JP7355731B2 - 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質 - Google Patents

脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質 Download PDF

Info

Publication number
JP7355731B2
JP7355731B2 JP2020508372A JP2020508372A JP7355731B2 JP 7355731 B2 JP7355731 B2 JP 7355731B2 JP 2020508372 A JP2020508372 A JP 2020508372A JP 2020508372 A JP2020508372 A JP 2020508372A JP 7355731 B2 JP7355731 B2 JP 7355731B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
independently
compound
compound according
alkyl
acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2020508372A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2020531418A5 (ja
JP2020531418A (ja
Inventor
シンヤオ ドゥ，
Original Assignee
アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド filed Critical アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド
Publication of JP2020531418A publication Critical patent/JP2020531418A/ja
Publication of JP2020531418A5 publication Critical patent/JP2020531418A5/ja
Priority to JP2023107156A priority Critical patent/JP2023138986A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7355731B2 publication Critical patent/JP7355731B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/16—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by amino or carboxyl groups, e.g. ethylenediamine-tetra-acetic acid, iminodiacetic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C219/00—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C219/02—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C219/04—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C219/06—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the hydroxy groups esterified by carboxylic acids having the esterifying carboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense

Description

本発明の実施形態は、中性脂質、コレステロールおよびポリマーコンジュゲート脂質などの他の脂質成分と組み合わせて使用することによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド、メッセンジャーＲＮＡ）等の治療剤の送達のための脂質ナノ粒子を形成することができる新規の脂質に一般的に関する。
生体系内で所望の応答に影響を及ぼす核酸の送達に関連して、多くの難題が存在する。核酸をベースとする治療薬は、莫大な可能性を有するが、この可能性を実現するためには、細胞または生物内の適当な部位への核酸のより有効な送達の必要性が依然としてある。治療用核酸として、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ＤＮＡザイム、プラスミド、免疫刺激核酸、アンタゴミール（ａｎｔａｇｏｍｉｒ）、抗ｍｉｒ、模倣体（ｍｉｍｉｃ）、スーパーｍｉｒ、およびアプタマーが挙げられる。ｍＲＮＡまたはプラスミドなどの一部の核酸は、例えば、タンパク質または酵素の欠乏に関係した疾患の処置に有用となるような、特定の細胞産物の発現を生じさせるために使用することができる。その系に常在性であるかどうかに関わらず、構築物を合成することによって、任意の選択されたタンパク質配列を生成することができるので、翻訳可能なヌクレオチド送達の治療適用は極めて幅広い。核酸の発現産物は、細胞または生物内で、タンパク質の既存レベルを増大させるか、欠損したもしくは非機能的バージョンのタンパク質を置き換えるか、または新規タンパク質および関連する機能性を導入することができる。
ｍｉＲＮＡ阻害剤などの一部の核酸は、例えば、タンパク質または酵素の欠乏に関係した疾患の処置に有用となるような、ｍｉＲＮＡにより調節される特定の細胞産物の発現を生じさせるために使用することができる。構築物を合成することによって、１つまたは複数のｍｉＲＮＡを阻害することができ、これがひいてはｍＲＮＡ産物の発現を調節することになるので、ｍｉＲＮＡ阻害の治療適用は極めて幅広い。内因性ｍｉＲＮＡの阻害は、特定のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡの群に関連する疾患を処置するための手段として、細胞または生物内で、その下流の標的内因性タンパク質の発現を増大させ、適切な機能を回復することができる。
他の核酸は、特定のｍＲＮＡの細胞内レベルを下方制御することができ、その結果、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）またはアンチセンスＲＮＡの相補的結合などのプロセスを介して対応するタンパク質の合成を下方制御することができる。オリゴヌクレオチド構築物は、標的ｍＲＮＡに向けられた任意のヌクレオチド配列を用いて合成することができるので、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびＲＮＡｉの治療適用もまた極めて幅広い。標的として、正常細胞由来のｍＲＮＡ、がんなどの疾患状態に関連するｍＲＮＡ、およびウイルスなどの感染物質のｍＲＮＡを挙げることができる。今日までに、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両モデルにおいて、同族ｍＲＮＡの分解を介して標的タンパク質を特異的に下方制御する能力を示している。加えて、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築物は、臨床研究において現在評価されている。
しかし、治療的状況におけるオリゴヌクレオチドの使用は、現在２つの問題に直面している。第１に、遊離ＲＮＡは、血漿中のヌクレアーゼ消化の影響を受けやすい。第２に、遊離ＲＮＡは、関連する翻訳機構が存在する細胞内区画へのアクセス取得能力が限られている。中性脂質、コレステロール、ＰＥＧ、ペグ化脂質、およびオリゴヌクレオチドなどの他の脂質成分と製剤化した脂質から形成された脂質ナノ粒子は、血漿中でのＲＮＡの分解を遮断し、オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを促進するために使用されてきた。
オリゴヌクレオチド送達のための改善された脂質および脂質ナノ粒子に対する必要性が依然として存在する。好ましくは、これらの脂質ナノ粒子は、薬物：脂質の最適比を提供し、血清中の分解およびクリアランスから核酸を保護し、全身または局所送達に対して適切であり、核酸の細胞内送達を提供する。加えて、これらの脂質－核酸粒子は、核酸の有効用量での患者の処置が、許容不可能な毒性および／または患者に対してリスクを伴わないよう、良好な耐容性を示し、十分な治療指数を提供するべきである。本発明の実施形態は、これらの、および関係する利点を提供する。
手短に言えば、本発明の実施形態は、単独で、あるいは他の脂質成分、例えば、中性脂質、荷電脂質、ステロイド（例えば、すべてのステロールを含む）および／もしくはこれらのアナログ、ならびに／またはポリマーコンジュゲート脂質などと組み合わせて使用することによって、治療剤の送達のための脂質ナノ粒子を形成することができる、その立体異性体、薬学的に許容される塩、プロドラッグまたは互変異性体を含めた、脂質化合物を提供する。ある場合には、脂質ナノ粒子を使用して、アンチセンスおよび／またはメッセンジャーＲＮＡなどの核酸を送達する。様々な疾患または状態、例えば、感染性の実体および／またはタンパク質の不全により引き起こされるものなどの処置のためにこのような脂質ナノ粒子を使用する方法もまた提供される。
一実施形態では、以下の構造（Ｉ）：
Figure 0007355731000001
 （式中、Ｒ３、Ｌ１、Ｌ２、Ｇ１、Ｇ２およびＧ３は本明細書で定義されるとおりである）
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、プロドラッグもしくは立体異性体が提供される。
前述の構造（Ｉ）の化合物の１つまたは複数と、治療剤とを含む医薬組成物もまた提供される。構造（Ｉ）の１つまたは複数の化合物を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）もまた提供される。一部の実施形態では、医薬組成物および／またはＬＮＰは、中性脂質、荷電脂質、ステロイドおよびポリマーコンジュゲート脂質から選択される１つまたは複数の構成成分をさらに含む。開示された組成物は、治療剤の送達のための脂質ナノ粒子の形成に有用である。
他の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療剤を投与するための方法であって、構造（Ｉ）の化合物および治療剤を含む脂質ナノ粒子の組成物を調製することと、患者に組成物を送達することとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、それを必要とする患者に治療剤を投与するための方法は、構造（Ｉ）の１つまたは複数の化合物および治療剤を含むＬＮＰを患者に投与することを含む。
本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳述された説明を参照して明らかとなる。
以下の説明では、本発明の様々な実施形態の十分な理解が得られるよう、ある特定の詳細が記載されている。しかし、当業者であれば、これらの詳細なしに本発明の実施形態は実施され得ることを理解するであろう。
本発明の実施形態は、哺乳動物の細胞への、核酸などの活性薬剤または治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ送達のために脂質ナノ粒子において使用した場合に利点をもたらす新規の脂質の発見に部分的に基づく。特に、本発明の実施形態は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、核酸の活性の増加および組成物の耐容性の改善を提供し、以前記載された核酸－脂質ナノ粒子組成物と比較した場合、治療指数の顕著な増加をもたらす、本明細書に記載の新規の脂質の１つまたは複数を含む核酸－脂質ナノ粒子組成物を提供する。例えば、実施形態は、構造（Ｉ）の１つまたは複数の化合物を含む脂質ナノ粒子を提供する。
特定の実施形態では、本発明は、ｍＲＮＡおよび／または他のオリゴヌクレオチドのｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ送達のための改善された組成物の製剤化を可能にする新規の脂質を提供する。一部の実施形態では、これらの改善された脂質ナノ粒子組成物は、ｍＲＮＡによってコードされているタンパク質の発現に有用である。他の実施形態では、これらの改善された脂質ナノ粒子組成物は、１つの標的ｍＲＮＡまたはいくつかのｍＲＮＡを調節する１つの特定のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡの群を標的とするｍｉＲＮＡ阻害剤を送達することによって、内因性タンパク質の発現を上方制御するのに有用である。他の実施形態では、これらの改善された脂質ナノ粒子組成物は、標的遺伝子のタンパク質レベルおよび／またはｍＲＮＡレベルを下方制御（例えば、サイレンシング）するのに有用である。いくつかの他の実施形態では、脂質ナノ粒子はまた、導入遺伝子の発現のためのｍＲＮＡおよびプラスミドの送達にも有用である。さらなる他の実施形態では、脂質ナノ粒子組成物は、タンパク質の発現に起因する薬理効果、例えば、適切なエリスロポエチンｍＲＮＡの送達を介した赤血球産生の増加、または適切な抗原もしくは抗体をコードしているｍＲＮＡの送達を介した感染からの保護などを誘発するのに有用である。
本発明の実施形態の脂質ナノ粒子および組成物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で、封入されたまたは付随する（例えば、複合体形成された）治療剤、例えば、核酸を細胞に送達することを含めて、様々な目的に使用することができる。したがって、本発明の実施形態は、被験体を適切な治療剤を封入または付随している脂質ナノ粒子と接触させることによって、それを必要とする被験体において、疾患または障害を処置または予防する方法であって、脂質ナノ粒子が、本明細書に記載の新規の脂質の１つまたは複数を含む方法を提供する。
本明細書に記載されているように、本発明の脂質ナノ粒子の実施形態は、例えば、ｍＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、プラスミドＤＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ阻害剤（アンタゴミール／抗ｍｉｒ）、メッセンジャー－ＲＮＡ－干渉性相補性ＲＮＡ（ｍｉｃＲＮＡ）、ＤＮＡ、多価ＲＮＡ、ダイサー基質ＲＮＡ、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）などを含めた、核酸の送達に特に有用である。したがって、本発明の実施形態の脂質ナノ粒子および組成物は、細胞を、本明細書に記載の１つまたは複数の新規の脂質を含む脂質ナノ粒子と接触させることによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で所望のタンパク質の発現を誘発させるために使用することができ、脂質ナノ粒子は、所望のタンパク質を生成する（例えば、所望のタンパク質をコードしているメッセンジャーＲＮＡまたはプラスミド）、またはｍＲＮＡの発現を終結させるプロセスを阻害する（例えば、ｍｉＲＮＡ阻害剤）ために発現される核酸を封入もしくは付随している。代わりに、本発明の実施形態の脂質ナノ粒子および組成物は、細胞を、本明細書に記載の１つまたは複数の新規の脂質（例えば、構造（Ｉ）の化合物）を含む脂質ナノ粒子と接触させることによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で標的遺伝子およびタンパク質の発現を低減するために使用することができ、脂質ナノ粒子は、標的遺伝子の発現を減少させる核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ））を封入または付随している。本発明の実施形態の脂質ナノ粒子および組成物はまた、異なる核酸（例えば、適切な遺伝子修飾酵素をコードするｍＲＮＡおよび宿主ゲノムへの組込みのためのＤＮＡセグメント（複数可））の共局在化を必要とする作用を提供するために有用であり得るなど、異なる核酸（例えば、ｍＲＮＡおよびプラスミドＤＮＡ）を別々にまたは組み合わせて共送達（ｃｏ－ｄｅｌｉｖｅｒｙ）するために使用することができる。
本発明の実施形態での使用のための核酸は、任意の利用可能な技術に従い調製することができる。ｍＲＮＡに関して、調製の主要な方法は、これに限定されないが、長い配列に特異的なｍＲＮＡを生成する最も効率的な方法を現在代表する酵素合成（ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写とも呼ばれる）である。ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写は、目的の遺伝子をコードしている下流の配列に連結している上流バクテリオファージプロモーター配列（例えば、Ｔ７、Ｔ３およびＳＰ６大腸菌ファージからのものを含むが、これらに限定されない）で構成される操作されたＤＮＡテンプレートからのＲＮＡ分子のテンプレート指示合成のプロセスを記載する。テンプレートＤＮＡは、これらに限定されないが、プラスミドＤＮＡおよびポリメラーゼ連鎖反応増幅を含めた当技術分野で周知である適当な技術を用いて、いくつかの供給源からｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のために調製することができる（Ｌｉｎｐｉｎｓｅｌ， Ｊ． ＬおよびＣｏｎｎ， Ｇ． Ｌ．、Ｇｅｎｅｒａｌ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ ｔｅｍｐｌａｔｅ、ならびにＢｏｗｍａｎ， Ｊ．Ｃ．、Ａｚｉｚｉ， Ｂ．、Ｌｅｎｚ， Ｔ．Ｋ．、Ｒａｙ， Ｐ．およびＷｉｌｌｉａｍｓ， Ｌ．Ｄ．、ＲＮＡ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ＲＮＡ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ＰＡＧＥ ｉｎ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ、９４１巻、Ｃｏｎｎ Ｇ．Ｌ．（編）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ． Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、２０１２年を参照されたい）。
ＲＮＡの転写は、生じたｍＲＮＡ転写物の起こり得る分解を最小限に抑えながら、ポリメラーゼ活性を支持する条件下で、対応するＲＮＡポリメラーゼならびにアデノシン、グアノシン、ウリジンおよびシチジンのリボヌクレオシド三リン酸（ｒＮＴＰ）の存在下で線状化ＤＮＡテンプレートを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで起こる。ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写は、これらに限定されないが、ＲｉｂｏＭａｘ Ｌａｒｇｅ Ｓｃａｌｅ ＲＮＡ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、ＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含めた様々な市販のキットを使用して、ならびにＲＮＡポリメラーゼおよびｒＮＴＰを含めた市販の試薬を用いて実施することができる。ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のための方法は当技術分野で周知である。（例えば、これらのすべてが参照により本明細書に組み込まれている、Ｌｏｓｉｃｋ， Ｒ．、１９７２年、Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ， Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ、４１巻、４０９～４６頁；Ｋａｍａｋａｋａ， Ｒ． Ｔ．およびＫｒａｕｓ， Ｗ． Ｌ．、２００１年、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２：１１．６：１１．６．１～１１．６．１７；Ｂｅｃｋｅｒｔ， Ｂ．およびＭａｓｑｕｉｄａ， Ｂ．、（２０１０年）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ＲＮＡ ｂｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ＲＮＡ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、７０３巻（Ｎｅｉｌｓｏｎ， Ｈ．編）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ． Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、２０１０年；Ｂｒｕｎｅｌｌｅ， Ｊ．Ｌ．およびＧｒｅｅｎ， Ｒ．、２０１３年、第５章Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｐｌａｓｍｉｄ ｏｒ ＰＣＲ－ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ＤＮＡ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、５３０巻、１０１～１１４頁を参照されたい）。
次いで、所望の、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡは、転写または関連する反応の所望しない構成成分（取り込まれなかったｒＮＴＰ、タンパク質酵素、塩、短いＲＮＡオリゴなどを含む）から精製される。ｍＲＮＡ転写物の単離のための技術は当技術分野で周知である。周知の手順として、一価カチオンまたは塩化リチウムの存在下での、いずれかのアルコール（エタノール、イソプロパノール）によるフェノール／クロロホルム抽出または沈殿が挙げられる。使用することができる精製手順の追加の、非限定的例として、サイズ排除クロマトグラフィー（Ｌｕｋａｖｓｋｙ， Ｐ．Ｊ．およびＰｕｇｌｉｓｉ， Ｊ．Ｄ．、２００４年、Ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ－ｆｒｅｅ ＲＮＡ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、ＲＮＡ、１０巻、８８９～８９３頁）、シリカベースの親和性クロマトグラフィーおよびポリアクリルアミドゲル電気泳動（Ｂｏｗｍａｎ， Ｊ．Ｃ．、Ａｚｉｚｉ， Ｂ．、Ｌｅｎｚ， Ｔ．Ｋ．、Ｒａｙ， Ｐ．およびＷｉｌｌｉａｍｓ， Ｌ．Ｄ．、ＲＮＡ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ＲＮＡ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ＰＡＧＥ ｉｎ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ、９４１巻、Ｃｏｎｎ Ｇ．Ｌ．（編）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ． Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、２０１２年）が挙げられる。精製は、これらに限定されないが、ＳＶ Ｔｏｔａｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｃｌｅａｎｕｐ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｎｏｒｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｋ）を含めた、様々な市販のキットを使用して実施することができる。
さらに、逆転写は多量のｍＲＮＡを産生することができるが、その産物は、全長ｍＲＮＡの調製物から除去する必要があり得る所望しないポリメラーゼ活性と関連するいくつかの異常なＲＮＡ不純物を含有する可能性がある。これらは、不完全な転写開始ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ活性、ＲＮＡテンプレートからの、ＲＮＡにプライミングされた転写、および自己相補性３’伸長により生成される二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）から生じる短いＲＮＡを含む。ｄｓＲＮＡ構造を有するこれらの混入物は、特定の核酸構造を認識し、強力な免疫応答を誘発するように機能する真核細胞内の様々な生得的免疫センサーとの相互作用を介して所望しない免疫刺激活性をもたらす可能性があることが実証されている。ひいてはこれによって、細胞の生得的免疫応答の間、タンパク質合成は減少するため、ｍＲＮＡ翻訳が劇的に減少する可能性がある。したがって、これに限定されないが、拡張可能なＨＰＬＣ精製を含めた、これらのｄｓＲＮＡ混入物を除去するための追加的技術が開発され、当技術分野で公知である（例えば、Ｋａｒｉｋｏ， Ｋ．、Ｍｕｒａｍａｔｓｕ， Ｈ．、Ｌｕｄｗｉｇ， Ｊ．およびＷｅｉｓｓｍａｎ， Ｄ．、２０１１年、Ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍＲＮＡ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ： ＨＰＬＣ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ， ｐｒｏｔｅｉｎ－ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｍＲＮＡ、Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ、３９巻、ｅｌ４２；Ｗｅｉｓｓｍａｎ， Ｄ．、Ｐａｒｄｉ， Ｎ．、Ｍｕｒａｍａｔｓｕ， Ｈ．およびＫａｒｉｋｏ， Ｋ．、ＨＰＬＣ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｌｏｎｇ ＲＮＡ ｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、９６９巻（Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ， Ｐ．Ｈ．編）、２０１３年を参照されたい）。ＨＰＬＣ精製されたｍＲＮＡは、特に初代細胞およびｉｎ ｖｉｖｏではるかにより高いレベルで翻訳されることが報告されている。
ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡの特定の特性を変化させ、その有用性を改善するために使用されるかなり様々な修飾が当技術分野で記載されている。これらは、ｍＲＮＡの５’および３’末端に対する修飾を含むが、これらに限定されない。内因性真核生物のｍＲＮＡは通常、ｍＲＮＡキャップ結合タンパク質（ＣＢＰ）の結合の媒介に重要な役割を果たす（これが、ひいては、細胞内のＲＮＡ安定性およびｍＲＮＡ翻訳の効率の増強に関与する）成熟分子の５’－末端上にキャップ構造を含有する。したがって、最高レベルのタンパク質発現が、キャッピングされたｍＲＮＡ転写物を用いて達成される。５’－キャップは、最も５’側のヌクレオチドとグアニンヌクレオチドとの間の５’－５’－トリホスフェート結合を含有する。コンジュゲートグアニンヌクレオチドはＮ７位でメチル化されている。追加的修飾は、２’－ヒドロキシル基上の最も５’側のヌクレオチドおよび最も５’側から２番目のヌクレオチドのメチル化を含む。
ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写された合成ｍＲＮＡの５’－キャップを生成するために、複数の異なるキャップ構造を使用することができる。合成ｍＲＮＡの５’－キャッピングは、化学キャップアナログとの共転写により実施することができる（すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写中のキャッピング）。例えば、アンチリバースキャップアナログ（Ａｎｔｉ－Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｃａｐ Ａｎａｌｏｇ）（ＡＲＣＡ）キャップは、１つのグアニンがＮ７メチル基ならびに３’－Ｏ－メチル基を含有する５’－５’－トリホスフェートグアニン－グアニン結合を含有する。しかし、転写物の２０％までが、この共転写プロセス中にキャッピングされないまま残り、合成キャップアナログは真正の細胞ｍＲＮＡの５’－キャップ構造と同一ではなくなり、翻訳可能性および細胞安定性を潜在的に減少させる。代わりに、合成ｍＲＮＡ分子はまた、転写後に酵素によりキャッピングされてもよい。これらは、キャップ結合タンパク質の結合が増強し、半減期が増加し、５’エンドヌクレアーゼに対する感受性が減少し、および／または５’キャップ除去が減少した内因性５’－キャップを構造的または機能的にさらに厳密に模倣するより真正の５’－キャップ構造を生成することができる。ｍＲＮＡ安定性および翻訳可能性を増強するために、多くの合成５’－キャップアナログが開発され、当技術分野で公知である（例えば、Ｇｒｕｄｚｉｅｎ－Ｎｏｇａｌｓｋａ， Ｅ．、Ｋｏｗａｌｓｋａ， Ｊ．、Ｓｕ， Ｗ．、Ｋｕｈｎ， Ａ．Ｎ．、Ｓｌｅｐｅｎｋｏｖ， Ｓ．Ｖ．、Ｄａｒｙｎｋｉｅｗｉｃｚ， Ｅ．、Ｓａｈｉｎ， Ｕ．、Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ， Ｊ．およびＲｈｏａｄｓ， Ｒ．Ｅ．、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｍＲＮＡｓ ｗｉｔｈ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、９６９巻（Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ， Ｐ．Ｈ．編）、２０１３年を参照されたい）。
３’－末端において、アデニンヌクレオチドの長鎖（ポリＡテール）は通常、ＲＮＡプロセシング中にｍＲＮＡ分子に付加される。転写直後に、転写物の３’末端は切断されて、３’ヒドロキシルを解放し、これに対して、ポリアデニル化と呼ばれるプロセスにおいて、ポリＡポリメラーゼはアデニンヌクレオチド鎖をＲＮＡに付加する。ポリＡテールは、ｍＲＮＡの翻訳効率と安定性の両方を増強することが広く示されている（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ， Ｐ．およびＲｏｓｓ， Ｊ．、１９８９年、Ｐｏｌｙ （Ａ）、ｐｏｌｙ （Ａ） ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍＲＮＡ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏ Ｓｃｉ、１４巻、３７３～３７７頁；Ｇｕｈａｎｉｙｏｇｉ， Ｊ．およびＢｒｅｗｅｒ， Ｇ．、２００１年、Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍＲＮＡ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ、Ｇｅｎｅ、２６５巻、１１～２３頁；Ｄｒｅｙｆｕｓ， Ｍ．およびＲｅｇｎｉｅｒ， Ｐ．、２００２年、Ｔｈｅ ｐｏｌｙ （Ａ） ｔａｉｌ ｏｆ ｍＲＮＡｓ： Ｂｏｄｙｇｕａｒｄ ｉｎ ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ， ｓｃａｖｅｎｇｅｒ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ、Ｃｅｌｌ、１１１巻、６１１～６１３頁を参照されたい）。
ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡのポリ（Ａ）テーリングは、これらに限定されないが、ポリ（Ｔ）トラクト（ｔｒａｃｔ）のＤＮＡテンプレートへのクローニングまたはポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用した転写後の付加を含めた様々な手法を使用して達成することができる。最初のケースは、ポリ（Ｔ）トラクトの大きさに応じて、定義された長さのポリ（Ａ）テールを有するｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写を可能にするが、テンプレートの追加操作を必要とする。後者のケースは、アデニン残基の、ＲＮＡの３’末端への組込みを触媒するポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用して、ポリ（Ａ）テールをｉｎ ｖｉｔｒｏで転写したｍＲＮＡに酵素的に付加することを含み、ＤＮＡテンプレートの追加操作は必要ないが、不均一な長さのポリ（Ａ）テールを有するｍＲＮＡが結果として生じる。５’－キャッピングおよび３’－ポリ（Ａ）テーリングは、これらに限定されないが、ポリ（Ａ）ポリメラーゼテーリングキット（ＥｐｉＣｅｎｔｅｒ）、ｍＭＥＳＳＡＧＥ ｍＭＡＣＨＩＮＥ Ｔ７ Ｕｌｔｒａキットおよびポリ（Ａ）テーリングキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含めた様々な市販のキットを使用して、ならびに市販の試薬、様々なＡＲＣＡキャップ、ポリ（Ａ）ポリメラーゼなどを用いて実施することができる。
５’キャップおよび３’ポリアデニル化に加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写物の他の修飾が、翻訳の効率および安定性に関係するような利益を提供することが報告されている。病原性ＤＮＡおよびＲＮＡは、真核細胞内の様々なセンサーにより認識され、強力な生得的免疫応答を引き起こすことができることが当技術分野で周知されている。天然の供給源由来の大部分の核酸は修飾ヌクレオシドを含有するので、病原性ＤＮＡおよびＲＮＡと、自己ＤＮＡおよびＲＮＡとを判別する能力は、少なくとも部分的に構造およびヌクレオシド修飾に基づくことが示されている。対照的に、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成したＲＮＡは、これらの修飾を欠き、したがって免疫刺激性になり、これが、ひいては、上記に概説されているように有効なｍＲＮＡ翻訳を阻害する可能性がある。ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡへの修飾ヌクレオシドの導入を使用して、ＲＮＡセンサーの認識および活性化を防止し、したがってこの所望しない免疫刺激活性を軽減し、翻訳能力を増強することができる（例えば、Ｋａｒｉｋｏ， Ｋ．およびＷｅｉｓｓｍａｎ， Ｄ．、２００７年、Ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＲＮＡ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＲＮＡ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ、１０巻、５２３～５３２頁；Ｐａｒｄｉ， Ｎ．、Ｍｕｒａｍａｔｓｕ， Ｈ．、Ｗｅｉｓｓｍａｎ， Ｄ．、Ｋａｒｉｋｏ， Ｋ．、Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ ＲＮＡ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、９６９巻（Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ， Ｐ．Ｈ．編）、２０１３年；Ｋａｒｉｋｏ， Ｋ．、Ｍｕｒａｍａｔｓｕ， Ｈ．、Ｗｅｌｓｈ， Ｆ．Ａ．、Ｌｕｄｗｉｇ， Ｊ．、Ｋａｔｏ， Ｈ．、Ａｋｉｒａ， Ｓ．、Ｗｅｉｓｓｍａｎ， Ｄ．、２００８年、Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｕｒｉｄｉｎｅ Ｉｎｔｏ ｍＲＮＡ Ｙｉｅｌｄｓ Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｎｏｎｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ Ｖｅｃｔｏｒ Ｗｉｔｈ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃａｐａｃｉｔｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、１６巻、１８３３～１８４０頁を参照されたい）。修飾ＲＮＡの合成に使用される修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当技術分野で公知の一般的方法および手順を使用して、調製、モニタリングおよび利用することができる。単独でまたは他の修飾ヌクレオシドと組み合わせて、ある程度ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡに取り込むことができる多種多様のヌクレオシド修飾が利用可能である（例えば、ＵＳ２０１２／０２５１６１８を参照されたい）。ヌクレオシド修飾されたｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ合成は、同時に翻訳能力を増強しながら、免疫センサーを活性化する能力を減少させることが報告されている。
翻訳可能性および安定性に関する利益を提供するために修飾することができるｍＲＮＡの他の構成成分として、５’および３’の非翻訳領域（ＵＴＲ）が挙げられる。両方ともまたは独立して、ＵＴＲ（好ましい５’および３’ＵＴＲは細胞またはウイルスＲＮＡから得ることができる）を最適化することは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写されたｍＲＮＡのｍＲＮＡ安定性および翻訳効率を増加させることが示されている（例えば、Ｐａｒｄｉ， Ｎ．、Ｍｕｒａｍａｔｓｕ， Ｈ．、Ｗｅｉｓｓｍａｎ， Ｄ．、Ｋａｒｉｋｏ， Ｋ．、Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ ＲＮＡ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、９６９巻（Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ， Ｐ．Ｈ．編）、２０１３年を参照されたい）。
ｍＲＮＡに加えて、他の核酸ペイロードを本発明の実施形態に使用することができる。オリゴヌクレオチドに対して、調製の方法として、これらに限定されないが、長い前駆体の化学合成および酵素的、化学的切断、上記のようなｉｎ ｖｉｔｒｏ転写などが挙げられる。ＤＮＡおよびＲＮＡヌクレオチドを合成する方法は、当技術分野で広く使用され、周知である（例えば、両方とも参照により本明細書に組み込まれている、Ｇａｉｔ， Ｍ． Ｊ．（編）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｏｘｆｏｒｄ ［Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ］、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．： ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８４年；およびＨｅｒｄｅｗｉｊｎ， Ｐ．（編）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２８８巻（Ｃｌｉｆｔｏｎ， Ｎ．Ｊ．）Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．： Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、２００５年を参照されたい）。
プラスミドＤＮＡに関して、本発明の実施形態での使用のための調製は、これらに限定されないが、目的のプラスミドを含有する細菌の液体培養物中のｉｎ ｖｉｔｒｏでのプラスミドＤＮＡの増大および単離を一般的に利用する。特定の抗生剤（ペニシリン、カナマイシンなど。）に対する耐性をコードする目的のプラスミドに遺伝子が存在することにより、目的のプラスミドを含有する細菌を、抗生剤を含有する培養物中で選択的に増殖させることが可能となる。プラスミドＤＮＡを単離する方法は当技術分野で広く使用され、周知である（例えば、Ｈｅｉｌｉｇ， Ｊ．、Ｅｌｂｉｎｇ， Ｋ． Ｌ．およびＢｒｅｎｔ， Ｒ（２００１年）Ｌａｒｇｅ－Ｓｃａｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．、４１巻：ＩＩ号：１．７：１．７．１～１．７．１６頁；Ｒｏｚｋｏｖ， Ａ．、Ｌａｒｓｓｏｎ， Ｂ．、Ｇｉｌｌｓｔｒｏｍ， Ｓ．、Ｂｊｏｒｎｅｓｔｅｄｔ， Ｒ．、およびＳｃｈｍｉｄｔ， Ｓ． Ｒ．（２００８年）、Ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ－ｆｒｅｅ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ．、９９巻：５５７～５６６頁；およびＵＳ６１９７５５３Ｂ１を参照されたい）。プラスミド単離は、これらに限定されないが、Ｐｌａｓｍｉｄ Ｐｌｕｓ（Ｑｉａｇｅｎ）、ＧｅｎＪＥＴ プラスミドＭａｘｉＰｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ）およびＰｕｒｅ Ｙｉｅｌｄ ＭａｘｉＰｒｅｐ（Ｐｒｏｍｅｇａ）キットを含めた様々な市販のキットを使用して、ならびに市販の試薬を用いて実施することができる。
遺伝子およびタンパク質発現をモジュレートする核酸などの活性物質（例えば、治療剤）を送達するための、本発明の脂質、これを含む脂質ナノ粒子および組成物、ならびにこれらの使用の様々な例示的な実施形態が、以下にさらに詳細に記載されている。
本明細書で使用される場合、他に特定されていない限り、以下の用語は、これらに属する意味を有する。
特に文脈上異なって理解されることを要しない限り、本明細書および特許請求の範囲を通して、単語「含む」およびその変形形態、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含むこと」などは、開かれた、包括的な意味、すなわち、「～を含むが、これらに限定されない」と解釈されるものとする。
本明細書全体にわたり「一実施形態」または「ある実施形態」への言及は、この実施形態に関連して記載されている特定の特色、構造または特徴が本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれていることを意味する。したがって、本明細書全体にわたり様々な箇所における「一実施形態では」または「ある実施形態では」という句の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態について言及しているわけではない。さらに、特定の特色、構造、または特徴は、１つまたは複数の実施形態において任意の適切な方式で組み合わせてもよい。
他に定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者により共通して理解されているものと同じ意味を有する。明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、特に文脈上そうではないことが明確に指示されていない限り、複数の言及を含む。
「所望のタンパク質の発現を誘発する」という句は、所望のタンパク質の発現を増加させる核酸の能力を指す。タンパク質発現の程度を調査するため、試験試料（例えば、所望のタンパク質を発現する培養中の細胞試料）または試験哺乳動物（例えば、哺乳動物、例えば、ヒトなどまたは動物モデル、例えば、げっ歯類（例えば、マウス）などまたはヒト以外の霊長類（例えば、サル）モデル）を核酸（例えば、本発明の脂質と組み合わせた核酸）と接触させる。試験試料または試験動物における所望のタンパク質の発現を、核酸と接触させていない、または核酸が投与されていない対照試料（例えば、所望のタンパク質を発現する培養中の細胞試料）または対照哺乳動物（例えば、哺乳動物、例えば、ヒトなどまたは動物モデル、例えば、げっ歯類（例えば、マウス）などまたはヒト以外の霊長類（例えば、サル）モデル）中の所望のタンパク質の発現と比較する。所望のタンパク質が対照試料または対照哺乳動物に存在する場合、対照試料または対照哺乳動物中の所望のタンパク質の発現に１．０の値を割り当てることができる。特定の実施形態では、所望のタンパク質の発現の誘発は、試験試料または試験哺乳動物中の所望のタンパク質発現の、対照試料または対照哺乳動物中の所望のタンパク質発現のレベルに対する比が１を超えた場合、例えば、約１．１、１．５、２．０、５．０または１０．０である場合達成される。所望のタンパク質が対照試料にも対照哺乳動物にも存在しない場合、所望のタンパク質の発現の誘発は、試験試料または試験哺乳動物中で、任意の測定可能なレベルの所望のタンパク質が検出された場合達成される。当業者であれば、試料中のタンパク質発現レベルを決定するのに適当なアッセイ、例えばドットブロット、ノーザンブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能、および表現型アッセイ、または適当な条件下で蛍光もしくは発光を生成できるリポータータンパク質に基づくアッセイを理解している。
「標的遺伝子の発現を阻害する」という句は、標的遺伝子の発現をサイレンシングさせる、減少させる、または阻害する核酸の能力を指す。遺伝子サイレンシングの程度を調査するために、試験試料（例えば、標的遺伝子を発現する培養中の細胞試料）または試験哺乳動物（例えば、哺乳動物、例えば、ヒトなどまたは動物モデル、例えば、げっ歯類（例えば、マウス）などまたはヒト以外の霊長類（例えば、サル）モデル）を、標的遺伝子の発現をサイレンシングさせる、減少させる、または阻害する核酸と接触させる。試験試料または試験動物中の標的遺伝子の発現を、核酸と接触させていない、または核酸が投与されていない対照試料（例えば、標的遺伝子を発現する培養中の細胞試料）または対照哺乳動物（例えば、哺乳動物、例えば、ヒトなどまたは動物モデル、例えば、げっ歯類（例えば、マウス）などまたはヒト以外の霊長類（例えば、サル）モデル）中の標的遺伝子の発現と比較する。対照試料または対照哺乳動物中の標的遺伝子の発現に、１００％の値を割り当てることができる。特定の実施形態では、標的遺伝子の発現のサイレンシング、阻害、または減少は、対照試料または対照哺乳動物中の標的遺伝子発現のレベルに対する、試験試料または試験哺乳動物中の標的遺伝子の発現レベルが約９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または０％である場合達成される。言い換えると、核酸は、核酸と接触させていない、または核酸が投与されていない対照試料または対照哺乳動物中の標的遺伝子の発現レベルに対して、試験試料または試験哺乳動物中で標的遺伝子の発現を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％サイレンシング、減少させる、または阻害することが可能である。標的遺伝子の発現レベルを決定するのに適切なアッセイとして、限定されないが、当業者に公知の技術、例えば、ドットブロット、ノーザンブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能、ならびに当業者に公知の表現型アッセイなどを使用したタンパク質またはｍＲＮＡレベルの調査が挙げられる。
活性薬剤または治療剤、例えば、治療用核酸などの「有効量」または「治療有効量」とは、所望の効果、例えば、核酸の不在下で検出された通常の発現レベルと比較して、標的配列の発現の増加または阻害を生じるのに十分な量である。標的配列の発現の増加は、核酸の不在下では存在しない発現産物のケースでは、任意の測定可能なレベルが検出された場合達成される。核酸との接触より前に発現産物があるレベルで存在するケースでは、発現の増加は、ｍＲＮＡなどの核酸を用いて得た値の倍数増加（ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ）が、対照に対して、約１．０５、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．７５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００、７５０、１０００、５０００、１００００倍またはそれを超える場合達成される。標的遺伝子または標的配列の発現の阻害は、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸を用いて得た値が、対照に対して、約９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または０％である場合達成される。標的遺伝子または標的配列の発現を測定するのに適切なアッセイとして、例えば、当業者に公知の技術、例えば、ドットブロット、ノーザンブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能、適切なリポータータンパク質の蛍光または発光、ならびに当業者に公知の表現型アッセイなどを使用したタンパク質またはＲＮＡレベルの調査が挙げられる。
本明細書で使用される「核酸」という用語は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態で少なくとも２つのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドを含有するポリマーを指し、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびそのハイブリッドを含む。ＤＮＡは、アンチセンス分子、プラスミドＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＣＲ産物、またはベクターの形態であってよい。ＲＮＡは、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉｃＲＮＡ、多価ＲＮＡ、ダイサー基質ＲＮＡまたはウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）、およびこれらの組合せの形態であってよい。核酸は、合成、天然に存在する、および天然に存在しないものであり、基準核酸と同様の結合特性を有する、公知のヌクレオチドアナログまたは修飾された骨格残基または結合を含有する核酸を含む。このようなアナログの例として、限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、およびペプチド－核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。具体的に限定されない限り、用語は、基準核酸と同様の結合特性を有する天然のヌクレオチドの公知のアナログを含有する核酸を包含する。他に指示されていない限り、特定の核酸配列はまた、保存的に修飾されたそのバリアント（例えば、縮退コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、一塩基多型、および相補性配列ならびに明示的に示された配列も暗示的に包含する。具体的には、縮退コドン置換は、１つまたは複数の選択された（またはすべての）コドンの三番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．、１９巻：５０８１頁（１９９１年）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６０巻：２６０５～２６０８頁（１９８５年）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｐｒｏｂｅｓ、８巻：９１～９８頁（１９９４年））。「ヌクレオチド」は、糖デオキシリボース（ＤＮＡ）またはリボース（ＲＮＡ）、塩基、およびリン酸基を含有する。ヌクレオチドは、リン酸基を介して一緒に連結している。「塩基」は、プリンおよびピリミジンを含み、このプリンおよびピリミジンは、天然の化合物のアデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシル、イノシン、および天然のアナログ、ならびにプリンおよびピリミジンの合成誘導体をさらに含み、このプリンおよびピリミジンの合成誘導体は、例えば、これらに限定されないが、アミン、アルコール、チオール、カルボキシレート、およびアルキルハロゲン化物などの新規反応性基を配置する修飾を含むが、これに限定されない。
「遺伝子」という用語は、ポリペプチドまたは前駆体ポリペプチドの産生に必要な部分的長さまたは全長のコード配列を含む核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）配列を指す。
「遺伝子産物」とは、本明細書で使用される場合、ＲＮＡ転写物またはポリペプチドなどの遺伝子の産物を指す。
「脂質」という用語は、これらに限定されないが、脂肪酸のエステルを含み、水中では難溶性であるが、多くの有機溶媒中では可溶性であることを一般的に特徴とする有機化合物の群を指す。脂質は、少なくとも３つのクラスに通常分けられる：（１）「単純脂質」、これは脂肪および油ならびに蝋を含む、（２）「複合脂質」、これは、リン脂質および糖脂質を含む、ならびに（３）「誘導脂質」、例えば、ステロイドなど。
「ステロイド」は、以下の炭素骨格：
Figure 0007355731000002
 を含む化合物である。ステロイドの非限定的例は、コレステロールなどを含む。
「カチオン性脂質」とは、正に帯電することが可能な脂質を指す。例示的なカチオン性脂質は、正電荷を保持する１つまたは複数のアミン基を含む。好ましいカチオン性脂質は、これらが、ｐＨに応じて、正に帯電しているか、または中性の形態で存在できるようにイオン化できる。カチオン性脂質のイオン化は、異なるｐＨ条件下での脂質ナノ粒子の表面電荷に影響を及ぼす。この電荷状態は、血漿タンパク質吸収、血液クリアランスおよび組織分布（Ｓｅｍｐｌｅ， Ｓ．Ｃ．ら、Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ、３２巻：３～１７頁（１９９８年））ならびに核酸の細胞内送達に重要な意味を持つエンドソーム溶解性の非二重層構造を形成する能力（Ｈａｆｅｚ， Ｉ．Ｍ．ら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ８巻：１１８８～１１９６頁（２００１年））に影響を及ぼし得る。
「ポリマーコンジュゲート脂質」という用語は、脂質部分とポリマー部分の両方を含む分子を指す。ポリマーコンジュゲート脂質の例はペグ化脂質である。「ペグ化脂質」という用語は、脂質部分とポリエチレングリコール部分の両方を含む分子を指す。ペグ化脂質は当技術分野で公知であり、１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）などを含む。
「中性脂質」という用語は、選択されたｐＨにおいて、帯電していないか、または中性の双性イオン形態のいずれかで存在するいくつかの脂質種のいずれかを指す。生理学的ｐＨでのこのような脂質として、これらに限定されないが、ホスホチジルコリン、例えば、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅｓ）例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミドなど、ステロイド、例えば、ステロールなどおよびこれらの誘導体が挙げられる。中性脂質は、合成でも、または天然由来でもよい。
「荷電脂質」という用語は、有用な生理学的な範囲内のｐＨ、例えばｐＨ約３～ｐＨ約９であるかに関係なく、正に帯電または負に帯電した形態で存在するいくつかの脂質種のいずれかを指す。荷電脂質は合成でもまたは天然由来でもよい。荷電脂質の例として、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ステロールヘミスクシネート、ジアルキルトリメチルアンモニウム－プロパン、（例えばＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＭＡ）、ジアルキルジメチルアミノプロパン、エチルホスホコリン、ジメチルアミノエタンカルバモイルステロール（例えばＤＣ－Ｃｈｏｌ）が挙げられる。
「脂質ナノ粒子」という用語は、構造（Ｉ）の化合物または他の特定されたカチオン性脂質の１つまたは複数を含む、少なくとも１つのナノメートル程度の（例えば、１～１，０００ｎｍ）寸法を有する粒子を指す。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、目的の標的部位（例えば、細胞、組織、器官、腫瘍など）に活性薬剤または治療剤、例えば、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）などを送達するために使用することができる製剤に含まれている。一部の実施形態では、本発明の脂質ナノ粒子は核酸を含む。このような脂質ナノ粒子は通常、構造（Ｉ）の化合物と、中性脂質、荷電脂質、ステロイドおよびポリマーコンジュゲート脂質から選択される１つまたは複数の賦形剤とを含む。一部の実施形態では、活性薬剤または治療剤、例えば、核酸などは、脂質ナノ粒子の脂質部分または脂質ナノ粒子の脂質部分の一部もしくはすべてにより包まれた水性空間に封入され、これによって、宿主生物または細胞の機構、例えば、有害な免疫応答により誘発される酵素的分解または他の望ましくない作用からこれを保護することができる。
様々な実施形態では、脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約９０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０～約９０ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、または約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍの平均直径を有し、実質的に無毒性である。ある特定の実施形態では、核酸は、脂質ナノ粒子中に存在する場合、水溶液中で、ヌクレアーゼによる分解に対して耐性がある。核酸を含む脂質ナノ粒子およびこれらの調製方法は、例えば、すべての目的のために、これら全体においてその完全な開示が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許公開第２００４／０１４２０２５号、第２００７／００４２０３１号およびＰＣＴ公開ＷＯ２０１７／００４１４３、ＷＯ２０１５／１９９９５２、ＷＯ２０１３／０１６０５８およびＷＯ２０１３／０８６３７３に開示されている。
本明細書で使用される場合、「～が封入された脂質」とは、完全な封入、部分的な封入、または両方を用いて、活性薬剤または治療剤、例えば、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）などを提供する脂質ナノ粒子を指す。ある実施形態では、核酸（例えば、ｍＲＮＡ）は脂質ナノ粒子内に完全に封入されている。
本明細書で使用される場合、「水溶液」という用語は、水を含む組成物を指す。
核酸脂質ナノ粒子に関連して「血清に安定な」とは、遊離ＤＮＡまたはＲＮＡを有意に分解する、血清またはヌクレアーゼアッセイへの曝露後、ヌクレオチドが有意に分解しないことを意味する。適切なアッセイとして、例えば、標準血清アッセイ、ＤＮＡｓｅアッセイ、またはＲＮＡｓｅアッセイが挙げられる。
「全身送達」は、本明細書で使用される場合、生物内で活性薬剤の広範囲な曝露をもたらすことができる治療用製品の送達を指す。一部の投与技術は、ある特定の薬剤の全身送達をもたらすことができるが、他の薬剤はできない。全身送達とは、薬剤の有用な、好ましくは治療用の量が身体の大部分に曝露されることを意味する。脂質ナノ粒子の全身送達は、例えば、静脈内、動脈内、皮下、および腹腔内送達を含めた当技術分野で公知の任意の手段によることができる。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の全身送達は静脈内送達による。
「局所送達」とは、本明細書で使用される場合、生物内の標的部位に直接活性薬剤を送達することを指す。例えば、薬剤は、疾患部位、例えば、腫瘍など、他の標的部位、例えば、炎症部位など、または標的器官、例えば、肝臓、心臓、膵臓、腎臓などに直接注射することにより局所的に送達できる。局所送達はまた、局所的適用または局在化注射の技術、例えば、筋肉内、皮下または皮内注射などを含むことができる。局所送達は、全身性薬理効果を妨げない。
「アルキル」とは、例えば、１～２４個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ２４アルキル）、４～２０個の炭素原子（Ｃ４～Ｃ２０アルキル）、６～１６個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ１６アルキル）、６～９個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ９アルキル）、１～１５個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ１５アルキル）、１～１２個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ１２アルキル）、１～８個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ８アルキル）または１～６個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ６アルキル）を有し、分子の残りに単結合で結合している、飽和の、炭素原子および水素原子のみからなる直鎖状または分岐状の炭化水素鎖ラジカル（例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１メチルエチル（イソプロピル）、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔブチル）、３－メチルヘキシル、２－メチルヘキシルなど）を指す。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、アルキル基は必要に応じて置換されている。
「アルケニル」とは、例えば、２～２４個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ２４アルケニル）、４～２０個の炭素原子（Ｃ４～Ｃ２０アルケニル）、６～１６個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ１６アルケニル）、６～９個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ９アルケニル）、２～１５個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ１５アルケニル）、２～１２個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ１２アルケニル）、２～８個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ８アルケニル）または２～６個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ６アルケニル）を有し、分子の残りに単結合で結合し、１つまたはそれより多くの炭素－炭素二重結合を含有している、炭素原子および水素原子のみからなる直鎖状または分岐状の炭化水素鎖ラジカル（例えば、エテニル、プロパ－１－エニル、ブタ－１－エニル、ペンタ－１－エニル、ペンタ－１，４－ジエニルなど）を指す。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、アルケニル基は必要に応じて置換されている。
「アルキニル」とは、例えば、２～２４個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ２４アルキニル）、４～２０個の炭素原子（Ｃ４～Ｃ２０アルキニル）、６～１６個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ１６アルキニル）、６～９個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ９アルキニル）、２～１５個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ１５アルキニル）、２～１２個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ１２アルキニル）、２～８個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ８アルキニル）または２～６個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ６アルキニル）を有し、分子の残りに単結合で結合し、１つまたはそれより多くの炭素－炭素三重結合を含有している、炭素原子および水素原子のみからなる直鎖状または分岐状の炭化水素鎖ラジカル（例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニルなど）を指す。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、アルキニル基は必要に応じて置換されている。
「アルキレン」または「アルキレン鎖」とは、例えば、１～２４個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ２４アルキレン）、１～１５個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ１５アルキレン）、１～１２個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ１２アルキレン）、１～８個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ８アルキレン）、１～６個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）、２～４個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ４アルキレン）、１～２個の炭素原子（Ｃ１～Ｃ２アルキレン）を有し、分子の残りをラジカル基に連結している、飽和の、炭素および水素のみからなる直鎖状または分岐状の二価の炭化水素鎖（例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ－ブチレンなど）を指す。アルキレン鎖は、分子の残りに単結合を介して結合し、単結合を介してラジカル基に結合している。アルキレン鎖の分子の残りおよびラジカル基への結合点は、鎖内の１個の炭素または任意の２個の炭素を介することができる。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、アルキレン鎖は必要に応じて置換されていてもよい。
「アルケニレン」または「アルケニレン鎖」とは、例えば、２～２４個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ２４アルケニレン）、２～１５個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ１５アルケニレン）、２～１２個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ１２アルケニレン）、２～８個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ８アルケニレン）、２～６個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ６アルケニレン）または２～４個の炭素原子（Ｃ２～Ｃ４アルケニレン）を有し、分子の残りをラジカル基に連結し、炭素および水素のみからなり、１つまたはそれより多くの炭素－炭素二重結合を含有している、直鎖状または分岐状の二価の炭化水素鎖（例えば、エテニレン、プロペニレン、ｎ－ブテニレンなど）を指す。アルケニレン鎖は、分子の残りに単結合または二重結合を介して結合し、単結合または二重結合を介してラジカル基に結合している。アルケニレン鎖の、分子の残りおよびラジカル基への結合点は、鎖内の１個の炭素または任意の２個の炭素を介することができる。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、アルケニレン鎖は必要に応じて置換されていてもよい。
「アリール」とは、水素、６～１８個の炭素原子および少なくとも１つの芳香族環を含む炭素環系ラジカルを指す。本発明の目的のため、アリールラジカルは単環式、二環式、三環式または四環式環系であり、縮合環系または架橋環系を含み得る。アリールラジカルとして、これらに限定されないが、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ－インダセン、ｓ－インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナントレン、プレイアデン、ピレン、およびトリフェニレンに由来するアリールラジカルが挙げられる。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、「アリール」という用語または接頭語「ａｒ－」（例えば、「アラルキル」など）は、必要に応じて置換されているアリールラジカルを含むことが意図されている。
「アラルキル」とは、式－Ｒｂ－Ｒｃ（式中、Ｒｂは上で定義された通りのアルキレンまたはアルケニレンであり、Ｒｃは上で定義された通りの１つまたは複数のアリールラジカルである）のラジカル、例えば、ベンジル、ジフェニルメチルなどを指す。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、アラルキル基は必要に応じて置換されている。
「シクロアルキル」とは、３～１５個の炭素原子、３～１０個の炭素原子、または３～８個の炭素原子を有し、飽和しており、分子の残りに単結合で結合している炭素原子および水素原子のみからなる、安定した非芳香族単環式または多環式の炭化水素ラジカル（縮合または架橋した環系を含んでもよい）を指す。単環式シクロアルキルラジカルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。多環式ラジカルは、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニル、７，７－ジメチル－ビシクロ［２．２．１］ヘプタニルなどを含む。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、シクロアルキル基は必要に応じて置換されていてもよい。
「シクロアルキレン」は二価のシクロアルキル基である。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、シクロアルキレン基は必要に応じて置換されていてもよい。
「シクロアルケニル」とは、３～１５個の炭素原子、３～１０個の炭素原子、または３～８個の炭素原子を有し、１つまたはそれより多くの炭素－炭素二重結合を含み、分子の残りに単結合で結合している炭素原子および水素原子のみからなる、安定した非芳香族単環式または多環式の炭化水素ラジカル（縮合または架橋した環系を含んでもよい）を指す。単環式シクロアルケニルラジカルは、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルおよびシクロオクテニルを含む。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、シクロアルケニル基は必要に応じて置換されていてもよい。
「シクロアルケニレン」は二価のシクロアルケニル基である。明細書中でそうではないことが具体的に述べられていない限り、シクロアルケニレン基は必要に応じて置換されていてもよい。
本明細書で使用される「置換されている」という用語は、少なくとも１個の水素原子が、非水素原子、例えば、これらに限定されないが、ハロゲン原子、例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩなど；オキソ基（＝Ｏ）；ヒドロキシル基（－ＯＨ）；Ｃ１～Ｃ１２アルキル基；シクロアルキル基；－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ’；－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ’；－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’；－ＯＲ’；－Ｓ（Ｏ）ｘＲ’；－Ｓ－ＳＲ’；－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’；－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ’；－ＮＲ’Ｒ’；－ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’；－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’；－ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’；－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ’Ｒ’；－ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’；－ＮＲ’Ｓ（Ｏ）ｘＮＲ’Ｒ’；－ＮＲ’Ｓ（Ｏ）ｘＲ’；および－Ｓ（Ｏ）ｘＮＲ’Ｒ’（式中、Ｒ’は、出現ごとに独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１５アルキルまたはシクロアルキルであり、ｘは、０、１または２である）への結合に置き換えられている、上記基のいずれか（例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル（cycloalkyenyl）、シクロアルキレンまたはシクロアルケニレン）を意味する。一部の実施形態では、置換基はＣ１～Ｃ１２アルキル基である。他の実施形態では、置換基はシクロアルキル基である。他の実施形態では、置換基は、ハロ基、例えば、フルオロなどである。他の実施形態では、置換基はオキソ基である。他の実施形態では、置換基はヒドロキシル基である。他の実施形態では、置換基はアルコキシ基（－ＯＲ’）である。他の実施形態では、置換基はカルボキシル基である。他の実施形態では、置換基はアミン基（－ＮＲ’Ｒ’）である。
「必要に応じた」または「必要に応じて」（例えば、必要に応じて置換されている）は、続いて記載されている状況の事象が起こっても、または起こらなくてもよいことを意味し、記載は、前記事象または状況が起こった場合と、それが起こらない場合とを意味する。例えば、「必要に応じて置換されているアルキル」とは、アルキルラジカルは、置換されていても、または置換されていなくてもよいことを意味し、記載は置換アルキルラジカルと置換を有さないアルキルラジカルの両方を含むことを意味する。
「プロドラッグ」とは、生理的条件下で、または構造（Ｉ）の生物活性のある化合物への加溶媒分解により、変換することができる化合物を示すことを意図する。したがって、「プロドラッグ」という用語は、薬学的に許容される構造（Ｉ）の化合物の代謝性前駆体を指す。プロドラッグは、それを必要とする被験体に投与されたときで不活性であってよいが、ｉｎ ｖｉｖｏで構造（Ｉ）の活性化合物に変換される。プロドラッグは通常、例えば、血中の加水分解により、ｉｎ ｖｉｖｏで急速に変換されて、構造（Ｉ）の親化合物を産生する。プロドラッグ化合物は、哺乳動物の生物において、溶解度、組織適合性または遅延放出という利点をしばしばもたらす（Ｂｕｎｄｇａｒｄ， Ｈ．、Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（１９８５年）、７～９頁、２１～２４頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）を参照されたい）。プロドラッグの議論は、Ｈｉｇｕｃｈｉ， Ｔら、Ａ．Ｃ．Ｓ． Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ、１４巻およびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ、Ｅｄｗａｒｄ Ｂ． Ｒｏｃｈｅ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、１９８７年において提供されている。
「プロドラッグ」という用語はまた、このようなプロドラッグが哺乳動物の被験体に投与された場合に構造（Ｉ）の活性化合物をｉｎ ｖｉｖｏで放出する任意の共有結合した担体を含むことを意図する。構造（Ｉ）の化合物のプロドラッグは、修飾が、慣例的な操作またはｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで切断されて構造（Ｉ）の親化合物になるように、構造（Ｉ）の化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製することができる。プロドラッグは、ヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基が任意の基に結合し、構造（Ｉ）の化合物のプロドラッグが、哺乳動物の被験体に投与された場合、この任意の基が切断されて、遊離ヒドロキシ、遊離アミノまたは遊離メルカプト基をそれぞれ形成する構造（Ｉ）の化合物を含む。プロドラッグの例として、これらに限定されないが、構造（Ｉ）の化合物中のアルコールのアセテート、ホルメートおよびベンゾエート誘導体またはアミン官能基のアミド誘導体などが挙げられる。
本明細書で開示されている本発明の実施形態はまた、１個または複数の原子が、異なる原子量または質量数を有する原子で置き換えられることにより同位体標識されている、構造（Ｉ）の化合物のすべての薬学的に許容される化合物を包含することを意図する。開示化合物に取り込むことができる同位体の例として、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、塩素、およびヨウ素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、および１２５Ｉなどが挙げられる。これらの放射性標識した化合物は、例えば、作用部位もしくは作用機序、または薬理学的に重要な作用部位への結合親和性を特徴付けることにより、化合物の有効性を決定または測定するのを助けるのに有用であり得る。構造（Ｉ）または（ＩＩ）の構造のある特定の同位体で標識された化合物、例えば、放射性同位体を取り込んでいるものなどは、薬物および／または基質組織分布研究において有用である。放射性同位元素トリチウム、すなわち、３Ｈ、および炭素１４、すなわち、１４Ｃは、これらの組込みの容易さおよび素早い検出手段を考慮すると、この目的に特に有用である。
より重い同位体、例えば、重水素、すなわち、２Ｈなどによる置換は、より大きな代謝安定性、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の増加または必要用量の減少に起因するある特定の治療上の利点をもたらすことができるので、一部の状況では好ましいこともある。
ポジトロン放出同位体、例えば、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎなどによる置換は、基質受容体占有率を調査するためのポジトロン放出トポグラフィー（ＰＥＴ）研究において有用であり得る。構造（Ｉ）の同位体標識された化合物は、当業者に公知の従来の技術によって、または以前に利用した非標識試薬の代わりに、適当な同位体標識した試薬を使用して、以下に提示されているように、調製および実施例に記載されているものと類似のプロセスにより一般的に調製することができる。
本明細書で開示されている本発明の実施形態はまた、開示化合物のｉｎ ｖｉｖｏ代謝産物を包含することを意図する。このような産物は、主に酵素的プロセスによる、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化などから生じ得る。したがって、本発明の実施形態は、その代謝産物を産生するのに十分な期間、本発明の化合物を哺乳動物に投与することを含むプロセスにより生成される化合物を含む。このような産物は、構造（Ｉ）の放射性標識した化合物を検出可能な用量で、ラット、マウス、モルモット、サル、またはヒトなどの動物に投与し、代謝が起きるだけの十分な時間おき、尿、血液または他の生物試料からその変換産物を単離することによって通常同定される。
「安定した化合物」および「安定した構造」とは、反応混合物から有用な程度の純度への単離および効果的治療剤への製剤化に耐え抜くのに十分に強固な化合物を示すことを意図する。
「哺乳動物」は、ヒトならびに家畜、例えば、実験動物および家庭のペット（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）と、非家畜動物、例えば、野生生物などの両方を含む。
「薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤」として、限定されないが、任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、甘味剤、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、香味向上剤（ｆｌａｖｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｒ）、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張剤、溶媒、または乳化剤が挙げられ、これらは、ヒトまたは家畜における使用が許容されるとして米国食品医薬品局により認可されたものである。
「薬学的に許容される塩」は、酸付加塩（ａｃｉｄ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）と塩基付加塩（ｂａｓｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｓａｌｔ）の両方を含む。
「薬学的に許容される酸付加塩」とは、遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的でも他の点でも望ましくないわけではなく、無機酸、例えば、これらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、および有機酸、例えば、これらに限定されないが、酢酸、２，２－ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４－アセトアミド安息香酸、樟脳酸、カンファー－１０－スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイヒ酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２－オキソ－グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４－アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などと一緒に形成される塩を指す。
「薬学的に許容される塩基付加塩」とは、遊離酸の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的でも他の点でも望ましくないわけではない塩を指す。これらの塩は、無機塩基または有機塩基の遊離酸への付加から調製される。無機塩基に由来する塩として、これらに限定されないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などが挙げられる。好ましい無機塩は、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩である。有機塩基に由来する塩として、これらに限定されないが、第一級、第二級、および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含めた置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂の塩、例えば、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などが挙げられる。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリンおよびカフェインである。
結晶化は多くの場合、構造（Ｉ）の化合物の溶媒和物を生成する。本明細書で使用される場合、「溶媒和物」という用語は、構造（Ｉ）の化合物の１個または複数の分子と、溶媒の１個または複数の分子とを含む凝集体を指す。溶媒は水であってよく、このケースでは、溶媒和物は水和物であってよい。代わりに、溶媒は有機溶媒であってよい。したがって、本発明の化合物は、一水和物、二水和物、半水化物、セスキ水和物（ｓｅｓｑｕｉｈｙｄｒａｔｅ）、三水和物、四水和物などを含めた水和物、ならびに対応する溶媒和形態として存在し得る。一部の実施形態では、構造（Ｉ）の化合物は真の溶媒和物として存在してもよいが、その一方で、他のケースでは、構造（Ｉ）の化合物は、単に外来性の水を保持してもよいし、または水とある外来性溶媒の混合物であってもよい。
「医薬組成物」とは、構造（Ｉ）の化合物と、哺乳動物、例えば、ヒトに生物活性化合物を送達するために当技術分野で一般的に認められた媒体との製剤を指す。このような媒体として、このためのすべての薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤が挙げられる。
「有効量」または「治療有効量」とは、哺乳動物、好ましくはヒトに投与された場合、哺乳動物、好ましくはヒトにおける処置を実行するのに十分である、構造（Ｉ）の化合物の量を指す。「治療有効量」を構成する本発明の実施形態の脂質ナノ粒子の量は、化合物、状態およびその重症度、投与方式、ならびに処置すべき哺乳動物の年齢に応じて変動することになるが、当業者であれば、自身の知識および本開示を考慮して慣例的に決定することができる。
本明細書で使用される「処置すること」または「処置」は、目的の疾患または状態を有する哺乳動物、好ましくはヒトにおける目的の疾患または状態の処置を網羅し、
（ｉ）哺乳動物において、特に、このような哺乳動物がその状態に対する素因を有するが、それを有するとまだ診断されていない場合、その疾患もしくは状態が生じるのを防止すること、
（ｉｉ）疾患もしくは状態を阻害する、すなわち、その発症を抑止すること、
（ｉｉｉ）疾患もしくは状態を緩和する、すなわち、その疾患もしくは状態の退行を引き起こすこと、または
（ｉｖ）疾患もしくは状態に起因する症状を緩和する、すなわち、根底にある疾患もしくは状態に対処することなく疼痛を緩和すること
を含む。本明細書で使用される場合、「疾患」および「状態」という用語は、交換可能に使用してもよいし、または特定の疾病もしくは状態が公知の原因物質を有さないこともあり（そのため、病因がまだ解決されておらず）、したがって疾患としてまだ認識されていないが、望ましくない状態もしくは症候群としてのみ認識され、程度の差はあるが特定の一連の症状が臨床医により確認されているという点で異なる場合もある。
構造（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の不斉中心を含有することができ、したがって、アミノ酸に対して、絶対立体化学の点から（Ｒ）－もしくは（Ｓ）－、または（Ｄ）－もしくは（Ｌ）－と定義することができるエナンチオマー、ジアステレオマー、および他の立体異性形態を生じることができる。本発明の実施形態は、すべてのこのような可能な異性体、ならびにこれらのラセミおよび光学的に純粋な形態を含むことを意図する。光学活性（＋）および（－）、（Ｒ）－および（Ｓ）－、または（Ｄ）－および（Ｌ）－異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製してもよいし、または従来技術、例えば、クロマトグラフィーおよび分別再結晶を使用して分割してもよい。個々のエナンチオマーの調製／単離の従来技術は、適切な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成、または、例えば、キラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用したラセミ体（または塩もしくは誘導体のラセミ体）の分割を含む。本明細書に記載の化合物がオレフィン二重結合または他の幾何的不斉中心を含有する場合、他に特定されていない限り、化合物は、ＥとＺの両方の幾何異性体を含むことが意図される。同様に、すべての互変異性形態もまた含まれることが意図される。
「立体異性体」とは、同じ結合により結合した同じ原子で構成されるが、交換可能ではない異なる三次元構造を有する化合物を指す。本発明は、様々な立体異性体およびその混合物を想定し、「エナンチオマー」を含み、「エナンチオマー」とは、その分子が互いに重ね合わせ不可能な鏡像である２つの立体異性体を指す。
「互変異性体」とは、分子の１個の原子から、同じ分子の別の原子へのプロトンシフトを指す。本発明は任意の前記化合物の互変異性体を含む。
化合物
ある態様では、本発明は、オリゴヌクレオチドと共に脂質ナノ粒子を形成するために、他の脂質成分、例えば、中性脂質、荷電脂質、ステロイドおよび／またはポリマーコンジュゲート脂質などと組み合わせることが可能である新規脂質化合物を提供する。理論に制約されることを望むことなく、これらの脂質ナノ粒子は、血清中でオリゴヌクレオチドを分解から遮蔽し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでのオリゴヌクレオチドの細胞への有効な送達を提供すると考えられている。
一実施形態では、化合物は、以下の構造（Ｉ）：
Figure 0007355731000003
 またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグもしくは立体異性体を有し、式中、
Ｌ１は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１、－ＯＲ１、－Ｓ（Ｏ）ｘＲ１、－Ｓ－ＳＲ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ１、－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ１、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃまたは－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲ１であり、
Ｌ２は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ２、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、－ＯＲ２、－Ｓ（Ｏ）ｘＲ２、－Ｓ－ＳＲ２、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２、－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ２、－ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒ２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ、－ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ；－ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＯＲ２またはＲ２への直接結合であり、
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立して、Ｃ２～Ｃ１２アルキレンまたはＣ２～Ｃ１２アルケニレンであり、
Ｇ３は、Ｃ１～Ｃ２４アルキレン、Ｃ２～Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキレンまたはＣ３～Ｃ８シクロアルケニレンであり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｄおよびＲｅは、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ１２アルキルまたはＣ１～Ｃ１２アルケニルであり、
ＲｃおよびＲｆは、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたはＣ２～Ｃ１２アルケニルであり、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、分岐状Ｃ６～Ｃ２４アルキルまたは分岐状Ｃ６～Ｃ２４アルケニルであり、
Ｒ３は－Ｎ（Ｒ４）Ｒ５であり、
Ｒ４はＣ１～Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ５は置換Ｃ１～Ｃ１２アルキルであり、
ｘは、０、１または２であり、
アルキル、アルケニル、アルキレン、アルケニレン、シクロアルキレン、シクロアルケニレン、アリールおよびアラルキルは各々、他に特定されていない限り、独立して置換されているまたは置換されていない。
ある特定の実施形態では、Ｇ３は置換されていない。より特定の実施形態では、Ｇ３はＣ２～Ｃ１２アルキレンであり、例えば、一部の実施形態では、Ｇ３はＣ３～Ｃ７アルキレンであり、または他の実施形態では、Ｇ３はＣ３～Ｃ１２アルキレンである。一部の実施形態では、Ｇ３はＣ２またはＣ３アルキレンである。
前述の実施形態の一部では、化合物は、以下の構造（ＩＡ）：
Figure 0007355731000004
 を有し、式中、ｙおよびｚは、それぞれ独立して、２～１２の範囲の整数、例えば、２～６の整数、４～１０の整数、または例えば４もしくは５である。ある特定の実施形態では、ｙおよびｚはそれぞれ同じであり、４、５、６、７、８および９から選択される。
前述の実施形態の一部では、Ｌ１は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１または－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃであり、Ｌ２は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ２、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２または－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆである。例えば、一部の実施形態では、Ｌ１およびＬ２はそれぞれ－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１および－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２である。他の実施形態では、Ｌ１は－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１であり、Ｌ２は－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆである。他の実施形態では、Ｌ１は－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃであり、Ｌ２は－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆである。
前述のものの他の実施形態では、化合物は、以下の構造（ＩＢ）、（ＩＣ）、（ＩＤ）または（ＩＥ）：
Figure 0007355731000005
 の１つを有する。
前述の実施形態の一部では、化合物は構造（ＩＢ）を有し、他の実施形態では、化合物は構造（ＩＣ）を有し、さらに他の実施形態では、化合物は構造（ＩＤ）を有する。他の実施形態では、化合物は構造（ＩＥ）を有する。
前述のものの一部の異なる実施形態では、化合物は、以下の構造（ＩＦ）、（ＩＧ）、（ＩＨ）または（ＩＪ）：
Figure 0007355731000006
 の１つを有し、式中、ｙおよびｚは、それぞれ独立して、２～１２の範囲の整数、例えば、２～６の整数、例えば、４である。
前述の実施形態の一部では、ｙおよびｚは、それぞれ独立して、２～１０、２～８、４～１０または４～７の範囲の整数である。例えば、一部の実施形態では、ｙは、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２である。一部の実施形態では、ｚは、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２である。一部の実施形態では、ｙおよびｚは同じであり、一方で、他の実施形態では、ｙおよびｚは異なる。
前述の実施形態の一部では、Ｒ１もしくはＲ２または両方は、分岐状Ｃ６～Ｃ２４アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、以下の構造：
Figure 0007355731000007
 を有し、式中、
Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、出現ごとに独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ１２アルキルであり、
ａは２～１２の整数であり、
Ｒ７ａ、Ｒ７ｂおよびａは各々、Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立して６～２０個の炭素原子を含むように選択される。例えば、一部の実施形態では、ａは、５～９または８～１２の範囲の整数である。
前述の実施形態の一部では、Ｒ７ａの少なくとも１つの出現はＨである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ７ａは出現ごとにＨである。前述のものの他の異なる実施形態では、Ｒ７ｂの少なくとも１つの出現はＣ１～Ｃ８アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｃ１～Ｃ８アルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ヘキシルまたはｎ－オクチルである。
異なる実施形態では、Ｒ１もしくはＲ２または両方は、以下の構造：
Figure 0007355731000008
 の１つを有する。
前述の実施形態の一部では、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｅおよびＲｆは、それぞれ独立して、Ｃ３～Ｃ１２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｅおよびＲｆはｎ－ヘキシルであり、他の実施形態では、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｅおよびＲｆはｎ－オクチルである。
前述の実施形態のいずれかでは、Ｒ４は、置換されているかまたは置換されていない、メチル、エチル、プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－オクチルまたはｎ－ノニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ４は置換されていない。他のものでは、Ｒ４は、－ＯＲｇ、－ＮＲｇＣ（＝Ｏ）Ｒｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｇＲｈ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒｈ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｈおよび－ＯＲｉＯＨ（式中、
Ｒｇは、出現ごとに独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒｈは、出現ごとに独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒｉは、出現ごとに独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキレンである）
からなる群より選択される１つまたはそれより多くの置換基で置換されている。
前述の実施形態の他のものでは、Ｒ５は、置換されている、メチル、エチル、プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－オクチルまたはｎ－ノニルである。一部の実施形態では、Ｒ５は置換されているエチルまたは置換されているプロピルである。他の異なる実施形態では、Ｒ５はヒドロキシルで置換されている。なおもさらなる実施形態では、Ｒ５は、－ＯＲｇ、－ＮＲｇＣ（＝Ｏ）Ｒｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｇＲｈ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒｈ、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｈ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｈおよび－ＯＲｉＯＨ（式中、
Ｒｇは、出現ごとに独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒｈは、出現ごとに独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒｉは、出現ごとに独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキレンである）
からなる群より選択される１つまたはそれより多くの置換基で置換されている。
他の実施形態では、Ｒ４は置換されていないメチルであり、Ｒ５は、置換されている、メチル、エチル、プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－オクチルまたはｎ－ノニルである。これらの実施形態の一部では、Ｒ５はヒドロキシルで置換されている。
一部の他の特定の実施形態では、Ｒ３は、以下の構造：
Figure 0007355731000009
 の１つを有する。
様々な異なる実施形態では、化合物は、以下の表１に記載の構造の１つを有する。
Figure 0007355731000010
Figure 0007355731000011
表１中の化合物は、当技術分野で公知の方法、例えば、本明細書で以下に記載されている一般的方法に従い、調製および試験した。
上に記載されているような構造（Ｉ）の化合物の任意の実施形態、および上に記載されているような構造（Ｉ）の化合物における任意の特定の置換基および／または変数は、構造（Ｉ）の化合物の他の実施形態ならびに／または置換基および／もしくは変数と独立して組み合わせることによって、上に具体的に記載されていない本発明の実施形態を形成することができることが理解されている。加えて、特定の実施形態および／または請求項において、置換基および／または変数の一覧が任意の特定のＲ基、Ｌ基、Ｇ基または変数ａ、ｘ、ｙ、またはｚに対して列挙されている場合、それぞれ個々の置換基および／または変数は、特定の実施形態および／または請求項から削除されてもよく、置換基および／または変数の残りの一覧は、本発明の実施形態の範囲内にあると考えられることが理解されている。
本記載では、示されている式の置換基および／または変数の組合せは、このような寄与が安定した化合物をもたらす場合のみ許容できることが理解されている。
一部の実施形態では、構造（Ｉ）の化合物のいずれか１つまたは複数と、治療剤とを含む組成物が提供される。一部の実施形態では、構造（Ｉ）の１つまたは複数の化合物を含む脂質ナノ粒子が提供される。例えば、一部の実施形態では、組成物は、構造（Ｉ）の化合物のいずれかと、治療剤と、中性脂質、ステロイドおよびポリマーコンジュゲート脂質から選択される１種または複数の賦形剤とを含む。他の薬学的に許容される賦形剤および／または担体もまた、組成物の様々な実施形態に含まれている。
一部の実施形態では、中性脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥおよびＳＭから選択される。一部の実施形態では、中性脂質はＤＳＰＣである。様々な実施形態では、化合物 対 中性脂質のモル比は、約２：１～約８：１の範囲である。
様々な実施形態では、組成物は、ステロイドまたはステロイドアナログをさらに含む。ある特定の実施形態では、ステロイドまたはステロイドアナログはコレステロールである。これらの実施形態の一部では、化合物 対 コレステロールのモル比は、約５：１～１：１の範囲である。
様々な実施形態では、ポリマーコンジュゲート脂質はペグ化脂質である。例えば、一部の実施形態は、ペグ化ジアシルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、例えば、１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、ペグ化ホスファチジルエタノールアミン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌｏａｍｉｎｅ）（ＰＥＧ－ＰＥ）、ＰＥＧスクシネートジアシルグリセロール（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＡＧ）、例えば、４－Ｏ－（２’，３’－ジ（テトラデカノイルオキシ）プロピル－１－Ｏ－（ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）ブタンジオエート（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ）、ペグ化セラミド（ＰＥＧ－ｃｅｒ）、またはＰＥＧジアルコキシプロピルカルバメート、例えば、ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル－Ｎ－（２，３－ジ（テトラデカンオキシ）プロピル）カルバメートまたは２，３－ジ（テトラデカンオキシ）プロピル－Ｎ－（ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）カルバメートなどを含む。様々な実施形態では、化合物 対 ペグ化脂質のモル比は、約１００：１～約２０：１の範囲である。
一部の実施形態では、組成物は、以下の構造（ＩＩ）：
Figure 0007355731000012
 （式中、
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、１０～３０個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐状のアルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、アルキル、アルケニルまたはアルキニルは、１つまたは複数のエステル結合により、必要に応じて分断されており、
ｗは３０～６０の範囲の平均値を有する）
を有するペグ化脂質またはその薬学的に許容される塩、互変異性体もしくは立体異性体を含む。
一部の実施形態では、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、１２～１６個の炭素原子を含有する、直鎖状の、アルキルである。一部の実施形態では、ｗは、４３～５３の範囲の平均値を有する。他の実施形態では、ｗの平均は約４５である。他の異なる実施形態では、ｗの平均は約４９である。
一部の実施形態では、構造（Ｉ）の化合物のいずれか１つまたは複数と、治療剤とを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）が提供される。例えば、一部の実施形態では、ＬＮＰは、構造（Ｉ）の化合物のいずれかと、治療剤と、中性脂質、ステロイドおよびポリマーコンジュゲート脂質から選択される１種または複数の賦形剤とを含む。
ＬＮＰの一部の実施形態では、中性脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥおよびＳＭから選択される。一部の実施形態では、中性脂質はＤＳＰＣである。様々な実施形態では、化合物 対 中性脂質のモル比は、約２：１～約８：１の範囲である。
ＬＮＰの様々な実施形態では、組成物は、ステロイドまたはステロイド類似体をさらに含む。ある特定の実施形態では、ステロイドまたはステロイド類似体はコレステロールである。これらの実施形態の一部では、化合物 対 コレステロールのモル比は、約５：１～１：１の範囲である。
ＬＮＰの様々な実施形態では、ポリマーコンジュゲート脂質はペグ化脂質である。例えば、一部の実施形態は、ペグ化ジアシルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、例えば、１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、ペグ化ホスファチジルエタノールアミン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌｏａｍｉｎｅ）（ＰＥＧ－ＰＥ）、ＰＥＧスクシネートジアシルグリセロール（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＡＧ）、例えば、４－Ｏ－（２’，３’－ジ（テトラデカノイルオキシ）プロピル－１－Ｏ－（ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）ブタンジオエート（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ）、ペグ化セラミド（ＰＥＧ－ｃｅｒ）、またはＰＥＧジアルコキシプロピルカルバメート、例えば、ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル－Ｎ－（２，３－ジ（テトラデカンオキシ）プロピル）カルバメートまたは２，３－ジ（テトラデカンオキシ）プロピル－Ｎ－（ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）カルバメートなどを含む。様々な実施形態では、化合物 対 ペグ化脂質のモル比は、約１００：１～約２０：１の範囲である。
一部の実施形態では、ＬＮＰは、以下の構造（ＩＩ）：
Figure 0007355731000013
 （式中、
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、１０～３０個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐状のアルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、アルキル、アルケニルまたはアルキニルは、１つまたは複数のエステル結合により、必要に応じて分断されており、
ｗは、３０～６０の範囲の平均値を有する）
を有するペグ化脂質またはその薬学的に許容される塩、互変異性体もしくは立体異性体を含む。
一部の実施形態では、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、１２～１６個の炭素原子を含有する直鎖状のアルキルである。一部の実施形態では、ｗは、４３～５３の範囲の平均値を有する。他の実施形態では、ｗの平均は約４５である。他の異なる実施形態では、ｗの平均は約４９である。
上記脂質、脂質ナノ粒子および組成物の調製方法は、本明細書に以下に記載されており、および／または、例えば、それぞれこれら全体において参照により本明細書に組み込まれている、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１５／１９９９５２、ＷＯ２０１７／００４１４３およびＷＯ ２０１７／０７５５３１において当技術分野で公知である。
前述の組成物の一部の実施形態では、治療剤は核酸を含む。例えば、一部の実施形態では、核酸は、アンチセンスおよびメッセンジャーＲＮＡから選択される。
他の異なる実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に治療剤を投与するための方法であって、前述の組成物のいずれかを調製または提供するステップと、組成物を患者に投与するステップとを含む方法を対象とする。
投与の目的のために、構造（Ｉ）の化合物（通常、治療剤と組み合わせた脂質ナノ粒子の形態で）は、粗製の化学物質（ｒａｗ ｃｈｅｍｉｃａｌ）として投与してもよいし、または医薬組成物として製剤化してもよい。本発明の実施形態の医薬組成物は、構造（Ｉ）の化合物（例えば、ＬＮＰ中の構成成分として）と、１種または複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む。構造（Ｉ）の化合物は、例えば、目的の特定疾患または状態を処置するために、脂質ナノ粒子を形成し、治療剤を送達するのに有効である量で、組成物中に存在する。適当な濃度および投薬量は、当業者により容易に決定することができる。
本発明の実施形態の組成物および／またはＬＮＰの投与は、同様の有用性を果たすための薬剤の容認された投与モードのいずれかを介して行うことができる。本発明の実施形態の医薬組成物は、固体、半固体、液体または気体の形態の調製物、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、懸濁剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア、およびエアゾールに製剤化することができる。このような医薬組成物を投与する典型的な経路として、限定されないが、経口、局所、経皮、吸入、腹腔、舌下、頬側、直腸、膣、および鼻腔内が挙げられる。本明細書で使用される腹腔という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、皮内、胸骨内注射または注入技術を含む。本発明の医薬組成物は、組成物を患者に投与すると、その中に含有されている活性成分が生物学的に利用可能となるように製剤化される。被験体または患者に投与される組成物は、１つまたは複数の投薬単位の形態をとり、この場合、例えば、錠剤は、単一投薬単位であってよく、エアゾール形態の構造（Ｉ）の化合物の容器は、複数の投薬単位を保持することができる。このような剤形を調製する実際の方法は公知であるか、または当業者には明らかであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０版（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０００年）を参照されたい。投与される組成物は、いずれにしても、本発明の実施形態の教示に従って、目的の疾患または状態の処置のための、治療有効量の構造（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含有する。
本発明の実施形態の医薬組成物は、固体または液体の形態であってよい。一態様では、担体（複数可）は微粒子であり、これによって、組成物は、例えば、錠剤または散剤の形態である。担体（複数可）は液体であってよく、組成物は、例えば、経口シロップ剤、注射液または、例えば、吸入投与に有用であるエアゾールである。
経口投与が意図される場合、医薬組成物は、好ましくは、固体または液体のいずれかの形態であり、半固体、半液体、懸濁物およびゲル形態は、本明細書で固体または液体のいずれかと考えられる形態に含まれる。
経口投与のための固体組成物として、医薬組成物は、散剤、顆粒剤、圧縮錠剤、丸剤、カプセル剤、チューインガム、カシェ剤などの形態に製剤化することができる。このような固体組成物は、通常１種または複数の不活性希釈剤または食用担体を含有する。加えて、以下の１つまたは複数が存在し得る：結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなど；賦形剤、例えば、デンプン、ラクトースまたはデキストリンなど；崩壊剤、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、コーンスターチなど；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステロテックスなど；流動促進剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素など；甘味剤、例えば、スクロースまたはサッカリンなど；矯味矯臭剤、例えば、ペパーミント、サルチル酸メチルまたはオレンジ香味料など；および着色剤。
医薬組成物がカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセル剤の形態である場合、医薬組成物は、上記タイプの材料に加えて、液体担体、例えば、ポリエチレングリコールまたは油などを含有してもよい。
医薬組成物は、液体の形態、例えば、エリキシル剤、シロップ剤、液剤、乳剤または懸濁剤などであってよい。液体は、２つの例として、経口投与用または注射による送達のためのものであってよい。経口投与が意図される場合、好ましい組成物は、本化合物またはＬＮＰに加えて、甘味剤、防腐剤、染料／着色剤および香味向上剤の１種または複数を含有する。注射による投与が意図される組成物では、界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝液、安定剤および等張剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）の１種または複数が含まれてもよい。
本発明の実施形態の液体医薬組成物は、これらが、液剤、懸濁剤または他の同様の形態であろうと、以下のアジュバントの１種または複数を含み得る：無菌希釈剤、例えば、注射用蒸留水、食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル溶液、等張性塩化ナトリウムなど、不揮発性油、例えば、溶媒または懸濁媒としての役目を果たすことができる合成モノまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒など；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸など；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩など、および張度調整剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースなど；抗凍結剤として作用する薬剤、例えば、スクロースまたはトレハロースなど。腹腔調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回用量バイアルに封入することができる。生理食塩水は好ましいアジュバントである。注射用医薬組成物は好ましくは無菌である。
腹腔または経口投与のいずれかを意図する本発明の実施形態の液体医薬組成物は、適切なＬＮＰが得られるように、ある量の構造（Ｉ）の化合物を含有すべきである。
本発明の実施形態の医薬組成物は局所投与を意図してもよく、この場合、担体は、液剤、乳剤、軟膏剤またはゲル剤の基剤を適切に含むことができる。基剤は例えば、以下の１種または複数を含むことができる：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、希釈剤、例えば、水およびアルコールなど、ならびに乳化剤および安定剤。増粘剤は、局所投与用医薬組成物中に存在し得る。経皮投与が意図される場合、組成物は、経皮パッチまたはイオン導入デバイスを含むことができる。
本発明の実施形態の医薬組成物は、例えば、直腸内で融解して、薬物を放出する坐剤の形態で、直腸投与を意図することができる。直腸投与用組成物は、適切な非刺激性賦形剤として油性基剤を含有してもよい。このような基剤として、限定されないが、ラノリン、ココアバターおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
本発明の実施形態の医薬組成物は、固体または液体投薬単位の物理的形態を改変する様々な材料を含むことができる。例えば、組成物は、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する材料を含むことができる。コーティングシェルを形成する材料は通常不活性であり、例えば、糖、セラック、および他の腸溶コーティング剤から選択することができる。代わりに、活性成分をゼラチンカプセル剤に入れることができる。
固体または液体形態の本発明の実施形態の医薬組成物は、構造（Ｉ）の化合物に結合し、これによって、化合物の送達を補助する薬剤を含むことができる。この能力で作用することができる適切な薬剤として、モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、またはタンパク質が挙げられる。
本発明の実施形態の医薬組成物は、エアゾールとして投与することができる投薬単位からなってもよい。エアゾールという用語は、コロイド状の性質のものから加圧パッケージからなる系までにわたって様々な系を表すのに使用される。送達は、液化ガスもしくは加圧ガスによるものであっても、または活性成分を分配する適切なポンプシステムによるものであってもよい。構造（Ｉ）の化合物のエアゾールは、活性成分（複数可）を送達するために単相、二相、または三相系で送達することができる。エアゾールの送達は、一緒になってキットを形成することができる、必要な容器、アクチベーター、弁、副容器（ｓｕｂ－ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）などを含む。当業者は、過度の実験を行わずに、好ましいエアゾールを決定することができる。
本発明の実施形態の医薬組成物は、薬学分野において周知の方法により調製することができる。例えば、注射による投与を意図する医薬組成物は、溶液を形成するために、本発明の脂質ナノ粒子を、無菌の、蒸留水または他の担体と組み合わせることによって調製することができる。界面活性剤は、均一溶液または懸濁物の形成を促進するために加えることができる。界面活性剤は、水系送達系において化合物の溶解または均一な懸濁を促進するために、構造（Ｉ）の化合物と非共有結合的に相互作用する化合物である。
本発明の実施形態の組成物またはこれらの薬学的に許容される塩は、治療有効量で投与されるが、この治療有効量は、利用する特定の治療剤の活性、治療剤の代謝安定性および作用期間、患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、および食事、投与のモードおよび時間、排出速度、薬物の組合せ、特定の障害または状態の重症度、ならびに治療を受ける被験体を含めた、様々な因子に応じて変動することになる。
本発明の実施形態の組成物はまた、１種または複数の他の治療剤の投与と同時に、投与前に、または投与後に投与することもできる。このような併用療法は、本発明の実施形態の組成物と、１種または複数の追加の活性薬剤の単一の医薬投与製剤の投与、ならびに本発明の組成物および各活性薬剤の、それ自体別個の医薬投与製剤での投与を含む。例えば、本発明の実施形態の組成物および他の活性薬剤は、錠剤もしくはカプセル剤などの単一の経口投与組成物として一緒に患者に投与することができ、または各薬剤を別個の経口投与製剤として投与することができる。別個の投与製剤を使用する場合、構造（Ｉ）の化合物および１種または複数の追加的活性薬剤は、本質的に同じ時間、すなわち、同時に、または時間をずらして別々に、すなわち、逐次的に投与することができ、併用療法は、これらのすべてのレジメンを含むと理解されている。
上記化合物および組成物のための調製方法は、本明細書で以下に記載されており、および／または当技術分野で公知である。
本明細書に記載のプロセスにおいて、中間体化合物の官能基を適切な保護基で保護することが必要であり得ることは、当業者であれば理解している。このような官能基として、ヒドロキシ、アミノ、メルカプトおよびカルボン酸が挙げられる。ヒドロキシの適切な保護基として、トリアルキルシリルまたはジアリールアルキルシリル（例えば、ｔ－ブチルジメチルシリル、ｔ－ブチルジフェニルシリルまたはトリメチルシリル）、テトラヒドロピラニル、ベンジルなどが挙げられる。アミノ、アミジノおよびグアニジノの適切な保護基として、ｔ－ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどが挙げられる。メルカプトの適切な保護基として、－Ｃ（Ｏ）－Ｒ”（式中、Ｒ”は、アルキル、アリールまたはアリールアルキルである）、ｐ－メトキシベンジル、トリチルなどが挙げられる。カルボン酸の適切な保護基として、アルキル、アリールまたはアリールアルキルエステルが挙げられる。保護基は、当業者に公知であり、本明細書に記載されているような標準技術に従って付加または除去することができる。保護基の使用は、Ｇｒｅｅｎ， Ｔ．Ｗ．およびＰ．Ｇ．Ｍ． Ｗｕｔｚ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９９年）、３版、Ｗｉｌｅｙにおいて詳細に記載されている。当業者であれば理解しているように、保護基はまた、ポリマー樹脂、例えば、Ｗａｎｇ樹脂、Ｒｉｎｋ樹脂または２－クロロトリチル－クロリド樹脂などであってもよい。
本発明の化合物のそのような保護された誘導体は、それ自体では薬理活性を保有しないことがあるが、哺乳動物に投与され、その後、体内で代謝されて、薬理学的に活性である構造（Ｉ）の化合物を形成し得ることも、当業者であれば理解する。したがって、そのような誘導体は、「プロドラッグ」として記載され得る。構造（Ｉ）の化合物のすべてのプロドラッグは、本発明の実施形態の範囲内に含まれる。
さらに、遊離塩基または酸形態で存在するすべての構造（Ｉ）の化合物は、当業者に公知の方法により適当な無機塩基もしくは有機塩基または無機酸もしくは有機酸で処理することによって、これらの薬学的に許容される塩に変換することができる。構造（Ｉ）の化合物の塩は、標準技術によりこれらの遊離塩基または遊離酸の形態に変換することができる。
構造（Ｉ）の化合物およびこれを含む脂質ナノ粒子は、当業者に公知または当業者によって導き出せる方法、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１５／１９９９５２、ＷＯ２０１７／００４１４３およびＷＯ２０１７／０７５５３１（これらのそれぞれがその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示された方法に従い、調製することができる。
以下の一般反応スキームは、構造（Ｉ）の化合物：
Figure 0007355731000014
 （式中、Ｒ３、Ｌ１、Ｌ２、Ｇ１、Ｇ２およびＧ３は本明細書で定義されているとおりである）
またはその薬学的に許容される塩、互変異性体もしくは立体異性体を作製する例示的方法を例示している。当業者は、同様の方法で、または当業者に公知の他の方法を組み合わせることによりこれらの化合物を作製可能であり得ることが理解されている。当業者であれば、適当な開始構成成分を使用し、必要に応じて合成のパラメーターを改変することによって、以下に具体的に示されていない、構造（Ｉ）の他の化合物を、以下に記載されているものと同様の方式で作製可能であることもまた理解されている。一般的に、開始構成成分は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＴＣＩおよびＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍ ＵＳＡなどの供給元から得てもよく、当業者に公知の情報元に従い合成してもよく（例えば、Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition (Wiley, December 2000)を参照されたい）、または本発明に記載の通り調製してもよい。
Figure 0007355731000015
 構造（Ｉ）の化合物の実施形態（例えば、化合物Ａ－５）は、一般反応スキーム１（「方法Ａ」）に従い調製することができ、式中、Ｒは、出現ごとに独立して、Ｒ１またはＲ２を表し、ｍは、０～２３の整数であり、各ｎは、独立して、２～１２の整数である。一般反応スキーム１について言及すると、構造Ａ－１の化合物は、商業的供給源から購入してもよく、当業者によく知られている方法に従い調製してもよい。Ａ－１、Ａ－２およびＤＭＡＰの混合物をＤＣＣで処理して、臭化物Ａ－３を得る。臭化物Ａ－３、塩基（例えば、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）およびＮ，Ｎ－ジメチルジアミンＡ－４の混合物を、任意の必要な後処理およびまたは精製ステップの後、Ａ－５を生成するために十分な温度および時間で加熱する。
Figure 0007355731000016
 構造（Ｉ）の化合物の実施形態（例えば、化合物Ｂ－５）は、一般反応スキーム２（「方法Ｂ」）に従い調製することができ、式中、Ｒは、出現ごとに独立して、Ｒ１またはＲ２を表し、ｍは、０～２３の整数であり、各ｎは、独立して、２～１２の整数である。一般反応スキーム２に示されるように、構造Ｂ－１の化合物は、商業的供給源から購入してもよく、当業者によく知られている方法に従い調製してもよい。Ｂ－１（１当量）の溶液を酸塩化物Ｂ－２（１当量）および塩基（例えば、トリエチルアミン）で処理する。粗生成物を酸化剤（例えば、クロロクロム酸ピリジニウム）で処理し、中間生成物Ｂ－３を回収する。次いで、粗製のＢ－３、酸（例えば、酢酸）およびＮ，Ｎ－ジメチルアミノアミンＢ－４の溶液を還元剤（例えば、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）で処理して、任意の必要な後処理および／または精製の後、Ｂ－５を得る。
出発材料Ａ－１およびＢ－１は飽和メチレン炭素のみを含むものとして上記で示されているが、炭素－炭素二重結合を含む出発材料もまた炭素－炭素二重結合を含む化合物の調製に利用され得ることに注目されたい。
Figure 0007355731000017
 構造（Ｉ）の化合物の実施形態（例えば、化合物Ｃ－７）は、一般反応スキーム３（「方法Ｃ」）に従い調製することができ、式中、Ｒは、出現ごとに独立して、Ｒ１またはＲ２を表し、ｍは、０～２３の整数であり、各ｎは、独立して、２～１２の整数である。一般反応スキーム３について言及すると、構造Ｃ－１の化合物は、商業的供給源から購入してもよく、当業者によく知られている方法に従い調製してもよい。Ｃ－１と適当なヒドロキシルアミン（例えば、Ｃ－２）との反応、これに続いて塩素化により、塩化物Ｃ－５を生成し、これを適当な第二級アミン（例えば、Ｃ－６）で処理して、任意の必要な後処理および／または精製の後、所望の化合物を生成することができる。
構造（Ｉ）の化合物の調製のための様々な代替の戦略が当業者に利用可能であることに注目されたい。例えば、Ｒ５部分は、置換基、例えば、ヒドロキシルを含み、置換基をマスクするために適切な保護基が必要とされ得るか、または置換基はＲ５が分子の残りに加えられた後に加えられてもよい。必要な場合の保護基の使用、および上記一般反応スキーム１～３の他の改変が、当業者には容易に明らかとなる。以下の実施例は、例示の目的で提供されるものである、限定ではない。
（実施例１）
脂質ナノ粒子組成物を使用したルシフェラーゼｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏ評価
構造（Ｉ）の脂質、ＤＳＰＣ、コレステロールおよびＰＥＧ－脂質を、５０：１０：３８．５：１．５または４７．５：１０：４０．８：１．７のモル比で、エタノール中で可溶化した。脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、全脂質のｍＲＮＡに対する重量比約１０：１～３０：１で調製した。簡単に説明すると、１０～５０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ４で、ｍＲＮＡを０．２ｍｇ／ｍＬに希釈した。シリンジポンプを使用して、１５ｍＬ／分を超える全流量で、エタノール性脂質溶液とｍＲＮＡ水溶液を約１：５～１：３（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の比で混合した。次いで、エタノールを除去し、外部の緩衝液を透析によりＰＢＳに置き換えた。最後に、脂質ナノ粒子を、０．２μｍ細孔の無菌フィルターを介して濾過した。
動物実験委員会（ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ ａｎｉｍａｌ ｃａｒｅ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＡＣＣ））およびカナダ動物管理協会（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）（ＣＣＡＣ）により確立されたガイドラインに従い、６～８週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）、８～１０週齢のＣＤ－１（Ｈａｒｌａｎ）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において研究を実施した。異なる用量のｍＲＮＡ－脂質ナノ粒子を尾静脈注射により全身投与し、投与後特定の時点（例えば、４時間）で動物を安楽死させた。肝臓および脾臓を、予め計量した管内に採取し、重量を決定し、液体窒素中で直ちに瞬間凍結し、分析用の処理が行われるまで－８０℃で保存した。
肝臓に関して、約５０ｍｇを分析用に切開し、２ｍＬのＦａｓｔＰｒｅｐ管（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｓｏｌｏｎ ＯＨ）内に入れた。１／４インチのセラミック球（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を各管に加え、室温に平衡化させた５００μＬのＧｌｏ溶解緩衝液－ＧＬＢ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）を肝臓組織に加えた。ＦａｓｔＰｒｅｐ２４装置（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を２×６．０ｍ／秒で１５秒間用いて、肝臓組織をホモジナイズした。ホモジネートを室温で５分間インキュベートした後、ＧＬＢで１：４希釈し、ＳｔｅａｄｙＧｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して評価した。具体的に、５０μＬの希釈された組織ホモジネートを５０μＬのＳｔｅａｄｙＧｌｏ基質と反応させ、１０秒間振盪させ、これに続いて５分間インキュベートし、次いで、ＣｅｎｔｒｏＸＳ３ ＬＢ ９６０照度計（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して定量化した。アッセイしたタンパク質の量をＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用して決定した。次いで、相対発光単位（ＲＬＵ）をアッセイした全タンパク質（μｇ）に正規化した。ＲＬＵをルシフェラーゼ（ｎｇ）に変換するために、ＱｕａｎｔｉＬｕｍ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて検量線を作成した。
Ｔｒｉｌｉｎｋ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製ＦＬｕｃ ｍＲＮＡ（Ｌ－６１０７またはＬ－７６０２）は、もともとホタル、ｐｈｏｔｉｎｕｓ ｐｙｒａｌｉｓから単離したルシフェラーゼタンパク質を発現する。ＦＬｕｃは、遺伝子発現および細胞生存度の両方を測定するために、哺乳動物細胞培養物に一般的に使用される。これは、基質、ルシフェリンの存在下で生物発光を放出する。このキャッピングおよびポリアデニル化されたｍＲＮＡは、５－メチルシチジンおよびプソイドウリジンで完全に置換されている。
実施例２
製剤化した脂質のｐＫａの決定
他の箇所で記載されているように、製剤化した脂質のｐＫａは、核酸の送達のためのＬＮＰの有効性と相関する（Jayaraman et al, Angewandte Chemie, International Edition (2012), 51(34), 8529-8533；Semple et al, Nature Biotechnology 28, 172-176 (2010)を参照されたい）。一部の実施形態では、ｐＫａの好ましい範囲は約５～約７である。２－（ｐ－トルイジノ）－６－ナフタレンスルホン酸（ＴＮＳ）の蛍光に基づくアッセイを使用して、構造（Ｉ）の代表的化合物のｐＫａを脂質ナノ粒子において決定した。ＰＢＳ中に、構造（Ｉ）の化合物／ＤＳＰＣ／コレステロール／ＰＥＧ－脂質（５０／１０／３８．５／１．５または４７．５：１０：４０．８：１．７ｍｏｌ％）を総脂質濃度０．４ｍＭで含む脂質ナノ粒子を、実施例１に記載されているようなインラインプロセスを使用して調製した。ＴＮＳは、蒸留水中１００μＭストック溶液として調製した。１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭＥＳ、１０ｍＭ酢酸アンモニウム、および１３０ｍＭ ＮａＣｌ（このｐＨは２．５～１１の範囲である）を含有する２ｍＬの緩衝化溶液中で、ベシクルを２４μＭの脂質に希釈した。一定分量のＴＮＳ溶液を加えて、最終濃度を１μＭにし、ボルテックス混合した後、３２１ｎｍおよび４４５ｎｍの励起および発光波長を使用する、ＳＬＭ Ａｍｉｎｃｏ Ｓｅｒｉｅｓ ２ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒで、室温で蛍光強度を測定した。シグモイドの適合度分析（best fit analysis）を蛍光データに適用し、最大半量の蛍光強度を引き起こすｐＨとしてｐＫａを測定した。
脂質ナノ粒子の粒径は、直径およそ５５～９５ｎｍであり、ある事例では、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）を使用した準弾性光散乱により決定した場合、直径およそ７０～９０ｎｍであった。示された直径は強度加重平均値である。蛍光インターカレート染料ベースアッセイ（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ）を使用して封入を決定する。
構造（Ｉ）の化合物は、下記のモル比：４７．５％カチオン性脂質／１０％ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）／４０．８％コレステロール／１．７％ＰＥＧ脂質（「ＰＥＧ－ＤＭＡ」２－［２－（ω－メトキシ（ポリエチレングリコール２０００）エトキシ］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド）を使用して製剤化した。実施例１に記載の通り尾静脈注射を介した投与の４時間後、肝臓内のルシフェラーゼ発現を測定することによって、相対的な活性を決定した。
実施例３
ｉｎ ｖｉｖｏルシフェラーゼｍＲＮＡ発現げっ歯類モデルを使用する様々なカチオン性脂質を含有する脂質ナノ粒子製剤の有効性の決定
表２に示されているカチオン性脂質は、核酸で以前に試験されたものである。比較する目的で、これらの脂質を、実施例１においておよびＰＣＴ／ＵＳ１０／２２６１４（これによって、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）において記載されているように、株混合法を使用して、ＦＬｕｃ ｍＲＮＡ（Ｌ－６１０７）を含有する脂質ナノ粒子を製剤化するためにも使用した。脂質ナノ粒子は、以下のモル比：５０％カチオン性脂質／１０％ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）／３８．５％コレステロール／１．５％ＰＥＧ脂質（「ＰＥＧ－ＤＭＧ」、すなわち、１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール、２０００の平均ＰＥＧ分子量を持つ）を使用して製剤化され得る。代替実施形態では、カチオン性脂質、ＤＳＰＣ、コレステロールおよびＰＥＧ－脂質は、約４７．５：１０：４０．８：１．７のモル比で製剤化される。実施例１に記載の通り尾静脈注射を介した投与の４時間後、肝臓内のルシフェラーゼ発現を測定することによって、相対的な活性を決定した。０．３および１．０ｍｇのｍＲＮＡ／ｋｇの用量での活性を比較し、実施例１に記載の通り、投与の４時間後に測定したルシフェラーゼ（ｎｇ）／肝臓（ｇ）として表現した。
Figure 0007355731000018
表３に示されている本発明の代表的化合物は、以下のモル比：５０％カチオン性脂質／１０％ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）／３８．５％コレステロール／１．５％ＰＥＧ脂質（「ＰＥＧ－ＤＭＡ」２－［２－（ω－メトキシ（ポリエチレングリコール２０００）エトキシ］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド）または４７．５％カチオン性脂質／１０％ＤＳＰＣ／４０．８％コレステロール／１．７％ＰＥＧ脂質を使用して製剤化した。そうではないと述べない限り、０．５ｍｇのｍＲＮＡ／ｋｇの用量での活性を比較し、実施例１に記載の通り、投与の４時間後に測定したルシフェラーゼ（ｎｇ）／肝臓（ｇ）として表現した。表３中の化合物番号は、表１の化合物番号を指す。
Figure 0007355731000019
実施例４
Figure 0007355731000020
４－１の合成
６－ブロモヘキサン酸（１６ｍｍｏｌ、３．１２ｇ）、２－ヘキシル－１－デカノール（２２．４ｍｍｏｌ、５．４３ｇ）およびＤＭＡＰ（８ｍｍｏｌ、９７６ｍｇ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、ＤＣＣ（１７．６ｍｍｏｌ、３．６２ｇ）を加えた。生成した混合物を室温で１６時間撹拌した。沈殿物（ＤＣＵ）を濾過によって除去した。濾液を濃縮し、生成した残留油状物質／固体をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～５％酢酸エチル）により精製した。これにより、所望の生成物を無色の油状物質として得た（５．７９ｇ、無色の油状物質、１３．８ｍｍｏｌ、８６％）。
４－２の合成
２－アミノエタノール（３３３ｍｇ、５．４６ｍｍｏｌ）の３５ｍｌの無水ＴＨＦ溶液に、４－１（４．３７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．４４ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５３４ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（３０ｍｇ）を加えた。生成した混合物を密閉圧力フラスコ内で、７０Ｃで６日間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をヘキサンおよび酢酸エチル（９４：４）の混合物中に入れ、水およびブラインで洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥抽出物（３２０ｍＬ）をシリカゲルのカラムに充填した。カラムを、ヘキサン、ＥｔＯＡｃおよびトリエチルアミン（９５：５：０～８０：２０：１）の混合物で溶出した。これにより、所望の生成物を無色の油状物質として得た（２．６８ｇ、３．６３ｍｍｏｌ、７０％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.53 (t, 5.3 Hz, 2H), 3.08-2.79 (br. 1H), 2.57 (t, 5.3 Hz, 2H), 2.45 (t様, 7.4 Hz, 4H), 2.31 (t, 7.5 Hz, 4H), 1.67-1.59 (m, 6H), 1.51-1.41 (m, 4H), 1.38-1.10 (52H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 12H).
４－３の合成
１ｍＬのＣＨＣ１３中の４－２（３００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、５ｍＬのクロロホルム中の塩化チオニル（１．２３ｍｍｏｌ、１４６ｍｇ）を、Ａｒ雰囲気下、滴下添加した。ＳＯＣｌ２の添加（１～２分）が完了した後、氷浴を取り除き、反応混合物を室温（２０Ｃ）で１６時間撹拌した。クロロホルムおよびＳＯＣｌ２の減圧下での除去により、濃厚な暗赤色の油状物質を得た。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（微量のＥｔ３Ｎを含むクロロホルム中０～１％ＭｅＯＨ）により精製した。所望の生成物を褐色油状物質として得た（１９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、６１％）。
化合物１の合成
４－３（１９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させた。溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２１７ｍＬ）および４－４（０．７５ｍｍｏｌ、１４０ｍｇ；１－ブロモノナンおよびアミノエタノールから調製）を加えた。密閉混合物を６９Ｃで一晩加熱した。翌日、ヨウ化ナトリウム（１０ｍｇ）を混合物に加え、加熱（６５Ｃで）を再開した。３日後、混合物を冷却し、濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン、ＥｔＯＡｃおよびトリエチルアミン（９５：５：０～８０：２０：１）の混合物で溶出した。これにより、所望の生成物を無色の油状物質として得た（１５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６６％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.90-4.20 (br. 1H), 3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.52 (t, 5.0 Hz, 2H), 2.61-2.53 (m, 4H), 2.52-2.45 (m, 4H), 2.45-2.40 (m, 4H), 2.31 (t, 7.5 Hz, 4H), 1.69-1.60 (m, 6H), 1.52-1.40 (m, 6H), 1.36-1.18 (64H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 15H).
実施例５
Figure 0007355731000021
 化合物２を、化合物１と類似の方式で合成した（５０ｍｇ、無色の油状物質）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.65-5.43 (br. 1H), 3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.77 (t, 5.1 Hz, 2H), 2.62 (t様, 5.6 Hz, 2H), 2.57-2.46 (m, 4H), 2.44-2.38 (m, 6H), 2.31 (t, 7.5 Hz, 4H), 1.69-1.60 (m, 8H), 1.51-1.40 (m, 6H), 1.36-1.18 (62H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 15H).
実施例６
Figure 0007355731000022
 化合物３を、化合物１と類似の方式で合成した（６２ｍｇ、無色の油状物質）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) d: 4.43-4.07 (br. 2H), 3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.58 (t, 5.0 Hz, 4H), 2.71 (t, 5.3 Hz, 4H), 2.68-2.63 (br, 2H), 2.57-2.35 (m, 6H), 2.30 (t, 7.5 Hz, 4H), 1.67-1.56 (m, 8H), 1.52-1.40 (br., 4H), 1.39-1.18 (60H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 12H).実施例２に記載されている方法を使用して、この化合物のｐＫａは７．１８であることが決定された。
実施例７
Figure 0007355731000023
 化合物４を、化合物１と類似の方式で合成した（無色の油状物質、２５１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ、アルコール４－２から２ステップで５１％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) d: 3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.57 (t様, 5.5 Hz, 2H), 2.62-2.38 (m, 10H), 2.32 (s, 3H). 2.31 (t, 7.4 Hz, 4H), 1.91-1.64 (br. 推定2H, OH), 1.69-1.59 (m, 6H), 1.54-1.40 (m, 4H), 1.37-1.19 (m, 52H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 12H).
実施例８
Figure 0007355731000024
 ステップ１． ８ｍＬのＣＨＣ１３中の４－２（２．１６ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、３５ｍＬのクロロホルム中の塩化チオニル（８．７９ｍｍｏｌ、１．０５ｇ、０．６４１）の溶液を、Ａｒ雰囲気下、滴下添加した。ＳＯＣｌ２の添加（１～２分）の完了後、氷浴を取り除き、反応混合物を室温（２０Ｃ）で１６時間撹拌した。ＣＨＣ１３およびＳＯＣｌ２の減圧下での除去により、濃厚な暗赤色の油状物質を得た。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（微量のＥｔ３Ｎを含むクロロホルム中０～１％ＭｅＯＨ）により精製した。所望の生成物を褐色油状物質として得た（１．７８６ｇ、２．３６ｍｍｏｌ、８０％）。
ステップ２． 圧力フラスコ内の、上記塩化物（１９０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、８－１（３当量、０．７５ｍｍｏｌ、１３０ｍｇ、９－ブロモ－１－ノナノールおよびメチルアミンから調製）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２１７ｍＬ）、ヨウ化ナトリウム（１０ｍｇ）およびＴＨＦ（６ｍＬ）の混合物を、６３Ｃで３日間加熱した。
混合物を冷却し、濃縮した。残渣をシリカゲル上でのフラッシュドライカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ－Ｅｔ３Ｎ、９５：５：０～８０：２０：１、およびクロロホルム中ＭｅＯＨ、０～５％）により２回精製した。所望の生成物を無色の油状物質として得た（１４０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、６３％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ:3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.65 (t, 6.6 Hz, 2H), 2.57-2.51 (m, 2H), 2.44-2.39 (m, 6H), 2.35-2.28 (m, 6H), 2.23 (s, 3H), 1.68-1.53 (m, 9H), 1.50-1.41 (m, 6H), 1.39-1.10 (62H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 12H).
実施例９
Figure 0007355731000025
 化合物６を、化合物１と類似の方式で合成した（無色の油状物質、１１５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、５２％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.63 (br. s, 1H), 3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.77 (t, 5.1 Hz, 2H), 2.63 (t様, 5.6 Hz, 2H), 2.57-2.48 (m, 6H), 2.43-2.38 (m, 4H), 2.30 (t, 7.5 Hz, 4H), 1.69-1.58 (m, 8H), 1.47-1.39 (m, 4H), 1.37-1.18 (60H), 1.05 (t, 7.1 Hz, 3H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 12H).実施例２に記載されている方法を使用して、この化合物のｐＫａは６．８２であることが決定された。
実施例１０
Figure 0007355731000026
 化合物７を、化合物１と類似の方式で合成した（無色の油状物質、１６６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、６５％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ:3.97 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.65 (t, 6.6 Hz, 2H), 2.58-2.28 (m, 14H), 2.23 (s, 3H), 1.68-1.53 (m, 9H), 1.50-1.41 (m, 6H), 1.39-1.10 (56H), 0.89 (t様, 6.8 Hz, 12H).
実施例１１
Figure 0007355731000027
１１－１の合成
２－ブチルオクタン酸（２６．９ｍｍｏｌ、５．３８８ｇ）、９－ブロモ－１－ノナノール（４ｇ、１８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（９ｍｍｏｌ、１．１０ｇ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液に、ＤＣＣ（１９．８ｍｍｏｌ、４．０８ｇ）を加えた。生成した混合物を室温で１６時間撹拌した。沈殿物（ＤＣＵ）を濾過によって除去した。濾液を濃縮し、粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュドライカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～３％酢酸エチル）により精製した。所望の化合物を無色の油状物質として得た（６．４２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、８８％）。
１１－２の合成
圧力フラスコ内の１１－１（２．４１ｇ、５．９４ｍｍｏｌ）、２－アミノエタノール（１８５ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．３２ｍＬ）および無水アセトニトリル（２０ｍＬ）の混合物を、８０℃で１６時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュドライカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ－Ｅｔ３Ｎ、９９：１：０～８０：２０：１）により精製した。所望の化合物を無色の油状物質として得た（１．４４１ｇ、無色の油状物質、２．０３ｍｍｏｌ、６８％）。
１１－３の合成
８ｍＬのＣＨＣ１３中の１１－２（１．４４１ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、塩化チオニル（６．０９ｍｍｏｌ、７２５ｍｇ）のクロロホルム（２５ｍＬ）溶液を、Ａｒ雰囲気下、滴下添加した。ＳＯＣｌ２の添加の完了後、氷浴を取り除き、反応混合物を室温（２０Ｃ）で１６時間撹拌した。ＣＨＣ１３およびＳＯＣｌ２の減圧下での除去により、濃厚な褐色油状物質、１．７３０ｇを得た。粗生成物（１．７３０ｇ）をシリカゲル上でのフラッシュドライカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２３０～４００メッシュグレード、微量のＥｔ３Ｎを含むクロロホルム中１％ＭｅＯＨ）により精製した。所望の化合物を褐色油状物質として得た（１．３５ｇ、１．８ｍｍｏｌ、９１％）。
化合物８の合成
ＴＨＦ（６ｍＬ）中の１１－３（２６８ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、８－１（０．７５ｍｍｏｌ、１３０ｍｇ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２２ｍＬ）およびヨウ化ナトリウム（１０ｍｇ）の混合物を密閉し、７０℃で３日間加熱した。混合物を冷却し、濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュドライカラムクロマトグラフィー（微量のＥｔ３Ｎを含むクロロホルム中０～５％ＭｅＯＨ）により精製した。所望の化合物を無色の油状物質として得た（１３５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、４３％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ:4.06 (t, 6.6 Hz, 4H), 3.64 (t, 6.6 Hz, 2H), 2.57-2.51 (m, 2H), 2.45-2.38 (m, 6H), 2.35-2.27 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.66-1.52 (m, 推定11H), 1.50-1.38 (m, 10H), 1.38-1.10 (54H), 0.90-0.85 (m, 12H).
実施例１２
Figure 0007355731000028
 化合物９を、化合物１と類似の方式で合成した（無色の油状物質、１５４ｍｇ、無色の油状物質、０．１７ｍｍｏｌ、５６％）。1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ:3.96 (d, 5.8 Hz, 4H), 3.64 (t, 6.6 Hz, 2H), 2.56-2.51 (m, 2H), 2.44-2.37 (m, 6H), 2.36-2.31 (m, 2H), 2.29 (t, 7.5 Hz, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.66-1.52 (m, 9H, 推定, 水のピークと重複), 1.52-1.37 (m, 8H), 1.37-1.08 (62H), 0.88 (t様, 6.8 Hz, 12H).
実施例１３
Figure 0007355731000029
 化合物１０を、上記のスキームに従い、化合物８と同様の方式で合成した。
上に記載の様々な実施形態は、組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本明細書において言及され、そして／または２０１７年８月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／５４６，３４６号を含む出願データシートに列挙されている、米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物のすべては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。実施形態の態様は、必要に応じて修正して、様々な特許、出願および公報の概念を利用し、またさらなる実施形態を提供することができる。これらおよび他の変更は、上記に詳述された記載を考慮して実施形態に行うことができる。一般的に、以下の特許請求の範囲において、使用された用語は、特許請求の範囲を、本明細書および特許請求の範囲で開示された特定の実施形態に限定するものと解釈されるべきではなく、このような特許請求の範囲の権利が与えられている同等物の全範囲と共に、すべての可能な実施形態を含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示により限定されない。

Claims (23)

  1. 以下の構造（ＩＡ）：
    Figure 0007355731000030
     を有する化合物またはその薬学的に許容される塩、もしくは立体異性体であって、
    式中、
    Ｌ１は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１、－ＯＲ１、－Ｓ（Ｏ）ｘＲ１、－Ｓ－ＳＲ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ１、－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ１、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒ１、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃまたは－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲ１であり、
    Ｌ２は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ２、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、－ＯＲ２、－Ｓ（Ｏ）ｘＲ２、－Ｓ－ＳＲ２、－Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２、－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ２、－ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒ２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ、－ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ；－ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＯＲ２またはＲ２への直接結合であり、
    Ｇ３は、Ｃ１～Ｃ２４アルキレン、Ｃ２～Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキレンまたはＣ３～Ｃ８シクロアルケニレンであり、
    Ｒａ、Ｒｂ、ＲｄおよびＲｅは、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ１２アルキルまたはＣ１～Ｃ１２アルケニルであり、
    ＲｃおよびＲｆは、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたはＣ２～Ｃ１２アルケニルであり、
    Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、分岐状Ｃ６～Ｃ２４アルキルまたは分岐状Ｃ６～Ｃ２４アルケニルであり、
    Ｒ３は－Ｎ（Ｒ４）Ｒ５であり、
    Ｒ４はＣ１～Ｃ１２アルキルであり、
    Ｒ５は、－ＯＲｇ 、および－ＯＲｉＯＨからなる群より選択される１つまたはそれより多くの置換基で置換されているＣ１～Ｃ１２アルキルであり、
    Ｒｇは、出現ごとに独立して、Ｈであり、
    Ｒｉは、出現ごとに独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキレンであり、
    ｙおよびｚは、それぞれ独立して、４～１２の範囲の整数であり、
    ｘは、０、１または２であり、
    アルキル、アルケニル、アルキレン、アルケニレン、シクロアルキレン、およびシクロアルケニレンは各々、他に特定されていない限り、独立して置換されているかまたは置換されていない、
    化合物またはその薬学的に許容される塩、もしくは立体異性体。
  2. Ｇ３がＣ１～Ｃ１２アルキレンである、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｇ３がＣ２またはＣ３アルキレンである、請求項１または２のいずれか一項に記載の化合物。
  4. Ｌ１が、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１または－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃであり、Ｌ２が、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ２、－（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２または－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
  5. 以下の構造（ＩＦ）、（ＩＧ）、（ＩＨ）または（ＩＪ）：
    Figure 0007355731000031
     の１つを有する、請求項４に記載の化合物。
  6. ｙおよびｚが、それぞれ独立して、４～１０の範囲の整数である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
  7. Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立して、分岐状Ｃ６～Ｃ２４アルキルである、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
  8. Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立して、以下の構造：
    Figure 0007355731000032
     を有し、
    式中、
    Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、出現ごとに独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ１２アルキルであり、
    ａは２～１２の整数であり、
    Ｒ７ａ、Ｒ７ｂおよびａは各々、Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立して分岐状であり、独立して６～２０個の炭素原子を含むように選択される、
    請求項７に記載の化合物。
  9. ａが８～１２の整数である、請求項８に記載の化合物。
  10. Ｒ１もしくはＲ２または両方が、独立して、以下の構造：
    Figure 0007355731000033
     の１つを有する、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
  11. Ｒ４が、置換されているかまたは置換されていない、メチル、エチル、プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－オクチルまたはｎ－ノニルである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
  12. Ｒ５が、置換されている、メチル、エチル、プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－オクチルまたはｎ－ノニルである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
  13. Ｒ５が置換されているエチルまたは置換されているプロピルである、請求項１２に記載の化合物。
  14. Ｒ４が置換されていないメチルである、請求項１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
  15. Ｒ５がヒドロキシルで置換されている、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の化合物。
  16. Ｒ３が、以下の構造：
    Figure 0007355731000034
     の１つを有する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
  17. 以下の化合物から選択される化合物。
    Figure 0007355731000035
    Figure 0007355731000036
    Figure 0007355731000037
    Figure 0007355731000038
    Figure 0007355731000039
    Figure 0007355731000040
    Figure 0007355731000041
    Figure 0007355731000042
    Figure 0007355731000043
  18. 請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物と治療剤とを含む、組成物。
  19. 前記治療剤が核酸を含む、請求項１８に記載の組成物。
  20. 前記核酸が、アンチセンスおよびメッセンジャーＲＮＡから選択される、請求項１９に記載の組成物。
  21. 前記治療剤を必要とする患者に投与するための医薬組成物の製造のための、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  22. 請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物を含む、脂質ナノ粒子。
  23. 請求項２２に記載の脂質ナノ粒子と、薬学的に許容される希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
JP2020508372A 2017-08-16 2018-08-16 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質 Active JP7355731B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2023107156A JP2023138986A (ja) 2017-08-16 2023-06-29 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762546346P 2017-08-16 2017-08-16
US62/546,346 2017-08-16
PCT/US2018/000293 WO2019036008A1 (en) 2017-08-16 2018-08-16 LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICULAR FORMULATIONS

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023107156A Division JP2023138986A (ja) 2017-08-16 2023-06-29 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2020531418A JP2020531418A (ja) 2020-11-05
JP2020531418A5 JP2020531418A5 (ja) 2021-09-30
JP7355731B2 true JP7355731B2 (ja) 2023-10-03

Family

ID=63787992

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020508372A Active JP7355731B2 (ja) 2017-08-16 2018-08-16 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質
JP2023107156A Pending JP2023138986A (ja) 2017-08-16 2023-06-29 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023107156A Pending JP2023138986A (ja) 2017-08-16 2023-06-29 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11639329B2 (ja)
EP (1) EP3668833A1 (ja)
JP (2) JP7355731B2 (ja)
CA (1) CA3073020A1 (ja)
WO (1) WO2019036008A1 (ja)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE061564T2 (hu) 2015-10-28 2023-07-28 Acuitas Therapeutics Inc Új lipidek és lipid nanorészecske készítmények nukleinsavak bevitelére
US11357856B2 (en) 2017-04-13 2022-06-14 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
CN116693411A (zh) 2017-04-28 2023-09-05 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的新型羰基脂质和脂质纳米颗粒制剂
US11524932B2 (en) 2017-08-17 2022-12-13 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2019036028A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICULAR FORMULATIONS
US20220273567A1 (en) 2018-09-21 2022-09-01 Acuitas Therapeutics, Inc. Systems and methods for manufacturing lipid nanoparticles and liposomes
JP2022512578A (ja) 2018-10-09 2022-02-07 ザ ユニヴァーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア 有機溶媒不含かつ劣化剤不含のトランスフェクション・コンピテント・ベシクルを含む組成物及びシステム並びにそれらに関連する方法
CN113474328A (zh) 2019-01-11 2021-10-01 爱康泰生治疗公司 用于脂质纳米颗粒递送活性剂的脂质
WO2020255014A1 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Recombinant interleukin 12 construct and uses thereof
WO2020255010A1 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of recombinant interleukin 12 construct and hepatitis b virus (hbv) vaccines
JP2022536945A (ja) 2019-06-18 2022-08-22 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ワクチンおよびＨＢＶを標的化するＲＮＡｉの組合せ
CA3143680A1 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibody
WO2020255009A2 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 antibody
MA56536A (fr) 2019-06-20 2022-04-27 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Administration de nanoparticules lipidiques ou de liposomes de vaccins contre le virus de l'hépatite b (vhb)
AR120080A1 (es) 2019-09-19 2022-02-02 Modernatx Inc Compuestos lipídicos de cola ramificada y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
US20220348908A1 (en) 2019-09-23 2022-11-03 Omega Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING HEPATOCYTE NUCLEAR FACTOR 4-ALPHA (HNF4alpha) GENE EXPRESSION
JP2022548320A (ja) 2019-09-23 2022-11-17 オメガ セラピューティクス， インコーポレイテッド アポリポタンパク質ｂ（ａｐｏｂ）遺伝子発現をモジュレートするための組成物および方法
AU2021234302A1 (en) 2020-03-11 2022-11-10 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression
WO2021204175A1 (en) 2020-04-09 2021-10-14 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid nanoparticle composition
TW202204622A (zh) 2020-04-09 2022-02-01 大陸商蘇州艾博生物科技有限公司 針對冠狀病毒之核酸疫苗
AU2021303478A1 (en) 2020-07-08 2023-02-16 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company RNA replicon vaccines against HBV
TW202245809A (zh) 2020-12-18 2022-12-01 美商詹森藥物公司 用於治療b型肝炎病毒感染之組合療法
EP4267740A1 (en) 2020-12-28 2023-11-01 Arcturus Therapeutics, Inc. Transcription activator-like effector nucleases (talens) targeting hbv
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
AR125204A1 (es) * 2021-03-24 2023-06-21 Modernatx Inc Compuestos de lípidos de cola ramificada y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
CA3220689A1 (en) * 2021-05-28 2022-12-01 Ciaran LAWLOR Lipid nanoparticles and methods of use thereof
WO2023283359A2 (en) 2021-07-07 2023-01-12 Omega Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression
WO2023023055A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Compositions and methods for optimizing tropism of delivery systems for rna
AU2022337090A1 (en) 2021-09-03 2024-02-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Substitution of nucleotide bases in self-amplifying messenger ribonucleic acids
WO2023031394A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
TW202328067A (zh) 2021-09-14 2023-07-16 美商雷納嘉德醫療管理公司 環狀脂質及其使用方法
WO2023044343A1 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Acyclic lipids and methods of use thereof
AR127312A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Compuestos lipídicos ycomposiciones de nanopartículas lipídicas
WO2023073228A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
WO2023081756A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 The J. David Gladstone Institutes, A Testamentary Trust Established Under The Will Of J. David Gladstone Precise genome editing using retrons
WO2023122752A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Renagade Therapeutics Management Inc. Constrained lipids and methods of use thereof
WO2023141602A2 (en) 2022-01-21 2023-07-27 Renagade Therapeutics Management Inc. Engineered retrons and methods of use
WO2023144330A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
WO2023144798A1 (en) * 2022-01-31 2023-08-03 Genevant Sciences Gmbh Ionizable cationic lipids for lipid nanoparticles
WO2023154451A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 Christiana Care Gene Editing Institute, Inc. Methods for lipid nanoparticle delivery of crispr/cas system
WO2023173203A1 (en) * 2022-03-14 2023-09-21 Nanovation Therapeutics Inc. Synthetic method for producing ionizable amino lipids
WO2023177904A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Modernatx, Inc. Sterile filtration of lipid nanoparticles and filtration analysis thereof for biological applications
WO2023196931A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and lipid nanoparticles (lnp) for the delivery of nucleic acids or peptides for use in vaccinating against infectious agents
WO2023218420A1 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Mrna compositions for inducing latent hiv-1 reversal
WO2023227608A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
WO2023233290A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Rnai agents targeting pd-l1
WO2023235589A1 (en) * 2022-06-03 2023-12-07 University Of Cincinnati Ionizable lipids, lipid nanoparticles for mrna delivery and methods of making the same
WO2023242817A2 (en) 2022-06-18 2023-12-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Recombinant rna molecules comprising untranslated regions or segments encoding spike protein from the omicron strain of severe acute respiratory coronavirus-2
WO2024020346A2 (en) 2022-07-18 2024-01-25 Renagade Therapeutics Management Inc. Gene editing components, systems, and methods of use
WO2024044147A1 (en) 2022-08-23 2024-02-29 Modernatx, Inc. Methods for purification of ionizable lipids
WO2024044723A1 (en) 2022-08-25 2024-02-29 Renagade Therapeutics Management Inc. Engineered retrons and methods of use
CN116396178A (zh) * 2023-01-05 2023-07-07 北京悦康科创医药科技股份有限公司 用于递送核酸的可电离阳离子脂质化合物和组合物及用途
CN116375592A (zh) * 2023-01-05 2023-07-04 北京悦康科创医药科技股份有限公司 长效低毒的新型阳离子脂质化合物及其组合物

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013086373A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
WO2016176330A1 (en) 2015-04-27 2016-11-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nucleoside-modified rna for inducing an adaptive immune response
WO2017075531A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
JP2017522376A (ja) 2014-06-25 2017-08-10 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 核酸の送達のための新規脂質および脂質ナノ粒子製剤
WO2018200943A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
JP2020500539A (ja) 2016-12-09 2020-01-16 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド 標的特異的ヌクレアーゼの送達

Family Cites Families (211)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2856420A (en) 1955-12-15 1958-10-14 Minnesota Mining & Mfg Perfluoro- and perfluorochlorocarboxylic acid esters of amino alcohols
US3340299A (en) 1964-03-27 1967-09-05 Air Reduction Tetrasubstituted ethylene diamines
GB1277947A (en) 1968-08-22 1972-06-14 Armour Ind Chem Co Compositions and method for controlling insect pests
US4491583A (en) 1970-08-07 1985-01-01 Pfizer Inc. Interferon induction in animals by amines
US3729564A (en) 1970-12-16 1973-04-24 Pfizer N-secondary alkyl alkanediamines and derivatives thereof as anti-inflammatory agents
JPS5122416B2 (ja) 1972-11-11 1976-07-09
JPS5718088B2 (ja) 1972-06-22 1982-04-14
DE2633615C3 (de) 1976-07-27 1981-08-13 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Verfahren zum Färben von synthetischen Polyamid-Fasermaterialien
DE3050800C2 (ja) 1979-03-22 1989-06-22 Continental Pharma Inc., Bruessel/Bruxelles, Be
US4883751A (en) 1986-05-28 1989-11-28 New York University Specific immunoassay for heparin
US6077509A (en) 1990-03-30 2000-06-20 Autoimmune, Inc. Peptide fragments of myelin basic protein
JP2588339B2 (ja) 1992-06-02 1997-03-05 花王株式会社 新規ジアミノジエステル及びその製造法
US6197553B1 (en) 1994-07-15 2001-03-06 Merck & Co., Inc. Method for large scale plasmid purification
FR2727679B1 (fr) 1994-12-05 1997-01-03 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux agents de transfection et leurs applications pharmaceutiques
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
EP0832271B8 (en) 1995-06-07 2005-03-02 INEX Pharmaceuticals Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
NZ313839A (en) 1995-07-21 1998-12-23 Genta Inc Amide-based cationic lipids
DE19605175A1 (de) 1996-02-13 1997-08-14 Sourovoi Andrej Dr Lipidverbindungen und deren Verwendung
JPH103643A (ja) 1996-06-12 1998-01-06 Fuji Photo Film Co Ltd ディスク状磁気記録媒体
WO1998016599A1 (en) 1996-10-11 1998-04-23 Infineum Holdings Bv Fuel compositions
CA2217550A1 (en) 1996-10-22 1998-04-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Cationic lipids for gene therapy
US6884430B1 (en) 1997-02-10 2005-04-26 Aventis Pharma S.A. Formulation of stabilized cationic transfection agent(s) /nucleic acid particles
US5965542A (en) 1997-03-18 1999-10-12 Inex Pharmaceuticals Corp. Use of temperature to control the size of cationic liposome/plasmid DNA complexes
US5756785A (en) 1997-03-21 1998-05-26 Lambent Technologies, Inc. Guerbet betaines
FR2763943B1 (fr) 1997-05-28 1999-07-09 Rhone Poulenc Rorer Sa Composes, leur preparation et leur utilisation pour le transfert d'acides nucleiques dans les cellules
US6395713B1 (en) 1997-07-23 2002-05-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Compositions for the delivery of negatively charged molecules
CA2315695A1 (en) 1997-12-23 1999-07-08 Inex Pharmaceuticals Corporation Polyamide oligomers
US6410328B1 (en) 1998-02-03 2002-06-25 Protiva Biotherapeutics Inc. Sensitizing cells to compounds using lipid-mediated gene and compound delivery
US6986902B1 (en) 1998-04-28 2006-01-17 Inex Pharmaceuticals Corporation Polyanionic polymers which enhance fusogenicity
US6013813A (en) 1998-06-17 2000-01-11 Hansotech Inc Guerbet based sorbitan esters
US6333433B1 (en) 1998-11-09 2001-12-25 Council Of Scientific Industrial Research Process for synthesis of novel cationic amphiphiles containing N-hydroxyalkl group for intracellular delivery of biologically active molecules
US6656498B1 (en) 1998-11-25 2003-12-02 Vanderbilt University Cationic liposomes for gene transfer
US5919743A (en) 1998-12-28 1999-07-06 Petroferm Inc. Guerbet branched quaternary compounds in personal care applications
US7112337B2 (en) 1999-04-23 2006-09-26 Alza Corporation Liposome composition for delivery of nucleic acid
US6211140B1 (en) 1999-07-26 2001-04-03 The Procter & Gamble Company Cationic charge boosting systems
EP1818409A1 (en) 1999-09-09 2007-08-15 CureVac GmbH Transfer of mRNAusing polycationic compounds
GB9930533D0 (en) 1999-12-23 2000-02-16 Mitsubishi Tokyo Pharm Inc Nucleic acid delivery
JP2001338416A (ja) 2000-05-25 2001-12-07 Sony Corp ディスク状磁気記録媒体
US20040142474A1 (en) 2000-09-14 2004-07-22 Expression Genetics, Inc. Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent
EP1471885A4 (en) 2002-01-09 2009-04-22 Transave Inc EFFECTIVE ENCAPSULATION IN A LIPOSOME
JP4111856B2 (ja) 2002-04-12 2008-07-02 昭和電工株式会社 安定化されたアスコルビン酸誘導体
EP1519714B1 (en) 2002-06-28 2010-10-20 Protiva Biotherapeutics Inc. Method and apparatus for producing liposomes
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
US6620794B1 (en) 2002-07-08 2003-09-16 Colonial Chemical Inc. Guerbet functionalized phospholipids
EP1530585A2 (en) 2002-08-22 2005-05-18 Cytos Biotechnology AG Inducible alphaviral/orip based gene expression system
ES2559828T3 (es) 2003-07-16 2016-02-16 Protiva Biotherapeutics Inc. ARN de interferencia encapsulado en lípidos
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
JP4842821B2 (ja) 2003-09-15 2011-12-21 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド ポリエチレングリコール修飾脂質化合物およびその使用
ATE450251T1 (de) 2004-05-17 2009-12-15 Tekmira Pharmaceuticals Corp Liposomale formulierungen mit dihydrosphingomyelin und verfahren zu ihrer verwendung
WO2005120152A2 (en) 2004-06-07 2005-12-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use
WO2005121348A1 (en) 2004-06-07 2005-12-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
JP5777846B2 (ja) 2005-06-15 2015-09-09 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー アミン含有脂質およびその使用
CA2616877C (en) 2005-07-27 2014-01-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for manufacturing liposomes
EP4174179A3 (en) 2005-08-23 2023-09-27 The Trustees of the University of Pennsylvania Rna containing modified nucleosides and methods of use thereof
JP4681425B2 (ja) 2005-11-15 2011-05-11 花王株式会社 毛髪弾性改善剤
DE102006035618A1 (de) 2006-07-31 2008-02-07 Curevac Gmbh Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz
CA2665225C (en) 2006-10-03 2015-06-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid containing formulations
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
US20100196492A1 (en) 2007-03-08 2010-08-05 Green Jordan J Electrostatic coating of particles for drug delivery
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
EP2229186A2 (en) 2007-12-04 2010-09-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
AU2008347251A1 (en) 2008-01-02 2009-07-16 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Liver screening method
AU2008347250A1 (en) 2008-01-02 2009-07-16 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Screening method for selected amino lipid-containing compositions
EP2548960B1 (en) 2008-01-31 2018-01-31 CureVac AG Nucleic acids comprising formula (nugixmgnv)a and derivatives thereof as an immunostimulating agents/adjuvant
CA2721183C (en) 2008-04-11 2019-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
DK2279254T3 (en) 2008-04-15 2017-09-18 Protiva Biotherapeutics Inc PRESENT UNKNOWN LIPID FORMS FOR NUCLEIC ACID ADMINISTRATION
WO2009132131A1 (en) 2008-04-22 2009-10-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Amino lipid based improved lipid formulation
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
ES2475065T3 (es) 2008-10-09 2014-07-10 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Aminol�pidos mejorados y métodos para la administración de ácidos nucleicos
WO2010048536A2 (en) 2008-10-23 2010-04-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Processes for preparing lipids
WO2010062322A2 (en) 2008-10-27 2010-06-03 Massachusetts Institute Of Technology Modulation of the immune response
KR102459839B1 (ko) 2008-11-10 2022-10-27 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제 운반용 신규 지질 및 조성물
WO2010054384A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids and compositions for the delivery of therapeutics
CA2742838A1 (en) 2008-11-17 2010-05-20 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric lipids for nucleic acids delivery systems
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
KR20210031549A (ko) 2009-05-05 2021-03-19 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 지질 조성물
AU2010245933B2 (en) 2009-05-05 2016-06-16 Arbutus Biopharma Corporation Methods of delivering oligonucleotides to immune cells
SI3431076T1 (sl) 2009-06-10 2022-04-29 Arbutus Biopharma Corporation Izboljšana lipidna formulacija
WO2010147992A1 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for increasing efficacy of lipid formulated sirna
IL292615B2 (en) 2009-07-01 2023-11-01 Protiva Biotherapeutics Inc Nucleic acid-lipid particles, preparations containing them and their uses
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
WO2011000106A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Improved cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
BR112012001666A2 (pt) 2009-07-15 2019-09-24 Novartis Ag composições de proteína rsv f e métodos para fazer as mesmas
WO2011036557A1 (en) 2009-09-22 2011-03-31 The University Of British Columbia Compositions and methods for enhancing cellular uptake and intracellular delivery of lipid particles
CN107028886A (zh) 2009-11-04 2017-08-11 不列颠哥伦比亚大学 含有核酸的脂质粒子及相关的方法
EP2506879A4 (en) 2009-12-01 2014-03-19 Protiva Biotherapeutics Inc PREPARATIONS OF SNALP CONTAINING ANTIOXIDANTS
CA3044884A1 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Arbutus Biopharma Corporation Compositions for nucleic acid delivery
NZ600725A (en) 2009-12-18 2015-08-28 Univ British Colombia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
WO2011136369A1 (ja) 2010-04-28 2011-11-03 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
CN102884041B (zh) 2010-04-28 2015-04-15 协和发酵麒麟株式会社 阳离子性脂质
WO2011143230A1 (en) 2010-05-10 2011-11-17 Alnylam Pharmaceuticals Methods and compositions for delivery of active agents
US20130123338A1 (en) 2010-05-12 2013-05-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel cationic lipids and methods of use thereof
WO2011141703A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein b
WO2011149733A2 (en) 2010-05-24 2011-12-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel amino alcohol cationic lipids for oligonucleotide delivery
KR101967411B1 (ko) 2010-06-03 2019-04-10 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 활성제의 전달을 위한 생분해성 지질
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
JP5940064B2 (ja) 2010-07-06 2016-06-29 ノバルティス アーゲー 低用量のｒｎａを用いた大型哺乳動物の免疫化
JP6061849B2 (ja) 2010-07-06 2017-01-18 ノバルティス アーゲー 自己複製ｒｎａ分子についてのビリオン様送達粒子
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
HUE047796T2 (hu) 2010-07-06 2020-05-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa RNS bevitele több immunútvonal bekapcsolására
WO2012016184A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
RS63984B1 (sr) 2010-08-31 2023-03-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Mali lipozomi za isporuku rnk koja kodira imunogen
CA2809851A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Novartis Ag Pegylated liposomes for delivery of immunogen-encoding rna
AU2011295938B2 (en) 2010-08-31 2016-01-14 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Lipids suitable for liposomal delivery of protein-coding RNA
US8466122B2 (en) 2010-09-17 2013-06-18 Protiva Biotherapeutics, Inc. Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
EP4098324A1 (en) 2010-10-11 2022-12-07 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Antigen delivery platforms
EP2640700B1 (en) 2010-11-15 2018-10-31 Life Technologies Corporation Amine-containing transfection reagents and methods for making and using same
WO2012089225A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of mhc class i restricted antigen presentation
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012113413A1 (en) 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
US8691750B2 (en) 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
CA2841047A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic compositions and uses thereof
JP2014522842A (ja) 2011-07-06 2014-09-08 ノバルティス アーゲー 免疫原性組み合わせ組成物およびその使用
WO2013016058A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel bis-nitrogen containing cationic lipids for oligonucleotide delivery
WO2013014073A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 Universite De Strasbourg Phospholipid-detergent conjugates and uses thereof
US9126966B2 (en) 2011-08-31 2015-09-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use thereof
SI2750707T1 (sl) 2011-08-31 2019-02-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilirani liposomi za dostavo imunogen-kodirajoče RNA
SG11201400707TA (en) 2011-09-21 2014-04-28 Sangamo Biosciences Inc Methods and compositions for regulation of transgene expression
JP6250543B2 (ja) 2011-09-27 2017-12-20 アルニラム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド ジ脂肪族置換ｐｅｇ化脂質
HUE057604T2 (hu) 2011-10-18 2022-06-28 Dicerna Pharmaceuticals Inc Amin-kationos lipidek és felhasználásuk
KR102272498B1 (ko) 2011-10-27 2021-07-06 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 약물 캡슐화 마이크로스피어를 형성할 수 있는, ｎ-말단 상에 관능화된 아미노산 유도체
JP2013095755A (ja) 2011-11-02 2013-05-20 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd カチオン性脂質
WO2013086322A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Branched alkyl and cycloalkyl terminated biodegradable lipids for the delivery of active agents
EP2788006A1 (en) 2011-12-07 2014-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
WO2013090648A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2013113326A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
EP2623121A1 (en) 2012-01-31 2013-08-07 Bayer Innovation GmbH Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and an antigen
WO2013113325A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
WO2013120498A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded allergenic antigen or an autoimmune self-antigen
WO2013120497A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
WO2013120499A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly (a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded pathogenic antigen
CN102604115B (zh) 2012-02-22 2013-07-10 天津大学 羧甲基壳聚糖季铵盐/pamam核壳纳米粒及制备方法
EP3988104A1 (en) 2012-02-24 2022-04-27 Arbutus Biopharma Corporation Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
SG11201405545XA (en) 2012-03-27 2014-11-27 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules comprising a 5'top utr
CA2867323C (en) 2012-03-27 2020-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. Diether based biodegradable cationic lipids for sirna delivery
CA2859452C (en) 2012-03-27 2021-12-21 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules for improved protein or peptide expression
SG10201607962RA (en) 2012-03-27 2016-11-29 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
US20150306249A1 (en) 2012-05-25 2015-10-29 Curevac Gmbh Reversible immobilization and/or controlled release of nucleic acid containing nanoparticles by (biodegradable) polymer coatings
WO2014005958A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Novartis Ag Immunogenic compositions and uses thereof
US9415109B2 (en) 2012-07-06 2016-08-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Stable non-aggregating nucleic acid lipid particle formulations
WO2014028487A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
CA2891911C (en) 2012-12-07 2023-03-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improved nucleic acid lipid particle formulations
WO2014108515A1 (en) 2013-01-10 2014-07-17 Novartis Ag Influenza virus immunogenic compositions and uses thereof
SG11201506052PA (en) 2013-02-22 2015-09-29 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of the pd-1 pathway
CA3120574A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Process for formulating an anionic agent
WO2014160284A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of stroke
US20160032316A1 (en) 2013-03-14 2016-02-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Purification and Purity Assessment of RNA Molecules Synthesized with Modified Nucleosides
JP6648019B2 (ja) 2013-08-21 2020-02-14 キュアバック アーゲー Ｒｎａコードされたタンパク質の発現を促進するための医薬的組成物、医薬的組成物の製造のための修飾ｒｎａの使用、および、医薬的組成物を含むパーツキット
CA2915712A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Margit SCHNEE Rabies vaccine
WO2015024669A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Curevac Gmbh Combination vaccine
SG11201510746WA (en) 2013-08-21 2016-03-30 Curevac Ag Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine
SG11201510751YA (en) 2013-08-21 2016-03-30 Curevac Ag Composition and vaccine for treating prostate cancer
ES2806575T3 (es) 2013-11-01 2021-02-18 Curevac Ag ARN modificado con propiedades inmunoestimuladoras disminuidas
CN105873902B (zh) 2013-11-18 2019-03-08 阿克丘勒斯治疗公司 用于rna递送的可电离的阳离子脂质
ES2712092T3 (es) 2013-12-30 2019-05-09 Curevac Ag Moléculas de ácido nucleico artificiales
JP6584414B2 (ja) 2013-12-30 2019-10-02 キュアバック アーゲー 人工核酸分子
WO2015123576A2 (en) 2014-02-17 2015-08-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeted nanoparticle compositions and methods of their use to treat obesity
WO2015130584A2 (en) 2014-02-25 2015-09-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
CA2936286A1 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Curevac Ag Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant
EP3981437A1 (en) 2014-04-23 2022-04-13 ModernaTX, Inc. Nucleic acid vaccines
US10309541B2 (en) 2014-05-22 2019-06-04 Flowserve S.R.L. Guide element for a valve actuator and actuator provided with said guide element
EP3169309B1 (en) 2014-07-16 2023-05-10 Novartis AG Method of encapsulating a nucleic acid in a lipid nanoparticle host
JP6339884B2 (ja) 2014-07-17 2018-06-06 富士フイルム株式会社 イミダゾール化合物およびそれを含有するリポソーム
WO2016014794A1 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for modulating nuclease-mediated genome engineering in hematopoietic stem cells
EP3230458B1 (en) 2014-12-12 2020-02-19 CureVac AG Artificial nucleic acid molecules for improved protein expression
WO2016097065A1 (en) 2014-12-16 2016-06-23 Curevac Ag Ebolavirus and marburgvirus vaccines
BR112017009835A2 (pt) 2014-12-30 2017-12-26 Curevac Ag moléculas de ácido nucleico artificiais
CN104876831B (zh) 2015-04-03 2017-05-17 苏州圣诺生物医药技术有限公司 脂质修饰精胺衍生物及利用该衍生物制备的脂质体
EP4353257A2 (en) 2015-04-13 2024-04-17 CureVac Manufacturing GmbH Method for producing rna compositions
JP6893177B2 (ja) 2015-05-15 2021-06-23 キュアバック アーゲー 少なくとも１つのｍＲＮＡコンストラクトの投与を含むプライムブーストレジメン（ＰＲＩＭＥ−ＢＯＯＳＴ ＲＥＧＩＭＥＮＳ）
WO2016203025A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Curevac Ag Vaccine composition
CN107922364B (zh) 2015-06-29 2021-12-31 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的脂质和脂质纳米颗粒制剂
WO2017021546A1 (en) 2015-08-05 2017-02-09 Curevac Ag Epidermal mrna vaccine
US20190024096A1 (en) 2015-08-07 2019-01-24 Curevac Ag Process for the in vivo production of rna in a host cell
SG10201913629VA (en) 2015-08-28 2020-03-30 Curevac Ag Artificial nucleic acid molecules
WO2017048770A1 (en) 2015-09-15 2017-03-23 Regulus Therapeutics, Inc. Systems, compositions, and methods for formulating nucleic acid compositions
EP3350157B1 (en) 2015-09-17 2022-01-05 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
AU2016342376A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Sexually transmitted disease vaccines
PL3718565T3 (pl) 2015-10-22 2022-09-19 Modernatx, Inc. Szczepionki przeciwko wirusom układu oddechowego
EP3373965A1 (en) 2015-11-09 2018-09-19 CureVac AG Rotavirus vaccines
US20180312545A1 (en) 2015-11-09 2018-11-01 Curevac Ag Optimized nucleic acid molecules
DK3394030T3 (da) 2015-12-22 2022-03-28 Modernatx Inc Forbindelser og sammensætninger til intracellulær afgivelse af midler
WO2017117528A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
MX2018009917A (es) 2016-02-17 2019-08-14 Curevac Ag Vacuna contra el virus del zika.
US20170266292A1 (en) 2016-03-21 2017-09-21 The Research Foundation For The State University Of New York Lipidic compound-telodendrimer hybrid nanoparticles and methods of making and uses thereof
AU2017244143A1 (en) 2016-03-30 2018-10-11 Intellia Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations for CRISPR/Cas components
US20190343942A1 (en) 2016-04-22 2019-11-14 Curevac Ag Rna encoding a tumor antigen
US20180126003A1 (en) 2016-05-04 2018-05-10 Curevac Ag New targets for rna therapeutics
ES2871537T3 (es) 2016-05-09 2021-10-29 Astrazeneca Ab Nanopartículas lipídicas que comprenden agentes antiinflamatorios lipófilos y métodos de uso de las mismas
WO2017201332A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding acyl-coa dehydrogenase, very long-chain for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
SG11201903460QA (en) 2016-10-26 2019-05-30 Curevac Ag Lipid nanoparticle mrna vaccines
EP3532097A1 (en) 2016-10-27 2019-09-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nucleoside-modified rna for inducing an adaptive immune response
WO2018191719A1 (en) * 2017-04-13 2018-10-18 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipid delivery of therapeutic agents to adipose tissue
US11357856B2 (en) 2017-04-13 2022-06-14 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
US20210069336A1 (en) 2017-07-31 2021-03-11 Ohio State Innovation Foundation Biomimetic nanomaterials and uses thereof
JP7461872B2 (ja) 2017-08-17 2024-04-04 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質
WO2019036028A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICULAR FORMULATIONS
US11524932B2 (en) 2017-08-17 2022-12-13 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2019089828A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Acuitas Therapeutics, Inc. Lamellar lipid nanoparticles
JP2022505234A (ja) 2018-10-18 2022-01-14 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 活性剤の脂質ナノ粒子送達のための脂質
CN113474328A (zh) 2019-01-11 2021-10-01 爱康泰生治疗公司 用于脂质纳米颗粒递送活性剂的脂质
GB2600859B (en) 2019-08-14 2024-04-03 Acuitas Therapeutics Inc Improved lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
WO2022016070A1 (en) 2020-07-16 2022-01-20 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipids for use in lipid nanoparticles

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013086373A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
JP2017522376A (ja) 2014-06-25 2017-08-10 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 核酸の送達のための新規脂質および脂質ナノ粒子製剤
WO2016176330A1 (en) 2015-04-27 2016-11-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nucleoside-modified rna for inducing an adaptive immune response
WO2017075531A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
JP2020500539A (ja) 2016-12-09 2020-01-16 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド 標的特異的ヌクレアーゼの送達
WO2018200943A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Acuitas Therapeutics, Inc. Novel carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chen, Delai et al.，Rapid Discovery of Potent siRNA-Containing Lipid Nanoparticles Enabled by Controlled Microfluidic Formulation，Journal of the American Chemical Society，2012年，vol.134, no.16，pp.6948-6951
Zhang, Xinfu et al.，Biodegradable Amino-Ester Nanomaterials for Cas9 mRNA Delivery in Vitro and in Vivo，ACS Applied Materials & Interfaces，2017年07月07日，vol.9, no.30，pp.25481-25487

Also Published As

Publication number Publication date
US11639329B2 (en) 2023-05-02
WO2019036008A8 (en) 2020-03-12
JP2020531418A (ja) 2020-11-05
CA3073020A1 (en) 2019-02-21
EP3668833A1 (en) 2020-06-24
US20210128488A1 (en) 2021-05-06
WO2019036008A1 (en) 2019-02-21
JP2023138986A (ja) 2023-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7355731B2 (ja) 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質
JP7443296B2 (ja) 核酸の送達のための脂質および脂質ナノ粒子製剤
JP7453269B2 (ja) 核酸のデリバリーのための新規脂質および脂質ナノ粒子製剤
JP7461872B2 (ja) 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質
JP7221353B2 (ja) 核酸の送達のための新規脂質および脂質ナノ粒子製剤
US11524932B2 (en) Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
US11542225B2 (en) Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
US11453639B2 (en) Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
US11357856B2 (en) Lipids for delivery of active agents
JP2023134433A (ja) 新規なカルボニル脂質、および核酸を送達するための脂質ナノ粒子製剤
JP2022505234A (ja) 活性剤の脂質ナノ粒子送達のための脂質
US20220106257A1 (en) Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
WO2023114944A1 (en) Fluorinated cationic lipids for use in lipid nanoparticles

Legal Events

Date Code Title Description
RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20201224

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20210128

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210813

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210813

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220614

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20220616

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220913

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221109

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20230307

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230629

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20230707

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230829

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20230921

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7355731

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150