CN102757572A

CN102757572A - 一种具有双抗特性(抗高温、酶解)的无颗粒化交联透明质酸钠凝胶的制备方法

Info

Publication number: CN102757572A
Application number: CN2011101081040A
Authority: CN
Inventors: 魏长征; 奚宏伟; 蒋丽霞
Original assignee: QISHENG BIOPREPARATIONS CO Ltd SHANGHAI
Current assignee: QISHENG BIOPREPARATIONS CO Ltd SHANGHAI
Priority date: 2011-04-28
Filing date: 2011-04-28
Publication date: 2012-10-31

Abstract

本发明涉及一种新型的交联透明质酸钠凝胶的制备方法，该方法通过低浓度线性分子状态下进行交联反应，摆脱了传统工艺的粉碎或挤压对交联透明质酸钠的机械外力造成的酶解位点的过多暴露。采用有机溶剂进行物理沉淀得到白色粉状交联透明质酸钠颗粒有效地去除多余的交联剂，保证了不同浓度产品的精确配置。该专利制备的交联透明质酸钠具有抗高温和抗酶解的双抗特性，同时具有无颗粒化的特性，优良的可注射性得以显著提高。121℃，灭菌30min后动力粘度减少3-10％之间，1000U透明质酸钠酶解48h，糖醛酸释放量＜40％。

Description

一种具有双抗特性(抗高温、酶解)的无颗粒化交联透明质酸钠凝胶的制备方法

技术领域

本发明涉及医用生物材料技术领域，是一种涉及一种新型交联透明质酸的制备方法，该交联透明质酸用于医学填充美容。

背景技术

透明质酸是人和动物皮肤、玻璃体、关节润滑液和软骨组织的重要成分，它由(1-β-4)D-葡糖醛酸和(1-β-3)N-乙酰基-D-氨基葡糖双糖单位重复连接而成，广泛使用在修复手术、眼部手术或作为美容产品填充皱纹。透明质酸具有良好的理化性能及生物相容性。然而，它在体内受到透明质酸酶的酶解作用而迅速降解，存留时间较短，需要重复注射才能达到疗效。交联透明质酸是透明质酸经交联剂交联修饰得到的高分子凝胶，可以弥补透明质酸存留时间短等缺点，同时仍具有良好的生物相容性及效果。

现在交联透明质酸的制备方法，大多采用高浓度的透明质酸溶液与交联剂反应，得到块状的交联凝胶，然后经透析，制粒或粉碎，得到一定浓度的交联透明质酸。该方法的缺点在于透析过程中，需控制透析时间时间，才能得到合适的浓度；同时，制粒或粉碎过程中造成透明质酸钠分子链的破化以及酶解位点的无规暴露，缩短体内降解时间，同时粒度不均匀以及交联剂残留的问题造成交联产品的可注射性以及生物相容性大大降低，必须通过层层的质量控制，不利于大规模生产。

现如今授权的发明专利主要集中在通过高起始浓度的透明质酸钠溶液进行交联，然后通过改进交联反应的方式得到较为理想的交联透明质酸钠凝胶。ZL101056891B专利中采用10％的起始交联浓度然后改进传统的交联剂的加入方式，即在溶解前将透明质酸钠和交联剂一起溶解，得到一整块的交联透明质酸钠凝胶，其后续的处理工艺都是传统的粉碎或挤压、透析得到一定浓度范围的交联透明质酸钠凝胶；因此如何得到交联透明质酸钠干粉然后溶解得到可控浓度的制备方法成为交联透明质酸钠的发展方向，但目前还没有一项专利涉及到。

透明质酸钠的交联反应的最终目的是在保证其生物相容性的基础上尽可能的提高其体内的残留时间，目前的专利虽然通过各种办法如提高交联度，提高起始反应浓度、缩短反应时间等，但是仍摆脱不了传统的粉碎挤压等工艺的使用，ZL200480010239.1采用高分子量的纤维状透明质酸钠样品，但仍通过传统的挤压工艺得到了较长降解时间的交联透明质酸钠凝胶，其高酶浓度(1000U)降解48h后糖醛酸释放量为75％，该专利考察了物理的机械作用力对交联透明质酸钠的影响巨大，因此交联透明质酸钠制备工艺中如何有效地减少物理挤压或粉碎对产品造成的影响是提高体内降解时间的有效手段。目前为止，还没有一项专利涉及到无挤压或粉碎工艺的制备方法。

发明内容

本发明的优点：

本发明为一种新型的交联透明质酸的制备方法。在较低浓度下进行交联反应，交联好的透明质酸溶液通过有机溶剂析出沉淀，析出的沉淀经溶剂洗涤后，复溶得到交联透明质酸凝胶。该交联透明质酸凝胶具有低交联剂残留、体内存留时间长、凝胶性能好等优点。该制备方法易操作、适合大规模生产。

由于在低浓度的透明质酸中，透明质酸钠是成线性平行分布，这样进行交联主要是分子间交联，得到的凝胶性能更好；通过该制备方法，得到交联透明质酸的固体沉淀，用有机溶剂多次洗涤后，可以快速的、有效的去除未反应的交联剂，经检测，有机溶剂洗涤后，交联剂残留为0；同时，不同于其他交联透明质酸的制备方法，本发明可以得到交联透明质酸的固体沉淀，该沉淀可以根据实际需要配制各种浓度的交联透明质酸凝胶，便于临床使用。

本发明专利制备的交联透明质酸钠由于制备过程中摈弃了物理机械外力对透明质酸钠的破坏，得到的样品具有抗高温灭菌和抗高浓度酶的降解的双抗特性，同时交联反应是在低浓度线性分子状态下进行的，因此得到的样品具有无颗粒化保留了原有分子的整体特性，其注射性显著提高。

附图说明：

图1为交联透明质酸钠凝胶灭菌前后动力粘度变化比较

图2为不同洗涤次数洗涤液中交联剂残留量

图3为体外高浓度透明质酸钠酶交联样品的降解率比较

具体实施方式

现结合实施例，对本发明作了详细描述：

实施例一

1g透明质酸干粉溶2％的氢氧化钠溶液50ml中，待完全溶解后，加入交联剂二乙烯基砜150微升，水浴加热40℃，反应3h；反应结束后，缓慢加入95％的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，该白色沉淀用同样浓度的乙醇溶液洗涤3～4次后，过滤，得到白色颗粒；该白色颗粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交联透明质酸凝胶。

实施例二

1g透明质酸干粉溶于2％的氢氧化钠溶液50ml中，待完全溶解后，加入交联剂二乙烯基砜180微升，水浴加热45℃，反应3h；反应结束后，缓慢加入95％的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，该白色沉淀用同样浓度的乙醇溶液洗涤3～4次后，过滤，得到白色颗粒；该白色颗粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交联透明质酸凝胶。

实施例三

1g透明质酸干粉溶于2％的氢氧化钠溶液50ml中，待完全溶解后，加入交联剂二乙烯基砜200微升，水浴加热50℃，反应2h；反应结束后，缓慢加入95％的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，该白色沉淀用同样浓度的乙醇溶液洗涤3～4次后，过滤，得到白色颗粒；该白色颗粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交联透明质酸凝胶。

实施例四

1g透明质酸干粉溶于20％的碳酸钠溶液50ml中，待完全溶解后，加入交联剂二乙烯基砜200微升，水浴加热50℃，反应2h；反应结束后，缓慢加入95％的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，该白色沉淀用同样浓度的乙醇溶液洗涤3～4次后，过滤，得到白色颗粒；该白色颗粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交联透明质酸凝胶。

实施例五

1g透明质酸干粉溶于2％的氢氧化钠溶液50ml中，待完全溶解后，加入交联剂二乙烯基砜250微升，水浴加热50℃，反应2h；反应结束后，缓慢加入95％的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，该白色沉淀用同样浓度的乙醇溶液洗涤3～4次后，过滤，得到白色颗粒；该白色颗粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交联透明质酸凝胶。

实施例六

分别取实施例一、二、三、四、五制得的交联透明质酸凝胶20ml，分别装入10个安培瓶中，分别编号为1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b，编号为b的5个样品，进行蒸汽灭菌，(121℃、30min)。然后，分别测定每个样品灭菌前后动力粘度的下降比例，研究样品对蒸汽灭菌的抗性能力。数据见附图1。

实施例七

按实施例一的反应比例制备透明质酸凝胶，析出白色沉淀用95％的乙醇溶液洗涤8次后，每次洗涤用的溶液进行交联剂残留检测。得到的数据见附图2。

实施例八

由实施例三、四得到的样品经蒸汽灭菌，(121℃、30min)后。取凝胶1ml，加入透明质酸酶液4ml(1000UI)；同样取Restylane^TM凝胶1ml，加入透明质酸酶液4ml(1000U)，37℃水浴48h，离心取上清液测定糖醛酸含量。参见附图3。

Claims

1.一种新型的交联透明质酸的制备过程，其主要特征为以低浓度透明质酸为基质通过交联，再通过有机溶剂将交联好的透明质酸沉淀，得到抗高温灭菌以及抗酶降解的交联透明质酸干粉。

2.如权利要求1所述，用于交联的透明质酸钠分子量为10～300万Da。

3.如权利要求1所述，用于交联的透明质酸钠通过NaOH、NaCO₃以及其他碱性溶液对其进行活化。

4.如权利要求3所述，活化后透明质酸的溶液为0.1～5％的NaOH、NaCO₃以及其他碱性溶液(m/m％)。

5.如权利要求4所述，透明质酸溶液采用低浓度交联，其浓度为0.1％～10％(m/m％)。

6.如权利要求1所述，交联采用的交联剂为二乙烯基砜、戊二醛、1，4-丁二醇二缩水甘油醚等。

7.如权利要求1所述，透明质酸和交联剂的比例为15/1～1/1(m/v)，交联时间为0.5-6小时。

8.如权利要求1所述，透明质酸交联反应的温度为30～60℃，低速搅拌，转速为50-300rpm。

9.如权利要求1所述，沉淀交联透明质酸的有机溶剂为乙醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一种或两种以上的混合溶液。