KR20190132405A - 치료제의 세포내 전달을 위한 화합물 및 조성물 - Google Patents

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KR20190132405A
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alkyl
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alkenyl
nanoparticle composition
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KR1020197029052A
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케리 이 베네나토
엘랄라헤와게 사트야지트 쿠마라싱게
마크 코네비스
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모더나티엑스, 인크.
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Abstract

본 개시내용은 신규한 지질 및 이를 함유하는 조성물을 특징으로 한다. 상기 나노입자 조성물은 신규한 지질 뿐만 아니라 추가의 지질 예컨대 인지질, 구조 지질, 및 PEG 지질을 포함한다. 치료제 및/또는 예방제 예컨대 RNA를 추가로 포함하는 나노입자 조성물은, 예를 들어, 폴리펩타이드, 단백질, 또는 유전자 발현을 조절하기 위해 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 세포 또는 기관에 전달하는데 유용하다.

Description

치료제의 세포내 전달을 위한 화합물 및 조성물
관련 출원
본원은 미국 가출원 번호 62/471,937(2017년 3월 15일 출원); 및 62/475,140(2017년 3월 22일 출원)에 대한 우선관 및 이점을 주장하며; 이들 각각의 전체 내용은 본 명세서에 참고로 편입되어 있다.
서열목록의 참조에 의한 편입
본원은 전자 형태의 서열목록과 함께 제출되어 있다. 서열목록은 파일명 "MRNA032001WOSequenceListing.txt" (제작: 2018년 2월 26일, 크기: 715 바이트)로서 제공된다. 전자 형태의 서열목록의 정보는 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있다.
개시내용의 분야
본 개시내용은 신규한 화합물, 그와 같은 화합물을 포함하는 조성물, 및 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 세포 또는 기관에 전달하고/거나 상기 포유동물 세포 또는 기관에서 폴리펩타이드를 생산하기 위해 지질 나노입자 조성물을 수반하는 방법을 제공한다. 신규한 지질 외에, 본 개시내용의 지질 나노입자 조성물은 하나 이상의 양이온성 및/또는 이온화가능 아미노 지질, 다중불포화된 지질 포함 인지질, PEG 지질, 구조 지질, 및/또는 치료제 및/또는 예방제를 특정 분율로 포함할 수 있다.
생물학적 활성 서브스턴스 예컨대 소분자 약물, 단백질, 및 핵산의 효과적인 표적화된 전달은 지속적인 의료적 도전을 나타낸다. 특히, 세포에 핵산의 전달은 이러한 종의 상대적 불안정성 및 낮은 세포 투과도에 의해 어려워진다. 따라서, 세포로 핵산과 같은 치료제 및/또는 예방제의 전달을 용이하게 하는 방법 및 조성물을 개발할 필요성이 존재한다.
지질-함유 나노입자 조성물, 리포좀, 및 리포플렉스는 생물학적 활성 서브스턴스 예컨대 소분자 약물, 단백질, 및 핵산에 대한 세포 및/또는 세포내 구획 안으로 이송 비히클로서 효과적이라는 것이 입증되었다. 이러한 조성물은 일반적으로 하나 이상의 "양이온성" 및/또는 아미노 (이온화가능) 지질, 다중 불포화된 지질을 포함하는 인지질, 구조 지질 (예를 들어, 스테롤), 및/또는 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 지질 (PEG 지질)을 포함한다. 양이온성 및/또는 이온화가능 지질은, 예를 들어, 용이하게 양성자화될 수 있는 아민-함유 지질을 포함한다. 이러한 지질-함유 나노입자 조성물의 다양성이 실증되었지만, 안전성, 효능 및 특이성에서의 개선은 여전히 부족하다.
본 개시내용은 신규한 화합물 및 조성물 및 이를 수반하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 제1 양태는 식 (I)의 화합물 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체에 관한 것이다:
Figure pct00001
식 중:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택된다.
또 다른 양태 본 개시내용은 식 (III)의 화합물 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체에 관한 것이다:
Figure pct00002
식 중
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 하기인 것을 포함한다: R4가 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 또는 -CQ(R)2일 때, (i) Q는, n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 때 -N(R)2가 아니고, 또는 (ii) Q는, n이 1 또는 2일 때 5, 6, 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아니다.
예를 들어, R4가 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, 또는 -CQ(R)2일 때, (i) Q는, n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 때 -N(R)2가 아니고, 또는 (ii) Q는, n이 1 또는 2일 때 5, 6, 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아니다.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 옥소 (=O), OH, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노, 및 C1-3 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된 N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬 (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(=NR9)N(R)2 (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고; 그리고 Q가 5- 내지 14-원 복소환이고, 그리고 (i) R4은 -(CH2)nQ (여기서, n은 1 또는 2임)이거나, 또는 (ii) R4은 -(CH2)nCHQR (여기서, n은 1임)이거나, 또는 (iii) R4은 -CHQR, 및 -CQ(R)2일 때, Q는 5- 내지 14-원 헤테로아릴 또는 8- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택됨), 및 -C(=NR9)N(R)2로부터 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고,
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R,
-S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C2-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 -(CH2)nQ 또는 -(CH2)nCHQR이되, Q는 -N(R)2이고, 그리고 n은 3, 4, 및 5로부터 선택되고;
각각의 R5은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3- 15알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C1-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 -N(R)2, 및 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고;
각각의 R5은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C1-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
일부 구현예에서, 식 (III)의 화합물은 하기인 것을 포함한다:
R4가 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 또는 -CQ(R)2일 때, (i) Q는, n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 때 -N(R)2가 아니고, 또는 (ii) Q는, n이 1 또는 2일 때 5, 6, 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아니다.
또 다른 구현예에서, 식 (III)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 옥소 (=O), OH, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노, 및 C1-3 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된 N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬 (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (III)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2,
-N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(=NR9)N(R)2 으 (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고; 그리고 Q가 5- 내지 14-원 복소환이고, 그리고 (i) R4은 -(CH2)nQ (여기서, n은 1 또는 2임)이거나, 또는 (ii) R4은 -(CH2)nCHQR (여기서, n은 1임)이거나, 또는 (iii) R4은 -CHQR, 및 -CQ(R)2일 때, Q는 5- 내지 14-원 헤테로아릴 또는 8- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (III)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택됨), 및 -C(=NR9)N(R)2 (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (III)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및
C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 식 (III)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C2-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 -(CH2)nQ 또는 -(CH2)nCHQR이되, Q는 -N(R)2이고, 그리고 n은 3, 4, 및 5로부터 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3- 15알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C1-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
또 다른 구현예에서, 식 (III)의 화합물의 또 다른 서브셋은 하기인 것을 포함한다:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 -N(R)2, 및 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C1-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고,
또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체.
특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IA) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00003
식 중 l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고; m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; R4은 수소, 비치환된 C1-3 알킬, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, 또는 -(CH2)nQ이되, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 예를 들어, m은 5, 7, 또는 9이다. 예를 들어, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, 또는 -NHC(O)N(R)2. 예를 들어, Q는 -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R이다.
특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IB), 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00004
식 중, 모든 변수은 본 명세서에서 정의된 바와 같다. 예를 들어, m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택되고; M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 예를 들어, m은 5, 7, 또는 9이다.
특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (II) 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00005
식 중 l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; R4은 수소, 비치환된 C1-3 알킬, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, 또는 -(CH2)nQ이되, n은 2, 3, 또는 4이고, 그리고 Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 R2 및 R3은 H, C1-1 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IIa), (IIb), (IIc), 또는 (IIe) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00006
또는
Figure pct00007
식 중 R4은 본 명세서에서 기재된 바와 같다.
특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IId) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00008
식 중 n은 2, 3, 또는 4이고; 그리고 m, R', R", 및 R2 내지 R6은 본 명세서에서 기재된 바와 같다. 예를 들어, 각각의 R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IIf) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00009
식 중 n은 2, 3, 또는 4이고; 그리고 m, M, M", R', R", 및 R2 내지 R6은 본 명세서에서 기재된 바와 같다. 예를 들어, 각각의 R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있고, 그리고 n은 2, 3, 및 4로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IIg) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00010
식 중 l, m, M, M1, R', R2 및 R3은 본 명세서에서 기재된 바와 같다. 예를 들어, 각각의 R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있고, l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고, 그리고 m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택된다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에서 기재된 바와 같은 화합물 (예를 들어, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물)을 포함하는 지질 성분을 포함하는 나노입자 조성물을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 이전의 양태에 따른 나노입자 조성물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 한다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 저장 및/또는 수송을 위한 냉장 또는 냉동된다 (예를 들어, 4 ℃ 이하의 온도, 예컨대 약 -150 ℃ 내지 약 0 ℃ 또는 약 -80 ℃ 내지 약 -20 ℃의 온도 (예를 들어, 약 -5 ℃, -10 ℃, -15 ℃, -20 ℃, -25 ℃, -30 ℃, -40 ℃, -50 ℃, -60 ℃, -70 ℃, -80 ℃, -90 ℃, -130 ℃ 또는 -150 ℃에서 저장된다). 예를 들어, 약제학적 조성물은, 예를 들어, 약 -20 ℃, -30 ℃, -40 ℃, -50 ℃, -60 ℃, -70 ℃, 또는 -80 ℃에서 저장 및/또는 수송을 위해 냉장된 용액이다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA)를 세포 (예를 들어, 포유동물 세포)에 전달하는 방법을 제공한다. 본 방법은 대상체 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간)에게, (i) 인지질 (예컨대 다중불포화된 지질), PEG 지질, 구조 지질, 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분 및 (ii) 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 투여는 상기 세포를 나노입자 조성물과 접촉시키는 것을 수반하고, 치료제 및/또는 예방제는 상기 세포에 전달된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 세포 (예를 들어, 포유동물 세포)에서 관심 폴리펩타이드를 생산하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 상기 세포를, (i) 인지질 (예컨대 다중불포화된 지질), PEG 지질, 구조 지질, 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분 및 (ii) 관심 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA를 포함하는 나노입자 조성물과 접촉시킴으로써, 상기 mRNA가 폴리펩타이드를 생산하기 위해 세포에서 번역될 수 있는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료가 필요한 포유동물 (예를 들어, 인간)에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 상기 포유동물에게, (i) 인지질 (예컨대 다중불포화된 지질), PEG 지질, 구조 지질, 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분 및 (ii) 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA)를 포함하는 나노입자 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 ?삼한다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 기능이상 또는 비정상적인 단백질 또는 폴리펩타이드 활성을 특징으로 한다. 예를 들어, 질환 또는 장애는 희귀 질환, 감염성 질환, 암 및 증식성 질환, 유전적 질환 (예를 들어, 낭포성 섬유증), 자가면역 질환, 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 심장- 및 신장-혈관 질환, 및 대사 질환으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료가 필요한 포유동물 (예를 들어, 인간)에서 질환 또는 장애의 치료에서 사용하기 위한 나노입자 조성물을 제공한다. 나노입자 조성물은 하기를 포함한다: (i) 인지질 (예컨대 다중불포화된 지질), PEG 지질, 구조 지질, 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분 및 (ii) 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA). 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 기능이상 또는 비정상적인 단백질 또는 폴리펩타이드 활성을 특징으로 한다. 예를 들어, 질환 또는 장애는 희귀 질환, 감염성 질환, 암 및 증식성 질환, 유전적 질환 (예를 들어, 낭포성 섬유증), 자가면역 질환, 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 심장- 및 신장-혈관 질환, 및 대사 질환으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료가 필요한 포유동물 (예를 들어, 인간)에서 질환 또는 장애의 치료용 약제의 제조에서 사용하기 위한 나노입자 조성물을 제공한다. 나노입자 조성물은 하기를 포함한다: (i) 인지질 (예컨대 다중불포화된 지질), PEG 지질, 구조 지질, 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분 및 (ii) 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA). 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 기능이상 또는 비정상적인 단백질 또는 폴리펩타이드 활성을 특징으로 한다. 예를 들어, 질환 또는 장애는 희귀 질환, 감염성 질환, 암 및 증식성 질환, 유전적 질환 (예를 들어, 낭포성 섬유증), 자가면역 질환, 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 심장- 및 신장-혈관 질환, 및 대사 질환으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료가 필요한 포유동물 (예를 들어, 인간)에서 질환 또는 장애의 치료용 약제의 제조에서의 나노입자 조성물의 용도를 제공한다. 나노입자 조성물은 하기를 포함한다: (i) 인지질 (예컨대 다중불포화된 지질), PEG 지질, 구조 지질, 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분 및 (ii) 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA). 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 기능이상 또는 비정상적인 단백질 또는 폴리펩타이드 활성을 특징으로 한다. 예를 들어, 질환 또는 장애는 희귀 질환, 감염성 질환, 암 및 증식성 질환, 유전적 질환 (예를 들어, 낭포성 섬유증), 자가면역 질환, 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 심장- 및 신장-혈관 질환, 및 대사 질환으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 장기 (예를 들어, 간, 비장, 폐, 또는 대퇴골)에 전달하는 (예를 들어, 특이적으로 전달하는) 방법을 제공한다. 본 방법은 대상체 (예를 들어, 포유동물)에게 (i) 인지질, PEG 지질, 구조 지질, 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분 및 (ii) 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA)를 포함하는 나노입자 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 투여는 상기 세포를 나노입자 조성물과 접촉시켜서, 치료제 및/또는 예방제가 상기 표적 장기 (예를 들어, 간, 비장, 폐, 또는 대퇴골)에 전달되는 것을 수반한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA)의 표적 조직 (예를 들어, 간, 비장, 폐, 또는 대퇴골)에의 향상된 전달 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 대상체 (예를 들어, 포유동물)에게 나노입자 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 조성물은 (i) 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물, 인지질, 구조 지질, 및 PEG 지질을 포함하는 지질 성분; 및 (ii) 치료제 및/또는 예방제를 포함하고, 상기 투여는 상기 표적 조직를 나노입자 조성물과 접촉시킴으로써, 치료제 및/또는 예방제가 상기 표적 조직에 전달되는 것을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 면역원성을 낮추는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 본 개시내용의 나노입자 조성물을 세포에 도입하는 것을 포함하되, 상기 나노입자 조성물은 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물 대신에 기준 지질을 포함하는 참조 조성물에 의해 유도된 세포에서 세포 면역 반응의 유도와 비교하여, 세포의 세포 면역 반응의 나노입자 조성물로의 유도를 감소시킨다. 예를 들어, 세포 면역 반응은 타고난 면역 반응, 적응성 면역 반응, 또는 둘 모두이다.
본 개시내용은 또한, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 합성하는 방법 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 성분을 포함하는 나노입자 조성물을 제조하는 방법을 포함한다.
도 1은 MC3을 포함한 나노입자 조성물의 투여 이전에 메토트렉세이트 또는 덱사메타손으로 비-인간 영장류를 전처리한 결과를 도시한다.
도 2는 순 사이노몰구스 원숭이에게 0.01 mpk 용량에서 60분 주입으로 다양한 나노입자 조성물의 정맥내 투여 후 측정된 hEPO mRNA 발현을 도시한다.
도 3-6 각각은 다양한 용량에서 랫트에 대해 화합물 26, 18, 25, 및 MC3을 포함한 다양한 나노입자 조성물의 정맥내 투여에 의해 측정된 hEPO 발현의 결과를 도시한다.
도 7은 0.005 mpk 내지 2 mpk 사이의 다양한 용량에서 화합물 18, 25, 및 26 및 MC3을 포함한 나노입자 조성물에 대한 곡선하면적 (AUC)을 도시한다.
도 8은 다양한 시점: 3hr (좌측 블록), 6hr (중간 블록) 및 24hr (우측 블록)에서 0.01 mpk로 마우스에 대해 MC3, 화합물 168-170, 및 173-175를 포함한 다양한 나노입자 조성물의 근육내 투여에 의해 측정된 루시퍼라제 발현의 결과를 도시한다. 본 도면에서 숫자 1-7은 각각 MC3, 화합물 168-170, 및 173-175에 상응한다.
도 9는 다양한 시점: 3hr (좌측 블록), 6hr (중간 블록) 및 24hr (우측 블록)에서 0.01 mpk로 마우스에 대해 MC3, 화합물 18, 25, 30, 108-112, 60, 및 122를 포함한 다양한 나노입자 조성물의 근육내 투여에 의해 측정된 hEPO 발현의 결과를 도시한다. 본 도면에서 숫자 1-11은 각각 MC3, 화합물 18, 25, 30, 108-112, 60, 및 122에 상응한다.
도 10은 MC3 또는 본 명세서에서 개시된 다양한 화합물을 포함한 다양한 나노입자 조성물의 정맥내 투여에 의해 측정된 루시퍼라제 발현 (총 유동)의 결과를 도시한다. 본 도면에서 숫자 1-12는 각각 화합물 18, MC3, 화합물 48-50, 54, 111, 60, 75, 68, 66, 128, 65, 130, 133-135, 147, 96, 및 151에 상응한다.
도 11A 및 11B는 순 사이노몰구스 원숭이에 대해 0.1 mpk (도 11A) 또는 0.3 mpk (도 11B) 용량에서 60분 주입으로 MC3 및 화합물 18을 포함한 다양한 나노입자 조성물의 정맥내 투여 후 측정된 항-HA (항-혈구응집소) 항체 발현의 결과를 도시한다.
도 12A-12C는 마우스에 본 개시내용의 화합물을 함유하는 나노입자 조성물의 정맥내 투여후 (도 12A) 3시간, (도 12B) 6시간 및 (도 12C) 24시간에서 루시퍼라제 발현 수준을 요약하는 일련의 그래프이다. 총 광속 값은 바디 발광성 이미지형성 (BLI)를 통해 획득되었다. 상기 도에서, 숫자 1-14는 화합물 160, 98, 161-165, 171, 172, 183-186, 및 MC3 각각을 함유하는 조성물을 지칭한다.
도 13A-13C는 마우스에 본 개시내용의 화합물을 함유하는 나노입자 조성물의 정맥내 투여후 (도 13A) 3시간, (도 13B) 6시간, 및 (도 13C) 24시간에서 루시퍼라제 발현 수준을 요약하는 일련의 그래프이다. 총 광속 값은 바디 발광성 이미지형성 (BLI)를 통해 획득되었다. PBS (포스페이트 완충 식염수)는 대조군으로서 사용되었다. 결과는 대수 규모로 제시된다. 이들 도에서, 숫자 1-15는 MC3, 화합물 18, 111, 168-170, 174, 175, 178, 179, 181, 182, 218, 198, 및 PBS 각각을 함유하는 조성물을 지칭한다.
도 14A-14C는 마우스에 본 개시내용의 화합물을 함유하는 나노입자 조성물의 정맥내 투여후, (도14A) 간 (도14B) 비장, 및 (도14C) 신장, 생체외, 6시간에서 루시퍼라제 발현 수준을 요약하는 일련의 그래프이다. 총 광속 값은 바디 발광성 이미지형성 (BLI)를 통해 획득되었다. PBS (포스페이트 완충 식염수)는 대조군으로서 사용되었다. 이들 도에서, 숫자 1-15는 MC3, 화합물 18, 111, 168-170, 174, 175, 178, 179, 181, 182, 218, 198, 및 PBS 각각을 함유하는 조성물을 지칭한다.
도 15A 및 15B는, MC3에 비교된, 그리고 임의의 치료를 받지 않은 마우스 (비접촉 시험 대상체)에 비교된, 본 개시내용의 화합물로 투약된 CD-1 마우스의 비장에서 활성화된 B-세포 빈도를 도시하는 한 쌍의 그래프이다. PBS는 대조군으로서 사용된다. 도 15A는 CD19+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 15B는 CD19+ CD69+ CD86+ 세포의 백분율을 도시한다. 숫자 1-16은 mRNA 발현 루시퍼라제 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: MC3, 2: 화합물 18, 3: 화합물 111; 4: 화합물 168; 5: 화합물 169; 6: 화합물 170; 7: 화합물 174; 8: 화합물 175; 9: 화합물 178; 10: 화합물 179; 11: 화합물 181; 12: 화합물 182; 13: 화합물 218; 14: 화합물 198; 15: PBS; 16: 치료 비접촉 대상체.
도 16A 및 16B는, MC3에 비교된, 그리고 임의의 치료를 받지 않은 마우스 (비접촉 시험 대상체)에 비교된, 본 개시내용의 화합물로 투약된 CD-1 마우스의 비장에서 활성화된 B-세포 빈도를 도시하는 한 쌍의 그래프이다. PBS는 대조군으로서 사용된다. 도 16A는 CD19+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 16B는 CD19+ CD69+ CD86+ 세포의 백분율을 도시한다. 숫자 1-14는 mRNA 발현 루시퍼라제 및 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: 화합물 147, 2: 화합물 184, 3: 화합물 232; 4: 화합물 189; 5: 화합물 200; 6: 화합물 233; 7: 화합물 234; 8: 화합물 235; 9: 화합물 237; 10: 화합물 239; 11: 화합물 243; 12: MC3; 13: PBS; 14: 치료 비접촉 대상체.
도 17은 다양한 나노입자 조성물의 정맥내 투여후 3시간 (좌측 블록), 6시간 (중간 블록) 및 24시간 (우측 블록) 측정된 CD1-마우스에서 hEPO mRNA 발현을 도시하는 그래프이다. 숫자 1-13은 mRNA 발현 hEPO 및 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: 화합물 147, 2: 화합물 184, 3: 화합물 232; 4: 화합물 189; 5: 화합물 200; 6: 화합물 233; 7: 화합물 234; 8: 화합물 235; 9: 화합물 237; 10: 화합물 239; 11: 화합물 243; 12: MC3; 13: PBS.
도 18A 및 18B는 0.01 mpk에서 CD-1 마우스에 다양한 나노입자 조성물의 근육내 투여시 측정된 루시퍼라제 발현의 결과를 도시한다. 도 18A는 투여후 6 시간에서 총 플럭스를 도시하는 막대 그래프이다. 각각의 막대 위의 숫자는 MC3에 대한 발현 비를 나타낸다. 도 18B는 투여후 3시간, 6시간, 및 24시간에서 총 플럭스를 도시한다. 상기 도에서 숫자 1-11은 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: MC3, 2: 화합물 143, 3: 화합물 49; 4: 화합물 113; 5: 화합물 61; 6: 화합물 72; 7: 화합물 75; 8: 화합물 71; 9: 화합물 128; 10: 화합물 156; 11: 화합물 157.
도 19A 및 19B는 0.05 mpk에서 CD-1 마우스에 다양한 나노입자 조성물의 피하 투여시 측정된 루시퍼라제 발현의 결과를 도시한다. 도 19A는 투여후 6 시간에서 총 플럭스를 도시하는 막대 그래프이다. 각각의 막대 위의 숫자는 MC3에 대한 발현 비를 나타낸다. 도 19B는 투여후 3시간, 6시간, 및 24시간에서 총 플럭스를 도시한다. 상기 도에서 숫자 1-12는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: PBS, 2: MC3, 3: 화합물 25; 4: 화합물 30; 5: 화합물 20; 6: 화합물 110; 7: 화합물 112; 8: 화합물 113; 9: 화합물 72; 10: 화합물 75; 11: 화합물 122, 12: 화합물 24.
도 20A-20C는 CD-1 마우스에 본 개시내용의 화합물을 함유하는 나노입자 조성물의 투여후 생체외, 24시간에서, (도 20A) 비장 (도 20B) 간, 및 (도 20C) 주사 부위 내 루시퍼라제 발현 수준을 요약하는 일련의 그래프이다. 총 광속 값은 바디 발광성 이미지형성 (BLI)를 통해 획득되었다. PBS (포스페이트 완충 식염수)는 대조군으로서 사용되었다. 상기 도에서 숫자 1-12는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: PBS, 2: MC3, 3: 화합물 25; 4: 화합물 30; 5: 화합물 20; 6: 화합물 110; 7: 화합물 112; 8: 화합물 113; 9: 화합물 72; 10: 화합물 75; 11: 화합물 122, 12: 화합물 24.
도 21A-21J는 본 개시내용의 지질을 포함하는 조성물에 의해 유도된 사이토카인 발현을 설명하는 일련의 그래프이다. 도 21A: G-CSF (12); 도 21B: IFN-감마 (38); 도 21C: MCP-1 (51); 도 21D: IFN-알파 (30); 도 21E: IL-6 (28); 도 21F: IL-12p70 (39); 도 21G: IL-10 (22); 도 21H: MIP-1 베타 (72); 도 21I: TNF-알파 (45); 도 21J: RANTES (44). 상기 도에서 숫자 1-12는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: PBS, 2: MC3, 3: 화합물 25; 4: 화합물 30; 5: 화합물 20; 6: 화합물 110; 7: 화합물 112; 8: 화합물 113; 9: 화합물 72; 10: 화합물 75; 11: 화합물 122, 12: 화합물 24.
도 22A-22C는 마우스에 본 개시내용의 화합물을 함유하는 나노입자 조성물의 피하 투여후 (도 22A) 3시간, (도 22B) 6시간, 및 (도 22C) 24시간에서 루시퍼라제 발현 수준을 요약하는 일련의 그래프이다. 총 광속 값은 바디 발광성 이미지형성 (BLI)를 통해 획득되었다. PBS (포스페이트 완충 식염수)는 대조군으로서 사용되었다. 상기 도에서 숫자 1-12는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: PBS, 2: MC3, 3: 화합물 168; 4: 화합물 23; 5: 화합물 19; 6: 화합물 108; 7: 화합물 109; 8: 화합물 111; 9: 화합물 60; 10: 화합물 61; 11: 화합물 69, 12: 화합물 128.
도 23은 다양한 시점: 3 시간 (좌측 블록), 6 시간 (중간 블록) 및 24 시간 (우측 블록)에 0.05 mpk에서 마우스에 본 개시내용의 화합물을 포함하는 다양한 나노입자 조성물의 피하 투여시 측정된 hEPO 발현의 결과를 도시한다. 이 도에서 숫자 1-11은 MC3, PBS, 및 화합물 18, 25, 48, 49, 111, 60, 168, 207, 및 233, 각각에 상응한다.
도 24는 다양한 시점: 3 시간 (좌측 블록), 6 시간 (중간 블록) 및 24 시간 (우측 블록)에 0.01 mpk에서 마우스에 본 개시내용의 화합물을 포함하는 다양한 나노입자 조성물의 근육내 투여시 측정된 루시퍼라제 발현의 결과를 도시한다. 이 도에서 숫자 1-9는 MC3, 및 화합물 178, 181, 182, 218, 198, 200, 233, 및 239, 각각에 상응한다.
도 25는, 투여후 3시간, 6시간, 및 24시간에 0.5 mpk에서 CD-1 마우스에, 각각의 우리딘이 N1-메틸 슈도우리딘으로 대체된 또는 각각의 우리딘이 5-메톡시 우리딘으로 대체된 변형된 mRNAs 그리고, MC3 또는, 화합물 18을 함유하는 나노입자 조성물의 정맥내 투여시 측정된 hEPO 발현의 결과를 도시한다. 상기 도에서 숫자 1-4는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: 각각의 우리딘이 5-메톡시 우리딘, 및 MC3으로 대체된 변형된 mRNAs; 2: 각각의 우리딘이 N1-메틸 슈도우리딘, 및 MC3으로 대체된 변형된 mRNAs; 3: 각각의 우리딘이 5-메톡시 우리딘, 및 화합물 18로 대체된 변형된 mRNAs; 4: 각각의 우리딘이 N1-메틸 슈도우리딘, 및 화합물 18로 대체된 변형된 mRNAs.
도 26은 각각의 우리딘이 N1-메틸 슈도우리딘으로 대체된 또는 각각의 우리딘이 5-메톡시 우리딘으로 대체된 변형된 mRNAs 그리고, MC3 또는, 화합물 18을 함유하는 나노입자 조성물로 투약된 마우스 비장세포에서 B-세포 활성화를 도시하는 그래프이다. PBS는 대조군으로서 사용된다. 상기 도에서 숫자 1-5는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: 각각의 우리딘이 5-메톡시 우리딘, 및 MC3으로 대체된 변형된 mRNAs; 2: 각각의 우리딘이 N1-메틸 슈도우리딘, 및 MC3으로 대체된 변형된 mRNAs; 3: 각각의 우리딘이 5-메톡시 우리딘, 및 화합물 18로 대체된 변형된 mRNAs; 4: 각각의 우리딘이 N1-메틸 슈도우리딘, 및 화합물 18로 대체된 변형된 mRNAs; 5: PBS.
도 27은 0.5 mpk에서 다양한 나노입자 조성물의 피하 투여후 3시간 (좌측 블록), 6시간 (중간 블록) 및 24시간 (우측 블록) 측정된 CD1-마우스내 hEPO mRNA 발현을 도시하는 그래프이다. 숫자 1-9는 mRNA 발현 hEPO 및 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: PBS, 2: 화합물 18, 3: 화합물 30; 4: 화합물 96; 5: 화합물 151; 6: 화합물 98; 7: 화합물 163; 8: 화합물 164; 9: 화합물 165.
도 28A-28J는, CD-1 마우스에 피하 투여후 6시간 측정된, 각각의 우리딘이 N1-메틸 슈도우리딘으로 대체된, 변형된 mRNA 발현 hEPO 및 본 개시내용의 지질을 포함하는 조성물에 의해 유도된 사이토카인 발현을 설명하는 일련의 그래프이다. 도 28A: G-CSF; 도 28B: IFN-감마; 도 28C: IFN-알파; 도 28D: IL-12p70; 도 28E: IP-10; F: IL-6; 도 28G: MCP-1; 도 28H: MIP-1beta; 도 28I: RANTES; 도 28J: TNF-알파. 상기 도에서 숫자 1-9는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: PBS, 2: 화합물 18, 3: 화합물 30; 4: 화합물 96; 5: 화합물 151; 6: 화합물 98; 7: 화합물 163; 8: 화합물 164; 9: 화합물 165
도 29A - 29C는 아미노 지질의 청소능 및 효율의 최적화를 설명하는 일련의 그래프이다. 도 29A는, 지질내 0.5 mg/kg hEPO mRNA의 정맥내 투여후 6시간, CD-1 마우스 (n = 6)에서 측정된, 신규한 LNPs 대 MC3 LNPs의 전신 루시퍼라제 생물발광이다. 상기 그래프는 혈청 hEPO 농도를 도시하고; 오차 막대는 신규한 지질 발현 대 MC3 발현의 비의 표준 편차를 나타낸다. * p < 0.05, ** p < 0.01, ***p < 0.001, n.s. = 통계적으로 유의미하지 않음. 숫자 1-9는 하기를 함유하는 조성물을 지칭한다: 1: 화합물 281; 2: 화합물 138; 3: 화합물 136; 4: 화합물 6; 5: 화합물 18; 6: 화합물 29; 7: 화합물 14; 8: 화합물 25; 및 9: 화합물 26. 도 29B는, hEPO mRNA를 함유하는 LNP의 0.2 mg/kg 용량으로 투여된 스프래그 다우리 랫트 (n = 3/시점)으로부터 간 조직에서 측정된, MC3에 비교된, 화합물 18 및 화합물 25의 수준을 요약한다. MC3에 대한 화합물 18 및 화합물 25 AUC에 대하여 p < 0.05. 도 29C는 스프래그 다우리 랫트에서 hEPO 발현을 도시하는 그래프이다. hEPO 혈청 농도는 화합물 18, 화합물 25, 화합물 26 또는 MC3, 및 hEPO mRNA (n =3)을 함유하는 LNP의 1 mg/kg 용량의 정맥내 투여후 측정되었다.
도 30A-30C는 다중 용량후 화합물 18의 약동학적 및 발현 프로파일을 도시하는 일련의 그래프이다. 도 30A는, 매주 투약된, CD-1 마우스 (n = 3/시점)에 0.05 mg/kg mRNA를 함유하는 3 볼러스 용량의 정맥내 투여후 MC3 및 화합물 18의 조직 분포의 비교이다. 도 30B는, 매주 투약하는, CD-1 마우스 (n = 8)에 hEPO mRNA를 함유하는 LNP의 0.5 mg/kg을 함유하는 볼러스 용량의 정맥내 투여후 6 시간 hEPO 혈청 농도를 도시한다. 도 30C는, 매주 투약하는, CD-1 마우스 (n = 3/시점)에 mRNA의 0.25 mg/kg을 함유하는 용량의 투여후, 화합물 18 및 그것의 일차 대사물, 화합물 166의 간 조직 청소능을 설명한다.
도 31A-31C는 사이노몰구스 모네이 연구에서 본 개시내용의 지질 나노입자에 대한 발현 프로파일을 설명하는 일련의 그래프이다. 도 31A는 MC3 또는 화합물 18내 0.01 mg/kg hEPO mRNA의 전달후 hEPO 혈청 농도를 설명한다. 액체 나노입자는, 60 분 주입 (n = 3)을 통해, 정맥내로 투여되었다. MC3에 비해 화합물 18 AUC에 대하여 p < 0.05. 도 31B는, MC3에 비해 화합물 18 AUC에 대하여 p < 0.05인, 60 분 주입 (n = 3)을 통해, 정맥내로 투여된, MC3 또는 화합물 18 LNPs내 0.3 mg/kg 항체 mRNA의 전달후 인간 IgG 인플루엔자 A 항체 혈청 농도를 도시한다. 도 31C는, 60 분 주입 (n =4)를 통해, 정맥내로 투여된, 매주 투약하는, 화합물 18 LNPs내 0.2 mg/kg hEPO mRNA의 전달후 hEPO 혈청 농도를 도시한다.
도 32A-32C는 랫트 및 비-인간 영장류에서 1 개월 독성학 평가의 결과를 요약하는 일련의 그래프이다. PBS (포스페이트 완충 식염수)는 대조군으로서 사용되었다. 도 32A는, 5 주 동안 매주 투약된, 10 분 주입을 통해 정맥내로 투여된, 스프래그 다우리 랫트에서 혈청 알라닌 아미노기전달효소 수준을 도시한다. 혈청 수준은 제5 용량 (n = 10) 후 24 시간에 측정되었다 PBS와 각각의 용량 수준 사이 통계적인 차이는 관측되지 않았다. 도 32B는 5 주 동안 매주 투약된, 10 분 주입을 통해, 정맥내로 투여된, 스프래그 다우리 랫트에서 혈청 아스파르테이트 아미노기전달효소 수준을 도시한다. 혈청 수준은 제5 용량 (n = 10) 후 24 시간에 측정되었다. * p < 0.05, PBS와 0.05 및 2.0 mg/kg 용량 사이 통계적인 차이 없음. 도 32C는, 매주 투약된, 정맥내로 60 분 주입에 의해, 1 mg/kg mRNA로 투여된, 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 알라닌 아미노기전달효소 수준을 도시한다. 혈청 수준은 제5 용량 (n = 4) 후 24에 측정되었다. PBS 투여전과 화합물 18이 있는 일 30 수준 사이 통계적인 차이는 관측되지 않았다. 도 32D는, 매주 투약된, 정맥내로 60 분 주입에 의해, 1 mg/kg mRNA로 투여된, 사이노몰구스 원숭이에서 혈청 아스파르테이트 아미노기전달효소 수준을 도시한다. 혈청 수준은 제5 용량 (n = 4) 후 24에 측정되었다. PBS 투여전과 화합물 18이 있는 일 30 수준 사이 통계적인 차이는 관측되지 않았다.
도 33A 및 33B는 랫트 및 비-인간 영장류에서 1 개월 독성학 평가의 결과를 요약하는 한 쌍의 그래프이다. 도 33A는, 일 1 및 일 29 (n = 4)에서, 1 mg/kg mRNA로 투여된 사이노몰구스 원숭이에서 C5b9 혈청 농도를 도시한다. 통계적인 차이는 모든 시점에서 PBS와 화합물 18 사이 관측되지 않았다. 도 33B는, 일 1 및 일 29에서, 1 mg/kg mRNA로 투여된 사이노몰구스 원숭이에서 MCP-1 혈청 농도를 도시한다. n = 4, * p < 0.05, 임의의 다른 시점에서 PBS와 화합물 18 사이 통계적인 차이 없음.
도 34A-34C는 본 개시내용의 지질 나노입자의 엔도좀 탈출 효율의 일련의 고정된 세포 이미지이다. HeLa 세포는 로다민 라벨링된 MC3 및 화합물 18 LNPs 캡슐화 루시퍼라제 mRNA로 형질감염되었고, 제형화되지 않은 mRNA로 전기천공된 세포와 함께, 4 시간 인큐베이션 후 단일 분자 FISH (smFISH, 적색)용으로 가공되었다. 사이토졸에 세포내이입 소기관을 떠났던 mRNA 분자는 녹색으로 도시된다 (이미지 분석 오버레이). 엔도좀 탈출 효율은 세포당 내재화된 LNPs의 수와 세포질 mRNA의 수 사이 비를 계산함으로써 평가되었다. 도 34A는 전기천공된 HeLa 세포를 도시하는 이미지이다. 도 34B는 MC3 처리된 HeLa 세포를 도시하는 이미지이다. 도 34C는 화합물 18 처리된 HeLa 세포를 도시하는 이미지이다.
도 35A 및 35B는 MC3 및 화합물 18의 조직 분포를 비교하는 한 쌍의 그래프이다. 도 35A는 CD-1 마우스 (n = 3/시점)에 투여된 3개의 정맥내 0.05 mg/kg의 mRNA 후 MC3 및 화합물 18의 조직 분포를 도시한다. 도 35B는, 사이노몰구스 원숭이 (n = 2)에 0.2 mg/kg mRNA의 투여후 12 시간에, MC3 및 화합물 18의 조직 분포를 도시한다.
도 36은, 정맥내로 60 분 주입 (n = 3)을 통해, MC3 또는 화합물 18을 포함하는 조성물에서 0.1 mg/kg 인간 IgG mRNA로 투여된 사이노몰구스 원숭이에서 인간 IgG 발현을 설명하는 그래프이다.
도 37은 랫트 간 및 간 효소내 MC3 단일 세포 괴사를 설명하는 일련의 그래프이다. 최상부 행은 mRNA (우측) 및 대조군으로서 PBS (포스페이트 완충 식염수) (좌측)을 함유하지 않은 0.3 mg/kg의 액체 나노입자 (LNP)로 투여된 랫트의 간의 한 쌍의 이미지이다. 최하부 행은 mRNA를 함유하는 0.3 mg/kg의 MC3-기반 LNP의 투여 이후 간에서 ALT (좌측) 및 AST(우측)의 발현을 도시하는 한 쌍의 그래프이다. ALT 및 AST는 상승되었고 병리학은 괴사의 증거를 보여주었다.
도 38은 29 일의 과정 동안 반복 투약후 NHP에서 mRNA 수준을 도시하는 그래프이다.
도 39A 및 39B는 화합물 18 기반 LNPs로 투여된 ApoE 넉아웃 마우스 및 LDLr 넉아웃 마우스에서 hEPO 발현을 도시하는 한 쌍의 그래프이다. 도 39A는 ApoE 넉아웃 마우스에서 hEPO 발현을 도시한다. 도 39B는 LDLr 넉아웃 마우스에서 hEPO 발현을 도시한다.
본 개시내용은 신규한 지질 및 신규한 지질을 포함하는 지질 나노입자 조성물에 관한 것이다. 개시내용은 또한, 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 세포에 전달하고, 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 장기에 특이적으로 전달하고, 포유동물 세포에서 관심 폴리펩타이드를 생산하고, 그리고 치료가 필요한 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 세포에서 관심 폴리펩타이드를 생산하는 방법은 mRNA를 포함하는 나노입자 조성물을 포유동물 세포와 접촉시킴으로써, 상기 mRNA가 관심 폴리펩타이드를 생산하기 위해 번역될 수 있는 것을 수반한다. 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 세포 또는 장기에 전달하는 방법은 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 수반할 수 있고, 상기 투여는 세포 또는 장기를 상기 조성물과 접촉시킴으로써, 상기 치료제 및/또는 예방제가 세포 또는 장기에 전달되는 것을 포함한다.
지질
본 개시내용은 중심 아민 모이어티 및 적어도 하나의 생분해성 그룹을 포함하는 지질을 제공한다. 본 명세서에 기재된 지질은 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 세포 또는 기관에 전달하기 위해 지질 나노입자 조성물에서 유익하게 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 지질은, 면역원성이 거의 없거나 없다. 예를 들어, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III) 중 임의의 것의 지질 화합물은 기준 지질 (예를 들어, MC3, KC2, 또는 DLinDMA)과 비교하여 더 낮은 면역원성을 갖는다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 지질 및 치료적 또는 예방적 제제를 포함하는 제형은 기준 지질 (예를 들어, MC3, KC2, 또는 DLinDMA) 및 동일한 치료적 또는 예방적 제제를 포함하는 상응하는 제형과 비교하여 증가된 치료 지수를 갖는다.
본 발명의 제1 양태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 식 (I) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00011
식 중:
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고; 그리고 R4은 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 또는 -CQ(R)2일 때, (i) Q는, n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 때 -N(R)2가 아니고, 또는 (ii) Q는, n이 1 또는 2일 때 5, 6, 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아니다.
또 다른 양태 본 개시내용은 식 (III)의 화합물 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체에 관한 것이다:
Figure pct00012
식 중
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IA) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00013
식 중 l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고; m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; R4은 수소, 비치환된 C1-3 알킬, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, 또는 -(CH2)nQ이되, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 예를 들어, m은 5, 7, 또는 9이다. 예를 들어, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, 또는 -NHC(O)N(R)2이다. 예를 들어, Q는 -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R이다.
특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (IB) 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00014
식 중, 모든 변수는 본 명세서에서 정의된 바와 같다. 예를 들어, m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택되고; M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 예를 들어, m은 5, 7, 또는 9이다. 특정 구현예에서, 식 (I)의 화합물의 서브셋은 식 (II), 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것을 포함한다:
Figure pct00015
식 중 l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; R4은 수소, 비치환된 C1-3 알킬, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, 또는 -(CH2)nQ이되, n은 2, 3, 또는 4이고, 그리고 Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다.
식 (I) 또는 (IA) 중 임의의 하나의 화합물은 적용가능할 때 하기 특징 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, M1은 M'이다.
일부 구현예에서, M 및 M'는 독립적으로 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이다.
특정 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -OC(O)-이다.
특정 구현예에서, M은 -OC(O)-이고, 그리고 M'는 -C(O)O-이다. 일부 구현예에서, M은 -C(O)O-이고, 그리고 M'는 -OC(O)-이다. 특정 구현예에서, M 및 M' 각각은 -OC(O)-이다. 일부 구현예에서, M 및 M' 각각은 -C(O)O-이다.
특정 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -OC(O)-M"-C(O)O-이다.
일부 구현예에서, M 및 M'는 독립적으로 -S-S-이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -S-S이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 하나는 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고, 그리고 다른 것은 -S-S-이다. 예를 들어, M은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고, 그리고 M'는 -S-S-이거나, 또는 M'는 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고, 그리고 M은 -S-S-이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 하나는 -OC(O)-M"-C(O)O-이되, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이다. 다른 구현예에서, M"은 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐이다. 특정 구현예에서, M"은 C1-4 알킬 또는 C2-4 알케닐이다.
일부 구현예에서, l는 1, 3, 또는 5이다.
일부 구현예에서, R4은 수소이다.
일부 구현예에서, R4은 수소가 아니다.
일부 구현예에서, R4은 비치환된 메틸 또는 -(CH2)nQ이되, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R이다.
일부 구현예에서, Q는 OH이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(S)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(O)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)R이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)S(O)2R이다.
일부 구현예에서, Q는 -O(CH2)nN(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -O(CH2)nOR이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)R8이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(=NR9)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(=CHR9)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -OC(O)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)OR이다.
일부 구현예에서, n은 2이다.
일부 구현예에서, n은 3이다.
일부 구현예에서, n은 4이다.
일부 구현예에서, M1은 부재한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 R5은 하이드록실이다. 예를 들어, 1개의 R5은 하이드록실이다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 R6은 하이드록실이다. 예를 들어, 1개의 R6은 하이드록실이다.
일부 구현예에서 R5 및 R6 중 하나는 하이드록실이다. 예를 들어, 1개의 R5은 하이드록실이고, 그리고 각각의 R6은 수소이다. 예를 들어, 1개의 R6은 하이드록실이고, 그리고 각각의 R5은 수소이다.
일부 구현예에서, Rx는 C1-6 알킬이다. 일부 구현예에서, Rx는 C1-3 알킬이다. 예를 들어, Rx는 메틸이다. 예를 들어, Rx는 에틸이다. 예를 들어, Rx는 프로필이다.
일부 구현예에서, Rx는 -(CH2)rOH이고, 그리고 r은 1, 2 또는 3이다. 예를 들어, Rx는 메타노일이다. 예를 들어, Rx는 에타노일이다. 예를 들어, Rx는 프로파노일이다.
일부 구현예에서, Rx는 -(CH2)rNR2이고, r은 1, 2 또는 3이고, 그리고 각각의 R은 H 또는 메틸이다. 예를 들어, Rx는 메탄아미노, 메틸메탄아미노, 또는 디메틸메탄아미노이다. 예를 들어, Rx는 아미노메타닐, 메틸아미노메타닐, 또는 디메틸아미노메타닐이다. 예를 들어, Rx는 아미노에타닐, 메틸아미노에타닐, 또는 디메틸아미노에타닐이다. 예를 들어, Rx는 아미노프로파닐, 메틸아미노프로파닐, 또는 디메틸아미노프로파닐이다.
일부 구현예에서, R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", 또는 -YR"이다.
일부 구현예에서, R2 및 R3은 독립적으로 C3-14 알킬 또는 C3-14 알케닐이다.
일 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 식 (IIa), 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00016
식 중 R4은 본 명세서에서 기재된 바와 같다.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 식 (IIb), 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00017
식 중 R4은 본 명세서에서 기재된 바와 같다.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 식 (IIc) 또는 (IIe) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00018
또는
Figure pct00019
식 중 R4은 본 명세서에서 기재된 바와 같다.
또 다른 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 식 (IIf) 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00020
식 중, M은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고, M"은 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐이고, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 n은 2, 3, 및 4로부터 선택된다.
추가 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 식 (IId), 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00021
식 중 n은 2, 3, 또는 4이고; 그리고 m, R', R", 및 R2 내지 R6은 본 명세서에서 기재된 바와 같다. 예를 들어, 각각의 R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
추가 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 식 (IIg), 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것이다:
Figure pct00022
식 중 l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고; m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 예를 들어, M"은 C1-6 알킬 (예를 들어, C1-4 알킬) 또는 C2-6 알케닐 (예를 들어 C2-4 알케닐)이다. 예를 들어, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다.
식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 및 (III) 중 임의의 하나의 화합물은 적용가능할 때 하기 특징 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, S, 및 P로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14- 원 방향족 또는 비-방향족 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -N(R)S(O)2R8, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)S(O)2R8, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR, 및 옥소 (=O), OH, 아미노, 및 C1-3 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된 N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬 (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)으로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)S(O)2R8, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고; 그리고 Q가 5- 내지 14-원 복소환이고, 그리고 (i) R4은 -(CH2)nQ (여기서, n은 1 또는 2임)이거나, 또는 (ii) R4은 -(CH2)nCHQR (여기서, n은 1임)이거나, 또는 (iii) R4은 -CHQR, 및 -CQ(R)2일 때, Q는 5- 내지 14-원 헤테로아릴 또는 8- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이다.
또 다른 구현예에서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)S(O)2R8, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택된다.
또 다른 구현예에서, R4은 -(CH2)nQ이되, Q는 -N(R)S(O)2R8이고, 그리고 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된다. 추가 구현예에서, R4은 -(CH2)nQ이되, Q는 -N(R)S(O)2R8이되, R8은 C3-6 카보사이클 예컨대 C3-6 사이클로알킬이고, 그리고 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된다. 예를 들어, R4은 -(CH2)3NHS(O)2R8, 그리고 R8은 사이클로프로필이다.
또 다른 구현예에서, R4은 -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ이되, Q는 -N(R)C(O)R, n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고, 그리고 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 선택된다. 추가 구현예에서, R4은 -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ이되, Q는 -N(R)C(O)R이고, 식 중, R은 C1-C3 알킬이고, 그리고 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고, 그리고 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 선택된다. 또 다른 구현예에서, R4은 -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ이되, Q는 -N(R)C(O)R이되, 식 중, R은 C1-C3 알킬이고, n은 3이고, 그리고 o는 1이다. 일부 구현예에서, R10은 H, OH, C1-3 알킬, 또는 C2-3 알케닐이다. 예를 들어, R4은 3-아세트아미도-2,2-디메틸프로필이다.
일부 구현예에서, 1개의 R10은 H이고, 그리고 1개의 R10은 C1-3 알킬 또는 C2-3 알케닐이다. 또 다른 구현예에서, 각각의 R10은 C1-3 알킬 또는 C2-3 알케닐이다. 또 다른 구현예에서, 각각의 R10은 C1-3 알킬 (예를 들어 메틸, 에틸 또는 프로필)이다. 예를 들어, 1개의 R10은 메틸이고, 그리고 1개의 R10은 에틸 또는 프로필. 예를 들어, 1개의 R10은 에틸이고, 그리고 1개의 R10은 메틸 또는 프로필이다. 예를 들어, 1개의 R10은 프로필이고, 그리고 1개의 R10은 메틸 또는 에틸이다. 예를 들어, 각각의 R10은 메틸이다. 예를 들어, 각각의 R10은 에틸이다. 예를 들어, 각각의 R10은 프로필이다.
일부 구현예에서, 1개의 R10은 H이고, 그리고 1개의 R10은 OH이다. 또 다른 구현예에서, 각각의 R10은 OH이다.
또 다른 구현예에서, R4은 비치환된 C1-4 알킬, 예를 들어, 비치환된 메틸이다.
또 다른 구현예에서, R4은 수소이다.
특정 구현예에서, 본 개시내용은 식 (I)을 갖는 화합물을 제공하되, 식 중, R4은 -(CH2)nQ 또는 -(CH2)nCHQR이되, Q는 -N(R)2이고, 그리고 n은 3, 4, 및 5로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 본 개시내용은 식 (I)을 갖는 화합물을 제공하되, 식 중, R4은 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 -N(R)2이고, 그리고 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 본 개시내용은 식 (I)을 갖는 화합물을 제공하되, 식 중, R2 및 R3은 C2-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고, 그리고 R4은 -(CH2)nQ 또는 -(CH2)nCHQR이되, Q는 -N(R)2이고, 그리고 n은 3, 4, 및 5로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R2 및 R3은 C2-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성한다.
일부 구현예에서, R1은 C5-20 알킬 및 C5-20 알케닐로 구성된 군으로부터 선택된다.
다른 구현예에서, R1은 -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, R1은 -R*YR" 및 -YR"로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Y는 사이클로프로필 기이다. 일부 구현예에서, R*은 C8 알킬 또는 C8 알케닐이다. 특정 구현예에서, R"은 C3-12 알킬이다. 예를 들어, R"는 C3 알킬일 수 있다. 예를 들어, R"는 C4-8 알킬 (예를 들어, C4, C5, C6, C7, 또는 C8 알킬)일 수 있다.
일부 구현예에서, R은 (CH2)qOR*이되, q는 1, 2, 및 3으로부터 선택되고, 그리고 R*은 아미노, C1-C6 알킬아미노, 및 C1-C6 디알킬아미노로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된 C1-12 알킬이다. 예를 들어, R은 (CH2)qOR*이되, q는 1, 2, 및 3으로부터 선택되고, 그리고 R*은 C1-C6 디알킬아미노로 치환된 C1-12 알킬이다. 예를 들어, R은 (CH2)qOR*이되, q는 1, 2, 및 3으로부터 선택되고, 그리고 R*은 C1-C6 디알킬아미노로 치환된 C1-3 알킬이다. 예를 들어, R은 (CH2)qOR*이되, q는 1, 2, 및 3으로부터 선택되고, 그리고 R*은 디메틸아미노로 치환된 C1-3 알킬이다 (예를 들어, 디메틸아미노에타닐).
일부 구현예에서, R1은 C5-20 알킬이다. 일부 구현예에서, R1은 C6 알킬이다. 일부 구현예에서, R1은 C8 알킬이다. 다른 구현예에서, R1은 C9 알킬이다. 특정 구현예에서, R1은 C14 알킬이다. 다른 구현예에서, R1은 C18 알킬이다.
일부 구현예에서, R1은 C21-30 알킬이다. 일부 구현예에서, R1은 C26 알킬이다. 일부 구현예에서, R1은 C28 알킬이다. 특정 구현예에서, R1은
Figure pct00023
이다.
일부 구현예에서, R1은 C5-20 알케닐이다. 특정 구현예에서, R1은 C18 알케닐이다. 일부 구현예에서, R1은 리놀레일이다.
특정 구현예에서, R1은 분지형 (예를 들어, 데칸-2-일, 운데칸-3-일, 도데칸-4-일, 트리데칸-5-일, 테트라데칸-6-일, 2-메틸운데칸-3-일, 2-메틸데칸-2-일, 3-메틸운데칸-3-일, 4-메틸도데칸-4-일, 또는 헵타데카-9-일)이다. 특정 구현예에서, R1은
Figure pct00024
이다.
특정 구현예에서, R1은 비치환된 C5-20 알킬 또는 C5-20 알케닐이다. 특정 구현예에서, R'은 치환된 C5-20 알킬 또는 C5-20 알케닐이다 (예를 들어, 이는 C3-6 카보사이클 예컨대 1-사이클로프로필노닐로 치환되거나 또는 OH 또는 알콕시로 치환됨). 예를 들어, R1은
Figure pct00025
이다.
다른 구현예에서, R1은 -R"M'R'이다. 특정 구현예에서, M'는 -OC(O)-M"-C(O)O-이다. 예를 들어, R1는
Figure pct00026
이되, 여기서 x는 정수 1 내지 13의 정수이고 (예를 들어, 3, 4, 5, 및 6로부터 선택되고), s는 1 내지 13의 정수이고 (예를 들어, 1, 2, 및 3로부터 선택되고), 그리고 t는 2 내지 14의 정수이고 (예를 들어, 4, 5, 및 6으로부터 선택된다). 예를 들어, x는 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고, s는 1, 2, 및 3으로부터 선택되고, 그리고 t는 4, 5, 및 6으로부터 선택된다.
다른 구현예에서, R1은 -(CHR5R6)m-M-CR2R3R7와 상이하다.
일부 구현예에서, R'은 -R*YR" 및 -YR"로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Y는 C3-8 사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, Y는 C6-10 아릴이다. 일부 구현예에서, Y는 사이클로프로필 기이다. 일부 구현예에서, Y는 사이클로헥실 기이다. 특정 구현예에서, R*은 C1 알킬이다.
일부 구현예에서, R"은 C3-12 알킬 및 C3-12 알케닐로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Y에 인접한 R"은 C1 알킬이다. 일부 구현예에서, Y에 인접한 R"은 C4-9 알킬 (예를 들어, C4, C5, C6, C7 또는 C8 또는 C9 알킬)이다.
일부 구현예에서, R"은 치환된 C3-12 (예를 들어, 하이드록실로 치환된 C3-12 알킬)이다. 예를 들어, R"은
Figure pct00027
이다.
일부 구현예에서, R'은 C4 알킬 및 C4 알케닐로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R'은 C5 알킬 및 C5 알케닐로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R'은 C6 알킬 및 C6 알케닐로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R'은 C7 알킬 및 C7 알케닐로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R'은 C9 알킬 및 C9 알케닐로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R'은
Figure pct00028
또는
Figure pct00029
이다. 일부 구현예에서, R'은
Figure pct00030
또는
Figure pct00031
이고, 그리고 M'는 -OC(O)-이다. 다른 구현예에서, R'은
Figure pct00032
또는
Figure pct00033
이고, 그리고 M'는 -C(O)O-이다.
다른 구현예에서, R'은 C11 알킬 및 C11 알케닐로부터 선택된다. 다른 구현예에서, R'은 C12 알킬, C12 알케닐, C13 알킬, C13 알케닐, C14 알킬, C14 알케닐, C15 알킬, C15 알케닐, C16 알킬, C16 알케닐, C17 알킬, C17 알케닐, C18 알킬, 및 C18 알케닐로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R'은 선형 C4-18 알킬 또는 C4-18 알케닐이다. 특정 구현예에서, R'은 분지형 (예를 들어, 데칸-2-일, 운데칸-3-일, 도데칸-4-일, 트리데칸-5-일, 테트라데칸-6-일, 2-메틸운데칸-3-일, 2-메틸데칸-2-일, 3-메틸운데칸-3-일, 4-메틸도데칸-4-일 또는 헵타데카-9-일)이다. 특정 구현예에서, R'은
Figure pct00034
이다.
특정 구현예에서, R'은 비치환된 C1-18 알킬이다. 특정 구현예에서, R'은 치환된 C1-18 알킬이다 (예를 들어, 알콕시 예컨대 메톡시로 치환된 C1-15 알킬, 또는 C3-6 카보사이클 예컨대 1-사이클로프로필노닐, 또는 C(O)O-알킬 또는 OC(O)-알킬 예컨대 C(O)OCH3 또는 OC(O)CH3). 예를 들어, R'는 하기이다:
Figure pct00035
Figure pct00036
또는
Figure pct00037
특정 구현예에서, R'은 분지형 C1-18 알킬이다. 예를 들어, R'은
Figure pct00038
이다.
일부 구현예에서, R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R"은 C3 알킬, C4 알킬, C5 알킬, C6 알킬, C7 알킬, 또는 C8 알킬이다. 일부 구현예에서, R"은 C9 알킬, C10 알킬, C11 알킬, C12 알킬, C13 알킬, C14 알킬, 또는 C15 알킬이다.
일부 구현예에서, M'는 -C(O)O-이다. 일부 구현예에서, M'는 -OC(O)-이다. 일부 구현예에서, M'는 -OC(O)-M"-C(O)O-이다.
다른 구현예에서, M'는 아릴 기 또는 헤테로아릴 기이다. 예를 들어, M'는 페닐, 옥사졸, 및 티아졸로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, M은 -C(O)O-이다. 일부 구현예에서, M은 -OC(O)-이다. 일부 구현예에서, M은 -C(O)N(R')-이다. 일부 구현예에서, M은 -P(O)(OR')O-이다. 일부 구현예에서, M은 -OC(O)-M"-C(O)O-이다.
다른 구현예에서, M은 아릴 기 또는 헤테로아릴 기이다. 예를 들어, M는로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고 페닐, 옥사졸, 및 티아졸.
일부 구현예에서, M은 M'와 동일하다. 다른 구현예에서, M은 M'와 상이하다.
일부 구현예에서, M"은 결합이다. 일부 구현예에서, M"은 C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이다. 일부 구현예에서, M"은 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐이다. 특정 구현예에서, M"은 선형 알킬 또는 알케닐이다. 특정 구현예에서, M"은 분지형, 예를 들어, -CH(CH3)CH2-이다.
일부 구현예에서, 각각의 R5은 H이다. 특정 그와 같은 구현예에서, 각각의 R6은 또한 H이다.
일부 구현예에서, R7은 H이다. 다른 구현예에서, R7은 C1-3 알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 i-프로필)이다.
일부 구현예에서, R2 및 R3은 독립적으로 C5-14 알킬 또는 C5-14 알케닐이다.
일부 구현예에서, R2 및 R3은 동일하다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은 C8 알킬이다. 특정 구현예에서, R2 및 R3은 C2 알킬이다. 다른 구현예에서, R2 및 R3은 C3 알킬이다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은 C4 알킬이다. 특정 구현예에서, R2 및 R3은 C5 알킬이다. 다른 구현예에서, R2 및 R3은 C6 알킬이다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은 C7 알킬이다.
다른 구현예에서, R2 및 R3은 상이하다. 특정 구현예에서, R2은 C8 알킬이다. 일부 구현예에서, R3은 C1-7 (예를 들어, C1, C2, C3, C4, C5, C6, 또는 C7 알킬) 또는 C9 알킬이다.
일부 구현예에서, R7 및 R3은 H이다
특정 구현예에서, R2은 H이다.
일부 구현예에서, m은 5, 7, 또는 9이다.
일부 구현예에서, R4은 -(CH2)nQ 및 -(CH2)nCHQR로부터 선택된다.
일부 구현예에서, Q는 -OR, -OH, -O(CH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX3, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(H)(R), -C(R)N(R)2C(O)OR, -N(R)S(O)2R8, 카보사이클, 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, Q는 -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, 또는 -N(R)C(O)OR이다.
특정 구현예에서, Q는 -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, 또는 -N(OR)C(=CHR9)N(R)2이다.
특정 구현예에서, Q는 티오우레아 또는 이의 등배체, 예를 들어,
Figure pct00039
또는 -NHC(=NR9)N(R)2이다.
특정 구현예에서, Q는 -C(=NR9)N(R)2이다. 예를 들어, Q가 -C(=NR9)N(R)2일 때, n은 4 또는 5이다. 예를 들어, R9은 -S(O)2N(R)2이다.
특정 구현예에서, Q는 -C(=NR9)R 또는 -C(O)N(R)OR, 예를 들어, -CH(=N-OCH3), -C(O)NH-OH, -C(O)NH-OCH3, -C(O)N(CH3)-OH, 또는 -C(O)N(CH3)-OCH3이다.
특정 구현예에서, Q는 -OH이다.
특정 구현예에서, Q는 치환된 또는 비치환된 5- 내지 10- 원 헤테로아릴이고, 예를 들어, Q는 트리아졸, 이미다졸, 피리미딘, 퓨린, 2-아미노-1,9-디하이드로-6H-퓨린-6-온-9-일 (또는 구아닌-9-일), 아데닌-9-일, 시토신-1-일, 또는 우라실-1-일이되, 이들 각각은 알킬, OH, 알콕시, -알킬-OH, -알킬-O-알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 그리고 치환체는 추가로 치환될 수 있다. 특정 구현예에서, Q는 치환된 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이고, 예를 들어, 옥소 (=O), OH, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노, 및 C1-3 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된다. 예를 들어, Q는 4-메틸피페라지닐, 4-(4-메톡시벤질)피페라지닐, 이소인돌린-2-일-1,3-디온, 피롤리딘-1-일-2,5-디온, 또는 이미다졸리딘-3-일-2,4-디온이다.
특정 구현예에서, Q는 -NHR8이되, R8은 옥소 (=O), 아미노 (NH2), 모노- 또는 디-알킬아미노, C1-3 알킬 및 할로로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 C3-6 사이클로알킬이다. 예를 들어, R8은 사이클로부테닐, 예를 들어, 3-(디메틸아미노)-사이클로부트-3-엔-4-일-1,2-디온이다. 추가 구현예에서, R8은 옥소 (=O), 티오 (=S), 아미노 (NH2), 모노- 또는 디-알킬아미노, C1-3 알킬, 헤테로사이클로알킬, 및 할로로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 C3-6 사이클로알킬이되, 상기 모노- 또는 디-알킬아미노, C1-3 알킬, 및 헤테로사이클로알킬은 추가로 치환된다. 예를 들어 R8은 옥소, 아미노, 및 알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐 이되, 상기 알킬아미노는 예를 들어, C1-3 알콕시, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노, 및 할로 중 하나 이상으로 추가로 치환된다. 예를 들어, R8은 3-(((디메틸아미노)에틸)아미노)사이클로부트-3-에닐-1,2-디온이다. 예를 들어 R8은 옥소, 및 알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어, R8은 3-(에틸아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디온이다. 예를 들어 R8은 옥소, 티오, 및 알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어 R8은 3-(에틸아미노)-4-티옥소사이클로부트-2-엔-1-온 또는 2-(에틸아미노)-4-티옥소사이클로부트-2-엔-1-온이다. 예를 들어 R8은 티오, 및 알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어 R8은 3-(에틸아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디티온. 예를 들어 R8은 옥소 및 디알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어 R8은 3-(디에틸아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디온이다. 예를 들어, R8은 옥소, 티오, 및 디알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어, R8은 2-(디에틸아미노)-4-티옥소사이클로부트-2-엔-1-온 또는 3-(디에틸아미노)-4-티옥소사이클로부트-2-엔-1-온이다. 예를 들어, R8은 티오, 및 디알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어, R8은 3-(디에틸아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디티온. 예를 들어, R8은 옥소 및 알킬아미노 또는 디알킬아미노 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이되, 상기 알킬아미노 또는 디알킬아미노는 예를 들어 하나 이상의 알콕시로 추가로 치환된다. 예를 들어, R8은 3-(비스(2-메톡시에틸)아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디온. 예를 들어, R8은 옥소, 및 헤테로사이클로알킬 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어, R8은 옥소, 및 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 모폴리닐 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이다. 예를 들어, R8은 옥소, 및 헤테로사이클로알킬 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이되, 상기 헤테로사이클로알킬은 예를 들어, 하나 이상의 C1-3 알킬로 추가로 치환된다. 예를 들어, R8은 옥소, 및 헤테로사이클로알킬 중 하나 이상으로 치환된 사이클로부테닐이되, 헤테로사이클로알킬 (예를 들어, 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 모폴리닐)은 메틸로 추가로 치환된다.
특정 구현예에서, Q는 -NHR8이되, R8은 아미노 (NH2), 모노- 또는 디-알킬아미노, C1-3 알킬 및 할로로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 예를 들어, R8은 티아졸 또는 이미다졸이다.
특정 구현예에서, Q는 -NHC(=NR9)N(R)2이되, R9은 CN, C1-6 알킬, NO2, -S(O)2N(R)2, -OR, -S(O)2R, 또는 H이다. 예를 들어, Q는 -NHC(=NR9)N(CH3)2, -NHC(=NR9)NHCH3, -NHC(=NR9)NH2이다. 일부 구현예에서, Q는 -NHC(=NR9)N(R)2이되, R9은 CN이고, 그리고 R은 모노- 또는 디-알킬아미노로 치환된 C1-3 알킬 이고, 예를 들어, R은 ((디메틸아미노)에틸)아미노이다. 일부 구현예에서, Q는 -NHC(=NR9)N(R)2이되, R9은 C1-6 알킬, NO2, -S(O)2N(R)2, -OR, -S(O)2R, 또는 H이고, 그리고 R은 모노- 또는 디-알킬아미노로 치환된 C1-3 알킬이고, 예를 들어, R은 ((디메틸아미노)에틸)아미노이다.
특정 구현예에서, Q는 -NHC(=CHR9)N(R)2이되, R9은 NO2, CN, C1-6 알킬, -S(O)2N(R)2, -OR, -S(O)2R, 또는 H이다. 예를 들어, Q는 -NHC(=CHR9)N(CH3)2, -NHC(=CHR9)NHCH3, 또는 -NHC(=CHR9)NH2이다.
특정 구현예에서, Q는 -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)OR, 예컨대 -OC(O)NHCH3, -N(OH)C(O)OCH3, -N(OH)C(O)CH3, -N(OCH3)C(O)OCH3, -N(OCH3)C(O)CH3, -N(OH)S(O)2CH3, 또는 -NHC(O)OCH3이다.
특정 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)R이되, R은 C1-3 알콕실 또는 S(O)tC1 -3 알킬 (여기서 t는 0, 1, 또는 2임)로 선택적으로 치환된 알킬이다.
특정 구현예에서, Q는 비치환되거나 치환된 C6-10 아릴 (예컨대 페닐) 또는 C3-6 사이클로알킬이다.
일부 구현예에서, n은 1이다. 다른 구현예에서, n은 2이다. 추가 구현예에서, n은 3이다. 특정 다른 구현예에서, n은 4이다. 예를 들어, R4는 -(CH2)2OH일 수 있다. 예를 들어, R4는 -(CH2)3OH일 수 있다. 예를 들어, R4는 -(CH2)4OH일 수 있다. 예를 들어, R4는 벤질일 수 있다. 예를 들어, R4는 4-메톡시벤질일 수 있다.
일부 구현예에서, R4은 C3-6 카보사이클이다. 일부 구현예에서, R4은 C3-6 사이클로알킬이다. 예를 들어, R4는 예를 들어, OH, 할로, C1-6 알킬, 등으로 선택적으로 치환된 사이클로헥실일 수 있다. 예를 들어, R4는 2-하이드록시사이클로헥실일 수 있다.
일부 구현예에서, R은 H이다.
일부 구현예에서, R은 모노- 또는 디-알킬아미노로 치환된 C1-3 알킬 이고, 예를 들어, R은 ((디메틸아미노)에틸)아미노이다.
일부 구현예에서, R은 C1-3 알콕실, 아미노, 및 C1-C3 디알킬아미노로 구성된 군으로부터 선태된 하나 이상의 치환체로 치환된 C1-6 알킬이다.
일부 구현예에서, R은 비치환된 C1-3 알킬 또는 비치환된 C2-3 알케닐이다. 예를 들어, R4는 -CH2CH(OH)CH3, -CH(CH3)CH2OH, 또는 -CH2CH(OH)CH2CH3일 수 있다.
일부 구현예에서, R은 치환된 C1-3 알킬, 예를 들어, CH2OH이다. 예를 들어, R4는 -CH2CH(OH)CH2OH, -(CH2)3NHC(O)CH2OH, -(CH2)3NHC(O)CH2OBn, -(CH2)2O(CH2)2OH, -(CH2)3NHCH2OCH3, -(CH2)3NHCH2OCH2CH3, CH2SCH3, CH2S(O)CH3, CH2S(O)2CH3, 또는 -CH(CH2OH)2일 수 있다.
일부 구현예에서, R4은 하기의 기들 중 임의의 것으로부터 선택된다:
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
일부 구현예에서, R4은 하기의 기들 중 임의의 것으로부터 선택된다:
Figure pct00043
Figure pct00044
일부 구현예에서, 식 (III)의 화합물은 추가로, 음이온을 포함한다. 본 명세서에서 기재된 바와 같이, 음이온은 아민과 반응하여 암모늄 염을 형성할 수 있는 임의의 음이온 일 수 있다. 그 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 염화물, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 포르메이트, 트리플루오로아세테이트, 디플루오로아세테이트, 트리클로로아세테이트, 및 포스페이트.
일부 구현예에서 본 명세서에 기재된 식들 중 임의의 것의 화합물은 근육내 투여를 위해 나노입자 조성물을 제조하는데 적합하다.
일부 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착되는 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성한다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, N, O, S, 및 P로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14- 원 방향족 또는 비-방향족 복소환을 형성한다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, 선택적으로 치환된 C3-20 카보사이클 (예를 들어, C3-18 카보사이클, C3-15 카보사이클, C3-12 카보사이클, 또는 C3-10 카보사이클)을 형성하는데, 이는 방향족 또는 비-방향족이다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, C3-6 카보사이클을 형성한다. 다른 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, C6 카보사이클, 예컨대 사이클로헥실 또는 페닐기를 형성한다. 특정 구현예에서, 복소환 또는 C3-6 카보사이클은 (예를 들어, 동일한 고리 원자에서 또는 인접한 또는 비-인접한 고리 원자에서) 하나 이상의 알킬기로 치환된다. 예를 들어, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, 하나 이상의 C5 알킬 치환을 보유하는 사이클로헥실 또는 페닐 기를 형성할 수 있다. 특정 구현예에서, R2 및 R3에 의해 형성된 복소환 또는 C3-6 카보사이클은 카보사이클 기로 치환된다. 예를 들어, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, 사이클로헥실 또는 페닐 기를 형성할수 있고, 이는 기는 사이클로헥실로 치환된다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, C7-15 카보사이클, 예컨대 사이클로헵틸, 사이클로펜타데카닐, 또는 나프틸 기를 형성한다.
일부 구현예에서, R4는 -(CH2)nQ 및 -(CH2)nCHQR로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Q는 -OR, -OH, -O(CH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX3, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(R)2, -N(R)S(O)2R8, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(H)(R), 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택된다고. 다른 구현예에서, Q는 이미다졸, 피리미딘, 및 퓨린으 로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착되는 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성한다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, C3-6 카보사이클, 예컨대 페닐기를 형성한다. 특정 구현예에서, 복소환 또는 C3-6 카보사이클은 (예를 들어, 동일한 고리 원자에서 또는 인접한 또는 비-인접한 고리 원자에서) 하나 이상의 알킬기로 치환된다. 예를 들어, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께, 하나 이상의 C5 알킬 치환을 보유하는 페닐 기를 형성할 수 있다.
일부 구현예에서, R5 및 R6 중 적어도 하나의 존재는 C1-3 알킬, 예를 들어, 메틸이다. 일부 구현예에서, M에 인접한 R5 및 R6 중 하나는 C1-3 알킬, 예를 들어, 메틸이고, 그리고 다른 것은 H이다. 일부 구현예에서, M에 인접한 R5 및 R6 중 하나는 C1-3 알킬, 예를 들어, 메틸이고, 그리고 다른 것은 H이고, 그리고 M은 -OC(O)- 또는 -C(O)O-이다.
일부 구현예에서, R5 및 R6 중 최대 하나의 경우는 C1-3 알킬, 예를 들어, 메틸이다. 일부 구현예에서, M에 인접한 R5 및 R6 중 하나는 C1-3 알킬, 예를 들어, 메틸이고, 그리고 다른 것은 H이다. 일부 구현예에서, M에 인접한 R5 및 R6 중 하나는 C1-3 알킬, 예를 들어, 메틸이고, 그리고 다른 것은 H이고, 그리고 M은 -OC(O)- 또는 -C(O)O-이다.
일부 구현예에서, 각 경우의 R5 및 R6은 H이다.
일부 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
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및
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추가 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
Figure pct00055
및
Figure pct00056
일부 구현예에서, 식 (I)의 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
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Figure pct00059
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및 이의 N-산화물, 그의 염 및 이성질체.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 지질은 화합물 340을 포함한다:
Figure pct00098
(화합물 340)
식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질의 중심 아민 모이어티는 생리적 pH에서 양성자화될 수 있다. 따라서, 지질은 생리적 pH에서 양전하 또는 부분적인 양전하를 가질 수 있다. 그와 같은 지질은 양이온성 또는 이온화가능 (아미노)지질로 칭할 수 있다. 지질은 또한, 쯔비터이온성일 수 있고, 즉, 중성 분자는 양전하 및 음전하 둘 모두를 갖는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알킬" 또는 "알킬기"는 선택적으로 치환된 1개 이상의 탄소 원자 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 그 초과 개의 탄소 원자)를 포함하는 선형 또는 분지형, 포화된 탄화수소를 의미한다. 표기법 "C1-14 알킬"은 1-14개의 탄소 원자를 포함하는 선택적으로 치환된 선형 또는 분지형, 포화된 탄화수소를 의미한다. 달리 구체화되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 알킬기는 비치환된 및 치환된 알킬기 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알케닐" 또는 "알케닐 기"는 선택적으로 치환된 2개 이상의 탄소 원자 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 그 초과 개의 탄소 원자) 및 적어도 하나의 이중 결합를 포함하는 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 표기법 "C2-14 알케닐"은 2-14개의 탄소 원자 및 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합를 포함하는 선택적으로 치환된 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 알케닐 기는 1, 2, 3, 4, 또는 그 초과 개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함할 수 있다. 예를 들어, C18 알케닐은 하나 이상의 이중 결합을 포함할 수 있다. 2개의 이중 결합을 포함하는 C18 알케닐 기응 리놀레일 기일 수 있다. 달리 구체화되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 알케닐기는 비치환된 및 치환된 알케닐기 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알키닐" 또는 "알키닐 기"는 선택적으로 치환된 2개 이상의 탄소 원자 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 그 초과 개의 탄소 원자) 및 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 표기법 "C2-14 알키닐"은 2-14개의 탄소 원자 및 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 선택적으로 치환된 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 알키닐 기는 1, 2, 3, 4, 또는 그 초과 개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함할 수 있다. 예를 들어, C18 알키닐은 1개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함할 수 있다. 달리 구체화되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 알키닐 기는 비치환된 및 치환된 알키닐기 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "카보사이클" 또는 "탄소환형 기"는 탄소 원자의 1개 이상의 고리를 포함하는 선택적으로 치환된 모노- 또는 다중환형 계를 의미한다. 고리는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 원 고리일 수 있다. 표기법 "C3-6 카보사이클"은 3-6개의 탄소 원자를 갖는 단일 고리를 포함하는 카보사이클을 의미한다. 카보사이클은 1개 이상의 탄소-탄소 이중 또는 삼중 결합을 포함할 수 있고, 비-방향족 또는 방향족 (예를 들어, 사이클로알킬 또는 아릴 기)일 수 있다. 카보사이클의 예는 사이클로프로필, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 나프틸, 및 1,2-디하이드로나프틸 기를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "사이클로알킬"은 비-방향족 카보사이클을 의미하고, 임의의 이중 또는 삼중 결합을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 달리 구체화되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 카보사이클은 비치환된 및 치환된 카보사이클 기, 즉, 선택적으로 치환된 카보사이클 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "복소환" 또는 "복소환형 기"는 1개 이상의 고리를 포함하는 선택적으로 치환된 모노- 또는 다중환형 계를 의미하되, 적어도 하나의 고리는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함한다. 헤테로원자는 예를 들어, 질소, 산소, 또는 황 원자일 수 있다. 고리는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14 원 고리일 수 있다. 헤테로사이클은 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 포함할 수 있고, 비-방향족 또는 방향족 (예를 들어, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴 기)일 수 있다. 헤테로사이클의 예는 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 옥사졸릴, 옥사졸리디닐, 티아졸릴, 티아졸리디닐, 피라졸리디닐, 피라졸릴, 이속사졸리디닐, 이속사졸릴, 이소티아졸리디닐, 이소티아졸릴, 모폴리닐, 피롤릴, 피롤리디닐, 퓨릴, 테트라하이드로푸릴, 티오페닐, 피리디닐, 피페리디닐, 퀴놀릴, 및 이소퀴놀릴 기를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "헤테로사이클로알킬" 는 비-방향족 복소환을 의미하고, 임의의 이중 또는 삼중 결합을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 달리 구체화되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 헤테로사이클은 비치환된 및 치환된 복소환 기, 즉, 선택적으로 치환된 헤테로사이클 둘 모두를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "생분해성 기"는 포유동물 독립체에서 지질의 더 빠른 대사를 촉진할 수 있는 기이다. 생분해성 기는 비제한적으로, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, 아릴기, 및 헤테로아릴기 로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "아릴기"는 하나 이상의 방향족 고리를 포함하는 선택적으로 치환된 탄소환형 기이다. 아릴 기의 예는 페닐 및 나프틸 기를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "헤테로아릴기"는 하나 이상의 방향족 고리를 포함하는 선택적으로 치환된 복소환형 기이다. 헤테로아릴 기의 예는 피롤릴, 퓨릴, 티오페닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 및 티아졸릴를 포함한다. 아릴 및 헤테로아릴 기 둘 모두는 선택적으로 치환될 수 있다. 예를 들어, M 및 M'은 선택적으로 치환된 페닐, 옥사졸, 및 티아졸로 구성된 비제한적인 군로부터 선택될 수 있다. 본 명세서의 식들에서, M 및 M'는 상기의 생분해성 기의 목록으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 달리 구체화되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 아릴 또는 헤테로아릴 기는 비치환된 및 치환된 기, 즉, 선택적으로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴 기 둘 모두를 지칭한다.
알킬, 알케닐, 및 사이클릴 (예를 들어, 카보사이클릴 및 헤테로사이클릴) 기는 달리 구체화되지 않는 한, 선택적으로 치환될 수 있다. 선택적인 치환체는 비제한적으로, 하기로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다: 할로겐 원자 (예를 들어, 염화물, 브로마이드, 플루오라이드, 또는 아이오다이드 기), 카복실산 (예를 들어, -C(O)OH), 알코올 (예를 들어, 하이드록실, -OH), 에스테르 (예를 들어, -C(O)OR 또는 -OC(O)R), 알데하이드 (예를 들어, -C(O)H), 카보닐 (예를 들어, -C(O)R, 대안적으로 표시되는 by C=O), 아실 할라이드 (예를 들어, -C(O)X, 여기서 X는 브로마이드, 플루오라이드, 염화물, 및 아이오다이드로부터 선택된 할라이드임), 카보네이트 (예를 들어, -OC(O)OR), 알콕시 (예를 들어, -OR), 아세탈 (예를 들어, -C(OR)2R"", 여기서 각각의 OR은 동일 또는 상이할 수 있는 알콕시이고, 그리고 R""는 알킬 또는 알케닐 기임), 포스페이트 (예를 들어, P(O)4 3-), 티올 (예를 들어, -SH), 설폭사이드 (예를 들어, -S(O)R), 설핀산 (예를 들어, -S(O)OH), 설폰산 (예를 들어, -S(O)2OH), 티알 (예를 들어, -C(S)H), 설페이트 (예를 들어, S(O)4 2-), 설포닐 (예를 들어, -S(O)2-), 아미드 (예를 들어, -C(O)NR2, 또는 -N(R)C(O)R), 아지도 (예를 들어, -N3), 니트로 (예를 들어, -NO2), 시아노 (예를 들어, -CN), 이소시아노 (예를 들어, -NC), 아실옥시 (예를 들어, -OC(O)R), 아미노 (예를 들어, -NR2, -NRH, 또는 -NH2), 카바모일 (예를 들어, -OC(O)NR2, -OC(O)NRH, 또는 -OC(O)NH2), 설폰아미드 (예를 들어, -S(O)2NR2, -S(O)2NRH, -S(O)2NH2, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)S(O)2H, 또는 -N(H)S(O)2H), 알킬기, 알케닐 기, 및 사이클릴 (예를 들어, 카보사이클릴 또는 헤테로사이클릴) 기. 이전 중 임의의 것에서, R은 본 명세서에서 정의된 바와 같은 알킬 또는 알케닐 기이다. 일부 구현예에서, 치환체 기 자체는 예를 들어, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 치환체로 추가로 치환될 수 있다. 예를 들어, C1-6 알킬기는 본 명세서에서 기재된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 치환체로 추가로 치환될 수 있다.
질소를 함유하는 본 개시내용의 화합물은 산화제 (예를 들어, 3-클로로퍼옥시벤조산 (mCPBA) 및/또는 과산화수소)에 의한 처리에 의해 N-산화물로 전환되어 본 개시내용의 다른 화합물을 얻을 수 있다. 따라서, 모든 보여지고 청구된 질소-함유 화합물은, 원자가 및 구조에 의해 허용될 때, 보여진 화합물 및 그것의 N-산화물 유도체 (이는 NO 또는 N+-O-로 지정될 수 있음) 둘 모두를 포함하는 것으로 간주된다. 게다가, 다른 사례에서, 본 개시내용의 화합물 중 질소는 N-하이드록시 또는 N-알콕시 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, N-하이드록시 화합물은 산화제 예컨대 m-CPBA에 의한 모 아민의 산화에 의해 제조될 수 있다. 모든 보여지고 청구된 질소-함유 화합물은 또한, 원자가 및 구조에 의해 허용될 때, 보여진 화합물 및 그것의 N-하이드록시 (즉, N-OH) 및 N-알콕시 (즉, N-OR, 식 중, R은 치환된 또는 비치환된 C1-C 6 알킬, C1-C6 알케닐, C1-C6 알키닐, 3-14-원 카보사이클 또는 3-14-원 복소환임) 유도체 둘 모두를 포함하는 것을 간주된다.
약, 대략: 본 명세서에서 사용된 바와 같은, 관심 있는 하나 이상의 값에 적용된 것으로 용어들 "대략" 및 "약"은 언급된 기준 값에 유사한 값을 지칭한다. 특정 구현예에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 달리 언급되지 않는 한 또는 문맥으로부터 달리 분명하지 않는 한 (이러한 수가 가능한 값의 100%를 초과할 수 있는 경우는 제외) 언급된 기준 값의 어느 하나의 방향 (초과 또는 미만)으로 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 그 미만 이내로 되는 값의 범위를 지칭한다. 예를 들어, 나노입자 조성물의 지질 성분에서 주어진 화합물의 양의 맥락에서 사용될 때, "약"은 인용된 값의 +/- 10%를 의미할 수 있다. 예를 들어, 주어진 화합물의 약 40%를 갖는 지질 성분을 포함하는 나노입자 조성물은 본 화합물의 30-50%를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "화합물"은 묘사된 구조의 모든 이성질체 및 동위원소를 포함하기 위한 것이다. "동위원소"는 동일한 원자 번호를 가지지만 핵 내 상이한 수의 중성자로부터 유래한 상이한 질량수를 갖는 원자를 지칭한다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다. 또한, 본 개시내용의 화합물, 염, 또는 복합체는 일상적인 방법에 의해 용매화물 및 수화물을 형성하기 위해 용매 또는 물 분자와 조합에서 제조될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "접촉하는 것"은 2 또는 그 초과 독립체 사이의 물리적 연결을 성취하는 것을 의미한다. 예를 들어, 나노입자 조성물과 포유동물 세포가 접촉하는 것은 포유동물 세포와 나노입자가 물리적 연결을 공유하도록 이루어지는 것을 의미한다. 생체내 및 생체외 둘 모두에서 외부 독립체와 세포를 접촉하는 방법은 생물학 기술에서 잘 알려져 있다. 예를 들어, 포유동물 내에 배치된 포유동물 세포와 나노입자 조성물이 접촉하는 것은 다양한 투여 경로 (예를 들어, 정맥내, 근육내, 진피내, 및 피하)에 의해 수행될 수 있고 다양한 양의 나노입자 조성물을 포함할 수 있다. 나아가, 1 초과 포유동물 세포가 나노입자 조성물에 의해 접촉될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "전달하는 것"은 독립체를 목적지에 제공하는 것을 의미한다. 예를 들어, 대상체에 치료제 및/또는 예방제를 전달하는 것은 (예를 들어, 정맥내, 근육내, 진피내, 또는 피하 경로에 의해) 상기 대상체에게 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 포유동물 또는 포유동물 세포에 나노입자 조성물의 투여는 하나 이상의 세포를 나노입자 조성물과 접촉하는 것을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "향상된 전달"은 관심 있는 표적 조직에 대조 나노입자 (예를 들어, MC3, KC2, 또는 DLinDMA)에 의한 치료제 및/또는 예방제의 전달 수준에 비교하여 관심 있는 표적 조직 (예를 들어, 포유동물 간)에 나노입자에 의한 치료제 및/또는 예방제의 많은 (예를 들어, 적어도 1.5 배 많은, 적어도 2-배 많은, 적어도 3-배 많은, 적어도 4-배 많은, 적어도 5-배 많은, 적어도 6-배 많은, 적어도 7-배 많은, 적어도 8-배 많은, 적어도 9-배 많은, 적어도 10-배 많은) 전달을 의미한다. 특정 조직에 나노입자의 전달 수준은 조직에서 생산된 단백질의 양을 상기 조직의 중량에 비교함에 의해, 조직 내 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직의 중량에 비교함에 의해, 조직에서 생산된 단백질의 양을 상기 조직 내 총 단백질의 양에 비교함에 의해, 또는 조직 내 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직 내 총 치료제 및/또는 예방제의 양에 비교함에 의해 측정될 수 있다. 표적 조직에 대한 나노입자의 향상된 전달은 치료되고 있는 대상체에서 결정될 필요가 없고, 대리자 예컨대 동물 모델 (예를 들어, 랫트 모델)에서 결정될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 특정 구현예에서, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물은 투여 경로에 무관하게 실질적으로 동일한 수준의 전달 향상을 갖는다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 특정 화합물은 이들이 정맥내로 또는 근육내로 치료제 및/또는 예방제를 전달하기 위해 사용될 때 유사한 전달 향상을 나타낸다. 다른 구현예에서, 본 명세서에 개시된 특정 화합물 (예를 들어, 식 (IA) 또는 (II)의 화합물, 예컨대 화합물 18, 25, 30, 60, 108-112, 또는 122)은 정맥내로보다는 근육내로 치료제 및/또는 예방제를 전달하기 위해 사용될 때 더 높은 전달 향상의 수준을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "특이적 전달", "구체적으로 전달한다" 또는 "구체적으로 전달하는 것"은 부정확한 조직 (예를 들어, 포유동물 비장)에 비교하여 관심 있는 표적 조직 (예를 들어, 포유동물 간)에 나노입자에 의한 치료제 및/또는 예방제의 많은 (예를 들어, 적어도 1.5 배 많은, 적어도 2-배 많은, 적어도 3-배 많은, 적어도 4-배 많은, 적어도 5-배 많은, 적어도 6-배 많은, 적어도 7-배 많은, 적어도 8-배 많은, 적어도 9-배 많은, 적어도 10-배 많은) 전달을 의미한다. 특정 조직에 나노입자의 전달 수준은 조직에서 생산된 단백질의 양을 상기 조직의 중량에 비교함에 의해, 조직 내 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직의 중량에 비교함에 의해, 조직에서 생산된 단백질의 양을 상기 조직 내 총 단백질의 양에 비교함에 의해, 또는 조직 내 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직 내 총 치료제 및/또는 예방제의 양에 비교함에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 신혈관 표적화의 경우, 치료제 및/또는 예방제의 전신 투여에 따른 간 또는 비장에 전달된 것에 비교하여 1g의 조직당 1.5, 2-배, 3-배, 5-배, 10-배, 15 배, 또는 20 배 많은 치료제 및/또는 예방제가 신장에 전달된다면, 치료제 및/또는 예방제는 간 및 비장에 비교하여 포유동물 신장에 구체적으로 제공된다. 표적 조직에 대해 구체적으로 전달되는 나노입자의 능력은 치료되고 있는 대상체에서 결정될 필요가 없고, 대리자 예컨대 동물 모델 (예를 들어, 랫트 모델)에서 결정될 수 있다는 것이 이해될 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "캡슐화 효율"은 나노입자 조성물의 제형에 사용된 치료제 및/또는 예방제의 초기 총량에 대비하여, 나노입자 조성물의 일부가 된 치료제 및/또는 예방제의 양을 지칭한다. 예를 들어, 만일 97mg의 치료제 및/또는 예방제가 조성물에 초기에 제공된 총 100mg의 치료제 및/또는 예방제 중에서 나노입자 조성물에 캡슐화된다면, 캡슐화 효율은 97%로 주어질 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "캡슐화"는 완전한, 실질적인, 또는 부분적인 봉입, 갇힘, 둘러쌈, 또는 케이스에 넣기를 지칭할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 핵산 서열의 "발현"은 폴리펩타이드 또는 단백질로 mRNA의 번역 및/또는 폴리펩타이드 또는 단백질의 번역후 변형을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "시험관내"는 유기체 (예를 들어, 동물, 식물, 또는 미생물)에서보다는 인공 환경, 예를 들어, 시험관 또는 반응 용기, 세포 배양, 페트리 접시, 등에서 발생하는 사건을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "생체내"는 유기체 (예를 들어, 동물, 식물, 또는 미생물 또는 이들의 세포 또는 조직) 내에서 발생하는 사건을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "생체외"는 유기체 (예를 들어, 동물, 식물, 또는 미생물 또는 이들의 세포 또는 조직)의 외부에서 발생하는 사건을 지칭한다. 생체외 사건은 천연 (예를 들어, 생체내) 환경으로부터 최소로 변경된 환경에서 발생할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "이성질체"는 화합물의 임의의 기하이성질체, 호변이성질체, 쯔비터이온, 입체이성질체, 거울상 이성질체, 또는 부분입체이성질체를 의미한다. 화합물은 하나 이상의 키랄중심 및/또는 이중 결합을 포함할 수 있고 따라서 입체이성질체, 예컨대 이중-결합 이성질체 (즉, 기하학적 E/Z 이성질체) 또는 부분입체이성질체 (예를 들어, 거울상 이성질체 (즉, (+) 또는 (-)) 또는 시스/트랜스 이성질체)로 존재할 수 있다. 본 개시내용은, 입체이성질체적으로 순수한 형태 (예를 들어, 기하학적으로 순수한, 거울상 이성질체로 순수한, 또는 부분입체이성질체로 순수한) 및 거울상 이성질체 및 입체이성질체 혼합물, 예를 들어, 라세미체를 포함하여, 본 명세서에 기재된 화합물의 임의의 및 모든 이성질체를 포괄한다. 화합물의 거울상 이성질체와 입체이성질체 혼합물 및 이들을 그것의 성분인 거울상이성질체 또는 입체이성질체로 분해하는 수단을 잘-알려져 있다.
"호변이성질체"은 평형 상태로 존재하고 하나의 이성질체 형태로부터 또 다른 형태로 쉽게 전환되는 2개 이상의 구조 이성질체 중 하나이다. 이러한 전환은 인접한 접합된 이중 결합의 스위치에 의해 동반된 수소 원자의 형식적 이동을 초래한다. 호변이성질체는 용액 중 호변이성질체성 세트의 혼합물로서 존재한다. 호변이성질체화가 가능한 용액에서, 호변이성질체의 화학적 평형이 도달될 것이다. 호변이성질체의 정확한 비는 온도, 용매 및 pH를 포함하는 몇 개의 인자에 좌우된다. 호변이성질체화에 의해 상호전환가능한 호변이성질체의 개념은 호변이성질체현상이라 한다.
가능한 호변이성질체현상의 다양한 유형 중에서, 2개가 통상적으로 관측된다. 케노-에놀 호변이성질체현상에서 전자 및 수소 원자의 동시 이동이 일어난다. 고리-사슬 호변이성질체현상은 동일한 분자에서 하이드록시 기 (-OH) 중 하나와 반응하여 글루코스에 의해 나타낸 환형 (고리-형상화된) 형태를 제공하는 당 사슬 분자에서 알데하이드 그룹 (-CHO)의 결과로서 일어난다.
일반적인 호변이성질체성 쌍은 하기이다: 케톤-에놀, 아미드-니트릴, 락탐-락팀, 복소환형 고리 중 (예를 들어, 핵염기 예컨대 구아닌, 티민 및 시토신 중) 아미드-이미드산 호변이성질체현상, 이민-엔아민 및 엔아민-엔아민. 이치환된 구아니딘 중 호변이성질체현상의 예는 아래에 나타나 있다.
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본 개시내용의 화합물이 상이한 호변이성질체로서 묘사될 수 있음을 이해해야 한다. 화합물이 호변이성질체 형태를 가질 때, 모든 호변이성질체 형태는 개시내용의 범위에 포함되는 것으로 의도되고, 화합물의 명명은 임의의 호변이성질체 형태를 배제하지 않는 것으로 또한 이해되어야 한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "지질 성분"은 하나 이상의 지질을 포함하는 나노입자 조성물의 그 성분이다. 예를 들어, 지질 성분은 하나 이상의 양이온성/이온화가능, 페길화된, 구조, 또는 다른 지질, 예컨대 인지질을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "링커"는 2개 모이어티를 연결하는 모이어티, 예를 들어, 캡 종의 2개 뉴클레오사이드 사이의 연결이다. 링커는 비제한적으로 포스페이트 기 (예를 들어, 포스페이트, 보라노포스페이트, 티오포스페이트, 셀레노포스페이트, 및 포스포네이트), 알킬 기, 아미데이트, 또는 글리세롤을 포함한 하나 이상의 기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 캡 유사체의 2개의 뉴클레오사이드는 삼인산기에 의해 또는 2개의 포스페이트 모이어티 및 보라노포스페이트 모이어티를 포함한 사슬에 의해 그것의 5' 위치에서 연결될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "투여의 방법"은 대상체에게 조성물을 전달하는 정맥내, 근육내, 진피내, 피하, 또는 다른 방법을 포함할 수 있다. 투여의 방법은 신체의 특정 영역 또는 계에 표적 전달을 위해 (예를 들어, 구체적으로 전달하기 위해) 선택될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "변형된"은 비-천연을 의미한다. 예를 들어, RNA는 변형된 RNA일 수 있다. 즉, RNA는 비-자연 발생인 하나 이상의 핵 염기, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 또는 링커를 포함할 수 있다. "변형된" 종은 또한 본 명세서에서 "변경된" 종으로 언급될 수 있다. 종은 화학적으로, 구조적으로, 또는 기능적으로 변형 또는 변경될 수 있다. 예를 들어, 변형된 핵 염기 종은 자연발생이 아닌 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "N:P 비"는 RNA에서, 예를 들어, 지질 성분 및 RNA를 포함한 나노입자 조성물에서 포스페이트 기에 대한 지질 내 이온화가능 (생리적 pH 범위 내) 질소 원자의 몰비이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "나노입자 조성물"은 하나 이상의 지질을 포함하는 조성물이다. 나노입자 조성물은 전형적으로 마이크로미터 또는 그보다 더 작은 정도의 크기로 되고 지질 이중층을 포함할 수 있다. 나노입자 조성물은 지질 나노입자 (LNP), 리포좀 (예를 들어, 지질 소포), 및 리포플렉스를 포괄한다. 예를 들어, 나노입자 조성물은 500nm 또는 그 미만의 직경을 갖는 지질 이중층을 갖는 리포좀일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "자연 발생"은 인공 도움없이 자연에 현존하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "환자"는 치료가 모색되거나 필요할 수 있거나, 치료를 요하거나, 치료를 받고 있거나, 치료를 받을 것인 대상체 또는 특정 질환 또는 병태에 대해 숙련된 전문가에 의한 돌봄하에 있는 대상체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "PEG 지질" 또는 "페길화된 지질"은 폴리에틸렌 글리콜 성분을 포함하는 지질을 지칭한다.
어구 "약제학적으로 허용가능한"은 건전한 의료 판단의 범위 내에서 합리적인 유익/유해 비율에 비례한 과도한 독성, 자극, 알러지성 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉에 사용하기에 적합한 화합물들, 물질, 조성물, 및/또는 투약 형태를 지칭하기 위해 본 명세서에서 사용된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 어구 "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 환자에서 실질적으로 비독성이고 비-염증성인 특성을 가지는 본 명세서에 기재된 화합물 이외의 임의의 성분 (예를 들어, 활성 화합물을 현탁하거나, 복합체화하거나 또는 용해시킬 수 있는 비히클)을 지칭한다. 부형제는, 예를 들어: 항-부착, 산화방지제, 결합제, 코팅물, 압축 조제, 붕해제, 염료 (색상), 완화제, 유화제, 충전제 (희석제), 피막 형성제 또는 코팅물, 풍미제, 방향제, 활택제 (유동 향상제), 윤활제, 보존제, 인쇄잉크, 흡수제, 현탁제 또는 분산제, 감미제, 및 수화의 물을 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는, 비제한적으로: 부틸화된 하이드록시톨루엔 (BHT), 탈산칼슘, 인산칼슘 (이염기성), 칼슘 스테아레이트, 크로스카르멜로스, 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 스테아르산 마그네슘, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸파라벤, 미세결정성 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 사전절라틴화된 전분, 프로필파라벤, 레티닐팔미테이트, 셸락, 이산화규소, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 나트륨 시트레이트, 나트륨 전분 글라이콜레이트, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 수크로스, 탈크, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E (알파-토코페롤), 비타민 C, 자일리톨, 및 본 명세서에 개시된 다른 종을 포함한다.
본 명세서에서, 화합물의 구조식은 일부 경우에 편의상 특정 이성질체를 나타내지만, 본 개시내용은 모든 이성질체, 예컨대, 모든 이성질체가 동일한 수준의 활성을 가지지 않을 것이다는 것을 이해하면서, 기하이성질체, 비대칭탄소에 기반한 광학이성질체, 입체이성질체, 호변이성질체, 및 동종의 것을 포함한다. 또한, 결정 다형성은 식에 의해 제시된 화합물에 대해 존재할 수 있다. 임의의 결정 형태, 결정 형태 혼합물, 또는 무수물 또는 그것의 수화물이 본 개시내용의 범위에 포함된다는 것이 인식된다.
용어 "결정 다형체", "다형체" 또는 "결정 형태"는 화합물 (또는 이들의 염 또는 용매화물)이 상이한 결정 팩킹 배열로 결정화될 수 있고 이들 모두가 동일한 원소 조성물을 갖는 결정 구조를 의미한다. 상이한 결정 형태는 일반적으로 상이한 X-선 회절 패턴, 적외선 스펙트럼, 용융점, 밀도 경도, 결정 형상, 광학 및 전기 특성, 안정성 및 용해도를 갖는다. 재결정화 용매, 결정화 속도, 저장 온도, 및 다른 인자는 하나의 결정 형태가 지배하도록 야기할 수 있다. 화합물의 결정 다형체는 상이한 조건하에서 결정화에 의해 제조될 수 있다.
조성물은 또한 하나 이상의 화합물의 염을 포함할 수 있다. 염은 약제학적으로 허용가능한 염일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 염"은 모화합물이 (예를 들어, 유리 염기 기가 적합한 유기산과 반응함에 의해) 그것의 염 형태로 현존하는 산 또는 염기 모이어티를 전환시킴에 의해 변경된 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 약제학적으로 허용가능한 염의 예는, 비제한적으로, 염기성 잔기 예컨대 아민의 무기 또는 유기 산성 염; 산성 잔기 예컨대 카복실산의 알칼리 또는 유기 염; 및 동종의 것을 포함한다. 대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 바이설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르설포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로아이오다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 락토바이오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트염, 및 기타 동종의 것을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 및 동종의 것뿐만 아니라 비제한적으로암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 및 기타 동종의 것을 포함한 비독성 암모늄, 사차 암모늄, 및 아민 양이온을 포함한다. 본 개시내용의 약제학적으로 허용가능한 염은, 예를 들어, 무독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모화합물의 통상적인 무독성 염을 포함한다. 본 개시내용의 약제학적으로 허용가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리산 또는 염기성 형태를, 물에서 또는 유기 용매에서, 또는 2개의 혼합물에서 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴에 의해 제조될 수 있고; 일반적으로, 에테르, 에틸아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, and Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)]에서 발견되고, 이들 각각은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "인지질"은 포스페이트 모이어티 및 1 또는 그 초과 개의 탄소 사슬, 예컨대 불포화된 지방산 사슬을 포함하는 지질이다. 인지질은 하나 이상의 다중 (예를 들어, 이중 또는 삼중) 결합 (예를 들어, 하나 이상의 불포화)을 포함할 수 있다. 특정 인지질은 막에 융합을 촉진할 수 있다. 예를 들어, 양이온성 인지질은 막 (예를 들어, 세포 또는 세포내막)의 하나 이상의 음으로 하전된 인지질과 상호작용할 수 있다. 막에 인지질의 융합은 지질-함유 조성물의 하나 이상의 요소가 막을 통과하도록 할 수 있어, 예를 들어, 세포로 하나 이상의 요소의 전달을 가능하게 할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "다분산도 지수"는 시스템의 입자 크기 분포의 균질성을 기술하는 비이다. 작은 값, 예를 들어, 0.3 미만은 좁은 입자 크기 분포를 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "폴리펩타이드" 또는 "관심 있는 폴리펩타이드"는 자연적으로 (예를 들어, 단리 또는 정제됨) 또는 합성으로 생산될 수 있는 펩타이드 결합에 의해 전형적으로 연결된 아미노산 잔기의 폴리머를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "RNA"는 자연적으로 또는 비-자연적으로 발생할 수 있는 리보핵산을 지칭한다. 예를 들어, RNA는 변형된 및/또는 비-자연 발 생성분 예컨대 하나 이상의 핵염기, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 또는 링커를 포함할 수 있다. RNA는 캡 구조, 사슬 종결 뉴클레오사이드, 스템 루프, 폴리A 서열, 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. RNA는 관심 있는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, RNA는 메신저 RNA (mRNA)일 수 있다. 특정 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA의 번역, 예를 들어, 포유동물 세포 내부의 mRNA의 생체내 번역은 인코딩된 폴리펩타이드를 생산할 수 있다. RNA는 작은 간섭하는 RNA (siRNA), 비대칭 간섭하는 RNA (aiRNA), microRNA (miRNA), 다이서-기질 RNA (dsRNA), 작은 헤어핀 RNA (shRNA), mRNA, 단일-가이드 RNA (sgRNA), cas9 mRNA, 및 이들의 혼합물로 구성되는 비-한정적인 군으로부터 선택될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "단일 단위 용량"은 1회 용량/한꺼번에/단일 경로/단일 접촉점, 즉, 단일 투여 건에서 투여된 임의의 치료제의 용량이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "분할 용량"은 단일 단위 용량 또는 총 1일 용량을 2회 이상 용량으로의 분할이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "총 1일 용량"은 24시간 기간 내에 주어진 또는 규정된 양이다. 이것은 단일 단위 용량으로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 나노입자 조성물의 맥락에서 "크기" 또는 "평균 크기"는 나노입자 조성물의 평균 직경을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 또는 "환자"는 개시내용에 따른 조성물이, 예를 들어, 실험적, 진단적, 예방적, 및/또는 치료적 목적을 위해 투여될 수 있는 임의의 유기체를 지칭한다. 전형적인 대상체는 동물 (예를 들어, 포유동물 예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 비-인간 영장류, 및 인간) 및/또는 식물을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "표적화된 세포"는 임의의 하나 이상의 관심 있는 세포를 지칭한다. 본 세포는 시험관내, 생체내, 현장에서, 또는 유기체의 조직 또는 장기에서 발견될 수 있다. 유기체는 동물, 바람직하게는 포유동물, 더 바람직하게는 인간 그리고 가장 바람직하게는 환자일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "표적 조직"은 치료제 및/또는 예방제의 전달이 원하는 생물학적 및/또는 약리적 효과를 초래할 수 있는 임의의 하나 이상의 관심 있는 조직 유형을 지칭한다. 관심 있는 표적 조직의 예는 특이적 조직, 기관, 및 시스템 또는 이들의 군을 포함한다. 특별한 적용에서, 표적 조직은 신장, 폐, 비장, 혈관에서의 혈관내피 (예를 들어, 내부-관상동맥 또는 내부-대퇴부), 또는 종양 조직 (예를 들어, 종양내 주사를 통함)일 수 있다. "부정확한 조직"은 인코딩된 단백질의 발현이 원하는 생물학적 및/또는 약리적 효과를 초래하지 않는 임의의 하나 이상의 조직 유형을 지칭한다. 특별한 적용에서, 부정확한 조직은 간 및 비장을 포함할 수 있다.
용어 "치료제" 또는 "예방적 제제"는, 대상체에게 투여될 때, 치료적, 진단적, 및/또는 예방적 효과를 가지고 및/또는 원하는 생물학적 및/또는 약리적 효과를 유도하는 임의의 제제를 지칭한다. 치료제는 또한 "활성 물질" 또는 "활성제"로 언급된다. 이러한 제제는, 비제한적으로, 세포독소, 방사성 이온, 화학 치료제, 소분자 약물, 단백질, 및 핵산을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료적 유효량"은 감염, 질환, 장애, 및/또는 병태를 앓고 있거나 또는 이에 민감한 대상체에게 투여될 때, 감염, 질환, 장애, 및/또는 병태를 치료하고, 그 증상을 개선하고, 진단하고, 예방하고 및/또는 그 개시를 지연시키기에 충분한, 전달되는 제제 (예를 들어, 핵산, 약물, 조성물, 치료제, 진단제, 예방적 제제, 등)의 양을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "형질감염"은 세포 안으로 종 (예를 들어, RNA)의 도입을 지칭한다. 형질감염은, 예를 들어, 시험관내, 생체외, 또는 생체내에서 일어날 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하는 것"은 특정 감염, 질환, 장애, 및/또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특징을 부분적으로 또는 완전히 경감하는 것, 개선하는 것, 개량하는 것, 경감하는 것, 그 개시를 지연하는 것, 그 진행을 억제하는 것, 그 중증도를 감소시키는 것, 및/또는 그 발병률을 감소시키는 것을 지칭한다. 예를 들어, 암을 "치료하는 것"은 종양의 생존, 성장, 및/또는 확산을 억제하는 것을 지칭할 수 있다. 치료는 질환, 장애, 및/또는 병태의 징후를 나타내지 않는 대상체 및/또는 질환, 장애, 및/또는 병태의 단지 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 질환, 장애, 및/또는 병태와 연관된 병리학을 전개할 위험을 감소시킬 목적으로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "제타 전위"는, 예를 들어, 입자 조성물에서, 지질의 계면동전기 전위이다.
나노입자 조성물
본 개시내용은 또한, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 지질 성분을 포함하는 나노입자 조성물을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 나노입자 조성물의 최대 치수는 예를 들어, 동적 광 산란 (DLS), 투과 전자 현미경검사, 주사 전자 현미경검사, 또는 또 다른 방법으로 측정시, 1 μm 이하 (예를 들어, 1 μm, 900 nm, 800 nm, 700 nm, 600 nm, 500 nm, 400 nm, 300 nm, 200 nm, 175 nm, 150 nm, 125 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm, 또는 더 짧은)이다. 나노입자 조성물은 예를 들어, 지질 나노입자 (LNP), 리포좀, 지질 소포, 및 리포플렉스를 포함한다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물은 하나 이상의 지질 이중층을 포함하는 소포이다. 특정 구현예에서, 나노입자 조성물은 수성 구획에 의해 분리된 2개 이상의 동심성 이중층을 포함한다. 지질 이중층은 작용화되고/거나 서로 가교결합될 수 있다. 지질 이중층은 하나 이상의 리간드, 단백질, 또는 채널을 포함할 수 있다.
나노입자 조성물은 적어도 하나의 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 지질 성분을 포함한다. 예를 들어, 나노입자 조성물의 지질 성분은 화합물 1-280 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 나노입자 조성물은 또한, 다양한 다른 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 나노입자 조성물의 지질 성분은 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질 외의 하나 이상의 다른 지질을 포함할 수 있다.
양이온성/이온화가능 지질
나노입자 조성물은 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질 외에 하나 이상의 양이온성 및/또는 이온화가능 지질 (예를 들어, 생리적 pH에서 양전하 또는 부분적인 양전하를 가질 수 있는 지질)를 포함할 수 있다. 양이온성 및/또는 이온화가능 지질은 하기로 구성된 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다: 3-(디도데실아미노)-N1,N1,4-트리도데실-1-피페라진에탄아민 (KL10), N1-[2-(디도데실아미노)에틸]-N1,N4,N4-트리도데실-1,4-피페라진디에탄아민 (KL22), 14,25-디트리데실-15,18,21,24-테트라아자-옥타트리아콘탄 (KL25), 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판 (DLin-DMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-K-DMA), 헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(디메틸아미노)부타노에이트 (DLin-MC3-DMA), 2,2-디리놀레일-4-(2-디메틸아미노에틸)-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 1,2-디올레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판 (DODMA), 2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2R)), 및 (2S)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2S)). 이들 외에, 양이온성 지질은 또한, 환형 아민 기를 포함하는 지질일 수 있다.
PEG 지질
나노입자 조성물의 지질 성분은 하나 이상의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 포함할 수 있다. 그와 같은 종은 대안적으로 페길화된 지질로 칭할 수 있다. PEG 지질은 폴리에틸렌 글리콜로 변형된 지질이다. PEG 지질은 하기로 구성된 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다: PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형된 포스파티드산, PEG-변형된 세라미드 (PEG-CER), PEG-변형된 디알킬아민, PEG-변형된 디아실글리세롤 (PEG-DEG), PEG-변형된 디알킬글리세롤, 및 이들의 혼합물. 예를 들어, PEG 지질은 PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC, 또는 PEG-DSPE 지질일 수 있다.
구조 지질
나노입자 조성물의 지질 성분은 하나 이상의 구조 지질을 포함할 수 있다. 구조 지질은 비제한적으로, 하기로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다: 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라씨카스테롤, 토마티딘, 토마틴, 우르솔산, 알파-토코페롤, 및 이들의 혼합물. 일부 구현예에서, 구조 지질은 콜레스테롤이다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 콜레스테롤 및 코르티코스테로이드 (예컨대 프레드니솔론, 덱사메타손, 프레드니손, 및 하이드로코르티손), 또는 이들의 조합을 포함한다.
인지질
나노입자 조성물의 지질 성분은 하나 이상의 인지질, 예컨대 하나 이상의 (폴리)불포화된 지질을 포함할 수 있다. 인지질은 하나 이상의 지질 이중층에 조립될 수 있다. 일반적으로, 인지질은 포스포지질 모이어티 및 하나 이상의 지방산 모이어티을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인지질은 식 (IV)에 따른 지질일 수 있다:
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식 중, Rp는 포스포지질 모이어티를 나타내고, 그리고 R1 및 R2는 동일 또는 상이할 수 있는 불포화를 갖거나 갖지 않는 지방산 모이어티를 나타낸다. 포스포지질 모이어티는 하기로 구성된 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다: 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜 세린, 포스파티드산, 2-라이소포스파티딜 콜린, 및 스핑고미엘린. 지방산 모이어티는 하기로 구성된 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다: 라우르산, 미리스트산, 미리스트올레산, 팔미트산, 팔미톨레산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 알파-리놀렌산, 에루스산, 파이탄산, 아라키드산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산, 베헨산, 도코사펜타엔산, 및 도코사헥사엔산. 분지화, 산화, 고리화, 및 알킨을 포함하는 변형 및 치환을 갖는 천연 종을 포함하는 비-천연 종이 또한 고려된다. 예를 들어, 인지질은 하나 이상의 알킨 (예를 들어, 하나 이상의 이중 결합이 삼중 결합으로 대체된 알케닐 기)로 작용화될 수 있거나 그것에 가교결합될 수 있다. 적절한 반응 조건 하에서, 알킨 기는 아자이드에 노출시 구리-촉매접촉된 고리화부가를 겪을 수 있다. 그와 같은 반응은 촉진하다 막 침투 또는 세포 인식을 촉진하기 위해 나노입자 조성물의 지질 이중층을 작용화하거나 또는 나노입자 조성물을 유용한 성분 예컨대 표적화 또는 이미지형성 모이어티 (예를 들어, 염료)에 접합시키는데 유용할 수 있다.
조성물 및 방법에서 유용한 인지질은 하기로 구성된 비제한적인 군로부터 선택될 수 있다: 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DSPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (DOPE), 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DLPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-포스포콜린 (DMPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DOPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DPPC), 1,2-di운데카노일-sn-글리세로-포스포콜린 (DUPC), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (POPC), 1,2-디-O-옥타데세닐-sn-글리세로-3-포스포콜린 (18:0 디에테르 PC), 1-올레오일-2-콜레스테릴헤미석시노일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (OChemsPC), 1-헥사데실-sn-글리세로-3-포스포콜린 (C16 Lyso PC), 1,2-딜리노레노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디파이타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (ME 16.0 PE), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-딜리노레노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-rac-(1-글리세롤) 나트륨 염 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤 (DPPG), 팔미토일올레오일포스파티딜에탄올아민 (POPE), 디스테아로일-포스파티딜-에탄올아민 (DSPE), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민 (DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민 (DMPE), 1-스테아로일-2-올레오일-포스파티딜에탄올아민 (SOPE), 1-스테아로일-2-올레오일-포스파티딜콜린 (SOPC), 스핑고미엘린, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티드산, 팔미토일올레오일 포스파티딜콜린, 라이소포스파티딜콜린, 라이소포스파티딜에탄올아민 (LPE), 및 이들의 혼합물. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물은 DSPC를 포함한다. 특정 구현예에서, 나노입자 조성물은 DOPE를 포함한다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물은 DSPC 및 DOPE 둘 모두를 포함한다.
아쥬반트
일부 구현예에서, 하나 이상의 본 명세서에 기재된 지질을 포함하는 나노입자 조성물은 추가로, 하나 이상의 아쥬반트, 예를 들어, 글루코피라노실 지질 아쥬반트 (GLA), CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드 (예를 들어, 부류 A 또는 B), 폴리(I:C), 알루미늄 하이드록사이드, 및 Pam3CSK4을 포함할 수 있다.
치료제
나노입자 조성물은 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함알 수 있다. 본 개시내용은 치료제 및/또는 예방제를 포유동물 세포 또는 장기에 전달하고, 포유동물 세포에서 관심 폴리펩타이드를 생산하고, 그리고 치료가 필요한 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물을 투여하고/거나 포유동물 세포를 상기 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다.
치료제 및/또는 예방제는 생물학적 활성 서브스턴스를 포함하고 대안적으로 "활성제"로 칭한다. 치료제 및/또는 예방제는 세포 또는 장기에 전달될 때, 세포, 장기, 또는 다른 신체 조직 또는 계에서 바람직한 변화를 이끄는 서브스턴스일 수 있다. 그와 같은 종은 하나 이상의 질환, 장애, 또는 병태의 치료에 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 특정 질환, 장애, 또는 병태의 치료에 유용한 소분자 약물이다. 나노입자 조성물에서 유용한 약물의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 항신생물성 제제 (예를 들어, 빈크리스틴, 독소루비신, 미톡산트론, 캄프토테신, 시스플라틴, 블레오마이신, 사이클로포스파마이드, 메토트렉세이트, 및 스트렙토조토신), 항종양 제제 (예를 들어, 악티노마이신 D, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 사이토신 아라비노시드, 안트라사이클린, 알킬화제, 백금 화합물, 항대사물질, 및 뉴클레오사이드 유사체, 예컨대 메토트렉세이트 및 퓨린 및 피리미딘 유사체), 항-감염제, 국소 마취제 (예를 들어, 디부카인 및 클로르프로마진), 베타-아드레날린 차단제 (예를 들어, 프로프라놀롤, 티몰롤, 및 라베탈롤), 혈압강하 제제 (예를 들어, 클로니딘 및 하이드랄라진), 항우울제 (예를 들어, 이미프라민, 아미트립틸린, 및 독세핀), 항경련제 (예를 들어, 페나이토인), 항히스타민제 (예를 들어, 디펜히드라민, 클로르페니라민, 및 프로메타진), 항생제/항균제 (예를 들어, 겐타마이신, 시프로플록사신, 및 세폭시틴), 항진균제 (예를 들어, 미코나졸, 테르코나졸, 에코나졸, 이소코나졸, 부타코나졸, 클로트리마졸, 이트라코나졸, 나이스타틴, 나프티핀, 및 암포테리신 B), 항기생충제, 호르몬, 호르몬 길항제, 면역조절물질, 신경전달물질 길항제, 항녹내장 제제, 비타민, 마약, 및 조영제.
일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 세포독소, 방사성 이온, 화학치료제, 백신, 면역 반응을 유도하는 화합물, 및/또는 또 다른 치료제 및/또는 예방제이다. 세포독소 또는 세포독성 약물은 세포에 해로울 수 있는 임의의 제제를 포함한다. 그 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 탁솔, 사이코칼라신 B, 그라마이시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테니포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시안트라신디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 메이탄시노이드, 예를 들어, 메이탄시놀, 라첼마이신 (CC-1065), 및 이의 유사체 또는 동족체. 방사성 이온은, 비제한적으로 요오드 (예를 들어, 요오드 125 또는 요오드 131), 스트론튬 89, 인, 팔라듐, 세슘, 이리듐, 포스페이트, 코발트, 이트륨 90, 사마륨 153, 및 프라세오디뮴을 포함한다. 백신은 감염성 질환 예컨대 인플루엔자, 홍역, 인간 파필로마바이러스 (HPV), 광견병, 수막염, 백일해, 테타누스독소증, 흑사병, 간염, 및 결핵과 관련된 하나 이상의 병태에 대항하여 면역력을 제공할 수 있는 화합물 및 제제를 포함하고, 그리고 감염성 질환 유래된 항원 및/또는 에피토프를 인코딩하는 mRNA를 포함할 수 있다. 백신은 또한 암 세포에 대항하여 면역 반응을 유도하는 화합물 및 제제를 포함하고 종양 세포 유래된 항원, 에피토프, 및/또는 네오에피토프를 인코딩하는 mRNA를 포함할 수 있다. 면역 반응을 유도하는 화합물은 백신, 코르티코스테로이드 (예를 들어, 덱사메타손), 및 다른 종을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 반응을 투요할 수 있는 백신 및/또는 화합물은 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물 (예를 들어, 화합물 3, 18, 20, 25, 26, 29, 30, 60, 108-112, 또는 122)을 포함하는 조성물을 통해 근육내로 투여된다. 다른 치료제 및/또는 예방제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 항대사물질 (예를 들어, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 사이타라빈, 5-플루오로우라실 데카바진), 알킬화제 (예를 들어, 메클로르에타민, 티오테파 클로르암부실, 라첼마이신 (CC-1065), 멜팔란, 카무스틴 (BSNU), 로무스틴 (CCNU), 사이클로포스파마이드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민 백금 (II) (DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린 (예를 들어, 다우노루비신 (예전에 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제 (예를 들어, 닥티노마이신 (예전에 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신 (AMC)), 및 항-유사분열 제제 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 탁솔 및 메이탄시노이드).
다른 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 단백질이다. 본 개시내용의 나노입자에서 유용한 치료적 단백질은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 겐타마이신, 아미카신, 인슐린, 에리트로포이에틴 (EPO), 과립구-집락 자극 인자 (G-CSF), 과립구-대식세포 집락 자극 인자 (GM-CSF), 인자 VIR, 황체형성 호르몬-방출 호르몬 (LHRH) 유사체, 인터페론, 헤파린, 간염 B 표면 항원, 장티푸스 백신, 및 콜레라 백신.
폴리뉴클레오타이드 및 핵산
일부 구현예에서, 치료제는 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산 (예를 들어, 리보핵산 또는 데옥시리보핵산)이다. 가장 넓은 의미로 용어 "폴리뉴클레오타이드"는 올리고뉴클레오타이드 사슬이거나 그것에 편입될 수 있는 임의의 화합물 및/또는 서브스턴스를 포함한다. 본 개시내용에 따라 사용되는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 는, 비제한적으로, 데옥시리보핵산 (DNA), 메신저 mRNA (mRNA)를 포함하는 리보핵산 (RNA), 그의 하이브리드, RNAi-유도제, RNAi 제제, siRNA, shRNA, miRNA, 안티센스 RNA, 리보자임, 촉매적 DNA, 삼중 나선 형성을 유도하는 RNA, 압타머, 벡터 등 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 RNA이다. 본 명세서에서 기재된 조성물 및 방법에서 유용한 RNA는 비제한적으로, 쇼트머, 안타고미르, 안티센스, 리보자임, 작은 간섭 RNA (siRNA), 비대칭 간섭 RNA (aiRNA), microRNA (miRNA), 다이서-기질 RNA (dsRNA), 작은 헤어핀 RNA (shRNA), 전사 RNA (tRNA), 메신저 RNA (mRNA), 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, RNA는 mRNA이다.
특정 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 mRNA이다. mRNA는 임의의 자연 또는 비-자연 발생 또는 달리 변형된 폴리펩타이드를 포함하는 임의의 관심 폴리펩타이드를 인코딩할 수 있다. mRNA에 의해 인코딩된 폴리펩타이드는 임의의 크기일 수 있고, 임의의 이차 구조 또는 활성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA에 의해 인코딩된 폴리펩타이드는 세포에서 발현될 때, 치료 효과를 가질 수 있다.
다른 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 siRNA이다. siRNA는 관심 유전자의 발현을 선택적으로 노킹하거나 조절할 수 있다. 예를 들어, siRNA는 siRNA를 포함하는 나노입자 조성물의 그것을 필요로 하는 대상체에의 투여시, 특정 질환, 장애, 또는 병태와 연관된 유전자를 침묵하도록 선택될 수 있다. siRNA는 관심 유전자 또는 단백질은 인코딩하는 mRNA 서열에 대해 상보적인 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, siRNA는 면역조절 siRNA일 수 있다.
특정 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 sgRNA 및/또는 cas9 mRNA이다. sgRNA 및/또는 cas9 mRNA는 유전자 편집 툴로서 사용될 수 있다. 예를 들어, sgRNA-cas9 복합체는 세포 유전자의 mRNA 번역에 영향을 줄 수 있다.
일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 shRNA 또는 이를 인코딩하는 벡터 또는 플라스미드이다. shRNA는 적절한 작제물의 핵에의 전달시 표적 세포 내부에서 생산될 수 있다. shRNA에 관련된 작제물 및 기전은 관련 기술에 잘 알려져 있다.
본 개시내용에서 유용한 핵산 및 폴리뉴클레오타이드는 전형적으로 관심 폴리펩타이드를 인코딩하는 연결된 뉴클레오사이드의 제1 영역 (예를 들어, 코딩 영역), 제1 영역의 5'-말단 (예를 들어, 5'-UTR)에 위치한 제1 측접 영역, 제1 영역의 3'-말단 (예를 들어, 3'-UTR)에 위치한 제2 측접 영역, 적어도 하나의 5'-캡 영역, 및 3'-안정화 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드는 추가로, (예를 들어, 5'-UTR에서) 폴리-A 영역 또는 코작 서열을 포함한다. 일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드를 절단할 수 있는 하나 이상의 인트론 뉴클레오타이드 서열을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산 (예를 들어, mRNA)는 5' 캡 구조, 사슬 종결 뉴클레오타이드, 스템 루프, polyA 서열, 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. 핵산의 영역 중 임의의 하나는 하나 이상의 대안적인 성분 (예를 들어, 대안적인 뉴클레오사이드)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 3'-안정화 영역은 contain 대안적인 뉴클레오사이드 예컨대 L-뉴클레오사이드, 역전된 티미딘, 또는 2'-O-메틸 뉴클레오사이드를 포함할 수 있고/거나 코딩 영역, 5'-UTR, 3'-UTR, 또는 캡 영역은 대안적인 뉴클레오사이드 예컨대 5-치환된 우리딘 (예를 들어, 5-메톡시우리딘), 1-치환된 슈도우리딘 (예를 들어, 1-메틸-슈도우리딘 또는 1-에틸-슈도우리딘), 및/또는 5-치환된 시티딘 (예를 들어, 5-메틸-시티딘)을 포함할 수 있다.
일반적으로, 폴리뉴클레오타이드의 가장 짧은 길이는 디펩타이드를 인코딩하는데 충분한 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이이다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 트리펩타이드를 인코딩하기에 충분하다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 테트라펩타이드를 인코딩하기에 충분하다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 펜타펩타이드를 인코딩하기에 충분하다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 헥사펩타이드를 인코딩하기에 충분하다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 헵타펩타이드를 인코딩하기에 충분하다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 옥타펩타이드를 인코딩하기에 충분하다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 노나펩타이드를 인코딩하기에 충분하다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 서열의 길이는 데카펩타이드를 인코딩하기에 충분하다.
대안적인 폴리뉴클레오타이드 서열가 인코딩할 수 있는 디펩타이드의 예는, 비제한적으로, 카르노신 및 안세린을 포함한다.
일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드는 30 초과 개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 분자는 35 초과 개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 40개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 45 뉴클레오타이드. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 55 뉴클레오타이드. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 50개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 60개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 80개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 90개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 100개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 120개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 140개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 160개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 180개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 200개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 250개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 300개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 350개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 400개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 450개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 500개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 600개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 700개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 800개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 900개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1000개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1100개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1200개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1300개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1400개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1500개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1600개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1800개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 2000개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 2500개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 3000개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 4000개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 5000개의 뉴클레오타이드, 또는 5000 초과 개의 뉴클레오타이드이다.
핵산 및 폴리뉴클레오타이드는 표준적 뉴클레오타이드 A (아데노신), G (구아노신), C (시토신), U (우리딘), 또는 T (티미딘) 중 임의의 것을 포함하는 하나 이상의 자연 발생 성분을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, (a) 5'-UTR, (b) 열린 해독틀 (ORF), (c) 3'-UTR, (d) 폴리 A 테일, 및 (상기 a, b, c, 또는 d)의 임의의 조합을 포함하는 모든 또는 실질적으로 모든 뉴클레오타이드는 자연 발생 표준적 뉴클레오타이드 A (아데노신), G (구아노신), C (시토신), U (우리딘), 또는 T (티미딘)을 포함한다.
핵산 및 폴리뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드가 도입되는 세포의 타고난 면역 반응의 증가된 안정성 및/또는 실질적인 유도의 결여를 포함하는 유용한 특성을 부여하는, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 하나 이상의 대안적인 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 대안적인 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산은, 상응하는 변경된 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산에 비해 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산이 도입되는 세포에서 감소된 열화를 나타낸다. 이들 대안적인 종은 단백질 생산의 효율, 폴리뉴클레오타이드의 세포내 체류, 및/또는 접촉된 세포의 생존력, 뿐만 아니라 과정 감소된 면역원성을 향상시킬 수 있다.
폴리뉴클레오타이드 및 핵산은 자연 또는 비-자연 발생일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 및 핵산은 하나 이상의 변형된 (예를 들어, 변경된 또는 대안적인) 핵염기, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 나노입자 조성물에서 유용한 핵산 및 폴리뉴클레오타이드는 예컨대 핵염기, 당, 또는 뉴클레오사이드간 연결 (예를 들어, 연결 포스페이트 / 포스포디에스테르 결합 / 포스포디에스테르 백본에 대한) 임의의 유용한 변형 또는 변경을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 변경 (예를 들어, 하나 이상의 변경)은 각각의 핵염기, 당, 및 뉴클레오사이드간 연결에 존재한다. 본 개시내용에 따른 변경은 리보핵산 (RNA)의 데옥시리보핵산 (DNA)로의 변경, 예를 들어, 리보푸라노실 고리의, 2'-OH 내지 2'-H, 트레오스 핵산 (TNAs), 글리콜 핵산 (GNAs), 펩타이드 핵산 (PNAs), 잠금 핵산 (LNAs), 또는 이의 하이브리드로의 치환일 수 있다. 추가의 변경은 본 명세서에 기재되어 있다.
폴리뉴클레오타이드 및 핵산은 분자의 전장을 따라 균일하게 변경되거나 그렇지 않을 수 있다. 예를 들어, 하나 이상 또는 모든 유형의 뉴클레오타이드 (예를 들어, 퓨린 또는 피리미딘, 또는 A, G, U, C 중 임의의 하나 이상 또는 모두)는 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산에서, 또는 그것의 주어진 사전결정된 서열 영역에서 균일하게 변경될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 일부 사례에서, 폴리뉴클레오타이드에서 (또는 그것의 주어진 서열 영역에서의) 모든 뉴클레오타이드 X는 변경되되, 상기 X는 뉴클레오타이드 A, G, U, C 중 임의의 하나, 또는 조합 A+G, A+U, A+C, G+U, G+C, U+C, A+G+U, A+G+C, G+U+C 또는 A+G+C 중 임의의 하나일 수 있다.
상이한 당 변경 및/또는 뉴클레오사이드간 연결기 (예를 들어, 백본 구조)는 폴리뉴클레오타이드 내의 다양한 위치에 존재할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는, 뉴클레오타이드 유사체 또는 다른 변경(들)는 폴리뉴클레오타이드의 임의의 위치(들)에서 위치할 수 있어서, 폴리뉴클레오타이드의 기능이 실질적으로 줄어들지 않음을 인정할 것이다. 변경은 또한, 5' 또는 3'-말단 변경일 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 3'-말단에서의 변경을 포함한다. 폴리뉴클레오타이드는 하기를 함유할 수 있다: 약 1% 내지 약 100% 대안적인 뉴클레오타이드 (전체적인 뉴클레오타이드 함량과 관련하거나, 또는 뉴클레오타이드의 하나 이상의 유형, 즉, A, G, U 또는 C 중 임의의 1개 이상과 관련하여) 또는 임의의 개재 백분율 (예를 들어, 1% 내지 20%, 1% 내지 25%, 1% 내지 50%, 1% 내지 60%, 1% 내지 70%, 1% 내지 80%, 1% 내지 90%, 1% 내지 95%, 10% 내지 20%, 10% 내지 25%, 10% 내지 50%, 10% 내지 60%, 10% 내지 70%, 10% 내지 80%, 10% 내지 90%, 10% 내지 95%, 10% 내지 100%, 20% 내지 25%, 20% 내지 50%, 20% 내지 60%, 20% 내지 70%, 20% 내지 80%, 20% 내지 90%, 20% 내지 95%, 20% 내지 100%, 50% 내지 60%, 50% 내지 70%, 50% 내지 80%, 50% 내지 90%, 50% 내지 95%, 50% 내지 100%, 70% 내지 80%, 70% 내지 90%, 70% 내지 95%, 70% 내지 100%, 80% 내지 90%, 80% 내지 95%, 80% 내지 100%, 90% 내지 95%, 90% 내지 100%, 및 95% 내지 100%). 임의의 나머지 백분율이 정식 뉴클레오타이드 (예를 들어, A, G, U, 또는 C)의 존재에 의해 설명됨을 이해할 것이다.
폴리뉴클레오타이드는 최소 제로 및 최대 100%로 대안적인 뉴클레오타이드, 또는 임의의 개재 백분율, 예컨대 적어도 5% 대안적인 뉴클레오타이드, 적어도 10% 대안적인 뉴클레오타이드, 적어도 25% 대안적인 뉴클레오타이드, 적어도 50% 대안적인 뉴클레오타이드, 적어도 80% 대안적인 뉴클레오타이드, 또는 적어도 90% 대안적인 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 대안적인 피리미딘 예컨대 대안적인 우라실 또는 시토신을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 중 우라실의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100%는 대안적인 우라실 (예를 들어, 5-치환된 우라실)로 대체된다. 대안적인 우라실은 단일 독특한 구조를 갖는 화합물에 의해 대체될 수 있나, 상이한 구조 (예를 들어, 2, 3, 4 또는 그 초과 독특한 구조)를 갖는 복수의 화합물에 의해 대체될 수 있다. 일부 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 중 시토신의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100%는 대안적인 시토신 (예를 들어, 5-치환된 시토신)으로 대체된다. 대안적인 시토신은 단일 독특한 구조를 갖는 화합물에 의해 대체될 수 있거나, 또는 상이한 구조 (예를 들어, 2, 3, 4 또는 그 초과 독특한 구조)를 갖는 복수의 화합물에 의해 대체될 수 있다.
일부 사례에서, 핵산은 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)가 도입되는 세포의 타고난 면역 반응을 실질적으로 유도하지 않는다. 유도된 타고난 면역 반응의 특징은 하기를 포함한다: 1) 전-염증 사이토카인의 증가된 발현, 2) 세포내 PRRs (RIG-I, MDA5, 등, 및/또는 3) 종결의 활성화, 또는 단백질 번역의 감소.
핵산은 선택적으로 다른 제제 (예를 들어, RNAi-유도제, RNAi 제제, siRNA, shRNA, miRNA, 안티센스 RNA, 리보자임, 촉매적 DNA, tRNA, 삼중 나선 형성을 유도하는 RNA, 압타머, 벡터)를 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산은 하나 이상의 대안적인 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드 (즉, 대안적인 mRNA 분자)를 갖는 하나 이상의 메신저 RNA (mRNA)를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 핵산 (예를 들어 mRNA) 분자, 식, 조성물 또는 그것과 연관된 방법은 하기에 기재된 특징을 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함한다: WO2002/098443, WO2003/051401, WO2008/052770, WO2009127230, WO2006122828, WO2008/083949, WO2010088927, WO2010/037539, WO2004/004743, WO2005/016376, WO2006/024518, WO2007/095976, WO2008/014979, WO2008/077592, WO2009/030481, WO2009/095226, WO2011069586, WO2011026641, WO2011/144358, WO2012019780, WO2012013326, WO2012089338, WO2012113513, WO2012116811, WO2012116810, WO2013113502, WO2013113501, WO2013113736, WO2013143698, WO2013143699, WO2013143700, WO2013/120626, WO2013120627, WO2013120628, WO2013120629, WO2013174409, WO2014127917, WO2015/024669, WO2015/024668, WO2015/024667, WO2015/024665, WO2015/024666, WO2015/024664, WO2015101415, WO2015101414, WO2015024667, WO2015062738, WO2015101416 (이들 모두는 본 명세서에 참고로 편입됨).
핵염기 대안
대안적인 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 대안적인 핵염기를 포함할 수 있다. 핵산의 핵염기는 유기 염기 예컨대 퓨린 또는 피리미딘 또는 이의 유도체이다. 핵염기는 표준 염기 (예를 들어, 아데닌, 구아닌, 우라실, 티민, 및 시토신)일 수 있다. 이들 핵염기는 향상된 특성, 예를 들어, 증가된 안정성 예컨대 뉴클레아제에 대한 내성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 분자를 제공하도록 변경되거나 전체적으로 대체될 수 있다. 비-표준적 또는 변형된 염기는, 예를 들어, 비제한적으로 알킬, 아릴, 할로, 옥소, 하이드록실, 알킬옥시, 및/또는 티오 치환을 포함하는 하나 이상의 치환 또는 변형; 하나 이상의 융합된 또는 개방 고리; 산화; 및/또는 환원을 포함할 수 있다.
대안적인 뉴클레오타이드 염기 짝짓기는 표준 아데닌-티민, 아데닌-우라실, 또는 구아닌-시토신 염기쌍, 뿐만 아니라 비-표준 또는 대안적인 염기를 포함하는 뉴클레오타이드 및/또는 대안적인 뉴클레오타이드 사이에 형성된 염기쌍을 포괄하고, 수소 결합 공여체 및 수소 결합 수용체의 배열은 비-표준 염기과 표준 염기 사이 또는 2개의 상보적 비-표준 기본 구조 사이의 수소 결합을 허용한다. 그와 같은 비-표준 염기 짝짓기의 하나의 예는 대안적인 뉴클레오타이드 이노신과 아데닌, 시토신, 또는 우라실 사이의 염기 짝짓기이다.
일부 구현예에서, 핵염기는 대안적인 우라실이다. 대안적인 우라실을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 슈도우리딘 (Ψ), 피리딘-4-온 리보뉴클레오사이드, 5-아자-우라실, 6-아자-우라실, 2-티오-5-아자-우라실, 2-티오-우라실 (s2U), 4-티오-우라실 (s4U), 4-티오-슈도우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 5-하이드록시-우라실 (ho5U), 5-아미노알릴-우라실, 5-할로-우라실 (예를 들어, 5-아이오도-우라실 또는 5-브로모-우라실), 3-메틸-우라실 (m3U), 5-메톡시-우라실 (mo5U), 우라실 5-옥시아세트산 (cmo5U), 우라실 5-옥시아세트산 메틸 에스테르 (mcmo5U), 5-카복시메틸-우라실 (cm5U), 1-카복시메틸-슈도우리딘, 5-카복시하이드록시메틸-우라실 (chm5U), 5-카복시하이드록시메틸-우라실 메틸 에스테르 (mchm5U), 5-메톡시카보닐메틸-우라실 (mcm5U), 5-메톡시카보닐메틸-2-티오-우라실 (mcm5s2U), 5-아미노메틸-2-티오-우라실 (nm5s2U), 5-메틸아미노메틸-우라실 (mnm5U), 5-메틸아미노메틸-2-티오-우라실 (mnm5s2U), 5-메틸아미노메틸-2-셀레노-우라실 (mnm5se2U), 5-카바모일메틸-우라실 (ncm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-우라실 (cmnm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오-우라실 (cmnm5s2U), 5-프로피닐-우라실, 1-프로피닐-슈도우라실, 5-타우리노메틸-우라실 (τm5U), 1-타우리노메틸-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-2-티오-우라실(τm5s2U), 1-타우리노메틸-4-티오-슈도우리딘, 5-메틸-우라실 (즉, 핵염기 데옥시티민을 갖는 m5U), 1-메틸-슈도우리딘 (m1Ψ), 1-에틸-슈도우리딘 (Et1ψ), 5-메틸-2-티오-우라실 (m5s2U), 1-메틸-4-티오-슈도우리딘 (m1s4Ψ), 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 3-메틸-슈도우리딘 (m3ψ), 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 디하이드로우라실 (D), 디하이드로슈도우리딘, 5,6-디하이드로우라실, 5-메틸-디하이드로우라실 (m5D), 2-티오-디하이드로우라실, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-메톡시-우라실, 2-메톡시-4-티오-우라실, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, N1-메틸-슈도우리딘, 3-(3-아미노-3-카복시프로필)우라실 (acp3U), 1-메틸-3-(3-아미노-3-카복시프로필)슈도우리딘 (acp3 ψ), 5-(이소펜테닐아미노메틸)우라실 (inm5U), 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2-티오-우라실 (inm5s2U), 5, 2'-O-디메틸-우리딘 (m5Um), 2-티오-2'-O_메틸-우리딘 (s2Um), 5-메톡시카보닐메틸-2'-O-메틸-우리딘 (mcm5Um), 5-카바모일메틸-2'-O-메틸-우리딘 (ncm5Um), 5-카복시메틸아미노메틸-2'-O-메틸-우리딘 (cmnm5Um), 3,2'-O-디메틸-우리딘 (m3Um), 및 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2'-O-메틸-우리딘 (inm5Um), 1-티오-우라실, 데옥시티미딘, 5-(2-카보메톡시비닐)-우라실, 5-(카바모일하이드록시메틸)-우라실, 5-카바모일메틸-2-티오-우라실, 5-카복시메틸-2-티오-우라실, 5-시아노메틸-우라실, 5-메톡시-2-티오-우라실, 및 5-[3-(1-E-프로페닐아미노)]우라실.
일부 구현예에서, 핵염기는 대안적인 시토신이다. 대안적인 시토신을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 5-아자-시토신, 6-아자-시토신, 슈도이소시티딘, 3-메틸-시토신 (m3C), N4-아세틸-시토신 (ac4C), 5-포르밀-시토신 (f5C), N4-메틸-시토신 (m4C), 5-메틸-시토신 (m5C), 5-할로-시토신 (예를 들어, 5-아이오도-시토신), 5-하이드록시메틸-시토신 (hm5C), 1-메틸-슈도이소시티딘, 피롤로-시토신, 피롤로-슈도이소시티딘, 2-티오-시토신 (s2C), 2-티오-5-메틸-시토신, 4-티오-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 제불라린, 5-아자-제불라린, 5-메틸-제불라린, 5-아자-2-티오-제불라린, 2-티오-제불라린, 2-메톡시-시토신, 2-메톡시-5-메틸-시토신, 4-메톡시-슈도이소시티딘, 4-메톡시-1-메틸-슈도이소시티딘, 라이시딘 (k2C), 5,2'-O-디메틸-시티딘 (m5Cm), N4-아세틸-2'-O-메틸-시티딘 (ac4Cm), N4,2'-O-디메틸-시티딘 (m4Cm), 5-포르밀-2'-O-메틸-시티딘 (f5Cm), N4,N4,2'-O-트리메틸-시티딘 (m42Cm), 1-티오-시토신, 5-하이드록시-시토신, 5-(3-아지도프로필)-시토신, 및 5-(2-아지도에틸)-시토신.
일부 구현예에서, 핵염기는 대안적인 아데닌이다. 대안적인 아데닌를 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 2-아미노-퓨린, 2,6-디아미노퓨린, 2-아미노-6-할로-퓨린 (예를 들어, 2-아미노-6-클로로-퓨린), 6-할로-퓨린 (예를 들어, 6-클로로-퓨린), 2-아미노-6-메틸-퓨린, 8-아지도-아데닌, 7-데아자-아데닌, 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-8-아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-2,6-디아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2,6-디아미노퓨린, 1-메틸-아데닌 (m1A), 2-메틸-아데닌 (m2A), N6-메틸-아데닌 (m6A), 2-메틸티오-N6-메틸-아데닌 (ms2m6A), N6-이소펜테닐-아데닌 (i6A), 2-메틸티오-N6-이소펜테닐-아데닌 (ms2i6A), N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데닌 (io6A), 2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데닌 (ms2io6A), N6-글라이시닐카바모일-아데닌 (g6A), N6-트레오닐카바모일-아데닌 (t6A), N6-메틸-N6-트레오닐카바모일-아데닌 (m6t6A), 2-메틸티오-N6-트레오닐카바모일-아데닌 (ms2g6A), N6,N6-디메틸-아데닌 (m62A), N6-하이드록시노르발릴카바모일-아데닌 (hn6A), 2-메틸티오-N6-하이드록시노르발릴카바모일-아데닌 (ms2hn6A), N6-아세틸-아데닌 (ac6A), 7-메틸-아데닌, 2-메틸티오-아데닌, 2-메톡시-아데닌, N6,2'-O-디메틸-아데노신 (m6Am), N6,N6,2'-O-트리메틸-아데노신 (m62Am), 1,2'-디메틸-아데노신 (m1Am), 2-아미노-N6-메틸-퓨린, 1-티오-아데닌, 8-아지도-아데닌, N6-(19-아미노-펜타옥사노나데실)-아데닌, 2,8-디메틸-아데닌, N6-포르밀-아데닌, 및 N6-하이드록시메틸-아데닌.
일부 구현예에서, 핵염기는 대안적인 구아닌이다. 대안적인 구아닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 이노신 (I), 1-메틸-이노신 (m1I), 와이오신 (imG), 메틸와이오신 (mimG), 4-데메틸-와이오신 (imG-14), 이소와이오신 (imG2), 와이부토신 (yW), 퍼옥시와이부토신 (o2yW), 하이드록시와이부토신 (OHyW), 미변형 하이드록시와이부토신 (OHyW*), 7-데아자-구아닌, 퀘우오신 (Q), 에폭시퀘우오신 (oQ), 갈락토실-퀘우오신 (galQ), 만노실-퀘우오신 (manQ), 7-시아노-7-데아자-구아닌 (preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아닌 (preQ1), 아케오신 (G+), 7-데아자-8-아자-구아닌, 6-티오-구아닌, 6-티오-7-데아자-구아닌, 6-티오-7-데아자-8-아자-구아닌, 7-메틸-구아닌 (m7G), 6-티오-7-메틸-구아닌, 7-메틸-이노신, 6-메톡시-구아닌, 1-메틸-구아닌 (m1G), N2-메틸-구아닌 (m2G), N2,N2-디메틸-구아닌 (m22G), N2,7-디메틸-구아닌 (m2,7G), N2, N2,7-디메틸-구아닌 (m2,2,7G), 8-옥소-구아닌, 7-메틸-8-옥소-구아닌, 1-메틸-6-티오-구아닌, N2-메틸-6-티오-구아닌, N2,N2-디메틸-6-티오-구아닌, N2-메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m2Gm), N2,N2-디메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m22Gm), 1-메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m1Gm), N2,7-디메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m2,7Gm), 2'-O-메틸-이노신 (Im), 1, 2'-O-디메틸-이노신 (m1Im), 1-티오-구아닌, 및 O-6-메틸-구아닌.
뉴클레오타이드의 대안적인 핵염기는 독립적으로 퓨린, 피리미딘, 퓨린 또는 피리미딘 유사체일 수 있다. 예를 들어, 핵염기는 아데닌, 시토신, 구아닌, 우라실, 또는 하이포잔틴의 대안일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 핵염기는 또한, 예를 들어, 하기를 포함하는 염기의 자연 발생 및 합성 유도체를 포함할 수 있다: 피라졸로[3,4-d]피리미딘, 5-메틸시토신 (5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-프로피닐 우라실 및 시토신, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로 (예를 들어, 8-브로모), 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록시 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 데아자구아닌, 7-데아자구아닌, 3-데아자구아닌, 데아자아데닌, 7-데아자아데닌, 3-데아자아데닌, 피라졸로[3,4-d]피리미딘, 이미다조[1,5-a]1,3,5 트리아지논, 9-데아자퓨린, 이미다조[4,5-d]피라진, 티아졸로[4,5-d]피리미딘, 피라진-2-온, 1,2,4-트리아진, 피리다진; 또는 1,3,5 트리아진. 뉴클레오타이드가 속기 A, G, C, T 또는 U를 사용하여 묘사될 때, 각각의 문자는 대표적인 염기 및/또는 이의 유도체를 지칭하고, 예를 들어, A는 아데닌 또는 아데닌 유사체, 예를 들어, 7-데아자 아데닌)를 포함한다.
당에 대한 변경
뉴클레오사이드는 당 분자 (예를 들어, 5-탄소 또는 6-탄소 당질, 예컨대 펜토스, 리보오스, 아라비노오스, 자일로스, 글루코스, 갈락토스, 또는 이의 데옥시 유도체)를 핵염기와 함께 포함하지만, 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드 및 포스페이트 그룹 또는 대안적인 그룹 (예를 들어, 보라노포스페이트, 티오포스페이트, 셀레노포스페이트, 포스포네이트, 알킬기, 아미데이트, 및 글리세롤)를 함유하는 뉴클레오사이드이다. 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드는 정식 종, 예를 들어, 정식 핵염기, 당, 및, 뉴클레오타이드의 경우, 포스페이트기를 포함하는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드일 수 있거나, 또는 대안적인 뉴클레오사이드 또는 하나 이상의 대안적인 성분을 포함하는 뉴클레오타이드 일 수 있다. 예를 들어, 대안적인 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드의 당에 대해 변경될 수 있다. 일부 구현예에서, 대안적인 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드는 하기의 구조를 포함한다:
Figure pct00101
각각의 식 IV, V, VI 및 VII에서,
각각의 m 및 n은 독립적으로, 정수 0 내지 5이고,
각각의 U 및 U'는 독립적으로, O, S, N(RU)nu, 또는 C(RU)nu이되, nu는 정수 0 내지 2이고, 그리고 각각의 RU는, 독립적으로, H, 할로, 또는 선택적으로 치환된 알킬이고;
각각의 R1', R2', R1", R2", R1, R2, R3, R4, 및 R5는, 독립적으로, 존재할 경우, H, 할로, 하이드록시, 티올, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 알케닐옥시, 선택적으로 치환된 알키닐옥시, 선택적으로 치환된 아미노알콕시, 선택적으로 치환된 알콕시알콕시, 선택적으로 치환된 하이드록시알콕시, 선택적으로 치환된 아미노, 아지도, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아미노알킬, 선택적으로 치환된 아미노알케닐, 선택적으로 치환된 아미노알키닐니거나, 또는 부재하고; R3과 R1', R1", R2', R2", 또는 R5 중 하나 이상의 조합 (예를 들어, R1'과 R3의 조합, R1"과 R3의 조합, R2'과 R3의 조합, R2"와 R3의 조합 또는 R5와 R3의 조합)은 함께 연결되어 선택적으로 치환된 알킬렌 또는 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌을 형성할 수 있고, 그리고, 그것이 부착된 탄소와 함께 합쳐져서, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴 (예를 들어, 이환형, 삼환형, 또는 테트라사이클릭 헤테로사이클릴)을 제공할 수 있고; R5와 R1', R1", R2 ' 또는 R2" 중 하나 이상의 조합 (예를 들어, R1'과 R5의 조합, R1"과 R5의 조합, R2'와 R5의 조합, 또는 R2"와 R5의 조합)은 함께 연결되어 선택적으로 치환된 알킬렌 또는 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌을 형성할 수 있고, 그리고 그것이 부착된 탄소와 함께 합쳐져서, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴 (예를 들어, 이환형, 삼환형, 또는 테트라사이클릭 헤테로사이클릴)을 제공할 수 있고; 그리고 R4와, R1', R1", R2', R2", R3, 또는 R5 중 하나 이상과의 조합은 함께 연결되어 선택적으로 치환된 알킬렌 또는 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌를 형성할 수 있고, 그것이 부착된 탄소화 함께 합쳐져서 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴 (예를 들어, 이환형, 삼환형, 또는 테트라사이클릭 헤테로사이클릴)를 제공할 수 있고; 각각의 m' 및 m"는 독립적으로, 정수 0 내지 3 (예를 들어, 0 내지 2, 0 내지 1, 1 내지 3, 또는 1 내지 2)이고;
각각의 Y1, Y2, 및 Y3은, 독립적으로, O, S, Se, ―NRN1―, 선택적으로 치환된 알킬렌, 또는 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌이되, RN1는 H, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알키닐, 선택적으로 치환된 아릴이거나, 또는 부재하고;
각의 Y4는, 독립적으로, H, 하이드록시, 티올, 보라닐, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알키닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 알케닐옥시, 선택적으로 치환된 알키닐옥시, 선택적으로 치환된 티오알콕시, 선택적으로 치환된 알콕시알콕시, 또는 선택적으로 치환된 아미노이고;
각각의 Y5는, 독립적으로, O, S, Se, 선택적으로 치환된 알킬렌 (예를 들어, 메틸렌), 또는 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌이고; 그리고
B는 변형된 또는 비변형된 핵염기이다.
일부 구현예에서, 2'-하이드록시 그룹 (OH)는 변형되거나 수많은 상이한 치환체로 대체될 수 있다. 2'-위치에서의 예시적인 치환은 비제한적으로, 하기를 포함한다: H, 아지도, 할로 (예를 들어, 플루오로), 선택적으로 치환된 C1-6 알킬 (예를 들어, 메틸); 선택적으로 치환된 C1-6 알콕시 (예를 들어, 메톡시 또는 에톡시); 선택적으로 치환된 C6-10 아릴옥시; 선택적으로 치환된 C3-8 사이클로알킬; 선택적으로 치환된 C6-10 아릴-C1-6 알콕시, 선택적으로 치환된 C1-12 (헤테로사이클릴)옥시; 당 (예를 들어, 리보오스, 펜토스, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 것); 폴리에틸렌글리콜 (PEG), -O(CH2CH2O)nCH2CH2OR (여기서, R은 H 또는 선택적으로 치환된 알킬이고, 그리고 n은 정수 0 내지 20 (예를 들어, 0 내지 4, 0 내지 8, 0 내지 10, 0 내지 16, 1 내지 4, 1 내지 8, 1 내지 10, 1 내지 16, 1 내지 20, 2 내지 4, 2 내지 8, 2 내지 10, 2 내지 16, 2 내지 20, 4 내지 8, 4 내지 10, 4 내지 16, 및 4 내지 20)임); "잠긴(locked)" 핵산 (LNA) (여기서, 상기 2'-하이드록시는 C1-6 알킬렌 또는 C1-6 헤테로알킬렌 브릿지에 의해 동일한 리보오스 당의 4'-탄소에 연결되고, 예시적인 브릿지는 메틸렌, 프로필렌, 에테르, 또는 아미노 브릿지를 포함했음); 본 명세서에서 정의된 바와 같은 아미노알킬; 본 명세서에서 정의된 바와 같은 아미노알콕시; 본 명세서에서 정의된 바와 같은 아미노; 및 본 명세서에서 정의된 바와 같은 아미노산.
일반적으로, RNA는 산소를 갖는 5-원 고리인 당 그룹 리보오스를 포함한다. 예시적인, 비제한적인 대안적인 뉴클레오타이드는 리보오스에서 (예를 들어, S, Se, 또는 알킬렌, 예컨대메틸렌 또는 에틸렌으로) 산소의 대체; (예를 들어, 리보오스를 사이클로펜테닐 또는 사이클로헥세닐로 대체하기 위해) 이중 결합의 첨가; (예를 들어, 사이클로부탄 또는 옥세탄의 4-원 고리를 형성하도록) 리보오스의 고리 수축; (예를 들어, 안하이드로헥시톨, 알트리톨, 만니톨, 사이클로헥사닐, 사이클로헥세닐, 및 모폴리노와 같은, 추가의 탄소 또는 헤테로 원자를 갖는 6- 또는 7-원 고리 (또한 포스포르아미데이트 백본을 가짐)를 형성하도록) 리보오스의 고리 팽창; 다중 환형 형태 (예를 들어, 트리사이클로 및 "비잠김" 형태, 예컨대 글리콜핵산 (GNA) (예를 들어, R-GNA 또는 S-GNA, 여기서 리보오스는 포스포디에스테르 결합에 부착된 글리콜 단위에 의해 대체됨), 트레오스 핵산 (TNA, 여기서 리보오스는 α-L-트레오푸라노실-(3'→2')로 대체됨), 및 펩타이드 핵산 (PNA, 여기서 2-아미노-에틸-글리신 연결기는 리보오스 및 포스포디에스테르 백본을 대체함)을 포함한다.
일부 구현예에서, 당 그룹은 리보오스 내 상응하는 탄소의 반대편 입체화학적 배치형태를 보유하는 1 또는 그 초과 개의 탄소를 함유한다. 따라서, 폴리뉴클레오타이드 분자는, 예를 들어, 당으로 아라비노오스 또는 L-리보오스를 함유하는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 당이 L-리보오스, 2'-O-메틸-리보오스, 2'-플루오로-리보오스, 아라비노오스, 헥시톨, LNA, 또는 PNA인 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 포함한다.
뉴클레오사이드간 연결에 대한 변경
대안적인 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드간 연결 (예를 들어, 포스페이트 백본)에 대해 변경될 수 있다. 본 명세서에서, 폴리뉴클레오타이드 백본의 맥락에서, 어구 "포스페이트" 및 "포스포디에스테르"는 상호교환적으로 사용된다. 백본 포스페이트 기는 산소 원자 중 하나 이상을 상이한 치환체로 대체함에 의해 변경될 수 있다.
대안적인 뉴클레오타이드는 본 명세서에서 기재된 바와 같은 또 다른 뉴클레오사이드간 연결로 변경된 포스페이트 모이어티의 전반적인 대체를 포함할 수 있다. 대안적인 포스페이트 기의 예는, 비제한적으로, 포스포로티오에이트, 포스포로셀레네이트, 보라노포스페이트, 보라노포스페이트에스테르, 수소 포스포네이트, 포스포르아미데이트, 포스포로디아미데이트, 알킬 또는 아릴 포스포네이트, 및 포스포트리에스테르를 포함한다. 포스포로디티오에이트는 황에 의해 대체된 양 비-연결 산소를 갖는다. 포스페이트 링커는 또한 질소 (브릿징된 포스포르아미데이트), 황 (브릿징된 포스포로티오에이트), 및 탄소 (브릿징된 메틸렌-포스포네이트)로 연결하는 산소의 대체에 의해 변경될 수 있다.
대안적인 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드는 보란 모이어티 (BH3), 황 (티오), 메틸, 에틸, 및/또는 메톡시로 비-브릿징 산소 중 하나 이상의 대체를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 동일한 위치 (예를 들어, 알파 (α), 베타 (β) 또는 감마 (γ) 위치)에서의 2개 비-브릿징 산소가 황 (티오) 및 메톡시로 대체될 수 있다.
포스페이트 모이어티 (예를 들어, α-티오 포스페이트)의 α 위치에서 산소 원자 중 하나 이상의 대체는 비천연 포스포로티오에이트 백본 연결기를 통해 RNA 및 DNA에 안정성 (예컨대 엑소뉴클레아제 및 엔도뉴클레아제에 대해)을 부여하기 위해 제공된다. 포스포로티오에이트 DNA 및 RNA는 증가된 뉴클레아제 저항과 후속으로 세포 환경에서 더 긴 반감기를 갖는다.
인 원자를 함유하지 않는 뉴클레오사이드간 연결기를 포함하여, 본 개시내용에 따라 이용될 수 있는 다른 뉴클레오사이드간 연결기가 본 명세서에 기재되어 있다.
내부 리보솜 유입 부위
폴리뉴클레오타이드는 내부 리보솜 유입 부위 (IRES)를 함유할 수 있다. IRES는 단독 리보솜 결합 부위로서 작용할 수 있거나, 또는 mRNA의 다중 리보솜 결합 부위의 하나로 기능할 수 있다. 1 초과 기능적 리보솜 결합 부위를 함유하는 폴리뉴클레오타이드는 리보솜 (예를 들어, 멀티시스트론성 mRNA)에 의해 독립적으로 번역된 몇 개의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 인코딩할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드가 IRES로 제공된 경우, 추가로 제2 번역가능 영역이 선택적으로 제공된다. 본 개시내용에 따라 사용될 수 있는 IRES 서열의 예는 비제한적으로, 피코나바이러스 (예를 들어, FMDV), 해충 바이러스 (CFFV), 소아마비 바이러스 (PV), 엔세팔로마이오카디티스 바이러스 (ECMV), 구제역 바이러스 (FMDV), C형 간염 바이러스 (HCV), 고전적 돼지 콜레라 바이러스 (CSFV), 쥣과 백혈병 바이러스 (MLV), 유인원 면역결핍 바이러스 (SIV) 또는 귀뚜라미 마비 바이러스 (CrPV)로부터의 것들을 포함한다.
5'-캡 구조
폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 5'-캡 구조를 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드의 5'-캡 구조는 핵 방출 및 증가하는 폴리뉴클레오타이드 안정성에 관여되고 성숙한 환형 mRNA 종을 형성하도록 폴리-A 결합 단백질과 CBP의 회합을 통한 번역 적격성과 세포에서 폴리뉴클레오타이드 안정성을 담당하는 mRNA 캡 결합 단백질 (CBP)을 결합한다. 본 캡은 추가로 mRNA 스플라이싱 동안 5'-근위 인트론 제거의 제거를 도울 수 있다.
내인성 폴리뉴클레오타이드 분자는 5'-말단 캡핑되어 폴리뉴클레오타이드의 5'-말단 전사된 센스 뉴클레오타이드와 말단 구아노신 캡 잔기 사이의 5'-ppp-5'-삼인산 연결을 생성할 수 있다. 이 5'-구아닐레이트 캡은 그런 다음 메틸화되어 N7-메틸-구아닐레이트 잔기를 생성할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드의 5' 말단의 말단 및/또는 앞선 말단 전사된 뉴클레오타이드의 리보오스 당류는 선택적으로 또한 2'-O-메틸화될 수 있다. 구아닐레이트 캡 구조의 가수분해 및 절단을 통한 5'-탈캡핑은 분해를 위해 폴리뉴클레오타이드 분자, 예컨대 mRNA 분자를 표적화할 수 있다.
폴리뉴클레오타이드에 대한 변경은 탈캡핑을 방지하고 따라서 폴리뉴클레오타이드 반감기를 증가하는 비-가수분해성 캡 구조를 생성할 수 있다. 캡 구조 가수분해는 5'-ppp-5' 포스포로디에스테르 결합의 절단을 요하기 때문에, 대안적인 뉴클레오타이드가 캡핑 반응 동안 사용될 수 있다. 예를 들어, 5'-ppp-5' 캡에서 포스포로티오에이트 연결을 생성하기 위해 New England Biolabs (Ipswich, MA)로부터 백시니아 캡핑 효소가 제조자의 지침에 따라 α-티오-구아노신 뉴클레오타이드와 함께 사용될 수 있다. α-메틸-포스포네이트 및 셀레노-포스페이트 뉴클레오타이드와 같은 추가의 대안적인 구아노신 뉴클레오타이드가 사용될 수 있다.
추가의 변경은, 비제한적으로, 당의 2'-O-하이드록시 기 상의 폴리뉴클레오타이드 (상기에서 언급된 바와 같음)의 5'-말단 및/또는 5'-앞선 말단 뉴클레오타이드의 리보오스 당류의 2'-O-메틸화를 포함한다. 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 분자의 5'-캡을 생성하기 위해 다수의 구별되는 5'-캡 구조가 사용될 수 있다.
5'-캡 구조는 국제 특허 공개 번호 WO2008127688, WO 2008016473, 및 WO 2011015347에 기재된 것들을 포함하고, 이들 각각의 캡 구조는 본 명세서에 참고로 편입된다.
본 명세서에 또한 합성 캡 유사체, 화학적 캡, 화학적 캡 유사체, 또는 구조 또는 기능적 캡 유사체로 언급되는 캡 유사체는 캡 기능을 보유하면서, 그것의 화학 구조에서 천연 (즉, 내인성, 야생형, 또는 생리적) 5'-캡과는 상이하다. 캡 유사체는 폴리뉴클레오타이드에 화학적으로 (즉, 비-효소적으로) 또는 효소적으로 합성 및/연결될 수 있다.
예를 들어, 항-가역적 캡 유사체 (ARCA) 캡은 5'-5'-삼인산기에 의해 연결된 2개의 구아노신을 함유하고, 여기서 하나의 구아노신은 N7-메틸기뿐만 아니라 3'-O-메틸기 (즉, N7,3'-O-디메틸-구아노신-5'-삼인산-5'-구아노신, m7G-3'mppp-G, 동등하게 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G로 지정될 수 있음)를 함유한다. 다른 변경된 구아노신의 3'-O 원자는 캡핑된 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-말단 뉴클레오타이드에 연결된다. N7- 및 3'-O-구아노신은 캡핑된 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 말단 모이어티를 제공한다.
또 다른 예시적인 캡은 ARCA에 유사하지만 구아노신 상에 2'-O-메틸기 (즉, N7,2'-O-디메틸-구아노신-5'-삼인산-5'-구아노신, m7Gm-ppp-G)를 갖는 mCAP이다.
캡은 디뉴클레오타이드 캡 유사체일 수 있다. 비제한적인 예로서, 디뉴클레오타이드 캡 유사체는 미국 특허 번호 8,519,110에서 기재된 디뉴클레오타이드 캡 유사체와 같이 보라노포스페이트 기 또는 포스포로셀레노에이트 기로 상이한 포스페이트 위치에서 변형될 수 있고, 이의 캡 구조는 본 명세서에 참고로 편입된다.
대안적으로, 캡 유사체는 당 업계에서 알려지고 및/또는 본 명세서에 기재된 N7-(4-클로로페녹시에틸) 치환된 디뉴클레오타이드 캡 유사체일 수 있다. N7-(4-클로로페녹시에틸) 치환된 디뉴클레오타이드 캡 유사체의 비-제한적인 예는 N7-(4-클로로페녹시에틸)-G(5')ppp(5')G 및 N7-(4-클로로페녹시에틸)-m3'-OG(5')ppp(5')G 캡 유사체를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Kore et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry 2013 21:4570-4574]에 기재된 다양한 캡 유사체 및 캡 유사체를 합성하는 방법 참고; 이의 캡 구조는 본 명세서에 참고로 편입된다). 다른 사례에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드에서 유용한 캡 유사체는 4-클로로/브로모페녹시에틸 유사체이다.
캡 유사체는 시험관내 전사 반응에서 폴리뉴클레오타이드의 수반되는 캡핑을 허용하는 반면, 전사체의 최대 20%가 캡핑되지 않고 남아있다. 이것뿐만 아니라 내인성, 세포 전사 기계장치에 의해 생산된 폴리뉴클레오타이드의 내인성 5'-캡 구조와 캡 유사체의 구조 차이는 감소된 번역 적격성 및 감소된 세포 안정성으로 이어질 수 있다.
대안적인 폴리뉴클레오타이드는 또한 보다 진정한 5'-캡 구조를 생성하기 위해 효소를 사용하여 후-전사로 캡핑될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 어구 "보다 진정한"은 내인성 또는 야생형 특색을 구조적으로 또는 기능적으로 밀접하게 닮거나 또는 모방하는 특색을 지칭한다. 즉, "보다 진정한" 특색은 선행 기술의 합성 특징 또는 유사체에 비교하여 내인성, 야생형, 천연 또는 생리적 세포 기능, 및/또는 구조의 더 나은 대표성이거나 또는 이것은 하나 이상의 점에서 상응하는 내인성, 야생형, 천연, 또는 생리적 특색을 능가한다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드에서 유용한 보다 진정한 5'-캡 구조의 비-제한적인 예는, 다른 것들 중에서도, 당 업계에서 알려진 합성 5'-캡 구조 (또는 야생형, 천연 또는 생리적 5'-캡 구조)에 비교하여 캡 결합 단백질의 향상된 결합, 증가된 반감기, 5'-엔도뉴클레아제에 대한 감소된 감수성, 및/또는 감소된 5'-탈캡핑을 갖는 것들이다. 예를 들어,재조합 백시니아 바이러스 캡핑 효소 및 재조합 2'-O-메틸전달효소는 구아노신 캡 뉴클레오타이드와 폴리뉴클레오타이드의 5'-말단 뉴클레오타이드 사이의 정식 5'-5'-삼인산 연결을 형성할 수 있고 여기서 캡 구아노신은 N7-메틸화를 함유하고 폴리뉴클레오타이드의 5'-말단 뉴클레오타이드는 2'-O-메틸을 함유한다. 이러한 구조는 Cap1 구조로 일컬어진다. 이 캡은, 예를 들어, 당 업계에서 알려진 다른 5'cap 유사체 구조에 비교하여 더 높은 번역-적격성, 세포 안정성, 및 세포의 전-염증 사이토카인의 감소된 활성화를 초래한다. 다른 예시적인 캡 구조는 7mG(5')ppp(5')N,pN2p (Cap 0), 7mG(5')ppp(5')NlmpNp (Cap 1), 7mG(5')-ppp(5')NlmpN2mp (Cap 2), 및 m(7)Gpppm(3)(6,6,2')Apm(2')Apm(2')Cpm(2)(3,2')Up (Cap 4)를 포함한다.
대안적인 폴리뉴클레오타이드가 후-전사로 캡핑될 수 있기 때문에, 그리고 이 과정은 보다 효율적이기 때문에, 거의 100%의 대안적인 폴리뉴클레오타이드가 캡핑될 수 있다. 이것은 시험관내 전사 반응의 과정에서 폴리뉴클레오타이드에 캡 유사체가 연결된 경우의 ~80%에 대조적으로 된다.
5'-말단 캡은 내인성 캡 또는 캡 유사체를 포함할 수 있다. 5'-말단 캡은 구아노신 유사체를 포함할 수 있다. 유용한 구아노신 유사체는 이노신, N1-메틸-구아노신, 2'-플루오로-구아노신, 7-데아자-구아노신, 8-옥소-구아노신, 2-아미노-구아노신, LNA-구아노신, 및 2-아지도-구아노신을 포함한다.
일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드는 변형된 5'-캡을 함유한다. 5'-캡에 대한 변형은 폴리뉴클레오타이드의 안정성을 증가시킬 수 있고, 폴리뉴클레오타이드의 반감기를 증가시킬 수 있고, 그리고 폴리뉴클레오타이드 번역 효율을 증가시킬 수 있었다. 변형된 5'-캡은, 비제한적으로, 하기 변형 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 캡핑된 구아노신 삼인산 (GTP)의 2'- 및/또는 3'-위치에서의 변형, 메틸렌 모이어티 (CH2)로 당 고리 산소 (탄소환형 고리를 생산함)의 대체, 캡 구조의 삼인산 브릿지 모이어티에서의 변형, 또는 핵염기 (G) 모이어티에서의 변형.
5'-UTR
5'-UTR은 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)에 측접하는 영역으로 제공될 수 있다. 5'-UTR은 폴리뉴클레오타이드에서 발견된 코딩 영역에 상동성 또는 이종성일 수 있다. 다중 5'-UTR은 측접하는 영역에 포함될 수 있고 동일 또는 상이한 서열일 수 있다. 아무것도 포함하지 않는, 측접하는 영역의 임의의 부분은 코돈 최적화될 수 있고 임의의 것은 코돈 최적화 전 및/또는 후에, 하나 이상의 상이한 구조 또는 화학적 변경을 독립적으로 함유할 수 있다.
대안적인 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 개시 및 중단 부위의 목록은, 본 명세서에 참고로 편입된, 미국 가출원 번호 61/775,509의 표 21 및 미국 가출원 번호 61/829,372의 표 21 및 표 22에 도시되어 있다. 표 21에서 각각의 5'-UTR (5'-UTR-005 내지 5'-UTR 68511)은 그것의 천연 또는 야생형 (상동성) 전사체 (ENST; ENSEMBL 데이터베이스에서 사용된 식별자)에 대비하여 그것의 개시 및 중단 부위에 의해 확인된다.
폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 하나 이상의 특성을 변경하기 위해, 대안적인 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 코딩 영역에 이종성인 5'-UTR이 조작될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 그런 다음 세포, 조직 또는 유기체에 투여될 수 있고, 그리고 이종성 5'-UTR이 대안적인 폴리뉴클레오타이드 (mRNA)에 대해 가질 수 있는 유익한 효과를 평가하기 위해 단백질 수준, 편재화, 및/또는 반감기와 같은 결과가 측정될 수 있다. A, T, C 또는 G를 포함한 하나 이상의 뉴클레오타이드가 말단에 첨가 또는 제거되는 5'-UTR의 변이체가 이용될 수 있다. 5'-UTR은 또한 본 명세서에 기재된 임의의 방식으로 코돈-최적화될 수 있거나, 또는 변경될 수 있다.
5'-UTR, 3'-UTR, 및 번역 향상제 요소 (TEE)
폴리뉴클레오타이드 (예를들어, mRNA)의 5'-UTR은 적어도 하나의 번역 향상제 요소를 포함할 수 있다. 용어 "번역 향상제 요소"는 폴리뉴클레오타이드로부터 생산된 폴리펩타이드 또는 단백질의 양을 증가시키는 서열을 지칭한다. 비제한적인 예로서, TEE는 전사 프로모터와 시작 코돈 사이에 위치될 수 있다. 5'-UTR에 적어도 하나의 TEE를 갖는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 5'-UTR에 캡을 포함할 수 있다. 또한, 적어도 하나의 TEE는 캡-의존적 또는 캡-독립적인 번역을 당하는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에 위치될 수 있다.
일 양태에서, TEE는 폴리뉴클레오타이드의 번역 활성 예컨대, 비제한적으로, 캡-의존적 또는 캡-독립적인 번역을 증진할 수 있는 UTR 내에 보존된 요소이다. 이들 서열의 보존은 인간을 포함한 14종에 걸쳐 Panek 등 (Nucleic Acids Research, 2013, 1-10)에 의해 이전에 밝혀졌다.
하나의 비-제한적인 예에서, 알려진 TEE는 Gtx 호메오도메인 단백질의 5'-선도에 있을 수 있다 (Chappell et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004, 이것의 TEE는 본 명세서에 참고로 편입된다).
또 다른 비제한적인 예에서, TEE는 US 특허 공개 번호. 2009/0226470 및 2013/0177581, 국제 특허 공개 번호. WO2009/075886, WO2012/009644, 및 WO1999/024595, 및 US 특허 번호 6,310,197 및 6,849,405에 개시되어 있고, 이들 각각의 TEE 서열은 참고로 본 명세서에 편입되어 있다.
여전히 또 다른 비-제한적인 예에서, TEE는 내부 리보솜 유입 부위 (IRES), HCV-IRES 또는 IRES 요소 예컨대, 비제한적으로, 미국 특허 번호 7,468,275, 미국 특허 공보 번호 2007/0048776 및 2011/0124100 및 국제 특허 공개 번호 WO2007/025008 및 WO2001/055369에 기재된 것들일 수 있고, 이들 각각의 IRES 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. IRES 요소는 Chappell 등 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004) 및 Zhou 등 (PNAS 102:6273-6278, 2005)에 의해 기재되고 미국 특허 공보 번호 2007/0048776 및 2011/0124100 및 국제 특허 공개 번호 WO2007/025008에서의 Gtx 서열 (예를 들어, Gtx9-nt, Gtx8-nt, Gtx7-nt)을 비제한적으로 포함할 수 있고, 이들 각각의 IRES 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
"번역 향상제 폴리뉴클레오타이드"는 본 명세서에 예시되고 및/또는 당업계에서 개시된 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,310,197, 6,849,405, 7,456,273, 7,183,395, 미국 특허 공보 번호 20090/226470, 2007/0048776, 2011/0124100, 2009/0093049, 2013/0177581, 국제 특허 공개 번호 WO2009/075886, WO2007/025008, WO2012/009644, WO2001/055371 WO1999/024595, 및 유럽 특허 번호 2610341 및 2610340 참고; 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다) 특이적 TEE 또는 그것의 변이체, 동족체 또는 기능적 유도체 중 하나 이상을 포함하는 폴리뉴클레오타이드이다. 특이적 TEE의 하나 또는 다중 복제가 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)에 존재할 수 있다. 번역 향상제 폴리뉴클레오타이드에서 TEE는 하나 이상의 서열 분절에 조직화될 수 있다. 서열 분절은 하나 이상의 복제에 존재하는 각각의 TEE와 함께, 본 명세서에서 예시된 특이적 TEE 중 하나 이상을 품을 수 있다. 다중 서열 분절이 번역 향상제 폴리뉴클레오타이드에 존재하는 경우, 이들은 균질 또는 불균질할 수 있다. 따라서, 번역 향상제 폴리뉴클레오타이드에서 다중 서열 분절은 본 명세서에 예시된 동일한 또는 상이한 유형의 특이적 TEE, 각각의 특이적 TEE의 동일한 또는 상이한 수의 복제, 및/또는 각각의 서열 분절 내의 TEE의 동일한 또는 상이한 조직화를 품을 수 있다.
폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 국제 특허 공개 번호 WO1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886, WO2007/025008, WO1999/024595, 유럽 특허 공보 번호 2610341 및 2610340, 미국 특허 번호 6,310,197, 6,849,405, 7,456,273, 7,183,395, 및 미국 특허 공보 번호 2009/0226470, 2011/0124100, 2007/0048776, 2009/0093049, 및 2013/0177581에 기재된 적어도 하나의 TEE를 포함할 수 있고 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. TEE는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에 위치될 수 있다.
폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 미국 특허 공보 번호 2009/0226470, 2007/0048776, 2013/0177581 및 2011/0124100, 국제 특허 공개 번호 WO1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886 및 WO2007/025008, 유럽 특허 공보 번호 2610341 및 2610340, 미국 특허 번호 6,310,197, 6,849,405, 7,456,273, 7,183,395에 기재된 TEE와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 적어도 하나의 TEE를 포함할 수 있고, 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR은 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18 적어도 19, 적어도 20, 적어도 21, 적어도 22, 적어도 23, 적어도 24, 적어도 25, 적어도 30, 적어도 35, 적어도 40, 적어도 45, 적어도 50, 적어도 55 또는 60 초과 60 TEE 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 (예를들어, mRNA)의 5'-UTR에서의 TEE 서열은 동일 또는 상이한 TEE 서열일 수 있다. TEE 서열은 1회 2회, 또는 3회 초과 반복된 패턴 예컨대 ABABAB, AABBAABBAABB, 또는 ABCABCABC, 또는 이들의 변이형으로 될 수 있다. 이들 패턴에서, 각각의 문자인, A, B, 또는 C는 뉴클레오타이드 수준에서 상이한 TEE 서열을 나타낸다.
일부 경우에, 5'-UTR은 2개의 TEE 서열을 분리하기 위한 스페이서를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 스페이서는 15 뉴클레오타이드 스페이서 및/또는 당 업계에서 알려진 다른 스페이서일 수 있다. 또 다른 비-제한적인 예로, 5'-UTR은 5'-UTR에서 적어도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회, 적어도 6회, 적어도 7회, 적어도 8회, 적어도 9회, 또는 9회 초과 반복된 TEE 서열-스페이서 모듈을 포함할 수 있다.
다른 사례에서, 2개의 TEE 서열을 분리하는 스페이서는, 비제한적으로, miR 서열 (예를 들어, miR 결합 부위 및 miR 씨드)과 같이 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 번역을 조절할 수 있는 당 업계에서 알려진 다른 서열을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 2개의 TEE 서열을 분리하기 위해 사용된 각각의 스페이서는 상이한 miR 서열 또는 miR 서열의 성분 (예를 들어, miR 종자 서열)을 포함할 수 있다.
일부 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에서 TEE는 미국 특허 공보 번호 2009/0226470, 2007/0048776, 2013/0177581 및 2011/0124100, 국제 특허 공개 번호 WO1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886 및 WO2007/025008, 유럽 특허 공보 번호 2610341 및 2610340, 및 미국 특허 번호 6,310,197, 6,849,405, 7,456,273, 및 7,183,395에 개시된 TEE 서열의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 99% 초과를 포함할 수 있고 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에서 TEE는 미국 특허 공보 번호 2009/0226470, 2007/0048776, 2013/0177581 및 2011/0124100, 국제 특허 공개 번호 WO1999/024595, WO2012/009644, WO2009/075886 및 WO2007/025008, 유럽 특허 공보 번호 2610341 및 2610340, 및 미국 특허 번호 6,310,197, 6,849,405, 7,456,273, 및 7,183,395에 개시된 TEE 서열의 5-30 뉴클레오타이드 단편, 5-25 뉴클레오타이드 단편, 5-20 뉴클레오타이드 단편, 5-15 뉴클레오타이드 단편, 5-10 뉴클레오타이드 단편을 포함할 수 있고; 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
특정 경우에, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에서 TEE는 Chappell 등 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004) 및 Zhou 등 (PNAS 102:6273-6278, 2005)에서, 그리고 Wellensiek 등 (Genome-wide profiling of human cap-independent translation-enhancing elements, Nature Methods, 2013; DOI:10.1038/NMETH.2522)에 의해 개시된 보충의 표 1 및 보충의 표 2에서 개시된 TEE 서열의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 99% 초과를 포함할 수 있고; 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에서 TEE는 Chappell 등 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:9590-9594, 2004) 및 Zhou 등 (PNAS 102:6273-6278, 2005)에서, 그리고 Wellensiek 등 (Genome-wide profiling of human cap-independent translation-enhancing elements, Nature Methods, 2013; DOI:10.1038/NMETH.2522)에 의해 개시된 보충의 표 1 및 보충의 표 2에서 개시된 TEE 서열의 5-30 뉴클레오타이드 단편, 5-25 뉴클레오타이드 단편, 5-20 뉴클레오타이드 단편, 5-15 뉴클레오타이드 단편, 5-10 뉴클레오타이드 단편을 포함할 수 있고; 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에 사용된 TEE는 IRES 서열 예컨대, 비제한적으로, 미국 특허 번호 7,468,275 및 국제 특허 공개 번호 WO2001/055369에 기재된 들이고, 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
일부 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에 사용된 TEE는 미국 특허 공보 번호 2007/0048776 및 2011/0124100 및 국제 특허 공개 번호 WO2007/025008 및 WO2012/009644에 기재된 방법에 의해 확인될 수 있고, 이들 각각의 방법은 본 명세서에 참고로 편입된다.
일부 경우에, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에 사용된 TEE는 미국 특허 번호 7,456,273 및 7,183,395, 미국 특허 공보 번호 2009/0093049, 및 국제 공개 번호 WO2001/055371에 기재된 전사 조절 인자일 수 있고, 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 전사 조절 인자는 당해 분야에서 알려진 방법, 예컨대, 비제한적으로, 미국 특허 번호 7,456,273 및 7,183,395, 미국 특허 공보 번호 2009/0093049, 및 국제 공개 번호 WO2001/055371에 기재된 방법에 의해 확인될 수 있고, 이들 각각의 방법은 본 명세서에 참고로 편입된다.
또 다른 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 5'-UTR에 사용된 TEE는 미국 특허 번호 7,456,273 및 7,183,395, 미국 특허 공보 번호 2009/0093049, 및 국제 공개 번호 WO2001/055371에서 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 또는 이들의 일부분이고, 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
본 명세서에 기재된 적어도 하나의 TEE를 포함하는 5'-UTR은 단일 시트론성 서열 예컨대, 비제한적으로, 벡터 시스템 또는 폴리뉴클레오타이드 벡터에 편입될 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터 시스템 및 폴리뉴클레오타이드 벡터는 미국 특허 번호 7,456,273 및 7,183,395, 미국 특허 공보 번호 2007/0048776, 2009/0093049 및 2011/0124100, 및 국제 특허 공개 번호 WO2007/025008 및 WO2001/055371에 기재된 것들을 포함할 수 있고, 이들 각각의 TEE 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
본 명세서에 기재된 TEE는 폴리뉴클레오타이드 (예를들어, mRNA)의 5'-UTR 및/또는 3'-UTR에 위치될 수 있다. 3'-UTR에 위치한 TEE는 5'-UTR에서 위치한 및/또는 편입을 위해 기재된 TEE와 동일 및/또는 상이할 수 있다.
일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드 (예를들어, mRNA)의 3'-UTR은 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18 적어도 19, 적어도 20, 적어도 21, 적어도 22, 적어도 23, 적어도 24, 적어도 25, 적어도 30, 적어도 35, 적어도 40, 적어도 45, 적어도 50, 적어도 55 또는 60 초과 TEE 서열을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 3'-UTR에서 TEE 서열은 동일 또는 상이한 TEE 서열일 수 있다. TEE 서열은 1회 2회, 또는 3회 초과 반복된 패턴 예컨대 ABABAB, AABBAABBAABB, 또는 ABCABCABC, 또는 이들의 변이형으로 될 수 있다. 이들 패턴에서, 각각의 문자인, A, B, 또는 C는 뉴클레오타이드 수준에서 상이한 TEE 서열을 나타낸다.
일 사례에서, 3'-UTR은 2개의 TEE 서열을 분리하기 위한 스페이서를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 스페이서는 15 뉴클레오타이드 스페이서 및/또는 당 업계에서 알려진 다른 스페이서일 수 있다. 또 다른 비-제한적인 예로, 3'-UTR은 3'-UTR에서 적어도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회, 적어도 6회, 적어도 7회, 적어도 8회, 적어도 9회, 또는 9회 초과 반복된 TEE 서열-스페이서 모듈을 포함할 수 있다.
다른 사례에서, 2개의 TEE 서열을 분리하는 스페이서는, 비제한적으로, 본 명세서에 기재된 miR 서열 (예를 들어, miR 결합 부위 및 miR 씨드)과 같이 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 번역을 조절할 수 있는 당 업계에서 알려진 다른 서열을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 2개의 TEE 서열을 분리하기 위해 사용된 각각의 스페이서는 상이한 miR 서열 또는 miR 서열의 성분 (예를 들어, miR 종자 서열)을 포함할 수 있다.
여전히 다른 사례에서, miR 서열 및/또는 TEE 서열의 편입은 번역을 증가 및/또는 감소시킬 수 있는 스템 루프 영역의 형상을 변화시킨다. (예를 들어, 문헌 [Kedde et al. A Pumilio-induced RNA structure switch in p27-3'UTR controls miR-221 and miR-22 accessibility. Nature Cell Biology. 2010] 참고).
스템 루프
폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNAs)는 스템 루프 예컨대, 비제한적으로, 히스톤 스템 루프를 포함할 수 있다. 스템 루프는 약 25 또는 약 26개의 뉴클레오타이드인 뉴클레오타이드 서열 예컨대, 비제한적으로, 국제 특허 공개 번호 WO2013/103659에 기재된 것일 수 있고, 이는 본 명세서에 참고로 편입된다. 히스톤 스템 루프는 코딩 영역에 대비하여 3'-에 (예를 들어, 코딩 영역의 3'-말단에) 위치될 수 있다. 비제한적인 예로서, 스템 루프는 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드의 3'-말단에 위치될 수 있다. 일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 1 초과 스템 루프 (예를 들어, 2개 스템 루프)를 포함한다. 스템 루프 서열의 예는 국제 특허 공개 번호 WO2012/019780 및 WO201502667에 기재되어 있고, 그 스템 루프 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 일부 사례에서, 폴리뉴클레오타이드는 스템 루프 서열 CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA (서열번호: 1)를 포함한다. 다른 것들에서, 폴리뉴클레오타이드는 스템 루프 서열 CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA (서열번호: 2)를 포함한다.
스템 루프는 폴리뉴클레오타이드의 제2 말단 영역에 위치될 수 있다. 비제한적인 예로서, 스템 루프는 제2 말단 영역에서 미번역된 영역 (예를 들어, 3'-UTR) 내에 위치될 수 있다.
일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드 예컨대, 비제한적으로 히스톤 스템 루프를 포함하는 mRNA는 3'-안정화 영역 (예를 들어, 적어도 하나의 사슬 종결 뉴클레오사이드를 포함하는 3'-안정화 영역)의 첨가에 의해 안정화될 수 있다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 적어도 하나의 사슬 종결 뉴클레오사이드의 첨가는 폴리뉴클레오타이드의 분해를 늦출 수 있고 따라서 폴리뉴클레오타이드의 반감기를 증가시킬 수 있다.
다른 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 예컨대, 비제한적으로 히스톤 스템 루프를 포함하는 mRNA는 올리지오(U)의 첨가를 예방 및/또는 억제할 수 있는 폴리뉴클레오타이드의 3'-영역에 대한 변경에 의해 안정화될 수 있다 (예를 들어, 국제 특허 공개 번호 WO2013/103659 참고).
여전히 다른 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 예컨대, 비제한적으로 히스톤 스템 루프를 포함하는 mRNA는 3'-데옥시뉴클레오사이드, 2',3'-디데옥시뉴클레오사이드 3'-O-메틸뉴클레오사이드, 3'-O-에틸뉴클레오사이드, 3'-아라비노시드, 및 당 업계에서 알려진 및/또는 본 명세서에 기재된 다른 대안적인 뉴클레오사이드에서 종결하는 올리고뉴클레오타이드의 첨가에 의해 안정화될 수 있다.
일부 사례에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드는 히스톤 스템 루프, 폴리-A 영역, 및/또는 5'-캡 구조를 포함할 수 있다. 히스톤 스템 루프는 폴리-A 영역의 전 및/또는 후에 있을 수 있다. 히스톤 스템 루프 및 폴리-A 영역 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드는 본 명세서에 기재된 사슬 종결 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다.
다른 사례에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드는 히스톤 스템 루프 및 5'-캡 구조를 포함할 수 있다. 5'-캡 구조는 비제한적으로, 본 명세서에서 기재된 것 및/또는 당 업계에서 알려진 것을 포함할 수 있다.
일부 경우에, 보존된 스템 루프 영역은 본 명세서에 기재된 miR 서열을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 스템 루프 영역은 본 명세서에 기재된 miR 서열의 종자 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예에서, 스템 루프 영역은 miR-122 종자 서열을 포함할 수 있다.
특정 사례에서, 보존된 스템 루프 영역은 본 명세서에 기재된 miR 서열을 포함할 수 있고 또한 TEE 서열을 포함할 수 있다.
일부 경우에, miR 서열 및/또는 TEE 서열의 편입은 번역을 증가 및/또는 감소시킬 수 있는 스템 루프 영역의 형상을 변화시킨다. (예를 들어, 문헌 [Kedde et al. A Pumilio-induced RNA structure switch in p27-3'UTR controls miR-221 and miR-22 accessibility. Nature Cell Biology. 2010](이것은 전체적으로 참고로 본 명세서에 통합됨) 참고).
폴리뉴클레오타이드는 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 및 폴리-A 영역 또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 및 폴리-A 영역 또는 폴리아데닐화 신호를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열의 비-제한적인 예는 국제 특허 공개 번호 WO2013/120497, WO2013/120629, WO2013/120500, WO2013/120627, WO2013/120498, WO2013/120626, WO2013/120499 및 WO2013/120628에 기재되어 있고, 이들 각각의 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 특정 경우에, 히스톤 스템 루프 및 폴리-A 영역 또는 폴리아데닐화 신호를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 국제 특허 공개 번호 WO2013/120499 및 WO2013/120628에 기재된 폴리뉴클레오타이드 서열과 같은 병원체 항원 또는 이의 단편에 대해 코딩할 수 있고, 이 둘 모두의 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 다른 사례에서, 히스톤 스템 루프 및 폴리-A 영역 또는 폴리아데닐화 신호를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 국제 특허 공개 번호 WO2013/120497 및 WO2013/120629에 기재된 폴리뉴클레오타이드 서열과 같은 치료적 단백질에 대해 코딩할 수 있고, 이 둘 모두의 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 일부 경우에, 히스톤 스템 루프 및 폴리-A 영역 또는 폴리아데닐화 신호를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 국제 특허 공개 번호 WO2013/120500 및 WO2013/120627에 기재된 폴리뉴클레오타이드 서열과 같은 종양 항원 또는 이의 단편에 대해 코딩할 수 있고, 이 둘 모두의 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다. 다른 사례에서, 히스톤 스템 루프 및 폴리-A 영역 또는 폴리아데닐화 신호를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 국제 특허 공개 번호 WO2013/120498 및 WO2013/120626에 기재된 폴리뉴클레오타이드 서열과 같은 알러지항원성 항원 또는 자가면역 자기-항원에 대해 코딩할 수 있고, 이 둘 모두의 서열은 본 명세서에 참고로 편입된다.
폴리-A 영역
폴리뉴클레오타이드 또는 핵산 (예를 들어, mRNA)은 폴리A 서열및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. 폴리A 서열은 전적으로 또는 대부분 아데닌 뉴클레오타이드 또는 이의 유사체 또는 유도체로 구성될 수 있다. 폴리A 서열은 핵산의 3' 미번역된 영역에 인접하여 위치한 꼬리일 수 있다.
RNA 처리 동안, 아데노신 뉴클레오타이드 (폴리-A 영역)의 장쇄는 메신저 RNA (mRNA) 분자에 정상적으로 첨가되어 분자의 안정성을 증가시킨다. 전사 직후, 전사체의 3'-말단은 절단되어 3'-하이드록시를 유리시킨다. 그런 다음 폴리-A 중합효소가 RNA에 아데노신 뉴클레오타이드의 사슬을 부가한다. 폴리아데닐화로 불리는 본 과정은 100 내지 250 사이 잔기 길이인 폴리-A 영역을 부가한다.
고유의 폴리-A 영역 길이는 본 개시내용의 대안적인 폴리뉴클레오타이드에 특정 이점을 제공할 수 있다.
일반적으로, 본 개시내용의 폴리-A 영역의 길이는 적어도 30개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 폴리-A 영역은 적어도 35개의 뉴클레오타이드. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 40개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 45개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 55개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 60개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 70개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 80개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 90개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 100개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 120개의 뉴클레오타이드. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 140개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 160개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 180개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 200개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 250개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 300개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 350개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 400개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 450개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 500개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 600개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 700개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 800개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 900개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1000개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1100개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1200개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1300개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1400개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1500개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1600개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1700개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1800개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 1900개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 2000개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 2500개의 뉴클레오타이드이다. 또 다른 구현예에서, 길이는 적어도 3000개의 뉴클레오타이드이다.
일부 사례에서, 폴리-A 영역은 본 명세서에 기재된 대안적인 폴리뉴클레오타이드 분자 상에 80개의 뉴클레오타이드, 120개의 뉴클레오타이드, 160개의 뉴클레오타이드일 수 있다.
다른 사례에서, 폴리-A 영역은 본 명세서에 기재된 대안적인 폴리뉴클레오타이드 분자 상에 20, 40, 80, 100, 120, 140 또는 160개의 뉴클레오타이드일 수 있다.
일부 경우에, 폴리-A 영역은 전체적인 대안적인 폴리뉴클레오타이드의 길이에 대하여 설계된다. 이 디자인은 대안적인 폴리뉴클레오타이드의 코딩 영역의 길이, 대안적인 폴리뉴클레오타이드 (예컨대 mRNA)의 특정 특색 또는 영역의 길이에 기반될 수 있거나, 또는 대안적인 폴리뉴클레오타이드로부터 발현된 궁극적인 생성물의 길이에 기반될 수 있다. 대안적인 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, 폴리-A 영역을 포함하는 mRNA 부분 이외)의 임의의 특색에 관련하는 경우 폴리-A 영역은 추가의 특색보다 길이에서 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100% 더 클 수 있다. 폴리-A 영역은 또한 이것이 속하는 대안적인 폴리뉴클레오타이드의 분획으로 설계될 수 있다. 이 문맥에서, 폴리-A 영역은 작제물의 총 길이 또는 작제물의 총 길이 마이너스 폴리-A 영역의 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 또는 90% 또는 그 초과일 수 있다.
특정 경우에, 폴리-A 결합 단백질에 대한 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 조작된 결합 부위 및/또는 콘주게이션은 발현을 고양하기 위해 사용될 수 있다. 조작된 결합 부위는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)의 국소 미세환경의 리간드에 대한 결합 부위로 작동할 수 있는 센서 서열일 수 있다. 비제한적인 예로서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 폴리-A 결합 단백질 (PABP) 및 그것의 유사체의 결합 친화도를 변경하는 적어도 하나의 조작된 결합 부위를 포함할 수 있다. 적어도 하나의 조작된 결합 부위의 편입은 PABP 및 그것의 유사체의 결합 친화도를 증가시킬 수 있다.
추가로, 다수의 구별되는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 폴리-A 영역의 3'-말단에서 대안적인 뉴클레오타이드를 사용하여 3'-말단을 통해 PABP (폴리-A 결합 단백질)에 함께 연결될 수 있다. 형질감염 실험은 관련된 세포주에서 수행될 수 있고 단백질 생산은 형질감염 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 및 7일 후에서 ELISA에 의해 분석될 수 있다. 비제한적인 예로서, 형질감염 실험은 적어도 하나의 조작된 결합 부위의 첨가의 결과로 PABP 또는 그것의 유사체 결합 친화도에 대한 효과를 평가하기 위해 사용될 수 있다.
특정 경우에, 폴리-A 영역은 번역 개시를 조절하기 위해 사용될 수 있다. 비록 이론에 의해 구속되기를 바라지 않지만, 폴리-A 영역은 차례로 번역 개시 복합체와 상호작용할 수 있는 PABP를 모집하고 따라서 단백질 합성을 위해 필수적일 수 있다.
일부 경우에, 폴리-A 영역은 또한 3'-5'-엑소뉴클레아제 소화로부터 보호하기 위해 본 개시내용에서 사용될 수 있다.
일부 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 폴리A-G 사중항을 포함할 수 있다. G-사중항은 DNA 및 RNA 둘 모두에서 G-풍부 서열에 의해 형성될 수 있는 4개 구아노신 뉴클레오타이드의 환형 수소 결합된 어레이이다. 이 구현예에서, G-사중항은 폴리-A 영역의 말단에 편입된다. 수득한 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 다양한 시점에서 반감기를 포함한 안정성, 단백질 생산 및 다른 파라미터에 대해 분석될 수 있다. 폴리A-G 사중항은 120개 뉴클레오타이드 단독의 폴리-A 영역을 사용하여 나타난 것의 적어도 75%에 등등한 단백질 생산을 초래한다는 것이 밝혀졌다.
일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 폴리-A 영역을 포함할 수 있고 3'-안정화 영역의 첨가에 의해 안정화될 수 있다. 폴리-A 영역을 갖는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 5'-캡 구조를 추가로 포함할 수 있다.
다른 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 폴리-A-G 사중항을 포함할 수 있다. 폴리-A-G 사중항을 갖는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)는 5'-캡 구조를 추가로 포함할 수 있다.
일부 경우에, 폴리-A 영역 또는 폴리-A-G 사중항을 포함한 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, mRNA)를 안정화시키기 위해 사용될 수 있는 3'-안정화 영역은, 비제한적으로, 국제 특허 공개 번호 WO2013/103659에 기재된 것들일 수 있고, 그것의 폴리-A 영역 및 폴리-A-G 사중항은 본 명세서에 참고로 편입된다. 다른 사례에서, 본 개시내용으로 사용될 수 있는 3'-안정화 영역은 사슬 종결 뉴클레오사이드 예컨대 3'-데옥시아데노신 (코디세핀), 3'-데옥시우리딘, 3'-데옥시시토신, 3'-데옥시구아노신, 3'-데옥시티민, 2',3'-디데옥시뉴클레오사이드, 예컨대 2',3'-디데옥시아데노신, 2',3'-디데옥시우리딘, 2',3'-디데옥시시토신, 2',3'-디데옥시구아노신, 2',3'-디데옥시티민, 2'-데옥시뉴클레오사이드, 또는 O-메틸뉴클레오사이드를 포함한다.
다른 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 예컨대, 비제한적으로 폴리A 영역 또는 폴리-A-G 사중항을 포함하는 mRNA는 올리지오(U)의 첨가를 예방 및/또는 억제할 수 있는 폴리뉴클레오타이드의 3'-영역에 대한 변경에 의해 안정화될 수 있다 (예를 들어, 국제 특허 공개 번호 WO2013/103659 참고).
또 다른 사례에서, 폴리뉴클레오타이드 예컨대, 비제한적으로 폴리-A 영역 또는 폴리-A-G 사중항을 포함하는 mRNA는 3'-데옥시뉴클레오사이드, 2',3'-디데옥시뉴클레오사이드 3'-O-메틸뉴클레오사이드, 3'-O-에틸뉴클레오사이드, 3'-아라비노시드, 및 당 업계에서 알려진 및/또는 본 명세서에 기재된 다른 대안적인 뉴클레오사이드에서 종결하는 올리고뉴클레오타이드의 첨가에 의해 안정화될 수 있다.
사슬 종결 뉴클레오사이드
핵산은 사슬 종결 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 사슬 종결 뉴클레오사이드는 그것의 당 그룹의 2' 및/또는 3' 위치에서 탈산소화된 뉴클레오사이드들을 포함한다. 그와 같은 종은 3'-데옥시아데노신 (코디세핀), 3'-데옥시우리딘, 3'-데옥시시토신, 3'-데옥시구아노신, 3'-데옥시티민, 및 2',3'-디데옥시뉴클레오사이드, 예컨대 2',3'-디데옥시아데노신, 2',3'-디데옥시우리딘, 2',3'-디데옥시시토신, 2',3'-디데옥시구아노신, 및 2',3'-디데옥시티민을 포함할 수 있다.
다른 성분
나노입자 조성물은 이전의 섹션에서 기재된 것들 외에 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 나노입자 조성물은 하나 이상의 작은 소수성 분자 예컨대 비타민 (예를 들어, 비타민 A 또는 비타민 E) 또는 스테롤을 포함할 수 있다.
나노입자 조성물은 또한, 하나 이상의 투과도 향상제 분자, 탄수화물, 폴리머, 표면 개질제, 또는 다른 성분을 포함할 수 있다. 투과도 향상제 분자는 예를 들어 U.S. 특허 출원 공개 No. 2005/0222064에 의해 의 기재된 분자일 수 있다. 탄수화물은 단당 (예를 들어, 글루코스) 및 다당류 (예를 들어, 글리코겐 및 유도체 및 그것의 유사체)를 포함할 수 있다.
폴리머는 나노입자 조성물 내에 포함되고/거나 그것을 캡슐화하거나 부분적으로 캡슐화하기 위해 사용될 수 있다. 폴리머는 생분해성 및/또는 생체적합성일 수 있다. 폴리머는 be, 비제한적으로, 폴리아민, 폴리에테르, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리카바메이트, 폴리우레아, 폴리카보네이트, 폴리스티렌, 폴리이미드, 폴리설폰, 폴리우레탄, 폴리아세틸렌, 폴리에틸렌, 폴리에틸렌이민, 폴리이소시아네이트, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴로니트릴, 및 폴리아릴레이트로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 폴리머는 하기를 포함할 수 있다: 폴리(카프로락톤) (PCL), 에틸렌 비닐 아세테이트 폴리머 (EVA), 폴리(락트산) (PLA), 폴리(L-락트산) (PLLA), 폴리(글라이콜산) (PGA), 폴리(락트산-코-글라이콜산) (PLGA), 폴리(L-락트산-코-글라이콜산) (PLLGA), 폴리(D,L-락타이드) (PDLA), 폴리(L-락타이드) (PLLA), 폴리(D,L-락타이드-코-카프로락톤), 폴리(D,L-락타이드-코-카프로락톤-코-글라이콜라이드), 폴리(D,L-락타이드-코-PEO-코-D,L-락타이드), 폴리(D,L-락타이드-코-PPO-코-D,L-락타이드), 폴리알킬 시아노아크릴레이트, 폴리우레탄, 폴리-L-라이신 (PLL), 하이드록시프로필 메타크릴레이트 (HPMA), 폴리에틸렌글리콜, 폴리-L-글루탐산, 폴리(하이드록시 산), 폴리무수물, 폴리오르토에스테르, 폴리(에스테르 아미드), 폴리아미드, 폴리(에스테르 에테르), 폴리카보네이트, 폴리알킬렌 예컨대 폴리에틸렌 및 폴리프로필렌, 폴리알킬렌 글리콜 예컨대 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG), 폴리알킬렌 옥사이드 (PEO), 폴리알킬렌 테레프탈레이트 예컨대 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르 예컨대 폴리(비닐 아세테이트), 폴리비닐 할라이드 예컨대 폴리(염화비닐) (PVC), 폴리비닐피롤리돈 (PVP), 폴리실록산, 폴리스티렌 (PS), 폴리우레탄, 유도된 셀룰로스 예컨대 알킬 셀룰로스, 하이드록시알킬 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 에스테르, 니트로 셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 아크릴산의 폴리머, 예컨대 폴리(메틸(메트)아크릴레이트) (PMMA), 폴리(에틸(메트)아크릴레이트), 폴리(부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(이소부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(헥실(메트)아크릴레이트), 폴리(이소데실(메트)아크릴레이트), 폴리(라우릴(메트)아크릴레이트), 폴리(페닐(메트)아크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트) 및 공중합체 및 이들의 혼합물, 폴리디옥사논 및 그것의 공중합체, 폴리하이드록시알카노에이트, 폴리프로필렌 푸마레이트, 폴리옥시메틸렌, 폴록사머, 폴리옥사민, 폴리(오르토)에스테르, 폴리(부티르산), 폴리(발레르산), 폴리(락타이드-코-카프로락톤), 트리메틸렌 카보네이트, 폴리(N-아크릴로일모폴린) (PAcM), 폴리(2-메틸-2-옥사졸린) (PMOX), 폴리(2-에틸-2-옥사졸린) (PEOZ), 및 폴리글리세롤.
표면 개질제는, 비제한적으로, 하기를 포함할 수 있다: 음이온성 단백질 (예를 들어, 소과 혈청 알부민), 계면활성제 (예를 들어, 양이온성 계면활성제 예컨대 디메틸디옥타데실-암모늄 브로마이드), 당류 또는 당 유도체 (예를 들어, 사이클로덱스트린), 핵산, 폴리머 (예를 들어, 헤파린, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴록사머), 점질다당분해 제제 (예를 들어, 아세틸시스테인, 쑥, 브로멜라인, 파파인, 클레로덴드럼, 브롬헥신, 카보시스테인, 에프라지논, 메스나, 암브록솔, 소브레롤, 도미오돌, 레토스테인, 스테프로닌, 티오프로닌, 겔솔린, 티모신 β4, 도르나제 알파, 넬테넥신, 및 에르도스테인), 및 DNases (예를 들어, rhDNase). 표면 개질제는 (예를 들어, 코팅, 흡착, 공유결합, 또는 다른 과정에 의해) 나노입자 내에 및/또는 나노입자 조성물의 표면 상에 배치될 수 있다.
나노입자 조성물은 또한, 하나 이상의 작용화된 지질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 지질은, 적절한 반응 조건 하에서 아자이드에 노출될 때, 고리화부가 반응을 겪을 수 있는 알킬 기로 작용화될 수 있다. 특히, 지질 이중층은 막 침투, 세포 인식, 또는 이미지형성을 촉진하는데 유용한 하나 이상의 기로 이방식으로 작용화될 수 있다. 나노입자 조성물의 표면은 또한, 하나 이상의 유용한 항체와 접합될 수 있다. 표적화된 세포 전달, 이미지형성, 및 막 침투에 유용한 작용기 및 콘주게이트는 당해 기술에 공지되어 있다.
이들 성분 외에, 나노입자 조성물은 약제학적 조성물에서 유용한 임의의 서브스턴스를 포함할 수 있다. 예를 들어, 나노입자 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 부속 성분 예컨대, 비제한적으로, 하나 이상의 용매, 분산매, 희석제, 분산 조제, 현탁 조제, 과립화 조제, 붕해제, 충전제, 활택제, 액체 비히클, 결합제, 계면 활성제, 등장제, 증점 또는 유화제, 완충제, 윤활제, 오일, 보존제, 및 다른 종을 포함할 수 있다. 부형제 예컨대 왁스, 버터, 착색제, 코팅제, 풍미제, 및 방향제가 또한, 포함될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 부형제는 당해 분야에서 잘 알려져 있다 (참고 예를 들어 Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro; Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006).
희석제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함할 수 있다: 탈산칼슘, 탄산나트륨, 인산칼슘, 인산제2칼슘, 황산칼슘, 칼슘 수소 포스페이트, 인산나트륨 락토스, 수크로스, 셀룰로스, 미세결정성 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 염화나트륨, 건조 전분, 옥수수녹말, 분말화된 당, 및/또는 이들의 조합. 과립화 및 분산제는 하기로 구성된 비제한적인 목록으로부터 선택될 수 있다: 감자 전분, 옥수수 전분, 타피오카 전분, 나트륨 전분 글라이콜레이트, 점토, 알긴산, 구아르 검, 사이트루스 펄프, 한천, 벤토나이트, 셀룰로스 및 목재 제품, 천연 스펀지, 양이온교환 수지, 탈산칼슘, 실리케이트, 탄산나트륨, 가교결합된 폴리(비닐-피롤리돈) (크로스포비돈), 나트륨 카복시메틸 전분 (나트륨 전분 글라이콜레이트), 카복시메틸 셀룰로스, 가교결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 (크로스카르멜로스), 메틸셀룰로스, 사전절라틴화된 전분 (전분 1500), 미세결정성 전분, 수불용성 전분, 칼슘 카복시메틸 셀룰로스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트 (VEEGUM®), 나트륨 라우릴 설페이트, 사차 암모늄 화합물, 및/또는 이들의 조합.
계면 활성제 및/또는 유화제는, 비제한적으로, 하기를 포함할 수 있다: 천연 유화제 (예를 들어 아카시아, 한천, 알긴산, 나트륨 알기네이트, 트라가칸쓰, 콘드룩스, 콜레스테롤, 크산탄, 펙틴, 젤라틴, 계란 노른자, 카세인, 양모 지방, 콜레스테롤, 왁스, 및 레시틴), 콜로이드성 점토 (예를 들어 벤토나이트 [알루미늄 실리케이트] 및 VEEGUM® [마그네슘 알루미늄 실리케이트]), 장쇄 아미노산 유도체, 고분자량 알코올 (예를 들어 스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 올레일 알코올, 트리아세틴 모노스테아레이트, 에틸렌 글리콜 디스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 폴리비닐 알코올), 카보머 (예를 들어 카복시 폴리메틸렌, 폴리아크릴산, 아크릴산 폴리머, 및 카복시비닐 폴리머), 카라기난, 셀룰로스 유도체 (예를 들어 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 분말화된 셀룰로스, 하이드록시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스), 소르비탄 지방산 에스테르 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트 [TWEEN®20], 폴리옥시에틸렌 소르비탄 [TWEEN® 60], 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트 [TWEEN®80], 소르비탄 모노팔미테이트 [SPAN®40], 소르비탄 모노스테아레이트 [SPAN®60], 소르비탄 트리스테아레이트 [SPAN®65], 글리세릴 모노올레에이트, 소르비탄 모노올레에이트 [SPAN®80]), 폴리옥시에틸렌 에스테르 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트 [MYRJ® 45], 폴리옥시에틸렌 수소화된 피마자유, 폴리에톡실화된 피마자유, 폴리옥시메틸렌 스테아레이트, 및 SOLUTOL®), 수크로스 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르 (예를 들어 CREMOPHOR®), 폴리옥시에틸렌 에테르, (예를 들어 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르 [BRIJ® 30]), 폴리(비닐-피롤리돈), 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 나트륨 올레에이트, 칼륨 올레에이트, 에틸 올레에이트, 올레산, 에틸 라우레이트, 나트륨 라우릴 설페이트, PLURONIC®F 68, POLOXAMER® 188, 세트리모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 염화물, 벤즈알코늄 염화물, 도쿠세이트 나트륨, 및/또는 이들의 조합.
결합제는 전분 (예를 들어 옥수수녹말 및 전분 페이스트); 젤라틴; 당류 (예를 들어 수크로스, 글루코스, 덱스트로스, 덱스트린, 당밀, 락토스, 락티톨, 만니톨); 천연 및 합성 검 (예를 들어, 아카시아, 나트륨 알기네이트, 뿔가사리의 추출물, 판와르 검, 가티 검, 이사폴 껍질의 점액, 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 미세결정성 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 폴리(비닐-피롤리돈), 마그네슘 알루미늄 실리케이트 (VEEGUM®), 및 낙엽송 아라보갈탁탄); 알기네이트; 폴리에틸렌 옥사이드; 폴리에틸렌 글리콜; 무기 칼슘 염; 규산; 폴리메타크릴레이트; 왁스; 물; 알코올; 및 이들의 조합, 또는 임의의 다른 적합한 결합제일 수 있다.
보존제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함할 수 있다: 산화방지제, 킬레이트제, 항미생물 보존제, 항진균 보존제, 알코올 보존제, 산성 보존제, 및/또는 다른 보존제. 산화방지제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 알파 토코페롤, 아스코르브산, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화된 하이드록시아니솔, 부틸화된 하이드록시톨루엔, 모노티오글리세롤, 칼륨 메타바이설파이트, 프로피온산, 프로필 갈레이트, 나트륨 아스코르베이트, 아황산수소나트륨, 나트륨 메타바이설파이트, 및/또는 아황산나트륨. 킬레이트제의 예는 하기를 포함한다: 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 시트르산 일수화물, 디나트륨 에데테이트, 디칼륨 에데테이트, 에데트산, 푸마르산, 말산, 인산, 나트륨 에데테이트, 타르타르산, 및/또는 트리나트륨 에데테이트. 항미생물 보존제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 벤즈알코늄 염화물, 벤즈에토늄 염화물, 벤질 알코올, 브로노폴, 세트리마이드, 세틸피리디늄 염화물, 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로자일레놀, 크레졸, 에틸 알코올, 글리세린, 헥세티딘, 이미드우레아, 페놀, 페녹시에탄올, 페닐에틸 알코올, 페닐수은 니트레이트, 프로필렌 글리콜, 및/또는 티메로살. 항진균 보존제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 부틸 파라벤, 메틸 파라벤, 에틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤조산, 하이드록시벤조산, 칼륨 벤조에이트, 칼륨 소르베이트, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 프로피오네이트, 및/또는 소르브산. 알코올 보존제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 벤질 알코올, 페놀, 페놀계 화합물, 비스페놀, 클로로부탄올, 하이드록시벤조에이트, 및/또는 페닐에틸 알코올. 산성 보존제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 비타민 A, 비타민 C, 비타민 E, 베타-카로텐, 시트르산, 아세트산, 데하이드로아스코르브산, 아스코르브산, 소르브산, 및/또는 피트산. 다른 보존제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 토코페롤, 토코페롤 아세테이트, 데테록심 메실레이트, 세트리마이드, 부틸화된 하이드록시아니솔 (BHA), 부틸화된 하이드록시톨루엔 (BHT), 에틸렌디아민, 나트륨 라우릴 설페이트 (SLS), 나트륨 라우릴 에테르 설페이트 (SLES), 아황산수소나트륨, 나트륨 메타바이설파이트, 칼륨 설파이트, 칼륨 메타바이설파이트, GLYDANT PLUS®, PHENONIP®, 메틸파라벤, GERMALL® 115, GERMABEN®II, NEOLONETM, KATHONTM, 및/또는 EUXYL®.
완충제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 시트레이트 완충 용액, 아세테이트 완충 용액, 포스페이트 완충 용액, 암모늄 염화물, 탈산칼슘, 염화칼슘, 칼슘 시트레이트, 칼슘 글루비오네이트, 칼슘 글루셉테이트, 칼슘 글루코네이트, d-글루콘산, 칼슘 글리세로포스페이트, 칼슘 락테이트, 칼슘 락토바이오네이트, 프로판산, 칼슘 레벌리네이트, 펜탄산, 이염기성 인산칼슘, 인산, 삼염기성 인산칼슘, 수산화칼슘 포스페이트, 아세트산칼륨, 칼륨 염화물, 칼륨 글루코네이트, 칼륨 혼합물, 이염기성 인산칼륨, 일염기성 인산칼륨, 인산칼륨 혼합물, 아세트산나트륨, 중탄산나트륨, 염화나트륨, 나트륨 시트레이트, 나트륨 락테이트, 이염기성 인산나트륨, 일염기성 인산나트륨, 인산나트륨 혼합물, 트로메타민, 아미노-설포네이트 완충액 (예를 들어, HEPES), 수산화마그네슘, 알루미늄 하이드록사이드, 알긴산, 무발열원 물, 등장성 염수, 링거액, 에틸 알코올, 및/또는 이들의 조합. 윤활제는 하기로 구성된 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다: 스테아르산마그네슘, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산, 실리카, 탈크, 맥아, 글리세릴 베헤네이트, 수소화된 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 류신, 마그네슘 라우릴 설페이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 및 이들의 조합.
오일의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 아몬드, 살구 알맹이, 아보카도, 바바수, 버가모트, 까막까치밥나무 종자, 보리지, 향나무속, 카밀레, 카놀라, 캐러웨이, 카르나우바, 캐스터, 신나몬, 코코아 버터, 코코넛, 대구 간, 커피, 옥수수, 면 종자, 에뮤, 유칼립투스, 달?이꽃, 물고기, 아마씨, 게라니올, 박, 포도씨, 헤이즐넛, 히솝, 이소프로필 미리스테이트, 호호바, 쿠쿠이 넛, 라반딘, 라벤다, 레몬, 릿세아 쿠베바, 마가다미아 넛, 아욱, 망고씨, 메도우포옴 종자, 밍크, 육두구, 올리브, 오렌지, 오렌지 러피, 야자나무, 팝핵, 복숭아 알맹이, 땅콩, 양귀비 종자, 호박씨, 평지씨, 쌀겨, 로즈마리, 잇꽃, 백단유, 사스쿠아나, 세이버리, 산자나무, 참께, 시어버터 나무, 실리콘, 대두, 해바라기, 차 나무, 엉겅퀴, 동백, 베티베르, 호두, 및 밀 배아 오일 뿐만 아니라 부틸 스테아레이트, 카프릴산 트리글리세라이드, 카프르산 트리글리세라이드, 사이클로메티콘, 디에틸 세바케이트, 디메티콘 360, 시메티콘, 이소프로필 미리스테이트, 광유, 옥틸도데칸올, 올레일 알코올, 실리콘 오일, 및/또는 이들의 조합.
제형
나노입자 조성물은 지질 성분 및 하나 이상의 추가의 성분, 예컨대 치료제 및/또는 예방제를 포함할 수 있다. 나노입자 조성물은 하나 이상의 특정 적용 또는 표적을 위해 설계될 수 있다. 나노입자 조성물의 요소는 특정 적용 또는 표적을 기반으로, 및/또는 하나 이상의 요소의 효능, 독성, 비용, 사용 용이성, 이용가능성, 또는 다른 특징을 기반으로 선택될 수 있다. 유사하게, 나노입자 조성물의 특정 제형은, 예를 들어, 요소의 특별한 조합의 효능 및 특성에 따라 특정 적용 또는 표적을 위해 선택될 수 있다.
나노입자 조성물의 지질 성분은, 예를 들어, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질, 인지질 (예컨대 불포화된 지질, 예를 들어, DOPE 또는 DSPC), PEG 지질, 및 구조 지질를 포함할 수 있다. 지질 성분의 요소는 특정 분율로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 나노입자 조성물의 지질 성분은 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질, 인지질, PEG 지질, 및 구조 지질을 포함한다. 특정 구현예에서, 나노입자 조성물의 지질 성분은 약 30 mol % 내지 약 60 mol % 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물, 약 0 mol % 내지 약 30 mol % 인지질, 약 18.5 mol % 내지 약 48.5 mol % 구조 지질, 및 약 0 mol % 내지 약 10 mol %의 PEG 지질을 포함하고, 단, 총 mol %는 100%를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물의 지질 성분은 약 35 mol % 내지 약 55 mol % 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물, 약 5 mol % 내지 약 25 mol % 인지질, 약 30 mol % 내지 약 40 mol % 구조 지질, 및 약 0 mol % 내지 약 10 mol %의 PEG 지질을 포함한다. 특정 구현예에서, 지질 성분은 약 50 mol % 상기 화합물, 약 10 mol % 인지질, 약 38.5 mol % 구조 지질, 및 약 1.5 mol %의 PEG 지질을 포함한다. 또 다른 특정 구현예에서, 지질 성분은 약 40 mol % 상기 화합물, 약 20 mol % 인지질, 약 38.5 mol % 구조 지질, 및 약 1.5 mol %의 PEG 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 인지질은 DOPE 또는 DSPC일 수 있다. 다른 구현예에서, PEG 지질은 PEG-DMG일 수 있고/거나 구조 지질은 콜레스테롤일 수 있다.
나노입자 조성물은 하나 이상의 특이적 적용 또는 표적을 위해 설계될 수 있다. 예를 들어, 나노입자 조성물은 치료제 및/또는 예방제 예컨대 RNA를 포유동물의 신체의 특정 세포, 조직, 장기, 또는 그것의 계 또는 그룹에 전달하기 위해 설계될 수 있다. 나노입자 조성물의 이화학적 특성은 특정 신체 표적에 대한 선택성을 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 예를 들어, 입자 크기는 상이한 기관의 개창술 크기를 기반으로 조정될 수 있다. 나노입자 조성물 내에 포함된 치료제 및/또는 예방제는 또한, 원하는 전달 표적 또는 표적을 기반으로 선택될 수 있다. 예를 들어, 치료제 및/또는 예방제는 특정 조짐, 병태, 질환, 또는 장애를 위해 및/또는 특정 세포, 조직, 장기, 또는 이의 계 또는 그룹에의 전달 (예를 들어, 국소화된 또는 특이적 전달)을 위해 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 나노입자 조성물은 관심 폴리펩타이드를 생산하기 위해 세포내에서 번역될 수 있는 관심 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA를 포함할 수 있다. 그와 같은 조성물은 특정 장기에 특이적으로 전달될 수 있도록 설계될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 간을 포유동물에게 특이적으로 전달하도록 설계될 수 있다.
나노입자 조성물 중 치료제 및/또는 예방제의 양은 나노입자 조성물의 크기, 조성물, 원하는 표적 및/또는 적용, 또는 다른 특성뿐만 아니라 치료제 및/또는 예방제의 특성에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 나노입자 조성물에서 유용한 RNA의 양은 RNA의 크기, 서열, 및 다른 특성에 좌우될 수 있다. 나노입자 조성물 중 치료제 및/또는 예방제 및 다른 요소 (예를 들어, 지질)의 상대적인 양은 또한, 변할 수 있다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물 중 지질 성분 대 치료제 및/또는 예방제의 wt/wt 비는 약 5:1 내지 약 60:1, 예컨대 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1, 12:1, 13:1, 14:1, 15:1, 16:1, 17:1, 18:1, 19:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 및 60:1일 수 있다. 예를 들어, 지질 성분 대 치료제 및/또는 예방제의 wt/wt 비는 약 10:1 내지 약 40:1일 수 있다. 특정 구현예에서, wt/wt 비는 약 20:1이다. 나노입자 조성물 중 치료제 및/또는 예방제의 양은, 예를 들어, 흡수 분광법 (예를 들어, 자외선-가시적인 분광법)을 사용하여 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, 나노입자 조성물은 하나 이상의 RNA를 포함하고, 그리고 하나 이상의 RNA, 지질, 및 그의 양은 특정 N:P 비를 제공하도록 선택될 수 있다. 조성물 중 N:P 비는 하나 이상의 지질 중 질소 원자 대 RNA 중 포스페이트기의 수의 몰비를 지칭한다. 일반적으로, 더 낮은 N:P 비는 바람직하다. 하나 이상의 RNA, 지질, 및 그의 양은 약 2:1 내지 약 30:1, 예컨대 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 22:1, 24:1, 26:1, 28:1, 또는 30:1의 N:P 비를 제공하도록 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, N:P 비는 약 2:1 내지 약 8:1일 수 있다. 다른 구현예에서, N:P 비는 약 5:1 내지 약 8:1이다. 예를 들어, N:P 비는 약 5.0:1, 약 5.5:1, 약 5.67:1, 약 6.0:1, 약 6.5:1, 또는 약 7.0:1일 수 있다. 예를 들어, N:P 비는 약 5.67:1일 수 있다.
물리적 특성
나노입자 조성물의 특성은 그것의 성분에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 구조 지질로서 콜레스테롤을 포함하는 나노입자 조성물은 상이한 구조 지질을 포함하는 나노입자 조성물보다 상이한 특성을 가질 수 있다. 유사하게, 나노입자 조성물의 특성은 그것의 성분의 절대적인 또는 상대적인 양에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 더 높은 몰 분획의 인지질을 포함하는 나노입자 조성물은 더 낮은 몰 분획의 인지질을 포함하는 나노입자 조성물보다 상이한 특성을 가질 수 있다. 특성은 또한, 나노입자 조성물의 제조의 방법 및 조건에 따라 변할 수 있다.
나노입자 조성물은 다양한 방법을 특징으로 할 수 있다. 예를 들어, 현미경검사 (예를 들어, 투과 전자 현미경검사 또는 주사 전자 현미경검사)는 나노입자 조성물의 형태 및 크기 분포를 실험하기 위해 사용될 수 있다. 동적 광 산란 또는 전위측정법 (예를 들어, 전위차 적정)는 제타 전위를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 동적 광 산란은 또한, 입자 크기를 결정하기 위해 이용될 수 있다. 기기 예컨대 Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Malvern, Worcestershire, UK)는 또한, 다중 나노입자 조성물의 특성, 예컨대 입자 크기, 다분산도 지수, 및 제타 전위를 측정하기 위해 사용될 수 있다.
나노입자 조성물의 평균 크기는 예를 들어, 동적 광 산란 (DLS)로 측정시, 10s의 nm 내지 100s의 nm일 수 있다. 예를 들어, 평균 크기는 약 40 nm 내지 약 150 nm, 예컨대 약 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm, 또는 150 nm일 수 있다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물의 평균 크기는 약 50 nm 내지 약 100 nm, 약 50 nm 내지 약 90 nm, 약 50 nm 내지 약 80 nm, 약 50 nm 내지 약 70 nm, 약 50 nm 내지 약 60 nm, 약 60 nm 내지 약 100 nm, 약 60 nm 내지 약 90 nm, 약 60 nm 내지 약 80 nm, 약 60 nm 내지 약 70 nm, 약 70 nm 내지 약 150 nm, 약 70 nm 내지 약 130 nm, 약 70 nm 내지 약 100 nm, 약 70 nm 내지 약 90 nm, 약 70 nm 내지 약 80 nm, 약 80 nm 내지 약 150 nm, 약 80 nm 내지 약 130 nm, 약 80 nm 내지 약 100 nm, 약 80 nm 내지 약 90 nm, 약 90 nm 내지 약 150 nm, 약 90 nm 내지 약 130 nm, 또는 약 90 nm 내지 약 100 nm일 수 있다. 특정 구현예에서, 나노입자 조성물의 평균 크기는 약 70 nm 내지 약 130 nm 또는 약 70 nm 내지 약 100 nm일 수 있다. 특정 구현예에서, 평균 크기는 약 80 nm일 수 있다. 다른 구현예에서, 평균 크기는 약 100 nm일 수 있다. 다른 구현예에서, 평균 크기는 약 120 nm일 수 있다
나노입자 조성물은 상대적으로 균질할 수 있다. 다분산도 지수는 나노입자 조성물의 균질성, 예를 들어, 나노입자 조성물의 입자 크기 분포를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 작은 (예를 들어, 0.3 미만) 다분산도 지수는 일반적으로 좁은 입자 크기 분포를 나타낸다. 나노입자 조성물은 약 0 내지 약 0.25, 예컨대 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19, 0.20, 0.21, 0.22, 0.23, 0.24, 또는 0.25의 다분산도 지수를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물의 다분산도 지수는 약 0.10 내지 약 0.20일 수 있다.
나노입자 조성물의 제타 전위는 조성물의 계면동전기 전위를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 제타 전위는 나노입자 조성물의 표적 전하를 기재할 수 있다. 상대적으로 낮은 전하, 양성 또는 음성을 갖는 나노입자 조성물은, 더 크게 하전된 충전된 종이 바람직하지 않게 신체 중 세포, 조직, 및 다른 요소와 상호작용할 수 있기 때문에, 일반적으로 바람직하다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물의 제타 전위는 약 -10 mV 내지 약 +20 mV, 약 -10 mV 내지 약 +15 mV, 약 -10 mV 내지 약 +10 mV, 약 -10 mV 내지 약 +5 mV, 약 -10 mV 내지 약 0 mV, 약 -10 mV 내지 약 -5 mV, 약 -5 mV 내지 약 +20 mV, 약 -5 mV 내지 약 +15 mV, 약 -5 mV 내지 약 +10 mV, 약 -5 mV 내지 약 +5 mV, 약 -5 mV 내지 약 0 mV, 약 0 mV 내지 약 +20 mV, 약 0 mV 내지 약 +15 mV, 약 0 mV 내지 약 +10 mV, 약 0 mV 내지 약 +5 mV, 약 +5 mV 내지 약 +20 mV, 약 +5 mV 내지 약 +15 mV, 또는 약 +5 mV 내지 약 +10 mV일 수 있다.
치료제 및/또는 예방제의 캡슐화의 효율은 제공된 초기 양에 비하여 제형 후 나노입자 조성물로 캡슐화된 또는 달리는 이와 연관된 치료제 및/또는 예방제의 양을 기술한다. 캡슐화 효율 바람직하게는 높다 (예를 들어, 100%에 가까움). 캡슐화 효율은, 예를 들어, 하나 이상의 유기 용매 또는 세제로 나노입자 조성물을 깨트리기 전 및 후 나노입자 조성물을 함유한 용액 내 치료제 및/또는 예방제의 양을 비교함에 의해 측정될 수 있다. 용액 내 유리 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, RNA)의 양을 측정하기 위해 형광이 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 나노입자 조성물에 대해, 치료제 및/또는 예방제의 캡슐화 효율은 적어도 50%, 예를 들어 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%일 수 있다. 일부 구현예에서, 캡슐화 효율은 적어도 80%일 수 있다. 일부 구현예에서, 캡슐화 효율은 적어도 90%일 수 있다.
나노입자 조성물은 선택적으로 하나 이상의 코팅을 포함할 수 있다. 예를 들어, 나노입자 조성물은 코팅을 갖는 캡슐, 필름, 또는 정제에 제형화될 수 있다. 본 명세서에 기재된 조성물을 포함하는 캡슐, 필름, 또는 정제는 임의의 유용한 크기, 인장 강도, 경도, 또는 밀도를 가질 수 있다.
약제학적 조성물
나노입자 조성물은 약제학적 조성물로 전체적으로 또는 부분적으로 제형화될 수 있다. 약제학적 조성물은 하나 이상의 나노입자 조성물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 하나 이상의 상이한 치료제 및/또는 예방제를 포함한 하나 이상의 나노입자 조성물을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 부속 성분 예컨대 본 명세서에서 기재된 것을 추가로 포함할 수 있다. 약제학적 조성물 및 제제의 제형 및 제조에 대한 일반적인 지침은, 예를 들어, 문헌 [Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro; Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006]에서 이용가능하다. 통상적인 부형제 및 부속 성분은, 임의의 통상적인 부형제 또는 부속 성분이 나노입자 조성물의 하나 이상의 성분과 양립 불가능할 수 있는 것을 제외하고 임의의 약제학적 조성물에서 사용될 수 있다. 부형제 또는 부속 성분은 본 성분과 그것의 조합이 임의의 바람직하지 않은 생물학적 효과 또는 달리 유해한 효과를 초래할 수 있는 경우 나노입자 조성물의 성분과 양립불가능할 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 부형제 또는 부속 성분은 나노입자 조성물을 포함한 약제학적 조성물의 총 질량 또는 용적의 50%보다 크게 구성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 부형제 또는 부속 성분은 약제학적 관행의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과를 구성할 수 있다. 일부 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 부형제는 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 순수하다. 일부 구현예에서, 부형제는 인간 및 수의적 용도에 사용하기 위해 승인된다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 식품의약품국에 의해 승인된다. 일부 구현예에서, 부형제는 약품 등급이다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 약전 (USP), 유럽 약전 (EP), 영국 약전, 및/또는 국제 약전의 표준을 충족한다.
본 개시내용에 따른 약제학적 조성물에서 하나 이상의 나노입자 조성물, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제, 및/또는 임의의 추가 성분의 상대적인 양은 치료되는 대상체의 동일성, 크기, 및/또는 병태에 의존하여, 그리고 추가로 조성물이 투여되어 지는 경로에 따라 다양할 것이다. 예로써, 약제학적 조성물은 0.1% 내지 100% (wt/wt) 사이의 하나 이상의 나노입자 조성물을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 나노입자 조성물 및/또는 약제학적 조성물은 저장 및/또는 수송을 위해 냉장 또는 냉동된다 (예를 들어, 4℃ 또는 그 미만의 온도, 예컨대 약 -150℃ 내지 약 0℃ 또는 약 -80℃ 내지 약 -20℃ 온도 (예를 들어, 약 -5℃, -10℃, -15℃, -20℃, -25℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, -80℃, -90℃, -130℃ 또는 -150℃)에서 저장됨). 예를 들어, 임의의 식 (I), (IA), (IB), (II), 및 (IIa)-(IIg)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 예를 들어, 약 -20℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, 또는 -80℃에서 저장 및/또는 수송을 위해 냉장된 용액이다. 특정 구현예에서, 본 개시내용은 또한 나노입자 조성물 및/또는 약제학적 조성물을 4℃ 또는 그 미만의 온도, 예컨대 약 -150℃ 내지 약 0℃ 또는 약 -80℃ 내지 약 -20℃ 온도, 예를 들어, 약 -5℃, -10℃, -15℃, -20℃, -25℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, -80℃, -90℃, -130℃ 또는 -150℃에서 저장함에 의해 임의의 식 (I), (IA), (IB), (II), 및 (IIa)-(IIg)의 화합물을 포함하는 나노입자 조성물 및/또는 약제학적 조성물의 안정성을 증가시키는 방법에 관한 것이다). 예를 들어, 본 명세서에 개시된 나노입자 조성물 및/또는 약제학적 조성물은, 예를 들어, 4℃ 또는 그 미만의 온도 (예를 들어, 약 4℃ 내지 -20℃)에서 약 적어도 1 주, 적어도 2 주, 적어도 3 주, 적어도 4 주, 적어도 5 주, 적어도 6 주, 적어도 1 개월, 적어도 2 개월, 적어도 4 개월, 적어도 6 개월, 적어도 8 개월, 적어도 10 개월, 적어도 12 개월, 적어도 14 개월, 적어도 16 개월, 적어도 18 개월, 적어도 20 개월, 적어도 22 개월, 또는 적어도 24 개월 동안 안정하다. 일 구현예에서, 제형은 약 4℃에서 적어도 4 주 동안 안정하다. 특정 구현예에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 본 명세서에 개시된 나노입자 조성물 및 Tris, 아세테이트 (예를 들어, 아세트산 나트륨), 시트레이트 (예를 들어, 나트륨 시트레이트), 염수, PBS, 및 수크로스 중 하나 이상으로부터 선택된 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 특정 구현예에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 약 7 내지 8 사이 (예를 들어, 6.8 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8.0, 또는 7.5 내지 8 또는 7 내지 7.8)의 pH 값을 갖는다. 예를 들어, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 본 명세서에 개시된 나노입자 조성물, Tris, 염수 및 수크로스를 포함하고, 약 7.5-8의 pH를 가져, 예를 들어, 약 -20℃에서 저장 및/또는 수송에 적합하다. 예를 들어, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 본 명세서에 개시된 나노입자 조성물 및 PBS를 포함하고, 예를 들어, 약 4℃ 또는 그 미만에서 저장 및/또는 수송에 적합한 약 7-7.8의 pH를 갖는다. 본 개시내용의 맥락에서 "안정성", "안정화된" 및 "안정한"은, 예를 들어, 스트레스 예컨대 전단력, 냉동/해동 스트레스, 등이 적용될 때, 주어진 제조, 준비, 수송, 저장 및/또는 사용 조건하에서 화학적 또는 물리적 변화 (예를 들어, 분해, 입자 크기 변화, 응집, 캡슐화에서의 변화, 등)에 대한 본 명세서에 개시된 나노입자 조성물 및/또는 약제학적 조성물의 저항을 지칭한다.
나노입자 조성물 및/또는 하나 이상의 나노입자 조성물을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 특정 세포, 조직, 기관, 또는 시스템 또는 이들의 군, 예컨대 신장계에 치료제 및/또는 예방제의 전달에 의해 제공된 치료 효과로부터 이점이 있을 수 있는 이들 환자 또는 대상체를 비롯한 임의의 환자 또는 대상체에게 투여될 수 있다. 비록 나노입자 조성물 및 나노입자 조성물을 포함한 약제학적 조성물의 본 명세서에 제공된 설명은 주로 인간에 투여에 대해 적합한 조성물에 대한 것이지만, 숙련가는 이러한 조성물이 일반적으로 임의의 다른 포유동물에 투여에 대해 적합하다는 것을 이해할 것이다. 다양한 동물에 투여에 대해 적합한 조성물을 부여하기 위한 인간에 투여에 대해 적합한 조성물의 변형은 잘 알려져 있고, 통상적으로 숙련된 수의과 약리학자는, 있다면 단지 통상적인 실험과정으로 이러한 변형을 디자인 및/또는 실행할 수 있다. 조성물의 투여가 고려되는 대상체는, 비제한적으로, 인간, 다른 영장류, 및 상업적으로 관련된 포유동물 예컨대 소, 돼지, 말, 양, 고양이, 개, 마우스, 및/또는 랫트를 포함한 다른 포유동물을 포함한다.
하나 이상의 나노입자 조성물을 포함하는 약제학적 조성물은 알려지거나 또는 이후에 약리학의 업계에서 발전된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 준비 방법은 활성 성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 부속 성분과 회합하는 단계, 그 다음, 바람직하거나 또는 필요하다면, 생성물을 원하는 단일- 또는 다중-용량 단위로 분할하고, 형상화하고, 및/또는 패키징하는 단계를 포함한다.
본 개시내용에 따른 약제학적 조성물은 벌크로, 단일 단위 용량으로, 및/또는 복수의 단일 단위 용량으로 제조되고, 포장되고, 및/또는 판매될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "단위 용량"은 사전결정된 양의 활성 성분 (예를 들어, 나노입자 조성물)을 포함하는 약제학적 조성물의 별개의 양이다. 활성 성분의 양은 대상체에게 투여되는 활성 성분의 투약량 및/또는 이러한 투약량의 편리한 분획 예컨대, 예를 들어, 이러한 투약량의 2분의 1 또는 3분의 1과 일반적으로 동등하다.
약제학적 조성물은 투여의 다양한 경로 및 방법에 대해 적합한 다양한 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 액체 투약 형태 (예를 들어, 에멀션, 마이크로에멀션, 나노에멀션, 용액, 현탁액, 시럽, 및 엘릭시르), 주사가능 형태, 고형 투약 형태 (예를 들어, 캡슐, 정제, 알약, 분말, 및 과립), 국소 및/또는 경피 투여를 위한 투약 형태 (예를 들어, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제, 및 패치), 현탁액, 분말, 및 다른 형태로 제조될 수 있다.
경구 및 비경구 투여를 위한 액체 투약 형태는, 비제한적으로, 약제학적으로 허용가능한 에멀션, 마이크로에멀션, 나노에멀션, 용액, 현탁액, 시럽, 및/또는 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분에 부가하여, 액체 투약 형태는 통상적으로 당 업계에서 사용된 불활성 희석제 예컨대, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제 예컨대 에틸 알코올, 이소프로필알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포름아미드, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수,세균, 올리브, 캐스터, 및 참께 오일), 글리세롤, 테트라하이드로푸르푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 불활성 희석제 외에도, 경구 조성물은 추가의 치료제 및/또는 예방제, 추가 제제 예컨대 습윤제, 유화 및 현탁화 제제, 감미제, 풍미제, 및/또는 방향제를 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 특정 구현예에서, 조성물은 가용화제 예컨대 크레모포어®, 알코올, 오일, 변형된 오일, 글리콜, 폴리소르베이트, 사이클로덱스트린, 폴리머, 및/또는 이들의 조합과 혼합된다.
주사가능 제제, 예를 들어, 멸균 주사가능 수성 또는 지질생산성 현탁액이 적합한 분산제, 습윤제, 및/또는 현탁화제를 사용하여 알려진 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사가능 제제는 비독성 비경구로 허용가능한 희석제 및/또는 용매에서 멸균 주사가능 용액, 현탁액, 및/또는 에멀션, 예를 들어, 1,3-부탄디올에서 용액으로 될 수 있다. 이용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액, U.S.P., 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 멸균, 고정유가 용매 또는 분산매로 통상적으로 이용된다. 이러한 목적을 위해 합성 모노- 또는 디글리세라이드를 포함한 임의의 무자극 고정유가 이용될 수 있다. 지방산 예컨대 올레산이 주사제의 제조에 사용될 수 있다.
주사가능 제형은, 예를 들어, 박테리아-고정 필터를 통한 여과에 의해, 및/또는 사용 이전에 멸균수 또는 다른 멸균 주사가능 배지에 용해 또는 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물에 살균제를 합체시킴에 의해 멸균될 수 있다.
활성 성분의 효과를 연장하기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터 활성 성분의 흡수를 늦추는 것이 종종 바람직하다. 이것은 불량한 수용성을 갖는 결정성 또는 비정질 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 약물의 흡수율은 그런 다음 차례로 결정 크기 및 결정형에 의존할 수 있는 그것의 용해 속도에 의존한다. 대안적으로, 비경구로 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 오일 비히클에 약물을 용해하거나 현탁함에 의해 달성된다. 주사가능 데포 형태는 생분해성 폴리머 예컨대 폴리락타이드-폴리글라이콜라이드에 약물의 마이크로캡슐화된 매트릭스를 형성함에 의해 제조된다. 약물 대 폴리머의 비 및 이용된 특정한 폴리머의 특성에 의존하여, 약물 방출의 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 폴리머의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 데포 주사가능 제형은 신체 조직과 양립가능한 리포좀 또는 마이크로에멀션에 약물을 포획함에 의해 제조된다.
직장 또는 질 투여를 위한 조성물은 전형적으로 주위온도에서 고체이지만 체온에서 액체이고 따라서 직장 또는 질강에서 용해하여 활성 성분을 방출하는 적합한 무-자극 부형제 예컨대 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 좌약 왁스와 조성물을 혼합함에 의해 제조될 수 있는 좌약이다.
경구 투여를 위한 고형 투약 형태는 캡슐, 정제, 알약, 필름, 분말, 및 과립을 포함한다. 이러한 고형 투약 형태에서, 활성 성분은 적어도 하나의 불활성인 약제학적으로 허용가능한 부형제 예컨대 나트륨 시트레이트 또는 인산 제2칼슘 및/또는 충전제 또는 증량제 (예를 들어 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 및 규산), 결합제 (예를 들어, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리디논, 수크로스, 및 아카시아), 휴멕턴트 (예를 들어, 글리세롤), 붕해제 (예를 들어, 한천, 탈산칼슘, 감자 또는 타피오카전분, 알긴산, 특정 실리케이트, 및 탄산나트륨), 용액 지연제 (예를 들어, 파라핀), 흡수 가속제 (예를 들어, 사차암모늄 화합물), 습윤제 (예를 들어, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트), 흡수제 (예를 들어, 카올린 및 벤토나이트 점토, 실리케이트), 및 윤활제 (예를 들어, 탈크, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산 마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴설페이트), 및 이들의 혼합물과 혼합된다. 캡슐, 정제 및 알약의 경우에, 투약 형태는 완충제를 포함할 수 있다.
유사한 유형의 고체 조성물이 락토스 또는 유당으로 이러한 부형제뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 및 기타 동종의 것을 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로 이용될 수 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 알약, 및 과립의 고형 투약 형태는 약제학적 제형 기술에서 잘 알려진 코팅물 및 쉘 예컨대 장용피 및 다른 코팅물로 제조될 수 있다. 이들은 선택적으로 불투명화제를 포함할 수 있고 이들이 장관의 특정 일부에서, 선택적으로, 지연 방식으로, 단지 활성 성분(들) 만 또는 이를 우선적으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 서브스턴스 및 왁스를 포함한다. 유사한 유형의 고체 조성물이 락토스 또는 유당으로 이러한 부형제뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 및 기타 동종의 것을 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로 이용될 수 있다.
조성물의 국소 및/또는 경피 투여를 위한 투약 형태는 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제, 및/또는 패치를 포함할 수 있다. 일반적으로, 활성 성분은 멸균 조건하에서 요구될 수 있는 바와 같은 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 임의의 필요한 보존제 및/또는 완충액과 혼합된다. 추가로, 본 개시내용은 신체에 화합물의 조절된 전달을 제공하는 부가된 이점을 종종 가지는 경피 패치의 사용을 고려한다. 이러한 투약 형태는, 예를 들어, 적절한 배지에 화합물을 용해 및/또는 분배함에 의해 제조될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 속도는 속도 조절 막을 제공함에 의해 및/또는 화합물을 폴리머 매트릭스 및/또는 겔에 분산시킴에 의해 제어될 수 있다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 진피내에 전달하는데 사용하기에 적합한 디바이스는 짧은 바늘 디바이스 예컨대 미국 특허 4,886,499; 5,190,521; 5,328,483; 5,527,288; 4,270,537; 5,015,235; 5,141,496; 및 5,417,662에 기재된 것들을 포함한다. 진피내 조성물은 피부 안으로 바늘의 효과적인 침투 길이를 제한하는 디바이스, 예컨대 PCT 공개 WO 99/34850에 기재된 것들 및 이들의 기능적 등가물에 의해 투여될 수 있다. 액체 제트 인젝터를 통해 및/또는 각질층을 꿰뚫고 진피에 도달하는 제트를 생성하는 바늘을 통해 진피에 액체 조성물을 전달하는 제트 주사 장치가 적합하다. 제트 주사 장치는, 예를 들어, 미국 특허 5,480,381; 5,599,302; 5,334,144; 5,993,412; 5,649,912; 5,569,189; 5,704,911; 5,383,851; 5,893,397; 5,466,220; 5,339,163; 5,312,335; 5,503,627; 5,064,413; 5,520,639; 4,596,556; 4,790,824; 4,941,880; 4,940,460; 및 PCT 공개 WO 97/37705 및 WO 97/13537에 기재되어 있다. 진피에 피부의 외층을 통해 분말 형태로 백신을 가속하는 압축된 가스를 사용하는 탄도 분말/입자 전달 장치가 적합하다. 대안적으로 또는 추가로, 종래의 주사기가 진피내 투여의 고전적 망투 방법에 사용될 수 있다.
국소 투여에 적합한 제형은, 비제한적으로, 액체 및/또는 반액상 제제 예컨대 도찰제, 로션, 수중유 및/또는 유중수 에멀션 예컨대 크림, 연고 및/또는 페이스트, 및/또는 용액 및/또는 현탁액을 포함한다. 국소적으로-투여가능한 제형은, 예를 들어, 활성 성분의 농도가 용매에서 활성 성분의 용해도 한계만큼 높을 수 있지만, 약 1% 내지 약 10% (wt/wt) 활성 성분을 포함할 수 있다. 국소 투여를 위한 제형은 본 명세서에 기재된 추가 성분 중 하나 이상을 더 포함할 수 있다.
약제학적 조성물은 구강을 통한 폐 투여에 적합한 제형으로 제조되고, 포장되고, 및/또는 판매될 수 있다. 이러한 제형은 활성 성분을 포함하는 건조 입자를 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 편리하게 추진제의 스트림이 분말을 분산하도록 지향될 수 있는 건조 분말 저장소를 포함하는 디바이스를 사용하고 및/또는 밀봉된 용기 내 저비점 추진제에 용해 및/또는 현탁된 활성 성분을 포함하는 디바이스와 같은 자기-추진 용매/분말 분배 용기를 사용하여 투여를 위한 건조 분말의 형태로 된다. 건조 분말 조성물은 고체 미세 분말 희석제 예컨대 당을 포함할 수 있고 단위 용량 형태로 편리하게 제공된다.
저비등 추진제는 일반적으로 대기압에서 65℉ 아래의 비점을 갖는 액체 추진제를 포함한다. 일반적으로 추진제는 조성물 중 50% 내지 99.9% (wt/wt)를 구성할 수 있고, 활성 성분은 조성물 중 0.1% 내지 20% (wt/wt)를 구성할 수 있다. 추진제는 추가 성분 예컨대 액체 비-이온성 및/또는 고체 음이온성 계면활성제 및/또는 고체 희석제 (활성 성분을 포함하는 입자와 동일한 정도의 입자 크기를 가질 수 있음)를 더 포함할 수 있다.
폐 전달을 위해 제형화된 약제학적 조성물은 용액 및/또는 현탁액의 액적의 형태로 활성 성분을 제공할 수 있다. 이러한 제형은 활성 성분을 포함하는, 선택적으로 멸균인, 수성 및/또는 희석 알코올성 용액 및/또는 현탁액으로 제조되고, 포장되고, 및/또는 판매될 수 있고 임의의 분무화 및/또는 원자화 디바이스를 사용하여 편리하게 투여될 수 있다. 이러한 제형은, 비제한적으로, 풍미제 예컨대 사카린 나트륨, 휘발성 오일, 완충제, 계면활성제, 및/또는 보존제 예컨대 메틸하이드록시벤조에이트를 포함한 하나 이상의 추가 성분을 더 포함할 수 있다. 이 투여 경로에 의해 제공된 액적은 약 1 nm 내지 약 200 nm의 범위인 평균 직경을 가질 수 있다.
폐 전달에 유용한 것으로 본 명세서에 기재된 제형은 약제학적 조성물의 비강내 전달에 유용하다. 비강내 투여에 적합한 다른 제형은 활성 성분을 포함하고 약 0.2 ㎛ 내지 500 ㎛의 평균 입자를 갖는 조립 분말이다. 이러한 제형은 코담배가 흡입되는 방식, 즉 코에 근접하여 유지된 분말의 용기로부터 콧구멍을 통한 신속 흡입에 의해 투여된다.
비강 투여에 적합한 제형은, 예를 들어, 적게는 약 0.1% (wt/wt)로부터 많게는 100% (wt/wt)의 활성 성분으로 포함할 수 있고, 본 명세서에 기재된 추가 성분 중 하나 이상을 더 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 볼 투여에 적합한 제형으로 제조되고, 포장되고, 및/또는 판매될 수 있다. 이러한 제형은, 예를 들어, 종래의 방법을 사용하여 제조된 정제 및/또는 로젠지의 형태로 될 수 있고, 예를 들어, 0.1% 내지 20% (wt/wt) 활성 성분, 경구로 용해성 및/또는 분해성 조성물과 선택적으로 본 명세서에 기재된 추가 성분 중 하나 이상을 포함하는 나머지일 수 있다. 대안적으로, 볼 투여에 적합한 제형은 활성 성분을 포함하는 분말 및/또는 에어로졸화 및/또는 분무화된 용액 및/또는 현탁액을 포함할 수 있다. 이러한 분말화된, 에어로졸화된, 및/또는 에어로졸화된 제형은 분산될 때 약 0.1 nm 내지 약 200 nm의 범위인 평균 입자 및/또는 액적 크기를 가질 수 있고, 본 명세서에 기재된 임의의 추가 성분 중 하나 이상을 더 포함할 수 있다.
약제학적 조성물은 안과 투여에 적합한 제형으로 제조되고, 포장되고, 및/또는 판매될 수 있다. 이러한 제형은, 예를 들어, 수성 또는 유성 액체 부형제에 0.1/1.0% (wt/wt) 활성 성분의 용액 및/또는 현탁액을 포함하는, 예를 들어, 안약의 형태일 수 있다. 이러한 드롭스는 완충제, 염, 및/또는 본 명세서에 기재된 임의의 추가 성분 중 하나 이상의 다른 것을 더 포함할 수 있다. 유용한 다른 안과적으로-투여가능한 제형은 미세결정형 및/또는 리포좀 제형에 활성 성분을 포함하는 것들을 포함한다. 귀 물약 및/또는 안약은 본 개시내용의 범위 이내인 것으로 고려된다.
mRNA 요법
약물 양식으로서 mRNA는 막관통 및 세포내 단백질, 즉, 표준 생물제제가 세포막을 가로지르는 그것의 무능으로 인해 접근할 수 없는 표적을 전달하는 가능성을 갖는다. (참고 Sahin, U., Kariko K., Tuerecioe. Nat. Rev. Drug. Discov. 2014, 13, 759-780, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음). mRNA 기반 요법 실현에 대한 하나의 주요 과제는 최적의 전달 비히클의 확인이다. 그것의 큰 크기, 화학적 불안정 및 잠재적 면역원성으로 인해, mRNA는 엔도- 및 엑소-뉴클레아제로부터 보호를 제공, 뿐만 아니라 면역 감시로부터 전달대상물을 차폐시킬 수 있는 전달 비히클을 필요로 한다. 지질 나노입자 (LNPs)는 이와 관련하여 선도하는 옵션으로서 확인되었다. (참고 Hajj, K.A., Whitehead, K.A. Nat. Rev. Mater. 2017, 2, 1-17, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음). 이 접근법은 LNPs에서 제형화된 mRNA 기반 백신의 안전한 및 효과적인 전달을 증명함으로써 최근에 입증되었다. (참고 Bahl, K. 등 Mol. Ther. 2017, 25, 1316-1327, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음).
지질 나노입자 전달 시스템용 핵심 성능 기준은 세포 흡수를 최대화시키는 것 그리고 엔도솜으로부터 mRNA의 효율적인 방출을 가능하게 하는 것이다. 동시에 LNP는 안정한 의약품을 제공해야 하고 치료적으로 관련된 수준에서 안전하게 투약될 수 있어야 한다. LNPs는 전형적으로 아미노 지질, 인지질, 콜레스테롤, 및 PEG-지질로 이루어지는 다중-성분 시스템이다. 각각의 성분은 핵산 전달대상물의 효율적인 전달 그리고 입자의 안정성의 양태에 요구된다. 세포 흡수, 엔도좀 탈출, 및 내성을 구동시킨다고 생각되는 핵심 성분은 아미노 지질이다. 콜레스테롤 및 PEG-지질은 생체내 및 보류중 양쪽에서 의약품의 안정성에 기여하고, 한편 인지질은 LNP에 추가의 융합유도성을 제공하고, 따라서 엔도좀 탈출 구동을 돕고 세포의 사이토졸에서 핵산을 생체이용가능하게 만든다.
몇 개의 아미노 지질 시리즈는 과거 수십 년 동안 올리고뉴클레오타이드 전달에 대하여 개발되어 왔다. (참고 Stanton M.G., Murphy-Benenato, K.E. RNA Therapeutics. Topics in Medicinal Chemistry, 2017, vol 27., A. Garner eds., (Springer, Cham) pp. 237-253, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음). 상기 문헌은 아미노 지질의 구조와 LNP의 수득한 전달 효율 및 내성 사이 직접적인 연결을 강조한다. MC3-기반 LNPs에서 제형화된 siRNA가 트랜스티레틴-매개된 아밀로이드증의 치료를 위하여 III 기로 진행함에 따라, 아미노 지질 MC3 (DLin-MC3-DMA)는 가장 임상적으로 진전된 올리고뉴클레오타이드 전달 시스템이다. (참고 Coelho, T. 등 N. Engl. J. Med. 2013, 369, 819-829.; Butler, J.S. 등 Amyloid 2016, 23, 109-118, 이들 각각의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참고로 편입되어 있음). 더욱 최근에, 문헌 보고는 mRNA를 전달하기 위한 MC3-기반 LNPs의 유효성을 증명하였다. (참고 Nanbhan, J.F. 등 Sci. Rep. 2016, 6, 20019, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음) 이 부류의 LNPs는 정맥내로 전달된 경우 아포지질단백질 E (ApoE)에 의해 빠르게 옵소닌작용되고, 이는 저밀도 지질단백질 수용체 (LDLr)에 의한 세포 흡수를 가능하게 한다. (참고 Akinc, A. 등 Mol. Ther. 2010, 18, 1357-1364, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음) 그러나, MC3'의 오랜 조직 반감기가 만성 요법에 대한 그것의 사용을 방해하는 이롭지 않은 부작용에 기여할 수 있다는 우려가 남아있다. (참고 Maier M.A. 등 Mol. Ther. 2013, 21, 1570-1578, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음). 또한, 광범위한 문헌 증거는 지질 나노입자의 만성 투약이 보체 활성화-관련된 가짜 알러지 (CARPA) 및 간 손상을 포함하는 몇 개의 독성 부작용을 생기게 할 수 있음을 시사한다 (참고 Szebeni J. Mol. Immunol. 2014, 61, 163-173, 그것의 내용은 본 명세서에 참고로 전체적으로 편입되어 있음). 그러므로, 인간용 mRNA 요법의 잠재력을 발휘하기 위해, 인간에 있어서 만성 투약을 가능하게 할 독성 프로파일 및 대사와 함께 증가된 전달 효율을 가진 LNPs의 부류는 필요하다.
넓은 범위의 질환을 치료하기 위한 능력은 다양한 용량 수준에서 만성적으로 안전하게 투약하기 위한 가요성을 요구한다. 아미노 지질 구조의 체계적인 최적화를 통해, 본 개시내용의 화합물은 화학적 안정성, 개선된 엔도좀 탈출로 인한 전달의 개선된 효율, 신속 생체내 대사, 및 깨끗한 독성 프로파일을 조화시키는 화합물로서 확인되었다 (실시예 26). 이들 특징의 조합은 면역계의 활성화 없이 만성적으로 투약될 수 있는 약물 후보를 제공한다. 초기 설치류 스크린은 양호한 전달 효율 및 약동학의 선도 지질의 확인으로 이어졌다. 선도 LNP는 단일 및 반복 투약 후 전달의 효율을 위하여 비-인간 영장류에서 추가로 프로파일링되었다. 마지막으로, 최적화된 LNPs는 랫트 및 비-인간 영장류에서 1-개월 반복 용량 독성 연구로 평가되었다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 본 개시내용의 신규한 이온화가능 지질은 급성 및 만성 질환에서 mRNA-기반 요법의 안전한 및 효과적인 사용을 허용한다.
세포에서 폴리펩타이드를 생성하는 방법
본 개시내용은 포유동물 세포에서 관심 있는 폴리펩타이드를 생산하는 방법을 제공한다. 폴리펩타이드를 생산하는 방법은 관심 있는 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA를 포함하는 나노입자 조성물과 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. 나노입자 조성물과 세포를 접촉시킴에 의해, mRNA는 세포를 취하고 번역되어 관심 있는 폴리펩타이드를 생산할 수 있다.
일반적으로, 관심 있는 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA를 포함하는 나노입자 조성물과 포유동물 세포를 접촉시키는 단계는 생체내, 생체외, 배양물 내, 또는 시험관내에서 수행될 수 있다. 세포와 접촉된 나노입자 조성물의 양, 및/또는 그 안의 mRNA의 양은 접촉되는 세포 유형 또는 조직, 투여 수단, 나노입자 조성물 및 그 안의 mRNA의 이화학적 특성 (예를 들어, 크기, 하전, 및 화학적 조성), 및 다른 인자에 의존할 수 있다. 일반적으로, 나노입자 조성물의 유효량은 세포에서 효율적인 폴리펩타이드 생산을 허용할 것이다. 효율에 대한 메트릭스는 폴리펩타이드 번역 (폴리펩타이드 발현에 의해 표지됨), mRNA 분해 수준, 및 면역 반응 지표를 포함할 수 있다.
세포와 mRNA를 포함하는 나노입자 조성물을 접촉시키는 단계는 형질감염을 포함할 수 있거나 유발할 수 있다. 나노입자 조성물의 지질 성분에 포함된 인지질은, 예를 들어, 세포 또는 세포내막과 상호작용 및/또는 융합함에 의해 형질감염을 촉진할 수 있고 및/또는 형질감염 효율을 증가시킬 수 있다. 형질감염은 세포 내에서 mRNA의 번역을 허용할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 나노입자 조성물은 치료적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 나노입자 조성물에 포함된 mRNA는 치료적 폴리펩타이드를 인코딩할 수 있고 (예를 들어, 번역가능 영역에서), 접촉에 의해 치료적 폴리펩타이드를 생산 및/또는 세포 안으로 도입할 수 있다 (예를 들어, 형질감염). 다른 구현예에서, 나노입자 조성물에 포함된 mRNA는 대상체의 면역력을 개선 또는 증가시킬 수 있는 폴리펩타이드를 인코딩할 수 있다. 예를 들어, mRNA는 과립구-집락 자극 인자 또는 트라스투주맙을 인코딩할 수 있다.
특정 구현예에서, 나노입자 조성물에 포함된 mRNA는 나노입자 조성물과 접촉된 세포에서 실질적으로 부재할 수 있는 하나 이상의 폴리펩타이드를 대체할 수 있는 재조합 폴리펩타이드를 인코딩할 수 있다. 하나 이상의 실질적으로 부재인 폴리펩타이드는 인코딩 유전자의 유전적 돌연변이 또는 이들의 조절 경로에 기인하여 결할 수 있다. 대안적으로, mRNA의 번역에 의해 생산된 재조합 폴리펩타이드는 세포 내, 그의 표면 상에 존재하는, 또는 이로부터 분비된 내인성 단백질의 활성을 길항시킬 수 있다. 길항적 재조합 폴리펩타이드는 내인성 단백질의 활성에 의해 야기된 유해한 효과, 예컨대 돌연변이에 의해 야기된 변경된 활성 또는 편재화에 대처하기에 바람직할 수 있다. 또 다른 대안에서, mRNA의 번역에 의해 생산된 재조합 폴리펩타이드는 세포 내, 그의 표면 상에 존재하는, 또는 이로부터 분비된 생물학적 모이어티의 활성을 간접적으로 또는 직접적으로 길항시킬 수 있다. 길항된 생물학적 모이어티는, 비제한적으로, 지질 (예를 들어, 콜레스테롤), 지질단백질 (예를 들어, 저밀도 지질단백질), 핵산, 탄수화물, 및 소분자 독소를 포함할 수 있다. mRNA의 번역에 의해 생산된 재조합 폴리펩타이드는 세포 내에, 예컨대 특이적 구획 예컨대 핵 내에 편재화를 위해 조작될 수 있거나, 또는 세포로부터의 분비를 위해 또는 세포의 원형질막으로 전좌를 위해 조작될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포를 mRNA를 포함하는 나노입자 조성물과 접촉시키는 단계는 외인성 핵산에 대한 세포의 선천적인 면역 반응을 감소시킬 수 있다. 세포는 번역가능 영역을 포함하는 제1 외인성 mRNA의 제1 양을 포함하는 제1 나노입자 조성물과 접촉될 수 있고, 제1 외인성 mRNA에 대한 세포의 선천적인 면역 반응의 수준이 결정될 수 있다. 후속으로, 세포는 제2 외인성 mRNA의 제2 양을 포함하는 제2 조성물과 접촉될 수 있고, 상기 제2 양은 제1 양에 비교된 제1 외인성 mRNA의 더 적은 양이다. 대안적으로, 제2 조성물은 제1 외인성 mRNA와 상이한 제2 외인성 mRNA의 제1 양을 포함할 수 있다. 세포를 제1 및 제2 조성물과 접촉시키는 단계는 1회 이상 반복될 수 있다. 추가로, 세포에서 폴리펩타이드 생산 (예를 들어, 번역)의 효율이 선택적으로 결정될 수 있고, 그리고 표적 단백질 생산 효율이 달성될 때까지 세포는 제1 및/또는 제2 조성물과 반복적으로 재-접촉될 수 있다.
세포 및 기관에 치료제를 전달하는 방법
본 개시내용은 포유동물 세포 또는 장기에 치료제 및/또는 예방제를 전달하는 방법을 제공한다. 세포에 치료제 및/또는 예방제의 전달은 대상체에게 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 조성물의 투여는 세포를 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 예를 들어, 단백질, 세포독성 약물, 방사성 이온, 화학 치료제, 또는 핵산 (예컨대 RNA, 예를 들어, mRNA)은 세포 또는 장기에 전달될 수 있다. 치료제 및/또는 예방제가 mRNA인 사례에서, 나노입자 조성물과 세포를 접촉시킴에 의해, 번역가능 mRNA가 세포에서 번역되어 관심 있는 폴리펩타이드를 생산할 수 있다. 그러나, 실질적으로 번역가능하지 않은 mRNA가 또한 세포로 전달될 수 있다. 실질적으로 번역 불가능 mRNA는 백신으로 유용할 수 있고 및/또는 세포에서 다른 종의 발현을 감소하도록 세포의 번역 성분을 격리할 수 있다.
일부 구현예에서, 나노입자 조성물은 특정 유형 또는 부류의 세포 (예를 들어, 특정 장기 또는 이들의 시스템의 세포)를 표적화할 수 있다. 예를 들어, 관심 있는 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물은 포유동물 간, 신장, 비장, 대퇴골, 또는 폐에 구체적으로 전달될 수 있다. 특정 부류의 세포, 장기, 또는 시스템 또는 이들의 군에 특이적 전달은 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물의 더 높은 비율이, 예를 들어, 포유동물에 나노입자 조성물의 투여에 의해, 다른 목표에 비하여 관심 있는 목표 (예를들어, 조직)에 전달된다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 특이적 전달은 또 다른 목표 (예를 들어, 비장)에 비하여 표적화된 목표 (예를 들어, 관심 있는 조직, 예컨대 간)의 1g의 조직 당 치료제 및/또는 예방제의 양에서 2배, 5배, 10배, 15배, 또는 20배수 초과 증가를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 관심 있는 조직은 간, 신장, 폐, 비장, 대퇴골, 안구 조직 (예를 들어, 안구내, 망막하, 또는 유리체내 주사를 통함), 혈관에서의 혈관내피 (예를 들어, 내부-관상동맥 또는 내부-대퇴부), 또는 신장, 및 종양 조직 (예를 들어, 종양내 주사를 통함)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
표적화된 또는 특이적 전달의 또 다른 예로서, 세포 표면상에 단백질-결합 파트너 (예를 들어, 항체 또는 이들의 기능적 단편, 스캐폴드 단백질, 또는 펩타이드) 또는 수용체를 인코딩하는 mRNA는 나노입자 조성물에 포함될 수 있다. mRNA는 지질, 탄수화물, 또는 다른 생물학적 모이어티의 합성 및 세포외 편재화를 위해 추가로 또는 대신 사용될 수 있다. 대안적으로, 나노입자 조성물의 다른 치료제 및/또는 예방제 또는 요소 (예를 들어, 지질 또는 리간드)는 나노입자 조성물이 수용체를 포함한 표적 세포 모집단과 보다 쉽게 상호작용할 수 있도록 특정 수용체 (예를 들어, 저밀도 지질 단백질 수용체)에 대한 그것의 친화성에 기반하여 선택될 수 있다. 예를 들어, 리간드는, 비제한적으로, 특이적 결합 쌍의 구성원, 항체, 단클론성 항체, Fv 단편, 단일 사슬 Fv (scFv) 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 단일 도메인 항체, 낙타화된 항체 및 이의 단편, 인간화된 항체 및 이의 단편, 및 이들의 다가 버전; 모노- 또는 이중 특이적 항체를 포함한 다가 결합 시약 예컨대 디설파이드 안정화된 Fv 단편, scFv 탠덤, 디아바디, 트리바디, 또는 테트라바디; 및 압타머, 수용체, 및 융합 단백질을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 리간드는 세표 표적화 특이성의 조정을 허용할 수 있는 표면-결합된 항체일 수 있다. 이것은 특히 고도로 특이적 항체가 원하는 표적화 부위에 대해 관심 있는 에피토프에 대하여 상승될 수 있기 때문에 유용하다. 일 구현예에서, 다중 항체는 세포의 표면상에 발현되고, 각각의 항체는 원하는 표적에 대해 상이한 특이성을 가질 수 있다. 이러한 접근법은 결합능 및 표적화 상호작용의 특이성을 증가시킬 수 있다
리간드는, 예를 들어, 세포의 원하는 편재화 또는 기능에 기반하여 생물학 기술에서 숙련가에 의해 선택될 수 있다. 예를 들어 에스트로겐 수용체 리간드, 예컨대 타목시펜은 세포를 세포 표면상에 증가된 수의 에스트로겐 수용체를 갖는 에스트로겐-의존적 유방암 세포에 대해 표적화할 수 있다. 리간드/수용체 상호작용의 다른 비-제한적인 예는 CCR1 (예를 들어, 류마티스성 관절염, 및/또는 다발성 경화증에서 염증성 관절 조직 또는 뇌의 치료를 위함), CCR7, CCR8 (예를 들어, 림프절 조직을 표적화함), CCR6, CCR9,CCR10 (예를 들어, 장내 조직을 표적화함), CCR4, CCR10 (예를 들어, 피부를 표적화함), CXCR4 (예를 들어, 일반적인 향상된 관통이동을 위함), HCELL (예를 들어, 염증 및 염증성 장애, 골수의 치료를 위함), Alpha4beta7 (예를 들어, 장내 점막 표적화를 위함), 및 VLA-4NCAM-1 (예를 들어, 내피를 표적화함)을 포함한다. 일반적으로, 표적화에 관여된 임의의 수용체 (예를 들어, 암 전이)는 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물에 사용하기 위해 활용될 수 있다.
표적화된 세포는, 비제한적으로, 간 세포, 상피 세포, 조혈 세포, 상피 세포, 내피 세포, 폐 세포, 뼈 세포, 줄기 세포, 간엽 세포, 신경 세포, 심장 세포, 지방 세포, 혈관 평활근 세포, 심근 세포, 골격 근육 세포, 베타 세포, 뇌하수체 세포, 활막 라이닝 세포, 난소 세포, 고환 세포, 섬유모 세포, B 세포, T 세포, 망상 적혈구, 백혈구, 과립구, 및 종양 세포를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 나노입자 조성물은 간 세포를 표적화할 수 있다. 아포리포 단백질 예컨대 아포지질 단백질 E (apoE)는 신체에서 중성 또는 거의 중성 지질-함유 나노입자 조성물과 회합하는 것으로 밝혀졌고 간 세포의 표면상에서 발견된 수용체 예컨대 저밀도 지질 단백질 수용체 (LDLR)와 회합하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 대상체에게 투여되는 중성 또는 거의 중성 전하를 갖는 지질 성분을 포함하는 나노입자 조성물은 대상체의 신체에서 apoE를 얻을 수 있고, 그리고 후속으로 표적화된 방식으로 LDLR을 포함하는 간 세포로 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, RNA)를 전달할 수 있다.
질환 및 장애를 치료하는 방법
나노입자 조성물은 질환, 장애, 또는 병태를 치료하는데 유용할 수 있다. 특히, 이러한 조성물은 단백질 또는 폴리펩타이드 활성 누락 또는 비정상을 특징으로 하는 질환, 장애, 또는 병태를 치료하는데 유용할 수 있다. 예를 들어, 누락 또는 비정상적인 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA를 포함하는 나노입자 조성물이 세포에 투여 또는 전달될 수 있다. mRNA의 후속적인 번역은 폴리펩타이드를 생성할 수 있고, 그것에 의해 폴리펩타이드의 부재에 의해 야기된 사안 또는 이에 의해 야기된 비정상적인 활성을 감소하거나 제거한다. 번역은 빠르게 발생할 수 있기 때문에, 본 방법 및 조성물은 급성질환, 장애, 또는 병태 예컨대 패혈증, 뇌졸중, 및 심근경색증의 치료에 유용할 수 있다. 나노입자 조성물에 포함된 치료제 및/또는 예방제는 또한 주어진 종의 전사 속도를 변경할 수 있고, 그것에 의해 유전자 발현에 영향을 미칠 수 있다.
조성물이 투여될 수 있는 기능 이상 또는 비정상적인 단백질 또는 폴리펩타이드 활성을 특징으로 하는 질환, 장애, 및/또는 병태는, 비제한적으로, 희귀 질환, 감염성 질환 (백신 및 치료제로 둘 모두로), 암 및 증식성 질환, 유전적 질환 (예를 들어, 낭포성 섬유증), 자가면역 질환, 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 심장- 및 신장-혈관 질환, 및 대사 질환을 포함한다. 다중 질환, 장애, 및/또는 병태는 단백질 활성 누락 (또는 적절한 단백질 기능이 발생하지 않도록 실질적으로 줄어듦)을 특징으로 할 수 있다. 이러한 단백질은 존재하지 않을 수 있거나, 또는 이들은 본질적으로 비-기능적일 수 있다. 기능이상성 단백질의 특정 예는 낭포성 섬유증 막관통 전도성 조절 인자 (CFTR) 유전자의 미스센스 돌연변이 변이체로, 낭포성 섬유증을 야기하는 CFTR 단백질의 기능이상성 단백질 변이체를 생성한다. 본 개시내용은 RNA를 포함하는 나노입자 조성물 및 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질, 인지질 (선택적으로 불포화됨), PEG 지질, 및 구조 지질을 포함하는 지질 성분을 투여함에 의해 대상체에서 이러한 질환, 장애, 및/또는 병태를 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 RNA는 대상체의 세포에 존재하는 비정상적인 단백질 활성을 길항시키거나 또는 달리 극복하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA일 수 있다.
본 개시내용은 하나 이상의 치료 및/또는 예방적 제제를 포함하는 나노입자 조성물 및 이를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 용어들 치료제 및 예방제는 본 개시내용의 특징 및 구현예에 관하여 본 명세서에 상호교환적으로 사용될 수 있다. 치료적 조성물, 또는 이미지 형성, 진단, 또는 이들의 예방적 조성물은 질환, 장애, 및/또는 병태를 예방, 치료, 진단 또는 이미지형성하는데, 및/또는 임의의 다른 목적에 대해 효과적인 임의의 합리적인 양 및 임의의 투여 경로를 사용하여 대상체에게 투여될 수 있다. 주어진 대상체에게 투여된 특정 양은 대상체의 종, 연령, 및 일반적인 병태; 투여 목적; 특정한 조성물; 투여 방식; 및 기타 동종의 것에 따라 다양할 수 있다. 본 개시내용에 따른 조성물은 투여의 용이 및 투약량의 균일성을 위해 투약량 단위 형태로 제형화될 수 있다. 그러나, 본 개시내용의 총 1일 사용량은 건전한 의료 판단의 범위 이내에서 주치의에 의해 결정될 것이다는 것이 이해될 것이다. 임의의 특정 환자에 대하여 특정 치료적으로 효과적인, 예방적으로 효과적인, 또는 달리는 적절한 용량 수준 (예를 들어, 이미지형성용)은, 만일 있다면, 치료되는 장애의 중증도 및 동일성; 이용된 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제; 이용된 특이적 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 및 다이어트; 이용된 특이적 약제학적 조성물의 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 속도; 치료의 기간; 이용된 특이적 약제학적 조성물과 조합 또는 동시 발생으로 사용된 약물; 및 의술에서 잘 알려진 유사 인자를 포함한 다양한 인자에 의존할 것이다.
하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물은 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 나노입자 조성물을 포함한, 예방적, 진단적, 또는 이미지형성 조성물을 포함하는 조성물은, 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 수질내, 척추강내, 뇌실질내, 피하, 심실내, 트랜스- 또는 내부-진피, 진피간, 직장, 질내, 복강내, 안구내, 망막하, 유리체내, 국소 (예를 들어 분말, 연고, 크림, 겔, 로션, 및/또는 드롭스에 의함), 점막, 비강, 볼, 장관, 유리체, 종양내, 설하, 비강내; 기관내점적, 기관지점적주입, 및/또는흡입에 의해; 경구분무 및/또는 분말, 비강스프레이, 및/또는 에어로졸로, 및/또는 문맥 카테터를 통한 것을 포함한, 다양한 경로 중 하나 이상에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 정맥내로, 근육내로, 진피내로, 동맥내로, 종양내로, 피하로, 안구내로, 망막하로, 유리체내로, 뇌실질내로, 또는 투여의 임의의 다른 비경구 경로에 의해 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 그러나, 본 개시내용은 약물 전달의 과학에서 가능성 있는 진보를 고려하여 임의의 적절한 경로에 의해 본 명세서에 기재된 조성물의 전달 또는 투여를 포괄한다. 일반적으로, 가장 적절한 투여 경로는 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함한 나노입자 조성물의 특성 (예를 들어, 다양한 체내 환경 예컨대 혈류 및 위장관에서 그것의 안정성), 환자의 병태 (예를 들어, 환자가 특정 투여 경로를 용인할 수 있는지 여부), 등을 포함한 다양한 인자에 의존할 것이다.
특정 구현예에서, 본 개시내용에 따른 조성물은 주어진 용량에서 약 0.0001mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 0.001mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 0.005mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 0.01mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 0.05mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 0.1mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 1mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 2mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 5mg/kg 내지 약 10mg/kg, 약 0.0001mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 0.001mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 0.005mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 0.01mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 0.05mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 0.1mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 1mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 2mg/kg 내지 약 5mg/kg, 약 0.0001mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 0.001mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 0.005mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 0.01mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 0.05mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 0.1mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 1mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 2mg/kg 내지 약 2.5mg/kg, 약 0.0001mg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 0.001mg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 0.005mg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 0.01mg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 0.05mg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 0.1mg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 0.0001mg/kg 내지 약 0.25mg/kg, 약 0.001mg/kg 내지 약 0.25mg/kg, 약 0.005mg/kg 내지 약 0.25mg/kg, 약 0.01mg/kg 내지 약 0.25mg/kg, 약 0.05mg/kg 내지 약 0.25mg/kg, 또는 약 0.1mg/kg 내지 약 0.25mg/kg의 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA)을 전달하기에 충분한 투약량 수준으로 투여될 수 있고, 여기서 1mg/kg (mpk)의 용량은 대상체 체중의 1kg당 1mg의 치료제 및/또는 예방제를 제공한다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물의 약 0.001mg/kg 내지 약 10mg/kg의 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, mRNA)의 용량이 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 약 0.005mg/kg 내지 약 2.5mg/kg의 치료제 및/또는 예방제의 용량이 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 약 0.1mg/kg 내지 약 1mg/kg의 용량이 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 약 0.05mg/kg 내지 약 0.25mg/kg의 용량이 투여될 수 있다. 용량은 원하는 수준의 mRNA 발현 및/또는 치료적, 진단적, 예방적, 또는 이미지형성 효과를 얻기 위해, 동일 또는 상이한 양으로 1일당 1회 이상 투여될 수 있다. 원하는 투약량은, 예를 들어, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 이틀 간격으로, 매주, 2주마다, 3주 마다, 또는 4주 마다 전달될 수 있다. 특정 구현예에서, 원하는 투약량은 다중 투여 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 그 초과 투여)를 사용하여 전달될 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 용량은, 예를 들어, 수술 과정 이전 또는 이후 또는 급성 질환, 장애, 또는 병태의 사례에서 투여될 수 있다.
하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물은 하나 이상의 다른 치료적, 예방적, 진단적, 또는 조영 제제와 조합하여 사용될 수 있다. "와 조합하여"는, 비록 이들 전달의 방법이 본 개시내용의 범위이지만, 제제는 함께 전달을 위해 동시에 투여 및/또는 제형화되어야 한다는 것을 의미하는 것으로 의도되지는 않는다. 예를 들어, 하나 이상의 상이한 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 하나 이상의 나노입자 조성물은 조합하여 투여될 수 있다. 조성물은 하나 이상의 다른 원하는 치료제 또는 의료절차와 동반하여, 이전에, 또는 후속적으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 제제는 그 제제에 대해 결정된 용량으로 및/또는 시간 스케줄에 투여될 것이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 조성물의 전달, 또는 그것의 생체이용률을 개선하고, 그것의 대사를 감소 및/또는 변경하고, 그것의 배출을 억제하고 및/또는 신체 내에서 그것의 분포를 변경하는 제제와 조합하여 이들의 이미지형성, 진단적 또는 예방적 조성물을 포괄한다
조합으로 이용된 치료적으로, 예방적으로, 진단으로, 또는 이미지형성 활성제는 단일 조성물로 함께 투여되거나 상이한 조성물로 별도로 투여될 수 있음이 추가로 인정될 것이다. 일반적으로 조합으로 이용되는 제제는 개별적으로 이용되는 수준을 초과하지 않는 수준에서 이용될 것으로 기대된다. 일부 구현예에서, 조합으로 이용되는 수준은 개별적으로 이용되는 것보다 낮을 수 있다.
조합 레지멘에서 채용하기 위한 요법 (치료제 또는 절차)의 특별한 조합은 원하는 치료제 및/또는 절차와 달성되기를 원하는 치료 효과의 혼용성을 고려하여 취해질 것이다. 이용된 요법은 동일한 장애에 대해 원하는 효과를 달성할 수 있거나 (예를 들어, 암을 치료하는데 유용한 조성물은 화학 치료제와 동반하여 투여될 수 있음) 또는 이들이 상이한 효과를 달성할 수 있다 (예를 들어, 임의의 역효과, 예컨대 주입 관련된 반응의 조절)는 것이 또한 인정될 것이다.
나노입자 조성물은 조성물의 유효성 및/또는 적정 약물농도를 증가시키기 위한 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 제제는, 예를 들어, 항-염증성 화합물, 스테로이드 (예를 들어, 코르티코스테로이드), 스타틴, 에스트라디올, BTK 억제제, S1P1 효능제, 글루코코르티코이드 수용체 조절물질 (GRM), 또는 항히스타민제일 수 있다. 일부 구현예에서, 나노입자 조성물은 덱사메타손, 메토트렉세이트, 아세트아미노펜, H1 수용체 차단제, 또는 H2 수용체 차단제와 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 그것을 필요로 하는 대상체를 치료하거나 또는 대상체 (예를 들어, 포유동물)에게 치료제 및/또는 예방제를 전달하는 방법은 나노입자 조성물을 투여하기 전에 하나 이상의 제제로 상기 대상체를 사전-처리하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 대상체는 유용한 양 (예를 들어, 10mg, 20mg, 30mg, 40mg, 50mg, 60mg, 70mg, 80mg, 90mg, 100mg, 또는 임의의 다른 유용한 양)의 덱사메타손, 메토트렉세이트, 아세트아미노펜, H1 수용체 차단제, 또는 H2 수용체 차단제로 사전-처리될 수 있다. 사전-처리는 나노입자 조성물의 투여 전 24 또는 그 미만 시간 (예를 들어, 24시간, 20시간, 16시간, 12시간, 8시간, 4시간, 2시간, 1시간, 50분, 40분, 30분, 20분, 또는 10분)에 발생할 수 있고, 그리고, 예를 들어, 증가하는 투약량에서 1, 2, 또는 그 초과 시간 발생할 수 있다.
당해 분야의 숙련가는 본 명세서에 기재된 개시내용에 따라 특정 구현예에 대한 많은 균등물을 일상적인 실험과정 이하를 사용하여 인식하거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 본 개시내용의 범위는 상기 설명에 제한하기 위한 것이 아니라 오히려 첨부된 청구항들에서 제시된 바와 같다.
청구항들에서, 관사 예컨대 "a", "an" 및 "the"는 문맥으로부터 상반되게 나타내지 않거나 또는 달리 분명하지 않은 한 하나 이상을 의미할 수 있다. 한 그룹의 하나 이상의 구성원 사이에 "또는"을 포함하는 청구항 또는 설명은 문맥으로부터 상반되게 나타내지 않거나 또는 달리 분명하지 않은 한 그룹 중 하나, 1 초과 또는 모두가 주어진 생성물 또는 과정에 존재하거나, 이용되거나 또는 달리는 관련이 있는 경우 충족되는 것으로 간주된다. 본 개시내용은 그룹의 정확히 한 구성원이 주어진 생성물 또는 과정에 존재하거나, 이용되거나 또는 달리는 관련이 있는 구현예를 포함한다. 본 개시내용은 그룹 구성원 중 1 초과, 또는 모두가 주어진 생성물 또는 과정에 존재하거나, 이용되거나 또는 달리는 관련이 있는 구현예를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 표현 "A, B, 또는 C 중 하나 이상", "하나 이상의 A, B, 또는 C", "A, B, 및 C 중 하나 이상", "하나 이상의 A, B, 및 C", "A, B, 및 C로부터 선택된", "A, B, 및 C로 이루어진 군으로부터 선택된", 및 기타 동종의 것은 상호교환적으로 사용되고, 그리고 모두는, 달리 구체화되지 않는 한, A, B, 및/또는 C로 이루어진 군, 즉, 하나 이상의 As, 하나 이상의 Bs, 하나 이상의 Cs, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택을 지칭한다.
용어 "포함하는"은 개방되도록 의도되고 추가의 요소 또는 단계의 봉입을 요구하지 않는다는 것을 또한 유의해야 한다. 용어 "포함하는"이 본 명세서에서 사용될 때, 용어들 "본질적으로 구성되는" 및 "구성되는"이 따라서 또한 포괄되고 개시된다. 설명 전반에 걸쳐, 조성물이 특이적 성분을 갖거나, 포함하거나 또는 함유하는 것으로 기재된 경우, 조성물은 또한 인용된 성분으로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는 것이 고려된다. 유사하게, 방법 또는 과정이 특이적 처리 단계를 갖거나, 포함하거나 또는 함유하는 것으로 기재된 경우, 과정은 또한 인용된 처리 단계로 구성되거나 또는 본질적으로 구성된다. 또한, 특정 동작을 수행하기 위한 단계 또는 순서는 본 발명이 동작 가능한 한 중요하지 않다는 것을 이해해야 한다. 나아가, 2개 또는 그 초과 단계 또는 동작이 동시에 수행될 수 있다.
범위가 주어진 경우, 종점이 포함된다. 게다가, 달리 나타내지 않는 한 또는 문맥으로부터 달리 분명하지 않는 한 그리고 당해 분야의 숙련가의 이해로, 범위로 표현된 값은 본 개시내용의 다른 구현예에서 언급된 범위 내에서 임의의 특정 값 또는 하위 범위를, 문맥에서 달리 명확히 명시되지 않는 한, 범위의 하한 단위의 1/10로 가정할 수 있다는 것을 이해해야 한다.
본 개시내용의 합성 과정은 다양한 작용기를 용인할 수 있고, 따라서 다양한 치환된 개시물질이 사용될 수 있다. 과정은 일반적으로, 화합물을 이의 약제학적으로 허용가능한 염으로 추가로 전환시키는 것이 특정 사례에서 바람직할 수도 있지만, 전체적인 과정에서 또는 말단 부근에서 원하는 최종 화합물을 제공한다.
본 개시내용의 화합물은 문헌에 알려진 상업적으로 입수가능한 개시 물질, 화합물을 사용하거나, 또는 당해 분야의 숙련가에게 알려지거나 본 명세서에의 교시에 비추어 숙련가에게 명백하게 될 표준 합성 방법 및 절차를 채용함에 의해 쉽게 제조된 중간체로부터 다양한 방식으로 제조될 수 있다. 유기 분자의 제조 및 작용기 전환 및 조작에 대한 표준 합성 방법 및 절차는 본 분야에서의 관련된 과학적 문헌 또는 표준 교과서로부터 수득될 수 있다. 비록 임의의 하나 또는 몇 개의 공급원에 제한되지는 않지만, 본 명세서에 참고로 편입된 고전적 교과서 예컨대 [Smith, M. B., March, J., March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001]; [Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999]; [R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989)]; [L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley 및 Sons (1994)]; 및 [L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley 및 Sons (1995)]가 유용하고 당해 기술의 숙련가에게 알려진 유기 합성의 인식된 참고 교과서이다. 합성 방법의 하기 설명은, 비제한적으로, 본 개시내용의 화합물의 제조를 위한 일반적인 절차를 설명하기 위해 설계된다.
본 명세서에 기재된 임의의 식을 갖는 본 개시내용의 화합물은 상업적으로 입수가능한 개시물질 또는 문헌 절차를 사용하여 제조될 수 있는 개시물질로부터, 하기 반응식 1, 2 및 3에서 설명된 절차에 따라 제조될 수 있다. 반응식에서의 변수 (예를 들어, R1, R2, 및 R3 등은 본 명세서에서 정의된 바와 같다). 당해 분야의 숙련가는, 본 명세서에 기재된 반응 순서 및 합성식 동안, 특정 단계의 순서 예컨대 보호기의 도입 및 제거는 변화될 수 있다는 것을 인지할 것이다.
당해 분야의 숙련가는 특정 기가 보호기의 사용을 통해 반응 조건으로부터 보호를 요할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 보호기는 또한 분자에서 유사한 작용기를 분화하기 위해 사용될 수 있다. 보호기의 목록 및 이들 기를 도입하고 제거하는 방법은 [Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999]에서 발견될 수 있다.
바람직한 보호기는, 비제한적으로, 하기를 포함한다:
하이드록실모이어티에 대해: TBS, 벤질, THP, Ac;
카복실산에 대해: 벤질 에스테르, 메틸 에스테르, 에틸 에스테르, 알릴 에스테르;
아민에 대해: Fmoc, Cbz, BOC, DMB, Ac, Bn, Tr, Ts, 트리플루오로아세틸, 프탈이미드, 벤질리덴아민;
디올에 대해: Ac (x2) TBS (x2), 또는 함께 합쳐져서 아세토나이드;
티올에 대해: Ac;
벤즈이미다졸에 대해: SEM, 벤질, PMB, DMB;
알데하이드에 대해: 디-알킬 아세탈 예컨대 디메톡시 아세탈 또는 디에틸 아세틸.
본 명세서에 기재된 반응식에서, 다중 입체이성질체가 생산될 수 있다. 특정 입체이성질체가 지시되지 않은 경우, 반응으로부터 생산될 수 있는 모든 가능한 입체이성질체를 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 당해 분야의 숙련가는 우선적으로 하나의 이성질체를 제공하도록 반응이 최적화될 수 있거나, 또는 단일 이성질체를 생성하기 위한 신규한 반응식이 고안될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 혼합물이 생산된 경우, 이성질체를 분리하기 위해 분취 박층 크로마토그래피, 분취 HPLC, 분취 키랄 HPLC, 또는 분취 SFC와 같은 기술이 사용될 수 있다.
반응식 1
Figure pct00102
상기 반응식 1에서 예시된 바와 같이, 8-브로모옥탄산은 알코올 a1 (예를 들어, 헵타데칸-9-올)과 반응하여 에스테르 b1 (예를 들어, 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트)을 제공한다. 단계 1은, 예를 들어, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드, N,N-디이소프로필에틸아민 및 DMAP의 존재에서 유기 용매 (예를 들어, 디클로로메탄) 안에서 일어날 수 있다. 단계 1은 실온에서 18시간 동안 일어날 수 있다. 다음으로, 에스테르 b1은 2-아미노에탄-1-올과 반응하여 아민 c1 (예를 들어, 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트)를 제공한다. 단계 2는, 예를 들어, 약 60℃의 온도에서 에탄올에서 일어날 수 있다. 그런 다음, 아민 c1은 브로모알킬 R1-Br (예를 들어, 1-브로모테트라데칸)과 반응하여 화합물 d1 (예를 들어, 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(테트라데실)아미노)옥타노에이트)을 제공한다. 단계 3은 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재에서 에탄올에서 일어날 수 있다.
반응식 2
Figure pct00103
Figure pct00104
상기 반응식 2에서 예시된 바와 같이, 산 a2 (t는 정수 1 내지 7; 예를 들어, 8-브로모옥탄산)는 알코올 b2 (예를 들어, 노난-1-올)와 반응하여 에스테르 c2 (예를 들어, 노닐-8-브로모옥타노에이트)를 제공한다. 단계 1은, 예를 들어, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드, N,N-디이소프로필에틸아민 및 DMAP의 존재에서 유기 용매 (예를 들어, 디클로로메탄)에서 일어날 수 있다. 알코올 e2 (예를 들어, 헵타데칸-9-올)는 단계 2를 통해 알데하이드 d2 (예를 들어, 노난알)를 그리냐드 시약 R3-MgX (예를 들어, n-C8H17MgBr)와 반응시킴으로부터 수득될 수 있다. 다음으로, 8-브로모옥탄산은 알코올 e2 (예를 들어, 헵타데칸-9-올)와 반응하여 에스테르 f2 (예를 들어, 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트)를 제공한다. 단계 3은, 예를 들어, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드, N,N-디이소프로필에틸아민 및 DMAP의 존재에서 유기 용매 (예를 들어, 디클로로메탄)에서 일어날 수 있다. 다음으로, 에스테르 f2는 2-아미노에탄-1-올과 반응하여 아민 g2 (예를 들어, 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트)를 제공한다. 단계 4는 i-Pr2EtN의 존재에서 에탄올에서 일어날 수 있다. 그런 다음 아민 g2는 에스테르 c2 (예를 들어, 노닐-8-브로모옥타노에이트)와 반응하여 화합물 h2 (예를 들어, 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트)를 제공한다. 단계 5는, 예를 들어, 고온 (예컨대 약 70-90℃, 예를 들어, 약 80℃)에서, 염기 (예컨대 무기 염기 (예를 들어, K2CO3) 또는 비-친핵성 유기 염기 (예를 들어, i-Pr2EtN)) 및 촉매 (예를 들어, 아이오다이드 예컨대 KI 또는 NaI)의 존재에서 유기 용매 (예를 들어, CPME 및 MeCN의 혼합물)에서 일어날 수 있다.
반응식 3
Figure pct00105
상기 반응식 3에서 설명된 바와 같이, 할로알칸올 (t는 1 내지 12의 정수임, 예를 들어, 6- 브로모헥산-1-올)은 개시 물질 a3 (s는 1 내지 6의 정수임, 예를 들어, 4-(헥실옥시)-4-옥소부탄산)로 반응하여 할로겐화된 디에스테르 b3 (예를 들어, 6-브로모헥실 헥실 석시네이트)를 얻는다. 화합물 a3은 알코올 (예를 들어, 헥산-1-올)과, 산 무수물 (예를 들어 석신산 무수물, 디하이드로-2H-피란-2,6(3H)-디온, 3-(tert-부톡시)-3-옥소프로판산, 4-(tert-부톡시)-3-메틸-4-옥소부탄산, 또는 4-(tert-부톡시)-2-메틸-4-옥소부탄산)과의 반응으로 수득될 수 있다. 단계 1은 유기 용매 (예를 들어, 디클로로메탄)에서, 예를 들어, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드-하이드로염화물, N,N-디이소프로필에틸아민 및 DMAP의 존재에서 일어날 수 있다. 다음으로, 할로겐화된 디에스테르 b3은 아민 c3 (u는 5 내지 13의 정수이고, v은 정수 1 내지 5의 정수임, 예를 들어, 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트)과 반응하여 생성물 d3을 얻는다. 단계 2는 유기 용매 (예를 들어, CPME과 MeCN의 혼합물)에서, 염기 (예컨대 무기 염기 (예를 들어, K2CO3) 및 촉매 (예를 들어, 아이오다이드 예컨대 KI) 및 에테르 용매 (예를 들어, 사이클로펜틸 메틸 에테르)의 존재에서, 고온 (예를 들어, 약 90 ℃)에서 일어날 수 있다.
당해 분야의 숙련가는 상기 반응식에서 특정 단계의 순서가 교환가능할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
특정 양태에서, 개시내용은 또한 임의의 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물 및 상기 화합물을 합성하기 위한 중간체(들)을 합성하는 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 식 (I)의 화합물을 합성하는 방법은 식 (I)의 화합물을 제공하기 위해 식 (X2)의 화합물:
Figure pct00106
을 R1-Br과 반응시키는 것을 포함하고, 여기서 각각의 변수는 본 명세서에서 정의된 바와 같다. 예를 들어, m은 5, 6, 7, 8, 또는 9, 바람직하게는 5, 7, 또는 9이다. 예를 들어, 각각의 R5, R6, 및 R7은 H이다. 예를 들어, M은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이다. 예를 들어, R4는 비치환된 C1- 3알킬, 또는 -(CH2)nQ이고, 여기서 n은 2, 3, 또는 4이고 Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R이다. 예를 들어, R1-Br과 식 (X2)의 화합물의 반응은 염기 (예컨대 무기 염기 (예를 들어, K2CO3) 또는 비-친핵성 유기 염기 (예를 들어, i-Pr2EtN))의 존재에서 일어난다. 예를 들어, 반응은 무기 염기 (예를 들어, K2CO3) 및 촉매 (예를 들어, 아이오다이드 예컨대 KI 또는 NaI)의 존재에서 일어난다. 예를 들어, 반응은 고온, 예를 들어, 약 50-100℃, 70-90℃, 또는 약 80℃)에서 일어난다.
본 방법은 또한 식 (X2)의 화합물을 제공하기 위해 식 (X1)의 화합물:
Figure pct00107
을 R4NH2와 반응시키는 것을 포함할 수 있고, 여기서 각각의 변수는 본 명세서에서 정의된 바와 같다.
일부 구현예에서, 중간체(들)은 임의의 식 (X1) 및 (X2):
Figure pct00108
또는
Figure pct00109
를 갖는 것들을 포함하고, 여기서 각각의 변수는 본 명세서에서 정의된 바와 같다. 예를 들어, 중간체는 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트, 및 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트, 및 이들의 형을 가진 형태 (예를 들어, 결정형)을 포함한다.
또한, 선행 기술 이내로 되는 본 개시내용의 임의의 특정 구현예는 청구항 중 임의의 하나 이상으로부터 명백하게 배제될 수 있다는 것을 이해해야 한다. 이러한 구현예는 당해 분야의 숙련가에게 알려진 것으로 간주되기 때문에, 본 명세서에서 배제가 명백하게 제시되지 않더라도 이들은 배제될 수 있다.
모든 인용된 공급원, 예를 들어, 참조문헌, 공보, 데이터베이스, 데이터베이스 표제, 및 본 명세서에서 인용된 기술은 인용으로 명시적으로 언급되지 않은 경우에도 본원에 참고로 편입된다. 인용된 공급원과 본원의 서술이 충돌할 경우에, 본원에서의 서술이 우선한다.
실시예
실시예 1: 식 I), (IA), ( IB ), (II), ( IIa ), ( IIb ), ( IIc ), ( IId ), ( IIe ) (IIf), 또는 (IIg)에 따른 화합물의 합성
A. 일반적인 고려사항들
사용된 모든 용매 및 시약은 달리 명시되지 않는 한 상업적으로 수득되었고 이와 같이 사용되었다. 1H NMR 스펙트럼은 Bruker Ultrashield 300 MHz 기기를 사용하여 300 K에서 CDCl3에서 기록되었다. 화학적 이동은 1H에 대한 TMS (0.00)에 대비하여 백만분율 (ppm)로 보고된다. 실리카 겔 크로마토그래피는 ISCO RediSep Rf 골드 플래시 카트리지 (입자 크기: 20-40 마이크론)를 사용하여 ISCO CombiFlash Rf+ LumenInstruments 상에서 수행되었다. 역상 크로마토그래피는 RediSep Rf 골드 C18 고성능 칼럼을 사용하여 ISCO CombiFlash Rf+ LumenInstruments 상에서 수행되었다. 모든 최종 화합물은 DAD 및 ELSD를 갖는 Waters Acquity UPLC 기기와 ZORBAX Rapid Resolution High Definition (RRHD) SB-C18 LC 칼럼, 2.1 mm, 50 mm, 1.8 μm, 및 1.2 mL/min으로 5분에 걸친 0.1% TFA를 갖는 물 내 65 내지 100% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 역상 UPLC-MS (체류 시간, RT, 분 단위)에 의한 분석을 통해 85%보다 더 순수한 것으로 결정되었다. 주입 용량은 5 μL였고 칼럼 온도는 80℃였다. 검출은 Waters SQD 질량 분광분석기 (Milford, MA, USA) 및 증발 광 산란 검출기를 사용한 양성 방식에서 전기분무 이온화 (ESI)에 기반되었다.
아래에 기재된 절차는 화합물 1-280의 합성에서 유용하다.
하기 약어는 본 명세서에서 이용된다:
THF: 테트라하이드로푸란
MeCN: 아세토니트릴
LAH: 리튬 수소화알루미늄
DCM: 디클로로메탄
DMAP: 4-디메틸아미노피리딘
LDA: 리튬 디이소프로필아미드
rt: 실온
DME: 1,2-디메톡시에탄
n-BuLi: n-부틸리튬
CPME: 사이클로펜틸 메틸 에테르
i-Pr2EtN: N,N-디이소프로필에틸아민
B. 화합물 2: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)( 테트라데실 )아미노) 옥타노에이트
대표적인 절차 1
Figure pct00110
헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (방법 A)
Figure pct00111
디클로로메탄 (20 mL) 중 8-브로모옥탄산 (1.04 g, 4.6 mmol) 및 헵타데칸-9-올 (1.5 g, 5.8 mmol)의 용액에 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'- 에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (1.1 g, 5.8 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (3.3 mL, 18.7 mmol) 및 DMAP (114 mg, 0.9 mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-10% 에틸 아세테이트)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (875 mg, 1.9 mmol, 41%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 3.42 (m, 2H); 2.31 (m, 2H); 1.89 (m, 2H); 1.73-1.18 (br. m, 36H); 0.88 (m, 6H).
헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (방법 B)
Figure pct00112
에탄올 (3 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (3.8 g, 8.2 mmol) 및 2-아미노에탄-1-올 (15 mL, 248 mmol)의 용액을 62 ℃에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 및 물에서 채취했다. 유기층을 분리하고, 물, 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (3.1 g, 7 mmol, 85%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 2.67 min. MS (ES): C27H55NO3에 대한 m/z (MH+) 442.68. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 3.67 (t, 2H); 2.81 (t, 2H); 2.65 (t, 2H); 2.30 (t, 2H); 2.05 (br. m, 2H); 1.72-1.41 (br. m, 8H); 1.40-1.20 (br. m, 30H); 0.88 (m, 6H).
헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(테트라데실)아미노)옥타노에이트 (방법 C)
Figure pct00113
화학식: C41H83NO3
분자량: 638.12
에탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (125 mg, 0.28 mmol), 1-브로모테트라데칸 (94 mg, 0.34 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (44 mg, 0.34 mmol)의 용액을 65 ℃에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각시키고, 용매를 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨에서 채취했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(테트라데실)아미노)옥타노에이트 (89 mg, 0.14 mmol, 50%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.61 min. MS (ES): C41H83NO3에 대한 m/z (MH+) 638.91. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 3.72-3.47 (br. m, 2H); 2.78-2.40 (br. m, 5H); 2.28 (t, 2H); 1.70-1.40 (m, 10H); 1.38-1.17 (br. m, 54H); 0.88 (m, 9H).
중간체의 합성:
중간체 A: 2-옥틸데칸산
Figure pct00114
THF (10 mL) 중 디이소프로필아민 (2.92 mL, 20.8 mmol)의 용액을 -78 ℃로 냉각시키고, n-BuLi의 용액 (7.5 mL, 18.9 mmol, 헥산 중 2.5 M)을 첨가했다. 반응을 0 ℃로 가온되도록 했다. THF (20 mL) 중 데칸산 (2.96 g, 17.2 mmol) 및 NaH (754 mg, 18.9 mmol, 60%w/w)의 용액에 0 ℃에서 LDA의 용액을 첨가하고, 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반되도록 했다. 이 시간 후 1-아이오도옥탄 (5 g, 20.8 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 45 ℃에서 6시간 동안 가열했다. 반응을 1N HCl (10 mL)로 켄칭했다. 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트)로 정제하여 2-옥틸데칸산 (1.9 g, 6.6 mmol, 38%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 2.38 (br. m, 1H); 1.74-1.03 (br. m, 28H); 0.91 (m, 6H).
중간체 B: 7-브로모헵틸 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00115
7-브로모헵틸 2-옥틸데카노에이트를, 2-옥틸데칸산 및 7-브로모헵탄-1-올로부터 방법 A를 사용하여 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.09 (br. m, 2H); 3.43 (br. m, 2H); 2.48-2.25 (br. m, 1H); 1.89 (br. m, 2H); 1.74-1.16 (br. m, 36H); 0.90 (m, 6H).
중간체 C: (2-헥실사이클로프로필)메탄올
Figure pct00116
디클로로메탄 (20 mL) 중 디에틸 아연 (20 mL, 20 mmol, 헥산 중 1 M)의 용액을 5분 동안 -40 ℃로 냉각되도록 했다. 그 다음 디클로로메탄 (10 mL) 중 디아이오도메탄 (3.22 mL, 40 mmol)의 용액을 적가했다. 반응을 1시간 동안 -40 ℃에서 교반되도록 한 후, 디클로로메탄 (10 mL) 중 트리클로로-아세트산 (327 mg, 2 mmol) 및 DME (1 mL, 9.6 mmol)의 용액을 첨가했다. 반응을 -15 ℃로 가온되도록 하고, 이 온도에서 1시간 동안 교반했다. 디클로로메탄 (10 mL) 중 (Z)-논-2-엔-1-올 (1.42 g, 10 mmol)의 용액을 그 다음 -15 ℃ 용액에 첨가했다. 반응을 그 다음 느리게 rt로 가온되도록 하고, 18시간 동안 교반했다. 이 시간 후 포화 NH4Cl (200 mL)을 첨가하고 반응을 디클로로메탄 (3X)로 추출하고, 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공에서 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트)로 정제하여 (2-헥실사이클로프로필)메탄올 (1.43 g, 9.2 mmol, 92%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.64 (m, 2H); 1.57-1.02 (m, 12H); 0.99-0.80 (m, 4H); 0.72 (m, 1H), 0.00 (m, 1H).
C. 화합물 1: 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(옥타데실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00117
화학식: C45H91NO3
분자량: 694.23
화합물 1를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.86 min. MS (ES): C45H91NO3에 대한 m/z (MH+) 694.93. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 1H); 3.77-3.47 (br. m, 2H); 2.78-2.37 (br. m, 5H); 2.28 (t, 2H); 1.73-1.40 (br. m, 10H); 1.38-1.18 (br. m, 62H); 0.88 (m, 9H).
D. 화합물 3: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(노닐)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00118
화학식: C36H73NO3
분자량: 567.98
화합물 3을, 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.36 min. MS (ES): C36H73NO3에 대한 m/z (MH+) 568.80. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 3.72-3.45 (br. m, 2H); 2.79-2.34 (br. m, 5H); 2.28 (t, 2H); 1.70-1.38 (m, 10H); 1.38-1.16 (br. m, 44H); 0.88 (m, 9H).
E. 화합물 4: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)( 옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00119
화학식: C35H71NO3
분자량: 553.96
화합물 4를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.99 min. MS (ES): C35H71NO3에 대한 m/z (MH+) 554.777. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 3.71 (br. s, 2H); 2.70 (br. s, 5H); 2.26 (t, 2H); 1.48-1.59 (br. m., 10H); 1.24 (m, 42H); 0.86 (t, 9H).
F. 화합물 5: 헵타데칸 -9-일 8-( 헥실(2-하이드록시에틸)아미노 ) 옥타노에이트
Figure pct00120
화학식: C33H67NO3
분자량: 525.90
화합물 5를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.10 min. MS (ES): C33H67NO3에 대한 m/z (MH+) 526.73. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 3.67-3.48 (br. m, 2H); 2.74-2.39 (br. m, 5H); 2.28 (t, 2H); 1.68-1.39 (br. m, 10H); 1.38-1.16 (br. m, 38H); 0.88 (m, 9H).
G. 화합물 6: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(( 9 Z ,12 Z )- 옥타데카 -9,12-디엔-1-일)아미노)옥타노에이트
Figure pct00121
화학식: C45H87NO3
분자량: 690.20
화합물 6를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.77 min. MS (ES): C45H87NO3에 대한 m/z (MH+) 690.84. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.37 (m, 4H); 4.86 (br. m, 1H); 3.53 (br. m; 2H); 2.78 (br. m, 2H); 2.58 (br. m, 2H); 2.45 (br. m, 4H); 2.28 (m, 2H); 2.05 (m, 4H); 1.68-1.15 (br. m, 57H); 0.89 (m, 9H).
H. 화합물 7: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 하이드록시프로필 )(노닐)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00122
화학식: C37H75NO3
분자량: 582.01
화합물 7를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.24 min. MS (ES): C37H75NO3에 대한 m/z (MH+) 582.987. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.84 (p, 1H); 3.76 (t, 2H); 2.42-2.66 (br. s, 5H); 2.25 (t, 2H); 1.47-1.68 (br. m, 12H); 1.24 (m, 42H); 0.86 (t, 9H).
화합물 8: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(1H-이미다졸-1-일)프로필)(노닐)아미노) 옥타노에이트
단계 1: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 클로로프로필 )(노닐)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00123
화학식: C37H74ClNO2
분자량: 600.45
4 mL의 DCM 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)(노닐)아미노)옥타노에이트 (0.53 g, 0.91 mmol)의0 ℃ 용액에 메실 염화물 (0.070 mL, 0.91 mmol) 이어서 트리에틸아민 (0.13 mL, 0.91 mmol)을 첨가했다. 반응을 rt로 느리게 가온되도록 하고, 밤새 교반했다. 반응을 물 (~10 mL)의 첨가로 켄칭했다. 혼합물을 DCM으로 3회 추출하고, 풀링된 유기물을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 원유을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(노닐)아미노)옥타노에이트 (0.23 g, 42%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.84 (p, 1H); 3.58 (t, 2H); 2.51 (br. s, 2H); 2.35 (br. s, 2H); 2.26 (2, 2H); 1.86 (br. s, 2H); 1.40-1.60 (br. m, 12H); 1.24 (br. m, 42H); 0.86 (t, 9H).
단계 2: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(1H-이미다졸-1-일)프로필)(노닐)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00124
화학식: C40H77N3O2
분자량: 632.08
둥근바닥 플라스크에서, 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(노닐)아미노)옥타노에이트 (50 mg, 0.083 mmol)을 MeCN (0.5 mL) 중 이미다졸 (17 mg, 0.25 mmol), K2CO3 (35 mg, 0.25 mmol)와 조합시켰다. 플라스크에 콘덴서를 구비하고, 82 ℃ 가열 맨틀에 배치하고, 24시간 동안 교반되도록 했다. 이 시간 후, 반응을 rt로 냉각되도록 하고, 여과하고, 여과물을 진공에서 농축시켰다. 원유을 실리카겔 크로마토그래피 (0-100% [DCM, 20% MeOH, 1% NH4OH]/MeOH)로 정제하여 원하는 생성물을 맑은 오일로서 (39 mg, 74%)로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 2.92 min. MS (ES): C40H77N3O2에 대한 m/z (MH+) 633.994. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.46 (s, 1H); 7.05 (s, 1H); 6.91 (s, 1H); 4.84 (dt, 1H); 4.02 (br. s, 2H); 2.47 (br. s, 4H); 2.26 (t, 2H); 2.00 (br. s, 2H); 1.47-1.59 (br. m, 10H); 1.24 (br. m, 44H); 0.86 (t, 9H).
J. 화합물 9: 헵타데칸 -9-일 8-((2- 아세톡시에틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00125
화학식: C46H89NO6
분자량: 752.22
디클로로메탄 (1 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (100 mg, 0.14 mmol) 및 아세트산 (8 mg, 0.13 mmol)의 용액에 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (31 mg, 0.16 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (73 mg, 0.56 mmol) 및 DMAP (3 mg, 0.02 mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-아세톡시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (63 mg, 0.08 mmol)을 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.63 min. MS (ES): C46H89NO6에 대한 m/z (MH+) 753.07. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87 (p, 1H); 4.17-3.99 (m, 4H); 2.67 (m, 2H); 2.43 (m, 3H); 2.29 (m, 4H); 2.05 (s, 3H); 1.71-1.17 (br. m, 63H); 0.88 (m, 9H).
K. 화합물 10: 헵타데칸 -9-일 8-((2- 하이드록시프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00126
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 10를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.73 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.10. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.80-3.54 (br. m, 1H); 2.61-2.13 (br. m, 9H); 1.69-1.03 (br. m, 67H); 0.88 (m, 9H).
L. 화합물 11: 헵타데칸 -9-일 ( R )-8-((2- 하이드록시프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 ) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00127
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.21
화합물 11를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 5.21 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.02. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.72 (br. m, 1H); 2.65-2.10 (br. m, 8H); 1.71-0.99 (br. m, 68H); 0.88 (m, 9H).
M. 화합물 12: 헵타데칸 -9-일 ( S )-8-((2- 하이드록시프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 ) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00128
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.21
화합물 12를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 5.30 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.10. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.71 (br. m, 1H); 2.64-2.10 (br. m, 8H); 1.71-1.03 (br. m, 68H); 0.88 (m, 9H).
N. 화합물 13: 헵타데칸 -9-일 8-((2- 하이드록시부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00129
화학식: C46H91NO5
분자량: 738.24
화합물 13를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.89 min. MS (ES): C46H91NO5에 대한 m/z (MH+) 739.21. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.58-3.38 (br. m, 1H); 2.65-2.15 (br. m, 9H); 1.72-1.12 (br. m, 66H); 0.98 (t, 3H); 0.88 (m, 9H).
화합물 14: 헵타데칸 -9-일 8-((2-(디메틸아미노)에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00130
화학식: C46H92N2O4
분자량: 737.252
화합물 14를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.51 min. MS (ES): C46H92N2O4에 대한 m/z (MH+) 738.23. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.84 (p, 1H); 4.04 (t, 2H); 2.95 (m, 2H); 2.78 (m, 6H); 2.44 (s, 6H); 2.28 (m, 4H); 1.70-1.41 (br. m, 14H); 1.41-1.14 (br. m, 48H); 0.87 (m, 9H).
P. 화합물 15: 헵타데칸 -9-일 8-((2- 메톡시에틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00131
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.21
화합물 15를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.90 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.19. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.43 (m, 2H); 3.34 (s, 3H); 2.61 (m, 2H); 2.43 (m, 3H); 2.29 (m, 4H); 1.70-1.15 (br. m, 63H); 0.88 (m, 9H).
Q. 화합물 16: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 메톡시프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00132
화학식: C46H91NO5
분자량: 738.236
화합물 16를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.90 min. MS (ES): C46H91NO5에 대한 m/z (MH+) 739.13. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.42 (m, 2H); 3.35 (s, 3H); 2.55-2.21 (m, 9H); 1.81-1.18 (br. m, 65H); 0.88 (m, 9H).
R. 화합물 17: 헵타데칸 -9-일 8-((2-(2-(디메틸아미노) 에톡시 )에틸) (8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00133
화학식: C48H96N2O5
분자량: 781.305
화합물 17를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.72 min. MS (ES): C48H96N2O5에 대한 m/z (MH+) 782.27. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (m, 4H); 2.72 (m, 2H); 2.52 (m, 5H); 2.38-2.13 (br. m, 12H); 1.73-1.19 (br. m, 61H); 0.90 (m, 9H).
S. 화합물 18: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00134
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.18
화합물 18를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 또는 아래의 반응식에 따라 합성했다:
Figure pct00135
Figure pct00136
UPLC/ELSD: RT = 3.59 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 710.89. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.53 (br. m, 2H); 2.83-2.36 (br. m, 5H); 2.29 (m, 4H); 0.96-1.71 (m, 64H); 0.88 (m, 9H).
T. 화합물 19: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 하이드록시프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00137
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.21
화합물 19를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 4.51 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.19. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.80 (m, 2H); 2.92-2.36 (br. m, 5H); 2.29 (m, 4H); 1.89-1.42 (br. m, 16H); 1.42-1.02 (br. m, 50H); 0.88 (m, 9H).
U. 화합물 20: 헵타데칸 -9-일 8-((4- 하이드록시부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00138
화학식: C46H91NO5
분자량: 738.24
화합물 20를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.84 min. MS (ES): C46H91NO5에 대한 m/z (MH+) 739.21. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.77-3.45 (br. m, 2H); 2.63-2.20 (br. m, 8H); 1.82-1.40 (br. m, 18H); 1.40-1.15 (br. m, 51H); 0.88 (m, 9H).
V. 화합물 21: 헵타데칸 -9-일 8-((2- 시아노에틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00139
화학식: C45H86N2O4
분자량: 719.19
화합물 21를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 4.04 min. MS (ES): C45H86N2O4에 대한 m/z (MH+) 720.18. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (p, 1H); 4.07 (t, 2H); 2.81 (m, 2H); 2.44 (m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.73-1.18 (br. m, 63H); 0.89 (m, 9H).
W. 화합물 22: 헵타데칸 -9-일 8-((2- 하이드록시사이클로헥실 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00140
화학식: C48H93NO5
분자량: 764.27
화합물 22를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 4.54 min. MS (ES): C48H93NO5에 대한 m/z (MH+) 765.21. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 2.89-2.34 (br. m, 4H); 2.28 (m, 4H); 2.00 (m, 1H); 1.86-0.99 (br. m, 72H); 0.88 (m, 9H).
X. 화합물 23: 헵타데칸 -9-일 10-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 데카노에이트
Figure pct00141
화학식: C46H91NO5
분자량: 738.24
화합물 23를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.75 min. MS (ES): C46H91NO5에 대한 m/z (MH+) 739.13. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 1H); 4.05 (m, 2H); 3.72-3.46 (br. m, 2H); 2.81-2.35 (br. m, 5H); 2.29 (m, 4H); 1.71-1.40 (br. m, 13H); 1.40-1.15 (br. m, 55H); 0.88 (m, 9H).
Y. 화합물 24: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-8_((2-하이드록시에틸) (8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00142
화학식: C44H85NO5
분자량: 708.17
화합물 24를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.54 min. MS (ES): C44H85NO5에 대한 m/z (MH+) 708.95. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.74-5.44 (br. m, 2H); 4.86 (m, 1H); 4.62 (m, 2H); 3.71-3.40 (br. m, 2H); 2.81-2.37 (br. m, 5H); 2.29 (m, 4H); 2.09 (m, 2H); 1.70-1.14 (br. m, 58H); 0.88 (m, 9H).
Z. 화합물 25: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(6-옥소-6-( 운데실옥시 ) 헥실 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00143
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.182
화합물 25를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.66 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 711.00. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.68-3.46 (br. m, 2H); 2.77-2.37 (br. m, 5H); 2.29 (m, 4H); 1.74-1.41 (br. m, 14H); 1.39-1.18 (m, 50H); 0.88 (m, 9H).
AA. 화합물 26: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(4-( 노닐옥시 )-4- 옥소부틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00144
화학식: C40H79NO5
분자량: 654.07
화합물 26를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 4.29 min. MS (ES): C40H79NO5에 대한 m/z (MH+) 655.07. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.06 (t, 2H); 3.79 (br. m, 2H); 2.91-2.20 (br. m, 10H); 1.98-1.03 (br. m, 55H); 0.88 (m, 9H).
AB. 화합물 27: 노닐 8-((6-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-6- 옥소헥실 )(2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00145
화학식: C42H83NO5
분자량: 682.13
화합물 27를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.57 min. MS (ES): C42H83NO5에 대한 m/z (MH+) 683.12. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 1H); 4.05 (m, 2H); 3.70-3.45 (br. m, 2H); 2.78-2.35 (br. m, 5H); 2.29 (m, 4H); 1.73-1.41 (m, 13H); 1.41-1.16 (m, 47H); 0.88 (m, 9H).
AC. 화합물 28: 헵타데칸 -9-일 8-((8-((2- 헥실사이클로프로필 ) 메톡시 )-8-옥소옥틸)(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00146
화학식: C45H87NO5
분자량: 722.19
화합물 28를, 중간체 C를 사용하여 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 5.17 min. MS (ES): C45H87NO5에 대한 m/z (MH+) 722.97. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.17 (m, 1H); 3.93 (m, 1H); 3.61 (br. m, 2H); 2.97-2.37 (br. m, 6H); 2.35-2.21 (m, 4H); 1.74-0.97 (br. m, 60H); 0.94-0.79 (m, 10H); 0.74 (m, 1H); 0.01 (m, 1H).
AD. 화합물 29: 디(헵타데칸-9-일) 8,8'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디옥타노에이트
Figure pct00147
화학식: C52H103NO5
분자량: 822.40
화합물 29를 상기에 기재된 일반적= 3.98 min. MS (ES): C52H103NO5에 대한 m/z (MH+) 823.19. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 2H); 3.72-3.44 (br. m, 2H); 2.83- 2.34 (br. m, 5H); 2.28 (m, 4H); 1.69-1.39 (br. m, 16H); 1.39-1.16 (br. m, 62H); 0.88 (m, 12H).
AE . 화합물 30: 7 -((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 헵 틸 2-옥틸데카노에이트인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다.
Figure pct00148
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.18
화합물 30를, 중간체 B를 사용하여 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.55 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 711.16. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.06 (m, 4H); 3.69-3.44 (br. m, 2H); 2.71-2.39 (br. m, 5H); 2.29 (m, 3H); 1.70-1.16 (br. m, 64H); 0.88 (m, 9H).
AF . 화합물 31: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((2-하이드록시에틸)( 옥타덱 -9-엔-1-일)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00149
화학식: C45H89NO3
분자량: 692.21
화합물 31를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.83 min. MS (ES): C45H89NO3에 대한 m/z (MH+) 693.20. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.37 (m, 2H); 4.89 (p, 1H); 3.58 (br. m, 2H); 2.72-2.43 (br. m, 5H); 2.30 (m, 2H), 2.05 (m, 4H); 1.71-1.03 (br. m, 63H), 0.90 (m, 9H).
AG. 화합물 32: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-( 펜타데칸 -7- 일옥시 ) 옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00150
화학식: C42H83NO5
분자량: 682.13
화합물 32를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.45 min. MS (ES): C42H83NO5에 대한 m/z (MH+) 683.20. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.60 (br. m, 2H); 2.85-2.40 (br. m, 5H); 2.31(m, 4H), 1.78-1.01 (m, 59H), 0.90 (m, 9H).
AH. 화합물 33: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-( 테트라데칸 -6- 일옥시 ) 옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00151
화학식: C41H81NO5
분자량: 668.10
화합물 33를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.39 min. MS (ES): C41H81NO5에 대한 m/z (MH+) 669.09. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.84 - 3.54 (br. m, 2H); 2.99-2.41 (br. m, 5H); 2.31 (m, 4H), 1.76-1.02 (br. m, 57H), 0.90 (m, 9H).
AI. 화합물 34: 도데칸 -4-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00152
화학식: C39H77NO5
분자량: 640.05
화합물 34를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.21 min. MS (ES): C39H77NO5에 대한 m/z (MH+) 641.05. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.67 (br. m, 2H); 3.03-2.44 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H), 1.75-1.00 (br. m, 53H), 0.90 (m, 9H).
AJ . 화합물 35: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-( 운데칸 -3- 일옥시 ) 옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00153
화학식: C38H75NO5
분자량: 626.02
화합물 35를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.16 min. MS (ES): C38H75NO5에 대한 m/z (MH+) 627.11. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.83 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.63 (br. m, 2H); 2.81-2.39 (br. m, 5H); 2.31 (m, 4H), 1.74-1.01 (br. m, 51H), 0.90 (m, 9H).
AK. 화합물 36: 데칸-2-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00154
화학식: C37H73NO5
분자량: 611.99
화합물 36를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.05 min. MS (ES): C37H73NO5에 대한 m/z (MH+) 613.00. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.55 (m, 2H); 2.60 (m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.29 (m, 4H), 1.731-1.01 (m, 51H), 0.90 (m, 6H).
AL. 화합물 47: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-(2- 옥틸사이클로프로필 ) 옥틸 ) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00155
화학식: C46H91NO3
분자량: 706.24
화합물 47를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.92 min. MS (ES): C46H91NO3에 대한 m/z (MH+) 707.39. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 3.56 (br. m, 2H); 2.72-2.38 (br. m, 5H); 2.28 (t, 2H); 1.70-1.02 (br. m, 67H), 0.88 (m, 9H); 0.71-0.49 (m, 4H); -0.33 (m, 1H).
AM. 화합물 48: 데칸-2-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00156
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.21
화합물 48를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.60 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.10. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 2H); 3.59 (br. m, 2H); 2.79-2.37 (br. m, 5H); 2.29 (m, 4H); 1.74-1.13 (m, 66H); 0.90 (m, 9H).
AN. 화합물 49: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-( 운데칸 -3- 일옥시 )옥틸) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00157
화학식: C46H91NO5
분자량: 738.24
화합물 49를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.68 min. MS (ES): C46H91NO5에 대한 m/z (MH+) 739.21. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 2H); 3.56 (br. m, 2H); 2.68-2.39 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.71-1.19 (m, 66H); 0.90 (m, 12H).
AO . 화합물 50: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00158
화학식: C47H93NO5
분자량: 752.26
화합물 50를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.73 min. MS (ES): C47H93NO5에 대한 m/z (MH+) 753.23. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 2H); 3.60 (br. m, 2H); 2.75-2.43 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.71-1.44 (m, 16H); 1.28 (m, 51H); 0.90 (m, 12H).
AP. 화합물 51: 헵타데칸 -9-일 8-((4- 부톡시 -4- 옥소부틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00159
화학식: C35H69NO5
분자량: 583.94
화합물 51를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.05 min. MS (ES): C35H69NO5에 대한 m/z (MH+) 584.87. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.10 (t, 2H); 3.61 (br. m, 2H); 2.81-2.21 (br. m, 9H); 1.87(br. m, 2H), 1.70-1.04 (m, 43H), 0.98-0.82 (m, 9H).
AQ. 화합물 52: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(4-옥소-4-( 펜틸옥시 )부틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00160
화학식: C36H71NO5
분자량: 597.97
화합물 52를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.11 min. MS (ES): C36H71NO5에 대한 m/z (MH+) 598.90. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.09 (t, 2H); 3.61 (br. m, 2H); 2.89-2.22 (br. m, 9H); 1.87(br. m, 2H), 1.73-1.43 (m, 11H), 1.28 (m, 34H); 0.90 (m, 9H).
AR. 화 합물 53: 헵타데칸 -9-일 8-((4-( 헥실옥시 )-4- 옥소부틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00161
화학식: C37H73NO5
분자량: 611.99
화합물 53를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.22 min. MS (ES): C37H73NO5에 대한 m/z (MH+) 612.92. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.06 (t, 2H); 3.55 (br. m, 2H); 2.68-2.38 (br. m, 5H); 2.28 (m, 4H); 1.79 (br. m, 2H); 1.71-0.96 (m, 48H); 0.88 (m, 9H).
AS. 화합물 54: 헵타데칸 -9-일 8-((4-( 헵틸옥시 )-4- 옥소부틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00162
화학식: C38H75NO5
분자량: 626.02
화합물 54를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.28 min. MS (ES): C38H75NO5에 대한 m/z (MH+) 626.94. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.09 (t, 2H); 3.60 (br. m, 2H); 2.77-2.42 (br. m, 5H); 2.32 (m, 4H); 1.84 (br. m, 2H); 1.75-1.03 (m, 49H); 0.90 (m, 9H).
AT. 화합물 55: 헵타데칸 -9-일 8-((4-((2- 헥실사이클로프로필 ) 메톡시 )-4-옥소부틸)(2-하이드록시에틸) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00163
화학식: C41H79NO5
분자량: 666.09
화합물 55를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.37 min. MS (ES): C41H79NO5에 대한 m/z (MH+) 667.04. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.83 (p, 1H); 4.15 (m, 1H); 3.95 (m, 1H); 3.53 (br. m, 2H); 2.66-2.39 (br. m, 5H); 2.34-2.19 (m, 4H); 1.78 (br. m, 2H); 1.66-0.98 (m, 50H); 0.85 (m, 10H); 0.70 (m, 1H); 0.00 (m, 1H).
AU. 화합물 56: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-( 트리데칸 -7- 일옥시 ) 옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00164
화학식: C40H79NO5
분자량: 654.07
화합물 56를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.28 min. MS (ES): C40H79NO5에 대한 m/z (MH+) 654.99. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.60 (br. m, 2H); 2.77-2.40 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.78-0.99 (m, 55H); 0.90 (m, 9H).
AV. 화합물 57: 노난 -5-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00165
화학식: C36H71NO5
분자량: 597.97
화합물 57를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.88 min. MS (ES): C36H71NO5에 대한 m/z (MH+) 598.98. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.59 (br. m, 2H); 2.82-2.37 (br. m, 5H); 2.31 (m, 4H); 1.73-1.03 (m, 47H); 0.91 (m, 9H).
AW . 화합물 58: 헵탄-4-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00166
화학식: C34H67NO5
분자량: 569.91
화합물 58를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.67 min. MS (ES): C34H67NO5에 대한 m/z (MH+) 570.93. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.93 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (br. m, 2H); 2.69-2.42 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.72-1.04 (m, 43H); 0.93 (m, 9H).
AX. 화합물 59: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-(펜탄-3- 일옥시 ) 옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00167
화학식: C32H63NO5
분자량: 541.86
화합물 59를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.39 min. MS (ES): C32H63NO5에 대한 m/z (MH+) 542.80. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.78 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (br. m, 2H); 2.71-2.39 (br. m, 5H); 2.31 (m, 4H); 1.77-1.05 (m, 39H); 0.90 (m, 9H).
AY. 화합물 60: ( 5Z,12Z )- 헵타데카 -5,12- 디엔 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
(5 Z ,12 Z )-헵타데카-5,12-디엔-9-올
Figure pct00168
화학식: C17H32O
분자량: 252.44
THF (45 mL) Mg 조각 중 (Z)-1-브로모옥트-3-엔 (6.2 g, 32.4 mmol)의 용액에 (0.843 g, 34.7 mmol)을 첨가했다. 반응을 3시간 동안 45 ℃로 가열했다. 반응을 0 ℃로 냉각시키고, THF (5 mL) 중 에틸 포르메이트 (2.4 g, 32.4 mmol)을 적가했다. 반응을 rt로 가온되도록 하고, 30분 동안 교반했다. 반응을 0 ℃로 냉각시키고, 물 (15 mL) 및 6N HCl (15 mL) 로 켄칭했다. 반응을 모든 Mg가 용해될 때까지 교반했다. 물 (25 mL)을 첨가하고 혼합물을 헥산 (3X25 mL)으로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOH (20 mL)에 용해시키고, 물 중 KOH (8 mL의 물 중 1.76 g)의 용액을 첨가하고 15분 동안 교반되도록 했다. EtOH을 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, 6N HCl (20 mL) 로 산성화하고, 헥산 (3x)으로 추출했다. 조합된 유기층를 염수로 세정하고, 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-5%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 (5Z,12Z)-헵타데카-5,12-디엔-9-올 (2.3 g, 9.1 mmol, 28%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5,41 (m, 4); 3.66 (m, 1H); 2.13 (m, 8H); 1.51 (m, 5H); 1.36 (m, 8H); 0.92 (m, 6H).
( 5 Z ,12 Z )- 헵타데카 -5,12- 디엔 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00169
화학식: C44H83NO5
분자량: 706.15
화합물 60를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.36 min. MS (ES): C44H83NO5에 대한 m/z (MH+) 707.10. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.37 (m, 4H); 4.92 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (br. m, 2H); 2.73-2.38 (br. m, 5H); 2.31 (m, 4H); 2.04 (m, 8H); 1.73-1.01 (m, 47H); 0.92 (m, 9H).
AZ. 화합물 61: ( 5Z,12Z )- 헵타데카 -5,12- 디엔 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00170
화학식: C44H83NO5
분자량: 706.15
화합물 61를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.39 min. MS (ES): C44H83NO5에 대한 m/z (MH+) 707.10. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.37 (m, 4H); 4.92 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.58 (br. m, 2H); 2.70-2.41 (br. m, 5H); 2.32 (m, 4H); 2.04 (m, 8H); 1.77-1.03 (m, 47H); 0.92 (m, 9H).
BA . 화합물 65: 1 - 사이클로프로필노닐 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00171
화학식: C47H91NO5
분자량: 750.247
화합물 65를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.72 min. MS (ES): C47H91NO5에 대한 m/z (MH+) 750.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.28 (m, 1H); 3.54 (m, 2H); 2.59 (m, 2H); 2.46 (m, 4H); 2.29 (m, 4H), 1.73-1.18 (m, 61H); 0.90 (m, 10H); 0.62-0.33 (m, 3H); 0.28 (m, 1H).
BB. 화합물 66: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-((4- 펜틸사이클로헥실 )옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00172
화학식: C46H89NO5
분자량: 736.220
화합물 66를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.72 min. MS (ES): C46H89NO5에 대한 m/z (MH+) 736.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.00 (m, 0.5H); 4.89 (m, 1H); 4.68 (m, 0.6H); 3.56 (m, 2H), 2.61 (br. m, 2H); 2.48 (m, 4H); 2.30 (m, 4H); 1.98 (m, 1H); 1.82 (m, 2H); 1.73-1.14 (m, 61H); 1.04 (m, 1H); 0.90 (m, 9H).
BC. 화합물 67: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(4-옥소-4-((4- 펜틸사이클로헥실 )옥시)부틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00173
화학식: C42H81NO5
분자량: 680.112
화합물 67를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.56 min. MS (ES): C42H81NO5에 대한 m/z (MH+) 680.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.01 (m, 0.4H); 4.89 (m, 1H); 4.68 (m, 0.6H); 3.59 (m, 2H), 2.72-2.43 (br. m, 6H); 2.30 (m, 4H); 1.98 (m, 1H); 1.83 (m, 4H); 1.69-1.44 (m, 10H); 1.28 (m, 41H); 1.03 (m, 1H); 0.90 (m, 9H).
BD . 화합물 68: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(6-옥소-6-((4- 펜틸사이클로헥실 )옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00174
화학식: C44H85NO5
분자량: 708.166
화합물 68를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.66 min. MS (ES): C44H85NO5에 대한 m/z (MH+) 708.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.00 (m, 0.5H); 4.89 (m, 1H); 4.68 (m, 0.6H); 3.55 (m, 2H), 2.66-2.39 (br. m, 6H); 2.30 (m, 4H); 1.97 (m, 1H); 1.83 (m, 2H); 1.73-1.41 (m, 15H); 1.41-1.17 (m, 42H); 1.04 (m, 1H); 0.90 (m, 9H).
BE. 화합물 69: 헵타데칸 -9-일 8-((2,3- 디하이드록시프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00175
화학식: C45H89NO6
분자량: 740.21
화합물 69를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.60 min. MS (ES): C45H89NO6에 대한 m/z (MH+) 741.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.76 (br. m, 2H); 3.51 (m, 1H); 2.57 (m, 6H); 2.31 (m, 4H); 1.71-1.41 (m, 14H); 1.41- 1.12 (m, 48H); 0.90 (m, 9H).
BF . 화합물 70: 헵타데칸 -9-일 8-((4-(데칸-2- 일옥시 )-4- 옥소부틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00176
화학식: C41H81NO5
분자량: 667.61
화합물 70를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.44 min. MS (ES): C41H81NO5에 대한 m/z (MH+) 668.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 2H); 3.57 (m, 2H); 2.71-2.40 (m, 5H); 2.30 (m, 4H), 1.80 (m, 2H); 1.71-1.40 (m, 11H); 1.39-1.05 (m, 45H); 0.90 (m, 9H).
BG. 화합물 71: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(4-옥소-4-( 테트라데칸 -6- 일옥시 )부틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00177
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 71를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.72 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 724.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 2H); 3.56 (m, 2H); 2.70-2.41 (m, 6H); 2.33 (m, 4H), 1.80 (m, 2H); 1.69-1.41 (m, 13H); 1.28 (m, 48H); 0.90 (m, 12H).
BH. 화합물 72: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(4-옥소-4-( 운데칸 -3- 일옥시 )부틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00178
화학식: C42H83NO5
분자량: 682.13
화합물 72를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.57 min. MS (ES): C42H83NO5에 대한 m/z (MH+) 683.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 2H); 3.58 (br. m, 2H); 2.75-2.41 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H), 1.81 (br. m, 2H); 1.70-1.42 (m, 13H); 1.40-1.18 (m, 42H); 0.90 (m, 12H).
BI. 화합물 73: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(4-옥소-4-( 펜타데칸 -7- 일옥시 )부틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00179
화학식: C46H91NO5
분자량: 738.236
화합물 73를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.80 min. MS (ES): C46H91NO5에 대한 m/z (MH+) 739.09. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 2H); 3.59 (br. m, 2H); 2.81-2.43 (br. m, 6H); 2.31 (m, 4H); 1.83 (m, 2H); 1.69-1.42 (m, 12H); 1.28 (m, 50H); 0.90 (m, 12H).
BJ . 화합물 74: 헵타데칸 -9-일 8-((4-( 도데칸 -4- 일옥시 )-4- 옥소부틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00180
화학식: C43H85NO5
분자량: 696.155
화합물 74를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.68 min. MS (ES): C43H85NO5에 대한 m/z (MH+) 696.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 2H); 3.56 (m, 2H); 2.70-2.41 (m, 6H); 2.30 (m, 4H), 1.80 (m, 2H); 1.70-1.40 (m, 12H); 1.28 (m, 44H); 0.90 (m, 12H).
BK. 화합물 75: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(6-옥소-6-( 운데칸 -3- 일옥시 )헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00181
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.18
화합물 75를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.67 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 711.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (m, 2H); 3.57 (m, 2H); 2.72-2.40 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.70-1.42 (m, 16H); 1.28 (m, 45H); 0.90 (m, 12H).
BL . 화합물 79: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-((4- 펜틸사이클로헥실 ) 옥시 )옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00182
화학식: C38H73NO5
분자량: 624.00
화합물 79를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.10 min. MS (ES): C38H73NO5에 대한 m/z (MH+) 624.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.00 (br. m, 0.5H); 4.68 (m, 0.5H); 4.08 (t, 2H); 3.56 (m, 2H); 2.72-2.38 (m, 6H); 2.31(m, 4H), 1.97 (m, 1H); 1.82 (m, 2H); 1.73-0.95 (m, 48H), 0.90 (m, 6H).
BM. 화합물 80: [1,1'- 바이 ( 사이클로헥산 -)]-4-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00183
화학식: C39H73NO5
분자량: 636.02
화합물 80를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.10 min. MS (ES): C39H73NO5에 대한 m/z (MH+) 636.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.01 (br. m, 0.5H); 4.65 (m, 0.5H); 4.08 (t, 2H); 3.56 (m, 2H); 2.69-2.36 (m, 6H); 2.31(m, 4H); 2.07-0.84 (m, 57H).
BN . 화합물 81: 사이클로펜타데실 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00184
화학식: C42H81NO5
분자량: 680.11
화합물 81를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.36 min. MS (ES): C42H81NO5에 대한 m/z (MH+) 681.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (br. m, 2H); 2.74-2.39 (m, 6H); 2.30(m, 4H), 1.73-1.03 (m, 62H), 0.90 (m, 3H).
BO. 화합물 94: 헵타데칸 -9-일) 8-( 벤질 (8- 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
헵타데칸-9-일 8-(베닐아미노)옥타노에이트
Figure pct00185
화학식: C32H57NO2
분자량: 487.81
페닐메탄아민 (1.2 mL, 10.83 mmol) 중 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (250 mg, 0.542 mmol)의 용액을 rt에서 6시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각시키고, 용매를 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에서 채취하고, 포화 수성 중탄산나트륨으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 20-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-(벤질아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.41 mmol, 76%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 2.87 min. MS (ES): C32H57NO2에 대한 m/z (MH+) 488.4. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.35-7.25 (br. m, 5H); 4.89 (p, 1H); 3.81 (s, 2H); 2.65 (t, 2H); 2.29 (t, 2H); 1.65-1.51 (br. m, 8H); 1.28 (m, 30H); 0.90 (m, 6H).
헵타데칸-9-일 8-(벤질(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00186
화학식: C49H89NO4
분자량: 756.25
헵타데칸-9-일 8-(베닐아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.41 mmol), 노닐 8-브로모옥타노에이트 (172 mg, 0.49 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (100 μL, 0.57 mmol)의 용액을 에탄올에 용해시키고, 62 ℃에서 48시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각시키고, 용매를 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에서 채취하고, 포화 수성 중탄산나트륨으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-(벤질(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (138 mg, 0.18 mmol, 45%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.78 min. MS (ES): C49H89NO4에 대한 m/z (MH+) 757.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.33-7.23 (br. m, 5H); 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.55 (s, 2H); 2.40 (m, 4H); 2.30 (m, 4H); 1.64-1.28 (br. m, 62H); 0.90 (m, 9H).
BP. 화합물 96: 7 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)헵틸 데카노에이트
Figure pct00187
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.182
화합물 96를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.74 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 711.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.61 (m, 2H); 2.88-2.37 (br. m, 6H); 2.31 (m, 4H), 1.79-1.04 (m, 62H); 0.90 (m, 9H).
BQ . 화합물 98: 8 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥탄-2-일 데카노에이트
옥탄-1,7-디올
Figure pct00188
화학식: C8H18O2
분자량: 146.230
THF (10 mL) 중 7-옥소옥탄산 (4 g, 25.29 mmol)의 용액을 THF (70 mL) 중 LAH의 교반 용액에 N2 하에서 0 ℃에서 첨가했다. 혼합물을 rt로 가온되도록 하고, rt에서 4시간 동안 교반하고, 그 후 10 mL의 포화 Na2SO4.10H2O (aq)을 용액에 느리게 첨가했다. 백색 고체가 쏟아졌다. 추가의 고체 Na2SO4.10H2O을 첨가하고 혼합물을 셀라이트의 플러그를 통해 여과했다. 여과물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중(0-40%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 옥탄-1,7-디올 (2.97 g, 20.31 mmol, 80%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.81 (m, 1H); 3.66 (t, 2H); 1.66-1.31 (m, 12H); 1.22 (d, 3H).
8-(( tert -부틸디페닐실릴)옥시)옥탄-2-올
Figure pct00189
화학식: C24H36O2Si
분자량: 384.635
DCM (75 mL) 중 옥탄-1,7-디올 (1 g, 6.84 mmol)의 용액에 0 ℃에서 이미다졸 (0.94 g, 13.81 mmol)을 첨가하고 이어서 DCM 중 tert-부틸(클로로)디페닐실란 (2.14 mL, 8.21 mmol)의 용액을 (적하 깔때기를 사용하여) 느리게 첨가했다. 반응을 0 ℃에서 1.5시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 포화 NH4Cl(aq)으로 켄칭했다. 수성층을 DCM (3 Х 50 mL) 로 3회 추출했다. 유기층을 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 조 생성물을 플래시 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 0-10% EtOAc)로 정제하여 8-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)옥탄-2-올 (2.29 g, 5.95 mmol, 87%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.69 (m, 4H); 7.42 (m, 6H); 3.80 (m, 1H); 3.68 (t, 2H); 1.59 (m, 2H); 1.50-1.26 (m, 9H); 1.21 (d, 3H); 1.07 (s, 9H).
8-(( tert -부틸디페닐실릴)옥시)옥탄-2-일 데카노에이트
화학식: C34H54O3Si
분자량: 538.888
8-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)옥탄-2-일 데카노에이트를 방법 A에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.69 (m, 4H); 7.42 (m, 6H); 4.92 (m, 1H); 3.67 (t, 2H); 2.29(t, 2H); 1.67-1.42 (m, 6H); 1.41-1.17 (m, 21H); 1.07 (s, 9H); 0.90 (m, 3H).
8-하이드록시옥탄-2-일 데카노에이트
Figure pct00190
화학식: C18H36O3
분자량: 300.483
THF 중 8-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]옥탄-2-일 데카노에이트 (1.08 g, 2 mmol)의 용액에 TBAF (THF 중 8.02 mL 1 M 용액, 8.02 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반되도록 했다. 유기 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3, 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중(0-40%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 8-하이드록시옥탄-2-일 데카노에이트 (0.55g, 1.82 mmol, 91%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 1H); 3.66 (t, 2H); 2.29 (t, 2H); 1.72-1.17 (m, 28H); 0.90 (m, 3H).
8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥탄-2-일 데카노에이트
Figure pct00191
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 98를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.55 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 2H); 3.58 (br. m, 2H); 2.77-2.40 (m, 6H); 2.29 (m, 4H); 1.72-1.41(m, 14H); 1.28 (m, 51H); 0.90 (m, 9H).
BR. 화합물 101: 헵타데칸 -9-일 8-((2-(4- 메틸피페라진 -1-일)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
헵타데칸-9-일 8-((2-클로로에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00192
화학식: C44H86ClNO4
분자량: 728.63
디클로로메탄 (25 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1100 mg, 1.55 mmol)의 용액을 0 ℃에서 N-클로로석신이미드를 한번에 첨가했다. 반응을 0 ℃에서 1시간 동안 이어서 1시간 동안 실온에서 교반되도록 했다. 90 mL의 헥산을 첨가하고, 반응을 실온에서 20분 동안 교반되도록 했다. 실리카겔 플러그를 통해 백색 고체를 여과 제거하고, 헥산으로 3회 세정했다. 유기층를 진공에서 농축시켰다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (m, 2H); 2.85 (m, 2H); 2.54 (m, 4H); 2.33-2.27 (m, 4H); 1.66-1.28 (br. m, 62H); 0.90 (m, 9H).
헵타데칸 -9-일 8-((2-(4- 메틸피페라진 -1-일)에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00193
화학식: C49H97N3O4
분자량: 792.33
1-메틸피페라진 (15 mg, 0.151 mmol), 헵타데칸-9-일 8-((2-클로로에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (110 mg, 0.151 mmol), K2CO3 (42 mg, 0.302 mmol) 및 KI (3 mg, 0.0151 mmol)의 용액을 1:1 THF:MeCN (1 mL:1 mL)에 용해시켰다. 반응을 65 ℃에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 헥산 및 EtOAc으로 세정했다. 유기 여과물을 분별 깔때기로 옮기고, 물 및 염수로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 [디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물)]로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (36 mg, 0.045 mmol, 30%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.25 min. MS (ES): C49H97N3O4에 대한 m/z (MH+) 792.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 2.57-2.45 (br. m, 20H); 2.31 (m, 3H); 1.64-1.28 (br. m, 62H); 0.90 (m, 9H).
BS. 화합물 103: 헵타데칸 -9-일 8-((2-(4- 메틸피페라진 -1-일)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
헵타데칸-9-일 8-((2-클로로에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00194
화학식: C44H86ClNO4
분자량: 728.63
디클로로메탄 (25 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1100 mg, 1.55 mmol)의 교반 용액에 0 ℃에서 N-클로로석신이미드를 한번에 첨가했다. 반응을 0 ℃에서 1시간 동안 이어서 1시간 동안 실온에서 교반되도록 했다. 90 mL의 헥산을 첨가하고, 반응을 실온에서 20분 동안 교반되도록 했다. 실리카겔 플러그를 통해 백색 고체를 여과 제거하고, 헥산으로 3회 세정했다. 유기층를 진공에서 농축시켰다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (m, 2H); 2.85 (m, 2H); 2.54 (m, 4H); 2.33-2.27 (m, 4H); 1.66-1.28 (br. m, 62H); 0.90 (m, 9H).
헵타데칸-9-일 8-((2-모폴리노에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00195
화학식: C48H94N2O5
분자량: 779.29
모폴린 (13 mg, 0.151 mmol), 헵타데칸-9-일 8-((2-클로로에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (110 mg, 0.151 mmol), K2CO3 (42 mg, 0.302 mmol) 및 KI (3 mg, 0.0151 mmol)의 용액을 1:1 THF:MeCN (1 mL:1 mL)에 용해시켰다. 반응을 65 ℃에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 헥산 및 EtOAc으로 세정했다. 유기 여과물을 분별 깔때기로 옮기고, 물 및 염수로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 [디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물)]로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (58 mg, 0.074 mmol, 49%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.53 min. MS (ES): C48H94N2O5에 대한 m/z (MH+) 779.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H); 4.05 (t, 2H); 3.70 (m, 4H); 2.59-2.54 (m, 2H); 2.48-2.38 (m, 10H); 2.31-2.25 (m, 4H); 1.64-1.26 (br. m, 62H); 0.88 (m, 9H).
BT. 화합물 108: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 아세트아미도프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00196
화학식: C47H92N2O5
분자량: 765.26
10 mL 디클로로메탄 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.553 mmol) 및 트리에틸아민 (0.15 mL, 1.10 mmol)의 용액에 0 ℃에서 아세틸 염화물 (47 μL, 0.66 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 실온으로 가온되도록 했다. MS는 생성물을 나타내었고, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세정했다. 그것을 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (300 mg, 71%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 9.14 min. MS (APCI): m/z (MH+) 765.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.41 (bs, 1H); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.40-3.25 (m, 2H); 2.53-2.23 (m, 10H); 1.91 (s, 3H); 1.65-1.16 (m, 64H); 0.86 (m, 9H).
BU . 화합물 109: 헵타데칸 -9-일 8-((3-( 메틸설폰아미도 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00197
화학식: C46H92N2O6S
분자량: 801.31
메탄설포닐 염화물 (51 μL, 0.66 mmol)을 10 mL 디클로로메탄 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.553 mmol) 및 트리에틸아민 (0.15 mL, 1.10 mmol)의0 ℃ 용액에 적가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 실온으로 가온되도록 했다. MS는 생성물을 나타내었고, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세정했다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (296 mg, 88%)로서 얻었다. LC/UV (214 nm): RT = 11.51 min. MS (APCI): m/z (MH+) 801.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.22 (t, 2H, J = 5.8 Hz); 2.88 (s, 3H); 2.53-2.23 (m, 10H); 1.73-1.16 (m, 64H); 0.87 (m, 9H).
BV . 화합물 110: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3,3- 디메틸우레이도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00198
화학식: C48H95N3O5
분자량: 794.30
10 mL 디클로로메탄 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.553 mmol), 디메틸아미노피리딘 (7 mg, 0.0553 mmol) 및 트리에틸아민 (0.15 mL, 1.10 mmol)의 용액에, 디메틸카밤산 염화물 (56 μL, 0.61 mmol)을 0 ℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반되도록 했다. MS는 생성물을 나타내었다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세정했다. 그것을 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (267 mg, 60%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 9.81 min. MS (APCI): m/z (MH+) 794.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.13 (t, 1H, J = 4.5 Hz); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.32-3.26 (m, 2H); 2.85 (s, 6H); 2.52-2.23 (m, 10H); 1.67-1.18 (m, 64H); 0.87 (m, 9H).
BW. 화합물 111: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3,3- 디메틸티오우레이도 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00199
화학식: C48H95N3O4S
분자량: 810.37
10 mL 디클로로메탄 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.553 mmol) 및 트리에틸아민 (0.15 mL, 1.10 mmol)의 용액에 0 ℃에서 티오포스겐 (51 μL, 0.664 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반되도록 했다. 이 시간 후, 반응을 0 ℃로 냉각시키고, THF (2.0 M, 0.55 mL, 1.10 mmol) 중 디메틸아민의 용액을 첨가했다. 반응을 그 다음 실온에서 16시간 동안 교반되도록 했다. MS는 생성물을 나타내었고, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세정했다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 갈색 오일 (346 mg, 77%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 9.89 min. MS (APCI): m/z (MH+) 810.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.12 (bs, 1H); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.74-3.64 (m, 2H); 3.20 (s, 6H); 2.62-2.23 (m, 10H); 1.77-1.17 (m, 64H); 0.87 (m, 9H).
BX . 화합물 112: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3- 메틸우레이도 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00200
화학식: C47H93N3O5
분자량: 780.28
10 mL 디클로로메탄 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.553 mmol)의0 ℃ 용액에 메틸 이소시아네이트 (38 mg, 0.664 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반되도록 했다. MS는 생성물을 나타내었다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세정했다. 그것을 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (320 mg, 70%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 9.63 min. MS (APCI): m/z (MH+) 780.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.54 (bs, 1H); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.76 (bs, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.23 (t, 2H, J = 5.8 Hz); 2.74 (d, 3H, J = 2.0 Hz); 2.47 (t, 2H, J = 6.0 Hz); 2.37 (t, 4H, J = 7.4 Hz); 2.31-2.23 (m, 4H); 1.68-1.17 (m, 64H); 0.87 (m, 9H).
BY. 화합물 113: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3- 메틸티오우레이도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00201
화학식: C49H93N3O4S
분자량: 795.69
10 mL 디클로로메탄 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.553 mmol)의0 ℃ 용액에 메틸 이소티오시아네이트 (45 μL, 0.664 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반되도록 했다. MS는 생성물을 나타내었다. 혼합물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (312 mg, 70%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 9.96 min. MS (APCI): m/z (MH+) 796.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.51 (bs, 2H); 2.93 (bs, 3H); 2.52 (t, 2H, J = 6.0 Hz); 2.41 (t, 4H, J = 7.8 Hz); 2.31-2.23 (m, 4H); 1.68-1.17 (m, 66H); 0.86 (m, 9H).
BZ . 화합물 114: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2,4- 디옥소 -3,4- 디하이드로피리미딘 -1(2 H )-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00202
화학식: C49H91N3O6
분자량: 818.28
3 mL DMF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.67 mmol), 우라실 (300 mg, 2.67 mmol) 및 1,8-디아자바이사이클로운덱-7-엔 (150 μL, 1.07 mmol)의 혼합물을 100 ℃에서 밀봉 튜브에서 16시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 디클로로메탄과 물 사이에서 분할시켰다. 유기층을 염수로 세정했다. 그것을 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 황색 오일 (268 mg, 49%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 8.91 min. MS (APCI): m/z (MH+) 818.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.19 (bs, 1H); 7.24 (d, 1H, J = 7.7 Hz); 5.64 (d, 1H, J = 7.7 Hz); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.76 (t, 2H, J = 7.0 Hz); 2.45-2.24 (m, 10H); 1.81 (p, 2H, J = 6.6 Hz); 1.68-1.17 (m, 62H); 0.87 (m, 9H).
CA. 화합물 115: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(4-아미노-2- 옥소피리미딘 -1(2 H )-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00203
화학식: C49H92N4O5
분자량: 817.30
1 mL DMF 중 시토신 (82 mg, 0.74 mmol)의 현탁액에 NaH (30 mg, 0.74 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 2 mL DMF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.67 mmol)의 용액을 그 다음 첨가하고 혼합물을 100 ℃에서 밀봉 튜브에서 16시간 동안 가열했다. MS는 생성물을 나타내었다. 반응을 포화 중탄산나트륨으로 켄칭하고, 헥산(2X)으로 추출했다. 조합된 유기층을 물 및 염수로 세정했다. 그것을 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 황색 오일 (310 mg, 56%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 8.32 min. MS (APCI): m/z (MH+) 817.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.34 (d, 1H, J = 7.1 Hz); 5.61 (d, 1H, J = 7.1 Hz); 5.44 (bs, 2H); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.79 (t, 2H, J = 7.0 Hz); 2.42-2.22 (m, 9H); 1.84 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 1.68-1.17 (m, 63H); 0.86 (m, 9H).
CB. 화합물 116: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(6-아미노-9 H -퓨린-9-일)프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00204
화학식: C50H92N6O4
분자량: 841.32
2 mL DMF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.67 mmol), 아데닌 (135 mg, 1.0 mmol) 및 1,8-디아자바이사이클로운덱-7-엔 (137 μL, 1.0 mmol)의 혼합물을 90 ℃에서 밀봉 튜브에서 16시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 디클로로메탄과 물 사이에서 분할시켰다. 유기층을 염수로 세정했다. 그것을 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 황색 오일 (325 mg, 57%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 8.47 min. MS (APCI): m/z (MH+) 841.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.36 (s, 1H); 7.80 (s, 1H); 5.51 (bs, 2H); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.24 (t, 2H, J = 7.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.45-2.24 (m, 10H); 2.01 (p, 2H, J = 6.9 Hz); 1.68-1.17 (m, 62H); 0.86 (m, 9H).
CC. 화합물 118: 3 ,4- 디펜틸페닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
5- 메톡시 -2-( 펜트 -1-인-1-일) 벤즈알데하이드 (참고 예를 들어, Bioorg . Med . Chem . Lett. 2013, 23, 1365)
Figure pct00205
화학식: C13H14O2
분자량: 202.25
60 mL THF 중 2-브로모-5-메톡시벤즈알데하이드 (4.30 g, 20 mmol), 1-펜틴 (3.0 mL, 30 mmol), 비스(트리페닐포스피노)팔라듐 염화물 (702 mg, 1 mmol), CuI (380 mg, 2.0 mmol) 및 트리에틸아민 (5.6 mL, 40 mmol)의 혼합물을 16시간 동안 질소 하에서 50 ℃로 가열시켰다. TLC는 개시 물질의 사라짐을 나타내었다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 물 및 염수로 세정했다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 잔류물을 ISCO (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 암갈색 오일 (3.00 g, 74%)로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.49 (s, 1H); 7.42 (d, 1H, J = 8.5 Hz); 7.36 (d, 1H, J = 2.8 Hz); 7.07 (dd, 1H, J = 8.5 Hz, 2.8 Hz); 3.84 (s, 3H); 2.44 (t, 2H, J = 7.0 Hz); 1.62 (m, 2H); 1.05 (t, 3H, J = 7.2 Hz).
4-메톡시-2-(펜트-1-엔-1-일)-1-(펜트-1-인-1-일)벤젠
Figure pct00206
화학식: C17H22O
분자량: 242.36
75 mL THF 중 부틸 트리페닐포스포늄 브로마이드 (8.88 g, 22.2 mmol)의 현탁액에 0 ℃에서 칼륨 tert-부톡시드 (2.50 g, 22.2 mmol)을 첨가했다. 30분 후, 25 mL THF 중 5-메톡시-2-(펜트-1-인-1-일)벤즈알데하이드 (3.00 g, 14.8 mmol)의 용액을 그 다음 오렌지색 현탁액에 느리게 첨가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 60시간 동안 교반했다. 포화 암모늄 염화물 용액을 첨가하고 혼합물을 에테르(2X)로 추출하고, 조합된 유기층을 염수로 세정했다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 잔류물을 ISCO (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 갈색 오일 (3.46 g, 96%)로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.33 (d, 0.5H, J = 8.5 Hz); 7.26 (d, 0.5H, J = 8.5 Hz); 6.99 (d, 0.5H, J = 2.8 Hz); 6.88-6.80 (m, 1H); 6.73-6.61 (m, 1.5H); 6.25 (dt, 0.5H, J = 15.9 Hz, 6.9 Hz); 5.73 (dt, 0.5H, J = 11.5 Hz, 7.4 Hz); 3.80 (s, 3H); 2.45-2.37 (m, 2H); 2.31-2.18 (m, 2H); 1.71-1.41 (m, 4H); 1.09-0.90 (m, 6H).
4-메톡시-1,2-디펜틸벤젠
Figure pct00207
화학식: C17H28O
분자량: 248.41
60 mL EtOH 중 4-메톡시-2-(펜트-1-엔-1-일)-1-(펜트-1-인-1-일)벤젠 (3.46 g, 14.3 mmol) 및 Pd/C (10%, 300 mg)의 혼합물을 60시간 동안 수소 밸룬 하에서 교반했다. TLC는 반응의 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켜 생성물을 황색 오일 (3.70 g, quant.)로서 얻었고, 이것을 다음 단계를 위해 정제 없이 사용했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.05 (d, 1H, J = 8.2 Hz); 6.72-6.55 (m, 2H); 3.78 (s, 3H); 2.59-2.50 (m, 4H); 1.62-1.48 (m, 4H); 1.39-1.28 (m, 8H); 0.93-0.86 (m, 6H).
3,4-디펜틸페놀
Figure pct00208
화학식: C16H26O
분자량: 234.38
75 mL 디클로로메탄 중 4-메톡시-1,2-디펜틸벤젠 (3.40 g, 13.7 mmol)의 용액에 -78 ℃에서 BBr3 (1.65 mL, 17.1 mmol)을 적가하고, 그 다음 반응을 실온으로 3시간에 걸쳐 가온되도록 했다. TLC는 반응의 완료를 나타내었다. 반응을 포화 중탄산나트륨의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 그것을 디클로로메탄 (2X)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 농축 후, 잔류물을 ISCO (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 30%)로 정제하여 생성물을 갈색 오일 (3.35 g, 97%)로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.99 (d, 1H, J = 8.0 Hz); 6.64-6.59 (m, 2H); 4.45 (bs, 1H); 2.55-2.47 (m, 4H); 1.66-1.43 (m, 4H); 1.39-1.28 (m, 8H); 0.93-0.86 (m, 6H).
3,4-디펜틸페닐 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00209
화학식: C24H39BrO2
분자량: 439.48
디클로로메탄 (50 mL) 중 8-브로모옥탄산 (2.23g, 10 mmol) 및 3,4-디펜틸페놀 (2.34 g, 10 mmol)의 용액에 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (1.92 g, 10 mmol) 및 DMAP (244 mg, 2 mmol)을 첨가했다. 반응을 실온에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨으로 추출했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 ISCO (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 10%)로 정제하여 생성물을 갈색 오일 (4.30 g, 98%)로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.11 (d, 1H, J = 7.7 Hz); 6.84-6.77 (m, 2H); 3.41 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.60-2.49 (m, 6H); 1.92-1.69 (m, 4H); 1.62-1.29 (m, 18H); 0.90 (m, 6H).
노닐 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00210
화학식: C19H39NO3
분자량: 329.53
10 mL EtOH 중 노닐 8-브로모옥타노에이트 (2.50 g, 7.15 mmol) 및 2-아미노에탄올 (4.3 mL, 71.5 mmol)의 혼합물을 실온에서 60시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 헥산과 물로 분할하고, 유기층을 염수로 세정했다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 20%)로 정제하여 생성물 백색 고체 (1.57 g, 66%)로서 얻었다. MS (APCI): m/z (MH+) 330.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.63 (t, 2H, J = 5.2 Hz); 2.77 (t, 2H, J = 5.1 Hz); 2.61 (t, 2H, J = 7.1 Hz); 2.28 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 1.99 (bs, 2H); 1.67-1.20 (m, 4H); 1.62-1.29 (m, 17H); 0.87 (m, 6H).
3,4- 디펜틸페닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00211
화학식: C43H77NO5
분자량: 688.09
tert-부탄올 (3 mL) 중 노닐 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 1.52 mmol), 3,4-디펜틸페닐 8-브로모옥타노에이트 (1.00 g, 2.27 mmol) 및 N, N-디이소프로필에틸아민 (0.40 mL, 2.27 mmol)의 용액을 밀봉 튜브에서 60시간 동안 60 ℃로 가열시켰다. 반응을 실온으로 냉각시키고, 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 혼합물 (365 mg)를 얻었고, 그 다음 혼합물을 ISCO (EtOAc/헥산/0.5% Et3N 0 내지 50%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (80 mg) 로서 얻었다. LC/UV (214 nm): RT = 10.23 min. MS (APCI): m/z (MH+) 688.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.11 (d, 1H, J = 8.0 Hz); 6.84-6.77 (m, 2H); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.51 (t, 2H, J = 5.5 Hz); 2.60-2.38 (m, 12H); 2.28 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 1.79-1.19 (m, 37H); 0.92-0.82 (m, 9H).
CD. 화합물 119: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-(4-펜틸페녹시)옥틸)아미노)옥타노에이트
4-펜틸페닐 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00212
화학식: C19H29BrO2
분자량: 369.34
디클로로메탄 (50 mL) 중 8-브로모옥탄산 (2.00 g, 8.96 mmol) 및 4-펜틸페놀 (3.07 mL g, 17.9 mmol)의 용액에 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (1.72 g, 8.96 mmol) 및 DMAP (220 mg, 1.79 mmol)을 첨가했다. 반응을 실온에서 60시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨으로 추출했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 ISCO (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 10%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (3.12 g, 94%)로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.16 (d, 2H, J = 8.5 Hz); 6.96 (d, 2H, J = 8.5 Hz); 3.41 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.61-2.49 (m, 4H); 1.92-1.69 (m, 4H); 1.65-1.25 (m, 10H); 0.88 (m, 3H).
노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-(4- 펜틸페녹시 ) 옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00213
화학식: C38H67NO5
분자량: 617.96
tert-부탄올 (3 mL) 중 노닐 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 1.52 mmol), 4-펜틸페닐 8-브로모옥타노에이트 (840 mg, 2.28 mmol) 및 N, N-디이소프로필에틸아민 (0.40 mL, 2.28 mmol)의 용액을 밀봉 튜브에서 48시간 동안 60 ℃로 가열시켰다. 반응을 실온으로 냉각시키고, 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 혼합물 (360 mg)을 얻었고, 그 다음 혼합물을 ISCO (EtOAc/헥산/0.5% Et3N 0 내지 50%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (95 mg) 로서 얻었다. LC/UV (214 nm): RT = 9.63 min. MS (APCI): m/z (MH+) 618.5. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.11 (d, 1H, J = 8.0 Hz); 6.84-6.77 (m, 2H); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.51 (t, 2H, J = 5.5 Hz); 2.60-2.38 (m, 12H); 2.28 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 1.79-1.19 (m, 37H); 0.92-0.82 (m, 9H).
CE. 화합물 120: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-(3- 펜틸페녹시 ) 옥틸 )아미노)옥타노에이트
3-펜틸페놀 (Ref: Tetrahedron Lett. 2013, 54, 52)
Figure pct00214
화학식: C11H16O
분자량: 164.25
-78 ℃에서, 15 mL 펜탄 중 칼륨 tert-부톡시드 (6.73 g, 60 mmol)의 현탁액에 테트라메틸에틸렌디아민 (9.0 mL, 60 mmol) 및 BuLi (헥산 중 2.5 M, 24 mL, 60 mmol)을 순차적으로 첨가하고, 10 mL 펜탄 중 m-크레졸 (2.6 mL, 25 mmol)의 용액을 느리게 첨가했다. 반응 혼합물을 3시간 동안 -20 ℃로 가온시켰다. 30 mL THF을 첨가하고 반응을 -60 ℃으로 냉각시켰다. 부틸 브로마이드 (4.8 mL, 45 mmol)을 느리게 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반했다. 0 ℃로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 4 M HCl로 pH~3 로 산성화하고, 그 다음 에테르로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 농축 후, 잔류물을 ISCO (EtOAc/헥산 0 내지 5%)로 정제하여 개시 물질과 함께 생성물의 혼합물을 제공하고 이것을 진공 하에서 증류하여 생성물을 무색 오일 (1.23 g, 65%)로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.14 (t, 1H, J = 7.7 Hz); 6.75 (d, 1H, J = 7.7 Hz); 6.67-6.61 (m, 2H); 4.62 (s, 1H); 2.55 (t, 2H, J = 7.7 Hz); 1.67-1.52 (m, 2H); 1.38-1.24 (m, 4H); 0.88 (t, 3H, J = 6.9 Hz).
3-펜틸페닐 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00215
화학식: C19H29BrO2
분자량: 369.34
디클로로메탄 (40 mL) 중 8-브로모옥탄산 (1.84 g, 8.20 mmol) 및 3-펜틸페놀 (1.23 g, 7.49 mmol)의 용액에 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (1.58 g, 8.20 mmol) 및 DMAP (183 mg, 1.50 mmol)을 첨가했다. 반응을 실온에서 16시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨으로 추출했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 ISCO (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 10%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (2.23 g, 80%)로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.26 (t, 1H, J = 8.5 Hz); 7.03 (d, 1H, J = 7.6 Hz); 6.91-6.84 (m, 2H); 3.41 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.61-2.49 (m, 4H); 1.92-1.69 (m, 4H); 1.65-1.25 (m, 12H); 0.88 (t, 3H, J = 6.9 Hz).
노닐 8-((2-하이드록시에틸)(8-옥소-8-(3-펜틸페녹시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00216
화학식: C38H67NO5
분자량: 617.96
tert-부탄올 (3 mL) 중 노닐 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 1.52 mmol), 3-펜틸페닐 8-브로모옥타노에이트 (840 mg, 2.28 mmol) 및 N, N-디이소프로필에틸아민 (0.40 mL, 2.28 mmol)의 용액을 60 ℃에서 밀봉 튜브에서 16시간 동안 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고, 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 혼합물 (247 mg)을 얻었고, 그 다음 혼합물을 ISCO (EtOAc/헥산/0.5% Et3N 0 내지 50%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (150 mg) 로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 7.45 min. MS (APCI): m/z (MH+) 618.5. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.26 (t, 1H, J = 8.5 Hz); 7.03 (d, 1H, J = 7.6 Hz); 6.91-6.84 (m, 2H); 4.05 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.51 (t, 2H, J = 5.5 Hz); 2.64-2.38 (m, 10H); 2.28 (t, 2H, J = 7.8 Hz); 1.79-1.19 (m, 41H); 0.91-0.82 (m, 6H).
CF. 화합물 121: 헵타데칸 -9-일 8-((3-아미노프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트헵타데칸-9-일 8-((3- 클로로프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00217
화학식: C45H88ClNO4
분자량: 742.65
디클로로메탄 (200 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (8.00 g, 11.0 mmol) 및 트리에틸아민 (2.0 mL, 14.4 mmol)의 용액에 메탄설포닐 염화물 (1.07 mL, 13.8 mmol)을 0 ℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 실온으로 가온되도록 했다. TLC 및 MS는 반응의 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세정했다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 용매를 진공 하에서 제거하여 생성물을 갈색 오일 (7.30 g, 89%)로서 얻었다. NMR은, 조물질이 소량의 메실레이트 및 원하는 염화물을 함유함을 나타내었다. 이것을 다음 단계를 위해 정제 없이 사용했다. MS (APCI): m/z (MH+) 742.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 3.58 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.58-2.22 (m, 9H); 1.92-1.16 (m, 65H); 0.87 (m, 9H).
헵타데칸-9-일 8-((3-아지도프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00218
화학식: C45H88N4O4
분자량: 749.22
20 mL DMF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (4.20 g, 5.66 mmol) 및 아지드화나트륨 (1.75 g, 28.28 mmol)의 혼합물을 밀봉 튜브에서 16시간 동안 100 ℃로 가열시켰다. 그것을 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, 헥산으로 추출했다. 조합된 유기층을 물 및 염수로 세정하고, 그 다음 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔류물을 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 5%)로 정제하여 생성물을 갈색 오일 (3.66 g, 86%)로서 얻었다. MS (APCI): m/z (MH+) 749.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.32 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.58-2.22 (m, 10H); 1.72-1.19 (m, 64H); 0.87 (m, 9H).
헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00219
화학식: C45H90N2O4
분자량: 723.23
150 mL EtOH 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아지도프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (3.66 g, 4.89 mmol) 및 Pd/C (10%, 400 mg)의 혼합물을 수소 밸룬 하에서 16시간 동안 교반했다. MS는 반응의 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축시키고 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2/1% NH4OH 0 내지 20%)로 정제하여 생성물을 갈색 오일 (3.08 g, 87%)로서 얻었다. LC/UV (202 nm): RT = 8.39 min. MS (APCI): m/z (MH+) 723.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.70 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.46-2.24 (m, 10H); 1.65-1.16 (m, 66H); 0.87 (m, 9H).
CG. 화합물 122: 헵타데칸 -9-일 8-((6-(데칸-2- 일옥시 )-6- 옥소헥실 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00220
화학식: C43H85NO5
분자량: 696.16
화합물 122를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.58 min. MS (ES): C43H85NO5에 대한 m/z (MH+) 697.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 2H); 3.62 (m, 2H); 2.81-2.42 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.73-1.43 (m, 14H); 1.28 (m, 48H); 0.90 (m, 9H).
CH. 화합물 123: 헵타데칸 -9-일) 8-( 메틸 (8- 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00221
화학식: C26H53NO2
분자량: 411.72
메탄아민 (10 mL, 19.92 mmol, THF 중 2M) 중 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (200 mg, 0.433 mmol)의 용액을 rt에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 10-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-(메틸아미노)옥타노에이트 (113 mg, 0.27 mmol, 63%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 2.76 min. MS (ES): C26H53NO2에 대한 m/z (MH+) 412.4. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.92 (p, 1H); 2.62 (t, 2H); 2.48 (s, 3H); 2.32-2.27 (m, 2H); 1.66-1.52 (br. m, 8H); 1.28 (m, 30H); 0.90 (m, 6H).
헵타데칸-9-일 8-(메틸(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00222
화학식: C43H85NO4
분자량: 680.16
헵타데칸-9-일 8-(메틸아미노)옥타노에이트 (113 mg, 0.27 mmol), 노닐 8-브로모옥타노에이트 (115 mg, 0.33 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (67 μL, 0.38 mmol) 및 요오드화칼륨 (5 mg, 0.027 mmol)의 용액을 에탄올에 용해시키고, 62 ℃에서 48시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각시키고, 용매를 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-(메틸(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (75 mg, 0.11 mmol, 41%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.84 min. MS (ES): C43H85NO4에 대한 m/z (MH+) 681.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 2.88-2.67 (br. m, 7H); 2.34-2.27 (m, 4H); 1.80 (m, 4H); 1.63-1.52 (br. m, 10H); 1.37-1.28 (br. m, 48H); 0.90 (m, 9H).
CI. 화합물 124: 디(헵타데칸-9-일) 8,8'-(메틸아잔디일)디옥타노에이트
Figure pct00223
화학식: C51H101NO4
분자량: 792.37
메탄아민 (11 mL, 21.67 mmol, THF 중 2M) 중 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (500 mg, 1.08 mmol)의 용액을 rt에서 6시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 20-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 디(헵타데칸-9-일) 8,8'-(메틸아잔디일)디옥타노에이트 (26 mg, 0.03 mmol, 3%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 4.03 min. MS (ES): C51H101NO4에 대한 m/z (MH+) 793.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 2H); 2.32-2.24 (m, 11H); 1.66-1.28 (br. m, 76H); 0.90 (m, 12H).
CJ. 화합물 125: 3 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)프로판산
헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00224
화학식: C42H83NO4
분자량: 666.13
-78 ℃에서, 3 mL 디클로로메탄 중 옥살릴 염화물 (0.25 mL, 3.0 mmol)의 용액에 2 mL 디클로로메탄 중 DMSO (0.43 mL, 6.0 mmol)의 용액을 적가하고, 그 다음 디클로로메탄 (10 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.45 g, 2.0 mmol)의 용액을 즉시 첨가했다. 그것을 30분 동안 교반한 후 이 온도에서, 트리에틸아민 (1.45 mL, 10.4 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고 TLC 및 MS은 완전한 반응을 나타내었고 (M+1: 722.7), 및 반응 혼합물을 물로 희석하고, 헥산(2X)으로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정했다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 여과물을 농축시키고 잔류물을 ISCO (SiO2: EtOAc/헥산/0.5% Et3N 0 내지 50%)로 정제하여 생성물을 갈색 오일 (810 mg, 61%)로서 얻었다. MS (APCI): m/z (MH+) 666.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.56 (t, 4H, J = 7.1 Hz); 2.31-2.24 (m, 4H); 1.67-1.19 (m, 63H); 0.87 (m, 9H).
헵타데칸 -9-일 8-((3-( 벤질옥시 )-3- 옥소프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00225
화학식: C52H93NO6
분자량: 828.32
디클로로메탄 (20 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (798 mg, 1.2 mmol) 및 벤질 아크릴레이트 (293 mg, 1.8 mmol)의 용액을 실온에서 16시간 동안 교반했다. TLC 및 MS은 거의 무반응을 나타내었고, 10 mL MeOH을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반했다. MS는 소량의 메틸 에스테르 (M+1: 829.8, 752.7)를 갖는 생성물을 나타내었다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, ISCO (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 35%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (280 mg, 28%)로서 얻었다. MS (APCI): m/z (MH+) 829.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.36-7.32 (m, 5H); 5.10 (s, 2H); 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.78 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 2.46 (t, 2H, J = 7.0 Hz); 2.36 (t, 4H, J = 6.9 Hz); 2.30-2.24 (m, 4H); 1.67-1.19 (m, 62H); 0.87 (m, 9H).
3-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)프로판산
Figure pct00226
화학식: C45H87NO6
분자량: 738.19
20 mL EtOAc 중 헵타데칸-9-일 8-((3-(벤질옥시)-3-옥소프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (280 mg, 0.34 mmol) 및 Pd/C (10%, 28 mg)의 혼합물을 수소 밸룬 하에서 1시간 동안 교반했다. MS는 반응의 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축했다. 잔류물을 ISCO (SiO2: MeOH/CH2Cl2 0 내지 10%)로 정제하여 생성물을 무색 오일 (230 mg, 91%)로서 얻었다. LC/UV (214 nm): RT = 12.38 min. MS (APCI): m/z (MH+) 838.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (p, 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.85 (t, 2H, J = 6.0 Hz); 2.65 (t, 4H, J = 7.7 Hz); 2.48 (t, 2H, J = 6.0 Hz); 2.32-2.24 (m, 4H); 1.67-1.17 (m, 63H); 0.87 (m, 9H).
CK. 화합물 126: 헵타데칸 -9-일 8-( 메틸(4-(노닐옥시)-4-옥소부틸)아미노 ) 옥타노에이트
Figure pct00227
화학식: C39H77NO4
분자량: 624.05
헵타데칸-9-일 8-(메틸아미노)옥타노에이트 (103 mg, 0.25 mmol), 노닐 4-브로모부타노에이트 (88 mg, 0.30 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (61 μL, 0.35 mmol)의 용액을 에탄올에 용해시키고, 62 ℃에서 48시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각시키고, 용매를 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에서 채취하고, 포화 수성 중탄산나트륨으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-(메틸(4-(노닐옥시)-4-옥소부틸)아미노)옥타노에이트 (90 mg, 0.14 mmol, 58%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.58 min. MS (ES): C39H77NO4에 대한 m/z (MH+) 624.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 4.08 (t, 2H); 2.38-2.24 (br. m, 11H); 1.82 (m, 2H); 1.64-1.28 (br. m, 52H); 0.90 (m, 9H).
CL. 화합물 127: 노닐 8-((9-(( 비스(노닐옥시)포스포릴 ) 옥시 )노닐)(2- 하이드록시에 틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00228
화학식: C46H94NO7P
분자량: 804.232
화합물 127을 화합물 131와 동일한 방식으로 그리고 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.58 min. MS (ES): C46H94NO7P에 대한 m/z (MH+) 805.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.05 (m, 8H); 3.55 (m, 2H); 2.59 (m, 2H); 2.46 (m, 4H); 2.31(t, 2H), 1.67 (m, 11H); 1.29 (m, 55H); 0.90 (m, 9H).
CM. 화합물 128: 헵타데칸 -9-일 8-((6-((1- 사이클로프로필노닐 ) 옥시 )-6-옥소헥실)(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00229
화학식: C45H87NO5
분자량: 722.193
화합물 128를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.67 min. MS (ES): C45H87NO5에 대한 m/z (MH+) 722.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.30 (m, 1H); 3.56 (m, 2H); 2.72-2.39 (m, 6H); 2.30 (m, 4H), 1.76-1.17 (m, 58H); 0.90 (m, 10H); 0.61-0.35 (m, 3H); 0.28 (m, 1H).
CN . 화합물 129: 운데실 6-((8-( 디옥틸아미노 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)헥사노에이트
Figure pct00230
화학식: C43H86N2O4
분자량: 695.171
화합물 129를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.45 min. MS (ES): C43H86N2O4에 대한 m/z (MH+) 695.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 2H); 3.54 (m, 2H), 3.28 (m, 4H); 2.59 (m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.32 (q, 4H); 1.73-1.19 (m, 58H); 0.90 (m, 9H).
CO. 화합물 130: 데칸-2-일 8-((8-( 디옥틸아미노 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00231
화학식: C44H88N2O4
분자량: 709.198
화합물 130를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.46 min. MS (ES): C44H88N2O4에 대한 m/z (MH+) 709.9. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 1H); 3.70 (br. m, 2H), 3.35-3.15 (m, 4H); 2.96-2.41 (br. m, 6H); 2.29 (m, 4H); 1.74-1.43 (m, 14H); 1.41-1.115 (m, 47H); 0.90 (m, 9H).
CP. 화합물 131: 노닐 8-((7-(( 비스(옥틸옥시)포스포릴 ) 옥시 ) 헵틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
7-브로모헵틸 디옥틸 포스페이트
Figure pct00232
화학식: C23H48BrO4P
분자량: 499.511
DCM (20 mL) 중 POCl3 (1.91 mL, 20.5 mmol)의 용액에 0 ℃에서, Et3N (2.85 mL, 20.4 mmol)을 느리게 첨가하고 이어서 7-브로모헵탄-1-올 (4.0 g, 20.5 mmol)을 첨가했다. 반응을 4시간 동안 0 ℃에서 교반되도록 했다. DCM 중 옥탄-1-올 (7.10 mL, 45.11 mmol) 및 Et3N (8.9 mL, 63.8 mmol)의 용액을 첨가하고 반응을 하고 rt에서 16시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-30%) EtOAc를 갖는 ISCO로 정제하여 7-브로모헵틸 디옥틸 포스페이트 (0.58 g, 1.16 mmol, 6%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.03 (m, 6H); 3.43 (t, 2H); 1.88 (m, 2H); 1.70 (m, 6H); 1.54-1.23 (m, 26H); 0.90 (m, 6H).
노닐 8-((7-(( 비스(옥틸옥시)포스포릴 ) 옥시 ) 헵틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00233
화학식: C42H86NO7P
분자량: 748.124
화합물 131를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.22 min. MS (ES): C42H86NO7P에 대한 m/z (MH+) 750.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.05 (m, 8H); 3.51 (m, 2H); 2.60 (br. m, 2H); 2.46 (m, 4H); 2.31 (t, 2H); 1.76 - 1.15 (m, 58H); 0.90 (m, 9H).
CQ . 화합물 132: 데칸-2-일 8-((7-(( 비스(옥틸옥시)포스포릴 ) 옥시 ) 헵틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00234
화학식: C43H88NO7P
분자량: 762.15
화합물 132을 화합물 131과 동일한 방식으로 그리고 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.27 min. MS (ES): C43H88NO7P에 대한 m/z (MH+) 764.00. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 1H); 4.03 (m, 6H); 3.56 (m, 2H); 2.73-2.38 (br. m, 6H); 2.29 (t, 2H); 1.79 - 1.16 (m, 61H); 0.90 (m, 9H).
CR . 화합물 133: ((2-하이드록시에틸)아잔디일)비스 ( 노난 -9,1- 디일 ) 비스 (2- 헥실데카노에이트 )
Figure pct00235
화학식: C52H103NO5
분자량: 822.398
화합물 133를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.91 min. MS (ES): C52H103NO5에 대한 m/z (MH+) 824.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.09 (t, 4H); 3.60 (m, 2H); 2.74 - 2.42 (br. m, 6H); 2.33 (m, 3H); 1.72 -1.17 (m, 76H); 0.90 (m, 12H).
CS. 화합물 134: 9 -((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)노닐 2-헥실데카노에이트
Figure pct00236
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.182
화합물 134를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.48 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 712.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (m, 4H); 3.55 (m, 2H); 2.67 - 2.39 (br. m, 6H); 2.31 (m, 3H); 1.71 -1.19 (m, 62H); 0.90 (m, 12H).
CT. 화합물 135: 7 -((8-(데칸-2- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 헵틸 2- 옥틸데카노에이트
Figure pct00237
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 135를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.63 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 726.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.57 (m, 2H); 2.73 - 2.40 (br. m, 6H); 2.29 (m, 3H); 1.71 -1.16 (m, 66H); 0.90 (m, 9H).
CU. 화합물 136: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(( 9 Z ,12 Z )- 옥타데카 -9,12- 디엔 -1-일)아미노)옥타노에이트
대표적인 절차 2:
노닐 8- 브로모옥타노에이트 (방법 A)
Figure pct00238
디클로로메탄 (100 mL) 중 8-브로모옥탄산 (5 g, 22 mmol) 및 노난-1-올 (6.46 g, 45 mmol)의 용액에 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (4.3 g, 22 mmol) 및 DMAP (547 mg, 4.5 mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-10% 에틸 아세테이트)로 정제하여 노닐 8-브로모옥타노에이트 (6.1 g, 17 mmol, 77%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.06 (t, 2H); 3.40 (t, 2H); 2.29 (t, 2H); 1.85 (m, 2H); 1.72-0.97 (m, 22H); 0.88 (m, 3H).
노닐 8-((2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00239
에탄올 (2 mL) 중 노닐 8-브로모옥타노에이트 (1.2 g, 3.4 mmol) 및 2-아미노에탄-1-올 (5 mL, 83 mmol)의 용액을 62 ℃에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 및 물로 추출했다. 유기층을 분리하고, 물, 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 노닐 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (295 mg, 0.9 mmol, 26%)를 얻었다.
UPLC/ELSD: RT = 1.29 min. MS (ES): C19H39NO3에 대한 m/z (MH+) 330.42.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.07 (t, 2H); 3.65 (t, 2H); 2.78 (t, 2H); 2.63 (t, 2H); 2.32-2.19 (m, 4H); 1.73-1.20 (m, 24H); 0.89 (m, 3H)
노닐 8-((2-하이드록시에틸)(( 9 Z ,12 Z )- 옥타데카 -9,12- 디엔 -1-일)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00240
화학식: C37H71NO3
분자량: 577.98
에탄올 (2 mL) 중 노닐 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (150 mg, 0.46 mmol), (6Z,9Z)-18-브로모옥타데카-6,9-디엔 (165 mg, 0.5 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (65 mg, 0.5 mmol)의 용액을 환류에서 48시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각되도록 하고, 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% MeOH)로 정제하여 노닐 8-((2-하이드록시에틸)((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일)아미노)옥타노에이트 (81 mg, 0.14 mmol, 30%)을 HBr 염으로서 얻었다.
UPLC/ELSD: RT = 3.24 min. MS (ES): C37H71NO3에 대한 m/z (MH+) 578.64.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.71 (br., 1H); 5.36 (br. m, 4H); 4.04 (m, 4H); 3.22-2.96 (br. m, 5H); 2.77 (m, 2H); 2.29 (m, 2H); 2.04 (br. m, 4H); 1.86 (br. m, 4H); 1.66-1.17 (br. m, 40H); 0.89 (m, 6H)
CV . 화합물 137: 메틸 12-( 도데실(2-하이드록시에틸)아미노 ) 도데카노에이트
메틸 12-브로모도데카노에이트
Figure pct00241
화학식: C13H25BrO2
분자량: 293.25
THF (7 mL) 중 12-브로모도데칸산 (2.5 g, 8.95 mmol)의 용액에 메탄올 (7.2 mL, 179 mmol)을 첨가했다. 황산 (0.50 mL, 8.95 mmol)을 적가하고, 반응을 65 ℃에서 2시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 5% NaHCO3 및 염수로 세정했다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피 (0-20% EtOAc/헥산)로 정제하여 메틸 12-브로모도데카노에이트 (2.40 g, 92%)를 제공했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.69 (s, 3H); 3.44 (t, 2H); 2.33 (t, 2H); 1.88 (br. m, 2H); 1.64 (br. m, 2H); 1.45 (br. m, 2H); 1.31 (br. m, 12H).
메틸 12-(도데실(2-하이드록시에틸)아미노)도데카노에이트
Figure pct00242
화학식: C27H55NO3
분자량: 441.74
MeCN (5 mL) 중 메틸 12-((2-하이드록시에틸)아미노)도데카노에이트 (413 mg, 1.51 mmol) (12,12'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디도데카노에이트의 합성으로부터 단리됨)의 용액에 1-브로모도데칸 (452 mg, 1.81 mmol), K2CO3 (418 mg, 3.02 mmol), 및 KI (25 mg, 0.151 mmol)을 첨가했다. 반응을 82 ℃에서 16시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O로 희석하고, EtOAc로 추출했다. 조합된 유기층를 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피 (0-100% [DCM, 20% MeOH, 1% NH4OH]/MeOH)로 정제하여 메틸 12-(도데실(2-하이드록시에틸)아미노)도데카노에이트 (409 mg, 61%)를 제공했다.
UPLC/ELSD: RT = 2.39 min. MS (ES): C27H55NO3에 대한 m/z (MH+) 442.60.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.69 (s, 3H); 3.61 (t, 2H); 2.68 (t, 2H); 2.54 (t, 4H); 2.32 (t, 2H); 1.64 (m, 2H); 1.50 (br. m, 4H); 1.28 (br. m, 32H); 0.90 (t, 3H).
CW . 화합물 138: 디노닐 8,8'-((2-하이드록시에틸) 아잔디일 ) 디옥타노에이트
대표적인 절차 3:
디노닐 8,8'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디옥타노에이트
Figure pct00243
화학식: C36H71NO5
분자량: 597.97
THF/CH3CN (1:1) (3 mL) 중 노닐 8-브로모옥타노에이트 (200 mg, 0.6 mmol) 및 2-아미노에탄-1-올 (16 mg, 0.3 mmol) 및 N, N-디이소프로필에틸아민 (74 mg, 0.6 mmol)의 용액을 63 ℃에서 72시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각시키고, 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 추출했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-10% MeOH)로 정제하여 디노닐 8,8'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디옥타노에이트 (80 mg, 0.13 mmol, 43%)를 얻었다.
UPLC/ELSD: RT = 3.09 min. MS (ES): C36H71NO5에 대한 m/z (MH+) 598.85.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.05 (m, 4H); 3.57 (br. m, 2H); 2.71-2.38 (br. m, 6H); 2.29 (m, 4H), 1.71-1.01 (br. m, 49H), 0.88 (m, 6H).
CX . 화합물 139: 디(( Z )-논-2-엔-1-일) 8,8'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디옥타노에이트
화합물 139을 대표적인 절차 3에 따라 합성했다.
Figure pct00244
화학식: C36H67NO5
분자량: 593.93
UPLC/ELSD: RT = 2.88 min. MS (ES): C36H67NO5에 대한 m/z (MH+) 594.78.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.60 (m, 2H); 5.50 (m, 2H); 4.59 (m, 4H); 3.96 (br. m, 2H); 3.20-2.94 (br. m, 5H); 2.28 (m, 4H); 2.07 (m, 4H); 1.80 (br. m 4H); 1.59 (br. m, 6H); 1.43-1.14 (br. m, 28H), 0.85 (m, 6H).
CY. 화합물 140: 디(( Z )-운덱-2-엔-1-일) 6,6'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디헥사노에이트
화합물 140을 대표적인 절차 3에 따라 합성했다.
Figure pct00245
화학식: C36H67NO5
분자량: 593.93
UPLC/ELSD: RT = 2.87 min. MS (ES): C36H67NO5에 대한 m/z (MH+) 594.74.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.73-5.44 (m, 4H); 4.62 (m, 4H); 3.55 (m, 2H); 2.73-2.39 (br. m, 6H); 2.39 (m, 4H); 2.09 (m, 4H); 1.64 (m, 4H); 1.55-1.14 (br. m, 33H); 0.88 (m, 6H).
CZ. 화합물 141: 디운데실 6,6'-((2-하이드록시에틸) 아잔디일 ) 디헥사노에이트
화합물 141을 대표적인 절차 3에 따라 합성했다.
Figure pct00246
화학식: C36H71NO5
분자량: 597.97
UPLC/ELSD: RT = 3.03 min. MS (ES): C36H71NO5에 대한 m/z (MH+) 598.63.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.05 (m, 4H); 3.53 (m, 2H); 2.95 (br. m, 1H); 2.65-2.35 (m, 6H); 2.30 (m, 4H); 1.73-1.54 (m, 8H); 1.54-1.15 (m, 40H); 0.88 (m, 6H).
DA. 화합물 142: 12 ,12'-((2-하이드록시에틸) 아잔디일 ) 디도데카노에이트
12,12'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디도데카노에이트
Figure pct00247
화학식: C28H55NO5
분자량: 485.75
MeCN (11 mL) 중 메틸 12-브로모도데카노에이트 (1.5 g, 5.12 mmol)의 용액에 에탄올아민 (0.310 mL, 5.12 mmol), K2CO3 (1.42 g, 10.2 mmol), 및 KI (85 mg, 0.512 mmol)을 첨가했다. 반응을 82 ℃에서 16시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 고체를 헥산으로 세정했다. 여과물을 헥산으로 추출하고, 조합된 추출물을 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피 (0-100% [DCM, 20% MeOH, 1% NH4OH]/MeOH)로 정제하여 12,12'-((2-하이드록시에틸)아잔디일)디도데카노에이트 (563 mg, 45%)를 제공했다.
UPLC/ELSD: RT = 1.81 min. MS (ES): C28H55NO5에 대한 m/z (MH+) 486.63.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.69 (s, 6H); 3.59 (br. m, 2H); 2.75-2.40 (br. m, 6H); 2.32 (t, 4H); 1.64 (m, 4H); 1.48 (br. m, 4H); 1.29 (br. m, 28H).
DB. 화합물 143: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(7-((2- 옥틸데실 ) 옥시 )-7- 옥소헵틸 )아미노)옥타노에이트
2-옥틸데칸산
Figure pct00248
화학식: C18H36O2
분자량: 284.48
THF (10 mL) 중 디이소프로필아민 (2.92 mL, 20.8 mmol)의 용액을 -78 ℃로 냉각시키고, n-BuLi의 용액 (7.5 mL, 18.9 mmol, 헥산 중 2.5 M)을 첨가했다. 반응을 0 ℃로 가온되도록 했다. THF (20 mL) 중 데칸산 (2.96 g, 17.2 mmol) 및 NaH (754 mg, 18.9 mmol, 60% w/w)의 용액에 0 ℃에서 LDA의 용액을 첨가하고, 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반되도록 했다. 이 시간 후 1-아이오도옥탄 (5 g, 20.8 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 45 ℃에서 6시간 동안 가열했다. 반응을 1N HCl (10 mL)로 켄칭했다. 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트)로 정제하여 2-옥틸데칸산 (1.9 g, 6.6 mmol)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 2.38 (br. m, 1H); 1.74-1.03 (br. m, 28H); 0.91 (m, 6H).
2-옥틸데칸-1-올
Figure pct00249
화학식: C18H38O
분자량: 270.50
건조 THF (12 mL) 중 2-옥틸데칸산 (746 mg, 2.6 mmol)의 용액을 건조 THF (6 mL) 중 LAH (5.2 mL, 5.2 mmol, THF 중 1M 용액)의 교반 용액에 질소 하에서 0 ℃에서 첨가했다. 반응을 rt로 가온되도록 하고, rt에서 12시간 동안 교반했다. 포화 Na2SO4*10H2O 용액 (10 mL)을 첨가했다. 고체를 셀라이트의 플러그를 통해 여과했다. 여과물을 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트)로 정제하여 2-옥틸데칸-1-올 (635 mg, 2.3 mmol)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.54 (d, 2H); 1.56-1.21 (br. m, 30H); 0.91 (t, 6H).
2- 옥틸데실 7- 브로모헵타노에이트
Figure pct00250
2-옥틸데실 7-브로모헵타노에이트를 방법 A에 따라 합성했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.96 (d, 2H); 3.40 (t, 2H); 2.31 (t, 2H); 1.86 (m, 2H); 1.71-1.19 (m, 35H); 0.88 (m, 6H).
노닐 8-((2-하이드록시에틸)(7-((2-옥틸데실)옥시)-7-옥소헵틸)아미노)옥타노에이트를 대표적인 절차 2에 따라 합성했다.
Figure pct00251
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.182
UPLC/ELSD: RT = 5.23 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 711.08.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.05 (t, 2H); 3.96 (d, 2H); 3.58 (br. m, 2H); 2.79-2.36 (br. m, 5H); 2.30 (m, 4H); 1.72-1.01 (br. m, 63H); 0.88 (m, 9H).
DC. 화합물 144: 노닐 8-((8-( 디옥틸아미노 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
8-브로모- N , N -디옥틸옥탄아미드
Figure pct00252
화학식: C24H48BrNO
분자량: 446.56
디클로로메탄 중 8-브로모옥탄산 (1 g, 2.2 mmol) 및 DMF (1 방울)의 용액에 옥살릴 염화물 (0.416 mL, 2.5 mmol)을 적가했다. 반응을 1시간 동안 실온에서 교반되도록 했다. 용매를 증발시키고 잔류물을 디옥틸아민 (1.14 g, 4.8 mmol) 및 DMAP (100 mg, 0.8 mmol)의 용액에 첨가했다. 트리에틸아민을 반응에 적가하고, 반응을 18시간 동안 교반되도록 했다. 용매를 증발시키고 잔류물을 에틸 아세테이트 및 포화 NaHCO3에 용해시켰다. 유기층을 분리하고, 물 및 염수로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 (0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 8-브로모-N,N-디옥틸옥탄아미드 및 클로로-N,N-디옥틸옥탄아미드의 혼합물 (736 mg, 1.6 mmol)을 얻었다.
UPLC/ELSD: RT = 4.02 min. MS (ES): C24H48BrNO에 대한 m/z (MH+) 446.53.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.55 (t, 0.6H); 3.42 (t, 1.4H); 3.36-3.15 (m, 4H); 2.31 (t, 2H); 1.96-1.18 (m, 34H); 0.91 (m, 6H).
노닐 8-((8-(디옥틸아미노)-8-옥소옥틸)(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트를 대표적인 절차 2를 이용하여 합성했다.
Figure pct00253
화학식: C43H86N2O4
분자량: 695.17
UPLC/ELSD: RT = 4.24 min. MS (ES): C43H86N2O4에 대한 m/z (MH+) 696.16.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.05 (t, 2H); 3.57 (br. m, 2H); 3.35-3.14 (m, 4H); 2.80-.2.20 (m, 10H); 1.74-1.00 (br. m, 59H); 0.88 (m, 9H).
DD . 화합물 145: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 메틸(옥틸)아미노 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00254
화학식: C44H88N2O4
분자량: 709.198
화합물 145를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.17 min. MS (ES): C44H88N2O4에 대한 m/z (MH+) 710.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 3.55 (m, 2H); 3.37 (t, 1H); 3.27 (t, 1H); 2.98 (s, 1.5H); 2.93 (s, 1.5H); 2.59 (m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.30 (m, 4H), 1.75-1.20 (m, 60H); 0.90 (m, 9H).
DE. 화합물 146: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(6-( 메틸(옥틸)아미노 )-6- 옥소헥실 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00255
화학식: C42H84N2O4
분자량: 681.144
화합물 146를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.01 min. MS (ES): C42H84N2O4에 대한 m/z (MH+) 682.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (m, 1H); 3.55 (m, 2H); 3.37 (t, 1H); 3.26 (t, 1H); 2.98 (s, 1.5H); 2.93 (s, 1.5H); 2.59 (m, 2H); 2.48 (m, 4H); 2.31 (m, 4H), 1.76-1.18 (m, 56H); 0.90 (m, 9H).
DF. 화합물 147: 트리데칸 -7-일 10-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)데카노에이트
Figure pct00256
화학식: C42H83NO5
분자량: 682.128
화합물 147를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.16 min. MS (ES): C42H83NO5에 대한 m/z (MH+) 683.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (m, 2H); 3.55 (m, 2H); 2.59 (m, 2H); 2.46 (m, 4H); 2.30 (m, 4H), 1.72-1.18 (m, 58H); 0.90 (m, 9H).
DG. 화합물 148: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-((2- 메톡시노닐 ) 옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
1-(( tert -부틸디페닐실릴)옥시)노난-2-올
Figure pct00257
화학식: C25H38O2Si
분자량: 398.662
TBDPSCl (8.58 g, 31.2 mmol)을 DMF 중 노난-1,2-디올 (5.0 g, 31.2 mmol) 및 이미다졸 (4.24 g, 62.4 mmol)의 혼합물에 rt에서 첨가했다. 반응을 rt에서 밤새 교반했다. 반응을 물 (150 mL)로 희석하고, EtOAc/헥산 (1:1) (4X)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-10%) EtOAc를 갖는 ISCO로 정제하여 1-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)노난-2-올 (7.75 g, 19.4 mmol)을 얻었다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ: ppm 7.63 (m, 4H); 7.43 (m, 6H); 4.51 (d, 1H); 3.54 (m, 2H); 3.43 (m, 1H); 1.57 (m, 1H); 1.24 (m, 11H); 1.00 (s, 9H); 0.85 (m, 3H).
2-메톡시노닐 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00258
화학식: C18H35BrO3
분자량: 379.379
2-메톡시노닐 8-브로모옥타노에이트를 대표적인 절차 1에서 방법 A에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.19 (m, 1H); 4.04 (m, 1H); 3.42 (m, 6H); 2.36 (t, 2H); 1.87 (m, 2H); 1.73-1.22 (m, 20H); 0.93 (m, 3H).
헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-((2- 메톡시노닐 ) 옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00259
화학식: C45H89NO6
분자량: 740.208
화합물 148를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.48 min. MS (ES): C45H89NO6에 대한 m/z (MH+) 741.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.19 (m, 1H); 4.04 (m, 1H); 3.57 (m, 2H); 3.42 (s, 3H); 3.37 (m, 1H); 2.73-2.41 (m, 6H); 2.33 (m, 4H), 1.73-1.19 (m, 61H); 0.90 (m, 9H).
DH . 화합물 149: 헵틸 10-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )( 메틸 )아미노) 데카노에이트
Figure pct00260
화학식: C43H85NO4
분자량: 680.156
화합물 149을 화합물 123와 유사하게 그리고 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.55 min. MS (ES): C43H85NO4에 대한 m/z (MH+) 681.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 2.42-2.14 (m, 11H); 1.73-1.17 (m, 62H); 0.90 (m, 9H).
DI . 화합물 150: 펜틸 12-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )( 메틸 )아미노) 도데카노에이트
Figure pct00261
화학식: C43H85NO4
분자량: 680.156
화합물 150을 화합물 123과 유사하게 그리고 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.47 min. MS (ES): C43H85NO4에 대한 m/z (MH+) 681.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 2.42-2.16 (m, 10H); 1.73-1.20 (m, 63H); 0.90 (m, 9H).
DJ. 화합물 151: 7 -((7-( 데카노일옥시 ) 헵틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 헵틸 2- 옥틸데카노에이트
Figure pct00262
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.182
화합물 151를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.83 min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 711.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.07 (m, 4H); 3.57 (m, 2H); 2.63 (br. m, 2H); 2.50 (m, 4H); 2.31 (m, 3H), 1.71-1.19 (m, 62H); 0.90 (m, 9H).
DK . 화합물 152: 노닐 ( Z )-8-((2-하이드록시에틸)(10- 옥틸옥타덱 -8-엔-1-일)아미노)옥타노에이트
N -메톡시- N -메틸-2-옥틸데칸아미드
Figure pct00263
화학식: C20H41NO2
분자량: 327.553
DCM (100 mL) 중 2-옥틸-데칸산 (11.1 g, 39.02 mmol) 및 DMF (0.05 mL, 3.9 mmol)의 용액에 옥살릴 염화물 (3.63 mL, 42.92 mmol)을 적가했다. 반응을 2시간 동안 rt에서 교반되도록 했다. 용매 및 휘발성물질을 진공 하에서 증발시켰다. 수득한 잔류물 (조 2-옥틸데카노일 염화물) (11.82 g, 39.02 mmol)을 DCM (100 mL)에 용해시키고, N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (4 g, 40.97 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (0.48 g, 3.9 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 0 ℃로 냉각되도록 하고, 트리에틸아민 (19.04 mL, 136.57 mmol)을 느리게 첨가했다. 반응을 rt로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3, 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중(0-40%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 N-메톡시-N-메틸-2-옥틸데칸아미드 (7.10 g, 21.68 mmol, 56%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.70 (s, 3H); 3.22 (s, 3H); 2.82 (br. m, 1H); 1.62 (m, 2H); 1.51-1.19 (m, 26H); 0.90 (m, 6H).
2-옥틸데칸알
Figure pct00264
화학식: C18H36O
분자량: 268.485
건조 THF (2 ml) 중 N-메톡시-N-메틸-2-옥틸데칸아미드 (7.1 g, 21.68 mmol)의 용액을 건조 THF (5 ml) 중 LAH (27.53 mL THF 중 1 M, 27.53 mmol)의 현탁액에 -45 ℃에서 첨가했다. 수득한 현탁액을 1시간 동안 -45 ℃에서 교반하고, 그 후 그것을 실온으로 가온되도록 하고, 0.5시간 동안 교반했다. 반응을 -45 ℃로 다시 냉각시키고, 황산나트륨 10수화물 (2 mL) 의 포화 수용액으로 켄칭했다. 혼합물을 20분 동안 실온에서 교반하고, 셀라이트의 플러그를 통해 여과했다. 여과물을 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-10 %) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-옥틸데칸알 (4.45 g, 16.57 mmol, 76%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 9.58 (d, 1H); 2.23 (m, 1H); 1.63 (m, 2H); 1.53-1.19 (m, 26H); 0.90 (m, 6H).
( Z )-10-옥틸옥타덱-8-엔-1-올
Figure pct00265
화학식: C26H52O
분자량: 380.701
THF (16 mL)　및 HMPA 중 (8-하이드록시옥틸)트리페닐포스포늄 브로마이드 (3.68 g, 7.81 mmol)의 용액을 빙욕에서 냉각시키고, NaHMDS (19.52 mL 1 M, 19.52 mmol)을 첨가했다. THF (5 mL) 중 2-옥틸데칸알 (1.05 g, 3.9 mmol)을 느리게 첨가하고, 반응을 30 ℃로 가온시켰다. 16시간 후 반응을 20 mL의 물로 희석하고, 2N HCl로 산성화했다. 반응을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 (0-50%) EtOAc)로 정제하여 (Z)-10-옥틸옥타덱-8-엔-1-올 (0.5 g, 1.30 mmol, 33%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3)δ: ppm 5.24 (m, 1H); 4.90 (m, 1H); 3.53 (t, 2H); 2.14 (m, 1H); 1.89 (m, 2H); 1.45 (m, 3H); 1.33-0.95 (m, 36H); 0.77 (m, 6H).
( Z )-1-브로모-10-옥틸옥타덱-8-엔
Figure pct00266
화학식: C26H51Br
분자량: 443.598
DCM (10 mL) 중 PPh3 (0.29 g, 1.11 mmol) 및 (8Z)-10-옥틸옥타덱-8-엔-1-올 (0.4 g, 1.05 mmol)의 용액에 0 ℃에서, NBS (0.22 g, 1.22 mmol)을 한번에 첨가했다. 반응을 0 ℃에서 1시간 동안 교반되도록 하고, 그 다음 rt로 가온시키고, 1시간 동안 교반했다. 300 mL의 헥산을 첨가하고 혼합물을 실리카 플러그를 통해 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 200 mL의 헥산을 첨가하고 혼합물을 실리카 플러그를 통해 여과하고, 진공 하에서 증발시켜 (Z)-1-브로모-10-옥틸옥타덱-8-엔 (0.39 g, 0.88 mmol, 83%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.24 (m, 1H); 4.90 (m, 1H); 3.53 (t, 2H); 2.14 (m, 1H); 1.89 (m, 2H); 1.45 (m, 3H); 1.33-0.95 (m, 36H); 0.77 (m, 6H).
노닐 ( Z )-8-((2-하이드록시에틸)(10-옥틸옥타덱-8-엔-1-일)아미노)옥타노에이트
Figure pct00267
화학식: C45H89NO3
분자량: 693.211
화합물 152를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.00 min. MS (ES): C45H89NO3에 대한 m/z (MH+) 694.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.36 (m, 1H); 5.03 (m, 1H); 4.07 (t, 2H); 3.54 (t, 2H); 2.59 (t, 2H); 2.46 (m, 4H); 2.30 (m, 3H); 2.01 (m, 2H); 1.63 (m, 4H); 1.53-1.03 (m, 58H); 0.90 (m, 9H).
DL. 화합물 153: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(10- 옥틸옥타데실 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00268
화학식: C45H91NO3
분자량: 694.227
플라스크에 Pd(OH)2 (20 mg)을 충전하고, N2 로 퍼지했다. EtOH (1 mL) 중 노닐 8-[(2-하이드록시에틸)[(8Z)-10-옥틸옥타덱-8-엔-1-일]아미노]옥타노에이트 (100 mg, 0.14 mmol)의 용액을 첨가했다. 반응을 H2로 퍼지하고, 16시간 동안 rt에서 교반하면서 H2 (밸룬) 하에서 유지했다. 이 시간 후 반응을 N2 로 퍼지했다. 반응을 셀라이트의 플러그를 통해 여과하고, EtOH (50 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, 물로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중 (0-50%) (DCM 중 1%, 20% MeOH)를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(10-옥틸옥타데실)아미노)옥타노에이트 (0.069 g, 0.099 mmol, 69%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.21 min. MS (ES): C45H91NO3에 대한 m/z (MH+) 695.08. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 2H); 3.56 (t, 2H); 2.62 (m, 2H); 2.48 (m, 4H); 2.31 (m, 2H); 1.64 (m, 4H); 1.54-1.16 (m, 66H); 0.90 (m, 9H).
DM. 화합물 154: 헵타데칸 -9-일 8-((2-(2- 하이드록시에톡시 )에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00269
화학식: C46H91NO6
분자량: 754.235
화합물 154를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.54 min. MS (ES): C46H91NO6에 대한 m/z (MH+) 755.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (m, 1H); 4.62 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.79-3.56 (m, 6H); 2.64 (m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.31 (m, 4H), 1.73-1.20 (m, 61H); 0.90 (m, 9H).
DN . 화합물 155: tert -부틸 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
tert -부틸 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00270
화학식: C12H23BrO2
분자량: 279.218
DCM (20 mL) 중 8-브로모옥탄산 (2 g, 8.96 mmol)의 용액에　0 ℃에서 트리플루오로아세트산 무수물 (2.77 mL, 19.9 mmol)을 적가했다. 2.5시간 후h. tBuOH (3.1 mL, 32.27 mmol)을 느리게 첨가했다. 1시간 후 반응을 rt로 가온시키고, 2.5시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 물로 켄칭하고, 디에틸에테르로 추출했다. 유기층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-10%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 8-브로모옥타노에이트 (1.5 g, 5.37 mmol, 60%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.42 (t, 2H); 2.23 (t, 2H); 1.87 (m, 2H); 1.60 (m, 2H); 1.47 (s, 11H); 1.35(m, 4H).
tert -부틸 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00271
화학식: C39H77NO5
분자량: 640.047
화합물 155를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.18 min. MS (ES): C39H77NO5에 대한 m/z (MH+) 641.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 3.58 (br. m, 2H); 2.75-2.36 (br. m, 6H); 2.26 (m, 4H); 1.71-1.40 (m, 22H); 1.28 (m, 35H); 0.90 (m, 6H).
DO. 화합물 156: 헵타데칸 -9-일 8-((1,3- 디하이드록시프로판 -2-일)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00272
화학식: C45H89NO6
분자량: 740.208
화합물 156를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.53 min. MS (ES): C45H89NO6에 대한 m/z (MH+) 741.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.67 (br. m, 4H); 3.04 (m, 1H); 2.65 (m, 4H); 2.32 (m, 4H), 1.72-1.44 (m, 15H); 1.28 (m, 48H); 0.90 (m, 9H).
DP. 화합물 157: 헵타데칸 -9-일 8-((1- 하이드록시프로판 -2-일)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00273
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 157를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.56 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.45-3.17 (br. m, 2H); 2.94 (br. m, 1H); 2.55-2.22 (m, 8H); 1.70-1.17 (m, 62H); 0.90 (m, 12H).
DQ . 화합물 158: tert -부틸 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00274
화학식: C31H61NO5
분자량: 527.831
화합물 158를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.23 min. MS (ES): C31H61NO5에 대한 m/z (MH+) 528.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 2H); 3.55 (br. m, 2H); 2.60 (br. m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.31 (t, 2H); 2.22 (t, 2H); 1.64 (br. m, 6H); 1.53-1.23 (m, 37H); 0.90 (m, 3H).
DR. 화합물 159: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(2-((2-하이드록시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00275
화학식: C48H96N2O6
분자량: 797.304
화합물 159를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.15 min. MS (ES): C48H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 798.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (m, 1H); 4.07 (t, 2H); 3.62 (br. m, 4H); 2.72 - 2.47 (br. m, 12H); 2.31 (m, 4H); 1.72-1.42 (m, 14H); 1.28 (m, 47H); 0.90 (m, 12H).
DS . 화합물 160: 1 ,5- 비스(2-부틸사이클로프로필)펜탄 -3-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
2-(2-부틸사이클로프로필)에탄-1-올
Figure pct00276
화학식: C9H18O
분자량: 142.242
2-(2-부틸사이클로프로필)에탄-1-올을 중간체 C와 동일한 방식으로 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm: 3.94 (t, 2H); 1.93 (m, 1H); 1.59 (m, 7H); 1.39 (m, 1H); 1.12 (m, 3H); 0.90 (m, 3H); 0.00 (m, 1H).
1-(2-브로모에틸)-2-부틸사이클로프로판
Figure pct00277
화학식: C9H17Br
분자량: 205.139
1-(2-브로모에틸)-2-부틸사이클로프로판을 (Z)-1-브로모-10-옥틸옥타덱-8-엔과 동일한 방식으로 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm: 3.64 (t, 2H); 2.18 (m, 1H); 1.92 (m, 1H); 1.47 (m, 6H); 0.96 (m, 6H); 0.00 (m, 1H).
1,5-비스(2-부틸사이클로프로필)펜탄-3-올
Figure pct00278
화학식: C19H36O
분자량: 280.496
1,5-비스(2-부틸사이클로프로필)펜탄-3-올을 (5Z,12Z)-헵타데카-5,12-디엔-9-올과 동일한 방식으로 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm: 3.96 (t, 1H); 1.64 (m, 21H); 1.16 (m, 6H); 0.91 (m, 6H); 0.03 (m, 2H).
1,5- 비스(2-부틸사이클로프로필)펜탄 -3-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00279
화학식: C46H87NO5
분자량: 734.204
화합물 160를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.51 min. MS (ES): C46H87NO5에 대한 m/z (MH+) 735.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.97 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.56 (br. m, 2H); 2.75-2.37 (br. m, 6H); 2.31 (m, 4H); 1.74-1.05 (m, 54H); 0.92 (m, 9H); 0.67 (m, 6H); 0.31 (m, 2H).
DT. 화합물 161: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(10-( 옥타노일옥시 )데칸-2-일)아미노)옥타노에이트
10-(벤질옥시)데칸-2-올
Figure pct00280
화학식: C17H28O2
분자량: 264.409
THF (10 mL) 중 10-(벤질옥시)데칸-2-온 (3.5 g, 13.34 mmol)의 용액을 THF (10 mL) 중 LAH의 교반 용액에 N2 하에서 0 ℃에서 첨가했다. 혼합물을 rt로 가온되도록 하고, 2시간 동안 교반한 후,　10 mL의 포화 Na2SO4.10H2O (aq) 용액을 느리게 첨가했다. 백색 고체 침전된. 추가의 고체　Na2SO4.10H2O을 첨가하고 혼합물을 셀라이트의 플러그를 통해 여과했다. 여과물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 헥산 중(0-40%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 10-(벤질옥시)데칸-2-올 (3.2 g, 12.1 mmol, 91%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.32 (m, 5H); 4.53 (s, 2H); 3.80 (m, 1H); 3.49 (t, 2H); 1.64 (m, 2H); 1.55-1.25 (m, 132H); 1.21 (d, 3H).
9-하이드록시데실 옥타노에이트
Figure pct00281
화학식: C18H36O3
분자량: 300.483
9-하이드록시데실 옥타노에이트를 방법 A에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 2H); 3.80 (m, 1H); 2.30 (t, 2H); 1.64 (m, 4H); 1.52-1.17 (m, 23H); 0.90 (m, 3H).
헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(10-( 옥타노일옥시 )데칸-2-일)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00282
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 161을 화합물 152와 유사한 방식으로 그리고 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.46 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.49 (br. m, 2H); 2.77-2.55 (m, 2H); 2.54-2.23 (m, 7H); 1.71-1.20 (m, 63H); 0.91 (m, 12H).
DU. 화합물 162: 7 -((2-하이드록시에틸)(10-( 옥타노일옥시 )데칸-2-일)아미노) 헵틸 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00283
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 162를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.49 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.99 (m, 4H); 2.72-2.48 (m, 2H); 2.48-2.17 (m, 6H); 1.55 (m, 8H); 1.44-1.10 (m, 56H); 0.92-0.75 (m, 12H).
DV . 화합물 163: 7 -((2-하이드록시에틸)(7- 메틸 -8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)헵틸 2- 옥틸데카노에이트
8-메톡시옥탄산
Figure pct00284
화학식: C9H18O3
분자량: 174.240
무수 MeOH (80 mL)에 0 ℃에서　KOH에서 (7.54 g, 134.46 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 교반했다. 무수 MeOH (70 mL) 중 8-브로모옥탄산 (10 g, 44.82 mmol)의 용액을 첨가하고 수득한 용액을 18시간 동안 환류했다. MeOH을 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 1N HCl로 산성화하고, 디에틸에테르로 추출했다. 유기층을 염수로 세정하고, 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-50%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 8-메톡시옥탄산 (6.3 g, 36.16 mmol, 81%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.35 (m, 5H); 2.37 (t, 2H); 1.61 (m, 4H); 1.36 (m, 6H).
8-메톡시-2-메틸옥탄산
Figure pct00285
화학식: C10H20O3
분자량: 188.267
THF (100 mL) 중 NaH의 현탁액에 0 ℃에서, THF (30 mL) 중　8-메톡시옥탄산 (5.6 g, 32.14 mmol)을 적가했다. 반응을 rt에서 30분 동안 교반되도록 했다. 반응을 0 ℃로 냉각시키고, LDA (17.86 mL, THF 중 2M, 35.71 mmol)을 적가했다. 첨가 완료 후, 반응을 45 ℃에서 2시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 rt로 냉각시키고, THF (15 mL) 중 요오드화메틸 (2.45 mL, 39.28 mmol)을 느리게 첨가했다. 반응을 45 ℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응을 1N HCl (20 mL)로 켄칭했다. 켄칭된 반응을 진공 하에서 증발시켜 휘발성물질을 제거했다. 잔류물을 헥산/EtOAc (1:1)에 용해시키고, 1N HCl (100 mL X 2) 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-15%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 8-메톡시-2-메틸옥탄산 (3.25 g, 17.26 mmol, 54%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.35 (m, 5H); 2.49 (m, 1H); 1.70 (m, 1H); 1.59(m, 2H); 1.36 (m, 7H); 1.21 (d, 3H).
8-하이드록시-2-메틸옥탄산
Figure pct00286
화학식: C9H18O3
분자량: 174.240
DCM (20 mL) 중 8-메톡시-2-메틸옥탄산 (1 g, 5.31 mmol)의 용액에 -78 ℃에서, 붕소 트리브로마이드 (DCM 중 13.28 mL 1 M, 13.28 mmol)을 적가했다. 반응을 rt로 가온되도록 하고, rt에서 2시간 동안 교반했다. 반응을 얼음에 부었고, DCM으로 추출했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 정제된 헥산 중 (0-40%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 8-하이드록시-2-메틸옥탄산 (0.77 g, 4.41 mmol, 83%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.43 (t, 2H); 2.50 (m, 1H); 1.94-1.64 (m, 4H); 1.56-1.26 (m, 7H); 1.20 (d, 3H).
노닐 8-하이드록시-2-메틸옥타노에이트
Figure pct00287
화학식: C18H36O3
분자량: 300.483
DCM (20 mL) 중 8-하이드록시-2-메틸옥탄산 (0.75 g, 4.31 mmol), 노난-1-올 (6.22 g, 43.1 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.11 g, 0.86 mmol)의 용액을 N2 하에서 (3-{[(에틸이미노)메틸리덴]아미노}프로필)디메틸아민 하이드로클로라이드 (0.83 g, 4.31 mmol)에 첨가했다. 반응을 rt에서 16시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3, 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-20%) EtOAc를 가지고 있는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 노닐 8-하이드록시-2-메틸옥타노에이트 (0.68 g, 2.26 mmol, 53%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 2H); 3.42 (t, 2H); 2.45 (m, 1H); 1.87 (m, 2H); 1.75-1.57 (m, 4H); 1.52-1.22 (m, 19H); 1.15 (d, 3H); 0.91 (m, 3H).
7-((2-하이드록시에틸)(7- 메틸 -8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 헵틸 2- 옥틸데카노에이트
Figure pct00288
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 163을 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 화합물 152와 유사한 방식으로 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.50 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 4H); 3.55 (m, 2H); 2.67 (m, 2H); 2.53-2.24 (m, 6H); 1.72-1.10 (m, 65H); 0.90 (m, 9H).
DW. 화합물 164: 노닐 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)-2-메틸옥타노에이트
Figure pct00289
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 164를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.51 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.55 (m, 2H); 2.69-2.38 (m, 8H); 2.30 (t, 2H); 1.74-1.09 (m, 65H); 0.90 (m, 9H).
DX . 화합물 165: 7 -((7-( 데카노일옥시 ) 옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 헵틸 2- 옥틸데카노에이트
Figure pct00290
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 165를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.55 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.55 (m, 2H); 2.68-2.39 (m, 8H); 2.29 (m, 3H); 1.72-1.15 (m, 64H); 0.90 (m, 9H).
DY. 화합물 166: 8 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥탄산
Figure pct00291
화학식: C35H69NO5
분자량: 583.939
DCM 중 헵타데칸-9-일 8-{[8-(tert-부톡시)-8-옥소옥틸](2-하이드록시에틸)아미노}옥타노에이트 (0.11 g, 0.17 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (0.06 mL, 0.69 mmol)을 첨가하고, 반응을 rt에서 40시간 동안 교반되도록 했다. 휘발성물질을 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 에틸아세테이트 및 물에 용해시키고, 에틸아세테이트로 추출했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 (0-50%) (DCM 중 1%, 20% MeOH))로 정제하여 8-{[8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸](2-하이드록시에틸)아미노}옥탄산 (0.023 g, 0.04 mmol)을 무색 액체로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 2.72 min. MS (ES): C35H69NO5에 대한 m/z (MH+) 585.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87 (m, 1H); 3.98 (m, 2H); 3.25-3.05(m, 6H); 2.32 (m, 4H); 1.82-1.45 (m, 12H); 1.45-1.19 (m, 37H); 0.89 (m, 6H).
DZ . 화합물 167: 8 -((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥탄산
Figure pct00292
화학식: C27H53NO5
분자량: 471.723
화합물 167을 화합물 166와 동일한 절차에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 1.57 min. MS (ES): C27H53NO5에 대한 m/z (MH+) 472.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (m, 2H); 4.00 (m, 2H); 3.44-2.98 (m, 10H); 2.35 (t, 4H); 1.85-1.55 (m, 10H); 1.33 (m, 23H); 0.90 (m, 3H).
EA . 화합물 168: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-8-((3-(2- 시아노 -3,3-디메틸구아니디노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00293
화학식: C49H95N5O4
분자량: 818.33
5 mL 2-프로판올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 0.3 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.04 mL, 0.3 mmol) 이어서 디페닐 시아노carbon이미데이트 (72 mg, 0.3 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물에 THF (0.75 mL, 1.5 mmol) 중 2M 디메틸아민 용액을 첨가하고, 수득한 용액을 18시간 동안 75 ℃로 가열시켰다. 추가의 2M 디메틸아민/THF 용액 (0.75 mL, 1.5 mmol)을 첨가하고 온도를 85 ℃로 증가시켰다. 6시간 후 반응을 LC/MS에 의해 완료시키고, 이로써 용액을 진공 하에서 감소시키고, DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정했다. 유기상을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 여과물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(2-시아노-3,3-디메틸구아니디노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (119.2 mg, 0.14 mmol, 49%)을 무색 시럽으로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.52 min. MS (ES): C49H95N5O4에 대한 m/z (MH+) 819.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.62 (br. s., 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 3.68 (d, 2H, J = 3 Hz); 2.99 (s, 6H); 2.59 (br. s, 2H); 2.43 (br. s, 3H); 2.28 (m, 4H); 1.71 (br. s, 2H); 1.62 (m, 8H); 1.49 (m, 5H); 1.26 (br. m, 50H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EB . 화합물 169: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-(디메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
3-(디메틸아미노)-4- 메톡시사이클로부트 -3-엔-1,2- 디온
Figure pct00294
100 mL 디에틸 에테르 중 3,4-디메톡시-3-사이클로부텐-1,2-디온 (1 g, 7 mmol)의 용액에 THF (3.8 mL, 7.6 mmol) 중 2M 디메틸아민 용액을 첨가하고, ppt.가 거의 즉시 형성되었다. 혼합물을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 다음 여과했다. 필터 고체를 디에틸 에테르로 세정하고, 공기-건조시켰다. 필터 고체를 뜨거운 MeOH에 용해시키고, 여과하고, 여과물을 실온으로 냉각되도록 하고, 그 다음 0 ℃로 냉각시켜 ppt를 얻었다. 이것을 여과를 통해 단리하고, 차가운 MeOH로 세정하고, 공기-건조시키고, 그 다음 진공 하에서 건조시켜 3-(디메틸아미노)-4-메톡시사이클로부트-3-엔-1,2-디온 (0.42 g, 2.7 mmol, 39%)을 옅은 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ: ppm 4.28 (s, 3H); 3.21 (s, 3H); 3.05 (s, 3H).
헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-(디메틸아미노)-3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00295
10 mL 에탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 0.3 mmol)의 용액에 3-(디메틸아미노)-4-메톡시사이클로부트-3-엔-1,2-디온 (47 mg, 0.3 mmol)을 첨가하고, 수득한 무색 용액을 rt에서 20시간 동안 교반하고 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((2-(디메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (135 mg, 0.16 mmol, 53%)을 무색 시럽으로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.51 min. MS (ES): C51H95N3O6에 대한 m/z (MH+) 847.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.86 (br. s., 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.92 (d, 2H, J = 3 Hz); 3.20 (s, 6H); 2.63 (br. s, 2H); 2.42 (br. s, 3H); 2.28 (m, 4H); 1.74 (br. s, 2H); 1.61 (m, 8H); 1.50 (m, 5H); 1.41 (m, 3H); 1.25 (br. m, 47H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EC. 화합물 170: 헵타데칸 -9-일 (E)-8-((3-((1-( 메틸아미노 )-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00296
5 mL 메탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 0.3 mmol)의 용액에 1-메틸티오-1-메틸아미노-2-니트로에텐 (45 mg, 0.3 mmol)을 첨가하고, 수득한 용액을 70 ℃로 가열하고, 24시간 동안 교반하고 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정했다. 유기상을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 여과물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (E)-8-((3-((1-(메틸아미노)-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (90 mg, 0.11 mmol, 36%)을 옅은 황색 시럽으로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.33 min. MS (ES): C48H94N4O6에 대한 m/z (MH+) 824.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.15 (d, 1H, J = 9 Hz); 8.26 (d, 1H, J = 27 Hz); 6.55 (d, 1H, J = 9 Hz); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.32 (br. s, 1H); 3.24 (br. s, 1H); 2.81 (dd, 3H, J = 3 Hz, 12 Hz); 2.63 (br. s, 1H); 2.47 (br. s, 4H); 2.28 (m, 4H); 1.77 (br. s, 2H); 1.62 (m, 5H); 1.59 (m, 6H); 1.49 (m, 3H); 1.43 (m, 3H); 1.26 (br. m, 46H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
ED. 화합물 171: 헵타데칸 -9-일 8-((9- 하이드록시 -9- 메틸옥타데실 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
((데크-9-엔-1-일옥시)메틸)벤젠
Figure pct00297
화학식: C17H26O
분자량: 246.394
THF (100 mL) 중 수소화나트륨 (3.88 g, 96.99 mmol)의 현탁액에 9-데센-1-올 (10 g, 63.99 mmol)을 느리게 첨가했다. 30분 후, 벤질 브로마이드 (10.57 mL, 88.9 mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 물로 켄칭했다. 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3, 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-20%) EtOAc를 가지고 있는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 ((데크-9-엔-1-일옥시)메틸)벤젠 (8.5 g, 34.5 mmol, 54%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.32 (m, 5H); 5.83 (m, 1H); 4.98 (m, 2H); 4.53 (s, 2H); 3.49 (t, 2H); 2.06 (m, 2H); 1.64 (m, 2H); 1.46-1.26 (br. m, 10H).
10-(벤질옥시)데칸-2-온
Figure pct00298
화학식: C17H26O2
분자량: 262.393
DMF/물 (7:1, 12.8 mL) 중 팔라듐 염화물 (0.09 g, 0.52 mmol)　및 벤조퀴논 (3.09 g, 28.57 mmol)의 용액에, [(데크-9-엔-1-일옥시)메틸]벤젠 (6.4 g, 25.98 mmol)을 느리게 첨가하고, 암갈색 용액을 3일 동안 rt에서 교반되도록 했다. 혼합물을 2N HCl (50 mL)에 용해시키고, 에테르 (3 x 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 2N NaOH (3 x 50 mL)로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 용매를 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 (0-40%) 에틸 아세테이트)로 정제하여 10-(벤질옥시)데칸-2-온 (3.44 g, 13.11 mmol, 50%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.36 (m, 5H); 4.52 (s, 2H); 3.48 (t, 2H); 2.43 (t, 2H); 2.15 (s, 3H); 1.61 (m, 4H); 1.45-1.24 (br. m, 8H).
1-(벤질옥시)-9-메틸옥타데칸-9-올
Figure pct00299
화학식: C26H46O2
분자량: 390.652
THF (30 mL) 중　 10-(벤질옥시)데칸-2-온 (1 g, 3.81 mmol)의 용액에 0 ℃에서, 브로모(노닐)마그네슘 (디에틸에테르 중 4.57 mL 1 M, 4.57 mmol)을　적가했다. 반응을 rt로 가온되도록 하고, 4시간 동안 교반했다. 반응을 물 (2mL)로 켄칭하고, 디에틸에테르 (200 mL)를 첨가하고, 수득한 백색 고체을 실리카 플러그를 통해 여과했다. 여과물을 에테르로 추출했다. 유기층을 물, 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 헥산 중(0-40%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 1-(벤질옥시)-9-메틸옥타데칸-9-올 (0.99 g)을 얻었다. 생성물은 불순했지만, 추가 정제없이 다음 단계로 옮겼다.
9-메틸옥타데칸-1,9-디올
Figure pct00300
화학식: C19H40O2
분자량: 300.527
N2 하에서, 플라스크에 1-(벤질옥시)-9-메틸옥타데칸-9-올 (1 g, 2.56 mmol), Pd(OH)2 (100 mg) 및 EtOH를 충전했다. 반응을 H2 로 퍼지하고, 16시간 동안 rt에서 교반하면서 H2 (밸룬) 하에서 유지했다. 반응을 N2 로 퍼지했다. 반응을 셀라이트의 플러그를 통해 여과하고, 셀라이트를 EtOAc (200 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, 물로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 EtOAc (0-40%)를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 9-메틸옥타데칸-1,9-디올 (0.65g, 2.16 mmol, 84%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.66 (t, 2H); 1.59 (m, 2H); 1.49-1.22 (br. m, 29H); 1.17 (s, 3H); 0.90 (m, 3H).
브로모-9-메틸옥타데칸-9-올
Figure pct00301
화학식: C19H39BrO
분자량: 363.42
1-브로모-9-메틸옥타데칸-9-올을 (Z)-1-브로모-10-옥틸옥타덱-8-엔와 동일한 방식으로 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.43 (t, 2H); 1.88 (m, 2H); 1.53-1.23 (br. m, 28H); 1.17 (s, 3H); 0.91 (m, 3H).
헵타데칸 -9-일 8-((9- 하이드록시 -9- 메틸옥타데실 )(2-하이드록시에틸)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00302
화학식: C46H93NO4
분자량: 724.253
화합물 171를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.56 min. MS (ES): C46H93NO4에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 3.55 (m, 2H); 2.60 (m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.30 (t, 2H); 1.74-1.21(m, 69H); 1.17 (s, 3H); 0.90 (m, 9H).
EE . 화합물 172: ( R )-데칸-2-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00303
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 172를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.53 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 2H); 3.54 (m, 2H); 2.59 (m, 2H); 2.46 (m, 4H); 2.30 (m, 4H); 1.70-1.19 (m, 66H); 0.90 (m, 9H).
EF . 화합물 173: 헵타데칸 -9-일 8-((3-( N - 메틸메틸설폰아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00304
4 mL 건조 DMF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.27 mmol) 및 N-메틸 메탄설폰아미드 (50 uL, 0.54 mmol)의 용액에 탄산세슘 (130 mg, 0.40 mmol)을 첨가하고, 수득한 혼합물은 60 ℃로 가열하고, 24시간 동안 교반하고, 그 후 개시 염화물은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 rt로 냉각되도록 하고, 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 황색 오일로 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(N-메틸메틸설폰아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (85 mg, 0.11 mmol, 39%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.57 min. MS (ES): C47H94N2O6S에 대한 m/z (MH+) 816.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.15 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 2.85 (s, 3H); 2.79 (3, 3H); 2.40 (br. m, 5H); 2.28 (m, 4H); 1.72 (br. m, 2H); 1.64 - 1.49 (m, 13H); 1.26 (br. m, 50H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EG. 화합물 174: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2,5- 디옥소이미다졸리딘 -1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00305
4 mL 건조 DMF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.27 mmol) 및 히단토인 (50 mg, 0.54 mmol)의 용액에 탄산세슘 (130 mg, 0.40 mmol)을 첨가하고, 수득한 혼합물은 60 ℃로 가열하고, 24시간 동안 교반하고, 그 후 개시 염화물은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 rt로 냉각되도록 하고, 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2,5-디옥소이미다졸리딘-1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (35 mg, 0.05 mmol, 18%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.52 min. MS (ES): C48H91N3O6에 대한 m/z (MH+) 807.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.27 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.95 (s, 2H); 3.55 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 2.50 - 2.34 (br. m, 5H); 2.26 (m, 4H); 1.77 (br. s, 2H); 1.64 - 1.49 (m, 15H); 1.26 (br. m, 48H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EH . 화합물 175: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(( 메틸카바모일 ) 옥시 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00306
5 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.27 mmol) 및 트리에틸아민 (60 uL, 0.41 mmol)의 용액에 0 ℃에서 메틸 이소시아네이트 (22 uL, 0.35 mmol)을 적가했다. 냉각욕을 제거하고, 용액을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 후 개시 알코올은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 반응을 3 방울의 메탄올 로 켄칭하고, 혼합물을 질소의 스트림에서 환원시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((메틸카바모일)옥시)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (115　mg, 0.15 mmol, 53%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.54 min. MS (ES): C47H92N2O6에 대한 m/z (MH+) 782.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.62 (br. s, 1H); 4.05 (m, 4H); 2.79 (d, 3H, J = 3 Hz); 2.47 (br. s, 2H); 2.37 (br. m, 3H); 2.27 (m, 4H); 1.73 (br. s, 2H); 1.61 (m, 7H); 1.50 (br. m, 4H); 1.40 (br. m, 4H); 1.25 (br. m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EI . 화합물 176: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2,5- 디옥소피롤리딘 -1-일)프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00307
4 mL 건조 DMSO 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.27 mmol) 및 석신이미드 (50 mg, 0.54 mmol)의 용액에 탄산세슘 (130 mg, 0.40 mmol)을 첨가하고, 수득한 혼합물을 80 ℃로 가열하고, 48시간 동안 교반하고, 그 후 개시 염화물은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 rt로 냉각되도록 하고, 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 3회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 2회 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (44 mg, 0.05 mmol, 19%)을 약간 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.56 min. MS (ES): C49H92N2O6에 대한 m/z (MH+) 806.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.52 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 2.69 (s, 4H); 2.42 - 2.25 (br. m, 9H); 1.71 - 1.58 (m, 10H); 1.50 (br. d, 4H, J = 3 Hz); 1.26 (br. m, 51H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EJ . 화합물 177: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(4-( tert - 부톡시메틸 )-1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00308
4 mL THF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아지도프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.67 mmol) 및 tert-부틸 프로파르길 에테르 (100 uL, 0.73 mmol)의 용액에 1 mL 물 중 무수 구리(II) 설페이트 (5 mg, 0.03 mmol) 및 나트륨 아스코르베이트 (14 mg, 0.07 mmol)의 현탁액을 첨가하고, 혼합물을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 후 개시 아자이드가 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 3회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(4-(tert-부톡시메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (485 mg, 0.56 mmol, 84%)을 약간 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.63 min. MS (ES): C52H100N4O5에 대한 m/z (MH+) 862.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.50 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.59 (s, 2H); 4.36 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 2.36 (br. m, 5H); 2.28 (m, 4H); 2.02 (br. m, 2H); 1.62 (br. m, 8H); 1.50 (br. d, 4H, J = 3 Hz); 1.28 (br. m, 60H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EK . 화합물 178: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 메톡시아세트아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00309
5 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.27 mmol) 및 트리에틸아민 (60 uL, 0.41 mmol)의 용액에 0 ℃에서 메톡시아세틸 염화물 (30 uL, 0.33 mmol)을 적가했다. 냉각욕을 제거하고, 용액을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-메톡시아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (50　mg, 0.06 mmol, 23%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.56 min. MS (ES): C48H94N2O6에 대한 m/z (MH+) 796.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.53 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.87 (s, 2H); 3.39 (m, 5H); 2.47 (br. s, 2H); 2.36 (br. m, 3H); 2.27 (m, 4H); 1.61 (m, 8H); 1.46 (br. m, 9H); 1.26 (br. m, 48H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EL. 화합물 179: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
헵타데칸 -9-일 8-((8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-(4-( 트리메틸실릴 )-1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)프로필)아미노)옥타노에이트
Figure pct00310
2 mL THF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아지도프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.27 mmol) 및 에티닐트리메틸실란 (41 uL, 0.29 mmol)의 용액에 0.5 mL 물 중 무수 구리(II) 설페이트 (2 mg, 0.01 mmol) 및 나트륨 아스코르베이트 (5 mg, 0.02 mmol)의 현탁액을 첨가하고, 혼합물을 rt에서 20시간 동안 교반하고, 그 후 개시 아자이드가 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 3회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)(3-(4-(트리메틸실릴)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로필)아미노)옥타노에이트 (150 mg, 0.18 mmol, 66%)을 약간 황색 오일로서 얻었고, 이것은 1H-NMR에 의해 TMS / des-TMS 생성물의 2:1 혼합물이다. 있는 그대로 전달했다. UPLC/ELSD: RT = 3.63 min. MS (ES): C50H98N4O4Si에 대한 m/z (MH+) 848.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.55 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.45 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.42 (br. s, 1H); 2.28 (m, 5H); 1.65 - 1.45 (br. m, 14H); 1.25 (br. m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 7.5 Hz); 0.33 (s, 6H).
헵타데칸 -9-일 8-((3-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00311
5 mL THF 중 (150 mg, 0.18 mmol)의 용액에 THF (0.21 mL, 0.21 mmol) 중1M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 용액을 첨가하고, 용액을 rt에서 24시간 동안 교반하고 그 후 반응은 ca. 25%로 진행되었다. 용액을 55 ℃로 가열시키고, 24시간 동안 교반하고, 그 후 반응은 LC/MS에 의해 완료되었다. 용액을 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (53　mg, 0.07 mmol, 39%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.55 min. MS (ES): C47H90N4O4에 대한 m/z (MH+) 776.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.69 (s, 1H); 7.55 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.44 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 2.37 (br. m, 5H); 2.28 (m, 4H); 2.05 (br. m, 2H); 1.61 (br. m, 8H); 1.49 (br. m, 4H); 1.26 (br. m, 51H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EM . 화합물 181: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(( 메톡시카보닐 )아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00312
5 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.27 mmol) 및 트리에틸아민 (60 uL, 0.41 mmol)의 용액에 0 ℃에서 메틸 클로로포르메이트 (27 uL, 0.33 mmol)을 적가했다. 냉각욕을 제거하고, 용액을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((메톡시카보닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (120　mg, 0.15 mmol, 54%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.55 min. MS (ES): C47H92N2O6에 대한 m/z (MH+) 782.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.11 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.64 (s, 3H); 3.25 (br. d, 2H, J = 6 Hz); 2.46 (br. s, 2H); 2.38 - 2.24 (m, 7H); 1.61 (br. t, 9H, J = 7.5 Hz); 1.50 (m, 4H); 1.42 (br. m, 3H); 1.26 (br. m, 49H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EN. 화합물 182: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
3-메톡시-4-(메틸아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디온
Figure pct00313
100 mL 디에틸 에테르 중 3,4-디메톡시-3-사이클로부텐-1,2-디온 (1 g, 7 mmol)의 용액에 THF (3.8 mL, 7.6 mmol) 중 2M 메틸아민 용액을 첨가하고, ppt.는 거의 즉시 형성되었다. 혼합물을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 다음 여과하고, 필터 고체를 디에틸 에테르로 세정하고, 공기-건조시켰다. 필터 고체를 뜨거운 EtOAc에 용해시키고, 여과하고, 여과물을 실온으로 냉각되도록 하고, 그 다음 0 ℃로 냉각시켜 ppt를 얻었다. 이것을 여과를 통해 단리하고, 차가운 EtOAc로 세정하고, 공기-건조시키고, 그 다음 진공 하에서 건조시켜 3-메톡시-4-(메틸아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디온 (0.70 g, 5 mmol, 73%)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ: ppm 8.50 (br. d, 1H, J = 69 Hz); 4.27 (s, 3H); 3.02 (sdd, 3H, J = 42 Hz, 4.5 Hz).
헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-( 메틸아미노 )-3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00314
10 mL 에탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.28 mmol)의 용액에 3-메톡시-4-(메틸아미노)사이클로부트-3-엔-1,2-디온 (39 mg, 0.28 mmol)을 첨가하고, 수득한 무색 용액을 rt에서 20시간 동안 교반하고 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (138 mg, 0.17 mmol, 60%)을 고무질 백색 고체로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3. min. MS (ES): C51H95N3O6에 대한 m/z (MH+) 833.4. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.86 (br. s., 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.92 (d, 2H, J = 3 Hz); 3.20 (s, 6H); 2.63 (br. s, 2H); 2.42 (br. s, 3H); 2.28 (m, 4H); 1.74 (br. s, 2H); 1.61 (m, 8H); 1.50 (m, 5H); 1.41 (m, 3H); 1.25 (br. m, 47H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EO. 화합물 183: 1 ,3- 비스(헥실옥시)프로판 -2-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
(((1,3- 비스(헥실옥시)프로판 -2-일) 옥시 ) 메틸 )벤젠
Figure pct00315
THF (40 mL) 중 NaH (1.76 g, 43.9 mmol)의 슬러리에　 N2 하에서 2-(벤질옥시)프로판-1,3-디올 (2 g, 10.98 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 40 ℃에서 2시간 동안 교반되도록 했다. 이 시간 후 DMF (2ml) 중 1-브로모헥산 (4.35 g, 26.34 mmol) 및 촉매량의 KI를 첨가했다. 반응을 16시간 동안 환류했다. 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3, 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중(0-40%) EtOAc를 갖는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 (((1,3-비스(헥실옥시)프로판-2-일)옥시)메틸)벤젠 (1.7 g, 4.75 mmol, 43%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.34 (m, 5H); 4.73 (s, 2H); 3.75 (m, 1H); 3.61-3.40 (m, 8H); 1.59 (m, 4H); 1.32 (m, 12H); 0.91 (m, 6H).
1,3-비스(헥실옥시)프로판-2-올
Figure pct00316
화학식: C15H32O3
분자량: 260.418
1,3-비스(헥실옥시)프로판-2-올을, 9-메틸옥타데칸-1,9-디올과 동일한 방식을 사용하여 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.96 (m, 1H); 3.48 (m, 8H); 2.37 (br. S, 1H); 1.64 (m, 2H); 1.60 (m, 4H); 1.32 (m, 12H); 0.91 (m, 6H).
1,3- 비스(헥실옥시)프로판 -2-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00317
화학식: C42H83NO7
분자량: 714.126
화합물 183를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.17 min. MS (ES): C42H83NO7에 대한 m/z (MH+) 715.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.15 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.66-3.34 (m, 10H); 2.71-2.41 (m, 6H); 2.34 (m, 4H); 1.74-1.20 (m, 50H); 0.91 (m, 9H).
EP . 화합물 184: 헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-((2- 메틸노닐 ) 옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
2-메틸노닐 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00318
화학식: C18H35BrO2
분자량: 363.380
DCM (25 mL) 중 8-브로모옥탄산 (3.83 g, 17.18 mmol), 2-메틸노난-1-올 (2.72 g, 17.18 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.42 g, 3.44 mmol)의 용액에　 N2 하에서 (3-{[(에틸이미노)메틸리덴]아미노}프로필)디메틸아민 하이드로클로라이드 (3.29 g, 17.18 mmol)을 첨가했다. 반응을 교반되도록 하고 rt에서 16시간 동안 교반했다. 반응을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3, 이어서 염수로 세정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 (0-20%) EtOAc를 가지고 있는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 2-메틸노닐 8-브로모옥타노에이트 (5.1 g, 14.04 mmol, 82%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.98 (m, 2H); 3.43 (t, 2H); 2.33 (t, 2H); 1.93-1.74 (m, 3H); 1.72-1.09 (m, 20H); 0.93 (m, 6H).
헵타데칸 -9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-((2- 메틸노닐 ) 옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00319
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 184를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.60 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 3.92 (m, 2H); 3.57 (m, 2H); 2.70-2.41 (m, 6H); 2.31 (m, 4H); 1.79 (m, 1H); 1.70-1.07(m, 60H); 0.93 (m, 12H).
EQ. 화합물 185: 헤니코산 -11-일 6-((2-하이드록시에틸)(6-옥소-6-( 운데실옥시 ) 헥실 )아미노)헥사노에이트
Figure pct00320
화학식: C46H91NO5
분자량: 738.236
화합물 185를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.72min. MS (ES): C46H91NO5에 대한 m/z (MH+) 739.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.55 (m, 2H); 2.60 (m, 2H); 2.48 (m, 4H); 2.32 (m, 4H); 1.72-1.41 (m, 15H); 1.28 (m, 52H); 0.90 (m, 9H).
ER. 화합물 186: 헵틸 10-((2-하이드록시에틸)(10-옥소-10-( 트리데칸 -7- 일옥시 )데실)아미노)데카노에이트
Figure pct00321
화합물 186를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.31min. MS (ES): C42H83NO5에 대한 m/z (MH+) 739.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.55 (m, 2H); 2.58 (m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.30 (m, 4H); 1.71-1.18 (m, 58H); 0.90 (m, 9H).
ES . 화합물 189: 헵틸 10-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)데카노에이트
Figure pct00322
화학식: C44H87NO5
분자량: 710.182
화합물 189를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.47min. MS (ES): C44H87NO5에 대한 m/z (MH+) 710.98. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.55 (m, 2H); 2.61 (m, 2H); 2.47 (m, 4H); 2.31 (m, 4H); 1.70-1.20 (m, 62H); 0.90 (m, 9H).
ET. 화합물 194: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 이소부티르아미도프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00323
5 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (150 mg, 0.21 mmol) 및 트리에틸아민 (90 uL, 0.62 mmol)의 용액에 0 ℃에서 이소부티릴 염화물 (35 uL, 0.31 mmol)을 적가했다. 30분 후 냉각욕을 제거하고, 용액을 rt에서 90분 동안, 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-이소부티르아미도프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (65　mg, 0.08 mmol, 39%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.65 min. MS (ES): C49H96N2O5에 대한 m/z (MH+) 794.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.53 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.87 (s, 2H); 3.39 (m, 5H); 2.47 (br. s, 2H); 2.36 (br. m, 3H); 2.27 (m, 4H); 1.61 (m, 8H); 1.46 (br. m, 9H); 1.26 (br. m, 48H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EU. 화합물 197: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2-( 벤질옥시 ) 아세트아미도 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00324
10 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (300 mg, 0.41 mmol) 및 트리에틸아민 (145 uL, 1 mmol)의 용액에 0 ℃에서 벤질옥시아세틸 염화물 (82 uL, 0.52 mmol)을 적가했다. 냉각욕을 제거하고, 용액을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-(벤질옥시)아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (179　mg, 0.21 mmol, 50%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.66 min. MS (ES): C54H98N2O6에 대한 m/z (MH+) 872.4. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.55 (s, 1H); 7.33 (m, 5H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.55 (s, 2H); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.97 (s, 2H); 3.35 (quart., 2H, J = 6 Hz); 2.46 (br. m, 2H); 2.28 (m, 7H); 1.65 - 1.48 (m, 15H); 1.26 (br. m, 50H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EV. 화합물 198: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 하이드록시아세트아미도 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00325
5 mL 에탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-(벤질옥시)아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (130 mg, 0.15 mmol)의 용액에 질소 하에서 탄소상 팔라듐 10 wt.% (근사치. 20, cat.)을 첨가하고, 플라스크의 측면을 에탄올로 세정하고, 플라스크 수소 밸룬을 구비했다. 플라스크를 진공처리하고, 수소로 다시 3회 채우고, 그 다음 rt에서 24시간 동안 교반하고 그 후 개시 에테르가 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 플라스크를 질소로 씻어 내고, 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 고체를 에탄올로 세정하고, 농축 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-하이드록시아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (55 mg, 0.07 mmol, 47%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.46 min. MS (ES): C47H92N2O6에 대한 m/z (MH+) 782.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.73 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (m, 4H); 3.40 (quart., 2H, J = 6 Hz); 2.50 (m, 2H); 2.37 (t, 4H, J = 6 Hz); 2.28 (m, 4H); 1.63 (m, 8H); 1.46 (br. m, 8H); 1.26 (br. m, 49H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EW . 화합물 200: 헵타데칸 -9-일 ( E )-8-((3-(3- 메틸 -2-니트로구아니디노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
메틸 ( E/Z )- N -메틸- N '-니트로카밤이미도티오에이트
Figure pct00326
8 mL 건조 DMF 중 2-메틸-1-니트로-2-thio슈도우레아 (1.0 g, 7.4 mmol) 및 탄산세슘 (2.5 g, 7.8 mmol)의 현탁액에 아이오도메탄 (0.69 mL, 11.1 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반했다. 황색 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 3회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 황색 고체로 농축했다. 이것을 열수에 용해시키고, 용액을 여과하고, 여과물을 3일 동안 4 ℃로 냉각시켰다. 수득한 고체를 여과를 통해 단리하고, 물로 세정하고, 공기-건조시키고, 그 다음 진공 하에서 건조시켜 메틸 (E/Z)-N-메틸-N'-니트로카밤이미도티오에이트 (85 mg, 0.57 mmol, 8%)을 옅은 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.02 (br. s, 1H); 3.12 (d, 1H, J = 6 Hz); 2.53 (s, 3H).
Figure pct00327
5 mL 메탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.28 mmol)의 용액에 메틸 (E/Z)-N-메틸-N'-니트로카밤이미도티오에이트 (45 mg, 0.3 mmol)을 첨가하고, 수득한 용액을 70 ℃로 가열하고, 24시간 동안 교반하고 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정했다. 유기상을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 여과물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (E)-8-((3-(3-메틸-2-니트로구아니디노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (75 mg, 0.09 mmol, 33%)을 옅은 황색 시럽으로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.55 min. MS (ES): C47H93N5O6에 대한 m/z (MH+) 825.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 9.26 (br. s, 1H); 8.27 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.42 (br. s, 2H); 2.86 (d, 3H, J = 6 Hz); 2.60 - 2.40 (br. m, 5H); 2.28 (m, 4H); 1.73 (br. s, 2H); 1.65 - 1.40 (m, 16H); 1.26 (br. m, 47H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EX. 화합물 207: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 구아니디노프로필 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
헵타데칸 -9-일 6-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)-2,2-디메틸-11-(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )-4-옥소-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-6-엔-19-오에이트
Figure pct00328
10 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (300 mg, 0.41 mmol) 및 트리에틸아민 (230 uL, 1.66 mmol)의 용액에 0 ℃에서 1,3-비스(tert-부톡시카보닐)-2-(트리플루오로메틸설포닐)구아니딘 (325 mg, 0.83 mmol)을 한번에 첨가하고, 수득한 용액을 밤새 교반하면서 rt로 가온되도록 했다. LC/MS는 개시 물질이 남아 있지 않음을 나타내었고, 이로써 용액을 DCM으로 희석하고, 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 세정하고, 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 6-((tert-부톡시카보닐)아미노)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-6-엔-19-오에이트 (310 mg, 0.32 mmol, 77%)을 무색 오일로서 ca. 95% 순도로 얻었다. 최대 단일 불순물은 하나의 Boc 기가 손실된 생성물에 상응하는 질량을 갖는다. 있는 그대로 전달했다. UPLC/ELSD: RT = 3.90 min. MS (ES): C56H108N4O8에 대한 m/z (MH+) 966.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 11.49 (s, 1H); 8.55 (br. s., 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 3.45 (quart., 2H, J = 6 Hz); 2.46 (m, 2H); 2.36 (m, 4H); 2.27 (m, 4H); 1.61 (m, 8H); 1.50 (m, 22H); 1.40 (m, 4H); 1.25 (br. m, 48H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
Figure pct00329
10 mL DCM 중 헵타데칸-9-일 6-((tert-부톡시카보닐)아미노)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-6-엔-19-오에이트 (310 mg, 0.32 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (500 uL, 과잉)을 첨가하고, 용액을 rt에서 48시간 동안 교반하고 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 농축, 잔류물을 DCM와 2회 동시증류시키고, 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-구아니디노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (210 mg, 0.27 mmol, 84%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.16 min. MS (ES): C46H92N4O4에 대한 m/z (MH+) 766.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.92 (br. s, 1H); 8.82 (br. s, 1H); 7.25 (br. s, 2H); 4.85 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.38 (br. s, 2H); 3.15 (br. s, 2H); 3.00 (br. s, 4H); 2.29 (m, 4H); 2.05 (br. s, 2H); 1.91 (br. s, 3H); 1.70 - 1.45 (br. m, 12H); 1.26 (br. m, 47H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
EY . 화합물 218: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(4-( 하이드록시메틸 )-1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00330
4 mL DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-(4-(tert-부톡시메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (190 mg, 0.22 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (675 uL, 과잉)을 첨가하고, 용액을 rt에서 72시간 동안 교반하고 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 농축, 잔류물을 DCM와 2회 동시증류시키고, 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(4-(하이드록시메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (113 mg, 0.14 mmol, 64%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.41 min. MS (ES): C48H92N4O5에 대한 m/z (MH+) 806.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.54 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.80 (s, 2H); 4.40 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6 Hz); 2.38 (br. m, 5H); 2.28 (m, 5H); 2.04 (br. m, 2H); 1.61 (br. m, 7H); 1.50 (br. d, 4H, J = 3 Hz); 1.26 (br. m, 51H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz) (하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
EZ . 화합물 232: 노닐 8-((2-하이드록시에틸)(6-옥소-6-((4-펜틸사이클로헥실)옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00331
화학식: C36H69NO5
분자량: 595.950
화합물 232를 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 2.84 min. MS (ES): C36H69NO5에 대한 m/z (MH+) 596.84. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.01 (m, 0.5H); 4.68 (m, 0.5H); 4.08 (t, 2H); 3.56 (m, 2H), 2.67-2.55 (br. m, 2H); 2.55-2.40 (br. m, 4H); 2.31 (m, 4H); 1.97 (m, 1H); 1.82 (m, 2H); 1.73-1.15 (m, 43H); 1.02 (m, 1H); 0.90 (m, 6H).
FA. 화합물 233: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2-( 메틸설포닐 ) 구아니디노 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
디페닐 (메틸설포닐)카본이미데이트
Figure pct00332
100 mL RBF에서, 교반하면서 15 mL 에틸 아세테이트 중 2.0 g (7.4 mmol) 디클로로디페녹시메탄 및 1.56 g (16.4 mmol) 메탄설폰아미드를 현탁시켜 백색 혼합물을 얻었다. 이것을 가열 환류하고 (85 ℃), 24시간 동안 교반하고, 그 후 생성물만이 LC/MS에 의해 보여졌다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 농축하고, 잔류물을 DCM에 현탁시키고 여과했다. 필터 고체를 DCM으로 세정하고, 여과물을 조합하고 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40% EtOAc)로 정제하고, 생성물-함유 분획을 풀링하고 농축하여 약간 황색 고체를 얻었다. 이것을 헥산으로 분쇄하고, 여과하고, 필터 고체를 헥산으로 세정하고 공기-건조시켜 디페닐 (메틸설포닐)카본이미데이트 (0.84 g, 2.88 mmol, 39%)을 백색 고체로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 0.50 min. MS (ES): C14H13NO4S에 대한 m/z (MH+) 292.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.45-7.37 (m, 4H); 7.30 (m, 2H); 7.21 (m, 4H); 3.01 (s, 3H).
헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2-( 메틸설포닐 ) 구아니디노 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00333
5 mL 2-프로판올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 0.28 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (40 uL, 0.28 mmol) 이어서 디페닐 (메틸설포닐)카본이미데이트 (81 mg, 0.28 mmol)을 첨가하고, 백색 혼합물을 실온에서 교반했다. 3시간 동안 교반하고 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액에 2.0M THF 중 디메틸아민 용액 (0.75 mL, 1.5 mmol)을 첨가하고, 약간 황색 용액을 80 ℃로 가열시키고 24시간 동안 교반했다. 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 용액을 실온으로 냉각되도록 하고, 질소의 스트림에서 농축하고 잔류물을 DCM에 용해시켰다. 용액을 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고, 그 다음 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2-(메틸설포닐)구아니디노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (80 mg, 0.09 mmol, 33%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.53 min. MS (ES): C49H98N4O6S에 대한 m/z (MH+) 872.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.22 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.3 Hz, 5.9 Hz, ); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.40 (br. d, 2H, J = 5.4 Hz); 2.97 (s, 9H); 2.52 (br. s, 2H); 2.39 (br. s, 3H); 2.29 (m, 4H); 1.69-1.49 (m, 15H); 1.45-1.15 (m, 50H); 0.87 (t, 9H, J = 5.8 Hz)
FB . 화합물 234: 8 -((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥탄-2-일 2- 옥틸데카노에이트
8-하이드록시옥탄-2-일 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00334
화학식: C26H52O3
분자량: 412.699
화합물 8-하이드록시옥탄-2-일 2-옥틸데카노에이트를 8-하이드록시옥탄-2-일 데카노에이트에서와 같이 일반적인 절차에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.93 (m, 1H); 3.66 (t, 2H); 2.29 (m, 1H); 1.69-1.16 (m, 42H); 0.90 (m, 6H).
8-브로모옥탄-2-일 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00335
화학식: C26H51BrO2
분자량: 475.596
화합물 8-브로모옥탄-2-일 2-옥틸데카노에이트를 (Z)-1-브로모-10-옥틸옥타덱-8-엔에서와 같이 일반적인 절차에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.94 (m, 1H); 3.42 (t, 2H); 2.30 (m, 1H); 1.87 (m, 2H); 1.69-1.16 (m, 39H); 0.90 (m, 6H).
8-((2-하이드록시에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥탄-2-일 2- 옥틸데카노에이트
Figure pct00336
화학식: C45H89NO5
분자량: 724.209
화합물 234을 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.61 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 725.08. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.93 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.71 (br. m, 2H); 3.00-2.50 (br. m, 6H); 2.32 (m, 3H); 1.73-1.15(m, 65H); 0.90 (m, 9H).
FC . 화합물 235: 헵타데칸 -9-일 8-((8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3- 프로피온아미도프로필 )아미노)옥타노에이트
9-하이드록시데실 아세테이트
Figure pct00337
화학식: C12H24O3
분자량: 216.321
9-하이드록시데실 아세테이트를 8-하이드록시옥탄-2-일 데카노에이트에서와 같이 일반적인 절차에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.07 (t, 2H); 3.80 (m, 1H); 2.07 (s, 3H); 1.76 (m, 2H); 1.54-1.16 (m, 16H).
10-아세톡시데칸-2-일 6-하이드록시헥사노에이트
Figure pct00338
화학식: C18H34O5
분자량: 330.465
10-아세톡시데칸-2-일 6-하이드록시헥사노에이트를 8-하이드록시옥탄-2-일 데카노에이트에서와 같이 일반적인 절차에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.07 (t, 2H); 3.80 (m, 1H); 2.07 (s, 3H); 1.76 (m, 2H); 1.76 (m, 2H); 1.54-1.42 (m, 8H); 1.41-1.17 (m, 16H).
10-아세톡시데칸-2-일 6-브로모헥사노에이트
Figure pct00339
화학식: C18H33BrO4
분자량: 393.362
10-아세톡시데칸-2-일 6-브로모헥사노에이트를 (Z)-1-브로모-10-옥틸옥타덱-8-엔에서와 같이 일반적인 절차에 따라 합성했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.93 (m, 1H); 4.07 (t, 2H); 3.43 (t, 2H); 2.32 (t, 2H); 2.07 (s, 3H); 1.90 (m, 2H); 1.76-1.42 (m, 8H); 1.41-1.17 (m, 13H).
헵타데칸 -9-일 8-((6-((10- 아세톡시데칸 -2-일) 옥시 )-6- 옥소헥실 )(2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00340
화학식: C45H87NO7
분자량: 754.191
화합물 235을 상기에 기재된 일반적인 절차 및 대표적인 절차 1에 따라 합성했다. UPLC/ELSD: RT = 3.33min. MS (ES): C45H87NO7에 대한 m/z (MH+) 755.10. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 2H); 4.07 (t, 2H); 3.56 (m, 2H); 2.67-2.41 (m, 6H); 2.30 (t, 4H); 2.07 (s, 3H); 1.73-1.08(m, 61H); 0.90 (m, 6H).
FD . 화합물 236: 헵타데칸 -9-일 8-((8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3- 프로피온아미도프로필 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00341
5 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (160 mg, 0.22 mmol) 및 트리에틸아민 (95 uL, 0.66 mmol)의 용액에 0 ℃에서 프로피오닐 염화물 (30 uL, 0.33 mmol)을 적가했다. 30분 후, 냉각욕을 제거하고 용액을 rt에서 30분 동안 교반하고, 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 희석하고 DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)(3-프로피온아미도프로필)아미노)옥타노에이트 (90　mg, 0.12 mmol, 52%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.59 min. MS (ES): C48H94N2O5에 대한 m/z (MH+) 780.1. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.29 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.4 Hz, 5.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.34 (quart., 2H, J = 11.3 Hz, 5.9 Hz); 2.63-2.33 (m, 6H); 2.31-2.25 (m, 4H); 2.16 (quart., 2H, J = 15.1 Hz, 7.6 Hz); 1.61 (br. t, 8H, J = 6.8 Hz); 1.55-1.38 (br. m, 9H); 1.35-1.20 (br. m, 47H); 1.14 (t, 3H, J = 7.6 Hz); 0.87 (t, 9H, J = 6.4 Hz).
FE. 화합물 244: 헵타데칸 -9-일 8-((2- 아세트아미도에틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
헵타데칸 -9-일 8-((2-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)에틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00342
10 mL 건조 THF 중 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.0 g, 1.5 mmol) 및 N-Boc-글리시날 (0.36 g, 2.25 mmol)의 용액에 MgSO4　(ca. 0.5 g, 과잉)을 첨가하고 백색 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 상기 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (0.67 g, 3.0 mmol)을 5분에 걸쳐 나누어서 첨가하고 수득한 백색 혼합물을 rt에서 밤새 교반했다. 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 반응을 ca. 5 mL의 포화 수성 중탄산나트륨 용액의 첨가로 켄칭했다. 수득한 혼합물을 물로 희석하고, DCM으로 3회 추출하고, 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (930 mg, 1.15 mmol, 77%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.66 min. MS (ES): C49H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 809.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (quint. 1H, J = 11.9 Hz, 6.0 Hz); 4.07 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.60-2.25 (m, 8H); 1.70-1.55 (m, 6H); 1.53-1.43 (m, 22H); 1.37-1.22 (m, 48H); 0.90 (t, 9H, J = 6.8 Hz)
헵타데칸 -9-일 8-((2- 아미노에틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00343
20 mL DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (820 mg, 1.0 mmol)의 용액에 0 ℃에서 1,4-디옥산 (2.5 mL, 10 mmol) 중 4N HCl 용액을 첨가하고, 수득한 황색 용액을 rt로 가온되도록 하고 3시간 동안 교반하고 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 적색/갈색 용액을 DCM으로 희석하고 포화 수성 중탄산나트륨 용액 및 염수의 1:1 혼합물로 세정했다. 상들을 분리하고 수성 DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 갈색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-아미노에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (520 mg, 0.73 mmol, 72%)을 갈색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.15 min. MS (ES): C44H88N2O4에 대한 m/z (MH+) 709.5. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 12.4 Hz, 5.9 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.74 (t, 2H, J = 6.0 Hz); 2.52-2.35 (m, 5H); 2.31-2.25 (m, 4H); 1.75-1.67 (br. s, 5H); 1.61 (br. t, 6H, J = 6.8 Hz); 1.55-1.37 (br. m, 8H); 1.36-1.16 (br. m, 46H); 0.88 (t, 9H, J = 6.1 Hz).
헵타데칸 -9-일 8-((2- 아세트아미도에틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00344
10 mL 건조 THF 중 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.0 g, 1.5 mmol) 및 N-Boc-글리시날 (0.36 g, 2.25 mmol)의 용액에 MgSO4　(ca. 0.5 g, 과잉)을 첨가하고 백색 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 상기 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (0.67 g, 3.0 mmol)을 5분에 걸쳐 나누어서 첨가하고 수득한 백색 혼합물을 rt에서 밤새 교반했다. 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 반응을 ca. 5 mL의 포화 수성 중탄산나트륨 용액의 첨가로 켄칭했다. 수득한 혼합물을 물로 희석하고, DCM으로 3회 추출하고, 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (930 mg, 1.15 mmol, 77%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.66 min. MS (ES): C49H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 809.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.88 (quint. 1H, J = 11.9 Hz, 6.0 Hz); 4.07 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.60-2.25 (m, 8H); 1.70-1.55 (m, 6H); 1.53-1.43 (m, 22H); 1.37-1.22 (m, 48H); 0.90 (t, 9H, J = 6.8 Hz)
FF. 화합물 246: 헵타데칸 -9-일 8-((2-( 메틸설폰아미도 )에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00345
4 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((2-아미노에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (160 mg, 0.23 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (63 uL, 0.45 mmol)을 첨가하고 용액을 0 ℃로 냉각시켰다. 이것에 메탄설포닐 염화물 (24 uL, 0.32 mmol)을 첨가하고, 용액을 rt로 가온되도록 하고 4시간 동안 교반했다. 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 용액을 DCM으로 희석하고, 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 그리고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-(메틸설폰아미도)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (130 mg, 0.165 mmol, 73%)을 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.48 min. MS (ES): C45H90N2O6S에 대한 m/z (MH+) 787.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint. 1H, J = 12.4 Hz, 5.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.14 (br. s, 2H); 2.95 (s, 3H); 2.61 (br. s, 2H); 2.42 (br. s, 3H); 2.32-2.25 (m, 4H); 1.61 (br. t, 6H, J = 7.0 Hz); 1.55-1.38 (m, 8H); 1.37-1.14 (m, 50H); 0.88 (t, 9H, J = 6.1 Hz).
FG . 화합물 247: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((2-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00346
4 mL 2-프로판올 중 헵타데칸-9-일 8-((2-아미노에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (160 mg, 0.23 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (31 uL, 0.23 mmol) 이어서 디페닐 시아노카본이미데이트 (54 mg, 0.23 mmol)을 첨가하고, 백색 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고 그 후 무색 용액으로 되었다. 개시 물질이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고 모노페닐 카밤이미데이트만이 관측되었다 (MW = 853.3). 이것에 메탄올 중 2M 디메틸아민 용액 (1.1 mL, 2.2 mmol)을 첨가하고, 수득한 옅은 황색 용액을 55 ℃로 가열하고 20시간 동안 교반하고, 그 후 카밤이미데이트 중간체는 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 반응을 rt로 냉각되도록 하고, 농축하고, 잔류물을 DCM에 용해시키고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((2-(2-시아노-3,3-디메틸구아니디노)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (75 mg, 0.09 mmol, 41%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.46 min. MS (ES): C48H93N5O4에 대한 m/z (MH+) 804.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.80 (br. s, 1H); 4.86 (quint. 1H, J = 12.5 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.60 (br. s, 2H); 3.01 (s, 6H); 2.59 (br. s, 2H); 2.40 (br. s, 3H); 2.32-2.25 (m, 4H); 1.68-1.45 (m, 12H); 1.38-1.12 (m, 51H); 0.88 (t, 9H, J = 6.0 Hz).
FH . 화합물 251: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-아미노-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00347
8 mL 에탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 0.28 mmol)의 용액에 3-아미노-4-메톡시사이클로부트-3-엔-1,2-디온 [JACS, 88(7), 1533-1536 (1966)](35 mg, 0.28 mmol)을 첨가하고, 수득한 무색 용액을 40 ℃로 가열하고 20시간 동안 교반하고, 그 후 개시 아민은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 진공에서 농축시키고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((2-아미노-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (175 mg, 0.21 mmol, 77%)을 고무질 백색 고체로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.38 min. MS (ES): C49H91N3O6에 대한 m/z (MH+) 818.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.43 (br. s., 1H); 4.85 (quint., 1H, J = 12.6 Hz, 5.8 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.65 (br. s, 2H); 2.78-2.38 (m, 5H); 2.29 (m, 4H); 1.84 (br. s, 2H); 1.68-1.41 (m, 14H); 1.40-1.14 (m, 51H); 0.88 (t, 9H, J = 6.0 Hz).
FI . 화합물 252: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2-( 메틸티오 ) 아세트아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00348
20 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.0 g, 1.38 mmol) 및 (메틸티오)아세트산 (Matrix Scientific, Columbia, SC) (150 uL, 1.66 mmol)의 용액에 4-(디메틸아미노)피리딘 (42 mg, 0.35 mmol) 이어서 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트 (HATU; 790 mg, 2.1 mmol) 및 마지막으로 N,N-디이소프로필에틸아민 (740 uL, 4.1 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 rt에서 밤새 교반했다. 개시 아민이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 황색 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-50% 메탄올)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-(메틸티오)아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.0 g, 1.23 mmol, 89%)을 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.54 min. MS (ES): C48H94N2O5S에 대한 m/z (MH+) 811.56. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.79 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.5 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.40 (br. s, 2H); 3.17 (s, 2H); 2.96 (br. s, 2H); 2.66-2.34 (br. m, 3H); 2.28 (m, 4H); 2.15 (s, 3H); 1.88-1.41 (m, 16H); 1.39-1.18 (br. m, 49H); 0.88 (t, 9H, J = 5.8 Hz).
FJ . 화합물 255: 헵타데칸 -9-일 8-((4- 아세트아미도부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
벤질 (4,4-디에톡시부틸)카바메이트
Figure pct00349
25 mL 에테르 중 4-아미노부탄알 디에틸 아세탈 (Aldrich, St. Louis, MO) (1 g, 6.2 mmol)의 용액에 25 mL 물 이어서 탄산칼륨 (2.6 g, 18.6 mmol)을 첨가하고 수득한 무색 2상을 격렬한 교반과 함께 0 ℃으로 냉각시켰다. 이것에 벤질 클로로포르메이트 (0.88 mL, 6.2 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하고 수득한 혼합물을 밤새 rt로 가온되도록 했다. 상들을 분리하고 수성물을 에테르로 추출했다. 유기물을 조합하고, 수성 10% 시트르산 용액으로 2회 세정하고, 그 다음 염수로 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 그리고 여과물을 농축하여 무색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% EtOAc)로 정제하여 벤질 (4,4-디에톡시부틸)카바메이트 (1.56 g, 5.3 mmol, 85%)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.32 (m, 5H); 5.09 (s, 2H); 4.88 (s, 1H); 4.48 (t, 2H, J = 5.3 Hz); 3.70-3.55 (m, 2H); 3.54-3.40 (m, 2H); 3.22 (quart.; 2H, J = 12.5 Hz, 6.2 Hz); 1.71-1.51 (m, 4H); 1.20 (t, 6H, J = 7.0 Hz).
벤질 (4-옥소부틸)카바메이트
Figure pct00350
25 mL 아세톤 중 벤질 (4,4-디에톡시부틸)카바메이트 (1.56 g, 5.3 mmol)의 용액에 수성 1N HCl 용액 (25 mL, 25 mmol)을 첨가하여 흐린 혼합물을 얻었고, 이것은 빠르게 맑은 용액으로 되었다. 이것을 rt에서 밤새 교반하고, 그 후 개시 아세탈은 TLC에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 Et2O로 2회 추출하고, 유기물을 조합하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 무색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% EtOAc)로 정제하여 벤질 (4-옥소부틸)카바메이트 (0.82 g, 5.3 mmol, 70%)을 무색 액체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.36 (m, 5H); 5.52 (br. d, 1H, J = 12.0 Hz); 5.15 (s, 2H); 3.68-3.52 (m, 1H); 3.44-3.30 (m, 1H); 2.18-1.79 (m, 4H) (알데하이드 양성자는 관측되지 않음).
헵타데칸 -9-일 8-((4-((( 벤질옥시 ) 카보닐 )아미노)부틸)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00351
15 mL 건조 THF 중 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.65 g, 2.5 mmol) 및 벤질 (4-옥소부틸)카바메이트 (0.82 g, 3.71 mmol)의 용액에 무수 MgSO4　(ca. 0.5 g, 과잉)을 첨가하고 백색 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반했다. 상기 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (1.1 g, 4.9 mmol)을 5분에 걸쳐 나누어서 첨가하고 수득한 백색 혼합물을 rt에서 밤새 교반했다. 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 반응을 ca. 5 mL의 포화 수성 중탄산나트륨 용액의 첨가로 켄칭했다. 수득한 혼합물을 물로 희석하고, DCM으로 3회 추출하고, 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.43 g, 1.64 mmol, 66%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.54 min. MS (ES): C54H98N2O6에 대한 m/z (MH+) 871.52. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.34 (m, 5H); 5.51 (m, 1H); 5.15 (m, 2H); 5.09 (s, 2H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.3 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.60 (m, 1H); 3.38 (m, 1H); 3.20 (br. d, 2H, J = 3.8 Hz); 2.40 (br. s, 4H); 2.27 (m, 4H); 2.15-1.75 (m, 4H); 1.61 (br. t, 6H, J = 6.3 Hz); 1.55-1.43 (m, 8H); 1.37-1.15 (m, 46H); 0.88 (t, 9H, J = 5.8 Hz).
헵타데칸 -9-일 8-((4- 아미노부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00352
헵타데칸-9-일 8-((4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.42 g, 1.63 mmol)을 교반하면서 20 mL 에탄올에 용해시켜 옅은 황색 용액을 얻었다. 반응 용기을 질소로 씻어내고 탄소상 팔라듐 10 wt.% (ca. 200 mg, cat.)을 첨가하고, 용기의 측면을 5 mL 에탄올로 세정하고 용기를 다시 질소로 씻어내었다. 플라스크에 수소 밸룬을 구비하고, 진공처리하고 수소로 다시 3회 채웠다. 수득한 어두운 혼합물을 rt에서 5시간 동안 교반하고 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 플라스크를 질소로 씻어내고, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 고체를 에탄올로 세정하고 여과물을 농축하여 흐린 백색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-아미노부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (706 mg, 0.96 mmol, 59%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.09 min. MS (ES): C46H92N2O4에 대한 m/z (MH+) 737.43. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 12.2 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.71 (t, 1H, J = 6.4 Hz); 2.48-2.34 (m, 6H); 2.33-2.23 (m, 4H); 1.95 (br. s, 2H); 1.61 (br. t, 6H, J = 6.6 Hz); 1.55-1.38 (m, 12H); 1.37-1.17 (m, 49H); 0.88 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
헵타데칸 -9-일 8-((4- 아세트아미도부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00353
4 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((4-아미노부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 0.3 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (125 uL, 0.9 mmol)을 첨가하고 용액을 0 ℃로 냉각시켰다. 이것에 아세트산 무수물 (42 uL, 0.45 mmol)을 첨가하고 용액을 교반하면서 밤새 rt로 가온되도록 했다. 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 용액을 DCM으로 희석하고, 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 그리고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-아세트아미도부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (160 mg, 0.20 mmol, 69%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.50 min. MS (ES): C48H94N2O5에 대한 m/z (MH+) 779.66. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.33 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.3 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.23 (quart., 2H, J = 11.9 Hz, 6.1 Hz); 2.46-2.33(m, 5H); 2.32-2.22 (m, 4H); 1.95 (s, 3H); 1.68-1.56 (m, 6H); 1.54-1.36 (m, 12H); 1.35-1.15 (m, 49H); 0.87 (t, 9H, J = 5.8 Hz).
FK . 화합물 256: 8 -( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-N-(3-(2-( 메틸설피닐 ) 아세트아미도 )프로필)-N-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-8-옥소옥탄-1-아민 옥사이드
Figure pct00354
FL. 화합물 257: 8 -( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-N-(3-(2-( 메틸설포닐 ) 아세트아미도 )프로필)-N-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-8-옥소옥탄-1-아민 옥사이드
Figure pct00355
5 mL DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-(메틸티오)아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (350 mg, 0.43 mmol)의 용액에 0 ℃에서 m-클로로퍼옥시벤조산 (50중량 %; 300 mg, 0.84 mmol)을 한번에 첨가했다. 빙욕을 제거하고 수득한 황색 용액을 rt에서 24시간 동안 교반하고 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 옅은 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-75% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 2 세트의 분획을 얻었다. 용출하기 위한 제1 세트를 농축하여 8-(헵타데칸-9-일옥시)-N-(3-(2-(메틸설포닐)아세트아미도)프로필)-N-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-8-옥소옥탄-1-아민 옥사이드 (60 mg, 0.07 mmol, 16%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.44 min. MS (ES): C48H94N2O8S (화합물 257)에 대한 m/z (MH+) 859.62. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.95 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.3 Hz, 5.9 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.93 (s, 2H); 3.38 (br. d, 3H, J = 5.2 Hz); 3.15 (m, 6H); 2.62-2.36 (m, 1H); 2.34-2.21 (m, 4H); 2.02 (t, 2H, J = 6.1 Hz); 1.86-1.55 (m, 10H); 1.54-1.43 (m, 5H); 1.41-1.14 (m, 48H); 0.88 (t, 9H, J = 6.0 Hz).
용출하기 위한 제2 세트의 분획을 농축하여 8-(헵타데칸-9-일옥시)-N-(3-(2-(메틸설피닐)아세트아미도)프로필)-N-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-8-옥소옥탄-1-아민 옥사이드 (75 mg, 0.09 mmol, 20%)을 왁스성 백색 고체로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.42 min. MS (ES): C48H94N2O7S (화합물 256)에 대한 m/z (MH+) 843.71. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.15 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.5 Hz, 6.3 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.57 (m, 2H); 3.44-3.25 (m, 3H); 3.14 (t, 3H, J = 8.2 Hz); 2.72 (s, 3H); 2.54-2.34 (m, 1H); 2.33-2.24 (m, 4H); 2.04 (t, 2H, J = 5.6 Hz); 1.88-1.71 (m, 2H); 1.69-1.55 (m, 8H); 1.54-1.43 (m, 4H); 1.41-1.14 (m, 49H); 0.88 (t, 9H, J = 6.0 Hz).
FM. 화합물 258: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2-(메틸설피닐)아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00356
10 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.55 mmol) 및 메탄설피닐아세트산 [J. Med. Chem., 38(3), 508-525 (1995)] (81 mg, 0.66 mmol)의 용액에 4-(디메틸아미노)피리딘 (17 mg, 0.14 mmol) 이어서 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트 (HATU; 315 mg, 0.83 mmol) 및 마지막으로 N,N-디이소프로필에틸아민 (300 uL, 1.66 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 rt에서 밤새 교반했다. 개시 아민이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 짙은 오레지색 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 농황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-(메틸설피닐)아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (190 mg, 0.23 mmol, 41%)을 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.44 min. MS (ES): C48H94N2O6S에 대한 m/z (MH+) 827.56. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.74 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.5 Hz, 6.1 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.60 (d, 1H, J = 13.7 Hz); 3.36 (m, 3H); 2.71 (s, 3H); 2.60-2.48 (br. s, 2H); 2.47-2.34 (br. s, 3H); 2.28 (m, 4H); 1.76-1.55 (m, 8H); 1.54-1.38 (m, 8H); 1.37-1.15 (br. m, 49H); 0.88 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
FN . 화합물 259: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((4-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00357
4 mL 2-프로판올 중 헵타데칸-9-일 8-((4-아미노부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (235 mg, 0.32 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (44 uL, 0.32 mmol) 이어서 디페닐 시아노카본이미데이트 (76 mg, 0.32 mmol)을 첨가하고, 백색 혼합물을 rt에서 90분 동안 교반하고 그 후 무색 용액으로 되었다. 개시 물질이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고 모노페닐 카밤이미데이트만이 관측되었다 (MW = 881.4). 이것에 메탄올 중 2M 디메틸아민 용액 (1.6 mL, 3.2 mmol)을 첨가하고, 수득한 옅은 황색 용액을 55 ℃로 가열하고 20시간 동안 교반하고, 그 후 카밤이미데이트 중간체는 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 반응을 rt로 냉각되도록 하고, 농축하고, 잔류물을 DCM에 용해시키고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-60% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((4-(2-시아노-3,3-디메틸구아니디노)부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (130 mg, 0.16 mmol, 49%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.43 min. MS (ES): C50H97N5O4에 대한 m/z (MH+) 832.48. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.50 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.2 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.48 (quart., 2H, J = 11.4 Hz, 5.7 Hz); 3.02 (s, 6H); 2.49 (br. s, 6H); 2.32-2.22 (m, 4H); 1.70-1.55 (m, 8H); 1.54-1.45 (m, 6H); 1.44-1.15 (m, 52H); 0.87 (t, 9H, J = 5.8 Hz).
FO. 화합물 260: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2- 설파모일구아니디노 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
디페닐 설파모일카본이미데이트
Figure pct00358
10 mL 건조 아세토니트릴 중 디클로로디페녹시메탄 (1 g, 3.7 mmol)의 용액에 건조 질소 하에서 설파마이드 (0.72 g, 7.4 mmol)을 첨가하고 옅은 황색 혼합물을 rt에서 72 시간 동안 교반했다. 수득한 혼합물을 농축하고, 잔류물을 DCM으로 분쇄하고, 여과하고, 그리고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카상 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-60% EtOAc)로 정제하여 디페닐 설파모일카본이미데이트 (295 mg, 1.01 mmol, 27%)을 무색 오일로서 얻었고, 이것은 정치시 반투명한 백색 고체로 고형화되었다. UPLC/ELSD: RT = 0.31 min. MS (ES): C13H12N2O4S에 대한 m/z (M-SO2NH2) 213.97. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: ppm 7.54-7.29 (dt, 10H, J = 44.5 Hz, 7.5 Hz); 7.19 (s, 2H).
헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2- 설파모일구아니디노 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00359
5 mL 2-프로판올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (48 uL, 0.35 mmol) 이어서 디페닐 설파모일카본이미데이트 (101 mg, 0.35 mmol)을 첨가하고 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 보이지 않았고 관측된 유일한 피크는 모노페닐 카밤이미데이트 중간체와 상응했다 (MW = 921.4). 반응 혼합물에 메탄올 중 2M 디메틸아민 용액 (1 mL, 2 mmol)을 첨가하고 수득한 옅은 황색 용액을 55 ℃로 가열하고 18시간 동안 교반했다. 반응은 LC/MS에 의해 완료되었고, 이로써 용액은 진공 하에서 감소되었고, DCM으로 희석하고 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정했다. 유기상을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 흐린 옅은 황색 오일을 얻어다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2-설파모일구아니디노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (155 mg, 0.18 mmol, 51%)을 약간 황색 시럽으로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.34 min. MS (ES): C48H97N5O6S에 대한 m/z (MH+) 872.58. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.02 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.4 Hz, 6.4 Hz, ); 4.48 (br. s, 2H); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.36 (quart., 2H, J = 11.5 Hz, 5.5 Hz); 2.97 (s, 6H); 2.54 (br. s, 2H); 2.41 (br. s, 3H); 2.28 (m, 4H); 1.79-1.68 (m, 2H); 1.67-1.55 (m, 6H); 1.54-1.45 (m, 4H); 1.44-1.37 (m, 2H); 1.36-1.14 (m, 51H); 0.87 (t, 9H, J = 5.8 Hz).
FP . 화합물 261: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 하이드록시프로필 )(6-옥소-6-( 운데실옥시 )헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00360
16 mL 건조 아세토니트릴 중 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)아미노)옥타노에이트 (740 mg, 1.62 mmol) 및 운데실 6-브로모헥사노에이트 (570 mg (1.62 mmol)의 용액에 건조 질소 하에서 요오드화칼륨 (300 mg, 1.79 mmol) 이어서 분말화된 탄산칼륨 (900 mg, 6.5 mmol)을 첨가하고 혼합물을 4 mL 건조 사이클로펜틸 메틸 에테르로 희석했다. 수득한 백색 혼합물을 90 ℃로 가열시키고 24시간 동안 교반하고, 그 다음 rt로 냉각되도록 하고, 여과하고, 필터 고형물을 DCM으로 세정하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액에 현탁시키고 DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (780 mg, 1.08 mmol, 66%)을 약간 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.55 min. MS (ES): C45H89NO5에 대한 m/z (MH+) 724.39. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.60 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.2 Hz, 6.2 Hz, ); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.78 (t, 2H, J = 4.9 Hz); 2.62 (t, 2H, J = 5.2 Hz); 2.40 (quint., 4H, J = 8.3 Hz, 5.2 Hz); 2.28 (quart., 4H, J = 15.0 Hz, 7.7 Hz); 1.73-1.55 (m, 8H); 1.54-1.39 (m, 8H); 1.38-1.12 (m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
FQ . 화합물 263: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 메톡시아세트아미도 )프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
헵타데칸 -9-일 8-((3- 클로로프로필 )(6-옥소-6-( 운데실옥시 ) 헥실 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00361
건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (700 mg, 0.97 mmol) 및 트리에틸아민 (202 uL, 1.45 mmol)의 용액에 0 ℃에서 메탄설포닐 염화물 (90 uL, 1.16 mmol)을 첨가하고 수득한 용액을 밤새 rt로 가온되도록 하고 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (720 mg ~quant.)을 옅은 황색 오일 /고체 혼합물로서 얻었고, 이것은 1H-NMR에 의해 상응하는 메실레이트의 일부를 함유했다. 물질을 추가 정제없이 운반했다. UPLC/ELSD: RT = 3.61 min. MS (ES): C45H88ClNO4에 대한 m/z (M-Cl) 706.68. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 12.1 Hz, 5.9 Hz, ); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.59 (t, 2H, J = 6.5 Hz); 2.51 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 2.40-2.23 (m, 7H); 1.86 (t., 2H, J = 6.0 Hz); 1.70-1.45 (m, 12H); 1.44-1.37 (m, 4H); 1.36-1.15 (m, 47H); 0.88 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
헵타데칸 -9-일 8-((3- 아지도프로필 )(6-옥소-6-( 운데실옥시 ) 헥실 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00362
10 mL 건조 DMF 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (720 mg, 0.97 mmol)의 용액에 고압 파이렉스 용기에서 아지드화나트륨 (250 mg, 3.9 mmol)을 첨가하고, 용기를 질소로 씻어내고 테플론 스크류-탑 캡으로 밀봉했다. 반응을 100 ℃로 가열시키고 밤새 교반하고 그 후 개시 염화물은 TLC에 의해 남아 있지 않았다. 반응을 rt로 냉각되도록 하고, 용액을 물로 희석하고 헥산으로 3회 추출했다. 유기물을 조합하고, 물로 1회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 그리고 여과물을 농축하여 옅은 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-20% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-아지도프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (550 mg, 0.73 mmol, 75%)을 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.61 min. MS (ES): C45H88N4O4에 대한 m/z (MH+) 749.32. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 12.5 Hz, 6.2 Hz, ); 4.06 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.33 (t, 2H, J = 6.4 Hz); 2.46 (t, 2H, J = 6.3 Hz); 2.42-2.34 (m, 3H); 2.28 (quart., 4H, J = 14.3 Hz, 7.1 Hz); 1.77-1.55 (m, 8H); 1.54-1.38 (m, 8H); 1.37-1.14 (m, 49H); 0.88 (t, 9H, J = 5.7 Hz).
헵타데칸 -9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-( 운데실옥시 ) 헥실 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00363
8 mL 에탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아지도프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (550 mg, 0.73 mmol)의 분산물을 수용하고 있는 플라스크를 질소로 씻어내고 탄소상 팔라듐 10 wt.% (ca. 50 mg, cat.)을 첨가하여 흑색 혼합물을 얻었다. 용기의 측면을 2 mL 에탄올로 세정하고 플라스크를 다시 질소로 씻어내었다. 플라스크에 수소 밸룬을 구비하고, 진공처리하고 수소로 다시 3회 채우고 rt에서 2시간 동안 교반하고, 그 후 개시 아자이드는 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 플라스크를 질소로 씻어내고, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 고체를 에탄올로 세정하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (375 mg, 0.52 mmol, 71%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.17 min. MS (ES): C45H90N2O4에 대한 m/z (MH+) 723.57. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.91 (br. s, 2H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.3 Hz, 6.1 Hz, ); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.06 (t, 2H, J = 5.5 Hz); 2.65 (t, 2H, J = 5.8 Hz); 2.48 (quint., 4H, J = 9.7 Hz, 5.3 Hz); 2.29 (quart., 4H, J = 17.1 Hz, 9.6 Hz); 1.89-1.72 (m, 2H); 1.70-1.55 (m, 6H); 1.54-1.39 (m, 8H); 1.38-1.13 (m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 5.8 Hz).
헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 메톡시아세트아미도 )프로필)(6-옥소-6-( 운데실옥시 )헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00364
4 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (170 mg, 0.23 mmol) 및 트리에틸아민 (100 uL, 0.7 mmol)의 용액에 0 ℃에서 메톡시아세틸 염화물 (32 uL, 0.35 mmol)을 적가하고, 수득한 혼합물을 교반하고 밤새 rt로 가온되도록 했다. 개시 아민이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 황색 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-메톡시아세트아미도)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (42 mg, 0.05 mmol, 22%)을 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.44 min. MS (ES): C48H94N2O6에 대한 m/z (MH+) 795.25. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.50 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.0 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.87 (s, 2H); 3.40 (m, 5H); 2.98 (br. s, 1H); 2.54-2.34 (m, 4H); 2.28 (quart., 4H, J = 14.7 Hz, 7.4 Hz); 1.69-1.39 (m, 14H); 1.38-1.13 (m, 51H); 0.88 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
FR . 화합물 264: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 에톡시아세트아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00365
화합물 264을 화합물 178과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.55 mmol)로부터 제조하고, 단, 에톡시아세틸 염화물 (Alfa Aesar, Tewksbury, MA) (92 uL, 0.83 mmol)을 메톡시아세틸 염화물 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-에톡시아세트아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (140 mg, 0.55 mmol, 31%)을 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.51 min. MS (ES): C49H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 809.43. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.48 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.6 Hz, 6.1 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.91 (s, 2H); 3.55 (quart., 2H, J = 13.8 Hz, 7.0 Hz); 3.36 (d, 2H, J = 5.8 Hz); 2.53-2.43 (m, 2H); 2.41-2.32 (br. m, 3H); 2.31-2.23 (m, 4H); 1.70-1.56 (m, 8H); 1.55-1.37 (m, 8H); 1.36-1.14 (m, 52H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
FS . 화합물 265: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00366
화합물 265을 화합물 168과 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (170 mg, 0.23 mmol)을 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(2-시아노-3,3-디메틸구아니디노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (40 mg, 0.05 mmol, 21%)을 무색 시럽으로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.52 min. MS (ES): C49H95N5O4에 대한 m/z (MH+) 818.78. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.52 (br. s., 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.6 Hz, 6.3 Hz); 4.06 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.68 (d, 2H, J = 4.3 Hz); 3.00 (s, 6H); 2.59 (br. s, 2H); 2.44 (br. s, 3H); 2.29 (quart., 4H, J = 13.4 Hz, 7.1 Hz); 1.80-1.58 (m, 8H); 1.56-1.38 (m, 6H); 1.37-1.13 (m, 51H); 0.88 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
FT. 화합물 267: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 메톡시프로판아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00367
화합물 267을 화합물 252과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (300 mg, 0.42 mmol)로부터 제조하고, 단, 2-메톡시프로판산 (Rk Pharm, Arlington Heights, IL)(66 mg, 0.62 mmol)을 (메틸티오)아세트산 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-메톡시프로판아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (45 mg, 0.06 mmol, 54%)을 약간 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.48 min. MS (ES): C49H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 809.60. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.43 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.2 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.71 (quart., 1H, J = 13.4 Hz, 6.7 Hz); 3.36 (m, 5H); 2.58-2.47 (m, 2H); 2.45-2.35 (m, 3H); 2.34-2.24 (m, 4H); 1.76-1.41 (m, 16H); 1.40-1.15 (m, 52H); 0.87 (t, 9H, J = 5.7 Hz).
FU. 화합물 268: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 메톡시 -2- 메틸프로판아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00368
화합물 268을 화합물 252과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)로부터 제조하고, 단, 2-메톡시-2-메틸프로판산 (Enamine, Monmouth Jct., NJ) (63 mg, 0.52 mmol)을 (메틸티오)아세트산 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-메톡시-2-메틸프로판아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (35 mg, 0.04 mmol, 12%)을 약간 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.58 min. MS (ES): C50H98N2O6에 대한 m/z (MH+) 823.62. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.96 (s, 1H); 7.49 (t, 1H, J = 6.7 Hz); 4.86 (quint., 1H, J = 12.1 Hz, 6.1 Hz); 4.07 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.44-3.37 (m, 5H); 3.20-2.98 (m, 5H); 2.37-2.26 (m, 4H); 2.17-2.02 (m, 2H); 1.80-1.69 (m, 3H); 1.68-1.60 (m, 6H); 1.57-1.47 (m, 4H); 1.46-1.17 (m, 55H); 0.90 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
FV . 화합물 269: 6 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)헥실 헥실 석시네이트
4-(헥실옥시)-4-옥소부탄산
Figure pct00369
1-헥산올 (6.3 mL, 49.4 mmol) 중 석신산 무수물 (5 g, 49.4 mmol)의 슬러리를 80 ℃로 가열시키고 20시간 동안 교반하고, 그 후 무색 용액으로 되었다. 이것을 rt로 냉각되도록 하고, EtOAc로 희석하고, 1N HCl 용액으로 2회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 여과물을 농축하여 4-(헥실옥시)-4-옥소부탄산 (9.87 g, 48.8 mmol, 99%)을 무색 액체로서 얻었고, 이것을 추가 정제없이 운반했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 10.59 (br. s., 1H); 4.10 (quart., 2H,　J　= 11.9 Hz, 5.2 Hz); 2.65 (m, 4H); 1.62 (quint., 2H,　J　= 13.0 Hz, 6.9 Hz); 1.30 (m, 6H); 0.89 (t, 3H,　J　= 6.7 Hz) (카복실레이트 양성자는 관측되지 않음).　
6-브로모헥실 헥실 석시네이트
Figure pct00370
20 mL 건조 DCM 중 4-(헥실옥시)-4-옥소부탄산 (1.0 g, 4.9 mmol) 및 6-브로모-1-헥산올 (0.75 mL, 5.2 mmol)의 용액에 건조 질소 하에서 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (1.67 g, 7.4 mmol) 이어서 4-(디메틸아미노)피리딘 (0.3 g, 2.47 mmol) 및 마지막으로 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.6 mL, 14.8 mmol)을 첨가하여 옅은 황색 용액을 얻었다. 이것을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 후 TLC는 대부분 완료된 반응을 나타내었다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고 (농후한 에멀션), 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 무색 액체/백색 고체 혼합물을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-25% EtOAc)로 정제하여 6-브로모헥실 헥실 석시네이트 (0.92g, 2.5 mmol, 51%)을 옅은 황색 액체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.11-4.06 (m, 4H); 3.41 (t, 2H,　J　= 6.7 Hz); 2.62 (s, 4H); 1.87 (quint., 2H,　J　= 13.9 Hz, 7.2 Hz); 1.69-1.57 (m, 4H); 1.50-1.30 (m, 10H); 0.89 (t, 3H,　J　= 6.3 Hz).
6-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노) 헥실 헥실 석시네이트
Figure pct00371
8 mL 건조 아세토니트릴 중 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (300 mg, 0.61 mmol) 및 6-브로모헥실 헥실 석시네이트 (223 mg (0.61 mmol)의 용액에 건조 질소 하에서 요오드화칼륨 (115 mg, 0.68 mmol) 이어서 분말화된 탄산칼륨 (340 mg, 2.4 mmol)을 첨가하고 혼합물을 2 mL 건조 사이클로펜틸 메틸 에테르로 희석했다. 수득한 백색 혼합물을 90 ℃로 가열시키고 24시간 동안 교반하고, 그 다음 rt로 냉각되도록 하고, 여과하고, 필터 고형물을 DCM으로 세정하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액에 현탁시키고 DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-30% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 6-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(2-하이드록시에틸)아미노)헥실 헥실 석시네이트 (40 mg, 0.06 mmol, 9%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.15 min. MS (ES): C43H83NO7에 대한 m/z (MH+) 726.36. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 12.2 Hz, 6.1 Hz, ); 4.08 (t, 4H, J = 6.6 Hz); 3.52 (t, 2H, J = 5.0 Hz); 2.96 (br. s, 1H); 2.62 (s, 4H); 2.57 (t, 2H, J = 4.9 Hz); 2.44 (t., 4H, J = 6.4 Hz); 2.27 (t., 2H, J = 7.4 Hz); 1.70-1.56 (m, 6H); 1.54-1.37 (m, 8H); 1.36-1.15 (m, 40H); 0.87 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
FW . 화합물 238: 헵타데칸 -9-일 8-((4-(디메틸아미노)-4- 옥소부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00372
-15 ℃로 냉각된 15 mL 건조 THF 중 4-브로모부타노일 염화물 (1.6 g, 8.62 mmol)의 용액에 THF 중 2M 디메틸아민 용액 (12 mL, 24 mmol)을 첨가하고, 수득한 혼합물을 교반하고 rt로 가온되도록 했다. 침전된 고체를 여과를 통해 제거하고 여과물을 농축시켜 조 4-브로모-N,N-디메틸부탄아미드를 얻었다. 이것을 20 mL의 1:1 아세토니트릴 / 메틸 사이클로펜틸 에테르 혼합물에 용해시키고, 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1 g, 1.5 mmol), 탄산칼륨 (0.8 g, 6 mmol), 요오드화칼륨 (0.3 g, 1.8 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 80 ℃로 가열시키고 밤새 교반했다. 반응을 rt로 냉각되도록 하고, 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (4:1 헥산 / 아세톤 등용매)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-(디메틸아미노)-4-옥소부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (180 mg, 0.23 mmol, 15%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. MS (CI): C48H94N2O5에 대한 m/z (MH+) 779.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.83 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.03 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 3-2.7 (m, 10H); 2.5 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 2.26 (m, 4H); 2 (m, 2H); 1.7-1.4 (m, 14H); 1.4-1.2 (m, 50H); 0.8 (m, 9H).
FX . 화합물 239: 헵타데칸 -9-일 8-((4-( 메틸아미노 )-4- 옥소부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00373
화합물 239을 화합물 238과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (0.8 g, 1.2 mmol)로부터 제조하고, 단, 메탄올 (8 mL, 16 mmol) 중 2M 메틸아민 용액을 THF 중 2M 디메틸아민 용액 대신에 사용했다. 반응 혼합물의 여과 및 농축 다음에 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (4:1 헥산 / 아세톤 등용매)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-(메틸아미노)-4-옥소부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.52 mmol, 43%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. MS (CI): C47H92N2O5에 대한 m/z (MH+) 765.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.83 (quint., 1H, J = 6 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6 Hz); 3.6 (s, 3H); 2.4-2.2 (m, 12H); 1.8-1.4 (m, 14H); 1.4-1.2 (m, 50H); 0.8 (m, 9H); (아미드 양성자는 관측되지 않음).
FY . 화합물 240: 헵타데칸 -9-일 8-((4-( 메톡시(메틸)아미노 )-4-옥소부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
4-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)부탄산
Figure pct00374
100 mL 아세토니트릴 중 과요오드산 (7.3 g, 32 mmol)의 혼합물을 15분 동안 0 ℃에서 격렬하게 교반했다. 이것에 30 mL 아세토니트릴 중 헵타데칸-9-일 8-((4-하이드록시부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (10.75 g, 14.6 mmol)의 용액 이어서 피리디늄 클로로크로메이트 (0.16 g, 0.73 mmol)을 첨가했다. 수득한 혼합물을 rt로 가온되도록 하고 4시간 동안 교반하고 그 후 LC/MS는 우세하게 남아 있는 개시 알코올을 나타내었다. 상기 혼합물에 추가의 피리디늄 클로로크로메이트 (0.16 g, 0.73 mmol)을 첨가하고 교반을 1시간 동안 계속했다. LC/MS는 추가의 피리디늄 클로로크로메이트의 첨가 후에 형성된 더 많은 생성물을 나타내었지만, 이러한 반응 단계는 느렸다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물/염수 (1:1) 혼합물, 포화 수성 중탄산나트륨 용액, 및 마지막으로 염수로 세정했다. 건조 (MgSO4) 및 농축 후, NMR에 의해 수득된 13 g 조 물질은 일부 알데하이드 중간체와 함께 20% 개시 알코올을 함유했다. 조 물질을 120 mL 1:1 아세토니트릴 / TBME에 용해시키고, 과요오드산 (13.0 g, 57 mmol) 및 피리디늄 클로로크로메이트 (0.16 g, 0.73 mmol)을 첨가하고 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반했다. 추가의 피리디늄 클로로크로메이트 (0.16 g, 0.73 mmol)을 첨가하고 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반하고 그 후 LC/MS는 남아 있는 개시 알코올이 거의 없음을 나타내었다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물/염수 (1:1) 혼합물, 포화 수성 중탄산나트륨 용액, 및 마지막으로 염수로 세정했다. 유기물을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-6% 그 다음 10% 메탄올)로 정제하여 4-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)부탄산 (8.80 g, 11.7 mmol, 80%)을 갈색 오일로서 얻었다. MS (CI): C46H89NO6에 대한 m/z (MH+) 752.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.84 (quint., 1H, J = 6.3 Hz); 4.03 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.12 (m, 2H); 3.00 (m, 4H); 2.52 (m, 2H); 2.27 (m, 4H); 2.08 (m, 2H); 1.81 (br. m, 4H); 1.60 (m, 6H); 1.48 (m, 4H); 1.24 (br. m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.9 Hz); 카복실레이트 양성자가 관측되지 않았다.
헵타데칸 -9-일 8-((4-( 메톡시(메틸)아미노 )-4- 옥소부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00375
40 mL 디클로로메탄 중 4-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)부탄산 (1.00 g, 1.33 mmol)의 용액에 카보닐디이미다졸 (259 mg, 1.6 mmol)을 0 ℃에서 첨가하고, 냉각욕을 제거하고 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반했다. 0 ℃로 냉각한 후, N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (156 mg, 1.6 mmol) 및 트리에틸아민 (0.23 mL, 1.6 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반했다. 10% 미만의 개시 산이 LC/MS에 의해 남아 있었고, 이로써 반응 혼합물을 헥산으로 희석하고, 물로 1회 세정하고 염수로 세정했다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-6% 그 다음 10% 메탄올)로 정제하여 일부 개시 산을 함유하는 0.77 g의 혼합물을 얻었다. 이러한 물질을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40%, 그 다음 60% 아세톤)로 다시 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-(메톡시(메틸)아미노)-4-옥소부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (210 mg, 0.26 mmol, 20%)을 무색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (214 nm): RT = 9.78 min. MS (CI): C48H94N2O6에 대한 m/z (MH+) 795.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (quint., 1H, J = 6.3 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.67 (s, 3H); 3.17 (s, 3H); 2.41 (m, 6H); 2.27 (m, 6H); 1.74 (m, 2H); 1.60 (m, 8H); 1.48 (m, 4H); 1.40 (m, 2H); 1.24 (br. m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.8 Hz).
FZ . 화합물 241: 헵타데칸 -9-일 8-((4-( 메톡시아미노 )-4- 옥소부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00376
20 mL 디클로로메탄 중 4-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)부탄산 (1.00 g, 1.33 mmol) 및 O-메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (178 mg, 2.13 mmol)의 혼합물에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (460 mg, 2.39 mmol) 이어서 트리에틸아민 (0.30 mL, 2.13 mmol)을 첨가하고 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반했다. 소량의 개시 산만이 LC/MS에 의해 남아 있었고, 이로써 반응 혼합물을 헥산으로 희석하고, 물로 1회 세정하고 염수로 세정했다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-6% 그 다음 10% 메탄올)로 정제하여 일부 개시 산을 함유하는 0.63 g의 혼합물을 얻었다. 이러한 물질을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40%, 그 다음 80% 아세톤)로 다시 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-(메톡시아미노)-4-옥소부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (0.56 g, 0.71 mmol, 53%)을 무색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (214 nm): RT = 9.49 min. MS (CI): C47H92N2O6에 대한 m/z (MH+) 781.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (quint., 1H, J = 6.3 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.73 (s, 3H); 2.48 (m, 2H); 2.42 (m, 4H); 2.28 (m, 6H); 1.73 (m, 4H); 1.60 (m, 6H); 1.48 (m, 6H); 1.24 (br. m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 7.1 Hz); 하이드록사메이트 양성자가 관측되지 않았다.
GA. 화합물 242: 헵타데칸 -9-일 8-((4-( 하이드록시(메틸)아미노 )-4- 옥소부틸 )(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00377
25 mL 디클로로메탄 중 4-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)부탄산 (1.08 g, 1.43 mmol)의 용액에 0 ℃에서 옥살릴 염화물 (121 μL, 1.43 mmol) 이어서 5 방울의 DMF을 첨가하고, 냉각욕을 제거하고 반응 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반했다. 수득한 용액에 0 ℃에서 N-메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (0.36 g, 4.3 mmol) 및 DMAP (355 mg, 0.29 mmol) 이어서 트리에틸아민 (1.0 mL, 7.2 mmol)을 첨가하고, 반응을 rt로 가온되도록 하고 16시간 동안 교반했다. 소량의 개시 산만이 LC/MS에 의해 남아 있었고, 이로써 반응 혼합물을 헥산으로 희석하고, 물로 1회 세정하고 염수로 세정했다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50%, 그 다음 80% 아세톤)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-(하이드록시(메틸)아미노)-4-옥소부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (0.61 g, 0.78 mmol, 54%)을 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (214 nm): RT = 9.69 min. MS (CI): C47H92N2O6에 대한 m/z (MH+) 781.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.85 (quint., 1H, J = 6.0 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.9 Hz); 3.21 (s, 3H); 2.55 (m, 4H); 2.44 (m, 4H); 2.27 (m, 4H); 1.96 (m, 2H); 1.60 (m, 8H); 1.47 (m, 6H); 1.24 (br. m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 7.1 Hz); 하이드록사메이트 양성자가 관측되지 않았다.
GB. 화합물 243: 헵타데칸 -9-일 8-((4-아미노-4- 옥소부틸 )(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00378
25 mL 디클로로메탄 중 4-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)부탄산 (1.0 g, 1.33 mmol)의 용액에 0 ℃에서 옥살릴 염화물 (120 μL, 1.33 mmol) 이어서 5 방울의 DMF을 첨가하고, 냉각욕을 제거하고 반응 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반했다. 수득한 용액을 0 ℃로 냉각시키고, 암모니아 가스로 5분 동안 버블을 일으키고 반응을 0 ℃에서 2시간 동안 유지했다. 소량의 개시 산만이 LC/MS에 의해 남아 있었고, 이로써 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 염수로 세정했다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40%, 그 다음 80% 아세톤)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((4-아미노-4-옥소부틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (0.30 g, 0.40 mmol, 30%)을 갈색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (214 nm): RT = 9.09 min. MS (CI): C46H90N2O5에 대한 m/z (MH+) 751.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.73 (bs, 1H); 5.22 (bs, 1H); 4.85 (quint., 1H, J = 6.3 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.45 (m, 2H); 2.37 (m, 4H); 2.27 (m, 6H); 1.75 (m, 2H); 1.60 (m, 8H); 1.50 (m, 4H); 1.40 (m, 2H); 1.24 (br. m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
GC . 화합물 248: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2- 니트로구아니디노 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
S-메틸-N-니트로-N-프탈로일이소티오우레아
Figure pct00379
70 mL 피리딘 중 S-메틸-N-니트로이소티오우레아 (5.0 g, 37 mmol)의 용액에 0 ℃에서 프탈로일 염화물 (14.5 g, 10.3 mL, 72 mmol)을 25분에 걸쳐 적가했다. 용액을 0 ℃에서 30분 동안 교반하고 그 동안에, 침전물이 형성되었다. 혼합물을 600 mL 빙랭 2N 염산 용액에 부었고, 수득한 고체를 여과하고, 물로 세정하고 공기-건조시켰다. 고체를 에탄올로부터 침전시켜 S-메틸-N-니트로-N-프탈로일이소티오우레아 (6.23 g, 23.5 mmol, 64%)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.97-7.95 (m, 2H); 7.87-7.86 (m, 2H); 2.66 (s, 3H).
메틸 N,N-디메틸-N-니트로카밤이미도티오에이트
Figure pct00380
10 mL 디클로로메탄 중 S-메틸-N-니트로소-N-프탈로일이소티오우레아 (1.5 g, 5.68 mmol)의 용액에 0 ℃에서 5 mL 메탄올 중 2M THF 중 디메틸아민 용액 (2.84 mL, 5.68 mmol)의 용액을 25분에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하고, 농축, 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고 실리카겔 크로마토그래피 (4:1 헥산 / 에틸 아세테이트, 등용매)로 정제하여 메틸 N,N-디메틸-N-니트로카밤이미도티오에이트 (678 mg, 4.15 mmol, 73 %)을 왁스성 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 3.25 (s, 6H); 2.53 (s, 3H).
헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2- 니트로구아니디노 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00381
20 mL 메탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((아미노프로필)(8-노닐옥실)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.69 mmol)의 용액에 메틸-N,N-디메틸-N-니트로카밤이미도티오에이트 (118 mg, 0.73 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 가열 환류하고 5시간 교반했다. 개시 아민이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 용매를 제거하고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (용출액 디클로로메탄, 메탄올, 1% 수산화암모늄)로 정제하여 520 mg의 불순한 물질을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (먼저 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트, 그 다음 디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물) )로 다시 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸-2-니트로구아니디노)프로필)(8-(노닐옥실)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 0.26 mmol, 38%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV 214 nm: RT = 9.48 min. MS (CI): C48H95N5O6에 대한 m/z (MH+) 838.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.51 (t, 2H, J = 5.2 Hz); 3.05 (s, 6H); 2.66 (bs, 1H); 2.48 (bs, 2H); 2.28 (dt, 4H, J = 7.4 Hz, 3.8 Hz); 1.62-1.58 (m, 8H); 1.48- 1.30 (m, 8H); 1.29- 1.24 (m, 52H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
GD . 화합물 249: 헵타데칸 -9-일 (E)-8-((3-(2- 시아노 -3- 메틸구아니디노 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00382
화합물 249을 화합물 168과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노옥타노에이트 (400 mg, 0.55 mmol)로부터 제조하고, 단, 메탄올 중 메틸아민의 2M 용액 (1.4 mL, 2.8 mmol)을 THF 중 2M 디메틸아민 용액 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄, 메탄올 /1% NH4OH)로 정제하여 헵타데칸-9-일 (E)-8-((3-(2-시아노-3-메틸구아니디노)프로필)(8-(노닐옥실)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (260 mg, 0.32 mmol, 58%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV 214 nm: RT = 9.83 min. MS (CI): C48H93N5O4에 대한 m/z (MH+) 804.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.29 (m, 2H); 2.77 (d, 3H, J = 4.6 Hz); 2.52 (m, 1H); 2.44-2.39 (m, 3H); 2.28 (dt, 4H, J = 7.4 Hz, 3.6 Hz); 1.65-1.57 (m, 16H); 1.50- 1.41 (m, 3H); 1.30- 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.4 Hz).
GE. 화합물 250: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-((1-(디메틸아미노)-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
(E)-N,N-디메틸-1-(메틸티오)-2-니트로에텐-1-아민
Figure pct00383
아세토니트릴 중 (2-니트로에텐-1,1-디일)비스(메틸설판) (EP 5984 A1)(1.0 g, 6.1 mmol)의 용액에 0 ℃에서 테트라하이드로푸란 (3 mL, 6 mmol) 중2M 디메틸아민을 첨가하고 반응 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하고 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산, 에틸 아세테이트)로 정제하여 N,N,N,N-테트라메틸-2-니트로에텐-1,1-디아민을 함유하는 (E)-N,N-디메틸-1-(메틸티오)-2-니트로에텐-1-아민 (200 mg, 20%)을, 불그스름한 황색 오일로서 얻었고, 이것을 추가 정제없이 사용했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.67 (s, 1H); 3.20 (s, 6H); 2.46 (s, 3H).
헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-((1-(디메틸아미노)-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00384
20 mL 메탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.69 mmol)의 용액에 (E)-N,N-디메틸-1-(메틸티오)-2-니트로에텐-1-아민 (112 mg, 0.69 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 가열 환류하고 5시간 교반했다. 용매를 제거하고 화합물을 실리카겔 크로마토그래피 [칼럼 1: 헥산/에틸 아세테이트, 그 다음 디클로로메탄, 메탄올 /1% NH4OH), 칼럼 2: 헥산/에틸 아세테이트, 그 다음 디클로로메탄, 메탄올 /1% NH4OH)]로 2회 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-((1-(디메틸아미노)-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (104 mg, 0.12 mmol,18%)을 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV 214 nm: RT = 8.69 min. MS (CI): C48H96N4O6에 대한 m/z (MH+) 837.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 9.56 (bs, 1H); 6.49 (s, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.34-3.32 (m, 2H); 2.92 (s, 6H); 2.49 (m, 2H); 2.37-2.33 (m, 4H); 2.27 (dt, 4H, J = 7.4 Hz, 3.8 Hz); 1.77-1.75 (m, 2H); 1.62-1.48 (m, 8H); 1.34- 1.24 (m, 54H); 0.86 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
GF . 화합물 254: 헵타데칸 -9-일 4-이미노-9-(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )-2-옥사-3,5,9-트리아자헵타데칸-17-오에이트
헵타데칸 -9-일 7-(tert-부톡시카보닐)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-6-(1H-피라졸-1-일)-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-5-엔-19-오에이트
Figure pct00385
10 mL 건조 테트라하이드로푸란 중 헵타데칸-9-일 (8-((3-하이드록시프로필)(8-(노닐옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.69 mmol)의 용액에 트리페닐포스핀 (271.8 mg, 1.04 mmol) 및 tert-부틸 (((tert-부톡시카보닐)아미노)(1H-피라졸-1-일)메틸렌)카바메이트 (Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO; 214.3 mg, 0.69 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물 0 ℃로 냉각시켰다. 이것에 디이소프로필 아조디카복실레이트 (0.2 mL, 1.04 mmol)을 적가하고, 냉각욕을 제거하고 반응 혼합물을 rt에서 24시간 동안 교반했다. 개시 알코올은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 용매를 제거하고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40% 에틸 아세테이트)로 정제하여 헵타데칸-9-일 7-(tert)-부톡시카보닐)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-6-(1H-피라졸-1-일)-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-5-엔-19-오에이트 (227 mg, 0.22 mmol, 32%)을 무색 오일로서 얻었다. MS (CI): C59H109N5O8에 대한 m/z (MH+) 1016.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.93 (s, 1H); 7.67 (s, 1H); 6.40 (s, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.69-3.67 (m, 2H); 2.45 (t, 2H, J = 7.0 Hz) 2.35-2.23 (m, 8H); 1.88-1.84 (m, 2H); 1.57-1.49 (m, 10H); 1.38- 1.24 (m, 70H); 0.86 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
헵타데칸 -9-일 7-( tert - 부톡시카보닐 )-6-( 메톡시아미노 )-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-5-엔-19-오에이트
Figure pct00386
30 mL의 1:1 사이클로펜틸메틸 에테르 / 아세토니트릴 혼합물 중 헵타데칸-9-일 7-(tert-부톡시카보닐)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-6-(1H-피라졸-1-일)-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-5-엔-19-오에이트 (227 mg, 0.22 mmol)의 용액에 O-메틸 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (93.3 mg, 1.12 mmol) 이어서 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.2 mL, 1.12 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 85 ℃로 가열시키고 24시간 동안 교반했다. 반응은 LC/MS에 의해 ca. 80%가 진행되었고, 이로써 추가의 O-메틸 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (93.3 mg, 1.12 mmol) 이어서 N,N-디이소프로필에틸아민 (144.4 mg, 0.2 mL, 1.12 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 85 ℃에서 추가 24시간 동안 교반했다. 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 용매를 제거하고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:1 헥산 / 에틸 아세테이트 등용매)로 정제하여 헵타데칸-9-일 7-(tert-부톡시카보닐)-6-(메톡시아미노)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-5-엔-19-오에이트 (189 mg, 0.19 mmol, 85%)을 무색 오일로서 얻었다. MS (CI): C57H110N4O9에 대한 m/z (MH+) 995.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.31 (s, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.83 (s, 3H); 3.42 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 2.48-2.32 (m, 6H); 2.26 (dt, 4H, J = 7.4 Hz, 3.8 Hz); 1.62-1.55 (m, 8H); 1.50-1.43 (m, 20H); 1.39-1.24 (m, 54H); 0.86 (t, 9H, J = 6.4 Hz).
헵타데칸 -9-일 4-이미노-9-(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )-2-옥사-3,5,9- 트리아자헵타데칸 -17-오에이트
Figure pct00387
1 mL 에틸 아세테이트 중 헵타데칸-9-일 7-(tert-부톡시카보닐)-6-(메톡시아미노)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,7,11-트리아자노나데크-5-엔-19-오에이트 (189 mg, 0.19 mmol)의 용액에 0 ℃에서 1,4-디옥산 (8 mL, 32 mmol) 중 4M 염산 용액을 적가하고 반응 혼합물을 rt에서 3일 동안 교반했다. 개시 물질이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고 완전히 탈보호된 생성물만이 관측되었다. 반응을 농축하고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 용액을 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회, 그 다음 염수로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄, 메탄올 /1% NH4OH)로 정제하여 헵타데칸-9-일 4-이미노-9-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-2-옥사-3,5,9-트리아자헵타데칸-17-오에이트 (120 mg, 0.15 mmol, 80%)를 얻었다. MS (CI): C47H94N4O5에 대한 m/z (MH+) 795.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.64 (s, 3H); 3.15 (bs, 2H); 2.51-2.49 (m, 2H); 2.42-2.38 (m, 4H); 2.27 (dt, 4H, J = 7.4 Hz, 3.7 Hz); 1.65-1.55 (m, 8H); 1.49-1.41 (m, 8H); 1.29- 1.24 (m, 50H); 0.86 (t, 9H, J = 6.4 Hz).
GG . 화합물 266: 헵타데칸 -9-일 (E)-8-((3-(2- 시아노구아니디노 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00388
화합물 266을 화합물 168과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노옥타노에이트 (400 mg, 0.55 mmol)로부터 제조하고, 단, 메탄올 (2 mL, 14 mmol) 중 암모니아의 7M 용액을 THF 중 2M 디메틸아민 용액 대신에 사용하고 반응을 밀봉 튜브에서 수행했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄, 메탄올 /1% NH4OH)로 정제하여 헵타데칸-9-일 (E)-8-((3-(2-시아노구아니디노)프로필)(8-(노닐옥실)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (170 mg, 0.21 mmol, 39%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV 214 nm: RT = 9.26 min. MS (CI): C47H91N5O4에 대한 m/z (MH+) 790.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm δ 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.29-3.27 (m, 2H); 2.51-2.48 (m, 2H); 2.43-2.38 (m, 4H); 2.31-2.25 (m, 4H); 1.68-1.55 (m, 8H); 1.50- 1.48 (m, 4H); 1.40-1.37 (m, 4H); 1.30- 1.23 (m, 50H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz); 하나의 구아니딘 양성자가 관측되지 않았다.
GH . 화합물 274: 헵타데칸 -9-일 (E)-8-((3-(2- 니트로구아니디노 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00389
20 mL 메탄올 중 헵타데칸-9-일 8-((아미노프로필)(8-노닐옥실)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (530 mg, 0.73 mmol)의 용액에 메틸-N-니트로카밤이미도티오에이트 (104 mg, 0.77 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 가열 환류하고 4시간 동안 교반했다. 개시 물질이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고 2개의 니트로구아니딘 레지오이성질체 (Z 및 E)에 해당하는 2개의 생성물 피크가 관측되었다. Z 이성질체의 양은, 더 많은 안정한 E 이성질체로 전환되기 때문에, 반응 시간과 함께 감소되었다. 용매를 제거하고 조 화합물을 실리카겔 크로마토그래피 (초기에 헥산, 헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트, 그 다음 디클로로메탄 중 0-50% 메탄올 /1% NH4OH)로 정제하여 헵타데칸-9-일 (E)-8-((3-(2-니트로구아니디노)프로필)(8-(노닐옥실)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (160 mg, 0.20 mmol, 27%)을 무색 오일로서 얻었다. HPLC/UV 214 nm: RT = 9.53 min. MS (CI): C46H91N5O6에 대한 m/z (MH+) 810.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.41 (bs, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.36-3.34 (m, 2H); 2.51-2.41 (m, 6H); 2.28 (dt, 4H, J = 7.6 Hz, 3.7 Hz); 1.78 (bs, 2H); 1.63-1.58 (m, 8H); 1.50- 1.38 (m, 6H); 1.30- 1.23 (m, 50H); 0.86 (t, 9H, J = 6.8 Hz).
또한 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(2-니트로구아니디노)프로필)(8-(노닐옥실)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (65 mg, 0.08 mmol, 11%)을 밝은 황색 오일로서 단리하고, 이것은 정치시 E 이성질체로 느리게 전환되었다. HPLC/UV 214 nm: RT = 10.66 min. MS (CI): C46H91N5O6에 대한 m/z (MH+) 810.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87-4.80 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.36-3.34 (m, 2H); 2.48 (bs, 4H); 2.30-2.24 (m, 4H); 2.16-2.15 (m, 1H); 1.79 (bs, 1H); 1.62-1.42 (m, 15H); 1.30- 1.24 (m, 52H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
GI. 화합물 275: 7 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트
Figure pct00390
100 mL 건조 DCM 중 1-옥틴-3-올 (2.15 mL, 14.4 mmol) 및 메틸 프로피올레이트 (1.2 mL, 14.4 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.4 mmol)을 첨가하고 옅은 황색 용액을 rt에서 20시간 동안 교반하고, 그 후 개시 알코올은 TLC에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 농축 및 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 메틸 (E)-3-(옥트-1-인-3-일옥시)아크릴레이트 (2.92 g, 13.9 mmol, 97%)을 무색 액체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.61 (d, 1H, J = 12.5 Hz); 5.38 (d, 1H, J = 12.5 Hz); 4.53 (td, 1H, J = 6.6 Hz, 2.0 Hz); 3.70 (s, 3H); 2.58 (d, 1H, J = 2.0 Hz); 1.91-1.75 (m, 2H); 1.52-1.41 (m, 2H); 1.37-1.26 (m, 4H); 0.90 (t, 3H, J = 6.9 Hz).
Figure pct00391
5 mL 마이크로파 바이알에서 840 mg (4 mmol) 메틸 (E)-3-(옥트-1-인-3-일옥시)아크릴레이트 및 2 mL 물을 조합하여 무색 이중층을 얻었다. 바이알을 밀봉하고 혼합물에 대해 175 ℃에서 90 분 동안 마이크로웨이브 조사를 거쳤다. 수득한 이중층을 DCM로 2회 세정하고, 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 암오렌지색 오일을 얻었다. 이것을 헥산에 용해시키고 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 (Z)-데크-3-에노산 (155 mg, 0.91 mmol, 23%)을 오렌지색 오일로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 11.03 (br. s, 1H); 5.70-5.44 (m, 2H); 3.14 (d, 2H, J = 6.6 Hz); 2.04 (q., 2H, J = 6.8 Hz); 1.43-1.13 (m, 8H); 0.88 (t, 3H, J = 6.8 Hz). (Z)-기하학은 2.07 ppm (C-5 양성자) 및 3.16 ppm (C-2 양성자)에서 조사되는 1D 선택적 구배 NOEsy 실험에 의해 확인되었다.
Figure pct00392
10 mL 건조 DCM 중 (Z)-데크-3-에노산 (220 mg, 1.29 mmol) 및 7-브로모-1-헵타놀 (250 uL, 1.42 mmol)의 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (440 mg, 1.94 mmol) 이어서 DMAP (80 mg, 0.65 mmol) 및 마지막으로 N,N-디이소프로필에틸아민 (680 uL, 3.88 mmol)을 첨가했다. 수득한 오렌지 용액을 실온에서 24시간 동안 교반하고, 그 후 TLC는 남아 있는 개시 산이 없음을 나타내었다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고 (농후한 에멀션), 수성 10% 시트르산 용액으로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-15% EtOAc)로 정제하여 7-브로모헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트 (250 mg, 0.72 mmol, 56%)을 약간 황색 액체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.65-5.49 (m, 2H); 4.07 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.40 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.08 (d, 2H, J = 5.5 Hz); 2.04 (q., 2H, J = 6.8 Hz); 1.92-1.79 (m, 2H); 1.70-1.56 (m, 2H); 1.51-1.20 (m, 14H); 0.88 (t, 3H, J = 6.3 Hz).
Figure pct00393
화합물 285을 화합물 284과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (350 mg, 0.71 mmol)로부터 제조하고, 단, 7-브로모헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트 (250 mg, 0.72 mmol)을 5-브로모펜틸 옥틸 말로네이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 수득한 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물) )로 정제하여 7-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(2-하이드록시에틸)아미노)헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트 (205 mg, 0.29 mmol, 41%)을 무색 오일로서 얻었다.
UPLC/ELSD: RT = 3.35 min. MS (ES): C44H85NO5에 대한 m/z (MH+) 708.75. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.64-5.48 (m, 2H); 4.86 (quint., 1H, J = 6.2 Hz); 4.07 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.55 (t, 2H, J = 5.0 Hz); 3.40 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.08 (d, 2H, J = 5.6 Hz); 2.61 (t, 2H, J = 4.1 Hz); 2.47 (t, 4H, J = 6.8 Hz); 2.27 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 2.04 (q., 2H, J = 6.8 Hz); 1.70-1.55 (m, 4H); 1.54-1.40 (m, 6H); 1.39-1.13 (m, 45H); 0.87 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
GJ . 화합물 276: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3- 메톡시프로판아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00394
화합물 276을 화합물 178과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)로부터 제조하고, 단, 3-메톡시프로파노일 염화물 (Oakwood Chemical, Estill, SC) (57 uL, 0.52 mmol)을 메톡시아세틸 염화물 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(3-메톡시프로판아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (140 mg, 0.55 mmol, 31%)을 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.48 min. MS (ES): C49H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 809.78. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.48 (s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.6 Hz, 6.1 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.91 (s, 2H); 3.55 (quart., 2H, J = 13.8 Hz, 7.0 Hz); 3.36 (d, 2H, J = 5.8 Hz); 2.53-2.43 (m, 2H); 2.41-2.32 (br. m, 3H); 2.31-2.23 (m, 4H); 1.70-1.56 (m, 8H); 1.55-1.37 (m, 8H); 1.36-1.14 (m, 52H); 0.88 (t, 9H, J = 7.5 Hz).
GK. 화합물 277: 4 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)부틸 헵틸 글루타레이트
단계 1: 5-(헵틸옥시)-5-옥소펜탄산
Figure pct00395
7.2 mL (50 mmol) 1-헵타놀 중 5 g (41.6 mmol) 글루타르산 무수물의 슬러리를 90 ℃로 가열시키고 20시간 동안 교반하고, 그 후 무색 용액으로 되었다. 이것을 rt로 냉각되도록 하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (~50 mL)로 희석하고 디에틸 에테르로 3회 추출했다. 수성층을 수성 4N HCl 용액으로 pH ~3으로 조정하고 수득한 흐린 혼합물을 EtOAc로 3회 추출했다. EtOAc 상들을 조합하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고, (Na2SO4), 여과하고 여과물을 농축하여 5-(헵틸옥시)-5-옥소펜탄산 (7.36 g, 31.9 mmol, 77%)을 무색 액체로서 얻었고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계로 옮겼다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 11.40 (br. s., 1H); 4.06 (t., 2H, J = 6.8 Hz); 2.41 (m, 4H); 1.95 (quint., 2H, J = 14.5 Hz, 7.3 Hz); 1.61 (m, 2H); 1.28 (m, 8H); 0.88 (t, 3H, J = 5.8 Hz).
단계 2: 4-브로모부틸 헵틸 글루타레이트
Figure pct00396
20 mL 건조 DCM 중 5-(헵틸옥시)-5-옥소펜탄산 (1.5 g, 6.5 mmol) 및 4-브로모-1-부탄올 (0.82 mL, 6.8 mmol)의 용액에 건조 질소 하에서 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (2.2 g, 9.8 mmol) 이어서 4-(디메틸아미노)피리딘 (0.4 g, 3.26 mmol) 및 마지막으로 N,N-디이소프로필에틸아민 (3.4 mL, 19.5 mmol)로 첨가하여 옅은 황색 용액을 얻었다. 이것을 rt에서 24시간 동안 교반하고, 그 후 LC/MS는 남아 있는 개시 산이 없음을 나타내었다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고 (농후한 에멀션), 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 4-브로모부틸 헵틸 글루타레이트 (0.34 g, 0.93 mmol, 14%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.11-4.06 (m, 4H); 3.41 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.62 (s, 4H); 1.87 (quint., 2H, J = 13.9 Hz, 7.2 Hz); 1.69-1.57 (m, 4H); 1.50-1.30 (m, 10H); 0.89 (t, 3H, J = 6.3 Hz).
단계 3: 4 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)부틸 헵틸 글루타레이트
Figure pct00397
8 mL 건조 아세토니트릴 중 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (300 mg, 0.61 mmol) 및 6-브로모헥실 헥실 석시네이트 (223 mg (0.61 mmol)의 용액에 건조 질소 하에서 요오드화칼륨 (115 mg, 0.68 mmol) 이어서 분말화된 탄산칼륨 (340 mg, 2.4 mmol)을 첨가하고 혼합물을 2 mL 건조 사이클로펜틸 메틸 에테르로 희석했다. 수득한 백색 혼합물을 90 ℃로 가열시키고 24시간 동안 교반하고, 그 다음 rt로 냉각되도록 하고, 여과하고, 필터 고형물을 DCM으로 세정하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액에 현탁시키고 DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-30% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 4-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(2-하이드록시에틸)아미노)부틸 헵틸 글루타레이트 (140 mg, 0.19 mmol, 32%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.22 min. MS (ES): C43H83NO7에 대한 m/z (MH+) 726.63. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 12.2 Hz, 6.1 Hz, ); 4.07 (quart., 4H, J = 12.1 Hz, 6.0 Hz); 3.53 (t, 2H, J = 5.0 Hz); 2.88 (br. s, 1H); 2.58 (t, 2H, J = 4.7 Hz); 2.47 (quart., 4H, J = 16.8 Hz, 7.0 Hz); 2.37 (t., 4H, J = 7.0 Hz); 2.27 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 1.94 (quint., 2H, J = 14.7 Hz, 7.3 Hz); 1.70-1.55 (m, 6H); 1.54-1.37 (m, 8H); 1.36-1.15 (m, 38H); 0.87 (t, 9H, J = 6.1 Hz).
GL . 화합물 278: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(사이클로프로판설폰아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00398
화합물 278을 화합물 109과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)로부터 제조하고, 단, 사이클로프로판설포닐 염화물 (Oakwood Chemical, Estill, SC) (54 uL, 0.52 mmol)을 메탄설포닐 염화물 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(사이클로프로판설폰아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (125 mg, 0.15 mmol, 44%)을 약간 황색 오일로서 얻었다.
UPLC/ELSD: RT = 3.45 min. MS (ES): C49H94N2O6S에 대한 m/z (MH+) 827.82. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.95 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 12.4 Hz, 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.48 (quart., 1H, J = 14.1 Hz, 7.0 Hz); 3.26 (t, 2H, J = 5.6 Hz); 2.63-2.47 (br. m, 2H); 2.45-2.32 (br. m, 4H); 2.31-2.21 (m, 4H); 1.77-1.68 (m, 2H); 1.61 (br. t, 6H, J = 6.8 Hz); 1.55-1.39 (m, 8H); 1.38-1.17 (m, 48H); 1.16-1.10 (m, 2H); 0.98-0.92 (m, 2H); 0.88 (t, 9H, J = 6.0 Hz).GM. 화합물 279: 헵타데칸 -9-일 (Z)-6-(시아노이미노)-2-메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-2,5,7,11-테트라아자노나데칸-19-오에이트
Figure pct00399
화합물 279을 화합물 168과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)로부터 제조하고, 단, 순수한 N,N-디메틸에틸렌-1,2-디아민 (160 uL, 1.4 mmol)을 THF 중 디메틸아민 용액 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-6-(시아노이미노)-2-메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-2,5,7,11-테트라아자노나데칸-19-오에이트 (110 mg, 0.13 mmol, 37%)을 약간 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.10 min. MS (ES): C51H100N6O4에 대한 m/z (MH+) 861.94. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.91 (br. s., 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.28-3.18 (m, 4H); 2.53-2.40 (m, 7H); 2.32-2.22 (m, 10H); 1.75-1.55 (m, 8H); 1.49-1.43 (m, 8H); 1.32-1.26 (br. m, 50H); 0.88 (t, 9H, J = 6.1 Hz).
GN . 화합물 280: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00400
60 mL 디에틸 에테르 중 3,4-디메톡시-3-사이클로부텐-1,2-디온 (500 mg, 3.45 mmol)의 용액에 10 mL 에테르 중 0.42 mL (3.8 mmol) N,N-디메틸에틸렌-1,2-디아민의 용액을 5분에 걸쳐 빠르게 적가하고 수득한 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, 그 다음 여과하고, 필터 고체를 디에틸 에테르로 세정하고 공기-건조시켰다. 필터 고체를 헥산에 용해시키고, 여과하고, 여과물을 EtOAc로 희석하여 탁도를 얻었고 혼합물 실온으로 냉각되도록 하고, 그 다음 0 ℃으로 냉각시켜 ppt를 얻었다. 이것을 여과를 통해 단리하고, 헥산으로 세정하고, 공기-건조시키고, 그 다음 진공 하에서 건조시켜 3-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-4-메톡시사이클로부트-3-엔-1,2-디온 (255 mg, 1.29 mmol, 37%)을 백색 고체로서 얻었다. 화합물은 클로로포름에서 실온에서 2개의 회전이성질체로서 존재한다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.35 (br. s, 0.65H); 6.09 (br. s, 0.35H); 4.39 (s, 3H); 3.73 (br. s, 0.75H); 3.46 (br. s, 1.25H); 2.50 (m, 2H); 2.25 (s, 6H).
Figure pct00401
화합물 280을 화합물 169과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (300 mg, 0.42 mmol)로부터 제조하고, 단, 3-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-4-메톡시사이클로부트-3-엔-1,2-디온 (160 uL, 1.4 mmol)을 3-(디메틸아미노)-4-메톡시사이클로부트-3-엔-1,2-디온 대신에 사용하고 용액을 40 ℃로 가열시켰다. 용액을 질소의 스트림에서 감소시키고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((2-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (105 mg, 0.12 mmol, 28%)을 황색 페이스트로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.16 min. MS (ES): C53H100N4O6에 대한 m/z (MH+) 890.06. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.58 (br. s., 1H); 6.20 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 5.9 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.76-3.60 (m, 4H); 2.63 (br. s, 2H); 2.54-2.44 (m, 6H); 2.28 (m, 10H); 1.74 (br. s, 2H); 1.61 (m, 6H); 1.49 (m, 8H); 1.25 (br. m, 48H); 0.88 (t, 9H, J = 6.0 Hz).
GO. 화합물 281: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3- 메톡시 -2,2- 디메틸프로판아미도 )프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00402
화합물 281을 화합물 252과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)로부터 제조하고, 단, 3-메톡시-2,2-디메틸프로판산 (Enamine, Monmouth Junction, NJ)(63 mg, 0.52 mmol)을 (메틸티오)아세트산 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(3-메톡시-2,2-디메틸프로판아미도)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (125 mg, 0.15 mmol, 43%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.63 min. MS (ES): C51H100N2O6에 대한 m/z (MH+) 837.99. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 9.26 (s, 1H); 7.39 (t, 1H, J = 6.3 Hz); 4.85 (quint., 1H, J = 6.3 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.42-3.32 (m, 7H); 3.12-2.98 (m, 5H); 2.33-2.23 (m, 4H); 2.04 (br. s, 2H); 1.75-1.53 (br. m, 14H); 1.51-1.10 (m, 54H); 0.88 (t, 9H, J = 6.1 Hz).
GP . 화합물 282: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((1-아미노-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐 옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00403
메탄올 (5 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.69 mmol) 및 (2-니트로에텐-1,1-디일)비스(메틸설판) (125 mg, 0.76 mmol)의 용액을 80 ℃에서 밀봉 튜브에서 5시간 교반했다. 그 다음 암모니아 용액 (메탄올 중 7 N, 5 mL, 35 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 80 ℃에서 2시간 동안 추가 가열했다. 용매를 제거하고 조 물질 정제된 by 실리카겔 크로마토그래피 (SiO2: EtOAc/헥산 0 내지 100%, 그 다음 1% 수산화암모늄/디클로로메탄 0 내지 20%를 함유하는 메탄올)로 정제하여 헵타데칸-9-일 (E)-8-((3-((1-아미노-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (80 mg, 12%)을 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (214 nm): RT = 8.78 min. MS (CI): C47H92N4O6에 대한 m/z (MH+) 809.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 6.49 (s, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.36 (m, 2H); 2.49-2.39 (m, 6H); 2.27 (dt, 4H, J = 4.3 Hz, 7.2 Hz); 1.77-1.75 (m, 2H); 1.62-1.48 (m, 15H); 1.34- 1.24 (m, 50H); 0.86 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
GQ . 화합물 283: 헵타데칸 -9-일 8-((3-( 메틸아미노 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00404
2 mL 2-프로판올 중 헵타데칸-9-일 8-((3-클로로프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.54 mmol)의 용액에 요오드화나트륨 (10 mg, cat.) 이어서 THF 중 4 mL (8 mmol)의 2M 메틸아민 용액을 첨가하여 황색 용액을 얻었다. 이것을 55 ℃로 가열시키고 3일 동안 교반하고 그 후 개시 염화물은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 혼합물을 질소의 스트림에서 농축하고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(메틸아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 0.30 mmol, 55%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 2.98 min. MS (ES): C46H92N2O4에 대한 m/z (MH+) 737.70. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, J = 6.1 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.72 (t, 2H, J = 6.5 Hz); 2.51 (t, 2H, J = 6.1 Hz); 2.46 (s, 3H); 2.40 (t, 4H, J = 6.3 Hz); 2.32-2.23 (m, 4H); 1.76-1.55 (m, 8H); 1.54 - 1.36 (m, 8H); 1.35-1.12 (br. m, 49H); 0.87 (t, 9H, J = 5.9 Hz).
GR . 화합물 284: 5 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)펜틸 옥틸 말로네이트
Figure pct00405
20 mL 건조 DCM 중 모노-tert-부틸 말로네이트 (Oakwood Products, Inc., Estill, SC) (1.5 g, 9.2 mmol) 및 1-옥탄올 (1.6 mL, 10.1 mmol)의 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (3.1 g, 13.8 mmol) 이어서 4-(디메틸아미노)피리딘 (0.34 g, 2.7 mmol) 및 마지막으로　N,N-디이소프로필에틸아민 (4.8 mL, 27.5 mmol)을 교반하면서 건조 질소 하에서 첨가하여 무색 용액을 얻었다. 이것을 실온에서 교반했다. 24시간 동안 교반하고, 그 후 LC/MS는 남아 있는 개시 산이 없음을 나타내었다. 황색 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회, 수성 10% 시트르산 용액으로 2회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-15% EtOAc)로 정제하여 tert-부틸 옥틸 말로네이트 (1.86 g, 6.8 mmol, 74%)을 무색 액체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.11-4.06 (m, 4H); 3.41 (t, 2H,　J　= 6.7 Hz); 2.62 (s, 4H); 1.87 (quint., 2H,　J　= 7.2 Hz); 1.69-1.57 (m, 4H); 1.50-1.30 (m, 10H); 0.89 (t, 3H,　J　= 6.3 Hz).
Figure pct00406
10 mL DCM 중 tert-부틸 옥틸 말로네이트 (1.5 g, 5.5 mmol)의 용액에 0 ℃에서 트리플루오로아세트산 (5 mL, 과잉)을 교반하면서 빠르게 적가하여 무색 용액을 얻었다. 수득한 무색 용액을 실온으로 가온되도록 하고 24시간 동안 교반하고, 그 후 반응은 TLC에 의해 완료되지 않았다. 용액을 45 ℃로 가열시키고 3시간 동안 교반하고 그 후 TLC에 의해 개시 물질은 남아 있지 않았다. 옅은 황색 용액을 실온으로 냉각되도록 하고, 농축하고, 그리고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-30% EtOAc)로 정제하여 3-(옥틸옥시)-3-옥소프로판산 (0.9 g, 4.2 mmol, 75%)을 무색 액체로서 얻었다. 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 4.19 (t, 2H,　J　= 6.8 Hz); 3.44 (s, 2H); 1.66 (quint., 2H,　J　= 7.1 Hz); 1.40-1.19 (m, 10H); 0.88 (t, 3H,　J　= 7.0 Hz); 카복실레이트 양성자가 관측되지 않았다.
Figure pct00407
20 mL 건조 디클로로메탄 중 3-(옥틸옥시)-3-옥소프로판산 (900 mg, 4.2 mmol) 및 5-브로모-1-펜타놀 (0.58 mL, 4.4 mmol)의 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (1.4 g, 6.2 mmol) 이어서 4-(디메틸아미노)피리딘 (250 mg, 2.1 mmol) 및 마지막으로　N,N-디이소프로필에틸아민 (2.2 mL, 12.5 mmol)을 교반하면서 건조 질소 하에서 첨가했다. 무색 용액을 실온에서 교반했다. 24시간 동안 교반하고, 그 후 TLC는 남아 있는 개시 산이 없음을 나타내었다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (농후한 에멀션)으로 2회, 수성 10% 시트르산 용액으로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 5-브로모펜틸 옥틸 말로네이트 (810 mg, 2.2 mmol, 53%)을 무색 액체로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 2.17 min. MS (ES): C16H29BrO4에 대한 m/z (M+Na+) 387.24. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.15 (dt, 4H,　J　= 8.2 Hz, 6.6 Hz); 3.41 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.37 (s, 2H); 1.95-1.85 (m, 2H); 1.74-1.59 (m, 4H); 1.57-1.47 (m, 2H); 1.39-1.20 (m, 10H); 0.88 (t, 3H,　J　= 6.6 Hz).
Figure pct00408
8 mL 건조 아세토니트릴 중 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (400 mg, 0.81 mmol) 및 6-브로모헥실 헥실 석시네이트 (300 mg (0.81 mmol)의 용액에 건조 질소 하에서 요오드화칼륨 (150 mg, 0.9 mmol) 이어서 분말화된 탄산칼륨 (450 mg, 3.3 mmol)을 첨가하고 혼합물을 2 mL 건조 사이클로펜틸 메틸 에테르로 희석했다. 수득한 백색 혼합물을 90 ℃로 가열시키고 24시간 동안 교반하고, 그 다음 rt로 냉각되도록 하고, 여과하고, 필터 고형물을 DCM으로 세정하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 50% 포화 수성 중탄산나트륨 용액에 현탁시키고 DCM로 2회 추출했다. 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 5-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(2-하이드록시에틸)아미노)펜틸 옥틸 말로네이트 (225 mg, 0.31 mmol, 38%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.24 min. MS (ES): C43H83NO7에 대한 m/z (MH+) 726.87. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.86 (quint., 1H, 6.1 Hz, ); 4.14 (td, 4H, J = 6.7 Hz, 2.9 Hz); 3.57 (m, 2H); 3.37 (s, 2H); 2.63 (br. s, 2H); 2.51 (br. s, 4H); 2.27 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 1.73-1.56 (m, 6H); 1.55-1.42 (m, 8H); 1.41-1.16 (m, 43H); 0.88 (t, 9H, J = 6.1 Hz).
GS . 화합물 285: 7 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트
Figure pct00409
100 mL 건조 DCM 중 1-옥틴-3-올 (2.15 mL, 14.4 mmol) 및 메틸 프로피올레이트 (1.2 mL, 14.4 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.2 mL, 1.4 mmol)을 첨가하고 옅은 황색 용액을 rt에서 20시간 동안 교반하고, 그 후 개시 알코올은 TLC에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 농축하고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 메틸 (E)-3-(옥트-1-인-3-일옥시)아크릴레이트 (2.92 g, 13.9 mmol, 97%)을 무색 액체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 7.61 (d, 1H, J = 12.5 Hz); 5.38 (d, 1H, J = 12.5 Hz); 4.53 (td, 1H, J = 6.6 Hz, 2.0 Hz); 3.70 (s, 3H); 2.58 (d, 1H, J = 2.0 Hz); 1.91-1.75 (m, 2H); 1.52-1.41 (m, 2H); 1.37-1.26 (m, 4H); 0.90 (t, 3H, J = 6.9 Hz).
Figure pct00410
5 mL 마이크로파 바이알에서 840 mg (4 mmol) 메틸 (E)-3-(옥트-1-인-3-일옥시)아크릴레이트 및 2 mL 물을 조합하여 무색 이중층을 얻었다. 바이알을 밀봉하고 혼합물에 대해 175 ℃에서 90 분 동안 마이크로웨이브 조사를 거쳤다. 수득한 이중층을 DCM로 2회 세정하고, 유기물을 조합하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 암오렌지색 오일을 얻었다. 이것을 헥산에 용해시키고 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 (Z)-데크-3-에노산 (155 mg, 0.91 mmol, 23%)을 오렌지색 오일로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 11.03 (br. s, 1H); 5.70-5.44 (m, 2H); 3.14 (d, 2H, J = 6.6 Hz); 2.04 (q., 2H, J = 6.8 Hz); 1.43-1.13 (m, 8H); 0.88 (t, 3H, J = 6.8 Hz). (Z)-기하학은 2.07 ppm (C-5 양성자) 및 3.16 ppm (C-2 양성자)에서 조사되는 1D 선택적 구배 NOEsy 실험에 의해 확인되었다.
Figure pct00411
10 mL 건조 DCM 중 (Z)-데크-3-에노산 (220 mg, 1.29 mmol) 및 7-브로모-1-헵타놀 (250 uL, 1.42 mmol)의 용액에 1-에틸-3-(디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드 (440 mg, 1.94 mmol) 이어서 DMAP (80 mg, 0.65 mmol) 및 마지막으로 N,N-디이소프로필에틸아민 (680 uL, 3.88 mmol)을 첨가했다. 수득한 오렌지 용액을 실온에서 교반했다. 24시간 동안 교반하고, 그 후 TLC는 남아 있는 개시 산이 없음을 나타내었다. 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 1회 세정하고 (농후한 에멀션), 수성 10% 시트르산 용액으로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-15% EtOAc)로 정제하여 7-브로모헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트 (250 mg, 0.72 mmol, 56%)을 약간 황색 액체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.65-5.49 (m, 2H); 4.07 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.40 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.08 (d, 2H, J = 5.5 Hz); 2.04 (q., 2H, J = 6.8 Hz); 1.92-1.79 (m, 2H); 1.70-1.56 (m, 2H); 1.51-1.20 (m, 14H); 0.88 (t, 3H, J = 6.3 Hz).
Figure pct00412
화합물 285을 화합물 284과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트 (350 mg, 0.71 mmol)로부터 제조하고, 단, 7-브로모헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트 (250 mg, 0.72 mmol)을 5-브로모펜틸 옥틸 말로네이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 수득한 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-40% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 7-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(2-하이드록시에틸)아미노)헵틸 (Z)-데크-3-에노에이트 (205 mg, 0.29 mmol, 41%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.35 min. MS (ES): C44H85NO5에 대한 m/z (MH+) 708.75. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.64-5.48 (m, 2H); 4.86 (quint., 1H, J = 6.2 Hz); 4.07 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.55 (t, 2H, J = 5.0 Hz); 3.40 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.08 (d, 2H, J = 5.6 Hz); 2.61 (t, 2H, J = 4.1 Hz); 2.47 (t, 4H, J = 6.8 Hz); 2.27 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 2.04 (q., 2H, J = 6.8 Hz); 1.70-1.55 (m, 4H); 1.54-1.40 (m, 6H); 1.39-1.13 (m, 45H); 0.87 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
GT . 화합물 286: 헵타데칸 -9-일 8-((3- 아세트아미도 -2,2- 디메틸프로필 )(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00413
헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)-2,2-디메틸프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 화합물 244과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.75 mmol)로부터 제조하고, 단, tert-부틸 (2,2-디메틸-3-옥소프로필)카바메이트 (Enamine LLC, Monmouth Junction, NJ)(231 mg, 1.13 mmol)을 N-Boc-글리시날 대신에 사용하고, 3 당량의 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드가 요구되었고 반응을 50 ℃에서 3일 동안 수행했다. 수성 워크업 다음에, 수득한 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-50% 메탄올)로 정제하고 생성물-함유 분획을 풀링하고 농축하여 무색 오일/백색 고체 혼합물을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-25% EtOAc)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)-2,2-디메틸프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (85 mg, 0.1 mmol, 13%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.65 min. MS (ES): C52H102N2O6에 대한 m/z (MH+) 852.01. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.32 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6.1 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 2.99 (d, 2H, J = 4.6 Hz); 2.37 (t, 4H, J = 7.4 Hz); 2.32-2.19 (m, 6H); 1.69-1.55 (m, 6H); 1.54-1.37 (m, 16H); 1.36-1.15 (m, 49H); 0.91-0.84 m, 15H).
Figure pct00414
0 ℃으로 냉각된 2 mL DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)-2,2-디메틸프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (85 mg, 0.1 mmol)의 용액에 디에틸 에테르 (0.5 mL, 과잉) 중 2M 염화수소 용액을 교반하면서 첨가하여 무색 용액을 얻었다. 이것을 실온으로 가온되도록 하고, 그 다음 40 ℃로 가열하고 2시간 동안 교반하고 그 후 개시 물질은 LC/MS에 의해 남아 있지 않았다. 용액을 실온으로 냉각되도록 하고 질소의 스트림에서 농축하고, 잔류물을 에테르에 재용해시키고, 농축하고 고진공 하에서 밤새 배치하여 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노-2,2-디메틸프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (79.3 mg, 0.096 mmol, 96%)을 무색 포움성 고체로서 얻었다 (디하이드로클로라이드인 것으로 추정). 추가 정제없이 운반했다. UPLC/ELSD: RT = 3.12 min. MS (ES): C47H94N2O4에 대한 m/z (MH+) 751.97.
Figure pct00415
0 ℃으로 냉각된 2 mL 건조 DCM 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노-2,2-디메틸프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (디하이드로클로라이드인 것으로 추정)(79 mg (0.096 mmol) 및 트리에틸아민 (41 uL, 0.29 mmol)의 용액에 아세트산 무수물 (13 uL, 0.15 mmol)을 교반하면서 적가했다. 15분 후, 냉각욕을 제거하고 수득한 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 개시 아민이 LC/MS에 의해 남아 있지 않았고, 이로써 황색 용액을 DCM으로 희석하고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 2회 세정하고, 염수로 1회 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-아세트아미도-2,2-디메틸프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (56 mg, 0.07 mmol, 73%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.52 min. MS (ES): C49H96N2O5에 대한 m/z (MH+) 793.95. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.06 (t, 1H, J = 4.2 Hz); 4.86 (quint., 1H, J = 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.13 (d, 2H, J = 4.6 Hz); 2.41 (t, 4H, J = 7.4 Hz); 2.35-2.21 (m, 6H); 1.94 (s, 3H); 1.69-1.56 (m, 6H); 1.55-1.39 (m, 8H); 1.38-1.13 (m, 48H); 0.95-0.82 m, 15H).
GU. 화합물 287: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-6-( 시아노이미노 )-2,5-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-2,5,7,11-테트라아자노나데칸-19-오에이트
Figure pct00416
화합물 287을 화합물 168과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)로부터 제조하고, 단, N,N,N '-트리메틸에틸렌-1,2-디아민 (90 uL, 0.69 mmol)을 디메틸아민 용액 대신에 사용하고 제2 단계를 70 ℃에서 2일 동안 수행했다. 수성 워크업 다음에, 수득한 흐린 옅은 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-6-(시아노이미노)-2,5-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-2,5,7,11-테트라아자노나데칸-19-오에이트 (172 mg, 0.35 mmol, 57%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.00 min. MS (ES): C52H102N6O4에 대한 m/z (MH+) 876.20. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 8.68 (br. s., 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.54-3.43 (m, 2H); 3.31 (t, 2H, J = 4.8 Hz); 3.03 (s, 3H); 2.55-2.44 (m, 4H); 2.44-2.33 (br. s, 3H); 2.32-2.23 (m, 10H); 1.74-1.55 (m, 8H); 1.54-1.37 (m, 8H); 1.36-1.18 (m, 49H); 0.87 (t, 9H, J = 6.8 Hz).
GV . 화합물 288: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-9-( 시아노이미노 )-2- 메틸 -14-(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)-5-옥사-2,8,10,14-테트라아자도코산-22-오에이트
Figure pct00417
화합물 288을 화합물 168과 유사하게 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (250 mg, 0.35 mmol)로부터 제조하고, 단, 2-(2-아미노에톡시)-N,N-디메틸에탄-1-아민 (110 uL, 0.76 mmol)을 디메틸아민 용액 대신에 사용하고 제2 단계를 2일 동안 75 ℃에서 수행했다. 수성 워크업 다음에, 수득한 옅은 황색 오일을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-9-(시아노이미노)-2-메틸-14-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-5-옥사-2,8,10,14-테트라아자도코산-22-오에이트 (147 mg, 0.16 mmol, 47%)을 무색 오일로서 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.07 min. MS (ES): C53H104N6O5에 대한 m/z (MH+) 906.05. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 6.95 (br. s., 1H); 6.18 (br. s, 1H); 4.86 (quint., 1H, J = 6.2 Hz); 4.05 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.56 (t, 4H, J = 5.6 Hz); 3.37 (q, 2H, J = 5.0 Hz); 3.26 (q, 2H, J = 5.6 Hz); 2.52 (q, 4H, J = 6.2 Hz); 2.44 (t, 4H, J = 7.6 Hz); 2.35-2.20 (m, 10H); 1.75-1.55 (m, 8H); 1.54-1.38 (m, 8H); 1.37-1.15 (m, 48H); 0.87 (t, 9H, J = 6.4 Hz).
GW . 화합물 289: 헵타데칸 -9-일 8-((8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-(티아졸-2-일아미노)프로필) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00418
tert-부틸티아졸-2-일 카바메이트 (276 mg, 1.38 mol) 및 트리페닐 포스핀 (544 mg, 2.07 mmol)를 함유하는 테트라하이드로푸란 (20 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-하이드록시프로필)(8-노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (1.0 g, 1.38 mmol)의 용액에 0 ℃에서 디이소프로필아조 디카복실레이트 (DIAD) (0.4 mL, 2.07 mmol)을 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% EtOAc)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)(티아졸-2-일)아미노)프로필) (8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (512 mg, 0.56 mmol, 41%)을 무색 오일로서 얻었다 (불순물로서 DIAD 부산물을 함유함). MS (APCI): C53H99N3O6S에 대한 m/z (MH+) 906.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.39 (d, 1H, J = 3.6 Hz); 6.89 (d, 1H, J = 3.6 Hz); 4.87-4.80 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.51-2.48 (m, 2H); 2.41-2.37 (m, 4H); 2.26 (dt, 4H, J = 7.5 Hz, 3.7 Hz); 1.84-1.79 (m, 2H); 1.62-1.57 (m, 12H); 1.49-1.41 (m, 5H,); 1.39-1.24 (m, 56H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
Figure pct00419
디클로로메탄 (15 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)(티아졸-2-일)아미노)프로필) (8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (512 mg, 0.56 mmol)의 용액에 0 ℃에서 트리플루오로아세트산 (10 mL)을 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그것을 포화된 중탄산나트륨 용액으로 0 ℃에서 켄칭했다. 유기층을 포화된 중탄산나트륨 용액으로 세정하고, 0.1 N 수산화나트륨 용액 및 염수로 세정했다. 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 유기층을 여과하고, 그리고 용매를 진공 하에서 제거하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% EtOAc)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)(3-(티아졸-2-일아미노)프로필) 아미노)옥타노에이트 (280 mg, 0.34 mmol, 61%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (214 nm): RT = 7.01 min. MS (APCI): C48H91N3O4S에 대한 m/z (MH+) 806.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.09 (d, 1H, J = 3.6 Hz); 6.96 (bs, 1H); 6.42 (d, 1H, J = 3.9 Hz); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.39-3.35 (m, 2H); 2.54 (t, 2H, J = 5.7 Hz); 2.40-2.35 (m, 4H); 2.26 (dt, 4H, J = 3.7 Hz, 7.5 Hz); 1.77-1.73 (m, 2H); 1.61-1.57 (m, 6H); 1.48-1.43 (m, 8H); 1.29-1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
GX . 화합물 290: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-((2-메톡시에틸)아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00420
디에틸 에테르 (50 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.69 mmol)의 용액에 0 ℃에서 3,4-디메톡시사이클로부트-3-엔-1,2-디온 (148 mg, 1.04 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. LCMS는 개시 물질의 부재를 나타내었다. 그 다음 테트라하이드로푸란 (3.5 mL) 중 2-메톡시에탄-1-아민 (0.6 mL, 6.9 mmol)의 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 농축시키고 정제된 by 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((2-((2-메톡시에틸)아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (350 mg, 58%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): 6.91 min. MS (CI): C52H97N3O7에 대한 m/z (MH+) 876.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.10 (bs, 1H); 6.20 (bs, 1H); 4.86-4.82 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.76-3.68 (m, 4H); 3.52 (t, 2H, J = 4.8 Hz); 3.35 (s, 3H); 2.53 (t, 2H, J = 6.0 Hz); 2.39-2.36 (m, 4H); 2.31-2.25 (m, 4H); 1.75-1.71 (m, 2H); 1.66-1.55 (m, 6H); 1.50-1.48 (m, 4H); 1.40-1.38 (m, 4H); 1.29- 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
GY . 화합물 291: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((3,4- 디옥소 -2-(피페리딘-1-일) 사이클로부트 -1-엔-1-일) 아미노)프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00421
화합물 291을 화합물 290과 유사하게 제조하지만, 피페리딘 대신에 2-메톡시에탄-1-아민을 사용했다. 밝은 황색 오일, 290 mg, 47%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.70 min. MS (CI): C54H99N3O6에 대한 m/z (MH+) 886.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.01 (bs, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.93-3.92 (m, 2H); 3.59 (bs, 4H); 2.63-2.60 (m, 2H); 2.39 (m, 4H); 2.31-2.24 (m, 4H); 1.72-1.54 (m, 17H); 1.49-1.48 (m, 5H); 1.38- 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
GZ . 화합물 292: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-( 에틸아미노 )-3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일) 아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00422
화합물 292을 화합물 290와 유사하게 제조하지만, 2-메톡시에탄-1-아민 대신에 에틸아민을 사용했다. 밝은 황색 고무질 고체, 135 mg, 23%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.81 min. MS (CI): C51H95N3O6에 대한 m/z (MH+) 846.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 6.20 (bs, 1H); 4.86-4.82 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.69-3.56 (m, 4H); 2.56 (t, 2H, J = 5.5 Hz); 2.44-2.39 (m, 4H); 2.31-2.25 (m, 4H); 1.76-1.72 (m, 2H); 1.70-1.52 (m, 9H); 1.51-1.44 (m, 5H); 1.42-1.38 (m, 4H); 1.28- 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
HA. 화합물 293: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-( 디에틸아미노 )-3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일) 아미노)프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00423
화합물 293을 화합물 290와 유사하게 제조하지만, 디에틸아민을 2-메톡시에탄-1-아민 대신에 사용했다. 황색 오일, 315 mg, 52%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.63 min. MS (CI): C53H99N3O6에 대한 m/z (MH+) 874.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.52 (bs, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.93-3.91 (m, 2H); 3.53 (m, 4H,), 2.62-2.59 (m, 2H); 2.41-2.39 (m, 4H); 2.30-2.24 (m, 4H); 1.72 (m, 2H); 1.61-1.58 (m, 11H); 1.50-1.48 (m, 5H); 1.40-1.37 (m, 4H); 1.29- 1.20 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
HB . 화합물 294: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2- 모폴리노 -3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일) 아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00424
화합물 294을 화합물 290와 유사하게 제조하지만, 2-메톡시에탄-1-아민 대신에 모폴린을 사용했다. 밝은 황색 오일, 297 mg, 48%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.67 min. MS (CI): C53H97N3O7에 대한 m/z (MH+) 888.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.12 (bs, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.92-3.91 (m, 2H); 3.77-3.73 (m, 4H); 3.67-3.66 (m, 4H); 2.62-2.60 (m, 2H); 2.41-2.36 (m, 4H); 2.31-2.25 (m, 4H); 1.72-1.71 (m, 2H); 1.63-1.58 (m, 10H); 1.50-1.48 (m, 4H); 1.29- 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
HC. 화합물 295: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-( 비스(2-메톡시에틸)아미노 )-3,4-디옥소사이클로부트-1 -엔-1-일)아미노)프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00425
화합물 295을 화합물 290와 유사하게 제조하지만, 2-메톡시에탄-1-아민 대신에 비스(2-메톡시에틸)아민을 사용했다. 황색 오일, 215 mg, 33%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.73 min. MS (CI): C55H103N3O8에 대한 m/z (MH+) 934.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 6.74 (t, 1H, J = 5.9 Hz); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.77-3.71 (m, 4H); 3.57-3.56 (m, 4H); 3.35 (s, 6H); 2.50-2.47 (m, 2H); 2.40-2.36 (m, 4H); 2.30-2.24 (m, 4H); 1.77 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 1.62-1.52 (m, 8H); 1.50-1.42 (m, 4H); 1.40-1.36 (m, 4H); 1.29-1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
HD. 화합물 296: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-(4-메틸피페라진-1-일)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00426
화합물 296을 화합물 290와 유사하게 제조하지만, 2-메톡시에탄-1-아민 대신에 N-메틸 피페라진을 사용했다. 황색 오일, 210 mg, 34%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.28 min. MS (APCI): C54H100N4O6에 대한 m/z (MH+) 901.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.05 (bs, 1H); 4.87-4.82 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.91-3.90 (m, 2H); 3.70 (bs, 4H); 2.71 (m, 2H); 2.48-2.45 (m, 8H); 2.31 (s, 3H); 2.28-2.26 (m, 4H); 1.71-1.58 (m, 10H); 1.52-1.48 (m, 6H), 1.30- 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
HE. 화합물 297: 노닐 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(메틸)아미노)-7-하이드록시옥타노에이트
단계 1: 노닐 옥트-7-에노에이트
Figure pct00427
화학식: C17H32O2
분자량: 268.44
DCM (70　mL) 중 옥트-7-에노산 (2　g, 14.065　mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘 (0.344　g, 2.813　mmol)　및 1-노나놀 (2.435　g, 16.878　mmol)의 용액에 EDC (2.696　g, 14.065　mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 16시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 DCM으로 희석하고 포화 수성 중탄산나트륨으로 추출했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-20% 에틸 아세테이트)로 정제하여 노닐 옥트-7-에노에이트 (2.1　g, 7.82　mmol, 56%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ ppm 5.83 (m, 1H); 4.98 (m, 2H); 4.08 (t, 2H); 2.32 (t, 2H); 2.08 (m, 2H); 1.65 (m, 4H); 1.50-1.19 (m, 16H); 0.90 (m, 3H).
단계 2: 노닐 6-(옥시란-2-일)헥사노에이트
Figure pct00428
화학식: C17H32O3
분자량: 284.44
DCM (38　mL)중 노닐 옥트-7-에노에이트 (2.07　g, 7.71　mmol)의 용액에 0 ℃에서 DCM (38 mL) 중 3-클로로퍼벤조산 (2.129　g, 8.64　mmol)의 용액을 첨가했다. 2시간 후 반응을 rt로 가온되도록 하고 16시간 동안 교반했다. 반응을 DCM으로 희석하고 포화 수성 중탄산나트륨으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% 에틸 아세테이트)로 정제하여 노닐 6-(옥시란-2-일)헥사노에이트 (1.1　g, 3.86　mmol, 50%)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 2H); 2.92 (m, 1H); 2.77 (t, 1H); 2.48 (m, 1H); 2.33 (t, 2H); 1.71-1.26 (m, 22H); 0.91 (m, 3H).
단계 3: 노닐 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )( 메틸 )아미노)-7- 하이드록시옥타노에이트
Figure pct00429
화학식: C43H85NO5
분자량: 696.15
고-압력관에 노닐 6-(옥시란-2-일)헥사노에이트 (0.173　g, 0.61　mmol),　헵타데칸-9-일 8-(메틸아미노)옥타노에이트 (0.25　g, 0.61　mmol)　및 촉매량의　리튬 퍼클로레이트 (0.003　g, 0.03　mmol)을 첨가했다. 용기를 밀봉하고 반응을 60분 동안 100 ℃로 가열시켰다. 반응을 실온으로 냉각되도록 하고, 헥산에 용해시키고 정제된 by 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40% 에틸 아세테이트)로 정제하여 노닐 8-{[8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸](메틸)아미노}-7-하이드록시옥타노에이트 (0.097　g, 0.14　mmol, 23%)를 얻었다. LC/ELSD: RT = 3.33 min. MS (ES): C43H85NO5에 대한 m/z (MH+) 697.11. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.66 (br. m, 2H); 2.50 (br., m, 1H); 2.43-2.20 (m, 10H); 1.76-1.19 (m, 60H); 0.90 (m, 9H).
HF. 화합물 298: 노닐 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(2-하이드록시에틸)아미노)-7-하이드록시옥타노에이트
Figure pct00430
화학식: C44H87NO6
분자량: 726.18
화합물 298을, 헵타데칸-9-일 8-(메틸아미노)옥타노에이트를 대신에 사용하고 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)아미노)옥타노에이트를 사용하여 화합물 297과 유사하게 제조했다. 수율은 0.121 g (0.167 mmol, 29%)였다. LC/ELSD: RT = 3.32 min. MS (ES): C44H87NO6에 대한 m/z (MH+) 727.12. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.66 (br. m, 3H); 2.79 (m, 1H); 2.69-2.24 (m, 10H); 1.74-1.22 (m, 60H); 0.90 (m, 9H) (일차 하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
HG. 화합물 299: 헵타데칸 -9-일 7- 하이드록시 -8-( 메틸(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노 )옥타노에이트
단계 1: 헵타데칸 -9-일 옥트 -7- 에노에이트
Figure pct00431
화학식: C25H48O2
분자량: 380.66
헵타데칸-9-일 옥트-7-에노에이트를, 헵타데칸-9-올 및 옥트-7-에노산을 사용하여 노닐 옥트-7-에노에이트와 동일한 방식으로 합성했다. 수율은 2.15 g (5.65 mmol, 80%)였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.83 (m, 1H); 5.08-4.81 (m, 3H); 2.31 (t, 2H); 2.06 (m, 2H); 1.73-1.15 (m, 34H); 0.90 (m, 6H).
단계 2: 헵타데칸-9-일 6-(옥시란-2-일)헥사노에이트
Figure pct00432
화학식: C25H48O3
분자량: 396.66
헵타데칸-9-일 6-(옥시란-2-일)헥사노에이트를, 헵타데칸-9-일 옥트-7-에노에이트를 사용하여 노닐 6-(옥시란-2-일)헥사노에이트와 동일한 방식으로 합성했다. 수율은 1.45g (3.66 mmol, 69%)였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (p, 1H); 2.92 (m, 1H); 2.77 (t, 1H); 2.48 (m, 1H); 2.32 (t, 2H); 1.74-1.21 (m, 36H); 0.90 (m, 6H).
단계 3: 노닐 8-( 메틸아미노 ) 옥타노에이트
Figure pct00433
화학식: C18H37NO2
분자량: 299.49
노닐 8-브로모옥타노에이트 (1　g, 2.86　mmol)를 수용하는 플라스크에 THF 중 메틸아민의 2M 용액 (42.9　mL, 85.87　mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 16시간 동안 교반되도록 하고, 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석하고 포화된 중탄산나트륨 용액으로 세정했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-20% MeOH)로 정제하여 노닐 8-(메틸아미노)옥타노에이트 (0.625 g, 2.86 mmol, 73%)를 얻었다. LC/ELSD: RT = 1.19 min. MS (ES): C18H37NO2에 대한 m/z (MH+) 300.17. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.08 (t, 2H); 2.60 (t, 2H); 2.46 (s, 3H); 2.31 (t, 2H); 1.91-1.45 (m, 7H); 1.33 (m, 18H); 0.90 (m, 3H).
단계 4: 헵타데칸 -9-일 7- 하이드록시 -8-( 메틸(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노 )옥타노에이트
Figure pct00434
화학식: C43H85NO5
분자량: 696.16
화합물 299을, 노닐 8-(메틸아미노)옥타노에이트 및 헵타데칸-9-일 6-(옥시란-2-일)헥사노에이트를 사용하여 화합물 297과 동일한 방식으로 합성했다. 수율은 0.152 mg (0.218 mmol, 39%)였다. LC/ELSD: RT = 3.25 min. MS (ES): C43H85NO5에 대한 m/z (MH+) 697.85. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.89 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.66 (br. m, 1H); 2.52 (br., m, 1H); 2.31 (br. m, 10H); 1.75-1.20 (m, 60H); 0.90 (m, 9H) (하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
HH . 화합물 300: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
단계 1: 운데칸-3-일 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00435
디클로로메탄 (50 mL) 중 3-운데칸올 (4.14 g, 24 mmol), 8-브로모옥탄산 (8.01 g, 36 mmol) 및 DMAP (0.58 g, 4.8 mmol)의 용액에 0 ℃에서 EDCI (6.9 g, 36 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. TLC는 반응의 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 염산의 용액 (10 mL 농축 HCl, 90 mL 물, 7.5 g 염화나트륨)을 20분에 걸쳐 아주 느리게 첨가했다. 그 다음 아세토니트릴 (100 mL) 및 헥산 (100 mL)을 첨가하고, 층을 분리하고 유기층을 건조시키고 진공에서 제거하여 오일을 얻었다. 오일을 헥산 (100 mL)에 용해시키고 아세토니트릴 (100 mL) 및 5% 수성 중탄산나트륨 용액 (100 mL)의 혼합물로 세정했다. 헥산 층을 분리하고 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 헥산으로 세정하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 운데칸-3-일 8-브로모옥타노에이트 (8.76 g, 97%)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.82-4.76 (m, 1H); 3.39 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.44 (t, 0.3H, J = 7.4 Hz, CH 2Cl에 대한); 2.28 (t, 2H, J = 7.5 Hz, CH 2Br에 대한); 1.88-1.79 (m, 2H); 1.70-1.42 (m, 6H); 1.38-1.17 (m, 18H); 0.88-0.82 (m, 6H).
단계 2: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)프로필)아미노)옥타노에이트
Figure pct00436
500 mL 에탄올 중 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (69.2 g, 0.15 몰) 및 tert-부틸 (3-아미노프로필)카바메이트 (130.6 g, 0.75 몰)의 용액을 밤새 65 ℃로 가열시켰다. 반응 혼합물을 농축하고, 그리고 조물질을 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-20% 메탄올)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)아미노)옥타노에이트 (62 g, 74%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. MS (CI): C33H66N2O4에 대한 m/z (MH+) 555.5. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.15 (bs, 1H); 4.85 (quint., 1H, J = 6.0 Hz); 3.17 (m, 2H); 2.65 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.56 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 2.26 (t, 2H, J = 7.6 Hz); 1.68-1.56 (m, 6H); 1.46 (m, 5H); 1.43 (s, 9H); 1.24 (m, 30H); 0.86 (t, 6H, J = 6.6 Hz).
단계 3: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00437
탄산칼륨 (6.02 g, 43 mmol) 및 요오드화칼륨 (1.97 g, 12 mmol)를 함유하는 사이클로펜틸 메틸 에테르 (50 mL) 및 아세토니트릴 (50 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)아미노)옥타노에이트 (6.0 g, 12 mmol) 및 운데칸-3-일 8-브로모옥타노에이트 (4.27 g, 11 mmol)의 용액을 86 ℃에서 18시간 동안 가열했다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세정하고, 여과물을 진공 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% EtOAc)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (6.8 g, 74%)을 오일로서 얻었다. MS (CI): C52H102N2O6에 대한 m/z (MH+) 851.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.66 (m, 1H); 4.87-4.80 (m, 2H); 3.17 (m, 2H); 2.42 (t, 2H, J = 6.3 Hz); 2.35-2.24 (m, 8H); 1.64-1.56 (m, 12H); 1.53-1.44 (m, 9H); 1.44-1.36 (m, 3H); 1.42 (s, 9H); 1.32-1.12 (m, 42H); 0.86 (t, 12H, J = 6.4Hz).
단계 4: 헵타데칸 -9-일 8-((3-아미노프로필)(8-옥소-8-( 운데칸 -3- 일옥시 ) 옥 틸) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00438
디클로로메탄 (30 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (6.8 g, 7.99 mmol)의 용액에 0 ℃에서 트리플루오로아세트산 (10 mL)을 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응을 0 ℃에서 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 켄칭했다. 유기층을 포화 수성 바이카보네이트 용액, 0.1 N 수산화나트륨 용액 및 염수로 세정했다. 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 용매를 진공 하에서 제거하여 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (5.7 g, 97%)을 오일로서 얻었다. MS (CI): C47H94N2O4에 대한 m/z (MH+) 751.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.87-4.79 (m, 2H); 2.70 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 2.42-2.33 (m, 6H); 2.27 (dt, 4H, J = 2.8 Hz, 7.4 Hz); 1.68-1.46 (m, 22H); 1.44-1.35 (m, 4H); 1.34-1.16 (m, 42H); 0.88-0.84 (m, 12H).
단계 5: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00439
화합물 300을 화합물 168과 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.66 mmol)을 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-시아노-3,3-디메틸구아니디노) 프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (240 mg, 43%)을 무색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 8.60 min. MS (CI): C51H99N5O4에 대한 m/z (MH+) 846.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.59 (bs, 1H); 4.87-4.80 (m, 2H); 3.70-3.64 (m, 2H); 3.03 (s, 6H); 2.69-2.42 (m, 4H); 2.28 (dd, 4H, J = 3.0 Hz, 7.4 Hz); 1.71-1.42 (m, 26H); 1.36-1.16 (m, 42H); 0.88-0.84 (m, 12H).
HI. 화합물 301: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00440
화합물 301을 화합물 182와 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.66 mmol)을 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (180 mg, 32%)을 백랍성 고체로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.77 min. MS (CI): C52H97N3O6에 대한 m/z (MH+) 860.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.86-4.79 (m, 2H); 3.66 (bs, 2H); 3.25 (d, 3H, J = 4.9 Hz); 2.56-2.52 (m, 2H); 2.42-2.37 (m, 4H); 2.28 (dd, 4H, J = 2.7 Hz, 7.4 Hz); 1.78-1.68 (m, 3H); 1.64-1.50 (m, 16H); 1.48-1.38 (m, 6H); 1.32-1.18 (m, 43H); 0.88-0.84 (m, 12H).
HJ . 화합물 302: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3,3- 디메틸티오우레이도 )프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00441
화합물 302을 화합물 111과 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.66 mmol)을 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(3,3-디메틸티오우레이도)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노) 옥타노에이트 (140 mg, 25%)을 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.03 min. MS (CI): C50H99N3O4S에 대한 m/z (MH+) 838.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.87-4.80 (m, 2H); 3.83 (bs, 2H); 3.27 (s, 6H); 2.91-2.64 (m, 4H); 2.27 (dd, 4H, J = 3.1 Hz, 7.5 Hz); 1.68-1.42 (m, 27H); 1.38-1.12 (m, 42H); 0.88-0.84 (m, 12H).
HK . 화합물 303: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((1-( 메틸아미노 )-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00442
화합물 303을 화합물 170과 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.66 mmol)을 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((1-(메틸아미노)-2-니트로비닐)아미노)프로필) (8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (270 mg, 40%)을 오일로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 8.19 min. MS (CI): C50H98N4O6에 대한 m/z (MH+) 851.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3 , 25 ℃에서): δ ppm 10.15 (bs, 1H); 8.36, 8.22 (bs, 1H); 6.55 (s, 0.5H); 6.53 (s, 0.5H); 4.85-4.80 (m, 2H); 3.32-3.23 (m, 2H); 2.85 (d, 1.5H, J = 4.9 Hz); 2.74-2.72 (m, 1.5H); 2.64 (m, 1H); 2.46-2.44 (m, 5H); 2.28 (dd, 4H, J = 2.7 Hz, 7.4 Hz); 1.76 (m, 2H); 1.68-1.38 (m, 22H); 1.31-1.18 (m, 42H); 0.88-0.84 (m, 12H). 1H NMR (300 MHz, 60 ℃에서 CDCl3): δ ppm 10.15 (bs, 1H); 7.70 (bs, 1H); 6.51 (s, 1H); 4.86-4.80 (m, 2H); 3.27 (m, 2H); 2.82 (bs, 3H); 2.64-2.39 (m, 6H); 2.28 (m, 4H); 1.76 (m, 2H); 1.68-1.38 (m, 22H); 1.31-1.18 (m, 42H); 0.88-0.84 (m, 12H).
HL . 화합물 304: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 메톡시아세트아미도 )프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00443
화합물 303을 화합물 170과 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.66 mmol)을 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(2-메톡시아세트아미도)프로필)(8-옥소-8-(운데칸-3-일옥시)옥틸)아미노)옥타노에이트 (290 mg, 53%)을 오일로서 얻었다. HPLC/UV (210 nm): RT = 8.52 min. MS (CI): C50H98N2O6에 대한 m/z (MH+) 823.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.59-7.56 (m, 1H); 4.87-4.80 (m, 2H); 3.86 (s, 2H); 3.38 (s, 3H); 3.38-3.32 (m, 2H); 2.48-2.32 (m, 6H); 2.27 (dd, 4H, J = 2.7 Hz, 7.5 Hz); 1.68-1.36 (m, 24H); 1.34-1.18 (m, 42H); 0.88-0.83 (m, 12H).
HM . 화합물 305: 7 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-(2- 메톡시아세트아미도 )프로필) 아미노) 헵틸 데카노에이트
Figure pct00444
화합물 305을 화합물 178과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 밝은 황색 오일, 230 mg, 42%. HPLC/UV (210 nm): RT = 5.76 min. MS (CI): C48H94N2O6에 대한 m/z (MH+) 795.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.57 (bs, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.86 (s, 2H); 3.38 (s, 3H); 3.38-3.31 (m, 2H); 2.35-2.42 (m, 2H); 2.35-2.33 (m, 4H); 2.27 (dd, 2H, J = 2.9 Hz, 7.4 Hz); 1.68-1.52 (m, 11H); 1.50-1.38 (m, 11H); 1.34-1.18 (m, 44H); 0.86 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
HN . 화합물 306: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3,3- 디메틸티오우레이도 )프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
단계 1: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00445
탄산칼륨 (5.53 g, 40 mmol) 및 요오드화칼륨 (2.49 g, 15 mmol)를 함유하는 사이클로펜틸 메틸 에테르 (80 mL) 및 아세토니트릴 (80 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)아미노)옥타노에이트 (5.55 g, 10 mmol), 운데실 6-브로모헥사노에이트 (5.24 g, 15 mmol)의 용액을 86 ℃에서 18시간 동안 가열했다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 세정하고, 여과물을 진공 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% EtOAc, 그 다음 1:1 아세톤/헥산)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (6.2 g, 73%)을 오일로서 얻었다. MS (CI): C50H98N2O6에 대한 m/z (MH+) 823.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.64 (bs, 1H); 4.85 (quint, 1H, J = 6.3 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.17 (m, 2H); 2.42 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 2.35-2.24 (m, 8H); 1.64-1.56 (m, 8H); 1.53-1.44 (m, 8H); 1.42 (s, 9H); 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
단계 2: 헵타데칸 -9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-( 운데실옥시 ) 헥실 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00446
디클로로메탄 (75 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (6.2 g, 7.53 mmol)의 용액에 0 ℃에서 트리플루오로아세트산 (5.8 mL)을 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응을 0 ℃에서 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 켄칭했다. 유기층을 포화 수성 바이카보네이트 용액, 0.1 N 수산화나트륨 용액 및 염수로 세정했다. 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후, 용매를 진공 하에서 제거하여 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (5.57 g, quant.)을 황색 오일로서 얻었다. MS (CI): C45H90N2O4에 대한 m/z (MH+) 723.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.85 (quint, 1H, J = 6.3 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.85 (t, 2H, J = 6.3 Hz); 2.53 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 2.45-2.37 (m, 4H); 2.28 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 2.26 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 1.70-1.55 (m, 8H); 1.54-1.40 (m, 8H); 1.24 (m, 50H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
단계 3: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3,3- 디메틸티오우레이도 )프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00447
화합물 306을 화합물 111과 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.66 mmol)을 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-(3,3-디메틸티오우레이도)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (320 mg, 57%)을 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (210 nm): RT = 5.98 min. MS (CI): C48H95N3O4S에 대한 m/z (MH+) 810.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.03 (bs, 1H); 4.85 (quint, 1H, J = 6.3 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.70 (m, 2H); 3.20 (s, 6H); 2.57 (m, 2H); 2.42 (m, 4H); 2.28 (m, 4H); 1.71 (m, 2H); 1.62 (m, 6H); 1.54-1.40 (m, 8H); 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
HO. 화합물 307: 7 -((3-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )프로필)(8-( 헵타데 칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 데카노에이트
Figure pct00448
화합물 307을 화합물 168과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 무색 오일, 160 mg, 28%. HPLC/UV (214 nm): RT = 5.88 min. MS (CI): C49H95N5O4에 대한 m/z (MH+) 818.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.68-3.64 (m, 2H); 3.02 (s, 6H); 2.79-2.48 (m, 4H,); 2.27 (dd, 4H, J = 1.6 Hz, 7.4 Hz); 1.89 (bs, 1H); 1.68-1.42 (m, 21H); 1.38-1.16 (m, 45H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
HP. 화합물 308: 7 -((3-(3,3- 디메틸티오우레이도 )프로필)(8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8-옥소옥틸) 아미노)헵틸 데카노에이트
Figure pct00449
화합물 308을 화합물 111과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 황색 오일, 150 mg, 27%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.77 min. MS (CI): C48H95N3O4S에 대한 m/z (MH+) 810.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.20 (bs, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.73 (bs, 2H); 3.23 (s, 6H); 2.68-2.38 (m, 4H,); 2.30-2.25 (m, 4H); 1.68-1.42 (m, 22H); 1.38-1.14 (m, 44H); 0.86 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
HQ . 화합물 309: 7 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-((2-( 메틸아미노 )-3,4-디옥소 사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)아미노)헵틸 데카노에이트
Figure pct00450
화합물 309을 화합물 182과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 백랍성 고체, 190 mg, 28%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.71 min. MS (CI): C50H93N3O6에 대한 m/z (MH+) 832.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.86-4.82 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.64 (bs, 2H); 3.25 (d, 3H, J = 4.9 Hz); 2.53 (t, 2H, J = 5.6 Hz); 2.42-2.37 (m, 4H); 2.28 (t, 4H, J = 7.5 Hz); 1.76-1.71 (m, 2H); 1.64-1.58 (m, 10H); 1.52-1.38 (m, 9H); 1.30-1.18 (m, 44H); 0.86 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
HR. 화합물 310: 7 -((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-((1-( 메틸아미 노)-2-니트로비닐) 아미노)프로필)아미노)헵틸 데카노에이트
Figure pct00451
화합물 310을 화합물 170과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 갈색 오일, 195 mg, 28%. HPLC/UV (214 nm): RT = 6.15 min. MS (CI): C48H94N4O6에 대한 m/z (MH+) 823.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 25 ℃에서): δ ppm 10.14 (bs, 1H); 8.32 (s, 0.5H); 8.18 (s, 0.5H); 6.55 (s, 0.5H);, 6.53 (s, 0.5H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.33-3.23 (m, 2H); 2.86 (d, 1.5H, J = 5.2 Hz); 2.73 (bs, 1.5H); 2.65 (m,1H); 2.48 (m, 5H); 2.27 (t, 4H, J = 7.5 Hz); 1.77 (m, 2H); 1.67-1.58 (m, 10H); 1.49-1.43 (m, 8H); 1.30-1.14 (m, 44H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz). 1H NMR (300 MHz, 60℃에서 CDCl3): δ ppm 10.14 (bs, 1H); 7.70 (bs, 1H); 6.51 (s, 1H); 4.87-4.83 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.28 (bs, 2H); 2.83 (bs, 3H); 2.65-2.41 (m, 6H); 2.27 (t, 4H, J = 7.5 Hz); 1.77 (m, 2H); 1.67-1.58 (m, 10H); 1.49-1.43 (m, 8H); 1.30-1.14 (m, 44H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
HS. 화합물 311: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )프로필)(8-((2-메틸노닐)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00452
화합물 311을 화합물 168과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-((2-메틸노닐)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 무색 오일 350 mg, 62%. HPLC/UV (214 nm): RT = 6.04 min. MS (CI): C50H97N5O4에 대한 m/z (MH+) 832.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.62 (bs, 1H); 4.87-4.80 (m, 1H); 3.94 (dd, 1H, J = 5.9 Hz, 10.5 Hz); 3.83 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 10.7 Hz); 3.70-3.64 (m, 2H); 2.99 (s, 6H); 2.69-2.38 (m, 4H); 2.28 (dd, 4H, J = 7.6 Hz, 15.1 Hz); 1.80-1.52 (m, 7H); 1.52-1.16 (m, 58H); 0.91-0.82 (m, 12H).
HT. 화합물 312: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(2- 메톡시아세트아미도 )프로필)(8-((2-메틸 노닐) 옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00453
화합물 312을 화합물 178과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-((2-메틸노닐)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 무색 오일, 300 mg, 55%. HPLC/UV (210 nm): RT = 6.02 min. MS (CI): C49H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 809.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.56 (bs, 1H); 4.89-4.81 (m, 1H); 3.94 (dd, 1H, J = 5.7 Hz, 10.4 Hz); 3.83 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 10.7 Hz); 3.86 (s, 2H); 3.38 (s, 3H); 3.38-3.32 (m, 2H); 2.46 (m, 2H); 2.37-2.24 (m, 8H); 1.78-1.72 (m, 1H); 1.68-1.52 (m, 8H); 1.528-1.18 (m, 54H); 0.91-0.82 (m, 12H).
HU . 화합물 313: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
단계 1: ( Z )-논-2-엔-1-일 8-브로모옥타노에이트
Figure pct00454
디클로로메탄 중 시스-2-노넨-1-올 (10.0 g, 70 mmol), 8-브로모옥탄산 (23.43 g, 105 mmol) 및 DMAP (1.72 g, 14 mmol)의 용액에 0 ℃에서 EDCI (20.23 g, 105 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. TLC는 반응의 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 염산의 용액 (10 mL 농축 HCl, 90 mL 물, 7.5 g 염화나트륨)을 20분에 걸쳐 아주 느리게 첨가했다. 그 다음 아세토니트릴 (100 mL) 및 헥산 (100 mL)을 첨가하고, 층을 분리하고 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 및 진공 하에서 제거하여 오일을 얻었다. 이것을 헥산 (100 mL)에 용해시키고 아세토니트릴 (100 mL) 및 5% 수성 중탄산나트륨 (100 mL)의 혼합물로 세정했다. 헥산 층을 분리하고 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 헥산으로 세정하고 여과물을 농축하여 (Z)-논-2-엔-1-일 8-브로모옥타노에이트 (19.98 g, 82%)을 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.65-5.59 (m, 1H); 5.53-5.49 (m, 1H); 4.61 (d, 2H, J = 6.8 Hz); 3.92 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 2.44 (t, 0.5H, J =7.4 Hz, CH 2Cl에 대한); 2.29 (t, 2H, J = 7.4 Hz, CH 2Br에 대한); 2.08 (dd, 2H, J = 6.6 Hz, 13.7 Hz); 1.88-1.79 (m, 2H); 1.70-1.56 (m, 2H); 1.50-1.16 (m, 14H); 0.87 (t, 3H, J = 6.7 Hz).
단계 2: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-8-((3-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00455
에탄올 (50 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)아미노)옥타노에이트 (6.0 g, 12 mmol), (Z)-논-2-엔-1-일 8-브로모옥타노에이트 (4.49 g, 13 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.8 mL, 16 mmol)의 용액을 70 ℃에서 3일 동안 가열했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% EtOAc)로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (5.2 g, 60%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다. MS (CI): C50H96N2O6에 대한 m/z (MH+) 821.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.72-5.58 (m, 2H); 5.56-5.48 (m, 1H);4.87-4.83 (m, 1H); 4.60 (d, 2H, J = 6.6 Hz); 3.20-3.12 (m, 2H); 2.42 (t, 2H, J = 6.3 Hz); 2.35-2.24 (m, 9H); 2.12-2.02 (m, 4H); 1.68-1.56 (m, 8H); 1.42 (s, 9H); 1.50-1.12 (m, 47H); 0.88-0.84 (m, 9H).
단계 3: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-8-((3-아미노프로필)(8-(논-2-엔-1- 일옥시 )-8-옥소옥틸) 아미노)옥타노에이트
Figure pct00456
디클로로메탄 (20 mL) 중 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (5.2 g, 6.33 mmol)의 용액에 0 ℃에서 트리플루오로아세트산 (8 mL)을 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응을 포화 수성 중탄산나트륨 용액의 첨가로 0 ℃에서 켄칭했다. 유기층을 포화 수성 바이카보네이트 용액, 0.1 N 수산화나트륨 용액, 염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 용매를 진공 하에서 제거하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-아미노프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸) 아미노) 옥타노에이트 (4.2 g, 93%)을 오일로서 얻었다. MS (APCI): C45H88N2O4에 대한 m/z (MH+) 721.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.68-5.58 (m, 1H); 5.54-5.46 (m, 1H); 4.89-4.82 (m, 1H); 4.60 (d, 2H, J = 6.6 Hz); 2.72 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 2.44 (t, 2H, J = 7.4 Hz); 2.40-2.34 (m, 4H); 2.27 (dt, 4H, J = 7.5 Hz, 15.2 Hz); 2.11-2.03 (m, 2H); 1.84-1.72 (m, 4H); 1.68-1.55 (m, 6H); 1.54-1.46 (m, 6H); 1.44-1.16 (m, 44H); 0.86 (t, 9H, J = 6.5 Hz).
단계 4: 헵타데칸 -9-일 (Z)-8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00457
화합물 313을 화합물 182와 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-아미노프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸) 아미노)옥타노에이트 (500 mg, 0.66 mmol)을 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (200 mg, 29%)을 백랍성 고체로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.56 min. MS (CI): C50H91N3O6에 대한 m/z (MH+) 830.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.68-5.59 (m, 1H); 5.54-5.48 (m, 1H); 4.86-4.80 (m, 1H); 4.60 (d, 2H, J = 6.8 Hz); 3.72-3.58 (m, 2H); 3.25 (d, 3H, J = 4.9 Hz); 2.59-2.52 (m, 2H); 2.46-2.38 (m, 4H); 2.29 (dd, 4H, J = 7.2 Hz, 14.6 Hz); 2.08 (dd, 2H, J = 6.8 Hz, 14.0 Hz); 1.82-1.68 (m, 3H); 1.64-1.56 (m, 5H); 1.52-1.12 (m, 52H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
HV . 화합물 314: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((1-( 메틸아미노 )-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-((( Z )-논-2-엔-1-일)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00458
화합물 314을 화합물 170과 유사하게 제조하고, 단, 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-아미노프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸) 아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((1-(메틸아미노)-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(((Z)-논-2-엔-1-일)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (190 mg, 28%)을 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.30 min. MS (CI): C48H92N4O6에 대한 m/z (MH+) 821.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 25 ℃에서): δ ppm 10.13 (bs, 1H); 8.36, 8.22 (bs, 1H); 6.54 (s, 0.5H); 6.52 (s, 0.5H); 5.65-5.59 (m, 1H); 5.52-5.48 (m, 1H); 4.87-4.81 (m, 1H); 4.60 (d, 2H, J = 6.6 Hz); 3.38-3.22 (m, 2H); 2.85 (d, 1.5H, J = 5.2 Hz); 2.73-2.72 (m, 1.5H); 2.63 (m, 1H); 2.46 (m, 5H); 2.28 (dd, 4H, J = 7.5 Hz, 14.9 Hz); 2.08 (dd, 2H, J = 7.1 Hz, 14.0 Hz); 1.76 (m, 2H); 1.68-1.56 (m, 6H); 1.52-1.12 (m, 50H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz). 1H NMR (300 MHz, 60 ℃에서 CDCl3): δ ppm 10.15 (bs, 1H); 7.70 (bs, 1H); 6.51 (s, 1H); 5.65-5.59 (m, 1H); 5.52-5.48 (m, 1H); 4.87-4.81 (m, 1H); 4.60 (d, 2H, J = 6.6 Hz); 3.27 (bs, 2H); 2.81 (bs, 3H); 2.62-2.41 (m, 6H); 2.28 (dd, 4H, J = 7.5 Hz, 14.9 Hz); 2.08 (dd, 2H, J = 7.1 Hz, 14.0 Hz); 1.76 (m, 2H); 1.68-1.56 (m, 6H); 1.52-1.12 (m, 50H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
HW. 화합물 315: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(( Z )-2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )프로필)(8-(((Z)-논-2-엔-1-일)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00459
화합물 315을 화합물 168과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-아미노프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸) 아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((Z)-2-시아노-3,3-디메틸구아니디노)프로필)(8-(((Z)-논-2-엔-1-일)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (150 mg, 26%)을 무색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.55 min. MS (CI): C49H93N5O4에 대한 m/z (MH+) 816.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.66 (bs, 1H); 5.68-5.58 (m, 1H); 5.56-5.44 (m, 1H); 4.87-4.81 (m, 1H); 4.61 (d, 2H, J = 6.8 Hz); 3.72-3.64 (m, 2H); 2.98 (s, 6H); 2.59-2.54 (m, 2H); 2.44-2.38 (m, 4H); 2.28 (dd, 4H, J = 7.5 Hz, 15.2 Hz); 2.08 (dd, 2H, J = 7.1 Hz, 14.0 Hz); 1.68-1.58 (m, 7H); 1.52-1.42 (m, 5H); 1.38-1.12 (m, 46H); 0.88-0.84 (m, 9H).
HX . 화합물 316: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-8-((3-(2-메톡시아세트아미도)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00460
화합물 316을 화합물 178과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-아미노프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸) 아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(2-메톡시아세트아미도)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (220 mg, 40%)을 무색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (210 nm): RT = 5.73 min. MS (CI): C48H92N2O6에 대한 m/z (MH+) 793.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.59-7.56 (m, 1H); 5.68-5.58 (m, 1H); 5.54-5.48 (m, 1H); 4.87-4.81 (m, 1H); 4.60 (d, 2H, J = 6.8 Hz); 3.86 (s, 2H); 3.37 (s, 3H); 3.37-3.31 (m, 2H); 2.46 (t, 2H, J = 6.3 Hz); 2.37-2.24 (m, 8H); 2.08 (dd, 2H, J = 7.1 Hz, 13.7 Hz); 1.68-1.58 (m, 5H); 1.50-1.40 (m, 8H); 1.38-1.18 (m, 45H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
HY . 화합물 317: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-( 메틸아미노 )-3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일)아미노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00461
화합물 317을 화합물 182과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((2-(메틸아미노)-3,4-디옥소사이클로부트-1-엔-1-일)아미노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (180 mg, 32%)을 백랍성 고체로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 11.45 min. MS (CI): C50H93N3O6에 대한 m/z (MH+) 832.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.86-4.79 (m, 1H); 4.06 (t, 2H, J = 6.8 Hz); 3.66 (bs, 2H); 3.26 (d, 3H, J = 4.9 Hz); 2.56-2.52 (m, 2H); 2.40-2.25 (m, 8H); 1.78-1.68 (m, 2H); 1.64-1.55 (m, 8H); 1.48-1.38 (m, 8H); 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
HZ. 화합물 318: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((1-( 메틸아미노 )-2-니트로비닐)아미노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트
Figure pct00462
화합물 318을 화합물 170과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((3-((1-(메틸아미노)-2-니트로비닐)아미노)프로필)(6-옥소-6-(운데실옥시)헥실)아미노)옥타노에이트 (270 mg, 40%)을 황색 오일로서 얻었다, 270 mg, 40%. HPLC/UV (254 nm): RT = 8.74 min. MS (CI): C48H94N4O6에 대한 m/z (MH+) 823.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 25 ℃에서): δ ppm 10.15 (bs, 1H); 8.21, 8.13 (bs, 1H); 6.55 (s, 0.5H); 6.53 (s, 0.5H); 4.85 (quint, 1H, J = 6.3 Hz); 4.04 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.32-3.23 (m, 2H); 2.85 (d, 1.5H, J = 4.9 Hz); 2.74-2.72 (m, 1.5H); 2.64 (m, 1H); 2.46 (m, 5H); 2.28 (m, 4H); 1.76 (m, 2H); 1.66-1.53 (m, 6H); 1.53-1.40 (m, 8H); 1.24 (m, 48H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz). 1H NMR (300 MHz, 50 ℃에서 CDCl3): δ ppm 10.15 (bs, 1H); 7.79 (bs, 1H); 6.52 (s, 1H); 4.85 (m, 1H); 4.05 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 3.29 (m, 2H); 2.84 (bs, 3H); 2.64-2.44 (m, 6H); 2.28 (m, 4H); 1.76 (m, 2H); 1.61 (m, 6H); 1.53-1.40 (m, 8H); 1.24 (m, 48H); 0.86 (m, 9H).
IA. 화합물 319: 헵타데칸 -9-일 ( Z )-8-((3-(3,3-디메틸티오우레이도)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00463
화합물 319을 화합물 111과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-아미노프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸) 아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 수성 워크업 다음에, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-50% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 (Z)-8-((3-(3,3-디메틸티오우레이도)프로필)(8-(논-2-엔-1-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (110 mg, 20%)을 황색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.67 min. MS (CI): C48H93N3O4S에 대한 m/z (MH+) 808.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.72 (bs, 1H); 5.64-5.58 (m, 1H); 5.53-5.48 (m, 1H); 4.86-4.80 (m, 1H); 4.60 (d, 2H, J = 6.8 Hz); 3.78-3.77 (m, 2H); 3.26 (s, 6H); 2.91-2.64 (m, 4H); 2.27 (dd, 4H, J = 7.6 Hz, 15.3 Hz); 2.08 (dd, 4H, J = 6.7 Hz, 13.8 Hz); 1.68-1.42 (m, 12H); 1.38-1.12 (m, 46H); 0.88-0.84 (m, 9H).
IB . 화합물 320: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((1-( 메틸아미노 )-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-((2-메틸노닐)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00464
화합물 320을 화합물 170과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-((2-메틸노닐)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 황색 오일, 380 mg, 56%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.85 min. MS (CI): C49H96N4O6에 대한 m/z (MH+) 837.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 25 ℃에서): δ ppm 10.13 (bs, 1H); 8.36 (s, 0.5H); 8.22 (s, 0.5H); 6.55 (s, 0.5H); 6.53 (s, 0.5H); 4.87-4.81 (m, 1H); 3.94 (dd, 1H, J = 5.7 Hz, 10.4 Hz); 3.83 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 10.7 Hz); 3.38-3.23 (m, 2H); 2.85 (d, 1.5H, J = 5.1 Hz); 2.72 (d, 1.5H, J = 4.1 Hz); 2.63 (m, 1H); 2.46 (m, 5H); 2.28 (dd, 4H, J = 7.4 Hz, 15.1 Hz); 1.76 (m, 3H); 1.68-1.58 (m, 6H); 1.52-1.12 (m, 54H); 0.91-0.84 (m, 12H). 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 50℃에서):δ ppm 10.15 (bs, 1H); 7.89 (bs, 1H); 6.51 (s, 1H); 4.87-4.81 (m, 1H); 3.94 (dd, 1H, J = 5.7 Hz, 10.4 Hz); 3.83 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 10.7 Hz); 3.25 (bs, 2H); 2.87-2.72 (m, 3H); 2.63 (m, 1H); 2.46 (m, 5H); 2.28 (dd, 4H, J = 7.4 Hz, 15.1 Hz); 1.76 (m, 3H); 1.68-1.58 (m, 6H); 1.52-1.12 (m, 54H); 0.91-0.84 (m, 12H).
IC. 화합물 321: 헵타데칸 -9-일 8-((3-((2-( 메틸아미노 )-3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일) 아미노)프로필)(8-((2- 메틸노닐 ) 옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00465
화합물 321을 화합물 182과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-((2-메틸노닐)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 백랍성 고체, 240 mg, 41%. HPLC/UV (ELSD): RT = 7.10 min. MS (CI): C51H95N3O6에 대한 m/z (MH+) 846.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.86-4.80 (m, 1H); 3.93 (dd, 1H, J = 6.0 Hz, 10.7 Hz); 3.83 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 10.7 Hz); 3.68-3.58 (m, 2H); 3.25 (d, 3H, J = 4.9 Hz); 2.55-2.52 (m, 2H); 2.42-2.37 (m, 4H); 2.29 (dd, 4H, J = 7.7 Hz, 15.1 Hz); 1.80-1.68 (m, 3H); 1.66-1.56 (m, 10H); 1.52-1.38 (m, 9H); 1.32-1.12 (m, 42H); 0.91-0.82 (m, 12H).
ID. 화합물 322: 헵타데칸 -9-일 8-((3-(3,3-디메틸티오우레이도)프로필)(8-((2-메틸 노닐) 옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00466
화합물 322을 화합물 111과 유사하게 제조하지만, 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-((2-메틸노닐)옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 황색 오일, 150 mg, 27%. HPLC/UV (254 nm): RT = 7.27 min. MS (CI): C49H97N3O4S에 대한 m/z (MH+) 824.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.60 (bs, 1H); 4.87-4.82 (m, 1H); 3.94 (dd, 1H, J = 5.7 Hz, 10.7 Hz); 3.86-3.80 (m, 3H); 3.27 (s, 6H); 3.04-2.74 (m, 4H); 2.28 (dd, 4H, J = 7.6 Hz, 15.1 Hz); 1.80-1.72 (m, 3H); 1.68-1.42 (m, 12H); 1.38-1.18 (m, 50H); 0.91-0.82 (m, 12H).
IE . 화합물 323: 7 -((3-(2- 메톡시아세트아미도 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노) 헵틸 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00467
화합물 323을 화합물 178과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 황색 오일, 220 mg, 40%이다. HPLC/UV (214 nm): RT = 6.00 min. MS (CI): C48H94N2O6에 대한 m/z (MH+) 795.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.52 (m, 1H); 4.05-4.02 (m, 4H); 3.86 (s, 2H); 3.38 (s, 3H); 3.38-3.32 (m, 2H); 2.52-2.25 (m, 9H); 1.72-1.53 (m, 12H); 1.44-1.12 (m, 52H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
IF. 화합물 324: 7 -((3-(2- 시아노 -3,3- 디메틸구아니디노 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00468
화합물 324을 화합물 168과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 무색 오일, 370 mg, 65%. HPLC/UV (214 nm): RT = 6.04 min. MS (CI): C49H95N5O4에 대한 m/z (MH+) 818.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.64 (m, 1H); 4.06-4.02 (m, 4H); 3.68-3.62 (m, 2H); 2.98 (s, 6H); 2.59-2.56 (m, 2H); 2.44-2.39 (m, 4H); 2.32-2.26 (m, 3H); 1.72-1.53 (m, 12H); 1.44-1.12 (m, 52H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
IG. 화합물 325: 7 -((3-((1-( 메틸아미노 )-2-니트로비닐)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00469
화합물 325을 화합물 170과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 황색 오일, 355 mg, 52%. HPLC/UV (214 nm): RT = 5.76 min. MS (CI): C48H94N4O6에 대한 m/z (MH+) 823.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 25 ℃에서): δ ppm 10.15 (bs, 1H); 8.37-8.24 (m, 1H); 6.55 (s, 0.5H); 6.53 (s, 0.5H); 4.06-4.04 (m, 4H); 3.34-3.24 (m, 2H); 2.90-2.85 (m, 1.5H); 2.74-2.73 (m, 1.5H); 2.64 (m, 1H); 2.47 (bs, 4H); 2.34-2.26 (m, 3H); 1.77 (m, 2H); 1.68-1.53 (m, 10H); 1.44-1.12 (m, 53H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz). 1H NMR (300 MHz, CDCl3, 50 ℃에서): δ ppm 10.15 (bs, 1H); 7.89 (bs, 1H); 6.52 (s, 1H); 4.06-4.04 (m, 4H); 3.29 (bs, 2H); 2.87 (m, 3H); 2.64-2.40 (m, 6H); 2.34-2.26 (m, 3H); 1.79 (m, 2H); 1.64-1.54 (m, 10H); 1.44-1.12 (m, 52H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
IH. 화합물 326: 7 -((3-((2-( 메틸아미노 )-3,4- 디옥소사이클로부트 -1-엔-1-일)아미노)프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00470
화합물 326을 화합물 182과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 백랍성 고체, 330 mg, 57%. HPLC/UV (254 nm): RT = 7.01 min. MS (CI): C50H93N3O6에 대한 m/z (MH+) 832.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 6.90 (bs, 1H); 4.05-4.01 (m, 4H); 3.63 (bs, 2H); 3.25 (d, 3H, J = 4.9 Hz); 2.53 (t, 2H, J = 5.6 Hz); 2.40 (t, 4H, J = 7.4 Hz); 2.33-2.26 (m, 3H); 1.74-1.71 (m, 2H); 1.68-1.52 (m,11H); 1.48-1.12 (m, 52H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
II. 화합물 327: 7 -((3-(3,3- 디메틸티오우레이도 )프로필)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노) 헵틸 2-옥틸데카노에이트
Figure pct00471
화합물 327을 화합물 111과 유사하게 제조하지만, 7-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)헵틸 2-옥틸데카노에이트를 헵타데칸-9-일 8-((3-아미노프로필)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 대신에 사용했다. 황색 오일, 200 mg, 36%. HPLC/UV (254 nm): RT = 6.95 min. MS (CI): C48H95N3O4S에 대한 m/z (MH+) 810.6. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.08 (bs, 1H); 4.06-4.02 (m, 4H); 3.72 (bs, 2H); 3.23 (s, 6H); 2.72-2.38 (m, 4H); 2.34-2.25 (m, 3H); 1.71-1.55 (m, 12H); 1.44-1.12 (m, 54H); 0.86 (t, 9H, J = 6.7 Hz).
IJ. 화합물 328: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3- 하이드록시프로필 )아미노)옥타노에이트
단계 1: 도데칸 -4-일 8-((3- 하이드록시프로필 )아미노) 옥타노에이트
Figure pct00472
화학식: C23H47NO3
분자량: 385.63
에탄올 (100 mL) 중 도데칸-4-일 8-브로모옥타노에이트 (2.5 g, 6.4 mmol)의 용액에 프로판올아민 (9.8 mL, 130 mmol)을 첨가하고 반응을 50 ℃에서 밤새 교반되도록 했다. 용액을 실온으로 되돌리고 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 DCM에 용해시키고 5% NaHCO3로 2회 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 그리고 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-100% (DCM 20% MeOH 1% NH4OH))로 정제하여 도데칸-4-일 8-((3-하이드록시프로필)아미노)옥타노에이트를 맑은 무색 오일로서 제공했다 (2.08 g, 84.5%). UPLC/ELSD: RT = 1.58 min. MS (ES): C23H47NO3에 대한 m/z (MH+) 386.42. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 1H); 3.83 (t, 2H); 3.31 (br, 1H); 2.90 (t, 2H); 2.62 (t, 2H); 2.29 (t, 2H); 1.85-1.05 (br. m, 30H); 0.91 (m, 6H) (하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
단계 2: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3- 하이드록시프로필 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00473
화학식: C48H95NO5
분자량: 766.29
도데칸-4-일 8-[(3-하이드록시프로필)아미노]옥타노에이트 (2.08 g, 5.39 mmol), 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (2.61 g, 5.66 mmol), 탄산칼륨 (1.49 g, 10.8 mmol), 및 요오드화칼륨 (179 mg, 1.08 mmol)을 MeCN (60 mL)에 현탁시키고 혼합물을 82 ℃에서 12시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 실온으로 냉각되도록 하고, 셀라이트의 패드 상에서 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-50% (DCM 20% MeOH 1% NH4OH))로 정제하여 도데칸-4-일 8-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(3-하이드록시프로필)아미노)옥타노에이트를 맑은 밝은 황색 오일로서 얻었다 (3.26 g, 78.9%). UPLC/ELSD: RT = 3.53 min. MS (ES): C48H95NO5에 대한 m/z (MH+) 766.97. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 3.82 (t, 2H); 2.76 (t, 2H); 2.54 (t, 4H); 2.30 (t, 4H); 1.85-1.05 (br. m, 68H); 0.90 (m, 12H) (하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
IK . 화합물 329: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(1- 하이드록시프로판 -2-일)아미노)옥타노에이트
단계 1: 도데칸 -4-일 8-((1- 하이드록시프로판 -2-일)아미노) 옥타노에이트
Figure pct00474
화학식: C23H47NO3
분자량: 385.63
화합물 328에 대한 단계 1과 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((1-하이드록시프로판-2-일)아미노)옥타노에이트를 에탄올 (15 mL) 중 도데칸-4-일 8-브로모옥타노에이트 (500 mg, 1.28 mmol) 및 2-아미노프로판올 (2.00 mL, 25.5 mmol)로부터 합성했다. 수율 (343 mg, 69.6%). UPLC/ELSD: RT = 1.66 min. MS (ES): C23H47NO3에 대한 m/z (MH+) 386.50. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.91 (m, 1H); 3.64-3.16 (br. m, 2H); 2.76 (br. m, 2H); 2.53 (br. m, 1H); 2.30 (t, 2H); 2.05-1.15 (br. m, 29H); 1.06 (d, 3H); 0.91 (m, 6H) (하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
단계 2: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(1- 하이드록시프로판 -2-일)아미노)옥타노에이트
Figure pct00475
화학식: C48H95NO5
분자량: 766.29
화합물 328에 대한 단계 2와 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(1-하이드록시프로판-2-일)아미노)옥타노에이트를 MeCN (12 mL) 중 도데칸-4-일 8-[(1-하이드록시프로판-2-일)아미노]옥타노에이트 (343 mg, 0.889 mmol), 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (431 mg, 0.934 mmol), 탄산칼륨 (246 mg, 1.78 mmol), 및 요오드화칼륨 (30 mg, 0.18 mmol)로부터 합성했다. 수율 (395 mg, 58.0%). UPLC/ELSD: RT = 3.54 min. MS (ES): C48H95NO5에 대한 m/z (MH+) 766.97. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 3.60-2.10 (br. m, 11H); 1.81-1.05 (br. m, 66H); 0.90 (m, 15H) (하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
IL. 화합물 330: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-(메틸설폰아미도)프로필)아미노)옥타노에이트
단계 1: 도데칸 -4-일 8-((3- 클로로프로필 )(8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00476
화학식: C48H94ClNO4
분자량: 784.73
DCM (50 mL) 중 도데칸-4-일 8-{[8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸](3-하이드록시프로필)아미노}옥타노에이트 (3.16 g, 4.12 mmol) 및 트리에틸아민 (750 μL, 5.4 mmol)의 0 ℃ 용액에 DCM (4 mL) 중 메탄설포닐 염화물 (400 μL, 5.2 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응을 실온으로 되돌리고 4시간 동안 교반했다. 반응을 물로 켄칭하고 DCM으로 3회 추출했다. 조합된 유기물을 5% NaHCO3, 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 그리고 진공에서 농축시켜서 맑은 오렌지색 오일을 얻었다. 물질을 추가 정제없이 수행했다 (3.15 g, 97.3%). UPLC/ELSD: RT = 3.50 min. MS (ES): C48H94ClNO4에 대한 m/z (MH+) 784.93. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 4.55-4.20 (br. m, 2H); 3.70-3.40 (br. m, 2H); 3.15-2.15 (br. m, 8H); 2.00-1.05 (br. m, 68H); 0.90 (m, 12H).
단계 2: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-( 메틸설폰아미도 )프로필)아미노)옥타노에이트
Figure pct00477
화학식: C49H98N2O6S
분자량: 843.39
DMF (7 mL) 중 도데칸-4-일 8-[(3-클로로프로필)[8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸]아미노]옥타노에이트 (300 mg, 0.382 mmol) 및 메탄설폰아미드 (364 mg, 3.82 mmol)의 용액에 탄산세슘 (186 mg, 0.573 mmol)을 첨가하고 반응을 60 ℃에서 12시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 실온으로 냉각되도록 하고, 50% NaHCO3로 희석하고, DCM로 2회 추출했다. 조합된 유기물을 물로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 그리고 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-50% (DCM 20% MeOH 1% NH4OH))로 정제하여 도데칸-4-일 8-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(3-(메틸설폰아미도)프로필)아미노)옥타노에이트 (79 mg, 25%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 3.44 min. MS (ES): C49H98N2O6S에 대한 m/z (MH+) 844.06. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 3.26 (t, 2H); 2.92 (s, 3H); 2.68-2.20 (br. m, 10H); 1.85-1.05 (br. m, 68H); 0.90 (m, 12H) (설폰아미드 양성자는 관측되지 않음).
IM . 화합물 331: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-(N-메틸메틸설폰아미도)프로필)아미노)옥타노에이트
Figure pct00478
화학식: C50H100N2O6S
분자량: 857.42
화합물 330에 대한 단계 2와 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(3-(N-메틸메틸설폰아미도)프로필)아미노)옥타노에이트를 DMF (7mL) 중 도데칸-4-일 8-[(3-클로로프로필)[8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸]아미노]옥타노에이트 (300 mg, 0.382 mmol), N-메틸메탄설폰아미드 (83 mg, 0.77 mmol), 및 탄산세슘 (186 mg, 0.573 mmol)로부터 합성했다. 수율 (213 mg, 65.0%). UPLC/ELSD: RT = 3.45 min. MS (ES): C50H100N2O6S에 대한 m/z (MH+) 858.00. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 3.18 (t, 2H); 2.87 (s, 3H); 2.81 (s, 3H); 2.58-2.22 (br. m, 10H); 1.80-1.05 (br. m, 68H); 0.90 (m, 12H).
IN. 화합물 332: 도데칸 -4-일 8-((3- 아세트아미도프로필 )(8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00479
화학식: C50H98N2O5
분자량: 807.34
화합물 330에 대한 단계 2와 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((3-아세트아미도프로필)(8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 DMF (7 mL) 중 도데칸-4-일 8-[(3-클로로프로필)[8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸]아미노]옥타노에이트 (300 mg, 0.382 mmol), 아세트아미드 (226 mg, 3.82 mmol), 및 탄산세슘 (125 mg, 0.382 mmol)로부터 합성했다. 수율 (74 mg, 24%). UPLC/ELSD: RT = 3.47 min. MS (ES): C50H98N2O5에 대한 m/z (MH+) 807.98. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 3.34 (m, 2H); 2.64-2.22 (br. m, 10H); 1.95 (s, 3H); 1.80-1.10 (br. m, 68H); 0.90 (m, 12H) (아세트아미드 양성자는 관측되지 않음).
IO . 화합물 333: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )(3-(3-메틸티오우레이도)프로필)아미노)옥타노에이트
Figure pct00480
화학식: C50H99N3O4S
분자량: 838.42
화합물 330에 대한 단계 2와 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(3-(3-메틸티오우레이도)프로필)아미노)옥타노에이트를 DMF (7 mL) 중 도데칸-4-일 8-[(3-클로로프로필)[8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸]아미노]옥타노에이트 (300 mg, 0.382 mmol), N-메틸티오우레아 (345 mg, 3.82 mmol), 및 탄산세슘 (187 mg, 0.573 mmol)로부터 합성했다. 수율 (29 mg, 9.0%). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 3.04 (t, 2H); 2.88 (s, 3H); 2.60-2.20 (br. m, 10H); 1.90-1.05 (br. m, 70H); 0.90 (m, 12H).
IP. 화합물 334: 도데칸 -4-일 8-((2,3- 디하이드록시프로필 )(8-( 헵타데칸 -9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
단계 1: 도데칸-4-일 8-((2,3-디하이드록시프로필)아미노)옥타노에이트
Figure pct00481
화학식: C23H47NO4
분자량: 401.63
화합물 328에 대한 단계 1과 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((2,3-디하이드록시프로필)아미노)옥타노에이트를 에탄올 (15 mL) 중 도데칸-4-일 8-브로모옥타노에이트 (500 mg, 1.28 mmol), 및 3-아미노프로판-1,2-디올 (2.33 g, 1.97 mmol)로부터 합성했다. 수율 (359 mg, 70.0%). UPLC/ELSD: RT = 1.49 min. MS (ES): C23H47NO4에 대한 m/z (MH+) 402.49. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 1H); 3.76 (m, 2H); 3.65 (m, 1H); 2.96-2.52 (br. m, 7H); 2.30 (t, 2H); 1.75-1.10 (br. m, 28H); 0.90 (m, 6H).
단계 2: 도데칸 -4-일 8-((2,3- 디하이드록시프로필 )(8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00482
화학식: C48H95NO6
분자량: 782.29
화합물 328에 대한 단계 2와 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((2,3-디하이드록시프로필)(8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트를 MeCN (10 mL) 중 도데칸-4-일 8-[(2,3-디하이드록시프로필)아미노]옥타노에이트 (359 mg, 0.894 mmol), 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (454 mg, 0.983 mmol), 탄산칼륨 (247 mg, 1.79 mmol), 및 요오드화칼륨 (30 mg, 0.18 mmol)로부터 합성했다. 수율 (412 mg, 58.9%). UPLC/ELSD: RT = 3.39 min. MS (ES): C48H95NO6에 대한 m/z (MH+) 782.97. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 3.77 (m, 2H); 3.51 (m, 1H); 2.74-2.38 (br. m, 6H); 2.30 (t, 4H); 1.75-1.10 (br. m, 66H); 0.90 (m, 12H) (하이드록실 양성자는 관측되지 않음).
IQ. 화합물 335: 헵타데칸 -9-일 8-((2-((2- 아미노에틸 )아미노)에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
단계 1: tert -부틸 (2-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)에틸)(2-하이드록시에틸) 카바메이트 (J. Med. Chem., 2003, 46(26), 5712-5724)
Figure pct00483
테트라하이드로푸란 (40 mL) 중 2-((2-아미노에틸)아미노)에탄올 (2.0 g, 20 mmol)의 용액에 0 ℃에서 테트라하이드로푸란 (10 mL) 중 디-tert-부틸디카보네이트 (9.2 g, 40 mmol)의 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반했다. 용매를 제거하고 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시켰다. 용액을 염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 용매를 진공 하에서 제거하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-40% EtOAc)로 정제하여 tert-부틸 (2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)(2-하이드록시에틸)카바메이트 (3.8 g, 65%)을 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.03-4.88 (m, 1H); 3.71 (bs, 2H); 3.34-3.11 (m, 7H); 1.45 (s, 9H); 1.41 (s, 9H).
단계 2: tert -부틸 (2-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)에틸)(2-(1,3- 디옥소이소인돌린 -2-일)에틸)카바메이트 (J. Med . Chem ., 2003, 46(26), 5712-5724)
Figure pct00484
테트라하이드로푸란 (50 mL) 중 tert-부틸 (2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)(2-하이드록시에틸)카바메이트 (2.3 g, 7.56 mmol), 프탈이미드 (1.21 g, 8.24 mmol), 및 트리페닐 포스핀 (2.16 g, 8.24 mmol)의 용액에 0 ℃에서 디이소프로필 아조디카복실레이트 (DIAD) (1.62 mL, 8.24 mmol)을 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반했다. 용매를 제거하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-50% EtOAc)로 정제하여 tert-부틸 (2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)(2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에틸)카바메이트 (2.75 g, 84%)을 발포성 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.82 (m, 2H); 7.72-7.69 (m, 2H); 5.16 (bs, 1H); 3.83-3.79 (m, 2H); 3.50-3.49 (m, 2H); 3.33-3.28 (m, 4H); 1.40 (s, 9H); 1.21 (s, 9H).
단계 3: tert -부틸 (2- 아미노에틸 )(2-(( tert - 부톡시카보닐 )아미노)에틸) 카바메이트 (J. Med . Chem ., 2003, 46(26), 5712-5724)
Figure pct00485
하이드라진 일수화물 (0.7 mL, 12.69 mmol)을 tert- 메탄올 (50 mL) 중 부틸 (2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)(2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)에틸)카바메이트 (2.75 g, 6.35 mmol)의 용액에 첨가하고 반응 혼합물을 환류 하에서 18시간 동안 교반했다. 그것을 실온으로 냉각되도록 하고, 혼합물을 통해 여과하고 유리-소결된 깔때기, 필터 케이크를 메탄올로 세정하고 여과물을 농축시켜 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 tert-부틸 (2-아미노에틸)(2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)카바메이트 (1.6 g, 83 %)를 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.50-5.20 (m, 1H); 3.29-3.24 (m, 6H); 2.84-2.82 (m, 2H); 1.44 (s, 9H); 1.41 (s, 9H) (일차 아민 양성자는 관측되지 않음).
단계 4: 헵타데칸 -9-일 8-( tert - 부톡시카보닐 )-2,2-디메틸-4-옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자노나데칸-19-오에이트
Figure pct00486
에탄올 (20 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (0.97 g, 2.11 mmol) 및 tert-부틸 (2-아미노에틸)(2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)카바메이트 (1.6 g, 5.27 mmol)의 용액을 65 ℃에서 18시간 동안 가열했다. 용매를 진공 하에서 제거하고 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0-100% EtOAc, 그 다음 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-(tert-부톡시카보닐)-2,2-디메틸-4-옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자노나데칸-19-오에이트 (670 mg, 50 %)을 오일로서 얻었다. MS (ES): C39H77N3O6에 대한 m/z (MH+) 684.5. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 5.46-5.26 (bs, 1H); 4.88-4.82 (m, 1H); 3.59 (bs, 2H); 3.42-3.28 (m, 4H); 3.10-2.70 (m, 3H); 2.25 (t, 2H, J = 7.5 Hz); 1.78-1.57 (m, 4H); 1.45 (s, 9H); 1.41 (s, 9H); 1.41-1.27 (m, 4H); 1.26-1.22 (m, 32H); 0.86 (t, 6H, J = 6.7 Hz).
단계 5: 헵타데칸 -9-일 8-( tert - 부톡시카보닐 )-2,2-디메틸-11-(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자노나데칸-19-오에이트
Figure pct00487
사이클로펜틸 메틸 에테르 (10 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-(tert-부톡시카보닐)-2,2-디메틸-4-옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자노나데칸-19-오에이트 (670 mg, 0.98 mmol)의 용액에 아세토니트릴 (10 mL) 중 노닐 8-브로모옥타노에이트 (358 mg, 1.029 mmol)의 용액 이어서 탄산칼륨 (546 mg, 3.92 mmol) 및 요오드화칼륨 (179 mg, 1.07 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 2일 동안 90 ℃로 가열시켰다. 그 다음 그것을 실온으로 냉각되도록 하고, 규조토를 통해 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트로 광범위하게 세정하고 여과물을 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (헥산 중 0% 내지 100% EtOAc)로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-(tert-부톡시카보닐)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자노나데칸-19-오에이트 (560 mg, 60 %)을 얻었다. MS (ES): C56H109N3O8에 대한 m/z (MH+) 952.8. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 6.65 (bs, 0.5H); 5.70 (bs, 0.5H); 4.88-4.82 (m, 1H); 4.04 (t, 2H, J = 6.7 Hz); 3.32-3.12 (m, 6H); 2.68-2.48 (m, 2H); 2.44-2.34 (m, 4H); 2.29-2.22 (m, 4H); 1.68-1.54 (m, 8H); 1.52-1.38 (m, 10H); 1.44 (s, 18H); 1.38-1.12 (m, 44H); 0.86 (t, 9H, J = 6.8 Hz).
단계 6: 헵타데칸 -9-일 8-((2-((2- 아미노에틸 )아미노)에틸)(8-( 노닐옥시 )-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트
Figure pct00488
디클로로메탄 (10 mL) 중 헵타데칸-9-일 8-(tert-부톡시카보닐)-2,2-디메틸-11-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-4-옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자노나데칸-19-오에이트 (560 mg, 0.59 mmol)의 용액에 0 ℃에서 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응을 포화 수성 중탄산나트륨 용액으로 켄칭했다. 유기층을 1 N 수산화나트륨 용액, 염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 용매를 진공 하에서 제거하여 조 생성물을 얻었고, 이것을 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 4% 암모니아 0-100%를 함유하는 메탄올)으로 정제하여 헵타데칸-9-일 8-((2-((2-아미노에틸)아미노)에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 (256 mg, 58 %)을 무색 오일로서 얻었다. HPLC/UV (ELSD): RT = 6.70 min. MS (ES): C46H93N3O4에 대한 m/z (MH+) 752.7. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 4.87-4.82 (m, 1H); 4.03 (t, 2H, J = 6.6 Hz); 2.78 (t, 2H, J = 5.9 Hz); 2.63 (dd, 4H, J = 5.9 Hz, 13.9 Hz); 2.50 (t, 2H, J = 6.0 Hz); 2.36 (t, 4H, J = 7.3 Hz); 2.26 (dt, 4H, J = 3.8 Hz, 7.5 Hz); 1.68-1.54 (m, 7H); 1.52-1.42 (m, 8H); 1.42-1.36 (m, 7H); 1.36-1.12 (m, 43H); 0.86 (t, 9H, J = 6.6 Hz).
IR. 화합물 336: 8 -( 헵타데칸 -9- 일옥시 )- N -(3- 하이드록시프로필 )- N -메틸- N -(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-8-옥소옥탄-1-아미늄 아이오다이드
Figure pct00489
화학식: C46H92INO5
분자량: 866.15
디클로로에탄 (2　mL)　및 아세토니트릴 (3　mL)의 혼합물 중 헵타데칸-9-일 8-[(3-하이드록시프로필)[8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸]아미노]옥타노에이트 (0.21　g, 0.29　mmol)의 용액에 요오드화메틸 (0.02　mL, 0.29　mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 2시간 동안 교반했다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 DCM으로 희석하고 sat NaHCO3로 추출했다. 유기층을 분리하고, 염수로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0-100% (디클로로메탄 중 1% NH4OH, 20% MeOH의 혼합물))로 정제하여 8-(헵타데칸-9-일옥시)-N-(3-하이드록시프로필)-N-메틸-N-(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-8-옥소옥탄-1-아미늄 아이오다이드 (0.152 g, 0.29 mmol, 70%)을 얻었다. LC/ELSD: RT = 3.29 min. MS (ES): C46H92NO5 +에 대한 m/z (M+) 738.85. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87 (m, 1H); 4.08 (t, 2H); 3.91-3.68 (br. m, 4H); 3.38 (br. m, 4H); 3.26 (s, 3H); 2.33 (m, 4H); 2.07 (br. m, 3H); 1.90-1.18 (m, 62H); 0.90 (m, 9H).
IS. 화합물 337: 8 -( 헵타데칸 -9- 일옥시 )- N -(2-하이드록시에틸)- N - 메틸 - N -(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)-8-옥소옥탄-1-아미늄 아이오다이드
Figure pct00490
화학식: C45H90INO5 +
분자량: 852.12
화합물 337을, 헵타데칸-9-일 8-((2-하이드록시에틸)(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 및 요오드화메틸을 사용하여 화합물 336과 동일한 방식으로 합성했다. 수율은 95 mg (0.111 mmol, 15%)였다. LC/ELSD: RT = 3.37 min. MS (ES): C45H90NO5 +에 대한 m/z (M+) 724.91. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87 (m, 1H); 4.20 (br. m, 2H); 4.07 (t, 2H); 3.74 (br. m, 2H); 3.50 (br. m, 4H); 3.33 (s, 3H); 2.33 (m, 4H); 1.87-1.17 (br. m, 62H); 0.90 (m, 9H).
IT. 화합물 338: 8 -( 헵타데칸 -9- 일옥시 )- N,N -디메틸- N -(8-( 노닐옥시 )-8- 옥소옥틸 )-8-옥소옥탄-1-아미늄 아이오다이드
Figure pct00491
화학식: C44H88INO4
분자량: 822.09
화합물 338을, 헵타데칸-9-일 8-(메틸(8-(노닐옥시)-8-옥소옥틸)아미노)옥타노에이트 및 요오드화메틸을 사용하여 화합물 336과 동일한 방식으로 합성했다. 수율은 202 mg (0.29 mmol, 39%)였다. LC/ELSD: RT = 3.33 min. MS (ES): C44H88NO4 +에 대한 m/z (M+) 694.89. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.87 (p, 1H); 4.07 (t, 2H); 3.56 (br. m, 4H); 3.41 (s, 6H); 2.32 (m, 4H); 1.85-1.17 (br. m, 62H); 0.90 (m, 9H).
IU . 화합물 339: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )( 메틸 )아미노)옥타노에이트
단계 1: 도데칸 -4-일 8-( 메틸아미노 ) 옥타노에이트
Figure pct00492
화학식: C21H43NO2
분자량: 341.58
THF (19 mL) 중 메틸아민의 2M 용액 (1.19 g, 38.3 mmol)에 도데칸-4-일 8-브로모옥타노에이트 (500 mg, 1.28 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 48시간 동안 교반되도록 했다. 용액을 진공에서 농축시키고, EtOAc에 용해시키고 물로 3회, 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 그리고 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피 (DCM 중 0-50% (DCM 20% MeOH 1% NH4OH))로 정제하여 도데칸-4-일 8-(메틸아미노)옥타노에이트 (326 mg, 74.7%)를 얻었다. UPLC/ELSD: RT = 1.55 min. MS (ES): C21H43NO2에 대한 m/z (MH+) 342.23. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 1H); 2.58 (t, 2H); 2.45 (s, 3H); 2.30 (t, 2H); 1.80-1.05 (br. m, 29H); 0.92 (m, 6H).
단계 2: 도데칸 -4-일 8-((8-( 헵타데칸 -9- 일옥시 )-8- 옥소옥틸 )( 메틸 )아미노)옥타노에이트
Figure pct00493
화학식: C46H91NO4
분자량: 722.24
화합물 328에 대한 단계 2와 동일한 방식으로, 도데칸-4-일 8-((8-(헵타데칸-9-일옥시)-8-옥소옥틸)(메틸)아미노)옥타노에이트를 MeCN (10 mL) 중 도데칸-4-일 8-(메틸아미노)옥타노에이트 (326 mg, 0.954 mmol), 헵타데칸-9-일 8-브로모옥타노에이트 (485 mg, 1.05 mmol), 탄산칼륨 (264 mg, 1.91 mmol), 및 요오드화칼륨 (32 mg, 0.19 mmol)로부터 합성했다. 수율 (392 mg, 56.9%). UPLC/ELSD: RT = 3.48 min. MS (ES): C46H91NO4에 대한 m/z (MH+) 722.94. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 4.90 (m, 2H); 2.55-2.05 (br. m, 11H); 1.75-1.10 (br. m, 66H); 0.90 (m, 12H).
IV. 화합물 340: 2 -( 디((9Z,12Z) - 옥타데카 -9,12- 디엔 -1-일)아미노)에탄-1-올
Figure pct00494
화학식: C38H71NO
분자량: 557.99
MeCN (26 mL) 중 (6Z,9Z)-18-브로모옥타데카-6,9-디엔 (4 g, 12.1 mmol)의 용액에 에탄올아민, (0.334 mL, 5.52 mmol), K2CO3 (3.36 g, 24.3 mmol), 및 KI (92 mg, 0.552 mmol)을 첨가했다. 반응을 82 ℃에서 48시간 동안 교반되도록 했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 그리고 고체를 헥산으로 세정했다. 여과물을 헥산으로 추출하고, 조합된 추출물을 진공에서 농축시켰다. ISCO 실리카 플래시 크로마토그래피 (0-20% MeOH/DCM)로 정제하여 2-(디((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일)아미노)에탄-1-올을 얻었다. 수율 (1.9 g, 62%).
UPLC/ELSD: RT = 6.80 min. MS (ES): C38H71NO에 대한 m/z (MH+) 557.94. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: ppm 5.35 (m, 8H); 3.52 (t, 2H); 2.77 (t, 4H); 2.57 (t, 2H); 2.43 (t, 4H); 2.04 (q, 8H); 1.48-1.18 (br. m, 36H); 0.89 (t, 6H).
실시예 2: 나노입자 조성물의 생산
A. 나노입자 조성물의 생산
세포에 대한 치료제 및/또는 예방제의 전달에 사용하기 위한 안전하고 유효한 나노입자 조성물을 조사하기 위해서, 제형의 범위가 준비되고 시험되었다. 구체적으로, 나노입자 조성물의 지질 성분에서 특정한 요소 및 이들의 비가 최적화된다.
나노입자는, 그 중 하나가 치료제 및/또는 예방제를 함유하고 다른 것은 지질 성분을 갖는, 2 유체 스트림의 미세유체공학 및 T-접합 혼합과 같은 혼합 공정으로 제조될 수 있다.
지질 조성물은 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질, 인지질 (예컨대 DOPE 또는 DSPC, 알라바마주 앨러배스터 소재의 Avanti Polar Lipids로부터 수득가능), PEG 지질 (예컨대 1,2-디미리스토일-sn-글리세롤 메톡시폴리에틸렌 글리콜, PEG-DMG로도 알려짐, 알라바마주 앨러배스터 소재의 Avanti Polar Lipids로부터 수득가능), 및 구조 지질 (예컨대 콜레스테롤, 독일 타우프키르첸 소재의 Sigma-Aldrich로부터 수득가능, 또는 코르티코스테로이드 (예컨대 프레드니솔론, 덱사메타손, 프레드니손, 및 하이드로코르티손), 또는 이들의 조합)을 에탄올에서 약 50 mM의 농도로 배합시킴에 의해 제조된다. 용액은, 예를 들어, -20℃에서 저장을 위해 냉동되어야 한다. 지질은 원하는 몰 비 (예를 들어, 표 23 참고)를 생성하기 위해 조합되고, 약 5.5 mM 내지 약 25 mM 사이의 최종 지질 농도로 물 및 에탄올로 희석된다.
치료제 및/또는 예방제 및 지질 성분을 포함하는 나노입자 조성물은 약 5:1 내지 약 50:1 사이의 지질 성분 대 치료제 및/또는 예방제 wt:wt 비로 지질 용액을 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 용액과 배합시킴에 의해 제조된다. 지질 용액은 약 1:1 내지 약 4:1 사이의 물 대 에탄올 비를 갖는 현탁액을 제조하기 위해 치료제 및/또는 예방제 용액 안으로 약 10 ml/min 내지 약 18 ml/min 사이의 유량으로 NanoAssemblr 미세유체 기반 시스템을 사용하여 빠르게 주입된다.
RNA를 포함하는 나노입자 조성물을 위해, 탈이온수 내 0.1mg/ml의 농도에서의 RNA의 용액을 3 내지 4 사이의 pH에서 50 mM 나트륨 시트레이트 완충액에서 희석하여 모액을 형성한다.
나노입자 조성물은 에탄올을 제거하고 완충액 교환을 달성하기 위해 투석에 의해 가공될 수 있다. 제형은 10 kD의 분자량 컷오프를 갖는 Slide-A-Lyzer 카셋트 (Thermo Fisher Scientific Inc., 일리노이주 록퍼드 소재)를 사용하여 일차 생성물의 것을 용적 200 배에서 pH 7.4 포스페이트 완충 식염수 (PBS)에 대해 2회 투석된다. 제1 투석은 3시간 동안 실온에서 수행된다. 제형은 그 다음 4℃에서 밤새 투석된다. 얻어진 나노입자 현탁액은 유리 바이알 안으로 0.2 μm 멸균 필터 (Sarstedt, 독일 뉨브레히트 소재)를 통해 여과하고 크림프 마개로 밀봉한다. 0.01mg/ml 내지 0.10mg/ml의 나노입자 조성물 용액이 일반적으로 수득된다.
상기 기재된 방법은 나노-침전 및 입자 형성을 유도한다. 비제한적으로, T-접합 및 직접적인 주입을 포함하는 대안적인 과정이 동일한 나노-침전을 달성하기 위해 사용될 수 있다.
B. 나노입자 조성물의 특성규명
Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, 영국 우스터셔 몰번 소재)를 사용하여 입자 크기를 결정하는데 1ХPBS와 제타 전위를 결정하는데 15 mM PBS에서 나노입자 조성물의 입자 크기, 다분산도 지수 (PDI) 및 제타 전위를 결정할 수 있다.
자외선-가시적인 분광법을 사용하여 나노입자 조성물에서 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, RNA)의 농도를 결정할 수 있다. 1ХPBS 내 100 μl의 희석된 제형이 메탄올 및 클로로포름의 4:1 (v/v) 혼합물 900 μl에 첨가된다. 혼합 후, 예를 들어, DU 800 분광측정기 (Beckman Coulter, Beckman Coulter, Inc., 캘리포니아주 브레이아 소재) 상에서 230nm 내지 330nm 사이에서 용액의 흡수스펙트럼이 기록된다. 나노입자 조성물 내 치료제 및/또는 예방제의 농도는 조성물에서 사용된 치료제 및/또는 예방제의 소광 계수와, 예를 들어, 260nm의 파장에서 흡광도와, 예를 들어, 330nm의 파장에서 기준선 값 사이의 차이에 기반하여 계산될 수 있다.
RNA를 포함하는 나노입자 조성물에 대해, QUANT-IT™ RIBOGREEN® RNA 검정 (Invitrogen Corporation 캘리포니아주 칼스배드 소재)을 사용하여 나노입자 조성물에 의한 RNA의 캡슐화를 평가할 수 있다. 샘플은 TE 완충 용액 (10 mM 트리스-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5)에서 대략 5 μg/mL의 농도로 희석된다. 50 μl의 희석된 샘플은 폴리스티렌 96 웰 플레이트로 이전되고 50 μl의 TE 완충액 또는 50 μl의 2% 트리톤 X-100 용액 중 어느 하나가 웰들에 첨가된다. 플레이트는 15분 동안 37℃의 온도에서 인큐베이션된다. RIBOGREEN® 시약은 TE 완충액에서 1:100으로 희석되고 이 용액의 100 μl가 각 웰에 첨가된다. 형광 강도는, 예를 들어, 약 480nm의 여기 파장 및, 예를 들어, 약 520nm의 방출 파장에서 형광 플레이트 리더 (Wallac Victor 1420 Multilablel 계수기; Perkin Elmer, 매사추세츠주 월샘 소재)를 사용하여 측정될 수 있다. 시약 바탕시료의 형광 값은 각각의 샘플의 것으로부터 공제되고 유리 RNA의 백분율은 (트리톤 X-100의 첨가 없는) 온전한 샘플의 형광 강도를 (트리톤 X-100의 첨가에 의해 야기된) 파괴된 샘플의 형광 값으로 나눔에 의해 결정된다.
C. 생체내 제형 연구
다양한 나노입자 조성물이 표적화된 세포에 치료제 및/또는 예방제를 얼마나 효과적으로 전달하는지를 모니터하기 위해, 특정 치료제 및/또는 예방제 (예를 들어, 변형된 또는 자연발생 RNA 예컨대 mRNA)를 포함하는 상이한 나노입자 조성물이 준비되고 설치류 모집단에 투여된다. 마우스는 실시예 3에서 제공된 것들과 같은 제형을 갖는 나노입자 조성물을 포함하는 단일 용량이 정맥내로, 근육내로, 동맥내로, 또는 종양내로 투여된다. 일부 사례에서, 마우스는 용량을 흡입할 수 있다. 용량 크기는 0.001mg/kg 내지 10mg/kg의 범위일 수 있고, 여기서 10mg/kg은 마우스의 1kg의 체질량 각각에 대해 나노입자 조성물에 10mg의 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 용량을 기술한다. PBS를 포함하는 대조 조성물이 또한 이용될 수 있다.
마우스에 나노입자 조성물의 투여에 의해, 용량 전달 프로파일, 용량 반응, 및 이들의 특정 제형 및 용량의 독성이 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA), 생물발광 이미지형성, 또는 다른 방법에 의해 측정될 수 있다. mRNA를 포함하는 나노입자 조성물에 대해, 단백질 발현의 시간 경과가 또한 평가될 수 있다. 평가를 위해 설치류로부터 수집된 샘플은 혈액, 혈청, 및 조직 (예를 들어, 근육내 주사의 부위로부터 근육 조직 및 내부 조직)을 포함할 수 있다; 샘플 수집은 동물의 희생을 포함할 수 있다.
mRNA를 포함하는 나노입자 조성물은 치료제 및/또는 예방제의 전달을 위한 다양한 제형의 효능 및 유용성의 평가에 유용하다. mRNA를 포함하는 조성물의 투여에 의해 유도된 단백질 발현의 더 높은 수준은 더 높은 mRNA 번역 및/또는 나노입자 조성물 mRNA 전달 효율성의 지표일 것이다. 비-RNA 성분은 번역 기구 자체에 영향을 주는 것으로 생각되지 않기 때문에, 단백질 발현의 더 높은 수준은 다른 나노입자 조성물 또는 이들의 부재에 비하여 주어진 나노입자 조성물에 의한 치료제 및/또는 예방제의 전달의 더 높은 효율성의 지표인 것으로 보인다.
실시예 3: 샘플 제형
치료제 및/또는 예방제를 포함한 나노입자 조성물은 본 명세서에서 기재된 바와 같이, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물의 선택, 추가의 지질의 선택, 지질 성분에서 각각의 지질의 양, 및 지질 성분 대 치료제 및/또는 예방제의 wt:wt 비에 따라 최적화될 수 있다.
초기 연구는 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 다양한 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 전달 효율을 비교하기 위해 수행되었다. 양이온성 지질 MC3은 당 업계에서 현행 표준이다. 따라서, 약 50 mol % MC3, 약 10 mol % DSPC, 약 38.5 mol % 콜레스테롤, 및 약 1.5 mol % PEG-DMG를 포함한 표준 MC3 제형이 이 연구에 대한 기초로 사용되었다. 인지질로 DSPC, 구조 지질로 콜레스테롤, PEG 지질로 PEG-DMG, RNA, 및 화합물 1-159, 168-170, 및 173-175로부터 선택된 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물은 실시예 1 및 2에 기재된 것에 따라 또는 그에 유사한 방법을 통해 제조되었다. 지질의 비는 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 지질:DSPC:콜레스테롤:PEG-DMG에 대해 50:10:38.5:1.5 mol%였다. 사용된 RNA는 G5 루시퍼라제 (Luc) 또는 G5 hEPO를 인코딩하는 mRNA였다. 표 1A-1B는 제형의 함량 및 특성을 요약한다.
표 1A-1E에서 나타낸 바와 같이, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물의 선택은 조성물의 크기 (예를 들어, 직경), 다분산도 지수, 및 캡슐화 효율 (EE)에 극적으로 영향을 미친다. 조성물은 대략 53nm 내지 237nm 사이의 크기를 갖는다. 화합물 5, 35, 36, 51, 59, 131, 132, 137-139, 145, 148, 155 및 158을 포함한 조성물은 최대 입자를 생산한 반면, 화합물 9, 21, 29, 30, 65, 7175, 94, 107, 114-116, 119, 124, 133, 149, 150, 152, 174 및 175를 포함한 조성물은 최소 입자를 생산했다. 다분산도 지수는 0.04 내지 0.99 사이로 다양한 반면, 캡슐화 효율성은 화합물 21, 94, 107, 132, 148, 155 및 158을 제외한 모든 시험된 화합물을 포함한 조성물에 대해 75%를 초과하였다. 최고 캡슐화 효율성은 화합물 1, 6, 18, 19, 24, 26, 28, 29, 49, 50, 55, 60, 61, 65-70, 72, 74, 75, 101, 109-116, 118, 119, 121, 122, 124, 126, 128, 130, 149, 152, 153, 156, 159, 169, 170 및 174에 대해 관측되었다.
표 1A. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 나노입자 조성물의 특성.
Figure pct00495
Figure pct00496
Figure pct00497
Figure pct00498
Figure pct00499
Figure pct00500
표 1B. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 나노입자 조성물의 특성.
Figure pct00501
표 1C. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 피하 투여를 위한 나노입자 조성물의 특성.
Figure pct00502
표 1D. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 피하 투여를 위한 나노입자 조성물의 특성. hEPO mRNA로 제형화됨
Figure pct00503
Figure pct00504
표 1E. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 피하 투여를 위한 나노입자 조성물의 특성.
Figure pct00505
실시예 4: 샘플 제형에 의해 유도된 Luc의 발현
표 1A에 제시된 나노입자 조성물의 효능이 생물발광 연구로 평가되었다. 제형은 0.5mg/kg (mpk)의 투약량으로 마우스 (n = 6)에 정맥내로 투여되고 생물발광은 3, 6, 및 24시간 시점에서 측정되었다. 표준 MC3 제형 및, 일부 사례에서, 대조군 (예를 들어, PBS 대조군)이 비교를 위해 평가되었다. 표 2에서 분명한 바와 같이, 3시간에서, 총 유동은 화합물 4, 28, 32, 48, 66, 128 및 135를 포함한 조성물에 대해 최고였고 3h에서 총 유동은 화합물 2, 3, 18, 19, 20, 24, 26, 25, 27, 31, 33, 47, 49, 50, 53-55, 60, 61, 65-68, 70, 72, 74, 75, 96, 111, 122, 130, 133, 134, 143, 147, 148, 150, 151 및 153에 대한 MC3 제형의 것보다 더 높았거나 또는 그에 비교할만하였다. 이들 조성물은 또한 6 및 24시간 시점에서 더 높은 총 유동을 실증했다. 화합물 9, 17, 57, 58, 59, 121, 125, 137, 140, 141 및 158을 포함한 조성물은 측정된 모든 시점에서 상당히 낮은 유동을 가졌다. 일반적으로, 유동은 시간이 진행함에 따라 초기 유동의 10% 미만으로 줄어들었다. 이들 결과는 본 명세서에 기재된 화합물이 형질감염 적용에 유용할 수 있다는 것을 시사한다.
표 2. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 투여에 의해 유도된 루시퍼라아제의 발현.
Figure pct00506
Figure pct00507
Figure pct00508
Figure pct00509
MC3을 포함한 제형의 투여에 의해 유도된 것에 비교하여 주어진 지질을 포함한 제형의 투여에 의해 유도된 총 유동 (곡선하면적, AUC에 의해 측정됨)이 또한 몇 개의 지질에 대해 측정되었다. 표 3A (i.v. 투여)에서 나타낸 바와 같이, 6h에서 측정된 화합물 48 및 49를 포함한 제형에 의해 유도된 유동은 MC3 제형에 의해 유도된 것보다 10배 더 높았다. 화합물 50, 54, 및 55를 포함하는 제형은 또한 MC3 제형보다 더 높은 유동을 실증했다. 표 3B에서 나타낸 바와 같이, 6h에서 측정된 화합물 108 및 168을 포함한 제형에 의해 유도된 유동은 근육내 투여 (i.m.)를 통한 MC3 제형에 의해 유도된 것보다 14 및 16배 더 높았다. 결과는 또한 도 8에 도시되어 있다. 표 3C (i.v. 투여)에서 나타낸 바와 같이, 6h에서 측정된 화합물 66, 133-135, 및 147을 포함한 제형에 의해 유도된 유동 및 총 유동은 MC3 제형에 의해 유도된 것보다 현저히 더 높았다. 표 3D에서 나타낸 바와 같이, 6h에서 측정된 화합물 96, 148, 및 151을 포함한 제형에 의해 유도된 총 유동은 MC3 제형에 의해 유도된 것보다 현저히 더 높았다.
표 3A. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 투여시 루시퍼라아제의 발현.
Figure pct00510
Figure pct00511
표 3B. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 투여시 루시퍼라아제의 발현.
Figure pct00512
표 3C. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 투여시 루시퍼라아제의 발현.
Figure pct00513
Figure pct00514
표 3D. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 정맥내 투여시 루시퍼라아제의 발현 및 지질 청소능.
Figure pct00515
표 3E. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 정맥내 투여시 루시퍼라아제의 발현 및 지질 청소능.
Figure pct00516
표 3F. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 정맥내, 근육내, 종양내, 및 피하 투여시 루시퍼라아제의 발현 및 지질 청소능.
Figure pct00517
Figure pct00518
표 3G. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 정맥내, 근육내, 종양내, 및 피하 투여시 루시퍼라아제의 발현 및 지질 청소능.
Figure pct00519
Figure pct00520
표 3H. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 근육내 투여시 루시퍼라아제의 발현.
Figure pct00521
표 3I. MC3을 포함하는 제형의 투여에 대한 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 근육내 투여시 hEPO의 발현.
Figure pct00522
Figure pct00523
실시예 5: 상이한 기관에서 샘플 제형에 의해 유도된 Luc의 발현
주어진 조성물의 투여에 의해 간, 폐, 비장, 및 대퇴골에서 변형된 루시퍼라제의 발현을 측정함에 의해 표 1A에서 제시된 나노입자 조성물의 효능이 추가로 평가되었다. 제형은 0.5 mpk의 투약량으로 마우스 (n = 3)에 정맥내로 투여되고 생물발광이 6시간 후에 측정되었다. 표준 MC3 제형 및 PBS 대조군이 또한 시험되었다. 표 4에서 분명한 바와 같이, 거의 모든 종에 대한 유동은 다른 조직에 비하여 간에서 더 높았다. 간에서 유동은 3, 28, 33, 48, 96 및 135를 포함한 조성물에 대해 최고였고 화합물 2, 4, 6, 7, 18, 20, 24-27, 30-32, 34, 47, 49, 50, 53-56, 60, 65, 67, 68, 74, 75, 111, 113, 122, 128, 130, 133, 134, 143, 147-151, 153 및 157을 포함한 조성물에 대해 MC3 제형의 것에 비교할만하였다. 간에서 유동은 화합물 58, 59, 137, 및 141을 포함한 조성물에 대해 가장 낮았다. 비장에서 유동은 화합물 4, 7, 33, 34, 48, 53, 108, 129, 130, 및 148을 포함한 조성물에 대해 최고였고, 화합물 9, 59, 124, 및 141을 포함한 조성물에 대해 가장 낮았다. 유사한 결과가 폐 및 대퇴골에서 관측되었다.
표 4. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 투여 6시간 후의 다양한 기관에서의 루시퍼라아제의 발현.
Figure pct00524
Figure pct00525
Figure pct00526
실시예 6A: 근육내 투여에 의한 샘플 제형에 의해 유도된 발현
변형된 루시퍼라제 (Luc) mRNA 및 H10 mRNA 둘 모두를 포함한 샘플 제형이 준비되고 근육내로 투여되고 그리고 얻어진 발현 및 면역원성이 동시에 평가되었다. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 제형이 준비되고 0.001 및 0.01 mpk의 용량 (예를 들어, Luc mRNA를 포함하는 제형 및 H10 mRNA를 포함하는 제형의 0.0005 mpk의 용량 또는 Luc mRNA를 포함하는 제형 및 H10 mRNA를 포함하는 제형의 0.005 mpk의 용량)으로 투여되었다. 표 5A에서 나타낸 바와 같이, 화합물 20은 용량 수준 둘 모두에서 최고 발현을 나타냈다. 화합물 20의 저용량은 MC3의 고용량에 동등한 발현을 나타냈다. 다른 화합물을 포함한 제형은 또한 MC3에 비교하여 발현에서 다중-배 향상을 나타냈다.
표 5A. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 근육내 투여 6시간 후에 측정된 총 플럭스 (p/s).
Figure pct00527
실시예 6B: 근육내 투여에 의한 샘플 제형에 의해 유도된 발현
변형된 루시퍼라제 (Luc) mRNA를 포함한 샘플 제형이 준비되고 근육내로 투여되고 그리고 얻어진 발현 및 면역원성이 동시에 평가되었다. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 제형이 준비되고 및 0.01 mpk의 용량으로 투여되었다. 표 5B에서 나타낸 바와 같이, 화합물 108이 최고 발현을 나타냈다. 다른 화합물을 포함한 제형이 또한 MC3에 비교하여 발현에서 다중-배 향상을 나타냈다.
표 5B. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 근육내 투여 6시간 후에 측정된 총 플럭스 (p/s).
Figure pct00528
정맥내 및 근육내 투여에 의해 측정된 유동은 표 6에 비교되어 있다. 유동은 MC3 제형에 대해 측정된 것에 대한 증가 배수로 제시되어 있다. 화합물 20을 포함한 제형은 근육내 투여에 의한 Luc 발현에서 최고 배수 증가를 나타냈고, 반면에 화합물 18 및 26을 포함한 것들은 정맥내 투여에 의해 최고 배수 증가를 나타냈다. 현저히, 표 6에 포함된 정맥내 데이터는 근육내 데이터보다 더 높은 용량에서 측정되었다.
표 6. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 정맥내 또는 근육내 투여 후에 측정된 상대 플럭스.
Figure pct00529
실시예 7: 샘플 제형에 의해 유도된 사이토카인 생산
포유동물 신체 안으로 외래 물질의 도입은 사이토카인 생산을 촉진하는 선천적인 면역반응을 유도한다. 예를 들어, 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 나노입자 조성물에 대한 이러한 면역 반응은 바람직하지 않다. 특정 사이토카인의 유도는 따라서 나노입자 조성물의 효능을 평가하기 위해 측정된다. 0.5 mpk의 투약량에서 표 1A에 제시된 나노입자 조성물의 정맥내 투여에 의한 마우스 내 다양한 사이토카인의 농도가 6시간에서 측정되었다. 표준 MC3 제형 및 PBS 대조군이 또한 시험되었다. 표 7에서 분명한 바와 같이, IL-6 유도는 화합물 1, 3, 9, 19, 및 26을 포함한 조성물에 대해 최고였고, 반면에 IP-10 유도는 화합물 3, 4, 7, 20, 및 26을 포함한 조성물에 대해 최고였다. IL-6 유도는 화합물 4, 11, 12, 및 28을 포함한 조성물에 대해 최저였다. IP-10 유도는 화합물 10, 11, 12, 13, 15, 17, 및 18을 포함한 조성물에 대해 최저였다.
표 7. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 투여 6시간 후의 사이토카인 유도.
Figure pct00530
실시예 8: 샘플 제형에 의해 유도된 보체 활성화
보체 활성화는 유기체로부터 병원체의 청소능에 도움이 된다. 대상체의 신체가 나노입자 조성물을 외래 침입자로 인식하는 것이 바람직하지 않기 때문에, 이러한 조성물의 투여에 의한 낮은 보체 시스템 활성화가 바람직하다. 복합체 sC5b-9는 보체 시스템의 활성화에 대한 마커이다. 따라서, 인간 세포는 표 1A에 따른 나노입자 조성물과 시험관내 접촉되고 sC5b-9 수준에 대해 평가되었다. 표 8은 화합물 1, 6, 9, 18, 24, 25, 29, 및 30을 포함한 나노입자 조성물에 대하여 염수에 대비한 sC5b-9 수준에서의 배수 증가를 도시한다. 화합물 6 및 18을 포함한 조성물은 염수에 대비하여 어느 정도 sC5b-9 수준을 증가시키는 반면, 화합물 1, 9, 24, 29, 및 30을 포함한 조성물은 염수에 대비하여 sC5b-9 수준을 약간 감소시킨다.
표 8. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 나노입자 조성물의 투여에 의한 sC5b-9 수준에서의 배수 증가.
Figure pct00531
실시예 9: 임상 화학 및 혈액학
상이한 지질을 포함한 나노입자 조성물의 샘플 제형이 2 mpk의 용량으로 랫트에 정맥내로 투여되었다. 다양한 임상 마커의 발현은 투여 후 48h에서 평가되고 MC3 제형 또는 포스페이트 완충 식염수 (PBS)의 투여에 의해 유도된 것에 비교되었다.
표 9. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)의 화합물을 포함한 나노입자 조성물의 투여에 의해 유도된 임상 마커의 수준.
Figure pct00532
실시예 10: 샘플 제형에 의해 유도된 hEPO의 발현
상이한 지질을 포함한 나노입자 조성물의 샘플 제형이 일반적으로 생체내 Luc 발현에 따라 1차 평가된다. 몇 개의 이러한 조성물의 활성은 hEPO를 인코딩하는 mRNA를 사용하여 추가로 평가되었다. 화합물 6, 18, 25, 30, 108-112, 60, 및 122를 포함한 나노입자 조성물, 또는 MC3이 실시예 2에 따라 제조되었다. 표 10 및 상기 1B에서 나타낸 바와 같이, 각각의 조성물은 유사한 입자 크기 및 캡슐화 효율을 가졌다.
표 10. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 특성.
Figure pct00533
0.5 mpk의 용량에서 정맥내로 나노입자 조성물 투여된 마우스에서 hEPO의 발현 및 사이토카인 유도가 3, 6, 및 24시간에서 측정되었다. 수득한 hEPO 및 사이토카인 수준은 표 11A에 요약되어 있다. 화합물 6 및 18을 포함한 조성물은 각각의 시점에서 MC3 제형보다 더 높은 hEPO 농도를 생성하였다. 0.01 mpk의 용량에서 표 1B로부터의 나노입자 조성물이 근육내로 투여된 마우스에서 hEPO의 발현은 3, 6, 및 24시간에서 측정되었다. 수득한 hEPO 수준은 표 11B에 요약되어 있다. 화합물 18, 25, 30, 108-112, 60, 및 122를 포함한 조성물은 6hr 시점에서 MC3 제형보다 더 높은 hEPO 농도를 생성하였다. (또한 도 9 참고.)
표 11A. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 평가.
Figure pct00534
표 11B. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 평가.
Figure pct00535
표 12는 발현 및 유동 수준의 기준으로 MC3을 포함한 조성물에 대해 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 나노입자 조성물을 비교한다. 표 12에서 분명한 바와 같이, 화합물 6 및 18 둘 모두는 hEPO 발현 및 평균 총 유동 둘 모두에서 MC3을 능가한다. 따라서, 이들 지질은 나노입자 조성물 치료제에서 유용할 수 있다.
표 12. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 비교.
Figure pct00536
실시예 11: 랫트에서 샘플 제형에 의해 유도된 hEPO의 발현 및 간에서 잔존 지질 수준
2.0 mpk의 용량으로 나노입자 조성물이 정맥내로 투여된 랫트에서 hEPO의 발현 및 사이토카인 유도가 6h에서 측정되었다.
48h에서 간 조직이 지질 정량화를 위해 수확되었다. 조직을 사전-칭량하기 위해, Milli-Q 물이 첨가되었다 (100mg 조직당 900 μL 물). 조직은 균일하게 될 때까지 Omni 프로브 균질기를 사용하여 균질화되었다. 50 μL의 샘플 및 매트릭스 보정 표준이 96-웰 플레이트 안으로 분취되었다. 매트릭스 블랭크 및 대조군 블랭크에 대해 50 μL의 블랭크 매트릭스가 분취되었다. 400 μL IS 스파이킹 용액이 매트릭스 블랭크를 제외한 모든 샘플에 수작업으로 첨가되었다. 400 μL의 50:50 ACN:IPA가 매트릭스 블랭크에 수작업으로 첨가되었다. 플레이트는 닫히고 샘플은 와동되고 그리고 > 3000 rpm에서 5분 동안 원심분리되었다. 200 μL의 샘플은 분석을 위해 깨끗한 96-웰 플레이트 안으로 이전되었다. 샘플은 1.2 mL/min에서 1.3분에 걸쳐 (칼럼 온도 55℃) 70-95% 또는 60-95% (이동상 A: 50:50:1 H2O:MeOH:포름산 내 5 mM 암모늄포르메이트; 이동상 B: 100:1 MeOH:포름산 내 5mM 암모늄포르메이트) 중 어느 하나의 구배와 Higgins Analytical Clipeus C8 칼럼 (5 μM, 30 x 2.1 mm)을 사용하여 Waters Acquity UPLC 상에서 분석되었다. 검출은 Sciex API5500 질량 분광분석기를 사용하여 양성 방식에서 전기분무 이온화 (ESI)에 기반되었다.
표 13. 랫트, 6h, 2 mpk에서 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 나노입자 조성물의 투여에 의해 유도된 hEPO의 발현.
Figure pct00537
표 14. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 hEPO 나노입자 조성물의 투여 6시간 후 사이토카인 유도
Figure pct00538
표 15. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 조성물이 투여된 48h 후 랫트에서 간 수준.
Figure pct00539
0.2 mpk 또는 2.0 mpk의 용량으로 나노입자 조성물이 정맥내로 투여된 랫트에서 hEPO의 발현이 6시간에서 측정되었다. 표 16은, 상기에 기재된 바와 같이, 투여 48시간 후 측정된 MC3 제형을 사용한 hEPO 발현 수준에 비교된 다양한 나노입자 조성물을 사용한 hEPO 발현 수준의 비와 간에서의 지질 수준을 요약한다. 표 17 및 18은 화합물 28, 33, 53, 및 54의 투여 48시간 후 측정된 간 및 비장에서의 지질 수준을 요약한다. 간 및 비장 수준은 각각의 그룹에서 3 랫트에 대해 계산된 평균값을 나타낸다. 표 17 및 18에서 나타난 바와 같이, 화합물 28, 33, 53, 및 54의 10% 미만이 48시간 후 간에 남아 있는 반면, MC3의 60% 초과가 남아 있었다.
표 16. 48h 후 간에서 남아 있는 지질 수준과 hEPO의 발현의 비.
Figure pct00540
표 17. 48h 후 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 조성물의 0.2 mpk 용량 투여된 랫트에서의 간 수준.
Figure pct00541
표 18. 48h 후 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 조성물의 2 mpk 용량 투여된 랫트에서의 간 수준.
Figure pct00542
표 19는 0.2 및 2 mpk에서 랫트에 화합물 48, 49, 및 50 그리고 hEPO mRNA를 포함한 제형의 정맥내 투여에 의해 측정된 hEPO 발현, IP-10 유도, 간 및 비장 수준, 및 알라닌 아미노기전달효소 (ALT) 및 아스파르테이트 아미노기전달효소 (AST)를 요약한다. hEPO 농도는 투여 6시간 후 측정된 반면, 사이토카인 유도 및 간과 비장 수준은 투여 48시간 후 측정되었다. hEPO 및 IP-10 농도는 pg/ml로 제시된 반면, 간 수준은 ng/g로 제공된다. ALT 및 AST 수준은 국제 단위로 제시된다.
표 19A. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III) 중 하나에 따른 화합물을 포함한 조성물의 투여 후 측정된 hEPO 발현, IP-10 유도, 및 간 수준.
Figure pct00543
표 19B. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III) 중 하나에 따른 화합물을 포함한 조성물의 투여 후 측정된 hEPO 발현 및 간 수준.
Figure pct00544
실시예 12: 랫트에서 샘플 제형의 용량 반응
다양한 용량에서 나노입자 조성물의 랫트에 정맥내 투여에 의해 유도된 hEPO의 발현은 2, 4, 6, 8, 24, 및 48시간 시점에서 측정되었다. 도 3-6 각각은 다양한 용량에서 랫트에 MC3과 화합물 26, 18, 25를 포함한 제형의 정맥내 투여에 의해 측정된 hEPO 발현을 요약한다. 48시간 후 간에서 화합물 26의 지질 수준은 약 19%였다.
도 7은 상이한 투약량: 0.005 mpk, 0.01 mpk, 0.025 mpk, 0.05 mpk, 0.1 mpk, 0.25 mpk, 0.5 mpk, 1 mpk 또는 2 mpk에서 화합물 18, 25, 및 26을 포함한 조성물 및 MC3에 대한 곡선하면적을 도시한다.
실시예 13: 랫트에서 샘플 제형의 약동학
0.2 mpk의 용량으로 나노입자 조성물이 정맥내로 투여된 랫트에서 간 및 비장 내 지질 수준과 hEPO의 발현이 다양한 시점에서 측정되었다. 화합물 18 및 25가 MC3와 비교를 위해 선택되었다. 지질은 상기 기재된 표준 MC3 제형에 따라 제형화되었다. 랫트는 단일 0.2 mpk 용량이 정맥내로 투여되었고 발현은 투여 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 24, 및 48시간 후에 모니터링되었다.
표 20. 랫트에, 6h, 0.2 mpk로 나노입자 조성물의 투여에 의해 유도된 hEPO의 발현.
Figure pct00545
표 21. 랫트에, 6h, 0.2 mpk로 나노입자 조성물의 투여에 의해 유도된 간에서 지질 수준.
Figure pct00546
표 22. 랫트에, 6h, 0.2 mpk로 나노입자 조성물의 투여에 의해 유도된 비장에서 지질 수준.
Figure pct00547
실시예 14: 지질:치료제 비의 최적화
나노입자 조성물 내 지질 성분 및 치료제 및/또는 예방제의 상대적인 양이 효능 및 내성의 고려사항들에 따라 최적화될 수 있다. 치료제 및/또는 예방제로서 RNA를 포함한 조성물에 대해, N:P 비가 유용한 척도로 작용할 수 있다.
나노입자 조성물의 N:P 비가 발현 및 내성 둘 모두를 제어하기 때문에, 낮은 N:P 비 및 강한 발현을 갖는 나노입자 조성물이 바람직하다. N:P 비는 나노입자 조성물에서 지질 대 RNA의 비에 따라 다양하다. 따라서, 총지질 대 RNA의 wt/wt 비는 약 50 mol %의 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물, 약 10 mol % 인지질 (예를 들어, DOPE 또는 DSPC), 약 38.5 mol % 구조 지질 (예를 들어, 콜레스테롤), 및 약 1.5 mol % PEG 지질 (예를 들어, PEG-DMG)을 포함한 지질 제형에 대해 10:1, 15:1, 20:1, 32:1, 40:1, 50:1, 내지 60:1 사이에서 변화된다. N:P 비는 단일 양성자화된 질소 원자를 가정한 각각의 나노입자 조성물에 대해 계산된다. 각각의 조성물의 캡슐화 효율 (EE), 크기, 및 다분산도 지수가 또한 측정된다.
일반적으로, 더 높은 총 지질:RNA 비를 갖는 조성물이 더 높은 캡슐화 효율성을 갖는 더 작은 입자를 생성하고, 이 둘 모두는 바람직하다. 그러나, 이러한 제형에 대한 N:P 비는 일반적으로 4를 초과한다. 당 업계에서 현행 표준 예컨대 상기 기재된 MC3 제형은 5.67의 N:P 비를 갖는다. 따라서, N:P 비, 크기, 및 캡슐화 효율 사이의 밸런스가 맞아야 한다.
상이한 N:P 비를 갖는 나노입자 조성물의 효능을 탐구하기 위해, 낮은 (0.05mg/kg) 또는 높은 (0.5mg/kg) 용량의 나노입자 조성물이 정맥내로 투여된 후 마우스에서 루시퍼라제 (Luc) 또는 인간 에리트로포이에틴 (hEPO)의 발현이 검사된다. 발현된 Luc 또는 hEPO의 농도는 투여 3, 6, 및/또는 24시간 후에 측정된다.
실시예 15: 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물의 함량의 최적화
더 높은 캡슐화 효율성을 갖는 더 작은 입자가 일반적으로 바람직하기 때문에, 나노입자 조성물의 지질 성분에서 다양한 요소의 상대적인 양이 이들 파라미터에 따라 최적화된다.
식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물이 최적화에 대해 선택된다. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물의 상대적인 양은 제형 내 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물의 최적의 양을 결정하기 위해 인지질로서 DOPE 또는 DSPC를 포함한 조성물에서 30 mol % 내지 60 mol % 사이에서 변화된다. 제형은 3:1의 지질-mRNA 용액 내 물 대 에탄올 비와 NanoAssemblr 미세유체 기반 시스템 상에서 12 mL/min의 mRNA 용액 내로 지질 용액의 주입 속도로 표준화된 과정을 사용하여 제조된다. 이 방법은 나노-침전 및 입자 형성을 유도한다. 동일한 나노-침전을 달성하기 위해, 비제한적으로, T-접합 또는 직접적인 주입을 포함하는 대안적인 과정이 또한 사용될 수 있다.
최고 캡슐화 효율성을 갖는 최소 입자를 생성하는 제형이 일반적으로 바람직하지만, 그러나 더 큰 또는 더 작은 입자 크기가 (예를 들어, 표적 장기의 개창술 크기에 기반하여) 주어진 적용 기반하여 바람직할 수 있다. 조성물은 또한 그것의 Luc 또는 hEPO 발현 수준 및 사이토카인 프로파일에 대해 평가된다.
실시예 16: 인지질의 최적화
나노입자 조성물의 지질 성분 내 인지질의 상대적인 양은 제형을 추가로 최적화하기 위해 변화된다. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물은 나노입자 조성물에서 사용하기 위해 선택되고 DOPE 및 DSPC가 인지질로 선택된다. 추가의 인지질이 또한 평가될 수 있다. 나노입자 조성물은 0 mol % 내지 30 mol % 사이로 상대적인 인지질 함량을 변화함으로 제조된다. 조성물은 그것의 크기, 캡슐화 효율, Luc 또는 hEPO 발현 수준, 및 사이토카인 프로파일에 대해 평가된다.
실시예 17: 구조 지질의 최적화
나노입자 조성물의 지질 성분 내 구조 지질의 상대적인 양은 제형을 추가로 최적화하기 위해 변화된다. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물은 나노입자 조성물에서 사용하기 위해 선택되고 콜레스테롤이 구조 지질로 선택된다. 추가의 구조 지질이 또한 평가될 수 있다. 나노입자 조성물은 18.5 mol % 내지 48.5 mol % 사이로 상대적인 구조 지질 함량을 변화함으로 제조된다. 조성물은 그것의 크기, 캡슐화 효율, Luc 또는 hEPO 발현 수준, 및 사이토카인 프로파일에 대해 평가된다.
실시예 18: PEG 지질의 최적화
나노입자 조성물의 지질 성분 내 PEG 지질의 상대적인 양은 제형을 추가로 최적화하기 위해 변화된다. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물은 나노입자 조성물에서 사용하기 위해 선택되고 PEG-DMG가 PEG 지질로 선택된다. 추가의 PEG 지질이 또한 평가될 수 있다. 나노입자 조성물은 0 mol % 내지 10 mol % 사이로 상대적인 PEG 지질 함량을 변화함으로 제조된다. 조성물은 그것의 크기, 캡슐화 효율, Luc 또는 hEPO 발현 수준, 및 사이토카인 프로파일에 대해 평가된다.
나노입자 조성물 제형의 최적화에서 유용한 예시적인 제형이 표 23에 제시되어 있다.
표 23. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 예시적인 제형.
Figure pct00548
실시예 19: 입자 크기의 최적화
상이한 신체상의 기관에 대한 개창술 크기는 종종 다양하다; 예를 들어, 신장은 간보다 더 작은 개창술 크기를 갖는 것으로 알려져 있다. 따라서, 특정 장기 또는 기관의 군에 치료제 및/또는 예방제의 전달을 표적화하는 것 (예를 들어, 구체적으로 전달하는 것)은 상이한 입자 크기를 갖는 나노입자 조성물의 투여를 요할 수 있다. 이 효과를 조사하기 위해, 표 23에 포함된 것들과 같은 제형을 갖는 나노입자 조성물이 Nanoassemblr 기기를 사용하여 다양한 입자 크기로 제조된다. 나노입자 조성물은 Luc를 인코딩하는 RNA를 포함한다. 각각의 상이하게 크기조정된 나노입자 조성물은 후속으로 마우스에 투여되어 전달 선택성에 대한 입자 크기의 효과를 평가한다. 2 또는 그 초과의 기관 또는 기관의 군에서 Luc 발현은 각각의 장기에서 상대적인 발현을 평가하기 위해 생물발광을 사용하여 측정될 수 있다.
실시예 20: 전처리에 이은 투여
대상체에게 나노입자 조성물의 투여는 낮은 내성을 나타내는 염증, 주입 관련된 반응, 및 다른 바람직하지 않은 효과를 초래할 수 있다. 이들 효과는 바람직하지 않은 면역반응성에 기인할 수 있다.
부정적 효과에 대처하기 위해, 나노입자 조성물은 대상체에게 하나 이상의 서브스턴스 (예를 들어, 보조-약물 또는 추가의 치료제 및/또는 예방제)와 공-투여된다. 잠재적으로 유용한 추가의 치료제 및/또는 예방제는 스테로이드 (예를 들어, 코르티코스테로이드), 항히스타민제, H1 수용체 차단제, H2 수용체 차단제, 항-염증성 화합물, 스타틴, BTK 억제제, S1P1 효능제, 글루코코르티코이드 수용체 조절 물질 (GRMs), 및 에스트라디올을 포함한다. 비-인간 영장류는 덱사메타손 및 아세트아미노펜으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 치료제로 사전처리된다. 추가의 치료제는 나노입자 조성물의 투여 24시간, 1시간, 또는 24시간 및 1시간 둘 모두 전에 투여된다. 샘플 프로토콜은 표 24에 요약되어 있다. 전처리의 유효성을 평가하기 위해 사이토카인 프로파일, 염증, 및 다른 파라미터가 측정되고 비교된다.
표 24. 전처리 연구를 위한 샘플 프로토콜.
Figure pct00549
예를 들어, 유용한 치료적 처치 과정은 1.3 mpk의 용량 수준으로 나노입자 조성물의 투여에 대해 1일 이전 및 그날 (1시간 이전) 둘 모두에 추가의 치료제 및/또는 예방제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 추가의 치료제 및/또는 예방제는 다양한 상이한 경로에 의한 전달을 위해 제형화될 수 있다. 예를 들어, 덱사메타손은 경구로 전달될 수 있다. 일반적으로, 추가의 치료제 및/또는 예방제는 임상적으로 승인된 또는 전형적인 투약량 수준으로 투여된다.
실시예 21: 비-인간 영장류에 대한 투여
비-인간 영장류에 대한 나노입자 조성물의 내성 및 효능은 사이노몰구스 원숭이에서 평가되었다. 원숭이에 4주 동안 매주 1회 hEPO를 인코딩하는 mRNA를 포함한 최적화된 나노입자 조성물이 투여되었다. hEPO 단백질, mRNA, 및 사이토카인 프로파일의 수준은 각각의 투여 전 및 2, 6, 12, 24, 48, 72, 및 120시간 후 ELISA-기반 기술을 사용하여 측정되었다.
비-인간 영장류에 대한 전처리의 효과는 hEPO를 인코딩하는 mRNA를 포함하는 표준 MC3 제형을 사용하여 평가되었다. 연구 설계는 표 25에 요약되어 있다. 수컷 원숭이에는 5 ml/kg/h의 투약량 비율에서 4주 동안 매주 1회 나노입자 조성물이 투여되었고 메토트렉세이트 또는 덱사메타손으로 사전처리되었다.
표 25. 사이노몰구스 원숭이에서 전처리 연구에 대한 프로토콜.
Figure pct00550
전처리 연구의 결과는 도 1에 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 임의의 전처리의 부재에서, 최대 발현 수준은 연구의 과정에 걸쳐 거의 70% 감소하였다. 메토트렉세이트는 임의의 특정 유익한 효과를 부여하지 않았다. 그러나, 덱사메타손의 사전-투여는 사전처리를 포함하지 않은 치료 과정에 비교하여 증가된 단백질 발현을 초래했다. 현저하게는, 혈장/혈청 단백질 발현에서의 최소 감소가 덱사메타손으로 사전처리된 동물에 대해 경시적으로 관측되었다. 이들 결과는 코르티코스테로이드 예컨대 덱사메타손의 사전처리가, 예를 들어, 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 함유하는 나노입자 조성물의 내성 및 효능을 개선한다는 것을 시사한다.
비-인간 영장류에 대한 나노입자 조성물의 내성 및 효능은 또한 화합물 18을 포함하는 샘플 제형을 사용하여 조사되었다. 제형은 상기에 기재되고 hEPO mRNA가 포함된 표준 MC3 제형에 따라 제조되었다. 영장류에 60분 동안 정맥내 주입을 통해 0.05 (그룹 1), 0.3 (그룹 2), 또는 1.0 (그룹 3) mpk의 단일 용량이 투여되었다. 3 영장류에 각각의 용량이 투여되었다. hEPO의 발현은 투약 이전과 처리 2, 6, 24, 48, 및 96시간 후에서 측정되었다 (표 26). Tmax, Cmax, 및 AUC를 포함한 약동학적 파라미터가 또한 결정되고 표 27에 제시되어 있다. 표 28은 보체 활성화의 지표의 수준을 포함하고, 반면에 표 29는 사이토카인 유도 데이터를 포함한다.
표 26. 비-인간 영장류에 대한 나노입자 조성물의 투여에 의한 다양한 시점에서 측정된 hEPO 발현.
Figure pct00551
표 27. 비-인간 영장류에 대한 나노입자 조성물의 투여에 의해 측정된 약동학적 파라미터.
Figure pct00552
표 28. 비-인간 영장류에 대한 나노입자 조성물의 투여에 의한 다양한 시점에서 측정된 보체 활성화 지표.
Figure pct00553
표 29. 비-인간 영장류에 대한 나노입자 조성물의 투여에 의한 다양한 시점에서 측정된 사이토카인 유도.
Figure pct00554
일반적으로, 제형은 용량- 반응 효과로 MC3 제형에 유사하게 용인되었다. 아스파르테이트 아미노기전달효소 (AST)는 고용량 그룹에서 2일째에 증가했고 5일째까지 기준선으로 복귀했다. 그러나, 알라닌 아미노기전달효소 (ALT) 수준은 증가하지 않았다. 일반적으로, 보다 낮은 용량이 더 잘 용인되었다. 고용량은 더 높은 용량의 MC3 제형이 투여된 영장류에 대해 관측된 행동에 유사한, 체온 상승과 등을 구부린 자세를 유도했다. 백혈구 개수는 고용량 그룹에서의 동물에서 약간 상승했지만, 그러나 모든 그룹은 5일째에 망상적혈구 개수에서 현저한 증가를 보여, 강한 약리적 반응을 나타냈다. 보체 활성화 및 사이토카인 방출 (IL-6 및 MCP-1)은 용량-관련되었고 낮은 및 중간-용량 그룹에 대해서는 24시간 이내 그리고 고용량 그룹에서는 5일째까지 원상으로 될 수 있었다. hEPO 수준은 비-인간 영장류에 대해 MC3 제형의 비교할만한 용량의 투여에 의해 측정된 것들보다 더 높았다.
실시예 22: 비-인간 영장류에 대한 투여
비-인간 영장류에 대한 나노입자 조성물의 내성 및 효능이 또한 화합물 18, 25, 26, 및 48을 포함하는 샘플 제형 및 MC3을 사용하여 이들 화합물이 단백질 발현의 관점에서 분화되는지를 결정하기 위해 조사되었다. 제형은 상기에 기재되고 hEPO mRNA가 포함된 표준 MC3 제형에 따라 제조되었다. 표 30은 시험된 조성물의 세부사항을 포함하는 반면, 표 31은 마우스 및 랫트에서 Luc 및 hEPO mRNA의 상대적인 발현을 요약한다. 발현은 투여 6시간 후 측정되었다.
표 30. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 나노입자 조성물의 특성.
Figure pct00555
표 31. 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함한 나노입자 조성물의 비교.
Figure pct00556
도 2는 순 사이노몰구스 원숭이에 대해 60분 주입으로 0.01 mpk 용량의 정맥내 투여 후 측정된 hEPO mRNA 발현을 도시한다. 도면에서 분명한 바와 같이, 발현은 시험된 모든 제형에 대해 투여 6시간 후 최고였고, 화합물 18을 포함하는 이들 제형에 대해 최고였다.
표 32는 비-인간 영장류에 대해 제형의 0.01 mpk 용량의 투여에 의해 측정된 약동학적 파라미터를 요약한다.
표 32. 비-인간 영장류에 대해 식 (I), (IA), (IB), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), 또는 (III)에 따른 화합물을 포함하는 제형의 투여에 의해 측정된 약동학적 파라미터.
Figure pct00557
실시예 23: 비-인간 영장류에 대한 투여
hEPO 발현 연구의 결과는 표준 MC3 제형 및 항-혈구응집소 (항-HA) 항체를 인코딩하는 mRNA를 포함한 화합물 18을 함유하는 나노입자 조성물을 사용하여 입증되었다. 사이노몰구스 원숭이에 60분 동안 정맥내 주입을 통해 항-HA 항체를 인코딩하는 mRNA를 포함하는 화합물 18을 함유하는 나노입자 조성물 (표 33 참고; 실시예 2에 따라 제조됨)의 0.1 mpk 또는 0.3 mpk의 단일 용량이 투여되었다.
표 33
Figure pct00558
항-HA (항-혈구응집소) 항체 발현의 결과는 표 34 및 도 11에 도시되어 있다.
표 34
Figure pct00559
5배 더 높은 단백질 발현이 MC3 대응물에 대하여 화합물 18을 함유하는 나노입자 조성물로 관측되었고, 화합물 18로 0.1 내지 0.3 mpk 사이의 명확한 용량 반응이 밝혀졌다 (예를 들어, 0.3 mpk AUC는 0.1 mpk 용량으로부터의 것의 약 3배이다).
실시예 24: 질환 및 장애를 치료하는 방법
높은 내성 (예를 들어, 낮은 면역 반응을 야기함) 및 효능 (예를 들어, 치료제 및/또는 예방제의 효율적이고 효과적인 캡슐화 및 원하는 표적에 제제의 전달을 용이하게 함)을 갖는 나노입자 조성물 제형이 사용을 위해 선택된다. 나노입자 조성물을 갖는 제형에 대한 치료제 및/또는 예방제는 대상체의 상태에 기반한 사용을 위해 선택된다. 예를 들어, 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)를 인코딩하는 mRNA는 죽상경화성 신혈관 질환을 치료하기 위해 혈관 신생을 증진하도록 선택될 수 있는 반면, 아포지질단백질 B (apoB)를 녹다운할 수 있는 siRNA는 대사 질환 또는 장애 예컨대 이상지질혈증을 치료하기 위해 선택될 수 있다.
치료를 요하는 대상체는 나노입자 조성물로 치료 1 또는 그 초과 시간 이전에 작은 용량의 덱사메타손으로 사전처리된다. 나노입자 조성물은 바람직하게는 상기 대상체에게 정맥내로 투여되지만, 그러나 근육내, 진피내, 피하, 비강내, 또는 흡입 투여 경로가 또한 허용가능하다. 치료는 약 0.001mg/kg 내지 약 10mg/kg의 치료제 및/또는 예방제의 용량으로 제공되고, 대상체의 필요에 따라 매일, 매주, 격주로, 또는 매월 반복된다.
실시예 25: 피하 투여
피하투여에 의한 단백질 발현에 대한 본 개시내용의 지질의 효과가 연구되었다. 본 개시내용의 지질 및 루시퍼라제 또는 hEPO를 발현하는 mRNA를 함유하는 제형이 0.5 mpk에서 암컷 CD-I 마우스에게 피하로 투여되었다. 발현 수준은 주입 후 3, 6 및 24시간에서 전신 발광성 이미지형성 (BLI)을 통해 수득되었고 그리고 간, 비장 내 그리고 주입 부위에서의 발현 수준은 24시간 후 생체외 평가되었다. 역 에스테르는, 예를 들어 6.5의 인자로 MC3 (화합물 30)을 능가하는 것으로 밝혀졌다. 또한 하기를 참조한다: 표 35 및 36, 및 도 19 및 27.
표 35는 본 개시내용의 다양한 나노입자 조성물을 사용한 루시퍼라제 발현 수준과, 상기에 기재된 바와 같이, 피하 투여 후 MC3 제형을 사용한 루시퍼라제 발현 수준에 비교된 본 개시내용의 다양한 나노입자 조성물을 사용한 루시퍼라제 발현 수준을 요약한다.
표 36은, 상기에 기재된 바와 같이, 피하 투여에 따른 MC3 또는 화합물 18을 함유하는 제형을 사용한 hEPO 발현 수준에 비교된 본 개시내용의 다양한 나노입자 조성물을 사용한 hEPO 발현 수준을 요약한다.
Figure pct00560
실시예 26: 비-인간 영장류에서 개선된 엔도조말 탈출 및 지속된 효율 및 안전성을 갖는 신규한 아미노 지질의 개발
물질 및 방법
mRNA 합성 : 본 명세서에서 기재된 실험에 사용된 mRNA는 폴리-A 꼬리를 포함하는, 5' 및 3' 미번역된 영역 (UTR)을 합체하는 선형화된 DNA 템플레이트로부터 T7 중합효소-매개된 전사에 의해 시험관내 합성되었다. mRNA는 정제되고 원하는 농도에서 시트레이트 완충액에 재-현탁되었다. 공여체 메틸기 S-아데노실메티오닌 (SAM)이 메틸화된 캡핑된 RNA (cap-0)에 첨가되어, mRNA 번역 효율이 증가하는 cap-1을 초래했다.
지질 합성 : 본 명세서에서 기재된 실험에서 시험된 지질 화합물은 실시예 1에서 기재된 바와 같이 합성되었다.
LNP 제형의 조제 : 지질을 50:10:38.5:1.5 (이온화가능 지질: DSPC: 콜레스테롤: PEG-지질)의 몰비로 에탄올에 용해시켰다. 지질 혼합물을 미세유체 혼합기를 사용하여 3: 1 (수성: 에탄올)의 비로 mRNA를 함유하는 6.25 mM 아세트산나트륨 완충액 (pH 5)과 조합시켰다. 제형은 적어도 18시간 동안 투석 카셋트에서 포스페이트 완충 식염수 (pH 7.4)에 대해 투석되었다. 제형은 원심 여과를 통해 농축되고, 0.22-㎛ 필터를 통해 통과되고 사용시까지 4℃에서 저장되었다. 모든 제형은 입자 크기, RNA 캡슐화, 및 내독소에 대해 시험되었고, 90% 초과 캡슐화 및 <lEU/mL 내독소를 갖는, 크기가 80nm - 100nm 사이인 것으로 밝혀졌다. LNP 제형의 명백한 pKa는 TNS 검정을 통해 결정되었다.
TNS 검정: 마스터 완충액 스톡 (10 mM 인산나트륨, 10 mM 나트륨보레이트, 10 mM 나트륨시트레이트, 150 mM 염화나트륨)을 제조하고 LNP 제형의 명백한 pKa를 결정하기 위한 다양한 pH 값으로 완충액을 제조하기 위해 사용하였다. 수산화나트륨 (1 M) 및 염산 (1 M)을 사용하여, 21개 독특한 완충액을 마스터 완충액 스톡으로부터 약 3 내지 12 사이의 pH 값으로 제조하였다. 다음으로, DMSO 내 300μM 6-(p-톨루이디노)-2-나프탈렌 설폰산 나트륨염 (TNS 시약)의 스톡을 제조하고 LNP는 0.04 mg/mL mRNA의 농도로 원하는 제형 완충액과 혼합하였다. 이 검정은 lx PBS 및 20 mM Tris w/ 8% 수크로스 완충액에서 입증되었다. 다양한 pH 값에서의 완충 용액이 각각의 pH에 대해 3중으로 96-웰 플레이트에 첨가되었다. 각 웰에 0.04 mg/mL의 mRNA 농도로 3.26μL의 LNP 샘플 및 2.0μL의 300 μM TNS 시약 용액이 첨가되었다. 주의 깊은 혼합 후, 얻어진 형광 값이 각각의 플레이트에 대해 판독되어 형광 값 대 완충액 pH의 에스자형 플롯을 생성했다. 이 곡선의 변곡점의 로그는 LNP 제형의 명백한 pKa이다.
생체내 연구
동물에 대한 LNP 투여 : 포스페이트 완충 식염수 (PBS)에서 희석된 mRNA-LNP를 3분 동안 열 램프를 사용하여 동물을 온화한 가온 후 29 g, 3/10 cc 인슐린주사기 (마우스) 또는 27 g, 1 mL 주사기 (랫트)를 사용하여 꼬리 정맥을 통해 암컷 CD-I 암컷 마우스 (체중 18 내지 22g) 및 수컷 스프래그-다우리 랫트 (체중 225-250g) 안으로 정맥내로 주사하였다 (5 mL/kg).
마우스의 전신 및 생체외 장기 생물발광 이미지형성: CD-I 마우스에 15 mg/mL의 농도로 사용 직전에 PBS에 희석된 200μL Xenolight D-루시페린 K+ 염으로 복강내로 (IP) 이미지형성 시점 15분 이전에 주사되었다. 장기의 생체외 이미지형성은 루시페린 투여의 25분 이내에 완료되었다. 모든 이미지는 총 유입에 대한 관심 있는 영역에 의해 정량화되었다.
hEPO에 대한 채혈 및 분석. 혈액은 꼬리 정맥을 통해 마우스 또는 랫트로부터 수집되고 hEPO 농도는 hEPO ELISA 검정을 사용하여 결정되었다.
NHP 연구: 비인간 영장류 연구는 천연 사이노몰구스 원숭이 (cynos), 2-4 연령, 체중 2-6kg을 사용하여 수행하였다. 무 처리 무작위화 또는 블라인딩 방법이 임의의 동물 연구에 대해 사용되었다. 샘플 크기는 자원 방정식 방법에 의해 결정되었다. 주입에 대해서는, 포스페이트 완충 식염수 (PBS) 내 mRNA-LNP를 주변 정맥에 삽입된 일시적 내재 카테터를 사용하여 60-분 정맥내 주입에 의해 투여되었다.
NHP 샘플에 대한 hEPO ELISA: 인간 Epo 수준은 인간 에리트로포이에틴 면역검정을 사용하여 측정되었다. 사이토카인 수준은 비-인간 영장류 사이토카인 키트를 사용하여 측정되었다.
NHP 샘플에 대한 인간 IgG 분석: 10.0-μL 매트릭스 분취액은 저단백질 결합 96-웰 플레이트로 이전된다. 25.0-μL 분취액의 작업 내부 표준 용액이 첨가되고, 샘플 분취액은 장입 완충액으로 희석된다. 인간 IgG 및 그것의 내부 표준은 단백질 A 자기 비드를 사용하여 단리된다. 세척 후, 포착된 단백질은 Rapigest를 사용하여 변성되고, DTT를 사용하여 환원되고, 아이오도아세트산을 사용하여 알킬화되고, 그리고 트립신으로 소화된다. 최종 추출물은 양이온 전기분무를 사용하여 MS/MS 검출로 HPLC를 통해 분석된다. 선형의 1/농도2 계량된, 최소 자승 퇴행 알고리즘이 사용되어 알려지지 않은 샘플을 정량한다.
혈청 ALT 및 AST 수준: 샘플은 모듈식 분석적 분석기를 사용하여 분석되었다.
혈청 C5b9 수준: C5b9 샘플 분석은 ELISA 방법을 사용하여 수행되었다. 사용된 키트는 BD Bioscience로부터의 인간 C5b-9 ELISA 세트 및 시약 세트 B였다. 연구 샘플은 1/100 희석된 4중복 샘플에서 분석되었다.
mRNA 수준의 측정을 위한 bDNA: mRNA 샘플 분석 (bDNA 방법)은 Affymetrix로부터의 QuantiGene® 2.0 시약 시스템 키트를 사용하여 수행되었다. 연구 샘플은 QuantiGene 샘플 프로세싱 키트 (혈액 샘플)를 사용하여 분석 이전에 용해되었다. 연구 샘플은 1/100 내지 1/1250000 사이로 희석된 중복 샘플에서 분석되었다.
LC-MS/MS에 의한 지질의 정량화: 간 샘플은 19 eq. (w/v)의 물 (DF=20)의 첨가에 따라 균질화되었다. 단백질은 침전되고 매칭하는 블랭크에서 제조된 보정 표준에 대해 분석되었다. 크로마토그래피 분리 및 정량화는 LC-MS/MS 시스템으로 달성되었다. 샘플은 HPLC를 통해 주사되고 분리되었다. 양이온 방식으로 작동된 삼중-사중극자 MS/MS 시스템이 신호 검출을 위해 사용되었다
대사물 확인: 화합물 18 (10 μM)을 50 mM 인산염 버퍼, pH 7.4 내에 50/50 v/v 순수한 혈장 (희석되지 않음)/기질액으로 구성된 인큐베이션 혼합물 (200μL 최종 인큐베이션 용적)에서 인간 혈장 (29.0 mg 단백질/인큐베이션)으로 인큐베이션하였다). 혈장은 남성 및 여성 공여체로부터 수득되었고 K2EDTA 항응고제를 함유했다. 반응은 인간 혈장에 기질액의 첨가에 의해 개시되었고 600μL의 중단 시약 (아세토니트릴)의 첨가에 의해 4 지정된 시점 (0, 30, 60 및 90분)에서 중단되었다. 중단된 인큐베이션 샘플은 원심분리되고 (예를 들어, 10℃에서 10분 동안 10,000 × g) 상청액 분획은 LC-MS/MS에 의해 분석되어 화합물 18로부터 형성된 대사물이 특징화되었다. 추가의 인큐베이션은 양성 대조군 프로카인 (5 μM)으로 수행되어 시험 시스템의 적격성을 확립하였다. 샘플은 LC-MS/MS에 의해 분석되었다.
엔도조말 탈출 효율을 정량화하기 위한 현미경 검사-기반 검정: 화학적으로 변형된 시험관내 전사된 mRNA 개똥벌레 루시퍼라제를 캡슐화하는 형광으로 라벨링된 LNP (0.1% 로다민 DOPE) (Rhod-Luc LNP)를 LNP 흡수를 정량하기 위해 사용하였고 단일 분자 FISH (smFISH)가 세포질 mRNA 분자의 수의 정량화를 가능하게 했다. HeLa 세포는 ATCC DMEM 배양 배지를 사용하여 96-웰 플레이트로 분주되었고, 80% 밀집도에 도달하면 세포는 세포질 및 핵 검출 라벨과 함께 인큐베이션되고, 이어서 100 ul 용적에서 웰당 25 ng (mRNA)으로 Rhod-Luc LNP로 형질감염되었다. 세포는 LNP로 4시간 동안 인큐베이션되었고, 그 다음 샘플은 4 % 파라포름알데하이드에 고정되고 공초점 이미지형성으로 높은 함량 스크리닝 시스템 (Opera Phenix High-Content Screening System)에서 이미지화되었다.
병렬적으로, 세포는 비제형화된 루시퍼라제 mRNA로 전기천공되었다. 전기천공된 세포는 LNP 처리된 웰들에 인접한 웰들에 씨딩되었고, 전체 플레이트는 동시에 고정되었다. 플레이트가 LNP 흡수에 대해 이미지화된 후, 샘플은 smFISH 하이브리드화를 위해 가공되었다. 플레이트는 공초점 이미지형성을 사용하여 이미지화되었고, 그리고 기준점으로 전기천공된 샘플을 사용하여 LNP 처리된 샘플에서 단일 분자 세포질 mRNA (R, 세포내이입 소기관으로부터 방출됨)의 수를 정량하기 위해 대물 분석이 사용되었다. 세포내이입 마커 EEA1 (조기 엔도솜) 및 Lampl (리소좀)으로 공-염색을 사용하여 강도 기반 분석 결과를 확인하였다.
Rhod-Luc LNP는 유리 상에 직접적으로 침착되어 LNP 처리된 세포에 대해 사용된 동일한 취득 설정을 사용하여 이미지화되었다. 세포내 LNP 흡수 (세포당 LNP의 수, L)는 로다민 채널 내 세포당 형광 강도 합 (Cellint)과 유리상의 단일 LNP 대상물의 평균 형광 강도 (LNPint) 사이의 비로 계산되었다. 세포질 mRNA의 수와 내재화된 LNP 사이의 비 (R/L)로서 정의된 엔도조말 탈출 비 (EER)는 이 연구에서 사용된 두 제형 (화합물 18 및 MC3) 사이의 엔도조말 탈출 효율을 비교하기 위해 사용되었다.
통계적인 분석: 평균은 다중비교 (단일 참조에 대해 다중 조건을 비교하기 위한 던넷 또는 조건의 쌍을 비교하기 위한 시닥)를 위한 사후 시험으로 통상적인 원-웨이 ANOVA를 사용하여 비교되었다. 곡선하 면적 (AUC)은 사다리꼴 규칙을 사용하여 계산되었고 z 값이 계산되었다. 모든 시험에 대해, 2-테일드 P 값 < 0.05가 통계적으로 상당한 것으로 간주되었고 도면에 * < 0.05, ** < 0.005, 또는 *** < 0.001로 도시되어 있다. 프리즘 7.0b가 사용되었다.
지질 꼬리의 최적화
넓은 화학적 공간의 초기 스크리닝은 mRNA 캡슐화를 효과적으로 가속할 수 있고 우월한 이화학적 특성을 갖는 LNP를 제공하는 아미노 지질 헤드 기로서 에탄올아민을 확인했다. 에탄올아민 헤드 기를 디-리놀레산 지질 꼬리 (화합물 281)와 배합시키는 것은 루시퍼라제 mRNA의 높은 캡슐화, 작은 입자 크기, 및 낮은 다분산도 지수를 갖는 LNP를 생성했다. 화합물 281을 갖는 LNP는 siRNA 전달에 대해 최적인 것으로 밝혀진 범위인 표면 pKa (입자에 대한 명백한 값)를 가졌다 (Semple, S.C. et al., Nature Biotech. 2010. 28, 172-176, Jayaraman, M., et al. Angew. Chem. Int. Ed. 2012, 51, 8529-8533 참고, 이들 각각의 전체 내용은 그 전체가 참고로 본 명세서에 편입되어 있음). 신규한 아미노 지질의 효율을 평가하기 위해, 신규한 화합물을 사용한 LNP가 리포터로서 루시퍼라제 mRNA를 사용한 마우스에서 생체내 시험되었다. MC3 LNP는 각각의 실험에서 대조군으로서 포함되어, 실험으로부터 실험으로 LNP의 비교를 가능하게 했다. 측정된 루시퍼라제 활성은 또한 단백질 체내 분포의 결정을 가능하게 했다. 마우스로 화합물 281-기반 LNP의 0.5 mg/kg (mRNA 용량)의 정맥내 전달은 MC3 LNP 대조군보다 2-배 낮은 루시퍼라제 활성을 초래했다 (도 29A). 전신 이미지형성은 단백질 발현의 다수가 간에 국소화되었다는 것을 실증했다. 지질은 투여 24시간 후 마우스의 간 조직에서 잔존하는 최초 용량의 66%를 갖는 간 조직으로부터 MC3에 유사한 청소능을 가졌다 (표 37)
조직 청소능에 대한 지질 꼬리 내 에스테르 결합의 효과가 시험되었다 (화합물 138 및 136). 에스테르 결합은 생체내 에스테라제에 의한 대사를 유발하는 것으로 이전에 보고되었다. (Fukami, T. et al. Drug Metab. Pharmacokinet.2012, 27, 466-477 참고, 그것의 내용은 본 명세서에서 전체적으로 참고로 편입되어 있음). 이 전략은 MC3-기반 지질 구조에서 지질 청소능을 개선하는 것으로 밝혀졌다. (Maier M.A., Mol. Ther. 2013, 21, 1570-1578 참고, 그것의 내용은 본 명세서에서 전체적으로 참고로 편입되어 있음) 첫째, 지질의 화학적 안정성은 실온 및 37℃에서 에탄올 안정성을 측정함에 의해 평가되었다 (표 39). 순도에서 1% 미만 변화가 시험된 모든 지질에 대해 관측되었다. 화합물 138로 형성된 LNP는 표면 pKa > 7로 더 컸다. 24시간에서 검출된 지질이 없는 신속 조직 청소능이 이들 LNP에 대해 관측되었다 (표 37). 에스테르 기능 (화합물 136)의 제거는 LNP에 개선된 이화학적 특성 및 보다 낮은 LNP 표면 pKa를 부여했다.
단백질 발현에서의 개선은 분지형 에스테르가 도입될 때 관측되었다 (화합물 6). MC3 LNP에 동등한 발현이 관측되었지만, 제거율은 화합물 138 및 136에 대한 것보다 늦었다 (남아 있는 지질 67%, 표 37). 일차 에스테르-함유 지질 꼬리로 리놀레산 꼬리의 대체 (화합물 18)는 증가된 발현 (MC3보다 3-배 더 높음) 및 최적의 조직 청소능 (24h에서 검출된 지질 없음, 표 37)을 제공했다. 추가로 발현을 증가시키기 위해, 추가의 분지형 에스테르가 도입되었지만 (화합물 29), 이것은 6.00으로 표면 pKa의 저하 및 보다 낮은 루시퍼라제 활성을 초래했다. 또한, 본 화합물은 24h에서 남아 있는 68%로 상당히 느린 조직 청소능을 가졌다.
화합물 14는 알코올 작용기가 디메틸아민으로 대체된 하나의 대표적인 예이다. 이것은 화합물 18의 것에 비교할만한 이화학적 특성을 갖지만 전달 효율의 완전한 소실을 갖는 LNP를 생성했다 (도 29A).
지질 꼬리 구조 활성 관계, 구체적으로 (화합물 18, 화합물 25 및 26에 비교하여, 표 37), 일차 에스테르의 위치, 및 전달 효율과 조직 청소능에 대한 그것의 효과가 추가로 탐구되었다. 마우스에서, 루시퍼라제 mRNA를 사용하여, 본 발명자들은 화합물 25 및 화합물 26로 0.5 mg/kg 용량의 정맥내 전달 후 MC3에 비교하여 더 높은 발현을 관측했고, 화합물 26은 일련의 최고 루시퍼라제 활성을 제공했다 (도 29A). 유사한 결과가 mRNA를 인코딩하는 인간 에리트로포이에틴 (hEPO)을 사용하여 스프래그 다우리 랫트에서 수득되었다 (도 29C). 랫트 연구의 종결시 (투여 48h 후) 간에서의 모 아미노 지질 수준을 결정할 때 청소능은 일차 에스테르기 질소에 가깝게 이동함에 따라 감소되는 것으로 밝혀졌다 (<1% 화합물 18, 화합물 25 및 20% 화합물 26, 표 37). 화합물 18 및 화합물 25는 전달 효율과 약동학의 양호한 밸런스를 제공했다.
이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 아미노 지질의 다중 구조 모티프는 지질 꼬리 내 에스테르의 표면 전하, 구조, 및 위치, 및 헤드 기의 구조를 포함한 mRNA-함유 지질 나노입자의 효율적인 생체내 성능에 중요한 것으로 밝혀졌다. 높은 수준의 단백질 발현을 가능하게 하고 신속한 조직 청소능을 실증하였고, 만성 치료적 징후를 지지할 수 있는 독성 프로파일을 초래하는 지질이 모색되었다. 입자의 표면 pKa에 대한 변이가 관측되어, 발현의 효율로 추적되었다. 6.6의 평균값이 최적인 것으로 결정되었다. 그러나, 화합물 14가 저수준의 루시퍼라제 발현을 실증하였기 때문에 최적의 pKa 범위 내에 있는 것이 효율적인 전달을 위한 유일한 요건은 아니었다 (표 37). MC3-기반 시리즈로 관측된 것에 유사한 일차 에스테르의 도입은 신속한 생체내 조직 청소능을 입증한 지질을 제공하였다. 화합물 18을 사용한 대사물 확인 연구는 지질의 대사에서 제1 단계로서 일차 에스테르의 가수분해를 나타냈다. 이 가수분해를 효율적으로 하기 위해, 에스테르의 입체 및 전자가 균형을 이루는 것이 필요했다. 더 치환된 에스테르 (화합물 29) 및 더 적은 친전자성 에스테르 (화합물 26)는 각각 보다 느린 간 청소능을 실증했다. 에탄올 아민 헤드 기, 하나의 지질 꼬리 내 C8 위치에서의 일차 에스테르, 및 제2 지질 꼬리 내 이차 에스테르의 조합은 생체내 지질 청소능 및 단백질 발현의 양호한 균형을 제공하는 것으로 나타났다.
약동학적 연구
MC3에 화합물 18 및 화합물 25를 비교한 랫트 약동학적 연구가 수행되었다 (도 29B). 48시간에서 여전히 고농도로 존재하는 MC3에 대조적으로, 화합물 18 및 화합물 25는 24시간까지 간 조직으로부터 효율적으로 제거되었다. 각각 5.8h 대 6.9h의 간 조직 반감기로 화합물 18은 화합물 25보다 더 빠르게 간 조직으로부터 제거되었다 (전체 PK 파라미터에 대해서는 표 40 참고). 이 빠른 청소능은 MC3의 > 50h 반감기와 뚜렷한 대조를 이루었다. 화합물 18 및 화합물 25에 대한 생체내 양호한 지질 분해가 비장 및 혈장에서 또한 관측되었다 (표 40).
치료 징후를 위한 MC3-기반 LNP 내 mRNA의 반복 투약은 측정된 반감기에 기반하여 조직에서 MC3의 축적으로 이어질 것으로 기대된다. 따라서, 화합물 18의 양호한 단일 용량 약동학이 매주 투약으로 유지되는지 여부를 조사하였다. 다중 마우스 조직으로부터 MC3 및 화합물 18의 청소능은 1, 8 및 15일째에 0.05 mg/kg mRNA 투약 후 측정되었다 (도 30A). MC3 LNP로 투약에 따라, 지질은 간, 비장, 혈장, 신장, 심장 및 폐에서 검출되었으며, 간 및 비장이 최대 농도를 함유하였다 (도 30A, 조직의 전체 패널에 대해 도 35A 참고). MC3의 축적은 각각의 투약 후 관측되었다. 간 및 비장은 화합물 18의 최고 수준을 가졌으나, 그러나 MC3보다는 수준이 상당히 낮았다. 화합물 18은 또한 혈장, 폐, 및 신장에서 검출되었으나, 심장에서는 검출되지 않았다 (도 35A). 화합물 18-기반 LNP에서 마우스로 정맥내로 0.5 mg/kg hEPO mRNA가 전달될 때 관측된 발현의 일관된 수준 (도 30B)은 반복 투약에 대한 잠재력을 입증한다.
화합물 18을 사용한 시험관내 대사물 확인 연구가 또한 수행되었다. 이들 연구는 화합물 18의 대사의 초기 단계는 화합물 166으로 일차 에스테르 가수분해였다는 것을 나타냈다 (표 41 및 42). 마우스 간 조직으로부터 모 화합물 18 및 일차 대사물인 화합물 166의 소멸은 1, 8 및 15일째에 0.25 mg/kg mRNA를 투약한 후에 측정되었다. 도 30C에서 볼 수 있듯이, 모 화합물 18 및 대사물인 화합물 166 둘 모두의 신속 청소능이 관측되었다.
비-인간 영장류에서 발현
NHP는 설치류보다 LNP-기반 시스템에 대한 임상 반응에 보다 근접하게 근사하다 (DeRosa, F., Guild, B., Karve, S., Smith, L., Love, K., Dorkin, J.R., et. al. Therapeutic efficacy in a hemophilia B model using a biosynthetic mRNA liver depot system. Gene Ther. 2016, 23, 699-707, 이들의 내용은 본 명세서에서 그것의 전체로 참고로 편입되어 있음). 설치류로부터 비-인간 영장류 (NHP)로 번역하기 위해, 지질은 NHP에서 시험되었다. 이러한 목적을 위해, 단일 용량 후 NHP에서 화합물 18을 함유하는 LNP를 갖는 마우스 및 랫트에서 관측된 개선된 발현이 또한 달성될 수 있는지 여부가 평가되었다. 도 31은 2개의 상이한 mRNA 전달 대상물로 달성된 결과를 도시한다. 0.01 mg/kg의 hEPO-인코딩 mRNA의 용량이 60분 정맥내 주입을 통해 전달되었다. MC3 LNP 대조군에 비하여 hEPO 단백질의 5-배 더 높은 노출이 관측되었다 (도 31A). 유사하게, 항-인간 IgG 인플루엔자 A 항체에 대해 인코딩하는 제2 mRNA 전달대상물을 사용하여, MC3 LNP에 비교하여 발현 및 청소 용량 반응에서 5-배수 증가가 관측되었다 (도 31B 및 도 36). 별개의 연구는 단일 용량 후 NHP에서 지질 조직 축적을 평가했다. 설치류에서의 결과와 일치하여, MC3 잔류물이 투여 12시간 후에 다수의 조직에서 발견되었고, 간 및 비장에서 최고 수준으로 검출되었다. 그에 반해서, 화합물 18은 상당히 낮은 수준으로 존재했다 (도 35B). 이들 예비 데이터는 NHP에서 화합물 18의 전달 및 신속 제거의 개선된 효율의 번역을 입증한다.
본 실험은 교차종 번역성을 입증한다. 종에 걸친 다중 발현 및 약동학적 (PK) 연구는 마우스, 랫트 및 비인간 영장류에서 유사한 프로파일을 나타냈다. 영장류에서 mRNA 함유 화합물 18-기반 LNP의 정맥내 전달은 설치류에서 관측된 바와 같이 MC3에 비하여 유사하게 개선된 발현으로 다수개의 단백질의 효율적인 발현을 초래했다 (도 31A 및 31B). 또한, 조직으로부터 지질의 신속 청소능이 NHP에서 또한 관측되었다. 5주의 투약에 걸쳐 화합물 18 LNP로 효율적인 발현이 실증되었다 (도 31C).
비-인간 영장류에서 독성학 연구
영장류에서 반복 용량 실험에서 본 개시내용의 LNP에 의해 제공된 발현 수준이 평가되었다. 화합물 18-기반 LNP 내 hEPO mRNA의 0.2 mg/kg 용량이 5주 동안 매주 1회 사이노몰구스 원숭이 (n = 4)에 60-분 정맥내 주입을 통해 전달되었다. 설치류에서의 관찰에 따라, 실험의 과정에 걸쳐 일관된 노출이 관측되었다 (도 31C).
다음으로, 생체내 화합물 18-기반 LNP의 내성 및 안전성이 시험되었다. 스프래그 다우리 랫트 및 사이노몰구스 원숭이 둘 모두에서 화합물 18-기반 LNP의 전체 독물학적 평가가 각각의 종에서 3가지 용량 수준으로 매주 투약으로 표준 일-개월 연구를 사용하여 수행되었다. 랫트에는 0.05, 0.5, 및 2 mg/kg으로 투약되었고 비-인간 영장류에는 0.1, 0.3, 및 1 mg/kg으로 투약되었다. MC3-기반 LNP 시스템과 연관된 LNP-관련된 독성은 면역학 (사이토카인 및 보체 활성화) 및 간 손상과 일반적으로 연관된다. 랫트에서, 화합물 18로 비정상적인 결과는 없었다. 도 32 및 33은 간 손상의 두 지표인, 알라닌 전달효소 (ALT, 도 32A) 및 아스파르테이트 아미노기 전달효소 (AST, 도 32B)의 30일째 수준을 조명한다. PBS 대조군에 비해 임의의 용량 수준에서 효소 중 어느 하나의 최소 상승이 있고, 이 추세는 측정된 모든 임상 화학, 혈액학 및 면역학적 마커에 대해 일치한다. 이것은 0.3 mg/kg 용량 mRNA에서 ALT 및 AST가 상승되고 병리학이 괴사의 증거를 나타내는 LNP를 함유하는 MC3-기반 mRNA의 독성 프로파일과는 뚜렷한 대조를 이룬다 (도 37) (Sedic, M., Senn, J.J., Lynn, A., Laska, M., Smith, M., Platz, S.J., et al. Safety Evaluation of Lipid Nanoparticle-Formulated Modified mRNA in the Sprague-Dawley Rat and Cynomologus Monkey. Vet. Pathol. 2017,55, 341-354., 그것의 내용은 전체적으로 참고로 본 명세서에 편입되어 있음).
사이노몰구스 원숭이는 또한 모든 용량 수준에서 최소 발견을 나타냈다. 각각의 용량 후 순환하는 mRNA 수준의 측정은 실험의 과정에 걸쳐 일관된 노출을 실증했다 (도 37). 30일째에 1 mg/kg 용량에 대한 ALT (도 32C) 및 AST (도 32D) 수준은 대조군과 동일한 수준이었다. 보체 및 사이토카인을 포함한 면역 활성화의 마커에서 최소 상승이 관측되었다. 도 33A에서 나타낸 바와 같이, 용량 1 또는 용량 5 후 말단 보체 활성화 생성물인, C5b9 수준에서 유의미한 변화는 관측되지 않았다. 도 33B는 단핵구 화학-매력적인 단백질 (MCP-1)에 대해 관측된 기준선 이상의 약간의 변이를 나타낸다.
신규한 아미노 지질 시리즈의 최적화는 개선된 대사 프로파일에 부분적으로 기인하는 MC3에 비교될 때 랫트 및 비-인간 영장류에서 내성에서의 상당한 개선을 초래했다. 각각 최대 2 mg/kg 및 1 mg/kg 용량에서의 랫트 및 사이노몰구스 원숭이 둘 모두에서, 매주 투약 5주 후 간 손상 또는 보체 활성화의 징후는 검출되지 않았다. 이들 데이터는 본 개시내용의 지질 나노입자를 함유하는 mRNA의 반복 투약이 임의의 독성 징후 없이 순환하는 LNP 수준의 유지를 초래한다는 것을 나타낸다.
엔도조말 탈출 효율의 평가
예를 들어, MC3에 비하여, 개선된 전달 효율, 특히 흡수 및/또는 엔도조말 탈출이 조사되었다. 화합물 18기반 LNP로 ApoE 넉아웃 마우스 및 LDLr 넉아웃 마우스에서의 발현 연구는 발현에서 거의 완전한 소실을 나타내어 이 아미노 지질 시리즈가 MC3과 유사한 흡수 기전을 가지고 ApoE-매개된 LDLr 의존 방식으로 작용한다는 것을 나타낸다 (도 38). (Akinc, A. et al. Mol. Ther. 2010, 18, 1357-1364 참고, 그것의 내용은 본 명세서에서 전체적으로 참고로 편입되어 있음). 엔도조말 탈출 효율의 더 나은 이해를 얻기 위해, 시험관내 세포-기반 검정은 로다민 라벨링된 LNP를 사용하여 세포 흡수 및 단일 분자 형광 원위치 하이브리드화 (FISH)를 정량화하여 세포내이입 구획을 탈출하는 mRNA를 검출하도록 개발되었다. 도 34에서 볼 수 있듯이, 화합물 18 기반 LNP로 처리된 세포는 MC3 기반 LNP로 처리된 세포에 비교하여 상당히 낮은 양의 소기관 응집된 mRNA (적색)을 갖는다. 동시에, 단일 분자 세포질 mRNA 대상체의 밀도는 화합물 18-기반 LNP 처리된 세포에서 더 높다. 두 LNP 제형에 대해 엔도조말 탈출 효율을 정량적으로 비교하기 위해, 단일 세포 수준에서 세포질 mRNA의 수와 내재화된 LNP의 수 사이의 비가 계산되었다 (표 38). 결과는 LNP에서 MC3에 비교하여 화합물 18에 대한 효율에서 6-배수 증가를 나타냈다 (각각 0.76 및 0.13의 비).
세포에 의해 취해진 siRNA 기반 LNP의 2% 미만이 그것의 전달대상물을 사이토졸 안으로 방출한다는 것이 이전에 추정되었다. (Gilleron, J. et al. Nature Biotech. 2013. 31, 638-646 참고, 그것의 내용은 본 명세서에서 전체적으로 참고로 편입되어 있음.) 단일 분자 형광 현미경검사를 사용하여, 엔도조말 탈출 효율 (세포당 세포질 mRNA의 수와 내재화된 LNP의 수 사이의 비로 계산됨)이 시험관내 시스템에서 정량화되었다. 화합물 18에 대한 효율은 MC3에 비교하여 6-배 증가된 것으로 나타났다 (각각 0.76 및 0.13의 비). 이들 제형은 입자당 대략 5 mRNA 분자를 캡슐화하기 때문에, 여기서 보고된 엔도조말 탈출 비는 화합물 18 및 MC3 각각에 대해 15 및 2.5% 엔도조말 탈출 효율로 해석된다.
연구의 결과는 표 37-42에 요약되어 있다. 표 37은 나노입자의 이화학적 특성을 나타낸다. 엔도조말 탈출 효율성은 표 38에 제시되어 있다. 지질 순도는 표 39에 요약되어 있다. 표 40은 마우스 약동학적 파라미터를 나타낸다. 인간 간 세포 또는 인간 혈장으로 인큐베이션된 화합물 18에 대한 대사 프로파일링 및 특성규명의 결과는 각각 표 41 및 42에 요약되어 있다.
Figure pct00561
Figure pct00562
개별 혈장 및 조직 농도 데이터의 PK 분석은 비-입증된 프로그램 (Phoenix WinNonlin®, 버전 7.0 (Pharsight Corp., 캘리포니아주 마운틴뷰 소재))을 사용하여 수행되었다. 동력학 파라미터는 비구획적 모델 (혈장 (200-202), 균일한 가중, 희소 샘플링으로 혈관외 투약)을 사용하여 추정되었다. AUC는 선형 사다리꼴 규칙을 사용하여 계산되었다.모든 유래된 파라미터는 일 소수점이하 자리로 보고된, 피크 농도에 대한 시간 (Tmax) 및 반감기 (HL)를 예외로 3개의 상당한 숫자로 보고된다. 혈장 농도 데이터 또는 유래된 약동학적 파라미터에 대한 추가의 통계적인 분석은 수행되지 않았다.
Figure pct00563
등가물
비록 본 개시내용이 이들의 상세한 설명과 공조하여 기재되었지만, 전술한 설명은 예시하기 위해 의도되고, 첨부된 청구항들의 범위에 의해 정의되는 본 개시내용의 범위를 한정하지 않는다는 것을 이해해야 한다. 다른 양태, 이점, 및 변경은 하기 청구항들의 범위 내에 있다.
SEQUENCE LISTING <110> ModernaTX, Inc. <120> COMPOUNDS AND COMPOSITIONS FOR INTRACELLULAR DELIVERY OF THERAPEUTIC AGENTS <130> MRNA-032/001WO <150> US 62/471,937 <151> 2017-03-15 <150> US 62/475,140 <151> 2017-03-22 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 1 caaaggctct tttcagagcc acca 24 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polynucleotide <400> 3 caaaggcucu uuucagagcc acca 24

Claims (229)

  1. 식 (I)의 화합물 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체:
    Figure pct00564

    식 중,
    R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
    R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
    각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
    R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R10은 H, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고,
    그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
    각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택되고; 그리고 R4은 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 또는 -CQ(R)2일 때, (i) Q는, n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 때 -N(R)2가 아니고, 또는 (ii) Q는, n이 1 또는 2일 때 5, 6, 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아니다.
  2. 식 (III)의 화합물 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체:
    Figure pct00565

    식 중
    R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하고;
    R4은 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환된 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 카보사이클, 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR (각각의 o는 1, 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되고;
    Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)rOH, 및 -(CH2)rNR2로 구성된 군으로부터 선택되고,
    r은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되고;
    각각의 R5은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고, M"는 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
    R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R8은 C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R9은 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R10은 H, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR*, 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    그리고 각각의 q는 1, 2, 및 3로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
    각각의 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13으로부터 선택된다.
  3. 청구항 2에 있어서, Rx는 메틸인, 화합물.
  4. 청구항 2 또는 3에 있어서, 상기 화합물은 추가로, 음이온을 포함하는, 화합물.
  5. 청구항 3에 있어서, 상기 음이온은 염화물, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 포르메이트, 트리플루오로아세테이트, 디플루오로아세테이트, 트리클로로아세테이트 및 포스페이트로부터 선택되는, 화합물.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -OC(O)-M"-C(O)O-인, 화합물.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -OC(O)-인, 화합물.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, M은 -OC(O)-이고, 그리고 M'는 -C(O)O-인, 화합물.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, M은 -C(O)O-이고, 그리고 M'는 -OC(O)-인, 화합물.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, M 및 M' 각각은 -OC(O)-인, 화합물.
  11. 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, M 및 M' 각각은 -C(O)O-인, 화합물.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 식 (IA) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00566

    식 중
    l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고;
    m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택되고;
    M1은 결합 또는 M'이고;
    R4은 수소, 비치환된 C1-3 알킬, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, 또는 -(CH2)nQ이되, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고;
    M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다.
  13. 청구항 1에 있어서, 상기 화합물은 식 (IB) 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00567
    .
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, m은 5, 7, 또는 9인, 화합물.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 식 (II) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00568

    식 중
    l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고;
    M1은 결합 또는 M'이고;
    R4은 수소, 비치환된 C1-3 알킬, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n - oQ, 또는 -(CH2)nQ이되, n은 2, 3, 또는 4이고, 그리고 Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고;
    M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, R4은 수소인, 화합물.
  17. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, R4은 수소가 아닌, 화합물.
  18. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R인, 화합물.
  19. 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, 또는 -N(R)C(O)OR인, 화합물.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, 또는 -N(OR)C(=CHR9)N(R)2인, 화합물.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(R)C(O)R이되, R은 C1-3 알콕실, 또는 S(O)tC1 -3 알킬 (여기서 t는 0, 1, 또는 2임)로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬인, 화합물.
  22. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, Q는 헤테로아릴인, 화합물.
  23. 청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, Q는 헤테로사이클로알킬이고, 그리고 n은 3, 4, 또는 5인, 화합물.
  24. 청구항 1 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, R은 C1-3 알콕실, 아미노, 및 C1-C3 디알킬아미노로 구성된 군으로부터 선태된 하나 이상의 치환체로 치환된 C1-6 알킬인, 화합물.
  25. 청구항 1 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, R8은 4-원 카보사이클인, 화합물.
  26. 청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, R8은 4-원 카보사이클인, 화합물.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, R8은 4-원 카보사이클이되, 상기 카보사이클은 옥소, 티오, 아미노, C1-C3 알킬아미노, C1-C3 디알킬아미노, C1-C3 알콕시알킬아미노, C1-C3 디알콕시알킬아미노, C1-C3 알콕시알킬, 및 5 또는 6-원 헤테로사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되는, 화합물.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, M1은 M'인, 화합물.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, M 및 M'는 독립적으로 -C(O)O- 또는 -OC(O)-인, 화합물.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -S-S-인, 화합물.
  31. 청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, M 및 M' 중 하나는 -S-S-이고, 그리고 다른 것은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-인, 화합물.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, l는 1, 3, 또는 5인, 화합물.
  33. 청구항 1 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, R4은 비치환된 메틸 또는 -(CH2)nQ이되, Q는 OH, -NHC(S)N(CH3)2, 또는 -NHC(O)N(CH3)2인, 화합물.
  34. 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, M1은 부재하는, 화합물.
  35. 청구항 1 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", 또는 -YR"인, 화합물.
  36. 청구항 1 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 독립적으로 C3-14 알킬 또는 C3-14 알케닐인, 화합물.
  37. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, R1은 C5-20 알킬 및 C5-20 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  38. 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  39. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항에 있어서, R1은 C5-20 알킬인, 화합물.
  40. 청구항 1 내지 39 중 어느 한 항에 있어서, R1은 C6 알킬, C8 알킬, C9 알킬, C14 알킬 또는 C18 알킬인, 화합물.
  41. 청구항 1 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, R1은 C5-20 알케닐인, 화합물.
  42. 청구항 1 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, R1은 C18 알케닐인, 화합물.
  43. 청구항 1 내지 42 중 어느 한 항에 있어서, R1은 리놀레일인, 화합물.
  44. 청구항 1 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -R"M'R'인, 화합물.
  45. 청구항 1 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -(CHR5R6)m-M-CR2R3R7와 상이한, 화합물.
  46. 청구항 1 내지 45 중 어느 한 항에 있어서, R'은 -R*YR" 및 -YR"로부터 선택되는, 화합물.
  47. 청구항 1 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, Y는 사이클로프로필 기인, 화합물.
  48. 청구항 1 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y에 인접한 R"은 C1 알킬인, 화합물.
  49. 청구항 1 내지 48 중 어느 한 항에 있어서, R'은 C4 알킬, C4 알케닐, C5 알킬, C5 알케닐, C6 알킬, C6 알케닐, C7 알킬, C7 알케닐, C9 알킬, C9 알케닐, C11 알킬, C11 알케닐, C17 알킬, C17 알케닐, C18 알킬, 및 C18 알케닐로부터 선택되고, 이들 각각은 선형 또는 분지형인, 화합물.
  50. 청구항 1 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, R"은 C3 알킬인, 화합물.
  51. 청구항 1 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, R"은 C5 알킬인, 화합물.
  52. 청구항 1 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, R"은 C7 알킬인, 화합물.
  53. 청구항 1 내지 52 중 어느 한 항에 있어서, R1은 하이드록실로 치환된 C5-20 알킬인, 화합물.
  54. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, 또는 -OC(O)-M"-C(O)O-이되, M"는 C1-4 알킬 또는 C2-4 알케닐인, 화합물.
  55. 청구항 1 내지 54 중 어느 한 항에 있어서, M'는 아릴 기 또는 헤테로아릴 기인, 화합물.
  56. 청구항 1 내지 55 중 어느 한 항에 있어서, M'는 페닐, 옥사졸, 및 티아졸로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  57. 청구항 1 내지 56 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -R*YR" 및 -YR"으로부터 선택되는, 화합물.
  58. 청구항 1 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, Y는 사이클로프로필 기인, 화합물.
  59. 청구항 1 내지 58 중 어느 한 항에 있어서, R*은 C8 알킬인, 화합물.
  60. 청구항 1 내지 59 중 어느 한 항에 있어서, R*은 아미노, C1-C6 알킬아미노, 및 C1-C6 디알킬아미노로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된 C1-12 알킬인, 화합물.
  61. 청구항 1 내지 60 중 어느 한 항에 있어서, R"은 C3-12 알킬인, 화합물.
  62. 청구항 1 내지 61 중 어느 한 항에 있어서, R"은 C8 알킬인, 화합물.
  63. 청구항 1 내지 62 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R5은 H인, 화합물.
  64. 청구항 1 내지 63 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 R5은 하이드록실인, 화합물.
  65. 청구항 1 내지 64 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R6은 H인, 화합물.
  66. 청구항 1 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 R6은 하이드록실인, 화합물.
  67. 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환 또는 카보사이클을 형성하는, 화합물.
  68. 청구항 1 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 동일한, 화합물.
  69. 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C8 알킬인, 화합물.
  70. 청구항 1 내지 69 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C2 알킬인, 화합물.
  71. 청구항 1 내지 70 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C3 알킬인, 화합물.
  72. 청구항 1 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C4 알킬인, 화합물.
  73. 청구항 1 내지 72 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C5 알킬인, 화합물.
  74. 청구항 1 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C6 알킬인, 화합물.
  75. 청구항 1 내지 74 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 C7 알킬인, 화합물.
  76. 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은 상이한, 화합물.
  77. 청구항 1 내지 76 중 어느 한 항에 있어서, R2은 C8 알킬인, 화합물.
  78. 청구항 1 내지 77 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C1 알킬인, 화합물.
  79. 청구항 1 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C2 알킬인, 화합물.
  80. 청구항 1 내지 79 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C3 알킬인, 화합물.
  81. 청구항 1 내지 80 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C4 알킬인, 화합물.
  82. 청구항 1 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C5 알킬인, 화합물.
  83. 청구항 1 내지 82 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C6 알킬인, 화합물.
  84. 청구항 1 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C7 알킬인, 화합물.
  85. 청구항 1 내지 84 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C9 알킬인, 화합물.
  86. 청구항 1 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 복소환을 형성하는, 화합물.
  87. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3은, 이들이 부착된 원자와 함께 카보사이클을 형성하는, 화합물.
  88. 청구항 1 내지 87 중 어느 한 항에 있어서, 상기 카보사이클은 C6 카보사이클인, 화합물.
  89. 청구항 1 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 카보사이클은 페닐 기인, 화합물.
  90. 청구항 1 내지 89 중 어느 한 항에 있어서, 상기 카보사이클은 사이클로헥실 기인, 화합물.
  91. 청구항 1 내지 90 중 어느 한 항에 있어서, 상기 R2 및 R3에 부착된 원자와 함께 그것들에 의해 형성된 복소환 또는 카보사이클은, 하나 이상의 알킬 기로 치환되는, 화합물.
  92. 청구항 1 내지 91 중 어느 한 항에 있어서, M은 -C(O)O-인, 화합물.
  93. 청구항 1 내지 92 중 어느 한 항에 있어서, M은 -OC(O)-인, 화합물.
  94. 청구항 1 내지 93 중 어느 한 항에 있어서, M은 -OC(O)-M"-C(O)O-이되, M"는 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐인, 화합물.
  95. 청구항 1 내지 94 중 어느 한 항에 있어서, M은 -OC(O)-M"-C(O)O-이되, M"는 C1-4 알킬 또는 C2-4 알케닐인, 화합물.
  96. 청구항 1 내지 95 중 어느 한 항에 있어서, M은 아릴 기 또는 헤테로아릴 기인, 화합물.
  97. 청구항 1 내지 96 중 어느 한 항에 있어서, M은 페닐, 옥사졸, 및 티아졸로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  98. 청구항 1 내지 97 중 어느 한 항에 있어서, m은 5인, 화합물.
  99. 청구항 1 내지 98 중 어느 한 항에 있어서, m은 7인, 화합물.
  100. 청구항 1 내지 99 중 어느 한 항에 있어서, m은 9인, 화합물.
  101. 청구항 1 내지 100 중 어느 한 항에 있어서, R4은 비치환된 C1-4 알킬인, 화합물.
  102. 청구항 1 내지 101중 어느 한 항에 있어서, R4은 비치환된 메틸인, 화합물.
  103. 청구항 1 내지 102 중 어느 한 항에 있어서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, S, 및 P로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14- 원 방향족 또는 비-방향족 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)S(O)2R8, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR로부터 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
  104. 청구항 1 내지 103 중 어느 한 항에 있어서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)S(O)2R8, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR, 및 옥소 (=O), OH, 아미노, 및 C1-3 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된 N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
  105. 청구항 1 내지 104 중 어느 한 항에 있어서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 복소환, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)S(O)2R8,-N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR로부터 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 Q가 5- 내지 14-원 복소환이고, 그리고 (i) R4은 -(CH2)nQ (여기서, n은 1 또는 2임)이거나, 또는 (ii) R4은 -(CH2)nCHQR (여기서, n은 1임)이거나, 또는 (iii) R4은 -CHQR, 및 -CQ(R)2일 때, Q는 5- 내지 14-원 헤테로아릴 또는 8- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬인, 화합물.
  106. 청구항 1 내지 105 중 어느 한 항에 있어서, R4은 C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 및 -CQ(R)2로 구성된 군으로부터 선택되되, Q는 C3-6 카보사이클, N, O, 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)S(O)2R8, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -C(R)N(R)2C(O)OR로부터 선택되고, 그리고 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
  107. 청구항 1 내지 106 중 어느 한 항에 있어서, R4은 -(CH2)nQ 및 -(CH2)nCHQR로부터 선택되는, 화합물.
  108. 청구항 1 내지 107 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -OR인, 화합물.
  109. 청구항 1 내지 108 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -OH인, 화합물.
  110. 청구항 1 내지 109 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -O(CH2)nN(R)2인, 화합물.
  111. 청구항 1 내지 110 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -OC(O)R인, 화합물.
  112. 청구항 1 내지 111 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -CX3인, 화합물.
  113. 청구항 1 내지 112 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -CN인, 화합물.
  114. 청구항 1 내지 113 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(R)C(O)R 또는 -N(R)S(O)2R인, 화합물.
  115. 청구항 1 내지 114 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(H)C(O)R 또는 -N(H)S(O)2R인, 화합물.
  116. 청구항 1 내지 115 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(R)C(O)N(R)2인, 화합물.
  117. 청구항 1 내지 116 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(H)C(O)N(R)2인, 화합물.
  118. 청구항 1 내지 117 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(H)C(O)N(H)(R)인, 화합물.
  119. 청구항 1 내지 118 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(R)C(S)N(R)2인, 화합물.
  120. 청구항 1 내지 119 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(H)C(S)N(R)2인, 화합물.
  121. 청구항 1 내지 120 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(H)C(S)N(H)(R)인, 화합물.
  122. 청구항 1 내지 121 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -C(R)N(R)2C(O)OR인, 화합물.
  123. 청구항 1 내지 122 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -N(R)S(O)2R8인, 화합물.
  124. 청구항 1 내지 123 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -NHR8이되, R8은 옥소 (=O), 아미노 (NH2), 모노- 또는 디-알킬아미노, C1-3 알킬 및 할로로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 C3-6 사이클로알킬인, 화합물.
  125. 청구항 1 내지 124 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -NHC(=NR9)N(R)2이되, R9은 CN, C1-6 알킬, 또는 H인, 화합물.
  126. 청구항 1 내지 125 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -NHC(=CHR9)N(R)2이되, R9은 NO2, C1-6 알킬, 또는 H인, 화합물.
  127. 청구항 1 내지 126 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -OC(O)N(R)2 또는 -N(R)C(O)OR인, 화합물.
  128. 청구항 1 내지 127 중 어느 한 항에 있어서, Q는 트리아졸, 이미다졸, 피리미딘, 및 퓨린으로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  129. 청구항 1 내지 128 중 어느 한 항에 있어서, Q는 적어도 하나의 질소 고리 원자를 함유하는 5- 또는 6-원 헤테로사이클로알킬이고, 그리고 옥소 (=O), 아미노 (NH2), 모노- 또는 디-알킬아미노, 할로, 및 C1-3 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되는, 화합물.
  130. 청구항 1 내지 129 중 어느 한 항에 있어서, n은 1인, 화합물.
  131. 청구항 1 내지 130 중 어느 한 항에 있어서, n은 2인, 화합물.
  132. 청구항 1 내지 131 중 어느 한 항에 있어서, n은 3인, 화합물.
  133. 청구항 1 내지 132 중 어느 한 항에 있어서, n은 4인, 화합물.
  134. 청구항 1 내지 133 중 어느 한 항에 있어서, R7은 H인, 화합물.
  135. 청구항 1 내지 133 중 어느 한 항에 있어서, R7은 C1-3 알킬로부터 선택되는, 화합물.
  136. 청구항 1 내지 135 중 어느 한 항에 있어서, R3 및 R7은 H인, 화합물.
  137. 청구항 1 내지 136 중 어느 한 항에 있어서, R2은 H인, 화합물.
  138. 청구항 1 내지 137 중 어느 한 항에 있어서, R5 및 R6 중 적어도 하나의 존재는 메틸인, 화합물.
  139. 청구항 1 내지 138 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화합물 1-8 및 31, 및 이의 염 및 이성질체로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  140. 청구항 1 내지 139 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화합물 9-30, 32-36, 및 47-61 및 이의 염 및 이성질체로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  141. 청구항 1 내지 140 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화합물 65-75, 79-81, 94, 101, 103, 108-116, 및 118-135, 및 이의 염 및 이성질체로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  142. 청구항 1 내지 141 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화합물 136-232 및 이의 염 및 이성질체로부터 선택되는, 화합물.
  143. 청구항 1 내지 142 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화합물 233-235, 236, 238-244, 246-252, 254, 259-261, 및 263-280, 및 이의 염 및 이성질체로부터 선택되는, 화합물.
  144. 청구항 1 내지 143 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화합물 256 및 257, 및 이의 염 및 이성질체로부터 선택되는, 화합물.
  145. 청구항 1 내지 144 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 화합물 281-339, 및 이의 염 및 이성질체로부터 선택되는, 화합물.
  146. 청구항 1 내지 145 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 식 (IIa), 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00569
    .
  147. 청구항 1 내지 146 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 식 (IIb), 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00570
    .
  148. 청구항 1 내지 147 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 식 (IIc) 또는 (IIe), 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00571

    Figure pct00572
    .
  149. 청구항 1 내지 148 중 어느 한 항에 있어서, R4은 -(CH2)nQ 및 -(CH2)nCHQR로부터 선택되는, 화합물.
  150. 청구항 1 내지 149 중 어느 한 항에 있어서, Q는 -OR, -OH, -O(CH2)nN(R)2, -OC(O)R, -CX3, -CN, -N(R)C(O)R, -N(H)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(R)2, -N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(R)2, -N(H)C(S)N(H)(R), -N(R)S(O)2R8, 및 복소환으로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  151. 청구항 1 내지 150 중 어느 한 항에 있어서, n은 1, 2, 또는 3인, 화합물.
  152. 청구항 1 내지 151 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 식 (IId), 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00573

    식 중, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 n은 2, 3, 및 4로부터 선택된다.
  153. 청구항 1 내지 152 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 식 (IIf), 또는 이의 N-산화물, 또는 그의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00574

    식 중, M은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고, M"은 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐이고, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 n은 2, 3, 및 4로부터 선택된다.
  154. 청구항 1에 있어서, 상기 화합물은 식 (IIg) 또는 이의 N-산화물, 또는 그것의 염 또는 이성질체의 것인, 화합물:
    Figure pct00575

    식 중,
    l는 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 선택되고;
    m은 5, 6, 7, 8, 및 9로부터 선택되고;
    M1은 결합 또는 M'이고;
    M 및 M'는 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴 기, 및 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되고;
    그리고 R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다.
  155. 청구항 1 내지 154 중 어느 한 항에 있어서, R2은 C8 알킬인, 화합물.
  156. 청구항 1 내지 155 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C5 알킬, C6 알킬, 또는 C7 알킬인, 화합물.
  157. 청구항 1 내지 156 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C8 알킬인, 화합물.
  158. 청구항 1 내지 157 중 어느 한 항에 있어서, R3은 C9 알킬인, 화합물.
  159. 청구항 1 내지 158 중 어느 한 항에 있어서, m은 5인, 화합물.
  160. 청구항 1 내지 159 중 어느 한 항에 있어서, m은 7인, 화합물.
  161. 청구항 1 내지 160 중 어느 한 항에 있어서, m은 9인, 화합물.
  162. 청구항 1 내지 161 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R5은 H인, 화합물.
  163. 청구항 1 내지 162 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R6은 H인, 화합물.
  164. 청구항 1에 있어서, 상기 화합물은 화합물 18인, 화합물:
    Figure pct00576
    (화합물 18).
  165. 청구항 1 내지 164 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 지질 성분을 포함하는 나노입자 조성물.
  166. 청구항 165에 있어서, 상기 지질 성분은 추가로, 인지질을 포함하는, 나노입자 조성물.
  167. 청구항 1 내지 166 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질은 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DLPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-포스포콜린 (DMPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DOPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DPPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DSPC), 1,2-di운데카노일-sn-글리세로-포스포콜린 (DUPC), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (POPC), 1,2-디-O-옥타데세닐-sn-글리세로-3-포스포콜린 (18:0 디에테르 PC), 1-올레오일-2-콜레스테릴헤미석시노일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (OChemsPC), 1-헥사데실-sn-글리세로-3-포스포콜린 (C16 Lyso PC), 1,2-딜리노레노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포콜린,1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (DOPE), 1,2-디파이타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (ME 16.0 PE), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-딜리노레노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-rac-(1-글리세롤) 나트륨 염 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤 (DPPG), 팔미토일올레오일포스파티딜에탄올아민 (POPE), 디스테아로일-포스파티딜-에탄올아민 (DSPE), 디팔미토일 포스파티딜 에탄올아민 (DPPE), 디미리스토일포스포에탄올아민 (DMPE), 1-스테아로일-2-올레오일-포스파티딜에탄올아민 (SOPE), 1-스테아로일-2-올레오일-포스파티딜콜린 (SOPC), 스핑고미엘린, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티드산, 팔미토일올레오일 포스파티딜콜린, 라이소포스파티딜콜린, 라이소포스파티딜에탄올아민 (LPE), 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는, 나노입자 조성물.
  168. 청구항 1 내지 167 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질은 DOPE인, 나노입자 조성물.
  169. 청구항 1 내지 168 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질은 DSPC인, 나노입자 조성물.
  170. 청구항 1 내지 169 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분은 추가로, 구조 지질을 포함하는, 나노입자 조성물.
  171. 청구항 1 내지 170 중 어느 한 항에 있어서, 상기 구조 지질은 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라씨카스테롤, 토마티딘, 우르솔산, 알파-토코페롤, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는, 나노입자 조성물.
  172. 청구항 1 내지 171 중 어느 한 항에 있어서, 상기 구조 지질은 콜레스테롤인, 나노입자 조성물.
  173. 청구항 1 내지 172 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분은 추가로, PEG 지질을 포함하는, 나노입자 조성물.
  174. 청구항 1 내지 173 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질은 PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형된 포스파티드산, PEG-변형된 세라미드, PEG-변형된 디알킬아민, PEG-변형된 디아실글리세롤, PEG-변형된 디알킬글리세롤, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는, 나노입자 조성물.
  175. 청구항 1 내지 174 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질은 약 1000 Da 내지 약 20 kDa의 크기를 갖는 PEG 모이어티를 포함하는, 나노입자 조성물.
  176. 청구항 1 내지 175 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질은 하기로로부터 선택되는 나노입자 조성물:
    Figure pct00577

    Figure pct00578

    Figure pct00579
    또는
    Figure pct00580

    식 중, p는 1 내지 40이다.
  177. 청구항 1 내지 176 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분은 추가로, 하기로 구성된 군으로부터 선택된 양이온성 및/또는 이온화가능 지질을 포함하는, 나노입자 조성물: 3-(디도데실아미노)-N1,N1,4-트리도데실-1-피페라진에탄아민 (KL10), N1-[2-(디도데실아미노)에틸]-N1,N4,N4-트리도데실-1,4-피페라진디에탄아민 (KL22), 14,25-디트리데실-15,18,21,24-테트라아자-옥타트리아콘탄 (KL25), 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판 (DLin-DMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-K-DMA), 헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(디메틸아미노)부타노에이트 (DLin-MC3-DMA), 2,2-디리놀레일-4-(2-디메틸아미노에틸)-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 1,2-디올레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판 (DODMA), 2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2R)), 및 (2S)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2S)).
  178. 청구항 1 내지 177 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분은 추가로, 인지질, 구조 지질, 및 PEG 지질을 포함하는, 나노입자 조성물.
  179. 청구항 1 내지 178 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분은 약 30 mol % 내지 약 60 mol % 상기 화합물, 약 0 mol % 내지 약 30 mol % 인지질, 약 18.5 mol % 내지 약 48.5 mol % 구조 지질, 및 약 0 mol % 내지 약 10 mol % PEG 지질을 포함하는, 나노입자 조성물.
  180. 청구항 1 내지 179 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분은 약 50 mol % 상기 화합물, 약 10 mol % 인지질, 약 38.5 mol % 구조 지질, 및 약 1.5 mol % PEG 지질을 포함하는, 나노입자 조성물.
  181. 청구항 1 내지 180 중 어느 한 항에 있어서, 치료적 및/또는 예방적 제제를 추가로 포함하는, 나노입자 조성물.
  182. 청구항 1 내지 181 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제는 면역 반응을 유도할 수 있는 백신 또는 화합물인, 나노입자 조성물.
  183. 청구항 1 내지 182 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제는 핵산인, 나노입자 조성물.
  184. 청구항 1 내지 183 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제는 리보핵산 (RNA)인, 나노입자 조성물.
  185. 청구항 1 내지 184 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNA은 작은 간섭 RNA (siRNA), 비대칭 간섭 RNA (aiRNA), microRNA (miRNA), 다이서-기질 RNA (dsRNA), 작은 헤어핀 RNA (shRNA), 메신저 RNA (mRNA), 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는, 나노입자 조성물.
  186. 청구항 1 내지 185 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNA는 mRNA인, 나노입자 조성물.
  187. 청구항 1 내지 186 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA는 스템 루프, 사슬 종결 뉴클레오사이드, polyA 서열, 폴리아데닐화 신호, 및/또는 5' 캡 구조 중 하나 이상을 포함하는, 나노입자 조성물.
  188. 청구항 1 내지 187 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제의 캡슐화 효율은 적어도 50%인, 나노입자 조성물.
  189. 청구항 1 내지 188 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제의 캡슐화 효율은 적어도 80%인, 나노입자 조성물.
  190. 청구항 1 내지 189 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제의 캡슐화 효율은 적어도 90%인, 나노입자 조성물.
  191. 청구항 1 내지 190 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분 대 상기 치료적 및/또는 예방적 제제의 wt/wt 비는 약 10:1 내지 약 60:1인, 나노입자 조성물.
  192. 청구항 1 내지 191 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 성분 대 상기 치료적 및/또는 예방적 제제의 wt/wt 비는 약 20:1인, 나노입자 조성물.
  193. 청구항 1 내지 192 중 어느 한 항에 있어서, 상기 N:P 비는 약 2:1 내지 약 30:1인, 나노입자 조성물.
  194. 청구항 1 내지 193 중 어느 한 항에 있어서, 상기 N:P 비는 약 5.67:1인, 나노입자 조성물.
  195. 청구항 1 내지 194 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물의 평균 크기는 약 70 nm 내지 약 100 nm인, 나노입자 조성물.
  196. 청구항 1 내지 195 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물의 다분산도 지수는 약 0.10 내지 약 0.20인, 나노입자 조성물.
  197. 청구항 1 내지 196 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물은 약 -10 mV 내지 약 +20 mV의 제타 전위를 갖는, 나노입자 조성물.
  198. 청구항 1 내지 197 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자는 약 6.6의 표면 pKa를 갖는, 나노입자 조성물.
  199. 청구항 1 내지 198 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자는 약 15%의 엔도좀 탈출 효율을 갖는, 나노입자 조성물.
  200. 청구항 1 내지 199 중 어느 한 항의 나노입자 조성물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  201. 치료적 및/또는 예방적 제제를 포유동물 세포에 전달하는 방법으로서, 대상체에게 청구항 1 내지 200 중 어느 한 항의 나노입자 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여는 상기 세포를 상기 나노입자 조성물과 접촉시켜서, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제가 세포에 전달되는 것을 포함하는, 방법.
  202. 청구항 1 내지 201 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물 세포는 포유동물의 것인, 방법.
  203. 청구항 1 내지 202 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인, 방법.
  204. 청구항 1 내지 203 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물은 정맥내로, 근육내로, 진피내로, 피하로, 비강내로, 또는 흡입에 의해 투여되는, 방법.
  205. 청구항 1 내지 204 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 치료적 및/또는 예방적 제제의 용량이 포유동물에게 투여되는, 방법.
  206. 포유동물 세포에서 관심 폴리펩타이드를 생산하는 방법, 상기 세포를 청구항 1 내지 205 중 어느 한 항의 나노입자 조성물을 접촉시키는 것을 포함하되, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제는 mRNA이고, 상기 mRNA는 관심 폴리펩타이드를 인코딩함으로써, 상기 mRNA는 관심 폴리펩타이드를 생산하기 위해 세포에서 번역될 수 있는, 방법.
  207. 청구항 1 내지 206 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물 세포는 포유동물의 것인, 방법.
  208. 청구항 1 내지 207 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인, 방법.
  209. 청구항 1 내지 208 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물은 정맥내로, 근육내로, 진피내로, 피하로, 비강내로, 또는 흡입에 의해 투여되는, 방법.
  210. 청구항 1 내지 209 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 mRNA의 용량이 포유동물에게 투여되는, 방법.
  211. 치료가 필요한 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 상기 포유동물에게 청구항 1 내지 210 중 어느 한 항의 나노입자 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  212. 치료가 필요한 포유동물에서 질환 또는 장애의 치료에서 사용하기 위한, 청구항 1 내지 211 중 어느 한 항의 나노입자 조성물.
  213. 치료가 필요한 포유동물에서 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제로서 사용되는, 청구항 1 내지 212 중 어느 한 항의 나노입자 조성물.
  214. 치료가 필요한 포유동물에서 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서의, 청구항 1 내지 213 중 어느 한 항의 나노입자 조성물의 용도.
  215. 청구항 1 내지 214 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 기능이상 또는 비정상적인 단백질 또는 폴리펩타이드 활성을 특징으로 하는, 사용 방법, 용도, 또는 나노입자 조성물.
  216. 청구항 1 내지 215 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 감염성 질환, 암 및 증식성 질환, 유전적 질환, 자가면역 질환, 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 심장- 및 신장-혈관 질환, 및 대사 질환으로 구성된 군으로부터 선택되는, 사용 방법, 용도, 또는 나노입자 조성물.
  217. 청구항 1 내지 216 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인, 사용 방법, 용도, 또는 나노입자 조성물.
  218. 청구항 1 내지 217 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물은 정맥내로, 근육내로, 진피내로, 피하로, 비강내로, 또는 흡입에 의해 투여되는, 사용 방법, 용도, 또는 나노입자 조성물.
  219. 청구항 1 내지 218 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물은 피하로 투여되는, 사용 방법, 용도, 또는 나노입자 조성물.
  220. 청구항 1 내지 219 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 치료적 및/또는 예방적 제제의 용량이 상기 포유동물에게 투여되거나, 또는 상기 약제는 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 상기 치료적 및/또는 예방적 제제를 포함하는, 사용 방법, 용도, 또는 나노입자 조성물.
  221. 치료적 및/또는 예방적 제제를 포유동물 장기에 특이적으로 전달하는 방법으로서, 포유동물에게 청구항 1 내지 220 중 어느 한 항의 나노입자 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여는 상기 포유동물 장기를 상기 나노입자 조성물과 접촉시킴으로써, 상기 치료적 및/또는 예방적 제제가 상기 장기에 전달되는 방법.
  222. 청구항 1 내지 221 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인, 방법.
  223. 청구항 1 내지 222 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노입자 조성물은 정맥내로, 근육내로, 진피내로, 피하로, 비강내로, 또는 흡입에 의해 투여되는, 방법.
  224. 청구항 1 내지 223 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 치료적 및/또는 예방적 제제의 용량이 포유동물에게 투여되는, 방법.
  225. 청구항 1 내지 224 중 어느 한 항에 있어서, 접촉 또는 투여 단계 전에, 상기 포유동물을 하나 이상의 추가의 화합물로 처리하는 단계로서, 상기 전처리는 상기 하나 이상의 추가의 화합물을 상기 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  226. 청구항 1 내지 225 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 접촉 또는 투여 단계 2 주 이하, 1 주 이하, 24 시간 이하 전에 전처리되는, 방법.
  227. 청구항 1 내지 226 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유동물은 접촉 또는 투여 단계 약 시간 전에 전처리되는, 방법.
  228. 청구항 1 내지 227 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가의 화합물은 항-염증성 화합물, 스테로이드, 스타틴, 에스트라디올, BTK 억제제, S1P1 효능제, 글루코코르티코이드 수용체 조절물질 (GRMs), 및 항히스타민제로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  229. 청구항 1 내지 228 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가의 화합물은 덱사메타손, 메토트렉세이트, 아세트아미노펜, H1 수용체 차단제, 및 H2 수용체 차단제로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
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