JP4607522B2 - 高分子複合体の製造方法及び該製造方法によって得られる高分子複合体、並びに該高分子複合体を用いた動物細胞の培養方法 - Google Patents
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Description
また、カチオン性高分子化合物を溶媒に溶解した該カチオン性高分子化合物溶液を任意の形状に凍結し、このカチオン性高分子化合物溶液の凍結物を、アニオン性高分子化合物を前記溶媒と相溶性のある溶媒に溶解した該アニオン性高分子化合物溶液に、前記凍結物の融解温度以下で浸漬することによりゲル化することを特徴とする。
アルギン酸を溶媒中に濃度が0.1〜10.0wt%、好ましくは2.0〜5.0wt%となるように溶解してアルギン酸溶液を調製する。上記溶媒としては水が好ましく用いられる。このアルギン酸溶液を、任意の形状の型に入れて−5〜−196℃で凍結する。上記溶媒としては水が好ましく用いられる。
オリゴキトサンを、DMSO、ジメチルアセトアミド等の溶媒、好ましくはDMSOに、濃度が0.1〜20.0wt%、好ましくは0.5〜4.0wt%となるように溶解してオリゴキトサン溶液を調製する。
上記アルギン酸溶液の凍結物を、上記オリゴキトサン溶液に浸漬してゲル化する。反応時間はアルギン酸溶液の凍結物の形状等によって変わるため一概には決定できないが、通常、−10〜−30℃で18〜36時間行うことが好ましい。ゲル化する際の温度が高すぎると凍結物が融解し、任意の形状が得られない。
上記のようにして得られた高分子複合体は、真空凍結乾燥することにより多孔体とすることができる。真空凍結乾燥は、得られた高分子複合体を凍結し、真空条件下(0.02〜0.5Torr)、−196〜60℃で1〜168時間乾燥すればよい。
高分子化合物B溶液:エタノールとDMSOを等量で混合した溶媒に、濃度が2wt%になるようにオリゴキトサンを溶解したもの
高分子化合物B溶液:エタノールとジメチルスルホキシド(DMSO)を等量で混合した溶媒に、それぞれの濃度が2wt%になるようにオリゴキトサンとMPTMOSを溶解したもの
EDXの結果を図3、FT−IRの結果を図4に示す。
擬似体液中における挙動試験には、炭酸水素ナトリウム、塩化マグネシウム6水和物、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸水素カリウム3水和物、塩化カルシウム、塩化カリウム、HEPESで構成されるpH7.4の水溶液を擬似体液として用い、37℃で3週間担体を浸漬した。
細胞毒性試験は実施例1と同様の方法で行った。その結果を図7、8に示す。
Claims (9)
- アニオン性高分子化合物を溶媒に溶解した該アニオン性高分子化合物溶液を任意の形状に凍結し、このアニオン性高分子化合物溶液の凍結物を、カチオン性高分子化合物を前記溶媒と相溶性のある溶媒に溶解した該カチオン性高分子化合物溶液に、前記凍結物の融解温度以下で浸漬することによりゲル化することを特徴とする高分子複合体の製造方法。
- 前記カチオン性高分子化合物を溶解する溶媒として、前記溶媒と相溶性のある溶媒と凝固点降下作用を有する溶媒の混合溶媒を用いる請求項1に記載の高分子複合体の製造方法。
- カチオン性高分子化合物を溶媒に溶解した該カチオン性高分子化合物溶液を任意の形状に凍結し、このカチオン性高分子化合物溶液の凍結物を、アニオン性高分子化合物を前記溶媒と相溶性のある溶媒に溶解した該アニオン性高分子化合物溶液に、前記凍結物の融解温度以下で浸漬することによりゲル化することを特徴とする高分子複合体の製造方法。
- 前記アニオン性高分子化合物を溶解する溶媒として、前記溶媒と相溶性のある溶媒と凝固点降下作用を有する溶媒の混合溶媒を用いる請求項3に記載の高分子複合体の製造方法。
- ゲル化した前記高分子複合体を真空凍結乾燥することにより多孔体とする請求項1〜4のいずれか一つに記載の高分子複合体の製造方法。
- 前記アニオン性高分子化合物としてアルギン酸を用い、前記カチオン性高分子化合物としてオリゴキトサンを用いる請求項1〜5のいずれか一つに記載の高分子複合体の製造方法。
- 請求項1〜6のいずれか一つに記載の方法により製造された高分子複合体を細胞培養のための担体とすることを特徴とする移植用組織再生基材の調製方法。
- 請求項1〜6のいずれか一つに記載の方法により製造された高分子複合体を担体として用いて動物細胞の培養を行うことを特徴とする動物細胞の培養方法。
- 前記動物細胞は、骨細胞、皮膚細胞、軟骨細胞、肝細胞、膵細胞、繊維芽細胞、幹細胞及び骨髄細胞からなる群より選ばれた1種である請求項8に記載の動物細胞の培養方法。
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