FR2574414A1

FR2574414A1 - Gels reticules d'acide hyaluronique, produits contenant ces gels notamment pour des formulations cosmetiques et ses systemes de distribution de medicaments et leurs procedes d'obtention

Info

Publication number: FR2574414A1
Application number: FR8507941A
Authority: FR
Inventors: Endre A Balazs; Adolf Leshchiner
Original assignee: Biomatrix Inc
Current assignee: Biomatrix Inc
Priority date: 1984-12-06
Filing date: 1985-05-28
Publication date: 1986-06-13
Also published as: AU569157B2; SE8901672L; GB2205848B; GB2181147A; CA1230186A; GB2181148A; DE3520008C2; AU7217387A; GB2181147B; GB2181148B; GB8817772D0; JPH0637575B2; JPH0430961B2; GB2168067B; SE8503486L; JPS61138601A; AU4304585A; IT8522089A0; SE501828C2; DE3546811C2

Abstract

L'INVENTION CONCERNE LES GELS RETICULES A BASE D'ACIDE HYALURONIQUE, LES PRODUITS OBTENUS AVEC CES GELS ET DES PROCEDES DE FABRICATION. SELON L'INVENTION, POUR PREPARER UN GEL RETICULE A BASE D'ACIDE HYALURONIQUE, ON SOUMET DU HYALURONATE DE SODIUM, DANS UNE SOLUTION ALCALINE AQUEUSE DILUEE, A UN PH NON INFERIEUR A 9, A UNE REACTION DE RETICULATION AVEC DU SULFONE DE DIVINYLE A ENVIRON 20C.

Description

1 L'invention est relative aux gels et aux gels mélan- gés d'acide

hyaluronique (AH), à des formulations conte- nant ces gels et à des procédés pour les préparer. L'acide hyaluronique est un polysaccharide bien con- 5 nu qui se rencontre naturellement et qui contient une alternance d'unités de monosaccharide d'acide N-acétyle-D- glucosamine et D-glucoronique reliées par des liaisons 1- 4 et des unités de disaccharide reliées par des liai- sons glycosides P 1 - 3. L'acide hyaluronique se rencon- 10 tre habituellement dans le sel de sodium. Le poids moléculaire de l'acide hyaluronique se situe généralement dans la gamme de 50.000 à 8 x 106, et même au-delà. L'art antérieur décrit la réticulation de l'acide hyaluronique par l'utilisation de 1, 2, 3,4 diépoxybutane 15 en milieu alcalin à 50 C. (voir T.C. Laurent, K. Hellsing, et B. Gelotte, Acta Chem. Scand. 18 (1984), N 1, 274-5). Le produit obtenu par cette méthode est un gel qui gonfle sensiblement dans l'eau. Il est également connu que le sulfone de divinyle 20 (SDV) est employé pour la réticulation des polysaccharides, en particulier la cellulose (voir le Brevet américain 3 357 784). La Fig. 1 montre une représentation graphique des données expérimentales de l'exemple 3 ci-dessous ; et 25 Fig. 2 est une représentation graphique des données expérimentales de l'exemple 4 ci-dessous. Suivant un premier aspect, la présente invention fournit des gels d'acide hyaluronique réticuléshautement gonflés. 30 Suivant un deuxième aspect, l'invention fournit des gels réticulés mélangés d'acide hyaluronique et d'autres polymères hydrophiles. Suivant un troisième aspect, l'invention fournit des gels réticulés d'acide hyaluronique et d'autres polymères 35 remplis ou chargés de substances variées. Suivant un quatrième aspect, l'invention fournit des gels réticulés d'acide hyaluronique contenant des substan- ces de faible poids moléculaire liées de manière covalente à des macromolécules.

2 Suivant un cinquième aspect, l'invention fournit des formulations et produits variés contenant des gels d'acide hyaluronique réticulés. Enfin, l'invention fournit des procédés pour prépa- 5 rer ces produits. La présente invention est basée sur l'observation crue le sulfone de divinyle réagit facilement avec l'acide hyaluronique dans des solutions alcalines aqueuses à la température ambiante, c'est-à-dire à environ 20 C, pour 10 fournir des gels d'acide hyaluronique réticulés. Dans la présente demande, on désigne par acide hyaluronique non seulement l'acide lui-même mais également ses sels, tels que les sels de sodium, de potassium, de magnésium, de cal- cium, etc. Ces gels gonflent dans l'eau et dans des milieux 15 contenant de l'eau. Le taux de gonflement dépend du degré de réticulation du gel. On a constaté que le degré de réti- culation peut être commandé en faisant varier plusieurs facteurs, notamment le poids moléculaire de l'acide hyalu- ronique, sa concentration dans le mélange de réaction, la 20 concentration d'alcali et le taux polymères/sulfone de divinyle. La réaction est très rapide et, dans la plupart des cas, on peut obtenir un gel fort en plusieurs minutes. Le taux de gonflement de ces gels peut se situer entre 20 et 8.000 ou plus, selon les paramètres de réaction. 25 On a également constaté que le taux de gonflement des gels d'acide hyaluronique réticulés est sensiblement plus grand que le taux de gonflement des gels réticulés d'autres polysaccharides obtenus dans les mêmes conditions de réaction. Cela s'explique probablement par la nature 30 particulière de l'acide hyaluronique (par rapport aux au- tres polysaccharides) et de ses solutions aqueuses. On a constaté que, dans l'eau, une grande molécule d'acide hyaluronique forme un serpentin aléatoire long et très flexible qui occupe un volume extrêmement grand dans 35 la solution. Par exemple, le volume spécifique d'une molé- cule d'acide hyaluronique hydratée dans une solution de 3 sel physiologique est d'environ 2 - 6 x 10 ml/g. Cela si- gnifie que, dans une solution aqueuse d'acide hyaluronique à très faible concentration, un phénomène d'exclusion sté-

3 rique se produit, laquelle affecte sensiblement non seule- ment les propriétés physico-chimiques de la solution, mais également la réaction de l'acide hyaluronique avec des subs- tances de faible poids moléculaire. En d'autres termes, la 5 nature des solutions d'acide hyaluronique affecte le degré de réticulation et le comportement du gel réticulé, d'une manière tout à fait différente decelle que l'on rencontre avec d'autres polysaccharides. On a également constaté que cette propriété unique 10 de l'acide hyaluronique, qui réside dans l'obtention de gels réticulés hautement gonflés, peut être utilisée pour effectuer une modification des propriétés des gels réticu- lés constitués par des mélanges d'acide hyaluronique avec d'autres polymères hydrophiles. Ces polymères sont par exem- 15 ple d'autres polysaccharides, synthétiques ou naturels, notamment cellulose hydroxyéthyle, cellulose carboxyméthyle, gomme xanthan, sulfate de chrondroitine, héparine, des pro- téines de types divers, par exemple collagène, élastine, albumine, globuline, des protéines sulfatées telles que le 20 sulfate de kératine et les aminoglycosaminoglycans sulfa- tés, les polymères synthétiques solubles dans l'eau, notam- ment l'alcool polyvinylique et ses co-polymères, les co- polymères de méthacrylate poly-(hydroxyéthyle) et analogues. En d'autres termes, tout polymère soluble dans l'eau ou 25 dans des solutions alcalines aqueuses et contenant des grou- pes capables de réagir avec le sulfone de divinyle, à sa- voir des groupes hydroxyle , amino-ou sulfy-hydryle, peu- vent être utilisés pour obtenir des gels mélangés réticu- lés d'acide hyaluronique hautement gonflés. 30 On a constaté que des produits utiles peuvent facilement être obtenus en mettant en oeuvre la réaction de réticulation de l'acide hyaluronique en présence de subs- tances de faible poids moléculaire contenant des groupes réactifs des types mentionnés. 35 Un autre type de matière selon la présente inven- tion est un gel réticulé hydrophile rempli avec des subs- tances variées insolubles dans l'eau, notamment les hydro- carbures, par exemple le pétrolatum, une huile ou une graisse telle que la cire d'abeille, l'huile de noix de

4 coco ou la lanoline, les pigments, notamment le kaolin, l'oxyde de fer, des teintures insolubles, des polymères, par exemple le polyéthylene, le polytétrafluoroéthylène, etc. Dans ce type de produit, de fines particules de la ma- 5 tière de remplissage sont immobilisées dans un réseau de gel ou dans ce que l'on pourrait appeler une "cage poly- mère". Ce dernier produit peut être très utile dans divers buts qui seront indiqués plus en détail ci-après. On décrira maintenant en détail les procédés par lesquels les produits ci-dessus peuvent être obtenus. De manière à obtenir un gel réticulé d'acide hyalu- ronique, un échantillon-de hyaluronate de sodium ou d'a- cide hyaluronique, provenant d'une source quelconque, est dissout dans une solution alcaline diluée. Le poids molé- 15 culaire de l'acide hyaluronique peut être de 50.000 à 8 x 106, et même au-delà. Le poids moléculaire affecte la réaction ; plus le poids moléculaire est élevé, plus la possibilité d'obtenir un gel réticulé est grande. La concentration d'alcali dans le mélange de réaction 20 peut être de 0,005 M à 0,5 M et même au-delà. La limite in- férieure est imposée par la nécessité que le pH du milieu ne soit pas inférieur à 9, et la limite supérieure est im- posée par l'hydrolyse de l'acide hyaluronique dans une so- lution d'alcali. Habituellement, une diminution de la concentration alcaline provoque pour les gels un plus grand taux de gonflement, probablement en raison du fait qu'une faible quantité de sulfone de divinyle participe à la réac- tion de réticulation. La concentration de l'acide hyaluronique dans la solu- 30 tion de départ peut varier de 1% à 8 % en poids, et même au-delà. Quand la concentration est située en-deçà de la limite inférieure, on ne peut pas obtenir un gel réticulé même pour un faible taux d'acide hyaluronique / sulfone de divinyle. Quand la concentration est trop élevée, la solu- 35 tion devient si visqueuse qu'il est difficile de la manipu- ler. La concentration d'acide hyaluronique affecte sensible- ment le comportement de gonflement des gels (Fig. 1). On a constaté que la forme de la courbe de dépendance du rapport de gonflement à l'égard de la concentration d'acide hyalu-

5 ronique est essentiellement la même pour divers rapports acide hyaluronique/sulfone de divinyle mais que, plus ce taux est faible, c'est-à-dire plus il existe de sulfone de divinyle dans le mélange, plus le rapport de gonflement du 5 gel réticulé est faible pour la même concentration d'acide hyaluronique dans le mélange de départ. On a constaté que le rapport acide hyaluronique/sul- fone de divinyle dans le mélange de réaction constitue un autre paramètre qui peut être utilisé de manière appropriée 10 pour commander le rapport de gonflement du gel d'acide hya- luronique réticulé. Une augmentation du rapport entraine des gels mous hautement gonflés (le rapport de gonflement est d'environ 4.000 et au-delà), tandis qu'on obtient des gels durs et moins gonflés quand ce rapport diminue. En 15 général, le rapport pondéral acide hyaluronique / sulfone de divinyle peut être compris entre 15/1 et 1/5, et même en-deçà. La réaction de réticulation est habituellement con- duite à la température ambiante, c'est-à-dire à environ 20 20 C, mais elle peut être menée à une température infé- rieure ou supérieure,si désiré. Toutefois, il faut garder à l'esprit que l'acide hyaluronique peut se dégrader rela- tivement rapidement dans des solutions alca]inespour des températures élevées et, si une telle dégradation se pro- 25 duit, la diminution du poids moléculaire peut affecter les propriétés des gels obtenus. La réaction de réticulation est relativement rapide et des gels forts sont habituellement obtenus en quelques minutes quand la concentration d'acide hyaluronique est 30 suffisamment élevée et que le rapport acide hyaluronique/ sulfone de divinyle est faible. Mais, même pour une faible concentration d'acide hyaluronique dans le mélange de réac- tion, la formation du gel commence habituellement 5 à lOmn après l'addition du sulfone de divinyle. On a constaté que, 35 dans la plupart des cas, une heure suffit pour l'achèvement de la réaction de réticulation. Un autre procédé pour commander le rapport de gonfle- ment des gels d'acide hyaluronique réticulés implique l'ad- dition d'un sel neutre au mélange de réaction. On a cons-

6 taté que le rapport de gonflement des gels obtenus en pré- sence de sels neutres solubles dans l'eau, par exemple les chlorures, les sulfates, les phosphates et les acetates de métaux alcalins, diminue avec l'augmentation de la concen- 5 tration en sel. On peut utiliser un sel en concentration jusqu'à 20 % en poids et même au-delà selon la nature du sel et ses effets sur la solubilité de l'acide hyaluroniqcue dans le mélange de réaction. Pour obtenir des gels réticulés d'autres polymères 10 hydrophiles, on peut utiliser les mêmes conditions de réac- tion que pour l'acide hyaluronique. Le rapport de gon- flement de ces gels peut être commandé de manière appro- priée en incorporant de l'acide hyaluronique dans la struc- ture du gel. Quand les gels mélangés sont obtenus, la com- 15 position du mélange polymère peut varier sur une large gam- me selon le rapport de gonflement désiré pour le gel réti- culé. La teneur préférée en acide hyaluronique dans le mé- lange est comprise entre 5 et 95 % en poids. On obtient les gels réticulés d'acide hyaluronique 20 ou d'autres polymères, ou des gels réticulés mélangés char- gés de substances inertes, en incorporant ces substances dans le mélange de réaction avant l'addition du sulfone de divinyle. De préférence, ces matières inertes sont des li- quides ou des substances solides insolubles dans l'eau.Des 25 exemples de telles substances sont le pétrolatum et le kao- lin. Pour obtenir un gel réticulé charge, une substance, qui est choisie en fonction des propriétés désirées du gel, est émulsifiée ou dispersée dans une solution alcaline d'acide hyaluronique, d'un autre polymère ou d'un mélange 30 d'acide hyaluronique avec un autre ou des autres polymères et du sulfone de divinyle est ajouté au mélange. La quan- tité de sulfone de divinyle et les autres paramètres de la réaction sont choisis selon les propriétés désirées du gel. La quantité relative de la matière de remplissage dans le 35 gel peut varier sur une large gamme qui peut aller de 1 à 95 % en poids, cette quantité étant calculée par rapport à la quantité totale de polymères et de la matière de remplis- sage et étant de préférence de 5 à 90 % en poids. On peut obtenir des gels réticulés contenant des subs-

7 tances de faible poids moléculaire, telles que des médica- ments, des teintures et autresliées de manière covalente au réseau moléculaire, de préférence en incorporant ces substances citées dans l'acide hyaluronique ou dans la so- 5 lution d'acide hyaluronique et d'autres polymères avant l'addition du sulfone de divinyle. Un exemple d'une telle substance est l'acide carminique, substance qui est auto- risée pour la préparation d'aliments et de médicaments. C'est probablement la présence d'une partie glucosi- 10 dique de la molécule carminique qui participe à la réaction de réticulation avec le sulfone de divinyle. Il doit être noté qu'un grand nombre de substances peut être utilisé pour obtenir un gel réticulé modifié de ce type. La seule caractéristique essentielle de ces substances réside en ce 15 qu'elles contiennent des groupes chimiques présentant des atomes hydrogène actifs qui réagissent avec le sulfone de divinyle. La quantité de telles substances de faible poids moléculaire qui peut être utilisée dans la réaction dépend du niveau désiré de cette substance dans le gel. Cette quan- 20 tité peut être dans la gamme de 1 à 99 % en poids, par rap- port à la teneur du gel en polymère, de préférence de 5 à 90 % en poids. L'acide hyaluronique réticulé et les gels mélangés obtenus selon l'invention peuvent être utilisés dans de 25 nombreux buts et applications. On a constaté que ces gels hautement gonflés sont très utiles dans les formulations cosmétiques et peuvent être considérés comme des ingrédients de rétention d'eau ou de fourniture d'eau dans ces formula- tions. 30 Du fait que l'acide hyaluronique est connu comme étant un polymère biologiquement tolérable, en ce sens qu'il ne provoque aucune réponse d'ordre immunologique ou analogue quand il est introduit dans le corps humain, les gels d'a- cide hyaluronique réticulés peuvent être utilisés dans de 35 nombreuses et variées applications médicales. Les gels ré- ticulés, qui sont modifies avec d'autres polymères ou des substances de faible poids moléculaire, peuvent être uti- lisés dans des dispositifs de distribution ou de présenta- tion des médicaments. Par exemple, on a constaté que l'hé-

8 parine introduite dans un gel d'acide hyaluronique réticulé conserve son activité anti-coagulante. On a constaté que les gels réticulés d'acide hyaluro- nique peuvent ralentir la libération d'une substance de fai- 5 ble poids moléculaire dispersée en son sein mais non liée de manière covalente à la matrice moléculaire du gel. Le domaine de l'acide hyaluronique réticulé (seul ou co-polymérisé avec d'autres polymères polyanioniques ou neu- tres) constitue une cage moléculaire. Dans cette cage, les 10 molécules hydrophiles ou hydrophobes d'activité pharmacologique ou biologique peuvent être dispersées. Ainsi, la ca- ge constitue un dépôt pour ces substances de taille molécu- laire variée. Ces substances contenues dans le domaine de la cage moléculaire seront délivrées à l'environnement par 15 diffusion. Ce processus de délivrance est commandé par des facteurs tels que l'effet de volume d'exclusion et la taille des pores de la cage moléculaire et par l'interaction molé- culaire entre le réseau polymérique et la substance contenue en son sein. Ainsi, la cage moléculaire forme un dépôt pour 20 la distribution contrôlée de médicaments ou d'autres subs- tances sur la peau ou d'autres tissus. Il existe une propriété additionnelle des gels d'aci- de hyaluronique réticulés qui les rend potentiellement très utiles dans des dispositifs de distribution de médica- 25 ments. Le rapport de gonflement de ces gels dans l'eau dé- pend sensiblement de la concentration de sel dans le milieu et décroît de plusieurs fois pour une augmentation de la concentration de sel. Cela signifie qu'un gel gonflé dans l'eau se contracte sensiblement quand il est introduit dans 30 le corps (en raison de la teneur normale de sel des fluides ét lès tissus du corps), en libérant ainsi son contenu,par exemple un médicament qui y est incorporé, dans le-tissu du corps. Les gels réticulés charges de matières diverses peu- 35 vent également être utilisés dans les formulations cosméti- ques. Par exemple, un gel comportant du pétrolatum incorpo- ré permet d'obtenir tous les avantages et bénéfices de l'u- tilisation du pétrolatum dans les formulations cosmétiques sans pour autant donner la sensation graisseuse déplaisan-

9 te que l'on observe normalement avec les formulations qui contiennent du pétrolatum. La présente invention va maintenant être illustrée plus en détail à l'aide des exemples suivants, dans les- 5 quels les quantités sont exprimées en poids, sauf indica- tion contraire . Ces exemples sont donnés uniquement à ti- tre d'exemple et nullement limitatif de l'invention telle que définie dans les revendications. Exemple 1 10 Cet exemple illustre l'effet de la variation du poids moléculaire de AH sur la réaction de réticulation. 0,3410 g de hyaluronate de sodium obtenu à partir de crêtes de coq (viscosité intrinsèque ) de 3 850 dans une solution de NaCl à 0,15 M, poids moléculaire d'environ 2,5 15 x 106) a été mélangé avec 8,1840 g d'une solution de NaOH à 0,2 M pour donner une solution à 4 % en poids après agi- tation pendant 30 minutes. Ensuite, 0,0721 g de sulfone de polyvinyle a été agité dans la solution. Le rapport pondé- ral acide hyaluronique/sulfone de divinyle a été d'environ 20 4,7. Un gel fort s'est formé environ en 15 minutes. Le gel a été laissé au repos pendant une heure puis placé dans un litre d'eau distillée. On a laissé gonfler le gel dans l'eau pendant une nuit. Ensuite, le gel a été brisé en fi- nes particules par agitation vigoureuse dans l'eau. Les 25 particules de gel ont été filtrées et lavées plusieurs fois à l'eau. On a obtenu des particules incolores exemptes d'eau. Pour déterminer le taux de gonflement du gel, on a centrifugé un échantillon pondéral d'environ 1 g dans un filtre en verre à 3.000 tr/mn pendant deux heures. Ensuite, 30 les particules présentes sur le filtre ont été hydrolysées avec 2 ml d'une solution de H2S04 à iN pendant trois heu- res à une température de 95 98 C. La solution claire obtenue a été neutralisée lors d'un refroidissement avec 2 ml de cette solution et la teneur en acide glucoronique 35 a été déterminée par la méthode au carbazole (Voir l'article "An Automated Method For The Determination Of Hexu- ronic Acids, Analytical Biochemistry,2, 517-558 (1965)). La teneur en acide hyaluronique dans le gel de départ a été calculée et le rapport de gonflement a été exprimé sous la

10 lO forme 100/(AH)%, AH % représentant le pourcentage d'acide hyaluronique dans le gel gonflé. Le rapport de gonflement du gel obtenu dans l'eau a été de 820. 5 Cet exemple a été répété, à la différence que la so- lution d'acide hyaluroniqcue dans l'alcali a été maintenue à la température ambiante pendant 24 heures. Cela a conduit à une hydrolyse de l'acide hyaluronique. La viscosité in- trinsèque (q ) du polymère a été de 1064, pour un poids mo- 10 léculaire d'environ 0,5 x 106. On n'a pas pu obtenir un gel réticulé à partir de ce polymère pour le rapport acide hyaluronique/sulfone de divinyle utilisé ci-dessus. Cet exemple avec l'acide hyaluronique dégradé a été répété, mais avec un rapport acide hyaluronique/sulfone de 15 divinyle d'environ 2. On a pu obtenir un gel réticulé qui présentait un rapport de gonflement dans l'eau de 2 910. Exemple 2 Cet exemple illustre l'effet de la concentration d'alcali sur la réticulation de l'acide hyaluronique. 20 Un échantillon d'acide hyaluronique d'un poids mo- léculaire d'environ 3 x 106 a été dissout dans une quanti- té calculée de solution de NaOH à 0,2 M pour donner une solution visqueuse à 4 % à laquelle du sulfone de divinyle a été ajouté dans une quantité fournissant un rapport aci- 25 de hyaluronique/sulfone de divinyle d'environ 5/1. La réti- culation et le traitement du gel ont été conduits comme décrit à propos de l'exemple précédent. Le rapport de gon- flement du gel dans l'eau a été de 990. Cet exemple a été répété mais avec une concentration 30 d'alcali de 0,01 M. On a obtenu un gel présentant un rap- port de gonflement dans l'eau de 3640. Ainsi, une diminu- tion de la concentration d'alcali dans le mélange de réac- tion a permis d'obtenir un gel d'un gonflement dans l'eau sensiblement supérieur. 35 Exemple 3 Cet exemple illustre l'effet de la variation de la concentration d'acide hyaluronique dans le mélange de dé- part sur le comportement du gel résultant quant à son gon- flement.

11 Huit solutions de hyaluronate de sodium dans une so- lution d'hydroxyde de sodium à 0,2 M ont été préparées avec des concentrations d'acide hyaluronique respectivement de 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 5,5, 8 et 10 % en poids. A chaque solu- 5 tion une quantité calculée de sulfone de divinyle a été ajoutée pour obtenir un rapport pondéral acide hyaluronique/ sulfone de divinyle d'environ 1 (rapport molaire d'environ 0,33). Les gels réticulés ont été obtenus comme décrit dans les exemples précédents et traités de la même manière. Le 10 rapport de gonflement a été déterminé pour chaque échantil- lon et porté sur un graphique en fonction de la concentra- tion de départ d'acide hyaluronique. Les résultats sont il- lustrés à la Fig. 1. Exemple 4 15 Cet exemple illustre l'effet de la variation du rap- port acide hyaluronique/sulfone de divinyle sur le compor- tement du gel résultant quant à son gonflement. Six solutions de hyaluronate de sodium dans une solu- tion d'hydroxyde de sodium à 0,2 M ont été préparées avec 20 une concentration de 4 % en poids. A chaque solution, une quantité calculée de sulfone de divinyle a été ajoutée pour qu'on obtienne les rapports acide hyaluronique/sulfone de divinyle suivants : 0,2, 0,3, 0,5, 1, 1,5 et 2 mole/mole. Les gels réticulés ont été obtenus et traités comme décrit 25 dans les exemples précédents. Le rapport de gonflement a été déterminé pour chaque échantillon et porté sur un gra- phique en fonction du rapport acide hyaluronique/sulfone de divinyle dans le mélange de réaction. Ces résultats sont illustrés à la Fig. 2. 30 Exemple 5 Cet exemple illustre l'effet du chlorure de sodium dans le mélange de réaction sur le rapport de gonflement du gel réticulé. Deux échantillons du gel d'acide hyaluronique réti- 35 culé ont été préparés en utilisant le processus ci-dessus. La concentration du hyaluronate de sodium dans la solution d'hydroxyde de sodium à 0,2 M était de 4 % en poids. Le rapport acide hyaluronique/sulfone de divinyle était envi- ron 5/1, le temps de réaction étant de 1 heure. On a ajou-

12 té au second mélange de réaction du chlorure de sodium dans une quantité telle qu'on obtienne une concentration de sel molaire de 1. Le rapport de gonflement du premier gel a été de 2380, tandis que le gel obtenu en présence de 5 sel a présenté un rapport de gonflement dans l'eau de 650. Exemple 6 Cet exemple illustre la réticulation de la cellulose d'hydroxyéthyle en utilisant du sulfone de divinyle. - 0,4312 g de cellulose d'hydroxyéthyle séchée à l'air 10 (distribuée par la Société Union Carbide sous la dénomina- tion Cellosize QP-100000) a été dissout sous agitation dans 10,3 g d'une solution d'hydroxyde de sodium à 0,2 N pour donner une solution à 4 % en poids. 0,0855 g de sulfone de divinyle a été agité dans la solution (le rapport polymè- 15 re/sulfone de divinyle étant d'environ 5/1 en poids) et le mélange a été abandonné pendant une heure à la tempéra- ture ambiante. On a obtenu un gel réticulé qui a été trai- té comme décrit dans l'exemple 1. Pour déterminer la con- centration de polymère dans le gel et, par conséquent, le 20 rapport de gonflement, un échantillon pesé du gel a été placé dans de l'acétone, laissé au repos pendant une nuit, lavé plusieurs fois à l'acétone et séché dans un four à vide à 50 à un poids constant. Le rapport de gonflement du gel obtenu a été de 43, ce qui est sensiblement infé- 25 rieur à ce qui est obtenu pour le gel d'acide hyaluronique réticulé obtenu dans les mêmes conditions de réaction. Exemple 7 Cet exemple illustre la réticulation de la gomme de xanthan en utilisant du sulfone de divinyle. 30 0,4935 g de gomme de xanthan séchée à l'air (distri- buée par la Société Kelco, sous la dénomination Kelzan) a été dissout dans 11,3 g d'une solution d'hydroxyde de so- dium à 0,2 M pour donner une solution à 4 % en poids. A cette solution, 0,0718 g de sulfone de divinyle a été 35 ajouté (le rapport polymère/sulfone de divinyle étant d'en- viron 7/1 en poids). Le mélange a été laissé pendant une heure à la température ambiante. Le gel réticulé finale- ment obtenu a été placé dans une grande quantité d'eau, laissé à gonfler pendant une nuit et fragmenté en petits

13 morceaux qui ont été lavés à l'eau de manière intense. Le rapport de gonflement du gel, déterminé par Jla mé- thode pondérale décrite dans l'exemple précédent, a été de 526, ce qui est sensiblement inférieUr à ce qui est obtenu 5 pour le gel d'acide hyaluronique réticulé obtenu dans les mêmes conditions de réaction. Exemple 8 Cet exemple illustre la réticulation d'un polymère de cellulose cationique soluble dans l'eau en utilisant du 10 sulfone de divinyle. 0,5483 g d'un polymère de cellulose cationique ob- tenu par modification chimique de la cellulose d'hydroxyéthyle (distribuée par la Société Union Carbide sous la déno- mination Polymère Ucare JR) a été dissout dans 13,71 g d'une 15 solution d'hydroxyde de sodium à 0,2 M pour donner une solu- tion à 4 % en poids à laquelle on a ajouté 0,0849 g de sul- fone de divinyle , pour un rapport polymère/sulfone de di- vinyle d'environ 6,5/1. Le mélange de réaction a été laissé au repos pendant une heure à la température ambiante et le 20 gel obtenu a été traité et analysé comme décrit dans l'exem- ple précédent. Le rapport de gonflement du gel dans l'eau a été de 386, ce qui est sensiblement inférieur à ce qui est obtenu pour un gel d'acide hyaluronique résultant des mêmes conditions de réaction. 25 Exemple 9 Cet exemple illustre la réticulation d'une cellulose de carboxyméthyle en utilisant le sulfone de divinyle. 0,4703 g de sel de sodium de cellulose de carboxymé- thyle (9H 4F, Hercules) a été dissout dans 11,76 g d'une 30 solution de NaOH à 0,2 M pour donner une solution à 4 % en poids à laquelle on a ajouté 0,0651 g de sulfone de diviny- le, pour un rapport polymère/sulfone de divinyle d'environ 7/1. Le mélange de réaction a été laissé au repos pendant une heure à la température ambiante et le gel obtenu a été 35 traité et analysé comme décrit dans l'exemple précédent. Le rapport de gonflement dans l'eau a été de 893, ce qui est supérieur àce qui est obtenu pour d'autres polymères cellu- losiques mais inférieur à ce qui est obtenu pour le gel d'a- cide hyaluronique réticulé.

14 Exemples 10 à 13 Ces exemples illustrent des gels réticulés mélangés constitués d'acide hyaluronique et de cellulose de carbo- xyméthyle, et l'effet de la teneur en acide hyaluronique 5 sur le rapport de gonflement des gels. Dans chaque exemple, le hyaluronate de sodium et la cellulose de carboxyméthyle (9H4F) ont été dissouts dans une solution d'hydroxyde de sodium à 0,2 M suivant des quan- tités permettant d'obtenir des rapports spécifiques des 10 deux polymères. Dans tous les cas, la concentration totale en polymères a été de 4 % en poids et le rapport polymère/ sulfone de divinyle a été d'environ 5/1. Les gels ont été obtenus et traités comme décrit ci-dessus. La teneur en po- lymères dans les gels a été déterminée comme décrit dans 15 l'exemple 1, à l'exception que la concentration d'hexosa- mine (au lieu de l'acide glucoronique) a été déterminée par une méthode connue (voir l'article "A Rapid Procedure for the Estimation of Amino Sugars on a Micro Scale",Analytical Biochemistry 15, 167-171 (1966) dans l'hydrolyzat . La te- 20 neur en polymères a été calculée à partir de la concentra- tion en acide hyaluronique et du rapport des deux polymères. Teneur en acide hyaluronique Rapport de dans le mélange de départ gonflement dans (% en poids) l'eau 25 Exemple 10 70 8196 Exemple 11 50 6757 Exemple 12 20 1117 Exemple 13 O 623 Comme on peut le voir d'après ces données, une aug- 30 mentation de la concentration en acide hyaluronique dans le mélange de départ provoaue une augmentation du taux de gonflement des gels résultants. Exemple 14 Cet exemple illustre des gels réticulés mélangés ob- 35 tenus à partir de l'acide hyaluronique et du collagène. On a dissout 0,2531 g de hyaluronate de sodium sec dans 2,5 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium à 0,1 M. On a dissout 0,063 g de collagène obtenu à partir d'un cor-

15 don ombilical humain dans 2,3 ml d'acide acétique à 0,1 M et les deux solutions ont été combinées. La concentration totale en polymères a été de 6 % en poids et le rapport pondéral acide hyaluronique / coilagène a été d'environ 5 4/1.-0,05 g de KC1 sec a été dissout dans la solution de mélange et le sulfone de divinyle a été ajouté et agité dans le mélange de réaction pour donner un rapport polymè- res/sulfone de divinyle d'environ 5/1. Le mélange de réac- tion a été laissé au repos à la température ambiante pen- 10 dant une heure et le gel obtenu a été traité comme décrit ci-dessus. La teneur en polymères dans le gel gonflé a été calculée à partir de la teneur en acide hyaluronique qui a été déterminée par la méthode à l'acide glucoronique. On a obtenu un gel fort et élastique présentant un rapport de 15 gonflement dans l'eau de 321. Exemle 15 - Cet exemple illustre un gel mélangé collagène - acide hyaluronique réticulé présentant une plus forte concentra- tion en collagène et un taux de gonflement plus faible que 20 le gel de l'exemple 14. On a dissout 0,2544 g de hyaluronate de sodium dans 3,5 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium à 0,2. M. On a dissout 0,1192 g de collagène obtenu à partir d'un cordon ombilical humain dans 1,5 ml d'une solution d'acide acéti- 25 que à 0,2 M, et les deux solutions ont été combinées. La concentration totale en polymères a été de 7,5 % en poids et le rapport pondérai acide hyaluronique/collagène a été d'environ 2/1. On a dissout 0,05 g de chlorure de sodium dans la solution mélangée à laquelle on a ajouté 0,1189 g 30 de sulfone de divinyle, pour obtenir un rapport polymères/ sulfone de divinyle d'environ 3/1 en poids. Le gel a été obtenu et traité comme décrit dans l'exemple précédent. On a obtenu un gel fort présentant un rapport de gonflement de 35 35 Exemple 16 Cet exemple illustre un gel réticulé mélangé d'acide hyaluronique et d'héparine. On a dissout 0,2968 g de hyaluronate de sodium sec dans 6,92 g d'une solution d'hydroxyde de sodium à 0,2 M

16 pour obtenir une solution à 4 % en poids à laquelle on a ajouté 0,0503 g d'héparine. La teneur en héparine calculée sur la base de la quantité totale des polymères a été de 14,5 % en poids. On a ajouté et agité 0,0590 g de sulfone 5 de divinyle dans le mélange. La réaction a été conduite pendant une heure à la température ambiante. Le gel obte- nu a été traité comme décrit dans les exemples. précédents. Le rapport de gonflement du gel a été de 625. Exemple 17 10 Cet exemple illustre un gel de cellulose d'hydroxy- éthyle réticulé chargé de pétrolatum. On a dissout 0,5292 g de cellulose d'hydroxyéthyle sèche dans 10,58 g d'une solution d'hydroxyde de sodium à 1M et on a agité 1,058 g de pétrolatum blanc dans la 15 solution. Le rapport pétrolatum/polymère a été d'environ 2. On a ajouté une solution de 0,1771 g de sulfone de di- vinyle à 1 g d'une solution d'hydroxyde de sodium à 1 M à l'émulsion, sous agitation vigoureuse. Le mélange de réaction a été laissé au repos pendant une heure à la tem- 20 pérature ambiante et le gel obtenu a été traité comme décrit dans Ies exemples précédents. Pour déterminer la teneur du gel en pétrolatum, un échantillon du gel a été placé dans 2ml de 1N H2S04 à 95 Cpendant trois heures. Ensuite, on a ajouté successivement au mélange 2ml de 25 1N NaOH et 4 ml de xylène pour extraire le pétrolatum. L'extrait a été séché sous vide et le résidu a été pesé. La teneur calculée du pétrolatum dans le gel a été de 6% en poids. Exemle 18 30 Cet exemple illustre un gel mélangé acide hyaluro- nique - cellulose de carboxyméthyle chargé de pétrolatum. On a dissout 0,1830 g de hyaluronate de sodium et la même quantité de cellulose de carboxyméthyle dans 9,1g d'une solution d'hydroxyde de sodium à 0,2 N pour obtenir 35 une solution de polymère à 4 % en poids. On a ajouté et agité 0,3660 g de pétrolatum dans la solution et on a ajouté 0,0730g de sulfone de divinyle à l'émulsion résul- tante sous agitation vigoureuse. Le rapport polymère/ sulfone de divinyle a été de 5/1. Le mélange de réaction

17 a été laissé au repos pendant une heure à la température ambiante. Le gel obtenu a été traité comme décrit dans l'exemple précédent. Le rapport de gonflement du gel, dé- terminé par l'intermédiaire de la teneur en hexosamine, 5 a été de 738 et la teneur en pétrolatum, déterminée comme dans l'exemple précédent, a été de 0,1 % en poids. Exemple 19 Cet exemple illustre un gel d'acide hyaluronique ré- ticulé chargé avec du kaolin. 10 On a dissout 0,2700 g de hyaluronate de sodium dans une quantité d'une solution hydroxyde de sodium à 0,2 N suffisante pour obtenir une solution du polymère à 4 % en poids. On a ajouté et agité 0,5400 g de kaolin dans la solu- tion. On a ajouté 0,0540 g de sulfone de divinyle à la 15 suspension et le mélange de réaction a été laissé au repos pendant une heure à la température ambiante. Le gel obtenu a été laissé à gonfler dans une grande quantité d'eau. Le gel hautement gonflé a été divisé en petites particules par poussée à travers une seringue avec une aiguille. Les 20 particules ont été lavées à l'eau de manière intensive.On a obtenu des particules hautement gonflées, de couleur blanc laiteux. La concentration des matières solides dans le gel a été de 0,064 % en poids. Exemple 20 25 Cet exemple illustre un gel d'acide hyaluronique réti- culé contenant de l'acide carminique lié de manière cova- lente au réseau macromoléculaire. On a dissout 0,20 g de hyaluronate de sodium et 0,04 g d'acide carminique dans 5,0 ml d'une solution d'hydroxyde 30 de sodium à 0,2 M pour obtenir une solution de polymère à environ 4 % en poids. On a ajouté 0,40 g de sulfone de divi- nyle à la solution, pour un rapport polymère/sulfone de di- vinyle de 1/2, et le mélange a été laissé au repos pendant une heure à la température ambiante. Le gel obtenu a été 35 traité comme décrit dans les exemples précédents. On a obtenu des particules de gel transparentes de couleur rouge, et la couleur n'a pas disparu après un lava- ge intensif à l'eau. Le rapport de gonflement dans l'eau, déterminé par la méthode pondérale, a été de 115.

18 Exemple 21 Cet exemple illustre l'influence de la concentration de sel dans l'eau sur le comportement du gel d'acide hyalu- ronique réticulé quant à son gonflement. Un gel d'acide hyaluronique réticulé a été obtenu comme décrit dans les exemples précédents, avec une concen- tration d'acide hyaluronique dans une solution de NaOH à 0,2 M pour obtenir une solution à 4 % en poids et un rapport acide hyaluronique/sulfone de divinyle de 5/1. On a laissé 10 au repos pendant une heure à la température ambiante . Les particules de gel ont été placées dans l'eau et dans une solution aqueuse de chlorure de sodium de différentes concentrations, et on a déterminé les taux de gonflement. On a obtenu les résultats suivants : 15 ~15 Concentration de NaCl(M) Taux de gonflement eau 990 0,05 413 0,15 384 0,50 219 20 1,00 176 Exemple 22 Cet exemple illustre l'activité biologique d'un gel réticulé mélangé acide hyaluronique-héparine. On a préparé des fines particules de gel réticulé mé- 25 langé acide hyaluronique - héparine selon l'exemple 16 et on les a mélangées avec du plasma humain normal suivant des quantités donnant des concentrations d'acide hyaluronique réticulé de 0,01, 0,02 et 0,04 %, et le temps de coagula- tion des échantillons a crl respectivement de 1,4, 2,8 et 30 5 fois. Des concentrations identiques de particules de gel réticulé ne contenant pas d'héparine n'ont eu aucun effet sur le temps de coagulation. Ces données indiquent que l'héparine ne perd pas sa propriété- d'inhiber la formation de fibrine catalysée par 35 la thrombine quand elle est incorporée dans une structure de gel réticulée. Exemple 23 Cet exemple illustre un produit qui contient des par- ticules de gel d'acide hyaluronique réticulé utilisable

19 pour des formulations cosmétiques. On a préparé un gel d'acide hyaluronique comme décrit dans l'exemple 1, à l'exception des conditions de réaction suivantes : concentration d'acide hyaluronique 3,0 % en 5 poids, concentration d'hydroxyde de sodium 0,2 M, rapport acide hyaluronique/sulfone de divinyle environ 3/1, tempé- rature ambiante, temps de repos une heure. Le gel a été laissé à gonfler dans une grande quantité d'eau pendant une nuit puis il a été divisé en fines particules par pas- 10 sage à travers une seringue avec une aiguille d'un diamè- tre intérieur de 0,84 mm, puis à travers une seringue avec une aiguille d'un 'diamètre intérieur de 0,24 mm. Les par- ticules ont été lavées intensivement à l'eau. On a obtenu des particules incolores optiquement claires. Le rapport 15 de gonflement du gel a été de 1980. La concentration d'a- cide hyaluronique des particules de gel filtrées a été de 0,025 % en poids. Ces particules ont été utilisées dans des mélanges d'oxyde de polyéthylène de poids moléculaire éle- vé (coagulant Polyox, Union Carbide) et de hyaluronate de 20 sodium soluble (Hyalderm, Biomatrix,Inc.) de composition suivante : Ingrédients Parties (en poids) Mélange 1 Mélange 2 Mélange 3 Gel réticulé 90 80 75 25 Hyalderm(solution à 1% de hyaluronate de sodium) 5 2 14 Polyox (solution aqueuse à 1%) 5 4 11 30 Eau - 14 - TQutes ces formulations avaient l'aspect-de liquides visqueux homogènes bien qu'elles soient hétérogènes par la nature des ingrédients. Leur application sur la peau a don- né une sensation très douce et soyeuse. 35 E Cet exemple illustre une crème oculaire humidifian- te contenant un gel d'acide hyaluronique réticulé selon la présente invention.

20 % en poids A. Carbopol 940 (B.F. Goodrich) 0,4 Mélange 3 (Exemple 23) 10,0 Eau 83,3 5 B. Volpo -3 (Croda, Inc.) 1,0 Volpo -5 (Croda, Inc.) 0,5 Solulan C-24 (Amerchol Co) 1,8 Roban 1,0 Crodamol PMP (Croda,Inc.) 0,5 10 Glucam E-10 (Americhol) 0,7 Conservateur 0,3 C. Triéthanolamine 0,4 Parfum 0,1 Cette formulation est préparée suivant des étapes 15 successives, comme suit : la partie A du mélange a été pré- parée par dispersion du Carbopol dans l'eau puis agitation dans les autres constituants. Tous les constituants de la partie B ont été mélangés ensemble et chauffés à 70 C. Les parties A et B ont ensuite été combinées et la triéthanola- -20 mine et le parfum ont été ajoutés. La crème résultante s'est révélée stable et douce, avec de bonnes qualités d'humidi- fication et une excellente sensation sur la peau. Exemple 25 Cet exemple illustre l'utilisation du gel réticulé 25 chargé de pétrolatum pour une lotion pour les mains. % en poids A. Carbopol 0,25 Carboxyméthylcellulose 9H4F,solution aqueuse à 1 % 2,00 30 Produit de l'Exemple 18 60,00 Eau 36,70 B. Roban 0,20 Cochin 0,10 Conservateur 0,30 35 C. Triéthanolamine 0,25 Parfum 0,20 Cette formulation a été préparée comme celle de l'exemple précédent. La lotion résultante s'est révélée riche avec d'excellentes qualités d'humidification sans

21 donner sur la peau une sensation graisseuse. Les ingrédients des Exemples 24 et 25, identifiés par leur dénomination commerciale, correspondent aux défi- nitions suivantes 5 Volpo-5 Oleth-5 ( Ether polyéthylène glycol d'alcool oléyle) Volpo-3 Oleth-3 ( Ether polyéthylène glycol d'alcool oléyle) Solulan C-24 Choleth-24 (Ether polyéthylène 10 glycol de cholestérol) Crodamol PMP (Propionate de myristyle propoxylaté) PPG-3 Propionate d'éther myristyle Glucam E-10 Méthyle gluceth 10 (Ether 15 polyéthylène glycol de glucose de méthyle). Exemple 26 Cet exemple illustre la libération lente d'une ma- tière à faible poids moléculaire dispersée dans une matri- 20 ce d'acide hyaluronique réticulé. Dans cette expérimentation, une substance radio- active, le binoxolate d'hydroxytryptamine, 5-(1,2-3H(N) ) a été utilisée. On a mélangé 5 pl d'une solution à 40 FM de la substance avec 5 pl de particules de gel d'acide 25 hyaluronique réticulé (concentration d'acide hyaluronique dans le gel de 0,131 %) et avec de l'eau respectivement.Les mélanges ont été placés dans des tubes de dialyse et dia- lysés en présence d'une solution de NaCl à 0,15 M pendant 24 heures. Pour le mélange de la substance et du gel réti- 30 culé, 54 % de la quantité de départ de la matière a été laissée dans le tube de dialyse, tandis que seulement 10 % ont été laissés pour la solution aqueuse. Cela démontre que le gel réticulé d'acide hyaluronique ralentit la li- bération de la substance à faible poids moléculaire d'un 35 facteur supérieur à 5 fois. Bien entendu, des variantes et modifications peu- vent être apportées sans sortir de l'esprit et du cadre de l'invention.

Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé pour préparer un gel réticulé à base d'a- cide hyaluronique, caractérisé par le fait qu'il consiste à soumettre du hyaluronate de sodium, dans une solution al- caline aqueuse diluée, à un pH non inférieur à 9, à une réac- 5 tion de réticulation avec du sulfone de divinyle à environ 20 C.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le gel est à base d'acide hyaluronique et d'au moins un autre polymère hydrophile présentant un groupe fonc- 10 tionnel capable de réagir avec le sulfone de divinyle.

3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que ledit autre polymère hydrophile est un polysac- charide naturel ou synthétique sélectionné dans le groupe comportant : la cellulose d'hydroxyéthyle, la cellulose de 15 carboxyméthylei la gomme de xanthan, le sulfate de chondroitine et l'héparine, une protéine sélectionnée dans le groupe comportant le collagène, l'élastine, l'albumine, une globuline, un sulfate de kératine, un aminoglycosaminogly- can sulfaté,et un polymère synthétique soluble dans l'eau. 20

4. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que le gel est un gel d'acide hyalu- ronique ou un gel réticulé mélangé d'acide hyaluronique et d'au moins un autre polymère hydrophile présentant un grou- pe fonctionnel capable de réagir avec le sulfone de divinyle, l'un ou l'autre comportant une substance inerte in- soluble dans l'eau, le hyaluronate de sodium ou un mélange de hyaluronate de sodium et dudit autre polymère hydrophile étant soumis à ladite réaction de réticulation.

5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par 30 le fait que la matière inerte insoluble dans l'eau est un hydrocarbure, notamment du pétrolatum, une huile ou graisse, par exemple de la cire d'abeille, de l'huile de noix de co- co ou de la lanoline, un pigment, par exemple du kaolin, de l'oxyde-de fer ou une teinture insoluble, ou du polyéthylene 35 ou encore du polytétrafluoroéthylêne.

6. Procédé selon l'une des revendications 4 et 5, ca- ractérisé par le fait que la substance inerte insoluble dans l'eau est présente dans une quantité de 1 à 95 % en poids sur la base du poids total des polymères plus la substance inerte insoluble dans l'eau.

7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, ca- ractérisé par le fait que le gel réticulé est un gel d'aci- 5 de hyaluronique ou un gel réticulé mélangé d'acide hyaluro- nique et d'au moins un autre polymère hydrophile présentant un groupe fonctionnel capable de réagir avec le sulfone de divinyle, l'un ou l'autre comportant une matière de faible poids moléculaire liée de manière covalente au réseau macro- 10 moléculaire.

8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé par le fait que la matière à faible poids moléculaire est un mé- dicament. -

9. Procédé selon la revendication 7, caractérisé par 15 le fait que la matière à faible poids moléculaire est un acide carmirique.

10. Procédé selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisé par le fait que la substance à faible poids mo- léculaire est présente à raison de 1 à 95 % en poids sur la 20 base du poids total des polymères plus la substance à faible poids moléculaire.

11. Procédé selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé par le fait que le hyaluronate de sodium pré- sente un poids moléculaire d'environ 50.000 à environ 8x106' 25

12. Procédé selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait que le rapport pondéral du hyaluro- nate de sodium au sulfone de divinyle est compris entre 15/1 et 1/5.

13. Procédé selon l'une des revendications 1 à 12, 30 caractérisé par le fait qu'il comporte l'adjonction d'un chlorure, sulfate, phosphate ou acétate d'un métal alcalin au mélange de réaction suivant une quantité suffisante pour fournir une concentration pondérale dans le mélange d'envi- ron 20 %. 35

14. Procédé selon l'une des revendications 2 à 13, caractérisé par le fait que la concentration du hyaluronate de sodium ou du mélange du hyaluronate de sodium et de l'au- tre polymère hydrophile est compris entre 1 et 8 % en poids. .CLMF:

15. Gel réticulé mélangé d'acide hyaluronique et d'au moins un autre polymère hydrophile présentant un grou- pe fonctionnel capable de réagir avec le sulfone de diviny- le, caractérisé par le fait que la concentration combinée du hyaluronate de sodium et dudit autre polymère hydrophile 5 est comprise entre 1 et 8 % en poids et que le hyalurona- te de sodium constitue de 5 à 95 % du total en poids.

16. Système de distribution pour une substance pré- sentant une activité biologique ou pharmacologique, carac- térisé par le fait qu'il comporte une cage moléculaire for- 10 mée par un gel réticulé d'acide hyaluronique ou un gel ré- ticulé mélangé d'acide hyaluronique et d'au moins un autre polymère hydrophile co-polymérisable avec celui-ci et pré-- sentant en son sein une matière dispersée susceptible d'une activité biologique ou pharmacologique et pouvant être dif- 15 fusée à partir de celui-ci d'une manière commandée..