KR20160043103A - 전립선암 치료를 위한 조성물 및 백신 - Google Patents

전립선암 치료를 위한 조성물 및 백신 Download PDF

Info

Publication number
KR20160043103A
KR20160043103A KR1020167006937A KR20167006937A KR20160043103A KR 20160043103 A KR20160043103 A KR 20160043103A KR 1020167006937 A KR1020167006937 A KR 1020167006937A KR 20167006937 A KR20167006937 A KR 20167006937A KR 20160043103 A KR20160043103 A KR 20160043103A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
mrna
sequence
seq
stem
prostate
Prior art date
Application number
KR1020167006937A
Other languages
English (en)
Inventor
칼-요셉 칼렌
마리올라 포틴-믈레크제크
울리케 그나드-보그트
토마스 란데르
Original Assignee
큐어백 아게
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 큐어백 아게 filed Critical 큐어백 아게
Publication of KR20160043103A publication Critical patent/KR20160043103A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
    • A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
    • A61K39/001194—Prostate specific antigen [PSA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
    • A61K39/001195—Prostate specific membrane antigen [PSMA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays, needleless injectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4727—Mucins, e.g. human intestinal mucin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0091—Oxidoreductases (1.) oxidizing metal ions (1.16)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/485—Exopeptidases (3.4.11-3.4.19)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5152—Tumor cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/884—Vaccine for a specifically defined cancer prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y116/00—Oxidoreductases oxidizing metal ions (1.16)
    • C12Y116/01—Oxidoreductases oxidizing metal ions (1.16) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.16.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
    • C12Y301/03002—Acid phosphatase (3.1.3.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/17—Metallocarboxypeptidases (3.4.17)
    • C12Y304/17021—Glutamate carboxypeptidase II (3.4.17.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21077—Semenogelase (3.4.21.77), i.e. prostate specific antigen or PSA or kallikrein 3

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 포유동물에 (적응) 면역 반응을 유도할 수 있는 항원의 조합을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 상기 항원은 PSA (전립선-특이적 항원(Prostate-Specific Antigen)), PSMA (전립선-특이적 막 항원(Prostate-Specific Membrane Antigen)), PSCA (전립선 줄기 세포 항원(Prostate Stem Cell Antigen)), STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원(Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate)), MUC1 (뮤신 1(Mucin 1)) 및 PAP (전립선산 포스파타아제(Prostatic acid phosphatase))로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본 발명은 나아가 이러한 항원의 조합을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 백신 및 상기 조성물의(백신의 제조를 위한) 및/또는 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이상 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암, 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위한 (적응) 면역 반응을 유도하기 위한 백신의 용도에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 상기 조성물 및/또는 백신을 포함하는 키트, 특히 파트들의 키트에 관한 것이다.

Description

전립선암 치료를 위한 조성물 및 백신{Composition and Vaccine for Treating Prostate Cancer}
본 발명은 포유동물 내 (적응) 면역 반응을 유도할 수 있는 항원의 조합을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 상기 항원은 PSA (전립선-특이적 항원(Prostate-Specific Antigen)), PSMA (전립선-특이적 막 항원(Prostate-Specific Membrane Antigen)), PSCA (전립선 줄기 세포 항원(Prostate Stem Cell Antigen)), STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원(Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate)), MUC1 (뮤신 1(Mucin 1)) 및 PAP (전립선산 포스파타아제(Prostatic acid phosphatase))로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 나아가 본 발명은 이러한 항원의 조합을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 백신 및 상기 조성물의(백신의 제조를 위한) 및/또는 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이상 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암, 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위한 (적응) 면역 반응을 유도하기 위한 백신의 용도에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 상기 조성물 및/또는 상기 백신을 포함하는 키트, 특히 파트들(parts)의 키트에 관한 것이다.
현재, 전립선암은 세계적으로 선진국에서 두번째로 흔하게 진단되는 암이며, 인간의 암 관련된 사망의 네번째 주요 원인이다. 효과적인 치료(curative treatment) 방법(modalities)은 약화시키는 것(debilitating)이며, 현재 국소화된 질병에 유일하게 활용 가능하다. 호르몬 무반응(거세-내성(resistant); 거세-내화(refractory)) 전립선암에서, 대략 1년을 넘는 연장된 생존기간을 보이는 제제는 없었다 (예를 들어 Pavlenko, M., A. K. Roos, et al. (2004). "A phase I trial of DNA vaccination with a plasmid expressing prostate-specific antigen in patients with hormone-refractory prostate cancer." Br J Cancer 91(4): 688-94. 참조). 미국과 같이 고도로 개발된 일부 서방 국가에서, 전립선암은 현재 가장 흔하게 진단되는 악성 종양이며 미국(예를 들어Jemal, A., R. Siegel, et al. (2006). "Cancer statistics, 2006." CA Cancer J Clin 56(2): 106-30. 참조) 및 유럽(예를 들어 Thomas-Kaskel, A. K., C. F. Waller, et al. (2007). "Immunotherapy with dendritic cells for prostate cancer." Int J Cancer 121(3): 467-73 참조) 각각 사람들 가운데 암 관련된 사망의 세번째 주요 원인이다. 진단된 종양의 대부분은 호르몬 의존적 방식으로 초기에 증식하는 선암(adeno-carcinomas)이다.
전립선암은 전립선, 남성 생식계 내 샘(gland)에서 발달하는 암인 질병이다. 이는 전립선의 세포가 변이되고 통제 불능의 증식을 시작할 때 발생한다. 정상적인 상대(counterparts)에 비해 전립선암 세포에 의해 과발현되는 것으로 보이는 전형적인 항원은은 PSA, PSMA, PAP, PSCA, HER-2 및 Ep-CAM과 같은 그 중에서 항원이다. 이들 전립선암은 전립선으로부터 다른 인체 부위, 특히 뼈 및 림프절로 확산(전이)될 수 있다. 전립선암은 통증, 배뇨 곤란, 발기 부전 및 다른 증상을 유발할 수 있다. 전형적으로, 전립선암은 환자의 가장 흔한 그룹을 나타내는, 50세 이상의 사람에서 가장 흔하게 발달된다. 그러나, 전립선암은 결정이 가능하더라도, 가장 흔하게 발견되지 않은채 남아있다. 전립선암의 결정은 전형적으로 신체 검사에 의해 또는 PSA(전립선 특이적 항원) 테스트와 같은 스크리닝 혈액 테스트에 의해 일어난다. 전립선암이 의심될 때 암은 전형적으로 전립선(생검)의 조각을 제거하고 현미경 하에 이를 실험함으로써 확인된다. X-레이 및 뼈 스캔과 같은 추가적 실험은 전립선암이 확산되었는지 결정하기 위해 수행될 수 있다.
전립선암의 치료는 여전히 해결되지 않은 문제로 남아있다. 통상적인 요법(therapy methods)은 수술, 방사선 요법, 호르몬 요법, 가끔(occasionally) 화학 요법, 양자선 요법(proton therapy), 또는 이들의 일부 조합과 같이, 전립선암의 치료에 적용될 수 있다. 그러나, 사람의 연령 및 기본적인 건강뿐만 아니라 확산의 정도, 현미경 하 형태, 및 초기 치료에 대한 암의 반응은 질병의 결과를 결정하는데 중요하다. 전립선암은 전형적으로 노인에서 진단되는 질병이기 때문에, 많은 사람들은 서서히 진행하는 전립선암이 증식 확산 또는 증상을 유발하기 전에 다른 원인에 의해 사망할 것이다. 이는 치료의 선택을 어렵게 만든다. 치료 목적으로 국소화된 전립선암(전립선 내 포함된 종양)을 치료할지 여부를 결정하는 것은 환자의 생존 및 삶의 질의 관점에서 예상되는 유익한 및 유해한 효과 사이에 균형이다.
그러나, 수술, 방사선 요법, 호르몬 요법, 및 화학 요법 등과 같은 상기 요법 모두는 심각한 한계를 겪는다. 예를 들어, 전립선의 수술적 제거, 또는 전립선 절제(prostatectomy)는 초기 단계의 전립선암 또는 방사선 요법에 반응에 실패한 암에 대하여 통상적인 치료이다. 이는 삶의 질을 현저하게 바꾸는 신경 손상을 유발할 수 있다. 가장 흔한 심각한 문제는 배뇨 제어의 손실 및 생식 불능(impotence)이다. 그러나, 전립선암이 성공적으로 제거될 수 있다고 하더라도, 유기체를 통한 전립선암의 확산은 해결되지 않은 문제로 남아있다.
방사선 요법은 전립선암의 치료에 흔하게 사용된다. 이는 초기 암의 수술 대신에 사용될 수 있으며, 또한 고통스러운 뼈 전이를 치료하기 위해 전립선암의 진행 단계에 사용될 수 있다. 방사선 치료는 또한 방사선 단독 요법이 암을 치료하기 어려울 때, 중간 위험 질병에 대해 호르몬 요법과 함께 조합될 수 있다. 그러나, 방사선 요법은 또한 높은 위험을 가지며 환자의 면역계의 파괴에 의한 면역 방어의 완전한 손실을 종종 유도한다. 게다가, 방사선 요법은 전형적으로 암 성장의 부위에 국소적으로 적용되며, 따라서 유기체를 통해 전립선암이 확산되는 상기 문제를 회피하기 어려울 수 있다. 만약 전신에 적용된다면, 방사선 요법은 세포 및 면역계에 심각한 손상을 일으킬 수 있다.
화학 요법은 극히 소수의 환자만이 이러한 종류의 요법에 반응하기 때문에 전립선암의 치료의 덜 효과적인 종류로 고려된다. 그러나, 전이성 전립선 암종을 갖는 일부 환자(반응자)는 화학 요법이 유익할 수 있다. 반응 속도는 약 20%이며, 화학 요법은 따라서 종양 재발 및 호르몬 요법의 실패의 치료 동안 역할을 수행할 것이다. 그러나, 화학 요법은 전형적으로 단지 완화제(palliative)이며, 환자 내 전립선암의 완전한 제거를 유도하지 못한다. 전형적인 화학 요법제는 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 독소루비신(doxorubicin), 5-플루오르우라실(5-fluoruracil), 아드리아마이신(Adriamycin), 수라민(suramin) 및 다른 제제를 포함하며, 그러나 이들 중 어느 것도 환자의 현저하게 연장된 생존 기간을 초래하지 않는다. New England Journal of Medicine에서 2004년에 공개된, 더욱 최근 연구에서, 평균 2.5 개월의 보다 긴 생존 기간은 매 3주 도세타셀(docetaxel) 제제로 투여량을 받은 환자에 대해 설명될 수 있다(Tannock IF et al. Docetaxel plus prednisone or mitoxantrone plus prednisone for advanced prostate cancer. N Engl J Med. 2004 Oct 7;351(15):1502-12).
호르몬 요법은 전형적으로 약제 또는 호르몬 요법과 디하이드로테스토스테론(DHT), 전립선에서 생산되고 대부분의 전립선 암 세포의 성장 및 확산에 필요한 호르몬을 얻는 것으로부터 전립선암 세포를 차단하는 수술의 조합을 사용한다. DHT의 차단은 종종 전립선암의 증식을 멈추고 심지어 축소를 일으킬 수 있다. 그러나, 호르몬 요법에 초기에 반응하는 암은 전형적으로 1 내지 2년 후 내성이 되기 때문에, 호르몬 요법은 드물게 전립선암을 치료한다. 예를 들어, 일시적인(palliative) 안드로겐 결핍(deprivation) 요법은 환자의 80%까지 차도를 유도할 수 있으나, 15 내지 20개월 이후, 종양 세포는 호르몬 무반응이되며 안드로겐 비의존적 전립선암이 발달한다. 이러한 상황에서, 화학 요법은 제한된 효과를 갖는 것과 같이(상기 참조), 치료 옵션은 드물다. 호르몬 요법은 따라서 암이 전립선으로부터 확산될 때 일반적으로 사용된다. 이는 또한 방사선 요법 또는 그들의 암의 재발을 예방하는 것을 돕는 수술을 받는 특정한 사람에게 주어질 수 있다.
임상 3상(phase III trial)의 중간 분석 결과에 기초하여(ClinicalTrials.gov ID NCT00887198), 아비라테론 아세테이트/프레드니손(Abiraterone acetate/prednisone)은 유럽 및 미국에서 거세 내성 전립선암을 갖는 화학적 미투약 환자의 치료를 위해 입증되었으며, 이는 진행되지 않는(progression free) 생존을 연장하였고 다른 이차적인 단점(endpoints)은 플라시보/프레드니손 대조군에 현저하게 비교되었다. 반면, 이에 증진된 전체 생존의 경향이 있었으며, 상기 차이는 통계적으로 현저하지 않았다(Ryan C.J. et al. (2013) Abiraterone in metastatic prostate cancer without previous chemotherapy. N Engl J Med. Jan 10;368(2):138-48.).
환자들이 그들의 질병 증상을 발달하는 즉시, 화학 요법(바람직하게 도세탁셀(docetaxel)로)의 시작은 추천된다. 이러한 상황에서 추가적인 요법 옵션은 고통스러운 뼈 전이의 방사선 또는 스트론튬-89 또는 사마리움-153 또는 라듐 223-클로라이드(알파라딘(alpharadin))과 같은 뼈를 찾는 방사선 동위 원소로 치료이다.
도세탁셀로 치료 동안 질병의 진행 이후, 치료는 새로운 항호르몬 제제 엔잘루타미드(enzalutamide)로 계속되거나(Scher H.I. et al. (2012). Increased survival with enzalutamide in prostate cancer after chemotherapy. N Engl J Med. Sep 27;367(13):1187-97), abiraterone acetate/prednisone (de Bono, J.S., et al. (2011). Abiraterone and increased survival in metastatic prostate cancer. N. Engl. J. Med. 364:1995-2005), 또는 새로운 탁산 카바지타셀/프레드니손(Yap, et al. (2011). The changing therapeutic landscape of castration-resistant prostate cancer. Nat Rev Clin Oncol. 8:597-610)은 임상 제3상에 설명된 생존 이익을 갖는 추가적으로 입증된 치료 옵션이다 - 그러나 이들 치료의 어느 것도 장기 생존을 유도할 수 없으며 화학 요법제는 상당한 부작용을 갖는다. 주요 독성을 추가함이 없이 가능한 치료의 효과를 연장할 수 있는 새로운 요법 옵션은 긴급하게 요구된다.
하나의 접근 방법으로, 방사선 전립선 절제 또는 외부(빔) 조사 및 근접 치료(brachytherapy)와 같은 방사선 요법을 포함하는, 장기(organ)-국한된(confined) 전립선암에 사용되는 상기 논의된 표준 요법은 어떤 환경 하에 또한 네오어쥬번트(neoadjuvant) 또는 어쥬번트 호르몬 요법을 포함할 수 있다(예를 들어 Totterman, T. H., A. Loskog, et al. (2005). "The immunotherapy of prostate and bladder cancer." BJU Int 96(5): 728-35. 참조). 이들 요법이 상대적으로 단기간에 효과적인 반면, 초기 국한된 질병을 갖는 환자의 현저한 비율(30-40%)은 궁극적으로 재발될 것이다. 전이성 전립선암에 대한 주요 요법은 안드로겐 제거(ablation)이다. 이는 일반적으로 세포 감소(cytoreduction)를 제공하는 반면, 호르몬-무반응 질병에 대한 진행은 전형적으로 14-20 개월 내에 일어난다. 많은 임상 연구는 진행된 안드로겐 비의존적 전립선암에 대한 화학 요법의 분야에서 보고되었다. 최근 두 임상 연구에서만이 화학 요법이 호르몬-무반응(거세-내성) 질병을 갖는 환자의 전체 생존 기간을 미미하게 증진시키는 것으로 나타내었다.
상기를 요약하면, 상기 개시된 수술, 방사선 요법, 호르몬 요법, 가끔 화학 요법, 양자선 요법 등과 같은 표준 기술은 만약 단독으로 적용될 경우, 전립선암(PCa)의 효과적인 치료에 적절한 것으로 나타나지 않는다. 하나의 향상된 치료 방법은 따라서 이러한 표준 기술을 포함할 수 있으나, 다른 접근 방법과 조합으로 포함할 수 있다. 본 발명에 따르면, 적응 면역계는 전립선암(PCa)의 치료 또는 보충적인 치료에 접근 방법으로써 다루어진다.
본 발명이 속하는 기술 분야에 알려진 것처럼, 면역계는 수많은 질병의 치료 및 예방에 중요한 역할을 수행한다. 현재 단계의 지식에 따르면, 다양한 메커니즘은 예를 들어 종양 세포를 식별 및 사멸함으로써 유기체를 보호하는 포유류에 의해 제공된다. 본 발명의 목적에 대하여, 이들 종양 세포는 유기체 일반(건강한) 세포 및 조직으로부터 검출되고 구분되어야 한다.
인간과 같은 척추 동물의 면역계는 다양한 타입의 단백질, 세포, 기관, 및 조직으로 이루어져 있으며, 이는 정교하고 활발한 네트워크로 상호 작용한다. 이러한 복잡한 면역 반응의 일부와 같이, 척추동물 시스템은 특정한 병원체 또는 종양 세포를 보다 효과적으로 인식하기 위해 시간의 흐름에 따라 적응한다. 적응 과정은 면역 기억을 생성하고 장래 접촉(encounters) 동안 보다 효과적인 보호를 허용한다. 이러한 적응 또는 획득 면역의 과정은 백신 접종 전략을 위한 기초를 형성한다.
적응 면역계는 항원 특이적이며 항원 제시로 불리는 과정 동안 특정한 "자가" 또는 "비-자가" 항원의 인식을 요구한다. 항원 특이성은 특정한 병원체 또는 병원체 감염된 세포 또는 종양 세포에 맞추어진 반응을 발생시킨다. 이들 조절된 반응을 고정하는 능력은 소위 "기억 세포"에 의해 체내에서 유지된다. 병원체가 몸을 한번 이상 감염할 때, 이들 특정한 기억 세포는 이를 신속하게 제거하기 위해 사용된다. 적응 면역계는 따라서 보다 강한 면역 반응뿐만 아니라 면역 기억을 허용하며, 각 병원체 또는 종양 세포는 한번 이상의 특징(signature) 항원에 의해 "기억"된다.
척추동물 내 적응 면역계의 주요 구성요소는 대부분 세포 수준에 림프구 및 분자 수준에 항체를 포함한다. 적응 면역계의 세포 구성요소로 백혈구는 B 세포 및 T 세포를 포함하며, 이는 골수 내 조혈 줄기 세포로부터 유도된다. B 세포는 체액성 반응에 포함되는 반면, T 세포는 세포 매개 면역 반응에 포함된다. B 세포 및 T 세포 모두 특정한 표적을 인식하는 수용체 분자를 수송한다. T 세포는 항원(예를 들어 병원체의 작은 절편)이 가공되고 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자로 불리는 "자가" 수용체와 조합되어 나타난 이후에만, 병원체 표적 구조와 같은 "비자기" 표적을 인식한다. 대조적으로, B 세포 항원 특이적 수용체는 B 세포 표면에 항체 분자이며, 이의 표면에 항체가 특정한 외래 항원에 결합될 때 그러한 병원체를 인식한다. 이러한 항원/항체 복합체는 B 세포에 의해 흡수되고 펩타이드로 단백질 가수분해에 의해 가공된다. B 세포는 이후 이의 표면 MHC 클래스 II 분자에 이들 항원 펩타이드를 제시한다. 이러한 MHC 및 항원의 조합은 도움 T 세포의 결합을 이끌며, 이는 림포카인을 방출하고 B 세포를 활성화시킨다. 활성화된 B 세포가 이후 나누어지기 시작함에 따라, 이의 자손은 이들 항원을 인식하는 항체의 수백만의 복제를 분비한다. 이들 항체는 혈장 및 림프에서 순환하며, 항원을 제시하는 병원체 또는 종양 세포에 결합하며 보체 활성화에 의한 파괴를 위해 또는 식세포에 의한 흡수 및 파괴를 위해 그들을 표지한다. 적응 면역계의 세포 구성요소와 같이 세포독성 T 세포 (CD8+)는 CTL-반응을 형성할 수 있다. 세포독성 T 세포 (CD8+)는 MHC 제1형 분자에 의해 결합된 내생 병원체 및 자가 항원으로부터 펩타이드를 인식할 수 있다. CD8+-T 세포는 세포 내 세포독성 단백질의 방출에 의해 그들의 사멸 기능을 수행한다.
면역계의 메커니즘은 따라서 다양한 질병의 치유(curative) 치료를 위한 표적을 형성할 수 있다. 적절한 방법은 적응 면역 반응을 유도하기 위해 선천 면역 반응의 유도하기 위한 어쥬번트의 투여 또는 항원 또는 면역원의 투여에 전형적으로 기초한다. 항원은 병원체의 특정한 구성요소(예를 들어 표면 단백질) 또는 이의 절편에 전형적으로 기초하며, 원하는 폴리펩타이드, 단백질 또는 항원의 발현이 뒤따르는 환자에게 핵산의 투여는 잘 예상된다.
거세-내성 전립선암은 지금까지, 특이적 면역 반응을 유도하기 위한 활성 면역 요법이 전체 생존 기간의 현저한 증가에 기초한, 오직 암 표지이다. 시푸류셀-T(Sipuleucel-T) (Provenge®), 전립선암 관련된 항원 PAP 및 어쥬번트 GM-CSF로 이루어진 융합 단백질과 펄스된(pulsed) 자가 항원 제시 세포로 이루어진 활성 면역요법은 무증상 또는 최소한 증상의 거세-내성 전립선암을 갖는 환자에 플라시보에 비해 평균 4.1 개월의 임상 제3상 등록된 512명의 환자에서 생존 기간을 연장하는 것으로 나타났다(25.8 대(vs) 21.7 mo; p=0.03). 이들 결과에 기초하여 시푸류셀-T는 2010년에 이러한 환자 그룹의 치료에 대해 FDA에 의해 입증되었다(Kantoff, P., Higano, C., Shore, N., Berger, E.R., Small, E.J., et al. (2010). Sipuleucel-T immunotherapy for castration-resistant prostate cancer. N. Engl. J. Med. 363:411-422).
추가적으로 예를 들어, 알려진 전립선 관련된 항원에 기초한 백신 접종 연구는 Noguchi et al. (2003) 및 (2004)에서 수행되었다(예를 들어 Noguchi, M., K. Itoh, et al. (2004). "Phase I trial of patient-oriented vaccination in HLA-A2-positive patients with metastatic ㅎrefractory prostate cancer." Cancer Sci 95(1): 77-84; and Noguchi, M., K. Kobayashi, et al. (2003). "Induction of cellular and humoral immune responses to tumor cells and peptides in HLA-A24 positive hormone-refractory prostate cancer patients by peptide vaccination." Prostate 57(1): 80-92. 참조). Noguchi et al. (2003) 및 (2004)는 증가된 세포뿐만 아니라 선택된 타겟에 대한 체액성 면역 반응을 보이는 전이성 호르몬-무반응(거세-내성) 전립선암 환자에 백신 접종의 멀티펩타이드 실험과 함께 두번의 제1상 연구를 수행하였다. 백신 접종 전략은 안전하고 주요 독성 효과가 없이 내약화된다. 전립선 특이적 항원(PSA) 수준의 안정화 또는 감소는 또한 관찰되었고 오직 한 환자만 뼈 전이의 소멸을 보였다. 이러한 접근 방법의 주요한 한계점은 환자의 HLA 일배체형(haplotype)뿐만 아니라 전립선암 세포에 의한 펩타이드 발현의 사전(a priori) 지식의 필요로 이루어진 임상적 적용을 어렵게 만드는 것이다.
일부 다른 최근 접근 방법은 세포 기초의 백신 접종 전략, 예를 들어 백신 접종 전략에 다른 항원의 사용 또는 다른 항원 또는 이의 절편으로 로드된(loaded) 수지상 세포의 사용을 활용한다. 일 실시예에 따르면, 전립선암 환자의 백신 접종은 재조합 인간 PSA와 함께 펄스된(pulsed) 자가 수지상 세포로 임상적 실험에서 테스트되었다(예를 들어 Barrou, B., G. Benoit, et al. (2004). "Vaccination of prostatectomized prostate cancer patients in biochemical relapse, with autologous dendritic cells pulsed with recombinant human PSA." Cancer Immunol Immunother 53(5): 453-60 참조). PSCA 및 PSA 펩타이드 로드된 수지상 세포로 진행된 전립선암 환자의 백신 접종의 결과로, 10명 중 5명의 환자는 적어도 하나의 항원에 대한 면역 반응을 보였다 (예를 들어 Thomas-Kaskel, A. K., R. Zeiser, et al. (2006). "Vaccination of advanced prostate cancer patients with PSCA and PSA peptide-loaded dendritic cells induces DTH responses that correlate with superior overall survival." Int J Cancer 119(10): 2428-34. 참조).
다른 실시예에서, Murphy et al. (1996)는 펄스된 DC에 기초한 백신 접종과 함께 펩타이드 단독에 기초한 백신 접종과 비교하여, 두 HLA-A*0201 PSMA 에피토프와 함께 상응하는 제1상 실험에서 전립선암 환자의 백신 접종을 수행하였다. 상기 결과는, 만약 환자들의 펄스된 DC로 백신 접종된 경우, 보다 많은 환자들이 백신 접종에 반응하는 것으로 나타났다. 본 연구는 펩타이드 또는 단백질로 로드된 DC에 기초한 백신 접종은 검출가능한 면역 반응에 최소한 많은 인스턴스(instances)뿐만 아니라 임시적인 PSC 감소 또는 안정화를 유도하는 것을 보였다(예를 들어 Murphy, G., B. Tjoa, et al. (1996). "Phase I clinical trial: T-cell therapy for prostate cancer using autologous dendritic cells pulsed with HLA-A0201-specific peptides from prostate-specific membrane antigen." Prostate 29(6): 371-80 참조).
전립선암 환자의 백신 접종은 또한 수지상 세포에 로드된 펩타이드의 조합으로, 예를 들어 펩타이드 칵테일-로드된 수지상 세포로 조합되어 수행될 수 있다(예를 들어 Fuessel, S., A. Meye, et al. (2006). "Vaccination of hormone-refractory prostate cancer patients with peptide cocktail-loaded dendritic cells: results of a phase I clinical trial." Prostate 66(8): 811-21 참조). 상기 칵테일은 PSA, PSMA, 서바이빈(Survivin), 프로스테인(Prostein) 및 Trp-p8 (일시적 수용체 잠재성 p8(transient receptor potential p8))로부터 펩타이드를 포함한다. 임상 실험은 또한 호르몬-무반응 전립선 암종의 수지상 세포 기초의 멀티-에피토프 면역 요법으로 수행되었다(예를 들어 Waeckerle-Men, Y., E. Uetz-von Allmen, et al. (2006). "Dendritic cell-based multi-epitope immunotherapy of hormone-refractory prostate carcinoma." Cancer Immunol Immunother 55(12): 1524-33 참조). Waeckerle-Men, Y., E. Uetz-von Allmen, et al. (2006)은 PSCA, PAP(전립선산 포스파타제), PSMA 및 PSA로부터 펩타이드를 갖는 호르몬-무반응 전립선 암종의 백신 접종을 테스트하였다.
한편 항원성 단백질 또는 펩타이드로 백신 접종은, 예를 들어 수지상 세포로 로드될(loaded) 때, 면역 반응을 유도하기 위한 일반적인 방법이며, 면역화(immunization) 또는 백신 접종은 또한 세포 내 요구되는 유전 정보를 병합하기 위해 핵산의 용도에 기초될 수 있다. 일반적으로, 다양한 방법은 칼슘 포스페이트 형질전환, 폴리프렌 형질전환, 원형질 융합, 전기천공, 미세주사 및 리포펙션, 적절한 방법인 것으로 특히 증명된 리포펙션과 함께 세포로 핵산을 도입하기 위해 개발되었다.
전립선암의 백신 접종 치료는, 예를 들어, DC로 자가 종양으로부터 유도된 총 mRNA의 형질전환에 기초될 수 있다(Heiser et al. (2002) (see e.g. Heiser, A., D. Coleman, et al. (2002). "Autologous dendritic cells transfected with prostate-specific antigen RNA stimulate CTL responses against metastatic prostate tumors." J Clin Invest 109(3): 409-17. 참조). 이러한 전략은 사전 HLA 타이핑(typing) 없이 멀티플 HLA 클래스 I 및 클래스 II 환자 특이적 종양 관련된 항원(TAAs)을 타겟으로 하는 장점을 갖는다. 나아가, 심지어 기질(stromal) 항원은 mRNA가 종양 세포라인으로부터가 아닌 수술 샘플로부터 수득되기 때문에, 이러한 전략에 의해 타겟이 된다. 예를 들어, Heiser et al.은 DC가 PSA를 코딩하는 mRNA로 형질전환된 DC-기초의 면역 요법 프로토콜을 개발하였다. 백신 접종은 내약화되었고 PSA에 반응하는 증가된 T 세포를 유도하였다. 그러나, 이러한 DC 기초의 항-전립선암 백신은 나중 빈도가 여전히 불충분하게 남아 있다 하더라도 임상적 반응에 의해 달성될 수 있는, 강한 T 세포 반응을 발생시키는 것으로 나타났다.
DNA는 또한 세포 내로 필요한 유전적 정보를 포함시키기 위해 백신 접종 전략에 핵산으로 활용될 수 있다. 예를 들어, DNA 바이러스는 DNA 비히클(vehicle)로 사용될 수 있다. 그들의 감염 특성 때문에, 이러한 바이러스는 매우 높은 형질전환 속도를 달성한다. 상기 사용된 바이러스는 기능적 감염 입자가 형질전환된 세포 내에 형성되지 않는 방식으로 유전적으로 변형된다. 예를 들어, 임상 제1상은 PSA를 발현하는 재조합 백신 바이러스를 사용하여 Eder et al. (2000)의 연구에서 수행되었다. 상기 저자는 PSA에 반응하는 T 세포 면역 반응 및 또한 선택된 환자 내 혈청 PSA 안정화를 설명하였다. (예를 들어 Eder, J. P., P. W. Kantoff, et al. (2000). "A phase I trial of a recombinant vaccinia virus expressing prostate-specific antigen in advanced prostate cancer." Clin Cancer Res 6(5): 1632-8. 참조). 재조합 바이러스로부터 높은 면역원성 펩타이드에 의해 촉발된 항염 반응은 외래 단백질의 면역원성을 증진시킬 수 있다. 그러나, 면역계는 재조합 바이러스의 복제를 감소시키고 그에 따라 임상적 결과물을 제한하는 것으로 나타났다. 심지어 재조합 백신이 면역 원성을 보이고 종양 반응에 대한 결과가 몇몇 실험에서 나타나더라도, 이들 결과는 추가적 임상 테스트에 대해 추가적으로 입증되기 위해 필요하다.
추가적인 접근 방법에 따르면, 호르몬-무반응 전립선암 환자의 백신 접종은 PSA를 발현하는 DNA 플라스미드로 수행된다(예를 들어 Pavlenko, M., A. K. Roos, et al. (2004). "A phase I trial of DNA vaccination with a plasmid expressing prostate-specific antigen in patients with hormone-refractory prostate cancer." Br J Cancer 91(4): 688-94 참조). Garcia-Hernandez et al. (2007)는 STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원)를 코딩하는 플라스미드 또는 바이러스 유사 레플리콘(replicon)으로 치료 및 예방 백신 접종은 종양-시험된(challenged) 마우스에 생존을 연장시킴을 보였다(예를 들어 Garcia-Hernandez Mde, L., A. Gray, et al. (2007). "In vivo effects of vaccination with six-transmembrane epithelial antigen of the prostate: a candidate antigen for treating prostate cancer." Cancer Res 67(3): 1344-51 참조). 최근 STEAP는 인간 전립선암에 매우 과발현된, 진행된 인간 전립선암에 대한 지시 단백질로 식별되었다. 이의 기능은 현재 알려져 있지 않다.
유전 정보의 담체로써 DNA를 사용하는 동안, 그러나, 이는 도입된 유전자의 또는 바이러스 유전자의 비통제된 증식의 위험, 예를 들어 잠재적 재조합의 경우를 배제하는 것이 불가능하다. 이는 또한 이러한 유전자가 변형될 수 있으며 따라서 완전히 또는 부분적으로 비활성화되거나 상기 유전자가 오정보(misinformation)를 일으킬 수 있다는 결론과 함께, 예를 들어 재조합에 의해, 숙주 세포의 유전체의 온전한 유전자에 삽입된 DNA의 위험을 수반한다. 즉, 세포에 필수적인 유전자 산물의 합성은 완전히 억제되거나 그 대신에 변형되거나 부정확한 유전자 산물이 발현된다. 상기 DNA는 예를 들어 세포 성장의 조절에 포함되는 유전자에 포함될 수 있다. 이러한 경우, 숙주 세포는 퇴화될 수 있고 암 또는 종양 형성을 유도한다. 게다가, 만약 세포로 도입되는 DNA가 발현되는 경우, 바이러스 CMV 프로모터와 같이 강한 프로모터를 포함하기 위해 상응하는 DNA 수송체를 위해 필수적이다. 치료되는 세포의 유전체에 이러한 프로모터의 삽입은 세포 내 유전자 발현의 조절의 바람직하지 않은 변형을 초래할 수 있다. 면역 반응을 유도하기 위핸 제제로써(예를 들어 백신으로써) DNA를 사용함에 다른 위험은 그에 따라 (아마도 치명적인) 면역 반응을 유도하는 치료되는 환자에 병원성 항-DNA 항체의 유도이다.
따라서, 전립선암(PCa)을 치료하는 면역계를 효과적으로 자극하기 위해, DNA 기초의 조성물에 의해 도입된 유전자의 비통제된 증식의 문제를 회피하는 동안, RNA 기초의 항원 조성물이 개발되었다. WO 2009/046975는 PSA (전립선 특이적 항원(Prostate-Specific Antigen); 또한 KLK3 또는 Kallikrein-3로 알려짐), PSMA (전립선 특이적 막 항원(Prostate-Specific Membrane Antigen)), PSCA (전립선 줄기 세포 항원(Prostate Stem Cell Antigen)) 및 STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원(Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate))로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 두가지, 세가지 또는 네가지 (바람직하게 다른) 항원을 코딩하는 적어도 하나의 RNA를 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 개시된 조성물 내 항원의 조합이 전립선암 환자의 그룹 가운데 반응자의 수를 현저하게 증가시키더라도, 그럼에도 불구하고 기술분야에 알려진 접근 방법의 어느 것으로부터도 효능이 없는 비-반응 개체가 있다. 전립선암에서 높은 발생 정도(incidence) 및 증가된 사망률을 고려할 때, 따라서 추가의, 대안적인 또는 향상된 치료 프로토콜이 강력하게 요구된다.
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 전립선암(PCa)의 치료를 위한 조성물 또는 면역계의 자극에 의한 백신을 제공하는 것이다.
본 발명의 근본적인 목적은 청구항의 대상에 의해 해결된다.
본 발명의 요약
이러한 목적은 본 발명의 주제에 의해, 특히 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 조성물에 의해 해결되며, 상기 적어도 하나의 mRNA는 하기 항원 또는 이의 절편을 코딩하며:
* STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원(Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate));
* PSA (전립선-특이적 항원(Prostate-Specific Antigen)),
* PSMA (전립선-특이적 막 항원(Prostate-Specific Membrane Antigen)),
* PSCA (전립선 줄기 세포 항원(Prostate Stem Cell Antigen));
* PAP (전립선산 포스파타제(Prostatic Acid Phosphatase)), 및
* MUC1 (뮤신 1(Mucin 1)),
또는 이의 절편 또는 변이체.
놀랍게도, 본 발명에 따르는 조성물에 포함된 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 상기 언급된 그룹의 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 특정한 조합이 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선 암, 및 이와 관련된 질병 또는 질환을 치료하는 (적응) 면역계를 효과적으로 자극할 수 있는 것으로 발견되었다. 상기 언급된 질병의 치료에 유익한 효과는 본 발명에 따르는 항원의 조합이 하나의 단일 조성물 또는 각 항원의 분리 투여에 의해 적용되는 것과 관계없이 달성된다. 따라서, 본 발명에 설명된 항원의 어느 조합, 예를 들어 여섯가지 분리 mRNA 제형의 형태는 매우 동일한 목적을 수행하고 원하는 효과를 달성할 수 있다. 이러한 백신 접종 전략에 응답자(responders)의 수는 다른 접근 방법에 비해 현저하게 증가할 것으로 기대된다. 본 발명에, 용어 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드는 같은 뜻으로(synomously) 사용될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 본 발명의 조성물은 나아가 조성물 내 포함된 구성요소(들)의 적어도 하나에 의해 또는, 약간(rather), 조성물의 적어도 하나의 구성요소에 의해 코딩되는 적어도 하나의 항원에 의해, 즉 상기 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA에 의해, 면역 반응, 바람직하게 본 발명에 정의된 적응 면역 반응을 유도할 수 있는 조성물로 이해될 수 있다. 본 발명에 따르면, 분리(예를 들어 동시에) 또는 하나의 단일 조성물로 투여되는 항원의 조합은 원하는 면역 반응을 유도할 수 있다. 분리 투여는 별개의 mRNA가 필수적으로 동시에, 예를 들어 10분 내 또는 확장된 시간, 예를 들어 30분 이상에 걸쳐 순차적인 것(time-staggered) 의미할 수 있다.
다음으로, 본 발명에 따르는 항원의 조합은 항원의 조합을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 조성물의 설명에 의해 보여질 수 있다. 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 하나의 단일 조성물 또는 분리된 제형, 예를 들어, 각각 하나의 항원을 코딩하며 분리되어 투여되는(예를 들어 동시에) 여섯가지 분리된 mRNA로 제형으로 투여되는 것과 관계 없이, 본 발명에 설명된 특징에 의해 특징지어지는 것으로 이해된다.
전립선암 세포 내 과발현된 항원의 많은 수 가운데, 본 발명은 특이적으로 PSA, PSMA, PSCA, STEAP, PAP 및 MUC1을 선택하였다. 이들 항원은 면역요법의 가능한 타겟을 나타내기 위해 본 발명에 따라 식별된다. 본 발명에 따르면, 하나 이상의 상기 항원은 적어도 하나의 mRNA에 의해 제공되는 적어도 하나의 ORF/코딩 영역/코딩 서열에 의해 코딩된다. 이러한 맥락에서, 메신저 RNA는 전형적으로 (적어도) 몇몇 구조 요소, 예를 들어 선택적 5' UTR 영역, 코딩 영역에 따르는 선택적 업스트림 위치한 리보좀 결합 부위, 폴리-A 테일(및/또는 폴리-C 테일)이 따를 수 있는 선택적 3'UTR 영역으로 구성된, 단일 가닥 RNA이다. 본 발명에 따르면, 조성물은 상기 정의된 적어도 여섯가지 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함한다. 그 안에, 조성물이 그와 같이 상기 정의된 적어도 여섯가지 항원을 제공하는 동안 하나의 mRNA는 하나 또는 그 이상의 항원을 코딩할 수 있다. 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 따라서 하나 이상의 ORF/코딩 영역/코딩 서열을 포함할 수 있으며, 상기 전체 조성물은 상기 정의된 적어도 여섯가지 항원의 각각에 대한 적어도 하나의 코딩 영역을 포함한다. 그렇지 않으면, 적어도 여섯가지 항원의 각각에 대한 코딩 영역은 조성물의 분리된 mRNA에 위치할 수 있다. 적어도 하나의 mRNA를 위한 보다 바람직한 실시예는 하기에 제공된다:
상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 항원의 하나는 PSA이다. 본 발명의 맥락에서, "PSA"는 "전립선 특이적 항원"이며 논문(literature) 내 동의어로 명명된 KLK3(칼리크레인-3(Kallikrein-3))일 수 있다. 전립선-특이적 항원(PSA)는 33 kDa 단백질이며 전립선 조직, 양성 및 악성의 모든 타입의 상피 세포에 의해 독점적으로 생산된 안드로겐 조절된 칼리클레인-유사, 세린 프로테아제이다. 특히, PSA는 일반적인 전립선 상피 세포에 의해 높게 발현되며 전립선암 내 가장 특성화된 종양 관련된 항원의 하나를 나타낸다. 생리학적으로, 이는 높은 농도로 정액(seminal fluid)에서 나타나며, 정액 응혈(seminal coagulum)을 보다 작은 폴리펩타이드로 책임이 있는 고분자량 단백질을 쪼개는 기능을 한다. 이러한 활동은 응고물(coagulum)의 용해를 초래한다. PSA는 또한 혈청에서 나타나며 단일클론 면역방사계측분석(immunoradiometric assay) 또는 폴리클론 방사선면역분석에 의해 확실하게 측정될 수 있다. PSA는 오늘날 전립선암을 스크리닝, 진단, 및 모니터링하기 위해 가장 넓게 사용되는 종양 마커이다. 특히, 혈청 PSA의 검출을 위한 몇몇 면역분석은 널리 퍼진 임상적 용도이다. 최근, 혈청 내 PSA mRNA에 대한 역전사효소-중합효소 연쇄 반응(RT-PCR) 분석이 개발되었다.
본 발명에 맥락에서, PSA(전립선 특이적 항원)을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 바람직한 서열은 접근 번호 NP_001639.1 (도. 31; SEQ ID NO: 76)로 기탁된 PSA의 아미노산 서열을 코딩하는 서열 또는 접근 번호 NM_001648로 기탁된 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 적어도 하나의 mRNA는 도 2, 3 또는 27 (SEQ ID NO: 2, 3 또는 82)의 어느 하나에 나타난 코딩 서열을 포함한다. 보다 바람직하게, mRNA에 최소한은 도 1 또는 19(SEQ ID NO: 1 또는 19)에 나타난 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 보다 바람직한 실시예에 따르면, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 대안적으로 접근 번호 NP_001639.1로 기탁되거나 도 31에 나타난(SEQ ID NO: 76) PSA 서열의 절편, 변이체 또는 에피토프로부터 선택된 PSA 항원 서열을 코딩할 수 있으며, 또는 접근 번호 NM_001648로 기탁된 또는 도 1, 2, 3, 19 또는 27(SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 19 또는 82)의 어느 것에 나타난 서열의 절편 또는 변이체를 포함할 수 있다. PSMA는 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 다른 항원이다.
본 발명의 맥락에서 "PSMA"는 "전립선 특이적 막 항원"이며 FOLH1 (엽산 가수분해효소 1(Folate hydrolase 1))로 동의어로 명명되거나 "PSM"일 수 있다. PSMA는 100 kDa 제2형 막관통 당단백질이며, 상기 PSMA 발현은 전립선 조직에 크게 제한되나, PSMA mRNA의 검출 가능한 수준은 뇌, 침샘, 소장, 및 신장 세포 암종에서 관찰된다(Israeli et al., 1993, Cancer Res 53 : 227-230). PSMA는 대부분의 일차 및 전이성 전립선암에서 높게 발현되나, 또한 대부분의 일반 상피내 종양 형성 표본(intraepithelial neoplasia specimens)에서 발현된다(Gao et al. (1997), supra). 특히, PSMA는 전립선 암세포 및 비전립선 고형 종양 혈관 신생(neovasculature)에서 높게 발현되며 항암 이미징(imaging) 및 치료제를 위한 타겟이다. PSMA는 엽산, 항암 약물 메토트렉세이트(methotrexate), 및 신경펩티드 N-아세틸-L-아스파틸-L-글루타메이트를 포함하는, 작은 분자 기질에 글루탐산 카르복시펩티다제(GCPII)로써 활동한다. 전립선암에서, PSMA 발현은 호르몬-무반응 및 전이성 질병에 가장 높은 수준으로 발현과 함께, 질병 진행에 상관이 있는 것으로 나타난 나타났다. PSMA의 세포 국재화(localization)은 세포질성(cytoplasmic) 및/또는 막성(membranous)이다. PSMA는 전립선암(PCa)에 대한 바이오마커로 고려되며, 이미징 및 치료적 타겟으로써 사용을 위하여 강하게 조사중이다.
본 발명의 맥락에서, PSMA(전립선 특이적 막 항원)을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 바람직한 서열은 접근 번호 NP_004467.1 (도. 32; SEQ ID NO: 77)로 기탁된 PSMA의 아미노산 서열을 코딩하는 서열 또는 접근 번호 NM_004476으로 기탁된 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게, 도 5, 6 또는 28 (SEQ ID NO: 5, 6 또는 83)의 어느 것에 나타난 코딩 서열을 포함한다. 보다 바람직하게, 적어도 하나의 mRNA는 도. 4 또는 20 (SEQ ID NO: 4 또는 20)에 나타난 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 보다 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 적어도 하나의 mRNA는 접근 번호 NP_004467.1로 기탁된 PSMA 서열의 절편, 변이체 또는 에피토프로부터 선택된 또는 도 32에 나타난 (SEQ ID NO: 77) PSMA 항원 서열 또는 대안적으로 코딩할 수 있거나, 접근 번호 NM_004476으로 기탁된 또는 도 4, 5, 6, 20 또는 28(SEQ ID NO: 4, 5, 6, 20 또는 83)의 어느 하나에 나타난 서열의 절편 또는 변이체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩된 추가적인 항원은 PSCA이다. 본 발명의 맥락에서 "PSCA"는 "전립선 줄기 세포 항원"이다. PSCA는 높은 등급 전립선 상피내 종양 형성(PIN), 안드로겐 의존적 및 안드로겐 비의존적 전립선 종양을 포함하는, 전립선암의 모든 단계에 걸쳐 광범위하게 과발현된다. PSCA 유전자는 줄기 세포 항원-2, 글리코실포스파티딜이노지톨(GPI)-고정된(anchored) 세포 표면 항원의 Thy-I/Ly-6 패밀리의 구성원과 30% 상동성을 보이며, 아미노-말단 신호 서열, 카르복시-말단 GPI-고정(anchoring) 서열 및 멀티플 N-글리코실화 부위를 갖는 123개 아미노산 단백질을 코딩한다. PSCA mRNA 발현은 안드로겐 의존적 및 안드로겐 비의존적 전립선암 이종 이식(xenografts) 모두에 매우 상향조절(upregulated)된다. 인시추(In situ) mRNA 분석은 기저 세포 상피, 전립선의 추정 줄기 세포 구획에 PSCA 발현을 국한시킨다(localizes). 유세포 분석(flow cytometric analysis)은 PSCA가 세포 표면에서 주로 발현되고 GPI 연결에 의해 고정됨을 설명한다. 형광(fluorescent) 인시추(in situ) 혼성화 분석은 PSCA 유전자를 염색체 8q24. 2, 전립선암의 80% 이상에서 얻는 대립 형질의 영역에 국한시킨다. PSCA는 악성 전립선암, 일반 전립선 샘 및 비-악성 종양 형성(neoplasias) 사이를 구별하는 전립선암 마커로써 사용될 수 있다. 예를 들어, PSCA는 양성 전립선 비대증(benign prostatic hyperplasia, BPH)와 관련된 전립선암에 매우 높은 수준으로 발현된다.
본 발명의 맥락에서, PSCA(전립선 줄기 세포 항원)를 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 바람직한 서열은 접근 번호 O43653.1(도. 33; SEQ ID NO: 78)로 기탁된 PSCA의 아미노산 서열을 코딩하는 서열 또는 접근 번호 NM_005672로 기탁된 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게, 이는 도 8, 9 또는 29(SEQ ID NO: 8, 9 또는 84)의 어느 것에 나타난 코딩 서열을 포함한다. 더욱 바람직하게, 적어도 하나의 mRNA는 도 7 또는 21(SEQ ID NO: 7 또는 21)에 나타난 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 보다 바람직한 실시예에 따르면, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 대안적으로 접근 번호 O43653.1로 기탁된 또는 도 33(SEQ ID NO: 78)에 나타난 PSCA 서열의 절편, 변이체 또는 에피토프로부터 선택된 PSCA 항원 서열을 코딩할 수 있거나, 접근 번호 NM_005672로 기탁된 또는 도 7, 8, 9, 21 또는 29(SEQ ID NO: 7, 8, 9, 21 또는 84)의 어느 것에 나타난 서열의 절편 또는 변이체를 포함할 수 있다.
추가로, STEAP는 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩된다. 본 발명의 맥락에서, "STEAP"는 "전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원"이며 STEAP1과 동의어로 명명될 수 있다. STEAP 또는 STEAP-1은 신규 세포 표면 단백질이며, 인간 전립선 조직 내 및 전립선, 방광, 대장, 및 난소 암종을 포함하는 다른 보통의 악성 종양에서, 및 유윙 육종(Ewing's sarcoma)에서 주로 발현되고, 거의 모든 일반적인 종양 항원으로써 기능할 수 있음을 제안한다. 특히, STEAP는 일반 조직 내 제한된 발현을 갖는 일차 전립선암에서 높게 발현된다. 골수 샘플 내 양성적(positivity) STEAP는 카플란 마이어 분석(Kaplan Meier analysis) (p=0.001)으로 새로운 전이를 갖는 생존(survival)과 매우 관련된다.
본 발명의 맥락에서, STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원) (또는 STEAP1)을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 바람직한 서열은 접근 번호 NP_036581.1로 기탁된(도. 34; SEQ ID NO: 79) STEAP의 아미노산 서열을 코딩하는 서열 또는 접근 번호 NM_012449로 기탁된 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게, 도 11, 12 또는 30 (SEQ ID NO: 11, 12 또는 85)의 어느 것에 나타난 코딩 서열을 포함한다. 더욱 바람직하게, 적어도 하나의 mRNA는 도 10 또는 22 (SEQ ID NO: 10 또는 22)에 나타난 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 보다 바람직한 실시예에 따르면, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 대안적으로 접근 번호 NP_036581.1로 기탁된 또는 도 34(SEQ ID NO: 79)에 나타난 STEAP 서열의 절편, 변이체 또는 에피토프로부터 선택된 STEAP 항원 서열을 코딩할 수 있거나, 접근 번호 NM_012449로 기탁된 또는 도 10, 11, 12, 22, 또는 30(SEQ ID NO: 10, 11, 12, 22 또는 85)의 어느 것에 나타난 서열의 절편 또는 변이체를 포함할 수 있다.
게다가, 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 PAP를 코딩한다. "PAP"는 "전립선산 포스파타아제"이며, 예를 들어 PSAP(전립선 특이적 산 포스파타아제(prostate specific acid phosphatase)) 또는 ACPP(산 포스파타아제, 전립선(acid phosphatase, prostate))과 동의어로 언급될 수 있다. PAP는 전립선의 상피 세포에 의해 분비되며 오르쏘포스포릭 모노에스터(orthophosphoric monoester)를 알코올 및 오르쏘포스페이트로 전환을 촉매 작용을 하는 효소이다. 종양에 인접한 일반 조직을 포함하는 보통 성인의 전립선 조직 샘플의 > 95%뿐만 아니라 1차 선암의 > 95%은 강하게 PAP를 발현한다. PAP 발현은 전립선에 비해 일부 일반 인간 조직 내(예를 들어 신장, 폐, 정소, 대장, 췌장)에서 그러나 낮은 규모의 수준 약 1-2 순서(orders)에서 검출될 수 있으며, PAP는 일반적으로 일반 및 악성 전립선 세포 모두에서 높게 발현되는 조직 특이적 전립선 항원으로 고려된다. 게다가, PAP는 전립선 암 뼈 전이에서 강하게 발현되고 질병의 골모 상(osteoblastic phase)에 인과 역할을 수행할 수 있는 것으로 설명되어 왔다. PAP는 환자 내 CTL 반응을 포함하는 장기 CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 유도하는 것으로 나타났다. PAP로 자극된 자가 항원 제시 세포를 갖는 전립선 암 환자의 치료는 향상된 생존 및 바람직한 안전 프로파일을 초래하였다.
본 발명의 맥락에서, PAP를 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 바람직한 서열은 접근 번호 NP_001090.2으로 기탁된 PAP의 아미노산 서열(도. 35; SEQ ID NO: 80) 또는 접근 번호 NM_001099.4로 기탁된 서열을 코딩하는 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게, 이는 도 14 또는 15의 어느 것에 나타난 코딩 서열(SEQ ID NO: 14 또는 15)을 포함한다. 보다 바람직하게, 적어도 하나의 mRNA는 도 13 또는 23(SEQ ID NO: 13 또는 23)에 나타난 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 보다 바람직한 실시예에 따르면, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 대안적으로 접근 번호 NP_001090.2로 기탁된 또는 도 35에 나타난(SEQ ID NO: 80) PAP 서열의 절편, 변이체 또는 에피토프로부터 선택된 PAP 항원 서열을 코딩할 수 있거나, 접근 번호 NM_001099.4로 기탁된 또는 도 13, 14, 15 또는 23에 나타난(SEQ ID NO: 13, 14, 15 또는 23) 서열의 절편 또는 변이체를 포함할 수 있다.
마지막으로, MUC1은 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩된다. "MUC1"은 "뮤신 1(Mucin 1)"이며 예를 들어 CD227 또는 DF3와 동의어로 언급될 수 있다. MUC1은 큰 점액(mucinous) 당단백질이며 선의 상피(glandular epithelia)의 루미나(luminar) 표면에 일반적으로 발현된다. 일반 상피에 이의 기능은 상피 세포를 윤활 및 보호하는 것이다. MUC1의 발현은 종종 증가되며, 루미나 표면에 더 이상 제한되지 않으며, 전립선암을 포함하는 많은 인간 악성 종양에서 비정상적인 글리코실화에 의해 특징 지어진다. MUC1은 일차 전립선암의 약 60% 및 림프 절 전이의 90%에서 발현된다. 추가로, MUC-1 양성 일차 전립선 종양의 86%는 글리슨 등급(Gleason grade) ≥7이며, 보다 공격적인 질병과 관련을 돕는다. 인간 전립선암의 유전자 발현 프로파일링은 또한 MUC1이 공격적인 임상 병리학적 특징을 갖는 하위그룹에서 매우 발현되고 재발의 위험을 증가시키는 것으로 나타났다. MUC-1의 과다(over-) 및 낮은 발현(underexpression) 모두는 전립선 암 진행의 위험을 증가시키는 것으로 밝혀졌다. MUC1은 면역원성인 것으로 나타났으며 환자 내 CD8+ CTL 및 IgM 항체를 포함하는 특이적 면역 반응을 유도하는 것으로 설명되었다. 다른 백신 접종 접근 방법을 사용하는 MUC1에 대한 백신 접종은 진행된 비소세포 폐암을 갖는 환자 내 제2상 임상에서 임상적으로 유익한 경향과 관련되며 내약화되는 것으로 나타났다. 동일한 백신을 사용하여 전립선암 내 MUC1에 대한 백신 접종은 일부 환자에 PSA 배가 시간(doubling time)의 연장과 관련된다. (Bilusic, M., et al. (2011) Immunotherapy in prostate cancer: emerging strategies against a formidable foe. Vaccine. 29:6485-6497; Dreicer, R. et al. (2009). MVA-MUC1-IL2 vaccine immunotherapy (TG4010) improves PSA doubling time in patients with prostate cancer with biochemical failure. Invest New Drugs. 27:379-386, Sangha, R. and North, S. (2007). L-BLP25: a MUC1-targeted peptide vaccine therapy in prostate cancer. Expert Opin Biol Ther. 7:1723-1730).
본 발명의 맥락에서, 적어도 하나의 mRNA, 바람직하게 MUC1을 코딩하는 mRNA의 바람직한 서열은 접근 번호 AAA60019.1(도. 36; SEQ ID NO: 81)로 기탁된 MUC1의 아미노산 서열 또는 도. 37(SEQ ID NO: 86; MUC1 5×VNTR)에 나타난 끝이 절단된(truncated) 아미노산 서열을 코딩하는 서열을 포함할 수 있거나, 적어도 하나의 mRNA는 접근 번호 J05582.1로 기탁된 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게, 도 17, 18 또는 38(SEQ ID NO: 17, 18 또는 87)의 어느 것에 나타난 코딩 서열을 포함한다. 더욱 바람직하게, 적어도 하나의 mRNA는 도. 16 또는 24에 나타난 서열(SEQ ID NO: 16 또는 24)을 포함하거나 이로 이루어진다. 더욱 바람직한 실시예에 따르면, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 대안적으로 또는 추가적으로 접근 번호 AAA60019.1로 기탁된 또는 도 36 또는 37에 나타난(SEQ ID NO: 81 또는 86) MUC1 서열의 절편, 변이체 또는 에피토프로부터 선택된 MUC1 항원 서열을 코딩할 수 있거나, 접근 번호 J05582.1로 기탁된 또는 도 16, 17, 18, 24 또는 38에 나타난 서열(SEQ ID NO: 16, 17, 18, 24 or 87)의 절편 또는 변이체를 포함할 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 참조는 항원 또는 이의 절편 또는 변이체로 만들어지며, 이는 참조가 본 발명에 제공된 mRNA 서열의 어느 하나 이상에 의해 코딩되는 항원 또는 펩타이드에 관련되는 것으로 이해된다. 나아가, 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 상기 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드는 이들 서열의 절편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 이러한 절편 또는 변이체는 전형적으로 상기 언급된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드 또는 서열의 하나와 서열 상동성을 갖는 서열 또는 핵산 수준 또는 아미노산 수준에서 전체 야생형 서열에 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 바람직하게 적어도 70%, 더욱 바람직하게 적어도 80%, 동일하게 더욱 바람직하게 적어도 85%, 더욱 더 바람직하게 적어도 90% 및 가장 바람직하게 적어도 95% 또는 97%까지의 그들의 코딩 핵산 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 맥락에서 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 "절편"은 상기 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 서열을 포함할 수 있으며, 이는 본래(천연) 단백질의 아미노산 서열(또는 이의 코딩된 핵산 서열)에 비해 N-말단, C-말단 및/또는 서열 내부(intrasequentially)에 절단된(truncated) 이의 아미노산 서열(또는 이의 코딩된 핵산 서열)에 관한 것이다. 따라서 이러한 절단은 아미노산 수준 또는 핵산 수준에 상응하여 발생할 수 있다. 따라서, 상기 정의된 이러한 절편에 관하여 서열 상동성은 바람직하게 상기 정의된 전체 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드 또는 이러한 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 전체(코딩)핵산 서열을 말한다.
나아가 본 발명의 맥락에서 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 절편은 약 6개 내지 약 20개 또는 그 이상의 아미노산의 길이를 갖는, 예를 들어 MHC 클래스 I 분자에 의해 가공 및 제시되는 절편, 바람직하게 약 8개 내지 약 10개 아미노산의 길이, 예를 들어 8, 9, 또는 10개, (또는 6, 7, 11, 또는 12개까지 아미노산)를 갖는, 또는 MHC 클래스 II 분자에 의해 가공되고 제시되는 절편, 바람직하게 약 13개 또는 그 이상의 아미노산, 예를 들어 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 이상의 아미노산의 길이를 갖는, 상기 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 서열을 포함할 수 있으며, 상기 이들 절편은 아미노산 서열의 어느 일부로부터 선택될 수 있다. 이들 절편은 전형적으로 펩타이드 절편 및 MHC 분자로 이루어진 복합체의 형태 내 T-세포에 의해 인식되며, 즉 절편은 전형적으로 그들의 천연 형태로 인식되지 않는다.
본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 절편은 또한 이들 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 에피토프를 포함할 수 있다. 본 발명의 맥락에서 에피토프(소위 "항원 결정자")는 전형적으로 바람직하게 5 내지 15개 아미노산을 갖는, 더욱 바람직하게 5 내지 12개 아미노산을 갖는, 더욱 더 바람직하게 6 내지 9개 아미노산을 갖는, 본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 바깥 표면에 위치한 절편이며, 이는 항체 또는 B-세포 수용체에 의해, 즉 그들의 천연 형태로 인식될 수 있다. 이러한 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 에피토프는 추가로 본 발명에 개시된 이러한 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 변이체의 어느 것으로부터 선택될 수 있다. 이러한 맥락에서, 항원 결정자는 형태적 또는 불연속 에피토프일 수 있으며, 이는 본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 아미노산 서열에서 불연속적인 본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 부분으로 구성되지만, 삼차원 구조 또는 단일 폴리펩타이드 체인으로 구성된 연속 또는 선형 에피토프로 합쳐진다. 따라서 본 발명의 맥락에서 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 절편은 항원의 적어도 하나의 에피토프를 포함하는 것이 특히 바람직하다.
상기 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 "변이체"는 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩될 수 있으며, 상기 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드를 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 핵산은 교체(exchanged)된다. 따라서, 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드는 하나 또는 그 이상의 치환된, 삽입된 및/또는 삭제된 아미노산(들)과 같이, 하나 또는 그 이상의 변이(들) 내 본래 서열과 상이한, 아미노산을 가지고 발생될 수 있다. 바람직하게, 이들 절편 및/또는 변이체는 전체 길이 자연 항원 또는 항원성 단백질과 비교하여 동일한 생물학적 기능 또는 특정한 활성, 예를 들어 이의 특정한 항원성 특성을 가진다.
본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 또한 상기 정의된 항원 또는 항원성 단백질을 코딩할 수 있으며, 상기 코딩된 아미노산 서열은 이의 생리학적 서열에 비해 보존적 아미노산 치환(들)을 포함한다. 그들 코딩된 아미노산 서열뿐만 아니라 그들의 코딩 뉴클레오티드 서열은 특히 상기 정의된 용어 변이체에 속한다. 서로 교체되는 동일한 종류로부터 유래된 아미노산에 치환은 보존적 치환이라고 부른다. 특히, 이들은 지방족 곁사슬, 양전하 또는 음전하를 띤 곁사슬, 곁사슬 또는 아미노산에 방향족 그룹, 수소 브릿지로 들어갈 수 있는 곁사슬, 예를 들어 하이드록실 기능을 갖는 곁사슬을 갖는 아미노산이다. 이는 예를 들어 극성 곁사슬을 갖는 아미노산이 유사한 극성 곁사슬을 갖는 다른 아미노산으로 교체되는 것, 또는, 예를 들어, 소수성 곁사슬에 의한 특징을 갖는 아미노산이 유사한 소수성 곁사슬을 갖는 다른 아미노산에 의해 치환되는 것(예를 들어 트레오닌(세린)에 의한 세린(트레오닌) 또는 이소루신(루신)에 의한 루신(이소루신))을 의미한다. 삽입 및 치환은 삼차원 구조에 변형을 유발하지 않으며 결합 영역에 영향을 미치지 않는 이들 서열 위치에서 특히 가능하다. 삽입(들) 또는 결실(들)에 의한 삼차원 구조에 변형은 예를 들어 CD 스펙트럼(원편광 이색성 스펙트럼)을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다 (Urry, 1985, Absorption, Circular Dichroism and ORD of Polypeptides, in: Modern Physical Methods in Biochemistry, Neuberger et al. (ed.), Elsevier, Amsterdam).
나아가, 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩될 수 있는, 상기 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 변이체는 또한 그들 서열을 포함할 수 있으며, 상기 적어도 하나의 mRNA의 핵산은 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 대표적인 아미노산 서열의 변형을 유도하지 않고, 유전자 코드의 퇴화에 따라 교체되며, 즉 아미노산 서열 또는 이들의 적어도 일부는 상기 의미 내 하나 또는 그 이상의 변이(들)에 본래 서열과 다르지 않을 수 있다.
나아가, 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩될 수 있는, 상기 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 변이체는 또한 본 발명에 정의된 RNA 서열에 상응하는 그들 DNA 서열을 포함할 수 있으며, 추가로 본 발명에 정의된 DNA 서열에 상응하는 RNA 서열을 포함할 수 있다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술자는 RNA 서열이 DNA로 번역(또는 역으로) 또는 상보적 가닥 서열의 창조에 대해 익히 알 것이다(즉 T 잔기로 U 잔기의 치환에 의해 및/또는 주어진 서열에 대해 상보적 가닥을 구성함을 통해).
동일한 두 서열(핵산 서열, 예를 들어 본 발명에 정의된 RNA 또는 mRNA, 또는 아미노산 서열, 바람직하게 그들의 코딩된 아미노산 서열, 예를 들어 본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드의 아미노산 서열)에 대한 백분율을 결정하기 위해, 서열은 이후 서로 비교되도록 정렬될 수 있다. 따라서, 예를 들어 갭(gaps)은 첫번째 서열의 서열 내로 삽입될 수 있으며, 두번째 서열의 상응하는 위치의 구성 요소가 비교될 수 있다. 만약 첫번째 서열의 위치가 두번째 서열 내 위치에 있는 그대로 동일한 구성 요소에 의해 차지된다면, 두 서열은 이러한 위치에서 동일하다. 동일한 두 서열에 대한 백분율은 위치의 총 수에 의해 나누어지는 동일한 위치의 수의 기능이다. 동일한 두 서열에 대한 백분율은 수학적 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 바람직하게, 사용될 수 있는 수학적 알고리즘의 예시는 Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877 or Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res., 25:3389-3402의 알고리즘이 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 알고리즘은 BLAST 프로그램에 통합된다. 특정한 정도에 본 발명의 서열과 동일한 서열은 이 프로그램을 통해 식별될 수 있다.
본 발명에 사용된 것처럼, 용어 "조성물"은 적어도 하나의 mRNA 및, 선택적으로 추가적인 첨가제를 의미한다. 용어 "조성물"은 따라서 mRNA가 모노-, 바이- 또는 멀티시스트로닉인 것과 무관하게, 상기 정의된 항원을 코딩하는 mRNA(mRNA 종)의 어느 혼합물을 포함한다. 본 발명의 의미 내에서, 용어 "조성물"은 또한 상기 정의된 여섯개 항원 모두를 코딩하는 멀티시스트로닉 RNA로 이루어진 실시예를 의미한다. 바람직하게, 상기 조성물은 각 mRNA 종이 상기 항원의 하나를 코딩하는, 적어도 여섯개 특별한 mRNA 종을 포함한다. 용어 "조성물"은 바람직하게 적어도 하나의 다른 적절한 물질과 함께 적어도 하나의 mRNA에 관련된다. 일반적으로, 상기 조성물은 약학적 조성물이며, 이는 의학 분야에 사용을 위해 설계된다. 따라서, 상기 조성물은 전형적으로 적어도 하나의 추가적인 부형제를 포함하며, 이는 약학적으로 허용가능하며 예를 들어 담체 및 비히클 등으로부터 선택될 수 있다. 상기 "조성물"은 액체 또는 건조 조성물일 수 있다. 만약 조성물이 액체이면, 이는 바람직하게 적어도 하나의 RNA의 수용성 용액 또는 분산액(dispersion)일 것이다. 만약 "조성물"이 건조 조성물이면, 이는 전형적으로 적어도 하나의 mRNA의 동결 건조된 조성물일 것이다. 본 발명에 사용된 용어 "조성물"은 나아가 추가적인 활성 재료와 조합된 본 발명의 적어도 하나의 mRNA를 의미한다. 바람직하게, 상기 조성물은 면역 자극성 조성물이며, 즉 면역 반응을 유도할 수 있는 또는 면역 반응을 유도할 수 있는 구성 요소로부터 적어도 하나의 구성요소를 포함하는 조성물이 유도될 수 있다. 이러한 맥락에서, 면역 반응은 적응 및/또는 선천적 면역계의 결과일 수 있다.
본 발명에 따르는 조성물은 상기 항원의 특정한 조합은 (적응) 면역 시스템을 효과적으로 자극하여, 전립선암(PCa)을 치료할 수 있는 것으로 밝혀진 것과 같이, 상기 정의된 적어도 여섯개의 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함한다.
요약하면, 본 발명의 목적은 본 발명에 정의된 항원의 새로운 조합을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 조성물을 제공함으로써 해결된다.
바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 모노시스트론 mRNA, 상기 정의된 항원의 그룹으로부터 선택된 다른 항원을 코딩하는 이들 각각의 mRNA에 의해 코딩되는 여섯가지 항원(PSA, PSMA, PSCA, STEAP, PAP 및 MUC1)을 포함한다. 그렇지 않으면, 상기 조성물은 모노시스트론, 바이- 및/또는 멀티시스트론 mRNA의 조합을 포함할 수 있으며, 상기 여섯개 항원의 하나 이상은 바이- 또는 멀티시스트론 mRNA에 의해 코딩된다. 본 발명에 따르면, 모노-, 바이- 또는 멀티시스트론 mRNA의 어느 조합은 본 발명에 정의된 모든 여섯개 항원, 예를 들어 각각 상기 여섯개 항원 가운데 둘을 코딩하는 세가지 바이시스트론 mRNA 또는 두가지 바이시스트론 및 두가지 모노시스트론 mRNA을 코딩하는 것으로 구상된다.
바람직한 실시예에 따르면, 상기 조성물은 SEQ ID Nos: 2, 5, 8, 11, 14 또는 17(또는 87)의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 mRNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는, 적어도 하나의 mRNA를 포함한다. 더욱 더 바람직하게, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 각 mRNA에 코딩 서열은 SEQ ID NOs: 2, 5, 8, 11, 14 및17(또는 87)에 따르는 RNA 서열의 어느 하나와 동일하거나 적어도 80% 동일하다.
바람직한 실시예에서, 본 발명의 조성물의 적어도 여섯개 항원의 각각은 하나의 (모노시스트론) mRNA에 의해 코딩될 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물은 여섯가지 (모노시스트론) mRNA를 포함할 수 있으며, 상기 이들 여섯 (모노시스트론) mRNA의 각각은 상기 정의된 단지 하나의 항원을 코딩할 수 있다.
더욱 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며, 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며, 하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며, 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며, 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며, 각각은 이의 절편 또는 변이체를 코딩한다.
더욱 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며 SEQ ID NO: 2와 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며 SEQ ID NO: 5와 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PSCA을 코딩하며 SEQ ID NO: 8과 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 11과 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 14와 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 및 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며 SEQ ID NO: 17(또는 87)과 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며(또는 이들 서열의 각각의 절편 또는 변이체), 및 선택적으로 추가적인 부형제를 포함한다.
더욱 더 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA 또는 이의 각각의 절편을 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며 SEQ ID NO: 2에 따르는 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며 SEQ ID NO: 5에 따르는 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며 SEQ ID NO: 8에 따르는 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 11에 따르는 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 14에 따르는 코딩 서열을 포함하며, 및 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며 SEQ ID NO: 17(또는 87)에 따르는 코딩 서열을 포함한다.
본 발명에 따르면, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 바람직하게 3' UTR 영역에 히스톤 스템-루프를 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 각각 mRNA는 본 발명에 정의된 히스톤 스템-루프를 포함한다.
또 다른 특히 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (적어도) 하나 바이- 또는 그 이상의 멀티시스트론 mRNA, 즉 본 발명에 따르는 여섯개 항원의 둘 또는 그 이상의 코딩 서열을 수송하는 (적어도) 하나의 mRNA를 포함할 수 있다. (적어도) 하나 바이 또는 그 이상의 멀티시스트론 mRNA의 둘 또는 그 이상의 항원의 이러한 코딩 서열은 하기 정의된 것처럼, 적어도 하나의 IRES(내부 리보좀 유입점(internal ribosomal entry site)) 서열에 의해 분리될 수 있다. 따라서, 용어 "둘 또는 그 이상의 항원을 코딩"하는 것은 (적어도) 하나 (바이- 또는 그 이상의 멀티시스트론) mRNA가 상기 개시된 항원의 적어도 둘, 셋, 넷, 다섯 또는 여섯(바람직하게 다른) 항원 또는 상기 정의 내 그들의 절편 또는 변이체를 코딩할 수 있음을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 더욱 바람직하게, (적어도) 하나 (바이- 또는 그 이상의 멀티시스트론) mRNA는 예를 들어 상기 언급된 항원의 적어도 둘, 셋, 넷, 다섯 또는 여섯 (바람직하게 다른) 항원 또는 상기 정의 내 그들의 절편 또는 변이체를 코딩할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 맥락에서, 상기 정의된 소위 IRES (내부 리보좀 유입점) 서열은 단독 리보좀 결합 부위로 기능할 수 있으나, 또한 서로 독립적으로 리보좀에 의해 번역되는 몇몇 단백질을 코딩하는 상기 정의된 바이- 또는 그 이상의 멀티시스트론 mRNA를 제공할 수 있다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 IRES 서열의 예시는 피코르나바이러스(picornaviruses) (예를 들어 FMDV), 페스티바이러스(pestiviruses) (CFFV), 폴리오바이러스(polioviruses) (PV), 뇌심근염 바이러스(encephalomyocarditis viruses) (ECMV), 구제역 바이러스(foot and mouth disease viruses) (FMDV), C형 간염 바이러스(hepatitis C viruses) (HCV), 돼지 콜레라 바이러스(classical swine fever viruses) (CSFV), 마우스 류코마 바이러스(mouse leukoma virus) (MLV), 유인원 면역결핍 바이러스(simian immunodeficiency viruses) (SIV) 또는 귀뚜라미 마비 바이러스(cricket paralysis viruses) (CrPV)로부터이다.
나아가 특히 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물은 상기 정의된 적어도 하나의 모노시스트론 mRNA의 혼합물 및 상기 정의된 적어도 하나의 바이- 또는 멀티시스트론 mRNA까지 포함할 수 있다. 적어도 하나의 모노시스트론 mRNA 및/또는 적어도 하나의 바이- 또는 멀티시스트론 mRNA까지는 바람직하게 다른 항원 또는 상기 정의 내 그들의 절편 또는 변이체를 코딩한다. 그러나, 적어도 하나의 모노시스트론 mRNA 및 적어도 하나의 바이- 또는 멀티시스트론 mRNA까지는 바람직하게 또한 전체로서 본 발명의 조성물이 상기 정의된 여섯가지 항원을 제공할 때, 상기 개시된 항원으로부터 선택된 (일부) 동일한 항원을 코딩한다. 하나 또는 그 이상의 항원의 다중 카피를 제공함으로써, 상기 하나 또는 그 이상의 항원의 상대적인 단백질 양은 증가될 수 있으며, 즉 여섯가지 항원의 각각의 양 사이의 비율이 조절될 수 있다. 나아가 이러한 실시예는 예를 들어 시차를 둔(staggered), 예를 들어 시간 의존적으로, 이것이 필요한 환자에 본 발명의 조성물의 투여에 유익할 수 있다. 본 발명에 정의된 본 발명의 이러한 조성물의 구성 요소, 특히 본 발명에 따라 적어도 여섯가지 항원의 특정한 조합을 코딩하는 다른 mRNA는 예를 들어 파트들의 키트(의 다른 파트)에 포함될 수 있거나, 예를 들어 본 발명에 따르는 다른 조성물의 구성 요소로서 분리되어 투여될 수 있다.
이러한 맥락에서, 적어도 여섯가지 항원의 각각은 별개의 mRNA에 의해 코딩되며 키트의 다른 파트(parts)에 포함되는 것이 특히 바람직하다. 적어도 여섯가지 항원의 하나를 코딩하는 각 mRNA는 바람직하게 본 발명에 정의된 다른 조성물의 구성 요소로써 분리되어 투여된다. 본 발명의 조성물에 대해 개시된 모든 실시예는 다른 항원을 코딩하는 mRNA를 포함하는 조성물의 이러한 조합에 대해 적용 가능하다.
바람직하게, 상기 여섯개 항원의 적어도 하나를 코딩하는 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 전형적으로 약 50 내지 약 20000개, 또는 100 내지 약 20000개 뉴클레오티드, 바람직하게 약 250 내지 약 20000개 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 약 500 내지 약 10000개, 더욱 더 바람직하게 약 500 내지 5000개의 길이를 포함한다.
일 실시예에 따르면, 상기 항원의 적어도 하나를 코딩하는 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 변형된 RNA의 형태일 수 있으며, 상기 본 발명에 정의된 어느 변형은 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 도입될 수 있다. 본 발명에 정의된 변형은 바람직하게 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 안정화된 mRNA를 유도한다.
첫번째 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 따라서 인비보(in vivo) 분해(예를 들어 엑소- 또는 엔도- 뉴클레아제에 의한)에 대해 근본적으로 내성인, mRNA로 불리는 "안정화된 mRNA"로 제공될 수 있다. 이러한 안정화는 예를 들어 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 변형된 포스페이트 백본에 의해 영향을 받을 수 있다. 본 발명과 관련된 백본 변형은 mRNA 내 포함된 뉴클레오티드의 백본의 포스페이트가 화학적으로 변형된 변형이다. 이러한 연결에 바람직하게 사용될 수 있는 뉴클레오티드는 예를 들어 포스포로티오에이트-변형된 포스페이트 백본, 바람직하게, 황 원자에 의해 교체된 포스페이트 백본에 포함된 인산염 산소의 적어도 하나를 포함할 수 있다. 안정화된 mRNA는 나아가 예를 들어: 전하를 띤 포스페이트 산소가 알킬 또는 아릴 기에 의해 교체된, 예를 들어, 알킬 및 아릴 포스포네이트와 같은, 비이온성 포스페이트 유사체(analogues), 또는 전하를 띤 산소 잔기가 알킬화된 형태인 포스포디에스터 및 알킬 포스포트리에스터를 포함할 수 있다. 이러한 백본 변형은 전형적으로 메틸포스포네이트(methylphosphonates), 포스포아미데이트(phosphoramidates), 및 포스포로티오에이트(phosphorothioates) (예를 들어 시티딘-5'-O-(1-티오포스페이트))로 이루어진 그룹으로부터 변형을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 추가로 또는 대안적으로 또한 당 변형을 포함할 수 있다. 본 발명과 관련된 당 변형은 적어도 하나의 mRNA의 뉴클레오티드의 당의 화학적 변형이며, 전형적으로 2'-데옥시-2'-플루오로-올리고리보뉴클레오티드(2'-deoxy-2'-fluoro-oligoribonucleotide) (2'-플루오로-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트(2'-fluoro-2'-deoxycytidine-5'-triphosphate), 2'-플루오로-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트(2'-fluoro-2'-deoxyuridine-5'-triphosphate)), 2'-데옥시-2'-디아민 올리고리보뉴클레오티드(2'-deoxy-2'-deamine oligoribonucleotide) (2'-아미노-2'-데옥시시티딘-5'-트리포스페이트(2'-amino-2'-deoxycytidine-5'-triphosphate), 2'-아미노-2'-데옥시우리딘-5'-트리포스페이트(2'-amino-2'-deoxyuridine-5'-triphosphate)), 2'-O-알킬 올리고리보뉴클레오티드(2'-O-alkyl oligoribonucleotide), 2'-데옥시-2'-C-알킬 올리고뉴클레오티드(2'-deoxy-2'-C-alkyl oligoribonucleotide) (2'-O메틸시티딘-5'-트리포스페이트(2'-O-methylcytidine-5'-triphosphate), 2'-메틸우리딘-5'-트리포스페이트(2'-methyluridine-5'-triphosphate)), 2'-C-알킬 올리고리보뉴클레오티드(2'-C-alkyl oligoribonucleotide), 및 이의 이성질체(2'-아라시티딘-5'-트리포스페이트(2'-aracytidine-5'-triphosphate), 2'-아라우리딘-5'-트리포스페이트(2'-arauridine-5'-triphosphate)), 또는 아지도트리포스페이트(azidotriphosphate) (2'-아지도-2'-디옥시시티딘-5'-트리포스페이트(2'-azido-2'-deoxycytidine-5'-triphosphate), 2'-아지도-2'-디옥시우리딘-5'-트리포스페이트(2'-azido-2'-deoxyuridine-5'-triphosphate))로 이루어진 그룹에서 선택된 당 변형을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 추가로 또는 대안적으로, 바람직하게 비변형된, 즉 자연(=본래), mRNA 서열에 비해 현저하게 적어도 하나의 mRNA 서열에 의해 코딩된 적어도 하나의 단백질의 발현을 증가시키기 위해 바람직하게 적절한, 적어도 하나의 염기 변형을 또한 포함할 수 있다. 이러한 경우에 현저성은 본래 mRNA 서열의 발현에 비해 단백질의 발현을 적어도 20%, 바람직하게 적어도 30%, 40%, 50% 또는 60%, 더욱 바람직하게 적어도 70%, 80%, 90% 또는 100% 까지 및 가장 바람직하게 적어도 150%, 200% 또는 300%까지 또는 그 이상 증가시키는 것을 의미한다. 본 발명과 관련하여, 이러한 염기 변형을 갖는 뉴클레오티드는 바람직하게 2-아미노-6-클로로퓨린리보사이드-5'-트리포스페이트(2-amino-6-chloropurineriboside-5'-triphosphate), 2-아미노아데노신-5'-트리포스페이트(2-aminoadenosine-5'-triphosphate), 2-티오시티딘-5'-트리포스페이트(2-thiocytidine-5'-triphosphate), 2-티오우리딘-5'-트리포스페이트(2-thiouridine-5'-triphosphate), 4-티오우리딘-5'-트리포스페이트(4-thiouridine-5'-triphosphate), 5-아미노알릴시티딘-5'-트리포스페이트(5-aminoallylcytidine-5'-triphosphate), 5-아미노알릴우리딘-5'-트리포스페이트(5-aminoallyluridine-5'-triphosphate), 5-브로모시티딘-5'-트리포스페이트(5-bromocytidine-5'-triphosphate), 5-브로모우리딘-5'-트리포스페이트(5-bromouridine-5'-triphosphate), 5-아이오도시티딘-5'-트리포스페이트(5-iodocytidine-5'-triphosphate), 5-아이오도우리딘-5'-트리포스페이트(5-iodouridine-5'-triphosphate), 5-메틸시티딘-5'-트리포스페이트(5-methylcytidine-5'-triphosphate), 5-메틸우리딘-5'-트리포스페이트(5-methyluridine-5'-triphosphate), 6-아자시티딘-5'-트리포스페이트(6-azacytidine-5'-triphosphate), 6-아자우리딘-5'-트리포스페이트(6-azauridine-5'-triphosphate), 6-클로로퓨린리보사이드-5'-트리포스페이트(6-chloropurineriboside-5'-triphosphate), 7-디아자아데노신-5'-트리포스페이트(7-deazaadenosine-5'-triphosphate), 7-디아자구아노신-5'-트리포스페이트(7-deazaguanosine-5'-triphosphate), 8-아자아데노신-5'-트리포스페이트(8-azaadenosine-5'-triphosphate), 8-아지도아데노신-5'-트리포스페이트(8-azidoadenosine-5'-triphosphate), 벤지미다졸-리보사이드-5'-트리포스페이트(benzimidazole-riboside-5'-triphosphate), N1-메틸아데노신-5'-트리포스페이트(N1-methyladenosine-5'-triphosphate), N1-메틸구아노신-5'-트리포스페이트(N1-methylguanosine-5'-triphosphate), N6-메틸아데노신-5'-트리포스페이트(N6-methyladenosine-5'-triphosphate), O6-메틸구아노신-5'-트리포스페이트(O6-methylguanosine-5'-triphosphate), 슈도우리딘-5'-트리포스페이트(pseudouridine-5'-triphosphate), 또는 퓨로마이신-5'-트리포스페이트(puromycin-5'-triphosphate), 잔토신-5'-트리포스페이트(xanthosine-5'-triphosphate).로 이루어진 염기-변형된 뉴클레오티드의 그룹으로부터 선택된다. 특히 바람직한 것은 5-메틸시티딘-5'-트리포스페이트(5-methylcytidine-5'-triphosphate), 7-디아자구아노신-5'-트리포스페이트(7-deazaguanosine-5'-triphosphate), 5-브로모시티딘-5'-트리포스페이트(5-bromocytidine-5'-triphosphate), 및 슈도우리딘-5'-트리포스페이트(pseudouridine-5'-triphosphate)로 이루어진 염기 변형된 뉴클레오티드의 그룹으로부터 선택된 염기 변형에 대한 뉴클레오티드로 주어진다.
다른 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 그들의 리보스 또는 염기 일부의 변형을 포함하는 변형된 뉴클레오티드를 추가적으로 도입함으로써 마찬가지로 변형(및 바람직하게 안정화)될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 어느 천연(=자연 발생) 뉴클레오티드, 예를 들어 구아노신, 우라실, 아데노신 및/또는 시토신 또는 이의 유사체를 포함할 수 있다. 이와 관련해서, 뉴클레오티드 유사체는 자연 발생 뉴클레오티드의 비자연적으로 발생하는 변이체로 정의된다. 추가로, 유사체는 비-천연적으로 발생한 기능기를 갖는 화학적으로 유도된 뉴클레오티이며, 이는 바람직하게 자연적으로 발생한 뉴클레오티드로부터 추가 또는 삭제되거나 뉴클레오티드의 자연 발생 기능기를 치환한다. 따라서, 이러한 자연 발생 뉴클레오티드의 구성 요소는 즉 염기 구성 요소, 당(리보스) 구성 요소 및/또는 mRNA 서열의 백본(상기 참조)을 형성하는 포스페이트 구성 요소로 변형될 수 있다. 구아노신, 우라실, 아데노신, 및 시토신의 유사체는 자연 발생 또는 예를 들어 아세틸화, 메틸화, 하이드록실화 등에 의하여, 화학적으로 변형된, 1-메틸-아데노신(1-methyl-adenosine), 1-메틸-구아노신(1-methyl-guanosine), 1-메틸-이노신(1-methyl-inosine), 2,2-디메틸-구아노신(2,2-dimethyl-guanosine), 2,6-디아미노퓨린(2,6-diaminopurine), 2'-아미노-2'디옥시아데노신(2'-Amino-2'-deoxyadenosine), 2'-아미노-2'-디옥시시티딘(2'-Amino-2'-deoxycytidine), 2'-아미노-2'-디옥시구아노신(2'-Amino-2'-deoxyguanosine), 2'-아미노-2'-디옥시우리딘(2'-Amino-2'-deoxyuridine), 2-아미노-6-클로로퓨린리보사이드(2-Amino-6-chloropurineriboside), 2-아미노퓨린-리보사이드(2-Aminopurine-riboside), 2'-아라데노신(2'-Araadenosine), 2'-아라시티딘(2'-Aracytidine), 2'-아라우리딘(2'-Arauridine), 2'-아지도-2'-디옥시아데노신(2'-Azido-2'-deoxyadenosine), 2'-아지도-2'-디옥시시티딘(2'-Azido-2'-deoxycytidine), 2'-아지도-2'-디옥시구아노신(2'-Azido-2'-deoxyguanosine), 2'-아지도-2'-디옥시우리딘(2'-Azido-2'-deoxyuridine), 2-클로로아데노신(2-Chloroadenosine), 2'-플루오로-2'-디옥시아데노신(2'-Fluoro-2'-deoxyadenosine), 2'-플루오로-2'-디옥시시티딘(2'-Fluoro-2'-deoxycytidine), 2'-플루오로-2'-디옥시구아노신(2'-Fluoro-2'-deoxyguanosine), 2'-플루오로-2'-디옥시우리딘(2'-Fluoro-2'-deoxyuridine), 2'-플루오로티미딘(2'-Fluorothymidine), 2-메틸-아데노신(2-methyl-adenosine), 2-메틸-구아노신(2-methyl-guanosine), 2-메틸-티오-N6-이소페네닐-아데노신(2-methyl-thio-N6-isopenenyl-adenosine), 2'-O-메틸-2-아미노아데노신(2'-O-Methyl-2-aminoadenosine), 2'-O-메틸-2'-디옥시아데노신(2'-O-Methyl-2'-deoxyadenosine), 2'-O-메틸-2'-디옥시시티딘(2'-O-Methyl-2'-deoxycytidine), 2'-O-메틸-2'-디옥시구아노신(2'-O-Methyl-2'-deoxyguanosine), 2'-O-메틸-2'-디옥시우리딘(2'-O-Methyl-2'-deoxyuridine), 2'-O-메틸-5-메틸우리딘(2'-O-Methyl-5-methyluridine), 2'-O-메틸이노신(2'-O-Methylinosine), 2'-O-메틸슈도우리딘(2'-O-Methylpseudouridine), 2-티오시티딘(2-Thiocytidine), 2-티오-시토신(2-thio-cytosine), 3-메틸-시토신(3-methyl-cytosine), 4-아세틸-시토신(4-acetyl-cytosine), 4-티오우리딘(4-Thiouridine), 5-(카르복시하이드록시메틸)-우라실(5-(carboxyhydroxymethyl)-uracil), 5,6-디하이드로우리딘(5,6-Dihydrouridine), 5-아미노알릴시티딘(5-Aminoallylcytidine), 5-아미노알릴-디옥시-우리딘(5-Aminoallyl-deoxy-uridine), 5-브로모우리딘(5-Bromouridine), 5-카르복시메틸아미노메틸-2-티오-우라실(5-carboxymehtylaminomethyl-2-thio-uracil), 5-카르복시메틸아모노메틸-우라실(5-carboxymethylamonomethyl-uracil), 5-클로로-아라-시토신(5-Chloro-Ara-cytosine), 5-플루오로-우리딘(5-Fluoro-uridine), 5-아이오도우리딘(5-Iodouridine), 5-메톡시카르보닐메틸-우리딘(5-methoxycarbonylmethyl-uridine), 5-메톡시-우리딘(5-methoxy-uridine), 5-메틸-2-티오-우리딘(5-methyl-2-thio-uridine), 6-아자시티딘(6-Azacytidine), 6-아자우리딘(6-Azauridine), 6-클로로-7-디아자-구아노신(6-Chloro-7-deaza-guanosine), 6-클로로퓨린리보사이드(6-Chloropurineriboside), 6-메르캅토-구아노신(6-Mercapto-guanosine), 6-메틸-메르캅토퓨린-리보사이드(6-Methyl-mercaptopurine-riboside), 7-디아자-2'-디옥시-구아노신(7-Deaza-2'-deoxy-guanosine), 7-디아자아데노신(7-Deazaadenosine), 7-메틸-구아노신(7-methyl-guanosine), 8-아자아데노신(8-Azaadenosine), 8-브로모-아데노신(8-Bromo-adenosine), 8-브로모-구아노신(8-Bromo-guanosine), 8-메르캅토-구아노신(8-Mercapto-guanosine), 8-옥소구아노신(8-Oxoguanosine), 벤즈이미다졸-리보사이드(Benzimidazole-riboside), 베타-D-만노실-퀘신(Beta-D-mannosyl-queosine), 디하이드로-우라실(Dihydro-uracil), 이노신(Inosine), N1-메틸아데노신(N1-Methyladenosine), N6-([6-아미노헥실]카바모일메틸)-아데노신(N6-([6-Aminohexyl]carbamoylmethyl)-adenosine), N6-이소펜테닐-아데노신(N6-isopentenyl-adenosine), N6-메틸-아데노신(N6-methyl-adenosine), N7-메틸-잔토신(N7-Methyl-xanthosine), N-우라실-5-옥소아세트산 메틸 에스터(N-uracil-5-oxyacetic acid methyl ester), 퓨로마이신(Puromycin), 퀘신(Queosine), 우라실-5-옥소아세트산(Uracil-5-oxyacetic acid), 우라실-5-옥소아세트산 메틸 에스터(Uracil-5-oxyacetic acid methyl ester), 위부톡소신(Wybutoxosine), 잔토신(Xanthosine), 및 자일로-아데노신(Xylo-adenosine)을 포함하는 비자연 발생 구아노신, 우라실, 아데노신, 티미딘 또는 시토신을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 유사체의 제조는 예를 들어 US 특허 4,373,071, US 4,401,796, US 4,415,732, US 4,458,066, US 4,500,707, US 4,668,777, US 4,973,679, US 5,047,524, US 5,132,418, US 5,153,319, US 5,262,530 및 5,700,642로부터 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에게 알려져 있다. 상기 설명된 유사체의 경우에, 특히 바람직한 것은 본 발명의 조성물의 mRNA의 면역원성(immunogenity)을 증가시키는 및/또는 도입된 mRNA의 추가적인 변형을 방해하지 않는 그들의 유사체에 본 발명에 따라 주어질 수 있다.
특정한 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 지질 변형을 포함할 수 있다. 이러한 지질 변형된 mRNA는 전형적으로 상기 정의된 여섯가지 항원의 적어도 하나를 코딩하는, 본 발명에 정의된 mRNA를 포함한다. 이러한 지질 변형된 mRNA는 전형적으로 추가로 mRNA와 공유결합된 적어도 하나의 연결자, 및 각각의 연결자에 공유 결합된 적어도 하나의 지질을 포함한다. 그렇지 않으면, 지질 변형된 mRNA는 본 발명에 정의된 (적어도 하나의) mRNA 및 mRNA와 공유 결합된(연결자 없이) 적어도 하나의 (이기능성) 지질을 포함한다. 세번째 대안에 따르면, 지질 변형된 mRNA는 본 발명에 정의된 mRNA, 상기 mRNA와 공유 결합된 적어도 하나의 연결자, 및 각각 연결자와 공유 결합된 적어도 하나의 지질, 및 또한 상기 mRNA와 공유 결합된(연결자 없이) 적어도 하나의 (이기능성) 지질을 포함한다.
본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA내 포함된 지질은(이에 복합체가 되거나 공유 결합된) 전형적으로 바람직하게 그 자체가 생물학적으로 활성인 지질 또는 친유성 잔기이다. 이러한 지질은 바람직하게 예를 들어, RRR-알파-토코페롤(이전에 D-알파-토코페롤), L-알파-토코페롤, D,L-알파토코페롤 라세미 화합물, 비타민 E 숙시네이트(VES)를 포함하는 알파-토코페롤(비타민 E), 또는 비타민 A 및 이의 유도체, 예를 들어 레티노산, 레티놀, 비타민 D 및 이의 유도체, 예를 들어 비타민 D 및 또한 이의 에르고스테롤(ergosterol) 전구체, 비타민 E 및 이의 유도체, 비타민 K 및 이의 유도체, 예를 들어 비타민 K 및 관련된 퀴논 또는 피톨 화합물과 같은 비타민 또는 담즙산(bile acids), 예를 들어 콜산(cholic acid), 디옥시콜산, 디하이드로콜산, 코르티손, 디곡시게닌, 테스토스테론, 콜레스테롤 또는 티오콜레스테롤과 같은 스테로이드와 같은 천연 물질 또는 화합물을 포함한다. 본 발명의 범위 내 추가적인 지질 또는 친유성 잔기는 폴리알킬렌 글리콜(Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533), 예를 들어 C1-C20 알칸, C1-C20 알켄 또는 또는 C1-C20-알카놀 화합물 등과 같은, 예를 들어, 도데칸디올, 헥사데카놀 또는 운데실 잔기와 같은 지방족 그룹(Saison-Behmoaras et al., EMBO J, 1991, 10, 111; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49), 예를 들어, 포스파티딜글리세롤, 디아실포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디스테아로일포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 포스파티딜에타놀라민, 디-헥사데실-락-글리세롤, 스핑고리피드, 세레브로사이드, 강글리오사이드, 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-O-헥사데실-락-글리세로-3-H-포스포네이트와 같은 인지질(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777), 예를 들어, 폴리에틸렌글리콜(PEG) (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969), 헥사에틸렌글리콜(HEG), 팔미틴 또는 팔미틸 잔기(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229), 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카보닐-옥시콜레스테롤 잔기(Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923)와 같은 폴리아민 또는 폴리알킬렌 글리콜, 및 또한 왁스, 테르펜, 알리실릭 탄화수소, 포화된 및 모노- 또는 폴리- 비포화된 지방산 잔기 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 마찬가지로 다양한 접근에 의해 인비보(in vivio)에 mRNA의 분해를 예방하기 위해 안정화될 수 있다. 일반적으로 인비보 mRNA 또는 RNA의 불안정성 및 (빠른) 분해는 RNA 기초의 조성물의 적용에 심각한 문제를 나타낼 수 있음이 기술분야에 알려져 있다. 이러한 RNA의 불안정성은 전형적으로 RNA-분해 효소, "RNases"(리보뉴클레아제) 때문이며, 상기 이러한 리보뉴클레아제로 오염은 종종 용액 내 RNA를 완전히 분해한다. 따라서, 세포의 세포질 내 mRNA의 자연적인 분해는 매우 세밀하게 조절되며, RNase 오염은 일반적으로 상기 조성물의 사용 전에 특별한 처리에 의해, 특히 디에틸 피로카보네이트(DEPC)로 제거될 수 있다. 자연적인 분해의 많은 메커니즘은 선행 기술에서 이와 관련하여 알려져 있으며, 이는 예를 들어 들어 말단 구조가 전형적으로 인비보 mRNA에 대해 매우 중요한 것과 같이 활용될 수 있다. 예를 들어, 자연 발생 mRNA의 5' 말단에는 소위 "캡(cap) 구조"(변형된 구아노신 뉴클레오티드)이며, 3' 말단에는 전형적으로 200개 까지의 아데노신 뉴클레오티드의 서열이 있다(소위 폴리-A 꼬리).
본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 따라서 소위 "5' 캡" 구조의 추가에 의해 RNases에 의한 분해에 대해 안정화될 수 있다. 특히 바람직한 것은 5' 캡" 구조로 m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A 또는 G(5')ppp(5')G와 관련된다. 그러나, 이러한 변형은 만약 변형, 예를 들어 지질 변형이 본 발명의 조성물의 mRNA의 5' 말단에 이미 도입되지 않은 경우, 또는 만약 변형이 (비변형된 또는 화학적으로 변형된) mRNA의 면역원성 특성을 방해하지 않는 경우에 도입된다.
더욱 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 전형적으로 약 10 내지 200개 아데노신 뉴클레오티드, 바람직하게 약 10 내지 100개 아데노신 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 약 40 내지 80개 아데노신 뉴클레오티드 또는 더욱 더 바람직하게 약 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드를 3' 말단에 폴리-A 꼬리를 포함할 수 있다.
더욱 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 약 10 내지 200개 시토신 뉴클레오티드, 바람직하게 약 10 내지 100개 시토신 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 약 20 내지 70개 시토신 뉴클레오티드 또는 더욱 더 바람직하게 약 20 내지 60개 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드까지 3' 말단에 폴리-C 꼬리를 포함할 수 있다.
본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 바람직하게 적어도 하나의 히스톤 스템-루프를 포함하거나 코딩한다. 본 발명의 맥락에서, 이러한 일반적인 히스톤 스템-루프(히스톤 스템 루프 또는 아닌지와 무관하게) 전형적으로 히스톤 유전자로부터 유도되며, 그에 따라 스템-루프를 형성하는, 두 이웃한 전체적으로 또는 부분적으로 역 상보적인 서열의 분자내 염기쌍을 포함한다. 스템-루프는 단일 가닥 DNA 또는 보다 일반적으로 RNA에서 발생할 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 히스톤 스템-루프 서열은 이의 DNA 또는 이의 상응하는 RNA 서열에 의해 설명될 수 있다. 따라서, DNA 서열(예를 들어 SEQ ID NO: 37 내지 66 및 70)에 의해 본 발명에 개시된, 히스톤 스템-루프 서열에 어느 참조문헌은 - 본 출원의 전체에 걸쳐 - 또한 상응하는 RNA 서열을 포함한다. 이는 특히 히스톤 스템-루프 서열을 적용하며, 이는 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA에 포함된다. 따라서, 히스톤 스템-루프를 정의하는 특정한 DNA 서열에 대한 참고문헌에 의해, 상응하는 RNA 서열 또한 정의된다.
상기 구조는 또한 헤어핀 또는 헤어핀 루프로 알려져 있으며 보통 연속적인 서열 내 스템 및 (말단) 루프로 이루어지며, 상기 스템은 스페이서(spacer)의 종류로 짧은 서열에 의해 분리되는 두 이웃한 전체적 또는 부분적으로 역 상보적인 서열에 의해 형성되며, 이는 스템-루프 구조의 루프를 만든다. 두 이웃한 전체적 또는 부분적으로 역 상보적인 서열은 예를 들어 스템 루프 요소 스템 1 및 스템 2로 정의될 수 있다. 스템 루프는 이들 두 이웃한 전체적 또는 부분적으로 역 상보적인 서열, 예를 들어 스템 루프 요소 스템1 및 스템2가 연속 서열에 스템 루프 요소 스템 1 및 스템 2 사이에 위치한 짧은 서열에 의해 형성된 이의 말단에 짝이 없는 루프를 포함하는 이중 가닥 핵산 서열 스트레치를 유도하는 서로 염기 쌍을 형성할 때 형성된다. 따라서 짝이 없는 루프는 따라서 전형적으로 이들 스템 루프 요소로 염기쌍을 이룰 수 없는 핵산의 영역을 나타낸다. 결과물 막대 사탕 형태의 구조는 많은 RNA 이차 구조의 주요 빌딩 블록이다. 스템-루프 구조의 형성은 따라서 결과물 스템 및 루프 영역의 안정성에 의존하며, 상기 첫번째 전제 조건은 전형적으로 짝지어진 이중 가닥을 형성하기 위해 자체에 꺾일 수(fold back) 있는 서열의 존재이다. 짝지어진 스템 루프 요소의 안정성은 미스매치(mismatches)의 길이, 수 또는 이를 포함하는 벌지(bulges)(미스매치의 작은 수는 전형적으로 내성이며, 특히 긴 이중 가닥 스트레치에서) 및 짝지어진 영역의 염기 조성물에 의해 결정된다. 본 발명의 맥락에서, 3 내지 15개 염기의 루프 길이가 가능한 반면, 더욱 바람직한 루프 길이는 3 내지 10개 염기, 더욱 바람직하게 3 내지 8개, 3 내지 7개, 3 내지 6개 또는 더욱 더 바람직하게 4 내지 5개 염기, 및 가장 바람직하게 4개 염기이다. 히스톤 스템-루프 내 스템 영역을 형성하는 서열은 전형적으로 5 내지 10개 염기, 더욱 바람직하게 5 내지 8개 염기 사이의 길이를 가지며, 상기 바람직하게 염기의 적어도 하나는 미스매치를 나타내며, 즉 염기 쌍이 아니다.
본 발명의 맥락에서, 히스톤 스템-루프는 전형적으로 히스톤 유전자(예를 들어 히스톤 패밀리 H1, H2A, H2B, H3, H4로부터 유전자)로부터 유도되며, 그에 따라 스템-루프를 형성하는 두 이웃한 전체적 또는 부분적으로 역 상보적인 서열의 분자 내 염기쌍을 포함한다. 전형적으로, 히스톤 3' UTR 스템-루프는 히스톤 mRNA의 핵원형질 수송, 및 세포질 내 안정성 및 번역 효율의 조절에 포함된다. 후생동물(metazoan) 히스톤 유전자의 mRNA는 폴리아데닐화 및 폴리-A 꼬리가 부족한 대신, 3' 말단 가공이 이러한 매우 보존된 스템-루프 및 20개 뉴클레오티드 다운스트림 주변의 퓨린 풍부 영역(히스톤 다운스트림 요소, 또는 HDE) 사이의 위치에 발생한다. 히스톤 스템-루프는 31 kDa 스템-루프 결합 단백질(SLBP - 또한 히스톤 헤어핀 결합 단백질, 또는 HBP로 불림)에 의해 결합된다. 이러한 히스톤 스템-루프 구조는 바람직하게 다른 서열 요소 및 구조와 조합된 본 발명에 의해 적용되며, 이는 히스톤 유전자에서 자연적으로(비변형된 생물 유기체/세포를 의미함) 발생하지 않으나, 인공적, 이종 핵산을 제공하기 위해 - 본 발명에 따라 - 조합된다. 따라서, 히스톤 유전자 또는 후생 동물 히스톤 유전자에서 발생하지 않는 다른 이종 서열 요소를 갖는 히스톤 스템-루프 구조의 인공(비-천연) 조합은 다른 히스톤 보다 단백질을 코딩하는 유전자의 운영 및/또는 조절 서열 영역(전사 및/또는 번역에 영향을 주는)으로부터 분리되며, 유리한 효과를 제공하는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 하나의 실시예는 폴리(A) 서열 또는 폴리아데닐화 신호(코딩 영역의 3'-말단)를 나타내는 서열을 갖는 히스톤 스템-루프 구조의 조합을 포함하며, 이는 후생동물 히스톤 유전자에서 발생하지 않는다. 본 발명의 다른 바람직한 실시예에 따르면, 바람직하게 후생동물 히스톤 유전자에서 발생하지 않는, 상기 정의된 본 발명에 따르는 적어도 하나의 항원을 코딩하는 코딩 영역을 갖는 히스톤 스템-루프 구조의 조합은, 본 발명에 제공된다 (코딩 영역 및 히스톤 스템 루프 서열은 이종임).
히스톤 스템 루프는 따라서 본 발명에 설명된 스템-루프 구조이며, 이는 만약 바람직하게 기능적으로 정의된 다면, 이의 자연 결합 파트너, 스템-루프 결합 단백질(SLBP - 또한 히스톤 헤어핀 결합 단백질, 또는 HBP로 불림)에 결합하는 특성을 전시/보유한다.
바람직한 실시예에서, 히스톤 스템 루프 서열은 마우스 히스톤 단백질로부터 유도되지 않는다. 보다 구체적으로, 히스톤 스템 루프 서열은 마우스 히스톤 유전자 H2A614로부터 유도되지 않을 수 있다. 또한, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 마우스 히스톤 스템 루프 서열 또는 마우스 히스톤 유전자 H2A614를 포함하지 않는다. 나아가, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 스템-루프 가공 신호, 보다 구체적으로, 마우스 히스톤 가공 신호를 포함하지 않을 수 있으며, 가장 구체적으로, 만약 적어도 하나의 mRNA가 적어도 하나의 포유동물 히스톤 유전자를 포함하더라도, 마우스 스템 루프 가공 신호 H2kA614를 포함하지 않을 수 있다. 그러나, 적어도 하나의 포유동물 히스톤 유전자는 WO 01/12824의 Seq. ID No. 7이 아닐 수 있다.
상기 정의된 적어도 하나의mRNA는 바람직하게 상기 정의된 항원 또는 이의 절편, 변이체 또는 유도체를 코딩하는 코딩 영역; 및 적어도 하나의 히스톤 스템-루프를 포함하는 3'UTR을 포함한다. 상기 정의된 항원에 추가할 때, 추가적인 펩타이드 또는 단백질은 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩된 후, 코딩된 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게 상기 정의된 히스톤 단백질, 리포터 단백질 및/또는 마커 또는 선별 단백질이 아니다. 적어도 하나의 mRNA의 3' UTR은 바람직하게 또한 본 발명에 정의된 폴리(A) 및/또는 폴리(C) 서열을 포함한다. 3' UTR의 하나의 요소는 적어도 하나의 mRNA의 서열에 따라 5' 에서 3'의 어느 순서로 그 안에 발생할 수 있다. 게다가, 본 발명에 정의된 추가 요소는 또한 본 발명에 정의된 안정화 서열(예를 들어 글로빈 유전자의 UTR로부터 유도된), IRES 서열 등에 포함될 수 있다. 각 요소는 또한 적어도 한번(특히 다이- 또는 멀티시스트론 구조 내), 바람직하게 두번 또는 그 이상, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA내 반복될 수 있다. 예를 들어, 단일 요소는 하기 순서 내 적어도 하나의 mRNA에 개시될 수 있다:
5' - 코딩 영역- 히스톤 스템 루프- 폴리(A)/(C) 서열- 3'; 또는
5' - 코딩 영역 - 폴리(A)/(C) 서열- 히스톤 스템 루프- 3'; 또는
5' - 코딩 영역 - 히스톤 스템 루프- 폴리아데닐화 신호- 3'; 또는
5' - 코딩 영역 - 폴리아데닐화 신호- 히스톤 스템 루프- 3'; 또는
5' - 코딩 영역 - 히스톤 스템 루프- 히스톤 스템 루프 - 폴리(A)/(C) 서열- 3'; 또는
5' - 코딩 영역 - 히스톤 스템 루프 - 히스톤 스템 루프 - 폴리아데닐화 신호- 3'; 또는
5' - 코딩 영역 - 안정화 서열- 폴리 (A)/(C) 서열- 히스톤 스템 루프 - 3'; 또는
5' - 코딩 영역 - 안정화 서열 - 폴리 (A)/(C) 서열 - 폴리(A)/(C) 서열- 히스톤 스템 루프 - 3'; 등
이러한 맥락에서, 이는 특히 - 만약 상기 정의된 항원에 추가로, 추가적인 펩타이드 또는 단백질이 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 경우 - 코딩된 펩타이드 또는 단백질은 바람직하게 히스톤 단백질, 리포터 단백질(예를 들어 루시퍼라제, GFP, EGFP, b-갈락토시다제, 특히 EGFP) 및/또는 마커 또는 선별 단백질(예를 들어 알파-글로빈, 갈락토키나제 및 잔틴:구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(GPT))가 아닌 것이 바람직하다.
바람직한 실시예에서, 본 발명에 따르는 mRNA는 리포터 유전자 또는 마커 유전자를 포함하지 않는다. 바람직하게, 본 발명에 따르는 mRNA는 예를 들어 루시퍼라제; 녹색 형광 단백질(GFP) 및 이의 변이체(eGFP, RFP 또는 BFP와 같은); α-글로빈; 하이포잔틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(HGPRT); β-갈락토시다제; 갈락토키나제; 알칼라인 포스파타제; 분비된 배아 알칼라인 포스파타제(SEAP)) 또는 내성 유전자(네오마이신, 퓨로마이신, 하이그로마이신 및 제오신에 대한 내성 유전자와 같은)를 코딩하지 않는다. 바람직한 실시예에서, 본 발명에 따르는 mRNA는 루시퍼라제를 코딩하지 않는다. 다른 실시예에서, 본 발명에 따르는 mRNA는 GFP 또는 이의 변이체를 코딩하지 않는다.
보다 바람직한 실시예에서, 본 발명에 따르는 mRNA는 바이러스로부터, 바람직하게 오르쏘믹소바이러스과(Orthomyxoviridae)의 패밀리에 속하는 바이러스로부터 유도된 단백질(또는 단백질의 절편)을 코딩하지 않는다. 바람직하게 mRNA는 인플루엔자 바이러스, 더욱 바람직하게 인플루엔자 A 바이러스로부터 유도된 단백질을 코딩하지 않는다. 바람직하게, 본 발명에 따르는 mRNA는 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), 핵단백질(NP), M1, M2, NS1, NS2(NEP: 핵 수출 단백질), PA, PB1(폴리머라제 베이직 1), PB1-F2 및 PB2로 이루어진 그룹으로부터 선택된 인플루엔자 A 단백질을 코딩하지 않는다. 다른 바람직한 실시예에서, 본 발명에 따르는 mRNA는 오발부민(OVA) 또는 이의 절편을 코딩하지 않는다. 바람직하게, 본 발며엥 따르는 mRNA는 인플루엔자 A 단백질 또는 오발부민을 코딩하지 않는다.
하나의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 적어도 하나의, 바람직하게 하기 화학식 (I) 또는 (II)의 적어도 하나에 따르는 히스톤 스템-루프 서열을 포함한다:
화학식 (I) (스템 보더링(bordering) 요소가 없는 스템 루프 서열):
Figure pct00001
화학식 (II) (스템 보더링 요소가 있는 스템 루프 서열):
Figure pct00002
상기:
스템1 또는 스템2 보더링 요소 N1-6은 1 내지 6개, 바람직하게 2 내지 6개, 더욱 바람직하게 2 내지 5개, 더욱 더 바람직하게 3 내지 5개, 가장 바람직하게 4 내지 5개 또는 5개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드, 또는 이의 뉴클레오티드로 유사체로부터 서로 독립적으로 선택된다;
스템1[N0-2GN3-5]은 요소 스템2와 역 상보적 또는 부분적으로 역 상보적이며, 5 내지 7개 뉴클레오티드 사이의 연속적인 서열이며;
상기 N0- 2은 0 내지 2개, 바람직하게 0 내지 1개, 더욱 바람직하게 1개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
상기 N3-5 은 3 내지 5개, 바람직하게 4 내지 5개, 더욱 바람직하게 4N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 독립적으로 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며,
상기 G는 구아노신 또는 이의 유사체이며, 스템2 내 이의 상보적인 뉴클레오티드 시티딘이 구아노신에 의해 교체되는 경우, 시티딘 또는 이의 유사체에 의해 선택적으로 교체될 수 있다;
루프 서열[N0- 4(U/T)N0 - 4]은 요소 스템1 및 스템2 사이에 위치하며, 3 내지 5개 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 4개 뉴클레오티드의 연속적인 서열이며;
상기 각 N0- 4은 0 내지 4개, 바람직하게 1 내지 3개, 더욱 바람직하게 1 내지 2개 N의 다른 연속적인 서열로부터 독립적이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며; 및
상기 U/T는 우리딘, 또는 선택적으로 티미딘을 나타낸다;
스템2[N3-5CN0-2]는 요소 스템1에 역 상보적 또는 부분적으로 역 상보적이며, 5 내지 7개 뉴클레오티드 사이의 연속적인 서열이며;
상기 N3- 5은 3 내지 5개, 바람직하게 4 내지 5개, 더욱 바람직하게 4개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택된다;
상기 N0-2는 0 내지 2개, 바람직하게 0 내지 1개, 더욱 바람직하게 1개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 또는 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적이며; 및
상기 C는 시티딘 또는 이의 유사체이며, 스템1 내 이의 상보적인 뉴클레오티드 구아노신이 시티딘에 의해 교체되는 경우 구아노신 또는 이의 유사체에 의해 선택적으로 교체될 수 있다;
상기
스템1 및 스템2는 역 상보적 서열을 서로 형성하는 염기 쌍이 가능하며, 상기 염기 쌍은 스템1 및 스템2 사이에, 예를 들어 뉴클레오티드 A 및 U/T 또는 G 및 C의 왓슨-크릭 염기쌍에 의해, 또는 비-왓슨-크릭 염기쌍, 예를 들어 워블(wobble) 염기쌍, 역 왓슨-크릭 염기쌍, 후그스틴(Hoogsteen) 염기쌍, 역 후그스틴 염기쌍에 의해 발생할 수 있으며, 또는 부분적으로 역 상보적 서열을 서로 형성하는 염기 쌍이 가능하며, 상기 불완전 염기쌍은, 하나의 스템 내 하나 또는 그 이상의 염기가 다른 스템의 역 상보적 서열 내 상보적인 염기를 갖지 않음에 기초하여, 스템1 및 스템2 사이에 발생할 수 있다.
상기 맥락에서, 워블 염기쌍은 전형적으로 두 뉴클레오티드 사이 비-왓슨-크릭 염기쌍이다. 사용될 수 있는 본 발명에서 네가지 주요 워블 염기쌍은 구아노신-우리딘, 이노신-우리딘, 이노신-아데노신, 이노신-시티딘(G-U/T, I-U/T, I-A 및 I-C) 및 아데노신-시티딘(A-C)이다.
따라서, 본 발명의 맥락에서, 워블 염기는 상기 설명된 추가적인 염기와 함께 워블 염기쌍을 이루는 염기이다. 따라서 비-왓슨-크릭 염기쌍, 예를 들어 워블 염기쌍은 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA 내 히스톤 스템-루프 구조의 스템 내에 발생할 수 있다.
상기 맥락에서, 부분적으로 역 상보적인 서열은 스템1 및 스템2의 염기쌍에 의해 형성된 스템-루프 서열의 스템-구조 내에 최대 2개, 바람직하게 오직 1개의 미스매치를 포함한다. 즉, 스템1 및 스템2는 바람직하게 스템1 및 스템2의 전체 서열을 통해 서로 (전체) 염기쌍(가능한 정확한 왓슨-크릭 또는 비-왓슨-크릭 염기쌍의 100%)이 가능하며, 그에 따라 역 상보적인 서열을 형성하며, 상기 각 염기는 상보적인 결합 파트너로 이의 정확한 왓슨-크릭 또는 비-왓슨-크릭 염기 팬던트(pendant)를 갖는다. 그렇지 않으면, 스템1 및 스템2는 바람직하게 스템1 및 스템2의 전체 서열에 걸쳐 서로 부분 염기쌍을 이룰 수 있으며, 상기 100% 가능한 정확한 왓슨-크릭 또는 비-왓슨-크릭 염기쌍의 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%가 정확한 왓슨-크릭 또는 비-왓슨-크릭 염기쌍으로 차지되며, 잔여 염기의 거의 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 또는 5%가 쌍을 이루지 않는다.
바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 정의된 적어도 하나의 mRNA의 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열(스템 보더링 요소와 함께)은 약 15 내지 약 45개 뉴클레오티드의 길이, 바람직하게 약 15 내지 약 40개 뉴클레오티드의 길이, 바람직하게 약 15 내지 약 35개 뉴클레오티드의 길이, 바람직하게 약 15 내지 약 30개 뉴클레오티드의 길이 및 더욱 더 바람직하게 약 20 내지 약 30개의 길이 및 가장 바람직하게 약 24 내지 약 28개 뉴클레오티드의 길이를 포함한다.
더욱 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 정의된 적어도 하나의 mRNA의 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열(스템 보더링 요소 없이)은 약 10 내지 약 30개 뉴클레오티드의 길이, 바람직하게 약 10 내지 약 20개 뉴클레오티드의 길이, 바람직하게 약 12 내지 약 20개 뉴클레오티드의 길이, 바람직하게 약 14 내지 약 20개 뉴클레오티드의 길이 및 더욱 더 바람직하게 약 16 내지 약 17개의 길이 및 가장 바람직하게 약 16개 뉴클레오티드의 길이를 포함한다.
더욱 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 하기 특정한 화학식 (Ia) 또는 (IIa)의 적어도 하나에 따르는 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있다:
화학식 (Ia) (스템 보더링 요소가 없는 스템-루프 서열):
Figure pct00003
화학식 (IIa) (스템 보더링 요소가 있는 스템-루프 서열):
Figure pct00004
상기:
N, C, G, T 및 U는 상기 정의된 것과 같다.
첫번째 양태의 보다 특히 바람직한 실시예에 따르면, 적어도 하나의 mRNA는 하기 특정한 화학식 (Ib) 또는 (IIb)의 적어도 하나에 따르는 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함하거나 코딩할 수 있다:
화학식 (Ib) (스템 보더링 요소가 없는 스템-루프 서열):
Figure pct00005
화학식 (IIb) (스템 보더링 요소가 있는 스템-루프 서열):
Figure pct00006
상기:
N, C, G, T 및 U는 상기 정의된 것과 같다.
더욱 더 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 하기 특정한 화학식 (Ic) 내지 (Ih) 또는 (IIc) 내지 (IIh)의 적어도 하나에 따르는 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함할 수 있으며, 이의 스템-루프 구조 내 대안적으로 및 히스톤 스템-루프 서열을 나타내는 선형 서열로 나타난다:
화학식 (Ic): (스템 보더링 요소가 없는 후생동물 및 원생동물 히스톤 스템-루프 일치 서열):
Figure pct00007
화학식 (IIc): (스템 보더링 요소가 있는 후생동물 및 원생동물 히스톤 스템-루프 일치 서열):
Figure pct00008
화학식 (Id): (스템 보더링 요소가 없음)
Figure pct00009
화학식 (IId): (스템 보더링 요소가 있음)
Figure pct00010
화학식 (Ie): (스템 보더링 요소가 있는 후생동물 히스톤 스템-루프 일치 서열)
Figure pct00011
화학식 (IIe): (스템 보더링 요소가 있는 후생동물 히스톤 스템-루프 일치 서열)
Figure pct00012
화학식 (If): (스템 보더링 요소가 없는 후생동물 히스톤 스템-루프 일치 서열)
Figure pct00013
화학식 (IIf): (스템 보더링 요소가 있는 후생동물 히스톤 스템-루프 일치 서열)
Figure pct00014
화학식 (Ig): (스템 보더링 요소가 없는 척추동물 히스톤 스템-루프 일치 서열)
Figure pct00015
화학식 (IIg): (스템 보더링 요소가 있는 척추동물 히스톤 스템-루프 일치 서열)
Figure pct00016
화학식 (Ih): (스템 보더링 요소가 없는 인간 히스톤 스템-루프 일치 서열 (호모 사피엔스))
Figure pct00017
화학식 (IIh): (스템 보더링 요소가 있는 인간 히스톤 스템-루프 일치 서열(호모 사피엔스))
Figure pct00018
상기 화학식 (Ic) 내지 (Ih) 또는 (IIc) 내지 (IIh)의 각각에:
N, C, G, A, T 및 U는 상기 정의된 것과 같음;
각 U는 T로 교체될 수 있음;
스템 요소 1 및 2에 각 (매우) 보존된 G 또는 C는, 상응하는 스템 내 이의 상보적인 뉴클레오티드가 동시에 이의 상보적인 뉴클레오티드에 의해 교체되는 경우, 이의 상보적인 뉴클레오티드 염기 C 또는 G에 의해 교체될 수 있음; 및/또는
G, A, T, U, C, R, Y, M, K, S, W, H, B, V, D, 및N은 하기 표에 정의된 뉴클레오티드 염기임:
약어 뉴클레오티드 염기 의미(remark)
G G 구아닌(Guanine)
A A 아데닌(Adenine)
T T 티민(Thymine)
U U 우라실(Uracile)
C C 시토신(Cytosine)
R G 또는 A 퓨린(Purine)
Y T/U 또는 C 피리미딘(Pyrimidine)
M A 또는 C 아미노(Amino)
K G 또는 T/U 케토(Keto)
S G 또는 C 강(Strong) (3H 결합(bonds))
W A 또는 T/U 약(Weak) (2H 결합)
H A 또는 C 또는 T/U G가 아님
B G 또는 T/U 또는 C A가 아님
V G 또는 C 또는 A T/U가 아님
D G 또는 A 또는 T/U C가 아님
N G 또는 C 또는 T/U 또는 A 어느 염기
* 존재 또는 비존재 염기가 존재 또는 존재하지 않을 수 있음
이러한 맥락에서, 상기 적어도 하나의 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih) 또는 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh)에 따르는 히스톤 스템-루프 서열은 자연적으로 발생하는 히스톤 스템 루프 서열로부터, 더욱 특히 바람직하게 원생동물 또는 후생동물 히스톤 스템-루프 서열로부터, 및 더욱 더 특히 바람직하게 척추동물로부터 및 가장 바람직하게 포유동물 히스톤 스템-루프 서열로부터 특히 인간 히스톤 스템-루프 서열로부터 선택되는 것이 특히 바람직하다.
특히 바람직한 실시예에 따르면, 적어도 하나의 특정한 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih) 또는 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh)에 따르는 히스톤 스템-루프 서열은 가장 빈번하게 발생하는 뉴클레오티드, 또는 후생동물, 원생동물, 원생동물, 후생동물, 척추동물 및 인간 내 자연적으로 발생하는 히스톤 스템-루프 서열의 가장 빈번하게 또는 두번째로 가장 빈번하게 발생하는 뉴클레오티드의 각 뉴클레오티드 위치를 포함하는 히스톤 스템-루프 서열이다. 이러한 맥락에서, 자연적으로 발생하는 히스톤 스템-루프 서열의 가장 빈번하게 발생하는 뉴클레오티드에 상응하는 적어도 80%, 바람직하게 적어도 85%, 또는 가장 바람직하게 적어도 90%의 모든 뉴클레오티드가 특히 바람직하다.
보다 특정한 실시예에서, 상기 특정한 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih)의 적어도 하나에 따르는 히스톤 스템-루프 서열은 하기 히스톤 스템-루프 서열(스템-보더링 요소가 없는)로부터 선택된다:
VGYYYYHHTHRVVRCB (화학식(Ic)에 따르는 SEQ ID NO: 37)
SGYYYTTYTMARRRCS (화학식(Ic)에 따르는 SEQ ID NO: 38)
SGYYCTTTTMAGRRCS (화학식(Ic)에 따르는 SEQ ID NO: 39)
DGNNNBNNTHVNNNCH (화학식 (Ie)에 따르는 SEQ ID NO: 40)
RGNNNYHBTHRDNNCY (화학식 (Ie)에 따르는 SEQ ID NO: 41)
RGNDBYHYTHRDHNCY (화학식 (Ie)에 따르는 SEQ ID NO: 42)
VGYYYTYHTHRVRRCB (화학식 (If)에 따르는 SEQ ID NO: 43)
SGYYCTTYTMAGRRCS (화학식 (If)에 따르는 SEQ ID NO: 44)
SGYYCTTTTMAGRRCS (화학식 (If)에 따르는 SEQ ID NO: 45)
GGYYCTTYTHAGRRCC (화학식 (Ig)에 따르는 SEQ ID NO: 46)
GGCYCTTYTMAGRGCC (화학식 (Ig)에 따르는 SEQ ID NO: 47)
GGCTCTTTTMAGRGCC (화학식 (Ig)에 따르는 SEQ ID NO: 48)
DGHYCTDYTHASRRCC (화학식 (Ih)에 따르는 SEQ ID NO: 49)
GGCYCTTTTHAGRGCC (화학식 (Ih)에 따르는 SEQ ID NO: 50)
GGCYCTTTTMAGRGCC (화학식 (Ih)에 따르는 SEQ ID NO: 51)
나아가 이러한 맥락에서, 특정한 화학식 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh)의 하나에 따르는 하기 히스톤 스템-루프 서열(스템 보더링 요소가 있는)이 특히 바람직하다:
H*H*HHVVGYYYYHHTHRVVRCBVHH*N*N* (화학식 (IIc)에 따르는 SEQ ID NO: 52)
M*H*MHMSGYYYTTYTMARRRCSMCH*H*H* (화학식 (IIc)에 따르는 SEQ ID NO: 53)
M*M*MMMSGYYCTTTTMAGRRCSACH*M*H* (화학식 (IIc)에 따르는 SEQ ID NO: 54)
N*N*NNNDGNNNBNNTHVNNNCHNHN*N*N* (화학식 (IIe)에 따르는 SEQ ID NO: 55)
N*N*HHNRGNNNYHBTHRDNNCYDHH*N*N* (화학식 (IIe)에 따르는 SEQ ID NO: 56)
N*H*HHVRGNDBYHYTHRDHNCYRHH*H*H* (화학식 (IIe)에 따르는 SEQ ID NO: 57)
H*H*MHMVGYYYTYHTHRVRRCBVMH*H*N* (화학식 (IIf)에 따르는 SEQ ID NO: 58)
M*M*MMMSGYYCTTYTMAGRRCSMCH*H*H* (화학식 (IIf)에 따르는 SEQ ID NO: 59)
M*M*MMMSGYYCTTTTMAGRRCSACH*M*H* (화학식 (IIf)에 따르는 SEQ ID NO: 60)
H*H*MAMGGYYCTTYTHAGRRCCVHN*N*M* (화학식 (IIg)에 따르는 SEQ ID NO: 61)
H*H*AAMGGCYCTTYTMAGRGCCVCH*H*M* (화학식 (IIg)에 따르는 SEQ ID NO: 62)
M*M*AAMGGCTCTTTTMAGRGCCMCY*M*M* (화학식 (IIg)에 따르는 SEQ ID NO: 63)
N*H*AAHDGHYCTDYTHASRRCCVHB*N*H* (화학식 (IIh)에 따르는 SEQ ID NO: 64)
H*H*AAMGGCYCTTTTHAGRGCCVMY*N*M* (화학식 (IIh)에 따르는 SEQ ID NO: 65)
H*M*AAAGGCYCTTTTMAGRGCCRMY*H*M* (화학식 (IIh)에 따르는 SEQ ID NO: 66)
보다 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 적어도 하나의 특정한 화학식 (I) 또는 (Ia) 내지 (Ih) 또는 (II) 또는 (IIa) 내지 (IIh)에 따르거나 자연 발생하는 히스톤 스템-루프 서열을 갖는 히스톤 스템-루프 서열 내 100% 보존된 뉴클레오티드가 아닌, 적어도 약 80%, 바람직하게 적어도 약 85%, 더욱 바람직하게 적어도 약 90%, 또한 더욱 더 바람직하게 적어도 약 95% 서열 상동성를 보이는 적어도 하나의 히스톤 스템-루프 서열을 포함한다.
특히 바람직한 히스톤 스템-루프 서열은 SEQ ID NO: 70 CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA에 따르는 서열 또는 더욱 바람직하게 SEQ ID NO: 70에 따르는 핵산 서열의 상응하는 RNA 서열이다:
CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA(SEQ ID NO: 71).
바람직한 실시예에서, 히스톤 스템 루프 서열은 루프 서열 5'-UUUC-3'을 포함하지 않는다. 보다 구체적으로, 히스톤 스템 루프는 스템1 서열 5'-GGCUCU-3' 및/또는 스템2 서열 5'-AGAGCC-3'을 각각 포함하지 않는다. 다른 바람직한 실시예에서, 스템 루프 서열은 루프 서열 5'-CCUGCCC-3' 또는 루프 서열 5'-UGAAU-3'을 포함하지 않는다. 보다 구체적으로, 스템 루프는 스템1 서열 5'-CCUGAGC-3'을 포함하지 않거나 스템1 서열 5'-ACCUUUCUCCA-3' 및/또는 스템2 서열 5'-GCUCAGG-3' 또는 5'-UGGAGAAAGGU-3' 각각을 포함하지 않는다. 또한, 스템 루프 서열은 바람직하게 포유동물 인슐린 수용체 3'-비번역된 영역으로부터 유도되지 않는다. 또한, 바람직하게 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 히스톤 스템 루프 가공 신호, 특히 마우스 히스톤 유전자 H2A614 유전자(H2kA614)로부터 유도된 것들을 포함하지 않는다.
바람직하게, 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 하기로 이루어진 그룹의 구성 요소의 하나 또는 둘 또는 적어도 하나 또는 모두 그러나 하나 또는 모두를 포함하지 않는다: 리보자임(바람직하게 자가 스플라이싱 리보자임)을 코딩하는 서열, 바이러스 핵산 서열, 히스톤 스템-루프 가공 신호, 특히 마우스 히스톤 H2A614 유전자로부터 유도된 히스톤-스템 루프 가공 서열, Neo 유전자, 비활성화된 프로모터 서열 및 비활성화된 인헨서 서열. 더욱 보다 바람직하게, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA는 리보자임, 바람직하게 자가 스플라이싱 리보자임, 및 하기로 이루어진 그룹의 하나를 포함하지 않는다: Neo 유전자, 비활성화된 프로모터 서열, 비활성화된 인헨서 서열, 히스톤 스템-루프 가공 신호, 특히 마우스 히스톤 H2A614 유전자로부터 유도된 히스톤-스템 루프 가공 서열. 따라서, mRNA는 바람직한 방법으로 리보자임, 바람직하게 자가 스플라이싱 리보자임 또는 Neo 유전자 또는, 대안적으로, 리보자임, 바람직하게 자가 스플라이싱 리보자임 또는 어느 내성 유전자(예를 들어 보통 선별을 위해 적용되는 것)를 포함하지 않을 수 있다. 다른 바람직한 양태에서, 본 발명의 적어도 하나의 mRNA는 리보자임, 바람직하게 자가 스플라이싱 리보자임 또는 히스톤 스템-루프 가공 신호, 특히 마우스 히스톤 H2A614 유전자로부터 유도된 히스톤-스템 루프 가공 서열을 포함하지 않을 수 있다.
그렇지 않으면, 본 발명에 따르는 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 선택적으로 특정한 단백질 인자(예를 들어 분열 및 폴리아데닐화 특이적 인자(CPSF), 분열 촉진 인자(CstF), 분열 인자 I 및 II(CF I 및 CF II), 폴리(A) 폴리머라제(PAP))에 의해 (전사된) mRNA에 폴리아데닐화를 전달하는 신호로써 본 발명에 정의된 폴리아데닐화 신호를 포함한다. 이러한 맥락에서, 일치 폴리아데닐화 신호는 바람직하게 NN(U/T)ANA 일치 서열을 포함한다. 특히 바람직한 양태에서 폴리아데닐화 신호는 하기 서열의 하나를 포함한다: AA(U/T)AAA 또는 A(U/T)(U/T)AAA(상기 우리딘은 보통 RNA에 나타나며 티미딘을 보통 DNA에 나타남). 일부 실시예에서, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA에 사용된 폴리아데닐화 신호는 U3 snRNA, U5, 인간 유전자 G-CSF로부터 폴리아데닐화 가공 신호, 또는 SV40 폴리아데닐화 신호 서열에 상응하지 않는다. 특히, 상기 폴리아데닐화 신호는 어느 항생제 내성 유전자 (또는 어느 다른 리포터, 마커 또는 선별 유전자)와, 특히 내성 neo 유전자(네오마이신 포스포트랜스퍼라제)와 조합되지 않는다. 그리고 상기 폴리아데닐화 신호의 어느 것은 바람직하게 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA 내 마우스 히스톤 유전자 H2A614로부터 히스톤 스템 루프 또는 히스톤 스템 루프 가공 신호와 조합되지 않는다.
다른 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 바람직하게 적어도 하나의 mRNA의 코딩 영역의, mRNA의 G/C 함량을 변형함으로써, 변형될 수 있으며, 따라서 안정화된다.
본 발명의 특히 바람직한 실시예에서, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 코딩 영역의 G/C 함량은 변형, 이의 특히 야생형 mRNA, 즉 비변형된 mRNA의 코딩 영역의 G/C 함량에 비해 특히 증가된다. 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 아미노산 서열은 바람직하게 특정한 야생형 mRNA에 의해 코딩되는 아미노산 서열에 비해 변형되지 않는다. 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 이러한 변형은, 번역되는 어느 mRNA 영역의 서열이 그 mRNA의 효율적인 번역을 위해 중요하다는 사실에 기초한다. 따라서, 상기 조성물 및 다양한 뉴클레오티드의 서열은 중요하다. 특히, 증가된 G(구아노신)/C(시토신) 함량을 갖는 서열은 증가된 A(아데노신)/U(우라실) 함량을 갖는 서열에 비해 보다 안정하다. 본 발명에 따르면, mRNA의 코돈은 따라서 각각의 야생형 mRNA에 비해 다양한 한편, 번역된 아미노산 서열을 유지하며, 그들은 G/C 뉴클레오티드의 증가된 함량을 포함한다. 몇몇 코돈이 하나 및 동일한 아미노산을 코딩하는 사실(소위 유전자 코드의 퇴화)에 관하여, 안정성을 위해 가장 선호되는 코돈이 결정될 수 있다(소위 대안적 코동 사용). 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 아미노산에 기초하여, 이의 야생형 서열에 비해 상기 mRNA 서열의 변형에 대하여 다양한 가능성이 있다. 아미노산이 G 또는 C 뉴클레오티드를 독점적으로 포함하는 코돈에 의해 코딩되는 경우에, 코돈의 변형은 필요하지 않다. 따라서, Pro (CCC 또는 CCG), Arg (CGC 또는 CGG), Ala (GCC 또는 GCG) 및 Gly (GGC 또는 GGG)에 대한 코돈은, A 또는 U가 존재하지 않으므로, 변형이 필요하지 않다. 대조적으로, A 및/또는 U 뉴클레오티드를 포함하는 코돈은 동일한 아미노산을 코딩하는 다른 코돈의 치환에 의해 변형될 수 있으나 A 및/또는 U를 포함하지 않는다. 이들의 예시는 다음과 같다: Pro에 대한 코돈은 CCU 또는 CCA 내지 CCC 또는 CCG로부터 변형될 수 있으며; Arg에 대한 코돈은 CGU 또는 CGA 또는 AGA 또는 AGG 내지 CGC 또는 CGG로부터 변형될 수 있으며; Ala에 대한 코돈은 GCU 또는 GCA 내지 GCC 또는 GCG로부터 변형될 수 있으며; Gly에 대한 코돈은 GGU 또는 GGA 내지 GGC 또는 GGG로부터 변형될 수 있다. 다른 경우에, 비록 A 또는 U 뉴클레오티드가 코돈으로부터 제거될 수 없더라도, 그러나 A 및/또는 U 뉴클레오티드의 낮은 함량을 포함하는 코돈을 사용함으로써 A 및 U 함량을 감소시킬 수 있다. 이들의 예시는 다음과 같다: Phe에 대한 코돈은 UUU 내지 UUC로부터 변형될 수 있으며; Leu에 대한 코돈은 UUA, UUG, CUU 또는 CUA 내지 CUC 또는 CUG로부터 변형될 수 있으며; Ser에 대한 코돈은 UCU 또는 UCA 또는 AGU 내지 UCC, UCG 또는 AGC로부터 변형될 수 있으며; Tyr에 대한 코돈은 UAU 내지 UAC 로부터 변형될 수 있으며; Cys에 대한 코돈은 UGU 내지 UGC 로부터 변형될 수 있으며; His에 대한 코돈은 CAU 내지 CAC 로부터 변형될 수 있으며; Gln에 대한 코돈은 CAA 내지 CAG 로부터 변형될 수 있으며; Ile에 대한 코돈은 AUU 또는 AUA 내지 AUC 로부터 변형될 수 있으며; Thr에 대한 코돈은 ACU 또는 ACA 내지 ACC 또는 ACG 로부터 변형될 수 있으며; Asn에 대한 코돈은 AAU 내지 AAC 로부터 변형될 수 있으며; Lys에 대한 코돈은 AAA 내지 AAG 로부터 변형될 수 있으며; Val에 대한 코돈은 GUU 또는 GUA 내지 GUC 또는 GUG 로부터 변형될 수 있으며; Asp에 대한 코돈은 GAU 내지 GAC 로부터 변형될 수 있으며; Glu에 대한 코돈은 GAA 내지 GAG 로부터 변형될 수 있으며; UAA에 대한 정지 코돈은 UAG 또는 UGA 로부터 변형될 수 있다. Met(AUG) 및 Trp(UGG)에 대한 코돈의 경우에, 반대로, 서열 변형의 가능성은 없다. 상기 나열된 치환은 이의 특정한 야생형 mRNA(즉 본래 서열)에 비해 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 G/C 함량을 증가시키는 개별적으로 또는 모든 가능한 조합에 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 야생형 서열 내 발생하는 쏙에 대한 모든 코돈은 ACC(또는 ACG)로 변형될 수 있다. 바람직하게, 그러나, 예를 들어, 상기 치환 가능성의 조합은 사용된다:
ACC(또는 ACG)로 본래 서열(야생형 mRNA) 내 Thr을 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
UCC(또는 UCG 또는 AGC)로 Ser을 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환; AUC에 본래 서열 내 Ile를 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
AAG로 Lys을 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
UAC로 Tyr을 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환; GUC(또는 GUG)로 본래 서열 내 Val을 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
GAG로 Glu를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
GCC (또는 GCG) 로 Ala를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
CGC(또는 CGG)로 Arg를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환; GUC(또는 GUG)로 본래 서열 내 Val을 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
GAG로 Glu를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
GCC (또는 GCG) 로 Ala를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
GGC(또는 GGG)로 Gly를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
AAC로 Asn을 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환; GUC(또는 GUG)로 본래 서열 내 Val을 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
UUC로 Phe를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
UGC로 Cys를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
CUG(또는 CUC)로 Leu를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
CAG로 Gln을 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환 및
CCC(또는 CCG)로 Pro를 본래 코딩하는 모든 코돈의 치환; 등. 바람직하게, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 코딩 영역의 G/C 함량은 본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드 또는 이의 절편 또는 변이체를 코딩하는 야생형 mRNA의 코딩된 영역의 G/C 함량에 비해 적어도 7%, 더욱 바람직하게 적어도 15%, 특히 바람직하게 적어도 20% 증가된다. 특정한 실시예에 따르면, 본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드를 코딩하는 영역 내 치환 코돈의 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 더욱 바람직하게 적어도 70%, 더욱 더 바람직하게 적어도 80% 및 가장 바람직하게 적어도 90%, 95% 또는 100%까지의 치환가능한 코돈 또는 이의 절편 또는 변이체 또는 야생형 mRNA의 전체 서열은 치환되며, 그에 따라 상기 서열의 GC/함량이 증가한다. 이러한 맥락에서, 야생형 서열에 비해, 특히 단백질을 코딩하는 영역에서, 최대로(즉 치환 가능한 코돈의 100%) 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 (m)RNA의 G/C 함량을 증가시키는데 특히 바람직하다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 보다 바람직한 변형은 번역 효율이 또한 세포 내 tRNAs의 발현에 다른 빈도에 의해 결정된다는 발견에 기초한다. 따라서, 만약 소위 "드문(rare) 코돈"이 증가된 범위로 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 존재한다면, 상응하는 변형된 적어도 하나의 mRNA 서열은 상대적으로 "빈번한" tRNAs를 코딩하는 코돈이 존재하는 경우에 비해 현저하게 열등한 정도로 번역된다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물의 변형된 적어도 하나의 mRNA에, 상기 항원을 코딩하는 영역은, 세포 내 상대적으로 드문 tRNA를 코딩하는 야생형 서열의 적어도 하나의 코돈이 세포 내 상대적으로 빈번하며 상대적으로 드문 tRNA로서 동일한 아미노산을 수송하는 tRNA를 코딩하는 코돈으로 교환되도록, 야생형 mRNA의 상응하는 영역에 비해 변형된다. 이러한 변형을 통해, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 서열은 빈번하게 발생하는 tRNA활용 가능하도록 코돈이 삽입되게 변형된다. 다시 말해, 본 발명에 따르면, 이러한 변형을 통해 세포 내 상대적으로 드문 tRNA를 코딩하는 야생형 서열의 모든 코돈은 각 경우에 세포 내 상대적으로 빈번하며 각 경우에 상대적으로 드문 tRNA와 같이 동일한 아미노산을 수송하는 tRNA를 코딩하는 코돈으로 교체될 수 있다. 어떤 tRNAs가 세포 내 상대적으로 빈번하게, 및 대조적으로 상대적으로 드물게 발생하는지 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에게 알려져 있다; 예를 들어 Akashi, Curr. Opin. Genet. Dev. 2001, 11(6): 660-666 참조. 가장 빈번하게 발생하는 특정한 아미노산 tRNA를 위해 사용되는 코돈, 예를 들어 Gly 코돈, (인간) 세포 내 가장 빈번하게 발생하는, tRNA를 사용하는 것이 특히 바람직하다. 본 발명에 따르면, 이는 mRNA의 코딩 영역에 의해 코딩된 단백질의 아미노산 서열을 변형시키지 않는 "빈번한" 코돈을 갖는 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 변형된 mRNA에서, 증가되는, 특히 최대화된, 순차적인 G/C 함량에 연결하는 것이 특히 바람직하다. 이러한 바람직한 실시예는 특히 효율적으로 번역되고 안정화된(변형된) 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 제공을 허용한다. 상기 설명된 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 변형된 mRNA의 결정은(증가된 G/C 함량; tRNAs의 교환) WO 02/098443에 설명된 컴퓨터 프로그램을 사용하여 수행될 수 있다 - 이의 개시된 내용은 본 발명에 이의 전체 범위에 포함된다. 이러한 컴퓨터 프로그램을 사용하여, 어느 바람직한 mRNA의 뉴클레오티드 서열은 유전자 코드 또는 이의 퇴화(degenerative) 본성의 도움으로 변형될 수 있다. 최대 G/C 함량 결과, 세포 내 가능한한 빈번하게 발생하는 tRNAs를 코딩하는 코돈의 사용과 조합하여, 상기 아미노산 서열은 비변형된 서열에 비해 바람직하게 변형되지 않은 적어도 하나의 변형된 mRNA에 의해 코딩된다. 그렇지 않으면, 또한 본래 서열에 비해 오직 G/C 함량 또는 오직 코돈의 사용을 변경하는 것이 가능하다. Visual Basic 6.0(사용된 개발 환경: Microsoft Visual Studio Enterprise 6.0 with Servicepack 3) 내 소스 코드는 또한 WO 02/098443에서 설명되었다. 본 발명의 보다 바람직한 실시예에서, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 (m)RNA의 리보좀 결합 부위의 환경 내 A/U 함량은 이의 특정한 야생형 mRNA의 리보좀 결합 부위의 환경 내 A/U 함량에 비해 증가된다. 이러한 변형은(리보좀 결합 부위 주변의 증가된 A/U 함량) 적어도 하나의 mRNA에 결합하는 리보좀의 효율을 증가시킨다. 차례로 리보좀 결합 부위(코작 서열(Kozak sequence): GCCGCCACCAUGG (SEQ ID NO: 67), AUG는 시작 코돈을 형성)에 리보좀의 효율적인 결합은 적어도 하나의 mRNA의 효율적인 번역의 효과를 갖는다. 본 발명의 추가적인 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 잠재적으로 불안정화 서열 요소에 관하여 변형될 수 있다. 특히, 적어도 하나의 mRNA의 코딩 영역 및/또는 5' 및/또는 3' 비번역된 영역은 불안정화 서열 요소를 포함하지 않도록 특정한 야생형 mRNA에 비해 변형될 수 있으며, 적어도 하나의 변형된 mRNA의 코딩된 아미노산 서열은 이의 특정한 야생형 mRNA에 비해 바람직하게 변형되지 않는다. 예를 들어, 진핵생물 RNAs의 서열 내 불안정화 서열 요소(DSE)는 신호 단백질이 결합하는 곳에 발생하며 인비보(in vivo) RNA의 효소 분해를 조절하는 것으로 알려져 있다. 변형된 적어도 하나의 mRNA의 추가적인 안정화를 위해, 본 발명에 정의된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드를 코딩하는 영역 내 선택적으로, 야생형 mRNA의 상응하는 영역에 비해 하나 또는 그 이상의 이러한 변형은 따라서 수행될 수 있으며, 그에 따라 상당한 불안정화 서열 요소가 이에 포함되지 않는다. 본 발명에 따르면, 비번역된 영역(3'- 및/또는 5'-UTR)에 존재하는 DSE는 이러한 변형에 의해 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA로부터 또한 제거될 수 있다. 수많은 불안정 RNAs의 3'-UTR 구획에 발생하는, 이러한 불안정화 서열은 예를 들어 AU-풍부 서열(AURES)이다(Caput et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986, 83: 1670 to 1674). 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 그에 따라 적어도 하나의 mRNA가 이러한 불안정화 서열을 포함하지 않도록 바람직하게 야생형 mRNA에 비해 변형된다. 이는 또한 트랜스페린 수용체를 코딩하는 유전자의 3'-UTR 부분에 포함되는 가능한 엔도뉴클레아제, 예를 들어 서열 GAACAAG에 의해 인식되는 그들 서열 모티프에 적용한다(Binder et al., EMBO J. 1994, 13: 1969 to 1980). 이들 서열 모티프는 또한 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA에서 바람직하게 제거된다. 또한 바람직하게 본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는, 예를 들어 리보좀 결합을 증진시키거나 또는 본 발명의 조성물의 적어도 하나(바이- 또는 멀티시스트론까지) mRNA에 위치한 다른 코딩된 항원을 발현시키기 위해, 변형된 형태의 상기 정의된 적어도 하나의 IRES 및/또는 변형된 형태의 적어도 하나의 5' 및/또는 3' 안정화 서열을 갖는다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 추가적으로 바람직하게 적어도 하나의 5' 및/또는 3' 안정화 서열을 갖는다. 5' 및/또는 3' 비번역된 영역 내 이들 안정화 서열은 시토졸 내 적어도 하나의 mRNA의 반감기를 증가시키는 효과를 갖는다. 이들 안정화 서열은 자연적으로 발생하는 서열에 100% 서열 상동성을 가질 수 있으며, 이는 바이러스, 박테리아 및 진핵생물에 발생하나, 또한 부분적 또는 완전히 합성일 수 있다. 예를 들어 호모 사피엔스(Homo sapiens) 또는 제노푸스 라에비스(Xenopus laevis)로부터 β-글로빈 유전자의 비번역된 서열(UTR)은 안정화된 mRNA에 대한 본 발명 내 사용될 수 있는 안정화 서열의 예시로 언급될 수 있다. 안정화 서열의 다른 예시는 일반식(C/U)CCANxCCC(U/A)PyxUC(C/U)CC (SEQ ID NO: 68)을 가지며, 이는 α-글로빈, α(I)-콜라겐, 15-리폭시게나제 또는 티로신 하이드록실라제를 코딩하는 매우 안정한 mRNA의 3' UTR에 포함된다(Holcik et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997, 94: 2410 to 2414 참조). 이러한 안정화 서열은 물론 개별적으로 또는 서로 조합되어 및 또한 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술자에게 알려진 다른 안정화 서열과 조합되어 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 따라서 바람직하게 글로빈 UTR(비번역된 영역)-안정화된 mRNA, 특히 α-글로빈 UTR-안정화된 mRNA로 존재한다. 바람직하게 본 발명의 적어도 하나의 mRNA는 바람직하게 SEQ ID No. 69를 따르는, 인간 α-글로빈 유전자와 같은, α-글로빈 유전자의 3'UTR의 중앙, α-복합체-결합 부위로부터 유도된 3'-UTR 내 안정화 서열을 포함한다:
α-글로빈 유전자의 3'UTR의 α-복합체 결합 부위(또한 본 발명에 "muag"로 지칭)
GCCCGAUGGGCCUCCCAACGGGCCCUCCUCCCCUCCUUGCACCG (SEQ ID NO. 69)
그럼에도 불구하고, 염기의 치환, 추가 또는 제거는 바람직하게 위치 지정된 변이 또는 올리고뉴클레오티드 결찰(ligation) 전략과 함께 잘 알려진 기술을 통해 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 제조를 위한 DNA 매트릭스를 사용하여, 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA로 수행된다(예를 들어 Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd ed., Cold Spring Harbor, NY, 2001 참조). 이와 같은 과정에서, 적어도 하나의 mRNA의 제조를 위해, 상응하는 DNA 분자는 인비트로에서 전사될 수 있다. 이러한 DNA 매트릭스는 바람직하게 인비트로 전사를 위해, 적절한 프로모터, 예를 들어 T7 또는 SP6 프로모터를 포함하며, 제조되는 적어도 하나의 mRNA에 대한 목적하는 뉴클레오티드 서열 및 인비트로 전사를 위한 종결 신호가 따른다. 관심있는 적어도 하나의 mRNA의 매트릭스를 형성하는 DNA 분자는 발효 증식 및 박테리아에서 복제될 수 있는 플라스미드의 일부로 차후 분리에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에 적절한 것으로 언급될 수 있는 플라스미드는 예를 들어 플라스미드 pT7Ts (GenBank accession number U26404; Lai et al., Development 1995, 121: 2349 to 2360), pGEM® 시리즈, 예를 들어 pGEM®-1 (GenBank 접근 번호 X65300; from Promega) and pSP64 (GenBank 접근 번호 X65327)이다; 또한 Mezei and Storts, Purification of PCR Products, in: Griffin and Griffin (ed.), PCR Technology: Current Innovation, CRC Press, Boca Raton, FL, 2001 참조.
본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 안정화는 마찬가지로 적어도 하나의 mRNA를 회합(associating) 또는 복합화(complexing) 또는 양이온성 화합물, 특히 다가양이온성 화합물, 예를 들어 (폴리)양이온성 펩타이드 또는 단백질에 결합함으로써 수행될 수 있다. 특히, mRNA에 다가양이온, 핵산 결합 단백질로 프로타민, 뉴클레올라인, 스퍼민 또는 스퍼미딘의 사용은 특히 효과적이다. 나아가, 폴리-L-리신 또는 히스톤과 같은 양이온성 펩타이드 또는 단백질의 사용은 마찬가지로 가능하다. RNA를 안정화하기 위한 이러한 절차는 EP-A-1083232에 설명되고, 이러한 개시 내용은 이의 전체로 본 발명에 참고문헌으로 병합된다. 본 발명의 조성물의 mRNA를 안정화하기 위해 사용될 수 있는 보다 바람직한 양이온성 물질은 양이온성 폴리사카라이드, 예를 들어 키토산, 폴리브렌, 폴리에틸렌이민(PEI) 또는 폴리-L-리신(PLL) 등을 포함한다. 양이온성 화합물, 예를 들어 양이온성 단백질 또는 양이온성 지질, 예를 들어 지질 기초의 복합화 제제)로써 올리고펙타민과 함께 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 회합 또는 복합화는 바람직하게 치료된 세포 내 또는 치료될 유기체 내로 약학적으로 활성인 구성요소로 적어도 하나의 mRNA 존재의 전달을 증가시킨다. 이는 또한 RNA의 안정화도 보유하는, 복합화에 의해 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 안정화 효과에 관하여 본 발명에 개시된다.
다른 특히 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 적어도 하나의 mRNA는 추가적으로 또는 대안적으로 분비 신호 펩타이드를 코딩할 수 있다. 이러한 신호 펩타이드는 전형적으로 약 15 내지 30개 아미노산의 길이를 보이는 서열이며 바람직하게 코딩된 펩타이드의 N-말단에 위치하나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 정의된 신호 펩타이드는 바람직하게 정의된 세포 구획, 바람직하게 세포 표면, 소포체(ER) 또는 엔도좀-리소좀 구획으로 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩된 항원, 항원성 단백질 또는 항원성 펩타이드를 수송한다. 본 발명에 정의된 분비 신호 펩타이드 서열의 예시는 전통적 또는 비전통적 MHC-분자의 신호 서열(예를 들어 MHC I 및 II 분자, 예를 들어 MHC 클래스 I 분자 HLA-A *0201의 신호 서열), 본 발명에 정의된 사이토카인 또는 면역글로불린의 신호 서열, 본 발명에 정의된 면역글로불린 또는 항체의 불변 체인의 신호 서열, Lamp1, 타파신, Erp57, 칼레티쿨린, 칼넥신, 및 추가 막 관련 단백질 또는 소포체(ER) 또는 엔도좀-리소좀 구획과 관련된 단백질의 신호 서열을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특히 바람직하게, MHC 클래스 I 분자 HLA-A*0201의 신호 서열은 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
상기 변형의 어느 것은 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA 및 추가로 본 발명의 맥락에서 사용되는 어느 (m)RNA에 적용될 수 있으며, 만약 적절하거나 필요한 경우에, 어떤 조합으로 서로 조합될 수 있으며, 변형의 이들 조합은 RNA 각각을 서로 방해하지 않는다. 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자는 따라서 그의 선택에 따를 수 있다.
바람직한 실시예에 따르면, 상기 조성물은 본 발명에 설명된 것과 같이 변형된 적어도 하나의 mRNA를 포함하며, 이는 SEQ ID NOs: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 82, 83, 84, 또는 85의 RNA 서열과 동일하거나 또는 적어도 80% 동일한 RNA 서열로부터 선택되는 적어도 하나의 코딩 서열을 포함한다. 더욱 더 바람직하게, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 각 mRNA 내 코딩 서열은 SEQ ID NOs: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 82, 83, 84, 또는 85에 따르는 RNA 서열의 어느 하나와 동일하거나 적어도 80% 동일하다.
바람직한 실시예에서, 본 발명의 조성물의 여섯가지 항원의 각각은 하나의 (모노시스트론) mRNA에 의해 코딩될 수 있다. 다시 말해, 본 발명의 조성물은 여섯가지 (모노시스트론) mRNA를 포함할 수 있으며, 상기 이들 여섯가지 (모노시스트론) mRNA의 각각은 상기 정의된 오직 하나의 항원을 코딩할 수 있다.
더욱 더 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 이들의 각각은 본 발명에 설명된 것처럼 변형되며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며, 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며, 하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며, 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며, 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 하나의 mRNA는 MUC1를 코딩하며, 또는 이들 각각의 절편 또는 변이체를 코딩한다.
더욱 더 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA 및 선택적으로 추가 부형제를 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며 SEQ ID NO: 3 또는 82와 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며 SEQ ID NO: 6 또는 83과 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며 SEQ ID NO: 9 또는 84와 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 12 또는85와 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 15와 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함하며, 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며 SEQ ID NO: 18과 동일하거나 적어도 80% 동일한 코딩 서열을 포함한다(또는 이들 서열 각각의 절편 또는 변이체를 코딩함).
일 실시예에서, 상기 조성물은 SEQ ID NOs: 1, 4, 7, 10, 13 또는 16의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 mRNA를 포함한다. 더욱 더 바람직하게, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 각 mRNA는 SEQ ID NOs: 1, 4, 7, 10, 13 또는 16에 따르는 RNA 서열의 하나와 동일하거나 적어도 80% 동일하다.
더욱 더 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA 및 선택적으로 추가 부형제를 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며 SEQ ID NO: 1과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며 SEQ ID NO: 4와 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며 SEQ ID NO: 7과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 10과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 13과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며 SEQ ID NO: 16과 동일하거나 적어도 80% 동일하다(또는 이들 서열 각각의 절편 또는 변이체와 동일함).
본 발명의 보다 바람직한 실시예에 따르면, 상기 설명된 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 3'UTR 영역에 히스톤 스템-루프를 포함한다. 바람직하게, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 mRNA의 각각은 본 발명에 정의된 히스톤 스템-루프를 포함한다.
바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 선택적으로 추가 부형제를 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며 SEQ ID NO: 19와 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며 SEQ ID NO: 20과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며 SEQ ID NO: 21과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 22와 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 23과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 상기 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며 SEQ ID NO: 24와 동일하거나 적어도 80% 동일하다(또는 이들 서열 각각의 절편 또는 변이체와 동일함).
다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 조성물은 상기 조성물의 면역 자극성 특성을 증진시키기 위해 어쥬번트를 포함할 수 있다. 이러한 맥락에서, 어쥬번트는 투여를 돕고 본 발명에 따르는 조성물의 전달에 적절한 어느 화합물로 이해될 수 있다. 게다가, 이러한 어쥬번트는 선천적 면역계의 면역 반응, 즉 비특이적 면역 반응을 시작 또는 증가시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 다시 말하면, 투여될 때, 본 발명에 따르는 조성물은 전형적으로 본 발명의 조성물에 포함된 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 적어도 여섯가지 항원에 의한 적응 면역 반응을 시작한다. 추가적으로, 본 발명에 따르는 조성물은 본 발명에 따르는 조성물에 본 발명에 정의된 어쥬번트의 추가에 의해 (보조) 선천적 면역 반응을 발생시킬 수 있다.
이러한 어쥬번트는 통상의 기술자에게 알려진 어느 어쥬번트로부터 선택될 수 있으며, 본 발명의 경우, 즉 포유동물 내 면역 반응의 유도를 도움에 적절하다. 바람직하게, 상기 어쥬번트는 TDM, MDP, 무라밀 디펩티드(muramyl dipeptide), 플루로닉(pluronics), 알룸 용액(alum solution), 알루미늄 하이드록사이드(aluminium hydroxide), ADJUMERTM (폴리포스파젠(polyphosphazene)); 알루미늄 포스페이트 겔(aluminium phosphate gel); 조류(algae)로부터 글루칸; 알감물린(algammulin); 알루미늄 하이드록사이드 겔(aluminium hydroxide gel) (알룸(alum)); 높은 단백질 흡수 알루미늄 하이드록사이드 겔(highly protein-adsorbing aluminium hydroxide gel); 낮은 점도 알루미늄 하이드록사이드 겔(low viscosity aluminium hydroxide gel); AF 또는 SPT (스쿠알란의 에멀전(5%), Tween 80 (0.2%), 플루로닉(Pluronic) L121 (1.25%), 포스페이트 버퍼 식염수(phosphate-buffered saline), pH 7.4); AVRIDINETM (프로판디아민(propanediamine)); BAY R1005TM ((N-(2-디옥시-2-L-류실아미노-b-D-글루코피라노실)-N-옥타데실-도데카노일-아미드 하이드로아세테이트)(N-(2-deoxy-2-L-leucylamino-b-D-glucopyranosyl)-N-octadecyl-dodecanoyl-amide hydroacetate)); CALCITRIOLTM (1-알파,25-디하이드록시-비타민 D3(1-alpha,25-dihydroxy-vitamin D3)); 칼슘 포스페이트 겔(calcium phosphate gel); CAPTM (칼슘 포스페이트 나노입자(calcium phosphate nanoparticles)); 콜레라 홀로톡신(cholera holotoxin), 콜레라-톡신-A1-단백질-A-D-절편 융합 단백질(cholera-toxin-A1-protein-A-D-fragment fusion protein), 콜라레 톡신의 서브유닛 B; CRL 1005 (블록 코폴리머 P1205); 사이토카인 함유 리포좀; DDA (디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드(dimethyldioctadecylammonium bromide)); DHEA (디하이드로에피안드로스테론(dehydroepiandrosterone)); DMPC (디미리스토일포스파티딜콜린(dimyristoylphosphatidylcholine)); DMPG (디미리스토일포스파티딜글리세롤(dimyristoylphosphatidylglycerol)); DOC/알룸 복합체 (데옥시콜린산 소듐 염); 프로인트 완전 어쥬번트(Freund's complete adjuvant); 프로인트 불완전 어쥬번트; 감마 이눌린(inulin); 게르부(Gerbu) 어쥬번트(i) N-아세틸글루코사미닐-(P1-4)-N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-글루타민(N-acetylglucosaminyl-(P1-4)-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamine) (GMDP), ii) 디메틸디옥타데실암모늄 클로라이드(dimethyldioctadecylammonium chloride, DDA), iii) 아연-L-프롤린 염 복합체(zinc-L-proline salt complex) (ZnPro-8); GM-CSF의 혼합물); GMDP (N-아세틸글루코사미닐-(b1-4)-N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(N-acetylglucosaminyl-(b1-4)-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine)); 이미퀴모드(imiquimod) (1-(2-메티프로필)-1H-이미다조[4,5-c]퀴놀린-4-아민)(1-(2-methypropyl)-1H-imidazo[4,5-c]quinoline-4-amine); ImmTherTM (N-아세틸글루코사미닐-N-아세틸무라밀-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-글리세롤 디팔미테이트(N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-glycerol dipalmitate)); DRVs (탈수-재수화 소낭으로부터 제조된 면역리포좀(immunoliposomes prepared from dehydration-rehydration vesicles)); 인터페론-감마; 인터루킨-1베타; 인터루킨-2; 인터루킨-7; 인터루킨-12; ISCOMSTM; ISCOPREP 7.0.3. TM; 리포좀; LOXORIBINETM (7-알릴-8-옥소구아노신(7-allyl-8-oxoguanosine)); LT 구강 어쥬번트 (E.coli 불안정 장독소-독소전구물질); 어느 조성물의 마이크로스피어 및 마이크로입자; MF59TM; (스쿠알렌-물 에멀젼); MONTANIDE ISA 51TM (정제된 불완전한 프로인트 어쥬번트); MONTANIDE ISA 720TM (대사가능한 오일 어쥬번트); MPLTM (3-Q-데사실-4'-모노포스포릴 지질 A(3-Q-desacyl-4'-monophosphoryl lipid A)); MTP-PE 및 MTP-PE 리포좀((N-아세틸-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1,2-디파미토일-sn-글리세로-3-(하이드록시포스포릴옥시))-에틸아미드(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-(hydroxyphosphoryloxy))-ethylamide), 모노소듐 염(monosodium salt)); MURAMETIDETM (Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-OCH3); MURAPALMITINETM 및 D-MURAPALMITINETM (Nac-Mur-L-Thr-D-isoGIn-sn-글리세롤디팔미토일(glyceroldipalmitoyl)); NAGO (뉴라미니다제-갈락토스 옥시다제(neuraminidase-galactose oxidase)); 어느 조성물의 나노스피어 또는 나노입자; NISVs (비이온성 계면활성제 소낭); PLEURANTM (β-글루칸); PLGA, PGA 및 PLA (젖산 미치 글리콜산의 호모- 및 코폴리머; 마이크로스피어/나노스피어); PLURONIC L121TM; PMMA (폴리메틸 메타크릴레이트(polymethyl methacrylate)); PODDSTM (프로테이노이드 마이크로스피어(proteinoid microspheres)); 폴리에틸렌 카바메이트 유도체(polyethylene carbamate derivatives); 폴리-rA: 폴리-rU (폴리아데닐산-폴리우리딜산 복합체(polyadenylic acid-polyuridylic acid complex)); 폴리소르베이트 80 (Tween 80); 단백질 코클레이트(protein cochleates) (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL); STIMULONTM (QS-21); Quil-A (Quil-A 사포닌); S-28463 (4-아미노-오텍-디메틸-2-에톡시메틸-1H-이미다조[4,5 c]퀴놀린-1-에탄올(4-amino-otec-dimethyl-2-ethoxymethyl-1H-imidazo[4,5 c]quinoline-1-ethanol)); SAF-1TM ("Syntex 어쥬번트 제형"); 센다이(Sendai) 프로테오리포좀 및 센다이 함유 지질 매트릭스; Span-85 (소르비탄 트리올레이트(sorbitan trioleate)); Specol (Marcol 52, Span 85 및 Tween 85의 에멀전); 스쿠알렌 또는 Robane® (2,6,10,15,19,23-헥사메틸테트라코산 및 2,6,10,15,19,23-헥사메틸-2,6,10,14-18.22-테트로코사헥산(2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosan and 2,6,10,15,19,23-hexamethyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexane)); 스테아릴티로신(옥타데실티로신 하이드로클로라이드(octadecyltyrosine hydrochloride)); Theramid® (N-아세틸글루코사미닐-N-아세틸무라밀-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-디팔미톡시프로필아미드(N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-dipalmitoxypropylamide)); 테로닐-MDP(Theronyl-MDP) (테르무티드TM(TermurtideTM) 또는 [thr 1]-MDP; N-아세틸무라밀-L-트레오닐-D-이소클루타민(N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutamine)); Ty 입자 (Ty-VLPs 또는 바이러스 유사 입자); Walter-Reed 리포좀 (알루미늄 하이드록사이드에 흡수된 지질 A 함유 리포좀), 및 리포펩타이드(lipopeptides), Pam3Cys 포함, 특히 어쥬-포스(Adju-phos), 알하이드로겔(Alhydrogel), 리하이드라겔(Rehydragel)과 같은 알루미늄 염; CFA, SAF, IFA, MF59, 프로박스(Provax), 티터맥스(TiterMax), 몬타니드(Montanide), 박스펙틴(Vaxfectin)을 포함하는 에멀전; Optivax (CRL1005), L121, Poloaxmer4010) 등을 포함하는 코폴리머; BIORAL을 포함하는 스텔스(Stealth), 코클레이트(cochleates)를 포함하는 리포좀; QS21, Quil A, 이스코매트릭스(Iscomatrix), ISCOM를 포함하는 식물 유래 어쥬번트; 토마틴(Tomatine), 바이오폴리머를 포함하며, PLG, PMM, 이눌린을 포함하는 보조 자극(costimulation)에 적절한 어쥬번트; 로무티드(Romurtide), DETOX, MPL, CWS, 만노스(Mannose), CpG 핵산 서열, CpG7909, 인간 TLR 1-10의 리간드, 쥣과 TLR 1-13의 리간드, ISS-1018, IC31, 이미다조퀴놀린(Imidazoquinolines), 앰플리겐(Ampligen), Ribi529, IMOxine, IRIVs, VLPs, 콜레라 톡신, 열 불안정 독소, Pam3Cys, 플라겔린(Flagellin), GPI 앵커(anchor), LNFPIII/Lewis X, 항미생물 펩타이드, UC-1V150, RSV 융합 단백질, cdiGMP를 포함하는 미생물 유래 어쥬번트; 및 CGRP 뉴로펩타이드를 포함하는 길항제로 적절한 어쥬번트로 이루어진 그룹에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
적절한 어쥬번트는 또한 양이온성 또는 다가양이온성 화합물로부터 선택될 수 있으며, 상기 어쥬번트는 바람직하게 양이온성 또는 다가양이온성 화합물과 함께 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA와 복합화로 제조될 수 있다. 본 발명에 정의된 양이온성 또는 다가양이온성 화합물과 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 회합 또는 복합화는 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 어쥬번트 특성을 제공하고 안정화 효과를 부한다. 특히 바람직한 양이온성 또는 다가양이온성 화합물은 HIV-결합 펩타이드, Tat, HIV-1 Tat(HIV), Tat-유도된 펩타이드, 페네트라틴(Penetratin), VP22 유도된 또는 유사체 펩타이드, HSV VP22 (단순 포진), MAP, KALA 또는 단백질 전달 도메인 (PTDs, PpT620, 프롤린 풍부 펩타이드, 아르기닌 풍부 펩타이드, 리신 풍부 펩타이드, MPG-펩타이드(들), Pep-1, L-올리고머, 칼시토닌 펩타이드(들), 안테나페디아(Antennapedia)-유도된 펩타이드(특히 드로소필라 안테나페디아(Drosophila antennapedia)로부터), pAntp, pIsl, FGF, 락토페린(Lactoferrin), 트랜스포탄(Transportan), 부포린(Buforin)-2, Bac715-24, SynB, SynB(1), pVEC, hCT-유도된 펩타이드, SAP, 프로타민, 스페르민, 스페르미딘, 또는 히스톤을 포함하는, 폴리-L-리신(PLL), 폴리-아르기닌, 염기성 폴리펩타이드, 세포 투과성 펩타이드(CPPs)와 같은, 프로타민, 뉴클레올라인, 스퍼민 또는 스퍼미딘, 또는 다른 양이온성 펩타이드 또는 단백질을 포함하는 양이온성 또는 다가양이온성 펩타이드 또는 단백질로부터 선택된다. 보다 바람직한 양이온성 또는 다가양이온성 화합물은 양이온성 폴리사카라이드, 예를 들어 키토산, 폴리브렌(polybrene), 양이온성 폴리머, 예를 들어 폴리에틸렌이민(PEI), 양이온성 지질, 예를 들어 DOTMA: 1-(2,3-시올레일옥시)프로필-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(1-(2,3-sioleyloxy)propyl)-N,N,N-trimethylammonium chloride), DMRIE, 디-C14-아미딘, DOTIM, SAINT, DC-Chol, BGTC, CTAP, DOPC, DODAP, DOPE: 디올레일 포스파티딜에탄올-아민(Dioleyl phosphatidylethanol-amine), DOSPA, DODAB, DOIC, DMEPC, DOGS: 디옥타데실아미도글리실스페르민(Dioctadecylamidoglicylspermin), DIMRI: 디미리스토-옥시프로필 디메틸 하이드록시에틸 암모늄 브로마이드(Dimyristo-oxypropyl dimethyl hydroxyethyl ammonium bromide), DOTAP: 디올레오일옥시-3-(트리메틸암모니오)프로판(dioleoyloxy-3-(trimethylammonio)propane), DC-6-14: O,O-디테트라데카노일-N-(-트리메틸암모니오아세틸)디에타놀아민 클로라이드(O,O-ditetradecanoyl-N-(-trimethylammonioacetyl)diethanolamine chloride), CLIP1: rac-(2,3-디옥타데실옥시프로필)(2-하이드록시에틸)-디메틸암모늄 클로라이드(rac-(2,3-dioctadecyloxypropyl)(2-hydroxyethyl)-dimethylammonium chloride), CLIP6: rac-2(2,3-디헥사데실옥시프로필-옥시메틸옥시)에틸 트리메틸암모늄(rac-2(2,3-dihexadecyloxypropyl-oxymethyloxy)ethyl trimethylammonium), CLIP9: rac-2(2,3-디헥사데실옥시프로필-옥시숙시닐옥시)에틸-트리메틸암모늄(rac-2(2,3-dihexadecyloxypropyl-oxysuccinyloxy)ethyl-trimethylammonium), 올리고펙타민(oligofectamine), 또는 양이온성 또는 다가양이온성 폴리머, 예를 들어 -아미노산-폴리머 또는 역전된 폴리아미드 등과 같은 변형된 폴리아미노산, PVP(폴리(N-에틸-4-비닐피리디늄 브로마이드)) 등과 같은 변형된 폴리에틸렌, pDMAEMA(폴리(디메틸아미노에틸 메틸아크릴레이트)) 등과 같은 변형된 아크릴레이트, pAMAM(폴리(아미도아민)) 등과 같은 변형된 아미도아민, 디아민 말단 변형된 1,4 부탄디올 디아크릴레이트-co-5-아미노-1-펜타놀 폴리머 등과 같은 변형된 폴리베타아미노에스터(PBAE), 폴리프로필아민 덴드리머 또는 pAMAM 기초의 덴드리머 등과 같은 덴드리머, PEI: 폴리(에틸렌이민), 폴리(프로필렌이민) 등과 같은 폴리이민(들), 폴라알릴아민, 사이클로덱스트린 기초의 폴리머, 덱스트란 기초의 폴리머, 키토산 등과 같은 당 백본 기초의 폴리머, PMOXA-PDMS 코폴리머 등과 같은 실란 백본 기초의 폴리머, 하나 또는 그 이상의 양이온성 블록(예를 들어 상기 개시된 양이온성 폴리머의 선택) 및 하나 또는 그 이상의 친수성- 또는 소수성 블록(예를 들어 폴리에틸렌글리콜)의 조합으로 이루어진 블록폴리머; 등을 포함할 수 있다.
추가로, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA를 복합화 함으로써 어쥬번트로 사용될 수 있는 바람직한 양이온성 또는 다가양이온성 단백질 또는 펩타이드는 하기 전체 화학식 (III): (Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x를 갖는 하기 단백질 또는 펩타이드로부터 선택될 수 있으며, 상기 l + m + n +o + x = 8-15, 및 l, m, n 또는 o는, Arg, Lys, His 및 Orn의 총 함량이 올리고펩타이드의 전체 아미노산의 적어도 50%를 나타내는 경우, 서로 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15로부터 선택된 어느 수일 수 있으며; Xaa는 Arg, Lys, His 또는 Orn을 제외한 천연(=자연 발생) 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 어느 아미노산일 수 있으며; Xaa의 전체 함량이 올리고펩타이드의 전체 아미노산의 50%를 초과하지 않는 경우, x는 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택된 어느 수 일 수 있다. 이러한 맥락에서 특히 바람직한 올리고아르기닌은 예를 들어 Arg7, Arg8, Arg9, Arg7, H3R9, R9H3, H3R9H3, YSSR9SSY, (RKH)4, Y(RKH)2R 등이다.
상기 어쥬번트 구성요소 내 양이온성 또는 다가양이온성 화합물에 RNA의 비율은 전체 RNA 복합체의 질소/인산염 비율(N/P-비율), 즉 핵산의 음전하를 띤 인산염 원자 대비 양이온성 또는 다가양이온성 화합물의 양전하를 띤 (질소) 원자의 비율에 기초하여 계산될 수 있다. 예를 들어, 1 μg RNA는 전형적으로 RNA가 염기의 통계적인 분포를 보이는 경우, 약 3 nmol 인산염 잔기를 포함한다. 추가로, 1 μg 펩타이드는 전형적으로 염기성 아미노산의 분자량 및 수에 의존하여, 약 x nmol 질소 잔기를 포함한다. (Arg)9에 대하여 실험적으로 계산될 때(분자량 1424 g/mol, 9개 질소 원자), 1 μg (Arg)9은 약 700 pmol (Arg)9 및 따라서 700 x 9 = 6300 pmol 염기성 아미노산 = 6.3 nmol 질소 원자를 포함한다. 약 1:1 RNA/(Arg)9의 질량비에 대하여 약 2의 N/P 비율이 계산될 수 있다. 프로타민에 대하여 실험적으로 계산될 때(연어로부터 프로타민이 사용될 때, 약 4250 g/mol 분자량, 21개 질소 원자), 2 μg RNA와 함께 약 2:1의 질량비와 함께, 6 nmol 포스페이트는 RNA에 대해 계산되며; 1 μg 프로타민은 약 235 pmol 프로타민 분자를 포함하며 따라서 235 x 21 = 4935 pmol 염기성 질소 원자 = 4.9 nmol 질소 원자. 약 2:1 RNA/프로타민의 질량비에 대하여 약 0.81의 N/P 비율이 계산될 수 있다. 약 8:1 RNA/프로타민의 질량비에 대하여 약 0.2의 N/P 비율이 계산될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 복합체 내 RNA:펩타이드 비율에 관하여, N/P-비율은 바람직하게 약 0.1-10의 범위, 바람직하게 약 0.3-4의 범위이며, 가장 바람직하게 약 0.5-2 또는 0.7-2의 범위이다.
바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 효율적인 면역 자극 효과 및 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA의 효율적인 번역, 양쪽을 모두 얻기 위해 두 분리된 단계에서 수득된다. 이에, 소위 "어쥬번트 구성요소"는 - 첫번째 단계 - 안정한 복합체를 형성하기 위해 특정한 비율로 양이온성 또는 다가양이온성 화합물과 어쥬번트 구성요소의 상기 적어도 하나의 mRNA를 복합화에 의해 제조된다. 이러한 맥락에서, mRNA를 복합화한 후에 어쥬번트 구성요소에 자유 양이온성 또는 다가양이온성 화합물이 없거나 오직 무시할 수 있는 소량이 남아 있어야 함이 중요하다. 따라서, mRNA 및 어쥬번트 구성요소 내 양이온성 또는 다가양이온성 화합물의 비율은 전형적으로 mRNA가 전체적으로 복합화되고, 조성물 내에 자유 양이온성 또는 다가양이온성 화합물이 없거나 단지 무시할 수 있는 소량이 남아 있는 범위로 선택된다. 바람직하게 상기 어쥬번트 구성요소의 비율, 즉 양이온성 또는 다가양이온성 화합물에 대한 mRNA의 비율은 약 6:1 (w/w) 내지 약 0.25:1 (w/w), 더욱 바람직하게 약 5:1 (w/w) 내지 약 0,5:1 (w/w), 더욱 더 바람직하게 약 4:1 (w/w) 내지 약 1:1 (w/w)의 또는 약 3:1 (w/w) 내지 약 1:1 (w/w)의 범위, 및 가장 바람직하게 약 3:1 (w/w) 내지 약 2:1 (w/w)의 범위로부터 선택된다.
바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA는 본 발명의 (면역자극성) 조성물을 형성하기 위해 어쥬번트 구성요소의 복합화된 mRNA에 두번째 단계에 추가된다. 이에, 본 발명의 적어도 하나의 mRNA는 자유 mRNA, 즉 다른 화합물과 복합화되지 않는 mRNA로 추가된다. 첨가 전에, 적어도 하나의 자유 mRNA는 복합화되지 않으며, 바람직하게 어쥬번트 구성요소의 첨가에 어느 검출 가능하거나 현저한 복합화 반응을 겪지 않는다. 이는 어쥬번트 구성요소 내 상기 설명된 적어도 하나의 mRNA에 양이온성 또는 다가양이온성 화합물의 강한 결합 때문이다. 즉, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 항원을 코딩하는 적어도 하나의 자유 mRNA가 "어쥬번트 구성요소"로 첨가될 때, 바람직하게 비자유 또는 대체로 비자유 양이온 또는 다가양이온 화합물이 존재하며, 이는 적어도 하나의 자유 mRNA와 복합체를 형성할 수 있다. 따라서, 본 발명 조성물의 적어도 하나의 자유 mRNA의 효과적인 번역은 인비보에서 가능하다. 이에, 적어도 하나의 자유 mRNA는 모노-, 디-, 또는 멀티시스트론 mRNA로 발생할 수 있으며, 즉 mRNA는 하나 또는 그 이상의 단백질의 코딩 서열을 수송한다. 디-, 또는 멀티시스트론까지 mRNA 내 이러한 코딩 서열은 예를 들어 본 발명에 정의된 것처럼 적어도 하나의 IRES 서열에 의해 분리될 수 있다.
특히 바람직한 실시예에서, 본 발명 조성물에 포함되는 적어도 하나의 자유 mRNA는 요법의 특정한 요구에 의존하여, 본 발명 조성물의 어쥬번트 구성요소의 적어도 하나의 mRNA와 동일하거나 다를 수 있다. 더욱 더 바람직하게, 본 발명의 조성물에 포함된 적어도 하나의 자유 mRNA는 본 발명의 면역 자극성 조성물의 어쥬번트 구성요소의 적어도 하나의 mRNA와 동일하다.
특히 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 적어도 하나의 mRNA를 포함하며, 상기 적어도 하나의 mRNA는 상기 정의된 항원을 코딩하며, 상기 mRNA는 자유 mRNA로 부분적으로 및 복합화된 mRNA로 부분적으로 상기 조성물 내에 존재한다. 바람직하게, 상기 정의된 하나 또는 그 이상의 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA는 상기 설명된 것처럼 복합화되며, 동일한 적어도 하나의 mRNA는 자유 mRNA로 이후 첨가되며, 상기 바람직하게 mRNA를 복합화하는데 사용된 화합물은 자유 mRNA 구성요소의 첨가의 순간에 조성물 내 자유 형태로 존재하지 않는다.
첫번째 구성요소(즉 양이온성 또는 다가양이온성 화합물로 복합화된 상기 적어도 하나의 mRNA를 포함하거나 또는 이로 이루어진 어쥬번트 구성요소) 및 두번째 구성요소(즉 적어도 하나의 자유 mRNA)의 비율은 특정한 요법의 특정한 요구에 따라 본 발명의 조성물에서 선택될 수 있다. 전형적으로, 어쥬번트 구성요소 및 본 발명 조성물의 적어도 하나의 자유 mRNA(어쥬번트 구성요소: 자유 RNA)의 비율은 선천적 면역계의 현저한 자극이 어쥬번트 구성요소에 의해 유도되도록 선택된다. 병행하여, 상기 비율은 적어도 하나의 자유 mRNA의 현저한 양이 인비보에서 발현된 단백질, 예를 들어 상기 정의된 항원의 효율적인 번역 및 농도를 유도하는 인비보에서 제공될 수 있도록 선택된다. 바람직하게 어쥬번트 구성요소 내 상기 RNA : 본 발명의 조성물 내 자유 mRNA의 비율은 약 5:1 (w/w) 내지 약 1:10 (w/w)의 범위, 더욱 바람직하게 약 4:1 (w/w) 내지 약 1:8 (w/w)의 범위, 더욱 더 바람직하게 약 3:1 (w/w) 내지 약 1:5 (w/w) 또는 1:3 (w/w)의 범위로부터 선택되며, 가장 바람직하게 어쥬번트 구성요소 내 mRNA : 본 발명의 조성물 내 자유 mRNA의 비율은 약 1:1 (w/w)의 비율로부터 선택된다.
추가적으로 또는 그렇지 않으면, 첫번째 구성요소(즉 양이온성 또는 다가양이온성 화합물과 복합화된 상기 적어도 하나의 mRNA를 포함하거나 이로 이루어진 어쥬번트 구성요소) 및 두번째 구성요소(즉 적어도 하나의 자유 mRNA)의 비율은 전체 mRNA 복합체의 질소/인산염 비율(N/P-비율)에 기초하여 계산될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, N/P-비율은 복합체 내 RNA:펩타이드의 비율에 관하여 바람직하게 약 0.1-10의 범위, 바람직하게 약 0.3-4의 범위이며 가장 바람직하게 약 0.5-2 또는 0.7-2의 범위이며, 가장 바람직하게 약 0.7-1.5의 범위이다.
추가적으로 또는 그렇지 않으면, 첫번째 구성요소(즉 양이온성 또는 다가양이온성 화합물과 복합화된 상기 적어도 하나의 mRNA를 포함하거나 이로 이루어진 어쥬번트 구성요소) 및 두번째 구성요소(즉 적어도 하나의 자유 mRNA)의 비율은 또한 각각에 대해 mRNA 양쪽, 즉 양이온성 또는 다가양이온성 화합물에 복합화되는 어쥬번트 구성요소의 mRNA 및 두번째 구성요소의 적어도 하나의 자유 mRNA의 분자비에 기초하여 본 발명의 조성물에 선택될 수 있다. 전형적으로, 두번째 구성요소의 적어도 하나의 자유 mRNA에 비해 어쥬번트 구성요소의 mRNA의 분자비는 분자비가 상기 (w/w) 및/또는 N/P-정의를 만족시키도록 선택될 수 있다. 보다 바람직하게, 두번째 구성요소의 적어도 하나의 자유 mRNA에 비해 어쥬번트 구성요소의 mRNA의 분자비는, 예를 들어 약 0.001:1, 0.01:1, 0.1:1, 0.2:1, 0.3:1, 0.4:1, 0.5:1, 0.6:1, 0.7:1, 0.8:1, 0.9:1, 1:1, 1:0.9, 1:0.8, 1:0.7, 1:0.6, 1:0.5, 1:0.4, 1:0.3, 1:0.2, 1:0.1, 1:0.01, 1:0.001, 등의 분자비로부터 또는 상기 값의 어느 둘에 의해 형성된 어느 범위로부터, 예를 들어 약 0.001:1 내지 1:0.001로부터 선택된 범위, 약 0.01:1 내지 1:0.001, 0.1:1 내지 1:0.001, 0.2:1 내지 1:0.001, 0.3:1 내지 1:0.001, 0.4:1 내지 1:0.001, 0.5:1 내지 1:0.001, 0.6:1 내지 1:0.001, 0.7:1 내지 1:0.001, 0.8:1 내지 1:0.001, 0.9:1 내지 1:0.001, 1:1 내지 1:0.001, 1:0.9 내지 1:0.001, 1:0.8 내지 1:0.001, 1:0.7 내지 1:0.001, 1:0.6 내지 1:0.001, 1:0.5 내지 1:0.001, 1:0.4 내지 1:0.001, 1:0.3 내지 1:0.001, 1:0.2 내지 1:0.001, 1:0.1 내지 1:0.001, 1:0.01 내지 1:0.001의 범위를 포함, 또는 약 0.01:1 내지 1:0.01, 0.1:1 내지 1:0.01, 0.2:1 내지 1:0.01, 0.3:1 내지 1:0.01, 0.4:1 내지 1:0.01, 0.5:1 내지 1:0.01, 0.6:1 내지 1:0.01, 0.7:1 내지 1:0.01, 0.8:1 내지 1:0.01, 0.9:1 내지 1:0.01, 1:1 내지 1:0.01, 1:0.9 내지 1:0.01, 1:0.8 내지 1:0.01, 1:0.7 내지 1:0.01, 1:0.6 내지 1:0.01, 1:0.5 내지 1:0.01, 1:0.4 내지 1:0.01, 1:0.3 내지 1:0.01, 1:0.2 내지 1:0.01, 1:0.1 내지 1:0.01, 1:0.01 내지 1:0.01의 범위, 또는 약 0.001:1 내지 1:0.01, 0.001:1 내지 1:0.1, 0.001:1 내지 1:0.2, 0.001:1 내지 1:0.3, 0.001:1 내지 1:0.4, 0.001:1 내지 1:0.5, 0.001:1 내지 1:0.6, 0.001:1 내지 1:0.7, 0.001:1 내지 1:0.8, 0.001:1 내지 1:0.9, 0.001:1 내지 1:1, 0.001 내지 0.9:1, 0.001 내지 0.8:1, 0.001 내지 0.7:1, 0.001 내지 0.6:1, 0.001 내지 0.5:1, 0.001 내지 0.4:1, 0.001 내지 0.3:1, 0.001 내지 0.2:1, 0.001 내지 0.1:1의 범위를 포함, 또는 약 0.01:1 내지 1:0.01, 0.01:1 내지 1:0.1, 0.01:1 내지 1:0.2, 0.01:1 내지 1:0.3, 0.01:1 내지 1:0.4, 0.01:1 내지 1:0.5, 0.01:1 내지 1:0.6, 0.01:1 내지 1:0.7, 0.01:1 내지 1:0.8, 0.01:1 내지 1:0.9, 0.01:1 내지 1:1, 0.001 내지 0.9:1, 0.001 내지 0.8:1, 0.001 내지 0.7:1, 0.001 내지 0.6:1, 0.001 내지 0.5:1, 0.001 내지 0.4:1, 0.001 내지 0.3:1, 0.001 내지 0.2:1, 0.001 내지 0.1:1의 범위 등으로부터 선택될 수 있다.
더욱 더 바람직하게, 두번째 구성요소의 적어도 하나의 자유 mRNA 대비 어쥬번트 구성요소의 mRNA의 분자비는 예를 들어 약 0.01:1 내지 1:0.01의 범위로부터 선택될 수 있다. 가장 바람직하게, 두번째 구성요소의 적어도 하나의 자유 mRNA에 비해 어쥬번트 구성요소의 적어도 하나의 mRNA의 분자 비는 예를 들어 약 1:1의 분자비로부터 선택될 수 있다. (w/w) 및/또는 N/P 비율에 관하여 상기 정의의 어느 것은 또한 적용될 수 있다.
적절한 어쥬번트는 나아가 화학식 (IV) GlXmGn을 갖는 핵산으로부터 선택될 수 있으며, 상기: G는 구아노신, 우라실 또는 구아노신 또는 우라실의 유사체이며; X는 구아노신, 우라실, 아데노신, 티미딘, 시토신 또는 상기 개시된 뉴클레오티드의 유사체; l은 1 내지 40 사이의 정수이며, 상기 l=1일 때 G는 구아노신 또는 이의 유사체이며, l>1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 구아노신 또는 이의 유사체이며; m은 정수이며 적어도 3이며; 상기 m=3일 때 X는 우라실 또는 이의 유사체이며, m > 3일 때 적어도 3 연속적인 우라실 또는 우라실의 유사체가 발생; N은 1 내지 40의 정수이며, 상기 n=1일 때 G는 구아노신 또는 이의 유사체이며, n > 1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 구아노신 또는 이의 유사체이다.
다른 적절한 어쥬번트는 나아가 화학식 (V) ClXmCn를 갖는 핵산으로부터 선택될 수 있으며, 상기: C는 시토신, 우라실 또는 시토신 또는 우라실의 유사체이며; X는 구아노신, 우라실, 아데노신, 티미딘, 시토신 또는 상기 언급된 뉴클레오티드의 유사체이며; l은 1 내지 40의 정수이며, 상기 l=1일 때 C는 시토신 또는 이의 유사체이며, l>1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 시토신 또는 이의 유사체이며; m은 정수이며 적어도 3이며; 상기 m=3일 때 X는 우라실 또는 이의 유사체이며, 상기 m>3일 때 적어도 3 연속적인 우라실 또는 우라실의 유사체가 발생; n은 1 내지 40의 정수이며, 상기 n=1일 때 C는 시토신 또는 이의 유사체이며, n>1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 시토신 또는 이의 유사체이다.
추가적인 양태에 따르면, 본 발명은 적어도 상기 정의된 항원 PSMA, PSA, PSCA, STEAP, PAP및 MUC-1을 코딩하는, 적어도 하나의 mRNA, 바람직하게 적어도 여섯가지 분명한 mRNA 종에 기초한 백신을 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명의 백신은 상기 정의된 조성물과 같은 동일한 구성요소에 기초한다. 그에 따르면, 이는 본 발명의 조성물을 정의하는 상기 개시에 언급될 수 있다. 본 발명의 백신은 그러나 신체적으로 분리된 형태로 제공될 수 있으며 분리된 투여 단계에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 백신은 mRNA 구성요소가 하나의 단일한 조성물에 의해 제공되는 경우, 본 발명의 조성물에 상응할 수 있다. 그러나, 본 발명의 백신은 예를 들어 신체적으로 분리되어 제공될 수 있다. 예를 들어, mRNA 종은 세가지 분명한 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA 종 각각(예를 들어 세가지 분명한 mRNA 종)을 포함할 수 있는 두 분리 조성물이 제공되도록, 조합되거나 조합되지 않은채 제공될 수 있다. 또한, 본 발명의 백신은 세가지 분명한 조성물, 상기 여섯가지 항원의 둘을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 각 조성물의 조합일 수 있다. 또는, 상기 백신은 적어도 하나의 mRNA, 바람직하게 상기 정의된 여섯가지 항원의 하나를 각각 코딩하는 여섯가지 mRNA의 조합으로 제공될 수 있다. 상기 백신은 이의 사용 전에 하나의 단일 조성물을 제공하기 위해 조합될 수 있거나, 이는 하나 이상의 투여가 상기 정의된 여섯가지 분명한 항원을 코딩하는 분명한 mRNA 종을 투여하는데 필요하도록 사용될 수 있다. 만약 백신이 상기 정의된 여섯가지 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA 분자, 전형적으로 적어도 두가지, 세가지, 네가지, 다섯가지 또는 여섯가지 mRNA 분자를 포함하는 경우, 이는 예를 들어 하나의 단일 투여(모든 mRNA 종을 조합)에 의해, 두 분리된 투여(예를 들어 상기 여섯가지 항원의 셋을 코딩하는 mRNA 분자를 투여하는 각 투여)에 의해, 셋, 넷, 다섯 또는 여섯번 투여(상기 mRNA 종의 모두가 상기 정의된 여섯가지 항원의 하나를 코딩하고 신체적으로 분리되어 제공되는 경우)에 의해 투여될 수 있다. 따라서; 분리 독립체들(entitities)(하나의 mRNA 종을 포함)로써 또는 조합된 독립체(하나 이상의 mRNA 종을 포함)로써 제공되는 상기 정의된 여섯가지 항원(및 선택적으로 추가 항원)을 코딩하는 모노-, 바이- 또는 멀티시스트론 mRNA의 어느 조합은 본 발명에 따르는 백신으로 이해된다. 본 발명의 백신의 특히 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 항원의 각각은 분리되어 투여되는 개별적 (모노시스트론) mRNA로 제공된다.
본 발명에 따르는 조성물과 마찬가지로, 백신의 독립체는 액체 및 또는 건조(예를 들어 동결건조) 형태로 제공될 수 있다. 그들은 추가 구성요소, 특히 이의 약학적인 용도를 위한 추가적인 구성요소를 포함할 수 있다. 본 발명의 백신 또는 백신 조성물은 예를 들어 추가적으로 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 추가로 보조 물질 및 첨가제 및/또는 어쥬번트를 포함할 수 있다.
본 발명의 백신 또는 조성물은 전형적으로 상기 정의된 항원을 코딩하는 상기 정의된 조성물의 적어도 하나의 mRNA의 안전하고 유효한 양을 포함한다. 본 발명에 사용된, "안전하고 유효한 양"은 상기 정의된 조성물 또는 백신의 적어도 하나의 mRNA의 양을 의미하며, 이는 전립선암(PCa)의, 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선 암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 양성적인 변화를 현저하게 유도하기에 충분하다. 동시에, 그러나 "안전하고 유효한 양"은 심각한 부작용을 회피하기에 충분히 작으며, 이는 장점 및 위험 사이에 민감한 관계를 허용하는 것을 말한다. 이들 한계의 결정은 전형적으로 민감한 의학적 판단의 범위 내에 있다. 본 발명의 백신 또는 조성물에 관하여, 표현 "안전하고 유효한 양"은 바람직하게 mRNA의(및 그에 따라 코딩된 항원의) 양을 의미하며, 이는 과도하거나 손상 면역 반응이 수행되지 않는 방식으로 적응 면역계를 촉진하기에 충분하나, 바람직하게 또한 이러한 면역 반응은 측정 가능한 수준 아래에 있지 않다. 이러한 상기 정의된 본 발명의 조성물 또는 백신의 적어도 하나의 mRNA의 "안전하고 유효한 양"은 나아가, 바이- 또는 멀티시스트론까지 mRNA는 모노시스트론 RNA의 동일한 양의 사용에 비해 코딩된 항원(들)의 현저하게 높은 발현을 유도할 수 있기 때문에, mRNA의 타입, 예를 들어 모노시스트론, 바이- 또는 멀티시스트론까지 mRNA에 의존하여 선택될 수 있다. 상기 조성물 또는 상기 정의된 백신의 적어도 하나의 mRNA의 "안전하고 유효한 량"은 나아가 동반 의사의 지식 및 경험 안에서 치료되는 특정한 상태 및 또한 연령 및 치료되는 환자의 신체적 상태, 상태의 심각성, 치료 기간, 병행 요법, 사용되는 특정한 약학적으로 허용가능한 담체의 특성, 및 유사한 인자와 관련하여 다양할 것이다. 본 발명에 따르는 백신 또는 조성물은 약학적 조성물로써 또는 백신으로써 인간을 위한 또는 수의과적 목적을 위한 발명에 따라 사용될 수 있다.
바람직한 실시예에서, 본 발명에 따르는 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA, 백신 또는 파트들의 키트는 동결 건조된 형태로 제공된다. 바람직하게, 적어도 하나의 동결건조된 mRNA는 투여 전에, 유리하게 수용성 담체, 예를 들어 바람직하게 링거-락테이트 용액, 링거 용액, 인산염 버퍼 용액에 기초하여 적절한 버퍼에 재구성된다. 바람직한 실시예에서, 본 발명에 따르는 조성물, 백신 또는 파트들의 키트는 여섯가지 (모노시스트론) mRNA의 각각을 개별적으로 투여할 수 있도록 이의 사용 전에, 동결 건조된 형태로 분리되어 제공되며(선택적으로 적어도 하나의 추가적인 첨가제와 함께), 바람직하게 적절한 버퍼(링거-락테이트 용액과 같은) 내에서 분리되어 재구성되는 여섯가지 mRNA를 포함한다.
본 발명에 따르는 백신 또는 조성물은 전형적으로 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 본 발명에 사용된 표현 "약학적으로 허용가능한 담체"는 바람직하게 본 발명의 조성물 또는 백신의 액체 또는 비 액체 기초를 포함한다. 만약 본 발명의 조성물 또는 백신이 액체 형태로 제공된다면, 담체는 물, 전형적으로 피로겐 없는 물; 등장성 식염수 또는 버퍼 (수용성) 용액, 예를 들어 인산염, 시트르산염 등 버퍼 용액일 것이다. 본 발명의 조성물 또는 백신의 투여에 대하여 특히, 물 또는 바람직하게 버퍼, 더욱 바람직하게 수용성 버퍼는 소듐 염, 바람직하게 적어도 50 mM의 소듐 염, 칼슘 염, 바람직하게 적어도 0,01 mM의 칼슘 염, 및 선택적으로 포타슘 염, 바람직하게 적어도 3 mM의 포타슘염을 포함하여 사용될 수 있다. 바람직한 실시예에 따르면, 소듐, 칼슘 및 선택적으로 포타슘염은 수산화물, 탄산염, 탄산수소염, 또는 황산염 등의 형태로, 그들의 할로겐화물, 예를 들어 염화물, 요오드화물, 또는 브롬화물의 형태로 발생할 수 있다. 소듐염의 예시는 예를 들어 NaCl, NaI, NaBr, Na2CO3, NaHCO3, Na2SO4를 포함하며, 선택적인 포타슘 염의 예시는 예를 들어 KCl, KI, KBr, K2CO3, KHCO3, K2SO4를 포함하며, 칼슘염의 예시는 예를 들어 CaCl2, CaI2, CaBr2, CaCO3, CaSO4, Ca(OH)2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 추가로, 상기 개시된 양이온의 유기 음이온은 버퍼에 포함될 수 있다. 더욱 바람직한 실시예에 따르면, 상기 정의된 주사 목적을 위해 적절한 버퍼는 소듐 클로라이드(NaCl), 칼슘 클로라이드(CaCl2) 및 선택적으로 포타슘 클로라이드(KCL)로부터 선택된 염을 포함할 수 있으며, 추가적인 음이온은 클로라이드에 추가하여 존재할 수 있다. CaCl2는 또한 다른 염 유사 KCl에 의해 교체될 수 있다. 전형적으로, 상기 주사 버퍼 내 염은 적어도 50 mM 소듐 클로라이드(NaCl), 적어도 3 mM 포타슘 클로라이드(KCl) 및 적어도 0,01 mM 칼슘 클로라이드(CaCl2)의 농도로 존재한다. 주사 버퍼는 특정한 참고 매체에 관하여 고장성, 등장성 또는 저장성일 수 있으며, 즉 버퍼는 특정한 참고 매체에 관하여 높은, 동일한 또는 낮은 염 함량을 가질 수 있으며, 바람직하게 삼투 또는 다른 농도 효과에 의한 세포의 손상을 유도하지 않는, 상기 언급된 염의 이러한 농도가 사용될 수 있다. 참조 배지는 혈액, 림프, 시토졸 액체, 또는 다른 체액과 같은, 예를 들어 "인비보" 방법이 발생하는 액체 또는 예를 들어 일반적인 버퍼 또는 액체와 같은 "인비트로" 방법 내 참조 배지로 사용될 수 있는 액체이다. 이러한 통상적인 버퍼 또는 액체는 통상의 기술자에게 알려져 있다. 링거-락테이트 용액은 액체 기초로 특히 바람직하다.
그러나, 하나 또는 그 이상의 호환가능한 고체 또는 액체 필터 또는 희색제 또는 캡슐화 화합물은 마찬가지로 사용될 수 있으며, 이는 사람에 투여를 위해 적절하다. 본 발명에 사용된 용어 "호환가능한"은 본 발명의 조성물 또는 백신의 구성요소가, 전형적인 사용 조건 하에 본 발명의 조성물 또는 백신의 약학적인 효과를 실질적으로 감소시킬 수 있는 상호작용이 일어나지 않는 방식으로, 상기 적어도 하나의 mRNA와 함께 혼합될 수 있음을 의미한다. 약학적으로 허용가능한 담체, 필터 및 희석제는 치료되는 사람에게 투여를 위해 적절하도록, 반드시 물론 충분히 높은 순도 및 충분히 낮은 독성을 갖는다. 약학적으로 허용가능한 담체, 필러 또는 이의 구성요소로 사용될 수 있는 화합물의 일부 예시는 예를 들어, 락토스, 글루코스, 트레할로스 및 수크로스와 같은 당; 예를 들어, 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 전분; 덱스트로스; 예를 들어, 소듐 카르복시메칠셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트와 같은 셀룰로오스 및 이의 유도체; 트라가칸스 분말; 맥아; 젤라틴; 수지(tallow); 예를 들어 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트와 같은 고체 활택제; 칼슘 설페이트; 예를 들어 땅콩 오일, 목화씨 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 테오브로마(Theobroma)로부터 오일과 같은 식물성 오일; 예를 들어 폴리프로필렌 글리콜, 글리세롤, 솔비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌글리콜과 같은 폴리올; 알긴산이다.
약학적으로 허용가능한 담체의 선택은 원칙적으로 본 발명의 백신이 투여되는 방법에 의해 결정된다. 본 발명의 백신은 예를 들어 전신 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 일반적인 전신 투여 경로는 예를 들어 경피, 구강, 피하, 정맥내, 근육내, 동맥내, 피네 및 복강 주사를 포함하는 비경구 경로 및/또는 비강 투여 경로를 포함한다. 일반적으로 국소(local) 투여를 위한 경로는 예를 들어 국소(topical) 투여 경로 그러나 또한 피내, 경피, 피하, 또는 근육 내 주사 또는 병소 내, 두개 내(intracranial), 폐내, 심장내, 및 설하 주사를 포함한다. 보다 바람직하게, 백신은 피내, 피하, 또는 근육내 경로에 의해, 바늘이 없는 및/또는 바늘 주사일 수 있는, 바람직하게 주사에 의해 투여될 수 있다.
바람직한 실시예에서, 본 발명의 조성물 또는 백신은 무-바늘 주사의 하나의 특정한 형태인 제트 인젝션(jet injection)에 의해 투여된다. 본 발명에 사용된 "제트 인젝션"은 무-바늘 주사 방법을 의미하며, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA, 조성물 또는 백신을 포함하는 유체 및, 선택적으로 추가적인 적절한 부형제는, 그에 따라 포유동물 피부를 관통할 수 있는 고압의 초-미세(ultra-fine) 액체 증기를 발생시키며, 주사 셋팅, 피하 조직 또는 근육 조직에 의존하는 구멍(orifice)을 통해 주입된다(forced). 원칙적으로 액체 증기는 액체 증기가 타겟 조직으로 압력이 가해짐을 통해 피부에 구멍을 형성한다. 바람직하게, 제트 인젝션은 본 발명에 따르는 조성물의 또는 백신의 피내, 피하 또는 근육내 주사를 위해 사용된다. 바람직한 실시예에서, 제트 인젝션은 상기 조성물 또는 백신의 근육 내 주사를 위해 사용된다. 보다 바람직한 실시예에서, 제트 인젝션은 조성물 또는 백신의 피내 주사를 위해 사용된다.
조성물/백신은 따라서 바람직하게 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 투여되는 본 발명의 조성물 또는 백신의 적절한 양은 동물 모델로 경로 실험에 의해 결정될 수 있다. 이러한 모델은 토끼, 양, 마우스, 랫, 개 및 비인간 영장류 모델을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 주사를 위한 바람직한 단위 투여 형태는 물, 생리학적 식염수 또는 이의 혼합물의 멸균 용액을 포함한다. 이러한 용액의 pH는 약 7.4로 조절되어야 한다. 주사를 위해 적절한 담체는 하이드로겔, 통제된 또는 지연된 방출을 위한 장치, 폴리락트산 및 콜라겐 매트릭스를 포함한다. 국소 적용을 위한 적절한 약학적으로 허용가능한 담체는 로션, 크림, 겔 등에 사용에 적절한 이들을 포함한다. 만약 본 발명의 조성물 또는 백신이 경구로 투여된다면, 정제, 캡슐 등은 바람직한 단위 투여 형태이다. 구강 투여를 위해 사용될 수 있는 단위 투여 형태의 제조를 위해 약학적으로 허용가능한 담체는 선행 기술에 잘 알려져 있다. 이의 선택은 본 발명의 목적에 중요하지 않은 맛, 가격 및 안정성과 같은 이차적인 고려 요소에 의존할 수 있으며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 어려움 없이 선택될 수 있다.
본 발명의 백신 또는 조성물은 면역 원성을 더욱 증가시키기 위해 추가로 하나 또는 그 이상의 보조 물질을 포함할 수 있다. 상기 설명된 본 발명의 백신 또는 조성물과 함께 선택적으로 공동 제조(co-formulated) (또는 분리 제조)될 수 있는, 상기 정의된 본 발명의 조성물 또는 백신의 적어도 하나의 mRNA 및 보조 물질의 시너지 활동은 바람직하게 이에 따라 수행된다. 보조 물질의 다양한 타입에 의존하여, 다양한 메커니즘은 이러한 관점에서 고려될 수 있다. 예를 들어, 수지상 세포(DCs)를 성숙시키는 화합물, 예를 들어 리포폴리사카라이드, TNF-알파 또는 CD40 리간드는 적절한 보조 물질의 첫번째 종류이다. 일반적으로, 목표 방식을 증진 및/또는 영향을 주는 본 발명에 따르는 면역 자극 어쥬번트에 의해 생산된 면역 반응을 허용하는 "위험 신호"(LPS, GP96 등) 또는 GM-CFS와 같은 사이토카인의 방법으로 면역계에 영향을 미치는 어느 제제를 보조 물질로 사용하는 것이 가능하다. 특히 바람직한 보조 물질은 - 코딩된 적어도 여섯가지 항원에 의해 적응 면역 반응의 유도에 추가하여 - 선천적 면역 반응을 촉진시키는, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-19, IL-20, IL-21, IL-22, IL-23, IL-24, IL-25, IL-26, IL-27, IL-28, IL-29, IL-30, IL-31, IL-32, IL-33, INF-알파, IFN-베타, INF-감마, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, LT-베타 또는 TNF-알파, hGH와 같은 성장인자와 같은, 모노카인, 림포카인, 인터루킨 또는 케모카인과 같은 사이토카인이다. 바람직하게, 이러한 면역원성을 증가시키는 제제 또는 화합물은 분리되어 제공(본 발명의 백신 또는 조성물과 함께 제조되지 않음)되며 개별적으로 투여된다.
본 발명의 백신 또는 조성물에 포함될 수 있는 추가적인 첨가제는 예를 들어 Tween 과 같은 유화제; 예를 들어 소듐 라우릴 설페이트와 같은 습윤제(wetting agents); 착색제; 맛 부여제(taste-imparting agents), 약학적 담체; 정제 형성제; 안정화제; 항산화제; 보존제이다.
본 발명의 백신 또는 조성물은 또한 추가적으로 인간 Toll-유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10에 이의 결합 친화력(리간드로써) 때문에, 또는 쥣과 Toll-유사 수용체 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 또는 TLR13에 이의 결합 친화력(리간드로써) 때문에 면역을 자극하는 것으로 알려진 어느 추가 화합물을 포함할 수 있다.
이러한 맥락에서 본 발명의 백신 또는 조성물에 첨가될 수 있는 화합물의 다른 종류는 CpG 핵산, 특히 CpG-RNA 또는 CpG-DNA일 수 있다. CpG-RNA 또는 CpG-DNA는 단일 가닥 CpG-DNA (ss CpG-DNA), 이중 가닥 CpG-DNA (dsDNA), 단일 가닥 CpG-RNA (ss CpG-RNA) 또는 이중 가닥 CpG-RNA (ds CpG-RNA)일 수 있다. CpG 핵산은 바람직하게 CpG-RNA의 형태, 더욱 바람직하게 단일 가닥 CpG-RNA(ss CpG-RNA의 형태이다. CpG 핵산은 바람직하게 적어도 하나 또는 그 이상의 (유사분열(mitogenic)) 시토신/구아닌 디뉴클레오티드 서열(들) (CpG 모티프(s))를 포함한다. 첫번째로 바람직한 대안에 따르면, 이들 서열에 포함된 적어도 하나의 CpG 모티프, CpG 모티프의 즉 C(시토신) 및 G(구아닌)은 비메틸화되었다. 이들 서열에 선택적으로 포함되는 모든 추가적인 시토신 또는 구아닌은 메틸화되거나 비메틸화될 수 있다. 보다 바람직한 대안에 따르면, 거란, CpG 모티프의 C(시토신) 및 G(구아닌)은 또한 메틸화된 형태로 존재할 수 있다.
바람직하게, 상기 화합물은 적어도 상기 정의된 여섯가지 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 (본 발명의) 상기 조성물 또는 백신으로부터 제형되고 투여된다.
본 발명의 더욱 바람직한 목적에 따르면, 본 발명의 조성물 또는 백신은 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위해 본 발명에 따라(약제의 제조를 위해) 사용될 수 있다.
본 발명의 추가적 양태에 따르면, 본 발명의 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 본 발명의 백신 또는 본 발명의 조성물은 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.
이러한 맥락에서, 또한 본 발명에 포함된 것은 본 발명의 백신의 약학적으로 유효한 양, 또는 본 발명의 조성물의 약학적으로 유효한 양을 이것이 필요한 개체에 투여함으로써 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료 방법이다. 이러한 방법은 전형적으로 본 발명의 조성물을, 또는 본 발명의 백신을 제조하는 선택적인 첫번째 단계, 및 이가 필요한 환자에 상기 본 발명의 조성물 또는 상기 본 발명의 백신의 (약학적으로 유효한 양)을 투여하는 단계를 포함하는, 두번째 단계를 포함한다. 이가 필요한 개체는 전형적으로 수컷 포유동물일 것이다. 본 발명의 맥락에서, 포유 동물은 바람직하게 예를 들어 염소, 소(cattle), 돼지, 개, 고양이, 당나귀, 원숭이, 유인원(ape), 쥐, 햄스터와 같은 설치류, 토끼 및, 특히 인간을 포함하나 이에 제한되지 않는 그룹으로부터 선택되며, 상기 포유 동물은 전형적으로 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환을 겪는다.
구체적으로, 본 발명에 따르는 조성물 또는 백신은 진행성(progressive) 질병과 함께 전립선의 거세-내성 전이성 선암을 갖는 개체의 치료에 유익한 효과를 갖는다. 전형적으로 개체는 외과적 거세 또는 안드로겐 억제 요법(성선 자극 호르몬(gonadotropin)-방출 호르몬(GNRH) 작용제(agonist) 또는 길항제(antagonist)를 포함)를 겪는다. 바람직하게, 개체는 적어도 하나의 두번째 라인(second-line) 항 호르몬 조작(manipulation) (예를 들어 안티안드로겐) 이후 진행성 질병 상태와 함께 치료된다. 보다 바람직하게, 개체는 < 50 ng/dL 또는 < 1.7 nmol/dL의 혈청 테스토스테론 수준을 갖는 것으로 선택된다. 질병 진행은 예를 들어, 최하점(nadir)을 넘어 적어도 50% 증가 및 PSA > 2 ng/ml을 초래하는, 적어도 1주 떨어져 측정된, PSA의 두번의 연속적인 증가에 의해 특징 지어질 수 있다. 질병의 진행은 또한 기술분야에서 알려진 방법에 의해 방사선 의학적으로 측정될 수 있다.
게다가 본 발명에 따르는 조성물 또는 백신은 전립선 절제(prostatectomy) 전 및(und) 후 전립선 암을 겪는 개체의 (네오어쥬번트(neoadjuvant)) 치료를 위해 유익한 효과를 갖는다.
본 발명은 또한 바람직하게 포유 동물 내 면역 반응을 유발하기 위해, 바람직하게 전립선암(PCa)의 치료를 위해, 더욱 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위해, 본 발명의 조성물 또는 본 발명에 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA (본 발명의 백신의 제조를 위해)의 용도와 관련된다.
유사하게, 본 발명은 또한 포유 동물 내 적응 면역 반응을 유도하기 위한, 바람직하게 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위한, 본 발명의 백신 그 자체(per se) 또는 본 발명에 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 용도에 관한 것이다.
전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선 암 및/또는 호르몬-무반응 전립선암, 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 예방 또는 치료는 면역 반응을 촉진하기 위해 본 발명의 조성물 형태 또는 본 발명의 백신의 형태로, 본 발명에 따르는 항원의 조합을 투여함을 통해 수행될 수 있다. 본 발명에 정의된 적어도 여섯가지 항원의 조합에 대한 개체의 면역화를 위한 면역 프로토콜은 전형적으로 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 백신의 단일 투여 또는 복용(dosages)의 연속을 포함한다. 본 발명에 사용된 단일 투여는 초기/첫번째 투여, 두번째 투여 또는 어느 추가 투여에 각각 관한 것이며, 이는 바람직하게 면역 반응을 "촉진(boost)"시키기 위해 투여된다. 이러한 맥락에서, 각 단일 복용은 본 발명에 따르는 적어도 여섯가지 항원 모두의 투여를 포함하며, 상기 두 단일 복용의 투여 사이에 간격은 적어도 하루, 바람직하게 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일, 적어도 1주, 바람직하게 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 주까지 다양할 수 있다. 단일 투여 사이의 간격은 면역 프로토콜의 코스에 따라 일정하거나 다양할 수 있으며, 예를 들어 간격은 프로토콜의 시작에서 짧으며 끝으로 갈수록 길 수 있다. 단일 복용의 총 수 및 단일 복용 사이 간격에 의존하여, 면역 프로토콜은 시기에 따라 확장될 수 있으며, 이는 바람직하게 적어도 1주, 더욱 바람직하게 몇주(예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 주), 더욱 바람직하게 몇 달(예를 들어 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월) 지속된다. 각 단일 복용은 본 발명에 정의된 적어도 여섯가지 항원 모두의 투여를 포함하며, 따라서 적어도 하나, 바람직하게 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 주사를 포함할 수 있다. 이러한 경우에, 본 발명에 따르는 조성물이 투여될 때, 단일 복용은 전형적으로 일회 주사를 포함한다. 이러한 경우에, 백신은 본 발명에 따르는 각각의 항원을 코딩하는 분리 mRNA 제형을 포함하는데, 단일 복용의 투여 동안 수행되는 주사의 최소 횟수는 백신의 분리 구성요소의 숫자에 상응한다. 특정한 실시예에서, 단일 복용량의 투여는 상기 백신의 각 구성 요소(예를 들어 mRNA, 예를 들어 본 발명에 따르는 여섯가지 항원의 하나를 포함하는 특정한 mRNA 제형)에 대해 일회 이상의 주사를 포함할 수 있다. 예를 들어, 백신의 각 구성 요소의 총 부피의 일부는 다른 인체 일부로 주사될 수 있으며, 따라서 일회 이상의 주사를 포함한다. 보다 특정한 실시예에서, 각각 두 다른 인체 일부로 투여되는 여섯가지 분리 mRNA 제형을 포함하는 백신의 단일 복용량은 12회 주사를 포함한다. 전형적으로, 단일 복용량은 백신의 모든 구성 요소를 관리하는데 필요한 모든 주사를 포함하며, 상기 단일 구성 요소는 상기 나타난 것처럼 일회 이상의 주사를 포함할 수 있다. 이러한 경우에, 본 발명에 따르는 백신의 단일 복용량의 투여가 일회 이상의 주사를 포함할 때, 주사는 필수적으로 동시에(simultaneously) 또는 함께(concurrently), 즉 전형적으로 의사가 단일 주사 단계를 수행하는데 필요한 시간 프레임 내에 시차를 둔 방식으로, 교대로 수행된다. 단일 복용량의 투여는 따라서 바람직하게 몇분, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 10, 15, 30 또는 60분의 시간에 걸쳐 연장된다.
전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선 암 및/또는 호르몬-무반응 전립선암, 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 예방 또는 치료는 본 발명의 조성물 형태 또는 본 발명의 백신의 형태로, 동시에, 즉 한번에 또는 시차를 두어, 예를 들어 각 파트가 바람직하게 다른 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는, 파트들(parts)의 키트로써, 본 발명에 따르는 항원의 조합을 투여함을 통해 수행될 수 있다. 바람직하게, 상기 항원의 각각은 분리되어 투여되며, 즉 각 항원은 치료되는 개체의 몸의 다른 부위 또는 영역으로, 바람직하게 각각 동시에 또는 동일한 짧은 시간 간격 내에 투여된다. 바람직한 실시예에서, 개별적인 mRNA는 개체의 네 사지(즉 왼쪽/오른쪽 팔 및 다리)에 분산되어 투여된다. 바람직하게, 투여(모든 적어도 하나의 mRNA의)는 한시간 내에, 더욱 바람직하게 30분 내에, 더욱 더 바람직하게 15, 10, 5, 4, 3, 또는 2분 내에 또는 심지어 1분 내에 일어난다.
투여를 위해, 바람직하게 투여 경로의 어느 것은 상기 정의된 것처럼 사용될 수 있다. 예를 들어, 하나는 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 적어도 여섯가지 (구체적으로 선택된) 항원에 기초한 적응 면역 반응을 유도 또는 증진함으로써, 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환을 치료할 수 있다. 본 발명의 조성물 및/또는 본 발명의 백신의 투여는 다른 항원을 코딩하는 mRNA의 다른 조합을 포함 - 추가적으로 - 포함할 수 있는, 본 발명에 정의된 다른 본 발명의 조성물 및/또는 본 발명의 백신을 투여하기 전, 동시 및/또는 후에 일어날 수 있으며, 상기 본 발명의 조성물의 적어도 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 각 항원은 바람직하게 전립선암(PCa)의, 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료에 적절할 수 있다. 이러한 맥락에서, 본 발명에 정의된 요법(therapy)은 또한 전립선암(PCa)과 관련된 질병의, 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 조절(modulation)을 포함할 수 있다.
하나의 추가 실시예에 따르면, 본 발명은 추가로 조절(modulationg), 바람직하게 상기 정의된 것처럼 포유 동물 내 면역 반응을 유도 또는 증진하기 위해, 더욱 바람직하게 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 처리(treat) 및/또는 돕기 위해, 본 발명의 조성물 또는 본 발명에 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA((본 발명의) 백신의 제조를 위해)의 용도를 포함한다. 이러한 맥락에서, 본 발명에 따르는 전립선암(PCa)의 치료는 수술, 방사선 요법, 호르몬 요법, 가끔(occasionally) 화학 요법, 양자선 요법, 또는 이의 어느 조합과 같은 통상적인 전립선 암 요법, 및 본 발명에 정의된 본 발명의 조성물을 사용하는 요법으로부터 알려진 어느 접근 방법 또는 어느 조합 접근 방법에 의해 지원될 수 있다. 전립선암(PCa)의 치료의 지원은 또한 본 발명에 정의된 다른 어느 실시예에서 구상될 수 있다. 따라서, 상기 요법 접근 방법의 어느 것과 함께 공동-요법에서, 특히 전립선 수술, 호르몬(예를 들어 안티안드로겐), 및/또는 화학 요법과 조합에서, 본 발명의 조성물 또는 백신의 어느 사용은 본 발명의 범위 내에 있다.
본 발명의 조성물 또는 본 발명에 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA 또는 본 발명에 따르는 백신의 투여는 시차 치료로 수행될 수 있다. 시차 치료는 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 통상적인 치료 이전, 동시 및/또는 이후에 예를 들어 본 발명의 조성물 또는 본 발명에 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA 또는 본 발명의 백신의 투여, 예를 들어 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위해 적절한 요법 또는 치료적 투여 이전, 동시 및/또는 이후에 본 발명의 약제 또는 본 발명의 조성물 또는 백신의 투여에 의할 수 있다. 이러한 시차 치료는 예를 들어 키트, 바람직하게 하기 정의된 파트들의 키트를 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 시차 치료는 예를 들어 키트, 바람직하게 하기 정의된 파트들의 키트를 사용하여 수행될 수 있다.
이러한 맥락에서, 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 백신의 투여는 전립선 절제(네오어쥬번트 치료)의 전 및 선택적 추가적으로 이후에 수행된다.
시차 치료는 본 발명의 조성물 또는 백신, 바람직하게 상기 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 투여를 추가적으로 또는 대안적으로 또한 포함할 수 있으며, 상기 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA, 바람직하게 본 발명의 조성물 또는 백신의 일부를 형성하는 것은 바람직하게 동일한 본 발명의 조성물 또는 백신의 일부를 형성하는 상기 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 다른 mRNA 이전 또는 이후에 평행(parallel) 투여된다. 바람직하게, 투여(적어도 하나의 mRNA 모두의)는 1시간 내에, 더욱 바람직하게 30분 내, 더욱 더 바람직하게 15, 10, 5, 4, 3, 또는 2분 내 또는 1분 내에 일어난다. 이러한 시차 투여는 예를 들어 키트, 바람직하게 하기 정의된 것처럼 파트들의 키트를 사용하여 수행될 수 있다.
바람직한 실시예에서, 상기 본 발명의 조성물 또는 백신은 반복적으로 투여되며, 상기 각 투여는 바람직하게 본 발명에 따르는 적어도 하나의 mRNA의 개별적인 투여를 포함한다. 각 투여의 시점에, 적어도 하나의 mRNA는 일회 이상(예를 들어 2 또는 3회) 투여될 수 있다. 본 발명의 특히 바람직한 실시예에서, 여섯가지 mRNA(상기 정의된 항원의 하나를 각각 코딩하는)는 각 시점에 투여되며, 상기 각 mRNA는 주사에 의해 두번 투여되어, 따라서 네 사지에 걸쳐 분산된 12회 주사를 초래한다.
마지막 실시예에 따르면, 본 발명은 또한 본 발명의 조성물, 및/또는 본 발명의 백신, 선택적으로 용해를 위한 액체 담체, 선택적으로 본 발명의 조성물 및/또는 본 발명의 백신의 투여 및 복용에 대한 정보가 있는 기술적 지도서(instructions)를 포함하는 키트, 특히 파트들의 키트를 제공한다. 기술적 지도서는 본 발명의 조성물, 및/또는 본 발명의 백신의 투여 및 복용에 관한 정보를 포함할 수 있다. 이러한 키트, 바람직하게 파트들의 키트는 예를 들어 상기 언급된 적용 또는 용도의 어느 것에 대하여, 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위한 적어도 하나의 본 발명의 조성물의 용도를 위해(본 발명의 약제, 바람직하게 백신의 제조를 위해) 적용될 수 있다. 상기 키트는 또한 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위한 적어도 하나의 본 발명의 조성물의 용도를 위해 (본 발명의 백신의 제조를 위해) 적용될 수 있으며, 상기 적어도 여섯가지 항원이 코딩됨에 따라 본 발명의 조성물) 및/또는 백신은 상기 정의된 포유 동물 내 면역 반응을 유도 또는 증진시킬 수 있다. 이러한 키트는 추가로 조절을 위해, 바람직하게 예를 들어 상기 정의된 포유 동물 내 면역 반응을 유도 또는 증진시키는 것을 촉발하기 위해, 및 바람직하게 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 돕기 위해, 적어도 하나의 본 발명의 조성물의 사용을 위해(본 발명의 약제, 바람직하게 백신의 제조를 위해) 적용될 수 있다. 키트의 특정한 형태로써 파트들의 키트는 하나 또는 그 이상의 동일한 또는 다른 본 발명의 조성물 및/또는 키트의 다른 파트 내 하나 또는 그 이상의 동일한 또는 다른 본 발명의 백신을 포함할 수 있다. 파트들의 키트는 또한 (예를 들어 하나의) 본 발명의 조성물, (예를 들어 하나의) 본 발명의 백신 및/또는 키트의 다른 파트, 예를 들어 바람직하게 다른 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 키트의 각 파트에 상기 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 포함할 수 있다.
추가적으로, 파트들의 키트의 양쪽 형태의 조합이 가능하다. 파트들의 키트는 예를 들어 시차 치료가 구상될 때, 예를 들어 인비보에서 동일한 처리 동안 다른 제형 및/또는 본 발명의 조성물, 본 발명의 백신 및/또는 상기 정의된 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA의 증가하는 농도를 사용할 때, 사용될 수 있다. 파트들의 키트는 또한 본 발명의 조성물의 항원의 적어도 하나의 분리된 제형 또는 투여(즉 파트들로(in parts))가 구성 또는 필요할 때(예를 들어 기술적인 이유로), 단 예를 들어 인비보에서 다른 항원의 조합된 존재가 여전히 달성될 때 사용될 수 있다. 키트의 특수한 형태로써 특정한 파트들의 키트는 구상되며, 상기 키트의 각 파트는 상기 정의된 적어도 하나의 바람직한 다른 항원, 본 발명에 정의된 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 백신을 형성하는 파트들의 키트의 모든 파트를 포함한다. 이러한 특수한 파트들의 키트는 특히, 예를 들어 다른 항원이 키트의 다른 파트로서 분리되어 제형되는 경우에, 적절할 수 있으나, 이후 이가 필요한 포유 동물에 한번에 함께 또는 시차를 둔 방식으로 투여된다. 후자의 경우에 이러한 키트의 다른 파트들의 모두의 투여는 모든 항원이 키트의 마지막 파트의 투여 이후 거의 동일한 시간에 포유 동물 내 존재하도록, 짧은 시간 한계 내에 일어난다. 바람직한 실시예에서, 키트는 본 발명에 따르는 여섯가지 mRNA를 포함하는 적어도 두 파트를 포함한다. 바람직하게, 모든 여섯가지 mRNA는 키트의 분리 파트로 제공되며, 상기 mRNA는 바람직하게 동결 건조된다. 더욱 바람직하게, 상기 키트는 추가적으로 적어도 하나의 mRNA를 용해시키기 위한 파트로써 담체를 포함하며, 담체는 바람직하게 링거-락테이트 용액이다. 상기 키트의 어느 것은 상기 정의된 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 장점
본 발명은 전립선암(PCa)의 치료를 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 포유 동물 내 (적응) 면역 반응을 유도할 수 있는 적어도 여섯가지 항원을 코딩하는, 적어도 하나의 mRNA를 포함하며, 상기 항원은 PSA (전립선-특이적 항원), PSMA (전립선-특이적 막 항원), PSCA (전립선 줄기 세포 항원), STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원), PAP (전립선 알칼라인 포스파타아제) 및 MUC1 (뮤신 1)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 이러한 조성물은 통상적인 요법을 사용할 때 전립선암(PCa)의 효율적인 치료 또는 보충적인 치료를 허용한다. 이는 나아가 치료 방법을 위한 접근으로써 mRNA의 사용에 의해 도입된 DNA 서열의 비통제된 증식의 문제를 회피한다. 본 발명의 조성물에 사용된 mRNA는 DNA 발현 시스템에 걸쳐, 예를 들어 면역 반응, 면역화 또는 백신 접종에 추가적인 현저한 장점을 갖는다. 이들 장점은 그 중에서도 세포로 도입된 mRNA가 유전체에 포함되지 않는 것을 포함한다. 이러한 유전자의 변이의 위험 회피는, 그렇지 않으면 완전히 또는 부분적으로 비활성화되거나 오정보(misinformation)를 일으킬 수 있다. 이는 추가로 외래 DNA가 도입된 환자 내 병원성 항 DNA 항체의 유도와 같이, 그에 따라 (아마도 치명적인) 면역 반응을 가져오는, 면역 반응을 유도하는 제제로써(예를 들어 백신으로써) DNA 사용의 다른 위험을 회피한다. 대조적으로, 항-RNA 항체는 아직 검출되지 않았다.
하기 도면은 본 발명을 추가적으로 설명하기 위한 것이다. 이들은 본 발명의 범위를 제한하려는 의도는 아니다.
도 1: PSA(전립선 특이적 항원)(= KLK3)을 코딩하는 mRNA 서열 KLK3 (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 1)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~ 64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일).
도 2: SEQ ID NO: 2에 따르는 PSA(전립선 특이적 항원)(= KLK3)를 코딩하는 야생형 -코딩 서열, 즉 GC-최적화된 서열이 없는 PSA(전립선 특이적 항원)를 코딩하는 코딩 서열(CDS)을 나타낸다.
도 3: SEQ ID NO: 3에 따르는 PSA(전립선 특이적 항원) (= KLK3)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 4: PSMA(전립선 특이적 막 항원)(= FOLH1)을 코딩하는 mRNA 서열 FOLH1 (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 4)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~ 64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일).
도 5: SEQ ID NO: 5에 따르는 PSMA(전립선 특이적 막 항원)(= FOLH1)를 코딩하는 야생형 코딩 서열, 즉 GC-최적화된 서열이 없는 PSMA(전립선 특이적 막 항원)(= FOLH1)를 코딩하는 코딩 서열(CDS)을 나타낸다.
도 6: SEQ ID NO: 6에 따르는 PSMA(전립선 특이적 막 항원) (= FOLH1)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 7: PSCA(전립선 줄기 세포 항원)를 코딩하는 mRNA 서열 PSCA (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 7)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~ 64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일).
도 8: SEQ ID NO: 8에 따르는 PSCA(전립선 줄기 세포 항원)를 코딩하는 야생형 코딩 서열, 즉 GC-최적화된 서열이 없는 PSCA(전립선 줄기 세포 항원)를 코딩하는 코딩 서열(CDS)을 나타낸다.
도 9: SEQ ID NO: 9에 따르는 PSCA(전립선 줄기 세포 항원)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 10: STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원)를 코딩하는 mRNA 서열 STEAP (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 10)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~ 64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일).
도 11: SEQ ID NO: 11에 따르는 STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원)를 코딩하는 야생형 코딩 서열, 즉 GC-최적화된 서열이 없는 STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원)를 코딩하는 코딩 서열(CDS)을 나타낸다.
도 12: SEQ ID NO: 12에 따르는 STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 13: PAP(전립선 알칼리 포스파타아제)를 코딩하는 mRNA 서열 PAP (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 13)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~ 64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일).
도 14: SEQ ID NO: 14에 따르는 PAP(전립선 알칼리 포스파타아제)를 코딩하는 야생형 코딩 서열, 즉 GC-최적화된 서열이 없는 PAP(전립선 알칼리 포스파타아제)를 코딩하는 코딩 서열(CDS)을 나타낸다.
도 15: SEQ ID NO: 15에 따르는 PAP(전립선 알칼리 포스파타아제)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 16: MUC1 (뮤신 1)를 코딩하는 mRNA 서열 RNActive MUC1 5xVNTR (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 16; R1715)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~ 64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일).
도 17: SEQ ID NO: 17에 따르는 MUC1 (뮤신 1)을 코딩하는 야생형 코딩 서열, 즉 GC-최적화된 서열이 없는 MUC1 (뮤신 1)을 코딩하는 코딩 서열(CDS)을 나타낸다.
도 18: SEQ ID NO: 18에 따르는 MUC1 (뮤신 1)을 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 19: mRNA 서열 PSA (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 19)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
5'-CAP, SEQ ID NO: 3에 따르는 PSA를 코딩하는 안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 코딩 서열, SEQ ID No. 69에 따르는 3'-UTR 내 안정화 서열 "muag", 3'-말단에 ~64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일); 및 SEQ ID No. 71에 따르는 히스톤 스템-루프 서열.
도 20: mRNA 서열 PSMA (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 20)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
SEQ ID NO: 6에 따르는 PSMA를 코딩하는 안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 코딩 서열, SEQ ID No. 69에 따르는 3'-UTR 내 안정화 서열 "muag", 3'-말단에 ~64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일); 및 SEQ ID No. 71에 따르는 히스톤 스템-루프 서열.
도 21: mRNA 서열 CAP-PSCA (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 21)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
SEQ ID NO: 9에 따르는 PSCA를 코딩하는 안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 코딩 서열, SEQ ID No. 69에 따르는 3'-UTR 내 안정화 서열 "muag", 3'-말단에 ~64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일); 및 SEQ ID No. 71에 따르는 히스톤 스템-루프 서열.
도 22: mRNA 서열 STEAP1 (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 22)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
SEQ ID NO: 12에 따르는 STEAP를 코딩하는 안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 코딩 서열, SEQ ID No. 69에 따르는 3'-UTR 내 안정화 서열 "muag", 3'-말단에 ~64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일); 및 SEQ ID No. 71에 따르는 히스톤 스템-루프 서열.
도 23: mRNA 서열 PAP (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (R2251) (SEQ ID NO: 23)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
5'-CAP, SEQ ID NO: 15에 따르는 PAP를 코딩하는 안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 코딩 서열, SEQ ID No. 69에 따르는 3'-UTR 내 안정화 서열 "muag", 3'-말단에 ~64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일); 및 SEQ ID No. 71에 따르는 히스톤 스템-루프 서열.
도 24: mRNA 서열 CAP-MUC1 5×VNTR (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (R2312) (SEQ ID NO: 24)을 나타낸다. 상기 mRNA는 하기 서열 요소를 포함한다:
SEQ ID NO: 18에 따르는 MUC1을 코딩하는 안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 코딩 서열, SEQ ID No. 69에 따르는 3'-UTR 내 안정화 서열 "muag", 3'-말단에 ~64개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일); 및 SEQ ID No. 71에 따르는 히스톤 스템-루프 서열.
도 25: ELISPOT에 의한 PAP-특이적 세포 면역 반응의 검출을 보여준다. C57BL/6 마우스는 1, 5, 8, 12 및 15일에 32μg PAP-RNActive® (PAP (GC)-muag-A64-C30; SEQ ID NO: 13)로 백신 접종되었다. 백신 접종된 및 대조군 마우스로부터 비장 세포 내 IFN-감마의 분비의 엑스비보(ex vivo) ELISpot 분석은 마지막 백신 접종 5일 이후 수행되었다. 세포들은 PAP-유도된 펩타이드(예상되는 MHC-클래스 I 에피토프) 또는 대조군 펩타이드로 플레이트 상에 자극되었다. 해당 그래프는 개별 마우스에 대한 단일 데이터 점수를 보여준다.
도 26: ELISPOT에 의한 MUC1-특이적 세포 면역 반응의 검출을 보여준다. C57BL/6 마우스는 1, 5, 8, 12 및 15일에 32μg MUC1-RNActive® (MUC1 5xVNTR (GC)-muag-A64-C30; SEQ ID NO: 16; R1715)로 백신 접종되었다. 백신 접종된 및 대조군 마우스로부터 비장 세포 내 IFN-감마의 분비의 엑스비보(ex vivo) ELISpot 분석은 마지막 백신 접종 6일 이후 수행되었다. 세포들은 MUC1-유도된 펩타이드(예상되는 MHC-클래스 I 에피토프) 또는 대조군 펩타이드로 플레이트 상에 자극되었다. 해당 그래프는 개별 마우스에 대한 단일 데이터 점수를 보여준다.
도 27: SEQ ID NO: 82에 따르는 PSA(전립선 특이적 항원) (=KLK3)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 28: SEQ ID NO: 83에 따르는 PSMA(전립선 특이적 막 항원) (= FOLH1)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 29: SEQ ID NO: 84에 따르는 PSCA(전립선 줄기 세포 항원)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 30: SEQ ID NO: 85에 따르는 STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원)를 코딩하는 GC-최적화된 코딩 서열을 나타낸다.
도 31: SEQ ID NO: 76에 따르는 PSA NP_001639.1의 단백질 서열을 보여준다.
도 32: SEQ ID NO: 77에 따르는 PSMA (FOLH1) NP_004467.1의 단백질 서열을 보여준다.
도 33: SEQ ID NO: 78에 따르는 PSCA O43653.1의 단백질 서열을 보여준다.
도 34: SEQ ID NO: 79에 따르는 STEAP NP_036581.1의 단백질 서열을 보여준다.
도 35: SEQ ID NO: 80에 따르는 PAP NP_001090.2 의 단백질 서열을 보여준다.
도 36: SEQ ID NO: 81에 따르는 접근 번호 AAA60019.1 (J05582.1)로 기탁된 MUC1의 단백질 서열을 보여준다.
도 37: SEQ ID NO: 86에 따르는 MUC1 5xVNTR의 단백질 서열을 보여준다.
도 38: SEQ ID NO: 87에 따르는 MUC1을 코딩하는 야생형 코딩 서열, 즉 GC-최적화된 코딩 서열이 없는 MUC1을 코딩하는 전장 코딩 서열(CDS)을 나타낸다.
실시예 :
하기 실시예들은 본 발명을 추가적으로 설명하기 위한 의도이다. 그들은 이에 본 발명의 범위를 제한하려는 의도는 아니다.
1. 코딩(encoding) 플라스미드의 제조:
하기 실험에서, 항원을 코딩하는 각각의 mRNA 서열 끝에 상응하는 DNA 서열
* PSA (전립선 특이적 항원),
* PSMA (전립선 특이적 막 항원),
* PSCA (전립선 줄기 세포 항원),
* STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원),
* PAP (전립선 알칼리 포스파타아제) 및
* MUC1 (뮤신 1),
각각이 제조되고 인비트로(in vitro) 전사 및 형질전환 실험을 위해 사용되었다.
그에 따라, mRNA(도 2, 5, 8, 11, 14 및 17에 따르는 RNA 서열, 즉 SEQ ID NO: 2, 5, 8, 11, 14 및 17에 상응하는 코딩 서열을 포함하는 서열)를 코딩하는 천연 항원에 상응하는 DNA 서열은 도 27, 28, 29, 30, 15 및 18에 따르는 RNA 서열에 상응하는 코딩 서열, 즉 SEQ ID NO: 82, 83, 84, 85, 15 및 18을 포함하는 서열을 수득하는 보다 나은 코돈-용도를 위해 GC-최적화되었다. 이후, 코딩 서열은 폴리-A-테일 및 폴리-C-테일(A64-C30 각각)로 변형된, GC-최적화된 구조(CureVac GmbH, Tubingen, Germany)로 형질전환되었다. 최종 구성 및 상응하는 mRNA는 명명되었다:
KLK3/PSA (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 1),
FOLH1/PSMA (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 4),
PSCA (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 7),
STEAP (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 10),
PAP (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 13), 및
MUC1-5xVNTR (GC)-muag-A64-C30 (SEQ ID NO: 16), 각각.
최종 구성은 하기 서열 요소를 포함하는 도 1, 4, 7, 10, 13 및 16에 나타난 서열(SEQ ID NO: 1, 4, 7, 10, 13 및 16)에 따르는 RNA 서열에 상응하는 서열을 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~70개 아데노신(폴리-A-테일), 3'-말단에 ~30개 시토신(폴리-C-테일).
대안으로 GC-최적화된 CDS 서열은 폴리-A테일, 폴리-C-테일 및 SEQ ID NO: 70에 따르는 히스톤-스템-루프 서열로 변형된, GC-최적화된 구성으로 형질전환되었다.
최종 구성 및 상응하는 RNA는 명명되었다:
KLK3/PSA (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 19),
FOLH1/PSMA (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 20),
PSCA (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 21),
STEAP (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 22),
PAP (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 23), 및
MUC1-5xVNTR (GC)-muag-A64-C30-histoneSL (SEQ ID NO: 24), 각각.
최종 구성은 하기 서열 요소를 포함하는, 각각 도 19, 20, 21, 22, 23 및 24에 나타난 서열(SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 23 및 24)에 따르는 RNA 서열에 상응하는 서열을 포함한다:
안정화 및 보다 나은 코돈 용도를 위한 GC-최적화된 서열
3'-말단에 ~70개 아데노신 뉴클레오티드(폴리-A-테일), 3'-말단에 30개 시토신 뉴클레오티드(폴리-C-테일) 및 SEQ ID NO: 71에 따르는 히스톤 스템-루프 서열.
2. 인비트로 ( In vitro ) 전사:
실시예 1에서 얻어진 재조합 플라스미드 DNA에 기초하여 mRNA 서열은 인비트로 전사를 통해 제조되었다. 따라서, 재조합 플라스미드 DNA는 선형화되었고 이후 T7 RNA 중합효소를 사용하여 인비트로(in vitro) 전사되었다. DNA 주형은 이후 DNase I 소화에 의해 분해되었고, mRNA는 LiCl 침전에 의해 회복되고 HPLC 추출(PUREMessenger®, CureVac GmbH, Tubingen, Germany)에 의해 추가로 청소되었다(cleaned).
3. 프로타민( protamine ) 으로 복합화( complexation )
본 발명에 따르는 항원을 코딩하는 각 mRNA는 (1:2)의 비율(w/w)(어쥬번트 구성요소)로 mRNA에 프로타민을 첨가함으로써 프로타민과 함께 복합화되었다. 10분간 배양 후, 항원 제공 mRNA로 사용된 자유 mRNA의 동량이 첨가되었다.
4. mRNA 백신의 제조 및 항원 특이적 세포독성 항체 및 항원 특이적 세포독성 T-세포의 유도:
4.1 mRNA 백신의 제조:
mRNA 백신은 각각 PAP(SEQ ID NO: 13) 또는 MUC1(SEQ ID NO: 16)을 코딩하는 GC-최적화된 mRNA로 이루어진다. 상기 mRNA는 비율 (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소) 내 mRNA에 프로타민의 첨가에 의해 프로타민과 복합화된다. 10분 동안 배양 이후, mRNA를 제공하는 항원으로써 사용된 자유 mRNA의 동일한 양이 첨가되었다.
결과 조성물은 80% (v/v) 링거-락테이트 수용액에 용해되었다.
4.2 백신 접종
C57BL/6 쥐는 상기 4.1 하에 설명된 것처럼 mRNA 백신의 하나의 32 μg으로 피내로 백신 접종되었다. 대조군 마우스는 버퍼(링거-락테이트)와 함께 피내로 주사되어 치료되었다. 백신 접종은 1주 당 2회 면역화(immunizations)로 5회 면역화를 포함하였다. 면역 반응은 백신 접종 사이클의 완료 5 또는 6일 이후 분석되었다.
4.3 ELISPOT - CTL (세포독성 T 세포) 반응의 검출
CTL(세포독성 T 세포) 반응의 검출을 위해 특정한 자극에 반응하는 IFN-감마 분비의 분석은 ELISPOT 기술을 사용하여 단일 세포 수준에서 시각화될 수 있다.
상기 4.1 하에 설명된 것과 같이 mRNA로 백신 접종된 마우스 및 대조군 마우스로부터 비장은 마지막 백신 접종 5 또는 6일 이후에 분리되었고, 이후 IFN-감마 포획 항체로 코팅된 96-웰 ELISPOT 플레이트로 이송되었다. 상기 세포는 이후 하기 펩타이드를 사용하여 37°C에서 24시간 동안 자극 되었다:
MUC1-유도된 펩타이드 코넥신-유도된 펩타이드(대조군)
SAPDNRPAL (SEQ ID NO: 72) FEQNTAQP (SEQ ID NO: 73)
PAP- 유도된 펩타이드 PSMA- 유도된 펩타이드(대조군)
VSIWNPILL (SEQ ID NO: 74) SAVKNFTEI (SEQ ID NO: 75)
배양 기간 이후 상기 세포들은 플레이트로부터 세척되었고, 세포에 의해 분비된 IFN-감마는 쥣과 IFN-감마에 대한 비오틴이 결합된 이차 항체, 이후 스트렙타비딘-AKP을 사용하여 검출되었다. 점들(spots)은 BCIP/NBT 기질을 사용하여 시각화되었고 자동화된 ELISPOT 리더(Immunospot Analyzer, CTL Analyzers LLC)를 사용하여 세어졌다.
결과:
MUC1 및 PAP 모두를 코딩하는 mRNA 구성(constructs)으로 피내 백신 접종은 ELISpot에서 IFN-감마의 분비에 의해 나타나는 것처럼 항원 특이적 CD8+ T-세포의 활성화를 유도한다.
5. 임상 실험:
5.1. 본 발명의 백신의 제조
본 발명에 따르는 mRNA 백신은 6가지 각각, KLK3/PSA (SEQ ID NO: 19), FOLH1/PSMA (SEQ ID NO: 20), PSCA (SEQ ID NO: 21), STEAP (SEQ ID NO: 22), PAP (SEQ ID NO: 23) 또는 MUC1 (SEQ ID NO: 24) 각각을 코딩하는 분리되어 제형화된 GC-최적화된 mRNA로 이루어진다. 각 mRNA는 (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소)의 비율로 mRNA에 프로타민을 첨가함으로써 프로타민과 께 복합화되었다. 10분간 배양 이후, 항원 제공하는 mRNA로써 사용된 자유 mRNA의 동량이 첨가되었다. 복합화 이후 각각 제형된 mRNA는 개별적으로 동결 건조되었다. 재구성을 위해, 상기 mRNA들은 링거-락테이트에 용해되었다. 본 발명의 백신의 여섯가지 구성요소의 각각은 본 발명에 따르는 여섯가지 항원의 하나를 코딩하는 제조되고 동결 건조된 mRNA를 포함한다.
본 발명의 백신의 구성 요소:
구성 요소 1: (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소) 비율로 프로타민과 복합화된 KLK3/PSA(SEQ ID NO: 19)를 코딩하는 160 μg mRNA 및 KLK3/PSA (SEQ ID NO: 19)를 코딩하는 160 μg mRNA
구성 요소 2: (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소) 비율로 프로타민과 복합화된 FOLH1/PSMA (SEQ ID NO: 20)를 코딩하는 160 μg mRNA 및 FOLH1/PSMA (SEQ ID NO: 20)를 코딩하는 160 μg mRNA
구성 요소 3: (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소) 비율로 프로타민과 복합화된 PSCA (SEQ ID NO: 21)를 코딩하는 160 μg mRNA 및 PSCA (SEQ ID NO: 21)를 코딩하는 160 μg mRNA
구성 요소 4: (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소) 비율로 프로타민과 복합화된 STEAP (SEQ ID NO: 22)를 코딩하는 160 μg mRNA 및 STEAP (SEQ ID NO: 22)를 코딩하는 160 μg mRNA
구성 요소 5: (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소) 비율로 프로타민과 복합화된 PAP (SEQ ID NO: 23)를 코딩하는 160 μg mRNA 및 PAP (SEQ ID NO: 23)를 코딩하는 160 μg mRNA
구성 요소 6: (1:2) (w/w) (어쥬번트 구성요소) 비율로 프로타민과 복합화된 MUC1 (SEQ ID NO: 24)을 코딩하는 160 μg mRNA 및 MUC1 (SEQ ID NO: 24)을 코딩하는 160 μg mRNA
각 구성 요소는 동결 건조되었고 링거-락테이와 함께 주사를 위해 재구성되었다.
5.2. 제2상 임상 실험 (지원 연구(Supportive study)):
주사 장비(제트 인젝션)의 선택적인 사용을 포함하는 오픈-라벨(open-label), 무작위화된 제2상 실험은 근치적 전립선 절제술(radical prostatectomy)(네오어쥬번트 치료) 전에 6주 기간 내에 실시예 5.1에 따라 제조된 본 발명의 mRNA 백신으로 4번 백신 접종을 받은 중간 또는 고 위험 전립선암을 갖는 환자에서 수행되었고 수술 전 백신 접종 없이 관찰되었다. 통상적인 피내 주사를 통해 치료돤 환자들은 실시예 5.1에 따르는 각 mRNA의 320 μg을 수용하였다. 본 발명의 백신의 각 구성 요소는 2개 별개의 주사 구역에 주사되었다(160 μg mRNA/주사 구역). 제트 인젝션에 의해 주사된 환자들은 투여량의 절반만을 수용하였고(상기 투여량은 본 발명의 백신의 160 μg/구성 요소에 상응함), 또한 2개 분리된 주사 구역(80 μg mRNA/주사 구역)에 주사되었다. 환자들은 1, 2, 3 및 5주에 백신 접종을 수용하였다. 이들 환자들은 네번째 백신 접종 이후(6 또는 7주), 2주 이내에, 적어도 1주에 근치적 전립선 절제술(radical prostatectomy)을 받았다. 전립선 절제 이후 환자들은 선택적으로 본 발명의 백신으로 2회 추가 백신 접종을 수용하였다.
5.3. 제2b상 임상 실험:
오픈 라벨 안전성 도입부를 갖는 제I/II상 무작위화된 이중-맹검 플라시보 조절된 다중심(multicenter) 연구는 전이성 거세 내성 전립선암을 갖는 환자에서 수행되었다.
수술적 거세 또는 성선 자극 호르몬(gonadoptropin) 방출 호르몬(GNRH) 작용제 또는 길항제 요법 이후 및 적어도 하나의 제2선 항 호르몬 조작(antihormonal manipulation) 이후 무증상(asymptomatic) 또는 최소화된 증상 질병 진행을 갖는 환자는 본 발명의 백신 암(arm)에 유리하게 2:1 비율로 실시예 5.1에 따라 제조된 본 발명의 백신 또는 플라시보를 수용하였다.
본 발명의 백신으로 치료는 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12, 15, 18 및 24주의 1일에, 이후 첫번째 백신 접종 이후 12개월까지 매 6주 및 이후 매 3개월에 투여되었다.
안전성 도입부(lead-in)는 6명의 환자에서 수행되었다.
치료 투여(Treatment Administration):
모든 백신 접종 시점에서, 6가지 백신 구성 요소의 각각은 총 12회 주사를 위해 각 구성 요소당 200 μL의 2회 피내(i.d.) 주사로 동일한 날에 개별적으로 투여되었다.
결과:
본 연구의 안전성 도입부 비율의 결과로써 본 발명의 백신은 면역원성이며 환자들의 83%에서 세포성 및/또는 체액성 면역 반응을 유도하는 것으로 나타났다.
SEQUENCE LISTING <110> CureVac GmbH <120> Composition and Vaccine for Treating Prostate Cancer <130> IMP152650 <160> 87 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 990 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-KLK3(GC)-muag-A64-C30 <400> 1 gggagaaagc uuaccaugug ggugccgguc guguuccuga cccucagcgu gacguggauc 60 ggcgccgcgc cccugauccu gucgcggauc guggggggcu gggagugcga gaagcacagc 120 cagcccuggc aggugcuggu ggccagccgc ggccgggccg ugugcggcgg cgugcuggug 180 cacccccagu gggugcugac cgccgcccac ugcauccgga acaagagcgu cauccugcug 240 ggccggcaca gccuguucca ccccgaggac accggccagg uguuccaggu gagccacagc 300 uucccccacc cccuguacga caugagccuc cugaagaacc gguuccugcg gcccggcgac 360 gacagcagcc acgaccugau gcugcugcgg cugagcgagc ccgccgagcu gaccgacgcc 420 gugaagguga uggaccugcc gacccaggag cccgcccugg gcaccaccug cuacgccagc 480 ggcuggggga gcaucgagcc cgaggaguuc cucaccccca agaagcugca gugcguggac 540 cugcacguga ucagcaacga cgugugcgcc caggugcacc cccagaaggu gaccaaguuc 600 augcugugcg ccggccggug gaccggcggc aagagcaccu gcagcggcga cagcggcggc 660 ccccuggucu gcaacggcgu gcugcagggc aucaccagcu ggggcagcga gcccugcgcc 720 cugcccgagc gccccagccu guacaccaag guggugcacu accggaagug gaucaaggac 780 accaucgugg ccaacccgug accacuaguu auaagacuga cuagcccgau gggccuccca 840 acgggcccuc cuccccuccu ugcaccgaga uuaauaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaau auuccccccc cccccccccc 960 cccccccccc cccucuagac aauuggaauu 990 <210> 2 <211> 786 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS KLK3(wt) <400> 2 augugggucc cgguugucuu ccucacccug uccgugacgu ggauuggugc ugcaccccuc 60 auccugucuc ggauuguggg aggcugggag ugcgagaagc auucccaacc cuggcaggug 120 cuuguggccu cucguggcag ggcagucugc ggcgguguuc uggugcaccc ccaguggguc 180 cucacagcug cccacugcau caggaacaaa agcgugaucu ugcugggucg gcacagccug 240 uuucauccug aagacacagg ccagguauuu caggucagcc acagcuuccc acacccgcuc 300 uacgauauga gccuccugaa gaaucgauuc cucaggccag gugaugacuc cagccacgac 360 cucaugcugc uccgccuguc agagccugcc gagcucacgg augcugugaa ggucauggac 420 cugcccaccc aggagccagc acuggggacc accugcuacg ccucaggcug gggcagcauu 480 gaaccagagg aguucuugac cccaaagaaa cuucagugug uggaccucca uguuauuucc 540 aaugacgugu gugcgcaagu ucacccucag aaggugacca aguucaugcu gugugcugga 600 cgcuggacag ggggcaaaag caccugcucg ggugauucug ggggcccacu ugucuguaau 660 ggugugcuuc aagguaucac gucauggggc agugaaccau gugcccugcc cgaaaggccu 720 ucccuguaca ccaagguggu gcauuaccgg aaguggauca aggacaccau cguggccaac 780 cccuga 786 <210> 3 <211> 786 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS KLK3(GC) <400> 3 augugggugc ccgucguguu ccugacccuc agcgugaccu ggaucggcgc cgccccgcug 60 auccuguccc ggaucgucgg gggcugggag ugcgagaagc acagccagcc cuggcaggug 120 cucguggcgu cccgcgggcg ggccgucugc ggcggggugc uggugcaccc ccaguggguc 180 cugacggccg cccacugcau ccgcaacaag agcgugaucc uccugggccg gcacucccug 240 uuccaccccg aggacaccgg ccagguguuc caggucagcc acuccuuccc gcacccccuc 300 uacgacauga gccugcugaa gaaccgcuuc cuccggcccg gggacgacuc cagccacgac 360 cugaugcugc uccgccuguc cgagcccgcc gagcugaccg acgcggugaa ggugauggac 420 cucccgaccc aggagcccgc ccugggcacg accugcuacg ccagcgggug gggcuccauc 480 gagcccgagg aguuccugac ccccaagaag cuccagugcg ucgaccugca cgugaucagc 540 aacgacgugu gcgcccaggu ccacccgcag aaggugacca aguucaugcu gugcgcgggg 600 cgguggacgg gcggcaaguc caccugcagc ggggacuccg gcgggccccu cgugugcaac 660 ggcguccugc agggcaucac cagcuggggg uccgagcccu gcgcccugcc cgagcgcccg 720 agccucuaca ccaagguggu gcacuaccgg aaguggauca aggacacgau cgucgccaac 780 cccuga 786 <210> 4 <211> 2457 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-FOLH1(GC)-muag-A64-C30 <400> 4 gggagaaagc uuaccaugug gaaccugcuc cacgagaccg acagcgccgu ggcgacggcc 60 cggcgcccgc gguggcugug cgccggcgcc cugguccugg ccgggggcuu cuuccugcug 120 ggcuuccugu ucggcugguu caucaagucg agcaacgagg ccaccaacau cacccccaag 180 cacaacauga aggccuuccu cgacgagcug aaggccgaga acaucaagaa guuccuguac 240 aacuucaccc agauccccca ccuggccggg accgagcaga acuuccagcu ggccaagcag 300 auccagagcc aguggaagga guucggccug gacucggugg agcuggcgca cuacgacgug 360 cugcucagcu accccaacaa gacccacccc aacuacauca gcaucaucaa cgaggacggc 420 aacgagaucu ucaacaccag ccuguucgag cccccgcccc ccggcuacga gaacgugucg 480 gacaucgugc cccccuucag cgccuucagc ccgcagggca ugcccgaggg ggaccuggug 540 uacgugaacu acgcccggac ggaggacuuc uucaagcugg agcgcgacau gaagaucaac 600 ugcagcggca agaucgugau cgcccgguac ggcaaggugu uccggggcaa caaggugaag 660 aacgcccagc uggccggggc caagggcgug auccuguacu cggaccccgc cgacuacuuc 720 gcccccggcg ugaagagcua ccccgacggc uggaaccugc ccggcggggg cguccagcgc 780 ggcaacaucc ucaaccugaa cggcgccggc gacccgcuga cccccgggua ccccgcgaac 840 gaguacgccu accggcgggg caucgccgag gccgugggcc ugcccagcau ccccgugcac 900 ccgaucggcu acuacgacgc ccagaagcug cuggagaaga ugggcgggag cgccccgccc 960 gacucgagcu ggcggggcag ccugaaggug cccuacaacg ugggccccgg cuucaccggg 1020 aacuucucga cccagaaggu gaagaugcac auccacagca ccaacgaggu gacccgcauc 1080 uacaacguga ucggcacccu gcggggcgcc guggagcccg accgguacgu gauccucggc 1140 gggcaccgcg acagcugggu guucggcggc aucgaccccc agagcggcgc cgccgugguc 1200 cacgagaucg ugcggucguu cggcacccug aagaaggagg gguggcggcc ccgccggacg 1260 auccuguucg ccagcuggga cgcggaggag uucggccugc ugggcagcac cgagugggcc 1320 gaggagaaca gccggcugcu gcaggagcgg ggcguggccu acaucaacgc cgacucgagc 1380 aucgagggca acuacacccu ccgcguggac ugcaccccgc ugauguacag ccuggugcac 1440 aaccugacca aggagcugaa gagccccgac gagggguucg agggcaaguc gcuguacgag 1500 agcuggacca agaagagccc cucgcccgag uucagcggca ugccccggau cagcaagcug 1560 ggcagcggga acgacuucga gguguucuuc cagcggcugg gcaucgccuc gggccgcgcc 1620 cgguacacca agaacuggga gacgaacaag uucagcggcu acccccucua ccacagcgug 1680 uacgagaccu acgagcuggu ggagaaguuc uacgacccca uguucaagua ccaccugacc 1740 guggcccagg ugcggggcgg gaugguguuc gagcuggcca acagcaucgu gcugcccuuc 1800 gacugccgcg acuacgccgu cgugcugcgg aaguacgccg acaagaucua cucgaucagc 1860 augaagcacc cccaggagau gaagaccuac agcgugagcu ucgacucgcu guucagcgcg 1920 gugaagaacu ucaccgagau cgccagcaag uucucggagc ggcuccagga cuucgacaag 1980 agcaacccga ucgugcugcg caugaugaac gaccagcuga uguuccugga gcgggccuuc 2040 aucgaccccc ugggccugcc cgaccggccc uucuaccggc acgugaucua cgcccccagc 2100 agccacaaca aguacgccgg cgagucguuc ccggggaucu acgacgcccu guucgacauc 2160 gagagcaagg uggaccccag caaggccugg ggcgagguga agcgccagau cuacguggcc 2220 gccuucaccg ugcaggccgc ggccgagacc cugagcgagg uggccugacc acuaguuaua 2280 agacugacua gcccgauggg ccucccaacg ggcccuccuc cccuccuugc accgagauua 2340 auaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2400 aaaaaauauu cccccccccc cccccccccc cccccccccc ucuagacaau uggaauu 2457 <210> 5 <211> 2253 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS FOLH1(wt) <400> 5 auguggaauc uccuucacga aaccgacucg gcuguggcca ccgcgcgccg cccgcgcugg 60 cugugcgcug gggcgcuggu gcuggcgggu ggcuucuuuc uccucggcuu ccucuucggg 120 ugguuuauaa aauccuccaa ugaagcuacu aacauuacuc caaagcauaa uaugaaagca 180 uuuuuggaug aauugaaagc ugagaacauc aagaaguucu uauauaauuu uacacagaua 240 ccacauuuag caggaacaga acaaaacuuu cagcuugcaa agcaaauuca aucccagugg 300 aaagaauuug gccuggauuc uguugagcua gcacauuaug auguccuguu guccuaccca 360 aauaagacuc aucccaacua caucucaaua auuaaugaag auggaaauga gauuuucaac 420 acaucauuau uugaaccacc uccuccagga uaugaaaaug uuucggauau uguaccaccu 480 uucagugcuu ucucuccuca aggaaugcca gagggcgauc uaguguaugu uaacuaugca 540 cgaacugaag acuucuuuaa auuggaacgg gacaugaaaa ucaauugcuc ugggaaaauu 600 guaauugcca gauaugggaa aguuuucaga ggaaauaagg uuaaaaaugc ccagcuggca 660 ggggccaaag gagucauucu cuacuccgac ccugcugacu acuuugcucc uggggugaag 720 uccuauccag augguuggaa ucuuccugga gguggugucc agcguggaaa uauccuaaau 780 cugaauggug caggagaccc ucucacacca gguuacccag caaaugaaua ugcuuauagg 840 cguggaauug cagaggcugu uggucuucca aguauuccug uucauccaau uggauacuau 900 gaugcacaga agcuccuaga aaaaaugggu ggcucagcac caccagauag cagcuggaga 960 ggaagucuca aagugcccua caauguugga ccuggcuuua cuggaaacuu uucuacacaa 1020 aaagucaaga ugcacaucca cucuaccaau gaagugacaa gaauuuacaa ugugauaggu 1080 acucucagag gagcagugga accagacaga uaugucauuc ugggagguca ccgggacuca 1140 uggguguuug gugguauuga cccucagagu ggagcagcug uuguucauga aauugugagg 1200 agcuuuggaa cacugaaaaa ggaagggugg agaccuagaa gaacaauuuu guuugcaagc 1260 ugggaugcag aagaauuugg ucuucuuggu ucuacugagu gggcagagga gaauucaaga 1320 cuccuucaag agcguggcgu ggcuuauauu aaugcugacu caucuauaga aggaaacuac 1380 acucugagag uugauuguac accgcugaug uacagcuugg uacacaaccu aacaaaagag 1440 cugaaaagcc cugaugaagg cuuugaaggc aaaucucuuu augaaaguug gacuaaaaaa 1500 aguccuuccc cagaguucag uggcaugccc aggauaagca aauugggauc uggaaaugau 1560 uuugaggugu ucuuccaacg acuuggaauu gcuucaggca gagcacggua uacuaaaaau 1620 ugggaaacaa acaaauucag cggcuaucca cuguaucaca gugucuauga aacauaugag 1680 uugguggaaa aguuuuauga uccaauguuu aaauaucacc ucacuguggc ccagguucga 1740 ggagggaugg uguuugagcu agccaauucc auagugcucc cuuuugauug ucgagauuau 1800 gcuguaguuu uaagaaagua ugcugacaaa aucuacagua uuucuaugaa acauccacag 1860 gaaaugaaga cauacagugu aucauuugau ucacuuuuuu cugcaguaaa gaauuuuaca 1920 gaaauugcuu ccaaguucag ugagagacuc caggacuuug acaaaagcaa cccaauagua 1980 uuaagaauga ugaaugauca acucauguuu cuggaaagag cauuuauuga uccauuaggg 2040 uuaccagaca ggccuuuuua uaggcauguc aucuaugcuc caagcagcca caacaaguau 2100 gcaggggagu cauucccagg aauuuaugau gcucuguuug auauugaaag caaaguggac 2160 ccuuccaagg ccuggggaga agugaagaga cagauuuaug uugcagccuu cacagugcag 2220 gcagcugcag agacuuugag ugaaguagcc uaa 2253 <210> 6 <211> 2253 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS FOLH1(GC) <400> 6 auguggaacc ugcuccacga gaccgacagc gccguggcca ccgcgcggcg cccccggugg 60 cugugcgccg gcgcccuggu ccucgccggg ggcuucuucc ugcugggguu ccucuucggc 120 ugguucauca aguccagcaa cgaggccacg aacaucaccc cgaagcacaa caugaaggcg 180 uuccuggacg agcugaaggc cgagaacauc aagaaguucc ucuacaacuu cacccagauc 240 ccccaccugg ccgggaccga gcagaacuuc cagcuggcca agcagaucca gucccagugg 300 aaggaguucg gccucgacag cguggagcug gcgcacuacg acgugcugcu cuccuacccc 360 aacaagacgc accccaacua caucagcauc aucaacgagg acggcaacga gaucuucaac 420 accucccugu ucgagccgcc cccccccggg uacgagaacg ucagcgacau cgugccgccc 480 uucuccgccu ucagccccca gggcaugccc gagggggacc ugguguacgu caacuacgcc 540 cgcaccgagg acuucuucaa gcucgagcgg gacaugaaga ucaacugcuc cggcaagauc 600 gugaucgccc gcuacgggaa gguguuccgg ggcaacaagg ucaagaacgc ccagcuggcg 660 ggcgccaagg gggugauccu guacagcgac ccggccgacu acuucgcccc cggcgugaag 720 uccuaccccg acggguggaa ccuccccggc ggcggggucc agcgcggcaa cauccugaac 780 cugaacgggg ccggcgaccc gcucaccccc ggguaccccg cgaacgagua cgccuaccgg 840 cgcggcaucg ccgaggccgu gggccugccc agcaucccgg ugcaccccau cggguacuac 900 gacgcccaga agcugcucga gaagaugggc ggguccgcgc cccccgacag cuccuggcgg 960 ggcagccuga aggucccgua caacgugggg cccggcuuca cgggcaacuu cuccacccag 1020 aaggugaaga ugcacaucca cagcaccaac gaggucaccc gcaucuacaa cgugaucggg 1080 acgcugcggg gcgccgugga gcccgaccgc uacgucaucc ucgggggcca ccgggacagc 1140 uggguguucg ggggcaucga cccccagucc ggcgccgccg ugguccacga gaucgugcgc 1200 agcuucggga cccugaagaa ggagggcugg cggccgcgcc ggaccauccu guucgccucc 1260 ugggacgcgg aggaguucgg gcuccugggc agcaccgagu gggccgagga gaacucccgc 1320 cugcuccagg agcggggcgu cgccuacauc aacgccgaca gcuccaucga ggggaacuac 1380 acgcugcgcg uggacugcac cccgcugaug uacagccucg ugcacaaccu gaccaaggag 1440 cugaaguccc ccgacgaggg cuucgagggg aagagccucu acgaguccug gaccaagaag 1500 agcccguccc ccgaguucag cggcaugccc cggaucucca agcuggggag cggcaacgac 1560 uucgaggucu ucuuccagcg gcugggcauc gcguccgggc gcgcccggua cacgaagaac 1620 ugggagacca acaaguucag cggcuacccc cucuaccacu ccguguacga gaccuacgag 1680 cugguggaga aguucuacga cccgauguuc aaguaccacc ugaccgucgc ccaggugcgc 1740 gggggcaugg uguucgagcu ggccaacagc aucguccucc ccuucgacug ccgggacuac 1800 gccguggugc ugcgcaagua cgcggacaag aucuacagca ucuccaugaa gcacccccag 1860 gagaugaaga cguacagcgu cuccuucgac agccuguucu ccgccgugaa gaacuucacc 1920 gagaucgcca gcaaguucuc cgagcggcuc caggacuucg acaagagcaa ccccaucgug 1980 cugcgcauga ugaacgacca gcugauguuc cucgagcggg ccuucaucga cccgcugggg 2040 cugcccgacc gccccuucua ccggcacguc aucuacgccc ccuccagcca caacaaguac 2100 gcgggcgagu ccuucccggg gaucuacgac gcccucuucg acaucgagag caagguggac 2160 cccuccaagg ccuggggcga ggugaagcgc cagaucuacg ucgccgccuu caccgugcag 2220 gcggccgccg agacccugag cgagguggcc uga 2253 <210> 7 <211> 576 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-PSCA(GC)-muag-A64-C30 <400> 7 gggagaaagc uuaccaugaa ggccgugcug cucgcgcugc ugauggccgg ccuggcccug 60 cagccgggga ccgcccugcu gugcuacagc ugcaaggccc aggucucgaa cgaggacugc 120 cugcaggugg agaacugcac gcagcugggc gagcagugcu ggaccgcccg gauccgcgcc 180 gugggccugc ucaccgugau cagcaagggc ugcagccuga acugcgugga cgacagccag 240 gacuacuacg ugggcaagaa gaacaucacc ugcugcgaca ccgaccugug caacgccagc 300 ggcgcccacg cccugcagcc cgcggccgcc auccuggccc ugcugcccgc ccugggccug 360 cugcucuggg gccccggcca gcugugacca cuaguuauaa gacugacuag cccgaugggc 420 cucccaacgg gcccuccucc ccuccuugca ccgagauuaa uaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 480 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaauauuc cccccccccc 540 cccccccccc cccccccccu cuagacaauu ggaauu 576 <210> 8 <211> 372 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS PSCA(wt) <400> 8 augaaggcug ugcugcuugc ccuguugaug gcaggcuugg cccugcagcc aggcacugcc 60 cugcugugcu acuccugcaa agcccaggug agcaacgagg acugccugca gguggagaac 120 ugcacccagc ugggggagca gugcuggacc gcgcgcaucc gcgcaguugg ccuccugacc 180 gucaucagca aaggcugcag cuugaacugc guggaugacu cacaggacua cuacgugggc 240 aagaagaaca ucacgugcug ugacaccgac uugugcaacg ccagcggggc ccaugcccug 300 cagccggcug cugccauccu ugcgcugcuc ccugcacucg gccugcugcu cuggggaccc 360 ggccagcucu ag 372 <210> 9 <211> 372 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS PSCA(GC) <400> 9 augaaggccg ugcugcucgc ccugcugaug gcgggccucg cccugcagcc cgggaccgcc 60 cugcucugcu acagcugcaa ggcccagguc uccaacgagg acugccugca gguggagaac 120 ugcacccagc ugggcgagca gugcuggacg gcccggaucc gcgcgguggg gcuccugacc 180 gucaucagca agggcugcuc ccugaacugc guggacgaca gccaggacua cuacgugggg 240 aagaagaaca ucaccugcug cgacaccgac cucugcaacg ccuccggcgc ccacgcccug 300 cagccggcgg ccgccauccu ggcccuccug cccgcccugg gccuccugcu gugggggccc 360 ggccagcucu ga 372 <210> 10 <211> 1224 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-STEAP(GC)-muag-A64-C30 <400> 10 gggagaaagc uuaccaugga gagccggaag gacaucacca accaggagga gcuguggaag 60 augaagccgc gccggaaccu cgaggaggac gacuaccugc acaaggacac gggcgagacc 120 ucgaugcuga agcggcccgu gcuccugcac cugcaccaga ccgcccacgc ggacgaguuc 180 gacugcccga gcgagcucca gcacacgcag gagcuguucc cgcaguggca ccugcccauc 240 aagaucgccg ccaucaucgc gagccucacc uuccuguaca cccugcuccg cgaggucauc 300 cacccgcugg ccacgucgca ccagcaguac uucuacaaga ucccgauccu ggugaucaac 360 aaggugcucc ccauggucag caucacccug cuggcccucg uguaccugcc gggggugauc 420 gcggccaucg uccagcugca caacggcacc aaguacaaga aguucccgca cuggcucgac 480 aaguggaugc ugacgcggaa gcaguucggc cugcucagcu ucuucuucgc cgugcugcac 540 gcgaucuacu cgcugagcua ccccaugcgg cgcagcuacc gguacaagcu ccugaacugg 600 gccuaccagc aggugcagca gaacaaggag gacgccugga ucgagcacga cgucuggcgg 660 auggagaucu acgugucgcu ggggaucgug ggccucgcga uccuggcccu gcucgccguc 720 accagcaucc cgagcguguc ggacagccug accuggcgcg aguuccacua cauccagagc 780 aagcugggca ucgugucgcu ccugcugggg acgauccacg cgcucaucuu cgccuggaac 840 aaguggaucg acaucaagca guucgucugg uacaccccgc ccaccuucau gaucgccgug 900 uuccugccga ucgugguccu gaucuucaag agcauccucu uccugccgug ccugcggaag 960 aagauccuca agauccggca cggcugggag gacgugacga agaucaacaa gaccgagauc 1020 ugcagccagc ugugaccacu aguuauaaga cugacuagcc cgaugggccu cccaacgggc 1080 ccuccucccc uccuugcacc gagauuaaua aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1140 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaauauuccc cccccccccc cccccccccc 1200 cccccccucu agacaauugg aauu 1224 <210> 11 <211> 1020 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS STEAP(wt) <400> 11 auggaaagca gaaaagacau cacaaaccaa gaagaacuuu ggaaaaugaa gccuaggaga 60 aauuuagaag aagacgauua uuugcauaag gacacgggag agaccagcau gcuaaaaaga 120 ccugugcuuu ugcauuugca ccaaacagcc caugcugaug aauuugacug cccuucagaa 180 cuucagcaca cacaggaacu cuuuccacag uggcacuugc caauuaaaau agcugcuauu 240 auagcaucuc ugacuuuucu uuacacucuu cugagggaag uaauucaccc uuuagcaacu 300 ucccaucaac aauauuuuua uaaaauucca auccugguca ucaacaaagu cuugccaaug 360 guuuccauca cucucuuggc auugguuuac cugccaggug ugauagcagc aauuguccaa 420 cuucauaaug gaaccaagua uaagaaguuu ccacauuggu uggauaagug gauguuaaca 480 agaaagcagu uugggcuucu caguuucuuu uuugcuguac ugcaugcaau uuauagucug 540 ucuuacccaa ugaggcgauc cuacagauac aaguugcuaa acugggcaua ucaacagguc 600 caacaaaaua aagaagaugc cuggauugag caugauguuu ggagaaugga gauuuaugug 660 ucucugggaa uugugggauu ggcaauacug gcucuguugg cugugacauc uauuccaucu 720 gugagugacu cuuugacaug gagagaauuu cacuauauuc agagcaagcu aggaauuguu 780 ucccuucuac ugggcacaau acacgcauug auuuuugccu ggaauaagug gauagauaua 840 aaacaauuug uaugguauac accuccaacu uuuaugauag cuguuuuccu uccaauuguu 900 guccugauau uuaaaagcau acuauuccug ccaugcuuga ggaagaagau acugaagauu 960 agacaugguu gggaagacgu caccaaaauu aacaaaacug agauauguuc ccaguuguag 1020 <210> 12 <211> 1020 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS STEAP(GC) <400> 12 auggagagcc ggaaggacau caccaaccag gaggagcugu ggaagaugaa gccccgccgg 60 aaccucgagg aggacgacua ccugcacaag gacaccggcg agacguccau gcugaagcgc 120 ccggugcucc ugcaccugca ccagaccgcc cacgccgacg aguucgacug ccccagcgag 180 cuccagcaca cccaggagcu guucccccag uggcaccugc ccaucaagau cgcggccauc 240 aucgccuccc ucaccuuccu guacacgcug cuccgggagg ucauccaccc gcuggccacc 300 agccaccagc aguacuucua caagaucccc auccugguga ucaacaaggu gcuccccaug 360 gucuccauca cccugcuggc ccucguguac cugcccgggg ugaucgcggc caucguccag 420 cugcacaacg gcaccaagua caagaaguuc ccgcacuggc ucgacaagug gaugcugacg 480 cgcaagcagu ucgggcugcu cagcuucuuc uucgccgugc ugcacgccau cuacucccug 540 agcuacccca ugcggcgcuc cuaccgguac aagcuccuga acugggcgua ccagcaggug 600 cagcagaaca aggaggacgc cuggaucgag cacgacgucu ggcgcaugga gaucuacgug 660 agccugggca ucguggggcu cgccauccug gcccugcucg ccgucaccuc cauccccagc 720 guguccgaca gccugaccug gcgggaguuc cacuacaucc aguccaagcu gggcaucgug 780 agccuccugc ugggcaccau ccacgcgcuc aucuucgccu ggaacaagug gaucgacauc 840 aagcaguucg ucugguacac gcccccgacc uucaugaucg ccguguuccu gcccaucgug 900 guccugaucu ucaaguccau ccucuuccug cccugccugc gcaagaagau ccucaagauc 960 cggcacgggu gggaggacgu gaccaagauc aacaagaccg agaucugcag ccagcuguga 1020 <210> 13 <211> 1353 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-PAP(GC)-muag-A64-C30 <400> 13 gggagaaagc uuaccaugcg ggccgccccg cugcuccugg cgcgcgccgc cagccugucc 60 cucggcuucc uguuccugcu cuucuucugg cuggaccgga gcgugcuggc caaggagcuc 120 aaguucguca cccugguguu ccgccacggg gaccgguccc cgaucgacac cuuccccacg 180 gaccccauca aggagagcuc cuggccccag ggcuucgggc agcugaccca gcucggcaug 240 gagcagcacu acgagcuggg ggaguacauc cgcaagcggu accgcaaguu ccugaacgag 300 agcuacaagc acgagcaggu guacauccgg uccaccgacg ucgaccgcac ccucaugagc 360 gccaugacga accuggcggc ccuguucccg cccgagggcg uguccaucug gaaccccauc 420 cuccuguggc agcccauccc ggugcacacc gucccccuga gcgaggacca gcuccuguac 480 cugcccuucc ggaacugccc ccgcuuccag gagcucgagu ccgagacccu gaagagcgag 540 gaguuccaga agcggcugca cccguacaag gacuucaucg ccacccucgg caagcugucc 600 gggcugcacg gccaggaccu cuucgggauc uggagcaagg uguacgaccc ccuguacugc 660 gaguccgugc acaacuucac gcugcccagc ugggccaccg aggacaccau gaccaagcuc 720 cgcgagcugu ccgagcugag ccuccugucc cuguacggca uccacaagca gaaggagaag 780 agccggcucc agggcggcgu ccuggugaac gagauccuga accacaugaa gcgcgcgacg 840 cagaucccca gcuacaagaa gcucaucaug uacuccgccc acgacaccac cgugagcggg 900 cugcagaugg cccuggacgu cuacaacggg cuccugccgc ccuacgccuc cugccaccug 960 accgagcugu acuucgagaa gggcgaguac uucguggaga uguacuaccg gaacgagacg 1020 cagcacgagc ccuacccccu caugcugccg gggugcagcc ccuccugccc ccuggagcgc 1080 uucgccgagc ucgugggccc cgucaucccg caggacugga gcaccgagug caugaccacc 1140 aacucccacc agggcacgga ggacagcacc gacugaggac uaguuauaag acugacuagc 1200 ccgaugggcc ucccaacggg cccuccuccc cuccuugcac cgagauuaau aaaaaaaaaa 1260 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaauauucc 1320 cccccccccc cccccccccc ccccccccuc uag 1353 <210> 14 <211> 1161 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS PAP(wt) <400> 14 augagagcug caccccuccu ccuggccagg gcagcaagcc uuagccuugg cuucuuguuu 60 cugcuuuuuu ucuggcuaga ccgaagugua cuagccaagg aguugaaguu ugugacuuug 120 guguuucggc auggagaccg aagucccauu gacaccuuuc ccacugaccc cauaaaggaa 180 uccucauggc cacaaggauu uggccaacuc acccagcugg gcauggagca gcauuaugaa 240 cuuggagagu auauaagaaa gagauauaga aaauucuuga augaguccua uaaacaugaa 300 cagguuuaua uucgaagcac agacguugac cggacuuuga ugagugcuau gacaaaccug 360 gcagcccugu uucccccaga aggugucagc aucuggaauc cuauccuacu cuggcagccc 420 aucccggugc acacaguucc ucuuucugaa gaucaguugc uauaccugcc uuucaggaac 480 ugcccucguu uucaagaacu ugagagugag acuuugaaau cagaggaauu ccagaagagg 540 cugcacccuu auaaggauuu uauagcuacc uugggaaaac uuucaggauu acauggccag 600 gaccuuuuug gaauuuggag uaaagucuac gacccuuuau auugugagag uguucacaau 660 uucacuuuac ccuccugggc cacugaggac accaugacua aguugagaga auugucagaa 720 uugucccucc ugucccucua uggaauucac aagcagaaag agaaaucuag gcuccaaggg 780 gguguccugg ucaaugaaau ccucaaucac augaagagag caacucagau accaagcuac 840 aaaaaacuca ucauguauuc ugcgcaugac acuacuguga guggccuaca gauggcgcua 900 gauguuuaca acggacuccu uccucccuau gcuucuugcc acuugacgga auuguacuuu 960 gagaaggggg aguacuuugu ggagauguac uaucggaaug agacgcagca cgagccguau 1020 ccccucaugc uaccuggcug cagccccagc uguccucugg agagguuugc ugagcugguu 1080 ggcccuguga ucccucaaga cugguccacg gaguguauga ccacaaacag ccaucaaggu 1140 acugaagaca guacagauua g 1161 <210> 15 <211> 1161 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS PAP(GC) <400> 15 augcgggccg ccccgcugcu ccuggcgcgc gccgccagcc ugucccucgg cuuccuguuc 60 cugcucuucu ucuggcugga ccggagcgug cuggccaagg agcucaaguu cgucacccug 120 guguuccgcc acggggaccg guccccgauc gacaccuucc ccacggaccc caucaaggag 180 agcuccuggc cccagggcuu cgggcagcug acccagcucg gcauggagca gcacuacgag 240 cugggggagu acauccgcaa gcgguaccgc aaguuccuga acgagagcua caagcacgag 300 cagguguaca uccgguccac cgacgucgac cgcacccuca ugagcgccau gacgaaccug 360 gcggcccugu ucccgcccga gggcgugucc aucuggaacc ccauccuccu guggcagccc 420 aucccggugc acaccguccc ccugagcgag gaccagcucc uguaccugcc cuuccggaac 480 ugcccccgcu uccaggagcu cgaguccgag acccugaaga gcgaggaguu ccagaagcgg 540 cugcacccgu acaaggacuu caucgccacc cucggcaagc uguccgggcu gcacggccag 600 gaccucuucg ggaucuggag caagguguac gacccccugu acugcgaguc cgugcacaac 660 uucacgcugc ccagcugggc caccgaggac accaugacca agcuccgcga gcuguccgag 720 cugagccucc ugucccugua cggcauccac aagcagaagg agaagagccg gcuccagggc 780 ggcguccugg ugaacgagau ccugaaccac augaagcgcg cgacgcagau ccccagcuac 840 aagaagcuca ucauguacuc cgcccacgac accaccguga gcgggcugca gauggcccug 900 gacgucuaca acgggcuccu gccgcccuac gccuccugcc accugaccga gcuguacuuc 960 gagaagggcg aguacuucgu ggagauguac uaccggaacg agacgcagca cgagcccuac 1020 ccccucaugc ugccggggug cagccccucc ugcccccugg agcgcuucgc cgagcucgug 1080 ggccccguca ucccgcagga cuggagcacc gagugcauga ccaccaacuc ccaccagggc 1140 acggaggaca gcaccgacug a 1161 <210> 16 <211> 1860 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-MUC1 5xVNTR(GC)-muag-A64-C30 <400> 16 gggagaaagc uuaccaugac ccccggcacc cagagcccgu ucuuccugcu ccugcugcuc 60 acggugcuga ccgucgugac cggguccggc cacgccagcu ccacccccgg gggcgagaag 120 gagacgagcg ccacccagcg guccagcgug cccuccagca ccgagaagaa cgcggucucc 180 augaccagcu ccgugcugag cucccacagc cccggguccg gcagcuccac gacccagggc 240 caggacguga cccucgcccc ggccaccgag cccgccagcg gguccgccgc gacguggggc 300 caggacguca ccagcgugcc cgugacccgc cccgcccugg ggagcaccac gccgcccgcc 360 cacgacguca ccuccgcccc cgacaacaag cccgcgccgg gcagcaccgc cccccccgcc 420 cacgggguga ccuccgcccc cgacacgcgg ccggcccccg gcagcaccgc gccccccgcc 480 cacggcguga ccuccgcccc ggacacccgc cccgcccccg ggagcacggc cccgccggcg 540 cacggcguca ccuccgcccc cgacacccgg cccgcccccg ggagcaccgc cccgcccgcc 600 cacggcguga cguccgcgcc cgacacccgc ccggcccccg gcagcaccgc cccccccgcc 660 cacgggguga ccuccgcccc ggacacgcgg cccgcgcccg gcagcaccgc cccgccggcc 720 cacgggguca ccuccgcgcc cgacaaccgc cccgcccugg ggagcaccgc cccgcccgug 780 cacaacguga ccuccgccag cggcuccgcg agcggguccg ccagcacccu cguccacaac 840 ggcacguccg cccgggccac caccaccccc gccagcaagu ccacgcccuu cagcaucccg 900 ucccaccaca gcgacacccc caccacccug gcgucccaca gcacgaagac cgacgccucc 960 agcacccacc acuccagcgu gcccccgcug accagcucca accacagcac guccccgcag 1020 cucagcaccg ggguguccuu cuucuuccug agcuuccaca ucuccaaccu gcaguucaac 1080 agcucccucg aggaccccag caccgacuac uaccaggagc ugcagcggga caucuccgag 1140 auguuccugc agaucuacaa gcagggcggc uuccucgggc ugagcaacau caaguuccgc 1200 cccggcuccg ucguggugca gcugacccuc gccuuccggg aggggacgau caacguccac 1260 gacguggaga cccaguucaa ccaguacaag accgaggccg ccagccgcua caaccugacc 1320 aucuccgacg ugagcgucuc cgacgugccc uucccguuca gcgcgcaguc cggcgccggc 1380 gugcccgggu ggggcaucgc ccugcucguc cuggugugcg ugcuggucgc ccucgccauc 1440 guguaccuga ucgcgcuggc cgugugccag ugccggcgca agaacuacgg gcagcucgac 1500 aucuuccccg cccgggacac guaccacccg augagcgagu acccgaccua ccacacccac 1560 ggccgcuacg ucccccccag cuccaccgac cggagccccu acgagaaggu guccgccggg 1620 aacggcggca gcucccugag cuacaccaac ccggcggugg ccgccgccuc cgccaaccug 1680 ugaccacuag uuauaagacu gacuagcccg augggccucc caacgggccc uccuccccuc 1740 cuugcaccga gauuaauaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa auauuccccc cccccccccc cccccccccc cccccucuag 1860 <210> 17 <211> 1668 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS MUC1(wt) <400> 17 augacaccgg gcacccaguc uccuuucuuc cugcugcugc uccucacagu gcuuacaguu 60 guuacagguu cuggucaugc aagcucuacc ccagguggag aaaaggagac uucggcuacc 120 cagagaaguu cagugcccag cucuacugag aagaaugcug ugaguaugac cagcagcgua 180 cucuccagcc acagccccgg uucaggcucc uccaccacuc agggacagga ugucacucug 240 gccccggcca cggaaccagc uucagguuca gcugccaccu ggggacagga ugucaccucg 300 gucccaguca ccaggccagc ccugggcucc accaccccgc cagcccacga ugucaccuca 360 gccccggaca acaagccagc cccgggcucc accgcccccc cagcccacgg ugucaccucg 420 gccccggaca ccaggccggc cccgggcucc accgcccccc cagcccacgg ugucaccucg 480 gccccggaca ccaggccggc cccgggcucc accgcccccc cagcccacgg ugucaccucg 540 gccccggaca ccaggccggc cccgggcucc accgcccccc cagcccacgg ugucaccucg 600 gccccggaca ccaggccggc cccgggcucc accgcccccc cagcccacgg ugucaccucg 660 gccccggaca ccaggccggc cccgggcucc accgcccccc cagcccacgg ugucaccucg 720 gccccggaca acaggcccgc cuugggcucc accgccccuc caguccacaa ugucaccucg 780 gccucaggcu cugcaucagg cucagcuucu acucuggugc acaacggcac cucugccagg 840 gcuaccacaa ccccagccag caagagcacu ccauucucaa uucccagcca ccacucugau 900 acuccuacca cccuugccag ccauagcacc aagacugaug ccaguagcac ucaccauagc 960 ucgguaccuc cucucaccuc cuccaaucac agcacuucuc cccaguuguc uacugggguc 1020 ucuuucuuuu uccugucuuu ucacauuuca aaccuccagu uuaauuccuc ucuggaagau 1080 cccagcaccg acuacuacca agagcugcag agagacauuu cugaaauguu uuugcagauu 1140 uauaaacaag gggguuuucu gggccucucc aauauuaagu ucaggccagg aucuguggug 1200 guacaauuga cucuggccuu ccgagaaggu accaucaaug uccacgacgu ggagacacag 1260 uucaaucagu auaaaacgga agcagccucu cgauauaacc ugacgaucuc agacgucagc 1320 gugagugaug ugccauuucc uuucucugcc cagucugggg cuggggugcc aggcuggggc 1380 aucgcgcugc uggugcuggu cuguguucug guugcgcugg ccauugucua ucucauugcc 1440 uuggcugucu gucagugccg ccgaaagaac uacgggcagc uggacaucuu uccagcccgg 1500 gauaccuacc auccuaugag cgaguacccc accuaccaca cccaugggcg cuaugugccc 1560 ccuagcagua ccgaucguag ccccuaugag aagguuucug cagguaacgg uggcagcagc 1620 cucucuuaca caaacccagc aguggcagcc gcuucugcca acuuguag 1668 <210> 18 <211> 1668 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CDS MUC1(GC) <400> 18 augacccccg gcacccagag cccguucuuc cugcuccugc ugcucacggu gcugaccguc 60 gugaccgggu ccggccacgc cagcuccacc cccgggggcg agaaggagac gagcgccacc 120 cagcggucca gcgugcccuc cagcaccgag aagaacgcgg ucuccaugac cagcuccgug 180 cugagcuccc acagccccgg guccggcagc uccacgaccc agggccagga cgugacccuc 240 gccccggcca ccgagcccgc cagcgggucc gccgcgacgu ggggccagga cgucaccagc 300 gugcccguga cccgccccgc ccuggggagc accacgccgc ccgcccacga cgucaccucc 360 gcccccgaca acaagcccgc gccgggcagc accgcccccc ccgcccacgg ggugaccucc 420 gcccccgaca cgcggccggc ccccggcagc accgcgcccc ccgcccacgg cgugaccucc 480 gccccggaca cccgccccgc ccccgggagc acggccccgc cggcgcacgg cgucaccucc 540 gcccccgaca cccggcccgc ccccgggagc accgccccgc ccgcccacgg cgugacgucc 600 gcgcccgaca cccgcccggc ccccggcagc accgcccccc ccgcccacgg ggugaccucc 660 gccccggaca cgcggcccgc gcccggcagc accgccccgc cggcccacgg ggucaccucc 720 gcgcccgaca accgccccgc ccuggggagc accgccccgc ccgugcacaa cgugaccucc 780 gccagcggcu ccgcgagcgg guccgccagc acccucgucc acaacggcac guccgcccgg 840 gccaccacca cccccgccag caaguccacg cccuucagca ucccguccca ccacagcgac 900 acccccacca cccuggcguc ccacagcacg aagaccgacg ccuccagcac ccaccacucc 960 agcgugcccc cgcugaccag cuccaaccac agcacguccc cgcagcucag caccggggug 1020 uccuucuucu uccugagcuu ccacaucucc aaccugcagu ucaacagcuc ccucgaggac 1080 cccagcaccg acuacuacca ggagcugcag cgggacaucu ccgagauguu ccugcagauc 1140 uacaagcagg gcggcuuccu cgggcugagc aacaucaagu uccgccccgg cuccgucgug 1200 gugcagcuga cccucgccuu ccgggagggg acgaucaacg uccacgacgu ggagacccag 1260 uucaaccagu acaagaccga ggccgccagc cgcuacaacc ugaccaucuc cgacgugagc 1320 gucuccgacg ugcccuuccc guucagcgcg caguccggcg ccggcgugcc cggguggggc 1380 aucgcccugc ucguccuggu gugcgugcug gucgcccucg ccaucgugua ccugaucgcg 1440 cuggccgugu gccagugccg gcgcaagaac uacgggcagc ucgacaucuu ccccgcccgg 1500 gacacguacc acccgaugag cgaguacccg accuaccaca cccacggccg cuacgucccc 1560 cccagcucca ccgaccggag ccccuacgag aagguguccg ccgggaacgg cggcagcucc 1620 cugagcuaca ccaacccggc gguggccgcc gccuccgcca accuguga 1668 <210> 19 <211> 1003 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-PSA/KLK3 (GC)-muag-A64-C30-histoneSL <400> 19 gggagaaagc uuaccaugug ggugccgguc guguuccuga cccucagcgu gacguggauc 60 ggcgccgcgc cccugauccu gucgcggauc guggggggcu gggagugcga gaagcacagc 120 cagcccuggc aggugcuggu ggccagccgc ggccgggccg ugugcggcgg cgugcuggug 180 cacccccagu gggugcugac cgccgcccac ugcauccgga acaagagcgu cauccugcug 240 ggccggcaca gccuguucca ccccgaggac accggccagg uguuccaggu gagccacagc 300 uucccccacc cccuguacga caugagccuc cugaagaacc gguuccugcg gcccggcgac 360 gacagcagcc acgaccugau gcugcugcgg cugagcgagc ccgccgagcu gaccgacgcc 420 gugaagguga uggaccugcc gacccaggag cccgcccugg gcaccaccug cuacgccagc 480 ggcuggggga gcaucgagcc cgaggaguuc cucaccccca agaagcugca gugcguggac 540 cugcacguga ucagcaacga cgugugcgcc caggugcacc cccagaaggu gaccaaguuc 600 augcugugcg ccggccggug gaccggcggc aagagcaccu gcagcggcga cagcggcggc 660 ccccuggucu gcaacggcgu gcugcagggc aucaccagcu ggggcagcga gcccugcgcc 720 cugcccgagc gccccagccu guacaccaag guggugcacu accggaagug gaucaaggac 780 accaucgugg ccaacccgug accacuaguu auaagacuga cuagcccgau gggccuccca 840 acgggcccuc cuccccuccu ugcaccgaga uuaauaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaau gcaucccccc cccccccccc 960 cccccccccc cccccaaagg cucuuuucag agccaccaga auu 1003 <210> 20 <211> 2470 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-PSMA/FOLH1 (GC)-muag-A64-C30-histoneSL <400> 20 gggagaaagc uuaccaugug gaaccugcuc cacgagaccg acagcgccgu ggcgacggcc 60 cggcgcccgc gguggcugug cgccggcgcc cugguccugg ccgggggcuu cuuccugcug 120 ggcuuccugu ucggcugguu caucaagucg agcaacgagg ccaccaacau cacccccaag 180 cacaacauga aggccuuccu cgacgagcug aaggccgaga acaucaagaa guuccuguac 240 aacuucaccc agauccccca ccuggccggg accgagcaga acuuccagcu ggccaagcag 300 auccagagcc aguggaagga guucggccug gacucggugg agcuggcgca cuacgacgug 360 cugcucagcu accccaacaa gacccacccc aacuacauca gcaucaucaa cgaggacggc 420 aacgagaucu ucaacaccag ccuguucgag cccccgcccc ccggcuacga gaacgugucg 480 gacaucgugc cccccuucag cgccuucagc ccgcagggca ugcccgaggg ggaccuggug 540 uacgugaacu acgcccggac ggaggacuuc uucaagcugg agcgcgacau gaagaucaac 600 ugcagcggca agaucgugau cgcccgguac ggcaaggugu uccggggcaa caaggugaag 660 aacgcccagc uggccggggc caagggcgug auccuguacu cggaccccgc cgacuacuuc 720 gcccccggcg ugaagagcua ccccgacggc uggaaccugc ccggcggggg cguccagcgc 780 ggcaacaucc ucaaccugaa cggcgccggc gacccgcuga cccccgggua ccccgcgaac 840 gaguacgccu accggcgggg caucgccgag gccgugggcc ugcccagcau ccccgugcac 900 ccgaucggcu acuacgacgc ccagaagcug cuggagaaga ugggcgggag cgccccgccc 960 gacucgagcu ggcggggcag ccugaaggug cccuacaacg ugggccccgg cuucaccggg 1020 aacuucucga cccagaaggu gaagaugcac auccacagca ccaacgaggu gacccgcauc 1080 uacaacguga ucggcacccu gcggggcgcc guggagcccg accgguacgu gauccucggc 1140 gggcaccgcg acagcugggu guucggcggc aucgaccccc agagcggcgc cgccgugguc 1200 cacgagaucg ugcggucguu cggcacccug aagaaggagg gguggcggcc ccgccggacg 1260 auccuguucg ccagcuggga cgcggaggag uucggccugc ugggcagcac cgagugggcc 1320 gaggagaaca gccggcugcu gcaggagcgg ggcguggccu acaucaacgc cgacucgagc 1380 aucgagggca acuacacccu ccgcguggac ugcaccccgc ugauguacag ccuggugcac 1440 aaccugacca aggagcugaa gagccccgac gagggguucg agggcaaguc gcuguacgag 1500 agcuggacca agaagagccc cucgcccgag uucagcggca ugccccggau cagcaagcug 1560 ggcagcggga acgacuucga gguguucuuc cagcggcugg gcaucgccuc gggccgcgcc 1620 cgguacacca agaacuggga gacgaacaag uucagcggcu acccccucua ccacagcgug 1680 uacgagaccu acgagcuggu ggagaaguuc uacgacccca uguucaagua ccaccugacc 1740 guggcccagg ugcggggcgg gaugguguuc gagcuggcca acagcaucgu gcugcccuuc 1800 gacugccgcg acuacgccgu cgugcugcgg aaguacgccg acaagaucua cucgaucagc 1860 augaagcacc cccaggagau gaagaccuac agcgugagcu ucgacucgcu guucagcgcg 1920 gugaagaacu ucaccgagau cgccagcaag uucucggagc ggcuccagga cuucgacaag 1980 agcaacccga ucgugcugcg caugaugaac gaccagcuga uguuccugga gcgggccuuc 2040 aucgaccccc ugggccugcc cgaccggccc uucuaccggc acgugaucua cgcccccagc 2100 agccacaaca aguacgccgg cgagucguuc ccggggaucu acgacgcccu guucgacauc 2160 gagagcaagg uggaccccag caaggccugg ggcgagguga agcgccagau cuacguggcc 2220 gccuucaccg ugcaggccgc ggccgagacc cugagcgagg uggccugacc acuaguuaua 2280 agacugacua gcccgauggg ccucccaacg ggcccuccuc cccuccuugc accgagauua 2340 auaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2400 aaaaaaugca uccccccccc cccccccccc cccccccccc ccaaaggcuc uuuucagagc 2460 caccagaauu 2470 <210> 21 <211> 589 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-PSCA (GC)-muag-A64-C30-histoneSL <400> 21 gggagaaagc uuaccaugaa ggccgugcug cucgcgcugc ugauggccgg ccuggcccug 60 cagccgggga ccgcccugcu gugcuacagc ugcaaggccc aggucucgaa cgaggacugc 120 cugcaggugg agaacugcac gcagcugggc gagcagugcu ggaccgcccg gauccgcgcc 180 gugggccugc ucaccgugau cagcaagggc ugcagccuga acugcgugga cgacagccag 240 gacuacuacg ugggcaagaa gaacaucacc ugcugcgaca ccgaccugug caacgccagc 300 ggcgcccacg cccugcagcc cgcggccgcc auccuggccc ugcugcccgc ccugggccug 360 cugcucuggg gccccggcca gcugugacca cuaguuauaa gacugacuag cccgaugggc 420 cucccaacgg gcccuccucc ccuccuugca ccgagauuaa uaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 480 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaugcau cccccccccc 540 cccccccccc cccccccccc caaaggcucu uuucagagcc accagaauu 589 <210> 22 <211> 1237 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-STEAP1 (GC)-muag-A64-C30-histoneSL <400> 22 gggagaaagc uuaccaugga gagccggaag gacaucacca accaggagga gcuguggaag 60 augaagccgc gccggaaccu cgaggaggac gacuaccugc acaaggacac gggcgagacc 120 ucgaugcuga agcggcccgu gcuccugcac cugcaccaga ccgcccacgc ggacgaguuc 180 gacugcccga gcgagcucca gcacacgcag gagcuguucc cgcaguggca ccugcccauc 240 aagaucgccg ccaucaucgc gagccucacc uuccuguaca cccugcuccg cgaggucauc 300 cacccgcugg ccacgucgca ccagcaguac uucuacaaga ucccgauccu ggugaucaac 360 aaggugcucc ccauggucag caucacccug cuggcccucg uguaccugcc gggggugauc 420 gcggccaucg uccagcugca caacggcacc aaguacaaga aguucccgca cuggcucgac 480 aaguggaugc ugacgcggaa gcaguucggc cugcucagcu ucuucuucgc cgugcugcac 540 gcgaucuacu cgcugagcua ccccaugcgg cgcagcuacc gguacaagcu ccugaacugg 600 gccuaccagc aggugcagca gaacaaggag gacgccugga ucgagcacga cgucuggcgg 660 auggagaucu acgugucgcu ggggaucgug ggccucgcga uccuggcccu gcucgccguc 720 accagcaucc cgagcguguc ggacagccug accuggcgcg aguuccacua cauccagagc 780 aagcugggca ucgugucgcu ccugcugggg acgauccacg cgcucaucuu cgccuggaac 840 aaguggaucg acaucaagca guucgucugg uacaccccgc ccaccuucau gaucgccgug 900 uuccugccga ucgugguccu gaucuucaag agcauccucu uccugccgug ccugcggaag 960 aagauccuca agauccggca cggcugggag gacgugacga agaucaacaa gaccgagauc 1020 ugcagccagc ugugaccacu aguuauaaga cugacuagcc cgaugggccu cccaacgggc 1080 ccuccucccc uccuugcacc gagauuaaua aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1140 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaugcaucc cccccccccc cccccccccc 1200 ccccccccca aaggcucuuu ucagagccac cagaauu 1237 <210> 23 <211> 1378 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAP-PAP (GC)-muag-A64-C30-histoneSL <400> 23 gggagaaagc uuaccaugcg ggccgccccg cugcuccugg cgcgcgccgc cagccugucc 60 cucggcuucc uguuccugcu cuucuucugg cuggaccgga gcgugcuggc caaggagcuc 120 aaguucguca cccugguguu ccgccacggg gaccgguccc cgaucgacac cuuccccacg 180 gaccccauca aggagagcuc cuggccccag ggcuucgggc agcugaccca gcucggcaug 240 gagcagcacu acgagcuggg ggaguacauc cgcaagcggu accgcaaguu ccugaacgag 300 agcuacaagc acgagcaggu guacauccgg uccaccgacg ucgaccgcac ccucaugagc 360 gccaugacga accuggcggc ccuguucccg cccgagggcg uguccaucug gaaccccauc 420 cuccuguggc agcccauccc ggugcacacc gucccccuga gcgaggacca gcuccuguac 480 cugcccuucc ggaacugccc ccgcuuccag gagcucgagu ccgagacccu gaagagcgag 540 gaguuccaga agcggcugca cccguacaag gacuucaucg ccacccucgg caagcugucc 600 gggcugcacg gccaggaccu cuucgggauc uggagcaagg uguacgaccc ccuguacugc 660 gaguccgugc acaacuucac gcugcccagc ugggccaccg aggacaccau gaccaagcuc 720 cgcgagcugu ccgagcugag ccuccugucc cuguacggca uccacaagca gaaggagaag 780 agccggcucc agggcggcgu ccuggugaac gagauccuga accacaugaa gcgcgcgacg 840 cagaucccca gcuacaagaa gcucaucaug uacuccgccc acgacaccac cgugagcggg 900 cugcagaugg cccuggacgu cuacaacggg cuccugccgc ccuacgccuc cugccaccug 960 accgagcugu acuucgagaa gggcgaguac uucguggaga uguacuaccg gaacgagacg 1020 cagcacgagc ccuacccccu caugcugccg gggugcagcc ccuccugccc ccuggagcgc 1080 uucgccgagc ucgugggccc cgucaucccg caggacugga gcaccgagug caugaccacc 1140 aacucccacc agggcacgga ggacagcacc gacugaggac uaguuauaag acugacuagc 1200 ccgaugggcc ucccaacggg cccuccuccc cuccuugcac cgagauuaau aaaaaaaaaa 1260 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaugcauc 1320 cccccccccc cccccccccc cccccccccc aaaggcucuu uucagagcca ccagaauu 1378 <210> 24 <211> 1885 <212> RNA <213> CAP-MUC1 5xVNTR (GC)-muag-A64-C30-histoneSL <400> 24 gggagaaagc uuaccaugac ccccggcacc cagagcccgu ucuuccugcu ccugcugcuc 60 acggugcuga ccgucgugac cggguccggc cacgccagcu ccacccccgg gggcgagaag 120 gagacgagcg ccacccagcg guccagcgug cccuccagca ccgagaagaa cgcggucucc 180 augaccagcu ccgugcugag cucccacagc cccggguccg gcagcuccac gacccagggc 240 caggacguga cccucgcccc ggccaccgag cccgccagcg gguccgccgc gacguggggc 300 caggacguca ccagcgugcc cgugacccgc cccgcccugg ggagcaccac gccgcccgcc 360 cacgacguca ccuccgcccc cgacaacaag cccgcgccgg gcagcaccgc cccccccgcc 420 cacgggguga ccuccgcccc cgacacgcgg ccggcccccg gcagcaccgc gccccccgcc 480 cacggcguga ccuccgcccc ggacacccgc cccgcccccg ggagcacggc cccgccggcg 540 cacggcguca ccuccgcccc cgacacccgg cccgcccccg ggagcaccgc cccgcccgcc 600 cacggcguga cguccgcgcc cgacacccgc ccggcccccg gcagcaccgc cccccccgcc 660 cacgggguga ccuccgcccc ggacacgcgg cccgcgcccg gcagcaccgc cccgccggcc 720 cacgggguca ccuccgcgcc cgacaaccgc cccgcccugg ggagcaccgc cccgcccgug 780 cacaacguga ccuccgccag cggcuccgcg agcggguccg ccagcacccu cguccacaac 840 ggcacguccg cccgggccac caccaccccc gccagcaagu ccacgcccuu cagcaucccg 900 ucccaccaca gcgacacccc caccacccug gcgucccaca gcacgaagac cgacgccucc 960 agcacccacc acuccagcgu gcccccgcug accagcucca accacagcac guccccgcag 1020 cucagcaccg ggguguccuu cuucuuccug agcuuccaca ucuccaaccu gcaguucaac 1080 agcucccucg aggaccccag caccgacuac uaccaggagc ugcagcggga caucuccgag 1140 auguuccugc agaucuacaa gcagggcggc uuccucgggc ugagcaacau caaguuccgc 1200 cccggcuccg ucguggugca gcugacccuc gccuuccggg aggggacgau caacguccac 1260 gacguggaga cccaguucaa ccaguacaag accgaggccg ccagccgcua caaccugacc 1320 aucuccgacg ugagcgucuc cgacgugccc uucccguuca gcgcgcaguc cggcgccggc 1380 gugcccgggu ggggcaucgc ccugcucguc cuggugugcg ugcuggucgc ccucgccauc 1440 guguaccuga ucgcgcuggc cgugugccag ugccggcgca agaacuacgg gcagcucgac 1500 aucuuccccg cccgggacac guaccacccg augagcgagu acccgaccua ccacacccac 1560 ggccgcuacg ucccccccag cuccaccgac cggagccccu acgagaaggu guccgccggg 1620 aacggcggca gcucccugag cuacaccaac ccggcggugg ccgccgccuc cgccaaccug 1680 ugaccacuag uuauaagacu gacuagcccg augggccucc caacgggccc uccuccccuc 1740 cuugcaccga gauuaauaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa augcaucccc cccccccccc cccccccccc cccccccaaa 1860 ggcucuuuuc agagccacca gaauu 1885 <210> 25 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (3)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 25 ngnnnnnnun nnnncn 16 <210> 26 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(24) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not. <400> 26 nnnnnngnnn nnnunnnnnc nnnnnn 26 <210> 27 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Id) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (3)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 27 ncnnnnnnun nnnngn 16 <210> 28 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IId) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not. <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 28 nnnnnncnnn nnnunnnnng nnnnnn 26 <210> 29 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 29 dgnnnnnnun nnnnch 16 <210> 30 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (22)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 30 nnnnndgnnn nnnunnnnnc hnnnnn 26 <210> 31 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 31 ngnbyynnun vndncn 16 <210> 32 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 32 nnnnnngnby ynnunvndnc nnnnnn 26 <210> 33 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 33 nghyyydnuh abrdcn 16 <210> 34 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (4)..(6) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (21)..(23) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> may be present or not <400> 34 nnhnnnghyy ydnuhabrdc nnnnnh 26 <210> 35 <211> 16 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 35 dghycudyuh asrrcc 16 <210> 36 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> may be present or not <400> 36 nhaahdghyc udyuhasrrc cvhbnh 26 <210> 37 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <400> 37 vgyyyyhhth rvvrcb 16 <210> 38 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <400> 38 sgyyyttytm arrrcs 16 <210> 39 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ic) <400> 39 sgyycttttm agrrcs 16 <210> 40 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 40 dgnnnbnnth vnnnch 16 <210> 41 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (13)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 41 rgnnnyhbth rdnncy 16 <210> 42 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ie) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <400> 42 rgndbyhyth rdhncy 16 <210> 43 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <400> 43 vgyyytyhth rvrrcb 16 <210> 44 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <400> 44 sgyycttytm agrrcs 16 <210> 45 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (If) <400> 45 sgyycttttm agrrcs 16 <210> 46 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <400> 46 ggyycttyth agrrcc 16 <210> 47 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <400> 47 ggcycttytm agrgcc 16 <210> 48 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ig) <400> 48 ggctcttttm agrgcc 16 <210> 49 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 49 dghyctdyth asrrcc 16 <210> 50 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 50 ggcyctttth agrgcc 16 <210> 51 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (Ih) <400> 51 ggcycttttm agrgcc 16 <210> 52 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 52 hhhhvvgyyy yhhthrvvrc bvhhnn 26 <210> 53 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 53 mhmhmsgyyy ttytmarrrc smchhh 26 <210> 54 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIc) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 54 mmmmmsgyyc ttttmagrrc sachmh 26 <210> 55 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(10) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (12)..(13) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (17)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (22)..(22) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 55 nnnnndgnnn bnnthvnnnc hnhnnn 26 <210> 56 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (8)..(10) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (18)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 56 nnhhnrgnnn yhbthrdnnc ydhhnn 26 <210> 57 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIe) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> may be present or not <400> 57 nhhhvrgndb yhythrdhnc yrhhhh 26 <210> 58 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <400> 58 hhmhmvgyyy tyhthrvrrc bvmhhn 26 <210> 59 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 59 mmmmmsgyyc ttytmagrrc smchhh 26 <210> 60 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIf) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 60 mmmmmsgyyc ttttmagrrc sachmh 26 <210> 61 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> may be present or not <400> 61 hhmamggyyc ttythagrrc cvhnnm 26 <210> 62 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(26) <223> may be present or not <400> 62 hhaamggcyc ttytmagrgc cvchhm 26 <210> 63 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIg) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> may be present or not <400> 63 mmaamggctc ttttmagrgc cmcymm 26 <210> 64 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> may be present or not <400> 64 nhaahdghyc tdythasrrc cvhbnh 26 <210> 65 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (25)..(25) <223> n is a, u, t, g, and c, or a nucleotide analogue thereof; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (26)..(26) <223> may be present or not <400> 65 hhaamggcyc tttthagrgc cvmynm 26 <210> 66 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence according to formula (IIh) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (24)..(26) <223> may be present or not <400> 66 hmaaaggcyc ttttmagrgc crmyhm 26 <210> 67 <211> 13 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Kozak sequence <400> 67 gccgccacca ugg 13 <210> 68 <211> 15 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> general formula of a 3-UTR stabilizing sequence <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is c or u <220> <221> repeat_unit <222> (5)..(5) <223> n is a, u, t, g, or c; may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> n is a, u, t, g, or c <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> n is a, or u <220> <221> repeat_unit <222> (10)..(10) <223> n is c or u, may be present or not <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> n is c or u <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> n is c or u <400> 68 nccancccnn ucncc 15 <210> 69 <211> 44 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 3'-UTR of an alpha-globin gene (muag) <400> 69 gcccgauggg ccucccaacg ggcccuccuc cccuccuugc accg 44 <210> 70 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Specific histone stem-loop sequence <400> 70 caaaggctct tttcagagcc acca 24 <210> 71 <211> 24 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Specific histone stem-loop sequence <400> 71 caaaggcucu uuucagagcc acca 24 <210> 72 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MUC1-derived peptide <400> 72 Ser Ala Pro Asp Asn Arg Pro Ala Leu 1 5 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Connexin-derived peptide <400> 73 Phe Glu Gln Asn Thr Ala Gln Pro 1 5 <210> 74 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAP-derived peptide <400> 74 Val Ser Ile Trp Asn Pro Ile Leu Leu 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PSMA-derived peptide <400> 75 Ser Ala Val Lys Asn Phe Thr Glu Ile 1 5 <210> 76 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76 Met Trp Val Pro Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu 20 25 30 Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala 35 40 45 Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala 50 55 60 His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Ser Leu 65 70 75 80 Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe 85 90 95 Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Phe Leu Arg 100 105 110 Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu 115 120 125 Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu Pro Thr Gln 130 135 140 Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile 145 150 155 160 Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu 165 170 175 His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro Gln Lys Val 180 185 190 Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly Lys Ser Thr 195 200 205 Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln 210 215 220 Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Arg Pro 225 230 235 240 Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr 245 250 255 Ile Val Ala Asn Pro 260 <210> 77 <211> 750 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Met Trp Asn Leu Leu His Glu Thr Asp Ser Ala Val Ala Thr Ala Arg 1 5 10 15 Arg Pro Arg Trp Leu Cys Ala Gly Ala Leu Val Leu Ala Gly Gly Phe 20 25 30 Phe Leu Leu Gly Phe Leu Phe Gly Trp Phe Ile Lys Ser Ser Asn Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ile Thr Pro Lys His Asn Met Lys Ala Phe Leu Asp Glu 50 55 60 Leu Lys Ala Glu Asn Ile Lys Lys Phe Leu Tyr Asn Phe Thr Gln Ile 65 70 75 80 Pro His Leu Ala Gly Thr Glu Gln Asn Phe Gln Leu Ala Lys Gln Ile 85 90 95 Gln Ser Gln Trp Lys Glu Phe Gly Leu Asp Ser Val Glu Leu Ala His 100 105 110 Tyr Asp Val Leu Leu Ser Tyr Pro Asn Lys Thr His Pro Asn Tyr Ile 115 120 125 Ser Ile Ile Asn Glu Asp Gly Asn Glu Ile Phe Asn Thr Ser Leu Phe 130 135 140 Glu Pro Pro Pro Pro Gly Tyr Glu Asn Val Ser Asp Ile Val Pro Pro 145 150 155 160 Phe Ser Ala Phe Ser Pro Gln Gly Met Pro Glu Gly Asp Leu Val Tyr 165 170 175 Val Asn Tyr Ala Arg Thr Glu Asp Phe Phe Lys Leu Glu Arg Asp Met 180 185 190 Lys Ile Asn Cys Ser Gly Lys Ile Val Ile Ala Arg Tyr Gly Lys Val 195 200 205 Phe Arg Gly Asn Lys Val Lys Asn Ala Gln Leu Ala Gly Ala Lys Gly 210 215 220 Val Ile Leu Tyr Ser Asp Pro Ala Asp Tyr Phe Ala Pro Gly Val Lys 225 230 235 240 Ser Tyr Pro Asp Gly Trp Asn Leu Pro Gly Gly Gly Val Gln Arg Gly 245 250 255 Asn Ile Leu Asn Leu Asn Gly Ala Gly Asp Pro Leu Thr Pro Gly Tyr 260 265 270 Pro Ala Asn Glu Tyr Ala Tyr Arg Arg Gly Ile Ala Glu Ala Val Gly 275 280 285 Leu Pro Ser Ile Pro Val His Pro Ile Gly Tyr Tyr Asp Ala Gln Lys 290 295 300 Leu Leu Glu Lys Met Gly Gly Ser Ala Pro Pro Asp Ser Ser Trp Arg 305 310 315 320 Gly Ser Leu Lys Val Pro Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Thr Gly Asn 325 330 335 Phe Ser Thr Gln Lys Val Lys Met His Ile His Ser Thr Asn Glu Val 340 345 350 Thr Arg Ile Tyr Asn Val Ile Gly Thr Leu Arg Gly Ala Val Glu Pro 355 360 365 Asp Arg Tyr Val Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ser Trp Val Phe Gly 370 375 380 Gly Ile Asp Pro Gln Ser Gly Ala Ala Val Val His Glu Ile Val Arg 385 390 395 400 Ser Phe Gly Thr Leu Lys Lys Glu Gly Trp Arg Pro Arg Arg Thr Ile 405 410 415 Leu Phe Ala Ser Trp Asp Ala Glu Glu Phe Gly Leu Leu Gly Ser Thr 420 425 430 Glu Trp Ala Glu Glu Asn Ser Arg Leu Leu Gln Glu Arg Gly Val Ala 435 440 445 Tyr Ile Asn Ala Asp Ser Ser Ile Glu Gly Asn Tyr Thr Leu Arg Val 450 455 460 Asp Cys Thr Pro Leu Met Tyr Ser Leu Val His Asn Leu Thr Lys Glu 465 470 475 480 Leu Lys Ser Pro Asp Glu Gly Phe Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Glu Ser 485 490 495 Trp Thr Lys Lys Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ser Gly Met Pro Arg Ile 500 505 510 Ser Lys Leu Gly Ser Gly Asn Asp Phe Glu Val Phe Phe Gln Arg Leu 515 520 525 Gly Ile Ala Ser Gly Arg Ala Arg Tyr Thr Lys Asn Trp Glu Thr Asn 530 535 540 Lys Phe Ser Gly Tyr Pro Leu Tyr His Ser Val Tyr Glu Thr Tyr Glu 545 550 555 560 Leu Val Glu Lys Phe Tyr Asp Pro Met Phe Lys Tyr His Leu Thr Val 565 570 575 Ala Gln Val Arg Gly Gly Met Val Phe Glu Leu Ala Asn Ser Ile Val 580 585 590 Leu Pro Phe Asp Cys Arg Asp Tyr Ala Val Val Leu Arg Lys Tyr Ala 595 600 605 Asp Lys Ile Tyr Ser Ile Ser Met Lys His Pro Gln Glu Met Lys Thr 610 615 620 Tyr Ser Val Ser Phe Asp Ser Leu Phe Ser Ala Val Lys Asn Phe Thr 625 630 635 640 Glu Ile Ala Ser Lys Phe Ser Glu Arg Leu Gln Asp Phe Asp Lys Ser 645 650 655 Asn Pro Ile Val Leu Arg Met Met Asn Asp Gln Leu Met Phe Leu Glu 660 665 670 Arg Ala Phe Ile Asp Pro Leu Gly Leu Pro Asp Arg Pro Phe Tyr Arg 675 680 685 His Val Ile Tyr Ala Pro Ser Ser His Asn Lys Tyr Ala Gly Glu Ser 690 695 700 Phe Pro Gly Ile Tyr Asp Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val Asp 705 710 715 720 Pro Ser Lys Ala Trp Gly Glu Val Lys Arg Gln Ile Tyr Val Ala Ala 725 730 735 Phe Thr Val Gln Ala Ala Ala Glu Thr Leu Ser Glu Val Ala 740 745 750 <210> 78 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Met Lys Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Ala Leu Gln 1 5 10 15 Pro Gly Thr Ala Leu Leu Cys Tyr Ser Cys Lys Ala Gln Val Ser Asn 20 25 30 Glu Asp Cys Leu Gln Val Glu Asn Cys Thr Gln Leu Gly Glu Gln Cys 35 40 45 Trp Thr Ala Arg Ile Arg Ala Val Gly Leu Leu Thr Val Ile Ser Lys 50 55 60 Gly Cys Ser Leu Asn Cys Val Asp Asp Ser Gln Asp Tyr Tyr Val Gly 65 70 75 80 Lys Lys Asn Ile Thr Cys Cys Asp Thr Asp Leu Cys Asn Ala Ser Gly 85 90 95 Ala His Ala Leu Gln Pro Ala Ala Ala Ile Leu Ala Leu Leu Pro Ala 100 105 110 Leu Gly Leu Leu Leu Trp Gly Pro Gly Gln Leu 115 120 <210> 79 <211> 339 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Met Glu Ser Arg Lys Asp Ile Thr Asn Gln Glu Glu Leu Trp Lys Met 1 5 10 15 Lys Pro Arg Arg Asn Leu Glu Glu Asp Asp Tyr Leu His Lys Asp Thr 20 25 30 Gly Glu Thr Ser Met Leu Lys Arg Pro Val Leu Leu His Leu His Gln 35 40 45 Thr Ala His Ala Asp Glu Phe Asp Cys Pro Ser Glu Leu Gln His Thr 50 55 60 Gln Glu Leu Phe Pro Gln Trp His Leu Pro Ile Lys Ile Ala Ala Ile 65 70 75 80 Ile Ala Ser Leu Thr Phe Leu Tyr Thr Leu Leu Arg Glu Val Ile His 85 90 95 Pro Leu Ala Thr Ser His Gln Gln Tyr Phe Tyr Lys Ile Pro Ile Leu 100 105 110 Val Ile Asn Lys Val Leu Pro Met Val Ser Ile Thr Leu Leu Ala Leu 115 120 125 Val Tyr Leu Pro Gly Val Ile Ala Ala Ile Val Gln Leu His Asn Gly 130 135 140 Thr Lys Tyr Lys Lys Phe Pro His Trp Leu Asp Lys Trp Met Leu Thr 145 150 155 160 Arg Lys Gln Phe Gly Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ala Val Leu His Ala 165 170 175 Ile Tyr Ser Leu Ser Tyr Pro Met Arg Arg Ser Tyr Arg Tyr Lys Leu 180 185 190 Leu Asn Trp Ala Tyr Gln Gln Val Gln Gln Asn Lys Glu Asp Ala Trp 195 200 205 Ile Glu His Asp Val Trp Arg Met Glu Ile Tyr Val Ser Leu Gly Ile 210 215 220 Val Gly Leu Ala Ile Leu Ala Leu Leu Ala Val Thr Ser Ile Pro Ser 225 230 235 240 Val Ser Asp Ser Leu Thr Trp Arg Glu Phe His Tyr Ile Gln Ser Lys 245 250 255 Leu Gly Ile Val Ser Leu Leu Leu Gly Thr Ile His Ala Leu Ile Phe 260 265 270 Ala Trp Asn Lys Trp Ile Asp Ile Lys Gln Phe Val Trp Tyr Thr Pro 275 280 285 Pro Thr Phe Met Ile Ala Val Phe Leu Pro Ile Val Val Leu Ile Phe 290 295 300 Lys Ser Ile Leu Phe Leu Pro Cys Leu Arg Lys Lys Ile Leu Lys Ile 305 310 315 320 Arg His Gly Trp Glu Asp Val Thr Lys Ile Asn Lys Thr Glu Ile Cys 325 330 335 Ser Gln Leu <210> 80 <211> 386 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Met Arg Ala Ala Pro Leu Leu Leu Ala Arg Ala Ala Ser Leu Ser Leu 1 5 10 15 Gly Phe Leu Phe Leu Leu Phe Phe Trp Leu Asp Arg Ser Val Leu Ala 20 25 30 Lys Glu Leu Lys Phe Val Thr Leu Val Phe Arg His Gly Asp Arg Ser 35 40 45 Pro Ile Asp Thr Phe Pro Thr Asp Pro Ile Lys Glu Ser Ser Trp Pro 50 55 60 Gln Gly Phe Gly Gln Leu Thr Gln Leu Gly Met Glu Gln His Tyr Glu 65 70 75 80 Leu Gly Glu Tyr Ile Arg Lys Arg Tyr Arg Lys Phe Leu Asn Glu Ser 85 90 95 Tyr Lys His Glu Gln Val Tyr Ile Arg Ser Thr Asp Val Asp Arg Thr 100 105 110 Leu Met Ser Ala Met Thr Asn Leu Ala Ala Leu Phe Pro Pro Glu Gly 115 120 125 Val Ser Ile Trp Asn Pro Ile Leu Leu Trp Gln Pro Ile Pro Val His 130 135 140 Thr Val Pro Leu Ser Glu Asp Gln Leu Leu Tyr Leu Pro Phe Arg Asn 145 150 155 160 Cys Pro Arg Phe Gln Glu Leu Glu Ser Glu Thr Leu Lys Ser Glu Glu 165 170 175 Phe Gln Lys Arg Leu His Pro Tyr Lys Asp Phe Ile Ala Thr Leu Gly 180 185 190 Lys Leu Ser Gly Leu His Gly Gln Asp Leu Phe Gly Ile Trp Ser Lys 195 200 205 Val Tyr Asp Pro Leu Tyr Cys Glu Ser Val His Asn Phe Thr Leu Pro 210 215 220 Ser Trp Ala Thr Glu Asp Thr Met Thr Lys Leu Arg Glu Leu Ser Glu 225 230 235 240 Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Gly Ile His Lys Gln Lys Glu Lys Ser 245 250 255 Arg Leu Gln Gly Gly Val Leu Val Asn Glu Ile Leu Asn His Met Lys 260 265 270 Arg Ala Thr Gln Ile Pro Ser Tyr Lys Lys Leu Ile Met Tyr Ser Ala 275 280 285 His Asp Thr Thr Val Ser Gly Leu Gln Met Ala Leu Asp Val Tyr Asn 290 295 300 Gly Leu Leu Pro Pro Tyr Ala Ser Cys His Leu Thr Glu Leu Tyr Phe 305 310 315 320 Glu Lys Gly Glu Tyr Phe Val Glu Met Tyr Tyr Arg Asn Glu Thr Gln 325 330 335 His Glu Pro Tyr Pro Leu Met Leu Pro Gly Cys Ser Pro Ser Cys Pro 340 345 350 Leu Glu Arg Phe Ala Glu Leu Val Gly Pro Val Ile Pro Gln Asp Trp 355 360 365 Ser Thr Glu Cys Met Thr Thr Asn Ser His Gln Gly Thr Glu Asp Ser 370 375 380 Thr Asp 385 <210> 81 <211> 1255 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr 1 5 10 15 Val Leu Thr Val Val Thr Gly Ser Gly His Ala Ser Ser Thr Pro Gly 20 25 30 Gly Glu Lys Glu Thr Ser Ala Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Ser Ser 35 40 45 Thr Glu Lys Asn Ala Val Ser Met Thr Ser Ser Val Leu Ser Ser His 50 55 60 Ser Pro Gly Ser Gly Ser Ser Thr Thr Gln Gly Gln Asp Val Thr Leu 65 70 75 80 Ala Pro Ala Thr Glu Pro Ala Ser Gly Ser Ala Ala Thr Trp Gly Gln 85 90 95 Asp Val Thr Ser Val Pro Val Thr Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Thr 100 105 110 Pro Pro Ala His Asp Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn Lys Pro Ala Pro 115 120 125 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 130 135 140 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 145 150 155 160 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 165 170 175 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 180 185 190 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 195 200 205 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 210 215 220 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 225 230 235 240 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 245 250 255 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 260 265 270 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 275 280 285 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 290 295 300 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 305 310 315 320 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 325 330 335 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 340 345 350 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 355 360 365 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 370 375 380 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 385 390 395 400 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 405 410 415 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 420 425 430 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 435 440 445 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 450 455 460 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 465 470 475 480 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 485 490 495 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 500 505 510 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 515 520 525 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 530 535 540 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 545 550 555 560 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 565 570 575 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 580 585 590 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 595 600 605 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 610 615 620 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 625 630 635 640 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 645 650 655 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 660 665 670 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 675 680 685 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 690 695 700 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 705 710 715 720 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 725 730 735 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 740 745 750 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 755 760 765 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 770 775 780 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 785 790 795 800 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 805 810 815 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 820 825 830 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 835 840 845 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 850 855 860 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 865 870 875 880 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 885 890 895 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 900 905 910 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 915 920 925 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn 930 935 940 Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Ala Pro Pro Val His Asn Val Thr Ser 945 950 955 960 Ala Ser Gly Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ser Thr Leu Val His Asn Gly 965 970 975 Thr Ser Ala Arg Ala Thr Thr Thr Pro Ala Ser Lys Ser Thr Pro Phe 980 985 990 Ser Ile Pro Ser His His Ser Asp Thr Pro Thr Thr Leu Ala Ser His 995 1000 1005 Ser Thr Lys Thr Asp Ala Ser Ser Thr His His Ser Ser Val Pro 1010 1015 1020 Pro Leu Thr Ser Ser Asn His Ser Thr Ser Pro Gln Leu Ser Thr 1025 1030 1035 Gly Val Ser Phe Phe Phe Leu Ser Phe His Ile Ser Asn Leu Gln 1040 1045 1050 Phe Asn Ser Ser Leu Glu Asp Pro Ser Thr Asp Tyr Tyr Gln Glu 1055 1060 1065 Leu Gln Arg Asp Ile Ser Glu Met Phe Leu Gln Ile Tyr Lys Gln 1070 1075 1080 Gly Gly Phe Leu Gly Leu Ser Asn Ile Lys Phe Arg Pro Gly Ser 1085 1090 1095 Val Val Val Gln Leu Thr Leu Ala Phe Arg Glu Gly Thr Ile Asn 1100 1105 1110 Val His Asp Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys Thr Glu Ala 1115 1120 1125 Ala Ser Arg Tyr Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val Ser Asp 1130 1135 1140 Val Pro Phe Pro Phe Ser Ala Gln Ser Gly Ala Gly Val Pro Gly 1145 1150 1155 Trp Gly Ile Ala Leu Leu Val Leu Val Cys Val Leu Val Ala Leu 1160 1165 1170 Ala Ile Val Tyr Leu Ile Ala Leu Ala Val Cys Gln Cys Arg Arg 1175 1180 1185 Lys Asn Tyr Gly Gln Leu Asp Ile Phe Pro Ala Arg Asp Thr Tyr 1190 1195 1200 His Pro Met Ser Glu Tyr Pro Thr Tyr His Thr His Gly Arg Tyr 1205 1210 1215 Val Pro Pro Ser Ser Thr Asp Arg Ser Pro Tyr Glu Lys Val Ser 1220 1225 1230 Ala Gly Asn Gly Gly Ser Ser Leu Ser Tyr Thr Asn Pro Ala Val 1235 1240 1245 Ala Ala Ala Ser Ala Asn Leu 1250 1255 <210> 82 <211> 786 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 82 augugggugc cggucguguu ccugacccuc agcgugacgu ggaucggcgc cgcgccccug 60 auccugucgc ggaucguggg gggcugggag ugcgagaagc acagccagcc cuggcaggug 120 cugguggcca gccgcggccg ggccgugugc ggcggcgugc uggugcaccc ccagugggug 180 cugaccgccg cccacugcau ccggaacaag agcgucaucc ugcugggccg gcacagccug 240 uuccaccccg aggacaccgg ccagguguuc caggugagcc acagcuuccc ccacccccug 300 uacgacauga gccuccugaa gaaccgguuc cugcggcccg gcgacgacag cagccacgac 360 cugaugcugc ugcggcugag cgagcccgcc gagcugaccg acgccgugaa ggugauggac 420 cugccgaccc aggagcccgc ccugggcacc accugcuacg ccagcggcug ggggagcauc 480 gagcccgagg aguuccucac ccccaagaag cugcagugcg uggaccugca cgugaucagc 540 aacgacgugu gcgcccaggu gcacccccag aaggugacca aguucaugcu gugcgccggc 600 cgguggaccg gcggcaagag caccugcagc ggcgacagcg gcggcccccu ggucugcaac 660 ggcgugcugc agggcaucac cagcuggggc agcgagcccu gcgcccugcc cgagcgcccc 720 agccuguaca ccaagguggu gcacuaccgg aaguggauca aggacaccau cguggccaac 780 ccguga 786 <210> 83 <211> 2253 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 83 auguggaacc ugcuccacga gaccgacagc gccguggcga cggcccggcg cccgcggugg 60 cugugcgccg gcgcccuggu ccuggccggg ggcuucuucc ugcugggcuu ccuguucggc 120 ugguucauca agucgagcaa cgaggccacc aacaucaccc ccaagcacaa caugaaggcc 180 uuccucgacg agcugaaggc cgagaacauc aagaaguucc uguacaacuu cacccagauc 240 ccccaccugg ccgggaccga gcagaacuuc cagcuggcca agcagaucca gagccagugg 300 aaggaguucg gccuggacuc gguggagcug gcgcacuacg acgugcugcu cagcuacccc 360 aacaagaccc accccaacua caucagcauc aucaacgagg acggcaacga gaucuucaac 420 accagccugu ucgagccccc gccccccggc uacgagaacg ugucggacau cgugcccccc 480 uucagcgccu ucagcccgca gggcaugccc gagggggacc ugguguacgu gaacuacgcc 540 cggacggagg acuucuucaa gcuggagcgc gacaugaaga ucaacugcag cggcaagauc 600 gugaucgccc gguacggcaa gguguuccgg ggcaacaagg ugaagaacgc ccagcuggcc 660 ggggccaagg gcgugauccu guacucggac cccgccgacu acuucgcccc cggcgugaag 720 agcuaccccg acggcuggaa ccugcccggc gggggcgucc agcgcggcaa cauccucaac 780 cugaacggcg ccggcgaccc gcugaccccc ggguaccccg cgaacgagua cgccuaccgg 840 cggggcaucg ccgaggccgu gggccugccc agcauccccg ugcacccgau cggcuacuac 900 gacgcccaga agcugcugga gaagaugggc gggagcgccc cgcccgacuc gagcuggcgg 960 ggcagccuga aggugcccua caacgugggc cccggcuuca ccgggaacuu cucgacccag 1020 aaggugaaga ugcacaucca cagcaccaac gaggugaccc gcaucuacaa cgugaucggc 1080 acccugcggg gcgccgugga gcccgaccgg uacgugaucc ucggcgggca ccgcgacagc 1140 uggguguucg gcggcaucga cccccagagc ggcgccgccg ugguccacga gaucgugcgg 1200 ucguucggca cccugaagaa ggaggggugg cggccccgcc ggacgauccu guucgccagc 1260 ugggacgcgg aggaguucgg ccugcugggc agcaccgagu gggccgagga gaacagccgg 1320 cugcugcagg agcggggcgu ggccuacauc aacgccgacu cgagcaucga gggcaacuac 1380 acccuccgcg uggacugcac cccgcugaug uacagccugg ugcacaaccu gaccaaggag 1440 cugaagagcc ccgacgaggg guucgagggc aagucgcugu acgagagcug gaccaagaag 1500 agccccucgc ccgaguucag cggcaugccc cggaucagca agcugggcag cgggaacgac 1560 uucgaggugu ucuuccagcg gcugggcauc gccucgggcc gcgcccggua caccaagaac 1620 ugggagacga acaaguucag cggcuacccc cucuaccaca gcguguacga gaccuacgag 1680 cugguggaga aguucuacga ccccauguuc aaguaccacc ugaccguggc ccaggugcgg 1740 ggcgggaugg uguucgagcu ggccaacagc aucgugcugc ccuucgacug ccgcgacuac 1800 gccgucgugc ugcggaagua cgccgacaag aucuacucga ucagcaugaa gcacccccag 1860 gagaugaaga ccuacagcgu gagcuucgac ucgcuguuca gcgcggugaa gaacuucacc 1920 gagaucgcca gcaaguucuc ggagcggcuc caggacuucg acaagagcaa cccgaucgug 1980 cugcgcauga ugaacgacca gcugauguuc cuggagcggg ccuucaucga cccccugggc 2040 cugcccgacc ggcccuucua ccggcacgug aucuacgccc ccagcagcca caacaaguac 2100 gccggcgagu cguucccggg gaucuacgac gcccuguucg acaucgagag caagguggac 2160 cccagcaagg ccuggggcga ggugaagcgc cagaucuacg uggccgccuu caccgugcag 2220 gccgcggccg agacccugag cgagguggcc uga 2253 <210> 84 <211> 372 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 84 augaaggccg ugcugcucgc gcugcugaug gccggccugg cccugcagcc ggggaccgcc 60 cugcugugcu acagcugcaa ggcccagguc ucgaacgagg acugccugca gguggagaac 120 ugcacgcagc ugggcgagca gugcuggacc gcccggaucc gcgccguggg ccugcucacc 180 gugaucagca agggcugcag ccugaacugc guggacgaca gccaggacua cuacgugggc 240 aagaagaaca ucaccugcug cgacaccgac cugugcaacg ccagcggcgc ccacgcccug 300 cagcccgcgg ccgccauccu ggcccugcug cccgcccugg gccugcugcu cuggggcccc 360 ggccagcugu ga 372 <210> 85 <211> 1020 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 85 auggagagcc ggaaggacau caccaaccag gaggagcugu ggaagaugaa gccgcgccgg 60 aaccucgagg aggacgacua ccugcacaag gacacgggcg agaccucgau gcugaagcgg 120 cccgugcucc ugcaccugca ccagaccgcc cacgcggacg aguucgacug cccgagcgag 180 cuccagcaca cgcaggagcu guucccgcag uggcaccugc ccaucaagau cgccgccauc 240 aucgcgagcc ucaccuuccu guacacccug cuccgcgagg ucauccaccc gcuggccacg 300 ucgcaccagc aguacuucua caagaucccg auccugguga ucaacaaggu gcuccccaug 360 gucagcauca cccugcuggc ccucguguac cugccggggg ugaucgcggc caucguccag 420 cugcacaacg gcaccaagua caagaaguuc ccgcacuggc ucgacaagug gaugcugacg 480 cggaagcagu ucggccugcu cagcuucuuc uucgccgugc ugcacgcgau cuacucgcug 540 agcuacccca ugcggcgcag cuaccgguac aagcuccuga acugggccua ccagcaggug 600 cagcagaaca aggaggacgc cuggaucgag cacgacgucu ggcggaugga gaucuacgug 660 ucgcugggga ucgugggccu cgcgauccug gcccugcucg ccgucaccag caucccgagc 720 gugucggaca gccugaccug gcgcgaguuc cacuacaucc agagcaagcu gggcaucgug 780 ucgcuccugc uggggacgau ccacgcgcuc aucuucgccu ggaacaagug gaucgacauc 840 aagcaguucg ucugguacac cccgcccacc uucaugaucg ccguguuccu gccgaucgug 900 guccugaucu ucaagagcau ccucuuccug ccgugccugc ggaagaagau ccucaagauc 960 cggcacggcu gggaggacgu gacgaagauc aacaagaccg agaucugcag ccagcuguga 1020 <210> 86 <211> 555 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MUC1 Protein 5xVNTR <400> 86 Met Thr Pro Gly Thr Gln Ser Pro Phe Phe Leu Leu Leu Leu Leu Thr 1 5 10 15 Val Leu Thr Val Val Thr Gly Ser Gly His Ala Ser Ser Thr Pro Gly 20 25 30 Gly Glu Lys Glu Thr Ser Ala Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Ser Ser 35 40 45 Thr Glu Lys Asn Ala Val Ser Met Thr Ser Ser Val Leu Ser Ser His 50 55 60 Ser Pro Gly Ser Gly Ser Ser Thr Thr Gln Gly Gln Asp Val Thr Leu 65 70 75 80 Ala Pro Ala Thr Glu Pro Ala Ser Gly Ser Ala Ala Thr Trp Gly Gln 85 90 95 Asp Val Thr Ser Val Pro Val Thr Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Thr 100 105 110 Pro Pro Ala His Asp Val Thr Ser Ala Pro Asp Asn Lys Pro Ala Pro 115 120 125 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 130 135 140 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 145 150 155 160 Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His 165 170 175 Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala 180 185 190 Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr Arg Pro Ala Pro 195 200 205 Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser Ala Pro Asp Thr 210 215 220 Arg Pro Ala Pro Gly Ser Thr Ala Pro Pro Ala His Gly Val Thr Ser 225 230 235 240 Ala Pro Asp Asn Arg Pro Ala Leu Gly Ser Thr Ala Pro Pro Val His 245 250 255 Asn Val Thr Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ser Thr Leu 260 265 270 Val His Asn Gly Thr Ser Ala Arg Ala Thr Thr Thr Pro Ala Ser Lys 275 280 285 Ser Thr Pro Phe Ser Ile Pro Ser His His Ser Asp Thr Pro Thr Thr 290 295 300 Leu Ala Ser His Ser Thr Lys Thr Asp Ala Ser Ser Thr His His Ser 305 310 315 320 Ser Val Pro Pro Leu Thr Ser Ser Asn His Ser Thr Ser Pro Gln Leu 325 330 335 Ser Thr Gly Val Ser Phe Phe Phe Leu Ser Phe His Ile Ser Asn Leu 340 345 350 Gln Phe Asn Ser Ser Leu Glu Asp Pro Ser Thr Asp Tyr Tyr Gln Glu 355 360 365 Leu Gln Arg Asp Ile Ser Glu Met Phe Leu Gln Ile Tyr Lys Gln Gly 370 375 380 Gly Phe Leu Gly Leu Ser Asn Ile Lys Phe Arg Pro Gly Ser Val Val 385 390 395 400 Val Gln Leu Thr Leu Ala Phe Arg Glu Gly Thr Ile Asn Val His Asp 405 410 415 Val Glu Thr Gln Phe Asn Gln Tyr Lys Thr Glu Ala Ala Ser Arg Tyr 420 425 430 Asn Leu Thr Ile Ser Asp Val Ser Val Ser Asp Val Pro Phe Pro Phe 435 440 445 Ser Ala Gln Ser Gly Ala Gly Val Pro Gly Trp Gly Ile Ala Leu Leu 450 455 460 Val Leu Val Cys Val Leu Val Ala Leu Ala Ile Val Tyr Leu Ile Ala 465 470 475 480 Leu Ala Val Cys Gln Cys Arg Arg Lys Asn Tyr Gly Gln Leu Asp Ile 485 490 495 Phe Pro Ala Arg Asp Thr Tyr His Pro Met Ser Glu Tyr Pro Thr Tyr 500 505 510 His Thr His Gly Arg Tyr Val Pro Pro Ser Ser Thr Asp Arg Ser Pro 515 520 525 Tyr Glu Lys Val Ser Ala Gly Asn Gly Gly Ser Ser Leu Ser Tyr Thr 530 535 540 Asn Pro Ala Val Ala Ala Ala Ser Ala Asn Leu 545 550 555 <210> 87 <211> 3768 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 87 atgacaccgg gcacccagtc tcctttcttc ctgctgctgc tcctcacagt gcttacagtt 60 gttacaggtt ctggtcatgc aagctctacc ccaggtggag aaaaggagac ttcggctacc 120 cagagaagtt cagtgcccag ctctactgag aagaatgctg tgagtatgac cagcagcgta 180 ctctccagcc acagccccgg ttcaggctcc tccaccactc agggacagga tgtcactctg 240 gccccggcca cggaaccagc ttcaggttca gctgccacct ggggacagga tgtcacctcg 300 gtcccagtca ccaggccagc cctgggctcc accaccccgc cagcccacga tgtcacctca 360 gccccggaca acaagccagc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 420 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 480 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 540 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 600 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 660 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 720 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 780 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 840 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 900 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 960 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1020 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1080 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1140 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1200 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1260 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1320 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1380 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1440 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1500 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1560 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1620 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1680 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1740 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1800 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1860 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1920 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 1980 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2040 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2100 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2160 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2220 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2280 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2340 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2400 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2460 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2520 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2580 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2640 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2700 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg 2760 gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccatgg tgtcacctcg 2820 gccccggaca acaggcccgc cttgggctcc accgcccctc cagtccacaa tgtcacctcg 2880 gcctcaggct ctgcatcagg ctcagcttct actctggtgc acaacggcac ctctgccagg 2940 gctaccacaa ccccagccag caagagcact ccattctcaa ttcccagcca ccactctgat 3000 actcctacca cccttgccag ccatagcacc aagactgatg ccagtagcac tcaccatagc 3060 tcggtacctc ctctcacctc ctccaatcac agcacttctc cccagttgtc tactggggtc 3120 tctttctttt tcctgtcttt tcacatttca aacctccagt ttaattcctc tctggaagat 3180 cccagcaccg actactacca agagctgcag agagacattt ctgaaatgtt tttgcagatt 3240 tataaacaag ggggttttct gggcctctcc aatattaagt tcaggccagg atctgtggtg 3300 gtacaattga ctctggcctt ccgagaaggt accatcaatg tccacgacgt ggagacacag 3360 ttcaatcagt ataaaacgga agcagcctct cgatataacc tgacgatctc agacgtcagc 3420 gtgagtgatg tgccatttcc tttctctgcc cagtctgggg ctggggtgcc aggctggggc 3480 atcgcgctgc tggtgctggt ctgtgttctg gttgcgctgg ccattgtcta tctcattgcc 3540 ttggctgtct gtcagtgccg ccgaaagaac tacgggcagc tggacatctt tccagcccgg 3600 gatacctacc atcctatgag cgagtacccc acctaccaca cccatgggcg ctatgtgccc 3660 cctagcagta ccgatcgtag cccctatgag aaggtttctg caggtaacgg tggcagcagc 3720 ctctcttaca caaacccagc agtggcagcc gcttctgcca acttgtag 3768

Claims (48)

  1. 적어도 하나의 mRNA를 포함하며, 상기 적어도 하나의 mRNA는 하기 항원을 코딩하는 조성물:
    * STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원);
    * PSA (전립선 특이적 항원),
    * PSMA (전립선 특이적 막 항원),
    * PSCA (전립선 줄기 세포 항원);
    * PAP (전립선산 포스파타아제), 및
    * MUC1 (뮤신 1),
    또는 이의 절편이고, 상기 적어도 하나의 mRNA는 모노(mono)-, 바이(bi)- 또는 멀티시스트론(multicistronic)임.
  2. 제1항에 있어서, 상기 각각의 항원 또는 이의 절편은 분리(separate) mRNA에 의해 코딩되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 STEAP, PSA, PSMA, PSCA, PAP 및 MUC1 또는 이의 절편은 하나의 mRNA에 의해 코딩되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항원 또는 이의 절편은 적어도 하나의 바이시스트론(bicistronic) 및/또는 멀티시스트론(multicistronic) mRNA에 의해 코딩되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA, 바람직하게 적어도 두가지 mRNA, 더욱 바람직하게 적어도 세가지 mRNA, 더욱 더 바람직하게 적어도 네가지 mRNA, 더욱 더 바람직하게 적어도 다섯가지 mRNA, 또는 더욱 더 바람직하게 적어도 여섯가지 mRNA 각각은 SEQ ID NOs: 2, 5, 8, 11, 14, 17 또는 87의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열로부터 선택된 적어도 하나의 코딩 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 SEQ ID NOs: 2, 5, 8, 11, 14, 17 또는 87의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 변형된 mRNA, 특히 안정화된 mRNA인 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA의 코딩 영역의 G/C 함량은 야생형 mRNA의 코딩 영역의 G/C 함량에 비해 증가되며, 적어도 하나의 mRNA의 코딩된 아미노산 서열은 바람직하게 야생형 mRNA의 코딩된 아미노산 서열에 비해 변형되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 SEQ ID NOs: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 82, 83, 84, 또는 85의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 5' 캡 구조를 포함하며 및/또는 3' UTR은 바람직하게 10 내지 200개, 10 내지 100개, 40 내지 80개 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드의 폴리(A) 테일을 포함하며, 및/또는 3' UTR은 바람직하게 10 내지 200개, 10 내지 100개, 20 내지 70개, 20 내지 60개 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드의 폴리(C) 테일을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 하기 요소를 (5'에서 3' 방향으로) 포함하는 3' UTR을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물:
    a) 중앙(center)으로부터 유도된 3'-UTR, 바람직하게 SEQ ID NO: 69에 따르는, 인간 a-글로빈 유전자와 같은, a-글로빈 유전자의 3'UTR의 a-복합체-결합 부분:
    b) 바람직하게 10 내지 200개, 10 내지 100개, 40 내지 80개 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 이루어진 폴리(A) 테일, 및
    c) 바람직하게 10 내지 200개, 10 내지 100개, 20 내지 70개, 20 내지 60개 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 이루어진 폴리(C) 테일.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 각 mRNA는 STEAP(전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원), PSA(전립선 특이적 항원), PSMA(전립선 특이적 막 항원), PSCA(전립선 줄기 세포 항원), PAP(전립선산 포스파타아제) 및 MUC1(뮤신 1)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 다른 항원을 코딩하며, 바람직하게 상기 각 mRNA는 SEQ ID NO: 1, 4, 7, 10, 13 및 16에 따르는 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한, RNA 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 하기 요소를 (5'에서 3' 방향으로) 포함하는, 3'UTR을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물:
    a) 바람직하게 10 내지 200개, 10 내지 100개, 40 내지 80개 또는 50 내지 70개 아데노신 뉴클레오티드로 이루어진 폴리(A) 테일,
    b) 바람직하게 10 내지 200개, 10 내지 100개, 20 내지 70개, 20 내지 60개 또는 10 내지 40개 시토신 뉴클레오티드로 이루어진 폴리(C) 테일, 및
    c) 히스톤 스템-루프.
  14. 제13항에 있어서, 상기 히스톤 스템-루프는 전체적으로 또는 부분적으로 역 상보적인, 두 이웃 서열(neighbouring sequence)의 분자 내 염기쌍에 의해 형성되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 히스톤 스템-루프 내 루프는 3 내지 15개 염기, 바람직하게 3 내지 10개, 3 내지 8개, 3 내지 7개, 3 내지 6개, 4 내지 5개 또는 4개 염기의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히스톤 스템-루프 내 스템 영역을 형성하는 서열은 5 내지 10개 염기, 바람직하게 5 내지 8개 염기의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA의 3'UTR은 하기 화학식 (I) 또는 (II)로부터 선택된 적어도 하나의 히스톤 스템-루프를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물:
    화학식 (I) (스템 보더링(bordering) 요소가 없는 스템-루프 서열):
    Figure pct00019

    화학식 (II) (스템 보더링 요소가 있는 스템-루프 서열):
    Figure pct00020

    상기:
    스템1 또는 스템2 보더링 요소 N1-6은 1 내지 6개, 바람직하게 2 내지 6개, 더욱 바람직하게 2 내지 5개, 더욱 더 바람직하게 3 내지 5개, 가장 바람직하게 4 내지 5개 또는 5개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드, 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
    스템1[N0-2GN3-5]은 요소 스템2와 역 상보적 또는 부분적으로 역 상보적이며, 5 내지 7개 뉴클레오티드 사이의 연속적인 서열이며;
    상기 N0- 2은 0 내지 2개, 바람직하게 0 내지 1개, 더욱 바람직하게 1개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
    상기 N3-5 은 3 내지 5개, 바람직하게 4 내지 5개, 더욱 바람직하게 4N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 독립적으로 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며,
    상기 G는 구아노신 또는 이의 유사체이며, 스템2 내 이의 상보적인 뉴클레오티드 시티딘이 구아노신에 의해 교체되는 경우, 시티딘 또는 이의 유사체에 의해 선택적으로 교체될 수 있으며;
    루프 서열[N0- 4(U/T)N0 - 4]은 요소 스템1 및 스템2 사이에 위치하며, 3 내지 5개 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게 4개 뉴클레오티드의 연속적인 서열이며;
    상기 각 N0- 4은 0 내지 4개, 바람직하게 1 내지 3개, 더욱 바람직하게 1 내지 2개 N의 다른 연속적인 서열로부터 독립적이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며; 및
    상기 U/T는 우리딘, 또는 선택적으로 티미딘을 나타내며;
    스템2[N3-5CN0-2]는 요소 스템1에 역 상보적 또는 부분적으로 역 상보적이며, 5 내지 7개 뉴클레오티드 사이의 연속적인 서열이며;
    상기 N3- 5은 3 내지 5개, 바람직하게 4 내지 5개, 더욱 바람직하게 4개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 및 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적으로 선택되며;
    상기 N0-2는 0 내지 2개, 바람직하게 0 내지 1개, 더욱 바람직하게 1개 N의 연속적인 서열이며, 상기 각 N은 A, U, T, G 또는 C로부터 선택된 뉴클레오티드 또는 이의 뉴클레오티드 유사체로부터 서로 독립적이며; 및
    상기 C는 시티딘 또는 이의 유사체이며, 스템1 내 이의 상보적인 뉴클레오티드 구아노신이 시티딘에 의해 교체되는 경우 구아노신 또는 이의 유사체에 의해 선택적으로 교체될 수 있으며;
    상기
    스템1 및 스템2는 서로 염기쌍이 가능하며
    역 상보적 서열을 형성하며, 염기쌍이 스템1 및 스템2 사이에 일어날 수 있는 역 상보적 서열을 형성하거나, 또는
    불완전한 염기쌍이 스템1 및 스템2 사이에 일어날 수 있는 부분적으로 역 상보적 서열을 형성함.
  18. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 히스톤 스템-루프는 하기 화학식 (Ia) 또는 (IIa)의 적어도 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물:
    화학식 (Ia) (스템 보더링 요소가 없는 스템-루프 서열):
    Figure pct00021

    화학식 (IIa) (스템 보더링 요소가 있는 스템-루프 서열):
    Figure pct00022
  19. 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 SEQ ID Nos: 25 내지 66에 따르는 히스톤 스템 루프 뉴클레오티드 서열의 어느 하나, 바람직하게 SEQ ID NO. 70에 따르는 뉴클레오티드 서열 및 가장 바람직하게 SEQ ID NO. 71에 따르는 RNA 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 SEQ ID NOs: 19 내지 24에 따르는 어느 RNA 서열을 따르는 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 적어도 하나의 mRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 각 mRNA는 STEAP (전립선의 여섯가지 막관통 상피 항원(Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate)), PSA (전립선-특이적 항원(Prostate-Specific Antigen)), PSMA (전립선-특이적 막 항원(Prostate-Specific Membrane Antigen)), PSCA (전립선 줄기 세포 항원(Prostate Stem Cell Antigen)), PAP (전립선산 포스파타아제(Prostatic Acid Phosphatase)) 및 MUC1 (뮤신 1)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 다른 항원을 코딩하며, 각 mRNA는 SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 23 또는 24에 따르는 RNA 서열로부터 선택된 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 것을 특징으로 하는 조성물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며 SEQ ID NO: 19와 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며 SEQ ID NO: 20과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며 SEQ ID NO: 21과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 22와 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 SEQ ID NO: 23과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 및 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며 SEQ ID NO: 24와 동일하거나 적어도 80% 동일한 것을 특징으로 하는 조성물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 하나 또는 그 이상의 다가양이온과 함께, 바람직하게 프로타민 또는 올리고펙타민과 함께, 가장 바람직하게 프로타민과 함께 복합화(complexed)된 것을 특징으로 하는 조성물.
  24. 제23항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 다가양이온에 적어도 하나의 mRNA의 N/P 비율은 약 0.3 내지 4, 약 0.5 내지 2, 약 0.7 내지 2 및 약 0.7 내지 1.5의 범위를 포함하는, 약 0.1 내지 10의 범위 내인 것을 특징으로 하는 조성물.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 하나 또는 그 이상의 다가양이온과 복합화된 적어도 하나의 mRNA, 및 적어도 하나의 자유 mRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 상기 복합화된 mRNA는 자유 mRNA와 동일한 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 자유 mRNA에 대한 복합화된 mRNA의 분자비는 약 1:1의 비율을 포함하는, 약 0.001:1 내지 약 1:0.001의 분자비로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 추가적으로 적어도 하나의 어쥬번트를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 어쥬번트는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물:
    프로타민, 뉴클레올라인, 스페르민 또는 스페르미딘, 폴리-L-라이신(PLL), 폴리-아르기닌, 염기성 폴리펩타이드, HIV-결합 펩타이드, Tat, HIV-1 Tat(HIV), Tat-유도된 펩타이드, 페네트라틴을 포함하는 세포 투과성 펩타이드(CPPs), VP22 유도된 또는 유사 펩타이드, HSV VP22(단순 포진(Herpes simplex), Map, KALA 또는 단백질 수송 도메인(PTDs, PpT620, 프롤린-풍부 펩타이드, 아르기닌-풍부 펩타이드, 리신-풍부 펩타이드, MPG-펩타이드(들), Pep-1, L-올리고머, 칼시토닌 펩타이드(들), 안테나페디아(Antennapedia)-유도된 펩타이드(특히 드로소필라 안테나페디아(Drosophila antennapedia)로부터), pAntp, pIsl, FGF, 락토페린, 트랜스포탄, 부포린-2, Bac715-24, SynB, SynB(1), pVEC, hCT-유도된 펩타이드, SAP, 프로타민, 스페르민, 스페르미딘, 또는 히스톤을 포함하는 양이온성 또는 다가양이온성 펩타이드 또는 단백질, 키토산, 폴리브렌을 포함하는 양이온성 폴리사카라이드, 폴리에틸렌이민(PEI)을 포함하는 양이온성 폴리머, DOTMA: 1-(2,3-시올레일옥시)프로필-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(1-(2,3-sioleyloxy)propyl)-N,N,N-trimethylammonium chloride), DMRIE, 디-C14-아미딘, DOTIM, SAINT, DC-Chol, BGTC, CTAP, DOPC, DODAP, DOPE: 디올레일 포스파티딜에탄올-아민(Dioleyl phosphatidylethanol-amine), DOSPA, DODAB, DOIC, DMEPC, DOGS: 디옥타데실아미도글리실스페르민(Dioctadecylamidoglicylspermin), DIMRI: 디미리스토-옥시프로필 디메틸 하이드록시에틸 암모늄 브로마이드(Dimyristo-oxypropyl dimethyl hydroxyethyl ammonium bromide), DOTAP: 디올레오일옥시-3-(트리메틸암모니오)프로판(dioleoyloxy-3-(trimethylammonio)propane), DC-6-14: O,O-디테트라데카노일-N-(-트리메틸암모니오아세틸)디에타놀아민 클로라이드(O,O-ditetradecanoyl-N-( -trimethylammonioacetyl)diethanolamine chloride), CLIP1: rac- (2,3-디옥타데실옥시프로필)(2-하이드록시에틸) -디메틸암모늄 클로라이드(rac- (2,3-dioctadecyloxypropyl)(2-hydroxyethyl) -dimethylammonium chloride), CLIP6: rac- 2(2,3-디헥사데실옥시프로필-옥시메틸옥시)에틸 트리메틸암모늄(rac- 2(2,3-dihexadecyloxypropyl-oxymethyloxy)ethyl trimethylammonium), CLIP9: rac- 2(2,3-디헥사데실옥시프로필-옥시숙시닐옥시)에틸 -트리메틸암모늄(rac- 2(2,3-dihexadecyloxypropyl-oxysuccinyloxy)ethyl -trimethylammonium), 올리고펙타민(oligofectamine)을 포함하는 양이온성 지질, 또는 -아미노산-폴리머 또는 역전된 폴리아미드를 포함하는 변형된 폴리아미노산, PVP(폴리(N-에틸-4-비닐피리디니움 브로마이드))를 포함하는 변형된 폴리에틸렌, pDMAEMA(폴리(디메틸아미노에틸 메틸아크릴레이트))를 포함하는 변형된 아크릴레이트, pAMAM(폴리(아미도아민))을 포함하는 변형된 아미도아민, 디아민 말단(end) 변형된 1,4 부탄디올 디아크릴레이트-코-5-아미노-1-펜타놀 폴리머를 포함하는 변형된 폴리베타아미노에스터(PBAE), 폴리프로필아민 덴드리머 또는 pAMAM 기초의 덴드리머를 포함하는 덴드리머, PEI: 폴리(에틸렌이민), 폴리(프로필렌이민), 폴리알릴아민을 포함하는 폴리이민(들), 사이클로덱스트린 기초의 폴리머, 덱스트란 기초의 폴리머, 키토산 등을 포함하는 당 백본 기초의 폴리머, PMOXA-PDMS 코폴리머 등과 같은 실란 백본 기초의 폴리머, 상기 개시된 양이온성 폴리머의 선택된 하나 또는 그 이상의 양이온성 블록 및 하나 또는 그 이상의 친수성- 또는 소수성 블록(예를 들어 폴리에틸렌글리콜)의 조합으로 이루어진 블록폴리머를 포함하는 양이온성 또는 다가양이온성 폴리머;를 포함하는 양이온성 또는 다가양이온성 화합물
    또는
    하기 전체 화학식 (III): (Arg)l;(Lys)m;(His)n;(Orn)o;(Xaa)x을 갖는 하기 단백질 또는 펩타이드로부터 선택된 양이온성 또는 다가양이온성 단백질 또는 펩타이드, Arg, Lys, His 및 Orn의 전체 함량이 올리고펩타이드의 전체 아미노산의 적어도 50%를 나타내는 경우에, 상기 l + m + n +o + x = 8-15, 및 l, m, n 또는 o는 서로 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15로부터 선택된 어느 수 일 수 있으며; 및 Xaa는 Arg, Lys, His 또는 Orn을 제외한 천연(=자연적으로 발생) 또는 비-천연 아미노산으로부터 선택된 어느 아미노산일 수 있으며; Xaa의 전체 함량이 올리고펩타이드의 전체 아미노산의 50%를 초과하지 않는 경우에, X는 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택된 어느 수일 수 있으며; 또는
    화학식 (IV): GlXmGn을 갖는 핵산, 상기: G는 구아노신, 우라실 또는 구아노신 또는 우라실의 유사체이며; X는 구아노신, 우라실, 아데노신, 티미딘, 시토신 또는 상기 개시된 뉴클레오티드의 유사체이며; l은 1 내지 40의 정수이며, 상기 l = 1일 때 G는 구아노신 또는 이의 유사체이며, l > 1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 구아노신 또는 이의 유사체이며; m은 정수이며 적어도 3이며; 상기 m = 3일 때 X는 우라실 또는 이의 유사체이며, m > 3일 때 적어도 3개 연속적인 우라실 또는 우라실의 유사체가 나타나며; n은 1 내지 40의 정수이며, 상기 n=1일 때 G는 구아노신 또는 이의 유사체이며, n > 1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 구아노신 또는 이의 유사체이며;
    또는
    화학식 (V): ClXmCn을 갖는 핵산, 상기: C는 시토신, 우라실 또는 시토신 또는 우라실의 유사체이며; X는 구아노신, 우라실, 아데노신, 티미딘, 시토신 또는 상기 개시된 뉴클레오티드의 유사체이며; l은 1 내지 40의 정수이며, 상기 l = 1일 때 C는 시토신 또는 이의 유사체이며, l > 1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 시토신 또는 이의 유사체이며; m은 정수이며 적어도 3이며; 상기 m = 3일 때 X는 우라실 또는 이의 유사체이며, m > 3일 때 적어도 3개 연속적인 우라실 또는 우라실의 유사체가 나타나며; n은 1 내지 40의 정수이며, 상기 n=1일 때 C는 시토신 또는 이의 유사체이며, n > 1일 때 적어도 50%의 뉴클레오티드는 시토신 또는 이의 유사체임.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는 백신.
  31. 제30항에 있어서, 상기 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 조성물은 적응 면역 반응을 유도하는 것을 특징으로 하는 백신.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 백신은 추가적으로 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 백신.
  33. 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 적어도 하나의 mRNA는 개체에 개별적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 백신.
  34. 전립선암(PCa), 바람직하게 전립선 선암, 국소적으로 제한된, 국소적으로 진행된, 전이성, 거세-내성(호르몬-무반응), 전이성 거세-내성 및 비-전이성 거세-내성 전립선암, 및 이와 관련된 질병 또는 질환의 치료를 위한 백신으로써 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  35. 각 mRNA가 STEAP (전립선의 여섯개 막관통 상피 항원), PSA (전립선-특이적 항원), PSMA (전립선-특이적 막 항원), PSCA (전립선 줄기 세포 항원), PAP (전립선산 포스파타아제) 및 MUC1 (뮤신 1)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나의 항원을 코딩하는, 전립선암의 치료를 위한 여섯가지 mRNA의 조합의 용도.
  36. 제35항에 있어서, 상기
    하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며 SEQ ID NOs: 2, 3 또는 82의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함하며;
    하나의 mRNA는 PSMA를 코딩하며 SEQ ID NOs: 5, 6 또는 83의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함하며;
    하나의 mRNA는 PSCA를 코딩하며 SEQ ID NOs: 8, 9 또는 84의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함하며;
    하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며 SEQ ID NOs: 11, 12 또는 85의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함하며;
    하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며 SEQ ID NOs: 14 또는 15의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함하며;
    하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며 SEQ ID NOs: 17, 18 또는 87의 RNA 서열과 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하거나 이로 이루어진 코딩 서열을 포함;하는 것을 특징으로 하는 용도.
  37. 제35항 또는 제36항에 있어서, 상기 적어도 하나의 mRNA는 3' UTR 영역에 히스톤 스템-루프를 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  38. 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 각 mRNA는 SEQ ID Nos: 19 내지 24에 따르는 RNA 서열의 다른 하나와 동일하거나 적어도 80% 동일한 RNA 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
  39. 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 여섯가지 mRNA를 포함하며, 상기 하나의 mRNA는 PSA를 코딩하며, SEQ ID NO: 19와 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 PSMA을 코딩하며, SEQ ID NO: 20과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 PSCA을 코딩하며, SEQ ID NO: 21과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 STEAP를 코딩하며, SEQ ID NO: 22와 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 PAP를 코딩하며, SEQ ID NO: 23과 동일하거나 적어도 80% 동일하며, 하나의 mRNA는 MUC1을 코딩하며, SEQ ID NO: 24와 동일하거나 적어도 80% 동일한 것을 특징으로 하는 용도.
  40. 제35항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 여섯가지 mRNA 각각은 분리 투여되는 것을 특징으로 하는 용도.
  41. 제35항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA는 피하 주사에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 용도.
  42. 제35항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 치료는 공동-요법(co-therapy), 예를 들어 전립선 수술, 방사선 요법, 호르몬 요법 및/또는 화학 요법에 의해 지원되는 것을 특징으로 하는 용도.
  43. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 조성물 및/또는 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 백신, 및 용해를 위하여 선택적으로 액체 비히클(vehicle) 및 상기 활성 조성물 및/또는 상기 백신의 투여(administration) 및 복약(dosage)에 대한 정보가 있는 기술적 지도서를 포함하는 키트, 바람직하게 파트들(parts)의 키트.
  44. 제43항에 있어서, 상기 키트는 파트들의 키트이며, 키트의 각 파트는 바람직하게 제1항에서 정의된 항원으로부터 선택된 다른 항원을 코딩하는 적어도 하나의 mRNA, 상기 청구항의 조성물 또는 백신을 형성하는 파트들의 키트의 모든 파트들을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 키트는 여섯가지 mRNA를 포함하는 적어도 두가지 파트들을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  46. 제43항 내지 제45항에 있어서, 상기 모든 여섯가지 mRNA는 분리 파트들(separate parts)로 동결 건조된 형태로 제공되는 것을 특징으로 하는 키트.
  47. 제43항 내지 46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키트는 파트로써 링거-락테이트 용액을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  48. 제43항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키트는 여섯가지 파트들을 포함하며, 각 파트는 여섯가지 mRNA의 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
KR1020167006937A 2013-08-21 2014-08-21 전립선암 치료를 위한 조성물 및 백신 KR20160043103A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EPPCT/EP2013/002516 2013-08-21
EPPCT/EP2013/002515 2013-08-21
EP2013002516 2013-08-21
EP2013002515 2013-08-21
PCT/EP2014/002297 WO2015024664A1 (en) 2013-08-21 2014-08-21 Composition and vaccine for treating prostate cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20160043103A true KR20160043103A (ko) 2016-04-20

Family

ID=51398599

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167006937A KR20160043103A (ko) 2013-08-21 2014-08-21 전립선암 치료를 위한 조성물 및 백신

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20160166668A1 (ko)
JP (2) JP2016532451A (ko)
KR (1) KR20160043103A (ko)
CN (1) CN105517566A (ko)
AU (1) AU2014310930A1 (ko)
BR (1) BR112016000889A2 (ko)
CA (1) CA2915904A1 (ko)
MX (1) MX2016002153A (ko)
RU (1) RU2016109938A (ko)
SG (2) SG11201510751YA (ko)
WO (1) WO2015024664A1 (ko)

Families Citing this family (106)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
AU2012267578B2 (en) 2011-06-08 2017-04-20 Translate Bio, Inc. Cleavable lipids
WO2013120497A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
CA2897858A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of the pd-1 pathway
WO2015024665A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Curevac Gmbh Rabies vaccine
BR112016003358A2 (pt) 2013-08-21 2017-11-21 Curevac Ag método para aumentar a expressão de proteínas codificadas por rna
CA2915728A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Thomas Kramps Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine
CA2915730A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Karl-Josef Kallen A combination rsv/influenza a vaccine
CA2925021A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Curevac Ag Modified rna with decreased immunostimulatory properties
CA2927254C (en) 2013-12-30 2023-10-24 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
SG11201604198YA (en) 2013-12-30 2016-07-28 Curevac Ag Methods for rna analysis
WO2015149944A2 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Curevac Gmbh Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant
PT3155129T (pt) 2014-06-10 2019-05-16 Curevac Ag Método para potenciar a produção de arn
HUE060907T2 (hu) 2014-06-25 2023-04-28 Acuitas Therapeutics Inc Új lipidek és lipid nanorészecske formulációk nukleinsavak bevitelére
DE202015009961U1 (de) 2014-12-12 2022-01-25 Curevac Ag Artifizielle Nukleinsäuremoleküle für eine verbesserte Proteinexpression
US10653768B2 (en) 2015-04-13 2020-05-19 Curevac Real Estate Gmbh Method for producing RNA compositions
EP3283125B1 (en) 2015-04-17 2021-12-29 CureVac Real Estate GmbH Lyophilization of rna
DK3326641T3 (da) 2015-04-22 2019-09-30 Curevac Ag Rna-holdig sammensætning til behandling af tumorsygdomme
CN107889503A (zh) 2015-04-30 2018-04-06 库瑞瓦格股份公司 固定化的聚(n)聚合酶
WO2016180430A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Curevac Ag Method for producing rna
CN107810009A (zh) 2015-05-15 2018-03-16 库瑞瓦格股份公司 涉及施用至少一种mRNA构建体的初免‑加强方案
EP3297682B1 (en) 2015-05-20 2021-07-14 CureVac AG Dry powder composition comprising long-chain rna
EP3298142B1 (en) 2015-05-20 2021-07-14 CureVac AG Dry powder composition comprising long-chain rna
DK3303583T3 (da) 2015-05-29 2020-07-13 Curevac Real Estate Gmbh Fremgangsmåde til fremstilling og oprensning af rna, omfattende mindst et trin til tangential-flow-filtrering
EP3303575B1 (en) 2015-05-29 2022-03-16 CureVac AG Method for adding cap structures to rna using immobilized enzymes
CN105985984B (zh) * 2015-06-17 2018-10-02 深圳益世康宁生物科技有限公司 携带pap抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用
CN105087649B (zh) * 2015-06-17 2018-10-02 深圳益世康宁生物科技有限公司 携带muc-1抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用
WO2017004143A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2017009376A1 (en) 2015-07-13 2017-01-19 Curevac Ag Method of producing rna from circular dna and corresponding template dna
EP3736261B1 (en) 2015-09-17 2023-10-11 ModernaTX, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
EP3362576A1 (en) 2015-10-12 2018-08-22 CureVac AG Automated method for isolation, selection and/or detection of microorganisms or cells comprised in a solution
WO2017066782A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Hydrophobic mrna cap analogs
WO2017066789A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Mrna cap analogs with modified sugar
DK3362461T3 (da) 2015-10-16 2022-05-09 Modernatx Inc Mrna-cap-analoger med modificeret phosphatbinding
JP2018530587A (ja) 2015-10-16 2018-10-18 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． ｍＲＮＡキャップ類似体およびｍＲＮＡキャッピングの方法
WO2017066791A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Sugar substituted mrna cap analogs
CA3003055C (en) 2015-10-28 2023-08-01 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
EP3373965A1 (en) 2015-11-09 2018-09-19 CureVac AG Rotavirus vaccines
HUE057877T2 (hu) 2015-12-22 2022-06-28 Modernatx Inc Vegyületek és készítmények terápiás szerek intracelluláris bejuttatására
EP3701963A1 (en) 2015-12-22 2020-09-02 CureVac AG Method for producing rna molecule compositions
US11248223B2 (en) 2015-12-23 2022-02-15 Curevac Ag Method of RNA in vitro transcription using a buffer containing a dicarboxylic acid or tricarboxylic acid or a salt thereof
US11723967B2 (en) 2016-02-17 2023-08-15 CureVac SE Zika virus vaccine
US11920174B2 (en) 2016-03-03 2024-03-05 CureVac SE RNA analysis by total hydrolysis and quantification of released nucleosides
US11596699B2 (en) 2016-04-29 2023-03-07 CureVac SE RNA encoding an antibody
EP3452493A1 (en) 2016-05-04 2019-03-13 CureVac AG Nucleic acid molecules and uses thereof
EP3452101A2 (en) 2016-05-04 2019-03-13 CureVac AG Rna encoding a therapeutic protein
WO2017203008A1 (en) 2016-05-25 2017-11-30 Curevac Ag Novel biomarkers
KR20190034503A (ko) * 2016-06-03 2019-04-02 이투빅스 코포레이션 전립선암-연관 항원을 사용한 종양 백신접종을 위한 조성물 및 방법
US11478552B2 (en) 2016-06-09 2022-10-25 Curevac Ag Hybrid carriers for nucleic acid cargo
JP2019525901A (ja) 2016-06-14 2019-09-12 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 脂質ナノ粒子の安定化製剤
CN106119231A (zh) * 2016-06-24 2016-11-16 安徽未名细胞治疗有限公司 一种肿瘤抗原psa的ctl识别表位肽及其应用
JOP20190067A1 (ar) * 2016-09-30 2019-03-28 Janssen Pharmaceutica Nv طُرق تشخيص وعلاج سرطان البروستاتا النقيلي المقاوم للإخصاء والمقاوم أو الحساس لأبيراتيرون أسيتات-الهرمون القشري السكري
WO2018089540A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
US11279923B2 (en) 2016-11-28 2022-03-22 Curevac Ag Method for purifying RNA
WO2018102397A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
WO2018104540A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Curevac Ag Rnas for wound healing
JP2020501545A (ja) 2016-12-08 2020-01-23 キュアバック アーゲー 肝疾患の処置または予防のためのｒｎａ
EP3558355A2 (en) 2016-12-23 2019-10-30 CureVac AG Henipavirus vaccine
US11464847B2 (en) 2016-12-23 2022-10-11 Curevac Ag Lassa virus vaccine
WO2018115527A2 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Curevac Ag Mers coronavirus vaccine
EP3589308A1 (en) 2017-02-28 2020-01-08 Sanofi Therapeutic rna
ES2940259T3 (es) 2017-03-15 2023-05-04 Modernatx Inc Compuesto y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
US11969506B2 (en) 2017-03-15 2024-04-30 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
CN110914433A (zh) 2017-03-24 2020-03-24 库尔维科公司 编码crispr相关蛋白质的核酸及其用途
WO2018191657A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
CA3061326A1 (en) 2017-04-27 2018-11-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nucleoside-modified mrna-lipid nanoparticle lineage vaccine for hepatitis c virus
AU2018256877B2 (en) 2017-04-28 2022-06-02 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
US20210198200A1 (en) 2017-06-14 2021-07-01 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
WO2019008001A1 (en) 2017-07-04 2019-01-10 Curevac Ag NEW NUCLEIC ACID MOLECULES
JP7355731B2 (ja) 2017-08-16 2023-10-03 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質
WO2019036028A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICULAR FORMULATIONS
US11524932B2 (en) 2017-08-17 2022-12-13 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
US20200362382A1 (en) 2017-08-18 2020-11-19 Modernatx, Inc. Methods of preparing modified rna
WO2019038332A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Curevac Ag VACCINE AGAINST BUNYAVIRUS
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
JP2021501572A (ja) 2017-10-19 2021-01-21 キュアバック アーゲー 新規な人工核酸分子
TW201927288A (zh) * 2017-10-20 2019-07-16 德商拜恩迪克Ｒｎａ製藥有限公司 適用於治療之微脂體ｒｎａ配製物的製備及儲存
EP3707271A1 (en) 2017-11-08 2020-09-16 CureVac AG Rna sequence adaptation
EP3723796A1 (en) 2017-12-13 2020-10-21 CureVac AG Flavivirus vaccine
US11525158B2 (en) 2017-12-21 2022-12-13 CureVac SE Linear double stranded DNA coupled to a single support or a tag and methods for producing said linear double stranded DNA
US20220409536A1 (en) 2018-09-19 2022-12-29 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
JP2022501367A (ja) 2018-09-20 2022-01-06 モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX, Inc. 脂質ナノ粒子の調製及びその投与方法
JP2022519557A (ja) 2019-01-31 2022-03-24 モデルナティエックス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子の調製方法
WO2020160430A1 (en) 2019-01-31 2020-08-06 Modernatx, Inc. Vortex mixers and associated methods, systems, and apparatuses thereof
CU20210075A7 (es) * 2019-03-12 2022-04-07 BioNTech SE Arn terapéutico para el cáncer de próstata
US11576966B2 (en) 2020-02-04 2023-02-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
CA3178455A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid nanoparticle composition
WO2021204179A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for coronavirus
WO2021209897A1 (en) * 2020-04-13 2021-10-21 Janssen Biotech, Inc. Psma and steap1 vaccines and their uses
US20220331414A1 (en) 2020-06-30 2022-10-20 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
JP2023532768A (ja) * 2020-07-07 2023-07-31 バイオエヌテック エスエー Ｈｐｖ陽性癌の治療用ｒｎａ
EP4182297A1 (en) 2020-07-16 2023-05-24 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
KR20230054672A (ko) 2020-08-20 2023-04-25 쑤저우 아보젠 바이오사이언시스 컴퍼니 리미티드 지질 화합물 및 지질 나노입자 조성물
MX2023007574A (es) 2020-12-22 2023-09-29 CureVac SE "vacuna de arn contra variantes de sars-cov-2.
WO2022152141A2 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Polymer conjugated lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
WO2022152109A2 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
EP4204390A1 (en) 2021-05-24 2023-07-05 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
WO2023044343A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Acyclic lipids and methods of use thereof
CA3232386A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and methods of use thereof
AR127312A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Compuestos lipídicos ycomposiciones de nanopartículas lipídicas
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
CA3234127A1 (en) 2021-10-08 2023-04-13 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
WO2023122752A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Renagade Therapeutics Management Inc. Constrained lipids and methods of use thereof
WO2023196931A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and lipid nanoparticles (lnp) for the delivery of nucleic acids or peptides for use in vaccinating against infectious agents
WO2024037578A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Composition of lipid nanoparticles

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL125608A0 (en) * 1998-07-30 1999-03-12 Yeda Res & Dev Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines
TW201204410A (en) * 2004-04-01 2012-02-01 Oncothyreon Inc Mucinous glycoprotein (MUC-1) vaccine
JP4550115B2 (ja) * 2004-08-03 2010-09-22 ジーンアート・アクチエンゲゼルシャフト ＣｐＧ含量を変化させることにより遺伝子発現を調整する方法
ES2526344T3 (es) * 2005-06-28 2015-01-09 Oncothyreon Inc. Método para el tratamiento de pacientes con una vacuna de glicoproteína mucinosa (MUC-1)
WO2009046738A1 (en) * 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
WO2009046739A1 (en) * 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
GB2484058A (en) * 2009-12-01 2012-04-04 Uni Konstanz Prostate cancer DNA vaccine
WO2012019630A1 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
WO2012116715A1 (en) * 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012116714A1 (en) * 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients

Also Published As

Publication number Publication date
JP2018184422A (ja) 2018-11-22
RU2016109938A3 (ko) 2018-03-28
WO2015024664A1 (en) 2015-02-26
CN105517566A (zh) 2016-04-20
MX2016002153A (es) 2017-03-01
SG10201801433XA (en) 2018-04-27
RU2016109938A (ru) 2017-09-26
JP2016532451A (ja) 2016-10-20
CA2915904A1 (en) 2015-02-26
AU2014310930A1 (en) 2016-01-21
BR112016000889A2 (pt) 2017-12-12
SG11201510751YA (en) 2016-03-30
US20160166668A1 (en) 2016-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10434154B2 (en) Composition for treating prostate cancer (PCa)
KR20160043103A (ko) 전립선암 치료를 위한 조성물 및 백신
AU2014310932B2 (en) Composition and vaccine for treating lung cancer
AU2008309930B2 (en) Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (NSCLC)
EP3035955B1 (en) Composition and vaccine for treating lung cancer
EP2195015B1 (en) COMPOSITION FOR TREATING PROSTATE CANCER (PCa)
EP3035954A1 (en) Composition and vaccine for treating prostate cancer