CN104876831B - 脂质修饰精胺衍生物及利用该衍生物制备的脂质体 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有通式(1)的脂质修饰精胺衍生物以及利用该衍生物制备的脂质体。精胺衍生物通过直接使用，或与胆固醇、中性脂质和聚乙二醇修饰脂质中的一种或几种混合使用，可作为载体用于包载或吸附生物活性分子药物，并将其送入细胞达到调节、干预或治疗的用途。通式(1)中，X1为‑(CH2)n‑或羰基，其中n为1，2或3；X2选自‑(CH2)‑、酯基、酰胺基、氧或硫；R1和R2独立地选自C6‑C18烷基、含有烯键的C6‑C18烷基或亲脂性胆固醇类分子；
Description
技术领域
本发明涉及药物载体领域，更特别涉及一种脂质修饰精胺衍生物及其制备方法，以及利用该衍生物的脂质体，该脂质体可将外源性核苷酸导入或运送到细胞内(体外)或者动物/人体(体内)从而发挥特定作用的应用，该外源性核苷酸包括小干扰核苷酸(siRNA)、DNA、信使RNA(mRNA)、microRNA(miRNA)或者反义核苷酸(antisense oligonucleotides)、适体(Aptamer)等。
背景技术
基因组的任何DNA序列，以及每一种非编码或者编码的RNA转录体(transcriptome)分子，都可以通过特定外源性的核苷酸(包括DNA和RNA)来调节其表达，实现对特定疾病的治疗。这些治疗手段包括DNA水平的基因治疗和RNA水平的核酸干扰(RNAinterference，RNAi)治疗。
基因治疗是通过将特定序列的核苷酸(多数为重组的核苷酸)运送到特定细胞/细胞核内，以调控、修复、替换、增加或删除特定的基因序列，从而实现对基因紊乱所致疾病的治疗。基因的治疗、预防和诊断效果与其所采用的序列或者序列的表达框架直接相关。基因治疗长期以来被视为一种极具潜力的治疗多种疾病的手段，包括遗传紊乱疾病(如血友病、囊性纤维化)或获得性疾病(如艾滋病、癌症)。
核酸干扰技术被誉为生物学研究的一项里程碑式的革命性发现，尤其是在哺乳类细胞内发现了相同的调节机制之后。核酸干扰是细胞内天然存在的、一种“转录后基因沉默”(PTGS，Post-transcription gene silencing)的调节机制(图1)。内源性的和外源性的双链RNA(ds-RNA，double-stranded RNA)在细胞内被一种叫Dicer的核酸外切酶(Endoribonuclease)降解成为20-25bp的siRNA(small interference RNA，小干扰核酸)。然后siRNA中的引导链(Guide strand)与序列互补的靶mRNA在RISK复合体(RNA-inducedsilencing complex)配对结合。RISK复合体具备酶促活性，通过一系列的酶解反应，将靶mRNA降解，从而导致该基因的表达及活性降低。医药工业界正在利用这一发现积极发展小干扰核酸类药物，希望能够更有效地治疗威胁人类的疑难疾病。核酸干扰技术在探查基因功能和治疗人类疾病方面有广阔的应用前景。
尽管核酸干扰技术及基因治疗有众多优势，但是以核苷酸(DNA或RNA)作为活性分子，要进入动物/人体内并进入细胞，必须避免细胞外基质的清除机制，保护核苷酸被核酸酶降解，并在有效透过细胞膜进入细胞后从内涵体中释放出来。以小干扰核酸(siRNA)为例，其理化性质决定其本身是难以进入穿过细胞壁(小干扰核酸分子量在13KDa、高度负电荷、高度亲水性)，容易被机体或细胞降解，从而达不到治疗效果。而基因治疗的DNA序列或DNA表达框架还必须进入细胞核才能发挥作用。因此，设计及应用一种高效的载体让siRNA类或者其他核酸干扰药物和基因治疗药物通过机体内的种种屏障，以有效浓度到达靶点组织并释放药物，是核酸干扰药物和基因治疗药物能够进入临床和产业化的关键。
目前基因治疗或核酸干扰治疗的载体主要有病毒载体与非病毒载体两类，随着研究的深入，病毒载体的弊端逐步显现，病毒载体的毒副作用以及相关死亡事件的发生已受到医学界的高度关注，利用病毒载体的基因治疗已受到质疑，美国食品药品管理局于2005年停止了对病毒载体临床应用的审批。而非病毒载体是目前公认可替代病毒载体的小干扰核酸载体系统，它可避免诸如免疫原性、毒性等病毒载体的缺陷。这类材料中生物可降解的载体成为非病毒载体研究的首选，其与生物不可降解的载体相比具有诸如结构可设计性、粒径可控性、良好的安全性、生物相容性、稳定性和缓释性等优势。
非病毒载体中脂质体的研究最为广泛和深入。脂质体是由脂双分子层组成的颗粒，可介导基因穿过细胞膜。通过脂质体介导比利用病毒转导进行基因转移具有以下明显的优势：①脂质体与基因的复合过程比较容易；②易于大量生产；③脂质体是非病毒性载体，与细胞膜融合将目的基因导入细胞后，脂质即被降解，无毒，无免疫原性；④DNA或RNA可得到保护，不被灭活或被核酸酶降解；⑤脂质体携带的基因可能转运至特定部位。
发明内容
为了克服现有技术中的上述问题，本发明提供了一种脂质修饰精胺衍生物及其制备方法和利用该衍生物的脂质体。该脂质体基因导入能力强，生物相容性好，且具有长循环性能与靶向性。
本发明采用的技术方案是：
在一方面，本发明提供了一种具有如下通式(I)的脂质修饰精胺衍生物：
其中，
X1为-(CH2)n-或羰基，其中n为1，2或3；
X2选自-(CH2)-、酯基、酰胺基、氧或硫；
R1和R2独立地选自C6-C18烷基、含有烯键的C6-C18烷基或亲脂性胆固醇类分子；
进一步地，X1和X2均为-(CH2)-，R1和R2独立地选自C10-C18烷基。
进一步地，X1为-(CH2)2-，X2为氧，R1和R2为相同的C12-C18烷基或含有烯键的C6-C18烷基。
优选地，X1为羰基，X2为-(CH2)-，R1和R2为相同的C12-C18烷基或含有烯键C6-C18烷基。
优选地，X1为-(CH2)2-，X2为酯基，R1和R2为相同的C12-C18烷基或含有烯键的C6-C18烷基。
优选地，X1为-(CH2)-，X2为酰胺基，R1和R2是相同的C12-C18烷基或含有烯键的C6-C18烷基。
在另一方面，本发明还提供了上述脂质修饰精胺衍生物中的一种或几种自组装形成的脂质体。
优选地，上述脂质体进一步包载或吸附了生物活性分子药物，所述生物活性分子药物选自抗肿瘤药物分子、抗生素、免疫调节剂、抗炎剂或作用于中枢神经的核酸类药物。
更优选地，上述核酸分子选自小干扰核苷酸、DNA、信使RNA、mi croRNA、反义核苷酸或适体。
在另一方面，本发明还提供了上述脂质修饰精胺衍生物中的一种或几种与胆固醇、中性脂质体焦磷酸二乙酯(DEPC)、聚乙二醇(PEG)以及聚乙二醇(PEG)修饰脂质体中的一种或几种形成的复合脂质体。
优选地，上述复合脂质体进一步包载或吸附了生物活性分子药物，所述生物活性分子药物选自抗肿瘤药物分子、抗生素、免疫调节剂、抗炎剂或作用于中枢神经的核酸类药物。
更优选地，核酸分子选自小干扰核苷酸、DNA、信使RNA、microRNA、反义核苷酸或适体。
本发明首先提供一类新型阳性脂质的设计与合成方法以及实际应用。合成这些阳性脂质的目的在于构建新的有效的小干扰核酸药物体内运载脂质体，同时，通过不同的制剂配方，这些脂质体还可以作为有效的体外转染试剂，用于小干扰核酸候选药物的体外筛选。
目前用于临床的脂质体载体多用于小分子化学药的系统给药，比如紫杉醇的静脉注射(4-5)。国外的一些公司正在将脂质体用于生物大分子的体内载运，比如加拿大的Tekmira公司用SNALP脂质体进行了小干扰核酸药物的体内载运研究，获得良好的效果(5-6)。
与其他脂质体不同的是，本发明中所用的精胺衍生物及其所形成的脂质体是天然生物可降解分子，不会在体内积聚，因此安全性良好。
另外，本发明中的阳性脂质体还可以广泛应用于体外培养细胞的核酸转染研究工作。目前市场上常用的体外细胞转染试剂多为国外品牌，价格昂贵。通过比较研究，本发明中的阳性脂质体的体外细胞转染效率与目前市场上最常用的脂质体Lipofectamine 2000的效率相当。但本发明中的脂质体合成成本更低，因此可以有效降低科研的成本，具有很强的市场竞争力。
本发明的脂质修饰精胺衍生物还具体地包含以下化合物：
本发明提供的新型阳性脂质由精胺和油醇通过不同的化学键偶联组成。精胺作为带正电荷的头基，而油醇链接在位于中间的两个三级胺基。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：本发明的精胺衍生物形成的脂质体具有携带siRNA进入细胞的能力，并能很好达到基因沉默的效果。基因导入能力强，而且生物相容性好，因此在此基础上进一步提高其细胞的积聚能力和体内的长循环特性，设计合成一种非病毒基因载体，具有长循环性能与靶向性，目标分子精胺衍生物能够自组装形成稳定的脂质体，外围包裹PEG实现长循环，达到理想的载药体系。
附图说明
图1展示了siRNA沉默mRNA的机理。
图2为根据本发明的精胺脂质体的粒径比较图。
图3为根据本发明的精胺脂质体的电位图。
图4为根据本发明的精胺脂质体的电镜图。
图5为根据本发明的精胺脂质体的转染效率荧光图。
图6展示了根据本发明的精胺脂质体有效运载siRNA敲低靶基因表达。
图7展示了根据本发明的精胺脂质体有效运载siRNA敲低靶基因相关表达。
图8为根据本发明的精胺脂质体毒性测定(MTT检测法)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，以便本领域技术人员可更好地理解本发明，从而对本发明的保护范围作出更为清楚明确的界定。
实施例1
合成化合物1。
称取100毫克化合物12加入100毫升圆底烧瓶，加入三氟乙酸3毫升，室温搅拌反应12个小时，蒸干三氟乙酸。采用预先处理好的离子交换树脂过柱，得到的液体冷冻干燥既得产物。产率98％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.880(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.25-1.33(m,44H),1.41-1.57(m,10H),1.96-2.00(m,10H),2.63-3.10(m,12H),5.32-5.38(m,4H)；13CNMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.147,22.710,27.256,29.347,29.563,29.798,31.930,129.744,129.777,130.006,130.044.HRMS(MALDI)found 731.7142[M+H]+(Calculatedmass for C46H90N4O2was 731.7142[M+H]+)。
反应路线如下：
实施例2
合成化合物2。
称取100毫克化合物16加入100毫升圆底烧瓶，加入三氟乙酸3毫升，室温搅拌反应12个小时，蒸干三氟乙酸。采用预先处理好的离子交换树脂过柱，得到的液体冷冻干燥既得产物。产率98％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝0.835-0.868(t,6H,j1＝7.2,j2＝6),1.236-1.403(m,48H),1.530-1.563(m,8H),1.956-1.986(m,8H),2.321-2.397(m,12H),2.621-2.715(m,8H),3.347-3.558(m,4H),3.963-3.996(t,4H,j1＝6.4,j2＝6.8),5.321-5.357(m,2H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.143,22.711,25.764,27.244,29.260-29.797,31.933,32.838,63.122,129.987.HRMS(ESI)found 847.8009[M+H]+(Calculated massfor C52H102N4O4was 847.7936[M+H]+)。
实施例3
合成化合物3。
称取100毫克化合物11加入100毫升圆底烧瓶，加入三氟乙酸3毫升，室温搅拌反应12个小时，蒸干三氟乙酸。采用预先处理好的离子交换树脂过柱，得到的液体冷冻干燥既得产物。产率98％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.880(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.26-1.41(m,44H),1.58(br,8H),1.90-2.0(m,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(br,4H),3.30-3.56(m,8H),5.30-5.38(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.138,22.711,27.189,27.245,29.283,29.352,29.529,29.585,29.728,29.801,31.937,52.553,53.464,129.794,129.952.HRMS(MALDI)found 730.7557[M+H]+(Calculated mass for C46H94N4was703.7557[M+H]+)。
反应路线如下：
实施例4
合成化合物(4)。
取化合物19 0.20g于圆底烧瓶中，并溶于20ml二氯甲烷中，加入5ml三氟乙酸，室温下搅拌反应2小时。停止反应，加入烧瓶中旋转蒸干，多次加入二氯甲烷和甲醇，反复蒸干几次。将残留物溶于水中，通过阴离子交换树脂除去残留的三氟乙酸根离子，得到化合物0.14g，产率约为90％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.880(t,6H,j1＝7.2,j2＝6.4),1.253-1.281(m,40H),1.471-1.558(m,8H),1.692-1.729(m,4H),1.813-1.835(m,4H),2.429-2.464(m,4H),2.523-2.561(m,4H),2.662-2.689(m,4H),3.118-3.145(m,4H),3.378(t,4H,j1＝6.8,j2＝3.6),3.402(t,4H,j1＝2.8,j2＝6.0)；13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.148,22.719,25.446,25.851,26.203,29.393-29.765,31.955,40.883,50.494,53.350,54.57,68.605,71.196。
实施例5
合成化合物5。
取上述得到的化合物15 0.20g于圆底烧瓶中，并溶于20ml二氯甲烷中，加入5ml三氟乙酸，室温下搅拌反应2小时。停止反应，加入烧瓶中旋转蒸干，多次加入二氯甲烷和甲醇，反复蒸干几次。将残留物溶于水中，通过阴离子交换树脂除去残留的三氟乙酸根离子，得到化合物0.15g，产率约为95％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.26-1.41(m,36H),1.58(br,8H),1.90-2.0(m,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(br,4H),3.30-3.56(m,8H),5.30-5.38(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.10,22.72,20.24,20.39,29.65,29.74,29.77,31.96,50.72,71.22。
反应路线如下：
实施例6
合成化合物6。
称取100毫克化合物23加入100毫升圆底烧瓶，加入三氟乙酸3毫升，室温搅拌反应12个小时，蒸干三氟乙酸。采用预先处理好的离子交换树脂过柱，得到的液体冷冻干燥既得产物。产率95％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.880(t,6H,j1＝6.8,j2＝6.8),1.255-1.333(m,48H),1.461-1.562(m,8H),1.692-1.776(m,8H),1.986-2.016(m,6H),2.418-2.617(m,12H),3.304(t,4H,j1＝6.0,j2＝5.6),3.380(t,4H,j1＝6.8,j2＝5.2),5.332-5.359(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.150,22.714,25.148,26.196,26.345,27.246,29.352-29.802,31.937,40.606,50.754,53.480,53.591,68.848,71.187,129.850,129.957.HRMS(MALDI)found 819.8398[M+H]+(Calculated mass for C52H106N4O2was819.9394[M+H]+)。
实施例7
合成化合物7。
称取100毫克化合物24加入100毫升圆底烧瓶，加入三氟乙酸3毫升，室温搅拌反应12个小时，蒸干三氟乙酸。采用预先处理好的离子交换树脂过柱，得到的液体冷冻干燥既得产物。产率95％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.26-1.41(m,52H),1.58(br,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(,br,4H),3.30-3.56(m,8H)。
实施例8
合成化合物8。
称取100毫克化合物27加入100毫升圆底烧瓶，加入三氟乙酸3毫升，室温搅拌反应12个小时，蒸干三氟乙酸。采用预先处理好的离子交换树脂过柱，得到的液体冷冻干燥既得产物。产率95％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.26-1.41(m,60H),1.58(br,8H),1.90-2.0(m,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(,br,4H),3.30-3.56(m,8H),5.30-5.38(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.10,22.72,20.24,20.39,29.65,29.74,29.77,31.96,50.72,71.22。
实施例9
合成化合物9。
称取精胺1.15克加到100毫升圆底烧瓶中，加入40毫升四氢呋喃溶解，冷却到0℃。称取2-(叔丁氧羰基氧亚氨基)-2-苯乙腈(Boc-on)2.87克溶解在30毫升四氢呋喃中滴加到圆底烧瓶中，搅拌反应3小时。反应液中加入饱和碳酸钠溶液100毫升，每次加入200毫升二氯甲烷提取三次。合并提取液，无水硫酸钠干燥过滤，滤液旋转蒸干。残留物加入5毫升甲醇溶解，柱层析分离，洗脱液甲醇：氨水＝10:1，得淡黄色固体产物1.91克，产率83％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝1.43(t,9H,),1.53-1.56(m,4H,),1.63-1.69(m,8H),2.62(t,4H,j1＝22Hz,j2＝6Hz),2.67(t,4H,j1＝6.4Hz,j2＝6.4Hz),3.17-3.22(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝27.83,28.46,29.92,39.20,47.60,49.76,156.15。
反应路线如下：
实施例10
合成化合物10。
称取油醇1.7克加到100毫升圆底烧瓶中，加入10毫升氯仿，冷却到0℃。称取三苯基膦1.25克加入上述圆底烧瓶中，搅拌反应，然后分批次加入四溴化碳1.5克。加完后室温搅拌反应2小时。反应结束后蒸干溶剂，加入环己烷，过滤，滤液蒸干，然后再次加入环己烷15毫升，过滤蒸干滤液得到无色油状物为产物。产物1.9克，产率85％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.27-1.41(m,22H),1.83-1.87(m,2H),2.00(t,4H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),3.40(t,4H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),5.30-5.41(m,2H)。
实施例11
合成化合物11。
称取330mg叔丁氧羰基精胺化合物9加到圆底烧瓶中，加入无水乙腈15毫升，无水碳酸钾815毫克，称取679毫克化合物10加入到圆底烧瓶中，氮气氛围下回流72小时。停止搅拌，加入饱和氯化铵溶液，用二氯甲烷萃取(50ml×3)，合并提取液，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干溶解。粗品柱层析分离，洗脱剂(DCM：MeOH＝30:1)，收集第二带，得无色油状物290mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.25-1.37(m,48H),1.44(s,18H),1.49-1.77(m,12H),1.98-2.03(m,8H),2.26-2.30(m,4H),3.04-3.40(m,12H),5.30-5.34(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.14,22.71,22.26,29.35,29.53,29.79,31.93。
反应路线如下：
实施例12
合成化合物12。
称取叔丁氧羰基保护的精胺90mg，加到两口圆底烧瓶中，加入二氯甲烷10毫升，冰水冷却。三乙胺0.2毫升加入反应瓶中，油酰氯加入2毫升二氯甲烷中，放入分液漏斗然后滴加到圆底烧瓶中，搅拌反应。加完后，反应1小时。反应倒入冰水中，采用碳酸钠溶液中和至pH到9，二氯甲烷提取三次，合并提取液，无水硫酸镁干燥，蒸干，柱层析分离既得产物12，产率90％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.25-1.37(m,48H),1.44(s,18H),1.56-1.68(m,4H),1.94-2.03(m,12H),2.44-2.53(m,8H),3.177-3.19(m,4H),5.30-5.38(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.14,22.71,27.24,28.43,29.35,29.55,29.59,29.68,29.78,29.79,31.94,121.81,121.99。
反应路线如下：
实施例13
合成化合物13。
称取2.78g油醇与1.27g三乙胺于圆底烧瓶中并溶于20ml二氯甲烷中，冷却至0℃。称取1.04g丙烯酰氯溶于10ml二氯甲烷中，滴加至圆底烧瓶中，保持0℃搅拌反应3小时。停止反应，反应液加入20ml水洗，每次加入50ml二氯甲烷萃取三次，萃取液加入无水硫酸钠干燥过滤，滤液旋转蒸干。残留物加入5毫升二氯甲烷溶解，柱层析分离，洗脱液二氯甲烷：正己烷＝1:1，收集第二带，得无色油状产物2.33g，产率63％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.863-0.897(t，3H，j1＝6.8，j2＝5.2)，1.258-1.382(m，20H)，1.426(m，6H)，1.630-1.683(m，2H)，1.959-2.021(m，2H)，4.131-4.165(t，2H，j1＝6.8，j2＝6.8)，5.797-5.827(m，1H)，6.086-6.156(m，1H)，6.376-6.423(m，1H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.131，22.719，25.954，27.252，28.649，29.232-29.805，31.944，64.742，128.680，129.806，129.999，130.415，166.371。
反应路线如下：
实施例14
合成化合物14。
称取1.90g十二醇与1.23g三乙胺于圆底烧瓶中并溶于20ml二氯甲烷中，冷却至0℃。称取1.00g丙烯酰氯溶于10ml二氯甲烷中，滴加至圆底烧瓶中，保持0℃搅拌反应3小时。停止反应，反应液加入20ml水洗，每次加入50ml二氯甲烷萃取三次，萃取液加入无水硫酸钠干燥过滤，滤液旋转蒸干。残留物加入5毫升二氯甲烷溶解，柱层析分离，洗脱液二氯甲烷：正己烷＝1:1，收集第二带，得无色油状产物1.73g，产率65％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝0.83-0.87(t，6H，j1＝7.2，j2＝6)，1.24-1.40(m，18H)，1.53-1.56(m，2H)，3.96-3.99(t，2H，j1＝6.4，j2＝6.8)，5.60-6.25(m，3H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.143，22.711，25.764，27.244，65.122，129.987，131.832,166.573。
反应路线如下：
实施例15
合成化合物15。
称取合成的叔丁氧羰基精胺化合物(9)0.15g于圆底烧瓶中并溶于20ml异丙醇中，加入0.35g化合物14，90℃下搅拌回流反应2小时。蒸干浓缩，残留物加5ml甲醇溶解，柱层析分离，洗脱液二氯甲烷：甲醇＝25:1，收集第二带，得无色油状产物0.24g，产率72％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝＝0.88(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.26-1.41(m,36H),1.58(br,8H),1.90-2.0(m,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(,br,4H),3.30-3.56(m,8H),5.30-5.38(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.10,22.72,20.24,20.39,29.65,29.74,29.77,31.96,50.72,71.22。
反应路线如下：
实施例16
合成化合物16。
称取合成的叔丁氧羰基精胺化合物(9)0.15g于圆底烧瓶中并溶于20ml异丙醇中，加入0.51g化合物13，90℃下搅拌回流反应24小时。蒸干浓缩，残留物加洗脱液溶解，柱层析分离，洗脱液二氯甲烷：甲醇＝25:1，收集第二带，得无色油状产物0.30g，产率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.86-0.89(t，6H，j1＝6.8，j2＝5.2),1.25-1.36(m，48H)，1.44(s，18H)，1.60-1.63(m，8H)，1.98-2.04(m，8H)，2.36-2.45(m，12H)，2.70-2.80(m，2H)，3.04-3.20(m，4H),4.04-4.07(t，4H，j1＝7.2，j2＝6.8)，5.28-5.39(m，8H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.141，22.708，24.884，25.964，27.246，28.504，29.275-29.794，31.932，32.635，39.500，49.474，52.018，53.719，64.695，129.786-129.998，156.071，172.828。
反应路线如下：
实施例17
合成化合物17。
分别称取丙二醇680mg、钠氢2.5g加到100毫升圆底烧瓶中，加入THF 10毫升溶解搅拌30分钟，然后升高温度回流1小时，然后称取溴代十二烷分散在10毫升THF中加入分液漏斗中滴加到反应液中，加完后回流反应过夜。反应结束后，加入饱和的氯化钠溶液，二氯甲烷提取三次，合并提取液，过滤蒸干溶剂，粗品柱层析分离，收集第二带，既得产物，550mg,产率17.1％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.27-1.31(m,18H),1.53-1.61(m,2H),1.80-1.85(m,2H),3.42(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),3.61(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),3.77(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.14,22.72,26.18,29.39,29.51,29.62,29.65,29.70,29.73,31.96,62.48,70.46,71.54。
反应路线如下：
实施例18
合成化合物18。
称取615毫克化合物17加到100毫升圆底烧瓶中，加入10毫升氯仿，冷却到0℃。称取三苯基膦781毫克加入上述圆底烧瓶中，搅拌反应，然后分批次加入四溴化碳752毫克。加完后室温搅拌反应2小时。反应结束后蒸干溶剂，加入环己烷，过滤，滤液蒸干，然后再次加入环己烷15毫升，过滤蒸干滤液得到无色油状物为产物。产物600毫克，产率82％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.27-1.31(m,18H),1.52-1.61(m,2H),2.00-2.12(m,2H),3.42(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),3.49-3.54(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.14,22.72,26.18,29.39,29.51,29.62,29.65,29.70,29.73,31.96,62.48,70.46,71.54。
反应路线如下：
实施例19
合成化合物19。
称取合成的叔丁氧羰基精胺0.15g，碳酸钾2克，于圆底烧瓶中并溶于20ml乙腈中，加入0.48g化合物18，90℃下搅拌回流反应24小时。蒸干浓缩，残留物加洗脱液溶解，柱层析分离，洗脱液二氯甲烷：甲醇＝25:1，收集第二带，得无色油状产物0.30g，产率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.27-1.31(m,48H),1.45(s,18H),1.90-2.0(m,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(,br,4H),3.30-3.56(m,8H),5.30-5.38(m,4H)。
反应路线如下：
实施例20
合成化合物20。
称取油醇5.0克，加入二氯甲烷10毫升，冰水冷却。称取四溴化碳9.67克，三苯基膦10.0克，分批加入圆底烧瓶中，加完后室温搅拌反应1小时，蒸干溶剂。加入正己烷20毫升，过滤除去沉淀，滤液蒸干，柱层析分离，洗脱液二氯甲烷：环己烷＝1:2，收集第一带，蒸干既得产品5.58克。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.27-1.31(m,22H),1.83-1.88(m,4H),1.99-2.04(m,4H),3.41(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),5.30-5.39(m,2H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝8.90,21.94,22.01,22.98,23.52,23.94,24.12,24.31,24.40,24.48,24.49,24.55,24.57,26.72,27.61,28.73,124.51,124.77。
反应路线如下：
实施例21
合成化合物21。
分别称取丙二醇680mg、钠氢2.5g加到100毫升圆底烧瓶中，加入THF 10毫升溶解搅拌30分钟，然后升高温度回流1小时，然后称取溴代十八烯(化合物20)分散在10毫升THF中加入分液漏斗中滴加到反应液中，加完后回流反应过夜。反应结束后，加入饱和的氯化钠溶液，二氯甲烷提取三次，合并提取液，过滤蒸干溶剂，粗品柱层析分离，收集第二带，既得产物，550mg，产率17.1％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.79(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.18-1.21(m,22H),1.46-1.52(m,2H),1.74-1.79(m,2H),1.86-2.0(m,4H),3.36(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),3.54(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),3.71(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),5.23-5.31(m,2H)。
反应路线如下：
实施例22
合成化合物22。
称取615毫克化合物21加到100毫升圆底烧瓶中，加入10毫升氯仿，冷却到0℃。称取三苯基膦781毫克加入上述圆底烧瓶中，搅拌反应，然后分批次加入四溴化碳752毫克。加完后室温搅拌反应2小时。反应结束后蒸干溶剂，加入环己烷，过滤，滤液蒸干，然后再次加入环己烷15毫升，过滤蒸干滤液得到无色油状物为产物。产物600毫克，产率82％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.25-1.34(m,22H),1.52-1.62(m,2H),1.95-2.06(m,4H),3.41(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),3.49-3.54(m,4H),5.29-5.38(m,2H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.15,22.59,26.95,27.23,29.18,29.36,29.49,29.54,29.57,29.60,29.72,29.79,29.81,30.74,31.95,32.99,68.04,71.23,129.85,129.94。
反应路线如下：
实施例23
合成化合物23。
称取330mg叔丁氧羰基精胺化合物加到圆底烧瓶中，加入无水乙腈15毫升，无水碳酸钾900毫克，称取700毫克化合物22加入到圆底烧瓶中，氮气氛围下回流72小时。停止搅拌，加入饱和氯化铵溶液，用二氯甲烷萃取(50ml×3),合并提取液，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干溶解。粗品柱层析分离，洗脱剂(DCM：MeOH＝10:1)，收集第二带，得无色油状物330mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.25-1.37(m,48H),1.44(s,48H),1.45(s,18H),1.51-1.56(m,8H),1.69-1.77(m,8H),1.98-2.03(m,8H),2.58(br,12H),3.17-3.21(m,4H),3.83(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),3.43(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),5.29-5.47(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.15,22.71,27.19,28.50,29.19,29.32,29.35,29.39,29.55,29.68,29.73,29.80,50.79,71.16,129.71,129.76,129.96,130.10。
反应路线如下：
实施例24
合成化合物24。
称取330mg叔丁氧羰基精胺化合物加到圆底烧瓶中，加入无水乙腈15毫升，无水碳酸钾900毫克，称取700毫克溴代十二烷加入到圆底烧瓶中，氮气氛围下回流72小时。停止搅拌，加入饱和氯化铵溶液，用二氯甲烷萃取(50ml 3),合并提取液，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干溶解。粗品柱层析分离，洗脱剂(DCM：MeOH＝10:1)，收集第二带，得无色油状物320mg。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.26-1.41(m,64H),1.58(br,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(,br,4H),3.30-3.56(m,8H)。
反应路线如下：
实施例25
合成化合物25。
分别称取丙二醇680mg、钠氢2.5g加到100毫升圆底烧瓶中，加入THF 10毫升溶解搅拌30分钟，然后升高温度回流1小时，然后称取溴代十八烷分散在10毫升THF中加入分液漏斗中滴加到反应液中，加完后回流反应过夜。反应结束后，加入饱和的氯化钠溶液，二氯甲烷提取三次，合并提取液，过滤蒸干溶剂，粗品柱层析分离，收集第二带，既得产物，550mg,产率17.1％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.27-1.31(m,30H),1.53-1.61(m,2H),1.80-1.85(m,2H),3.42(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),3.61(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),3.77(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.14,22.72,26.18,29.39,29.51,29.62,29.65,29.70,29.73,31.96,62.48,70.46,71.54。
反应路线如下：
实施例26
合成化合物26。
称取615毫克化合物25加到100毫升圆底烧瓶中，加入10毫升氯仿，冷却到0℃。称取三苯基膦781毫克加入上述圆底烧瓶中，搅拌反应，然后分批次加入四溴化碳752毫克。加完后室温搅拌反应2小时。反应结束后蒸干溶剂，加入环己烷，过滤，滤液蒸干，然后再次加入环己烷15毫升，过滤蒸干滤液得到无色油状物为产物。产物600毫克，产率82％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝0.88(t,3H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.27-1.31(m,30H),1.45(s,18H),1.52-1.61(m,2H),2.00-2.12(m,2H),3.42(t,2H,j1＝6.4Hz,j2＝6.0Hz),3.49-3.54(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.14,22.72,26.18,29.39,29.51,29.62,29.65,29.70,29.73,31.96,62.48,70.46,71.54。
反应路线如下：
实施例27
合成化合物27。
称取合成的叔丁氧羰基精胺0.15g于圆底烧瓶中并溶于20ml乙腈中，加入0.48g化合物26，碳酸钾2克，90℃下搅拌回流反应24小时。蒸干浓缩，残留物加洗脱液溶解，柱层析分离，洗脱液二氯甲烷：甲醇＝25:1，收集第二带，得无色油状产物0.30g，产率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝＝0.88(t,6H,j1＝7.2Hz,j2＝6.4Hz),1.26-1.41(m,60H),1.45(s,18H),1.58(br,8H),1.90-2.0(m,8H),2.12-2.27(m,4H),2.92(,br,4H),3.30-3.56(m,8H),5.30-5.38(m,4H)。
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ＝14.10,22.72,20.24,20.39,29.65,29.74,29.77,31.96,50.72,71.22。
本发明所利用的酸碱交换树脂的处理方法如下：
直接用1M氢氧化钠浸泡4-8小时，用去离子水洗至中性(约10次)，备用。
本发明的脂质体效果：
体外和动物体内的对比研究结果表明，本发明是一较好的核酸类药品运载辅料，在体外可以完全替代Lipofectamine 2000。而在临床上体内应用，则可以作为有效安全的药物辅料进行本公司版权独有的小干扰核酸治疗用的体内药物运载。
体外转染试剂精胺脂质体配方及配制方法
1.采用乙醇注入法制备脂质体；
a.称取1.62mg TM-X(X代表1-8，TM-X表示化合物1-8，这里以TM-1为例)和0.68mg胆固醇(50％:50％，mol％)溶于1.24ml乙醇中，得到乙醇溶液；
b.取1.24ml乙醇溶液与1.24ml注射用水，37℃且剧烈搅拌下同时缓慢加入小烧杯中，加入完成后再搅拌10分钟，从小烧杯中吸出转移至15ml离心管中，得到脂质体样品YY-3-50。其中脂质体浓度为1mg/ml，乙醇含量50％(v/v)。
2.分别用注射用水梯度稀释样品YY-X-50，得到样品中乙醇含量25％和12.5％(v/v)，记为YY-X-25和YY-X-12.5；
其余化合物制备的脂质体分别记为：
| YY-1-50 | YY-2-50 | YY-3-50 | YY-4-50 | YY-5-50 |
| YY-1-25 | YY-2-25 | YY-3-25 | YY-4-25 | YY-5-25 |
| YY-1-12.5 | YY-2-12.5 | YY-3-12.5 | YY-4-12.5 | YY-5-12.5 |
配置高脂质体浓度，低乙醇含量的样品时在配置乙醇溶液过程中减小乙醇体积。
脂质体制备小结：
脂质体制备采用了改进的乙醇注入法，与核酸药物制备方法中的乙醇注入法有区别。常规核酸药物制备时采用的乙醇注入法都会在制备的最后一步通过透析的方法除去已包裹核酸的脂质体药物中的乙醇。如果采用该方法制备未包裹核酸的脂质体样品则无法在制备完成后通过孵育等方法再包裹核酸。通过多次实验，我们发现保留溶液中的乙醇，可通过孵育等方法再包裹核酸。这样就可以使用制备的脂质体随时包裹核酸，可作为如Lipofactamine 2000一样的体外转染试剂，使用方便。同时在包裹核酸后又可以作为药物使用。根据实验发现降低乙醇含量并没有使得脂质体的装载效率下降，而降低乙醇含量可减小细胞毒性。
乙醇注入法制备脂质体的关键在于制备过程中对于温度的控制，控制在37℃，在注入乙醇和水的时候一定注意控制流速，缓慢加入，同时要快速搅拌，这样有利于减小脂质体粒径，使其大小均一性比较好。
精胺脂质体理化性质测定(粒径、表面电位、电镜)
采用马尔文粒径电位仪，对粒径和电位进行测定，其中，所有脂质体的组成均为：胆固醇：精胺脂质＝50％：50％(Mol％)，溶解在12.5％的乙醇水溶液中，浓度为1mg/ml，然后取1ml样品在马尔文粒径电位仪，对粒径和电位进行测定，每一检测重复3次。
从图2可以看到粒径TM-1和TM-2化合物制备的脂质体，含有胆固醇浓度不同时，粒径变化不大而且粒径比较小，不大于310nm。
从图3的电位图中看到，增加胆固醇制备的脂质，电位下降，但是单位都大于20mV，说明脂质体稳定性比较好。
图3展示了精胺脂质体的电位图。；其中，精胺脂质体制备如上所述，将脂质体样品与siRNA按照质量比2:1在室温下孵育30分钟。将样品浓度从1mg/ml稀释至0.1mg/ml，滴至硅片表面并自然风干。硅片表面镀一层约2nm厚度的钯金合金后，放入扫描电镜中(SEM，Hitach S-480，Japan)，在20℃、60RH(相对湿度)条件下拍摄电镜图片，放大倍数如图片下方所示
对比包裹siRNA(附图3中的A、B、C及D组)与未包裹siRNA(附图3中的E和F组)的两组样品可以看出包裹siRNA的样品形状更加规则(都接近球形)，而未包裹siRNA的样品形状不规则(有的呈椭圆形，有的则是梭形)；包裹siRNA的样品粒径基本都在100-200nm左右，甚至更小，而未包裹siRNA的样品粒径则大小不一。
体外转染效率测定-荧光标记siRNA示踪
1试验步骤：
1.倒置显微镜下观察贴壁细胞生长状况，取处于对数生长期的细胞铺板(以HeLa细胞为例)。
A.弃去培养基，贴壁加入10ml PBS(细胞生长在T75培养瓶中)，晃动几次后吸出；
B.取3-5ml胰酶加入培养瓶中消化细胞(HeLa细胞约1-2分钟，不同细胞消化时间不同)；
C.加入等体积含10％NBS的完全培养基终止消化，反复吹打瓶壁，制成细胞悬液，装入15ml离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清液；
D.向细胞中加入5ml PBS，吹打或涡旋混匀，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，洗两次；
E.加入10ml含10％NBS的完全培养基，吹打或涡旋混匀，细胞计数；
F.12孔板每孔接种2×105个细胞，加含10％NBS的完全培养基1ml，过夜培养；
2.分别取样品(以YY-1-50为例)和Lipofectamine 20002μg加到200μl无血清培养基中，每份样品与0.5μg荧光siRNA/200μl无血清培养基混合孵育0.5小时，每个样品做1个副本，作为对照；
3.取出前一晚铺好细胞的12孔板，吸出培养基，使用无血清培养基洗每孔1-2次，加入400μl载体与siRNA混合溶液，其余孔加入400μl无血清培养基作为空白对照。37℃，5％CO2下培养4-6小时。
4.取出12孔板，移除培养基，使用无血清培养基洗每孔1-2次后，荧光显微镜下观察得到结果。
图5为根据本发明的精胺脂质体的转染效率荧光图。如何制备上述各种精胺脂质体与FAM-siRNA。取处于对数生长期的HeLa细胞铺板，12孔板每孔接种2105个细胞，过夜培养；精胺脂质体制备如上所述，分别与0.5g FAM标记的siRNA/200l无血清培养基混合孵育0.5小时，每个样品做1个副本，作为对照；Lipofactamine 20002g作为对照并按照厂家说明配置。孵育30分钟后加入细胞孔，37℃，5％CO2下培养4-6小时。移除培养基，使用无血清培养基洗每孔1-2次后，荧光显微镜下观察得到结果。400l无血清培养基作为空白对照。
A1、A2：Lipofectamine2000为载体，左为放大200倍，右为放大100倍
B1、B2：TM-1为载体，左为放大200倍，右为放大100倍
C1、C2：TM-2为载体，左为放大200倍，右为放大100倍
D1、D2：TM-3为载体，左为放大200倍，右为放大100倍
E1、E2：TM-4为载体，左为放大200倍，右为放大100倍
F1、F2：TM-2为载体，左为放大200倍，右为放大100倍。
体外转染效率测定-实时定量PCR测定靶基因敲低情况
试验步骤：
1、倒置显微镜下观察贴壁细胞生长状况，取处于对数生长期的细胞铺板(以HeLa细胞为例)。
G.弃去培养基，贴壁加入10ml PBS(细胞生长在T75培养瓶中)，晃动几次后吸出；
H.取3-5ml胰酶加入培养瓶中消化细胞(HeLa细胞约1-2分钟，不同细胞消化时间不同)；
I.加入等体积含10％NBS的完全培养基终止消化，反复吹打瓶壁，制成细胞悬液，装入15ml离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清液；
J.向细胞中加入5ml PBS，吹打或涡旋混匀，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，洗两次；
K.加入10ml含10％NBS的完全培养基，吹打或涡旋混匀，细胞计数；
L.24孔板每孔接种105个细胞，加含10％NBS的完全培养基1ml，过夜培养；
2.分别取样品(以YY-1-12.5即TM-1:chol＝1:1-12.5％为例)和Lipofectamine20002μg加到200μl无血清培养基中，每份样品与100nM、50nM、25nM TGF-β小核酸/200μl无血清培养基混合孵育0.5小时，NC为无关siRNA，作为平行对照；
3.取出前一晚铺好细胞的24孔板，吸出培养基，使用无血清培养基洗每孔1-2次，加入400μl载体与siRNA混合溶液，其余孔加入400μl无血清培养基作为空白对照。37℃，5％CO2下培养4-6小时。
4.随后取出培养板，加入1ml完全培养基，过夜培养。
5.取出12孔板，移除培养基，加入细胞裂解液，裂解细胞提取RNA，做q-PCR得到靶基因敲低效果。
6.体外靶基因敲低效果试验结果描述(参见图6-7)。
如图6、7所示，使用与TGF-β不相关的siRNA序列作为阴性对照，说明靶基因的降低与脂质体本身无关。使用lipofactamine2000为阳性对照，加入可敲低TGF-β的siRNA，结果表明lipofactamine 2000和我们的脂质体都可以运载siRNA进入细胞，并敲低TGF-βmRNA的表达，其中脂质体YY-1-12.5的效果与lipofactamine 2000接近，YY-4-12.5和YY-5-12.5稍差，而YY-2-12.5和YY-3-12.5效果较差。
通过荧光siRNA示踪实验结果可看出脂质体YY-1-12.5，YY-3-12.5，YY-4-12.5和YY-5-12.5转染效率较好，而YY-2-12.5的转染效率较差。而通过实时定量PCR测定靶基因敲低实验结果表明，YY-1-12.5的转染效果最好，甚至于Lipofactamine 2000的转染效率接近，YY-4-12.5和YY-5-12.5稍差，而YY-2-12.5和YY-3-12.5结果接近。综合两方面的实验可以得出，YY-1-12.5脂质体转染效率以及释放核酸的能力都较好。
YY-2-12.5转染效率较低的原因可能是化合物TM-2结构中含有脂键，影响了其空间的翻转，导致其包裹核酸的能力下降。而YY-3-12.5则可能是另一种情况，它可能是由于结合核酸的能力太强而导致其将核酸包裹的太紧以至于不能很好地释放核酸。
体外毒性测定(MTT法)
实验目的及方法简述
通过MTT毒性实验检测脂质体样品对细胞的毒性影响。
用对数期细胞铺板，96孔板每孔加入8000/孔/200μl，5％CO2，37℃孵育过夜培养。选择五种脂质体样品及Lipofactamine 2000，分别加入浓度梯度的样品(250μg/ml，125μg/ml，62.5μg/ml，31.25μg/ml，15.625μg/ml，7.8125μg/ml，3.90625μg/ml，1.953μg/ml，样品用10％NBS培养基稀释)，每孔200ul，设3个复孔，并设置调零孔(只加培养基200μl，MTT 50μl，DMSO 150μl)。5％CO2，37℃培养24小时。每孔加入50μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4小时。终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入150μl DMSO，低速振荡10分钟，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD 490nm处测量各孔的吸光值。
实验结果
根据改良寇式法：lgIC50＝Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)计算IC50值，其中Xm:lg最大剂量，I:lg(最大剂量/相临剂量)，P：阳性反应率之和，Pm：最大阳性反应率，Pn：最小阳性反应率。
计算结果如下：
YY-1-IC50：56.6μg/ml；YY-2-IC50：85.2μg/ml；YY-3-IC50：75.0μg/ml；YY-4-IC50：74.1μg/ml；YY-5-IC50：87.1μg/ml；Lipofactamine 2000-IC50：64.6μg/ml。
以上对本发明的特定实施例进行了说明，但本发明的保护内容不仅仅限定于以上实施例，在本发明的所属技术领域中，只要掌握通常知识，就可以在其技术要旨范围内进行多种多样的变更。
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Claims (7)
1.一种具有如下通式（I）的脂质修饰精胺衍生物：
（I)
其中，
X1为-(CH2)-，X2为氧，R1和R2为相同的C12-C18烷基或含有烯键的C6-C18烷基；
或，X1为-(CH2)-，X2为酯基，R1和R2为相同的C12-C18烷基或含有烯键的C6-C18烷基；
或，X1为-(CH2)-，X2为酰胺基，R1和R2是相同的C12-C18烷基或含有烯键的C6-C18烷基。
2.如权利要求1所述的脂质修饰精胺衍生物中的一种或几种自组装形成的脂质体。
3.根据权利要求2所述的脂质体，其特征在于：所述脂质体进一步包载或吸附了生物活性分子药物，所述生物活性分子药物选自核酸分子、抗肿瘤药物分子、抗生素、免疫调节剂、抗炎剂或作用于中枢神经的药物。
4.根据权利要求3所述的脂质体，其特征在于：所述核酸分子选自小干扰核苷酸、DNA、信使RNA、microRNA、反义核苷酸或适体。
5.如权利要求1所述的脂质修饰精胺衍生物中的一种或几种与胆固醇、中性脂质体焦磷酸二乙酯、聚乙二醇以及聚乙二醇修饰脂质体中的一种或几种形成的复合脂质体。
6.根据权利要求5所述的复合脂质体，其特征在于：所述复合脂质体进一步包载或吸附了生物活性分子药物，所述生物活性分子药物选自核酸分子、抗肿瘤药物分子、抗生素、免疫调节剂、抗炎剂或作用于中枢神经的药物。
7.根据权利要求6所述的复合脂质体，其特征在于：所述核酸分子选自小干扰核苷酸、DNA、信使RNA、microRNA、反义核苷酸或适体。
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