HU217413B - Eljárás hímsterilitás kialakítására, valamint hímsteril növény és szaporítóanyag előállítására - Google Patents

Eljárás hímsterilitás kialakítására, valamint hímsteril növény és szaporítóanyag előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU217413B
HU217413B HU763/89A HU276389A HU217413B HU 217413 B HU217413 B HU 217413B HU 763/89 A HU763/89 A HU 763/89A HU 276389 A HU276389 A HU 276389A HU 217413 B HU217413 B HU 217413B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
dna
promoter
gene
plant
male sterile
Prior art date
Application number
HU763/89A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT52553A (en
HU892763D0 (en
Inventor
Marc Beuckeleer
Willy Greef
Jan Leemans
Celestina Mariani
Original Assignee
Plant Genetic Systems N.V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10636060&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU217413(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Plant Genetic Systems N.V. filed Critical Plant Genetic Systems N.V.
Publication of HU892763D0 publication Critical patent/HU892763D0/hu
Publication of HUT52553A publication Critical patent/HUT52553A/hu
Publication of HU217413B publication Critical patent/HU217413B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01031—Beta-glucuronidase (3.2.1.31)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C12N15/823—Reproductive tissue-specific promoters
    • C12N15/8231—Male-specific, e.g. anther, tapetum, pollen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8287—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for fertility modification, e.g. apomixis
    • C12N15/8289—Male sterility
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/63—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/27—Endoribonucleases producing 3'-phosphomonoesters (3.1.27)
    • C12Y301/27003—Ribonuclease T1 (3.1.27.3)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Fertilizers (AREA)

Abstract

A találmány értelmében egy növényben a hímsterilitás kialakításáhőznem biőlógiai lépésként a növény sejtmaggenőmját egy idegen DNS-szekvenciával, előnyösen egy idegen kimer DNS-szekvenciával látják el,ahől az idegen DNS-szekvencia tartalmaz: a) egy hímsteril DNS-t, amelyegy első RNS-t, fehérjét vagy pőlipeptidet kódől, amely az adőttnövény pőrzószálsejtjében termelődve vagy túltermelődve lényegesenmegzavarja az adőtt pőrzószálsejt metabőlizműsát, fűnkcióját és/vagyfejlődését, és b) egy első prőmőtert, amely alkalmas a hímsteril DNS-nek szelektíven a növény pőrzószálsejtjeiben, előnyösen pőrtők-,pőllen- és/vagy szálsejtjeiben, elsősőrban a tapétűm és/vagy pőrtőkepidermális sejtjeiben történő kifejezésének irányítására, ahől ahímsteril DNS űgyanabban az átírási egységben helyezkedik el, mint aszabályőzására szőlgáló első prőmőter; azzal a megszőrítással, hőgy haaz első prőmőter a hímsteril DNS-t szelektíven a pőllensejtekbenfejezi ki, a transzfőrmált növény nűkleáris genőmja hőmőzigóta;miáltal a növény pőrzószálsejtjei elpűsztűlnak vagy tönkremennek, és anövény képtelenné válik fertilis hímivarsejtek termelésére. Atalálmány kiterjed hímsteril növény és szapőrítóanyag előállítására,melynek sőrán a növényt és a szapőrítóanyagőt az idegen DNS-szekvenciával transzfőrmált sejtből regenerálják. ŕ

Description

A találmány tárgya eljárás hímsterilitás kialakítására, valamint hímsteril növény és szaporítóanyag előállítására, a hímsteril növény termesztésére, a hibrid mag előállítására, továbbá a hímsterilitást biztosító DNS és az ezt tartalmazó vektor előállítására.
A találmány értelmében a sejtmaggenomjába sejttranszformációval idegen DNS-szekvenciát viszünk be. Ez az idegen DNS-szekvencia legalább egy első idegen DNS-t (továbbiakban hímsteril DNS) tartalmaz, amely:
1. olyan első RNS-t vagy fehérjét, vagy polipeptidet kódol, amely a növény porzószálsejtjeiben termelődve jelentős mértékben megzavarja a porzószálsejtek metabolizmusát, funkcióját és/vagy fejlődését és 2. ugyanabban az átírási egységben található, mint a szabályozására szolgáló első promoter, amely szelektíven a növény porzószálsejtjeiben biztosítja a hímsteril DNS közvetlen kifejezését.
A találmány tehát olyan, magban hímsteril növényre és szaporítóanyagára vonatkozik, amelyben az idegen DNS-szekvencia egy idegen kimer DNS-szekvencia, amely további szekvenciaként legalább egy második idegen DNS-szekvenciát (marker DNS) tartalmazhat, amely: 1. egy második RNS-t vagy fehéijét, vagy polipeptidet kódol, amely a növény legalább egy specifikus szövetében vagy sejtjében előfordulva biztosítja, hogy az egész növény könnyen megkülönböztethető legyen az olyan növényektől, amelyek nem tartalmaznak második RNS-t, fehéijét vagy polipeptidet, és 2. ugyanabban az átírási egységben található, mint a szabályozására szolgáló második promoter, amely a növény legalább egy specifikus szövetében vagy sejtjében biztosítja a marker DNS közvetlen kifejezését, és 3. a növényi sejtmaggenomon belül ugyanabban a genetikus szakaszban helyezkedik el, mint a hímsteril DNS.
A találmány kiteljed az idegen kimer DNS-szekvencia előállítására, amely legalább egy hímsteril DNS-t tartalmaz, amelyet egy első promoter szabályoz, és amely a hímsteril DNS mellett adott esetben legalább egy marker DNS-t tartalmaz, amelyet egy második promoter szabályoz.
A találmány kiteljed továbbá olyan vektor előállítására, amely a fenti idegen DNS-szekvenciát tartalmazza és növényi sejtekbe transzformálható, miáltal az idegen DNS-szekvencia stabilan beépül a sejtmaggenomjába.
A találmány tárgya továbbá eljárás magban hímsteril növény és szaporítóanyag előállítására, amely olyan idegen DNS-szekvenciát tartalmaz, amelyben a hímsteril DNS: 1. egy első promoter szabályozása alatt van és egy második promoter által szabályozott marker DNS-sel azonos genetikai szakaszban helyezkedik el,
2. stabilan beépült a növényi sejtmaggenomjába, és 3. egy első RNS, fehéije vagy polipeptid formájában szelektíven a növény porzószálsejtjeiben fejeződik ki.
A találmány tárgya továbbá eljárás hibrid magok előállítására, amelyekből hibrid növények fejlődnek, amelynek során 1. találmány szerinti hímsteril növényt, amelynek maggenomjában olyan marker DNS található, amely előnyösen herbicidekkel szembeni rezisztenciát biztosító fehérjét kódol, és 2. marker DNS nélküli hím fertilis növényt keresztezünk. A hibrid magok előállítására vonatkozó, találmány szerinti eljárás során előnyösen kereskedelmi célra alkalmas, általában lényegében véletlenszerű populációt képző magokat állítunk elő jelentős kézi munka nélkül.
A találmány értelmében előnyösen alkalmazható a növényi genomból származó tapétum specifikus promoter, amely az idegen DNS-szekvenciának a növényi sejtbe történő transzformálását biztosító első promoterként alkalmazható.
A hibridizálás általánosan alkalmazott eljárás olyan növények előállítására, amelyek a szülőnövények kívánt tulajdonságait egyesítik magukban. A kapott hibrid növény egyes tulajdonságokban, így terméshozamban, környezeti változáshoz történő alkalmazkodóképességben vagy betegségekkel szembeni ellenálló képességben gyakran túltesz a szülőnövényeken. Ez a képesség az úgynevezett heterózis vagy hibrid életképesség. Ennek következtében a hibridizálást gyakran alkalmazzák a fő kultúrnövények, így a gabona, cukorrépa és napraforgó javítására. Különböző okokból, elsősorban azért, mert a legtöbb növény mind önbeporzásra, mind keresztbe beporzásra képes, a hibrid magok előállítására szolgáló szabályozott keresztbe beporzás jelentős önbeporzás nélkül, kereskedelmi méretekben nehezen valósítható meg.
A természetben szinte valamennyi kultúrnövény egy növényen hím és női szaporodószerveket fejleszt, amelyek általában egy virágon belül egymáshoz közel helyezkednek el. Ez okozza az önbeporzást. Néhány növénynél azonban a szaporodószervek különleges morfológiája miatt kivételesen a keresztbe beporzás részesül előnyben. Ezek a növények fokozott életképességű és alkalmazkodóképességű hibrid utódokat termelnek. Ilyen morfológiával rendelkezik például a Cannabis ssp. (kender), ahol a hím és női szaporodószervek külön növényen fejlődnek. Hasonló morfológiával rendelkezik továbbá a Zea mays (kukorica), ahol a hím és női szaporodószervek ugyanazon növény különböző részein fejlődnek. Másfajta morfológiával rendelkezik az Elaeis guineensis (olajpálma), ahol a hím és szaporodóképes női ivarsejtek a növény fejlődésén belül különböző időpontokban válnak szaporodóképessé.
Más növényfajták, például az Ananas comosus (ananász) a keresztbe beporzást a szaporodószervek különleges fiziológiája miatt részesítik előnyben. Ezek a növények úgynevezett öninkompatibilis rendszert fejlesztettek ki, amelynek következtében az egyik növényhez tartozó pollen nem képes megtermékenyíteni az ugyanahhoz a növényhez vagy más növényhez, de azonos genotípushoz tartozó női ivarsejteket.
Más növényfajok a hímsterilitás nevű genom jellemző természetes előfordulása miatt részesítik előnyben a keresztbe beporzást. Ennél a jellemzőnél a növény portokja elkorcsosul, mielőtt az általa termelt pollen megérne (M. L. H. Kául: Male-Sterility in Higher Plants, Monographs on Theoretical and Applied Genetics, 10, Springer Verlag, 1987). Ez a természetes hímsterilitás a feltevések szerint egy sor természetes mutáció következménye, amelyek gyakran recesszív fogyatékosságot jelentenek, és ez a jellemző főként ön2 beporzásra hajlamos növényeknél nem tartható fenn egykönnyen, mivel természetes körülmények között magok nem termelődnek.
A természetben a hímsterilitás négy fő típusa figyelhető meg. Mind a négy típus alkalmazható a mesterséges növénynemesítő programban, és így biztosíthatjuk, hogy a kultúrnövényeknél, így a kukoricánál, cukorrépánál, olajrepcénél és napraforgónál a hibrid magok előállítása során keresztbe beporzás történjen.
Az egyik típusú hímsterilitás a magban kódolt és a feltételezések szerint recesszív allelomorf génként öröklődik. Növénynemesítési célból egy recesszív hímsteril szülőnövényt úgy őriznek meg, hogy heterozigóta hím fertilis növénnyel keresztezik, amely szintén tartalmazza a recesszív hímsterilitás allelomorf gént, és így az utódok 50%-a recesszív hímsteril növény. A másik 50% hím fertilis növény, ezeket eldobják a keresztezési programban, amely csak akkor végezhető eredményesen, ha a recesszív hímsterilitás allelomorf gén egy szelektálható vagy kimutatható markerrel együtt választódik ki. A 4 727219 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás a recesszív hímsterilitás hibrid kukorica előállításában történő alkalmazását ismerteti.
A sterilitás második típusa is magban van kódolva, de domináns allelomorf génként öröklődik. A domináns hímsteril növény előnye a recesszív hímsteril növényhez képest, hogy a domináns hímsteril növény hím fertilis növénnyel keresztezve fenntartható, amikor is 50%-ban domináns hímsteril utódok képződnek. A domináns, magban hímsteril növény alkalmazhatósága azonban korlátozott, mivel a domináns hímsteril allelomorf gén a legtöbb esetben (azonos genetikai szakaszon belül) nem kapcsolódik szorosan valamely szelektálható vagy kimutatható markerhez.
A hímsterilitás harmadik típusa citoplazmatikusan van kódolva. A legtöbb esetben a citoplazmakód a növény mitokondriális genomjában található, és csak néhány esetben van a kloroplaszt genomon belül. A citoplazmatikusan kódolt hímsterilitás öröklődése nem követi a Mendel-szabályokat, hanem citoplazmafaktoroktól függ. A citoplazmatikusan hímsteril növény és hím fertilis növény kereszteződéséből kapott utódok valamennyien hordozzák a citoplazmatikus hímsteril gént, és ezért sterilek. Ennek következtében az ilyen típusú növények utódai csak akkor rendelkeznek kereskedelmi értékkel, ha az utódok termékét nem vetőmagként, hanem növényként, így dísznövényként vagy cukorrépaként kívánják hasznosítani.
A hímsterilitás negyedik típusa a nukleárisan kódolt hímsterilitás és a citoplazmatikusan kódolt hímsterilitás kombinációja. A hímsterilitást kiváltó sejtmagban előforduló allelomorf gének általában recesszívek, és csak azok a fenotípusosan hímsteril növények, amelyek tartalmazzák a hímsterilitás citoplazma allelomorf génjét, és amelyek a sejtmagbeli allelomorf gén által kiváltott hímsterilitásra homozigóták. Az ilyen növényekben a megfelelő domináns hímsterilitást kiváltó allelomorf gének vagy „termőképesség-helyreállítók” hím fertilis fenotípust eredményeznek. Ennek következtében az ilyen típusú növények hímsteril utódai hím fertilissé alakíthatók, ha a hímsteril növényeket a termőképesség helyreállítóit tartalmazó pollennel porozzuk be. Az ilyen típusú növények utódainak tehát akkor van kereskedelmi jelentősége, ha a termék maga a mag, vagyis kukorica, cirok és napraforgó esetében.
Hibrid magok termelése során általában úgy járnak el, hogy citoplazmatikusan hímsteril növényeket és hím fertilis növényeket ültetnek el és valamilyen úton (például megkülönböztető markerrel) megakadályozzák, hogy a keletkező hibrid magok nem hibrid magokkal keveredjenek. A 3 842538 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint a hibrid magokat színük alapján választják el a nem hibrid magoktól, ami meglehetősen hosszadalmas eljárás. A 4351 130 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint a hibrid magoknak nem hibrid magoktól történő elválasztását kiküszöbölik, mivel rövid hímsteril növényeket és magas hím fertilis növényeket alkalmaznak, majd beporzás után a magas hím fertilis növényeket elpusztítják. A 4 658 085, 4517763 és a 4658084 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint citoplazmatikusan hímsteril növényeket állítanak elő, amelyek herbicidekkel szemben rezisztensek, majd a hím fertilis növényeket beporzás után a herbiciddel elpusztítják. A 4 305 225 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint a hímsteril rizsnövényeket növekedési hormonnal (például giberelinnel) permetezik be, és így biztosítják a virágot hordozó füzérvirágzatnak a rizslevél hüvelyéből történő teljes kinövését, ami növeli a virágoknak hím fertilis növényekről származó virágport fogadó képességét.
Hibrid magok hímsteril növényekből történő ismert előállításainál olyan egyszerű és olcsó módszert kerestek, amely: 1. magas hibridmag-termelékenységet biztosít minden hímsteril növényre, 2. olyan hibridmagpopulációt eredményez, amely szinte kizárólag hím fertilis növények virágporából és hímsteril növények csírasejtjéből származik, és hím fertilis növényekből származó, nem hibrid magoktól lényegében mentes, 3. könnyen felhasználható mind hímsteril, mind hím fertilis növények előállításához, és 4. teljes egészében biztosítják a hím fertilis növényeknek a hímsteril növények beporzása után történő eltávolítását vagy elpusztítását, vagy a hím fertilis növények által előállított, nem hibrid magok elválasztását a hímsteril növények által termelt hibrid magoktól.
A találmány szerinti növényi sejtben a sejtmaggenomját olyan idegen DNS-szekvenciával, előnyösen idegen kimer DNS-szekvenciával transzformáljuk, amely:
a) olyan hímsteril DNS-t tartalmaz, amely egy első RNS-t, fehéijét vagy polipeptidet kódol, amely a növény porzószálsejtjében termelődve jelentős mértékben megzavaqa a porzószálsejt metabolizmusát, fünkcióját és/vagy fejlődését, és
b) a hímsteril DNS mellett olyan első promotert tartalmaz, amely biztosítja a hímsteril DNS-nek szelektíven a növény porzószálsejtjeiben történő direkt kifejezését, és amely első promoter ugyanabban az átírási egységben található, mint az általa szabályozott hímsteril DNS.
HU 217 413 Β
A transzformált sejt sejtmaggenomjában az idegen DNS-szekvencia további komponensként, előnyösen a hímsteril DNS-sel azonos genetikai szakaszon belül
c) egy marker DNS-t tartalmaz, amely egy második RNS-t, fehérjét vagy polipeptidet kódol, amely a növény legalább egy specifikus szövetében vagy sejtjében előfordulva biztosítja a növénynek a második RNS-t, fehérjét vagy polipeptidet nem tartalmazó növényektől történő könnyű elválaszthatóságát, és
d) a marker DNS mellett egy második promotert tartalmaz, amely biztosítja a marker DNS-nek a növény legalább egy specifikus szövetben vagy sejtben lévő közvetlen kifejezését, és amely második promoter ugyanabban az átírási egységben található, mint az általa szabályozott marker DNS.
A találmány szerinti idegen kimer DNS-szekvencia egy hímsteril DNS-t és egy első promotert, valamint adott esetben egy marker DNS-t és egy második promotert, valamint adott esetben legalább egy további DNS-t tartalmaz, amely utóbbi egy tranzitpeptidet kódol, amely biztosítja az első fehérjének vagy polipeptidnek vagy a második fehéijének vagy polipeptidnek annak a növényi sejtnek a kloroplasztjába vagy mitokondriumába történő szállítását, amelynek citoplazmájában az idegen kimér DNS-szekvencia kifejeződött.
A találmány értelmében a hímsteril növényt egyetlen növényi sejtből állítjuk elő, ahol a növényi sejt sejtmaggenomjába önmagában ismert módon végzett transzformálással a találmány szerinti idegen DNSszekvenciát építjük be. Az idegen DNS-szekvencia legalább egy hímsteril DNS-t tartalmaz, amelyhez 5’végén a szabályozására szolgáló első promoter és 3’végén megfelelő átírásszabályozó szignál (többek között egy poliadenilezőszignál) kapcsolódik. Ezáltal egy első RNS, fehéije vagy polipeptid termelődik szelektíven a növény porzószálsejtjeiben, amelyek a növényben hímsterilitást váltanak ki. Az idegen DNSszekvencia további komponensként legalább egy marker DNS-t tartalmaz, amely 5’-végén a szabályozására szolgáló második promotorhez és 3’-végén megfelelő átírásszabályozó szignálhoz (többek között poliadenilezőszignálhoz) kapcsolódik. A marker DNS előnyösen ugyanazon a genetikai szakaszon belül helyezkedik el, mint a himsteril DNS, és ezáltal a második RNS, fehérje vagy polipeptid a növény legalább egy specifikus szövetében vagy sejtjében termelődik, és így biztosítja a növénynek a második RNS-t, fehérjét vagy polipeptidet nem tartalmazó növényektől történő könnyű megkülönböztetését és/vagy elválasztását. Ez a megoldás nagy biztonsággal garantálja, hogy mind a hímsteril DNS, mind a marker DNS megjelenjen az utódnövényekben.
A növényi sejtet (előnyösen agrobaktériummal fertőzhető növény sejtjét) a találmány értelmében előnyösen vektorként az idegen DNS-szekvenciát tartalmazó és agrobaktériumban előforduló úgynevezett lefegyverzett Ti-plazmiddal transzformáljuk, vagyis olyan plazmiddal, amelyben egy vagy több rákot okozó gént kiiktattunk vagy inaktiváltunk. A transzformáció elvégezhető például a 116718 vagy a 270822 számú európai szabadalmi leírásban ismertetett módon. Az alkalmazott Ti-plazmid-vektor az idegen DNS-szekvenciát előnyösen a Ti-plazmidhoz tartozó T-DNS határszekvenciái között vagy legalább egy jobb határszekvenciától balra elhelyezkedve tartalmazza. Természetesen a növényi sejt transzformációjához más típusú vektorok is alkalmazhatók a közvetlen géntranszfereljárással (például 223 247 számú európai szabadalmi leírás), a pollennel közvetített transzformációval (például 270356 számú európai szabadalmi leírás, WO 85/01856 számon közrebocsátott nemzetközi szabadalmi bejelentés, 275 069 számú európai szabadalmi leírás), in vitro protoplaszt transzformációval (például 4684611 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), növényi RNS-vírussal közvetített transzformációval (például 067553 számú európai szabadalmi leírás és 4 407 956 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) és liposzómával közvetített transzformációval (például 4 536475 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás).
A találmány szerinti, magban hímsteril növény előállításához a növényi sejtet előnyösen olyan legyengített Ti-plazmid-vektorral transzformáljuk, amelyben az idegen DNS-szekvencia mind az első promoter által szabályozott hímsteril DNS-t, mind a második promoter által szabályozott marker DNS-t tartalmazza. A marker DNS a Ti-plazmid-vektoron belül elhelyezkedhet a hímsteril DNS alatt vagy felett, ahol a két DNS előnyösen egymás mellett a Ti-plazmid-vektor határszekvenciái között vagy legalább a jobb határszekvenciától balra helyezkedik el úgy, hogy a növényi sejt sejtmaggenomjába együttesen és teljes egészében átvihetők legyenek. Kívánt esetben eljárhatunk azonban úgy is, hogy a sejtet először hímsteril DNS-t és első promotert tartalmazó idegen DNS-szekvenciával, majd ezt követően a marker DNS-sel és a második promoterrel transzformáljuk, ahol a marker DNS és a második promoter a sejtmaggenomon belül ugyanabba a genetikai szakaszba épül be, mint a hímsteril DNS. Ebből a célból alkalmazhatók az idegen DNS-szekvenciával végzett transzformációhoz ismertetett vektorok, előnyösen a legyengített Ti-plazmid-vektor.
A hímsteril DNS kiválasztása nem kritikus. A megfelelő hímsteril DNS önmagában ismert módon kiválasztható és izolálható úgy, hogy kódolja azt az első RNS-t, fehérjét vagy polipeptidet, amely jelentős mértékben megzavarja azoknak a porzószálsejteknek a szokásos metabolizmusát, funkcióját és/vagy fejlődését, amelyekben a hímsteril DNS kifejeződik, és így előnyösen a porzószálsejtek elpusztulásához vezetnek. A hímsteril DNS-ekre előnyös példaként említhetők azok, amelyek kódolják az RN-ázokat, így az RN-áz Tl-et (amely a guanidincsoport utáni kötés hidrolizálásával elbontja az RNS-molekulákat) és a bamázt, valamint a DN-ázokat, így az endonukleázt (például EcoRI), valamint a proteázokat, így a papaint (például a papain-zimogén és a papain aktív fehérjét).
Hímsteril DNS-ként alkalmazhatók továbbá azok, amelyek fitohormonok szintézisét katalizáló enzimeket
HU 217 413 Β kódolnak, ilyen például az izopentenil-transzferáz, amely a citokininbioszintézis első lépését katalizáló enzim és az agrobaktérium T-DNS négyes génje kódolja, valamint az auxin szintézisében részt vevő enzimek, amelyeket az agrobaktérium T-DNS egyes és kettes génjei kódolnak. A hímsteril DNS-ekre további példaként említhetők azok, amelyek glükanázokat, lipázokat, így foszfolipáz A2-t (Verheij és munkatársai: Rév. Biochem. Pharmacol., 91, 92-203, 1981., lipid-peroxidázokat vagy növényisejtfal-inhibitorokat kódolnak. A hímsteril DNS-ekre további példaként említhetők azok, amelyek a növényi sejtre toxikus fehéijéket, így bakteriális toxint (például diftériatoxin B-fragmenst vagy botulint) kódolnak.
A hímsteril DNS-ekre további példaként említhető az olyan antiszenz DNS, amely a növényi porzószálsejtekben egy endogén promoter által szabályozva természetesen átíródó DNS-szállal komplementer DNS-szálat kódol (például 223 399 számú európai szabadalmi leírás). Az ilyen antiszenz DNS a porzószálsejt által természetesen termelt RNS kódoló- és/vagy nem kódoló szakaszához nem kapcsolódó RNS szekvenciába írható be, ami gátolja a természetesen termelődő RNS transzlációját. Az ilyen antiszenz DNS-ekre példaként említhető a TA29 gén antiszenz DNS-e (lásd a 2. példát), amely a TA29 promoter szabályozása alatt a növényi portok tapétumsejtjeiben természetesen kifejeződik.
Az alkalmazható hímsteril DNS-ekre további példaként említhetők azok, amelyek specifikus RNS-enzimet (vagyis úgynevezett ribozimot) kódolnak, amelyek specifikusan hasítanak egy adott mintaszekvenciát (Haseloff és Gerlach: Natúré, 334, 585-591, 1988). Ilyen ribozim például a TA29 gén által kódolt RNS-t hasító ribozim.
Az alkalmazható hímsteril DNS-ekre további példaként említhetők azok, amelyek olyan anyagokat kódolnak, amelyek a porzószálsejteket adott betegségekkel szemben érzékennyé teszik, ilyen például a gombás fertőzés. Az ilyen típusú hímsteril DNS olyan növényeknél alkalmazható, amelyekben azok a sejtek, amelyekben a hímsteril DNS nem fejeződik ki, az adott betegségre rezisztensek.
A találmány szerinti idegen DNS-szekvenciával kapcsolatban az idegen kifejezés azt jelenti, hogy az adott szekvencia egy idegen hímsteril DNS-t és/vagy egy idegen első promotert tartalmaz. A DNS-sel, így hímsteril DNS-sel, első promoterrel, marker DNS-sel, második promoterrel és bármely más DNS-sel kapcsolatban alkalmazott idegen kifejezés azt jelenti, hogy az adott DNS a találmány szerint transzformált növényi sejtben nem tartozik ugyanahhoz a genomkömyezethez, mint az adott DNS eredetéül szolgáló növényi, baktérium-, állati-, gomba- vagy vírussejtben természetesen előforduló DNS. Ez azt jelenti például, hogy az idegen hím steril DNS vagy marker DNS 1. az eredeti növény sejtmagjának DNS-e, 2. a transzformált növényi sejtre (vagyis a transzformált növénnyel azonos genotípusba tartozó növényre) nézve endogén, és 3. a transzformált növényi sejtben található találmány szerinti idegen DNS-szekvencián belül ugyanabban az átírási egységben helyezkedik el, mint a saját endogén promotere és a 3’-véghez tartozó átírásszabályozó szignál, de 4. a transzformált növényi sejt sejtmaggenomjába más helyen épül be, mint az eredeti növényben, és így a transzformált növényi sejtben más gének veszik körül, mint az eredeti növényben. Az idegen hímsteril vagy marker DNS lehet továbbá például 1. az eredeti növény sejtmagjához tartozó DNS, vagy 2. a transzformáit növényi sejtre nézve endogén, de 3. a transzformáit növényi sejthez tartozó találmány szerinti idegen kimer DNS-szekvencián belül ugyanabban az átírási egységben helyezkedik el, mint egy különböző, vagyis nem saját, endogén promoter és/vagy 3’-végű átírási szabályozószignál. Az idegen hímsteril vagy marker DNS lehet továbbá például 1. az eredeti növényhez tartozó sejtmag DNS és 2. a transzformált növényi sejtre nézve endogén, de 3. a transzformált növényi sejthez tartozó idegen kimer DNS-szekvencián belül ugyanabban az átírási egységben helyezkedik el, mint a heterológ promoter és/vagy 3 ’-végű átírási szabályozószignál. Az idegen hímsteril vagy marker DNS lehet például heterológ a transzformált növényi sejtre nézve, és elhelyezkedhet a transzformált növényi sejthez tartozó találmány szerinti idegen kimer DNS-szekvencián belül ugyanabban az átírási egységben, mint az endogén promoter és/vagy 3’-végű átírási szabályozószignál (például a transzformált növénnyel azonos genotípusba tartozó növény sejtmaggenomjából származó szignál). Az idegen hímsteril DNS származhat például a transzformáit növénnyel azonos genotípusba tartozó növény sejtmaggenomjából és olyan katalitikus enzimet, így proteázt vagy ribonukleázt kódolhat, amely a transzformáit növény porzószálsejtjeire nézve endogén, és így az enzim a transzformált porzószálsejtekben termelődve lényegesen megzavarja azok metabolizmusát, funkcióját és/vagy fejlődését. Előnyösen mind a hímsteril DNS, mind a marker DNS heterológ a transzformált növényi sejtre nézve.
A DNS-sel, így hímsteril DNS-sel, első promoterrel, marker DNS-sel, második promoterrel vagy bármely más DNS-sel kapcsolatban alkalmazott heterológ kifejezés azt jelenti, hogy az adott DNS a transzformált sejttel azonos genotípusba tartozó növény sejtmaggenomjában természetesen nem fordul elő. A heterológ DNS-re példaként említhető a transzformált növénnyel azonos genotípusba tartozó növényből nyert kloroplaszt és mitokondrium DNS, továbbá a transzformált növénytől eltérő genotípusba tartozó növényből származó kloroplaszt, mitokondrium és sejtmag DNS, állati vagy baktériumsejt magjából származó DNS és gomba vagy vírus genomjához tartozó kromoszomális vagy plazmid DNS.
A találmány szerinti idegen DNS-szekvenciával kapcsolatban alkalmazott kimer kifejezés azt jelenti, hogy a hímsteril DNS-ek közül legalább egy 1. a természetből adódóan nem esik az egyik hímsteril DNS-hez tartozó első promoter szabályozása alá és/vagy 2. a természetből adódóan a marker DNS-ek közül legalább egyiktől eltérő genetikai szakaszban található. A találmány szerinti idegen kimer DNS-szekvenciákra példaként említhető a növényi eredetű első promoter szabá5
HU 217 413 Β lyozása alá eső, bakteriális eredetű hímsteril DNS, és növényi eredetű első promoter szabályozása alá eső növényi eredetű hímsteril DNS, amely a bakteriális eredetű marker DNS-sel azonos genetikai szakaszon belül helyezkedik el.
Mivel a hímsteril DNS szelektíven a növény porzószálsejtjeiben fejeződik ki, előnyös, ha az első promoter, amely az idegen DNS-szekvenciában a hímsteril DNS-t szabályozza, olyan promoter, amely képes a növény porzószálsejtjeiben szelektíven történő közvetlen génkifejezésre. (Poizószál alatt a növénynek azt a szervét értjük, amely a hím csírasejtet termeli, és magában foglalja a portokot és a szálat.) Az ilyen porzószál-specifikus promoter lehet endogén vagy exogén promoter, és származhat a növényi sejt sejtmaggenomjából, mitokondriális genomjából vagy kloroplasztgenomjából. Minden esetben, az első promoter idegen a transzformált növényi sejt sejtmaggenomjára nézve. Előnyös, ha az első promoter a hímsteril DNS-t csak a portokban, pollenben vagy szálsejtekben, elsősorban a tapétum vagy portok epidermális sejtekben fejezi ki. Az első promoter önmagában ismert módon választható ki és izolálható abból a növényfajból, amelyet hímsterillé kívánunk alakítani, és az első promoter úgy szabályozza a hímsteril DNS porzószálsejteken belüli szelektív kifejeződését, hogy az elpusztítsa a porzószálat és megszüntesse a növény fertilis hím csírasejteket termelő képességét. Az első promotert előnyösen úgy választjuk ki és izoláljuk, hogy hatásosan akadályozza meg a hímsteril DNS-nek olyan növényi részekben történő kifejeződését, amelyek nem vesznek részt a fertilis pollen termelésében, elsősorban a növény női szervezeteiben. Megfelelő endogén, porzószál-specifikus első promoter a hímsterillé alakítandó növényben azonosítható és izolálható például úgy, hogy
1. a növényben csak a porzószál, előnyösen a portok, pollen vagy szál fejlődése során előforduló mRNS-t keresünk,
2. a porzószál-specifikus mRNS-t izoláljuk,
3. a porzószál-specifikus mRNS-ből cDNS-t állítunk elő,
4. a cDNS-t mintaként használva meghatározzuk a növény genomjának azon szakaszait, amelyet a porzószál-specifikus mRNS-t kódoló DNS-t tartalmazzák, majd
5. meghatározzuk a növény genomjának azon szakaszát, amely a porzószál-specifikus mRNS-t kódoló DNS-től számítva felfelé (vagyis 5’-irányban) helyezkedik el, és amely tartalmazza a DNS promoterét.
Az ilyen első promoterekre példaként említhető a TA29 promoter, a TA26 promoter és a TA13 promoter, amelyek dohányból izolált tapétumspecifikus promoterek. Más növényfajtákból is izolálhatunk tapétumspecifikus első promotert, ha a fent ismertetett eljárás 4. lépésében mintaként a TA29, TA26 vagy TA13 gént használjuk. Hibridizálási körülmények között az ilyen minta a másik növényfaj genomjából származó DNS-szekvenciák elegyében a tapétumspecifikus mRNS-t kódoló DNS-sel hibridizál (Maniatis és munkatársai: Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982.). Ezután az 5.
lépésben más tapétumspecifikus első promoter is azonosítható.
Ha a találmány szerinti idegen DNS-szekvenciákban több mint egy hímsteril DNS található, valamennyi hímsteril DNS az egyetlen első promoter szabályozása alá eshet, de előnyösebb, ha minden egyes hímsteril DNS-nek saját külön első promotere van. Több hímsteril DNS jelenléte esetében az általuk kódolt első RNS, polipeptid vagy fehéije lehet azonos vagy különböző. így például, ha a hímsteril DNS egy RN-áz, így RN-áz Tl-et kódol, akkor előnyös, ha a hímsteril DNS és a hozzá tartozó első promoter legalább három, előnyösen négy-hat másolatban fordul elő az idegen DNSszekvenciában. Mindenesetre előnyös, ha valamennyi hím steril DNS és a hozzá tartozó első promoter egymáshoz képest szomszédos helyzetben fordul elő az idegen DNS-szekvenciában és annak növényi sejtbe történő transzformálásához alkalmazott bármely vektorban.
A marker DNS kiválasztása szintén nem kritikus. Megfelelő marker DNS kiválasztható és izolálható önmagában ismert módon úgy, hogy az egy olyan második RNS-t, fehéqét vagy polipeptidet kódoljon, amely lehetővé teszi, hogy a marker DNS-t kifejező növényeket könnyen megkülönböztethessük és elválaszthassuk a második RNS-t, fehéqét vagy polipeptidet ki nem fejező növényektől. A marker DNS által kódolt fehérjékre példaként említhetők azok, amelyek megkülönböztethető színt eredményeznek a növényi sejtben, ilyen például az Al gén, amely dihidroquercetin-4-reduktázt kódol (Meyerés munkatársai: Natúré, 330, 677-678, 1987), a glükoronidázgén (Jefferson és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 8447, 1988), valamint azok, amelyek különleges morfológiajellemzőt kölcsönöznek a növénynek, ilyen például a törpenövés vagy a különleges levélalak. A marker DNS egyéb példái eredményezhetnek stressztűrő képességet, ilyen például a szuperoxid-dizmutáz-gén (88/402222.9 számú európai szabadalmi bejelentés, amely 0 359 617-es számon lett közzétéve) vagy betegségrezisztencia, ilyen például az a gén, amely a Bacillus thuringiensis endotoxint kódolja, és rovarrezisztenciát eredményez (01 193 259-es számú európai közzétételi irat, valamint az a gén, amely baktériumrezisztenciát kiváltó bakteriális pepiidet kódol (0289 828 számú európai közzétételi irat).
Az előnyös marker DNS által kódolt második fehérje vagy polipeptid gátolja vagy semlegesíti a herbicidek hatását, ilyen például az sfr gén, az sfrv gén, amelyek által kódolt enzimek rezisztenciát váltanak ki a glutamin-szintetáz-inhibitorokkal szemben, ilyen például a Biolaphos és a foszfino-tricin (0242 246-os számú európai közzétételi irat), valamint azok a gének, amelyek módosított célenzimeket kódolnak bizonyos herbicidekre nézve, amelyeknek kisebb az affinitása az adott herbicidre, mint a természetesen előállított endogén enzimeknek, ilyen például a módosított glutamin-szintetáz a foszfino-tricinre nézve (240792 számú európai közrebocsátási irat), és a módosított 5-enol-piruvil-sikimát-3foszfát-szintáz a glifozátra nézve (218571 számú európai közrebocsátási irat).
A marker DNS-t szabályozó második promoter szintén önmagában ismert módon kiválasztható és izolálható, amikor is a marker DNS vagy szelektíven egy vagy több speciális szövetben vagy sejtben fejeződik ki, vagy az egész növényben a marker DNS által kódolt második RNS, fehérje vagy polipeptid természetétől függően. így például, ha a marker DNS herbicidrezisztenciát kódol, előnyös, ha a marker DNS a növény valamennyi sejtjében kifejeződik, és ehhez erős jellegű második promotert, így 35S promotert (Odell és munkatársai: Natúré, 313, 810-812, 1985), 35S’3 promoter (Hull és Howell: Virology, 86, 482-493, 1987), a Ti-plazmidban található nopalin-szintetáz-gén promoterét (PNOS) (Herrera-Estrella: Natúré, 303, 209-213, 1983) vagy oktopin-szintáz-gén promoterét (POCS) (De Greve és munkatársai: J. Mól. Appl. Génét. 1 (6), 499-511, 1982) alkalmazzuk. Ha a marker DNS által kódolt fehérje betegségrezisztenciát vált ki, akkor előnyös lehet, ha a marker DNS szelektíven a beteg szövetben fejeződik ki, amikor is például TR promotert, így Ti-plazmidbeli TR1 ’ vagy TR2’ promotert (Velten és munkatársai : EMBO J. 3, 2723-2730, 1984) alkalmazunk. Ha a marker DNS herbicid rezisztenciát kódol, akkor előnyös lehet, ha a marker DNS szelektíven a zöld szövetekben fejeződik ki, amikor is például a Rubisco kis alegységét kódoló génnek megfelelő promotert (0242246-os számú európai közzétételi irat) alkalmazunk. Ha a marker DNS pigmentet kódol, akkor előnyös lehet, ha a marker DNS speciális sejtekben, a virágszirom, a levél vagy a mag sejtjeiben, előnyösen a magbevonat külső rétegében fejeződik ki.
A hímsterilitást és a nem transzformált növénytől történő könnyű megkülönböztethetőséget biztosító szövetspecifikus második promoter önmagában ismert módon azonosítható és izolálható:
1. olyan mRNS-t keresünk, amely a növényben csak megfelelő szövetek, így virágszirom, levél vagy mag fejlődése során van jelen,
2. a szövetspecifikus mRNS-t izoláljuk,
3. a szövetspecifikus mRNS alapján cDNS-t állítunk elő,
4. a cDNS-t mintaként alkalmazva meghatározzuk a növény genomjának azon szakaszát, amely tartalmazza a szövetspecifíkus mRNS-t kódoló DNS-t, majd
5. azonosítjuk a növény genomjának azon szakaszát, amely a szövetspecifikus mRNS-t kódoló DNS felett helyezkedik el, és tartalmazza az adott DNS-hez tartozó promotert.
Ha a találmány szerinti idegen DNS-szekvenciában több mint egy marker DNS fordul elő, akkor valamennyit szabályozhatja ugyanaz a második promoter, de előnyösebb, ha minden marker DNS-hez saját külön második promoter tartozik. Még előnyösebb, ha minden marker DNS-hez saját külön második promoter tartozik, és különböző második RNS-t, fehérjét vagy polipeptidet kódolnak, és így a transzformált növényben egymástól eltérő, megkülönböztethető jellemzőt váltanak ki. Mindenesetre előnyös, ha az egy vagy több marker DNS és a hozzá tartozó egy vagy több második promoter egymáshoz képest és az egy vagy több hímsteril DNS-hez képest szomszédosán helyezkedik el a találmány szerinti idegen DNS-szekvenciában és annak a növényi sejtbe történő transzformálásához alkalmazott bármely vektorban.
Általában előnyös, ha a hímsteril DNS által kódolt első RNS, fehérje vagy polipeptid hatását a citoplazmában vagy a sejtmagban kifejtve bekapcsolódik a porzószálsejt metabolizmusába, funkciójába és/vagy fejlődésébe. Ha szükség van arra, hogy az első fehéije vagy polipeptid és/vagy a második fehéije vagy polipeptid a citoplazmából a transzformált növény sejtjeinek kloroplasztjába vagy mitokondriumába kerüljön, akkor az idegen DNS-szekvencia további idegen DNS-t tartalmazhat, amely egy tranzitpeptidet kódol. A további idegen DNS a hímsteril DNS és az első promoter között helyezkedik el, ha az első fehérjét vagy polipeptidet kell elszállítani, és a marker DNS és a második promoter között helyezkedik el, ha a második fehérjét vagy polipeptidet kell elszállítani. A tranzitpeptid kifejezés olyan polipeptidfragmenst jelöl, amely normálisan egy kloroplaszt, vagy mitokondriális fehéréhez vagy fehérjealegységhez kapcsolódik, és a fehéijében a sejtmag DNS-e által kódolva prekurzorfehéijeként termelődik. A tranzitpeptid felelős a sejtmag által kódolt kloroplaszt- vagy mitokondriális fehéijének vagy alegységnek a kloroplasztba vagy a mitokondriumba történő szállításáért és a folyamat során a tranzitpeptid elkülönül vagy proteolitikusan eltávozik a kloroplaszt- vagy mitokondriális fehérjétől vagy alegységtől. A találmány szerinti idegen DNS-szekvenciában egy vagy több további idegen DNS fordulhat elő, attól függően, hogy egy vagy több első vagy második fehérjét vagy polipeptidet kell elszállítani (0189 707-es számú európai közzétételi irat, és a 0319353-as számú közzétett) 88/402222.9 számú európai szabadalmi bejelentések, valamint Van den Broeck és munkatársai: Natúré 313, 358-363, 1985, Schatz: Eur. J. of Bioch. 165, 1-6, 1987, Boutry és munkatársai: Natúré, 328, 340-342, 1987). A kloroplasztba történő szállításra alkalmas tranzitpeptidre példaként említhető az RUBP karboxilázenzim kis alegységének tranzitpeptide (0189 707-es számú európai közzétételi irat) és a mitokondriumba szállító tranzitpeptidre példaként említhető az Mn-szuperoxid-dizmutáz-enzim tranzitpeptide (lásd a 16. példát).
A találmány szerinti idegen DNS-szekvenciában 3 átírásszabályozó szignál választható ki azok között, amelyek biztosítják az mRNS növényi sejtben történő korrekt átírását, terminálását és poliadenilezését. Az átírásszabályozó szignál lehet természetes eredetű, és származhat az átírandó génből, de lehet idegen vagy heterológ is. A heterológ átírásszabályozó szignálra példaként említhető az oktopin-szintáz-gén (Gielen és munkatársai: EMBO J., 3, 835-845,1984) és a T-DNS gén 7 (Velten és Schell: Nucleic Acids Research, 13, 6981-6998, 1985) átírásszabályozó szignálja.
Azok a növényi sejttenyészetek, így portoksejttenyészetek, amelyek olyan találmány szerinti, idegen DNS-szekvenciát tartalmaznak, amelyben az első promoter hímsteril DNS-szekvencia kifejezését a pollen fejlődésének adott szakaszában, előnyösen a miózis
HU 217 413 Β után biztosítja, felhasználhatók homozigóta domináns hímsteril növények előállítására (E. B. Swanson, Μ. P. Coumans, S. C. Wu, T. L. Barby és W. D. Beversdorf: Plánt Cell Reports, 6, 94-97,1987).
A hibrid növények előállítására alkalmas hibrid magok találmány szerinti előállítása során kétféle módon járhatunk el. Az egyik eljárásnál egy magban hímsteril növényt, amely legalább egy marker DNS-t tartalmaz, hím fertilis növénnyel keresztezünk, amely utóbbi marker DNS-t nem tartalmaz. Mind a hímsteril növényt, mind a hím fertilis növényt egymáshoz közel, külön sorokba ültetjük. A másik eljárás során egy magban hímsteril növényt, amely legalább két különböző marker DNS-t tartalmaz, olyan hím fertilis növénnyel keresztezünk, amely a két különböző marker DNS közül homozigóta formában csak egyet tartalmaz. Mind a hímsteril növényt, mind a hím fertilis növényt lényegében véletlenszerű populációban termesztjük, és így növeljük a keresztbe beporzás esélyét anélkül, hogy az ültetéshez pontos mintát alkalmaznánk. A hím fertilis növényt ezután a populációból könnyen eltávolíthatjuk, amikor is a nem szokásos marker DNS által kódolt megkülönböztető jelet alkalmazzuk, amely a hím fertilis növényben nincs jelen. Az eljárás során előnyösen olyan hím steril növényt alkalmazunk, amelyben a nem közönséges marker DNS-t egy alkotó jellegű promoter szabályozza, és a marker DNS olyan fehérjét vagy polipeptidet kódol, amely a hímsteril növényben különböző herbicidekkel szemben rezisztenciát vált ki. A hím fertilis növényt a keresztbe beporzás után a szokásos herbicidekkel elpusztítjuk.
A találmány szerinti növények, amelyekbe transzformáció segítségével stabilan egy hímsteril DNS-t vagy egy hímsteril DNS-t és egy herbicid rezisztenciát kódoló marker DNS-t építünk be, amely generációkon át domináns allelomorf gén formájában öröklődik, a jelenleg ismert citoplazmatikusan hímsteril növényekkel szemben a növénynemesítés és hibrid kultúrnövények előállítása szempontjából egy sor előnnyel rendelkezik:
1. Keresztbe beporzásos növényeknél a nemesítési stratégia jelentős mértékben leegyszerűsödik, mivel a kereskedelmileg forgalmazható hibrid magok előállításához a hím fertilis növénybe nem kell helyreállító gént bevinni. Egy heterozigóta magban hímsteril szülő vonal egy másik hím fertilis szülővonallal keresztezve 50% hímsteril hibrid utódot és 50% hím fertilis hibrid utódot eredményez, amelynek következtében a kultúrnövény elegendő pollent termel ahhoz, hogy megfelelő kitermeléssel kapjunk magokat. Az ilyen kultúrnövényekre példaként említhető a kukorica és az olajrepce.
2. A termesztési stratégia azoknál a növényeknél is leegyszerűsödik, amelyeknél nem a mag képezi a kereskedelmi terméket, itt sincs szükség helyreállító génnek a hím fertilis szülővonalba történő bevezetésére. Ezeknél a kultúrnövényeknél nincs jelentősége annak, hogy a kereskedelmileg forgalmazott hibrid magok 50%-a hímsteril. Az ilyen növényekre példaként említhető a cukorrépa és a lucerna.
3. A találmány lehetővé teszi, hogy a meglévő beltenyésztett vonalakból egy művelettel magban hímsteril vonalakat és fenntartó vonalakat állítsunk elő visszakeresztezés nélkül. Ez legalább 6-8 generációval csökkenti a tenyésztés kezdete és a kereskedelmi forgalmazás közötti időt. Hímsteril DNS-t tartalmazó és kifejező szülőnövényből kiindulva a hibrid növények előállításának stratégiája lehet például:
1. beltenyésztett vonalak keresztezésével teszthibrideket állítunk elő és vizsgáljuk a kombinációs készséget és a szelektált jellemzőket (2 év),
2. a szelektált magban hímsteril hibridekből a találmány szerinti eljárással egy szülővonalat állítunk elő (1 év),
3. a kapott magban hímsteril szülőnövényt (továbbiakban AS) és annak fenntartó vonalát (továbbiakban A), valamint a beporzó hím fertilis szülőnövényt (továbbiakban B) elszaporítjuk (3 év), és ugyanebben a periódusban elvégezzük a kiválasztott hibrid hivatalos kísérleti termesztését (3 év),
4. a megfelelő hibrid magokat előállítjuk és kereskedelmi forgalomba hozzuk (1 év).
4. Ha a magban a hímsterilitást herbicidrezisztenciát kódoló marker DNS-sel kombináljuk, akkor tetszőleges kombinációkban kettő-, három- és négyutas hibrideket állíthatunk elő. Tapasztalataink szerint elegendő, ha a hímsteril DNS-t és vele szomszédosán a marker DNS-t bevezetjük egy olyan növény sejtmaggenomjába, amelyet kettő- vagy háromutas hibridek előállításánál az egyik nagyszülő beltenyésztett vonalként alkalmazunk, és két olyan növény sejtmaggenomjába, amelyeket négyutas hibridek előállításánál két nagyszülővonalként alkalmazunk. Valamennyi beltenyésztett vonal fenntartható például az alábbi két keresztezéssel, ahol SH a hímsterilitás (S) és a herbicidrezisztencia (H) domináns allelomorf génje és sh a hímsterilitás (s) és a herbicid érzékenység (h) recesszív allelomorf génje:
a) SH/sh x sh/sh, amely 50% SH és 50% sh utódot eredményez és a H által rezisztenciát biztosító herbiciddel bepermetezve 100% steril magot eredményez,
b) sh/sh x sh/sh 100%-ban fertilis utódot eredményez.
5. A tenyésztő számára biztosítja a hímsteril rendszerbe bevitt marker DNS védelmét, mivel a konkurens csak nagy nehézséggel tudja a marker DNS-t saját beltenyésztett vonalába bevezetni.
A találmány szerinti eljárás bemutatására két kultúrnövény vonatkozásában az alábbi termesztési vázlatot adjuk meg:
1. számú vázlat: Egymás mellett hímsteril DNS-t és herbicidrezisztenciát kódoló marker DNS-t tartalmazó növény termesztése
A) Az AS hímsteril vonal fenntartása:
ASH/sh vonal χ Ash/sh vonal, amelynek eredménye
50% ASH/sh (fenotípus: hímsteril herbicidrezisztens)
50% Ash,'sh (fenotípus: hím fertilis herbicidérzékeny) 1B) Hibrid mag előállítása:
a) Bsh/sh magok (hím növény) elültetése és a kapott magok IA) szerinti keresztezése, ahol az ASH/sh és Ash/sl1 (női növény) növényeket külön sorokba ültetjük.
b) Az Ash/sh genotípust kiiktatjuk úgy, hogy a női sorokat herbiciddel permetezzük.
HU 217 413 Β
c) Keresztbe beporzás: ASH/sh χ Bsh/sh és Bsh/sh x Bsh/sh, amelynek során a női sorokban 50% ABSH/sh-t (fenotípus: hibrid, hímsteril, herbicidrezisztens) és
50% ABsh/sh-t (fenotípus: hibrid, hím fertilis, herbicidérzékeny) kapunk, míg a hím sorokban 100% Bsh/sh-t kapunk.
d) A Bsh/sh genotípust a hím sorokban herbiciddel történő bepermetezéssel vagy mechanikai úton kiiktatjuk.
e) A c) pont alatt keresztbe beporzott női sorok hibrid magjait betakarítjuk, ezek képezik a kereskedelmi forgalomba hozható magot.
2. számú vázlat: Egymás mellett hímsteril DNS-t és két különböző herbicidrezisztenciát kódoló marker DNS-t (Hl és H2. tartalmazó növény termesztése 2A) Az As hímsteril vonal fenntartása:
As: ASH1 H2/sh ih2 χ y\sh ih2/sh i h2, amelynek eredménye 50% ASHIH2/shlh2 (fenotípus: hímsteril, kettős herbicidrezisztens) és
50% Ashlh2/shlh2 (fenotípus: hím fertilis, mindkét herbicidre érzékeny)
2B) A B vonal fenntartó beporzása:
BshiH2/shiH2xBshiH2/shiH2, amelynek eredménye 100% BshIH2/shlH2 (fenotípus: hím fertilis, 1 herbicidre érzékeny és 2 herbicidre rezisztens)
2C) Hibrid magok előállítása:
a) Véletlenszerűen elültetjük a 2A) és 2B) pont szerint kapott magokat.
b) Az Ashlh2Zshlh2 genotípust 2 herbiciddel bepermetezve kiiktatjuk.
c) Keresztbe beporzást hajtunk végre: ASHiH2/shih2xBshih2/shiH2, amelynek eredménye 50% ABSHIH2/shlH2 és 50% ABshlh2/shlH2 valamint önbeporzást hajtunk végre: BshiH2/shiH2xBshiH2/shiH2, amelynek eredménye 100% Bsh'H2/shlH2.
d) A B szülővonalból önbeporzással kapott BshiH2/shiH2 genotípust 1 herbiciddel bepermetezve kiiktatjuk.
e) A c) pont szerinti keresztbe beporzással kapott ASHiH2/shiH2 növények hibrid magjait betakarítjuk.
A leíráshoz a következő ábrákat csatoljuk:
1. ábra az 1. példa szerinti pTA29S3-ban lévő TA29 cDNS és ennek Clal ffagmensének hasítási térképe.
2. ábra a 2. példa szerinti TA29 gén PstI ffagmensének cDNS-szekvenciája.
3A. ábra a TA29 gén DNS-szekvenciája és aminosavszekvenciája a Clal helytől a HindlII helyig. A szekvenciák felett megjelöltük a fontos hasítási helyeket, míg a szekvenciák alatt megadtuk a kódolt aminosavszekvenciát.
További jelölések:
- 1446-1452 nukleotid (nt) között: TATA box (csillagok)
- 1477 nt-nél: a TA29 mRNS átírási iniciálóhelye (csillag),
- 1514-1537 nt között: a 2. példa szerinti szintetikus oligomer 3-5. szekvenciája,
- 1940-2296 nt között (nyilak): a TA29 cDNS kiegyenesített szekvenciája.
A 3B. ábra a TA13 cDNS (felső vonal) és a TA29 cDNS (alsó vonal) felsorolása (lásd a 4. példát). A homológ nukleotidokat vízszintes vonal jelzi.
A 3C. ábra a TA26 cDNS-szekvenciája (lásd a 4. példát), ORF aláhúzva.
A 4A. példa a 3. példa szerinti pMB2 vektor vázlatos előállítása.
A 4B. ábra a 3. példa szerinti pMB3 vektor térképe.
Az 5. ábra az 5. példa szerinti pTTM3 vektor térképe.
A 6. ábra a 7. példa szerinti pTTM4 vektor térképe.
A 7A. ábra a 9. példa szerinti pTTM6 vektor térképe.
A 7B. ábra all. példa szerinti pTTM6A- vektor térképe.
A 8. ábra a 12. példa szerinti pTTM8 vektor térképe.
A 9A. ábra a 14. példa szerinti pTVEPl vektor térképe.
A 9B. ábra a 14. példa szerinti pTVEP2 vektor térképe.
A 10A. ábra a 16. példa szerinti pTVEP63 vektor térképe.
A 10B. ábra a 16. példa szerinti pTVEP62 vektor térképe.
All. ábra normál dohánynövény virágjának és a 9. példa szerinti hímsteril DNS-sel transzformált dohánynövény virágjának fényképe.
A 12. ábra normál dohánynövényportok ferde metszetének és a 9. példa szerinti hímsteril DNS-sel transzformáit dohánynövényportok ferde metszetének fényképe (250-szeres nagyítás).
A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példákkal világítjuk meg anélkül, hogy az oltalmi kör a példákra korlátozódna. A példákban ellenkező értelmű megjelölés hiányában valamennyi műveletet rekombináns DNS-sel Maniatis és munkatársai: Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982 előírásai szerint végeztük. A példákban alkalmazott és alább felsorolt plazmidokat és vektorokat a Deutsche Sammlung túr Mikroorganismen und Zellculturen (DSM) gyűjteményben a Budapesti Szerződés előírásai szerint helyeztük letétbe:
Plazmid vagy vektor DSM-szám Dátum
pMB3 4470 1988. március 21.
pGSC1600 4467 1988. március 21.
pGCC1700 4469 1988. március 21.
pGV2260 2799 1983. december
pGSC1701A 4286 1987. október 22.
pTTM4 4471 1988. március 21.
pMAC5-8 4566 1988. április 25.
pTTM6 4468 1988. március 21.
1. példa
Portokspecifikus gén (TA29 gén) szubklónozása Róbert Goldberg professzor (University of California, Los Angeles, USA) a rendelkezésünkre bocsátott egy Nicotiana tabacum portokspecifikus cDNS-t (TA29 cDNS), amely PstI fragmensként GC farkazással pBR329-be (Covarrubias és Bolivár: Gene 17, 79,1982. van klónozva, valamint a megfelelő genom kiónt („lambda TA29”), amely egy N. tabacum Samsun” genomtárból mintaként TA29 cDNS-t alkalmazva izoláltak és a cH32 lambda fág vektor (Loenen és Blattner: Gene 26, 171, 1983. EcoRI helyére építettek be. A TA29 cDNS 365 bázispár hosszúságú (±0,4 kb). A TA29 cDNS-t az
N. tabacum portokjából származó poli A+ mRNS
O, 24%-át kitevő 1100 nukleotid hosszúságú tapétum specifikus mRNS-sel hibridizáltuk. Mint az 1. ábra mutatja, a lambda TA29 két EcoRI ffagmenst tartalmaz, a teljes beépítés mérete 13,2 kb.
Mint az 1. ábrán látható, a lambda TA29-ből származó és a TA29 gént tartalmazó belső 7,5 kb Clal ffagmenst pLK31-be (Botterman és Zabeau: DNA, 6, 6, 1987) szubklónoztuk, amely a pTA29S3 plazmidot eredményezi. A lambda TA29 EcoRI/Clal/HindlII/HindlII-EcoRI kombinációval és Clal-EcoRI kombinációval emésztett és TA29 cDNS-sel szemben hibridizált nitro-cellulóz-kötésű ffagmensei igazolják a TA29 cDNS-sel homológ szekvencia jelenlétét.
2. példa
A pTA29S3-böl származó TA29 cDNS és homológ szekvenciái nukleotidszekvenciájának meghatározása, a TA29 gén térképezése és annak promotere A pBR329-ben található TA29 cDNS PstI beépített szakaszát teljes egészében szekvenálták (Maxam és Gilbert: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74, 560, 1977). A cDNS-szekvenciát a 2. ábra mutatja. Mint az ábrából látható, a teljes cDNS-szekvenciában egy nyitott leolvasókeret található (az ábrán jelölve).
A pTA29S3-ban található Clal beépített szakasz szekvenciáját meghatároztuk a Clal helytől a HindlII helyig (3261 bázispárhossz). A TA29 cDNS-szekvencia és a pTA29S3 szekvencia összehasonlításából látható, hogy a pTA29S3-ban található egy olyan szakasz, amely teljesen homológ a TA29 cDNS-szekvenciájával.
A pTA29S3-ban található TA29 gén szekvenciáját a 3A. ábra mutatja. A TA29 cDNS-szekvenciájával azonos szakaszt a 3 A. ábrán a nyilak között találjuk. A megfelelő aminosavszekvenciában feltehető nyílt leolvasókeret azonosítható. Ez arra utal, hogy a TA29 gén 321 aminosavból álló fehérjét kódol, és a kódolószakaszban nincsenek intronok. A nyílt leolvasókeret hossza 964 (+vezető) nukleotid, amely egyenlő annak az átírásnak a méretével, amely megtalálható fiatal (12-20 mm hosszú) dohányvirágrügyből izolált portokból előállított dohányportok-mRNS-ben, de nincs jelen a levélből és öreg virágból (a rügy kinyílt és a virágszirmok megjelentek) izolált mRNS-ben. A fenti mRNS mérete mintegy 1100 nukleotid.
Két ATG kód található, az egyik az 1527. nukleotidnál, a másik az 1560. nukleotidnál, amelyek a nyílt leolvasókeret kezdőkódjaként működhetnek, és amelyek 33 nukleotid távolságban helyezkednek el. Egy TATA együttműködés-szekvencia található az 1446. nukleotidnál az első ATG kódtól 5’-irányban 81 nukleotid távolságban (a 3. ábrán csillagokkal jelölve). Annak igazolására, hogy a TATA szakasz a TA29 gén promoterének részét képezi, meghatároztuk a TA29 mRNS 5’végét. Ezt primer meghosszabbítással (McKnight és munkatársai: Cell 25, 385, 1981. végeztük. Ebből a célból egy 24 nukleotidból álló oligomert, amelynek szekvenciája ’ GGA GCT ACC ATT TTA GCT AAT TTC 3 ’ használtunk, mivel az komplementer a TA29 gén 1514-1537 nukleotidja közötti szakaszával.
Ezt az oligonukleotidot 3 2P-vel jelöltük az 5’-végen. Portok-mRNS-sel végzett hibridizálás után az oligonukleotidot reverz transzkriptázzal meghosszabbítottuk. A kapott meghosszabbított oligonukleotidot szekvenálógélen analizáltuk egy szekvenálólétra mellett, és így meghatároztuk a pontos méretet. A fragmens 61 nukleotidból áll. Ez arra utal, hogy a TA29 mRNS átírási kezdete az 1477. nukleotidra esik (a 3. ábrán csillaggal jelölve). A TA29 gén tehát egy TATA szakasszal rendelkezik az átírás kezdeti helyétől számítva felfelé a 31. nukleotidnál. Az mRNS egy 51 nukleotid hosszúságú vezetőszekvenciát tartalmaz az 1477-1527 nukleotid között, egy 964 nukleotidból álló kódolószakaszt tartalmaz az 1527-2491 nukleotid között és egy mintegy 100 nukleotid hosszúságú 3’ nem kódoló szakaszt tartalmaz a 2492-2590 nukleotid között. A jelenleg ismert növényi gének mintegy 92%-ához (Joshin: Nucleic Acids Research, 15(16), 6643,1987) hasonlóan itt is feltehető, hogy az mRNS első AUG kódja biztosítja a transzláció kezdetét. A TA29 promoter tehát a Clal restrikciós hely és az 1477. nukleotid között helyezkedik el.
3. példa
TA29 génből származó promoterszakasz (PTA29) előállítása
A 4. ábrán bemutatott módon olyan kimer DNSszekvenciát állítunk elő, amely 5’ szabályozószakaszt és egy promotert tartalmaz, amely a TA29 génen belül azonos átírási egységbe tartozik az általa szabályozott első heterológ hímsteril DNS-sel. Ebből a célból a pTA29S3ból származó 2,5 kb Clal/AccI ffagmenst a pMAC5-8 (0319353-as számú európai közzétételi irat) polilinker Acél helyére szubklónozzuk. így pMB2 vektort kapunk, amely felhasználható a helyspecifikus mutációhoz szükséges egyszálú DNS előállítására.
Ezután az első ATG kódot körülvevő AAAATGGTA szekvenciát ACCATGGTA szekvenciára módosítjuk úgy, hogy két adeninmaradékot citozinmaradékra cserélünk. Ez a mutáció CCATGG szekvenciát eredményez, ami az Ncol restrikciós enzim felismerőhelye. A pMB2-n belül ezt a helyspecifikus mutációt 24 nukleotidból álló és alábbi szekvenciájú szintetikus oligonukleotid felhasználásával végezzük:
3’ GTT TAA TCG ATG GTA CCA TCG AGG 5’.
A kapott pMB3 plazmidot, amely tartalmazza az újonan előállított Ncol helyet, a 4B. ábra mutatja. Az Ncol helyet körülvevő pontos nukleotidszekvenciát meghatározva megállapíthatjuk, hogy az a TA29 gén 5’-szekvenciájától csak az AA-CC helyettesítéssel különbözik, amely előállította az Ncol helyet. Az 1507 nukleotid hosszúságú Clal-Ncol fragmens a PTA29 jelet kapja.
4. példa
Más porzöszál-specifikus mRNS-ből előállított cDNS-klónok meghatározása
Annak bemutatására, hogy más portokspecifikus mRNS is a TA29 génnel azonos módon alkalmazható cDNS kiónok izolálására, Goldberg professzortól két további N. tabacum portokspecifikus cDNS-t (TA13 cDNS és TA26 cDNS) szereztünk be.
A TA13 cDNS 1100 bp nagyságú klón, amely két darab, mintegy 1100 és 1200 nukleotid hosszúságú mRNS-sel hibridizálódik, amelyek a tapétumsejtekre specifikusak és a portok fejlődésének nagyon korai szakaszában fordulnak elő. A TA13 cDNS-t a 2. példában leírt módon szekvenáltuk és összehasonlítottuk a TA29 cDNS-szekvenciájával. Az összehasonlításból adódik, hogy a TA13 cDNS és a TA29 cDNS 92%-os homológiát mutat, és az ORF nagyon sok glicint tartalmaz.
A TA26 cDNS-t poli-G/C farkazással PstI beépített szakaszként pBR329-be vittük be. Ez egy olyan 519 bp klón, amely egy 580 nukleotidból álló dohány mRNSsel hibridizálódik, amely mRNS specifikus a tapétumsejtekre, és a portok fejlődésének egy bizonyos szakaszában fordul elő. A teljes TA26 cDNS-t a 2. példában megadott módon szekvenáltuk és a TA29 cDNS-szekvenciájával összehasonlítva megállapítottuk, hogy homológiát nem mutat. A TA26 cDNS-szekvenciáját a 3C. ábra mutatja.
5. példa
PTA29-et és egy glükuronidázgént tartalmazó kimer DNS-szekvencia előállítása Az 5. ábra szerinti pTTM3 plazmidot az alábbi közismert DNS-fragmensekből állítottuk össze:
1. pGSC 1600-ből származó és T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektorfragmens,
2. 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amely egy kereten belül béta-glükuronidázt kódoló E. coli gént tartalmazó pMB3 Ncol/EcoRl fragmenssel (Jefferson és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci., 83, 8447,1986, Jefferson és munkatársai: EMBO J., 6, 3901, 1987) és egy oktopin szintáz gén (Dhaese és munkatársai: EMBO J., 2,419,1983) 3’-végű szignáljával van egyesítve,
3. Arabidopsis SSU promotert (PSSU vagy PSSUARA), herbicid rezisztens sfr gént (0242246-os számú európai és egy T-DNS-gén 7 (Velten és Schell: Nucleic Acid Research, 13, 6981, 1985) 3’-végű szignálját tartalmazó kimer szekvencia, és
4. a pGSFR401 EcoRI/SacI ffagmensét tartalmazó kimer szekvencia, amely egy nopalin-szintáz-promotert (PNOS), egy kanamicinrezisztenciát kódoló neo gént és egy oktopin-szintáz-gén (0242246-os számú európai közzétételi irat, ahol a pGSFR401-et pGSR4-nek jelölik) 3’-végű szignálját tartalmazza.
A pTTM3 olyan T-DNS-vektor, amely a T-DNShatárszekvenciák között két kimer szekvenciát tartalmaz: PSSU-sfr, amelyben az sfr a második promoterként PSSU szabályozása alá eső marker DNS (0 242 246os számú európai közzétételi irat), és PTA29-GUS, amelyben a GUS egy riportergén, amelynek a TA29 promoter szabályozása alatt történő kifejeződése növényben és növényi sejtben könnyen lokalizálható és meghatározható.
6. példa
Az 5. példa szerinti kimer DNS-szekvencia dohányba történő bevitele
Rekombináns agrobaktérium-törzset állítunk elő úgy, hogy E. coliból származó pTTM3-at (5. példa), pGV2260-at (De Blaere és munkatársai: Nucleic Acid Research 13, 4777, 1985) tartalmazó agrobaktérium C58C1 Rifö-be viszünk be. A bevitelt a 116718 számú európai közrebocsátási iratban leírt módon végezzük, amelynek során segítőként pRK2013-at (Figurski és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. 76, 1648, 1979) tartalmazó E. coli HBlOl-et alkalmazunk. A kapott agrobaktérium-törzs egy hibrid Ti-plazmidot tartalmaz, amelyben pGV2260 és pTTM3 található.
Ezt a törzset alkalmazzuk ahhoz, hogy a például 0242246-os számú európai közzétételi iratban leírt, standard eljárással dohánylevéllemezeket (N. tabacum Petite Havane SRI. transzformáljunk. A transzformált hegeket és hajtásokat úgy szelektáljuk, hogy a közegbe 5 mg/1 mennyiségben foszfino-tricin-herbicidet adagolunk (De Blockés munkatársai: EMBO J., 6,2513,1987). A transzformáit herbicidrezisztens hegekben és hajtásokban béta-glükuronidáz-enzimaktivitás nem mutatható ki.
A transzformált hajtásokat gyökereztettük, elültettük, és üvegházban virágzásig termesztettük. A virágokat megvizsgáltuk, és csak a porzószál portokjának tapétumsejtjeiben találtunk béta-glükuronidáz-aktivitást. Ez azt mutatja, hogy a TA29 promoter képes a heterológ géneknek, így a béta-glükuronidáz-génnek szelektíven a növény tapétumsejtjeiben történő direkt kifejezésére.
7. példa
PTA29 és gén 4 szekvenciát tartalmazó kimer
DNS előállítása
A 6. ábra szerinti pTTM4 plazmidot állítottunk elő az alábbi közismert DNS-fragmensekből:
1. pGSC 1700-ból származó (Comellisen és Vandewiele: Nucleic Acid Research 17 (1), 19-29, 1989) és T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektorfragmens,
2.5. példa szerinti kimer szekvencia (3 szám), amely a herbicidrezisztens sfr gén és a T-DNS gén 73’-vég kifejezését szabályozó CSSU promotert tartalmaz,
3. 5. példa szerinti kimer szekvencia (4 szám), amely neogén és oktopin szintáz gén 3’-vég kifejezését szabályozó PNOS promotert tartalmaz és
4. 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amely a keretben izopentenil-transzferázt kódoló agrobaktérium T-DNS-gén 4-gyel (Akiyoshi és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci., 76, 5994, 1984, Barry és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. 81, 4776, 1984) van egyesítve, amely tartalmazza a saját 3’-vég átírásszabályozó szignálját.
A pTTM4 egy biner típus T-DNS-vektor, amely a T-DNS-határszekvenciák között az alábbi kimer szekvenciákat tartalmazza: PSSU-sff és PNOS-neo, amelyekben az sír és neo gének a növényre nézve szelektív domináns markert kódoló marker DNS-ek, és amelyeket második promoterként a PSSU és a PNOS szabályoz, valamint PTA29 gén 4, amelyben a gén 4 az első promoterként a PTA29 szabályozása alá eső hímsteril DNS és citokinin túltermelését okozó izopentenil-transzferázenzimet kódol. A tapétumsejtekben a TA29 promoter szabályozása alatt kiváltott fokozott citokinintermelés megzavarja a tapétumsejtek metabolizmusát és organogenezisét.
8. példa
A 7. példa szerinti kimer DNS-szekvencia dohánynövénybe történő bevitele
A 6. példában leírt módon a 7. példa szerinti pTMM4-et viszünk be E. coli törzsből agrobaktérium C58C1 Rifö törzsbe. A kapott agrobaktérium-törzs pGV2260-at és pTTM4-et tartalmazó, biner típusú Ti-plazmidot tartalmaz.
Szintén a 6. példában leírt módon ezt a törzset felhasználhatjuk dohánylevéllemezekbe történő transzformálásra és a transzformált hegeket és hajtásokat 5 mg/1 foszfíno-tricin segítségével szelektáljuk. Gyökereztetjük azokat a transzformált herbicidrezisztens hajtásokat, amelyekben a 4 gén még nem fejeződött ki.
A növényeket elültetjük és üvegházban virágoztatjuk. A virágokat megvizsgáljuk és azt találjuk, hogy a porzószálban a portok tapétumsejtjei nem funkcionálnak. Ez azt igazolja, hogy a TA29 promoter képes a heterológ 4 génnek a tapétumsejtekben történő közvetlen kifejezésére.
9. példa
PTA29 és RN-άζ TI gént tartalmazó kimer DNSszekvencia előállítása
A 7A. ábra szerinti pTTM6 plazmidot állítunk elő az alábbi közismert DNS-fragmensekből:
1. pGSC1600-ból származó és T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektorfragmens,
2. 5. példa szerinti kimer szekvencia (3 szám), amely PSSU promotert, sír herbicidrezisztens gént és T-DNS 7 gén 3’-végét tartalmazza, és
3. 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amelyben egy kereten belül A. orhyzae-ból származó RN-áz Tl-et kódoló szintetikus gén (Quaas és munkatársai: Biophosphates and their Analogues-Synthese, Structure, Metabolism and Activity, Elsevier Science Publisher Β. V., Amsterdam, 1987, Quaas és munkatársai: Eur. J. Biochem. 173, 617-622, 1988) és nopalin-szintáz- (NOS) gén 3’-végi szignáljai (An és munkatársai: EMBO J., 4, (2), 277, 1985) egyesülnek.
A pTTM6 olyan T-DNS-vektor, amely a T-DNShatárszekvenciák között két kimer szekvenciát tartalmaz : PSSU-sff, amely második promoterként PSSU szabályozása alatt működő marker DNS és PTA29-RN-áz TI gén, amely az első promoterként PTA29 szabályozása alá eső hímsteril DNS. A hímsteril DNS TA29 promoter szabályozása alatt tapétumsejtekben történő kifejeződése olyan RN-áz Tl-et termel, amely letális a sejtekre nézve, mivel az RN-áz TI elroncsolja azokat az RNS-molekulákat, amelyek nélkülözhetetlenek a sejtmetabolizmushoz.
10. példa
9. példa szerinti kimer DNS-szekvencia dohányba történő bevitele
A 6. példában leírt módon rekombináns agrobaktérium-törzset állítunk elő úgy, hogy E. coliból származó, 9. példa szerinti pTTM6-ot agrobaktérium C58C1 Rifö törzsbe viszünk be. A kapott agrobaktérium-törzs, amely pGV2260-ból és pTTM6-ból álló Ti-plazmidot tartalmaz, felhasználható dohánylevéllemezek transzformálásához. A transzformált hegeket és hajtásokat 5 mg/1 foszfino-tricinnel szelektáljuk. Az a tény, hogy az RN-áz TI gén nem fejeződik ki a transzformált herbicidrezisztens hegekben és hajtásokban, a növekedésükből látható.
A transzformált hajtásokat gyökereztetjük, elültetjük és üvegházban virágoztatjuk. A transzformált dohánynövények a portoktól eltekintve normális virágokat fejlesztenek. A portok, bár normális alakú, később nyílik, mint a nem transzformált dohánynövény portokja. (Lásd all. ábrát.) A portok nyílása után a transzformáit növényből legfeljebb csak kevés pollen szabadul fel, és a transzformált növények által termelt pollenszemcsék térfogatukban mintegy 50-100-szor kisebbek, mint a normál pollenszemcsék, és alakúk szabálytalan. Emellett a transzformált növény legtöbb pollenszemcséje csírázásra alkalmatlan, és a transzformált növény pollenjének csírázási képessége mintegy 0-2% a normál pollenszemcsék csírázási képességéhez viszonyítva. A transzformált növények sem természetes, sem kézzel végzett önbeporzással nem termelnek magot.
A transzformált növény vékonyrétegű keresztmetszetének mikroszkopikus vizsgálatával megállapítható, hogy normális tapétumréteg nem képződik, és a pollenzsák üres marad. (Lásd a 12. ábrát.) Ezt azt jelenti, hogy a TA29 promoter alkalmas a heterológ RN-áz TI gén szelektíven a transzformált növény tapétumsejtjeiben történő közvetlen kifejezésére, és hogy az RN-áz TI képes a tapétumsejtek megfelelő roncsolására, és így a növényben hímsterilitás kialakítására.
11. példa
9. példa szerinti kimer DNS-szekvencia származékának olajrepcébe történő bevitele Rekombináns agrobaktérium-törzset állítunk elő úgy, hogy E. coliból származó pTTM6A~-t agrobaktérium C58 Rifö törzsbe viszünk be, amely pMP90-et tartalmaz (Koncz és Schell: Mól. Gén. Genetics 204, 383-396, 1986). Az pMP90 vir és transz funkcióval rendelkezik, és nem hordoz ampicillinrezisztenciát kódoló gént. Mint a 7B. ábra mutatja, a pTTM6A- a 9. példa szerinti pTTM6 származéka, amelyben az ampicillinrezisztenciát kódoló béta-laktamáz-gént annak Seal helyére történő DNSszekvencia beépítésével inaktiváltuk.
A kapott agrobaktérium-törzs (A3144) hordozza a pMP90-et és a pTTM6A~-t és felhasználható Brassica napus transzformálásához (Lloyd és munkatársai: Science, 234,464-466,1986, és Klimaszewska és munkatársai: Plánt Cell Tissue Organ Culture 4, 183-197, 1985). A közös tenyésztés után az A3144-et karbenicillinnel elpusztítjuk. A transzformált hegeket 5 mg/1 foszfino-tricinnel és 100 pg/ml kanamicinnel szelektáljuk, és a rezisztens hegeket visszavisszük a növényekre. Hajtások és gyökerek előállítása után a transzformált növényeket üvegházba visszük és virágoztatjuk. A virágokat megvizsgáljuk és azt találjuk, hogy azok lényegében ugyanolyan fenotípussal rendelkeznek, mint a 10. példa szerinti transzformált dohánynövények. Ez azt igazolja, hogy a TA29 promoter képes a heterológ RN-áz TI gén dohánytól eltérő növények tapétumsejtjeiben történő szelektív és közvetlen kifejezésére, és így hímsterilitás kialakítására.
12. példa
PTA29-et és bamázgént tartalmazó kimer DNSszekvencia előállítása
A 8. ábra szerinti pTTM8 plazmidot az alábbi közismert fragmensekből állítjuk elő:
1. pGSC 1700-ból származó T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektorfragmens (Cornelissen és Vancewiele: Nucleic Acid Research, 17 (1), 19-29, 1989), amely béta-laktamáz-gént (a 8. ábrán Γ) tartalmaz, amelyet az Seal helyre DNS-szekvencia beépítésével inaktiváltunk,
2. 5. példa szerinti kimer szekvencia (3 szám), amely PSSU promotert, sfr herbicidrezisztens gént és T-DNS-gén 3’-végét tartalmazza,
3. 5. példa szerinti kimer szekvencia (4 szám), amely PNOS promotert, neo gént és oktopin-szintázgén 3’-végét tartalmazza, és
4) 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amelyhez egy kereten belül Bacillus amiloliquefaciensból származó bamázgén (Hartley és Rogerson: Preparative Biochemistry, 2 (3), 243-250, 1972. és 9. példa szerinti nopalil-szintáz-gén 3’-vége egyesül.
A pTTM8 olyan biner típusú T-DNS-vektor, amely a T-DNS-határszekvenciák között három kimer szekvenciát tartalmaz: PSSU-sfr és PNOS-neo, amelyek második promoterként PSSU-val és PNOS-sel kifejezhető marker DNS-ek, valamint PTA29-bamáz gén, amely első promoterként PTA29 szabályozása alá eső hímsteril DNS. A hímsteril DNS TA29 promoter szabályozása alatt történő kifejezésével szelektíven a tapétumsejtekben termelünk bamázt, amely bekapcsolódik a sejtek metabolizmusába.
73. példa
12. példa szerinti kimer DNS-szekvencia dohányba és olajrepcébe történő bevitele All. példában leírt módon rekombionáns agrobaktérium-törzset állítunk elő úgy, hogy E. coliból származó pTTM8-at (12. példa) pMP90-et tartalmazó agrobaktérium C58C1 Rifö törzsbe (Koncz és Schell: Mól.
Gén. Genetics 204, 383-396, 1986) viszünk be. A kapott A3135 törzs pMP90-et és pTTM8-at hordoz, és dohánylevéllemezzel és olajrepcével transzformálható. A transzformált hegeket és hajtásokat 5 mg/1 foszfinotricinnel és 100 pg/ml kanamicinnel szelektáljuk. Az a tény, hogy a bamázgén nem fejeződik ki a transzformáit herbicidrezisztens hegekben és hajtásokban, a fejlődésükből látszik.
A transzformált hajtásokat gyökereztetjük, elültetjük és üvegházban virágoztatjuk. A dohány- és az olajrepcevirágokat megvizsgálva azt tapasztaljuk, hogy a transzformált növény virágjainak fenotípusa lényegében azonos a 10. példa szerinti transzformált dohánynövény fenő típusával. Ez azt jelenti, hogy a TA29 promoter képes a heterológ bamázgén szelektíven tapétumsejtekben történő közvetlen kifejezésére, és így hímsterilitás kialakítására.
14. példa
PTA29-et és papaint kódoló gént tartalmazó kimer
DNS-szekvencia előállítása
A 9A. ábra szerinti pTVEPl plazmidot állítunk elő a következő, közismert fragmensekből:
1. pGSC 1700-ból származó T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektorfragmens, amelyben a bétalaktamáz-gént (9A. ábra, 1’) az Seal helyre DNS-szekvencia beépítésével inaktiváltuk,
2. 5. példa szerinti kimer szekvencia (3 szám), amely PSSU promotert, sfr herbicidrezisztens gént és T-DNS gén 7 3’-végét tartalmazza,
3. 5. példa szerinti kimer szekvencia (4 szám), amely PNOS promotert, neo gént és oktopin-szintázgén 3’-végét tartalmazza, és
4. 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amelyben egy kereten belül
a) Carica papaja gyümölcsből származó papaingén, amely peptid- és észterkötések megtámadására alkalmas növényi endopeptidáz papain zimogént (Cohen és munkatársai: Gene 48, 219-227, 1986) kódol, amelynek DNS-szekvenciájában Cohen és munkatársai a
3. példában leírt módon az alábbi, helyspecifikus mutációt hajtották végre.
i) az első ATG kódtól felfelé az első helyzetben található A nukleotidot C nukleotidra cserélve egy megfelelő Ncol hasítási helyet alakítottak ki, és ii) a 47, 118 és 135 helyzetben lévő glutamátot kódoló GAA kódokat glutamint kódoló CAA kódokra cserélték, és
b) a 9. példa szerinti nopalin-szintáz-gén 3’-vége egyesül.
A pTVEPl olyan biner típusú T-DNS-vektor, amely a T-DNS-határszekvenciája között három kimer szekvenciát tartalmaz: PSSU-sfr és PNOS-neo, amelyek a második promoterként PSSU és PNOS szabályozása alatt a transzformált növényre nézve szelektálható markért kódoló marker DNS-ek, valamint PTA29-papain gén, amely első promoterként a PTA29 szabályozása alá eső hímsteril DNS. A hímsteril DNS-nek a TA29 promoter szabályozása alatt a tapétumsejtekbe történő
HU 217 413 Β kifejezésével olyan endopeptidázt (papain zimogént) kapunk, amely hasítja a tapétumsejtekben található fehérjéket, és így elpusztítja ezeket a sejteket.
A 9B. ábra szerinti pTVEP2 plazmidot az alábbi közismert fragmensekből kapjuk:
1. pGSC 1700-ból származó T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektoríragmens, amelyben a béta-laktamáz-gént (9B. ábra, 1’) az Seal helyre DNS-szekvencia beépítésével inaktiváltuk,
2. 5. példa szerinti kimer szekvencia (3 szám), amely PSSU promotert, sff herbicidrezisztens gént és T-DNS-gén 7 3’-végét tartalmazza,
3. 5. példa szerinti kimer szekvencia (4 szám), amely PNOS promotert, neo gént és oktopin-szintázgén 3 ’-végét tartalmazza, és
4. 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amelyben egy kereten belül
a) Carica papaja gyümölcsből származó papaingén, amely a papain zimogén aktív fehérjéjét kódolja, amelyben a DNS-szekvenciában Cohen és munkatársai 3. példa szerinti helyspecifikus mutációval az alábbi módosításokat hajtották végre:
i) az aktív fehéije első Ile csoportjától felfelé az Asn-t kódoló AAT kódot GAT kódra cserélték, amely megfelelő EcoRV hasítási helyet (GAT ATC) biztosít, az EcoRV hasítási hely közvetlenül a PTA29 szakaszhoz kapcsolódik, és így a kereten belül közvetlen kapcsolatot létesít a promoter és a papain zimogén aktív fehéijéjét kódoló szekvencia között, és ii) a 47, 118 és 135 helyzetű glutamátot kódoló GAA kódokat glutamint kódoló CAA kódra cserélték, és
b) 9. példa szerinti nopalin-szintáz-gén 3’-vége kapcsolódik.
A pTVEP2 a pTVEP 1-hez hasonlóan olyan biner típusú T-DNS-vektor, amely a T-DNS-határszekvenciák között három kimer gént tartalmaz: PSSU-sfr és PNOSneo, amelyek a növénytranszformációnál domináns szelektálható markert kódolnak, és PTA29-papain gén, amely a tapétumsejtekben lévő fehérjéket hasító endopeptidázt kódol, és így ezeket a sejteket elpusztítja.
15. példa
14. példa szerinti kimer DNS-szekvencia dohányba és olajrepcébe történő bevitele A 11. példában leírt módon egymástól külön pTVEP 1-et és pTVEP2-t viszünk be E. coliból agrobaktérium C58C1 Rifö törzsbe, amely pMP90-et hordoz.
A kapott törzseket, amelyek a pMP90 mellett pTVEP 1-et, illetve a pMP90 mellett pTVEP2-t hordoznak, a 11. és 13. példa szerint dohány- és olajrepcenövényekbe transzformálunk. Az a tény, hogy a transzformáit herbicid- és kanamicinrezisztens hegekben, hajtásokban és gyökerekben a papaingén nem fejeződik ki, a növekedésen látszik.
A transzformált növényeket üvegházban helyezzük és talajba ültetve virágoztatjuk. A dohány- és olajrepcevirágokat megvizsgálva megállapíthatjuk, hogy a transzformáit növények fenotípusa lényegében azonos a
10. példa szerinti transzformált dohánynövény fenotípusával. Ez azt jelenti, hogy a TA29 promoter képes a pTVEP 1-ben és pTVEP2-ben lévő heterológ papaingén szelektíven a növény tapétumsejtjeiben történő közvetlen kifejezésére, és így himsterilitás kialakítására.
16. példa
PTA 29-et és EcoRI-et kódoló gént tartalmazó kimer DNS-szekvencia előállítása A 10 A. ábra szerinti pTVE63 plazmidot állítunk elő az alábbi közismert fragmensekből:
1. pGSC1701A2-ből származó T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektorffagmens (87/115985.1 számú európai szabadalmi bejelentés),
2. 5. példa szerinti kimer szekvencia (3 szám), amely PSSU promotert, sff herbicidrezisztens gént és T-DNSgén 7 3’-végét tartalmazza,
3) 5. példa szerinti kimer szekvencia (4 szám), amely PNOS promotert, neo gént és oktopin-szintáz-gén 3’-végét tartalmazza,
4. 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amelyben egy kereten belül
a) E. coliból származó EcoRI restrikciós endonukleázt kódoló gén (Green és munkatársai: J. Bioi. Chem. 256, 2143-2153, 1981, Botterman és Zabeau: Gene, 37,229-239, 1985), amely képes GAATTC szekvenciának kettős szálú DNS-en történő felismerésére és hasítására, és amelyben a Green és munkatársai féle DNSszekvenciában a 3. példa szerint az alábbi helyspecifikus mutációt végeztük:
i) az ATG kezdeti kód nukleotidjait ATGCA nukleotidokra cseréltük, amellyel a kezdeti kódnál egy Nsil helyet alakítottunk ki, és így az alábbi nukleotidszekvenciát kaptuk:
ATCCA, TCT, AAT,..., és ii) a pEcoR12-be klónozott EcoRI gén HindlIHindlII fragmensét (Botterman és Zabeau idézett műve) pMAC5-8 helyspecifikus mutációs vektorba klónoztuk, és
b) a 9. példa szerinti nopalin-szintáz-gén 3’-végét egyesíti, és
5. saját, természetes promotere szabályozása alatt EcoRI metilázt kódoló gén (Botterman és Zabeau: Gene 37, 229-239, 1985), amely E. coliban vagy agrobaktériumban gátolja az EcoRI aktivitását, és így kijavítja az EcoRI gén lehetséges hibás kifejeződését.
A pTVE63 dimer típusú T-DNS vektor, amely a T-DNS-határszekvenciák között három kimer szekvenciát tartalmaz: PSSU-sfr és PNOS-neo, amelyek a második promoterként PSSU és PNOS szabályozása alatt marker DNS-ként szolgálnak, és a PTA29-EcoRI gén, amely első promoterként PTA29 szabályozása alatt hímsteril DNS-ként szolgál. A hímsteril DNS TA29 promoter által szabályozott és tapétumsejtekben bekövetkeződő kifejezése olyan EcoRI restrikciós endonukleázt termel, amely a tapétumsejtek kettős szálú DNS-ét a GAATTC helyen hasítja (lásd a II. típusú restrikciós modifikációs rendszereket, így Wilson: TIG 4 (11), 314-318, 1988), ami a sejtek pusztulását okozza.
HU 217 413 Β
A 10B. ábra szerinti pTVE62 plazmidot az alábbi közismert fragmensekből állítjuk elő:
1. pGSC1701A2-ből származó T-DNS-határszekvenciákat tartalmazó vektorfragmens,
2. 5. példa szerinti kimer szekvencia (3 szám), amely PSSU promotert, sfr herbicidrezisztens gént és T-DNSgén 7 3’-végét tartalmazza,
3.5. példa szerinti kimer szekvencia (4 szám), amely PNOS promotert, neo gént és oktopin-szintáz-gén neo 3 ’-végét tartalmazza,
4. 3. példa szerinti PTA29 promotert tartalmazó kimer szekvencia, amelyben egy kereten belül
a) Mn-szuperoxid-dizmutáz (Mn-SOD) tranzitpeptidjét kódoló génfragmens; amely a pSODl HpalHindlII fragmenséből származó NcoI-PstI fragmens (Bowler és munkatársai: EMBO J. 8, 31-38, 1989), amelynek DNS-szekvenciájában Bowler és munkatársai a 3. példában leírt helyspecifikus mutációval az alábbi módosításokat végezték:
i) az ATG kezdeti kódtól felfelé a -2 és -1 pozícióban elhelyezkedő AA nukleotidokat CC nukleotidokra cserélték, és így a kezdeti kódnál egy Ncol helyet alakítottak ki, amely a következő nukleotidszekvenciának felel meg:
-CCATGGCACTAC
Ncol ii) a tranzitpeptid működési helyétől közvetlenül lefelé elhelyezkedő T, TCG, CTC nukleotidokat C, TGC, AGC nukleotidokra cserélték, és így egy PstI helyet alakítottak ki a működési hely mögött, amely a következő nukleotidszekvenciának felel meg:
L Q T F S L CTC, CGC, GGC, TTG, CAG, ACC, TTT, TCG, CTC CTC, CGC, GGC, TTG, CAG, ACC, TTC, TGC, AGC...
PstI ahol a nyíl a tranzitpeptid működési helyét mutatja, míg a felső vonal az Mn-SOD kódolószekvenciának megfelelő aminosavszekvenciát mutatja, az NcoI-PstI fragmens egy kereten belül EcoRI restrikciós endonukleázt kódoló génnel van egyesítve (Green és munkatársai: J. Bioi. Chem. 256, 2143-2153, 1981, Botterman és Zabeau: Gene 37,229-239,1985), amely alkalmas a pTVE63-ban található kettős szálú DNS GAATTC szekvenciájának felismerésére és hasítására, és
b) 9. példa szerinti nopalin-szintáz-gén 3’-vége van egyesítve és
5. természetes promoterek szabályozása alatt EcoRI metilázt kódoló gén (Botterman és Zabeau idézett műve), amely E. coliban vagy agrobaktériumban gátolja az EcoRI aktivitását, és így kiküszöböli az EcoRI gén esetleges hibás kifejeződésének következményeit, amely gén a vektorfragmensen belül a határszekvenciákon kívül helyezkedik el.
A pTVE62 biner típusú T-DNS-vektor, amely a határszekvenciákon belül három kimer szekvenciát tartalmaz: PSSU-sír és PNOS-NPTII, amelyek második promoterként PSSU és PNOS szabályozása alatt álló marker DNS-ek, valamint pTA29-tranzitpeptid-EcoRI endonukleáz gén, amely első promoterként PTA29 szabályozás alá eső hímsteril DNS és ezek között elhelyezkedő tranzitpeptid-kódoló szekvencia. A hímsteril DNS tapétumsejtekben TA29 promoter szabályozása alatt történő kifejeződése olyan restrikciós endonukleázt eredményez, amely beépül a tapétumsejtek mitokondriumába és a sejtek kettős szálú DNS-ét a GAATTC helyen hasítja. Ez a sejtek pusztulását okozza.
17. példa
16. példa szerinti kimer DNS-szekvencia dohányba és olajrepcébe történő bevitele A 11. és 15. példában leírt módon E. coliból származó pTVE62-t és pTVE63-at agrobaktérium C58C1 RifRbe viszünk be, amely pMP90-et hordoz. A kapott törzsek, amelyek pMP90-nel együtt pTVE62-t, illetve pMP90-nel együtt pTVE63-at hordoznak, felhasználhatók dohány és olajrepce transzformálódására a 11. és 13. példában leírt módon. Azt a tényt, hogy az EcoRI endonukleáz gének a transzformált herbicid- és kanamicinrezisztens hegekben, hajtásokban és gyökerekben nem fejeződnek ki, azok fejlődésén látjuk.
A transzformált növényeket üvegházban talajba ültetve virágoztatjuk. A dohány- és olajrepcevirágokat megvizsgálva azt találtuk, hogy a transzformált növények fenotípusa lényegében azonos a 10. példa szerinti transzformált dohánynövények fenotípusával. Ez azt jelenti, hogy a TA29 promoter képes a heterológ EcoRI endonukleáz gén szelektíven a pTVE62 és pTVE63 transzformált növények tapétumsejtjeiben történő közvetlen kifejezésére, és így himsterilitás kiváltására.
A találmány szerinti eljárás nem korlátozódik valamely konkrét növény transzformálására. Az eljárás megvalósítható minden olyan növénynél, amelynek sejtmaggenomja hímsteril DNS-sel transzformálható, amely egy első promoter szabályozása alatt szelektíven a növény porzószálsejtjeiben közvetlenül kifejezhető, és a növény mind önbeporzó, mind keresztbeporzó lehet. A növényekre példaként említhető burgonya, paradicsom, olajrepce, lucerna, napraforgó, gyapot, zeller, hagyma, kukorica, szójabab, dohány, káposztafélék és cukorrépa.
A találmány oltalmi köre továbbá nem korlátozódik a példákban említett plazmidokra és vektorokra, hanem kiterjed minden olyan plazmidra és vektorra, amely egy első promoter szabályozása alá eső hímsteril DNS-t tartalmaz.
A találmány oltalmi köre nem korlátozódik továbbá a példákban említett promoterekre, így a TA29 promoterre, hanem kiteljed minden olyan DNS-szekvenciára, amely valamely hímsteril DNS-nek szelektíven a porzószálsejtekben történő közvetlen kifejeződésére alkalmas promotert kódol. Ebben a vonatkozásban az oltalmi kör kiterjed a 3A. ábra szerinti TA29 promoter DNSszekvenciájára, valamely bármely ekvivalens DNSszekvenciára, így a 3B. ábra szerinti TA13 promoter és a 3C. ábra szerinti TA26 promoter DNS-szekvenciájára, amelyek felhasználhatók a hímsteril DNS-nek szelektíven a növény tapétumsejtjeiben történő kifejezésé15 re. A TA29, TA26 és TA13 promoter DNS-szekvenciái módosíthatók:
1. néhány kód azonos vagy más aminosavat kódoló kódra történő kicserélésével, és/vagy
2. néhány kód kiiktatásával vagy hozzáadásával, azzal a feltétellel, hogy ezek a módosítások lényegében nem változtatják meg a kódolt promotemek azt a tulajdonságát, hogy szabályozza a himsterilitás tapétumspecifikus kifejeződését.
A találmány oltalmi köre továbbá nem korlátozódik a példákban említett hímsteril DNS-ekre, hanem kiterjed minden olyan DNS-szekvenciára, amely olyan első RNS-t, fehéijét vagy polipeptidet kódol, amely lényegesen megzavaija azoknak a porzószálsejteknek a metabolizmusát, működését és/vagy fejlődését, amelyekben az első promoter szabályozása alatt kifejeződtek.
Az oltalmi kör nem korlátozódik végül a példákban említett marker DNS-ekre, hanem kiterjed bármely olyan DNS-szekvenciára, amely olyan második RNS-t, fehéijét vagy polipeptidet kódol, amely legalább egy olyan speciális növényi szövetnek vagy sejtnek, amelyben az adott DNS-szekvencia kifejeződik, egy megkülönböztethető jelleget kölcsönöz, az olyan növényi szövethez vagy sejthez viszonyítva, amelyben az adott DNS-szekvencia nem fejeződik ki.

Claims (63)

1. Eljárás hímsteril növény előállítására, azzal jellemezve, hogy
i) a növény sejtjének nukleáris genomjába egy, a) hímsteril DNS-t és egy b) első promotert tartalmazó idegen DNS-szekvenciát juttatunk be, amelyben a hímsteril DNS ugyanabban a transzkripciós egységben helyezkedik el, mint az első promoter, úgy, hogy egyben annak irányítása alatt áll, és az első promoter alkalmas a hímsteril DNS expressziójának szelektíven a növény porzószálsejtjeiben történő irányítására, és ii) a növényi sejtből növényt regenerálunk, azzal a megszorítással, hogy amennyiben első promoterként a hímsteril DNS expresszióját szelektíven a pollensejtekben irányító promotert alkalmazunk, akkor a transzformált növény nukleáris genomjába a DNS-t homozigóta módon juttatjuk be.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként egy, a porzószálsejteket - amelyekben a DNS expresszálódik - megölő első fehérjét vagy polipeptidet kódoló DNS-t alkalmazunk.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az expressziót szelektíven a porzószálsejtekben irányítani képes első promoterként a hímsteril DNS-nek a növény specifikus portoksejtjeiben történő expresszióját eredményező első promotert alkalmazunk.
4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első promoterként a hímsteril DNS-nek a tapétumsejtekben történő expresszióját eredményező promotert alkalmazunk.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első promoterként a 3A. ábrán bemutatott TA29 gén promoterét alkalmazzuk.
6. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első promoterként a 3C. ábra szerinti cDNS-szekvenciának megfelelő TA26 gén promoterét, a 3B. ábra szerinti cDNS-szekvenciának megfelelő TA13 gén promoterét vagy a TA29 génnel, a TA26 génnel vagy a TA13 génnel hibridizálódni képes, tapétumspecifikus mRNS-t kódoló DNS promoterét alkalmazzuk.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként RN-ázt kódoló DNS-t alkalmazunk.
8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként bamázt kódoló DNS-t alkalmazunk.
9. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként RN-áz-Tl-et kódoló DNS-t alkalmazunk.
10. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként DN-ázt, proteázt, glükanázt, lipázt, lipidperoxidázt, sejtfalinhibitort vagy bakteriális toxint kódoló DNS-t alkalmazunk.
11. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként endonukleázt vagy papaint kódoló DNS-t alkalmazunk.
12. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként zimogén papaint, aktív papainfehérjét vagy foszfolipáz-A2-t kódoló DNS-t alkalmazunk.
13. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként növényi hormon szintézisét katalizáló enzimet kódoló DNS-t alkalmazunk.
14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként Agrobacterium T-DNS-ének 1. génje, 2. génje vagy 4. génje által kódolt enzimet alkalmazunk.
15. Az 1 -6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként ribozimot kódoló, előnyösen a 3A. ábra szerinti TA29 gén által kódolt mRNS elleni, a 3C. ábra szerinti cDNS-szekvenciát tartalmazó TA26 gén által kódolt mRNS elleni vagy a 3B. ábra szerinti cDNS-szekvenciát tartalmazó TA13 gén által kódolt mRNS elleni ribozimot kódoló, vagy egy antiszensz DNS-t, előnyösen a TA29 gén, a TA26 gén vagy a TA13 gén antiszensz DNS-ét kódoló DNS-t alkalmazunk.
16. Az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy idegen DNS-szekvenciaként egy tranzitpeptidet kódoló első DNS-t is tartalmazó, és az első DNS-t a hímsteril DNS-sel és az első promoterrel azonos transzkripciós egységben, a kettő közötti helyzetben tartalmazó idegen DNS-szekvenciát alkalmazunk.
17. Az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy idegen DNS-szekvenciaként egy c) marker DNS-t és d) egy második promotert is tartalmazó idegen DNS-szekvenciát alkalmazunk, amelyben a marker DNS a második promoterrel azonos transzk16
HU 217 413 Β ripciós egységben helyezkedik el úgy, hogy annak irányítása alatt áll; és a második promoter alkalmas a marker DNS expressziójának a növény legalábbis specifikus szövetében vagy sejtjeiben történő irányítására.
18. A 17. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként herbicidrezisztencia-gént vagy egy, herbiciddel szembeni, módosított, a módosítatlan enzimnél a herbiciddel szemben kisebb affmitású célenzimet kódoló gént alkalmazunk.
19. A 18. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként glutamin-szintetáz inhibitorával szemben rezisztenciát biztosító gént, vagy „glyphosate”tal szembeni célenzimként egy módosított 5-enol-piruvilsikimát-3-foszfát-szintázt kódoló gént vagy glutaminszintetáz inhibitorával szembeni célenzimként egy módosított glutamin-szintetázt kódoló gént alkalmazunk.
20. A 18. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként foszfinotricinnel szemben rezisztenciát biztosító gént alkalmazunk.
21. A 18. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként sff gént vagy sffv gént alkalmazunk.
22. A 17. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként legalább a specifikus szövetnek vagy a specifikus sejteknek színt biztosító fehérjét vagy polipeptidet kódoló gént; egy növénynek stresszel szembeni tűrőképességet biztosító gént; vagy egy betegséggel, vagy kártevővel szemben rezisztenciát biztosító fehérjét vagy polipeptidet kódoló gént alkalmazunk.
23. A 22. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként GUS-gént vagy Al-gént, Mn-szuperoxid-dizmutázt kódoló gént, rovarokkal szemben rezisztenciát biztosító, Bacillus thuringiensis endotoxint kódoló gént vagy baktériummal szemben rezisztenciát biztosító baktericid peptidet kódoló gént alkalmazunk.
24. A 17-23. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy második promoterként egy konstitutív promotert, sérüléssel indukálható promotert, a génexpressziót szelektíven fotoszintetikus aktivitással rendelkező növényi szövetben irányító promotert, vagy a génexpressziót szelektíven levélsejtben, sziromsejtben vagy magsejtben irányító promotert alkalmazunk.
25. A 24. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy második promoterként 35S promotert, PNOS promotert vagy POCS promotert, TR1’ vagy TR2’ promotert, SSU promotert vagy a génexpressziót szelektíven magburoksejtekben irányító promotert alkalmazunk.
26. A 17-25. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy idegen DNS-szekvenciaként egy tranzitpeptidet kódoló második DNS-t is tartalmazó és az első DNS-t a marker DNS-sel és a második promoterrel azonos transzkripciós egységben, a kettő közötti helyzetben tartalmazó idegen DNS-szekvenciát alkalmazunk.
27. Az 1-26. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy idegen DNS-szekvenciaként a 6. ábrán bemutatott pTTM4 vektor, a 7A. ábrán bemutatott pTTM6 vektor, a 7B. ábrán bemutatott pTTM6A vektor, a 8. ábrán bemutatott pTTM8 vektor, a 9 A. ábrán bemutatott pTVEPl vektor, a 9B. ábrán bemutatott pTVEP2 vektor, a 10B. ábrán bemutatott pTVE62 vektor vagy a 10A. ábrán bemutatott pTVE63 vektor T-DNS-ét tartalmazó DNS-szekvenciát alkalmazunk.
28. Eljárás hímsteril növény és szaporítóanyagai előállítására, azzal jellemezve, hogy a növény egy sejtjének nukleáris genomjába idegen DNS-szekvenciát viszünk be és a növényt regeneráljuk a növényi sejtből az 1 -27. igénypontok bármelyike szerinti eljárás i) és ii) lépéseivel megegyező módon - azzal a megszorítással, hogy amennyiben első promoterként a hímsteril DNS expresszióját szelektíven a pollensejtekben irányító promotert alkalmazunk, akkor a transzformált növény nukleáris genomjába a DNS-t homozigóta módon juttatjuk be - majd az idegen DNS-szekvenciát tartalmazó növényből a szaporítóanyagokat kinyerjük.
29. Eljárás sejtjeinek nukleáris gemomjában az alábbiakat tartalmazó idegen DNS-szekvenciát hordozó hímsteril növény termesztésére:
a) egy hímsteril DNS-t és egy első promotert, amely hímsteril DNS ugyanabban a transzkripciós egységben helyezkedik el, mint az első promoter úgy, hogy egyben annak irányítása alatt áll, és amely első promoter alkalmas a hímsteril DNS expressziójának szelektíven a növény porzószálsejtjeiben történő irányítására, és
b) egy marker DNS-t és egy második promotert, amely marker DNS a második promoterrel azonos transzkripciós egységben helyezkedik el úgy, hogy annak irányítása alatt áll; és amely második promoter alkalmas a marker DNS expressziójának a növény legalábbis specifikus szövetében vagy sejtjeiben történő irányítására, azzal jellemezve, hogy
i) a hímsteril növényt keresztbe beporozzuk egy, ugyanahhoz a vonalhoz tartozó, a második promotert és a marker DNS-t hordozó idegen DNS-szekvenciától mentes hímtermékeny növénnyel, majd ii) a hímsteril növényt és/vagy a keresztbe beporzásból származó hímsteril utódait különválasztjuk a hímtermékeny növénytől és/vagy hímtermékeny utódaitól, kihasználva azt, hogy a hímtermékeny növény mentes a marker DNS-től és a második promotertől, majd (ifi) a hímsteril növényből magokat nyerünk, és azokból növényeket termesztünk.
30. Eljárás hibrid magok előállítására, azzal jellemezve, hogy
i) egy olyan hímsteril növényt, amely sejtjeinek nukleáris genomjában egy, az alábbiakat tartalmazó idegen DNS-szekvenciát tartalmaz:
a) egy hímsteril DNS-t és egy b) első promotert, amely hímsteril DNS ugyanabban a transzkripciós egységben helyezkedik el, mint az első promoter, úgy, hogy egyben annak irányítása alatt áll, és amely első promoter alkalmas a hímsteril DNS expressziójának szelektíven a növény porzószálsejtjeiben történő irányítására;
HU 217 413 Β keresztbe beporzunk egy, az idegen DNS-szekvenciától mentes hímtermékeny növénnyel, majd ii) a hímsteril növényből hibrid magokat takarítunk be.
31. A 29. vagy a 30. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy expressziót szelektíven a növény porzószálsejtjeiben irányító első promoterként a hímsteril DNS portoksejtekben történő expressziót eredményező promotert alkalmazunk.
32. A 31. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első promoterként a hímsteril DNS tapétumsejtekben történő expresszióját eredményező promotert alkalmazunk.
33. A 32. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első promoterként a 3A. ábra szerinti TA29 gén promoterét alkalmazzuk.
34. A 31-33. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hímsteril DNS-ként RNázt kódoló DNS-t alkalmazunk.
35. A 34. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként bamázt kódoló DNS-t alkalmazunk.
36. A 30. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy idegen DNS-szekvenciaként
c) marker DNS-t és d) egy második promotert is tartalmazó idegen DNS-szekvenciát alkalmazunk, amelyben a marker DNS a második promoterrel azonos transzkripciós egységben helyezkedik el, úgy, hogy annak irányítása alatt áll; és a második promoter alkalmas a marker DNS expressziójának a növény legalábbis specifikus szövetében vagy sejtjeiben történő irányítására.
37. A 29. vagy 36. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként egy herbicidrezisztencia-gént vagy egy, herbiciddel szembeni, módosított, a módosítatlan enzimnél a herbiciddel szemben kisebb affinitású célenzimet kódoló gént alkalmazunk.
38. A 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként glutamin-szintetáz inhibitorával szemben rezisztenciát biztosító gént, vagy „glyphosate”tal szembeni célenzimként egy módosított 5-enol-piruvil-sikimát-3-foszfát-szintázt kódoló gént vagy glutaminszintetáz inhibitorával szembeni célenzimként egy módosított glutamin-szintetázt kódoló gént alkalmazunk.
39. A 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként foszfinotricinnel szemben rezisztenciát biztosító gént alkalmazunk.
40. A 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként sfi gént vagy sffv gént alkalmazunk.
41. A 29. vagy a 36. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként legalább a specifikus szövetnek vagy a specifikus sejteknek színt biztosító fehéijét vagy polipeptidet kódoló gént; egy növénynek stresszel szembeni tűrőképességet biztosító gént; vagy egy betegséggel, vagy kártevővel szemben rezisztenciát biztosító fehérjét vagy polipeptidet kódoló gént alkalmazunk.
42. A 41. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként GUS-gént vagy A1-gént, Mnszuperoxid-dizmutázt kódoló gént, rovarokkal szemben rezisztenciát biztosító, Bacillus thuringiensis endotoxint kódoló gént vagy baktériummal szemben rezisztenciát biztosító baktericid peptidet kódoló gént alkalmazunk.
43. A 37-42. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy második promoterként egy konstitutív promotert, sérüléssel indukálható promotert, a génexpressziót szelektíven fotoszintetikus aktivitással rendelkező növényi szövetben irányító promotert, vagy a génexpressziót szelektíven levélsejtben, sziromsejtben vagy magsejtben irányító promotert alkalmazunk.
44. A 43. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy második promoterként 35S promotert, PNOS promotert vagy POCS promotert, TR1’ vagy TR2’ promotert, SSU promotert vagy a génexpressziót szelektíven magburoksejtekben irányító promotert alkalmazunk.
45. A 37-44. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hímsteril növényt vagy a keresztbe beporzásból származó hímsteril utódait különválasztjuk a hímtermékeny növénytől vagy hímtermékeny utódaitól, kihasználva azt, hogy a hímtermékeny növény vagy hímtermékeny utódja mentes a marker DNS-től.
46. A 45. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként herbicidrezisztencia-gént alkalmazunk, és a hímtermékeny növényt vagy hímtermékeny utódját herbiciddel való permetezéssel elimináljuk.
47. A 37-46. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril növényként nukleáris genomjában a marker DNS mellett egy második marker DNS-t is tartalmazó hímsteril növényt, és hímtermékeny növényként egy marker DNS-t - de a két marker DNS közül az egyiket nem - tartalmazó hímtermékeny növényt alkalmazunk, és a hímsteril növény különválasztását a hímtermékeny növénytől azt kihasználva végezzük, hogy a hímtermékeny növény mentes az egyik marker DNS expressziójától.
48. A 37-47. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hímsteril növények közül többet és a hímtermékeny növények közül is többet külön sorba ültetünk.
49. A 37-47. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hímsteril növények közül többet és a hímtermékeny növények közül is többet lényegében véletlenszerű eloszlásban termesztünk.
50. Eljárás a) egy hímsteril DNS-t és b) egy, a hímsteril DNS expresszióját szelektíven egy növény porzószálsejtjeiben irányító első promotert tartalmazó idegen DNS-szekvencia előállítására, azzal jellemezve, hogy a hímsteril DNS-t az első promoter irányítása alá és azzal azonos transzkripciós egységbe építjük be.
51. Az 50. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy expressziót szelektíven porzószálsejtekben irányító első promoterként egy, a hímsteril DNS expreszszióját a növény specifikus portoksejtjeiben irányító promotert alkalmazunk.
52. Az 51. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első promoterként a hímsteril DNS-nek a tapétumsejtekben történő expresszióját eredményező promotert alkalmazunk.
53. Az 52. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első promoterként a 3A. ábra szerinti TA29 gén promoterét alkalmazzuk.
54. Az 50-53. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hímsteril DNS-ként RNázt kódoló DNS-t alkalmazunk.
55. Az 54. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként bamázt kódoló DNS-t alkalmazunk.
56. Az 54. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként RN-áz-Tl-et kódoló DNS-t alkalmazunk.
57. Az 50-53. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hímsteril DNS-ként DNázt, proteázt, glükanázt, lipázt, lipidperoxidázt, sejtfalinhibitort vagy bakteriális toxint kódoló DNS-t alkalmazunk.
58. Az 50-57. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az idegen DNS-szekvenciába a második promoter irányítása alá és azzal azonos transzkripciós egységbe egy marker DNS-t építünk be.
59. Az 58. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként egy herbicidrezisztenciagént vagy egy, herbiciddel szembeni, módosított, a módosítatlan enzimnél a herbiciddel szemben kisebb affinitású célenzimet kódoló gént alkalmazunk.
60. Az 59. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként foszfinotricin-rezisztenciát biztosító gént alkalmazunk.
61. Az 59. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként sfr gént vagy sfrv gént alkalmazunk.
62. Az 58. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy marker DNS-ként legalább a specifikus szövetnek vagy a specifikus sejteknek színt biztosító fehérjét vagy polipeptidet kódoló gént; egy növénynek stresszel szembeni tűrőképességet biztosító gént; vagy egy betegséggel, vagy kártevővel szemben rezisztenciát biztosító fehérjét vagy polipeptidet kódoló gént alkalmazunk.
63. Az 50-62. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy idegen DNS-szekvenciaként a
6. ábrán bemutatott pTTM4 vektor, a 7A. ábrán bemutatott pTTM6 vektor, a 7B. ábrán bemutatott pTTM6A vektor, a 8. ábrán bemutatott pTTM8 vektor, a 9A. ábrán bemutatott pTVEPl vektor, a 9B. ábrán bemutatott pTVEP2 vektor, a 10B. ábrán bemutatott pTVE62 vektor vagy a 10A. ábrán bemutatott pTVE63 vektor T-DNS-ét tartalmazó DNS-szekvenciát alkalmazunk.
HU763/89A 1988-04-28 1989-04-27 Eljárás hímsterilitás kialakítására, valamint hímsteril növény és szaporítóanyag előállítására HU217413B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB888810120A GB8810120D0 (en) 1988-04-28 1988-04-28 Transgenic nuclear male sterile plants

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU892763D0 HU892763D0 (en) 1990-06-28
HUT52553A HUT52553A (en) 1990-07-28
HU217413B true HU217413B (hu) 2000-01-28

Family

ID=10636060

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU763/89A HU217413B (hu) 1988-04-28 1989-04-27 Eljárás hímsterilitás kialakítására, valamint hímsteril növény és szaporítóanyag előállítására

Country Status (18)

Country Link
US (6) US6372967B1 (hu)
EP (2) EP0737749B1 (hu)
JP (2) JP3020530B2 (hu)
AT (2) ATE395425T1 (hu)
AU (2) AU621113C (hu)
CA (3) CA1340324C (hu)
DE (2) DE68927721T2 (hu)
DK (1) DK175585B1 (hu)
ES (1) ES2097745T3 (hu)
GB (1) GB8810120D0 (hu)
GR (1) GR3023224T3 (hu)
HK (1) HK1008051A1 (hu)
HU (1) HU217413B (hu)
IE (1) IE81154B1 (hu)
IL (1) IL90095A (hu)
PT (1) PT90420B (hu)
WO (1) WO1989010396A1 (hu)
ZA (1) ZA893136B (hu)

Families Citing this family (554)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8901677D0 (en) * 1989-01-26 1989-03-15 Ici Plc Hybrid seed production
US5177307A (en) * 1987-05-26 1993-01-05 Calgene, Inc. Compositions and methods for modulation of endogenous cytokinin levels
US5741684A (en) * 1988-02-03 1998-04-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Molecular methods of hybrid seed production
US6162964A (en) * 1988-02-03 2000-12-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Molecular methods of hybrid seed production
GB8901675D0 (en) * 1989-01-26 1989-03-15 Ici Plc Inhibitor of gene expression
ATE294872T1 (de) * 1989-02-02 2005-05-15 Pioneer Hi Bred Int Molekulare verfahren zur vermehrung von hybriden saaten
ES2166750T3 (es) * 1989-07-19 2002-05-01 Calgene Llc Composiciones y procedimientos para la modulacion de niveles de citoquinina endogenas.
ES2152208T3 (es) * 1989-08-04 2001-02-01 Aventis Cropscience Nv Planta con flores, semillas o embriones modificados.
US5633441A (en) * 1989-08-04 1997-05-27 Plant Genetic Systems, N.V. Plants with genetic female sterility
US5689041A (en) * 1989-08-10 1997-11-18 Plant Gentic Systems N.V. Plants modified with barstar for fertility restoration
DE69034268D1 (de) * 1989-08-10 2011-03-03 Bayer Bioscience Nv Pflanzen mit modifizierten Blüten
EP0436467A3 (en) * 1989-12-29 1992-10-21 Ciba-Geigy Ag Expression of s-locus specific glycoprotein gene in transgenic plants
WO1991010725A1 (en) * 1990-01-22 1991-07-25 Dekalb Plant Genetics Fertile transgenic corn plants
CA2042448A1 (en) * 1990-06-05 1991-12-06 Jonathan P. Duvick Antimicrobial peptides and plant disease resistance based thereon
US5478369A (en) * 1990-06-12 1995-12-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same
US5824524A (en) * 1990-06-12 1998-10-20 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleotide sequences mediating fertility and method of using same
CA2042447C (en) * 1990-06-12 1999-09-28 Marc C. Albertsen Control of microsporogenesis by externally inducible promoter sequences
US5432068A (en) * 1990-06-12 1995-07-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Control of male fertility using externally inducible promoter sequences
US6297426B1 (en) 1990-06-12 2001-10-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods of mediating female fertility in plants
EP0540561B1 (en) * 1990-07-20 1998-11-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Binary cryptocytotoxic method of hybrid seed production
US6395966B1 (en) 1990-08-09 2002-05-28 Dekalb Genetics Corp. Fertile transgenic maize plants containing a gene encoding the pat protein
IL99413A0 (en) * 1990-09-06 1992-08-18 Du Pont Compounds and constructs for producing male sterile plants
BR9106926A (pt) * 1990-09-26 1994-06-07 Forbio Pty Ltd Processo e método de alteraçao de uma planta
AU665339B2 (en) * 1990-09-26 1996-01-04 Fb Investments Pty Ltd A plant and method of modification
AU8914291A (en) * 1990-11-23 1992-06-25 Plant Genetic Systems N.V. Process for transforming monocotyledonous plants
GB9028060D0 (en) * 1990-12-24 1991-02-13 Nickerson Int Seed Recombinant dna
AU1202192A (en) * 1991-02-07 1992-09-07 Plant Genetic Systems N.V. Stamen-specific promoters from corn
DE69233636D1 (de) * 1991-02-08 2006-08-17 Bayer Bioscience Nv Staubblatt spezifische promotoren aus reis
WO1992018625A1 (en) * 1991-04-16 1992-10-29 Mogen International N.V. Male-sterile plants, method for obtaining male-sterile plants and recombinant dna for use therein
US5770718A (en) * 1991-05-23 1998-06-23 University Of Waterloo Gene for APRT from plant tissue
GB9115909D0 (en) * 1991-07-23 1991-09-04 Nickerson Int Seed Recombinant dna
EP0537399A1 (en) * 1991-10-16 1993-04-21 Plant Genetic Systems, N.V. A novel ribonuclease and its inhibitor
US5750867A (en) * 1992-06-12 1998-05-12 Plant Genetic Systems, N.V. Maintenance of male-sterile plants
EP0578611B1 (en) * 1992-07-02 2003-11-26 Syngenta Participations AG Anther-specific cDNA sequences, genomic DNA sequences and recombinant DNA sequences
US5409823A (en) * 1992-09-24 1995-04-25 Ciba-Geigy Corporation Methods for the production of hybrid seed
GB9225845D0 (en) 1992-12-10 1993-02-03 Nickerson Biocem Ltd Modified plants
AU6164794A (en) * 1993-01-29 1994-08-29 Monsanto Company Method of controlling plant pathogenic fungi
US5837850A (en) * 1994-04-21 1998-11-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Regulatory element conferring tapetum specificity
JPH10504706A (ja) * 1994-06-06 1998-05-12 プラント・ジェネティック・システムズ・エヌ・ブイ 雄性不稔植物の維持のためのアントシアニン遺伝子の使用
US6013859A (en) * 1994-07-14 2000-01-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Molecular methods of hybrid seed production
US7285416B2 (en) 2000-01-24 2007-10-23 Gendaq Limited Regulated gene expression in plants
US7262055B2 (en) 1998-08-25 2007-08-28 Gendaq Limited Regulated gene expression in plants
GB9502468D0 (en) 1995-02-09 1995-03-29 Gene Shears Pty Ltd DNA Sequence
US5717129A (en) * 1995-02-16 1998-02-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for maintaining sterility in plants
GB9506684D0 (en) * 1995-03-31 1995-05-24 Nickerson Biocem Ltd Control of pod dehiscence
US6008437A (en) * 1995-06-06 1999-12-28 Plant Genetic Systems Use of anthocyanin genes to maintain male sterile plants
EP0757102A1 (en) 1995-08-04 1997-02-05 Plant Genetic Systems N.V. Genetic transformation using a PARP inhibitor
AU1214397A (en) * 1995-12-21 1997-07-17 New Zealand Institute For Crop & Food Research Limited Production of true-breeding transgenics seeds from plants heterozygous for transgene insertions
US6476291B1 (en) 1996-12-20 2002-11-05 New Zealand Institute For Food And Crop Research Limited True breeding transgenics from plants heterozygous for transgene insertions
EP0790311A1 (en) * 1996-02-16 1997-08-20 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek Microspore-specific promoter from tobacco
US6077991A (en) * 1996-03-28 2000-06-20 Washington State University Research Foundation Compositions and methods for production of male-sterile plants
GB9607517D0 (en) * 1996-04-11 1996-06-12 Gene Shears Pty Ltd The use of DNA Sequences
FR2759857B1 (fr) * 1997-02-27 1999-04-30 Biocem Nouvelles utilisations de la sterilite male chez les plantes
US6211437B1 (en) 1997-03-04 2001-04-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Nucleic acids from maize encoding proteins which suppress plant cell death
GB9706381D0 (en) * 1997-03-27 1997-05-14 Cambridge Advanced Tech Improvements relating to the specificity of gene expression
EP1894467A3 (en) * 1997-04-03 2008-07-16 DeKalb Genetics Corporation Use of glyphosate resistant maize lines
US6037523A (en) * 1997-06-23 2000-03-14 Pioneer Hi-Bred International Male tissue-preferred regulatory region and method of using same
US7154024B2 (en) 1997-06-23 2006-12-26 Pioneer Hi-Bred, Inc. Male tissue-preferred regulatory sequences of Ms45 gene and method of using same
GB9719359D0 (en) * 1997-09-11 1997-11-12 Nickerson Biocem Ltd The Use of DNA Sequences
CN1206360C (zh) 1998-02-20 2005-06-15 辛甄塔有限公司 杂交种子生产
US7303917B2 (en) * 1998-03-20 2007-12-04 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Eastern Cereal & Oilseed, Research Center Modification of pollen coat protein composition
JP4187413B2 (ja) 1998-03-20 2008-11-26 コモンウェルス サイエンティフィック アンドインダストリアル リサーチ オーガナイゼーション 遺伝子発現の制御
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
US20040214330A1 (en) 1999-04-07 2004-10-28 Waterhouse Peter Michael Methods and means for obtaining modified phenotypes
US8598332B1 (en) 1998-04-08 2013-12-03 Bayer Cropscience N.V. Methods and means for obtaining modified phenotypes
PT1068311E (pt) 1998-04-08 2011-07-20 Commw Scient Ind Res Org Processos e meios de obter fenótipos modificados
US6750377B1 (en) * 1998-06-19 2004-06-15 Advanta Technology Ltd. Method of breeding glyphosate resistant plants
US6693185B2 (en) 1998-07-17 2004-02-17 Bayer Bioscience N.V. Methods and means to modulate programmed cell death in eukaryotic cells
AR021056A1 (es) * 1998-11-03 2002-06-12 Syngenta Participations Ag Adn que comprende un gen especifico de antera de arroz y planta transgenica transformada con el mismo
GB9918061D0 (en) 1999-07-30 1999-10-06 Univ Bath Modified plants
US6423885B1 (en) 1999-08-13 2002-07-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells
JP2001095406A (ja) * 1999-09-30 2001-04-10 Japan Tobacco Inc 雄性不稔植物の作出方法
US6384304B1 (en) 1999-10-15 2002-05-07 Plant Genetic Systems N.V. Conditional sterility in wheat
US6509516B1 (en) 1999-10-29 2003-01-21 Plant Genetic Systems N.V. Male-sterile brassica plants and methods for producing same
US6444877B1 (en) 1999-11-04 2002-09-03 Westvaco Corporation Liquidambar styraciflua AGAMOUS (LSAG) gene
US6506963B1 (en) 1999-12-08 2003-01-14 Plant Genetic Systems, N.V. Hybrid winter oilseed rape and methods for producing same
US6646186B1 (en) * 2000-07-26 2003-11-11 Stine Seed Farm Inc. Hybrid soybeans and methods of production
US20040219525A1 (en) 2000-08-25 2004-11-04 Heiko Haertel Plant polynucleotides encoding novel prenyl proteases
GB0025225D0 (en) * 2000-10-14 2000-11-29 Cambridge Advanced Tech Plant cell death system
EP1207204A1 (de) 2000-11-16 2002-05-22 KWS Saat AG Gewebespezifische Promotoren aus der Zuckerrübe
US7645919B2 (en) * 2001-08-06 2010-01-12 Monsanto Technology Llc DNA molecules from maize and methods of use thereof
US7230168B2 (en) 2001-12-20 2007-06-12 The Curators Of The University Of Missouri Reversible male sterility in transgenic plants by expression of cytokinin oxidase
US20100031387A1 (en) * 2002-02-07 2010-02-04 Hybrigene, Inc. Prevention of transgene escape in genetically modified perennials
WO2003066823A2 (en) * 2002-02-07 2003-08-14 Hybrigene, Inc Prevention of transgene escape in genetically modified perennials
US7576262B2 (en) 2002-03-14 2009-08-18 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization Modified gene-silencing RNA and uses thereof
DE10212892A1 (de) 2002-03-20 2003-10-09 Basf Plant Science Gmbh Konstrukte und Verfahren zur Regulation der Genexpression
JP4113952B2 (ja) * 2002-03-22 2008-07-09 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 機能性植物、その機能性植物を生産するために使用されるプロモーター、ならびにその利用法
US20050044596A1 (en) * 2003-03-19 2005-02-24 Smith Alan G. Methods to confer enhanced floral properties to plants
US7786349B2 (en) 2003-04-09 2010-08-31 Bayer Bioscience N.V. Methods and means for increasing the tolerance of plants to stress conditions
US7667096B2 (en) 2003-06-03 2010-02-23 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Conditional sterility in plants
IL157538A0 (en) 2003-08-21 2004-03-28 Bar Ilan Res & Dev Company Ltd Plant resistant to cytoplasm-feeding parasites
US8709811B2 (en) 2003-10-03 2014-04-29 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for synthesis of a flavor and aroma volatile in plants
KR100537955B1 (ko) * 2003-10-29 2005-12-20 학교법인고려중앙학원 꽃가루 특이적 유전자 발현 프로모터
CN104313049A (zh) 2003-12-16 2015-01-28 先锋高级育种国际公司 显性基因抑制性转基因及其使用方法
US20070169227A1 (en) 2003-12-16 2007-07-19 Pioneer Hi-Bred International Inc. Dominant Gene Suppression Transgenes and Methods of Using Same
WO2005100575A2 (en) 2004-04-14 2005-10-27 Bayer Bioscience N.V. Rice pollen-specific promoters and uses thereof
US8030549B2 (en) 2004-05-19 2011-10-04 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Broccoli type adapted for ease of harvest
US7453025B2 (en) 2004-09-22 2008-11-18 Arborgen, Llc Reproductive ablation constructs
KR101331677B1 (ko) 2004-09-24 2013-11-26 바이엘 크롭사이언스 엔.브이. 스트레스 내성 식물
GB0421598D0 (en) 2004-09-29 2004-10-27 Cambridge Advanced Tech Modification of plant development and morphology
US7429692B2 (en) 2004-10-14 2008-09-30 Ceres, Inc. Sucrose synthase 3 promoter from rice and uses thereof
JP2007060979A (ja) * 2005-08-31 2007-03-15 Asahi Breweries Ltd システインプロテアーゼ遺伝子を導入した葯の裂開を抑制する植物
EP2980220A1 (en) 2005-09-20 2016-02-03 BASF Plant Science GmbH Improved methods controlling gene expression
CA2628656C (en) 2005-11-22 2016-05-17 Franciscus Van Den Bosch Broccoli type having curds with detached florets
US8669418B2 (en) 2005-12-22 2014-03-11 Vib Vzw Means and methods for mediating protein interference
AU2007229005B2 (en) 2006-03-21 2012-05-31 Bayer Cropscience Nv Stress resistant plants
EP2018431B1 (en) 2006-05-12 2011-08-10 Bayer BioScience N.V. Novel stress-related micro-RNA molecules and uses thereof
CL2007003744A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un derivado 2-piridilmetilbenzamida y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
CL2007003743A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende fenamidona y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
BRPI0701230B1 (pt) 2007-02-05 2018-06-26 Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária - Embrapa Composições e métodos para modificar a expressão de genes usando o promotor do gene da proteína de conjugação à ubiquitina de plantas de algodoeiro
BRPI0701172B1 (pt) 2007-02-05 2019-11-26 Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuaria Embrapa composições e métodos para modificar a expressão de genes usando o promotor do gene da proteína de conjugação à ubiquitina de plantas de soja
EP1969931A1 (de) * 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Fluoalkylphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969929A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Substituierte Phenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969934A1 (de) * 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG 4-Cycloalkyl-oder 4-arylsubstituierte Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
WO2008110281A2 (de) 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag 3,4-disubstituierte phenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
EP2136627B1 (de) 2007-03-12 2015-05-13 Bayer Intellectual Property GmbH Dihalogenphenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
EP1969930A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
BRPI0701826B1 (pt) 2007-03-16 2021-02-17 Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária proteínas da teia de aranha nephilengys cruentata, avicularia juruensis e parawixia bistriata isoladas da biodiversidade brasileira
JP2010524869A (ja) 2007-04-19 2010-07-22 バイエル・クロツプサイエンス・アクチエンゲゼルシヤフト チアジアゾリルオキシフェニルアミジンおよび殺菌剤としてのこれらの使用
US8459463B2 (en) 2007-04-24 2013-06-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method for sorting resistant seed from a mixture with susceptible seed
BRPI0810540A2 (pt) * 2007-04-24 2017-01-31 Pioneer Hi Bred Int método e programa informático para distinguir as sementes que contêm um elemento genético de interesse de uma amostra global
US8452445B2 (en) * 2007-04-24 2013-05-28 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method and computer program product for distinguishing and sorting seeds containing a genetic element of interest
EP2185706B1 (en) 2007-08-14 2017-09-27 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation Improved gene silencing methods
DE102007045919B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045953B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045956A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045957A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akarziden Eigenschaften
DE102007045955A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045920B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistische Wirkstoffkombinationen
DE102007045922A1 (de) 2007-09-26 2009-04-02 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2090168A1 (de) 2008-02-12 2009-08-19 Bayer CropScience AG Methode zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2064952A1 (en) 2007-11-29 2009-06-03 Bayer CropScience AG Method for reducing mycotoxin contamination in maize
EP2070413A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070416A1 (de) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Verwendung von Wirkstoffkombinationen zur Bekämpfung von tierischen Schädlingen
EP2070411A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070415A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2070414A1 (en) 2007-12-11 2009-06-17 Bayer CropScience AG Active compound combinations
WO2009085982A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Monsanto Technology Llc Method to enhance yield and purity of hybrid crops
EP2072506A1 (de) 2007-12-21 2009-06-24 Bayer CropScience AG Thiazolyloxyphenylamidine oder Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2092824A1 (de) 2008-02-25 2009-08-26 Bayer CropScience AG Heterocyclyl-Pyrimidine
EP2103615A1 (de) 2008-03-19 2009-09-23 Bayer CropScience AG 4'4'-Dioxaspiro-spirocyclisch substituierte Tetramate
MX2010011879A (es) 2008-04-30 2010-12-06 Bayer Cropscience Ag Esteres y tioesteres del acido tiazol-4-carboxilico como agentes fitoprotectores.
JP4251375B1 (ja) 2008-04-30 2009-04-08 淳一 田中 遺伝子操作手法により作出される優性の雄性不稔性を用いる自殖性植物におけるゲノムシャッフリング法および同方法に基づく循環選抜育種システム。
JP2011525505A (ja) 2008-06-27 2011-09-22 バイエル・クロツプサイエンス・アクチエンゲゼルシヤフト チアジアゾリルオキシフェニルアミジンおよび殺真菌剤としてのこれらの使用
EP2168434A1 (de) 2008-08-02 2010-03-31 Bayer CropScience AG Verwendung von Azolen zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
US20110190365A1 (en) 2008-08-14 2011-08-04 Bayer Crop Science Ag Insecticidal 4-phenyl-1H-pyrazoles
DE102008041695A1 (de) 2008-08-29 2010-03-04 Bayer Cropscience Ag Methoden zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2161259A1 (de) 2008-09-03 2010-03-10 Bayer CropScience AG 4-Halogenalkylsubstituierte Diaminopyrimidine als Fungizide
EP2334669B1 (de) * 2008-10-01 2015-12-23 Bayer Intellectual Property GmbH Heterocyclyl substituierte thiazole als pflanzenschutzmittel
BRPI0920845A2 (pt) * 2008-10-02 2018-05-22 Bayer Cropscience Ag uso de análogos de ácido heteroaromáticos contendo enxofre
PT2386203E (pt) 2008-10-15 2014-02-17 Bayer Cropscience Ag Utilização de ditiina-tetracarboximidas para combater fungos fitopatogénicos
EP2184273A1 (de) 2008-11-05 2010-05-12 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide
TW201031327A (en) 2008-11-14 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations having insecticidal and acaricidal properties
CN102257143B (zh) 2008-11-28 2013-11-06 科学及工业研究委员会 生产雄性不育植物的方法
EP2201838A1 (de) 2008-12-05 2010-06-30 Bayer CropScience AG Wirkstoff-Nützlings-Kombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
WO2010069495A1 (de) * 2008-12-18 2010-06-24 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Atpenine
EP2198709A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verfahren zur Bekämpfung resistenter tierischer Schädlinge
EP2198710A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verwendung von 5-Pyridin-4yl-(1,3)Thiazole zur Bekämpfung phytopathogener Pilze
EP2204094A1 (en) 2008-12-29 2010-07-07 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants Introduction
EP2039770A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039771A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039772A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants introduction
EP2387317A2 (de) 2009-01-15 2011-11-23 Bayer CropScience AG Fungizide Wirkstoffkombinationen enthaltend Bixafen oder dessen Salze
WO2010081646A2 (de) 2009-01-15 2010-07-22 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungizide wirkstoffkombinationen
BRPI1006916A8 (pt) 2009-01-19 2016-05-03 Bayer Cropscience Ag Dionas cíclicas e seu uso como inseticidas, acaricidas e/ou fungicidas
EP2100506A2 (en) 2009-01-23 2009-09-16 Bayer CropScience AG Uses of fluopyram
EP2227951A1 (de) 2009-01-23 2010-09-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren
BRPI1004930B1 (pt) 2009-01-28 2017-10-17 Bayer Intellectual Property Gmbh Compounds, fungicidal composition and method for controlling phytopathogenic fungi of crops.
AR075126A1 (es) 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
EP2223917A1 (de) 2009-02-02 2010-09-01 Bayer CropScience AG Isothiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
CN102361559B (zh) 2009-02-03 2013-11-06 拜尔农作物科学股份公司 含硫杂芳族酸类似物作为杀细菌剂的用途
EP2218717A1 (en) 2009-02-17 2010-08-18 Bayer CropScience AG Fungicidal N-((HET)Arylethyl)thiocarboxamide derivatives
CN102317259B (zh) 2009-02-17 2015-12-02 拜尔农科股份公司 杀真菌n-(苯基环烷基)羧酰胺，n-(苄基环烷基)羧酰胺和硫代羧酰胺衍生物
TW201031331A (en) 2009-02-19 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Pesticide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a fungicide or an insecticide active substance
WO2010102758A2 (de) 2009-03-11 2010-09-16 Bayer Cropscience Ag Halogenalkylmethylenoxy-phenyl-substituierte ketoenole
DE102009001469A1 (de) 2009-03-11 2009-09-24 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102010000662A1 (de) 2009-03-18 2010-10-21 Bayer Cropscience Ag Aminopropylthiazol-Derivate als Fungizide
DE102009001681A1 (de) 2009-03-20 2010-09-23 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001730A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001732A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
DE102009001728A1 (de) 2009-03-23 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
EP2232995A1 (de) 2009-03-25 2010-09-29 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
CN102448305B (zh) 2009-03-25 2015-04-01 拜尔农作物科学股份公司 具有杀昆虫和杀螨虫特性的活性成分结合物
JP2012521371A (ja) 2009-03-25 2012-09-13 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺虫特性および殺ダニ特性を有する活性化合物の組合せ
CN102361555B (zh) 2009-03-25 2014-05-28 拜尔农作物科学股份公司 具有杀昆虫和杀螨特性的活性化合物结合物
EP2410847A1 (de) 2009-03-25 2012-02-01 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden eigenschaften
WO2010108507A2 (de) 2009-03-25 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Synergistische wirkstoffkombinationen
EP2239331A1 (en) 2009-04-07 2010-10-13 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2245936A1 (en) * 2009-04-27 2010-11-03 Bayer CropScience AG Use of 4-aza indole derivatives for the reduction of mycotoxin contamination
JP5771189B2 (ja) 2009-05-06 2015-08-26 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ シクロペンタンジオン化合物、ならびにこの殺虫剤、殺ダニ剤および／または抗真菌剤としての使用
AR076839A1 (es) 2009-05-15 2011-07-13 Bayer Cropscience Ag Derivados fungicidas de pirazol carboxamidas
EP2251331A1 (en) 2009-05-15 2010-11-17 Bayer CropScience AG Fungicide pyrazole carboxamides derivatives
EP2432785B1 (de) 2009-05-19 2014-10-15 Bayer CropScience AG Herbizide spiroheterocyclische tetronsäurederivate
EP2253617A1 (de) 2009-05-20 2010-11-24 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen als Pestizide
EP2255626A1 (de) 2009-05-27 2010-12-01 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat Dehydrogenase Inhibitoren zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
PL2437595T3 (pl) 2009-06-02 2019-05-31 Bayer Cropscience Ag Zastosowanie fluopyramu do zwalczania Sclerotinia ssp.
EP2264010A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Hetarylamidine
EP2264012A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2264011A1 (de) 2009-06-03 2010-12-22 Bayer CropScience AG Heteroarylamidine und deren Verwendung als Fungizide
WO2010145846A1 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Bayer Bioscience N.V. Nicotiana benthamiana plants deficient in xylosyltransferase activity
WO2010145789A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Bayer Cropscience Ag Propargyloxybenzamide derivatives
EP2272846A1 (de) 2009-06-23 2011-01-12 Bayer CropScience AG Thiazolylpiperidin Derivate als Fungizide
EP2277870A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Substituierte Benzoxa(thia)zole
EP2277868A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Phenyloxy(thio)phenylamidbenzoxa(thia)zole
EP2277869A1 (de) 2009-06-24 2011-01-26 Bayer CropScience AG Cycloalkylamidbenzoxa(thia)zole als Fungizide
CA2767385A1 (en) 2009-07-08 2011-01-13 Bayer Cropscience Ag Phenyl(oxy/thio)alkanol derivatives
WO2011003528A2 (de) 2009-07-08 2011-01-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Substituierte phenyl(oxy/thio)alkanol-derivate
MX2012000566A (es) 2009-07-16 2012-03-06 Bayer Cropscience Ag Combinaciones sinergicas de principios activos con feniltriazoles.
WO2011006604A1 (de) 2009-07-17 2011-01-20 Bayer Cropscience Ag Substituierte aminothiazole und deren verwendung als fungizide
WO2011009182A2 (pt) 2009-07-24 2011-01-27 Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária Molécula de ácido nucléico isolada, construção gênica, vetor, célula transgênica, método para obtenção de uma célula e de uma planta transgênica, polipeptídeo isolado e purificado, composição pesticida biodegradável, método para o controle de uma praga, método de obtenção de linhagens transgênicas resistentes a um inseto praga
WO2011015524A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Bayer Cropscience Ag Fungicide heterocycles derivatives
EP2292094A1 (en) 2009-09-02 2011-03-09 Bayer CropScience AG Active compound combinations
AR077956A1 (es) 2009-09-14 2011-10-05 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
EP2301350A1 (en) 2009-09-16 2011-03-30 Bayer CropScience AG Use of succinate dehydrogenase inhibitors for increasing the content of desired ingredients in crops
WO2011032656A1 (de) 2009-09-18 2011-03-24 Bayer Cropscience Ag 5-fluor-2-thio-substituierte pyrimidin-derivate
EP2308866A1 (de) 2009-10-09 2011-04-13 Bayer CropScience AG Phenylpyri(mi)dinylpyrazole und ihre Verwendung als Fungizide
BR112012006841B8 (pt) 2009-10-15 2021-06-08 Bayer Cropscience Ag combinação de composto ativo, seus usos e método para curativamente ou preventivamente controlar os fungos fitopatogênicos e/ou microrganismos e/ou pragas de plantas ou safras
KR20120094533A (ko) 2009-10-16 2012-08-24 바이엘 크롭사이언스 아게 살진균제로서의 아미노프로페노에이트
WO2011048119A2 (en) 2009-10-20 2011-04-28 Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Methods and means to alter lipid biosynthesis by targeting multiple enzymes to suborganelle domains
WO2011051243A1 (en) 2009-10-29 2011-05-05 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
EP2493886B1 (de) 2009-10-30 2014-11-26 Bayer CropScience AG Heteroarylpiperidin und -piperazin derivate
WO2011051198A2 (de) 2009-10-30 2011-05-05 Bayer Cropscience Ag Pyridin-derivate als pflanzenschutzmittel
AU2010320995B2 (en) 2009-11-17 2015-01-15 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
EP2343280A1 (en) 2009-12-10 2011-07-13 Bayer CropScience AG Fungicide quinoline derivatives
EP2515649A2 (en) 2009-12-16 2012-10-31 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations
WO2011082941A1 (de) 2009-12-16 2011-07-14 Bayer Cropscience Ag Benzylsubstituierte thiadiazolyloxyphenylamidiniumsalze als fungizide
CN102762551A (zh) 2009-12-21 2012-10-31 拜尔农作物科学股份公司 噻吩基吡(嘧)啶基吡唑及其用于防治植物致病菌的用途
JP5785560B2 (ja) 2009-12-21 2015-09-30 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 殺真菌剤としてのビス（ジフルオロメチル）ピラゾール
EP2338890A1 (en) 2009-12-22 2011-06-29 Bayer CropScience AG 4,7-Diazaindole derivatives and their use as fungicides
US8796463B2 (en) 2009-12-28 2014-08-05 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
JP5782657B2 (ja) 2009-12-28 2015-09-24 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
CN102725270B (zh) 2009-12-28 2015-10-07 拜尔农科股份公司 杀真菌剂肟基-杂环衍生物
CN102811617A (zh) 2010-01-22 2012-12-05 拜耳知识产权有限责任公司 杀螨和/或杀虫活性物质结合物
EP2353387A1 (de) 2010-02-05 2011-08-10 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat-Dehydrogenase (SDH)-Inhibitoren in der Behandlung von Pflanzenarten der Familie der Süßgräser
JP6151917B2 (ja) 2010-02-10 2017-06-21 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ スピロヘテロ環置換テトラミン酸誘導体
ES2700996T3 (es) 2010-02-10 2019-02-20 Bayer Cropscience Ag Cetoenoles cíclicos sustituidos con bifenilo
UA108638C2 (uk) 2010-03-04 2015-05-25 Застосування солей імідів малеїнової кислоти для боротьби з фітопатогенними грибами
ES2523503T3 (es) 2010-03-04 2014-11-26 Bayer Intellectual Property Gmbh 2-Amidobencimidazoles sustituidos con fluoroalquilo y su uso para el aumento de la tolerancia al estrés en plantas
CN102970867A (zh) 2010-03-18 2013-03-13 拜耳知识产权有限责任公司 作为活性剂对抗非生物植物应激的芳基和杂芳基磺酰胺
WO2011117184A1 (de) 2010-03-24 2011-09-29 Bayer Cropscience Ag Fludioxonil-derivate
WO2011124554A2 (de) 2010-04-06 2011-10-13 Bayer Cropscience Ag Verwendung der 4-phenylbuttersäure und/oder ihrer salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
AR081810A1 (es) 2010-04-07 2012-10-24 Bayer Cropscience Ag Piridinilpirazoles biciclicos
CN102933083B (zh) 2010-04-09 2015-08-12 拜耳知识产权有限责任公司 (1-氰基环丙基)苯基次膦酸或其酯的衍生物和/或其盐提高植物对非生物胁迫耐受性的用途
CN103068243B (zh) 2010-04-14 2014-12-03 拜尔农作物科学股份公司 活性化合物结合物
PL2558470T3 (pl) 2010-04-14 2014-12-31 Bayer Ip Gmbh Pochodne ditiinopirydazynodionu jako środki grzybobójcze
WO2011128297A2 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations
EP2377397A1 (de) 2010-04-14 2011-10-19 Bayer CropScience AG Verwendung fungizider Wirkstoffe zur Kontrolle von Mykosen an Palmengewächsen
EP2377867A1 (de) 2010-04-14 2011-10-19 Bayer CropScience AG Dithiinopyridazinon-Derivate
EP2558471B1 (de) 2010-04-14 2014-05-21 Bayer CropScience AG Thienodithiinderivate als Fungizide
EP2706058B1 (de) 2010-04-14 2015-08-12 Bayer Intellectual Property GmbH Dithiin-Derivate als Fungizide
BR112012027762B1 (pt) 2010-04-28 2018-06-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Derivados de cetoheteroarilpiperidina e - piperazina como fungicidas
WO2011134911A2 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2563784A1 (en) 2010-04-28 2013-03-06 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives
JP2013525400A (ja) 2010-04-28 2013-06-20 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺菌剤ヒドロキシモイル−複素環誘導体
US8815775B2 (en) 2010-05-18 2014-08-26 Bayer Cropscience Ag Bis(difluoromethyl)pyrazoles as fungicides
EP2576528A1 (de) 2010-05-27 2013-04-10 Bayer CropScience AG Heterocyclische alkanolderivate als fungizide
BR112012030208A2 (pt) 2010-05-27 2015-09-29 Bayer Intelectual Property Gmbh derivados de alcanol heterocíclicos como fungicidas
WO2011147816A1 (de) 2010-05-27 2011-12-01 Bayer Cropscience Ag Heterocyclische alkanolderivate als fungizide
JP5872548B2 (ja) 2010-05-27 2016-03-01 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌剤としてのヘテロ環式アルカノール誘導体
WO2011147765A1 (de) 2010-05-27 2011-12-01 Bayer Cropscience Ag Pyridinylcarbonsäure derivate als fungizide
CN102985414B (zh) 2010-05-27 2016-05-18 拜耳知识产权有限责任公司 作为杀真菌剂的杂环硫代取代链烷醇衍生物
UA110703C2 (uk) 2010-06-03 2016-02-10 Байєр Кропсайнс Аг Фунгіцидні похідні n-[(тризаміщений силіл)метил]-карбоксаміду
US8653114B2 (en) 2010-06-03 2014-02-18 Bayer Intellectual Property Gmbh O-cyclopropylcyclohexyl-carboxanilides and their use as fungicides
JP5730992B2 (ja) 2010-06-03 2015-06-10 バイエル・クロップサイエンス・アーゲーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ａｇ Ｎ−［（ヘタ）アリールエチル）］ピラゾール（チオ）カルボキサミド類及びそれらのヘテロ置換された類似体
CN102918028B (zh) 2010-06-03 2016-04-27 拜尔农科股份公司 N-[(杂)芳基烷基]吡唑(硫代)羧酰胺及其杂取代的类似物
CN103119169B (zh) 2010-06-09 2018-11-20 拜尔作物科学公司 植物基因组改造中常用的在核苷酸序列上修饰植物基因组的方法和工具
AU2011264074B2 (en) 2010-06-09 2015-01-22 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
WO2011161034A1 (de) 2010-06-22 2011-12-29 Bayer Cropscience Ag 3-aryl-4-(2,6-dimethylbenzyliden)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide
WO2011161035A1 (de) 2010-06-22 2011-12-29 Bayer Cropscience Ag 3-aryl-4-(2-thienylmethylen)-isoxazol-5(4h)-one als fungizide
ES2626601T3 (es) 2010-06-28 2017-07-25 Bayer Intellectual Property Gmbh Compuestos heterocíclicos como pesticidas
UA111593C2 (uk) 2010-07-07 2016-05-25 Баєр Інтеллекчуел Проперті Гмбх Аміди антранілової кислоти у комбінації з фунгіцидами
EP2590996B1 (en) 2010-07-08 2016-05-25 Bayer CropScience NV Glucosinolate transporter protein and uses thereof
AR082286A1 (es) 2010-07-20 2012-11-28 Bayer Cropscience Ag Benzocicloalquenos como agentes antifungicos
AU2011281679B2 (en) 2010-07-20 2015-09-03 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of anthranilic acid amide derivatives for controlling insects and spider mites by watering, mixing with soil, drench treatment, droplet application, injection into the soil, stems or blossoms, in hydroponic systems, by treating the planting hole or immersion application, floating or seed box application or by the treatment of seeds, and for increasing the stress tolerance in plants to abiotic stress
EP2600718B1 (en) 2010-08-05 2017-05-10 Bayer Intellectual Property GmbH Active compounds combinations comprising prothioconazole and fluxapyroxad
US20120122928A1 (en) 2010-08-11 2012-05-17 Bayer Cropscience Ag Heteroarylpiperidine and -Piperazine Derivatives as Fungicides
EP2423210A1 (de) 2010-08-25 2012-02-29 Bayer CropScience AG Heteroarylpiperidin- und -piperazinderivate als Fungizide
US8759527B2 (en) 2010-08-25 2014-06-24 Bayer Cropscience Ag Heteroarylpiperidine and -piperazine derivatives as fungicides
WO2012025506A1 (de) 2010-08-26 2012-03-01 Bayer Cropscience Ag 5-iod-triazol-derivate
EP2611813B1 (de) 2010-09-03 2015-01-21 Bayer Intellectual Property GmbH Dithiin-tetra(thio)carboximide zur bekämpfung phytopathogener pilze
AU2011298423B2 (en) 2010-09-03 2015-11-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Substituted fused pyrimidinones and dihydropyrimidinones
JP2012062267A (ja) 2010-09-15 2012-03-29 Bayer Cropscience Ag 殺虫性ピロリンｎ−オキサイド誘導体
JP2012082186A (ja) 2010-09-15 2012-04-26 Bayer Cropscience Ag 殺虫性アリールピロリジン類
WO2012038480A2 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Bayer Cropscience Ag Use of biological or chemical control agents for controlling insects and nematodes in resistant crops
EP2460406A1 (en) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Use of fluopyram for controlling nematodes in nematode resistant crops
EP2624699B1 (en) 2010-10-07 2018-11-21 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Fungicide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a thiazolylpiperidine derivative
WO2012045726A2 (en) 2010-10-07 2012-04-12 Bayer Cropscience Ag 5-heteroarylimino-1,2,3-dithiazoles
US9545105B2 (en) 2010-10-21 2017-01-17 Bayer Intellectual Property Gmbh 1-(heterocyclic carbonyl) piperidines
MX2013004278A (es) 2010-10-21 2013-06-05 Bayer Ip Gmbh N-bencil carboxamidas heterociclicas.
JP5918773B2 (ja) 2010-10-27 2016-05-18 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌剤としてのヘテロアリールピペリジンおよびヘテロアリールピペラジン誘導体
JP2013542215A (ja) 2010-11-02 2013-11-21 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー Ｎ−ヘタリールメチルピラゾリルカルボキサミド類
WO2012062749A1 (de) 2010-11-12 2012-05-18 Bayer Cropscience Ag Benzimidazolidinone verwendbar als fungizide
JP2013543858A (ja) 2010-11-15 2013-12-09 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー ５−ハロゲノピラゾール（チオ）カルボキサミド類
US9206137B2 (en) 2010-11-15 2015-12-08 Bayer Intellectual Property Gmbh N-Aryl pyrazole(thio)carboxamides
MX2013005407A (es) 2010-11-15 2013-07-03 Bayer Ip Gmbh 5-halopirazolcarboxamidas.
CN103443078B (zh) 2010-11-15 2017-03-22 拜耳知识产权有限责任公司 氰基烯胺以及其作为杀真菌剂的用途
US9351489B2 (en) 2010-11-15 2016-05-31 Bayer Intellectual Property Gmbh Cyanoenamines and their use as fungicides
EP2454939A1 (en) 2010-11-18 2012-05-23 Bayer CropScience AG Post-harvest treatment
WO2012072547A1 (de) 2010-11-30 2012-06-07 Bayer Cropscience Ag Pyrimidin- derivate und ihre verwendung als schädlingsbekämpfungsmittel
KR20130123416A (ko) 2010-12-01 2013-11-12 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 작물에서 선충류를 구제하고 수확량을 증가시키기 위한 플루오피람의 용도
AR083987A1 (es) 2010-12-01 2013-04-10 Bayer Cropscience Ag Amidas de acido pirazolcarboxilico utiles para la reduccion de la contaminacion de micotoxina en las plantas
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
EP2474542A1 (en) 2010-12-29 2012-07-11 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
JP2014502611A (ja) 2010-12-29 2014-02-03 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EP2471363A1 (de) 2010-12-30 2012-07-04 Bayer CropScience AG Verwendung von Aryl-, Heteroaryl- und Benzylsulfonamidocarbonsäuren, -carbonsäureestern, -carbonsäureamiden und -carbonitrilen oder deren Salze zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
WO2012088645A1 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Bayer Cropscience Ag Method for improving plant quality
CA2827159A1 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Ruth Meissner Synergistic combinations containing a dithiino-tetracarboxamide fungicide and a herbicide, safener or plant growth regulator
JP2014508752A (ja) 2011-02-17 2014-04-10 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 治療用の置換３−（ビフェニル−３−イル）−８，８−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−１−アザスピロ［４．５］デカ−３−エン−２−オン
EP2681191B1 (de) 2011-03-01 2015-09-02 Bayer Intellectual Property GmbH 2-acyloxy-pyrrolin-4-one
EP2494867A1 (de) 2011-03-01 2012-09-05 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden
EP2508072A2 (en) 2011-03-10 2012-10-10 Bayer CropScience AG Use of dithiine-tetracarboximides for controlling phytopathogenic fungi on (flower) bulbs
WO2012120105A1 (en) 2011-03-10 2012-09-13 Bayer Cropscience Ag Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
EP2499911A1 (en) 2011-03-11 2012-09-19 Bayer Cropscience AG Active compound combinations comprising fenhexamid
US20140005230A1 (en) 2011-03-14 2014-01-02 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2502495A1 (en) 2011-03-16 2012-09-26 Bayer CropScience AG Use of a dithiino-tetracarboxamide for the protection of harvested products against phytopathogenic fungi
JP5951650B2 (ja) 2011-03-18 2016-07-13 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ Ｎ−（３−カルバモイルフェニル）−１ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド誘導体及び害虫を防除するためのそれらの使用
PT2688413T (pt) 2011-03-23 2018-03-27 Bayer Ip Gmbh Combinações de compostos ativos
BR112013024604A2 (pt) 2011-03-25 2016-07-19 Bayer Ip Gmbh combinações de compostos ativos
UA110241C2 (en) 2011-03-31 2015-12-10 Bayer Ip Gmbh Herbicides and fungicides active phneylisoxazoline 3-5-carboxamide and 3- phneylisoxazoline -5-thioamides
EP2694494A1 (en) 2011-04-08 2014-02-12 Bayer Intellectual Property GmbH Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
AR085588A1 (es) 2011-04-13 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
AR085587A1 (es) 2011-04-13 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos
EP2510787A1 (en) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer Cropscience AG Propenoates as fungicides
AR085585A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Vinil- y alquinilciclohexanoles sustituidos como principios activos contra estres abiotico de plantas
AR085568A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-penta-2,4-dienos y 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas
AR090010A1 (es) 2011-04-15 2014-10-15 Bayer Cropscience Ag 5-(ciclohex-2-en-1-il)-penta-2,4-dienos y 5-(ciclohex-2-en-1-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas, usos y metodos de tratamiento
EP2511255A1 (de) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer CropScience AG Substituierte Prop-2-in-1-ol- und Prop-2-en-1-ol-Derivate
GB201106964D0 (en) 2011-04-21 2011-06-08 Rothamsted Res Ltd A method
US20140038823A1 (en) 2011-04-22 2014-02-06 Peter Dahmen Active compound combinations comprising a (thio)carboxamide derivative and a fungidical compound
EP2524598A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising dithianon
EP2524600A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising phosphorous acid or a derivative thereof and Tebuconazole or Myclobutanil
RU2589909C2 (ru) 2011-05-17 2016-07-10 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Комбинации активных соединений
EP2524599A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2524601A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising a phosphorous acid derivative and cyazofamid
EP2532233A1 (en) 2011-06-07 2012-12-12 Bayer CropScience AG Active compound combinations
WO2012171914A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent
AR086992A1 (es) 2011-06-20 2014-02-05 Bayer Ip Gmbh Tienilpiri(mi)dinilpirazoles
EP2540165A1 (en) 2011-06-30 2013-01-02 Bayer CropScience AG Use of a halogenated pesticide in combination with a biological pest control agent
BR112014000267A2 (pt) 2011-07-04 2016-09-20 Bayer Ip Gmbh utilização de isoquinolinonas, isoquinolinedionas, isoquinolinetrionas e dihidroisoquinolinonas substituídas ou, em cada caso, sais das mesmas como agentes ativos contra o stress abiótico em plantas
UA115128C2 (uk) 2011-07-27 2017-09-25 Байєр Інтеллектуал Проперті Гмбх Протравлювання насіння для боротьби з фітопатогенними грибами
EP2551348B1 (en) 2011-07-29 2014-09-24 Icon Genetics GmbH Production of galactosylated N-glycans in plants
CN103717076B (zh) 2011-08-10 2016-04-13 拜耳知识产权股份有限公司 含有特定特特拉姆酸衍生物的活性化合物组合物
EP2742030B1 (de) 2011-08-11 2016-07-27 Bayer Intellectual Property GmbH 1,2,4-triazolyl-substituierte ketoenole zum einsatz im pflanzenschutz
US20140206726A1 (en) 2011-08-22 2014-07-24 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
MX348003B (es) 2011-08-22 2017-03-08 Bayer Cropscience Nv Metodos y medios para modificar un genoma vegetal.
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
BR112014005262A2 (pt) 2011-09-09 2017-04-04 Bayer Ip Gmbh método para aprimorar um vegetal e utilização de um composto de fórmula (i) ou (ii)
CN103874681B (zh) 2011-09-12 2017-01-18 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌性4‑取代的‑3‑{苯基[(杂环基甲氧基)亚氨基]甲基}‑1,2,4‑噁二唑‑5(4h)‑酮衍生物
JP5959646B2 (ja) 2011-09-15 2016-08-02 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌剤としてのピペリジンピラゾール類
MX362112B (es) 2011-09-16 2019-01-07 Bayer Ip Gmbh Uso de fenilpirazolin-3-carboxilatos para mejorar el rendimiento de las plantas.
JP6138797B2 (ja) 2011-09-16 2017-05-31 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 植物収量を向上させるためのアシルスルホンアミド類の使用
BR112014006208B1 (pt) 2011-09-16 2018-10-23 Bayer Intellectual Property Gmbh método de indução de respostas reguladoras do crescimento nas plantas aumentando o rendimento de plantas úteis ou plantas de cultura e composição de aumento do rendimento da planta compreendendo isoxadifen-etilo ou isoxadifeno e combinação de fungicidas
US9226505B2 (en) 2011-09-23 2016-01-05 Bayer Intellectual Property Gmbh 4-substituted 1-phenylpyrazole-3-carboxylic acid derivatives as agents against abiotic plant stress
JP6255344B2 (ja) 2011-10-04 2017-12-27 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ サッカロピンデヒドロゲナーゼ遺伝子を阻害することによって真菌類及び卵菌類を防除するためのＲＮＡｉ
EP2764105B1 (en) 2011-10-04 2017-03-15 Icon Genetics GmbH Nicotiana benthamiana plants deficient in fucosyltransferase activity
EP2763993B1 (en) 2011-10-06 2017-04-19 Bayer Intellectual Property GmbH Heterocyclylpyri(mi)dinylpyrazole
WO2013050324A1 (de) 2011-10-06 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b)
MX355016B (es) 2011-10-06 2018-04-02 Bayer Ip Gmbh Heterociclilpiri(mi)dinilpirazoles como fungicidas.
US9617286B2 (en) 2011-11-21 2017-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicide N-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
CN104066725A (zh) 2011-11-25 2014-09-24 拜耳知识产权有限责任公司 新颖的杂环烷醇衍生物
EP2782447A1 (de) 2011-11-25 2014-10-01 Bayer Intellectual Property GmbH 2-iod-imidazol-derivate
JP2015504442A (ja) 2011-11-30 2015-02-12 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌性ｎ−ビシクロアルキルおよびｎ−トリシクロアルキル（チオ）カルボキサミド誘導体
EP2601839A1 (en) 2011-12-08 2013-06-12 Bayer CropScience AG Synergisitic fungicidal combinations containing phosphorous acid derivative and zoxamide
EP2606732A1 (en) 2011-12-19 2013-06-26 Bayer CropScience AG Use of an anthranilic diamide derivatives with heteroaromatic and heterocyclic substituents in combination with a biological control agent
US9414595B2 (en) 2011-12-19 2016-08-16 Bayer Cropscience Ag Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops
ES2649403T3 (es) 2011-12-20 2018-01-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Nuevas amidas aromáticas insecticidas
US9375009B2 (en) 2011-12-27 2016-06-28 Bayer Intellectual Property Gmbh Heteroarylpiperidine and piperazine derivatives as fungicides
TWI558701B (zh) 2011-12-29 2016-11-21 拜耳知識產權公司 殺真菌之３－［（１，３－噻唑－４－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物
TWI557120B (zh) 2011-12-29 2016-11-11 拜耳知識產權公司 殺真菌之３－［（吡啶－２－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物
US20150011394A1 (en) 2012-01-21 2015-01-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of host defense inducers for controlling bacterial harmful organisms in useful plants
PT2806740T (pt) 2012-01-25 2018-04-16 Bayer Ip Gmbh Composição de compostos ativos que contém bacillus de fluopiram e agente de controlo biológico
EP2806739A1 (en) 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
EP2622961A1 (en) 2012-02-02 2013-08-07 Bayer CropScience AG Acive compound combinations
NZ722692A (en) 2012-02-22 2018-02-23 Bayer Ip Gmbh Use of succinate dehydrogenase inhibitors (sdhis) for controlling wood diseases in grape
PE20190346A1 (es) 2012-02-27 2019-03-07 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos
CN104703998B (zh) 2012-03-13 2020-08-21 先锋国际良种公司 植物中雄性育性的遗传减少
WO2013138309A1 (en) 2012-03-13 2013-09-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Genetic reduction of male fertility in plants
JP2015515454A (ja) 2012-03-14 2015-05-28 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺有害生物性アリールピロリジン類
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
CN104245687B (zh) 2012-04-12 2016-12-14 拜尔农科股份公司 作为杀真菌剂的n-酰基-2-(环)烷基吡咯烷和哌啶
WO2013156559A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-n-[(heterocyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
EP2838363A1 (en) 2012-04-20 2015-02-25 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
MX2014013489A (es) 2012-05-09 2015-02-12 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopirazolindanil carboxamidas.
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
CN104768934B (zh) 2012-05-09 2017-11-28 拜耳农作物科学股份公司 吡唑茚满基甲酰胺
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
US9364006B2 (en) 2012-05-30 2016-06-14 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
AR091197A1 (es) 2012-05-30 2015-01-21 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida
CN107926985B (zh) 2012-05-30 2021-02-02 拜尔农作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物
US9585399B2 (en) 2012-05-30 2017-03-07 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
EP2854549B1 (en) 2012-05-30 2018-08-01 Bayer Cropscience AG Composition comprising a biological control agent and fluopicolide
US9386773B2 (en) 2012-05-30 2016-07-12 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex I or II
WO2013178653A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of amino acid or protein biosynthesis, inhibitors of atp production and inhibitors of the cell wall synthesis
JP6285423B2 (ja) 2012-05-30 2018-02-28 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 生物農薬および殺虫剤を含む組成物
WO2013184768A1 (en) 2012-06-05 2013-12-12 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods of gene silencing in plants
AU2013285460A1 (en) 2012-07-06 2015-01-22 Bayer Cropscience Nv Brassica plants with modified seed oil composition
CA2878287A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Bayer Cropscience Nv Soybean rod1 gene sequences and uses thereof
US9873886B2 (en) 2012-07-06 2018-01-23 Bayer Cropscience Nv Brassica ROD1 gene sequences and uses thereof
WO2014009322A1 (en) 2012-07-11 2014-01-16 Bayer Cropscience Ag Use of fungicidal combinations for increasing the tolerance of a plant towards abiotic stress
WO2014019983A1 (en) 2012-07-31 2014-02-06 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a pesticidal terpene mixture and an insecticide
JP2015532650A (ja) 2012-09-05 2015-11-12 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 非生物的植物ストレスに対する活性物質としての置換された２−アミドベンズイミダゾール類、２−アミドベンゾオキサゾール類および２−アミドベンゾチアゾール類またはそれらの塩の使用
MX354745B (es) 2012-09-25 2018-03-16 Bayer Cropscience Ag 3-fenilisoxazolin-5-carboxamidas 5-oxi-sustituidas y 3-fenilisoxazolin-5-tioamidas 5-oxi-sustituidas herbicidas y fungicidas.
DE102012219029A1 (de) 2012-10-18 2014-04-24 Bayer Cropscience Ag Verwendung von Dithiin-tetracarboximiden zum Bekämpfen von neuer Blattfallkrankheit Marssonia coronaria
US20150259294A1 (en) 2012-10-19 2015-09-17 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
CN104869829B (zh) 2012-10-19 2017-11-17 拜尔农科股份公司 包含羧酰胺衍生物和生物控制剂的活性化合物复配物
AU2013333846B2 (en) 2012-10-19 2017-04-20 Bayer Cropscience Ag Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
EP2908641B1 (en) 2012-10-19 2018-01-10 Bayer Cropscience AG Method for treating plants against fungi resistant to fungicides using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
JP6153619B2 (ja) 2012-10-19 2017-06-28 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト カルボキサミド誘導体を含む活性化合物の組み合わせ
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2925137A1 (en) 2012-11-30 2015-10-07 Bayer CropScience AG Binary fungicidal or pesticidal mixture
EA030236B1 (ru) 2012-11-30 2018-07-31 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Тройные фунгицидные и пестицидные смеси
BR112015012055B1 (pt) 2012-11-30 2021-01-12 Bayer Cropscience Ag composição fungicida ternária, seu processo de preparação, método para controlar um ou mais microrganismos nocivos, semente resistente a microrganismos nocivos e seu método de tratamento
US9510596B2 (en) 2012-11-30 2016-12-06 Bayer Cropscience Ag Binary pesticidal and fungicidal mixtures
WO2014083088A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary fungicidal mixtures
EP2925143A2 (en) 2012-12-03 2015-10-07 Bayer CropScience AG Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
BR112015012702A2 (pt) 2012-12-03 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag composição que compreende um agente de controle biológico e um fungicida
ES2667555T3 (es) 2012-12-03 2018-05-11 Bayer Cropscience Ag Composición que comprende un agente de control biológico y un insecticida
ES2770775T3 (es) 2012-12-03 2020-07-03 Bayer Cropscience Ag Procedimiento para el control de plagas aplicando una combinación de Paecilomyces lilacinus y Fluopyram
US9867377B2 (en) 2012-12-03 2018-01-16 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
MX2015006946A (es) 2012-12-03 2015-09-08 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende agentes de control biologico.
CA2893080A1 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
EP2740356A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte (2Z)-5(1-Hydroxycyclohexyl)pent-2-en-4-insäure-Derivate
BR112015012926A2 (pt) 2012-12-05 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag uso de 1-(aril etinil)-, 1-(heteroaril etinil)-, 1-(heterociclil etinil)- substituído e 1-(cicloalquenil etinil)-ciclohexanóis como agentes ativos contra o estresse abiótico da planta
EP2740720A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte bicyclische- und tricyclische Pent-2-en-4-insäure -Derivate und ihre Verwendung zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
AR093909A1 (es) 2012-12-12 2015-06-24 Bayer Cropscience Ag Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
BR112015014307A2 (pt) 2012-12-19 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag difluorometil-nicotínico- tetrahidronaftil carboxamidas
CA2900029C (en) 2013-02-06 2021-03-02 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Halogen-substituted pyrazol derivatives as pest-control agents
AU2014214628A1 (en) 2013-02-11 2015-08-13 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising gougerotin and an insecticide
MX2015010259A (es) 2013-02-11 2015-10-29 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden un agente de control biologico basado en la cepa nrrl b-50550 de streptomyces microflavus y otro agente de control biologico.
KR20150119023A (ko) 2013-02-11 2015-10-23 바이엘 크롭사이언스 엘피 고제로틴 및 살진균제를 포함하는 조성물
CN105705490A (zh) 2013-03-07 2016-06-22 拜耳作物科学股份公司 杀真菌的3-{苯基[(杂环基甲氧基)亚氨基]甲基}-杂环衍生物
EP2967068A1 (en) 2013-03-12 2016-01-20 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Use of dithiine-tetracarboximides for controlling bacterial harmful organisms in useful plants
CA2903693A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize stress related transcription factor 18 and uses thereof
CN105143454A (zh) 2013-03-15 2015-12-09 先锋国际良种公司 Acc氧化酶多核苷酸和多肽的组合物和使用方法
EP2781151A1 (en) 2013-03-18 2014-09-24 Bayer CropScience AG Methods of separating hybrid seed from a mixture of seeds
US9550752B2 (en) 2013-04-12 2017-01-24 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Triazolinthione derivatives
JP6397482B2 (ja) 2013-04-12 2018-09-26 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 新規トリアゾール誘導体
CN105555135B (zh) 2013-04-19 2018-06-15 拜耳作物科学股份公司 涉及邻苯二甲酰胺衍生物应用的用于改善对转基因植物生产潜能的利用的方法
JP2016519687A (ja) 2013-04-19 2016-07-07 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト バイナリー殺虫または農薬混合物
EA036298B1 (ru) * 2013-04-19 2020-10-23 Басф Агрикалчерал Солюшнс Сид Юс Ллк Гибридные растения brassica и способы их получения
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
EP2801575A1 (en) 2013-05-07 2014-11-12 Bayer CropScience AG Heteroaryldihydropyridine derivatives as fungicides
CA2913068C (en) 2013-05-23 2023-01-10 Nomad Bioscience Gmbh Process of providing plants with abiotic stress resistance
US9770022B2 (en) 2013-06-26 2017-09-26 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-N-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
UA122386C2 (uk) 2013-07-01 2020-11-10 Байєр Кропсаєнс Нв Спосіб прискорення цвітіння, розвитку насіння або уповільнення проростання насіння у однодольних рослин
AU2014289341A1 (en) 2013-07-09 2016-01-28 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of selected pyridone carboxamides or salts thereof as active substances against abiotic plant stress
EP2837287A1 (en) 2013-08-15 2015-02-18 Bayer CropScience AG Use of prothioconazole for increasing root growth of Brassicaceae
PL3041355T3 (pl) 2013-09-03 2017-10-31 Bayer Cropscience Ag Zastosowanie grzybobójczych substancji czynnych do kontrolowania Chalara fraxinea w drzewostanie jesionu
UA120701C2 (uk) 2013-12-05 2020-01-27 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт N-циклоалкіл-n-{[2-(1-заміщений циклоалкіл)феніл]метилен}-(тіо)карбоксамідні похідні
TW201607929A (zh) 2013-12-05 2016-03-01 拜耳作物科學公司 Ｎ－環烷基－ｎ－｛［２－（１－經取代環烷基）苯基］亞甲基｝－（硫代）甲醯胺衍生物
EP2865267A1 (en) 2014-02-13 2015-04-29 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising phenylamidine compounds and biological control agents
EP2865265A1 (en) 2014-02-13 2015-04-29 Bayer CropScience AG Active compound combinations comprising phenylamidine compounds and biological control agents
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
AR101214A1 (es) 2014-07-22 2016-11-30 Bayer Cropscience Ag Ciano-cicloalquilpenta-2,4-dienos, ciano-cicloalquilpent-2-en-4-inas, ciano-heterociclilpenta-2,4-dienos y ciano-heterociclilpent-2-en-4-inas sustituidos como principios activos contra el estrés abiótico de plantas
AU2015317724B2 (en) 2014-09-17 2019-10-24 Basf Corporation Compositions comprising recombinant Bacillus cells and an insecticide
US10667522B2 (en) 2014-09-17 2020-06-02 Basf Se Compositions comprising recombinant Bacillus cells and another biological control agent
WO2016044548A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising recombinant bacillus cells and another biological control agent
AR103024A1 (es) 2014-12-18 2017-04-12 Bayer Cropscience Ag Piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como sustancias activas contra estrés abiótico de las plantas
CN107531676A (zh) 2015-04-13 2018-01-02 拜耳作物科学股份公司 N‑环烷基‑n‑(双杂环基亚乙基)‑(硫代)羧酰胺衍生物
US10934556B2 (en) 2015-04-16 2021-03-02 Council Of Scientific And Industrial Research Reversible expression system for transgene expression in plants
WO2017060321A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of pydiflumetofen for the reduction of mycotoxin contamination in plants
EP3178313A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 Leibniz-Institut für Pflanzenbiochemie Gene and protein for the synthesis of oxidized zingiberene derivatives
WO2017102923A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Bayer Cropscience Nv Brassicaceae plants resistant to plasmodiophora brassicae (clubroot)
BR112018070695A2 (pt) 2016-04-06 2019-02-12 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft combinação de vírus da poliedrose nuclear e diamidas
DE102016015741A1 (de) 2016-04-12 2017-11-30 Kws Saat Se Kernkodierte männliche Sterilität durch Mutation in Cytochrom P450 Oxidase
DE102016106656A1 (de) 2016-04-12 2017-10-12 Kws Saat Se Kernkodierte männliche Sterilität durch Mutation in Cytochrom P450 Oxidase
WO2017178407A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Fungicidal combinations
WO2018019676A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants
BR112019005668A2 (pt) 2016-09-22 2019-06-04 Bayer Ag novos derivados de triazol
US20190281828A1 (en) 2016-09-22 2019-09-19 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives
CN109890204A (zh) 2016-10-26 2019-06-14 拜耳作物科学股份公司 Pyraziflumid用于在种子处理应用中控制核盘菌属种的用途
WO2018104392A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of insecticides for controlling wireworms
EP3332645A1 (de) 2016-12-12 2018-06-13 Bayer Cropscience AG Verwendung substituierter pyrimidindione oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
WO2018108627A1 (de) 2016-12-12 2018-06-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
AU2018239406A1 (en) 2017-03-23 2019-09-26 Basf Se Anther-specific promoter and uses thereof
US11872262B2 (en) 2017-05-09 2024-01-16 Vib Vzw Means and methods for treating bacterial infections
CN110770232B (zh) 2017-06-13 2023-08-15 拜耳公司 除草活性的四氢和二氢呋喃羧酸和酯的3-苯基异噁唑啉-5-甲酰胺
AU2018285213B2 (en) 2017-06-13 2022-05-19 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidally active 3-phenylisoxazoline-5-carboxamides of tetrahydro and dihydrofuran carboxamides
WO2019025153A1 (de) 2017-07-31 2019-02-07 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung von substituierten n-sulfonyl-n'-aryldiaminoalkanen und n-sulfonyl-n'-heteroaryldiaminoalkanen oder deren salzen zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
US20200369630A1 (en) 2017-08-17 2020-11-26 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidally active 3-phenyl-5-trifluoromethylisoxazoline-5-carboxamides of cyclopentylcarboxylic acids and esters
AU2018325363A1 (en) 2017-08-29 2020-04-09 Global Crop Innovations Pty. Ltd. Improved BLue Aleurone and other segregation systems
BR112020005311B1 (pt) 2017-09-19 2024-02-27 Bayer Aktiengesellschaft Usos de isotianila, e método para controle do mal-do-panamá em plantas da família musaceae
CN111465321B (zh) 2017-10-13 2022-12-06 先锋国际良种公司 用于植物细胞的细胞重编程的系统和方法
EP3360417A1 (de) 2017-11-02 2018-08-15 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Verwendung von sulfonylindol als herbizid
US20220306591A1 (en) 2018-01-25 2022-09-29 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidally active 3-phenylisoxazoline-5-carboxamides of cyclopentenylcarboxylic acid derivatives
CA3004115A1 (en) 2018-05-07 2019-11-07 Bayer Cropscience Lp Canola hybrid variety 6cn0122
AR115089A1 (es) 2018-05-15 2020-11-25 Bayer Ag 2-alquil-6-alcoxifenil-3-pirrolin-2-onas especialmente sustituidas y su uso como herbicidas
AR115088A1 (es) 2018-05-15 2020-11-25 Bayer Ag Espirociclohexilpirrolin-2-onas y su uso como herbicidas
WO2019219585A1 (de) 2018-05-15 2019-11-21 Bayer Aktiengesellschaft Neue 3-(4-alkinyl-6-alkoxy-2-chlorphenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
CA3100089A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Bayer Aktiengesellschaft 2-bromo-6-alkoxyphenyl-substituted pyrrolin-2-ones and their use as herbicides
WO2019228787A1 (de) 2018-05-29 2019-12-05 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte 2-alkyl-6-alkoxyphenyl-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
WO2019228788A1 (de) 2018-05-29 2019-12-05 Bayer Aktiengesellschaft 2-brom-6-alkoxyphenyl-substituierte pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
CN112513033A (zh) 2018-06-04 2021-03-16 拜耳公司 除草活性的双环苯甲酰基吡唑
BR112020026543A2 (pt) 2018-06-27 2021-04-06 Basf Se Métodos para aumentar a razão de uma proteína, para aumentar a termotolerância, aumentar o rendimento, para produzir uma planta, para aumentar a termoestabilidade e produzir uma variante de proteína, variante de proteína, ácido nucleico, genes recombinantes, vetores, células, alelos nocaute e termoestável, planta, parte de planta ou semente, uso da variante de proteína, método de produção de alimentos e planta de cereal
CN112689457A (zh) 2018-07-26 2021-04-20 拜耳公司 琥珀酸脱氢酶抑制剂氟吡菌酰胺用于防治十字花科物种中由立枯丝核菌、镰刀菌属种和腐霉菌属种引起的根腐病复合症和/或苗期病害复合症的用途
US20220039383A1 (en) 2018-09-17 2022-02-10 Bayer Aktiengesellschaft Use of the Succinate Dehydrogenase Inhibitor Fluopyram for Controlling Claviceps Purpurea and Reducing Sclerotia in Cereals
BR112021004865A2 (pt) 2018-09-17 2021-06-01 Bayer Aktiengesellschaft uso do fungicida isoflucypram para controlar claviceps purpurea e reduzir esclerócios em cereais
BR112021004889A2 (pt) 2018-09-20 2021-06-01 Bayer Cropscience Lp método para controlar pestes animais com paenibacillus terrae
WO2020065025A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 Bayer Aktiengesellschaft Combination of bacterial biological control agent and fatty acids
WO2020102592A1 (en) 2018-11-14 2020-05-22 Bayer Cropscience Lp Bacillus thuringiensis strains and methods for controlling pests
EA202191910A1 (ru) 2019-01-14 2021-11-16 Байер Акциенгезельшафт Гербицидные замещенные n-тетразолил-арилкарбоксамиды
BR112021012852A2 (pt) 2019-02-20 2021-09-21 Bayer Aktiengesellschaft 4-(4-trifluormetil-6-ciclopropil pirazolil) pirimidinas ativos de modo herbicida
DK3937637T3 (da) 2019-03-12 2023-07-24 Bayer Ag Herbicidt virksomme 3-phenylisoxazolin-5-carboxamider af s-holdige cyclopentenylcarbonsyreestere
CA3133184A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bayer Aktiengesellschaft Specifically substituted 3-phenyl-5-spirocyclopentyl-3-pyrrolin-2-ones and their use as herbicides
EA202192469A1 (ru) 2019-03-15 2022-02-16 Байер Акциенгезельшафт 3-(2-бром-4-алкинил-6-алкоксифенил)-замещенные 5-спироциклогексил-3-пирролин-2-оны и их применение в качестве гербицидов
WO2020187623A1 (de) 2019-03-15 2020-09-24 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte 3-(2-halogen-6-alkyl-4-propinylphenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
JP2022525174A (ja) 2019-03-15 2022-05-11 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 特異的に置換された３－（２－アルコキシ－６－アルキル－４－プロピニルフェニル）－３－ピロリン－２－オン類およびそれらの除草剤としての使用
JP2022525173A (ja) 2019-03-15 2022-05-11 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 新規３－（２－ブロモ－４－アルキニル－６－アルコキシフェニル）－３－ピロリン－２－オン類及び除草剤としてのその使用
CA3040289A1 (en) 2019-04-12 2020-10-12 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Canola hybrid variety 7cn0298
EP3955730A1 (en) 2019-04-18 2022-02-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Embryogenesis factors for cellular reprogramming of a plant cell
AU2020278906A1 (en) 2019-05-23 2021-11-25 Nomad Bioscience Gmbh RNA viral RNA molecule for gene editing
AU2020287208A1 (en) 2019-06-03 2022-01-06 Bayer Aktiengesellschaft 1-phenyl-5-azinyl pyrazolyl-3-oxyalkyl acids and their use for controlling undesired plant growth
CA3047768A1 (en) 2019-06-21 2020-12-21 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Canola hybrid variety 7cn0425
WO2021004838A2 (en) 2019-07-05 2021-01-14 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Rubisco activase with reduced adp inhibition and uses thereof
WO2021100034A1 (en) 2019-11-19 2021-05-27 Protalix Ltd. Removal of constructs from transformed cells
EP4075979A1 (de) 2019-12-19 2022-10-26 Bayer Aktiengesellschaft 1,5-diphenylpyrazolyl-3-oxyalkylsäuren und 1-phenyl-5-thienylpyrazolyl-3-oxyalkylsäuren und deren verwendung zur bekämpfung unerwünschten pflanzenwachstums
WO2021204669A1 (de) 2020-04-07 2021-10-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte isophtalsäurediamide
CA3179394A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituted isophthalic acid diamides
ES2973424T3 (es) 2020-04-07 2024-06-20 Bayer Ag Diamidas de ácido isoftálico sustituidas
US20230180757A1 (en) 2020-04-07 2023-06-15 Bayer Aktiengesellschaft Substituted isophthalic acid diamides and their use as herbicides
WO2021204884A1 (de) 2020-04-09 2021-10-14 Bayer Aktiengesellschaft 3-(4-alkenyl-phenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
WO2021209486A1 (de) 2020-04-15 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
US11997965B2 (en) 2020-04-24 2024-06-04 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Canola hybrid variety 8CN0001
US11997966B2 (en) 2020-04-24 2024-06-04 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Canola hybrid variety 7CN0020
US11672218B2 (en) 2020-04-24 2023-06-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Canola hybrid variety 7CN0065
WO2021219527A1 (de) 2020-04-29 2021-11-04 Bayer Aktiengesellschaft 1-pyrazinylpyrazolyl-3-oxyalkylsäuren sowie deren derivate und deren verwendung zur bekämpfung unerwünschten pflanzenwachstums
AR122093A1 (es) 2020-05-13 2022-08-10 Bayer Cropscience Lp Cepas de bacillus thuringiensis y métodos para el control de plagas
KR20230015975A (ko) 2020-05-27 2023-01-31 바이엘 악티엔게젤샤프트 치환된 피롤린-2-온 및 제초제로서의 그의 용도
WO2022040510A1 (en) 2020-08-21 2022-02-24 Bayer Cropscience Lp Combinations of trichoderma and bradyrhizobium
JP2023545999A (ja) 2020-10-05 2023-11-01 プロタリクス リミテッド ダイサー（ｄｉｃｅｒ）様ノックアウト植物細胞
CN116368129A (zh) 2020-10-23 2023-06-30 拜耳公司 1-(吡啶基)-5-吖嗪基吡唑衍生物及其用于控制有害的植物生长的用途
EP4243608A1 (en) 2020-11-11 2023-09-20 Leibniz-Institut für Pflanzenbiochemie (IPB) Fusion protein for editing endogenous dna of a eukaryotic cell
EP4026833A1 (de) 2021-01-12 2022-07-13 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame 2-(het)arylmethylpyrimidine
WO2022253700A1 (de) 2021-06-01 2022-12-08 Bayer Aktiengesellschaft Speziell substituierte pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
AU2022296784A1 (en) 2021-06-25 2024-01-18 Bayer Aktiengesellschaft (1,4,5-trisubstituted-1h-pyrazole-3-yl)oxy-2-alkoxy alkyl acids and their derivatives, their salts and their use as herbicidal agents
WO2023274869A1 (de) 2021-06-29 2023-01-05 Bayer Aktiengesellschaft 3-(4-alkenyl-phenyl)-3-pyrrolin-2-one und deren verwendung als herbizide
EP4373277A1 (en) 2021-07-19 2024-05-29 Bayer Aktiengesellschaft Method for spot-treatment application against weeds
CN117794357A (zh) 2021-07-23 2024-03-29 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 抗黑胫病植物及用于鉴定抗黑胫病植物的方法
EP4408860A1 (en) 2021-10-01 2024-08-07 Basf Se Wheat plants with an increased yield
WO2023052561A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Basf Se Plants with improved properties
WO2023092050A1 (en) 2021-11-20 2023-05-25 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with recombinant bacillus cells expressing a serine protease
CN118632626A (zh) 2021-12-01 2024-09-10 拜耳公司 (1,4,5-三取代-1h-吡唑-3-基)氧-2-烷氧基硫代烷基酸及其衍生物、其盐及其作为除草活性剂的用途
WO2024020360A1 (en) 2022-07-18 2024-01-25 Pairwise Plants Services, Inc. Mustard green plants named 'pwrg-1', 'pwrg-2,' and 'pwsgc'
WO2024078871A1 (de) 2022-10-14 2024-04-18 Bayer Aktiengesellschaft 1-pyridyl-5-phenylpyrazolyl-3-oxy- und -3-thioalkylsäuren und derivate und deren verwendung zur bekämpfung unerwünschten pflanzenwachstums

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU165923B (hu) 1972-03-13 1974-12-28
US4305225A (en) 1980-06-03 1981-12-15 China National Seed Corporation Hybrid rice
US4407956A (en) 1981-03-13 1983-10-04 The Regents Of The University Of California Cloned cauliflower mosaic virus DNA as a plant vehicle
US4351130A (en) 1981-06-16 1982-09-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Recessive tall--a fourth genetic element to facilitate hybrid cereal production
US4536475A (en) 1982-10-05 1985-08-20 Phytogen Plant vector
US4517763A (en) 1983-05-11 1985-05-21 University Of Guelph Hybridization process utilizing a combination of cytoplasmic male sterility and herbicide tolerance
US4943674A (en) * 1987-05-26 1990-07-24 Calgene, Inc. Fruit specific transcriptional factors
US5180873A (en) * 1985-04-16 1993-01-19 Dna Plant Technology Corporation Transformation of plants to introduce closely linked markers
US4658084A (en) 1985-11-14 1987-04-14 University Of Guelph Hybridization using cytoplasmic male sterility and herbicide tolerance from nuclear genes
US4658085A (en) 1985-11-14 1987-04-14 University Of Guelph Hybridization using cytoplasmic male sterility, cytoplasmic herbicide tolerance, and herbicide tolerance from nuclear genes
US4727219A (en) 1986-11-28 1988-02-23 Agracetus Genic male-sterile maize using a linked marker gene
NZ227835A (en) * 1988-02-03 1992-09-25 Paladin Hybrids Inc Antisense gene systems of pollination control for hybrid seed production
US5356799A (en) 1988-02-03 1994-10-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Antisense gene systems of pollination control for hybrid seed production
CA1340729C (en) * 1988-03-23 1999-09-07 Mohan Bir Singh Ryegrass pollen allergen
AU1202192A (en) * 1991-02-07 1992-09-07 Plant Genetic Systems N.V. Stamen-specific promoters from corn
DE69233636D1 (de) * 1991-02-08 2006-08-17 Bayer Bioscience Nv Staubblatt spezifische promotoren aus reis

Also Published As

Publication number Publication date
JP3020530B2 (ja) 2000-03-15
IE81154B1 (en) 2000-05-03
AU621113B2 (en) 1992-03-05
EP0737749B1 (en) 2008-05-14
CA1340324C (en) 1999-01-19
IL90095A0 (en) 1989-12-15
HUT52553A (en) 1990-07-28
PT90420B (pt) 1996-04-30
HK1008051A1 (en) 1999-04-30
US6316699B1 (en) 2001-11-13
US6320097B1 (en) 2001-11-20
IL90095A (en) 1999-10-28
EP0737749A1 (en) 1996-10-16
EP0344029B1 (en) 1997-01-29
IE891386L (en) 1989-10-28
EP0344029A1 (en) 1989-11-29
JP2000037146A (ja) 2000-02-08
ATE148498T1 (de) 1997-02-15
CA1341578C (en) 2008-07-22
DK175585B1 (da) 2004-12-13
ZA893136B (en) 1990-12-28
AU3537189A (en) 1989-11-24
ATE395425T1 (de) 2008-05-15
GR3023224T3 (en) 1997-07-30
US5652354A (en) 1997-07-29
DE68929558D1 (de) 2008-06-26
US6372967B1 (en) 2002-04-16
DE68927721D1 (de) 1997-03-13
AU5224596A (en) 1996-09-26
CA1341494C (en) 2006-02-07
US6344598B1 (en) 2002-02-05
WO1989010396A1 (en) 1989-11-02
HU892763D0 (en) 1990-06-28
DK668489D0 (da) 1989-12-27
ES2097745T3 (es) 1997-04-16
GB8810120D0 (en) 1988-06-02
JP3727492B2 (ja) 2005-12-14
PT90420A (pt) 1989-11-10
DE68927721T2 (de) 1997-06-26
US6627799B1 (en) 2003-09-30
AU621113C (en) 2001-10-11
DK668489A (da) 1990-02-28
JPH02503988A (ja) 1990-11-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU217413B (hu) Eljárás hímsterilitás kialakítására, valamint hímsteril növény és szaporítóanyag előállítására
JP3105242B2 (ja) 変更された花を有する植物
US5689041A (en) Plants modified with barstar for fertility restoration
US5633441A (en) Plants with genetic female sterility
EP0412006B1 (en) Plants with modified flowers, seeds or embryos
AU625509C (en) Plants with modified flowers
AU3124899A (en) Plants with modified stamen cells