘導するかどうかを定める。また、他の細胞株を用いることができる。加えて、抗体混合物を、抗体依存性の細胞毒性、及び、例えば、Ramos細胞の補体依存性の細胞障害性を誘導するそれらの潜在能力について分析する。
次の実験のそれぞれでは、標的CD22、CD72及びHLA-DRを認識する抗体混合物の機能性を分析し、及び個々のIgG1抗体のそれぞれに対して、及び3種の個々のIgG1の特異性の等モルの組合せに対して比較することができる。
代わりのアッセイにおいて、アポトーシスを、Ramos細胞の細胞表面上のCD22、CD72及びHLA-DRに対する抗体混合物を、ヤギ-抗-ヒト(Fc-特異的)多クローン抗体[Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA(ジャクソン免疫研究所、ウエスト・グローブ、米国ペンシルベニア州)]のF(ab)2の25μg/mLを用いるインキュベート期間中の架橋結合によって誘導する。
別の代わりとなるアッセイでは、アポトーシスを、CD22、CD72及びHLA-DRに対するいくつかの濃度(5〜20μg/mL)の抗体混合物を用い、Ramos細胞をインキュベートする一方、それらを化学感作剤(chemosensitizing agent)のドキソルビジン[Calbiochem(カルビオケム社)]又はデキサメタゾン[UMCU, Utrecht(ユトレヒト),オランダ国]と共に同時インキュベートすることによって誘導する。
補体依存性細胞障害性を同様のアッセイにおいて定める。効果細胞の代りに、ここでは50μLのヒト血清を標的細胞に添加する。続いて、アッセイを同じ様式において行う。
代わりに、抗体混合物のADCC及びCDCを、ユーロピウム(Europium)遊離アッセイを用いるか[Patel(パーテル)及びBoyd(ボイド)、1995年]、又はLDH遊離アッセイを用いて[Shields(シールズ)等、2001年]定める。
同じタンパク質、例えば、上皮成長因子受容体Her-2上に存在する多数のエピトープを結合可能なscFv断片を提示するファージを、半-合成ファージライブラリ(de Kruif等、1995a, b)から分離することができる。かかるファージのいくつかを識別し、及び更に本発明に従う使用のために、同じ軽鎖配列を含むものを選定することができる。半-合成ライブラリを、7種のサブ-ライブラリで、それはそれぞれが異なる軽鎖(de Kruif等、1995a, b)を含むものであり、これらを混合することによって形成する。したがって、かかるサブ-ライブラリで、唯一の軽鎖及び多くの重鎖を含むものを、選別のために用いることは、特に実際的であり、その結果、同一のVL配列を有する多数の抗体が得られ、及び本発明に従う抗体混合物を発現させるのに用いられる。
Her-2に対するファージの選定のために、いくつかの融合タンパク質を生じさせ、これはヒトIgG1のCH2及びCH3ドメインに融合するHer-2の細胞外ドメインの異なる部分を含む。この目的のために、pCDNA3.1zeo発現ベクタ(InVitrogen)を構築し、これは、その多数のクローン化領域において、ヒトIgG1のCH2及びCH3ドメインに先立つフレーム中のヒンジ領域におけるXhoIの制限部位を含む。Her-2cDNAクローンを鋳型として用い、PCR断片を、当業者に知られる標準的な分子生物学の技術を用いて生じさせる。これらの断片は独特な5′制限部位、開始コドンに次ぐ真核生物リーダ配列からなり、これは、Her-2の全体の細胞外(EC)ドメインへか、又はフレームにおいてXhoI制限部位によって続けられるHer-2のECドメインの一部分にフレームにおいて連結する。次いで、これらのPCR断片を、フレームにおいて、CH2-CH3のIgG1の領域を用い、pCDNA3.1zeo発現ベクタ中にクローン化する。Her-2の全体のECドメインを含む融合タンパク質に加えて、いくつかのより一層小さい融合タンパク質を生じさせ、これはHer-2のECドメインの重複してない断片を含む。Her-2-Ig融合タンパク質を暗号化するこれらの構築物を、リポフェクタミン試薬[Gibco(ギブコ社)]を用いる293T細胞の一過性の形質移入のために用いる。形質移入後5日で、293T細胞の上清を収集し、及びHer-2-Ig融合タンパク質を、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用いて、標準的手法に従い精製する。
Her-2のECドメインの重複してない断片を含むHer-2-Ig融合タンパク質を、2時間、37℃で、MaxisorpTM(マキシソウプ)のプラスチック製試験管[Nunc(ヌンク社)]の表面上に、飽和濃度(0.5〜5μg/mL)で被覆する。試験管をPBS(MPBS)中に溶解させた脂肪を含まない2%の粉乳において1時間ブロックする。同時に、半-合成ファージ提示ライブラリ(上記で用いる専門用語に従うサブ-ライブラリ)の500μL(およそ1013のcfu)で、それでは、唯一のvカッパ1の軽鎖が代表されるものを、de Kruif等(1995a,b)及びその中の参考文献群によって記述されるように調製され、及びそれを、2容量の4%MPBSに添加する。加えて、ヒト血清を、15%の終濃度にまで添加し、及びブロッキングを30〜60分間進行させる。Her-2-Ig被覆試験管を空にし、及びブロックされたファージライブラリを添加する。管を密封し、及び緩徐に1時間回転させ、次いで、回転させないで2時間インキュベートする。管を空にし、及び10回0.1%のTween(トウィーン)-20を含有するPBSにおいて洗浄し、次いで、PBSにおいて5回洗浄する。1mLのグリシン-HCl、0.05M、pH 2.2を添加し、及び管を10分間緩徐に回転させる。溶離されたファージを、500μLの1MのTris-HCl pH 7.4に添加する。この混合物に、3.5mLの指数関数的に増殖するXL-1ブルー細菌培養物を添加する。管を30分間37℃で振とうさせずにインキュベートする。続いて、細菌を、アンピシリン、テトラサイクリン及びブドウ糖を含む2TY寒天平板上で平板培養する。37℃での平板の一昼夜のインキュベートの後、コロニを平板から擦り取り、及び本質的にde Kruif(1995a)等によって記述されているように豊富なファージライブラリを調製するのに用いる。簡潔には、擦り取った細菌を、アンピシリン、テトラサイクリン及びブドウ糖を含む2TY培地に接種するのに用い、及び37℃で〜0.3のOD600nmまで増殖させる。ヘルパファージを添加し、及び細菌に感染させ、しかる後、培地を、アンピシリン、テトラサイクリン及びカナマイシンを含む2TYに変える。インキュベートを一昼夜30℃で続ける。翌日、細菌を遠心分離によって2TY培地から除き、しかる後、ファージをポリエチレングリコール6000/NaClを用いて沈殿させる。最終的に、ファージをPBS-1%BSAの小容量において溶解させ、フィルタ-殺菌し、及び選定の次のラウンドのために用いる。選定/再-感染の手法を2回行う。選定の第2ラウンドの後、個々のE. coliコロニを、単クローンファージ抗体を調製するのに用いる。本質的に、個々のコロニを対数-相にまで増殖させ、及びヘルパファージで感染させ、しかる後、ファージ抗体の生産を一昼夜進行させる。ファージ抗体を含む上清を、96ウェルの平板に被覆されたHer-2-総EC-Igに対する結合活性についてELISAにおいて試験する。
別のアッセイにおいて、選定されたファージ抗体を、Her-2を発現するBT474ヒト乳癌細胞に結合するそれらの能力について分析する。フローサイトメトリ分析のために、ファージ抗体を、まず、BT474細胞の染色に先立ち、4%のMPBSの等しい容量において、15分間4℃でブロックする。ファージ抗体の細胞への結合を、ビオチン化抗-M13抗体[Santa Cruz Biotechnology(サンタクルス生物工学社)]、次いでストレプトアビジン-フィコエリトリン(Caltag)を用いて視覚化する。
代わりに、Her-2上の多数のエピトープを認識するファージ抗体を、Her-2に対するファージ結合の、良く特徴付けられたネズミ抗-Her-2抗体HER50、HER66及びHER70の結合との競合に基づく方法(Spiridon等、2002年)を用いて選定する。この目的のために、2×106個のBT474細胞を、4℃で、およそ1013のcfu(0.5mL)の半-合成ファージ提示ライブラリと共にインキュベートし、ここでは、1種のVカッパ1の軽鎖しか上述のように調製されないことが表わされ、及び10%のFBSを含む培地の2容量でブロックされる。混合物を緩徐に4℃で2時間密閉管において回転する。続いて、結合してないファージを、10%のFBSを含む50mLの冷培地での2回の洗浄によって除去する。以後、Her-2上の多数のエピトープを認識するファージを、BT474細胞を、飽和濃度(5〜20μg/mL)のHER50、HER66及びHER70のネズミ抗-Her-2抗体を含む1mLの冷培地において再懸濁することにより溶出させる。細胞を氷上で10分間放置し、遠沈させ、及び抗-Her-2ファージ抗体を含む上清を用い、XL1-ブルー細胞に上述のように再感染させる。
5時間後、細胞をDMEMで2回洗浄し、及び選択のない新鮮培地を補給する。翌日、培地を500μg/mLのG418を含有する新鮮培地で置換する。細胞を、2又は3日毎に、同じ濃度のG418を含有する培地でリフレッシュさせる。播種後の約20〜22日で、多数のコロニが現れ、及び各形質移入から少なくとも300種を採取し、及び96-ウェル及び/又は6-ウェルを介する24-ウェル平板を介し、T25フラスコにまで増殖させる。この段階で、細胞を凍らせ[sub-cultured(継代培養した)コロニ1個につき、少なくとも1つ、通常4つのバイアル]、及び組換えヒトIgG抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1について特異的なELISAを用いて定める。また、この段階で、G418を培地から除去し、及び決して再度再適用しない。コロニの代表的な数のために、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgG1画分を、馴化した上清から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用いて、標準的な手法に従い精製する。種々のクローンからの精製したヒトIgG1を、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)上で分析し、及びHer-2-Ig融合タンパク質への結合をELISAによってアッセイし、及びBT474細胞の表面上のHer-2への結合についてフローサイトメトリによって分析する。
pCRU-VK1HER2-1、pCRU-VK1HER2-2及びpCRU-VK1HER2-3の同時-形質移入から得られるクローンを、3種の構築物のそれぞれの存在又は不存在についてのゲノムDNA上のPCRによって選別する。PCR生成物の同一性を、DNA配列決定によって更に確認する。
次に、クローン細胞株が3種の結合特異性のそれぞれの生産を説明することが例証される。したがって、限られた数のコロニが、3種の結合特異性のそれぞれの生産についての陽性を選別され(DNAレベルでのPCRによって並びにHer-2に対する特異的結合アッセイにおける双方で)、蛍光標示式細胞分取器(FACS)(Becton & Dickinson FACS VANTAGE SE)を用いる単一細胞の仕分けにかけられる。代わりに、コロニを0.3細胞/ウェルで播種し、クローンの成長を保証する。以後サブ-クローンと称するクローン細胞集団を、新鮮培地を用い週に1回リフレッシュさせる。サブ-クローンを増殖させ、及び96-ウェルから24-及び6-ウェル平板を介してT25フラスコに移す。この段階で、サブ-クローンを凍らせ(サブ-クローン当り少なくとも1、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG1抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1特異的ELISAを用いて定める。サブ-クローンの代表的な数について、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgGl画分を、馴化上清から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用いて、標準的手法に従い精製する。
次いで、種々のサブ-クローンからの精製したヒトIgG1を、親のクローンから得られるヒトIgG1について、上述のように、すなわち、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及びHer-2に対する結合性によって分析する。また、サブ-クローンを、3種の構築物pCRU-VK1HER-2-1、pCRU-VK1HER-2-2及びpCRU-VK1HER-2-3のそれぞれの存在又は不存在についてのゲノムDNA上のPCRによって選別する。さらに、PCR生成物の同一性をDNA配列分析によって確認する。
また、サザンブロット及び/又はFISHのような他の方法を用い、3種の構築物のそれぞれがクローン細胞株において存在するかどうか定めることができる。
3種の構築物のそれぞれについてトランスジェニックであると証明されたサブ-クローンを、広範囲に及ぶ期間培養し、導入遺伝子の存在が安定かどうか、及び抗体混合物の発現が同じに残るかどうか、発現レベルについてのみならず、細胞から分泌される種々の抗体の間の比率についても定める。したがって、サブ-クローンの培養を、少なくとも25の集団倍加数の時間の間、付着培養又は浮遊培養のいずれかとして維持する。4〜6の集団倍加数毎に、特異的な生産の試験を、ヒトIgG特異的ELISAを用いて行い、及びより一層大きな容量を培養し、細胞ペレット及び上清を得る。細胞ペレットを用い、3種の構築物の存在を、ゲノムDNAにおいて、PCR、サザンブロット及び/又はFISHのいずれかによって評価する。上清を用い、上記のように組換えヒトIgG1画分を精製する。種々の集団倍加数で得られる精製したヒトIgG1を、記述するように、すなわち、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及びELISAによるHer-2に対する結合性及びBT474細胞を用いるフローサイトメトリによって分析する。
代わりに、抗体混合物のADCC及びCDCを、ユーロピウム遊離アッセイを用いるか(Patel及びBoyd、1995年)、又はLDH遊離アッセイを用いて(Shields等、2001年)定める。
(トランスジェニック動物の乳における異なる機能的ヒトIgGsの発現)
ヒトB-細胞上に存在するタンパク質に対するファージのVH及びVH配列、すなわちCD22(クローンB28)、CD72(クローンII-2)及びHLA-DR(クローンI-2)(図7)を、発現プラスミドpBC1[pBC1 Mouse Milk Expression System(マウスミルク発現系)、Invitrogen Life Technologiesにおいて提供される]中にクローン化し、トランスジェニック動物におけるこれらのヒトIgG分子の乳-腺及び乳分泌-特異的発現を、製造者の指示に従って得る。これらの乳-腺特異的発現ベクタは、抗-CD22、抗-CD72及び抗-HLA-DRについての抗体配列を暗号化し、これらを製造者の指示に従ってネズミ生殖系列中に導入する。得られる子を、3種の構築物のそれぞれの存在について、尾部から分離されるDNA上のPCRによって選別する。子は、雄性又は雌性のいずれでもよく、3種の抗体のそれぞれについてトランスジェニックであることについて確認され、離乳され、及び成熟する。雌性のトランスジェニックマウスを、6〜8週歳で受胎させ、及び乳試料を妊娠後の複数の時間点で得る。雄性のトランスジェニックマウスを、非トランスジェニックの雌性と交尾させ、及び雌性のトランスジェニック子孫(上述のようにPCRで定められる)を交尾させ、及び雌性のトランスジェニックの初代について上述されているように搾乳する。必要とされるときは、雌性又は雄性のトランスジェニックの初代を、別の世代のために交尾させ、各初代株のためのトランスジェニック乳の十分な量を得ることができる。トランスジェニック乳を、ヒトIgGの存在について、ヒトIgG特異的ELISAを用いて分析し、これは、マウスIgG又は他のマウスの乳成分と交差反応しない。ヒトIgGを、トランスジェニックマウスの乳から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用いて、標準的手法に従い精製する。精製したヒトIgGを、SDS-PAGE、等電点電気泳動及び標的CD22、CD72及びHLA-DR上への結合性において分析する。抗体混合物の機能性を、上述したように分析する。
ホモタイプ付着分子EP-CAMに対して向けられたファージUBS-54のVH-VL配列(Huls等、1999年)を、カッパの軽鎖を有するヒトIgG1の定常ドメインを暗号化するベクタ(発現ベクタpUBS3000Neo)中だけでなく、また、カッパの軽鎖を有するヒトIgA1の定常ドメインを暗号化する発現ベクタ(発現ベクタpUBS54-IgA、図8)中にもクローン化した。それ故に、pUBS3000Neo及びpUBS54-IgAから導かれる抗体は、EPCAM上の同じエピトープに結合する。pUBS3000Neo及びpUBS54-IgAから導かれる唯一の相違する抗体は、重鎖の定常ドメインを暗号化する配列においてであり、IgG1又はIgA1アイソタイプのいずれでも生じる。これらの2種のベクタのカッパ軽鎖配列は同一である。
pUBS3000Neo及びpUBS54-IgA上の遺伝情報によって暗号化される抗体を発現する安定なPER.C6TM誘導細胞株を、当業者に良く知られた手法によって生じさせる。したがって、PER.C6TM細胞を、10%のFBSを加えたDMEMで、組織培養皿(10cm直径)又はT80のフラスコにおいて、およそ1皿につき2.5×106個の細胞を用いて播種し、及び一昼夜、それらの正常な培養条件下(10%のCO2濃度及び37℃)で保つ。翌日、形質移入を、別々の皿において37℃で、リポフェクタミン(Invitrogen Life Technologies)を用い、製造者により提供される標準的なプロトコルに従い、1〜2μgのpUBS3000Neo及びpUBS54-IgAのいずれかで行う。形質移入の効率のための制御として、少数の皿をLacZの対照ベクタで形質移入する一方、少数の皿を形質移入させず、及び陰性対照として働かせる。
4〜5時間後、細胞をDMEMで2回洗浄し、及び選択のない新鮮培地を補給する。翌日、培地を500μg/mLのG418を含有する新鮮培地で置換する。細胞を、2又は3日毎に、同じ濃度のG418を含有する培地でリフレッシュさせる。播種後の約20〜22日で、多数のコロニが現れ、及び各形質移入から少なくとも300種を採取し、及び96-ウェル及び/又は6-ウェルを介する24-ウェル平板を介し、T25フラスコにまで増殖させる。この段階で、細胞を凍らせ(継代培養したコロニ当り、少なくとも1つ、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG及びヒトIgA抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1について特異的なELISA、並びにヒトIgAについて特異的なELISAを用いて定める。また、この段階で、G418を培養培地から除去し、及び決して再度再適用しない。コロニの代表的な数のために、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgG1及びヒトIgA画分を、馴化された上清から、例えば(以下の組合せ)、プロテインL又はLAアフィニティクロマトグラフィ、陽イオン交換クロマトグラフィ、疎水的相互作用クロマトグラフィ及びゲルろ過を用いて精製する。種々のクローンから精製したヒト免疫グロブリンを、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及びこの分子の高い発現を持つ細胞株を用いる標的EPCAMへの結合性において分析する。また、クローンを、pUBS3000Neo及びpUBS54-IgAの存在又は不存在についてのゲノムDNA上のPCRによって選別する。PCR生成物の同一性を、DNA配列決定によって更に確認する。
クローンの限られた数は、EPCAM IgG1及びEPCAM IgAの双方の生産についての陽性を選別され、蛍光標示式細胞分取器(FACS)(Becton & Dickinson FACS VANTAGE SE)を用いる単一細胞の仕分けにかけられる。代わりに、コロニを0.3細胞/ウェルで播種し、クローンの成長を保証する。以後サブ-クローンと称するクローン細胞集団を、新鮮培地で週に1回リフレッシュする。サブ-クローンを増殖させ、及び96-ウェルから24-及び6-ウェル平板を介してT25フラスコに移す。この段階で、サブ-クローンを凍らせ(サブクローン当り少なくとも1、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG1及びIgA抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1特異的ELISA及びヒトIgA特異的ELISAを用いて定める。サブ-クローンの代表的な数について、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgGl及びヒトIgA画分を、馴化上清から、例えば(以下の組合せ)、プロテインL又はLAアフィニティクロマトグラフィ、陽イオン交換クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ及びゲルろ過を用いて精製する。種々のクローンから精製したヒト免疫グロブリンを、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及びこの分子の高い発現を持つ細胞株を用いる標的EPCAMに対する結合性において分析する。また、サブ-クローンを、pUBS3000Neo及びpUBS54-IgAの存在又は不存在についてのゲノムDNA上のPCRによって選別する。さらに、PCR生成物の同一性をDNA配列決定によって確認する。
また、サザンブロット及び/又はFISHのような他の方法を用い、双方の構築物がクローン細胞株において存在するかどうか定めることができる。
ファージクローンUBS-54及びクローンK53(図3)を、例1で記載したように得た。クローンUBS-54のVH及びVLを、カッパ軽鎖を有するヒトIgG1の定常ドメインのためのHAVT20リーダ配列及びコーディング配列のすべてを含む発現ベクタ中に、本質的に記述された方法(Boel等、2000年)によって挿入した。得られるプラスミドを、pUBS3000Neoとして示した(図4)。任意の望ましいアイソタイプの重鎖定常ドメインを含む発現ベクタを、日常的な分子生物学の方法によって、この技術で利用できるすべてのこれらの領域の配列を用いて、構築することができることは、明らかである。ファージクローンK53のVH及びVL配列を、カッパ軽鎖を有するヒトIgG3の重鎖の定常ドメインのためのHAVT20リーダ配列及びコード配列のすべてを含む発現ベクタ中に、本質的に記述された方法(Boel等、2000年)によってクローン化する。この発現ベクタを、pK53IgG3として示す。
これらのプラスミドは単独で又は組合せにおいて一過性に、PER.C6TM細胞において発現される。簡潔には、80cm2の各フラスコを、4時間、140μLのリポフェクタミン+10μgのDNA(pUBS3000Neo、pK53IgG3又は10μgの双方)を用い、無血清DMEM培地中、37℃で、インキュベートすることによって形質移入する。4時間後、これをDMEM+10%FBSで置換し、及び細胞を一昼夜37℃で増殖させる。次いで、細胞をPBSで洗浄し、及び培地をExcell525培地(JRH Bioscience)で置換する。細胞を37℃で6日間増殖させ、しかる後、細胞培養物の上清を収集する。ヒトIgG特異的ELISA分析を、すなわち、IgGサブ-タイプすべてを測定して行い、形質移入された、及び形質移入されてないPER.C6TM細胞におけるヒトIgGの濃度を定める。次いで、各上清からのヒトIgGを、プロテインAアフィニティクロマトグラフィ[Hightrap Protein A(ハイトラップ・プロテインA) HP、cat. no. 1-040203]を用いて、標準的手法、次いで、製造者(Amersham Biosciences)の推薦に従い精製する。溶出後、試料をMicrocon(マイクロコン)YM30の濃縮機[amicon(アミコン社)]において濃縮し、及び緩衝液を、pH 6.7の10mMリン酸ナトリウムに交換する。試料を、標的EPCAM及びCD46に対する結合性について、LS174T細胞のようなこれらの分子の高い発現を持つ細胞株を用いて分析する。次いで、精製したIgGの12μgを、いずれも、一過性に、UBS-54 IgG1、K53 IgG3又は細胞からのIgGを発現し、そこでは、双方の抗体が同時-形質移入されており、これを等電点電気泳動のゲル(Serva Pre-cast IEF gels, pH range 3-10, cat. no. 42866)上で分析する。試料を、低いpHの側部上に負荷し、及び集束の後、コロイド性ブルーで染色する。各試料について主要なイソ型のpI値を定め、UBS-54 IgGl、K53 IgG3又は二重特異性ヘテロ二量体の発現が、どのように細胞が形質移入されるかに依存してあるかどうか例示する。ヘテロ二量体の同定は、単一細胞がK53のIgG3重鎖及び
UBS-54のIgGl重鎖の双方を翻訳し、及び完全な長さのIgG分子中に共通の軽鎖と共にこれらを組み立てたことを示す。二重特異性ヘテロ二量体の不存在は、単一細胞におけるK53のIgG3重鎖及びUBS-54のIgGlの重鎖の双方を翻訳することが可能であるが、これらが共通の軽鎖と共に完全な長さのIgG分子に組み立てられず、すなわち、IgGl及びIgG3重鎖の選択的な結合があることを示す。しかし、これはまた、UBS-54 IgG1及びK53 IgG3の同時-発現の欠乏によって説明することができる。したがって、pUBS3000Neo及びpK53 IgG3の双方を発現する安定したクローン細胞株を、当業者に良く知られたような手法によって生じさせる。PER.C6TM細胞を、10%のFBSを加えたDMEM中で、組織培養皿(10cm直径)又はT80フラスコにおいて、およそ1皿につき2.5×106個の細胞を用いて播種し、及び一昼夜、それらの正常な培養条件下(10%のCO2濃度及び37℃)で保つ。翌日、形質移入を、別々の皿において37℃で、リポフェクタミン(Invitrogen Life Technologies)を用い、製造者により提供される標準的プロトコルに従い、1〜2μgのpUBS3000Neo、pK53IgG3又は双方のいずれかで行う。形質移入の効率のための制御として、少数の皿をLacZの対照ベクタで形質移入する一方、少数の皿を形質移入させず、及び陰性対照として働かせる。
4〜5時間後、細胞をDMEMで2回洗浄し、及び選択を伴わない新鮮培地を補給する。翌日、培地を500μg/mLのG418を含有する新鮮培地で置換する。細胞を、2又は3日毎に、同じ濃度のG418を含有する培地でリフレッシュさせる。播種後約20〜22日で、多数のコロニが現れ、及び各形質移入から少なくとも300種を採取し、及び96-ウェル及び/又は6-ウェルを介する24-ウェル平板を介し、T25フラスコにまで増殖させる。この段階で、細胞を凍らせ(継代培養したコロニ当り、少なくとも1つ、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG抗体の生産レベルを、上清において、すべてのサブ-タイプのヒトIgGについて特異的なELISAを用いて定める。また、この段階で、G418を培養培地から除去し、及び決して再度再適用しない。コロニの代表的な数のために、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgGを、馴化上清から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィ(Hightrap Protein A HP, cat. no. 1-040203)を用い、標準的手法、次いで製造者(Amersham Biosciences)の推薦に従い精製する。種々のクローンから精製したヒト免疫グロブリンを、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及びLS174T細胞のような、これらの分子の高い発現を持つ細胞株を用いる標的EPCAM及びCD46への結合性において分析する。また、クローンを、pUBS3000Neo及びpK54IgG3の存在又は不存在についてのゲノムDNA上のPCRによって選別する。PCR生成物の同一性を、更にDNA配列決定によって確認する。クローンの限られた数は、EPCAM IgG1及びK53 IgG3の双方の生産についての陽性を選別され、蛍光標示式細胞分取器(FACS)(Becton & Dickinson FACS VANTAGE SE)を用いる単一細胞の仕分けにかけられる。代わりに、コロニを0.3細胞/ウェルで播種し、クローンの成長を保証する。以後サブ-クローンと称するクローン細胞集団を、新鮮培地で週に1回リフレッシュさせる。サブ-クローンを増殖させ、及び96-ウェルから24-及び6-ウェル平板を介してT25フラスコに移す。この段階で、サブ-クローンを凍らせ(サブ-クローン当り少なくとも1、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG特異的ELISAを用いて定める。サブ-クローンの代表的な数について、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgG画分を、馴化上清から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィ(Hightrap Protein A HP, cat. no. 1-040203)を用い、標準的手法、次いで製造者(Amersham Biosciences)の推薦に従い精製する。種々のクローンから精製したヒト免疫グロブリンを、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及び例えば、LS174T細胞のような、この分子の高い発現を持つ細胞株、又はこれらの分子を発現する形質移入体を用いる標的EPCAM及びCD46に対する結合性において分析する。また、サブ-クローンを、pUBS3000Neo及びpK53IgG3の存在又は不存在についてゲノムDNA上のPCRによって選別する。さらに、PCR生成物の同一性を、DNA配列決定によって確認する。
また、サザンブロット及び/又はFISHのような他の方法を用い、双方の構築物がクローン細胞株において存在するかどうか定めることができる。
一旦、クローン性サブ-クローンが入手可能で、及びUBS-54 IgGl及びK53 IgG3の双方の発現について陽性が確認されると、機能的なK53及びUBS-54の存在は、単一細胞における共通の軽鎖を備える異なるアイソタイプを有する機能的IgG’sの混合物を生じさせることが可能であることを示す。EPCAM及びCD46の双方を結合する二重特異性抗体の発現の分析は、異なるサブタイプを持つ異なる重鎖がどんな範囲に対合し、それが、生成される二重特異性抗体の量に影響を及ぼすかを明らかにする。二重特異性抗体の全くないか又は著しく低いレベルがこの場合に見つけられることが期待される。
この例は、別の潜在的な標的として、狂犬病ウイルスに対する抗体の混合物の生産を記載する。抗原として、狂犬病ウイルス糖タンパク質(RVGP)を選ぶが、他の狂犬病の抗原を選び、又は同様にこの目的のために包含することができる。RVGPを認識するいくつかの単クローン抗体は、この技術で既に記述されており、及び多クローン抗体は、狂犬病の感染の処置において同様に有用であることが認識されている(例えば、EP 0402029号; EP 0445625号)。
抗体の断片を、US patent 6,265,150号において及びWO 98/15833号において本質的に記述されているように、抗体のファージ提示ライブラリ及びMabstractTMの技術を用いて選定する。別に示されない限り、すべての手法は室温で行う。RVGPの配列は、当業者にとってクローン化の目的のために入手できる[例えば、Yelverton(イェルベルトン)等、1983年]。ヒトIgG1のCH2及びCH3ドメインに遺伝的に融合した全体のRVGPからなるRVGP-Ig融合タンパク質を、PER.C6TMにおいて発現するベクタpcDNA3.1 Zeo-CH2-CH3を用いて生産し、及び2時間37℃で、MaxisorpTMのプラスチック管(Nunc)上に、1.25μg/mLの濃度で被覆する。管を1時間PBS(MPBS)中に溶解した2%の無脂肪粉乳においてブロックする。同時に、本質的にde Kruif等(1995a, b)及びその中の文献により記述されたように調製する単一鎖Fvの断片(scFv’s)を発現するファージ提示ライブラリの500μL(およそ1013cfu)を、4%のMPBSの2容量に添加する。この実験では、選定を、唯一の単一の可変的な軽鎖の遺伝子種だけを用いて組み立てられた元のライブラリの画分(例えば、‘VK1’-ライブラリ)を用いて行う。加えて、ヒト血清を15%の終濃度まで添加し、及びブロッキングを30〜60分間進行させる。RVGP-Ig-被覆管を空にし、及びブロックしたファージライブラリを添加する。管を、密閉し、及び1時間緩徐に回転させ、次いで、回転せずに2時間インキュベートする。管を空にし、及び10回0.1%のTween-20を含有するPBSで洗浄し、次いで、5回PBSにおいて洗浄する。1mLのグリシン-HCl、0.05M、pH 2.2を添加し、及び管を緩徐に10分間回転させる。溶離されたファージを、500μLの1MのTtris-HCl pH 7.4に添加する。この混合物に、3.5mLの指数関数的に増殖するXL-1ブルー細菌培養物を添加する。管を30分間37℃で振とうさせずにインキュベートする。次いで、細菌を、アンピシリン、テトラサイクリン及びブドウ糖を含有する2TYの寒天平板上に平板培養する。平板での一昼夜の37℃でのインキュベート後、コロニを平板から
擦り取り、及び本質的にDe Kruif等(1995a, b)によって記述されているように、豊富なファージライブラリを調製するのに用いる。簡潔には、擦り取った細菌を、アンピシリン、テトラサイクリン及びブドウ糖を含む2TY培地に接種するのに用い、及び37℃の温度で〜0.3のOD600nmまで増殖させる。ヘルパファージを添加し、及び細菌に感染させ、しかる後、培地を、アンピシリン、テトラサイクリン及びカナマイシンを含む2TYに変える。インキュベートを一昼夜30℃で続ける。翌日、細菌を2TY培地から遠心分離によって除き、しかる後、ファージをポリエチレングリコール6000/NaClを用いて沈殿させる。最終的に、ファージをPBS-1%BSAの小容量において溶解させ、フィルタ-殺菌し、及び選定の次のラウンドのために用いる。選定/再-感染の手法を2回行う。選定の第2ラウンド後、個々のE. coliコロニを用い、単クローンファージ抗体を調製する。本質的に、個々のコロニを対数-相にまで増殖させ、及びヘルパファージで感染させ、しかる後、ファージ抗体の生産を一昼夜進行させる。ファージ抗体を含む上清を、96ウェル平板に被覆されたヒトRVGP-Igに対する結合活性について、ELISAにおいて試験する。
安定なPER.C6TM誘導細胞株を、当業者に既知の手法(例えば、WO 00/63403号参照)に従い生じさせ、これらの細胞株は、pCRU-RVGP-1、pCRU-RVGP-2又はpCRU-RVGP-3上の遺伝情報によって暗号化される抗体を発現し、及びある細胞株が3種のすべてのプラスミドによって暗号化される抗体を発現する。したがって、PER.C6TM細胞を、10%のFBSを加えたDMEMで、組織培養皿(10cm直径)又はT80のフラスコにおいて、およそ1皿につき2.5×106個の細胞を用いて播種し、及び一昼夜、それらの正常な培養条件下(10%CO2濃度及び37℃)で保つ。翌日、形質移入を、別々の皿において37℃で、リポフェクタミン(Invitrogen Life Technologies)を用い、製造者により提供される標準的プロトコルに従い、1〜2μgのpCRU-RVGP-1、1〜2μgのpCRU-RVGP-2、1〜2μgのpCRU-RVGP-3又はPCRU-RVGP-1、pCRU-RVGP-2及びpCRU-RVGP-3の混合物の1μgのいずれかを用いて行う。形質移入の効率のための制御として、少数の皿をLacZの対照ベクタで形質移入する一方、少数の皿を形質移入させず、及び陰性対照として働かせる。
4〜5時間後、細胞をDMEMで2回洗浄し、及び選択を伴わない新鮮培地を補給する。翌日、培地を500μg/mLのG418を含有する新鮮培地で置換する。細胞を、2又は3日毎に、同じ濃度のG418を含有する培地でリフレッシュさせる。播種後約20〜22日で、多数のコロニが現れ、及び各形質移入から少なくとも300種を採取し、及び96-ウェル及び/又は6-ウェルを介する24-ウェル平板を介し、T25フラスコにまで増殖させる。この段階で、細胞を凍らせ(継代培養したコロニ当り、少なくとも1つ、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1について特異的なELISAを用いて定める(WO 00/63403号に記述)。また、この段階で、G418を培養培地から除去し、及び決して再度再適用しない。コロニの代表的な数のために、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgG1画分を、馴化上清から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用い、標準的手法に従い精製する。種々のクローンから精製したヒトIgG1を、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及び上述のRVGP PER.C6-形質移入体を用いる標的RVGPへの結合性において分析する。
pCRU-RVGP-1、pCRU-RVGP-2及びpCRU-RVGP-3での同時-形質移入から得られるクローンを、3種の構築物の各々の存在又は不存在についてゲノムDNA上のPCRによって選別する。PCR生成物の同一性を、DNA配列決定によって更に確認する。
クローンの限られた数は、3種の結合特異性の各々の生産についての陽性を選別され(DNAレベルでのPCRによって、並びにRVGPに対する特異的結合アッセイにおいて双方で)、蛍光標示式細胞分取器(FACS)(Becton & Dickinson FACS VANTAGE SE)を用いる単一細胞の仕分けにかけられる。代わりに、コロニを0.3細胞/ウェルで播種し、クローンの成長を保証する。以後サブ-クローンと称するクローン細胞集団を、新鮮培地で週に1回リフレッシュする。サブ-クローンを増殖させ、及び96-ウェルから24-及び6-ウェル平板を介してT25フラスコに移す。この段階で、サブ-クローンを凍らせ(サブ-クローン当り少なくとも1つ、しかし、通常4つのバイアル)、及び組換えヒトIgG1抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1特異的ELISAを用いて定める。サブ-クローンの代表的な数について、より一層大きな容量を培養し、組換えヒトIgGl画分を、馴化上清から、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用い、標準的手法に従い精製する。次いで、種々のサブ-クローンから精製したヒトIgG1を、親クローンから得られるヒトIgG1について上述のように、すなわち、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及び標的RVGPに対する結合性によって分析する。また、サブ-クローンを、3種の構築物pCRU-RVGP-1、pCRU-RVGP-2及びpCRU-RVGP-3の各々の存在又は不存在についてゲノムDNA上のPCRによって選別する。さらに、PCR生成物の同一性を、DNA配列決定によって確認する。
また、サザンブロット及び/又はFISHのような他の方法を用い、3種の構築物の各々がクローン細胞株において存在するかどうか定めることができる。
3種の構築物のそれぞれについてトランスジェニックであると証明されたサブ-クローンを、広範囲に及ぶ期間培養し、導入遺伝子の存在が安定かどうか、及び抗体混合物の発現が同じままかどうか、発現レベルについてのみならず、細胞から分泌される様々な抗体のイソ型間の比率についても定める。したがって、サブ-クローンの培養を、少なくとも25の集団倍加数の時間の間、付着培養として又は浮遊培養としてのいずれかで維持する。4〜6の集団倍加数毎に、特異的な生産の試験を、ヒトIgG特異的ELISAを用いて行い、及びより一層大きい容量を培養し、細胞ペレット及び上清を得る。細胞ペレットを用い、ゲノムDNAにおける3種の構築物の存在を、PCR、サザンブロット及び/又はFISHのいずれかを介して評価する。上清を用い、上記のように組換えヒトIgG1画分を精製する。種々の集団倍加数で得られる精製したヒトIgG1を、記述されているように、すなわち、SDS-PAGE、等電点電気泳動(IEF)及び標的RVGPに対する結合性によって分析する。
狂犬病に対する抗体混合物の有効性を、インビトロの細胞培養アッセイにおいて試験し、ここでは、狂犬病ウイルスの広がりの減少を測定し、並びに、インビボの狂犬病によって感染した動物モデルにおいて試験する。かかるモデルは当業者に既知であり、及び例えば、EP 0402029号において記述されている。
本発明に従う抗体の混合物を生産するための方法で、組換え宿主細胞における単一の軽鎖及び単一の軽鎖に対合可能な3種の異なる重鎖の発現を用いて、機能的な抗体を形成するものは、本明細書において実証され、及び図6において模式的に示される。
EP-CAMホモタイプ付着分子(Huls等、1999年)及び膜補助因子タンパク質CD46(WO 02/18948号)に対するヒトIgGのUBS54及びK53を、それぞれ、例1に記載する。補助因子タンパク質CD46に結合することが識別された別のクローンは、クローン02-237であった(図12に提供するVHの配列)。このクローンのDNA配列決定は、それが、UBS54及びK53と同じ軽鎖を含むが、独特な重鎖可変配列(図3における配列比較参照)を含むことを明らかにした。結果として、02-237の重鎖のCDR3は、K53のそれとは4種の位置で異なる(図13の配列比較参照)。ファージ02-237の重鎖及び軽鎖可変配列を、発現プラスミドpCRU-K01中にクローン化し、[pCRU-K01は、第03041601号の下、European Collection of Cell Cultures(細胞培養物の欧州収集物)(ECACC)で寄託される]、これは、IgG1抗体についての重鎖及び軽鎖の定常ドメインを含む。得られるプラスミドをpgG102-237と示した。引き続くクローン化戦略のため、pgG102-237によって暗号化されるような、02-237の軽鎖の得られるN-末端は、pUBS3000Neo、pCD46_3000(Neo)のそれぞれ(図3)によって示されるような、UBS54及びK53のN-末端からわずかに異なった。プラスミドpgG102-237は、ヒト293(T)細胞において一過性にか、又はPER.C6細胞において安定に生産された。精製した02-237IgGが、精製したCD46(図14)について、K53 IgGよりも著しく高い親和性を持ち、すなわち、親和性が、K53及び02-237について、9.1×10-7Mから2.2×10-8Mまで、それぞれ増加したようであった。また、02-237は、ヒト大腸癌腫LS174T細胞上で、K53よりもCD46に対し著しく良好に結合した(図15)。
ヒトIgG 02-237を暗号化するプラスミドpUBS3000Neo、pCD46_3000(Neo)及びpgG102-237の組合せを発現する安定なPER.C6TM誘導細胞株を、当業者に既知のような方法従い生じさせた(例えば、WO 00/63403号参照)。したがって、PER.C6TM細胞を、10%FBSを加えたDMEM中で、組織培養皿(10cm直径)において、およそ1皿につき2.5×106個の細胞を用いて播種し、及び一昼夜、それらの正常な培養条件下(10%CO2濃度及び37℃)で保つ。翌日、形質移入を、別々の皿において37℃で、リポフェクタミン(Invitrogen Life Technologies)を用い、製造者により提供される標準的プロトコルに従い、pUBS3000Neo、pCD46_3000(Neo)及びpgG102-237の2μgの当モル混合物を用いて行った。選定のための陰性対照として、少数の皿を形質移入しなかった。4〜5時間後、細胞をDMEMで2回洗浄し、及び選択を伴わない新鮮培地を補給した。翌日、培地を500μg/mLのG418を含有する新鮮培地で置換した。細胞を、2又は3日毎に、同じ濃度のG418を含有する培地でリフレッシュさせた。播種後約20〜22日で、多数のコロニが現れ、及び約300種を採取し、及び96-ウェル及び/又は6-ウェルを介する24-ウェル平板を介し、T25フラスコにまで増殖させた。継代培養の間、組換えヒトIgG抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1について特異的なELISAを用いて定めた(WO 00/63403号において記述)。約25%のすべてのコロニは、この高い特異性のアッセイにおいて陽性であることが明らかであった。この段階で測定された生産レベルを、単一のIgGがPER.C6TM細胞において発現されるときのレベル(Jones等、2003年において記述された単一IgGの発現)に匹敵した。これらの高い発現レベルを導入遺伝子の増幅のための任意の方法を用いないで得たこと、及びそれらが導入遺伝子の低コピー数で起こることを強調するのは重要である。
30種の最も良好に生産するコロニを、バイアルにおいて凍らせ、及び19種の最も高く生産するクローンを、IgGの精製のために選定した(表1)。それらをT80フラスコにおいて継代培養し、及び次いで、各クローンからのヒトIgGを、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用いて精製した。したがって、15〜25mLの馴化培地を5mLのプロテインA FFセファロースカラム(Amersham Biosciences)上に負荷した。カラムを、0.1Mのクエン酸塩pH 3.0での溶出の前に、4mMのリン酸緩衝食塩水、pH 7.4(PBS)を用いて洗浄した。次いで、溶離された画分を、セファデックスG25 Fine HiPrep Desalting(ファイン・ハイプレプ・デソルティング)カラム(Amersham Biotech)上でPBSに対して脱塩した。精製したIgG画分の濃度を、0.1%(w/v)の溶液についての1.4の係数を用いて280nmでの吸光度測定によって定めた(表1)。
精製したIgG試料を、非-還元性及び還元性SDS-PAGE及びIEF上で分析した。非-還元性SDS-PAGE(図16A)は、移動したIgG試料すべてが、およそ150kDaの、組み立てられた、無傷のIgG分子のように、対照のK53又は02-237に匹敵することを示した。還元性SDS-PAGE(図16B)では、IgG試料は、約50及び25kDaの重鎖及び軽鎖として、それぞれ移動し、対照K53又は02-237の重鎖、軽鎖に匹敵する。
IEF上では、精製したIgG画分を、まず、等しい量のK53、UBS54及び02-237の混合物と比較した(図17)。明瞭に、精製したK53、UBS54及び02-237を含む混合物と比較するとき、いくつかの試料が独特のpIプロファイルを有するイソ型を含んでいた。いくつかの主要な独特なイソ型は、1種のハンド上でK53及びUBS54の、及び他のハンドにおいてUBS54の間におけるpIを持つ。これは、また、Expasyのホームページ(http://www.expasy.ch;Appel等、1994年)において提供されるProtParam用具を用いて算出されるとき、理論的なpIに基づき予測される。K53、02-237及びUBS54はそれぞれ、8.24、8.36及び7.65の理論的pIを持つが、1種のUBS54の重鎖及び1種のK53の重鎖のヘテロ二量体を表すイソ型は、8.01の理論的なpIを持つ。かかるヘテロ二量体の組立体は、単一細胞がK53の重鎖及びUBS54の重鎖の双方を翻訳し、及びこれらを完全な長さのIgG分子に共通の軽鎖と一緒に組み立てるときにしか起こらない場合がある。それ故に、これらの結果は、一定のクローンが2種の機能的な抗体を少なくとも発現することを示唆する。いくつかのイソ型の独特な同一性を確認するために、最も興味深いクローンの試料を、K53、UBS54及び02-237に平行して、単独でか、又は混合物において、動かした(図18)。これは、なお、いくつかのクローンが少なくとも2種の抗体(241、282、361)を発現したことを示した。さらに、それは、いくつかのクローンが3種の機能的抗体のすべてを発現するという証拠を提供した(280及び402)。
クローンが3種の重鎖のすべてを含むIgG混合物を発現したことを確認するために、ペプチド地図作製[Garnick(ガルニック)、1992年Gelpi(ジェルピ)、1995年]を用い、多クローンのIgG画分を分析した。本発明者は、以前、ペプチド地図作製を採用し、K53のタンパク質配列の99%を回収した。図12に提供するタンパク質配列に基づき、K53、UBS54及び02-237の理論的なトリプシンペプチドの質量を算出した(表II及びIII)。各IgGについての少数の独特なペプチドは、識別でき、すなわち、例えば、それぞれ、2116.05、2057.99及び2307.15DaのMWを有するK53、02-237及びUBS54のためのCDR3ペプチドである。次に、ポリ1-280のトリプシン消化物を調製し、及びこれをLC-MSを用いて分析した(図19)。K53、02-237及びUBS54のそれぞれの独特なCDR3ペプチドを表す2116、2057及び2308DaのMWを有するペプチドを検出した。これらのペプチドの精密なアミノ酸配列(表IIIにリストするような)を、MS-MS分析によって確認した(表IV、V及びVI)。本発明者は、また、2580及び2554DaのそれぞれのMWを有する2種の独特なN-末端軽鎖ペプチドの存在を確認した。ペプチド地図作製データは、明白に、共通の軽鎖及び3種の異なる重鎖を含む抗体の混合物がPER.C6TMクローンポリl-280によって発現されたことを示した。また、クローン055、241及び402を、ペプチド地図作製によって選別した。クローン241及び402はすべての3種の重鎖配列について陽性と確認されたが、クローン055のみが、K53及び02-237の重鎖の発現を示し、UBS54のものは示さなかった。これはIEF選別を確認し(図18)、そこでは、UBS54関連バンドが試料055において見られなかった。
ポリl-280を、CD46への結合性について、BIACOREによって分析した(図20)。CD46のためのポリl-280の親和性は2.1×10-8Mであったが、それは、IgG混合物が単独で02-237 IgGと同じ親和性を持つCD46結合分子を包含することを示す。
クローン細胞集団、以後サブ-クローンと称するが、これを週に1回新鮮培地を用いてリフレッシュさせた。サブ-クローンを増殖させ、及び96-ウェルから24-及び6-ウェル平板を介して、T25、T80及びT175フラスコに移した。T80の段階で、サブ-クローンを凍らせた。組換えヒトIgG1抗体の生産レベルを、上清において、ヒトIgG1特異的ELISAを用いて定めた。各々の親クローンに対して、3種のサブ-クローンを選び、及び少数のT175フラスコにおいて培養し、上述のように、プロテインAアフィニティクロマトグラフィを用いる精製のために十分な馴化培地を得た。
次いで、サブ-クローンから精製したヒトIgG1を、上述のように、親クローンから得られるヒトIgG1に対して、等電点電気泳動(IEF)によって分析した。結果を図21に示す。クローンのポリ1-241の各々からのサブクローンは、同じパターンを持つが、親クローンとは異なり、そこでは、それらは一定のバンドを失うと思われる。クローンのポリ1-280からのサブクローンのすべては、互いに、及び親クローンと異なると思われる。親クローンのポリ1-402からのサブクローンについてIEFにより得られるパターンは、すべての3種のサブクローン及び親クローンについて同一である。これらのデータから、クローン402が安定に抗体の混合物を生産していると結論付けることができる。このことは、本発明に従う抗体の混合物を単一細胞クローンから生産することが実行可能であることを例証する。図21において分析される物質を収集する前に、クローンを最初の分析(図18において示す)まで選択圧力の下で形質移入の手法から約25の集団倍加数(細胞分裂)を受けさせ、及びその点から更に選択圧力のないサブ-クローン化の手法の間の約30の集団倍加数受けさせた。したがって、単一細胞からのクローンから抗体の混合物を生産することは、少なくとも30世代にわたって安定であることができる。
抗体の混合物を発現するクローンの精製したIgGl、及び抗-GBSIIIの対照IgG1試料、抗-CD72抗体(02-004)、並びに、抗-EpCAMクローンUBS54及び抗-CD46クローンK53及び02-237からの抗体を、20μgのIgGl/mLの濃度にPBSBにおいて希釈した。それぞれの20μLを200.000の形質移入細胞に添加し、及び氷上で1時間インキュベートした。しかる後、細胞を氷-冷PBSBにおいて1回洗浄した。次いで、結合したIgGを、ヤギ-抗-ヒトIgG-ビオチンとのインキュベートを用い、次いで、ストレプトアビジン-PEによって検出した。最終的な洗浄工程の後、細胞を1μg/mLのヨウ化プロピジウムを含有するPBSBにおいて懸濁した。試料をFACS(FACSvantage、Becton Dickinson)上で分析した。生きている細胞をゲート制御し(gate)、平均蛍光強度(MFI)をFACSプロットから算出した。結果を図22に示す。予想されるように、UBS54はEpCAM形質移入細胞に選択的に結合し、及び02-237及びK53はCD46形質移入体に選択的に結合する一方、無関係な抗体はこれらの形質移入体に結合しなかった。
これらの結果は、EpCAM及びCD46の方への結合活性が、本発明に従う抗体の混合物を発現するほとんどのクローンの精製したIgG1調製物(preps)において存在することを例証し、機能的抗体の混合物が30回よりも多い分裂を受け、及び単一細胞からもたらされるサブ-クローンによって生産されることを例証する。サブクローン280-015では、CD46及びEpCAMの方への結合パターンは、他のクローンと対照的に、親クローンのポリ1-280でのものと類似していた。このアッセイの量的な局面が完全に明らかでないことを述べておくべきである。日常的な選別を用い、例えば、機能的試験によって、望ましい発現プロファイルを有するクローンを見出すことができる。量的な局面は、また、かかる選別において包含することができる。かかる選別は、量的に安定した様式において所定の機能性を有する抗体の混合物を発現する望ましいクローンの同定を可能にする。
Appel RD, Bairoch(ベイロッホ) A, Hochstrasser(ホクシュトラッサ) DF. 1994年. A new generation of information retrieval tools for biologists(生物学者のための新世代の情報検索ツール): the example of the ExPASy WWW server(ExPASy WWW サーバの例). Trends Biochem. Sci.(トレンド・イン・バイオケミカル・サイエンス) 19: 258-260.
Bendig MM. 1988年. The production of foreign proteins in mammalian cells(哺乳類細胞における外来タンパク質の生産). Genet Eng(ジェネティック・エンジニアリング) 7: 91-127.
Boel E, Verlaan(ベルラーン) S, Poppelier(ポッペリエル) MJ, Westerdaal(ウェステルダール) NA, Van Strijp(バン・ストライプ) JA, Logtenberg T. 2000年. Functional human monoclonal antibodies of all isotypes constructed from phage display library-derived single-chain Fv antibody fragments(ファージ提示ライブラリ-誘導単-鎖Fv抗体断片から構成されるすべてのアイソタイプの機能的ヒト単クローン抗体). J Immunol Methods(ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ) 239: 153-166.
Brink MF, Bishop(ビショップ) MD, Pieper(ピーパー) FR. 2000年. Developing efficient strategies for the generation of transgenic cattle which produce biopharmaceuticals in milk(乳中に生物医薬品を生産するトランスジェニック畜牛の世代のための効率的な戦略の発展). Theriogenology(動物繁殖学) 53: 139-148.
Campbell(キャンベル) KH, McWhir(マックフィル) J, Ritchie(リッチ) WA, Wilmut I. 1996年. Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line(培養細胞株からの核移植によってクローン化されたヒツジ). Nature(ネイチャ) 380: 64-66.
Casellas R, Shih(シー) TA, Kleinewietfelt(クライネバイトフェルト) M, Rakoniac(ラコニアック) J, Nemazee D, Rajewski(ラジェウスキ) K, Nussenzweig(ヌッセンズバイク) MC. 2001年. Contribution of receptor editing to the antibody repertoire(抗体レパートリを編集する受容体の貢献). Science(サイエンス) 291: 1541-1544.
Cockett MI, Bebbington(べビントン) CR, Yarranton(ヤラントン) GT. 1990年. High level expression of tissue inhibitor of metalloproteinases in Chinese hamster ovary cells using glutamate synthetase gene amplification(チャイニーズハムスター卵巣細胞における、グルタミン酸シンターゼ遺伝子増幅を用いる金属プロテイナーゼの組織抑制剤の高レベル発現). Bio/technology(バイオ/テクノロジ) 8: 662-667.
De Kruif J, Terstappen(テルシュタッペン) L, Boel E及びLogtenberg T(1995a) Rapid selection of cell subpopulation-specific human monoclonal antibodies from a synthetic phage antibody library(合成ファージ抗体ライブラリからの細胞サブ集団-特異的ヒト単クローン抗体の迅速選定). Proc Natl Acad Sci USA(プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンス・オブ・U. S. A.) 92: 3938
De Kruif J, Boel E及びLogtenberg T(1995b) Selection and application of human single chain Fv antibody fragments from a semi-synthetic phage antibody display library with designed CDR3 regions(設計されたCDR3領域を有する半-合成ファージ抗体提示ライブラリからのヒト単鎖Fv抗体断片の選定及び適用). J Mol Biol(ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジ) 248: 97
Dinnyes A, De Sousa(スーザ) P, King(キング) T, Wilmut I. 2002年. Somatic cell nuclear transfer: recent progress and challenges(体細胞核移植:近年の進展及び挑戦). Cloning Stem Cells(クローニング・ステム・セルズ) 4: 81-90.
Flavell(フラベル) DJ, Noss(ノス) A, Pulford(プルフォード) KA, Ling(リン) N, Flavell SU. 1997年. Systemic therapy with 3BIT, a triple combination cocktail of anti-CD19, -CD22, and-CD38-saporin immunotoxins, is curative of human B-cell lymphoma in severe combined immunodeficient mice(3BIT、抗-CD19, -CD22, 及び-CD38-サポリン免疫毒素の3種の結合カクテルを用いる全身療法は、重篤複合免疫不全マウスにおけるヒトB-細胞リンパ腫の病を治す効力がある). Cancer Res(キャンサ・リサーチ) 57: 4824-4829.
Fishwild DM, O'Donnell(オドネル) SL, Bengoechea(ベンゴエチア) T, Hudson(ハドスン) DV, Harding(ハージング) F, Bernhard(ベルンハルト) SL, Jones D, Kay(カイ) RM, Higgins(ヒギンス) KM, Schramm(シュラム) SR, Lonberg(ロンバーグ) N. 1996年. High-avidity human IgG kappa monoclonal antibodies from a novel strain of minilocus transgenic mice(ミニローカス・トランスジェニックマウスの新規株からの高-アビディティのヒトIgGカッパ単クローン抗体). Nat Biotechnol(ネイチャ・バイオテクノロジ). 14: 845-51.
Garnick RL. 1992年. Peptide mapping for detecting variants in protein products(タンパク質生産における変異体検出のためのペプチド地図作製). Develop. Biol. Standard(デベロップメンツ・イン・バイオロジカル・スタンダダイゼーション) 76: 117-130.
Gelpi E. 1995年. Biomedical and biochemical applications of liquid chromatography-mass spectrometry(液体クロマトグラフィ-質量分析の生物医学的及び生物化学的適用). J. Chromatography A(ジャーナル・オブ・クロマトグラフィ・A) 703: 59-80.
Ghetie M-A, Podar(ポダー) EM, Ilgen(イルゲン) A, Gordon(ゴードン) BE, Uhr(ウワー) JW, Vitetta(ビテッタ), ES. 1997年. Homodimerization of tumor-reactive monoclonal antibodies markedly increases their ability to induce growth arrest or apoptosis of tumor cells(腫瘍-反応性単クローン抗体のホモ二量体化は腫瘍細胞の増殖停止又はアポトーシスを誘導するそれらの能力を著しく増加させる). Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 7509-7514.
Giddings G, Allison(アリソン) G, Brooks(ブルクス) D, Carter(カーター) A. 2000年. Transgenic plants as factories for biopharmaceuticals(生物医薬品のための工場としてのトランスジェニック植物). Nat. Biotechnol. 18: 1151-1155.
Gorman C, Bullock C. 2000年. Site-specific gene targeting for gene expression in eukaryotes(真核生物における遺伝子発現のための部位-特異遺伝子ターゲティング). Curr Opin Biotechnol(カレント・オピニオン・イン・バイオテクノロジ) 11: 455-460.
Hiatt A, Cafferkey(カフェルキー) R, Bowdish(バウディシュ) K (1989年) Production of antibodies in transgenic plants(トランスジェニック植物における抗体の生産). Nature. 342: 76-78.
Huls, G. A., Heijnen(ハイネン), I. A., Cuomo(クオモ), M. E., Koningsberger(コーニングスバーガー), J. C., Wiegman(ウィーグマン), L., Boel, E., van der Vuurst de Vries, A. R., Loyson(ロアゾン), S. A., Helfrich(ヘルフリック), W., van Berge Henegouwen(バン・ベルグ・ヘネヴェン), G. P., van Meijer(バン・メイヤー), M., de Kruif, J. & Logtenberg, T. 1999年. A recombinant, fully human monoclonal antibody with antitumor activity constructed from phage-displayed antibody fragments(ファージ-提示抗体断片から構成される、抗腫瘍活性を有する、組換え型の、十分なヒト単クローン抗体). Nat Biotechnol 17: 276-281.
Jespers LS, Roberts(ロバーツ) A, Mahler(マーラ) SM, Winter(ウィンター) G, Hoogenboom(フーゲンブーン) HR. 1994年. Guiding the selection of human antibodies from phage display repertoires to a single epitope of an antigen(抗原の単一エピトープに対するファージ提示リパートリからのヒト抗体の選定の指針策定). Biotechnology(バイオテクノロジ) (N Y) 12: 899-903.
Jones, D., Kroos(クルース), N., Anema(アネマ), R., Van Montfort(バン・モンフォール), B., Vooys(フォーイス), A., Van Der Kraats(クラーツ), S., Van Der Helm(ヘルム), E., Smits(スミツ), S., Schouten(スハウテン), J., Brouwer(ブラウエル), K., Lagerwerf(ラジェウェルフ), F., Van Berkel(バーケル), P., Opstelten(オプステルテン), D-J., Logtenberg, T., Bout(バウト), A. (2003年). High-level expression of recombinant IgG in the human cell line PER.C6TM(ヒト細胞株PER.C6TMでの組換えIgGの高-レベル発現). Biotechnol Prog.(バイオテクノロジ・プログレス) 19, 163-168.
Kim SJ, Kim NS, Ryu(リュウ) CJ, Hong(ホン) HJ, Lee(リー) GM. 1998年. Characterization of chimeric antibody producing CHO cells in the course of dihydrofolate reductase-mediated gene amplification and their stability in the absence of selective pressure(ジヒドロ葉酸還元酵素-媒介遺伝子増幅の過程においてCHO細胞が産生するキメラ抗体の特徴付け及び選択圧の不存在下におけるそれらの安定性). Biotechnol Bioeng(バイオテクノロジ・アンド・バイオエンジニアリング) 58: 73-84.
Kohler G及びMillstein(ミルステイン) C. 1975年. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity(所定の特異性の融合細胞分泌抗体の継続培養). Nature 256: 495-497.
Koopman G, Reutelingsperger(ロイテリングスペルガー) CP, Kuijten(クイテン) GA, Keehnen(キーネン) RM, Pals(パルス) ST, van Oers(エルス) MH. 1994年. Annexin V for flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on B cells undergoing apoptosis(アポトーシスを受けるB細胞上のホスファチジルセリン発現のフローサイトメトリによる検出のためのアネキシンV). Blood(ブラッド) 84: 1415-1420.
Larrick JW, Thomas DW. 2001年. Producing proteins in transgenic plants and animals(トランスジェニック植物及び動物におけるタンパク質生産). Curr. Opin. Biotechnol. 12: 411-418.
Massengale WT, McBurney(マクバーニ) E, Gurtler(グルトラー) J. 2002年. CD20-negative relapse of cutaneous B-cell lymphoma after anti-CD20 monoclonal antibody therapy(抗-CD20単クローン抗体療法後の皮膚B-細胞リンパ腫のCD20-陰性再発). J. Am. Acad. Dermatol.(ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・アカデミイ・オブ・ダーマトロジ) 46: 441-443.
Mendez MJ, Green(グリーン) LL, Corvalan(コルバラン) JR, Jia(チア) XC, Maynard-Currie(メイナード-キューリ) CE, Yang(ヤン) XD, Gallo(ギャロ) ML, Louie(ルイ) DM, Lee DV, Erickson(エリクソン) KL, Luna(ルナ) J, Roy(ロイ) CM, Abderrahim(アブデルラヒム) H, Kirschenbaum(キルシェンバウム) F, Noguchi(ノグチ) M, Smith(スミス) DH, Fukushima(フクシマ) A, Hales(ヘールズ) JF, Klapholz(クラフォルツ) S, Finer(ファイナー) MH, Davis(デイビス) CG, Zsebo(ゼボ) KM, Jakobovits(ジェイコボビッツ) A. 1997年. Functional transplant of megabase human immunoglobulin loci recapitulates human antibody response in mice(マウスにおけるメガベースのヒト免疫グロブリン遺伝子座反復ヒト抗体応答の機能的移植). Nat Genet.(ネイチャー・ジェネティクス) 15: 146-56.
Merchant AM, Zhu(チュー) Z, Yuan(ユアン) JQ, Goddard(ゴダード) A, Adams(アダムス) CW, Presta(プレスタ) LG, Carter P. 1998年. An efficient route to human bispecific IgG.(ヒト二重特異性IgGに対する有効な経路) Nat. Biotech. 16: 677-681.
Nemazee D. 2000年. Receptor editing in B cells(B細胞における受容体編集). Adv. Immunol.(アドバンシーズ・イン・イムノロジ) 74: 89-126.
Nissim A, Hoogenboom HR, Tomlinson(トムリンスン) IM, Flynn(フリン) G, Midgley(ミジリー) C, Lane D, Winter G. 1994年. Antibody fragments from a “single pot” phage display library as immunological reagents(免疫学的試薬としての“単一ポット”ファージ提示ライブラリからの抗体断片). EMBO J(EMBO・ジャーナル). 13: 692-698.
Nowakowski A, Wang(ワン) C, Powers(パワーズ) DB, Amersdorfer(アメルスドルファ) P, Smith TJ, Montgomery(モンゴメリ) VA, Sheridan(シェリダン) R, Blake(ブレーク) R, Smith LA, Marks(マークス) JD. 2002年. Potent neutralization of botulinum neurotoxin by recombinant oligoclonal antibody(ボツリヌス神経毒素の組換え少クローン抗体による有力な中和). Proc. Natl. Acac. Sci. USA 99: 11346-11350.
Patel AK, Boyd PN. 1995年. An improved assay for antibody dependent cellular cytotoxicity based on time resolved fluorometry(時間分解蛍光分析に基づく抗体依存性細胞障害作用のための改良されたアッセイ). Journal of Immunological Methods(ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ) 184: 29-38.
Peeters K, De Wilde(デ・ワイルド) C, De Jaeger(イェーガー) G, Angenon(エンジェノン) G, Depicker(デピッカー) A. 2001年. Production of antibodies and antibody fragments in plants(植物における抗体及び抗体断片の生産). Vaccine(ワクチン) 19: 2756-2761.
Pollock DP, Kutzko(クッツコ) JP, Birck(バーク)-Wilson E, Williams(ウィリアムズ) JL, Echelard(エシュラード) Y, Meade(ミード) HM. 1999年. Transgenic milk as a method for the production of recombinant antibodies(組換え抗体の生産のための方法としてのトランスジェニック乳). J Immunol Methods. 231: 147-157.
Radic MC, Mascelli(マッセリ) MA, Shan(シャン) H, Weigert(ワイゲルト) M. 1991年. Ig H and L chain contributions to autoimmune specificities(IgのH鎖及びL鎖は自己免疫特異性に寄与する). J. Immunol.(ジャーナル・オブ・イムノロジ) 146: 176-182.
Schnieke AE, Kind(キント) AJ, Ritchie WA, Mycock(マイコック) K, Scott(スコット) AR, Ritchie M, Wilmut I, Colman(コールマン) A, Campbell KH. 1997年. Human factor IX transgenic sheep produced by transfer of nuclei from transfected fetal fibroblasts(形質移入胎児線維芽細胞からの核の移植によって生産されたヒト因子IXトランスジェニックヒツジ). Science. 278: 2130-2133.
Segal DM, Weiner(ウィーナー) GJ, Weiner LM. 2001年. Introduction: bispecific antibodies(序:二重特異性抗体). J Immunol Methods. 248: 1-6.
Shields, RL, Namenuk(ネームヌーク) AK, Hong K, Gloria Meng(グロリア・メン) Y, Rae(レイ) J, Biggs(ビッグス) J, Xie(シエ) D, Lai(レイ) J, Stadlen(シュタードレン) A, Li(リー) B, Fox(フォックス) JA及びPresta LG. 2001年. High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for FcgRI, FcgRII, FcgRIII and FcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the FcgR(FcgRI, FcgRII, FcgRIII及びFcRnのためのヒトIgG1上の結合部位の高分解地図作製及びFcgRに対する改善された結合性を有するIgG1変異体の設計). J Biol Chem(ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ) 276: 6591-6604.
Spiridon CI, Ghetie MA, Uhr J, Marches(マルケース) R, Li JL, Shen(シェン) GL, Vitetta ES. 2002年. Tartgeting multiple her-2 epitopes with monoclonal antibodies results in improved antigrowth activity of a human breast cancer cell line in vitro and in vivo(単クローン抗体を用いる多重Her-2エピトープのターゲティングは、インビトロ及びインビボにおいて、ヒト乳癌細胞株の改善された抗増殖活性をもたらす). Clin. Cancer Res.(クリニカル・キャンサ・リサーチ) 8: 1720-1730.
Van der Vuurst de Vries A, Logtenberg T. 1999年. Dissecting the human peripheral B-cell compartment with phage display-derived antibodies(ヒト末梢B-細胞区画のファージ提示-誘導抗体を用いる分析). Immunology 98: 55-62.
Vaughan TJ, Williams AJ, Pritchard(プリチャード) K, Osbourn(オスボーン) JK, Pope(ポープ) AR, Earnshaw(アーンショウ) JC, McCafferty(マッカファティ ) J, Hodits(ホーディッツ) RA, Wilton(ウィルトン) J, Johnson(ジョンスン) KS. 1996年. Human antibodies with sub-nanomolar affinities isolated from a large non-immunized phage display library(大規模な非-免疫化ファージ提示ライブラリから分離した、サブ-ナノモル親和性を有するヒト抗体). Nat. Biotech. 14: 309-314.
Wilmut I. Clark AJ. 1991年. Basic techniques for transgenesis(トランスジェネシスのための基礎技術). J Reprod Fertil Suppl(ジャーナル・オブ・リプロダクション・アンド・ファーテリティ・サプレメント) 43: 265-275.
Wilmut I, Schnieke AE, McWhir J, Kind AJ, Campbell KH. 1997年. Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells(胎児及び成体哺乳類細胞から誘導した生存能力のある子孫). Nature 385: 810-813.
Wilson TJ, Kola I. 2001年. The LoxP/CRE system and genome modification(LoxP/CREシステム及びゲノム修飾). Methods Mol Biol.(メソッズ・イン・モレキュラ・アンド・セルラ・バイオロジ) 158: 83-94.
Yelverton E, Norton(ノートン) S, Obijeski(オビジェスキ) JF, Goeddel(ゲデデル) DV. 1983年. Rabies virus glycoprotein analogs: biosynthesis in Escherichia coli(狂犬病ウイルス糖タンパク質類似体:エシェリキア・コリにおける生物的合成). Science 219: 614-620.
Yoo EM, Coloma(コロマ) MJ, Trinh(トリン) KR, Nguyen(グエン) TQ, Vuong(ブオン) LU, Morrison(モリスン) SL, Chintalacharuvu(チンターラチャルーブ) KR. 1999年. Structural requirements for polymeric immunoglobulin assembly and association with J chain(重合体の免疫グロブリン組立体のための構造条件及びJ鎖との関連). J Biol Chem. 274: 33771-33777.
[受託番号]
細胞培養物(PER. C6)、受託番号第96022940号
DNA(pCRU-K01)、受託番号第03041601号
Claims (54)
- 抗体の混合物を組換え宿主において生産する方法であって、この方法が次の:
組換え宿主細胞において、少なくとも1種の軽鎖及び前記少なくとも1種の軽鎖と対合可能な少なくとも3種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列、又は核酸配列群を発現させる工程
を含む、抗体混合物の生産方法。 - 前記組換え宿主細胞が、生産される抗体が共通の軽鎖を含むように、前記少なくとも3種の異なる重鎖と対合可能な共通の軽鎖を暗号化する核酸配列を含む、請求項1記載の方法。
- さらに、次の:
抗体を宿主細胞からか、又は宿主細胞培養物から回収する工程
を含む、請求項1又は2記載の方法。 - 前記混合物の抗体において重鎖−軽鎖の二量体を含む少なくとも2種の抗体が、異なる特異性及び/又は親和性を持つ、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
- 前記組換え宿主細胞が、前記細胞において組換えタンパク質を暗号化する核酸を増幅させる必要なく、前記タンパク質の高−レベル発現が可能である、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
- 前記細胞を、不死化されるか、又はアデノウイルスのE1配列により形質転換されるヒト胚性網膜細胞から導く、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
- 前記宿主細胞をPER.C6細胞から導く、請求項6記載の方法。
- 抗体の混合物であって、請求項1〜7のいずれかの方法により得られ得る、抗体混合物。
- 前記混合物において存在する抗体が、同じ抗原の異なるエピトープ及び/又は混合物を含む1種の抗原において存在する異なる抗原に結合する、請求項8記載の混合物。
- 組換え宿主細胞であって、軽鎖を暗号化する核酸配列及び抗体の少なくとも3種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列を含み、前記軽鎖及び重鎖が対合可能である、宿主細胞。
- 組成物であって、組換え的に生産される抗体の混合物を含み、少なくとも3種の異なる重鎖配列が組換え抗体の混合物において代表される、組成物。
- 前記抗体の軽鎖が共通配列を含む、請求項11記載の組成物。
- 前記混合物が二重特異性抗体を含む、請求項11又は12記載の組成物。
- 前記混合物の抗体が、請求項10記載の組換え宿主細胞により生産される、請求項11〜13のいずれか一項記載の組成物。
- 少なくとも2種の前記抗体が異なる特異性を持つ、請求項11〜14のいずれか一項記載の組成物。
- 前記異なる特異性が同じ抗原上の異なるエピトープに向けられる、請求項15記載の組成物。
- 前記異なる特異性が、混合物を含む1種の抗原において存在する異なる抗原に向けられる、請求項15記載の組成物。
- 少なくとも2種の前記抗体が同じエピトープについての異なる親和性を持つ、請求項11〜14のいずれか一項記載の組成物。
- 前記組成物が、前記組成物において存在する各々の個々の抗体の効果よりも大きな効果を持ち、前記効果が機能的アッセイにおいて測定される、請求項11〜18のいずれか一項記載の組成物。
- 抗体の混合物を生産する少なくとも1種の宿主細胞クローンを識別するための方法であって、前記混合物の抗体が機能的アッセイに従う所望の効果を持ち、この方法が次の:
(i)宿主細胞に、少なくとも1種の軽鎖を暗号化する核酸配列及び少なくとも2種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列を提供する工程であって、前記重鎖及び軽鎖が互いに対合可能な工程;
(ii)少なくとも1種のクローンの前記宿主細胞を、前記核酸配列の発現を助長する条件下に培養する工程;
(iii)前記少なくとも1種のクローンの宿主細胞を、機能的アッセイによる所望の効果を持つ抗体の混合物の生産について選別する工程;及び
(iv)所望の効果を持つ抗体の混合物を生産する少なくとも1種のクローンを識別する工程
を含む、方法。 - 前記宿主細胞が、生産される抗体が共通の軽鎖を含むように、前記少なくとも2種の異なる重鎖と対合可能な共通の軽鎖を暗号化する核酸配列を含む、請求項20記載の方法。
- 工程ii)における前記培養及び工程iii)における前記選別を、少なくとも2種のクローンで行う、請求項20又は21記載の方法。
- 工程ii)の前記培養及び/又は工程iii)の前記選別を、高−処理の手法を用いて行う、請求項20〜22のいずれか一項記載の方法。
- 前記宿主細胞が、前記細胞においてタンパク質を暗号化する核酸配列を増幅させる必要なく、前記タンパク質の高−レベル発現が可能である、請求項20〜23のいずれか一項記載の方法。
- 前記細胞を、不死化されるか、又はアデノウイルスのE1配列により形質転換されるヒト胚性網膜芽細胞腫から導く、請求項20〜24のいずれか一項記載の方法。
- 前記宿主細胞をPER.C6から導く、請求項25記載の方法。
- 前記混合物の抗体が、異なる特異性及び/又は親和性を持つ少なくとも2種の抗体を含む、請求項20〜26のいずれか一項記載の方法。
- 抗体の混合物を生産する方法であって、次の:
(i)請求項20〜27のいずれか一項記載の方法により識別される宿主細胞クローンを、少なくとも1種の軽鎖及び少なくとも2種の重鎖を暗号化する核酸の発現を助長する条件下に培養する工程
を含む、方法。 - さらに、次の:
(ii)抗体を、宿主細胞からか、又は宿主細胞培養物から回収する工程
を含む、請求項28記載の方法。 - 抗体の混合物であって、請求項28又は29記載の方法により得られ得る、混合物。
- 組換え宿主細胞を、抗体の混合物を生産するために作出する方法であって、この方法が次の:
前記宿主細胞中に、軽鎖を暗号化する核酸配列及び前記軽鎖と対合可能な少なくとも3種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列を導入する工程であって、前記核酸配列を連続的にか、又は同時に導入する工程
を含む、方法。 - 組換え宿主細胞を、抗体の混合物を生産するために作出する方法であって、この方法が次の:
少なくとも2種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列を、少なくとも2種の前記重鎖と対合可能な軽鎖を暗号化する核酸配列を含む組換え宿主細胞中に導入する工程
を含む、方法。 - トランスジェニックな非−ヒト動物又はトランスジェニック植物であって、軽鎖を暗号化する核酸配列及び前記軽鎖と対合可能な少なくとも2種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列又は配列群を含み、前記軽鎖及び重鎖を暗号化する前記核酸配列が、組織−特異的プロモータの調節下にある、トランスジェニック非ヒト動物又はトランスジェニック植物。
- 抗体の混合物であって、請求項33記載のトランスジェニック動物又はトランスジェニック植物から得られ得る、混合物。
- 薬学的組成物であって、組換え的に生産される抗体の混合物及び適切な担体を含み、少なくとも2種の異なる重鎖が前記混合物の組換え的に生産される抗体において代表される、薬学的組成物。
- 前記混合物が二重特異性抗体を含む、請求項35記載の薬学的組成物。
- 抗体の混合物であって、少なくとも2種の異なる重鎖が、ヒトか、又は動物の対象物の処置又は診断における使用のために代表される、混合物。
- 抗体の混合物の使用であって、少なくとも2種の異なる重鎖が、ヒトか、又は動物の対象物においての疾病又は疾患の処置又は診断における使用のための薬剤の調製のために代表される、混合物の使用。
- 異なるアイソタイプを含む抗体の混合物を宿主細胞から生産するための方法であって、この方法が次の:
組換え宿主細胞において、軽鎖を暗号化する核酸配列及び前記軽鎖と対合可能な異なるアイソタイプの少なくとも2種の重鎖を暗号化する核酸配列を発現させる工程
を含む、方法。 - 前記アイソタイプが少なくともIgG及びIgAを含む、請求項39記載の方法。
- 所望の効果を持つ抗体の混合物を、機能的アッセイにおいて識別するための方法であって、次の:
i)抗体の混合物を機能的アッセイにおいて加える工程、及び
ii)前記混合物の効果を前記アッセイにおいて定める工程
を含み、前記混合物における抗体が共通の軽鎖を含む、方法。 - 前記混合物が、請求項11〜19のいずれか一項記載の組成物において含まれる、請求項41記載の方法。
- 少なくとも1種の前記軽鎖及び/又は重鎖群を暗号化する核酸配列又は配列群が、少なくとも1種の抗体提示の選定工程を含む方法によって得られる、請求項1〜7、20〜29、39及び40のいずれか一項記載の方法、又は請求項10記載の組換え宿主細胞、又は請求項31又は32記載の組換え宿主細胞の作出方法、又は請求項33記載のトランスジェニック非ヒト動物又はトランスジェニック植物。
- 標的に結合可能な抗体の混合物を生産するための方法であって、この方法が次の:
i)抗体を含む抗体提示ライブラリを、標的を含む物質と接触させる工程、ii)前記標的に結合する抗体を選定する少なくとも1種の工程、iii)前記標的に結合する少なくとも2種の抗体を識別する工程であって、前記少なくとも2種の抗体が共通の軽鎖を含む工程、iv)軽鎖を暗号化する核酸配列及び前記少なくとも2種の抗体の重鎖を暗号化する核酸配列又は核酸配列群を、宿主細胞中に導入する工程、v)前記宿主細胞のクローンを、前記核酸配列の発現を助長する条件下に培養する工程
を含む、方法。 - 抗体の混合物を組換え宿主において生産するための方法であって、この方法が次の:
組換え宿主細胞において、共通の軽鎖を暗号化する核酸配列、及び可変領域において異なり及び前記共通の軽鎖と対合可能な少なくとも2種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列を発現させる工程であって、及び前記重鎖が、更に、それらの定常領域において、異なる重鎖の間の対合を減少させるか、又は防ぐのに十分に異なる工程
を包含する、方法。 - 前記重鎖が異なるアイソタイプである請求項45記載の方法。
- 前記異なるアイソタイプが少なくともIgG1及びIgG3を包含する、請求項46記載の方法。
- 前記異なるアイソタイプが少なくともIgG及びIgAのアイソタイプを包含する、請求項46記載の方法。
- 抗体の混合物であって、請求項45〜48のいずれか一項記載の方法により得られ得る、混合物。
- 二量体のIgAアイソタイプ{(IgA)2}抗体を含む抗体の混合物を組換え宿主において生産するための方法であって、少なくとも1部分の前記二量体IgA抗体が、異なる結合領域を各々の2種のIgAサブユニットにおいて持ち、この方法が次の:
組換え宿主細胞において、共通の軽鎖を暗号化する核酸配列、及び前記共通の軽鎖に対合可能なIgAアイソタイプの少なくとも2種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列を発現させる工程
を含む、方法。 - 少なくとも2種の異なる特異性を持つIgM抗体を含む抗体の混合物を生産するための方法であって、この方法が、組換え宿主細胞において、共通の軽鎖を暗号化する核酸配列、及びIgMアイソタイプの少なくとも2種の異なる重鎖を暗号化する核酸配列を発現させる工程を含み、前記重鎖が前記共通の軽鎖と対合可能である、方法。
- IgA二量体、IgM五量体又はIgM六量体であって、少なくとも2種の異なる特異性を持つ、IgA二量体、IgM五量体又はIgM六量体。
- 免疫グロブリンの混合物を単一細胞から生産する、細胞の培養物であって、前記混合物が少なくとも3種の異なる重鎖を含む、培養物。
- さらに、前記培養物が、前記免疫グロブリンの混合物を、単一細胞から、20より多い集団倍加数の間生産する、請求項53記載の培養物。
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DK1563100T3 (da) * | 2002-11-01 | 2013-08-05 | Iris Int Inc | Fortrængningssandwich-immuno-PCR |
GB0230201D0 (en) * | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Retargeting |
DE602004002275T2 (de) | 2003-01-07 | 2007-09-06 | Symphogen A/S | Verfahren zur herstellung rekombinanterpolyklonaler proteine |
JP4477579B2 (ja) * | 2003-01-21 | 2010-06-09 | 中外製薬株式会社 | 抗体の軽鎖スクリーニング方法 |
DK1626992T3 (da) * | 2003-05-23 | 2010-09-20 | Crucell Holland Bv | Produktion af rekombinant IgM i PER.C6-celler |
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AU2012201010B2 (en) * | 2005-10-21 | 2015-01-22 | Genzyme Corporation | Antibodies with enhanced antibody-dependent cellular cytoxicity activity, methods of their production and use |
WO2007048077A2 (en) * | 2005-10-21 | 2007-04-26 | Gtc Biotherapeutics, Inc. | Antibodies with enhanced antibody-dependent cellular cytoxicity activity, methods of their production and use |
DE102005054628A1 (de) * | 2005-11-16 | 2007-05-24 | Cevec Pharmaceuticals Gmbh | Verfahren zur Herstellung von permanenten humanen Zelllinien |
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WO2009002380A2 (en) * | 2007-06-26 | 2008-12-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Isolation of anti-desmoglein 1 antibodies by phage display of pemphigus foliaceus autoantibodies |
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WO2010089387A1 (en) | 2009-02-09 | 2010-08-12 | Morphosys Ag | Production of oligoclonal mixtures of immunoglobulins in single cells |
ES2637174T3 (es) | 2009-02-12 | 2017-10-11 | Cell Signaling Technology, Inc. | Expresión de ROS mutante en el cáncer de hígado humano |
JP5836807B2 (ja) | 2009-03-05 | 2015-12-24 | アッヴィ・インコーポレイテッド | Il−17結合タンパク質 |
JP2012525149A (ja) | 2009-04-27 | 2012-10-22 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ヘテロ多量体分子を作製するための方法 |
CN102471378B (zh) | 2009-06-26 | 2014-04-02 | 瑞泽恩制药公司 | 容易地分离的具有天然免疫球蛋白形式的双特异性抗体 |
US20120204278A1 (en) | 2009-07-08 | 2012-08-09 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
PL3241435T3 (pl) | 2009-07-08 | 2021-12-13 | Kymab Limited | Modele zwierzęce i cząsteczki terapeutyczne |
CN105131112A (zh) | 2009-08-29 | 2015-12-09 | Abbvie公司 | 治疗用dll4结合蛋白 |
CA2781682A1 (en) | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods |
US9796788B2 (en) | 2010-02-08 | 2017-10-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire |
US20130045492A1 (en) | 2010-02-08 | 2013-02-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain |
RU2724663C2 (ru) * | 2010-02-08 | 2020-06-25 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | Мышь с общей легкой цепью |
US20120021409A1 (en) * | 2010-02-08 | 2012-01-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common Light Chain Mouse |
MY160628A (en) | 2010-03-02 | 2017-03-15 | Abbvie Inc | Therapeutic DLL4 Binding Proteins |
CA2796633C (en) * | 2010-04-23 | 2020-10-27 | Genentech, Inc. | Production of heteromultimeric proteins |
PE20130205A1 (es) | 2010-05-14 | 2013-03-24 | Abbvie Inc | Proteinas de union a il-1 |
UY33492A (es) | 2010-07-09 | 2012-01-31 | Abbott Lab | Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas |
JP6146913B2 (ja) | 2010-08-02 | 2017-06-14 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. | Vlドメインを含む結合タンパク質を作製するマウス |
EP3252072A3 (en) | 2010-08-03 | 2018-03-14 | AbbVie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
US20120101108A1 (en) | 2010-08-06 | 2012-04-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Anaplastic Lymphoma Kinase In Kidney Cancer |
ES2537207T3 (es) * | 2010-08-16 | 2015-06-03 | Novimmune S.A. | Métodos para la generación de anticuerpos multiespecíficos y multivalentes |
KR20130139884A (ko) | 2010-08-26 | 2013-12-23 | 애브비 인코포레이티드 | 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
EP2611464B1 (en) | 2010-09-03 | 2018-04-25 | AbbVie Stemcentrx LLC | Novel modulators and methods of use |
DK2644698T3 (en) | 2010-11-17 | 2018-01-22 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | MULTI-SPECIFIC ANTIGEN-BINDING MOLECULE WITH ALTERNATIVE FUNCTION TO BLOOD COAGULATION FACTOR FUNCTION VIII |
SG191312A1 (en) | 2010-12-21 | 2013-07-31 | Abbvie Inc | Il-1 -alpha and -beta bispecific dual variable domain immunoglobulins and their use |
KR20140037036A (ko) | 2011-01-03 | 2014-03-26 | 에이브이엠 바이오테크놀로지, 엘엘씨 | 생물제제의 맞춤형 제조 및 체세포의 재프로그래밍 방법 |
LT2738259T (lt) | 2011-02-25 | 2020-03-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Adam6 pelės |
WO2012122512A1 (en) | 2011-03-10 | 2012-09-13 | Hco Antibody, Inc. | Recombinant production of mixtures of single chain antibodies |
US9561274B2 (en) | 2011-06-07 | 2017-02-07 | University Of Hawaii | Treatment and prevention of cancer with HMGB1 antagonists |
US9244074B2 (en) | 2011-06-07 | 2016-01-26 | University Of Hawaii | Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma |
UA117901C2 (uk) | 2011-07-06 | 2018-10-25 | Ґенмаб Б.В. | Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування |
RU2664232C2 (ru) * | 2011-08-05 | 2018-08-15 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Мыши с гуманизированной универсальной легкой цепью |
ES2612935T3 (es) | 2011-09-19 | 2017-05-19 | Kymab Limited | Anticuerpos, dominios variables y cadenas adaptados para su uso en seres humanos |
EP3485903B1 (en) | 2011-09-23 | 2022-11-16 | Mereo BioPharma 5, Inc. | Vegf/dll4 binding agents and uses thereof |
CA2791109C (en) | 2011-09-26 | 2021-02-16 | Merus B.V. | Generation of binding molecules |
PL2766397T3 (pl) | 2011-10-11 | 2018-10-31 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Ulepszone składanie przeciwciał bispecyficznych |
EP2627773B1 (en) | 2011-10-17 | 2017-06-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Restricted immunoglobulin heavy chain mice |
AR088514A1 (es) | 2011-10-24 | 2014-06-18 | Abbvie Inc | Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf |
UY34411A (es) | 2011-10-24 | 2013-05-31 | Abbvie Inc | Inmunoenlazantes dirigidos contra esclerostina |
CA2853951A1 (en) | 2011-11-01 | 2013-05-10 | Bionomics, Inc. | Antibodies and methods of treating cancer |
US10598653B2 (en) | 2011-11-01 | 2020-03-24 | Bionomics Inc. | Methods of blocking cancer stem cell growth |
EP2773667A1 (en) | 2011-11-01 | 2014-09-10 | Bionomics, Inc. | Anti-gpr49 antibodies |
US9220774B2 (en) | 2011-11-01 | 2015-12-29 | Bionomics Inc. | Methods of treating cancer by administering anti-GPR49 antibodies |
DK2793567T3 (en) | 2011-12-20 | 2019-04-15 | Regeneron Pharma | Humanized light chain mice |
US10745468B2 (en) | 2011-12-22 | 2020-08-18 | Kota Biotherapeutics, Llc | Compositions and methods for modified B cells expressing reassigned biological agents |
US9175072B2 (en) | 2011-12-22 | 2015-11-03 | Elwha Llc | Compositions and methods including recombinant B lymphocyte cell line including an exogenously incorporated nucleic acid expressing an exogenous membrane immunoglobulin reactive to a first antigen and including an endogenous gene expressing an endogenous secreted immunoglobulin reactive to a second antigen |
US10233424B2 (en) | 2011-12-22 | 2019-03-19 | Elwha Llc | Compositions and methods including cytotoxic B lymphocyte cell line expressing exogenous membrane immunoglobulin different from secreted immunoglobulin |
US8962315B2 (en) * | 2011-12-22 | 2015-02-24 | Elwha Llc | Compositions and methods including recombinant B lymphocyte cell line including at least one endogenous gene expressing at least one endogenous membrane immunoglobulin reactive to a first antigen and including at least one exogenously incorporated nucleic acid expressing at least one exogenous secreted immunoglobulin reactive to a second antigen |
EP2915818A3 (en) | 2011-12-30 | 2015-11-11 | AbbVie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
CN104159920A (zh) | 2011-12-30 | 2014-11-19 | 艾伯维公司 | 针对il-13和/或il-17的双重可变结构域免疫球蛋白 |
US9550830B2 (en) | 2012-02-15 | 2017-01-24 | Novo Nordisk A/S | Antibodies that bind and block triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1) |
KR20140136462A (ko) * | 2012-03-06 | 2014-11-28 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 공통 경쇄 마우스 |
CA2865643A1 (en) | 2012-03-16 | 2013-09-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Histidine engineered light chain antibodies and genetically modified non-human animals for generating the same |
BR112014022855A2 (pt) | 2012-03-16 | 2017-07-18 | Regeneron Pharma | animal não humano geneticamente modificado, mamífero geneticamente modificado, e, método para fabricar um animal não humano |
MY173376A (en) | 2012-03-16 | 2020-01-21 | Regeneron Pharma | Mice that produce antigen?binding proteins with ph?dependent binding characteristics |
US20140013456A1 (en) | 2012-03-16 | 2014-01-09 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same |
US10251377B2 (en) | 2012-03-28 | 2019-04-09 | Kymab Limited | Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies |
GB2502127A (en) | 2012-05-17 | 2013-11-20 | Kymab Ltd | Multivalent antibodies and in vivo methods for their production |
DK2838998T3 (en) | 2012-04-18 | 2018-01-15 | Cell Signaling Technology Inc | EGFR AND ROS1 IN CANCER |
SG10201607371UA (en) * | 2012-04-20 | 2016-10-28 | Merus Nv | Methods and means for the production of ig-like molecules |
MX362705B (es) * | 2012-05-10 | 2019-02-01 | Bioatla Llc | Anticuerpos monoclonales multiespecíficos. |
NZ703689A (en) | 2012-06-12 | 2016-05-27 | Regeneron Pharma | Humanized non-human animals with restricted immunoglobulin heavy chain loci |
EP3632462A1 (en) | 2012-07-06 | 2020-04-08 | Genmab B.V. | Dimeric protein with triple mutations |
SG10201605703TA (en) | 2012-07-06 | 2016-09-29 | Genmab Bv | Dimeric protein with triple mutations |
WO2014011955A2 (en) | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Abbvie, Inc. | Il-1 binding proteins |
CN102851338A (zh) | 2012-07-25 | 2013-01-02 | 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 | 利用电荷排斥作用制备同二聚体蛋白混合物的方法 |
ES2456823B1 (es) * | 2012-09-21 | 2015-01-27 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Método de producción de repertorios complejos de moléculas recombinantes |
SG10201705787VA (en) | 2012-09-27 | 2017-08-30 | Merus Nv | BISPECIFIC IgG ANTIBODIES AS T CELL ENGAGERS |
KR20180008921A (ko) | 2012-11-01 | 2018-01-24 | 애브비 인코포레이티드 | 항-vegf/dll4 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
CN104797599A (zh) * | 2012-11-05 | 2015-07-22 | 全药工业株式会社 | 抗体或抗体组合物的制备方法 |
EP2928919A2 (en) | 2012-12-04 | 2015-10-14 | AbbVie Inc. | Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins |
WO2014106001A2 (en) | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Abbvie, Inc. | Dual specific binding proteins having a receptor sequence |
US9856319B2 (en) | 2012-12-28 | 2018-01-02 | Abbvie Inc. | Monovalent binding proteins |
KR20200134340A (ko) | 2013-01-10 | 2020-12-01 | 젠맵 비. 브이 | 인간 IgG1 Fc 영역 변이체 및 그의 용도 |
US9222142B2 (en) * | 2013-01-15 | 2015-12-29 | The Regents Of The University Of California | Adenoviruses and their use |
KR101764800B1 (ko) | 2013-02-20 | 2017-08-04 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 변형된 면역글로불린 중쇄 서열을 갖는 비인간 동물 |
CN105189545A (zh) * | 2013-03-13 | 2015-12-23 | 瑞泽恩制药公司 | 常见轻链小鼠 |
TW201446800A (zh) | 2013-03-15 | 2014-12-16 | Abbvie Inc | 針對TNFα之雙特異性結合蛋白 |
CN105324396A (zh) | 2013-03-15 | 2016-02-10 | 艾伯维公司 | 针对IL-1β和/或IL-17的双重特异性结合蛋白 |
US9788534B2 (en) | 2013-03-18 | 2017-10-17 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
US9783593B2 (en) | 2013-05-02 | 2017-10-10 | Kymab Limited | Antibodies, variable domains and chains tailored for human use |
US11707056B2 (en) | 2013-05-02 | 2023-07-25 | Kymab Limited | Animals, repertoires and methods |
EP3016681B1 (en) | 2013-07-05 | 2019-12-18 | Genmab A/S | Humanized or chimeric cd3 antibodies |
US10208125B2 (en) | 2013-07-15 | 2019-02-19 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof |
JP6534615B2 (ja) | 2013-09-27 | 2019-06-26 | 中外製薬株式会社 | ポリペプチド異種多量体の製造方法 |
ES2859373T3 (es) | 2013-10-01 | 2021-10-01 | Kymab Ltd | Modelos animales y moléculas terapéuticas |
US20150125397A1 (en) | 2013-10-06 | 2015-05-07 | Abbvie Inc. | Dual specific binding proteins directed against immune cell receptors and autoantigens |
TW201536320A (zh) | 2013-12-02 | 2015-10-01 | Abbvie Inc | 治療骨性關節炎之組合物及方法 |
CN105992772A (zh) * | 2014-02-10 | 2016-10-05 | Igm生命科学股份有限公司 | IgA多特异性结合分子 |
EP3470435B1 (en) | 2014-02-28 | 2020-08-05 | Merus N.V. | Antibody that binds erbb-2 and erbb-3 |
SG11201607109QA (en) | 2014-02-28 | 2016-09-29 | Merus Nv | Antibodies that bind egfr and erbb3 |
RU2016141307A (ru) | 2014-03-21 | 2018-04-24 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Отличные от человека животные, которые вырабатывают однодоменные связывающие белки |
US20150266976A1 (en) | 2014-03-21 | 2015-09-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Vl antigen binding proteins exhibiting distinct binding characteristics |
EP3825326A1 (en) | 2014-04-01 | 2021-05-26 | Adimab, LLC | Multispecific antibody analogs comprising a common light chain, and methods of their preparation and use |
CA2944647A1 (en) | 2014-04-03 | 2015-10-08 | Igm Biosciences, Inc. | Modified j-chain |
CN106536556B (zh) | 2014-04-04 | 2020-02-07 | 生态学有限公司 | 结合lgr5的人源化抗体 |
WO2015171822A1 (en) | 2014-05-06 | 2015-11-12 | Genentech, Inc. | Production of heteromultimeric proteins using mammalian cells |
EP3142750B1 (en) * | 2014-05-13 | 2020-07-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions comprising aav expressing dual antibody constructs and uses thereof |
PT3169706T (pt) | 2014-07-11 | 2020-03-13 | Genmab As | Anticorpos que se ligam a axl |
AR101262A1 (es) | 2014-07-26 | 2016-12-07 | Regeneron Pharma | Plataforma de purificación para anticuerpos biespecíficos |
TWI700300B (zh) | 2014-09-26 | 2020-08-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 中和具有第viii凝血因子(fviii)機能替代活性的物質之抗體 |
MA40764A (fr) | 2014-09-26 | 2017-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité |
TWI701435B (zh) | 2014-09-26 | 2020-08-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 測定fviii的反應性之方法 |
CN106922129B (zh) | 2014-10-01 | 2024-02-20 | 免疫医疗有限责任公司 | 轭合多肽的方法 |
US10093733B2 (en) | 2014-12-11 | 2018-10-09 | Abbvie Inc. | LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins |
CN105820251B (zh) | 2015-01-08 | 2019-10-15 | 江苏康宁杰瑞生物制药有限公司 | 具有共同轻链的双特异性抗体或抗体混合物 |
WO2016118641A1 (en) | 2015-01-20 | 2016-07-28 | Igm Biosciences, Inc. | Tumor necrosis factor (tnf) superfamily receptor binding molecules and uses thereof |
IL297997A (en) | 2015-03-04 | 2023-01-01 | Igm Biosciences Inc | CD20 binding compounds and their uses |
WO2016149678A1 (en) | 2015-03-19 | 2016-09-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals that select for light chain variable regions that bind antigen |
JP7082484B2 (ja) | 2015-04-01 | 2022-06-08 | 中外製薬株式会社 | ポリペプチド異種多量体の製造方法 |
TW201710286A (zh) | 2015-06-15 | 2017-03-16 | 艾伯維有限公司 | 抗vegf、pdgf及/或其受體之結合蛋白 |
EP3319993B1 (en) | 2015-07-10 | 2020-01-15 | Genmab A/S | Axl-specific antibody-drug conjugates for cancer treatment |
CA2991880A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Merus N.V. | Human cd3 binding antibody |
IL310467A (en) | 2015-07-15 | 2024-03-01 | Genmab As | Human CD3 antibodies or chimeras |
KR20180038554A (ko) * | 2015-08-27 | 2018-04-16 | 크리스탈 바이오사이언스 주식회사 | 공통 경쇄를 갖는 항체 생산을 위한 유전자도입 동물 |
CA2999284C (en) | 2015-09-30 | 2023-06-13 | Igm Biosciences A/S | Binding molecules with modified j-chain |
JP7058213B2 (ja) | 2015-09-30 | 2022-04-21 | アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 改変j鎖を有する結合分子 |
ES2865482T3 (es) | 2015-10-23 | 2021-10-15 | Merus Nv | Moléculas de unión que inhiben el crecimiento del cáncer |
EP3398965A4 (en) | 2015-12-28 | 2019-09-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION |
BR112018015259A2 (pt) | 2016-01-27 | 2018-12-18 | Medimmune Llc | métodos para preparação de anticorpos com um padrão de glicosilação definido |
CA3016563A1 (en) | 2016-03-21 | 2017-09-28 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multispecific and multifunctional molecules and uses thereof |
CA3018081A1 (en) | 2016-03-22 | 2017-09-28 | Bionomics Limited | Administration of an anti-lgr5 monoclonal antibody |
JP7301540B2 (ja) | 2016-05-26 | 2023-07-03 | チールー ピュージェット サウンド バイオセラピューティクス コーポレイション | 抗体の混合物 |
SG11201811431VA (en) | 2016-07-14 | 2019-01-30 | Genmab As | Multispecific antibodies against cd40 and cd137 |
BR112019003989A2 (pt) | 2016-09-06 | 2019-05-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | métodos de utilização de um anticorpo biespecífico que reconhece o fator de coagulação ix e/ou o fator de coagulação ix ativado e o fator de coagulação x e/ou o fator de coagulação x ativado |
EP4342912A2 (en) | 2016-09-23 | 2024-03-27 | Merus N.V. | Binding molecules that modulate a biological activity expressed by a cell |
CA3041988A1 (en) | 2016-11-01 | 2018-05-11 | Genmab B.V. | Polypeptide variants and uses thereof |
WO2018098553A1 (en) * | 2016-12-01 | 2018-06-07 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Production of ricin antibodies in plant |
BR112019013648A2 (pt) * | 2017-02-02 | 2020-01-21 | Merck Patent Gmbh | emparelhamento preferido de domínios de anticorpos |
SG11201906961UA (en) | 2017-02-10 | 2019-08-27 | Genmab Bv | Polypeptide variants and uses thereof |
US20200291089A1 (en) | 2017-02-16 | 2020-09-17 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof |
US20200239579A1 (en) | 2017-03-09 | 2020-07-30 | Genmab A/S | Antibodies against pd-l1 |
AU2018246872C1 (en) | 2017-03-31 | 2023-05-18 | Merus N.V. | ErbB-2 targeting agent and a bispecific antibody with antigen-binding sites that bind an epitope on an extracellular part of erb-2 and erbB-3, for treatment of an individual with an erbB-2, erbB-2/erbB-3 positive tumour |
MX2019011660A (es) | 2017-03-31 | 2019-11-18 | Merus Nv | Anticuerpos biespecificos que se unen al receptor 2 del factor de crecimiento humano (erbb-2) y receptor 3 del factor de crecimiento humano (erbb3) para usarse en el tratamiento de celulas que tienen un gen de fusion de neuregulina-1 (nrg1). |
SG11201908772TA (en) | 2017-03-31 | 2019-10-30 | Genmab Holding B V | Bispecific anti-cd37 antibodies, monoclonal anti-cd37 antibodies and methods of use thereof |
CN111148764A (zh) | 2017-05-17 | 2020-05-12 | 美勒斯公司 | 用于乳腺癌的ErbB-2/ErbB-3双特异性抗体与内分泌治疗的组合 |
AR111963A1 (es) | 2017-05-26 | 2019-09-04 | Univ California | Método y moléculas |
EP3630836A1 (en) | 2017-05-31 | 2020-04-08 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multispecific molecules that bind to myeloproliferative leukemia (mpl) protein and uses thereof |
UY37758A (es) | 2017-06-12 | 2019-01-31 | Novartis Ag | Método de fabricación de anticuerpos biespecíficos, anticuerpos biespecíficos y uso terapéutico de dichos anticuerpos |
WO2019009728A1 (en) | 2017-07-06 | 2019-01-10 | Merus N.V. | ANTIBODIES THAT MODULATE A BIOLOGICAL ACTIVITY EXPRESSED BY A CELL |
EA202090003A1 (ru) | 2017-07-06 | 2020-06-18 | Мерус Н.В. | Связывающие молекулы, модулирующие биологическую активность, которую проявляет клетка |
TW201920657A (zh) | 2017-07-06 | 2019-06-01 | 荷蘭商米樂斯股份有限公司 | 藉由細胞表現之調控生物活性的抗體 |
GB201710984D0 (en) * | 2017-07-07 | 2017-08-23 | Kymab Ltd | Cells, vertebrates, populations & methods |
AU2018309339A1 (en) | 2017-08-04 | 2020-02-20 | BioNTech SE | Binding agents binding to PD-L1 and CD137 and use thereof |
MX2020001432A (es) | 2017-08-09 | 2020-03-20 | Merus Nv | Anticuerpos que se unen al receptor del factor de crecimiento epidermico (egfr) y tirosina-proteina cinasa met (cmet). |
AU2018338859A1 (en) | 2017-09-29 | 2020-02-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Multispecific antigen-binding molecule having blood coagulation factor VIII (FVIII) cofactor function-substituting activity, and pharmaceutical formulation containing said molecule as active ingredient |
EP3732201A4 (en) | 2017-12-19 | 2022-04-20 | Surrozen Operating, Inc. | WNT SUBSTITUTION MOLECULES AND THEIR USES |
JP7317016B2 (ja) * | 2017-12-19 | 2023-07-28 | スロゼン オペレーティング, インコーポレイテッド | 抗lrp5/6抗体及び使用方法 |
US20210107988A1 (en) | 2018-01-24 | 2021-04-15 | Genmab B.V. | Polypeptide variants and uses thereof |
TW202340257A (zh) | 2018-02-09 | 2023-10-16 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 雙特異性抗體 |
EP3765493A2 (en) | 2018-03-12 | 2021-01-20 | Genmab A/S | Antibodies |
US20210238280A1 (en) | 2018-03-14 | 2021-08-05 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof |
EP3765516A2 (en) | 2018-03-14 | 2021-01-20 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules and uses thereof |
EP3768707A4 (en) * | 2018-03-19 | 2022-01-26 | The Invention Science Fund II, LLC | COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODIFIED B CELLS EXPRESSING REALIZED BIOLOGICAL AGENTS |
CN111936514A (zh) | 2018-03-30 | 2020-11-13 | 美勒斯公司 | 多价抗体 |
US20210238296A1 (en) | 2018-05-03 | 2021-08-05 | Genmab B.V. | Antibody variant combinations and uses thereof |
JP2021528439A (ja) | 2018-06-22 | 2021-10-21 | ゲンマブ ホールディング ビー.ブイ. | 抗cd37抗体および抗cd20抗体、組成物、ならびにそれらの使用方法 |
CA3104390A1 (en) | 2018-06-22 | 2019-12-26 | Genmab A/S | Method for producing a controlled mixture of two or more different antibodies |
EP3818083A2 (en) | 2018-07-03 | 2021-05-12 | Elstar Therapeutics, Inc. | Anti-tcr antibody molecules and uses thereof |
JP2021526845A (ja) | 2018-07-13 | 2021-10-11 | ゲンマブ エー/エス | Cd38抗体を使用したトロゴサイトーシスを介した治療 |
CA3106146A1 (en) | 2018-07-13 | 2020-01-16 | Genmab A/S | Variants of cd38 antibody and uses thereof |
MA53812A (fr) | 2018-10-04 | 2021-08-11 | Genmab Holding B V | Compositions pharmaceutiques comprenant des anticorps anti-cd37 bispécifiques |
KR20210124959A (ko) | 2018-11-06 | 2021-10-15 | 젠맵 에이/에스 | 항체 제제 |
MX2021007949A (es) | 2018-12-31 | 2021-10-22 | Merus Nv | Dominios de union mixtos. |
SG11202105926QA (en) | 2018-12-31 | 2021-07-29 | Merus Nv | Truncated multivalent multimers |
CA3131014A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Andreas Loew | Anti-tcr antibody molecules and uses thereof |
CA3130508A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Marengo Therapeutics, Inc. | Antibody molecules that bind to nkp30 and uses thereof |
SG11202109056TA (en) | 2019-02-21 | 2021-09-29 | Marengo Therapeutics Inc | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof |
WO2020172598A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to t cells and uses thereof to treat autoimmune disorders |
GB2599228B (en) | 2019-02-21 | 2024-02-07 | Marengo Therapeutics Inc | Multifunctional molecules that bind to T cell related cancer cells and uses thereof |
TW202039578A (zh) | 2019-03-29 | 2020-11-01 | 荷蘭商美勒斯公司 | Cd3結合分子 |
TW202102544A (zh) | 2019-04-04 | 2021-01-16 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 雙特異性抗體 |
JP2022534674A (ja) | 2019-05-09 | 2022-08-03 | メルス ナムローゼ フェンノートシャップ | タンパク質を多量体化する変異体ドメイン及びその分離 |
JP2022531894A (ja) | 2019-05-09 | 2022-07-12 | ゲンマブ ビー.ブイ. | がんの処置において使用するための抗dr5抗体の組み合わせの投与レジメン |
WO2021006199A1 (ja) | 2019-07-05 | 2021-01-14 | 小野薬品工業株式会社 | Pd-1/cd3二重特異性タンパク質による血液がん治療 |
BR112022001473A2 (pt) | 2019-07-30 | 2022-03-22 | Ono Pharmaceutical Co | Anticorpo biespecífico |
EP3772518A1 (en) | 2019-08-07 | 2021-02-10 | Merus N.V. | Modified human variable domains |
GB201912008D0 (en) | 2019-08-21 | 2019-10-02 | Cambridge Entpr Ltd | Antibody |
JP2023500701A (ja) | 2019-11-06 | 2023-01-10 | ジェンマブ ビー.ブイ. | 抗体変種の組み合わせおよびその使用 |
JP7183143B2 (ja) | 2019-12-23 | 2022-12-05 | 日立Astemo株式会社 | エンジンの制御装置 |
CN116199780A (zh) | 2019-12-24 | 2023-06-02 | 美勒斯公司 | TGF-β-RII结合蛋白质 |
WO2021138407A2 (en) | 2020-01-03 | 2021-07-08 | Marengo Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof |
IL294453A (en) | 2020-01-16 | 2022-09-01 | Genmab As | Formulations of cd38 antibodies and uses thereof |
CN114945596A (zh) | 2020-01-29 | 2022-08-26 | 美勒斯公司 | 用于调节免疫细胞衔接效应的手段和方法 |
WO2021155916A1 (en) | 2020-02-04 | 2021-08-12 | BioNTech SE | Treatment involving antigen vaccination and binding agents binding to pd-l1 and cd137 |
BR112022015572A2 (pt) | 2020-03-18 | 2022-09-27 | Genmab As | Anticorpo, composição, composição farmacêutica, anticorpo para uso como um medicamento, métodos para tratar uma doença e para produzir um anticorpo, ácido nucléico, um ou mais ácidos nucléicos, célula, e, kit de partes |
EP4136123A2 (en) | 2020-04-13 | 2023-02-22 | Affyimmune Therapeutics, Inc. | Epcam antibody and car-t cells |
JP2023523011A (ja) | 2020-04-24 | 2023-06-01 | マレンゴ・セラピューティクス,インコーポレーテッド | T細胞関連のがん細胞に結合する多機能性分子およびその使用 |
CN116462766A (zh) | 2020-05-21 | 2023-07-21 | 美勒斯公司 | 用于生产ig样分子的方法和手段 |
WO2022018294A1 (en) | 2020-07-23 | 2022-01-27 | Genmab B.V. | A combination of anti-dr5 antibodies and an immunomodulatory imide drug for use in treating multiple myeloma |
US20230272052A1 (en) | 2020-07-31 | 2023-08-31 | CureVac SE | Nucleic acid encoded antibody mixtures |
CA3187061A1 (en) | 2020-08-06 | 2022-02-10 | Karsten Beckmann | Binding agents for coronavirus s protein |
CN116761818A (zh) | 2020-08-26 | 2023-09-15 | 马伦戈治疗公司 | 检测trbc1或trbc2的方法 |
GB2616128A (en) | 2020-08-26 | 2023-08-30 | Marengo Therapeutics Inc | Antibody molecules that bind to NKp30 and uses thereof |
CA3190755A1 (en) | 2020-08-26 | 2022-03-03 | Andreas Loew | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof |
JP2023541858A (ja) | 2020-09-10 | 2023-10-04 | ジェンマブ エー/エス | 慢性リンパ球性白血病を治療するためのcd3及びcd20に対する二重特異性抗体 |
BR112023004321A2 (pt) | 2020-09-10 | 2023-04-04 | Genmab As | Método para tratar linfoma de célula b grande difusa em um sujeito humano |
JP2023547329A (ja) | 2020-10-02 | 2023-11-10 | ジェンマブ エー/エス | Ror2へと結合することができる抗体ならびにror2およびcd3に結合する二重特異性抗体 |
KR20230121114A (ko) | 2020-12-16 | 2023-08-17 | 메뤼스 엔.페. | 암의 치료를 위한 다중특이적 항체 |
WO2022189667A1 (en) | 2021-03-12 | 2022-09-15 | Genmab A/S | Non-activating antibody variants |
KR20240004462A (ko) | 2021-04-08 | 2024-01-11 | 마렝고 테라퓨틱스, 인크. | Tcr에 결합하는 다기능성 분자 및 이의 용도 |
CN117396509A (zh) | 2021-05-07 | 2024-01-12 | 健玛保 | 包含结合b7h4和cd3的双特异性抗体的药物组合物 |
BR112023027006A2 (pt) | 2021-06-21 | 2024-03-12 | BioNTech SE | Método para reduzir ou prevenir a progressão de um tumor ou tratar um câncer em um sujeito, e, agente de ligação |
AR127743A1 (es) | 2021-09-06 | 2024-02-28 | Genmab Bv | Anticuerpos capaces de unirse a cd27, variantes y usos de los mismos |
AU2022361691A1 (en) | 2021-10-08 | 2024-03-28 | Genmab A/S | Antibodies binding to cd30 and cd3 |
WO2023146394A1 (en) | 2022-01-25 | 2023-08-03 | Merus N.V. | Combination therapy for the treatment of cancer |
WO2023174521A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Genmab A/S | Binding agents binding to epcam and cd137 |
WO2023218046A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Genmab A/S | Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy |
WO2023218051A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Genmab A/S | Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy |
WO2024013723A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Pheon Therapeutics Ltd | Antibody drug conjugates that bind cdcp1 and uses thereof |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001523971A (ja) * | 1997-05-02 | 2001-11-27 | ジェネンテック,インコーポレーテッド | ヘテロマルチマー及び共通成分を有する多重特異性抗体の製造方法 |
Family Cites Families (208)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5180502A (ja) | 1974-12-28 | 1976-07-14 | Seirei Ind | Tsumejikufurikaeshikiseigyakutenkonsochi |
US4634665A (en) * | 1980-02-25 | 1987-01-06 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US5179017A (en) * | 1980-02-25 | 1993-01-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4599311A (en) * | 1982-08-13 | 1986-07-08 | Kawasaki Glenn H | Glycolytic promotersfor regulated protein expression: protease inhibitor |
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
AU600885B2 (en) | 1984-05-25 | 1990-08-30 | Zymogenetics Inc. | Stable DNA constructs |
US5168062A (en) | 1985-01-30 | 1992-12-01 | University Of Iowa Research Foundation | Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence |
US4868103A (en) * | 1986-02-19 | 1989-09-19 | Enzo Biochem, Inc. | Analyte detection by means of energy transfer |
ATE87659T1 (de) | 1986-09-02 | 1993-04-15 | Enzon Lab Inc | Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette. |
US4801687A (en) | 1986-10-27 | 1989-01-31 | Bioprobe International, Inc. | Monoclonal antibody purification process using protein A |
US4937190A (en) * | 1987-10-15 | 1990-06-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Translation enhancer |
US5202238A (en) * | 1987-10-27 | 1993-04-13 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
FI884924A (fi) | 1987-10-28 | 1989-04-29 | Oncogen | Humanimmuglobulin som producerats med hybrid-dna-teknik. |
EP0317156B2 (en) * | 1987-11-09 | 1997-11-12 | Becton, Dickinson and Company | Method for analysis of hematopoietic cells in a sample |
WO1989006692A1 (en) | 1988-01-12 | 1989-07-27 | Genentech, Inc. | Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function |
DE68927933T2 (de) | 1988-09-02 | 1997-08-14 | Dyax Corp | Herstellung und auswahl von rekombinantproteinen mit verschiedenen bindestellen |
US5223409A (en) * | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
GB8909218D0 (en) | 1989-04-22 | 1989-06-07 | Medical Res Council | Improvements in or relating to enhancers |
ATE99958T1 (de) | 1989-06-08 | 1994-01-15 | Wistar Inst | Monoklonale antikoerper zur behandlung nach einem kontakt mit tollwutvirus. |
WO1991000906A1 (en) | 1989-07-12 | 1991-01-24 | Genetics Institute, Inc. | Chimeric and transgenic animals capable of producing human antibodies |
US5030002A (en) | 1989-08-11 | 1991-07-09 | Becton, Dickinson And Company | Method and apparatus for sorting particles with a moving catcher tube |
US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
US5151504A (en) | 1989-11-17 | 1992-09-29 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Method for purification of monoclonal antibodies |
DK0502976T3 (da) | 1989-12-01 | 1996-11-11 | Pharming Bv | Produktion af rekombinante polypeptider ved bovine arter og transgene fremgangsmåder |
EP1690935A3 (en) | 1990-01-12 | 2008-07-30 | Abgenix, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
DE4006630A1 (de) | 1990-03-03 | 1991-09-12 | Behringwerke Ag | Humane monoklonale antikoerper gegen tollwutviren, ihre herstellung und verwendung |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
CA2109602C (en) | 1990-07-10 | 2002-10-01 | Gregory P. Winter | Methods for producing members of specific binding pairs |
JPH0568599A (ja) | 1990-07-31 | 1993-03-23 | Wistar Inst | 遺伝子工学的に作られた抗体 |
IE76732B1 (en) * | 1990-08-07 | 1997-11-05 | Becton Dickinson Co | One step test for absolute counts |
US6255458B1 (en) † | 1990-08-29 | 2001-07-03 | Genpharm International | High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin |
ES2246502T3 (es) | 1990-08-29 | 2006-02-16 | Genpharm International, Inc. | Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos. |
US7041871B1 (en) | 1995-10-10 | 2006-05-09 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
GB9022543D0 (en) | 1990-10-17 | 1990-11-28 | Wellcome Found | Antibody production |
EP0564531B1 (en) | 1990-12-03 | 1998-03-25 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins with altered binding properties |
DK1279731T3 (da) | 1991-03-01 | 2007-09-24 | Dyax Corp | Fremgangsmåde til udvikling af bindende miniproteiner |
ATE199023T1 (de) | 1991-03-29 | 2001-02-15 | Genentech Inc | Methoden zur selektion von rekombinanten wirtszellen welche hohe mengen von einem gewünschten protein exprimieren |
DE69233367T2 (de) | 1991-04-10 | 2005-05-25 | The Scripps Research Institute, La Jolla | Bibliotheken heterodimerer rezeptoren mittels phagemiden |
WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
US5637481A (en) | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
DE4122599C2 (de) | 1991-07-08 | 1993-11-11 | Deutsches Krebsforsch | Phagemid zum Screenen von Antikörpern |
JP3502093B2 (ja) | 1991-07-15 | 2004-03-02 | ザ・ウエルカム・ファウンデーション・リミテッド | 抗体の製造 |
AU2515992A (en) | 1991-08-20 | 1993-03-16 | Genpharm International, Inc. | Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs |
JPH07503132A (ja) | 1991-12-17 | 1995-04-06 | ジェンファーム インターナショナル,インコーポレイティド | 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物 |
DE69326967T2 (de) * | 1992-01-17 | 2000-06-15 | Lakowicz Joseph R | Phasenmodulationsenergieübertragungsfluoroimmunassay |
US5667988A (en) * | 1992-01-27 | 1997-09-16 | The Scripps Research Institute | Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains |
US7067284B1 (en) * | 1992-01-27 | 2006-06-27 | The Scripps Research Institute | Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains |
SE9201984D0 (sv) * | 1992-06-29 | 1992-06-29 | Pharmacia Biosensor Ab | Improvement in optical assays |
WO1994002610A1 (en) * | 1992-07-17 | 1994-02-03 | Dana-Farber Cancer Institute | Method of intracellular binding of target molecules |
ATE381614T1 (de) | 1992-07-24 | 2008-01-15 | Amgen Fremont Inc | Bildung von xenogenen antikörpern |
DE4228162C1 (de) | 1992-08-25 | 1994-01-13 | Rajewsky Klaus Dr | Verfahren zum Ersetzen homologer Genabschnitte aus Säugern in der Keimbahn von nicht-menschlichen Säugern |
ATE348110T1 (de) | 1992-10-28 | 2007-01-15 | Genentech Inc | Hvegf rezeptor als vegf antagonist |
CA2149326C (en) | 1992-11-13 | 2007-04-17 | Mitchell E. Reff | Fully impaired consensus kozak sequences for mammalian expression |
WO1994023046A1 (en) | 1993-04-07 | 1994-10-13 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Dna sequence which acts as a chromatin insulator element to protect expressed genes from cis-acting regulatory sequences in mammalian cells |
ES2162863T3 (es) | 1993-04-29 | 2002-01-16 | Unilever Nv | Produccion de anticuerpos o fragmentos (funcionalizados) de los mismos derivados de inmunoglobulinas de cadena pesada de camelidae. |
JPH09501055A (ja) | 1993-07-30 | 1997-02-04 | ユニバーシティ オブ メディシン アンド デンティストリー オブ ニュージャージー | 初代リンパ球への効率的遺伝子転移 |
US5693506A (en) | 1993-11-16 | 1997-12-02 | The Regents Of The University Of California | Process for protein production in plants |
US5827690A (en) * | 1993-12-20 | 1998-10-27 | Genzyme Transgenics Corporatiion | Transgenic production of antibodies in milk |
EP1149898A2 (en) | 1993-12-23 | 2001-10-31 | Infigen, Inc. | Embryonic stem cells as nuclear donors and nuclear transfer techniques to produce chimeric and transgenic animals |
PT1231268E (pt) | 1994-01-31 | 2005-11-30 | Univ Boston | Bancos de anticorpos policlonais |
FR2717187B1 (fr) | 1994-03-10 | 1996-05-31 | Transgene Sa | Usage combiné de deux cassettes d'expression pour la production d'une protéine d'intérêt. |
US6080560A (en) | 1994-07-25 | 2000-06-27 | Monsanto Company | Method for producing antibodies in plant cells |
JPH08116978A (ja) | 1994-10-18 | 1996-05-14 | Nisshinbo Ind Inc | 抗体Fabライブラリーの作製法 |
AU722668B2 (en) * | 1994-12-30 | 2000-08-10 | King's College London | Methods for producing immunoglobulins containing protection proteins in plants and their use |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US6130364A (en) | 1995-03-29 | 2000-10-10 | Abgenix, Inc. | Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination |
US6265150B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-07-24 | Becton Dickinson & Company | Phage antibodies |
US5783186A (en) | 1995-12-05 | 1998-07-21 | Amgen Inc. | Antibody-induced apoptosis |
US5885827A (en) | 1996-01-23 | 1999-03-23 | The Regents Of The Universtiy Of California | Eukaryotic high rate mutagenesis system |
US6300065B1 (en) | 1996-05-31 | 2001-10-09 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
US6825396B2 (en) | 1996-06-12 | 2004-11-30 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Methods for tissue specific synthesis of protein in eggs of transgenic hens |
ATE230850T1 (de) | 1996-10-08 | 2003-01-15 | Bisys B V U | Verfahren und mittel zur auswahl von peptiden und proteinen mit spezifischer affinität zu einem zielmolekül |
GB9621113D0 (en) | 1996-10-10 | 1996-11-27 | Univ Southampton | Transgenic fish |
AU721121B2 (en) | 1996-12-02 | 2000-06-22 | Wake Forest University | Inactivation of HIV co-receptors as therapy for HIV infection |
CA2722378C (en) | 1996-12-03 | 2015-02-03 | Amgen Fremont Inc. | Human antibodies that bind tnf.alpha. |
AU738328B2 (en) * | 1997-01-21 | 2001-09-13 | General Hospital Corporation, The | Selection of proteins using RNA-protein fusions |
EP0973871A1 (en) | 1997-03-06 | 2000-01-26 | Infigen, Inc. | Method of cloning animals |
US5830698A (en) * | 1997-03-14 | 1998-11-03 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Method for integrating genes at specific sites in mammalian cells via homologous recombination and vectors for accomplishing the same |
WO1998041645A1 (en) | 1997-03-14 | 1998-09-24 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Method for integrating genes at specific sites in mammalian cells via homologous recombination and vectors for accomplishing the same |
US6080912A (en) | 1997-03-20 | 2000-06-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Methods for creating transgenic animals |
CN1203922A (zh) * | 1997-03-21 | 1999-01-06 | 三共株式会社 | 人源化抗人fas抗体 |
ES2236634T3 (es) | 1997-04-07 | 2005-07-16 | Genentech, Inc. | Anticuerpos anti-vegf. |
US20030207346A1 (en) * | 1997-05-02 | 2003-11-06 | William R. Arathoon | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
US20020062010A1 (en) * | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
DE69833755T2 (de) | 1997-05-21 | 2006-12-28 | Biovation Ltd. | Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen |
AU747609B2 (en) | 1997-09-23 | 2002-05-16 | Oxford Biomedica (Uk) Limited | Expression of genes in hematopoietic stem cells in hischaemic conditions |
GB9722131D0 (en) | 1997-10-20 | 1997-12-17 | Medical Res Council | Method |
DK1027439T3 (da) | 1997-10-27 | 2010-05-10 | Bac Ip Bv | Multivalente antigenbindende proteiner |
ATE265835T1 (de) | 1997-11-26 | 2004-05-15 | Mitsubishi Precision Co Ltd | Informationsleitungssystem |
US6074385A (en) | 1998-02-03 | 2000-06-13 | Kiefer Corp. | Hair follicle devitalization by induced heating of magnetically susceptible particles |
US6147275A (en) | 1998-03-30 | 2000-11-14 | Research Development Foundation | Corticotropin releasing factor receptor 1-deficient mice |
US6413776B1 (en) | 1998-06-12 | 2002-07-02 | Galapagos Geonomics N.V. | High throughput screening of gene function using adenoviral libraries for functional genomics applications |
CN1241574A (zh) * | 1998-07-02 | 2000-01-19 | 中国人民解放军第四军医大学 | 抗肝癌单克隆抗体HAb25及其单链抗体和双功能抗体 |
GB9823930D0 (en) † | 1998-11-03 | 1998-12-30 | Babraham Inst | Murine expression of human ig\ locus |
CA2361553A1 (en) | 1999-01-29 | 2000-08-03 | Zhenping Zhu | Antibodies specific to kdr and uses thereof |
CN100457914C (zh) | 1999-04-15 | 2009-02-04 | 荷兰克鲁塞尔公司 | 用编码腺病毒e1蛋白的序列在人体细胞中生产重组蛋白 |
ATE421976T1 (de) | 1999-05-18 | 2009-02-15 | Dyax Corp | Fab fragmentbibliotheken und verfahren für deren verwendung |
US6472147B1 (en) | 1999-05-25 | 2002-10-29 | The Scripps Research Institute | Methods for display of heterodimeric proteins on filamentous phage using pVII and pIX, compositions, vectors and combinatorial libraries |
US6833268B1 (en) | 1999-06-10 | 2004-12-21 | Abgenix, Inc. | Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions |
HU226742B1 (en) | 1999-06-25 | 2009-08-28 | Genentech Inc | Humanized anti-erbb2 antibodies and treatment with anti-erbb2 antibodies |
AU7491800A (en) | 1999-09-15 | 2001-04-17 | Therapeutic Human Polyclonals, Inc. | Immunotherapy with substantially human polyclonal antibody preparations purifiedfrom genetically engineered birds |
US6180357B1 (en) | 1999-10-08 | 2001-01-30 | Arius Research, Inc. | Individualized patient-specific anti-cancer antibodies |
WO2001027279A1 (en) * | 1999-10-12 | 2001-04-19 | Cambridge Antibody Technology | Human anti-adipocyte monoclonal antibodies and their use |
AU2400500A (en) | 1999-11-01 | 2001-05-14 | Chiron Corporation | Expression vectors, transfection systems, and method of use thereof |
GB9928787D0 (en) * | 1999-12-03 | 2000-02-02 | Medical Res Council | Direct screening method |
ATE366419T1 (de) | 1999-12-27 | 2007-07-15 | Crucell Holland Bv | Auswahl von epitop-bindungsfähigen verbindungen aus bibliotheken |
CA2401965A1 (en) | 2000-02-29 | 2001-09-07 | Auburn University | Production of antibodies in transgenic plastids |
EP1284752A4 (en) | 2000-04-26 | 2004-08-18 | Elusys Therapeutics Inc | BISPECIFIC MOLECULES AND USES THEREOF |
US6890532B2 (en) | 2000-05-16 | 2005-05-10 | Thomas Jefferson University | Rabies virus-specific neutralizing human monoclonal antibodies and nucleic acids and related methods |
PE20020132A1 (es) | 2000-06-29 | 2002-03-04 | Abbott Lab | Anticuerpos de especificidad doble y metodos para la elaboracion y el uso de los mismos |
CN1334343A (zh) * | 2000-07-14 | 2002-02-06 | 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 | 抑制肿瘤生长的新抗体、其衍生物及其应用 |
EP1184458A1 (en) | 2000-08-28 | 2002-03-06 | U-BISys B.V. | Differentially expressed CD46 epitopes, proteinaceous molecules capable of binding thereto, and uses thereof |
EP1188771A1 (en) | 2000-09-15 | 2002-03-20 | U-BISys B.V. | Libraries of human heavy chain variable fragments in a functional format |
US7737258B2 (en) | 2000-10-18 | 2010-06-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Uses of monoclonal antibody 8H9 |
US7105348B2 (en) | 2000-10-31 | 2006-09-12 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US6586251B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
IL155977A0 (en) | 2000-11-30 | 2003-12-23 | Medarex Inc | Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies |
FR2817875B1 (fr) | 2000-12-07 | 2005-03-18 | Technopharm | Procede de preparation d'un anticorps monoclonal humain, de fragments de celui-ci ou d'anticorps comprenant de tels fragments, les anticorps ainsi obtenus et leur utilisation |
EP1356037B1 (en) | 2001-01-25 | 2011-03-09 | Evolva Ltd. | A library of a collection of cells |
SG141239A1 (en) | 2001-01-26 | 2008-04-28 | Selexis Sa | Matrix attachment regions and methods for use thereof |
US7319139B2 (en) | 2001-01-29 | 2008-01-15 | Biogen Idec, Inc. | TAG-72 specific CH2 domain deleted antibodies |
JP2005508608A (ja) | 2001-03-22 | 2005-04-07 | アボット ゲーエムベーハー ウント カンパニー カーゲー | 問題遺伝子に対して特異的な抗体を発現するトランスジェニック動物及びその使用 |
GB0110029D0 (en) | 2001-04-24 | 2001-06-13 | Grosveld Frank | Transgenic animal |
RU2335507C2 (ru) * | 2001-06-13 | 2008-10-10 | Генмаб А/С | Человеческие моноклональные антитела к рецептору эпидермального фактора роста (egfr), способ их получения и их использование, гибридома, трансфектома, трансгенное животное, экспрессионный вектор |
US7595378B2 (en) * | 2001-06-13 | 2009-09-29 | Genmab A/S | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (EGFR) |
CA2449071C (en) | 2001-06-15 | 2008-12-16 | Crucell Holland B.V. | Chimaeric phages |
WO2004003211A1 (en) | 2002-06-26 | 2004-01-08 | Imclone Systems Incorporated | Bispecific antibodies that bind to vegf receptors |
ATE477280T1 (de) | 2001-06-28 | 2010-08-15 | Domantis Ltd | Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung |
MXPA03011801A (es) | 2001-07-04 | 2005-03-07 | Chromagenics Bv | Secuencias de acido desoxirribonucleico (adn) que comprenden cualidades reguladoras de transcripcion de genes y metodos para deteccion y uso de secuencias de acido desoxirribonucleico (adn). |
RU2292353C2 (ru) | 2001-08-21 | 2007-01-27 | Томас Джефферсон Юниверсити | Рекомбинантные антитела и композиции, а также способы их создания и использования |
NZ530852A (en) | 2001-08-27 | 2006-11-30 | Genentech Inc | Methods and compositions for recombinantly producing functional antibodies or antibody fragments in prokaryotic and eukaryotic host cells |
EP1456386B1 (en) | 2001-11-16 | 2009-01-14 | Biogen Idec Inc. | Polycistronic expression of antibodies in cho cells |
AU2002363861A1 (en) | 2001-11-30 | 2003-06-10 | Crucell Holland B.V. | Antigen presenting cell targeting conjugate, an intigen presenting cell contacted with such conjugate, their use for vaccination or as medicament, and methods for their production or generation |
DE60226486D1 (de) | 2001-11-30 | 2008-06-19 | Ca Nat Research Council | Selbstanordnende moleküle |
US20030215914A1 (en) | 2001-12-10 | 2003-11-20 | Erwin Houtzager | Structure for presenting desired peptide sequences |
US20050037427A1 (en) | 2001-12-10 | 2005-02-17 | Erwin Houtzager | Structure for presenting desired peptide sequences |
US7244592B2 (en) * | 2002-03-07 | 2007-07-17 | Dyax Corp. | Ligand screening and discovery |
GB2387030A (en) | 2002-03-26 | 2003-10-01 | Thales Plc | Compensation of mutual coupling in array antenna systems |
AU2003239966B9 (en) | 2002-06-03 | 2010-08-26 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
ITGE20020049A1 (it) | 2002-06-05 | 2003-12-05 | Ali Spa | Dispositivo a pistone per la erogazione di quantitativi dosati di sostanze pastose, quali i gelati, applicabile alle macchine per la loro fa |
JP4647309B2 (ja) | 2002-06-14 | 2011-03-09 | クロマジェニックス ビー.ブイ. | 複数のタンパク質の同時生産のための方法;そこで使用するためのベクター及び細胞 |
WO2003106674A2 (en) | 2002-06-14 | 2003-12-24 | Chromagenics B.V. | Means and methods for regulating gene expression |
US20080241166A1 (en) | 2002-06-28 | 2008-10-02 | Domantis Limited | Ligands that bind a receptor |
CA2492067A1 (fr) | 2002-07-10 | 2004-01-22 | Agostino Di Trapani | Element de construction |
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
EP1523496B1 (en) | 2002-07-18 | 2011-06-29 | Merus B.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
DE602004002275T2 (de) | 2003-01-07 | 2007-09-06 | Symphogen A/S | Verfahren zur herstellung rekombinanterpolyklonaler proteine |
EP1439234A1 (en) | 2003-01-08 | 2004-07-21 | ARTEMIS Pharmaceuticals GmbH | Targeted transgenesis using the rosa26 locus |
WO2004106375A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Merus Biopharmaceuticals B.V. I.O. | Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs |
US20100069614A1 (en) | 2008-06-27 | 2010-03-18 | Merus B.V. | Antibody producing non-human mammals |
CA2529001A1 (en) | 2003-06-10 | 2004-12-16 | Catchmabs B.V. | Binding peptides: methods for their generation and use |
KR101206206B1 (ko) | 2003-07-22 | 2012-11-29 | 크루셀 홀란드 비.브이. | 사스-코로나바이러스에 대한 결합분자 및 그것의 용도 |
JP4712724B2 (ja) | 2003-12-23 | 2011-06-29 | クルセル ホランド ベー ヴェー | CD1aに対するヒト結合分子 |
JP5912211B2 (ja) * | 2004-01-20 | 2016-04-27 | メルス ビー.ヴィー. | 結合タンパク質の混合物 |
ES2426725T3 (es) | 2004-05-27 | 2013-10-24 | Crucell Holland B.V. | Método para identificar moléculas de unión que pueden neutralizar el virus de la rabia |
ES2526343T3 (es) | 2004-06-03 | 2015-01-09 | Novimmune Sa | Anticuerpos anti-CD3 y métodos de uso de los mismos |
WO2006028936A2 (en) | 2004-09-02 | 2006-03-16 | Genentech, Inc. | Heteromultimeric molecules |
JP4487068B2 (ja) | 2004-10-12 | 2010-06-23 | 国立大学法人 岡山大学 | 細胞の遺伝子変異機能の制御による変異タンパク質の作製方法 |
WO2006040322A1 (en) | 2004-10-12 | 2006-04-20 | Crucell Holland B.V. | Binding molecules for treatment and detection of cancer |
CA2582057C (en) | 2004-11-11 | 2015-08-11 | Crucell Holland B.V. | Compositions against sars-coronavirus and uses thereof |
KR101374454B1 (ko) | 2005-03-31 | 2014-03-17 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 회합제어에 의한 폴리펩티드 제조방법 |
CA2604440A1 (en) | 2005-04-29 | 2006-11-09 | Inserm (Institut De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Transgenic animals and methods of making recombinant antibodies |
EP1879921B1 (en) | 2005-05-12 | 2011-04-27 | Crucell Holland B.V. | Host cell specific binding molecules capable of neutralizing viruses and uses thereof |
WO2006136601A1 (en) | 2005-06-23 | 2006-12-28 | Crucell Holland B.V. | Optimization of west nile virus antibodies |
WO2007031550A2 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-22 | Crucell Holland B.V. | Method for preparing immunoglobulin libraries |
AU2007229698B9 (en) | 2006-03-24 | 2012-11-08 | Merck Patent Gmbh | Engineered heterodimeric protein domains |
WO2007117410A2 (en) | 2006-03-31 | 2007-10-18 | Medarex, Inc. | Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies |
WO2007143168A2 (en) | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity antibodies to human il-6 receptor |
DK2395018T3 (en) | 2006-06-06 | 2016-04-25 | Crucell Holland Bv | HUMAN BINDING MOLECULES with killer activity against staphylococci and uses thereof |
US7960518B2 (en) | 2006-06-06 | 2011-06-14 | Crucell Holland B.V. | Human binding molecules having killing activity against enterococci and uses thereof |
US20090182127A1 (en) | 2006-06-22 | 2009-07-16 | Novo Nordisk A/S | Production of Bispecific Antibodies |
AU2007293662B2 (en) | 2006-09-07 | 2012-10-04 | Crucell Holland B.V. | Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus H5N1 and uses thereof |
LT2769992T (lt) | 2006-10-02 | 2021-04-12 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Didelio afiniškumo žmogaus antikūnai, atpažįstantys žmogaus il-4 receptorių |
US8290739B2 (en) | 2006-10-20 | 2012-10-16 | Amfit, Inc. | Method for determining relative mobility of regions of an object |
NO347649B1 (no) | 2006-12-14 | 2024-02-12 | Regeneron Pharma | Humant antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder human deltaliknende ligand 4 (hDII4), nukleinsyremolekyl som koder for slike og vektor og vert-vektorsystemer, samt fremgangsmåte for fremstilling, sammensetning og anvendelse. |
ES2593484T3 (es) | 2007-03-29 | 2016-12-09 | Genmab A/S | Anticuerpos biespecíficos y métodos de producción de los mismos |
ITMI20071522A1 (it) | 2007-07-27 | 2009-01-28 | Areta Internat S R L | Vaccino idiotipico |
EP3753947A1 (en) | 2007-09-14 | 2020-12-23 | Adimab, LLC | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
WO2009051974A1 (en) | 2007-10-17 | 2009-04-23 | Nuvelo, Inc. | Antibodes to cll-1 |
US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
CA2709847C (en) | 2008-01-07 | 2018-07-10 | Amgen Inc. | Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects |
JP5530367B2 (ja) | 2008-02-05 | 2014-06-25 | ザイムワークス,インコーポレイテッド | 分子動力学を使用してタンパク質またはその他のバイオポリマー中の相関残基を決定するための方法 |
EP3456193A1 (en) | 2008-06-27 | 2019-03-20 | Merus N.V. | Antibody producing non-human mammals |
CN104262483A (zh) | 2009-01-26 | 2015-01-07 | 根马布股份公司 | 用于生成抗体混合物的方法 |
JP2012525149A (ja) | 2009-04-27 | 2012-10-22 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ヘテロ多量体分子を作製するための方法 |
CN102448986B (zh) | 2009-05-11 | 2015-11-25 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 能中和流感病毒h3n2的人结合分子及其应用 |
CN102471378B (zh) | 2009-06-26 | 2014-04-02 | 瑞泽恩制药公司 | 容易地分离的具有天然免疫球蛋白形式的双特异性抗体 |
WO2011028952A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
RU2724663C2 (ru) | 2010-02-08 | 2020-06-25 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | Мышь с общей легкой цепью |
US20120021409A1 (en) | 2010-02-08 | 2012-01-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common Light Chain Mouse |
CA2797981C (en) | 2010-05-14 | 2019-04-23 | Rinat Neuroscience Corporation | Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them |
US20130177555A1 (en) | 2010-08-13 | 2013-07-11 | Medimmune Limited | Monomeric Polypeptides Comprising Variant FC Regions And Methods Of Use |
ES2537207T3 (es) | 2010-08-16 | 2015-06-03 | Novimmune S.A. | Métodos para la generación de anticuerpos multiespecíficos y multivalentes |
DK2635607T3 (da) | 2010-11-05 | 2019-11-18 | Zymeworks Inc | Stabilt heterodimert antistofdesign med mutationer i fc-domænet |
LT2738259T (lt) | 2011-02-25 | 2020-03-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Adam6 pelės |
MX358752B (es) | 2011-03-25 | 2018-08-31 | Glenmark Pharmaceuticals Sa | Inmunoglobulinas heterodiméricas. |
JP2013004215A (ja) | 2011-06-14 | 2013-01-07 | Hitachi Ltd | リチウムイオン二次電池 |
JP2016184957A (ja) | 2012-02-09 | 2016-10-20 | シャープ株式会社 | 情報処理装置及び情報処理方法 |
SG10201607371UA (en) † | 2012-04-20 | 2016-10-28 | Merus Nv | Methods and means for the production of ig-like molecules |
SG10201705787VA (en) | 2012-09-27 | 2017-08-30 | Merus Nv | BISPECIFIC IgG ANTIBODIES AS T CELL ENGAGERS |
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001523971A (ja) * | 1997-05-02 | 2001-11-27 | ジェネンテック,インコーポレーテッド | ヘテロマルチマー及び共通成分を有する多重特異性抗体の製造方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
J.IMMUNOL.METHODS, VOL.239, PP.153-166 (2000), JPN6009037915, ISSN: 0002539850 * |
J.MOL.BIOL., VOL.239, PP.68-78 (1994), JPN6009037914, ISSN: 0002539849 * |
LINDHOFER H, JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL, vol. V155 N1, JPN5005002902, 1 July 1995 (1995-07-01), US, pages 219 - 225, ISSN: 0002539847 * |
NATURE BIOTECHNOL., VOL.14, PP.309-314 (1996), JPN6009037913, ISSN: 0002539848 * |
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