KR101866310B1

KR101866310B1 - 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR101866310B1
Application number: KR1020160067045A
Authority: KR
Inventors: 권순익; 구현철
Original assignee: 주식회사 글랜젠
Priority date: 2016-05-31
Filing date: 2016-05-31
Publication date: 2018-06-11
Also published as: KR20170135313A

Abstract

본 발명은 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이며, 이는 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상되는 장점 및 항산화 효과로 인한 기능이 추가되는 장점 또한 갖는다. 또한, 본 발명은 항산화제로서 3번 탄소의 OH기의 H가 치환된 아스코빌 에테르를 이용함으로써 피부 미백 기능을 향상시키는 부수적인 효과 또한 발휘한다.

Description

생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법 {SKIN FILLING MATERIAL HAVING IMPROVED DURABILITY AND ANTIOXIDATIVE ACTIVITY AND THE MAUFACTURING METHOD THEREOF}

본 발명은 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

진피층에 존재하는 무코다당류 (glycosaminoglycans)인 히알루론산 (Hyaluronic acid, HA)은 생체 구성 물질로서 체중이 약 70㎏인 인체에 약 15g 정도 존재하며 그 중 50%의 양이 피부 특히 결합조직에 존재한다.

한편, 인체 내에 존재하는 히알루론산은 체내에서의 반감기가 대략 24 내지 48시간 정도이며, 매일 5g 정도가 체내에서 분해되고 생성되는 과정을 거치게 된다.

이와 같은 히알루론산은 수분 함유율이 히알루론산 무게의 1,000배 정도로 매우 높고, 피부 진피의 연조직 확장으로 인한 주름을 개선하거나 피부의 외관을 향상시키는 능력을 지녀, 종래에 보습제 또는 피부 충전재 (필러)로 널리 사용되어 왔다.

그러나, 가교결합 (cross-linking)되어 있지 않은 히알루론산은 생체 내에서 메타볼리즘 (metabolism) 및 케타볼리즘 (catabolism)에 의해 매우 빠르게 분해되는 특성을 지니며, 이에 따라 피부 충전재로 이용되는 히알루론산은 주로 가교된 히알루론산이 이용되어 왔다.

종래에 히알루론산을 가교결합시키기 위하여 사용된 가교제로는 디비닐술폰(divinyl sulfone, DVS) (하기 특허문헌 1 참고) 또는 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(1,4-butanediol diglycidyl ether, BDDE) (하기 특허문헌 2 참고)가 사용되어 왔다.

한편, DVS 또는 BDDE 가교제로 가교된 히알루론산 또한, 생체 내 지속성이 약 6 내지 12개월 이하로 비교적 지속성이 떨어지는 단점을 지니고 있었다. 이러한 단점을 보완하기 위하여, 가교된 히알루론산을 항산화제와 단순히 혼합하는 방법을 통하여 히알루론산의 생체 내 지속성을 늘리는 방법이 사용되어 왔으며, 이 때 사용되는 항산화제로는 비타민 C와 그 유도체 (하기 특허문헌 3 참고) 및 우르솔릭산 (하기 특허문헌 4 참고) 등이 사용되었다.

그러나, 이와 같은 항산화제는 항산화 작용과 더불어 다당류 분해 억제의 효과를 지니고 있어 진피 충전물로 사용되었을 경우 어느 정도 히알루론산의 생체 내 지속성을 늘릴 수 있지만, 이러한 항산화제를 가교된 히알루론산과 단순히 혼합하는 것만으로는 그 효과가 매우 낮은 단점이 있었다.

이러한 단점을 극복하기 위하여 하기 특허문헌 5에서는 비타민 C를 직접 히알루론산에 공유결합시킨 히알루론산 유도체를 제조하여 아토피 피부염에 적용한 사례를 개시하고 있으며, 하기 특허문헌 6에서는 비타민 C 및 비타민 C 유도체를 히알루론산에 공유적으로 공액결합시킨 히알루론산계 하이드로겔 조성물을 제조하여 이를 주사가능한 진피 필러로 적용한 사례를 개시하고 있으며, 주로 비타민 C 유도체인 L-아스코르브산 2-글루코시드, 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트 또는 소듐 아스코빌 포스페이트가 사용되었다.

항산화제로서 효과가 매우 좋은 비타민 C는 그 산화 안정성이 좋지 않은 이유로 인하여 여러 종류의 비타민 C 유도체들이 지속적으로 개발되고 있다. 대부분의 비타민 C 유도체는 비타민 C의 두 번째 위치의 탄소의 수산기의 수소와 치환된 형태를 취하고 있으며, 항산화제로 사용되는 비타민 C 유도체인 L-아스코르브산 2-글루코시드, 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트 및 소듐 아스코빌 포스페이트 등도 역시 비타민 C의 두 번째 위치의 탄소의 수산기의 수소와 치환된 형태를 취하고 있다. 그러나 비타민 C의 두 번째 탄소의 수산기의 수소와 치환된 비타민 C 유도체는 그 안정성이 떨어지는 문제점이 있다.

따라서, 생체 내 지속성을 더욱 향상시키기 위한 신규한 히알루론산계 진피 충전재 조성물의 개발이 절실히 요구되는 실정이다.

특허문헌 1: 미국특허 제4,582,865호 특허문헌 2: 미국특허 제 5,827,937호 특허문헌 3: 유럽특허 제 2484387 A1호 특허문헌 4: 대한민국 특허 제10-1459070호 특허문헌 5: 대한민국 특허 제10-1122163호 특허문헌 6: 미국특허 제9,149,422호

이에 본 발명에서는 상기 문제점을 해결하고자 히알루론산 (HA), 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE) 및 3-O-에틸 아스코빌 에테르 (VCE) 등과 같은 아스코빌 에테르를 이용하여 생체 내 지속성, 항산화 작용 및 다당류 분해 억제 효과의 지속성이 우수한 진피 충전재 조성물을 제조할 수 있음을 발견하였고, 본 발명은 이에 기초하여 완성되었다.

따라서, 본 발명의 하나의 관점은 생체 내 지속성, 항산화 작용 및 다당류 분해 억제 효과의 지속성이 우수한 진피 충전재 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 관점은 상기 진피 충전재 조성물의 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물은 히알루론산 (HA), 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE) 및 하기 화학식 1;

[화학식 1]

의 구조를 갖는 아스코빌 에테르를 포함하며,

상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르일 수 있다.

삭제

본 발명의 또 다른 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물에 있어서, 상기 히알루론산 (HA)과 아스코빌 에테르 상호 간 또는 히알루론산 (HA) 상호 간은 상기 BDDE에 의하여 가교 결합된 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물에 있어서, 상기 아스코빌 에테르가 BDDE에 의하여 어느 한 히알루론산 (HA)에 가교결합되고, 상기 어느 한 히알루론산 (HA)은 다른 히알루론산 (HA)과 BDDE에 의하여 가교결합된 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물에 있어서, 상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)는 상기 히알루론산 (HA) 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되고, 상기 아스코빌 에테르는 상기 히알루론산 (HA) 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함될 수 있다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물의 제조방법은 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)와 하기 화학식 1;

[화학식 1]

의 구조를 갖는 아스코빌 에테르를 반응시켜 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 형성시키는 제1단계; 및 상기 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 히알루론산 (HA) 및 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)와 반응시켜 아스코빌 에테르가 결합된 히알루론산이 다른 히알루론산과 가교결합된 형태의 복합체를 형성시키는 제2단계;를 포함하며, 상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르일 수 있다.

삭제

본 발명에 따른 진피 충전재 조성물은 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상되는 장점을 갖는다. 즉, 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물을 진피 필러로 체내 삽입 시 체내에서의 지속시간을 최장 2년까지 연장시티는 효과가 있다. 또한, 본 발명은 3-O-에틸 아스코빌 에텔을 사용함으로써 체내에서 히알루론산의 메타볼리즘에 의한 분해를 늦출 수 있는 장점이 있고, 항산화제인 3-O-에틸 아스코빌 에테르를 사용함으로써 기존 가교결합된 히알루론산의 진피 필러로서의 기능을 높여 줄 뿐만 아니라 항산화 효과로 인한 기능이 추가되는 장점 또한 갖는다. 또한, 항산화제인 3-O-에틸 아스코빌 에테르는 피부 미백 기능성 화장품의 재료가 되는 물질로서, 항산화 효과 이외에 피부 미백 기능을 향상시키는 부수적인 효과 또한 발휘한다.

도 1은 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물이 제조되는 과정을 나타내는 그림이다.

본 발명을 좀 더 구체적으로 설명하기 전에, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정되어서는 아니되며, 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시 예의 구성은 본 발명의 바람직한 하나의 예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.

이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록, 본 발명의 바람직한 실시 예들을 상세히 설명한다.

본 발명은 본 발명은 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이며, 더욱 구체적으로 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상되어, 체내에서 히알루론산의 메타볼리즘에 의한 분해를 늦출 수 있으며, 피부 미백 기능 또한 갖춘 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

[화학식 1]

의 구조를 갖는 아스코빌 에테르를 포함하며,

상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르 (VCE)일 수 있다.

삭제

상기 아스코빌 에테르는 히알루론산의 생체 내 지속성을 향상시키기 위한 비타민 C 유도체이다. 한편, 이는 항산화 역할과 다당류 분해 억제 역할 (진피 충전재의 체내 지속시간을 늘리는 역할)을 수행한다.

상기 아스코빌 에테르는 안정성이 우수한 비타민 C의 세 번째 탄소의 수산기의 수소와 치환된 비타민 C 유도체이며, 상기 스코빌 에테르 (ascorbyl ether)가 결합된 히알루론산 유도체는 결합되어 있는 상기 아스코빌 에테르에 의하여 우수한 안정성을 발휘하게 되어 체내에서 항산화 작용 및 다당류 분해 억제 효과의 지속성 효과가 우수하다.

상기 히알루론산 (Hyaluronic acid, HA)은 진피층에 존재하는 무코다당류 (glycosaminoglycans)이며 진피 필러의 주된 구조성분이 된다. 이는 생체 구성 물질로서 체중이 약 70㎏인 인체에 약 15g 정도 존재하며 그 중 50%의 양이 피부 특히 결합조직에 존재하며, 하기 화학식 2의 반복단위를 갖는 것일 수 있다.

[화학식 2]

상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)는 상기 3-O-에틸 아스코빌 에테르 (VCE)와 히알루론산 간의 가교결합 및 히알루론산 상호간의 가교결합을 담당하는 가교제로서 기능하며, 하기 화학식 3의 화학구조를 갖는 것일 수 있다.

[화학식 3]

한편, 상기 히알루론산 (HA)과 아스코빌 에테르 상호 간 또는 히알루론산 (HA) 상호 간은 상기 BDDE에 의하여 가교 결합될 수 있으며, 상기 아스코빌 에테르가 BDDE에 의하여 어느 한 히알루론산 (HA)에 가교 결합 되고, 상기 어느 한 히알루론산 (HA)은 다른 히알루론산 (HA)과 BDDE에 의하여 가교 결합될 수 있다.

한편, 상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)는 상기 히알루론산 (HA) 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되고, 상기 아스코빌 에테르는 상기 히알루론산 (HA) 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함될 수 있다.

상기 히알루론산의 함량이 상기 함량 비율보다 적게 포함되는 경우는 진피 충전재로서의 기능을 제대로 발휘하지 못하며, 상기 함량 비율을 초과하는 경우는 이를 주사기로 체내에 삽입하기 어려운 문제가 있다.

한편, 상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)의 함량 비율이 상기 범위보다 적게 포함되는 경우는 낮은 가교도로 인하여 진피 충전재의 지속시간이 줄어드는 문제 및 항산화 및 다당류 분해 억제 기능이 낮아지거나 상실되는 문제가 있고, 상기 함량범위를 초과하는 경우는 가교도가 높아져서 충전재의 체내 삽입이 어렵고 이물감이 느껴질 수 있다.

한편, 상기 아스코빌 에테르의 함량이 상기 범위보다 적게 포함되는 경우는 항산화 및 다당류 분해 억제기능이 상실될 수 있고, 상기 범위를 초과하는 경우는 가교제의 가교도를 낮출 수 있으며, 히알루론산과의 결합이 어렵게 되는 문제가 있다.

한편, 본 발명의 일 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물의 제조방법은 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)와 하기 화학식 1;

[화학식 1]

의 구조를 갖는 아스코빌 에테르를 반응시켜 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 형성시키는 제1단계; 및 상기 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 히알루론산 (HA) 및 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)와 반응시켜 아스코빌 에테르가 결합된 히알루론산이 다른 히알루론산과 가교결합된 형태의 복합체를 형성시키는 제2단계;를 포함하며, 상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르 (VCE)일 수 있다.

삭제

도 1에는 3-O-에틸 아스코빌 에테르를 이용하여 본 발명의 일 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물을 제조하는 구체적인 반응 공정도가 예시적으로 제시되어 있다.

도 1을 참고하면, 가교제로 사용되는 BDDE는 VCE와 반응하여 VCE-BDDE를 형성한다. 그 후, 이렇게 형성된 VCE-BDDE와 히알루론산과 반응하고 이때 함께 들어 있는 BDDE는 히알루론산의 가교제 역할을 하여 최종적으로 VCE가 결합된 가교된 히알루론산을 얻을 수 있다.

이하, 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 구체적인 제조과정을 하기 실시예를 통하여 살펴보기로 하며, 본 발명의 효과를 비교 확인할 수 있는 다양한 비교예를 기술하기로 한다. 그러나, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 결코 아니다.

실시예 1

NaOH 2.4wt%의 15.4g의 수용액에 9.3g의 3-O-에틸 아스코빌 에테르와 6.7g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 4.9g의 히알루론산을 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 3.5mg의 5M의 HCl PBS 용액 11.4㎖를 넣어 하이드로겔을 형성시킨 후, 상온에서 4시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이와 같이 형성된 하이드로겔을 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

비교예 1

NaOH 2.4wt%의 15.4g의 수용액에 9.3g의 L-아스코르브산 2-글루코시드와 6.7g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 4.9g의 히알루론산을 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 3.5mg의 5M의 HCl PBS 용액 11.4㎖를 넣어 하이드로겔을 형성시킨 후, 상온에서 4시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이와 같이 형성된 하이드로겔을 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

비교예 2

NaOH 2.4wt%의 15.4g의 수용액에 9.3g의 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트와 6.7g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 4.9g의 히알루론산을 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 3.5mg의 5M의 HCl PBS 용액 11.4㎖를 넣어 하이드로겔을 형성시킨 후, 상온에서 4시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이와 같이 형성된 하이드로겔을 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

비교예 3

NaOH 2.4wt%의 15.4g의 수용액에 9.3g의 소듐 아스코빌 포스페이트와 6.7g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 4.9g의 히알루론산을 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 3.5mg의 5M의 HCl PBS 용액 11.4㎖를 넣어 하이드로겔을 형성시킨 후, 상온에서 4시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이와 같이 형성된 하이드로겔을 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

[생체 내 지속성 실험]

생후 10개월 된 생쥐 (Mus musculus) 암컷 15마리를 마취시킨 후, 각각 생쥐의 복부 가로×세로 3㎝×3㎝의 면적에 걸쳐 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에 따라 제조된 진피 충전재 및 가교 결합 되지 않은 히알루론산 (대조구) 100㎎을 주사기로 20㎎씩 5회로 나누어 각각 5곳에 주입하였다 (생쥐 1 내지 3: 대조구 1 내지 3, 생쥐 4 내지 6: 실시예 1, 생쥐 7 내지 9: 비교예 1, 생쥐 10 내지 12: 비교예 2, 생쥐 13 내지 15: 비교예 3). 그 후, 각각 1주일, 1개월, 2개월, 3개월, 및 6개월 후에 각각 마취상태에서 복부 진피 샘플을 각각 1㎖씩 채취하여 히알루론산의 농도를 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

구분	생쥐	1주일	1개월	2개월	3개월	6개월
대조구 1	1	25	15	10	2	0
대조구 2	2	24	12	8	2	0
대조구 3	3	26	14	9	2	0
실시예 1	4	30	30	29	28	25
실시예 1	5	32	31	29	28	25
실시예 1	6	32	31	30	29	25
비교예 1	7	30	25	20	15	5
비교예 1	8	32	24	19	14	4
비교예 1	9	30	23	21	15	4
비교예 2	10	30	23	18	14	5
비교예 2	11	30	24	19	13	4
비교예 2	12	32	25	20	15	3
비교예 3	13	30	23	18	15	5
비교예 3	14	31	25	20	14	4
비교예 3	15	30	25	20	13	5

(단위: ㎍/㎖)

상기 표 1의 결과를 살펴보면, 가교 결합 되지 않은 히알루론산의 경우 (대조구 1 내지 3)는 시간이 지남에 따라 매우 급속하게 진피 내의 히알루론산의 농도가 감소함을 확인할 수 있다.

한편, L-아스코르브산 2-글루코시드, 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트, 소듐 아스코빌 포스페이트를 사용한 비교예 1 내지 3 (생쥐 7 내지 15)의 경우는 상기 대조구 보다는 생쥐 진피 내에서 안정적인 지속성을 나타냄을 확인할 수 있으나, 본 발명의 실시예 1 (생쥐 4 내지 6)에 비하여 현저하게 낮은 지속성을 보임을 확인할 수 있다.

따라서, 상기 표 1의 결과는 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 우수한 진피 내 지속성을 나타내는 것으로 해석될 수 있다.

[피부 노화도 실험]

생후 10개월 된 생쥐 (Mus musculus) 암컷 15마리를 마취시킨 후, 각각 생쥐의 복부 가로×세로 3㎝×3㎝의 면적에 걸쳐 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에 따라 제조된 진피 충전재 및 가교 결합 되지 않은 히알루론산 (대조구) 100㎎을 주사기로 20㎎씩 5회로 나누어 각각 5곳에 주입하였다 (생쥐 1 내지 3: 대조구 1 내지 3, 생쥐 4 내지 6: 실시예 1, 생쥐 7 내지 9: 비교예 1, 생쥐 10 내지 12: 비교예 2, 생쥐 13 내지 15: 비교예 3). 그 후, 각각 1주일, 1개월, 2개월, 3개월, 및 6개월 후에 각각 마취상태에서 상기 샘플이 주입된 부위에 형성된 주름의 총 길이를 측정하여 피부 노화 정도를 확인하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

구분	생쥐	1주일	1개월	2개월	3개월	6개월
대조구 1	1	0	1	3	5	8
대조구 2	2	0	1	3	5	9
대조구 3	3	0	2	4	6	8
실시예 1	4	0	0	0	0	0
실시예 1	5	0	0	0	0	0
실시예 1	6	0	0	0	0	0
비교예 1	7	0	0	0	2	3
비교예 1	8	0	0	0	2	4
비교예 1	9	0	0	0	1	3
비교예 2	10	0	0	0	2	3
비교예 2	11	0	0	0	2	3
비교예 2	12	0	0	0	2	3
비교예 3	13	0	0	0	2	4
비교예 3	14	0	0	0	2	4
비교예 3	15	0	0	0	2	4

(단위: ㎝)

상기 표 2의 결과를 살펴보면, 가교 결합 되지 않은 히알루론산을 주입한 경우 (대조구 1 내지 3)는 시간이 지남에 따라 피부 주름의 총 길이가 비교적 빨리 증가하는 것을 확인할 수 있다.

한편, L-아스코르브산 2-글루코시드, 아스코빌 3-아미노프로필 포스페이트, 소듐 아스코빌 포스페이트를 사용한 비교예 1 내지 3 (생쥐 7 내지 15)의 경우는 상기 대조구 보다는 피부 노화 상태가 양호함을 확인할 수 있으나, 본 발명의 실시예 1 (생쥐 4 내지 6)의 경우는 6개월간 전혀 주름이 관찰되지 않은 것에 비하여 현저하게 낮은 피부 노화방지 효과를 나타냄을 확인할 수 있다.

따라서, 상기 표 2의 결과는 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 우수한 진피 내 항산화 작용 지속성을 나타내는 것으로 해석될 수 있다.

[피부 독성 유무 실험]

생후 10개월 된 생쥐 (Mus musculus) 암컷 15마리를 마취시킨 후, 각각 생쥐의 복부 가로×세로 3㎝×3㎝의 면적에 걸쳐 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에 따라 제조된 진피 충전재 및 가교 결합 되지 않은 히알루론산 (대조구) 100㎎을 주사기로 20㎎씩 5회로 나누어 각각 5곳에 주입하였다 (생쥐 1 내지 3: 대조구 1 내지 3, 생쥐 4 내지 6: 실시예 1, 생쥐 7 내지 9: 비교예 1, 생쥐 10 내지 12: 비교예 2, 생쥐 13 내지 15: 비교예 3). 그 후, 각각 1주일, 1개월, 2개월, 3개월, 및 6개월 후에 각각 생쥐 1 내지 15를 마취한 상태에서 복부 피부의 발진, 변색 및 종양 형성 등 피부 상태를 육안으로 확인하여 피부 독성 유무를 관찰하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

구분	생쥐	1주일	1개월	2개월	3개월	6개월
대조구 1	-	-	-	-	-	-
대조구 2	-	-	-	-	-	-
대조구 3	-	-	-	-	-	-
실시예 1	-	-	-	-	-	-
실시예 1	-	-	-	-	-	-
실시예 1	-	-	-	-	-	-
비교예 1	-	-	-	-	-	-
비교예 1	-	-	-	-	-	-
비교예 1	-	-	-	-	-	-
비교예 2	-	-	-	-	-	-
비교예 2	-	-	-	-	-	-
비교예 2	-	-	-	-	-	-
비교예 3	-	-	-	-	-	-
비교예 3	-	-	-	-	-	-
비교예 3	-	-	-	-	-	-

(+: 피부 이상 발견, -: 피부 이상 없음)

상기 표 3의 결과를 살펴보면, 대조구 1 내지 3, 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 경우 6개월의 시간이 경과 하는 동안 복부 진피층에 상기 샘플 주입에 의한 피부 이상이 관찰되지 않았다.

따라서, 상기 표 3의 결과는 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 생체 안전성을 뒷받침하는 것으로 해석될 수 있다.

Claims

히알루론산 (HA), 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE) 및 하기 화학식 1;
[화학식 1]

의 구조를 갖는 아스코빌 에테르를 포함하며,
상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르인 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물.
삭제
청구항 1에 있어서,
상기 히알루론산 (HA)과 아스코빌 에테르 상호 간 또는 히알루론산 (HA) 상호 간은 상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)에 의하여 가교 결합된 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물.
청구항 1에 있어서,
상기 아스코빌 에테르가 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)에 의하여 어느 한 히알루론산 (HA)에 가교결합되고, 상기 어느 한 히알루론산 (HA)은 다른 히알루론산 (HA)과 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)에 의하여 가교결합된 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물.
청구항 1에 있어서,
상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)는 상기 히알루론산 (HA) 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되고, 상기 아스코빌 에테르는 상기 히알루론산 (HA) 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되는 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물.
1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)와 하기 화학식 1;
[화학식 1]

의 구조를 갖는 아스코빌 에테르를 반응시켜 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 형성시키는 제1단계; 및
상기 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 히알루론산 (HA) 및 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 (BDDE)와 반응시켜 아스코빌 에테르가 결합된 히알루론산이 다른 히알루론산과 가교결합된 형태의 복합체를 형성시키는 제2단계;를 포함하며,
상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르인 진피 충전재 조성물의 제조방법.
삭제