EA011449B1 - Моноклональное антитело человека к cd40 и способы его применения - Google Patents

Моноклональное антитело человека к cd40 и способы его применения Download PDF

Info

Publication number
EA011449B1
EA011449B1 EA200400654A EA200400654A EA011449B1 EA 011449 B1 EA011449 B1 EA 011449B1 EA 200400654 A EA200400654 A EA 200400654A EA 200400654 A EA200400654 A EA 200400654A EA 011449 B1 EA011449 B1 EA 011449B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
amino acid
sequence
acid sequence
antibody
acid sequences
Prior art date
Application number
EA200400654A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200400654A1 (ru
Inventor
Вахе Бедиан
Роналд П. ГЛЭЙДЬЮ
Хосе Корвалан
Ксиао-Чи Джиа
Ксиао Фенг
Original Assignee
Пфайзер Продактс Инк.
Эмджен Фримонт Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23370387&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA011449(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Пфайзер Продактс Инк., Эмджен Фримонт Инк. filed Critical Пфайзер Продактс Инк.
Publication of EA200400654A1 publication Critical patent/EA200400654A1/ru
Publication of EA011449B1 publication Critical patent/EA011449B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/06—Radiation therapy using light
    • A61N5/0613—Apparatus adapted for a specific treatment
    • A61N5/062—Photodynamic therapy, i.e. excitation of an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к человеческим моноклональным антителам и их антигенсвязывающим участкам, которые специфически связываются с CD40 и которые функционируют в качестве агонистов CD40. Настоящее изобретение относится также к выделенной тяжелой и легкой цепям иммуноглобулинов, полученных из антител человека к CD40 и молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих такие иммуноглобулины. Настоящее изобретение относится также к способам получения антител человека к CD40, к композициям, содержащим такие антитела, и к способам применения указанных антител и композиций для диагностики и лечения. В настоящем изобретении разработаны также способы генной терапии с использованием молекул нуклеиновых кислот, кодирующих тяжелые и/или легкие иммуноглобулиновые молекулы, включая антитела человека к CD40.

Description

Заявка на данный патент претендует на приоритет по предварительной заявке США № 60/348980, поданной 9 ноября 2001 г.
Характеристика известного уровня техники
Антиген ί.Ό40 представляет собой гликопротеин клеточной поверхности в 50 кДа, который относится к семейству рецепторов фактора некроза опухолей (ΤΝΡ-Κ). (81атепкот1с е! а1., ЕМВО 1. 8:1403-10 (1989)). ί.Ό40 экспрессируется во многих типах нормальных и опухолевых клеток, включая Влимфоциты, дендритные клетки, моноциты, макрофаги, эпителий вилочковой железы, эндотелиальные клетки, фибробласты и клетки гладкой мускулатуры. (Раи11е 8. е! а1., Сапсег 1ттипо1. 1ттипо!йег. 20:238 (1985); Вапсйегеаи 1. е! а1., Αάν. Ехр. Меб. & Вю1. 378:79-83 (1995); А1бегкоп М.В. е! а1., 1. ок Ехр. Меб. 178:669-74 (1993); Видд1его С. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 156:3737-46 (1996); Но11епЬаидй Ό. е! а1., 1. ок Ехр. Меб. 182:33-40 (1995); УеШп М.1. е! а1., 1. ок Ьеикосу!е Вю1. 58:209-16 (1995); и Ьа/аат А.Ь. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 161:3120-7 (1998)). СЭ40 экспрессируется во всех В-лимфомах и в 70% всех солидных опухолей. Несмотря на конститутивную экспрессию, ί.Ό40 хорошо регулируется в антигенпрезентирующих клетках с помощью сигналов созревания, таких как ЬР8, 16-1 β, ΙΕΝ-γ и СМ-С8Е.
Активация ί.Ό40 играет решающую роль в регуляции гуморального и клеточного иммунных ответов. Антигенная презентация без активации ί.Ό40 может привести к толерантности, а СЭ40сигнализация может способствовать обратимости такой толерантности, усилить антигенную презентацию с помощью всех антигенпрезентирующих клеток (АПК), привести к секреции хелперных цитокинов и хемокинов, повысить экспрессию костимулирующих молекул и передачу сигналов, а также стимулировать цитолитическую активность иммунных клеток.
ί.Ό40 играет ключевую роль в пролиферации В-клеток, созревании и переключении класса иммуноглобулинов. (Еоу Т.М. е! а1., Апп. Вет. ок 1ттипо1. 14:591-617 (1996)). Нарушение сигнального пути ί.Ό40 ведет к аномальному распределению изотипов сывороточного иммуноглобулина, к отсутствию СЭ4+-Т-клеточного примирования и к дефектам вторичных гуморальных ответов. Например, Хсцепленный синдром избыточного образования 1дМ представляет собой заболевание, связанное с мутацией у человека гена СП40Ь, которое характеризуется неспособностью пораженных индивидов вырабатывать антитела, отличные от 1дМ-изотопа, и свидетельствующее о том, что для эффективного иммунного ответа необходимо продуктивное взаимодействие между ΕΌ40 и СП40Ь.
Захват ί.Ό40 с помощью СО40Ь приводит к ассоциации цитоплазматического домена СЭ40 с ТВАЕ (ΤΝΡ-В-ассоциируемые факторы). (Ьее Н.Н. е! а1., Ргос. №!1. Асаб. 8сг И8А 96:1421-6 (1999); Ри11еп 8.8. е! а1., ВюсйетМгу 37:11836-45 (1998); Сгаттаг А.С. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 161:1183-93 (1998); 1кЫба Т.К. е! а1., Ргос. N311. Асаб. 8ск И8А 93:9437-42 (1996); Ри11еп 8.8. е! а1., 1. ок Вю1. Сйет. 274:14246-54 (1999)). Такое взаимодействие с ТВАЕ может завершать активацию обоих путей - ΝΕκΒ и 1ип/АР1. (Ткикато!о Ν. е! а1., Ргос. №!1. Асаб. 8ск И8А 96:1234-9 (1999); 8иίйе^1аиб С.Ь. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 162:4720-30 (1999)). В зависимости от типа клеток, данная сигнализация приводит к усилению секреции цитокинов, таких как 1Ь-6 (1ерркоп ΕΌ. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 161:1738-42 (1998); ИеДта Υ. е! а1., 1п!. Агсй, ок А11егду & 1ттипо1. 110:225-32, (1996), 1Ь-8 (Сгикк Н.Е е! а1., В1ооб 84:2305-14 (1994); топ ЕеортесШпд А. е! а1., Сапсег Век. 59:1287-94 (1999); Пепке1б В.У. е! а1., Еигор. 1. ок 1ттипо1. 26:2329-34 (1996)), 1Ь-12 (Се11а М. е! а1., 1. ок Ехр. Меб. 184:747-52 (1996); Еег1ш У.С. е! а1., Еигор. 1. ок 1ттипо1. 28:525-31 (1998); Агтап! М. е! а1., Еигор. 1. ок 1ттипо1. 26:1430-4 (1996); Косй Е. е! а1., 1. ок Ехр. Меб. 184:741-6 (1996); 8едшп В. апб Ь.Н. Какрег, 1. ок 1пкес!. Пкеакек 179:467-74 (1999); СйаиккаЬе1 Ό. е! а1., ИтГесбоп & 1ттиш1у 67:1929-34 (1999)), 1Ь-15 (КишуокЫ 1.8. е! а1., Се11и1аг 1ттипо1. 193:48-58 (1999)) и хемокинов (М1Р1а, М1Р1в, ВА№ТЕ8 и другие) (МсЭуег ЕЕ. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 162:3711-7 (1999); 8сйаше1 С. е! а1., 1. ок Ехр. Меб. 188:451-63 (1998); А1!епЬигд А. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 162:4140-7 (1999); Эескегк ЕС. е! а1., 1. ок !йе Ат. 8ос1е!у ок №рйго1оду 9:1187-93 (1998)), повышает экспрессию МНС класса I и II (8ап!ок-Агдитебо Ь. е! а1., Се11и1аг 1ттипо1. 156:272-85 (1994)), и повышает экспрессию адгезивных молекул (например, 1САМ) (Ьее Н.Н. е! а1., Ргос. №!1. Асаб. 8сг И8А 96:1421-6 (1999); Сгоиккоп 1. е! а1., АгсЫтек ок ОегтаЮк Век. 290:325-30 (1998); Ка!аба Υ. е! а1., Еигор. 1. ок 1ттипо1. 26:192-200 (1996); Мауит1 М. е! а1., 1. ок А11егду & С1т. 1ттипо1. 96:1136-44 (1995); Е1огек-Вото Ь. е! а1., 1ттипо1. 79:445-51 (1993) и костимулирующих молекул (например, В7) (Воу М. е! а1., Еигор. 1. ок 1ттипо1. 25:596-603 (1995); 1опек К.У. апб С.1. Наске!!, Се11и1аг 1ттипо1. 174:42-53 (1996); Саих С. е! а1., 1оигпа1 ок Ехр. Меб. 180:1263-72 (1994); К1епег Р.А. е! а1., 1. ок 1ттипо1. 155:4917-25 (1995)). Цитокины индуцировали в результате захвата СЭ40, что повышает выживаемость и активацию Т-клеток.
Помимо усиления клеточной и иммунной функции, эффекты СЭ40-активации включают в себя рекрутинг клеток и их дифференцировку с помощью хемокинов и цитокинов; активацию моноцитов, повышение цитолитической активности цитолитических Т-лимфоцитов (СТЬ) и природных киллерных (ΝΙ<) клеток; индукцию апоптоза в СЭ40-позитивных злокачественных опухолях; усиление иммуногенности СО40-позитивных злокачественных опухолей; и образование антител, специфичных в отношении злокачественных опухолей. Установлена также роль СО40-активации в опосредованных клеткой иммунных ответах, которая рассматривается у СгехтаП е! а1., Апп. Вет. ок 1ттипо1. 16:111-35 (1998); Маскеу е! а1., 1. ок Ьеикосу!е Вю1. 63:418-28 (1998); и №е11е В.Е, Адеп!к & Ас!юпк - 8ирр1. 49:17-22 (1998).
- 1 011449
Исследования с использованием модельной системы перекрестного примирования показывают, что СЭ40-активация АПК может заменить потребность в хелперных Т-клетках, необходимых для образования цитолитических Т-лимфоцитов (СТЬ). (Вейлей е! а1., Иа1иге 393:478-480 (1998)). Данные, полученные на мышах с недостатком СИ40Ь, свидетельствуют о явной потребности в СИ40-сигналах для инициации хелперных Т-клеток. (Сге\\'а1 1.8. е1 а1., 8с1епсе 273:1864-7 (1996); Сге\\'а1 1.8. е! а1., Иа1иге 378:617-20 (1995)). СЭ40-активация преобразует в противном случае толерогенные, антиген несущие Вклетки в компетентные АПК. (ВиШтаии ТЕ. е! а1., 1штипйу 2:645-53 (1995)). СИ40-активация индуцирует созревание и дифференцировку клеток-предшественников пуповинной крови в дендритные клетки. (Е1огек-Кото Ь. е! а1., 1. οί Ехр. Меб. 185:341-9 (1997); Маскеу М.Е. е! а1., 1. οί 1ттипо1. 161:2094-8 (1998)). СЭ40-активация индуцирует также дифференцировку моноцитов в функциональные дендритные клетки. (Вгоккай Р. е! а1., В1ооб 92:4238-47 (1998)). Кроме того, СИ40-активация повышает цитолитическую активность ΝΚ-клеток с помощью АПК-СЭ40 индуцированных цитокинов. (Сагйопе Е. е! а1., ί. οί Ехр. Меб. 185:2053-60 (1997); Магйп-Еоп!есйа А. е! а1., ί. οί 1ттипо1. 162:5910-6 (1999)). Данные наблюдения свидетельствуют о том, что СЭ40 играет существенную роль в инициации и усилении иммунных ответов путем индукции созревания АПК, секреции хелперных цитокинов, улучшенной регуляции костимулирующих молекул, а также в усилении эффекторных функций.
Ключевая роль СЭ40-сигналов в инициации и развитии гуморального и цитотоксического иммунных ответов делает данную систему идеальной мишенью для иммунного усиления. Такое усиление может быть особенно важным для поддержания эффективных иммунных ответов на антигены злокачественных опухолей, которые, как правило, представляются иммунной системе через примирование перекрестнореагирующим антигеном активированных АПК. (Ниапд Α.Υ. е! а1., С1Ьа Еоипбайоп 8утр. 187:229-44 (1994); Тоек К.Е.М. е! а1., 8ешшагк ш 1ттипо1. 10:443-8 (1998); А1Ьей М.Ь. е! а1., №Ш1ге 392:8 6-9 (1998); Веппе!! 8.К. е! а1., ί. οί Ехр. Меб. 186:65-70 (1997)).
Несколько групп исследователей продемонстрировали эффективность СИ40-активации в отношении противоопухолевых ответов ш уйго и ш угуо (Тоек К.Е.М. е! а1., 8ешшагк ш 1шшипо1. 10:443-8 (1998)). Две группы исследователей, используя модель легочных метастазов почечно-клеточной карциномы и подкожные опухоли, вызванные с помощью трансформированных вирусом клеток, независимо показали, что активация СЭ40 может обратить толерантность к опухолеспецифичным антигенам, вызывая эффективную противоопухолевую инициацию Т-клеток. (8о!отауог Е.М. е! а1., №Ш1ге Мебюше 5:780-787 (1999); Э|ей1 Ь. е! а1., №Ш.1ге Мебюше 5:774-9 (1999)). О противоопухолевой активности в отсутствие иммунных клеток сообщается также для обработанной с помощью СЭ40Б и антитела к СИ40 модельной линии злокачественных клеток молочной железы человека у 8СШ-мышей (Нйате А. е! а1., В1ооб 93:2999-3007 (1999)). На мышиных моделях недавно показана ликвидация лимфом СИ40+ и СИ40в результате СИ40-активации с помощью антител к СИ40. (Егепсй К.К. е! а1., №Ш.1ге Мебюше 5:548-53 (1999)). Более того, в предыдущих исследованиях С1епше и соавторов сделан вывод о том, что сигнальная активность антител к СЭ40 более эффективна для индукции клиренса опухоли ш угуо, чем сигнальная активность других антител к поверхностным маркерам, способных вызывать рекрутинг эффекторов. (Ти!! А.Ь. е! а1., ί. οί 1шшипо1. 161:3176-85 (1998)). Согласно этим наблюдениям, при тестировании антитела к СЭ40 на активность против СИ40+-злокачественных клеток ш угуо в большинстве случаев, хоть и не всегда, туморицидная активность ассоциируется скорее с СИ40-сигналом, чем с АЭСС. (Еипакокй 8. е! а1., ί. οί 1шшипо1йегару χνίΐΐι Етрйащк оп Титог 1шшипо1. 19:93-101 (1996)). В другом исследовании дендритные клетки костного мозга обрабатывали ех угуо различными агентами, и тестировали ш угуо противоопухолевую активность. Эти исследования показали, что ДК, стимулированные СИ40Ь, являются наиболее зрелыми и наиболее эффективными клетками, повышающими противоопухолевый ответ.
Существенная роль СЭ40 в противоопухолевом иммунитете показана также при сравнении ответов на противоопухолевые вакцины у мышей дикого типа и у мышей СЭ40-/-. Эти исследования показали, что мыши СЭ40-/- не способны реализовать противоопухолевый иммунитет, присущий нормальным мышам. (Маскеу М.Е. е! а1., Сапсег Кекеагсй 57:2569-74 (1997)). В другом исследовании спленоциты мышей, носителей опухоли, стимулированные опухолевыми клетками и обработанные активирующими ех у1уо антителами к СЭ40. показали повышенную опухолеспецифичную СТЬ-активность. (Попериб1 М. е! а1., Сапсег 1ттипо1. 1штипо1йег. 48:153-164 (1999)). Эти исследования показали, что СЭ40 занимает ключевую позицию в противоопухолевом иммунитете, как в позитивных, так и в негативных по СЭ40 злокачественных опухолях. Поскольку СЭ40 экспрессируется в лимфомах, лейкозах, множественной миеломе, в большинстве карцином носоглотки, мочевого пузыря, яичника и печени, а также в некоторых карциномах молочной железы и прямой кишки, активация СЭ40 может иметь широкий диапазон клинического применения.
Активация моноклональных антител к СЭ40 может способствовать ликвидации злокачественной опухоли с помощью нескольких важных механизмов. Первый из них заключается в активации хозяйских дендритных клеток для усиления процессинга опухолевого антигена и его презентации, а также повышения антигенной презентации или иммуногенности самих опухолевых СЭ40-позитивных клеток, что приводит к активации опухолеспецифичных СЭ4'- и СЭ8 '-лимфоцитов. Дополнительная противоопухолевая активность может быть опосредована иными усиливающими иммунитет эффектами СЭ40-сигналов
- 2 011449 (выработка хемокинов и цитокинов, набор и активирование моноцитов, повышение СТЬ- и ΝΚцитолитической активности), а также прямым уничтожением СЭ40'-опухолей в результате индукции апоптоза или путем стимуляции гуморального ответа, приводящего к АЭСС. Клетки апоптозной и погибающей опухоли могут также являться важным источником опухолеспецифичных антигенов, которые процессируются и презентируются АПК, активированными СЭ40.
В соответствии с изложенным существует острая необходимость в терапевтических, клинически пригодных антител против СЭ40-агонистов.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А-1Н представлены выравнивания предсказанных аминокислотных последовательностей для выделенных вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей моноклонального антитела к СЭ40 с аминокислотными последовательностями соответствующих легкой и тяжелой цепей генов зародышевой линии. Различия между клонами и соответствующей последовательностью зародышевой линии оттенены. Последовательности зародышевых линий СЭК.1, СЭК2 и СЭК3 подчеркнуты. В выровненных последовательностях тяжелой цепи появление инсерций на СЭК3-участке в последовательности зародышевой линии указаны знаком тире (-), появление в последовательности данного клона делеции в СЭК3-участке указаны знаком тире (-).
Фиг. 1А: предсказанные аминокислотные последовательности вариабельной области легкой каппацепи из монАТ 3.1.1 и 7.1.2 с У|.=А3/А19 и 1=1к1 аминокислотные последовательности гена зародышевой линии;
фиг. 1В: аминокислотные последовательности предсказанной вариабельной области легкой каппацепи из клона 15.1.1 и аминокислотная последовательность (Ук=А3/А19 и 1=1к2) клеток зародышевой линии;
фиг. 1С: аминокислотные последовательности предсказанной вариабельной области легкой каппацепи из монАТ 10.8.3 и 21.4.1 и аминокислотная последовательность (Ук=Ь5 (ЭР5) и 1=1к4) клеток зародышевой линии;
фиг. 1Э: аминокислотная последовательность предсказанной вариабельной области тяжелой цепи из монАТ 3.1.1 и аминокислотная последовательность (Ун=3-30+ (ЭР-49), Э=Э4+Э1К3 и 1=1н6) клеток зародышевой линии;
фиг. 1Е: аминокислотная последовательность предсказанной вариабельной области тяжелой цепи из монАТ 7.1.2 и аминокислотная последовательность (Ун=3-30+ (ЭР-49), Э=Э1К5+Э1-26 и 1=1н6) клеток зародышевой линии;
фиг. 1Е: аминокислотные последовательности предсказанной вариабельной области тяжелой цепи из монАТ 10.8.3 и аминокислотная последовательность (Ун=4.35 (У1У-4), Э=Э1К3 и 1=1н6) клеток зародышевой линии;
фиг. 1С: аминокислотные последовательности предсказанной вариабельной области тяжелой цепи из монАТ 15.1.1 и аминокислотная последовательность (Ун=4-59 (ЭР-71), Э=Э4-23 и 1=1н4) клеток зародышевой линии;
фиг. 1Н: аминокислотные последовательности предсказанной вариабельной области тяжелой цепи из монАТ 21.4.1 и аминокислотная последовательность (Ун=1-02 (ЭР-75), Э=ЭЬК1 и 1=1н4) клеток зародышевой линии.
На фиг. 2А-2Н представлено выравнивание предсказанных аминокислотных последовательностей выделенных доменов легкой и тяжелой цепи моноклонального антитела к СЭ40 и аминокислотных последовательностей соответствующих легкой и тяжелой цепи генов зародышевой линии. Различия между клонами и данной последовательностью зародышевой линии выделены жирным шрифтом. Последовательности клеток зародышевой линии СЭК1, СЭК2 и СЭК3 подчеркнуты. При выравнивании последовательностей тяжелой цепи появление вставок на СЭК3-участке зародышевой линии указаны знаком тире (-), появление в последовательности данного клона делеции в СЭКЗ-участке указаны знаком тире (-).
Фиг. 2А: предсказанные аминокислотные последовательности легкой каппа-цепи из монАТ 22.1.1, 23.5.1 и 23.29.1 и аминокислотная последовательность (Ук=А3/А19 и 1=1к1) клеток зародышевой линии;
фиг. 2В: предсказанные аминокислотные последовательности легкой каппа-цепи из монАТ 21.2.1 и аминокислотная последовательность (Ук=А3/А19 и 1=1к3) клеток зародышевой линии;
фиг. 2С: предсказанные аминокислотные последовательности легкой каппа-цепи из монАТ 23.28.1, 23.28.1Э-С92А и 24.2.1 и аминокислотная последовательность (Ук=А27 и 1=1к3) клеток зародышевой линии;
фиг. 2Э: предсказанная аминокислотная последовательность тяжелой цепи из монАТ 21.2.1 и аминокислотная последовательность (Ун=3-30+, Э=Э1К3+Э6-19 и 1=1н4) клеток зародышевой линии;
фиг. 2Е: предсказанная аминокислотная последовательность тяжелой цепи из монАТ 21.1.1, 22.1.1Н-С109А и аминокислотная последовательность (Ун=3-30+, Э=Э1-1 и 1=1н6) клеток зародышевой линии;
фиг. 2Е: предсказанная тяжелая цепь аминокислотной последовательности из монАТ 23.5.1 и аминокислотная последовательность (Ун=3-30+, Э=Э4-17 и 1=1н6) клеток зародышевой линии;
фиг. 20: предсказанная аминокислотная последовательность тяжелой цепи из монАТ 23.29.1 и ами
- 3 011449 нокислотная последовательность (Ун=3-30.3, Ό=Ό4-17 и 1=1н6) клеток зародышевой линии;
фиг. 2Н: предсказанные аминокислотные последовательности тяжелой цепи из монАТ 23.28.1, 23.28.1Η-Ό16Ε и 24.2.1 и аминокислотная последовательность клеток зародышевой линии (Ун=4-59, Ό=ΌΙΚ1+Ό4-17 и 1=1н5).
На фиг. 3 представлена кривая зависимости доза-эффект, которая иллюстрирует способность антитела против ί.Ό40 согласно изобретению (21.4.1) повышать образование 1Ь-12р40 дендритными клетками человека.
На фиг. 4 представлена кривая зависимости доза-эффект, которая иллюстрирует способность антитела против ί.Ό40 согласно изобретению (21.4.1) повышать образование 1Ь-12р70 дендритными клетками человека.
На фиг. 5 представлен график, который иллюстрирует способность антитела против ί.Ό40 согласно изобретению (21.4.1) повышать иммуногенность стимулирующих клеток 1у и усиливать СТЬ-активность против клеток-мишеней 1у.
На фиг. 6 представлена кривая ингибирования роста злокачественной опухоли, которая иллюстрирует снижение роста позитивных по СЭ40 злокачественных опухолей Ωαυάί у 8СШ-Ье1де мышей, обработанных антителом к ί.Ό40 (21.4.1) согласно изобретению.
На фиг. 7 представлена кривая ингибирования роста злокачественной опухоли, которая иллюстрирует снижение роста негативных по ί.Ό40 злокачественных опухолей К562 у мышей 8СШ-Ье1де, обработанных антителом к ί.Ό40 (21.4.1) согласно изобретению и дендритными клетками человека, а также Тклетками.
На фиг. 8 показано ингибирование роста негативных по ί.Ό40 злокачественных опухолей К562 у 8СГО-мышей разными концентрациями агониста монАТ 23.29.1 к СЭ40.
На фиг. 9 показано ингибирование роста негативных по ί.Ό40 злокачественных опухолей К562 разными концентрациями агониста монАТ 3.1.1 к ί.Ό40.
На фиг. 10 показано ингибирование роста позитивных по ί.Ό40 злокачественных опухолей Ка_ц в присутствии или отсутствие Т-клеток и дендритных клеток у 8СШ-мышей с помощью агониста монАТ к СО40.
На фиг. 11 показано ингибирование роста позитивных по СЭ40 злокачественных опухолей Кац у 8СГО-мышей с помощью агониста антител к СЭ40.
На фиг. 12 показано ингибирование роста клеток ВТ 474 злокачественной опухоли молочной железы у мышей ЗСЧЭ-Ьефе с помощью агониста антител к СЭ40.
На фиг. 13 показано ингибирование роста злокачественных опухолей РС-3 предстательной железы у мышей ЗСЧЭ-Ьефе с помощью агониста антител к СЭ40.
На фиг. 14 представлена кривая выживаемости для мышей ЗСЧЭ-Ьефе. инъецированных (ίν) злокачественными клетками Ωαυάί и обработанных агонистом антител к СЭ40.
На фиг. 15 представлен Вестерн-блот-анализ к СЭ40-агонисту антител для редуцированного (К) и нередуцированного (ΝΚ) СЭ40 человека.
На фиг. 16 представлены результаты выравнивания О1-Э4-доменов СЭ40 мыши и человека.
На фиг. 17 представлены результаты выравнивания аминокислотных последовательностей ί.Ό40 мыши и человека, демонстрирующих положение сайтов слияния в данных химерах.
На фиг. 18 схематически представлена группа диаграмм для химерных СО40-конструкций.
Краткое изложение существа изобретения
В настоящем изобретении представлено выделенное антитело или его антигенсвязывающая часть, которые связывает ί.Ό40 и действуют в качестве СО40-агониста.
В настоящем изобретении представлена композиция, содержащая антитело к ί.Ό40 или его антигенсвязывающую часть, и фармацевтически приемлемый носитель. Кроме того, созданная композиция может включать в себя второй компонент, такой как противоопухолевый агент или визуализирующий агент. В настоящем изобретении разработаны также диагностические и терапевтические способы.
В настоящем изобретении представлена выделенная клеточная линия, такая как гибридома, которая производит антитело к СЭ40 или его антигенсвязывающую часть.
В настоящем изобретении представлены также молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие тяжелую и/или легкую цепь антитела к СЭ40 или его антигенсвязывающую часть.
В настоящем изобретении представлены векторы и хозяйские клетки, содержащие молекулы нуклеиновых кислот, а также способы рекомбинантного получения полипептидов, кодируемых молекулами нуклеиновых кислот.
Предусмотрены также не принадлежащие человеческому роду трансгенные животные, которые экспрессируют тяжелую и/или легкую цепь антитела к СЭ40 или его антигенсвязывающую часть.
В настоящем изобретении разработан также способ лечения пациента, нуждающегося в этом, эффективным количеством молекул нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую и/или легкую цепь антитела к ί.Ό40 или его антигенсвязывающую часть.
- 4 011449
Подробное описание изобретения
Определения и общие методики.
За исключением особо оговоренных случаев, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, подразумевают их обычное понимание рядовыми специалистами в данной области. Кроме того, если не оговорено в контексте, употребление терминов в единственном числе подразумевает также и множественное толкование, и наоборот. Вообще терминология и методы, используемые применительно к культуре клеток и культуре тканей, к молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетике, а также к белковой химии и химии нуклеиновых кислот и описанной здесь гибридизации, представляют собой хорошо известную терминологию и методы, обычно используемые в данной области.
Способы и методы настоящего изобретения, как правило, осуществляют в соответствии с традиционными способами, хорошо известными в данной области, а также описанными в разных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в настоящем описании, если не указано иначе. См., например, 8атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога1огу Мапиа1, 2й ей., Со1й 8рппд НагЬог ЬаЬога1огу Ргекк, Со1й 8рппд НагЬог, Ν.Υ. (1989) и АикиЬе1 е! а1., Сиггеп! Рго1осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду, Огеепе РиЬБкЫпд Аккос1а!ек (1992), а также Наг1оте апй Ьапе АпйЬоФек: А ЬаЬога1огу Мапиа1, Со1й 8рппд НагЬог ЬаЬога1огу Ргекк, Со1й 8рппд НагЬог, Ν.Υ. (1990), которые включены здесь путем ссылки. Ферментативные реакции и методы выделения очисткой осуществляют в соответствии с предписаниями производителей, как обычно принято в данной области или как описано здесь. Терминология, используемая в этой связи, а также лабораторные операции и методы аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, описываемые здесь, относятся к лабораторным операциям и методам, хорошо известным и обычно используемым в данной области. Стандартные методы используют для химического синтеза, химического анализа, для получения фармацевтического препарата, в технологии приготовления лекарственного средства, а также для доставки и лечения пациентов.
Если не указано иначе, нижеследующие термины имеют следующие значения.
Термин полипептид подразумевает природные или синтетические белки, белковые фрагменты и полипептидные аналоги белковой последовательности. Полипептид может быть мономерным или полимерным.
Термин выделенный белок, выделенный полипептид или выделенное антитело представляет собой белок, полипептид или антитело, которое в силу своего происхождения или источника получения (1) не ассоциируется с естественно связанными компонентами, которые сопровождают его в своем нативном состоянии, (2) свободно от других белков из одних и тех же видов, (3) экспрессируется клетками разных видов или (4) не встречается в природе. Таким образом, полипептид, который химически синтезирован или синтезирован в клеточной системе, отличной от клетки, из которой он естественным образом произошел, должен быть выделенным из своих естественно связанных компонентов. Любой белок можно также практически освободить от естественно связанных компонентов путем выделения, применяя методы выделения очистки белка, хорошо известные в данной области.
Примеры выделенных антител включают в себя антитело к СЭ40, которое выделяют путем очистки по сродству с использованием СЭ40, антитело к СЭ40, которое синтезируют с помощью гибридомной или иной линии клеток шуйго, и антитело человека к СЭ40, получаемое из трансгенной мыши.
Белок или полипептид является практически чистым, практически гомогенным или практически очищенным, если по меньшей мере около 60-75% образца представлено одним видом полипептида. Данный белок или полипептид может быть мономерным или мультимерным. Практически чистый полипептид или белок обычно содержит около 50, 60, 70, 80 или 90% мас./мас. белкового образца, чаще около 95% и предпочтительно свыше 99% чистоты. Степень очистки белка или степень гомогенности можно показать несколькими способами, хорошо известными в данной области, такими как электрофорез белкового образца в полиакриламидном геле с последующей визуализацией одиночной полипептидной полосы после окраски геля красителем, хорошо известным в данной области. Для некоторых целей, что касается выделения очисткой, высокое разрешение можно получить путем использования ВЭЖХ или иными способами, хорошо известными в данной области.
Используемый здесь термин полипептидный фрагмент относится к полипептиду, который имеет аминоконцевую и/или карбоксиконцевую делецию, а остальная аминокислотная последовательность идентична по соответствующим положениям встречающейся в природе последовательности. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения длина фрагментов составляет по меньшей мере 5, 6, 8 или 10 аминокислот. В других вариантах осуществления настоящего изобретения длина фрагментов составляет по меньшей мере 14, по меньшей мере 20, по меньшей мере 50 или по меньшей мере 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот.
Используемый здесь термин полипептидный аналог относится к полипептиду, который включает в себя сегмент, практически идентичный части аминокислотной последовательности и который обладает, по меньшей мере, следующими характеристиками:
(1) специфически связывается с СЭ40 в подходящих условиях связывания, (2) способен активировать СЭ40,
- 5 011449 (3) способен хорошо регулировать экспрессию молекул на поверхности клетки, таких как 1САМ, МНС-11, В7-1, В7-2, СО71, СО23 и СО83, или (4) способен повышать секрецию цитокинов, таких как ΙΕΝ-β1, 1Ь-2, 1Ь-8, 1Ь-12, 1Ь-15, 1Ь-18 и 1Ь23.
Как правило, полипептидные аналоги включают в себя консервативную аминокислотную замену (или вставку, или делецию) во встречающейся в природе последовательности. Как правило, аналоги содержат в длину по меньшей мере 20 или 25 аминокислот, предпочтительно по меньшей мере 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 или 200 аминокислот или больше, и часто могут обладать такой же длиной, как и естественно встречающийся полноразмерный полипептид.
Предпочтительными аминокислотными заменами являются те, которые:
(1) уменьшают чувствительность к протеолизу, (2) уменьшают чувствительность к окислению, (3) изменяют сродство к связыванию при образовании белковых комплексов и (4) придают или модифицируют другие физикохимические или функциональные характеристики таких аналогов.
Аналоги могут содержать различные изменения последовательности, отличающиеся от изменений в естественно встречающейся пептидной последовательности. Например, одиночную или множественные аминокислотные замены (предпочтительно консервативные аминокислотные замены) можно создать в естественно встречающейся последовательности (предпочтительно на участке полипептида, находящемся вне домена(ов), образующего межмолекулярные контакты). Консервативная аминокислотная замена не должна существенно изменять структурные характеристики родительской последовательности (например, замена аминокислоты не должна приводить к разрушению спирали, которая существует в данной родительской последовательности, или разрушать другие виды вторичной структуры, которая характеризует данную родительскую последовательность). Примеры общеизвестных вторичных и третичных полипептидных структур описаны в Рго1ешк, 81гис1игек алб Мо1еси1аг ΡΓίηοίρΙοκ (С’гсщЫоп. Еб., XV. Н. Егеетаи апб Сотрапу, №\ν Уогк (1984)); 1п1гобис1юп 1о Рго1ет 81гис1иге (С. Вгапбеп апб 1. Тоохе, ебк., Саг1апб РиЬНкЫпд, №\ν Уогк, Ν.Υ. (1991)); апб Т1югп1оп е1 а1., №1Ц.1ге 354:105 (1991), каждая из которых включена в данное описание путем ссылки.
Непептидные аналоги обычно используют в фармацевтической промышленности в виде лекарственных средств с характеристиками, аналогичными характеристикам данного матриксного пептида. Данные виды непептидного фармацевтического соединения называют пептидными миметиками или пептидомиметиками, Еаисйеге, 1. Абу. Огид Век. 15:29 (1986); УеЬег апб Еге1бтдег, ΤΙΝ8 р.392 (1985); и Еуапк е1 а1., 1. Меб. Скет. 30:1229 (1987), включены здесь путем ссылки. Такие соединения часто создают с помощью компьютерного молекулярного моделирования. Пептидные миметики, которые структурно сходны с терапевтически пригодными пептидами, можно использовать для получения эквивалентного терапевтического или профилактического эффекта. Вообще пептидомиметики структурно сходны с образцовым полипептидом (т.е. полипептидом, который обладает требуемым биохимическим свойством или фармакологической активностью), таким как антитело человека, но обладает одним или несколькими пептидными связями, необязательно замещенными связью, выбранной из группы, состоящей из -СН2К1Н-, -СН28-, СН2-СН2-, -СН=СН-(цис и транс), -СОСН2-, -СН(ОН)СН2- и -СН2§0-, способами, хорошо известными в данной области. Для получения более стабильных пептидов можно также использовать системную замену одной или нескольких аминокислот консенсусной последовательности Όаминокислотой такого же типа (например, Ό-лизин вместо Ь-лизина). Кроме того, связанные пептиды, содержащие консенсусную последовательность или практически идентичную вариацию консенсусной последовательности, можно получить способами, хорошо известными в данной области (Мхо апб С1егаксй, Апп. Реу. Вюскет. 61:387 (1992), включены сюда в виде ссылки); например, путем добавления внутренних цистеиновых остатков, способных образовывать межмолекулярные дисульфидные мостики, которые циклизуют данный пептид.
Антитело относится к полному антителу или к его антигенсвязывающему участку, которые конкурируют с интактным антителом за специфическое связывание. См., главным образом, Еипбатеп1а1 1ттипо1оду, С1. 7 (Раи1, V., еб., 2пб еб. Рауеп Ргекк, Ν.Υ. (1989)) (включенную во всей полноте для всех целей). Антигенсвязывающие участки можно получить с помощью методов рекомбинантной ДНК или путем ферментативного или химического расщепления интактных антител. Антигенсвязывающие участки включают в себя, в частности, ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2, Еб, Εν, бАЬ и фрагменты, определяющие участок комплементарности (СЭВ), одноцепочечные антитела (^Εν), химерные антитела, диательца и полипептиды, которые содержат, по меньшей мере, участок антитела, который достаточен для придания специфичности связывания антигена с данным полипептидом.
От Ν-конца до С-конца вариабельные домены тяжелой и легкой цепи включают в себя участки ЕВ1, СОВ1, ЕВ2, СЭВ2, ЕВ3, СЭР3 и ЕВ4. Отнесение аминокислот к каждому из доменов производят в соответствии с определениями КаЬа!, 8ециепсек о£ РгсЛетк о£ 1ттипо1одюа1 Iп1егек( (№1бопа1 1пк1йи1ек о£ Неа11й, ВеЛекба, Мб. (1987 апб 1991)), или С1ю11иа & Ьекк, 1. Мо1. Вю1. 196:901-917 (1987); Скобка е! а1., №1иге 342:878-883 (1989).
- 6 011449
Здесь антитело, которое обозначается числом, представляет собой моноклональное антитело, которое получено из гибридомы с тем же числом. Например, моноклональное антитело 3.1.1 получают из гибридомы 3.1.1.
Здесь Рб-фрагмент означает фрагмент антитела, который состоит из доменов Ун и Сн 1; Ρνфрагмент состоит из доменов Уь и Ун одноплечевого антитела; и бЛЬ-фрагмент (^агб е! а1., Иа!иге 341:544-546 (1989)), который состоит из Ун-домена.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело представляет собой одноцепочечное антитело (κεΡν), в котором домены Уъ и Ун спарены с помощью синтетического линкера с образованием моновалентных молекул, что позволяет им образовывать одноцепочечный белок. (В1гб е! а1., 8с1епсе 242:423-426 (1988) и Иийоп е! а1., Ргос. №111. Асаб. δει. И8А 85:5879-5883 (1988)). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данные антитела представляют собой диательца, т.е. представляют собой бивалентные антитела, в которых домены Ун и Уъ экспрессируются в одной полипептидной цепи, но использующие линкер, который слишком короток, чтобы позволить образовать пару между этими двумя доменами в этой же цепи, тем самым вынуждая эти домены образовывать пару с комплементарными доменами другой цепи и создавая два антигенсвязывающих сайта (см., например, ИоИщег Р. е! а1., Ргос. №111. Асаб. δα. И8А 90:6444-6448 (1993) и Ро1)ак В.к е! а1., 81гис1иге 2:1121-1123 (1994)). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения один или несколько СОВ антитела согласно изобретению могут быть ковалентно или нековалентно включены в молекулу с превращением ее в иммуноадгезин, который специфически связывается с СЭ40. В таких вариантах осуществления настоящего изобретения СОК. может встраиваться в качестве участка большей полипептидной цепи, может ковалентно присоединяться к другой полипептидной цепи или может встраиваться нековалентно.
В вариантах осуществления настоящего изобретения с одним или несколькими связывающими сайтами эти связывающие сайты могут быть идентичны друг другу, а могут быть и разными.
В качестве используемого здесь термин антитело человека подразумевает любое антитело, в котором все вариабельные и константные доменные последовательности представляют собой последовательности человека. Данные антитела можно получить разнообразными способами, как описано ниже.
Используемый здесь термин химерное антитело подразумевает антитело, которое содержит области из двух или нескольких разных антител. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения один или несколько СИВ получают из антитела человека к СИ40. В другом варианте осуществления настоящего изобретения все указанные СИВ получают из антитела человека к СИ40. В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанные СИВ из более чем одного антитела человека к СИ40 объединяют в химерное антитело. Например, химерное антитело может включать в себя СИВ1 легкой цепи первого антитела человека к СИ40, СИВ2 легкой цепи второго антитела человека к СИ40, а также СИВ3 и СИВ3 легкой цепи третьего антитела человека к СИ40, а СИВ из тяжелой цепи можно получить из одного или нескольких других антител к СИ40. Кроме того, каркасные области можно получить из одних и тех же антител к СИ40 или из одного или нескольких разных антител человека.
Активирующее антитело (именуемое также здесь агонист антитела), использование которого подразумевает антитело, которое при добавлении к клетке, ткани или организму, экспрессирующим СИ40, повышает одну или несколько активностей СИ40 по меньшей мере приблизительно на 20%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело активирует СЭ40активность по меньшей мере на 40, 50, 60, 70, 80, 85%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения активирующее антитело добавляют в присутствии СО40Ь. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения активность активирующего антитела измеряют с использованием анализа повышающей регуляции молекулярной поверхности клеток цельной крови. См. пример У11. В другом варианте осуществления настоящего изобретения активность активирующего антитела измеряют с использованием анализа дендритных клеток для измерения высвобождения 1Ь-12. См. пример УШ. В другом варианте осуществления настоящего изобретения активность активирующего антитела измеряют с использованием ίη νίνΌ-модели злокачественной опухоли. См. пример X.
Фрагменты или аналоги антител или иммуноглобулиновых молекул могут легко получить рядовые специалисты в данной области, следуя указаниям данного описания. Предпочтительны амино- и карбоксиконцевые фрагменты или аналоги, встречающиеся вблизи границ функциональных доменов. Структурные и функциональные домены можно идентифицировать путем сравнения нуклеотидной и/или аминокислотной последовательности с последовательностью, опубликованной или зарегистрированной в базах данных. Для идентификации мотивов последовательности или предсказанной белковой конформации доменов, которые встречаются в белках известной структуры и/или функции, предпочтительно используют методы компьютерного сравнения. Способы идентификации белковых последовательностей, которые упакованы в известную трехмерную структуру, известны. См. Во\\зе е! а1., 8аепсе 253:164 (1991).
Используемый здесь термин поверхностный плазмонный резонанс относится к оптическому феномену, который позволяет анализировать в реальном времени биоспецифичные взаимодействия путем детектирования изменений концентрации белка в биосенсорной матрице, например, с использованием
- 7 011449 системы В1Асоге (Рйаттас1а Вюзсибог АВ, Ирр8а1а, 8тебси аиб Р18са!а^ау, N.1.). Дальнейшее описание см. 1ои88ои и. с! а1., Аии. Вю1. С1ш. 51:19-26 (1993); 1ои88ои и. с! а1., Вю1сс1шк|ис5 11:620-627 (1991); 1оп88ои В. с! а1., 1. Мо1. Вссодий. 8:125-131 (1995); и 1ойи88ои В. с! а1., Аиа1. Вюсйст. 198:268-277 (1991).
Термин Κι/1 относится к константе диссоциации конкретного взаимодействия антиген-антитело.
Термин эпитоп включает в себя любую белковую детерминанту, способную специфически связываться с иммуноглобулином или Т-клеточным рецептором. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных сгруппированных на поверхности молекул, таких как аминокислоты или сахарные боковые цепочки, и обычно обладают специфичными трехмерными структурными характеристиками, а также определенными значениями заряда. Считается, что антитело специфически связывает антиген при константе диссоциации <1 мкМ, предпочтительно <100 нМ и наиболее предпочтительно <10 нМ.
Используемые здесь двадцать стандартных аминокислот и их аббревиатуры соответствуют общепринятому использованию. См. 1ттиио1оду - А 8уи!йс818 (2иб Ебйюи, Е.8.Со1иЬ аиб О.В.Сгсп. Ебб., 8шаисг Аб8ос1а1с8, 8иибст1аиб, Мазз. (1991)), которая включена здесь путем ссылки.
Приводимый здесь термин полинуклеотид подразумевает полимерную форму нуклеотидов, состоящую по меньшей мере из 10 оснований в длину, любых рибонуклеотидов или дезоксинуклеотидов, либо модифицированную форму, состоящую из нуклеотидов любого типа. Данный термин включает в себя одноцепочечные и двухцепочечные формы.
Используемый здесь термин выделенный полинуклеотид подразумевает полинуклеотид геномного, кДНК-го или синтетического происхождения или их некоторую комбинацию, который в силу того, что он является выделенным полинуклеотидом (1), не связывается со всеми или с частью полинуклеотидов, с которыми выделенный полинуклеотид обнаруживается в природе, (2) присоединяется путем сшивки к полинуклеотиду, с которым в природе он не связывается, или (3) не встречается в природе в виде части большей последовательности.
Используемый здесь термин олигонуклеотид включает в себя естественно встречающиеся и модифицированные нуклеотиды, соединенные вместе с помощью естественно встречающихся или не встречающихся в природе олигонуклеотидных связей.
Олигонуклеотиды представляют собой полинуклеотидную подгруппу, как правило, длиной в 200 оснований или меньше. Предпочтительно олигонуклеотиды содержат 10-60 оснований и наиболее предпочтительно 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20-40 оснований. Олигонуклеотиды, как правило, являются одноцепочечными, например, праймеры и зонды; хотя олигонуклеотиды могут быть и двухцепочечными, например, для использования в конструировании генного мутанта. Олигонуклеотиды согласно изобретению могут представлять собой либо смысловые, либо антисмысловые олигонуклеотиды.
Используемый здесь термин естественно встречающиеся олигонуклеотиды включают в себя дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды. Используемый здесь термин модифицированные нуклеотиды включают в себя нуклеотиды с модифицированными или замещенными сахарными группами и т. п. Приводимый здесь термин олигонуклеотидные связи включает в себя олигонуклеотидные связи, такие как тиофосфатная, дитиофосфатная, фосфоселеноатная, фосфодиселеноатная, фосфоанилотиоатная, фосфоаниладатная, фосфоамидатная и т.п. См., например, ЕаР1аисйс с! а1., №с1. Ас1бз Все. 14:9081 (1986); 81сс с! а1., 1. Ат. Сйст. 8ос. 106:6077 (1984); 8!сш с! а1., №с1. Аабз Всз. 16:3209 (1988); 2ои с! а1., Аиб-Саиссг Эгид Эсзщп 6:539 (1991); 2ои с! а1., О11доиис1со!1бс8 аиб Аиа1одоиб: А Ргасбса1 Арргоасй, рр.87-108 (Е. Ескб!сш, Еб., ОхЕогб ишуствйу Ргсзб, ОхЕотб Еид1аиб (1991)); патент США № 5151510; ИЫтаии аиб Рсутаи, С11с1шса1 Всу1с\\ъ 90:543 (1990), раскрытие которых включено тем самым путем ссылки. При необходимости, олигонуклеотид может включать метку для детектирования.
Последовательности, присоединенные путем сшивки, включают в себя и экспрессирующие контрольные последовательности, которые соприкасаются с представляющим интерес геном, и экспрессирующие контрольные последовательности для контроля за интересующим геном и которые действуют в транс-положении или на расстоянии. Используемый здесь термин экспрессирующая контрольная последовательность подразумевает полинуклеотидные последовательности, которые необходимы для воздействия на экспрессию и процессинг кодирующих последовательностей, с которыми они лигированы. Экспрессирующие контрольные последовательности включают в себя соответствующие последовательности инициации транскрипции, терминации, промоторную и энхансерную последовательности; эффективные сигналы процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования; последовательности, которые стабилизируют цитоплазматическую мРНК; последовательности, которые повышают эффективность трансляции (т. е. консенсусную Козак-последовательность); последовательности, которые повышают стабильность белка; и, при необходимости, последовательности, которые повышают секрецию белка. Природа таких контрольных последовательностей различна и зависит от организма хозяина; у прокариот такие контрольные последовательности, как правило, содержат промотор, сайт связывания рибосом, и последовательность терминации транскрипции; у эукариот, как правило, такие контрольные последовательности включают в себя промоторы и последовательность терминации транскрипции. Термин контрольные последовательности подразумевает включение, как минимум, всех компонентов, присутствие которых существенно для экспрессии и процессинга, и может также включать в себя дополнительные компоненты, присутствие которых создает преимущество, например, лидерные последова
- 8 011449 тельности и последовательности партнеров слияния.
Используемый здесь термин вектор подразумевает молекулу нуклеиновой кислоты, способную переносить другую нуклеиновую кислоту, к которой она прикреплена. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вектор представляет собой плазмиду, т.е. кольцевую двухцепочечную ДНК-петлю, в которую могут быть лигированы дополнительные ДНК-сегменты. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вектор представляет собой вирусный вектор, в вирусный геном которого могут быть дополнительно лигированы ДНК-сегменты. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения векторы могут автономно реплицироваться в клетке-хозяине, в которую они интродуцированы (например, бактериальные векторы, обладающие бактериальным ориджином репликации или эписомные векторы млекопитающих). В других вариантах осуществления настоящего изобретения векторы (например, неэписомные векторы млекопитающих) могут интегрироваться в геном клеткихозяина после внедрения в хозяйскую клетку и, таким образом, реплицироваться одновременно с хозяйским геномом. Вместе с тем, некоторые векторы способны управлять экспрессией генов, к которым они присоединены путем сшивки. Такие векторы именуют здесь рекомбинантные экспрессирующие векторы (или просто экспрессирующие векторы).
Используемый здесь термин рекомбинантная клетка-хозяин (или просто клетка-хозяин) подразумевает клетку, в которую внедрен рекомбинантный экспрессирующий вектор. Следует иметь в виду, что рекомбинантная клетка-хозяин и клетка-хозяин подразумевает не только отдельную клетку пациента, но также и потомство такой клетки. Поскольку из-за какой-либо мутации или влияния окружающей среды в последующих поколениях могут происходить некоторые модификации, то такое потомство в действительности не может быть идентично родительской клетке, но все же его включают в рамки используемого здесь термина клетка-хозяин.
Приводимый здесь термин селективно гибридизуется подразумевает обнаружение и специфическое связывание. Полинуклеотиды, олигонуклеотиды и их фрагменты в соответствии с настоящим изобретением селективно гибридизуются с цепями нуклеиновой кислоты в условиях гибридизации и отмывки, которые минимизируют существенный уровень детектируемого связывания с неспецифическими нуклеиновыми кислотами. Очень жесткие или исключительно жесткие условия можно использовать для осуществления условий селективной гибридизации, которые известны в данной области и рассматриваются здесь. Один из примеров очень жестких или исключительно жестких условий представляет собой инкубацию полинуклеотида с другим полинуклеотидом, где один из полинуклеотидов может быть прикреплен к твердой поверхности, такой как мембрана, в гибридизационном буфере, состоящем из 6Х 88РЕ или 88С, 50% формамида, 5Х раствора Денхардта, 0,5% 8Ό8, 100 мкг/мл денатурированной, фрагментированной ДНК спермы лосося, при температуре гибридизации 42°С в течение 12-16 ч, с последующей двукратной отмывкой при 55°С с использованием буфера для отмывки, состоящего из IX 88С, 0,5% 8Ό8. См. также 8ашЬгоок е1 а1., выше, рр. 9.50-9.55.
Термин процентная идентичность последовательности применительно к последовательностям нуклеиновой кислоты подразумевает нуклеотидные остатки в двух последовательностях, которые одинаковы при выравнивании на максимальное соответствие. Длина идентичной сравниваемой последовательности может быть удлинена по меньшей мере почти на девять нуклеотидов, как правило, по меньшей мере почти на 18 нуклеотидов, в большинстве случаев, как правило, по меньшей мере почти на 24 нуклеотида, обычно по меньшей мере почти на 28 нуклеотидов, чаще по меньшей мере почти на 32 нуклеотида и предпочтительно по меньшей мере почти на 36, 48 или более нуклеотидов. Существует ряд различных алгоритмов, известных в данной области, которые можно использовать для измерения идентичности нуклеотидной последовательности. Например, полинуклеотидные последовательности можно сравнивать с использованием ΕΆ8ΤΆ, Оар или Век1П1, которые представляют собой программы в \νίκсоикш Раскаде Уегкюи 10.0, Оеиебск Сошри1ег Огоир (ОСО), Маб1кои, νίδοοηδίη. ΡΆ8ΤΆ, которая включает в себя, например, программы ΕΆ8ΤΆ2 и ΕΆ8ΤΆ3, производит выравнивания и определяет процентную идентичность областей с наилучшим перекрыванием между запрашиваемой и исследуемой последовательностями (Реагкои, Ме1йобк Епхуто1. 183:63-98 (1990); Реагкои, Ме1йобк Мо1. Вю1. 132:185-219 (2000); Реагкои, МеШобк Еихушо1. 266:227-258 (1996); Реагкои, 1. Мо1. Вю1. 276:71-84 (1998); включенные здесь путем ссылки). Если не оговорено иначе, используют параметры по умолчанию для конкретной программы или алгоритма. Например, процентную идентичность между последовательностями нуклеиновых кислот можно определить с использованием ΕΆ8ΤΆ и ее параметрами по умолчанию (размер слова из 6 и ИОРАМ-фактор для матрицы оценок) или с использованием ОАР и его параметров по умолчанию, которые разработаны для ОСО Уегкюи 6.1, включенные здесь путем ссылки.
Ссылка на нуклеотидную последовательность включает в себя комплементарную ей последовательность, если не оговорено иначе. Таким образом, следует иметь в виду, что ссылка на нуклеиновую кислоту, обладающую конкретной последовательностью, относится также к комплементарной ей цепи и ее комплементарной последовательности.
В молекулярной биологии исследователи используют взаимозаменяемые термины процентная идентичность последовательности, процентное сходство последовательности и процентная гомоло- 9 011449 гия последовательности. В данном патенте эти термины имеют то же значение и относятся только к последовательностям нуклеиновых кислот.
Термин существенно сходный или существенно сходная последовательность в отношении нуклеиновой кислоты или ее фрагмента означает, что оптимальное выравнивание, при соответствующем числе нуклеотидных вставок или делеций, с другой нуклеиновой кислотой (или с ее комплементарной цепью), означает идентичность нуклеотидной последовательности по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере почти на 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере почти на 95, 96, 97, 98 или 99% нуклеотидных оснований, и это измеряется с помощью хорошо известного алгоритма идентичности последовательностей, такого как РА8ТА, ВБА8Т или Сар, рассматриваемого выше.
Применительно к полипептидам термин существенно идентичный подразумевает, что две пептидные последовательности при оптимальном выравнивании с помощью таких программ как САР или ВЕ8ТР1Т, использующих по умолчанию взвешенные пробелы, обладают по меньшей мере 70-, 75- или 80-процентной идентичностью последовательностей, предпочтительно по меньшей мере 90- или 95процентной идентичностью последовательностей и наиболее предпочтительно по меньшей мере 97-, 98или 99-процентной идентичностью последовательностей. Предпочтительно остальные неидентичные позиции отличаются по консервативным аминокислотным заменам. Консервативная аминокислотная замена представляет собой замену, в которой аминокислотный остаток замещается другим аминокислотным остатком, обладающим боковой цепью в виде В-группы, с аналогичными химическими характеристиками (например, зарядом или гидрофобностью). В целом, консервативная аминокислотная замена не должна существенно изменять функциональные характеристики белка. В случае, когда две или более аминокислотные последовательности отличаются друг от друга консервативными аминокислотными заменами, процентная идентичность последовательности или степень сходства может быть повышена введением поправок на консервативную природу данной замены. Способы такого повышения хорошо известны специалистам в данной области. См., например, Реаткоп, шеОюбк Μοί. Вю1. 243:307-31 (1994). Примеры аминокислотных групп, которые обладают боковыми цепями со сходными химическими характеристиками, включают в себя: 1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; 2) алифатические с гидроксильной группой боковые цепи: серин и треонин; 3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин; 4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан; 5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин; 6) кислотные боковые цепи: аспарагиновая и глутаминовая кислота; и 7) серосодержащие боковые цепи: цистеин и метионин. Предпочтительные аминокислотные группы с консервативными заменами представляют собой валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамин-аспарагиновая кислота и аспарагинглутамин.
В качестве альтернативы, консервативная замена представляет собой любое изменение, обладающее положительной величиной в логарифмической матрице правдоподобия РАМ250, раскрытой у Соппе1 е1 а1., 8с1епсе 256:1443-45 (1992), включенной здесь путем ссылки. Умеренно консервативная замена представляет собой любое изменение, обладающее неотрицательной величиной в логарифмической матрице правдоподобия РАМ250.
Сходство последовательностей полипептидов, которое также именуют идентичностью последовательностей, как правило, измеряют с использованием программ анализа последовательности. Белковая аналитическая программа сопоставляет сходные последовательности с использованием измерения сходства, выравниваемые по разным заменам, делециям и иным модификациям, в том числе и консервативным аминокислотным заменам. Например, ССС содержит программы, такие как Сар и ВейГй, которые можно использовать с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательностей или идентичности последовательностей между близкородственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды разных видов организмов или между белком дикого типа и его мутантом. См., например, ССС Уеткюп 6.1. Полипептидные последовательности можно также сравнивать с помощью РА8ТА, используя параметры по умолчанию или рекомендуемые параметры, программа для ССС Ует8юп 6.1. РА8ТА (например, РА8ТА2 и РА8ТА3) обеспечивает выравнивание и процентную идентичность последовательности в областях наилучшего перекрывания между запрашиваемой и исследуемой последовательностями (Реаткоп, МеОюбк Епхуто1. 183:63-98 (1990); Реаткоп, Ме11юбк Μοί. Βίοί. 132:185219 (2000)). Другой предпочтительный алгоритм для сравнения последовательности согласно изобретению с базой данных, содержащей большое число последовательностей из разных организмов, представляет собой компьютерная программа ВЬА8Т, в частности, Ыак1р или ЫакЩ, с использованием параметров по умолчанию. См., например, Л115с1и.11 е1 а1., 1. Мо1. Вю1. 215:403-410 (1990); Л115сйи1 е1 а1., М.1с1е1с Ас1б§ Век. 25:3389-402 (1997); включенные здесь путем ссылки.
Длины полипептидных последовательностей, сравниваемых на предмет гомологии, составляет, как правило, по меньшей мере около 16 аминокислотных остатков, обычно по меньшей мере около 20 остатков, чаще обычно по меньшей мере около 24 остатков, обычно, как правило, по меньшей мере около 28 остатков и предпочтительно свыше около 35 остатков. Если поисковая база данных содержит последовательности большого числа разных организмов, она является предпочтительной для сравнения аминокислотных последовательностей.
- 10 011449
Используемые здесь термины метка или меченый относятся к внедрению другой молекулы в данное антитело. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения метка представляет собой детектируемый маркер, например, включенную в аминокислоту радиоактивную метку или присоединенную к полипептиду биотинилированную составляющую, которая может обнаруживаться с помощью маркируемого авидина (например, стрептавидина, содержащего флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которую можно детектировать оптическим или колориметрическим способами). В другом варианте осуществления настоящего изобретения метка или маркер могут быть терапевтическими, например, лекарственным конъюгатом или токсином. В данной области известны и могут использоваться различные способы мечения полипептидов и гликопротеинов. Примеры меток для полипептидов включают в себя, не ограничиваясь ими, радиоизотопы или радионуклиды (например, 3Н, 14С, 15Ν, 35δ, 90Υ, 99Тс, 1111п, 1251, 1311), флуоресцентные метки (например, Р1ТС, родамин, фосфатные лантаноиды), ферментные метки (например, пероксидаза хрена, β-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные маркеры, биотинильные группы, предопределенные полипептидные эпитопы, узнаваемые вторичным репортером (например, лейциновая застежка парных последовательностей, связывающие сайты вторичных антител, металлосвязывающие домены, эпитопные метки), магнитные агенты, такие как хелатные соединения гадолиния, токсины, такие как коклюшный токсин, таксол, цитохалазин В, грамицидин И, этидийбромид, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин И, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин, а также его аналоги и гомологи. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения метки присоединяют с помощью ножки разной длины для уменьшения возможного пространственного затруднения.
Термин пациент включает человека и животных.
В рамках данного описания и формулы изобретения слово включать или его варианты, такие как включает или включающий, подразумевает включение установленного целого числа или группы чисел, а не исключение любого иного целого числа или группы целых чисел.
Антитела человека к СИ40 и их характеристика.
Антитела человека помогают избежать некоторых проблем, связанных с ассоциацией антител, которыми обладают вариабельная и/или константная области антител животных, не являющихся человеком (например, грызунов). Такие осложнения включают в себя быстрый клиренс антител или иммунную реакцию против этого антитела. Поэтому в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения созданы гуманизированные антитела к СИ40. В другом варианте осуществления настоящего изобретения получены антитела человека к СИ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитела человека к СИ40 получают путем иммунизации грызуна, геном которого включает в себя гены иммуноглобулина человека, с тем, чтобы данный грызун продуцировал антитела человека. Предполагается, что антитела человека к СИ40 минимизируют иммуногенность и аллергические реакции, свойственные антителам, не принадлежащим человеку, или моноклональным антителам, не производимым человеком (монАТ), и, следовательно, повышают эффективность и безопасность вводимых антител. Использование полностью человеческих антител можно рассматривать предположительно для создания существенного преимущества при лечении хронических и возвратных заболеваний человека, таких как воспаление и злокачественная опухоль, которые могут потребовать повторного введения антител.
В настоящем изобретении создано одиннадцать активирующих моноклональных антител человека к СИ40 (монАТ) и производящих их гибридомных клеточных линий. В табл. А приведен список идентификаторов последовательностей (8ЕО ΙΌ N0:) нуклеиновых кислот, кодирующих полноразмерные тяжелые и легкие цепи (включая лидерную последовательность), соответствующие полноразмерные выведенные аминокислотные последовательности, а также нуклеотидная и выведенная на ее основе аминокислотная последовательность вариабельных областей тяжелой и легкой цепи.
- 11 011449
Таблица А
Кроме того, в настоящем изобретении предусмотрены монАТ 23.25.1 человека к ί.Ό40 и линия гибридомных клеток, которая их продуцирует.
Кроме того, в настоящем изобретении предусмотрены варианты тяжелой и/или легкой цепи некоторых вышеперечисленных монАТ человека к ί.Ό40. содержащих одну или несколько аминокислотных замен. В настоящем изобретении созданы два варианта монАТ 3.1.1 тяжелых цепей. В одном из них 78 остаток аланина заменен на треонин, в другом 78 остаток аланина заменен на треонин, а 88 и 97 остатки валина заменены аланином. В настоящем изобретении создан также вариант монАТ 3.1.1 легкой цепи, в котором 4 остаток лейцина и 83 остаток лейцина заменены, соответственно, на метионин и валин. Сочетания измеренной тяжелой или легкой цепи с легкой или тяжелой цепью дикого типа обозначается, соответственно, как мутантная цепь. Таким образом, антитело, содержащее легкую цепь дикого типа и тяжелую цепь, включающую изменение аланина на треонин по остатку 78, обозначено в виде 3.1.1Н-А78Т. Однако в других вариантах осуществления настоящего изобретения включены антитела, содержащие любое сочетание измененной тяжелой цепи и измененной легкой цепи из 3.1.1.
Далее в настоящем изобретении создан вариант монАТ 22.1.1 тяжелой цепи, в которой 109 остаток цистеина заменен на аланин. Моноклональное антитело, включающее измененную тяжелую цепь и легкую цепь 22.1.1, обозначено монАТ 22.1.1 Н-С109А. Еще в настоящем изобретении созданы два варианта тяжелой цепи и вариант легкой цепи монАТ 23.28.1. В одном из вариантов тяжелой цепи 16 остаток аспарагиновой кислоты заменен на глутаминовую кислоту. монАТ, включающее вариантную тяжелую цепь и легкую цепь 23.28.1, обозначено 23.28.1 Η-Ό16Ε. Настоящее изобретение включает также 23.28.1вариант легкой цепи, в которой 92 остаток цистеина заменен на аланин. монАТ, включающее 23.28.1тяжелую цепь и вариант легкой цепи, обозначено 23.28.1 Ь С92А. В настоящем изобретении созданы также монАТ, включающие любой из вариантов тяжелой цепи 23.28.1 с вариантом легкой цепи 23.28.1.
Легкая цепь, продуцируемая гибридомой 23.29.1, содержит мутацию в константной области по остатку 174. Легкая цепь, продуцируемая данной гибридомой, в этом положении несет аргинин вместо канонического лизина. В соответствии с этим в настоящем изобретении создана также легкая цепь 23.2 9.1 с каноническим лизином по остатку 174 и монАТ, обозначенным 23.29.1Ь-К.174К, содержащим тяжелую цепь 23.29.1 и измененную легкую цепь.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 представляет собой 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78Т-У88А-У97А, 3.1.1Ь-Е4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1,
21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Η-Ό16Ε, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1ЬК.174К и 24.2.1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 содержит легкую цепь, включающую в себя аминокислотную последовательность, выбранную из 8ΕΟ ΙΌ N0: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88 или 102, либо ее вариабельную область, или же кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из 8Ε0 ΙΌ N0: 7, 15, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87 или 101. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 включает в себя легкую цепь, содержащую, по меньшей мере, СЭК.2 одного из перечисленных антител, одну из идентифицированных выше аминокислотных последовательностей (как показано на фиг. 1А-1С и 2А-2С), либо кодируемую одной из идентифицированных выше последовательностей нуклеиновой кислоты. В другом варианте осуществления настоящего изобретения данная легкая цепь дополнительно содержит СЭК.1 и СЭК.3, независимо выбранные из вариабельной области легкой цепи, которая включает в себя не более десяти аминокислот из аминокислотной последовательности, кодируемой геном зародышевой линии Ук А3/А19, Ь5 или А27, либо включает в себя СЭК.1 и ΟΌΚ.3, независимо выбранные из СЭВ1 и ΟΌΚ.3 (1) антитела, выбранного из 3.1.1, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1,
23.28.1, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1Ь-К.174К или 24.2.1; (2) аминокислотной последовательности 8Ε0
- 12 011449
ΙΌ N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94, 100 или 102 или (3) кодируемой последовательностью нуклеиновой кислоты 8Е0 ΙΌ N0: 3, 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 93, 99 или 101.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 включает в себя тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из 8Е0 ГО N0: 6, 14, 22, 30, 38, 46, 54, 62, 70, 78 или 86, либо ее вариабельную область, или кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из 8Е0 ΙΌ N0: 5, 13, 21, 29, 37, 45, 53, 61, 69, 77 или 85. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против СГО40 включает в себя тяжелую цепь, содержащую, по меньшей мере, СГОИ3 одного из перечисленных антител, одну из вышеуказанных аминокислотных последовательностей (как показано на фиг. 1А-1С и 2 А-2 С), либо кодируемую одной из вышеуказанных последовательностей нуклеиновой кислоты. В другом варианте осуществления настоящего изобретения данная тяжелая цепь дополнительно включает СГОИ1 и СГОР2. независимо выбранные из вариабельной области тяжелой цепи, которая включает не более восемнадцати аминокислот из аминокислотной последовательности, кодируемой геном зародышевой линии νΗ3-30+, 4-59, 1-02, 4.35 или 3-30.3, либо включает СГОИ1 и ΟΌΒ2, независимо выбранные из СГОИ1 или СГОИ2 (1) антитела, выбранного из 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Η-Α78Τ-ν88Α-ν97Α, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1,
22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Η-Ό16Ε, 23.29.1 и 24.2.1; (2) аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98, либо (3) кодируемой последовательностью нуклеиновой кислоты 8Е0 ГО N0: 1, 9, 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 91, 95 или 97. В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 включает в себя тяжелую цепь и легкую цепь, как указано выше.
Используемое здесь антитело 3.1.1Н-А78Т идентично антителу 3.1.1 за тем исключением, что остаток 78 тяжелой цепи представляет собой треонин вместо аланина. Аналогично, в антителе 3.1.1Η-Α78Τν88Α-ν97Α остаток 78 заменен на А, а остатки 88 и 97 заменены в данной тяжелой цепи с валина на аланин. Антитело 3.1.1Ε-Ε4Μ-Ε83ν идентично антителу 3.1.1, за тем исключением, что остаток 4 представляет собой метионин вместо лейцина, а остаток 83 представляет собой в данной легкой цепи валин вместо лейцина. Антитело 22.1.1Н-С109А идентично антителу 22.1.1, за тем исключением, что остаток 109 данной тяжелой цепи заменен с цистеина на аланин. Антитела 23.28.1НГО16Е и 23.28.1Е-С92Л идентичны антителу 23.28.1, за тем исключением, что остаток 16 данной тяжелой цепи заменен с аспартата на глутамат, а остаток 92 данной легкой цепи заменен, соответственно, с цистеина на аланин. Антитело 23.29.1Ь-В174К идентично антителу 23.29.1, за тем исключением, что остаток 174 данной легкой цепи заменен с аргинина на лизин.
Классы и подклассы антител к СГО40.
Классы и подклассы антител к СГО40 можно определить любым способом, известным в данной области. Вообще класс и подкласс любого антитела можно определить с использованием антител, которые специфичны для конкретного класса и подкласса любого антитела. Такие антитела коммерчески доступны. Класс и подкласс можно определить с помощью ИФА или Вестерн-блота, также как и другими методами. В качестве альтернативы, класс и подкласс можно определить путем секвенирования всех или части константных доменов данной тяжелой и/или легкой цепей определенных антител, сравнивая их аминокислотные последовательности с известными аминокислотными последовательностями разных классов и подклассов иммуноглобулинов и определяя класс и подкласс антител.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 представляет собой моноклональное антитело. Антитело к СГО40 может представлять собой молекулу Ι§0, 1дМ, 1дЕ, Ι§Α или Ι§Ό. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 представляет собой Ι§0 и соответствует подклассу !дС1, Ι§02, !дС3 или ΙβΟ4. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитела к СГО40 представлены подклассом ΙβΟ2.
Видовая и молекулярная селективность.
В другом аспекте настоящего изобретения антитела к СГО40 демонстрируют и видовую, и молекулярную селективность. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 связывается с СГО40 приматов и человека. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 связывается с СГО40 человека, суиото1ди8 или резус-обезьяны. В других вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 не связывается с СГО40 мыши, крысы, собаки или кролика. Следуя указаниям настоящего описания, можно определить видовую селективность антитела к СИ40, применяя способы, хорошо известные в данной области. Например, можно определить видовую селективность с использованием Вестерн-блота, ΕΑС8, ИФА или РИА. (См., например, пример Ιν).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 обладает селективностью в отношении СИ40, которая в 100 раз выше, чем его селективность в отношении ΒΑΜΚ (рецепторный активатор ядерного фактора каппа-цепи В-клеток), 4-1ВВ (СИ137), ТИКЕ-1 (Рецептор-1 Фактора Некроза Опухоли) и ТИКЕ-2 (Рецептор-2 Фактора Некроза Опухоли). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СГО40 не обнаруживает какого-либо существенного специфичного связывания с любым другим белком, отличающимся от СГО40. Можно определить селективность антитела к СГО40 в отношении СИ40, используя способы, хорошо известные в данной области, сле
- 13 011449 дуя указаниям данного описания. Например, можно определить селективность, используя Вестерн-блот, РАС8, ИФА или РИА. (См., например, пример V).
Идентификация СР40-эпитопов, распознаваемых антителом к СИ40.
Далее, в настоящем изобретении создано моноклональное антитело человека к СИ40, которое связывает СИ40 и перекрестно конкурирует, и/или связывается, с тем же эпитопом и/или связывается с СГО40 с той же Кс, что и антитело человека к СИ40, выбранное из антител 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1НΑ78Τ-ν88Α-ν97Α, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83^ 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1,
23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Н-И16Е, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1Ь-В174К или 24.2.1; или антитело человека к СИ40, которое включает в себя вариабельную область тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98, либо антитело человека к СИ40, которое включает в себя вариабельную область легкой цепи, имеющей последовательность 8ЕО ГО N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94, 100 или 102.
Представляется возможным определить, действительно ли связывается антитело с одним и тем же эпитопом или перекрестно конкурирует за связывание с антителом против СИ40, используя любой способ, известный в данной области. В одном из вариантов осуществления согласно изобретению можно позволить данному антителу к СИ40 настоящего изобретения связать СГО40 в условиях насыщения, а затем измерить способность тестируемого антитела связывать СГО40. Если тестируемое антитело способно связывать СГО40 одновременно с антителом к СИ40, тогда это тестируемое антитело свяжется с другим эпитопом в качестве антитела к СГО40. Однако если тестируемое антитело не способно одновременно связываться с СГО40. тогда тестируемое антитело свяжется с тем же самым эпитопом, перекрывающимся эпитопом, или эпитопом, который находится в непосредственной близости к эпитопу, связанному антителом человека к СГО40. Данный эксперимент можно осуществить с использованием ИФА, РИА, РАС8 или поверхностного плазмонного резонанса. (См., например, пример VI). В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данный эксперимент осуществляют с использованием поверхностного плазмонного резонанса. В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения используют В1Асоге.
Связывание антител против СИ40 с СИ40 по сродству.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против СГО40 связывается с СИ40 с высоким сродством. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против СГО40 связывается с СГО40 с Кс 2х10-8 М или с Кс меньшего значения. В других предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против СГО40 связывается с СГО40 с Кс 2х10-9, 2х10-10, 4,0х10-11 М или с Кс меньшего значения. В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело связывается с СГО40 с Кс 2,5х10-12 М или с Кс меньшего значения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело связывается с СГО40 практически с той же Кс, что и антитело, выбранное из 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78ТЧ88АЧ97А, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83^ 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Н-И16Е, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1Ь-К.174К или 24.2.1. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело связывается с СГО40 практически с той же Кс, что и антитело, которое включает в себя СИК2 легкой цепи, и/или СИК.3 тяжелой цепи антитела, выбранного из 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78Т^88А^97А, 3.1.1Ε-Ε4Μ-Ε83ν, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1,
22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Н-И16Е, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1Ь-В174К и
24.2.1, Еще в одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело связывается с СГО40 практически с той же Кс, что и антитело, которое включает в себя вариабельную область тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98, или которое включает в себя легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94, 100 или 102. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело связывается с СГО40 практически с той же Кс, что и антитело, которое включает в себя СЭК.2 вариабельной области легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94, 100 или 102, либо СЭК.3 вариабельной области тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело против СГО40 имеет низкую скорость диссоциации. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против СГО40 имеет 1<,££ 2,0х10-4 или менее. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Ко££ составляет 2х10-7 или менее. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Ко££ практически такая же, что и для описанного здесь антитела, включая антитело, выбранное из
3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78Т^88А^97А, 3.1.1Ε-Ε4Μ-Ε83ν, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1НЮ16Е, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1Ь-К174К и 24.2.1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело связывается с СГО40 практически с таким же значением Ко££, что и у антитела, которое включает в себя СОК.3 тяжелой цепи или СЭК.2 легкой цепи антитела, выбранного из 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78ТЧ88АЧ97А, 3.1.1Ε-Ε4Μ-Ε83ν,
- 14 011449
7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Η-Ό16Ε, 23.28.1БС92А, 23.29.1, 23.29.1Б-В174К и 24.2.1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело связывается с ΕΌ40 практически с таким же значением Кяь что и у антитела, которое включает в себя вариабельную область тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8ΕΟ ΙΌ N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98, либо которая включает в себя вариабельную область легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8Ε0 ΙΌ N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94, 100 или 102. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитело связывается с ΕΌ40 практически с такой же КО££, что и у антитела, которое включает в себя ί.'ΌΡ2 вариабельной области легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8Ε0 ΙΌ N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94, 100 или 102, либо СОВ3 вариабельной области тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность 8Ε0 ΙΌ N0: 6, 14, 22, 30, 38, 46, 54, 62, 70, 78, 86, 90, 92, 96 или 98.
Связывание по сродству и скорость диссоциации антитела против ί.'Ό40 с ΕΌ40 можно определить любым способом, известным в данной области. Связывание по сродству можно измерить конкурентными ИФА, РИА или поверхностным плазмонным резонансом, таким как В1Асоге. Скорость диссоциации можно также измерить с помощью поверхностного плазмонного резонанса. Предпочтительно, связывание по сродству и скорость диссоциации измеряют поверхностным плазмонным резонансом. Более предпочтительно связывание по сродству и скорость диссоциации измеряют с использованием В1Асоге™. См., например, пример XIV.
Использование генов легкой и тяжелой цепи.
Антитело к ΕΌ40 согласно изобретению может включать в себя легкую каппа- или лямбда-цепь человека или аминокислотную последовательность, полученную из них. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, включающих легкую каппа-цепь, вариабельный домен (УД легкой цепи частично кодируется геном человека А3/А19 (ΌΡΚ-15), Ь5 (ΌΡ5) или А27 (ΌΡΙ<-22)νι.:.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения V антитела к ΕΌ40 содержит одну или несколько аминокислотных замен в сравнении с аминокислотной последовательностью клеток зародышевой линии. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения V антитела к ΕΌ40 содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен в сравнении с аминокислотной последовательностью клеток зародышевой линии. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одна или несколько из этих замен клеток зародышевой линии находятся в СОВ-участках легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения эти аминокислотные замены, по сравнению с клетками зародышевой линии, находятся в одной или в нескольких одинаковых положениях, как и замены в сравнении с клетками зародышевой линии для одного или нескольких VI, антител 3.1.1, 3.1.1БΌ4Μ-Ε83ν, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Б-С92А, 23.29.1, 23.29.1Б-В174К и 24.2.1. Например, ν2 антитела к СИ40 может содержать одну или несколько аминокислотных замен, в сравнении с клетками зародышевой линии, обнаруживаются в антителе 21.4.1, а другие аминокислотные замены, в сравнении с клетками зародышевой линии, обнаруживаются в антителе 10.8.3, которое использует тот же ^-ген, что и ген антитела 21.4.1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотные изменения происходят в одном или нескольких одних и тех же положениях, но вызывает их иная мутация, чем в данном эталонном антителе.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотные изменения, по сравнению с зародышевой линией, происходят в одном или нескольких одних и тех же положениях, что и в любой из V антител 3.1.1, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83^ 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1,
23.28.1, 23.28.1Б-С92А, 23.29.1, 23.29.1Б-В174К и 24.2.1, но данные изменения могут соответствовать консервативным аминокислотным заменам в этом положении(ях) относительно аминокислоты в эталонном антителе. Например, когда конкретное положение в одном из этих антител изменяется по отношению к клеткам зародышевой линии и представлено глутаматом, в этом положении можно консервативно заменить аспартат. Аналогично, если аминокислотное замещение в сравнении с замещением клеток зародышевой линии представлено серином, в этом положении можно консервативно заменить треонин на серин. Консервативные аминокислотные замены рассматриваются выше.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения легкая цепь антитела человека к ΕΌ40 включает в себя аминокислотную последовательность, которая представляет собой ту же аминокислотную последовательность, что и аминокислотная последовательность V антитела 3.1.1 (8Ε0 ΙΌ N0: 4), 3.1.1Ε-Ε4Μ-Ε83ν (8ΕΟ ΙΌ N0: 94), 7.1.2 (8ΕΟ ΙΌ N0: 12), 10.8.3 (8ΕΟ ΙΌ N0: 20), 15.1.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 28), 21.4.1 (8ΕΟ ΙΌ N0:), 21.2.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 36), 21.4.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 44), 22.1.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 52), 23.5.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 60), 23.28.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 68), 23.28.1Б-С92А (8ΕΟ ΙΌ N0: 100), 23.29.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 76), 23.29.1Б-В174К (8Ε0 ΙΌ N0: 102) или 24.2.1 (8Ε0 ΙΌ N0: 84), или указанная аминокислотная последовательность имеет до 1, 2, 3, 4, 6, 8 или 10 консервативных аминокислотных замен и/или в общей сложности до 3-х неконсервативных аминокислотных замен.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения легкая цепь антитела человека к СО40 включает в себя, по меньшей мере, легкую цепь СОВ2 и может также включать в себя участки СОВ1 и СОВ3 в последовательности клеток зародышевой линии, как описано здесь. В другом варианте
- 15 011449 осуществления настоящего изобретения легкая цепь может включать СИК! и СИКТ из антитела, независимо выбранного из 3.1.1, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1,
23.28.1. 23.28.1Ь-С92Л, 23.29.1 и 24.2.1, или СИК-участки, каждый, обладающий менее 8, менее 6, менее 4 или менее 3 консервативных замен и/или в общей сложности тремя или менее неконсервативными аминокислотными заменами. В других вариантах осуществления настоящего изобретения легкая цепь указанного антитела к СЭ40 включает в себя, по меньшей мере, легкую цепь СИК2, и может также включать в себя СЭК1- и СИКЗ-участки, каждый из которых независимо выбран из СЭК1- и СИК3-участков антитела, обладающего вариабельной областью легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из 8ЕО ΙΌ N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94 или 100, или кодируемую молекулой нуклеиновой кислоты, выбранной из 8Е0 ΙΌ N0: 3, 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 93 или 99.
Что касается тяжелой цепи, то в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вариабельная область аминокислотной последовательности тяжелой цепи частично кодируется геном человека νΗ 3-30+, νΗ 4-59, νΗ 1-02, νΗ 4.35 или νΗ 3-30.3. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения νΗ антитело к СЭ40 содержит одну или несколько аминокислотных замен, делеций или вставок (добавок) по сравнению с аминокислотной последовательностью клеток зародышевой линии. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вариабельный домен тяжелой цепи содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 мутаций по сравнению с аминокислотной последовательностью клеток зародышевой линии. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения мутация(ии) представляют собой неконсервативные замены по сравнению с аминокислотной последовательностью клеток зародышевой линии. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данные мутации находятся в СИК-участках данной тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотные изменения произведены в одном или нескольких одинаковых положениях по сравнению с мутациями в последовательности клеток зародышевой линии в любой одной или в нескольких νΗ антител 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-Л78Т-У88Л-У97Л,
7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Η-Ό16Ε, 23.29.1 и
24.2.1. В других вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотные изменения происходят в одном или в нескольких одинаковых позициях, но содержат другую мутацию по сравнению с эталонным антителом.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения тяжелая цепь включает в себя аминокислотную последовательность вариабельного домена (νΗ) антитела 3.1.1 (8Е0 ΙΌ N0: 2), 3.1.1НА78Т (8ЕО ΙΌ N0: 90), 3.1.1Η-Α78Τ-ν88Α-ν97Α (8ЕО ΙΌ N0: 92), 7.1.2 (8ЕО ΙΌ N0: 10), 10.8.3 (8ЕО ΙΌ N0: 18), 15.1.1 (8ЕО ΙΌ N0: 26), 21.2.1 (8ЕО ΙΌ N0: 34), 21.4.1 (8ЕО ΙΌ N0: 42), 22.1.1 (8ЕО ΙΌ N0: 50),
22.1. Ш-С109А (8ЕО ΙΌ N0: 96), 23.5.1 (8ЕО ΙΌ N0: 58), 23.28.1 (8ЕО ΙΌ N0: 66), 23.28.Ш-П16Е (8ЕО ΙΌ N0: 98), 23.29.1 (8Е0 ΙΌ N0: 74) и 24.2.1 (8Е0 ΙΌ N0: 82) или указанную аминокислотную последовательность, обладающую до 1, 2, 3, 4, 6, 8 или 10 консервативных аминокислотных замен и/или до 3 неконсервативных аминокислотных замен.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения тяжелая цепь включает в себя тяжелую цепь С0К1-. С0К2- и СОК3-участков антитела 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Η-Α78Τ-ν88Α-ν97Α,
7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.Ш-О16Е, 23.29.1 и 24.2.1 (как показано на фиг. 10-1Н или 2Ό-2Η), или указанных СИК-участков, каждый, обладающий менее 8, менее 6, менее 4 или менее 3 консервативных аминокислотных замен или до трех или меньше неконсервативных аминокислотных замен.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения тяжелая цепь включает в себя СИКЗ и может также включать СЭЕ1- и СИКЗ-участки последовательности клеток зародышевой линии, как описано выше, или может включать СЭК1 и СЭК2 антитела, каждое из которых независимо выбрано из антитела, включающего в себя тяжелую цепь антитела, выбранного из 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1НΑ78Τ-ν88Α-ν97Α, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.Ш-Э16Е, 23.29.1 и 24.2.1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения данная тяжелая цепь включает в себя СИК3 и может также содержать СЭК1- и СОК2-участки, каждый из которых независимо выбран из СЭК1- и СИК2-участков вариабельной области тяжелой цепи, включающей в себя аминокислотную последовательность, выбранную из 8Е0 ΙΌ N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98 (как показано на фиг. 10-1Н или на фиг. 2И-2Н) или кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из 8Е0 ΙΌ N0: 1, 9, 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 91, 95 или 97. В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело включает в себя тяжелую цепь, как описано выше, и легкую цепь, как описано выше.
Один из видов аминокислотной замены, которую можно произвести, представляет собой замену одного или нескольких цистеинов в данном антителе, которые могут быть химически реакционноспособными, на другой остаток, такой, каким, без ограничения, являются аланин или серин. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения замену цистеина осуществляют в каркасной области вариабельного домена или в константном домене антитела. В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанный цистеин находится в неканонической области данного антитела. Другой вид
- 16 011449 аминокислотной замены, которую можно произвести, заключается в замене любого потенциального из протеолитических сайтов в данном антителе, в частности, тех из них, которые находятся в каркасной области вариабельного домена, в константном домене антитела или в неканонической области данного антитела. Замена цистеиновых остатков и удаление протеолитических сайтов может снизить риск любой гетерогенности в данном антительном продукте и, таким образом, увеличить его гомогенность. Другой вид аминокислотной замены заключается в элиминации пар аспарагин-глицин, которые образуют потенциальные сайты дезамидирования, путем изменения одного или обоих остатков. Это предпочтительно осуществлять в каркасных областях, константном домене или неканонических областях антитела.
Активация СЭ40 с помощью антитела к СЭ40.
Другой аспект настоящего изобретения включает в себя антитело к СЭ40. которое представляет собой активирующее антитело, т.е. СЭ40-агонист. Активирующее антитело усиливает или заменяет действие СЭ40Ь относительно СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения активирующее антитело представляет собой, по существу, имитатор СЭ40Ь, и конкурирует с СЭ40Ь за связывание с СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело не конкурирует с СЭ40Ь за связывание с СЭ40, но усиливает эффект связывания СЭ40Ь с СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 активирует СЭ40 в присутствии или в отсутствие СЭ40Ь.
Ингибирование опухолевого роста ίη νίνο антителами к СЭ40.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения предусмотрено антитело к СЭ40, которое ингибирует пролиферацию опухолевых клеток ίη νίίτο или рост опухоли ίη νίνο.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело подавляет рост опухоли по меньшей мере на 50, 55, 60, 65, 70, 75%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело подавляет рост опухоли на 75%. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ингибирование роста опухоли детектируется через 14 дней после начала ее обработки антителом. В других вариантах осуществления настоящего изобретения ингибирование роста опухоли детектируется через 7 дней после начала ее обработки антителом. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения животному вводят другой противоопухолевый агент вместе с антителом к СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения противоопухолевый агент дополнительно ингибирует рост опухоли. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения противоопухолевый агент представляет собой адриамицин или таксол. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения совместное введение противоопухолевого агента и антитела к СЭ40 ингибирует рост опухоли по меньшей мере на 50% через 22-24 дня после начала обработки, по сравнению с ростом опухоли у необработанного животного.
Индукция апоптоза антителами к СЭ40.
Другая цель настоящего изобретения - создать антитело к СЭ40, которое индуцирует клеточную смерть в СЭ40-позитивных клетках. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело вызывает апоптоз СЭ40-позитивных клеток либо ίη νίνο, либо ίη νίίτο.
Усиление экспрессии молекул клеточной поверхности.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 усиливает экспрессию молекул В-клеточной поверхности, в том числе, но не ограничиваясь ими, 1САМ, МнС-11, В7-2, СЭ71, СЭ23 и СЭ83. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения концентрация антитела 1 мкг/мл усиливает экспрессию молекулы 1САМ В-клеточной поверхности в цельной крови, повышая ее содержание по меньшей мере в 2 раза или более предпочтительно по меньшей мере в 4 раза. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения концентрация антитела 1 мкг/мл усиливает экспрессию молекулы МИС-ΙΙ В-клеточной поверхности в цельной крови, повышая ее содержание по меньшей мере в 2 раза или более предпочтительно по меньшей мере в 3 раза. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения концентрация антитела 1 мкг/мл усиливает экспрессию молекулы СЭ23 поверхности В-клетки в цельной крови, повышая ее содержание по меньшей мере в 2 раза или более предпочтительно по меньшей мере в 5 раз. См., например, пример УП, табл. 25.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 усиливает экспрессию молекул, в том числе, но не ограничиваясь этим, МнС-ΙΙ, 1САМ, В7-2, СЭ83 и В7-1, на поверхности дендритных клеток. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения диапазон повышенного содержания аналогичен диапазону повышенного содержания, наблюдаемого в В-клетках. См., например, табл. 25 и 26 ниже. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело предпочтительно повышает экспрессию молекул поверхности дендритных клеток, таких как В7-2 и МнС-ΙΙ, по сравнению с экспрессией этих молекул на поверхности В-клеток. См., например, табл. 27.
Усиление секреции клеточных цитокинов.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело усиливает клеточную секрецию цитокинов, включая, но не ограничиваясь ими, ΙΕ-8, ΙΕ-12, ЕС-15, ЕС-18 и ΙΕ-23.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело усиливает секрецию цитокинов дендритными клетками и прилипающими моноцитами. В некоторых вариантах осуществления
- 17 011449 настоящего изобретения образование цитокинов усиливается в результате костимуляции одним или несколькими ЬР8, ΙΕΝ-γ или ΙΕ-1β. Еще в одном аспекте настоящего изобретения в опыте с дендритными клетками антитело вместе с ЬР8 костимулирует усиление образования 1Ь-12р70 в отношении ЕС50 почти на 0,48 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело усиливает образование 1Ь-12р40 в дендритных клетках в отношении ЕС50 почти на 0,21 мкг/мл. (См., например, пример VIII).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело усиливает секрецию гамма-ΙΕΝ Т-клетками в опыте с Т-клетками/дендритными клетками, как описано в примере VIII. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело усиливает секрецию гамма-ΓΕΝ в опыте с Т-клетками/дендритными клетками, что касается ЕС50, почти на 0,3 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело усиливает секрецию гамма-ΓΕΝ в опыте с Тклетками/дендритными клетками, что касается ЕС50, почти на 0,2 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело усиливает секрецию гамма-ШИ в опыте с Тклетками/дендритными клетками, что касается ЕС50, почти на 0,03 мкг/мл.
Способы получения антител и антителопродуцирующих клеточных линий.
Иммунизация.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитела человека получают путем иммунизации животного, не являющегося человеком, антигеном СЭ40, содержащего в своем геноме некоторые или все локусы тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина человека. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения не являющееся человеком животное представляет собой ХепоМоике™-жнвотное (ксеногенная мышь).
ХепоМоике-мыши представлены генно-инженерными мышиными линиями, которые содержат большие фрагменты тяжелой цепи и легкой цепи иммуноглобулиновых локусов человека и являются дефектными в отношении выработки мышиных антител. См., например, Сгееп еГ а1., №11иге Сепейск 7:1321 (1994) и патенты США № 5916771, 5939598, 5985615, 5998209, 6075181, 6091001, 6114598, 6130364, 6162963 и 6150584. См. также АО 91/10741, АО 94/02602, АО 96/34096, АО 96/33735, АО 98/16654, АО 98/24893, АО 98/50433, АО 99/45031, АО 99/53049, АО 00/09560 и АО 00/037504.
В другом аспекте в настоящем изобретении разработан способ получения антител у животных, не принадлежащих человеческому роду и не относящихся к мышам, путем иммунизации антигеном СЭ40, а также у не принадлежащих человеческому роду трансгенных животных, которые включают иммуноглобулиновые локусы человека. Таких животных можно получить, используя способы, описанные в цитированных выше документах. Способы, раскрытые в этих документах, можно модифицировать, как описано в патенте США № 5994619. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения не принадлежащие человеческому роду животные представляют собой крыс, овец, свиней, коз, крупный рогатый скот и лошадей.
ХепоМоике™-мыши, подобно взрослому человеку, продуцируют набор полноразмерных человеческих антител и синтезируют антиген-специфичные антитела человека. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ХепоМоике™-мыши содержат приблизительно 80% набора антител человеческого гена У, полученного в результате введения участка искусственной дрожжевой хромосомы (УАС) с конфигурацией клеток зародышевой линии и размером до одной т.н., содержащей локусы тяжелой и легкой каппа-цепи человека. См. Мепйех еГ а1., №11иге Сепебск 15:146-156 (1997), Сгееп апй 1акоЬоνίΐκ, I. Ехр. тей. 188:483-495 (1998) и АО 98/24893, раскрытие которых включено здесь путем ссылки.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения не принадлежащее человеческому роду животное, включающее иммуноглобулиновые гены человека, представляет собой животное, которое обладает иммуноглобулиновым минилокусом человека. В таком минилокусном методе экзогенный [д-локус имитируется путем включения индивидуальных генов из ^-локуса. В соответствии с этим один или несколько Ун-генов, один или несколько Он-генов, один или несколько 1н-генов, константный домен ти, и второй константный домен (предпочтительно константный гамма-домен) вводят в конструкцию для внедрения в животное. Данный метод описан, в частности, в патентах США № 5545807, 5545806, 5569825, 5625126, 5633425, 5661016, 5770429, 5789650, 5814318, 5591669, 5612205, 5721367, 5789215 и 5643763, включенных таким образом путем ссылки.
Преимущество мини-локусного метода заключается в быстроте, с которой могут быть образованы и внедрены животным конструкции, содержащие части Ю-локуса. Вместе с тем, потенциальное неудобство данного мини-локусного метода заключается в отсутствие достаточного разнообразия иммуноглобулинов, необходимого для поддержания полного развития В-клеток, что может снижать продукцию антител.
В другом аспекте в настоящем изобретении разработан способ получения гуманизированных антител к СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, не являющихся человеком животных иммунизируют СЭ40-антигеном, как описано ниже, в условиях, которые предоставляют возможность для получения антител. Из иммунизированных животных выделяют антителопродуцирующие клетки, сливают с миеломными клетками для получения гибридом, из которых выделяют нуклеиновые
- 18 011449 кислоты, кодирующие тяжелую и легкую цепи представляющего интерес СЭ40-антитела. Данные нуклеиновые кислоты последовательно создают, используя генно-инженерные методы, известные специалистам в данной области и, как описано ниже, уменьшают размер нечеловеческой последовательности, т.е. гуманизируя данное антитело для уменьшения иммунной реакции у людей.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антиген С.'Э40 отделяют и/или выделяют очисткой. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антиген С.'Э40 представляет собой С.'Э40 человека. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антиген С.'Э40 представляет собой фрагмент СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фрагмент антигена С.'Э40 представляет собой внеклеточный домен СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фрагмент антигена С.'Э40 включает в себя по меньшей мере один эпитоп из С.'Э40. В других вариантах осуществления настоящего изобретения антиген СЭ40 представляет собой клетку, которая на своей поверхности экспрессирует или сверхэкспрессирует СЭ40 или его иммуногенный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антиген С’Э40 представляет собой слитый белок СЭ40.
Иммунизацию животных можно осуществить любым способом, известным в данной области. См., например, Наг1оте аиб Ьаие, АийЬоб1ек: А ЬаЬогаФгу Маииа1, Ие\у Уогк: Со1б 8рппд НагЬог Ргекк, 1990. Способы иммунизации отличных от человека животных, таких как мыши, крысы, овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот и лошади, хорошо известны в данной области. См., например, Наг1оте аиб Ьаие, выше, а также патент США № 5994619. В предпочтительном варианте осуществления антиген С.'Э40 вводят с адъювантом для стимуляции иммунного ответа. Образцы адъювантов включают в себя полный или неполный адъювант Фрейнда, ШВ1 (мурамильные дипептиды) или 18СОМ (иммуностимулирующие комплексы). Такие адъюванты могут защитить данный полипептид от рассасывания путем его связывания в локальный осадок, или же они могут содержать вещества, которые стимулируют хозяина выделять факторы, вызывающие хемотаксис макрофагов и других компонентов данной иммунной системы. Предпочтительно при введении полипептида режим иммунизации растягивать на несколько недель и включать два или более введения данного полипептида.
Пример I описывает получение моноклональных антител к С.'Э40.
Получение антител и антителопродуцирующих клеточных линий.
После иммунизации животного антигеном С.'Э40 из этого животного можно получить антитела и/или антителопродуцирующие клетки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения сыворотку, содержащую антитело к С.'Э40, получают от животного путем взятия крови или умерщвления животного. Эту сыворотку можно использовать в качестве полученной от животного для получения из нее иммуноглобулиновой фракции или для выделения путем очистки из сыворотки антител к СЭ40. Специалистам в данной области хорошо известно, что сыворотка или иммуноглобулины, полученные данным способом, являются поликлональными. Неудобство использования получаемых из сыворотки поликлональных антител заключается в том, что количество получаемых антител ограничено, и данное поликлональное антитело обладает совокупностью разных характеристик.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антителопродуцирующие иммортализованные клеточные линии получают из клеток, выделенных из иммунизированного животного. После иммунизации животное умерщвляют, а лимфатические узлы и/или В-клетки селезенки иммортализуют. Способы иммортализации клеток включают в себя, не ограничиваясь этим, перенесение их вместе с онкогенами, заражение их онкогенным вирусом, культивирование их в условиях, в которых отбирают иммортализованные клетки, воздействие на них канцерогенных и мутагенных соединений, слияние их с иммортализованной клеткой, например, с миеломной клеткой, и инактивация опухолевого генасупрессора. См., например, Наг1оте аиб Ьаие выше. Если используют слияние с миеломными клетками, то такие миеломные клетки предпочтительно не секретируют иммуноглобулиновые полипептиды (несекретирующая клеточная линия). Иммортализованные клетки скринируют с использованием СЭ40, его участка, или с использованием клетки, экспрессирующей СЭ40. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения начальное скринирование осуществляют с использованием иммуноферментного анализа или радиоиммуноанализа. Пример ИФА-скринирования описан в νθ 00/37504, включенной здесь путем ссылки.
Клетки, продуцирующие антитело к СЭ40, например гибридомы, отбирают, клонируют и в дальнейшем скринируют на предмет выявления нужных характеристик, включая устойчивый рост, высокий выход и требуемые свойства антител, что рассматривается далее ниже. Гибридомы можно размножить ш у|уо в организме сингенных животных, в организме животных с недостаточной иммунной системой, например у голых мышей, или в культуре клеток 1и νίΙΐΌ. Способы селекции, клонирования и размножения гибридом хорошо известны рядовым специалистам в данной области.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения иммунизированное животное представляет собой не принадлежащее человеческому роду животное, которое экспрессирует иммуноглобулиновые гены человека, а его В-клетки селезенки сливают с миеломной клеточной линией животного того же вида, что и указанное иммунизированное животное, не являющееся человеком. В более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения иммунизированное животное явля
- 19 011449 ется ХепоМои8е™-животным, а миеломная клеточная линия представлена несекретирующей мышиной миеломой. В еще более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения миеломная клеточная линия представляет собой Р3-Х63-АС8.653. См., например, пример I.
Кроме того, в настоящем изобретении созданы гибридомы, вырабатывающие антитела человека к СГО40. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данные гибридомы представляют собой мышиные гибридомы, которые описаны выше. В других вариантах осуществления настоящего изобретения такие гибридомы создают в организме животных (но не человека), в организме таких животных, как крысы, овцы, свиньи, козы, крупный рогатый скот или лошади, но не мыши. В другом варианте осуществления настоящего изобретения гибридомы представляют собой гибридомы человека.
Нуклеиновые кислоты, векторы, хозяйские клетки и способы создания рекомбинантных антител.
Нуклеиновые кислоты.
Настоящее изобретение включает в себя молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела против СГО. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения разные молекулы нуклеиновой кислоты кодируют тяжелую цепь и легкую цепь иммуноглобулина к СГО. В других вариантах осуществления настоящего изобретения одна и та же молекула нуклеиновой кислоты кодирует тяжелую цепь и легкую цепь иммуноглобулина к СЭ40.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельный домен легкой цепи, включает в себя генную последовательность человека А3/А19 (ΌΡΚ-15), Ь5 (ΌΡ5) или А27 (ΌΡΚ-22) Ук или полученную из них последовательность. В других вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность гена А3/А19 Ук и гена Ц1, Ц2 или Ц3, либо последовательность, полученную из них. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данная молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность гена Ь5 Ук и гена 1к4. В других вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность гена А27 Ук и гена 1к3.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, кодирует аминокислотную последовательность, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 мутаций из аминокислотной последовательности клеток зародышевой линии. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность Уь, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 неконсервативных аминокислотных замен и/или 1, 2 или 3 неконсервативных замен по сравнению с последовательностью из клеток зародышевой линии. Замены могут находиться в СОВ-участках, в каркасных участках или в константном домене.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельный домен легкой цепи (Уъ), кодирует аминокислотную последовательность Уъ, содержащую одну или несколько мутаций по сравнению с последовательностью из клеток зародышевой линии, которые идентичны мутациям, обнаруживаемым в Уъ одного из антител 3.1.1, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У,
7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1 и 24.2.1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует по меньшей мере три аминокислотные мутации, по сравнению с последовательностью из клеток зародышевой линии, обнаруживаемые в Уъ одного из антител 3.1.1, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1,
21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1 и 24.2.1.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность Уъ моноклонального антитела 3.1.1 (8ΕΟ ΙΌ N0: 4), 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У (8Ε0 ΙΌ N0: 94), 7.1.2 (8Ε0 ГО N0: 12), 10.8.3 (8ΕΟ ГО N0: 20), 15.1.1 (8ΕΟ ГО N0: 28), 21.2.1 (8ΕΟ ГО N0: 36), 21.4.1 (8ΕΟ ГО N0: 44), 22.1.1 (8ΕΟ ГО N0: 52), 23.5.1 (8ΕΟ ГО N0: 60), 23.28.1 (8ΕΟ ГО N0: 68), 23.28. 1Ь-С92А (8ΕΟ ГО N0: 100), 23.29.1 (8Ε0 ГО N0: 76) или 24.2.1 (8Ε0 ГО N0: 84) либо ее часть. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанная часть включает в себя, по меньшей мере, СГОВ3-участок. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нуклеиновая кислота кодирует аминокислотную последовательность легкой цепи СГОВ указанного антитела. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанная часть представляет собой смежную часть, включающую в себя 0ΌΒ1-0ΌΒ3.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность одной из 8Ε0 ГО N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94 или 100, или указанную последовательность без сигнальной последовательности. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность из 8Ε0 ГО N0: 3, 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 93 или 99 или ее часть, причем в указанной последовательности необязательно отсутствует сигнальная последовательность.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанная часть кодирует Уъ
- 20 011449 область. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанная часть кодирует, по меньшей мере, область ί.ΌΒ2. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нуклеиновая кислота кодирует аминокислотную последовательность легкой цепи СОК. указанного антитела. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанная часть кодирует прилежащий участок из СЭВТ-СЭКЗ.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность Уь, которая идентична по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% У|-аминокислотной последовательности одного из антител 3.1.1, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У,
7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1 или 24.2.1, либо Уь-аминокислотной последовательности любой из 8ЕО ΙΌ N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94 или 100. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению включают в себя нуклеиновые кислоты, которые гибридизуются в жестких условиях, таких, которые описаны выше, с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность из числа 8ЕО ΙΌ N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94 или 100, либо которая обладает последовательностью нуклеиновой кислоты 8ЕО ΙΌ N0: 3, 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 93 или 99.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения последовательность нуклеиновой кислоты кодирует полноразмерную легкую цепь антитела, выбранного из 3.1.1, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1Ь-В174К или
24.2.1, либо легкую цепь, включающую в себя аминокислотную последовательность из числа 8Е0 ΙΌ N0: 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 94, 100 или 102, либо легкую цепь, содержащую такую мутацию, как раскрытая здесь мутация. Кроме того, нуклеиновая кислота может включать в себя нуклеотидную последовательность 8Е0 ΙΌ N0: 7, 15, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79 или 87, либо молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь, содержащую одну из мутаций, которая раскрыта здесь.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует вариабельный домен тяжелой цепи (УН), который включает в себя генную последовательность УН человека 3-30+, 4-59, 1-02, 4.35 или 3-30.3 или последовательность, полученную из нее. В различных вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя УН-ген человека 3-30+, ген Ό4 (ΌΙΒ3) и ген 1Н6 человека; УН-ген человека 3-30+, ген Ό4 (ΌΙΒ3) и ген й||6 человека; УН-ген человека 4.35, ген ΌΙΒ3 и ген 1Н6 человека; УН-ген человека 4-59, ген Ό4-23 и ген 1Н4 человека; УН-ген человека 1-02, ген ОЬВ1 и ген 1Н4 человека; УН-ген человека 3-30+, ген Ό6-19 (ΌΙΒ3) и ген 1Н4 человека; УН-ген человека 3-30+, ген Ό1-1 и ген 1Н6 человека; УН-ген человека 330+, ген Ό4-17 и ген 1Н6 человека; УН-ген человека 3-30.3, ген Ό4-17 и ген 1Н6 человека; УН-ген человека 4-59, ген Ό4-17 (ΌΙΒ1) и ген 1Н5 человека, или последовательность, полученную из этих генов человека.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18 мутаций по сравнению с аминокислотной последовательностью генов клеток зародышевой линии человека У, Ό или 1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанные мутации находятся в УН-области. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанные мутации находятся в С^Β-участках.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует одну или несколько аминокислотных мутаций, в сравнении с последовательностью из клеток зародышевой линии, которые идентичны аминокислотным мутациям, обнаруживаемым в УН моноклонального антитела 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78Т-У88А-У97А, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Н-О16Е, 23.29.1 и 24.2.1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нуклеиновая кислота кодирует по меньшей мере три аминокислотные мутации по сравнению с последовательностями из клеток зародышевой линии, которые идентичны по меньшей мере трем аминокислотным мутациям, обнаруживаемым в одном из вышеперечисленных моноклональных антител.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере часть аминокислотной последовательности УН антитела 3.1.1 (8Е0 ΙΌ N0: 2), 3.1.1Н-А78Т (8Е0 ΙΌ N0: 90), 3.1.1НА78Т-У88А-У97А (8ЕО ΙΌ N0: 92), 7.1.2 (8ЕО ΙΌ N0: 10), 10.8.3 (8ЕО ΙΌ N0: 18), 15.1.1 (8ЕО ΙΌ N0: 26), 21.2.1 (8ЕО ΙΌ N0: 34), 21.4.1 (8ЕО ΙΌ N0: 42), 22.1.1 (8ЕО ΙΌ N0: 50), 22.1.1Н-С109А (8ЕО ΙΌ N0: 96), 23.5.1 (8ЕО ΙΌ N0: 58), 23.28.1 (8ЕО ΙΌ N0: 66), 23.28.1Н-П16Е (8ЕО ΙΌ N0: 98), 23.29.1 (8ЕО ΙΌ N0: 74) или 24.2.1 (8Е0 ΙΌ N0: 82), либо указанная последовательность обладает консервативными аминокислотными мутациями и/или в общей сложности тремя или менее неконсервативными аминокислотными заменами. В различных вариантах осуществления настоящего изобретения данная последовательность кодирует один или несколько С^Β-участков, предпочтительно ί.ΌΒ3 -участок, все три ί.ΌΒучастка, смежную часть, включающую в себя С^Β1-С^Β3, или полную УН-область с сигнальной последовательностью или без нее.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя нуклеотидную последовательность, которая кодирует аминокислотную последователь
- 21 011449 ность из числа 8Е0 ГО N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98, или указанную последовательность без сигнальной последовательности. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты включает в себя по меньшей мере часть нуклеотидной последовательности 8Е0 ГО N0: 1, 9, 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 91, 95 или 97, либо указанную последовательность без сигнальной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанная часть кодирует νΗобласть (с сигнальной последовательностью или без нее), СОВ3-участок, все три СГОВ-участка или прилежащую смежную область, содержащую СГОВ1-СГОВ3.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты кодирует аминокислотную последовательность νΗ, которая идентична по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% аминокислотной последовательности νΗ, представленной на фиг. 1А-1С или 2А2С, или аминокислотной последовательности νΗ из любой 8Е0 ГО N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98. Молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению включают в себя нуклеиновые кислоты, которые гибридизуются в жестких условиях, таких, которые описаны выше, с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96 или 98, или которая обладает последовательностью нуклеиновой кислоты 8Е0 ГО N0: 1, 9, 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 91, 95 или 97. Последовательность нуклеиновой кислоты согласно изобретению включает в себя молекулу нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в жестких условиях, таких, которые описаны выше, с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей только что описанную выше νΗ.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения нуклеиновая кислота кодирует полноразмерную тяжелую цепь антитела, выбранного из 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78Т-У88А-У97А, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1НГО16Е, 23.29.1 и
24.2.1, или тяжелую цепь, обладающую аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0: 6, 14, 22, 30, 38, 46, 54, 62, 70, 78 или 86, либо тяжелую цепь, содержащую мутацию, такую как одна из мутаций, рассматриваемых здесь. Кроме того, нуклеиновая кислота включает в себя нуклеотидную последовательность 8Е0 ГО N0: 5, 13, 21, 29, 37, 45, 53, 61, 69, 77, 85 или 89 или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, содержащую мутацию, такую как одна из рассматриваемых здесь мутаций.
Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую или полную легкую цепь антитела к СГО40 или их части, может быть выделена из любого источника, который производит такое антитело. В различных вариантах осуществления настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты выделяют из Вклетки, выделенной из животного, иммунизированного СЭ40, или из иммортализованной клетки, произведенной от такой В-клетки, экспрессирующей антитело к СГО40. Способы выделения мРНК, кодирующей антитело, хорошо известны в данной области. См., например, 8атЬгоок е1 а1. Выделенную мРНК можно применять для получения кДНК при использовании в полимеразной цепной реакции (ПЦР) или для кДНК-клонирования антительных генов. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения молекулу нуклеиновой кислоты выделяют из гибридомы, содержащей в качестве одного из своих партнеров слияния иммуноглобулин-продуцирующую клетку, выделенную из трансгенного животного, не принадлежащего человеческому роду. В еще более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения клетку, продуцирующую иммуноглобулин человека, выделяют из ХепоМоике™-животного. В другом варианте осуществления настоящего изобретения клетка, продуцирующая иммуноглобулин человека, происходит от любого трансгенного животного, как описано выше, но не от человека и не от мыши. В другом варианте осуществления настоящего изобретения нуклеиновую кислоту выделяют из нетрансгенного животного, но не человека. Молекулы нуклеиновой кислоты, выделяемые из такого нетрансгенного животного, могут использоваться, например, для получения гуманизированных антител.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь антитела к СГО40 согласно изобретению, может включать в себя нуклеотидную последовательность, кодирующую νυ-домен согласно изобретению, объединенную в одной рамке считывания с нуклеотидной последовательностью, кодирующей тяжелую цепь константного домена из любого источника. Аналогичным образом, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь антитела к СГО40 согласно изобретению, может включать в себя нуклеотидную последовательность, кодирующую Уъдомен согласно изобретению, объединенную в одной рамке считывания с нуклеотидной последовательностью, кодирующей легкую цепь константного домена из любого источника.
В дополнительном аспекте настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие вариабельный домен тяжелой (νΗ) и легкой (Уь) цепей, преобразуют в полноразмерные антительные гены. В одном из вариантов настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие домены νΗ или Уъ, преобразуют в полноразмерные гены антител путем встраивания в экспрессирующий вектор константные домены, уже кодирующие, соответственно, тяжелую цепь или легкую цепь, и встраивают так, чтобы в данном векторе присоединить путем сшивки Уц-сегмент к Сл-сегмен^ам), а У,-сегмент присоединить путем сшивки к Съ-сегменту. В другом варианте осуществления настоящего
- 22 011449 изобретения, используя стандартные методы молекулярной биологии, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие домены Ун и/или Уъ, преобразуют в полноразмерные гены антител путем сшивки (например, лигирования) молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей домены Сн и/или Съ. Последовательности нуклеиновой кислоты константных доменов тяжелой и легкой цепи иммуноглобулиновых генов известны в данной области. См., например, КаЬа! е! а1., 8ес.|иепсе5 о£ Рго!ет§ о£ 1ттцпо1одюа1 1п!еге§!, 54Ь Еб., N14 РиЬ1. № 91-3242, 1991. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полноразмерные тяжелую и/или легкую цепи, можно затем экспрессировать во встроенной клетке и выделить антитело к СЭ40.
Молекулы нуклеиновой кислоты можно использовать для рекомбинантной экспрессии больших количеств антител к СЭ40. Ниже описано, как данные молекулы нуклеиновой кислоты можно использовать для получения химерных антител, биспецифических антител, одноцепочечных антител, иммуноадгезинов, диателец, мутировавших антител и производных антител. Если данные молекулы нуклеиновой кислоты получены не из человека, а из нетрансгенного животного, то эти молекулы нуклеиновой кислоты можно использовать для гуманизации антитела, что также описано ниже.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения молекулу нуклеиновой кислоты согласно изобретению используют в качестве зонда или ПЦР-праймера для специфичной антительной последовательности. Например, нуклеиновую кислоту можно использовать в качестве зонда в диагностических способах или в качестве ПЦР-праймера для амплификации участков ДНК, которые можно было бы использовать, в частности, для выделения дополнительных молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих вариабельные домены антител к СЭ40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты представляют собой олигонуклеотиды. В других вариантах осуществления настоящего изобретения олигонуклеотиды происходят из высоковариабельных участков тяжелой и легкой цепей представляющего интерес антитела. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения олигонуклеотиды кодируют полностью или частично один или несколько СОВ антитела
3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.Ш-А78Т-У88А-У97А, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.Ш-О16Е, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1 или 24.2.1.
Векторы.
В настоящем изобретении созданы векторы, включающие в себя молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют тяжелую цепь антитела к СЭ40 согласно изобретению или его антигенсвязывающую часть. В настоящем изобретении созданы также векторы, включающие в себя молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют легкую цепь таких антител или их антигенсвязывающую часть. Кроме того, в настоящем изобретении созданы векторы, включающие в себя молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие слитые белки, модифицированные антитела, антительные фрагменты и их зонды.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитела к СЭ40 или антигенсвязывающие части согласно изобретению экспрессируются путем встраивания ДНК, кодирующих неполные или полноразмерные легкую и тяжелую цепи, полученные, как описано выше, в экспрессирующие векторы, так, чтобы эти гены оказались присоединенными путем сшивки к требуемым экспрессионным контрольным последовательностям, таким как транскрипционные и трансляционные контрольные последовательности. Экспрессирующие векторы включают в себя плазмиды, ретровирусы, аденовирусы, аденоассоциированные вирусы (ААУ), растительные вирусы, такие как вирус мозаики цветной капусты, вирус табачной мозаики, космиды, УАС, производные ЕВУ эписомы и т.п. Ген антитела лигируют в вектор так, чтобы транскрипционная и трансляционная контрольные последовательности в векторе выполняли свою предполагаемую функцию регуляции транскрипции и трансляции антительного гена. Выбирают экспрессирующий вектор и экспрессионные контрольные последовательности, которые совместимы с используемой экспрессирующей хозяйской клеткой. Ген легкой цепи антитела и ген тяжелой цепи антитела можно встроить в разные векторы. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения оба гена встраивают в один и тот же экспрессирующий вектор. Антительные гены встраивают в экспрессирующий вектор с помощью стандартных способов (например, лигированием комплементарных сайтов рестрикции фрагмента антительного гена и вектора или лигированием по тупым концам, если сайты рестрикции не представлены).
Удобным вектором является вектор, который кодирует функционально полную, иммуноглобулиновую последовательность Сн или Сь человека с соответствующими сконструированными сайтами рестрикции, так, чтобы последовательности Ун или Уъ можно было легко встроить и экспрессировать, как описано выше. В таких векторах сплайсинг обычно происходит между донорным сайтом сплайсинга, во встраиваемом 1-участке, и акцепторным сайтом сплайсинга, предшествующим человеческому С-домену, а также на участках сплайсинга, которые находятся в Сн-экзонах человека. Полиаденилирование и терминация транскрипции происходят в нативных хромосомных сайтах правее от кодирующих областей. Рекомбинантный экспрессирующий вектор может также кодировать сигнальную последовательность, которая обеспечивает секрецию антительной цепи из хозяйской клетки. Ген антительной цепи можно клонировать в вектор так, чтобы сигнальный пептид оказывался присоединенным к аминоконцу иммуноглобулиновой цепи. Сигнальный пептид может представлять собой иммуноглобулиновый сигнальный пептид или гетерологичный сигнальный пептид (т. е. сигнальный пептид неиммуноглобулинового белка).
Помимо генов антительных цепей, рекомбинантные экспрессирующие векторы несут регуляторные
- 23 011449 последовательности, которые контролируют экспрессию генов антительных цепей в хозяйской клетке. Специалистам в данной области следует иметь в виду, что создание экспрессирующего вектора, включая выбор регуляторных последовательностей, может зависеть от таких факторов, как выбор клетки-хозяина, которая будет трансформирована, уровня экспрессии требуемого белка и т.д. Предпочтительные регуляторные последовательности экспрессии клетки-хозяина млекопитающего включают в себя вирусные элементы, которые контролируют высокие уровни белковой экспрессии в клетках млекопитающего, такие как промоторы и/или энхансеры, полученные из ретровирусных ЬТВ, цитомегаловируса (СМУ) (такой как СМУ-промотор/энхансер), вируса 40 иммунодефицита обезьян (8У40) (такой как 8У40промотор/энхансер), аденовируса (например, большой поздний промотор аденовируса (АбМЬР)), полиомы и сильные промоторы млекопитающего в виде иммуноглобулинового и актинового промоторов. Более полное описание вирусных регуляторных элементов и их последовательностей см., например, в патентах США № 5168062, 4510245 и 4968615. Способы экспрессии антител у растений, включая описание промоторов и векторов, а также трансформация растений, известны в данной области. См., например, патент США № 6517529, включенный здесь путем ссылки. Способы экспрессии полипептидов в бактериальных клетках или клетках грибов, например, в дрожжевых клетках, также хорошо известны в данной области.
Помимо генов антительных цепей и регуляторных последовательностей, рекомбинантные экспрессирующие векторы согласно изобретению могут нести дополнительные последовательности, такие, например, как последовательности, которые регулируют репликацию данного вектора в хозяйских клетках (например, ориджины репликации) и селективные маркерные гены. Селективный маркерный ген обеспечивает селекцию хозяйских клеток, в которые вектор встроен (см., например, патенты США № 4399216, 4634665 и 5179017). Например, типично селективный маркерный ген придает резистентность к лекарственным средствам, таким как 0418, гигромицин или метотрексат, хозяйской клетке, в которую встроен данный вектор. Предпочтительные селективные маркерные гены включают в себя ген дигидрофолатредуктазы (ОНЕВ) (для использования в бЫг-хозяйских клетках с селекцией/амплификацией по метотрексату), пео-ген (для 0418-селекции), и ген глутаматсинтетазы.
Негибридомные хозяйские клетки и способы рекомбинантного получения белка.
Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела к СО и векторы, включающие эти молекулы нуклеиновой кислоты, можно использовать для трансфекции хозяйских клеток соответствующего млекопитающего, растения, бактерии или дрожжевой клетки. Трансформацию можно осуществлять с помощью любого известного способа внедрения полинуклеотидов в хозяйскую клетку. Способы внедрения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны в данной области и включают в себя опосредованную декстраном трансфекцию, кальций-фосфатное осаждение, ро1уЬгепеопосредованную трансфекцию, слияние протопластов, электропорацию, инкапсулирование полинуклеотида(ов) в липосомы и прямую микроинъекцию ДНК в ядро. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты можно внедрить в клетки млекопитающего с помощью вирусных векторов. Способы трансформации клеток хорошо известны в данной области. См., например, патенты США № 4399216, 4912040, 4740461 и 4959455 (патенты, которые таким образом включены здесь путем ссылки). Способы трансформации растительных клеток хорошо известны в данной области, включая, например, опосредованную АдгоЬас1епит трансформацию, трансформацию путем бомбардировки микрочастицами, прямую инъекцию, электропорацию и вирусную трансформацию.
Способы трансформации бактериальных и дрожжевых клеток хорошо известны в данной области.
Клеточные линии млекопитающих, доступные в качестве хозяйских для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают в себя многочисленные линии иммортализованных клеток, доступных из Американской коллекции типовых культур (АТСС). В частности, они включают в себя овариальные клетки китайского хомячка (СНО), Ν80, 8Р2-клетки, клетки НеЬа, клетки почки детеныша хомяка (ВНК), клетки почки обезьяны (СО8), клетки гепатоцеллюлярной карциномы (например, Нер 02), А549клетки и ряд других клеточных линий. Особенно предпочтительными клеточными линиями являются клеточные линии, выбранные путем определения того, какие клеточные линии обладают высокими уровнями экспрессии. Другие клеточные линии, которые можно использовать, являются клеточными линиями насекомых, например, такие как 8£9-клетки. Когда рекомбинантные экспрессирующие векторы, кодирующие антительные гены, внедряют в хозяйские клетки млекопитающего, соответствующие антитела продуцируются путем культивирования хозяйских клеток в течение периода времени, достаточного для осуществления экспрессии данного антитела в этих хозяйских клетках или, более предпочтительно, путем секреции антитела в культуральную среду, в которой выращивают хозяйские клетки. Антитела можно извлечь из культуральной среды с использованием стандартных способов выделения белка путем очистки. Растительные хозяйские клетки включают в себя, например, №сойапа, АгаЬ1борк1к, ряску, кукурузу, пшеницу, картофель и др. Бактериальные хозяйские клетки включают в себя Е. сой и виды 81гер(отусек. Дрожжевые клетки включают в себя 8с1ихокасс11аготусек ротЬе, 8ассйаготусек сеге\зк1ае и РюЫа рак1опк.
Далее, экспрессию антител согласно изобретению (или другие их составляющие) в продуцирующих клеточных линиях можно усилить с использованием ряда известных методов. Например, экспрессирую
- 24 011449 щая система глутаминсинтетазного гена (08-система) представляет собой обычное решение усиления экспрессии в определенных условиях. 08-система рассматривается целиком или частично в связи с Европейскими патентами № 0216846, 0256055 и 0323997 и Европейской патентной заявкой № 89303964.4.
Возможно, что антитела, экспрессируемые разными клеточными линиями или в трансгенных животных, будут обладать отличающимся друг от друга гликозилированием. Однако все антитела, кодируемые созданными здесь молекулами нуклеиновой кислоты или содержащие представленные здесь аминокислотные последовательности, являются частью настоящего изобретения, независимо от гликозилирования антител.
Трансгенные животные и растения.
Антитела к ί.Ό40 согласно изобретению можно получить трансгенно путем создания млекопитающего или растения, которое является трансгенным в отношении представляющих интерес иммуноглобулиновых последовательностей тяжелой и легкой цепей и многократного получения из них антитела. В связи с трансгенной продукцией у млекопитающих, антитела к ί.Ό40 можно получить и извлечь из молока коз, коров или иных млекопитающих. См., например, патенты США № 5827690, 5756687, 5750172 и 5741957. В других вариантах осуществления настоящего изобретения не принадлежащих человеческому роду трансгенных животных, которые содержат иммуноглобулиновые локусы человека, иммунизируют ί.Ό40 или его иммуногенной частью, как описано выше. Способы создания антител у растений описаны, например, в патентах США № 6046037 и 5959177.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения не принадлежащие человеческому роду трансгенные животные или растения получают путем внедрения в данное животное или растение с помощью стандартных трансгенных методик одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих антитело к СЭ40 согласно изобретению. См. Нодаи и патент США № 6417429 выше. Трансгенные клетки, используемые для создания трансгенного животного, могут представлять собой эмбриональные стволовые клетки или соматические клетки. Трансгенные, не принадлежащие человеческому роду, животные могут представлять собой химерные, нехимерные гетерозиготы и нехимерные гомозиготы. См., например, Нодаи с! а1., Машри1а!тд 111с Моизс ЕтЬгуо: А ЬаЬога!огу Маииа1 2сб., Со1б 8ргтд НагЬог Ргсзз (1999); 1аскзои с! а1., Моизс Осисйсз аиб Тгаиздсшсз: А Ргас!юа1 Арргоасй, ОхГогб итусгзйу Ргсзз (2000); и Ртксгк Тгаиздсшс Ашта1 Тссйио1оду: А ЬаЬога!огу НаибЬоок, Асабсшк Ргсзз (1999). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения не принадлежащие человеческому роду трансгенные животные имеют направленный разрыв и замену в конструкции-мишени, которая кодирует представляющую интерес тяжелую цепь и/или легкую цепь. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения трансгенные животные содержат и экспрессируют молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие тяжелую и легкую цепи, специфически связывающие СЭ40, предпочтительно ί.Ό40 человека. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения трансгенные животные содержат молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие модифицированное антитело, такое как одноцепочечное антитело, химерное антитело или гуманизированное антитело. Антитела к ί.Ό40 можно создать в любом трансгенном животном. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения не принадлежащие человеческому роду животные представляют собой мышей, крыс, овец, свиней, коз, крупный рогатый скот или лошадей. Не принадлежащее человеческому роду трансгенное животное экспрессирует указанные кодируемые полипептиды в крови, молоке, моче, слюне, слезах, слизи и других организменных жидкостях.
Библиотеки фагового дисплея.
В настоящем изобретении разработан способ получения антитела к ί.Ό40 или его антигенсвязывающей части, включающий в себя стадии синтеза библиотеки антител человека в фаге, скрининга библиотеки для СЭ40 или его части, выделения фага, который связывает СЭ40, и получения антитела из данного фага. В примере осуществления один из способов получения библиотеки антител, основанный на использовании методики фагового дисплея, включает в себя определенные стадии иммунизации не принадлежащего человеческому роду животного, содержащего иммуноглобулиновые локусы человека для ί.Ό40 или его антигенной части, для создания иммунного ответа, извлечения антителопродуцирующих клеток из данного иммунизированного животного; стадии выделения РНК из извлеченных клеток, обратного транскрибирования РНК с образованием кДНК, амплификации кДНК с использованием праймера, встраивания кДНК в вектор фагового дисплея, так, чтобы антитела экспрессировались в фаге. Рекомбинантные антитела к СЭ40 согласно изобретению можно получить данным путем.
Рекомбинантные антитела к ί.Ό40 согласно изобретению можно выделить путем скринирования рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител. Предпочтительно данная библиотека представляет собой зсЕу-библиотеку фагового дисплея, образуемую с использованием Уь- и УН-кДНК, получаемых из мРНК, выделяемой из В-клеток. Методы получения и скринирования таких библиотек известны в данной области. Существуют коммерчески доступные наборы для создания библиотек фагового дисплея (например, Рйагтааа ВссотЬтаи! Рйадс АийЬобу 8уз!ст, № по каталогу 27-9400-01; и 8!га!адсис 8иг!2ЛР™ рйадс б1зр1ау к1!, № по каталогу 240612). Существуют также и другие способы и реагенты, которые можно использовать для создания и скринирования антительных дисплейных библиотек (см., например, патент США № 5223409; публикации РСТ № АО 92/18619, АО 91/17271, АО 92/20791, АО 92/15679, АО
- 25 011449
93/01288, ΧΧΌ 92/01047, ΧΧΌ 92/09690; Рисйк е! а1., Вю/ТесЬпо1о§у 9:1370-1372 (1991); Нау е! а1., Нит. Αηίίϋοά. ИуЬпйотак 3:81-85 (1992); Нике е! а1., 8с1епсе 246:1275-1281 (1989); МсСаГГеПу е! а1., №1иге 348:552-554 (1990); ОгЖШк е! а1., ЕМВ0 1. 12:725-734 (1993); Паиктк е! а1., 1. Мо1. Вю1. 226:889-896 (1992); С1асккоп е! а1., ХаИие 352:624-628 (1991); Сгат е! а1., Ргос. №11. Αсаа. δα. υδΑ 89:3576-3580 (1992); Саггай е! а1., Вю/Тесйпо1о§у 9:1373-1377 (1991); НоодепЬоот е! а1., кис. Ααά Век. 19:4133-4137 (1991); и ВагЬак е! а1., Ргос. №11. Αсаа. δα. υδΑ 88:7978-7982 (1991)).
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения для выделения антител человека к СЭ40 с требуемыми характеристиками антитело человека к СЭ40, как описано здесь, впервые используют для отбора последовательностей тяжелой и легкой цепи, обладающих подобной связывающей активностью по отношению к СЭ40, применяя способы эпитопного импринтинга, описанные в публикации РСТ № \¥0 93/06213. Библиотеки антител, используемые в данном способе, предпочтительно представляют собой ксРу-библиотеки, полученные и скринированные, как описано в публикации РСТ № \¥0 92/01047, МсСаГГеПу е! а1., ХаИие 348:552-554 (1990); и бпйййк е! а1., ЕМВ0 1. 12:725-734 (1993). Библиотеку антител ксРу предпочтительно скринируют с использованием в качестве антигена СЭ40 человека.
После того как исходные домены Уь и νΗ человека выбраны, осуществляют эксперименты смешать и сопоставить, в которых различные пары исходно выбранных Уь- и Уц-сегментов скринируют в отношении СП40-связывания с выбранными предпочтительными У|/Уц-парными сочетаниями. Кроме того, для последующего улучшения качества данного антитела, в сегментах Уь и νΗ из предпочтительной пары (пар) У|./Уц случайным образом вызывают мутации, предпочтительно в СЭВ3-участке νΗ и/или Уь; в процессе, аналогичном соматическому мутационному процессу ίη у1уо, ответственному за созревание по сродству антител в течение естественного иммунного ответа. Созревание по сродству ίη У1!то можно осуществить путем амплификации доменов νΗ и У|. с использованием ПЦР-праймеров, комплементарных, соответственно, νΗ СЭВ3 или Уь СЭКЗ, в которой праймеры скрепляют с помощью случайной смеси из четырех нуклеотидных оснований в определенных положениях, так, что результирующие ПЦР-продукты кодируют сегменты νΗ и Уь, в которые были интродуцированы случайные мутации по νΗ и/или У, СЭКЗ-участков. Эти случайным образом мутировавшие сегменты νΗ и У|, можно скринировать повторно в отношении связывания с СЭ40.
После скринирования и выделения из рекомбинантной дисплейной библиотеки иммуноглобулина к СЭ40 согласно изобретению нуклеиновые кислоты, кодирующие отобранное антитело, можно извлечь из дисплейного пакета (например, из фагового генома) и субклонировать в другие экспрессирующие векторы с помощью стандартных методов рекомбинантной ДНК. При необходимости, извлеченную нуклеиновую кислоту в последующем можно использовать для создания других форм антител согласно изобретению, как описано ниже. Чтобы экспрессировать рекомбинантное антитело человека, выделенное путем скринирования комбинаторной библиотеки, ДНК, кодирующую антитело, клонируют в рекомбинантный экспрессирующий вектор и внедряют в хозяйские клетки млекопитающего, как описано выше.
Переключение класса.
Другая цель настоящего изобретения заключается в разработке способа преобразования данного класса или подкласса антитела к СЭ40 в другой класс или подкласс. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая Уь или νΗ, которая не включает какие-либо последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие Сь или ΟΗ, выделяют с использованием способов, хорошо известных в данной области. Затем молекулу нуклеиновой кислоты присоединяют путем сшивки к последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей Сь или Си требуемого класса или подкласса иммуноглобулинов. Это можно осуществить с использованием вектора или молекулы нуклеиновой кислоты, которая содержит Сь- или С^цепь, как описано выше. Например, антитело к СЭ40, которое изначально представляет собой ЕМ, можно переключить (переделать) в класс ΙβΟ. Далее, класс переключения можно использовать для преобразования одного ΙβΟ-подкласса в другой, например, из ΙβΟ1 в ΙβΟ2. Другой способ получения антитела согласно изобретению, содержащего требуемый изотип, включает в себя стадии выделения нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь антитела к СЭ40, и нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь антитела к СЭ40, выделение последовательности, кодирующей νι ι-участок, лигирование данной νυ-последовательности с последовательностью, кодирующей константный домен тяжелой цепи требуемого изотипа, экспрессию гена легкой цепи и конструирование тяжелой цепи в клетке, и сборку антитела к СЭ40 с требуемым изотипом.
Деиммунизированные антитела.
Другой путь получения антител со сниженной иммуногенностью заключается в деиммунизации антител. В другом аспекте настоящего изобретения данное антитело можно деиммунизировать с использованием методов, описанных, например, в публикациях РСТ № XV0 98/52976 и XV0 00/34317 (которые включены здесь путем ссылки в их полноте).
Мутантные антитела.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, векторы и хозяйские клетки можно использовать для создания мутантных антител против СЭ40. Антитела можно изменить с помощью мутаций по вариабельным доменам тяжелой и/или легкой цепей, например,
- 26 011449 изменить характеристику связывания антитела. Например, мутацию можно осуществить по одному или нескольким СЭВ-участкам для увеличения или уменьшения Кс данного антитела к СЭ40. для увеличения или уменьшения Ко££ или для изменения специфичности связывания антитела. Методы сайтнаправленного мутагенеза хорошо известны в данной области. См., например, 8атЬгоок е) а1. и Аи5иЬе1 е) а1. выше. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения мутации осуществляют по аминокислотному остатку, так, чтобы он был измененным по сравнению с остатком в вариабельном домене антитела против СЭ40 у клеток зародышевой линии. В другом варианте осуществления настоящего изобретения одну или несколько мутаций осуществляют по аминокислотному остатку, который известным образом изменен по сравнению с остатком из клеток зародышевой линии на СЭВ-участке или в области рамки считывания вариабельного домена, или в константном домене моноклонального антитела 3.1.1, 3.1.1Н-А78Т, 3.1.1Н-А78Т^88А^97А, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83^ 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1,
21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Η-Ό16Ε, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1ЬВ174К и 24.2.1. В другом варианте осуществления настоящего изобретения одну или несколько мутаций осуществляют по аминокислотному остатку, который известным образом изменен по сравнению с остатком из клеток зародышевой линии на СЭВ-участке или в области рамки считывания вариабельного домена аминокислотной последовательности, выбранной из 8ΕΟ ΙΌ N0: 4, 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 94, 100, 102, 2, 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90, 92, 96, 98, 100 или 102, или последовательности нуклеиновой кислоты, которая представлена в 8Ε0 ΙΌ N0: 3, 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 93, 99, 101, 1, 9, 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 91, 95, 97, 99 и 101.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения область рамки считывания видоизменяют таким образом, чтобы полученный участок (участки) обладал аминокислотной последовательностью соответствующего гена клеток зародышевой линии. Мутацию можно осуществить в области рамки считывания или константного домена для увеличения времени полужизни антитела к СЭ40. См., например, публикацию РСТ № \¥0 00/09560, включенную здесь путем ссылки. Мутацию в области рамки считывания или константного домена можно также осуществить для изменения иммуногенности антитела, для создания сайта ковалентного или нековалентного связывания с другой молекулой или для изменения таких характеристик, как фиксация комплемента, ЕсВ-связывание и АЭСС. В соответствии с настоящим изобретением одиночное антитело может обладать мутациями в любом одном или нескольких участках рамки считывания, в константном домене и в вариабельных областях.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения существует от 1 до 18 аминокислотных мутаций в любом из νΗ- или У|-доменов мутантного антитела к СЭ40 (в том числе любое число мутаций между ними) по сравнению с антителом против СЭ40 до мутирования. В любой из вышеуказанных ситуаций данные мутации могут происходить в одном или в нескольких СОВ-участках. Далее, любая мутация может быть представлена консервативными аминокислотными заменами. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения существует не более чем 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотных замен в константных доменах.
Модифицированные антитела.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения слитое антитело или иммуноадгезин можно осуществить так, чтобы оно включало антитело к СЭ40 согласно изобретению, целиком или частично, присоединенное к другому полипептиду. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения только вариабельные домены антитела к СЭ40 соединены с другим полипептидом. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ^-домен антитела к СЭ40 присоединен к первому полипептиду, а VI-домен антитела к СЭ40 присоединен ко второму полипептиду, который связан с первым полипептидом таким образом, что домены νΗ и V могут взаимодействовать друг с другом с образованием сайта связывания антитела. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ^-домен отделен от У£-домена линкером таким образом, что домены V и VI, могут взаимодействовать друг с другом (см. ниже в разделе Одноцепочечные Антитела). В последующем ^-линкер присоединяется к представляющему интерес полипептиду. Такое слияние антитела полезно для направленного перехода полипептида в клетку или ткань, экспрессирующие СЭ40. Полипептид может представлять собой терапевтический агент, такой как токсин, фактор роста или иной регуляторный белок, или может представлять собой диагностический агент, такой как фермент, который можно легко визуализировать, такой как пероксидаза хрена. Кроме того, можно создать слитые антитела, в которых соединены друг с другом два (или более) одноцепочечных антитела. Это удобно, когда хотят создать бивалентное или поливалентное антитело в одной полипептидной цепи или когда хотят создать антитело с двойной спецификой.
Для создания одноцепочечного антитела (ксЕу) фрагменты VII- и У|-кодирующей ДНК присоединяют путем сшивки к другому фрагменту, кодирующему гибкий линкер, например, кодирующему данную аминокислотную последовательность (О1у4-8ег)3, так, чтобы последовательности и V могли экспрессироваться в виде соответствующего смежного одноцепочечного белка, содержащего объединенные гибким линкером V.- и ^-домены. См., например, Впб е) а1., 8аепсе 242:423-426 (1988); Ш^оп е) а1., Ргос. ЫаИ. Асаб. 8οΐ. И8А 85:5879-5883 (1988); МсСайейу е1 а1., ХаИие 348:552-554 (1990). Одноцепочечное антитело может быть одновалентным, если используются только единичные и V]., может быть
- 27 011449 бивалентным, если используются два УН и Уь, или поливалентным, если используется более двух УН и Уь. Можно создать биспецифические или поливалентные антитела, которые специфически свяжутся с СЭ40 и с другой молекулой.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения могут быть получены другие модифицированные антитела с использованием молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих антитело к СЭ40. Например, Каппа-тельца (111 е! а1., Рго!ет Епд. 10:949-57 (1997)), Минительца (Магйп е! а1., ЕМВО ί. 13:5303-9 (1994)), Диательца (НоШдег е! а1., Ргос. №!1. Асаб. 8ех. И8А 90:6444-6448 (1993)), или 1апикшк (Тгаипескег е! а1., ЕМВО ί. 10:3655-3659 (1991) и Тгаипескег е! а1., 1п!. 1. Сапсег (8ирр1.) 7:51-52 (1992)) можно получить с использованием стандартных методов молекулярной биологии, следуя указаниям соответствующих описаний.
Биспецифические антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно получить разнообразными способами, в том числе слиянием гибридом или соединением ЕаЬ'-фрагментов. См., например, 8опдкМ1а1 & Ьасйтапп, С1т. Ехр. 1штипо1. 79:315-321 (1990), Кок!е1пу е! а1., ί. 1штипо1. 148:1547-1553 (1992). Кроме того, биспецифические антитела можно образовать в виде диателец или ^аиик^и8. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения биспецифические антитела связывают два разных эпитопа ί.Ό40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения биспецифическое антитело обладает первой тяжелой цепью и первой легкой цепью моноклонального антитела 3.1.1, 3.1.1НА78Т, 3.1.1Н-А78Т-У88А-У97А, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1НС109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Н-О16Е, 23.28.1Ь-С92А, 23.29.1, 23.29.1Ь-К174К и 24.2.1, и дополнительной тяжелой цепью и легкой цепью антитела. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительная легкая цепь и тяжелая цепь также представлены цепями одного из вышеуказанных моноклональных антител, но отличаются от указанной первой тяжелой и легкой цепей.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вышеописанные модифицированные антитела получают с использованием одного или нескольких вариабельных доменов или СЭКучастков созданного здесь моноклонального антитела человека к СЭ40, из аминокислотной последовательности указанного моноклонального антитела или из тяжелой цепи или легкой цепи, кодируемой последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей указанное моноклональное антитело.
Антитела преобразованные и меченые.
Антитело к ί.Ό40 или его антигенсвязывающую часть согласно изобретению можно преобразовать или соединить с другой молекулой (например, другого пептида или белка). Вообще данное антитело или его часть преобразуют так, чтобы связывание ί.Ό40 не оказывало отрицательного влияния на преобразование или мечение. В соответствии с этим антитела или части антител согласно изобретению распространяются как на интактные, так и на модифицированные формы описанных здесь антител человека против ί.Ό40. Например, антитело или часть антитела согласно изобретению можно функционально соединить (путем химического присоединения, генетического слияния, нековалентного связывания или иначе) с одним или несколькими другими молекулярными элементами, такими как другое антитело (например, биспецифическое антитело или диательце), детектирующий агент, цитотоксический агент, фармацевтический агент и/или белок или пептид, которые могут опосредовать связь антитела или его части с другой молекулой (такой как коровая область стрептавидина или полигистидиновая метка).
Один из типов преобразованного антитела получают путем перекрестного связывания двух или нескольких антител (одного и того же типа или разных типов, например, для создания биспецифических антител). Соответствующие перекрестные линкеры включают в себя линкеры, которые являются гетеробифункциональными, обладающими двумя разными реакционными группами, разделенными подходящим спейсером (например, сложный эфир мета-малеимидобензоил-№гидроксисукцинимида) или гомобифункциональными (например, дисукцинимидилсуберат). Такие линкеры доступны от Р1егсе Сйеш1са1 Сотрапу, КоскГогб, 111.
Другой тип преобразованного антитела представляет собой меченое антитело. Пригодные детектирующие агенты, с помощью которых антитело или антигенсвязывающую часть согласно изобретению можно преобразовать, включают в себя флуоресцентные соединения, в том числе флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат, родамин, 5-диметиламин-1-нафталинсульфонилхлорид, фикоэретрин, лантаноидные фосфаты и т. п. Антитело можно также пометить с помощью ферментов, которые используют для детекции, таких как пероксидаза хрена, β-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза, глюкооксидаза и тому подобное. Если антитело метят с помощью детектируемого фермента, то его выявляют при добавлении дополнительных реагентов, чтобы использовать фермент для получения продукта реакции, который можно визуально распознать. Например, если агент представляет собой пероксидазу хрена, то добавление пероксида водорода и диаминобензидина дает цветной продукт реакции, который и детектируется. Антитело можно также метить биотином и детектировать путем непрямого измерения авидинового или стрептавидинового связывания. Антитело можно также метить с помощью эпитопа заранее установленного полипептида, узнаваемого вторичным репортером (например, парными последовательно стями лейциновой застежки, сайтами связывания вторичных антител, металлосвязывающими доменами, эпитопными метками). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения метки присоединяют с помощью ножек разной длины, чтобы уменьшить возможное пространственное затруднение.
- 28 011449
Антитело к ί.Ό40 можно также метить аминокислотой с радиоактивной меткой. Радиоактивная метка может использоваться для диагностических и терапевтических целей. Например, радиоактивная метка может использоваться для детекции опухолей, экспрессирующих ί.Ό40, методами рентгенодиагностики или иными методами диагностики. Далее, радиоактивная метка может использоваться терапевтически в виде токсина для раковых клеток или опухолей. Примеры меток для полипептидов включают в себя, не ограничиваясь ими, следующие радиоизотопы или радионуклиды - 3Н, 14С, 15Ν, 35δ, 90Υ, Жс, 1П1и, 1251, 1311.
Антитело против ί.Ό40 можно также преобразовать с помощью химической группы, такой как полиэтиленгликолевая (РЕО), метиловая или этиловая группа или с помощью углеводной группы.
Данные группы используют для улучшения биологических характеристик антитела, например, для увеличения времени полужизни сыворотки или для повышения тканевого связывания.
Фармацевтические композиции и наборы.
Настоящее изобретение относится также к композициям, содержащим агонист антитела против ί.Ό40 для лечения пациентов, нуждающихся в иммунной стимуляции. Такие композиции используют для лечения, предупреждения, снижения частоты или тяжести инфицированности, включая вирусную и бактериальную инфицированность, для лечения гиперпролиферативного нарушения, включая злокачественное и предраковое состояния, для лечения генетических иммунодефицитных состояний у животных, в том числе и у людей, таких как синдром гиперсекреции 1дМ и для лечения первичных или комбинированных иммунодефицитных состояний, включая состояния, характеризующиеся нейтропенией. Пациенты, подвергающиеся лечению с помощью терапии агонистом антитела против СЭ40, включают пациента, нуждающегося в усилении иммунитета, включают, не ограничиваясь ими, людей пожилого возраста и индивидов, у которых иммунитет подавлен, например из-за химиотерапии.
Гиперпролиферативные нарушения, которые можно подвергнуть лечению с помощью агониста антитела против ί.Ό40 согласно изобретению, могут затрагивать любую ткань или орган и включают в себя, не ограничиваясь этим, злокачественные опухоли головного мозга, легких, сквамозных клеток, мочевого пузыря, желудка, поджелудочной железы, молочной железы, головы, шеи, печени, почки, яичника, предстательной железы, прямой кишки, пищевода, гинекологические, носоглотки, или злокачественные опухоли щитовидной железы, меланомы, лимфомы, лейкозные или множественные миеломы. В частности, агонисты антител человека против ί.Ό40 согласно изобретению пригодны для лечения карцином молочной железы, предстательной железы, ободочной кишки и легкого.
Лечение может включать в себя введение одного или нескольких агонистов моноклональных антител против ί.Ό40 согласно изобретению или их антигенсвязывающих фрагментов, отдельно или вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Используемый здесь фармацевтически приемлемый носитель означает любой или все растворители, диспергирующие среды, сенсибилизаторы, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и задерживающие адсорбцию агенты и им подобные, которые физиологически совместимы. Некоторые примеры фармацевтически приемлемых носителей представляют собой воду, физиологический раствор, фосфатно-солевой буферный раствор, декстрозу, глицерин, этанол и им подобные, а также их сочетания. Во многих случаях в данную композицию предпочтительно включать изотонические растворы, например, сахара, полиспирты, такие как маннит, сорбит, либо хлорид натрия. Дополнительные примеры фармацевтически совместимых веществ представляют собой увлажняющие агенты, или минорные количества вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие агенты, консерванты или буферы, которые повышают срок годности при хранении или эффективность данного антитела.
Агонисты антител против СЭ40 согласно изобретению и композицию, включающие их, можно вводить в сочетании с одним или несколькими другими терапевтическими, диагностическими или профилактическими агентами. Дополнительные терапевтические агенты включают в себя другие антибластомные, противораковые, антиангиогенные или химиотерапевтические агенты. Такие дополнительные агенты могут быть включены в одну композицию или могут быть введены раздельно. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения один или несколько агонистов антител против СЭ40 согласно изобретению могут использоваться в качестве вакцины или в качестве адъювантов к вакцине.
Композиции согласно изобретению могут быть разнообразными по форме, например, жидкими, полужидкими и твердыми дозированными формами, такими как жидкие растворы (например, инъецируемые и инфузионные растворы), дисперсии или суспензии, таблетки, пилюли, порошки, липосомы или свечи. Предпочтительная форма зависит от предполагаемого режима введения и терапевтического применения. Типичные предпочтительные композиции представлены в форме инъецируемых или инфузионных растворов, таких как композиции, аналогичные композициям для пассивной иммунизации человека. Предпочтительным режимом введения является парентеральный (например, внутривенный, подкожный, внутрибрюшинный, внутримышечный). В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данное антитело вводят путем внутривенного вливания или внутривенной инъекции. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данное антитело вводят путем внутримышечной или подкожной инъекции.
Как правило, терапевтические композиции должны быть стерильными и стабильными в условиях
- 29 011449 изготовления и хранения. Данную композицию можно создать в виде раствора, микроэмульсии, дисперсии, липосомы или иной упорядоченной структуры, пригодной для высококонцентрированного лекарственного средства. Стерильные инъецируемые растворы можно получить путем включения антител к ί.Ό40 в требуемом количестве в соответствующий растворитель с одним или, при необходимости, с сочетанием вышеперечисленных ингредиентов с последующей стерилизацией фильтрованием. В основном, дисперсии готовят путем включения данного активного соединения в стерильный наполнитель, который содержит щелочную дисперсионную среду и требуемые другие ингредиенты из вышеперечисленных ингредиентов. Что касается стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов, предпочтительные способы их получения представлены вакуумной сушкой и замораживанием-оттаиванием, что дает не только активный порошкообразный ингредиент, но и любой необходимый дополнительный ингредиент из его ранее стерилизованного фильтрованием раствора. Надлежащую текучесть раствора можно сохранить, например, путем нанесения слоя, такого как лецитин, путем поддержания размера частиц, что касается дисперсии, и путем использования поверхностно-активных соединений. Поглощение инъецированных композиций можно пролонгировать путем включения в данную композицию агента, задерживающего поглощение, например, солей моностеарата и желатины.
Антитела настоящего изобретения можно вводить разнообразными способами, известными в данной области, хотя для многих терапевтических применений предпочтительным путем/способом введения является подкожное, внутримышечное или внутривенное вливание. Квалифицированным младшим специалистам следует иметь в виду, что путь и/или способ введения варьирует в зависимости от желаемых результатов.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, композиции антител активного соединения можно приготовить с носителем, который защищает данное антитело от быстрого высвобождения, таким носителем, который контролирует высвобождение композиции, в том числе, имплантаты, чрескожные пэтчи, и микроинкапсулируемые системы доставки. Можно использовать рассасывающиеся, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевую кислоту, коллаген, эфиры жирных ортокислот и многоатомных спиртов, и полимолочную кислоту. Многие способы получения таких композиций запатентованы и, как правило, известны специалистам в данной области. См., например, 8ик1атей апй Соп1го11ей Ке1еаке Эгид ЭеЩегу 8ук1етк (Продолжительное и контролируемое высвобождение систем доставки лекарственных средств) (кК.КоЬткоп, ей., Магсе1 Эеккег, Шс., Хеи Уогк, 1978).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело против СЭ40 согласно изобретению можно вводить перорально, например, вместе с инертным разбавителем или усвояемым пищевым носителем. Данное соединение (и, при необходимости, другие ингредиенты) можно также заключить в капсулу из твердой или мягкой желатиновой оболочки, запрессовать в таблетки, или включить непосредственно в диету пациента. Для перорального терапевтического введения антитело к СЭ40 можно включить вместе с наполнителями и использовать в форме проглатываемых таблеток, защечных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и тому подобное. Для введения соединения настоящего изобретения непарентеральным путем введения может возникнуть потребность покрыть данное соединение или ввести данное соединение совместно с веществом, защищающим его от инактивации.
В данные композиции можно также включить дополнительные активные соединения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 настоящего изобретения составляют совместно и/или вводят совместно с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами. Данные агенты включают, без ограничения, антитела, которые связывают другие мишени (например, антитела, такие как антитела к СТЬ4, которые связывают один или несколько ростовых факторов или цитокинов с их рецепторами на клеточной поверхности), антибластомные средства, противоопухолевые агенты, химиотерапевтические агенты, пептидные аналоги, которые активируют СЭ40, растворимый СО40Ь, один или несколько химических агентов, которые активируют СЭ40, и/или иные агенты, известные в данной области, которые усиливают иммунный ответ против клеток злокачественной опухоли, например, ΣΕΝ-β1, ^-2, ^-8, ^-12, ^-15, ^-18, ^-23, ΣΡΝ-γ и СМ-С8Е. При таком комбинированном лечении могут понадобиться более низкие дозы антитела к СЭ40, а также совместно вводимых агентов, с тем, чтобы исключить возможные токсикозы или осложнения, связанные с той или иной монотерапией.
Агонисты антитела против СЭ40 согласно изобретению и композиции, включающие их, также можно вводить в сочетании с другими лечебными режимами, в частности, в сочетании с радиационным лечением.
Композиции согласно изобретению могут включать в себя терапевтически эффективное количество или профилактически эффективное количество антитела или его антигенсвязывающей части согласно изобретению. Терапевтически эффективное количество относится к эффективному количеству для достижения требуемого терапевтического результата в необходимых дозах и в течение необходимых интервалов времени. Терапевтически эффективное количество данного антитела или части антитела может изменяться в соответствии с такими факторами, как состояние больного, возраст, пол и масса тела
- 30 011449 данного пациента, а также способности антитела или части антитела вызывать требуемый ответ у пациента. Терапевтически эффективное количество представляет собой также количество, при котором токсичный или приносящий ущерб эффект данного антитела или части антитела перевешивается терапевтически положительными последствиями. Профилактически эффективное количество относится к эффективному количеству для достижения требуемого профилактического результата в необходимых дозах и в течение необходимых интервалов времени. Как правило, поскольку профилактическую дозу используют у пациентов перед заболеванием или на ранней стадии заболевания, это профилактически эффективное количество должно быть меньше терапевтически эффективного количества.
Режим дозировки можно установить для создания оптимального нужного ответа (например, терапевтического или профилактического ответа). Например, можно ввести единственный болюс, можно вводить разделенные общие дозы длительное время, или же данную дозу можно пропорционально понижать или повышать, в зависимости от складывающейся терапевтической ситуации. Особенно полезно составлять парентеральные композиции в стандартной дозированной форме для удобства введения и единообразия дозировки. Используемая здесь стандартная дозированная форма относится к физическим дискретным единицам, пригодным в качестве унифицированных доз для лечения представителей млекопитающих; каждую единицу, содержащую заранее установленное количество активного соединения совместно с требуемым терапевтическим носителем, рассчитывают для получения требуемого терапевтического эффекта. Инструкция для стандартных дозированных лекарственных форм настоящего изобретения продиктована и прямо зависит от (а) уникальных характеристик антитела к СЭ40 или его части и от достижения конкретного терапевтического или профилактического эффекта, и (Ь) присущих в данной области ограничений рецептуры такого антитела для лечения восприимчивых к нему пациентов.
Не ограничивающий диапазон для терапевтически или профилактически эффективного количества антитела или части антитела настоящего изобретения составляет, примерно, 0,025-50 мг/кг, более предпочтительно 0,1-50 мг/кг, еще более предпочтительно 0,1-25, 0,1-10 или 0,1-3 мг/кг. Следует отметить, что величины доз могут изменяться от вида и тяжести состояния, которое пытаются облегчить. Кроме того, следует иметь в виду, что в отношении любого конкретного пациента необходимо длительное время осуществлять индивидуальный режим дозирования в соответствии с потребностью в нем, а также в соответствии с профессиональным усмотрением специалиста, вводящего или контролирующего введение данных композиций, и что изложенные здесь диапазоны дозирования являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения объема или применения заявленной композиции.
Другая цель настоящего изобретения заключается в создании наборов, содержащих антитело к СЭ40 или часть антитела согласно изобретению, или композицию, содержащую такое антитело. Набор может включать, кроме данного антитела или композиции, диагностические или терапевтические агенты. Набор может также содержать инструкции для использования диагностического или терапевтического способа. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения набор включает в себя антитело или композицию, включающую их, и диагностический агент, который можно использовать в описанном ниже способе. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, набор включает в себя антитело или композицию, включающую его, и один или несколько терапевтических агентов, которые можно использовать в описанном ниже способе.
Настоящее изобретение относится также к композициям для ингибирования у млекопитающего роста аномальной клетки, включающих в себя любое количество любого антитела согласно изобретению в сочетании с любым количеством химиотерапевтического агента, в которых определенные количества соединения, соли, сольвата или пролекарства и химиотерапевтического агента совместно являются эффективными для ингибирования роста аномальной клетки. В настоящее время в данной области известно множество химиотерапевтических агентов. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения химиотерапевтический агент выбран из группы, состоящей из ингибиторов митоза, алкилирующих агентов, антиметаболитов, интеркалирующих антибиотиков, ингибиторов фактора роста, ингибиторов клеточного цикла, ферментов, ингибиторов топоизомеразы, модификаторов биологической реакции, антигормонов, например, антиандрогенов, и антиангиогенных агентов.
Антиангиогенные агенты, такие как ингибиторы ММР-2 (матриксная металлопротеиназа 2), ингибиторы ММР-9 (матриксная металлопротеиназа 9) и ингибиторы СОХ-ΙΙ (циклооксигеназа ΙΙ), могут использоваться в сочетании с антителом к СЭ40 согласно изобретению. Примеры используемых СОХ-ΙΙингибиторов включают в себя СЕЬЕВКЕХ™ (алекоксиб), валдекоксиб и рофекоксиб. Примеры используемых ингибиторов матриксных металлопротеиназ описаны в международной публикации XV О 96/33172 (опубликованной 24 октября 1996 г.), XVО 96/27583 (опубликованной 7 марта 1996 г.), в Европейской патентной заявке № 97304971.1 (поданной 8 июля 1997 г.), в Европейской патентной заявке № 99308617.2 (поданной 29 октября 1999 г.), в международной публикации VО 98/07697 (опубликованной 26 февраля 1998 г.), ^№О 98/03516 (опубликованной 29 января 1998 г.), ^№О 98/34918 (опубликованной 13 августа 1998 г.), ^№О 98/34915 (опубликованной 13 августа 1998 г.), ^№О 98/33768 (опубликованной 6 августа 1998 г.), VО 98/30566 (опубликованной 16 июля 1998 г.), в Европейской патентной публикации 606046 (опубликованной 13 июля 1994 г.), в Европейской патентной публикации 931788 (опубликованной 28 июля 1999 г.), ^№О 90/05719 (опубликованной 31 мая 1990 г.), ^№О 99/52910 (опубликован
- 31 011449 ной 21 октября 1999 г.), УО 99/52889 (опубликованной 21 октября 1999 г.), УО 99/29667 (опубликованной 17 июня 1999 г.), международной заявке РСТ №РСТ/1В98/01113 (поданной 21 июля 1998 г.), в Европейской патентной заявке № 99302232.1 (поданной 25 марта 1999 г.), в патентной заявке Великобритании за номером 9912961.1 (поданной 3 июня 1999 г.), в Предварительной Заявке США № 60/148464 (поданной 12 августа 1999 г.), патенте США № 5863949 (изданном 26 января 1999 г.), патенте США № 5861510 (опубликованном 19 января 1999 г.), и в Европейской патентной публикации 780386 (опубликованной 25 июня 1997 г.), которые все включены здесь в их полноте путем ссылки. Предпочтительные ММР-ингибиторы представляют собой ингибиторы, которые не вызывают артралгии. Более предпочтительными являются ингибиторы, которые избирательно ингибируют ММР-2 и/или ММР-9, по сравнению с другими матриксными металлопротеиназами (т.е. ММР-1, ММР-3, ММР-4, ММР-5, ММР-6, ММР-7, ММР-8, ММР-10, ММР-11, ММР-12 и ММР-13). Некоторые конкретные примеры ММР-ингибиторов, используемых в настоящем изобретении, представляют собой АС-3340, В0 32-3555, В8 13-0830, а данные соединения повторно перечислены в нижеследующем списке:
3-[[4-(4-фторфенокси)бензолсульфонил]-(1-гидроксикарбамоилциклопентил)амино]пропионовая кислота;
3- экзо-3 -[4-(4-фторфенокси)бензолсульфониламино]-8-оксабицикло [3.2.1] октан-3-карбоновой кислоты гидроксиамид;
(2В, 3В) 1 -[4-(2-хлор-4-фторбензилокси)бензолсульфонил]-3 -гидрокси-3 -метилпиперидин-2-карбоновой кислоты гидроксиамид;
4- [4-(4-фторфенокси)бензолсульфониламино]тетрагидропиран-4-карбоновой кислоты гидроксиамид;
3- [[4-(4-фторфенокси)бензолсульфонил]-(1-гидроксикарбамоилциклобутил)амино]пропионовая кислота;
4- [4-(4-хлорфенокси)бензолсульфониламино]тетрагидропиран-4-карбоновой кислоты гидроксиамид;
(В) 3-[4-(4-(хлорфенокси))бензолсульфониламино]тетрагидропиран-3-карбоновой кислоты гидроксиамид;
(2В, 3В) 1 -[4-(4-фторо-2-метилбензилокси)бензолсульфонил]-3 -гидрокси-3 -метилпиперидин-2-карбоновой кислоты гидроксиамид;
3- [[4-(4-фторфенокси)бензолсульфонил]-(1 -гидроксикарбамоил-1 -метилэтил)амино]пропионовая кислота;
3-[[4-(4-фторфенокси)бензолсульфонил]-(4-гидроксикарбамоилтетрагидропиран-4-ил)амино]пропионовая кислота;
3-экзо-3-[4-(4-хлорфенокси)бензолсульфониламино]-8-оксабицикло[3.2.1]октан-3-карбоновой кислоты гидроксиамид;
3-эндо-3-[4-(4-фторфенокси)бензолсульфониламино]-8-оксабицикло[3.2.1]октан-3-карбоновой кислоты гидроксиамид; и (В) 3-[4-(4-фторфенокси)бензолсульфониламино]тетрагидрофуран-3-карбоновой кислоты гидроксиамид;
а также фармацевтически приемлемые соли и сольваты указанных соединений.
Соединение согласно изобретению можно также использовать совместно с ингибиторами трансдукции сигнала, такими как агенты, ингибирующие ЕСЕ-В (рецептор эпидермального фактора роста), такими как ЕСЕ-В-антитела, ЕСЕ-антитела, и молекулы, которые являются ЕСЕ-В-ингибиторами, УЕСЕингибиторами (фактора роста сосудистого эндотелия), такими как УЕСЕ-рецепторы, и молекулы, которые могут ингибировать УЕСЕ; и ингибиторами рецептора егЬВ2, такими как органические молекулы или антитела, которые связываются с рецептором егЬВ2, например, НЕВСЕРТШТМ (Сепеп!есй, 1пс.). ЕСЕ-В-ингибиторы описаны, например, в УО 95/19970 (опубликованной 27 июля 1995 г.), УО 98/14451 (опубликованной 9 апреля 1998 г.), УО 98/02434 (опубликованной 22 января 1998 г.), и в патенте США № 5747498 (выпущенного 5 мая 1998 г.), и такие вещества могут использоваться в настоящем изобретении, которое описывается здесь. ЕСЕВ-ингибирующие агенты включают в себя, но не ограничиваясь этим, моноклональные антитела С225 и анти-ЕСЕВ 22МонАТ (1тС1опе 8ук!етк 1псогрога!еб), АВХ-ЕСЕ (АЬдешх/Се11 Сепекук), ЕМЭ-7200 (Мегск КдаА), ЕМЭ-5590 (Мегск КдаА), МЭХ-447/Н-477 (Мебагех 1пс. апб Мегск КдаА), и соединения ΖΌ-1834, ΖΌ-1838 и ΖΌ-1839 (Ак!га2епеса), РК1-166 (ШтагОк), РК1166/ССР-75166 (ШтагОк), РТК 787 (ШтагОк), СР 701 (СерНа1оп), 1еДипот1бе (Рйагтас1а/8идеп), С1-1033 (Уагпег ЬатЬеп Рагке Эат1к), С1-1033/РЭ 183805 (Уагпег ЬатЬей Рагке Эат1к), СЬ-387785 (Ууе111Ауегк!), ВВВ-1611 (Воейппдег МаппНепп СтЬН/ВосНе), Шапибте А (Впк!о1 Муегк 8с.|шЬЬ), ВС-3940-ΙΙ (РБагтааа), В1ВХ-1382 (ВоеЬппдег 1пдеШе1т), ОЬХ-103 (Мегск & Со.), УВСТС-310 (Уеп!еск Векеагск), ЕСЕ-слитый токсин (8егадеп 1пс.), ЭАВ-389 (8е^адеи/^^1дапб), ΖМ-252808 (1трепа1 Сапсег ВекеагсН Еипб), ВС-50864 (Ш8ЕВМ), БЕМ-А12 (Рагкег НидНек Сапсег Сеп!ег), УН1-Р97 (Рагкег НидНек Сапсег Сеп!ег), СУ-282974 (С1ахо), КТ-8391 (Куо\\'а Накко) и ЕСЕ-В-вакцина (Уогк Меб1са1/Сеп!го бе 1ттипо1од1а Мо1еси1аг (С1М)). Эти и другие ЕСЕ-В-ингибирующие агенты могут использоваться в настоящем изобретении.
- 32 011449
УЕСР-инги6иторы, например, 8И-5416 и 8И-6668 (8идеп 1пс.), 8Η-268 (8сйеппд) и NX-1838 (№Хйаг) можно также сочетать с соединением согласно изобретению. АЕСР-ингибиторы описаны, например, в А0 99/24440 (опубликованной 20 мая 1999 г.), международной заявке РСТ РСТ/1В99/00797 (поданной 3 мая 1999 г.), в А0 95/21613 (опубликованной 17 августа 1995 г.), А0 99/61422 (опубликованной 2 декабря 1999 г.), патенте США № 5834504 (опубликованном 10 ноября 1998 г.), А0 98/50356 (опубликованной 12 ноября 1998 г.), патенте США № 5883113 (опубликованном 16 марта 1999 г.), патенте США № 5886020 (опубликованном 23 марта 1999 г.), патенте США № 5792783 (опубликованном 11 августа 1998 г.), А0 99/10349 (опубликованной 4 марта 1999 г.), А0 97/32856 (опубликованной 12 сентября
1997 г.), А0 97/22596 (опубликованной 26 июня 1997 г.), XV0 98/54093 (опубликованной 3 декабря
1998 г.), XV0 98/02438 (опубликованной 22 января 1998 г.), XV0 99/16755 (опубликованной 8 апреля
1999 г.), и Χν0 98/02437 (опубликованной 22 января 1998 г.), которые все включены здесь в их полноте путем ссылки. Другие примеры некоторых специфичных УЕСР-инги6иторов, используемых в настоящем изобретении, представляют собой ΙΜ862 (Су!гап 1пс.); моноклональное антитело к УЕСР от Сепеп1ес11 1пс.; и ангиозим, синтетический рибозим от В|Ьо/уте апб СЫгоп. Эти и другие УЕСР-инги6иторы можно использовать в настоящем изобретении, как здесь описано. Ингибиторы рецептора ЕгЬВ2, такие как СА-282971 (С1ахо Ае11соте р1с), и моноклональные антитела АВ-209 (Агопех РЬагтасеибсак 1пс.) и 2В-1 (СЫгоп), можно, кроме того, объединить с соединением настоящего изобретения, и которые, например, рассматриваются в Χν0 98/02434 (опубликованной 22 января 1998 г.), Χν0 99/35146 (опубликованной 15 июля 1999 г.), Χν0 99/35132 (опубликованной 15 июля 1999 г.), Χν0 98/02437 (опубликованной 22 января 1998 г.), Χν0 97/13760 (опубликованной 17 апреля 1997 г.), Χν0 95/19970 (опубликованной 27 июля 1995 г.), патенте США № 5587458 (опубликованном 24 декабря 1996 г.) и патенте США № 5877305 (опубликованном 2 марта 1999 г.), которые настоящим все включены здесь в их полноте путем ссылки. Ингибиторы рецептора ЕгЬВ2 описаны также в предварительной заявке США № 60/117341, поданной 27 января 1999 г., и в предварительной заявке США № 60/117346, поданной 27 января 1999 г., обе из которых включены здесь в их полноте путем ссылки. В соответствии с настоящим изобретением соединения, ингибирующие рецептор егЬВ2, и вещество, описанное в вышеупомянутых РСТ заявках, патентах США и предварительных заявках США, а также другие соединения и вещества, которые ингибируют рецептор егЬВ2, можно использовать совместно с соединением согласно изобретению.
Агенты, связанные с выживаемостью, включают в себя анти-1СР-1В-антитела и антиинтегриновые агенты, такие как антиинтегриновые антитела.
Применение диагностических способов.
Кроме того, в настоящем изобретении разработаны диагностические способы. Антитела к СЭ40 можно использовать для обнаружения СЭ40 в биологическом образце ш νίΙΐΌ или ш у1уо. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения разработан способ диагностирования присутствия или местонахождения у пациента, нуждающегося в диагностировании, опухоли, экспрессирующей СЭ40, включающий в себя стадии инъецирования данного антитела данному пациенту, определения экспрессии у данного пациента СЭ40 путем локализации места обнаружения антитела, экспрессии у данного пациента с экспрессией у нормального контрольного индивида или с эталонной экспрессией, и диагностирования присутствия или местоположения опухоли.
Антитела к СЭ40 можно использовать в традиционном иммунологическом анализе, включая, без ограничения, ИФА, РИА, РАС8, тканевую иммуногистохимию, Вестерн-блот или иммунопреципитацию. Антитела к СЭ40 согласно изобретению можно использовать для обнаружения СЭ40 у человека. В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитела к СЭ40 можно использовать для обнаружения СЭ40 у обезьян Старого Света, таких как супото1дик и резус-макак, шимпанзе и человекообразных обезьян. В настоящем изобретении разработан способ детекции СЭ40 в биологическом образце, включающий в себя контактирование биологического образца с антителом к СЭ40 согласно изобретению и детектирование связавшегося антитела. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 непосредственно метят детектируемой меткой. В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 (первое антитело) является немеченым, а второе антитело или другую молекулу, которая может связаться с анти-СЭ40-антителом, метят. Специалистам в данной области хорошо известно, что второе антитело выбирают таким образом, чтобы оно было способно специфически связать конкретные виды и класс первого антитела. Например, если антитело к СЭ40 представляет собой 1дС человека, то вторичное антитело может представлять собой антитело к 1дС человека. Другие молекулы, которые могут связываться с антителами, включают в себя, без ограничения, белок А и белок С, оба из которых коммерчески доступны, например, от Р1егсе Сйетка1 Со.
Подходящие метки для данного антитела или вторичного антитела раскрыты выше и включают в себя различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества и радиоактивные вещества. Примеры подходящих ферментов включают в себя пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, β-галактозидазу или ацетилхолинэстеразу; примеры подходящих сложных простетических групп включают в себя стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примеры подходящих флуоресцентных веществ включают умбеллиферон, флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат, родамин, дихлортриазиниламинфлуоресцеин, дансилхлорид или фикоэретрин; пример люминесцентного вещества вклю- 33 011449
125 131 35 чает в себя люминол; а примеры подходящих радиоактивных веществ включают в себя I, I, δ или 3Н.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения присутствие ί.Ό40 в биологическом образце можно установить с помощью конкурентного иммуноанализа, использующего СО40-стандарты, помеченные детектируемым веществом, и немеченое антитело к ί.Ό40. В данном анализе биологический образец, меченный СО40-стандартами и антителом к СЭ40. объединяют и определяют количество меченого СО40-стандарта, связавшегося с данным немеченым антителом. Количество СЭ40 в данном биологическом образце обратно пропорционально количеству меченого СО40-стандарта, связавшегося с антителом к СЭ40.
Вышеописанный анализ можно использовать для ряда целей. Например, антитела к ί.Ό40 можно использовать для обнаружения ί.Ό40 в клетках культуры клеток. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антитела к ί.Ό40 используют, чтобы определить количество СЭ40 на поверхности клеток, которые обрабатывают различными соединениями. Данный способ можно применять при идентификации соединений, которые используют для активирования или ингибирования ί.Ό40. В соответствии с данным способом один образец клеток обрабатывают тест-соединением в течение какого-то периода времени, а другой образец оставляют необработанным. При измерении общего уровня ί.Ό40 эти клетки лизируют, и общий уровень СЭ40 измеряют с использованием одного из вышеописанных иммуноанализов. Для определения эффекта данного тест-соединения сравнивают общий уровень ί.Ό40 в обработанных и необработанных клетках.
Предпочтительным иммуноанализом для измерения общего уровня ί.Ό40 является ИФА или Вестерн-блот. При измерении уровня ί.Ό40 на поверхности клетки анализируемые клетки не лизируют и уровень ί.Ό40 на поверхности данных клеток измеряют с использованием одного из вышеописанных иммуноанализов. Предпочтительный иммуноанализ для определения уровня ί.Ό40 на поверхности клеток включает в себя стадии мечения белков на поверхности клетки с помощью детектируемой метки, такой как биотин или 1251, иммунопреципитации СЭ40 с антителом к СЭ40 и последующего детектирования меченого ί.Ό40. Другой предпочтительный иммуноанализ для определения локализации уровня СЭ40, например, на клеточной поверхности, осуществляют с использованием иммуногистохимии. Способы, такие как ИФА, РИА, Вестерн-блоттинг, иммуногистохимические способы, способы мечения интегральных мембранных белков клеточной поверхности и иммунопреципитация, хорошо известны в данной области. См., например, Иаг1о\у апб Ьапе, выше. Кроме того, перечисленные иммуноанализы можно масштабировать для высокопроизводительного скринирования с целью тестировать большое число соединений в отношении активации или ингибирования ί.Ό40.
Антитела к ί.Ό40 согласно изобретению можно также использовать для определения уровня СЭ40 в ткани или в клетках, полученных из данной ткани. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ткань представляет собой больную ткань. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ткань представляет собой опухоль или ее биоптат. В некоторых вариантах осуществления данного способа ткань или ее биоптат вырезают у пациента. Затем больную ткань или биоптат используют в иммуноанализе для определения, например, общего уровня СЭ40, уровня СЭ40 на поверхности клетки, или для локализации ί.Ό40 вышеописанными способами.
Вышеописанный диагностический способ можно использовать для определения того, экспрессирует ли опухоль высокие уровни СЭ40, что могло бы свидетельствовать о том, что опухоль представляет собой мишень для обработки антителами к ί.Ό40. Далее, этот же способ можно также использовать, чтобы проследить эффект лечения антителом к СЭ40, детектируя гибель клеток в опухоли. Этот диагностический способ можно также использовать, чтобы определить, экспрессирует ли ткань или клетка недостаточный уровень СЭ40 или активированного СЭ40 и, следовательно, является ли кандидатом для лечения активирующими антителами к СЭ40, СО40Ь и/или иными терапевтическими агентами в целях повышения уровня ί.Ό40 или его активности.
Антитела согласно изобретению можно также использовать ш νί\Ό для идентификации тканей и органов, которые экспрессируют ί.Ό40. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитела к ί.Ό40 используют для идентификации опухолей, экспрессирующих СЭ40. Одним из преимуществ использования антител человека к ί.Ό40 согласно изобретению заключается в том, что их можно, не опасаясь, использовать ш νίνΌ, не вызывая иммунную реакцию на данное антитело после его введения, в отличие от антител, производимых не человеческим организмом, или гуманизированных антител.
Данный способ включает в себя стадии введения детектируемых меченых антител к СЭ40 или композиции, включающей их, пациенту, нуждающемуся в таком диагностическом тесте, и анализ изображения для определения у пациента местоположения тканей, экспрессирующих СЭ40. Анализ изображения хорошо известен в медицинской области и включает в себя, без ограничения перечисленным, рентгенографический анализ, магнитно-резонансную томографию (МРТ) или компьютерную томографию (СЕ). Данное антитело можно пометить с помощью любого агента, подходящего для ш ν^νо-изображения, например, контрастного агента, такого как барий, который может использоваться в рентгенографическом анализе, или магнитного контрастного вещества, такого как хелат гадолиния, который можно использовать в МРТ или СЕ. Другие вещества-метки включают в себя, не ограничиваясь этим, радиоизотопы, та
- 34 011449 кие как 99Тс. В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело к 0Ό40 должно быть немеченым и должно визуализироваться после введения второго антитела или иной молекулы, которая детектируема и которая может связать данное антитело к 0Ό40. В варианте осуществления настоящего изобретения биоптат получают от пациента, чтобы определить, экспрессирует ли представляющая интерес ткань 0Ό40.
Применение терапевтических способов.
Кроме того, в настоящем изобретении разработаны терапевтические способы, использующие антитело против 0Ό40 согласно изобретению.
Агонист антитела человека против 0Ό40 согласно изобретению можно ввести человеку или млеко питающему, не принадлежащему человеческому роду, которые экспрессируют перекрестно реагирующий 0Ό40. Данное антитело можно ввести такому не принадлежащему человеческому роду млекопитающему (т.е. примату, суиото1ди5 или резус-макаке) с ветеринарными целями или же в качестве изучения его действия на животной модели заболевания человека. Такие модельные животные полезны для оценки терапевтической эффективности антител настоящего изобретения.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело к 0Ό40 вводят пациенту, который страдает от первичного и/или комбинированного иммунодефицитов, в том числе, 0Ό40зависимого иммунодефицита с синдромом гиперсекреции 1дМ, общего вариабельного иммунодефицита, агаммаглобулинемии Брутона (Вги!ои), дефицитов субкласса 1дС и Х-сцепленного 8СГО (общие мутации гамма-цепи). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к 0Ό40 вводят для лечения пациента, который иммуносупрессивен, например, из-за химиотерапии, или обладает иммуноослабляющим заболеванием, в том числе, заболеванием приобретенного иммунодефицита, таким как ВИЧ. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к 0Ό40 вводят, чтобы повысить иммунитет пожилого пациента. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к 0Ό40 вводят для лечения пациента, который обладает бактериальной, вирусной, грибковой или паразитарной инфекцией. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения агонист антитела человека против 0Ό40 согласно изобретению можно профилактически вводить пациенту, который, вследствие возраста, нездоровья или общего слабого здоровья подвержен инфицированию, чтобы предупредить или уменьшить число или тяжесть инфекций.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к 0Ό40 вводят пациенту, который обладает гиперпролиферативным нарушением.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к 0Ό40 вводят для лечения пациенту, который обладает опухолью. В других вариантах осуществления настоящего изобретения опухоль является СО40-позитивной. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения опухоль является СО40-негативной. Опухоль может представлять собой солидную или несолидную опухоль, такую как лимфома. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к 0Ό40 вводят пациенту, который обладает опухолью, являющейся раковой. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело ингибирует пролиферацию раковой клетки, подавляет или предотвращает увеличение массы опухоли или ее объема, и/или вызывает уменьшение массы опухоли или ее объема.
Пациенты, которых можно лечить с помощью антител к 0Ό40 или участками антитела настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются, пациентов, у которых диагностируют наличие злокачественной опухоли головного мозга, злокачественной опухоли легкого, злокачественной опухоли кости, злокачественной опухоли поджелудочной железы, рака кожи, злокачественной опухоли головы и шеи, меланомы кожи или внутриглазной меланомы, злокачественной опухоли матки, злокачественной опухоли яичника, злокачественной опухоли прямой кишки, злокачественной опухоли анальной области, злокачественной опухоли желудка, желудочной злокачественной опухоли, колоректальной злокачественной опухоли, злокачественной опухоли ободочной кишки, злокачественной опухоли молочной железы, гинекологической злокачественной опухоли (например, маточные саркомы, карцинома фаллопиевой трубы, карцинома эндометрия, карцинома шейки матки, карцинома влагалища или карцинома вульвы), злокачественной опухоли пищевода, злокачественной опухоли тонкого кишечника, злокачественной опухоли эндокринной системы (например, злокачественная опухоль щитовидной, паращитовидной или надпочечной железы), сарком мягких тканей, лейкоза, миеломы, множественной миеломы, злокачественной опухоли уретры, злокачественной опухоли пениса, злокачественной опухоли предстательной железы, хронического или острого лейкоза, детских злокачественных опухолей, болезни Ходжкина, лимфоцитарных лимфом, лимфомы не Ходжкина, злокачественной опухоли мочевого пузыря, злокачественной опухоли печени, почечной злокачественной опухоли, злокачественной опухоли почки или мочеточника (например, гипернефроидный рак, злокачественная опухоль почечной лоханки), или новообразований центральной нервной системы (например, первичная лимфома ЦНС, злокачественные опухоли позвоночного столба, глиомы ствола мозга или аденома гипофиза), глиомы или фибросаркомы.
Данное антитело можно вводить от трех раз ежедневно до одного раза каждые шесть месяцев и, предпочтительно, можно вводить через рот, слизистую, защечно, интраназально, вдыханием, внутривенно, подкожно, внутримышечно, парентерально, внутриопухолево, чрескожно или местно. Данное анти
- 35 011449 тело можно также вводить непрерывно с помощью микронасоса. Как правило, данное антитело следует вводить до тех пор, пока данная опухоль присутствует, и при условии, что данное антитело приводит к остановке роста опухоли или рака или к уменьшению ее (его) массы или объема. Как правило, дозировка антитела колеблется в диапазоне от 0,025 до 50 мг/кг, более предпочтительно 0,1-50 мг/кг, более предпочтительно 0,1-20, 0,1-10, 0,1-5 мг/кг или еще более предпочтительно 0,1-2 мг/кг. Данное антитело можно также вводить профилактически.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данное антитело к СП40 вводят в виде элемента лечебной схемы, которая включает введение пациенту, который обладает гиперпролиферативным нарушением, таким как рак или опухоль, одного или нескольких дополнительных противоопухолевых лекарственных средств или молекул. Типичные противоопухолевые агенты включают, но не ограничиваются, ингибиторы митоза, алкилирующие агенты, антиметаболиты, интеркалирующие агенты, ингибиторы фактора роста, ингибиторы клеточного цикла, ферменты, ингибиторы топоизомеразы, модификаторы биологического ответа, антигормоны, киназные ингибиторы, ингибиторы матриксной металлопротеиназы, генетические терапевтические агенты и антиандрогены. В более предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 вводят вместе с противоопухолевым агентом, таким как адриамицин или таксол. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения терапию против СЭ40 осуществляют вместе с радиотерапией, химиотерапией, фототерапией, хирургией или иной иммунотерапией. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СП40 вводят вместе с одним или несколькими дополнительными антителами. Например, антитело к СЭ40 можно вводить вместе с антителами, о которых известно, что они ингибируют клеточную пролиферацию опухоли или рака. Такие антитела включают, но не ограничиваются, антитело, которое ингибирует СТЬА4, рецептор егЬВ2, ЕСР-В, ЮР-1В, СЭ20 или УЕСЕ.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 метят с помощью радиоактивной метки, иммунотоксина или токсина, или слитым белком, содержащим токсичный пептид. Антитело к СЭ40 или антитело к СО40-слитый белок направляет радиоактивную метку, иммунотоксин, токсин или токсичный пептид к клетке опухоли или к раковой клетке. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данная радиоактивная метка, иммунотоксин, токсин или токсичный пептид интернализуются клеткой опухоли или раковой клеткой после связывания антитела к СЭ40 с СЭ40 на поверхности искомой клетки.
Кроме того, антитело к СЭ40 можно использовать терапевтически для индукции у пациента апоптоза конкретных клеток. Во многих случаях клетки, мишенированные для апоптоза, представляют собой раковые клетки или клетки опухоли. Таким образом, в настоящем изобретении разработан способ индукции апоптоза путем введения пациенту антитела к СЭ40, нуждающегося в нем.
Кроме того, в настоящем изобретении разработан способ введения пациенту активирующего антитела к СЭ40 для увеличения СО40-активности. Антитело к СЭ40 вводят вместе с одним или несколькими другими факторами, которые увеличивают СО40-активность. Такие факторы включают СО40Ь и/или аналоги СО40Ь, которые активируют СЭ40.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к СЭ40 вводят вместе с одним или несколькими дополнительными иммунными усиливающими агентами, в том числе, без ограничения, №N^1, 1Ь-2, 1Ь-8, 1Ь-12, 1Ь-15, 1Ь-18, 1Ь-23, ΙΓΚ-γ и СМ-С8Р.
В некоторых вариантах осуществления согласно изобретению агонист антитела человека против СЭ40 используют в качестве адъюванта для повышения эффективности вакцины. При использовании данным образом, антитело против антитела к СЭ40 активирует СЭ40 в антигенпрезентирующих клетках, в том числе, в В-клетках, дендритных клетках и в моноцитах, а также усиливает образование иммуномодуляторных молекул, таких как цитокины и хемокины. Иммуностимуляторное действие данного антитела усиливает иммунную реакцию вакцинированного пациента к вакцинному антигену.
Кроме того, в настоящем изобретении разработан способ получения дендритно-клеточной вакцины для раковых клеток или для иммунотерапии дендритных клеток. В соответствии с данным способом дендритные клетки ракового больного культивируют в течение 1-5 дней с лизатом или гомогенатом опухоли, с клетками опухоли, убитыми облучением или с помощью других средств, или с помощью опухолеспецифичных антигенов (например, пептидов, идиотипов), а также с помощью 1-10 мкг/мл антитела к СЭ40. Обученные антигеном дендритные клетки реинъецируют данному пациенту, чтобы стимулировать противоопухолевые иммунные ответы, в частности противоопухолевые СТЬ-ответы. Для использования в данном способе моноцитные дендритные клетки можно получить из образца периферической крови путем культивирования в ΙΕ4 и СМ-С8Р. Дендритные клетки можно также получить из костного мозга пациента путем выделения очисткой с помощью магнита или сортировкой СП34-позитивных клеток, с последующим культивированием в ΙΕ-4 и СМ-С8Р.
Генная терапия.
Молекулы нуклеиновой кислоты настоящего изобретения можно вводить пациенту, нуждающемуся в этом, с помощью генной терапии. Генную терапию можно осуществлять либо ίη νΐνο, либо ех νΐνο. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения пациенту вводят молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие и тяжелую цепь, и легкую цепь. В более предпочтительном варианте осу
- 36 011449 ществления настоящего изобретения молекулы нуклеиновой кислоты вводят таким образом, чтобы они стабильно интегрировались в хромосомы В-клеток, так как эти клетки специализированы для образования антител. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения предшественники Вклеток трансфицируют или инфицируют ех νίνο и ретрансплантируют нуждающемуся в этом пациенту. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предшественники В-клеток или других клеток инфицируют ίη νίνο, используя известный вирус для заражения представляющих интерес клеток определенного типа. Обычные векторы, используемые для генной терапии, включают липосомы, плазмиды и вирусные векторы. Типичные вирусные векторы представляют собой ретровирусы, аденовирусы и аденоассоциированные вирусы. После инфицирования ίη νίνο либо ех νίνο, отслеживают уровень экспрессии антитела в образце, взятом у подвергающегося лечению пациента, и используют любой иммуноанализ, известный в данной области или рассматриваемый здесь.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения предлагаемый способ генной терапии включает стадии введения выделенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть антитела к СЭ40. и экспрессирования молекулы нуклеиновой кислоты. В другом варианте осуществления настоящего изобретения предлагаемый способ генной терапии включает стадии введения выделенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть антитела к СЭ40 и экспрессирования молекулы нуклеиновой кислоты. В более предпочтительном способе данный способ генной терапии включает стадии введения выделенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь или ее антигенсвязывающую часть, и выделенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь или ее антигенсвязывающую часть антитела к СЭ40 настоящего изобретения, и экспрессирования молекул нуклеиновой кислоты. Данный способ генной терапии может также включать стадию введения другого противоопухолевого агента, такого как таксол или адриамицин.
Для того чтобы лучше понять данное изобретение, ниже изложены примеры. Эти примеры преследуют лишь иллюстративные цели и не рассматриваются в качестве какого-либо ограничения смысла настоящего изобретения.
Пример Ι.
Создание гибридом, продуцирующих антитело к СЭ40.
Антитела настоящего изобретения получают, селектируют и анализируют следующим образом. Иммунизация и создание гибридомы.
Мышей ХешМюе™ в возрасте восемь-десять недель иммунизируют внутрибрюшинно или в подушечку задней лапы либо слитым белком СЭ40-[дС (10 мкг/дозу/мышь) либо клетками 300.19-СЭ40, которые представляют собой линию трансфицирующих клеток, которые экспрессируют СЭ40 человека на своей плазматической мембране (10х106 клеток/дозу/мышь). Введение данной дозы повторяют пять-семь раз на протяжении трех-восьми недель. За четыре дня до слияния мышам делают заключительную инъекцию внеклеточного домена СЭ40 человека в РВ8. Осуществляют слияние лимфоцитов селезенки и лимфатического узла из иммунизированных мышей с несекретирующей клеточной линией миеломы Р3Κ63-Α§8.653, и подвергают слитые клетки НАТ-селекции, как описано раньше (Са1Гге апй М115(е1п, ше111οάκ Εηζутο1. 73:3-46, 1981). Выделяют панель гибридом, которые все секретируют СЭ40-специфичные антитела человека Ι§Ο2κ. Отбирают одиннадцать гибридом для дальнейшего исследования и обозначают их 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1.
В соответствии с Будапештским Договором, гибридомы 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1 и 21.4.1 депонируют в Американской Коллекции Типовых Культур (АТСС), 10801 ИптуегШу Βου^νατά, Мапаккак, νΑ 20110-2209, 6 августа 2001 г. Гибридомы 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.29.1 и 24.2.1 депонируют в АТСС 16 июля 2002 г. Данным гибридомам присвоены следующие регистрационные номера:
- 37 011449
Гибридома № регистрации
3.1.1 (БЫ 15848) РТА-3600
7.1.2 (БЫ 15849) РТА-3601
10.8.3 (БЫ 15850) РТА-3602
15.1.1 (БЫ 15851) РТА-3603
21.4.1 (БЫ 15853) РТА-3605
21.2.1 (БЫ 15874) РТА-4549
22.1.1 (БЫ 15875) РТА-4550
23.5.1 (БЫ 15855) РТА-4548
23.25. 1 (БЫ 15876) РТА-4551
23.28. 1 (БЫ 15877) РТА-4552
23.29. 1 (БЫ 15878) РТА-4553
24.2.1 (БЫ 15879) РТА-4554
Пример II.
Последовательности антител к СИ40, полученные в соответствии с настоящим изобретением.
Для анализа структуры антител, полученных в соответствии с настоящим изобретением, клонируют нуклеиновые кислоты, кодирующие фрагменты тяжелой и легкой цепи гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к 0Ό40. Клонирование и секвенирование осуществляют следующим образом.
С помощью набора Еак1-Тгаск (1пткгодеп) выделяют Ро1у(А)+ мРНК, примерно из 2х105 гибридомных клеток, полученных от мышей ХепоМоике™, иммунизированных 0Ό40 человека, как описано в примере I. После чего с помощью ПЦР получают случайным образом примированную кДНК. Используют праймеры из специфичных вариабельных областей УН человека или семейства Ук (Магкк е! а1., 011допис1еойбе ргкпегк £ог ро1утегаке скат геоскоп атркПсакоп о£ китап 1ттипод1оЬи1т νа^^аЬ1е депек апб беыдп о£ ГатПу-кресШс о11допис1еойбе ргоЬек (Олигонуклеотидные праймеры для амплификации иммуноглобулиновых вариабельных генов человека и создание специфичного семейства олигонуклеотидных зондов с помощью полимеразной цепной реакции), Еиг. 1. 1ттипо1. 21:985-991 (1991)) или универсальный праймер УН человека, М0-30, СА00Т0СА0СТ00А0СА0ТС100 (8ЕЦ ΙΌ Ν0: 118), в сочетании с праймерами, специфичными для константной области С) 2 человека, М0-40б, 5'0СТ0А000А0ТА0А0ТССТ0А00А-3' (8ЕЦ ΙΌ Ν0: 119), или для константной области Ск (ккР2; как описано раньше у Огееп е! а1., 1994). Путем прямого секвенирования ПЦР-продуктов, образованных из ро1у(А+)-РНК с использованием вышеописанных праймеров, получают молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие транскрипты тяжелой цепи и легкой каппа-цепи человека из гибридом, продуцирующих антитела к 0Ό40. ПЦР-продукты клонируют в рСВ11, используя ТА-набор для клонирования Д^кгодеп), и секвенируют обе цепи с использованием Рпкш буе-наборов для терминирующего секвенирования и секвенатора АВ1 377. Анализируют все последовательности путем выравнивания по V ВА8Е кецпепсе бкесЮгу (Тоткпкоп е! а1., МВС Сеп(ге £ог Рго1ет Епдтееппд, СатЬпбде, Великобритания) с использованием программного обеспечения МасУесЮг и Сепе^огкк.
Далее, подвергают клонированию и секвенированию полноразмерную ДНК моноклональных антител 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.28.1, 23.29.1 и 24.2.1. Для такого секвенирования выделяют РНК, примерно, из 4х106 гибридомных клеток с использованием набора для выделения РНК ΟΙΛΟΗΝ В№аку (ОIАСЕН). мРНК подвергают обратному транскрибированию с использованием окдо-бТ(18) и набора Абνаηίаде ВТ/РСВ (С1опе!еск). Используется V Ваке для создания прямых амплификационных праймеров, которые включают сайты рестрикции, оптимальную последовательность Козака, стартовый АТ0-сайт и часть сигнальной последовательности данной тяжелой цепи. В табл. 1 приведен список прямых амплификационных праймеров, применяемых к последовательностям клонов данного антитела.
- 38 011449
Таблица 1
Клон Прямой праймер тяжелой цепи
3.1.1 5 ' -ТАТСТААССТТСТАНАСТСВАСССЗССАССАТССАСТТТССССТСАеСТС-З (ЗЕО ГО N0:120)
7.1.2 5 1 -ТАТСТААОСТТСТАОАСТСОАСС(ЗССАССАТ(ЗОАеТТТ<ЗСаСТ(ЗА(ЗСТа-3 ' (ЗЕ<2 ГО N0:121)
10.В.З 5 ' -ТАТСТАА<ЗСТТСТАОАСТСОАОС(ЗССАС!САТ(ЗАААСАССТОТОдТТСТТСС-3 ' (ЗЕО ГО N0:122)
15.1.1 5 ' -ТАТСТААОСТТСТАЕАСТССАССбССАССАТОАААСАТСТОТаОТТСТТСС-З ' (ЗЕО ГО N0:123)
21.4.1 5 ' -ТАТСТАА.ССТТСТАСАСТССАСССССАССАТССАСТаСАССТаСАОСАТСС-З ' (ЗЕО ГО N0:124)
21.2.1 5 ' -ТАТСТААССТТСТАОАСТС<ЗАССвССАССАТа<ЗА0ТТТО(3<ЗСТ<ЗАаСТа-3 ' (ЗЕО ГО N0:128)
22.1.1 5 ’ -ТАТСТААССТТСТАОАСТСОАССеССАССАТ0(ЗА0ТТТ<ЗСОСТ<ЗАаСТа-3 ' (ЗЕО ГО N0:129)
23.5.1 5 ’ -ТАТСТААССТТСТА0АСТССАСССССАССАТ<ЗСАаТТТаОаСТСАаСТ<3-3 1 (ЗЕ<2 ГО N0:130)
23.28.1 5 ’ -ТАТСТААССТТСТАСАСТССАССеССАССАТСАААСАТСТатеСТТСТТСС-З ' (ЗЕО ГО N0:131)
23.29.1 5'-ТАТСТАА0СТТСТАСАСТСаАССеССАССАТСОАСТТТО50СТаАаСТС-3 (3Εΰ ГО N0:132)
24.2.1 5 ' -ТАТСТААССТТСТАОАСТСаАСССССАССАТЕАААСАТСТСТСаТТСТТСС-З ' (ЗЕО ГО N0:133)
Этот же способ используют для создания праймера, который включает 3'-кодирующие последовательности, стоп-кодон константной области 1дО2, (5'-ΤΤСΤСΤОАΤСАОААΤΤССΤАΤСАΤΤΤАСССООАОАСАОООАОАО-3')(§Е^ ГО N0: 125) и сайты рестрикции.
Этот же способ используют также для создания праймера, расположенного около стартового АΤОсайта каппа-цепи, (5'-СΤΤСААОСΤΤАСССОООССАССАΤОАООСΤСССΤОСΤСАОС-3') (8 ЕС) ГО N0: 126). Оптимальную последовательность Козака добавляют по 5'-концу к стартовому АΤО-сайту. Данный праймер используют для ПЦР-клонирования легких цепей следующих клонов антител: 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1 и 23.29.1. Для клонирования легких цепей из клонов 23.28.1 и 24.2.1 используется второй прямой праймер 5'-ΤСΤΤСААОСΤΤОСССОООСССОССАССАΤООАААССССАОСОСАО-3' (8ЕО ГО N0: 134). Этот же способ используется для создания праймера, расположенного около стоп-кодона константной каппаобласти (5'-ΤΤСΤΤΤОАΤСАОААΤΤСΤСАСΤААСАСΤСΤССССΤОΤΤОААОС-3') (8ЕО ГО N0: 127). Используется пара праймеров для амплификации кДНК с использованием ПЦР-набора АбуаШаде Н1дй Είбе11!у (С1ои1есй). Последовательность указанного ПЦР-продукта получают путем прямого секвенирования с использованием стандартных методов (например, с использованием случайной затравки), используя наборы для секвенирования с терминирующим красителем и АВ1-секвенатор. В экспрессирующий вектор млекопитающего клонируют полученный ПЦР-продукт и секвенируют клоны для подтверждения соматических мутаций. Для каждого клона проверяют последовательности обеих цепей по меньшей мере в трех реакциях.
Анализ утилизации гена.
В соответствии с настоящим изобретением в табл. 2 показана утилизация гена с помощью селективных гибридомных клонов.
- 39 011449
Таблица 2
Утилизация генов тяжелой и легкой цепи
Клон Тяжелая цепь Легкая каппа-цепь
та ϋ ЦН νκ σκ
3.1.1 (3-30+) РР-49 ϋ4+ ΌΙΚ3 0Ή6 Α3/Α19 (ОРК-15) ЛК1
7.1.2 (3-30+) РР-49 ΟΙΒ5+ ϋ1-26 0Ή6 Α3/Α19 ЮРК-15) σκι
10.8.3 (4.35) νΐν-4 ШКЗ ЛН6 Ь5 (ЭР5) σκ4
15.1.1 (4-59) ΌΡ-71 04-23 0Η4 АЗ/А19 ЮРК-15) ЛК2
21.4.1 (1-02) ϋΡ-75 ЦЬК1 ЛН4 Ь5 ЮР5) ЛК4
21.2.1 (3-30+) ϋΡ-49 Ц1Н-3+ 06-19 ЛН4 АЗ/А19 ЮРК-15) σκι
22.1.1 (3-30+) ϋΡ-49 ϋΐ-ΐ ЛН6 АЗ/А19 ЮРК-15) σκι
23.5.1 (3-30 + ) ΟΡ-49 Ώ4-17 ЦН6 АЗ/А19 Юрк-15) σκι
23.28.1 (4-59) ϋΡ-71 Э1Н1+ Б4-17 ЛН5 А27 ЮРК-22) цкз
23.29.1 (3-30.3) ϋΡ46 Ώ4-17 ЛН6 АЗ/А19 (ОРК-15) σκι
24.2.1 _ (4-59) ЦР-71 ϋΐΜ+ 04-17 1ΤΗ5 А27 ЮРК-22) лкз
Анализ последовательности и мутационный анализ.
Следует иметь в виду, что анализ утилизации гена создает лишь общее представление о структуре антитела. Поскольку В-клетки животных ХепоМоике™ стохастически производят транскрипты тяжелой У-Э-1 или легкой У-1-каппа-цепи, происходит ряд вторичных процессов, включающих, без ограничения, соматическую гипермутацию, делеции, ^добавки и С^Β3-удлинения. См., например, Мепйех е! а1., №1(иге Сепейск 15:146-156 (1997) и международную патентную публикацию \¥0 98/24893. В соответствии с этим для дальнейшего изучения структуры антитела, на основании последовательности кДНК, полученных из данных клонов, предсказаны аминокислотные последовательности антител. В табл. А представлены идентификаторы последовательностей для каждой нуклеотидной и предсказанной из нее аминокислотной последовательности секвенированных антител.
В табл. 3-7 представлены нуклеотидные и предсказанные из них аминокислотные последовательности тяжелой и легкой каппа-цепи антител 3.1.1 (табл. 3), 7.1.2 (табл. 4), 10.8.3 (табл. 5), 15.1.1 (табл. 6), 21.4.1 (табл. 7).
В табл. 8-13 представлены нуклеотидные и предсказанные аминокислотные последовательности вариабельного домена тяжелой цепи и легкой каппа-цепи антител 21.2.1 (табл. 8), 22.1.1 (табл. 9), 23.5.1 (табл. 10), 23.28.1 (табл. 11), 23.29.1 (табл. 12) и 24.2.1 (табл. 13).
ДНК-последовательность из полноразмерного секвенированного моноклонального антитела 23.28.1 отличается от ДНК-последовательностей, полученных из секвенирования УН-области начального ПЦРпродукта, по одной паре оснований (С на С), что приводит к изменению остатка 16 с Ό на Е в природной тяжелой цепи.
В табл. 14-19 представлены нуклеотидные и предсказанные аминокислотные последовательности тяжелой и легкой каппа-цепи антител 21.2.1 (табл. 14), 22.1.1 (табл. 15), 23.5.1 (табл. 16), 23.25.1 (табл. 17), 23.29.1 (табл. 18) и 24.2.1 (табл. 19). В данных таблицах сигнальная пептидная последовательность (или основания, кодирующие ее) подчеркнуты.
Созданы два мутантных антитела, 22.1.1 и 23.28.1. Тяжелая цепь антитела 22.1.1 смутировала, заменив цистеиновый остаток в положении 109 на аланиновый остаток. Мутантный клон обозначен 22.1.1Н-С019А. Легкая цепь антитела 23.28.1 в положении 92 также смутировала, заменив цистеиновый остаток на аланиновый остаток. Мутантный клон обозначен 23.28.1Ь-С92А.
Мутагенез специфических остатков осуществляют с помощью сконструированных праймеров и с использованием набора для сайт-направленного мутагенеза ОшскСНапде от 81га1адепе, в соответствии с
- 40 011449 рекомендациями производителя. Мутации подтверждены автоматизированным секвенированием, а мутационные вставки субклонируют в экспрессирующие векторы.
В табл. 20 представлены нуклеотидная и аминокислотная последовательности мутантной тяжелой цепи антитела 22.1.1Н-С019А. В табл. 21 представлены нуклеотидная и аминокислотная последовательности мутантной легкой цепи антитела 23.28.1. Мутантные ДНК-кодоны изображены курсивом. Мутантный аминокислотный остаток выделен шрифтом.
Таблица 3
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 3.1.1
ОПИСАНИЕ
ДНКпоследовательность тяжелой цели
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчеркнута)
АТСЮА(УГГГС<ЮСТОА(КЛ^
ТСТТТТААСА(ИуТ6Т(ХА<ЗТОТСАССТОСАОСТО ΟΤΟΟΑίΠϋΤΟΟζΚΚίΑΟΟΟίΠΧΧΠΌΌΑί^ΟΤΟΟΌ АСИЗТСССТСАОАСЛХЛТХТГСЛХЗСАОССТСТбОАТ ТСАССГГСАСТАОТТАТОССАТССАСТбССТССС ССАС(КЛ(Х?АС<К:АА6(ХЮСТООАОТ(ХЗКтЗСС АСТТАТАТСАААССАТССАССгТААТАААТАССАТ 6САСАСТССОТСЗААССССС6АТТСАССАТСТССА ОАСАСААТТССААОААТССССТСТАТСТОСАААТ ОААТА6<ХЦ(хАСА<дГТСААСь\САС(КХТГ6ТСТАТ ТАСТ6ТОТСА6ААСА®КК:АТСА6СТООТГСТ6С (1АТАСТАСТАСТАСААСОСТСТ6САССТСТСОСС ССААССОАССАСС<дГСА(ХХлГСГССТСАСССТСС АССААСККЮССАТХХКЦСТТСССССТОССССССТ ОСТССАООАССАССТССОАСАОСАСА6ССОСССТ (КМХЛХЭОСТООТСААООАСТАСТГССССОААСОО еТОАСХХЛХИСОТ<ЮААСТСАО(КХЭСГСТОАС^ <к:с<юот(к:асассттсссассг6ТССТасастс СТСА6САСТСТАСТСССГСА6САОССТССТСАСС ОТССССТССАСЮААСТТСООСАСССАОАССТАСА ССТбСААССТАСАТСАСАьАОСССАбСААСАССАА ССТббАСААОАСАСдГТаАбСОСАААКтГГбТСТГ ОАСТГОСССАССОТбСССАбСАССАССТСУГбОСАб ОА(ХОТСА(ЖЛТСХГ1ХГГТС(Х:СХ:СААААСССАА ООАСАСХХТГСАТХхАТСТСССССАССССГОАООТС АСОТСССТСОТОСТСЮАСбТаАСССАСОААаАС СССОАСОТСХ1А<Т1ТСААСТСИЗТАСОТ6(лАС6ОСС ТСОАССТОСАТААТСССААОАСАДАСССАСССО А(3(ь^СИ2АСНТ^ААСА(ЮАС(д1Т(ХХдГОТССТСАС С(ЛССТСАССС1ТаГО<^(Х:АОСАСТО<ЗСТ6ААС <ХЮАА6ОА6ТАСААО1ХК:ААСОТСТССААСААА ОСГХТССХЗАОСССССАТС6АСААААССАТСТСЮА АААССАААСЮОСАСССССОАСААССАСАОСТСТ АСАСССТОСССССАТССССООАООАСАТОАССАА ОААССАбСТСАОССТОАССТОССТОСТСАААССС ТТСТАСХХСАССОАСАТСбССОТССАСТССОАСА ССААТСЮССАСОСССАСААСААСТАСААСАССА САССГСССАТССТСОАСТССОАСХ^ККДСХЛ'ГСТГС СТСТАСАССААССТСАССОТСЮАСААСАССАССТ ОбСАОСАСббСААССТСТГСТСАТССТССОТСАТ СЮАТСАОССТСГССАСААССАСТАСАСОСАОААб АСХХЖТСССТСШЦГСбССТАААТОА
- 41 011449
Белковая поомдовагельиость ТМКВЛОЙЦВГШ МЕРС1^АУГЬУАЬЬКОУОСОУОЬУЕ8СССУУОРО К5ЬКЬ8САА5СЕТР88УСМНАУк0АР0К6ЬЕАУА νΐ5№Οϋ№ΥΗΑΙ)8νΚ6Ι<ΓΠ8ΐωΝ8ΚΝΑ£ΥΕ9ΜΝ 8ΙΚνΕΟΤΑνΥΥσνΐα«3ΗςΕνΐΧΪΥΥΥΥΝΟ1Ι)νΐν0 (ХГ1ТУТУ88А8ТК6Р8У1Т1Л\РС8К8Т8Е8ТААЬ6СЬ УКПУГРЕЕ^ГУЗ^МЗСАЬТЗОУНТГРАУЬОЗЗОЬУ 8^8ννΐνΡ88ΝΓ(Η'0ΤΠ'α^νϋΗΚΡ8ΝΤΚνϋΚΤν ЕККССУЕСРРСРАРРУАСРбУГЬРРРКРКОТШККТ РЕУТСУУУОУЗНЮРЕУрЕйТУтТКЭУЕУНКАКТК ΡΚΕΕΟΕΝ8ΤΓΚνν8νΕΤννΗρϋΑΕΝσΚΕΥΚΟΚν5 ΝΚΟΙΤ’ΑΡΙΕΚΤΚΚΤΚΟρΡΚΕΡΟνΥΤΕΡΡδΚΕΕΜΤΚ ΝΟνδΕΤεΕνΚΟΕΥΡδϋΙΑνΕΑΕδΝίΧ^ΡΕΝΝνΚΤΤΡ РМЕР8Оа8ЕГЬ¥5КЬТУРК8К.А0ОСЦУР5С8УМНЕ ΑΙΉΝΗΥΤ^ΚΣΕδΣδΡΟΚ
днкпоследовательностъ 1НПЕОЙЦМИ АТ&АОССТСССТОСТСАССТССТСССССТССТАА ТССТСТбСвТСТСТОСАТССАбТССССАТАТТСтТ ССТСАСТСАСТСТССАСТСТСССТССССОТСАССС СТСОАОАСССОСССГССАТСТССТОСАССТСТАО ТСА6А6ССТСТГ6ТАТА(?ТААТ0<ЗАТАСААСТТТГ ТССАТТСОТАССТ6СА0ААСССАССССАСТСТСС АСА6СГССТСАТСТАТТТОСОТТСТААТСС6СССТ Α/ΊΑ Л/“ИТ*ГЛ л Α ηΦΓΆ Α ννυυννινννχυΛνΑυυι ινΛυιυυυΛυινυαΛν АСОСАСАСАТТТТАСАСТОААААТСА6СА6АТТО САСССТбАСИЗАТбТТССОСТТТАТТАСТССАТСС ААССТСТАСАААСТССТССОАССТТСССССААСО САССАА0СТ6ОАААТСАААССААСТ6Т6ССТСС АССАТСТСТСТТСАТСГТССССССАТСТСАТСАОС АОТТОАААТСТООААСТОССТСТСТТбТОТСССТ ССТСААТААСТТСТАТСССА0А6А6СССАААОТА САОТСКтААССТССАТААСССССТССААТССбСТА АСТСССАОСАОАбТСТСАСАСАОСАООАСАбСА АС0АСАССАССТАСАСССТСА0САССАСССТ6АС ССТвАОСАААОСАСАСТАСОАОАААСАСАААСТ СТАС<ЗССТ6ССАА6ТСАСССАТСАО6<ЗССТ6АОС ТССССССТСАСАААОАОСТТСААСАОСССАСАСТ СТТАО
Бетовм последовательность лептой цепи ММТАОЬЬОЬЬМЬ^УЗСЗЗСОГУЬТОЗРЕЗЬРУТРО ЕРА818СК8808ЬЬУ8Ы6УМЕЕО\¥УЬрКРО08Р0ЬЬ1 У1Л}8>Ди8ОУР0КР8С808ОТ0ЕТиа8КЬЕАЕЦУС УУ¥СТ40АЬ0ТРКТГО(ХтСУЕЖ1К.ТУААР8УЕ1ЕРР ЗПЕрЬКЗСИ-АБУУСГХММГУРКЕАКУСХУКУОНАЬ 08СР48рЕ8УТЕ<2О8КП8ТУ8Е88ТЬТЕ8КАО¥ЕКНК У¥АСЕУТНрСЬ88РУТК8БЪ1КОЕС
- 42 011449
днкпоследовательность зрелого вариабельного домана пимой цепи САбСТССАОСТССТССАСТСТСССССАСбСОТС СТССАОССТСОСАОаТСССТСАСАСТСТССТСТС САСХЗСТСТСКЗАТГСАССТГСАОТАОТТАТбОСАТ ССАСТССОТСССССАООСТССАСОСААСССССТС САСТ6ОСТ6<тСАОТГАТАТСАААС6АТО<ЗА6ОТ ААТАААТАССАТССА6АСТССОТОАА06СССОАТ ТСАССАТСТССА6АСАСААТТССААСААТОСОСТ ОТАТСТбСАААТОААТАОССТСАСАСТТСААОАС АСбССТОТОТАТТАСТОТСгТСАСгААСтАССССАТС АОСТ6СТ1СТСКЗСАТАСТАСТАСТАСААСССТСТ ССАССТСТСЮСЮССААСССАССАСССТСАСССТС ТССТСА
Белковая последовательность зрелого вариабельного домена тяжелой цепи 0У0ЪУЕ5С<ЗОУУрРОК81ГСЕ8САА8аБТЕ88¥ОМН VΑ¾^ΑΡСΚ^^ΕλVVΑVБΚIXXЖΚΥΗΑ^8VΚСΚΡΤ νΗΓιΎΥΥΝσΐ4)ννθ<^ΤΤνΤν8δ
ДНКпоследовательность зрелого вариабельного домена легкой цепи САТАТТОТОСТОАСТСАСТСТССАСТСТСССТОСС ССТСАССССТССАСАОССССССТССАТСТССТОС АССТСТАОТСАСАОССТСТТСТАТАСТААТССАТ АСААСТТТТТОСАТТаСТАССТССАСААСССАСС ССАОТСТССАСАССТССТСАТСТАТГТСтСгОТТСТА АТСОССССТССССССтТСССТСАСАОСТТСАСТСС СА6ТССАТСАСССАСА6АТПТАСАСТСААААТС А<ЮА0АТТ0СА0(ХЛ’0А6САТ0ТТ6<}СС}ТТТАТТ АСТОСАТ6САА6СТСТАСАААСТССТСОСАСОТТ СССССААСОСАССААОбТССАААТСААА
Белковая последовательность зрелого вариабельного домена легкой цепи ОГУЬТд8РЬ8ЬРУТРСЕРА818СК88р8ЬЬУ8П6¥)4ГЪ θν/Υ1Χ3ΚΡ0ρ8Ρ0ΕΕΙΥΣΟ8ΝΚΑ8θνΡ0ΚΕ868Ο8ΟΤ ПГШаЗ^ШЕАЕОУСУУУСМрАЬОТРГСЗТСОСТКУ ЕЖ
ДНКтиасалоА цели (вариабепышй домен) (3.1.1Н-А7ЭТ) 5ΕΟΒΝΟ:89 СА(ХЗТОСАОСТСОТООАСЗТСТа<ЗаСОАОСтСОТО СТССАСССГСССАСОТСССТОАОАСТСТССГОТО САСМХЛ*СТ(ЮАТГСАССТТСАСТАОТТАТ(ЗССАТ бСАСТбСОТСССССАСССТССАСССААОССССТС САСТСССТСССАОТТАТАТСАААООАТООАООТ ААТАААТАССАТОСАСАСТССОТОААаОбССОАТ ТСАССАТСТССАСАСАСААТТССААСААТаСОСТ ОТАТСТОСАААТСААТАСССТСАОАСТТСААОАС АССССТСТСТАТТАСТСТСТСАСААСАССССАТС А<ЗСТССТТСГОССАТАСТАСТАСТАСААСССТСТ ССАСОТСТОСССССААССОАССАСССТСАССОТС ТССТСА
- 43 011449
Бело» тяжелой цепи (вариабельный домен) (3.1.1Н-А7ЯТ) вЕОЮЮЯ) ЦУ9ЬУЕ86ОСУУ9РСК5ЬКЬ5САА5СБТР83УОМН νΑΤ^ΡΑΡΟΚΟΙ^ννΑνΚΚΙΧΜΝΚΥΗΑηδνΚΟΚΓΤ Ι5ΚΒΝ8ΚΝ7ΣΥΕΡΜΝ8ΓΚ.νΕϋΤΑνΥΥϋνκΚΟΗΡΕν ΐσΥΥΎΥΝαΐηνψ(ΧΚΗΤντν88
ДНК тяжелой цепи (вариабельный домен) (3.1.1Н-А7ет-786А-У97А) 5ЕОЮМОЛ1 СА(Х}Т(ЮА6С1теТССА(лТСТСССС<ЗА(ЗССОТО бТССАСЮСТаССАОСтТСССТОАОАСТСТССТаТО САСССТСТССтАТТСАССТТСАСТАСТТАГООСАТ ССАСТССОТСССССАОССТССАСССААбССОСТС САСТ6ССТ6ССАСТТАТАТСАААССАТ6ОА6СТ ААТАЛАТАССАТОСАбАСТССОТСААОбССССАТ ТСАССАТСТССАОАОАСААТГССААОДАТаСССТ етАТСТОСАААТСААТАСССТСАСАСсТОААОАС АСОаСТОТОТАТТАСТОТОсОАОААОАСОССАТС А6СТО(ЛТСТ<КЮАТАСГАСТАСТАСААС<ЗОТСГ СОАСОТСГССбСССААСООАССАССОТСАСССТС ТССТСА
Солок тяжелой цепи (вариабельный домен) Р.1.1Н-А78Т-У88А-У97А) 5ЕОЮкО:92 Р¥9ЬУЕ80ОСУУрР6К81КЬ8САА8СТТГ88УСМН ννΚ0ΑΡΌΚΟ1ΈλννΑνΕΚϋ(Χ3ΝΚΥΗΑΟ8νΚ0ΚΓΤ БКОКЗККТЬУЩМ^ЬВЛЕОТАУУУСЛВКСНРЬУ ΙΌΥΥΎΥΝΟΕΟννοςσΊΤνΤνδδ
ДНК лихой ц епи (вариабельный домен) (ии-имгезу) 5ЕОЮИО:93 ОАТАТТСТСаТСАСТСАСТСТССАСТСТСССТбСС ССТСАССССТССАОАСССООССТССАТСТССТОС АСЮТСТАСТСАОАОССТСТТСЗТАТАСТААТСОАТ АСААСТПТТ6САТТПСТАССТ6САСААСССАОС вСАСТСТССАСАОСТССТОАТСТАТТТбОСТТСТА АТССССССТССССССТСССТОАСАССТТСАОТСС СА6ТССАТСАСССАСАСАТТТТАСАСТСААААТС АССАСАдТСаАССХТТОАОСАТСТЩОСССТТТАТТ АСТССАТСтСААССТСТАСАААСТССТССтСАСОТТ СССССААОССАССААСОТОСАААТСААА
Белок лапой цепи (вариабельный домен) р.1.иг4*ц.взу) белокож ΒΐνΛΠ'ρ8ΡΓ8ϋνΓΡΟΕΡΑ8Ι5€Β8808ΙΧΥ8ΝΟΥΝΕ ТОЩЬКБК^АЕОУСТ^ТУСМОАЪОТРкТРСОСТК УЕ1К
- 44 011449
Таблица 4
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 7.1.2
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная послвдовятяльность подчяршуга)
ДНИ-последоветвльность АТССАС1ТГ6(ЮСТСАССТаОСТТТТССТССТТСС
тяжелейший ТСТТТТААбАСОТСТССАСТСТСАССТССАаСТС СТССАСТСТО6СОСАОСССТСОТССАОССТОСС АССТСССТОА6АСТСТССТСТОСАОССТСТС6АТ ТСАССТТСАОТАССТАТСССАТССАСТСССТССО ССАООСТССАСССААССООСГООАСТССОТОСС АОТТАТАТСАААТОАТООАОАТААТАААТАССАТ ОСАОАСТСССТСТССОССССАГГСАССАТСТССА САСАСААТТССАОСАССАСССТТТАТСТССАААТ СААСАСССТСАОАОСГОАСОАСАС6ССТ6ТАТАТ ТАСТОТОСОАОААОАОССАТССОвТСТАСТСОО А6ССОТ6СС6АТТАСГАСТАСТАСТАСССТТТ6О АСбТСТООСбССААСбСАССАСССТСАССОТСТС СТСА6ССТССАССААССССССАТСССТСТГСССС СТСССССССТССТССАССА0САССТСССА6АССА САОСС(Х:ССТ(ЮОСТСССТС6ТСАА6САСТАСТТ ССССОААССССТСАССОТОТСОТСЮААСТСАабС ССТСТОАССАбСООСОТССАСАССТТСССАОСТО ТССТАСАСТССТСАОСАСТСТАСТСССТСАбСАО СОГСОТОАССетОСССТССАССААСТТССССАСС САСАССТАСАССТССААСОТАбАТСАСААбСССА ССААСАССААССТССАСААОАСАОТТСАОСОСА ААТОТТСТОТССАОТССССАССОТОСССАОСАСС АССТСТбССАССАССОТСАОТСТТССТСТТССССС СААААСССААОСАСАСССТСАТОАТСТСССООАС СССТСА6СТСАССТСС6Т6СТСОТССАС6Т6АСС САССААОАССССОАССТССАСТТСААСТбСТАСС Т66АССОСОТ6СА6СТССАТААТСССААСАСАА АОССАССЮСАОСАССАСТТСААСАОСАСОТТСС 6ТСТ66ТСАСССТССТСАСССТТ6ТССАССАОСА СТбССТбААССОСААбСАОТАСААОТбСААббТ СТССААСААА6СССТСССАССССССАТССА6ААА АССАТСТССААААССАААСОССАССССССАСАА ССАСАССТСТАСАСССТССССССАТСССбССАСС АбАТбАССААОААССАОСТСАСССТСАССТОССТ ОСТСАААОССГГСТАССССАОССАСАТСССССТС САСТОбОАСАОСААТбСССАбССССАОААСААС ТАСААОАССАСАССТСССАТССТСОАСГСССАСС ССТССТТСТГССТСТАСАбСААССТСАСССТСОАС ААСАССАСОТСССАССАОСССААССТСТТСТСАТ ССТСССТСАТССАТ0АС6СТСТССАСААССАСТА САСССАОААОАОССТСТСССТОТСТССОООТААА ТСА
- 45 011449
Балковая последовательность тяжелой цепи ΜΕΡΟΙ^ΤννΕΕνΑΙΙΛΟνΟΟΟνΟΓνΕδΟαθννΟΡθ К8ЕК1^САА5С1Пте8УСМтУУК9АРСКСЬЕРА/А νΚΝϋθΠΝΚΥΗΑΟδνναΚΡΤΏΙΦΝδΚδΤΒΎΙ^ΜΝ ЗЫСАЕОТАУУУСАВКОМ^ЗаЗКаОУУУУУОЬПУ У/С0ОТЛУТУ88А8ТК<ЗР8УЕРЕАРС8К8Т8Е8ТААЕ ОСЕУКВУ1ФЕРУТ78УШ8ОАЬТ8(ТУНТГРАУЬР85 (ΗΎ8Ι^ννΓνΡ88ΝΡσΓ0ΤΥΤΟίνΡΙΚΡ8ΝΚνη КТУЕККССУЕСРРСРАРРУАОР8УЕЬРРРКРК1)ТЬМ ΕΚΤΡΕνΤϋνννΏνδΗΕΟΡΕνρΐ^ΓΥΛΊΧίνΕνΗΝΑ КТКРКЕЕрЕМ8ТГК.УУ8УЬТУУНрОУ712ЧОКЕ¥КС Κν8>Κ6Π’ΑΡΙΕΚΊΊ8ΚΤΚΟ0ΡΚΕΡ0νΥΊΤΡΡ8ΚΕΕΜ ΤΚΝίίνδΕΤΕΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕΑνΕδΝΟίίΡΕΝΝ^ΈΙΤ ТРРМ1Ю81Ю8ГЕЕУ8КЕТУОК8К¥/Р0СПУЕ8С8УМ ΗΕΑΙΉΝΗΥΤΟΚΕΕΞΣδΡΟΚ
дикпоследовательность легкой цепи АТОАО(Х7ГСССТССТСАОСГССТСССССТОСТАА 1ХЗСТСТО(ЮТСТ(ЛШАТССАОТаС<5САТАТГОТ 0АТСАСТСАОТСТССАСТСТСССТ6СССОТСАССС СТС<иСАСЮС(Х}ССТССАТСТССТ<ЗСАСЮТСТАС ТСАСАСССТСТТОТАТАСТААТбОАТАСААСТТТТ ТСОАТТСЮТАССТОСАСтААОССАбСОСАОТСТСС АСАвСТССТСАТСТАТТТССвТТСТААТСвСвССТ ССХ36ОО1 ССы иАСАбОТТСАбТОСЗСАОГййАТС АСОСАСАбАТТТТАСАСТОААААТСАССАОАСТС САСССТОАССАТСТТбСтСОТТТАТТАСТССАТОС ААОСТСТАСАААСТССТСССАССТТСООССААСгО САССААССТбОАААТСАААСОААСТОТСССТСС АССАТСГОТСЛТСАТСТТССССССАТСТСАТСАСС АСТТОАААТСТСОААСТСССТСТОТТбТСТОССТ ССТСААТААСТТСТАТСССАОА6А6СССАААСТА САОТбСААСОТССАТААСОСССТССААТССОСТА АСГСССАСгСАОАОТОТСАСАОАОСАССАСАССА АОСАСАОСАССТАСАСССТСАССАССАСССТОАС ОСТСАССАААССАОАСТАССАОАААСАСАААСТ СТАССССТСССААОТСАСССАТСАО6СССТ6АОС ТСССССаТСАСАААаАОСТТСААСАООООАОАаТ СгГТАО
Белковая последовательность легкой цепи МШ’АОиХЗШ4ЬТЛ^5О88СО1УМТО8РЬ8ЕРУТР σΕΡΑ8ΕΟΙ188(^Π.Υ8ΝαΥΝΡΙΙ)1¥Υ1Χ3ΚΡΟ98Ρρ£ ЬГУЕС51ЧКА8СУРОКР8О5<3£СТОЕТЕК18КУЕАЕОУ ^VΥΥСΜ^Α^(^ΚΤΕΟ^СΊΊСVΕIΚΒ.ΊVΑΑΡ8VΡIΡΡ Ρ5ϋΕρΐΧ8σΓΑ5ννθΕΙ2«ΦΎΡΚΕΑΚνθΤνΚνΏΝΑ 1Х28СЕЫ8СЕ8УТЕ9В8КП8Т¥8Е88ТЬТ15КАВ¥ЕКН КУУАСЕУГНООЬЗЗРУТКЗРЖОЕС
- 46 011449
ДНК-последовггельность зрелого ицшабельноп домена тяжелой цепи САоагосАбстсотбОАОтстбсасаАОбсстб ОТССАСССТСССАССТСССТ6АСАСТСТССТСТО СА6ССТСТСОАТТСАССТТСАСТАССТАТС<ЗСАТ ССАСТбОСТСССССАОССТССАОССААбОСОСТб ОАОТСОСТСЮСАОТТАТАТСАААТСАТССАОАТА АТАААТАССАТССАСАСТССОТСТХЗСбОССОАТТ САССАТСГССАОАОАСААТТССАООАОСАСССТТ ТАТСТССАААТОААСАОССТСАОАОСТОАООАСА СОСтСТ(ЗТАТАТТАСТ6ТОСОА<ЗААОА6ССАТОС<Э СТСТАОТбаСАбСССТОбСОАТТАСТАСТАСТАС ТАССОТТТССАСОТСТОСССтССААбСбАССАССС ТСАСССТСТССТСА
Белковая последователь ность зрелого вариабельного домена тяжелой цепи рУрЬУЕЗОСОУУОРОВЗЬКЬЗСААЗСТТРЗЗУвМН ^УКРАРЖСЬЕ^УАУ18ГГОСО?4К¥НА1)8У’УСК1; ΤΚΙΦΝδΒδΊΈΥΙ^ΜΝδΙΒΑΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΚΟΜΟδ 8Ο8Κ(3βΥΥΥΥΥΟΙ63νΛν00€ΤΓΓντν88
ДНК-последовательность зрелого вариабельного домена легкой цели <1\ТА1ЛОТСАТаАСТСАСТСТССАСТСТСССТССС СОТСАССССТСзСАОАОССбСССТССАТСТССТСС АССТСТАСТСАСАОССТСТТСТАТАСТААТСКЗАТ АСААСТГТТТСОАТТСбТАССТОСАОААСССАОС (ЮАСТСТССАСАССТССТСАТСТАТТГСООТТСТА АТССтСССХТГСССООСТСССТбАСАбСТТСАСТСЮ САСТССАТСАСССАСАОАТТТТАСАСТОААААТС А0САСА6ТССА6ОСТ6АСОАТСТТ0СССТТТАТТ АСТСгСАТОСААССГСТАСАААСТССТССОАССТТ СбСССААООСАССААСОТбОАААТСААА
Белковая последовательность зрелого вариабельного домена попой цели ΏΐνΜΤ08ΡΙ5ΙΛΎΤΡΟΕΡΑ8Ι8ΟΚ88Ρ8Ι^Υ8Ν6ΥΝΓ 1П^Г^КРС<^ШУи38>ЖА8СУГОКР8С8О8О ΤΟΙΤΈΚΙ8ΒνΕΑ№νσνΥΥαΜ9ΑΧρΊΤΚΤΡ60σΓΚ ΥΕΚ
- 47 011449
Таблица 5
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 10.8.3
- 48 011449
госледожггепьностъ тяжелей цепи МКИЕ^7ГИЕЬУААРК\¥У15ОУОЬОЕ8С5РаЬУКР8Е Т1^ЬТСТУ8ОО8188УУ^ВУ1К0РАОКОЬЕУ/10КУУ Τ8(38ΊΝΥΝΡ8Ι^8ΚνΤΜ8νΡΤ5ΚΝΟΚ1Κί88νΤΑΑ ϋΤΑνΥΥ€ΑΜΧ5ίΥΚσΤ6ΜΠνν<ΚΧ3ΤΓντν88Α8 ТКСгР8УЕРЬАРС5К5Т8Е8ТАА1.6СЬУКОУРРЕРУТ У8Х¥№САЬТ8СУНТЕРАУЬ088СтЬУ8Ь88УУТУР88 МЕОТОТГГСМУОНКРЗЖКУОКТУЪМСССУЕСРРС РАРРУАСР8УЕЬЕРРКРКОТЬМ18К.ТРЕУТСУУУТ>У 8ΗΕΠΡΕνθΡ№νΎνΏθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕρΓΝ8ΊΤΚ. νν8νΓΤννΗ0Ο5νΕΝαΚΕΥΚΟΚΛ'8ΝΚ6ΕΡΑΡΕΚΤΙ зктксоркероуутьррзкеемткмрузьтсьукс ΡΎΡ8ΟΙΑνΕ\νΕ8Ν60ΡΕΝΡΓΪΚΊΤΡΡΜ1Ι)8θα8ΡΡΕΥ 8ΚΕΊνηΚ8ΟΓ0(Χ34νΚ08νΜΗΕΑ1ΗΝΗΓΚϊΚ8ί ЗЬЗРОК
ДНК-посяммателымю» легкой цетм АТСАО<КЧСССТССТСАССТССТ(ЮООСТССТСС ТОСТСТ6СТТСССАОСТГССАСАТ6С6АСАТССА САТСАСССАСТСТССАТСТТСССТСТСТОСАТСТС ТАССАСАСАСАСТСАССАТСАСТТСТССаСССАб ТСАСЮСТАТТА(ЭСАСЗСГ(К5ТТА6ССТ<Э(ЗТАТСАО САОАААССАОССАААСССССТАААСТССТСгАТТТ АТТСТСССГСС6<}ТТТ0САААСТ<л€1ССТСССАТС ААООТТСАСССЗССАСТССАТСТОСКтАСАСАТТТС АСТСТСАССАТСАССАСССТОСАОССТСААОАТТ 1ТОСААСТТАСТАТТОТСААСА6АСТОАСАСТТГС схюстсАстггамюа<эсс<з<зАссААе<этоаАСА ТСАААССААСТСТСЮСТОСАССАТСТСТСТТСАТ СТТССССССАТСТОАТСАСгСАСТТСАААТСТССА АСТОССТСТОТТОТОТ(КХ^ОСТСААТААСТТСТА ТСССАСАСАССССАААОТАСАОТССААСХЗТОСА ТААСОСССТССААТССССТААСТСССАОСАСАСТ 6ТСАСАОАСЮАССАСА6САА6САСАССАССТАС АОССТСАбСАбСАСССТСАСССТСАССАААССА ОАСТАССАОАААСАСАААСТСТАСОССТСОеАА СТСАСССАТСАСООССТ6АССТСОССССТСАСАА АСАОСТТСААСАССССАОАОТОТТАС
Белковая последовательность легкой цепи ΜΚΠ>Α0Ε^ϊτ.τ.Ε^ΓΕΡΓτ.ςκΓητηΜΤ0^ςνςΑ<^π ОВУ7ТГСКА8рР1881^1А1¥У(Х2К1Ч5КАРКШУ8А8 6Ь08СУР5КГ8С8С8СТОЕГЬТ158ЬрРЕПГАТ¥УС0 ОТОЗЕРЬТРООСТКУЕЖКТУААРЗУБТЕРРЗПЕОЬК 8(^Α5ννϋ£Ο4ΝΕΥΡΚΕΑΚν0Α¥ΚνθΝΑΕ08σΝ80 ΕδνΊΈΟηδΚϋδΤΥδΙδδΤΓΤΕδΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑϋΕ νΤΗ<2Ο188ΡνΤΚ5ΕΝΚΟΕ0
- 49 011449
ДНК-лоследоеателыюсть зрелого вариабельного домена тяжелой цим СА(ЮТ<ЮАССТ6САССАСТССООСССАСОАСТО СТОААСССТТС6ОАСАСССТ6ТСССТСАССТ6СА СТСТС7ГСТООТООСТССАТСАС5ТАОТТАСТАСТСС АТСТОСАТСССССАОССССССбвСААООСАСТв СААТООАТТСООСОТбТСТАТАССАбТОСОАССА ССААСТАСААССССТСССТСААСАСТСОАСТСАС САТОТСА6ТАСАСАССТССАА6ААССАСПТСТСС СТСААССТСАССТСТСТОАСССССССССАСАССС ССОТОТАТТАСТСТОССАСАСАТССТСТТТАСАС «КЮТАСООТАТСЮАСОТСТббССССААбСОАС САСООТСАСС6ТСТССТСА
Болтовая последовательность зрелого вариабельного домена тяжелой цели 0УЦЬрЕ86РОЬУКР8ЕТ1^ЬТСТУ8СС8188У¥ШХУ1 ΚρΡΑ€ΚαΕΕνα6ΚνΥΤ8α8ΊΝΥΝΡ8ΣΚ8Κ.νΤΜ5νυ Т8КИрК1ЖЪ58УТАА1)ТАУУ¥САШЭОЬУК(3¥<ЗМ Πνν<3ΟΟΤΤντν88
ДНК-последовательность зрелого мриабелыюго домена летюй цели САСАТССАОАТОАСССАСТСТССАТСТТСССТСТ СТССАТСТОТАООАСАСАСАОТСАССАТСАСТТС ТСССССОАСТСАСССТАТТАССАОСТССТТАОСС ТССТАТСАССА0АААССАСССААА6ССССТААА СТССТСАТТТАТТСТбОЦСССОТТТССАААСТОО СКЭТГОССАТСААООТТСАОССОСАСзТООАТСТСОб АСАОАТТТСАСТСТСАССАТСАССАСССТОСАСС СТОААСАТТТТбСААСТТАСТАТТСТСААСАОАС ТСАСАСТТГСССССТСАСТТТССССОСССССАСС ААСОТСОАОАТСААА
Белковая последовательность зрелого вариабельного домена легвой цели П19МГ08Р88У8А8У(ЖкУТГГСКА5р1Т88ЖА¥ГУ ООКРСКАРКЬЫУЗАЗОЕЦЗСУРЗКРЗСЗОБСТОРТ ЬТЕ8ЬрРЕОРАТУУС0(ДО8РРЬТРО6СТКУЕЗК
- 50 011449
Таблица 6
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 15.1.1
- 51 011449
Бешовм последовательность тяжелой ими МКНЬ^^РПХЬУААРКУтЗОУОЬОЕЗОРОЬУКРЗЕ τι^ΕΤίπνδσοδίκδΥΥν’πνικ.οΡΡσκοΕΕ'ννισΥΐΥ Υ8Ο8ΤΝΥΝΡ8ΕΚ8ΚνΤΙ8νθΜ8ΚΝ9Ε8ΕΚΕ8δνΤΑΑ ОТАУУУСАВКС©УСЮМЛТПШРУ/60СТЬУТУ88 А81К6Р8УН>ЬАГС8В5Т8Е8ТАА1Х1СЬУКЦ¥ГРЕРУ ТУ8\\ТЧ8ОАЕТ8СУНТЕРАУЬ088СЬУ8Ь88УУТУР8 8№ОТО1УТСЫУО11КР8ШХУПКТУЕ№ССУЕСРР СРАРРУАОР8УЕЫТРКТКОТЬМ18КТРЕУТСУУУО νδΗΕΌΡΕν0Ι^4νΥνΌσνΈνΉΝΑΚΤΚΡΒΕΕ<2ΓΝ8ΤΕ Κννδλ^ΊννΗςΌν^ΝΟΚΕΥΚαΚνδΝΚΟΕΡΑΡΙΕΚ Т15КГКСОРКЕРОУУТЪРР8ВЕЕМПШРУ8ЬТСЬУК σΕΥΡ8ΌΙΑνΕν)Έ8Ν^ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜΕΌ5ΟΟ8ΓΡΕ Υ8ΚΕΤνθΚ8ΚΨ00ΟΝνΈ8€8νΜΗΕΑΙΗΝΗΥΤρΚ8 ЩЬЗРОК
ДНК-последовательность лептой цепи АТОАСССТСССГ(ЮГСА(КТССТаС<3<ЗСТОСТАА ТССТГСТСССТСГСТООАТССАСТСгСЮСтАТАТТСтТ САТСАСТСАОТСТССАСТСТСССТССССОТСАССС СТ6САОАСССССССТССАТСТССТ6САООТСТАО ТСАСА6ССТССТАСАТАСТААТ0САТАСААСТАТ ТТСОАТТСОТАССТССАОААОССАОСОСАСТСТС САСААСТССТСАТСТАТТТС<ХПТСТААТСС<даСС ТСССССОТСССТОАСАСЮТТСАОТбОСАОТОСАТ САСССАСАОАТТГТАСАСТОААААТСАОСАОАСТ (ХтАСКХИЦАССАТСТТСССИЗТТТАТТАСТССАТО СААССТСТАСАААСТССОТАСАОТТТТССССАСС СОАССААССТВДАОАТСАААССААСТСТСССТС САССАТСТСТСТТСАТСТГССС6ССАТСТОАТОАО САОТТОАААТСТСОААСТОССТСТСТТСТОТСССТ ССТОААТААСТТСТАТСССАбАСАбСССАААаТА САОТСОААССТОСАТААСССССТССААТССССТА АСТСССАСЗОАОАОТСТСАСАОАОСАбОАСАбСА АС6АСА6САССТАСАСССТСАССАССАСССТОАС ССТОАССАААОСАОАСТАСОАСАААСАСАААСТ СТАССССТСССААОТСАСССАТСАСОбССТОАСС ТССССССТСАСАААСАбСТТСААСАСбОСАСАСТ СТТАС
Балковая последовательность пяткой цепи ММ1»А0ЬиЭЕ1Ж5УУ8688ОО1тТ08Р1ЛЕРУТР СЕРА815СЖ88р81ЖЬГ™СУМУЮУ7УЪЦКРО08РОЬ ΠΥΙΧ}8ΝΚΑ8θνΡΌΚΕ8Ο868ΟΤΟΓΊΤΚΙ8ΚνΕΑΕΌν ОТУУСМрА1ХДТ¥8РСйМПКШККТУААР8УНЕР Ρ8ΌΕ0ΙΧ86ΤΑ8ννσΐ2ΕΝΝΕΥΡΒΕΑΚν0·\νΚνθΝΑ Ь08аХ8ЦЕ8УТЕрВ8Ю>8ТУ8Ь58ТЕТЕ8КАОУЕКН КУУАСЕУТН0СЬ88РУТК8РИВСЕС
- 52 011449
ДНК· поам*довага1ьиость зрелого вариабельного домаиа тяжелой цепи САСОТССАССТССАСОАСтГСОСгОСССАССАСТО ОТСААОССТТСССАОАСССТОТСССТСАССТОСА СГОТСТСГООТбОСТССАТСАСААСТТАСТАСТО САССТССАТСССССАОСССССАОССААСССАСТ 6<ЗАОТО6АТТ6<дАТАТАТСТАТТАСА6ТСССАСС АССААСГАСААТСССТСССТСААСАСТССАОТСА ССАТАТСАСТАОАСАТетССААОААССАСТТСТС ССТСААССТСАОТТСТСТСАССбСТОСОСАСАСС (КХЗОТТГАТТАСТбТОСбАСАААСССТОАСТАСС (ЗТССП'ААТТТТААСТАСТТТСАССАОТСССбССА ОССААССХТГСОТСАССОТСТССТСА
Белковая последовательность зрелого вариабельного домена тяжелой цмш 0У01Х)Е8СРСЬУКР8ЕТ1^ЬТС1У8<ЗС81К8У¥УгТ';У ΊΚ0ΡΡΟΚαΕΕνΛΟΥΙΥΥ8Ο5ΊΊτΥΝΡ8ΕΚ5ΚνΤΙδνθ ΜΒΚΝρΚΕΚΕδδνΓΑΑΠΓΑνΥΥΟΑΚΚαϋΥΟσΝΕΝ ΎΐΉοιναοοτΕντνδδ
ДНК-последоввтальиосп зрелого вариабельного домена легкой цепи ОАТАТТСТСАТСАСТСАОТСТССАСТСТСССГССС ССТСАССССТССАОАОСС6СССТССАТСТССТСС АСОТСТАСТЦАСАОССТССТАСАТАСГААТССАТ АСААСТАТТГСОАТТООТАССТССАСААСССАСС ССАОТСТССАСААСТССТСАТСТАТТГССЮТТСГА АТСОС^СТССОССЮТСССТОАСАОСТТСАОТСС СА6ТОС1АТСА6ОСАСАСАТТТТАСАСТСААААТС АОСАОАСТОСАСОСТОАОСАТСТТООСО'ПТАТТ АСТССАТ6СААССТСТАСАААСТСССТАСАСТТТ ТОСССАССССАССААССТСОАОАТСААА
Белковая последовательность зрелого вариабельного домека легкой цени ОГУШ'рЗР^ЬРУТРСВРАЗКСВЗЗрЗШПЪГСГгаУ Εοχ^ΧϊκραρδρριχίγιζϊδΝΒΑδανρπκΡδβδΟδο ΊΌΡΤΕΚΙδΚνΕΑΕϋνΟνΥΥαΜΟΑΕρΤΡΥδΡΟΟΟΤΚ ЬЕПС
- 53 011449
Таблица 7
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 21.4.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчеркнут»)
ДНК-1ю&пвдомтапыпсгь тяжелей цепи АТООАСТСОАССТСЮАСОАТССТСТТСГТООТбО САОСАОССАСАООАОСССАСТСССАСОТССАССТ
6СТ<ЗСАСТСТСС(36СТаА6СТСААОАА6ССТ<30 бСССТСАСТСААССТСТССТССААСССТТСТССА ТАСАССТГСАССОССТАСТАТАТССАСТСООТОС САСАСКЗССССТОСАСААСС6СГГСАОТСОАТСС САТООАТСААСССТОАСАСТССТОССАСАААСТА ТбСАСАСААОТТТСАбСССАСССТСАССАТСАСС АСЮОАСАСОТССАТСА6САСА6ССТАСАТООАОС Т6ААСАС0СТ0АСАТСТ6АССАСАС(ХтСССТ6ТА ТТАСТСТСтССАСАСАТСАСССССТАССАТАТТОТ АСТААТССТСТАТбСТССТАСТТТбАСТАСТССО ОССАОССААСССТОСТСАСССТСТССТСАСССТС САССААОСССССАТСССТСТТСССССТОСССССС ТОСТССАОСАССАССТСССАОАОСАСАССССССС ТОСОСТОССТСОТСААССАСТАСТТСССССААСС СОТСАСССТОТССТООААСТСАООСОСТСТОАСС АОССОСОТОСАСАССТТСССАбСГОТССТАСАОТ ССТСАССАСТСТАСТСССТСАОСАСССТ6СТОАС СОТССССТССАвСААСТТССбСАСССАОАССТАС АССТССААСОТАОАТСАСААОСССАССААСАССА АССТООАСААОАСАСТТ6АССССАААТСТТОТ6Т ССАОТССССАСССТОСССАаСАССАССТСТСССА ОСАССатСАСТСТТССТСГГССССССААААСССА АСОАСАСССТСАТСАТСТСССОбАССССТОАОСТ САССТССОТССТОСТ66АССТОА6ССАСОАА6А ССССОАООТССАОТТСААСТССТАСОТССАСССС ОТОСАСОТССАТААТбССААОАСАААбССАССб ОА6ОА(ЮАСТТСААСА6САССТТСССТОТ6СТСА ОСбТССТСАСССТТОТССАССАОСАСТОССТОАА СОССАА6ОАСТАСАА6ТОСААССТСТССААСАА А6СССТСССАССССССАТСОАОААААССАТСТСС ААААССАААССССАОСССССАОААССАСАООТО ТАСАСССТ0СССССАТССС6ССА6СА0АТ0АССА АбААССАООТСАбССТОАССТСССТОСТСАААбС СТТСТАССССАОС6АСАТСОССОТСОАОТОСОАО АССААТССССАСССОСАСААСААСТАСААСАСС АСАССТСССАТССТО<1АСТСССАСа<лСТССТТСГТ (ХТСТАСАбСААССТСАССОТССАСААОАССАОС ТбОСАСгСАСОССААССТСТТСТСАТОСТСГСТОА ТССАТСАСССТСТ6САСААССАСТАСАС6САСАА САОССТСТСССТСТСТССОООТАААТСА
- 54 011449
Бепяовм МОУ1^КШРЬУАААТ6АН5ОУО£УО8САЕУККРС
посгмдо витальность тяжелой цепи Α8νκν8ΌΚΑ8σΥΤΡΤσϊΥΜΗνΛΤ^ΡΑΡΟ9ΟΙΈν/Μ С?Л14РО8(Ю1К^А9К1^КУ™Т1ШТ818ТАУМЕЕ ΝΜ115ϋΣ)ΤΑνΥΥϋΑΚ]>2ΡΙΧΪΥ0ΊΝαν08ΥΗ>Υν6 0СП,УТУ88А8ТКОР8УРР1АЕЧЗК81ЯЕ8ТАА1ХЗСЬ УКО\ТРЕРУТУ8УМ8САЬТ8СУНТЕРАУЪр88ОЕ¥ 8Ι58ννΊΎΡ88ΝΡ6ΤρΤΥΤΟΓΑΌΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΤν ЕВКССУЕСРРСРАРРУА6Р8УРЪРРРКРК1)ТЕМ18К.Т ΡΕνΤ€νννΒν5ΗΗ>ΡΕν9ΡΝ1¥ΥνϋθνΕνΗΝΑΚΤΚ РКЕЕр™8Тга.УУ8УЬТУУН9ОУЬЙСКЕУКСКУ5 ЦКО1ТАРЕКТ18КТХС9Р1ШР9УУТЕРР8КЕЕМТК N^V8^ТС^VΚ^IΎΡ8^IΑVΕV/Ε8N6^ΡΕNNΥΚΤΊΤ ΡΜΙ^ΞΙΧτδΓΙ^ΥδΚΓΊΎΌΚ^Κ^ΟΟαίΤ^ΟδνΜΗΕ АШННУТ<2К5Ь8Ь8Р<ЗК
ДНК-посмнмапяьносгь 1МЛЮЙ1ИПИ АТОАбОСТСССККЛХ^^^ ТССТСЙССТТСССАСЮТТССАОАТСССАСАТССА САТОАСССАСТСТССАТСТТССбТОТСТОСАТСГС ТАбОАОАСАСАОТСАССАТСАСТТСТСбССССАС ТСАОООТАТТТАСА6СТСИЭТТАОССТССТАТСАС САСАААССА<ХХ5ААА6ССССТААССТССТ6АТСТ АТАСТССАТССАСТГТАСАААОТОСС6ТСССАТС ААОСТТСАОССОСАОТОСАТСТСССАСАОАТТТС АСТСТСАССАТСАОСА6ССТ6СААССТСААОАТТ ТТССААСТТАСТАТТСТСААСАСССТААСАТТТТС ССССГСАСТТТСООССКзАОбСАССААОСТббАСА ТСААЛССААСТОТООСТССАССАТСТСТСТТСАТ СТГСССОССАТСТСАТСАОСАСТТОАААТСТСКЗА АСТ6ССТСТ<ИТОТ0Т(ЮСТ<КТОААТААСТТСТА ТСССАСАСАОбССАААОТАСАСТССААСОТООА ТААСОСССТССААТСОСЮТААСТСССАССАОАбТ СТСАСАСАССАССАСАбСААСОАСАССАССТАС АСССТСАССАбСАСССТСАСбСТСАССАААОСА ОАСТАС6А6АААСАСАААСТСТАСОССТ6СОАА 6ТСАСССАТСА6ОСССТОАОСТССССССТСАСАА АСАОСТТСААСАбОССАОАСТСТТАС
Бшкмая последовательность пегхойцвпм ΜΒΕΡΑ0Ιχστ.τιχχνρρΩ8ΚΡητηΜτοςρς«ϊνςΑί?νο ϋΚνΤΙΤαυ^80ΟΙΥ8λνΐΑλ¥Υ09Κ6>ΟΚΑΡΝΕΙΊΥΤΑ 8ТЩ8аУР8КР808<Э8<7ГОГТЬТ188ЬрРЕОРАТУ¥С 09А№ЕРЬТГ6ССТКУЕ1ККТУААР8УГ1РРР8ОЕрЪ Κ8ΟΤΑ8νν€ΕΙ^ΝΕΎΡΚΕΑΚν9\νκνθΝΑΕ98<3Ν8 9Ε8νΤΕρθ8ΚΌ8ΤΥ8Ι£8ΊΈΊΙ^ΑΌΥΈΚΗΚνΥΑΟ ΕνΤΗ0<3Ε88ΡνΤΚ8ΓΝΒσΕΟ
- 55 011449
ДНК-оосладовательность зрелого вариабельного домене тяжелой цели САОСТОСАбСТССТССАаТСТббСССГОАООТОА АСААСССТСССОССТСАОТСААССТСТССТОСАА СОСТТСТССАТАСАССТГСАСССОСТАСТАТАТО САСТСССТССОАСАСгСССССТбСАСААбСССТТС А6Т6САТ6<}<ЗАТООАТСААСССТОАСАСТО(лТС<3 САСАААСГАТОСАСАОААОТТТСАОСССАССОТС АССАТОАССА6ССАСАСОТССАТСАССАСА6ССТ АСАТбСАСгСТСААСАСССТСАСАТСТСАССАСА (ХЮССетОТАТТАСТСТСССАОАСАТСАОССССТ АбОАТАТТОТАСТААТбСТСГАТОСТССТАСТТТС АСТАСТОСССССАбССААСССТССТСАССОТСТС СТСА
Белковая последовательность зрелого вариабельного до иена тяжелой цепи ОУрЬУОвОАЕУККРСАЯУКУЗСКАЗаУТГТСУУМ НЧГУКрА1ЧЭ0ОЕЕЧ7МО^1ЬРО8С<ЛЪГГАЧК1ХуЖ νΏνΓΠ^ΤδΙδΤΑΥΜΕΙ^ΒΚΒΟΟΤΑνΥΥΌΑΚΟΟΡΕ ОТСТМ<ЭУС8УИ>¥^аООТЬУТУ88
ДНК-последоввтельиость зрелого вариабельного домена легкой цепи САСАТССАОАТСАСССАОТСТССАТСТТСССТСТ СТОСАТСТСТАббАСАСАОАСТСАССАТСАСТТО ТСОССССАОТСАСССТАТТТАСАОСТ6СТТАССС ТООТАТСАОСАСАААССАСССАААОССССТААС СТССТОАТСТАТАСТ6САТССАСТТТАСАААОТСС (тОТСССАТСААОСТТСАОССССАОТСОАТСТОЮС АСАбАТТГСАСГСТСАССАТСАОСАОССТОСААС СТСААОАТТТТОСААСТТАСТАТТСТСААСАССС ТААСАТГТТССС6СТСАСТТТСО<лСССАС<ЭОАСХ7 АА6СТ0САСАТСААА
Балковая последовательность зрелого вариабельного домена легкой цели В1рМТС8Р55У8А5УСПКУТ1ТСЮк80а1¥5УТА'ХУУ (^КРСКАРкШЕ1УТА8ТЬО8СУР8КР868<Э8(7ГОРТ Ета81^РЕОРА1УУС09АЪ11ЕРЬТРС<}<ЗТКУЕ1К
- 56 011449
Таблица 8
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 21.2.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
ДНК тяжелой цепи САСОТбСАбСТССТОСАСТСТСССтССАОСССТО ОТССАОССТООСАОСТСССТСАОАСТСТССТОТа СА6ССТСТССАТТСАССТТСАОТАССТАТСТСАТС САСТОСОТСССССАСССТССАбОСААОСООСТОС АОТО6СТСОСА6ТТАТОТСАТАТОАТСОААОТАО ТАААТАСТАТССАААСТСС6ТСААОСОСС6АТТС АСС.АТСТССАСАСАСААТТССААСААСАСССТСТ АТСТССАААТАААСАОССГОАОАССТОАООАСА СС6СТСТ6ТАТТАСТСТСССАОА6АТ<3(3(ЭСОГАА АССАСТСССТССТССТбАСТАСТбСССССАОСаА АТССТОСТСАСССТСТССТСАС
Белок тяжелой цепи 0УрЬУЕ8ОСОУУрРСК8ЕК15САА5ОРТР88УУМН νΑΠ<ρΑΡ6Κ0ΙΈλννΑνΜ8ΥΟΟ83ΚΥΥΑΝ8νΚ0ΚΓ ΤΕΐωΝ8ΚΝΊΈΥΐΧ>ΙΝ81ΚΑΕΟΤΑνΥΥ€ΑΜ)ΟϋΚΑ уророужзосньутузз
ДНК легкой цепи 0АТАТТ6ТСАТ0АСТСА0ТСТССАСТСТСССТ0СС ССТСАССССТСОАСАОССОСССТССАТСТССТОС АбОТСТАОТСАОАОТОТТСТСТАТАСТААТООАТ асаастатттсоатт<зотасстосаоааоссасо ССАСТСТССАСАОСТССТОАТСТАТТГОООТТСТА АТССССССТССОСООТСССТСАСАОСТТСАаТСО САОТООАТСАООСАСАОАТПТАСАСТОААААТС АОСАОАСТбОАООСТОАаОАТОТГбббСТТТАТТ АСТССАТССААСТГТТАСАААСТССАТТСАСТТТС СССССТСССАССАААСТ6САТАТСАААС
Белок легкой цели ^IVΜΤ^5Ρ^5^ΡVΤΡΟΕΡΑ5IЗСΚ55^3V^Υ8NσΥNΥ ЬО\УУЬрКРОр8РрЬЬ1УЬО8]ЖА8С\гРОВГ868(38С ТОГТЬККИУЕАЕОУбУУУСМрЛЛ^ТРПТСРСТК МОПС
- 57 011449
Таблица 9
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 22.1.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
ДНК тяжелой цепи САСОТОСАССТССТССАСТСТСССОСАСбСОТС СТССАбССТСЮОАббТСССТСАОАСТСТССТСТО САСССТСТОСАТТСАССТТСАСТСССТАТООСАТ ССАСТСОСТССОССАСССТССАООСААОСббСТО САСТСССТСОСАСТТАТАТСАТСТСАТССАССТА АТАААТАСТАТССАОАСТССОТОААООСССОАТТ САССАТСТССАСАОАСААТТССААОААСАСССТО ТАТСТССАААТОААСАОССТОАОАОСТОАСОАСА СОССТСТСТАТТАСТСТАСОАСААСАОбСАСТаС АААСАСТТАСТАССАСТАСТСТСЮТАТ6ОАССТС ТСОСОССААСООАССАСССТСАСССТСТССТСАС
Белок тяжелой цепи РУЦЕУЕ8ОС<Э\УЦРаК5ЕКЕ8САА8СРТЕ8К.УОМН ΤννκρΑΡαΚΟΙΈντνΑνΊδδησΟΝΚΥΥΑϋδνΚΟΚΒΤ ΚΒΟΝδΚΪ^ΥΕρΜΝδΕΚΑΕΟΤΑνΥΥΟΤΚΚΟΤΟΚΤ γγΗΥϋΟΜΒνλναοοττντνδδ
ДНК легкой цепи аАТАТТСТСАТСАСТСАбТСТССАСТСТСССТССС ССТСАССССТСЮАСАОССССССТССАТСТССТСС А6СТСТАСТСАСАСССТССТ0ТАТАСТААТССАТ АТААСТАТТТ6ОАТТО0ТАССТССАОАА6ССА6О ССАСТСТССАСАССТССТСАТСТАТТТССОТТСТА АТСОССССТССССС6ТСССТ6АСАСОТТСА6ТСО САОТССТТСАСССАСТОАТТТТАСАСТСААААТС АССАСА0ТС0А0ССТ0А6САТСТТСС00ТТТАТТ АСТ6САТССААССТСТАСАААСТССТС6ОАСОТТ СССССААСССАССАА6СТССАААТСАААС
Белок легкой цепи ΟΐνΜΤ08ΡΕ8ΕΡνΤΡ(3ΕΡΑ8Ι80Κ.88ζ)8ΕΕΥ8ΝΟΥΝΎ Ι^\νΥΕρΚΡΟ98ΡΗΕΙΊΥΙΌ8ΝΚΑ8ανΡΟΚΓ8Ο563Ο ТОЕТЬК18К.УЕ>СЕОУ<ЗУУУСМЦАЕЦТРК.ТТ'СрОТК УЕПС
- 58 011449
Таблица 10
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 23.5.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
ДНК тяжелой цепи САССТОСАССТООТСОАбТСТСССОСАСОСОТС СТССАСССТСССАООТСССТОА6АСТСТССТОТО ТАбССТСТООАТТСАССТТСАСТААСТАТСССАТ бСАСТСООТССбССАСзОСТССАООСААбОбОСТО ОАОТСОСТСССААТТАТАТСАТАТбАТСОААСТА АТАААТАСТАТССАСАСТСССТСААОСССССАТТ САССАТСТССАОАОАСААТТССААСААСАСОСТО ТАТ0Т6САААТСААСАСССТСАСАССТ0АССАС АССОСТСТОТАТТАСТОТССОАОАСОСООТГАСТ АСССбАбаОАТТАСТАСТССТАСТАСССТТТССА ССТСТООССССААССОАССАСООТСАССОТСТСС ТСАС
Белок тяжелой цепи ^V^^VΕ8ССσVV^ΡσΒ8^Κ^5СVΑ8^ΡΤΡ8NΥ^ΜΗ λ¥νχρΑΡΟΚσΣΕ\ννΑΠ8ΥΒ08ΝΚΥΥΑ08νΚΟΚΕΠ δΚΒΝδΚΝΤΕΥνςΜΝδΕΒΑΕϋΤΑνΤΎΌΑΒΚΟΗΤ'σΚ ΠΥΥ8ΥΥΟΙΌν^(Χ}αΤΤντν88
ДНК легкой цепи ОАТАТТСТ6АТОАСТСАСТСТССАСТСТСССТССС СОТСАССССТСОАСАСССаСССТССАТСТССТОС А6СТСТАСТСАОАСССТССТСССТСОТААТССАТ АСААСТАТТТбОАТТССТАССТОСАСААСССАСО ССАСТСТССАСАССТССТСАТСТАТГГ6С0ТТСТА АТС6СОССТССССОСТСССТСАСАССТТСАСТСО САСТбСАТСАСаСАСАСАТТТТАСАСТОААААТС АССАСАСТССАСбСТСАССАТОТТОбСОТТГАТТ АСТ6САТОСАА6СТСТАСАААСТССТСССАСОТТ С0СССАА6ССАССААССТСЮАААТСАААС
Болок легкой цели ϋΐνΜΤρδΡ18ΣΡνΤΡΟΕΡΑ8Ι8€Κ8898ΕΕΡΟΝΟΥΝΥ £0ΐνΥΕρΚΡ0ρ8Ρς)ΧΙΥΙΧ38ΝΚΑ86νΡϋΚΓ808α80 ТОГГЬКТЗВУЕАЕОУОУУУСМрАЬОТРЯТРСраТК νΕΙΚ
- 59 011449
Таблица 11
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 23.28.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
ДНК тяжелой цепи СА6ОТ6САССТОСАССАСТСССССССАООАСТО 6ТОААСССТТС6САСАСССТСТСССТСАССТОСА СТСТСТСТСОТСССТССАТСАСАОСТТАСТАСТа СА6СТ®ЗАТССО6САССССССТСС(ЗАА6СК1АСТ ССАОТОСАТГОСОТАТАТСТАТТАСАСТССОАОС АССААСТАСААССССТСССТСААОАОТСОАОТСА ССАТАТСАСТАСАСАСОТССААОААССАСТТСТС ССТОААССТСААСТСТОТСАСССтСТССССАСАСО СССОТСТАТТАТТаТСССАСАААОСССССССТСТ АСОСТОАСТАС6ССТ6СТТСОСССССТССОСССА СООААСССТОСТСАСССТСТССТСАС
Белок тяжелой цепи ОУрЬрЕЗОЮЬУКРЗОТЪЗЕТСТУБСаЗЖСУУ^З Ч/ЩЦРРСКС)Ш^1ОУГПг8С81?т0Р8ЕК8К.УТ18У ΒΤδΚΝΟΡδΣΚΕΝδνΤ.ΑΑΟΤΑνΥΥΓΑΚΚΟΟίΥΟΒΥ ΟνΡΑΡνΟΟΟΊΈντνδδ
ДНК легкой цепи 6АААТТСТОТТСАСССАСТСТССАСОСАСССТСТ СТТТОТСТССАССССАААбАСССАСССТСТССТС САСССССАСТСАОАСТОТТАОСАбСАССОАСТТА СССТСССАССАОСА6АААССТОСССАСССТСССА САСТССТСАТСТАТССТССАТССАОСАСССССАС ТСССАТСССАОАСАССТТСА0Т6ССАСТ606ТСТ СОСАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАССАОАСТСС АбССТОААбАТПТССАСТСТАТГАСТСТСАбСА СТОГСОТА<ХЛТАТТСАСТТТС(56СССТОО<5АССА ААОТ6САТАТСАААС
Белок легкой цепи Е1УЬТ08РСТЬ515РОЕКАТЕ8СКА8С5У588ВЬА1¥Н (МККЭ9АРК11ЛУОА88КАТ61РВКР868О8(ЭТВР1Ъ Т18КЬЕРЕОЕАУУУСрНСК81ЛТ6РСТКУВ1К
ДНК тяжелой цепи (вариабельный домен) (2328.1ΗΌ16Ε) (БЕЯ Ю N0:97) САООТССАССТаСАССАСТСаСССССАООАСТа ОТСААСССТТССОАСАСССТОТСССТСАССТССА СТОТСТСТССТСССТССАТСАСАССТТАСТАСТО ОА6СТ6ОАТСССССАОСССССТ6ОСААСЮОАСГ бОАСТСОАТТОООТАТАТСТАТГАСАбТОСОАОС АССААСТАСААССССТСССТСААСАСТСОАСтТСА ССАТАТСАОТАСАСАССТССААСААСОАОТТСТС ССТСААССТСААСТСТОТСАССОСТбСОСАСАСС ОССаТОТАТТАТТОТССаАОАААОбООССССТСТ АСООТОАСТАСООСТС6ТТС6СССССТСОССССА СОСААСССТССТСАССОТСТССТСАС
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
Белок тяжелой цели (вариабельный домен) (23.28.1 ΗΌ16Ε) (5Ε0 Ю N0:98) рУрЬРЕЗбРбЬУКРЗЕТЬЗЬТСТУЗаОЗШОУУАУЗ νΐΚ0ΡΡΟΚΟΕΕ\νΐΟΥΙΥΥ8Ο8ΤΝΥΝΡ8ΕΚ8ΕνΤΙ8ν ΒΤδΚΝρΡδΙΚΙΝδνΤΑΑΒΤΑνΥΥΟΑΚΚΟΟΕΥΟΒΥ С^РАР5УСОеТЬУТУ58
- 60 011449
Таблица 12
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 23.29.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
ДНК тяжелой цепи САССТОСАССТОСТООАСТСТОСбООАООССТС ОТССАОССГСбОАбСТСССТСАОАСТСТССТСТО СА0ССТСТ60АТТСАССТТСАСТАССТАТ0ССАТ ОСАСТССОТСССССАООСТССАОбСААООаССТС САОТСООТОССАОТТАТАТСАТАТОАТбОААОТА АТАААТАСТАТССА0АСТСССТ0ААСС6СССАТТ САССАТСТАСАОАОАСААТТССААСААСАСОСТС ТАТСТОСАААТОААСАОССТОАОАОСТОАООАСА СООСТОТСТАТТАСТСТСССАСАСССССТСАСТА СббОААТААТТАСТАСТССТАТТАСООТТТОСАС ОТСТСОООССААОООАССАССЮТСАСССТСТССТ САО
Белок тяжелой цепи рУСЬУЕЗСКЗОУУрРОКЗЕКЬЗСААЗаГТгеЗУАМН УтОАРСКСГбЕ^АУКУГЮЗИКУУАЦЗУКСКРТ ΓΪΤΦΝ8ΚΝΙΈΎΣ9ΜΝ81ΚΑΕΟΤΑνΥΥϋΑΚΚΟΗΥΟ ΝΤΑΎδΥΎΟΙ^νν/ΟςαΤΊΎΤνδδ
ДНК легкой цепи ОАТАТТОТОАТОАСТСА6ТСТССАСТСТСССТОСС ССТСАССССТССАОАСССОСССТССАТСТССТСС АСОТСТАСТСАОАОССТССТОССТСОТААТСОАТ АСААСТАТТТСОАТТООТАССТОСАСААОССАОв ССАСТСТССАСАССТССТОАТСТАТТТО6ОТТСТА АТСбОСССТССООбСТСССТОАСАССТТСАОТСО САОТСССТСА6ССАСА0АТТТТАСАСТ0ААААТС АОСАСАОТООАСОСТОАССАТаТТССОАТТТАТТ АСТССАТОСААССТСТАСАААСТССТСОСАСОТТ СООССААОООАССААООТОСАААТСАААС
Белок легкой цели ОГ/МТ08РЬ8ЕРУТР(1ЕРА818СК88Ц8ЬЬРСМОУК¥ ^ΨΥΙ^ΚΡΟςδΡρΕΙΙΥΈΟδΝΚΑδΟνΡΟΚΓδΟδσδΟ ТОРШОЗКУЕАЕОУОГУУСМрАЬрТРЯТРбОСНК УЕПС
- 61 011449
Таблица 13
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 24.2.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
ДНК тяжелой цепи СА6СТССАССТССАССАСТС6С6СССА6САСТС ОТОААСССТТС6ОАСАСССТ6ТСССТСАССТОСА СТОТСТСТОСТООСТССАТСАОАбОТТАСТАСТС ОАССТССАТСССССАССССССАССОА^ОбОАСТ ОСАСТССАТТСОСТАТАТСТАТТАСАСТОССАСС АССААСТАСААССССТСССТСААСАСТСОАСТСА ССАТАТСАОТАОАСАСаТССААСААССАСТТСТС ССТОААССТОАОТТСТОТОАССОСТбСОСАСАСО ОСССТСТАТТАСТОТОССАОААСКЗССООСССТСТ АСССТСАСТАССССТСОТТСССССССТСОООССА 66ОААСССТООТСАСС6ТСТССТСА6
Белок тяжелой цепи рУрЬОЕЗОРОЬУКРЗЕТЪЗЬТСТУЗОСЗтаУУТУЗ ΨΙΒρΡΡΟΚΟΣΕνΖΙΟΥΙΥΤΈΟδΤΝΥΝΡδΕΚδΒνΤΚν ОТЗКМрГЗЬКЬЗЗУТААПТАУУУСАЕКОСЬУООУ ОиТАРУ/СЦСТЬУТУЗЗ
ДНК легкой цепи бАААТТОТОТТОАСОСАОТСТССАСССАСССТСТ СТГТ6ТСТССАСООСАААОАСССАСССТСТССТ6 САОббССАСТСАОАОТОТТАОСАОСАССТАСТТА СССТС0ТАССАССАСАААССТС6ССА0ССТСССА 06СТССТСАТСТАТ6СТ6САТССАССА00СССАС ТСССАТСССАОАСАССТТСАОТОССАСТСССТСТ (ЗСОАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСАСТСЮ А6ССТСААСАТТТТ0СА0ТСТАТТАСТ0ТСА6СА 6ТАТАОТА6СГТАТТСАСТТТССССССТ6ООАСС АААСТССАТАТСАААС
Белок легкой цепи Е1УЬТр8РОП^Ц8РаЕКАТЬ8СКАЗрЗУ38Т¥ЪА1Лгу ЦРКРСЦАРКЬЕГТОА88КАТ61РОКЕ8С8С8СТОЕТЕ ΊΊ8ΚΙΕΡΕΟΓΑνΥΥ€ΟρΥ88ΕΕΤΓΟΡΟΤΚνϋΙΚ
- 62 011449
Таблица 14
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 21.2.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчеркнута)
ДНК тяжелой цшм АТСОАСТТТОСССТСАССТОССТТТТССТСОТТСС ТСТТТТАА6АССТСТССА6Т6ТСАССТССА6СТС СТСОАСТСТОбОСОАОбССТООТССАОССТООб АС6ТСССТСА0АСТСТССТ6Т6СА6ССТСТ0САТ ТСАССТТСАОТАССТАТСТСАТОСАСТСОСТССС ССАСССТССАСССААССОССТССАСТОСОТСОС АСТТАТСТСАТАТСАТССгААСТАаТАААТАСТАТ ОСАААСТССаТСААОСбССОАТТСАССАТСТССА САСАСААТТССААСААСАС6СГСТАТСТССАААТ АААСАбССТбАСАССТСАСОАСАССССТСТСТАТ ТАСТСТбСОАСАОАТОСОООТАААОСАОТОССТС СТССТСАСТАСТСОССССАСбОААТССТОСТСАС СбТСТССТСАОССТССАССААССССССАТССаТС ТТСССССТСССбСССТССТССАССАССАССТССС АСА6САСА6С6ССССТССЮСТСССТСКЗТСААОС АСТАСТТССССОААСССЮТбАСССтеТСОТОСАА СТСАОССССТСТСАССАССОССОТбСАСАССГГС ССА6СТ0ТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТ САССАСССТСОТСАСС6Т6СССТССАОСААСТТС СССАСССАОАССТАСАССТССААСОТАСАТСАСА АССССАОСААСАССАА6СТООАСААСАСАОТТС АССССАААТОТТОТСТСОАСТОСССАСССТОССС АССАССАССТСТаОСАССАСССТСАСТСТТССТС ТТССССССААААСССААССАСАСССТСАТОАТСТ СССССАССССТОАССТСАСОТОССТССТОСТбОА ССТСАСССАССААОАССССОАОСТССАОТТСААС ТбаТАССТОСАСООСОТССАСЮТОСАТААТОССА АСАСАААСССАССЮСАССАССА0ТТСААСА6СА ССТТСССТСТОСТСАОССТССТСАСССТТСТССАС САССАСТСбСТСААССССААОСАСТАСААСТСС ААССТСТССААСАААССССТСССАССССССАТСС АОААААССАТСТССААААССАААОСССАОСССС ОАСААССАСАОСТСТАСАСССТССССССАТСССС СОАООАаАТСАССААОААССАООТСАСССТСАС СТСССТаСТСАААСЮСТТСТАССССАСССАСАТС ОССОТСОАОТСОбАСАбСААТСЮбСАСССОСАО ААСААСТАСАА0АССАСАССТСССАТ0СТ6САСТ СССАССССТССТТСТТССТСТАСАССААССТСАСС бТСОАСААСАССАОСТСССАССАССЮСААСаТС ТТСТСАТОСТСС6ТСАТССАТСАООСТСТССАСА АССАСТАСАСССАОААОАСССТСТСССТОТСТСС СгССТАААТОА
- 63 011449
Белок тяжелой цепи ΜΕΕΏΕδλννΈΈνΑΠΤίσνΟΟΟνΟΕνΕδΟΟΟννΟΡΟ ЙШСЬ8САА8аГ1К8УУМН¥т10АР(ЖОЬЕ^УА νΜ5ΥΟΟ88ΚΥΥΑΝ8νΚ0ΚΓΠ81ΦΝ8ΚΝΓΕΥΙΧ3ΙΝβ 1ЖАЕ0ТАУУУСАМХЗ<ЖА¥РОРО¥Т¥00О1ЬУТУ8 &А8ТКОР8¥ЕРЬАРС8К8Т8ЕвТААЬССЬ¥КОУЕРЕР νΊΎ8ΨΝ8<^ΓΤ8σνΗΙΈΡΑνΕς^8ΟΕΥ8Ε88νντνΡ δδΝΡσΓΟΊΎΤατνΟΗΚΡδΝΤΚνϋΚΤνΕΚΚΟϋνΕΟΡ ΡϋΡΑΡΡνΑΟΡδνΐ^ΕΡΡΚΡΚΟΊΙΊνΠδΚΤΡΕνΤΓΎννΟ νδΗΕΟΡΕνρΡΝνΥνίΧϊνΕνΗΝΑΚΤΚΜΙΕΕΟίίΝδΤΕ ΒννδνΕΊΎνΗρϋλνίΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚαΕΡΑΡΕΚ τΕΚΤκαρΗΦΡςνγτΕΡΡδΚΕΕΝπκΝςνδκτα-νκ аГУР8О1АУЕУ/Б8КС9РЕЪП>ГУКТГРРМ11)81Ю8РГЬ Υ8ΚΕΤ\^Κ^ν/00ΟΝνΡ8€8νΜΗΕΑ1ΉΝΗΥΤρΚ8 ЕЗЬЗРОК
ДНК легкой цели АТСАСХКЛГССТОТСАбСТССТСМКЮСТОСТАА ТССТСТОСОТСТСТСтСАТССАбТССООАТАТТОТ ОАТОАСТСАСтТСТССАСТСТСССТОССССТСАССС СТСОАОАСССССССТССАТСТССТОСАССЗТСТАС ТСАОАСТСТТСТОТАТАСТААТССАТАСААСТАТ ТТСОАТТССТАССТОСАСААбССАССССАСТСТС САСАССТССТСАТСТАТТТСЗС6ТТСТААТСССОСС Α А Г5ЛТТЛ А ι'νΓΓ’ΛΓ’ А ПТЛЛ А Т Л Ч^Ч^ЛЛЧЛЧЛЧЛ Д Ч>Ч*Ч> л чм^^пълчл Л Л νΛΜ л члντ—лчл Л члчлп. Л СА6ОСАСА6АГПТАСАСТСААААТСА6САСАОТ <К1А(ЮСТС^СЮАТОТТО(ЗООПТАТТАСТОСАТ<5 СААСУГТТЛ'АСАААСТССАТТСАСТТТССОСССТСС ОАССАААОТССАТАТСАААССААСТСТСОСТбСА ССАТСТСТСТТСАТСТТСССОССАТСТСАТСАОСА (ЛТОАААТСТООААСТОССТСТОТТСТОТОССГОС ТСААТААСТТСТАТСССАОАОАООССААА6ТАСА ОТСОААССЛХКтАТААСбСССТССААТСаССТААС ТСССАООАОАОТСТСАСАОАОСАСтСАСАОСААО САСА0САССТАСАСССГСА6САССАСССТСАССС ТОАССАААССАСАСТАСОАСАААСАСАААОТСТ АССССТ(КСААОТСАСССАТСАО<3<ЗССТОАССТС ОССССТСАСАААОАОСТТСААСАСОСКЗА6А6ТО ΊΤΑΟ
Белок легкой цепи МЮ^АОШЗЬ1^¥ГУ8О88СЮ1УМТО8РЬ8ЬРУТР <ЖА8КСК8808УЬУбМО¥>т1)5тлЭКР(308РрЬ и1ШЭ8М1А8<ЗУРОКР8С8О8<7ГОЕТШ8КУЕАЕПУ ΟνΥΥΟΜΟνί^ΊΤΕΠ^ΟΡσΤΚνηΐΚΚΤνΑΑΡδνΡΙΕΡ Ρ8^Ε^^Κ8ОТΑ8VVСШ4NΡΥΡΚΕΑΚV^^¥ΚV^NΑ Ι^8ΟΝ8ΟΕ8νΊΈρϋ8ΚΒ8ΊΎ8Ε88ΤΕΊΊ^ΚΑϋΥΕΚΗ КУУАСЕМГН0СЕ88РУТК8ЕМКСЕС
- 64 011449
Таблица 15
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 22.1.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчеркнута)
ДНК тяжелой цепи АТССтАСТТТООССТСАССТСССТТТТССТССТТСС ТСГПТААСАбОТОТССАОТОТСАаОТОСААСТО СТССАСТСТЗОСССАСССОТ6ОТССА6ССТСОС АбОТСССТСАОАСТСТССТОТССАСССТСТССАТ ТСАССТТСА0ТСССТАТС6САТССАСТ000ТСС0 ССАСССТССА6ССААСС60СТ60АСТСССТССС АСТТАТАТСАТСТОАТССАССТААТАААТАСТАТ ОСАОАСТСССТОААСОССССАТТСАССАТСТССА САСАСААТГССААСААСАСОСТСТАТСТаСАААТ СААСАОССТСАСАОСТОАССАСАССССТСТСТАТ ТАСТ6ТАССАСААОАСССАСТСОАААСАСТТАСТ АССАСТАСТОТССТАТССАССТСТССОСССААОС САССАСССТСАСССТСТССТСАСССТССАССААС С0СССАТСС0ТСТТСССССТ6ССССССТССТССА ССАССАССТССОАОАОСАСАССбОСССТОСССТ ОССТСвТСААООАСТАСТГССССОААСССетОАС ССТОТСОТОСААСТСАОССССТСТСАССАССССС СТ6САСАССТТСССАССТ0ТССТАСА0ТССТСА0 ОАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТбОТСАССОТССС СТССА6СААСТТСО6САСССАОАССТАСАССТ6С ААССТАОАТСАСААОСССАОСААСАССААООТО ОАСААОАСАОТТОАОСОСАААТОТТСТОТСеАОТ ОСССАССОТССССАССАССАССТОТСССАОСАСС СТСА0ТСТТССТСТТССССССААААСССАА60АС АСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАСОТСАССТ ССОТСОТССТССАССТСАСССАСОААОАССССО АОСТССАОТТСААСТС6ТАССТ(ЗОАСС6СОТ(КтА ООТССАТААТОССААОАСАААОССАССОСАООА ССАСТТСААСА6САСОТТССОТСТОСТСАСССТС СТСАССаТТСТССАССАССАСТСССТСААССОСА АССАСТАСААСТССААС6ТСТССААСАААСССС ТСССАССССССАТССАОААААССАТСТССААААС САААССОСАСССССОАСААССАСАСОТСТАСАС ССТОСССССАТССССббАСОАСАТОАССААОААС САОСТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССГТСТ АССССАСССАСАТСССССТСЮАбТСССАСтАОСА АТ0СССАСССССАСААСААСТАСАА6АССАСАС СТСССАТОСТССАСГССОАСООСТССТТСТТССТС ТАСАССАА6СТСАССОТООАСААОАОСАООТСЮ САССАССССААССТСТТСТСАТОСТСССТСАТСС АТ6АС6СТСТ0САСААССАСТАСАС6СА6АА6А СССТСТСССТСТСТССССОТАААТОА
- 65 011449
ЬДЕГСЬ81УУКЬУАЬТ^СУОСОУОЬУЕ8СаСУУОРа ^ии^СААЗСРттгекусмжуукрАРСкаькйп/А ΥΙ88Γ>ΟΟ>®ΎΥΑΙ}8νΚΓ®Ι<Π81ΦΝ8ΚΝΤΕΥΐΧ>ΜΝ зцехептаууусжвотсжлуунуссмпу^сос ТТ^88А5ТКСР8УГРЕАРС8К8Т8Е8ТААЕССЬУК СУРРЕРУ1У8У7К8ОАЕТ8ОУНТГРАУ1^88СЕУ8Ь8 8ννΊνΡ88№6Τ<ΚΥΤΟΝνθΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΤνΕΚΚ ССУЕСРРСРАРРУА6Р8УЕЕЕ₽РКРКОТГМ[8КТРЕУ ТСУУУВУ8НЕПРЕУрБКЧтаХ5УЕУНЫАК1КРКЕ ΕρΓΝ8ΤΡΚνν8νΕΤννΗρθΧνΕΝ6ΚΕΥΚσκν8ΝΚσ Ι^ΑΡΙΕΚΊΊδΚΤΚθρΡΚΕΡρνΥΤΕΡΡδΚΕΕΜΤΚΝφνδ ΕΤΟΕνΚΰΤΎΡ8ΠΙΑνΕ\¥Ε8Ν<3<2ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜΕΟ 8ОС8ГРЕУ8КЕ1УОК5К5У00СКУР8С8УМНЕАЬНК НУГОКБЕЗЬЗРСЖ
АТОАООСТСССПЮТСА(Х^С(ЖКХККЛ?ССТАА ТСтСТСТСОСТСТСТССАТССАСТСОССАТАТТОТ САТОАСТСАСТСТССАСТСТСССТСССССТСАССС СТ6САОАСССС6ССГССАТСГССТ6СА6СТСТАС ТСАСАСССТССТОТАТАСТААТОСАТАТААСТАТ ТТ6САТТ0СТАССТ6САСАА6ССА6С6САСТСТС САСАССТССТОАТСТАТТТСООТТСТААТСбСССС ТССОСОСТСССТСАСАОСТТСАСТСССАСТССТГ САООСАСТСАТГТТАСАСТбААААТСАСЗСАОАвТ СЗОА<КХЛПА(ЮАТаПС(ККГтАТГАСТССАТО СААССТСТАСАААСТССТСССАССТТСССССААС ССАССААССТСОАААТСАААСвААСТбТСОСТС САССАТСТСТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАС САОПХЗАААТСТ<ЮААСТ<ЮСТСТОТГОТСТСССТ ОСТСААТААСТТСТАТСССАСАСАССССАААСТА САбТбОААООТОСАТААСССССТССААТСООСТА АСТСССАООАСАСТСТСАСАОАССАООАСАССА АОСАСАССАССТАСАбССТСАОСАОСАССУГСАС ССТСАОСАААОСАОАСТАССАСАААСАСАААОТ СТАССССТСССААСТСАСССАТСАССОССТСАОС ТССЮССбТСАСАААОАбСТТСААСАООСОАбАСТ СТТА6
Балок папой цепи
СЕРА818СК880ЯХ¥8ЫСУЫУЕ01^УЬрКРОр8РНЬ
Ь1¥ЬС8кЛи8ОУРО1и?8С8С8(7ГОЕГЬК18ВУЕАЕОУ 6νΥΥσΜςΑ1>0ΤΡΒ.ΤΡ60ΟΤΚνΕΙΚΚΤνΑΑΡ8νΡΙΓΡ Ρ8ΟΕ9Ι^«ΟΤΑ8ννσΕΕΝ>«ΎΡΙ^ΑΚν9’ννΚνϋΝΑ Ε08ΟΝ8ρΕ8νΊΈρΒ8ΚΟ8ΤΥ8Ι88ΤΕΤΕ8ΚΑΟΥΕΚΗ КУУАСЕУТНрС153РУТК5ЕМКСЕС
- 66 011449
Таблица 16
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 23.5.1
ОПИСАНИЕ
ДНК тяжелой цепи
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчеркнута)
АТ<ЮАОтС<ЮСТСА(Х:ТС(ЮТГТТССТССгТТОС ТСТТТТААОАООТСТССАОТСТСАОСТ6САОСТ6 СТбСАСТСТСССССАСОССТССТССАСССТССС АССТСССТСАСАСТСТССТаТСТАСССТСТССАТТ САССТТСАОТААСТАТСССАТССАСТОСОТСССС САООСТССАОССААСОСССТССАСТСбСТСОСА АТТАТАТСАТАТСАТССААСТААТАААТАСТАТС САОАСТСССТСААОССССОАТТСАССАТСТССАО АбАСААТГССААСААСАСССТОТАТСТОСАААТО ААСАОССТСА6АССТСА6САСАССОСТОТСТАТТ АСТСТСССАСАСССССТСАСТАСОСОАССЮАТТА СТАСТССТАСТАСССТТТССАССТСТСООСССАА 0ССАССАС06ТСАСС6ТСТССТСАСССТССАССА АСОССССАТССКЗТСТТСССССТбОСОСССТССТС СА6СА6САССТСССАСАССАСАСССССССТССС СТОССТСОТСААОСАСТАСТТССССОААССОСТС АССОТОТСОТбОААСТСАСССОСТСТОАССАбСа СС6ТССАСАССТТСССАОСТ6ТССТАСАСТССТС АССАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТССТСАСССТС СССТССАОСААСТТС66САСССАОАССТАСАССТ 6СААССТАСАТСАСАА0СССАССААСАССАА6С ТСЮАСААОАСАОТТОАОСССАААТСТГОТСТССА СТССССАСССТССССАССАССАССТСТСССАССА СС6ТСАСТСТТССТСТТССССССААААСССААСС АСАСССТСАТ6АТСТСССС0АССССТСА66ТСАС ОТ6СОТ6СТС6ТСОАССТСА6ССАССААОАСССС бАСбТССАСТТСААСТОСТАСбТОСАСОССОТОа АбОТОСАТААТОССААСАСАААОССАСООСАСО АОСАСТТСААСАССАССТТСССТСТОСТСАСССТ ССТСАСССТТСТССАССАСОАСТСССТСААСССС ааооаотасааотосаасотстссаасаааосю СТСССАССССССАТССАОААААССАТСТССАААА ССАААСОССАСССССОАСААССАСАССТСТАСА СССТССССССАТСССССЮАССАОАТСАССААСтАА ССАОСТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССТТС ТАССССАСССАСАТСССССТСОАСТСССАСАСС ААТОСОСА6СС6САОААСААСТАСААОАССАСА ССТСССАТ0СТССАСТСС6АС0ССТССТТСТГССТ СТАСАОСААССТСАССОТООАСААОАССАСОТО ОСАССАОССОААСОТСТТСТСАТОСТССеТОАТО САТСАОССТСТССАСААССАСТАСАСССАСААСА 6ССТСТСССТСТСТСС00СТАААТСА
- 67 011449
Бело* тяжелой цели ΜΤΤΓτΒ8ψνΤΤνΑΙ5.ΚΩν0ϋ0ν0ΕνΚ80Ωηνν0Ρ0 Κ81ίυ^ϋνΑ5ΟΡΊΤΉΝΥΟΜΗνΑΤ<ΩΑΡ(3ΚΟΕΕλννΑ ПЗЛГОСЗККУУАОЗУКОКРТТЗКОНЗКИТЕУУЦКПЧЗ 1Л^^ЕОТАУУУСАШС(ЖУ61ШУУ8¥¥(НГОУ^СОС ТТУгГУ88А8ТК.(аР8УГРЕАРС8К8Т8Е8ТААЕСгСЕУК ΟΥΡΡΕΡντν8νΝ8ΟΑΕΤ8(ϊνΐΓΓΕΡΑνΐΧ288ΟΕΥ8Ι^ 8УУТУР88№ОТ0ТУТСБГТОЖР81МГКУОКТУЕКК ССУЕСРРСРАРРУАСР8УГЕРРРКРКПТЕМ18КТРЕУ ТСУУУОУ8НШ>РЕУрЖ^тТ>ОУЕУНЫАКТКРКЕ ЕРГО811^УУ8УЬТУУНРО^ГШ(ЖЕ¥КСКУ8ЫК<3 π»ΑΡΙΕΚΊΊ8ΚΤΚ®}ΡΚΚ42νΥΊΙίΡ8ΚΕΕΜΊΊΚΝ<>ν8 ΕΤ(ΧνΚΟ1ΎΡ8ΟΙΑνΕνΈ8Ν(Χ?ΡΕΓΠ4ΥΚΤΤΡΡΜΕΟ 81Х381ТЬУ8КЬ1ЛГОК8К1¥ОО(ЗЫУР8С8УМНЕА1ЛН ΗΥΤΟΚ5Ι5Ι5ΡΟΚ
ДНК легкой цели Ατο^οίκ^οσστίκ^ΓΑίκπ^αοτίΚΚϊαΌτοϋΤΑΑ тссгстооотстстссатссаотссосгАТаттст ОАТСАСТСАОТСТССАСТСТСССТОССССТСАССС СТССАСАСССССССТССАТСТССТОСАСОТСТАС ТСАОАОССГССТбССТССТААТООАТАСААСТАТ ТТССАТТООТАССТССАСААСССАСОССАСТСТС САСА6СТССТСАТСТА1ТТС<КПТСТААТССС<ЗСС τνν·ν2ΛΓ2Λ*ΓΓν^ζ»ΓΛ а г* а лп'ггл’ л л галтп д *г л ι ννν л. υζινηυυ д д ииили л и\бЛ1 САбССАСАОАТТТТАСАСТСААААТСАССАОАСТ СКЗА(ХЭСТОА(ЭОАТ(ИТО(3<ЗСТТТАТТАСТ6САТ<} СААОСТСТАСАААСТССТС€ЮАСОТТС<ЗСЗССААС ООАССААССТОСАААТСАААССААСТСТОССТС САССАТСТСТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАС САОТТСАААТСТССААСП'ОССТЗТСТТСТСТСССТ ОСТОААТААСТТСТАТСССАСАОАССССАААСТА САОТООААСОТССАТААСССССТССААТХЗСгОСТА АСТСССА<ЮАОАОТОТСАСАСА6СА6САСА(ЗСА АОйАСАССАССТАСАСССТСАОСАбСАССУТОАС ОСТОАССАААССАОАСТАССАОАААСАСАААОТ СТАССССТОСО/^СТСАСССАТСАСССССТСАСС ТСССССОТСАСАААОАОСТТСААСАССООАСАСТ СТТАА
Белок легкой цели М1иРАОШИ,ЬМЕ^У8С88<Ю1УМТО8Р1^и*УТР ОЫ’А818СК8898Ш’ОН(УУКШ>^т<ЭКР(Э<28Р0Ь ΙΤΥΕ08ΝΚΑ86νΡΟΚΡ868σ86ΤϋΡΤΕΚΙ8ΚνΕΑΕθν СУУУСМЦА1^ТТКТР(ЗОСТКУЕ1КК.ТУААР5УГ1ВР Ρ8ΟΕ0ΕΚ8σΓΑΧννθΙ124ΝητΚΕΑΚν(2’νΚνϋΝΑ ΙΧ^ΟΝ^Ε8νΤΕ0Ο8Κη8ΤΥ8158ΤΕΊΙ25ΚΑΒΥΕΚΗ КУУАСЕУТНОСЕЗетУТКЗРМКСЕС
- 68 011449
Таблица 17
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 23.28.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчеркнута)
ДНК тяжелой цепи АТОАААСАТСТОТООТТСТТССТТСТССТССТССС АССТСССАОАТСООТССТСЗТСССАОСТОСАбСТО САеСАОТСООССССАСОАСТбОТСААОССТТССС АОАСССТСТСССТСАССТССАСТСТСТСТОСТССС ТССАТСАОАС6ТТАСТАСТООА6СТООАТСС6(ЗС АССССССТС0СААСССАСТ6САСТО6АТТ6С6Т АТАТСТАТТАСАОТООСАССАССААСТАСААССС СТСССТСАА6А6ТССАСТСАССАТАТСА6ТАСАС АССТССААСААССАОТТСТСССТСтААССТСААСТ СТСТСАССССТССеОАСАСООССОТОТАТТАТТО ТССОАОАААСООООСлССТСТАСООТСАСТАССО СТбОТТСССССССТОСССССАСССААСССТССТС АСССТСТССТСА0ССТССАССАА6СОСССАТС6О ТСТТСССССТОССОСССТОСТССАСОАССАССТСС СА6АССАСАСС0ССССТС0ССТСССТ0СТСАА0 ОАСТАСТТССССОААСССОТОАССОТОТССТООА АСТСАСОСССТСТСАССАСССтОСОТССАСАССТТ СССАССТОТССТАСАОТССТСАСОАСТСТАСТССС ТСАбСАОСОТвОТСАСССТССССТССАОСААСТТ ССОСАСССАОАССТАСАССТОСААСОТАОАТСАС ААОСССАОСААСАССААООТООАСААСАСАОТТ САССОСАААТСТТСТОТСОАОТССССАССОТбСС САССАССАССТ6Т0ССАССАСССТСАСТСТТССТ СТТССССССААААСССААССАСАСССТСАТОАТС ТССССОАССССТОАООТСАСОТбСОТООТООТОО АС6ТОАСССАССААОАССССОАООТССАОТТСАА СТ6ОТАСОТООАСССССТСЮА66ТССАТААТССС ААбАСАААОССАССССАООАОСАСТТСААСАСС АССТТСССТСТССТСАбСОТССТСАСССТТСТСС АССА6САСТ6ССТСААС6ССАА0СА0ТАСАА0Т ОСААОСТСТССААСАААСОССТСССАССССССАТ ССАСААААССАТСТССААААССААА6СССА0СС СС0АСААССАСА6СТСТАСАСССТ0СССССАТСС ССОСАбСАбАТОАССААСААССАСтаТСАОССТа АССТОССТСОТСАААСОСТТСТАССССАСССАСА ТСОСССТСбАОТООСАОАССААТССССАОСССО АСААСААСТАСААСАССАСАССТСССАТОСТвОА СТСССАСбОСТССТТСТТССТСТАСАССААОСГСА СССТСОАСААОАОСАОСТООСАОСАОбООААСС ТСТТСТСАТ6СТСССТСАТ0САТСАСССТСТ6САС ААССАСТАСАСССАСтААОАСССТСТСССТСТСТС СССОТАААТ6А
- 69 011449
Балме тяжелой цели МКНЬ\\ШЕЕ17.УААРКУЛТ50УОЬОЕ8СР6ЬУКР8Е ТЕ8ЕТСТУ8СС8ЖСУ¥Ш«аР.рРР(ЗКСЕЕТ¥1О¥1¥ Υ808ΊΝΥΝΡ8ΕΚ8ΚνΤΕνθΤ8ΚΝ9Γ8ΕΚΕΝ8νΤΑΑ ОТАУУУСАККСИЗЕУСОУО^РАР^ООСТЕУТУЗЗ А5ТКСР8УГРЕАРСЗК5Т8ЕЗТААЕССЕУКОУРРЕРУ ТУ£П¥Ы8САЬТ8аУт7ФА¥Ь088СЬ¥8Е88УУТУР8 8№(ЛО1¥Т(^т)НКР8»ПХУОК1ДШККССУЕСРР 0>АРРУА(лР8УЕ11ФРКРКОТ1ЛП8КТРЕУТСУ¥УО ν8Η№ΡΕνζΕί^ΛΙΎνθ(3νΕνΗΝΑΚΤΚ1ιΚΚ^ΕΝ8ΤΡ Βνν8νΕΤ\νΗ0ΟΧνΕΝΟΚΕΥΚ(Χν8ΝΚΟΕΡΑΡΙΕΚ ΊΊ8ΚΤΚ(Κ2ΡΜΡ0νΥΤΙ^Ρ8Ι^ΕΜΤΚΝ0ν8ΕΤσΕνΚ ΟΡΥΡ8ΠΙΑνΕνΕ8ΝσρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜΕΟ8Ο08ΕΡΕ Υ8ΚΕΊΎΟΚ5Κν0<χϊΝνΡ8€8νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ0Κ8 БЗЕЗРОК
ДНК лептой цепи АТ(ЮАААССССАОС(ЮА(ХЛТСТСТТССТССГОСТ АСТСТСССГСССАСААТССАССбСАбАААТТОТО 1Т6АСОСА6ТСТССАСОСАСССТОТСТТТ6ТСТСС АООСОАААОАОССАСССТСТССТОСАбССССАбТ САбАСТСТТАССАОСАОССАСТТАСССГОССАСС АССАСАААССТбСССАСССТСССАСАСТССТСАТ СТАТОСТОСАТССАбСАбОСССАСТСОСАТСССА ОАСАСОТТСАСТбССАОТОООТСТССОАСАОАСТ ТСАСТСТСАССАТСАССАОАСТССАСССТОААОА ТТТТССАОТОТАТТАСТОТСАОСАСТСТССТАбСТ ТАТГСАСПТССССССТООСгАССАААбТООАТАТ САААСОААСТСТСКлСТССАССАТСТОТСТТСАТС ТТССССССАТСТОАТОАССАОТТСАААТСТСЮАА СТОССТСТСТТСТСТСССТССТСААТААСТТСТАТ СССАОАСАббССАААСТАСАбТООААССТСОАТ ААС6СССТССААТС6ССТААСТСССАССАСАОТО ТСАСАОА6САСЮАСАССААССАСА6САССТАСА ОССТСА6САОСАСССТОАСССТОА6СААА6САО АСТАССАСАААСАСАААСТСТАСОССТСССтААСТ САСССАТСАОССССТСАССТСОСССаТСАСАААС АССТТСААСАССССАбАОТСТТАС
Белок легкой цели МЕТРАОЕШ.Т.и^.РРВГГтРПП.ТПЯРСГГТЛТЛРГтЕ КАТЕ8СВА808У888ПЕА\УН0ЦКРС0АРКЕЕ1УСА ЗЗКАТОГРОКГЗСЗСЗСТОРТЕТККЕЕРЕОРАУУУС рНСКЗЕРТРОРОТКУО1ККТУААР8УР1РРР50Е0ЕК 86ΤΑ8νΎ0ΕΕΝΝΙΎΡΙ<ΕΑΚνρνκνΌΝΑΕζ>86Ν8ζ) Ε8νΤΕ0Ό5ΚΒ8ΤΥ8Ε88ΤΕΤΕ8ΚΑΌΥΈΚΗΚνΥΑ0Ε ¥ТН0ОЕ88РУ1К8ЕЫВ.(ЭЕС
- 70 011449
Таблица 18
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 23.29.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигналим последовательность подчеркнута)
ДНК тяжелой цели АТПСАСТТТ(тС(ХТОАОСТСССТТТТССТСОТТОС ТСтТААОАОСТОТССАОТеТСАОСТОСААСТО 6ТС<ЭАСТСТОСабСАССС6ТОСТССАС€СТаОС АСОТСССТСАбАСТСТССТОТССАСССТСТСОАТ ТСАССТГСАСТАОСТАТСССАТОСАСТО6СТССС ССАСККДССАбССААСКХЮСТОСАбТОООТОаС АОГГАТАТСАТАТОАТООААОТААТАААТАСТАТ (ЗСАОАСТСССТСААСССЗСССАТТСАССАТСТАСА ОАОАСААТТССААОААСАСОСТСТАТСТОСАААТ ОААСАОССТОАСАССТОАеСАСАССОСГОТСТАТ ТАСТСТСССАСАС6С6СТСАСТАСС6СААТААТТ АСТАСТССТАТТАСОСТГТООАССТСТСабОССА АСОСАССАСаСТСАССОТСТССТСАСССТССАСС АА666СССАТСООТСТТСССССТОССОСССТОСТ ССАСОАССАСХТССОАОАССАСАОССССССТОС СК^ОССТбОТСААСаАСТАСТТССССОАЛССССТ ОАСОСТвТССТССААСТСАСССОСТСТОАССАОС ОССОТ6САСАССТТСССАССТОТССТАСАСТССТ САССАСТСТАСТСССТСАОСАОСОТССТСАССОТ ССССТГСАССААСТТССОСАСССАОАССГАСАСС ТССААССТАОАТСАСААССССАОСААСАССААО ОТСбАСААОАСАСТТОАССССАААТОТТОТОТСС АОТССССАССОТССССАОСАССАССТСТООСАСО АССОТСАОТСТТССТСТТССОСССААААСССААС ОАСАСССТСАТСАТСТСССОСАССССТ6А6СТСА СОТОССТСЮТСОТСОАСОТаАСССАСаААаАССС СОАбОТССАСТТСААСТССТАССТССАССбССТС ОАСЗСТбСАТААТОССААОАСАААОССАСОСОАО ОАОСАСТТСААСАОСАСОТТССОТОТОСТСАССС ТССТСАСССТТОТССАССА6САСТ66СТОААСС6 СААССАОТАСААОТ6СААООТСТССААСАААОО ССТСССА6СССССАТС0А6ААААССАТСТССААА АССАААООССАССССССАОААССАСАСОТОТАС АСССТ0СССССАТССС6ССА66А0АТ0АССАА0А АССАСОТСАСССТбАССТСССТССТСАААСССТТ СТАССССА6ССАСАТССССОТ6САСТССОАОАОС ААТ66ОСАОСС6САСААСААСТАСААОАССАСА ССТСССАТ6СТО6АСТСССАССОСТССТТСТТССТ СТАСАССААОСТСАСССТбОАСААСАССАСОТС ОСАОСАОСССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТС САТОАСОСТСТОСАСААССАСТАСАСОСАСААСА СССТСТСССТОТСТСССЮСТАААТОА
- 71 011449
Балок тяжелой цепи МЕРСЕБУУБЪУАЬТ.кСУОСОУОЬУЕБОаОУУОРа К5ЫаБСАА8ОРт8¥АМ№УУВ.рАР(ЖСЕЕ^УА νΐ8ΥΌ08ΝΚΥΥΑϋ8νΚΟΚΓΓΙΥΚΟΝ8ΚΝΤΕΥΙΧ2ΜΝ δΕΚΑΕΟΤΑνΥΥΌΑΒΚΟΗΥΟΝΝΥΥδΥΥΟΕΒνΛνίΚ) СТТУТУ88А8ТКОРЗУБРЬАРС8К8Т8Е8ТААЬ(ЭСЬУ КРУГРЕРУТУЗУКЗСАЕТЗСУНТЕРАУЪРЗЗОЕУБЬ 88νντνΡ88№<ΠΧ2ΤΥΤ€ΝνΒΗΚΡ8ΝΤΚ\Ί)ΚΤνΕΗ КССУЕСТРСРАРРУАОРЗУЕиЕРРКРКВТЬМГЖТРЕ νΤΟνννΒνΞΗΕϋΡΕνρΡΝνΖΥνίΧίνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚ. ΕΕρΓΝδΊΉίννδνΕΤννΗρΒλνΐ^αΚΕΥΚϋΚνδΝΚ ΟΕΡΑΡΙΕΚΤΙ8ΚΤΚα<5ΡΚΕΡ0νΥΤΕΡΡ8ΚΕΕΜΤΚΝΡ νδΕΤϋΕλΖΚαΐΎΡδΟΙΑνΕΨΕδΝσρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜ иЭ8ОО8Р1Ш¥8КЬТУОК5КУ00ОМУЕ8С8УМНЕАЬ ΗΝΗΥΤΟΚΒΕδΣδΡΟΚ
ДНК лапой цепи АТСАСЮСТСССТОСТСА(ЗСТССТО<Ю<ЗСТССТАА ТОЛСТ(ХКПСЛСТ(ХтАТССАОТ6<ХЮАТА1ТОТ ОАТСАСТСАОТСТССАСТСТСССТОСССаТСАССС СТССАСА(ЮС6(Х:СТСХЗАТС1Х:СТ6САССТСТА6 ТСАбАбССТССТСССТОСТААТСКЗАТАСААСТАТ ТТОСАТТСКЗТАССТОСАСААСССАСкКтСАбТСТС САСАбСТССТОАТСТАТГТбСОГГСТААТСОООСС тссбосстссстсАСАсаттсАатоцсАатсост САСССАСАСАТТТТАСАСТОААААТСАОСАСА(лГ (ЮАСССГСА6САТСТТ6<ЮАТТТАТТАСТССАТ0 САА6СТСТАСАААСТССТСОСАССТТСОСССААС (ЗОАССААСОТООАААТСАААССААСТОТСОСТО САССАТСТетСТТСАТСТГСССОССАТСТОАТСАО САСТТСАААТСТСгСААСТСССТСТСТТСТСТСССТ (ЗСГОААТААСТГСТАТСССАСАОАССССАААСГГГ САОТСЮЛСОСТОСАТААСССССТССААТСбССТА АСТСССАССАСА6Т0ТСАСАСАССАССАСА6СА АСОАСА6САССТАСА6ССТСАССАОСАСССТ6АС ССТСАССАААССАСАСТАСОАСАААСАСАААОТ СТАСОССТбСОААОТСАСССАТСАССОССТОАбС ТСОССССТСАСАААСАОСТТСААСАОССК5АОАСТ СТТАС
Балок лапой цепи МтАОЬШЬ1ЛШ1^8О8ЯаП1УМТОЯРЪЧЕРУТР ОЕРА8КОЩ898ЬЬР(Ж5¥КШ)1ЙГП<>КРв08РрЬ υΥΙΌ5ΝΚΑ8θνΡΌΒΡ8<38α8αΤΟΡΤΕΚΙ8Κ.νΕΑΕθν О1¥¥СМЦАЕрТРК1ТС0аТКУЕ1КЯТУААР8УЕ1ГР РЗОЕОГХЗОТАЗУУСЕПкМ^КЕАКУрУНУВМА 1Хг8<^рЕ8УТЕрП8КП8Т¥5Ъ887гТЬ8КАЮ¥ЕКН КУУАСЕУТНОСЪЗЗРУТККЕККСЕС
- 72 011449
ДНК лептой цепи (23.28ИН174К) (ЗЕОЮ N0:101) АТСАСССТСССТССТСА6СТССТСССССТССТАА ТССТСТС<ЮТСТСТ(ЮАТССАСТаСССАТАТТОТ ОАТСАСТСАСТСТССАСТСТСССТССССаТСАССС СТССАОАОССССССТССАТСТССТССАбОТСТАС ТСАСАСССТССТ6ССТ6СТААТООАТАСААСТАТ ТТСЮА1Г60ТАССТ6СА6ААСССА<Ю<ЮАОТСТС САСАСМ^ССТОАТСТАТтаККИТСТААТСОООСС ТСССССОТСССТОАСА(КГ1ТСАСТОССАОТСОСТ САСССАСАСАТТТТАСАСТСААААТСАОСАОАОТ ССАСССТСАОСАТСТТСбСАТТГАТТАСТССАТС СААОСТСТАСАААСТССТСССгАССТТСОСССААС ССАССААСОТОСАААТСАААСбААСТОТСЗОСТС САССАТСТОТСТТСАТСТТСССОССАТСТСАТСА6 СА<тСАААТСТС<тААСТ(ЮСТСТаТТ6ТСТ6ССТ 6СТСААТААСТТСТАТСССАОАОАССССАААСТТ САСТССАЛССТОСАТААСОСССТССААТССООТА АСТСССАбСАСАбТОТСАСАСАбСАССАСАССА АССАСАССАССТАСАбССГСАССАССАСССТСАС ССТСАССАААССАСАСТАСОАОАААСАСАААОТ СТАСОССТСССААОТСАСССАТСАСССССТСАСС ТСССССОТСАСАААСАССТТСААСАССЮСАСАСТ ОТТА6
Бело* легкой цели (23.29.ИЯ174К) (8ЕОЮ N0:101) М1Ш>А0ЬЬ(ТШМЕ^8С88ООГУМТО8РЕ81^УТР 6ΕΡΑ8Ι8€Κ8803ΙΧΡ(3ΝΟΥΝΥ£Ο1ΒΓ5ίΙΧΪΚΡ(308ΡρΒ Ι6ΎΈΟδΝΚΑ8σνΡΟΚΓ8(3δ08θΊΌΡΤΕΚ18ΚνΕΑΕθν С1УУСМСА1Х31ТК17<Х)СтеЛ^1ККТУААР8У1ШТ Ρ8ΟΕρΐΧ86ΤΑ5ννα.Ι2^ίΕΎΡΚΕΑΚν0λνΛΎΟΝΑ 1Ю8СМ8ЦЕ5УТЕрО8КП5ТУ8Ь88ТЪТЬ8КАСУЕКН ΚνΥΑϋΕνΤΗ0ΟΙ^8ΡνΤΚ3ΚΝΚΟΕϋ
- 73 011449
Таблица 19
Последовательности ДНК и белковые последовательности антитела 24.2.1
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчертиута)
ДНК тяжелой цепи АТСАААСАТСТОТСЮТТСГГССТТСТССТСОТССС АОСТСССАСАТОССТССТОТСССАПСТОСАбСТС САОСАОТССООСССАОСАСТбСТОААСССТТССС АСАСССТОТСССТСАССТССАСТОТСТСТСХЗТОСС ТССАТСАСАССЗТАСТАСГОСАССТССАТССССС АОСССССАбССААСССАСТОСАОтаОАТТСССТ АТАТСТАТТАСА6Т66СА6САССААСТАСААССС СТСССТСААОАСТССгАСТСАССАТАТСАСТАОАС АСОТССААОААССАОТТСТСССТОААОСТОАОГТ СТСТСАСС<ХТСССОАСАСССССОТСТАТТАСТО Т(ЮСА6АА6<ХКт<Ю<ЮСТСТАС(ЗСТСАСТАССС СТОСТТСОСССССТСССЮССАСЮСААСССТаСТС АССОТСТССТСАСССТССАССАА6ОССССАТССС ТСТТСССССТ0ССССССТССТССА0СА6САССТСС САОАССАСАбСССгСССТССССТСССТССТСААС (ЗАСТАСТТСССССААСССОТСАСССТОТСОТССА АСТСАСССССТСТСАССАОССКлССТбСАСАССТТ СССАССТ6ТССТАСА0ТССТСАС6АСТСТАСТССС ТСАОСАССОТСЮТСАССОТОСССТССАОСААСТТ СОССАСССАСАССТАСАССТОСААССТАСАТСАС ААОСССАОСААСАССААбОТСЮАСААбАСАаТТ САССССАААТСТГСТСТССАСгТОСССАСССТОСС САОСАССАССТОТСКЗСАОСАСССТСАСТСТТССТ СТТССССССААААСССААСЮАСАСССТСАТСАТС ТССССЮАССССТСАОСТСАССТССбТССТСОТаС АССТОАСССАССААСАСССССАОСТССАСТТСАА СТСЮТАСбТОСАСООССТССАСОТССАТААТОСС ААОАСАААСССАСбСОАОСАССАОТТСААСАСС АСОТТСССТСТСОТСАбССТССТСАСССТТСТОС АССАССтАСТСОСТОААСООСААООАСТАСААСТ ССААССТСТССААСАААССССТСССАОСССССАТ С6АСААААССАТСТССААААССААА60ССАССС СССА0ААССАСА66ТСТАСАСССТССССССАТСС СОСОАСОАСАТСАССААОААССАООТСАСССТО АССТСССТООТСАААСОСТТСТАССССАСССАСА ТСССССТССАСТСССАСАССААТССССАСССаС А6ААСААСТАСАА0АССАСАССТСССАТ6СГ60А стсс<исс<х^ссттсттсс^ СССТССАСААСАОСАОСТСССАССАООСОААСС ТСТТСТСАТбСТСССТСАТССАТСАСССТСТССАС ААССАСТАСАСССАСААСА0ССТСТСССТ6ТСТС ССССТАААТОА
- 74 011449
Балм тяжелой цепи МКНЬ1УРР11^УААРКУГУЬ8ОУОЬОЕ8аР<ЭЕУКР8Е Τ^8^Τ(ЛV8¢Ю8IΚ<ЭΥΥ^ШΠΚ^ΡΡΟΚ^^Ε^ИΟΥIΥ Υ5Ο8ΤΝΥΤΦ8Ι^ΚνΤΕνΒΊΒΚΝρΚΙΧΕΝ8νΤΑΑ ОТАУУ¥СА1ЩООЬУОПУ(ГУРАРУгаОСТЬУТУ88 А8ТКСР8УЕРЕАРС8К8Т8Е8ТААИЭСЕУК1)УРРЕРУ ТУ81¥К8(ЗАЬ1ВОУ1ПТРАУи288еЬУ8Ь88УУТУР8 ЗОТС^ТУТСМУЛНКРЗЖКАЩКТУЕККССУЕСРР СРАРРУАСРЗУШФРКРКОТЪМЕКТРЕУТСУУУО ν8ΗΗ)ΡΕν4ΡΝ^ΥνηθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚ^0ΕΝ5ΤΡ КУУ8УЬ1УУН9О^Ш(ЗКЕУКСКУ8ЖОЕРАР1ЕК Т18КТКСК5Р1ШРрУУТЪРР8БШЕМТК249У8ЕТСЬУК ΟΡΥΡδΒΙΑνΕν^ΕδΝΟ^ΕΝΝΥΚΙΤΡΡΜίϋδΙΧΚΪΤΕ ΥδΚΕΊνΏΚδΒνΖΟΟσΝνΡδσδνΜΗΕΑΙΉΝΗΥΤρίίδ ЬЗЬЗРСК
ДНК лептой цепи АТ<ЭСАААССССАОСОСАО<ЛТСТСТТССТССТОСТ АСТСТСЮСТСССАСААТССАСССЮАаАААТГОТа ТТСАСОСАСТСТССАСОСАСССТОТСТТТСТСТСС АСККЮАААСАОССАСССТСТССТОСАСХЭСССАСТ сасастс1таск:асвзаск:састтассстоссасс АССАвАААССГСОССАСОСТСССАСАСТССТСАТ СТАТ(ХЗТ(Х:АТССАССАОСКЗССАСТСССАТСССА САСАСОТТСАСТбОСАОТСКЮТСТбООАСАСАСТ ТСАСТСТСАССАТСАССАСАСТОСАСССТСААОА ТТТТОСАОТСТАТТАСТОТСАССАСТОТССТАССТ ТАТГСАСТГТССССССТОбОАССАААСТССАТАТ САААССААСТаТОССТОСАССАТСТСТСТТСАТС ТТССССССАТСТСАТСАССАСТТСАААТСТОСАА СТ6ССТСТСТТОТОТ<ХЗСтаСТОААТААСТТСТАТ СССАОАОАООССАААСТАСАбТООААСОТбОАТ ААСССССТССААТССССТААСТСССАбОАСАСТС ТСАСАОАОСАССАСАОСААССАСАОСАССТАСА СССТСА6СА6САСССТСАСССТСА0СААА0СА6 АСТАСОАСАААСАСАААОТСТАССССТСССААСТ САСССАТСАСССССТЦАбСТСбСССОТСАСАААО АОСГТСААСАОСОСАСАОТСТТА6
Бело» лептой цепи МЕТРАОЕТ.Ри.Т.ЕЗУТ.РР.ЧТСтРПЛ ТПЯРЛТТЛТ 8РПЕ КА11£С1Е\8Р8У888П1А¥Щ^КРаЦАР]ШиУ<ЗА ЗЗКАТСНРТЖГЗбЗОЗОТЦВГЫТЗВЕЕРЕОЕАУУУС СНОЩЕ1ПТОРСтСУ01ККТУААР8УЕ1РРР8ПЕрЕК 8ΟΤΑ5ννΌΕΕΝΝΡΥΡΒΕΑΚνφΨΚνϋΝΑΕζ)86Ν8<2 Е8УТЕРО8Ы)8ТУ8Е88ТЕТЕ8КАОУЕКНКУУАСЕ νΤΗ0ΟΙ58ΡνΤΚ8₽ΝΚΟΒΟ
- 75 011449
Таблица 20
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 22.1.1Н-С109А
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (сигнальная последовательность подчеркнута)
ДНК тяжелой цели (5ΕΟΙΟΝΟ:95) САСОТбСААСТООТСОАОТСТОООСаАООСбТС СТССАОССТбОСАООТСССТаАОАСТСТССТОТО САСССТСТССАТТСАССТТСАСТСОСТАТСССАТ бСАСТСОСТССОССАСОСТССАСаСААСбалСТб САСТОСОТООСАОТТАТАТСАТСТбАТбОАООТА АТАААТАСТАТОСАСАСТССОТОААСЮОССОАТТ САССАТСТССАСАОАСААТГССААОААСАСОСТО ТАТСТОСАААТОААСАОССТОАОАОСТОАСОАСА СООСТОТОТАТТАСТОТАССА6ААОАС60АСТОС АААСАСТТАСТАССАСТАССССООТАТССАСОТС ТОСООССААОООАССАССОТСАССОТСТССТСАС
Белок тяжелой цепи (ЗЕОЮ N0:96) 9УрЬУЕ86ООУУрРОН8ЬКЬ8САА8аРТЕЗК.УОМН ТУУКрАРОКОЬЕТУУАУКЗПббМКУУАЛЗУКСЖБТ Ι8Κ1)Ν8ΚΝΤΕΥΕ9ΜΝ3ΕΚΑΕΟΤΑνΥλΓσΓΚΚΟΤΟΚΤ ΥΥΗΥΛσΜθνψ60ΟΊΤντν88
Таблица 21
Последовательности ДНК и белковые последовательности зрелых вариабельных доменов антитела 23.28.1Ь-С92А
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ (силильная последовательность подчеркнута)
ДНК легкой цепи (5ЕС110 N0:99) ОАААТТСТСТТОАСОСА6ТСТССАСКЭСАСССТ6Т СТТТОТСТССАООООАААОАбССАСССГСТССТО САСССССАСТСАСАСТСТТАОСАССАСССАСТТА СССТО6САССА6СА6АААССТС6ССАСССТСССА САСТССТСАТСТАТСОТССАТССАССАС66ССАС ТСССАТСССА0АСАССТТСАСТ6ССАСТСССТСТ ОССАСАСАСТГСАСТСТСАССАТСАОСАСАСТаО АСССТОААСАТГТТОСАОТСТАТТАСТОТСАССА ССССССТАССТГАТТСАСТТТССССССТСССАСС АААСТОСАТАТСАААС
Белок легкой цепи (БЕОЮ N0:100) Е1УЬТр8Р6ТЬ8Ь8РСЕКАТЬ8СКА898У888ПЕАУТ1 ΡΡΚΡΟ<2ΑΡΚΙ±ΙΥΟΑ88ΚΑΤΟΙΡΟΚΓ8Ο8α8ΟΤΟΕΓΕ Т18КЕЕРЕОРАУУУСЦ1Е4К8ЕЕТРСРСТК\Ф1К
Пример III.
Анализ аминокислотных замен тяжелой и легкой цепи.
На фиг. Ш-1Н и 2Э-2Н представлено выравнивание последовательностей между предсказанными аминокислотными последовательностями вариабельного домена тяжелой цепи моноклональных антител 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.28.1, 23.28.1Н-П16Е, 23.29.1 и 24.2.1-антитела, и аминокислотными последовательностями их соответствующих генов клеток зародышевой линии. Большинство СОК3-участков тяжелой цепи содержат аминокислотные вставки.
Ген ΌΕΚ1, используемый для УН-домена антитела 21.4.1, кодирует два цистеиновых (Сук) остатка. Масс-спектрометрический анализ и моделирование гомологии демонстрируют, что два Сук-остатка связаны дисульфидной связью, и что данная дисульфидная связь не нарушает структуру данного антитела.
На фиг. 1А-1С и 2А-2С представлено выравнивание последовательностей между предсказанными аминокислотными последовательностями вариабельного домена легкой цепи моноклональных антител 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.28.1, 23.28.1Б-С92А, 23.29.1 и 24.2.1-клонов, и аминокислотными последовательностями их соответствующих генов клеток зародышевой линии. Легкие цепи этих антител получены из трех разных Ук-генов. Семь из одиннадцати антител используют Ук-ген А3/А19, шесть из которых обладает двумя мутациями на участке СЭК1. Кроме того, пять из семи антител, которые используют Ук-ген А3/А19, также используют Ук-ген; у всех этих антител первая аминокислота, производимая 1к1-геном, последовательно заменена с на К.
Следует иметь в виду, что многие из вышеидентифицированных аминокислотных замен или вставок существуют в непосредственной близости или в пределах СОК. По-видимому, такие замены оказы
- 76 011449 вают некоторое влияние на связывание данного антитела с СЭ40-молекулой. Кроме того, такие замены могли бы оказывать существенное влияние на сродство данных антител.
Пример ТУ.
Перекрестная реактивность видов антител настоящего изобретения.
Осуществляют РАС8-анализ для определения связывания и сродства антител настоящего изобретения с СЭ40 разных видов животных, в частности, некоторых видов обезьян Старого Света. Аликвоты цельной крови человека и обезьяны инкубируют в течение 1 ч на льду с увеличивающимися концентрациями проиллюстрированных здесь антител настоящего изобретения к СЭ40, или с антителом к гемоцианину запирающейся улитки-блюдечка (КЬн) в качестве негативного контроля. Затем данные образцы инкубируют в течение 30 мин на льду с антителами человека к Ι§02, конъюгированными с КРЕ (фикоэритрином). Проточной цитометрией измеряют СЭ19/СЭ20-позитивные В-клетки и с использованием программного обеспечения СеИОпеЧ анализируют гистограммы интенсивности флуоресценции (Р12-Ы) в зависимости от числа клеток (СоиЩЦ. По графикам средней интенсивности флуоресценции, в зависимости от концентрации антител, оценивают связывание (Кс) для каждого антитела. Истощение антител контролируют путем измерения связывания в ряду клеточных концентраций.
Тестируют связывание антител 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1 и 21.4.1 с В-клетками человека, резусмакака и суηοтο1ди8. Тестируют также связывание антител 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.29.1 и 24.2.1 с В-клетками человека и суηοтο1ди8.
Наблюдают, что максимальный сигнал и концентрация для половины максимального связывания антител с клетками обезьяны находятся в пределах коэффициента, изменяющего свое значение от двух единиц и до значения соответствующих параметров для В-клеток человека. Связывание не наблюдается в аналогичных экспериментах для крови мыши, крысы, кролика и собаки.
Пример У. Селективность антител по СЭ40.
Для определения селективности антител настоящего изобретения в отношении СЭ40 осуществляют другой ίη νίίτο-анализ.
ИФА-селективность по СЭ40. Материалы и методы.
96-луночный Ρ1иο^οNυNС-планшет (Νιιηο Са1 № 475515) покрывают четырьмя антигенами: 0Ο40/Ι§, С^44/Iд, ΡΆΝΚ/Ιβ, 4-1ΒΒ/Ι§, ΤΝΡΚ-1/Ι§ и ΤΝΡΚ-2/Ι§ (антигены собственного изготовления), в течение ночи при +4°С по 100 мкл/лунку, из расчета 1 мкг/мл в 0,1 М натрийбикарбонатном буфере, рн 9,6.
Затем этот планшет промывают три раза РВ8Т (РВ8 + 0,1% Твин-20), и промытый планшет блокируют с помощью РВ8Т+0,5%В8А в концентрации 150 мкл/лунку. Блокированный планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего промывают трижды РВ8Т. Далее, разбавляют полученные в примере Ι антитела против СЭ40 до концентрации 1 мкг/мл и приливают разбавленные антитела в этот планшет. Инкубируют данный планшет при комнатной температуре в течение 1 ч, затем трижды промывают РВ8Т. После этого для блокирования обрабатывают данные лунки, которые содержат антитела, полученные в примере Ι, с помощью 100 мл/лунку конъюгированных с нКР антител к Ιβ02 человека (8οιι11ιογπ Вю1се11 Са1 № 9070-05) в разведении 1:4000. Кроме того, один ряд лунок обрабатывают антителом к ΙβΟ человека (Засктои Са1 № 209-035-088), разведенного 1:5000 для блокирования и добавляемого в количестве 100 мкл/лунку для нормализации сенсибилизации планшета. Один ряд лунок обрабатывают также конъюгированным с нКР антителом человека к СЭ40 (Рйа^т^ηдеη Са1 № 345815/Си5Юга нКР с разведением 0,05 мкг/мл в качестве позитивного контроля. Данный планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч и затем трижды промывают РВ8Т. К 100 мкл/лунку добавляют ТМВ-субстрат (К & Р ЬаЬ§) и этот планшет инкубируют в течение 5-10 мин. Затем прочитывают инкубированный планшет с использованием спектрофотометра 8рес1га-Мах™. Полученные результаты свидетельствуют о том, что данные антитела обладают селективностью в отношении СЭ40 по меньшей мере в 100 раз выше, чем их селективность в отношении РАМУ 4-1ВВ, 1МРК-1 и Т№К-2, для которых специфичный сигнал СЭ4-- (СЭ40-сигнал минус фон) по меньшей мере 100Х выше, чем соответствующий сигнал для других молекул.
Пример УТ Изучение классификации эпитопов.
Продемонстрировав, что антитела настоящего изобретения селективны в отношении СЭ40, осуществляют анализ конкурентного связывания с использованием В^отте и РАС8.
Изучение В^отте-конкуренции.
Осуществляют ΒIАсο^е-конкурентное исследование, чтобы определить, связываются ли антитела настоящего изобретения к СЭ40 с одними и теми же или с разными участками на молекуле СЭ40.
В данных экспериментах используют прибор В^тоте 2000, следуя протоколам производителя. На поверхностях сенсорного чипа В^тоте иммобилизуют белок-А. ί.Ό40-Ι§ в насыщающей концентрации, который включает внеклеточный домен СЭ40, связывают с сенсорным чипом. Затем связывают агонист первого антитела человека настоящего изобретения к СЭ40, коммерческое антитело к СЭ40 или СЭ40Б с сенсорным чипом, содержащим связанный в насыщающих условиях СЭ40. После этого измеряют способность агониста второго антитела человека настоящего изобретения к СЭ40 конкурировать с указан
- 77 011449 ным первым антителом, коммерческим антителом или СЭ40Ь за связывание с СЭ40. Данный метод позволяет определить антитела с разными связывающими группами. Связывание с СЭ40 свидетельствует об узнавании независимого эпитопа. Отсутствие связывания может свидетельствовать об узнавании одного и того же эпитопа, или о перекрывании эпитопов.
ЕЛС8 -исследования.
Осуществляют ЕЛС8-исследования, чтобы определить, связываются ли антитела человека настоящего изобретения к СЭ40 с одним и тем же или с разными участками на данной СЭ-молекуле, и связываются ли они с одним и тем же или отличающимся участком на СЭ-молекуле, как у коммерчески доступных антител к СЭ40 ЕА5 (А1ех1к СаГ № ΑΝ^300-050), ЬОВ7/6 (8его1ес МСА/590РЕ) и 5С3 (Рйагтшдеп # 555458 (немеченый) и 555460 (меченый РЕ для ЕАС8)).
Контрастноокрашенные дендритные клетки, обработанные антителами к СЭ40 настоящего изобретения, метят на льду в течение 30 мин с помощью РЕ-меченого антитела ЕА5 или РЕ-меченого антитела ЬОВ7/6. После промывки окрашенные клетки анализируют на В-Э-калибровочном цитометре. Уменьшенное связывание коммерческих антител интерпретируют в качестве указания того, что данное тестируемое антитело связано с одним и тем же, или с перекрывающимся эпитопом.
Анализ конкурентного связывания с помощью ВМсою и ЕАС8 показывает, что эпитопы, распознаваемые монАТ 21.4.1-антителами, перекрываются с эпитопом, распознаваемым ЕА5-антителом, но не перекрываются с эпитопом, распознаваемым коммерчески доступным ЬОВ7/6-антителом, и не перекрываются с сайтом, связывающим СЭ40Ь.
Эпитопы, распознаваемые остальными антителами перекрываются с сайтом, связывающим СЭ40Ь.
В табл. 22 суммированы результаты изучения классификации эпитопов.
Таблица 22
В^сою-конкурентная классификация эпитопов некоторых антител к СЭ40 настоящего изобретения
ЕА5 5СЗ ΙΌΒ7/6 3.1.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.29.1 21.4.1 23.25.1, 23.28.1, 24.2.1 СЦ4ОЬ
ЕА5 X X X X
5СЗ X X X X X
1ОВ7/6 X X X X
3.1.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.29.1, X X X
21.4.1 X X X
23.25.1, 23.28.1, 24.2.1 X X X X
СО40Ь X X X X X X
Пример VII.
Регуляция поверхностных молекул антителами к СЭ40.
Осуществляют анализ цельной крови, чтобы выяснить регулируют ли антитела к СЭ40 настоящего изобретения экспрессию молекул на поверхности В-клеток.
Цельную кровь человека или обезьяны разбавляют 1:1 средой КРМI и инкубируют 24 ч с разными концентрациями агониста СЭ40-антител или контрольными антителами. Клетки окрашивают в течение 30 мин (на льду, в темноте) на нЬА-ЭК, ГСАМ, В7-1, В7-2, СО19/СЭ20, СЭ40, СЭ23 и СЭ71 с использованием коммерчески доступных реагентов для флуорохромного мечения антител. Затем окрашенные клетки анализируют на ЕАС8-калибраторе (ВесЮп-Эюкткоп). В-клетки идентифицируют путем пропускания через СЭ19- или СЭ20-позитивные клетки, а активацию маркеров определяют по этому прохождению.
Максимальное кратное увеличение средней флуоресценции (при <1 мкг/мл антитела), и среднюю ЕС50, получают с использованием одного из заявленных в настоящем изобретении антител к СЭ40 (21.4.1), которые представлены в табл. 23.
- 78 011449
Таблица 23
Регуляция молекул на поверхности В-клеток с помощью антитела к ί.Ό40 настоящего изобретения
Максимальная кратность увеличения ЕС50 (нг/мл)
Средняя +/- ст.откл. Средняя +/- ст.откл.
МНС II 4,50+/-0,52 3,85+/-0,35
СО71 2,30+/-0,77 0,73+/-0,28
1САМ 4,52+/-2,42 15,3+/-7,3
СО23 69,9+/-25,8 19,0+/-4,4
В7-2 2,74+/-0,14 16,0+/-21,9
Осуществляют также эксперименты по определению способности антител человека к ί.Ό40 настоящего изобретения регулировать экспрессию молекул на поверхности происходящей из моноцита дендритной клетки.
Получение моноцит-производных дендритных клеток.
Периферическую кровь собирают от здоровых людей-добровольцев. Выделяют моноядерные клетки с использованием пробирок 81§та Лссикрт (8ΐ. Εουίκ, МО), которые ополаскивают средой ΗΡΜΙ (Οί^ο ВКЬ, ИлскуЩе, МО) и помещают их в колбы для тканевого культивирования с концентрацией клеток 5х106/мл в полной среде ΕΡΜΙ (содержащей 100 Ед./мл пенициллина/стрептомицина, 10 мМ буфера №РЕ8, 2 мМ глутамина, 0,1 мМ заменимых аминокислот; все от Οί^ο ВКЕ); и 10% околоплодной сыворотки теленка ЩусЦпе, Εοβοη, ШаН). После 3 ч инкубации при 37°С (5% С02), удаляют не прилипшие клетки и выделяют Т-клетки с использованием селективных колонок (Η&Ό кукТетк, Μ^ηηеаρο1^к, МЦ). Прилипшие клетки промывают средой ΕΡΜΙ и инкубируют в течение 7 дней в полной среде ΕΡΜΙ с добавлением 10 нг/мл Ш-4 (Η&Ό кукТетк) и 100 нг/мл СМ-С8Е (Η&Ό кукТетк). Затем выделяют не прилипшие клетки и применяют их во всех экспериментах в качестве моноцит-производных дендритных клеток (тОС). Оставшиеся прилипшие клетки удаляют с использованием трипсина/ЭДТА и применяют в экспериментах, использующих прилипшие моноциты.
Для определения способности антител к ί.Ό40 настоящего изобретения регулировать экспрессию маркеров клеточной поверхности, моноцит-производные дендритные клетки культивируют с разными концентрациями агонистов антител в течение 48-72 ч с последующим окрашиванием (30 мин на льду, в темноте) на наличие ΗΕΑ-ОК, ΚΆΜ, В7-1, В7-2, СЭ40 и СЭ83 с использованием коммерчески доступных меченных флуорохромом антительных реагентов. Затем окрашенные клетки анализируют на ΕΑС8калибраторе (ΒесТοη-^^ск^ηкοη).
Максимальная кратность увеличения средней флуоресценции (при <1 мкг/мл антитела) и среднее ЕС50, получаемые с использованием одного из заявленных в настоящем изобретении антител к СЭ40 (21.4.1), представлены в табл. 24.
Таблица 24
Регуляция молекул на поверхности дендритных клеток с помощью антитела настоящего изобретения к ί.Ό40
Максимальная кратность увеличения ЕСео (нг/мл)
Среднее +/- ст.откл. Среднее +/- ст.откл.
МНС II 7,7+/-5,6 252+/-353
СО83 36,3+/-42,2 233+/-262
1САМ 10,4+/-4,8 241+/-140
В7-2 21,9+/-9,4 71,4+/-44,4
Аналогичные эксперименты осуществляют с В-клетками и тОС с использованием разных антител настоящего изобретения к ί.Ό40 и дополнительных маркеров. Измеряют экспрессию молекул на поверхности В-клеток (ΜΗΟΙΙ, ΚΆΜ, В7-1, В7-2 и СО23), как описано выше, но с использованием 1 мкг/мл антитела к СО40. Результаты данного эксперимента представлены в табл. 25. Экспрессию молекул на поверхности дендритных клеток (ΜΗΟΠ, ΚΆΜ, В7-1, В7-2 и СО83) измеряют через 72 ч, как указано выше, но с использованием 1 мкг/мл антитела к СО40. Результаты данного эксперимента представлены в табл. 26. В табл. 25-26 представлены кратность увеличения средней интенсивности±стандартное отклонение.
- 79 011449
Таблица 25
Регуляция молекул на поверхности В-клеток с помощью антител настоящего изобретения к СЭ40
МНС, Класс II 1САМ (СО54) В7-1 (СО80) В7-2 (СО86) СО23
В-клетка В-клетка В-клетка В-клетка В-клетка
3.1.1 3,2+/-2,6 1,3+/-0,2 1,7+/-0,2 1,2+/-0,4 5,6+/-4,8
21.2.1 1,2+/-0,2 1,3+/-0,9 0,9+/-0,5 1,0+/-0,04 1,0+/-0,1
21.4.1 3,6+/-3,0 5,0+/-3,0 1,9+/-0,8 1,8+/-0,7 21,5+/-34,8
22.1.1 1,4+/-0,5 1,1+/-0,2 1,2+/-0,3 1,0+/-0,1 1,3+/-0,2
23.5.1 1,4+/-0,5 1,1+/-0,2 1,4+/-0,6 1,0+/-0,1 1,1+/-0,2
23.25.1 2,5+/-1,1 2,5+/-0,9 1,6+/-0,4 1,3+/-0,2 4,3+/-2,3
23.28.1 1,1+/-0,2 1,1+/-0,2 1,8+/-0,6 1,0+/-0,1 1,1+/-0,4
23.29.1 1,2+/-0,2 1,0+/-0,2 1,3+/-0,6 0,9+/-0,2 1,1+/-0,1
24.2.1 1,8+/-1,0 1,6+/-0,8 1,1+/-0,4 1,1+/-0,2 0,9+/-0,6
Таблица 26
Регуляция молекул на поверхности дендритных клеток с помощью антител настоящего изобретения к СЭ40
МНС, Класс II 1САМ (СО54) В7-1 (0380) В7-2 (СО86) 0323
ОС ЮС ос ос ОС
3.1.1 4,4+/-2,4 1,5+/-0,7 1,8+/-0,9 23,7+/-33,5 15,2+/-18,2
21.2.1 1,8+/-1,3 1,5+/-0,9 0,9+/-0,4 7,4+/-10,5 10,8+/-16,5
21.4.1 5,0+/-3,8 3,7+/-1,4 1,5+/-1,1 12,9+/-13,3 48,6+/-49,5
22.1.1 2,3+/-1,2 1,6+/-0,7 1,4+/-1,0 16,3+/-25,5 12,0+/-17,0
23.5.1 2,3+/-1,8 1,2+/-0,5 1,1+/-0,6 10,7+/-17,5 9,2+/-11,1
23.25.1 2,1+/-1,8 2,4+/-1,0 1,1+/-0,5 3,3+/-4,2 13,6+/-28,9
23.28.1 2,4+/-1,7 2,7+/-2,1 1,3+/-0,6 10,6+/-17,5 18,3+/-22,6
23.29.1 2,0+/-1,5 1,2+/-0,4 0,9+/-0,5 8,4+/-10,6 10,6+/-13,1
24.2.1 4,7+/-3,0 2,1+/-1,2 3,8+/-3,8 56,6+/-95,8 31,2+/-28,4
В табл. 27 сравнивают регуляцию молекул клеточной поверхности дендритных клеток относительно В-клеток по соотношению среднего кратного увеличения в дендритных клетках относительно среднего кратного увеличения в В-клетках.
Таблица 27
Регуляция молекул клеточной поверхности дендритных клеток относительно В-клеток
В7-1 (СОЗО) В7-2 (СО86) МНС, класс II 1САМ (СО54)
3.1.1 1,08 19,40 1,38 1,15
21.2.1 1,01 7,37 1,49 1,12
21.4,1 0,77 7, 04 1,37 0,74
22.1.1 1,18 16,36 1,61 1,44
23.5.1 0,83 10,54 1,59 1,06
23.25.1 0,66 2,57 0,85 0,98
23.28.1 0,71 10,81 2,16 2,57
23.29.1 0,73 9, 07 1,66 1,23
24.2.1 3,48 52,30 2,64 1,35
Пример νΙΙΙ.
Усиление секреции цитокинов.
Осуществляют анализ моноцит-производных дендритных клеток, чтобы выяснить, усиливают ли антитела человека к 0Ό40 настоящего изобретения секрецию 1Ь-12р40, 1Ь-12р70 и 1Ь-8.
Моноцит-производные дендритные клетки и адгезивные моноциты получают, как описано выше.
- 80 011449
Клетки культивируют в присутствии антитела настоящего изобретения к Ο'Ό40 (21.4.1) или с гемоцианином запирающейся улитки-блюдечка (КЬН). Через 24 ч в супернатантах измеряют содержание данных цитокинов с помощью ИФА (Κ&Ό 8уб!етб). В некоторых исследованиях (см. табл. 28) моноцитпроизводные дендритные клетки обрабатывают данным антителом, которое костимулируют либо 100 нг/мл ЬР8 (81дта), 1000 Ед./мл ШЫу (Κ&Ό 8уб!етб) или 25 нг/мл 1Ь-1 β (Κ&Ό 8уб!етб).
Антитело к СО40 усиливает образование 1Ь-12р40, 1Ь-12р70 и 1Ь-8 и в моноцит-производных дендритных клетках и в адгезивных моноцитах. Присутствие ЬР8 дополнительно усиливает образование 1Ь12р40 и 1Ь-12р70. И только в супернатантах дендритных клеток, инкубируемых с изотипом контрольного антитела к КБМ детектируются минимальные уровни цитокинов. Репрезентативные результаты представлены в табл. 28 и на фиг. 3 и 4. В табл. 28 суммируются данные по основным цитокинам, производимым дендритными клетками или адгезивными моноцитами, под воздействием 1 мкг/мл антитела настоящего изобретения к СО40 (21.4.1) ± 100 нг/мл ЬР8. Как показано на фиг. 3, антитело к СО40 усиливает образование 1Ь-12р40, благодаря дендритным клеткам человека. Фиг. 4 иллюстрирует усиленное образование 1Ь-12р70, благодаря дендритным клеткам человека в присутствии данного антитела и 100 нг/мл ЬР8.
Таблица 28
Усиление секреции 1Ь-12р40, 1Ь-12р70 и 1Ь-8 под воздействием антитела настоящего изобретения к СО40
Тип клетки Обработка Индуцируемый цитокин
Антитело 1 мкт/мл ЬРЗ 100 нг/мл 1Ь12р40 пг/мл 1Ь-12р70 пг/мл 1Ь-8 пг/мл
Дендритные клетки 21.4.1 + 32252 1000 НО
21.4.1 - 1200 76 1200
анти-КШ + 14280 352 НО
анти-КШ - 200 4 150
Адгезивный моноцит 21.4.1 НО НО 7000
21.4.1 НО 425 НО
анти-КШ - НО НО 400
анти-КШ + НО 30 НО
НО = не определено
Аналогичные эксперименты осуществляют с использованием многих антител настоящего изобретения к СО40. Моноцит-производные дендритные клетки получают, как описано выше, и культивируют в присутствии разных концентраций антител к СО40 и костимулируют с помощью 100 нг/мл ЬР8 (81дта). Содержание 1Ь-12р70 измеряют в супернатанте через 24 ч с помощью ИФА (Κ&Ό 8уб!етб) и для каждого антитела определяют ЕС50. Результаты данных экспериментов представлены в табл. 29.
Таблица 29
Усиление секреции 1Ь-12р70 дендритными клетками
Клон антитела ПС 1Ь-12р70
ЕС50 мкг/мл Мах пг/мл
21.4.1 0,3 1796-7004
22.1.1 0,1 720-1040
23.25.1 0,2 540-960
23.5.1 0,1 676-1112
24.2.1 0,2 754-3680
3.1.1 0,2 668-960
23.28.1 0,2 1332-1404
23.29.1 0,1 852-900
21.2.1 0,03 656-872
Протестирована также способность антител настоящего изобретения против СО40 усиливать секрецию гамма-ШИ Т-клеток в анализе аллогенных Т-клеток/дендритных клеток. Для осуществления данного анализа из периферической крови здоровых добровольцев выделяют Т-клетки и моноциты. Моно
- 81 011449 циты дифференцируют на дендритные клетки с использованием вышеописанных способов. 1х105 Тклеток, полученных от индивида, культивируют с 1 х 105 дендритными клетками, полученными от разных индивидов в присутствии антитела настоящего изобретения к СЬ40 или в присутствии контрольного антитела. После 4 дней культивирования, полученные супернатанты анализируют с помощью ИФА относительно секреции гамма-ШЫ. Результаты данного анализа представлены в табл. 30.
Таблица 30
Усиление секреции гамма-ШИ с помощью антител настоящего изобретения к СЬ40
Клон антитела Алло-ЦС/ШЖу
ЕСбо мкг/мл Мах пг/мл
21.4.1 0,3 212
22.1.1 0,3 110-180
23.25.1 0,3 180-232
23.5.1 0,2 150-240
24.2.1 0,2 111-194
3.1.1 0,1 100-195
23.28.1 0,2 120-190
23.29.1 0,3 134-150
21.2.1 0,03 230-256
Пример ΙΧ.
Индукция воспалительных цитокинов антителами настоящего изобретения к СЬ40.
Антитела 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1 и 3.1.1 тестируют в анализе по высвобождению цитокинов в цельной крови, описанном у \νίη§ е! а1., ТЬегареиЬс. ^типок 2:183-90 (1995), чтобы определить, индуцируются ли воспалительные цитокины под воздействием антител в концентрации 1, 10 и 100 мкг/мл. С данными антителами при указанных концентрациях в крови от 10 нормальных доноров существенного высвобождения ТИЕ-а, ГЪ-1 β, ШК-у или ГО-6 не наблюдается.
Пример Χ.
Усиление иммуногенности клеточной линии 1у с помощью антител к СЭ40.
СЬ-позитивные ЛУ0УЕ-клетки (АТСС ССЬ 87) (.Ту-клетки») культивируют и поддерживают в КРМЬсреде. ЛУ0УЕ-клетки инкубируют в течение 24 ч с антителом настоящего изобретения к СЭ40 (24.4.1), или с изотипом соответствующего антитела (против КЬИ), в полной КРМЬсреде. Затем клетки промывают и обрабатывают 25 мг митомицин С (δί§ιη;·ι)/7 мл среды в течение 60 мин. Затем эти клетки инкубируют с выделенными Т-клетками человека в соотношении 1:100 в течение 6 дней при 37°С (5% С02). После этого Т-клетки собирают, промывают и определяют уровень СТЬ-активности против ЛУ0УЕ-клеток, недавно помеченных 51хромом (№\ν Епд1апй N^^1·, Вок!оп, ΜΑ). Специфическую СТЬактивность вычисляют в виде % специфического цитолиза=(цитолизу 1у (срт) - спонтанный цитолиз (срт))/(полный цитолиз (срт) - спонтанный цитолиз (срт)).
Как следует из иллюстрации на фиг. 5, антитело настоящего изобретения к СЬ40 (21.4.1) существенно повышает иммуногенность против 1у-клеток, обработанных с помощью данного антитела.
Пример ΧΙ.
Животная модель опухоли.
Для дальнейшего исследования противоопухолевой активности антител к СЭ40, сделанных в соответствии с настоящим изобретением, создают δСI^-Ье^де-мышиную модель для проверки ίη у1уо влияния данного антитела на рост злокачественной опухоли.
Из С11аг1ек К1уег получают δСI^-Ье^де-мышей и в течение недели акклимируют их перед использованием в опыт. Клетки опухоли ПаиФ-клетки (АТСС ССЬ 213), СО40(-), К562-клетки (АТСС ССЬ 243) и СЬ40(+) Кац-клетки (АТСС ССЬ 86), злокачественные клетки молочной железы ВТ474 (АТСС НТВ 20) или РС-3-клетки предстательной железы (АТСС СКЬ 1435) инъецируют подкожно в концентрации 1 х 107 клеток/животное. В некоторых случаях Т-клетки (5х105) и дендритные клетки (1х105) от одного и того же человека-донора инъецируют вместе с клетками опухоли. Инъецируют также антитело настоящего изобретения к СЭ40, или соответствующий контрольный изотип (против КЬИ), внутрибрюшинно, непосредственно перед инъекцией клеток опухоли (только одна инъекция). Затем измеряют рост опухоли. Конкретные эксперименты описываются ниже.
В одном из экспериментов инъецируют антитело настоящего изобретения к СЬ40 (21.4.1), или соответствующий контрольный изотип (против КЬИ), внутрибрюшинно, в дозе 10 мг/кг непосредственно
- 82 011449 перед инъекцией клеток опухоли (только одна инъекция). Клетки опухоли (Όηιιώ-клетки) инъецируют подкожно в концентрации 1х 107 клеток/животное. Рост опухоли измеряют с помощью штангенциркуля на 17, 19, 20, 21, 25, 26, 27 и 28 дни после имплантации в присутствии Т-клеток человека и дендритных клеток. Как показано на фиг. 6, антитело к СЭ40 подавляет рост опухоли, примерно, на [60]%.
В другом эксперименте антитело настоящего изобретения к СЭ40 (21.4.1), или соответствующий контрольный изотип (против КЕН), инъецируют внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг или 10 мг/кг непосредственно перед инъекцией клеток опухоли (только одна инъекция). Клетки опухоли (К562-клетки) инъецируют подкожно в концентрации 1х107 клеток/животное. В данном эксперименте Т-клетки (5х105) и дендритные клетки (1х105) от одного и того же человека-донора инъецируют вместе с клетками опухоли. Рост опухоли измеряют с помощью штангенциркуля на 17, 19, 20, 21, 25, 26, 27 и 28 день после имплантации. Как показано на фиг. 7, антитело к СЭ40 ингибирует рост опухоли на 60-85%.
В другом эксперименте антитело настоящего изобретения к СЭ40 (21.4.1, 23.29.1 или 3.1.1), или соответствующий контрольный изотип (против КЕН), инъецируют внутрибрюшинно непосредственно перед инъекцией клеток злокачественной опухоли (только одна инъекция). Соответствующий контрольный изотип данного антитела и антитело 21.4.1 инъецируют в дозе 1 мг/мл. Антитела 23.29.1. и 3.1.1 инъецируют в дозе 0,1, 0,01, 0,001 или 0,0001 мг/кг. Клетки злокачественной опухоли (К562-клетки) инъецируют подкожно в концентрации 1х107 клеток/животное. В данном эксперименте Т-клетки (5х105) и дендритные клетки (1х 105) от одного и того же человека-донора инъецируют вместе с данными клетками злокачественной опухоли. Затем с помощью штангенциркуля измеряют рост злокачественной опухоли на 28-й день после имплантации. Результаты данного эксперимента представлены на фиг. 8 и 9. Каждая точка на этих фигурах соответствует измерению на отдельном животном.
В другом эксперименте антитело настоящего изобретения к СЭ40 (21.4.1), или соответствующий контрольный изотип (против КЕН), инъецируют внутрибрюшинно непосредственно перед инъекцией клеток опухоли (только одна инъекция). Указанные антитела инъецируют в дозе 0,1, 0,01, 0,001 или 0,0001 мг/кг. Клетки опухоли (Βа^^-клетки) инъецируют подкожно в концентрации 1х107 клеток/животное. Некоторым животным Т-клетки (5х105) и дендритные клетки (1х 105) от одного и того же человека-донора инъецируют вместе с данными клетками опухоли. Затем на 28-й день после имплантации измеряют рост опухоли с помощью штангенциркуля. Результаты данного эксперимента представлены на фиг. 10. Каждая точка на данной фигуре соответствует измерению на отдельном животном.
Еще в одном эксперименте антитело настоящего изобретения к СЭ40 (21.4.1, 23.28.1, 3.1.1 или 23.5.1), или соответствующий контрольный изотип (против КЕН), инъецируют внутрибрюшинно непосредственно перед инъекцией клеток опухоли (только одна инъекция). Указанные антитела инъецируют в дозе 1 или 0,1 мг/кг. Клетки опухоли (Βηίί-κ^τιαι) инъецируют подкожно в концентрации 1х 107 клеток/животное. Затем на 28-й день после имплантации измеряют рост опухоли с помощью штангенциркуля. Результаты данного эксперимента представлены на фиг. 11. Каждая точка на данной фигуре соответствует измерению на отдельном животном.
Еще в одном эксперименте антитело настоящего изобретения к СЭ40 (21.4.1, 23.29.1 или 3.1.1), или соответствующий контрольный изотип (против КЕН), инъецируют внутрибрюшинно непосредственно перед инъекцией клеток опухоли (только одна инъекция). Указанные антитела инъецируют в дозе 1 мг/кг. Клетки опухоли (ВТ474-клетки злокачественной опухоли молочной железы) инъецируют подкожно в концентрации 1х 107 клеток/животное. Т-клетки (5х105) и дендритные клетки (1х 105) от одного и того же донора инъецируют вместе с данными клетками опухоли. Затем с помощью штангенциркуля измеряют рост злокачественной опухоли на 39-й день после имплантации. Как показано на фиг. 12, все указанные антитела ингибируют рост злокачественной опухоли молочной железы. Каждая точка на данной фигуре соответствует измерению на отдельном животном.
Еще в одном эксперименте антитело настоящего изобретения к СЭ40 (3.1.1), или соответствующий контрольный изотип (против КЕН), инъецируют внутрибрюшинно непосредственно перед инъекцией клеток опухоли (только одна инъекция). Указанные антитела инъецируют в дозе 1 мг/кг. Клетки опухоли (РС-3-клетки опухоли предстательной железы) инъецируют подкожно в концентрации 1х107 клеток/животное. Затем с помощью штангенциркуля измеряют рост опухоли на 41-й день после имплантации. Как показано на фиг. 13, антитело к СЭ40 ингибирует рост опухоли предстательной железы, примерно, на 60%. Каждая точка на данной фигуре соответствует измерению на отдельном животном.
Пример ΧΙΙ.
Выживаемость 8СГО-Ье1де-мышей, инъецированных Паийъклетками опухоли и обработанных антителами настоящего изобретения к СЭ40.
В другом эксперименте мышей инъецируют антителом настоящего изобретения к СЭ40, или соответствующим контрольным изотипом (одна инъекция), внутрибрюшинно, непосредственно перед инъекцией клетками опухоли. Данные антитела инъецируют в дозе 1 или 0,1 мг/кг. Клетки опухоли (Όηιιώклетки) инъецируют внутривенно в дозе 5х106 клеток/животное. Затем наблюдают за выживаемостью животного. Как показано на фиг. 14, все испытываемые антитела к СЭ40 пролонгируют выживаемость мышей, инъецированных клетками опухоли по меньшей мере на шесть дней.
- 83 011449
В табл. 31 представлены ЕЭ50 антител к СЭ40 в разных моделях солидной опухоли, описанных в примере XI. В табл. 31 суммирована противоопухолевая активность ш νί\Ό некоторых антител настоящего изобретения к СЭ40 у 8СШ-мышей. Кроме того, в данной таблице приведены ЕО50 антител к СЭ40 для модели системной злокачественной опухоли Паиб1, описанной выше в примере XII.
Таблица 31 ЕЭ50 антител настоящего изобретения к СЭ40 при использовании разных ш ν^νо-моделей опухоли у 8СШ-мышей
Антитело СО40(-)К5б2 & Т/ЦС подкожно (мг/кг) СО40(+) КаЦ & Т/ЦС подкожно (мг/кг) СО40( + ) КаЦ подкожно (мг/кг) СЦ40(+) ЦаиЗ! внутрлвенно (мг/кг)
21.4.1 0, 005 0,0008 0,016 0,1
22.1.1 0,01 но >1,0 0,1
23.25.1 £1, 0 НО >1,0 но
23.5.1 >1,0 НО >1, 0 но
24.2.1 >1,0 НО >1,0 но
3.1.1 0,02 НО £0,1 <0,1
23.28.1 >1,0 НО £0,1 0,1
23.29.1 0, 009 НО >1, 0 <0,1
21.2.1 <1,0 НО но но
НО = не определено
Пример XIII.
Определение констант (Кс) сродства полноразмерных человеческих антител к СЭ40 с помощью ВМсоге.
Осуществляют измерение сродства выделенных очисткой антител с использованием прибора ВМсоге 3000, следуя протоколам производителя.
Прибор для анализа биосенсорного биоспецифического взаимодействия (ВМсоге) использует поверхностный плазмонный резонанс для измерения молекулярных взаимодействий на сенсорном чипе СМ5. Изменения в лучепреломляющих индексах между двумя средами, стеклом и карбоксиметилированным декстраном, вызываемое взаимодействием молекул на декстрановой стороне данного сенсорного чипа, измеряют и передают в виде изменений в произвольных единицах отражательной способности (ВИ), что детализируется в прилагаемых замечаниях производителя.
Карбоксиметилированная декстрановая поверхность проточной кюветы в сенсорном чипе активируется при образовании 0,05 М Ν-гидроксисукцинимида в присутствии 0,2 М Ν-этил-Ы'(диметиламинопропил)карбодиимида в течение 7 мин. Слитый белок СО40Чд (описанный в примере I) в концентрации 5 мкг/мл, в 10 мМ ^-ацетате, рН 3,5, вручную вливают в проточную кювету со скоростью 5 мкл/мин и ковалентно иммобилизуют на поверхности данной проточной кюветы с требуемым количеством ВИ. Дезактивирование непрореагировавших сложных эфиров Ν-гидроксисукцинимида осуществляют с использованием 1 М этаноламингидрохлорида, рН 8,5. После иммобилизации данные проточные кюветы очищают от любого непрореагировавшего или неудачно связавшегося материала с помощью пяти восстанавливающих добавлений по 5 мкл 50 мМ №10Н до стабильного базового состояния. Проточная кювета 2, с очень плотной поверхностью, измеряет, приблизительно, 300 ВИ после подготовки поверхности, а проточная кювета 3, с очень низкой плотностью, измеряет, приблизительно, 150 ВИ. В проточную кювету 1, с активируемой чистой поверхностью, во время иммобилизации вместо антигена вливают 35 мкл 10 мМ №1-ацетатного буфера. Проточная кювета 4 содержит приблизительно 450 ВИ иммобилизованного СΤ^А4-Iд, постороннего контрольного антигена.
Последовательные разведения каждого антитела готовят в диапазоне концентраций от 100 до 0,1 мкг/мл. Скорость потока устанавливают 5 мкл/мин и 25 мкл данного образца каждой концентрации вводят в сенсорный чип вместе с регенерационным вливанием 5 мкл 50 мМ №10Н между каждой концентрацией вводимого антитела. Полученные данные анализируют с использованием программного обеспечения ВIАеνа1иаΐ^оη 3.0.
Для обратноориентированных кинетических экспериментов антитело 21.4.1 иммобилизуют на поверхности данного сенсорного чипа с использованием вышеописанного протокола. Антитело против КЬН используют в качестве контрольной антительной поверхности. Антиген, слитый белок СП40Чд, вводят в диапазоне концентраций от 100 до 0,1 мкг/мл.
- 84 011449
В табл. 32 представлены результаты измерения сродства для соответствующих антител настоящего изобретения к СГО40.
Таблица 32
Измерение сродства для антител настоящего изобретения к СГО40
Антитело Κοηίΐ/Μβ} К„„(1/8) Кв (М)
3.1.1 1,12x10® 3,31x10’® 3,95Х10’11
10.8.3 2,22x10® 4,48х10’7 2,23хЮ’12
15,1.1 8,30x10’ 2,83хЮ’7 4,05x1ο’1·2
' 21.4.1 8,26x10’ 2,23x10’® 3,48х1О’10
22.1.1 9, 55x10® 1,55x10’’ 2,79x1ο’10
23.25.1 3,83x10® 1,65x10’’ 7,78x1ο-1·2
23.28.1 7,30x10® 8,11x10’® 1,б1х10’10
23.29.1 3,54x10® 3,90x10’® 7,04x1ο’1·1
Пример XIV.
Картирование эпитопа антител к СГО40.
Анализ связывания осуществляют с использованием выделенного очисткой белком А слитого антигена СЭ40-ЕС 1дС1 человека. Слитый белок СЭ40-Ес 1дС1 человека клонируют в РПхсг. Слитый белок СГО40-[дС1 человека экспрессируют в клеточной линии млекопитающего и выделяют очисткой на колонке с белком А. Степень очистки полученного слитого антигена оценивают с помощью 8Э8/ПААГ.
СЭ40 обладает структурой обычного трансмембранного белка типа I. Его зрелая молекула состоит из 277 аминокислот. Внеклеточный домен СГО40 состоит из четырех ΊΝΕΒ-подобных богатых цистеином доменов. См., например, Νάδΐηίΐΐι аиб 8ргаид, Т1В8 23:74-79 (1998); уаи Коо!си аиб Ваисйсгсаи, I. Ьсикосу!с Вю1. 67:2-17 (2000); 8!ашсηкоν^с с! а1., ЕМВО I. 8:1403-1410 (1989).
Связывание антител к СР40 с восстановленным и невосстановленным СЭ40 человека.
Так как внеклеточный домен СГО40 состоит из четырех богатых цистеином доменов, разрыв внутримолекулярных связей с помощью восстанавливающего агента может изменить реактивность антитела. Чтобы определить, происходит ли разрыв внутримолекулярных связей с помощью восстанавливающего агента, изменяется ли реактивность отобранных антител настоящего изобретения к СЭ40, выделенный очисткой СО40-ЫдО вносят в 8Э8/ПААГ (4-20%-й гель) в невосстанавливающих (ΝΒ) или в восстанавливающих (В) условиях. 8Э8/ПААГ осуществляют по методу Ьасшт11 с использованием мини-гелевой системы. Разделенные белки переносят на нитроцеллюлозную мембрану. Мембраны блокируют с использованием РВ8, содержащим 5% (мас./об.) обезжиренного молока по меньшей мере в течение 1 ч до проявления, и зондируют в течение 1 ч с помощью каждого антитела. Антитела к СГО40 детектируют с использованием конъюгированных с НВР антител козы против иммуноглобулинов человека (разведение 1:8000; № по каталогу А-8667 81дта). Мембраны проявляют с использованием усиленной хемилюминесценции (ЕСЬ®; Атсгзйат Вю^сюисс) в соответствии с инструкциями производителя.
Затем полученный вестерн-блот зондируют четырьмя антителами настоящего изобретения к СГО40: 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1 (1 мкг/мл) и затем конъюгированными с НВР антителами козы против 1дО человека (разведение 1:8000). Результаты данного эксперимента представлены на фиг. 15. Полученные результаты свидетельствуют, что 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1 связывают невосстановленный СГО40 и не связывают восстановленный СЭ40, таким образом, данные антитела распознают конформационный эпитоп.
Связывание антител к СЭ40 с белками человека с удаленным СЭ40-доменом.
Внеклеточная область СГО40 включает четыре ΊΝΕΒ-подобных повторяющихся домена (именуемых Ό1-Ό4). См., например, Νάδΐηίΐΐι аиб 8ргаид, Т1В8 23:74-79 (1998); уаи Коо!си аиб Ваисйсгсаи, I. Ьсикосу!с Вю1. 67:2-17 (2000); 8!ашсηкоν^с с! а1., ЕМВО I. 8:1403-1410 (1989). На фиг. 16 представлены аминокислотные последовательности СЭ40-доменов Ό1-Ό4 мыши и человека. Чтобы исследовать вклад разных участков СО40-молекулы в представляемом эпитопе, сконструировали ряд мутантов с удаленным доменом.
Для создания конструкций с элюминированным СЭ40 человека полный внеклеточный домен СЭ40 человека (аминокислоты 1-193) с помощью ПЦР амплифицируют из кДНК (СО 19+) В-клеток человека (кДНК-панели многих тканей, № по каталогу К1428-1, от ОоШссН) с использованием праймерспецифичных последовательностей, а на С-конец прикрепляют 6ХН18-метку. 5'-праймер СЭ40 человека 5'-6САА6СТТСАССААТ66ТТС6ТСТ6ССТСТ6СА6Т0-3' (8НО ГО 135) используют в разных сочетаниях с 3'-праймерами для клонирования полноразмерной и укороченной молекулы СГО40.
3'-праймер для клонирования полноразмерного внеклеточного домена СГО40 человека представляет собой 5'-ТСА6Т6АТ66Т6АТ66Т6АТ6ТСТСА6СС6АТССТ6660АССА-3' (8РО ГО 136).
3'-праймер, используемый для клонирования О1-03-доменов СГО40 человека, представляет собой 5'-ТСА6Т6АТ66Т6АТ66Т6АТ6Т666СА666СТС6С6АТ60ТАТ-3' (8РО ГО 137).
- 85 011449
3'-праймер, используемый для клонирования И1-О2-доменов СИ40, представляет собой 5'-ТСАСТСАТССТСАТССТСАТСАСАССТССАСАТССТСТСТСТТ-3' (8ЕО Ю ΝΘ: 138).
После того, как из кДНК укороченного СЭ40 были созданы данные конструкции, их экспрессируют в клетках линии 293Е с использованием вектора рСК3.1 (Iиν^ΐ^одеи). Слитые белки СЭ40-6Хн1к выделяют очисткой путем элюирования на колонке с никелем.
Аминокислотные последовательности этих четырех делеционных мутантов представлены в табл. 33.
Таблица 33
Слитые белки СП40-Шк-метка
Делециоиный мутант Аминокислотная последовательность (лидерная последовательность подчеркнута)
СД40-6ХН1а человека (полноразмерный внеклеточный домен)- МУКЬРЬОСУЕАУССЬЕТАУНРЕРРТАСКЕКОУЫМЗ
ОССЗЬСфРСОКЬУЗОСТЕРТЕТЕСЬРС ОЕЗЕЕЕОТУМКЕТНСНфНКУСОРКЪаЬКУООКаТ 8ЕТОТ1СТСЕЕ61УНСТ8ЕАСЕ8СУЬНК5 С8РСГСУКР1АТСУ8ОТ1СЕРСРУ6ГГ8ИУ55АРЕК СНРбЛ'ЗСЕТКОЬУУООАСТШСТОУУС ОРСДЖНННННН (8ЕО Ю ΝΟ: 139)
С040(01-03}-6ХН|5 человека МУКЕРЕОСУЬУгССЕЬТАУНРЕРРТАСКЕКОУЬШЗ
ОССЗЬСОРСОКЬУЗОСТЕГТЕТЕСЬРС СЕ8ЕРЬПГУМ1ШТНСНфНКУСОРкШСЬК.УО(2К6Т ЗЕТОЛСТСЕЕСАУНСТЗЕАСЕЗСУЬНКЗ С8Р6ЕСУК01АТ6У8ОТ1СЕРСРНННННН (8Εζ) Ш ΝΟ: 140)
Делециоиный мутант Аминокислотная последовательность (лидерная последовательность подчеркнута)
СЕМО (О1-О2)-6ХН'в человека МУКи>Ь(ХГУЬ^ОСЬЬТАУНРШ>РТАСКЕКОУЬ1ЫЗ
0СС8ЬС9Р69КЬУ8ОСТЕЕТЕТЕСЬРС 6Е8ЕШ)ТЧтКЕТНСНрНКУСОРЬ1ЬОЬКУ0рКОТ ЗЕТОПСТСНННННН (8Е<2 Н> ΝΟ: 141)
Для экспрессии этих делеционных конструкций СЭ40 человека данные конструкции клонируют в вектор рСК3.1 (Iиν^ί^одеи) и экспрессию оценивают в различных стабильных и кратковременно трансфицированных линиях 293Е-клеток. Супернатанты кратковременно трансфицированных 293Е-клеток анализируют с помощью ИФА и Вестерн-блота на связывание с антителами 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1.
ИФА-анализ осуществляют с использованием супернатанта из клеток 293Е, трансфицированных различными СИ40-конструкциями. ИФА-планшеты покрывают козьими поликлональными антителами к СЭ40 человека (Κ&Ό са)а1од № АЕ 632) или козьими поликлональными антителами к СЭ40 мыши (Κ&Ό са(а1од № АЕ 440), разбавленными до 1 мкг/мл ИФА-буфером для сенсибилизации поверхности планшета. Экспрессирование СИ-конструкций в 293Е-клетках подтверждают путем детектирования биотинилированных козьих антител к СЭ40 человека (Κ&Ό № по каталогу АЕ 632), козьих антител к СЭ40 мыши (Κ&Ό са(а1од № АЕ 440), или нКР-конъюгированным антителом против Шк (С-концевая) (Iиν^ΐ^одеи, Са(а1од № 46-0707). Связывание антител человека к СЭ40 детектируют с помощью нКРконъюгированных козьих антител против ^С человека (Ес кресШс СаНад н10507), разбавленных 1:2000. Полученные результаты, представленные в табл. 34, указывают, что большинство, если не все, эпитопов, распознаваемых с помощью монАТ 21.4.1, 23.28.1 и 23.29.1, локализуются в И1-О2-области СИ40, а эпитоп для монАТ 24.2.1 локализуется, по меньшей мере, отчасти в домене Ό3-Ό4. Слитый белок СЭ40 человека-Ес кролика используют в качестве контроля для подтверждения специфичности связывания антител.
- 86 011449
Таблица 34
ИФА: связывание антител с СЭ40-делеционными мутантами
СЭ40-делеционные конструкции анализируют также в Вестерн-блот-анализе. Полученные результаты представлены в табл. 35. Результаты ИФА показывают, что в сайте связывания антител 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1 участвуют домены Ό1-Ό3. Данные результаты показывают также, что сайт связывания антител 21.4.1, 23.25.1 и 23.29.1 содержит домены Ό1-Ό2, и что сайт связывания антитела 24.2.1 содержит домен Ό3.
Таблица 35
Вестерн-блот: связывание антитела с СЭ40-делеционным мутантом
СЛ40Ф1-ПЗ) человека- бХЫв СЛ40 человека-бХЪЫв
21.4.1 + +
23.25.1 + +
23.29.1 +
24.2.1 + +
Антитело против Н1з + +
Антитело против ЕЫд но но
Связывание антител к СЭ40 с СЭ40 мыши.
Определим способность антител 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1 связывать СЭ40 мыши.
Для данного эксперимента СЭ40 мыши амплифицируют из кДНК В-клеток мыши. Слитый белок СЭ40(Э1-О3) мыши-6хЫ18 клонируют в рСК3.1, в котором используют для запуска транскрипции СМУпромотор.
5'-праймер, используемый для клонирования внеклеточного домена СЭ40 мыши, представляет собой 5'-ТССААССТТСАССАТССТСТСТТТСССТССССТСТС-3'.
3'-праймер, используемый для клонирования Э1-Э3-доменов СЭ40 мыши, представляет собой 5'СТССТССАСТСАСТСАТССТСАТССТСАТСТССССАСССАТСАСАСАС-3'.
кДНК-конструкции мыши и человека кратковременно трансфицируют в 293Р-клетки. Экспрессию рекомбинантного СЭ40 детектируют с помощью ИФА с использованием поликлональных антител против СЭ40 мыши и человека, антител против нЦ и антителами к СЭ40 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1. Результаты этих экспериментов представлены в табл. 36. Данный эксперимент показывает, что все антитела специфичны по СЭ40 человека и не реагируют перекрестно с СЭ40 мыши.
- 87 011449
Таблица 36
Перекрестная реактивность ί.Ό40 мыши и человека
СЦ40(Ц1-ЦЗ) мыши-бХЫв С640(61-63) человека-6ХН1в
21.4.1 Нет Да
23.25.1 Нет Да
23.29.1 Нет Да
24.2.1 Нет Да
Козьи антитела против СЮ40 Нет Да
человека
Козьи антитела против СО40 мыши Да Нет
Антитела против ΗΪ8 Да Да
Связывание антител к СЭ40 с химерным человек/мышь СЭ40.
Так как антитела 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1 не связывают СЭ40 мыши, конструируют химерные белки человек/мышь ί.Ό40 для более определенных картированных эпитопов таких антител.
Для создания внутрирамочных слияний химерных белков из СЭ40 человека и мыши используют уникальные сайты рестрикции на границах СЭ40-доменов в идентичных позициях кДНК СЭ40 человека и мыши. Создают различные кДНК-овые конструкции СЭ40 с использованием сайта рестрикции ЕсоВ1 на конце домена 1 (нуклеотид 244, аминокислота 64) и сайта рестрикции Вап1 на конце домена 2 (нуклеотид 330, аминокислота 94 (фиг. 17)).
Различные СО40-домены амплифицируют с помощью ПЦР и лигируют. Данный подход позволяет заменить всевозможные домены мышиного ί.Ό40 гомологичными доменами СЭ40 человека. Полученные конструкции представлены на фиг. 18.
Затем определяют, способны ли антитела 21.4.1, 23.25.1, 23.29.1 и 24.2.1 связать химерные мышь/человек СЭ40-белки в ИФА. Результаты данного эксперимента представлены в табл. 37. Как показано в табл. 37, монАТ 21.4.1 и 23.25.1 распознают эпитоп, который локализован частично в Ό1 и частично в Ό2; монАТ 23.29.1 распознает эпитоп, локализованный по большей части, если не полностью, в Ό2; а монАТ 24.2.1 распознает эпитоп, локализованный в Ό2 и Ό3.
Таблица 37
Связывание антител с химерными СО40-белками
Антитело ЧелИ1 ЧелЮ2 ЧелИЗ ЧелО1, Β2 ЧелЦЗ, ϋ3 ЧвлИ, Ώ3
21.4.1 Нет Нет Нет Да Нет Нет
23.25.1 Нет Нет Нет Да Нет Нет
23.29.1 Нет Да Нет Да Да Нет
24.2.1 Нет Нет Нет Нет Да Нет
Все публикации и патентные заявки, цитируемые в настоящем описании, включены здесь путем ссылки, как если бы каждая индивидуальная публикация или патентная заявка были конкретно и индивидуально указаны для включения путем ссылки. Несмотря на то что вышеизложенное изобретение описано в некотором отношении подробно в виде иллюстраций и примеров, в целях внесения ясности в его понимание рядовым специалистам в данной области должно быть очевидным в свете указаний настоящего изобретения, что в нем могут быть сделаны определенные изменения и модификации, не выходящие за рамки существа или содержания настоящего изобретения.
- 88 011449
Список последовательностей
<110> ΑΒΌΕΝΙΧ, ΙΝΟ. ΡΕΙ2ΕΚ РНОЮиСТЗ 1НС.
<120> АНТИТЕЛА К 0ϋ40
<130> АВХ-РР/3 ₽ст
<140> <141> РСТ/иВ02/36107 2002-11*08
<150> <151> 80/348,880 2001-11*09
<1б0> 147
<170> РаСепСШ Уех. 2.1
<210> 1 <211> 378 <212> ДНК <213> Ното варХепз <4ОО> 1 саддедсадс ЬессдСдсад ссаддсаадд дсадасСссд сСдсааасда саСсадсСдд асддСсассд
СддСддадСс ссСссддаСС ддсСддадСд Сдаадддссд асадссСдад ССсСдддаСа Ссесссса едддддаддс сасссесадС ддрддсадСС аССсассаСс адССдаадас сСасеасСас дСддСссадс адССаСддса аСаСсааадд Сссададаса асддсСдЬдС аасддессдд сСдддаддСс СдсасСдддС асддаддсаа асессаадаа аССасСдЬдС асдесьдддд ссСдадасСс ссдссаддсС СаааСассаС Сдсдссдсас дадаададдд ссаадддасс
120
180
240
300 э«о
37« <210> 2 <211> 128 <212> РйТ <213> Ното варХепв <400> 2
С1п УаХ СХп Ьеи УаХ (Пи Вех СХу С1у СХу УаХ Уа1 СХп Рго СХу Ахд
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Вег Сув АХа АХа Вег С1у РЬе ТЬг РЬе Вег Вег Туг
20 25 30
С1у МеС ΗΪΒ Тгр УаХ Агд СХп АХа Рго СХу Ьув -СХу Ьеи СХи Тгр УаХ
35 40 45
А1а УаХ Не Вег Ьув Авр С1у С1у АВП Ьуа Туг Ηίε АХа Авр Вех Уа1
50 55 60
Ьуз СХу Агд РЬе ТЬг 1Хе Зег Агд Аар Авп Вех Ьув Авп АХа Ьеи Тух
85 70 75 ВО
Ьеи СХп МеС АВП Вег Ьеи Агд УаХ С1и Авр ТЬГ АХа УаХ Туг тух Сув
85 90 95
- 89 011449
Уа1 Агд Агд 61у Ηίε 61п Ьеи Ча!
100
Ьеи 61у Туг
105
Туг Туг Туг Авп 61у 110
Ьеи Авр Уа1 Тгр С1у 61л 61у ТЬг
115 120
ТЬг
Уа1 ТЬг
Уа1
Зег Зег
125 <210> 3 <211> 336 <212> ДНК <213> Ното зархелз <400> 3 даьагьдъдс аСсСссЬдса гассьдсада Ьссддддесс адсадаЕСдд сддасдЬСсд
ГдасСсадГс ддСсСадсса адссадддса сьдасаддьь аддсЬдадда дссаадддас сссасСссее дадссьсСбд дЬсГссасад садьддсадь ьд^ьддддьь сааддЪддаа сСдсссдЕеа Са^адГааГд сСссСдаЬсГ ддаЬсаддса ьасьас^доа абсааа ссссСддада дасасаассь агсЕдддЬСс садаьтас ГдсаадсЪсЪ дссддссгсс ЕССддаГЕдд каас-сдддсс асЬдааааСс асааасЪссГ
120
180
240
300
336 <210> 4 <211> 112 <212> РНТ <213» Ното зар1ег>£ <400> 4
Аар 1 Не Уа1 Ьеи ТЬг 5 61п Бег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго νβΐ ТЬг Рго 15 61у
С1и Рго А1а Бег 20 Пе Бег сув Агд Бег 25 Бег 61л Бег Ьеи Ьеи 30 Тух Бег
Азп 61у Туг 35 Азп РЬе Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи 61л Ьуз Рго 45 61у 61п Бег
Рго 61п 50 Ьеи Ьеи 11е Туг Ьеи 55 61у Бег Азл Агд А1а 60 5ег 61у Ца1 Рхо
Азр 65 Агд РЬе Бег С1у Бег 70 61у Бег С1у ТЬг Азр 75 РЬе ТЬг Ьеи Ьуз 11е 80
бег Агд Ьеи С1и А1а 85 61 и Азр νβΐ С1у νβΐ 90 Туг Тух Сув Мег С1л 95 А1а
ьеи 61л ТЬг Рго 100 Агд ТЬг РЬе 61у 61 п 105 С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 110 11е Ьув
<210> 5 <211> 1416 <212> ДНК <213> Ното зар^елз <400> 5 аСддадееед ддседадсгд ддесеьссгс дсхдссссъх ХаададдСдС ссадедисад 60 дьдсадсСдд Еддадгсьдд дддаддсдСд дсссадссгд ддаддЬсссе дадасгсгсс 120
Сдгдсадссг сгддаггеае сгьсадеадь £а1ддеа1дс асСдддСссд ссаддсЬсса 180
- 90 011449 ддсааддддс даскссдсда сааакдаака садскддкхс дксассдксС аддадсасск ссддкдасдд дксскаеадк ССсддсассс аадасадссд ддассдксад сскдаддкса кддкасдкдд аасадсасдк ааддадкаса Сссаааасса дадасдасса аксдссдсдд акдскддаск кддсадсадд асдсадаада сддадсдддс адддссдакк дсскдададк СдддакасСа ссСсадсскс седададсас Сдксдкддаа ссксаддасс адасссасас адсдсааакд кскксскскС едедедкддс аеддедкдда СссдкдСддк адкдсааддк аадддсадсс адаассаддк адкдддадад ссдасддскс ддааедкекк дссСскссск ддсадкСаСа сассаксксс кдаадасасд скаскасаас сассаадддс адсддссскд сксаддсдск скасссесСс ссдсаасдса ккдкдкедад ссссссаааа ддсддасдСд ддкдеакааС садсдксскс скссаасааа ссдадаасса садсскдасс сааедддсад сСкскСсскс сссакдсксс дкскссдддк
Ссаааддакд ададасаакк дскдсдкаск ддксСддасд ссаксддкск доекдсскдд скдассадсд адсадсдкдд даксасаадс кдсссассдк сссааддаса адссасдаад дссаадасаа ассдккдкдс ддссксссад саддкдкаса кдсскддкса ссддадааса Сасадсаадс дкдаСдсакд ааакда даддкаакаа акассакдса 240 ссаадаакдс дскдкасскд 300 ассдсдсдад аададддсак 360 кссддддсса адддассасд 420 слсссссддс дссскдсксс 480 ксааддаска сккссссдаа 540 дсдкдсасас сССсссадсс 600 сдассдсдсс скссадсаас 660 ссадсаасас сааддСддас 720 дсссадсасс асскдкддса 780 сссксакдак сксссддасс 840 ассеедаддс ссадкСсаас 900 адсеасддда ддадсадккс 960 ассаддаскд дскдаасддс 1020 сссссаксда даааассакс 1080 ссскдссссс аксссдддад 1140 ааддсккска ссссадсдас 1200 аскасаадас -сасасскссс 1260 ксассдкдда саададсадд 1320 аддскскдса саассаскас 1380 1416 <210> 6 <211> 471 <212> РКТ <213> Ното варгепв <400> 6
мак 1 С1и РЬе С1у Ъеи Вег 5 Тгр Уа1 РЬе Ъеи 10 Уа1 А1а Ъеи Ъеи Агд 15 С1у
ν»1 С1П Сув Б1п νβΐ С1п Ъеи Уа1 С1и Вег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 С1п
20 25 30
Рго е1у Агд Вег Ъеи Агд Ъеи Вег Сув А1а А1а Вег <31у РЬе ТЬг РЬе
35 40 45
вег Вег Туг 61у мек Ηίβ Тгр Уа1 Агд Я1п А1а Рго <31у Ъув С1у Ъеи
50 55 60
<31 и Тгр Ча! А1в ν«1 Не Вег Ьув Авр <31у <31у Авп Ьув Туг Ηίε А1а
65 70 75 80
Авр Бег Уа1 Ъув 61у Агд РЬе ТЬг 11е Вег Агд Авр Авп Зег Ъуз Авп
85 90 95
А1а Ьей Туг Ъеи С1П Мес Авп Вег Ъеи Агд Уа1 С1и Аер ТЬг А1а Уа1
100 105 но
Туг Туг Суе Уа1 Агд Агд С1у Ηιε С1п Ъеи Уа1 Ъеи С1у Туг Туг Туг
115 120 125
Туг Лап С1у Ъеи Авр Уа1 Тгр е1у <31п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЫ Уа1 Вег
130 135 140
Вег А1а Вег ТЬг Ъуз С1у Рго вег Уа1 РЬе Рго Ъеи А1а Рго Сув Вег
145 150 155 160
- 91 011449
Агд Зег ТЬг Бег С1и Зег ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Сув Ьеи Уа1 Ьуз 175 АЗр
165 170
Туг РЬе Рго С1и 180 Рго Уа1 ТЬг νβΐ Зег 185 Тгр Азп Бет 81у А1а 190 Ьеи ТЬг
Бег (31у Уа1 195 Ηίε ТЬг РЬе Рго А1а 200 Уа1 Ьеи С1п Бег Бег 205 81у Ьеи Туг
Бег Ьеи 210 йег Бег ν«ι Уа1 ТЬг 215 Уа1 Рго Бег Бег Азп 220 РЬе С1у ТЬг С1п
ТЬг 225 Туг ТЬг Сув А&П Уа1 230 Авр Ηίε Ьуз Рго Бег 235 Азп ТЫ Ьув Уа1 Αερ 240
Ьуз ТЬг Уа1 61 и Агд 245 Ьув Суз Суз Уа1 С1и 250 Суз Рго Рго Суз Рго 255 А1а
РГО Рго 7а1 А1а 260 81у Рго Зег Уа1 РЬе 265 Ьеи РНе Рго Рго Ьув 270 Рго Ьуз
Αερ ТЬг Ьеи 275 мер Не зег Агд ТЬг 280 Рго 81и Уа1 ТЬг Суз 285 Уа1 Уа1 Уа1
Азр νβΐ 290 Бег Ηίε С1и Αερ Рго 295 81и Уа1 81п РЬе Αεη 300 Тгр туг Уа1 Азр
С1у 305 Уа1 81и Уа1 ΗΪ5 Αεη 310 А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 315 Агд О1и С1и С1п РЬе 320
Αδη Бег ТЬг РЬе Агд 325 Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи 330 ТЬг Уа1 УаЗ Ηίε С1п 335 Авр
Тгр Ьеи Азп С1у 340 Ьуз 61и Туг Ьуз Суз 345 Ьув νβΐ Бег Αεη Ьуз 350 С1у Ьеи
Рго А1а Рго 355 Не 81и Ьув ТЬг Не 360 Бег Ьуз ТЬг Ьуз 61у 365 61п Рго Агд
С1и Рго 370 С1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи 375 РГО Рго Бег Агд 81и 380 81 и МеС ТЬг Ьуз
Αεη 365 С1п Уа1 Зет Ьеи ТЫ 390 Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у 395 РЬе Туг Рго Бег Азр 400
Не А1а ν»ι 61и Тгр 405 С1и Бег Азп С1у С1п 410 Рго С1и Азп АЗП Туг 415 Ьув
ТНг ТЬг Рго Рго 420 МеС Ьеи Азр Бег Авр 425 С1у Бег РЬе РЬе Ьеи 430 Туг Бег
Ьув Ьеи ТЬг 435 νβΐ Αερ Ьув Бег Агд 440 Тгр 81п С1п 01 у Азп 445 Уа1 РЬе Бег
Суе Бег Уа1 МеС Ηίε 81и А1а Ьеи Ηίε Αεη На з Туг ТЬг С1п Ьуз Бег
450 455 460
- 92 011449
Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьув
465 470 <210> 7 <211> 720 <212> ДНК <213> Ното εβρίβηε <400> 7 аидаддсгсс ссдсгсадсг сседдддсСд ссааъдстст дддСсссСдд аьссадсддд60 даьагьдГдс Ьдасгсадсс СссасЬсСсс Ыдсссдгса ссссьддада дссддссСсс120 ассгесг.дса ддЕссадЕса дадссЕсгсд гаСадСаагд дагасаассс иыддаыдд180 ъассЕдсада адссадддса дЬс^ссасад сСссСдаСсТ аЫЪдддЫс ЪааЪсдддсс240
Ъссддддюс сгдасаддтг. садСддсадС ддаСсаддса садаььыас асГдааааГс300 адсадаЫдд аддсГдадда ЬдЪЪддддТХ СакеасЬдса ЪдсаадЫс! асааасЕсс!360 сддасдсЪсд дссаадддас сааддЬддаа аСсааасдаа ссдСддоСдс ассаессдсс420 ысаьсысс сдссассСда СдадсадССд аааСсСддаа схдссСсСдГ ЕдсдЕдссхд480 сСдаабаасГ ЬсСаСсссад ададдссааа дСасадСдда аддсддаеаа -сдсссессаа540
Ъсдддгааск сссаддадад Едъсасадад саддасадса аддасадсас сьасадсссс600 адсадсассс Ъдасдстдад сааадсадас сэсдадааас асааадЬсга сдссСдсдаа660 дГсасссабс адддсстдад сгсдсссдСс асааададсс ссаасадддд ададЪдссад720 <210> 8 <211> 239 <212> РКТ <213> Ното вархепе <400> 8
Μβΐ 1 Агд Ьеи Рго А1а 5 61п Ьеи Ьеи 61у Ьеи 10 Ьеи Мег Ьеи Тгр Уа1 15 Зег
61у Зег Зег 61 у 20 Авр Не ν«ι Ьеи ТЬг 25 61 η Зег Рго Ьеи Зег 30 Ьеи Рго
Уа1 ТЫ Рго 35 61у 61и Рго А1а Зег 40 Не Зег Сув Акд Зег 45 Зег 61п Зег
Ьеи Ьеи 50 Туг Зег А$ η 61 у Туг 55 АБП РЬе Ьеи Авр Тгр 60 Туг Ьеи <31п Ьув
Рго 65 <31у С1п зег Рго 61 η 70 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 75 61у Зег А8П Агд А1а 80
Зег 61у Уа1 Рго Αερ 85 Агд РЬе Зег 61у Зег 90 61у Зег 61у ТЬг Аар 95 РЬе
ТЬг Ьеи Ьув 11 е 100 Зег Агд Ьеи 61 и А1а 105 61и Авр Уа1 61у Уа1 110 Туг Туг
сув МеГ αΐη 115 А1а Ьеи 61п ТЬг Рго 120 Агд ТЬг РЬе 61у 61л 125 61у ТЫ Ьув
Уа1 61и 130 Не Ьув Агд ТЬг V»! 135 А1а А1а Рго Зег Уа1 140 РЬе Не РЬе РГО
- 93 011449
Рго 145 Бег Азр С1и 61п Ьеи 150 Ьув Бег 61у ТЬг А1а 155 Бег УаХ ν«ι Сув ьеи 160
Ьеи Αεη Авп РЬе Туг 165 Рго Агд 61 и А1а Ьув 170 УаХ 6Хп Тгр Ьув ν«ι 175 Авр
Азп АХа Ьеи 61п 180 Бег 61 у Лап Бег 61п 185 61и Бег νβΐ ТЬг СХи 190 61п Авр
Бег ЬуБ Аар 195 бег ТЬг Туг Бег Ьеи 200 Бег Бег ТЬг Ьеи ТЬг 205 Ьеи Бег Ьуа
А1а Аар 210 Туг 61и Ьуз Ηιβ Ьуб 215 ν&1 Туг АХа Сув 61и 220 Уа1 ТЬг Н1в 61п
е1у 225 Ьеи Бег Бег Рго ν·ι 230 ТЬг Ьув Бег РЬе Авп 235 Агд 61у С1и СуВ
<210> 9 <211> 367 <212> ДНК <213> Ното εαρϊβηε <400 9 саддЕдсадс ЕддгддадЕс Едддддаддс дЕддЕссадс сгдддаддбс ссбдадасЕС 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕсадЕ адсЕаьддса ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ 120 ссаддсаадд дд^сддадЕд ддьддсадЕЕ аЕаЕсаааЕд аьддадараа ЕаааЕассаЕ 180 дсадасЕссд Едсддддссд аЕисассаос сссададаса аЕЕссаддад сасдсссЕао 240 сЕдсаааЕда асадссЕдад адсСдаддас асддсЕдЕаг аЕЕасЕдЕдс дадаададдс 300 абддддбсЕа дЕдддвдссд сддддаЕЕас ЕасЕасСасг асддЕЕЬдда сдбсЕддддс 360 саадддасса сддЕсассдЕ сЕссЕса 387 <210 10 <211> 129 <212> РКТ <213> Ηαηο вар1епв
<400> 10 Ьеи Уа1 5 С1и Бег С1у С1у 61у Уа1 Уа1 10 С1п Рго 61у Агд 15
61 п 1 Уа1 61п
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз АХа АХа Бег 61у РЬе ТЬг РЬе Бег Бег Туг
20 25 30
61у МеЕ ΗΪ6 Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго 61у Ьув 61у Ьеи <31 и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 Не Бег Авп Авр 61у Авр Азп Ьуз Туг Ηΐί А1а Авр Бег Уа1
50 55 60
тгр 61у Агд РЬе ТЬг Не Бег Агд Авр Авп Бег Агд Бег ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п МеЕ Авп Бег Ьеи Агд АХа <31 и Авр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Сув
85 90 95
- 94 011449
А1а Агд Агд €1у Мек С1у
100
Бег Бег С1у Бег Агд 105
С1у Айр
Туг Туг Туг
110
Туг Туг С1у
115
Ьеи А ср Уа1
Тгр С1у С1п <31у ТЬг
120
ТЬг νβΐ
125
ТЫ Уа1 Бег
Бег <210>
<211>
<212>
<213>
336
ДНК
Ното εβρίβηε <400> дакаккдкда аксксскдса касскдсада кссддддксс адсададкдд сддасдкксд кдасксадке ддкскадкса адссадддса скдасаддкк аддскдадда дссаадддас кссасксксс дадссксккд дкскссасад садкддсадк кдккддддкк сааддкддаа скдсссдкса какадкаакд сксскдакск ддаксаддса каккаскдса аксааа сссскддада дакасааскк акккдддккс сада Г к с С. ас кдсаадскск дссддссксс кккддаккдд кааксдддсс аскдаааакс асааасксск
120
180
240
300
336 <210> 12 <211> 112 <212> РКТ <213> Ното εβρίβηε <400> 12
А ер 1 Не Уа1 Мек ТЬг 5 С1п Бег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬх Рго 15 С1у
Й1и Рго А1а Зег 20 11е Зег Суа Агд Бег 25 Бег С1п Бег Ьеи Ьеи 30 Туг Зег
Азп Й1у Туг 35 Аал РЬе Ьеи Аар Тгр 40 Туг Ьеи С1п Ьуз Рго 45 Й1у С1п Бег
Рго О1л 50 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 55 С1у Бег Авп Агд А1а 60 Бег С1у νβΐ Рго
Азр Агд 65 РЬе Бег <31у Бег 70 С1у Бег Й1у ТЬг Αερ 75 РЬе ТЫ Ьеи Ьуе 11е 80
Бег Агд νβΐ О1и А1а 85 Й1и Аар νβΐ С1У Уа1 90 Тух Тух Сув Мек <31п 95 А1а
Ьеи С1п ТЬг РГО 100 Агд ТЬг РЬе 61у О1п 105 С1у ТЬг Ьуа ν·1 С1и 110 Не Ьув
<210> 13 <211> 1425 <212> ДНК <213> Нолю зархепа <400> 13 акддадкгкд ддскдадскд ддсккксскс дккдсксккк каададдкдк ссадкдксад 60
- 95 011449 дСдсадсСдд СдЬдсадссС ддсааддддс дасьседсдс саааСдааса дддСсСадСд дддассасдд сссСдсСсса ссссссдаас ССсссадссд СссадсаасС ааддСддаса сс'гдбддсад Ссссддассс садсссаасс дадсадССса ссдааеддса аааассаСсС ссссдддадд сссадсдаса асассСссса аададсаддс аассассаса
СддадСсСдд ссддаССсас сддадсдддс ддддссдасс дссСдададс ддадссдсдд ссаседсссе ддадсасссс сддсдасддс СссСасадСс Ссддсассса адасадегда дассдссадс сСдаддСсас ддСасдСдда асадсасды аддадсасаа ссаааассаа адаСдассаа СсдссдСдда сдсСддасСс ддсадсаддд сдсадаадад дддаддсд^д сССеадсадс ддсадссаса сассассСсс сдаддасасд ддассасьас сссадссбсс сдададсаса дссдсддаас сСсаддасСс дассСасасс дсдсаааСдС сССссСсССс дсдодсддсд сддсдСддад ссдсдсддСс дСдсааддСс адддсадссс даассаддСс дСдддададс сдасддсСсс даасдссссс ссСссссссд дСссадссСд ддаддСсссС дадасСсСсс 120 сасддсасдс ассдддсссд ссаддсбсса 180 СсаааСдасд дадаСаасаа асассаСдса 240 ададасааСС ссаддадсас дсСссаСсСд 300 дсСдСаСаСС ассдсдсдад аададдсаСд 360 сасСасеасд дсссддаедс ссддддссаа 420 ассаадддсс сассддсесс ссссссддсд 480 дсддссссдд дсСдссСддс сааддассас 540 есаддсдссс сдассадсдд сдсдсасасс 600 СасссссСса дсадсдсддс дассдСдссс 660 сдсаасдСад ассасаадсс садсаасасс 720 сдсдседадс доссаседсд сссадсасса 780 сссссаааас ссааддасас ссСсаСдаСс 840 дсддасдСда дссасдаада ссседаддСс 900 дСдсасааСд ссаадасааа дссаедддад 960 адсдСсссса осдссдсдса ссаддассдд 1020 Сссаасааад дссСсссадс ссссаСсдад 1080 сдадаассас аддсдсасас ссСдссссса 1140 адссСдассС дссСддссаа аддсССсСас 1200 аасдддсадс сддадаагаа ссасаадасс 1260 ссссссессс асадсаадсС сассдСддас 1320 ссасдесссд сдагдеасда ддсссгдсас 1380 СсСссдддСа ааСда 1425 <210> 14 <211> 474 <212-> РКТ <213> Ното заргепе <400> 14
Не* 1 С1и РЬе <31у Ьеи 5 Зег Тгр Уа1 РЬе Ьеи 10 νβΐ А1а Ьеи Ьеи Агд 15 С1у
ν*1 <31п Сув С1п 20 Уа1 61п Ьеи ν&ι С1и 25 Зег С1у С1у С1у Уа1 30 νβΐ <з1п
Рго С1у Агд 35 Зег Ьеи Агд Ьеи Зег 40 сув А1а А1а Зег С1у 45 РЬе ТЬГ РЬе
Вег Зег 50 Туг е1у Мес НЗ ε тгр 55 νβΐ Агд С1П А1а Рго 60 С1у ьув С1У Ьеи
С1и 65 Тгр νβΐ А1а νβΐ Не 70 Зег Αεη Αερ -С1у Авр 75 Абп ЬуБ Туг Ηίε А1а 80
Αερ Зег νβΐ Тгр (31у 85 Агд РЬе ТЬг Не Зег 90 Агд Αερ Азп Зег Агд 95 Зег
ТЬг Ьеи Туг ьеи 100 ΘΙη НеС Леи Зег Ьеи 105 Агд А1а С1и Αερ ТЬг 110 А1а νβΐ
Туг Туг Суа 115 А1а Агд Агд 61у МеС 120 61у Зег Зег С1у Зег 125 Агд <31у Αερ
туг Туг 130 Туг Туг Туг С1у Ьеи 135 Акр Уа1 Тгр С1у 61п 140 С1у ТЬг ТЬг νβΐ
- 96 011449
ТЬг 145 Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз 61 у Рго Зег V»! РЬе Рго Ьеи АХа 160
150 155
Рто Су Б Бег Агд Бег 165 ТЬг Бег е1и Бег ТЬг 170 А1а А1а Ьеи 61У Сув 175 Ьеи
νβΐ ЬуБ Авр Туг 180 РЬе Рго 01и Рго Уа1 185 ТЬг ν«ι Зег Тгр Азп 190 Зег 61у
А1а Ьеи ТЬг 195 Зег С1у νβΐ Ηΐε ТЬг 200 РЬе Рго А1а 1?а1 ьеи 205 61п Бег Зег
61у Ьеи 210 Туг Зег Ьеи Бег Бег 215 νβΐ Уа1 ТЬг νΛ1 Рго 220 Бег Бег Авп РЬе
61у 225 ТЬг 61л ТЬг Туг ТЬг 230 Суз Азп νβΐ Азр Βίε 235 Ьуз Рго Зег Азп ТЬг 240
ЬуЗ V»! Авр Ьув ТЬг 245 νβΐ 61и Агд Ьув Сув 250 Сув νβΐ 61и Сув Рго 255 Рго
Суз Рго А1а Рго 360 Рго Уа1 А1а С1у Рго 265 Зег 7а1 РЬе Ьеи РЬе 270 Рго Рго
Ьуз Рго Ьуз 275 Аар ТЬг Ьеи Меи 11е 280 Бег Агд ТЬг Рго С1и 285 Уа1 ТЬг Сув
ν«ι Уа1 290 νβΐ Авр Уа1 Бет Н1з 295 С2и Авр Рго 61 и νβΐ 300 61 п РЬе АЗП тгр
Туг 305 Уа1 Авр 61у Уа1 С1и 310 νβΐ Н1Б Абл А1а Ьуз 315 ТЬг Ьуз Рго Агд <31и 320
63ч 61л РЬе Азл Бег 325 ТЬг рье Агд ναΐ Уа1 330 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 335 νβΐ
Н1Б 61п Авр Тгр 340 Ьеи Абл 01у Ьув 61и 345 Туг Ьув Сув Ьув νβΐ 350 Зег Авп
Ьуз 61у Ьеи 355 Рго А1а Рго 12е 61и 360 Ьуз ТЬг Пе Зег Ьуз 365 ТЬг Ьуз <Э1у
61л Рго 370 Агд 61и Рго 62п Уа1 375 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 380 Зег Агд 61 и 61и
МеЕ 385 ТЬг Ьув Абл 61л νβΐ 390 Бег Ьеи ТЬг Сув Ьеи 395 Уа1 Ьув С1у РЬе Туг 400
Рго £ег Авр Не А] а 405 Уа1 61и Тгр 61и Зег 410 Азп 61 у С1п Рго С1и 415 Авп
Абл Туг Ьув ТЬг 420 ТЬг Рго Рго Меи Ьеи 425 Авр Бег Авр 61у Зег 430 РЬе РЬе
Ьеи Туг Бет 435 Ьуз Ьеи ТЬг νοί Авр 440 Ьув Зег Агд Тгр 61п 445 61П 61у АЗП
- 97 011449
Уа1 РЬе бег Су5 Зег νβΐ Мек Ηίε С1и А1а Ьеи Ηίε Авп Ηίε Туг ТЬг 450 455 460 η Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Бег Рго С1у Ьуз
465 470 <210? 15 <211? 720 <212? ДНК <213? Ното εηρίβηε <400> 15 акдаддсксс скдсксадск сскддддскд скаакдскск дддкскскдд акссадкддд 60 дакаккдкда кдасксадкс кссасксксс скдсссдкса сссскддада дссддссссе 120 аксксскдса ддкскадкса дадссксккд какадкаакд дакасааскк кккддаккдд 180 касскдсада адссадддса дкскссасад сксскдакск акккдддкьс кааксдддсс 240 кссддддксс скдасаддкк садкддсадк ддаксаддса садаккккас аскдаааакс 300 адсададкдд аддскдадда кдккддддкк каккаскдса кдсаадскск асааасксск 360 сддасдкксд дссаадддас сааддкддаа аксааасдаа скдкддскдс ассакскдкс 420 кксакскксс сдссакскда гдадсадккд ааакскддаа скдсскекдк кдкдкдсскд 480 скдаакааск кскаксссад ададдссааа дкасадкдда аддкддакаа сдссскссаа 540 ссдддкааск сссаддадад кдксасадад саддасадеа аддасадсас скасадсссс 600 адсадсассс кдасдскдад сааадсадас касдадааас асааадгска сдсскдсдаа 660 дксасссагс адддсскдад сксдсссдкс асааададск ссаасадддд ададкдкгад 720 <210> 16 <211> 239 <212> РКТ <213> Нсяпо εβρϊβηε
<400> 16 Мек Агд Ьеи Рго А1а 61п Ьеи Ьеи С1у Ьеи Ьеи Мек 10 Ьеи Тгр νβΐ 15 Зег
1 5
С1у Зег Зег <31у Авр Не νβΐ Мек ТЬг <31п Зег РГО Ьеи Зег Ьеи РГО
20 25 30
Уа1 ТЬг Рго О1у б1и Рго А1а Зег 11е Зег Сув Агд Зег Зег 61 п Зег
35 40 45
Ьеи Ьеи Туг Зег Аап С1у Туг Азп РЬе Ьеи Авр Тгр Туг Ьеи 61 п Ьув
50 55 60
Рго С1у 61 η Зег Рго С1п Ьеи ьеи Не туг Ьеи С1у Зег Авп Агд А1а
65 70 75 80
Зег С1у ν»ι Рго Авр Агд РЬе Бег б1у Зег <31у Зег С1у ТЬг Авр РЬе
85 90 95
ТЬг Ьеи Ьуз Не Зег Агд νβΐ 61и А1а С1и Авр Уа1 С1у Уа1 Тут Туг
100 105 НО
Сув Мек С1п А1а Ьеи 61п ТЬг Рго Агд ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьув
115 120 125
- 98 011449
ν»1 61υ 130 11е Ьув Агд ТЬг Уа1 135 А1а А1а Рго Бег νβΐ 140 РЬе 11е РЬе Рго
Рго Бег Азр С1и 61п Беи Буе Бег <31у ТЬг А1а Бег Уа1 Уа1 Суз Беи
145 150 155 160
Беи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд 61 и А1а Буе Уа1 61п Тгр Буе νβΐ Авр
165 170 175
АЗП А1а Беи Е1п Бег 61у Азп Бег 61п С1и Бег Уа1 ТЬг С1и 61П Азр
180 185 190
Бег Буе Азр Бег ТЬг Туг Бег Беи Бег Бег ТЬг Беи ТЬг Беи Бег Буе
195 200 205
А1а Аар Туг С1и Ьуз Н18 Буе νβΐ Туг А1а Суз 61и Уа1 ТЬг ΗΪΒ <31п
210 215 220
С1у Беи Бег Бег Рго Уа1 ТЬг Бук Бег РЬе Аеп Агд С1у С1и Сув
225 230 235
<210> 17 <211> 357 <212> ДНК <213> Ното варгепз <4ОО> 17 саддгдсадс Сдсаддадгс дддсссадда скддГдаадс сЬСсддадас ссСдкссскс 60 асссдсассд сскскддкдд ссссассадс адгсаскасс ддакскддас ссддсадссс 120 дссдддаадд даскддаакд даккдддсдк дкскакасса дкдддадсас сааскасаас 180 ссссссссса ададссдадк сассасдкса дкадасасдк ссаадаасса дСЬскссскд 240 аадскдадск скдкдассдс сдсддасасд дссдкдкакк аскдсдсдад адакддкскк 300 касадддддк асддкакдда сдкскддддс саадддасса сддксассдк сксекса 357 <210> 18 «211» 119 <212> РВТ <213> Ното заргепв <400> 18
С1п Уа! С1п Беи <31п 61 и Бег С1у Рго 61 у Беи Уа1 Буз Рго Бег <31 и 15
1 5 10
ТЬг Беи Бег Беи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Бег <31у 61у Бег Не Бег Бег Туг
20 25 30
Туг Тгр 11е Тгр Не Агд 61п Рго А1а <31у Був <31 у Беи 61и Тгр Пе
35 40 45
б1у Агд Уа1 Туг ТЬг Бег С1у Бег ТЬг Авп Тут Авп Рго Бег Беи Буе
50 55 60
Бег Агд Уа1 ТЬг Мег. Бег Уа1 Азр ТЬг Бег Ьув Авп С1п РЬе Бег Беи
65 70 75 80
- 99 011449
Ьув Ьеи Зег Зег νβΐ ТЬг А1а А1а Авр ТЬг А1 а Ча1 Туг Туг Сув А1а
85 90 95
Агд Авр С1у Ьеи Туг Агд С1у Туг С1у МеС АЕр Уа1 Тгр С1у (31п С1у
100 105 110
ТЬг ТЫ Уа1 ТЬг V»! Зег Зег
115 <210> 1Э <211> 321 <212> ДНК <213> Ното δορίβηε <400> 19 дасаСееада аЬсаеЬЬдЬС дддааадссс аддысвдсд даадаЫ.С1д дддассаадд
СдасссадСс дддсдадеса сьааасьссь дсадЬддаЬс саасЪЪасЪа СддадаГсаа
ЬссаСсЕЕсе дссгаебадс даьььаььсе ЬдддасадаС чдЪсаасад а дгдСсгдсаС адсСддЫад дссЕссддСб СЬсасксбса асСдасадСЬ
Ыдбаддада ссИддъаьса Сдсааадбдд ссаЬсадсад ЬсссдсЬсас сададСсасс дсадааасса ддбсссасса ссьдсадссь СГЛсддсддс £0
120
180
240
300
323 <210> 20 <211> 107 <212> РНТ <213* Ното эаргепб <400> 20
Авр Не С1п Ме£ ТЬг (31п Бег Рю Зет Зег ν»1 10 Зег А1а Зег Уа1 15 <31у
1 5
Авр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Сув Агд Л1а Зег βΐη Рго 11е Зег Зег Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьув Рго <31у Ьув А1а Рго Ьув Ьеи Ьеи Х1е
35 40 45
Туг Зег А1а Зег е1у Ьеи <31 η Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег <31у
50 55 £0
Бег О1у Зег б1у ТЬг Авр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
£5 70 75 ВО
С1и Авр РЬе А1а ты Туг Туг Сув С1П 61п ТЬг Авр Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у <31у 61у ТЬг Ьув Уа1 С1и 11е Ьув
100 105 <210> 21 <211> 1395 <212> ДНК <213> Ното варЗепв
- 100 011449 <400> 21 аЕдааасасс ЕдЕддЕЕсЕЕ ссЕсссдсЕд дЕддсадсЕс ссадаЕдддЕ ссЕдЕсссад дЬдсадсЕдс аддадЕсддд сссаддасЕд дЕдаадссЕЕ сддадасссг дЕсссгсасс ЕдсасЕдСсЕ сЕддЕддсЕс саЕсадгадЕ гасЕассдда ЕсЕддаЕссд дсадсссдсс дддаадддас ЕддааЕддаС ЕдддсдЕдЕс ЕаЕассадЕд ддадсассаа сЕасаасссс Ес-ссЕсаада дЕодадЕсас саЕдЕсадЕа дасасдЕсса адаа-ссадЕЕ сЕсссЕдаад сЕдадсЕсЕд Едассдссдс ддасасддсс дЕдЕаЕЕасЕ дЬдсдадада ЕддЕсЕЕЕае адддддгасд дЕаЕддасдЕ сЕддддссаа дддассасдд ЕсаседЕсЕс сЕсадссЕсс ассаадддсс саг-сддЕсЕЕ сссесгддсд ессЕдсЕсса ддадсассЕс сдададсаса дсддсссгдд дсЕдссЕддЕ сааддасЕас ЕЕссс-сдаас сддьдасддЕ дЕсдЕддаас ЕсаддсдсЕс Едассадсдд сдЕдсасасс ЕЕсссадсЕд ЕссЕасадЕс сСеаддасТс ЕасСсссЕса дсадсдЕддЕ да-ссдЕдссс ЕссадсаасЕ Есддсассса дассЕасасс Едсаасдеад аЕсасаадсс садсаасасс ааддЕддаса адасадссда дсдсаааЕдЕ ЕдЕдЕсдадЕ дсссассдЕд сссадсасса ссЕдЕддсад даседЕсадр сЕЕссЕсЕЕс сссссаааас ссааддасас ссЕсаЕдаЕс Есссддассс сЕдаддссас дЕдсдЕддЕд дЕддасдсда дссасдаада ссссдаддес садЕЕ-саасЕ ддЕасдЕдда сддсдЕддад дрдсаЕааЕд ссаадасааа дссасдддад дадсадЕЕса асадсасдЕЕ ссдЕдЕддЕс адсдЕссЕса ссдЕЕдсдса ссаддасЕдд сСдаасддса аддадЕасаа дЕдсааддЕс Ессаасааад дссЕсссадс ссссаЕсдад аааассаЕсс ссаааассаа адддсадссс сдадаассас аддЕдЕасас ссЕдесссса ссссдддадд адаЕдассаа даассаддЕс адссЕдаесЕ дссСддбсаа аддсЕЕсЕас сосадсдаеа Есдесдгдда дЕдддададс ааЕдддсадс сддадаасаа срасаадасс асасссссса ЕдсЕддасЕс сдасддсЕсс ЕесЕРссссе асадсаадсЕ сассдЕддас аададсаддЕ ддсадсаддд дааодЕСЕЕс ЕсаЕдсЕссд ЕдаЕдсасда ддсЕсЕдсас аассасЕаса сдсадаадад ссЕсЕсссЕд ССЕссдддЕа ааЕда
120
160
240
300
360
420
480
540
600
660
720
760
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1395 <210> 22 <2и> 464 <212> РКТ <213> Нолю еарЗепБ
<400> 22 РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 А1а А1а Рго Агд Тгр
МеЕ 1 Ьуа Η18 Ьеи Тгр 5
10 15
νβΐ Ьеи Вег С1П 20 νβΐ С1п Ьеи 31п С1и 25 Вег С1у Рго С1у Ьеи 30 Уа1 Ьув
Рго Бег С1и 35 ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг 40 сув ТЬг νβΐ Бег С1у 61у 45 Зег 11е
Вег Бег 50 Туг Туг Тгр Не Тгр 55 Не Агд <31п Рго А1а 60 <31у Ьуа С1у Ьеи
<31и 65 тгр Не 61у Агд Уа1 70 Туг ТЬг Зег С1у вег 75 ТНг Αε η Туг Αεη Рго 80
Вег Ьеи Ьуа Зег Агд 85 Уа1 ТЬг НеЕ Зег Уа1 90 Аар ТЬг Зег Ьуа Авп 95 <31п
РЬе Вег Ьеи Ьуа 100 Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг 105 А1а А1а Авр ТЬг А1а но νβΐ Туг
Туг Суа А1а 115 Агд Авр С1у Ьеи Туг 120 Агд С1у Туг С1у МеЕ 125 Агр νβΐ Тгр
- 101 011449
С1у С1П 61у 130 ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 135 Зег зег А1а Зег 140 ТЬг Ьув 61у Рго
Зег 145 Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 150 Рго Сув Зег Агд Зег 155 ТЬг Зег 61и Зег ТЬг 160
А1а А1а Ьеи С1у Сув 165 Ьеи Ча1 ьув Авр Туг 170 РЬе Рго С1и Рго Уа1 175 ТЬг
Уа1 Зег Тгр Аяп 100 Зег 61у А1а Ьеи ТЬг 185 Зег <31 у Уа1 Ηΐε ТЬг 190 РЬе Рго
А1а Уа1 Ьеи 195 61п Зег Зег 61у Ьеи 200 Туг Зег Ьеи Зег Зег 205 Уа1 νβΐ ТЬг
ν&1 Рго 210 Зег Зег Αεη РЬе С1у 215 ТЬг С1п ТЬг туг ТЬг 220 Суе Авп Уа1 Авр
Ηίε 225 ЬуВ Рго Зег Авп ТЬг 230 Ьув Уа1 Авр Ьув ТЬг 235 νβΐ <31и Агд Ьув Сув 240
Суе Уа1 61и Сув Рго 245 Рго Су& Рго А 1а Рго 250 Рго Уа1 А1а С1у Рго 255 Зег
Уа1 РНе Ьеи РЬе 260 Рго Рго Ьув Рго Ьув 265 Авр ТЬг Ьеи Мег Не 270 Зег Агд
ТЬг Рго С1и 275 Уа1 ТЬг Сув Уа1 Уа1 200 Уа1 Авр Уа1 Зег Н1в 285 61и Авр ₽го
61Ώ νβΐ 290 61п РЬе Авп Тгр туг 295 Уа1 Авр <31у νβΐ <31и 300 Уа1 Ηΐε Αεη А1а
Ьув 305 ТЫ ьуе Рго Агд €1и 310 С1и С1п РЬе Азп Зег 315 ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 320
Зег Уа1 Ьеи ТЬг V»! 325 νβΐ Ηΐε 61 п Авр Тгр 330 Ьеи Авп 61 у Ьув 61и 335 Туг
Ьув Сув Ьув Уа1 340 Зег Авп Ьув 61 у Ьеи 345 Рго А1а Рго Не 61и 350 Ьув ТЫ
Не Зег Ьув 355 ТЬг Ьув 61у 61 п Рго 360 Агд <31 и Рго С1п Уа1 365 Тух ТЬг Ьеи
Рго Рго 370 Зег Агд С1и С1и Мер 375 ТЬг Ьув Авп 61 п V»! 300 Зег Ьеи ТЬг Сув
Ьеи 385 νβΐ Ьуе 61у РЬе Туг 390 Рго Зег Авр Не А1а 395 νβΐ 61и Тгр 61и зег 400
Азп С1у С1п Рго С1и 405 Авп Авп Туг Ьув ТЬг 410 ТЬг Рго Рго Не Г Ьеи 415 Авр
Зег Αερ <31у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьув Ьеи ТЬг Уа1 Авр ьув Зег
420 425 430
- 102 011449
Агд Тгр С1л С1л 61у Аал νβΐ ₽Ье £ег Сув Бег ν«ι МеЬ ΗΪ5 61л АХа
435 440 445
Ьеи Нхв Аал Н1в Туг ТЬг С1п Ьув £ех Ьеи Бег Ьеи 8ег Рго С1у ьуз
450 455 460 <210> 23 <211> 705 <212> ДНК <213> Ното аархепа <400> 23 аЬдаддсссс ссдсСсадсС •ссСддддсСс сЪдсЬдсЪсе ддССессадд ссссадасдс 60 дасаСссада Ьдасссадсс СссаСсеСсс дСдЬсЬдсас сСдСаддада сададЬсасс 120 аСсасССдСс дддсдадсса дссЬассадс адсСддССад сссддсасса дсадааасса 180 дддааадссс сСааасгссС дасгсаггсС. дссСссдд+с сдсааадсдд ддесссасса 240 аддССсадсд дсадСддасс СдддаеадаС ССсасгсСса сеассадсад сссд-садссС 300 даадагСГСд саасСЬасса ССдСсаасад асСдасадЫ? ЬсссдсСсас Шсддсддс 360 дддассаадд сддадассаа аедаассдод дссдсассас ссдСсССсас сССсосдсса 420 сссдасдадс адССдаааСс СддаасСдсс СссдССдСдС дссСдсСдаа СаасССсСаС 480 сссадададд ссааадСаса дСддааддСд дасаасдссс СссааСсддд саасссссад 540 дададгдсеа сададсадда садсааддас адеассСаса дссСсадсад сасссСдасд 600 сСдадсааад садасСасда дааасасааа дСсСасдссС дсдаадссас ссаСсадддс 660 ссдадсссдс ссдЕсасааа дадсгссаас аддддададс досад 705 <210> 24 <211> 234 <212> РКТ <213> Ното варзела <400> 24
МеС Агд Ьеи Рго 1 А1а 5 <31 η Ьеи Ьеи С1у Ьеи Ьеи ьеи ьеи Тгр РЬе Рго
10 15
61у Бег Агд Суя Аар Не С1п НеС ТЬг <31п Бег Рго Бег Зег Уа1 Зег
20 25 30
А1а Зег Уа1 61у Аар Агд νβΐ ТЬг Не ТЬг Суя Агд А1а Бег 01Л Рго
35 40 45
Не Бет Зег Тгр Ьеи А1а Тгр Туг С1л С1л Ьуа Рго С1у Ьуз А1а Рго
50 55 60
Ьуа Ьеи Ьеи Не Туг Зег А1а Бег С1у Ьеи 01 η Бег С1у Уа1 Рго Бег
65 70 75 80
Агд РЬе Бег 61у Бег С1у Зег <31 у ТЬг Аар РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег
85 90 95
Зег Ьеи С1п Рго <31и Авр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Сув С1л <31 η ТЬг Аар
100 105 но
Зег РЬе Рго Ьеи ТЬг РЬе С1у 61у 61у ТЬг Ьуа Уа! С1и Не Ьуа Агд
115 120 125
- 103 011449
ТЫ Уа1 130 А1а А1а Рго Бег Уа1 135 РЬе Не РЬе Рго Рго 140 Бег Авр С1и С1п
Ьеи 145 Ьув Бег 61у ТЫ А1а 150 Бег νβΐ νβΐ Сув Ьеи 155 Ьеи Авп Авп РЬе Туг 160
Рго Агд С1и А1а Ьуа 165 νβΐ С1п Тгр Ьув νβΐ 170 Авр Авп А1а Ьеи С1п 175 Бег
С1у Азп Бег С1п 180 б1и Бег νβΐ ТЬг С1и 185 Сйп Авр Бег Ьув Αερ 190 Бег ТЫ
Туг Бег Ьеи 195 Бег Бег ТЫ Ьеи ТЬг 200 Ьеи Бег Ьув А1а Авр 205 Туг С1и Ьув
ЙХ5 ьув 210 Уа1 Туг А1а Сув С1и 215 Уа1 ТЬг Ηχε 61 п С1у 220 Ьеи Бег Бег Рго
Уа1 ТЬг ьув Бег РЬе Авп Агд С1у С1и Суз
225 230 <210> 25 <211> 363 <212> ДНК <213> Нолю вархепв <400> 25 саддкдсадс асскдсаскд ссадддаадд ссскссскса аадскдадкк касддкддка кса сдсаддадкс кскскддкдд даскддадкд ададесдадг скдсдассдс аккккааска дддсссадда скссаксада даккддакак сассакакса кдсддасасд сккксасеад скддкдаадс адккаскаск аксгаккаса дкадасакдк дссдкккакк кддддссадд скксддадас ддасскдда к дкдддадсас совадаасеа аскдкдсдад даассскддк сскдкссскс ссддсадссс сааскасаак дккскссскд ааадддкдас сассдксксс
120
180
240
300
360
363 <210> 26 <211> 121 <212> РИТ <213> Нолю вархепв <400> 26
Й1п 1 ν»ι С1п Ьеи С1п 5 С1и Бег С1у Рго С1у Ьеи 10 νβΐ Ьув Рго Бег 15 С1и
ТЬг Ьеи Бег Ьеи 20 ТИг Сув ТЬг ν«ι Бег 25 61у 61у Бег Не Агд 30 Бег Туг
Тут Тгр ТЫ 35 Тгр Не Агд С1п Рго 40 Рго <31у Ьув 01у Ьеи 45 С1и Тгр Не
51у Туг 50 Не Туг Туг Бег <31у 55 Бег ТЫ Авп Туг Авп 60 Рго Бег Ьеи Ьув
Бег 65 Агд Уа1 ты 11е Бег 70 νβΐ Авр Мек Бег Ьув 75 Авп С1п РЬе Бег Ьеи ВО
- 104 011449
Ьуз Ьеи Бег £ег Уа1 85 ТЬг А1а АХа Авр ТЬг 90 АХа ν«χ Туг Туг Суз А1а 95
Агд Ьуз С1у Азр 100 Туг С1у СХу Авп РЬе 105 Авп Туг РЬе ΗΪΒ СХп 110 Тгр С1у
С1п 61у ТЬг 115 Ьеи V»! ТЬг Уа1 Бег 120 Бег
<210> 27 <211> 336 <212> ДНК <213> Ното варгепв <400> 27 даЕаЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс ЕссасЕсЕсс сЕдсссдЕса ссссЕддада дссддссЕсс 60 аЕсЕссЕдса ддгсЕадЕса дадссЕссЕа саЕасЕааЕд даЕасаасЕа ЕЕЕсдаЕЕдд 120 ЕассЕдсада адссадддса дЕсЬссасаа сЕссЕдаЕсЕ аЕЕЕдддЕЕс ЕааЕсдддсс 180 ЕссддддЕсс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддса садаЕЕЕЕас асЕдааааЕс 240 адсададЕдд аддсЕдадда ЕдЕЕддддЕЕ ЕаЕЕасЕдса ЕдсаадсЕсЕ асааасЕссд 300 ЕасадЕЕЕЕд дссаддддас саадсЕддад аЕсааа 336 <210> 26 <211> 112 <212> РЕТ <213> Ното зарХепв
<400> 28 МеЕ ТЫ 61 п Бет Рго Ьеи Бег Ьеи Рго УаХ ТЬг Рго СХу 15
Авр 1 Не Уа1
5 10
С1и Рго АХа Бег 20 11е Бег Суз АГд Бег 25 Бег СХп Бег Ьеи Ьеи 30 Н1з ТЬг
Азп СХу Туг 35 Азп Туг РЬе Азр Тгр 40 Туг Ьеи СХп Ьуз Рго 45 С1у 61п Бег
РГО С1п 50 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 55 С1у бег Авп Агд АХа 60 Бег СХу УаХ РГО
АВр 65 Агд РЬе Бег 61у Бет 70 С1у Бег 61 у ТЬг Авр 75 РЬе ТЫ ьеи ьуе 11е 80
Бег Агд Уа1 С1и АХа 85 С1и Лер УаХ СХу УаХ 90 Туг Туг Сув МеЕ СХп 95 АХа
Ьеи СХп ТЬг Рго 100 Туг Бег РЬе С1у •СХп 105 СХу ТЬг Ьув Ьеи С1и 110 Не Ьуз
<210> 29 <211> 1401 <2Х2> ДНК <213> Ното ββρίβηβ
- 105 011449 <400> 29 асдааасаСс СдЕддггсЕЕ ссЕЕсЕссЕд дЕддсадсЕс ссадаЕдддЕ ссЕдЕсссад 60 дЕдсадсЕдс аддадЕсддд сссаддасЕд дЕдаадссЕЕ сддадаессЕ дЕсссЕсасс 120 ЕдсасЕдСсЕ сЕддГддссс саЕсадаадг сасЕассдда ссрддасссд дсадссссса 180 дддаадддас ЕддадСддаЕ ЕддаЕасасс ЕаЕЕасадСд ддадсассаа ссасааЕссс 240 ЕсссЕсаада дссдадЕсас саЕаЕсадСа дасаСдссса адаассадЕЕ сгсссЕдаад 300 сЕдадЕЕсЕд ЕдассдсЕдс ддасасддсс дЕЕЕаЕСасг дрдсдадааа дддрдасСас 360 ддРддЕааРЕ ЕЕаасЕасЕЕ РеассадРдд ддссадддаа сссЕддЕсас сдРсЕссЕса 420 дсерссасса адддсссаЕс ддссЕРсссе сЕддсдсссС дсрссаддад сассЕссдад 480 адсасадсдд сссЕдддсЕд ссСддЕсаад дасЕасЕЕсс ссдаассддр дасддЕдЕсд 540 рддаасЕсад дсдсЕсРдас садсддсдрд сасассЕЕсс садсЕдЕссЕ асадЕссРса 600 ддасЕсРасЕ сссрсадсад сдрддрдасс дРдсссРсса дсаасЕСсдд сасссадасс 660 ЕасассЕдса асдрадасса саадсссадс аасассаадд еддасаадас адЕЕдадсдс 720 ааардггдрд Есдадгдссс ассдрдссса дсассассгд Еддсаддасс дРсадРсЕЕс 780 сРсеессссс саааасссаа ддасассссс аЕдасссссс ддасссссда ддесасдрдс 840 дСддСддедд асдсдадЕса сдаадасссс даддессадС ЕсаасЕддЕа сдСддасддс 800 дЕддаддСдс асааЕдссаа дасааадсса сдддаддадс адЕЕсаасад сасдеьссде 860 дЕддРсадсд ЕссгсассдЕ ЕдЕдсассад дасЕддсЕда асддсаадда дРасаадЕдс 1020 ааддРсЕсса асаааддссЕ сссадссссс аесдадаааа ссаСсСссаа аассаааддд 1080 садссссдад аассасаддР дСасасссрд сссссаСссс дддаддадаС дассаадаас 1140 саддесадсс гдассЕдссЕ ддесаааддс СЕсЕасссса дсдасаЕсдс сдгддадхдд 1200 дададеааЕд ддсадссдда даасаасРас аадассасас сЕсссаЕдсЕ ддасЕссдас 1260 ддсЕссЕЕсЕ сссЕсЕасад саадсРсасс дЕддасаада дсаддСддса дсаддддаас 1320 дЕссссЕсаЕ дсЕссдРдаЕ дсаЕдаддсЕ сЕдсасаасс асЕасасдса даададссЕс 1380 ЕсссЕдРсЕс сдддЕаааЕд а 1401 с210> 30 <211> 466 <212> РКТ <213> Ното зар!еП£ <400> 30
МеС 1 Ьув На е Ьеи Тгр РЬе РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 А1а А1а Рхо Агд Тгр 15
5 10
Уа1 Ьеи Бег С1п Уа1 <31 л Ьеи С1п С1и Бег <31у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьув
20 25 30
Рго £ег 61и ТЬг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Сув ТЬг Уа1 Бег <51у С1у Бег Не
35 40 45
Агд Бег Туг Туг Тгр ТЬх Тгр Не Агд <31л Рго Рго С1у Ьув Б1у Ьеи
50 55 60
С1и Тгр Не 61у Туг 11е Туг Туг Бег С1у Бег ТЬг Авп Туг Авп Рго
65 70 75 80
Бег Ьеи Ьув Бег Агд ν·1 ТЬх Не Бег νβΐ Авр МеС Бег Ьув Авп С1п
85 90 95
РЬе Бег Ьеи Ьув Ьеи Бех Бег Уа1 ТЬг А1а АХа Авр ТЬг А1а Уа1 Туг
100 105 110
Туг Сув А1а Агд Ьув С1у Авр Туг С1у С1у Авп РЬе Авп Туг РЬе ΗΪ8
115 120 125
106 011449
αΐη Тгр 130 СЗу бЗп 61у ТЬг Ьеи Уа1 135 ТЬг УаЗ Бег Зег 140 А1а Бег ТЬг Ьув
С1у 145 Рго Бег УаЗ РЬе Рго 150 Ьеи А1а Рго Суз Бег 155 Агд Бег ТЬг Бег СЗи 160
Зег ТЬг А1а АЗа Ьеи 165 е1у Суз Ьеи УаЗ Ьув 170 Авр Туг РЬе Рго С1и 175 Рго
УаЗ ТЬг νβΐ Бег 180 тгр Азп Зег бЗу АЗа 185 Ьеи ТЬг Зег С1у УаЗ 190 Ηίε ТЬг
РЬе Рго А1а 195 Уа1 Ьеи С1п Бег Бег 200 С1у Ьеи Туг Зег Ьеи 205 Бег Бег νβΐ
Уа1 ТЬг 210 УаЗ Рго Зег Зег Авп 215 РЬе СЗу ТЬг 61п ТЬг 220 Туг ТЬг Сув Азп
УаЗ 225 Авр Н18 Ьув Рго Бег 230 Авп ТЬг Ьуз Уа1 Авр 235 Ьуз ТЬг Уа1 С1и Агд 240
Ьув Суз Суз Уа1 СЗи 245 Суз Рго Рго Сув Рго 250 А1а Рго Рго Уа1 АЗ а 255 С1у
Рго Зег УаЗ РЬе 260 Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз 265 Рго Ьув Авр ТЬг Ьеи 270 Не С Не
Бег Агд ТЬг 275 Рго <33и УаЗ ТЬГ Суз 280 Уа1 УаЗ Уа1 АЗр УаЗ 285 Бег Ηίε С1и
Авр Рго 290 СЗи УаЗ бЗп РЬе Азп 295 Тгр Туг УаЗ Авр «Зу 300 УаЗ <51и УаЗ Η18
Азп 305 А1а Ьув ТЬг Ьуз Рго 310 Агд б1и СЗи С1п РЬе 315 Азп Бег ТЬг РЬе Агд 320
у*з УаЗ Бег УаЗ Ьеи 325 ТЬг Уа1 УаЗ Ηίε СЗп 330 Азр Тгр Ьеи Авп С1у 335 Ьуз
С1и Туг Ьув Сув 340 Ьув Уа1 Бег Авп Ьув 345 СЗу Ьеи Рго А1а Рго 350 13е С1и
Ьув ТЬг 11е 355 Бег Ьув ТЬг Ьуз СЗу 360 С1п Рго Агд СЗи Рго 365 С1п УаЗ Туг
ТЬг Ьеи 370 Рго Рго Бег Агд бЗи 375 бЗи Мес ТЬг Ьув Азп 380 СЗп Уа1 Бег Ьеи
ТЬг 385 Сув Ьеи УаЗ Ьув С1у 390 РЬе Туг Рго Зег Азр 395 Не АЗ а УаЗ С1и Тгр 400
СЗи Зег Авп С1у СШ 405 Рго СЗи Азп Азп Туг 410 Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 415 Мес
Ьеи Авр Бег Авр С1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег Ьуз Ьеи ТЬг V»! Азр
420 425 430
- 107 011449
Ьуе Бег Агд Тгр 61η С1п 61у Азп Уа1 РЬе Бег Суе 440 Бег Уа1 МеЕ 445 Ηίε
435
61и А1а Ьеи Ηίδ Аеп ΗΪΒ Туг ТЬг 61п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго
450 455 460
61 у Ьуз
465 <210> 31 <211> 720 <212> ДНК <213> Ното зар1епЕ <400> 31 аЕдаддсЕос сЕдсЕсадсЕ ссЕддддсЕд сЕааЕдсгсЕ дддЕсЕ-сЕдд аЕссадЕддд ¢0 даЕаЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс ЕссасЕСЕсс ссдсссдЕса ссссЕддада дссддссЕсс 120 аЕсСссСдса ддЕсЕадЕса дадссЕссЕа саЕасЕааЕд даЕасаасЕа ЕЕЕсдаСЕдд 180
ЕассЕдсада адссадддса дЕсЕссасаа СЕССЕдаЕсЕ аЕЕЕдддЕЕс ЕааЕсдддсс 240
ЕссддддЕсс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаьсаддса садаЕЕЕЕас асЕдааааЕс 300 адсададЕдд аддсЕдадда ЕдЕЕддддЕЕ ЕаЕЕасгдса ЕдсаадсЕсЕ асааасЕссд 360
ЕасадЕЕЕЕд дссаддддае саадсЕддад аЕсааасдаа сЕдЕддсЕде ассаЕсЕдЕс 420
ЕЕсаЕсЕЕсс сдссаЕеЕда ЕдадсадЕЕд аааЕсЕддаа сЕдссЕсЕдЕ ЕдЕдЕдссЕд 480 сЕдааЕаасЕ ЕсЕаЕсссад ададдссааа дЕасадЕдда аддЕддаЕаа сдсссЕссаа 540
ЕсдддЕаасг сссаддадад ЕдЕсасадад саддасадса аддасадсас СЕасадссЕс 600 адсадсассс ЕдасдсЕдад сааадсадас Еасдадааас асааадЕсЕа сдссЕдсдаа 660 дЕсасссаЕс адддссЕдад сЕсдсссдЕс асааададеЕ Есаасадддд ададЕдЕЕад 720 <210> 32 <211> 239 <212> РКТ <213> Ното δβρίβηδ <400> 32
МеЕ Агд Ьеи Рго А1а б!п Ьеи Ьеи 61у Ьеи 10 Ьеи МеЕ Ьеи Тгр Уа1 15 Бег
1 5
61у Бег Бег 61у Авр 11е Уа1 МеЕ ТЬг С1п Бег Рго Ьеи Бег Ьеи Рго
20 25 30
Уа2 ТЬг Рго 61у 62« Рго А1а Бег Не Бег Сув Агд Зег Зег С1п Зег
35 40 45
Ьеи Ьеи Ηιβ ТЬг АЗП 61у Туг А&п Туг РЬе Авр Тгр Туг Ьеи 61 п Ьуа
50 55 60
Рго 61у 61 η Бег Рго 61п Ьеи Ьеи Не Туг ьеи 61у Зег Азп Агд А1а
65 70 75 80
Бег 61у Уа1 Рго АВр Агд РЬе Бег С1у Бег 61у Бег <31у ТЬг Авр РЬе
85 90 95
ТЬг Ьеи Ьуз 11е Бег Агд Уа1 61 и А1а 61и Азр Уа1 С1у Уа1 Туг Туг
100 105 110
- 108 011449
Суя МеС С1п 115 А1 а Ьеи 61п ТЬг Рго 120 Туг Бег РЬе е1у <31п 125 С1у ТЬг Ьув
Ьеи С1и 130 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 135 А1а А1а Рго Бег Уа1 140 РЬе Не РЬе Рго
Рго 145 Бег Азр Б1и 51п Ьеи 150 Ьуз Бег 61у ТЬг А1а 155 Бег Уа1 Уа1 Суз Ьеи 160
Ьеи АЗП Азп РЬе Туг 165 Рго Агд С1и А1а Ьуз 170 Уа1 С1п Тгр Ьуз 1/а1 175 Азр
Лвп А1а Ьеи С1П 180 Бег СЗу АЗП Бег С1п 185 61и Бег Уа1 ТЬг С1и 190 С1п Азр
Бег Ьуз Азр 195 Бег ТЬг Туг Бег Ьеи 200 Бег Бег ТЬг Ьеи ТЬг 205 Ьеи Бег Ьуз
А1а Азр 210 Туг С1и Ьуз Ηίε Ьуз 215 Уа1 Туг А1а Суз С1и 220 Уа1 ТЬг Нхз С1п
С1у Ьеи Бег Бег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Бег РЬе Азп Агд 81у С1и Суз
225 230 235 <210> 33 <211> 361 <212> ДНК <213> Ното зархепз <400> 33 саддСдсадс ссседедсад ссаддсаадд дсааасСсед ссдсааасаа ддСааадсад сддсддадсс сссссддаес ддсСддадСд Сдаадддссд асадссСдад СдссСддссс едддддаддс сассССсадС ддсддсадсс аССсассаСс адсСдаддас СдасСасСдд дсддСссадс адссасдсса аСдСсаСасд Сссададаса асддссдсдс ддссадддаа сСдддаддСС сдсассдддс аСддаадСад аССссаадаа ассассдсдс СссСддСсас сссдадассс ссдееаддсс сааасассас сасдсСдСас дададаСддд сдСсссссса
120
180
240
300
360
361 <210> 34 <211> 120 <212> РКТ <213> Ното зархепз <40 0> 34
61п 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1и Бег С1у С1у С1у 10 Уа1 ν»ι С1п Рго <51у 15 Агд
Бег Ьеи Агд Ьеи 20 Бег Суз А1а А1а Бег 25 С1у РЬе ТЬг РЬе Бег 30 Бег Туг
Уа1 Мес Н1з 35 Тгр Уа1 Агд Б1П А) а 40 Рго С1у Ьув Б1у Ьеи 45 81« Тхр Уа1
А1а Уа1 50 МеС Бег Туг Аар С1у 55 Бег Бег Ьув Туг Туг 60 А1а Азп Бег Уа1
- 109 011449
ЬуВ С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Авр Αεη Зег Ьуз Авп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Не Авп Зег Ьеи Агд А1а О1и Αερ ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Авр <31у С1у Ьуз А1а Уа1 Рго О1у Рго Азр Туг Тгр С1у С1п
100 105 НО
61у Не Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 <210* 35 <211> 337 <212> ДНК <213> Ното варгепв <400 35 даСаССдСда СдасЬсадСс СссасссСес сСдсссдьса ссссЬддада аСсЬссбдса ддСсСадСса дадсдССсСд СаСадСааСд даСасаасса СассСдсада адссадддса дсссссасад сссссдасес а!ССдддССс сссддддгсс ссдасаддсс садсддсад! ддассаддса садассссас адсададедд аддссдадда СдССддддСС Ьа!Сас1дса СдсаадСССС ССсасСССед дсссгдддас сааадСддас ассааас дссддссСсс 60 СССддаССдд 120 саассдддсс 180 асСдааааСс 240 асааасСсса 300
337 <210> 36 <2Н> 112 <212> РКТ <213> Нолю вар!епв <400> 36
Авр 11 е Уа1 Не! ТЬг С1п Зег Рго Ьеи Бег Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго С1у
1 5 10 15
С1и Рго А1а Зег 20 Не Зег Сув Агд Зег 25 Зег 61п Зег Уа1 Ьеи 30 Туг Зег
Αεη С1у Туг 35 АВП Туг Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи <31 η Ьув Рго 45 С1у 61п Зег
Рго С1п 50 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 55 <31у Зег Ави Агд А1а 60 Зег О1у Уа1 Рго
Αερ 65 Агд РЬе Зег С1у Зег 70 <31у 5ег С1у ты Авр 75 РЬе ТЬг Ьеи Ьув 11е 80
Зег Агд Уа1 С1и А1а 85 51и Авр νβΐ С1у νβΐ 90 Туг Туг Суз Мес 61п 95 νβΐ
Ьеи 61 η ТЬг Рго 100 РЬе ТЬг РЬе С1у Рго 105 С1у ТЬг Ьув Уа1 Авр 110 Не Ьуе
<210> 37 <211> 1398
- 110 011449 <212> ДНК <213> Ното заргепз <400> 37 еьддадкккд ддскдадскд дкдсадскдд кддадкскдд кдкдсадсск скддакксас ддсааддддс кддаакдддк ааскссдкда адддссдакк сааакаааса дссЬдададс ааадсадкдс скддксскда кссассаадд дсссаксддк асадсддссс кдддскдссг аасксаддсд сгскдассад скскаскссс ксадсадсдк асскдсаасд кадаксасаа кдккдкдксд адкдсссасс ССссссесаа аасссаадда дкддкддасд кдадссасда даддкдсака акдссаадас дксадсдксс гсассдккдк дкскссааса ааддсскссс ссссдадаас сасаддкдка дксадсскда сскдсскддк адсаакдддс адссддадаа кссгкскк.сс кскасадсаа кксксасдск ссдкдакдса сгдкскссдд дкааакда ддкккксскс дккдсксккк дддаддсдкд дкссадсссд скксадкадс сакдксакдс ддсадккакд ксакакдакд сассаксксс ададасаакк кдаддасасд дскдкдгакк скаскддддс садддааксс сккссссскд дсдссскдск ддксааддас касгкссссд сддсдкдсас асскксссад ддкдассдкд ссскссадса дсссадсаас ассааддкдд дкдсссадса ссасседедд сасссксакд аксссссдда адассссдад дгссадкгса ааадссасдд даддадсадк дсассаддас кддскдаасд адсссссакс дадаааасса сассекдссс ссагсссддд саааддсккс кассссадсд сааскасаад асеасасекс дсксассдкд дасаададса кдаддскскд сасаассаск каададдкдк ссадкдксад ддаддкссск дадаскексе аскдддкссд ссаддсксса даадкадкаа акаскакдса осаадаасас дскдкакскд аскдкдсдад адакдддддк кддксассдк сксскеадсе ссаддадсас скссдададс аассддкдас ддкдкедкдд скдксскаса дкссксадда аскксддсас ссадасскас асаадасадк кдадсдсааа саддассдкс адкскксскс сссскдаддк сасдкдсдкд аегддСаедк ддаеддедкд ксаасадсас дккссдкдкд дсааддадка саадкдсаад кскссаааас сааадддсад аддадакдас еаадаассад асаксдссдк ддадкдддад ееакдекдда скссдасддс ддеддсадса ддддааедке асасдсадаа дадссгсксс
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380
1398 <210> 38 <211> 465 <212> РЛТ <213> Исто заркепз <400> 38
Мек 1 С1и РЬе 61у Беи 5 £ег Тгр Уа1 РЬе Беи Уа! А1а Беи Беи Агд С1у
10 15
Уа1 61П Суз С1п νβΐ 61 п Беи Уа1 С1и Бег 61у 61у С1у Уа1 Уа1 С1п
20 25 30
Рго С1у Агд £ег Беи Агд Беи £ег Суз А1а А1а Бег С1у РЬе ТЬг РЬе
35 40 45
5ег Бег Туг Уа! Мек ΗΪ8 Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Був <31у Беи
50 55 60
61 и Тгр Уа1 А1а Уа! мек Бег Туг Азр 61у Бег Бег Був Туг Туг А1а
65 70 75 80
Азп Бег νβΐ Буе <31у Агд РЬе ТЬг Не Бег Агд Азр АЗП Бег Був Азп
85 90 95
ТЬг Ьей Туг Беи С1п Не АВП Бег Беи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа!
100 105 110
- 111 011449
Тут Туг Сув А1а Агд Авр 61у 61у Ьуз А1а УаХ Рго С1у Рго Азр Туг
115 120 125
Тгр СХу С1п С1у Не Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг ьуз СХу
130 135 140
Рго 8ег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Суз 5ег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег
145 150 155 160
ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи νβΐ ьуз Азр Тух РЬе Рго 61и Рго νβΐ
165 170 175
тЫ Уа1 Зег Тгр Аеп Зег 61у А1а Ьеи ТЬг Зег СХу Уа1 ΗΪ8 ТЬг РЬе
1В0 185 190
Рго А1а Уа1 ьеи 61 η Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 ν»ι
195 200 205
ТЬг Уа1 Рго Зег Зег Азп РЬе С1у ТЬг 61 п ТЬг Туг ТЫ Сув АВП Уа1
210 215 220
Авр ΗΪΕ Ъу8 Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаХ Азр Ьув ТЫ Уа1 СХи Агд Ьуз
225 230 235 240
Суй Суб V»! С1и Сув Рго Рго Суз Рго А1а Рго Рго νβΐ А1а С1у Рго
245 250 255
Зег νβΐ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуе Рго Ьув Авр ТЬг Ьеи МеЬ Т1е Зет
260 265 270
Агд ТЬг Рго 61и Уа1 ТЬг Сув Уа1 Уа1 Уа1 АВр νβΐ Зег Н1В С1и Авр
275 280 285
Рго С1и ν«ι С1п РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 61 и Уа1 Ηίβ Авп
290 295 300
А1а Ьуз ТЬг Ьуй Рго Агд 61и С1и 61п РЬе Айп Зег ТЫ РЬе Агд Уа1
305 310 315 320
Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг νβΐ νβΐ ΗΪ8 С1п Аар Тгр Ьеи Авп 61у Ьув 61и
325 330 3 35
Туг Ьув Суй Ьув νβΐ Зет АйП Ьув 61у Ьеи Рго А1а Рго 11а 61и Ьув
340 345 350
ТЬг Не Зег Ьув ТЬг Ьуз СХу С1п Рго Агд С1и Рго СХп Уа1 Туг ТЬг
355 360 365
Ьеи Рго Рго Зег Агд <31 и 61и Неи ТЬг Ьув Азп <31п УаХ Зег Ьеи ТЬг
370 375 380
Суй Ьеи νβΐ Ьув 61 у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а УаХ С1и Тгр <31 и
385 390 395 400
Зег Авп С1у С1п Рго СХи Азп Авп Туг Ьуе ТЬг ТЬг Рго Рго Нес Ьеи
405 410 415
112 011449
Αερ Бег А ер С1у 420 Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег Ьув 425 Ьеи ТЬг Уа1 430 Αερ Ьув
Зег Агд тгр 61л 61л С1у Αεη Уа1 РЬе Бег Сув Бег Уа1 Мек Ηίε С) и
435 440 445
А1а Ьеи Ηίε Αεη Ηίε Туг ТЬг С1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Зег Рго О1у
450 455 460
Ьув
465 <210> 39 <211? 720 <212> ДНК <213> Ното εβρίβηε <400> 39 акдаддсксс сгдсксадсЕ сскддддскд скаагдскск дддкскскдд акссадкддд 60 дакаккдкда кдасксадкс кссасксксс скдсссдкса сссскддада дссддссксс 120 аксксскдса ддкскадкса дадкдккскд какадкаакд дакасааска кккддаккдд 160 касскдсада адссадддса дкскссасад скссгдакек акккдддккс кааксдддсс 240 кссддддксс скдасаддкк садкддсадк ддаксаддса садаккккас аскдаааакс 300 адсададкдд аддскдадда кдккддддкк каккаскдса кдсаадкккк асааасксса 360 кксасккксд дссссдддас сааадкддак аксааасдаа скдкддскдс ассакскдкс 420 сксасскксс сдссакскда кдадсадккд ааакскддаа скдсскскдк кдкдкдсскд 480 скдаакааск кскаксссад ададдссааа дкасадкдда аддкддакаа сдссскссаа 540 ксдддкааск сссаддадад кдксасадад саддасадса аддасадсас скасадсскс 600 адсадсассс кдасдскдад сааадсадас касдадаавс асааадкска сдсскдсдаа 660 дксасссакс адддсскдад сксдсссдкс асааададск ксавсадддд ададкдккад 720 <210> 40 <211> 239 <212> РКТ <213> Нолю вартепв <400> 40
Мек 1 Агд Ьеи Рго А1а С1п Ьеи Ьеи С1у Ьеи Ьеи Мек Ьеи Тгр Уа1 15 Бет
5 10
<31у Зег Зег 61у Авр 11е Уа1 Мек ТЬг 61п Зег Рго Ьеи Зег Ьеи Рго
20 25 30
νβΐ ТЬг Рго С1у С1и Рго А1а Зег Не Бег Сув Агд Зег Зег С1п Зет
35 40 45
νβΐ Ьеи туг Бег Αεη С1у Туг Αεη Туг Ьеи Авр Тгр Туг Ьеи «п Ьув
50 55 60
РГО С1у С1п Бег Рго С1п Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи С1у Зег Αεη Агд А1а
65 70 75 80
Зег С1у Уа1 Рго Авр Агд РЬе Зег С1у Зег 61у Бег С1у ТЬг Авр РЬе
85 90 95
- 113
ТЬг Ьеи Ьуз Не 100 Бет Агд Уа1 С1и А1а 105 С1и Авр Уа1 С1у Уа1 110 Туг Туг
Суз Мес С1п 115 Уа1 Ьеи 61 п ТЬг Рго 120 РЬе ТЬг РЬе С1у Рго 125 61у ТЬг Ьуз
Уа1 Аар 130 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 135 А1а А1а Рго Зег νβΐ 140 РЬе 11е РЬе Рго
Рго 145 Бег Азр С1и С1П Ьеи 150 Ьуз Бег <31у ТЬг А1а 155 Бег νβΐ Уа1 Суз Ьеи 160
Ьеи Αεη Азп РЬе Туг 165 Рго Агд <31 и А1а Ьуз 170 Уа1 С1п Тгр Ьуз Оа1 175 Азр
Αεη А1а Ьеи С1п 180 Бег 61у Азп Бег С1п 185 С1и Зег νβΐ ТЬг С1и 190 С1п Азр
Зег Ьуз Авр 195 Бег ТЬг Туг Бег Ьеи 200 Бег Бег ТЬг Ьеи ТЬг 205 Ьеи Бег Ьуз
А1а Авр 210 Туг □1и Ьуз Н1в Ьуз 215 νβΐ Туг А1а Сув 61и 220 νβΐ ТЬг Ηΐε 61п
С1у Ьеи Зег Бег РГО Уа1 ТЬг Ьуз Бег РЬе Αεη Агд 61у С1и Суз
225 230 235 <210> 41 <211> 378 <212> ДНК <213> Ното εβρχβηε <400> 41 саддСдсадс сссСдсаадд ссСддасаад дсасадаадС аСддадсСда сесссаддаС ссддссассд
СддсдсадСс ссгсСддаСа ддсССдадСд ССсадддсад асаддсСдад ассдсаесаа ссссссса сддддссдад сасссссасс даЕдддабдд ддСсассаСд аСсСдасдас СддСдСаСдс дсдаадаадс ддссассаса аСсаасссЬд ассадддаса асддссдсдС ссссаесссд ссддддссес адсдааддсс 60 сдеассдддс дсдасаддсс 120 асадСддСдд сасааасСаС 180 сдСссаЬсад сасадссбас 240 аССасСдСдс дададаСсад 300 асСасс, дддд ссадддаасс 360
378 <210> 42 <211> 126 <212> РКТ <213> Нолю еархепе <400> 42
61 п νβΐ 61п Ьеи νηΐ 61п Бег 61у А1а 61и Уа1 Ьув Ьув Рго 61у А1а
1 5 10 15
Бег νβΐ ьув νβΐ Бег Суз Ьуз А1а Бег С1у туг ТЬг РЬе ТЬг 61 у Тух
20 25 30
Туг нес Ηίβ Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго 61у С1п 61 у Ьеи 61и Тгр Нес
35 40 45
- 114 011449
61у Тгр 11 е Авп Рго Авр Бег 01 у С1у ТЬг Азп Туг 60 А1а 61п Ьуз РЬе
50 55
01п С1у Агд Уа1 ТЬг МеЕ ТЬг Агд Авр ТЬг Бег Не Бег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ С1и Ьеи Авп Агд Ьеи Агд Бег Авр Азр ТЬг А1а Уа1 туг Туг Сув
В5 90 95
А1а Агд Авр 61п Рго Ьеи 01у Туг Сув ТЬг Авп С1у νβΐ Сув Бег Туг
100 105 110
РЬе Азр Туг Тгр <31у 51п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120 125
<210> 43 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното варАепз <400> 43 дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕсЕЕсс дЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс60 аЕсасЕЕдЕС дддсдадЕса дддЕаЕЕЕас адсЕддЕЕад ссЕддгаЕса дсадааасса120 дддааадссс сЕаассЕссЕ даЕсЕаЕасЕ дсаЕсгсасЕЕ ЕасааадЕдд ддЕсссаЕса160 аддЕЕсадсд дсадЕддаЕС ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕСЕса ссаЕсадсад ссЕдсаассЕ240 даадаЕЕЕЕд саасЕСасЕа ЕЕдЕсаасад деЕаасаЕЕЕ ЕсссдеЕсас ЕСЕсддсдда300 дддассаадд ЕддадаЕсаа а321 <210> 44 <211> 107 <212> РКТ <213> Нолю εβρίβηε <400> 44
Авр Пе 61п МеЕ ТЬг С1п Бег Рго Бег Бег Уа1 Бег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Сув Агд А1а Бег С1п С1у Пе Туг Бег Тгр
20 25 30
Ьеи А1а Тгр Туг С1п С1п Ьув Рго С1у Ьуз А1а Рго Авп Ьеи Ьеи Пе
35 40 45
Туг ТЬг А1а Бег тьг Ьеи С1п Бег С1у Уа1 РГО Бег Агд РЬе Бег С1у
50 55 60
Бег С1у Бег С1у ТЬг Авр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Пе Бег Бег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
С1и Авр РЬе А1а ТЬг Туг Тут Суз С1п 01п А1а Азп Пе РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьув Уа1 С1и Пе Ьуз
100 105
- 115 011449 <210> 45 <211> 1416 <212> ДНК <213> Ното вар ϊ еле <400> 45 асддаскдда дкдсадскдд кдсааддскк ддасаадддс садаадкккс дадскдааса скаддакакк дксассдкск аддадсасск ссддкдасдд дксскасадк кксддсассс аадасадккд ддассдксад сскдаддкса кддкасдкдд аасадсасдк ааддадсаса кссаааасса дадакдасса аксдссдкдд акдскддаск кддсадсадд асдсадаада сскддаддак кдсадкскдд скддакасас ккдадкддак адддсадддк ддскдадакс дкаскаакдд ссксадсскс ссдададсас кдксдкддаа ссксаддаск адасскасас адсдсааакд кскксскскк сдгдсдкддк асддсдкдда кссдкдкддк адкдсааддк аадддсадсс адаассаддк адкдддадад ссдасддскс ддаасдкскк дсскскссск сскскксккд ддскдаддсд скксассддс дддакддакс сассак дас с кдасдасасд кдкакдсксс сассаадддс адсддссскд сксаддсдск скаскссскс скдсаасдка ккдкдкедад ссссссаааа ддкддасдкд ддкдсакаак садсдксскс скссаасааа ссдадаасса садескдаес саакдддсад сккскксскс скеакдсксс. дкскссдддк дкддсадсвд аадаадсскд кассакасдс аассскдаса адддасвсдк дссдкдкакк каскккдаск ссаксддкск ддскдсскдд скдассадсд адеадсдкдд даксасаадс кдсссассдк сссааддаса адссасдаад дссаадасва ассдккдкдс ддссксссад саддкдкаса гдсскддкса ссддадааса Сасадсаадс дкдакдсакд ааакда ссасаддадс дддссксадк аскдддкдсд дкддкддсас ссаксадсас аскдкдсдад аскддддсса кссссскддс ксааддаска дсдкдсасас Ьдассдкдсс ссадеаасас дсссадсасс сссксакдак ассссйвчдк. адссасддда ассаддаскд сссссаксда ссскдссссс ааддеккека аскасаадас ксассдкдда а ддскекдса ссасьсссад дааддкексе асаддсссск аааскакдса адсскасакд адаксадссс дддаассссд дссссдсксс сккссссдаа скксссадек скссадсаас сааддкддас асскдкддса сксссддасс есадкксаас ддадсадккс дскдаасддс даааассакс аксссдддад ссссадсдас сасасскссс саададсадд саассаскас
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320 1380 1416 <210> 46 <211> 471 <212> РКТ <213> Ното Бар1епв <400> 46
Мек Авр Тгр ТЬг Тгр Агд Не Ъеи РЬе Ьей Уа1 А1а А1а А1а ТЬг 15 С1у
1 5 10
А1а ΗΪ6 5ег С1п νβΐ <31п Ьей Уа1 61п 5ег <31у А1а 61и Уа1 Ьув Ьув
20 25 30
Рго (31у А1а 5ег νβΐ Ьуз Уа1 Вег Суо Ьув А1а Бег Ч31у Туг ТЬг РЬе
35 40 45
ТЬг <51у Туг Туг Мек Н1в Тгр Уа1 Агд <31п А1а Рго С1у ΰΐη К31у Ъеи
50 55 60
С1и Тгр Мек С1у Тгр 11е Авп Рго Авр Бег 61у <51у ТЬг Авп Тух А1а
65 70 75 80
С1п Ьув РЬе С1п О1у Агд Уа1 ТЬг Мек ТЬг Агд Авр ТЬг Бег Не Зег
85 90 95
ТЬг А1а Туг Мек С1и Ьей Авп Агд Ъеи Агд Бег Авр Авр ТЬг А1а Уа1
100 105 110
116 011449
Тух Туг Сув 115 Айа Агд Авр <51X1 Рхо 120 Ьеи <31 у Тух сув ТЫ 125 Авп Сйу Уай
Суз Бег 130 Туг РЬе Авр Туг Тхр 135 С1у Сйп С1у ТЬг Ьеи 140 Уай ТЬг Уай Зег
Бег 145 А1а Бег ТЬг Ьув 61у 150 Рго Бег Уа1 РЬе Рго 155 Ьеи Айа Рго Сув Зег 160
Агд Бег ТЬг Бег С1и 165 Бег ТЬх Айа Айа Ьеи 170 С1у Сув Ьеи νβΐ Ьув 175 Авр
Туг РЬе Рго С1и 1В0 Рго Уа1 ТЬг Уай Бег 185 Тгр Авп Бег Сйу Айа 190 Ьеи ТЬг
Бег С1у νβΐ 195 Н1В ТЬг РЬе Рхо А1а 200 Уа1 Ьеи Сйп Бег Зег 205 Сйу Ьеи Туг
Бег ьеи 210 Бег Бег Уа1 ¥а1 ТЬг 215 νβΐ Рго Бег Бег Авп 220 РЬе С1у ТЫ Сйп
ТЬг 225 Туг ТЬх Суз Авп νβΐ 230 Авр ΗΪ5 Ьув Рго Бег 235 Авп ТЫ Ьув Уа1 Азр 240
Ьуз ТЬх νβΐ <31и Агд 245 Ьув Сув Суе Уа1 Сйи 250 Сув Рго Рго Сув Рго 255 Айв
Рго Рго ν·1 А1а 260 С1у Рго Бег νβΐ РЬе 265 Ьеи РЬе Рго Рго Ьув 270 Рго Ьув
Авр ТЬг Ьеи 275 Мек 1йе Бег Ахд ТЬг 280 Рго Сйи Уай ТЬх Сув 285 Уай Уай Уай
Авр Уай 290 Бех ΗΪΒ Сйи Авр Рхо 295 Сйи Уа1 Сйп РЬе Авп 300 Тгр Туг Уай Авр
С1у 305 ν»ι С1и νβΐ ΗΪΒ Авп 310 А1а Ьув ТЬг Ьув Рго 315 Агд Сйи О1и Сйп РЬе 320
Азп Бег ТЬг РНе Агд 325 Уа1 Уа1 Бег Уай Ьеи 330 ТЬг Уа1 νβΐ ΗΪΒ Сйп 335 Авр
Тгр Ьеи Авп С1у 340 Ьув Сйи Тух Ьув Сув 345 Ьув Уай Бег Авп Ьув 350 Сйу Ьеи
Рхо Айа Рхо 355 11е Сйи Ьув ТЬг Не 360 Зег Ьув ТЬг Ьув Сйу 365 Сйп Рго Агд
С1и Рго 370 С1п Уай Тух ТЬг Ьеи 375 Рго Рго Бег Агд Сй и 380 С1и Мек ТЬг Ьув
Авп 365 Сйп Уай Бех Ьеи ТЬг 390 Сув Ьеи Уа1 Ьув С1у 395 РЬе Туг Рго Бег Авр 400
Не А1а Уа1 Сйи Тгр С1и Бех Авп С1у С1п Рго <31и Авп Авп Туг Ьув
405 410 415
- 117 011449
ТЬг ТЬг Рго Рго 420 МеЕ Ьеи Авр Зег Авр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег
425 430
Ьув Ьеи ТЬг ν*ι Авр Ьув Бег Агд Тгр С1П С1п С1у Авп Уа1 РЬе Зег
435 440 445
Сув Зег Уа1 МеЕ Ηίε 61 и А1а Ьеи Ηίε Αεη Ηίε Туг ТЬг 61п Ьуз Зег
450 455 460
Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьув
465 470 <210> 47 <211> 705 <212> ДНК <213* Нсяпо еархепБ <400> 47 аЕдаддсрсс срдсгсадсЕ ссЕддддсгс сЕдсЕдсЕсЕ ддЕЕсвсадд ЕЕсоадаЕдс60 дасаЕссада ЕдасссадЕс ЕссаЕсЕЕсс дЕдЕсЕдеаЕ сЕдраддада сададЕ-сасс120 аЕсасЕЕдрс дддсдадЕса дддЕаЕЕЕас адсЕддЕЕад ссСддЕаЕса дсадааасса180 дддааадссс сЕаассЕссЕ даЕсЕаЕасЕ дсаЕссасЕЕ ЕасааадЕдд ддгЕсссаЕ-еа240 аддГЕсадсд1дсадЕддаСс ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ссЕдсаассЕ 300 даадаЕЕЕЕд саасЕЕасЕа ЕгдЕсаасад дсЕаасаЕЕЕ ЕсссдсЕсас ЕЕЕсддедда360 дддассаадд ЕддадаЕсаа асдаасЕдЕд дсЕдсассаЕ сЕдЕсЕСсаЕ ссЕсесдсса420
ЕсЕдаЕдадс адЕЕдаааЕс ЕддаасЕдсс ЕсЕдСЕдЕдЕ дссЕдсЕдаа ЕаасЕЕсЕаЕ480 сссадададд ссааадЕаса дЕддааддЕд даЕаасдссс ЕссааЕсддд ЕаасЕсссад540 дададЕдЕса сададсадда садсааддас адсассЕаса дссЕсадсад сасссЕдасд600 сЕдадсааад садасЕасда дааасасааа дЕсЕасдссЕ дсдаадЕеас ссаЕсадддс660 сЕдадсЕсдс ссдЕсвсааа дадсЕЕсаас аддддададЕ дЕЕад705 <210> 48 <211> 234 <212> РКТ <213> Ното вар1еП5 <400> 48
МеЕ 1 Агд Ьеи Рго А1а 5 С1п Ьеи Ьеи <51у Ьеи 10 Ьеи Ьеи Ьеи Тгр РЬе 15 Рго
51у Зег Агд Сув 20 Авр 11е <31п Мер ТЬг 25 С1п Бег Рго Бег Зег 30 Уа1 Зег
А1а Зег Уа1 35 61у Авр Агд Уа1 ТЬг 40 11е ТЬг Сув Агд А1а 45 Бег С1п <31у
Не Туг 50 Бег Тгр Ьеи А1а Тгр 55 Туг С1п С1п Ьув Рго 60 61у Ьув А1а Рго
Αεη 65 Ьеи Ьеи 11е Туг ТЬг 70 А1а Бег ТЬг Ьеи 01 п 75 Бег <51у νβΐ Рго Бег 80
Агд РЬе Бег С1у Бег 61у Бег 61у ТЬг Авр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Бег
90 95
- 118 011449
Бег Ьеи 51п Рго 100 С1и Авр РЬе А1а ТЬг 105 Туг туг Сув С1п С1п НО А1а Авп
11е РЬе Рго 115 Ьеи ТЬг РЬе СЗу С1у С1у 120 ТЫ Ьув Уа1 С1и 125 Не Ьув Агд
ТЬг Уа1 130 А1а АЗа Рго Зег УаЗ 335 РЬе 11е РЬе Рго Рго 140 Зег Авр С1и С1п
ьеи 145 Ьув Бег С1у ТЬг АЗа 150 Зег УаЗ Уа1 Сув Ьеи 155 Ьеи Авп Авп РЬе Туг 160
РГО Агд С1и А1а Ьув 165 Уа1 СЗп Тгр Ьув Уа1 170 Авр Авп А1а Ьеи СЗп 175 Бег
бЗу Авп Зег С1п 180 61и Зег Уа1 ТЬг С1и 185 С1п Авр Зег Ьув Авр 190 Бег ТЫ
Туг Бег Ьеи 195 Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг 200 Ьеи Зег Ьуз А1а Авр 205 Туг С1и Ьув
Ηίε Ьув 210 Уа1 Туг АЗа Сув СЗи 215 УаЗ ТЫ НЗв С1п С1у 220 Ьеи Бег Бег Рго
Уа1 225 ТЬг Ьув Бег РЬе Авп 230 Агд С1у СЗи Сув
<210> 49 <211> 373 <212> ДНК <213> Ното варгепв <400> 49 саддСдсадс СссСдСдсад ссаддсаадд деадасСссд сСдсаааСда аесддааада ассдСсЬссС
СддСддадСс ссСсСддасС ддсСддадсд Сдаадддссд асадссСдад сССасСасса сад
Ьдддддаддс сассССсадС ддсддсадсс аССсассаСс адсСдаддас сСаеСдСддС дСддсесадс сдсСаСддса асаСсаСсСд Сссададаса асддсСдСдС аСддасдСсС ссдддаддсс СдсасСдддС аеддаддСаа аССссаадаа ссСдадасСс 60 ссдссаддсС 120 СаааСасСаС 180 еаедсСдсас 240 аССасСдСас дадаададдд 300 ддддссаадд дассасддсс 360
373 <210> 50 <211> 124 <212> РЯТ <213 > Нолю зарЛепв <400> 50
СЗп 3 УаЗ СЗп Ьеи УаЗ 5 СЗи Бег С1у С1у С1у 10 УаЗ Уа1 С1п Рго СЗу 15 Агд
Бег Ьеи Агд Ьеи 20 Бег Сув АЗа А1а Бег 25 С1у РЬе ТЬг РЬе Бег 30 Агд Туг
СЗу МеС НЗв Тгр Уа1 Агд С1п АЗа Рго СЗу Ьув СЗу Ьеи <31и Тгр Уа1
40 45
- 119 011449
А1а УаХ Не Бег Бег Авр С1у С1у Авп Ьуз Туг Туг АХа Азр Бег Уа1
50 55 60
Ьуе С1у Агд РЬе ТЬг Не Бег Агд Азр Авп Бег Ьув Авп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 ВО
Ьеи 61 η МеС АвП Бег Ьеи Агд А1а С Хи Азр ТЬг А1а УаХ Тут Тут Сув
85 90 95
ТЫ Агд Агд С1у ТЬг С1у Ьуз ТЬг Туг Туг ΗΪΒ Туг Сув <51у Мег Азр
100 105 но
Уа1 Тгр СХу С1п СХу ТЬг ТЬг УаХ ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 51 <211> 337 <212> ДНК <213> Ното зарХелв <400> 51 даСаССдСда аСсСссСдса сасссдсада СссддддСсс адсададСдд сддасдССсд сдасссадсс ддСссадСса адссадддса сСдасаддСС аддсСдадда дссаадддас
СссасСеССС дадссСссСд дСсСссасас садСддсадС сдседдддсс сааддсддаа сСдсссдСса СаСадСааСд сессСдассС ддССоаддса СаССасЕдса аСсааас ссссСддада дасасааеса аССЕдддССс ссдаССССас сдсаадсСсС дссддссСсс СЕСддасСдд ЬааЬсдддес асЬдааааСс асааасЕссС
120
180
240
300
337 <210* 52 <211> 112 <212> РКТ <213> Нсипо вар!еле <400* 52
Азр 1 Не УаХ МеС ТЬг 5 С1п £ег Рго Ьеи Бет 10 Ьеи Рго Уа1 ТЫ Рго 15 С1у
С1и Рго АХа Бет 20 Не Бег Сув Агд Бег 25 Бет С1п Бег Ьеи 1ли 30 Тух Бет
АВП С1у Туг 35 Авп Тут Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи С1п Ьуз Рго 45 С1у <ЗХп Бег
Рго ΗΪ3 50 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 55 С1у Бег Азп Агд А1а 60 Бег С1у УаХ Рго
Азр 65 Агд РЬе Бет С1у Бег 70 (Ну Бег С1у ТЬг Авр 75 РЬе ТЫ Ьеи Ьуз Не 80
Бет Агд УаХ С1и АХа 85 С1и Авр Уа1 <31у Уа1 90 Туг Тут Суз Мес. С1п 95 А1а
Ьеи СХп ТЫ Рго 100 Агд ТЬг РЬе СХу СХп 105 С1у ТЬг Ьуз УаХ С1и 110 Не Ьуз
120 011449 <210> 53 <211> 1410 <212> ДНК <213> Ното зархепв <400> 53 аЕддадЕЕЕд ддсЕдадсЕд ддЕЕЕЕссЕс дСЕдсссЕСЕ ЕаададдЕдЕ ссадЕдЕсад60 дЕдсаасЕдд ЕддадЕсЕдд дддаддсдЕд дЕссадесЕд ддаддЕсссЕ дадасЕсЕсс120
ЕдЕдсадссЕ сЕддаЕЕсас сЕЕсадЕсдс ЕаЕддсаЕдс асЕдддЕссд ссаддсЕсса180 ддсааддддс ЕддадЕдддЕ ддсадЕЕаЕа ЕсаЕссдаЕд даддЕааЕаа аЕасЕасдса240 дассссдЕда адддссдаЕЕ сассаЕсЕсс ададасааЕЕ ссаадаасас дсЕдЕаЕсЕд300 саааЕдааса дссЕдададс Едаддасасд дсЕдЕдЕаЕЕ асЕдЕасдад аададддасЕ360 ддааадасЕЕ асЕассасЕа сЕдЕддЕаЕд даедЕсЕддд дссаадддас сасддЕсасс420 дЕсЕссЕсад ссЕссассаа дддсссаЕсд дЕсЕЕссссс ЕддсдсссЕд сЕссаддадс480 ассЕссдада дсасадсддс ссЕдддсЕдс сЕддЕсаадд асЕасЕЕссс сдаассддЕд540 асддЕдЕсдЕ ддаасЕсадд сдсЕсЕдасс адсддсдЕдс асассЕЕссс адсЕдЕссЕа600 садЕссЕсад дасЕСЕасЕс ссЕсадсадс дгддЕдассд ЕдсссЕссад саасССсддс660 асссадассЕ асассЕдсаа сдЕадаЕсас аадсссадса асассааддЕ ддасаадаса720 дЕЕдадсдса ааЕдЕЕдЕдЕ сдадЕдссса ссдЕдсссад сассассЕдЕ ддсаддассд780
ЕсадЕсЕЕсс ЕсЕЕсссссс аааасссаад дасасссЕса ЕдаЕсЕсссд дассссЕдад840 дЕсасдЕдсд ЕддЕддЕдда сдЕдадссас даадассссд аддЕесадЕЕ саасЕддЕас900 дЕддасддсд ЕддаддСдса ЕааЕдссаад асааадссас дддаддадса дЕЕсаасадс960 асдсЕссдЕд ЕддЕсадсдЕ ссЕсассдЕЕ дсдсассадд ассддсЕдаа сддсааддад1020
ЕасаадЕдса аддЕсЕссаа саааддссЕс ссадссссса Есдадаааас свЕсЕссааа1080 ассааадддс адссссдада ассасаддЕд ЕасасссЕдс ссссаЕсссд ддаддадаЕд1140 ассаадаасс аддЕсадссЕ дассЕдссЕд дЕсаааддсЕ ЕсЕассссад сдасаЕсдсс1200 дЕддадЕддд ададсааЕдд дсадссддад аасаасЕаса адассасасс ЕсссаЕдссд1260 дасЕссдасд дсЕссЕЕсЕЕ ссЕсЕасадс аадсЕсассд Еддасаадад саддЕддсад1320 саддддаасд ЕсСЕсЕсаЕд сЕссдЕдаЕд сагдаддсЕс Едсасаасса сЕасасдсад1380 аададссЕсЕ сссЕдЕсЕсс дддсаааЕда1410 <210> 54 <211> 469 <212> РКТ <213> Ното зархепз <400> 54
МеЕ 1 σΐυ РЬе 61у Ьеи 5 Бег Тгр νβΐ РЬе Ьеи 10 Уа1 А1а Ьеи Ьеи Агд 15 61у
Уа1 61 η Сув 61п 20 Уа1 61 η Ьеи Уа1 С1и 25 Бег 61у 61у <31 у νβΐ 30 1/а1 61п
Рго 61у Агд 35 Бег Ьеи Агд Ьеи Зег 40 Суз А1а А1а Бег 61у 45 РЬе ТЬг РЬе
Бег Агд 50 Туг 61у МеЕ Ηΐε Тгр 55 Уа1 Агд 61л А1а Рго 60 61у Ьув 61у Ьеи
61« 65 Тгр Уа1 А1а Уа1 11е 70 Зег Зег Авр С1у 61у 75 Азп Ьув Туг Туг А1а 80
Азр Бег Уа1 Ьуз 61у 85 Агд РЬе ТЬг 11е Бег 90 Агд Аяр Азп Зег ьув 95 АЗП
ТЫ ьеи Туг Ьеи 100 61а МеЕ Авп Бег Ьеи 105 Агд А1а 61и Авр ТЬг 110 А1а Уа1
- 121 011449
Туг Туг Сув ТЬг Агд Агд С1у ТЬг 61у 120 Ьув ТЬг туг Туг 125 Ηίε Туг Сув
115
С1У мег 130 Авр Уа! Тгр С1у С1п 135 61у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг 140 Уа1 Бег Бег А1а
Бег 145 ТЬг Ьув 61у Рго Бет 150 Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а 155 Рго Сув Бег Агд Бег 160
ТЬг Бег 61и Бег ТЬг 165 А1а А1а Ьеи 61у Сув 170 Ьеи Уа1 ьув Авр Туг 175 РЬе
Рго 61 и Рте Уа1 180 ТЬг Уа1 Бег Тгр АВП 185 Бег 61у А1а Ьеи ТЬх 190 Бег С1у
νβΐ Н1Б ТЬг 195 РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи 200 61п Бег Бег 61у Ьеи 205 Туг Бег Ьеи
Бег Бег 210 Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго 215 Бет Бег Авп РЬе С1у 220 ТЬг 61п ТЫ Тут
ТЬг 225 Сув Αεη Уа1 Авр ΗΪΒ 230 Ьув Рго Бег Авп ТЫ 235 Ьув νβΐ Авр Ьув ТЫ 240
Уа1 61и Агд Ьув Сув 245 Сув Уа1 61и Сув РГО 250 Рго Сув Рго А1а Рго 255 Рго
νβΐ А1а 61у Рго 260 Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе 265 Рго Рго Ьув РГО Ьув 270 Авр ТЬг
Ьеи Мек Не 275 Бег Агд ТЬг Рго 61и 280 Уа1 ТЬг сув 7а1 Уа1 285 Уа1 Авр Уа1
Бег Ηίε 290 С1и Авр Рго С1и Уа1 295 51п РНе Авп Тгр Туг 300 νβΐ Авр С1у Уа1
С1и 305 Уа1 Н13 Азп А1а Ьув 310 ТЬг Ьув Рго 61 и 315 61и 61η РЬе Азп Бег 320
ТЬг РЬе Агд Уа1 Уа1 325 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 330 Уа1 Н15 61η Авр Тгр 335 Ьеи
Αδη С1у Ьув 01 и 340 Туг Ьув Суз Ьув Уа1 345 Бег Авп ьув 61у Ьеи 350 Рго А1а
Рго 11е С1и 355 Ьув ТЬг 11е Бег Ьув 360 ТЫ Ьув 61у 61п Рго 365 Агд 61и Рго
С1П Уа1 370 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 375 Бег Агд 61и 61 и Иек 380 ТЬг Ьув Авп 61п
Уа1 385 Бег Ьеи ТЬг Сув Ьеи 390 Уа1 Ьув 61у РЬе Туг 395 Рго Бег Авр Не А1а 400
νβι 61и Тгр 61и Бег Авп С1у 61п Рго С1и Авп Авп Тут Ьув ТЬг ТЬг
405 410 415
122 011449
Рго Рго Мес Ьеи Авр Бег Авр С1у Бег РЬе РЬе Ьеи Тут Бег Ьув Ьеи
420 425 430
ТЬг νβΐ Азр Ьув Бег Агд Тгр 61 η С1п О1у Авп 7а1 РЬе Бег Сув Бег
435 440 445
νβΐ Мес ΗΪ8 61и А1а Ьеи Ηίε АвП Ηίε Туг ТЬг 61п Ьув Бег Ьеи Бег
450 455 460
Ьеи Бег Рго 61у Ьув 465 <210> 55 <211> 720 <212> ДНК <213> Ното варгепв <400> 55 асдаддсссс ссдсСсадсг сссддддссд ссаасдсссс дддссСссдд асссадсддд 60 даСаССдСда Сдасссадес сссасссесс сСдсссдСса ссссСддада дссддссСсс 120 аСсСссСдса ддСсСадСса дадссСссСд СаСадСааСд даСаСаЬсСа СССддаССдд 180 сасссдсада адссадддса дСсСссасас сСссСдаСсС аСССдддССс СааС-сдддсс 240 ессддддСсс сСдаеаддСС садсддсадС ддеесаддса сСдаССссас асСдаааасс 300 адсададСдд аддсСдадда СдССддддСС СаССасСдса СдсаадсссЬ асааасСссС 360 сддасдсссд дссаадддас сааддеддаа аСсааасдаа сСдСддссдс ассаСссдсс 420
ССсаСсессс сдссаСсСда сдадсадссд аааСседдаа сСдссссСдС СдСдСдссСд 480 седаасаасс СсСаСсссад ададдссааа деасадедда аддсддасаа сдсссСссаа 540
СсдддеаасС сссаддадад сдссасадад саддасадса аддасадсас сеасадссСс 600 адсадсассу СдасдсСдад сааадсадас Сасдадааас асааадссса сдссьдсдаа 660 дСсаессаСс адддссСдад сСсдсссдСс асааададсС Ссаасадддд ададСдССад 720 <210> 56 <211> 239 <212> РйТ <213> Нолю ββρίεηε <400> 56
Мес Агд Ьеи Рго А1а 61п Ьеи Ьеи С1у Ьеи Ьеи МеС Ьеи Тгр Уа1 Бег
1 5 10 15
61у Бег Бег 61у Авр 11е νβΐ мес ТЬг □1п Бег РГО Ьеи Бег Ьеи ИГО
20 25 30
νβΐ ТЬг Рго С1у С1и Рго А 1а Бег 11е Бег Сув Агд Бег Бег С1п Бег
35 40 45
Ьеи Ьеи Туг Бег Авп 61у Туг Авп Туг Ьеи Αερ Тгр Туг Ьеи С1п Ьув
50 55 60
Рго 61у 61п Бег Рго Ηίε Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 61у Бег Авп Агд А1а
65 70 75 80
Бег 61у Уа1 Рго Авр Агд РЬе Бег С1у Бег С1у Бег С1у ТЬг Аар РЬе
90 95
- 123 011449
ТЫ Ьеи Ьуз Не Бег Агд Уа1 С1и А1а С1и Азр V»! С1у V»! Туг Туг
100 105 110
Суз МеС С1п 115 А1а Ьеи <31п ТЬг Рго 120 Агд ТЫ РЬе Б1у С1г. 125 С1у ТЫ ьуз
Уа1 С1и 130 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 135 А1а А1а Рго Бег 7а1 140 РЬе 11е РЬе Рго
Рго 145 Бег Азр С1и С1п Ьеи 150 Ьуз Бег О1у ты А1а 155 Бег Уа1 νβΐ Суз Ьеи 160
Ьеи АЗП Азп РЬе Туг 165 Рго Агд С1и А1а Ьуз 170 Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 175 Азр
Αεη А1а Ьеи С1П 180 Бег С1у Азп Бет С1п 185 С1и Бег Уа1 ТЬг С1и 190 С1п Азр
Бег Ьуз Авр 195 Бег ТЬг Тут Бет Ьеи 200 Бег Бег ТЬг Ьеи ТЫ 205 Ьеи Бет Ьуз
А1а Азр 210 Туг С1и Ьуз Ηίε Ьуз 215 Уа1 Туг А1а Суз С1и 220 νβΐ ТЬг Ηίε С1п
81у Ьеи Бег Бет Рго Уа1 ТЫ Ьуз Бег РЬе Азп Агд С1у 61и Суз
225 230 235 <210> 57 <211> 376 <212> ДНК <21Э> Ното зар1епе <400> 57 саддсдсадс ссссдсдсад ссаддсаадд дсадасСссд дСдсаааСда сассасддда дСсассдСсС сддСддадСс ссСсСддаСс ддсС'ддадСд Сдаадддссд асадссСдад дддаССасСа ссСсад
Сдддддаддс сассССсадС ддСддсааСС аССсассаСс адсСдаддас сСссСасСас дСддСссадс аасСаСддса аСаСсасаСд Сссададаса асддсСдСдС ддСССддасд сСдддаддСс сдсассдддс аСддаадсаа асхссаадаа аСсасСдСдс Сссддддсса ссСдадасСс 60 ссдссаддсС 120 сааасассас 180 сасдсСдСаС 240 дадасдсддС 300 адддассасд 360 376 <210> 58 <211> 125 <212> РНТ <213> Ното вархепз <400> 58
61η νβι 1 С1п Ьеи Уа1 С1и 5 Бег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 О1п Рго С1у Агд
10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи 20 Бег Суз νβΐ А1а Бет 25 С1у РЬе ТЫ РЬе Бет 30 Азп Туг
61у Мес Ηίε 35 Тгр νβΐ Агд С1п А1а 40 Рго С1у ьуз С1у Ьеи 45 С1и Тгр Уа1
- 124 011449
А1а 11е 11е Зег Туг Авр <31у Зег АВП ьув Туг Туг А1а Авр Зег νβΐ
50 55 60
Ьуе О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Авр АВП Зег Ьуз Лап ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 ВО
νβΐ 01 η Мер Авп Зег Ьеи Агд А1а С1и Авр Ии А1а Уа1 Туг Туг Сув
85 90 95
А1а Агд Агд С1у Н1б Туг С1у Агд Авр Туг Туг Зег Туг Туг О1у Ьеи
100 105 НО
Аар Уа1 Тгр С1у С1П С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115 120 125
<210> 59 <211> 337 <212> ДНК <213> Ното вархепв <400> 59 даЕассдгда сдасЕсадЕс ЕссасЕсЕсс сЕдсссдсса ссссЕддада аЕсЕссЕдса ддЕсЕадЕса дадссЕссЕд ссЕддЕааЕд даЕасаасса ЕассЕдсада адссадддса дЕсЕссасад срссЕдаЕсЕ аЕЕЕдддЕгс Рссддддссс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддса садаЕЕЕЕас адсададрдд аддсЕдадда ЕдЕЕддддЕЕ ЕаЕсассдса рдсаад-СЕсг сддасдЕЕсд дссаадддас сааддСддаа аРсааас дссддссЕсс 60
ЕЕЕддаЕЕдд 120
ЕааЕсдддсс 1В0 асРдааааСс 240 асааасЕссЕ 300
337 <210> 60 <211> 112 <212> РКТ <213> Ното вардепв <400> 60
Авр 1 Не Уа1 МеЕ ТЬг 5 С1п 5ег Рго Ьеи Зег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 □1у
<31и Рго А1а зег 20 Не Зег Сув Агд Зег 25 Зет С1п Зег Ьеи Ьеи 30 Рго С1у
Авп С1у Туг 35 АВП Туг Ьеи Авр Тгр 40 Туг Ьеи С1п Ьуз Рго 45 С1у О1П Зег
Рго С1 п 50 Ьеи Ьеи 11е Туг Ьеи 55 С1у Зег Ави Агд А1а 60 Зег <31У Уа1 Рго
Авр Агд 65 РЪе Зег <31у Зег 70 О1у Зег <31 у ТЬг Авр 75 РЬе ты Ьеи Ьу» 11е ВО
Зег Агд Уа1 С1и А1а 85 О1и Авр Уа1 51у Уа1 90 Туг туг Сув меЕ С1п 95 АХа
Ьеи О1п ТЬг Рго Агд ТЫ РЪе С1у С1 п <31у ТЬг Ьув Уа1 <31и 11е Ьув
100 105 110
- 125 011449 <210> 61 <211> 1413 <212> ДНК <213> Нолю варгепв <400> 61 аСддадСЫд дСдсадссдд СдСдСадссС ддсааддддс дасСссдСда саааСдааса Сасдддаддд ассдСсСссс адсассСссд дсдасддсдс ссасадСссС ддсасссада асадссдадс ссдСсадСсС даддСсасдС СасдСддасд адсасдЬСсс дадСасаадС аааассааад аСдассаада дссдСддадС ссддасСссд садсадддда садаададсс ддсСдадсСд сддадСсСдд ссддасссас СддадСдддС адддссдаСС дссСдададс асСасСасСс садссСссас ададсасадс сдСддаасСс саддасСсСа сссасасссд дсааасдссд ссссессссе дсдСддСддС дсдсддаддс дСдСддСсад дсааддСсСс ддсадссссд ассаддСсад дддададсаа асддсСссСС асдссссссс ссссссСдГс ддССССссСе дддаддсдсд сССсадсаас ддсаассаса сассаСсссс Сдаддасасд сСасСасддС саадддссса ддсссСдддс аддсдсссСд сС-сссгсадс саасдсадас сдссдадсдс сссаааассс ддасдсдадс дсаСааСдсс сдСссСсасс саасаааддс адаассасад ссСдассСдс Сдддсадссд еССссСсСае асдссссдсд СссдддСааа дССдсСсССС дСссадссСд СаСддсасдс ЬсаСаСдаСд ададасааСС дсСдСдСаСС ССддасдссс СсддСсССсс СдссСддСса ассадсддсд адсдСддСда сасаадссса ссассдсдсс ааддасассс сасдаадасс аадасааадс дССдСдсасс сссссадссс дсдсасассс сСддСсааад дадаасаасС адсаадсСса аСдсаСдадд Сда
СаададдСдС ддаддСсссс асСдддСссд даадсаасаа ссаадаасас асСдСдсдад ддддссаадд сссСддсдсс аддасСасСС СдсасасссС ссдСдссссс дсаасассаа садсассасе ссасдасссс ссдаддссса сасдддадда аддасСддсС ссассдадаа СдсссссаСс дсССсСассс асаадассас ссдСддасаа сСсСдсвсаа ссадСдСсад дадасСсСсс ссаддсссса аСасСаСдса дсСдСаСдСд асдсддСсас дассасддСс сСдссссадд ссссдаассд сссадсСдес садсаасссс ддеддасаад СдСддсадда есддассссС дССсаасСдд дсадССсаас даасддсаад аассабсСсс седддаддад садсдасаСс ассСсссаСд дадсаддСдд ссассасасд
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1413 <210> 62 <211> 470 <212* РНТ <213> Ното варгепв <400> 62
МеС 61 и РЬе 61 у Ьеи Бег Тгр Уа1 РЬе Ьеи Уа1 А1а Ьеи Ьеи Агд 61 у
1 5 10 15
¥а1 61п Суз С1п 20 Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и 25 Бег 61у <»1у 61 у Уа1 30 Уа1 С1п
Рго б1у Агд 35 Зег Ьеи Агд Ьеи Бег 40 Сув Уа1 А1а Бег 61у 45 РЬе ТЬг РЬе
Зег Авп 50 Туг 61у НеС ΗΪΒ Тгр 55 Уа1 Агд 61п А1а Рго 60 61у Ьув 61у Ьеи
61и «5 Тгр Уа1 А1а Не Пе 70 Зег Туг Авр 61у Зег 75 Авп Ьув Туг Туг А1а 80
Авр Зег Уа1 Ьув 61у 85 Агд РЬе ТЬг 11 е Бег 90 Агд Авр Авп Зег Ьув 95 Авп
ТЬг Ьеи Туг Уа1 100 С1п Мес Авп Бег Ьеи 105 Агд А1а 61 и Авр ТЬг 110 А1а Уа1
- 126 011449
Туг Туг Суз А1а Агд Агд 61у ΗΪΒ Туг С1у Агд Азр Туг Туг Бег Туг
115 120 125
Туг С1у 130 Ьеи Азр Уа1 Тгр С1у 135 С1п С1у ТЫ ТЫ Уа1 140 ТЫ Уа1 Бег Бег
А1а 145 Бег ТЫ Ьуз С1у Рго 150 Бет Уа1 РЬе Рго Ьеи 155 А1а Рго Суз Бег Агд 160
Бег ТЫ Бег <51и Бег 165 ТЫ А1а А1а Ьеи С1у 170 Сув Ьеи Уа1 Ьув Азр 175 туг
РЬе Рго С1и Рго 100 Уа1 ТЫ Уа1 Бег тгр 185 АЗП Бег С1у А1а Ьеи 190 ТЫ Бег
С1у Уа1 ΗΪ3 195 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 200 Ьеи 61п Бег Бег <31у 205 Ьеи Туг Бег
Ьеи Бег 210 Бег Уа1 Уа1 ТЬг νβΐ 215 Рго Бег Бег Авп РЬе 220 С1у ТЫ (51 п ТЬт
Туг 225 ты Сув Авп Уа1 Авр 230 Н1В Ьуз Рго Бет Азп 235 ТЫ Ьув Уа1 АВР Ьув 240
ТЫ νβΐ С1и Агд ьув 245 Суз Суз Уа1 С1и Суз 250 Рго Рго Сув Рго А1а 255 Рго
Рго Уа1 А1а С1у 260 Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи 265 РЬе Рго Рго Ьув Рго 270 Ьув Авр
ТЫ Ьеи МеЕ 275 11е Бег Агд ТЫ Рго 280 С1и Уа1 ТЫ Суз νβΐ 285 Уа1 Уа1 Азр
Уа1 Бег 290 ΗΪ6 С1и Азр Рго С1и 295 Уа1 С1п РЬе Авп Тгр 300 Туг Уа1 Авр С1у
νβΐ 305 С1и Уа1 ΗΪ8 Азп А1а 310 Ьуз ТЫ Ьуз РГО Агд 315 С1и С1и С1п РЬе Авп 320
Бег ТЫ РЬе Агд Уа1 325 Уа1 Бег νβΐ Ьеи ТЫ 330 Уа1 νβΐ ΗΪ8 61п Авр 335 Тгр
Ьеи Азп б1у Ьуз 340 С1и Туг Ьуз Сув Ьув 345 νβΐ Бег Авп Ьув СЗу 350 Ьеи Рго
А1а Рго 11е 355 С1и Ьув ТЫ 11е Бег 360 Ьуз ты Ьуз С1у ΰΐη 365 Рго Агд СЗи
РГО 61л 370 Уа1 Туг ТЫ Ьеи ₽го 375 РГО Бет Агд 61и С1и 380 МеЕ тьг Ьув Авп
01л 385 ν»ι Бег Ьеи ТЫ Суз 390 Ьеи УаЗ Ьуз С1у РЬе 395 Туг Рго Бег Авр Пе 400
А1а Уа1 61и Тгр в1и Бег Авп 61у <51п Рго 31и Авп Авп Туг Ьуз ТЫ
405 410 415
- 127 011449
ТЬг Рго Рго Мес 420 Ьеи Авр Вег Авр 61у 425 Вег РЬе РЬе Ьеи Туг 430 Зег Ьув
Ьеи ТЬг Уа1 435 Авр Ьув Вег Агд Тгр 440 С1п С1п <31 у Авп ν<ι 445 РЬе вег Сув
Вег Уа1 450 НеЕ Ηίβ С1и А1а Ьеи 455 Ηΐβ Авп Ηίε Туг ТЬг 460 С1п Ьув Вег Ьеи
Вег Ьеи Вег Рго с1у Ьув
465 470 <210> 63 <211> 720 <212> ДНК <213> Нолю варгепЕ <400> 63 аСдаддсСсс даСаССдЕда аЕСРссрдса СассЕдсада СссддддСсс адсададсдд сддасдСЕсд ЕЕсаССЕЕСС сСдааСаасС ЕсдддСаасС адсадсассу дСсасссаЕс сСдсСсадсС СдасЕсадЬс ддрсрадрса адссаддд-са сСдасаддЕЕ аддсСдадда дссаадддас сдссаРсРда СсЕаСсссад сссаддадад сдасдсЕдад адддссЕдад ссЕддддсЕд ЕссасЕсЕсс дадссЕссЕд дСсЕссасад -садЕддсадС ЕдЕЕддддСЕ сааддрддаа ЕдадсадЕЕд ададдссааа ЕдЕсасадад сааадсадас сссдсссдЕс сЕааЕдсссЕ сСдсссдтса ссЕддЕааЕд ссссЕдаРсЕ ддаСсаддса ЕаЕЕасгдса аЕсааасдаа аааЕсЕддаа дСасадрдда саддасадса сасдадааас асааададсЕ дддЕсЕсЕдд ссссЕддада даЕасаасЕа аЕЕЕдддЕЕс садаЕЕЕЕас ЕдсаадсЕсЕ сЕдСддсрдс сСдссЕЗЕдР аддЕддаСаа аддасадсас асааадссЕа Есаасадддд аЕссадЕддд дссддссЕсс ЕЕЕддаЕЕдд ЕааСсдддсс асЕдааааЕс асааасЕссЕ аосаЕсЕдЕс сдсдЕдссЕд сдссссссаа сЕасадссЕс сдсссдсдаа ададЕдссаа
120
180
240
300
360
420
480
540
600 б 60
720 <210> 64 <211* 239 <212> РКТ <213> Ното зарХепз <220>
<221> ΜΟϋ_ΚΕ8 <222> <156) <223 > Вариабткм аминокислота <400> 64
НеЕ Агд Ьеи Рго А1а С1п Ьеи Ьеи О1у Ьеи Ьеи МеС Ьеи Тгр νβΐ 15 Вег
1 5 10
С1у Вег Вег С1у Авр 11е νβΐ МеС ТЬг С1п Вег Рго Ьеи Вег Ьеи Рго
20 25 30
Уа1 ТЬг Рго О1у С1и Рго А1а Вег 11е Бег Сув Агд Бег Вег С1п Вег
35 40 45
Ьеи Ьеи Рго С1у Авп С1у Туг Авп Туг Ьеи Авр Тгр Туг Ьеи С1л Ьув
50 55 60
Рго С1у С1п Вег Рго С1п Ьеи Ьеи Не Тут Ьеи С1у Бег Авп Агд А1а
65 70 75 80
- 128 011449
Зег 61у Уа1 Рго Азр 85 Агд РЬе 5ег 61у Зег 90 Сйу Зег 81у ТЫ Азр 95 РЬе
ТЫ Ьеи Ьув Не юо Зег Агд Уа1 61 и А1а 105 С1и Азр Уай Сйу Уай НО Туг Туг
Сув Мек С1п 115 А1а Ьеи С1п ТЫ Рго 120 Агд ТЫ РЬе бйу Сйп 125 Сйу тьг Ьув
Уа1 Сйи 130 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 135 А1а Айа Рго Зег Уа1 140 РЬе Не РЬе Рго
Рго 145 Зег Азр С1и С1л Ьеи 150 Ьуз Зег С1у ТЫ Айа 155 Хаа Уай Уай Суз Ьеи 160
Ьеи Азп Азп РЬе Туг 165 Рго Агд Сйи Айа Ьув 170 Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 175 Авр
Азп Айа Ьеи 61п 180 Зег С1у АЗП Зег Сйп 185 С1и Бег Уай ТЫ Сйи 190 61 п Авр
Зег Ьув Авр 195 Зег ТЬг Туг Зег Ьеи 200 Бег Зег ТЬг Ьеи ТЫ 205 Ьеи Зег Ьув
А1а Авр 210 Туг Сйи Ьуз Ηίε ьув 215 Уа1 Туг Айа Сув Сйи 220 Уай ТЬг Ηίε С1п
С1у Ьеи Зег Зег Рго νβι ТЫ Ьув Зег РЬе Азп Агд Сйу С1и СУз
225 230 235 <210> 65 <211> 364 <212> ДНК <213> Нолю вархепе <400> 65 саддгдсадс асскдсаскд сскдддаадд ссскссскса аадскдааск скскасддкд Ссад сдсаддадсс кскскддкдд даскддадкд ададксдадк скдкдаесдс аскасддскд дддсссадда скссаксада даккдддкак саеоакакса кдсддасасд дкксдссссс скддкдаадс скксддасас сскдкссскс 60 ддккаскаск ддадскддак ссддсадосс 120 акскакваса дкдддадсас сааскасаас 180 дкадасасдк ссаадаасса дккскссскд 240 дссдкдкакк аккдкдсдад аааддддддс 300 Юдддссадд даассскддк сассдксксс 360
364 <210> 66 <211> 121 <212 > РИТ <21Э> Ното вархепз <400> 66
С1л УаЗ О1л Ьеи 61η Сйи Зег бйу Рго С1у Ьеи Уа1 Ьув Рго Зег Авр 15 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Сув ТЬг Уа1 Зег С1у С1у Зег Не Агд <31у Туг 20 25 30
- 129 011449
Туг Тгр Зег 35 Тгр 11е Агд 61п Рго 40 Рго С1у ьув 61у Ьеи 45 С1и Тгр Не
С1у Туг 50 Не Туг Туг Зег 51 у 55 Зег ТЬг Αεη Туг Авп £0 Рго Зег Ьеи Ьув
Зег 65 Агд Уа1 ТЬг Не Зег 70 Уа1 Азр ТЬг Зег Ьув 75 Авп <31п РЬе Зег Ьеи 80
Ьув Ьеи Αεη Зег Уа1 85 ТЬг А1а А1а Авр ТЬг 90 А1а Уа1 Туг туг Сув 95 А1а
Агд Ьув С1у 61у 100 Ьеи Туг С1у Авр Туг 105 С1у Тгр РЬе А1а Рго 110 Тгр С1у
С1п С1у ТЬг Ьеи ν»1 ТЬг ν«1 Зег Зег
115 120 <210> 6?
<211> 322 <212> ДНК <213> Ното εβρίβηε <400> 67 даааССдСдС сдаодсадСс сссаддсасс ссдссссхдб сСссадддда аададссасс 60 сЕсСсссдса дддссадСса дадсдсгадс адсадсдасС СадссСддса ссадсадааа 120 сссддссадд сСсссадасС ссесассСаС ддгдсаСсса дсадддссас сддсасесса 180 дасаддССса дСддсадбдд дСсСдддаса дасССсаосе СсассаСоад садасСддад 240 сссдаадаСС ССдсадбдСа ССасСдСсад сасСдссдСа деССаССсас СССсддсссС 300 дддассааад ЪддаСабсаа ас 322 <210> 68 <211> 107 <212> РКТ <213> Ното вархепв <400> 68
31и 1 11е Уа1 Ьеи ТЬг 5 61п Зег Рго 61у ТЬг 10 ьеи Бег ьеи Зег РГО 15 •С1у
С1и Агд А1а ТЬг 20 Ьеи Зег Сув Агд А1а 25 Зег С1п Зег νβΐ Зег 30 Зег Зег
Авр Ьеи А1а 35 Тгр Нхв С1п С1п Ьув 40 Рго С1у С1п А1а Рго 45 Агд Ьеи Ьеи
Не Туг 50 <31у А1а Зег Зег Агд 55 А1а ТЬг С1у Не Рго 60 Авр Агд РЬе Зег
С1у 65 Зет С1у Зег 51у ТЬг 70 Авр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 75 Не Зег Агд Ьеи С1и ВО
Рго С1 и Авр РЬе А1а 85 νβΐ Туг Туг Сув С1п 90 ΗΪ8 Сув Агд Зег Ьеи 95 РЬе
- 130 011449
ТЬг РЬе С1у Рго 61у ТЬг Був Уа1 Авр II е Був 100 105 <210> <211* <212>
<213>
1401
ДНК Нолю
ΒβρίβΠΒ <400> акдааасакс дкдсадскдс гдсаскдкск дддаадддас кссексаада скдааскскд касддкдаск дсскссасса адсасадсдд кддаасксад ддаскскаск касасскдса ааакдккдкд сксккссссс дкддкддкдд дкддаддгдс дкддксадсд ааддксксса садссссдад саддксадсс дададсаакд ддскссккск дкскксксак кссскдкскс кдкддккскк аддадксддд скддкддскс кддадкддак дксдадксас кдассдскдс асддскддгк адддсссакс ссскдддскд дсдекскдас сссгсадсад асдкадакса ксдадкдссс сааааессаа асдкдадсса акаагдссаа кссксассдк асааааасск аассасаддк кдасскдсск ддсадссдда кссгскасад дскссдкдак сдддкааакд есккексскд сссаддаскд саксададдк кдддкакакс сакаксадка ддасасддсс едссссскдд ддкскксссс сскддксаад садсддсдкд сдкддкдасс саадсссадс ассдкдссса ддасассскс сдаадасссс даеааадсса кдкдсассад сссадссссс дкасассскд ддксаааддс даасааскас саадсксасс дсакдаддск а дьддсадсгс дкдаадсскк каскаскдда какгасадкд дасасдксса дкдкаккакк ддссадддаа скддсдссск даскаскссс сасасскксс дкдсссксса аасассаадд дсассасскд акдакскссс даддкссадк сдддаддадс даскддскда аксдаааааа сссссакссс ккскасссса аадассасас дкддасаада сгдсасаасс ссадакдддк сддадассск дскддакссд ддадсассаа адаассадкк дкдсдадааа ссскддкхас дскссаддад ссдааседдк садскдксск дсааскбсдд кддасаадас кддсаддасс ддасссскда ксааскддка адкксаасад асддсаадда есакскссаа дддаддадак дсдасаксдс сксссакдсь дсаддкддса ассасасдса сскдгсссад дксссксасс дсадссссск сгасаасссс скссскдаад ддддддсскс сдксксскса сасскссдад дасддкдксд асадксекса еасесадасс адккдадсдс дксадкеккс ддксасдкдс сдкддасддс свсдккссдк дкасаадкдс аассаааддд дассаадаас сдкддадкдд ддаскссдас дсаддддаас даададсске
120
180
240
300
360
420
480 540 «00 660
720
780
840
900
960 1020 10ВО 1140 1200 12«0 1320 1380 1401
<210> 70
<211> 466
<212> РКТ
<213> Ното вараепб
<400> 70
Мек Був Н1в Беи Тгр РЬе РЬе Беи Беи Беи Уа1 А1а Л1а Рго Агд Тгр
1 5 10 15
17а1 Беи Бег αΐη ν»ι С1П Беи Б1п С1и Бег 61у Рго С1у ьей νβΐ Був
20 25 30
Рго Бег С1и ТЬг Беи Бет Беи ТЬг Сув ТЬг νβΐ Бег С1у С1у Бег Не
35 40 45
Агд 51у Туг Туг Тгр Бег Тгр Не Агд <31п Рго Рго 61у Був 61у Беи
50 55 60
С1и Тгр Не Б1у Туг Не Туг Туг Бег С1у Бег ТЬг Аеп Туг АВП Рго
65 70 75 80
131 011449
Бег Ьеи Ьув Бег Агд ЧаЗ ТЬг 11е Бег Ча1 Авр ТЬг Бег Ьуа Авп 95 С1п
85 90
РЬе Бег Ьеи Ьув 100 Ьеи Авп Бег ЧаЗ ТЬг 105 А1а АЗа Авр ты А1а 310 ЧаЗ Туг
Тут Сув А1а 115 Агд Ьув С1у С1у Ьеи 120 Туг С1у Авр Туг СЗу 125 Тгр РЬе А1а
Рго Тгр 130 С1у СЗп С1у ТЬг ьеи 135 ча1 ТЬг ча1 Бег Бег 140 А1а Бег ТЬг Ьув
Й1у 145 Рго Бег Ча1 РЬе Рго 150 Ьеи А1а Рго Сув Бег 155 Агд Бег ТЬг Бег С1и 160
Бег ТЬг АЗа АХа Ьеи 165 С1у Сув Ьеи Ча1 Ьув 170 Азр Туг РЬе Рго СЗи 175 Рго
νβΐ ТЬг Ча1 Бег 180 Тгр Авп Бег С1у А1а 185 Ьеи ТЬг Бег С1у Ча1 190 Ηίε ТЬг
РЬе Рго АЗа 195 Ча1 Ьеи С1п Бет Бег 200 С1у Ьеи Туг Бег Ьеи 205 Бег Бег ЧаЗ
Ча1 ТЬг 210 Ча1 РГО Бег Бег АЗП 215 РЬе С1у ТЬг БЗп ТЬг 220 Туг ТЬг Сув Авп
Ча1 225 Авр Ηίε Ьуа Рго Бег 230 Авп ТЬг Ьув ЧаЗ Авр 235 Ьув ТЫ Ча1 СЗи Агд 240
Ьув Суз Сув ЧаЗ С1и 245 Сув Рго Рго Сув РГО 250 АЗа Рго Рго Ча1 А1а 255 СЗу
Рго Бег Ча1 РЬе 260 Ьеи РЬе Рго РГО Ьув 265 Рго Ьув Авр ТЫ Ьеи 270 Нес Не
Бег Агд ТЬг 275 Ргс С1и Ча1 ТЫ Сув 280 Ча1 ЧаЗ ЧаЗ Авр ЧаЗ 285 Бег Ηίε СЗи
Авр Рго 290 61и Ча1 СЗп РЬе Авп 295 Тгр Туг Ча1 Авр С1у 300 Ча1 С1и ЧаЗ Ηίε
АВП 305 А1а Ьув ТЫ Ьув РГО 310 Агд С1и □1и БЗп РЬе 315 Авп Бег ТЬг РЬе Агд 320
Ча1 Ча1 Бег ЧаЗ Ьеи 325 ТЫ ЧаЗ ЧаЗ Ηίε С1п 330 Авр Тгр Ьеи Аеп СЗу 335 Ьув
СЗи Туг Ьув Суз 340 Ьуз ЧаЗ Бег Авп Ьув 345 С1у Ьеи Рго АЗа Рго 350 ЗЗе СЗи
Ьув ТЬг Не 355 Бег Ьув ТЬг Ьув СЗу 360 С1п Рго Агд б1и Рго 365 С1п Ча1 Туг
ТЫ Ьеи Рго Рго Бег Агд 31и СЗи НеС ТЫ Ьув Авп СЗп Ча1 Бег Ьеи
370 375 300
132 011449
ТЬг 385 Сув Ьеи Уа1 Ьув С1у 390 РЬе Туг Рго £ег Азр 395 Не А1а Уа1 61 и Тгр 400
С1и £ег Авп С1у С1п 405 Рго б1и Авп Азп Туг 410 Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго 415 Мес
Ьеи Авр Зег Авр 420 С1у Зег РЬе РЬе Ьеи 425 Туг £ег Ьув Ьеи ТЬг 430 Уа1 Азр
Ьув Бег Агд 435 Тгр С1п С1п С1у Азп 440 Уа1 РЬе Зег Сув Зег 445 Уа1 МеЕ Ηΐε
С1и А1а 450 Ьеи Ηίβ Азп Ηίβ Туг 455 ТЬг С1п Ьув 5ех Ьеи 460 Зег Ьеи Зег Рго
С1у Ьув
465 <210> 71 <211> 705 <212> ДНК <213* Ното варгепз <400> 71 аЕддааассс садсдсадсЕ ЕсСсЕЕссЕс сЕдсЕасЕсЕ ддсЕсссада аСссассдда 60 дааасЕдсдЕ Едасдсадес Ессаддсасс сЕдСссссдс сЕссадддда аададссасс 120 сСсЕссСдса дддссадЕса дадЕдСЕадс адсадсдасЕ ЕадссЕддса ссадсадааа 180 ссЕддссадд сЕсссадасЕ ссЕсаЕсЕас ддЕдсаЕсса дсадддссас ЕддсаЕссса 240 дасаддЕЕса дЕддсадЕдд дЕсЕдддаса дассесасес ЕсассаЕсад садасЕддад 300 ссЕдаадаЕС ЕЕдсадсдса ссассдЕсад сассдесдса дссеаЕЕсас ЕЕСсддсссЕ 360 дддассааад ЕддаЕаСсаа асдаасЕдСд дсгдсассае сСдЕсЕСсаЕ сЕЕсссдсса 420 ЕсЕдаЕдадс адЕЕдаааЕс ЕддаасЕдсс ЕседССдсдС дссЕдсЕдаа ЕаасЕЕсЕаЕ 480 сссадададд ссааадСаса дСддааддЕд дасаасдссс ЕссааЕсддд ЕаасЕсссад 540 дададСдЕса сададсадда садсааддас адсассеаса дссгсадеад сасссЕдасд 600 ссдадсааад садасгасда дааасасааа дСсСасдссЕ дсдаадксас ссаЕсадддс 660 сЕдадсСсдс ссдЕсасааа дадсЕЕсаас аддддададЕ дЕЕад 705 <210* 72 <211> 234 <212> РКТ <213> Ното вархепя <400> 72
нее 1 61и ТЬг Рго А1а 5 61п Ьеи Ьеи РЬе Ьеи 10 Ьеи Ьеи Ьеи Тгр Ьеи 15 Рго
61 и Зег ТЬг 61у 20 61 и Не Уа1 Ьеи ТЬг 25 51Л £ег Рго 61у ТЬг 30 Ьеи Бег
Ьеи 5ег Рго 35 С1у <31и Агд А1а ТЬг 40 Ьеи Зег Сув Агд А1а 45 Зег С1п Бег
Уа1 Зег Зег Зег Авр Ьеи А1а Тгр Ηίβ 61п С1п ьув РГО х»1у (31л А1а
55 60
- 133 011449
Рго 65 Агд Ьеи Ьеи Не Туг 70 €1у А1а Зег Бег Агд 75 А1а ТЬг 61у Не Рго 80
Авр Агд РЬе Бег С1у 85 Зег 61у Зег 61у ТЬг 90 Авр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 95 Не
Зег Агд Ьеи 61и 100 Рго 61и Авр РЬе А1а 105 νβΐ Туг Туг Сув 61п но Ηίε Сув
Агд Зег Ьеи 115 РЬе ТЬг РЬе <31у Рго 120 С1у ТЬг Ьув Уа1 Авр 125 11е Ьув Агд
ТЬг νβΐ 130 А1а А1а Рго Зег νβΐ 135 РЬе Не РЬе Рго Рго 140 Бег Авр С1и 61п
Ьеи 145 Ьув Зег <31у ТЬг А1а 150 Зег ν«ι ν»1 Сув ьеи 155 Ьеи Авп Авп РЬе Туг 160
Рго Агд 61и А1а Ьув 165 Уа1 61п Тгр Ьув νβΐ 170 Авр Авп А1а Ьеи 61п 175 Зег
С1у Авп Зег С1п 180 С1и Зег Уа1 ТЬг £1и 185 С1п Авр Зег Ьув Авр 190 Зег ТЬг
Туг Бег Ьеи 195 Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг 200 Ьеи Зег Ьув А1а Авр 205 Туг 61и Ьув
Ηίε Ьув 210 νβΐ Туг А1а Сув 61и 215 Уа1 ТЬг Ηίε 61 п 61у 220 Ьеи Бег Бег Рго
νβΐ 225 ТЬг Ьув Бег РЬе АвП 230 Агд 61у 61и Сув
<210> 73 <211* 376 <212> ДНК <213> Ното ββρίβηβ <400> 73 саддедсадс сддгддадгс гдддддаддс дЕддсссаде сЕдддаддЕс сссдадаесс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕсадЕ адсЕаЕусса ЕдсасЕдддС ссдссаддсЕ 120 ссаддсаадд ддсЕддадЕд ддеддсадЕЕ аЕаЕсаЕаЕд аЕддаадраа ЕаааЕасЕаЕ 180 дсадасЕссд Едаадддссд вЕЕсассаЕс Еасададаса аЕЕссаадаа сасдсЕдЕаЕ 240 СЕдсаааЕда асадссЕдад адсЕдаддас асддсЕдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс дадасдсддС 300 сасЕасддда аЕааЕсасЕа сЕссЕаЕЕас ддЕЕЕддасд ЕсЕддддсса адддассасд 360 дЕсассдгсЕ ссЕсад 376 <210* 74 <211> 125 <212> РКТ <213> Ното вараепв <400> 74 <31п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1и Зег 61 у С1у 61у Уа1 ν«1 61п Рго 61у Агд 15 10 15
- 134 011449
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Су 5 А1а А1а Бег С1у РЪе ТЬг РЬе Бег Бег Туг
20 25 30
А1а Нес Ηίδ Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз 61у Ьеи (Ни Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 Не Бег Туг Αερ Б1у Бег Аеп Ьуз Туг Туг А1а АЗр Бег Уа1
50 55 60
Ьув <31 у Агд РЬе ТЬг Не Туг Агд Азр Азп Бег Ьув Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи <31п НеС Аеп Бег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а νβΐ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Агд С1у Ηιβ Туг е1у Авп Азл Туг Туг Бег Туг Туг <31у Ьеи
100 105 110
Авр Уа1 Тгр 61у С1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТНг νβΐ Бег Бег
115 120 125 <210> 75 <211> 337 <212> ДНК <213* Ното еархепв <400> 75 дасаССдСда СдасссадСс СссасСсСсс сСдсссдСса сссссддада дссддссСсс 60 аСссссЪдса ддСсСадСса дадссСссСд ссСддСааГд даСасаасСа СССддаССдд 120 Сасссдсада адссадддса дссСссасад сссссдагсс асссдддссс СааСсдддсс 180 Сссддддссс сСдасаддСС садСддсадС ддсСсаддса садассссас ассдааааСс 240 адеададедд аддссдадда сдссдддасс СагЕасСдса СдсаадсСсС асааассссС 300 еддаодссед дссаадддас сааддСддаа аесааас 337 <2Ю 76 <211> 112 <212> РКТ <213> Ното вархепв <400> 76
Азр 1 Не Уа1 Мес ТЬг 5 С1п Бег Рго Ьеи Бег 10 Ьеи Рго νβΐ ТЬг Рго 15 С1у
<31и Рго А1а Бег 20 Не Бег Суя Агд Бег 25 Бег С1п Зег Ьеи Ьеи 30 Рго С1у
Азп □1у Туг 35 Αεη Туг Ьеи Авр Тгр 40 Тут Ьеи С1п Ьуз Рго 45 (31у 61п Бег
Рго σΐη 50 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 55 С1у Бег Азп Агд А1а 60 Бег С1у νβΐ Рго
Азр Агд РЬе Бег 61у Бег 61у Бег Б1у ТЪг Азр РЪе ТЬг Ьеи ьув Не
70 75 80
- 135
Бег
11е Ьуз
Ьеи <3131 ТЬг Рго Агд ТЬг РЬе 61у 61п 61 у ТЬг
100 105
Ьуз Уа1 51и
110 <210> 77 <211> 1413 <212> ДНК <213> Ното варгепз <400> 77 асддадсЕЕд дЕдсааседд ЕдЕдсадссЕ ддсааддддс дасЕссдСда саааЕдааса ЕасдддааЕа ассдСсЕсс! адсассессд дЕдасддсдЕ сЕасадСссЕ ддсасссада асадссдадс есдЕсадЕсЕ даддЕсасдЕ ЕасдЕддасд адсасдЕЕсс дадЕасаадЕ аааассааад аЕдассаада дссдЕддадЕ сЕддасЕссд садсадддда садаададсс ддсЕдадсЕд ЕддадЕсЕдд сЕддаЕЕсас ЕддадЕдддЕ адддссдаЕЕ дееЕдададс аЕЕасЕасЕс садсссссас ададсасадс сдЕддаасЕс саддасЕсЕа ссЕасассЕд дсааасдЕсд ЕССЕСЕЕССС дсдЕддЕддс дсдЕддаддЕ дЕдЕддссад дсааддЕсЕс ддсадссссд ассаддЕсад дддададсаа асддсЕссЕЕ асдЕсЕЕсЕс ЕСЕССОСдЕС ддЕЕЕЕссЕс дддаддсдЕд сЕЕсадсадс ддсадЕЕаса сассаЕсЕас Едаддасасд сЕаЕЕасддЕ саадддссса ддсссЕдддс аддсдсЕсЕд сЕсссЕсадс саасдЕада! ЕдЕсдадЕдс сссаааассс ддасдЕдадс дсаЕааЕдсс сдЕссЕсасс саасаааддс адаассасад ссЕдасеЕдс Едддсадссд сЕЕссЕсЕас аЕдсЕссдЕд ЕссдддЕааа дЕЕдСЕсЕЕЕ дЕссадссЕд ЕаЕдссагдс ЕсаЕаЕдагд ададасааЕЕ дседьдЕаЕЕ ЕЕддасдЕсЕ ЕсддЕСЕЕсс ЕдссЕддЕса ассадсддсд адсдсддсда сасаадссса ссассдЕдсс ааддасассс сасдаадасс аадасааадс дЕЕдЕдсасс сЕсссадссс дЕдЕасассс сЕддЕсааад дадаасаасЕ адсаадсЕса аЕдсаЕдадд Еда
ЕаададдЕдЕ ссадЕдЕсад 60 ддаддЕссс! дадасЕсЕсс 120 асЕдяяЕссд ссаддсЕсса 180 даадЕааЕаа аЕасЕаЕдса 240 ссаадаасас дсЕдЕаЕсЕд 300 асЕдЕдсдад асдеддСеае 360 ддддссаадд дассабддЕс 420 сссЕддсдсс сЕдсЕссадд 480 аддасЕасЕЕ ссссдаассд 540 ЕдсасассЕЕ сссадсЕдЕс 600 ссдедсссЕс садсаасЕгс 660 дсаасассаа ддСддасаад 720 садсассасс Едеддсадда 780 СсагдаЕсЕс ссддассссЕ 840 ссдаддЕсса дЕЕсаасЕдд 900 сасдддадда дсадЕЕсаас 960 аддасЕддсЕ даасддсаад 1020 ссаЕсдадаа аассаЕсЕсс 1080 ЕдсссссаЕс ссдддэддад 1140 дсЕЕсЕассс садсдаоаЕС 1200 асаадассас ассЕсссаЕд 1260 ссдЕддасаа дадсаддЕдд 1320 сЕсЕдсасаа ссасЕасасд 1380 1413 <210> 78 <211> 470 <212* РАТ <213> Нолю зарзепе <400> 78
меЕ 1 С1и РЬе 61у Ьеи 5 Бег Тгр Уа1 РЬе Ьеи 10 Уа! А1а Ьеи Ьеи Агд 15 61у
νβΐ 61п Сув <31п 20 Уа1 С1п Ьеи Уа1 01 и 25 Бег 61у 61 у 61у Уа1 30 νβΐ 61 η
Рго 61у Агд 35 Бег Ьеи Агд Ьеи Бег 40 Сув А1а А1а Бег 61у 45 РЬе ТЬг РЬе
Бег Бег 50 Тут А1а Мес ΗΪ3 Тгр 55 Уа1 Агд 61п А1а Рго 60 61у Ьув С1у Ьеи
- 136 011449
61υ 65 Тгр Уай Айа Уай 1йе 70 Бег Туг Азр Сйу Бег 75 Авп Ьув Туг Туг Айа 80
Αερ Зег Уа1 ьуз С1у 85 Агд РЬе ТЫ Не Туг 90 Агд Азр Авп Зег Ьуз 95 Азп
ТЫ Ьеи Туг Ьеи 100 Сйп Мек Азп Зег Ьеи 105 Агд Айа Сйи Авр ТЬг но Айа Уай
Туг Тут Суз 115 Айа Агд Агд Сйу Ий в 120 Туг С1у Азп Азп Туг 125 Туг Зег Туг
Туг Сйу 130 Ьеи Азр Уай тгр Сйу 135 Сйп Сйу ТЬт ТЬх Уай 140 ТЫ Уай Бег Зег
Айа 145 Зег ТЫ Ьуз Сйу Рго й50 Зег Уай РЬе Рго Ьеи 155 Айа Рго Сув Зег Агд йбО
Зег ТЬг Зег 61и Зег 165 ТЬх Айа Айа Ьеи Сйу 170 Суз Ьеи Уай Ьув Азр 175 Туг
РЬе Рго Сйи Рго 180 Уай ТЬг Уай Зег Тгр 185 Азп Бег Сйу Айа Ьеи 190 ТЬг Бег
Сйу Уай Н1з 195 ТЬг РЬе Рго Айа Уай 200 Ьеи Сйп Бег Зег сйу 205 Ьеи Тут 5ег
Ьеи Зег 210 Зег Уай Уай ТЬг Уай 215 РГО Бех Бег Азп РЬе 220 Сйу ТЬг сйп ТЬг
Туг 225 ТЬг Сув АЗП Уа1 Авр 230 Н1в Ьув Рго Бег Азп 235 ТЫ Ьуз Уай Азр Ьуз 240
тЬг Уай 01 и Агд Ьув 245 Сув Сув Уай С1и Сув 250 Рго Рго Сув Рго Айа 255 Рго
Рго Уай Айа сйу 260 Рго Бег Уай РЬе Ьеи 265 РЬе Рхо Рго Ьуз Рго 270 ьуз АВр
ТЫ Ьеи Нек 275 1йе Зег Агд ТЫ Рго 280 Сйи Уай ТЬг Сув Уай 285 Уай Уай Авр
Уай Бег 290 ΗΪ8 Сйи Авр Рго С1и 295 Уай Сйп РЬе Авп Тгр 300 Туг Уай Азр Сйу
Уа1 305 Сйи Уай Нйа Азп Айа 310 Ьуз ТЬг Ьув Рго Агд 315 Сйи Сйи Сйп РЬе Азп 320
Зег ТЬх РЬе Агд Уай 325 Уай Бег Уай Ьеи ТЫ 330 Уай Уай Н1В С1п Азр 335 Тгр
Ьеи Авп Сйу Ьуз 340 Сйи Туг Ьув Сув Ьуз 345 Уай Бег Авп Ьуз Сйу 350 Ьеи Рго
Айа Рхо Не 355 Сйи Ьуз ТЫ Не Зег 360 Ьуз ТЫ Ьуз сйу Сйп 365 РГО Агд Сйи
137 011449
Рго 61 η νβΐ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд 01 и 61и Мек ТЬг Ьув Авп
370 375 380
61п νβΐ Бег Ьеи ТЬг Сув Ьеи νβΐ Ьуз 61у РЬе Туг Рго Бег Авр Не
365 390 395 400
А1а νβΐ 61и Тгр 21и Бег Авп С1у 61п Рго С1и Азп Авп Туг Ьув ТЬг
405 410 415
ТЬг Рго Рго мек Ьеи Азр Бег Аар С1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег* Ьув
420 425 430
Ьеи ТНг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр 61п С1п 61у Аеп Уа1 РЬе Бег Суз
435 440 445
Бег Уа1 Мек Ηίε 61и А1а Ьеи Ηίε Авп Ηίε Туг ТЬг О1п ьув Бег Ьеи
450 455 460
Бег Ьеи Бег Рго 61у Ьуз
465 470 <210> 79 <211> 720 <212> ДНК <213> Нелю вар!епв <400> 79 акдаддсксс дакаккдкда аксксскдса касскдсада кссддддксс адсададкдд еддаедккед кксакскксс скдаакааск ксдддкааск адсадсассс дксасссакс скдсксадск кдасксадкс ддкекадкеа адссадддса скдасаддкк аддскдадда дссаадддас сдссакскда кскаксссад сссаддадад кдасдскдад адддсскдад сскддддскд кссасксксс дадссксскд дкскссасад садкддсадк кдккдддакк сааддкддаа кдадсадккд ададдссааа кдксасадад сааадсадас сксдсссдкс скаакдекск скдсссдкса сскддкаакд сксскдаксЕ ддсксаддса Еаккаскдеа аксааасдаа ааакскддаа дкксадкдда саддасадса Еасдадааас асааададск дддкскскдд сссскддада даЕасаасЕа акккдддккс садаккккас кдсаадскск скдкддскдс скдсскскдк дддкддаЕаа аддасадсас асааадкска ксаасадддд акссадкддд дссддссксс кккддаккдд кааксдддсс аскдаааакс асааасксск ассакскдкс кЭкдкдсскд сдссскссаа скасадсскс сдсскдсдаа ададкдккад
120
160
240
300
360
420
460
540
600
660
720 <210> 80 <211> 239 <212> РИТ <213> Нолю варгепв <400> 60
Мек Агд Ьеи 1 Рго А1а 5 С1п Ьеи Ьеи (31у Ьеи Ьеи Нек Ьеи Тгр Уа1 Бег
10 15
61у 5ег Бег 61у Азр 11е νβΐ Мек ТЬг 61п Бег Рго Ьеи Бег Ьеи Рго
20 25 30
Уа1 ТЫ Рго 61у 61и Рго А1а Бег Не Бег Сув Агд Бег Бег 61п Бег
35 40 45
- 138 011449
Ьеи Ьеи 50 ₽го С1у АВП С1у Туг 55 Азп ТуГ Ьеи Авр Тгр 60 Туг Ьеи СХп Ьув
Рго 65 С1у СХп Бег Рго С1П 70 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 75 СХу Бег Авп Агд АХа 80
Бег СХу УаХ Рго Авр 85 Агд РЬе Зег СХу Зег 90 С1у Бег С1у ТЬг Авр 95 РЬе
ТЬг Ьеи Ьув 11е 100 Зег Агд УаХ С1и А1а 105 С1и АВр УаХ 61у Не 110 Туг Туг
Сув МеЕ С1п 115 А1а Ьеи С1п ТЬг Рго 120 Агд ТЬг РЬе СХу С1п 125 С1у ТЬг Ьув
Уа1 С1и 130 Не ьув Агд ТЬг УаХ 135 А1а А1а Рго Бег УаХ 140 РЬе 11е РЬе Рго
Рго 145 Зег Авр С1и <51п Ьеи 150 Ьув Бег ОХу ТЬг АХа 155 Бег УаХ Уа1 Сув Ьеи 160
Ьеи Авп А8П РЬе Туг 165 РГО Агд <31 и А1а ьув 170 Уа1 СХп Тгр Агд Уа1 175 Авр
Авп А1а Ьеи СХп 180 Бег СХу Авп Зег СХп 185 С1и Зег Уа1 ТЬг С1и 190 С1п Авр
Вег Ьув Авр 195 Бег ТЬг Туг Зег Ьеи 200 Зег Бег ТЬг Ьеи ТЬГ 205 Ьеи Бег Ьув
А1а Авр 210 Туг С1и Ьув ΗΪΒ Ьув 215 Уа1 Туг А1а Сув СХи 220 Уа1 ТЬг ΗΪ8 СХп
С1у Ьеи Бег Бег Рго УаХ ТЬг Ьув Бег РЬе Авп Агд С1у СХи Сув
225 2Э0 235 <210> 81 <211> 364 <212> ДНК <213> Ното ββρΐβηβ <400> 81 саддЕдсадс ассЕдсасЕд ссадддаадд сссЕсссЕса аадсЕдадЕЕ сЕсЕасддЕд Есад
ЕдсаддадЕс ЕсЕсЕддЕдд дасЕддадЕд ададЕсдадЕ сЕдЕдассдс асЕасддсЕд дддсссадда сЕссаЕсада даЕЕдддЕаЕ сассаЕаЕса сдеддасасд дЕЕсдссссс сЕддЕдаадс ддЕЕасЕасс аЕсЕаЕЕаса дЕадасасдЕ дссдЕдЕаЕЕ Еддддссадд сЕЕсддадас ддадсЕддаЕ дЕдддадсас ссаадаасса асЕдЕдсдад даасссЕддЕ ссЕдЕсссЕс ссддсадссс саасЕасаас дЕЕСЕ-СССЕд аадддддддс сассдЕсЕсс
120
180
240
300
360
364 <210> 82 <211> 121 <212> РКТ <213> Ното зарХепв
- 139 011449
<400> 82 Бег <51 у Рго 61у Ьеи Уа1 10 Ьуз Рго Бег 15 61и
61 η 1 νβΐ 61п Ьеи С1п С1и 5
ТЬг Ьеи Бег Ьеи 20 ТЬг Сув ТЬг Уа1 Бег 25 61у 61у Бег Не Агд 30 61у Туг
Туг Тгр Бег 35 Тгр 11е Агд С1п Рго 40 Рго 61у Ьуз С1у Ьеи 45 61и Тгр 11е
61у Туг 50 11е Туг Туг Бег 61у 55 Бег ТЫ Азп Туг Азп 60 Рго Бег ьеи Ьуз
2ег 65 Агд Уа1 ТЫ Не Бег 70 Уа1 Авр ТЫ Бег Ьуе 75 Азп С1п РЬе Бег Ьеи 80
Ьув Ьеи Бег Бег Уа1 85 ТЬг А 1а А1а Авр. ТЫ 90 А1а Уа1 Туг Туг Сув 95 А1а
Агд Агд 61у 61у 100 Ьеи Туг 61у Авр Туг 61у 105 Тгр РЬе А1а Рго но Тгр 61у
61 η 61у ТЫ Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120 <210> 83 <211> 322 <212> ДНК <213> Ното еархепз <400> 83 даааЕЕдЕдЕ сЕсЕссЕдса ссЕддссадд дасаддЕЕса ссЕдаадаЕЕ дддассааад
ЕдасдсадЕС дддссадЕса сЕсссаддсЕ дЕддсадгдд ЕЕдсВдЕдЕа ЕддаЕаЕсаа
Ессаддсасс дадЕдЕЕадс ссЕсаЕсЕаЕ дЕсЕдддаса ЕЕасЕдЕсад ас
СЕдЕСЕЕЕдЕ адсассЕасЕ ддЕдсвЕсса дасЕЕсасЕс садЕаЕадЕа
СЕсеадддда ЕадссЕддЕа дсадддссас есассаЕсад дсЕЕаЕЕсас аададссасс ССадсадааа ЕддсаЕссса садасЕддад ЕЕЕсддсссЕ ео
120
180
240
300
322 <210> 84 <211> 107 <212> РКТ <213> Ното εβρίβηε <400> 84
61и Не νβι Ьеи ТЫ С1п Зег Рго С1у ТЬг Ьеи Бег Ьеи Бег Рго 61у
1 5 10 15
61и Агд А1а ТЬг Ьеи 2ег Сув Агд А1а Бег 61п Бег Уа1 Бег Бег ТЬг
20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг С1п 61п Ьуз Рго 61у 61п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи
35 40 45
Не Туг 61у А1а Бег £ег Агд А1а ТЫ 61у Не РГО Азр Агд РЬе Бег
50 55 60
- 140 011449
С1у Вег <Э1у Вег С1у ТЬг Αερ РЬе ТЫ Ъеи ТЬг Не Вег Агд Ъеи<31и
70 7580
Рго б1и Авр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Сув 61п 61п Туг Зег Зег ЪеиРЬе
9095
ТЬг РЬе Б1у Рго Б1у ТЬг Ьув νβΐ Авр 11е Ьув
100105 <210> 85 <211> 1401 <212> ДНК <213> Ново варгепа <400> 85 акдааасакс сдкддккскк сскксксскд дкддсадскс ссадакдддк сскдксссад 60 дкдсадскдс аддадксддд сссаддаскд дкдаадсскк сддадассск дссссксасс 120 Сдсасхдкск скддкддскс саксададдк каскаскдда дскддакссд дсадссссса 180 дддаадддас кддадкддак кдддкакакс каккасадкд ддадсассаа скасаасссс 240 ьсссксаада дксдадксас сакаксадка дасасдксса адааосадкк сЬссскдаад 300 скдадккскд кдассдскдс ддасасддсс дкдкаккаск дсдсдадаад ддддддссес 360 касддкдаск асддскддсь сдссссскдд ддссадддаа ссскддксас сдьысскса 420 дсскссасса' адддсссакс ддкскксссс скддсдссск дскссаддад сасскссдад 480 адсасадсдд ссскдддскд сскддксаад даскаскксс ссдаассддк дасддкдксд 540 кддаасксад дсдскскдас садсддсдкд сасасскксс садекдксск асадксскса 600 ддаскскаск сссксадсад сдкддкдасс дкдсссксса дсааскгсдд сасссадасс 660 касасскдса асдкадакса саадсссадс аасассаадд кддасаадас адккдадсдс 720 ааакдккдкд ксдадгдссс ассдсдссса дсассасекд кддсаддасс дкеадкекке 780 сксккссссс саааасссаа ддасассске акдасскссс ддасссседа ддксасдкдс 840 дкддкддкдд аедкдадсса сдаадасссс даддкссадк ксааскддка сдкддасддс 900 дкддаддкде акаакдссаа дасааадсса сдддаддадс адкксаасад сасдккссдк 960 дкддксадед кссксассдк кдкдсассад даскддскда асддсаадда дкасаадкдс 1020 ааддксксса асаааддсск сссадссссс аксдадаааа ссакскссаа аассаааддд 1080 садссссдад аассасаддк дкасассскд сссссакссс дддаддадак дассаадаас 1140 саддксадсс кдасдкдсск ддксаааддс ккскасссса дедасаксдс едкддадкдд 1200 дададсаакд ддсадссдда даасаассас аадасеасас сгссеаьдсе ддаскссдас 1260 ддекееккек Ъсскскасад саадсксасс дкддасаада дсаддСддса дсаддддаас 1320 дкскксксак дскссдкдак деакдаддск скдсасаасс аскасасдса даададссес 1380 кссскдкскс едддкааакд а 1401 <210* 86 <211> 466 <212> РКТ <213> Ното εβρίβηε <400> 86
мек Ъув Н1в Ъеи тгр РЬе РЬе Ъеи Ъеи Ъеи ν·ι А1а А1а Рго Агд Тгр
1 5 10 15
Уа1 Ъеи Вег С1п Уа1 С1п Ъеи С1п <31и Вег <31 у Рго <31у Ъеи ν«ι Ьув
20 25 30
Рго Вег 01 и ТЫ Ъеи Вег Ъеи ТЬг Сув ТЬг Уа1 Вег С1у <31 у Вех Не
40 45
- 141 011449
Агд 61у Туг 50 Тух Тгр Зег Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьув С1у Ьеи
55 60
31υ 65 Тгр Не С1у Туг 11е 70 Туг Туг Зег 61 у Зег 75 ТЬг Авп Туг Авп Рго 80
Зег Ьеи Ьув Зег Агд 85 Уа1 ТНг Не Зег Уа1 90 Авр ТНг Зет Ьув Авп 95 <31п
РНе Зег Ьеи Ьув 100 Ьеи Зет Зег νβΐ ТНг 105 А1а АЗ а Авр ТЬг А1а 110 УаЗ Туг
Туг Сув А1а 115 Агд Агд С1у С1у Ьеи 120 Туг С1у Авр Туг 61у 125 Тгр РНе А1а
Рго Тгр 130 е1у С1п С1у ТЬг Ьеи 135 νβΐ ТНг Уа1 Зег Зег 140 А1а Зег ТЬг Ьув
С1у 145 Рго Зег Уа1 РНе Рго 150 Ьеи А1а Рго Сув Зег 155 Агд Зег ТЬг Зег <31и 160
Зег ТЬг А1а А1а Ьеи 165 <31 у Сув Ьеи Уа1 Ьув 170 АВр Туг РЪе Рго С1и 175 Рго
νβΐ ТЬг Уа1 Зег 180 Тгр Авп Бег 61 у А1а 185 ьеи ТЬг Зег С1у УаЗ 190 ΗΪΒ ТЬг
РНе Рго А1а 195 Уа1 Ьеи С1п Зег Зег 200 СИу Ьеи Тут Зег Ьеи 205 Зег Зег Уа1
Уа1 ТЬг 210 Уа1 Рго Зег Зег Авп 215 РНе 61у ТЬг (31 п ТЬг 220 Тут ТЬг Сув Авп
Уа1 225 Авр Н1В Ьув Рго Зег 230 АВП ТЬг Ьув Уа1 Авр 235 Ьув ТЬг Уа1 С1и Агд 240
Ьув Суя Суя Уа1 С1и 245 Сув РГО Рго Сув Рго 250 А1а Рго Рго Уа1 А1а 255 (31у
Рго Зег Уа1 РНе 260 Ьеи РНе Рго РГО Ьув 2 65 Рго Ьув Авр ТНг Ьеи 270 МеЕ Не
Зег Агд ТЬг 275 РГО 61и Уа1 ТЬг Сув 280 νβΐ Уа1 νβΐ Авр Уа1 285 Зег Ηϊβ <31и
Аар РГО 290 <31и νβΐ 61п РНе Авп 295 Тгр Туг Уа1 Авр С1у 300 Уа1 <31и Уа1 Н1В
Авп 305 А1л Ьуа ТЬг Ьув Рго 310 Агд 61 и С1и <31п РНе 315 Авп Зег ТНг РНе Агд 320
Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи 325 ТНг Уа1 Уа1 Ηίε 61п 330 Авр Тгр Ьеи Авп <31у 335 Ьув
61и Туг Ьув Сув Ьув Уа1 Зег Авп Ьув 61у Ьеи Рго А1а Рго Не <31 и
340 345 350
- 142 011449
ьув ТЬг 11е 355 Зег Ьув ТЬг Ьуз <31у 360 С1п Рго Агд Б1и Рго 365 С1п νβΐ Туг
ТЬг Ьеи 370 Рго Рго Зег Агд <31и 375 <31и Мес ТЬг Ьув Азп зво <31п Уа1 Зег Ьеи
ТЬг 385 Сув Ьеи νβΐ Ьув С1у 390 РЬе Туг Рго Зег Авр 395 Не А1а Уа1 С1и Тгр 400
С1и Зег Авп С1у С1п 405 Рго С1и Авп Авп Туг 410 Ьуз ТЪг ТЬг РГО Рго 415 Мес
Ьеи Авр Зег Авр 420 61у Зег РЬе РЬе Ьеи 425 Туг Зег Ьув Ьеи ТЬг 430 Уа1 Авр
Ьув Зег Агд 435 Тгр С1п С1п С1у Авп 440 νβΐ РЬе Зег Суз Зег 445 Уа1 Мес Н1в
С1и А1а 450 Ьеи ΗΪ5 Азп ΗΪ5 Туг 455 ТЬг С1п ьув Зег Ьеи 460 Зег Ьеи Зег Рго
61у Ьув
465 <210> 87 <211> 705 <212> ДНК <213> Ното зархепе <400> 87 асддааассс садедсадес ГссссЕссЕс сСдсЕасссЕ ддсгоссада Еассассдда 60 даааССдСдЕ СдасдсадЕс Сссаддсасс сСдСССЕСдС ссссадддда аададссасс 120 сЕсс-ссСдса дддссадЕса дадСдЕсадс адсассЕасС садсссддса ссадсадааа 180 сссддссадд сЕсссаддсь ссСсаессаС ддсдсассеа дсадддссас ЕддсаСссса 240 дасаддссса дсдд^адсдд дсссдддаса дасЕСсасСс гсаесасеад садасЕддад 300 ссЕдаадаЕЕ. СЕдсадГдСа ЕсасЕдСсад садЕаЬадСа дсЕСаСЕоас СЕЕсддсссЕ 360 дддассааад СддаЕасеаа асдаасСдкд дсЕдсассаЕ сЕдЕсСЕсаС сСЕсс-сдсса 420 ЕсЕдаЕдадс адСЕдаааЕС СддаасЕдсс ЕсЕдЕЕдЕдЕ дссЕдсСдаа ЕаасСЕсСаС 480 сссадададд ссааадСаса дЕддааддСд даСаасдссс ЕссааЕсддд ЕаасСсссад 540 дададСдЕса сададсадда садсааддас адсассЕаса дссЕсадсад сасссЕдасд 600 седадсааад садасЕасда дааасасааа дСесасдссЕ дсдаадЕсас ссаСсадддс 660 ссдадсЕсдс ссдЕсасааа дадсЕЕсаас аддддададЕ дссад 705 <210> 88 <211> 234 <212> РНТ <213> Нолю вархепз <400> 88
Мес С1и ТЬг Рго А1а С1п Ьеи Ьеи РЬе Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Тгр Ьеи РГО
1 5 10 15
Авр ТЬг ТЬг С1у С1и Не Уа1 Ьеи ТЬг 61п Зег Рго <31у ТЬг Ьеи £ег
20 25 30
- 143 011449
Ьеи Бег Рго 35 С1у С1и Агд А1а ТЬг 40 Ьеи Бег Сув Агд А1а 45 Бег С1п Бег
Уа1 Бег 50 Бег ТЬг Туг Ьеи А1а 55 Тгр Туг 31п 61п Ьув 60 Рго 61у С1п А1а
Рго 65 Агд Ьеи Ьеи 11е Туг 70 Б1у А1а Бег Бег Агд 75 А1а ТЬг Б1У 11е Рго ВО
Αερ Агд РЬе Бег С1у 85 Бег С1у Бег <31у ТЬх 90 Авр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 95 11е
56т Агд Ьеи С1и 100 Рго С1и АВР РЬе А1а 105 Уа1 Туг Туг Сув С1п 110 С1п Туг
Бег Бег Ьеи 115 РЬе ТЬг РЬе С1у Рго 120 61у ТЬг Ьув Уа1 Авр 125 11е Ьув Агд
ТЬг Уа1 130 А1а А1а Рго Бег Уа1 135 РЬе 11е РЬе Рго Рго 140 Бег Авр С1 и С1П
Ьеи 145 Ьув Бег С1у ТЬг А1а 150 Бег Уа1 Уа1 Сув Ьеи 155 Ьеи Авп Авп РЬе Туг 160
Рго Агд С1и А1а Ьув 165 Уа1 С1п Тгр Ьув Уа1 170 Авр Авп А1а Ьеи С1п 175 Бег
С1у Авп Бег С1п 180 С1и Бет Уа1 ТЬг С1и 185 <31п Авр Бег Ьув Авр 190 Бег ТЬг
Туг Бег Ьеи 195 Бег Бег ТЬг Ьеи ТЬг 200 Ьеи Бег Ьув А 1а Авр 205 Туг 61и Ьув
ΗΪΒ Ьув 210 νβΐ Туг А1а Сув С1и 215 ν»1 ТЬг Н1в С1п С1у 220 Ьеи Бег Бег Рго
Уа1 ТЬг Ьув Бег РЬе Авп Агд С1у С1и Сув
225 230 <210> 89 <211> 378 <212> ДНК <21Э> Ното варгепв <400> 89 саддЕдсадс ЕссЕдЕдсад ссаддсавдд дсадассссд сЕдсаааЕда саЕсадсЕдд асддЕсассд сддсддадес ссЕсЕддаес ддсЕддадЕд Едаадддссд аЕадсссдад ЕЕсЕдддаЕа ЕсЕссЕса сдддддаддс сассЕЕсадЕ ддЕддсадЕЕ аСЕсассаЕс адСЕдаадас сЕасЕасЕас дЕддЕссадс адЕЕаЕддса аЕаЕсааадд Ессададаса асддсЕдСдЕ аасддссЕдд сСдддаддЕс ЕдсасЕдддр аЕддаддЕаа аЕЕссаадаа аЕЕасЕдСдС асдЕсЕдддд ссЕдадасЕс ссдссаддсЕ ЕаааЕассаЕ ЕасдсЕдЕаЕ дадаададдд ссаадддасс ¢0
120
180
240
300
380
378 <210> 90 <211> 126
- 144 011449 <212> ΡΗΤ <213> Ното вархепв <400> 90
61 η Ча1 61η Ьеи 1 Ча1 5 О1и Зег 61у С1у 61у Ча1 Ча1 61п Рго 61 у Агд
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег Е1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
61у МеС Ηί« Тгр Ча1 Агд 61п А1а Рго 61у Ьуз С1у Ьеи 61и Тгр Ча1
35 40 45
А1а Ча1 11е Зег Ьуа Аар 61у 61у Аап Ьув Туг ΗΪΒ А1а Азр Зег Ча1
50 55 60
Ьуа 61у Агд РЬе ТЬг Пе Зег Агд Аар Азп Зег Ьуа Авп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеС Аап Зег Ьеи Агд Ча1 61и Азр ТЬг А1а Ча! Туг Туг Суз
85 90 95
Ча! Агд Агд 61у Н1в 61п Ьеи Ча1 Ьеи 61у Туг Туг Туг Туг Аап 61у
100 105 110
Ьеи Аар Ча1 Тгр 61у 61п 61у ТЬг ТЬг Ча1 ТЬг Ча! Зег Зег
115 120 125
<210> 91 <211> 378 <212> ДНК <213> Ното ββρίβηβ <400> 91 саддсдсадс СссСдСдсад есаддеаадд дсадасСссд сСдсаааСда саСсадсСдд асддхсассд
СддСддадСс ссксЬддасс ддесддадсд Сдаадддссд асадсссдад сг.ссдддаса СсСссСса ъдддддаддс сасссссадс ддгддсадсс аССсассаЪс адесдаадас ссассассас дСддЬссадс адССаЬддса аеассааадд Ъссададаса асддсСдЬдЬ аасддСсСдд сСдддаддЬс Сдсассдддс асддаддсаа аССссаадаа аССаскдСдс асдЕссдддд ссбдадасСс ссдссаддсС СаааЬассас Своде СдСаС. дадаададдд ссаадддасс
120
180
240
300
360
378 <210> 92 <211> 126 <212> РКТ <213> Ното заргепа <400 92
С1п Ча1 61 η Ьеи Ча1 С1и Зег 01у С1у 61у Ча1 Ча1 61 η Рго С1у Агд 15 1015
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61 у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 2530
61у Мес Нхз Тгр Ча1 Агд 61п А1а Рго 61у Ьуа е1у Ьеи 61 и Тгр Ча1 35 4045
- 145 011449
А1а УаХ 50 11е Зех Ьуз Азр С1у 55 С1у Азп Ьув Туг Н1в 60 АХа Азр Зег Уа1
Ьуэ 65 СХу Агд РЬе тЬг 11е 70 Зех Агд Азр Азп Зег 75 Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 80
Ьеи С1П МеЕ Авп Зег 85 Ьеи Агд А1а С1и Авр 90 ТЬг А1а Уа1 туг Туг 95 Суз
АХа Агд Агд СХу 100 Ηϊε С1п Ьеи Уа1 Ьеи 105 С1у Туг Туг Туг Туг 110 Азп СХу
Ьеи Азр УаХ Тгр С1у 61 п 61у ТЬг ТЬх Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 125 <210> 93 <211> 336 <212> ДНК <213> Ното вархепа <400> 93 даСаЕСдЕда ЕдасЕсадЕс ЕссасЕсЕсс сЕдсссдЕса ссссЕддада дссддссЕсс 60 аЕсЕссЕдса ддЕсЕадЕса дадссЕсЕЕд ЕаЕадЕааЕд даЕасаасЕЕ ЕЕЕддаЕЕдд 120 ЕассЕдсада адссадддса дЕсЕссасад сЕссЕдаЕсЕ аЕЕЕдддЕЕс ЕааЕсдддсс 180 ЕссддддЕсс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддса садаЕЕЕЕас асЕдааааЕс 240 адсададЕдд аддседадда ЕдсЕддддЕЕ ЕаЕЕасЕдса ЕдсаадсЕсЕ асааасЕссЕ 300
сддасдСЕсд дссаадддас сааддеддаа аЕсааа 336
<210> 94 <211> 112 <212> РКТ <213> Ното зархепз
<400> 94
Азр 1 11е УаХ МеЕ ТЬг 5 СХп Зег РГО Ьеи Зег 10 Ьеи Рго νβΐ ТЬг Рго 15 С1у
61 и Рго А1а Зег 20 11е Зег Сув Агд Зег 25 Зег С1п Зег Ьеи Ьеи 30 Туг Зег
Азп С1у Туг 35 Авп РЬе Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи С1п Ьув Рго 45 С1у С1п Бег
Рго С1П 50 Ьеи Ьеи 11е Туг Ьеи 55 61у Зег Авп Агд А1а 60 Зег С1у Уа1 Рго
Азр 65 Агд РЬе Зег 31у Зег 70 СХу Зег С1у ТЬг Азр 75 РЬе ТЬх Ьеи Ьув 1Хе 80
Зег Агд Уа1 С1и А1а В5 61и Азр УаХ С1у Уа1 90 Туг Тух Суз МеЕ СХп 95 А1а
Ьеи С1п ТЬг РГО 100 Агд ТЬг РЬе С1у С1п 105 С1у ТЬг Ьув Уа1 С1и 110 11е Ьуз
- 146 011449
120
160
240
300
360
373 <210> 95 <211> 373 <212> ДНК <213> Ното зар1епв <400> 95 саддсдсаас ЕссЕдЕдсад ссаддсаадд дсадасЕссд сЕдсаааЕда асЕддааада ассдЕсЕссЕ
ЕддЕддадЕс ссЕсЕддаЕЕ ддсЕддадсд Едаадддссд асадссЕдад сЕЕассасса сад
Едддддаддс сассЕЕсадЕ ддЕддсадЕЕ аЕЕсассаЕс адсЕдаддас сЕасдссддЕ дЕддЕссадс сдсЕасддса аЕаЕсаЕсЕд Ессададаса асддсЕдЕдЕ асддасдЕСЕ сЕдддаддЕс ЕдсасЕдддС аЕддаддЕаа аЕЕссаадаа аЕЕасЕдЕас ддддссаадд ссЕдадасЕс ссдссаддсе ЕаааЕасЕаЕ сасдсЕдЕаЕ дадаададдд дассасддЕс <210> 96 <211> 124 <212> РКТ <213> Ното Бархепв <400> 96
С1п Уа1 61л Ьеи Уа1 Е1и Бег 61 у 61у 61у 10 Уа1 Уа1 С1п Рго 61у 15 Агд
1 5
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Сув А1а А1а Бег 61у РЬе ТЬг РЬе Бег Агд Туг
20 25 30
С1у МеЕ Н1в Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго 61у Ьув 61у Ьеи 61и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Бег Зег Авр 61у 61у Авп Ьув Туг Туг А1а Авр Зег Уа1
50 55 60
Ьуе 61у Агд РЬе ТЬг 11 е Бег Агд Авр Авп Бег Ьув Авп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи (31 л МеЕ Αεη Бег Ьеи Агд А1а С1и Авр ТЬг А1а νβΐ Туг Туг Сув
85 90 95
ТЬг Агд Агд С1у ТЬг 61у Ьув ТЬг Туг Туг Н1в Туг А1а <31у МеЕ Авр
100 105 110
Уа1 Тгр 61у С1п <31у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120 <210> 97 <211> 364 <212* ДНК <21Э> Ното 5ар1епБ <400> 97 саддЕдсадс ЕдсаддадЕс дддсссадда ассЕдсассд ЕсСсЕддЕдд сЕссаЕсада ссЕдддаадд дасЕддадЕд даЕЕдддгаЕ сссЕсссЕса ададЕсдадЕ сассаЕаЕса аадсЕдаасЕ сЕдЕдассдс Едсддасасд сЕддЕдаадс сЕЕсддадас ссЕдЕсссЕс 60 ддЕЕасЕасЕ ддадсЕддаг ссддсадссс 120 аЕсЕаЕЕаса дЕдддадсас саасЕасаас 180 дЕадасасдЕ ссаадаасса дЕЕсЕссссд 240 дссдЕдЕаЕЕ аЕЕдЕдсдад аааддддддс 300
- 147 011449 сЕсЕасддЕд асЕасддсЕд дЕЕсдссссс Еддддссадд даасссЕддЕ Есад сассдЕсЕсс 360
364 <210> 98 <211·* 121 <212> РНТ <213> Ното Εβρϊβηε <400> 98
С1п 1 Уа1 61п Ьеи Б1П 5 61и Бег €1у Рго <31у 10 Ьеи Уа1 Ьув Рго Бег 15 С1и
ТЬг Ьеи Бег Ьеи 20 ТЫ Суа ТЫ νβΐ Бег 25 61у 61у Бег Не Агд 30 С1у Туг
Туг Тгр Бег 35 Тгр Не Агд С1П Рго 40 Рго 61у Ьув С1у Ьеи 45 С1и Тгр Не
С1у Туг 50 Не Туг Туг Бег 61 у 55 Бег ТЫ Авп Туг Авп 60 Рго Бег Ьеи Ьув
Бег 65 Агд νβΐ ТЬг Не Бег 70 Уа1 Авр ТЬг Бег Ьув 75 АЗП 61п РЬе Бег Ьеи 80
ьув Ьеи АВП Бег Уа1 85 ТЬг А1а А1а Авр ТЬг 90 А1а иа1 Туг Туг Сув 95 А1а
Агд Ьув 61у Б1у 100 Ьеи Туг С1у Авр Туг 105 С1у Тгр РЬе А1а Рго 110 Тгр 61у
61п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 99 <211> 322 <212> ДНК <213> Ното вар1епв <400> 99 даааЕЕдЕдЕ сисЕссЕдса сесддссадд дасаддЕЕса ССЕдаадаЕЕ дддассааад
ЕдасдсадЕс дддссадгса сисссадасЕ дЕддсадидд ЕЕдсадЕдЕа ЕддаЕаЕсаа
Ессаддсасс дадЕдЕЕадс ссЕсаЕсЕаЕ дЕсЕдддаса ЕЕасЕдссад ас сЕдЕсЕЕЕдЕ адсадсдасЕ ддЕдсаЕсса дасЕЕсасЕс сасдсссдЕа сЕссадддда ЕадссЕддса дсадддссас ЕсассаЕсад дсЕЕаЕЕсас аададссасс ссадсадааа ЕддсаЕссса садасЕддад ииесддсссЕ
120
180
240
300
322 <210> 100 <211> 107 <212> РНТ <213> Нолю варгепз <400> 100
01и 11е Уа1 Ьеи ТЬг С1п Бег Рго С1у ТЬг Ьеи Вег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15
- 148 011449
С1и Агд А1а ТЫ 20 Ьеи Зег Сув Агд Айа 25 Зег С1 п Зег Уай Зег 30 Зег Зег
Авр Ьеи А1а 35 Ттр Ηίε С1п Сйп Ьув 40 Рго С1у Сйп Айа Рго 45 Агд Ьеи Ьеи
11е Туг 50 Й1у А1а Зег Зег Агд 55 Айа ТЬг Сйу Не Рго 60 Авр Агд РЬе Зег
С1у 65 Зег С1у Зег Сйу ТЫ 70 Авр РЬе ТЫ Ьеи ТЬг 75 11е Зег Агд Ьеи Сйи 80
Рго Сйи Авр РЬе А1а Уай 85 Тух Тут Сув Сйп 90 Ηίβ Айа Агд Зег Ьеи 95 РЬе
ТЫ РЬе С1у Рго 100 Сйу ТЫ Ьув Уа1 Авр 105 Не Ьув
<210> 101 <211> 720 <212> ДНК <213> Ното варйепв <400> 101 акдаддсксс дакаккдкда аксксскдса касскдсада кссддддксс адсададкдд сддасдккед сксакскксс скдаакааск ксдддкааск адсадсассс дксасссакс с к дек саде ¢: кдасксадкс ддкскадкса адссадддса скдасаддкк аддскдадда дссаадддас сдссакскда кскаксссад сссаддадад кдасдскдад адддсскдад сскддддскд кссасксксс дадссксскд дкскссасад садкддсадк кдккдддакк сааддкддаа кдадсадккд ададдссааа кдксасадад сааадсадас оксдсссдкс скаакдскск скдсссдкса секддкаакд сксскдакск ддсксаддса каккаскдса аксааасдаа ааакскддаа дкксадкдда саддасадса касдадааас асааададск дддкскскдд сссскддада дакасааска акккдддккс садаккккас кдсаадскск скдкддскдс скдсскскдк аддкддакаа аддасадсас асааадкска ксаасадддд акссадкддд дссддссксс кккддаккдд кааксдддсс аскдаааакс асааасксск ассакскдкс кдкдкдсскд сдссскссаа скасадсскс сдсскдсдаа ададкдккад
120
160
240
300
360
420
480
540
600
660
720 <210> 102 <211> 239 <212> РЯТ <213> Ното варйепз <400> 102
Нек 1 Агд Ьеи РГО Айа 5 сйп Ьеи Ьеи сйу Ьеи 10 Ьеи Мек Ьеи Тгр Уай 15 Зег
61у Зег Зег Й1у 20 Азр Не Уай Мек ты 25 Ойл Зег Рго Ьеи Зег 30 Ьеи Рго
Уай ТЬг Рго 35 Сйу Сйи Рго Айа Зег 40 11 е Зег Сув Агд Зег 45 Зег Сйп Зег
Ьеи Ьеи 50 Рго Сйу Авп Сйу Туг 55 Авп Туг Ьеи Авр Тгр 60 Туг Ьеи Сйп Ьув
- 149 011449
РГО 65 81 у <31п Бег Рго 81 п 70 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 75 С1у Бет Азп Агд А1а 80
Бег 81у Уа1 Рго Азр 85 Агд РЬе Бег 81у Бег 90 61у Бег 81у ТЬг Азр 95 РЬе
ТЬг Ьеи Ьув Не 100 Бег Агд νβΐ 81и А1а 105 С1и Азр Уа1 <31у Не 110 туг Туг
Суз МеС 81 п 115 А1а Ьеи 61п ТЬг Рго 120 Агд ТЬг РЬе С1у С1П 125 81у ТЬг Ьув
Уа1 <31и 130 Не Ьуз Агд ТЬг Уа1 135 А1а А1а Рго Бег Уа1 140 РЬе Не РЬе Рго
Рго 145 Зег Азр С1и С1п Ьеи 150 Ьуз Бег С1у ТЬг А1а 155 Бег Уа1 Уа1 Сув ьеи 160
Ьеи Азп Азп РЬе Туг 165 Рго Агд С1и А1а Ьуз 170 νβΐ С1п Тгр Ьуз Уа1 175 Азр
Азп А1а Ьеи С1п 1В0 Бег С1у Азп Бег 81 п 185 81и Бег Уа1 ТЬг 81и 190 61п Αερ
Бег Ьуз Азр 195 Бег ТЬг Туг Бег Ьеи 200 Бег Бег ТЬг Ьеи ТЬг 205 Ьеи Бег Ьуз
А1а Азр 210 Туг 81и Ьуз ΗΪΒ Ьуз 215 νβΐ туг А1а сув 81и 220 Уа1 ТЬг Ηίε С1п
81у Ьеи Бег Бег Рго Уа1 ТЬг Ьув Бег РЬе Азп Агд 51у 81и Суз
225 230 235 <210> 103 <211> 112 <212> РКТ <213> Ното зарЗепз <400> 1Ό3
Азр 1 11е ν«ι Мес ТЬг 5 81 п Бег Рго Ьеи Бег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 61у
С1и Рго А1а Бег 20 Не Зег Суз Агд Бег 25 Бег 61п Зег Ьеи Ьеи 30 Ηίε Бег
Азп 81у Туг 35 Авп Туг Ьеи Αερ Тгр 40 Туг Ьеи 61п Ьуз Рго 45 С1у 61п Бег
Рго 81п 50 Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи 55 С1у Бег Азп Агд А1а 60 Бег С1у Уа1 Рго
Азр 65 Агд РЬе Бег С1у Бег 70 81у Бег 81 у ТЬг Авр 75 РЬе ТЬг Ьеи ьув Не 80
Бег Агд Уа1 81и А1а 61и Азр Уа1 81у Уа1 Туг туг Суз Мес С1п А1а
90 95
150 011449
РЬе
100
СХу
Ьув
105 νβΐ
110
Ьув <210> 104 <211> 112 <212> РКТ <213> Нолю вархепз
<400> 104 Уа1 ТЬг Рго 15 С1у
Авр 1 11е УаХ МеЕ ТЫ С1п Бег Рго Ьеи Бег Ьеи Рго
5 10
СХи Рго А1а Бег 20 Не Бег Сув Агд Бег 25 Бех СХп Бег Ьеи Ьеи 30 Ηίβ Бег
Авп 6Ху Туг 35 Авп Туг Ьеи Авр Тхр 40 Тух Ьеи С1п Ьув Рго 45 С1у С1п Бег
Рго СХп 50 Ьеи Ьеи 1Хе Тух Ьеи 55 СХу Бег Авп Агд А1а 60 Бег С1у Уа1 Рхо
Авр 65 Агд РЬе Бег С1у Бег 70 С1у Бег С1у ТЬх Авр 75 РЬе ТЫ Ьеи Ьув 11е 80
Бег Агд Уа1 С1и А1а 85 С1и Авр Уа1 СХу Уа1 90 Туг Туг Сув МеЕ С1п 95 АХа
ьеи СХп ТЫ РГО Туг ТЬх РЬе СХу С1п СХу ТЫ Ьув Ьеи С1и 11е Ьув
100 105 110 <210> 105 <211> 107 с212> РКТ <213> Нолю варХепв <400> 105
Авр 1 Пе СХп МеЕ ТЫ 5 <31п Бег Рго Бег Бег 10 УаХ Бег А1а Бег Уа1 15 С1у
Авр Агд УаХ ТЫ 20 11е ТЬг Сув Агд АХа 25 Бег СХп С1у Пе Бег 30 Бег Тхр
Ьеи А1а Тгр 35 Туг С1п СХп Ьув Рго 40 С1у Ьув АХа Рго Ьув 45 Ьеи Ьеи Пе
Туг А1а 50 АХа Бег Бег Ьеи С1П 55 Бег Й1у Уа1 Рго Бег 60 Агд РЬе Бег С1у
Бег 65 СХу Бег С1у ТЫ Авр 70 РЬе ТЬг Ьеи ТЫ Пе 75 Зег Бег Ьеи С1п Рго 80
С1и АВр РЬе А1а ТЫ 85 Туг Туг Сув 61η С1п 90 А1а Авп Бег РЬе Рго 95 Ьеи
ТЫ РЬе 61у 61у СХу ТЫ Ьув УаХ СХи Не Ьув
100 105
151 011449 <210> 106 <211> 124 <212> РКТ <213> Ното заргепв <400> 106
61п 1 Уа1 <31п Ьеи Уа1 5 С1и Бег <31у С1у <51 у Уа1 10 Уа1 61 η Рго <51у 15 Агд
Бег Ьеи Агд Ьеи 20 Бег СуБ А1а А1а Бег 25 С1у РЬе Ткг РЬе Бег 30 Бег Туг
С1у мег Н1Б 35 Тгр Υβΐ Агд 61п А1а 40 Рго 61у Ьуе 61у Ьеи 45 61и Тгр Уа1
А1а νβΐ 50 11е 5ег Туг Авр С1у 55 Бег Авп Ьув Туг Туг «0 А1а Авр Бег 7а1
Ьув 65 61у Агд РЬе ТЬг 11е 70 Бег Агд Авр Авп Бег 75 Ьув Авп ТЬг Ьеи Туг 80
Ьеи <51п МеЕ Азп Бег 85 Ьеи Агд А1а <31и Авр 90 ТЬг А1а ¥а1 Туг Туг 95 Сув
А1а Агд С1у На а 100 61п Ьеи Ьеи 61у Туг 105 Туг Туг Туг Туг 61У 110 МеЕ Авр
Уа1 Тгр 61у 61п 61 у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Зег
115 120 <210> 107 <211> 125 <212> РКТ <213> Ното заргепз <400> 107
С1п Уа1 61п Ьеи V»! 61и Бег 61у С1у 61у νβΐ νβΐ 61п Рго С1у Агд
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег С1у РЬе ТЬг РЬе Бег Бег Туг
20 25 30
С1у МеЕ Н1б Тгр ν»ι Агд О1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи <51и Тгр νβΐ
35 40 45
А1а Уа1 11е Бег Туг Азр 61у Бег Азп Ьуз Туг Туг А1а Азр Бег νβΐ
50 55 60
Ьув <51у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Бег ьуе Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЕ Авп Бег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Су»
90 95
- 152 011449
А1а Авр Агд Мек С1у Бег Бег <31 у Бег Айр Туг Туг Туг Туг Туг О1у Мек
Уа1 100 105 но
Тгр С1у 115 С1п (31у ТЬг ТЬг 120 Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег 125
<210? 108
<211? 120
<212? РКТ
<213? Нолю варгепв
<400? 108
С1п Уа1 61п Ьеи С1п 01и Бег 61У Рго 61у Ьеи Уа1 Ьув Рго Бег С1и
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Сув ТЬг Уа1 Бег 61у <31у Бег Не Бег Бет Туг
20 25 30
Туг Тгр Бег Тгр Не Агд <31 η Рго А1а <31у Ьув 61у Ьеи 61и Тгр Не
35 40 15
С1у Агд Не Туг ТЬг Бег С1у Бег ТЬх Авп Туг Аэп Рхо Бег Ьеи Ьув
50 55 60
Бег Агд Уа1 ТЬг Мек Бег Уа1 Авр ТЬг Бег Ьув Авп С1п РЬе Бег Ьеи
65 70 75 80
Ьув Ьеи Бег Бег νβΐ ТЬг А1а А1а Авр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Сув А1а
85 90 95
Агд Туг Сув 01у Туг Туг Туг Туг Туг 61у МеС Авр V»! Тгр 61у 61п
100 105 но
С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120 <210? 109 <211? 118 <212? РКТ <213> Ново варгепв
<400? 109 61η νβΐ С1п 1 Ьеи 61п 61и Бег 61у Рго <31у Ьеи Уа1 Ьув Рго Бег 61 и
5 10 15
ТЬг Ьеи Бег Ьеи 20 ТЬг Сув ТЬг Уа1 Бег 25 <31 у <31у Бег Не Бег 30 Бег тух
Туг Тгр Бег 35 Тгр 11е Агд 61п Рго 40 Рго 61у Ьув 61у Ьеи 45 С1и Тгр Пе
С1у Туг 50 Не Туг Туг Бег С1у 55 Бег ТЬг АВП Туг Авп 60 Рго Бег Ьеи Ьув
Бег Агд Уа1 ТЬг 11е Бег Уа1 Аар ТЬг Бег Ьув Авп С1п РЬе Бег Ьеи
70 75 80
153 011449
ьув Ьей Бег £ег Уа1 85 ТЬг А1а А1в Авр ТЬг 90 А1а Уа1 Туг Туг Сув 95 А1а
Агд Авр Туг С1у 100 61У Авп Бег туг РЬе 105 Авр Туг Тгр С1у С1п 110 С1у ТЬг
Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 <210> НО <211> 122 <212> РРТ <213> Нотю вархепв
<400> НО Е1и 10 Уа1 Ьув Ьув Рго С1у 15 А1а
61п 1 Уа! Б1п Ьей ν»1 5 61п Бег б1у А1а
Бег Уа1 Ьув Уа1 Бег Сув Ьув А1а Бег С1у Туг ТЬг РИе ТЬг С1у Туг
20 25 30
Тут нек Ηίε Тгр Уа1 Агд (31п А1а Рго <31у С1п С1у Ьей С1и Тгр Нек
35 40 45
61у Тгр Не Авп Рго Авп Бег С1у С1у ТЬг Авп Туг А1а С1п Ьув РЬе
50 55 60
61п 61у Агд Уа1 ТЬг Мек ТЬг Агд Авр ТЬг Бег Не Бег ТЬг А1а Тут
65 70 75 80
Мек С1и Ьей Бег Агд Ьей Агд Бег Авр Авр ТЬг А1а ν»ι Туг Туг Сув
85 90 95
А1а Агд 31у Туг Сув ТЬг Авп С1у Уа1 Сув Тут Туг РЬе Авр Туг Тгр
100 105 11«
<31у 61п 61у ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120 <210> 111 <211> 112 <212> РМ* <213> Ното εβρίβηΒ
<400> 111
Авр 1 Не Уа1 Нек ТЬг С1п Бег Рго Ьей Бег Ьей Рго Уа1 ТЬг Рго 15 С1у
5 10
61и Рго А1а Бег Не Бег Сув Агд Бег Бег С1п Бег Ьей ьей Ηίε Бег
20 25 30
Авп С1у Тух Авп Туг Ьей Авр Тгр Туг Ьей 61п Ьув Рго <51у С1П Бег
40 45
- 154 011449
РГО С1п 50 Ьеи Ьеи 11е Туг Ьеи 55 <51у Бет Азп Агд А1а 60 Бег <31у Уа1 РГО
Авр Агд 65 РЬе Бег 61у Зег 70 (31у 8ег Б1у ТЬг Аар 75 РЬе ТЬг Ьеи Ьув 11е 80
5ет Агд ν»ι С1и А1а 85 <31 и Авр Уа1 61у νβΐ 90 туг Туг Сув МеЕ С1п 95 А1а
Ьеи 61п ТЬг Рго 100 Тгр ТЬг РЬе 61у 61п 105 61у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 110 Не Ьув
<210> 112 <211> 112 <212> РКТ <213> Нолю вархепв
<400> 112 Бег Рго Ьеи Бег Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 61у
Азр 1 Не Уа1 мег тЬг 5 61п
10 15
61и Рго А1а Бег 11е Бег Суз Агд Бег Бег С1п Бег Ьеи Ьеи ΗΪΒ Бег
20 25 30
Авп С1у Туг В Азп Тух Ьеи Азр Тгр Туг Ьеи 61 п Ьув ₽го 61у 61п Бег
35 40 45
Рго С1п Ьеи Ьеи Не Туг Ьеи <31у Бег Азп Агд А1а Бег 61у ν»1 Рго
50 55 60
Авр Агд РЬе Бег С1у Бег С1у Зет С1у ТЬг Авр РЬе ТЬг Ьеи Ьув Не
65 70 75 80
Бег Агд νβΐ С1и А1а С1и АВр Уа1 С1у Уа1 Туг Туг Сув Мес С1П А1а
85 90 95
Ьеи 61п ТЬг Рго РЬе ТЬг РЬе 61у Рго 61у ТЬг Ьув Уа1 Авр 11е Ьув
100 105 110
<210> 113 <211> 106 <212> РКТ <213> Нойю вархепв
<400> 113 61и 11е Уа1 1 Ьеи ТЬг 5 61П Бег рго 61у ТЬг 10 ьеи Бег Ьеи Бег Рго 15 С1у
С1и Агд А1а ТЬг 20 Ьеи Бег Сув Агд А1а 25 Бег 61п Бег Уа1 Бег 30 Бег Бег
Тут Ьеи А1а 35 Тгр Туг С1п С1п ьув 40 РГО 61 у 61п А1а РГО 45 Агд Ьеи Ьеи
Не Туг 61у А 1а Бег Бег Агд А1а ТЬг С1у Не Рго Авр Агд РЬе бег
55 60
- 155 011449
Б1У 65 Вег С1у Вег С1у ТЬг 70 Авр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг 75 11е Вег Агд Ъеи С1и 80
Рго С1и Αερ РЬе А1а 85 Уа1 Туг Туг Суе С1п 90 <31П Туг С1у Бег Бег 95 Рго
РЬе ТЬг РЬе С1у Рго 61у ТЬг Ъуз Уа1 Азр Не Ьуз
100 105 <210> 114 <211> 122 <212> РКТ <213> Нелю εβρίβηε
<400> 114 61у Уа1 Уа1 <31п Рго С1у Агд
61п 1 Уа1 С1п Ъеи Уа1 5 Б1и Бег 61у 61у
10 15
Зег ъеи Агд Ъеи Зег Сув А1а А1а Вег Б1у РЬе ТЬг РЬе Вех Вех Тух
20 25 30
С1у Мек Шв Тгр Уа1 Агд Б1п А1а Рго С1у Ьув С1у Ьей С1и Тгр νβΐ
35 40 45
А1а Уа1 Т1е Бег Тух Авр <51у Бег Авп Ъув Тух Тух А1а Азр Вег Уа1
50 55 60
Ьув С1у Агд РЬе ТЬх 11е Вех Агд Авр Авп Вег Ъуз АЗП ТЬг Ъеи Туг
65 70 75 80
Ъеи С1п Мек Авп Вег Ъеи Агд А1а С1и Азр ТЬх А1а Уа1 Туг Туг Сув
85 - 90 95
А1а Агд Туг Сув С1у С1у Азр Сув Туг С1у 11е А1а νβΐ А1а С1у Тгр
100 105 110
Б1у С1п Б1у тьг Ъеи Уа1 ТЬх Уа1 Бег Вег
115 120 <210> 115 <211> 123 <212> РКТ <213> Ното варгепв
<400> 115
<31п 7а1 С1п Ъеи Уа1 С1и Бег С1у <31у <31у νβΐ νβΐ <31п Рго С1у Агд
1 5 10 15
Вег Ъеи Агд Ъеи Бег Суз А1а А1а Бег С1у РЬе ТЬх РЬе Бех Бег Туг
20 25 30
С1у Мек Ηίε Тгр νβΐ Агд 61п А1а Рго С1у Ьув 61у Ъеи С1и Тгр ν«ι
40 45
- 156 011449
А1а Уа1 50 11е Зег Туг Авр В1у 55 Зег Авп Ьув Туг Туг 60 А1а Авр Зег Уа1
Ьув 65 Й1у Агд РНе ТЬг 11е 70 Зег Агд Авр Αεη Зег 75 Ьув Авп ТЬг Ьеи Тух 80
Ьеи С1п МеЕ Авп Зег 85 Ьеи Агд А1а СЗи Авр 90 ТНг А1а Уа1 Туг Туг 95 Сув
А1а Агд С1у ТЬг 100 ТНг С1у ТЬг туг Туг 105 Туг Туг Туг СЗу МеЕ но Авр Уа1
Тгр 61У С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 <210> 116 <211> 123 <212> РКТ <213> Ното εβρίεηε
<400> 116 СЗи Зег С1у С1у С1у Уа1 Уа1 61л Рго С1у Агд
С1п 1 Уа1 С1п Ьеи УаЗ 5
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Сув АЗа АЗа Зег СЗу РНе ТЬг РЬе Зег Бег Туг
20 25 30
61у МеЕ Н1з Тгр УаЗ Агд 31п А1а Рго СЗу Ьув С1у Ьеи СЗи Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Зег Туг Авр СЗу Бег Авп Ьув Туг Туг А1а Авр Зег УаЗ
50 55 60
Ьув 61у Агд РНе ТЬг 11е Зег Агд Авр АВП Зег Ьув Авп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СЗп МеЕ Авп Зег Ьеи Агд А1а СЗи Авр ТЬГ А1а Уа1 туг Туг Сув
85 90 95
А1а Агд Авр Туг С1у Авр Туг Туг Туг Туг Туг Туг 61у МеЕ Авр Уа1
100 105 НО
Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг УаЗ Бег Бег
115 120
<210> 117 <211> 123 <212> РКТ <213> Нолю вархепз
<400> 117
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 61и Зег 31у <31у С1у Уа1 Уа1 <31п Рго О1у Агд
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Зег Сув А1а АЗа Зег СЗу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг
25 30
- 157
А1а Ме! ΗΪΒ 35 Тгр ν»ι Агд С1п А1а 40 Рго С1у Ьув 61у Ьеи 45 61и Тгр Уа1
А1а Уа1 50 Не Бег Туг Авр 61у 55 Бег АВП Ьув туг Туг 60 А1а Авр Бег νοί
ьуе 65 61у Агд РЬе ТЬг 11е 70 Бег Агд Авр Авп Бег 75 Ьув Авп ТЬг Ьеи Туг 80
Ьеи С1п МеС Авп Бег 85 Ьеи Агд А1а С1и Авр 90 ТЬг А1а Уа1 туг Туг 95 Сув
А1а Агд Авр Туг 100 61у Авр Туг Туг Туг 105 Туг Туг Туг С1у Мес НО Αερ Уа1
Тгр <31у <31п 115 <31у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг 120 Уа1 Бег Бег
<210> 118 <211> 23 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220 >
<223 > Описание синтетической последовательности: Праймер <220>
<221> модифицированное основание <222> (21) <22Э> ΐ <400> 118 саддСдсадс СддадсадСс пдд <210> 119 <211> 24 <212> ДНК <213 > Синтетическая последовательность <220>
<223 > Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 119 дсСдадддад СададСссСд адда <210> 120 <211> 49 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<2 23 > Описание синтетической последовательности: Праймер
- 158 011449 <400> 120 саЕсЕаадсЕ ЕсСадасСсд ассдссасса ЕддадЕЕСдд дскдадсСд <210* <211>
<212>
<213>
121
ДНК
Синтетическая последовательность <220> <223>
Описание синтетической последовательности: Праймер
121 <400>
ЕаЕсСаадсС СсЕадасЕсд ассдссасса ЕддадЕЕЕдд дсЕдадскд <210>
<211>
<212>
<213>
122
ДНК
Синтетическая последовательность <220 <223>
Описание синтетической последовательности: Праймер
122 <400>
ЪаЕссаадсЕ ЕсЕадасЕсд адсдссасса ЕдааасассЕ дсддЕЕсЕЕс <210> <211 >
<212>
<213>
123
ДНК
Синтетическая последовательность <220>
<223>
123 <400>
ЕаЕсСаадсЕ ЕсЕадасЕсд адсдссасса ЕдааасаЕсЕ дСддССсЕЕс <210> 124 <211> 51 <212> ДНК < 213 > Синтетическая последовательность <220>
<223> Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 124
ЕаЕсГаадсЕ ЕсЕадасЕсд адсдссасса ЕддасЕддас схддаддаСс с
<210> 125 <211> 44 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность
- 159 011449 <220>
<22 3> Описание синтетической последоытиъности: Праймер <400> 125
ССССсСдаГс адаагсссса гсаССЬассс ддадасаддд адад 44 <210> 126 <211> 41 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223* Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 126 сССсаадсСЪ асссдддсса ссакдаддсС сссСдсСсад с 41 <210> 12?
<211> 43 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220* <2 2 3 > Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 127
ССсСЬСдаСс адааССсгса сСаасасСсЪ ссссСдЬСда аде 43 <210> 128 <211* 49 <212> ДНК <21Э> Синтетическая последователь поста <220>
<2 23> Описание синтетической последовательности: Праймер <4 00а- 128 гагссаадсС ЕсСадасгсд ассдссасса сддадсссдд дссдадсСд 49 <210> 129 <211> 49 <212> ДНК <213* Синтетическая последовательность <22 0>
<223> Описание синтетической последовательности: Праймер <400* 129 гагссаадсс сесадасссд ассдссасса ЬддадСССдд дегдадсед 49 <210> 130 <211> 49
- 160 011449 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<22 3> Описание синтетической последовательности. Праймер <400> 130
ЕаЕсЕаадсЕ ЕсЕадасЕсд ассдссасса СддадЬССдд дсЕдадсЕд 49 <210> 131 <211> 51 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <22 0>
<223* Описание степетичестой последовательности: Праймер <400> 131
ЕаЕсЕаадсЕ ЕсЕадасЕсд адсдссасса ЕдааасаЕсЕ дгддЕЕсЕЕс с 51 <210* 132 <211> 49 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 132
ЕаЕсЕаадсЕ ЕсЕадасЕсд ассдссасса ЕддадЕЕЕдд дсЕдадсЕд 49 <210> 133 <211> 51 <212> ДНК < 213 > Синтетическая последовательность <220>
<22 3> Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 133
ЕаЕсЕаадсЕ ЕсЕадасЕсд адсдссасса ЕдааасаЕсЕ дЕддЕЕсЕЕс с 51 <210> 134 <211> 45 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<223> Описание синтетической последовательности: Праймар <400* 134
ЕсЕЕсаадсЕ Едсссдддсс сдссассаЕд дааассссад сдсад 45
- 161 011449 <210> 135 <211> 36 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<22 3> Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 135 дсаадсЕЕса ссааЕддЕЕс дгсЕдссЕсЕ дсадЕд <210> 136 <211> 43 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<22 3 > Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 136
ЕсадЕдаЕдд ЕдаЕддЕдаЕ дЕсЕсадссд аЕссЕдддда сса <210> 137 <211> 43 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220* <223> Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 137
ЕсадЕдаЕдд ЕдаЕддЕдаЕ дЕдддсаддд сЕсдсдаЕдд ЕаЕ <210> 138 <211* 43 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<2 2 3> Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 138
ЕсадЕдаЕдд ЕдаЕддЕдаЕ дасаддЕдса даЕддЕдЕсЕ дЕЕ <210> 139 <211* 197 <212> РКТ <213* Нолю варгепв <400> 139
МеЕ Уа1 Агд Ьеи Рго Ьеи С1п Сув Уа1 Ьеи Тгр С1у Сув Ьеи Ьеи ТЬг
10 15
- 162 011449
А1а Уа1 НЬз Рго СЬи Рго Рго ТЫ АЬа Суз Агд СЬи Ьуз СЬп Туг Ьеи
20 25 30
11е Азп Зег СЬп Суз Суз Бег Ьеи Сув СЬп Рхо <31у 61п Ьуз Ьеи УаЬ
35 40 45
Бег Азр Суз ТЬг СЬи РЬе ТЬг С1и ТЬг СЬи Суз Ьеи Рхо Сув СЬу СЬи
50 55 60
Вег СЬи РЬе Ьеи Азр ТЬх Тгр Деп Агд С1и ТЬх НЬз Суя НЬз СЬп НЬз
65 70 75 80
Ьув туг Суя Азр Рго Азп Ьеи СЬу Ьеи Агд УаЬ СЬп СЬп Ьуз С1у ТЬг
85 90 95
Бег С1и ТЬг Азр ТЬг 11 е Суз ТЬг Сув СЬи СЬи 61у Тгр НЬв Сув ТЬг
100 105 110
Бет СЬи А1а Суз СЬи Бег Суз УаЬ Ьеи НЬв Ахд Бег Сув Бег Рго СЬу
115 120 125
РЬе СЬу УаЬ Ьуз 6Ьп Не А1а ТЬг СЬу УаЬ Бег Азр ТЬг ЬЬе Суз СЬи
130 135 140
Рго Суз Рго УаЬ 61у РЬе РЬе Бег Азп УаЬ Бег Бег АЬа РЬе СЬи Ьуз
145 150 155 160
Су8 НЬз Рго Тгр ТЬг Бег Суз 61 и ТЬг Ьуз Азр Ьеи УаЬ УаЬ 61п СЬп
165 170 175
АЬа СЬу ТЬг АЗП Ьуз ТЬг Авр УаЬ Уа 1 Суз СЬу Рго 61п Азр Ахд НЬз
180 185 190
Н13 НЬз Й13 НЬз Н13
195 <210> 140 <2Ы> 153 <212> РНТ <213> Нолю варЬепв <400> 140
Мех 1 Уа1 Агд Ьеи Рго 5 Ьеи СЬп Сув УаЬ Ьеи 10 Тгр СЬу Сув Ьеи Ьеи 15 ТЬг
АЬа УаЬ НЬе Рхо 20 СЬи Рхо Рго ТЬг А1а 25 Суз Агд СЬи Ьув СЬп 30 Туг Ьеи
Не Азп Бег 35 СЬп Суз Суз Бег Ьеи 40 Сув СЬп Рго СЬу СЬп 45 Ьуз Ьеи УаЬ
Бег Авр 50 Сув ТЬг СЬи РЬе ТЬг 55 СЬи ТЬг СЬи Суз Ьеи 60 РГО Сув СЬу СЬи
Бег СЬи РЬе Ьеи Аяр ТЬг Тгр АВП Агд СЬи ТЬг НЬз Суз НЬз СЬп НЬе
70 75 80
- 163 011449
ьув Туг Суз Авр Рго 85 Авп Ьеи С1у Ьеи Агд 90 Уа1 61л (31п ьув 61у 95 ТЬг
зег С1и ТЬг Авр 100 ТЬг 11е Сув ТЬг Сув 105 61и 61и <51у Тгр Ηίε 110 Сув ТЬг
Зег С1и А1а 115 Сув С1и Зег сув νβΐ 120 Ьеи ΗίΒ Агд Зег Сув 125 Зег Рго С1у
РЬе С1у 130 Уа1 Ьув С1л 11е А1а 135 ТЬг С1у Уа1 Зег Авр 140 ТЬг Не Сув 61и
РГО Сув Рго Βίε Ηίε Н1В Ηίβ Ηίε Ηίε
145 150 <210> 141 <211> 111 <212> РНТ <213> Нолю зархелз <400> 141
МеЕ Уа1 Агд Ьеи Рго Ьеи 61п Сув Уа1 Ьеи Тгр С1у Суз Ьеи Ьеи ТЬг
1 5 10 15
А1а Уа1 ΗΪΒ Рго 20 С1и Рго Рго ТЫ А1а 25 Сув Агд С1и Ьув О1п 30 Туг Ьеи
Не Авп Зег 35 С1п Сув Суз Зег Ьеи 40 Сув С1п Рго 31у 61п 45 Ьув ьеи Уа1
Зег Авр 50 Сув ТЬг С1и РЬе ТЬг 55 61и ТЬг С1и Сув Ьеи 60 Рго Сув С1у С1и
Зег 65 (51 и РЬе Ьеи Авр ТЬг 70 Тгр Авп Агд С1и ТЬг 75 Ηίε Сув ΗίΒ С1п ΗίΒ 80
Ьув Туг Сув Авр Рго 85 Авп Ьеи С1у Ьеи Агд 90 7а1 С1п С1л Ьув Б1у 95 ТЫ
Зег <з1и ТЬг Лер 100 ТЫ 11е Сув ТЫ Сув 105 ΗίΒ ΗΪ8 ΗίΒ Иге ΗίΒ 110 Н1в
<210> 142 <211> Ив <212> РЯТ <213> Ното заргепз <400> 142
Б1п Уа1 О1п Ьеи βΐη В1и Зег С1у РГО С1у Ьеи Уа1 Ьув Рго Вег 61и
1 5 10 15
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг сув ТЫ νβΐ Зег С1у 51у Зег Не Зег Зег Туг
20 25 30
Туг Тгр Зег Тгр Не Агд 61п Рго Рго 61у Ьуз С1у Ьеи Й1и Тгр Не
40 45
164 011449
С1у Туг 50 Не Туг Туг Зег С1у 55 Зег ТЬг Авп Туг Авп 60 Рго Зег Ьеи Ьуе
Зег 65 Агд Уа1 ТЬг Не Зег 70 Уа1 Аар ТЬг Зег ьуз 75 АЗП С1П РЬе Зег ьеи 80
Ьув Ьеи Зег Зег Уа1 85 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг 90 А1а Уа1 туг Туг Суз 95 А1а
Агд Авр Туг С1у 100 Αερ Туг Αεη Тгр РЬе 105 Αερ Рго Тгр <31у С1п 110 <31у ТЬг
Ьеи νβΐ ТЬг νβΐ Зег Зег
115 <210> 1« <211> 15 <212> РКТ <213> Синтетическая последовательность <220>
< 2 2 3> Описание синтетической последокательиости: Линкерный пептид <400> 143
51у С1у С1у С1у Зег 61у С1у С1у С1у Зег С1у <31у С1у <31у Зег 15 10 15 <210> 144 <211> 18 <212> ДНК <213> Сиитетическая последовательность <220>
< 22 3 > Описание синтетической последовательности: Синтетический олигонуклеотид <400> 144 сссеьссссс ссыхссг <210> 145 <211> б <212> гат <213> Синтетическая последовательность <220>
<223» Описание сипетической последовательности: бНв-метка <400> 145
Ηίε Н18 Ηίε Ηίε Ηίβ Ηιβ
I 5 ι210> 146 <211> 36 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
< 2 2 з > Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 146
ГдсаадсССс ассаьддрдг сЬРСдссЬсд дссдСд 36 <210> 147 <211> 48 <212> ДНК <213> Синтетическая последовательность <220>
<22Э> Описание синтетической последовательности: Праймер <400> 147 дЬссссдадС садСдаГддТ. дасддСдаХд сдддсаддда Сдасадас 48
- 165 011449

Claims (17)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Человеческое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, которые специфически связываются с СИ40, причем указанное антитело или его антигенсвязывающая часть являются агонистом СИ40, и антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, при этом аминокислотные последовательности ΕΌΒΕ ί.ΌΒ2 и ί.ΌΒ3 указанной тяжелой цепи и аминокислотные последовательности ΕΌΒΕ ί.ΌΒ2 и ί.ΌΒ3 указанной легкой цепи выбраны из группы, состоящей из:
    (a) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ί.ΌΒ2 и ί.ΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 2 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ί.ΌΒ2 и ί.ΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 4 соответственно;
    (b) аминокислотных последовательностей ί,ΌΒΕ ί.ΌΒ2 и ί.ΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 2 и аминокислотных последовательностей ί,ΌΒΕ ί'ΌΒ2 и ί'ΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 94 соответственно;
    (c) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 5>Е0 ΙΌ N0: 90 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 4 соответственно;
    (й) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 5>Е0 ΙΌ N0: 90 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 94 соответственно;
    (е) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 92 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 4 соответственно;
    (ί) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 92 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 94 соответственно;
    (д) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 10 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 12 соответственно;
    (к) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 18 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 20 соответственно;
    (ί) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 26 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 28 соответственно;
    (ί) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 34 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 36 соответственно;
    (k) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 42 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 44 соответственно;
    (l) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 50 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 52 соответственно;
    (т) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 96 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ^ι вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 52 соответственно;
    (п) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 58 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 60 соответственно;
    (о) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 66 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 68 соответственно;
    (р) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 66 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 100 соответственно;
    (с.|) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 5>Е0 ΙΌ N0: 98 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 68 соответственно;
    (г) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 5>Е0 ΙΌ N0: 98 и аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0: 100 соответственно;
    (§) аминокислотных последовательностей ΕΌΒΕ ΕΌΒ2 и ΕΌΒ3 вариабельного домена тяжелой це
    - 166 011449 пи с последовательностью 8ЕЦ ΙΌ N0: 74 и аминокислотных последовательностей СЭЕ1. СЭЕ2 и С0В3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8ЕЦ ΙΌ N0: 76 соответственно и (ΐ) аминокислотных последовательностей 0ΌΕ1. 0ΌΒ2 и 0ΌΒ3 вариабельного домена тяжелой цепи с последовательностью 8ЕЦ ΙΌ N0: 82 и аминокислотных последовательностей 0ΌΕ1. 0ΌΒ2 и 0ΌΒ3 вариабельного домена легкой цепи с последовательностью 8ЕЦ Ш N0: 84 соответственно.
  2. 2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1, которые обладают по меньшей мере одним из следующих свойств:
    (a) не связываются с мышиными, крысиными, собачьими и/или кроличьими В-клетками;
    (b) связываются с В-клетками человека, макаков-резус и/или обезьян циномолгус;
    (c) обладают селективностью в отношении 004(), которая по меньшей мере в 100 раз выше, чем их селективность в отношении рецепторного активатора ядерного фактора каппа-цепи В-клеток (КЛИК), 41ВВ (0Ό137), рецептора 1 фактора некроза опухоли (Т>К-1) и рецептора 2 фактора некроза опухоли (ГМК-2);
    (б) связываются с 0Ό40 с Кс 4х 10-10 М или менее;
    (е) имеют показатель для 0Ό40 Ко[1\ составляющий 2х 10-4 или менее;
    (Г) ингибируют рост опухоли ίη νίνο в присутствии Т-клеток человека и/или дендритных клеток человека;
    (д) ингибируют рост СО40-положительных опухолей в отсутствие иммунных клеток человека;
    (11) повышают экспрессию 1САМ, МНС-ΙΙ, В7-2, 0Ό71, 0Ό23 и/или 0Ό71 на поверхности В-клеток человека;
    (ί) увеличивают секрецию ΙΕ-12ρ40, ΙΕ-12ρ70 и/или ΙΕ-8 дендритными клетками человека;
    (ί) увеличивают экспрессию Ι0ΑΜ, МНС-ΙΙ, В7-2 и/или 0Ό83 на поверхности дендритных клеток человека;
    (k) повышают экспрессию гамма-интерферона Т-клетками человека во время их аллогенной стимуляции;
    (l) связывают человеческий СО40 в присутствии человеческого СО40Ь;
    (т) связываются с эпитопом СО40 человека, который находится в пределах домена 1 или домена 2 внеклеточного домена СО40; и (η) связываются с эпитопом СО40 человека, который находится в пределах домена 2 или домена 3 внеклеточного домена СО40.
  3. 3. Моноклональное антитело по п.1, в котором аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи выбраны из группы, состоящей из:
    (a) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 3.1.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (b) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 7.1.2, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (c) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 10.8.3, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (б) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 15.1.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (е) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 21.4.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (Г) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 21.2.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (д) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 22.1.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (1) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 22.1.1Н-С109А, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (ί) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.5.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (ί) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.25.1, причем в обеих указанных аминокислотных последователь
    - 167 011449 ностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (k) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.28.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (l) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.28.1Ь-С92А, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (т) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.28.1Н-Э16Е, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (п) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.29.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (о) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 24.2.1, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (р) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 3.1.1Н-А78Т, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (с|) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 3.1.1Н-А78Т-У88А-У97А, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (г) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (к) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 3.1.1Н-А78Т-У88А-У97А/3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (ΐ) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.29.1Ь-К174К, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность; и (и) аминокислотной последовательности тяжелой цепи и аминокислотной последовательности легкой цепи моноклонального антитела 23.28.1Н-О16Е/23.28.1Ь-С92А, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность.
  4. 4. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1, в которых аминокислотные последовательности вариабельного домена указанной тяжелой цепи и вариабельного домена указанной легкой цепи выбраны из группы, состоящей из:
    (a) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 2 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 4 соответственно;
    (b) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 2 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 94 соответственно;
    (с) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 90 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 4 соответственно;
    (б) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 90 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 94 соответственно;
    (е) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 92 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 4 соответственно;
    (ί) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 92 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 94 соответственно;
    (д) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 10 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 12 соответственно;
    (11) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 18 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 20 соответственно;
    (ί) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 26 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 28 соответственно;
    (ί) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 34 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 36 соответственно;
    (к) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 42 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 44 соответственно;
    (1) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 50 и аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 52 соответственно;
    (т) аминокислотной последовательности БЕЦ ΙΌ N0: 96 и аминокислотной последовательности
    - 168 011449
    8ЕЦ ΙΌ N0: 52 соответственно;
    (η) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 58 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 60 соответственно;
    (o) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 66 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 68 соответственно;
    (p) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 66 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 100 соответственно;
    (с|) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 98 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 68 соответственно;
    (г) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 98 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 100 соответственно;
    (8) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 74 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 76 соответственно и (!) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 82 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 84 соответственно.
  5. 5. Моноклональное антитело по п.1, в котором аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи выбраны из группы, состоящей из:
    (a) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 6 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 8 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (b) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 14 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 16 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (c) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 22 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 24 соответственно, причем обе аминокислотные последовательности без сигнальной последовательности;
    (б) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 30 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 32 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (е) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 38 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 40 соответственно, причем обе аминокислотные последовательности без сигнальной последовательности;
    (Г) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 46 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 48 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (д) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 54 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 56 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (11) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 62 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 64 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (ί) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 70 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 72 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (ί) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 78 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 80 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность;
    (к) аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 86 и аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 88 соответственно, причем в обеих указанных аминокислотных последовательностях отсутствует сигнальная последовательность.
  6. 6. Моноклональное антитело по п.5, содержащее:
    (a) аминокислотную последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0: 6 без сигнальной последовательности, в которой остаток 78 зрелой последовательности изменен с аланина на треонин, остаток 88 зрелой последовательности изменен с валина на аланин и остаток 97 зрелой последовательности изменен с валина на аланин, и (b) аминокислотную последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0: 8 без сигнальной последовательности, в которой остаток 4 зрелой последовательности изменен с лейцина на метионин, а остаток 83 зрелой последовательности изменен с лейцина на валин.
  7. 7. Моноклональное антитело по п.5, содержащее:
    (a) аминокислотную последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0: 46 без сигнальной последовательности и (b) аминокислотную последовательность 8ЕЦ ΙΌ N0: 48 без сигнальной последовательности.
  8. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий участок по
    - 169 011449 любому из пп.1-7 и фармацевтически приемлемый носитель.
  9. 9. Применение антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-7 для производства лекарственного средства для лечения злокачественной опухоли у человека.
  10. 10. Применение антитела или антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-7 для производства лекарственного средства для усиления иммунного ответа у человека.
  11. 11. Выделенная клеточная линия, которая продуцирует антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-7 либо тяжелую цепь или легкую цепь указанного антитела или его антигенсвязывающий участок.
  12. 12. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь или ее антигенсвязывающий участок или легкую цепь или ее антигенсвязывающий участок антитела или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-7.
  13. 13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.12, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
    (a) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность тяжелой цепи (или ее антигенсвязывающего участка) антитела, выбранного из группы, состоящей из 3.1.1, 3.1.1НА78Т, 3.1.Ш-А78Т-У88А-У97А, 3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 3.1.Ш-А78Т-У88А-У97А/3.1.1Ь-Ь4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Б-С92А, 23.28.ШΌ16Ε, 23.28н-О16Е/23.28.1Ь-С92А, 23.28.1Б-С92А, 23.29.1, 23.29.1Б-К174К и 24.2.1, или указанную аминокислотную последовательность, не содержащую сигнальную последовательность;
    (b) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность легкой цепи (или ее антигенсвязывающего участка) антитела, выбранного из группы, состоящей из 3.1.1, 3.1.1НА78Т, 3.1.1н-А78Т-У88А-У97А, 3.1.1Е-Ь4М-Ь83У, 3.1.1н-А78Т-У88А-У97А/3.1.1Е-Е4М-Ь83У, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1Н-С109А, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1Б-С92А, 23.28.ШΌ16Ε, 23.28н-О16Е/23.28.1Ь-С92А, 23.28.1Б-С92А, 23.29.1, 23.29.1Б-К174К и 24.2.1, или указанную аминокислотную последовательность, не содержащую сигнальную последовательность;
    (c) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность тяжелой цепи или ее вариабельный домен, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 92, 96 и 98, или указанные аминокислотные последовательности, не содержащие сигнальной последовательности, если она присутствует;
    й) нуклеотидной последовательности, кодирующей тяжелую цепь или ее вариабельный домен, причем указанная нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 91, 95 и 97, или указанная последовательность не содержит сигнальной последовательности, если она присутствует;
    (е) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность легкой цепи или ее вариабельный домен, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 94, 100 и 102, или указанную аминокислотную последовательность, не содержащую сигнальной последовательности; и
    Г) нуклеотидной последовательности, кодирующей легкую цепь или ее вариабельный домен, причем указанная нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 55, 59, 63, 67, 71, 75, 79, 83, 87, 93, 99 и 101, или указанная последовательность не содержит сигнальной последовательности, если она присутствует.
  14. 14. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.12 или 13, где указанный вектор необязательно содержит контролирующую экспрессию последовательность, оперативно связанную с молекулой нуклеиновой кислоты.
  15. 15. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.14 или молекулу нуклеиновой кислоты по п.13.
  16. 16. Способ получения анти-СП40-антитела или его антигенсвязывающего участка, предусматривающий культивирование клетки-хозяина по п.15 или клеточной линии по п.11 в соответствующих условиях и выделение указанного антитела или его антигенсвязывающего участка.
  17. 17. Применение антитела по п.1 для производства лекарственного средства для лечения ί.Ό40отрицательной опухоли у человека.
EA200400654A 2001-11-09 2002-11-08 Моноклональное антитело человека к cd40 и способы его применения EA011449B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34898001P 2001-11-09 2001-11-09
PCT/US2002/036107 WO2003040170A2 (en) 2001-11-09 2002-11-08 Antibodies to cd40

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200400654A1 EA200400654A1 (ru) 2004-12-30
EA011449B1 true EA011449B1 (ru) 2009-02-27

Family

ID=23370387

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200400654A EA011449B1 (ru) 2001-11-09 2002-11-08 Моноклональное антитело человека к cd40 и способы его применения

Country Status (47)

Country Link
US (9) US7288251B2 (ru)
EP (2) EP2343086A3 (ru)
JP (3) JP4616555B2 (ru)
KR (1) KR100830086B1 (ru)
CN (2) CN1582165B (ru)
AP (1) AP1918A (ru)
AR (1) AR039067A1 (ru)
AU (1) AU2002356926B2 (ru)
BR (1) BRPI0214137B8 (ru)
CA (1) CA2466128C (ru)
CL (1) CL2009001779A1 (ru)
CR (2) CR7343A (ru)
CU (1) CU23745A3 (ru)
CY (1) CY1115675T1 (ru)
DK (1) DK1476185T3 (ru)
DO (1) DOP2002000507A (ru)
EA (1) EA011449B1 (ru)
EC (1) ECSP045093A (ru)
EG (1) EG25801A (ru)
ES (1) ES2432968T3 (ru)
GE (1) GEP20074222B (ru)
GT (1) GT200200228A (ru)
HK (1) HK1069122A1 (ru)
HN (1) HN2002000318A (ru)
HR (1) HRP20040525B1 (ru)
HU (1) HU229829B1 (ru)
IL (2) IL161823A0 (ru)
IS (1) IS2940B (ru)
MA (1) MA27139A1 (ru)
ME (1) ME00503B (ru)
MX (1) MXPA04004467A (ru)
MY (1) MY137641A (ru)
NI (1) NI200200128A (ru)
NO (1) NO334339B1 (ru)
NZ (1) NZ533180A (ru)
OA (1) OA12725A (ru)
PA (1) PA8557701A1 (ru)
PE (1) PE20030846A1 (ru)
PL (2) PL214634B1 (ru)
PT (1) PT1476185E (ru)
RS (1) RS52484B (ru)
SI (1) SI1476185T1 (ru)
TN (1) TNSN04078A1 (ru)
TW (2) TWI331040B (ru)
UY (1) UY27537A1 (ru)
WO (1) WO2003040170A2 (ru)
ZA (1) ZA200404207B (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2609647C2 (ru) * 2011-04-29 2017-02-02 Апексиджен, Инк. Анти-cd40-антитела и способы применения
RU2749041C2 (ru) * 2014-04-30 2021-06-03 Макс-Дельбрюк-Центрум Фюр Молекуляре Медицин Ин Дер Хельмхольтц - Гемайншафт Гуманизированные антитела против cd269 (bcma)
RU2766234C2 (ru) * 2017-04-04 2022-02-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Новые биспецифические антигенсвязывающие молекулы, обладающие способностью специфически связываться с cd40 и fap

Families Citing this family (248)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6943235B1 (en) * 1999-04-12 2005-09-13 Agensys, Inc. Transmembrane protein expressed in prostate cancer
US7244827B2 (en) * 2000-04-12 2007-07-17 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 24P4C12 useful in treatment and detection of cancer
US20050255106A1 (en) * 1999-05-22 2005-11-17 Linda Diehl Induction of anti-tumor ctl immunity through in vivo triggering of 4-1bb and/or cd40
US20030059427A1 (en) * 2000-04-28 2003-03-27 Force Walker R. Isolation and characterization of highly active anti-CD40 antibody
EP1319025A2 (en) 2000-09-07 2003-06-18 John R. Schreiber Human antibodies against pseudomonas aeruginosa lps derived from transgenic xenomouse
EP2011802A3 (en) 2001-04-27 2009-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-CD40 monoclonal antibody
US7658924B2 (en) * 2001-10-11 2010-02-09 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
AR039067A1 (es) * 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
US20040185040A1 (en) 2001-11-21 2004-09-23 Celltech R & D Limited Modulating immune responses
WO2003045318A2 (en) * 2001-11-21 2003-06-05 Celltech R & D, Inc. Manipulation of cytokine levels using cd83 gene products
AU2003243415A1 (en) * 2002-06-07 2003-12-22 Zymogenetics, Inc. Use of il-21 in cancer and other therapeutic applications
US7052694B2 (en) * 2002-07-16 2006-05-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Dendritic cell potentiation
HN2004000285A (es) 2003-08-04 2006-04-27 Pfizer Prod Inc ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET
JP4686465B2 (ja) * 2003-10-16 2011-05-25 イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 繊維芽細胞増殖因子レセプター−１阻害物質及びその治療方法
US8277810B2 (en) 2003-11-04 2012-10-02 Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc. Antagonist anti-CD40 antibodies
WO2005044854A2 (en) 2003-11-04 2005-05-19 Chiron Corporation Antagonist anti-cd40 monoclonal antibodies and methods for their use
EP1706425A2 (en) 2003-12-05 2006-10-04 John R. Schreiber Human anti-pseudomonas-aeruginosa antibodies derived from transgenic xenomouse®
US20050136055A1 (en) * 2003-12-22 2005-06-23 Pfizer Inc CD40 antibody formulation and methods
NZ548325A (en) 2003-12-25 2009-07-31 Kirin Pharma Kk Mutants of anti-CD40 antibody
MX350383B (es) 2004-01-09 2017-09-04 Pfizer Anticuerpos contra madcam.
AU2005227322A1 (en) 2004-03-23 2005-10-06 Biogen Idec Ma Inc. Receptor coupling agents and therapeutic uses thereof
WO2006004988A2 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-dc binding antibody
US20060099203A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Pease Larry R B7-DC binding antibody
CN1997670B (zh) 2004-07-01 2014-04-30 诺和诺德公司 人类抗-kir抗体
US20070286855A1 (en) * 2004-08-03 2007-12-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Improving treatments
US7563443B2 (en) * 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
ATE531733T1 (de) 2005-01-06 2011-11-15 Novo Nordisk As Kir-bindende wirkstoffe und verfahren zu ihrer verwendung
US8716451B2 (en) 2005-01-12 2014-05-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Stabilized human IgG2 and IgG3 antibodies
CN107033243B (zh) * 2005-03-23 2020-12-15 根马布股份公司 用于治疗多发性骨髓瘤的cd38抗体
EP1877444A2 (en) 2005-04-26 2008-01-16 Pfizer, Inc. P-cadherin antibodies
DK1889065T3 (da) * 2005-05-18 2013-09-02 Xoma Technology Ltd Metoder til diagnostisering og behandling af sygdomme med en autoimmun- og/eller inflammationskomponent
US8337851B2 (en) 2005-05-18 2012-12-25 Novartis Ag Methods of monitoring the efficacy of anti-CD40 antibodies in treating a subject for a CD40-expressing cancer
GB0512225D0 (en) * 2005-06-16 2005-07-27 Univ Sheffield Immunoglobulin molecules
PT3248613T (pt) 2005-07-18 2022-03-16 Seagen Inc Conjugados de ligante de fármaco e beta-glucuronida
EA201300320A1 (ru) 2005-09-07 2014-02-28 Эмджен Фримонт Инк. Моноклональные антитела человека к киназе-1, подобной рецептору активина
WO2007103048A2 (en) * 2006-03-01 2007-09-13 Regents Of The University Of Colorado Tlr agonist (flagellin)/cd40 agonist/antigen protein and dna conjugates and use thereof for inducing synergistic enhancement in immunity
CN101479375B (zh) * 2006-05-03 2016-03-30 科罗拉多州立大学董事会 Cd40激动剂抗体/1型干扰素协同佐剂组合、包含前述的结合物及其作为增强细胞免疫的治疗剂的用途
CA2651629A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Pfizer Products Inc. Cycloalkylamino acid derivatives and pharmaceutical compositions thereof
EP1854810A1 (en) * 2006-05-09 2007-11-14 PanGenetics B.V. Deimmunized antagonistic anti-human CD40 monoclonal antibody from the ch5D12 antibody
CA2652148C (en) 2006-05-12 2016-10-04 Fondazione Centro San Raffaele Del Monte Tabor Tolerogenic dendritic cells, method for their production and uses thereof
US20090074711A1 (en) * 2006-09-07 2009-03-19 University Of Southhampton Human therapies using chimeric agonistic anti-human cd40 antibody
CA2672581A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. Anti-claudin 3 monoclonal antibody and treatment and diagnosis of cancer using the same
EP2426145B1 (en) * 2007-02-23 2017-01-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Engineered anti-il-23p19 antibodies
PL2426144T3 (pl) * 2007-02-23 2019-05-31 Merck Sharp & Dohme Przeciwciała Anty-IL-23p19 wytworzone metodą inżynierii genetycznej
EP2708557A1 (en) 2007-05-30 2014-03-19 Xencor, Inc. Method and compositions for inhibiting CD32B expressing cells
EP1997830A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 AIMM Therapeutics B.V. RSV specific binding molecules and means for producing them
US8039597B2 (en) * 2007-09-07 2011-10-18 Agensys, Inc. Antibodies and related molecules that bind to 24P4C12 proteins
MX2010005080A (es) 2007-11-07 2010-07-28 Genentech Inc Metodos y composiciones para determinar la sensibilidad de linfoma de celula b al tratamiento con anticuerpos anti-cd40.
JP5761997B2 (ja) 2007-12-14 2015-08-12 ブリストル−マイヤーズ・スクイブ・カンパニー ヒトｏｘ４０受容体に対する結合分子
JO2913B1 (en) 2008-02-20 2015-09-15 امجين إنك, Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses
ES2378513T3 (es) 2008-08-06 2012-04-13 Pfizer Inc. Compuestos 2-heterociclilamino piracinas sustituidas en posición 6 como inhibidores de CHK-1
AU2009286247A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Delivery of a CD40 agonist to a tumor draining lymph node of a subject
EP2198878A1 (en) 2008-12-18 2010-06-23 University Of Miami Polypeptide bombesin antagonists
AU2016244220B2 (en) * 2008-12-23 2018-05-17 Amgen Inc. Human CGRP receptor binding proteins
JO3382B1 (ar) * 2008-12-23 2019-03-13 Amgen Inc أجسام مضادة ترتبط مع مستقبل cgrp بشري
WO2010111018A1 (en) * 2009-03-06 2010-09-30 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 24p4c12 proteins
EP2406286B1 (en) * 2009-03-10 2016-05-18 Baylor Research Institute Anti-cd40 antibodies and uses thereof
BRPI1009458A2 (pt) * 2009-03-10 2016-03-01 Baylor Res Inst vacinas antivirais direcionadas às células de apresentação de antígeno
CN103415534A (zh) 2009-03-10 2013-11-27 贝勒研究院 靶向抗原呈递细胞的癌症疫苗
US9617600B2 (en) 2009-04-18 2017-04-11 Genentech, Inc. Methods for assessing responsiveness of B-cell lymphoma to treatment with anti-CD40 antibodies
CA2759146C (en) 2009-04-20 2017-06-13 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Agonist anti-cd40 antibody
TW201138843A (en) 2009-12-18 2011-11-16 Colgate Palmolive Co Biguanide preservation of precipitated calcium carbonate
WO2011083391A2 (en) 2010-01-05 2011-07-14 Pfizer Inc. Biomarkers for anti-igf-ir cancer therapy
HUE038788T2 (hu) 2010-03-31 2018-11-28 Boehringer Ingelheim Int Anti-CD40 antitestek
GB201006096D0 (en) * 2010-04-13 2010-05-26 Alligator Bioscience Ab Novel compositions and uses thereof
FR2959994B1 (fr) 2010-05-12 2012-08-24 Lfb Biotechnologies Nouveaux anticorps humanises 12g4 mutes et leurs fragments diriges contre le recepteur humain de l'hormone anti-mullerienne de type ii
DK2614082T3 (en) 2010-09-09 2018-11-26 Pfizer 4-1BB BINDING MOLECULES
AU2011310887A1 (en) * 2010-09-29 2013-05-02 Universite De Liege Combination of an agonistic anti-CD40 monoclonal antibody or a CD40 ligand and inactivated or attenuated bacteria for use in the treatment and/or prevention of mastitis
AR083847A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Novartis Ag Variantes de fc (fragmento constante) silenciosas de los anticuerpos anti-cd40
JP2014500879A (ja) * 2010-11-16 2014-01-16 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｂｃｍａ発現に相関性を有する疾患を治療する因子及び方法
KR101614997B1 (ko) * 2011-01-10 2016-04-22 씨티 아틀란틱 엘티디. 종양 관련 항원 결합 항체를 포함하는 조합 요법
GB201103578D0 (en) 2011-03-02 2011-04-13 Sabrepharm Ltd Dipyridinium derivatives
AU2012229236B2 (en) 2011-03-11 2017-05-18 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Anti-CD40 antibodies and uses thereof
EP3536708A1 (en) 2011-04-19 2019-09-11 Pfizer Inc Combinations of anti-4-1bb antibodies and adcc-inducing antibodies for the treatment of cancer
CA2833785C (en) 2011-04-21 2022-06-07 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Compositions and methods for the treatment of neuromyelitis optica
MX354243B (es) 2011-04-21 2018-02-20 Bristol Myers Squibb Co Polipeptidos anticuerpos que antagonizan cd40.
EP2710042A2 (en) 2011-05-16 2014-03-26 Fabion Pharmaceuticals, Inc. Multi-specific fab fusion proteins and methods of use
GB201115280D0 (en) * 2011-09-05 2011-10-19 Alligator Bioscience Ab Antibodies, uses and methods
GB201116092D0 (en) 2011-09-16 2011-11-02 Bioceros B V Antibodies and uses thereof
BR112014006822B1 (pt) 2011-09-22 2021-05-18 Amgen Inc. Proteína de ligação ao antígeno cd27l, composição compreendendo uma proteína de ligação ao antígeno cd27l, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira recombinante procariótica, método de preparação de um conjugado de droga e anticorpo cd27l e uso de uma proteína de ligação ao antígeno cd27l
SG11201401518TA (en) 2011-10-28 2014-05-29 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Polypeptide constructs and uses thereof
WO2013091661A2 (en) * 2011-12-23 2013-06-27 Aarhus Universitet Proteolytic resistant protein affinity tag
JO3547B1 (ar) 2012-01-31 2020-07-05 Regeneron Pharma أجسام مضادة ضد تخليق جدار الخلية واستعمالاتها
AR090263A1 (es) * 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma
EP2837387B1 (en) * 2012-03-08 2020-07-29 Japan Science and Technology Agency Anticancer agent
US20140004131A1 (en) 2012-05-04 2014-01-02 Novartis Ag Antibody formulation
MX359257B (es) 2012-05-04 2018-09-19 Pfizer Antígenos asociados a próstata y regímenes de inmunoterapia basados en vacuna.
CA2877286C (en) 2012-06-18 2023-05-16 Yale University Compositions and methods for diminishing an immune response
KR102270618B1 (ko) * 2012-10-30 2021-06-30 아펙시젠, 인코포레이티드 항-cd40 항체 및 사용 방법
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
MX2015010023A (es) * 2013-02-01 2017-11-17 Transbio Ltd Anticuerpos anti-cd83 y su uso.
US9708375B2 (en) 2013-03-15 2017-07-18 Amgen Inc. Inhibitory polypeptides specific to WNT inhibitors
MX2015013288A (es) 2013-03-18 2016-04-07 Biocerox Prod Bv Anticuerpos anti-cd134 (ox40) humanizados y usos de los mismos.
PT2992013T (pt) 2013-04-29 2020-03-05 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anticorpos anti-cd38 e fusões a interferão alfa-2b atenuado
US11117975B2 (en) 2013-04-29 2021-09-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
WO2014202552A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 Koninklijke Philips N.V. Magnetic resonance imaging subject support
GB201311487D0 (en) * 2013-06-27 2013-08-14 Alligator Bioscience Ab Bispecific molecules
EP4269441A3 (en) 2013-08-08 2024-01-24 Cytune Pharma Il-15 and il-15ralpha sushi domain based on modulokines
US11427627B2 (en) 2013-09-05 2022-08-30 Amgen Inc. Fc-containing molecules exhibiting predictable, consistent, and reproducible glycoform profiles
AR097584A1 (es) 2013-09-12 2016-03-23 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de anticuerpos contra el csf-1r humano y anticuerpos contra el pd-l1 humano
ES2661132T3 (es) 2013-10-25 2018-03-27 Psioxus Therapeutics Limited Adenovirus oncolíticos armados con genes heterólogos
GB201322583D0 (en) * 2013-12-19 2014-02-05 Alligator Bioscience Ab Antibodies
JP6345787B2 (ja) * 2013-12-20 2018-06-20 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ａｎｇ２抗体とｃｄ４０アゴニストとの併用療法
CA2936833A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Baylor Research Institute Novel vaccines against hpv and hpv-related diseases
WO2015134988A1 (en) 2014-03-07 2015-09-11 Bristol-Myers Squibb Company Method of using antibody polypeptides that antagonize cd40 to treat ibd
EP3126386A1 (en) 2014-03-31 2017-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists
UA119352C2 (uk) 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
CA2949237C (en) 2014-05-16 2022-08-23 Amgen Inc. Assay for detecting th1 and th2 cell populations
GB201413665D0 (en) 2014-07-03 2014-09-17 Transimmune Ag And Yale University Method for obtaining globally activated monocytes
CA2957146A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Alligator Bioscience Ab Combination therapies with anti cd40 antibodies
EP3070102A1 (en) 2015-03-18 2016-09-21 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of antibodies human cd40 activating antibodies and anti human pld-1 antibodies
EP3180357B1 (en) 2014-08-14 2019-07-03 F.Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of antibodies activating human cd40 and antibodies against human pd-l1
UY36302A (es) 2014-09-15 2016-04-29 Amgen Inc Proteína de unión a antígenos, bi-específicos del receptor anti-cgrp/receptor pac1 y usos de las mismas
NZ731491A (en) 2014-10-23 2021-12-24 Kira Biotech Pty Ltd Cd83 binding proteins and uses thereof
US9107906B1 (en) 2014-10-28 2015-08-18 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
CA2965414C (en) 2014-10-29 2024-01-09 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Interferon .alpha.2.beta. variants
EP3831847A1 (en) 2014-10-29 2021-06-09 Seagen Inc. Dosage and administration of non-fucosylated anti-cd40 antibodies
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
CN107709365A (zh) 2015-04-13 2018-02-16 戊瑞治疗有限公司 癌症组合疗法
JOP20200116A1 (ar) 2015-04-24 2017-06-16 Amgen Inc طرق لعلاج أو الوقاية من الصداع النصفي
DK3288573T3 (da) 2015-04-30 2020-03-16 Psioxus Therapeutics Ltd Onkolytisk adenovirus, der koder for et b7-protein
HUE057952T2 (hu) 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
CN115838427A (zh) * 2015-06-29 2023-03-24 百时美施贵宝公司 针对cd40的抗体
WO2017004016A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 The Rockefeller University Antibodies to cd40 with enhanced agonist activity
KR20180063881A (ko) 2015-07-16 2018-06-12 바이오카인 테라퓨틱스 리미티드 암 치료용 조성물 및 방법
AU2016315873B2 (en) 2015-09-04 2022-08-18 Primatope Therapeutics Inc. Humanized anti-CD40 antibodies and uses thereof
CN108368510B (zh) * 2015-09-30 2023-09-01 詹森生物科技公司 特异性结合人cd40的激动性抗体和使用方法
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
JP6657392B2 (ja) 2015-10-02 2020-03-04 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ヒトｃｄ２０／ヒトトランスフェリン受容体抗体及び使用方法
GB2543550A (en) 2015-10-21 2017-04-26 Hox Therapeutics Ltd Peptides
SG11201803520PA (en) 2015-11-03 2018-05-30 Janssen Biotech Inc Antibodies specifically binding pd-1 and their uses
EP3757119A1 (en) * 2015-11-16 2020-12-30 Ubiprotein, Corp. A method for extending half-life of a protein
WO2017100305A2 (en) * 2015-12-07 2017-06-15 Opi Vi - Ip Holdco Llc Composition of antibody construct-agonist conjugates and methods of use thereof
MY193281A (en) 2015-12-17 2022-09-30 Psioxus Therapeutics Ltd Group b adenovirus encoding an anti-tcr-complex antibody or fragment
WO2017151176A1 (en) * 2016-03-04 2017-09-08 The Rockefeller University Antibodies to cd40 with enhanced agonist activity
WO2017156349A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Cold Genesys, Inc. Methods of treating solid or lymphatic tumors by combination therapy
US10870701B2 (en) 2016-03-15 2020-12-22 Generon (Shanghai) Corporation Ltd. Multispecific fab fusion proteins and use thereof
WO2017165681A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Gensun Biopharma Inc. Trispecific inhibitors for cancer treatment
EA201892040A1 (ru) 2016-03-25 2019-04-30 Сиэтл Дженетикс, Инк. Способ получения пегилированных соединений лекарственный препарат - линкер и их промежуточных соединений
UA123111C2 (uk) 2016-05-27 2021-02-17 Еббві Байотерапьютікс Інк. Антитіло до cd40 та його застосування
WO2017205738A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Abbvie Biotherapeutics Inc. Bispecific binding proteins binding an immunomodulatory protein and a tumor antigen
EP4371570A3 (en) 2016-06-08 2024-07-17 Xencor, Inc. Treatment of igg4-related diseases with anti-cd19 antibodies crossbinding to cd32b
CN115304669A (zh) * 2016-06-08 2022-11-08 上海交通大学医学院 增强激动型抗体活性的抗体重链恒定区序列
EP3471753A1 (en) 2016-06-20 2019-04-24 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
BR112019000512A2 (pt) 2016-07-14 2019-04-24 Genmab A/S anticorpo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, composição, métodos de tratamento de uma doença, para produzir um anticorpo biespecífico e para detectar se a reticulação entre as células que expressam cd40 e cd137 ocorre em uma amostra, uso de um anticorpo multiespecífico, e, kit
CN117717604A (zh) 2016-07-19 2024-03-19 梯瓦制药澳大利亚股份有限公司 抗cd47联合治疗
CN109863170B (zh) 2016-08-12 2024-08-16 詹森生物科技公司 具有增强的激动作用和效应子功能的工程化抗体及其他含Fc结构域分子
EP3497126A4 (en) 2016-08-12 2020-04-08 Janssen Biotech, Inc. ANTIBODIES OF FC MODIFIED ANTI-TNFR SUPERFAMILY HAVING IMPROVED AGONIST ACTIVITY AND METHODS OF USE THEREOF
EP3504239B1 (en) 2016-08-25 2024-05-29 F. Hoffmann-La Roche AG Intermittent dosing of an anti-csf-1r antibody in combination with macrophage activating agent
WO2018041838A1 (en) 2016-08-29 2018-03-08 Psioxus Therapeutics Limited Adenovirus armed with bispecific t cell engager (bite)
GB201713765D0 (en) 2017-08-28 2017-10-11 Psioxus Therapeutics Ltd Modified adenovirus
CN110546164B (zh) 2016-11-11 2023-10-20 锦湖Ht株式会社 特异性结合cd40的抗体及其用途
US20200347143A1 (en) 2016-12-19 2020-11-05 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Novel tnfr agonists and uses thereof
EP3558360A1 (en) 2016-12-22 2019-10-30 F. Hoffmann-La Roche AG Treatment of tumors with an anti-csf-1r antibody in combination with an anti-pd-l1 antibody after failure of anti-pd-l1/pd1 treatment
CN109071656B (zh) 2017-01-05 2021-05-18 璟尚生物制药公司 检查点调节物拮抗剂
WO2018144955A1 (en) * 2017-02-02 2018-08-09 Silverback Therapeutics, Inc. Construct-peptide compositions and methods of use thereof
SG11201906961UA (en) 2017-02-10 2019-08-27 Genmab Bv Polypeptide variants and uses thereof
MA47775A (fr) 2017-03-14 2020-01-22 Amgen Inc Contrôle des glycoformes afucosylées totales d'anticorps produits en culture cellulaire
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
CA3056134A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
CN110382541A (zh) * 2017-03-29 2019-10-25 葛莱高托普有限公司 人源化抗cd40抗体
JP6990355B2 (ja) 2017-03-30 2022-01-12 日油株式会社 ヘテロ二官能性単分散ポリエチレングリコール及びそれを用いた複合体
EP3604384B1 (en) 2017-03-30 2021-09-08 NOF Corporation Hydrophilic polymer derivative having self-immolative acetal linker and composite using same
KR20190136076A (ko) 2017-04-13 2019-12-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 암 치료 방법에 사용하기 위한 인터루킨-2 면역접합체, cd40 작용제 및 임의적인 pd-1 축 결합 길항제
CA3064298A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-cd40 antibody, antigen binding fragment thereof and medical use thereof
EP3630143B1 (en) * 2017-06-01 2023-06-07 Akamis Bio Limited Oncolytic virus and method
WO2018220100A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Administration routes for immune agonists
EP3418302A1 (en) 2017-06-19 2018-12-26 F. Hoffmann-La Roche AG Administration routes for immune agonists
WO2019014572A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Pfizer, Inc. ANTIBODIES DIRECTED AGAINST MADCAM
CN111511762A (zh) 2017-08-21 2020-08-07 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
AU2018335828A1 (en) * 2017-09-19 2020-03-05 Mab Discovery Gmbh Agonistic CD40 antibodies
US10610585B2 (en) 2017-09-26 2020-04-07 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating and preventing HIV
WO2019093342A1 (ja) 2017-11-08 2019-05-16 協和発酵キリン株式会社 ＣＤ４０とＥｐＣＡＭに結合するバイスペシフィック抗体
KR20200103761A (ko) 2017-12-27 2020-09-02 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-cd40 항체 및 그의 용도
CN109971717B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 共表达cd40抗体与间皮素特异性嵌合抗原受体的t细胞及其用途
CN109971723B (zh) * 2017-12-28 2023-07-07 上海细胞治疗研究院 包含CD40抗体与muc1特异性嵌合抗原受体基因的T细胞及其用途
GB201801614D0 (en) 2018-01-31 2018-03-14 Psioxus Therapeutics Ltd Formulation
WO2019148444A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Anti-ctla4 antibodies and methods of making and using the same
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
WO2019176875A1 (ja) 2018-03-13 2019-09-19 日油株式会社 主鎖および側鎖に単分散ポリエチレングリコールを有するヘテロ二官能性化合物
IL313983A (en) 2018-03-26 2024-08-01 Amgen Inc Fully fucose-free glycoforms of antibodies are produced in cell culture
MA52202A (fr) 2018-04-02 2021-02-17 Amgen Inc Compositions d'érénumab et utilisations de celles-ci
US11976123B2 (en) 2018-04-20 2024-05-07 Lyvgen Biopharma Holdings Limited Anti-CD40 antibodies and uses thereof
TW202003576A (zh) * 2018-05-10 2020-01-16 美商艾博視訊有限公司 活化cd40之單株抗體及其用途
WO2019232533A1 (en) * 2018-06-01 2019-12-05 Massachusetts Institute Of Technology Combination treatments of hsp90 inhibitors for enhancing tumor immunogenicity and methods of use thereof
AU2019287765A1 (en) 2018-06-15 2021-01-07 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors
CN112638401A (zh) 2018-06-29 2021-04-09 璟尚生物制药公司 抗肿瘤拮抗剂
BR112021003173A2 (pt) 2018-08-20 2021-05-11 Pfizer Inc. anticorpos anti-gdf15, composições e métodos de uso
WO2020070288A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and systems for controlling the agonistic properties of antibody variable domains by light
US20220025060A1 (en) 2018-11-30 2022-01-27 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Anti-cd40 antibody, antigen binding fragmentand pharmaceutical use thereof
US20240254248A1 (en) 2018-11-30 2024-08-01 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Cd40 antibody pharmaceutical composition and use thereof
US20220089758A1 (en) * 2019-01-22 2022-03-24 Revmab Biosciences Usa, Inc. Novel anti-cd40 antibodies
US10570210B1 (en) 2019-03-04 2020-02-25 Beijing Mabworks Biotech Co.Ltd Antibodies binding CD40 and uses thereof
WO2020193718A1 (en) 2019-03-27 2020-10-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Recombinant proteins with cd40 activating properties
WO2020207470A1 (zh) 2019-04-10 2020-10-15 南开大学 抗cd40抗体及其用途
WO2020227159A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity
KR20220008820A (ko) 2019-05-15 2022-01-21 쿄와 기린 가부시키가이샤 Cd40과 fap에 결합하는 이중 특이적 항체
EP3971293A4 (en) 2019-05-15 2023-02-08 Kyowa Kirin Co., Ltd. BISPECIFIC ANTIBODIES CAPABLE OF BINDING TO CD40 AND GPC3
CN114340735A (zh) 2019-06-28 2022-04-12 璟尚生物制药公司 突变的TGFβ1-RII胞外域和免疫球蛋白支架组成的抗肿瘤拮抗剂
EP4027998A1 (en) 2019-09-09 2022-07-20 Basilea Pharmaceutica International AG Pharmaceutical combinations comprising a furazanobenzimidazoles and a cd40 agonist for use in the treatment of neoplastic diseases
CA3152547A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Amgen Inc. Methods of producing antibody compositions
JPWO2021060439A1 (ru) 2019-09-26 2021-04-01
CN115052625A (zh) * 2019-12-03 2022-09-13 埃沃特克国际有限责任公司 干扰素相关抗原结合蛋白及其用途
JP2023509359A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド 鉄依存性細胞分解の誘導物質との併用抗癌療法
IL293640A (en) 2019-12-20 2022-08-01 Amgen Inc CD40 antagonistic mesothelin-targeted multispecific antibody constructs for the treatment of solid tumors
US20210214454A1 (en) * 2020-01-10 2021-07-15 Symphogen A/S Anti-cd40 antibodies and compositions
IL272194A (en) 2020-01-22 2021-07-29 Yeda Res & Dev Multi-target antibodies for use in the treatment of diseases
US20230210967A1 (en) 2020-04-23 2023-07-06 Brightpath Biotherapeutics Co., Ltd. Improved peptide vaccine
AU2021271129A1 (en) 2020-05-14 2022-12-15 Molecular Partners Ag Multispecific proteins
WO2021229076A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Molecular Partners Ag Recombinant cd40 binding proteins and their use
JP2023528017A (ja) 2020-05-26 2023-07-03 アンセルム（アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル） 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２）ポリペプチドおよびワクチン目的でのその使用
GB202008003D0 (en) 2020-05-28 2020-07-15 Quine Medical Ab Anti-CD40 antibody
US20230273126A1 (en) 2020-06-04 2023-08-31 Amgen Inc. Assessment of cleaning procedures of a biotherapeutic manufacturing process
EP4172323A1 (en) 2020-06-29 2023-05-03 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer
EP4200334A4 (en) * 2020-08-21 2024-08-21 Wuxi Biologics Shanghai Co Ltd CD40 AGONIST ANTIBODY AND METHOD OF USE
EP4229080A1 (en) 2020-10-15 2023-08-23 Amgen Inc. Relative unpaired glycans in antibody production methods
JP2023554587A (ja) 2020-11-12 2023-12-28 アンセルム（アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル） Ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２ スパイクタンパク質の受容体結合ドメインにコンジュゲートまたは融合している抗体およびワクチン目的でのそれらの使用
US20240131138A1 (en) 2020-12-23 2024-04-25 Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) Chlamydia vaccine based on targeting momp vs4 antigen to antigen presenting cells
WO2022147480A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Ansun Biopharma, Inc. Oncolytic virus encoding sialidase and multispecific immune cell engager
EP4274854A1 (en) * 2021-01-08 2023-11-15 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies and antigen binding peptides for factor xia inhibitors and uses thereof
MX2023008083A (es) 2021-01-13 2023-07-13 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto.
EP4284832A1 (en) 2021-01-29 2023-12-06 (INSERM) Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Chlamydia trachomatis antigenic polypeptides and uses thereof for vaccine purposes
TW202241508A (zh) 2021-01-29 2022-11-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 細胞介素相關之腫瘤浸潤性淋巴球組合物及方法
US20240174759A1 (en) 2021-03-09 2024-05-30 Genmab A/S Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in therapy
KR20230165276A (ko) 2021-03-31 2023-12-05 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이, 인크. 타노트랜스미션 폴리펩티드 및 암의 치료에서의 이의 용도
AR126089A1 (es) 2021-06-07 2023-09-13 Amgen Inc Uso de fucosidasa para controlar el nivel de afucosilación de proteínas glucosiladas
WO2023274201A1 (zh) * 2021-06-28 2023-01-05 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗cd40抗体、其抗原结合片段及医药用途
AU2022303363A1 (en) 2021-06-29 2024-01-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
KR20240046323A (ko) 2021-07-13 2024-04-08 비온테크 에스이 암에 대한 병용 요법에 있어서 cd40 및 cd137에 대한 다중특이 결합제
EP4402174A1 (en) * 2021-09-17 2024-07-24 Novartis AG Methods for prevention of graft rejection in xenotransplantation
CN118139886A (zh) * 2021-10-01 2024-06-04 Mab发现股份有限公司 作为免疫刺激剂的激动性cd40抗体
CA3233279A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Amgen Inc. Fc-gamma receptor ii binding and glycan content
CN118765283A (zh) 2021-11-17 2024-10-11 国家健康科学研究所 通用沙贝病毒疫苗
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
WO2023172890A2 (en) * 2022-03-07 2023-09-14 Agenus Inc. Anti-ilt2 antibodies and uses thereof
WO2023193239A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Peter Peizhi Luo Anti-cd28 antibodies and methods of use thereof
WO2023198851A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for controlling the tumor cell killing by light
WO2023215725A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Fred Hutchinson Cancer Center Compositions and methods for cellular immunotherapy
WO2024054992A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of separating chelator
WO2024059899A1 (en) * 2022-09-20 2024-03-28 Currus Biologics Pty Ltd Bispecific polypeptides and uses thereof
WO2024076969A1 (en) * 2022-10-04 2024-04-11 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Anti-cd40 antibodies and uses thereof
WO2024074571A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Dc-targeting vaccine against nipah virus infection
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer
WO2024118836A1 (en) 2022-11-30 2024-06-06 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for production of tumor infiltrating lymphocytes with shortened rep step
WO2024115725A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 BioNTech SE Multispecific antibody against cd40 and cd137 in combination therapy with anti-pd1 ab and chemotherapy
CN115969997B (zh) * 2022-12-19 2024-02-13 华润生物医药有限公司 一种靶向cldn18.2的抗体药物偶联物及其应用
CN116375870B (zh) * 2022-12-30 2023-09-15 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 抗人cd40蛋白的人源化抗体、制备方法及其应用
US20240269251A1 (en) 2023-01-09 2024-08-15 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6312693B1 (en) * 1998-02-19 2001-11-06 Alejandro A. Aruffo Antibodies against human CD40

Family Cites Families (137)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US59427A (en) * 1866-11-06 Improvement in fences
US142358A (en) * 1873-09-02 Improvement in the purification of illuminating-gas
US439216A (en) * 1890-10-28 Maker
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4510245A (en) 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
GB2183662B (en) 1985-04-01 1989-01-25 Celltech Ltd Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
US4735210A (en) 1985-07-05 1988-04-05 Immunomedics, Inc. Lymphographic and organ imaging method and kit
US4968615A (en) 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
US5750172A (en) 1987-06-23 1998-05-12 Pharming B.V. Transgenic non human mammal milk
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
GB8827305D0 (en) 1988-11-23 1988-12-29 British Bio Technology Compounds
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
JP3068180B2 (ja) 1990-01-12 2000-07-24 アブジェニックス インコーポレイテッド 異種抗体の生成
US6713610B1 (en) * 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5151510A (en) 1990-04-20 1992-09-29 Applied Biosystems, Inc. Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
AU665190B2 (en) 1990-07-10 1995-12-21 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE352612T1 (de) 1990-08-29 2007-02-15 Pharming Intellectual Pty Bv Homologe rekombination in säugetier-zellen
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
ATE363532T1 (de) 1991-03-01 2007-06-15 Dyax Corp Verfahren zur herstellung bindender miniproteine
US5416367A (en) * 1991-03-06 1995-05-16 Quicklogic Corporation Programmable application specific integrated circuit and logic cell therefor
ES2315612T3 (es) 1991-04-10 2009-04-01 The Scripps Research Institute Genotecas de receptores heterodimericos usando fagemidos.
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
AU2515992A (en) 1991-08-20 1993-03-16 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
WO1993006213A1 (en) 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
JPH05242071A (ja) * 1991-11-20 1993-09-21 Mitsubishi Electric Corp 対象システムを制御または決定・推定する方法、およびその装置
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5397703A (en) 1992-07-09 1995-03-14 Cetus Oncology Corporation Method for generation of antibodies to cell surface molecules
US5874082A (en) 1992-07-09 1999-02-23 Chiron Corporation Humanized anti-CD40 monoclonal antibodies and fragments capable of blocking B cell proliferation
ES2301158T3 (es) 1992-07-24 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Produccion de anticuerpos xenogenicos.
US6177401B1 (en) 1992-11-13 2001-01-23 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis
US5455258A (en) 1993-01-06 1995-10-03 Ciba-Geigy Corporation Arylsulfonamido-substituted hydroxamic acids
JP3801196B2 (ja) 1993-03-09 2006-07-26 ジェンザイム・コーポレイション 乳からの対象化合物の単離
DK0724456T3 (da) 1993-10-01 2004-04-13 Immunex Corp CD40-Antistoffer
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
ATE267607T1 (de) * 1993-12-23 2004-06-15 Immunex Corp Verwendung von löslichen oligomerischen cd40 liganden oder monoklonalen antikörpern zur herstellung eines arzneimitells zur vorbeugung oder behandlung von neoplastischen krankheiten
US5612126A (en) * 1994-01-19 1997-03-18 Burlington Industries, Inc. Stiff fabric and method of forming the stiff fabric
IL112248A0 (en) 1994-01-25 1995-03-30 Warner Lambert Co Tricyclic heteroaromatic compounds and pharmaceutical compositions containing them
JPH0812700A (ja) 1994-07-01 1996-01-16 Sumitomo Electric Ind Ltd マウスｃｄ４０に対するモノクローナル抗体
US5643763A (en) 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
GB9425060D0 (en) * 1994-12-13 1995-02-08 Univ Birmingham Carcinoma treatment
US6046037A (en) 1994-12-30 2000-04-04 Hiatt; Andrew C. Method for producing immunoglobulins containing protection proteins in plants and their use
US5863949A (en) 1995-03-08 1999-01-26 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6091001A (en) 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
JPH11503360A (ja) * 1995-04-11 1999-03-26 ローベルト ボツシユ ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクテル ハフツング 燃焼排ガス中の有害物質、特に窒素酸化物を減少させる方法および装置
EP0821671B1 (en) 1995-04-20 2000-12-27 Pfizer Inc. Arylsulfonyl hydroxamic acid derivatives as mmp and tnf inhibitors
WO1996033266A1 (en) 1995-04-21 1996-10-24 Cell Genesys, Inc. Generation of large genomic dna deletions
DE69637481T2 (de) 1995-04-27 2009-04-09 Amgen Fremont Inc. Aus immunisierten Xenomäusen stammende menschliche Antikörper gegen IL-8
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
US5780215A (en) * 1995-07-26 1998-07-14 Konica Corporation Silver halide color photographic light-sensitive material
GB9520822D0 (en) 1995-10-11 1995-12-13 Wellcome Found Therapeutically active compounds
US6440418B1 (en) 1995-11-07 2002-08-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Methods of treating autoimmune diseases with gp39-specific antibodies
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
DK0780386T3 (da) 1995-12-20 2003-02-03 Hoffmann La Roche Matrixmetalloproteaseinhibitorer
CN1116286C (zh) 1996-03-05 2003-07-30 曾尼卡有限公司 4－苯胺基喹唑啉衍生物
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5994619A (en) 1996-04-01 1999-11-30 University Of Massachusetts, A Public Institution Of Higher Education Of The Commonwealth Of Massachusetts, As Represented By Its Amherst Campus Production of chimeric bovine or porcine animals using cultured inner cell mass cells
EP0818442A3 (en) 1996-07-12 1998-12-30 Pfizer Inc. Cyclic sulphone derivatives as inhibitors of metalloproteinases and of the production of tumour necrosis factor
HRP970371A2 (en) 1996-07-13 1998-08-31 Kathryn Jane Smith Heterocyclic compounds
DK0912559T3 (da) 1996-07-13 2003-03-10 Glaxo Group Ltd Kondenserede heterocykliske forbindelser som proteintyrosinkinaseinhibitorer
US6207669B1 (en) 1996-07-13 2001-03-27 Glaxo Wellcome Inc. Bicyclic heteroaromatic compounds as protein tyrosine kinase inhibitors
TR199900066T2 (xx) 1996-07-18 1999-04-21 Pfizer Inc. Matriks metalloproteazlar�n fosfinat bazl� inhibit�rleri
PL331895A1 (en) 1996-08-23 1999-08-16 Pfizer Arylosulphonylamino derivatives of hydroxamic acid
US5817690A (en) * 1996-08-27 1998-10-06 American Home Products Corporation 4-aminoethoxy indolone derivatives
ID18494A (id) 1996-10-02 1998-04-16 Novartis Ag Turunan pirazola leburan dan proses pembuatannya
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
KR20080059467A (ko) 1996-12-03 2008-06-27 아브게닉스, 인크. 복수의 ｖｈ 및 ｖｋ 부위를 함유하는 사람 면역글로불린유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된항체
US6077864A (en) 1997-01-06 2000-06-20 Pfizer Inc. Cyclic sulfone derivatives
BR9807815A (pt) 1997-02-03 2000-03-08 Pfizer Prod Inc Derivados de ácido arilsulfonilamino-hidroxâmico
WO1998034915A1 (en) 1997-02-07 1998-08-13 Pfizer Inc. N-hydroxy-beta-sulfonyl-propionamide derivatives and their use as inhibitors of matrix metalloproteinases
HUP0000657A3 (en) 1997-02-11 2000-10-30 Pfizer N-arylsulfonyl-piperidine, -morpholine hydroxamic acid derivatives and pharmaceutical compositions containing them
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
EP0984930B1 (en) 1997-05-07 2005-04-06 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
JP2002512624A (ja) 1997-05-21 2002-04-23 バイオベーション リミテッド 非免疫原性タンパク質の製造方法
JP2002501532A (ja) 1997-05-30 2002-01-15 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド 新規血管形成阻害薬
WO1999010349A1 (en) 1997-08-22 1999-03-04 Zeneca Limited Oxindolylquinazoline derivatives as angiogenesis inhibitors
EP1017682A4 (en) 1997-09-26 2000-11-08 Merck & Co Inc NEW ANGIOGENESIS INHIBITORS
EP1028964A1 (en) 1997-11-11 2000-08-23 Pfizer Products Inc. Thienopyrimidine and thienopyridine derivatives useful as anticancer agents
GB9725782D0 (en) 1997-12-05 1998-02-04 Pfizer Ltd Therapeutic agents
GB9800575D0 (en) 1998-01-12 1998-03-11 Glaxo Group Ltd Heterocyclic compounds
RS49779B (sr) 1998-01-12 2008-06-05 Glaxo Group Limited, Biciklična heteroaromatična jedinjenja kao inhibitori protein tirozin kinaze
GB9801690D0 (en) 1998-01-27 1998-03-25 Pfizer Ltd Therapeutic agents
KR20010034554A (ko) 1998-03-03 2001-04-25 레이몬드, 엠. 위티 치료제로서의 ｃｄ147 결합 분자
JP4462654B2 (ja) 1998-03-26 2010-05-12 ソニー株式会社 映像素材選択装置及び映像素材選択方法
PA8469501A1 (es) 1998-04-10 2000-09-29 Pfizer Prod Inc Hidroxamidas del acido (4-arilsulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxilico
PA8469401A1 (es) 1998-04-10 2000-05-24 Pfizer Prod Inc Derivados biciclicos del acido hidroxamico
US20020029391A1 (en) 1998-04-15 2002-03-07 Claude Geoffrey Davis Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling
AU4009899A (en) * 1998-05-23 1999-12-13 Tanox, Inc. Molecules targeting cd40 and tumor cells
AU759226B2 (en) 1998-05-29 2003-04-10 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
AU770555B2 (en) 1998-08-17 2004-02-26 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US6114361A (en) 1998-11-05 2000-09-05 Pfizer Inc. 5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid hydroxamide derivatives
EP1051432B1 (en) 1998-12-08 2007-01-24 Biovation Limited Method for reducing immunogenicity of proteins
CZ303703B6 (cs) 1998-12-23 2013-03-20 Pfizer Inc. Monoklonální protilátka nebo její antigen-vázající fragment, farmaceutická kompozice obsahující tuto protilátku nebo fragment, bunecná linie produkující tuto protilátku nebo fragment, zpusob prípravy této protilátky, izolovaná nukleová kyselina kóduj
WO2000066155A1 (en) * 1999-04-30 2000-11-09 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Methods for preventing reactivation of latent virus and controlling virus replication
US20030118588A1 (en) * 1999-05-22 2003-06-26 Linda Diehl Induction of anti-tumor CTL immunity through in vivo triggering of 4-1BB and/or CD40
US6946129B1 (en) * 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
WO2001016180A2 (en) * 1999-08-27 2001-03-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Cd40 agonist compositions and methods of use
US6517529B1 (en) 1999-11-24 2003-02-11 Radius International Limited Partnership Hemodialysis catheter
GB9927757D0 (en) * 1999-11-25 2000-01-26 Kennedy Rheumatology Inst Treatment of autoimmune diseases
AU3662101A (en) * 2000-02-01 2001-08-14 Tanox Inc Cd40-binding apc-activating molecules
AU2001259215A1 (en) * 2000-04-28 2001-11-12 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Human anti-cd40 antibodies and methods of making and using same
US20030059427A1 (en) * 2000-04-28 2003-03-27 Force Walker R. Isolation and characterization of highly active anti-CD40 antibody
US7063845B2 (en) 2000-04-28 2006-06-20 Gemini Science, Inc. Human anti-CD40 antibodies
PL228041B1 (pl) 2001-01-05 2018-02-28 Amgen Fremont Inc Przeciwciało przeciwko receptorowi insulinopodobnego czynnika wzrostu I, zawierajaca go kompozycja farmaceutyczna, sposób jego wytwarzania, zastosowania, linia komórkowa, wyizolowana czasteczka kwasu nukleinowego, wektor, komórka gospodarza oraz zwierze transgeniczne.
AR039067A1 (es) * 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
MX350383B (es) 2004-01-09 2017-09-04 Pfizer Anticuerpos contra madcam.
US10181126B2 (en) 2012-03-13 2019-01-15 American Express Travel Related Services Company, Inc. Systems and methods for tailoring marketing
US10884952B2 (en) 2016-09-30 2021-01-05 Intel Corporation Enforcing memory operand types using protection keys

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6312693B1 (en) * 1998-02-19 2001-11-06 Alejandro A. Aruffo Antibodies against human CD40

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2609647C2 (ru) * 2011-04-29 2017-02-02 Апексиджен, Инк. Анти-cd40-антитела и способы применения
RU2749041C2 (ru) * 2014-04-30 2021-06-03 Макс-Дельбрюк-Центрум Фюр Молекуляре Медицин Ин Дер Хельмхольтц - Гемайншафт Гуманизированные антитела против cd269 (bcma)
RU2766234C2 (ru) * 2017-04-04 2022-02-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Новые биспецифические антигенсвязывающие молекулы, обладающие способностью специфически связываться с cd40 и fap

Also Published As

Publication number Publication date
HK1069122A1 (en) 2005-05-13
US20120225014A1 (en) 2012-09-06
AU2002356926A2 (en) 2003-05-19
WO2003040170A9 (en) 2004-06-10
TWI338579B (en) 2011-03-11
EP2343086A3 (en) 2012-02-22
JP2013099333A (ja) 2013-05-23
ECSP045093A (es) 2004-07-23
US20160152713A1 (en) 2016-06-02
RS52484B (en) 2013-02-28
ME00503B (me) 2011-10-10
UY27537A1 (es) 2003-02-28
PL392809A1 (pl) 2011-03-14
AU2002356926B2 (en) 2007-01-04
JP5547532B2 (ja) 2014-07-16
CU23745A3 (es) 2012-01-31
GT200200228A (es) 2008-09-26
MA27139A1 (fr) 2005-01-03
US7288251B2 (en) 2007-10-30
WO2003040170A3 (en) 2003-10-09
CR7343A (es) 2004-10-28
EP1476185A4 (en) 2007-04-04
HUP0402247A3 (en) 2012-09-28
PL214634B1 (pl) 2013-08-30
TW200306204A (en) 2003-11-16
CN1582165B (zh) 2013-05-29
HRP20040525B1 (hr) 2017-06-02
US20070190051A1 (en) 2007-08-16
CA2466128A1 (en) 2003-05-15
JP4616555B2 (ja) 2011-01-19
US8388971B2 (en) 2013-03-05
HRP20040525A2 (en) 2005-04-30
HUP0402247A2 (hu) 2005-01-28
US7563442B2 (en) 2009-07-21
PA8557701A1 (es) 2003-12-19
SI1476185T1 (sl) 2013-12-31
BRPI0214137B1 (pt) 2019-03-19
PT1476185E (pt) 2013-11-05
CA2466128C (en) 2013-10-29
NO20042388L (no) 2004-08-09
JP2005508176A (ja) 2005-03-31
KR20050063749A (ko) 2005-06-28
EG25801A (en) 2012-08-08
NI200200128A (es) 2010-01-11
KR100830086B1 (ko) 2008-05-20
OA12725A (en) 2006-06-28
BR0214137A (pt) 2004-09-14
US7338660B2 (en) 2008-03-04
EP2343086A2 (en) 2011-07-13
EA200400654A1 (ru) 2004-12-30
US20060093600A1 (en) 2006-05-04
CY1115675T1 (el) 2017-01-25
EP1476185A2 (en) 2004-11-17
NZ533180A (en) 2008-03-28
AP2004003034A0 (en) 2004-06-30
IL161823A0 (en) 2005-11-20
HU229829B1 (en) 2014-09-29
US20090169563A1 (en) 2009-07-02
EP1476185B1 (en) 2013-07-31
PE20030846A1 (es) 2003-10-11
NO334339B1 (no) 2014-02-10
GEP20074222B (en) 2007-10-25
IS2940B (is) 2016-03-15
HN2002000318A (es) 2003-03-10
AR039067A1 (es) 2005-02-09
DOP2002000507A (es) 2003-05-15
ZA200404207B (en) 2005-08-31
US20030211100A1 (en) 2003-11-13
US20130024956A1 (en) 2013-01-24
CN1582165A (zh) 2005-02-16
MXPA04004467A (es) 2005-05-16
PL214289B1 (pl) 2013-07-31
PL370514A1 (en) 2005-05-30
US7626012B2 (en) 2009-12-01
IL161823A (en) 2014-02-27
DK1476185T3 (da) 2013-10-14
US20090130715A1 (en) 2009-05-21
CN103450360A (zh) 2013-12-18
WO2003040170A2 (en) 2003-05-15
CN103450360B (zh) 2016-11-02
AU2002356926C1 (en) 2003-05-19
US20100098694A1 (en) 2010-04-22
MY137641A (en) 2009-02-27
JP5848232B2 (ja) 2016-01-27
RS39204A (en) 2006-12-15
AP1918A (en) 2008-11-13
ES2432968T3 (es) 2013-12-05
TNSN04078A1 (fr) 2006-06-01
TW201034686A (en) 2010-10-01
JP2010213704A (ja) 2010-09-30
US7618633B2 (en) 2009-11-17
IS7253A (is) 2004-05-06
CR10878A (es) 2011-01-12
TWI331040B (en) 2010-10-01
BRPI0214137B8 (pt) 2021-05-25
CL2009001779A1 (es) 2010-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA011449B1 (ru) Моноклональное антитело человека к cd40 и способы его применения
KR102710963B1 (ko) 항b7-h3의 모노클로널 항체 및 그가 세포 치료 중에서의 응용
CN111683968B (zh) 结合至cd137和psma的分子
US20180273632A1 (en) Anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof
UA119673C2 (uk) Біспецифічне fc-діатіло, здатне імуноспецифічно зв&#39;язуватися з епітопом pd-1 і з епітопом lag-3, та його застосування
CN109715657A (zh) Cd80变体免疫调节蛋白及其用途
UA126384C2 (uk) Антитіло, яке зв&#39;язує cd3
EA023555B1 (ru) АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ c-fms ЧЕЛОВЕКА
EA006972B1 (ru) Моноклональное антитело человека к ctla-4 и способы его применения
DK2769729T3 (en) POLYPEPTIDES AND POLYNUCLEOTIDES AND APPLICATIONS THEREOF AS A PHARMACEUTICAL OBJECTIVE FOR THE PRODUCTION OF MEDICINAL PRODUCTS AND BIOTECHNOLOGICAL PRODUCTS
EA012079B1 (ru) Моноклональное антитело к рецептору инсулиноподобного фактора роста i (igf-i) и способы его применения
PL211786B1 (pl) Zastosowanie przeciwciała oraz polipeptydu
EA015589B1 (ru) Антитела против миостатина и их применение
JP2007306933A (ja) 特異的結合タンパク質およびその使用
CN114891751A (zh) 一种高效稳定表达激活型抗体的car-t细胞及其用途
US6627439B2 (en) Antibodies against SEMP1(p23)
JP2019509759A (ja) 抗ｐｄ−１抗体及びその使用
US20220089741A1 (en) Binder against programmed death-ligand and application thereof
JP2022532249A (ja) インターロイキンタンパク質の類似体と組み合わせて癌を処置するための治療用組成物及び方法
US20240002530A1 (en) Anti-psma antibodies and methods of use
JP2019526528A (ja) 抗ｔｎｆｒｓｆ２５抗体
TW202241943A (zh) Tau特異性抗體基因療法組合物、方法及其用途
EP1167387A1 (en) Antibodies against SEMP1, methods for their production and uses thereof
EP4410834A1 (en) Ctla-4 binding molecule and use thereof
NZ718372B2 (en) Anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof