ES2969082T3 - Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos - Google Patents

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Kerry E Benenato
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Mark Cornebise
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Abstract

La divulgación presenta nuevos lípidos y composiciones que los involucran. Las composiciones de nanopartículas incluyen un nuevo lípido así como lípidos adicionales tales como fosfolípidos, lípidos estructurales y lípidos PEG. Las composiciones de nanopartículas que incluyen además terapéuticos y/o profilácticos tales como ARN son útiles en la administración de terapéuticos y/o profilácticos a células u órganos de mamíferos para, por ejemplo, regular la expresión de polipéptidos, proteínas o genes. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
Solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica la prioridad y el beneficio de la solicitud provisional estadounidense n.° 62/220.085, depositada el 17 de septiembre de 2015; 62/220.091, depositada el 17 de septiembre de 2015; 62/252.316, depositada el 6 de noviembre de 2015; 62/253.433, depositada el 10 de noviembre de 2015; 62/266.460, depositada el 11 de diciembre de 2015; 62/333.557, depositada el 9 de mayo de 2016; 62/382.740, depositada el 1 de septiembre de 2016; y 62/393.940, depositada el 13 de septiembre de 2016.
Campo de descripción
La presente descripción proporciona compuestos novedosos, composiciones que comprenden dichos compuestos y procedimientos que involucran composiciones de nanopartículas lipídicas para administrar uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos a y/o producir polipéptidos en células u órganos de mamífero. Además de un lípido novedoso, las composiciones de nanopartículas de lípidos de la descripción pueden incluir uno o más lípidos catiónicos y/o amino ionizables, fosfolípidos que incluyen lípidos poliinsaturados, lípidos PEG, lípidos estructurales y/o agentes terapéuticos y/o profilácticos en fracciones específicas.
Antecedentes de la descripción
La administración dirigida eficaz de sustancias biológicamente activas tales como fármacos de molécula pequeña, proteínas y ácidos nucleicos representa un desafío médico continuo. En particular, la administración de ácidos nucleicos a las células se dificulta debido a la inestabilidad relativa y a la baja permeabilidad celular de dichas especies. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar procedimientos y composiciones para facilitar la administración de agentes terapéuticos y/o profilácticos tales como ácidos nucleicos a las células.
Las composiciones de nanopartículas que contienen lípidos, liposomas y lipoplejos han demostrado ser eficaces como vehículos de transporte en células y/o compartimientos intracelulares para sustancias biológicamente activas tales como fármacos de molécula pequeña, proteínas y ácidos nucleicos. Dichas composiciones generalmente incluyen uno o más lípidos "catiónicos" y/o amino (ionizables), fosfolípidos que incluyen lípidos poliinsaturados, lípidos estructurales (por ejemplo, esteroles) y/o lípidos que contienen polietilenglicol (lípidos PEG). Los lípidos catiónicos y/o ionizables incluyen, por ejemplo, lípidos que contienen amina que se pueden protonar fácilmente. Aunque se ha demostrado una variedad de dichas composiciones de nanopartículas que contienen lípidos, aún faltan mejoras en la seguridad, eficacia y especificidad. En el documento WO2009/086558 se describen composiciones y métodos para la administración de agentes terapéuticos a las células, incluidos lípidos y partículas de ácido nucleico-lípido. En el documento WO2013/016058 se describen lípidos catiónicos que pueden utilizarse en combinación con otros componentes lipídicos, como colesterol y PEG-lípidos, para formar nanopartículas lipídicas con oligonucleótidos.
Resumen de la descripción
La presente descripción proporciona compuestos novedosos y composiciones y procedimientos que los involucran. La descripción, en contraste con la invención, puede incluir un objeto que se extiende más allá del alcance de la invención. El alcance de la invención y, por lo tanto, de la protección se define por las reivindicaciones. El objeto incluido en la descripción o la descripción en general pero que se extiende más allá del alcance de las reivindicaciones no debe considerarse como parte de la invención. En particular, cualquier procedimiento que involucre el tratamiento del cuerpo humano o animal con fines terapéuticos o de diagnóstico no debe considerarse como parte de la invención.
Un primer aspecto de la divulgación se refiere a compuestos de Fórmula (IA) como se indica en las reivindicaciones 1 y 2
Un segundo aspecto de la divulgación se refiere a una composición de nanopartículas que comprende un compuesto de Fórmula (IA) como se establece en la reivindicación 9.
Un tercer aspecto de la divulgación se refiere a una composición farmacéutica que comprende la composición de nanopartículas antes mencionada y un portador farmacéuticamente aceptable según la reivindicación 13.
Un cuarto aspecto de la divulgación se refiere a la composición de nanopartículas antes mencionada para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno.
Otros aspectos de la invención se exponen en las reivindicaciones dependientes.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 muestra los resultados del tratamiento previo de primates no humanos con metotrexato o dexametasona antes de la administración de una composición de nanopartículas que incluye MC3.
La Figura 2 muestra la expresión de ARNm de hEPO medida después de la administración intravenosa de diversas composiciones de nanopartículas a una dosis de 0,01 mpk con 60 minutos de infusión a monos cynomolgus sin tratamiento previo.
Las Figuras 3-6 muestran respectivamente los resultados de la expresión de hEPO medida tras la administración intravenosa de diversas composiciones de nanopartículas que incluyen los Compuestos 26, 18, 25 y MC3 a ratas a diversas dosis.
La Figura 7 muestra el área bajo la curva (AUC) para composiciones de nanopartículas que incluyen los Compuestos 18, 25 y 26 y MC3 a diversas dosis entre 0,005 mpk y 2 mpk
La Figura 8 muestra los resultados de la expresión de luciferasa medida tras la administración intramuscular de diversas composiciones de nanopartículas que incluyen MC3, Compuestos 168-170 y 173-175 a ratones a 0,01 mpk en diversos puntos de tiempo: 3 h (bloque izquierdo), 6 h (bloque medio) y 24 h (bloque derecho). Los números 1-7 en esta figura corresponden a MC3, Compuestos 168-170 y 173-175 respectivamente.
La Figura 9 muestra los resultados de la expresión de hEPO medida tras la administración intramuscular de diversas composiciones de nanopartículas que incluyen MC3, Compuestos y compuestos comparativos (marcados con *) 18, 25, 30, 108-112, 60 y compuesto comparativo 122* a ratones a 0,01 mpk en diversos puntos de tiempo: 3 h (bloque izquierdo), 6 h (bloque medio) y 24 h (bloque derecho). Los números 1-11 en esta figura corresponden a MC3, Compuestos 18, 25, 30, compuestos 108-112,60 y 122* respectivamente.
La Figura 10 muestra los resultados de la expresión de luciferasa (flujo total) medida tras la administración intravenosa de diversas composiciones de nanopartículas que incluyen MC3 o diversos compuestos y compuestos comparativos descritos en esta invención. Los números 1-12 en esta figura corresponden al Compuesto 18, MC3, Compuestos comparativos 48-50, compuestos 54, 111, 60, compuestos comparativos 75, 68, 66, 128, 65, 130, 133,compuesto 134, compuesto comparativo 135, compuestos 147, 96 y 151 respectivamente.
La Figura 11 muestra los resultados de la expresión de anticuerpos anti-HA (anti-hemaglutinina) medida después de la administración intravenosa de diversas composiciones de nanopartículas que incluyen MC3 y el Compuesto 18 a una dosis de 0,1 mpk (A) o 0,3 mpk (B) con 60 minutos de infusión a monos cynomolgus sin tratamiento previo.
Descripción detallada
La descripción se refiere a lípidos novedosos y composiciones de nanopartículas lipídicas que incluyen un lípido novedoso. La descripción también proporciona procedimientos para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico a una célula de mamífero, específicamente administrar un agente terapéutico y/o profiláctico a un órgano de mamífero, producir un polipéptido de interés en una célula de mamífero y tratar una enfermedad o trastorno en un mamífero que lo necesita. Por ejemplo, un procedimiento para producir un polipéptido de interés en una célula implica poner en contacto una composición de nanopartículas que comprende un ARNm con una célula de mamífero, mediante lo cual el ARNm se puede traducir para producir el polipéptido de interés. Un procedimiento para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico a una célula u órgano de mamífero puede implicar la administración de una composición de nanopartículas que incluye el agente terapéutico y/o profiláctico a un sujeto, en el que la administración implica poner en contacto la célula u órgano con la composición, mediante lo cual el agente terapéutico y/o profiláctico se administra a la célula u órgano.
Lípidos
La presente descripción proporciona lípidos que incluyen un resto amina central y al menos un grupo biodegradable. Los lípidos descritos en esta invención pueden usarse ventajosamente en composiciones de nanopartículas lipídicas para la administración de agentes terapéuticos y/o profilácticos a células u órganos de mamíferos. Por ejemplo, los lípidos descritos en esta invención tienen poca o ninguna inmunogenicidad. Por ejemplo, el compuesto lipídico de cualquiera de las Fórmulas (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (lId) o (IIe) tiene una inmunogenicidad más baja en comparación con un lípido de referencia (por ejemplo, MC3, KC2, o DLinDMA). Por ejemplo, una formulación que comprende un lípido descrito en esta invención y un agente terapéutico o profiláctico tiene un índice terapéutico aumentado en comparación con una formulación correspondiente que comprende un lípido de referencia (por ejemplo, MC3, KC2 o DLinDMA) y el mismo agente terapéutico o profiláctico.
En un primer aspecto de la divulgación, los compuestos aquí descritos son de Fórmula (I):
o sales de los mismos, donde:
R1 se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo C5-30, alquenilo C5-20, -R*YR", -YR" y -R"M'R'; R2 y R3 se seleccionan independientemente de entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-14, alquenilo C2-14, -R*YR", -YR" y -R*OR", o R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un heterociclo o carbociclo; R4 se selecciona de entre el grupo que consiste en un carbociclo C3-6, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2 y alquilo C1-6 no sustituido, donde Q se selecciona de entre un carbociclo, heterociclo, -OR, -O(CH<2>)nN(R)<2>, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)<2>, -C(O)N(R)<2>, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)<2>R, -N(R)C(O)N(R)<2>, -N(R)C(S)N(R)<2>, -N(R)R<8>, -O(CH<2>)nOR, -N(R)C(=NRg)N(R)<2>, -N(R)C(=CHRg)N(R)<2>, -OC(O)N(R)<2>, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)<2>R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)<2>, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NRg)N(R)2, -N(OR)C(=CHR<9>)N(R)<2>, -C(=NRg)N(R)2, -C(=NR<9>)R, -C(O)N(R)OR y -C(R)N(R)2C(O)OR, y cada n se selecciona independientemente de entre 1, 2, 3, 4 y 5;
cada R5 se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C1-3, alquenilo C2-3 y H; cada R<6>se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C1-3, alquenilo C2-3 y H; M y M' se seleccionan independientemente de entre -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, un grupo arilo y un grupo heteroarilo;
R7 se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo C1-3, alquenilo C2-3 y H;
R<8>se selecciona de entre el grupo que consiste en carbociclo C3-6 y heterociclo;
R9 se selecciona de entre el grupo que consiste en H, CN, NO2, alquilo C1-6, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, alquenilo C2-6, carbociclo C3-6 y heterociclo;
cada R se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C1-3, alquenilo C2-3 y H; cada R' se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C1-18, alquenilo C2-18, -R*YR", -YR" y H;
cada R" se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C3-14 y alquenilo C3-14; cada R* se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C1-12 y alquenilo C2-12; cada Y es independientemente un carbociclo C3-6;
cada X se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en F, Cl, Br e I; y m se selecciona de entre 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 y 13; y donde cuando R4 es -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR o -CQ(R)2, entonces (i) Q no es -N(R)2 cuando n es 1,2, 3, 4 o 5, o (ii) Q no es heterocicloalquilo de 5, 6 o 7 miembros cuando n es 1 o 2.
En realizaciones de la inveción un subconjunto de compuestos de Fórmula (I), incluye los de Fórmula (IA):
o una sal de los mismos, donde 1 se selecciona de entre 1, 2, 3, 4 y 5; m se selecciona de 5, 6, 7, 8 y 9; Mi es un enlace o M'; M y M'; R4 es alquilo C1-3 no sustituido, o -(CH2)nQ, en el que Q es OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)<2>, -N(R)C(O)R -N(R)S(O)<2>R, -N(R)Rb, -NHC(=NRg)N(R)<2>, -NHC(=CHRg)N(R)<2>, -OC(O)N(R)<2>, -N(R)C(O)OR, heteroarilo o heterocicloalquilo se seleccionan independientemente de entre -C(O)O-, -OC(O)-, -<c>(<o>)<n>(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, un grupo arilo y un grupo heteroarilo y R2 y R3 se seleccionan independientemente de entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-14 y alquenilo C2-14. Por ejemplo, m es 5, 7 o 9. Por ejemplo, Q es OH, -NHC(S)N(R)2, o -NHC(O)N(R)2. Por ejemplo, Q es -N(R)C(O)R, o -N(R)S(O)2R. En determinados ejemplos de la divulgación, un subconjunto de compuestos de Fórmula (I) incluye aquellos de Fórmula (II):
o una sal de los mismos, en donde 1 se selecciona entre 1, 2, 3, 4 y 5; M1 es un enlace o M'; R4 es alquilo C1-3 no sustituido, o -(CH2)nQ, en el que n es 2, 3 o 4, y Q es OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R -N(R)S(O)2R, -N(R)Rb, -NHC(=NR<9>)N(R)<2>, -NHC(=CHR<9>)N(R)<2>, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, heteroarilo o heterocicloalquilo; M y M ' s e seleccionan independientemente entre -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, un grupo arilo y un grupo heteroarilo; y R2 y R<3>se seleccionan independientemente entre el grupo formado por H, alquilo C1-14 y alquenilo C2-14.
Los compuestos de cualquiera de las fórmula (I) o (IA) incluye una o más de las siguientes características cuando corresponda.
En algunas realizaciones, M1 es M'.
En algunas realizaciones, M y M' son independientemente -C(O)O- o -OC(O)-.
En algunas realizaciones, al menos uno de M y M' es -C(O)O- o -OC(O)-.
En algunas realizaciones, M y M' son independientemente -S-S-.
En algunas realizaciones, al menos uno de M y M' es -S-S.
En algunas realizaciones, uno de M y M' es -C(O)O- o -OC(O)- y el otro es -S-S-. Por ejemplo, M es -C(O)O- o -OC(O)- y M' es -S-S- o M' es -C(O)O- o -OC(O)- y M es -S-S-.
En algunas realizaciones, 1 es 1, 3 o 5.
En algunas realizaciones, R4 es metilo no sustituido o -(CH2)nQ, en el que Q es OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, o -N(R)S(O)2R.
En algunas realizaciones, Q es OH.
En algunas realizaciones, Q es -NHC(S)N(R)2.
En alguna realizaciones, Q es -NHC(O)N(R)2.
En algunas realizaciones, Q es -N(R)C(O)R.
En algunas realizaciones, Q es -N(R)S(O)2R.
En algunos ejemplos, Q es -O(CH2)nN(R)2.
En algunos ejemplos, Q es -O(CH2)nOR.
En algunas realizaciones, Q es -N(R)Rs.
En algunas realizaciones, Q es -NHC(=NR<9>)N(R)<2>.
En algunas realizaciones, Q es -NHC(=CHR<9>)N(R)<2>.
En algunas realizaciones, Q es -OC(O)N(R)2.
En algunas realizaciones, Q es -N(R)C(O)OR,.
En algunas realizaciones, n es<2>.
En algunas realizaciones, n es<3>.
En algunas realizaciones, n es<4>.
En algunos ejemplos, M1 está ausente.
En algunas realizaciones, R' es Ci-is alquilo, en algunos ejemplos, R' es C2-18 alquenilo, -R*YR", o -YR". En algunas realizaciones, R2 y R3 son independientemente alquilo C3-14 y alquenilo C3-14.
En una realización, los compuestos de Fórmula (IA) son de Fórmula (Ila),
o sales de los mismos, donde R4 es como se describe en esta invención.
En otro ejemplo, los compuestos de Fórmula (l) son de Fórmula (I Ib),
O sales de los mismos, donde R4 es como se describe en esta invención.
En otro ejemplo, los compuestos de Fórmula (I) son de Fórmula (IIc) o (IIe):
o sales de los mismos, donde R4 es como se describe en esta invención
En otra realización, los compuestos de Fórmula (I) son de Fórmula (IId),
o sales de los mismos, donde n es<2>,<3>o<4>; y m, R', R" y R2 a R6 son como se describen en esta invención.Por ejemplo, cada uno de R2 y R3 se puede seleccionar independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C5-14 y alquenilo C5-14.
Los compuestos de cualquiera de las fórmulas (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), y (IIe) pueden incluir una o más de las siguientes características cuando corresponda.
En algunos ejemplos, R4 se selecciona de entre el grupo que consiste en un carbociclo C3-6, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR y -CQ(R)2, donde Q se selecciona de entre un carbociclo C3-6, heterociclo aromático o no aromático de 5 a 14 miembros que tiene uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O, S y P, -OR, -O(CH<2>)nN(R)<2>, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)<2>, -C(O)N(R)<2>, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)<2>R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2 y -C(R)N(R)2C(O)OR, y cada n se selecciona independientemente de entre 1, 2, 3, 4 y 5.
En otro ejemplo, R4 se selecciona de entre el grupo que consiste en un carbociclo C3-6, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR y -CQ(R)2, donde Q se selecciona de entre un carbociclo C3-6, un heteroarilo de 5 a 14 miembros que tiene uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O y S, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR, y un heterocicloalquilo de 5 a 14 miembros que tiene uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O, y S que se sustituye con uno o más sustituyentes seleccionados de entre oxo (=O), OH, amino y alquilo C1-3 y cada n se selecciona independientemente de entre 1, 2, 3, 4 y 5.
En otro ejemplo, R4 se selecciona de entre el grupo que consiste en un carbociclo C3-6, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR y -CQ(R)2, donde Q se selecciona de entre un carbociclo C3-6, un heterociclo de 5 a 14 miembros que tiene uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O y S, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR, y cada n se selecciona independientemente de entre 1, 2, 3, 4 y 5; y cuando Q es un heterociclo de 5 a 14 miembros y (i) R4 es -(CH2)nQ en el que n es 1 o 2, o (ii) R4 es -(CH2)nCHQR en el que n es 1, o (iii) R4 es -CHQR, y -CQ(R)2, entonces Q es un heteroarilo de 5 a 14 miembros o heterocicloalquilo de 8 a 14 miembros.
En otro ejemplo, R4 se selecciona de entre el grupo que consiste en un carbociclo C3-6, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR y -CQ(R)2, donde Q se selecciona de entre un carbociclo C3-6, un heteroarilo de 5 a 14 miembros que tiene uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O y S, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR, y cada n se selecciona independientemente de entre 1, 2, 3, 4 y 5.
En otro ejemplo, R4 es alquilo C1-4 no sustituido, por ejemplo, metilo no sustituido.
En ciertos ejemplos, la divulgación proporciona un compuesto que tiene la Fórmula (I), donde R4 es -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, donde Q es -N(R)2 y n se selecciona de entre 3, 4 y 5.
En ciertos ejemplos, la divulgación proporciona un compuesto que tiene la Fórmula (I), donde R4 se selecciona de entre el grupo que consiste en -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR y -CQ(R)2, donde Q es -N(R)2, y n se selecciona de entre 1,2, 3, 4, y 5.
En ciertos ejemplos, la divulgación proporciona un compuesto que tiene la Fórmula (I), donde R2 y R3 se seleccionan independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C2-14, alquenilo C2-14, -R*y R", -YR" y -R*OR", o R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un heterociclo o carbociclo, y R4 es -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, donde Q es -N(R)2 y n se selecciona de entre 3, 4 y 5.
En determinados ejemplos, R2 y R3 se seleccionan independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C2-14, alquenilo C2-14, -R*YR", -YR" y -R*OR", o R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un heterociclo o carbociclo.
En algunos ejemplos, R1 se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo C5-20 y alquenilo C5-20.
En otros ejemplos, R1 se selecciona de entre el grupo que consiste en -R*YR", -YR" y -R"M'R'.
En determinados ejemplos, R1 se selecciona de entre -R*YR" y -YR". En algunos ejemplos, Y es un grupo ciclopropilo. En algunos ejemplos, R* es alquilo Cs o alquenilo Cs. En determinados ejemplos, R” es alquilo C3-12. Por ejemplo, R” puede ser alquilo C3. Por ejemplo, R” puede ser alquilo C4-8 (por ejemplo, alquilo C4, C5, C<6>, C7 o Cs).
En algunos ejemplos, R1 es alquilo C5-20. En algunos ejemplos, R1 es alquilo C<6>. En algunos ejemplos, R1 es alquilo Cs. En otros ejemplos, R1 es alquilo C9. En determinados ejemplos, R1 es alquilo C14. En otros ejemplos, R1 es alquilo C1s.
En algunos ejemplos, Ri es alquilo C21-30. En algunos ejemplos, Ri es alquilo C26. En algunos ejemplos, Ri es alquilo C28. En determinados ejemplos, Ri es
En algunos ejemplos, R1 es alquenilo C5-20. En determinados ejemplos, R1 es alquenilo C18. En algunos ejemplos, R1 es linoleilo.
En determinados ejemplos, R1 es ramificado (por ejemplo, decan-2-ilo, undecan-3-ilo, dodecan-4-ilo, tridecan-5-ilo, tetradecan-6-ilo, 2-metilundecan-3-ilo, 2-metildecan-2-ilo, 3-metilundecan-3-ilo, 4-metildodecan-4-ilo o heptadeca-9-ilo). En determinados ejemplos, R1 es
En determinados ejemplos, R1 es alquilo C5-20 o alquenilo C5-20 no sustituido. En determinados ejemplos, R' es alquilo C5-20 sustituido o alquenilo C5-20 (por ejemplo, sustituido con un carbociclo C3-6 tal como 1-ciclopropilnonilo o sustituido con OH o alcoxi). Por ejemplo, R1 es
En otros ejemplos, R1 es -R"M'R'.
En algunos ejemplos, R' se selecciona de entre -R*YR" y -YR". En algunos ejemplos, Y es cicloalquilo C3-8. En algunos ejemplos, Y es arilo C6-10. En algunos ejemplos, Y es un grupo ciclopropilo. En algunos ejemplos, Y es un grupo ciclohexilo. En determinados ejemplos, R* es alquilo C1.
En algunos ejemplos, R" se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo C3-12 y alquenilo C3-12. En algunos ejemplos, R" adyacente a Y es alquilo C1. En algunos ejemplos, R" adyacente a Y es alquilo C4-9 (por ejemplo, alquilo C4, C5, C<6>, C7 o C<8>o C9).
En algunos ejemplos, R' se selecciona de entre alquilo C4 y alquenilo C4. En determinados ejemplos, R' se selecciona de entre alquilo C5 y alquenilo C5. En algunos ejemplos, R' se selecciona de entre alquilo C<6>y alquenilo C6. En algunos ejemplos, R' se selecciona de entre alquilo C7 y alquenilo C7. En algunos ejemplos, R' se selecciona de entre alquilo C<9>y alquenilo C<9>.
En otros ejemplos, R' se selecciona de entre alquilo C11 y alquenilo C11. En otros ejemplos, R' se selecciona de entre alquilo C12, alquenilo C12, alquilo C13, alquenilo C13, alquilo C14, alquenilo C14, alquilo C15, alquenilo C15, alquilo C16, alquenilo C16, alquilo C17, alquenilo C17, alquilo C18 y alquenilo C18. En determinadas realizaciones, R' es ramificado (por ejemplo, decan-2-ilo, undecan-3-ilo, dodecan-4-ilo, tridecan-5-ilo, tetradecan-6-ilo, 2-metildecan-3-ilo, 2-metildecan-2-ilo, 3-metildecan-3-ilo, 4-metildodecan-4-ilo o heptadeca-9-ilo). En determinadas realizaciones, R' es .
En determinadas realizaciones, R' es alquilo C1-18 no sustituido. En determinados ejemplos, R' es alquilo C1-18 sustituido (por ejemplo, alquilo C1-15 sustituido con, por ejemplo, un alcoxi tal como metoxi, o un carbociclo C3-<6>tal tal como 1-ciclopropilnonilo, o C(O)O-alquilo u OC(O)-alquilo tal como C(O)OCH<3>u OC(O)CH<3>). Por ejemplo, R' es
En algunos ejemplos, R" se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo C3-14 y alquenilo C3-14. En algunos ejemplos, R" es alquilo C3, alquilo C4, alquilo C5, alquilo C<6>, alquilo C7 o alquilo C<8>. En algunos ejemplos, R" es alquilo C9, alquilo C10, alquilo C11, alquilo C12, alquilo C13 o alquilo C14.
En algunas realizaciones, M' es -C(O)O-. En algunas realizaciones, M' es -OC(O)-.
En otras realizaciones, M' es un grupo arilo o grupo heteroarilo. Por ejemplo, M' puede seleccionarse de entre el grupo que consiste en fenilo, oxazol y tiazol.
En algunas realizaciones, M es -C(O)O-. En algunas realizaciones, M es -OC(O)-. En algunas realizaciones, M es -C(O)N(R')-. En algunas realizaciones, M es -P(O)(OR')O-.
En otras realizaciones, M es un grupo arilo o grupo heteroarilo. Por ejemplo, M puede seleccionarse de entre el grupo que consiste en fenilo, oxazol y tiazol.
En algunas realizaciones, M es igual a M'. En otras realizaciones, M es diferente de M'.
En algunos ejemplos, cada R5 es H. En determinados ejemplos de este tipo, cada R<6>también es H.
En algunos ejemplos, R7 es H. En otros ejemplos, R7 es alquilo C1-3 (por ejemplo, metilo, etilo, propilo o ipropilo).
En algunas realizaciones, R2 y R3 son independientemente alquilo C5-14 o alquenilo C5-14.
En algunas realizaciones, R2 y R3 son iguales. En algunas realizaciones, R2 y R3 son alquilo C<8>. En algunas realizaciones, R2 y R3 son alquilo C2. En algunas realizaciones, R2 y R3 son alquilo C3. En algunas realizaciones, R2 y R3 son alquilo C4. En algunas realizaciones, R2 y R3 son alquilo C5. En algunas realizaciones, R2 y R3 son alquilo C<6>. En algunas realizaciones, R2 y R3 son alquilo C7.
En algunas realizaciones, R2 y R3 son diferentes. En determinadas realizaciones, R2 es alquilo C<8>. En algunas realizaciones, R3 es alquilo C1-7 (por ejemplo, alquilo C1, C2, C3, C4, C5, C<6>o C7) o C9.
En algunos ejemplos, R7 y R3 son H.
En determinados ejemplos, R2 es H.
En algunas realizaciones, m es 5, 7 o 9.
En algunos ejemplos, R4 se selecciona de entre -(CH2)nQ y -(CH2)nCHQR.
En algunos ejemplos, Q se selecciona de entre el grupo que consiste en -OR, -OH, -O(CH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX3, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(H)(R), -C(R)N(R)2C(O)OR, un carbociclo y un heterociclo.
En determinados ejemplos, Q es -N(R)R<8>, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR<9>)N(R)<2>, -N(R)C(=CHR<9>)N(R)<2>, -OC(O)N(R)2 o -N(R)C(O)OR.
En determinadas realizaciones, Q es -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR<9>)N(R)<2>, o -N(OR)C(=CHR<9>)N(R)<2>.
En determinados ejemplos, Q es tiourea o una isóstero de la misma, por ejemplo,
o -NHC(=NR<9>)N(R)<2>.
En determinados ejemplos, Q es -C(=NR<9>)N(R)<2>. Por ejemplo, cuando Q es -C(=NR<9>)N(R)<2>, n es 4 o 5. Por ejemplo, R9 es - S(O)2N(R)2.
En determinados ejemplos, Q es -C(=NRg)R o -C(O)N(R)OR, por ejemplo, -CH(= N-OCH3), -C(O) NH-OH, -C(O)NH-OCHa, -C(O)N(CH<3>)-OH o -C(O)N(CH<3>)-OCH<3>.
En determinadas realizaciones,Q es -OH.
En determinadas realizacionesQ es un heteroarilo de 5 a 10 miembros sustituido o no sustituido, por ejemplo, Q es un triazol, un imidazol, una pirimidina, una purina, 2-amino-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona-9-ilo (o guanin-9-ilo), adenin-9-ilo, citosin-1-ilo o uracil-1-ilo, cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre alquilo, OH, alcoxi, -alquil-OH, -alquil-O-alquilo, y el sustituyente se puede sustituir adicionalmente. En determinadas realizaciones, Q es un heterocicloalquilo de 5 a 14 miembros sustituido, por ejemplo, sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de entre oxo (=O), OH, amino, mono o di-alquilamino y alquilo C1-3. Por ejemplo, Q es 4-metilpiperazinilo, 4-(4-metoxibencil)piperazinilo, isoindolin-2-il-1,3-diona, pirrolidin-1 -il-2,5-diona o imidazolidin-3-il-2,4-diona.
En determinadas realizaciones, Q es -NHRs, en el que R<8>es un cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de entre oxo (=O), amino (NH2), mono o di-alquilamino, alquilo C1-3 y halo. Por ejemplo, R<8>es ciclobutenilo, por ejemplo, 3-(dimetilamino)-ciclobut-3-en-4-il-1,2-diona.
En determinadas realizaciones, Q es -NHRs, en el que R<8>es un heteroarilo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de entre amino (NH2), mono o di-alquilamino, alquilo C1-3 y halo. Por ejemplo, R<8>es tiazol o imidazol.
En determinadas realizaciones, Q es -NHC(=NR<9>)N(R)<2>en el que R9 es CN, alquilo C1-6, NO2, -S(O)2N(R)2, -OR, -S(O)2R o H. Por ejemplo, Q es -NHC(=NR<9>)N(CH<3>)<2>, -NHC(=NR<9>)NHCH<3>, -NHC(=NR<9>)NH<2>.
En determinadas realizaciones, Q es -NHC(=CHR<9>)N(R)<2>, en el que R9 es NO2, CN, alquilo C1-6, -S(O)2N(R)2, -OR, -S(O)2R o H. Por ejemplo, Q es -NHC(=CHR<9>)N(CH<3>)<2>, -NHC(=CHR<9>)NHCH<3>o -NHC(=CHR<9>)NH<2>. En determinadas realizaciones, Q es -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)OR, tal como -OC(O)NHCH<3>, -N(OH)C(O)OCH<3>, -N(OH)C(O)CH<3>, -N(OCH<3>)C(O)OCH<3>, -N(OCH<3>)C(O)CH<3>, -N(OH)S(O)<2>CH<3>o -NHC(O)OCH<3>.
En determinados ejemplos, Q es un arilo C6-10 no sustituido o sustituido (tal como fenilo) o cicloalquilo C3-6. En algunas realizaciones, n es 1. En otras realizaciones, n es 2. En realizaciones adicionales, n es 3. En determinadas otras realizaciones, n es 4. Por ejemplo, R4 puede ser -(CH2)2OH. Por ejemplo, R4 puede ser -(CH<2>)<3>OH. Por ejemplo, en un compuesto comparativo R4 puede ser -(CH<2>)<4>OH. Por ejemplo, en un compuesto comparativo R4 puede ser bencilo. Por ejemplo, en un compuesto comparativo R4 puede ser 4-metoxibencilo. En algunos ejemplos, R4 es un carbociclo C3-6. En algunos ejemplos, R4 es un cicloalquilo C3-6. Por ejemplo, R4 puede ser ciclohexilo opcionalmente sustituido con, por ejemplo, OH, halo, alquilo C1-6, etc. Por ejemplo, R4 puede ser 2-hidroxiciclohexilo.
En algunas realizaciones, R es H.
En algunas realizaciones, R es alquilo C1-3 no sustituido o alquenilo de C2-3 no sustituido. Por ejemplo, R4 puede ser - CH<2>CH(OH)CH<3>, -CH(CH<3>)CH<2>OH o -CH<2>CH(OH)CH<2>CH<3>.
En algunas realizaciones, R es alquilo C1-3 sustituido, por ejemplo, CH2OH. Por ejemplo, R4 puede ser -CH2CH(OH)CH2OH, -(CH<2>)<3>NHC(O)CH<2>OH, -(CH<2>)<3>NHC(O)CH<2>OBn, -(CH2)2O(CH2)2OH o -CH(CH2OH)2. En algunas realizaciones, R4 se selecciona de entre cualquiera de los siguientes grupos:
En algunas realizaciones, R4 se selecciona de entre cualquiera de los siguientes grupos:
En algunas realizaciones, el compuesto de cualquiera de las fórmulas descritas en esta invención es adecuado para elaborar una composición de nanopartículas para administración intramuscular.
En algunos ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un heterociclo o carbociclo. En algunos ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un heterociclo aromático o no aromático de 5 a 14 miembros que tiene uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O, S y P. En algunos ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un carbociclo C3-20 opcionalmente sustituido (por ejemplo, carbociclo C3-18, carbociclo C3-15, carbociclo C3-12 o carbociclo C3-10), ya sea aromático o no aromático. En algunos ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un carbociclo C3-6. En otros ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un carbociclo Ca, tal como un grupo ciclohexilo o fenilo. En determinados ejemplos, el heterociclo o carbociclo C<3>-a se sustituye con uno o más grupos alquilo (por ejemplo, en el mismo átomo de anillo o en átomos de anillo adyacentes o no adyacentes). Por ejemplo, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, pueden formar un grupo ciclohexilo o fenilo que tiene una o más sustituciones de alquilo C5. En determinados ejemplos, el heterociclo o carbociclo C<3>-a formado por R2 y R3, se sustituye con un grupo carbociclo. Por ejemplo, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, pueden formar un grupo ciclohexilo o fenilo que está sustituido con ciclohexilo. En algunos ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un carbociclo C7-15, tal como un grupo cicloheptilo, ciclopentadecanilo o naftilo.
En algunos ejemplos, R4 se selecciona de entre -(CH2)nQ y -(CH2)nCHQR. En algunos ejemplos, Q se selecciona de entre el grupo que consiste en -OR, -O<h>, -O(cH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX3, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)<2>R, -N(H)S(O)<2>R, -N(R)C(O)N(R)<2>, -N(H)C(O)N(R)<2>, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(H)(R) y un heterociclo. En otros ejemplos, Q se selecciona de entre el grupo que consiste en un imidazol, una pirimidina y una purina.
En algunos ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un heterociclo o carbociclo. En algunos ejemplos, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, forman un carbociclo C<3>-a, tal como un grupo fenilo. En determinados ejemplos, el heterociclo o carbociclo C<3>-a se sustituye con uno o más grupos alquilo (por ejemplo, en el mismo átomo de anillo o en átomos de anillo adyacentes o no adyacentes). Por ejemplo, R2 y R3, junto con el átomo al que están unidos, pueden formar un grupo fenilo que tiene una o más sustituciones de alquilo C5.
En algunas realizaciones y ejemplos, el compuesto de Fórmula (IA) o el compuesto comparativo de Fórmula (I) (marcado con un *) se selecciona del grupo que consiste en:
*)
También denominada Fórmula A,
También denominada Fórmula B
37),
,
,
(Compuesto 53),
,
(Compuesto 61),En otros ejemplos, el compuesto de Fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en:
,
En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (IA) o el compuesto comparativo de Fórmula (I) (marcado con un *) se selecciona del grupo que consiste en:
��
,
,
��
*),
,
,
,
,
37
42
(Compuesto 232*),
y sales de los mismos.
En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (IA) se selecciona de entre el grupo que consiste en los Compuestos 1-5 y 7, y sales de los mismos. En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (IA) se selecciona de entre el grupo que consiste en los Compuestos 18-20, 23, 25- 27, 30, 32-36, 51-54 y 56-61, y sales de los mismos. En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (IA) se selecciona de entre el grupo que consiste en los Compuestos 127, 129-131 y 134, y sales de los mismos. En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (IA) se selecciona de entre los Compuestos 138, 141, 144, 147, 185 y 215 y sales de los mismos.
El resto amina central de un lípido según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) puede protonarse a un pH fisiológico. Por lo tanto, un lípido puede tener una carga positiva o positiva parcial a pH fisiológico. Dichos lípidos pueden denominarse (amino)lípidos catiónicos o ionizables. Los lípidos también pueden ser zwitteriónicos (de ion híbrido), es decir, moléculas neutras que tienen una carga tanto positiva como negativa.
Como se usa en esta invención, el término "alquilo" o "grupo alquilo" significa un hidrocarburo saturado lineal o ramificado que incluye uno o más átomos de carbono (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve, veinte o más átomos de carbono), que está opcionalmente sustituido. La notación "alquilo C<1 -14>" significa un hidrocarburo saturado lineal o ramificado opcionalmente sustituido que incluye de 1-14 átomos de carbono. A menos que se especifique lo contrario, un grupo alquilo descrito en esta invención se refiere tanto a grupos alquilo no sustituidos como sustituidos.
Como se usa en esta invención, el término "alquenilo" o "grupo alquenilo" significa un hidrocarburo lineal o ramificado que incluye dos o más átomos de carbono (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve, veinte o más átomos de carbono) y al menos un enlace doble, que está opcionalmente sustituido.
La notación "alquenilo C2-14" significa un hidrocarburo lineal o ramificado opcionalmente sustituido que incluye 2-14 átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. Un grupo alquenilo puede incluir uno, dos, tres, cuatro o más dobles enlaces carbono-carbono. Por ejemplo, el alquenilo C<18>puede incluir uno o más dobles enlaces. Un grupo alquenilo C<18>que incluye dos enlaces dobles puede ser un grupo linoleilo. A menos que se especifique lo contrario, un grupo alquenilo descrito en esta invención se refiere tanto a grupos alquenilo no sustituidos como sustituidos.
Como se usa en esta invención, el término "alquinilo" o "grupo alquinilo" significa un hidrocarburo lineal o ramificado que incluye dos o más átomos de carbono (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve, veinte o más átomos de carbono) y al menos un triple enlace carbono-carbono, que está opcionalmente sustituido. La notación "alquinilo C2-14" significa un hidrocarburo lineal o ramificado opcionalmente sustituido que incluye 2 14 átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono. Un grupo alquinilo puede incluir uno, dos, tres, cuatro o más triples enlaces carbono-carbono. Por ejemplo, el alquinilo C<18>puede incluir uno o más triples enlaces carbono-carbono. A menos que se especifique lo contrario, un grupo alquinilo descrito en esta invención se refiere tanto a grupos alquinilo no sustituidos como sustituidos.
Como se usa en esta invención, el término "carbociclo" o "grupo carbocíclico" significa un sistema monocíclico o multicíclico opcionalmente sustituido que incluye uno o más anillos de átomos de carbono. Los anillos pueden ser anillos de tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve o veinte miembros. La notación "carbociclo C3-6" significa un carbociclo que incluye un único anillo que tiene 3-6 átomos de carbono. Los carbociclos pueden incluir uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono y pueden ser no aromáticos o aromáticos (por ejemplo, grupos cicloalquilo o arilo). Los ejemplos de carbociclos incluyen grupos ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, fenilo, naftilo y 1,2-dihidronaftilo. El término "cicloalquilo", como se usa en esta invención, significa un carbociclo no aromático y puede incluir o no cualquier enlace doble o triple. A menos que se especifique lo contrario, los carbociclos descritos en esta invención se refieren tanto a grupos carbociclo no sustituidos como sustituidos, es decir, carbociclos opcionalmente sustituidos.
Como se usa en esta invención, el término "heterociclo" o "grupo heterocíclico" significa un sistema monocíclico o multicíclico opcionalmente sustituido que incluye uno o más anillos, donde al menos un anillo incluye al menos un heteroátomo. Los heteroátomos pueden ser, por ejemplo, átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre. Los anillos pueden ser anillos de tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce miembros. Los heterociclos pueden incluir uno o más dobles o triples enlaces y pueden ser no aromáticos o aromáticos (por ejemplo, grupos heterocicloalquilo o heteroarilo). Los ejemplos de heterociclos incluyen grupos imidazolilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, pirazolidinilo, pirazolilo, isoxazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolidinilo, isotiazolilo, morfolinilo, pirrolilo, pirrolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tiofenilo, piridinilo, piperidinilo, quinolilo e isoquinolilo. El término "heterocicloalquilo", como se usa en esta invención, significa un heterociclo no aromático y puede incluir o no cualquier enlace doble o triple. A menos que se especifique lo contrario, los heterociclos descritos en esta invención se refieren tanto a grupos heterociclo no sustituidos como sustituidos, es decir, heterociclos opcionalmente sustituidos.
Como se usa en esta invención, un "grupo biodegradable" es un grupo que puede facilitar el metabolismo más rápido de un lípido en una entidad mamífera. Un grupo biodegradable puede seleccionarse de entre el grupo que consiste en, pero sin limitarse a, -C(O)O-, -O<c>(<o>)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)<2>-, un grupo arilo y un grupo heteroarilo. Como se usa en esta invención, un "grupo arilo" es un grupo carbocíclico opcionalmente sustituido que incluye uno o más anillos aromáticos. Los ejemplos de grupos arilo incluyen grupos fenilo y naftilo. Como se usa en esta invención, un "grupo heteroarilo" es un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido que incluye uno o más anillos aromáticos. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen pirrolilo, furilo, tiofenilo, imidazolilo, oxazolilo y tiazolilo. Tanto los grupos arilo como heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos. Por ejemplo, M y M' pueden seleccionarse de entre el grupo no limitante que consiste en fenilo, oxazol y tiazol opcionalmente sustituidos. En las fórmulas de esta invención, M y M' se pueden seleccionar independientemente de entre la lista de grupos biodegradables anterior. A menos que se especifique lo contrario, los grupos arilo o heteroarilo descritos en esta invención se refieren tanto a grupos no sustituidos como sustituidos, es decir, grupos arilo o heteroarilo opcionalmente sustituidos.
Los grupos alquilo, alquenilo y ciclilo (por ejemplo, carbociclilo y heterociclilo) pueden estar opcionalmente sustituidos a menos que se especifique lo contrario. Los sustituyentes opcionales se pueden seleccionar de entre el grupo que consiste en, pero sin limitarse a, un átomo de halógeno (por ejemplo, un grupo cloruro, bromuro, fluoruro o yoduro), un ácido carboxílico (por ejemplo, -C(O)OH), un alcohol (por ejemplo, un hidroxilo, -OH), un éster (por ejemplo, -C(O)OR u -OC(O)R), un aldehído (por ejemplo,-C(O)H), un carbonilo (por ejemplo, -C(O)R, representado alternativamente por C=O), un haluro de acilo (por ejemplo,-C(O)X, en el que X es un haluro seleccionado de entre bromuro, fluoruro, cloruro y yoduro), un carbonato (por ejemplo, -OC(O)OR), un alcoxilo (por ejemplo, -OR), un acetal (por ejemplo,-C(OR)<2>R'''', en el que cada OR son grupos alcoxilo que pueden ser iguales o diferentes y R'''' es un grupo alquilo o alquenilo), un fosfato (por ejemplo, P(O)43-), un tiol (por ejemplo, -SH), un sulfóxido (por ejemplo, -S(O)R), un ácido sulfínico (por ejemplo, -S(O)OH), un ácido sulfónico (por ejemplo, -S(O)<2>OH), un tial (por ejemplo, -C(S)H), un sulfato (por ejemplo, S(O)42-), un sulfonilo (por ejemplo, -S(O)<2>-), un amida (por ejemplo, -C(O)NR<2>, o -N(R)C(O)R), un azido (por ejemplo, -N<3>), un nitro (por ejemplo, -NO<2>), un ciano (por ejemplo, -CN), un isociano (por ejemplo, -NC), un aciloxi (por ejemplo, -OC(O)R), un amino (por ejemplo, -NR<2>, -NRH, o -NH<2>), un carbamoilo (por ejemplo, -OC(O)NR<2>, -OC(O)NRH, o -OC(O)NH<2>), una sulfonamida (por ejemplo, -S(O)<2>NR<2>, -S(O)<2>NRH, -S(O)<2>NH<2>, -N(R)S(O)<2>R, -N(H)S(O))<2>R, -N(R)S(O)<2>H, o -N(H)S(O)<2>H), un grupo alquilo, un grupo alquenilo y un grupo ciclilo (por ejemplo, carbociclilo o heterociclilo). En cualquiera de los anteriores, R es un grupo alquilo o alquenilo, como se define en esta invención. En algunas realizaciones, los propios grupos sustituyentes se pueden sustituir además con, por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis sustituyentes como se define en esta invención. Por ejemplo, un grupo alquilo C<1 -6>puede sustituirse adicionalmente con uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis sustituyentes como se describe en esta invención.
Alrededor de, aproximadamente: Como se usa en esta invención, los términos "alrededor de" y "aproximadamente", como se aplican a uno o más valores de interés, se refieren a un valor que es similar a un valor de referencia establecido. En determinadas realizaciones, el término "aproximadamente" o "alrededor de" se refiere a un intervalo de valores que se encuentran dentro del 25 %, 20 %, 19 %, 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 % o menos en cualquier dirección (mayor o menor que) del valor de referencia establecido a menos que se indique lo contrario o sea evidente de cualquier otra manera a partir del contexto (excepto cuando dicha cantidad exceda el 100 % de un valor posible). Por ejemplo, cuando se usa en el contexto de una cantidad de un compuesto dado en un componente lipídico de una composición de nanopartículas, "alrededor de" puede significar /-10 % del valor mencionado. Por ejemplo, una composición de nanopartículas que incluye un componente lipídico que tiene alrededor del 40 % de un compuesto dado puede incluir el 30-50 % del compuesto.
Como se usa en esta invención, el término "compuesto" pretende incluir todos los isómeros e isótopos de la estructura representada. "Isótopos" se refiere a átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números de masa resultantes de un número diferente de neutrones en los núcleos. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio. Además, un compuesto, sal o complejo de la presente descripción se puede preparar en combinación con moléculas de disolvente o agua para formar solvatos e hidratos mediante procedimientos de rutina.
Como se usa en esta invención, la expresión "poner en contacto" significa establecer una conexión física entre dos o más entidades. Por ejemplo, poner en contacto una célula de mamífero con una composición de nanopartículas significa que la célula de mamífero y una nanopartícula están hechas para compartir una conexión física. Los procedimientos para poner en contacto células con entidades externas tanto in vivo como ex vivo son bien conocidos en las técnicas biológicas. Por ejemplo, poner en contacto una composición de nanopartículas y una célula de mamífero dispuesta dentro de un mamífero se puede realizar mediante diversas vías de administración (por ejemplo, intravenosa, intramuscular, intradérmica y subcutánea) y puede involucrar diversas cantidades de composiciones de nanopartículas. Además, se puede poner en contacto más de una célula de mamífero mediante una composición de nanopartículas.
Como se usa en esta invención, el término "administrar" significa proporcionar una entidad a un destino. Por ejemplo, administrar un agente terapéutico y/o profiláctico a un sujeto puede implicar administrar una composición de nanopartículas que incluye el agente terapéutico y/o profiláctico al sujeto (por ejemplo, mediante una vía intravenosa, intramuscular, intradérmica o subcutánea). La administración de una composición de nanopartículas a una célula de mamífero o mamífero puede implicar poner en contacto una o más células con la composición de nanopartículas.
Como se usa en esta invención, la expresión "administración mejorada" significa la administración de más (por ejemplo, al menos 1,5 veces más, al menos 2 veces más, al menos 3 veces más, al menos 4 veces más, al menos 5 veces más, al menos 6 veces más, al menos 7 veces más, al menos 8 veces más, al menos 9 veces más, al menos 10 veces más) de un agente terapéutico y/o profiláctico mediante una nanopartícula a un tejido diana de interés (por ejemplo, hígado de mamífero) en comparación con el nivel de administración de un agente terapéutico y/o profiláctico mediante una nanopartícula de control a un tejido diana de interés (por ejemplo, MC3, KC2 o DLinDMA). El nivel de administración de una nanopartícula a un tejido particular se puede medir comparando la cantidad de proteína producida en un tejido con el peso de dicho tejido, comparando la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico en un tejido con el peso de dicho tejido, comparando la cantidad de proteína producida en un tejido con la cantidad de proteína total en dicho tejido, o comparando la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico en un tejido con la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico total en dicho tejido. Se entenderá que no es necesario determinar la administración mejorada de una nanopartícula a un tejido diana en un sujeto que se está tratando, se puede determinar en un sustituto tal como un modelo animal (por ejemplo, un modelo de rata). En determinadas realizaciones y ejemplos, una composición de nanopartículas que incluye un compuesto o un compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) tiene sustancialmente el mismo nivel de mejora de administración independientemente de las vías de administración. Por ejemplo, determinados compuestos o compuestos comparativos descritos en esta invención presentan una mejora de la administración similar cuando se utilizan para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico, ya sea por vía intravenosa o intramuscular. En otras realizaciones y ejemplos, determinados compuestos descritos en esta invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (IA) o (II), tal como el Compuesto 18, 25, 30, 60, o 108-112 o compuesto comparativo 122) presentan un mayor nivel de mejora de la administración cuando se utilizan para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico por vía intramuscular que por vía intravenosa.
Como se usa en esta invención, la expresión "administración específica", "administrar específicamente" o "que administra específicamente" significa la administración de más (por ejemplo, al menos 1,5 veces más, al menos 2 veces más, al menos 3 veces más, al menos 4 veces más, al menos 5 veces más, al menos 6 veces más, al menos 7 veces más, al menos 8 veces más, al menos 9 veces más, al menos 10 veces más) de un agente terapéutico y/o profiláctico mediante una nanopartícula a un tejido diana de interés (por ejemplo, hígado de mamífero) en comparación con un tejido distinto de la diana (por ejemplo, bazo de mamífero). El nivel de administración de una nanopartícula a un tejido particular se puede medir comparando la cantidad de proteína producida en un tejido con el peso de dicho tejido, comparando la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico en un tejido con el peso de dicho tejido, comparando la cantidad de proteína producida en un tejido con la cantidad de proteína total en dicho tejido, o comparando la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico en un tejido con la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico total en dicho tejido. Por ejemplo, para el direccionamiento renovascular, se proporciona específicamente un agente terapéutico y/o profiláctico a un riñón de mamífero en comparación con el hígado y el bazo si se administra 1,5, 2 veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 15 veces o 20 veces más agente terapéutico y/o profiláctico por 1 g de tejido a un riñón en comparación con el administrado al hígado o al bazo después de la administración sistémica del agente terapéutico y/o profiláctico. Se entenderá que no es necesario determinar la capacidad de una nanopartícula para administrar específicamente a un tejido diana en un sujeto que se está tratando, se puede determinar en un sustituto tal como un modelo animal (por ejemplo, un modelo de rata).
Como se usa en esta invención, "eficiencia de encapsulación" se refiere a la cantidad de un agente terapéutico y/o profiláctico que se convierte en parte de una composición de nanopartículas, con respecto a la cantidad total inicial de agente terapéutico y/o profiláctico utilizado en la preparación de una composición de nanopartículas. Por ejemplo, si 97 mg de agente terapéutico y/o profiláctico se encapsulan en una composición de nanopartículas de un total de 100 mg de agente terapéutico y/o profiláctico proporcionado inicialmente a la composición, la eficiencia de encapsulación se puede dar como el 97 %. Como se usa en esta invención, "encapsulación" puede referirse a un encerramiento, confinamiento, entorno o envoltura completa, sustancial o parcial.
Como se usa en esta invención, la "expresión" de una secuencia de ácido nucleico se refiere a la traducción de un ARNm en un polipéptido o proteína y/o modificación postraduccional de un polipéptido o proteína.
Como se usa en esta invención, el término "in vitro" se refiere a eventos que se producen en un ambiente artificial, por ejemplo, en un tubo de ensayo o recipiente de reacción, en cultivo celular, en una placa de Petri, etc., en lugar de dentro de un organismo (por ejemplo, animal, planta o microbio).
Como se usa en esta invención, el término "in vivo" se refiere a eventos que se producen dentro de un organismo (por ejemplo , animal, planta o microbio o célula o tejido del mismo).
Como se usa en esta invención, el término "ex vivo" se se refiere a eventos que se producen fuera de un organismo (por ejemplo, animal, planta o microbio o célula o tejido del mismo). Los eventos ex vivo pueden tener lugar en un entorno mínimamente alterado de un entorno natural (por ejemplo, in vivo).
Las fórmulas de los compuestos descritos en esta invención incluyen todas las formas tautoméricas, zwitteriónicas, estereoisoméricas (es decir, enantioméricas o diastereoisoméricas).
Los compuestos pueden incluir uno o más centros quirales y/o enlaces dobles y, por lo tanto, pueden existir como estereoisómeros, tales como isómeros de enlace doble (es decir, isómeros geométricos E/Z) o diastereómeros (por ejemplo, enantiómeros (es decir, (+) o (-)) o isómeros cis/trans). La presente descripción incluye formas estereoméricamente puras (por ejemplo, geométricamente puras, enantioméricamente puras o diastereoméricamente puras) y mezclas enantioméricas y estereoisoméricas, por ejemplo, racematos. Las mezclas enantioméricas y estereoméricas de compuestos y los medios para resolverlos en sus enantiómeros o estereoisómeros componentes son bien conocidos.
Como se usa en esta invención, un "componente lipídico" es el componente de una composición de nanopartículas que incluye uno o más lípidos. Por ejemplo, el componente lipídico puede incluir uno o más lípidos catiónicos/ionizables, PEGilados, estructurales u otros, tales como fosfolípidos.
Como se usa en esta invención, un "enlazador" es un resto que conecta dos restos, por ejemplo, la conexión entre dos nucleósidos de una especie de casquete. Un enlazador puede incluir uno o más grupos que incluyen pero sin limitarse a grupos fosfato (por ejemplo, fosfatos, boranofosfatos, tiofosfatos, selenofosfatos y fosfonatos), grupos alquilo, amidatos o gliceroles. Por ejemplo, dos nucleósidos de un análogo de casquete pueden estar unidos en sus posiciones 5' por un grupo trifosfato o por una cadena que incluye dos restos fosfato y un resto boranofosfato.
Como se usa en esta invención, los "procedimientos de administración" pueden incluir procedimientos intravenosos, intramusculares, intradérmicos, subcutáneos u otros para administrar una composición a un sujeto. Se puede seleccionar un procedimiento de administración para dirigir la administración (por ejemplo, para administrar específicamente) a una región o sistema específico de un cuerpo.
Como se usa en esta invención, "modificado" significa no natural. Por ejemplo, un ARN puede ser un ARN modificado. Es decir, un ARN puede incluir una o más nucleobases, nucleósidos, nucleótidos o enlazadores que no son de origen natural. Una especie "modificada" también puede denominarse en esta invención una especie "alterada". Las especies pueden modificarse o alterarse química, estructural o funcionalmente. Por ejemplo, una especie de nucleobases modificada puede incluir una o más sustituciones que no son de origen natural.
Como se usa en esta invención, la "relación N:P" es la relación molar de átomos de nitrógeno ionizables (en el intervalo de pH fisiológico) en un lípido a grupos fosfato en un ARN, por ejemplo, en una composición de nanopartículas que incluye un componente lipídico y un ARN.
Como se usa en esta invención, una "composición de nanopartículas" es una composición que comprende uno o más lípidos. Las composiciones de nanopartículas típicamente tienen un tamaño del orden de micrómetros o más pequeño y pueden incluir una bicapa lipídica. Las composiciones de nanopartículas comprenden nanopartículas lipídicas (LNP), liposomas (por ejemplo, vesículas lipídicas) y lipoplejos. Por ejemplo, una composición de nanopartículas puede ser un liposoma que tiene una bicapa lipídica con un diámetro de 500 nm o menos.
Como se usa en esta invención, "de origen natural" significa que existe en la naturaleza sin ayuda artificial.
Como se usa en esta invención, "paciente" se refiere a un sujeto que puede buscar o necesitar tratamiento, requiere tratamiento, está recibiendo tratamiento, recibirá tratamiento o un sujeto que está bajo el cuidado de un profesional capacitado para una enfermedad o afección particular.
Como se usa en esta invención, un "lípido PEG" o "lípido PEGilado" se refiere a un lípido que comprende un componente de polietilenglicol.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" se usa en esta invención para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del buen criterio médico, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable.
La expresión "excipiente farmacéuticamente aceptable", como se usa en esta invención, se refiere a cualquier ingrediente distinto de los compuestos descritos en esta invención (por ejemplo, un vehículo capaz de suspender , formar complejos o disolver el compuesto activo) y que tiene las propiedades de no ser sustancialmente tóxico ni inflamatorio en un paciente. Los excipientes pueden incluir, por ejemplo: antiadherentes, antioxidantes, aglutinantes, recubrimientos, auxiliares de compresión, desintegrantes, colorantes (colores), emolientes, emulsionantes, cargas (diluyentes), formadores de película o recubrimientos, sabores, fragancias, deslizantes (potenciadores de flujo), lubricantes, conservantes, tintas de impresión, sorbentes, agentes de suspensión o dispersantes, edulcorantes y aguas de hidratación. Los excipientes ejemplares incluyen, pero sin limitarse a: hidroxitolueno butilado (BHT), carbonato de calcio, fosfato de calcio (dibásico), estearato de calcio, croscarmelosa, polivinil pirrolidona reticulada, ácido cítrico, crospovidona, cisteína, etilcelulosa, gelatina, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, lactosa, estearato de magnesio, maltitol, manitol, metionina, metilcelulosa, metil parabeno, celulosa microcristalina, polietilenglicol, polivinil pirrolidona, povidona, almidón pregelatinizado, propil parabeno, palmitato de retinilo, laca, dióxido de silicio, carboximetil celulosa de sodio, citrato de sodio, glicolato almidón de sodio, sorbitol, almidón (maíz), ácido esteárico, sacarosa, talco, dióxido de titanio, vitamina A, vitamina E (alfa-tocoferol), vitamina C, xilitol y otras especies descritas en esta invención.
En la presente memoria descriptiva, la fórmula estructural del compuesto representa un determinado isómero por conveniencia en algunos casos, pero la presente descripción incluye todos los isómeros, tales como isómeros geométricos, isómeros ópticos basados en un carbono asimétrico, estereoisómeros, tautómeros y similares, entendiéndose que no todos los isómeros pueden tener el mismo nivel de actividad. Además, puede estar presente un polimorfismo de cristal para los compuestos representados por la fórmula. Cabe señalar que cualquier forma cristalina, mezcla de forma cristalina o anhídrido o hidrato de las mismas se incluye en el alcance de la presente descripción.
El término "polimorfos cristalinos", "polimorfos" o "formas cristalinas" significa estructuras cristalinas en las cuales un compuesto (o una sal o solvato del mismo) puede cristalizarse en diferentes disposiciones de empaque de cristal, todas las cuales tienen la misma composición elemental. Las diferentes formas cristalinas tienen diferentes patrones de difracción de rayos X, espectros infrarrojos, puntos de fusión, densidad, dureza, forma del cristal, propiedades ópticas y eléctricas, estabilidad y solubilidad.
El disolvente de recristalización, la velocidad de cristalización, la temperatura de almacenamiento y otros factores pueden hacer que una forma cristalina domine. Los polimorfos cristalinos de los compuestos se pueden preparar mediante cristalización en diferentes condiciones.
Las composiciones también pueden incluir sales de uno o más compuestos. Las sales pueden ser sales farmacéuticamente aceptables. Como se usa en esta invención, “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a derivados de los compuestos descritos donde el compuesto base se altera al convertir un ácido o resto base existente en su forma de sal (por ejemplo, al hacer reaccionar un grupo base libre con un ácido orgánico adecuado). Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitarse a, sales de ácidos minerales u orgánicos de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales de adición de ácido representativas incluyen sales de acetato, adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, hemisulfato, heptonato, hexanoato, bromhidrato, clorhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, toluenosulfonato, undecanoato, valerato y similares. Las sales de metales alcalinos o alcalinotérreos representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares, así como cationes no tóxicos de amonio, amonio cuaternario y amina, que incluyen, pero sin limitarse a, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente descripción incluyen las sales no tóxicas convencionales del compuesto base, por ejemplo, formado a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente descripción se pueden sintetizar a partir de un compuesto base que contiene un resto básico o ácido, mediante procedimientos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas ácidas o básicas libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Las listas de sales adecuadas se encuentran en Remington 's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, pág. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl y C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008 y Berge y col., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977).
Como se usa en esta invención, un "fosfolípido" es un lípido que incluye un resto fosfato y una o más cadenas de carbono, tales como cadenas de ácidos grasos insaturados. Un fosfolípido puede incluir uno o más enlaces múltiples (por ejemplo, dobles o triples) (por ejemplo, una o más insaturaciones). Los fosfolípidos particulares pueden facilitar la fusión a una membrana. Por ejemplo, un fosfolípido catiónico puede interactuar con uno o más fosfolípidos cargados negativamente de una membrana (por ejemplo, una membrana celular o intracelular). La fusión de un fosfolípido a una membrana puede permitir que uno o más elementos de una composición que contiene lípidos pasen a través de la membrana permitiendo, por ejemplo, la administración de uno o más elementos a una célula.
Como se usa en esta invención, el "índice de polidispersidad" es una relación que describe la homogeneidad de la distribución de tamaño de partícula de un sistema. Un valor pequeño, por ejemplo, inferior a 0,3, indica una distribución de tamaño de partícula estrecha.
Como se usa en esta invención, el término "polipéptido" o "polipéptido de interés" se refiere a un polímero de residuos de aminoácidos típicamente unidos por enlaces peptídicos que se pueden producir naturalmente (por ejemplo, aislados o purificados) o sintéticamente.
Como se usa en esta invención, un "ARN" se refiere a un ácido ribonucleico que puede ser de origen natural o de origen no natural. Por ejemplo, un ARN puede incluir componentes modificados y/o de origen no natural tales como una o más nucleobases, nucleósidos, nucleótidos o enlazadores. Un ARN puede incluir una estructura de casquete, un nucleósido de terminación de cadena, un bucle en horquilla (tallo-bucle), una secuencia de poliA y/o una señal de poliadenilación. Un ARN puede tener una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de interés. Por ejemplo, un ARN puede ser un ARN mensajero (ARNm). La traducción de un ARNm que codifica un polipéptido particular, por ejemplo, la traducción in vivo de un ARNm dentro de una célula de mamífero, puede producir el polipéptido codificado. Los ARN pueden seleccionarse de entre el grupo no limitante que consiste en ARN interferente pequeño (ARNip), ARN interferente asimétrico (ARNia), microARN (miARN), ARN de Dicer sustrato (ARNds), a Rn de horquilla pequeña (ARNhp), ARNm y mezclas de los mismos.
Como se usa en esta invención, una "dosis unitaria única" es una dosis de cualquier agente terapéutico administrada en una dosis/en un momento/vía única/punto de contacto único, es decir, un evento de administración única.
Como se usa en esta invención, una "dosis dividida" es la división de la dosis unitaria única o dosis diaria total en dos o más dosis.
Como se usa en esta invención, una "dosis diaria total" es una cantidad administrada o prescrita en un período de 24 horas. Puede administrarse como una dosis unitaria única.
Como se usa en esta invención, "tamaño" o "tamaño medio" en el contexto de composiciones de nanopartículas se refiere al diámetro medio de una composición de nanopartículas.
Como se usa en esta invención, el término "sujeto" o "paciente" se refiere a cualquier organismo al cual se le puede administrar una composición conforme a la descripción, por ejemplo, con fines experimentales, diagnósticos, profilácticos y/o terapéuticos. Los sujetos típicos incluyen animales (por ejemplo, mamíferos tales como ratones, ratas, conejos, primates no humanos y seres humanos) y/o plantas.
Como se usa en esta invención, "células diana" se refiere a cualquiera de una o más células de interés. Las células pueden encontrarse in vitro, in vivo, in situ, o en el tejido u órgano de un organismo. El organismo puede ser un animal, preferentemente un mamífero, más preferentemente un ser humano y lo más preferentemente un paciente.
Como se usa en esta invención, "tejido diana" se refiere a uno o más tipos de tejido de interés en los que la administración de un agente terapéutico y/o profiláctico daría como resultado un efecto biológico y/o farmacológico deseado. Los ejemplos de tejidos diana de interés incluyen tejidos, órganos y sistemas específicos o grupos de los mismos. En aplicaciones particulares, un tejido diana puede ser un riñón, un pulmón, un bazo, endotelio vascular en vasos (por ejemplo, intra-coronario o intra-femoral), o tejido tumoral (por ejemplo, mediante inyección intratumoral). Un "tejido fuera de la diana" se refiere a uno o más tipos de tejido en los que la expresión de la proteína codificada no produce un efecto biológico y/o farmacológico deseado. En aplicaciones particulares, los tejidos fuera de la diana pueden incluir el hígado y el bazo.
El término "agente terapéutico" o "agente profiláctico" se refiere a cualquier agente que, cuando se administra a un sujeto, tiene un efecto terapéutico, diagnóstico y/o profiláctico y/o provoca un efecto biológico y/o farmacológico deseado. Los agentes terapéuticos también se denominan "activos" o "agentes activos". Dichos agentes incluyen, pero sin limitarse a, citotoxinas, iones radiactivos, agentes quimioterapéuticos, fármacos de molécula pequeña, proteínas y ácidos nucleicos.
Como se usa en esta invención, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" significa una cantidad de un agente a administrar (por ejemplo, ácido nucleico, fármaco, composición, agente terapéutico, agente de diagnóstico, agente profiláctico, etc.) que es suficiente, cuando se administra a un sujeto que padece o es susceptible a una infección, enfermedad, trastorno y/o afección, para tratar, mejorar los síntomas, diagnosticar, prevenir y/o retrasar el inicio de la infección, enfermedad, trastorno y/o afección.
Como se usa en esta invención, "transfección" se refiere a la introducción de una especie (por ejemplo, un ARN) en una célula. La transfección puede producirse, por ejemplo, in vitro, ex vivo o in vivo.
Como se usa en esta invención, el término "tratar" se refiere a aliviar, mitigar, mejorar, rebajar, retrasar el inicio, inhibir la progresión, reducir la gravedad y/o reducir parcial o completamente la incidencia de uno o más síntomas o características de una infección, enfermedad, trastorno y/o afección particular. Por ejemplo, "tratar" el cáncer puede referirse a la inhibición de la supervivencia, el crecimiento y/o la propagación de un tumor. El tratamiento se puede administrar a un sujeto que no presenta signos de una enfermedad, trastorno y/o afección y/o a un sujeto que presenta solo signos tempranos de una enfermedad, trastorno y/o afección con el fin de disminuir el riesgo de desarrollar una patología asociada con la enfermedad, trastorno y/o afección.
Como se usa en esta invención, el "potencial zeta" es el potencial electrocinético de un lípido, por ejemplo, en una composición de partículas.
Composiciones de nanopartículas
La descripción también presenta composiciones de nanopartículas que comprenden un componente lipídico que comprende un compuesto según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) como se describe en esta invención.
En algunas realizaciones, la dimensión más grande de una composición de nanopartículas es 1 pm o más corta (por ejemplo, 1 pm, 900 nm, 800 nm, 700 nm, 600 nm, 500 nm, 400 nm, 300 nm, 200 nm, 175 nm, 150 nm, 125 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm o más corta), por ejemplo, cuando se mide mediante dispersión dinámica de luz (DLS), microscopía electrónica de transmisión, microscopía electrónica de barrido u otro procedimiento. Las composiciones de nanopartículas incluyen, por ejemplo, nanopartículas lipídicas (LNP), liposomas, vesículas lipídicas y lipoplejos. En algunas realizaciones, las composiciones de nanopartículas son vesículas que incluyen una o más bicapas lipídicas. En determinadas realizaciones, una composición de nanopartículas incluye dos o más bicapas concéntricas separadas por compartimientos acuosos.
Las bicapas lipídicas pueden funcionalizarse y/o reticularse entre sí. Las bicapas lipídicas pueden incluir uno o más ligandos, proteínas o canales.
Las composiciones de nanopartículas comprenden un componente lipídico que incluye al menos un compuesto o comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (lId) o (IIe). Por ejemplo, el componente lipídico de una composición de nanopartículas puede incluir uno o más de los Compuestos y compuestos comparativos 1-147. Las composiciones de nanopartículas también pueden incluir una variedad de otros componentes. Por ejemplo, el componente lipídico de una composición de nanopartículas puede incluir uno o más lípidos adicionales además de un lípido según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe).
Lípidos catiónicos/ionizables
Una composición de nanopartículas puede incluir uno o más lípidos catiónicos y/o ionizables (por ejemplo, lípidos que pueden tener una carga positiva o parcial positiva a pH fisiológico) además de un lípido según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe). Los lípidos catiónicos y/o ionizables se pueden seleccionar de entre el grupo no limitante que consiste en 3-(didodecilamino)-N1,N1,4-tridodecil-1-piperazinaetanamina (KL10), N1-[2-(didodecilamino)etil]-N1,N4,N4-tridodecil-1,4-piperazinadietanamina (KL22), 14,25-ditridecil-15,18,21,24-tetraaza-octatriacontano (KL25), 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLin-DMA), 2,2dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano (DLin-K-DMA), 4-(dimetilamino)butanoato de heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo (DLin-MC3-DMA), 2,2-dilinoleil-4-(2-dimetilaminoetM)-[1,3]-dioxolano (DLin-KC2-DMA), 1,2-dioleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DODMA), 2-({8-[(3(3)-colest-5-en-3-Noxi]octil}oxi)-N,N-dimetN-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-1-amina (Octil-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3p)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-1-amina (Octil-CLinDMA (2R)) y (2S)-2-({8-[(3(3)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-iloxi]propan-1-amina (Octil-CLinDMA (2S)). Además de estos, un lípido catiónico también puede ser un lípido que incluye un grupo amina cíclico.
Lípidos PEG
El componente lipídico de una composición de nanopartículas puede incluir uno o más lípidos PEG o modificados con PEG. Dichas especies pueden denominarse alternativamente lípidos PEGilados. Un lípido PEG es un lípido modificado con polietilenglicol. Un lípido PEG se puede seleccionar de entre el grupo no limitante que consiste en fosfatidiletanolaminas modificadas con PEG, ácidos fosfatídicos modificados con PEG, ceramidas modificadas con PEG, dialquilaminas modificadas con PEG, diacilgliceroles modificados con PEG, dialquilgliceroles modificados con PEG y mezclas de los mismos. Por ejemplo, un lípido PEG puede ser PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC o un lípido PEG-DSPE.
Lípidos estructurales
El componente lipídico de una composición de nanopartículas puede incluir uno o más lípidos estructurales. Los lípidos estructurales se pueden seleccionar de entre el grupo que consiste en, pero sin limitarse a, colesterol, fecosterol, sitosterol, ergosterol, campesterol, estigmasterol, brasicasterol, tomatidina, tomatina, ácido ursólico, alfa-tocoferol y mezclas de los mismos. En algunas realizaciones, el lípido estructural es colesterol. En algunas realizaciones, el lípido estructural incluye colesterol y un corticosteroide (tal como prednisolona, dexametasona, prednisona e hidrocortisona), o una combinación de los mismos.
Fosfolípidos
El componente lipídico de una composición de nanopartículas puede incluir uno o más fosfolípidos, tales como uno o más lípidos (poli)insaturados. Los fosfolípidos pueden ensamblarse en una o más bicapas lipídicas. En general, los fosfolípidos pueden incluir un resto fosfolípido y uno o más restos de ácidos grasos. Por ejemplo, un fosfolípido puede ser un lípido según la Fórmula (IlI):
en la que Rp representa un resto fosfolípido y Ri y R<2>representan restos de ácidos grasos con o sin insaturación que pueden ser iguales o diferentes. Un resto fosfolípido puede seleccionarse de entre el grupo no limitante que consiste en fosfatidil colina, fosfatidil etanolamina, fosfatidil glicerol, fosfatidil serina, ácido fosfatídico, 2-lisofosfatidil colina y una esfingomielina. Un resto de ácido graso puede seleccionarse de entre el grupo no limitante que consiste en ácido láurico, ácido mirístico, ácido miristoleico, ácido palmítico, ácido palmitoleico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido alfa-linolénico, ácido erúcico, ácido fitanoico, ácido araquídico, ácido araquidónico, ácido eicosapentaenoico, ácido behénico, ácido docosapentaenoico y ácido docosahexaenoico. También se contemplan especies no naturales que incluyen especies naturales con modificaciones y sustituciones que incluyen ramificación, oxidación, ciclación y alquinos. Por ejemplo, un fosfolípido puede funcionalizarse o reticularse con uno o más alquinos (por ejemplo, un grupo alquenilo en el que uno o más dobles enlaces se reemplazan con un triple enlace). En condiciones de reacción adecuadas, un grupo alquino puede someterse a una cicloadición catalizada por cobre tras la exposición a una azida. Dichas reacciones pueden ser útiles en la funcionalización de una bicapa lipídica de una composición de nanopartículas para facilitar la permeación de la membrana o el reconocimiento celular o en la conjugación de una composición de nanopartículas con un componente útil tal como un resto de direccionamiento o formación de imágenes (por ejemplo, un tinte).
Los fosfolípidos útiles en las composiciones y procedimientos se pueden seleccionar de entre el grupo no limitante que consiste en 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC),
1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE),
1.2- dilinoleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DLPC),
1.2- dimiristoil-sn-glicero-fosfocolina (DMPC), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DOPC), 1,2-dipalmitoil-snglicero-3-fosfocolina (DPPC),
1.2- diundecanoil-sn-glicero-fosfocolina (DUPC),
1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC),
1.2- di-O-octadecenil-sn-glicero-3-fosfocolina (18:0 Diéter PC),
1-oleoil-2-colesterilhemisuccinoil-sn-glicero-3-fosfocolina (OChemsPC),
1-hexadecil-sn-glicero-3-fosfocolina (C16 Liso PC),
1.2- dilinolenoil-sn-glicero-3-fosfocolina,
1.2- diaraquidonoil-sn-glicero-3-fosfocolina,
1.2- didocosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfocolina,
1.2- diftanoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (ME 16.0 PE),
1.2- distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina,
1.2- dilinoleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina,
1.2- dilinolenoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina,
1.2- diaraquidonoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina,
1.2- didocosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina,
sal sódica de 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-(1-glicerol) (DOPG) y esfingomielina.
En algunas realizaciones, una composición de nanopartículas incluye DSPC. En determinadas realizaciones, una composición de nanopartículas incluye DOPE. En algunas realizaciones, una composición de nanopartículas incluye tanto DSPC como DOPE.
Adyuvantes
En algunas realizaciones, una composición de nanopartículas que incluye uno o más lípidos descritos en esta invención puede incluir además uno o más adyuvantes, por ejemplo, adyuvante de lípidos de glucopiranosilo (GLA), oligodesoxinucleótidos CpG (por ejemplo, clase A o B), poli(I:C), hidróxido de aluminio y Pam3CSK4. Agentes terapéuticos
Las composiciones de nanopartículas pueden incluir uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos. La descripción presenta procedimientos para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico a una célula u órgano de mamífero, producir un polipéptido de interés en una célula de mamífero y tratar una enfermedad o trastorno en un mamífero que lo necesita que comprende administrar a un mamífero y/o poner en contacto una célula de mamífero con una composición de nanopartículas que incluye un agente terapéutico y/o profiláctico. Los agentes terapéuticos y/o profilácticos incluyen sustancias biológicamente activas y se denominan alternativamente “agentes activos”. Un agente terapéutico y/o profiláctico puede ser una sustancia que, una vez administrada a una célula u órgano, produce un cambio deseable en la célula, órgano u otro tejido o sistema corporal. Dichas especies pueden ser útiles en el tratamiento de una o más enfermedades, trastornos o afecciones. En algunas realizaciones, un agente terapéutico y/o profiláctico es un fármaco de molécula pequeña útil en el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección particular. Los ejemplos de fármacos útiles en las composiciones de nanopartículas incluyen, pero sin limitarse a, agentes antineoplásicos (por ejemplo, vincristina, doxorrubicina, mitoxantrona, camptotecina, cisplatino, bleomicina, ciclofosfamida, metotrexato y estreptozotocina), agentes antitumorales (por ejemplo, actinomicina D, vincristina, vinblastina, arabinósido de cistina, antraciclinas, agentes alquilantes, compuestos de platino, antimetabolitos y análogos de nucleósidos, tales como metotrexato y análogos de purina y pirimidina), agentes antiinfecciosos, anestésicos locales (por ejemplo, dibucaína y clorpromazina), bloqueadores beta-adrenérgicos (por ejemplo, propranolol, timolol y labetol), agentes antihipertensivos (por ejemplo, clonidina e hidralazina), agentes antidepresivos (por ejemplo, imipramina, amitriptilina y doxepina), anticonvulsivos (por ejemplo, fenitoína), antihistaminas (por ejemplo, difenhidramina, clorfeniramina y prometazina), agentes antibióticos/antibacterianos (por ejemplo, gentamicina, ciprofloxacina y cefoxitina), agentes antifúngicos (por ejemplo, miconazol, terconazol, econazol, isoconazol, butaconazol, clotrimazol, itraconazol, nistatina, naftifina y anfotericina B), agentes antiparasitarios, hormonas, antagonistas de hormonas, inmunomoduladores, antagonistas de neurotransmisores, agentes antiglaucoma, vitaminas, narcóticos y agentes de formación de imágenes.
En algunas realizaciones, un agente terapéutico y/o profiláctico es una citotoxina, un ion radiactivo, un agente quimioterapéutico, una vacuna, un compuesto que provoca una respuesta inmunitaria y/u otro agente terapéutico y/o profiláctico. Una citotoxina o agente citotóxico incluye cualquier agente que pueda ser perjudicial para las células. Los ejemplos incluyen, pero sin limitarse a, taxol, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etopósido, tenipósido, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxiantracenediona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-dehidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, puromicina, maitansinoides, por ejemplo, maitansinol, raquelmicina (CC-1065) y análogos u homólogos de los mismos. Los iones radiactivos incluyen, pero sin limitarse a, yodo (por ejemplo, yodo 125 o yodo 131), estroncio 89, fósforo, paladio, cesio, iridio, fosfato, cobalto, itrio 90, samario 153 y praseodimio. Las vacunas incluyen compuestos y preparaciones que son capaces de proporcionar inmunidad contra una o más afecciones relacionadas con enfermedades infecciosas tales como influenza, sarampión, virus del papiloma humano (VPH), rabia, meningitis, tos ferina, tétanos, peste, hepatitis y tuberculosis y pueden incluir ARNm que codifican antígenos y/o epítopos derivados de enfermedades infecciosas. Las vacunas también incluyen compuestos y preparaciones que dirigen una respuesta inmunitaria contra células cancerosas y pueden incluir ARNm que codifican antígenos, epítopos y/o neoepítopos derivados de células tumorales. Los compuestos que provocan respuestas inmunitarias pueden incluir vacunas, corticosteroides (por ejemplo, dexametasona) y otras especies. En algunas realizaciones y ejemplos comparativos, una vacuna y/o un compuesto capaz de provocar una respuesta inmunitaria se administra por vía intramuscular a través de una composición que incluye un compuesto o comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (lId) o (IIe) (por ejemplo, el Compuesto o compuesto comparativo (marcado con un *) 3, 18, 20, 25, 26, 29*, 30, 60, 108-112, o 122*). Otros agentes terapéuticos y/o profilácticos incluyen, pero sin limitarse a, antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracil decarbazina), agentes alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, tiotepa clorambucilo, raquelmicina (CC-1065), melfalán, carmustina (BSNU), lomustina (CCNU), ciclofosfamida, busulfán, dibromomanitol, estreptozotocina, mitomicina C y cis-diclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatino), antraciclinas (por ejemplo, daunorrubicina (anteriormente daunomicina) y doxorrubicina), antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (anteriormente actinomicina), bleomicina, mitramicina y antramicina (AMC), y agentes antimitóticos (por ejemplo, vincristina, vinblastina, taxol y maitansinoides).
En otras realizaciones, un agente terapéutico y/o profiláctico es una proteína. Las proteínas terapéuticas útiles en las nanopartículas de la descripción incluyen, pero sin limitarse a, gentamicina, amikacina, insulina, eritropoyetina (EPO), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), factor VIR, análogos de la hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH), interferones, heparina, antígeno de superficie de la hepatitis B, vacuna contra la fiebre tifoidea y vacuna contra el cólera.
Polinudeótidos y ácidos nucleicos
En algunas realizaciones, un agente terapéutico es un polinucleótido o ácido nucleico (por ejemplo, ácido ribonucleico o ácido desoxirribonucleico). El término "polinucleótido", en su sentido más amplio, incluye cualquier compuesto y/o sustancia que sea o pueda ser incorporada en una cadena de oligonucleótidos. Los polinucleótidos ejemplares para su uso según la presente descripción incluyen, pero sin limitarse a, uno o más de ácido desoxirribonucleico (ADN), ácido ribonucleico (ARN) que incluye ARNm mensajero (ARNm), híbridos de los mismos, agentes inductores de ARNi, agentes de ARNi, ARNip, ARNhp, miARN, ARN antisentido, ribozimas, ADN catalítico, ARN que inducen la formación de triple hélice, aptámeros, vectores, etc. En algunas realizaciones, un agente terapéutico y/o profiláctico es un ARN. Los ARN útiles en las composiciones y procedimientos descritos en esta invención se pueden seleccionar de entre el grupo que consiste en, pero sin limitarse a, shortmers, antagomirs, antisentido, ribozimas, ARN interferente pequeño (ARNip), ARN interferente asimétrico (ARNia), microARN (miARN), ARN de Dicer sustrato (ARNds), ARN de horquilla pequeña (ARNhp), ARN de transferencia (ARNt), ARN mensajero (ARNm) y mezclas de los mismos. En determinadas realizaciones el ARN es un ARNm.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico y/o profiláctico es un ARNm. Un ARNm puede codificar cualquier polipéptido de interés, incluyendo cualquier polipéptido de origen natural o no natural o modificado de cualquier otra manera. Un polipéptido codificado por un ARNm puede ser de cualquier tamaño y puede tener cualquier estructura o actividad secundaria. En algunas realizaciones, un polipéptido codificado por un ARNm puede tener un efecto terapéutico cuando se expresa en una célula.
En otras realizaciones, un agente terapéutico y/o profiláctico es un ARNip. Un ARNip puede ser capaz de inactivar o reducir selectivamente la expresión de un gen de interés. Por ejemplo, se podría seleccionar un ARNip para silenciar un gen asociado con una enfermedad, trastorno o afección en particular tras la administración a un sujeto que lo necesita de una composición de nanopartículas que incluye el ARNip. Un ARNip puede comprender una secuencia que es complementaria a una secuencia de ARNm que codifica un gen o proteína de interés. En algunas realizaciones, el ARNip puede ser un ARNip inmunomodulador.
En algunas realizaciones, un agente terapéutico y/o profiláctico es un ARNhp o un vector o plásmido que lo codifica. Un ARNhp puede producirse dentro de una célula diana tras la administración de una construcción adecuada al núcleo. Las construcciones y mecanismos relacionados con el ARNhp son bien conocidos en las técnicas pertinentes.
Los ácidos nucleicos y polinucleótidos útiles en la descripción incluyen típicamente una primera región de nucleósidos enlazados que codifican un polipéptido de interés (por ejemplo, una región codificante), una primera región flanqueante ubicada en el extremo 5' de la primera región (por ejemplo, una 5'-UTR), una segunda región flanqueante ubicada en el extremo 3' de la primera región (por ejemplo, una 3'-UTR), al menos una región del casquete 5' y una región 3'-estabilizadora. En algunas realizaciones, un ácido nucleico o polinucleótido incluye además una región poli-A o una secuencia de Kozak (por ejemplo, en la 5'-UTR). En algunos casos, los polinucleótidos pueden contener una o más secuencias de nucleótidos intrónicos que se pueden extirpar del polinucleótido. En algunas realizaciones, un polinucleótido o ácido nucleico (por ejemplo, un ARNm) puede incluir una estructura de casquete 5', un nucleótido de terminación de cadena, un bucle en horquilla, una secuencia poli A y/o una señal de poliadenilación. Cualquiera de las regiones de un ácido nucleico puede incluir uno o más componentes alternativos (por ejemplo, un nucleósido alternativo). Por ejemplo, la región 3'-estabilizadora puede contener un nucleósido alternativo tal como un L-nucleósido, una timidina invertida, o un 2'-O-metil nucleósido y/o la región codificante, 5'-UTR, 3'-UTR, o la región del casquete puede incluir un nucleósido alternativo tal como una uridina 5-sustituida (por ejemplo, 5-metoxiuridina), una pseudouridina 1 -sustituida (por ejemplo, 1-metil-pseudouridina o 1-etil-pseudouridina), y/o una citidina 5-sustituida (por ejemplo, 5-metil-citidina).
Generalmente, la longitud más corta de un polinucleótido puede ser la longitud de la secuencia de polinucleótidos que es suficiente para codificar un dipéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un tripéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un tetrapéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un pentapéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un hexapéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un heptapéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un octapéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un nonapéptido. En otra realización, la longitud de la secuencia de polinucleótidos es suficiente para codificar un decapéptido.
Los ejemplos de dipéptidos que las secuencias de polinucleótidos alternativos pueden codificar incluyen, pero sin limitarse a, camosina y anserina.
En algunos casos, un polinucleótido tiene más de 30 nucleótidos de longitud. En otra realización, la molécula de polinucleótido tiene más de 35 nucleótidos de longitud. En otra realización, la longitud es de al menos 40 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 45 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 55 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 50 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 60 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 80 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 90 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 100 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 120 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 140 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 160 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 180 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 200 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 250 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 300 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 350 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 400 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 450 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 600 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 700 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 800 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 900 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1100 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1200 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1300 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1400 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1600 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1800 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 2000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 2500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 3000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 4000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 5000 nucleótidos, o mayor que 5000 nucleótidos.
Los ácidos nucleicos y polinucleótidos pueden incluir uno o más componentes de origen natural, que incluyen cualquiera de los nucleótidos canónicos A (adenosina), G (guanosina), C (citosina), U (uridina) o T (timidina). En una realización, todos o sustancialmente todos los nucleótidos que comprenden (a) la 5'-UTR, (b) el marco de lectura abierto (ORF), (c) la 3'-UTR, (d) la cola poli A, y cualquier combinación de (a, b, c, o d anteriores) comprenden nucleótidos canónicos de origen natural A (adenosina), G (guanosina), C (citosina), U (uridina), o T (timidina).
Los ácidos nucleicos y polinucleótidos pueden incluir uno o más componentes alternativos, como se describe en esta invención, que transmiten propiedades útiles que incluyen una mayor estabilidad y/o la falta de una inducción sustancial de la respuesta inmunitaria innata de una célula en la que se introduce el polinucleótido. Por ejemplo, un polinucleótido o ácido nucleico alternativo presenta degradación reducida en una célula en la que se introduce el polinucleótido o ácido nucleico, con respecto a un polinucleótido o ácido nucleico inalterado correspondiente. Estas especies alternativas pueden mejorar la eficiencia de la producción de proteínas, la retención intracelular de los polinucleótidos y/o la viabilidad de las células en contacto, además de poseer inmunogenicidad reducida.
Los polinucleótidos y ácidos nucleicos pueden ser de origen natural o no natural. Los polinucleótidos y ácidos nucleicos pueden incluir una o más nucleobases, nucleósidos, nucleótidos modificados (por ejemplo, alterados o alternativos) o combinaciones de los mismos. Los ácidos nucleicos y polinucleótidos útiles en una composición de nanopartículas pueden incluir cualquier modificación o alteración útil, tal como a la nucleobase, el azúcar, o el enlace internucleosídico (por ejemplo, a un fosfato de enlace/a un enlace de fosfodiéster/a la cadena principal de fosfodiéster). En determinadas realizaciones, las alteraciones (por ejemplo, una o más alteraciones) están presentes en cada una de la nucleobase, el azúcar y el enlace internucleosídico. Las alteraciones según la presente descripción pueden ser alteraciones de ácidos ribonucleicos (ARN) a ácidos desoxirribonucleicos (ADN), por ejemplo, la sustitución del 2'-OH del anillo ribofuranosilo a 2'-H, ácidos nucleicos de treosa (TNA), ácidos nucleicos de glicol (GNA), ácidos nucleicos peptídicos (PNA), ácidos nucleicos bloqueados (LNA) o híbridos de los mismos. En esta invención se describen alteraciones adicionales.
Los polinucleótidos y ácidos nucleicos pueden alterarse o no uniformemente a lo largo de toda la longitud de la molécula. Por ejemplo, uno o más o todos los tipos de nucleótido (por ejemplo, purina o pirimidina, o cualquiera o más o la totalidad de A, G, U, C) pueden o no alterarse de manera uniforme en un polinucleótido o ácido nucleico, o en una región de secuencia predeterminada dada del mismo. En algunos casos, todos los nucleótidos X en un polinucleótido (o en una región de secuencia dada del mismo) se alteran, donde X puede cualquiera de los nucleótidos A, G, U, C, o cualquiera de las combinaciones A+G, A+U, A+C, G+U, G+C, U+C, A+G+U, A+G+C, G+U+C o A+G+C.
Pueden existir diferentes alteraciones de azúcar y/o enlaces internucleosídicos (por ejemplo, estructuras de cadena principal) en diversas posiciones en un polinucleótido. Un experto en la materia apreciará que los análogos de nucleótidos u otra(s) alteración(es) pueden estar ubicados en cualquier posición o posiciones de un polinucleótido de modo que la función del polinucleótido no disminuya sustancialmente. Una alteración también puede ser una alteración terminal 5' o 3'. En algunas realizaciones, el polinucleótido incluye una alteración en el extremo 3'. El polinucleótido puede contener de alrededor del 1 % a alrededor del 100 % de nucleótidos alternativos (ya sea en relación con el contenido de nucleótidos total, o en relación con uno o más tipos de nucleótidos, es decir, uno cualquiera o más de A, G, U o C) o cualquier porcentaje intermedio (por ejemplo, del 1 % al 20 %, del 1 % al 25 %, del 1 % al 50 %, del 1 % al 60 %, del 1 % al 70 %, del 1 % al 80 %, del 1 % al 90 %, del 1 % al 95 %, del 10 % al 20 %, del 10 % al 25 %, del 10 % al 50 %, del 10 % al 60 %, del 10 % al 70 %, del 10 % al 80 %, del 10 % al 90 %, del 10 % al 95 %, del 10 % al 100 %, del 20 % al 25 %, del 20 % al 50 %, del 20 % al 60 %, del 20 % al 70 %, del 20 % al 80 %, del 20 % al 90 %, del 20 % al 95 %, del 20 % al 100 %, del 50 % al 60 %, del 50 % al 70 %, del 50 % al 80 %, del 50 % al 90 %, del 50 % al 95 %, del 50 % al 100 %, del 70 % al 80 %, del 70 % al 90 %, del 70 % al 95 %, del 70 % al 100 %, del 80 % al 90 %, del 80 % al 95 %, del 80 % al 100 %, del 90 % al 95 %, del 90 % al 100 % y del 95 % al 100 %). Se entenderá que cualquier porcentaje restante se explica por la presencia de un nucleótido canónico (por ejemplo, A, G, U o C):
Los polinucleótidos pueden contener como mínimo cero y como máximo el 100 % de nucleótidos alternativos, o cualquier porcentaje intermedio, tal como al menos el 5 % de nucleótidos alternativos, al menos el 10 % de nucleótidos alternativos, al menos el 25 % de nucleótidos alternativos, al menos el 50 % de nucleótidos alternativos, al menos el 80 % de nucleótidos alternativos o al menos el 90 % de nucleótidos alternativos. Por ejemplo, los polinucleótidos pueden contener una pirimidina alternativa tal como un uracilo o citosina alternativos. En algunas realizaciones, al menos el 5 %, al menos el 10 %, al menos el 25 %, al menos el 50 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o el 100 % del uracilo en un polinucleótido se reemplaza con un uracilo alternativo (por ejemplo, un uracilo sustituido en 5). El uracilo alternativo puede reemplazarse por un compuesto que tiene una única estructura, o puede reemplazarse por una pluralidad de compuestos que tienen diferentes estructuras (por ejemplo, 2, 3, 4 o más estructuras únicas). En algunos casos, al menos el 5 %, al menos el 10 %, al menos el 25 %, al menos el 50 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o el 100 % de la citosina en el polinucleótido se reemplaza con una citosina alternativa (por ejemplo, una citosina sustituida en 5). La citosina alternativa puede reemplazarse por un compuesto que tiene una única estructura, o puede reemplazarse por una pluralidad de compuestos que tienen diferentes estructuras (por ejemplo, 2, 3, 4 o más estructuras únicas).
En algunos casos, los ácidos nucleicos no inducen sustancialmente una respuesta inmunitaria innata de una célula en la que se introduce el polinucleótido (por ejemplo, ARNm). Las características de una respuesta inmunitaria innata inducida incluyen 1) mayor expresión de citocinas proinflamatorias, 2) activación de PRR intracelulares (RIG-1, MDA5, etc., y/o 3) terminación o reducción en la traducción de proteínas.
Los ácidos nucleicos pueden incluir opcionalmente otros agentes (por ejemplo, agentes inductores de ARNi, agentes de ARNi, ARNip, ARNhp, miARN, ARN antisentido, ribozimas, a Dn catalítico, ARNt, ARN que inducen la formación de triple hélice, aptámeros, vectores). En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos pueden incluir uno o más ARN mensajeros (ARNm) que tienen uno o más nucleósidos o nucleótidos alternativos (es decir, moléculas de ARNm alternativas).
En algunas realizaciones, una molécula de ácido nucleico (por ejemplo, ARNm), fórmula, composición o procedimiento asociado con la misma comprende uno o más polinucleótidos que comprenden características tal como se describen en los documentos WO2002/098443, WO2003/051401, WO2008052770, WO2009127230, WO2006122828, WO2008/083949, WO2010088927, WO2010037539, WO2004004743, WO2005016376, WO2006024518, WO2007/095976, WO2008014979, WO2008077592, WO2009030481, WO2009/095226, WO2011069586, WO2011026641, WO2011/144358, WO2012019780, WO2012013326, WO2012089338, WO2012113513, WO2012116811, WO2012116810, WO2013113502, WO2013113501, WO2013113736, WO2013143698, WO2013143699, WO2013143700, WO2013120626, WO2013120627, WO2013120628, WO2013120629, WO2013174409, WO2014127917, WO2015/024669, WO2015024668, WO2015024667, WO2015024665, WO2015/024666, WO2015/024664, WO2015101415, WO2015101414, WO2015024667, WO2015062738, WO2015101416.
Alternativas de nucleobases
Los nucleósidos y nucleótidos alternativos pueden incluir una nucleobase alternativa. Una nucleobase de un ácido nucleico es una base orgánica tal como una purina o pirimidina o un derivado de las mismas. Una nucleobase puede ser una base canónica (por ejemplo, adenina, guanina, uracilo, timina y citosina). Estas nucleobases se pueden alterar o reemplazar completamente para proporcionar moléculas de polinucleótidos que tienen propiedades mejoradas, por ejemplo, mayor estabilidad tal como resistencia a nucleasas. Las bases no canónicas o modificadas pueden incluir, por ejemplo, una o más sustituciones o modificaciones que incluyen pero sin limitarse a sustituciones alquilo, arilo, halo, oxo, hidroxilo, alquiloxi y/o tio; uno o más anillos fusionados o abiertos; oxidación; y/o reducción.
El apareamiento de bases de nucleótidos alternativos abarca no solo los pares de bases estándar adeninatimina, adenina-uracilo o guanina-citosina, sino también pares de bases formados entre nucleótidos y/o nucleótidos alternativos, incluidas bases no estándar o alternativas, donde la disposición de los donantes de enlaces de hidrógeno y los aceptores de enlaces de hidrógeno permite el enlace de hidrógeno entre una base no estándar y una base estándar o entre dos estructuras de base no estándar complementarias. Un ejemplo de dicho apareamiento de bases no estándar es el apareamiento de bases entre el nucleótido alternativo inosina y adenina, citosina o uracilo.
En algunas realizaciones, la nucleobase es un uracilo alternativo. Las nucleobases y nucleósidos ejemplares que tienen un uracilo alternativo incluyen, 4-pseudouridina (<y>), piridin-4-ona ribonucleósido, 5-aza-uracilo, 6-aza-uracilo, 2-tio-5-aza-uracilo, 2-tio-uracilo (s2U), 4-tio-uracilo (s4U), 4-tio-pseudouridina, 2-tio-pseudouridina, 5-hidroxi-uracilo (ho5U), 5-aminoalil-uracilo, 5-halo-uracilo (por ejemplo, 5-yodo-uracilo o 5-bromo-uracilo), 3-metil-uracilo (m3U), 5-metoxi-uracilo (mo5U), ácido uracil 5-oxiacético (cmo5U), éster metílico del ácido uracil 5-oxiacético (mcmo5U), 5-carboximetil-uracilo (cm5U), 1-carboximetil-pseudouridina, 5-carboxihidroximetiluracilo (chm5U), éster metílico de 5-carboxihidroximetil-uracilo (mchm5U), 5-metoxicarbonilmetil-uracilo (mcm5U), 5-metoxicarbonilmetil-2-tio-uracilo (mcm5s2U), 5-aminometil-2-tio-uracilo (nm5s2U), 5-metilaminometil-uracilo (mnm5U), 5-metilaminometil-2-tio-uracilo (mnm5s2U), 5-metilaminometil-2-selenouracilo (mnm5se2U), 5-carbamoilmetil-uracilo (ncm5U), 5-carboximetilaminometil-uracilo (cmnm5U), 5-carboximetilaminometil-2-tio-uracilo (cmnm5s2U), 5-propinil-uracilo, 1-propinil-pseudouracilo, 5-taurinometiluracilo (ím 5U), 1-taurinometil-pseudouridina, 5-taurinometil-2-tio-uracilo (Tm5s2U), 1-taurinometil-4-tiopseudouridina, 5-metil-uracilo (m5U, es decir, que tiene la nucleobase desoxitimina), 1-metil-pseudouridina (m1Y), 1-etil-pseudouridina (Et1^ ), 5-metil-2-tio-uracilo (m5s2U), 1-metil-4-tio-pseudouridina (m1s4^ ), 4-tio-1-metil-pseudouridina, 3-metil-pseudouridina (m3Y), 2-tio-1-metil-pseudouridina, 1-metil-1-deaza-pseudouridina, 2-tio-1-metil-1-deaza-pseudouridina, dihidrouracilo (D), dihidropseudouridina, 5,6-dihidrouracilo, 5-metildihidrouracilo (m5D), 2-tio-dihidrouracilo, 2-tio-dihidropseudouridina, 2-metoxi-uracilo, 2-metoxi-4-tio-uracilo, 4-metoxi-pseudouridina, 4-metoxi-2-tio-pseudouridina, N1-metil-pseudouridina, 3-(3-amino-3-carboxipropil)uracilo (acp3U), 1-metil-3-(3-amino-3-carboxipropil)pseudouridina (acp3 y ), 5-(isopentenilaminometil)uracilo (inm5U), 5-(isopentenilaminometil)-2-tio-uracilo (inm5s2U), 5,2'-O-dimetil-uridina (m5Um), 2-tio-2'-O-metil-uridina (s2Um), 5-metoxicarbonilmetil-2'-O-metil-uridina (mcm5Um), 5-carbamoilmetil-2'-O-metil-uridina (ncm5Um), 5-carboximetilaminometil-2'-O-metil-uridina (cmnm5Um), 3,2'-O-dimetil-uridina (m3Um), y 5-(isopentenilaminometil)-2'-O-metil-uridina (inm5Um), 1-tio-uracilo, desoxitimidina, 5-(2-carbometoxivinil)-uracilo, 5-(carbamoilhidroximetil)-uracilo, 5-carbamoilmetil-2-tio-uracilo, 5-carboximetil-2-tiouracilo, 5-cianometil-uracilo, 5-metoxi-2-tio-uracilo y 5-[3-(1-E-propenilamino)]uracilo.
En algunas realizaciones, la nucleobase es una citosina alternativa. Las nucleobases y nucleósidos ejemplares que tienen una citosina alternativa incluyen 5-aza-citosina, 6-aza-citosina, pseudoisocitidina, 3-metil-citosina (m3C), N4-acetil-citosina (ac4C), 5-formil-citosina (f5C), N4-metil-citosina (m4C), 5-metil-citosina (m5C), 5-halo-citosina (por ejemplo, 5-yodo-citosina), 5-hidroximetil-citosina (hm5C), 1-metil-pseudoisocitidina, pirrolocitosina, pirrolo-pseudoisocitidina, 2-tio-citosina (s2C), 2-tio-5-metil-citosina, 4-tio-pseudoisocitidina, 4-tio-1-metil-1 -pseudoisocitidina, 4-tio-1 -metil-1 -deaza-pseudoisocitidina, 1 -metil-1 -deaza-pseudoisocitidina, zebularina, 5-aza-zebularina, 5-metil-zebularina, 5-aza-2-tio-zebularina, 2-tio-zebularina, 2-metoxi-citosina, 2-metoxi-5-metil-citosina, 4-metoxi-pseudoisocitidina, 4-metoxi-1-metil-pseudoisocitidina, lisidina (k2C), 5,2'-O-dimetil-citidina (m5Cm), N4-acetil-2'-O-metil-citidina (ac4Cm), N4,2'-O-dimetil-citidina (m4Cm), 5-formil-2'-O-metil-citidina (f5Cm), N4,N4,2'-O-trimetil-citidina (m42Cm), 1 -tio-citosina, 5-hidroxi-citosina, 5-(3-azidopropil)-citosina y 5-(2-azidoetil)-citosina.
En algunas realizaciones, la nucleobase es una adenina alternativa. Las nucleobases y nucleósidos ejemplares que tienen una adenina alternativa incluyen 2-amino-purina, 2,6-diaminopurina, 2-amino-6-halo-purina (por ejemplo, 2-amino-6-cloro-purina), 6-halo-purina (por ejemplo, 6-cloro-purina), 2-amino-6-metil-purina, 8-azidoadenina, 7-deaza-adenina, 7-deaza-8-aza-adenina, 7-deaza-2-amino-purina, 7-deaza-8-aza-2-amino-purina, 7-deaza-2,6-diaminopurina, 7-deaza-8-aza-2,6-diaminopurina, 1-metil-adenina (m1A), 2-metil-adenina (m2A), N6-metil-adenina (m6A), 2-metiltio-N6-metil-adenina (ms2m6A), N6-isopentenil-adenina (i6A), 2-metiltio-N6-isopentenil-adenina (ms2i6A), N6-(cis-hidroxiisopentenil)adenina (io6A), 2-metiltio-N6-(cishidroxiisopentenil)adenina (ms2io6A), N6-glicinilcarbamoil-adenina (g6A), N6-treonilcarbamoil-adenina (t6A), N6-metil-N6-treonilcarbamoil-adenina (m6t6A), 2-metiltio-N6-treonilcarbamoil-adenina (ms2g6A), N6,N6-dimetil-adenina (m62A), N6-hidroxinorvalilcarbamoil-adenina (hn6A), 2-metiltio-N6-hidroxinorvalilcarbamoiladenina (ms2hn6A), N6-acetil-adenina (ac6A), 7-metil-adenina, 2-metiltio-adenina, 2-metoxi-adenina, N6,2'-O-dimetil-adenosina (m6Am), N6,N6,2'-O- trimetil-adenosina (m62Am), 1,2'-O-dimetil-adenosina (m1Am), 2-amino-N6-metil-purina, 1-tio-adenina, 8-azido-adenina, N6-(19-amino-pentaoxanonadecil)-adenina, 2,8-dimetil-adenina, N6-formil-adenina y N6-hidroximetil-adenina.
En algunas realizaciones, la nucleobase es una guanina alternativa. Las nucleobases y nucleósidos ejemplares que tienen una guanina alternativa incluyen inosina (I), 1-metil-inosina (m1l), wiosina (imG), metilwiosina (mimG), 4-demetil-wiosina (imG-14), isowiosina (imG2), wibutosina (yW), peroxiwibutosina (o2yW), hidroxiwibutosina (OHyW), hidroxiwibutosina submodificada (OHyW*), 7-deaza-guanina, queuosina (Q), epoxiqueuosina (oQ), galactosil-queuosina (galQ), manosil-queuosina (manQ), 7-ciano-7-deaza-guanina (preQ0), 7-aminometil-7-deaza-guanina (preQ1), arqueosina (G+), 7-deaza-8-aza-guanina, 6-tio-guanina, 6-tio-7-deaza-guanina, 6-tio-7-deaza-8-aza-guanina, 7-metil-guanina (m7G), 6-tio-7-metil-guanina, 7-metilinosina, 6-metoxi-guanina, 1-metil-guanina (m1G), N2-metil-guanina (m2G), N2,N2-dimetil-guanina (m22G), N2,7-dimetil-guanina (m2,7G), N2,N2,7-dimetil-guanina (m2,2,7G), 8-oxo-guanina, 7-metil-8-oxo-guanina, 1-metil-6-tioguanina, N2-metil-6-tio-guanina, N2,N2-dimetil-6-tio-guanina, N2-metil-2'-O-metil- guanosina (m2Gm), N2,N2-dimetil-2'-O-metil-guanosina (m22Gm), 1-metil-2'-O-metil-guanosina (mlGm), N2,7-dimetil-2'-O-metil-guanosina (m2,7Gm), 2'-O-metil-inosina (Im), 1,2'-O-dimetil-inosina (m1lm), 1-tio-guanina y O-6-metilguanina.
La nucleobase alternativa de un nucleótido puede ser independientemente una purina, una pirimidina, un análogo de purina o de pirimidina. Por ejemplo, la nucleobase puede ser una alternativa a la adenina, citosina, guanina, uracilo o hipoxantina. En otra realización, la nucleobase también puede incluir, por ejemplo, derivados sintéticos y de origen natural de una base, que incluyen pirazolo[3,4-d]pirimidinas, 5-metilcitosina (5-me-C), 5-hidroximetil citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metilo y otros derivados alquilo de adenina y guanina, 2-propilo y otros derivados alquilo de adenina y guanina, 2-tiouracilo, 2-tiotimina y 2-tiocitosina, 5-propinil uracilo y citosina, 6-azo uracilo, citosina y timina, 5-uracilo (pseudouracilo), 4-tiouracilo, 8-halo (por ejemplo, 8-bromo), 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquilo, 8-hidroxilo y otras adeninas y guaninas sustituidas en 8, 5-halo, en particular 5-bromo, 5-trifluorometilo y otros uracilos y citosinas sustituidos en 5, 7-metilguanina y 7-metiladenina, 8-azaguanina y 8-azaadenina, deazaguanina, 7-deazaguanina, 3-deazaguanina, deazaadenina, 7-deazaadenina, 3-deazaadenina, pirazolo[3,4-d]pirimidina, imidazo[1,5-a]1,3,5 triazinonas, 9-deazapurinas, imidazo[4,5-d]pirazinas, tiazolo[4,5-d]pirimidinas, pirazin-2-onas, 1,2,4-triazina, piridazina; o 1,3,5 triazina. Cuando los nucleótidos se representan usando la abreviatura A, G, C, T o U, cada letra se refiere a la base representativa y/o derivados de la misma, por ejemplo, A incluye adenina o análogos de adenina, por ejemplo, 7-deaza adenina).
Alteraciones en el azúcar
Los nucleósidos incluyen una molécula de azúcar (por ejemplo, un azúcar de 5 o 6 carbonos, tal como pentosa, ribosa, arabinosa, xilosa, glucosa, galactosa o un derivado desoxi de las mismas) en combinación con una nucleobase, mientras que los nucleótidos son nucleósidos que contienen un nucleósido y un grupo fosfato o grupo alternativo (por ejemplo, boranofosfato, tiofosfato, selenofosfato, fosfonato, grupo alquilo, amidato y glicerol). Un nucleósido o nucleótido puede ser una especie canónica, por ejemplo, un nucleósido o nucleótido que incluye una nucleobase canónica, azúcar y, en el caso de nucleótidos, un grupo fosfato, o puede ser un nucleósido o nucleótido alternativo que incluye uno o más componentes alternativos. Por ejemplo, los nucleósidos y nucleótidos alternativos pueden alterarse en el azúcar del nucleósido o nucleótido. En algunas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos alternativos incluyen la estructura:
En cada una de las Fórmulas IV, V, VI y VII,
cada uno de m y n es independientemente, un número entero de 0 a 5,
cada uno de U y U' independientemente, es O, S, N(Ru)nu o C(Ru)nu, donde nu es un número entero de 0 a 2 y cada Ru es, independientemente, H, halo o alquilo opcionalmente sustituido;
cada uno de R1', R2', R1'', R2'’, R1, R2, R3, R4 y R5 es, independientemente, si está presente, H, halo, hidroxi, tiol, alquilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, alqueniloxi opcionalmente sustituido, alquiniloxi opcionalmente sustituido, aminoalcoxi opcionalmente sustituido, alcoxialcoxi opcionalmente sustituido, hidroxialcoxi opcionalmente sustituido, amino opcionalmente sustituido, azido, arilo opcionalmente sustituido, aminoalquilo opcionalmente sustituido, aminoalquenilo opcionalmente sustituido, aminoalquinilo opcionalmente sustituido o está ausente; donde la combinación de R3 con uno o más de R1', R2', R1'', R2''o R5, (por ejemplo, la combinación de R1' y R3, la combinación de R1'' y R3, la combinación de R2' y R3, la combinación de R2' y R3 o la combinación de R5 y R3) pueden unirse entre sí para formar alquileno opcionalmente sustituido o heteroalquileno opcionalmente sustituido y, tomado junto con los carbonos a los que están unidos, proporcionar un heterociclilo opcionalmente sustituido (por ejemplo, un heterociclilo bicíclico, tricíclico o tetracíclico); donde la combinación de R5 con uno o más de R1', R2', R1', R2' (por ejemplo, la combinación de R1' y R5, la combinación de R1' y R5, la combinación de R2' y R5, o la combinación de R2' y R5) pueden unirse entre sí para formar alquileno opcionalmente sustituido o heteroalquileno opcionalmente sustituido y, tomado junto con los carbonos a los que están unidos, proporcionar un heterociclilo opcionalmente sustituido (por ejemplo, un heterociclilo cíclico, tricíclico o tetracíclico); y donde la combinación de R4 y uno o más de R1', R2', R1', R2’, R3 o R5 puede unirse entre sí para formar alquileno opcionalmente sustituido o heteroalquileno opcionalmente sustituido y, tomado junto con los carbonos a los que están unidos, proporcionar un heterociclilo opcionalmente sustituido (por ejemplo, un heterociclilo bicíclico, tricíclico o tetracíclico); cada uno de m' y m'' es, independientemente, un número entero de 0 a 3 (por ejemplo, de 0 a 2, de 0 a 1, de 1 a 3 o de 1 a 2);
cada uno de Y1, Y2 e Y3 es,independientemente, O, S, Se, — NRN1— , alquileno opcionalmente sustituido o heteroalquileno opcionalmente sustituido, donde RN1 es H, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o está ausente;
cada Y4 es, independientemente, H, hidroxi, tiol, boranilo, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, alqueniloxi opcionalmente sustituido, alquiniloxi opcionalmente sustituido, tioalcoxi opcionalmente sustituido, alcoxialcoxi opcionalmente sustituido o amino opcionalmente sustituido;
cada Y5 es, independientemente, O, S, Se, alquileno opcionalmente sustituido (por ejemplo, metileno) o heteroalquileno opcionalmente sustituido; y
B es una nucleobase, ya sea modificada o no modificada. En algunas realizaciones, el grupo 2'-hidroxi (OH) se puede modificar o reemplazar con u número de sustituyentes diferentes. Las sustituciones ejemplares en la posición 2' incluyen, pero sin limitarse a, H, azido, halo (por ejemplo, fluoro), alquilo C<1 -6>opcionalmente sustituido (por ejemplo, metilo); alcoxi Ci-6 opcionalmente sustituido (por ejemplo, metoxi o etoxi); ariloxi C<6 -1 0>opcionalmente sustituido; cicloalquilo C<3 -8>opcionalmente sustituido; alcoxi C<1 -6>-arilo C<6 -10>opcionalmente sustituido, (heterociclil)oxi C<1 -12>opcionalmente sustituido; un azúcar (por ejemplo, ribosa, pentosa o cualquiera de las descritas en esta invención); un polietilenglicol (PEG),
O(CH<2>CH<2>O)nCH<2>CH<2>OR, donde R es H o alquilo opcionalmente sustituido, y n es un número entero de 0 a 20 (por ejemplo, de 0 a 4, de 0 a 8, de 0 a 10, de 0 a 16, de 1 a 4, de 1 a 8, de 1 a 10, de 1 a 16, de 1 a 20, de 2 a 4, de 2 a 8, de 2 a 10, de 2 a 16, de 2 a 20, de 4 a 8, de 4 a 10, de 4 a 16 y de 4 a 20); ácidos nucleicos "bloqueados" (LNA) en los que el 2'-hidroxi está conectado por un puente de alquileno C<1 -6>o heteroalquileno C<1 -6>al carbono 4' del mismo azúcar ribosa, donde los puentes ejemplares incluyen puentes metilo, propileno, éter o amino; aminoalquilo, como se define en esta invención; aminoalcoxi, como se define en esta invención; y aminoácido, como se define en esta invención.
Generalmente, el ARN incluye el grupo de azúcar ribosa, que es un anillo de 5 miembros que tiene un oxígeno. Los nucleótidos alternativos no limitantes ejemplares incluyen el reemplazo del oxígeno en la ribosa (por ejemplo, con S, Se, o alquileno, tal como metileno o etileno); la adición de un enlace doble (por ejemplo, para reemplazar la ribosa con ciclopentenilo o ciclohexenilo); la contracción anular de la ribosa (por ejemplo, para formar un anillo de 4 miembros de ciclobutano u oxetano); la expansión anular de la ribosa (por ejemplo, para formar un anillo de 6 o 7 miembros que tiene un carbono o heteroátomo adicional, tal como para anhidrohexitol, altritol, manitol, ciclohexanilo, ciclohexenilo y morfolino (que también tiene una estructura principal de fosforamidato)); formas multicíclicas (por ejemplo, formas triciclo y "desbloqueadas", tal como ácido nucleico de glicol (GNA), R-GNA o S-GNA, donde la ribosa se reemplaza por unidades de glicol unidas a enlaces fosfodiéster), ácido nucleico de treosa (TNA, donde la ribosa se reemplaza por a-L-treofuranosil-(3'^2')), y ácido nucleico peptídico (PNA, donde los enlaces 2-amino-etil-glicina reemplazan la estructura de fosfodiéster y ribosa).
En algunas realizaciones, el grupo de azúcar contiene uno o más carbonos que poseen la configuración estereoquímica opuesta del carbono correspondiente en la ribosa. Por lo tanto, una molécula de polinucleótido puede incluir nucleótidos que contienen, por ejemplo, arabinosa o L-ribosa, como el azúcar.
En algunas realizaciones, el polinucleótido incluye al menos un nucleósido donde el azúcar es L-ribosa, 2'-O-metil-ribosa, 2'-fluoro-ribosa, arabinosa, hexitol, un LNA o un PNA.
Alteraciones en el enlace intemudeosídico
Los nucleótidos alternativos se pueden alterar en el enlace intemucleosídico (por ejemplo, estructura principal de fosfato). En esta invención, en el contexto de la estructura principal del polinucleótido, los términos "fosfato" y "fosfodiéster" se utilizan indistintamente. Los grupos fosfato de la estructura principal se pueden alterar reemplazando uno o más de los átomos de oxígeno con un sustituyente diferente.
Los nucleótidos alternativos pueden incluir el reemplazo total de un resto de fosfato inalterado con otro enlace intemucleosídico tal como se describe en esta invención. Los ejemplos de grupos fosfato alternativos incluyen, pero sin limitarse a, fosforotioato, fosforoselenatos, boranofosfatos, ésteres de boranofosfato, hidrogenofosfonatos, fosforamidatos, fosforodiamidatos, fosfonatos de alquilo o arilo y fosfotriésteres. Los fosforoditioatos tienen ambos oxígenos no enlazantes reemplazados por azufre. El enlazador de fosfato también se puede alterar mediante el reemplazo de un oxígeno de enlace con nitrógeno (fosforamidatos en puente), azufre (fosforotioatos en puente) y carbono (metileno-fosfonatos en puente).
Los nucleósidos y nucleótidos alternativos pueden incluir el reemplazo de uno o más de los óxidos que no forman puentes con un resto de borano (BH<3>), azufre (tio), metilo, etilo y/o metoxi. Como un ejemplo no limitante, dos oxígenos que no forman puentes en la misma posición (por ejemplo, la posición alfa (a), beta (p) o gamma (<y>)) pueden reemplazarse con un azufre (tio) y un metoxi.
El reemplazo de uno o más de los átomos de oxígeno en la posición a del resto fosfato (por ejemplo, atiofosfato) se proporciona para conferir estabilidad (tal como contra exonucleasas y endonucleasas) al ARN y ADN a través de los enlaces de estructura principal de fosforotioato no naturales. El ADN y el ARN de fosforotioato tienen una mayor resistencia a las nucleasas y, posteriormente, una semivida más larga en un entorno celular.
En esta invención se describen otros enlaces intemucleosídicos que se pueden emplear según la presente descripción, incluyendo enlaces intemucleosídicos que no contienen un átomo de fósforo.
Sitios internos de entrada al ribosoma
Los polinucleótidos pueden contener un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES). Un IRES puede actuar como el único sitio de unión al ribosoma, o puede servir como uno de los múltiples sitios de unión al ribosoma de un ARNm. Un polinucleótido que contiene más de un sitio de unión al ribosoma funcional puede codificar varios péptidos o polipéptidos que se traducen independientemente por los ribosomas (por ejemplo, ARNm multicistrónico). Cuando se proporcionan polinucleótidos con un IRES, opcionalmente se proporciona además una segunda región traducible. Los ejemplos de secuencias IRES que se pueden usar según la presente descripción incluyen, sin limitación, los de picomavirus (por ejemplo, FMDV), virus de plagas (CFFV), virus de la poliomielitis (PV), virus de la encefalomiocarditis (ECMV), virus de la fiebre aftosa (FMDV), virus de la hepatitis C (HCV), virus de la peste porcina clásica (CSFV), virus de la leucemia murina (MLV), virus de la inmunodeficiencia de los simios (SIV) o virus de la parálisis del grillo (CrPV).
Estructura del casquete 5'
Un polinucleótido (por ejemplo, un ARNm) puede incluir una estructura de casquete 5'. La estructura de casquete 5' de un polinucleótido está involucrada en la exportación nuclear y en el aumento de la estabilidad del polinucleótido y se une a la proteína de unión al casquete de ARNm (CBP), que es responsable de la estabilidad del polinucleótido en la célula y la competencia de traducción a través de la asociación de CBP con la proteína de unión a poli-A para formar la especie de ARNm cíclico maduro. El casquete ayuda además a la eliminación de intrones proximales 5' durante el splicing (empalme) de ARNm.
Las moléculas de polinucleótidos endógenas pueden tener un grupo de bloqueo en el extremo 5' que genera un enlace 5'-ppp-5'-trifosfato entre un residuo de casquete de guanosina terminal y el nucleótido sentido transcrito 5' terminal del polinucleótido. Este casquete de 5'-guanilato se puede metilar a continuación para generar un residuo de N7-metil-guanilato. Los azúcares ribosa de los nucleótidos transcritos terminales y/o anteterminales del extremo 5' del polinucleótido también pueden estar opcionalmente 2'-O-metilados. El desbloqueo de 5' a través de hidrólisis y escisión de la estructura de casquete de guanilato puede dirigirse a una molécula de polinucleótido, tal como una molécula de ARNm, para su degradación.
Las alteraciones de polinucleótidos pueden generar una estructura de casquete no hidrolizable que evita el desbloqueo y, por lo tanto, aumenta la semivida del polinucleótido. Debido a que la hidrólisis de la estructura del casquete requiere la escisión de los enlaces fosforodiéster 5'-ppp-5', se pueden usar nucleótidos alternativos durante la reacción de bloqueo. Por ejemplo, se puede usar una enzima de recubrimiento de Vaccinia de New England Biolabs (Ipswich, MA) con nucleótidos de a-tio-guanosina según las instrucciones del fabricante para crear un enlace fosforotioato en el casquete 5'-ppp-5'.
Se pueden usar nucleótidos de guanosina alternativos adicionales tales como nucleótidos de a-metil-fosfonato y seleno-fosfato.
Las alteraciones adicionales incluyen, pero sin limitarse a, 2'-O-metilación de los azúcares ribosa de nucleótidos 5'-terminales y/o 5'-anteterminales del polinucleótido (como se mencionó anteriormente) en el grupo 2'-hidroxi del azúcar. Se pueden utilizar múltiples estructuras de casquete 5' distintas para generar el casquete 5' de un polinucleótido, tal como una molécula de ARNm. Las estructuras de casquete 5' incluyen las descritas en las publicaciones de patente internacional n.° WO2008127688, WO 2008016473 y WO 2011015347.
Los análogos de casquete, que en esta invención también se denominan análogos de casquete sintéticos, casquetes químicos, análogos de casquete químicos o análogos de casquete estructurales o funcionales, difieren de los casquetes 5' naturales (es decir, endógenos, de tipo salvaje o fisiológicos) en su estructura química, mientras que conservan la función de casquete. Los análogos de casquete pueden sintetizarse química (es decir, no enzimáticamente) o enzimáticamente y/o unirse a un polinucleótido.
Por ejemplo, el casquete Anti-Reverse Cap Analog (ARCA) contiene dos guanosinas unidas por un grupo 5'-5'-trifosfato, donde una guanosina contiene un grupo N7-metilo, así como un grupo 3'-O-metilo (es decir, N7,3'-O-dimetil-guanosina-5'-trifosfato-5'-guanosina, m7G-3'mppp-G, que puede designarse de manera equivalente 3' O-Me-m7G(5')ppp(5')G). El átomo 3'-O de la otra guanosina inalterada se une al nucleótido 5' terminal del polinucleótido bloqueado (por ejemplo, un ARNm). La guanosina N7- y 3'-O-metilada proporciona el resto terminal del polinucleótido bloqueado (por ejemplo, ARNm).
Otro casquete ejemplar es mCAP, que es similar a ARCA pero tiene un grupo 2'-O-metilo en la guanosina (es decir, N7,2'-O-dimetil-guanosina-5'-trifosfato-5'-guanosina, m7Gm- PPP-G).
Un casquete puede ser un análogo de casquete de dinucleótido. Como un ejemplo no limitante, el análogo de casquete de dinucleótido puede modificarse en diferentes posiciones de fosfato con un grupo boranofosfato o un grupo fosforoselenoato, tal como los análogos de casquete de dinucleótido descritos en la patente estadounidense n.° 8.519.110.
De manera alternativa, un análogo de casquete puede ser un análogo de casquete de dinucleótido sustituido con N7-(4-clorofenoxietilo) conocido en la técnica y/o descrito en esta invención. Los ejemplos no limitantes de análogos de casquete de dinucleótido sustituidos con N7-(4-clorofenoxietil) incluyen un análogo de casquete de N7-(4-clorofenoxietil)-G(5')ppp(5')G y un análogo de casquete de N7-(4-clorofenoxietil)-m3'-OG(5')ppp(5')G (véase, por ejemplo, los diversos análogos de casquete y los procedimientos de síntesis de análogos de casquete descritos en Kore y col. Bioorganic & Medicinal Chemistry 2013 21:4570-4574). En otros casos, un análogo de casquete útil en los polinucleótidos de la presente descripción es un análogo de 4-cloro/bromofenoxietilo.
Mientras que los análogos de casquete permiten el bloqueo concomitante de un polinucleótido en una reacción de transcripción in vitro, hasta el 20 % de los transcritos permanecen sin grupo de bloqueo. Esto, así como las diferencias estructurales de un análogo de casquete de estructuras endógenas de casquete 5' de polinucleótidos producidos por la maquinaria de transcripción celular endógena, puede conducir a una capacidad de traducción reducida y una menor estabilidad celular.
Los polinucleótidos alternativos también pueden bloquearse después de la transcripción, usando enzimas, con el fin de generar estructuras de casquete 5' más auténticas Como se usa en esta invención, la expresión "más auténtica" se refiere a una característica que refleja o imita estrechamente, ya sea estructural o funcionalmente, una característica endógena o de tipo salvaje. Es decir, una característica "más auténtica" es mejor representativa de una función y/o estructura celular endógena, de tipo salvaje, natural o fisiológica en comparación con las características sintéticas o análogas de la técnica anterior, o que supera la característica endógena, de tipo salvaje, natural o fisiológica correspondiente en uno o más aspectos. Los ejemplos no limitantes de estructuras de casquete 5' más auténticas útiles en los polinucleótidos de la presente descripción son aquellas que, entre otras cosas, tienen una unión mejorada de las proteínas de unión al casquete, una mayor semivida, una susceptibilidad reducida a las 5'-endonucleasas y/o una reducción del desbloqueo de 5', en comparación con las estructuras de casquete 5' sintéticas conocidas en la técnica (o a una estructura de casquete 5' de tipo salvaje, natural o fisiológica). Por ejemplo, la enzima de bloqueo del virus de la Vaccinia recombinante y la enzima 2'-O-metiltransferasa recombinante pueden crear un enlace 5'-5'-trifosfato canónico entre el nucleótido 5'-terminal de un polinucleótido y un nucleótido de casquete de guanosina donde la guanosina de casquete contiene una N7-metilación y el nucleótido 5'-terminal del polinucleótido contiene un 2'-O-metilo. Tal estructura se denomina la estructura Cap1. Esta casquete da como resultado una mayor competencia de traducción, estabilidad celular y una activación reducida de citocinas proinflamatorias celulares, en comparación, por ejemplo, con otras estructuras análogas de casquete 5' conocidas en la técnica. Otras estructuras de casquete ejemplares incluyen 7mG(5')ppp(5')N, pN2p (Cap 0), 7mG(5')ppp(5')NlmpNp (Cap 1), 7mG(5')-ppp(5')NlmpN2mp (Cap 2) y m(7) Gpppm (3)(6,6,2')Apm(2')Apm(2')Cpm(2)(3,2')Up (Cap 4).
Debido a que los polinucleótidos alternativos pueden bloquearse después de la transcripción, y debido a que este procedimiento es más eficiente, casi el 100 % de los polinucleótidos alternativos pueden ser bloqueados. Esto contrasta con el -80 % cuando un análogo de casquete está unido a un polinucleótido en el curso de una reacción de transcripción in vitro. Los casquetes 5' terminales pueden incluir casquetes endógenos o análogos de casquetes. Un casquete terminal 5' puede incluir un análogo de guanosina. Los análogos de guanosina útiles incluyen inosina, N1-metil-guanosina, 2'-fluoro-guanosina, 7-deaza-guanosina, 8-oxo-guanosina, 2-amino-guanosina, LNA-guanosina, y 2-azido-guanosina.
En algunos casos, un polinucleótido contiene un casquete 5' modificado. Una modificación en el casquete 5' puede aumentar la estabilidad del polinucleótido, aumentar la semivida del polinucleótido y podría aumentar la eficiencia de traducción del polinucleótido. El casquete 5' modificado puede incluir, pero sin limitarse a, una o más de las siguientes modificaciones: modificación en la posición de 2' y/o 3' de un trifosfato de guanosina bloqueado (GTP), un reemplazo del oxígeno del anillo de azúcar (que produjo el anillo carbocíclico) con un resto de metileno (CH<2>), una modificación en el resto de puente trifosfato de la estructura del casquete, o una modificación en el resto de la nucleobase (G).
5-UTR
Se puede proporcionar una 5'-UTR como una región flanqueante para polinucleótidos (por ejemplo, ARNm).Una 5'-UTR puede ser homóloga o heteróloga a la región codificante que se encuentra en un polinucleótido. Pueden incluirse múltiples 5'-UTR en la región flanqueante y pueden ser iguales o de diferentes secuencias. Cualquier parte de las regiones flanqueantes, incluyendo ninguna, puede optimizarse por codones y cualquiera puede contener independientemente una o más alteraciones estructurales o químicas diferentes, antes y/o después de la optimización por codones.
Se muestra en la Tabla 21 de la solicitud provisional estadounidense n.° 61/775.509, y en la Tabla 21 y en la Tabla 22 de la solicitud provisional estadounidense n.° 61/829.372, una lista del sitio de inicio y finalización de polinucleótidos alternativos (por ejemplo, ARNm). En la Tabla 21 cada 5'-UTR (5'-UTR-005 a 5'-UTR 68511) se identifica por su sitio de inicio y finalización en relación con su transcripción nativa o de tipo salvaje (homóloga) (ENST; el identificador utilizado en la base de datos ENSEMBL).
Para alterar una o más propiedades de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm), se pueden modificar por ingeniería genética las 5'-UTR que son heterólogas a la región codificante de un polinucleótido alternativo (por ejemplo, ARNm). A continuación, los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) pueden administrarse a células, tejidos u organismos y los resultados tales como nivel de proteína, localización y/o semivida pueden medirse para evaluar los efectos beneficiosos que la 5'-UTR heteróloga puede tener sobre los polinucleótidos alternativos (ARNm). Las variantes de las 5'-UTR se pueden utilizar donde uno o más nucleótidos se añaden o eliminan de los extremos, incluyendo A, T, C o G. Las 5'-UTR también se pueden optimizar con codones, o alterar de cualquier manera descrita en esta invención.
5-UTR, 3-UTR y elementos potenciadores de la traducción (TEE)
La 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir al menos un elemento potenciador de la traducción. La expresión "elemento potenciador de la traducción" se refiere a secuencias que aumentan la cantidad de polipéptido o proteína producida a partir de un polinucleótido. Como un ejemplo no limitante, el TEE puede estar ubicado entre el promotor de transcripción y el codón de inicio. Los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) con al menos un TEE en la 5'-UTR pueden incluir un casquete en la 5'-UTR. Además, al menos un TEE puede estar ubicado en la 5'-UTR de polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) que se someten a traducción dependiente de casquete o independiente de casquete.
En un aspecto, los TEE son elementos conservados en la UTR que pueden promover la actividad de traducción de un polinucleótido tal como, pero sin limitarse a, traducción dependiente del casquete o independiente del casquete. La conservación de estas secuencias ha sido demostrada previamente por Panek y col. (Nucleic Acids Research, 2013, 1-10) en 14 especies, incluidos los seres humanos.
En un ejemplo no limitante, los TEE conocidos pueden estar en el líder 5' de la proteína de homeodominio Gtx (Chappell y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004).
En otro ejemplo no limitante, los TEE se describen como SEQ ID NO: 1-35 en la publicación de patente estadounidense n.° 2009/0226470, SEQ ID NO: 1-35 en la publicación de patente estadounidense n.° 2013/0177581, SEQ ID NO: 1-35 en la publicación de patente internacional n.° WO2009/075886, SEQ ID NO: 1-5 y 7-645 en la publicación de patente internacional n.° WO2012/009644, SEQ ID NO: 1 en la publicación de patente internacional n.° WO 1999/024595, SEQ ID NO: 1 en la patente estadounidense n.° 6.310.197 y SEQ ID NO: 1 en la patente estadounidense n.° 6.849.405.
En otro ejemplo no limitante más, el TEE puede ser un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES), HCV-IRES o un elemento IRES tal como, pero sin limitarse a, los descritos en la patente estadounidense n.° 7.468.275, las publicaciones de patente estadounidense n.° 2007/0048776 y 2011/0124100 y las publicaciones de patente internacional n.° WO2007/025008 y WO2001/055369. Los elementos IRES pueden incluir, pero sin limitarse a, las secuencias Gtx (por ejemplo, Gtx9-nt, Gtx8-nt, Gtx7-nt) descritas por Chappell y col. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004) y Zhou y col. (PNAS 102: 6273-6278, 2005) y en las publicaciones de patentes estadounidenses n.° 2007/0048776 y 2011/0124100 y la publicación de patente internacional n.° WO2007/025008.
Los "polinucleótidos potenciadores de la traducción" son polinucleótidos que incluyen uno o más de los TEE específicos ejemplificados en esta invención y/o descritos en la técnica (véase, por ejemplo, las patentes estadounidenses n.° 6.310.197, 6.849.405, 7.456.273, 7.183.395, las publicaciones de patentes estadounidenses n.° 20090/226470, 2007/0048776, 2011/0124100, 2009/0093049, 2013/0177581, las publicaciones de patentes internacionales n.° WO2009/075886, WO2007/025008, WO2012/009644, WO2001/055371
WO 1999/024595, y las patentes europeas n.° 2610341 y 2610340) o sus variantes, homólogos o derivados funcionales. Una o múltiples copias de un TEE específico pueden estar presentes en un polinucleótido (por ejemplo, ARNm). Los TEE en los polinucleótidos potenciadores de la traducción pueden organizarse en uno o más segmentos de secuencia. Un segmento de secuencia puede albergar uno o más de los TEE específicos ejemplificados en esta invención, con cada TEE presente en una o más copias.
Cuando múltiples segmentos de secuencia están presentes en un polinucleótido potenciador de la traducción, pueden ser homogéneos o heterogéneos. Por lo tanto, los múltiples segmentos de secuencia en un polinucleótido potenciador de la traducción pueden albergar tipos idénticos o diferentes de los TEE específicos ejemplificados en esta invención, número idéntico o diferente de copias de cada uno de los TEE específicos y/u organización idéntica o diferente de los TEE dentro de cada segmento de secuencia.
Un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir al menos un TEE que se describe en las publicaciones de patentes internacionales n.° WO 1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886, WO2007/025008, WO1999/024595, las publicaciones de patentes europeas n.° 2610341 y 2610340, las patentes estadounidenses n.° 6.310.197, 6.849.405, 7.456.273, 7.183.395 y las publicaciones de patentes estadounidenses n.° 2009/0226470, 2011/0124100, 2007/0048776, 2009/0093049 y 2013/0177581. El TEE puede estar ubicado en la 5'-UTR de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm)
Un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir al menos un TEE que tiene al menos el 50 %, al menos el 55 %, al menos el 60 %, al menos el 65 %, al menos el 70 %, al menos el 75 %, al menos el 80 %, al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 95 % o al menos el 99 % de identidad con los TEE descritos en las publicaciones de patente estadounidenses n.° 2009/0226470, 2007/0048776, 2013/0177581 y 2011/0124100, las publicaciones de patente internacional n.° WO1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886 y WO2007/025008, las publicaciones de patente europea n.° 2610341 y 2610340, las patentes estadounidenses n.° 6.310.197, 6.849.405, 7.456.273, 7.183.395.
La 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir al menos 1, al menos 2, al menos 3, al menos 4, al menos 5, al menos 6, al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 16, al menos 17, al menos 18 al menos 19, al menos 20, al menos 21, al menos 22, al menos 23, al menos 24, al menos 25, al menos 30, al menos 35, al menos 40, al menos 45, al menos 50, al menos 55 o más de 60 secuencias TEE. Las secuencias TEE en la 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) pueden ser las mismas o diferentes secuencias TEE. Las secuencias TEE pueden estar en un patrón tal como AB AB AB, AABBAABBAABB o ABCABCABC, o variantes de las mismas, repetidas una, dos o más de tres veces. En estos patrones, cada letra, A, B o C representa una secuencia TEE diferente a nivel de nucleótido.
En algunos casos, la 5'-UTR puede incluir un espaciador para separar dos secuencias TEE. Como un ejemplo no limitante, el espaciador puede ser un espaciador de 15 nucleótidos y/u otros espaciadores conocidos en la técnica. Como otro ejemplo no limitante, la 5'-UTR puede incluir un módulo espaciador de secuencia TEE repetido al menos una vez, al menos dos veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces o más de 9 veces en la 5-UTR.
En otros casos, el espaciador que separa dos secuencias TEE puede incluir otras secuencias conocidas en la técnica que pueden regular la traducción de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) de la presente descripción tal como, pero sin limitarse a, secuencias miR (por ejemplo, sitios de unión miR y semillas miR). Como un ejemplo no limitante, cada espaciador utilizado para separar dos secuencias TEE puede incluir una secuencia miR o un componente de una secuencia miR diferente (por ejemplo, secuencia semilla de miR).
En algunos casos, el TEE en la 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir al menos el 5 %, al menos el 10 %, al menos el 15 %, al menos el 20 %, al menos el 25 %, al menos el 30 %, al menos el 35 %, al menos el 40 %, al menos el 45 %, al menos el 50 %, al menos el 55 %, al menos el 60 %, al menos el 65 %, al menos el 70 %, al menos el 75 %, al menos el 80 %, al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 95 %, al menos el 99 % o más del 99 % de las secuencias TEE descritas en las publicaciones de patente estadounidenses n .° 2009/0226470, 2007/0048776, 2013/0177581 y 2011/0124100, publicaciones de patente internacional n.°
WO 1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886 y W02007/025008, las publicaciones de patente europea n.° 2610341 y 2610340, y las patentes estadounidenses n.° 6.310.197, 6.849.405, 7.456.273 y 7.183.395. En otra realización, el TEE en la 5'-UTR de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) de la presente descripción puede incluir un fragmento de 5-30 nucleótidos, un fragmento de 5-25 nucleótidos, un fragmento de 5-20 nucleótidos, un fragmento de 5-15 nucleótidos, un fragmento de 5-10 nucleótidos de las secuencias TEE descritas en las publicaciones de patentes estadounidenses n.° 2009/0226470, 2007/0048776, 2013/0177581 y 2011/0124100, las publicaciones de patentes internacionales n.° WO 1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886 y W02007/025008, las publicaciones de patentes europeas n.° 2610341 y 2610340, y las patentes estadounidenses n.° 6.310.197, 6.849.405, 7.456.273 y 7.183.395.
En determinados casos, el TEE en la 5'-UTR de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) de la presente descripción puede incluir al menos el 5 %, al menos el 10 %, al menos el 15 %, al menos el 20 %, al menos el 25 %, al menos el 30 %, al menos el 35 %, al menos el 40 %, al menos el 45 %, al menos el 50 %, al menos el 55 %, al menos el 60 %, al menos el 65 %, al menos el 70 %, al menos el 75 %, al menos el 80 %, al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 95 %, al menos el 99 % o más del 99 % de las secuencias de TEE descritas en Chappell y col. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004) y Zhou y col. (PNAS 102:6273-6278, 2005), en la Tabla complementaria 1 y en la Tabla complementaria 2 descrita por Wellensiek y col (Genome-wide profiling of human cap-independent translation-enhancing elements, Nature Methods, 2013; DOE10.1038/NMETH.2522). En otra realización, el TEE en la 5'-UTR de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) de la presente descripción puede incluir un fragmento de 5-30 nucleótidos, un fragmento de 5-25 nucleótidos, un fragmento de 5-20 nucleótidos, un fragmento de 5-15 nucleótidos, un fragmento de 5-10 nucleótidos de las secuencias TEE descritas en Chappell y col. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004) y Zhou y col. (PNAS 102:6273-6278, 2005), en la Tabla complementaria 1 y en la Tabla complementaria 2 descrita por Wellensiek y col (Genome-wide profiling of human cap-independent translation-enhancing elements, Nature Methods, 2013; DOI: 10.1038/NMETH.2522).
En algunos casos, el TEE utilizado en la 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) es una secuencia IRES tal como, pero sin limitarse a, las descritas en la patente estadounidense n.° 7.468.275 y la publicación de patente internacional n.° WO2001/055369.
En algunos casos, los TEE utilizados en la 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) se pueden identificar mediante los procedimientos descritos en las publicaciones de patente estadounidenses n.° 2007/0048776 y 2011/0124100 y en las publicaciones de patente internacional n.° WO2007/025008 y WO2012/009644.
En algunos casos, los TEE utilizados en la 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) de la presente descripción pueden ser un elemento regulador de la transcripción descrito en las patentes estadounidenses n.° 7.456.273 y 7.183.395, la publicación de patente estadounidense n.° 2009/0093049 y la publicación internacional n .° WO2001/055371. Los elementos reguladores de la transcripción se pueden identificar mediante procedimientos conocidos en la técnica, tales como, pero sin limitarse a, los procedimientos descritos en las patentes estadounidenses n.° 7.456.273 y 7.183.395, la publicación de patente estadounidense n .° 2009/0093049 y la publicación internacional n .° WO2001/055371.
En otros casos más, el TEE utilizado en la 5'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) es un polinucleótido o una parte del mismo como se describe en las patentes estadounidenses n.° 7.456.273 y 7.183.395, publicación de patente estadounidense n.° 2009/0093049 y publicación internacional n.° WO2001/055371.
La 5'-UTR que incluye al menos un TEE descrito en esta invención puede incorporarse en una secuencia monocistrónica tal como, pero sin limitarse a, un sistema de vectores o un vector de polinucleótidos. Como un ejemplo no limitante, los sistemas de vectores y vectores de polinucleótidos pueden incluir los descritos en las patentes estadounidenses n.° 7.456.273 y 7.183.395, las publicaciones de patentes estadounidenses n.° 2007/0048776, 2009/0093049 y 2011/0124100, y las publicaciones de patentes internacionales n.° W02007/025008 y WO2001/055371.
Los TEE descritos en esta invención pueden estar ubicados en la 5'-UTR y/o la 3'-UTR de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) Los TEE ubicados en la 3'-UTR pueden ser iguales y/o diferentes a los TEE ubicados en y/o descritos para su incorporación en la 5'-UTR.
En algunos casos, la 3'-UTR de un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir al menos 1, al menos 2, al menos 3, al menos 4, al menos 5, al menos 6 , al menos 7, al menos 8 , al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 16, al menos 17, al menos 18 al menos 19, al menos 20, al menos 21, al menos 22, al menos 23, al menos 24, al menos 25, al menos 30, al menos 35, al menos 40, al menos 45, al menos 50, al menos 55 o más de 60 secuencias TEE. Las secuencias TEE en la 3'-UTR de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) de la presente descripción pueden ser las mismas o diferentes secuencias TEE. Las secuencias<t>E<e>pueden estar en un patrón tal como AB AB AB, AABBAABBAABB o ABCABCABC, o variantes de las mismas, repetidas una, dos o más de tres veces. En estos patrones, cada letra, A, B o C representa una secuencia TEE diferente a nivel de nucleótido.
En un caso, la 3'-UTR puede incluir un espaciador para separar dos secuencias TEE.
Como un ejemplo no limitante, el espaciador puede ser un espaciador de 15 nucleótidos y/u otros espaciadores conocidos en la técnica. Como otro ejemplo no limitante, la 3'-UTR puede incluir un módulo espaciador de secuencia TEE repetido al menos una vez, al menos dos veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces o más de 9 veces en la 3'-UTR.
En otros casos, el espaciador que separa dos secuencias TEE puede incluir otras secuencias conocidas en la técnica que pueden regular la traducción de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) de la presente descripción tal como, pero sin limitarse a, secuencias miR descritas en esta invención (por ejemplo, sitios de unión miR y semillas miR). Como un ejemplo no limitante, cada espaciador utilizado para separar dos secuencias TEE puede incluir una secuencia miR o un componente de una secuencia miR diferente (por ejemplo, secuencia semilla de miR).
En otros casos más, la incorporación de una secuencia miR y/o una secuencia TEE cambia la forma de la región de bucle en horquilla que puede aumentar y/o disminuir la traducción (véase, por ejemplo, Kedde y col. Un interruptor de estructura de ARN inducido por Pumilio enp27-3 'UTR controla la accesibilidad de miR-221 y miR-22. Nature Cell Biology. 2010).
Bucles en horquilla
Los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) pueden incluir un bucle en horquilla tal como, pero sin limitarse a, un bucle en horquilla de histona. El bucle en horquilla puede ser una secuencia de nucleótidos que tiene alrededor de 25 o alrededor de 26 nucleótidos de longitud tal como, pero sin limitarse a, SEQ ID NO: 7-17 como se describe en la publicación de patente internacional n.° WO2013/103659. El bucle en horquilla de histona puede estar ubicado en la región codificante en relación con 3' (por ejemplo, en el extremo 3' de la región codificante). Como un ejemplo no limitante, el bucle en horquilla puede estar ubicado en el extremo 3' de un polinucleótido descrito en esta invención. En algunos casos, un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) incluye más de un bucle en horquilla (por ejemplo, dos bucles en horquilla). Los ejemplos de secuencias de bucle en horquilla se describen en las publicaciones de patente internacional n.° WO2012/019780 y WO2015/02667. En algunos casos, un polinucleótido incluye la secuencia de bucle en horquilla CAAAGGCTCTTTCAGAGCCACCA (SEQ ID NO: 5). En otros, un polinucleótido incluye la secuencia de bucle en horquilla CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA (SEQ ID NO: 6 ).
Un bucle en horquilla puede estar ubicado en una segunda región terminal de un polinucleótido. Como un ejemplo no limitante, el bucle en horquilla puede estar ubicado dentro de una región no traducida (por ejemplo, 3''-UTR) en una segunda región terminal.
En algunos casos, un polinucleótido tal como, pero sin limitarse a ARNm, que incluye el bucle en horquilla de histona se puede estabilizar mediante la adición de una región 3'-estabilizadora (por ejemplo, una región 3"-estabilizadora que incluye al menos un nucleósido de terminación de cadena). Sin desear limitarse a la teoría, la adición de al menos un nucleósido de terminación de cadena puede retrasar la degradación de un polinucleótido y, por lo tanto, puede aumentar la semivida del polinucleótido.
En otros casos, un polinucleótido tal como, pero sin limitarse a ARNm, que incluye el bucle en horquilla de histona se puede estabilizar mediante una alteración en la región 3' del polinucleótido que puede prevenir y/o inhibir la adición de oligio (U) (véase, por ejemplo, la publicación de patente internacional n.° WO2013/103659).
En otros casos más, un polinucleótido tal como, pero sin limitarse a, ARNm, que incluye el bucle en horquilla de histona puede estabilizarse mediante la adición de un oligonucleótido que termina en un 3'-desoxinucleósido, 2',3'-didesoxinucleósido 3'-O-metilnucleósidos, 3'-O-etilnucleósidos, 3'-arabinósidos y otros nucleósidos alternativos conocidos en la técnica y/o descritos en esta invención.
En algunos casos, los polinucleótidos de la presente descripción pueden incluir un bucle en horquilla de histona, una región poli-A y/o una estructura de casquete 5'. El bucle en horquilla de histona puede estar antes y/o después de la región poli-A. Los polinucleótidos que incluyen el bucle en horquilla de histona y una secuencia de región poli-A pueden incluir un nucleósido de terminación de cadena descrito en esta invención.
En otros casos, los polinucleótidos de la presente descripción pueden incluir un bucle en horquilla de histona y una estructura de casquete 5'. La estructura de casquete 5' puede incluir, pero sin limitarse a, las descritas en esta invención y/o conocidas en la técnica.
En algunos casos, la región de bucle en horquilla conservada puede incluir una secuencia miR descrita en esta invención. Como un ejemplo no limitante, la región de bucle en horquilla puede incluir la secuencia semilla de una secuencia miR descrita en esta invención. En otro ejemplo no limitante, la región de bucle en horquilla puede incluir una secuencia semilla de miR-122.
En determinados casos, la región de bucle en horquilla conservada puede incluir una secuencia miR descrita en esta invención y también puede incluir una secuencia TEE.
En algunos casos, la incorporación de una secuencia miR y/o una secuencia TEE cambia la forma de la región de bucle en horquilla que puede aumentar y/o disminuir la traducción. (Véase, por ejemplo, Kedde y col. Un interruptor de estructura de ARN inducido por Pumilio enp27-3'UTR controla la accesibilidad de miR-221 y miR-22. Nature Cell Biology. 2010).
Los polinucleótidos pueden incluir al menos un bucle en horquilla de histona y una región poli-A o señal de poliadenilación. Los ejemplos no limitantes de secuencias de polinucleótidos que codifican para al menos un bucle en horquilla de histona y una región poli-A o una señal de poliadenilación se describen en la publicación de patente internacional n.° WO2013/120497, WO2013/120629, WO2013/120500, WO2013/120627,WO2013/120498, WO2013/120626, WO2013/120499 y WO2013/120628. En determinados casos, el polinucleótido que codifica para un bucle en horquilla de histona y una región poli-A o una señal de poliadenilación puede codificar para un antígeno patógeno o fragmento del mismo, tal como las secuencias de polinucleótidos descritas en la publicación de patente internacional n.° WO2013/120499 y WO2013/120628. En otros casos, el polinucleótido que codifica para un bucle en horquilla de histona y una región poli-A o una señal de poliadenilación puede codificar para una proteína terapéutica tal como las secuencias de polinucleótidos descritas en la publicación de patente internacional n.° WO2013/120497 y WO2013/120629. En algunos casos, el polinucleótido que codifica para un bucle en horquilla de histona y una región poli-A o una señal de poliadenilación puede codificar para un antígeno tumoral o fragmento del mismo, tal como las secuencias de polinucleótidos descritas en la publicación de patente internacional n.° WO2013/120500 y WO2013/120627. En otros casos, el polinucleótido que codifica para un bucle en horquilla de histona y una región poli-A o una señal de poliadenilación puede codificar para un antígeno alergénico o un autoantígeno autoinmunitario tal como las secuencias de polinucleótidos descritas en la publicación de patente internacional n.° WO2013/120498 y WO2013/120626.
Regiones poli-A
Un polinucleótido o ácido nucleico (por ejemplo, un ARNm) puede incluir una secuencia de poliA y/o señal de poliadenilación. Una secuencia de poliA puede comprender en su totalidad o en su mayoría nucleótidos de adenina o análogos o derivados de los mismos. Una secuencia de poliA puede ser una cola ubicada adyacente a una región no traducida 3' de un ácido nucleico.
Durante el procesamiento de ARN, normalmente se añade una cadena larga de nucleótidos de adenosina (región poli-A) a las moléculas de ARN mensajero (ARNm) para aumentar la estabilidad de la molécula. Inmediatamente después de la transcripción, el extremo 3' de la transcripción se escinde para liberar un hidroxi 3".
A continuación, la poli-A polimerasa añade una cadena de nucleótidos de adenosina al ARN. El procedimiento, llamado poliadenilación, añade una región poli-A que tiene entre 100 y 250 residuos de largo.
Las longitudes de región poli-A únicas pueden proporcionar determinadas ventajas a los polinucleótidos alternativos de la presente descripción.
Generalmente, la longitud de una región poli-A de la presente descripción tiene al menos 30 nucleótidos de longitud. En otra realización, la región poli-A tiene al menos 35 nucleótidos de longitud. En otra realización, la longitud es de al menos 40 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 45 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 55 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 60 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 70 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 80 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 90 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 100 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 120 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 140 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 160 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 180 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 200 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 250 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 300 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 350 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 400 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 450 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 600 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 700 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 800 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 900 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1100 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1200 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1300 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1400 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1600 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1700 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1800 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 1900 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 2000 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 2500 nucleótidos. En otra realización, la longitud es de al menos 3000 nucleótidos.
En algunos casos, la región poli-A puede tener 80 nucleótidos, 120 nucleótidos, 160 nucleótidos de longitud en una molécula de polinucleótido alternativa descrita en esta invención.
En otros casos, la región poli-A puede tener 20, 40, 80, 100, 120, 140 o 160 nucleótidos de longitud en una molécula de polinucleótido alternativa descrita en esta invención.
En algunos casos, la región poli-A se diseña con respecto a la longitud del polinucleótido alternativo total. Este diseño puede basarse en la longitud de la región codificante del polinucleótido alternativo, la longitud de una característica o región particular del polinucleótido alternativo (tal como ARNm), o en la longitud del producto final expresado a partir del polinucleótido alternativo. Cuando se relaciona con cualquier característica del polinucleótido alternativo (por ejemplo, que no sea la porción de ARNm que incluye la región poli-A) la región poli-A puede tener el 10, el 20, el 30, el 40, el 50, el 60 , el 70, el 80, el 90 o el 100 % más de longitud que la característica adicional. La región poli-A también se puede diseñar como una fracción del polinucleótido alternativo al que pertenece. En este contexto, la región poli-A puede tener el 10, el 20, el 30, el 40, el 50, el 60, el 70, el 80 o el 90 % o más de la longitud total de la construcción o la longitud total de la construcción menos la región poli-A.
En determinados casos, los sitios de unión modificados por ingeniería genética y/o la conjugación de polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) para la proteína de unión a poli-A se pueden utilizar para mejorar la expresión. Los sitios de unión modificados por ingeniería genética pueden ser secuencias de sensores que pueden funcionar como sitios de unión para ligandos del microambiente local de los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm). Como un ejemplo no limitante, los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) pueden incluir al menos un sitio de unión modificado por ingeniería genética para alterar la afinidad de unión de la proteína de unión a poli-A (PABP) y análogos de la misma. La incorporación de al menos un sitio de unión modificado por ingeniería genética puede aumentar la afinidad de unión del PABP y análogos de la misma.
De manera adicional, múltiples polinucleótidos distintos (por ejemplo, ARNm) se pueden unir juntos a la PABP (proteína de unión a poli-A) a través del extremo 3' usando nucleótidos alternativos en el extremo 3' de la región poli-A. Los experimentos de transfección se pueden llevar a cabo en líneas celulares relevantes y la producción de proteínas se puede evaluar mediante ELISA a las 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas y el día 7 después de la transfección. Como un ejemplo no limitante, los experimentos de transfección pueden usarse para evaluar el efecto de esta afinidad de unión sobre la PABP o análogos de la misma como resultado de la adición de al menos un sitio de unión modificado por ingeniería genética.
En determinados casos, se puede usar una región poli-A para modular la iniciación de la traducción.
Sin desear limitarse a ninguna teoría, la región poli-A recluta PABP que, a su vez, puede interactuar con el complejo de iniciación de la traducción y, por lo tanto, puede ser esencial para la síntesis de proteínas.
En algunos casos, también se puede usar una región poli-A en la presente descripción para proteger contra la digestión con 3'-5'-exonucleasa.
En algunos casos, un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir un cuarteto poliA-G. El cuarteto G es una matriz cíclica de cuatro nucleótidos de guanosina con enlaces de hidrógeno que pueden formarse por secuencias ricas en G tanto en ADN como en ARN. En esta realización, el cuarteto G se incorpora en el extremo de la región poli-A. Los polinucleótidos resultantes (por ejemplo, ARNm) se pueden evaluar para determinar la estabilidad, la producción de proteínas y otros parámetros que incluyen la semivida en diversos puntos de tiempo. Se ha descubierto que el cuarteto poliA-G da como resultado una producción de proteínas equivalente a al menos el 75 % de la observada usando una región poli-A de 120 nucleótidos sola.
En algunos casos, un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir una región poli-A y puede estabilizarse mediante la adición de una región 3'-estabilizadora. Los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) con una región poli-A pueden incluir además una estructura de casquete 5'.
En otros casos, un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) puede incluir un cuarteto poli-A-G. Los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) con un cuarteto poli-A-G pueden incluir además una estructura de casquete 5'.
En algunos casos, la región 3'-estabilizadora que se puede utilizar para estabilizar un polinucleótido (por ejemplo, ARNm) que incluye una región poli-A o un cuarteto poli-A-G puede ser, pero sin limitarse a, las descritas en la publicación de patente internacional n.° WO2013/103659. En otros casos, la región 3'-estabilizadora que se puede utilizar con la presente descripción incluyen un nucleósido de terminación de cadena tal como 3'-desoxiadenosina (cordicepina), 3'-desoxiuridina, 3'-desoxicitosina, 3'-desoxiguanosina, 3'-desoxitimina, 2',3'-didesoxinucleósidos, tal como 2',3'-didesoxiadenosina, 2',3'-didesoxiuridina, 2',3'-didesoxicitosina, 2',3'-didesoxiguanosina, 2',3'-didesoxitimina, un 2'-desoxinucleósido o un O-metilnucleósido.
En otros casos, un polinucleótido tal como, pero sin limitarse a ARNm, que incluye una región poliA o un cuarteto poli-A-G se puede estabilizar mediante una alteración en la región 3' del polinucleótido que puede prevenir y/o inhibir la adición de oligio (U) (véase, por ejemplo, la publicación de patente internacional n.° WO2013/103659).
En otros casos más, un polinucleótido tal como, pero sin limitarse a, ARNm, que incluye una región poli-A o un cuarteto poli-A-G puede estabilizarse mediante la adición de un oligonucleótido que termina en un 3'-desoxinucleósido, 2',3'-didesoxinucleósido 3'-O-metilnucleósidos, 3'-O-etilnucleósidos, 3'-arabinósidos y otros nucleósidos alternativos conocidos en la técnica y/o descritos en esta invención.
Nucleósidos de terminación de cadena
Un ácido nucleico puede incluir un nucleósido de terminación de cadena. Por ejemplo, un nucleósido de terminación de cadena puede incluir aquellos nucleósidos desoxigenados en las posiciones 2' y/o 3' de su grupo de azúcar. Dichas especies pueden incluir 3'-desoxiadenosina (cordicepina), 3'-desoxiuridina, 3'-desoxicitosina, 3'-desoxiguanosina, 3'-desoxitimina y 2',3'-didesoxinucleósidos, tales como 2',3'-didesoxiadenosina, 2',3'-didesoxiuridina, 2',3'-didesoxicitosina, 2',3'-didesoxiguanosina y 2',3'-didesoxitimina.
Otros componentes
Una composición de nanopartículas puede incluir uno o más componentes además de los descritos en las secciones anteriores. Por ejemplo, una composición de nanopartículas puede incluir una o más moléculas hidrofóbicas pequeñas tales como una vitamina (por ejemplo, vitamina A o vitamina E) o un esterol.
Las composiciones de nanopartículas también pueden incluir una o más moléculas potenciadoras de la permeabilidad, carbohidratos, polímeros, agentes que alteran la superficie u otros componentes. Una molécula potenciadora de la permeabilidad puede ser una molécula descrita por la publicación de solicitud de patente estadounidense n.° 2005/0222064, por ejemplo. Los carbohidratos pueden incluir azúcares simples (por ejemplo, glucosa) y polisacáridos (por ejemplo, glucógeno y derivados y análogos de los mismos).
Un polímero se puede incluir en y/o utilizar para encapsular o encapsular parcialmente una composición de nanopartículas. Un polímero puede ser biodegradable y/o biocompatible. Un polímero se puede seleccionar, pero sin limitarse a, poliaminas, poliéteres, poliamidas, poliésteres, policarbamatos, poliureas, policarbonatos, poliestirenos, poliimidas, polisulfonas, poliuretanos, poliacetilenos, polietilenos, polietileniminas, poliisocianatos, poliacrilatos, polimetacrilatos, poliacrilonitrilos y poliarilatos. Por ejemplo, un polímero puede incluir poli(caprolactona) (PCL), polímero de acetato de etileno y vinilo (EVA), poli(ácido láctico) (PLA), poli(ácido L-láctico) (PLLA), poli(ácido glicólico) (PGA), poli(ácido láctico-co-ácido glicólico) (PLGA), poli(ácido L-láctico-co-ácido glicólico) (<p>L<l>GA), poli(D,L-láctido) (PDLA), poli(L-láctido) (PLLA), poli(D,L-láctido-cocaprolactona), poli(D,L-láctido-co-caprolactona-co-glicólido), poli(D,L-láctido-co-PEO-co-D,L-láctido), poli(D,L-láctido-co-PPO-co-D,L-láctido), poli(cianoacrilato de alquilo), poliuretano, poli-L-lisina (PLL), hidroxipropil metacrilato (HPMA), polietilenglicol, ácido poli-L-glutámico, poli(hidroxiácidos), polianhídridos, poliortoésteres, poli(ésteramidas), poliamidas, poli(éster éteres), policarbonatos, polialquilenos tales como polietileno y propileno, polialquilen glicoles tales como poli(etilenglicol) (PEG), óxidos de polialquileno (PEO), tereftalatos de polialquileno tales como poli(tereftalato de etileno), polivinil alcoholes (PVA), polivinil éteres, polivinil ésteres tales como poli(acetato de vinilo), polivinil haluros tales como poli(cloruro de vinilo) (PVC), polivinilpirrolidona (PVP), polisiloxanos, poliestireno (PS), poliuretanos, celulosas derivadas tales como alquil celulosas, hidroxialquil celulosas, éteres de celulosa, ésteres de celulosa, nitrocelulosas, hidroxipropilcelulosa, carboximetilcelulosa, polímeros de ácidos acrílicos, tales como poli(metil(met)acrilato) (PMMA), poli(etil(met)acrilato), poli(butil(met)acrilato), poli(isobutil(met)acrilato), poli(hexil(met)acrilato), poli(isodecil(met)acrilato), poli(lauril(met)acrilato), poli(fenil(met)acrilato), poli(acrilato de metilo), poli(acrilato de isopropilo), poli(acrilato de isobutilo), poli(acrilato de octadecilo) y copolímeros y mezclas de los mismos, polidioxanona y sus copolímeros, polihidroxialcanoatos, fumarato de polipropileno, polioximetileno, poloxámeros, polioxaminas, poli(orto)ésteres, poli(ácido butírico), poli(ácido valérico), poli(láctido-cocaprolactona), carbonato de trimetileno, poli(N-acriloilmorfolina) (PAcM), poli(2-metil-2-oxazolina) (PMOX), poli(2-etil-2-oxazolina) (PEOZ) y poliglicerol.
Los agentes que alteran la superficie pueden incluir, pero sin limitarse a, proteínas aniónicas (por ejemplo, albúmina de suero bovino), tensioactivos (por ejemplo, tensioactivos catiónicos tales como bromuro de dimetildioctadecil-amonio), azúcares o derivados de azúcar (por ejemplo, ciclodextrina), ácidos nucleicos, polímeros (por ejemplo, heparina, polietilenglicol y poloxámero), agentes mucolíticos (por ejemplo, acetilcisteína, artemisa, bromelaína, papaína, clerodendro, bromhexina, carbocisteína, eprazinona, mesna, ambroxol, sobrerol, domiodol, letosteína, estepronina, tiopronina, gelsolina, timosina p4, domasa alfa, neltenexina y erdosteína) y DNasas (por ejemplo, rhDNasa). Un agente de alteración de la superficie puede disponerse dentro de una nanopartícula y/o en la superficie de una composición de nanopartículas (por ejemplo, mediante recubrimiento, adsorción, enlace covalente u otro procedimiento).
Una composición de nanopartículas también puede comprender uno o más lípidos funcionalizados. Por ejemplo, un lípido puede funcionalizarse con un grupo alquino que, cuando se expone a una azida en condiciones de reacción adecuadas, puede experimentar una reacción de cicloadición. En particular, una bicapa lipídica puede funcionalizarse de esta manera con uno o más grupos útiles para facilitar la permeación de la membrana, el reconocimiento celular o la formación de imágenes. La superficie de una composición de nanopartículas también se puede conjugar con uno o más anticuerpos útiles. Los grupos funcionales y conjugados útiles en la administración celular dirigida, formación de imágenes y permeación de membrana son bien conocidos en la técnica.
Además de estos componentes, las composiciones de nanopartículas pueden incluir cualquier sustancia útil en composiciones farmacéuticas. Por ejemplo, la composición de nanopartículas puede incluir uno o más excipientes o ingredientes accesorios farmacéuticamente aceptables tales como, pero sin limitarse a, uno o más disolventes, medios de dispersión, diluyentes, auxiliares de dispersión, auxiliares de suspensión, auxiliares de granulación, desintegrantes, cargas, deslizantes, vehículos líquidos, aglutinantes, agentes tensioactivos, agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsionantes, agentes amortiguadores, agentes lubricantes, aceites, conservantes y otras especies. También se pueden incluir excipientes tales como ceras, mantecas, agentes colorantes, agentes de recubrimiento, saborizantes y agentes perfumantes. Los excipientes farmacéuticamente aceptables son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Remington 's The Science and Practice o f Pharmacy, 21a edición, A. R. Gennaro; Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006).
Los ejemplos de diluyentes pueden incluir, pero sin limitarse a, carbonato de calcio, carbonato de sodio, fosfato de calcio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, hidrógeno fosfato de calcio, fosfato de sodio lactosa, sacarosa, celulosa, celulosa microcristalina, caolín, manitol, sorbitol, inositol, cloruro de sodio, almidón seco, almidón de maíz, azúcar en polvo y/o combinaciones de los mismos. Los agentes de granulación y dispersión se pueden seleccionar de entre la lista no limitativa que consiste en almidón de patata, almidón de maíz, almidón de tapioca, glicolato almidón de sodio, arcillas, ácido algínico, goma guar, pulpa de cítricos, agar, bentonita, celulosa y productos de madera, esponja natural, resinas de intercambio catiónico, carbonato de calcio, silicatos, carbonato de sodio, poli(vinil-pirrolidona) reticulada (crospovidona), carboximetil almidón de sodio (glicolato almidón de sodio), carboximetil celulosa, carboximetil celulosa de sodio reticulada (croscarmelosa), metilcelulosa, almidón pregelatinizado (almidón 1500), almidón microcristalino, almidón insoluble en agua, carboximetil celulosa de calcio, silicato de aluminio y magnesio (VEEGUM®), lauril sulfato de sodio, compuestos de amonio cuaternario y/o combinaciones de los mismos.
Los agentes tensioactivos y/o emulsionantes pueden incluir, pero sin limitarse a, emulsionantes naturales (por ejemplo, acacia, agar, ácido algínico, alginato de sodio, tragacanto, condrux, colesterol, xantano, pectina, gelatina, yema de huevo, caseína, grasa de lana, colesterol, cera y lecitina), arcillas coloidales (por ejemplo, bentonita [silicato de aluminio] y VEEGUM® [silicato de aluminio y magnesio]), derivados de aminoácidos de cadena larga, alcoholes de alto peso molecular (por ejemplo, alcohol estearílico, alcohol cetílico, alcohol oleílico, monoestearato de triacetina, diestearato de etilenglicol, monoestearato de glicerilo y monoestearato de propilenglicol, alcohol polivinílico), carbómeros (por ejemplo, carboxipolimetileno, ácido poliacrílico, polímero de ácido acrílico, y polímero de carboxivinilo), carragenano, derivados celulósicos (por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, celulosa en polvo, hidroximetil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, metilcelulosa), ésteres de ácidos grasos de sorbitán (por ejemplo, monolaurato de sorbitán polioxietileno [TWEEN®20], sorbitán polioxietileno [TWEEN® 60], monooleato de sorbitán polioxietileno [TWEEN®80], monopalmitato de sorbitán [SPAN®40], monoestearato de sorbitán [SPAN®60], triestearato de sorbitán [SPA<n>®65], monooleato de glicerilo, monooleato de sorbitán [SPAN®80]), ésteres de polioxietileno (por ejemplo, monoestearato de polioxietileno [MYRJ® 45], aceite de ricino hidrogenado con polioxietileno, aceite de ricino polietoxilado, estearato de polioximetileno y SOLUTOL®), ésteres de ácidos grasos de sacarosa, ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol (por ejemplo, CREMOPHOR®), éteres de polioxietileno (por ejemplo, éter laurílico de polioxietileno [BRIJ® 30]), poli(vinil-pirrolidona), monolaurato de dietilenglicol, oleato de trietanolamina, oleato de sodio, oleato de potasio, oleato de etilo, ácido oleico, laurato de etilo, lauril sulfato de sodio, PLURONIC®F 68, POLOXAMER® 188, bromuro de cetrimonio, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio, docusato de sodio y/o combinaciones de los mismos.
Un agente aglutinante puede ser almidón (por ejemplo, almidón de maíz y pasta de almidón); gelatina; azúcares (por ejemplo, sacarosa, glucosa, dextrosa, dextrina, melaza, lactosa, lactitol, manitol); gomas naturales y sintéticas (por ejemplo, acacia, alginato de sodio, extracto de musgo irlandés, goma panwar, goma ghatti, mucílago de cáscaras de isapol, carboximetilcelulosa, metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, celulosa microcristalina, acetato de celulosa, poli(vinilpirrolidona), silicato de aluminio y magnesio (VEEGUM®) y arabogalactano de alerce); alginatos; óxido de polietileno; polietilenglicol; sales inorgánicas de calcio; ácido silícico; polimetacrilatos; ceras; agua; alcohol y combinaciones de los mismos, o cualquier otro agente aglutinante adecuado.
Los ejemplos de conservantes pueden incluir, pero sin limitarse a, antioxidantes, agentes quelantes, conservantes antimicrobianos, conservantes antifúngicos, conservantes de alcohol, conservantes ácidos y/u otros conservantes. Los ejemplos de antioxidantes incluyen, pero sin limitarse a, alfa tocoferol, ácido ascórbico, palmitato de acorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxi tolueno butilado, monotioglicerol, metabisulfito de potasio, ácido propiónico, galato de propilo, ascorbato de sodio, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio y/o sulfito de sodio. Los ejemplos de agentes quelantes incluyen ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido cítrico monohidrato, edetato disódico, edetato dipotásico, ácido edético, ácido fumárico, ácido málico, ácido fosfórico, edetato de sodio, ácido tartárico y/o edetato trisódico. Los ejemplos de conservantes antimicrobianos incluyen, pero sin limitarse a, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, alcohol bencílico, bronopol, cetrimida, cloruro de cetilpiridinio, clorhexidina, clorobutanol, clorocresol, cloroxilenol, cresol, alcohol etílico, glicerina, hexetidina, imidurea, fenol, fenoxietanol, alcohol feniletílico, nitrato fenilmercúrico, propilenglicol y/o timerosal. Los ejemplos de conservantes antifúngicos incluyen, pero sin limitarse a, butil parabeno, metil parabeno, etil parabeno, propil parabeno, ácido benzoico, ácido hidroxibenzoico, benzoato de potasio, sorbato de potasio, benzoato de sodio, propionato de sodio y/o ácido sórbico. Los ejemplos de conservantes de alcohol incluyen, pero sin limitarse a, etanol, polietilenglicol, alcohol bencílico, fenol, compuestos fenólicos, bisfenol, clorobutanol, hidroxibenzoato y/o alcohol feniletílico. Los ejemplos de conservantes ácidos incluyen, pero sin limitarse a, vitamina A, vitamina C, vitamina E, beta-caroteno, ácido cítrico, ácido acético, ácido deshidroascórbico, ácido ascórbico, ácido sórbico y/o ácido fítico. Otros conservantes incluyen, pero sin limitarse a, tocoferol, acetato de tocoferol, mesilato de deteroxima, cetrimida, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxi tolueno butilado (BHT), etilendiamina, lauril sulfato de sodio (SLS), lauril éter sulfato de sodio (SLES), bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de potasio, metabisulfito de potasio, GLYDANT PLUS®, PHENONIP®, metilparabeno, GERMALL ® 115, GERMABEN ®II, NEOLONE™, KATHON™ y/o EUXYL®.
Los ejemplos de agentes amortiguadores incluyen, pero sin limitarse a, soluciones amortiguadoras de citrato, soluciones amortiguadoras de acetato, soluciones amortiguadoras de fosfato, cloruro de amonio, carbonato de calcio, cloruro de calcio, citrato de calcio, glubionato de calcio, gluceptato de calcio, gluconato de calcio, ácido d-glucónico, glicerofosfato de calcio, lactato de calcio, lactobionato de calcio, ácido propanoico, levulinato de calcio, ácido pentanoico, fosfato de calcio dibásico, ácido fosfórico, fosfato de calcio tribásico, fosfato de hidróxido de calcio, acetato de potasio, cloruro de potasio, gluconato de potasio, mezclas de potasio, fosfato de potasio dibásico, fosfato de potasio monobásico, mezclas de fosfato de potasio, acetato de sodio, bicarbonato de sodio, cloruro de sodio, citrato de sodio, lactato de sodio, fosfato de sodio dibásico, fosfato de sodio monobásico, mezclas de fosfato de sodio, trometamina, amortiguadores de amino-sulfonato (por ejemplo, HEPES), hidróxido de magnesio, hidróxido de aluminio, ácido algínico, agua libre de pirógenos, solución salina isotónica, solución de Ringer, alcohol etílico y/o combinaciones de los mismos. Los agentes lubricantes pueden seleccionarse de entre el grupo no limitante que consiste en estearato de magnesio, estearato de calcio, ácido esteárico, sílice, talco, malta, behenato de glicerilo, aceites vegetales hidrogenados, polietilenglicol, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, leucina, lauril sulfato de magnesio, lauril sulfato de sodio y combinaciones de los mismos.
Los ejemplos de aceites incluyen, pero sin limitarse a, aceites de almendra, pepita de albaricoque, aguacate, babasú, bergamota, semilla de corriente negra, borraja, cade, manzanilla, canola, alcaravea, carnauba, ricino, canela, manteca de cacao, coco, hígado de bacalao, café, maíz, semilla de algodón, emú, eucalipto, onagra, pescado, linaza, geraniol, calabaza, semilla de uva, avellana, hisopo, miristato de isopropilo, jojoba, nuez de kukui, lavandín, lavanda, limón, litsea cubeba, nuez de macademia, malva, semilla de mango, semilla de espuma de prado, visón, nuez moscada, oliva, naranja, reloj anaranjado, palma, pepita de palma, pepita de melocotón, cacahuete, semilla de amapola, semilla de calabaza, colza, salvado de arroz, romero, cártamo, sándalo, sasanqua, ajedrea, espino amarillo, sésamo, manteca de karité, silicona, soja, girasol, árbol de té, cardo, tsubaki, vetiver, nuez y germen de trigo, así como estearato de butilo, triglicérido caprílico, triglicérido cáprico, ciclometicona, sebacato de dietilo, dimeticona 360, simeticona, miristato de isopropilo, aceite mineral, octildodecanol, alcohol oleílico, aceite de silicona y/o combinaciones de los mismos.
Formulaciones
Las composiciones de nanopartículas pueden incluir un componente lipídico y uno o más componentes adicionales, tal como un agente terapéutico y/o profiláctico. Una composición de nanopartículas se puede diseñar para una o más aplicaciones u objetivos específicos. Los elementos de una composición de nanopartículas se pueden seleccionar en función de una aplicación u objetivo particular, y/o en función de la eficacia, toxicidad, gasto, facilidad de uso, disponibilidad u otra característica de uno o más elementos. De manera similar, la formulación particular de una composición de nanopartículas se puede seleccionar para una aplicación u objetivo particular según, por ejemplo, la eficacia y toxicidad de combinaciones particulares de elementos.
El componente lipídico de una composición de nanopartículas puede incluir, por ejemplo, un lípido según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe), un fosfolípido (tal como un lípido insaturado, por ejemplo, DOPE o DSPC), un lípido PEG y un lípido estructural. Los elementos del componente lipídico se pueden proporcionar en fracciones específicas.
En algunos ejemplos, el componente lipídico de una composición de nanopartículas incluye un lípido según la Fórmula (I), (II), (lIb), (IIc), o (IIe), un fosfolípido, un lípido PEG y un lípido estructural. En algunas realizaciones, el componente lipídico de una composición de nanopartículas incluye un lípido según la fórmula (IA), (IIa) o (IId), un fosfolípido, un lípido PEG y un lípido estructural. En ciertos ejemplos, el componente lipídico de la composición de nanopartículas incluye de alrededor del 30 % en moles a alrededor del 60 % en moles de compuesto de Fórmula (I), (II), (lIb), (IIc), o (IIe), de alrededor del 0 % en moles a alrededor del 30 % en moles de fosfolípido, de alrededor del 18,5 % en moles a alrededor del 48,5 % en moles de lípido estructural, y de alrededor del 0 % en moles a alrededor del 10 % en moles de lípido PEG, siempre que el % en moles total no exceda del 100 %. En ciertas realizaciones, el componente lipídico de la composición de nanopartículas incluye aproximadamente 30 mol % a aproximadamente 60 mol % de compuesto de Fórmula (IA), (IIa), o (IId), aproximadamente 0 mol % a aproximadamente 30 mol % de fosfolípido, aproximadamente 18,5 mol % a aproximadamente 48,5 mol % de lípido estructural, y aproximadamente 0 mol % a aproximadamente 10 mol % de lípido PEG, siempre que el mol % total no supere el 100%. En algunos ejemplos, el componente lipídico de la composición de nanopartículas incluye de alrededor del 35 % en moles a alrededor del 55 % en moles de compuesto de Fórmula (I), (II), (lIb), (IIc), o (IIe), aproximadamente 5 mol % a aproximadamente 25 mol % de fosfolípido, aproximadamente 30 mol % a aproximadamente 40 mol % de lípido estructural, y aproximadamente 0 mol % a aproximadamente 10 mol % de lípido PEG. En algunas realizaciones, el componente lipídico de la composición de nanopartículas incluye aproximadamente 35 mol % a aproximadamente 55 mol % de compuesto de Fórmula (IA), (IIa) o (IId), de alrededor del 5 % en moles a alrededor del 25 % en moles de fosfolípido, de alrededor del 30 % en moles a alrededor del 40 % en moles de lípido estructural, y de alrededor del 0 % en moles a alrededor del 10 % en moles de lípido PEG. En una realización particular, el componente lipídico incluye alrededor del 50 % en moles de dicho compuesto, alrededor del 10 % en moles de fosfolípido, alrededor del 38,5 % en moles de lípido estructural y alrededor del 1,5 % en moles de lípido PEG. En otra realización particular, el componente lipídico incluye alrededor del 40 % en moles de dicho compuesto, alrededor del 20 % en moles de fosfolípido, alrededor del 38,5 % en moles de lípido estructural y alrededor del 1,5 % en moles de lípido PEG. En algunas realizaciones, el fosfolípido puede ser DOPE o DSPC. En otras realizaciones, el lípido PEG puede ser PEG-DMG y/o el lípido estructural puede ser colesterol.
Las composiciones de nanopartículas se pueden diseñar para una o más aplicaciones u objetivos específicos. Por ejemplo, una composición de nanopartículas puede diseñarse para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico tal como un ARN a una célula, tejido, órgano o sistema particular o grupo de los mismos en un cuerpo de mamífero. Las propiedades fisicoquímicas de las composiciones de nanopartículas pueden alterarse para aumentar la selectividad para objetivos corporales particulares. Por ejemplo, los tamaños de partícula se pueden ajustar en función de los tamaños de fenestración de diferentes órganos. El agente terapéutico y/o profiláctico incluido en una composición de nanopartículas también se puede seleccionar en función del objetivo o los objetivos de administración deseados. Por ejemplo, se puede seleccionar un agente terapéutico y/o profiláctico para una indicación, afección, enfermedad o trastorno particular y/o para la administración a una célula, tejido, órgano o sistema particular o grupo de los mismos (por ejemplo, administración localizada o específica). En determinadas realizaciones, una composición de nanopartículas puede incluir un ARNm que codifica un polipéptido de interés capaz de traducirse dentro de una célula para producir el polipéptido de interés. Dicha composición se puede diseñar para administrarse específicamente a un órgano particular. En algunas realizaciones, una composición puede diseñarse para administrarse específicamente a un hígado de mamífero.
La cantidad de un agente terapéutico y/o profiláctico en una composición de nanopartículas puede depender del tamaño, composición, objetivo y/o aplicación deseados, u otras propiedades de la composición de nanopartículas, así como de las propiedades del agente terapéutico y/o profiláctico. Por ejemplo, la cantidad de un ARN útil en una composición de nanopartículas puede depender del tamaño, la secuencia y otras características del ARN. Las cantidades relativas de un agente terapéutico y/o profiláctico y otros elementos (por ejemplo, lípidos) en una composición de nanopartículas también pueden variar. En algunas realizaciones, la relación peso/peso del componente lipídico a un agente terapéutico y/o profiláctico en una composición de nanopartículas puede ser de alrededor de 5:1 a alrededor de 60:1, tal como 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1, 12:1, 13:1, 14;1, 15;1, 16:1,17:1, 18:1, 19:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1 y 60:1. Por ejemplo, la relación peso/peso del componente lipídico a un agente terapéutico y/o profiláctico puede ser de alrededor de 10:1 a alrededor de 40:1. En determinadas realizaciones la relación peso/peso es de alrededor de 20 :1. La cantidad de un agente terapéutico y/o profiláctico en una composición de nanopartículas se puede medir, por ejemplo, usando espectroscopía de absorción (por ejemplo, espectroscopía visible por ultravioleta).
En algunas realizaciones, una composición de nanopartículas incluye uno o más ARN, y el uno o más ARN, lípidos y cantidades de los mismos se pueden seleccionar para proporcionar una relación N:P específica. La relación N:P de la composición se refiere a la relación molar de átomos de nitrógeno en uno o más lípidos con respecto a la cantidad de grupos fosfato en un ARN. En general, se prefiere una relación N:P más baja. El uno o más ARN, lípidos y cantidades de los mismos se pueden seleccionar para proporcionar una relación N:P de alrededor de 2:1 a alrededor de 30:1, tal como 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 22:1, 24:1, 26:1, 28:1 o 30:1. En determinadas realizaciones, la relación N:P puede ser de alrededor de 2:1 a alrededor de 8:1. En otras realizaciones, la relación N:P es de alrededor de 5:1 a alrededor de 8:1. Por ejemplo, la relación N:P puede ser de alrededor de 5,0:1, alrededor de 5,5:1, alrededor de 5,67:1, alrededor de 6,0:1, alrededor de 6,5:1 o alrededor de 7,0:1. Por ejemplo, la relación N:P puede ser de alrededor de 5,67:1.
Propiedades físicas
Las características de una composición de nanopartículas pueden depender de los componentes de la misma. Por ejemplo, una composición de nanopartículas que incluye colesterol como lípido estructural puede tener características diferentes que una composición de nanopartículas que incluye un lípido estructural diferente. De manera similar, las características de una composición de nanopartículas pueden depender de las cantidades absolutas o relativas de sus componentes. Por ejemplo, una composición de nanopartículas que incluye una fracción molar más alta de un fosfolípido puede tener características diferentes que una composición de nanopartículas que incluye una fracción molar más baja de un fosfolípido. Las características también pueden variar en función del procedimiento y las condiciones de preparación de la composición de nanopartículas.
Las composiciones de nanopartículas pueden caracterizarse por una variedad de procedimientos. Por ejemplo, se puede usar microscopía (por ejemplo, microscopía electrónica de transmisión o microscopía electrónica de barrido) para examinar la morfología y distribución de tamaño de una composición de nanopartículas. Se puede usar potenciometría o dispersión dinámica de luz (por ejemplo, titulaciones potenciométricas) para medir los potenciales zeta. También se puede utilizar la dispersión dinámica de luz para determinar los tamaños de partícula. También se pueden usar instrumentos tales como el Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Malvern, Worcestershire, Reino Unido) para medir múltiples características de una composición de nanopartículas, tales como tamaño de partícula, índice de polidispersidad y potencial zeta.
El tamaño medio de una composición de nanopartículas puede estar entre 10s de nm y 100s de nm, por ejemplo, medido mediante dispersión dinámica de luz (<d>L<s>). Por ejemplo, el tamaño medio puede ser de alrededor de 40 nm a alrededor de 150 nm, tal como alrededor de 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm o 150 nm. En algunas realizaciones, el tamaño medio de una composición de nanopartículas puede ser de alrededor de 50 nm a alrededor de 100 nm, de alrededor de 50 nm a alrededor de 90 nm, de alrededor de 50 nm a alrededor de 80 nm, de alrededor de 50 nm a alrededor de 70 nm, de alrededor de 50 nm a alrededor de 60 nm, de alrededor de 60 nm a alrededor de 100 nm, de alrededor de 60 nm a alrededor de 90 nm, de alrededor de 60 nm a alrededor de 80 nm, de alrededor de 60 nm a alrededor de 70 nm, de alrededor de 70 nm a alrededor de 100 nm, de alrededor de 70 nm a alrededor de 90 nm, de alrededor de 70 nm a alrededor de 80 nm, de alrededor de 80 nm a alrededor de 100 nm, de alrededor de 80 nm a alrededor de 90 nm, o de alrededor de 90 nm a alrededor de 100 nm. En determinadas realizaciones, el tamaño medio de una composición de nanopartículas puede ser de alrededor de 70 nm a alrededor de 100 nm. En una realización particular, el tamaño medio puede ser de alrededor de 80 nm. En otras realizaciones, el tamaño medio puede ser de alrededor de 100 nm.
Una composición de nanopartículas puede ser relativamente homogénea. Se puede usar un índice de polidispersidad para indicar la homogeneidad de una composición de nanopartículas, por ejemplo, la distribución del tamaño de partícula de las composiciones de nanopartículas. Un índice de polidispersidad pequeño (por ejemplo, inferior a 0,3) generalmente indica una distribución de tamaño de partícula estrecha. Una composición de nanopartículas puede tener un índice de polidispersidad de alrededor de 0 a alrededor de 0,25, tal como 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19, 0,20, 0,21, 0,22, 0,23, 0,24 o 0,25. En algunas realizaciones, el índice de polidispersidad de una composición de nanopartículas puede ser de alrededor de 0,10 a alrededor de 0 ,20.
El potencial zeta de una composición de nanopartículas se puede utilizar para indicar el potencial electrocinético de la composición. Por ejemplo, el potencial zeta puede describir la carga superficial de una composición de nanopartículas. Las composiciones de nanopartículas con cargas relativamente bajas, positivas o negativas, son generalmente deseables, ya que las especies más altamente cargadas pueden interactuar de forma no deseada con células, tejidos y otros elementos del cuerpo. En algunas realizaciones, el potencial zeta de una composición de nanopartículas puede ser de alrededor de -10 mV a alrededor de 20 mV, de alrededor de -10 mV a alrededor de 15 mV, de alrededor de -10 mV a alrededor de 10 mV, de alrededor de -10 mV a alrededor de 5 mV, de alrededor de -10 mV a alrededor de 0 mV, de alrededor de -10 mV a alrededor de -5 mV, de alrededor de -5 mV, a alrededor de 20 mV, de alrededor de -5 mV a alrededor de 15 mV, de alrededor de -5 mV a alrededor de 10 mV, de alrededor de-5 mV a alrededor de 5 mV, de alrededor de -5 mV a alrededor de 0 mV, de alrededor de 0 mV a alrededor de 20 mV, de alrededor de 0 mV a alrededor de 15 mV, de alrededor de 0 mV a alrededor de 10 mV, de alrededor de 0 mV a alrededor de 5 mV, de alrededor de 5 mV a alrededor de 20 mV, de alrededor de 5 mV a alrededor de 15 mV, o de alrededor de 5 mV a alrededor de 10 mV.
La eficiencia de encapsulación de un agente terapéutico y/o profiláctico describe la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico que está encapsulado o asociado de cualquier otra manera con una composición de nanopartículas después de la preparación, con respecto a la cantidad inicial proporcionada. La eficiencia de encapsulación es deseablemente alta (por ejemplo, cercana al 100 %). La eficiencia de encapsulación se puede medir, por ejemplo, comparando la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico en una solución que contiene la composición de nanopartículas antes y después de romper la composición de nanopartículas con uno o más disolventes o detergentes orgánicos. La fluorescencia se puede utilizar para medir la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico libre (por ejemplo, ARN) en una solución. Para las composiciones de nanopartículas descritas en esta invención, la eficiencia de encapsulación de un agente terapéutico y/o profiláctico puede ser de al menos el 50 %, por ejemplo, el 50 %, el 55 %, el 60 %, el 65 %, el 70 %, el 75 %, el 80 %, el 85 %, el 90 %, el 91 %, el 92 %, el 93 %, el 94 %, el 95 %, el 96 %, el 97 %, el 98 %, el 99 % o el 100 %. En algunas realizaciones, la eficiencia de encapsulación puede ser de al menos el 80 %. En determinadas realizaciones, la eficiencia de encapsulación puede ser de al menos el 90 %.
Una composición de nanopartículas puede comprender opcionalmente uno o más recubrimientos. Por ejemplo, una composición de nanopartículas puede formularse en una cápsula, película o comprimido que tenga un recubrimiento. Una cápsula, película o comprimido que incluye una composición descrita en esta invención puede tener cualquier tamaño útil, resistencia a la tracción, dureza o densidad.
Composiciones farmacéuticas
Las composiciones de nanopartículas se pueden formular en su totalidad o en parte como composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir una o más composiciones de nanopartículas. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede incluir una o más composiciones de nanopartículas que incluyen uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos diferentes. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir además uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables o ingredientes accesorios tales como los descritos en esta invención. Las pautas generales para la formulación y fabricación de agentes y composiciones farmacéuticas están disponibles, por ejemplo, en Remington's The Science and Practice o f Pharmacy, 21a edición, A. R. Gennaro; Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006. Los excipientes e ingredientes accesorios convencionales se pueden usar en cualquier composición farmacéutica, excepto en la medida en que cualquier excipiente o ingrediente accesorio convencional pueda ser incompatible con uno o más componentes de una composición de nanopartículas. Un excipiente o ingrediente accesorio puede ser incompatible con un componente de una composición de nanopartículas si su combinación con el componente puede dar como resultado cualquier efecto biológico indeseable o efecto perjudicial de cualquier otra manera.
En algunas realizaciones, uno o más excipientes o ingredientes accesorios pueden constituir más del 50 % de la masa o volumen total de una composición farmacéutica que incluye una composición de nanopartículas. Por ejemplo, el uno o más excipientes o ingredientes accesorios pueden constituir el 50 %, el 60 %, el 70 %, el 80 %, el 90 % o más de una convención farmacéutica. En algunas realizaciones, un excipiente farmacéuticamente aceptable es al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % o el 100 % puro. En algunas realizaciones, un excipiente está aprobado para su uso en seres humanos y para uso veterinario. En algunas realizaciones, un excipiente está aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos (Food and Drug Administration) de los Estados Unidos. En algunas realizaciones, un excipiente es de grado farmacéutico. En algunas realizaciones, un excipiente cumple con los estándares de la farmacopea de los Estados Unidos (USP), la farmacopea europea (EP), la farmacopea británica y/o la farmacopea internacional.
Las cantidades relativas de la una o más composiciones de nanopartículas, el uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y/o cualquier ingrediente adicional en una composición farmacéutica conforme a la presente descripción variarán, dependiendo de la identidad, tamaño y/o condición del sujeto tratado y además dependiendo de la vía por la cual se administra la composición. A modo de ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender entre el 0,1 % y el 100 % (peso/peso) de una o más composiciones de nanopartículas.
En determinadas realizaciones, las composiciones de nanopartículas y/o composiciones farmacéuticas de la descripción se refrigeran o congelan para su almacenamiento y/o envío (por ejemplo se almacenan a una temperatura de 4 °C o menor, tal como una temperatura entre alrededor de -150 °C y alrededor de 0 °C o entre alrededor de -80 °C y alrededor de -20 °C (por ejemplo, alrededor de -5 °C, -10 °C, -15 °C, -20 °C, -25 °C, -30 °C, -40 °C, -50 °C, -60 °C, -70 °C, -80 °C, -90 °C, -130 °C o -150 °C). Por ejemplo, la composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las Fórmulas (I), (IA), (II), y (Na)-(Me) es una solución que se refrigera para su almacenamiento y/o envío a, por ejemplo, alrededor de -20 °C, -30 °C, -40 °C, -50 °C, -60 °C, -70 °C, o -80 °C. En determinadas realizaciones, la descripción también se refiere a un procedimiento para aumentar la estabilidad de las composiciones de nanopartículas y/o composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de cualquiera de las Fórmulas (I), (IA), (II), y (Na)-(Ne) almacenando las composiciones de nanopartículas y/o composiciones farmacéuticas a una temperatura de 4 °C o menor, tal como una temperatura entre alrededor de -150 °C y alrededor de 0 °C o entre alrededor de -80 °C y alrededor de -20 °C, por ejemplo, alrededor de -5 °C, -10 °C, -15 °C, -20 °C, -25 °C, -30 °C, -40 °C, -50 °C, -60 °C, -70 °C, -80 °C, -90 °C, -130 °C o -150 °C). Por ejemplo, las composiciones de nanopartículas y/o composiciones farmacéuticas descritas en esta invención son estables durante alrededor de 1 semana, al menos 2 semanas, al menos 3 semanas, al menos 4 semanas, al menos 5 semanas, al menos 6 semanas, al menos 1 mes, al menos 2 meses, al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 8 meses, al menos 10 meses, al menos 12 meses, al menos 14 meses, al menos 16 meses, al menos 18 meses, al menos 20 meses, al menos 22 meses o al menos 24 meses, por ejemplo, a una temperatura de 4 °C o menor (por ejemplo, entre alrededor de 4 °C y -20 °C). En una realización, la formulación se estabiliza durante al menos 4 semanas a alrededor de 4 °C. En determinadas realizaciones, la composición farmacéutica de la descripción comprende una composición de nanopartículas descrita en esta invención y un portador farmacéuticamente aceptable seleccionado de entre uno o más de Tris, un acetato (por ejemplo, acetato de sodio), un citrato (por ejemplo, citrato de sodio), solución salina, PBS y sacarosa. En determinadas realizaciones, la composición farmacéutica de la descripción tiene un valor de pH entre alrededor de 7 y 8 (por ejemplo, 6 ,8 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9 u 8,0, o entre 7,5 y 8 o entre 7 y 7,8). Por ejemplo, una composición farmacéutica de la descripción comprende una composición de nanopartículas descrita en esta invención, Tris, solución salina y sacarosa, y tiene un pH de alrededor de 7,5-8, que es adecuado para su almacenamiento y/o envío a, por ejemplo, alrededor de -20 °C. Por ejemplo, una composición farmacéutica de la descripción comprende una composición de nanopartículas descrita en esta invención y PBS y tiene un pH de alrededor de 7-7,8, adecuado para su almacenamiento y/o envío a, por ejemplo, alrededor de 4 °C o menos. "Estabilidad", "estabilizado" y "estable" en el contexto de la presente descripción se refiere a la resistencia de las composiciones de nanopartículas y/o composiciones farmacéuticas descritas en esta invención a cambios químicos o físicos (por ejemplo, degradación, cambio de tamaño de partícula, agregación, cambio en la encapsulación, etc.) en condiciones de fabricación, preparación, transporte, almacenamiento y/o en uso dadas, por ejemplo, cuando se aplica tensión tal como fuerza de cizallamiento, tensión de congelación/descongelación, etc.
Las composiciones de nanopartículas y/o las composiciones farmacéuticas que incluyen una o más composiciones de nanopartículas se pueden administrar a cualquier paciente o sujeto, incluyendo aquellos pacientes o sujetos que se pueden beneficiar de un efecto terapéutico proporcionado por la administración de un agente terapéutico y/o profiláctico a una o más células, tejidos, órganos o sistemas particulares o grupos de los mismos, tal como el sistema renal. Aunque las descripciones proporcionadas en esta invención de composiciones de nanopartículas y composiciones farmacéuticas que incluyen composiciones de nanopartículas se dirigen principalmente a composiciones que son adecuadas para su administración a seres humanos, el experto en la materia entenderá que dichas composiciones son generalmente adecuadas para su administración a cualquier otro mamífero. Se comprende bien la modificación de composiciones adecuadas para la administración a seres humanos con el fin de hacer que las composiciones sean adecuadas para la administración a diversos animales, y el farmacólogo veterinario normalmente experto puede diseñar y/o realizar dicha modificación con experimentación meramente ordinaria, si la hubiera. Los sujetos a los que se contempla la administración de las composiciones incluyen, pero sin limitarse a, seres humanos, otros primates y otros mamíferos, que incluyen mamíferos comercialmente relevantes tales como ganado, cerdos, caballos, ovejas, gatos, perros, ratones y/o ratas.
Una composición farmacéutica que incluye una o más composiciones de nanopartículas se puede preparar mediante cualquier procedimiento conocido o desarrollado en lo sucesivo en la técnica de la farmacología. En general, dichos procedimientos preparatorios incluyen asociar el ingrediente activo con un excipiente y/o uno o más ingredientes accesorios adicionales, y a continuación, si es deseable o necesario, dividir, dar forma y/o empaquetar el producto en una unidad de dosis única o múltiples deseada.
Una composición farmacéutica conforme a la presente descripción se puede preparar, empaquetar y/o vender a granel, como una dosis unitaria única y/o como una pluralidad de dosis unitarias únicas. Como se usa en esta invención, una “dosis unitaria” es una cantidad discreta de la composición farmacéutica que comprende una cantidad predeterminada del ingrediente activo (por ejemplo, composición de nanopartículas). La cantidad del ingrediente activo es generalmente igual a la dosificación del ingrediente activo que se administraría a un sujeto y/o una fracción conveniente de dicha dosificación tal como, por ejemplo, la mitad o un tercio de dicha dosificación.
Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en una variedad de formas adecuadas para una variedad de vías y procedimientos de administración. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas se pueden preparar en formas de dosificación líquidas (por ejemplo, emulsiones, microemulsiones, nanoemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires), formas inyectables, formas de dosificación sólidas (por ejemplo, cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos), formas de dosificación para administración tópica y/o transdérmica (por ejemplo, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, pulverizadores, inhalantes y parches), suspensiones, polvos y otras formas.
Las formas de dosificación líquidas para la administración por vía oral y parenteral incluyen, pero sin limitarse a, emulsiones, microemulsiones, nanoemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y/o elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los ingredientes activos, las formas de dosificación líquidas pueden comprender diluyentes inertes comúnmente utilizados en la técnica, tal como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites (en particular, aceite de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de los mismos. Además de diluyentes inertes, las composiciones orales pueden incluir agentes terapéuticos y/o profilácticos adicionales, agentes adicionales tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes y/o perfumantes. En determinadas realizaciones para administración parenteral, las composiciones se mezclan con agentes solubilizantes tales como Cremophor®, alcoholes, aceites, aceites modificados, glicoles, polisorbatos, ciclodextrinas, polímeros y/o combinaciones de los mismos.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles se pueden formular según la técnica conocida usando agentes dispersantes, agentes humectantes y/o agentes de suspensión adecuados. Las preparaciones inyectables estériles pueden ser soluciones, suspensiones y/o emulsiones inyectables estériles en diluyentes y/o disolventes parenterales aceptables no tóxicos, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, la solución de Ringer, USP y la solución isotónica de cloruro de sodio. Los aceites fijos estériles se emplean convencionalmente como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite fijo blando que incluya mono o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos tales como el ácido oleico pueden usarse en la preparación de inyectables.
Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención bacteriana, y/o mediante la incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver o dispersar en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de su uso.
Para prolongar el efecto de un ingrediente activo, a menudo es deseable retardar la absorción del ingrediente activo de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede llevar a cabo mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con poca solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco entonces depende de su velocidad de disolución la cual, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y la forma cristalina. Como alternativa, la absorción retardada de una forma de fármaco administrado por vía parenteral se lleva a cabo al disolver o suspender el fármaco en un vehículo oleoso. Las formas de depósito inyectables se realizan formando matrices microencapsuladas de los fármacos en polímeros biodegradables tales como poliláctido-poliglicólido. Dependiendo de la relación del fármaco con respecto al polímero, y la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con los tejidos corporales.
Las composiciones para administración rectal o vaginal son típicamente supositorios que se pueden preparar mezclando composiciones con excipientes no irritantes adecuados tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio que son sólidos a temperatura ambiente pero líquidos a temperatura corporal y, por lo tanto, se funden en el recto o cavidad vaginal y liberan el ingrediente activo.
Las formas de dosificación sólidas para administración por vía oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, películas, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, un ingrediente activo se mezcla con al menos un excipiente inerte farmacéuticamente aceptable tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o cargas o extensores (por ejemplo, almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico), aglutinantes (por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarosa y acacia), humectantes (por ejemplo, glicerol), agentes desintegrantes (por ejemplo, agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y carbonato de sodio), agentes retardantes de solución (por ejemplo, parafina), aceleradores de absorción (por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario), agentes humectantes (por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol), absorbentes (por ejemplo, arcilla de caolín y bentonita, silicatos) y lubricantes (por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio) y mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, la forma de dosificación puede comprender agentes amortiguadores.
Se pueden emplear composiciones sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina rellenas blandas y duras utilizando excipientes tales como lactosa o azúcar de leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Las formas de dosificación sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos se pueden preparar con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. Opcionalmente, pueden comprender agentes opacificantes y pueden ser de una composición que liberan el o los ingredientes activos solo, o preferentemente, en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, de forma retardada. Los ejemplos de composiciones de incrustación que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. Se pueden emplear composiciones sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina blandas y duras utilizando excipientes tales como lactosa o azúcar de leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.
Las formas de dosificación para la administración tópica y/o transdérmica de una composición pueden incluir ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, aerosoles, inhalantes y/o parches. Generalmente, un ingrediente activo se mezcla en condiciones estériles con un excipiente farmacéuticamente aceptable y/o cualquier conservante y/o amortiguador necesario según sea necesario. Además, la presente descripción contempla el uso de parches transdérmicos, que a menudo tienen la ventaja adicional de proporcionar una administración controlada de un compuesto al cuerpo. Dichas formas de dosificación se pueden preparar, por ejemplo, disolviendo y/o dispensando el compuesto en el medio adecuado. De manera alternativa o adicional, la velocidad puede controlarse proporcionando una membrana de control de velocidad y/o dispersando el compuesto en una matriz polimérica y/o gel.
Los dispositivos adecuados para su uso en la administración de composiciones farmacéuticas intradérmicas descritas en esta invención incluyen dispositivos de aguja corta tales como los descritos en las patentes estadounidenses 4.886.499; 5.190.521; 5.328.483; 5.527.288; 4.270.537; 5.015.235; 5.141.496; y 5.417.662. Las composiciones intradérmicas se pueden administrar mediante dispositivos que limitan la longitud de penetración efectiva de una aguja en la piel, tal como los descritos en la publicación PCT WO 99/34850 y equivalentes funcionales de los mismos. Los dispositivos de inyección a chorro que administran composiciones líquidas a la dermis a través de un inyector de chorro líquido y/o a través de una aguja que perfora el estrato córneo y produce un chorro que llega a la dermis son adecuados. Los dispositivos de inyección a chorro se describen, por ejemplo, en las patentes estadounidenses 5.480.381; 5.599.302; 5.334.144; 5.993.412; 5.649.912; 5.569.189; 5.704.911; 5.383.851; 5.893.397; 5.466.220; 5.339.163; 5.312.335; 5.503.627; 5.064.413; 5.520.639; 4.596.556; 4.790.824; 4.941.880; 4.940460; y las publicaciones PCT WO 97/37705 y WO 97/13537. Los dispositivos balísticos de administración de polvo/partículas que utilizan gas comprimido para acelerar la vacuna en forma de polvo a través de las capas externas de la piel hasta la dermis son adecuados. De manera alternativa o adicional, se pueden usar jeringas convencionales en el procedimiento de mantoux clásico de administración intradérmica.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica incluyen, pero sin limitarse a, preparaciones líquidas y/o semilíquidas tales como linimentos, lociones, emulsiones de aceite en agua y/o agua en aceite tales como cremas, ungüentos y/o pastas, y/o soluciones y/o suspensiones. Las formulaciones que se pueden administrar tópicamente, por ejemplo, pueden comprender de alrededor del 1 % a alrededor del 10 % (peso/peso) del ingrediente activo, aunque la concentración de ingrediente activo puede ser tan alta como el límite de solubilidad del ingrediente activo en el disolvente. Las formulaciones para la administración tópica pueden comprender además uno o más de los ingredientes adicionales descritos en esta invención.
Una composición farmacéutica se puede preparar, empaquetar y/o vender en una formulación adecuada para la administración pulmonar a través de la cavidad bucal. Dicha formulación puede comprender partículas secas que comprenden el ingrediente activo. Dichas composiciones se encuentran convenientemente en forma de polvos secos para su administración utilizando un dispositivo que comprende un depósito de polvo seco al que se puede dirigir una corriente de propulsor para dispersar el polvo y/o utilizando un recipiente dispensador de disolvente/polvo autopropulsado tal como un dispositivo que comprende el ingrediente activo disuelto y/o suspendido en un propulsor de bajo punto de ebullición en un recipiente sellado. Las composiciones de polvo seco pueden incluir un diluyente de polvo sólido fino tal como azúcar y se proporcionan convenientemente en una forma de dosis unitaria.
Los propulsores de bajo punto de ebullición generalmente incluyen propulsores líquidos que tienen un punto de ebullición inferior a 65 °F a presión atmosférica. Generalmente, el propulsor puede constituir del 50 % al 99,9 % (peso/peso) de la composición, y el ingrediente activo puede constituir del 0,1 % al 20 % (peso/peso) de la composición. Un propulsor puede comprender además ingredientes adicionales tales como un tensioactivo sólido aniónico y/o líquido no iónico y/o un diluyente sólido (que puede tener un tamaño de partícula del mismo orden que las partículas que comprenden el ingrediente activo).
Las composiciones farmacéuticas formuladas para la administración pulmonar pueden proporcionar un ingrediente activo en forma de gotitas de una solución y/o suspensión. Dichas formulaciones se pueden preparar, empaquetar y/o vender como soluciones y/o suspensiones alcohólicas acuosas y/o diluidas, opcionalmente estériles, que comprenden el ingrediente activo, y se pueden administrar convenientemente usando cualquier dispositivo de nebulización y/o atomización. Dichas formulaciones pueden comprender además uno o más ingredientes adicionales que incluyen, pero sin limitarse a, un agente saborizante tal como sacarina de sodio, un aceite volátil, un agente amortiguador, un agente tensioactivo y/o un conservante tal como metilhidroxibenzoato. Las gotitas proporcionadas por esta vía de administración pueden tener un diámetro promedio en el intervalo de alrededor de 1 nm a alrededor de 200 nm.
Las formulaciones descritas en esta invención como útiles para la administración pulmonar son útiles para la administración intranasal de una composición farmacéutica. Otra formulación adecuada para la administración intranasal es un polvo grueso que comprende el ingrediente activo y que tiene una partícula promedio de alrededor de 0,2 pm a 500 pm. Dicha formulación se administra de la manera en que se toma el rapé, es decir, mediante inhalación rápida a través de las fosas nasales desde un recipiente del polvo que se mantiene cerca de la nariz.
Las formulaciones adecuadas para la administración nasal pueden comprender, por ejemplo, de alrededor del 0,1 % (peso/peso) y hasta el 100 % (peso/peso) del ingrediente activo, y pueden comprender uno o más de los ingredientes adicionales descritos en esta invención. Una composición farmacéutica se puede preparar, empaquetar y/o vender en una formulación adecuada para la administración bucal. Dichas formulaciones pueden estar, por ejemplo, en forma de comprimidos y/o grageas elaboradas usando procedimientos convencionales, y pueden, por ejemplo, del 0,1 % al 20 % (peso/peso) de ingrediente activo, comprendiendo el resto una composición soluble y/o degradable por vía oral y, opcionalmente, uno o más de los ingredientes adicionales descritos en esta invención. Alternativamente, las formulaciones adecuadas para la administración bucal pueden comprender un polvo y/o una solución y/o suspensión aerosolizada y/o atomizada que comprende el ingrediente activo. Dichas formulaciones en polvo, en aerosol y/o en aerosol, cuando se dispersan, pueden tener un tamaño de partícula y/o gotita promedio en el intervalo de alrededor de 0,1 nm a alrededor de 200 nm, y pueden comprender además uno o más de cualquiera de los ingredientes adicionales descritos en esta invención.
Una composición farmacéutica se puede preparar, empaquetar y/o vender en una formulación adecuada para la administración oftálmica. Dichas formulaciones pueden estar, por ejemplo, en forma de gotas para los ojos que incluyen, por ejemplo, una solución y/o suspensión al 0 ,1/1,0 % (peso/peso) del ingrediente activo en un excipiente líquido acuoso u oleoso. Dichas gotas pueden comprender además agentes amortiguadores, sales y/o uno o más de cualquiera de los ingredientes adicionales descritos en esta invención. Otras formulaciones administrables oftálmicamente que son útiles incluyen aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina y/o en una preparación liposómica. Se contempla que las gotas para los oídos y/o gotas para los ojos están dentro del alcance de esta presente descripción.
Procedimientos para producir polipéptidos en células
La presente descripción proporciona procedimientos para producir un polipéptido de interés en una célula de mamífero. Los procedimientos para producir polipéptidos implican poner en contacto una célula con una composición de nanopartículas que incluye un ARNm que codifica el polipéptido de interés. Al poner en contacto la célula con la composición de nanopartículas, el ARNm se puede incorporar y traducir en la célula para producir el polipéptido de interés.
En general, la etapa de poner en contacto una célula de mamífero con una composición de nanopartículas que incluye un ARNm que codifica un polipéptido de interés se puede realizar in vivo, ex vivo, en cultivo o in vitro. La cantidad de composición de nanopartículas puesta en contacto con una célula, y/o la cantidad de ARNm en la misma, puede depender del tipo de célula o tejido en contacto, los medios de administración, las características fisicoquímicas de la composición de nanopartículas y el ARNm (por ejemplo, tamaño, carga y composición química) en la misma, y otros factores. En general, una cantidad efectiva de la composición de nanopartículas permitirá la producción eficiente de polipéptidos en la célula. Las métricas para la eficiencia pueden incluir traducción de polipéptidos (indicada por la expresión de polipéptidos), nivel de degradación de ARNm e indicadores de respuesta inmunitaria.
La etapa de poner en contacto una composición de nanopartículas que incluye un ARNm con una célula puede implicar o causar transfección. Un fosfolípido que se incluya en el componente lipídico de una composición de nanopartículas puede facilitar la transfección y/o aumentar la eficiencia de transfección, por ejemplo, al interactuar y/o fusionarse con una membrana celular o intracelular. La transfección puede permitir la traducción del ARNm dentro de la célula.
En algunas realizaciones, las composiciones de nanopartículas descritas en esta invención se pueden utilizar terapéuticamente. Por ejemplo, un ARNm incluido en una composición de nanopartículas puede codificar un polipéptido terapéutico (por ejemplo, en una región traducible) y producir el polipéptido terapéutico al ponerse en contacto y/o entrar (por ejemplo, transfección) en una célula. En otras realizaciones, un ARNm incluido en una composición de nanopartículas puede codificar un polipéptido que puede mejorar o aumentar la inmunidad de un sujeto. Por ejemplo, un ARNm puede codificar un factor estimulante de colonias de granulocitos o trastuzumab.
En determinadas realizaciones, un ARNm incluido en una composición de nanopartículas puede codificar un polipéptido recombinante que puede reemplazar uno o más polipéptidos que pueden estar sustancialmente ausentes en una célula en contacto con la composición de nanopartículas. El uno o más polipéptidos sustancialmente ausentes pueden faltar debido a una mutación genética del gen codificador o una vía reguladora del mismo. De manera alternativa, un polipéptido recombinante producido por traducción del ARNm puede antagonizar la actividad de una proteína endógena presente en, en la superficie de, o secretada por la célula. Un polipéptido recombinante antagonista puede ser deseable para combatir los efectos perjudiciales causados por las actividades de la proteína endógena, tales como actividades alteradas o localización causada por mutación. En otra alternativa, un polipéptido recombinante producido por traducción del ARNm puede antagonizar de forma indirecta o directa la actividad de un resto biológico presente en, en la superficie de, o secretado por la célula. Los restos biológicos antagonizados pueden incluir, pero sin limitarse a, lípidos (por ejemplo, colesterol), lipoproteínas (por ejemplo, lipoproteína de baja densidad), ácidos nucleicos, carbohidratos y toxinas de molécula pequeña. Los polipéptidos recombinantes producidos por traducción del ARNm pueden modificarse por ingeniería genética para la localización dentro de la célula, tal como dentro de un compartimiento específico tal como el núcleo, o pueden modificarse por ingeniería genética para la secreción de la célula o para la translocación a la membrana plasmática de la célula.
En algunas realizaciones, poner en contacto una célula con una composición de nanopartículas que incluye un ARNm puede reducir la respuesta inmunitaria innata de una célula a un ácido nucleico exógeno. Se puede poner una célula en contacto con una primera composición de nanopartículas que incluye una primera cantidad de un primer ARNm exógeno que incluye una región traducible y se puede determinar el nivel de la respuesta inmunitaria innata de la célula al primer ARNm exógeno. Posteriormente, la célula puede ponerse en contacto con una segunda composición que incluye una segunda cantidad del primer ARNm exógeno, siendo la segunda cantidad una cantidad menor del primer ARNm exógeno en comparación con la primera cantidad. De manera alternativa, la segunda composición puede incluir una primera cantidad de un segundo ARNm exógeno que es diferente del primer ARNm exógeno. Las etapas de poner en contacto la célula con la primera y segunda composiciones pueden repetirse una o más veces. Además, la eficiencia de la producción de polipéptidos (por ejemplo, traducción) en la célula se puede determinar opcionalmente, y la célula se puede volver a poner en contacto con la primera y/o segunda composición repetidamente hasta que se logre una eficiencia de producción de proteína diana.
Procedimientos para administrar agentes terapéuticos a células y órganos
La presente descripción proporciona proceimientos para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico a una célula u órgano de mamífero. La administración de un agente terapéutico y/o profiláctico a una célula implica administrar una composición de nanopartículas que incluye el agente terapéutico y/o profiláctico a un sujeto, donde la administración de la composición implica poner la célula en contacto con la composición. Por ejemplo, una proteína, un agente citotóxico, un ion radiactivo, un agente quimioterapéutico o un ácido nucleico (tal como un ARN, por ejemplo ARNm) se pueden administrar a una célula u órgano. En el caso de que un agente terapéutico y/o profiláctico sea un ARNm, al poner en contacto una célula con la composición de nanopartículas, se puede traducir un ARNm traducible en la célula para producir un polipéptido de interés. Sin embargo, los ARNm que no son sustancialmente traducibles también se pueden administrar a las células. Los ARNm sustancialmente no traducibles pueden ser útiles como vacunas y/o pueden secuestrar componentes de traducción de una célula para reducir la expresión de otras especies en la célula.
En algunas realizaciones, una composición de nanopartículas puede dirigirse a un tipo o clase particular de células (por ejemplo, células de un órgano o sistema particular del mismo). Por ejemplo, una composición de nanopartículas que incluye un agente terapéutico y/o profiláctico de interés puede administrarse específicamente a un hígado, riñón, bazo, fémur o pulmón de mamífero. La administración específica a una clase particular de células, un órgano o un sistema o grupo de los mismos implica que una mayor proporción de composiciones de nanopartículas, incluido un agente terapéutico y/o profiláctico, se administran al destino (por ejemplo, tejido) de interés con respecto a otros destinos, por ejemplo, tras la administración de una composición de nanopartículas a un mamífero. En algunas realizaciones, la administración específica puede resultar en un aumento mayor que 2 veces, 5 veces, 10 veces, 15 veces o 20 veces en la cantidad de agente terapéutico y/o profiláctico por 1 g de tejido del destino diana (por ejemplo, tejido de interés, tal como un hígado) en comparación con otro destino (por ejemplo, el bazo). En algunas realizaciones, el tejido de interés se selecciona de entre el grupo que consiste en un hígado, riñón, un pulmón, un bazo, un fémur, un tejido ocular (por ejemplo, mediante inyección intraocular, subretiniana o intravítrea), endotelio vascular en vasos (por ejemplo, intra-coronario o intra-femoral) o riñón, y tejido tumoral (por ejemplo, mediante inyección intratumoral).
Como otro ejemplo de administración dirigida o específica, un ARNm que codifica un compañero de unión a proteína (por ejemplo, un anticuerpo o fragmento funcional del mismo, una proteína de matriz de sostén o un péptido) o un receptor en una superficie celular puede incluirse en una composición de nanopartículas. Un ARNm puede usarse adicionalmente o en su lugar para dirigir la síntesis y localización extracelular de lípidos, carbohidratos u otros restos biológicos. De manera alternativa, se pueden seleccionar otros elementos o agentes terapéuticos y/o profilácticos (por ejemplo, lípidos o ligandos) de una composición de nanopartículas en función de su afinidad por receptores particulares (por ejemplo, receptores de lipoproteínas de baja densidad) de modo que una composición de nanopartículas pueda interactuar más fácilmente con una población de células diana que incluye los receptores. Por ejemplo, los ligandos pueden incluir, pero sin limitarse a, miembros de un par de unión específica, anticuerpos, anticuerpos monoclonales, fragmentos Fv, fragmentos Fv de cadena simple (scFv), fragmentos Fab', fragmentos F(ab')2, anticuerpos de dominio simple, anticuerpos camelizados y fragmentos de los mismos, anticuerpos humanizados y fragmentos de los mismos, y versiones multivalentes de los mismos; reactivos de unión multivalentes que incluyen anticuerpos mono o biespecíficos tales como fragmentos Fv estabilizados con disulfuro, tándems scFv, diacuerpos, tricuerpos o tetracuerpos; y aptámeros, receptores y proteínas de fusión.
En algunas realizaciones, un ligando puede ser un anticuerpo unido a la superficie, que puede permitir la sintonización de la especificidad de direccionamiento celular. Esto es especialmente útil ya que se pueden generar anticuerpos altamente específicos contra un epítopo de interés para el sitio de direccionamiento deseado. En una realización, múltiples anticuerpos se expresan en la superficie de una célula, y cada anticuerpo puede tener una especificidad diferente para una diana deseada. Tales estrategias pueden aumentar la avidez y especificidad de las interacciones de direccionamiento.
Por ejemplo, un experto en las materia de las técnicas biológicas puede seleccionar un ligando basándose en la localización o función deseada de la célula. Por ejemplo, un ligando de receptor de estrógeno, tal como tamoxifeno, puede dirigirse a células de células de cáncer de mama dependientes de estrógeno que tienen un mayor número de receptores de estrógeno en la superficie celular. Otros ejemplos no limitantes de interacciones de ligando/receptor incluyen CCR1 (por ejemplo, para el tratamiento de tejidos articulares inflamados o cerebro en artritis reumatoide y/o esclerosis múltiple), CCR7, CCR8 (por ejemplo, dirigirse al tejido de ganglios linfáticos), CCR6 , CCR9, CCR10 (por ejemplo, para dirigirse al tejido intestinal), CCR4, CCR10 (por ejemplo, para dirigirse a la piel), CXCR4 (por ejemplo, para una transmigración general mejorada), HCELL (por ejemplo, para el tratamiento de inflamación y trastornos inflamatorios, médula ósea), Alfa4beta7 (por ejemplo, para dirigirse a la mucosa intestinal) y VLA-4NCAM-1 (por ejemplo, dirigirse al endotelio). En general, cualquier receptor implicado en el direccionamiento (por ejemplo, metástasis de cáncer) se puede aprovechar para su uso en los procedimientos y composiciones descritos en esta invención.
Las células diana pueden incluir, pero sin limitarse a, hepatocitos, células epiteliales, células hematopoyéticas, células epiteliales, células endoteliales, células pulmonares, células óseas, células madre, células mesenquimales, células neurales, células cardíacas, adipocitos, células del músculo liso vascular, cardiomiocitos, células del músculo esquelético, células beta, células pituitarias, células de revestimiento sinovial, células ováricas, células testiculares, fibroblastos, células B, células T, reticulocitos, leucocitos, granulocitos y células tumorales.
En algunas realizaciones, una composición de nanopartículas puede dirigirse a los hepatocitos. Se ha demostrado que las apolipoproteínas tales como la apolipoproteína E (apoE) se asocian con composiciones de nanopartículas neutras o casi neutras que contienen lípidos en el cuerpo, y se sabe que se asocian con receptores tales como receptores de lipoproteínas de baja densidad (LDLR) que se encuentran en la superficie de los hepatocitos. Por lo tanto, una composición de nanopartículas que incluye un componente lipídico con una carga neutra o casi neutra que se administra a un sujeto puede adquirir apoE en el cuerpo de un sujeto y posteriormente puede administrar un agente terapéutico y/o profiláctico (por ejemplo, un ARN) a hepatocitos que incluyen LDLR de una manera específica.
Procedimientos para tratar enfermedades y trastornos
Las composiciones de nanopartículas pueden ser útiles para tratar una enfermedad, trastorno o afección. En particular, dichas composiciones pueden ser útiles en el tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección caracterizada por una actividad de polipéptido o proteína aberrante o faltante. Por ejemplo, una composición de nanopartículas que comprende un ARNm que codifica un polipéptido faltante o aberrante puede administrarse o suministrarse a una célula. La traducción posterior del ARNm puede producir el polipéptido, reduciendo o eliminando así un problema causado por la ausencia o actividad aberrante causada por el polipéptido. Debido a que la traducción puede producirse rápidamente, los procedimientos y las composiciones pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades agudas, trastornos o afecciones tales como sepsis, accidente cerebrovascular e infarto de miocardio. Un agente terapéutico y/o profiláctico incluido en una composición de nanopartículas también puede ser capaz de alterar la velocidad de transcripción de una especie dada, afectando así la expresión génica.
Las enfermedades, trastornos y/o afecciones caracterizadas por actividad proteica o polipéptida disfuncional o aberrante para la cual se puede administrar una composición incluyen, pero sin limitarse a, enfermedades raras, enfermedades infecciosas (tanto vacunas como terapias), cáncer y enfermedades proliferativas, enfermedades genéticas (por ejemplo, fibrosis quística), enfermedades autoinmunes, diabetes, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades cardio y renovasculares y enfermedades metabólicas.
Múltiples enfermedades, trastornos y/o afecciones pueden caracterizarse por la falta (o disminución sustancial de tal manera que no se produzca la función proteica adecuada) de actividad proteica. Dichas proteínas pueden no estar presentes, o pueden ser esencialmente no funcionales. Un ejemplo específico de una proteína disfuncional son las variantes de mutación sin sentido del gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR), que producen una variante de proteína disfuncional de la proteína CFTR, que causa fibrosis quística. La presente descripción proporciona un procedimiento para tratar dichas enfermedades, trastornos y/o afecciones en un sujeto mediante la administración de una composición de nanopartículas que incluye un ARN y un componente lipídico que incluye un lípido según la Fórmula (I), un fosfolípido (opcionalmente insaturado), un lípido PEG y un lípido estructural, donde el ARN puede ser un ARNm que codifica un polipéptido que antagoniza o supera de cualquier otra manera una actividad de proteína aberrante presente en la célula del sujeto.
La descripción proporciona procedimientos que implican la administración de composiciones de nanopartículas que incluyen uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos y composiciones farmacéuticas que incluyen los mismos. Los términos terapéutico y profiláctico se pueden utilizar indistintamente en esta invención con respecto a las características y realizaciones de la presente descripción. Las composiciones terapéuticas, o las composiciones de imágenes, diagnósticas o profilácticas de las mismas, se pueden administrar a un sujeto utilizando cualquier cantidad razonable y cualquier vía de administración eficaz para prevenir, tratar, diagnosticar u obtener imágenes de una enfermedad, trastorno y/o afección y/o cualquier otra finalidad. La cantidad específica administrada a un sujeto dado puede variar dependiendo de la especie, edad y condición general del sujeto; la finalidad de la administración; la composición particular; el modo de administración; y similares. Las composiciones conforme a la presente descripción se pueden formular en forma de unidad de dosificación para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación. Sin embargo, se entenderá que el uso diario total de una composición de la presente descripción será decidido por un médico tratante dentro del alcance del buen criterio médico. El nivel de dosis específico terapéuticamente eficaz, profilácticamente eficaz o apropiado de cualquier otra manera (por ejemplo, para imágenes) para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores que incluyen la gravedad e identificación de un trastorno que se está tratando, si lo hay; el uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos empleados; la composición específica empleada; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente; el tiempo de administración, la vía de administración y la velocidad de excreción de la composición farmacéutica específica empleada; la duración del tratamiento; los fármacos utilizados en combinación o coincidentes con la composición farmacéutica específica empleada; y factores similares conocidos en las técnicas médicas.
Una composición de nanopartículas que incluye uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos se puede administrar por cualquier vía. En algunos ejemplos, las composiciones, que incluyen composiciones profilácticas, diagnósticas o de imágenes que incluyen una o más composiciones de nanopartículas descritas en esta invención, se administran por una o más de una variedad de vías, que incluyen vía oral, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intratecal, subcutánea, intraventricular, trans o intradérmica, interdérmica, rectal, intravaginal, intraperitoneal, intraocular, subretiniana, intravítrea, tópica (por ejemplo, por polvos, ungüentos, cremas, geles, lociones y/o gotas), mucosa, nasal, bucal, enteral, vítrea, intratumoral, sublingual, intranasal; por instilación intratraqueal, instilación bronquial y/o inhalación; como un pulverizador y/o polvo oral, pulverizador nasal y/o aerosol, y/o a través de un catéter de vena porta. En algunos ejemplos, una composición se puede administrar por vía intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraarterial, intratumoral, subcutánea, intraocular, subretiniana, intravítrea o por inhalación. Sin embargo, la presente descripción abarca el suministro o administración de composiciones descritas en esta invención por cualquier vía apropiada teniendo en cuenta los avances probables en las ciencias del suministro de fármacos. En general, la vía de administración más adecuada dependerá de una variedad de factores que incluyen la naturaleza de la composición de nanopartículas que incluye uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos (por ejemplo, su estabilidad en diversos entornos corporales tales como el torrente sanguíneo y el tracto gastrointestinal), la condición del paciente (por ejemplo, si el paciente es capaz de tolerar vías de administración particulares), etc.
En determinados ejemplos, las composiciones conforme a la presente descripción pueden administrarse a niveles de dosificación suficientes para administrar de alrededor de 0,0001 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 0,001 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 0,005 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 0,01 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 0,05 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 1 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg kg, de alrededor de 2 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 5 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, de alrededor de 0,0001 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 0,001 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 0,005 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 0,01 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 0,05 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 1 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 2 mg/kg a alrededor de 5 mg/kg, de alrededor de 0,0001 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 0,001 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 0,005 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 0,01 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 0,05 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 1 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 2 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg, de alrededor de 0,0001 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, de alrededor de 0,001 mg/kg a alrededor de 1 mg/kg, de alrededor de 0,005 mg/kg a alrededor de 1 mg/kg, de alrededor de 0,01 mg/kg a alrededor de 1 mg/kg, de alrededor de 0,05 mg/kg a alrededor de 1 mg/kg, de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 1 mg/kg, de alrededor de 0,0001 mg/kg a alrededor de 0,25 mg/kg, de alrededor de 0,001 mg/kg a alrededor de 0,25 mg/kg, de alrededor de 0,005 mg/kg a alrededor de 0,25 mg/kg, de alrededor de 0,01 mg/kg a alrededor de 0,25 mg/kg, de alrededor de 0,05 mg/kg a alrededor de 0,25 mg/kg o de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 0,25 mg/kg de un agente terapéutico y/o profiláctico (por ejemplo, un ARNm) en una dosis dada, donde una dosis de 1 mg/kg (mpk) proporciona 1 mg de un agente terapéutico y/o profiláctico por 1 kg de peso corporal del sujeto. En algunos ejemplos, se puede administrar una dosis de alrededor de 0,001 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg de un agente terapéutico y/o profiláctico (por ejemplo, ARNm) de una composición de nanopartículas. En otros ejemplos, se puede administrar una dosis de alrededor de 0,005 mg/kg a alrededor de 2,5 mg/kg de un agente terapéutico y/o profiláctico. En determinados ejemplos, se puede administrar una dosis de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 1 mg/kg. En otros ejemplos, se puede administrar una dosis de alrededor de 0,05 mg/kg a alrededor de 0,25 mg/kg. Se puede administrar una dosis una o más veces al día, en la misma cantidad o en una cantidad diferente, para obtener un nivel deseado de expresión de ARNm y/o efecto terapéutico, de diagnóstico, profiláctico o de imágenes. La dosificación deseada se puede administrar, por ejemplo, tres veces al día, dos veces al día, una vez al día, cada dos días, cada tres días, cada semana, cada dos semanas, cada tres semanas o cada cuatro semanas. En determinados ejemplos, la dosificación deseada puede administrarse utilizando múltiples administraciones (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce o más administraciones). En algunos ejemplos, se puede administrar una sola dosis, por ejemplo, antes o después de un procedimiento quirúrgico o en el caso de una enfermedad, trastorno o afección aguda.
Las composiciones de nanopartículas que incluyen uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos pueden usarse en combinación con uno o más agentes terapéuticos, profilácticos, de diagnóstico o de imágenes. Por "en combinación con", no se pretende implicar que los agentes deban administrarse al mismo tiempo y/o formularse para la administración juntos, aunque estos procedimientos de administración están dentro del alcance de la presente descripción. Por ejemplo, se pueden administrar una o más composiciones de nanopartículas que incluyen uno o más agentes terapéuticos y/o profilácticos diferentes en combinación. Las composiciones se pueden administrar simultáneamente con, antes o después de, uno o más de otros procedimientos terapéuticos o médicos deseados. En general, cada agente se administrará a una dosis y/o en un cronograma determinado para ese agente. En algunos ejemplos, la presente descripción comprende la administración de composiciones, o composiciones de imágenes, diagnósticas o profilácticas de las mismas en combinación con agentes que mejoran su biodisponibilidad, reducen y/o modifican su metabolismo, inhiben su excreción y/o modifican su distribución dentro del cuerpo.
Se apreciará además que los agentes activos terapéuticos, profilácticos, diagnósticos o de imágenes utilizados en combinación se pueden administrar juntos en una única composición o se pueden administrar por separado en diferentes composiciones. En general, se espera que los agentes utilizados en combinación se utilicen en niveles que no excedan los niveles en los que se utilizan individualmente. En algunos ejemplos, los niveles utilizados en combinación pueden ser más bajos que los utilizados individualmente.
La combinación particular de terapias (productos terapéuticos o procedimientos) para emplear en un régimen de combinación deberá tener en cuenta la compatibilidad de los productos terapéuticos y/o los procedimientos deseados y el efecto terapéutico deseado a conseguir. También se apreciará que las terapias empleadas puedan lograr un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, una composición útil para tratar el cáncer se puede administrar simultáneamente con un agente quimioterapéutico), o pueden lograr efectos diferentes (por ejemplo, control de cualquier efecto adverso, tal como reacciones relacionadas con la infusión).
Se puede utilizar una composición de nanopartículas en combinación con un agente para aumentar la eficacia y/o la ventana terapéutica de la composición. Dicho agente puede ser, por ejemplo, un compuesto antiinflamatorio, un esteroide (por ejemplo, un corticosteroide), una estatina, un estradiol, un inhibidor de BTK, un agonista de S1P1, un modulador del receptor de glucocorticoides (GRM) o una antihistamina. En algunos ejemplos, se puede utilizar una composición de nanopartículas en combinación con dexametasona, metotrexato, acetaminofén, un bloqueador del receptor H1 o un bloqueador del receptor H2. En algunos ejemplos, un procedimiento para tratar a un sujeto que lo necesita o para administrar un agente terapéutico y/o profiláctico a un sujeto (por ejemplo, un mamífero) puede implicar tratar previamente al sujeto con uno o más agentes antes de administrar una composición de nanopartículas. Por ejemplo, un sujeto puede pretratarse con una cantidad útil (por ejemplo, 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg o cualquier otra cantidad útil) de dexametasona, metotrexato, acetaminofén, un bloqueador del receptor H1 o un bloqueador del receptor H2. El pretratamiento puede producirse en 24 o menos horas (por ejemplo, 24 horas, 20 horas, 16 horas, 12 horas, 8 horas, 4 horas, 2 horas, 1 hora, 50 minutos, 40 minutos, 30 minutos, 20 minutos o 10 minutos) antes de la administración de la composición de nanopartículas y puede producirse una, dos o más veces en, por ejemplo, cantidades crecientes de dosificación.
En las reivindicaciones, los artículos tales como "un", "una" y "el", "la", pueden significar uno o más de uno a menos que se indique lo contrario o sea evidente de cualquier otra manera a partir del contexto. Las reivindicaciones o descripciones que incluyen "o" entre uno o más miembros de un grupo se consideran satisfechas si uno, más de uno o todos los miembros del grupo están presentes en, se emplean en, o de cualquier otra manera son relevantes para un producto o procedimiento dado, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de cualquier otra manera a partir del contexto. La descripción incluye realizaciones en las que exactamente un miembro del grupo está presente en, se emplea en o de cualquier otra manera es relevante para un producto o procedimiento dado. La descripción incluye realizaciones en las que más de uno, o todos, de los miembros del grupo están presentes en, se emplean en, o de cualquier otra manera son relevantes para un producto o procedimiento dado.
También se observa que se pretende que la expresión "que comprende" sea abierta y permita, pero no requiera la inclusión de elementos o etapas adicionales. Cuando la expresión "que comprende" se utiliza en esta invención, las expresiones "que consiste esencialmente en" y "que consiste en" también se abarcan y describen. A lo largo de la descripción, cuando se describe que las composiciones tienen, incluyen o comprenden componentes específicos, se contempla que las composiciones también consisten esencialmente en, o consisten en, los componentes mencionados. De manera similar, cuando se describe que los procedimientos tienen, incluyen o comprenden etapas de procedimiento específicas, los procedimientos también consisten esencialmente en, o consisten en, las etapas de procesamiento mencionadas. Además, debe entenderse que el orden de las etapas u orden para realizar determinadas acciones es irrelevante siempre y cuando la invención permanezca operable. Además, se pueden realizar dos o más etapas o acciones simultáneamente.
Cuando se dan intervalos, se incluyen los extremos finales. Además, debe entenderse que, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de cualquier otra manera a partir del contexto y la comprensión de un experto en la materia, los valores que se expresan como intervalos pueden asumir cualquier valor o subintervalo específico dentro de los intervalos indicados en diferentes realizaciones de la descripción, hasta la décima parte de la unidad del límite inferior del intervalo, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.
Los procedimientos sintéticos de la descripción pueden tolerar una amplia variedad de grupos funcionales, por lo tanto, se pueden usar diversos materiales de partida sustituidos. Los procedimientos generalmente proporcionan el compuesto final deseado en o cerca del final del procedimiento general, aunque puede ser deseable en determinados casos convertir adicionalmente el compuesto en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los compuestos de la presente descripción se pueden preparar de diversas maneras utilizando materiales de partida disponibles en el mercado, compuestos conocidos en la bibliografía o a partir de intermedios fácilmente preparados, mediante el empleo de procedimientos sintéticos estándar conocidos por los expertos en la materia, o que serán evidentes para el experto en la materia a la luz de las enseñanzas de esta invención. Los procedimientos sintéticos estándar para la preparación de moléculas orgánicas y transformaciones y manipulaciones de grupos funcionales se pueden obtener de la bibliografía científica pertinente o de libros de texto estándar en el campo. Aunque sin limitarse a una o varias fuentes, textos clásicos como Smith, M. B., March, J., March 's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a edición, John Wiley & Sons: Nueva York, 2001;
Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edición, John Wiley & Sons: Nueva York, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser y M. Fieser, Fieser and Fieser 's Reactives for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); y L. Paquette, ed., Encyclopedia o f Reactives for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) son libros de texto de referencia útiles y reconocidos de síntesis orgánica conocidos por los expertos en la materia. Las siguientes descripciones de procedimientos sintéticos están diseñadas para ilustrar, pero no limitar, los procedimientos generales para la preparación de los compuestos de la presente descripción.
Los compuestos de esta descripción que tienen cualquiera de las fórmulas descritas en esta invención se pueden preparar según los procedimientos ilustrados en los Esquemas 1 y 2 a continuación, a partir de materiales de partida disponibles en el mercado o materiales de partida que se pueden preparar usando procedimientos bibliográficos. Las variables en los esquemas (por ejemplo, R<1>, R<2>y R<3>, etc., son como se definen en esta invención). Un experto en la materia observará que, durante las secuencias de reacción y los esquemas sintéticos descritos en esta invención, se puede cambiar el orden de determinadas etapas, tales como la introducción y eliminación de grupos protectores.
Un experto en la materia reconocerá que determinados grupos pueden requerir protección contra las condiciones de reacción mediante el uso de grupos protectores. También se pueden usar grupos protectores para diferenciar grupos funcionales similares en moléculas. Se puede encontrar una lista de grupos protectores y cómo introducir y eliminar estos grupos en Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edición, John Wiley & Sons: Nueva York, 1999.
Los grupos protectores preferidos incluyen, pero sin limitarse a:
Para un resto hidroxilo: TBS, bencilo, THP, Ac;
Para ácidos carboxílicos: éster bencílico, éster metílico, éster etílico, éster alílico;
Para aminas: Fmoc, Cbz, BOC, DMB, Ac, Bn, Tr, Ts, trifluoroacetilo, ftalimida, bencilidenamina;
Para dioles: Ac (x2) TBS (x2), o cuando se toman juntos acetónidos;
Para tioles: Ac;
Para bencimidazoles: SEM, bencilo, PMB, DMB;
Para aldehídos: acetales de di-alquilo tal como dimetoxi acetal o dietil acetilo.
En los esquemas de reacción descritos en esta invención, se pueden producir múltiples estereoisómeros. Cuando no se indica ningún estereoisómero en particular, se entiende que significa todos los estereoisómeros posibles que podrían producirse a partir de la reacción. Un experto en la materia reconocerá que las reacciones se pueden optimizar para proporcionar un isómero preferentemente, o se pueden diseñar nuevos esquemas para producir un único isómero. Si se producen mezclas, se pueden usar técnicas tales como cromatografía en capa fina preparativa, HPLC preparativa, HPLC quiral preparativa o SFC preparativa para separar los isómeros.
Esquema 1
Como se ilustra en el Esquema 1 anterior, el ácido 8 -bromooctanoico reacciona con un alcohol a l (por ejemplo, heptadecan-9-ol) para proporcionar un éster b1 (por ejemplo, 8 -bromooctanoato de heptadecan-9-ilo). La Etapa 1 puede llevarse a cabo en un disolvente orgánico (por ejemplo, diclorometano) en presencia de, por ejemplo, clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida, N,N-diisopropiletilamina y DMAP. La Etapa 1 puede tener lugar a temperatura ambiente durante 18 h. A continuación, el éster b1 reacciona con 2-aminoetan-1-ol para proporcionar amina c1 (por ejemplo, 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo).
La Etapa 2 puede tener lugar en etanol, por ejemplo, a una temperatura de alrededor de 60 °C. A continuación, la amina c1 reacciona con un bromoalquilo R-Br (por ejemplo, 1-bromotetradecano) para proporcionar el compuesto d i (por ejemplo, 8-((2-hidroxietil)(tetradecil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo). La Etapa 3 puede tener lugar en etanol en presencia de N,N-diisopropiletilamina.
Como se ilustra en el Esquema 2 anterior, un ácido a2 (t es un entero entre 1 y 7; por ejemplo, ácido 8 -bromooctanoico) reacciona con un alcohol b2 (por ejemplo, nonan-1-ol) para proporcionar un éster c2 (por ejemplo, nonil-8 -bromooctanoato). La Etapa 1 puede tener lugar en un disolvente orgánico (por ejemplo, diclorometano) en presencia de, por ejemplo, clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida, N,N-diisopropiletilamina y DMAP. El alcohol e2 (por ejemplo, heptadecan-9-ol) se puede obtener a partir de la reacción del aldehido d2 (por ejemplo, nonanal) con un reactivo de Grignard R3-MgX (por ejemplo, n-CsH17-MgBr) a través de la Etapa 2. A continuación, el ácido 8 -bromooctanoico reacciona con un alcohol e2 (por ejemplo, heptadecan-9-ol) para proporcionar un éster f2 (por ejemplo, 8 -bromooctanoato de heptadecan-9-ilo). La Etapa 3 puede tener lugar en un disolvente orgánico (por ejemplo, diclorometano) en presencia de, por ejemplo, clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida,; N,N-diisopropiletilamina y DMAP. A continuación, el éster f2 reacciona con 2 -aminoetan-1-ol para proporcionar amina g2 (por ejemplo, 8 -((2 -hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo). La Etapa 4 puede tener lugar en etanol en presencia de z-Pr<2>EtN. A continuación, la amina g2 reacciona con éster c2 (por ejemplo, nonil-8 -bromooctanoato) para proporcionar el compuesto h2 (por ejemplo, 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo). La Etapa 5 puede tener lugar en un disolvente orgánico (por ejemplo, una mezcla de CPME y MeCN), en presencia de una base (tal como una base inorgánica (por ejemplo, K<2>CO<3>) o una base orgánica no nucleofílica (por ejemplo, z-Pr<2>EtN)) y un catalizador (por ejemplo, un yoduro tal como KI o Nal) a, por ejemplo, una temperatura elevada (tal como a alrededor de 70- 90 °C, por ejemplo, alrededor de 80 °C).
Un experto en la materia reconocerá que en los esquemas anteriores el orden de determinadas etapas puede ser intercambiable.
En determinados aspectos, la descripción también incluye procedimientos para sintetizar un compuesto o compuesto comparativo de cualquiera de las Fórmulas (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (Me), (IId) o (IIe) e intermedio o intermedios para sintetizar el compuesto.
En algunos ejemplos, el procedimiento para sintetizar un compuesto de Fórmula (I) incluye hacer reaccionar un compuesto de Fórmula (X2):
con Ri-Br para proporcionar el compuesto de Fórmula (I), donde cada una de las variables son como se definen en esta invención. Por ejemplo, m es 5, 6, 7, 8 o 9, preferentemente 5, 7 o 9. Por ejemplo, cada uno de R<5>, R6 y R<7>es H. Por ejemplo, M es -C(O)O- o -OC(O)-. Por ejemplo, R<4>es alquilo C<1 -3>no sustituido o -(CH<2>)nQ, en el que n es 2,3 o 4 y Q es OH, -NHC(S)N(R)<2>, -NHC(O)N(R)<2>, -N(R)C(O)R o -N(R)S(O)<2>R, por ejemplo, la reacción del compuesto de Fórmula (X2) con Ri-Br tiene lugar en presencia de una base (tal como una base inorgánica (por ejemplo, K<2>CO<3>) o una base orgánica no nucleofílica (por ejemplo, z-Pr<2>EtN)). Por ejemplo, la reacción tiene lugar en presencia de una base inorgánica (por ejemplo, K<2>CO<3>) y un catalizador (por ejemplo, un yoduro tal como KI o Nal). Por ejemplo, la reacción tiene lugar a una temperatura elevada, por ejemplo, alrededor de 50-100 °C, 70-90 °C o alrededor de 80 °C).
El procedimiento también puede incluir hacer reaccionar un compuesto de Fórmula (X1):
con R<4>NH<2>para proporcionar un compuesto de Fórmula (X2), donde cada una de las variables son como se definen en esta invención.
donde cada una de las variables son como se definen en esta invención. Por ejemplo, el intermedio incluye 8-bromooctanoato de heptadecan-9-ilo y 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo y formas mórficas de los mismos (por ejemplo, una forma cristalina).
Ejemplos
Ejemplo 1: Síntesis de compuestos y compuestos comparativossegún la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), ((lIc), (lId), (lIe) - (compuestos comparativos marcados con *)
A. Consideraciones generales
Todos los disolventes y reactivos utilizados se obtuvieron en el mercado y se utilizaron como tales, a menos que se indique lo contrario. Los espectros de 1H RMN se registraron en CDCl3, a 300 K utilizando un instrumento Bruker Ultrashield 300 MHz. Los cambios químicos se informan como partes por millón (ppm) en relación con TMS (0,00) para 1H. Las cromatografías en gel de sílice se realizaron en instrumentos CombiFlash Rf+ Lumen de ISCO utilizando cartuchos Flash RediSep Rf Gold de ISCO (tamaño de partícula: 20-40 micrómetros). Las cromatografías de fase inversa se realizaron en instrumentos CombiFlash Rf+ Lumen de ISCO utilizando columnas RediSep Rf Gold C18 de alto rendimiento. Se determinó que todos los compuestos finales tenían una pureza superior al 85 % mediante análisis por UPLC-MS de fase inversa (tiempos de retención, RT, en minutos) utilizando el instrumento Waters Acquity UPLC con DAD y ELSD y una columna ZORBAX de alta definición de resolución rápida (RRHD) SB-C18 LC, 2,1 mm, 50 mm, 1,8 pm y un gradiente del 65 al 100 % de acetonitrilo en agua con TFA al 0,1 % durante 5 minutos a 1,2 ml/min. El volumen de inyección fue de 5 pl y la temperatura de la columna fue de 80 °C. La detección se basó en la ionización por electropulverización (ESI) en modo positivo utilizando el espectrómetro de masas Waters SQD (Milford, MA, EE. UU.) y el detector de dispersión de luz evaporativa.
Los procedimientos descritos a continuación son útiles en la síntesis de los Compuestos y compuestos comparativos 1-147.
Se emplean las siguientes abreviaturas en esta invención:
THF: Tetrahidrofurano
MeCN: Acetonitrilo
LAH: Hidruro de litio y aluminio
DCM: Diclorometano
DMAP: 4-Dimetilaminopiridina
LDA: Diisopropilamida de litio
ta: Temperatura ambiente
DME: 1,2-Dimetoxietano
n-BuLi: n-Butillitio
CPME: Ciclopentil metil éter
/-Pr2EtN: N,N-Diisopropiletilamina
B. Compuesto 2: 8-((2-hidroxietil)(tetradecil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Procedimiento representativo 1
8-((2-hidroxietil)(tetradecil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
8-bromooctanoato de heptadecan-9-ilo (Procedimiento A)
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (1,04 g, 4,6 mmol) y heptadecan-9-ol (1,5 g, 5,8 mmol) en diclorometano (20 ml) se le añadió clorhidrato de W-(3-dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida (1,1 g, 5,8 mmol), W,W-diisopropiletilamina (3,3 ml, 18,7 mmol) y DMAP (114 mg, 0,9 mmol). La reacción se dejó agitar a ta durante 18 h. La reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. La capa orgánica se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-10 % en hexanos) para obtener 8-bromooctanoato de heptadecan-9-ilo (875 mg, 1,9 mmol, 41 %). 1H RMN (300 MHz, CDCI<3>) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 3,42 (m, 2H); 2,31 (m, 2H); 1,89 (m, 2H); 1,73-1,18 (br. m, 36H); 0,88 (m, 6H).
8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (Procedimiento B)
Se dejó agitar una solución de 8-bromooctanoato de heptadecan-9-ilo (3,8 g, 8,2 mmol) y 2-aminoetan-1-ol (15 ml, 248 mmol) en etanol (3 ml) a 62 °C durante 18 h.
La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se recogió en acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. La mezcla se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (3,1 g, 7 mmol, 85 %). UPLC/ELSD: RT = 2,67 min. MS (ES): m/z (MH+) 442,68 para C<2 7>H 55NOa1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 3,67 (t, 2H); 2,81 (t, 2H); 2,65 (t, 2H); 2,30 (t, 2H); 2,05 (br. m, 2H); 1,72-1,41 (br. m, 8H); 1,40-1,20 (br. m, 30H); 0,88 (m, 6H).
8-((2-hidroxietil)(tetradecil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (Procedimiento C)
Fórmula química: C<4 1>H<8 3>NO<3>
Peso molecular: 638,12
Se dejó agitar una solución de 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (125 mg, 0,28 mmol), 1-bromotetradecano (94 mg, 0,34 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (44 mg, 0,34 mmol) en etanol a 65 °C durante 18 h. La reacción se enfrió hasta ta y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se recogió en acetato de etilo y solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener 8-((2-hidroxietil)(tetradecil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (89 mg, 0,14 mmol, 50 %). UPLC/ELSD: RT = 3,61 min. MS (ES): m/z (MH+) 638,91 para C<4 1>H<8 3>NO<3>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 3,72-3,47 (br. m, 2H); 2,78-2,40 (br. m, 5H); 2,28 (t, 2H); 1,70-1,40 (m, 10H); 1,38-1,17 (br. m, 54H); 0,88 (m, 9H).
Síntesis de intermedios:
Intermedio A: Ácido 2-octildecanoico
Se enfrió una solución de diisopropilamina (2,92 ml, 20,8 mmol) en THF (10 ml) a -78 °C y se anadió una solución de n-BuLi (7,5 ml, 18,9 mmol, 2,5 M en hexanos). La reacción se dejó calentar a 0 °C. A una solución de ácido decanoico (2,96 g, 17,2 mmol) y NaH (754 mg, 18,9 mmol, 60 % p/p) en THF (20 ml) a 0 °C se le anadió la solución de LDA y se dejó agitar la mezcla a ta durante 30 min. Después de este tiempo se anadió 1- yodooctano (5 g, 20,8 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 45 °C durante 6 h. La reacción se apagó con HCl 1 N (10 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-20 % en hexanos) para proporcionar ácido 2- octildecanoico (1,9 mg, 6,6 mmol, 38 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 2,38 (br. m, 1H); 1,74-1,03 (br. m, 28H); 0,91 (m, 6H).
Intermedio B: 2-octildecanoato de 7-bromoheptilo
El 2-octildecanoato de 7-bromoheptilo se sintetizo usando el procedimiento A a partir de acido 2-octildecanoico y 7-bromoheptano-1-ol. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,09 (br. m, 2H); 3,43 (br. m, 2H); 2,48-2,25 (br. m, 1H); 1,89 (br. m, 2H); 1,74-1,16 (br. m, 36H); 0,90 (m, 6H).
Intermedio C: (2-hexilciclopropil)metanol
Se dejó enfriar una solución de dietilcinc (20 ml, 20 mmol, 1 M en hexanos), en diclorometano (20 ml) a -40 °C durante 5 min. A continuación se añadió gota a gota una solución de diyodometano (3,22 ml, 40 mmol) en diclorometano (10 ml). Después de que la reacción se dejó agitar durante 1 h a -40 °C, se añadió una solución de acido tricloroacético (327 mg, 2 mmol) y DME (1 ml, 9,6 mmol) en diclorometano (10 ml). La reacción se dejó calentar a -15 °C y se agitó a esta temperatura durante 1 h. A continuación, se añadió una solución de (Z)-non-2-en-1-ol (1,42 g, 10 mmol) en diclorometano (10 ml) a la solución a -15 °C. A continuación, la reacción se dejó calentar lentamente hasta ta y se agitó durante 18 h. Después de este tiempo se añadió una solución saturada de NH4Cl (200 ml) y la reacción se extrajo con diclorometano (3X), se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. La capa orgánica se filtró, se evaporó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-50 % en hexanos) para proporcionar (2-hexilciclopropil)metanol (1,43 g, 9,2 mmol, 92 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,64 (m, 2H); 1,57-1,02 (m, 12H); 0,99-0,80 (m, 4H); 0,72 (m, 1H), 0,00 (m, 1H).
C. Compuesto 1*: 8-((2-hidroxietil)(octadecil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<9 1>NO<3>
Peso molecular: 694,23
El compuesto 1 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,86 min. MS (ES): m/z (MH+) 694,93 para C<4 5>H<9 1>NO<3>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (m, 1H); 3,77-3,47 (br. m, 2H); 2,78-2,37 (br. m, 5H); 2,28 (t, 2H); 1,73-1,40 (br. m, 10H), 1,38-1,18 (br. m, 62H); 0,88 (m, 9H).
D. Compuesto 3: 8-((2-hidroxietil)(nonil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<3 6>H<7 3>NO<3>
Peso molecular: 567,98
El compuesto 3 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/<e>L<s>D: RT = 3,36 min. M<s>(ES): m/z (M<h>+) 568,80 para C<3 6>H<7 3>NO<3>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 3,72-3,45 (br. m, 2H); 2,79-2,34 (br.
m, 5H); 2,28 (t, 2H); 1,70-1,38 (m, 10H); 1,38-1,16 (br. m, 44H); 0,88 (m, 9H).
E. Compuesto 4: 8-((2-hidroxietil)(octil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 553,96
El compuesto 4 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,99 min. MS (ES): m/z (MH+) 554,777 para C<3 5>H<7 1>NO<3>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 3,71 (br. s, 2H); 2,70 (br. s, 5H); 2,26 (t, 2H); 1,48-1,59 (br. m,, 10H); 1,24 (m, 42H); 0,86 (t, 9H).
F. Compuesto 5: 8-(hexil(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 7>NO<3>
Peso molecular: 690,20
El compuesto 6 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,77 min. MS (ES): m/z (MH+) 690,84 para C<4 5>H<8 7>NO<3>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 5,37 (m, 4H); 4,86 (br. m, 1H); 3,53 (br. m, 2H); 2,78 (br. m, 2H); 2,58 (br. m, 2H); 2,45 (br. m, 4H); 2,28 (m, 2H); 2,05 (m, 4H), 1,68-1,15 (br. m, 57H); 0,89 (m, 9H).
H. Compuesto 7: 8-((3-hidroxipropil)(nonil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 582,01
El compuesto 7 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,24 min. MS (ES): m/z (MH+) 582,987 para C<3 7>H<7 5>NO<3>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,84 (p, 1H); 3,76 (t, 2H); 2,42-2,66 (br. s, 5H); 2,25 (t, 2H); 1,47-1,68 (br. m, 12H); 1,24 (m, 42H); 0,86 (t, 9H).
I. Compuesto 8: 8-((3-(1H-imidazol-1-il)propil)(nonil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo Etapa 1 :8-((3-cloropropil)(nonil)am ino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C37H74ClNO2
Peso molecular: 600,45
A una solución a 0 °C de 8-((3-hidroxipropil)(nonil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (0,53 g, 0,91 mmol) en 4 ml de DCM se le añadió cloruro de mesilo (0,070 ml, 0,91 mmol) seguido de trietilamina (0,13 ml, 0,91 mmol). La reacción se dejo calentar lentamente a ta y se agitó durante la noche. La reacción se apagó mediante la adición de agua (-10 ml). La mezcla se extrajo con DCM tres veces y los orgánicos agrupados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El aceite bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar 8-((3-cloropropil)(nonil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (0,23 g, 42 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,84 (p, 1H); 3,58 (t, 2H); 2,51 (br. s, 2H); 2,35 (br. s, 2H); 2,26 (2, 2H); 1,86 (br. s, 2H); 1,40-1,60 (br. m, 12H); 1,24 (br. m, 42H); 0,86 (t, 9H). Etapa 2: 8-((3-(1H-imidazol-1-il)propil)(nonil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 632,08
En un matraz de fondo redondo, se combinó 8-((3-cloropropil)(nonil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (50 mg, 0,083 mmol) con imidazol (17 mg, 0,25 mmol), K<2>CO<3>(35 mg, 0,25 mmol) en MeCN (0,5 ml). El matraz se equipó con un condensador y se colocó en un manto de calentamiento a 82 °C y se dejó agitar durante 24 h. Después de este tiempo, la reacción se dejó enfriar hasta ta, se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El aceite bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % [d Cm , MeOH al 20 %, NH<4>OH al 1 %]/MeOH) para proporcionar el producto deseado como un aceite transparente (39 mg, 74 %). UPLC/ELSD: r T = 2,92 min. MS (ES): m/z (MH+) 633,994 para C<4 0>H<7 7>N<3>O<2>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,46 (s, 1H); 7,05 (s, 1H); 6,91 (s, 1H); 4,84 (dt, 1H); 4,02 (br. s, 2H); 2,47 (br. s, 4H); 2,26 (t, 2H); 2,00 (br. s, 2H); 1,47-1,59 (br. m, 10H); 1,24 (br. m, 44H); 0,86 (t, 9H).
J. Compuesto 9*: 8-((2-acetoxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<8 9>NO<6>
Peso molecular: 752,22
A una solución de 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (100 mg, 0,14 mmol) y ácido acético<( 8>mg, 0,13 mmol) en diclorometano (1 ml) se le añadió clorhidrato de N-(3-Dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (31 mg, 0,16 mmol), N,N-diisopropiletilamina (73 mg, 0,56 mmol) y DMAP (3 mg, 0,02 mmol). La reacción se dejó agitar a ta durante 18 h. La reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO<4>. La capa orgánica se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar<8>-((<2>-acetoxietil)(<8>-(noniloxi)-<8>-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo<( 6 3>mg, 0,08 mmol). UPLC/e Ls D: RT = 3,63 min. MS (ES): m/z (m H+) 753,07 para C<4 6>H<8 9>NO<6>.1H RMN (300 MHz, CDCla)<8>: ppm 4,87 (p, 1H); 4,17-3,99 (m, 4H); 2,67 (m, 2H); 2,43 (m, 3H), 2,29 (m, 4H), 2,05 (s, 3H); 1,71-1,17 (br. m, 63H); 0,88 (m, 9H).
K. Compuesto 10*: 8-((2-hidroxipropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 724,21
El compuesto 12 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 5,30 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,10 para C<4 5>H<8 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 4,05 (t, 2H); 3,71 (br. m, 1H); 2,64-2,10 (br. m, 8H); 1,71-1,03 (br. m, 68H); 0,88 (m, 9H).
N. Compuesto 13*: 8-((2-hidroxibutil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Formula química: C<4 6>H<9 1>NO<5>
Peso molecular: 738,24
El compuesto 13 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,89 min. MS (ES): m/z (MH+) 739,21 para C<4 6>H<9 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 4,05 (t, 2H); 3,58-3,38 (br. m, 1H); 2,65-2,15 (br. m, 9H); 1,72-1,12 (br. m, 66H); 0,98 (t, 3H); 0,88 (m, 9H).
O. Compuesto 14*: 8-((2-(dimetilamino)etil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<9 2>N<2>O<4>
Peso molecular: 737,252
El compuesto 14 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,51 min. MS (ES): m/z (MH+) 738,23 para C<4 6>H<9 2>N<2>O<4>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,84 (p, 1H); 4,04 (t, 2H); 2,95 (m, 2H); 2,78 (m, 6H); 2,44 (s, 6H); 2,28 (m, 4H); 1,70-1,41 (br. m, 14H); 1,41-1,14 (br. m, 48H); 0,87 (m, 9H).
P. Compuesto 15*: 8-((2-metoxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 724,21
El compuesto 15 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,90 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,19 para C<4 5>H<8 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 4,05 (t, 2H); 3,43 (m, 2H); 3,34 (s, 3H); 2,61 (m, 2H); 2,43 (m, 3H); 2,29 (m, 4H); 1,70-1,15 (br. M, 63H); 0,88 (m, 9H).
Q. Compuesto 16*: 8-((3-metoxipropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Formula química: C<4 6>H<9 1>NO<5>
Peso molecular: 738,236
El compuesto 16 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,90 min. MS (ES): m/z (MH+) 739,13 para C<4 6>H<9 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 6: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,42 (m, 2H); 3,35 (s, 3H); 2,55-2,21 (m, 9H); 1,81-1,18 (br. m, 65H); 0,88 (m, 9H).
R. Compuesto 17*: 8-((2-(2-(dimetilamino)etoxi)etil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Formula química: C<4 8>H<9 6>N<2>O<5>
Peso molecular: 781,305
El compuesto 17 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,72 min. MS (ES): m/z (MH+) 782,27 para C<4 8>H<9 6>N<2>O<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 4,88 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (m, 4H); 2,72 (m, 2H); 2,52 (m, 5H); 2,38-2,13 (br. m, 12H); 1,73 1,19 (br. m, 61H); 0,90 (m, 9H).
S. Compuesto 18: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Formula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,18
El compuesto 18 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente o según el esquema a continuacion:
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,21
El compuesto 19 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 4,51 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,19 para C<4 5>H<8 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 5: ppm 4,86 (p, 1H); 4,05 (t, 2H); 3,80 (m, 2H); 2,92-2,36 (br. m, 5H), 2,29 (m, 4H), 1,89-1,42 (br. m, 16H); 1,42-1,02 (br. m, 50H); 0,88 (m, 9H).
U. Compuesto 20: 8-((4-hidroxibutil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<9 1>NO<5>
Peso molecular: 738,24
El compuesto 20 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,84 min. MS (ES): m/z (MH+) 739,21 para C<4 6>H<9 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 5: ppm 4,86 (p, 1H); 4,05 (t, 2H); 3,77-3,45 (br. m, 2H); 2,63-2,20 (br. m, 8H); 1,82-1,40 (br. m, 18H); 1,40-1,15 (br. m, 51H); 0, 88 (m, 9H).
V. Compuesto 21*: 8-((2-cianoetil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 6>N<2>O<4>
Peso molecular: 719,19
El compuesto 21 se sintetizó según el procedimiento general y
el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 4,04 min. MS (ES): m/z (MH+) 720,18 para C<4 5>H<8 6>N<2>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,88 (p, 1H); 4,07 (t, 2H); 2,81 (m, 2H); 2,44 (m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,73-1,18 (br. m, 63H); 0,89 (m, 9H).
W. Compuesto 22*: 8-((2-hidroxicidohexN)(8-(nomloxi)-8-oxooctM)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 8>H<9 3>NO<5>
Peso molecular: 764,27
El compuesto 22 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 4,54 min. MS (ES): m/z (MH+) 765,21 para C<4 8>H<9 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 4,05 (t, 2H); 2,89-2,34 (br. m, 4H); 2,28 (m, 4H); 2,00 (m, 1H); 1,86-0,99 (br. m, 72H); 0,88 (m, 9H).
X. Compuesto 23: 10-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)decanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<9 1>NO<5>
Peso molecular: 738,24
El compuesto 23 se sintetizó según el procedimiento general y
el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,75 min. MS (ES): m/z (MH+) 739,13 para C<4 6>H<9 1>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (m, 1H); 4,05 (m, 2H); 3,72-3,46 (br. m, 2H); 2,81-2,35 (br. m, 5H); 2,29 (m, 4H); 1,71-1,40 (br. m, 13H); 1,40-1,15 (br. m, 55H); 0,88 (m, 9H).
Y. Compuesto 24*: (Z)-8 ((2-hidroxietil)(8-(non-2-en-1-iloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C44H85NO5
Peso molecular: 708,17
El compuesto 24 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,54 min. MS (ES): m/z (MH+) 708,95 para C<4 4>H<8 5>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm: 5,74-5,44 (br. m, 2H), 4,86 (m, 1H); 4,62 (m, 2H); 3,71-3,40 (br. m, 2H); 2,81-2,37 (br. m, 5H); 2,29 (m, 4H); 2,09 (m, 2H); 1,70-1,14 (br. m, 58H); 0,88 (m, 9H).
Z. Compuesto 25: 8-((2-hidroxietil)(6-oxo-6-(undeciloxi)hexil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Formula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,182
El compuesto 25 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,66 min. MS (ES): m/z (MH+) 711,00 para C<4 4>H<8 7>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,86 (m, 1H); 4,05 (t, 2H); 3,68-3,46 (br. m, 2H); 2,77-2,37 (br. m, 5H); 2,29 (m, 4H); 1,74-1,41 (br. m, 14H); 1,39-1,18 (m, 50H); 0,88 (m, 9H).
AA. Compuesto 26:8-((2-hidroxietil)(4-(noniloxi)-4-oxobutil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 0>H<7 9>NO<5>
Peso molecular: 654,07
El compuesto 26 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 4,29 min. MS (ES): m/z (MH+) 655,07 para C<4 0>H<7 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 4,06 (t, 2H); 3,79 (br. m, 2H); 2,91-2,20 (br. m, 10H); 1,98-1,03 (br. m, 55H); 0,88 (m, 9H).
AB. Compuesto 27:8-((6-(heptadecan-9-iloxi)-6-oxohexil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C42H83NO5
Peso molecular: 682,13
El compuesto 27 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,57 min. MS (ES): m/z (MH+) 683,12 para C<4 2>H<8 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm: 4,86 (m, 1H); 4,05 (m, 2H); 3,70-3,45 (br. m, 2H); 2,78-2,35 (br. m, 5H), 2,29 (m, 4H); 1,73-1,41 (m, 13H); 1,41-1,16 (m, 47H); 0,88 (m, 9H).
AC. Compuesto 28*: 8-((8-((2-hexNcidopropN)metoxi)-8-oxooctN)(2-hidroxietM)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
F ó rm u la qu ím ica : C<45>H<87>N O<5>
P eso m o lecu la r: 722 ,19
El compuesto 28 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente usando el intermedio C. UPLC/ELSD: RT = 5,17 min. MS (ES): m/z (MH+) 722,97 para C<4 5>H<8 7>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm: 4,86 (p, 1H); 4,17 (m, 1H); 3,93 (m, 1H); 3,61 (br. m, 2H); 2,97 2,37 (br. m, 6H); 2,35-2,21 (m, 4H); 1,74-0,97 (br. m, 60H); 0,94-0,79 (m, 10H), 0,74 (m, 1H); 0,01 (m, 1H). AD. Compuesto 29*: 8,8'-((2-hidroxietil)azanodiil)dioctanoato de di(heptadecan-9-ilo)
Fórmula química: C<5 2>H<1 0 3>NO<5>
Peso molecular: 822,40
El compuesto 29 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,98 min. MS (ES): m/z (MH+) 823,19 para C<5 2>H<1 0 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (m, 2H); 3,72-3,44 (br. m, 2H); 2,83- 2,34 (br. m, 5H); 2,28 (m, 4H); 1,69-1,39 (br. m, 16H); 1,39-1,16 (br. m, 62H); 0,88 (m, 12H).
AE. Compuesto 30: 2-octildecanoato de 7-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)heptilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,18
El compuesto 30 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente usando el intermedio B. UPLC/ELSD: RT = 3,55 min. MS (ES): m/z (MH+) 711,16 para C<4 4>H<8 7>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,06 (m, 4H); 3,69-3,44 (br. m, 2H); 2,71-2,39 (br. m, 5H); 2,29 (m, 3H); 1,70-1,16 (br. m, 64H); 0,88 (m, 9H).
AF. Compuesto 31*: (Z)-8-((2-hidroxietil)(octadec-9-en-1-il) amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 692,21
El compuesto 31 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,83 min. MS (ES): m/z (MH+) 693,20 para C<4 5>H<8 9>NO<3>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 5,37 (m, 2H); 4,89 (p, 1H); 3,58 (br. m, 2H); 2,72-2,43 (br. m, 5H); 2,30 (m, 2H); 2,05 (m, 4H); 1,71-1,03 (br. m, 63H), 0,90 (m, 9H).
AG. Compuesto 32: 8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(pentadecan-7-iloxi)octil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 3>NO<5>
Peso molecular: 682,13
El compuesto 32 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,45 min. MS (ES): m/z (MH+) 683,20 para C<4 2>H<8 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,60 (br. m, 2H); 2,85-2,40 (br. m, 5H); 2,31(m, 4H), 1,78-1,01 (m, 59H), 0,90 (m, 9H).
AH. Compuesto 33:8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(tetradecan-6-iloxi)octil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<4 1>H<8 1>NO<5>
Peso molecular: 668,10
El compuesto 33 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,39 min. MS (ES): m/z (MH+) 669,09 para C<4 1>H<8 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,84 - 3,54 (br. m, 2H); 2,99-2,41 (br. m, 5H); 2,31 (m, 4H), 1,76-1,02 (br. m, 57H), 0,90 (m, 9H).
AI. Compuesto 34:8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de dodecan-4-ilo
F ó rm u la qu ím ica : C38H75NO5
P eso m o lecu la r: 626 ,02
El compuesto 35 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,16 min. MS (ES): m/z (MH+) 627,11 para C<3 8>H<7 5>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,83 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,63 (br. m, 2H); 2,81-2,39 (br. m, 5H); 2,31 (m, 4H), 1,74-1,01 (br. m, 51H), 0,90 (m, 9H).
AK. Compuesto 36: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de decan-2-ilo
Fórmula química: C<3 7>H<7 3>NO<5>
Peso molecular: 611,99
El compuesto 36 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,05 min. MS (ES): m/z (MH+) 613,00 para C<3 7>H<7 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,91 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,55 (m, 2H); 2,60 (m, 2H); 2,47 (m, 4H); 2,29 (m, 4H), 1,731-1,01 (m, 51H), 0,90 (m, 6H).
AL. Compuesto 47*: 8-((2-hidroxietM)(8-(2-octMcidopropM)octM)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<9 1>NO<3>
Peso molecular: 706,24
El compuesto 47 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,92 min. MS (ES): m/z (MH+) 707,39 para C<4 6>H<9 1>NO<3>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 3,56 (br. m, 2H); 2,72-2,38 (br. m, 5H); 2,28 (t, 2H); 1,70-1,02 (br. m, 67H), 0,88 (m, 9H); 0,71-0,49 (m, 4H); -0,33 (m, 1H).
AM. Compuesto 48*: 8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de decan-2-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,21
El compuesto 48 se sintetizó según el procedimiento general y
el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,60 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,10 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,91 (m, 2H); 3,59 (br. m, 2H); 2,79-2,37 (br. m, 5H); 2,29 (m, 4H); 1,74-1,13 (m, 66H); 0,90 (m, 9H).
AN. Compuesto 49*: 8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(undecan-3-iloxi)octil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 738,24
El compuesto 49 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,68 min. MS (ES): m/z (MH+) 739,21 para C<4 6>H<9 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,89 (m, 2H); 3,56 (br. m, 2H); 2,68-2,39 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,71-1,19 (m, 66H); 0,90 (m, 12H).
AO. Compuesto 50*: 8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de dodecan-4-ilo
Fórmula química: C<4 7>H<9 3>NO<5>
Peso molecular: 752,26
El compuesto 50 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,73 min. MS (ES): m/z (MH+) 753,23 para C<4 7>H<9 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,89 (m, 2H); 3,60 (br. m, 2H); 2,75-2,43 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,71-1,44 (m, 16H); 1,28 (m, 51H); 0,90 (m, 12H).
AP. Compuesto 51: 8-((4-butoxi-4-oxobutil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<3 5>H<6 9>NO<5>
Peso molecular: 583,94
El compuesto 51 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,05 min. MS (ES): m/z (MH+) 584,87 para C<3 5>H<6 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,10 (t, 2H); 3,61 (br. m, 2H); 2,81-2,21 (br. m, 9H); 1,87 (br. m, 2H), 1,70-1,04 (m, 43H), 0,98-0,82 (m, 9H).
AQ. Compuesto 52: 8-((2-h¡drox¡et¡lH4-oxo-4-(pent¡lox¡)butil)am¡no)octanoato de heptadecan-9-ilo
F ó rm u la qu ím ica : C<36>H<71>N O<5>
P eso m o lecu la r: 597 ,97
El compuesto 52 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,11 min. MS (ES): m/z (MH+) 598,90 para C<3 6>H<7 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,09 (t, 2H); 3,61 (br. m, 2H); 2,89-2,22 (br. m, 9H); 1,87 (rbr. m, 2H), 1,73-1,43 (m, 11H), 1,28 (m, 34H); 0,90 (m, 9H).
AR. Compuesto 53: 8-((4-(hexiloxi)-4-oxobutil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<3 7>H<7 3>NO<5>
Peso molecular: 611,99
El compuesto 53 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,22 min. MS (ES): m/z (MH+) 612,92 para C<3 7>H<7 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 4,06 (t, 2H); 3,55 (br. m, 2H); 2,68-2,38 (br. m, 5H); 2,28 (m, 4H); 1,79 (br. m, 2H); 1,71-0,96 (m, 48H); 0,88 (m, 9H).
AS. Compuesto 54: 8-((4-(heptiloxi)-4-oxobutil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<3 8>H<7 5>NO<5>
Peso molecular: 626,02
El compuesto 54 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,28 min. MS (ES): m/z (MH+) 626,94 para C<3 8>H<7 5>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,09 (t, 2H); 3,60 (br. m, 2H); 2,77-2,42 (br. m, 5H); 2,32 (m, 4H); 1,84 (br. m, 2H); 1,75-1,03 (m, 49H); 0,90 (m, 9H).
AT. Compuesto 55*: 8-((4-((2-hexMcidopropN)metoxi)-4-oxobutM)(2-hidroxietN)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 1>H<7 9>NO<5>
Peso molecular: 666,09
El compuesto 55 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,37 min. MS (ES): m/z (MH+) 667,04 para C<4 1>H<7 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,83 (p, 1H); 4,15 (m, 1H); 3,95 (m, 1H); 3,53 (br. m, 2H); 2,66-2,39 (br. m, 5H); 2,34-2,19 (m, 4H); 1,78 (br. m, 2H); 1,66- 0,98 (m, 50H); 0,85 (m, 10H); 0,70 (m, 1H); 0,00 (m, 1H).
AU. Compuesto5 6: 8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(tridecan-7-iloxi)octil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<4 0>H<7 9>NO<5>
Peso molecular: 654,07
El compuesto 56 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,28 min. MS (ES): m/z (MH+) 654,99 para C<4 0>H<7 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 6: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,60 (br. m, 2H); 2,77-2,40 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,78-0,99 (m, 55H); 0,90 (m, 9H).
AV. Compuesto 57: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de nonan-5-ilo
Fórmula química: C<3 6>H<7 1>NO<5>
Peso molecular: 597,97
El compuesto 57 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,88 min. MS (ES): m/z (MH+) 598,98 para C<3 6>H<7 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,59 (br. m, 2H); 2,82-2,37 (br. m, 5H); 2,31 (m, 4H); 1,73-1,03 (m, 47H); 0,91 (m, 9H).
AW. Compuesto 58: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptan-4-ilo
Fórmula química: C<3 4>H<6 7>NO<5>
Peso molecular: 569,91
El compuesto 58 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,67 min. MS (ES): m/z (MH+) 570,93 para C<3 4>H<6 7>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 6: ppm 4,93 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (br. m, 2H); 2,69-2,42 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,72-1,04 (m, 43H); 0,93 (m, 9H).
AX. Compuesto 59: 8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(pentan-3-iloxi)octil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<3 2>H<6 3>NO<5>
Peso molecular: 541,86
El compuesto 59 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,39 min. MS (ES): m/z (MH+) 542,80 para CC<3 2>H<5 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 6: ppm 4,78 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (br. m, 2H); 2,71-2,39 (br. m, 5H); 2,31 (m, 4H); 1,77-1,05 (m, 39H); 0,90 (m, 9H).
AY. Compuesto 60: 8-((2-h¡drox¡et¡l)(8-(non¡lox¡)-8-oxooct¡l)am¡no)octanoato de (5Z,12Z)-heptadeca-5,12-dien-9-ilo
(5Z,12Z)-heptadeca-5,12-d¡en-9-ol
Fórmula química: C<1 7>H<3 2>O
Peso molecular: 252,44
A una solución de (Z)-1-bromooct-3-eno (6,2 g, 32,4 mmol) en THF (45 ml) se le añadieron torneados de Mg (0,843 g, 34,7 mmol). La reacción se calentó a 45 °C durante 3 h. La reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota formiato de etilo (2,4 g, 32,4 mmol) en THF (5 ml). La reacción se dejó calentar a ta y se agitó durante 30 min. La reacción se enfrió a 0 °C y se apagó con agua (15 ml) y HCl 6 N (15 ml). La reacción se agitó hasta que se disolvió todo el Mg. Se añadió agua (25 ml) y la mezcla se extrajo con hexanos (3X25 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en EtOH (20 ml), se añadió una solución de KOH en agua (1,76 g en 8 ml de agua) y se dejó agitar durante 15 min. El EtOH se evaporó al vacío. El residuo se diluyó con agua (20 ml), se acidificó con HCl 6 N (20 ml) y se extrajo con hexanos (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se separaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-5 %) en hexanos para obtener (5Z,12Z)-heptadeca-5,12-dien-9-ol (2,3 g, 9,1 mmol, 28 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 5,41 (m, 4); 3,66 (m, 1H); 2,13 (m, 8H); 1,51 (m, 5H); 1,36 (m, 8H); 0,92 (m, 6H).
8-((2-h¡drox¡et¡l)(8-(non¡lox¡)-8-oxooct¡l)am¡no)octanoato de (5Z,12Z)-heptadeca-5,12-d¡en-9-¡lo
Peso molecular: 706,15
El compuesto 60 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,36 min. MS (ES): m/z (MH+) 707,10 para C<4 4>H<8 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 6: ppm 5,37 (m, 4H); 4,92 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (br. m, 2H); 2,73-2,38 (br. m, 5H); 2,31 (m, 4H), 2,04 (m, 8H), 1,73-1,01 (m, 47H), 0,92 (m, 9H).
AZ. Compuesto 61: 8-((2-hidroxietil)(6-oxo-6-(undeciloxi)hexil)amino)octanoato de (5Z,12Z)-heptadeca-5,12-dien-9-ilo
Peso molecular: 750,247
El compuesto 65 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,72 min. MS (ES): m/z (MH+) 750,9 para C<4 7>H<9 1>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 4,28 (m, 1H), 3,54 (m, 2H); 2,59 (m, 2H), 2,46 (m, 4H); 2,29 (m, 4H), 1,73-1,18 (m, 61H), 0,90 (m, 10H), 0,62-0,33 (m, 3H), 0,28 (m, 1H).
X2. Compuesto 66*: 8-((2-hidroxietN)(8-oxo-8-((4-pentNcidohexN)oxi)octN)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 736,220
El compuesto 66 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,72 min. MS (ES): m/z (MH+) 736,9 para C<4 6>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 5,00 (m, 0,5H); 4,89 (m, 1H); 4,68 (m, 0,6H); 3,56 (m, 2H), 2,61 (br. m, 2H), 2,48 (m, 4H), 2,30 (m, 4H); 1,98 (m, 1H); 1,82 (m, 2H); 1,73-1,14 (m, 61H); 1,04 (m, 1H); 0,90 (m, 9H).
X3. Compuesto 67*: 8-((2-hidroxietN)(4-oxo-4-((4-pentNddohexN)oxi)butN)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 1>NO<5>
Peso molecular: 680,112
El compuesto 67 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,56 min. MS (ES): m/z (MH+) 680,8 para C<4 2>H<8 1>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 5,01 (m, 0,4H); 4,89 (m, 1H); 4,68 (m, 0,6H); 3,59 (m, 2H); 2,72-2,43 (br. m, 6H); 2,30 (m, 4H); 1,98 (m, 1H); 1,83 (m, 4H); 1,69-1,44 (m, 10H); 1,28 (m, 41H); 1,03 (m, 1H); 0,90 (m, 9H).
X4. Compuesto 68*: 8-((2-hidroxietN)(6-oxo-6-((4-pentMcidohexM)oxi)hexM)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 5>NO<5>
Peso molecular: 708,166
El compuesto 68 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,66 min. MS (ES): m/z (MH+) 708,9 para C<4 4>H<8 5>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 5,00 (m, 0,5H); 4,89 (m, 1H); 4,68 (m, 0,6H); 3,55 (m, 2H); 2,66-2,39 (br. m, 6H); 2,30 (m, 4H); 1,97 (m, 1H); 1,83 (m, 2H); 1,73-1,41 (m, 15H); 1,41-1,17 (m, 42H); 1,04 (m, 1H); 0,90 (m, 9H).
XX1. Compuesto 69*: 8-((2,3-dihidroxipropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<6>
Peso molecular: 740,21
El compuesto 69 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,60 min. MS (ES): m/z (MH+) 741,0 para C<4 5>H<8 9>NO<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,76 (br. m, 2H); 3,51 (m, 1H); 2,57 (m, 6H), 2,31 (m, 4H); 1,71-1,41 (m, 14H); 1,41- 1,12 (m, 48H); 0,90 (m, 9H).
XX2. Compuesto 70*: 8-((4-(decan-2-iloxi)-4-oxobutil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 1>H<8 1>N<0 5>
Peso molecular: 667,61
El compuesto 70 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,44 min. MS (ES): m/z (MH+) 668,9 para C<4 1>H<8 1>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,91 (m, 2H); 3,57 (m, 2H); 2,71-2,40 (m, 5H); 2,30 (m, 4H), 1,80 (m, 2H); 1,71-1,40 (m, 11H); 1,39-1,05 (m, 45H); 0,90 (m, 9H).
X5. Compuesto 71*: 8-((2-hidroxietil)(4-oxo-4-(tetradecan-6-iloxi)butil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 71 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,72 min. MS (ES): m/z (MH+) 724,9 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,89 (m, 2H); 3,56 (m, 2H); 2,70- 2,41 (m, 6H); 2,33 (m, 4H), 1,80 (m, 2H); 1,69-1,41 (m, 13H); 1,28 (m, 48H); 0,90 (m, 12H).
XX3. Compuesto 72*: 8-((2-hidroxietil)(4-oxo-4-(undecan-3-iloxi)butil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 3>NO<5>
Peso molecular: 682,13
El compuesto 72 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,57 min. MS (ES): m/z (MH+) 683,0 para C<4 2>H<8 3>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (m, 2H); 3,58 (br. m, 2H); 2,75-2,41 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H), 1,81 (br. m, 2H), 1,70-1,42 (m, 13H); 1,40-1,18 (m, 42H); 0,90 (m, 12H).
X6. Compuesto 73*: 8-((2-hidroxietil)(4-oxo-4-(pentadecan-7-iloxi)butil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<9 1>NO<5>
Peso molecular: 738,236
El compuesto 73 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,80 min. MS (ES): m/z (MH+) 739,09 para C<4 6>H<9 1>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (m, 2H); 3,59 (br. m, 2H); 2,81-2,43 (br. m, 6H); 2,31 (m, 4H); 1,83 (m, 2H); 1,69-1,42 (m, 12H); 1,28 (m, 50H); 0,90 (m, 12H).
X7. Compuesto 74*: 8-((4-(dodecan-4-iloxi)-4-oxobutil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 3>H<8 5>NO<5>
Peso molecular: 696,155
El compuesto 74 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,68 min. MS (ES): m/z (MH+) 696,9 para C<4 3>H<8 5>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (m, 2H); 3,56 (m, 2H); 2,70- 2,41 (m, 6H); 2,30 (m, 4H), 1,80 (m, 2H); 1,70-1,40 (m, 12H); 1,28 (m, 44H), 0,90 (m, 12H).
XX4. Compuesto 75*: 8-((2-hidroxietil)(6-oxo-6-(undecan-3-iloxi)hexil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,18
El compuesto 75 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,67 min. MS (ES): m/z (MH+) 711,1 para C<4 4>H<8 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,86 (m, 2H); 3,57 (m, 2H); 2,72-2,40 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,70-1,42 (m, 16H); 1,28 (m, 45H); 0,90 (m, 12H).
XX5. Compuesto 79*: 8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-((4-pentilciclohexil)oxi)octil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C38H73NO5
Peso molecular: 624,00
El compuesto 79 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,10 min. MS (ES): m/z (MH+) 624,8 para C<3 8>H<7 3>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 5,00 (br. m, 0,5H); 4,68 (m, 0,5H); 4,08 (t, 2H); 3,56 (m, 2H); 2,72-2,38 (m, 6H); 2,31 (m, 4H), 1,97 (m, 1H); 1,82 (m, 2H); 1,73-0,95 (m, 48H), 0,90 (m, 6H).
XX6. Compuesto 80*: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de [1,1'-bi(ciclohexan)]-4-ilo
Fórmula química: C<3 9>H<7 3>NO<5>
Peso molecular: 636,02
El compuesto 80 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,10 min. MS (ES): m/z (MH+) 636,9 para C<3 9>H<7 3>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 5,01 (br. m, 0,5H); 4,65 (m, 0,5H); 4,08 (t, 2H); 3,56 (m, 2H); 2,69-2,36 (m, 6H); 2,31(m, 4H); 2,07-0,84 (m, 57H).
XX7. Compuesto 81*: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de ciclopentadecilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 1>NO<5>
Peso molecular: 680,11
El compuesto 81 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,36 min. MS (ES): m/z (MH+) 681,0 para C<4 2>H<8 1>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,91 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (br. m, 2H); 2,74-2,39 (m, 6H); 2,30(m, 4H), 1,73-1,03 (m, 62H), 0,90 (m, 3H).
XX8. Compuesto 94*: 8-(bencil(8-noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo 8-(bencilamino)octanoato de heptadecan-9-ilo)
Fórmula química: C<3 2>H<5 7>NO<2>
Peso molecular: 487,81
Se dejó agitar una solución de 8-bromooctanoato de heptadecan-9-ilo (250 mg, 0,542 mmol) en fenilmetanamina (1,2 ml, 10,83 mmol) a ta durante 6 h. La reacción se enfrió hasta ta y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se recogió en acetato de etilo y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (20-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener 8-(bencilamino)octanoato de heptadecano-9-ilo (200 mg, 0,41 mmol, 76 %). UPLC/ELSD: RT = 2,87 min. MS (ES): m/z (MH+) 488,4 para C<3 2>H<5 7>NO<2>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,35-7,25 (br. m, 5H); 4,89 (p, 1H); 3,81 (s, 2H); 2,65 (t, 2H); 2,29 (t, 2H); 1,65 1,51 (br. m, 8H); 1,28 (m, 30H); 0,90 (m, 6H).
8-(bencil(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
F ó rm u la qu ím ica : C<49>H<89>N O<4>
P eso m o lecu la r: 756 ,25
Se disolvió una solución de<8>-(bencilamino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,41 mmol),<8>-bromooctanoato de nonilo (172 mg, 0,49 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (100 pl, 0,57 mmol) en etanol y se dejó agitar a 62 °C durante 48 h. La reacción se enfrió hasta ta y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se recogió en acetato de etilo y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera , se secó sobre Na<2>SO<4>y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener<8>-(bencil(<8>-(noniloxi)-<8>-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (138 mg, 0,18 mmol, 45 %). UPLC/ELSD: RT = 3,78 min. MS (ES): m/z (MH+) 757,0 para C<4 9>H<8 9>NO<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 7,33-7,23 (br. m, 5H); 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,55 (s, 2H); 2,40 (m, 4H); 2,30 (m, 4H); 1,64-1,28 (br. m, 62H); 0,90 (m, 9H).
X8. Compuesto 96:Decanoato de 7-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)heptilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,182
El compuesto 96 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,74 min. MS (ES): m/z (MH+) 711,0 para C<4 4>H<8 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,61 (m, 2H); 2,88-2,37 (br. m, 6H); 2,31 (m, 4H), 1,79-1,04 (m, 62H); 0,90 (m, 9H).
X9. Compuesto 98*: Decanoato de 8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octan-2-ilo Octano-1,7-diol
Fórmula química: C<8>H<1 8>O<2>
Peso molecular: 146,230
Se añadió una solución de ácido 7-oxooctanoico (4 g, 25,29 mmol) en THF (10 ml) a una solución agitada de LAH en THF (70 ml) en N<2>a 0 °C. La mezcla se dejó calentar a ta y se agitó a ta durante 4 h, después de lo cual se añadieron 10 ml de una solución (ac) sat. de Na2SO4.10H2O a la solución lentamente. Se dejó caer el sólido blanco. Se añadió Na2SO4.10H2O sólido adicional y la mezcla se filtró a través de un tapón de celite. El filtrado se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-40 %) en hexanos para obtener octano-1,7-diol (2,97 g, 20,31 mmol, 80 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 3,81 (m, 1H); 3,66 (t, 2H); 1,66-1,31 (m, 12H); 1,22 (d, 3H).
8-((ferc-butNdifemlsMN)oxi)octan-2-ol
F ó rm u la qu ím ica : C<24>H<36>O<2>SÍ
P eso m o lecu la r: 384 ,635
A una solución de octano-1,7-diol (1 g, 6,84 mmol) en DCM (75 ml) a 0 °C se le añadió imidazol (0,94 g, 13,81 mmol) seguido de la adición lenta de una solución de íerc-butil(cloro)difenilsilano (2,14 ml, 8,21 mmol) en DCM (utilizando embudo de decantación). La reacción se dejó agitar a 0 °C durante 1,5 h. La reacción se apagó con una solución (ac) saturada de NH<4>CI. La capa acuosa se extrajo 3 veces con un DCM (3 * 50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró, y el disolvente se evaporó. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice ultrarrápida con EtOAc al 0-10 % en hexanos para obtener 8-((ferc-butildifenilsilil)oxi)octan-2-ol (2,29 g, 5,95 mmol, 87 %). 1H RMN (300 MHz, CDCI<3>) 6: ppm 7,69 (m, 4H); 7,42 (m, 6H); 3,80 (m, 1H); 3,68 (t, 2H); 1,59 (m, 2H); 1,50-1,26 (m, 9H); 1,21 (d, 3H); 1,07 (s, 9H). Decanoato de 8-((ferc-butNdifenMsNN)oxi)octan-2-No
Fórmula química: C34H54O3Si
Peso molecular: 538,888
El decanoato de 8-((ferc-butildifenilsilil)oxi)octan-2-ilo se sintetizó según el procedimiento A. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 7,69 (m, 4H); 7,42 (m, 6H); 4,92 (m, 1H); 3,67 (t, 2H); 2,29(t, 2H); 1,67-1,42 (m, 6H); 1,41-1,17 (m, 21H); 1,07 (s, 9H); 0,90 (m, 3H).
Decanoato de 8-hidroxioctan-2-ilo
Fórmula química: C<1 8>H<3 6>O<3>
Peso molecular: 300,483
A una solución de decanoato de 8-[(ferc-butildifenilsilil)oxi]octan-2-ilo (1,08 g, 2 mmol) en THF se le añadió TBAF (8,02 ml en solución 1 M en t Hf , 8,02 mmol) y se dejó agitar la mezcla a ta durante 3 h. Los disolventes orgánicos se evaporaron al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución sat. de NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-40 %) en hexanos para obtener decanoato de 8-hidroxioctano-2-ilo (0,55 g, 1,82 mmol, 91 %). 1H RMN (300 MHz, C<d>CI3) 6: ppm 4,91 (m, 1H); 3,66 (t, 2H); 2,29 (t, 2H); 1,72-1,17 (m, 28H); 0,90 (m, 3H).
Decanoato de 8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octan-2-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 98 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,55 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCI<3>) 6: ppm 4,89 (m, 2H); 3,58 (br. m, 2H); 2,77-2,40 (m, 6H); 2,29 (m, 4H); 1,72-1,41 (m, 14H); 1,28 (m, 51H); 0,90 (m, 9H).
X10. Compuesto 101*: 8-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
8-((2-cloroetil)(8-(nomloxi)-8-oxooctil)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 6>CINO<4>
Peso molecular: 728,63
A una solución de 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (1100 mg, 1,55 mmol) en diclorometano (25 ml) a 0 °C se le añadió W-clorosuccinimida en una porción. La reacción se dejó agitar a 0 °C durante 1 h, seguido de 1 h a temperatura ambiente. Se añadieron 90 ml de hexanos y se dejó que la reacción se agitara a temperatura ambiente durante 20 min. Se eliminó por filtración el sólido blanco a través de un tapón de gel de sílice y se lavó tres veces con hexanos. Las capas orgánicas se concentraron al vacío. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 6: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (m, 2H); 2,85 (m, 2H); 2,54 (m, 4H); 2,33-2,27 (m, 4H); 1,66- 1,28 (br. m, 62H); 0,90 (m, 9H).
8-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)(8-(noniloxi)-8- oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 792,33
Se disolvió una solución de 1-metilpiperazina (15 mg, 0,151 mmol), 8-((2-cloroetil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (110 mg, 0,151 mmol), K<2>CO<3>(42 mg, 0,302 mmol) y KI (3 mg, 0,0151 mmol) en THF:MeCN 1:1 (1 ml:1 ml). La reacción se dejó agitar a 65 °C durante 18 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y se lavó con hexanos y EtOAc. El filtrado orgánico se transfirió a un embudo de separación y se lavó con agua y salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice [0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano] para obtener 8-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (36 mg, 0,045 mmol, 30 %). UPLC/ELSD: RT = 3,25 min. MS (ES): m/z (MH+) 792,8 para C<4 9>H<9 7>N<3>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 4,88 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 2,57-2,45 (br. m, 20H); 2,31 (m, 3H); 1,64-1,28 (br. m, 62H); 0,90 (m, 9H).
Xll. Compuesto 103*: 8-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
8-((2-cloroetil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 6>CINO<4>
Peso molecular: 728,63
A una solución agitada de 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (1100 mg, 1,55 mmol) en diclorometano (25 ml) a 0 °C se le añadió W-clorosuccinimida en una porción. La reacción se dejó agitar a 0 °C durante 1 h seguido de 1 h a temperatura ambiente. Se añadieron 90 ml de hexanos y se dejó que la reacción se agitara a temperatura ambiente durante 20 min. Se eliminó por filtración el sólido blanco a través de un tapón de gel de sílice y se lavó tres veces con hexanos. Las capas orgánicas se concentraron al vacío. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (m, 2H); 2,85 (m, 2H); 2,54 (m, 4H); 2,33-2,27 (m, 4H); 1,66- 1,28 (br. m, 62H); 0,90 (m, 9H).
8-((2-morfolinoetil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 8>H<9 4>N<2>O<5>
Peso molecular: 779,29
Se disolvió una solución de morfolina (13 mg, 0,151 mmol), 8-((2-cloroetil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (110 mg, 0,151 mmol), K<2>CO<3>(42 mg, 0,302 mmol) y KI (3 mg, 0,0151 mmol) en 1:1 THF:MeCN (1 ml:1 ml). La reacción se dejó agitar a 65 °C durante 18 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y se lavó con hexanos y EtOAc. El filtrado orgánico se transfirió a un embudo de separación y se lavó con agua y salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice [0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano] para obtener 8-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (58 mg, 0,074 mmol, 49 %). UPLC/ELSD: RT = 3,53 min. MS (ES): m/z (MH+) 779,8 para C<4 8>H<9 4>N<2>O<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (p, 1H); 4,05 (t, 2H), 3,70 (m, 4H); 2,59- 2,54 (m, 2H); 2,48-2,38 (m, 10H); 2,31-2,25 (m, 4H); 1,64-1,26 (br. m, 62H); 0,88 (m, 9H).
XX9. Compuesto 108: 8-((3-acetamidopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 7>H<9 2>N<2>O<5>
Peso molecular: 765,26
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (400 mg, 0,553 mmol) y trietilamina (0,15 ml, 1,10 mmol) en 10 ml de diclorometano se le añadió gota a gota cloruro de acetilo (47 pl, 0,66 mmol) a 0 °C, y se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 h. La MS mostró el producto y la mezcla se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SiO2: MeOH/CH2Ch/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (300 mg, 71 %). LC/UV (202 nm): RT = 9,14 min. MS (APCI): m/z (MH+) 765,7. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 7,41 (bs, 1H); 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,40-3,25 (m, 2H); 2,53-2,23 (m, 10H); 1,91 (s, 3H); 1,65-1,16 (m, 64H); 0,86 (m, 9H).
XX10. Compuesto 109: 8-((3-(metilsulfonamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
F ó rm u la qu ím ica : C<46>H<92>N<2>O<6>S
P eso m o lecu la r: 801,31
Se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (51 pl, 0,66 mmol) a una solución a 0 °C de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (400 mg, 0,553 mmol) y trietilamina (0,15 ml, 1,10 mmol) en 10 ml de diclorometano y se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 h. La MS mostró el producto y la mezcla se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SiO<2>: MeOH/CH2Ch/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (296 mg, 88 %). LC/UV (214 nm): RT = 11,51 min. MS (APCI): m/z (MH+) 801,7. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 6: ppm 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,22 (t, 2H, J= 5,8 Hz); 2,88 (s, 3H); 2,53-2,23 (m, 10H); 1,73-1,16 (m, 64H); 0,87 (m, 9H).
XX11. Compuesto 110: 8-((3-(3,3-dimetilureido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 8>H<9 5>N<3>O<5>
Peso molecular: 794,30
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (400 mg, 0,553 mmol), dimetilaminopiridina (7 mg, 0,0553 mmol) y trietilamina (0,15 ml, 1,10 mmol) en 10 ml de diclorometano, se le añadió cloruro dimetilcarbámico (56 pl, 0,61 mmol) gota a gota a 0 °C y se dejó agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 h. La MS mostró el producto. La mezcla se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. Después de que se secó sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISC<o>(SO<2>: MeOH/CH2Ch/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (267 mg, 60 %). LC/UV (202 nm): RT = 9,81 min. MS (APCI): m/z (MH+) 794,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 6,13 (t, 1H, J= 4,5 Hz); 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,32-3,26 (m, 2H); 2,85 (s, 6H); 2,52-2,23 (m, 10H); 1,67-1,18 (m, 64H); 0,87 (m, 9H).
XX12. Compuesto 111: 8-((3-(3,3-dimetiltioureido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 8>H<9 5>N<3>O<4>S
Peso molecular: 810,37
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (400 mg, 0,553 mmol) y trietilamina (0,15 ml, 1,10 mmol) en 10 ml de diclorometano se le añadió tiofosgeno (51 pl, 0,664 mmol) gota a gota a 0 °C y se dejó agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 6 h. Después de este tiempo, la reacción se enfrió a 0 °C y se añadió una solución de dimetilamina en THF (2,0 M, 0,55 ml, 1,10 mmol). A continuación, se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 16 h. La MS mostró el producto y la mezcla se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SO<2>: MeOH/CH2Cl2/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón (346 mg, 77 %). LC/UV (202 nm): RT = 9,89 min. MS (APCI): m/z (MH+) 810,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 8,12 (bs, 1H); 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J=6,6 Hz): 3,74- 3,64 (m, 2H); 3,20 (s, 6H); 2,62-2,23 (m, 10H); 1,77-1,17 (m, 64H); 0,87 (m, 9H).
XX13. Compuesto 112: 8-((3-(3-metilureido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 780,28
A una solución a 0 °C de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (400 mg, 0,553 mmol) en 10 ml de diclorometano se le isocianato de metilo (38 mg, 0,664 mmol) y se dejó agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 h. La MS mostró el producto. La mezcla se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. Después de que se secó sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISC<o>(SiO<2>: MeOH/CH2Ch/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (320 mg, 70 %). LC/UV (202 nm): RT = 9,63 min. MS (APCI): m/z (MH+) 780,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 5,54 (bs, 1H); 4,85 (p, 1H, J = 6,0 Hz); 4,76 (bs, 1H); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,23 (t, 2H, J= 5,8 Hz); 2,74 (d, 3H, J= 2,0 Hz); 2,47 (t, 2H, J= 6,0 Hz); 2,37 (t, 4H, J= 7,4 Hz); 2,31-2,23 (m, 4H); 1,68-1,17 (m, 64H); 0,87 (m, 9H).
XX14. Compuesto 113: 8-((3-(3-metiltioureido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 9>H<9 3>N<3>O<4>S
Peso molecular: 795,69
A una solución a 0 °C de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (400 mg, 0,553 mmol) en 10 ml de diclorometano se le añadió isotiocianato de metilo (45 pl, 0,664 mmol) y se dejó agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 h. La MS mostró el producto. La mezcla se concentró y se purificó mediante ISCO (SiO<2>: MeOH/CH2Cb/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (312 mg, 70 %). LC/UV (202 nm): RT = 9,96 min. MS (APCI): m/z (MH+) 796,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,51 (bs, 2H); 2,93 (bs, 3H); 2,52 (t, 2H, J= 6,0 Hz); 2,41 (t, 4H, J= 7,8 Hz); 2,31-2,23 (m, 4H); 1,68-1,17 (m, 66H); 0,86 (m, 9H).
XX15. Compuesto 114: 8-((3-(2,4-dioxo-3,4-dihidropmmidm-1(2H)-M)propil)(8-(nomloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 9>H<9 1>N<3>O<6>
Peso molecular: 818,28
Se calentó una mezcla de 8-((3-cloropropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (500 mg, 0,67 mmol), uracilo (300 mg, 2,67 mmol) y 1,8-diazabicidoundec-7-eno (150 pl, 1,07 mmol) en 3 ml de DMF a 100 °C en un tubo sellado durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad y se dividió entre diclorometano y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera. Después de que se secó sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SiO<2>: MeOH/CH2Ch/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite amarillo (268 mg, 49 %). LC/UV (202 nm): RT = 8,91 min. MS (APCI): m/z (MH+) 818,7. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 8,19 (bs, 1H); 7,24 (d, 1H, J= 7,7 Hz); 5,64 (d, 1H, J= 7,7 Hz); 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,76 (t, 2H, J= 7,0 Hz); 2,45-2,24 (m, 10H); 1,81 (p, 2H, J= 6,6 Hz); 1,68-1,17 (m, 62H); 0,87 (m, 9H).
XX16. Compuesto 115: 8-((3-(4-ammo-2-oxopmmidm-1(2H)-M)propN)(8-(nomloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 9>H<9 2>N<4>O<5>
Peso molecular: 817,30
A una suspensión de citosina (82 mg, 0,74 mmol) en 1 ml de DMF se le añadió NaH (30 mg, 0,74 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 min. A continuación se añadió una solución de 8-((3-cloropropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (500 mg, 0,67 mmol) en 2 ml de DMF y la mezcla se calentó a 100 °C en un tubo sellado durante 16 h. La MS mostró el producto. La reacción se apagó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con hexanos (2X). La capa orgánica combinada se lavó con agua y salmuera. Después de que se secó sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SiO<2>: MeOH/CH2Cb/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite amarillo (310 mg, 56 %). LC/UV (202 nm): RT = 8,32 min. MS (APCI): m/z (MH+) 817,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 7,34 (d, 1H, J=7,1 Hz); 5,61 (d, 1H, J=7,1 Hz); 5,44 (bs, 2H); 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,79 (t, 2H, J= 7,0 Hz); 2,42-2,22 (m, 9H); 1,84 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 1,68 1,17 (m, 63H); 0,86 (m, 9H).
XX17. Compuesto 116: 8-((3-(6-ammo-9H-purm-9-il)propM)(8-(nomlox¡)-8-oxooctM)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<5 0>H<9 2>N<6>O<4>
Peso molecular: 841,32
Se calentó una mezcla de 8-((3-cloropropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (500 mg, 0,67 mmol), adenina (135 mg, 1,0 mmol) y 1,8-diazabicicloundec-7-eno (137 pl, 1,0 mmol) en 2 ml de DMF a 90 °C en un tubo sellado durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad y se dividió entre diclorometano y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera. Después de que se secó sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SO<2>: MeOH/CH2Cb/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite amarillo (325 mg, 57 %). LC/UV (202 nm): RT = 8,47 min. MS (ApCI): m/z (MH+) 841,7. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 8,36 (s, 1H); 7,80 (s, 1H); 5,51 (bs, 2H); 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,24 (t, 2H, J= 7,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 2,45-2,24 (m, 10H); 2,01 (p, 2H, J= 6,9 Hz); 1,68-1,17 (m, 62H); 0,86 (m, 9H).
. - - - - - , -
5-metoxi-2-(pent-1-in-1-il)benzaldehído (véase, por ejemplo, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23. 1365).
Fórmula química: C<1 3>H<1 4>O<2>
Peso molecular: 202,25
Se calentó una mezcla de 2-bromo-5-metoxibenzaldehído (4,30 g, 20 mmol), 1-pentina (3,0 ml, 30 mmol), cloruro de bis(trifenilfosfino)paladio (702 mg, 1 mmol), Cul (380 mg, 2,0 mmol) y trietilamina (5,6 ml, 40 mmol) en 60 ml de THF a 50 °C durante 16 h en nitrógeno. La TLC mostró la desaparición del material de partida. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad. El residuo se disolvió en diclorometano y se lavó con agua y salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante ¡SCO (SiO<2>: EtOAc/Hexanos 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón oscuro (3,00 g, 74 %). 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 10,49 (s, 1H); 7,42 (d, 1H, J= 8,5 Hz); 7,36 (d, 1H, J= 2,8 Hz); 7,07 (dd, 1H, J= 8,5 Hz, 2,8 Hz); 3,84 (s, 3H); 2,44 (t, 2H, J= 7,0 Hz); 1,62 (m, 2H); 1,05 (t, 3H, J= 7,2 Hz).
4-metoxi-2-(pent-1 -en-1 -il)-1 -(pent-1 -in-1 -il)benceno
Fórmula química: C<1 7>H<2 2>O
Peso molecular: 242,36
A una suspensión de bromuro de butil trifenilfosfonio (8,88 g, 22,2 mmol) en 75 ml de THF se le añadió tercbutóxido de potasio a 0 °C (2,50 g, 22,2 mmol). Después de 30 min, se añadió lentamente una solución de 5-metoxi-2-(pent-1-in-1-il)benzaldehído (3,00 g, 14,8 mmol) en 25 ml de THF en la suspensión anaranjada. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 60 h. Se añadió una solución saturada de cloruro de amonio y la mezcla se extrajo con éter (2X), y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante ISCO (SiO<2>: EtOAc/Hexanos 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón (3,46 g, 96 %). 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 7,33 (d, 0,5H, J= 8,5 Hz); 7,26 (d, 0,5H, J= 8,5 Hz); 6,99 (d, 0,5H, J= 2,8 Hz); 6,88-6,80 (m, 1H); 6,73-6,61 (m, 1,5H); 6,25 (dt, 0,5H, J= 15,9 Hz, 6,9 Hz); 5,73 (dt, 0,5H, J= 11,5 Hz, 7,4 Hz); 3,80 (s, 3H); 2,45-2,37 (m, 2H); 2,31-2,18 (m, 2H); 1,71-1,41 (m, 4H); 1,09-0,90 (m, 6H).
4-metoxi-1,2-dipentilbenceno
Peso molecular: 248,41
Se agitó una mezcla de 4-metoxi-2-(pent-1-en-1-il)-1-(pent-1-in-1-il)benceno (3,46 g, 14,3 mmol) y Pd/C (10 %, 300 mg) en 60 ml de EtOH durante 60 h en un globo de hidrógeno. La TLC mostró una reacción completa La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró para proporcionar el producto como un aceite amarillo (3,70 g, cantidad), que se utilizó para la siguiente etapa sin purificación. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,05 (d, 1H, J= 8,2 Hz); 6,72- 6,55 (m, 2H); 3,78 (s, 3H); 2,59-2,50 (m, 4H); 1,62-1,48 (m, 4H); 1,39-1,28 (m, 8H); 0,93-0,86 (m, 6H).
3,4-dipentilfenol
F ó rm u la qu ím ica : C<16>H<26>O
P eso m o lecu la r: 234 ,38
A una solución de 4-metoxi-1,2-dipentilbenceno (3,40 g, 13,7 mmol) en 75 ml de diclorometano se le añadió gota a gota BBr3 a -78 °C (1,65 ml, 17,1 mmol), y a continuación se dejó calentar la reacción a temperatura ambiente durante 3 h. La TLC mostró una reacción completa.La reacción se apagó mediante la adición de una solución saturada de bicarbonato de sodio y a continuación se extrajo con diclorometano (2X). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. Después de la concentración, el residuo se purificó mediante ISCO (SO<2>: EtOAc/Hexanos 0 a 30 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón (3,35 g, 97 %). 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 6,99 (d, 1H), J= 8,0 Hz); 6,64-6,59 (m, 2H); 4,45 (bs, 1H); 2,55-2,47 (m, 4H); 1,66-1,43 (m, 4H); 1,39-1,28 (m, 8H); 0,93-0,86 (m, 6H).
8-bromooctanoato de 3,4-dipentilfenilo
Fórmula química: C24H39BrO2
Peso molecular: 439,48
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (2,23 g, 10 mmol) y 3,4-dipentilfenol (2,34 g, 10 mmol) en diclorometano (50 ml) se le añadieron clorhidrato de W-(3-Dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida (1,92 g, 10 mmol) y DMAP (244 mg, 2 mmol). La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 18 h. La reacción se diluyó con diclorometano y se extrajo con una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. La capa orgánica se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO (SO<2>: EtOAc/Hexanos 0 a 10 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón (4,30 g, 98 %). 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 7,11 (d, 1H, J= 7,7 Hz); 6,84-6,77 (m, 2H); 3,41 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,60-2,49 (m, 6H); 1,92-1,69 (m, 4H); 1,62- 1,29 (m, 18H); 0,90 (m, 6H).
8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<1 9>H<3 9>NO<3>
Peso molecular: 329,53
Se agitó una mezcla de 8-bromooctanoato de nonilo (2,50 g, 7,15 mmol) y 2-aminoetanol (4,3 ml, 71,5 mmol) en 10 ml de EtOH a temperatura ambiente durante 60 h. La mezcla de reacción se dividió con hexanos y agua, y la capa orgánica se lavó con salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SO<2>: MeOH/CH2Ch/NH4OH al 1 % 0 a 20 %) para proporcionar el producto como un sólido blanco (1,57 g, 66 %). MS (APCI): m/z (MH+) 330,3. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,63 (t, 2H, J= 5,2 Hz); 2,77 (t, 2H, J=5,1 Hz); 2,61 (t, 2H, J=7,1 Hz); 2,28 (t, 2H, J= 7,4 Hz); 1,99 (bs, 2H); 1,67-1,20 (m, 4H); 1,62-1,29 (m, 17H); 0,87 (m, 6H).
8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de 3,4-dipentilfenilo
Fórmula química: C<4 3>H<7 7>NO<5>
Peso molecular: 688,09
Se calentó una solución de 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo (500 mg, 1,52 mmol), 8-bromooctanoato de 3,4-dipentilfenMo (1,00 g, 2,27 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,40 ml, 2,27 mmol) en ferc-butanol (3 ml) a 60 °C en un tubo sellado durante 60 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO (SO<2>: MeOH/CH2Cb/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para obtener la mezcla (365 mg), y a continuación la mezcla se purificó mediante ISCO (EtOAc/Hexanos/Et3N al 0,5 % 0 a 50 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (80 mg). LC/UV (214 nm): RT = 10,23 min. MS (APCI): m/z (MH+) 688,6. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 7,11 (d, 1H, J= 8,0 Hz); 6,84-6,77 (m, 2H); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,51 (t, 2H, J= 5,5 Hz); 2,60-2,38 (m, 12H); 2,28 (t, 2H, J= 7,4 Hz); 1,79-1,19 (m, 37H); 0,92-0,82 (m, 9H).
XX19. Compuesto 119*: 8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(4-pentilfenoxi)octil)amino)octanoato de nonilo
8-bromooctanoato de 4-pentilfenilo
Fórmula química: C19H29BrO2
Peso molecular: 369,34
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (2,00 g, 8,96 mmol) y 4-pentilfenol (3,07 ml g, 17,9 mmol) en diclorometano (50 ml) se le añadieron clorhidrato de W-(3-Dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida (1,72 g, 8,96 mmol) y DMAP (220 mg, 1,79 mmol). La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 60 h. La reacción se diluyó con diclorometano y se extrajo con una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. La capa orgánica se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO (SiO<2>: EtOAc/Hexanos 0 a 10 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (3,12 g, 94 %). 1H r Mn (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,16 (d, 2h , J= 8,5 Hz); 6,96 (d, 2H, J= 8,5 Hz); 3,41 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,61-2,49 (m, 4H); 1,92-1,69 (m, 4H); 1,65-1,25 (m, 10H); 0,88 (m, 3H).
8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(4-pentilfenoxi)octil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<3 8>H<6 7>NO<5>
Peso molecular: 617,96
Se calentó una solución de 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo (500 mg, 1,52 mmol), 8-bromooctanoato de 4-pentilfenilo (840 mg, 2,28 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,40 ml, 2,28 mmol) en ferc-butanol (3 ml) a 60 °C en un tubo sellado durante 48 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO (SO<2>: MeOH/CH2Cb/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para obtener la mezcla (360 mg), y a continuación la mezcla se purificó mediante ISCO (EtOAc/Hexanos/Et3N al 0,5 % 0 a 50 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (95 mg). LC/UV (214 nm): RT = 9,63 min. MS (APCI): m/z (MH+) 618,5. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,11 (d, 1H, J= 8,0 Hz); 6,84-6,77 (m, 2H); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,51 (t, 2H, J= 5,5 Hz); 2,60-2,38 (m, 12H); 2,28 (t, 2H, J= 7,4 Hz); 1,79-1,19 (m, 37H); 0,92-0,82 (m, 9H).
XX20. Compuesto 120*: 8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(3-pentilfenoxi)octil)amino)octanoato de nonilo
3-pentilfenol (Ref: Tetraedron Lett. 2013, 54, 52)
F ó rm u la qu ím ica : C iiH ia O
P eso m o lecu la r: 164 ,25
A -78 °C, a una suspensión de ferc-butóxido de potasio (6,73 g, 60 mmol) en 15 ml de pentano se le añadió secuencialmente tetrametiletilendiamina (9,0 ml, 60 mmol) y BuLi (2,5 M en hexano, 24 ml, 60 mmol), y se añadió lentamente una solución de m-cresol (2,6 ml, 25 mmol) en 10 ml de pentano. La mezcla de reacción se calentó hasta -20 °C durante 3 h. Se añadieron 30 ml de THF y la reacción se enfrió hasta -60 °C. Se añadió bromuro de butilo (4,8 ml, 45 mmol) lentamente y se dejó calentar la mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. Después de enfriarse a 0 °C, la mezcla de reacción se acidificó con HCl 4 M a pH-3 y a continuación se extrajo con éter. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. Después de la concentración, el residuo se purificó mediante ISCO (EtOAc/Hexanos 0 a 5 %) para proporcionar una mezcla del producto con el material de partida, que se destiló al vacío para proporcionar el producto como un aceite incoloro (1,23 g, 65 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 7,14 (t, 1<h>, J= 7,7 Hz); 6,75 (d, 1H, J= 7,7 Hz); 6,67-6,61 (m, 2H); 4,62 (s, 1H); 2,55 (t, 2H, J= 7,7 Hz); 1,67-1,52 (m, 2H); 1,38-1,24 (m, 4H); 0,88 (t, 3H, J= 6,9 Hz).
8-bromooctanoato de 3-pentilfenilo
Fórmula química: C19H29BrO2
Peso molecular: 369,34
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (1,84 g, 8,20 mmol) y 3-pentilfenol (1,23 g, 7,49 mmol) en diclorometano (40 ml) se le añadieron clorhidrato de W-(3-Dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida (1,58 g, 8,20 mmol) y DMAP (183 mg, 1,50 mmol). La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se diluyó con diclorometano y se extrajo con una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio. La capa orgánica se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO (SiO<2>: EtOAc/Hexanos 0 a 10 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (2,23 g, 80 %). 1H r Mn (300 MHz, CDCb) 6: ppm 7,26 (t, 1h , J= 8,5 Hz); 7,03 (d, 1H, J= 7,6 Hz); 6,91-6,84 (m, 2H); 3,41 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,61- 2,49 (m, 4H); 1,92-1,69 (m, 4H); 1,65 1,25 (m, 12H); 0,88 (t, 3H, J= 6,9 Hz).
8-((2-hidroxietil)(8-oxo-8-(3-pentilfenoxi)octil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<3 8>H<6 7>NO<5>
Peso molecular: 617,96
Se agitó una solución de 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo (500 mg, 1,52 mmol), 8-bromooctanoato de 3-pentilfenilo (840 mg, 2,28 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,40 ml, 2,28 mmol) en ferc-butanol (3 ml) a 60 °C en un tubo sellado durante 16 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO (SO<2>: MeOH/CH2Cb/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para obtener una mezcla (247 mg), y a continuación la mezcla se purificó mediante ISCO (EtOAc/Hexanos/Et3N al 0,5 % 0 a 50 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (150 mg). LC/UV (202 nm): RT = 7,45 min. MS (APCI): m/z (MH+) 618,5. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 7,26 (t, 1H, J= 8,5 Hz); 7,03 (d, 1H, J = 7,6 Hz); 6,91-6,84 (m, 2H); 4,05 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 3,51 (t, 2H, J= 5,5 Hz); 2,64-2,38 (m, 10H); 2,28 (t, 2H, J= 7,8 Hz); 1,79-1,19 (m, 41H); 0,91-0,82 (m, 6H).
XX21. Compuesto 121*: 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo 8-((3-doropropM)(8-(noNoxi)-8-oxooctN)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Formula química: C<4 5>H<8 8>CINO<4>
Peso molecular: 742,65
A una solución de 8-((3-hidroxipropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (8,00 g, 11,0 mmol) y trietilamina (2,0 ml, 14,4 mmol) en diclorometano (200 ml) se le añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (1,07 ml, 13,8 mmol) a 0 °C y se dejó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 h. La TLC y MS mostraron una reacción completa. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el disolvente se retiró al vacío para proporcionar el producto como un aceite marrón (7,30 g, 89 %). La RMN mostró que el producto bruto contenía una pequeña cantidad de mesilato y cloruro deseado. Esto se utilizó para la siguiente etapa sin purificación. MS (APCI): m/z (MH+) 742,6. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,86 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 3,58 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 2,58-2,22 (m, 9H); 1,92-1,16 (m, 65H); 0,87 (m, 9H).
8-((3-azidopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 749,22
Se calentó una mezcla de 8-((3-cloropropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (4,20 g, 5,66 mmol) y azida de sodio (1,75 g, 28,28 mmol) en 20 ml de DMF en un tubo sellado hasta 100 °C durante 16 h. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con hexanos. La capa orgánica combinada se lavó con agua y salmuera y a continuación se secó sobre sulfato de sodio. Después de la filtración y la concentración, el residuo se purificó mediante ISCO (S O<2>: MeOH/CH2Cl2/NH4OH al 1 % 0 a 5 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón (3,66 g, 86 %). MS (APCI): m/z (MH+) 749,7. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,7 Hz); 3,32 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,58-2,22 (m, 10H); 1,72-1,19 (m, 64H); 0,87 (m, 9H).
8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<9 0>N<2>O<4>
Peso molecular: 723,23
Se agitó una mezcla de 8-((3-azidopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (3,66 g, 4,89 mmol) y Pd/C (10 %, 400 mg) en 150 ml de EtOH en un globo de hidrógeno durante 16 h. La MS mostró una reacción completa. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite, y el filtrado se concentró y se purificó mediante ISCO (SiO<2>: MeOH/CH2Cb/NH4OH al 1 % 0 a 20 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón (3,08 g, 87 %). LC/UV (202 nm): RT = 8,39 min. MS (APCI): m/z (MH+) 723,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 2,70 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,46-2,24 (m, 10H); 1,65 1,16 (m, 66H); 0,87 (m, 9H).
XX22. Compuesto 122*: 8-((6-(decan-2-iloxi)-6-oxohexil)(2-hidroxietil)amino)octanato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 3>H<8 5>NO<5>
Peso molecular: 696,16
El compuesto 122 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,58 min. MS (ES): m/z (MH+) 697,1 para C<4 3>H<8 5>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,91 (m, 2H); 3,62 (m, 2H), 2,81-2,42 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,73-1,43 (m, 14H); 1,28 (m, 48H); 0,90 (m, 9H).
XX23. Compuesto 123: 8-(metil(8-noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo)
Fórmula química: C<2 6>H<5 3>NO<2>
Peso molecular: 411,72
Se dejó agitar una solución de 8-bromooctanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,433 mmol) en metanamina (10 ml, 19,92 mmol, 2 M en THF) a ta durante 18 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (10-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener 8-(metilamino)octanoato de heptadecan-9-ilo (113 mg, 0,27 mmol, 63 %). UPLC/ELSD: RT = 2,76 min. MS (ES): m/z (MH+) 412,4 para C<2 6>H<5 3>NO<2>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,92 (p, 1H); 2,62 (t, 2H); 2,48 (s, 3H); 2,32-2,27 (m, 2H); 1,66-1,52 (br. m, 8H); 1,28 (m, 30H); 0,90 (m, 6H).
8-(metil(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 3>H<8 5>NO<4>
Peso molecular: 680,16
Se disolvió una solución de<8>-(metilamino)octanoato de heptadecan-9-ilo (113 mg, 0,27 mmol),<8>-bromooctanoato de nonilo (115 mg, 0,33 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (67 pl, 0,38 mmol) y yoduro de potasio (5 mg, 0,027 mmol) en etanol y se dejó agitar a 62 °C durante 48 h. La reacción se enfrió hasta ta y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener<8>-(metil(<8>-(noniloxi)-<8>-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (75 mg, 0,11 mmol, 41 %). UPLC/ELSD: r T = 3,84 min. MS (ES): m/z (MH+) 681,0 para C<4 3>H<8 5>NO<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,88 (p, 1H); 4,08 (t, 2H), 2,88-2,67 (br. m, 7H); 2,34-2,27 (m, 4H); 1,80 (m, 4H); 1,63-1,52 (br. m, 10H); 1,37-1,28 (br. m, 48H); 0,90 (m, 9H).
XX24. Compuesto 124: 8,8'-(metilazanodiil)dioctanoato de di(heptadecan-9-ilo)
Fórmula química: C<5 1>H<1 0 1>NO<4>
Peso molecular: 792,37
Se dejó agitar una solución de 8-bromooctanoato de heptadecan-9-ilo (500 mg, 1,08 mmol) en metanamina (11 ml, 21,67 mmol, 2 M en THF) a ta durante 6 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (20-100% (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener 8,8'-(metilazanodiil)dioctanoato de di(heptadecan-9-ilo) (26 mg, 0,03 mmol, 3 %). UPLC/ELSD: RT = 4,03 min. MS (ES): m/z (MH+) 793,3 para C<5 1>H<1 0 1>NO<4>.1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,89 (p, 2H); 2,32-2,24 (m, 11H); 1,66-1,28 (br. m, 76H); 0,90 (m, 12H).
XX25. Compuesto 125*: Ácido 3-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(8-(nonioxi)-8-oxooctil) amino)propanoico
8-((8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 3>NO<4>
Peso molecular: 666,13
A -78 °C, a una solución de cloruro de oxalilo (0,25 ml, 3,0 mmol) en 3 ml de diclorometano se le añadió gota a gota una solución de DMSO (0,43 ml, 6,0 mmol) en 2 ml de diclorometano y, a continuación, se añadió inmediatamente una solución de 8-((3-hidroxipropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (1,45 g, 2,0 mmol) en diclorometano (10 ml). Después de agitarlo durante 30 min a esta temperatura, se le añadió trietilamina (1,45 ml, 10,4 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente. La TLC y MS mostraron una reacción completa (M+1: 722,7), y la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con hexanos (2X). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, el filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante ISCO (SiO<2>: EtOAc/Hexanos/Et3N al 0,5 % 0 a 50 %) para proporcionar el producto como un aceite marrón (810 mg, 61 %). MS (APCI): m/z (MH+) 666,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,56 (t, 4H, J= 7,1 Hz); 2,31-2,24 (m, 4H); 1,67-1,19 (m, 63H); 0,87 (m, 9H).
8-((3-(benciloxi)-3-oxopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<5 2>H<9 3>NO<6>
Peso molecular: 828,32
Se agitó una solución de 8-((8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (798 mg, 1,2 mmol) y acrilato de bencilo (293 mg, 1,8 mmol) en diclorometano (20 ml) a temperatura ambiente durante 16 h. La TLC y la MS no mostraron casi ninguna reacción, se añadieron 10 ml de MeOH y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La MS mostró el producto con una pequeña cantidad de éster metílico (M+1: 829,8, 752,7). La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad y se purificó mediante ISCO (SO<2>: EtOAc/hexanos 0 a 35 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (280 mg, 28 %). MS (APCI): m/z (MH+) 829,8. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 7,36-7,32 (m, 5H); 5,10 (s, 2H); 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,78 (t, 2H, J= 6,9 Hz); 2,46 (t, 2H, J= 7,0 Hz); 2,36 (t, 4H, J= 6,9 Hz); 2,30-2,24 (m, 4H); 1,67-1,19 (m, 62H); 0,87 (m, 9H).
Ácido 3-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)propanoico
Fórmula química: C<4 5>H<8 7>NO<6>
Peso molecular: 738,19
Se agitó una mezcla de 8-((3-(benciloxi)-3-oxopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (280 mg, 0,34 mmol) y Pd/C (10%, 28 mg) en 20 ml de EtOAc en un globo de hidrógeno durante 1 h. La MS mostró una reacción completa. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante ISCO (SiO<2>: MeOH/CH<2>Cl<2>0 a 10 %) para proporcionar el producto como un aceite incoloro (230 mg, 91 %). LC/UV (214 nm): RT = 12,38 min. MS (APCI): m/z (MH+) 838,7. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,85 (p, 1H, J= 6,0 Hz); 4,04 (t, 2H, J= 6,6 Hz); 2,85 (t, 2H, J= 6,0 Hz); 2,65 (t, 4H, J= 7,7 Hz); 2,48 (t, 2H, J= 6,0 Hz); 2,32-2,24 (m, 4H); 1,67-1,17 (m, 63H); 0,87 (m, 9H).
XX26. Compuesto 126: 8-(metil(4-(noniloxi)-4-oxobutil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C39H77NO4
Peso molecular: 624,05
Se disolvió en etanol una solución de 8-(metilamino)octanoato de heptadecan-9-ilo (103 mg, 0,25 mmol), 4-bromobutanoato de nonilo (88 mg, 0,30 mmol) y N, N-diisopropiletilamina (61 pl, 0,35 mmol) y se dejó agitar a 62 °C durante 48 h. La reacción se enfrió hasta ta y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se recogió en acetato de etilo y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener 8-(metil(4-(noniloxi)-4-oxobutil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (90 mg, 0,14 mmol, 58 %). UPLC/ELSD: RT = 3,58 min. MS (ES): m/z (MEI ) 624,8 para C39H77NO4. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,89 (p, 1H); 4,08 (t, 2H); 2,38-2,24 (br. m, 11H); 1,82 (m, 2H); 1,64-1,28 (br. m, 52H); 0,90 (m, 9H).
XX27. Compuesto 127*: 8-((9-((bis(noniloxi)fosforil)oxi)nonil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo
Formula química: C<4 6>H<9 4>NO<7>P
Peso molecular: 804,232
El compuesto 127 se sintetizó de la misma manera que el compuesto 131 y según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,58 min. MS (ES): m/z (MH+) 805,1 para C<4 6>H<9 4>NO<7>P. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,05 (m, 8H); 3,55 (m, 2H); 2,59 (m, 2H); 2,46 (m, 4H); 2,31 (t, 2H), 1,67 (m, 11H); 1,29 (m, 55H); 0,90 (m, 9H).
XX28. Compuesto 128*: 8-((6-((1-cidopropMnoml)oxi)-6-oxohexM)(2-hidroxietN)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 722,193
El compuesto 128 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,67 min. MS (ES): m/z (MH+) 722,9 para C<4 5>H<8 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 4,30 (m, 1H); 3,56 (m, 2H); 2,72-2,39 (m, 6H); 2,30 (m, 4H), 1,76-1,17 (m, 58H); 0,90 (m, 10H); 0,61-0,35 (m, 3H); 0,28 (m, 1H).
XX29. Compuesto 129*: 6-((8-(dioctilamino)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)hexanoato de undecilo
Fórmula química: C43H86N2O4
Peso molecular: 695,171
El compuesto 129 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,45 min. MS (ES): m/z (MH+) 695,9 para C<4 3>H<8 6>N<2>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,08 (t, 2H); 3,54 (m, 2H), 3,28 (m, 4H); 2,59 (m, 2H); 2,47 (m, 4H); 2,32 (q, 4H); 1,73-1,19 (m, 58H); 0,90 (m, 9H).
XX30. Compuesto 130*: 8-((8-(dioctilamino)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de decan-2-ilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 8>N<2>O<4>
Peso molecular: 709,198
El compuesto 130 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,46 min. MS (ES): m/z (MH+) 709,9 para C<4>H<8 8>N<2>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,90 (m, 1H); 3,70 (br. m, 2H), 3,35-3,15 (m, 4H); 2,96-2,41 (br. m, 6H), 2,29 (m, 4H); 1,74-1,43 (m, 14H); 1,41-1,115 (m, 47H); 0,90 (m, 9H).
XX31. Compuesto 131*: 8-((7-((bis(octiloxi)fosforil)oxi)heptil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo 7-bromoheptil d ioctil fosfato
Fórmula química: C23H48BrO4P
Peso molecular: 499,511
A una solución de POCl3 (1,91 ml, 20,5 mmol) en DCM (20 ml) a 0 °C, se le añadió lentamente Et3N (2,85 ml, 20,4 mmol) seguido de 7-bromoheptano-1-ol (4,0 g, 20,5 mmol). La reacción se dejó agitar durante 4 h a 0 °C Se añadió una solución de octan-1-ol (7,10 ml, 45,11 mmol) y Et3N (8,9 ml, 63,8 mmol) en DCM y la reacción se dejó agitar a ta durante 16 h. La reacción se diluyó con DCM y se lavó con una solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO con EtOAc (0-30 %) en hexanos para obtener 7-bromoheptil dioctil fosfato (0,58 g, 1,16 mmol, 6 %). 1H NMR (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,03 (m, 6H); 3,43 (t, 2H); 1,88 (m, 2H); 1,70 (m, 6H); 1,54-1,23 (m, 26H); 0,90 (m, 6H).
8-((7-((bis(octiloxi)fosforil)oxi)heptil)(2-hidroxietil)am ino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 6>NO<7>P
Peso molecular: 748,124
El compuesto 131 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,22 min. MS (ES): m/z (MH+) 750,0 para C<4 2>H<8 6>NO<7>P. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,05 (m, 8H); 3,51 (m, 2H); 2,60 (br. m, 2H); 2,46 (m, 4H); 2,31 (t, 2H); 1,76 - 1,15 (m, 58H); 0,90 (m, 9H).
XX32. Compuesto 132*: 8-((7-((bis(octiloxi)fosforil)oxi)heptil)(2-hidroxietil)am ino)octanoato de decan-2-ilo
Fórmula química: C<4 3>H<8 8>NO<7>P
Peso molecular: 762,15
El compuesto 132 se sintetizó de la misma manera que el compuesto 131 y según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,27 min. MS (ES): m/z (MH+) 764,00 para C<4 3>H<8 8>NO<7>P. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,91 (m, 1H); 4,03 (m, 6H); 3,56 (m, 2H); 2,73 2,38 (br. m, 6H); 2,29 (t, 2H); 1,79 - 1,16 (m, 61H); 0,90 (m, 9H).
XX33. Compuesto 133*: bis(2-hexildecanoato) de ((2-hidroxietil)azanodiil)bis(nonano-9,1-diilo)
Fórmula química: C<5 2>H<1 0 3>NO<5>
Peso molecular: 822,398
El compuesto 133 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,91 min. MS (ES): m/z (MH+) 824,0 para C<5 2>H<1 0 3>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,09 (t, 4H); 3,60 (m, 2H); 2,74-2,42 (br. m, 6H); 2,33 (m, 3H); 1,72 -1,17 (m, 76H); 0,90 (m, 12H).
XX34. Compuesto 134: 2-hexildecanoato de 9-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)nonilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,182
El compuesto 134 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,48 min. MS (ES): m/z (MH+) 712,0 para C<4 4>H<8 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,08 (m, 4H); 3,55 (m, 2H); 2,67-2,39 (br. m, 6H); 2,31 (m, 3H); 1,71 -1,19 (m, 62H); 0,90 (m, 12H).
XX35. Compuesto 135*: 2-octildecanoato de 7-((8-(decan-2-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)heptilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 135 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,63 min. MS (ES): m/z (MH+) 726,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,91 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,57 (m, 2H); 2,73-2,40 (br. m, 6H); 2,29 (m, 3H); 1,71-1,16 (m, 66H); 0,90 (m, 9H).
BA. Compuesto 136*: 8-((2-hidroxietil)((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)amino)octanoato de nonilo
Procedimiento representativo 2:
8-bromooctanoato de nonilo (Procedimiento A)
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (5 g, 22 mmol) y nonan-1-ol (6,46 g, 45 mmol) en diclorometano (100 ml) se le añadieron clorhidrato de W-(3-Dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida (4,3 g, 22 mmol) y DMAP (547 mg, 4,5 mmol). La reacción se dejó agitar a ta durante 18 h. La reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. La capa orgánica se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo 0-10 % en hexanos) para obtener 8-bromooctanoato de nonilo (6,1 g, 17 mmol, 77 %).
1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,06 (t, 2H); 3,40 (t, 2H); 2,29 (t, 2H); 1,85 (m, 2H); 1,72-0,97 (m, 22H); 0,88 (m, 3H).
8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo
Se dejó agitar una solución de 8-bromooctanoato de nonilo (1,2 g, 3,4 mmol) y 2-aminoetan-1-ol (5 ml, 83 mmol) en etanol (2 ml) a 62 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se extrajo con acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. La capa orgánica se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para obtener 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo (295 mg, 0,9 mmol, 26 %).
UPLC/ELSD: RT = 1,29 min. MS (ES): m/z (MH+) 330,42 para C19H39NO3
1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,07 (t, 2H); 3,65 (t, 2H); 2,78 (t, 2H); 2,63 (t, 2H); 2,32-2,19 (m, 4H), 1,73 1,20 (m, 24H); 0,89 (m, 3H).
8-((2-hidroxietil)((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)amino)octanoato de nonilo
Peso molecular: 577,98
Se dejó agitar a reflujo durante 48 h una solución de 8-((2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo (150 mg, 0,46 mmol), (6Z,9Z)-18-bromooctadeca-6,9-dieno (165 mg, 0,5 mmol) y A,A-diisopropiletilamina (65 mg, 0,5 mmol) en etanol (2 ml). La reacción se dejó enfriar a ta y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (MeOH al 0-10 % en diclorometano) para obtener 8-((2-hidroxietil)((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)amino)octanoato de nonilo (81 mg, 0,14 mmol, 30 %) como una sal de HBr.
UPLC/ELSD: RT = 3,24 min. MS (ES): m/z (MH+) 578,64 para C<3 7>H<7 1>NO<3>
1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 10,71 (br., 1H); 5,36 (br. m, 4H); 4,04 (m, 4H); 3,22-2,96 (br. m, 5H); 2,77 (m, 2H); 2,29 (m, 2H); 2,04 (br. m, 4H); 1,86 (br. m, 4H); 1,66-1,17 (br. m, 40H); 0,89 (m, 6H)
BB. Compuesto 137*: 12-(dodecil(2-hidroxietil)amino)dodecanoato de metilo
12-bromododecanoato de metilo.
Fórmula química: C13H25BrO2
Peso molecular: 293,25
A una solución de ácido 12-bromododecanoico (2,5 g, 8,95 mmol) en THF (7 ml) se le añadió metanol (7,2 ml, 179 mmol). Se añadió ácido sulfúrico (0,50 ml, 8,95 mmol) gota a gota y la reacción se agitó a 65 °C durante dos horas. La mezcla de reacción se lavó con una solución de NaHCO3 al 5 % y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 0-20 %/hexanos) proporcionó 12-bromododecanoato de metilo (2,40 g, 92 %).
1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,69 (s, 3H); 3,44 (t, 2H); 2,33 (t, 2H); 1,88 (br. m, 2H); 1,64 (br. m, 2H); 1,45 (br. m, 2H); 1,31 (br. m, 12H).
12-(dodecil(2-hidroxietil)amino)dodecanoato de metilo
Peso molecular: 441,74
A una solución de 12-((2-hidroxietil)amino)dodecanoato de metilo (413 mg, 1,51 mmol) (aislado de la síntesis de 12,12'-((2-hidroxietil)azanodiil)didodecanoato) en MeCN (5 ml) se le añadió 1-bromododecano (452 mg, 1,81 mmol), K<2>CO<3>(418 mg, 3,02 mmol) y KI (25 mg, 0,151 mmol). La reacción se dejó agitar a 82 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con H<2>O y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % [DCM, MeOH al 20 %, NH<4>OH al 1 %]/MeOH) proporcionó 12-(dodecil(2-hidroxietil)amino)dodecanoato de metilo (409 mg, 61 %). UPLC/ELSD: RT = 2,39 min. MS (ES): m/z (MH+) 442,60 para C<2 7>H<5 5>NO<3>
1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,69 (s, 3H); 3,61 (t, 2H); 2,68 (t, 2H); 2,54 (t, 4H); 2,32 (t, 2H); 1,64 (m, 2H); 1,50 (br. m, 4H); 1,28 (br. m, 32H); 0,90 (t, 3H).
BC. Compuesto 138*: 8,8'-((2-hidroxietil)azanodiil)dioctanoato de dinonilo
Procedimiento representativo 3:
8,8'-((2-hidroxietil)azanodiil)dioctanoato de dinonilo
Formula química: C<3 6>H<7 1>NO<5>
Peso molecular: 597,97
Se dejó agitar una solución de<8>-bromooctanoato de nonilo (200 mg, 0,6 mmol) y 2-aminoetan-1-ol (16 mg, 0,3 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (74 mg, 0,6 mmol) en THF/CH<3>CN (1:1) (3 ml) a 63 °C durante 72 h. La reacción se enfrió hasta ta y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo y una solución saturada de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na<2>SO<4>y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (MeOH al 0-10 % en diclorometano) para obtener 8,8'-((2-hidroxietil)azanodiil)dioctanoato de dinonilo (80 mg, 0,13 mmol, 43 %). UPLC/ELSD: RT = 3,09 min. MS (ES): m/z (MH+) 598,85 para C<3 6>H<7 1>NO<5>
1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 4,05 (m, 4H); 3,57 (br. m, 2H); 2,71-2,38 (br. m, 6H); 2,29 (m, 4H), 1,71 1,01 (br. m, 49H), 0,88 (m, 6H).
BD. Compuesto 139*: 8,8'-((2-hidroxietil)azanodiil)dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo)
El compuesto 139 se sintetizó siguiendo el procedimiento representativo 3.
Fórmula química: C36H67NO5
Peso molecular: 593,93
UPLC/ELSD: RT = 2,88 min. MS (ES): m/z (MH+) 594,78 para C<3 6>H<6 7>NO<5>
1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 5,60 (m, 2H); 5,50 (m, 2H); 4,59 (m, 4H); 3,96 (br. m, 2H); 3,20-2,94 (br. m, 5H); 2,28 (m, 4H); 2,07 (m, 4H); 1,80 (br. m, 4H); 1,59 (br. m, 6H); 1,43-1,14 (br. m, 28H), 0,85 (m, 6H). BE. Compuesto 140*: 6,6'-((2-hidroxietil)azanodiil)dihexanoato de di((Z)-undec-2-en-1-ilo)
El compuesto 140 se sintetizó siguiendo el procedimiento representativo 3.
Fórmula química: C36H67NO5
Peso molecular: 593,93
UPLC/ELSD: RT = 2,87 min. MS (ES): m/z (MH+) 594,74 para C<3 6>H<6 7>NO<5>
1H RMN (300 MHz, CDCla) 5: ppm 5,73-5,44 (m, 4H); 4,62 (m, 4H); 3,55 (m, 2H); 2,73-2,39 (br. m, 6H); 2,39 (m, 4H); 2,09 (m, 4H); 1,64 (m, 4H); 1,55-1,14 (br. m, 33H); 0,88 (m, 6H).
BF. Compuesto 141*: 6,6'-((2-hidroxietil) azanodiil)dihexanoato de diundecilo
El compuesto 141 se sintetizó siguiendo el procedimiento representativo 3.
Fórmula química: C<2 8>H<5 5>NO<5>
Peso molecular: 485,75
A una solución de 12-bromododecanoato de metilo (1,5 g, 5,12 mmol) en MeCN (11 ml) se le añadió etanolamina (0,310 ml, 5,12 mmol), K<2>CO<3>(1,42 g, 10,2 mmol) y KI (85 mg, 0,512 mmol). La reacción se dejó agitar a 82 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y los sólidos se lavaron con hexanos. El filtrado se extrajo con hexanos y los extractos combinados se concentraron al vacío. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % [DCM, MeOH al 20 %, NH<4>OH al 1 %]/MeOH) proporcionó 12,12'-((2-hidroxietil)azanodiil)didodecanoato (563 mg, 45 %).
UPLC/ELSD: RT = 1,81 min. MS (ES): m/z (MH+) 486,63 para C<2 8>H<5 5>NO<5>
1H RMN (300 MHz, CDCb) 5: ppm 3,69 (s, 6H); 3,59 (br. m, 2H); 2,75-2,40 (br. m, 6H); 2,32 (t, 4H); 1,64 (m, 4H); 1,48 (br. m, 4H); 1,29 (br. m, 28H).
BH. Compuesto 143*: 8-((2-hidroxietil)(7-((2-octildecil)oxi)-7-oxoheptil)amino)octanoato de nonilo Ácido 2-octildecanoico
Fórmula química: C<1 8>H<3 6>O<2>
Peso molecular: 284,48
Se enfrió una solución de diisopropilamina (2,92 ml, 20,8 mmol) en THF (10 ml) a -78 °C y se añadió una solución de n-BuLi (7,5 ml, 18,9 mmol, 2,5 M en hexanos). La reacción se dejó calentar a 0 °C. A una solución de ácido decanoico (2,96 g, 17,2 mmol) y NaH (754 mg, 18,9 mmol, 60 % p/p) en THF (20 ml) a 0 °C se le añadió la solución de LDA y la mezcla se dejó agitar a ta durante 30 min. Después de este tiempo se añadió 1- yodooctano (5 g, 20,8 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 45 °C durante 6 h. La reacción se apagó con HCl 1N (10 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-20 % en hexanos) para proporcionar ácido 2- octildecanoico (1,9 g, 6,6 mmol).
1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 2,38 (br. m, 1H); 1,74-1,03 (br. m, 28H); 0,91 (m, 6H).
2-octildecan-1-ol
Fórmula química: C<1 8>H<3 8>O
Peso molecular: 270,50
Se añadió una solución de ácido 2-octildecanoico (746 mg, 2,6 mmol) en THF seco (12 ml) a una solución agitada de LAH (5,2 ml, 5,2 mmol, solución 1 M en THF) en THF seco (6 ml) en nitrógeno a 0 °C . La reacción se dejó calentar a ta y se agitó a ta durante 12 h. Se añadió una solución de solución saturada de Na2SO4*<1 0>H<2>O (10 ml). Los sólidos se filtraron a través de un tapón de Celite. El filtrado se evaporó al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (acetato de etilo al 0-20 % en hexanos) para proporcionar 2-octildecan-1-ol (635 mg, 2,3 mmol).
1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 3,54 (d, 2H); 1,56-1,21 (br. m, 30H); 0,91 (t, 6H).
7-bromoheptanoato de 2-octildecilo
El 7-bromoheptanoato de 2-octildecilo se sintetizó según el procedimiento A.
1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 3,96 (d, 2H); 3,40 (t, 2H); 2,31 (t, 2H); 1,86 (m, 2H); 1,71-1,19 (m, 35H); 0,88 (m, 6H).
El 8-((2-hidroxietil)(7-((2-octildecil)oxi)-7-oxoheptil)amino)octanoato de nonilo se sintetizó utilizando el procedimiento representativo 2.
Fórmula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,182
UPLC/ELSD: RT = 5,23 min. MS (ES): m/z (MH+) 711,08 para C<4 4>H<8 7>NO<5>
1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,05 (t, 2H); 3,96 (d, 2H); 3,58 (br. m, 2H); 2,79-2,36 (br. m, 5H); 2,30 (m, 4H); 1,72-1,01 (br. m, 63H); 0,88 (m, 9H).
BI. Compuesto 144*: 8-((8-(dioctilamino)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo
8-bromo-W,W-d¡oct¡loctanam¡da
Peso molecular: 446,56
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (1 g, 2,2 mmol) y DMF (1 gota) en diclorometano se le añadió cloruro de oxalilo (0,416 ml, 2,5 mmol) gota a gota. La reacción se dejó agitar durante 1 h a temperatura ambiente. Los disolventes se evaporaron y se añadió el residuo a una solución de dioctilamina (1,14 g, 4,8 mmol) y DMAP (100 mg, 0,8 mmol). Se añadió trietilamina a la reacción gota a gota y la reacción se dejó agitar durante 18 h. Los disolventes se evaporaron y el residuo se recogió en acetato de etilo y una solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano para proporcionar una mezcla de 8-bromo-W,W-dioctiloctanamida y cloro-W,W-dioctiloctanamida (736 mg, 1,6 mmol).
UPLC/ELSD: RT = 4,02 min. MS (ES): m/z (MH+) 446,53 para C24H4sBrNO
1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,55 (t, 0,6H); 3,42 (t, 1,4H); 3,36-3,15 (m, 4H); 2,31 (t, 2H); 1,96-1,18 (m, 34H); 0,91 (m, 6H).
El 8-((8-(dioctilamino)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de nonilo se sintetizó utilizando el procedimiento representativo 2.
Fórmula química: C<4 3>H<8 6>N<2>O<4>
Peso molecular: 695,17
UPLC/ELSD: RT = 4,24 min. MS (ES): m/z (MH+) 696,16 para C<4 3>H<8 6>N<2>O<4>
1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,05 (t, 2H); 3,57 (br. m, 2H); 3,35-3,14 (m, 4H); 2,80-2,20 (m, 10H); 1,74 1,00 (br. m, 59H); 0,88 (m, 9H).
XX45. Compuesto 145: 8-((2-hidrox¡et¡l)(8-(met¡l(oct¡l)am¡no)-8-oxooct¡l)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 8>N<2>O<4>
Peso molecular: 709,198
El compuesto 145 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,17 min. MS (ES): m/z (MH+) 710,0 para C<4 4>H<8 8>N<2>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCI<3>)<8>: ppm 4,89 (m, 1H); 3,55 (m, 2H); 3,37 (t, 1H), 3,27 (t, 1H), 2,98 (s, 1,5H); 2,93 (s, 1,5H); 2,59 (m, 2H); 2,47 (m, 4H), 2,30 (m, 4H), 1,75-1,20 (m, 60H); 0,90 (m, 9H).
XX46. Compuesto 146: 8-((2-hidroxietil)(6-(metil(octil)amino)-6-oxohexil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 4>N<2>O<4>
Peso molecular: 681,144
El compuesto 146 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,01 min. MS (ES): m/z (MH+) 682,0 para C<4 2>H<8 4>N<2>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,88 (m, 1H); 3,55 (m, 2H); 3,37 (t, 1H), 3,26 (t, 1H), 2,98 (s, 1,5H); 2,93 (s, 1,5H); 2,59 (m, 2H); 2,48 (m, 4H), 2,31 (m, 4H), 1,76-1,18 (m, 56H); 0,90 (m, 9H).
XX47. Compuesto 147 : 10-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)decanoato de tridecan-7-ilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 3>NO<5>
Peso molecular: 682,128
El compuesto 147 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,16 min. MS (ES): m/z (MH+) 683,0 para C<4 2>H<8 3>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (m, 2H); 3,55 (m, 2H); 2,59 (m, 2H); 2,46 (m, 4H), 2,30 (m, 4H), 1,72-1,18 (m, 58H); 0,90 (m, 9H).
XX48. Compuesto 148*: 8-((2-hidroxietil)(8-((2-metoxinonil)oxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
1-((ferc-butildifemlsMN)oxi)nonan-2-ol
Fórmula química: C25H38O2Si
Peso molecular: 398,662
Se añadió T BDPSCl (8,58 g. 31,2 mmol) a una mezcla de nonano-1,2-diol (5,0 g, 31,2 mmol) e imidazol (4,24 g, 62,4 mmol) en DMF a TA. La reacción se agitó a TA durante la noche. La reacción se diluyó con agua (150 ml) y se extrajo con EtOAc/hexanos (1:1) (4X). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se separó, se secó con Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante ISCO con EtOAc (0-10 %) en hexanos para obtener 1-((terc-butildifenilsilil)oxi)nonan-2-ol (7,75 g, 19,4 mmol). 1H RMN (300 MHz, DMSO) 8: ppm 7,63 (m, 4H); 7,43 (m, 6H); 4,51 (d, 1H), 3,54 (m, 2H); 3,43 (m, 1H); 1,57 (m, 1H); 1,24 (m, 11H); 1,00 (s, 9H); 0,85 (m, 3H).
2-metoxietil 1 8-bromooctanoato
Formula química: C1sH35BrO3
Peso molecular: 379,379
El 8-bromooctanoato de 2-metoxinonilo se sintetizó siguiendo el procedimiento A en el procedimiento representativo 1. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,19 (m, 1H); 4,04 (m, 1H); 3,42 (m, 6H), 2,36 (t, 2H); 1,87 (m, 2H); 1,73-1,22 (m, 20H); 0,93 (m, 3H).
8-((2-hidroxietil)(8-((2-metoxinonil)oxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Formula química: C<4 5>H<8 9>NO<6>
Peso molecular: 740,208
El compuesto 148 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,48 min. MS (ES): m/z (MH+) 741,0 para C<4 5>H<8 9>NO<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 4,19 (m, 1H), 4,04 (m, 1H); 3,57 (m, 2H); 3,42 (s, 3H), 3,37 (m, 1H); 2,73-2,41 (m, 6H); 2,33 (m, 4H), 1,73-1,19 (m, 61H); 0,90 (m, 9H).
XX49. Compuesto 149*: 10-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8- oxooctil)(metil)amino)decanoato de heptilo
Formula química: C<4 3>H<8 5>NO<4>
Peso molecular: 680,156
El compuesto 149 se sintetizó de manera similar al compuesto 123 y según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,55 min. MS (ES): m/z (MH+)<6 8 1>,0 para C<4 3>H<8 5>NO<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCb)<8>: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 2,42-2,14 (m, 11H), 1,73-1,17 (m, 62H); 0,90 (m, 9H).
XX50. Compuesto 150*: 12-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(metil)amino)dodecanoato de pentilo
Formula química: C<4 3>H<8 5>NO<4>
Peso molecular: 680,156
El compuesto 150 se sintetizó de manera similar al compuesto 123 y según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,47 min. MS (ES): m/z (MH+)<6 8 1>,0 para C<4 3>H<8 5>NO<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCla)<8>: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 2,42-2,16 (m, 10H), 1,73-1,20 (m, 63H); 0,90 (m, 9H).
XX51. Compuesto 151:7-((7-(decanoiloxi)heptil)(2-hidroxietil)amino)heptil 2-octildecanoato
Peso molecular: 710,182
El compuesto 151 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,83 min. MS (ES): m/z (MH+) 711,0 para C<4 4>H<8 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,07 (m, 4H); 3,57 (m, 2H); 2,63 (br. m, 2H); 2,50 (m, 4H); 2,31 (m, 3H), 1,71-1,19 (m, 62H); 0,90 (m, 9H).
XX52. Compuesto 152*: (Z)-8-((2-hidroxietil)(10-octiMoctadec-8-en-1-il)amino)octanoato de nonilo , amida de W-metoxi-W-metil-2-octildecano
Formula química: C<2 0>H<4 1>NO<2>
Peso molecular: 327,553
A una solución de ácido 2-octil-decanoico (11,1 g, 39,02 mmol) y DMF (0,05 ml, 3,9 mmol) en DCM (100 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (3,63 ml, 42,92 mmol) gota a gota. Esta suspensión se dejó agitar durante 2 h a ta. Los disolventes y volátiles se evaporaron al vacío. El residuo resultante (cloruro de 2-octildecanoilo bruto) (11,82 g, 39,02 mmol) se recogió en DCM (100 ml) y se añadieron clorhidrato de N-O-dimetilhidroxilamina (4 g, 40,97 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (0,48 g, 3,9 mmol). La mezcla se dejó enfriar a 0 °C y se añadió lentamente trietilamina (19,04 ml, 136,57 mmol). La reacción se dejó calentar a ta y se agitó durante 1 h. Los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución sat. de NaHCOs, seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-40 %) en hexanos para obtener N-metoxi-N-metil-2-octildecanamida (7,10 g, 21,68 mmol, 56 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,70 (s, 3H); 3,22 (s, 3H); 2,82 (br. m, 1H); 1,62 (m, 2H); 1,51-1,19 (m, 26H); 0,90 (m, 6H).
2-octildecanal
Fórmula química: C<1 8>H<3 6>O
Peso molecular: 268,485
Se añadió una solución de W-metoxi-W-metil-2-octildecanamida (7,1 g, 21,68 mmol) en THF seco (2 ml) a una suspensión de LAH (27,53 ml, 1 M en THF, 27,53 mmol) en THF seco (5 ml) a -45 °C. La suspensión resultante se agitó durante 1 h a -45 °C, después de lo cual se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 0,5 h. La reacción se enfrió nuevamente a -45 °C y se apagó con una solución acuosa sat. de sulfato de sodio decahidratado (2 ml). La mezcla se agitó durante 20 min a temperatura ambiente y se filtró a través del tapón de Celite. El filtrado se lavó con salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-10 %) en hexanos para obtener 2-octildecanal (4,45 g, 16,57 mmol, 76 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 9,58 (d, 1H); 2,23 (m, 1H); 1,63 (m, 2H); 1,53-1,19 (m, 26H); 0,90 (m, 6H).
(Z)-10-octiloctadec-8-en-1-ol
Fórmula química: C<2 6>H<5 2>O
Peso molecular: 380,701
Se enfrió una solución de bromuro de (8-hidroxioctil)trifenilfosfonio (3,68 g, 7,81 mmol) en THF (16 ml) y HMPA en un baño de hielo y se añadió NaHMDS (19,52 ml 1 M, 19,52 mmol). Se añadió lentamente 2-octildecanal (1,05 g, 3,9 mmol) en THF (5 ml) y la reacción se calentó a 30 °C. Después de 16 h, la reacción se diluyó con 20 ml de agua y se acidificó con HCl 2 N. La reacción se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice EtOAc (0-50 %) en hexanos para obtener (Z)-10-octiloctadec-8-en-1-ol (0,5 g, 1,30 mmol, 33 %). 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 5,24 (m, 1H); 4,90 (m, 1H); 3,53 (t, 2H); 2,14 (m, 1H); 1,89 (m, 2H); 1,45 (m, 3H); 1,33-0,95 (m, 36H); 0,77 (m, 6H).
(Z)-1-bromo-10-octiloctadec-8-eno
Peso molecular: 443,598
A una solución de PPh3 (0,29 g, 1,11 mmol) y (8Z)-10-octiloctadec-8-en-1-ol (0,4 g, 1,05 mmol) en DCM (10 ml) a 0 °C, se le añadió NBS (0,22 g, 1,22 mmol) en una porción. La reacción se dejó agitar a 0 °C durante 1 h y a continuación se calentó hasta ta y se agitó durante 1 h. Se añadieron 300 ml de hexanos y la mezcla se filtró a través de un tapón de sílice y se evaporó al vacío. Se añadieron 200 ml de hexanos y la mezcla se filtró a través de un tapón de sílice y se evaporó al vacío para obtener (Z)-1-bromo-10-octiloctadec-8-eno (0,39 g, 0,88 mmol, 83 %). 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 5,24 (m, 1H); 4,90 (m, 1H); 3,53 (t, 2H); 2,14 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,45 (m, 3H), 1,33-0,95 (m, 36H); 0,77 (m, 6H).
(Z)-8-((2-hidroxietM)(10-octMoctadec-8-en-1-M)ammo)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<3>
Peso molecular: 693,211
El compuesto 152 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,00 min. MS (ES): m/z (MH+) 694,0 para C<4 5>H<8 9>NO<3>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 5,36 (m, 1H); 5,03 (m, 1H); 4,07 (t, 2H); 3,54 (t, 2H); 2,59 (t, 2H); 2,46 (m, 4H); 2,30 (m, 3H), 2,01 (m, 2H); 1,63 (m, 4H); 1,53-1,03 (m, 58H); 0,90 (m, 9H).
XX53. Compuesto 153: 8-((2-hidroxietil)(10-octiloctadecil)amino)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<4 5>H<9 1>NO<3>
Peso molecular: 694,227
Se cargó un matraz con Pd(OH)<2>(20 mg) y se purgó con N<2>. Se añadió una solución de 8-[(2-hidroxietil)[(8Z)-10-octiloctadec-8-en-1-il]amino]octanoato de nonilo (100 mg, 0,14 mmol) en EtOH (1 ml). La reacción se purgó con H<2>y se mantuvo en H<2>(globo) con agitación durante 16 h a ta. Tras este tiempo, la reacción se purgó con N<2>. La reacción se filtró a través de un tapón de Celite y se lavó con EtOH (50 ml). El filtrado se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con (0-50 %) (1 %, MeOH al 20 % en DCM) en DCM para obtener 8-((2-hidroxietil)(10-octiloctadecil)amino)octanoato de nonilo (0,069 g, 0,099 mmol, 69 %). UPLC/ELSD: RT = 3,21 min. MS (ES): m/z (MH+) 695,08 para C<4 5>H<9 1>NO<3>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,08 (t, 2H); 3,56 (t, 2H); 2,62 (m, 2H); 2,48 (m, 4H); 2,31 (m, 2H); 1,64 (m, 4H); 1,54-1,16 (m, 66H); 0,90 (m, 9H).
XX54. Compuesto 154*: 8-((2-(2-hidroxietoxi)etil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<9 1>NO<6>
Peso molecular: 754,235
El compuesto 154 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,54 min. MS (ES): m/z (MH+) 755,0 para C<4 6>H<9 1>NO<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,88 (m, 1H); 4,62 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,79-3,56 (m, 6H); 2,64 (m, 2H); 2,47 (m, 4H), 2,31 (m, 4H), 1,73-1,20 (m, 61H); 0,90 (m, 9H).
XX55. Compuesto 155*: 8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de tercbutilo
8-bromooctanoato de terc-butilo
Fórmula química: Ci2H23BrO2
Peso molecular: 279,218
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (2 g, 8,96 mmol) en DCM (20 ml) a 0 °C se le añadió anhídrido trifluoroacético (2,77 ml, 19,9 mmol) gota a gota. Después de 2,5 h. se le añadió lentamente ‘BuOH (3,1 ml, 32,27 mmol). Después de 1 h, la reacción se calentó a ta y se dejó agitar durante 2,5 h. La reacción se apagó con agua y se extrajo con éter dietílico. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-10 %) en hexanos para obtener 8-bromooctanato de ferc-butilo (1,5 g, 5,37 mmol, 60 %). 1H RMN (300<m>H<z>, CDCb) 8: ppm 3,42 (t, 2H); 2,23 (t, 2H); 1,87 (m, 2H); 1,60 (m, 2H); 1,47 (s, 11H); 1,35(m, 4H).
8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de terc-butilo
Fórmula química: C<3 9>H<7 7>NO<5>
Peso molecular: 640,047
El compuesto 155 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,18 min. MS (ES): m/z (MH+) 641,0 para C<3 9>H<7 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 3,58 (br. m, 2H); 2,75-2,36 (br. m, 6H); 2,26 (m, 4H); 1,71-1,40 (m, 22H); 1,28 (m, 35H); 0,90 (m, 6H).
XX56. Compuesto 156*: 8-((1,3-dihidroxipropan-2-il)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<6>
Peso molecular: 740,208
El compuesto 156 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,53 min. MS (ES): m/z (MH+) 741,0 para C<4 5>H<8 9>NO<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,88 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,67 (br. m, 4H); 3,04 (m, 1H); 2,65 (m, 4H); 2,32 (m, 4H), 1,72-1,44 (m, 15H); 1,28 (m, 48H); 0,90 (m, 9H).
XX57. Compuesto 157*: 8-((1-hidroxipropan-2-il)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 157 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,56 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,45-3,17 (br. m, 2H); 2,94 (br. m, 1H); 2,55-2,22 (m, 8H); 1,70-1,17 (m, 62H); 0,90 (m, 12H).
XX58. Compuesto 158*: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de tere-butilo
Peso molecular: 527,831
El compuesto 158 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,23 min. MS (ES): m/z (MH+) 528,0 para C<3 1>H<6 1>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,08 (t, 2H); 3,55 (br. m, 2H); 2,60 (br. m, 2H); 2,47 (m, 4H); 2,31 (t, 2H); 2,22 (t, 2H); 1,64 (br. m, 6H); 1,53-1,23 (m, 37H); 0,90 (m, 3H).
XX59. Compuesto 159*: 8-((2-hidroxietil)(2-((2-hidroxietil)(8-noniloxi)-8-oxooctil)amino)etil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 8>H<9 6>N<2>O<6>
Peso molecular: 797,304
El compuesto 159 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,15 min. MS (ES): m/z (MH+) 798,0 para C<4 8>H<9 6>N<2>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,88 (m, 1H); 4,07 (t, 2H); 3,62 (br. m, 4H); 2,72-2,47 (br. m, 12H); 2,31 (m, 4H), 1,72-1,42 (m, 14H), 1,28 (m, 47H); 0,90 (m, 12H).
XX60. Compuesto 160*: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de 1,5-bis (2-butilciclopropil)pentan-3-ilo
2-(2-butilciclopropil)etan-1-ol
Peso molecular: 142,242
El 2-(2-butilciclopropil)etan-1 -ol se sintetizó de la misma manera que el Intermedio C. 1H RMN (300 MHz, CDCls)<8>: ppm: 3,94 (t, 2H); 1,93 (m, 1H); 1,59 (m, 7H); 1,39 (m, 1H); 1,12 (m, 3H); 0,90 (m, 3H); 0,00 (m, 1H).
1-(2-bromoetil)-2-butilciclopropano
Peso molecular: 205,139
El 1-(2-bromoetil)-2-butilciclopropano se sintetizó de la misma manera que el (Z)-1-bromo-10-octiloctadec-8-eno. 1H RMN (300 MHz, CDCls)<8>: ppm 3,64 (t, 2H); 2,18 (m, 1H); 1,92 (m, 1H); 1,47 (m,<6>H); 0,96 (m,<6>H);<0 , 0 0>(m,<1>H).
1,5-bis(2-butilciclopropil)pentan-3-ol
Fórmula química: C<1 9>H<3 6>O
Peso molecular: 280,496
El 1,5-bis(2-butilciclopropil)pentan-3-ol se sintetizó de la misma manera que el (5Z,12Z)-heptadeca-5,12-dien-9-ol. 1H RMN (300 MHz, CDCls)<8>: ppm 3,96 (t, 1H); 1,64 (m, 21H); 1,16 (m,<6>H); 0,91 (m,<6>H); 0,03 (m, 2H).
8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de 1,5-bis(2-butilciclopropil)pentan-3-ilo
Peso molecular: 734,204
El compuesto 160 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,51 min. MS (ES): m/z (MH+) 735,0 para C<4 6>H<8 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,97 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,56 (br. m, 2H); 2,75-2,37 (br. m, 6H); 2,31 (m, 4H); 1,74-1,05 (m, 54H); 0,92 (m, 9H); 0,67 (m, 6H); 0,31 (m, 2H).
XX61. Compuesto 161*: 8-((2-hidroxietM)(10-(octanoMoxi)decan-2-M)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
10-(benciloxi)decan-2-ol
Formula química: C<1 7>H<2 8>O<2>
Peso molecular: 264,409
Se añadió una solución de 10-(benciloxi)decan-2-ona (3,5 g, 13,34 mmol) en THF (10 ml) a una solución agitada de LAH en THF (10 ml) en N<2>a 0 °C. La mezcla se dejó calentar a ta y se agitó durante 2 h después de lo cual se añadieron lentamente 10 ml de una solución (ac) sat. de Na2SO4.10H2O. Precipitó un sólido blanco. Se añadió Na2SO4.10H2O sólido adicional y la mezcla se filtró a través de un tapón de Celite. El filtrado se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-40 %) en hexanos para obtener 10-(benciloxi)decan-2-ol (3,2 g, 12,1 mmol, 91 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,32 (m, 5H); 4,53 (s, 2H); 3,80 (m, 1H); 3,49 (t, 2H); 1,64 (m, 2H); 1,55-1,25 (m, 132H); 1,21 (d 3H). Octanoato de 9-hidroxidecilo
Fórmula química: C<1 8>H<3 6>O<3>
Peso molecular: 300,483
El octanoato de 9-hidroxidecilo se sintetizó siguiendo el procedimiento A. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,08 (t, 2H); 3,80 (m, 1H); 2,30 (t, 2H); 1,64 (m, 4H); 1,52-1,17 (m, 23H); 0,90 (m, 3H).
8-((2-hidroxietil)(10-(octanoiloxi)decan-2-il)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 161 se sintetizó de una manera similar al compuesto 152 y según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,46 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,49 (br. m, 2H); 2,77-2,55 (m, 2H); 2,54-2,23 (m, 7H); 1,71-1,20 (m, 63H), 0,91 (m, 12H).
XX62. Compuesto 162*: 2-octildecanoato de 7-((2-hidroxietil)(10-(octanoiloxi)decan-2-il)amino)heptilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 162 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,49 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 3,99 (m, 4H); 2,72-2,48 (m, 2H); 2,48-2,17 (m, 6H), 1,55 (m, 8H), 1,44-1,10 (m, 56H); 0,92-0,75 (m, 12H).
XX63. Compuesto 163*: 2-octildecanoato de 7-((2-hidroxietN)(7-metN-8-(nomloxi)-8-oxooctil)amino)heptilo
Ácido 8-metoxioctanoico
Fórmula química: C<9>H<1 8>O<3>
Peso molecular: 174,240
A MeOH anhidro (80 ml) a 0 °C se le añadió KOH (7,54 g, 134,46 mmol) y se agitó durante 30 min. Se añadió una solución de ácido<8>-bromooctanoico (10 g, 44,82 mmol) en MeOH anhidro (70 ml) y la solución resultante se sometió a reflujo durante 18 h. El MeOH se retiró al vacío y el residuo se acidificó con HCl 1N y se extrajo con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con salmuera, se separó, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-50 %) en hexanos para obtener ácido<8>-metoxioctanoico (6,3 g, 36,16 mmol, 81 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb)<8>: ppm 3,35 (m, 5H); 2,37 (t, 2H); 1,61 (m, 4H); 1,36 (m,<6>H).
Ácido 8-metoxi-2-metiloctanoico
Fórmula química: C<1 0>H<2 0>O<3>
Peso molecular: 188,267
A una suspensión de NaH en THF (100 ml) a 0 °C, se le añadió gota a gota ácido 8-metoxioctanoico (5,6 g, 32,14 mmol) en THF (30 ml). La reacción se dejó agitar a ta durante 30 min. La reacción se enfrió a 0 °C y se añadió LDA (17,86 ml, 2 M en THF, 35,71 mmol) gota a gota. Después de la adición completa, la reacción se dejó agitar a 45 °C durante 2 h. La reacción se enfrió hasta ta y se añadió lentamente yoduro de metilo (2,45 ml, 39,28 mmol) en THF (15 ml). La reacción se agitó a 45 °C durante 16 h. La reacción se apagó con HCl 1N (20 ml). La reacción apagada se evaporó al vacío para eliminar los volátiles. El residuo se disolvió en hexanos/EtOAc (1:1) y se lavó con HCl 1N (100 ml X 2) seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-15 %) en hexanos para obtener ácido 8-metoxi-2-metiloctanoico (3,25 g, 17,26 mmol, 54 %). 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 3,35 (m, 5H); 2,49 (m, 1H); 1,70 (m, 1H); 1,59(m, 2H); 1,36 (m, 7H); 1,21 (d, 3H).
Ácido 8-hidroxi-2-metiloctanoico
Fórmula química: C9H18O3
Peso molecular: 174,240
A una solución de ácido 8-metoxi-2-metiloctanoico (1 g, 5,31 mmol) en DCM (20 ml) a -78 °C, se le añadió tribromuro de boro (13,28 ml 1 M en DCM, 13,28 mmol) gota a gota. La reacción se dejó calentar a ta y agitar a ta durante 2 h. La reacción se vertió en hielo y se extrajo con DCM. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromtografía en gel de sílice con EtOAc (0-40 %) en hexanos para obtener ácido 8-hidroxi-2-metiloctanoico (0,77 g, 4,41 mmol, 83 %). 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 3,43 (t, 2H); 2,50 (m, 1H); 1,94-1,64 (m, 4H); 1,56-1,26 (m, 7H); 1,20 (d, 3H).
8-hidroxi-2-metiloctanoato de nonilo
Fórmula química: C<1 8>H<3 6>O<3>
Peso molecular: 300,483
Se añadió una solución de ácido 8-hidroxi-2-metiloctanoico (0,75 g, 4,31 mmol), nonan-1-ol (6,22 g, 43,1 mmol), 4-dimetilaminopiridina (0,11 g, 0,86 mmol) en d Cm (20 ml) en N<2>a clorhidrato de (3-{[(etilimino)metiliden]amino}propil)dimetilamina (0,83 g, 4,31 mmol). La reacción se dejó agitar a ta durante 16 h. La reacción se diluyó con d Cm y se lavó con una solución sat. de NaHCO3, seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-20 %) en hexanos para obtener 8-hidroxi-2-metiloctanoato de nonilo 204 (0,68 g, 2,26 mmol, 53 %). 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,08 (t, 2H); 3,42 (t, 2H); 2,45 (m, 1H); 1,87 (m, 2H), 1,75-1,57 (m, 4H); 1,52-1,22 (m, 19H); 1,15 (d, 3H); 0,91 (m, 3H).
2-octildecanoato de 7-((2-hidroxietil)(7-metil-8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)heptilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 163 se sintetizó de una manera similar al compuesto 152 según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,50 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,08 (t, 4H); 3,55 (m, 2H); 2,67 (m, 2H); 2,53-2,24 (m, 6H), 1,72-1,10 (m, 65H); 0,90 (m, 9H).
XX64. Compuesto 164*: 8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)-2-metiloctanoato de nonilo
Fórmula química: C45H89NO5
Peso molecular: 724,209
El compuesto 164 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,51 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,55 (m, 2H); 2,69-2,38 (m, 8H); 2,30 (t, 2H); 1,74-1,09 (m, 65H); 0,90 (m, 9H).
XX65. Compuesto 165*: 2-octildecanoato de 7-((7-(decanoiloxi)octil)(2-hidroxietil)amino)heptilo
Fórmula química: C<3 5>H<6 9>NO<5>
Peso molecular: 583,939
A una solución de 8-{[8-(ferc-butoxi)-8-oxooctil](2-hidroxietil)amino}octanoato de heptadecan-9-ilo (0,11 g, 0,17 mmol) en DCM se le añadió ácido trifluoroacético (0,06 ml, 0,69 mmol) y la reacción se dejó agitar a ta durante 40 h. Los volátiles se evaporaron al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 %) (1 %, MeOH al 20 % en DCM) en DCM para obtener ácido 8-{[8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil](2-hidroxietil)amino}octanoico (0,023 g, 0,04 mmol) como un líquido incoloro. UPLC/ELSD: RT = 2,72 min. MS (ES): m/z (MH+) 585,0 para C<3 5>H<6 9>NO<5>1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,87 (m, 1H); 3,98 (m, 2H); 3,25-3,05 (m, 6H); 2,32 (m, 4H); 1,82-1,45 (m, 12H); 1,45-1,19 (m, 37H); 0,89 (m, 6H).
XX67. Compuesto 167*: Ácido 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoico
Fórmula química: C<2 7>H<5 3>NO<5>
Peso molecular: 471,723
El compuesto 167 se sintetizó siguiendo el mismo procedimiento que el compuesto 166. UPLC/ELSD: RT = 1,57 min. MS (ES): m/z (MH+) 472,0 para C<2 7>H<5 3>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,08 (m, 2H); 4,00 (m, 2H); 3,44-2,98 (m, 10H); 2,35 (t, 4H), 1,85-1,55 (m, 10H); 1,33 (m, 23H); 0,90 (m, 3H).
XX68. Compuesto 168: (Z)-8-((3-(2-ciano-3,3-dimetMguamdmo)propN)(8-(nomloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 9>H<9 5>N<5>O<4>
Peso molecular: 818,33
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (220 mg, 0,3 mmol) en 5 ml de 2-propanol se le añadió trietilamina (0,04 ml, 0,3 mmol) seguida de cianocarbonimidato de difenilo (72 mg, 0,3 mmol) y la mezcla se agitó a ta durante dos horas. A la mezcla de reacción se le añadió una solución de dimetilamina 2 M en THF (0,75 ml, 1,5 mmol) y la solución resultante se calentó a 75 °C durante 18 horas. Se añadió una solución de dimetilamina/THF 2 M adicional (0,75 ml, 1,5 mmol) y la temperatura aumentó a 85 °C. Después de seis horas, la reacción se completó mediante LC/MS, por lo que la solución se redujo al vacío, se diluyó con DCM y se lavó una vez con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar (Z)-8-((3-(2-ciano-3,3-dimetilguanidino)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (119,2 mg, 0,14 mmol, 49 %) como un jarabe incoloro. UPLC/ELSD: RT = 3,52 min. MS (ES): m/z (MH+) 819,0 para C<4 9>H<9 5>N<5>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 7,62 (br. s., 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 3,68 (d, 2H, J= 3 Hz); 2,99 (s, 6H); 2,59 (br. s, 2H); 2,43 (br. s, 3H); 2,28 (m, 4H); 1,71 (br. s, 2H); 1,62 (m, 8H); 1,49 (m, 5H); 1,26 (br. m, 50H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX69. Compuesto 169: 8-((3-((2-(dimetMammo)-3,4-dioxocidobut-1-en-1-M)ammo)propM)(8-(nonMoxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo 3-(dimetilamino)-4-metoxiciclobut-3-eno-1,2-diona
Fórmula química: C<7>H<9>NO<3>
Peso molecular: 155,15
A una solución de 3,4-dimetoxi-3-ciclobuteno-1,2-diona (1 g, 7 mmol) en 100 ml de éter dietílico se le añadió una solución de dimetilamina 2 M en THF (3,8 ml, 7,6 mmol) y se formó una ppt casi inmediatamente. La mezcla se agitó a ta durante 24 h y a continuación se filtró. Los sólidos del filtro se lavaron con éter dietílico y se secaron al aire. Los sólidos del filtro se disolvieron en MeOH caliente, se filtraron, el filtrado se dejó enfriar a temp. ambiente, a continuación se enfrió a 0 °C para proporcionar un ppt. Esto se aisló mediante filtración, se lavó con MeOH frío, se secó al aire y a continuación se secó al vacío para proporcionar 3-(dimetilamino)-4-metoxiciclobut-3-eno-1,2-diona (0,42 g, 2,7 mmol, 39 %) como un sólido amarillo pálido. 1H RMN (300 MHz, DMSO-cfe) 8: ppm 4,28 (s, 3H); 3,21 (s, 3H); 3,05 (s, 3H). 8-8-((3-((2-(dimetMammo)-3,4-dioxocidobut-1-en-1-il)amino)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<5 1>H<9 5>N<3>O<6>
Peso molecular: 846,34
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (220 mg, 0,3 mmol) en 10 ml de etanol se le añadió 3-(dimetilamino)-4-metoxiciclobut-3-eno-1,2-diona (47 mg, 0.3 mmol) y la solución incolora resultante se agitó a ta durante 20 horas después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La solución se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-((2-(dimetilamino)-3,4-dioxocidobut-1-en-1-il)amino)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (135 mg, 0,16 mmol, 53 %) como un jarabe incoloro. UPLc /e LSD: RT = 3,51 min. MS (ES): m/z (MH+) 847,3 para C<5 1>H<9 5>N<3>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCls)<6>: ppm 7,86 (br. s., 1H); 4,86 (quint., 1H, J=<6>Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,92 (d, 2H, J= 3 Hz); 3,20 (s,<6>H); 2,63 (br. s, 2H); 2,42 (br. s, 3H); 2,28 (m, 4H); 1,74 (br. s, 2H); 1,61 (m,<8>H); 1,50 (m, 5H); 1,41 (m, 3H); 1,25 (br. m, 47H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX70. Compuesto 170: (E)-8-((3-((1-(metNammo)-2-mtrovmN)ammo)propM)(8-(nomloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 8>H<9 4>N<4>O<6>
Peso molecular: 823,30
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (220 mg, 0,3 mmol) en 5 ml de metanol se le añadió 1-metiltio-1-metilamino-2-nitroeteno (45 mg, 0,3 mmol), la solución resultante se calentó hasta 70 °C y se agitó durante 24 horas después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La solución se diluyó con DCM y se lavó una vez con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar (E)-8-((3-((1-(metilamino)-2-nitrovinil)amino)propil)(8-(noloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (90 mg, 0,11 mmol, 36 %) como un jarabe amarillo pálido. UPLC/ELSD: RT = 3,33 min. MS (ES): m/z (MH+) 824,3 para C<4 8>H<9 4>N<4>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCla)<6>: ppm 10,15 (d, 1H, J= 9 Hz); 8,26 (d, 1H, J= 27 Hz); 6,55 (d, 1H, J= 9 Hz); 4,86 (quint., 1H, J=<6>Hz); 4,05 (t, 2H, J=<6>Hz); 3,32 (br. s, 1H); 3,24 (br. s, 1H); 2,81 (dd, 3H, J= 3 Hz, 12 Hz); 2,63 (br. s, 1H); 2,47 (br. s, 4H); 2,28 (m, 4H); 1,77 (br. s, 2H); 1,62 (m, 5H); 1,59 (m,<6>H); 1,49 (m, 3H); 1,43 (m, 3H); 1,26 (m, 46H); 0,88 (t, 9H, J =7,5 Hz).
XX71. Compuesto 171*: 8-((9-hidroxi-9-metiloctadecil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
((dec-9-en-1-iloxi)metil)benceno
Fórmula química: C<1 7>H<2 6>O
Peso molecular: 246,394
A una suspensión de hidruro de sodio (3,88 g, 96,99 mmol) en THF (100 ml) se le añadió 9-decen-1-ol (10 g, 63,99 mmol) lentamente. Después de 30 min, se añadió bromuro de bencilo (10,57 ml, 88,9 mmol). La reacción se dejó agitar a ta durante<1 8>h. La reacción se apagó con agua. Los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución sat. de NaHCOs, seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó con Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-20 %) en hexanos para obtener ((dec-9-en-1-iloxi)metil)benceno (8,5 g, 34,5 mmol, 54 %). 1H RMN (300 MHz, CDCls)<6>: ppm 7,32 (m, 5H); 5,83 (m, 1H); 4,98 (m, 2H); 4,53 (s, 2H); 3,49 (t, 2H); 2,06 (m, 2H); 1,64 (m, 2H); 1,46-1,26 (br. m, 10H).
10-(benciloxi)decan-2-ona
Fórmula química: C17H26O2
Peso molecular: 262,393
A una solución de cloruro de paladio (0,09 g, 0,52 mmol) y benzoquinona (3,09 g, 28,57 mmol) en DMF/agua (7:1, 12,8 ml), se le añadió lentamente [(dec-9-en-1-iloxi)metil]benceno (6,4 g, 25,98 mmol) y la solución marrón oscura se dejó agitar durante 3 días a ta. La mezcla se disolvió con HCl 2 N (50 ml) y se extrajo con éter (3 x 50 ml). La fase orgánica combinada se lavó con NaOH 2 N (3 x 50 ml) y se secó sobre MgSO4. Los disolventes se retiraron al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo (0-40 %) en hexanos para obtener 10-(benciloxi)decan-2-ona (3,44 g, 13,11 mmol, 50 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,36 (m, 5H); 4,52 (s, 2H); 3,48 (t, 2H); 2,43 (t, 2H); 2,15 (s, 3H); 1,61 (m, 4H); 1,45-1,24 (br. m, 8H).
1-(benciloxi)-9-metiloctadecan-9-ol
Fórmula química: C<2 6>H<4 6>O<2>
Peso molecular: 390,652
A una solución de 10-(benciloxi)decan-2-ona (1 g, 3,81 mmol) en THF (30 ml) a 0 °C, se le añadió bromo(nonil)magnesio (4,57 ml 1 M en éter dietílico, 4,57 mmol) gota a gota. La reacción se dejó calentar a ta y se agitó durante 4 h. La reacción se apagó con agua (2 ml), se añadió éter dietílico (200 ml) y el sólido blanco resultante se filtró a través de un tapón de sílice. El filtrado se extrajo con éter. La capa orgánica se lavó con agua, seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-40 %) en hexanos para obtener 1-(benciloxi)-9-metiloctadecan-9-ol (0,99 g). El producto fue impuro pero se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional.
9-metiloctadecano-1,9-diol
Fórmula química: C<1 9>H<4 0>O<2>
Peso molecular: 300,527
En N<2>se cargó un matraz con 1-(benciloxi)-9-metiloctadecan-9-ol (1 g, 2,56 mmol), Pd(OH)<2>(100 mg) y EtOH. La reacción se purgó con H<2>y se mantuvo en H<2>(globo) con agitación durante 16 h a ta. La reacción se purgó con N<2>. La reacción se filtró a través de un tapón de Celite y el Celite se lavó con EtOAc (200 ml). El filtrado se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc en hexanos (0-40 %) para obtener 9-metiloctadecano-1,9-diol(0,65 g, 2,16 mmol, 84 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,66 (t, 2H); 1,59 (m, 2H); 1,49-1,22 (br. m, 29H); 1,17 (s, 3H); 0,90 (m, 3H). 1-bromo-9-metiloctadecan-9-ol
Fórmula química: C1gH3gBrO
Peso molecular: 363,42
El 1-bromo-9-metiloctadecan-9-ol se sintetizó de la misma manera que el (Z/)-1-bromo-10-octilloctadec-8-eno.
1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,43 (t, 2H); 1,88 (m, 2H); 1,53-1,23 (br. m, 28H), 1,17 (s, 3H), 0,91 (m, 3H).
8-((9-hidroxi-9-metiloctadecil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 724,253
El compuesto 171 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,56 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 6>H<9 3>NO<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 3,55 (m, 2H); 2,60 (m, 2H); 2,47 (m, 4H); 2,30 (t, 2H); 1,74 -1,21 (m, 69H); 1,17 (s, 3H); 0,90 (m, 9H).
XX72. Compuesto 172*: 8-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)octanoato de (R)-decan-2-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 172 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,53 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,91 (m, 2H); 3,54 (m, 2H); 2,59 (m, 2H); 2,46 (m, 4H); 2,30 (m, 4H), 1,70-1,19 (m, 66H); 0,90 (m, 9H).
XX73. Compuesto 173: 8-((3-(W-met¡lsulfonam¡do)propM)(8-(nomlox¡)-8-oxooct¡l)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 7>H<9 4>N<2>O<6>S
Peso molecular: 815,34
A una solución de 8-((3-cloropropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,27 mmol) y N-metil metanosulfonamida (50 ul, 0,54 mmol) en 4 ml de DMF seco se le añadió carbonato de cesio (130 mg, 0,40 mmol), la mezcla resultante se calentó hasta 60 °C y se agitó durante 24 horas, después de lo cual no quedó cloruro de partida por LC/MS. La mezcla se dejó enfriar hasta ta, se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 % y se extrajo dos veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se lavaron una vez con agua, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. en un aceite amarillo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(W-metilsulfonamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (85 mg, 0,11 mmol, 39 %) como un aceite amarillo pálido. UPLC/ELSD: RT = 3,57 min. MS (ES): m/z (MH+) 816,1 para C<4 7>H<9 4>N<2>O<6>S. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,15 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 2,85 (s, 3H); 2,79 (3, 3H); 2,40 (br. m, 5H); 2,28 (m, 4H); 1,72 (br. m, 2H); 1,64-1,49 (m, 13H); 1,26 (br. m, 50H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX74. Compuesto 174: 8-((3-(2,5-dioxoimidazolidin-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 806,27
A una solución de 8-((3-doropropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,27 mmol) e hidantoína (50 mg, 0,54 mmol) en 4 ml de DMF seco se le añadió carbonato de cesio (130 mg, 0,40 mmol), la mezcla resultante se calentó hasta 60 °C y se agitó durante 24 horas, después de lo cual no quedó cloruro de partida por LC/MS. La mezcla se dejó enfriar hasta ta, se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 % y se extrajo dos veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se lavaron una vez con agua, se secaron (MgSO<4>), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al<1>%, MeOH al<2 0>% en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(2,5-dioxoimidazolidin-1 -il)propil)(<8>-(noniloxi)-<8>-
oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (35 mg, 0,05 mmol, 18 %) como un aceite amarillo pálido. UPLC/ELSD: RT = 3,52 min. MS (ES): m/z (MH+) 807,2 para C<4 8>H<9 1>N<3>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 5,27 (br. s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,95 (s, 2H); 3,55 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 2,50-2,34 (br. m, 5H); 2,26 (m, 4H); 1,77 (br. s, 2H); 1,64-1,49 (m, 15H); 1,26 (br. m, 48H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX75. Compuesto 175: 8-((3-((metilcarbamoil)oxi)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 781,26
A una solución de 8-((3-hidroxipropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,27 mmol) y trietilamina (60 ul, 0,41 mmol) en 5 ml de DCM seco a 0 °C se le añadió isocianato de metilo (22 ul, 0,35 mmol) gota a gota. El baño de enfriamiento se retiró y la solución se agitó a ta durante 2 horas, después de lo cual no quedó alcohol de partida por LC/MS. La reacción se apagó con tres gotas de metanol, la mezcla se redujo en una corriente de nitrógeno y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-((metilcarbamoil)oxi)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (115 mg, 0,15 mmol, 53 %) como un aceite incoloro. UPLC/ELSD: RT = 3,54 min. MS (ES): m/z (MH+) 782,3 para C<4 7>H<9 2>N<2>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,62 (br. s, 1H); 4,05 (m, 4H); 2,79 (d, 3H, J= 3 Hz); 2,47 (br. s, 2H); 2,37 (br. m, 3H); 2,27 (m, 4H); 1,73 (br. s, 2H); 1,61 (m, 7H); 1,50 (br. m, 4H); 1,40 (br. m, 4H); 1,25 (br. m, 48H); 0,87 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX76. Compuesto 176: 8-((3-(2,5-dioxopirrolidin-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 805,28
A una solución de 8-((3-doropropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,27 mmol) y succinimida (50 mg, 0,54 mmol) en 4 ml de DMSO seco se le añadió carbonato de cesio (130 mg, 0,40 mmol), la mezcla resultante se calentó hasta 80 °C y se agitó durante 48 horas, después de lo cual no quedó cloruro de partida por LC/MS. La mezcla se dejó enfriar hasta ta, se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 % y se extrajo tres veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se lavaron una vez con agua, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó dos veces mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(2,5-dioxopirrolidin-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (44 mg, 0,05 mmol, 19 %) como un aceite ligeramente amarillo. UPLC/ELSD: RT = 3,56 min. MS (ES): m/z (MH+) 806,1 C<4 9>H<9 2>N<2>O<6>.1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,52 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 2,69 (s, 4H); 2,42 - 2,25 (br. m, 9H); 1,71 - 1,58 (m, 10H); 1,50 (br. d, 4H, J = 3 Hz); 1,26 (br. m, 51H); 0,88 (t, 9H, J =7,5 Hz).
XX77. Compuesto 177: 8-((3-(4-(íerc-butoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)(8-(noloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula Química: C<5 2>H<1 0 0>N<4>O<5>
Peso molecular: 861,40
A una solución de 8-((3-azidopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (500 mg, 0,67 mmol) y éter propargílico de ferc-butilo (100 ul, 0,73 mmol) en 4 ml de THF se le añadió una suspensión de sulfato de cobre anhidro (5 mg, 0,03 mmol) y ascorbato de sodio (14 mg, 0,07 mmol) en 1 ml de agua y la mezcla se agitó a ta durante 24 horas, después de lo cual no quedó azida de partida por LC/MS. La mezcla se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo tres veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(4-(terc-butoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (485 mg, 0,56 mmol, 84 %) como un aceite ligeramente amarillo. UPLC/ELSD: RT = 3,63 min. MS (ES): m/z (MH+) 862,2 para C<4 2>H<0 0>N<4>O<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 7,50 (s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,59 (s, 2H); 4,36 (t, 2H, J = 7,5 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 2,36 (br. m, 5H); 2,28 (m, 4H); 2,02 (br. m, 2H); 1,62 (br. m, 8H); 1,50 (br. d, 4H, J = 3 Hz); 1,28 (br. m, 60H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX78. Compuesto 178: 8-((3-(2-metoxiacetamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 8>H<9 4>N<2>O<6>
Peso molecular: 795,29
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,27 mmol) y trietilamina (60 ul, 0,41 mmol) en 5 ml de DCM seco a 0 °C se le añadió cloruro de metoxiacetilo (30 ul, 0,33 mmol) gota a gota. El baño de enfriamiento se retiró y la solución se agitó a ta durante 24 horas, después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La mezcla se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 % y se extrajo dos veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se lavaron una vez con agua, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(2-metoxiacetamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (50 mg, 0,06 mmol, 23 %) como un aceite incoloro. UPLC/E<l>SD: RT = 3,56 min. MS (ES): m/z (MH+) 796,2 para C<4 8>H<9 4>N<2>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 7,53 (s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,87 (s, 2H); 3,39 (m, 5H); 2,47 (br. s, 2H); 2,36 (br. m, 3H); 2,27 (m, 4H); 1,61 (m, 8H); 1,46 (br. m, 9H); 1,26 (br. m, 48H); 0,88 (t, 9H, J =7,5 Hz).
XX79. Compuesto 179: 8-((3-(1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
8- ((8-(noniloxi)-8-oxooctil)(3-(4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)amino)octanoato de heptadecan-9- ilo
Fórmula química: C50H9sN4O4Si
Peso molecular: 847,44
A una solución de 8-((3-azidopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,27 mmol) y etiniltrimetilsilano (41 ul, 0,29 mmol) en 2 ml de THF se le añadió una suspensión de sulfato de cobre(II) anhidro (2 mg, 0,01 mmol) y ascorbato de sodio (5 mg, 0,02 mmol) en 0,5 ml de agua y la mezcla se agitó a ta durante 20 horas, después de lo cual no quedó azida de partida por LC/MS. La mezcla se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo tres veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((8-(noniloxi)-8-oxooctilo)(3-(4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (150 mg, 0,18 mmol, 66 %) como un aceite ligeramente amarillo que es una mezcla 2:1 de un producto TMS/des-TMS mediante 1H-RMN. Se llevó a cabo tal cual. UPLC/ELSD: RT = 3,63 min. MS (ES): m/z (MH+) 848,3 para C<5 0>H<9 8>N<4>O<4>SL 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 7,55 (s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,45 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,42 (br. s, 1H); 2,28 (m, 5H); 1,65 - 1,45 (br. m, 14H); 1,25 (br. m, 48H); 0,87 (t, 9H, J= 7,5 Hz); 0,33 (s, 6H).
8-((3-(1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 7>H<9 0>N<4>O<4>
Peso molecular: 775,26
A una solución de (150 mg, 0,18 mmol) en 5 ml de THF se le añadió una solución de fluoruro de tetrabutilamonio 1 M en THF (0,21 ml, 0,21 mmol) y la solución se agitó a ta durante 24 horas después de lo cual la reacción había progresado aproximadamente al 25 %. La solución se calentó a 55 °C y se agitó durante 24 horas, después de lo cual la reacción se completó mediante LC/MS. La solución se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo dos veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(1 H-1,2,3-triazol-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-ilo (53 mg, 0,07 mmol, 39 %) como un aceite incoloro. UPLC/ELSD: RT =3,55 min. MS (ES): m/z (MH+) 776,2 para C<4 7>H<9 0>N<4>O<4>.1H RMN (300 MHz, CDCl3)<8>: ppm 7,69 (s, 1H); 7,55 (s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,44 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 2,37 (br. m, 5H); 2,28 (m, 4H); 2,05 (br. m, 2H); 1,61 (br. m,<8>H); 1,49 (br. m, 4H); 1,26 (br. m, 51H); 0,88 (t, 9H, J=7,5Hz).
XX81. Compuesto 181: 8-((3-((metoxicarbonil)amino) propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 7>H<9 2>N<2>O<6>
Peso molecular: 781,26
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,27 mmol) y trietilamina (60 ul, 0,41 mmol) en 5 ml de DCM seco a 0 °C se le añadió cloroformiato de metilo (27 ul, 0,33 mmol) gota a gota. El baño de enfriamiento se retiró y la solución se agitó a ta durante 24 horas, después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La mezcla se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 % y se extrajo dos veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se lavaron una vez con agua, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-((metoxicarbonil)amino)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (120 mg, 0,15 mmol, 54 %) como un aceite incoloro. UPLC/ELSD:<r>T = 3,55 min. MS (ES): m/z (MH+) 782,1 para C<4 7>H<9 2>N<2>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCla)<8>: ppm 6,11 (br. s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J=<6>Hz); 4,05 (t, 2H, J=<6>Hz); 3,64 (s, 3H); 3,25 (br. d, 2H, J=<6>Hz); 2,46 (br. s, 2H); 2,38 - 2,24 (m, 7H); 1,61 (br. t, 9H, J= 7,5 Hz); 1,50 (m, 4H); 1,42 (br. m, 3H); 1,26 (br. m, 49H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX82. Compuesto 182: 8-((3-((2-(metMammo)-3,4-dioxocidobut-1-en-1-M)ammo)propM)(8-(nonMoxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo 3-metoxi-4-(metilamino)ciclobut-3-eno-1,2-diona
Fórmula química: C<6>H<7>NO<3>
Peso molecular: 141,13
A una solución de 3,4-dimetoxi-3-ciclobuteno-1,2-diona (1 g, 7 mmol) en 100 ml de éter dietílico se le añadió una solución de metilamina 2 M en THF (3,8 ml, 7,6 mmol) y se formó una ppt casi inmediatamente. La mezcla se agitó a ta durante 24 horas, a continuación se filtró, los sólidos del filtro se lavaron con éter dietílico y se secaron al aire. Los sólidos del filtro se disolvieron en EtOAc caliente, se filtraron, el filtrado se dejó enfriar a temp. ambiente, a continuación se enfrió a 0 °C para proporcionar un ppt. Esto se aisló mediante filtración, se lavó con EtOAc frío, se secó al aire y a continuación se secó al vacío para proporcionar 3-metoxi-4-(metilamino)ciclobut-3-eno-1,2-diona (0,70 g, 5 mmol, 73 %) como un sólido blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-de)<8>: ppm 8,50 (br. d, 1H, J = 69 Hz); 4,27 (s, 3H); 3,02 (sdd, 3H, J = 42 Hz, 4,5 Hz).
8-((3-((2-(metMammo)-3,4-dioxocidobut-1-en-1-M)ammo)propM)(8-(nomloxi)-8-oxooctM)ammo)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<5 0>H<9 3>N<3>O<6>
Peso molecular: 832,31
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,28 mmol) en 10 ml de etanol se le añadió 3-metoxi-4-(metilamino)ciclobut-3-eno-1,2-diona (39 mg, 0,28 mmol) y la solución incolora resultante se agitó a ta durante 20 horas después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La solución se concentró al vacío y el residuo se purifico mediante cromatografía en gel de sílice (0-100 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-((2-(metilamino)-3,4-dioxociclobut-1-en-1-il)amino)propil)(8-(noloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (138 mg, 0,17 mmol, 60%) como un sólido blanco gomoso. UPLC/ELSD: RT = 3, min. MS (ES): m/z (MH+) 833,4 para C<5 1>H<9 5>N<3>O<6>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 7,86 (br. s., 1H); 4,86 (quint., 1H, J=6Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,92 (d, 2H, J=3 Hz); 3,20 (s, 6H); 2,63 (br. s, 2H); 2,42 (br. s, 3H); 2,28 (m, 4H); 1,74 (br. s, 2H); 1,61 (m, 8H); 1,50 (m, 5H); 1,41 (m, 3H); 1,25 (br. m, 47H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX83. Compuesto 183*: 8-((2-hidroxietil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de 1,3-bis(hexiloxi)propan-2-ilo (((1,3-bis(hexiloxi)propan-2-il)oxi)metil)benceno
Fórmula química: C<2 2>H<3 8>O<3>
Peso molecular: 350,543
A una suspensión de NaH (1,76 g, 43,9 mmol) en THF (40 ml) en N<2>se le añadió 2-(benciloxi)propano-1,3-diol (2 g, 10,98 mmol) y la mezcla se dejó agitar a 40 °C durante 2 h. Después de este tiempo, se añadieron 1-bromohexano (4,35 g, 26,34 mmol) en DMF (2 ml) y una cantidad catalítica de KI. La reacción se calentó a reflujo durante 16 h. Los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución sat. de NaHCOs, seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-40 %) en hexanos para obtener (((1,3-bis(hexiloxi)propan-2-il)oxi)metil)benceno (1,7 g, 4,75 mmol, 43 %). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 6: ppm 7,34 (m, 5H); 4,73 (s, 2H); 3,75 (m, 1H); 3,61-3,40 (m, 8H); 1,59 (m, 4H); 1,32 (m, 12H); 0,91 (m, 6H).
1,3-bis(hexiloxi)propan-2-ol
Fórmula química: C15H32O3
Peso molecular: 260,418
El 1,3-bis(hexiloxi)propan-2-ol se sintetizó de la misma manera que el 9-metiloctadecano-1,9-diol. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 6: ppm 3,96 (m, 1H); 3,48 (m, 8H); 2,37 (br. S, 1H); 1,64 (m, 2H); 1,60 (m, 4H); 1,32 (m, 12H); 0,91 (m, 6H).
8-((2-hidroxietil)(8-(nolinoxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de 1,3-bis(hexiloxi)propan-2-ilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 3>NO<7>
Peso molecular: 714,126
El compuesto 183 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,17 min. MS (ES): m/z (MH+) 715,0 para C<4 2>H<8 3>NO<7>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 5,15 (m, 1H); 4,08 (t, 2H); 3,66-3,34 (m, 10H); 2,71-2,41 (m, 6H), 2,34 (m, 4H); 1,74-1,20 (m, 50H); 0,91 (m, 9H).
XX84. Compuesto 184*: 8-((2-hidroxietil)(8-((2-metilnonil)oxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
8-bromooctanoato de 2-metilnonilo
Fórmula química: C18H35BrO2
Peso molecular: 363,380
A una solución de ácido 8-bromooctanoico (3,83 g, 17,18 mmol), 2-metilnonan-1-ol (2,72 g, 17,18 mmol), 4-dimetilaminopiridina (0,42 g, 3,44 mmol) en DCM (25 ml) en N<2>se le añadió clorhidrato de (3-{[(etilimino)metilideno]amino}propil)dimetilamina (3,29 g, 17,18 mmol). La reacción se dejó agitar a ta durante 16 h. La reacción se diluyó con DCM y se lavó con una solución sat. de NaHCOs, seguido de salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice con EtOAc (0-20 %) en hexanos para obtener 8-bromooctanoato de 2-metilnonilo (5,1 g, 14,04 mmol, 82 %). 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 3,98 (m, 2H); 3,43 (t, 2H); 2,33 (t, 2H); 1,93-1,74 (m, 3H), 1,72-1,09 (m, 20H); 0,93 (m, 6H).
8-((2-hidroxietil)(8-((2-metilnonil)oxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 5>H<8 9>NO<5>
Peso molecular: 724,209
El compuesto 184 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,60 min. MS (ES): m/z (MH+) 725,0 para C<4 5>H<8 9>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 8: ppm 4,89 (m, 1H); 3,92 (m, 2H); 3,57 (m, 2H); 2,70-2,41 (m, 6H); 2,31 (m, 4H); 1,79 (m, 1H), 1,70 1,07 (m, 60H); 0,93 (m, 12H).
XX85. Compuesto 185: 6-((2-hidroxietil)(6-oxo-6-(undeciloxi)hexil)amino)hexanoato de henicosan-11-ilo
Fórmula química: C<4 6>H<9 1>NO<5>
Peso molecular: 738,236
El compuesto 185 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,72 min. MS (ES): m/z (MH+) 739,0 para C<4 6>H<9 1>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 6: ppm 4,88 (m, 1H), 4,08 (t, 2H); 3,55 (m, 2H); 2,60 (m, 2H); 2,48 (m, 4H); 2,32 (m, 4H); 1,72-1,41 (m, 15H), 1,28 (m, 52H); 0,90 (m, 9H).
XX86. Compuesto 186: 10-((2-hidroxietil)(10-oxo-10-(tridecan-7-iloxi)decil)amino)decanoato de heptilo
Fórmula química: C<4 2>H<8 3>NO<5>
Peso molecular: 682,128
El compuesto 186 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,31min. MS (ES): m/z (MH+) 739,0 para C<4 2>H<8 3>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H), 3,55 (m, 2H); 2,58 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,30 (m, 4H); 1,71-1,18 (m, 58H); 0,90 (m, 9H).
XX89. Compuesto 189*: 10-((8-(heptadecan-9-iloxi)-8-oxooctil)(2-hidroxietil)amino)decanoato de heptilo
Fórmula química: C<4 4>H<8 7>NO<5>
Peso molecular: 710,182
El compuesto 189 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 3,47min. MS (ES): m/z (MH+) 710,98 para C<4 4>H<8 7>NO<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 6: ppm 4,89 (m, 1H); 4,08 (t, 2H), 3,55 (m, 2H); 2,61 (m, 2H); 2,47 (m, 4H), 2,31 (m, 4H); 1,70-1,20 (m, 62H); 0,90 (m, 9H).
XX94. Compuesto 194: 8-((3-isobutiramidopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 9>H<9 6>N<2>O<5>
Peso molecular: 793,32
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (150 mg, 0,21 mmol) y trietilamina (90 ul, 0,62 mmol) en 5 ml de DCM seco a 0 °C se le añadió cloruro de isobutirilo (35 ul, 0,31 mmol) gota a gota. Después de 30 minutos, se retiró el baño de enfriamiento y la solución se agitó a ta durante 90 minutos, después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La mezcla se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 % y se extrajo dos veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se lavaron una vez con agua, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-isobutiramidopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (65 mg, 0,08 mmol, 39 %) como un aceite incoloro. UPL<c>/<e>LSD: RT = 3,65 min. MS (ES): m/z (MH+) 794,3 para C<4 9>H<9 6>N<2>O<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 6: ppm 7,53 (s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,87 (s, 2H); 3,39 (m, 5H); 2,47 (br. s, 2H); 2,36 (br. m, 3H); 2,27 (m, 4H); 1,61 (m, 8H); 1,46 (br. m, 9H); 1,26 (br. m, 48H); 0,88 (t, 9H, J =7,5 Hz).
XX97. Compuesto 197: 8-((3-(2-(benciloxi)acetamido) propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<5 4>H<9 8>N<2>O<6>
Peso molecular: 871,39
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (300 mg, 0,41 mmol) y trietilamina (145 ul, 1 mmol) en 10 ml de DCM seco a 0 °C se le añadió cloruro de benciloxiacetilo (82 ul, 0,52 mmol) gota a gota. El baño de enfriamiento se retiró y la solución se agitó a ta durante 24 horas, después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La mezcla se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 % y se extrajo dos veces con DCM. Los orgánicos se combinaron, se lavaron una vez con agua, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(2-(benciloxi)acetamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecano-9-ilo (179 mg, 0,21 mmol, 50 %) como un aceite incoloro. UPl C/ELSD: r T = 3,66 min. MS (ES): m/z (MH+) 872,4 para C<5 4>H<9 8>N<2>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 7,55 (s, 1H); 7,33 (m, 5H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,55 (s, 2H); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,97 (s, 2H); 3,35 (quint., 2H, J= 6 Hz); 2,46 (br. m, 2H); 2,28 (m, 7H); 1,65 - 1,48 (m, 15H); 1,26 (br. m, 50H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX98. Compuesto 198: 8-((3-(2-hidroxiacetamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Fórmula química: C<4 7>H<9 2>N<2>O<6>
Peso molecular: 781,26
A una solución de 8-((3-(2-(benciloxi)acetamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (130 mg, 0,15 mmol) en 5 ml de etanol en nitrógeno se le añadió paladio al 10 % en peso sobre carbono (aprox.<2 0>, cat.), las caras del matraz se lavaron con etanol y el matraz se equipó con un globo de hidrógeno. El matraz se evacuó y se rellenó con hidrógeno tres veces, a continuación se agitó a ta durante 24 horas después de lo cual no quedó éter de partida por LC/MS. El matraz se enjuagó con nitrógeno, la mezcla se filtró a través de tierra de diatomea, los sólidos del filtro se lavaron con etanol y el filtrado se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(2-
hidroxiacetamido)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (55 mg, 0,07 mmol, 47 %) como un aceite incoloro. UPLC/E<l>S<d>: RT = 3,46 min. MS (ES): m/z (MH+) 782,2 para C<4 7>H<9 2>N<2>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 7,73 (br. s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (m, 4H); 3,40 (quart., 2H, J= 6 Hz); 2,50 (m, 2H); 2,37 (t, 4H, J= 6 Hz); 2,28 (m, 4H); 1,63 (m, 8H); 1,46 (br. m, 8H); 1,26 (br. m, 49H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
XX100. Compuesto 200: (E)-8-((3-(3-metM-2-mtroguamdmo)propM)(8-(nonMoxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
(E/Z)-W-metM-W-mtrocarbamimidotioato de metilo
Fórmula química: C<3>H<7>N<3>O<2>S
Peso molecular: 149,17
A una suspensión de 2-metil-1-nitro-2-tiopseudourea (1,0 g, 7,4 mmol) y carbonato de cesio (2,5 g, 7,8 mmol en 8 ml de DMF seco se le añadió yodometano (0,69 ml, 11,1 mmol) y la mezcla se agitó a temp. ambiente durante 24 horas. La mezcla amarilla se diluyó con agua y se extrajo dos veces con EtOAc. Los orgánicos se combinaron, se lavaron tres veces con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 %, una vez con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se conc., hasta obtener un sólido amarillo. Esto se disolvió en agua caliente, la solución se filtró y el filtrado se enfrió a 4 °C durante tres días. Los sólidos resultantes se aislaron mediante filtración, se lavaron con agua, se secaron al aire y a continuación se secaron al vacío para proporcionar (£/Z)-W-metil-W-nitrocarbamimidotioato de metilo (85 mg, 0,57 mmol, 8 %) como un sólido amarillo pálido. 1H RMN (300 MHz, CDCla) 6: ppm 10,02 (br. s, 1H); 3,12 (d, 1H, J= 6 Hz); 2,53 (s, 3H).
Peso molecular: 824,29
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (200 mg, 0,28 mmol) en 5 ml de metanol se le añadió (£Z)-W-metil-W-nitrocarbamimidotioato de metilo (45 mg, 0,3 mmol), la solución resultante se calentó hasta 70 °C y se agitó durante 24 horas después de lo cual no quedó amina de partida por LC/MS. La solución se diluyó con DCM y se lavó una vez con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar (E)-8-((3-(3-metil-2-nitroguanidino)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (75 mg, 0,09 mmol, 33 %) como un jarabe amarillo pálido. UPLC/ELSD: RT = 3,55 min. MS (ES): m/z (MH+) 825,3 para C<4 7>H<9 3>N<5>O<6>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 6: ppm 9,26 (br. s, 1H); 8,27 (br. s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,42 (br. s, 2H); 2,86 (d, 3H, J= 6 Hz); 2,60 - 2,40 (br. m, 5H); 2,28 (m, 4H); 1,73 (br. s, 2H); 1,65 - 1,40 (m, 16H); 1,26 (br. m, 47H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz). XX107. Compuesto 207: 8-((3-guanidinopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
6-((ferc-butoxicarbonN)ammo)-2,2-dimetiM1 -(8-(noniloxi)-8-oxooctil)-4-oxo-3-oxa-5,7,l11 -triazanonadec-6-en-19-oato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 965,50
A una solución de 8-((3-aminopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (300 mg, 0,41 mmol) y trietilamina (230 ul, 1,66 mmol) en 10 ml de Dc M seco a 0 °C se le añadió 1,3-bis(tercbutoxicarbonil)-2-(trifluorometilsulfonil)guanidina (325 mg, 0,83 mmol) en una porción y la solución resultante se dejó calentar gradualmente a ta con agitación durante la noche. La LC/MS no mostró que quedara ningún material de partida, por lo que la solución se diluyó con DCM, se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al 50 %, la capa orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se conc. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 6-((terc-butoxicarbonil)amino)-2,2-dimetil-11-(8-(noniloxi)-8-oxooctil)-4-oxo-3-oxa-5,7,11-triazanonadec-6-en-19-oato de heptadecan-9-ilo (310 mg, 0,32 mmol, 77 %) como un aceite incoloro con una pureza de aprox. el 95 %. La mayor impureza individual tiene una masa correspondiente al producto con pérdida de un grupo Boc. Se llevó tal como está. UPLC/ELSD: RT = 3,90 min. MS (ES): m/z (MH+) 966,0 para C<5 6>H<1 0 8>N<4>O<8>. 1H RMN (300 MHz, CDCh) 6: ppm 11,49 (s, 1H); 8,55 (br. s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 3,45 (quart., 2H, J= 6 Hz); 2,46 (m, 2H); 2,36 (m, 4H); 2,27 (m, 4H); 1,61 (m, 8H); 1,50 (m, 22H); 1,40 (m, 4H); 1,25 (br. m, 48H); 0,88 (t, 9H, J= 7,5 Hz).
Peso molecular: 765,27
A una solución de 6-((terc-butoxicarbonil)amino)-2,2-dimetil-11-(8-(noniloxi)-8-oxooctil)-4-oxo-3-oxa-5,7,11-triazanonadec-6-en-19-oato de heptadecan-9-ilo (310 mg, 0,32 mmol) en 10 ml de DCM se le añadió ácido trifluoroacético (500 ul, exceso) y la solución se agitó a ta durante 48 horas después de lo cual no quedó material de partida por LC/MS. La solución se conc., el residuo se destiló conjuntamente con DCM dos veces y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH4OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-guanidinopropil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (210 mg, 0,27 mmol, 84 %) como un aceite incoloro. UPLC/ELSD: RT = 3,16 min. MS (ES): m/z (MH+) 766,3 para C<4 6>H<9 2>N<4>O<4>. 1H RMN (300 MHz, CDCls) 8: ppm 10,92 (br. s, 1H); 8,82 (br. s, 1H); 7,25 (br. s, 2H); 4,85 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 3,38 (br. s, 2H); 3,15 (br. s, 2H); 3,00 (br. s, 4H); 2,29 (m, 4H); 2,05 (br. s, 2H); 1,91 (br. s, 3H); 1,70 - 1,45 (br. m, 12H); 1,26 (br. m, 47H); 0,88 (t, 9H, J = 7,5 Hz).
XX118. Compuesto 218: 8-((3-(4-(hidroximetN)-1H-1,2,3-triazoM-M)propN)(8-(nonMoxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo
Peso molecular: 805,29
A una solución de 8-((3-(4-(terc-butoximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (190 mg, 0,22 mmol) en 4 ml de DCM se le añadió ácido trifluoroacético (675 ul, exceso) y la solución se agitó a ta durante 72 horas después de lo cual no quedó material de partida por LC/MS. La solución se conc., el residuo se destiló conjuntamente con DCM dos veces y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (0-50 % (mezcla de NH<4>OH al 1 %, MeOH al 20 % en diclorometano) en diclorometano) para proporcionar 8-((3-(4-(hidroximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)propil)(8-(noniloxi)-8-oxooctil)amino)octanoato de heptadecan-9-ilo (113 mg, 0,14 mmol, 64 %) como un aceite incoloro. UPLC/ELSD: RT = 3,41 min. MS (ES): m/z (MH+) 806,1 para C<4 8>H<9 2>N<4>O<5>. 1H RMN (300 MHz, CDCb) 8: ppm 7,54 (s, 1H); 4,86 (quint., 1H, J= 6 Hz); 4,80 (s, 2H); 4,40 (t, 2H, J= 7,5 Hz); 4,05 (t, 2H, J= 6 Hz); 2,38 (br. m, 5H); 2,28 (m, 5H); 2,04 (br. m, 2H); 1,61 (br. m, 7H); 1,50 (br. d, 4H, J = 3 Hz); 1,26 (br. m, 51H); 0,88 (t, 9H, J = 7,5 Hz) (protón de hidroxilo no observado).
XX132. Compuesto 232*: 8-((2-hidroxietM)(6-oxo-6-((4-pentMciclohexN)oxi)hexM)ammo)octanoato de nonilo
Fórmula química: C<3 6>H<6 9>NO<5>
Peso molecular: 595,950
El compuesto 232 se sintetizó según el procedimiento general y el procedimiento representativo 1 descritos anteriormente. UPLC/ELSD: RT = 2,84 min. MS (ES): m/z (MH+) 596,84 para C<3 6>H<6 9>NO<5>.1H RMN (300 MHz, CDCla) 8: ppm 5,01 (m, 0,5H); 4,68 (m, 0,5H); 4,08 (t, 2H); 3,56 (m, 2H), 2,67-2,55 (br. m, 2H); 2,55-2,40 (br. m, 4H); 2,31 (m, 4H); 1,97 (m, 1H); 1,82 (m, 2H); 1,73-1,15 (m, 43H); 1,02 (m, 1H); 0,90 (m, 6H).
Ejemplo 2: Producción de composiciones de nanopartículas
A. Producción de composiciones de nanopartículas
Con el fin de investigar composiciones de nanopartículas seguras y eficaces para su uso en la administración de agentes terapéuticos y/o profilácticos a las células, se preparan y evalúan una gama de formulaciones. Específicamente, se optimizan los elementos particulares y las relaciones de los mismos en el componente lipídico de las composiciones de nanopartículas.
Las nanopartículas se pueden preparar con procedimientos de mezcla tales como microfluídicos y mezcla de unión en T de dos corrientes de fluido, una de las cuales contiene el terapéutico y/o profiláctico y la otra tiene los componentes lipídicos.
Las composiciones lipídicas se preparan combinando un lípido según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (llb), (IIc), (lid) o (IIe), un fosfolípido (tal como DOPE o DSPC, que se puede obtener de Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL), un lípido PEG (tal como 1,2-dimiristoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol, también conocido como PEG-DMG, que se puede obtener de Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL), y un lípido estructural (tal como el colesterol, que se puede obtener de Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Alemania, o un corticosteroide (tal como prednisolona, dexametasona, prednisona e hidrocortisona), o una combinación de los mismos) a concentraciones de alrededor de 50 mM en etanol. Las soluciones se deben refrigerar para su almacenamiento a, por ejemplo, -20 °C. Los lípidos se combinan para proporcionar las relaciones molares deseadas (véase, por ejemplo, la Tabla 23) y se diluyen con agua y etanol hasta una concentración final de lípidos de entre alrededor de 5,5 mM y alrededor de 25 mM.
Las composiciones de nanopartículas que incluyen un agente terapéutico y/o profiláctico y un componente lipídico se preparan combinando la solución lipídica con una solución que incluye el agente terapéutico y/o profiláctico a relaciones de peso:peso componente lipídico a agente terapéutico y/o profiláctico de entre alrededor de 5:1 y alrededor de 50:1. La solución de lípidos se inyecta rápidamente usando un sistema basado en microfluidos NanoAssemblr a velocidades de flujo entre alrededor de 10 ml/min y alrededor de 18 ml/min en la solución terapéutica y/o profiláctica para producir una suspensión con una relación de agua a etanol entre alrededor de 1:1 y alrededor de 4:1.
Para composiciones de nanopartículas que incluyen un ARN, las soluciones del ARN a concentraciones de 0,1 mg/ml en agua desionizada se diluyen en amortiguador de citrato de sodio 50 mM a un pH entre 3 y 4 para formar una solución madre.
Las composiciones de nanopartículas se pueden procesar mediante diálisis para eliminar el etanol y lograr el intercambio de amortiguador. Las formulaciones se dializan dos veces contra solución salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7,4, a volúmenes 200 veces mayores que el del producto primario utilizando casetes Slide-A-Lyzer (Thermo Fisher Scientific Inc., Rockford, IL) con un valor de corte de peso molecular de 10 kD. La primera diálisis se realiza a temperatura ambiente durante 3 horas. A continuación, las formulaciones se dializan durante la noche a 4 °C. La suspensión de nanopartículas resultante se filtra a través de filtros estériles de 0,2 |jm (Sarstedt, Numbrecht, Alemania) en viales de vidrio y se sellan con cierres de engarce. Generalmente se obtienen soluciones de composiciones de nanopartículas de 0,01 mg/ml a 0,10 mg/ml.
El procedimiento descrito anteriormente induce la nanoprecipitación y la formación de partículas. Para lograr la misma nanoprecipitación, se pueden usar procedimientos alternativos que incluyen, pero sin limitarse a, la unión en T y la inyección directa.
B. Caracterización de las composiciones de nanopartículas
Se puede utilizar un Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Malvern, Worcestershire, RU) para determinar el tamaño de partícula, el índice de polidispersidad (PDI) y el potencial zeta de las composiciones de nanopartículas en 1 xPBS para determinar el tamaño de partícula y PBS 15 mM para determinar el potencial zeta.
La espectroscopía ultravioleta visible puede usarse para determinar la concentración de un agente terapéutico y/o profiláctico (por ejemplo, ARN) en composiciones de nanopartículas. Se añaden 100 j l de la formulación diluida en 1 *PBS a 900 j l de una mezcla 4:1 (v/v) de metanol y cloroformo. Después de la mezcla, el espectro de absorbancia de la solución se registra, por ejemplo, entre 230 nm y 330 nm en un espectrofotómetro DU 800 (Beckman Coulter, Beckman Coulter, Inc., Brea, CA). La concentración de agente terapéutico y/o profiláctico en la composición de nanopartículas se puede calcular en función del coeficiente de extinción del agente terapéutico y/o profiláctico utilizado en la composición y de la diferencia entre la absorbancia a una longitud de onda de, por ejemplo, 260 nm y el valor de referencia a una longitud de onda de, por ejemplo, 330 nm.
Para composiciones de nanopartículas que incluyen un ARN, se puede usar un ensayo de ARN QUANT-IT™ RIBOGRE<e>N® (Invitrogen Corporation Carlsbad, CA) para evaluar la encapsulación de un ARN por la composición de nanopartículas. Las muestras se diluyen a una concentración de aproximadamente 5 jg/m l en una solución tampón TE (Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 7,5). Se transfieren 50 j l de las muestras diluidas a una placa de 96 pocillos de poliestireno y se añaden a los pocillos 50 j l de amortiguador TE o 50 j l de una solución de Triton X-100 al 2 %. La placa se incuba a una temperatura de 37 °C durante 15 minutos. El reactivo RIBOGREEN® se diluye 1:100 en amortiguador TE, y se añaden 100 j l de esta solución a cada pocillo. La intensidad de fluorescencia se puede medir usando un lector de placas de fluorescencia (Contador Multilablel Wallac Victor 1420; Perkin Elmer, Waltham, MA) a una longitud de onda de excitación de, por ejemplo, alrededor de 480 nm y una longitud de onda de emisión de, por ejemplo, alrededor de 520 nm. Los valores de fluorescencia del blanco de reactivo se restan de los de cada una de las muestras y el porcentaje de ARN libre se determina dividiendo la intensidad de fluorescencia de la muestra intacta (sin adición de Triton X-100) por el valor de fluorescencia de la muestra alterada (causado por la adición de T riton X-100).
C. Estudios de formulación in vivo
Con el fin de monitorear la eficacia de diversas composiciones de nanopartículas para administrar agentes terapéuticos y/o profilácticos a células diana, se preparan y administran diferentes composiciones de nanopartículas que incluyen un agente terapéutico y/o profiláctico particular (por ejemplo, un a Rn modificado o de origen natural tal como un ARNm) a poblaciones de roedores. A los ratones se les administra por vía intravenosa, intramuscular, intraarterial o intratumoral una única dosis que incluye una composición de nanopartículas con una formulación tal como las proporcionadas en el Ejemplo 3.
En algunos casos, se puede hacer que los ratones inhalen dosis. Los tamaños de dosis pueden variar de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg, donde 10 mg/kg describe una dosis que incluye 10 mg de un agente terapéutico y/o profiláctico en una composición de nanopartículas por cada 1 kg de masa corporal del ratón. También se puede emplear una composición de control que incluya PBS.
Tras la administración de composiciones de nanopartículas a ratones, los perfiles de administración de dosis, las respuestas a dosis y la toxicidad de formulaciones particulares y dosis de las mismas se pueden medir mediante ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA), formación de imágenes bioluminiscentes u otros procedimientos. Para composiciones de nanopartículas que incluyen ARNm, también se pueden evaluar los ciclos temporales de expresión de proteínas. Las muestras recolectadas de los roedores para su evaluación pueden incluir sangre, sueros y tejido (por ejemplo, tejido muscular del sitio de una inyección intramuscular y tejido interno); la recolección de muestras puede implicar el sacrificio de los animales.
Las composiciones de nanopartículas que incluyen ARNm son útiles en la evaluación de la eficacia y utilidad de diversas formulaciones para la administración de agentes terapéuticos y/o profilácticos. Los niveles más altos de expresión de proteína inducidos por la administración de una composición que incluye un ARNm serán indicativos de mayores eficiencias de administración de ARNm de composición de nanopartículas y/o traducción de ARNm. Dado que no se cree que los componentes que no son de ARN afecten a las propias maquinarias de traducción, es probable que un nivel más alto de expresión de proteína indique una mayor eficiencia de administración del agente terapéutico y/o profiláctico mediante una composición de nanopartículas dada con respecto a otras composiciones de nanopartículas o la ausencia de las mismas.
Ejemplo 3: Formulaciones de muestra
Las composiciones de nanopartículas que incluyen un agente terapéutico y/o profiláctico se pueden optimizar según la selección de un compuesto o compuesto comparativo (marcado con *) según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe), la selección de lípidos adicionales, la cantidad de cada lípido en el componente lipídico y la relación peso peso del componente lipídico con respecto al agente terapéutico y/o profiláctico, como se describe en esta invención.
Se realizaron estudios iniciales para comparar la eficacia de administración de composiciones de nanopartículas que incluyen diversos compuestos o compuestos comparativos (marcados con *)según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe). El lípido catiónico MC3 es un estándar actual en la técnica. Por consiguiente, se utilizó la formulación MC3 estándar que incluye alrededor del 50 % en moles de MC3, alrededor del 10 % en moles de DSPC, alrededor del 38,5 % en moles de colesterol y alrededor del 1,5 % en moles de PEG-DMG como base para este estudio. Las composiciones de nanopartículas que incluyen DSPC como fosfolípido, colesterol como lípido estructural, PEG-DMG como lípido PEG, un ARN y un compuesto según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) seleccionado de entre los Compuestos y Compuestos Comparativos 1-159, 168-170 y 173-175 se prepararon según o mediante procedimientos similares a los descritos en los Ejemplos 1 y 2. Las relaciones de los lípidos fueron 50:10:38,5:1,5% en moles para el lípido según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe):DSPC:colesterol:PEG-DMG. El ARN utilizado fue un ARNm que codifica la luciferasa G5 (Luc) o hEPO G5. Las Tablas 1A-1B resumen el contenido y las características de las formulaciones.
Como se muestra en las Tablas 1A-1B, la elección de compuesto o compuestos comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe) afecta drásticamente el tamaño (por ejemplo, diámetro), índice de polidispersidad y eficiencia de encapsulación (EE) de las composiciones. Las composiciones tenían tamaños entre aproximadamente 53 nm y 237 nm. Las composiciones que incluyen los Compuestos o Compuestos comparativos (marcados con *) 5, 35, 36, 51, 59, 131*, 132*, 137*-139*, 145, 148*, 155* y 158* produjeron las partículas más grandes, mientras que las composiciones que incluyen los Compuestos y Compuestos comparativos (marcados con *) 9*, 21*, 29*, 30, 65*, 71*-75*, 94*, 107*, 114-116, 119*, 124, 133*, 149*, 150*, 152*, 174 y 175 produjeron las partículas más pequeñas. Los índices de polidispersidad variaron entre 0,04 y 0,99, mientras que las eficiencias de encapsulación superaron el 75 % para las composiciones que incluían cada compuesto analizado, excepto para los Compuestos y Compuestos comparativos (marcados con *) 21*, 94*, 107*, 132*, 148*, 155* y 158*. Las mayores eficiencias de encapsulación se observaron para los Compuestos y Compuestos comparativos (marcados con *) 1, 6*, 18, 19, 24*, 26, 28*, 29*, 49*, 50*, 55*, 60, 61, 65*-70*, 72*, 74*, 75*, 101*, 109-116, 118*, 119*, 121*, 122*, 124, 126, 128*, 130*, 149*, 152*, 153, 156*, 159*, 169, 170 y 174.
Tabla 1A. Características de las composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe). Compuestos comparativos están marcados con *
Tabla 1B. Características de las composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (Me), (IId) o (IIe). Compuestos comparativos están marcados con *
Ejemplo 4: Expresión de Luc inducida por formulaciones de muestra
La eficacia de las composiciones de nanopartículas presentadas en la Tabla 1A se evaluó con un estudio de bioluminiscencia. Las formulaciones se administraron por vía intravenosa a ratones (n = 6) a una dosificación de 0,5 mg/kg (mpk) y se midió la bioluminiscencia en puntos de tiempo de 3, 6 y 24 horas. La formulación MC3 estándar y, en algunos casos, un control (por ejemplo, un control de PBS) se evaluaron para su comparación. Como es evidente en la Tabla 2, a las 3 horas, el flujo total fue mayor para las composiciones que incluyen los Compuestos y Compuestos comparativos (marcados con *) 4, 28*, 32, 48*, 66*, 128* y 135* y el flujo total a las 3 h fue mayor o comparable al de las formulaciones MC3 para los Compuestos y Compuestos comparativos (marcados con *) 2, 3, 18, 19, 20, 24*, 26, 25, 27, 31*, 33, 47*, 49*, 50*, 53, 54, 55*, 60, 61, 65*-68*, 70*, 72*, 74*, 75*, 96, 111, 122*, 130*, 133*, 134, 143*, 147, 148*, 150*, 151 y 153. Estas composiciones también demostraron un mayor flujo total en puntos de tiempo de 6 y 24 horas. Las composiciones que incluyen los Compuestos y Compuestos comparativos (marcados con *) 9*, 17*, 57, 58, 59, 121*, 125*, 137*, 140*, 141* y 158* tuvieron un flujo significativamente menor en todos los puntos de tiempo medidos. En general, el flujo disminuyó a medida que avanzaba el tiempo a menos del 10 % del flujo inicial. Estos resultados sugieren que los compuestos descritos en esta invención pueden ser útiles en aplicaciones de transfección.
Tabla 2. Expresión de luciferasa inducida por la administración de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe).Compuestos comparativos están marcos con *.
El flujo total (medido por el área bajo la curva, AUC) inducido por la administración de una formulación que incluye un lípido dado con respecto al inducido por la administración de una formulación que incluye MC3 también se midió para varios lípidos. Como se muestra en la Tabla 3A (administración i.v.), el flujo inducido por formulaciones que incluyen los Compuestos comparativos 48* y 49* medido a las 6 h fue diez veces mayor que el inducido por la formulación MC3. Las formulaciones que incluyen el Compuesto comparativo 50*, el compuesto 54 y el compuesto comparativo 55* también demostraron mayor flujo que las formulaciones MC3. Como se muestra en la Tabla 3B, el flujo inducido por formulaciones que incluyen los Compuestos 108 y 168 medido a las 6 h fue catorce y dieciséis veces mayor que el inducido por la formulación MC3 mediante administración intramuscular (i.m.). Los resultados también se muestran en la Figura 8. Como se muestra en la Tabla 3C (administración i.v.), el flujo inducido por formulaciones que incluyen los Compuestos comparativos 66*, 133* y 135* y compuestos 134 y 147 medido a las 6 h y el flujo total fueron notablemente más altos que los inducidos por la formulación MC3. Como se muestra en la Tabla 3D, el flujo total inducido por formulaciones que incluyen el Compuesto 96, y el compuesto comparativo 148* y el compuesto 151 medido a las 6 h fue notablemente mayor que el inducido por la formulación MC3.
Tabla 3A. Expresión de luciferasa tras la administración de formulaciones que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe) con respecto a la administración de formulaciones que incluyen MC3. Compuestos comparativos marcados con *.
Tabla 3B. Expresión de luciferasa tras la administración de formulaciones que incluyen compuestos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe) con respecto a la administración de formulaciones que incluyen MC3.
Tabla 3C. Expresión de luciferasa tras la administración de formulaciones que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe) con respecto a la administración de formulaciones que incluyen MC3.Compuestos comparativos marcados con *.
Tabla 3D. Expresión de luciferasa y aclaramiento de lípidos tras la administración de formulaciones que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe) con respecto a la administración de formulaciones que incluyen MC3. Compuestos comparativos marcados con *.
Ejemplo 5: Expresión de Luc inducida por formulaciones de muestra en diferentes órganos
La eficacia de las composiciones de nanopartículas presentadas en la Tabla 1A se evaluó adicionalmente midiendo la expresión de luciferasa modificada en el hígado, pulmón, bazo y fémur tras la administración de una composición dada. Los compuestos comparativos y las composiciones que comprenden un compuesto comparativo están marcados con *. Las formulaciones se administraron por vía intravenosa a ratones (n = 3) a una dosificación de 0,5 mpk y se midió la bioluminiscencia después de 6 horas. También se evaluaron la formulación MC3 estándar y un control de PBS. Como es evidente en la Tabla 4, el flujo para casi todas las especies fue mayor en el hígado en comparación con otros tejidos. El flujo en el hígado fue el más alto para las composiciones y compuestos comparativos que incluyen 3, 28*, 33, 48*, 96 y 135* y comparable con el de las formulaciones de MC3 para las composiciones y composiciones comparativas que incluyen los Compuestos y compuestos comparativos 2, 4, 6*, 7, 18, 20, 24*, 25-27, 30, 31*, 32, 34, 47*, 49*, 50*, 53, 54, 55*, 56, 60, 65*, 67*, 68*, 74*, 75*, 111, 113, 122*, 128*, 130*, 133*, 134, 143*, 147, 148*-150*, 151, 153 y 157*. El flujo en el hígado fue el más bajo para las composiciones y composiciones comparativas que incluyen los Compuestos y compuestos comparativos 58, 59, 137* y 141*. El flujo en el bazo fue el más alto para las composiciones y composiciones comparativas que incluyen los Compuestos y compuestos comparativos 4, 7, 33, 34, 48*, 53, 108, 129*, 130* y 148*, y el más bajo para las composiciones y composiciones comparativas que incluyen los Compuestos y compuestos comparativos 9*, 59, 124 y 141*. Se observaron resultados similares en el pulmón y el fémur.
Tabla 4. Expresión de luciferasa en diversos órganos 6 horas después de la administración de composiciones y composiciones comparativas de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (lIe). Compuestos comparativos y composiciones comparativas marcadas con *.
Ejemplo 6A: Expresión inducida por formulaciones de muestra tras la administración intramuscular
Las formulaciones de muestra que incluyen ARNm de luciferasa (Luc) modificada y ARNm de H10 se prepararon y administraron por vía intramuscular y la expresión e inmunogenicidad resultantes se evaluaron simultáneamente. Las formulaciones que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe) se prepararon y administraron en dosis de 0,001 y 0,01 mpk (por ejemplo, dosis de 0,0005 mpk de una formulación que incluye ARNm de Luc y una formulación que incluye ARNm de H10 o dosis de 0,005 mpk de una formulación que incluye ARNm de Luc y una formulación que incluye ARNm de H10). Como se muestra en la Tabla 5A, el Compuesto 20 presentó la expresión más alta en ambos niveles de dosis. La dosis baja del Compuesto 20 mostró una expresión equivalente a la dosis alta de MC3. Las formulaciones que incluyen otros compuestos y compuestos comparativos también mostraron una mejora múltiple en la expresión con respecto a MC3.
Tabla 5A. Flujo total (p/s) medido 6 horas después de la administración intramuscular de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (lIe).Compuestos comparativos están marcados con *.
Ejemplo 6B: Expresión inducida por formulaciones de muestra tras la administración intramuscular
Las formulaciones de muestra que incluyen ARNm de luciferasa (Luc) modificada preparado y administrado por vía intramuscular y la expresión e inmunogenicidad resultantes se evaluaron simultáneamente. Las formulaciones que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (II b), (IIc), (IId) o (IIe) se prepararon y administraron a una dosis de y 0,01 mpk. Como se muestra en la Tabla 5B, el Compuesto 108 presentó la expresión más alta. Las formulaciones que incluyen otros compuestos y compuestos comparativos también mostraron una mejora múltiple en la expresión con respecto a MC3.
Tabla 5B Flujo total (p/s) medido 6 horas después de la administración intramuscular de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (lie). Compuestos comparativos están marcados como *.
Los flujos medidos tras la administración intravenosa e intramuscular se comparan en la Tabla 6. Los flujos se presentan como un incremento sobre el medido para las formulaciones de MC3. Las formulaciones que incluyen el Compuesto 20 mostraron el incremento más alto en la expresión de Luc tras la administración intramuscular, mientras que las que incluyen los Compuestos 18 y 26 mostraron el incremento más alto tras la administración intravenosa. En particular, los datos intravenosos incluidos en la Tabla 6 se midieron a dosis más altas que los datos intramusculares.
Tabla 6. Flujo relativo medido después de la administración intravenosa o intramuscular de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe). Compuestos comparativos están marcados con *.
Ejemplo 7: Producción de citocinas inducida por formulaciones de muestra
La introducción de material extraño en el cuerpo de un mamífero induce una respuesta inmunitaria innata que promueve la producción de citocinas. Dichas respuestas inmunitarias a, por ejemplo, composiciones de nanopartículas que incluyen agentes terapéuticos y/o profilácticos, son indeseables. Por lo tanto, se mide la inducción de determinadas citocinas para evaluar la eficacia de las composiciones de nanopartículas. Las concentraciones de diversas citocinas en ratones tras la administración intravenosa de composiciones de nanopartículas presentadas en la Tabla 1A a una dosificación de 0,5 mpk se midieron a las 6 horas. También se evaluaron la formulación MC3 estándar y un control de PBS. Las composiciones que comprenden compuestos comparativos están marcadas con *. Como es evidente en la Tabla 7, la inducción de IL-6 fue la más alta para las composiciones que incluyen los Compuestos y compuestos comparativos 1, 3, 9*, 19 y 26, mientras que la inducción de IP-10 fue la más alta para las composiciones que incluyen los Compuestos 3, 4, 7, 20 y 26. La inducción de IL-6 fue la más baja para las composiciones que incluyen el Compuesto 4, y compuestos comparativos 11*, 12* y 28*. La inducción de IP-10 fue la más baja para las composiciones que incluyen los Compuestos comparativos 10*, 11*, 12*, 13*, 15*, 17* y el compuesto 18.
Tabla 7. Inducción de citocinas 6 horas después de la administración de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe). Compuestos comparativos están marcados con *.
Ejemplo 8: Activación del complemento inducida por formulaciones de muestra
La activación del complemento ayuda en el aclaramiento de patógenos de un organismo. Como no es deseable que el cuerpo de un sujeto reconozca una composición de nanopartículas como un invasor extraño, se prefiere la activación baja del sistema de complemento tras la administración de dicha composición. El complejo sC5b-9 es un marcador para la activación del sistema de complemento. Por lo tanto, las células humanas se pusieron en contacto in vitro con composiciones de nanopartículas según la Tabla 1A y se evaluaron para determinar los niveles de sC5b-9. Las composiciones que comprenden compuestos comparativos están marcadas con *La Tabla 8 muestra el incremento en los niveles de sC5b-9 con respecto a la solución salina para composiciones de nanopartículas que incluyen los Compuestos 1, 6*, 9*, 18, 24*, 25, 29* y 30. Las composiciones que incluyen los Compuestos 6* y 18 aumentan un poco los niveles de sC5b-9 con respecto a la solución salina, mientras que las composiciones que incluyen los Compuestos 1,9*, 24*, 29* y 30 disminuyen ligeramente los niveles de sC5b-9 con respecto a la solución salina.
Tabla 8. Incrementos en los niveles de sC5b-9 tras la administración de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe).Compuestos comparativos están marcados con *.
Ejemplo 9: Química clínica y hematología
Las formulaciones de muestra de composiciones de nanopartículas que incluyen diferentes lípidos se administraron por vía intravenosa a ratas a una dosis de 2 mpk. La expresión de varios marcadores clínicos se evaluó 48 h después de la dosis y se comparó con la inducida por la administración de formulaciones de MC3 o solución salina tamponada con fosfato (PBS).
Tabla 9. Niveles de marcadores clínicos inducidos por la administración de composiciones de nanopartículas que incluyen un compuesto o un compuesto comparativo de Fórmula (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) o (IIe). Compuestos comparativos están marcados con *.
Ejemplo 10: Expresión de hEPO inducida por formulaciones de muestra
Las formulaciones de muestra de composiciones de nanopartículas que incluyen diferentes lípidos generalmente se evalúan primero según la expresión de Luc in vivo. La actividad de varias de dichas composiciones se evaluó adicionalmente mediante el uso de un ARNm que codifica hEPO. Las composiciones que comprenden compuestos comparativos están marcadas con *. Las composiciones de nanopartículas que incluyen los Compuestos y compuestos comparativos 6*, 18, 25, 30, 108-112, 60 y 122*, o MC3 se prepararon según el Ejemplo 2. Como se muestra en las Tablas 10 y 1B anteriores, cada composición tuvo un tamaño de partícula y eficiencia de encapsulación similares.
Tabla 10. Características de las composiciones de nanopartículas que incluyen un compuesto y un compuesto comparativo (marcado con *) según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe).
La expresión de hEPO y la inducción de citocinas en ratones a los que se les administró por vía intravenosa una composición de nanopartículas a una dosis de 0,5 mpk se midieron a las 3, 6 y 24 horas. Los niveles de hEPO y citocinas resultantes se resumen en la Tabla 11 A. Las composiciones que incluyen el Compuesto comparativo 6* y el compuesto 18 produjeron concentraciones de hEPO más altas que las formulaciones de MC3 en cada punto de tiempo. La expresión de hEPO en ratones a los que se les administró por vía intramuscular una composición de nanopartículas de la Tabla 1B a una dosis de 0,01 mpk se midió a las 3, 6 y 24 horas. Los niveles de hEPO resultantes se resumen en la Tabla 11B con los compuestos comparativos marcados como *. Las composiciones que incluyen los Compuestos 18, 25, 30, 108-112, 60 y 122* produjeron concentraciones de hEPO más altas que las formulaciones de MC3 en un punto de tiempo de 6 horas (véase también la Figura 9).
Tabla 11A. Evaluación de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe).
Tabla 11B. Evaluación de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe). Compuestos comparativos están marcados con *.
La Tabla 12 compara las composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos comparativos (marcados con *) según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (lId) o (IIe) con las composiciones que incluyen MC3 en función de los niveles de expresión y flujo. Como es evidente en la Tabla 12, ambos el Compuesto comparativo 6* y el compuesto 18 superan a MC3 tanto en expresión de hEPO como en flujo total promedio. Por lo tanto, estos lípidos pueden ser útiles en terapias de composición de nanopartículas.
Tabla 12. Comparación de composiciones de nanopartículas que incluyen un compuesto y un compuesto comparativo (marcado com *) según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (llb), (llc), (lid) o (lie).
Ejemplo 11: Expresión de hEPO inducida por formulaciones de muestra en ratas y niveles de lípidos residuales en el hígado
La expresión de hEPO y la inducción de citocinas en ratas a las que se les administró por vía intravenosa una composición de nanopartículas a una dosis de 2,0 mpk se midió a las 6 h.
A las 48 h, se recogió tejido hepático para la cuantificación de lípidos. A los tejidos previamente pesados, se le añadió agua Milli-Q (90o pl de agua por 100 mg de tejido). Los tejidos se homogeneizaron usando un homogeneizador de sonda Omni hasta uniformidad. Se asignaron alícuotas de 50 pl de muestras y estándares de calibración de matriz en una placa de 96 pocillos. Se asignaron alícuotas de 50 pl de blancos de matriz para los blancos de matriz y los blancos de control. Se añadieron manualmente 400 pl de solución de adición de IS a todas las muestras, excepto a los blancos de matriz. Se añadieron manualmente 400 pl de ACN:IPA 50:50 a los blancos de matriz. La placa se cubrió y las muestras se agitaron con formación de vórtice y centrifugaron durante 5 minutos a > 3000 rpm. 200 pl de las muestras se transfirieron a una placa limpia de 96 pocillos para su análisis. Las muestras se analizaron en un UPLC Waters Acquity usando una columna Higgins Analytical Clipeus C8 (5 pM, 30 x 2,1 mm) y un gradiente de 70-95 % o 60-95 % (Fase móvil A: formiato de amonio 5 mM en MeOH:ácido fórmico 100:1; Fase móvil B: formiato de amonio 5 mM en MeOH: ácido fórmico 100:1) durante 1,3 min a 1,2 ml/min (temperatura de columna 55 °C). La detección se basó en la ionización por electropulverización (ESI) en modo positivo utilizando un espectrómetro de masas Sciex API5500.
Tabla 13. Expresión de hEPO inducida por la administración de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe) en rata, 6 h, 2 mpk. Compuestos comparativos están marcados con *.
Tabla 14. Inducción de citocinas 6 horas después de la administración de composiciones de nanopartículas de hEPO que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe). Compuestos comparativos están marcados con *.
Tabla 15. Niveles hepáticos en ratas a las que se les administró composiciones que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), ((lIb), (lIc), (lId) o (lIe) después de 48 h. Compuestos comparativos están marcados con *.
La expresión de hEPO en ratas a las que se les administró por vía intravenosa una composición de nanopartículas a una dosis de 0,2 mpk o 2,0 mpk se midió a las 6 horas. La Tabla 16 resume la relación de los niveles de expresión de hEPO usando varias composiciones de nanopartículas en comparación con el nivel de expresión de hEPO usando la formulación MC3 y los niveles de lípidos en el hígado medidos 48 horas después de la administración, como se describió anteriormente. Las Tablas 17 y 18 resumen los niveles de lípidos en el hígado y el bazo medidos 48 horas después de la administración de el Compuesto comparativo 28*,y los compuestos 33, 53 y 54. Los niveles de hígado y bazo representan los valores promedio calculados para 3 ratas en cada grupo. Como se muestra en las Tablas 17 y 18, menos del 10 % de los Compuestos 28*, 33, 53 y 54 permanecieron en el hígado después de 48 horas, mientras que permaneció más del 60 % de MC3.
Tabla 16. Relación de expresión de hEPO y niveles de lípidos que permanecen en el hígado después de 48 h. Compuestos comparativos están marcados con *.
Tabla 17. Niveles hepáticos en ratas a las que se les administró dosis de 0,2 mpk de composiciones que incluyen un compuesto y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe) después de 48 h. Compuestos comparativos están marcados con *.
Tabla 18. Niveles hepáticos en ratas a las que se les administró dosis de 2 mpk de composiciones que incluyen un compuesto y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe) después de 48 h.
La Tabla 19 resume la expresión de hEPO, la inducción de IP-10, los niveles de hígado y bazo y la alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST) medidas tras la administración intravenosa de formulaciones que incluyen los Compuestos comparativos 48*, 49* y 50* a ratas a 0,2 y 2 mpk y el ARNm de hEPO. Las concentraciones de hEPO se midieron 6 horas después de la administración, mientras que la inducción de citocinas y los niveles de hígado y bazo se midieron 48 horas después de la administración. Las concentraciones de hEPO e IP-10 se presentan en pg/ml, mientras que los niveles de hígado se proporcionan en ng/g. Los niveles de ALT y AST se presentan en unidades internacionales.
Ejemplo 12: Respuesta a la dosis de formulaciones de muestra en ratas
La expresión de hEPO inducida por administración intravenosa a ratas de composiciones de nanopartículas en diversas dosis se midió en puntos de tiempo de 2, 4, 6, 8, 24 y 48 horas. Las Figuras 3-6 resumen respectivamente la expresión de hEPO medida tras la administración intravenosa de formulaciones que incluyen los Compuestos 26, 18, 25 y MC3 a ratas a diversas dosis. Los niveles de lípidos del Compuesto 26 en el hígado después de 48 horas fueron de alrededor del 19 %.
La Figura 7 muestra el área bajo la curva para composiciones que incluyen los Compuestos 18, 25 y 26 y MC3 en diferentes dosificaciones: 0,005 mpk, 0,01 mpk, 0,025 mpk, 0,05 mpk, 0,1 mpk, 0,25 mpk, 0,5 mpk, 1 mpk o 2 mpk.
Ejemplo 13: Farmacocinética de formulaciones de muestra en ratas
La expresión de hEPO y los niveles de lípidos en el hígado y el bazo en ratas a las que se les administró por vía intravenosa una composición de nanopartículas a una dosis de 0,2 mpk se midió en varios momentos. Los Compuestos 18 y 25 se seleccionaron para comparación con MC3. Los lípidos se formularon según la formulación MC3 estándar descrita anteriormente. Se administró a las ratas por vía intravenosa una dosis única de 0,2 mpk y se monitoreó la expresión a 0,25, 0,5, 1,2, 4, 8, 24 y 48 horas después de la administración.
Tabla 20. Expresión de hEPO inducida por la administración de composiciones de nanopartículas en rata, 6 h, 0,2 mpk.
Tabla 21. Nivel de lípidos en el hígado inducido por la administración de composiciones de nanopartículas en rata, 6 h, 0,2 mpk.
Tabla 22. Nivel de lípidos en el bazo inducido por la administración de composiciones de nanopartículas en rata, 6 h, 0,2 mpk.
Ejemplo 14: Optimización de las relaciones de agentes terapéuticos lipídicos
Las cantidades relativas de componente lipídico y agente terapéutico y/o profiláctico en una composición de nanopartículas se pueden optimizar según consideraciones de eficacia y tolerabilidad. Para composiciones que incluyen un ARN como agente terapéutico y/o profiláctico, la relación N:P puede servir como una métrica útil.
Como la relación N:P de una composición de nanopartículas controla tanto la expresión como la tolerabilidad, las composiciones de nanopartículas con relaciones N:P bajas y expresión fuerte son deseables. Las relaciones N:P varían según la relación de lípidos a ARN en una composición de nanopartículas. Por lo tanto, la relación peso/peso del lípido total con respecto al ARN varía entre 10:1, 15:1, 20:1, 32:1, 40:1, 50:1 y 60:1 para una formulación lipídica que incluye alrededor del 50 % en moles de un compuesto o un compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe), alrededor del 10 % en moles de fosfolípido (por ejemplo, DOPE o DSPC), alrededor del 38,5 % en moles de lípido estructural (por ejemplo, colesterol) y alrededor del 1,5 % en moles de lípido PEG (por ejemplo, PEG-DMG). Las relaciones N:P se calculan para cada composición de nanopartículas suponiendo un solo átomo de nitrógeno protonado. También se miden la eficiencia de encapsulación (EE), el tamaño y el índice de polidispersidad de cada composición.
Generalmente, las composiciones con mayores relaciones de lípidos totales:ARN producen partículas más pequeñas con mayores eficiencias de encapsulación, las cuales son deseables. Sin embargo, la relación N:P para tales formulaciones generalmente excede de 4. Los estándares actuales en la técnica, tales como la formulación de MC3 descrita anteriormente tienen relaciones N:P de 5,67. Por lo tanto, se debe lograr un equilibrio entre la relación N:P, el tamaño y la eficiencia de la encapsulación.
Con el fin de explorar la eficacia de las composiciones de nanopartículas con diferentes relaciones N:P, se examina la expresión de luciferasa (Luc) o eritropoyetina humana (hEPO) en ratones después de dosis bajas (0,05 mg/kg) o altas (0,5 mg/kg) de composiciones de nanopartículas administradas por vía intravenosa. La concentración de Luc o hEPO expresada se mide 3, 6 y/o 24 horas después de la administración.
Ejemplo 15: Optimización del contenido de un compuesto o compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe)
Como las partículas más pequeñas con eficiencias de encapsulación más altas son generalmente deseables, las cantidades relativas de varios elementos en componentes lipídicos de composiciones de nanopartículas se optimizan según estos parámetros.
Se selecciona un compuesto o un compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) para su optimización. La cantidad relativa del compuesto o compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) se varía entre 30 % en moles y 60 % en moles en composiciones que incluyen DOPE o DSPC como fosfolípidos para determinar la cantidad óptima del compuesto o compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) en las formulaciones. Las formulaciones se preparan usando un procedimiento estandarizado con una relación de agua a etanol en la solución de ARNm lipídica de 3:1 y una velocidad de inyección de la solución lipídica en la solución de ARNm de 12 ml/min en un sistema basado en microfluidos NanoAssemblr. Este procedimiento induce la nano-precipitación y la formación de partículas. También se pueden usar procedimientos alternativos que incluyen, pero sin limitarse a, unión en T o inyección directa para lograr la misma nano-precipitación.
Generalmente se prefieren formulaciones que produzcan las partículas más pequeñas con las eficiencias de encapsulación más altas, sin embargo, pueden ser deseables tamaños de partículas más grandes o más pequeños en función de una aplicación dada (por ejemplo, en función del tamaño de fenestración de un órgano diana). Las composiciones también se evalúan por sus niveles de expresión de Luc o hEPO y perfiles de citocinas.
Ejemplo 16: Optimización del fosfo líp ido
La cantidad relativa de fosfolípido en un componente lipídico de una composición de nanopartículas se varía para optimizar aún más la formulación. Se selecciona un compuesto o compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (lId) o (IIe) para su uso en la composición de nanopartículas y DOPE y DSPC se seleccionan como fosfolípidos. También se pueden evaluar fosfolípidos adicionales. Las composiciones de nanopartículas se preparan con el contenido relativo de fosfolípidos que varía entre 0 % en moles y 30 % en moles. Las composiciones se evalúan por su tamaño, eficiencia de encapsulación, niveles de expresión de Luc o hEPO y perfiles de citocinas.
Ejemplo 17: Optimización del lípido estructural
La cantidad relativa de lípido estructural en un componente lipídico de una composición de nanopartículas se varía para optimizar aún más la formulación. Se selecciona un compuesto o compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (lId) o (IIe) para su uso en la composición de nanopartículas y el colesterol se selecciona como lípido estructural. También se pueden evaluar lípidos estructurales adicionales. Las composiciones de nanopartículas se preparan con el contenido lipídico estructural relativo que varía entre 18,5 % en moles y 48,5 % en moles. Las composiciones se evalúan por su tamaño, eficiencia de encapsulación, niveles de expresión de Luc o hEPO y perfiles de citocinas.
Ejemplo 18: Optimización del lípido PEG
La cantidad relativa de lípido PEG en un componente lipídico de una composición de nanopartículas se varía para optimizar aún más la formulación. Se selecciona un compuesto o un compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) para su uso en la composición de nanopartículas y PEG-DMG se selecciona como lípido PEG. También se pueden evaluar lípidos PEG adicionales. Las composiciones de nanopartículas se preparan con el contenido de lípido PEG relativo que varía entre 0 % en moles y 10 % en moles. Las composiciones se evalúan por su tamaño, eficiencia de encapsulación, niveles de expresión de Luc o hEPO y perfiles de citocinas.
Los ejemplos de formulaciones útiles en la optimización de formulaciones de composición de nanopartículas se presentan en la Tabla 23.
Tabla 23. Formulaciones ejemplares que incluyen compuestos o compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (IIa) (lIb), (lIc), (lId) o (lIe).
Ejemplo 19: Optimización de tamaños de partícula
Los tamaños de fenestración para diferentes órganos corporales a menudo varían; por ejemplo, se sabe que el riñón tiene un tamaño de fenestración más pequeño que el hígado. Por lo tanto, la administración dirigida de un agente terapéutico y/o profiláctico (por ejemplo, la administración específica) a un órgano o grupo de órganos particular puede requerir la administración de composiciones de nanopartículas con diferentes tamaños de partículas. Con el fin de investigar este efecto, las composiciones de nanopartículas con formulaciones tales como las incluidas en la Tabla 23 se preparan con una variedad de tamaños de partículas usando un instrumento Nanoassemblr. Las composiciones de nanopartículas incluyen un ARN que codifica Luc. Cada composición de nanopartículas de diferente tamaño se administra posteriormente a ratones para evaluar el efecto del tamaño de partícula en la selectividad de administración. La expresión de Luc en dos o más órganos o grupos de órganos se puede medir usando bioluminiscencia para evaluar la expresión relativa en cada órgano.
Ejemplo 20: Adm inistración después del pretratamiento
La administración de composiciones de nanopartículas a sujetos puede provocar inflamación, reacciones relacionadas con la infusión y otros efectos indeseables indicativos de baja tolerabilidad. Estos efectos se pueden atribuir a la inmunoactividad no deseada.
Con el fin de combatir los efectos negativos, las composiciones de nanopartículas se administran conjuntamente con una o más sustancias (por ejemplo, medicación conjunta o agentes terapéuticos y/o profilácticos adicionales) a sujetos. Los agentes terapéuticos y/o profilácticos adicionales potencialmente útiles incluyen esteroides (por ejemplo, corticosteroides), antihistaminas, bloqueadores del receptor de H1, bloqueadores del receptor de H2, compuestos antiinflamatorios, estatinas, inhibidores de BTK, agonistas de S1P1, moduladores del receptor de glucocorticoides (GRM) y estradioles. Los primates no humanos se tratan previamente con uno o más agentes terapéuticos adicionales seleccionados de entre dexametasona y acetaminofén. El agente terapéutico adicional se administra ya sea 24 horas, 1 hora, o ambas 24 horas y 1 hora antes de la administración de una composición de nanopartículas. El protocolo de muestra se resume en la Tabla 24. Los perfiles de citocinas, la inflamación y otros parámetros se miden y comparan para evaluar la efectividad del pretratamiento.
Tabla 24. Protocolo de muestra para el estudio de pretratamiento.
Por ejemplo, un ciclo de tratamiento terapéutico útil puede implicar administrar un agente terapéutico y/o profiláctico adicional tanto el día anterior como el día de (una hora antes) a la administración de una composición de nanopartículas a un nivel de dosis de 1,3 mpk. Se pueden formular agentes terapéuticos y/o profilácticos adicionales para su administración por una variedad de vías diferentes. Por ejemplo, la dexametasona puede administrarse por vía oral. En general, se administran agentes terapéuticos y/o profilácticos adicionales a niveles de dosificación típicos o aprobados clínicamente.
Ejemplo 21: Adm inistración a primates no humanos
Se evaluó la tolerabilidad y eficacia de las composiciones de nanopartículas para primates no humanos en monos Cynomolgus. A los monos se les administró una composición de nanopartículas optimizada que incluye un ARNm que codifica hEPO una vez a la semana durante cuatro semanas. Los niveles de proteína hEPO, ARNm y perfiles de citocinas se midieron utilizando técnicas basadas en ELISA antes y 2, 6, 12, 24, 48, 72 y 120 horas después de cada administración.
Los efectos del pretratamiento a primates no humanos se evaluaron usando una formulación MC3 estándar que incluye un ARNm que codifica hEPO. El diseño del estudio se resume en la Tabla 25. A los monos machos se les administró la composición de nanopartículas una vez a la semana durante cuatro semanas a una velocidad de dosis de 5 ml/kg/h y se pretrataron con metotrexato o dexametasona.
Tabla 25. Protocolo para el estudio de pretratamiento en monos Cynomolgus.
Los resultados del estudio previo al tratamiento se muestran en la Figura 1. Como se muestra, en ausencia de cualquier pretratamiento, los niveles máximos de expresión disminuyeron casi un 70 % a lo largo del estudio. El metotrexato no confirió ningún efecto beneficioso particular. Sin embargo, la administración previa de dexametasona dio lugar a un aumento de la expresión de proteínas en comparación con los ciclos de tratamiento que no implican pretratamiento. En particular, se observó una disminución mínima en la expresión de proteínas plasmáticas/séricas a lo largo del tiempo para los animales pretratados con dexametasona. Estos resultados sugieren que el tratamiento previo de corticosteroides tales como dexametasona mejora la tolerabilidad y eficacia de las composiciones de nanopartículas que contienen, por ejemplo, un compuesto o compuesto comparativo según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (lId) o (IIe).
También se investigó la tolerabilidad y eficacia de las composiciones de nanopartículas para primates no humanos mediante el uso de una formulación de muestra que incluye el Compuesto 18. La formulación se preparó según la formulación MC3 estándar descrita anteriormente e incluyó un ARNm de hEPO. A los primates se les administró una dosis única de 0,05 (Grupo 1), 0,3 (Grupo 2) o 1,0 (Grupo 3) mpk mediante infusión intravenosa durante 60 minutos. Se administró cada dosis a tres primates. La expresión de hEPO se midió antes de la dosificación y a las 2, 6, 24, 48 y 96 horas después del tratamiento (Tabla 26). También se determinaron los parámetros farmacocinéticos que incluyen Tmáx, Cmáx y el AUC y se presentan en la Tabla 27. La Tabla 28 incluye niveles de indicadores de activación del complemento, mientras que la Tabla 29 incluye datos de inducción de citocinas.
Tabla 26. Expresión de hEPO medida en varios puntos de tiempo tras la administración de composiciones de nanopartículas a primates no humanos.
Tabla 27. Parámetros farmacocinéticos medidos tras la administración de composiciones de nanopartículas a primates no humanos.
Tabla 28. Indicadores de activación del complemento medidos en varios puntos de tiempo tras la administración de composiciones de nanopartículas a primates no humanos.
Tabla 29. Inducción de citocinas medida en varios puntos de tiempo tras la administración de composiciones de nanopartículas a primates no humanos.
En general, la formulación se toleró de manera similar a la formulación MC3 con efectos de respuesta a la dosis. La aspartato aminotransferasa (AST) aumentó en el grupo de dosis alta el Día 2 y volvió al valor inicial el Día 5. Sin embargo, los niveles de alanina aminotransferasa (ALT) no aumentaron. En general, las dosis más bajas se toleraron mejor. Las dosis altas indujeron elevación de la temperatura corporal y postura encorvada, que es similar al comportamiento observado para los primates a los que se les administraron dosis más altas de formulaciones de MC3. Los recuentos de glóbulos blancos fueron ligeramente elevados en los animales del grupo de dosis alta, sin embargo, todos los grupos mostraron un marcado aumento en los recuentos de reticulocitos en el Día 5, lo que indica una fuerte respuesta farmacológica. La activación del complemento y la liberación de citocinas (IL-6 y MCP-1) estuvieron relacionadas con la dosis y fueron reversibles dentro de las 24 horas para los grupos de dosis baja y media y para el Día 5 en el grupo de dosis alta. Los niveles de hEPO fueron más altos que los medidos tras la administración de dosis comparables de formulaciones de MC3 a primates no humanos.
Ejemplo 22: Adm inistración a primates no humanos
La tolerabilidad y eficacia de las composiciones de nanopartículas para primates no humanos también se investigó usando formulaciones de muestra que incluyen los Compuestos 18, 25, 26 y el compuesto comparativo 48* y MC3 para determinar si estos compuestos se diferencian en términos de expresión de proteínas. Las formulaciones se prepararon según la formulación MC3 estándar descrita anteriormente e incluyeron un ARNm de hEPO. La Tabla 30 incluye detalles de las composiciones evaluadas, mientras que la Tabla 31 resume la expresión relativa de Luc y ARNm de hEPO en ratones y ratas. La expresión se midió 6 horas después de la administración.
Tabla 30. Características de las composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos comparativos (marcados con *) según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (lIc), (lId) o (lIe).
Tabla 31. Comparación de composiciones de nanopartículas que incluyen compuestos y compuestos comparativos según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), ((llb), (llc), (lid) o (lie).
La Figura 2 muestra la expresión de ARNm de hEPO medida después de la administración intravenosa de una dosis de 0,01 mpk con 60 minutos de infusión a monos cynomolgus sin tratamiento previo. Como es evidente en la figura, la expresión fue la más alta 6 horas después de la administración para todas las formulaciones evaluadas, y fue la más alta para aquellas formulaciones que incluyen el Compuesto 18.
La Tabla 32 resume los parámetros farmacocinéticos medidos tras la administración de dosis de 0,01 mpk de formulaciones a primates no humanos.
Tabla 32. Parámetros farmacocinéticos medidos tras la administración de formulaciones que incluyen compuestos y compuestos comparativos (marcados con *) según la Fórmula (I), (IA), (II), (Ila), (lIb), (IIc), (IId) o (IIe) a primates no humanos.
Ejemplo 23: Adm inistración a primates no humanos
Los resultados de los estudios de expresión de hEPO se validaron usando una formulación MC3 estándar y una composición de nanopartículas que contiene el Compuesto 18 que incluye un ARNm que codifica un anticuerpo anti-hemaglutinina (anti-HA). A los monos cynomolgus se les administró una dosis única de 0,1 mpk o 0,3 mpk de una composición de nanopartículas que contiene el Compuesto 18 (véase la Tabla 33; preparada según el Ejemplo 2) que incluye un ARNm que codifica un anticuerpo anti-HA mediante infusión intravenosa durante 60 minutos.
Tabla 33
Los resultados de la expresión del anticuerpo anti-HA (anti-hemaglutinina) se muestran en la Tabla 34 y en la Figura 11.
Tabla 34
Se observó una expresión de proteína cinco veces mayor con la composición de nanopartículas que contiene el Compuesto 18 frente al homólogo de MC3, y se encontró una respuesta de dosis clara entre 0,1 y 0,3 mpk con el Compuesto 18 (por ejemplo, el AUC de 0,3 mpk es alrededor de tres veces mayor que el de la dosis de 0,1 mpk).
Ejemplo 24: Procedimientos para tratar enfermedades y trastornos
Se selecciona una formulación de composición de nanopartículas que tiene alta tolerabilidad (por ejemplo, que provoca una respuesta inmunitaria baja) y eficacia (por ejemplo, que facilita la encapsulación eficiente y eficaz de un agente terapéutico y/o profiláctico y la administración del agente a una diana deseada) para su uso. Se selecciona un agente terapéutico y/o profilácti
base en la afección de un sujeto. Por ejemplo, un ARNm que codifica un factor de crecimiento endotelial vascular A (VEGF-A) puede seleccionarse para promover la angiogénesis para tratar la enfermedad renovascular aterosclerótica, mientras que un ARNip capaz de eliminar la apolipoproteína B (apoB) puede seleccionarse para tratar una enfermedad o trastorno metabólico tal como dislipidemia.
Un sujeto que necesita tratamiento se trata previamente con una pequeña dosis de dexametasona una o más horas antes del tratamiento con la composición de nanopartículas. La composición de nanopartículas se administra preferentemente al sujeto por vía intravenosa, sin embargo, las vías de administración intramuscular, intradérmica, subcutánea, intranasal o de inhalación también son aceptables. El tratamiento se proporciona en una dosis de alrededor de 0,001 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg de agente terapéutico y/o profiláctico y se repite diariamente, semanalmente, quincenalmente o mensualmente según las necesidades del sujeto.

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de Fórmula (IA):
    0 una sal del mismo, donde 1 se selecciona de entre 1, 2, 3, 4 y 5; m se selecciona de entre 5, 6, 7, 8 y 9; M<1>es un enlace o M'; R<4>es alquilo C<1 -3>no sustituido o -(CH<2>)nQ, en el que Q es OH o -NHC(S)N(R)<2>, -NHC(O)N(R)<2>, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)Rb, -NHC(=NRg)N(R)2, -NHC(=CHRg)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -n (o r )c (=Ch R9)N(r )2, o heteroarilo, y n se selecciona entre 1, 2, 3, 4 y 5; M y M' se seleccionan independientemente entre -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, un grupo arilo y un grupo heteroarilo; y R<2>y R<3>se seleccionan independientemente entre C<1 -1 4>alquilo y C<2 - 14>alquenilo R8 se selecciona del grupo que consiste en C<3 -6>carbociclo y heterociclo; R<9>se selecciona del grupo que consiste en H, CN, NO<2>, C<1 -6>alquilo, -OR, -S(O)<2>R, -S(O)<2>N(R)<2>, C<2 -6>alquenilo, C<3 -6>carbociclo y heterociclo; cada R se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en alquilo C<1 - 3>, alquenilo C<2 -3>y H; y cada R' independientemente es alquilo lineal C<1 - 1 8>.
  2. 2. Un compuesto de Fórmula (IA)
    1 se selecciona entre 1, 2, 3, 4 y 5; m se selecciona entre 5, 6, 7, 8 y 9; M<1>es un enlace o M'; R<4>es (CH<2>)nQ, en el que Q es -NHR8, en el que R8 es un cicloalquilo C<3 -6>opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de entre oxo (=O), amino (NH<2>), mono- o di-alquilamino, C<1 -3>alquilo y halo, y n se selecciona de entre 1, 2, 3, 4 y 5; M y M' se seleccionan independientemente entre -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-,-S-S-, un grupo arilo y un grupo heteroarilo; cada R' es independientemente un alquilo C<1 - 1 8>; y R<2>y R<3>se seleccionan independientemente del grupo formado por C<3 -14>alquilo o C<3 -14>alquenilo.
  3. 3. El compuesto de reivindicación 2, en donde cada R' se selecciona independientemente entre alquilo C<4>, alquilo C<5>, alquilo Ca, alquilo C<7>, alquilo C<9>, alquilo Cn, alquilo C<17>y alquilo C<1 8>, cada uno de los cuales es lineal o ramificado
  4. 4. El compuesto de cualquier reivindicación anterior, en donde i) R<2>y R<3>son iguales, ii) R<2>y R<3>son alquilos C8, o iii) R<2>y R<3>son diferentes.
  5. 5. El compuesto de cualquier reivindicación precedente en donde M es -C(O)O-; y/o en donde M' es -C(O)O- u -OC(O)-; y/o en donde n es 2; y/o en donde 1 se selecciona entre 1, 3 y 5.
  6. 6. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en los Compuestos 8, 37-46, 96, 97, 100, 104, 105, 108-117, 123, 124, 126, 145-146, 151, 153, 168-170, 173 179, 181, 182, 186, 193, 194, 196-198, 200, 203-213, 218-228, 230, y 231, y sales de los mismos
    .
    .
    y sales e isómeros de los mismos.
  7. 7. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es de fórmula (IIa),
  8. 8. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 4 o 5, en donde el compuesto es de la Fórmula (IId)
    o una sal de la misma, en donde R<2>y R<3>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C<5 -1 4>y alquenilo C<5 - 1 4>, y n se selecciona de 2, 3 y 4.
  9. 9. Una composición de nanopartículas que comprende un componente lipídico que comprende un compuesto de cualquier reivindicación precedente.
  10. 10. La composición de nanopartículas de la reivindicación 9, en donde el componente lipídico comprende además: i) un fosfolípido seleccionado del grupo que consiste en 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3 -fosfocolina (DLPC), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-fosfocolina (DMPC), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3 -fosfocolina (DOPC), 1,2-dipalmitoil-snglicero-3 -fosfocolina (DPPC), 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC), 1,2-diundecanoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DUPC), 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC), 1,2-di-O-octadecenil-sn-glicero-3-fosfocolina (18: 0 Diéter PC), 1-oleoyl-2-cholesterylhemisuccinoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (OChemsPC), 1-hexadecyl-sn-glycero-3-phosphocholine (C16 Lyso PC), 1,2-dilinolenoyl-sn-glycero-3 -phosphocholine, 1., 2-diarachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,2-didocosahexaenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanola mine (DOPE), 1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (ME 16. 0 PE), 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3 -fosfoetanolamina, 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3 -fosfoetanolamina, 1,2-diarachidonoyl-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, 1,2-didocosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-(1-glicerol) sal sódica (DOPG), esfingomielina, y sus mezclas; y/o ii) un lípido estructural, seleccionado del grupo que consiste en colesterol, fecosterol, sitosterol, ergosterol, campesterol, estigmasterol, brasicasterol, tomatidina, ácido ursólico, alfa-tocoferol, y mezclas de los mismos; y/o iii) un lípido PEG seleccionado del grupo que consiste en una fosfatidiletanolamina modificada con PEG, un ácido fosfatídico modificado con PEG, una ceramida modificada con PEG, una dialquilamina modificada con PEG, un diacilglicerol modificado con PEG, un dialquilglicerol modificado con PEG, y sus mezclas, y/o iv) un lípido catiónico y/o ionizable seleccionado del grupo formado por 3-(didodecilamino)-N1,N1,4-tridodecil-1-piperazinetanamina (KL10), N1-[2-(didodecilamino)etil]-N1,N4,N4-tridodecil-1,4-piperazinedietanamina (Kl22), 14,25-ditridodecil-15 18,21,24-tetraaza-octatriacontano (KL25), 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLin-DMA), 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano (DLin-K-DMA), heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-il 4-(dimetilamino)butanoato (DLin-MC3-DMA), 2, 2-dilinoleil-4-(2-dimetilaminoetil)-[1,3]-dioxolano (DLin-KC2-DMA), 1,2-dioleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DODMA), 2-({8-[(3p)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12 -dien-1-iloxi]propan-1-amina (Octil-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3p)-colest-5-en-3-iloxi]octil}oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z,12Z)-octadeca-9,12 -die n-1-iloxi]propan-1-amina (Octil-CLinDMA (2R)) y (2S)-2-({8-[(3p)-colest-5-en-3-iloxi]octil} oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]propan-1 -amina (Octil-CLinDMA (2S)); opcionalmente, en el que el componente lipídico comprende de aproximadamente un 30 % en moles a aproximadamente un 60 % en moles de dicho compuesto, de aproximadamente un 0 % en moles a aproximadamente un 30 % en moles de fosfolípido, de aproximadamente un 18,5 % en moles a aproximadamente un 48,5 % en moles de lípido estructural y de aproximadamente un 0 % en moles a aproximadamente 10 % en moles. % lípido PEG.
  11. 11. La composición de nanopartículas de la reivindicación 9 o la reivindicación 10, que comprende además un agente terapéutico y/o profiláctico, opcionalmente en donde el agente terapéutico y/o profiláctico es un ácido ribonucleico (ARN), en donde el ARN se selecciona del grupo que consiste en un ARN de interferencia pequeño (ARNip), un ARN de interferencia asimétrico (ARNai), un microARN (miARN), un ARN de sustrato dicer (ARNds), un ARN en horquilla pequeña (ARNsh), un ARN mensajero (ARNm) y mezclas de los mismos. además opcionalmente, en donde el ARN es un ARNm, en el que el ARNm incluye opcionalmente uno o más de un bucle de tallo, un nucleósido terminal de cadena, una secuencia poliA, una señal de poliadenilación y/o una estructura de tapa 5'.
  12. 12. La composición de nanopartículas de la reivindicación 11, en donde i) la eficacia de encapsulación del agente terapéutico y/o profiláctico es de al menos 80%, o al menos 90%; o ii) la relación peso/peso del componente lipídico con respecto al agente terapéutico y/o profiláctico es de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 60:1; o iii) la relación N:P es de aproximadamente 2:1 a aproximadamente 30:1.
  13. 13. Una composición farmacéutica que comprende la composición de nanopartículas de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12 y un portador farmacéuticamente aceptable.
  14. 14. La composición de nanopartículas según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno, opcionalmente en donde la enfermedad o trastorno se caracteriza por una actividad proteica o polipeptídica disfuncional o aberrante y se selecciona del grupo que consiste en enfermedades infecciosas, cáncer y enfermedades proliferativas, enfermedades genéticas, enfermedades autoinmunes, diabetes, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades cardio- y reno-vasculares y enfermedades metabólicas.
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