KR100730527B1

KR100730527B1 - 히알루론산 겔 조성물과 그의 제조방법 및 그것을함유하는 의용 재료

Info

Publication number: KR100730527B1
Application number: KR1020017010474A
Authority: KR
Inventors: 우메다도시히꼬; 미야따요시아끼; 야마모또오사무; 아라이가즈히꼬; 히메다야스까즈; 하시모또마사미찌
Original assignee: 덴끼 가가꾸 고교 가부시키가이샤
Priority date: 1999-02-19
Filing date: 2000-02-18
Publication date: 2007-06-20
Also published as: CN1288197C; NZ513517A; WO2000049084A8; AU773826B2; US6638538B1; AU2574400A; CA2371833C; EP1174463A4; WO2000049084A1; CN1340080A; CA2371833A1; EP1174463A1; KR20010102231A

Abstract

히알루론산과 고분자 화합물로 이루어지며, 실질적으로는 화학적 가교제 또는 화학적 수식제에 의해 개질되어 있지 않고, 중성의 37 ℃ 의 수용액 중에서 12 시간에서의 히알루론산 용해율이 50 % 이하인 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물.

Description

히알루론산 겔 조성물과 그의 제조방법 및 그것을 함유하는 의용 재료 {HYALURONIC ACID GEL COMPOSITION, PROCESS FOR PRODUCING THE SAME, AND MEDICAL MATERIAL CONTAINING THE SAME}

본 발명은 히알루론산과 고분자 화합물로 이루어지며 실질적으로는 화학적 가교제 또는 화학적 수식제(modifying agent)에 의해 개질되어 있지 않은, 신규 난수용성 히알루론산 겔 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것으로서, 또한 특히 이들을 이용한 생체적합성이 양호한 의용(醫用) 재료에 관한 것이다.

히알루론산은 β-D-N-아세틸글루코사민과 β-D-글루쿠론산이 번갈아 결합한 직쇄상의 고분자 다당으로, 종(種) 및 장기 특이성을 가지지 않으며, 생체에 이식 또는 주입한 경우에도 우수한 생체적합성을 나타내는 것이 알려져 있다.

이 히알루론산을 의용 재료로서 생체에 적용하는 경우, 물에 쉽게 용해되고 생체내 체류시간이 비교적 짧은 점을 개량하기 위해 다종다양한 히알루론산의 화학수식물이 제안되어 왔다. 또한, 이들의 강도, 조직접착성 등 의용 재료로서의 다양한 물성면의 성질을 보완하기 위해 고분자를 첨가하여 개질하는 수많은 히알루론산 조성물의 검토가 행해져 왔다.

예컨대, 히알루론산 조성물을 골(骨)수복재로서 사용하기 위해서는 관절용 인공 연골에 사용하는 경우에 비교하여 보다 큰 강도가 필요하고, 또 히알루론산 조성물을 유착(癒着) 방지재로서 사용하기 위해서는 색전형성제로서 사용하는 경우에 비교하여 보다 높은 조직접착성이 요구된다.

종래, 의용 재료로서 유용한 히알루론산 조성물은, 예컨대 일본 특허공표공보 평5-508161 호, 일본 특허공표공보 평6-508169 호의 히알루론산 나트륨과 카르복시메틸셀룰로오스를 카르보디이미드류의 EDC (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염) 로 수식한 히알루론산 조성물의 보고를 들 수 있다. 또, WO 86/00912 의 카르복시 함유 폴리사카라이드 (히알루론산 나트륨, 카르복시메틸덱스트란, 카르복시메틸스타치, 카르복시메틸셀룰로오스 등) 를 이중 및 다중 관능 에폭시드류의 BDDE (1,4-부탄디올글리신에테르) 등으로 가교한 히알루론산 조성물의 보고를 들 수 있다. 또, 일본 공개특허공보 소61-164558 호의 히알루론산 나트륨, 콘드로이틴 황산, 헤파린 등을 다중 관능 에폭시드류나 브롬화 시안, 에피클로로히드린 등으로 가교한 히알루론산 조성물의 보고를 들 수 있다. 또, 일본 공개특허공보 소61-138601 호의 히알루론산 나트륨이나 각종 고분자 화합물을 디비닐술폰으로 가교한 히알루론산 조성물의 보고를 들 수 있다. 또, 일본 공개특허공보 평6-73102 호, 일본 공개특허공보 평8-301903 호의 히알루론산 나트륨이나 각종 고분자 화합물을 계피산으로 가교한 히알루론산 조성물의 보고를 들 수 있다.

그러나, 이들은 제조에 있어서 가교제 등을 완전히 제거, 정제하는 것이 매우 어려울 뿐만 아니라, 히알루론산 및 고분자 화합물의 분자에 가교화합물을 내포 하여 그 생리작용이나 생체적합성, 안전성이 본질적으로 히알루론산 및 고분자 화합물과 동일하다고는 하기 어렵다.

히알루론산 및 고분자 물질 자체가 본래 갖고 있는 우수한 생체적합성의 특징을 최대한 살리기 위해 화학적 가교제나 화학적 수식제를 전혀 사용하지 않고, 생체적합성 의용 재료로서 사용 가능한, 생체내 체류시간이 긴 히알루론산 조성물은 아직 개발되어 있지 않았다.

본 발명자들은 상기 목적을 달성하기 위해, 히알루론산만으로 이루어지는 생체적합성이나 성형성이 우수한 생체내 분해성을 갖는 화학적 가교제나 화학적 수식제를 사용하지 않은 히알루론산 겔 (PCT/JP98/03536) 자체의 물리화학적 성질을 예의검토하였다.

또한, 히알루론산과 고분자 화합물로 이루어지며, 실질적으로는 화학적 가교제 또는 화학적 수식제에 의해 개질되어 있지 않은 히알루론산 겔 조성물이, 히알루론산 겔이 본래 갖는 강도, 접착성, 점도, 탄성 등의 성질을 보완하여 히알루론산 겔 단독으로는 만족하기 어려운 의용 재료의 요구물성에도 응할 수 있고, 또한 간편하게 조제할 수 있으며, 의용 재료로서 이상적인 생체적합성, 저장성을 갖는 것을 발견하여 본 발명에 이르렀다.

특히, 이 히알루론산 겔 조성물의 고분자 화합물로서 카르복시메틸셀룰로오스를 사용한 경우, 특히 유착 방지재, 창상(創傷) 피복재로서 적합하다.

발명의 개시

즉, 본 발명은 (1) 히알루론산과 고분자 화합물로 이루어지며, 실질적으로는 화학적 가교제 또는 화학적 수식제에 의해 개질되어 있지 않고, 중성의 37 ℃ 의 수용액 중에서 12 시간에서의 히알루론산 용해율이 50 % 이하인 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물, (2) 고분자 화합물이 카르복시메틸셀룰로오스인 것을 특징으로 하는 (1) 에 기재된 히알루론산 겔 조성물, (3) 히알루론산 및 고분자 화합물을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액 또는 분산액을 동결시키고, 이어서 해동시켜 히알루론산 겔 조성물을 형성하는 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물의 제조방법, (4) 히알루론산을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액을 동결시키고, 이어서 해동시켜 형성되는 히알루론산 겔과, 고분자 화합물 또는 고분자 화합물 겔을 혼합하여 히알루론산 겔 조성물을 형성하는 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물의 제조방법, (5) 고분자 화합물이 다당류, 단백질, 핵산류, 및 합성 고분자류로 이루어지는 군에서 선택된 1 종 이상인 것을 특징으로 하는 (3) 또는 (4) 에 기재된 히알루론산 겔 조성물의 제조방법, (6) 고분자 화합물이 카르복시메틸셀룰로오스인 것을 특징으로 하는 (3) 또는 (4) 에 기재된 히알루론산 겔 조성물의 제조방법, (7) (1) 또는 (2) 에 기재된 히알루론산 겔 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 의용 재료, (8) 히알루론산 겔 조성물에 감마선, 전자선, 플라즈마, 또는 EOG 로 이루어지는 군에서 선택된 1 종을 조사 또는 주입함으로써 얻어지는 히알루론산 겔 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 의용 재료, (9) 의용 재료가 유착 방지재인 것을 특징으로 하는 (7) 에 기재된 의용 재료, (10) 의용 재료가 창상 피복재인 것을 특징으로 하는 (7) 에 기재된 의용 재료이다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명에서 말하는 개질이란, 본래 수용성인 히알루론산 또는 고분자 화합물을 난용화하기 위해 가교나 화학적 수식을 하는 것을 의미한다.

본 발명의 히알루론산 겔 조성물은 히알루론산 및 고분자 화합물을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액 또는 분산액을 동결시키고, 이어서 해동시키고, 중화, 세정, 건조시킴으로써 얻어진다.

또, 본 발명의 히알루론산 겔 조성물은 히알루론산을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액을 동결시키고 이어서 해동시켜 얻어지는 히알루론산 겔을 파쇄하고, 고분자 화합물 겔을 물 등의 수용액에 투입하여 파쇄, 분산시키고, 이것을 건조시킴으로써 얻어진다.

이들 히알루론산 겔 조성물은 히알루론산 겔 단독의 경우보다도 기계적 강도 및 조직접착성을 간단하게 향상시킬 수 있다.

히알루론산 및 고분자 화합물의 수용액의 pH 를 조정하기 위해 사용하는 산은 pH 3.5 이하로 조정할 수 있는 산이면, 어느 산이라도 사용할 수 있다. 산의 사용량을 저감시키기 위해, 바람직하게는 강산, 예컨대 염산, 질산, 황산 등을 사용하는 것이 바람직하다.

동결, 해동은 히알루론산 및 고분자 화합물이 조정된 산성 수용액을 임의의 용기에 넣은 후, 소정의 온도로 동결시키고, 동결이 끝난 후, 소정의 온도로 해동시키는 조작을 적어도 1 회 행한다. 동결, 해동의 온도와 시간은 용기의 크기, 수용액량에 따라 히알루론산의 산성 수용액이 동결, 해동되는 온도와 시간의 범위 내에서 적당히 결정되지만, 일반적으로는 빙점 이하의 동결온도, 빙점 이상의 해동온도가 바람직하다.

동결, 해동시간을 짧게 할 수 있는 점에서 더욱 바람직하게는 -5 ℃ 이하의 동결온도, 5 ℃ 이상의 해동온도가 선택된다. 또, 시간은 그 온도에서 동결, 해동이 종료되는 시간 이상이면 특별히 제한되지 않는다.

히알루론산 및 고분자 화합물이 조정된 산성 수용액을 동결시키고, 이어서 해동시키는 조작의 반복 횟수는 사용하는 히알루론산의 분자량, 수용액 농도, 수용액의 pH, 동결 및 해동의 온도와 시간, 및 생성되는 히알루론산 겔 조성물의 강도 등의 모든 특성에 따라 적당히 결정된다. 통상은 1 회 이상 반복하는 것이 바람직하다.

또, 동결, 해동의 조작을 반복할 때마다 그 동결, 해동의 온도 및 시간을 바꿔도 된다.

히알루론산 겔 조성물의 성형가공 등의 처리는, 제작시에는 히알루론산이 조정된 산성 용액의 동결시의 용기나 수법의 선택에 따라 시트상, 필름상, 파쇄상, 스폰지상, 괴(塊)상, 섬유상, 유동상 및 튜브상의 원하는 형태의 히알루론산 겔 조성물의 제작이 가능하다.

예컨대 시트상의 히알루론산 겔 조성물은 히알루론산 조성물 및 그의 분산액을 바닥이 평평한 용기에 넣어 동결건조시킴으로써 얻어진다.

또, 필름상의 히알루론산 겔 조성물은 히알루론산 조성물 및 그의 분산액을 바닥이 평평한 용기에 넣어 바람에 건조시킴으로써 얻어진다.

본 발명에 사용되는 히알루론산은 동물 조직으로부터 추출한 것이라도, 또 발효법으로 제조한 것이라도 그 기원에 상관없이 사용할 수 있다.

본 발명에 사용되는 히알루론산의 분자량은 약 1 ×10⁵ ∼ 약 1 ×10⁷ 달톤 범위내의 것이 바람직하다. 또, 상기 범위내의 분자량을 갖는 것이면, 보다 고분자량의 것으로부터 가수분해처리 등을 하여 얻은 것이라도 동일하게 바람직하게 사용할 수 있다.

그리고, 본 발명에서 말하는 히알루론산은 알칼리 금속염, 예컨대 나트륨, 칼륨, 리튬의 염도 포함하는 개념으로 사용된다.

본 발명에 사용되는 고분자 화합물은 천연 고분자 화합물, 합성 고분자 화합물에 상관없이 본 발명의 히알루론산 겔 조성물이 생성될 수 있는 어떠한 고분자 화합물이라도, 또한 히알루론산 겔 단독으로는 만족하기 어려운 의용 재료의 요구물성에 대하여 그 히알루론산 겔이 본래 갖는 성질을 보완할 수 있는 것이면 어떠한 고분자 화합물이라도 사용할 수 있다.

따라서, 고분자 화합물끼리, 또는 고분자 화합물과 히알루론산 겔 사이의 가교의 생성에 관계없이, 히알루론산 겔 중에 도입되어 본 발명의 히알루론산 겔 조성물이 생성될 수 있는 모든 고분자 화합물을 본 발명에 사용할 수 있다.

본 발명에 사용되는 고분자 화합물의 대표예로서는 다당류, 단백질, 핵산류, 및 합성 고분자류로 이루어지는 군에서 선택되는데 이에 의해 조금도 제한되지 않는다.

다당류의 예로서는 글리코사미노글리칸류 (헤파린, 헤파란 황산, 데르마탄 황산 등), 콘드로이틴 황산염 (콘드로이틴-6-황산 등), 케라틴 황산염, 헤파린, 헤파란 황산염, 알긴산 및 그의 생물학적으로 수용한 염, 셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 전분, 아밀로오스, 폴리 젖산, 카라기난 등을 들 수 있다.

또, 다당류의 합성적 유도체로서는, 예컨대 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸아밀로오스, 각종 알킬셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 카르복시키셀룰로오스 및 산화 전분 산화 재생 셀룰로오스 등을 들 수 있다.

또한, 단백질의 예로서는 콜라겐, 젤라틴, 알부민, 엘라스틴, 각종 글로불린, 카세인, 글루텐 등, 및 이들의 생물학적으로 수용한 합성 유도체 등을 들 수 있다.

또, 합성 고분자 화합물의 예로서는 폴리비닐알콜, 폴리에틸렌글리콜, 폴리글루콜산, 폴리아크릴산, 폴리메타크릴산, 이들의 코폴리머, 및 아크릴산 또는 메타크릴산 폴리(히드록시에틸)에스테르, 폴리아크릴아미드 등, 폴리비닐알콜, 말레산이나 푸말산의 코폴리머 등과 같은 유도체 등을 들 수 있다.

그리고, 본 발명은 이들 고분자 화합물에 조금도 제한되지 않는다.

본 발명에 사용되는 히알루론산 및 고분자 화합물을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액 또는 분산액은 히알루론산 및 고분자 화합물과 물을 혼합하고, 교반하여 얻어진다. 이 히알루론산 및 고분자 화합물의 농도는 각각 5.0 질량% 이하가 수용액 또는 분산액의 취급상 바람직하다.

특히 분자량이 2 ×10⁶ 달톤 이상인 히알루론산을 사용하는 경우에는 히알루론산의 농도는 2.5 질량% 이하가 바람직하다.

또, 히알루론산과 고분자 화합물을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액 또는 분산액의 배합비는 이 액을 동결ㆍ해동시킴으로써 히알루론산 겔 조성물이 얻어지는 것이면 특별히 한정되지 않는다. 예컨대, 유착 방지재로서의 배합비는 50:1 ∼ 1:20 이 바람직하다.

또한, 본 발명에서는 미리 히알루론산 겔과 고분자 화합물 겔을 따로따로 제작하고, 그들을 파쇄함으로써 얻어지는 히알루론산 겔 파쇄물과 고분자 화합물 겔 파쇄물을 혼합하여 히알루론산 겔 조성물로서 사용해도 된다.

본 발명에 사용되는 히알루론산 겔과 고분자 화합물 겔을 혼합하는 비율은 물 등의 수용액에 투입하여 파쇄, 분산할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않는다.

본 발명에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물은 일반적인 생체내 분해성 의용 재료 및 히알루론산이 사용되는 분야이면 특별히 제한 없이 사용할 수 있다. 예컨대, 유착 방지재, 관절용 인공연골, 약리활성 화합물의 담체, 창상 피복재, 인공피부, 조직치환형 생체조직수복재, 관절주입제, 외과수술용 봉합사, 지혈제, 인공장기, 인공세포외 매트릭스 또는 인공기저막, 진단ㆍ치료에 사용하는 의료기구ㆍ의료용구 등의 생물의학적 제품 또는 의약조성물로의 사용을 들 수 있다.

그리고, 히알루론산 겔과 고분자 화합물 겔을 혼합할 때 생리활성 물질을 혼합함으로써 생리활성물질을 포함한 히알루론산 겔 조성물을 얻는 것도 가능하다.

다음으로, 본 발명의 히알루론산 겔 조성물을 조사처리한 의용 재료에 대하여 설명한다. 히알루론산 겔 조성물에 조사하는 감마선은 코발트 60 또는 세슘 137 을 방사선원으로 하는 것이 바람직하다. 히알루론산 겔 조성물의 건조품에 바람직하게는 선량 30 kGy 이하의 감마선을 조사하면 유착 방지재, 창상치료재에 효과적인 히알루론산 겔 조성물이 얻어진다. 또, 조사량, 조사시간을 바꿈으로써 히알루론산 겔 조성물의 용해성을 제어하고, 생체재료로서의 용도에서의 적절한 생체저장성을 제어하는 것이 가능하다. 히알루론산 겔 조성물에 감마선을 조사함으로써 멸균효과도 기대된다.

히알루론산 겔 조성물에 조사하는 전자선은 전자선 가속기에 의해 발생시킨다. 히알루론산 겔 조성물의 건조품에 바람직하게는 선량 30 kGy 이하의 전자선을 조사하면 유착 방지재, 창상 피복재에 효과적인 히알루론산 겔 조성물이 얻어진다.

플라즈마는 고체, 액체 및 기체와는 구별될 수 있는 물질의 제 4 상태로 표현되며, 상당한 고온 또는 강력한 전계(電界) 또는 자계(磁界)의 작용을 통해 형성되고, 통상은 이온, 전자 및 중성 핵종으로 이루어진다. 가스 흐름에 전력을 작용시킴으로써 이온화된 가스는 글로 방사로서도 알려져 있다.

히알루론산 겔 조성물에 조사하는 플라즈마는 수소, 산소, 불활성 캐리어ㆍ가스의 혼합물을 전자계에 폭로하여 형성되는 저온 가스ㆍ플라즈마 등이 사용된다.

히알루론산 겔 조성물의 건조품을 플라즈마 발생기 챔버내에 넣고, 아르곤, 산소, 수소로 이루어지는 플라즈마 발생 가스를 주입, 확산하고, 플라즈마 분위기 하에 10 분 이상 조사하면 유착 방지재, 창상 피복재에 효과적인 히알루론산 겔 조성물이 얻어진다.

EOG 는 통상 건조멸균, 증기멸균이 불가능한 물질에 대하여 행해지는 산화 에틸렌 가스를 사용한 멸균법이다. 히알루론산 겔 조성물의 건조품을 EOG 멸균 챔버내에 넣고, EOG 를 주입하고, 온도조건은 바람직하게는 50 ℃ 이하에서 멸균하면, 유착 방지재, 창상 피복재에 효과적이다.

EOG 를 주입하는 온도, 시간을 바꿈으로써 히알루론산 겔 조성물의 용해성을 제어하고, 생체재료로서의 용도에서의 적절한 생체저장성을 제어하는 것이 가능하다.

다음으로, 본 발명의 의용 재료 중 유착 방지재에 대하여 설명한다.

본 발명에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재는 시트상, 필름상, 파쇄상, 스폰지상, 괴상, 섬유상, 유동상 또는 튜브상 등의 형태로 외과수술에 사용된다. 사용되는 형태로서는 필름상 또는 시트상으로 하여 외과수술부위에 직접 점착하는 것이 바람직하다. 또는, 미세파쇄상, 유동상으로 하여 주사기로 외과수술부위에 도포하는 것이 바람직하다. 또는, 복강경의 수술에도 사용 가능하다.

또한, 히알루론산 겔 조성물이 조정된 산성 용액에 생리활성 화합물을 혼합한 후에 동결, 해동시킴으로써 생리활성 화합물을 포함한 히알루론산 겔 조성물을 유착 방지재로서 얻는 것도 가능하다.

본 발명에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재의 투여시기는 수술 후의 유착을 방지할 수 있는 어느 시기라도 되며, 수술중 또는 수술종료시에 투여할 수 있지만, 특히 수술종료 직전에 투여하는 것이 바람직하다.

실시예

이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그리고, 본 발명은 이에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨과 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 각각 0.5 질량%가 되도록 용해시켰다. 조정된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하였다. 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 유리병에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시켰다. 그 결과, 스폰지상의 히알루론산 겔 조성물이 얻어졌다.

실시예 2

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨과 폴리비닐알콜 (중합도 1500, 와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 각각 0.5 질량%, 10 질량%가 되도록 용해시켰다. 조정된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하였다. 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 유리병에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시켰다. 그 결과, 블록상의 히알루론산 겔 조성물이 얻어졌다.

실시예 3

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨과 알긴산 나트륨 (후나코시사 제조) 을 증류수에 각각 0.5 질량%가 되도록 용해시켰다. 조정된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하였다. 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 유리병에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시켰다. 그 결과, 스폰지상의 히알루론산 겔 조성물이 얻어졌다.

비교예 1

실시예 1 에 있어서, 혼합 수용액의 pH 를 조정하지 않고 중성인 채로 동결시키고, 해동시키는 것을 8 회 반복하였다. 그 결과, 히알루론산의 수용액의 변화는 일어나지 않았다. 즉, 겔화되지 않았다. 9 회째의 동결후, 동결건조시켜 스폰지상의 히알루론산 조성물을 얻었다.

비교예 2

실시예 2 에 있어서, 혼합 수용액의 pH 를 조정하지 않고 중성인 채로 동결시키고, 해동시키는 것을 8 회 반복하였다. 그 결과, 히알루론산의 수용액의 변화는 일어나지 않았다. 즉, 겔화되지 않았다. 9 회째의 동결후, 동결건조시켜 스폰지상의 히알루론산 조성물을 얻었다.

비교예 3

실시예 3 에 있어서, 혼합 수용액의 pH 를 조정하지 않고 중성인 채로 동결시키고, 해동시키는 것을 8 회 반복하였다. 그 결과, 히알루론산의 수용액의 변화는 일어나지 않았다. 즉, 겔화되지 않았다. 9 회째의 동결후, 동결건조시켜 스폰지상의 히알루론산 조성물을 얻었다.

참고예 1

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨을 증류수에 1.0 질량%가 되도록 용해시켰다. 조정된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하였다. 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 유리병에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시켰다. 그 결과, 스폰지상의 히알루론산 겔이 얻어졌다.

실시예 4

히알루론산 겔 조성물의 용해성 시험

생리적 식염수에 50 mmol/ℓ농도로 인산 완충성분을 첨가하여 pH 7 의 인산 완충 생리적 식염수를 조정하였다. 상기 실시예 1 ∼ 3 에서 얻어진 스폰지상의 히알루론산 겔 조성물, 및 참고예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔을 증류수로 세정하고, 여과지 위에서 탈수하였다. 건조중량으로 150 ㎎ 의 히알루론산을 포함하는 얻어진 히알루론산 겔 조성물에 대하여 50 ㎖ 의 인산 완충 생리적 식염수의 비율로 히알루론산 겔 조성물을 인산 완충 생리적 식염수중에 침지하였다. 또, 상기 비교예 1 ∼ 3 에서 얻어진 건조중량으로 150 ㎎ 의 히알루론산을 포함하는 동결건조된 스폰지상의 히알루론산 조성물은, 이것에 대하여 50 ㎖ 의 인산 완충 생리적 식염수의 비율로 히알루론산 조성물을 인산 완충 생리적 식염수중에 침지하 였다.

그리고, 히알루론산 겔 조성물 및 히알루론산 조성물의 용해성을 육안으로 구하였다. 또, 25 ℃ 에서 인산 완충 생리적 식염수중에 용출되는 히알루론산의 비율을 인산 완충 생리적 식염수중의 히알루론산 농도로부터 구하였다.

따라서, 중성의 25 ℃ 의 수용액 중에서의 히알루론산 겔 조성물의 용해성은 상기 시험에 의해 규정되는 것이다.

히알루론산 농도의 측정

인산 완충 생리적 식염수중의 히알루론산은 GPC 를 사용하여 측정하였다. 히알루론산은 고분자량이므로 먼저 용출되고, 저분자의 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐알콜은 그 후부터 용출된다. 히알루론산의 농도는 그 용출되는 히알루론산의 피크를 시차굴절률 검출기에 의해 산출한 피크면적으로부터 구하였다.

상기에 따라 구체적으로 실시예 1 ∼ 3 의 히알루론산 겔 조성물 및 참고예 1 의 히알루론산 겔, 비교예 1 ∼ 3 의 히알루론산 조성물의 용해성 시험을 행하였다. 그 결과를 표 1 에 나타낸다.

실험 No	히알루론산 용해율 (%)			비고
실험 No	1 일	4 일	10 일	비고
1	2	4	6	실시예 1
2	0	1	3	실시예 2
3	3	5	10	실시예 3
4	100	100	100	비교예 1
5	100	100	100	비교예 2
6	100	100	100	비교예 3
7	3	5	10	참고예 1

표 1 로부터, 예컨대 실험 No. 1 의 실시예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔 조 성물의 용해율을 조사하면, 히알루론산은 1 일 경과한 후에는 2 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 4 % 의 용해율이고, 또한 10 일 경과한 후에는 6 % 의 용해율이었다. 즉, 10 일 경과해도 히알루론산은 94 % 의 히알루론산 겔이 잔존하고 있었다. 스폰지상의 형태도 유지되어 있었다.

실험 No. 7 의 참고예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔의 용해율을 조사하면, 1 일 경과한 후에는 3 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 5 % 의 용해율이고, 또한 10 일 경과한 후에는 10 % 의 용해율이었다. 즉, 실시예 1 ∼ 3 에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 용해율은 참고예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔의 용해율과 동일한 것이 발견된다.

그에 대하여, 실험 No. 4 ∼ 6 의 비교예 1 ∼ 3 에서 얻어진 히알루론산 조성물의 용해율을 조사하면, 1 일 경과한 후에는 100 % 의 용해율로, 완전히 용해되었다.

실시예 5

히알루론산 겔 조성물의 용해성 시험

생리적 식염수에 50 mmol/ℓ농도로 인산 완충성분을 첨가하여 pH 7 의 인산 완충 생리적 식염수를 조정하였다. 상기 실시예 1 ∼ 3 에서 얻어진 스폰지상의 히알루론산 겔 조성물, 및 참고예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔을 증류수로 세정하고, 여과지 위에서 탈수하였다. 건조중량으로 20 ㎎ 의 히알루론산을 포함하는 얻어진 히알루론산 겔 조성물에 대하여 50 ㎖ 의 인산 완충 생리적 식염수의 비율로 히알루론산 겔 조성물을 인산 완충 생리적 식염수중에 침지하였다. 또, 상기 비교예 1 ∼ 3 에서 얻어진 건조중량으로 20 ㎎ 의 히알루론산을 포함하는 동결건조된 스폰지상의 히알루론산 조성물은, 이것에 대하여 50 ㎖ 의 인산 완충 생리적 식염수의 비율로 히알루론산 조성물을 인산 완충 생리적 식염수중에 침지하였다.

그리고, 37 ℃ 에서 교반하의 인산 완충 생리적 식염수중에 용출되는 히알루론산의 비율을 인산 완충 생리적 식염수중의 히알루론산 농도로부터 구하였다.

따라서, 중성의 37 ℃ 의 수용액 중에서의 히알루론산 겔 조성물의 용해성은 상기 시험에 의해 규정되는 것이다.

상기에 따라 구체적으로 실시예 1 ∼ 3 의 히알루론산 겔 조성물 및 참고예 1 의 히알루론산 겔, 비교예 1 ∼ 3 의 히알루론산 조성물의 용해성 시험을 행하였다. 그 결과를 표 2 에 나타낸다.

실험 No	히알루론산 용해율 (%)			비고
실험 No	6 시간후	12 시간후	24 시간후	비고
8	12	14	18	실시예 1
9	10	16	23	실시예 2
10	13	15	20	실시예 3
11	100	100	100	비교예 1
12	100	100	100	비교예 2
13	100	100	100	비교예 3
14	12	15	20	참고예 1

표 2 로부터, 예컨대 실험 No. 8 의 실시예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 용해율을 조사하면, 히알루론산은 6 시간 경과한 후에는 12 % 의 용해율이고, 12 시간 경과한 후에는 14 % 의 용해율이고, 또한 24 시간 경과한 후에는 18 % 의 용해율이었다. 즉, 24 시간 경과해도 히알루론산은 82 % 의 히알루론산 겔 이 잔존하고 있었다.

실험 No. 14 의 참고예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔의 용해율을 조사하면, 6 시간 경과한 후에는 12 % 의 용해율이고, 12 시간 경과한 후에는 15 % 의 용해율이고, 또한 24 시간 경과한 후에는 20 % 의 용해율이었다. 즉, 실시예 1 ∼ 3 에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 용해율은 참고예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔의 용해율과 동일한 것이 발견된다.

그에 대하여, 실험 No. 10 ∼ 12 의 비교예 1 ∼ 3 에서 얻어진 히알루론산 조성물의 용해율을 조사하면, 6 시간 경과한 후에는 100 % 의 용해율로, 완전히 용해되었다.

실시예 6

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨과 키토산 (와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 각각 1.0 질량%, 0.1 질량%로 혼합하고, pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하였다. 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 유리병에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시켰다. 그 결과, 스폰지상의 히알루론산 겔 조성물이 얻어졌다.

실시예 7

히알루론산 겔 조성물의 용해성 시험

생리적 식염수에 100 mmol/ℓ농도로 인산 완충성분을 첨가하여 pH 7 의 인산 완충 생리적 식염수를 조정하였다. 상기 실시예 1, 2 및 6 에서 얻어진 스폰지 상의 히알루론산 겔 조성물을 증류수로 세정하고, 여과지 위에서 탈수하였다. 건조중량으로 20 ㎎ 의 히알루론산을 포함하는 얻어진 히알루론산 겔 조성물에 대하여 100 ㎖ 의 인산 완충 생리적 식염수의 비율로 히알루론산 겔 조성물을 인산 완충 생리적 식염수중에 침지하였다.

25 ℃ 에서 인산 완충 생리적 식염수중에 용출되는 히알루론산, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐알콜 및 키토산의 비율을 인산 완충 생리적 식염수중의 각 성분의 농도로부터 구하였다.

히알루론산, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐알콜 및 키토산 농도의 측정

인산 완충 생리적 식염수중의 히알루론산, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐알콜 및 키토산은 GPC 를 사용하여 측정하였다. 히알루론산은 고분자량이므로 GPC 에 의해 먼저 용출되고, 저분자의 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐알콜 및 키토산은 그 후부터 용출된다. 히알루론산의 농도는 그 용출되는 히알루론산의 피크를 시차굴절률 검출기에 의해 산출한 피크면적으로부터 구하였다.

상기에 따라 구체적으로 실시예 1, 2 및 6 의 히알루론산 겔 조성물의 용해성 시험을 행하였다. 그 결과를 표 3 에 나타낸다.

실험 No	성분	히알루론산, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐알콜, 키토산 용해율 (%)			비고
실험 No	성분	1 일후	4 일후	10 일후	비고
15	HA CMC	2 10	4 30	6 51	실시예 1
16	HA PVA	0 0	1 1	3 1	실시예 2
17	HA 키토산	1 4	4 5	5 6	실시예 6

표 3 으로부터, 예컨대 실험 No. 15 의 실시예 1 에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 용해율을 조사하면, 히알루론산은 1 일 경과한 후에는 2 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 4 % 의 용해율이고, 또한 10 일 경과한 후에는 6 % 의 용해율이었다. 또, 카르복시메틸셀룰로오스는 1 일 경과한 후에는 10 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 30 % 의 용해율이고, 또한 10 일 경과한 후에는 51 % 의 용해율이었다.

실험 No. 16 의 실시예 2 에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 용해율을 조사하면, 히알루론산은 1 일 경과한 후에는 0 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 1 % 의 용해율이고, 또한 10 일 경과한 후에는 3 % 의 용해율이었다. 또, 폴리비닐알콜은 1 일 경과한 후에는 0 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 1 % 의 용해율이고, 또한 10 일 경과한 후에는 1 % 의 용해율이었다.

실험 No. 17 의 실시예 6 에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물의 용해율을 조사하면, 히알루론산은 1 일 경과한 후에는 1 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 4 % 의 용해율이고, 또한 10 일 경과한 후에는 5 % 의 용해율이었다. 또, 키토산은 1 일 경과한 후에는 4 % 의 용해율이고, 4 일 경과한 후에는 5 % 의 용해율이 고, 또한 10 일 경과한 후에는 6 % 의 용해율이었다.

실시예 8

히알루론산 겔 조성물의 세포독성시험

정상 인간 피부 유래 섬유 아세포 배양에 있어서 본 발명에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물을 비접촉하에서 공존시키고, 세포증식거동의 관찰에 의해 그 세포독성을 평가하였다. 실시예 1 의 방법으로 제작한 스폰지상의 히알루론산 겔 조성물을 인산 완충 생리적 식염수에 침지한 후 동결건조체로 하였다. 이 동결건조체를 기계적으로 분쇄한 것 20 ㎎ 을 팔콘사 제조의 셀컬처인서트 (포어 사이즈 : 3 ㎛) 중에 넣고, 세포를 파종한 배지에 담궜다. 또, 히알루론산 겔 조성물 비공존하에서의 배양을 대조군으로 하였다.

배양조건 플레이트 : 세포배양용 12 웰 플레이트

배지 : DMEM 배지 + 10 % 소 태아 혈청, 2 ㎖/웰

온도 : 37 ℃ (5 % CO₂ 하)

파종세포수 : 1 ×10⁴ 개/웰

배양개시후 2 일, 5 일, 8 일 후에 세포밀도를 도립현미경을 사용하여 관찰한 결과, 히알루론산 겔 조성물이 공존하고 있어도 대조군과 동일하게 양호한 증식을 나타내어 본 발명에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물에는 세포독성작용이 없는 것이 확인되었다.

실시예 9

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨과 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 각각 0.5 질량%가 되도록 용해시켰다. 이 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하여 히알루론산 산성 수용액을 얻었다. 이 히알루론산 산성 수용액 25 ㎖ 를 플라스틱제 샬레에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 동결시켜 스폰지상의 히알루론산 겔 조성물이 얻어졌다. 다음으로, 이것을 생리적 식염수에 50 mM 농도로 인산 완충 성분을 첨가하여 조정한 pH 7 의 인산 완충 생리적 식염수 100 ㎖ 에 5 ℃ 에서 24 시간 침지하여 중화한 후, 증류수로 충분히 세정하였다. 그리고, 이것을 동결건조시켰다. 그 결과, 시트상의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재를 얻었다.

실시예 10

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨을 0.5 질량%가 되도록 용해시켰다. 조정된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하였다. 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 유리병에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 얻어진 스폰지상의 히알루론산 겔을 마이크로호모지나이저 (Polytoron, Kinematica AG 제조) 로 분쇄하여 파쇄상의 히알루론산 겔을 얻었다.

25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이 이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 0.5 내지 1 질량%가 되도록 용해시켰다. 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.0 으로 조정하고, 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 용기에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 얻어진 스폰지상의 카르복시메틸셀룰로오스 겔을 마이크로호모지나이저 (Polytoron, Kinematica AG 제조) 로 분쇄하여 파쇄상의 카르복시메틸셀룰로오스 겔을 얻었다.

얻어진 파쇄상의 히알루론산 겔과 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 겔을 증류수에 각각 10.0 질량%가 되도록 투입하고, 교반하여 슬러리 용액을 얻었다. 이 슬러리 용액 25 ㎖ 를 9 ㎝ 의 사각 플라스틱제 샬레에 넣어 자연건조시켰다. 그 결과, 필름상의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재를 얻었다.

비교예 4

실시예 9 에 있어서, 혼합 수용액의 pH 를 조정하지 않고 중성인 채로 동결시키고, 해동시키는 것을 8 회 반복하였다. 그 결과, 히알루론산의 수용액의 변화는 일어나지 않았다. 즉, 겔화되지 않았다. 이 용액을 플라스틱제 샬레에 넣어 9 회째의 동결을 행하고, 동결건조시켜 시트상의 히알루론산 조성물의 유착 방지재를 얻었다.

비교예 5

Na₂HPO₄ㆍ12H₂O 1.1 g 을 30 g 의 물에 용해시켜 2 % NaOH 로 pH 10 으로 조정한 용액에 평균분자량 60 만의 히알루론산 나트륨 0.3 g 과 카르복시메틸셀룰로 오스 나트륨 (와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 각각 0.3 g 을 용해시켰다. 염화 시아눌 0.05 g 을 1.5 ㎖ 의 디옥산에 용해시키고, 상기 히알루론산 용액에 첨가하여 3 시간 실온에서 반응시켰다. 그 후, 투석막에 넣어 1 일간 물에 대하여 투석하고, 그 용액 15 ㎖ 를 플라스틱제 샬레에 넣고 동결건조시켜 시트상의 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물의 유착 방지재를 얻었다.

실시예 11

히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재의 마우스 자궁 모델에 의한 유착방지효과 시험

실시예 9 와 10 에서 얻어진 시트상 및 필름상의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재를 1 ㎝ ×2 ㎝ 의 직사각형으로 재단한 것, 대조군으로서 비교예 4 에서 얻어진 시트상 히알루론산 조성물을 1 ㎝ ×2 ㎝ 의 직사각형으로 재단한 것, 및 비교예 5 에서 얻어진 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물을 1 ㎝ ×2 ㎝ 의 직사각형으로 재단한 것을 이하의 시험에 사용하였다.

생후 7 주된 암컷 ICR 마우스 (체중 25 ∼30 g) 를 복강내 펜트바르비탈 주사로 마취후 한가운데를 절개하여 개복하고, 자궁 귀퉁이에 약 10 ㎜ 길이로 요오드 팅크 찰과도포에 의해 손상을 가하였다. 각 군 10 마리의 마우스에 대조군으로서 무처치, 및 각각 상기 실시예 9 및 10 의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재, 비교예 4 의 히알루론산 조성물의 유착 방지재, 비교예 5 의 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물의 유착 방지재 1 ㎝ ×2 ㎝ 의 직사각형 시트를 손상부위에 감았다. 그리고, 모든 경우에 5-0 덱손으로 배를 닫았다.

수술후 10 일째에 무처치, 히알루론산 겔 조성물 및 히알루론산 조성물 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물을 투여한 마우스 각 10 마리를 경추탈구 치사후, 복부를 재개복하여 유착형성의 유무를 판정하였다. 유착형성은 막형상과 같은 매우 경도의 유착은 유착이라고 판정하지 않고, 섬유상으로 두껍고, 핀셋으로 잡아당겨도 용이하게 떼어지지 않는 강한 유착을 발생시킨 경우를 유착이라고 판정하였다. 그 결과를 표 4 에 나타낸다.

실험 No	군	유착의 비율	조직의 상태	비고
18	실시예 9 의 히알루론산겔 조성물	0/10	이상 없음	실시예
19	실시예 10 의 히알루론산겔 조성물	0/10	이상 없음	실시예
20	비교예 4 의 히알루론산조성물	5/10	이상 없음	비교예
21	무처치 (생리적 식염수)	9/10	이상 없음	비교예
22	비교예 5 의 히알루론산조성물	3/10	경미한 염증	비교예

표 4 로부터, 무처치에서 유착의 형성비율이 10 마리중 9 마리일 때, 단지 히알루론산 혼합액을 중성으로 동결시켜 얻은 히알루론산 조성물이 10 마리중 5 마리, 및 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물이 10 마리중 3 마리인 것에 비교하여, 실시예 9 및 10 의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재는 10 마리중 0 마리로 우수한 유착방지작용이 있는 것이 시사되었다.

모든 마우스가 정상적으로 생육되었지만, 조직의 상태는 실시예 9 와 10 의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재 및 비교예 4 의 히알루론산 조성물의 유착 방지재가 들어가 있는 국소 조직의 상태에 이상은 보이지 않았던 것에 대하여, 비교 예 5 에서 얻어진 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물에서는 조직의 경미한 염증이 관찰되었다.

실시예 12

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 50:1 이 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 실온에서 바람에 건조시킴으로써 HA/CMC 겔 필름을 얻었다.

실시예 13

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 수용액의 pH 를 1 N 질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 2:1 이 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 실온에서 바람에 건조시킴으로써 HA/CMC 겔 필름을 얻었다.

실시예 14

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 1:1 이 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 실온에서 바람에 건조시킴으로써 HA/CMC 겔 필름을 얻었다.

실시예 15

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 1:2 가 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 실온에서 바람에 건조시킴으로써 HA/CMC 겔 필름을 얻었다.

실시예 16

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 50:1 이 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 동결시킴으로써 HA/CMC 겔 시트를 얻었다.

실시예 17

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 2:1 이 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동 시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 동결시킴으로써 HA/CMC 겔 시트를 얻었다.

실시예 18

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 1:1 이 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 동결시킴으로써 HA/CMC 겔 시트를 얻었다.

실시예 19

히알루론산 나트륨 (분자량 2 ×10⁵ 달톤) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용 해시키고, 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ질산으로 1.5 로 조제하였다. 한편, 25 ℃ 에서의 1 % 점도가 150 ∼ 250 mPaㆍs 인 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (에테르화도 0.62 ∼ 0.68, 환산분자량 1.28 ×10⁵ ∼ 1.35 ×10⁵ 달톤, 다이이찌고오교세이야꾸 제조) 을 증류수에 1 질량%가 되도록 용해시키고, 이렇게 하여 조제된 수용액의 pH 를 1 N 질산으로 1.5 로 조정하였다. 2 개의 산성 수용액을 용량비로 1:2 가 되도록 혼합하고, 혼합액 100 ㎖ 를 용기 (면적 : 16 ㎝ ×16 ㎝) 에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 3 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 스폰지상의 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물이 얻어졌다. 또한, 얻어진 겔 조성물을 2 회 증류수에 의해 과잉의 산용액을 치환한 후, 3 회 100 mmol/ℓ인산 완충 생리식염수에 의한 세정으로 완전 중화하였다. 중화후, 겔을 동결시킴으로써 HA/CMC 겔 시트를 얻었다.

실시예 20

히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스 겔 조성물의 용해성 시험

생리적 식염수에 50 mmol/ℓ농도로 인산 완충성분을 첨가하여 pH 7.4 의 인산 완충 생리적 식염수를 조정하였다. 상기 실시예 11 ∼ 18 에서 얻어진 건조중량으로 50 ㎎ 의 겔 조성물은 이것에 대하여 50 ㎖ 의 인산 완충 생리적 식염수의 비율로 인산 완충 생리적 식염수중에 침지하였다.

또, 37 ℃ 에서 인산 완충 생리적 식염수중에 용출되는 히알루론산과 카르복시메틸셀룰로오스의 비율을 인산 완충 생리적 식염수중의 히알루론산 농도로부터 구하였다.

히알루론산과 카르복시메틸셀룰로오스 농도의 측정

인산 완충 생리적 식염수중의 히알루론산은 NaOH 용액을 첨가함으로써 겔을 완전히 분해시킨 후, 히알루론산 분해효소처리를 하였다. 그리고, 분석용 샘플은 0.45 ㎛ 의 필터에 의한 여과후, GPC 를 사용하여 측정하였다. 히알루론산 및 카르복시메틸셀룰로오스의 농도는 용출되는 히알루론산의 피크를 시차굴절률 검출기에 의해 산출한 피크면적으로부터 구하였다. 히알루론산은 효소분해에 의해 분자량이 저하되어 있으며, 고분자량의 카르복시메틸셀룰로오스와 피크 분리가 가능하다.

상기에 따라 구체적으로 실시예 12 ∼ 19 의 히알루론산 겔 조성물의 용해성 시험을 행하였다. 그 결과를 표 5, 6 에 나타낸다.

히알루론산 겔 용해성 (pH 7)

실험 No	형상	조성	히알루론산 용해율 (%)			비고
실험 No	형상	조성	1 일	3 일	7 일	비고
23	필름상	50:1	96	81	74	실시예 12
24		2:1	96	90	62	실시예 13
25		1:1	95	93	67	실시예 14
26		1:2	97	87	68	실시예 15
27	시트상	50:1	94	82	70	실시예 16
28		2:1	94	86	72	실시예 17
29		1:1	95	87	59	실시예 18
30		1:2	97	81	65	실시예 19

히알루론산 겔 용해성 (pH 8)

실험 No	형상	조성	히알루론산 용해율 (%)			비고
실험 No	형상	조성	1 일	3 일	7 일	비고
31	필름상	50:1	70	46	27	실시예 12
32		2:1	64	42	22	실시예 13
33		1:1	72	53	20	실시예 14
34		1:2	83	50	19	실시예 15
35	시트상	50:1	72	44	20	실시예 16
36		2:1	69	43	22	실시예 17
37		1:1	73	49	25	실시예 18
38		1:2	71	41	21	실시예 19

표 5, 6 으로부터 모든 조성비의 겔 조성물이, 겔화시킴으로써 히알루론산, 카르복시메틸셀룰로오스 양측 모두가 용출되기 어려워지는 것을 알았다.

실시예 21

히알루론산 겔 조성물의 세포독성시험

정상 인간 피부 유래 섬유 아세포 배양에 있어서 본 발명에서 얻어진 히알루론산 겔 조성물을 비접촉하에서 공존시키고, 세포증식거동의 관찰에 의해 그 세포독성을 평가하였다. 실시예 12 ∼ 19 의 방법으로 제작한 겔 조성물을 기계적으로 분쇄한 것 20 ㎎ 을 팔콘사 제조의 셀컬처인서트 (포어 사이즈 : 3 ㎛) 중에 넣고, 세포를 파종한 배지에 담궜다. 또, 히알루론산 겔 조성물 비공존하에서의 배양을 대조군으로 하였다.

배양조건 플레이트 : 세포배양용 12 웰 플레이트

배지 : DMEM 배지 + 10 % 소 태아 혈청, 2 m/웰

온도 : 37 ℃ (5 % CO₂ 하)

파종세포수 : 1 ×10⁴ 개/웰

배양개시후 2 일, 5 일, 8 일 후에 세포밀도를 도립현미경을 사용하여 관찰한 결과, 겔 조성물이 공존하고 있어도 대조군과 동일하게 양호한 증식을 나타내어 본 발명에서 얻어진 겔 조성물에는 세포독성작용이 없는 것이 확인되었다.

실시예 22

래트 맹장 찰과 모델에서의 유착방지시험

유착유도법

래트 (SD, 암컷, 생후 9 주 이상) 의 뒷다리에 마취제를 근육주사하여 마취후, 위를 보게 고정시켜 이소딘으로 복부 피부를 소독한 후 털을 깎았다. 래트 복근을 한가운데 선을 따라 개복하고, 맹장부분에 가제를 씌운 회전봉을 꽉 눌러 찰과하였다. 찰과부에 히알루론산 조성물을 원료로 하여 제작한 필름상 유착 방지재를 대고, 맹장을 원래로 되돌려 봉합하였다. 또, 유착 방지재를 처치하지 않고, 그대로 맹장을 되돌린 것을 대조군으로 하였다. 이러한 처치는 대조군을 포함시킨 각 실험에서 10 마리씩 래트를 사용하였다. 수술후 1 주 정도 지나 부검하여 유착형성의 유무를 판정하였다. 유착형성은 막형상과 같은 매우 경도의 유착은 유착이라고 판정하지 않고, 섬유상으로 두껍고, 핀셋으로 잡아당겨도 용이하게 떼어지지 않는 강한 유착을 발생시킨 경우를 유착이라고 판정하였다. 그 결과를 표 7 에 나타낸다.

그리고, 비교예 4, 5 및 실시예 14 ∼ 16 에서 제조한 조성물 200 ㎎/81 ㎠ 를 시험편으로 하여 상기 방법에 의한 유착방지제로서의 효과를 평가하였다.

히알루론산 겔 유착방지시험

실험 No	군	유착의 비율	조직의 상태	비고
39	무처치	9/10	이상 없음	비교예
40	비교예 4 의 히알루론산 조성물	7/10	이상 없음	비교예
41	비교예 5 의 히알루론산 조성물	4/10	경미한 염증	비교예
42	실시예 14 의 히알루론산 조성물	3/10	이상 없음	실시예
43	실시예 15 의 히알루론산 조성물	2/10	이상 없음	실시예
44	실시예 16 의 히알루론산 조성물	2/10	이상 없음	실시예

표 7 로부터, 무처치에서 유착의 형성비율이 10 마리중 9 마리일 때, 단지 히알루론산 혼합액을 중성으로 동결시켜 얻은 히알루론산 조성물이 10 마리중 7 마리, 및 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물이 10 마리중 4 마리인 것에 비교하여, 실시예 8 의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재는 10 마리중 3 마리 이하로 우수한 유착방지작용이 있는 것이 시사되었다.

조직의 상태는 실시예 14 ∼ 16 의 히알루론산 겔 조성물의 유착 방지재 및 비교예 4 의 히알루론산 조성물의 유착 방지재가 들어가 있는 국소 조직의 상태에 이상이 보이지 않았던 것에 대하여, 비교예 5 에서 얻어진 염화 시아눌 가교 히알루론산 조성물에서는 조직의 경미한 염증이 관찰되었다.

실시예 23

겔 창상 피복재의 래트 피부 결손 모델에 의한 창상치료효과 시험

생후 7 주 (약 200 g) 된 위스타 (Wistar) 계, 암컷 래트의 등부의 털을 깎 고, 에테르 마취하에서 안과용 가위를 사용하여 등부 피부부분을 직경 2 ㎝ 의 원형으로 제거하여 완전 피부결손창을 제작하였다. 의료용 부직포 가제 (40 ×40 ㎜ : 2 장 겹침) 만을 사용한 무처치군, 비교예 4, 5 및 실시예 14 에서 제작한 조성물 (30 ×30 ㎜) 을 창면(創面)에 피복한 후, 의료용 부직포 가제 (40 ×40 ㎜ : 2 장 겹침) 를 사용한 처치군을 설정하였다. 각 군 6 마리의 래트를 사용하였다. 의료용 부직포 가제는 점착 붕대로 설정하고, 또한 테이핑으로 고정시켰다.

치료효과는 창 면적의 시간 경과에 따른 변화를 측정함으로써 비교하였다. 즉, 초기 창면의 면적에 대한 면적비를 다음의 식에 의해 구하고, 그 시간 경과에 따른 변화를 조사하였다. 결과를 표 8 에 나타낸다.

면적비 (%)

= ｛(관찰일의 창면의 장경 ×단경) / (초기 창면의 장경 ×단경)｝×100

히알루론산 겔 창상치유효과 시험

실험 No	실험군	면적비 (%)
실험 No	실험군	0 일	2 일	3 일	7 일	10 일
45	무처치	100	93	81	74	65
46	비교예 4 의 히알루론산 조성물	100	93	75	65	57
47	비교예 5 의 히알루론산 조성물	100	89	74	60	49
48	실시예 14 의 히알루론산 조성물	100	86	74	45	35

표 8 로부터, 난수용성이 된 히알루론산 겔 시트가 창상치료효과를 증강시키는 것을 알았다.

실시예 24

분자량이 2 ×10⁶ 달톤인 히알루론산 나트륨을 0.5 질량%가 되도록 용해시켰다. 조정된 수용액의 pH 를 1 mol/ℓ염산으로 pH 1.5 로 조정하였다. 산성 수용액 15 ㎖ 를 30 ㎖ 의 유리병에 넣고, -20 ℃ 로 설정한 냉동고에 넣었다. 5 일간 방치한 후, 25 ℃ 에서 해동시키고, 얻어진 스폰지상의 히알루론산 겔을 마이크로호모지나이저 (Polytoron, Kinematica AG 제조) 로 분쇄하여 파쇄상의 히알루론산 겔을 얻었다. 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 (와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 1.0 질량%가 되도록 용해시킨 용액에 파쇄상의 히알루론산 겔을 2.0 질량%가 되도록 확산시키고, 이 용액 25 ㎖ 를 9 ㎝ 의 사각 플라스틱제 샬레에 넣어 자연건조시켰다. 그 결과, 필름상의 히알루론산 겔 조성물을 얻었다.

실시예 25

실시예 1 과 동일하게 하여 파쇄상의 히알루론산 겔을 얻었다. 그리고, 폴리비닐알콜 (중합도 1500, 와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 1.0 질량%가 되도록 용해시킨 용액에 파쇄상의 히알루론산 겔을 2.0 질량%가 되도록 확산시키고, 이 용액 25 ㎖ 를 9 ㎝ 의 사각 플라스틱제 샬레에 넣어 자연건조시켰다. 그 결과, 필름상의 히알루론산 겔 조성물을 얻었다.

실시예 26

실시예 1 과 동일하게 하여 파쇄상의 히알루론산 겔을 얻었다. 그리고, 젤라틴 (후나코시사 제조) 을 증류수에 1.0 질량%가 되도록 용해시킨 용액에 파쇄 상의 히알루론산 겔을 2.0 질량%가 되도록 확산시키고, 이 용액 25 ㎖ 를 9 ㎝ 의 사각 플라스틱제 샬레에 넣어 자연건조시켰다. 그 결과, 필름상의 히알루론산 겔 조성물을 얻었다.

실시예 27

실시예 1 과 동일하게 하여 파쇄상의 히알루론산 겔을 얻었다. 그리고, 콘드로이틴 황산 (와꼬준야꾸 제조) 을 증류수에 1.0 질량%가 되도록 용해시킨 용액에 파쇄상의 히알루론산 겔을 2.0 질량%가 되도록 확산시키고, 이 용액 25 ㎖ 를 9 ㎝ 의 사각 플라스틱제 샬레에 넣어 자연건조시켰다. 그 결과, 필름상의 히알루론산 겔 조성물을 얻었다.

비교예 6

실시예 1 과 동일하게 하여 파쇄상의 히알루론산 겔을 얻었다. 그리고, 얻어진 파쇄상의 히알루론산 겔을 3.0 질량%가 되도록 증류수중에 확산시키고, 이 용액 25 ㎖ 를 9 ㎝ 의 사각 플라스틱제 샬레에 넣어 자연건조시켰다. 그 결과, 필름상의 히알루론산 겔을 얻었다.

실시예 28

히알루론산 겔 조성물의 건조강도시험

상기 실시예 24 ∼ 27, 비교예 6 의 필름상의 히알루론산 겔 조성물 및 히알루론산 겔의 건조인장강도를 시마즈세이사꾸쇼 제조의 EZ-TEST 로 측정하였다. 각 샘플을 1 ㎝ ×5 ㎝ 의 직사각형으로 절단하고, 30 ㎜ 의 간격을 두어 크로스헤드의 속도 10 ㎜/min 으로 인장파단하는 시점의 최대응력을 측정하였다.

그 결과를 표 9 에 나타낸다. 실시예 24 ∼ 27 의 히알루론산 겔 조성물의 필름이 파단할 때의 가중은 비교예 6 의 히알루론산 겔만의 필름보다도 커 건조강도가 향상되어 있는 것을 알았다.

히알루론산 겔 조성물의 건조강도

실험 No	건조강도 (MPa)	비고
49	59	실시예 24
50	65	실시예 25
51	62	실시예 26
52	65	실시예 27
53	45	비교예 6

실시예 29

히알루론산 겔 조성물의 조직접착성 시험

상기 실시예 24 ∼ 27, 비교예 6 의 필름상의 히알루론산 겔 조성물 및 히알루론산 겔의 조직접착성을 시마즈세이사꾸쇼 제조의 EZ-TEST 로 측정하였다. 각 샘플을 1 ㎝ ×1 ㎝ 의 정사각형으로 절단하여 크로스헤드에 장착하고, 조직으로 하여 껍질을 벗긴 닭과의 박리시의 응력을 측정하였다. 각 샘플과 조직을 0.01 ㎏/㎠ 의 압력으로 30 초간 접촉시킨 후, 크로스헤드의 속도 1 ㎜/min 으로 인장박리되는 시점의 최대응력을 측정하였다.

그 결과를 표 10 에 나타낸다.

히알루론산 겔 조성물의 조직접착성

실험 No	최대박리가중 (N)
54	2.0	실시예 24
55	1.5	실시예 25
56	1.7	실시예 26
57	1.9	실시예 27
58	0.9	비교예 6

표 10 으로부터, 실시예 24 ∼ 27 의 히알루론산 겔 조성물의 필름이 파단할 때의 가중은 비교예 6 의 히알루론산 겔의 필름의 그것과 비교하여 우수한 것을 알았다.

이상, 본 발명에 의하면, 화학적 가교제나 화학적 수식제를 전혀 사용하지 않고, 히알루론산과 고분자 화합물로 이루어지는 히알루론산 겔 조성물을 간단하게 조정할 수 있다. 그리고, 이 히알루론산 겔 조성물은 히알루론산 단독으로 형성된 겔의 각종 물성을 보완하고, 또한 생체적합성이 우수한 의료분야에 유용한 의용 재료로서 제공할 수 있다.

Claims

히알루론산의 알칼리 금속염과 고분자 화합물로 이루어지며, 실질적으로는 화학적 가교제 또는 화학적 수식제(modifying agent)에 의해 개질되어 있지 않고, pH 3.5 이하의 수용액 또는 분산액을 동결시키고, 이어서 해동시켜 얻어지며, 37℃의 교반하에서, 50mmol/ℓ의 농도의 중성 인산 완충 생리적 식염수 중에서 12시간 동안의 히알루론산 용해율이 50 % 이하인 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물.
제 1 항에 있어서, 고분자 화합물이 카르복시메틸셀룰로오스인 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물.
히알루론산의 알칼리 금속염 및 고분자 화합물을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액 또는 분산액을 동결시키고, 이어서 해동시켜 히알루론산 겔 조성물을 형성하는 것을 특징으로 하는 제 1 항에 기재된 히알루론산 겔 조성물의 제조방법.
히알루론산의 알칼리 금속염을 함유하는 pH 3.5 이하의 수용액을 동결시키고, 이어서 해동시켜 형성되는 히알루론산 겔과, 고분자 화합물 또는 고분자 화합물 겔을 혼합하여 히알루론산 겔 조성물을 형성하는 것을 특징으로 하는 제 1 항에 기재된 히알루론산 겔 조성물의 제조방법.
제 3 항 또는 제 4 항에 있어서, 고분자 화합물이 다당류, 단백질, 핵산류, 및 합성 고분자류로 이루어지는 군에서 선택된 1 종 이상인 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물의 제조방법.
제 3 항 또는 제 4 항에 있어서, 고분자 화합물이 카르복시메틸셀룰로오스인 것을 특징으로 하는 히알루론산 겔 조성물의 제조방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 히알루론산 겔 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 의용 재료.
제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 히알루론산 겔 조성물에 감마선, 전자선, 플라즈마, 또는 EOG 로 이루어지는 군에서 선택된 1 종을 조사 또는 주입함으로써 얻어지는 히알루론산 겔 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 의용 재료.
제 7 항에 있어서, 의용 재료가 유착 방지재인 것을 특징으로 하는 의용 재료.
제 7 항에 있어서, 의용 재료가 창상 피복재인 것을 특징으로 하는 의용 재료.