EA023555B1 - АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ c-fms ЧЕЛОВЕКА - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к антигенсвязывающим белкам, которые связывают c-fms человека. Раскрыты нуклеиновые кислоты, кодирующие антигенсвязывающие белки, а также векторы и клетки, кодирующие белки. Антигенсвязывающие белки способны ингибировать связывание c-fms с КСФ-1, снижать миграцию моноцитов в опухоль, ингибировать накопление опухоль-ассоциированных макрофагов в опухоли.

Description

Многие линии опухолевых клеток человека и мышей секретируют цитокин КСФ-1 (колониестимулирующий фактор-1, известный также как макрофаг-колониестимулирующий фактор, М-КСФ), который привлекает моноциты/макрофаги, а также способствует их выживанию и активации с помощью рецептора с-Гтк (штамма вируса кошачьей саркомы Мак-Доноу). Опухоль-ассоциированные макрофаги (ТАМ) (известные также как опухоль-инфильтрующие макрофаги (ΤΙΜ)) могут являться основным компонентом стромы опухоли, составляющей до 50% клеточной массы опухоли. Ке11у с соавт., 1988, Вг. 1. Сапсег 57:174-177; Ьеек с соавт., 1994, I. Ьеикос, Βίο1. 56:423-435. При исследованиях первичных опухолей человека получено достаточно доказательств экспрессии мРНК КСФ-1. Кроме того, многие исследования показали, что повышенный уровень КСФ-1 в сыворотке, количество ТАМ или присутствие в ткани КСФ1 и/или с-Гтк связаны с плохим прогнозом для онкологических пациентов.

ТАМ способствуют существованию и росту опухоли, метастазированию по различным механизмам, в том числе за счет прямого митогенного воздействия на опухолевые клетки за счет секреции тромбоцитарного фактора роста (ΡΌΟΡ), трансформирующего ростового фактора (ΤΟΡ-β), эпидермального фактора роста (ΕΟΡ) и метастазы за счет продукции ферментов, вызывающих деградацию внеклеточного матрикса ЕСМ (обзор Ьеек апй Нагпк, 2002, 1. Маттагу О1апй Βίο1 апй ЛеоркМа 7:177-189 и Ьедак апй Ρο11агй, 2006, Сапсег Ке8 66:605-612). Еще одним важным фактором обеспечения опухоли со стороны ТАМ является участие в нео-васкуляризации опухоли за счет образования различных про-ангиогенных факторов, таких как СОХ-2, фактор роста эндотелия сосудов (УЕОР), фактор роста фибробластов (ΡΟΡ), эпидермальный фактор роста (ΕΟΡ), моноксид азота, ангиопоэтины и матриксные металлопротеиназы (ММР). ЭгапоГГ с соавт., 2004, Ла1. Кеу. Сапсег 4:11-22; МасМюкшд с соавт., 1997, Аппи. Кеу. 1ттипо1. 15:323-350; Майоуаш с соавт., 1992, 1ттипо1. Тойау 13:265-270. Помимо этого, макрофаги-производные КСФ-1 могут оказывать иммуносуппрессивное действие за счет продукции различных факторов, таких как простагландины, индоламин-2,3-диоксигеназа, оксид азота, 1Ь-10 и ΤΟΡρ. МасМюктд с соавт., 1997, Аппи. Кеу. 1ттипо1. 15:323-350; Вгойе с соавт., 2001, I. 1ттипо1йег. 24:431-446.

Цитокин КСФ-1 экспрессируется и в мембраносвязанной, и в растворимой форме (Сеггей с соавт., 1988, Мо1. 1ттипо1. 25:761-770; ЭоЬЫп с соавт., 2005, ВюшГогтайск 21:2430-2437; \Уопд с соавт., 1987, ВюсЬет. Рйагтасок 36:4325-4329) и регулирует выживание, пролиферацию, хемотаксис и активацию макрофагов и их предшественников (Воиге11е с соавт., 2000, Οιό\\11ι Рас1огк 17:155-166; СессЫш с соавт., 1994, Оеуе1ортей 120:1357-1372; НатЫоп, 1997, I. Ьеикос. Вю1 62:145-155; Ните, 1985, 8ск Ргод. 69:485-494; Зактопо апй Ните, в: ТЬе шпа1е 1ттипе гекропке 1о ЫГесОоп (ред. КаиГтапп, 8., Оогйоп, 8. & Мей/1йоу, К.) 71-94 (АЗМ Ргекк, Ле\у Уогк, 2004); Кокк апй Аидег, в: ТЬе тасгорЬаде (ейк. Вигке, В. & Ьедак, С.) (ОхГогй Ишуегкйу Ргекк, ОхГогй, 2002)).

Соответствующий ему рецептор, прото-онкоген с-Гтк (известный также как М-С8РК, С8Р-1К или СЭ115), представляет собой гликопротеин массой 165-кДа, проявляющий ассоциированную тирозинкиназную активность и принадлежащий к семейству тирозинкиназных рецепторов класса ΙΙΙ, включающему ΡΌΟΡΚ-а, ΡΌΟΡΚ-β, УЕОРК1, УЕОРК2, УЕОРК3, Ρ113 и с-кй. В1ите-1епкеп апй Нийег, 2001, Ла1иге 4Л:355-365; 8сЫеккш§ег апй ИПпсЬ, 1992, Леигоп 9:383-391; 8Ьегг с соавт., 1985 Се11 41:665-676; уап йег Оеег с соавт., 1994, Аппи. Кеу. Се11. Вю1. 10:251-337. Онкогенную форму с-Гтк (ν-Гтк), которую несет линия вируса кошачьей саркомы Мак-Доноу, подвергают мутации, придавая ей конститутивно активированную протеинкиназную активность (8Ьегг с соавт., 1985, Се11 41: 665-676; Коикке1 апй 8Ьегг, 2003, Се11 Сус1е 2: 5-6). Экспрессия с-Гтк в нормальных клетках ограничивается миеломоноцитами (к которым относятся моноциты, тканевые макрофаги, клетки Купфера, клетки Лангерганса, микроглиальные клетки и остеокласты), кроветворными клетками-предшественниками и трофобластами. Ага1 с соавт., 1999, 1. Ехр. Мей. 190:1741-1754; Эа1 с соавт., 2002, В1оой 99:111-120; Ρί.χΚν апй 81ап1еу, 2004, Тгепйк Се11 Вю1. 14: 628-638. Экспрессия с-Гтк была также обнаружена в некоторых опухолевых клетках (К1гта с соавт., 2007, Сапсег Кек 67:1918-1926). В ряде исследований ш \йго и анализов мутантных мышей было показано, что КСФ-1 может служить лигандом для с-Гтк (см., например, Воигейе апй КоЬгксйпеЫег, 2000, ОгоМЬ Райогк 17:155-166; \У1к1ог-1ейг/е]с/ак с соавт., 1990, Ργόο. №11 Асай. 8ск И8А, 87:4828-4832; УокЫйа с соавт., 1990, Ла1иге 345:442-444; νап ХУекепЬееск апй νап Ни1, 2005, Сгй. Ре\'. Еикагуо1. Оепе Ехрг. 15:133-162). Связывание КСФ-1 и с-Гтк индуцирует аутофосфорилирование рецептора в определенные положения, приводящее к активации нисходящих сигнальных путей, в том числе ΡΠ-К/АКТ и Как/КаГ/ΜΕК/ΜАΡК, а на дифференциацию макрофагов влияет прежде всего постоянная активность МЕК-киназы (Оокке с соавт., 2005, Се11и1аг §1§па1ш§ 17:1352-1362). Недавно получены доказательства того, что интерлейкин-34 (1Ь-34) также является лигандом для с-Гтк (Ьт, с соавт. 2008, 8с1епсе 320:807811).

- 1 023555

Краткое изложение изобретения

В данном документе описаны антигенсвязывающие белки, которые связывают с-Гт8, в том числе сГт8 человека. Было обнаружено, что антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гт8 человека, ингибируют, нарушают или модулируют по крайней мере один из биологических ответов, относящихся к с-Гт8, и в этом качестве могут служить для улучшения ситуации при заболеваниях или нарушениях, имеющих отношение к с-Гт8. Связывание определенных антигенсвязывающих белков с с-Гт8 может, таким образом, оказать одно или более из следующих действий: ингибирование, нарушение или модулирование связывания или передачи сигнала с-Гт8-ЛСФ-1, ингибирование связывания или передачи сигнала с-Гт81Б-34, снижение миграции моноцитов внутрь опухоли и/или снижение накопления опухольассоциированных макрофагов (ТАМ).

Одно осуществление включает системы экспрессии, в том числе клеточные линии, для продукции антигенсвязывающих белков к рецептору с-Гт8, а также способы диагностики и лечения заболеваний, связанных с с-Гт8 человека.

Некоторые из выделенных антигенсвязывающих белков содержат Ун и У_ь, которые связывают сГт8, характеризующиеся тем, что:

(a) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 77, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 109;

(b) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 77, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 110;

(c) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 78, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 133;

(б) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 79, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 111;

(е) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 80, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 112;

(Г) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 84, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 115;

(д) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 85, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 116;

(й) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 86, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 117;

(ΐ) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 87, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 118;

О) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 70, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 102;

(k) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 70, и Уь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 103;

(l) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 73, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 105;

(т) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 74, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 106;

(п) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 89, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 121;

(о) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 93, и Уь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕО ГО N0: 123;

(р) У_н содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 94, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную

- 2 023555

5ЕС) ΙΌ N0: 124;

(ς) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 97, и V!, содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 5ЕС) ГО N0: 127;

(г) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 98, и V содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 5ЕС) ГО N0: 128;

(δ) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8Е0 ГО N0: 99, и V содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 5ЕС) ГО N0: 129.

Частным вариантом является антигенсвязывающий белок, включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 147, СГОРН2. содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 163, СИРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 186, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 193, СГОРБ® содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 214, и СГОРЕЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 228; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 137, СИРН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 150, СГОРНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 166, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 198, СПРЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 216, и СГОРЕо, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 233; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 137, С0РН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 150, СИРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 189, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 198, СГОРЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 216, и СОРЕЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 233; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 147, СГОРН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 163, СОРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 186, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 195, СГОРБ® содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 214, и СПРЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 228; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 137, СИРН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 152, СИРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 170, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 198, СГОРЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 216, и СПРЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 233; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 147, С0РН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 163, СОРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 186, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 194, СГОРБ® содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 214, и СПРЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 228; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 141, СИРН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 156, СИРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 172, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 209, СГОРЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 223, и СПРЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 245; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 143, СИРШ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 160, СОРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 182, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 203, СГОРБ® содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 216, и СПРЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 240; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 140, СИРН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 155, СИРН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 169, СИРЫ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 202, СГОРЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 218, и СПРЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 236; или включающий СГОРНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 140, СИРШ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 155,

- 3 023555

СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>ЕО ГО N0: 169, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 201, СЭРЕ2. содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 218, и СПЕЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 236; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 143, СЭЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 158, СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 190, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 199, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 219, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 237; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 137, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 151, СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 167, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 199, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 217, и СПЕЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 233; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 137, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 150, СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 173, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 198, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 216, и СПЕЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 233; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 142, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 157, СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 187, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 206, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 221, и СПЕЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 242; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 143, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 158, СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 177, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 200, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 216, и СПЕЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 235; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 142, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 157, СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 176, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 207, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 224, и СПЕЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 243; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 136, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 149, СПЕН3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 171, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 208, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 222, и СПЕЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 244.

Другим частным вариантом является антигенсвязывающий белок, содержащий У_Н и У_ь, характеризующийся тем, что:

(a) Ун содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 77, и У[, содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 109;

(b) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 77, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 110;

(c) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 78, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 133;

(ά) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 79, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 111;

(е) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 80, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 112;

(ί) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 84, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 115;

(д) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 85, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 116;

(й) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 86, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 117;

(ί) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 5>Е0 ГО N0: 87, и У_ъ содержит

- 4 023555 аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕО ГО N0: 118;

(ί) Ун содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 70, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 102;

(k) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 70, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 103;

(l) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 73, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 105;

(т) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 74, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 106;

(п) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 89, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 121;

(о) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 93, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 123;

(р) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 94, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 124;

(η) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 97, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 127;

(г) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 98, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 128;

(8) У_н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 99, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 129.

Другим частным вариантом является антигенсвязывающий белок, в котором У_н является частью тяжелой цепи, а У_ъ является частью легкой цепи, отличающийся тем, что:

(a) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 11, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 43;

(b) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 11, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 44;

(с) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 12, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 67;

(ά) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 13, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 45;

(е) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 14, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 46;

(ί) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 18, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 49;

(д) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 19, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 50;

(к) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 20, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 51;

(ί) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 21, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 52;

(ί) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 4, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 36;

(k) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 4, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 37;

(l) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 7, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 39;

(т) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 8, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 40;

(п) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 23, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 55;

(о) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 27, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 57;

(р) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 28, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 58;

(с|) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 31, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 61;

(г) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 32, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 62;

(8) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 33, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 63.

Другим частным вариантом является антигенсвязывающий белок, характеризующийся тем, что по- 5 023555 липептидная структура антигенсвязывающего белка основана на:

(a) антителах и их фрагментах; или (b) моноклональных антителах, биспецифических антителах, мини-антителах, доменных антителах, синтетических антителах, химерных антителах, гуманизированных антителах, человеческих антителах, слитых антителах и их фрагментах.

Другим частным вариантом является антигенсвязывающий белок, представляющий собой человеческий антигенсвязывающий белок.

Другим частным вариантом является антигенсвязывающий белок, представляющий собой антитело или его фрагмент.

Другим частным вариантом является антигенсвязывающий белок, который:

(a) представляет собой моноклональное антитело, рекомбинантное антитело, человеческое антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело, мультиспецифическое антитело или их фрагмент;

(b) представляет собой Ι§01-, Ι§02-, 1§О3- или 1дО4-тип;

(c) представляет собой РаЬ фрагмент, РаЬ' фрагмент, Р(аЬ')₂ фрагмент, Ρν фрагмент, димер диабоди, доменное антитело, или одноцепочечную молекулу антитела; или (ά) представляет собой иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина и имеет происхождение из любого млекопитающего, выбранного из человека, мыши, крысы, верблюда или кролика.

В другом аспекте выделенный антигенсвязывающий белок может конкурировать с антигенсвязывающим белком одного из предложенных выделенных антигенсвязывающих белков за связывание с внеклеточной частью с-£ш8 человека. В одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок при введении в организм может снижать хемотаксис моноцитов, ингибировать миграцию моноцитов в опухоль, ингибировать накопление опухоль-ассоциированных макрофагов в опухоли и ингибировать накопление макрофагов в пораженной ткани.

В очередном аспекте предлагаются также выделенные молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антигенсвязывающие белки, которые связывают с-Гпъ. В некоторых случаях выделенные молекулы нуклеиновых кислот функционально связаны с контрольной последовательностью.

В другом аспекте предлагаются также векторы экспрессии и клетки-хозяева, трансформированные или трансфецированные векторами экспрессии, включающими вышеуказанные выделенные молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антигенсвязывающие белки, которые связывают с-Гпъ.

Еще один аспект - способы получения антигенсвязывающих белков, включающие стадию получения антигенсвязывающего белка из клетки-хозяина, которая секретирует антигенсвязывающий белок.

Еще один аспект - предлагается фармацевтическая композиция, содержащая хотя бы один из упомянутых выше антигенсвязывающих белков и фармацевтически приемлемый носитель. В одном осуществлении фармацевтическая композиция может содержать дополнительное активное вещество, которое выбирают из группы, включающей радиоизотоп, радионуклид, токсин или терапевтический или химиотерапевтический препарат.

Далее, осуществления изобретения предоставляют способ применения для лечения или профилактики состояний, связанных с с-Гпъ. включающий введение в организм эффективного количества хотя бы одного выделенного антигенсвязывающего белка. Примером указанных состояний может служить онкологическое заболевание, выбранное из группы, куда входит рак молочной железы, рак предстательной железы, колоректальный рак, аденокарцинома эндометрия, лейкемия, лимфома, меланома, плоскоклеточный рак пищевода, рак желудка, астроцитарный рак, рак эндометрия, цервикальный рак, рак мочевого пузыря, рак почек, рак легких и рак яичников.

Указанные и другие аспекты будут изложены в настоящем документе более подробно. Каждый из аспектов может включать различные осуществления, предложенные в настоящем документе. Таким образом, предполагается, что каждое осуществление, включающее один элемент или комбинацию элементов, может входить в каждый из приведенных аспектов. Другие раскрываемые признаки, объекты и преимущества очевидны из последующего подробного описания.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1А - сопоставление последовательностей вариабельных областей тяжелой цепи, предложенных в настоящем документе.

Фиг. 1В - сопоставление последовательностей вариабельных областей легкой цепи, предложенных в настоящем документе. Обозначены СОК. и каркасные области.

Фиг. 2 - генеалогический анализ для 29 гибридомных антител к с-Гпъ. Аминокислотные последовательности, соответствующие вариабельным доменам тяжелой (Ун) либо легкой (У_ь) цепи всех клонированных гибридом, выравнивали и сопоставляли друг с другом для выявления различий антител. Приведены древовидные диаграммы выравнивания, причем длина горизонтальной ветви соответствует относительному количеству замен (различий) между двумя любыми последовательностями или кладами последовательностей (группы близкородственных последовательностей). Указаны последовательности, сгруппированные для определения консенсусных последовательностей.

Фиг. 3 - ингибирование пролиферации клеток АМЕ-5 супернатантами гибридомных антител против

- 6 023555 с-Гтх Фиг. ЗА - биотестирование АМЬ-5 с супернатантами гибридомных антител к е-Гпъ. Фиг. 3В - биотестирование АМЬ-5 с очищенными рекомбинантными антителами к с-Гтх Клетки АМЬ-5 инкубировали с 10 нг/мл КСФ-1 в присутствии антител при снижении их концентрации. Через 72 ч измеряли пролиферацию клеток с помощью красителя Аламар блу.

Фиг. 4 - анализ костного мозга яванских макак при титровании антител к с-Гпъ в КСФ-1. Проиллюстрировано ингибирование пролиферации клеток костного мозга яванских макак, обогащенных КСФ-1, под действием супернатантов гибридомных антител к с-Гтх Клетки костного мозга яванских макак инкубировали с 10 нг/мл КСФ-1 в присутствии антител при снижении их концентрации. Через 72 ч измеряли пролиферацию клеток с помощью красителя Аламар блу.

Фиг. 5 - ингибирование лиганд-индуцированного рТуг-с-Гпъ действием МКА 1дО2 (РТ, исходная форма). Клетки 293Т/с-Гт5 помещали в бессывороточную среду на 1 ч, обрабатывали МКА 1§О2 1.109, 1.2 или 2.360 (РТ) и контрольными МКА против с-Гпъ 3-4А4 (неблокирующие) и против Н-СИ39 М105 (неспецифические) в серии титрования (1.0-0.0001 мкг/мл) или 1.0 мкг/мл (контроль). Затем клетки стимулировали действием 50 нг/мл КСФ-1 в течение 5 мин при 37°С. Лизаты цельных клеток осаждали антителом к с-Гпъ С20, как описано. Вестерн-блот-анализ проводили с антителами к рТуг 4010 (верхний рисунок) или к с-Гпъ С20 (нижний рисунок) соответственно для обнаружения рТуг/с-Гпъ и суммарного сГтк.

Фиг. 6 - сравнение ингибирования лиганд-индуцированного рТут-с-Гтк действием МКА 1д02 (РТ форма по сравнению с 8М (излеченная соматическая мутация)). Клетки 293Т/с-Гт8 помещали в бессывороточную среду на 1 ч, обрабатывали МКА 1§0₂, 1.109, 1.2 или 2.360 (формы РТ или 8М) и контрольными МКА к с-Гпъ 3-4А4 (неблокирующие) при концентрации 1.0 и 0.1 мкг/мл. Затем клетки стимулировали действием 50 нг/мл КСФ-1 в течение 5 мин при 37°С. Иммунопреципитацию лизатов цельных клеток проводили антителом против с-Гпъ С20, как описано. Вестерн-блот анализ проводили с антителами к рТуг 4010 (верхний рисунок) или к с-Гпъ С20 (нижний рисунок) соответственно для обнаружения рТуг/с-Гпъ и суммарного с-Гтх

Фиг. 7 - вестерн-блот анализ иммунопреципитации с-Гпъ действием МКА 1д02 (форма РТ по сравнению с 8М). Иммунопреципитацию лизатов нестимулированных цельных клеток 293Т/с-Гт8 проводили (оставляя на ночь при 4°С) действием МКА 1§02 1.109, 1.2 или 2.360 (формы РТ и 8М) и анти-с-Гпъ С20 при концентрации 2.5 мкг/мл. Вестерн-блоттинг проводили с антителами против с-Гпъ С20 и с антителами против кроличьего 1д0/НКР.

Фиг. 8 - аминокислотная последовательность (8ЕО ГО N0: 1) участка внеклеточного домена с-Гпъ человека.

Фиг. 9 - вестерн-блот анализ иммунопреципитации с-Гпъ ОНП. Конструкции экспрессии указанных ОНП с-Гпъ собирали и проводили временную экспрессию в клетках 293Т/с-Гт8. Проводили иммунопреципитацию нестимулированных лизатов цельных клеток каждым МКА и контрольным антителом. Вестерн-блот анализ проводили с с-Гпъ Н300 и антителами к 1§0/НКР кролика.

Фиг. 10 - схема внеклеточного домена (ЕСИ) с-Гпъ человека и укороченных конструкций. Авидинтэг слит в рамке на Ν-конце с-Гтх Для каждой конструкции с-Гпъ указаны первая и четыре последних аминокислоты.

Фиг. 11 - связывание ФИТЦ-меченых антител против авидина 1.109, 1.2 и 2.360 и против с-Гпъ с внеклеточным доменом с-Гпъ и укороченным слитым белком на основе авидина.

Фиг. 12 - связывание ФИТЦ-меченых антител против авидина, контрольных антител и антител против с-Гпъ (ФИТЦ-меченые) с полноразмерным слитым белком из с-Гпъ и 1д-подобной петли 2 (индивидуально).

Фиг. 13 - конкурентный анализ с 20-кратными количествами немеченых антител 1.109, 1.2 и 2.360 против с-Гпъ с последующим добавлением ФИТЦ-меченого 1.109 при концентрации 1 мкг/мл.

Фиг. 14 - конкурентный анализ с 20-кратными количествами немеченых антител 1.109, 1.2 и 2.360 к с-Гпъ с последующим добавлением ФИТЦ-меченого 1.2 при концентрации 1 мкг/мл.

Фиг. 15 - конкурентный анализ с 20-кратными количествами немеченых антител 1.109, 1.2 и 2.360 к с-Гпъ с последующим добавлением ФИТЦ-меченого 2.360 при концентрации 1 мкг/мл.

Фиг. 16 - ингибирование роста ксенотрансплантата аденокарциномы груди МИАМВ231 антителами к с-Гпъ мыши, измеряли объем опухоли и долю некроза для каждой опухоли. Долю некроза для каждой опухоли рассчитывали на основе измерений, результаты показаны на фиг. 16.

Фиг. 17 - ингибирование роста ксенотрансплантата аденокарциномы легких ΝΟΗ1975. Показаны результаты измерения опухоли и время лечения. Можно видеть, что антитела к мышиному с-Гпъ способны ингибировать рост устойчивого ксенотрансплантата аденокарциномы легких Νί'ΊΗ1975.

- 7 023555

Подробное описание

В настоящем документе заголовки разделов служат для структурирования и не должны считаться ограничивающими предмет изобретения.

Если не указано иначе, научные и технические термины, которые используются в связи с настоящей заявкой, имеют то значение, которое обычно подразумевается специалистом среднего уровня. Далее, если контекст не подразумевает иного, термины в единственном числе подразумевают и множественное число, а термины во множественном числе также имеют в виду и единственное число.

В целом номенклатура и методы, касающиеся культур клеток и тканей, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетики, химии белков и нуклеиновых кислот и гибридизации, описанные в настоящем документе - хорошо известны и обычно используется в данной области. В данном изобретении способы и методики обычно реализуются в соответствии с обычными способами, хорошо известными в данной области, приведенными в общих и более конкретных ссылках, которые упоминаются и цитируются по ходу данного описания, если не указано иначе. См., например, 8атЪтоок с соавт., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬогаФту Мапиа1, 3гй ей, Со1й 8ртшд НагЬог йаЬогаЮгу Рге88, Со1й 8ртшд НагЬог, НьюЙорк (2001), Аи8иЬе1 с соавт., Ситтеп! Рто1осо18 ίη Мо1еси1аг Вю1оду, Стеепе РиЬйкЫпд А88ос1а1е8 (1992), и Нат1оте апй Ьапе АпИЪой1е8: А ЬаЬота1огу Мапиа1 Со1й §ртшд НагЬог ЬаЬота1огу Рге88, Со1й §ртшд НагЬог, Нью-Йорк (1990), которые включены в данный документ посредством ссылки. Ферментативные реакции и процедуры очистки осуществляются в соответствии с инструкцией производителя, как это делается обычно в данной области или как описано в документе. Приведенные здесь лабораторные методики и методы аналитической химии, синтетической органической химии, медицинской и фармацевтической химии, а также связанная с этим терминология соответствуют хорошо известным и традиционным в данной области. Стандартные методы применимы к химическим синтезам, химическим анализам, приготовлению фармацевтических препаратов, составлению рецептур, доставке препаратов и лечению пациентов.

Следует иметь в виду, что настоящее изобретение не ограничено конкретной методологией, протоколом, реагентами и т.д., описанными в настоящем документами, и в этом возможны варианты. Терминология, которая здесь употребляется, предназначена только для описания конкретных осуществлений, но не для ограничения предмета изобретения, который определяется формулой изобретения.

Помимо употребления в рабочих примерах и если не указано иначе, все числа, выражающие количество компонентов или условия реакций в данном документе, следует во всех случаях считать модифицированными термином около. По отношению к процентному содержанию термин около может означать ±1%.

Определения.

Термин полинуклеотид или нуклеиновая кислота относится как к одноцепочечным, так и к двухцепочечным полимерам нуклеотидов. Нуклеотидами, составляющими полинуклеотид, могут быть рибонуклеотиды или дезоксирибонуклеотиды или модифицированная форма того или другого типа нуклеотидов. Указанные модификации могут представлять собой модификацию оснований, такую как бромуридин и инозин, модификацию рибозы, такую как 2',3'-дидезоксирибоза, а также модификацию межнуклеотидных связей, такую как тиофосфат, дитиофосфат, селенофосфат, диселенофосфат, анилотиофосфат, анилофосфат и амидофосфат.

Термин олигонуклеотид означает полинуклеотид, содержащий 200 или менее нуклеотидов. В некоторых осуществлениях олигонуклеотиды состоят из 10-60 оснований. В других осуществлениях олигонуклеотиды состоят из 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или от 20 до 40 нуклеотидов. Олигонуклеотиды могут быть одно- и двухцепочечными, например, для конструирования мутантного гена. Олигонуклеотиды могут быть смысловыми или антисмысловыми. Олигонуклеотид может содержать метку, в том числе радиоактивную метку, флуоресцентную метку, гаптен или антигенную метку, которые служат для их обнаружения. Олигонуклеотиды применяют, например, в качестве праймеров для ПЦР, клонирования или зондов для гибридизации.

Выделенная молекула нуклеиновой кислоты означает ДНК или РНК геномного происхождения, мРНК, кДНК синтетического происхождения, либо их комбинацию, которая не связана с полинуклеотидом, в котором выделенная молекула находится в природе, или с его частью, либо связана с полинуклеотидом, с которым она не связана в природе. Для целей данного изобретения следует понимать, что в понятие молекула нуклеиновой кислоты, содержащая определенную последовательность нуклеотидов не входят интактные хромосомы. Выделенные молекулы нуклеиновых кислот, содержащие заданные последовательности нуклеиновой кислоты, могут дополнительно включать кодирующие последовательности до десяти или даже двадцати других белков или их частей либо функционально связанные регуляторные последовательности, регулирующие экспрессию кодирующей области указанной нуклеиновой кислоты, и/или могут включать векторные последовательности.

Если не указано иначе, левый конец всех обсуждаемых одноцепочечных полинуклеотидных последовательностей является 5'-концом; левое направление двухцепочечной полинуклеотидной последовательности называется 5'-направлением. Направление присоединения нового транскрипта РНК от 5' к 3' называется направлением транскрипции; участки на спирали ДНК, характеризующиеся той же последовательностью, что и транскрипт РНК, 5' к 5'-концу транскрипта РНК, называются вышележащими по- 8 023555 следовательностями; участки на спирали ДНК, характеризующиеся той же последовательностью, что и транскрипт РНК, 3' к 3'-концу транскрипта РНК, называются нижележащими последовательностями.

Термин контрольная последовательность относится к полинуклеотидной последовательности, которая способна влиять на экспрессию и процессинг кодирующих последовательностей, к которым она лигирована. Природа такой контрольной последовательности может зависеть от организма-хозяина. В конкретных осуществлениях контрольные последовательности для прокариотов могут содержать промотор, участок рибосомного связывания и последовательность терминации транскрипции. Например, контрольные последовательности для эукариотов могут содержать промоторы, включающие один или много участков узнавания для факторов транскрипции, последовательности энхансеров транскрипции и последовательность терминации транскрипции. Контрольные последовательности могут содержать лидерные последовательности и/или последовательности партнера для присоединения.

Термин вектор относится к любой молекуле или объекту (например, это может быть нуклеиновая кислота, плазмида, бактериофаг или вирус), который служит для переноса информации, кодирующей белок, в клетку-хозяина.

Термин вектор экспрессии или экспрессирующая конструкция относится к вектору, способному трансформировать клетку-хозяина и содержащему последовательности нуклеиновой кислоты, направляющие и/или регулирующие (совместно с клеткой-хозяином) экспрессию одного или более гетерологичных кодирующих областей, оперативно с ним связанных. Экспрессирующая конструкция может включать, без ограничения, последовательности, влияющие на транскрипцию, трансляцию или регулирующие их, и при наличии интронов влияющие на сплайсинг РНК кодирующей области, функционально с ним связанной.

В настоящем документе функционально связанный означает, что компоненты, к которым относится данный термин, находятся во взаимосвязи, которая позволяет им осуществлять присущие им функции в соответствующих условиях. Например, контрольная последовательность вектора, которая функционально связана с кодирующей последовательностью белка, лигирована к ней так, что экспрессия кодирующей последовательности белка достигается в условиях, совместимых с транскрипционной активностью контрольной последовательности.

Термин клетка-хозяин относится к клетке, которая была трансформирована или способна к трансформации последовательностью нуклеиновой кислоты и за счет этого экспрессирует целевой ген. Термин заключает в себе потомство родительской клетки, независимо от того, имеет ли потомство такую же морфологию и генетическое строение, что и исходная родительская клетка, при условии, что в нем присутствует целевой ген.

Термин трансдукция означает перенос генов от одной бактерии к другой, обычно за счет бактериофага. Трансдукция относится также к приобретению и переносу последовательностей клеток эукариотов при репликации дефектных ретровирусов.

Термин трансфекция означает накопление чужеродной или экзогенной ДНК в клетке, а клетка была трансфецирована, если экзогенная ДНК проникла внутрь клеточной мембраны. Ряд методов трансфекции хорошо известен в данной области и раскрыт в настоящем документе. См., например, Ога1ат с соавт., 1973, У1го1оду 52:456; ЗатЬгоок с соавт., 2001, Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога1огу Мапиа1, см. выше; Эауй с соавт., 1986, Вакю МеШобк ίη Мо1еси1аг Вю1оду, Екеу1ег; С1ш с соавт., 1981, Оепе 13:197. Такие методы позволяют ввести в подходящую клетку-хозяина один или более фрагмент экзогенной ДНК.

Термин трансформация относится к изменению генетических характеристик клетки, а клетка была трансформирована, если она модифицирована так, что содержит новую ДНК или РНК. Например, клетка трансформирована, если ее нативное состояние было генетически модифицировано в результате введения генетического материала за счет трансфекции, трансдукции или другого способа. После трансфекции или трансдукции трансформирующая ДНК может рекомбинировать с ДНК клетки за счет физической интеграции в хромосому клетки, либо может временно сохраняться как эписомный элемент без репликации, либо может быть реплицирована или независимо реплицироваться как плазмида. Клетка считается стабильно трансформированной, если трансформирующая ДНК реплицируется при делении клетки.

Термины полипептид или белок в данном документе взаимозаменяемы и относятся к полимеру, состоящему из остатков аминокислот. Термины также включают полимеры аминокислот, в которых один или более аминокислотный остаток является аналогом или миметиком соответствующей природной аминокислоты, а также природные полимеры аминокислот. Термины могут предполагать также полимеры аминокислот, которые были модифицированы, например, присоединением углеводных остатков с образованием гликопротеинов или фосфорилированием. Полипептиды и белки могут продуцироваться природными и нерекомбинантными клетками; либо продуцируются генетически сконструированными или рекомбинантыми клетками, и представляют собой молекулы, имеющие аминокислотную последовательность природного белка, или молекулы, содержащие делецию, присоединение и/или замену одной или более аминокислоты нативной последовательности. В понятия полипептид и белок, в частности, входят антигенсвязывающие белки, связывающие с-1т8, антитела или последовательности, содержащие

- 9 023555 делецию, присоединение и/или замену одной или более аминокислоты антигенсвязывающего белка. Термин полипептидный фрагмент относится к полипептиду, который имеет аминоконцевую делецию, карбоксилконцевую делецию, и/или внутреннюю делецию по сравнению с полноразмерным белком. Такие фрагменты могут также содержать модифицированные аминокислоты по сравнению с аминокислотами полноразмерного белка. В некоторых осуществлениях длина фрагментов составляет около 5-500 аминокислот. Например, длина фрагмента может составлять хотя бы 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400 или 450 аминокислот. К важным полипептидным фрагментам относятся иммунологически функциональные фрагменты антител, в том числе связывающие домены. В случае с-1т5связывающего антитела важными фрагментами являются, без ограничения, участок СОВ, вариабельный домен тяжелой или легкой цепи, часть цепи антитела или только ее вариабельный участок, включающий два СОК, и т.п.

Термин выделенный белок означает, что данный белок (1) свободен хотя бы от части других белков, вместе с которыми он обычно обнаруживается, (2) в основном свободен от других белков из того же источника, например, из того же вида организмов, (3) экспрессирован клеткой другого вида, (4) отделен по крайней мере от около 50% полинуклеотидов, липидов, углеводов или других материалов, которые обычно сопутствуют ему в природе, (5) функционально ассоциирован (за счет ковалентного или нековалентного взаимодействия) с полипептидом, с которым он не ассоциирован в природе, или (6) в природе не существует. Как правило, на долю выделенного белка приходится хотя бы около 5%, хотя бы около 10%, хотя бы около 25% или хотя бы около 50% данного образца. Указанный выделенный белок может кодировать геномная ДНК, кДНК, мРНК или другая РНК синтетического происхождения либо любая их комбинация. Предпочтительно выделенный белок в основном не содержит белков, полипептидов или других примесей, которые присутствуют в его природной среде и которые препятствуют его применению в терапевтических, диагностических, профилактических или исследовательских целях.

Вариант полипептида (например, антигенсвязывающий белок или антитело) представляет собой аминокислотную последовательность, в которую введен либо из которой удален и/или в которой замещен один или более аминокислотный остаток по отношению к другой полипептидной последовательности. Слитые белки являются вариантами.

Производное полипептида представляет собой полипептид (например, антигенсвязывающий белок или антитело), химически модифицированный каким-либо образом, отличным от вариантов введения, удаления или замены, например, за счет замещения другим химическим фрагментом.

Термин природный в том смысле, в котором он используется в данном описании в отношении биологических материалов, таких как полипептиды, нуклеиновые кислоты, клетки-хозяева и прочее относится к материалам, которые существуют в природе.

Антигенсвязывающий белок в данном документе означает белок, который специфически связывается с заданным антигеном-мишенью, таким как с-1т5 или с-1т5 человека.

Антигенсвязывающий белок считается специфически связанным с антигеном-мишенью, если константа диссоциации (КО) <10^-8 М. Антитело специфически связывается с антигеном с высокой аффиностью, если Кс <5х10^-9 М и с очень высокой аффиностью если Кс <5х10^-10 М. В одном осуществлении антитело характеризуется Кс <10^-9 М, а скорость диссоциации около 1х10⁴/с. В другом осуществлении скорость диссоциации составляет около 1х10^-5/с. В следующих осуществлениях антитела связывают сТт или сТт человека с Кс от около 10^-8 М до 10^-10 М, и а еще в одном осуществлении они связываются с К_с <2х 10^-10

Антигенсвязывающая область означает белок или часть белка, который специфически связывается с определенным антигеном. Например, такая часть антигенсвязывающего белка, которая содержит аминокислотный остаток, взаимодействующий с антигеном и придающий антигенсвязывающему белку его специфичность и аффинность к антигену, называют антигенсвязывающей областью. Антигенсвязывающая область обычно включает один или более определяющий комплементарность участок (СОК). Определенные антигенсвязывающие области также содержат одну или более каркасную область. СОК - это аминокислотная последовательность, которая способствует антигенсвязывающей специфичности и аффинности. Каркасные области содействуют в закреплении требуемой конформации СОК, что способствует связыванию антигенсвязывающей области с антигеном.

В некоторых аспектах предлагаются рекомбинантные антигенсвязывающие белки, которые связывают белок с-Гпъ или с-1т8 человека. В данном контексте рекомбинантный белок - это белок, полученный рекомбинантными методами, т.е. при экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты, как описано в настоящем документе. Методы и процедуры получения рекомбинантных белков хорошо известны в данной области.

Термин антитело относится к интактному иммуноглобулину любого изотипа или его фрагменту, который способен конкурировать с интактным антителом за специфическое связывание антигенамишени, и включает, например, химерные, гуманизированные антитела, полностью человеческие и биспецифические антитела. Само по себе антитело - это вид антигенсвязывающего белка. Интактное антитело обычно содержит хотя бы две полноразмерных тяжелых цепи и две полноразмерных легких цепи,

- 10 023555 но в некоторых случаях может содержать меньше цепей, например антитела, которые в природе обнаруживаются у камелидов, которые могут содержать только тяжелые цепи. Антитела могут происходить из одного источника, но могут быть и химерными, то есть, разные части антитела могут происходить из двух разных антител, как описано ниже. Антигенсвязывающие белки, антитела или связывающие фрагменты могут получаться в гибридомах по технологии рекомбинантной ДНК или в результате ферментативного или химического расщепления интактных антител. Если не указано иначе, термин антитело включает, помимо антител, содержащих две полноразмерных тяжелых цепи и две полноразмерных легких цепи, также их производные, варианты, фрагменты и мутации, примеры которых приведены ниже.

Термин легкая цепь подразумевает полноразмерную легкую цепь или ее фрагменты, имеющие достаточную последовательность вариабельной области для обеспечения специфичности связывания. В полноразмерную легкую цепь входит домен вариабельной области У_ъ и домен константной области Сь Домен вариабельной области легкой цепи расположен на амино-конце полипептида. К легким цепям относятся каппа-цепи и лямбда-цепи.

Термин тяжелая цепь подразумевает полноразмерную тяжелую цепь или ее фрагменты, имеющие достаточную последовательность вариабельной области для обеспечения специфичности связывания. В полноразмерную тяжелую цепь входит домен вариабельной области У_н и три домена константной области С_н1, С_н2 и С_н3. Домен У_н расположен на амино-конце полипептида, а домены С_н - на карбоксильном конце, причем С_н3 расположен наиболее близко к карбоксильному концу полипептида. Тяжелые цепи могут относиться к любому изотипу, в том числе 1§О (включая подтипы 1дО1, 1дО2, 1§О3 и 1§О4), 1§А (включая подтипы 1§А1 и 1§А2), 1дМ и 1§Е.

Термин иммунологически функциональный фрагмент (или просто фрагмент) антитела или цепи иммуноглобулина (тяжелой или легкой цепи) в данном документе означает антигенсвязывающий белок, содержащий часть (независимо от того, как эта часть была получена или синтезирована) антитела, в котором недостает хотя бы некоторых из аминокислот, присутствующих в полноразмерной цепи, но который способен специфически связывать антиген. Такие фрагменты биологически активны, так как они специфически связывают антиген-мишени и способны конкурировать с другими антигенсвязывающими белками, включая интактные антитела, за специфическое связывание с определенным эпитопом. В одном аспекте в таком фрагменте сохраняется хотя бы один СОК, присутствующий в полноразмерной легкой или тяжелой цепи, и в некоторых осуществлениях в нем находится одна тяжелая цепь и/или легкая цепь либо их часть. Указанные биологически активные фрагменты могут быть получены методами рекомбинантной ДНК или в результате ферментативного или химического расщепления антигенсвязывающих белков, в том числе интактных антител. Иммунологически функциональные фрагменты иммуноглобулина подразумевают, без ограничения, РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')₂, Ρν, доменные антитела и одноцепочечные антитела, и могут иметь происхождение из любого млекопитающего, в том числе, но без ограничения человека, мыши, крысы, камелида или кролика. Далее предполагается, что функциональная часть антигенсвязывающих белков, предлагаемых здесь, например, один или более СЭК. может быть ковалентно связана со вторым белком или с малой молекулой для получения лечебного средства, направленного на определенную мишень в организме, имеющего двойное терапевтическое действие или длительное время полужизни в сыворотке.

Фрагмент РаЬ состоит из одной легкой цепи и вариабельных и С_н1 областей одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы РаЬ неспособна образовать дисульфидную связь с другой молекулой тяжелой цепи.

Область Рс содержит два фрагмента тяжелой цепи, состоящих из доменов С_н1 и С_н2 антитела. Оба фрагмента тяжелой цепи удерживаются вместе двумя или более дисульфидными связями и гидрофобными взаимодействиями доменов Сн3.

Фрагмент РаЬ' состоит из одной легкой цепи и части одной тяжелой цепи, которая содержит домен У_н и домен С_н1, а также участок между доменами С_н1 и С_н2, причем между двумя тяжелыми цепями двух фрагментов РаЬ' может образоваться межцепная дисульфидная связь с формированием молекул Р(аЬ')2.

Фрагмент Р(аЬ')₂ содержит две легких цепи и две тяжелых цепи, включающих часть константной области между доменами С_н1 и С_н2, причем между двумя тяжелыми цепями образуется межцепная дисульфидная связь. Таким образом, фрагмент Р(аЬ')2 состоит из двух фрагментов РаЬ', которые удерживаются за счет дисульфидной связи между двумя тяжелыми цепями.

Область Ρν содержит вариабельные области как из тяжелой, так и легкой цепи, но не содержит константных областей.

Одноцепочечные антитела - молекулы Ρν, в которых вариабельные области тяжелой и легкой цепи были связаны гибким линкером с образованием единой полипептидной цепи, которая образует антигенсвязывающую область. Одноцепочечные антитела подробно обсуждаются в опубликованной международной патентной заявке № \УО 88/01649 и в патентах США № 4946778 и 5260203, раскрытые объекты которых включены в данный документ посредством ссылки.

Доменное антитело - иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина, содержащий только вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи. В некоторых

- 11 023555 случаях два или более областей Ун ковалентно связаны с пептидным линкером, в результате чего получаются двухвалентные доменные антитела. Две области Υ_Η двухвалентного доменного антитела могут иметь в качестве мишени один и тот же антиген или разные антигены.

Двухвалентный антигенсвязывающий белок или двухвалентное антитело имеет в своем составе два антигенсвязывающих участка. В некоторых случаях два указанных сайта связывания характеризуются специфичностью к тому же самому антигену. Двухвалентные антигенсвязывающие белки и двухвалентные антитела могут быть биспецифическими, см. ниже.

Мультиспецифический антигенсвязывающий белок или мультиспецифическое антитело - это объект, имеющий в качестве мишени более одного антигена или эпитопа.

Биспецифический, имеющий двойную специфичность или бифункциональный антигенсвязывающий белок или антитело - это соответственно гибридный антигенсвязывающий белок или антитело, имеющее в своем составе два разных участка связывания антигенов. Биспецифические антигенсвязывающие белки и антитела - это один из видов мультиспецифических антигенсвязывающих белков или мультиспецифических антител, которые могут быть получены с помощью целого ряда способов, в том числе, но без ограничения, слиянием гибридом или связыванием фрагментов РаЬ', см., например, 8опдδίνίΗί апб ЬасЬтапи, 1990, С1ш. Ехр. 1ттипо1. 79:315-321; Ко81е1иу е! а1., 1992, 1. 1ттипо1. 1_48:15471553. Два участка связывания биспецифического антигенсвязывающего белка или антитела взаимодействуют с двумя разными эпитопами, которые могут располагаться на одной или разных мишенях.

Термин нейтрализующий антигенсвязывающий белок или нейтрализующее антитело относится соответственно к антигенсвязывающему белку или антителу, которое связывается с лигандом, препятствует связыванию лиганда с партнером и прерывает биологический отклик, который в ином случае появился бы в результате связывания лиганда с партнером. При оценке связывания и специфичности антигенсвязывающего белка, например, антитела или его иммунологически функционального фрагмента, считают, что антитело или фрагмент существенно ингибирует связывание лиганда со своим партнером в том случае, если избыток антител снижает количество партнера, связанного с лигандом, хотя бы на приблизительно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 97, 99% или более (по данным анализа конкурентного связывания ίη νίΙΐΌ). В случае антигенсвязывающих белков, связывающих с-1ш8, такая нейтрализующая молекула будет снижать способность с-1ш8 связываться с КСФ-1. В некоторых осуществлениях нейтрализующий антигенсвязывающий белок ингибирует способность с-1ш8 связывать 1Ь-34. В других осуществлениях нейтрализующий антигенсвязывающий белок ингибирует способность с-Гпъ связывать КСФ-1 и Ш-34.

Термин конкурировать в контексте антигенсвязывающих белков (например, нейтрализующих антигенсвязывающих белков или нейтрализующих антител), конкурирующих за один и тот же эпитоп, означает конкуренцию между антигенсвязывающими белками, определяемую в анализе, в котором испытуемый антигенсвязывающий белок (например, антитело или его иммунологически функциональный фрагмент) блокирует или ингибирует специфическое связывание эталонного антигенсвязывающего белка (например, лиганда или эталонного антитела) с обычным антигеном (например, с-Гпъ или его фрагментом). Существует большое число типов испытаний на конкурентное связывание, например, прямой и косвенный твердофазный радиоиммуноанализ (РИА), прямой и косвенный твердофазный иммуноферментный анализ (ТИФА), конкурентный анализ сэндвич-методом (см., например, 81аНП с соавт., 1983, МеОюШ ίη Еп/уто1оду 9:242-253); твердофазный прямой ИФА с биотин-авидин взаимодействием (см., например, Кпк1апб с соавт., 1986, I 1ттипо1. 137:3614-3619); твердофазный прямой анализ с использованием метки, твердофазный прямой анализ с использованием метки сэндвич-методом (см., например, Наг1оте апб Ьапе, 1988, Антитела, А ЬаЬогаФгу Мапиа1, Со1б 8ргшд НагЬог Рге88); твердофазный прямой РИА с использованием метки 1-125 (см., например, Моге1 с соавт., 1988, Мо1ес. 1ттипо1. 25:7-15); твердофазный прямой ИФА с биотин-авидин взаимодействием (см., например, Сйеипд, с соавт., 1990, Упо1оду 176:546-552); и прямой РИА с меченым антигеном (МоМепйаиег с соавт., 1990, 8сапб. 1. 1ттипо1. 32:77-82). Как правило, в таком анализе используют очищенный антиген, закрепленный на твердой поверхности либо клетки, содержащий один из компонентов, немеченый испытуемый антигенсвязывающий белок и меченый эталонный антигенсвязывающий белок. Конкурентное ингибирование измеряют по количеству метки, связанной с твердой поверхностью или клетками в присутствии испытуемого антигенсвязывающего белка. Как правило, испытуемый антигенсвязывающий белок присутствует в избытке. К антигенсвязывающим белкам, которые идентифицируют на основе конкурентного анализа (конкурирующих антигенсвязывающих белков), относятся антигенсвязывающие белки, взаимодействующие с тем же эпитопом, что эталонные антигенсвязывающие белки, а также антигенсвязывающие белки, взаимодействующие с соседним эпитопом, расположенным достаточно близко к эпитопу, взаимодействующему с эталонным антигенсвязывающим белком, для создания стерических затруднений. Дополнительная информация, касающаяся способов определения конкурентного связывания, имеется в примерах, приведенных в данном документе. Как правило, если конкурирующий антигенсвязывающий белок присутствует в избытке, он ингибирует специфическое связывание эталонного антигенсвязывающего белка с общим антигеном по крайней мере на 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 или 75%. В некоторых случаях связывание ингибируется по крайней мере на 80, 85, 90, 95 или 97% или более.

- 12 023555

Термин антиген относится к молекуле или части молекулы, способной селективно связываться с селективным агентом, таким как антигенсвязывающий белок (в том числе, например, антитело или его иммунологический функциональный фрагмент), а также способной кроме того вырабатывать в организме животного антитела для взаимодействия с данным антигеном. Антиген может иметь один или более эпитоп, способный взаимодействовать с различными антигенсвязывающими белками, например, антителами.

Термин эпитоп относится к части молекулы, которая взаимодействует с антигенсвязывающим белком (например, антителом). Данный термин также подразумевает все детерминанты, способные к специфическому связыванию с антигенсвязывающим белком, например, с антителом или Т-клеточным рецептором. Эпитоп может быть непрерывным или не непрерывным (например, в полипептиде аминокислотные остатки, не прилегающие друг к другу в полипептидной последовательности, в пределах молекулы связываются антигенсвязывающим белком). В определенных осуществлениях эпитопы могут быть миметиками, а именно, они представляют собой трехмерную структуру, аналогичную эпитопу, который служит для генерирования антигенсвязывающего белка, но при этом не содержит или содержит только часть аминокислотных остатков, присутствующих в самом указанном эпитопе, генерирующем антигенсвязывающий белок. Как правило, эпитопы располагаются на белках, но в некоторых случаях они могут располагаться на молекулах других типов, таких как нуклеиновые кислоты. К детерминантам эпитопов относятся химически активные поверхностные группы молекул, такие как аминокислоты, боковые цепи сахаров, фосфорильные или сульфонильные группы, они могут иметь специфические характеристики трехмерной структуры и/или специфические характеристики заряда. В общем случае антитела, специфические для определенного антигена-мишени, будет предпочтительно узнавать эпитоп антигена-мишени в сложной смеси белков и/или макромолекул.

Термин идентичность относится к взаимосвязи последовательностей двух или более молекул полипептидов или двух или более молекул нуклеиновых кислот, которая определяется при выравнивании и сравнении последовательностей. Процент идентичности означает процентную долю одинаковых аминокислотных остатков или нуклеотидов в сравниваемых молекулах и рассчитывается на основе размера минимальной из сравниваемых молекул. Для указанных расчетов разрывы, обнаруживаемые при выравнивании (если таковые имеются), следует учитывать с помощью определенной математической модели или компьютерной программы (т.е. алгоритма). К методам, пригодным для расчета идентичности сравниваемых нуклеиновых кислот или полипептидов, относятся способы, описанные в Сотри1айопа1 Мо1еси1аг Вю1оду (Ье8к, А. М., ред.), 1988, Нью-Йорк: ОхГогб Итуегейу Рге88; Вюсотрийпд 1пТогтайс8 апб Оепоте Рго)ес18, (Бтйй, Ό. ред.), 1993, Нью-Йорк: Асабетю Рге88; Сотри1ег Апа1у818 оГ Бесцюпсе Иа1а, Рай I (Огййп, А. М., апб СпЛит Н. О, еб8.), 1994, №\ν 1ег8еу: Нитапа Рге88; уоп Неш)е, О, 1987, Бесцюпсе Апа1у818 ш Мо1еси1аг Вю1оду, Нью-Йорк: Асабетю Рге88; Бесцюпсе Апа1у818 Рптег, (ОпЪ8коу, М. апб Неуегеих, I, еб8.), 1991, Нью-Йорк: М. БЮскЮп Рге88; апб СагШо с соавт., 1988, Б1АМТ Аррйеб Ма1й 48:1073.

При расчете процента идентичности сравниваемые последовательности выравнивают таким образом, чтобы получить между ними максимальное соответствие. Для определения процента идентичности применяют компьютерную программу - пакет ОСО, содержащий ОАР (Неуегеих с соавт., 1984, №ю1. Ааб Ке8. 12:387; Сепейс8 Сотри1ег Огоир, Висконсинский университет, Мэдисон, Висконсин). Компьютерный алгоритм ОАР служит для выравнивания и сопоставления двух полипептидов или полинуклеотидов, для которых нужно определить процент идентичности последовательностей. Последовательности выравнивают для получения оптимального совпадения соответствующих аминокислот или нуклеотидов (ша1сйеб 8рап в соответствии с алгоритмом). В сочетании с алгоритмом применяются понятия штрафа за открытие делеции (дар орешпд репайу) (который рассчитывают как взятую трижды среднюю диагональ, где средняя диагональ - средняя величина диагонали используемой матрицы сравнения; диагональ - балл или число, присваиваемое каждому идеальному соответствию аминокислот определенной матрицей сравнения) и штраф на продолжение делеции (дар е\1еп8юп репайу) (обычно 1/10 от штрафа за открытие делеции), а также матрица сравнения, такая как РАМ 250 или ВЬОБиМ 62. В определенных осуществлениях алгоритм использует стандартную матрицу сравнения (матрица сравнения РАМ 250: см., ИауйоГГ с соавт., 1978, АЙа8 оГ Рго1еш Бесцюпсе апб Б1гис1иге 5:345-352; матрица сравнения ВЬОБИМ 62: см. НеЩкоГГ с соавт., 1992, Ргос. Νηΐ1. Асаб. Бск ИБА 89:10915-10919).

Рекомендуемые параметры для определения процента идентичности полипептидов или последовательностей нуклеотидов с помощью программы ОАР приведены ниже:

алгоритм: №еб1етап с соавт., 1970, 1. Мо1. Вю1. 48:443-453; матрица сравнения: ВЬОБИМ 62 из НеЩкоГГ с соавт., 1992, 8ирга; штраф на делецию: 12 (отсутствие штрафа для концевых делеции); штраф на длину делеции: 4;

порог соответствия: 0.

Некоторые схемы выравнивания двух аминокислотных последовательностей могут привести к совпадению только короткой области двух указанных последовательностей, при этом данный небольшой участок может иметь очень высокую степень идентичности последовательностей, несмотря на то, что две

- 13 023555 полноразмерные последовательности существенно не взаимосвязаны. Соответственно, выбранную программу выравнивания (программу ОЛР) можно настроить для сопоставления участков длиной хотя бы 50 смежных аминокислот целевого полипептида.

В данном документе существенно чистый означает, что описанный вид молекул является преобладающим из присутствующих, то есть, в молярном отношении этот компонент присутствует в большем количестве, чем любой другой индивидуальный компонент той же смеси. В определенных осуществлениях существенно чистая молекула - это композиция, где на долю целевого компонента приходится по крайней мере 50% (в молярном отношении) всех макромолекулярных компонентов. В других осуществлениях существенно чистая композиция будет содержать по крайней мере 80, 85, 90, 95 или 99% всех макромолекулярных компонентов данной композиции. В других осуществлениях целевой компонент очищают до существенной однородности, при которой загрязняющие примеси не могут быть обнаружены в композиции обычными методами и таким образом композиция состоит из одного обнаруживаемого макромолекулярного компонента.

Термин лечение обозначает любой признак успеха в терапии или уменьшение симптомов травмы, патологии или состояния, включая и объективные, и субъективные параметры, такие как ослабление; ремиссия; уменьшение симптомов или достижение лучшей переносимости травмы, патологии или состояния пациентом; снижение темпов деградации или прогрессирования заболевания; достижение менее разрушительного финального состояния деградации; улучшение физического качества жизни или психического состояния пациента. Лечение либо ослабление симптомов может быть основано на объективных или субъективных параметрах; в том числе на результатах физикальное обследования, психоневрологического обследования и/или психиатрической оценки. Например, некоторые приведенные в настоящем документе способы пригодны для успешного лечения рака за счет снижения числа случаев рака, достижения ремиссии при раке и/или ослабления симптома, связанного с онкологическим или воспалительным заболеванием.

Эффективное количество в общем случае относится к количеству, достаточному для снижения тяжести и/или частоты симптомов, устранения симптомов и/или первопричины, предотвращения появления симптомов и/или их первопричины, и/или улучшения или исправления нарушений, являющихся следствием или сопутствующих онкологическому заболеванию. В некоторых осуществлениях эффективное количество - это терапевтически эффективное количество или профилактически эффективное количество. Терапевтически эффективное количество - это количество, достаточное для излечения состояния болезни (напр. онкологического заболевания) или симптомов, в частности, состояния или симптомов, сопутствующих состоянию болезни, или иным образом предотвратить, замедлить, задержать или направить в обратную сторону прогрессирование состояния болезни или другого нежелательного симптома, связанного с заболеванием любым образом. Профилактически эффективное количество - это количество фармацевтической композиции, которое, при введении в организм объекта, окажет желаемое профилактическое действие, например, предотвращение или задержка начала (или повторного появления) онкологического заболевания, или снижение вероятности начала (или повторного появления) онкологического заболевания или его симптомов. Полное терапевтическое или профилактическое действие не должно обязательно проявляться при введении одной дозы, а может проявиться после введении ряда доз. Таким образом, терапевтически или профилактически эффективное количество можно вводить однократно или в виде нескольких доз.

Аминокислота соответствует обычному значению в данной области. Двадцать природных аминокислот и их обозначения соответствуют обычно используемым. См. 1ттипо1оду-А 8уп1йе818. издание 2, (Е.8. Оо1иЬ апб Ό.Κ Огееп, ред.), 81паиег А88оаа1е8: 8ипбег1апб, Ма88. (1991), которые включены в данный документ посредством ссылки для любых целей. Пригодными компонентами полипептидов могут также быть стереоизомеры (например, Ό-аминокислоты) двадцати обычных аминокислот, неприродные аминокислоты, такие как альфа,альфа-дизамещенные аминокислоты, №алкилзамещенные аминокислоты и другие необычные аминокислоты, которые также входят в понятие аминокислоты. Примерами необычных аминокислот являются: 4-гидроксипролин, гамма-карбоксиглутамат, эпсилон-НИНтриметиллизин, эпсилон-Ы-ацетиллизин, О-фосфосерин, №ацетилсерин, №формилметионин, 3метилгистидин, 5-гидроксилизин, сигма-И-метиларгинин и другие аналогичные аминокислоты и иминокислоты (например, 4-гидроксипролин). В настоящем документе при обозначении полипептидов направление влево - направление к амино-концу, а направление вправо - направление к карбоксильному концу, что соответствует договоренности и стандартному употреблению.

Общий обзор.

В настоящем документе предложены антигенсвязывающие белки, которые связывают белок с-Гт8, в том числе с-Гт8 человека (йс-Гт8) белок. Указанные антигенсвязывающие белки представляют собой полипептиды, в которые встроены и/или к которым присоединены один или более определяющий комплементарность участок (СЭР), как описано в настоящем документе. В некоторых антигенсвязывающих белках СЭР встроены в каркасную область, которая ориентирует СЭР таким образом, что проявляются собственно антигенсвязывающие свойства СЭР. В общем случае предложенные антигенсвязывающие белки могут нарушать, блокировать, уменьшать или модулировать взаимодействие между КСФ-1 и с- 14 023555 £т8.

Определенные антигенсвязывающие белки, описанные в настоящем документе, являются антителами или образуются из антител. В определенных осуществлениях полипептидное строение антигенсвязывающих белков основывается на антителах, в том числе, но без ограничения, моноклональных антителах, биспецифических антителах, мини-антителах, доменных антителах, синтетических антителах (называемых здесь в некоторых случаях миметики антител), химерных антителах, гуманизированных антителах, человеческих антителах, слитых антителах (называемых здесь в некоторых случаях конъюгатами антител) и их фрагментов. Различные структуры описаны далее в настоящем документе.

Было показано, что антигенсвязывающие белки, предложенные в настоящем документе, связываются с внеклеточным доменом с-Гпъ, в частности, с-Гпъ человека. Как далее описано в приведенных примерах, испытания некоторых антигенсвязывающих белков показали их способность связываться с эпитопами, отличными от эпитопов которые связывают ряд других антител к с-Гпъ. Предложенные антигенсвязывающие белки конкурируют с КСФ-1 и таким образом препятствуют связыванию КСФ-1 с его рецептором. В определенных осуществлениях антигенсвязывающие белки ингибируют связывание 1Ь-34 и с-Гпъ. В других осуществлениях антигенсвязывающие белки ингибируют способность с-Гпъ связывать как КСФ-1, так и 1Ь-34. В результате антигенсвязывающие белки, предложенные в настоящем документе, способны ингибировать активность сТш8. Конкретно, антигенсвязывающие белки, которые связываются с указанными эпитопами, могут проявлять один или более из следующих видов активности: помимо прочего, ингибирование аутофосфорилирования сТл!; индукции сигнальных путей трансдукции сПпх индуцированного с-Рпк роста клеток, хемотаксиса моноцитов, накопления опухольассоциированных макрофагов в опухоли или в строме опухоли, продукцию опухоль-промотирующих факторов и других физиологических эффектов, вызванных связыванием с-Тп! с КСФ-1. Раскрытые в настоящем документе антигенсвязывающие белки характеризуются широким спектром полезных функций. Например, некоторые антигенсвязывающие белки могут служить для анализа специфического связывания, аффинной очистки сТю!, в частности, НсТпъ или его лигандов и для скрининговых испытаний с целью идентификации антагонистов активности с-Тп!. Некоторые из антигенсвязывающих белков можно применять для ингибирования связывания КСФ-1 и с-Тп! или ингибирования аутофосфорилирования сТп!.

Антигенсвязывающие белки можно применять для различных видов лечения, что поясняется в настоящем документе. Например, некоторые антигенсвязывающие белки, связывающие с-Тп!, пригодны для лечения связанных с с-Тп! состояний, например, для снижения хемотаксиса моноцитов в организме, ингибирования миграции моноцитов в опухоли, ингибирования накопления опухоль-ассоциированных макрофагов в опухоли или ингибирования ангиогенеза, что ниже объясняется более подробно. В определенных осуществлениях антигенсвязывающие белки ингибируют способность ТАМ промотировать рост опухоли, прогрессирование и/или метастазирование. Кроме того, в тех случаях когда опухолевые клетки сами экспрессируют и используют с-Тп!, связывание антител с с-Тп! может ингибировать их рост/существование. К прочим областям применения антигенсвязывающих белков относится, например, диагностика заболеваний или состояний, связанных с с-Тп! и скрининговые пробы для определения присутствия или отсутствия с-Тп!. Некоторые из описанных здесь антигенсвязывающих белков пригодны для лечения последствий, симптомов и/или патологий, связанных с активностью с-Тп!. К таковым относятся, без ограничения, различные типы онкологических и воспалительных заболеваний, а также кахексия на фоне онкологического заболевания. В некоторых осуществлениях антигенсвязывающие белки могут служить для лечения костных патологий.

С-Тп!.

Колониестимулирующий фактор 1 (КСФ-1) способствует выживанию, пролиферации и дифференциации поколений мононуклеарных фагоцитов. КСФ-1 функционирует за счет связывания с рецептором с-Тп! на поверхности клетки, что приводит к аутофосфорилированию киназой рецептора с-Тп! с последующим каскадом внутриклеточных сигналов.

Термины с-Гпъ, рецептор с-Гпъ, с-Гпъ человека и рецептор с-Гпъ человека относятся к рецептору на поверхности клетки, который связывается с лигандом, в том числе, но без ограничения, КСФ1, и таким образом инициирует путь трансдукции сигнала в клетке. В некоторых осуществлениях рецептор может связывать 1Ь-34, либо одновременно КСФ-1 и 1Ь-34. Предложенные здесь антигенсвязывающие белки связывают с-Тп!, в частности, с-Тп! человека. Пример внеклеточного домена аминокислотной последовательности с-Рпк человека приведен в 8Е0 ГО N0: 1. Как указано ниже, белки с-Гпъ могут также содержать фрагменты. В настоящем документе термины взаимозаменяемы и означают рецептор, в частности, человеческий рецептор, специфически связывающийся с КСФ-1.

Термин рецептор с-Гпъ человека (Н-сГпъ) при использовании в настоящем документе подразумевает также природные аллели, в том числе мутации А2458, У279М и Н362К. Термин с-Гпъ относится также к посттрансляционным модификациям аминокислотной последовательности с-Тп!. Например, внеклеточный домен (ЕСГО) с-Гпъ человека (остатки 20-512 рецептора) содержит 11 возможных Νсвязанных позиций гликозилирования в последовательности. Таким образом, антигенсвязывающие белки могут связывать или генерироваться из белков, гликозилированных в одно или несколько из указанных

- 15 023555 положений.

Положительное регулирование пути трансдукции сигнала с-Гпъ участвует в ряде патологических состояний человека, связанных с постоянной активацией тканевых макрофагов. Повышение продукции КСФ-1 также связано с накоплением макрофагов в тканях, проявляющимся при различных воспалительных заболеваниях, например, при воспалительной болезни кишечника. Помимо этого, рост нескольких типов опухолей связан с чрезмерной экспрессией КСФ-1 и рецептора с-Гпъ в раковых клетках и/или строме опухоли.

Антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гпъ-рецептор.

Предлагается ряд селективно связывающихся агентов, способных регулировать активность с-Гпъ. Такие агенты включают, например, антигенсвязывающие белки, содержащие антигенсвязывающий домен (например, одноцепочечные антитела, доменные антитела, компоненты иммуноадгкзии и полипептиды с антигенсвязывающей областью) и специфически взаимодействующие с полипептидом с-Гпъ. в частности, с-Гпъ человека. Некоторые из таких агентов, например, способны ингибировать связывание КСФ-1 и с-Гпъ и тем самым ингибировать, нарушать или модулировать один или более вид активности, связанный с сигнальным путем с-Гпъ. В определенных осуществлениях антигенсвязывающие белки можно применять для ингибирования связывания 1Ь-34 с с-Гпъ. В некоторых осуществлениях антигенсвязывающие белки нарушают способность с-Гпъ связывать как КСФ-1, так и 1Ь-34.

В общем случае антигенсвязывающие белки, предложенные в настоящем документе, обычно содержат один или более СГОВ, как здесь описано (например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6). В некоторых случаях антигенсвязывающий белок содержит (а) полипептидную структуру и (Ь) один или более СОК, который внедряется в и/или объединяется с полипептидной структурой. Полипептидная структура может принимать ряд различных форм. Например, она может представлять собой или содержать каркас природного антитела или его фрагмент или вариант, или может быть полностью синтетическим по своей природе. Ниже приведены примеры различных полипептидных структур.

В определенных осуществлениях полипептидная структура антигенсвязывающих белков представляет собой антитело или образуется из антитела, в том числе, но без ограничения, моноклональное антитело, биспецифическое антитело, мини-антитело, доменное антитело, синтетическое антитело (иногда называемое в настоящем документе миметиком антитела), химерное антитело, гуманизированное антитело, слитые антитела (иногда называемые в настоящем документе конъюгатами антител), а также части или фрагменты каждого из них. В некоторых случаях антигенсвязывающий белок - это иммунологический фрагмент антитела (например, РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')₂ или ксРу). Различные структуры далее определены и описаны в настоящем документе.

Определенные антигенсвязывающие белки, предложенные в настоящем документе, специфически связываются с человеческим с-Гпъ. В отдельном осуществлении антигенсвязывающий белок специфически связывается с человеческим белком с-Ттк, имеющим аминокислотную последовательность §ЕЦ ГО N0: 1.

В тех осуществлениях, где антигенсвязывающий белок служит для терапевтических целей, антигенсвязывающий белок может ингибировать, нарушать или модулировать один или более вид биологической активности с-Гпъ. Считается, что антигенсвязывающий белок специфически связывает и/или существенно ингибирует связывание с-Гпъ человека с КСФ-1 в том случае, если избыток антитела снижает количество с-Гпъ человека, связанного с КСФ-1 (или наоборот) хотя бы приблизительно на 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 97, 99% или более (по данным анализа конкурентного связывания ίη νίΐτο). С-Гпъ оказывает биологическое действие разных видов, которое может быть определено разными методами анализа в различных типах клеток; примеры таких анализов приведены в настоящем документе.

Строение природных антител.

Некоторые из предложенных антигенсвязывающих белков имеют строение, характерное для природных антител. Структурные единицы таких антител обычно содержат один или более тетрамер, состоящий из двух одинаковых пар одинаковых полипептидных цепей, хотя в некоторых видах млекопитающих продуцируются также антитела, имеющие только тяжелую цепь. В типовом антителе каждая пара состоит из одной полноразмерной легкой цепи (в определенных осуществлениях около 25 кДа) и одной полноразмерной тяжелой цепи (в определенных осуществлениях около 50-70 кДа). Каждая индивидуальная иммуноглобулиновая цепь состоит из нескольких иммуноглобулиновых доменов, каждый из которых содержит приблизительно 90-110 аминокислот и имеет характерную картину укладки. Указанные домены являются основными единицами, из которых состоят полипептиды антител. Аминоконцевая часть каждой цепи обычно включает вариабельный домен, ответственный за узнавания антигена. Карбокси-концевая часть более эволюционно консервативна, чем противоположный конец цепи, и называется константной областью или С-областью. Человеческие легкие цепи обычно подразделяются на каппа- и лямбда-легкие цепи, и каждая из них содержит один вариабельный домен и один константный домен. Тяжелые цепи обычно подразделяют на цепи мю, дельта, гамма, альфа и эпсилон, что определяет следующие изотипы антител: соответственно ί§Μ, ί§Ό, 1§С, 1дА и 1§Е. Существует несколько подтипов ί§Ο, в том числе, но без ограничения, ί§Ο1, ί§Ο2, 1дС3 и ί§Ο4. К подтипам ί§Μ относятся 1дМ1 и 1дМ2. Подтипы ί§Α - ί§Α1 и ί§Α2. В организме человека изотипы ί§Α и ί§Ό содержат четыре тяжелых

- 16 023555 цепи и четыре легких цепи; изотипы 1§С и 1дЕ содержат две тяжелых цепи и две легких цепи; а изотип 1дМ содержит пять тяжелых цепей и пять легких цепей. С-область тяжелой цепи обычно включает один или более домен, ответственный за эффекторную функцию. Количество доменов константной области тяжелой цепи зависит от изотипа. Тяжелые цепи 1§С, например, содержат по три домена С-области, называемые С_Н1, С_Н2 и С_Н3. Предлагаемые антитела могут относиться к любому из указанных изотипов и подтипов. В определенных осуществлениях антитела с-Гт8 относятся к подтипам 1дС1, 1дС2 или 1дС4.

В полноразмерных легких и тяжелых цепях вариабельные и константные области объединяются с помощью участка 1, состоящего приблизительно из двенадцати или более аминокислот, при этом тяжелая цепь также имеет участок Ό, содержащий еще около десяти аминокислот. См., например, Рипйатеп!а1 1ттипо1оду, 2-е изд., гл. 7 (Раи1, ред.) 1989, Нью-Йорк: Кауеп Рге88 (полностью включен в данный документ посредством ссылки для любых целей). Вариабельные области каждой пары легкая/тяжелая цепь обычно образуют антигенсвязывающую область.

Например, константный домен тяжелой цепи 1дС2 типового моноклонального антитела с-Гт8 имеет следующую аминокислотную последовательность:

Л5ТКС|Р8\'РРЬЛРС8Е-8Т£Е8ТЛЛЬССЬ\'КХ)УРРЕР\'Т\'8\\'Ъ(8СЛЕТ5С\'НТР

ΡΑνΕΡ88ΟΕΥ8Ε88νντνΡ88ΝΡΟΤ0ΙΎΤεΝνΠΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΤνΕΚΚ0ΰνΕΕΡΡΕΡΑ

ΡΡνΑΟΡ8νΡΕΡΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙ8ΚΤΡΕνΤΕνν\Όν8ΗΕΟΡΕνΓ)ΡΝ\\Ύ’νθΩ\ΈνΗΝΑΚΤ ΚΡΡΕΕφΡΝδΤΡΚν V 8 \Ч.Т\УНОГА\Т.ХОКЕУКСК\' 8ΝΚΟΤ.Ρ ΑΡΙΕΚΤΙ ЗКТКОЦРКЕРф νΥΤΕΡΡ8ΚΕΕΜΤΚΝφν8ΕΤΕΕνΚΟΡΥΡ8ΟΙΑνΕ\νΕ8ΝΟφΡΕΝΝΥΚΤΓΡΡΜΕΟ8ϋθ8ΡΡ ΕΥ8ΚΤΤ\·ΌΚ8Κ\νθθαΝνΡ8€8νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤΟΚ8Ε8Ε8ΡΟΚ* (8ЕЦ ΙΌ N0:2; звездочкой обозначен стоп-кодон).

Например, константный домен каппа-легкой цепи типового моноклонального антитела имеет следующую аминокислотную последовательность:

ΚΤνΑΑΡδνΡΙΡΡΡδΠΕρΕΚδΟΤΑδννεΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚνφλνκνΟΝΑΕρδΟΝδ

ΟΕδνΤΕφΠδΚΟδΤΥδΕδδΤΕΤΕδΚΑϋΥΕΚΗΚνΥΑΓΕνΤΗΟΟΕδδΡνΤΚδΡΝΚΟΕΰ* (8ЕЦ ΙΌ N0: 3; звездочкой обозначен стоп-кодон).

Вариабельные области иммуноглобулиновых цепей обычно имеют одинаковое общее строение, куда входят сравнительно консервативные каркасные области (РК), объединенные тремя гипервариабельными областями, которые чаще называют определяющими комплементарность участками (СОК). Участки СОК двух цепей от каждой упомянутой выше пары тяжелая цепь/легкая цепь обычно выровнены по каркасным областям, образуя структуру, которая специфически связывается со специфическим эпитопом целевого белка (например, с-Гт8). От Ν-конца до С-конца природные вариабельные участки и легкой, и тяжелой цепи, как правило, соответствуют следующему порядку указанных элементов: РК1, СЭК1, РК2, ί'ΌΚ2, РК3, СЭК3 и РК4. Для присваивания номеров аминокислотам, занимающим позиции в каждом из доменов, была разработана система нумерации. Определение данной системы нумерации дано в КаЬа! 8ециепсе8 оГ РгсЯепъ оГ 1ттипо1одюа1 1п1еге81 (1987 и 1991, ΝΙΚ Ве1йе8йа, МО), или С’НоЙна & Ье8к, 1987, 1. Мо1. Вю1. 196:901-917; СНоШа с соавт., 1989, Уинге 342:878-883.

Различные вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, предложенные в настоящем документе, приведены в табл. 2. Каждая из указанных вариабельных областей может быть присоединена к упомянутым выше константным областям тяжелой и легкой цепи, образуя соответственно полную структуру тяжелой и легкой цепи антитела. Далее, сформированные таким образом последовательности тяжелой и легкой цепи комбинируют, получая полную структуру антитела. Следует иметь в виду, что вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, предложенные в настоящем документе, могут также присоединяться и к другим константным доменам, имеющим иные последовательности нежели типовые последовательности, приведенные выше.

Конкретные примеры некоторых полноразмерных легких и тяжелых цепей предлагаемых антител, а также их соответствующие аминокислотные последовательности приведены в табл. 1.

- 17 023555

Таблица 1

Примеры тяжелых и легких цепей

Ссылка	Обозначение	2ΕΟΙΟ НО.	Последовательность аминокислот
Н1109 1Ν1Ο1	Н1	4	ΟνΟίνΟδΟΑΕνίΟίΡΟΑδνκνεΟΚΑδΟΥΤΡΤΑΥΥΜΗνίΜΪΟΑΡΟΟΟΙΕ νΐ/ΜθννΐΝΡΝ5βΟΤΝΥΑΟΚΡΟΘΚνΤΜ1ΉΟΤδΙ5ΤΑΥΜ£ί9ϊ1-Κ300ΤΑν ΥΥΟΑΡΟΟΥδΟΥΕ«.ΟΥΥΥΟΜθνννθαθπντν55Α5ΤΚβΡδνΓΡΙΑΡ05 Κ3Τ3Ε5ΤΑΑί6ΟΐνΚ0ΥΡΡΕΡν™δννΝδ0ΑίΤ5ενΗΤΕΡΑνΐΟ5δαΐ.Υ 31-33νντνΡδδΝΡΟΤαΤΥΤΟΝνθΗΚΡδΝΤΚ\ΏΚΤνΕΒίΟθνΕΟΡΡΟΡΑ ρρνΑΟΡενρυρρκρκοτίΜίδΗΤΡΕνΓενννονδΗΕΚΈναΡΝνΛ'νο 0νΕΥΗΝΑΜΚΡΚΕΕ<ΪΝ5ΤΡΚνν5\1ΤννΗ00ΜΝβΚΕΥΚ0Κν3ΝΚε υΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΤΚ6ΟΡβΕΡθνΥΤΐΡΡ5ΡΕΕΜΤΚΝαν5ίΤ0ΐνΚ6ΡΥΡδ0Ι ΑνΕ\№5Ν6αΡΕΝΝΥΚπΡΡΜ105003ΡΡΙΥεΚΙΤνθΚ5ΚΜ3ΰβΝνΡ5 ΟδνΜΗΕΑΙΗΝΗΥΤΟΚδΙδίδΡεΚ
Н113 1Ν161	Н2	5	ονοίΟΕδΰΡΟίνκΡδΕτίδίτοτνδΟβδνδδΟβΥΥΑδί'/ίΡΟΡΡΟκοι ΕννβΥΙΥΥδβδΤΝΥΝΡδΙ^δΚνΤΙδνΟΤδΚΝΟΡδΙΚΙ^δνΤΑΑΟΤΑνΥΥΟ ΑΑείΑΑτετίΡοεννεοετιντνδδΑδτκεΡδνρρίΑΡΟδίϊδΤδΕδΤΑΑί οοίνκοΥΡΡΕΡντνδνιίΝδΟΑίΤδβνΗΤΡΡΑνιοδδοίΥδίδδνντνΡδ δΝΡ6ΤΟΤΥΤΟΝνθΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΤνΕΚΚθενΕΟΡΡΟΡΑΡΡνΑΟΡ3νΡΙ ΡΡΡΚΡΚΟΤΙΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννονδΡΙΕΟΡΕνΟΡΝν/ΥνοενΕνΗΝΑΚΤΚ ΡΚΕΕΟΡΝδΤΡΚννδνίΤννΗΟΟ\Μ.ΝΟΚΕΥΚΟΚν5ΝΚ61ΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΓ ΚΟαΡΚΕΡανΥΤίΡΡδΚΕΕΜΤΚΝΟνδΙΤΙδίνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕννΕδΝΟαΡ ΕΝΝΥΚπΡΡΜίΟδΟεδΡΡΙΥδΚΙΤνΟΚδΡνΥΟΟεΝνΡδΟδνΜΗΕΑίΗΝ нгтокзсазрек
Н1131 1Ν1Ο1	НЭ	6	ΟνΟίνΟδΟΑΕνΚΚΡεΑδνκνδΰΚΑβεΥΤΡΤΟΥΥΙΗνΥνΚΟΑΡΟΟείΕ^ Μ6«ΙΝΡΜ50ΘΤΝΥΑαΚΡ06ΚνΤΜΤΜ)Τ5Ι3ΤΑΥΜΕ13ΡίΗ300ΤΑνΥΥ ϋΑΚ0Κ(ΜΙΜννΥΥΥΥΥ6Μ0ννΥΟ06πντν83Α3ΤΚΟΡ5νΡΡΙΛΡ05 Η5Τ3Ε3ΤΜ100ΐνΚϋΥΙΞΡΕΡνΤν5'Λ'Ν3ϋΑΙ.130νυΤΓΡΑνΐα356Ι.Υ 5ί$3νντνΡ53ΝΡεταΤΥΤ3ΝνθΗΚΡ3ΝΤΚνΜ<ΤνΕΡΚΰ0νΕ0ΡΡ0ΡΑ ΡΡνΑΘΡενΡΗΡΡΚΡΚΟΤίΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννονΒΗΕΟΡΕνΟΡΝννΥνΟ 0νΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<3ΡΝ3ΤΡΡνν3νΐΤννΗα0νΑ.ΜΟΚΕΥΚΟΚν5ΝΚβ ίΡΑΡΙΕΙίΤΙ3ΚΤΚβΟΡβΕΡανΥΤίΡΡδΡΕΕΜΤΚΝθν31ΤΟΐνΚΟΡΥΡ3Μ ΑνΕννΕ3Μ6αΡΕΗΝΥΚΤΤΡΡΜ105ϋ0δΡΡίΥ5ΚΙΤν0Κ3ΚνΥααεΝνΡ3 Ο3ΥΜΗΕΑΙΗΝΗΥΤΟΚ515ί5ΡΙ3Κ
Н1134 1М1С1	Н4	7	0ν0ίνΕ5ύΕ0νν0ΡεΡ51Βί50ΑΑ3εΡΤΡδ3ΥεΜΗνΑ/Ρ0ΑΡεκείΕ ΥΑ/Ανΐ1Λ/ΥΟ63ΝΚΥΥΑ05νκεΚΡΤΙ5ΡΟΝ3ΚΝΤίΥί0ΜΝ3υϊΑΕ0ΤΑνΥ Υ0Α555νν3ΥΥ6Μ0ννΑΜθπνΐν53Α5ΤΚεΡ$νΡΡΙΑΡε5Ρ3Τ5Εετ ΑΑΐεεΐνΚ0ΥΡΡΕΡνΤΥ3ννΝ50ΑΙ.Τ56νΗΤΡΡΑνΐ.α5$61-Υ5Ι.33ννΤ νΡ33ΝΡεΤΟΤΥΤ0Νν№ΙΚΡ3ΝΤΚνΕ)ΚΤνΕ(ϊΚ00νΕ0ΡΡ0ΡΑΡΡνΑΘΡ 3νΡίΡΡΡΚΡΚΟΤ1ΜΙ3ΚΤΡΕνΤενννθν3ΗΕΟΡΕνθΡΝνΥΥνοενΕνΗΝ ΑΚΤΚΡΚΕΕΟΡΝ3ΤΡΚνν3νΐΤννΗαον«.ΗεΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΟΙΡΑΡ1ΕΚ Τ15ΚΤΚεθΡΡΕΡθνΥπΡΡ8βΕΕΜ·Π<Νθν51ΤεΐνκεΡΥΡ30ΙΑνΕ1№3 Ν00ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜ105063ΡΡΙΥ5ΚΙΤν0Κ5ΡΙίΥ0αβΝνΡ305νΜΗΕ ΑΙ_ΗΝΗΥΤΟΚ5Ι_51_5Ρ6Κ
Н1143 11161	Н5	В	ΕναίνΕ3εθανΚΡε«№5ΰΑΑ3ύΓΠ'3ΝΑΜΜ5ΥΛ'ΡΟΑΡεκθίΈ νννε№Κ3ΐσοα0ΤΤ0ΝΑΑΡνΚεΚΡΉ3Ρ0Ο5ΚΝΤί.ΥΙ.0ΜΝ5Ι.ΚΤΕ0ΪΑ νΥΥεΠ065ίΐννΤεΡΝΥΥΥΥΟΜ0ννΐίθαθπντν55Α5ΤΚ0Ρ3νΡΡΙΑ Ρε3Κ8Τ3Ε3ΤΑΑΙ.ε01.νΚΟΥΡΡΕΡντν3ννΝ5εΑΙ.Τ56νΗΤΡΡΑνΐ.α55 οΐΥΒίεενντνΡδΒΜΡετατγτεΝνοΗΚΡδΝτκνοκπΈΡκεονΕερρ 0ΡΑΡΡνΑεΡ$νΡίΡΡΡΚΡΚ0ΚΜΙ3Κ^Ε\Η0νννον5ΗΕ0ΡΕνθΡΜνν ΥνϋενΕνΗΝΑΚΤΚΡΕΕεαΡΝδΤΡΡννδνίΤννΗΟΟ'ΛΙΝ^ΕΥΚεΚνδ ΝΚεΐΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΤΚε0ΡβΕΡ0’νΎΤίΡΡ2βΕΕΜΤΚ№ν5Ι_Τ0Ι.νΚεΡΥ Ρ5ϋ1ΑνΕννΕ3ΝΘΟΡΕΝΝΥΚπΡΡΜ105ΟΟ5ΡΡίΥ3ΚίΤν0Κ3ΚΑί(Κΐε №/Ρ8ε5νΜΗΕΑΙ.ΗΝΗΥΤαΚ5Ι.8ί5ΡεΚ

- 18 023555

Η1144 1Ν101	Η6	9	ΕναΐνΕ$6ΘβΐνΚΡ665ίΚ13ΟΑΑ53ΡΤΡ5ΝΑννΜ5ν7νΚΟΑΡβΚ61Ε «νβΚΙΚδΚΤΟβΘΤΤΟΥΑΑΡνΚΘΒΓΠδΚΟΟδΚΝΤΙΥΙΟΜΝδΙΚΤΕΟΤΑ тСТТЕУУС5СС\Л1/У¥ОМОУУ«'еОСт/ТУ58А5ТКЗР5УРРИРСЗ К5Т8Е$ТАА1.6С1УК0УРРЕРУТ\/5№153А1-ТЗС7НТРРАШ135СЕУ 5125ννΤνΡ55ΝΡΰΤΟΤΥΤ€ΝΥΟΗΚΡ2ΝΤΚνθΚΤνΕβΚΟθνΕΟΡΡΟΡΑ ΡΡνΑΟΡδνΡίΡΡΡΙΐΡΚΟΤίΜΙδΡΤΡΕνΤΟνννονδΗΕΟΡΕνΟΡΝννΥνΟ 6νΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΡΝ5ΤΡβνν3ΥίΤννΗ0Ο1ΛΙΙΝβΚΕΥΚ0ΚνδΝΚβ ΙΡΑΡ1ΕΚΤ13ΚΤΚβ0ΡΚΕΡ0νΥΤίΡΡ5βΕΕΜΤΚΝ0ν5ίΐα.νΚβΡΥΡε01 ΑνΕΐνΕ5Ν(2ΰΡΡΝΝΥΚΤΤΡΡΜΙϋ50θεΡΡΙΥ5ΚΙΓ/0Κ5Ρίνα(ΧΝνΡ5 οενΜΗΕΑίΗΝΗΥΤοκεί δίδΡΰκ
111 16 1Ν161	Η7	10	ЕУ01УЕ2ССа_УКРСЙаР!£5САА5СЕТР5МА'А/М21г7УР0АРСКС1Е Υ/νβΡΙΚ5ΚΤ0ΰννΤΤϋΥΑΑΡνΚβΡΡΤΙ3Ρ[)Ο5ΚΝΤΙ_ΥΙ_0ΜΝ51ΚΤΕϋΤΑ νΥΥεπϋΙΒΙΤβΓ1ΎΥΥΥΥΥ6Μ0ννΚ6ΟΟΤτνίν53Α3ΤΚΰΡ5νΡΡΙΑΡ СЗКЗТЗЕЗТААЬССШКОУРРЕРУТУЗЙНЗСАЬТЗСУНТРРАУЮЗЗС ΙΥδΙδενντνΡδδΝΡΟΙΌΤΎΤΟΝνΟΗΚΡδΝΤΚνΟΚΤνΕΡΚΟΟνΕΟΡΡΟ ΡΑΡΡνΑ6Ρ3νΡίΡΡΡΚΡΚΟΤΙΜΙ3ΚΤΡΕνΓΰνννθν3ΗΕΟΡΕνθΡΝννΥ νϋθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΒΕΕΟΡΝ3ΤΡΚννδνΐΤννΗαοννΐΝ3ΚΕΥΚΟΚν5Ν ΚΟΡΑΡ1ΕΚΤ15ΚΤΚ0αΡΓΪΕΡ0νΥΤΙΡΡδβΕΕΜΤΚΝανδΙτα.νΚβΡΥΡ 3ΟΙΑνΕ№Ε3ΝΟΟΡΕΗΝΥΚΤΤΡΡΜ1050θδΡΡίΥ3ΚΙΤν0Κ5ΚννθΟβΝ УРЗСЗУМНЕЛШИНУТОКЗЕЗЕЗРСК
Η121Ν101	Н8	11	0\Λ3ΐν0δ€ΑΕνΚΚΡ0Α5νκν5ϋΚΑ5βΥΤΡΤ3Υ0Ι3νννΚ0ΑΡ СОСЬЕР Μβ1Μ3ΑΥΝβΝΤΝΥΑΟΚΐα6βνΤΜΤΤΟΤ5Τ5ΤΑΥΜΕίΚ51Ρ(3001ΑνΥ ΥβΑΚΕδννΡβΕνΡΡΌΥννβαβΤίντνδδΑεΤΚβΡδνΡΡίΑΡβδΚδΤδΕδ ΤΑΑίΟΟΐνΚϋΥΡΡΕΡνΤν3Ι№Ι3βΑίΐ3βνΗΤΡΡΑνία33βΙΥδί55νν ΤνΡ55ΝΡβΤΟ1ΎΤ0Νν0ΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΤΥΕΡΚββνΕ{ΤΡ€ΡΑΡΡνΑβΡ ενρ υ-ρρκρκοΒΜΐερτΡΕντενννβν3ΗΞθΡΕναΡΝννγνοβνΕνΗ η ΑΚΤΚΡΚΕΕΟΡΝδΤΡβννδνΐ’ΓννΗΟϋννίΝΟΚΕΥΚβΚνδυΚΘΙΡΑΡΙΕΚ τιεκτκβΟΡΡΕΡανγτίΡΡδΚΕΕΜΤΚΜανδίτοίνκθργρδοίΑνΕνϊΕδ ΝΟΟΡΕΝΝΥΚΤΓΡΡΜί05Οβ5ΡΡΐΥ5Μ_ΤΥΏΚ5ΡΥ/ααβΝ'νΕ505νΜΗΕ Α!_ΗΝΗΥΤΟΚ3Ι.3Ι.3ΡΟΚ
Η1 26 1Ν161	Η9	12	ЕУСЯ.УЕЗевВкУКРВйЗШ.ЗСААЗеРТРЗЦА’Л'МЗУ/ТНОАРСКСЬЕ νννβΚΙΚ5ΚΤ0ΟΟΠΰΥΑΑΡνΚβΡΕΤΙ5Κ003ΚΝτΐΥΐαΜΝ51ΚΤΕ0ΤΑ νΥΥβΤΤΕΥΥβ3Θβν\νΥΥ0Μ0νν«ϊαβΤΤντν53Α5ΤΚβΡενΡΡΙΑΡβ5 Κ3Τ3Ε3ΤΑΑίββίνΚ0ΥΡΡΕΡντνενΐ,Ν8βΑΙΤ5βνΗΤΡΡΑνΐα336Ι.Υ 3153νντνΡ55ΝΕβΤΟΤΥΤβΝνθΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΤνΕΡΚ€θνΕβΡΡβΡΑ ΡΡνΑβΡδνΡίΡΡΡΚΡΚΟΊΙΜΙδΡΙΤΡΕνΤΟνννΟνδΗΕΟΡ’ΕνΟΡΝΙΛίΥνΟ βνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟΡΝΒΤΤΡννδνίΤννΗΟΟνΛ.ΜβΚΕΥΚβΚνδΝΚβ ΙΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΤΚ0ΟΡΚΕΡανΥτΐΡΡ5ΚΕΕΜΤΚΝανδΙ.Τ<;ΐ.νΚ6ΡΥΡ50Ι ΑνΕ«ίΕδΝβαΡΕΝΜΥΚΤΤΡΡΗΙΟδ06δΡΡΤ.Υ5ΚΙΤν[)Κδβ1Λ/ΟΟβΝνΡε β5νΜΗΕΑΙΗΝΗΥΤ0Κ9-3Ι 5ΡβΚ
Η1 27 1Ν101	Η10	13	ΕνθίνΕ3βββΐνΚΡββ5ίΡΙδΟΑΑδΟΡΤΡ3ΝΑννΜ3νννΕ!ΟΑΡακβΙ_Ε №/βΚΙΚ8ΚΤ06ΘΤΤ0ΥΑΑΡνΚβΡΡΤΙ3Κ003ΚΜΤΙΥ10ΜΝ$ΙΚΤΕ0ΤΑ νΥΥ0Τπ)βΑ7ννΤΡΘΥΥΥΥβΤ0ννΥβ0Θπντν53Α5ΤΚΘΡ5νΡΡίΑΡβ 3Κ5Τ5Ε5ΤΑΑί6βί\ΠΦΥΡΡΕΡντν5№Ι5ΘΑΙΤ5βνΗΤΡΡΑνΐΟ55εΐ Υ^δδνντνΡδδΝΡβΤαΤΥΤΟΝνΟΗΚΡδΝΤΚνΟΚΤνΕΡίΚβΟνΕΟΡΡβΡ ΑΡ1>νΑβΡ3νΕίΕΡΡΚΡΚ0ΤίΜΙ3ΡΤΡΕ^βν''ΛΌν8ΗΕ0ΡΕνθΕΝ'ΛΎν 0βνΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ0ΡΝ5ΤΡΡ\Λ/5'ΛΓ·Α/Η30'Λ1_Ν0ΚΡΥΚ0Κν3ΝΚ ΘΙΡΑΡΙΕΚΤίδΚΤΚβΟΡΚΕΡΟνΥΤΙΡΡδΠΕΕΜΤΚΝΟνδΙΤβίνΚβΡΥΡδ 0(Α\ΈννΕδΝβαΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜΕϋ5[)β3ΡΡΙΥ5ΚΕΤν0Κ5ΚννοαβΝν Ρ3βδνΜΗΕΑΙ.ΗΝΗΥΤαΚ5Ι.δ15ΡβΚ

- 19 023555

Η1 30 1Ν1Ο1	Η11	14	0ν0ΐν050ΑΕνΚΚΡ0Α5νκν50ΚΑ50ΥΤΡΤ3Υ0Ι3\ννΡ0ΑΡ0001Ενΐ/ ΜΟ«Ι5ΑΥΝΟΜΤΝΥΑΩΚίΟΟβ';ΤΜΤπ)Τ5Τ5ΤΑνΜΕίΚ51Ρ500ΤΑνΥ УСАКЕЗ№РеЕУБРОЖОаОТ17Т755А5ТКОР5УРР1АРС2Й5ТЖ5 ΤΑΑί0ανΚ0ΥΡΡΕΡντνδνΐ/Νε&«.Τ50νΗΤΡΡΑνΐΟ55είΥ5ίεδνν ΤνΡ55ΝΡΟΤΟΤΥΤ€ΝνθΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΤνΕ«ΚΟϋ\ΈΟΡΡΟΡΑΡΡνΑαΡ 3'/ΡΐΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙ5ΡΤΡΕ'ΛΟΥν'/θν5ΜΕΟΡΕνθΡΝ'ΛΎνθβνΕ7ΗΝ ΑΚΤΚΡΚΕΕΟΡΝ3ΤΡΗ\Λ/εΛΤννΗΟΟ№ΝΟΚΕΥΚΟΚνδΝΚΟΙΡΑΡ!ΕΚ τιεκτκθορκΕΡονγτίΡΡεΡΕΕΜτκΝον^τείνκοργρεοίΑνΕΛΕε Ν00ΡΕΝΜΥΚΠΡΡΙ<[)δΟ6εΡΡΙΥ5ΚΙΤνθΚ$№№3αεΝνΡ$03νΜΗΕ Α1_ΡΙΝΗΥΤΟΚ5Ι_5Ι_3ΡΟΚ
Η1 33-1 1М1С1	Η12	15	αναινοεοΑΕνκκρβΑενκνεοκΑεογτρτογγΜΗΐΛΓνκοΑΡααοίΕ ννΜΟΛΙΝΡΝ5(30ΤΝΥΑΟΚΡαΰΚνΤΜΤΡΟΤ3Ι3ΤΑΥΜΕ13ΕίΡδΟΟΤΑΡ ΥΥΟΑΡΟδΝ№ΥΗΝ№ΡΟΡννΰΟΟΤΙΥΤ755Α5ΤΚ&Ρ5νΡΡίΑΡ05ΡεΤ5Ε εϊΜΙΰανΚϋΥΡΡΕΡνΤ75ΛΝ3ΟΑίΤ5<?/ΗΤΡΡΑν!_355ΟΙ_Υ31_33ν ντνΡεεΝΡΟΤΟΤΥΤΟΝνΟΗΚΡεΝΤΚνΟΚΤνΕΚΚΟενΕΟΡΡΰΡΑΡΡνΑβ Ρ5νΡΌΤ^ΡΚΟΤυΛ3ΚΤΡΕνΤθνννθν3ΗΕΟΡΕνθΡ№Λ/ΥνΐΜ3νΕνΗ ΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟΡΝεΤΡβννενίΤννΗΟΟννίΝΟΚΕΥΚΟΚνεΜΚΟίΡΑΡΙΕ ΚΤ!3ΚΤΚΟΌΡΡΕΡθνΥπ_ΡΡ5ΡΕΕΜΤΚΝθν£ίΤεΐνΚ3ΡΥΡ2ΜΑνΕ№ εΝοαΡΕΝΜΥΚττρρΜίΌεοοερρίγεκιτνοκεκννααΕΝνρεαενΜΗ ЕАБНМНУТОКЗБЗБЗРСК
Н1 33 1Ν1Θ1	Η13	16	(Μ1ΐνθεεΑΕνΚΚΡ6Α5νκν20ΚΑ50ΥΤΡΤΟΥΥΜΗν™αΑΡ6001Ε ννΜσ№ΙΝΡΝ3θ6ΙΝΥΑΟΚΡθεΡνΤΜΤβ0Τ3Ι2ΤΑΥΜΕί3ΡίΡ300ΤΑΡ ΥΥΟΑΚ05ΝννΥΗΝννΓ0Ρ«6Ο6ΤΐνΊν33Α3ΤΚβΡ3νΡΡίΑΡ03ΚεΤ^ ετΑΑίοοινκογρρΕΡνινεννΝεοΑίΤΒονΗΤΡΡΑνίαεεοίγείεεν ντνΡ33ΝΡΘΤΟΤΥΤ0Νν[)ΗΚΡ3ΝΤΚν0ΚΤ\ΐΡ!Κ00νΕ€ΡΡ0ΡΑΡΡνΑε Ρ5νΡ1ΤΡ«ίΡΚθτΐΜΙ5ΡΤΡΕνΤθνννθν5ΗΕΟΡΕνθΡ№ΛΙΥνθθνΕνΗ ΝΑΚΐΚΡΚΕΕΟΡΝΒΤΡΡννενίΤΥ'Λίαε',ΥΙΝΰΚΕΥΚσκνδΝΚΕΙΡΑΡΙΡ ΚΤΙ£ΚΤΚβαΡΡΕΡθνΥΤΙΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝαν51ΤαΐνΚ0ΡΥΡ5ΟΙΑνΕννΕ 5Ν5ΟΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜί020<3εΡΡ!_Υ3ΚΙΤν0Κ5Ρ'Λ0θεΝνΓ202νΜΗ ΕΑίΗΝΗΥΤαΚ313Ι.2ΡβΚ
Η1 34 1Ν1Ο1	Η14	17	Εν0ίνΕ5Ο30ίνΚΡΘ051Ρ130ΑΑ50ΓΤΓ3ΝΑ\Υ^3\ΥΥΡ0ΑΡεΚ(31Ε \Α/νθΗΙΚ3ΚΤΟΟΟΤΤΟΥΑΑΡνΚΟΡΡΤΙ3ΡΌ03ΚΝΤΙΥΐαΜΝ31ΚΤΕΟΤΑ νΥΥΟΤΤϋΟΑΐννΤΡΟΥΥΥΥΟΤθνΥ.ΌΟβπντν55Α5ΤΚΟΡ5νΡΡΙΑΡ€ 5Ρ3Τ3εεΤΑΑΙβ01.νΚ0ΥΡΡΕΡντν5ΙΛΙΝ30ΑΙ.Τ2ΘνΗΤΡΡΑν[.α5501. γ^εενντνρεεΝΡΟτατγτοΜνϋΗΚΡεΝτκνοκτνΕΡΚοονΕερρορ ΑΡΡνΑ6Ρ5νΡΙΤΡΡΚΡΚΟΤωΐ3ΡΤΡΕνΤθνννθνεΗΕΟΡΕνθΡΝ\νγν 0ενΕνΗΝΑΚΤΚΡβΕΕ0ΡΝ3ΤΡΚννενΐΤννΗα0ν«.Ν6ΚΕΥΚ0ΚνδΝΚ ΘΙΡΑΡΙΕΚΤΙ8ΚΤΚΟΟΡΚΕΡανΥΤΙ.ΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝθν3Ι.Τεΐ.νΚΟΡΥΡ3 ΟΙΑνΕ^ΝθΟΡΕΝΝΥΚπΡΡΜΗ>5005ΡΡίΥ5ΚίΤν[Κ3Η«ΟΟΟΝν Ρ5€5νΜΗΕΑΙ_ΗΝΗΥΤΟΚ5Ι_5ί5ΡΕΚ
Η1 39 1Ν1Ο1	Η15	18	ΕνοινΕδ666ίνκροβεΐΡ!ίεοΑΑ3ερτρεΝΑνι/ΜενιίνκοΑΡβκα.Ε νννθΚΙΚ5ΚΤ000τΑ0ΥΑΑΡνΚβΚΡΤΙ5ΡΟΟ3ΚΝΤίΥί0ΜΝ31ΚΤΕϋΤΑ νΥΥΟΤΤΕΟΡΥβΟΥΟΥΥΥΥΟΜΟνννΰαΟΤΤνΤνεδΑδΤΚΟΡδνΡΡίΑΡε ЗК5Т8ЕЗТААБОС1.УКОУРРЕРУТ75]ЛМ5СА1Т5СУНТРРА\/1.аЗЗО[. ΥδίεενντνρβεΝΡΟτατγτοΜνοΗΚΡεΝτκνοκτνΕΕΚοονΕΟΡΡΰΡ ΑΡΡνΑβΡδνΠΡΡΡΚΡΚΟΤΙΗΙδΚΤΡΕνΤΟνννονδΗΕΟΡΕνΟΡΝννΥν ΟΟΥΕνΗΝΑΚΤΚΡΡ£ΕαΡΝ3ΤΡΚνν5νΐΡ/'/ΗΟΟ'ΛΙΝ&ΚΕΥΚ3Κν3ΜΚ ΟίΡΑΡ1ΕΚΤΐεΚΤΚθαΡΡΕΡΟ'Λ'ΤίΡΡ3ΡΕΕΜΤΚΝΟΥ31Τ31ΥΚ2ΡΥΡ5 ϋ(ΑνΕννΕ8№3αΡΕΝΜΥΚΤΤΡΡΜυ)3ΟΟ3ΡΡίΥδΚΙΤ№Κ3βνναθβΝν РЗСЗУМНЕА1НМНУТ0К5131.5Р6К

- 20 023555

Η1 42 1Ν161	Η16	15	0ν0ΐν05(3ΑΕνκΚΡ€Α5νΚν50ΚΑδ0ΥΤΡΤ5ΥΟ5\ν7ίΐ0ΑΡ6001ΕΛί Μ0ΥΥ]$ΑΥΝβΝΤΝΥΑΟΚ1_Ο6ΡνΤΜΐΤ0Τ5Τ5ΤΑΥΜΕΙ_Ρ5'._Ρ50ΟΤΑνΥ ΥΟΑΚΕ5ν7ΡΟΕνΡΡΟΥ1Λ/ΘΟΟΤΐντν33Α5ΤΚ6Ρ3νΡΡΙΑΡ05Κ5Τ3Ε5 ΤΑΑΙΰΰίνΚΟΥΡΡΕΡνΤν5νΛ45ΟΑΙΤ35νΗΤΡΡΑνΐΟ836ίΥ5155νν ΊνΡ55ΝΡ6ΤΟΤΥΤ0Νν№ΙΚΡ3ΝΤΚν0ΚΐνΕβΚ00νΕ0№0ΡΑΡΡνΑ6Ρ 3νΗ.ΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙ3βΤΡΕνΤθνννθν5ΗΕΟΡΕνθΕΝ1ΛΎνθδνΕνΗΝ ΑΚΤΚΡΡ£ΕΟΡΝ8ΤΡΚνν3νΐΤννΗ№1ΛΙΙΝθΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΟΙΡΑΡΙΕΚ Т15КТКбОР№РаУУПРР5КЕЕМТКМОУ51ТС1УКСРУР51)1АУЕИ/Е5 ΝΘ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΗ105[Κϊ5ΡΡΙΥ3ΚΙΤν0Κ3βνΐ/(ΧΧιΝνΡ5€5νΜΗΕ ΑίΗΝΗΥΤΟΚδίδίεΡΘΚ
Η164 1Ν101	Η17	20	Εν(ΧνΕ5066ΐνθΡ6051Ρ150Μ50ΡΤΡ5εΥΟΜΗνννΡ!ί!ΑΤΟΚεΐ_Ε νΥν3εΐΟΤΑ30ΤΥΥΡδ5νΚΟΡΡΝ13ΚΕΝΑΚΝ5ίΥίΟΜΝ51_ΒΑΰΟΤΑνΥΥ ΟΑΚΕθεΐΛίΥΟΡΟΥ1ΛβΟΟΤίνΤν53Α8ΤΚβΡδνΡΡΙΑΡ08Ρ8Τ5Ε3ΤΑΑ ίΟΟΛ0ίΰΥΡΡΕΡντν5ν№Ι56ΑΙΤδδνΗΤΡΡΑνί05321Υ5135νντνΡ 83ΝΡ6ΤΟΤΥτθΗ\ΐ)ΗΚΡ5ΝΐΚνθΚΤ7ΕΡΚΟθνΕΟΡΡΟΡΑΡΡνΑ6Ρ5νΡ ίΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙ2ΡΤΡΕνΤθνννΌν5ΗΕΟΡΕνθΕΝ'ΛΎ’Λ>3ΥΕνΗΝΑΚΙ ΚΡβ££αΡΝ5ΤΡΚνν5νηννΗ00ννίΝδΚΕΥΚ0Κν5ΝΚα.ΡΑΡΙΕΚΤΙ5Κ ΤΚ6ΟΡΚΕΡθνΥΤΙ,ΡΡ5ΡΕΕΜΤΚΝθν5ίΤ0ίνΚδΡΥΡ50ΙΑνΕ1ΛίΕ5ΝΟΟ ΡΕΝΝΥΚπΡΡΜΙΟεΚ^ΓΓίΥδΚΙΤνΟΚΕΒΛΌαΟΝνΡδϋδνΜΗΕΑίΗ ННУТОК513Ь5РСК
Η166 1Ν1Θ1	Η18	21	αν0ίνΕ5β06νν0Ρ6Κ51β150ΑΑ5δΡΤΡ35ΥδΜΗνΐ/νΚ0ΑΡδΚδίΕ ν/νΑνΐν/ΥΟβ3ΝΕΥΥΑ03νΚΟβΡΤΙ3ΚΟΝ3Κ5Π.ΥίΟΜΝ31ΗΑΕΟΤΑνΥ ΥΕΑΗ55ΟΝΥΥ0Μ0νν/6Ο6ΤΓνΤν55Α5ΤΚεΡ5νΡΡΙΑΡ05Ρ5Τ5Ε3Τ ΑΑί6(ΧνΚΟΥΡΡΕΡντν31Λ№Ι56ΑΙΤ5θνΗΤΡ РАМОЗЗОЬУЗЬЗЗт νΡ53ΝΡΟΤΟΤΥΤαΐνθΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΤνΕΡΚΟθνΕΟΡΡΟΡΑΡΡνΑΘΡ 5νΠΡΡΡΚΡΚΟΤΙΜ[3βΤΡΕνΤθνννον3ΗΕΟΡΕνθΡΝννΥνθθνΕνΕΙΝ ΑΚΤΚΡΡ£ΕαΡΝ5ΤΡΚνν5νΐΤλ<ΥΗϋυΜΝΌΚΕΥΚΟΚνε.ΝΚΟΙΡΑΡ!ΕΚ ΤΙ3ΚΓΚΟΟΡΚΕΡθνΥΤΙΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝύν31ΤΟΐνΚδΡΥΡ3βΑνΕνΥΕ3 ΝθαΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜΙϋ5003ΡΡΙΥ3ΚΙΤνθΚ5Κννθ06ΝνΡ505νΜΗΕ ΑΙΗΝΗΥΤ0Κ5ίΞί2Ρ6Κ
Η172 1Ν161	Н1Э	22	ЕУаЬУЕЗеоеЬУЕРбеЗСКЬЗСААЗСРТРЗТА^МЗИЛ^ОАРекСкЕ \Λίν6ΚΙΚ5ΚΤ[)ΟΟΠΟΥΑΑΡνΚ2ΚΕΤΙ3(ΐ003ΚΝΤΙ-ΥΙ-ΟΜΝ81ΚΝΕΟΤΑ νΥΥύπΕΟΡΥ5ΝΥΟΥΥΥΥθνο™δΩ6ΤΤνΤν55Α5ΤΚΟΡδνΡΡΙΑΡΟ 3β3Τ3Ε3ΤΑΑίβα.νΚΟΥΡΡΕΡντν5\ΥΝ5θΑΙΤ5βνΗΤΡΡΑνΚ133θΙ Υ315$νντνΡ55ΝΡΟΤαΤΥΤΟΝνθΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΤνΕΡΚ{Χ:νΕΟΡΡΰΡ ΑΡΡνΑδΡ5νΡΙΡΡΡΚΡΚΟΤΙΜΙ3ΚΤΡΕνΓθνννον5ΗΕΒΡΕναΡΝΥΪΥν [)ΘνΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ0ΡΜ3ΤΡΒνν3νΐΤννΗα0ΜΝδΚΕΥΚ0Κν5ΝΚ 0ίΡΑΡΙΕΚΤ13(σΚ0(3ΡΚΕΡ0νΥΤ1ΡΡ5ΡΕΕΜΤΚΝ0ν3ΕΤα.νΚ0ΡΥΡ3 □ΙΑνεννΕ3ΝθαΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜ103Ι)δ3ΡΡΙΥ5ΚΙΤν0Κ5Ρν(ί0ύδΝν Ρ305νΜΗΕΑ1_ΗΝΗΥΤ0Κ51_£13ΡΟΚ
Η21Ο3 1Ν162	Η20	23	Εν0ΐνΕ3β66ΐνΚΡ665ΐπ.5ΟΑΑ32ΡΤΡΝΝΑνΐ/Η3νΑ/βΟΑΡδΚΟΙΕ νννθΚΙΚ3ΚπΧϊβΤΤΟΥΑΑΡνΚδΚΕΤΙ3Κ005ΚΝΤΙΥΙΟΜΝ3υ<ΤΕΟΤΑ νΥΥθπΕΥΥΗΙί·Γβ3ΡΥΥ3ΎΥαι(θ™θΟβΤ7ντν55Α3ΤΚ6Ρ3νΡΡίΑ Ρ03Κ5Τ3Ε5ΤΑΑίΟΰΐνΚ0ΥΡΡΕΡ\Πν5ννΝ5ΟΑΙ.Τ3δ\ΉΤΡΡΑνΐ.α55 ΘΙΥ8185ννΤνΡ33ΝΡΟΤΟΤΥΤΟΝνθΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΤνΕΡΚΟθνΕΟΡΡ ΟΡΑΡΡνΑδΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙδΡΤΡΕνΤΟνΥνΟνδΜΕΟΡΈνΟΡΝνν ΥνΟΟνΈνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕΟΡΝδΤΡΡννδ'ΛίνΥΗαονΥίΝΟΚΕΥΚΟΚνδ ΝΚ0ίΡΑΡ1ΕΚΤΐεΚΤΚα0ΡΚΕΡανΥΤΙΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝαν51Τ€ΐνΚ3ΡΥ Ρ5ϋΙΑνΕνΐ/Ε3ΝΟΟΡΕΝΝΥΐσΤΡΡΜΙ-05[Χ35ΡΡΙΥ5Κϊ.Τν0ΙΐεΐΐννθΟδ МУРЗСЗУМНЕАШННУТОКЗЕЗЬЗРОК

- 21 023555

Η190 1Ν1Ο1	Н21	24	0ναΐνΕ50Ο0νν0ΡΟΗ3ΐΡί5εΑΑ5<3ΡΤΡ53Υ0ΜΙ-ΐνΛΉαΑΡ0Κ01Ε №/ΑνΐννΥ[Χ3»1ΚΥνΑ05νΚβΚΡΤΙ5Κ1Ν5ΚΝ'η.Υ10Μ№ΙΚΑε0ΤΑνΥ Υ0Α5555ΝΡΥ0ΜϋννΛϊ0βπντν55Α5ΤΚ0Ρ5№ΡΙΑΡ05Π5Τ3ΕδΤ ΑΑ160υνΚ0ΥΡΡΕΡντν5νΥΝ50ΑΙΤ50νΗΤΡΡΑνί05321Υ5ΐεδννΤ УРЗЗМРбТОтСГтеНКРЗЫТКУОККЕККССУЕСРРСРАРРУАеР 3νΡίΡΡΡΙΦΚΟΤΙΜΙ5ΒΤΡΕνΤΠνννθν3ΗΕΟΡΕνθΡΝ№ΎνθθνΕνΗΝ ΑΚΓΚΡΚΕΕΟΡΝδΤΡΚννδνίΤννΗΟΟννίΝβΚΕΥΚΟΚνδΝΚαίΡΑΡΙΕΚ ΤΙ^ΤΚΘΟΡΚΕΡανΥηΡΡδΒΕΕΜΤΚΝΟνδΙΤΟίνκεΡΥΡδΟΙΑΧΈ^Εε ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜί0ΞΟΰ5ΡΡΙΥ5ΚΙΤν0Κ5ΚνΥ006ΝνΡ503νΜΗΕ ΑίΗΝΗΥΐοκείδίδΡΟΚ
Η2131 1Ν1Ο2	Н22	25	θνθΐαΕ56ΡΟΙ\ΛίΡ5ΕΤί51ΤΟΤν£β03Ι5ΜΥΎΙΛ/5Μ/Ιβα3ΑβΚβίΕ\ΝΙ №ΙΥΤ5Ο5ΤΗΥΝΡ51Κ3ΚΙΙΜ8ν0|·2ΚΝΩΡ51Κ155νΤΑΑ0ΤΑνΥΥ0ΑΡ0 ΚνΡΥΟΜΙ)ννΐ/ΟΟΟΠντνε8Α5ΤΚΟΡ3νΡΡίΑΡΟ€Κ5Τ5Ε5ΤΑΑΙΟΟίν Κ0ΥΡΡΕΡντν5ννΜ56ΑίΤ5βνΗΤΡΡΑνΐ<152ΟΙΥ5Ε55νντνΡ55ΝΡ0 ΤαΤΥΤΟΝνΟΗΚΡεΜΤΚνΟΚΤνΕΚΚΟίΆΈΟΡΡΟΡΑΡΡνΑαΡδνΡίΡΡΡΚ ΡΚΟΤίΜΙΞΡΤΡΕνΤΟνννονδΗΕΟΡΕνΟΡΝν/ΥνΟΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ αΓΝ5ΤΡΡνν3νΐΤνΥΗαθννΐΝΟΚΕΥΚΟΚν5ΝΚΟΙΡΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΤΚΟΟΡ ΡΕΡθνΥΙΙ.ΡΡ5ΚΕΕΜ7ΧΝαν2ίΤα_νΚβΡΥΡ5ΟΙΑ7ΕΛΈ8Μ(5αΡΕΝΝΥ κπρρΜίΦδοοδΡΠΥδκιινοκεκΑοαοΝνΡδΟδνΜΗΕΑίΗΝΗΥΤΟ К5[_21_5РСК
Η2 291 1Ν162	Н23	26	аУСИУЕ56ССОТОРеК5иУ-5САА5СРТР55УеМНтнаАРСКС1Е ΜΆνΓΛΎ[Χ33ΥΚΥΥΑΟ5νΚΘΡΡΤΙ5Ρ3Ν5ΚΝΤΙΥΙΟΜΝ51ΚΑΕ0ΤΑνΥ Υ0ΑΒΕ60Υ50ΥΥ6Μ0νΐ№3αβΤΤντν53Α5ΤΚ0Ρ5νΡΡΙΑΡ03Κ8Τ5ε 3ΤΑΑΙΘ(ΧνΐΦΥΡΡΕΡντν5νΐΝ£0ΑΙΤ50νΗΤΡΡΑνΐ05501Υδ13εν \ΠνΡ3εΝΡ6ΤαΤΥΤΟΝνθΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΤνΕΚΚθανΕΟΡΡΟΡΑΡΡνΑ6 ΡενηΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννΟνδΗΕΟΡΕνΟΡΝ’ΛΎνΟΟνΕνΗ ΝΑΚΤΚΡΡΕΕΟΡΝ5ΤΡΚνν5νΐΤννΗαθν'Λ.ΝεΚΕΥΚΟΚν5ΝΚ61ΡΑΡΙΕ ΚΤΙ5ΚΤΚθαΡΡΕΡθνΥΤίΡΡ2ΡΕΕΜ7ΚΝ0ν51ΤανΚ0ΡΥΡ20ΙΑνΕΥ.Έ 3ΝσαΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜΙϋ3ΙΧΪ3ΡΡΙΥ5ΚίΤν0Κ3Κνν0Ο6ΝνΡ3Ο5νΜΗ ЕАШЫНУТОКЗЕаЗРСК
Η2 360 1М1С2	Н24	27	ΟνΟίναδβΑΕνΚΚΡΟΑδνΚνδΟΚνδεΥΤίΤΕίδΜΗΥΛ/ίϊΟΑΡβΙΐΟΙΈ νΥΜ06ΡΟΡΕϋΘΕΤΙΥΑΟΚΡΰ6ΚνΤΗΙΕΟΊ5ΤΟΤνΥΜΕ133ίΚ3ΕΟΤΑν ΥΥ0ΑΤ6νΜΙΤΡΘΘνΐνβΗ5ΥΥ0Μ0νΐΛ/000ΤΤντν35Α3ΤΚ0Ρ5νΡΡΙΑ Ρ€3Κ5Τ3Ε3ΤΑΑίΟ0ΐνΚΟΥΡΡΕΡντν5νϊΝ5εΑΙΤ5ενΗΤΡΡΑνίΟ35 6ίΥ8ί55νντνΡ25ΝΕΟΤΟΤΥΤΟΝν№ΚΡ5ΝΤ(<νθΚΤνΕΡΚ€θνΕΰΡΡ ΟΡΑΡΡνΑ6Ρ3νΕΙΗ3ΡΚΡΚΟΤΙΜΙ3ΗΤΡΕνΤθνννθν8ΗΕΟΡΕνθΡΝνί ΥνΐΚϊνΕνΗΝΑΚΤΚΡΒΕΕΟΡΝ5ΤΡΗνν3νΐΤννΗΩ№Μ.Ν6ΚΕΥΚϋΚν3 ΝΚ61ΡΑΡΙΕΚΠ5ΚΤΚ6ΟΡΗΕΡθνΥΤίΡΡ3ΡΕΕΜΤΚΝθν5Ι.Τ0Ι.νΚΟΡΥ Ρ3ΟΙΑνΕννΕ5ΝθΟΡ0(ΝΥΚΤΤΡΡΜ11ΐ5ΟβεΡΡΙΥ3Κ17νθΚ5Κν«3ΟΘ №/ГЗСЗУМНЕАШМНУТОК51313РОК
Н2 360 1Ν1Θ2 5Μ	Н25	26	0ν(Μ.ν03βΑΕνΚΚΡ6Α3νΚν50Κν56ΥΤίΤΕί5ΜΗνΛ/βαΑΡεΚ01Ε (ΥΜ66ΡΟΡΕ03ΕΤΙΥΑαΚΡ6>3ΚνΤΜΤΕΩΤ5Τ0ΤΑΥΜΕΙ_58ΐ_Κ2Ε0ΤΑν γγΟΑΤονΜίτΡοανινοίδΥΥΟΜονγ,'οαοτΓντνδΧΑδτκοΡδντΡίΑ ΡΟ8Π3Τ3Ε3ΤΑΑί(ΜΧνΚΟΥΡΡΕΡντν3ΗΝ36ΑίΤ3βνΗΤΡΡΑνΐΛΙ33 ΟΙΥ5135ννΤ\Φ$5ΝΡ6ΤΟΤΥΤεΝνθΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΤνΕίΐΚΟθνΕΟΡΡ ΟΡΑΡΡνΑΟΡΒνΡίΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙδΚΤΡΕνΤΟνννονεΗΕΟΡΕνΟΡΝΜ/ ΥνοενΕνΗΗΑΚΤΚΡΡΕΕΟΡΝεΤΡΚννδνίΤννΗαοννίΝβΚΕΥΚΟΚνε ΝΚ61ΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΤΚ<3ΩΡΚΕΡ0νΥΤΙ.ΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝ0ν5Ι.Τα.νΚ0ΡΥ Ρ50ΙΑνΕ1Λ/Ε3ΝΟΟΡΕΝΚΥΚΤΤΡΡΜί03Ο65ΡΡΙΥ5ΚίΤν0Κ5Κ\ν(ΚΙΘ ΝνΡΞΟδνΜΗΕΑίΗΝΗΥΤΟΚδΙδίδΡΟΚ

- 22 023555

Н2369 1Ν162	Н26	29	θν0ΐν036ΑΕνΚΚΡ0Α5νκν5(Χν30ΥΤΙΤΕ15ΜΗ№/νβ0ΑΡ6Κ0ίΕ ЙМСОРОРЕОСЕТ1УАОКРОСКУТМТЕОТ5ГОТАУМЕ155!-В5ЕОТАУ ΥΥϋΑΤΚΑ0ΤΚΑΥΥΥΥΑΜ0ννν0ΟΘΤΤντν5δΑ57ΚβΡ3νΡΡΙΑΡα3Κ5 τδΕδΓΑΑΐΛανκογρρΕη/η^ΜΝδΟΑί^ονΗΤΡΡΑνιοδδαΥΛ ЗЗУУТУРЗЗМРСТаТУТСМУОНКРЗНТКТОКТУЕРКССУЕСРРСРАРР νΑβΡ5νΡίΡΡΡΚΡΚΟΤΙΜ13ΚΤΡΕνΤθνννθν3ΗΕΟΡΕναΡΝννΥνΕΧϊν ΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕαΡΗδΤΡΡννδνίΤΥνΚΟΟνωΟΚΕΥίωκνδΝΚΟΙΡ ΑΡΙΕΚΤ15ΚΤΚβ0ΡβΕΡ0νΥΤΙΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝ0ν81ΤΟ.νΚ0ΡΥΡ50ΙΑν ΕΥΪΕ5Ν6αΡΕΝΝΥΚπΡΡΜΙΧ)3[Χ33ΡΡΙΥ5ΚΙΤνθΚ3ΚνϊθαθΝνΡ503 УМНЕА1 НМТГгакд 51 5РСК
Н2 380 1Ν102	Н27	30	(Μ11ΟΕ5βΡ6ίνΚΡ5ΕΤί3.ΤΟΐν3ΰε5Ι33ΥΥνν3ΙΜΚ0ΡΡ6ΚαΕννΐ βΥΙΥΥδβΝΤΝΥΝΡδΙΚδΚΠΊ-δΙΟΤδΚΝΟΡδΙΡΙ-δδνΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑβΙ ΑΤΚΡΡΟΥννοαθΤίνΤν33Α5ΤΚβΡ3νΡΡίΑΡ05Κ5Τ5Ε3ΤΑΑ10ΰΐνΚ 0ΥΡΡΕΡνΤν5«Ν50Αΐτ56νΚΤΡΡΑνΐ033θΙΥ3133νντνΡ33ΝΡβτ αΤΥΤ3ΝνθΗΚΡ3ΝΤΚν0ΚΤνΕΚΚ£ΧνΕ0ΡΡύΡΑΡΡνΑ0Ρ3νΡίΡΡΡΚΡ ΚΟΤΙΜΟΚΤΡΕνΤενννονΒΗΕΟΡΕνΟΡΝννΥΜΙΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟ ΡΝΒΤΡΡννβνί.ΤννΚΟΟΙΛίΙ-ΝβΚΕΥΚΟΚνδΝΚβΙ.ΡΑΡΈΚ'ΠδΚΤΚβΟΡβ ΕΡΟνΥΤίΡΡδΗΕΕΜΤΚΝΟνδΙΤΟίνΚΟΡΥΡεΟΙΑνΕΥΐΕδΝΟΟΡΕΝΝΥΚ ΤΤΡΡΜΙ.Ο51Χ35ΡΡΙ.Υ3ΚΙ.ΤνθΚ3ΚνΐίΟ0βΝνΡ3Ο5νΜΗΕΑΙ.ΗΝΗΥΤΟΚ 51515РСК
Н2475 1Ν102	Н28	31	ОУаУЕЗЗОе™ЗРСК51КЕ5САА$6РТР15УСМН№РОАРСКО1.Е νννΑνΐν^ε5ΝΚΥΥΑ05νΚΟΚΡΤΙ8ΚΟΝ5ΚΝπΥΐαΜΝ51ΚΑΕΟΤΑνΥ ΥΟΑ05360ΥΥ6ΜθνΚΥ606ΤΤντν53Α3ΤΚΘΡ3νΡΡΙΑΡ05Κ3Τ5Ε5Τ ΑΑί6€ίνΚΟΥΡΡΕΡντν3νΐ(Ν5(3ΑΙΤ3βνΗΤΡΡΑνΐ0550ίΥ3ί£3ννΤ νΡ35ΝΡ6ΤαΤΥΤ0Νν0ΗΚΡ5ΚΤΚνθΚΤνΕΚΚ0θνΕ0ΡΡεΡΑΡΡνΑ6Ρ 3νΡσΡΡΚΡΙΦΤί34Ι$ΚΤΡΕνΤθνννθν5ΗΕΟΡΕναΡΝννγνθβνΕνΗΝ ΑΚΤΚΡΡΕΕΟΡΝβΤΡΡννδνίΤννΗΟΟννίΝβΚΕΥΚϋΚνεΝΚΟίΡΑΡΙΕΚ ΤΟΚΤΚΟΟΡΚΕΡΟνΠίΡΡ^ΕΕΜΤΚΝΟνδΙΤΟίνΚβΡΥΡδΟΙΑνΕννΕδ Ν60ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡΜΙ£β0β5Ρ^Υ3Μ.ΤνθΚ3Κΐνθ0ΟΝνΡ305νΜΗΕ ΑίΗΝΗΥτοκ^είερβκ
К2 508 1Ν102	Н29	32	ОУОГУОЗСАЕУККРвАЗУКУЗСКУЗбУТЬТЕЕЗМтЛА/НОАРСКОЕЕ ΪΥΜβ6ΡΟΡΕ06ΕΤΙΥΑΟΚΡββΚνΤΜΤΕΟΤ5ΤΟΤΑΥΜΕί35υΐ3ΕΟΤΑν УУСАТАв1Е1Р\№0Р№0О6Т17ТУ35АЗТК0Р5УРРЬАРС5йЗТЗЕ5Т ΑΑΙβΟίνΚΟΥΕΡΕΡντνδΟΙδθΑίΤδβνΗΤΡΡΑνί03301Υ5ί35ννΤ νΡ55ΝΡΟΪΟ^βΝν0ΗΚΡ5ΝΤΚν0ΚΤνΕΚΚ00νΕ0ΡΡεΡΑΡΡνΑθΡ 3νΗ.ΡΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙ5ΚΤΡΕνΤϋνννθν3ΗΕΟΡΕνθΡΝνΥΥνΐΧ3νΕνΗΝ ΑΚΤΚΡΡΕΕΟΡΝδΤΡβΥνενίΤννΗΟΟΜΚβΚΕΥΚίΧνδΝΚβΙΡΑΡΙΕΚ ΤΙδΚΤΚΟΟΡΗΕΡΟνΥηΡΡδΚΕΕΜΤΚΝΟναΤΟίνΚβΡΥΡδΟΙΑνΕνΥΕδ ΝΟ0ΡΕΝΗΥΚπΡΡΜ1Ό5Ο05ΡΡίΥ5ΚΙΤ\ΌΚ5Ρ'/Α9α(Φ'7Ρ5ε5νΜΗΕ ΑΙΜΝΗΥΤΟΚ9.ί15ΡΟΚ
Н2 534 1Ν102	ИЗО	33	ονοίΟΕδβροίνκΡδοπ^βτνεββδίδδΘβγγννδΜΡΟΗΡβΚβί. ΕνΥΙβΥΙ3Υ360ΤΥΥΝΡ5ίΚ3ΚΙΤΙ3νθΤ3ΚΗΟΡ31№.55νΤ3ΑΟΤΑνΥΥΟ ΑδΕΜ.Υβ0ΥΡ0Υν№0βανΓν55Α5ΤΚβΡ3νΡΡίΑΡϋδ(ΐ3Τ3Ε3ΤΑΑΙ ββΐνΚ0ΥΕΡΕΡντν5ΝΝδβΜΤ5θνΗΤΡΡΑ\ΛΛ3δβΙ-Υ6Ι-53ννΤνΡ3 5ΝΡβΤαΤΥτθΝνθΗΚΡ$ΝΤΚνθΚΓ/ΞΚΚββνΕΟΡΡβΡΑΡΡνΑ6Ρ$νΗ ΡΡΡΚΡΚΟΤίΗΙδΡΤΡΕνΤβνννονδΗΕΟΡΕνΟΕΝν/ΥνΟΟνΕνΗΝΑΚΤΚ ΡΚΕΕΟΡΝδΤΡΚννδνίΤννΗΟΟνΥΙΝβΚΕΥΚΟΚνδΝΚβΙΡΑΡΙΕΚΤίεΚΤ ΚβΟΡΚΕΡθνΥπ.ΡΡ5ΚΕΕΜΤΚΝθν51ΤΰίνΚ6ΡΥΡδ01ΑνΕνΥΕ3ΝβΟΡ ΕΜΙΥΚΤΤΡΡΜΙΟεΟβδΡΡίΥδΚΙΤνΟΚδΚννΟΟβΝνΡδΟδνΜΗΕΑΙΗΝ ΜΥΤ0Κ3Ε3ί3ΡβΚ

- 23 023555

Н2 550 1Ν182	Η31	34	аУ01\/05САЕУККР0А5УК75СКА56УТ1Т5У015У1Л/РС1АРв0С1Е1Л( ΜεΜ/Ι8ΑΥΝ6ΝΡΝΥΑ0ΚΡΟ0ΚνΤΜΤΤϋΤ3Τ3ΤΑΥΜΕΙ.β5Ι.β500ΤΑνΥ γοΑ«οοοιιθΡοεΐΕ(3υογνγοα(ϊΓΐντνδδΑδτκοΡ5νρρΐΑΡθ3Κ5 Т5Е5ТАА1СС1УК0УРРЕРт'5М№С-А£Т8О'УНТРРА;г058О1У51 55ΥΥΤνΡ5δΜΡΟΤαΤΥΤ0ΝνθΗΚΡ3ΝΤΚνυΚΓ75ΡΚ00νΕ0ΡΡ0ΡΑΡΡ νΑΟΡδνΡίΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙδΡΤΡΕΥΓΟΥΛΌνδΗΞΟΡΕνΟΡΝ'ΑΎ'^Ον ΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟΡΝ5ΓΡΚνΓ73νίΤΆΗΟΟ'ΛΊΝ6ΚΕΥΚΟΚν5ΝΚ31Ρ ΑΡίΕκηεκτκοορκΕΡονγπ,ρρδΡΕΕΜτκΝανειτα,νκοργΡδοίΑν Ενΐ/Ε8Νΰ0ΡΕΝΝΥΚΓΓΡΡΜ1050ε5ΕΕΙΥ5ΚΙΤνΐΧ5Κνν0ΟΰΝνΡ5Ο3 νΜΗΕΑΙ ΗΝΗΥΤΟΚ5Ι 5Ι 2Ρ&<
Н265 1Ν1Ο2	Η32	35	ΕναίνΕ5βΟ0ίνΚΡβΟ8ίΚ150ΑΑ50ΡΤΡ5ΝΑΜΛ5ΥΛΒΟΑΡ0Κ6Ι_Ε νΥνΟΚΙΚΤΚΤΙΧΪΟΤΤΟΥΑΑΡνΚΟΚΡΤΙδίΐΟΟΒΟΝΚΥίαΜΝδυίΤΕΟΤΑ νΥΥ0ΤΤΕΥΥ6ΐνΤβ5ΡΥΥΥΥΥβΜ0ννΐΙ6(Χ3ΤΤντν58Α3ΤΚ0Ρ8νΡΡίΑ РСЗРЗТЕЕеТААЮСЬУКОУРРЕРтаМНЗСАкТЗеУНТРРАУЮЗЗ ΟΙΥ5153νντνΡ35ΝΡθΐαΤΥΤΟΝνϋΗΚΡ3ΝΤΚνθΚΤνΕ(ΐΚΟθνΕΟΡΡ ΟΡΑΡΡνΑ6Ρ3νΡίΡΡΡΚΡΚΟΤίΜΙ5ΡΤΡΕνΤθνννθν5ΗΕΟΡΕνθΡΝνν Υνθ5νΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕΟΕΝ5Τ?Ρνν3νίΤννΗαον/1_Ν(3ΚΕΥΚΟΚν5 ΝΚ01ΡΑΡ1ΕΚΤΐεΚΤΚ00ΡΡΕΡΟΥΥΤίΡΡ5ΡΕΕΜΓΚΝ0νί1_τα_νκ0ΕΥ Ρ30ΙΑνΕνΥΕ3ΝθαΡΕΝΝΥΚπΡΡΜ103Ι>Ξ5ΡΡΙΥ5ΚΙΤνΌΚ5Ρ!ννθΟΟ ΝνΡ5θενΜΗΕΑΙΗΝΗΥΤΟΚ51515ΡΟΚ
Η1 109 1Ν1Κ	Ы	36	ΟΙΟΜΤα5Ρ5315Α5να0ΚνΤΙΤ0ΟΑ3ΟΝΙ3ΝΓ10ννΥθαΚΡβΚΑΡΝ1±ΙΥ ОА501ОР6УРЗКР5С5СЗеТ0РТРТ153Е0РЕ01АТУ¥ССЮУУ31.Р1.ТР ΟΘεΤΚνΕΙΚΡΤνΑΑΡ3νΡΙΡΡΡ$ΟΕΟίΚ3βΤΑ5ννθίΙΝΝΡΥΡΡΕΑΚνα ΜΚν0ΝΑ105ΟΝ30ΕδνΤΕΟ03ΚϋεΤΥ51δ511_κεΚΑ0ΥΕΚΗΚνΥΑ0Ε νΐΉΟΟίδδΡντκεεΝκοΕΟ
Η1109 1Ν1Κ3Μ	12	37	□ΐαΜΤΟ5Ρ53ί3Α3νβ0ΚνΤΙΤ0ΟΑ300Ι3ΝΡ10νΥΥααΚΡ6ΚΑΡΚίΙΙΥ θΑ5θίθΡονΡ5ΚΡ53565ετορτρτ!55ΐ_θΡΕθΐΑτγγσααγνείΡΐ_τρ ΟββΤΚνΕΙίαυνΑΑΡενΡΙΕΡΡδΟΕΟΙΚδβΤΑεννΟΙΙΝΝΕΥΡΒΕΑΚνΟ ΙΛίΚνθΝΑΙΟ5ΟΝ5ΟΕ5νΤΕΟ0εΚ02ΤΥδί53ΤίΤί5ΚΑ0ΥΕΚΗΚΥΥΑ0Ε νΤΉΟΘΙ.55ΡνΤΚ3ΡΝΚΟΕΟ
Η1131 1Ν1Κ	1.3	38	0ΝνΜΤαΤΡί513νΤΡΟΟΡΑ3Ι50Κ35α3ίΙΗ300ΚΤΥίΥΛΎΐαΚΡαθΡ Ρα.υΥΕΑ8ΝΡΡ3βνΡ0ΡΡ5β5030ΤΌΡΤίΚΙ3ΚνΕΑΕ0νανΥΥ0Μα5Ι ΟίΡΙΤΡθΟΟΤΚνΕ(ΚΚΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ50Ε(ΧΚ30ΤΑ5νν0υ-ΝΝΡΥΡΚ ΕΑΚνΟΙΛ/ΚνΟΜΑΙΟδεΝδΟΕδνΤΕΟΟδΚΟδΤΥδίδδΤίΤΙδΚΑΟΥΕΚΗΚ νΥΑ0Ε\ΠΉαα.53ΡνΤΚ3ΡΝΡβΕ0
Η1134 1Ν1Κ	14	39	0ΙΟΜΤΟ3Ρ&515Α5νε№ΥΤΙΤεθΑ3α0ΙΝΝΥίΝΥνΥΟΟ»<ΡαΚΑΡΚ11ΙΥ [)Α5№ΕΙθνΡ8ΗΓ9θ8(35(?Π)ΗΓΤΙ55Ι.ΟΡΕΙ)ΙΑΤΥΥ€ΟΟΥΟΝΡΡΠΓΘ 601ΚνΕ1ΚΚΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ30Εθυί50ΤΑ3ννθίίΝ№ΥΡΡΕΑΚνθνϊ ΚνθΝΑω36Ν5ΟΕ3νΤΕΟΟ5Κ05ΤΥ5ί55ΤίΤί5ΚΑ0ΥΕΚΗΚνΥΑ0Εν ΤΗΟ3Ι 33ΡνΤΚ5ΕΝΚσΕ0
Н1143 1Ν1Κ	ί5	40	0Ι0ΜΤ03Ρ5515Α5νεΜϊνΤΙΤεθΑ3Ο0ΙΝΝΥΙΝννΥΟ0ΚΡβΚΑΡΰ.ίΙΥ □Τ5ΝΙΕΡενΡ3ΡΡ565(3δΟΤΟΡΤΡΤΙ35Ι_ΟΡΕΟΙΑΤΥΥ€ΟΟΥΟΝυ.ΤΕ6 αεΤΡΙΕΙΚΡίνΑΑΡδνΕΙΡΡΡδΟΕΟΙΚβεΤΑδννΟΙΙΝΝΕΥΡΚΕΑΚνΟνΥ КТОНАЮЗбНЗОЕЗУТЕООЗКОЗТУЗкЗЗТПЪЗКАОУЕКНКУУАСЕУ П-ЮОЕЗЗРУТКЗРЧРСЕС
Η1 Ш 1Ν1Κ	1.6	41	ΟΙΟΜΠΌ5Ρ£313Α$νεθΚνΤΙΤΟΟΑ3αθΙ3ΝΥΙΝννΥΟΗΚΡΟΚΑΡΙ«.ΙΙΥ 0Α3ΝΙΠ0νΡ5ΚΡ305ε3εΤ0ΡΤΡΤΙ3310ΡΕ0ΙΑΤΥΥ00(ΪΥ[»ΙΙ.Ι.ΤΡε ΘεΤΚνΕ(ΚΗΤνΑΑΡ3νΕΙΕΡΡ5ΟΕ(11Κ5ΘΤΑεννθυ-ΝΝΕΥΡΡΕΑΚνζ11ή/ ΚνθΝΑίΟ8ΟΜδΟΕ5νΤΕΟ08Κ08ΤΥδΙδ5Τνπ.δΚΑ0ΥΕΚΗΚνΥΑεΕν ТНЮ01_55РУТКЗРГ1Р0ЕС

- 24 023555

Η1 161Ν1Κ	1.7	42	0ΙύΜΤΟ6ΡδδΙ&Αδν60ΚνΤΙΤ0ΟΑ800ΙδΝΥίΝΜΥΟ0ΚΡ6ΚΑΡΙ<ΡυΥ ΟΑ3Κ0ΈΤθνΡ3ΡΡ3Ο3Ο3ΟΤΟΡΤΡΤ1331ΟΡΕΟΙΑΤΥΥϋΟΟΥΟΝΙΙΤΡΘ ΟΟΤΚίΕΙΚΚ·ΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ50Ε0ίΚ50ΤΑ3νν0ίΙΝΝΡΥΡΚΕΑΚνανν Κν0ΝΑί0ε0Ν5ΟΕ3νΤΕ005Κ03ΤΎ5133ΤΙΤ13ΚΑ0ΥΕΚΗΚνΥΑΕΕν τΗύΟίδδΡντκεΡΝίϊβΕΟ
Η121Ν1Κ	ЬЗ	43	ΟίνΜΤΟδΡΟδίΑνδΙθΕΚΑΒΝϋΚδδΟδνίΟεδΟΝΚΝΥΙΑννΥΟαΚΡΟΟ ΡΡ^ΥννΑ5ΝΚΕ50νΡ0ΚΡ505α30Τ0Ρ51ΤΙ531ΟΑΕ0νΑνΥΥ0θα ΥΥ50ΡΡΤΡΟΡβΤΚν0ΙΚΡΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ3ΟΕ<ΧΚ5βΤΑ3νν0ΙΛΝΝΡΥ ΡΡΕΑΚν0νΛ<νθΝΑΕ05ΟΝ50Ρ5ΥΤΕ0ϋ3Κ05ΤΥ5ί55ΤΙΤ13ΚΑ0ΥΕΚ ΗΚνΥΑΟΕνΤΗΟΟίΞΞΡνΤΚδΡΝΡΟΕΰ
Η121Ν1Κ ЗМ	1.9	44	0ΐνΜΤ0δΡ081.ΑναθΕΡΑ1ΙΝ0Κ5δ05Η-0ε50ΝΚΝΥΙΑΥΛΌ0ΚΡθα ΡΡΚίυΥΥ/Α8ΝΡΕδθνΡΰΡΕδβδΟ80Τ0ΡΤΙ_ΤΙ53Ι_0ΑΕδνΑνΥΥ0Ω0Υ Υ3ΟΡΡΤΡ0Ρ6ΤΚν0ΙΚΕΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ50Ε01Κ5ΟΤΑ5νν01ίΝΝΡΥΡ ΡΕΑΚν0ννΚν[№ΙΑίΟ5αΝ3ΟΕ3\ηΈ005Κ0$ΤΥ5Ι.55ΤΙ.Τί$ΚΑΟΥΕΚΗ ΚνΥΑεΕνΤΗΟΟίδδΡνΤΚδΡΝΚΟΕΟ
ΗΙ 271Ν1Κ	ИО	45	ΟΚ1ΜΤα5Ρ5εΐ3Α3νθΟΚνΤΙΤΟΟΑ300Ι5ΝΥΙΝννΥΟΟΚΡ6ΚΑΡΙ«ΧΙΥ ΟΑδΝίΕΤβνΡ5ΡΡδΓΤΤΖΛΤΟΕΤΕΤΙδ5Ι_ΟΡΕΟΙΑΤΥΥδααΥΕΝΙ_Ι_ΤΡΟ 00ΤΚνΕΙΚΚΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ5№0ίΚ3αΤΑ3ννα.ίΝ№ΥΡΚΕΑΚν0№ ΚνθΝΑ!αδΟΝ5ΟΕδνΤΈΟΟ5Κ05ΤΥ5155ΤΙΤΕ5ΚΑ0ΥΕ'<ΗΚνΥΑΟΕν ТНОбЕЗЗРУТКЭЕМНСЕС
Η1301Ν1Κ	1.11	46	□ΐνΗΤα5Ρ031Αν^6ΕβΑΤΙΙΧ:Κ53αβνΐ035ΝΝΚΝΡΙΑνΥΥαθ№βα ΡΡΚίίΙΥννΛ5ΝΡΕ5θνΡνΗΓ2ΟδΟ5ΟΤ0ΕΤΙΤΙ35ΐαΑΕ0νΑΕΥΥ0θαΥ Υ30ΡΡΤΡ0ΡΟΤΚν0ΙΚΡΤνΑΑΡ3νΡΙΡΡΡ50ΕΟΙΚ5ΟΤΑ3ννθ1±ΝΝΡΥΡ βΕΑΚνθνΐ/ΚνθΝΑί030Ν50Ε5νΤΕ005Κ03ΤΥ3153ΤίΤί3ΙΐΑΟΥΕΚΗ Ю/УАСЕСГНО6155РУТК5Р№СЕС
ΗΙ 33-1 1Ν1Κ	Π2	47	ΟΙΟΜ7Ο3Ρ3315Α3νθΟΚνΤΙΤςΗΑ5α5Ι5ΟΥΙΝννΥα0ΚΡΟΚΑΡΝΙΙΙΥ АА831Л86УР8ПР8бае8<Ш)РТ1Т13а0Ре0РАПР(Х»ТУ80РРТР ΟΡΟΤΚνΟΙΚΡΤνΑΑΡδνΡΙΕΡΡδΟΕαύΚδβΤΑδννΟΙΙΝΝΡΥΡΡΕΑΧνΟ №ΚνθΗΑ1_03ΟΝ5ΟΕ3νΤΕ00δΚΟ3ίΎ8Ι_35Τί_ΤΙ_5ΚΑΕΥΕΚΗΚνΥΑ0Ε νΤΗ00ί53ΡνΤΚ5ΡΝΗ6Ες
Η1341Ν1Κ	ИЗ	48	ΟΙΟΜΤΟδΡδδΙδΑδνΘΟΡνΤΙΐΟΟΑδίΧΗδΝΥΕΜΛΎΟΟΚΡΟΚΑΡΚΙίΙΥ βΑ3ΝΕΕΤΰνΡ3ΗΡ365036Τ[ΪΡΤΡΤΙ33ΐαΡΕ0ΙΑΤΥΥ€ααΥΙ)Ν1±ΤΡ6 ΟΟΤΚνΕΙΚΗΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ5ϋΕΟΙΚ5ΟΤΑ3νν0ίίΝΝΡΥΡβΕΑΚνονΥ ΚνΟΝΑίΟδΟΝδΟΕδνΤΕΟΟδΚΟδΤΥδΙδδΠ.'Π.δΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑΟΕν ΤΜαβίδδΡντκδΡΝβδΕΟ
ΗΙ 391Ν1Κ	Η 4	49	ΟΙΟΜΤαδΡδδΙδΑδνβΟΡνΤΙΤΟΟΑδΟΟΙδΝΥίΝνΥΥΟΟΚΡΘΚΑΡΚνίΙΥ ΟΑ3ΝΙΕΤθνΡ5ΚΡδβ5α3ΟΤ0ΡΤΡΤΙ331.ΟΡΕ0ΙΑΤΥΥ0ααΥ[»Ι11ΤΡ6 εΘΤΚΥΕΙΚΒΤνΑΑΡδνΡΙΡΡΡδΟΕΟΙΚδΘΤΑδννείΙΝΗΡΥΡΒΕΑΚνΟνΥ ΚνΠΝΑίΟδΟΝδΟΕδνΤΕΟΟδΚΟδΤνδΙδδΤΕΤίδΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑύΕν ΤΗΟΘΙδδΡνΤΚδΡΝΚΟΕΟ
ΗΙ42 1Ν1Κ	И 5	50	ΕκνΜτοεροεΕΑνείβΕΡΑΤίοδκδδΟδνωδεΝΝΚΝΡίΑνγγοακΡΰο ΡΡΚίίΙΥνΥΑ3ΝβΕ3βνΡ0ΡΡ3Οδβ3βΤ0ΡΤίΤΙ33ί0ΑΕ[)νΑνΥΥ0θαΥ Υ80ΡΡΤΡ6ΡΘΤΚνΐ)ΙΚΒΤνΑΑΡ3νΡΙΡΡΡ80ΕΟΙΚ56ΤΑ3νν0ίΧΝΝΡΥΡ ΚΕΑΚναννΚνθΝΑ103<3Νδ0Ε3νΤΕ003Κ05ΤΥ31δδΠ.Τ15ΚΑ0ΎΕΚΗ ΚΥΥΑΟΕνΤΗΟείδδΡνΤΚεΡΝΡΟΕΟ

- 25 023555

Η1 641Ν1Κ	И6	51	ΕΐνΐΤ05Ρ>βΤΕ3Ε3ΡβΕΡΑΤί30ΡΑ505Υ55βΥΙΑΥΕΑ'ΛΥ(ΜΚΡ60ΑΡ ΡΙ_Ι_1ΥΟΑ55ΤΑΤΟΙΡΟΚΡ3<35(352Τ№Τ1_ΤΙδΡΙ_ΕΡΕΟΡΑνΥΥΟΟΟΥ555 Ρ,ΤΡΘ02ΤΡίΕΙΚΚΤνΑΑΡ5',ΤΙΡΡΡ20ΕαΐΚ52ΤΑ5'ΛΌΙίΝΝί;ΥΡΗΕΑ Κν0ννκν0«ΑΙΟ5ΟΝ5ΟΕ5νΤΕαθ6ΚΟ6ΤΥ5Ε5εΤίπ.δΚΑΟΥΕΚΗΚνγ АСЕУТНООЬЗЗРУГСЗГОКеЕС
Η1 661Ν1Κ	И7	52	ΜΟΗΤΟ3Ρ5315Α3ν(30ΡνΤΙΤΟΟΑ500Ι5ΝΡΙΜνΥΥ0ΟβΡΕΚΑΡΚ1±ΙΥ ΕΪΑ5ΜίΕΤ6νΡ3ΚΡδ68Θ3βΤ0ΡΤΠΊ55Ε0ΡΕ0ΙΑΤΥΥ0α0Υ0ΝΙΡΡΤΡ ΟΡΘΤΚνΟΙΚΡίνΑΑΡδνΡΙΡΙΨδΟΕΟίΚδσΤΑδννΟΙΙΝΝΡΥΡΡΕΑΚνα ννκνθΝΑΙΟ3εΝ3ΟΕ8νΤΕΟ05ΚΟ5ΤΥ5155Τ1715ΚΑ0ΥΕΚΗΚνΥΑΟΕ νΤΗββ|.55ΡνΤΚ5ΡΝββΕβ
Ж721Ν1Κ	ιιβ	53	ωθΜτα5Ρ$5ί3Α3ναοκντιτοοΑ5αοΐ3ΝΥίΝννγαακρεκΑΡκιιΐγ ΟΑ5ΝίΕΤ6νΡ3ΡΡ563β3ΟΤβΡΤΡΤΙ55ΕΟΡΕΟΡΑΤΥΥΰ(Κ1ΥΟΝ11ΤΡβ ΰΟΤΚνΕΙΚΡΤνΜΡ5νΡ!ΡΡΡ80ΕαίΚ£6ΤΑ5νν0Ι_Ι.ΝΝΡΥΡΚΕΑΚναΥν Κν0ΝΑΙΟ5ΟΝ3ΟΕ3νΤΕαθ5ΚΟ3ΤΥ3Ε33ΤΙΤί3ΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑ0Εν ΤΗ06ί55ΡνΤΚ5ΡΝΡ6Ε0
Ж 901Ν1Κ	119	54	□ΙΟ^α5Ρ53Ε5Α3νθΟΚ\σΐΤΟΟΑ3αθΙ5ΝΥΙΝννΥΟΟΚΡβΚΑΡΚΙ±ΙΥ [>АЗМЬЕТ6УР5КР5СЗС5СТОРТРТ133ЕОРЕО1АТ¥УСйКУОО1Р1ТРС 0ΘΤΒΙ£ΙΚίίΤνΑΑΡ3νΡΙΡΡΤ30Ε0ίΚ36ΤΑ5ννα.ίΝΝΡΥΡβΕΑΚνθνΥ Κν0ΝΑί050Ν50Ε5νΤΕ003Κ05ΤΥ3Ε55ΤίΤί5ΚΑ0ΥΕΚΗΚνΥΑ0Εν ΤΗ0α.55ΡνΤΚ5ΡΝΒ6Ε0
Η2103 1Ν1Κ	120	55	О1ОШа5РБ515А59еОР\ПТСС1А5а015МУ1МтООРРОКАРКШУ □Α3ΝίΕΤ6νΡ3ΚΡ5(35Ο5θΤ0ΡΤΡΤΙ351ΟΡΕ0ΙΑτΥΥ0ααΥ0Ν11ΤΡθ 22ΤΚνΕΙΚΡΤνΑΑΡ5ΥΡΙΡΡΡ50ΕΟΙ_Κ5ύΤΑ3ννΐ2ΐ_Ι_ΝΝ'ΥΡΡΕΑΚνθΆ Κν0ΜΑίΟ3ΟΝ3ΟΕ8νΐΈΟθεκθ5ΤΥ3133ΤίΤ15ΚΑ0ΥΕΚΜΚνΥΑ0Εν ΤΗϋϋΕ33ΡνΤΚ5ΕΝΡΘΕΰ
Η2131 1Ν1Κ	Ι_21	56	Μ(ΜΓα3Ρ5&5Α5νβ0Κ\Π1Τ0ΚΑ3αΰΡ3ΝΥυ\νΜΜΚΡ6ΚνΡΚΙ±ΙΥ ΛΑ3Τΐα30νΡ5ΡΡ303β5βΤ0ΡΤΙΤΙ55ΐαΡΕ0νΑΤΥΥ30ΚΥΝ3ΑΡίΤΡ ΟΟΟΤΚνΕΙΚβΤνΑΑΡενΡΙΡΡΡδΟΕΟΕΚδΟΤΑδΥνείΕΝΝΡΥΡΡΕΑΚνΟ \νΚνθΝΑί03βΝ5αΕ5νΤΕΟ0δΚΟ5ΤΥ5155ΤΕΤ13ΚΑ0ΥΕΚΗΚΥΥΑΟΕ ντΗαα.33ρντκ3ΡΝΚ0Ε6
Η2 360 1Ν1Κ	122	57	□ίΟΜΤΟ3Ρ831.3ΑΞν0ΟΚνΤΙΤεΡΑ300ΐΝΝΥ£ΑνΥΥ0α:<Ρ0ΚνΡΟ^ΙΥ νΑ5ΤΕα30νΡ5ΡΕ3Εε23ΟΤΟΡΤΙΠ55ί0ΡΕ0νΑΤΥΥ0ΟΚΥΝ52ΡΡ·Τ ΟΡΟΓΚνΟΙΚΡΤνΑΑΡενΡΙΡΡΡεΟΕΟίΚδΟΊΑονναίΝΝΡΥΡΡΕΑΚνΟ \Μ<νθΝΑί03βΝ50Ε3νΤΕ005Κ03ΤΥ3.55ΤΙΤ15ΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑ(Χ утнсю1.ззруткзрмк6ес
Η2 360 1Ν1Κ5Μ	1_23	58	ΟΙΟΜΤαδΡεεΕδΑενΟΟΡνΤΙΤΟΡΑεΟΟΙΝΝΥΙΑΥΥΥΟΟΚΡΟΚνΡΚΙΙΙΥ νΑ5'Π_03βνΡ5ΡΡ3β8682ΤϋΕΤ!_ΤΙ551_0ΡΕ0\/ΑΤΥΥϋ0ΚΥΝ52ΡΡΤΕ ΟΡθΤΚνθΙΚΚΤνΑΑΡ3νΡΙΡΡΡ50Ε01Κ36ΤΑ5νν011ΗΝΡΥΡΚΕΑΚνα υηΐνθΝΑΐα5βΝ5αΕ5νΤΕΟΟ5ΚΟ5ΤΥ3ί537ίΤί3ΚΑ0ΥΕΚΗΚνΥΑ(Έ νΤΗαθί53ΡνΤΚ5ΡΝΚ6ΕΟ
Η2 369 1Ν1Κ	1.24	59	ΟΙΟΜΤα3Ρε315ΑεΥβΟΡ\σΐΤΟΡΑ3Ω3Ι3ΡΥΕΝΥΛΌΟΚΡβΚΑΡΜΙΙΗ ΑΑ88ΕΟ86νΡ8№865686Τ0ΓΠ.ΤΙ38ί0ΡΕΟΡΑ1ΎΥ0ΟΟ8ΥΙΤΡΡ8Ρ οαοτκίΕίκρτνΑΑΡενρίρρρεοΕακεοτΑεννοιίΝΝΡΥΡΡΕΑκνα ЖУОНАШЗСНЗОЕЗУТЕООЗКОЗТУЗЕЗЗТтЗКАОУЕКНКУУАСЕ νΤ400ί33ΡνΤΚ5ΡΝΡ6Εβ

- 26 023555

Н2 380 1Ν1Κ	|_25	60	οιαΜτοδΡδείδΑδνοοκντιτοκΑδαοΐίϊΝοιοννγοοκροκΑΡΚίΐΐΐγ ΑΑ88ί<ϊ8θνΡ8ΚΚΟ8Θ86ΤΒ41ΤΙΝ81ΟΡΕΟΡΑτΥΥα.ΟΥΝ8ΥΡΙΤΡ βΟ6ΤΚΙΕ!ΚΒΤνΜΡ5νΡΙΡΡΡ30Ε0ΕΚδ6ΤΑ5νν0Ι_Ι_ΝΝΡΥΡΚΕΑΚν0 ντκνοΜΑίΟδΟΝδΟΕδντΕοοδΚΟδΤΥδίδδτιτίδκ/ΏΥΕΚΗκνγΑςΕ νΤΗΟδΙδδΡνΤΚδΡΝΡΟΕΟ
Н2475 1Ν1Κ	126	61	ΟΙΟΜΙΟδΡδδΙδΑ5ν60ΚνΤΙΤΟΟΑ»10ΙδΝΥΙΝνΐίΥ(Χ1ΚΡΟΚΑΡΚΡΙΙδΟ ΑδΝΙΕΤΟνΡδΚΡδΟδΟδβΤΟΡΤΡΙΙδδίαΡΕΟΙΑΤΥΥϋΟαΥΟΝΙΡίΤΡβ <ΧΤΚνΕΙΚΡΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ50Ε0ίΚ2βΤΑ5νν0υΝΝΓνΡΡΕΑΚνΩΖ/ ΚνϋΝΑίΌδβΝδΟΕδνΤΕΟΟδΚΟδΤΥδΙ-δδΤΙΤΙδΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑϋΕν ΊΒΟΟΙ_55ΡνΤΚδΡΝΚ6ΕΟ
Н2 5О8 1М1К	127	62	οινΜτοδΡίδίρντροΕΡΑδίδοκδδίΐδΐίΗδΝδΥΝΥίοννγιακρβαε РОР1Л1631ЯА5в№ОКР8бЗб88ТОРМ.'ПЗНУЕАЕОУвУУУСМСМ. απ»ΙΠΡΘΟΟΤΙ<νΕΙΜΠνΑΑΡ5νηΡΡΡ8ΟΕ01Κ8βΤΑ8ννθΙ±ΝΝΡΥΡ ΚΕΑκνοννκνοΝΑωδΟΝδΟΕδνίΕαοδκοδΤΥδίδδΐιτίδΚΑΟΥΕΚΗ ΚνΥΑΟΕνίΉΟείδεΡνΤΚδΡΝΡΟΕϋ
Н2 534 1Ν1Κ	Б2в	63	ΕίνιτοδΡοραδντρκΕκνπτϋβΑδΟΥΐθδδΐΗννΥοοτροαερκίΒΝΥ νδα^δΟνΡδΒΡδΟδΘδΘΤΟΡΤΙΤΙΝδΙΕΑΕΟΑΑΤΥΥΟΗΟδδδΙΡΡΤΡΟ ρετκνακκτνΑΑΡδνπρρρεοΕΟίΚδοτΑεννδίίΝΜΡΥΡΕΕΑκνοίήί ΚνϋΝΑίΟδΟΝ5αΕδνΤΕαΰ3Κη5ΤΥΗ55ΗΤ15ΚΑΟΥΕ<ΗΚνΥΑΟΕν ΤΗ0α.83ΡνΤΚ5ΕΝΚΘΕ0
Н2 550 1Ν1Κ	129	64	ΟΜιΙΤΩδΡΟδΙΑνείβΑβΑΤίεΰΚδδΟδνΐΥεδΝΝΚΝΥΙΑνΛΌΟΚΡΟΟ ΡνΚίυΥν/Α5ΤΕΕ56νΡΟΡ!Ρ305β36ΤΟΡΤΙΤΙ5ΤΐαΑΕθνΑ\/ΥΥΟΟΟΥ ΥΤ1ΡΡΤΕΘ(ΧΪΤΚνΕ1ΚΚΓνΑΑΡδνΡΙΡΡΡδ0Ε01Κδ6ΤΑ5νναΧΝΝΡΥΡ ΚΕΑΚνΕΑΜ<νϋΝΑ1Ο30Ν3ΩΕ5νΤΕα33Κ05ΤΥ5155Τπΐ5ΚΑ0ΥΕΚΗ ΚνΥΑΟΕνΤΗΟΟίδδΡνΤΚδΡΝΡΟΕΟ
Н2 651Н1К	изо	65	0Ι0ΜΤαδΡδδΙ^Α5ν60ΚνΤ1Τα0Αδ00ΙΝΝΥΙΝννΥ00ΚΡ0ΚΑΟ(υ.ΙΥ □Α3ΝΙΕΤϋνΡ5ΒΕ565ε5ΟΤ0ΕΤΕΤ.55ΐαΡΕ0ΙΑΤΥΥ0ααΥΟ0ΠΤΓ0 ΟΟΤΚνείΚΚΤνΑΑΡενΡΙΡΡΡδΟΕΟίΚδΰΤΑδννΟΙΙΝΝΡΥΡΡΕΑΚνΟίν Κν0ΝΑΐα5ΟΝ50Ε5νΓΕΟ03Κ03ΤΥ3155Τ1ΤΙ3ΚΑΟΧΕΚΗΚνΥΑΟΕ7 ТНОаЗбРУГКЗРЫКСЕС
Η1131Ν1Κ	131	66	ΩίΟΜΤΟδΡδδίεΑδνοοβντιτδΟΑδοοίδΝΥίΝννγοοκροκΑΡβίΐγ ϋΑδΝΙΕΤΟνΡδίίΡδδδΟδβΤΟΡΤΡΙΙδδίαΡΕΟΙΑΤΥΥΟΟΟΡΟΝΙΡΡΤΡΟ Θ0ΤΚνΕ3ΚβτνΑΑΡ3νΡΙΡΡΡδ0ΕαίΚ56ΤΑδνν01.Ι.ΝΝΡΥΡΚΕΑΚν0 ννκνΟΝΑΙΟδθΝδΟΕδνΤΕαΟδΚΟδΙΥδΙδδΤΙΤίδΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑδΕ νΤΗΟΟίδδΡνΤΚδΕΝβΟΕΟ
Н126 1Ν1Κ	1.32	67	□(ΟΜΤΟδΡδδΙδΑδνΘΟΚνΤΙΤΟΟΑδΟΟΙδΝΥΙΝΙΑίΥαΗΚΡΰΚΑΡΚΙΙΙΥ [1Α5ΝΙΕΤθνΡεί(Γ5Θδ0δ6Τ0ΡΤΡΤΙδ5ωΡΕ0ΙΑΤΥΥ0ααΥΙ»ΙΙίΤΕ6 ΕδΤΚνΕΙΚΗΤνΑΑΡδ^ΙΡΡΡδΟΕΟΙΚδΟΤΑδννΟΙΙΝΝΡΥΡβΕΑΚνονν Κν0ΝΑί03θΝ5αΕ3νΤΕ(»3Κη5ΤΥ3ΐ35ΤίΤί3ΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑεΕν ΤΗαΰίδδΡνΤΚδΕΜΚΟΕΟ
Η113Н1 13 1ΝΥΚ2ΚΚ	1.33	68	ΟννΜΤΟδΡΙδΙΡνπβΟΡΑδΙδδβδδΟδίνΥδΟΟΝΤΥΠΛΚΡΟΟΒΡβΟ δΡΒΡΕ1ΥΚνδΝ1Λ/ΟδενΡΟΚΡ503056ΤΟΡπΚΙδΡ\ΐΑΕθνθνΥΥΟΜΟ ΟΤΗ1ΝΡΗΘΙΡΤΡΘΡ6ΊΚνθΙΚΚΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡδΟΕΟίΚ55ΤΑ5ννθ1-Ε ΝΝΡΥΡΚΕΑΚνΟΙΜΚνΟΝΑίαδΟΝδΟΕδνΤΕαΟδΚΟδΤΥδΕδδΤΕΤίδΚΑ □ΥΕΚΗΚνΥΑΟΕνίΉΟΟίδδΡνΤΚδΡΝΗΟΕΟ
Η1 26Н1 26 1№/К2КК	1.34	69	οννΜτοδΡΐ^.ρντνοαΡΑδΐδοκδδθ5ΐνγδΕ>θΜπΐΜΐί:(ΜΡΡ(Μ 3ΡΚΚυΥΚνδΝ№δθνΡΟΑΡΝΟδ656ΤΌΡΤ[_ΚΙ5ϊϊνΕΑΕθν6νΥΥΕΜΟ 0ΤΗΥ/ΡΐΤΡαΚΠΟΕΕΙΚΚΤ7ΑΑΡενΕΙΕΡΡ50ΕαΐΚ3ΟΤΑ3ννθΕΙ_ΝΝΕΥ ΡΡΕΑΚνοννκν[»ϋα.ΟδΟΝδΟΕ5νΤΕΧδΚΟδΤΥδίδ6ΤΕΤΕεΚΑΟΥΕΚ ΚΚνΥΑΟΕνΤΗΟΟΙδδΡνΤΚδΡΝΡΟΕΟ

Также и в этом случае каждая из типовых тяжелых цепей (Н1, Н2, Н3 и т.д.), перечисленных в табл. 1, может комбинироваться с любой из типовых легких цепей, приведенных в табл. 1, образуя антитело. Примерами таких комбинаций является Н1 в сочетании с любым из Ь1-Ь34; Н2 в сочетании с любым из Ь1-Ь34; Н3 в сочетании с любым из Ь1-Ь34 и т.д. В некоторых случаях антитела содержат хотя бы одну тяжелую цепь и одну легкую цепь из перечисленных в табл. 1. В некоторых случаях антитела содержат две разные тяжелые цепи и две разные легкие цепи, перечисленные в табл. 1. В других случаях антитела содержат две одинаковые легкие цепи и две одинаковые тяжелые цепи. В качестве примера антитело или его иммунологически функциональный фрагмент может включать в себя две тяжелых цепи Н1 и две легких цепи Ь1, или две тяжелых цепи Н2 и две легких цепи Ь2, или две тяжелых цепи Н3 и две легких цепи Ь3, а также другие аналогичные сочетания пар легких цепей и пар тяжелых цепей, как это указано в табл. 1.

Другие предлагаемые антигенсвязывающие белки являются вариантами антител, образованных

- 27 023555 комбинацией тяжелых и легких цепей, приведенных в табл. 1 и содержат легкие и/или тяжелые цепи, имеющие хотя бы по 90, 95, 97 или 99% идентичности с аминокислотными последовательностями указанных цепей. В некоторых случаях такие антитела включают хотя бы одну тяжелую цепь и одну легкую цепь, в то время как в других случаях вариантные формы содержат две одинаковых легких цепи и две одинаковых тяжелых цепи.

Вариабельные домены антител.

Предлагаются также антигенсвязывающие белки, которые содержат вариабельную область тяжелой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей из У_н1, У_н2, У_н3, У_н4, У_н5, У_н6, У_н7, У_н8, У_н9, У_Н10, Ун11, Ун12, Ун13, Ун14, Ун15, Ун16, Ун17, Ун18, Ун19, Ун20, Ун21, Ун22, Ун23, Ун24, Ун25, Ун26, У_н27, У_н28, У_н29, У_н30, У_н31 и У_н32 и/или вариабельную область легкой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей из У_ь1, Уь2, У_ъ3, У_ъ4, У_ъ5, У_ъ6, У_ъ7, У_ъ8, У_ъ9, У_ъ10, У_ъ11, У_ъ12, У_ъ13, У_ъ14, У_ъ15, У_ъ16, У_ъ17, У_ъ18, У_ъ19, У_ъ20, У_ъ21, У_ъ22, У_ъ23, У_ъ24, У_ъ25, У_ъ26, У_ъ27, У_ъ28, У_ъ29, У_ъ30, У_ъ31, У_ъ32, У[,33 и У_ъ34, как показано ниже в табл. 2, а также иммунологически функциональные фрагменты, производные, мутеины и варианты указанных вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи.

Сопоставление последовательностей различных вариабельных областей тяжелых и легких цепей показано соответственно на фиг. 1А и 1В.

Антигенсвязывающие белки рассматриваемого типа можно в общем виде представить формулой У_нх/У_ъу, где х соответствует номеру вариабельных областей тяжелой цепи, а у соответствует номеру вариабельных областей легкой цепи (в общем виде, х и у = 1 или 2), как показано в табл. 2.

Таблица 2

Примеры цепей У_н и У_ъ

Ссылка	Обозначение	5ЕЦ Ю N0.	Последовательность аминокислот
Н1 109 1Ν1Θ1	νΜ1	70	ΟνΟίνΟδΟΑΕνΚΚΡΟΑδνκνΒΟΚΑδΟΪΙΡΤΑΥΥΜΗΙΛΜΐΟΑΡΘΟΟΙΕ ΙΛΜΟννίΝΡΝδΘΘΤΝΥΑαΚΡαΟβνΤΜΤβΟΤεΐδΤΑΥΜΕίδΚΙίϊδΟΟΤΑν γγοΑΒΟοΥδβγοιογγγαονννοαοττντνεε
Н113 1Ν1Ο1	ν»2	71	даОШЕ86РО.УКР5ЕП.ЯТСТУ5СС5\/5$ебУУИЗ№1КОРРа<С1 Ε\ΛίΙ6ΥΙΥΥ565ΊΝΥΝΡ5Ι-Κ3ΚνΤΙ5ν073ΚΝ0Ρ5Ι-ΚΙ.33νΤΑΑ07ΑνΥΥΰ ΑΑ6ΐΑΑΤ5τυοο№/σοσπ.ντνδ3
Н1131 1Ν1Ο1	νώ	72	ΟΥ6ίνθ56ΑΕνΚΚΡ5Α3νκν3εΚΑ30ΥΤΡΤ3'ιΎΙΗνννΡ!0ΑΡε<!α.Ενν ΜΟ7/^Ρ14366ΤΝΥΑΟΚΡΟΰΡνΤΜΙΒ0Τ3Ι3ΤΑΥΜΕί5ΡίΡ300ΤΑ/7Υ йиадбСХИЕЖУУУУСМОТОбйСТТУТУЗЗ
Н1134 1Ν1Ο1	ν«4	73	(3Μ(Χ.νΕ5Ο(36ννθΡΟΒ5ίΚί50ΑΑ50ΡΤΡ35ΥβΜΗΖίνΚ0ΑΡ0Κ31Ε 1ΛΑ/ΑνΐΥ№65ΝΚΥΥΑ03νΚΟΙΐΡ7Ι5Ρ0Ν5ΚΝΤ1.ΥΙ.0ΜΝ5Ι.βΑΕΟ7ΑνΥ Υ0Α355ΙΛΙ3ΥΥ6Μ0ννί60077ν7ν58
Н1143 1Ν1Ο1	ν«5	74	ЕУО1УЕ5ееяикресякьзсАА$ер™5МА«м5¥7УКС1Ареке1.Е №/ΟΕ1ΙΚ5ΚΤΟΟΕΤ70ΝΑΑΡνΚ6βΡ7Ι5ΡΟΟ$ΚΝ7ίΥΙΟΜΝ3ίΚ7Ε07Αν γγοπο^ίίνποΡΝΥΥΥΥΟΜονννοοοττντνδε
Н1144 1Ν1Ο1	Υκ6	75	ΕνύΐνΕ36εα.νΚΡ30^β15ΟΑΑ50Ρ7Ρ5ΝΑνΥΜ5νννβ0ΑΡΟΚ(31Έ νΥν0ΒΙΚ5ΚΤ000ΤΤΟΥΑΑΡνΚ0ΡΡΤ!3Ρ005ΚΝΤΙ-ΥΙ.ΟΜΝ51_Κ7Ε07Αν γγοπΕΥΥοεοοννι/γγοΜονΜϊΟβττντνδδ
Н116 1Ν1Ο1	ν«7	76	ЕУОСУЕзееаикреези^зсААзертрзыАимзмкоАРокеьЕ ^3ΚΙΚ3ΚΤϋθν^ΥΑΑΡνΚΟΒΡ7Ι3ΙΦΟ5ΚΝΤΙ.ΥΙ_ΟΜΝ5Ι.Κ7Ε07Α νγγεττοίκιτβττγγγγγγοΜονννΰαΰττντνδδ
Η121Ν101	Υμ8	77	θνα.νθ3ΟΑΕνΚΚΡ0Α5νκν3ΟΚΑδ6Υ7Ρ75ΥΟΙ3νννΐϊΟΑΡ6αθίΕ1Λ/ Μ6ννΐδΑΥΝ(3ΝΤΜΥΑαΚίΟΟΚν7ΜπθΤδ757ΑΥΜΕυϊ^Ρ300ΤΑνΥΥ ΟΑΙϊΕ81Λ/ΡβΕνΡΕ0Υνν6Ο67ΐντν55
Н126 1Ν101	Ун9	76	Ενα.νΕδΟβΟίνΚΡΟΟδΙΚί50ΑΑ33Ρ7Ρ5ΝΑν№<3№/ΙΪΟΑΡ3Κ31Χ 1ΑΑΛ3ΚΙΚδΚ7ϋ6677ϋΥΑΑΡνκαΚΡ7Ι5Ρ005ΚΝ71ΥΚ1ΜΝ51Κ7Ε07Αν ΥΥ0ΤΤΈΥΥΘ56βννΛΎ6Μθν'ΛΌ0(3ΤΤν7ν33
Н1 27 1Ν1Ο1	УнЮ	79	Εν0ΐνΕ3ΘΟΘΐνΚΡ663ίβί50ΑΑ5ΟΡΤΡ3ΝΑ\νΜ3νΛΤ!0ΑΡ(3Κ0Ι£ ννν6ΡΙΚδΚΓ0β6Τ70ΥΑΑΡνΚ0ΚΡ7Ι5Κ[)05ΚΝ71Υ10ΜΝ51Κ7Ε07Αν γγοττοοΑτνντρβγγγγΰτονΛοαογτντνδδ
Н130 1Ν1Ο1	ν«11	60	аУ01УО30АЕ7ККРСА5УКУ5СКАббУ7Р75¥О13№7КОАР6ОС1£1Л( ΜθνΥ15ΑΥΜ0Μ7ΝΥΑ0Κ10ΟΕνΤΜΤΤ0Τ5757ΑΥΜΕίΡ2ίΚ5Ο07ΑνΥΥ ΕΑΡΕ31ΝΡ6ΕνΡΡΟΥ1ΛΚ3Ο67ΐν7ν53
Н133-1 1Ν131	νΗ12	61	ανθΐνα50ΑΕνΚΚΡΟΑ5νκν30ΚΑ5βΥΤΡ7ΰΥΥΜ№ΥνΡ!ΟΑΡ&αΰΙΈ νΥΙιθνΐΝΡΝ3007ΝΥΑαΚΡ0βΚνΤΜ7β075137ΑΥΜΕΙ£ΡΙΒ5007ΑΡ ΥΥ0ΑΚ[35Ι№ΥΗΝ№0ΡΥν(ΜΟ7ΐν™55
Н1 33 1Ν1Ο1	νΗ13	32	0ν0ΐν0δ5ΑΕ7ΚΚΡ6Α8νκν50ΚΑ50Υ7ΡΤ3ΥΥΜΗνΥνΡ0ΑΡ0Ο01Ε 1Λ/Μ(ϊ1Λ))ΝΡΝ8007ΝΥΑαΚΡΟ<3ΚνΤΜΤΡΟΤ5157ΑΥΜΕ15ίΐΙΡ5007ΑΡ ΥΥΟΑΙ®5№Α/ΥΗΝν№ΟΡννθΟβ7ίντν53

- 28 023555

Η1 34 1Ν1Θ1	ν«14	83	Εν0Ι_νΕ56θθ[.νΚΡ068Ι-ΡΙ-3βΑΑ50ΕΤΡδΝΑννΜ3Μ/Κ0ΑΡ6Κ61Ε ΙΑ8/βΡΙΚδΚΤΟΟβΤΤΟΥΑΑΡνΚβΚΡΤΙ3Β005ΚΝ7ίΥΐαΜΝδΙΚΤΕΟΤΑν ΥΥΰΤΤΟΰΑΤνντΡΟΥΥΥΥΟΤΟνννΟΟβΤΓ/Τνδε
Η1 39 1Ν1β1	ν«15	84	Εν0ίνΕ56ΟΟΐνΚΡΌ651Κ150ΑΑ5ΟΡΤΡ5ΝΑννΜδνΥνΡ0ΑΡΟΚ01£ ΙΛ8/6ΚΙΚ5ΚΠ)66ΤΑΟΥΑΑΡνΚ0ΚΓΠ5ΡΟΟδΚΝΤίΥΙΟΜΝ5υσΕΟΤΑν ΥΥΟΠΈΟΡΥδΟΥΟΥΥΥΥΟΜΟνΥΛΜΘΤΤντνεδ
Η142 1Ν161	ν«16	85	ΟνΟίναδβΑΕνΚΚΡΟΑδνκνδϋΚΑδΟΥΤΡΤδΥβΙδΥΛ/ΗΟΑΡΟΟΘίΈΜΙ МСтеЗАУЛамтаУАСКЮСЯУТМГТС'ТЗТЗТАУМЕЬР.ЗЬКЗОО'ГАУУУ ΟΑΚ£δν7ΡΰΕνΡΕΟΪ\ΝΟΟΘΤΐντν88
Η1 64 1Ν161	νΗ17	86	ΕνανΕδοοαναΡοοδυ^εΜδΟΡΤΡδδΥΟΜΗνγνποΑΤΘΚοΐΕνγ ν56ΐεΤΑ00ΤΥΥΡ6δνΚ6ΒΡΝΙδΡΕΝΑΚΝδίΥ10ΜΝ3ίΚΑΰ0ΤΑνΥΥδ ΑΚΕ<3$^οΡ0ΥΜ<Μ6Τί.ντνδδ
Η1 66 1Ν161	νΗιβ	87	ονα.νΕδεοεννορεκδΐΒίδθΑΑ5ερτρδδΥεΜΗνΛ/κοΑΡεκείΕ νΥνΑνΐ’Α/Υ0Ο5ΝΕΥΥΑ05νΚδΡΡΤΙ5Ρ[>Ν5Κ5ΤίΥίαΜΝ31ΡΑΕ0ΤΑνΥ γοΑΗδδΟΝΥΥϋΜονννοοοπντνεδ
Η172 1Ν101	νΜ19	88	ΕνανΕδΟΟανΕΡΟΟδυΐΙδΟΑΑδΟΡΤΡδΤΑνΥΜδΑΐνΡΟΑΡΟΚΟΙΕ νννεΚΚ3ΐσθε0πθΥΑΑΡνΚΟΡΡΤΙ5ΚΟΟ5ΚΝΤΙ.ΥΙ.ΟΜΝ5Ι.ΚΝΕΟΤΑν γγσττΕΟΡΥδΝΥεγγγγενονννοαεττνΐνδδ
Η2103 114102	ν«2Ο	89	Е\/О1.УЕ360С1-УКРОв81.Т1.3СААЗВРТРМ1АУУМ5№/Р0АРСКС1-Е №/βΡ!Κ5ΚΤΠ6βΤΤ0ΥΑΑΡνΚ0ΡΕΤΙ5Κΰ05ΚΝΤΙΥΙ_ΟΜΝ51.ΚΤΕ0ΤΑν γγοπΕΥΥΗΐίτοδΓΥΥδΥΥΟΗονν/οαοπντνδδ
Ηί 90 1Ν1Ο1	Υη21	90	ОТО1УЕ5еС6УУОРеН51В1бСАА8СРТР35УСМНтР0АРСК61Е ΙΛΑ/ΑνίνΥΥΟΟδΝΚΥΥΑΟδνΚΟΚΠΊδΗΟΝδΚΝΤίΥΙΟΜΝβΙΚΑΕΟΤΑνΥ Υ€Α8358ΝΡΥ0Μ0νννβ0βΤΤΥΤν33
Η2131 1Ν1Ο2	Μ»22	91	€ΜΧ<ϊ36Ρ<ΐνΚΡ3ΕΪ1^ίΤ0Τν5ΰΰ3Ι5ΜΥΥ\ΑίδννΐίΜ5Α6Κ6Ι±Μ ΟβΙΥΤδΟδΤΗΥΝΡΒίΚβΗΙΙΜδνΟΤδΚΝΟΡδΙΚΕδδνΓΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚΟ κνργονιυνννοαεπντνδδ
Η2291 1Ν162	Υη23	92	<Μ^νΕ5006ννθΡ6Κ51β13ΰΑΑ56ΡΤΡ53ΥΟΜΗνννΡΟΑΡαΚ6Ι.Ε ν^Μ^065ΥΚΥΥΑΟδνΚ№ΡΤΙ3Ρ[)ΝδΚΝπ.ΥΙ.ΟΜΝεΐ.ΡΑΕΟΓΑνΥ ΥΟΑΚΕΟΟΥδΟΥΥδΜΟννΥΟΟΟΤΤνΤΥδδ
Η2 360 1Ν1Θ2	ν»24	93	ΟναΐνΟδεΑΕνΚΚΡΟΑενκνδΟΚνδεΥΤΙΤΕΙδΜΗνγνΡΟΑΡΟΚΟΙΕνΥ Μβ0ΕΟΡΕ(Χ3ΕΠΥΑΟΚΕΟ6ΚνΤΜΤΕΟΤ5ΤΟΤνΥΜΕ1551Ρ5ΕΟΤΑνΥΥ ΟΑΤΟΥΜΠΡΟδνινοΗδΥΥβΜοννγοαοττνινδδ
Η230Ο 1Ν1Ο2 8Μ	Υη25	94	ΟνϋνΟδΟΑΕΥΚΚΡΟΑδνΚνδΟΚνδΟΥΤΙΤΕίδΜΗνννΡαΑΡΟΚΟΙΕνν ΜββΡΟΡΕΟβΕΤΙΥΑΟΚΕΟβΚνΤΜΙΕΟΤεΤΟΤΑΥΜΕΙδδίΡδΕΟΤΑνΥΥ θΑΤ6νΜ(ΓΡ6θνινθΗδΥΥ6Μονννεο6ττντνδδ
Η2 369 1Ν162	ν«26	95	ανοίναδθΑΕνκκρ6Αδνκνδθκνδ6ΥΐΕΤΕίδΜΗνννραΑΡθΚ6ίΕνγ Μβ6ΕΟΡΕΟ6ΕΤΙΥΑΟΚΡΟΟΡνΤΜΤΕΟΤ5ΤΟΤΑΥΜΕΙ_55Ι_Κ5Ε0ΤΑΥΥΥ ΟΑΤΚΑΘΤπΑΥΥΥΥΑΜΟνννΘΟΟπνΓνδδ
Η2 380 1ΝΚ32	νΗ27	96	ΟνΟίΟΕδδΡείνΚΡδΕΤΙδίΙΟΤνδββδΙδδΥΥ^δνΥΙΡΟΡΡβΚΟΙΈ^Ι ΟΥΙΥΥ5ΕΝΤΝΥΝΡ31Κ3№Τ15ΙΟΤ3ΚΝΟΡ3ίΚ1.55νΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΟΙ Ατρρρογνγβαΰτι,ντνδδ
Η2 475 1Ν1Ο2	ν.28	97	ΟνΟίνΕδΘΟβνναΡβΚδΙΡίδΟΑΑδβΡΤΡίδΥΘΜΗΥννΡΟΑΡβΚβΙΕνν νΑνΐΥ7ΥΟ63ΝΚΥΥΑ05νΚ0ΡΡΤΙ5Ρ0Ν5ΚΝΤΙ_ΥΙ_αΜΝ5Ι_ΚΑΕ0ΤΑνΥΥβ ΑϋδδοογγοΜΟΥννβΟβπνΓνδδ

- 29 023555

Н2 5О8 1ΝΚ32	Ун29	98	ανανα50ΑΕνΚΚΡ6Α8νκν5Ο<ν36ΥαΤΒ-8ΜΗ1Λ/νΚ0ΑΡΘΚ6ίΕ1Λί ΜΟΟΡΟΡΕΟβΕΤίΥΑΟΚΡΟβίϊνΤΜΤεΟΓδΤΟΤΑΥΜΕίδδΙΒδΕΟΤΑνΥΫ САТАе1Е1Й№ОРЖХЗСТЬУТУ5$
Н2 534 1Ν102	νΗ30	99	αναΰεδδΡΟίνκρδοτίδίτοτνδοαδίδδοογνννδήίβΟΗΡαΐίίΐΕ ν7ΙΟΥΙ5Υ560ΤΥΥΜΡ51Κ38ίΤ15νθΤ5ΚΗΟΡ51Βίδ5νΤ3ΑΟΤΑνΥΥΟΑ 5ίΟΙΥΟΟΥΡΟΥΜΘΟθηνΓ755
Н2550 1Ν102	ν«31	100	0ναν0δθΑΕΥΜΐΡ6Α5νκν5ΟίΑ30πίΤ5Υ0Ι5νννΒ0ΑΡ6αθίΕνν ΜΟΜΙΙ3ΑΥΝΘΝΡΝΥΑΟΚΡΟ6ΗνΤΜΠ0Τ5Τ3ΤΑΥΜΕΙ-Β51Κ500ΤΑνΥΥ САКОаО-ЬСРОЕкЕСкРО^бОеТЬТТУЗЗ
Н265 1Ν162	νΗ32	ιοί	Ενα.νΕ5Ο06ΐνΚΡ00δΙΒ15ΟΑΑδ6ΠΡ5ΝΑ1Λ/Μ51ήίνΒ0ΑΡΰΚ61Ε \Υ/0βΙΚΤΚΤ0Ο3π0ΥΑΑΡ\'Κ0«ΡΤΙ5β002αΝΤΙΥί014Ν31ΚΤΕ0ΤΑν π0ΤΤΕΥΥθνΤ03ΡΥΥΥΥΥ6Μ0ννν000ΤΤντν5δ
Η1109 1Ν1Κ	νπ	102	οιΟΜΤοεΡδδίεΑδνδΜϊντιτοοΑδΟΝίδΝΡίοννγοοκροκΑΡΝίΐΐγ 0Α20ί0ΡονΡ5ΡΡ3οεε53Τ0ΡΤΡπ55ΐαΡΕ0ΐΑΤΥΥ0ααγν5ΐΡίτρ ΟΟΟΤΚνΕΙΚ
Η1 1Ε9 1Ν1Κ5Μ	νώ	103	ϋΐαΜταεΡ5α5Αδνο[)βντιτοοΑ3θοΐδΝΡίονγγ(κικρβΚΑΡκιιΐγ 0Α30Ε0Ρ<3№3ΒΡ30δ6ε0Τ0ΡΤΡΤΙ5&αΡΕ0ΙΑΤΥΥ0ααΥν5Ι_ΡΙ_ΤΡ 660ΤΚνΕΙΚ
Η1 131 1Ν1Κ	ντ	104	0ΝνΐΗΤαΤΡ18Ε8νΤΡ(3ΟΡΑ3Ι30Κ53α51ίΗ3[Χ3ΚΤΥΕΥΛΎίΟΚΡΟΟΡ Ρ0ωΥΕΑ3ΝΒΡ3ΘνΡ0ΚΡ3ε363ΟΤ0ΡΤ1ΚΙ5ΡνΕΑΕ0ν0νΥΥαΛΟ5Ι ΟίΡίΙΡΟΟΟΤΚνΕΙΚ
Η1 134 1Ν1Κ	νι4	105	0ΐαΜΤΟ5Ρ5εί5Α,3ν3№νΤΙΤ0ΟΑ500ΙΝΝΥΙΝνΥΥΟΟΚΡΌΚΑΡΚΕΙΙΥ ΟΑ»υ06νΡ3№3β568βΤ№ΙΤ·|δΛΟΡΗ)ΙΑΤΥΥΟΟΟΥΟΝΡΡΠΡ6 66ТОЕ1К
Η1143 1Ν1Κ	νιδ	106	0ΐαΜΤα8Ρ58ί2Α8ν30βνΤΙΤ0ΟΑεθ0ΙΜΝΥΙΝ\νΥα3ΚΡ6ΚΑΡΚίΙΙΥ 0Τ2ΝΕΕΡΟ'7Ρ8ΚΡ505050Τ0ΕΤΡΤΙ55ίΰΡΕ0ΙΑΤΥΎ0ΟΩΥΟΝ[1ΤΡ5 06ΤΑΙ.ΕΙΚ
Н1144 1Ν1Κ	Уьб	107	01амтозрза.ЗАЗуе[жут1ТСОА5оазмУ1ктонкрекАРКшу ΟΑ5ΝΕΕ76νΡ3«(:565636ΤΟΡΤΡΤΙ53ίΟΡΕΟΙΑΤΥΥΟθαΥΟΝυ.ΤΡα ССТОЕ1К
Μ1 10 1Ν1Κ	νι7	103	ΟΐαΜΤΟ5Ρεεΐ.5Α3Υ3[>ΡνΤΙΤ0ΟΑ5Ο0Ι3ΝΥΙΛΛνγ0ΟΚΡ0ΚΑΡΚΡίΙΥ 0Α5ΝίΕΤθνΡ3ΚΡ50505€Τ0ΡΤΡΤ153ί0ΡΕ0ΙΑΤΥΥ0Ο0ΥΟΝυΤΡ6Ο ΟΤΡίΕΙΚ
Η121Ν1Κ	νιδ	109	ϋΐνΜΤΟ5ΡΟ3ίΑν^6ΕΚΑΤΙΝΟΚ3305νω53ΟΗ№ΙΥίΑ№ΥαθΚΡθα ΡΡΚαΐΥ™5ΝΚΕ3θνΡΙ)№ε05ε30Τ0Ρ81ΤΙ33ί0ΑΕ0νΑνΥΥ€ΟΟΥ Υδορρτρερετκνοικ
Η121Ν1Κ	νι9	ио	ΓΙΥΜ1Ο3ΡΌ51.ΑΥ5Ε6ΕΚΑΤΙ1ΐεΚ550$νω55ΟΝΚΝΥΙΑ'ΛΥααΚΡβΟ РРКШУЖА514ВЕ55УРОКР53585 6Τ0ΡΤΠ1531-0 Α ΕΟΥΑνΥΥΰΟΟΥ УЗОРРТРСРСТКИЖ
Η1 27 1Ν1Κ	νι10	111	(Χ»ΜΤΟ5Ρ5315Α5νε0βνΤΙΤεθΑ500ΐ3ΝΥΙΚννΥ0ΟΚΡεΐ(ΑΡΚ111Υ ΟΑ3ΝίΕ7ενΡ5βΡ5ε5ε30ΤΟΡΤΡΤ(55Κ3ΡεθΙΑΤΥΥΟ(Κ1ΥΟΝυ.ΤΡΘ ΘΟΥΚΥΕΙΚ
Η1301Ν1Κ	νπι	112	ανΜΤα8ΡΟ5ΕΑΥ5ΕβΕΚΑΤΙ[ΧΚ5300νΐ055ΝΝΚΝΡίΑννΥααΚΡΟΩ ΡΡΚίυΥίνΑδΝΒΕδεΥΡνΕΡδβδΟδΟΤΟΡΤίΤΙδδΕΟΑΕΟνΑίΥΥΟΟΟΥ Υδορρτρορετκνοικ

- 30 023555

шзз-1 1Ν1Κ	Й.12	113	ΟΙΟΜΤΟ8Ρ5515Α5ν60Γ?νΤ(Τ0ΚΑ5Ο5(50ΥΙΝννΥαθΚΡΰΚΑΡΝΙ1,Υ ΑΑ551Ο$(3νΡ5ΡΡ5θεθ5ΟΤ0ΡΤΙΤΙ55ΐαΡΕ0ΡΑΤΎΡεαΐ3ΤΥ5ΟΡΡΤΡ ОРбТКУЙК
Η1341Ν1Κ	Уи13	114	6ΙΟΜΤ63Ρ5^5Α3ν60ΚνΤΙΤεθΑ5αθΙ5ΝΥίΜνΥΥθαΚΡ(3ΚΑΡΚΙ1ΙΥ ΟΑ5Νί£ΤΘνΡ$Ρ(Ρδβ3650ΤΟΡΤΡΤΙ55ΐαΡΕΟΙΑΤ'νΎΟθαΥΟΝίίΤΡΟ ΟΟΤΚΥΕΙΚ
Η1391Ν1Κ	7ι14	115	0ΙΟΜΤΟ3Ρ3815Α3ν60ΒνΠΤΟΟΑ3α0Ι5ΝΥΙΜ«ΥθαΚΡβΚΑΡΚνυΥ ΟΑ3Νί£Τ6№8ΒΡ305650ΤΟΡΤΡΠ5310ΡΕΟΙΑΤΥΥΟΟ<1ΥΟΝΙΙΤΕ6 οστκνεικ
Н1 42 1Ν1Κ	νι15	116	0)νΜΤΟ5ΡΟ^Ανεΐ0ΕΚΑΤΙ00Κ350£’/ί055ΝΝΚΝΡΙΑν/Υα0ΚΡ0Ο ΡΡΚωΥΥΪΑ5ΗβΕ5βνΡΟΒΡ£Οδ656ΤΟΡΤίΤΙ5510ΑΕθνΑνΥΥΟΟΟΥ Υ5ϋΡΡΤΡ6ΡΟΤΚνϋΙΚ
Η1 64 1Ν1Κ	V116	117	ΕΐνΐΤ05Ρ5Τί$1$Ρ6ΕΡΑΤί5€ΡΑ5Οδν55ΘΥΙΑΥίΑνΥΥ(ΚΙΚΡΟΟΑΡ ΚΙ±ΙΥδΑ35ΤΑΤΟΙΡ0ΙΐΡδ6δΟ3©ΤΙ)ΡΤΙ.ΤΙ5ΒΙ-ΕΡΕΟΡΑνΥΥδαθΥ033 ΡΙΤΡΟΟΟΤΕΙΞΙΚ
Η1661Ν1Κ	νι.17	118	СЯ0МТ03РЗЗи5АЗ\'С0ЕУТ1ТСОА5О013ипмЛ7ООЕРСКАРКШУ ΒΑ5ΝΙΕΤθνΡ3ΚΡ3Θ5Ο5ΘΤ0ΡΤΡΤΙ53ΐαΡΕαΑΤγΥ0θαΎΟΝΙΡΡΤΡ 8Ρ0ΤΚν0ΙΚ
Η1721Ν1Κ	νι18	119	И 0Μ703Ρ55ί8Α5ν6ΗϊνΤΙΤίΧ1Α8Ο0Ι5ΝΥυ4νίΥΟ0ΚΡ6ΚΑΡΚΙίΙΥ Ε)Α3ΝΙΈΤβνΡ5ΚΡ565Ο56Τ0ΡΤΡΤ(3δίαΡΕ0ΡΑΤΥΥ000Υ0ΝΙίΤΡ6 ΘθΤΚνΕΙΚ
Η1901Ν1Κ	νι19	120	ΚΟΜΤαεΡδΕίδΑδνΟβΚνΤΓΟΟΑΒΟΟΙδΝΥίΝν/ΥΟύΚΡΟΚΑΡΚίίΙΥ ΟΑδΝΙΈΤενΡ3ΚΡ50503ΘΤΟΡΤΡΤΙ53ίΟΡΕΟΙΑΙΥΥΟΟίΙΥΟΟίΡίΤΡΘ αατκίΕΐκ
Н2103 1Ν1Κ	νι20	121	[>10ΜΤ03Ρ3513Α3ν0Ι3ΡίνΤΙΤε0Α30Η3ΝγίΝΙήίΥΟ0ΡΡ(3ΚΑΡΚΙίΙΥ ΒΑ3Νΐ£Τΰνρ5ΡΡ363σ56τορτρτΐδ3ΐαΡΕοΐΑτγγοοαγοΝατρο (ΏΤΚνΕΙΚ
Н2131 1Ν1Κ	Υι21	122	ΜΟΜΤΟ3Ρ5δί5Α5ν6[»νΤΙΤ€βΑεθ(3ΡΕΝΥΙΑ№ΥΟΟΚΡΟκνΡΚί11Υ ΑΑδτωεονΡδΡΡεΘΚϊδΰτορπτίδδίοΡΕονΑΤΥΥοοκΥΝδΑΡίτρ ΟΟΟΤΚΥΈΙΚ
Н2 360 1Ν1Κ	\ίι_22	123	ΟΙΟΜΤ05Ρ551δΑ5νθΟΡνΤΙΤΟΡΪΑδΟΟΙΝΝΥίΑννΥθαΚΡβΚνΡαΐ±ΙΥ νΑ5Τΐα5θνΡ5ΕΡ5€5050Τ0ΡΤΙΤΙ5$Ι.ΟΡΕ0νΑΤγΥ0αΚΥΝ3ΟΡΡΤΡ ΟΡΟΓΚΙΌΙΚ
Н2 36С 1Ν1Κ3Μ	Ш23	124	ΟΙΟΜΤ(33Ρ3315Α5νθΟΚνΤΙΤδΚΑ5αθΙΝΝΥΙΑνϊΥαθΚΡΰΚνΡΚ11ΙΥ νΑ5ΤίΟ5θνΡ5ΕΡ5Ο5053Τ0ΡΤΕΤΙ351ΟΡΕ0νΑΤΎΥ00ΚΥΝ50ΡΡΓΡ бРбТКУИК
Н2Э69 1Ν1Κ	4ι24	125	О1ОМТОЗР8а.5А5УС0ВУТ1ТСНАЭа515КУ1№/УУСЮКРСКАРМа1Н ΑΑ551Ο5βνΡ5ΚΡ5Θ565εΤ0ΡΤίΤΙ551ΟΡΕϋΡΑΤΥΥ0αα5ΥΙ1ΡΡ5Ρ ΟΟΟΤΚίΕίΚ
Н2 380 1Ν1Κ	νι25	126	οιοΜτοδΡδδίδΑδνΘΟΒντιτοκΑδαΰίΡΝοίΒννΥΟΟίίΡΟΚΑΡΚΒυΥ ΑΑ55ί03ΘνΡ3ΗΡ563636ΤΕΡΤίΤ1Ν3ί.0ΡΕ0ΡΑΤΥΥϋί0ΥΝ5ΥΡ(ΤΡ6 ΟΟΤΕίΕΙΚ
Н2 475 1Ν1Κ	νι26	127	О1ОМЮ8Р5313АЗУС0В1/Т1ТСОА5Н015тадтоаКР0КАРКРИ50 Α3ΝίΕΤ0νΡεΕΡ565236Τ6ΡΤΡΤΐε5ί0ΡΕ0ΙΑΤΥΥ0α<2Υ0ΝίΡίΤΡ0 οοτκνεικ

- 31 023555

Н2 508 1Ν1Κ	Уь27	128	0ΐνΜΤΟ5Ρ181ΡνΤΡ6ΕΡΑ5150Β55α511Κ5ΝΟΥΝΥ1Ό№ΥΙΟΚΡθαεΡ ΟΡυΥΙΟ3!ΡΑεΘνΡ0№5ΘδΟΕβΤ0ΡΑίΤΙ5ΡίνΕΑΕ0ν0νΥΥ·3Μ0Αία ΤΡΡΤΡΜΟΤΚνΕΙΚ
Н2 534 1Ν1Κ	νι23	129	ΕΙ\/ίΤΟ3Ρ0ΡθενΤΡΚΕΚνΤΙΤ3βΑ50ΥΙ3351ΗνΥΥ(Χ1ΤΡΙΧ35ΡΚίΙΙΝΥ ν5α3Ρ3θνΡ3ΚΡ503030Τ0ΡΤΙΤΙΝ5ίεΑΕ0ΑΑΤΥΥ<;Ηαε3ΞΙ.ΡΡΤΡ{ϊ ροτκνοικ
Н2 550 1Ν1Κ	1429	130	□ινΜτο5Ρθ5ΐΑν5ΐ6ΑΐΐΑτΐ5εκ53α$νΕΥ83ΝΝκκγυυΛίγαοκροα ΡΡΚΙ1.ΙΥν¥Α5ΤΡΕ56νΡ0ΚΡ535Ο5ΘΤΟΡΤΙ_ΤΙ3ΤΙ_ΟΑΕθνΑνΥΥ0αθΥ γτίΡΡΤΡΘ06τκνεικ
Η2 651Ν1Κ	νί30	131	□ΙΟ№Ο5Ρ33Ε5Α3ν6Ν?νΤΙΤΟΟΑ3Ο0ΙΝΝΥΙ_ΝνΥΥΟΟΚΡΟΚΑΡΚΙ±ΙΥ □Α3Μ-ΕΤ0νΡ5ΗΡ565Ο36ΤΟΡΤΡΤΙ351ΟΡΕΟΙΑΤΎΥ00ύΥ0011ΤΡΟ οοτκνεικ
Н113 1Ν1Κ	νιί1	132	0ΙΟΜΤΟ5Ρ55ί3Α5ν6[)ΚνΤΙΤΟΟΑ5Ο0Ι5ΝΥίΝ)ΛΎΟΟΚΡβΚΑΡΚΙ±ΙΥ ΟΑ5ΜΕΤθνΡ5ΗΡ365036ΤΟΡΤΡΙΙ5510ΡΕΟΙΑΤΥΥΟΟΟΡΟΝί№ΤΡΟ ССТК7ЕЗК
Η1281Ν1Κ	^32	133	0ΙΟΜΤΟ5Ρ5315Α5νθ№νΤΙΤ€ΟΑ500Ι5ΝΥΙΝΛΎΟΗΚΡ3ΚΑΡΚϋ.ΙΥ 0Α5ΝΙΕΙ0νΡ5ΡΡ5Ο3Ο3ΟΤ0ΡΤΤΙ351ΟΡΕΟΙΑΤΥΥ3Ο0ΥΟΝίΙΤΡΟ οοτκνακ
Η113Н1 13 1МУК2КК	VI33	134	□ννΜΤα5Ρ15ίΡνΤ16ΟΡΑ5Ι5€.Ρ55Ο3νΥ$№3ΝΤΥίΝΛΤ0ΟΡΡΟΟ5 ΡΚΚυΥΚν3№Λ)Ο3βνΡ0ΚΡ5Ο3Ο3ί3ΤϋΡΤΙΚΐεβνΕΑΕ[ϊνβνΥΥϋΜ06 τΗΥνρκ6ίΡΤΡ6Ρ6τκνοικ
Н1 26Н1 26 1ΝΫΚ2ΚΚ	Υι34	135	0ννΜΓΟ5Ρ15ίΡνΤΕβΟΡΑ5Ι3ϋΡ5303ίνΥ3·2><3ΜΤΥΙΜ\\ΈΟΟΚΡ<3Ο5 ΡΚΡυΥΚν3Μννθ5ΰνΡΟΡΡΝΟ£65ΟΤ0ΡΤΙΚ13ΚνΕΑΕϋν0νΥΥ0Μ06 ΤΗΙΛΤΡΓΓΡΘΟΟΤΟΙ-ΕΙΚ

Каждая из вариабельных областей тяжелой цепи, упомянутых в табл. 2, может комбинироваться с любой вариабельной областью легкой цепи, упомянутой в табл. 2, с образованием антигенсвязывающего белка. Примеры таких комбинаций - У_Н1 в сочетании с любым из У_ь1, У_ъ2, У_ъ3, У_ъ4, У_ъ5, У_ъ6, У_ъ7, У_ъ8, У_ъ9, У_ъ10, У_ъ11, У_ъ12, У_ъ13, У_ъ14, У_ъ15, ν_Σ16, У_ъ17, У_ъ18, У_ъ19, У_ъ20, У_ъ21, У_ъ22, У_ъ23, У_ъ24, У_ъ25, У_ъ26, У_ъ27, У_ъ28, У_ъ29, У_ъ30, У_ъ31, У_ъ32, У_ъ33 или У_ъ34; ν_Η2 в сочетании с любым из У_ъ1, У_ъ2, У_ъ3, ν_Σ4, У_ъ5, У_ъ6, У_ъ7, У_ъ8, У_ъ9, ν_Σ10, У_ъ11, ν_Σ12, ν_Σ13, У_ъ14, ν_Σ15,

У_ъ16, У_ъ17, У_ъ18, У_ъ19, ν_Σ20, У_ъ21, ν_τ22, ν_τ23, ν_τ24, ν_τ25, ν_τ26, У_т27, ν_τ28, ν_τ29 или ν_τ30, или ν_Η3 в сочетании с любым из ν_τ 1, ν_τ2, ν_Σ3, У_ъ4, ν_τ5, ν_τ6, ν_τ7, ν_τ8, ν_τ9, ν_τ 10, Υ_τ11, ν_τ 12,

У_ъ13, У_ъ14, У_ъ15, У_ъ16, У_ъ17,

У_ъ18, У_ъ19, У_ъ20,

У_ь21, У_ъ22, У_ъ23, У_ъ24, У_ъ25, У_ъ26, У_ъ27, У_ъ28, У_ъ29, У_ъ30, ν_Σ31, У_ъ32, ν_Σ33 или У_ъ34 и т.д.

В некоторых случаях антигенсвязывающий белок содержит хотя бы одну вариабельную область тяжелой цепи и/или одну вариабельную область легкой цепи из указанных в табл. 2. В некоторых случаях антигенсвязывающий белок содержит хотя бы две разных вариабельные области тяжелой цепи и/или легкой цепи из указанных в табл. 2. Пример такого антигенсвязывающего белка состоит из (а) одного Ун1 и (Ь) одного из Ун2, Ун3, Ун4, Ун5, Ун6, Ун7, Ун8, Ун9, Ун10, Ун11, Ун12, Ун13, Ун14, Ун15, Ун16, Ун17, Ун18, Ун19, Ун20, Ун21, Ун22, Ун23, Ун24, Ун25, Ун26, Ун27, Ун28, Ун29, Ун30, Ун31 или Ун32. Другой пример состоит из (а) одного У_н2 и (Ь) одного из У_н1, У_н3, У_н4, У_н5, У_н6, У_н7, У_н8, У_н9, У_н10, ν_Η11, ν_Η12, ν_Η13, ν_Η14, ν_Η15, ν_Η16, ν_Η17, ν_Η18, ν_Η19, ν_Η20, ν_Η21, ν_Η22, ν_Η23, ν_Η24, ν_Η25, ν_Η26, νΗ27, νΗ28, νΗ29, νΗ30, νΗ31 или νΗ32. Далее, еще один пример состоит из (а) одного νΗ3 и (Ь) одного ν_Η1, ν_Η2, ν_Η4, ν_Η5, ν_Η6, ν_Η7, У_н8, У_н9, У_н10, У_н11, У_н12, У_н13, У_н14, У_н15, У_н16, У_н17, У_н18, У_н19,

У_н20, У_н21, У_н22, У_Н23, У_н24, У_н25, У_н26, У_н27, У_н28, У_н29, У_н30, У_н31 или У_н32 и т.д.

Далее, еще один пример такого антигенсвязывающего белка состоит из (а) одного У_Ь1 и (Ь) одного из У_ъ2, У_ъ3, У_ъ4, У_ъ5, У_ъ6, У_ъ7, У_ъ8, У_ъ9, У_ъ10, У_ъ11, У_ъ12, У_ъ13, У_ъ14, У_ъ15, У_ъ16, У_ъ17, У_ъ18, У_ъ19,

У_ь20, У_ъ21, У_ъ22, У_ъ23, У_ъ24, У_ъ25, У_ъ26, У_ъ27, У_ъ28, У_ъ29, У_ъ30, У_ъ31, У_ъ32, У_ъ33 или У_ъ34. Далее, еще один пример такого антигенсвязывающего белка состоит из (а) одного У_ъ2 и (Ь) одного из У_Ь1 У_ъ3, У_ъ4, У_ъ5, У_ъ6, У_ъ7, У_ъ8, У_ъ9, У_ъ10, У_ъ11, У_ъ12, У_ъ13, У_ъ14, У_ъ15, У_ъ16, У_ъ17, У_ъ18, У_ъ19, У_ъ20, У_ъ21,

Уь22, У_ъ23, У_ъ24, У_ъ25, У_ъ26, У_ъ27, У_ъ28, У_ъ29, У_ъ30, У_ъ31, У_ъ32, У_ъ33 и У_ъ34. Далее, еще один пример такого антигенсвязывающего белка состоит из (а) одного У_ъ3 и (Ь) одного из У_ь1, У_ъ2, У_ъ4, У_ъ5, У[,6. У_ъ7, У_ъ8, У_ъ9, У_ъ10, У_ъ11, У_ъ12, У_ъ13, У_ъ14, У_ъ15, У_ъ16, У_ъ17, У_ъ18, У_ъ19, У_ъ20, У_ъ21, У_ъ22, У_ъ23, У_ъ24, У_ъ25, У_ъ26, У_ъ27, У_ъ28, У_ъ29, У_ъ30, У_ъ31, У_ъ32, У_ъ33 или У_ъ34 и т.д.

Различные сочетания вариабельных областей тяжелой цепи могут комбинироваться с любой комбинацией вариабельных областей легкой цепи.

В других случаях антигенсвязывающий белок содержит две одинаковые вариабельные области легкой цепи и/или две одинаковые вариабельные области тяжелой цепи. Например, антигенсвязывающий белок может представлять собой антитело или иммунологически функциональный фрагмент, содержащий две вариабельные области легкой цепи и две вариабельные области тяжелой цепи в сочетании с парами вариабельных областей легкой цепи и парами вариабельных областей тяжелой цепи, как указано в табл. 2.

Некоторые из предлагаемых антигенсвязывающих белков содержат вариабельный домен тяжелой

- 32 023555 цепи, состоящий из последовательности аминокислот, которая отличается от последовательности вариабельного домена тяжелой цепи, выбранного из ν_Η1, ν_Η2, ν_Η3, ν_Η4, ν_Η5, ν_Η6, ν_Η7, ν_Η8, ν_Η9, ν_Η10, ν_Η11, ν_Η12, ν_Η13, ν_Η14, ν_Η15, ν_Η16, ν_Η17, ν_Η18, ν_Η19, ν_Η20, ν_Η21, ν_Η22, ν_Η23, ν_Η24, ν_Η25, ν_Η26, ν_Η27, ν_Η28, ν_Η29, ν_Η30, ν_Η31 и ν_Η32, только одним, двумя, 3-мя, 4-мя, 5-ю, 6-ю, 7-ю, 8-ю, 9-ю, 10-ю, 11-ю, 12ю, 13-ю, 14ю или 15ю аминокислотными остатками, где каждое из таких различий в последовательностях независимо представляет собой делецию, внедрение или замену одной аминокислоты, причем делеции, внедрения и/или замены приводят не более чем к 15 изменениям аминокислот по сравнению с приведенными выше последовательностями вариабельного домена. Вариабельная область тяжелой цепи в некоторых антигенсвязывающих белках содержит последовательность аминокислот, имеющую хотя бы 90, 95, 97 или 99% идентичности с аминокислотными последовательностями вариабельной области тяжелой цепи Уи1, νΗ2, Уы3, Уы4, Уы5, ^6, Уы7, Уы8, Уы9, Уы10, Уы11, Уы12, Уы13, Уы14, Уы15, Уы16, Уи17, Уи18, Уи19, Уи20, Уи21, Уи22, Уи23, Уы24, Уы25, Уи26, Уи27, Уы28, Уи29, Уи30, Уи31 или Уи32.

Некоторые антигенсвязывающие белки содержат вариабельный домен легкой цепи, состоящий из последовательности аминокислот, которая отличается от последовательности вариабельного домена легкой цепи, выбранного из У_ь1, У_ъ2, У_ъ3, У 4, У_ъ5, У 6, У”, У8, У 9, У_ь10, У_ь11, У_ь12, У_ь13, У_ь14, У_ь15, У_ь16, У_ь17, У_ь18, У_ь19, У 20, У_ь21, У 22, У 23, У 24, У 25, У 26, У 27, У 28, У 2У У_ъ30, У_ь31, У_ь32, У[ 33 или У_ъ34, только одним, двумя, 3-мя, 4-мя, 5-ю, 6-ю, 7-ю, 8-ю, 9-ю, 10-ю, 11-ю, 12-ю, 13-ю, 14-ю или 15-ю аминокислотными остатками, где каждое из таких различий в последовательностях независимо представляет собой делецию, внедрение или замену одной аминокислоты, причем делеции, внедрения и/или замены приводят не более чем к 15 изменениям аминокислот по сравнению с приведенными выше последовательностями вариабельного домена. Вариабельная область легкой цепи в некоторых антигенсвязывающих белках содержит последовательность аминокислот, имеющую хотя бы 90, 95, 97или 99% идентичности с аминокислотными последовательностями вариабельной области легкой цепи У_ь1, У 2, У 3 У 4, У 5, У 6, У_ъ7, У 8, У 9, У_ь10, У_ь11, У_ь12, У_ь13, У_ь14, У_ь15, У_ь16, У_ь17, У_ь18, У_ь19, Уь20, У_ь21, У 22, У 23, У 24, У 25, У 26, У 27, У 28, У 2У У 30, У_ь31, У 32, У 33 или У_ъ34.

Другие антигенсвязывающие белки, например, антитела или иммунологически функциональные фрагменты, включают вариантные формы варианта тяжелой цепи и варианта легкой цепи, как описано.

Определяющие комплементарность участки (СОК).

Раскрытые в настоящем документе антигенсвязывающие белки представляют собой полипептиды, к которым привит, в которые внедрен и/или с которыми объединен один или более СОК. Антигенсвязывающий белок может содержать 1, 2, 3, 4, 5 или 6 СОК. При этом антигенсвязывающий белок может иметь, например, один СОК1 тяжелой цепи (СОКШ) и/или один СОК2 тяжелой цепи (СОКЫ2) и/или один ΟΏΚ3 тяжелой цепи (СОКЫ3), и/или один СЭК1 легкой цепи (СОКЬ1) и/или один СОК2 легкой цепи (СОКЬ2), и/или один СОК3 легкой цепи (СОКЬ3). Некоторые антигенсвязывающие белки содержат как СОКЫ3, так и СОКЬ3. Конкретные СОК тяжелой и легкой цепи указаны соответственно в табл. 3А и 3В.

Определяющие комплементарность участки (СОК) и каркасные области (РК) данного антитела можно идентифицировать с помощью системы, описанной КаЬа! с соавт. в Зециепсек о£ РгоЮиъ о£ 1ттипо1о§1са1 бИегей, 511 Еб., И8 Оер1. о£ ШабН апб Иитап §егуюе8, ΡΗδ, ΝΙΗ, ΝΙΗ РиЬНсабоп по. 91-3242, 1991. Определенные антитела, раскрытые в настоящем документе, содержат одну или более аминокислотных последовательностей, которые идентичны либо имеют значительный процент идентичности аминокислотным последовательностям одного или более из СОК, приведенным в табл. 3А (СОКИ) и табл. 3В (СОКЬ).

- 33 023555

Примеры последовательностей СОКИ

Таблица 3А

Содержится по ссыпке	Обозначение	Аминокислотная последовательность/ЗЕОЮ N0.
Н1 131Ν161,Η2534 1Ν02	СОКИ 1-1	5ΟΟΥΥνν5 (5ЕО Ю N0:136]
Ж261Ν161: Н11431Ν161; Н1 1441Ν101, Н1391Ν101; Н2103 1Ν102; Н2 651Ν1Ο2; Н116 1Ν161; Н1 34 1ЖС1;Н1 27 1Ν1Ο1	СОВН 1-2	ΝΑ1ΝΜ5[6ΕΟΙΟ ΝΟΊ37]
Н1 72 1Ν1Ο1	СОВН1-3	ΤΑ1ΝΜ6 [5ЕО10 N0:138]
Н1 331Ν161; Н13311Ν1Ο1	СОВН1-4	0ΥΥΜΗ|5Ε0Ι0 N0:139]
Н1 1091ЖС1	СОВН1-5	ΑΥΥΜΗ [5ЕО ЮЫ0140]
Н1 4 1 N101	СОВН 1-6	5Υ0ΜΗ [£ЕО Ю N0141]
Н2 3691 N102; Н25081N102; Н2 3601Ν102	СОВН 1-7	ЕБЗМН [БЕОΙΟ N0:142]
Н24751Ν102; Н1 661Ν161: Н1 90 1Ν1Ο1;Η1 134 1Ν161; Н2 291 1Ν102	СОВН 1-8	3ΥΟΜΗ [5Е010 N0:143]
N2 3801п1д2	СОВН 1-9	5¥ТО5[5ЕОЮ ΝΟ144|
Н21311Ν1Ο2	СО ВН 1-10	ΝΥΥΥ/5 (5Ε0Ι0 N0:145]
Ж 131 1Ν1Ο1	СОВН 1-11	ΟΥΥΙΗ [5ЕО Ю N0146]
Н2 5501Ν162; Η1 21Ν161; Н1 30 1Ν101. Η1421Ν101	СОВН1-12	$Υ0Ι5 [5Е0 Ю ΝΟΊ47]
Ж131Ν1Ο1	СОКИ 2-1	ΥΙΥΥ5Ο8ΤΝΥΝΡ3Ι.Κ3 (2Е0 ΙΟ N0.148]
Н25341Ν102	СОВН 2-2	ΥΙ8Υ5ΟΟΤΥΥΝΡ5Ι.Κ5 (2Е0 ΙΟ N0:149]
Ж 261И1С1;Н11441Ν101; Н2 1031Ν162; Н1 72 1М161; Ж 34 1Ν1Ο1, Η1 271Ν1Ο1	СОВН 2-3	ΒΙΚεΚΤΟΟΟπΟΥΑΑΡνΚΟ [3Ε0 10 N0:150]
Н11431Ν101	СОВН 2-4	ΒΙΚδΚΤΟββπΟΝΑΑΡνΚΟ [5Ε0 ΙΟ N0151]
Ж 391Ν1Ο1	СОВН 2-5	ΒΙΚδΚΤΟΘΘΤΑΟΥΑΑΡνΚΟ [2Ε0 ΙΟ N0152]
№65 1Ν162	СОВН 2-6	ΒΙΚΤΚΤΟΟΘπΟΥΑΑΡνΚΟ [8Ε0 ΙΟ N0:153]
Ж 161Ν1Θ1	СОВН 2-7	ΒΙΚ5ΚΤϋθννπθΥΑΑΡνΚ6 [8Ε0 Ю N0.154]
Н1331Ν1Ο1: Н13311Ν161; Н1 1ΟΘ1Ν1β1;Η11311Ν101	СОВН 2-8	1ΝΙΝΡΝ500ΤΝΥΑ0ΚΡ0Ο (ЗЕО Ю N0:155]
Η14 1Ν161	СОВН 2-9	6Ι6ΤΑ00ΤΥΥΡ03νΚ6 [3Ε0 ΙΟ N0:156]
И2 3691 N102, Н2 5061 N102; Н2 3601Ν102	СОВН 2-10	ΟΡΟΡΕΟΟΕΤΙΥΑΟΚΡΟΟ [5Ε0 Ю N0:157]
Н24751Ν1Ο2; Н1901Ν101; Н1 1341Ν1Ο1	СОВН 2-11	νΐΥΛΌ63ΝΚΥΥΑΟ5νΚΟ [5Ε0 Ю N0.158]
Н2 3801 N102	СОВН 2-12	Υ(ΥΥ5ΟΝΤΝΫΝΡ3ίΚ3[5ΕΟ Ю N0:159]

- 34 023555

Η1 661Ν161	СОКИ 2-13	ΥΙΑΙΥΟ65ΝΕΥΥΑΟ5ΥΚ6 [БЕО ГО N0:160]
Η2 131 1Ν162	СОРИ 2-14	ΡΙΥΤ563ΤΗΥΝΡδΙΚ8 |5Е0 ГО N0:161}
Η2291 1Ν162	СОРИ 2-15	νΐ№ΦΘ5ΥΚΥΥΑ03ΥΚ6 [БЕО 10 N0.162]
Ж 21Ν1Θ1: Η1 301Ν1Ο1,Η142 1Ν161	СТОН 2-16	\ΝΙ5ΑΥΝ5ΝΪΝΥΑΟΚ1_06 [БЕО ГО N0:163]
Η2 5501Ν102	стен 2-17	1Λ1Ι3ΑΥΝΟΝΡΝΥΑΟΚΡΟΟ [БЕО Ю N0 164)
Н1 131Ν161	стен з-ι	адлтетитс [еео гомо.165]
Ж 26 1Ν161; Н1 144 1Ν1Θ1	стен з-2	ΕΥΥΟδββννΥΥΥβΜϋν [БЕС! ГО N0 166]
Ж 1431Ν161	стен з-з	6051±1ΛΤ6ΡΝΥΥΥΥ6Η0Υ [ЗЕО 10 N0:167]
Ж 331М1С1;Н1 331 1Ν161	стен 34	08Ν1ΝΥΗΝΜΙΡ0Ρ [БЕО10 N0:168]
Ж 1091Ν161	стен 3-5	66Υ36Υ0Ι 6ΥΥΥ6Μ0ν (ЗЕО Ю N0169]
Η1 391Ν161	СОРН 3-6	Ε6ΡΥ50Υ6ΥΥΥΥ6Μ0ν [ЗЕО ГО N0170]
Н1 534 1141(31	СОРН 3-7	ίΟΙΥΟΟΥΕϋΥ [БЕО ГО МО-171]
Η141Ν101	СОРН 3-8	Ε651ΛΎ6Ε0Υ [БЕС! ГО N0 172]
Ж 1031Ν1Ο1	СОРИ 3-9	ΕΥΥΗΙίΤΟδΡΥΥδΥΥΟΜϋν [ЗЕО ГО N0173]
Н265 1Ν1Θ2	СОРН 3-10	ΕΥΥ6ΐνΤ68ΕΥΥΥΥΥ6Μϋν [5Е0 10 N0174]
Η23691Ν162	СОКИ 3-11	РАСТРАΥΥΥΥΑΜΟν (5Е0 ГО N0 175)
Η2 5081Ν102	СОКИ 3-12	ΑΟΈΙΡΙΛΙΡΟΡ [ЗЕО ГО N0 176]
Н2 4751 N162	СОКИ 3-13	5360ΥΥ6Μθν [БЕО10 N0177]
Η2 3801Ν1 62	СОРН 314	1ΑΤΡΡΕ0Υ [БЕО10 N0:178]
Н2131 1141(32	СОРН 315	ΟΡνΡΥΟΜϋν [БЕС! ГО N0179]
Н2 291 1Ν102	СОРН 3-16	ΕΟΟΥΞΟΥΥΟΜΟν [ЗЕО ГО N0180)
Н11311 N161	стен 3-17	0Κ60ί1ΝΕνΐίΥΥΥΥΥ6Μ0ν [БЕО Ю N0 181]
Н1 66 1Ν161	стен 318	555ΝΥΥΜθν [ЗЕО ГО N0:182)
Н1 90 1Ν161	стен 319	555ΝΡΥϋΜ0ν [ЗЕО ГО N0 183]
Ж 161Ν161	стен 320	ΟίΚΙΤΟΤΤΥΥΥΥΥΥΟΜΟν [ЗЕО ГО N0184]
Η25501Ν162	стен 321	ΟΟΟΙΙβΡβΕΕΕΟυΟΥ [ЗЕО ГО N0185]
Н1 2 1Ν161, Н1 30 1Ν161;Η1 42 1Ν161	стен 322	ЕБМСЕУРГОУ (БЕО Ю N0:186]
Н2 3601Ν162	стен 323	θνΜΙΤΡ66νΐν6Η5ΥΥβΜθν [5Е0 ГО N0187]
Ж 721 N101	СОРН 324	Ε6ΡΥ5ΝΥ6ΥΥΥΥ6νθν [БЕО Ι0 N0:183)
Н1 341Ν161; Н1 27 1Ν161	стен 325	06ΑΤννΤΡ6ΥΥΥΥΘΤθν [БЕО ГО N0:189]
Ж 134 1Ν161	стен 326	5δΛ5ΥΥ6Μ0ν [БЕО 10 N0:190]

- 35 023555

Примеры последовательностей СЭВЬ

Таблица 3В

Содержится по ссылке	Обозначение	Аминокислотная последовательность/$Е<2 ГО ΝΟ.
Н1 26Н1 26 1УК2КК; Η113Н113 1Ν1/Κ2ΚΚ	СОКН-1	кззозьуузоемтуш (зео го νοίθι ]
Н1 33 11Ν1Κ	СОКИ-2	ΚΑδΩδΙδΟΥίΝ [ЗЕО ГО N0192)
Η121Ν1Κ	СОКИ-3	Κ5505νΐ-0550ΝΚΝΥΙ-Α [ЗЕО ГО N0:193]
Н142 1Ν1Κ	СОКН-4	Κ5505νΐ053ΝΝΚΝΡΙΑ [ЗЕО ГО N0:194)
Н1 30 1Ν1Κ	СОКН-5	Κ5506νΐ055ΝΝΚΝΡίΑ [ЗЕО ГО N0195]
Η2 3691Ν1Κ	СОКН-6	ΡΑ5Ο5Ι5ΚΥΙΝ [ЗЕО ГО N0:196]
Н1 131 1Ν1Κ	СОКИ-7	Κ3505Ι±50βΚΤΥΙ.Υ [ЗЕО ГО N0:197]
Η1 161Ν1ΚΗ1 90 1Ν1Κ: Н1 34 1Ν1Κ; Н1 72 1Ν1Κ; Н2 103 1Ν1Κ; Н1 271Ν1Κ; Н1144 1Ν1Κ. Н1 39 1Ν1Κ.Η113 1Ν1Κ; Н1 261Ν1Κ	СОКИ-8	ΟΑ5ΟΟΙ5ΝΥΕ.Ν [ЗЕО ГО N0198)
Н1143 1Ν1Κ; Н2 65 ΙΝ1Κ; Н1 134 1Ν1Κ	СОКИ-9	0Α50[»ΝΝΥ1_Ν (ЗЕО 10 N0199]
Η24751Ν1Κ	С1ЖИ-10	ΟΑ5ΗΟΙ3ΝΥΙΝ [ЗЕО ГО N0 200]
Η1 1091Ν1Κ	СОКИ-11	ΟΑ30ΝΙ5ΝΡΙΟ (ЗЕО ГО N0:201 ]
Н1 109 1Ν1Κ 5М	СОКИ-12	0Α300Ι5ΝΡ1Ο (ЗЕО ГО N0:202]
Η1661Ν1Κ	СОКИ-13	0А30013№Ш [ЗЕО ГО N0:203]
Η25501Ν1Κ	СОКИ-14	Κ5505νί.Υ58ΝΝΚΝΥΙ Α [5Е0 ГО N0:204]
Н21311Ν1Κ	СОКИ-15	ΚΑδΟΟΡδΝΥΙΑ [ЗЕО ГО N0:206]
Н2 3601Ν1Κ	СОКИ-16	ΚΑ506ΙΝΝΥίΑ [ЗЕО ГО N0 206]
Н2 5081Ν1Κ	СОКН-17	Κ55Ο51ΕΗ5Ν0ΥΝΥ10 [ЗЕО ГО N0:207]
Η2 5341Ν1Κ	СОКП-18	КАЗОУЮЗЗЕН [ЗЕО ГО Ν0:208|
Η1641Ν1Κ	СОКИ-19	ΚΑ3Ο5ν356ΥΙΛΥΙΛ [ЗЕО ГО N0:209]
Η2 3801Ν1Κ	СОКП-20	ΚΑ306ΙΚΝΕΧ0 [ЗЕО ГО N0 210]
Η1 26Н1 26 1Ν7Κ2ΚΚ; Н113Н1 131ΝνΚ2ΚΚ	С0К12-1	КУЗМЛГОЗ [ЗЕО ГО N0 211]
Н1 3311Ν1ΚΗ2 3691Ν1Κ; Н2 380 1Ν1Κ	СБК12-2	ААЗЗЮЗ[ЗЕО ГО N0:212]
Η25501Ν1Κ	СОК12-3	ОТАЗТКЕЗ [ЗЕО ГО N0:213]
Η1 21Н1К; Н1421М1К;Н1 30 1Ν1Κ	СОКЕ2-4	ΝΑ5ΝΚΕ5 [ЗЕО ГО N0:214]
Н11311Ν1Κ	СОК1.2-5	ΕΑ5ΝΚΡ3 [ЗЕО ГО N0:215]

- 36 023555

ΗΙ 161Ν1Κ;Η1 901Ν1Κ; Н1 34 1Ν1Κ.-Η2651Ν1Κ; Н1 72 1Ν1Κ; Η24751Ν1Κ Н2103 1Ν1Κ.Η1 271Ν1Κ; Н1144 1Ν1Κ; Н133 1Ν1Κ; Н1131Ν1Κ; Н1 26 1Ν1Κ; Ш 661Ν1Κ	СНЧ2-6	0Α5ΝΕΕΤ [ЗЕО Ю N0:216]
ΗΙ 1431Ν1Κ	С6К1.2-7	ϋΤ8ΝΙ ΕΡ [5Е0 Ю N0:217]
Η11091111К	С0Р12-8	0А50ШР [ЗЕО Ю N0:218]
Н1 1341Ν1Κ	сэкьг-э	ΟΑΒΝίΕΙ [ЗЕО Ю N0:219]
Η21311Ν1Κ	сокьг-ю	АА5ТКЭ5 |5Е0 Ю N0220]
Н2 3601141К	С [Ж Ι.2-11	УАЗТЮЗ [ЗЕО Ю ΝΟ:221|
Η25341Ν1Κ	С0Я12-12	ΥνδΟδΡδΙδΕΟ® N0:222]
Η1641Ν1Κ	С0КЬ2-13	СА35ТАТ [ЗЕО 10 N0:223]
&25081ΝΙΚ	ΟΟΚί.2-14	ίΟ5ΙΡΑ3 [ЗЕО Ю N0:224]
Н1 26Н1 261ΝΥΚ2ΚΚ	00Κί3-1	М06ТЖР1Т |5ЕО Ю N0:225]
ΗΙ 13Н113 ИЧУК2КК	С0Р13-2	ΜΟΟΤΗνΥΡΚΟ-ΡΤ |5Е0 Ю N0226]
Н1 3311Ν1Κ	СОКЬЗ-З	00ΤΥ5ϋΡΡΤ [ЗЕО Ю N0:227)
Н1 2 1Ν1Κ, Н1 42 1Ν1Κ; Н1 30 1Ν1Κ	СОКВМ	0ΟΥΥ30ΡΡΤ [ЗЕО Ю N0:228]
Н2 3691Ν1Κ	СОКЬЗ-б	005ΥΓΓΡΡ5 [ЗЕО ГО N0:229]
Н11311Ν1Κ	СОК13-6	М05Ю1Р1Т(5Е0 10 N0:230]
Η1161Ν1Κ	СОКЬЗ-7	ΟΟΥΟΝΙ.ΙΤ [ЗЕО ГО N0:231}
Η1901Ν1Κ	СОРЬЗ-8	0ΡΥ001ΡΙΤ[5Ε0 ГО N0 232]
ΗΙ 1431Ν1Κ, Η1341Ν1Κ.Η1 72 1Ν1Κ; Н2 103 1Ν1Κ, Н1 27 1Ν1Κ. Н11441Ν1Κ Н1 391Ν1Κ, Н1 26 1Ν1Κ	СОРЬЗ-9	ΟΟΥΟΝΙΙΤ [ЗЕО ГО N0233]
Η2 651Ν1Κ	сога.з-10	ООУОИ±Т [ЗЕО ГО N0:234]
Η24751Ν1Κ	СИЧ.3-11	ΟΟΥΟΝυΈΤ [ЗЕО ГО N0 235]
Η21091Ν1Κ	скиз-12	ΟΟΥνδίΡΕΤ [ЗЕО ГО N0 236]
Н1 134 1Ν1К	ССЖЬЗ-13	ΟΟΥΟΝΕΡΕΤ [ЗЕО ГО N0:237]
Н1131Ν1Κ	СОР 1.3-14	ΟΟΡϋΜΡΡΤ[5ΕΟΙΟ N0:238]
Η2 5601Ν1Κ	СОКЬЗ-15	ΟΟΥΥΤΤΡΡΤ [ЗЕО ГО N0.239]
Η1661Ν1Κ	сога.з-16	ΟΟΥΟΝΕΡΕΤ [ЗЕО ГО N0:240]
Η21311Ν1Κ	СНЧ.3-17	0ΚΥΝ3ΑΡΙ.Τ [ЗЕО ГО N0241]
Η2 3601Ν1Κ	СОРЬЗ-18	ΟΚΥΝ$ΟΡΕΤ [ЗЕО 10 N0:242]
Η2 5081Ν1Κ	сотз-19	МОАЮТРРТ |5Е010 N0:243]
Н2 534 1Ν1Κ	СОРЬЗ-20	НОЗЗЗЬРРТ [ЗЕО ГО N0:244]
Η1641Ν1Κ	С0К1Л21	ΟΟΥΟ55ΡΙΤ (ЗЕО Ю N0.245]
Н23301Ι41Κ	СОРЬЗ-22	ωΥΝ$ΥΡΙΓ[$ΕΟΙΟ N0:246]

Строение и свойства СОР в составе природных антител описаны выше. Говоря вкратце, в традиционном антителе СОР заключены в вариабельной области тяжелой и легкой цепи, где они представляют собой участки, ответственные за связывание и узнавание антигена. В вариабельной области содержится по крайней мере три СОР тяжелой или легкой цепи, см. выше (КаЬа! с соавт., 1991, 8ес.|иепсе8 оГ Ргсйейъ оГ 1ттипо1одюа1 1п1еге8к РиЬйс неаИй 8егу1се N.1.4., ВеШе8ба, ΜΌ; см. также Сйобйа апб Ье8к, 1987, 1. Мо1. Вю1. 196:901-917; Сйоййа с соавт., 1989, №Киге 342: 877-883) в каркасной области (обозначены каркасные области 1-4, РР1, РР2, РР3 и РР4, КаЬа! с соавт., 1991, см. выше; см. также Сйоййа апб Ье8к, 1987, см. выше). Предложенные в настоящем документе СОР, однако, не только определяют антигенсвязывающий домен в традиционной структуре антитела, но также могут быть заключены в другие полипептидные структуры, как описано в настоящем документе.

В одном аспекте предложенные СОР представляют собой (а) СОРИ, выбранный из группы, включающей (ϊ) СГОРЧЕ выбранный из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0: 136-147; (ίί) СОРШ, выбранный из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 148-164; (ίίί) СОРЮ, выбранный из группы, состоящей из 8Е0 ГО

- 37 023555

N0: 165-190; и (ίν) СИРН согласно (ί), (ίί) и (ίίί), содержащий одну или более замену, делецию или внедрение не более чем пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты; (В) СИРЬ, выбранный из группы, включающей (ί) СИРЫ, выбранный из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 191-210; (ίί) СИРЬ® выбранный из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 211-224; (ίίί) СИРР3, выбранный из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 225-246; (ίν) СИРЬ согласно (ί), (ίί) и (ίίί) содержащий одну или более замену, делецию или внедрение не более чем пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты.

В другом аспекте антигенсвязывающий белок содержит 1, 2, 3, 4, 5 или 6 вариантных форм СИР, перечисленных в табл. 3А и 3В, характеризующихся по крайней мере по 80, 85, 90 или 95% идентичности, последовательностей по сравнению с последовательностями СИР, перечисленными в табл. 3А и 3В. Некоторые антигенсвязывающие белки содержат 1, 2, 3, 4, 5 или 6 из СИР, перечисленных в табл. 3 А и 3В, каждый из которых отличается на не более чем 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислоты от СИР, перечисленных в указанных таблицах.

В еще одном аспекте СИР, раскрытые в настоящем документе, включают консенсусные последовательности, полученные из групп родственных моноклональных антител. В соответствии с настоящим документом консенсусная последовательность означает аминокислотную последовательность, в которой присутствуют консервативные аминокислоты, общие для ряда последовательностей, а также вариабельные аминокислоты, которые варьируют по этим аминокислотным последовательностям. Предлагаемые консенсусные последовательности СИР включают СИР, соответствующие каждому из СНРН1, СИРН2, СИРН3, СИРЬ1, СИРИ2 и СИРИ3.

Консенсусные последовательности определяли с помощью стандартного филогенетического анализа СИР, соответствующих цепям и ν₇ антител против с-Гтк. Для определения консенсусных последовательностей СИР сохраняли в виде непрерывного участка в одной последовательности, соответствующей или ν^ Вкратце, аминокислотные последовательности, соответствующие полным вариабельным доменам либо или ν^ превращали в формат РА8ТА для более легкой обработки данных по выравниванию и выявления филогенеза. Далее, каркасные области указанных последовательностей замещали искусственной последовательностью линкера (ОООАААОООААА (8Е0 ГО N0: 325)), что позволяло исследовать только СИР без введения систематической ошибки для весов различных положений аминокислот вследствие совпадающих событий (например, таких как неродственные антитела, которые случайно имеют общий наследуемый каркас), при этом СИР оставались непрерывными в одной и той же последовательности, соответствующей или В данном формате для последовательностей или ν проводили поиск сходства с помощью программы, применяющей стандартный алгоритм С1и51а1\У (см. ТЬотркои с соавт., 1994, №с1ею ЛсЙ5 Рек. 22:4673-4680). Штраф за создание делеции принимали равным 8.0, а штраф на продолжение делеции - 2.0. Аналогичным образом программа генерирует филограммы (филогенетические дендрограммы) на основе сопоставления последовательностей с помощью метода ИРОМА (метод невзвешенного попарного арифметического среднего) или ХещНЬоШопипд (см. 8айои аий №ί, 1987, Мо1еси1аг Вю1оду аий Еуо1п1юп 4:406-425) для построения и иллюстрации сходства и различия групп последовательностей за счет сравнения длин участков и группировки. Результаты, полученные двумя указанными методами, аналогичны, но в дальнейшем использовали древовидные диаграммы, построенные по методу ИРОМА, так как в данном методе применяются более простые и менее строгие допущения. Древовидные диаграммы, построенные по методу ИРОМА, показаны на фиг. 2, где сходными группами последовательностей считали такие, где присутствовало менее 15 замен на 100 остатков (см. подпись к диаграмме) по индивидуальным последовательностям в пределах группы, которые и использовали для определения наборов консенсусных последовательностей.

Как показано на фиг. 2, генеалогический анализ ряда антигенсвязывающих белков, предложенных в настоящем документе, выявил три группы близкородственных филогенетических клонов, обозначенных как группы А, В и С.

Консенсусные последовательности различных участков СИР группы А следующие:

a) СИРН1 общей формулы ΟΥΤΧιΤδΥΟΙδ (8Е0 ΙΌ N0: 307), где X выбирают из группы, состоящей из Р и Ь;

b) СИРН2 общей формулы ®ΙδΛΥ\0\Χ·\ΥΛΟΚΧ_;Ο0 (8ЕО ΙΌ N0: 308), где X выбирают из группы, состоящей из Т и Р, а Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ь и Р;

c) СИРН3 общей формулы Χ₁Χ₂Χ₃Χ₄Χ₄Χ₅ΡΟΒΧ₆Χ₇Χ₈Χ₉ΡΌΥ (δΐ®) ΙΌ N0: 309), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из Е и И, Х₂ выбирают из группы, состоящей из δ и О, Χ₃ выбирают из группы, состоящей из О без аминокислоты, Х4 выбирают из группы, состоящей из Ь без аминокислоты, Х₅ выбирают из группы, состоящей из и О, Χ₆ выбирают из группы, состоящей из ν и Ь, Χ₇ выбирают из группы, состоящей из Е без аминокислоты, Χ8 выбирают из группы, состоящей из О без аминокислоты, и Х9 выбирают из группы, состоящей из Р и Ь;

ά) СИРЬ1 общей формулы ΚδδX1ОV^X₂δδX₃NΚNX₄^А (®Е0 ГО N0: 310), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из О и δ, Х₂ выбирают из группы, состоящей из И и Υ, Χ₃ выбирают из группы, состоящей из N и И, и Х₄ выбирают из группы, состоящей из Р и Υ;

е) СИРИ2 общей формулы ^АδX1РЕδ (®Е0 ГО N0: 311), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из N и Т; и

- 38 023555

ί) СОРЬ3 общей формулы ΟΟΥΥΧιΧ₂ΡΧ₃,Τ (δΕΟ ΙΌ N0: 312), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из δ и Т, Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ό и Т, а Χ₃ выбирают из группы, состоящей из Р и Р.

Консенсусные последовательности различных участков СОВ группы В следующие:

a) СОРШ общей формулы ΟΡΤΧ₁Χ₂Χ₃Λ^Μδ (δΕΟ ΙΌ N0: 313), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Р и У, Х₂ выбирают из группы, состоящей из δ и N и Х₃ выбирают из группы, состоящей из N и Т;

b) СЭРн2 общей формулы КПСХ₁КТПСХ₂ТХ₃ПХ₄ЛЛРУКС (δΕΟ ΙΌ N0: 314), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из δ и Т, Х₂ выбирают из группы, состоящей из С и ^, Х₃ выбирают из группы, состоящей из Т и А, а Х₄ выбирают из группы, состоящей из Υ и N

c) СОРГО общей формулы Χ₁Χ₂Χ₃Χ₄Χ₅Χ₆Χ·Х₈ХХ'Х Х Х· ΥΥΟΧΌΥ (δΕΟ ΙΌ N0: 315), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Е, Ό и С, Х₂ выбирают из группы, состоящей из Υ, Ь без аминокислоты, Х₃ выбирают из группы, состоящей из Υ, Р, С без аминокислоты, Х₄ выбирают из группы, состоящей из Н, С, δ без аминокислоты, Х₅ выбирают из группы, состоящей из I, А, Ь без аминокислоты, Х₅ выбирают из группы, состоящей из Ь, У, Т, Р без аминокислоты, Х₇ выбирают из группы, состоящей из Т, У, Υ, С, без аминокислоты, Х₈ выбирают из группы, состоящей из С, У, δ и Т, Х₉ выбирают из группы, состоящей из δ, Т, Ό, N и С, Х₁₀ выбирают из группы, состоящей из С, Р, Р, и Υ, Х₁₁ выбирают из группы, состоящей из С, Υ и N а Х₁₂ выбирают из группы, состоящей из У и Υ, Χ₁₃ выбирают из группы, состоящей из ^, δ и Υ, а Х₁₄ выбирают из группы, состоящей из М, Т и У;

ά) СОРГО общей формулы ^Аδ^^IX1NΥ^N (δΕΟ ΙΌ N0: 316), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из δ и N

е) С0РЬ2 общей формулы 0Х^ЖЕХ₃ (δΕΟ ΙΌ N0: 317), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из А и Т, и Χ2 выбирают из группы, состоящей из Т и Р;

ί) СОРЬ3 общей формулы ΟΟΥΌΧΥΧΤΓ (δΕΟ ΙΌ N0: 318), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из N и Ό, а Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ь и Ι.

Консенсусные последовательности различных участков СОР группы С следующие:

a) СОРИ1 общей формулы СРΤРX₁δΥСΜΗ (δΕΟ ГО N0: 319), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из δ и Ι;

b) СОРШ общей формулы \Ί\\Ύΐκ..δ\.\·ΥΥΆυδΥΚα (δΕΟ ГО N0: 320), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из Ε и К;

c) СОРИ3 общей формулы δδX1X₂X₃ΥX₄Μ^У (δΕΟ ГО N0: 321), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из С, δ и ^, Х₂ выбирают из группы, состоящей из N Ό и δ, Χ ₃выбирают из группы, состоящей из Υ и Р, и Х₄ выбирают из группы, состоящей из Ό и С;

ά) СОРЬ1 общей формулы ^АδX1^^С₂NX₃^N (δΕΟ ГО N0: 322), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из О и Н, Х₂ выбирают из группы, состоящей из δ и N и Χ₃ выбирают из группы, состоящей из Р и Υ;

е) СОРЬ2 общей формулы ΟΛδ^-ΕΧ] (δΕΟ ГО N0: 323), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из Т и Ι; и

ί) СОРЬ3 общей формулы ΟΧ₁ΥΌΧ₂Χ₃ΡΧ₄Τ (δΕΟ ГО N0: 324), где Χ₁ выбирают из группы, состоящей из О и Р, Х₂ выбирают из группы, состоящей из N и О, Χ₃ выбирают из группы, состоящей из Ь и Р, и Х₄ выбирают из группы, состоящей из Р, Ь и Ι.

В некоторых других случаях антигенсвязывающий белок содержит хотя бы один СОРИ1, СОРИ2 или СОРИ3, имеющий одну из приведенных выше консенсусных последовательностей. В некоторых случаях антигенсвязывающий белок содержит хотя бы один СОРГО, СОРЬ2 или СОРЕ3, имеющий одну из приведенных выше консенсусных последовательностей. В других случаях антигенсвязывающий белок содержит хотя бы два СОРИ в соответствии с приведенными консенсусными последовательностями и/или хотя бы два СОРЕ в соответствии с приведенными консенсусными последовательностями. В одном аспекте СОРЯ и/или СОРЕ получены из разных групп А, В и С. В других случаях антигенсвязывающий белок содержит хотя бы два СОРЫ из одной и той же группы А, В или С и/или хотя бы два СОРЕ из одной и той же группы А, В или С. В других аспектах антигенсвязывающий белок содержит последовательности СОРШ, СОРн2 и СОРЮ из одной и той же группы А, В, или С и/или последовательность СОРГО, СОРЬ2 и СОРЬ3 из одной и той же группы А, В или С.

Таким образом, некоторые из предложенных антигенсвязывающих белков содержат 1, 2, 3, 4, 5 или все 6 СОР из консенсусных последовательностей группы А. Т.е. определенные антигенсвязывающие белки, например, содержат СОРШ, СОРШ, СОРЮ, СОРГО, СОРЬ2 и СОРБ3 из консенсусных последовательностей группы А, указанных выше. Другие из предложенных антигенсвязывающих белков содержат 1, 2, 3, 4, 5 или все 6 СОР из консенсусных последовательностей группы А. Так определенные антигенсвязывающие белки содержат, например, СОРШ, СОРШ, СОРЮ, СОРГО, СОРЬ2 и СОРЬ3 из приведенных выше консенсусных последовательностей группы В. Другие из предложенных антигенсвязывающих белков содержат 1, 2, 3, 4, 5 или 6 СОР из консенсусных последовательностей группы С. Так определенные антигенсвязывающие белки содержат, например, СОРШ, СОРШ, СОРЮ, СОРГО, СОРЬ2 и СОРЕ3 из приведенных выше консенсусных последовательностей группы С.

- 39 023555

Примеры антигенсвязывающих белков.

В соответствии с одним аспектом, предлагается выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает с-Гт8 и содержит (А) один или более определяющий комплементарность участок в тяжелой цепи (СИ КН), выбранный из группы, состоящей из:

(ί) СЭКН1, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 136-147;

(ίί) СИКН2, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 148-164;

(ίίί) СЭКН3, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 165-190; и (ίν) СГОКН согласно (ί), (ίί) и (ίίί), содержащего замену, делецию или внедрение одной или более аминокислот, затрагивающее не более пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты;

(B) один или более определяющий комплементарность участок в легкой цепи (СИКЬ), выбранный из группы, состоящей из:

(ί) СИКЫ, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 191-210;

(ίί) СГОКС2, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 211-224;

(ίίί) СГОКС3, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 225-246; и (ίν) СИКЬ согласно (ί), (ίί) и (ίίί), содержащего замену, делецию или внедрение одной или более аминокислот, затрагивающее не более пяти, четырех, трех, четырех, двух или одной аминокислоты; или (C) один или более СГОКН в тяжелой цепи согласно (А) и один или более СИКЬ в легкой цепи согласно (В).

В другом осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок может содержать:

(A) СГОКН, выбранный из группы, состоящей из:

(ί) СГОКН1, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 136-147;

(ίί) СГОКН2, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 148-164;

(ίίί) СГОКН3, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 165-190;

(B) СИКЬ, выбранный из группы, состоящей из:

(ί) СГОКЫ, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 191-210;

(ίί) СГОКС2, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 211-224;

(ίίί) СГОКС3, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 225-246; или (C) один или более СГОКН в тяжелой цепи согласно (А) и один или более СИКЬ в легкой цепи согласно (В).

В одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок может содержать (А) СГОКН1 БЕЦ ГО ЫО: 136-147, СГОКН2 БЕЦ ГО ЫО: 148-164 и СГОКН3 БЕЦ ГО ЫО: 165-190, и (В) СНКЬ1 БЕЦ ГО ЫО: 191-210, СНКЬ2 БЕЦ ГО ЫО: 211-224 и СНКЬ3 БЕЦ ГО ЫО: 225-246.

В другом осуществлении последовательность вариабельной тяжелой цепи (У_Н) имеет хотя бы 90, 95, 97 или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 70-101 и/или последовательность вариабельной легкой цепи (У_ь) имеет хотя бы 90, 95, 97 или 99% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 102-135. В другом осуществлении У_Н выбирают из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 70-101 и/или У_ъ выбирают из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 102-135.

В другом аспекте предлагается также выделенный антигенсвязывающий белок, который специфически связывается с эпитопом, содержащим субдомены с-Гт8 - 1д-подобный 1-1 и 1д-подобный 1-2 с-Гт8.

Еще в одном аспекте предлагается выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает сГт8, при этом антигенсвязывающий белок содержит СГОКН3, выбранный из группы, состоящей из (1) СГОКН3, выбранного из группы, состоящей из БЕЦ ГО ЫО: 165-190; (2) СГОКН3, отличающийся по аминокислотной последовательности от СГОКН3 согласно (ί) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; (3) СГОКН3 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из (а) Х1Х₂ХзХ₄Х₄Х5рОЕХ₆Х₇Х₈Х9рН¥ (БЕЦ ГО ЫО: 309), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Е и Ό, Х₂ выбирают из группы, состоящей из Б и О, Х₃ выбирают из группы, состоящей из О без аминокислоты, Х4 выбирают из группы, состоящей из Ь без аминокислоты, Х₅ выбирают из группы, состоящей из и О, Х₆ выбирают из группы, состоящей из У и Ь, Х₇ выбирают из группы, состоящей из Е без аминокислоты, Х₈ выбирают из группы, состоящей из О без аминокислоты, и Х₉ выбирают из группы, состоящей из Р и Ь (консенсусная последовательность СГОКН3 получена из описанной выше филогенетической группы А); (Ь) Х₁Х₂Х₃Х₄Х₅Х₆Х₇Х₈Х9Х1₀ХцХ1₂Х1₃¥¥ОХ₁₄НУ (БЕЦ ГО ЫО: 315), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Е, Ό и О, Х₂ выбирают из группы, состоящей из Υ, Ь без аминокислоты, Х₃ выбирают из группы, состоящей из Υ, К, О без аминокислоты, Х₄ выбирают из группы, состоящей из Н, О, Б без аминокислоты, Х₅ выбирают из группы, состоящей из I, А, Ь без аминокислоты, Х₆ выбирают из группы, состоящей из Ь, У, Т, Р без аминокислоты, Х₇ выбирают из группы, состоящей из Т, У, Υ, О, без аминокислоты, Х₈ выбирают из группы, состоящей из О, У, Б и Т, Х₉ выбирают из группы, состоящей из Б, Т, Ό, Ы и О, Х₁₀ выбирают из группы, состоящей из О, Р, Р и Υ, Х₁₁ выбирают из группы, состоящей из О, Υ и Ы, Х12 выбирают из группы, состоящей из У и Υ, Х13 выбирают из группы, состоящей из ^, Б и Υ, и Х₁₄ выбирают из группы, состоящей из М, Т и У (консенсусная последовательность СГОКН3 получена из описанной выше филогенетической группы В); и (с) ББХ|Х₂Х₃УХ.₁МОУ (БЕЦ ГО ЫО: 321), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из О, Б и ^, Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ы,

- 40 023555

Ό и δ, Χ₃ выбирают из группы, состоящей из Υ и Р, а Х₄ выбирают из группы, состоящей из Ό и С (консенсусная последовательность СПЕН3 получена из описанной выше филогенетической группы С); или (В) определяющий комплементарность участок в легкой цепи (СОЕЬ), выбранный из группы, состоящей из (1) а СОЕЬ3, выбранного из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 225-246, (2) СОЕЬ3, отличающийся по аминокислотной последовательности от СПЕЬ3 согласно (ί) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (3) СПЕЬ3 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из (а) ΟΟΥΥΧιΧ₂ΡΧ₃Τ (δΕΟ ΙΌ N0: 312), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из δ и Т, Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ό и Т, и Х₃ выбирают из группы, состоящей из Р и Р (консенсусная последовательность СПЕЬ3 получена из описанной выше филогенетической группы А); (Ь) 00ΥΟΧιΡΧ₂Τ (δΕΟ ΙΌ N0: 318), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из N и Ό, и Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ь и I (консенсусная последовательность СОЕЬ3 получена из описанной выше филогенетической группы В); и (с) ΟΧ1ΥΩΧ2Χ3ΡΧ4Τ (δΕΟ ΙΌ N0: 324), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из О и Е, Х₂ выбирают из группы, состоящей из N и Ό, Х₃ выбирают из группы, состоящей из Ь и Р, и Х₄ выбирают из группы, состоящей из Р, Ь и I (консенсусная последовательность СОЕЬ3 получена из описанной выше филогенетической группы С).

В одном осуществлении антигенсвязывающий белок, который связывает с-Гш8, содержит СЭЕН3 в соответствии с консенсусными последовательностями групп А, В или С и/или С0ЕЬ3 в соответствии с консенсусными последовательностями групп А, В или С, и СПЕН1 и/или СЭЕН2 любой из перечисленных групп и/или СОРГО и/или а СПЕЬ2 любой из перечисленных групп.

В одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает с-Гш8, содержит СЭЕН3 и/или СОЕЬ3 группы А, см. выше, и СОК выбранный из группы, состоящей из:

(1) СГОЕНР выбранного из группы, состоящей из (а) а СЭЕН1 δΕΟ ΙΌ N0: 136-147; (Ь) С0ЕН1, отличающегося по аминокислотной последовательности от СПЕН1 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СЭЕН1 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из СΥΤΧ1ΤδΥСIδ (δΕΟ ΙΌ N0: 307), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Р и Ь;

(2) С0ЕН2, выбранного из группы, состоящей из (а) С0ЕН2 δΕΟ ΙΌ N0: 148-164; (Ь) СОЕН2, отличающегося по аминокислотной последовательности от СПЕН2 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СПЕН2 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ^IδАΥNСNΧ₁NΥА^ΚΧ₂^С (δΕΟ ΙΌ N0: 308), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Т и Р, а Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ь и Р;

(3) СГОЕТО выбранного из группы, состоящей из (а) СОЕТО δΕΟ ΙΌ N0: 191-210; (Ь) СОЕТО отличающегося по аминокислотной последовательности от СПЕТО согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СПЕТО с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ΚδδΧ_|СУ_^Χ₂δδΧ₃NΚNΧ.₁^А (δΕΟ ΙΌ N0: 310), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из О и δ, Х₂ выбирают из группы, состоящей из Ό и Υ, Х₃ выбирают из группы, состоящей из N и Ό, и Х₄ выбирают из группы, состоящей из Р и Υ;

(4) СОЕЬ2, выбранного из группы, состоящей из (а) СГОЕР2 δΕΟ ΙΌ N0: 211-224; (Ь) СОЕЬ2, отличающегося по аминокислотной последовательности от СПЕЬ2 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) а СПЕЬ2 с аминокислотной последовательностью, выбранный из группы, состоящей из \VАδΧ_|ЕΕδ (δΕΟ ΙΌ N0: 311), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из N и Т.

В одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает с-Гш8, содержит СГОЕН3 и/или СПЕЬ3 из группы В, см. выше, СПЕ, выбранный из группы, состоящей из:

(1) а СОЕН1, выбранного из группы, состоящей из (а) СОЕН1 δΕΟ ΙΌ N0: 136-147; (Ь) СГОЕН1, отличающегося по аминокислотной последовательности от СПЕН1 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СПЕН1 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из СГОΧ_|Χ₂Χ₃А\VΜδ (δΕΟ ΙΌ N0: 313), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Р и У, Х₂ выбирают из группы, состоящей из δ и N и Х₃ выбирают из группы, состоящей из N и Т;

(2) С0ЕН2, выбранного из группы, состоящей из (а) СОЕН2 δΕΟ ΙΌ N0: 148-164; (Ь) С0ЕН2, отличающегося по аминокислотной последовательности от СПЕН2 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СПЕН2 с аминокислотной последовательностью, выбранный из группы, состоящей из ЕНСХ|1<ТОСХ₂ТХ₃,ОХ₂ААРУ1<С (δΕΟ ГО N0: 314), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из δ и Т, Х₂ выбирают из группы, состоящей из С и ^, Х₃ выбирают из группы, состоящей из Т и А, и Х₄ выбирают из группы, состоящей из Υ и N (3) СГОЕТО выбранного из группы, состоящей из (а) СОЕТО δΕΟ ГО N0: 191-210; (Ь) СОЕТО, отличающегося по аминокислотной последовательности от СПЕТО согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СПЕТО с аминокислотной последовательностью, выбранный из группы, состоящей из ^Аδ^^IΧ_|NΥ^N (δΕΟ ΙΌ N0: 316), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из δ и N (4) СОЕЬ2, выбранного из группы, состоящей из (а) СГОЕР2 δΕΟ ΙΌ N0: 211-224; (Ь) СОЕЬ2, отли- 41 023555 чающегося по аминокислотной последовательности от СЭКЕ2 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СЭКЕ2 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ΌΧ₁δΝΕΕΧ2 (8ЕО ГО N0: 317), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из А и Т, а Х₂ выбирают из группы, состоящей из Т и Р.

В одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок, который связывает с-Тп!, содержит СГОКн3 и С0КЬ3 из группы С, см. выше, и СОК, выбранный из группы, состоящей из (1) С'ГОКнК выбранного из группы, состоящей из (а) С'ГОКШ 8Е0 ГО N0: 136-147; (Ь) С'ГОКнК отличающегося по аминокислотной последовательности от СЭКШ согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СЭКШ с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ОРТРХ^УОМн (8Е0 ГО N0: 319), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из 8 и I;

(2) СГОКн2, выбранного из группы, состоящей из (а) СГОКн2 8Е0 ГО N0: 148-164; (Ь) СГОКн2, отличающегося по аминокислотной последовательности от СГОКн2 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СГОКн2 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из VI^Υ^Ο8NΧ₁ΥΥА^8VΚΟ (8Е0 ГО N0: 320), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Ей К;

(3) СГОКЬС выбранного из группы, состоящей из (а) СГОКЫ 8Е0 ГО N0: 191-210; (Ь) СГОКЬС отличающегося по аминокислотной последовательности от СГОКЫ согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) С'ГОКЫ с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ^А8Χ1^^С₂NΧз^N (8Е0 ГО N0: 322), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из О и Н, Х₂ выбирают из группы, состоящей из 8 и N и Х₃ выбирают из группы, состоящей из Ρ и Υ;

(4) СОКЬ2, выбранного из группы, состоящей из (а) СГОКЬ2 8Е0 ГО N0: 211-224; (Ь) С0КЬ2, отличающегося по аминокислотной последовательности от СЭКЕ2 согласно (а) добавлением, делецией или заменой не более чем двух аминокислот; и (с) СГОКК2 с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из ОА8^ЕХ! (8Е0 ГО N0: 323), где Х₁ выбирают из группы, состоящей из Т и Ι.

Еще в одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок, описанный выше, состоит из первой аминокислотной последовательности, содержащей хотя бы одну из указанных выше консенсусных последовательностей СГОКН и второй аминокислотной последовательности, содержащей хотя бы одну из указанных выше консенсусных последовательностей СОКЕ. В одном аспекте в первую аминокислотную последовательность входит хотя бы две из указанных выше консенсусных последовательностей СГОКн и/или во вторую аминокислотную последовательность входит хотя бы две из указанных выше консенсусных последовательностей. Еще в одном аспекте в первую аминокислотную последовательность входит хотя бы два СГОКн из одной и той же из указанных групп А, В или С, и/или во вторую аминокислотную последовательность входит хотя бы два СГОКЬ из одной и той же из указанных групп А, В, или С. В других аспектах в первую и вторую аминокислотную последовательности входит соответственно хотя бы один СГОКн и один СГОКЬ из одной и той же из указанных групп А, В или С. В другом аспекте в первую аминокислотную последовательность входит СЭКШ, СГОКн2 и СГОКн3 из одной и той же из указанных групп А, В или С, и/или во вторую аминокислотную последовательность входит СГОКЫ, С0КЬ2 и СГОКК-3 из одной и той же из указанных групп А, В или С.

В определенных осуществлениях первая и вторая аминокислотные последовательности ковалентно связаны друг с другом.

Еще в одном осуществлении первая аминокислотная последовательность выделенного антигенсвязывающего белка включает СГОК11.3 8ЕС) ГО N0: 165-190, СГОК112 8ЕС) ГО N0: 148-164 и СГОК111 8ЕС) ГО N0: 136-147 и/или вторая аминокислотная последовательность выделенного антигенсвязывающего белка включает СГОК1.3 8ЕС) ГО N0: 225-246, СГОК1.2 8ЕС) ГО N0: 211-224 и СГОК1.1 8ЕС) ГО N0: 191-210.

В другом осуществлении антигенсвязывающий белок содержит хотя бы два СГОКн последовательностей тяжелой цепи н1, н2, н3, н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, н10, н11, н12, н13, н14, н15, н16, н17, н18, н19, н20, н21, н22, н23, н24, н25, н26, н27, н28, н29, н30, н31 или н32, как указано в табл. 4А. В еще одном осуществлении антигенсвязывающий белок содержит хотя бы два СОКЬ последовательностей легкой цепи Ь1, Ь2, Ь3, Ь4, Ь5, Ь6, Ь7, Ь8, Ь9, Ь10, Ь11, Ь12, Ь13, Ь14, Ь15, Ь16, Ь17, Ь18, Ь19, Ь20, Ь21, Ь22, Ь23, Ь24, Ь25, Ь26, Ь27, Ь28, Ь29, Ь30, Ь31, Ь32, Ь33 или Ь34, как указано в табл. 4В. Далее, в одном осуществлении антигенсвязывающий белок включает хотя бы два СГОКн последовательностей тяжелой цепи н1, н2, н3, н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, н10, н11, н12, н13, н14, н15, н16, н17, н18, н19, н20, н21, н22, н23, н24, н25, н26, н27, н28, н29, н30, н31 или н32, как указано в табл. 4А, и хотя бы два СОКЬ последовательностей легкой цепи Ь1, Ь2, Ь3, Ь4, Ь5, Ь6, Ь7, Ь8, Ь9, Ь10, Ь11, Ь12, Ь13, Ь14, Ь15, Ь16, Ь17, Ь18, Ь19, Ь20, Ь21, Ь22, Ь23, Ь24, Ь25, Ь26, Ь27, Ь28, Ь29, Ь30, Ь31, Ь32, Ь33 или Ь34, как указано в табл. 4В.

Еще в одном осуществлении антигенсвязывающий белок включает СЮКШ, СГОКн2 и СГОКн3 последовательностей тяжелой цепи н1, н2, н3, н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, н10, н11, н12, н13, н14, н15, н16, н17, н18, н19, н20, н21, н22, н23, н24, н25, н26, н27, н28, н29, н30, н31 или н32, как указано в табл.

- 42 023555

4А. В другом осуществлении антигенсвязывающий белок включает СОКЬ1, СОКЬ2 и СОКЬ3 последовательностей легкой цепи Ь1, Ь2, Ь3, Ь4, Ь5, Ь6, Ь7, Ь8, Ь9, Ь10, Ь11, Ь12, Ь13, Ь14, Ь15, Ь16, Ь17, Ь18, Ь19, Ь20, Ь21, Ь22, Ь23, Ь24, Ь25, Ь26, Ь27, Ь28, Ь29, Ь30, Ь31, Ь32, Ь33 или Ь34, как указано в табл. 4В.

В другом осуществлении в антигенсвязывающий белок входят все шесть СЭК-Н1 и Ь1, или Н1 и Ь2, или Н2 и Ь31, или Н2 и Ь33, или Н3 и Ь3, или Н4 и Ь4, или Н5 и Ь5, или Н6 и Ь6, или Н7 и Ь7, или Н8 и Ь8, или Н8 и Ь9, или Н9 и Ь32, или Н9 и Ь34, или Н10 и Ь10, или Н11 и Ь11, или Н12 и Ь12, или Н13 и Ь12, или Н14 и Ь13, или Н15 и Ь14, или Н16 и Ь15, или Н17 и Ь16, или Н18 и Ь17, или Н19 и Ь18, или Н20 и Ь20, или Н21 и Ь19, или Н22 и Ь21, или Н24 и Ь22, или Н25 и Ь23, или Н26 и Ь24, или Н27 и Ь25, или Н28 и Ь26, или Н29 и Ь27, или Н30 и Ь28, или Н31 и Ь29, или Н32 и Ь30, как указано в табл. 4А и 4В.

Данные о последовательностях для конкретных антител, полученных и идентифицированных как описано ниже в примерах, приведены в табл. 4С. Для упрощения ссылок в некоторых случаях приведена сокращенная форма кода, в которой опущена последняя цифра. Например, 1.109.1 иногда называется 1.109; 1.109.1 §М называется 1.109 §М; 1.2.1 называется 1.2; 1.2.1 §М называется 1.2 §М; 2.360.1 называется 2.360, 2.360.1 §М называется 2.360 §М и т.д.

Таблица 4А

2 5 л и о	5Г X χ с к «б § 1 к «б Е § с	О Ζ а σ ш м л с ш Е б; ге Е 5 С	Вариабельная тяжелая цепь (УН#)	ο ζ ο σ Ш (Λ Л С <υ 5 1 5 ή. >6 СО	5» X сх ο ο *“ £ ο ο	Ο ζ α σ Ш (Λ X X ο ο	4* СЧ X IX Ο ц, СЧ X Ο£ α ο	Ο ζ α 2 V) СЧ X Ο£ Ο Ο	«ο X IX ο ο Π X □С ο ο	Ο ζ ο α ί» <*» X αί ο ο
Н1109114161	Н1	4	ν«ι	70	ΟϋΚΗ 1-5	140	СИ4Н 2-8	155	ΟϋΒΗ 3-5	169
Η1131Ν161	Н2	5	Уц2	71	соки 1-1	136	СОРН 2-1	148	С0КНЗ-1	165
Η11311Ν161	НЗ	6	ν„3	72	ΟϋΡΗ 1-11	146	СМ7Н 2-8	155	ΟϋΒΗ 3-17	161
Н1 1341Ν1Θ1	Н4	7	Ун4	73	СОКН1-8	143	СЕЖН2-11	158	СОВН 3-26	190
Н1143 1Ν161	Н5	6	ν«5	74	СОКН1-2	137	СОКН2-4	151	совн 3-3	167
Н1144 1Ы1С1	Н6	9	νΜ6	75	СОКН1-2	137	СЕЖН2-3	150	СОКН 3-2	166
Н116 1Ν1Ο1	Н7	10	νΗ7	76	СЕЖН1-2	137	СОКН 2-7	154	ΟϋΒΗ 3-20	184
Η121Ν161	Н8	11	ν„8	77	СЕЗКН1-12	147	ССЖН 2-16	163	ΟϋΒΗ 3-22	186
Η1261Ν161	Н9	12	ν„9	78	СЕЗКН1-2	137	СИ4Н 2-3	150	ΟϋΒΗ 3-2	166
Н1 27114161	НЮ	13	ν„ιο	79	СЭВН1-2	137	ССЭЯН 2-3	150	С0КН 3-25	189
Н1 301Г4161	Н11	14	ν„11	ВО	С13ВН1-12	147	СЕЖН 2-16	163	СЮРН 3-22	186
Н1 33-11Ν1Θ1	Н12	15	νΗ12	81	ΟΰΒΗ 14	139	СЕЖН2-8	155	СЭЯН 34	168
Н1 33 1(4161	Н1Э	16	ν413	82	СОР.Н1-4	139	СОКН2-8	155	С6РН34	168
Η1341Ν161	Н14	17	1/-,14	83	ΟϋΚΗ 1-2	137	СОЯН2-3	150	С0КН 3-25	189
Н1 39 1Ν161	Н15	18	ν«15	84	СОВН 1-2	137	СЮВН2-5	152	ССЖНЗ-6	170
Н1 421 N161	Н16	19	Уц16	85	ΟϋΚΗ 1-12	147	СОКН2-16	163	С1ЖНЗ-22	186

- 43 023555

Η1641Ν1Θ1	Н17	20	4)17	86	СОРН 1-6	141	СОРН 2-9	156	СОКИ 3-8	172
Н1661 N1(31	N18	21	4,18	87	ΟϋΡΗ 1-8	143	СЭРН2-13	160	СОРН 3-18	182
Н1 72 1Ν161	Н19	22	ν„19	88	ΟϋΚΗ 1-3	138	СРРН 2-3	150	СОРН 3-24	188
Н21031Ν162	Н20	23	νώΟ	89	ΟϋΡΗ 1-2	137	ССКН 2-3	150	СОРН 3-9	173
Н1 90 1Ν161	Н21	24	1/н21	90	ΟϋΡΗ 1-8	143	СОРН 2-11	158	СОРН 3-19	183
Н21311Ν162	К22	25	ν«22	91	сорн ι-ίο	145	СЕЖН 2-14	161	СОРИ 3-15	179
Н2 291 1Ν162	Н23	26	ν«23	92	соки 1-β	143	СЕЖН 2-15	162	СОРНЗ-16	180
Н2 3601 N102	Н24	27	ν«24	93	СОРН1-7	142	СОРН 2-10	157	СОРНЗ-23	187
Η2 3601Ν1026Μ	Н25	28	ν«25	94	СЕЖН 1-7	142	СЕКИ 2-10	157	СОРНЗ-23	187
Н2 3691 N102	Н26	29	Ун26	95	СОРН1-/	142	СЕЖН2-10	157	СОРН 3-11	175
Η2 3801Ν162	Н27	30	4,27	96	СИМ 1-9	144	СОРН 2-12	159	СОРН 3-14	178
Η24751Ν162	Н28	31	4,28	97	СОРН 1-8	143	СОРН 2-11	158	СОРНЗ-13	177
Н2 5081 N102	Н29	32	429	98	СЕЖН1-7	142	СОРН 2-10	157	СОРН 3-12	176
Η2 5341Ν1Ο2	ИЗО	33	ν«30	99	СОРН1-1	136	СОРН 2-2	149	СОРНЗ-7	171
Н2 5501 N102	Н31	34	νΗ31	100	СОРН1-12	147	СОРН 2-17	164	СОРН 3-21	185
Н2 651 N102	Н32	35	Υη32	101	СОРН1-2	137	СОРИ 2-6	153	СОРН 3-10	174

Таблица 4В

Ссылка	Полная легкая цепь (ί#,	Полная легкая цепь 5Е<Э Ю N0	Вариаб. легкая цепь (VI.#)	Ο ζ α Ξ (Λ С <υ Ш с; (Ο η X & η Ш	5? 3 ОС ο ο Σί ο* α ο	§ о а ш (Л 5 о о	вг М _1 О£ а и а о	О Ζ о 3 и> Ί О* о о	ч» Л _1 ОС о о о о	§ О σ ш СЯ го _1 ОС й О
Н1109 1Ν1Κ	И	36	41	102	сои. 1-12	202	СОРЕ 2-6	218	СОРЕЗ-12	236
К1109 1Ν1Κ3Μ	ί2	37	42	103	ΟϋΡί 1-11	201	СОРЕ 2-8	218	СОРЕЗ-12	236
Н1131 1Ν1Κ	из	38	43	104	СОРЬ 1-7	197	СОРЕ 2-5	215	СЕЗРЕЗб	230
Н1134 1Ν1Κ	Ь4	39	44	105	С0Р1.1-9	199	СОРЕ 2-9	219	СОРЕЗ-13	237
Н1143 1Ν1Κ	ί5	40	45	106	ΟΰΡί 1-9	199	СОРЕ 2-7	217	СОИ.3-9	233
Н1 144 1Ν1Κ	ί6	41	ν,6	107	ΟΰΡί1-8	198	СОРЕ 2-6	216	ссииз-9	233
Н1 161Ν1Κ	ί7	42	Ц?	108	ΟΩΡί 1-8	193	СОРЕ 2-6	216	С13РЕЗ-7	231
Κ121Ν1Κ	ίβ	43	48	109	сою. ι-з	193	СОРЕ 24	214	С0И.34	228
Η121Ν1Κ3Μ	ί9	44	49	110	ΟΟΡί 1-3	193	СОРЕ 2-4	214	СОРЕЗ-4	228
Η1271Ν1Κ	И0	45	УьЮ	111	СОРЕ1-8	198	СОРЕ 2-6	216	СОРЕЗ-9	233
Н1301Ν1Κ	И1	46	411	112	СЭРЕ 1-5	195	СОРЕ 2-4	214	00Ρί34	228
Н1 33-1 1Ν1Κ	И2	47	412	113	СЭРЕ 1-2	192	СОРЕ 2-2	212	ΟΟΡί3-3	227
Н1341Ν1Κ	ИЗ	48	413	114	СЭРЕ 1-8	198	СОРЕ 2-6	216	ссмиз-э	233
Η1391Ν1Κ	И 4	49	414	115	СЕЖЕ 1-8	193	СОРЕ 2-6	216	СЕниз-э	233
Η1421Ν1Κ	115	50	Уи15	116	ССЖЕ 1-4	194	СОРЕ 2-4	214	СОРЬЗ-4	228
Η1641Ν1Κ	116	51	416	117	СЕКЕ 1-19	209	СОРЕ 2-13	223	СОРЕЗ-21	245
Η1661Ν1Κ	117	52	417	118	СЭРЕ 1-13	203	СОРЕ 2-6	216	СОРЬЗ-16	240
Н1 721Ν1Κ	И 8	53	418	119	СОРЕ 1-8	198	СОРЕ 2-6	216	ссииз-э	233
Η1901Ν1Κ	И 9	54	419	120	СЭРЕ 1-8	193	СОРЕ 2-6	216	СОРЕЗ-8	232
Κ21031Ν1Κ	120	55	420	121	СЭРЕ 1-8	198	СОРЕ 2-6	216	СОРЕЗ-9	233
Н2 1311Ν1Κ	121	56	421	122	СЭРЕ 1-15	205	СОРЕ 2-10	220	СОРЕЗ-17	241
Η23601Ν1Κ	122	57	422	123	ССЖЬ1-16	206	СОРЕ 2-11	221	СОКЕЗ-18	242
Η23601Ν1Κ8Μ	123	58	423	124	СОКЬ1-16	206	СОРЕ 2-11	221	СОКЕЗ-18	242

- 44 023555

Η23691Ν1Κ	124	59	424	125	СОРЬ1-6	196	СОРЕ 2-2	212	СОР1.3-5	229
Η23801Ν1Κ	Ι_25	60	425	126	ΟϋΚΙ. 1-20	210	СОРЕ 2-2	212	СОРЬЗ-22	246
Н2 4751Ы1К	126	61	426	127	СОКЕ 1-10	200	СОРЕ 2-6	216	€ϋΡί3-11	235
Н25081Ы1К	127	62	\ΙιΖ7	128	СОРЬ 1-17	207	СОРЕ 2-14	224	СОР13-19	243
Η2 5341Ν1Κ	12β	63	428	129	СОРЕ1-18	208	СОРЬ 2-12	222	СОВ1.3-20	244
Η2 5501Ν1Κ	129	64	429	130	СОРЬ 1-14	204	СОРЕ 2-3	213	СОРЕЗ-15	239
Η2 651Ν1Κ	1.30	65	430	131	СОРЬ1-9	199	СОРЬ 2-6	216	сога.з-10	234
Η1131Ν1Κ	121	66	431	132	ΟΟΡί 1-8	198	сорьг-е	216	СОИ.3-14	238
Η1261Ν1Κ	1.32	67	Уь32	133	СОРЕ 1-3	198	СОРЕ 2-6	216	СОВЬЗ-Э	233
Η113Н1 131№/К2КК	1.33	68	Уь33	134	СОИ. 1-1	191	СОРЕ 2-1	211	СОНЕЗ-2	226
Η1 26Η1 26 1ΝνΚ2ΚΚ	ί34	69	434	135	СОТО. 1-1	191	СОРЕ 2-1	211	СОРЬЗ-1	225

Таблица 4С

I	Полная тяжелая цепь 5ЕО Ю N0	О σ ιυ (Л л с а> а- ф е; 5 ь	Вариабельная тяжелая цепь 5ЕО Ю N0	Вариабельная легкая цепь 5ЕО Ю N0	О 2 О σ ш ν> V* Ё о о	О Ζ а а ш <о С4 £ о о	О Ζ о аг ш V» X X О О	О Ζ о о ш * о о	О Ζ о а Щ 40 <м к а а	О Ζ а σ ш (О _1 0£ О и
1.109.1	4	36	70	102	140	155	169	202	218	236
1.109.18М	4	37	70	103	140	155	169	201	218	236
1.13.1	5	66	71	132	136	148	165	198	216	238
1.13.13.1	5	68	71	134	136	148	165	191	211	226
1.131.1	6	38	72	104	146	155	181	197	215	230
1.134.1	7	39	73	105	143	158	190	199	219	237
1.143.1	8	40	74	106	137	151	167	199	217	233
1.144.1	9	41	75	107	137	150	166	198	216	233
1.16.1	10	42	76	108	137	154	184	198	216	231
12.1	11	43	77	109	147	163	186	193	214	228
12.1 5М	11	44	77	110	147	163	186	193	214	228
1.26.1	12	67	78	133	137	150	166	198	216	233
12626.1	12	69	78	135	137	150	166	191	211	225
1.27,1	13	45	79	111	137	150	189	198	216	233
1.30.1	14	46	80	112	147	163	186	195	214	228
1.33-1.1	15	47	81	113	139	155	168	192	212	227
1.33.1	16	47	82	113	139	155	168	192	212	227
1.34.1	17	48	83	114	137	150	189	198	216	233
1.39.1	1В	49	84	115	137	152	170	198	216	233
1.42.1	19	50	85	116	147	163	186	194	214	228
1.64.1	20	51	86	117	141	156	172	209	223	245
1.66.1	21	52	87	118	143	160	182	203	216	240
1.72.1	22	53	88	119	138	150	188	198	216	233
2.103.1	23	55	89	121	137	150	173	198	216	233
1.90.1	24	54	90	120	143	158	183	198	216	232
2.131,1	25	56	91	122	145	161	179	205	220	241
2291.1	26		92		143	162	180
2.360.1	27	57	93	123	142	157	187	206	221	242
2.360.1 8М	28	58	94	124	142	157	187	206	221	242
2269.1	29	59	95	125	142	157	175	196	212	229
2.380.1	30	60	96	126	144	159	178	210	212	246
2.475,1	31	61	97	127	143	158	177	200	216	235
2.508.1	32	62	98	128	142	157	176	207	224	243
2.534.1	33	63	99	129	136	149	171	208	222	244
2250.1	34	64	100	130	147	164	185	204	213	239
2.65.1	35	65	101	131	137	153	174	199	216	234

- 45 023555

В одном аспекте выделенные антигенсвязывающие белки, предлагаемые в настоящем документе, могут представлять собой моноклональное антитело, поликлональное антитело, рекомбинантное антитело, человеческое антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело, мультиспецифическое антитело или фрагмент указанных антител.

В другом осуществлении фрагмент антитела предлагаемого выделенного антигенсвязывающего белка может представлять собой фрагмент РаЬ, фрагмент РаЬ', фрагмент Р(аЬ')₂, фрагмент Ρν, димер диабоди или одноцепочечную молекула антитела.

Далее, в одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок, предложенный в настоящем документе, является человеческим антителом и может относиться к типу 1д01, 1д02, 1д03 или 1д04.

В другом осуществлении антигенсвязывающий белок состоит только из полипептида легкой или тяжелой цепи, как предложено в табл. 4А-4С. В некоторых осуществлениях антигенсвязывающий белок состоит только из вариабельного домена легкой цепи или вариабельного домена тяжелой цепи, которые перечислены в табл. 4А-4С. Такие антигенсвязывающие белки могут быть соединены с одной или более молекулой ПЭГ.

Еще в одном аспекте выделенный антигенсвязывающий белок, предложенный в настоящем документе, может быть соединен с группой, содержащей метку, и может конкурировать за связывание с внеклеточной частью с-Гпъ человека с одним из предложенных в настоящем документе выделенных антигенсвязывающих белков. В одном осуществлении выделенный антигенсвязывающий белок, предложенный в настоящем документе, при введении в организм пациента снижает хемотаксис моноцитов, ингибирует миграцию моноцитов в опухоли или ингибирует накопление и функции опухоль-ассоциированного макрофага в опухоли.

Как может оценить специалист, для любого антигенсвязывающего белка с более чем одним СЭК из приведенных последовательностей имеет смысл любое сочетание СЭК, выбранных независимым образом из приведенных последовательностей. Таким образом, могут быть генерированы антигенсвязывающие белки с одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или шестью независимо выбранными СЭК. Однако, как может оценить специалист, в конкретных осуществлениях обычно используются нерегулярные комбинации СЭК, например, в составе антигенсвязывающих белков обычно не оказывается двух участков СЭКН2 и т.д.

Некоторые из предложенных антигенсвязывающих белков ниже обсуждаются более подробно.

Антигенсвязывающие белки, связывание эпитопов и связывание доменов.

Говоря, что антигенсвязывающий белок связывает эпитоп по определенным остаткам, таким как сГпъ или внеклеточный домен с-Гтх подразумевают, что антигенсвязывающий белок специфически связывается с определенной частью с-Гт8. В некоторых осуществлениях антигенсвязывающий белок специфически связывается с полипептидом, состоящим из заранее заданных остатков (например, заданного сегмента с-Гпъ). Такой антигенсвязывающий белок обычно не контактирует со всеми остатками в составе с-Гпъ или с внеклеточным доменом с-Гтх Также, какая либо единичная замена или делеция аминокислоты в составе с-Гпъ или внеклеточного домена с-Гпъ не обязана значительно влиять на эффективность связывания.

Специфичность эпитопа и связывающие домены антигенсвязывающего белка можно определить различными способами. В некоторых из них, например, применяются укороченные части антигена. В других методах используют антиген, содержащий мутации по одному или более остатку.

В отношении способов, основанных на применении укороченных частей антигена, в одном из типовых подходов применяют набор перекрывающихся пептидов. Перекрывающиеся пептиды состоят приблизительно из 15 аминокислот, охватывающих последовательность антигена и различающихся небольшим числом аминокислот (например, тремя аминокислотами). Указанные пептиды иммобилизуют в лунках планшета для микротитрования или в различных положениях на мембране. Эффективность иммобилизации можно повысить за счет биотинилирования пептида по одному концу. В качестве одной из возможностей, разные образцы одних и тех же пептидов биотинилируют по амино- и карбокси-концам и иммобилизуют в отдельных лунках для сравнения. Такой способ позволяет выявить антигенсвязывающие белки, специфически связывающие определенный конец цепи. В качестве одной из возможностей, включают дополнительные пептиды, с определенными заданными аминокислотами на концах. Такой способ позволяет выявить антигенсвязывающие белки, специфические к внутренним фрагментам с-Гпъ (или внеклеточному домену с-Гпъ). Антигенсвязывающий белок или иммунологически функциональный фрагмент тестируют на специфическое связывание с каждым из разных пептидов. Эпитоп определяют как сегмент аминокислот, общий для всех пептидов, с которыми антигенсвязывающий белок демонстрирует специфическое связывание. Более подробно указанный способ определения эпитопа поясняется в примере 12.

Как показано в примере 12, в одном осуществлении антигенсвязывающие белки, предложенные в настоящем документе, способны связывать полипептид, содержащий комбинацию 1д-подобного домена 1 и 1д-подобного домена 2; однако они не связывают полипептид, содержащий только 1д-подобный домен 1 или только 1д-подобный домен 2. Связывающие эпитопы таких антигенсвязывающих белков состоят таким образом из трехмерной комбинации 1д-подобного 1 и 1д-подобного 2 доменов. Как помечено

- 46 023555 на фиг. 8, два указанных домена включают аминокислоты 20-223 внеклеточного домена с-Гпгт который имеет следующую аминокислотную последовательность:

1РУ1ЕР8УРЕЬУУКРОАТУТи<СУОМО8УЕ\УООРР8РН\УГЬУ8ОО8881Е8та

ΝΑΤΡ0ΝΤΟΊΎΚ£ΤΕΡΟΟΡΕΟΟδΑΑ]ΗΕΥνΚΕ>ΡΑΚΡ\νΝνΕΑ(3ΕνννΡΕΟ<>ϋΑΕΕΡΕΕΕ

ТОРУЕЕЛОУ8ЕУПУРС1РРЕМРНТ\Х8Г8РУТОРТ[Р1ПЛКР1030ОУ0С8ЛЕМ6ОККУ

М8181РЕКУОКУ1РСРРАЫЕУРАЕ\^;ШКОЕААО1У. (ЗЕО ГО N0:326)

Аминокислотная последовательность, которую используют в примере 12 в качестве 1д-подобного 1 домена, соответствует аминокислотам 20-126 последовательности, показанной на фиг. 8 (т.е. аминокислоты 20-126 из 8Е0 ГО N0: 1, а именно

ΙΡνΐΕΡ8νΡΕΕννΚΡ0ΑΤνΤΕΚΕν0Ν05νΕ\ν00ΡΡ3ΡΗ\νΤΕΥ300δδ8ΙΕδΤΝΝΑΤΡ()Ν

ΤΟΙΎΚΟΙΈΡΟΟΡΕΟΟδΑΑΙΗΕΥνΚϋΡΑΚΡ\νΝνΕΑφΕν\νΡΕΟφΟΑΕΕΡ).

Аминокислотная последовательность, которую используют в качестве индивидуального 1дподобного 2 домена, соответствует аминокислотам 85-223 последовательности, показанной на фиг. 8 (т.е. аминокислотам 85-223 8Е0 ГО N0: 1, а именно

ТЕРООРЕСОЗААШЕУУКОРАРКУгаУЕАОЕУУУРЕОООАЕЕРСЕЕТОРУЕЕАОУЗЕУ ΚνΚΟΚΡΕΜΚΗΤΝΥ8Ρ8ΡΨΗΟΡΤΙΗΚΑΚΡΙ9890ΥρΕ8ΑΕΜΟΟΚΚνΜ8Ι8ΙΚΕΚνφΚνΐ РОРРАЕТЕУРАБУЫ ΚΟΕΑΑφίν)

Таким образом, антигенсвязывающий белок в одном осуществлении может связываться или специфически связываться с участком белка с-Гтк (например, зрелого полноразмерного белка), причем указанный участок имеет аминокислотную последовательность, приведенную в 8Е0 ГО N0: 326. В некоторых осуществлениях антигенсвязывающий белок связывается или специфически связывается с полипептидом, в основном состоящим или состоящим из аминокислотных остатков, заданных в 8Е0 ГО N0: 326.

В другом осуществлении антигенсвязывающий белок может связываться или специфически связываться с полипептидом, состоящим из 8Е0 ГО N0: 326, но не с полипептидом, состоящим из аминокислот 20-126 последовательности, изображенной на фиг. 8 (т.е. аминокислоты 20-126 8Е0 ГО N0: 1). В другом аспекте антигенсвязывающий белок может связываться или специфически связываться с полипептидом, состоящим из 8Е0 ГО N0: 326, но не с полипептидом, состоящим из аминокислот 85-223 последовательности, изображенной на фиг. 8 (т.е. аминокислоты 85-223 8Е0 ГО N0: 1). Еще в одном осуществлении антигенсвязывающий белок может связываться или специфически связываться с полипептидом, состоящим из 8Е0 ГО N0: 326, но не с полипептидом, состоящим из аминокислот 20-126 последовательности, изображенной на фиг. 8 (т.е. аминокислоты 20-126 8Е0 ГО N0: 1) или с полипептидом, состоящим из аминокислот 85-223 последовательности, изображенной на фиг. 8 (т.е. аминокислоты 85-223 ЗЕС) ГО N0: 1).

Согласно другому подходу, домен(ы)/участки, содержащие остатки, контактирующие с антителами, можно выявить, внося мутацию в определенный остаток антигена (например, антигена дикого типа) и определяя, может ли антигенсвязывающий белок взаимодействовать с мутированным белком. В результате проведения нескольких отдельных мутаций, можно обнаружить остатки, играющие непосредственную роль в связывании или расположенные вблизи антитела, так что мутация может повлиять на связывание между антигенсвязывающим белком и антигеном. Зная эти аминокислоты, можно определить домен(ы) или участок(участки) антигена, содержащие остатки, контактирующие с антигенсвязывающим белком или покрытые антителом. Такой домен обычно включает связывающий эпитоп антигенсвязывающего белка. В одном из примеров, иллюстрирующих этот общий подход, используется методика тестирования аргинин/глютаминовая кислота (см., например, М-тетю/, Т., с соавт., 1995, 1. Вю1. СНет., 270:37, 21619-21625 и 2иртск, А., с соавт., 2006, 1. Вю1. СНет., 281:29, 20464-20473). В общем случае аминокислоту в полипептиде дикого типа заменяют на аргинин и глутаминовые кислоты (как правило индивидуально), так как указанные аминокислоты имеют большой объем и заряд и таким образом способны нарушить связывание между антигенсвязывающим белком и антигеном на том участке антигена, куда внесена мутация. Аргинины и лизины, имеющиеся в антигене дикого типа, заменяют на глутаминовую кислоту. Получают набор индивидуальных мутантов и анализируют данные по связыванию, определяя таким образом, какие остатки влияют на связывание.

В примере 14 описано тестирование аргинин/глутаминовая кислота с-Гтк человека в применении к предлагаемым с-Гтк-связывающим белкам. Был создан ряд из 95 мутантных антигенов с-Гтк человека, при этом каждый мутантный антиген содержал единичную мутацию. Определяли связывание каждого мутантного антигена с-Гтк с выбранными антигенсвязывающими белками, связывающими с-Гтк, предложенными в настоящем документе, и сравнивали результат со способностью указанных выбранных связывающих белков взаимодействовать с антигеном с-Гтк дикого типа (8Е0 ГО N0: 1). Уменьшение связывания между антигенсвязывающим белком и мутантным антигеном с-Гтк в настоящем документе означает, что уменьшается аффинность (например, по данным известных методов измерения, таких как анализ на приборе В1асоге, описанный в примерах) и/или уменьшается суммарная способность антигенсвязывающего белка к связыванию (например, определяемая на основе снижения В_тах на графике зависимости концентрации антигенсвязывающего белка от концентрации антигена). Существенное

- 47 023555 мости концентрации антигенсвязывающего белка от концентрации антигена). Существенное уменьшение связывания говорит о том, что мутированный остаток непосредственно участвует в связывании с антигенсвязывающим белком или расположен в непосредственной близости со связывающим белком, когда белок связан с антигеном.

В некоторых осуществлениях существенное уменьшение связывания означает, что аффинность и/или связывающая способность антигенсвязывающего белка с мутантным антигеном с-Гт8 снизилась более чем на 40%, более чем на 50%, более чем на 55%, более чем на 60%, более чем на 65%, более чем на 70%, более чем на 75%, более чем на 80%, более чем на 85%, более чем на 90% или более чем на 95% по сравнению со связыванием между связывающим белком и антигеном с-Гт8 дикого типа (например, внеклеточным доменом, показанным в δΕΟ ΙΌ N0: 1). В определенных осуществлениях связывание уменьшается ниже предела определяемых величин. В некоторых осуществлениях существенное уменьшение связывания подтверждается, если связывание антигенсвязывающего белка с мутантным антигеном с-Гт8 составляет менее 50% (например, менее 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15 или 10%) по сравнению со связыванием, наблюдаемым между антигенсвязывающим белком антигеном с-Гт8 дикого типа (например, внеклеточным доменом, показанным на δΕΟ ΙΌ N0: 1). Величина связывания может быть измерена с помощью ряда методов анализа связывания, известных в данной области. Один из вариантов такого анализа приведен в примере 14.

В некоторых осуществлениях предлагаются антигенсвязывающих белки, которые проявляют существенно меньшее связывание с мутантным антигеном с-Гт8, в котором один остаток в антигене с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1) заменен аргинином или глутаминовой кислотой. В одном из таких осуществлений связывание антигенсвязывающего белка существенно уменьшается для мутантного антигена с-Гт8, имеющего любую одну или более (например, 1, 2, 3 или 4) из следующих мутаций: Ε29Р, 0121Р, Т152Р и К185Е по сравнению с с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1). В настоящем документе используется следующий формат сокращенных обозначений: остаток дикого типа: положение в полипептиде: мутантный остаток, при этом нумерация остатков соответствует указанной для δΕΟ ΙΌ N0: 1. В некоторых осуществлениях связывание антигенсвязывающего белка существенно уменьшается для мутантного антигена с-Гт8, имеющего любую одну или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) из следующих мутаций: Ε29Р, 0121Р, δ172Р, С274Р и Υ276Р по сравнению с с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1). В другом осуществлении антигенсвязывающий белок демонстрирует существенно более низкое связывание с мутантным антигеном с-Гт8, содержащим одну или более (например, 1, 2, 3, 4, 5 и т.д. до 23) из следующих мутаций: Р106Ε, н151Р, Т152Р, У154Р, 8155Р, №159Р, 0171Р, δ172Κ О173Р, С183Р, Р184Ε, К185Е, Ε218Κ А220Р, δ228Κ н239Р, Ю40Р, К259Е, С274Р, Ю75Р, Υ276Κ δ277Р и Ш82Р по сравнению со связыванием с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1). В дополнительных осуществлениях связывание антигенсвязывающего белка существенно уменьшается для мутантного антигена с-Гт8, имеющего любую одну или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) из следующих мутаций: К102Е, Р144Ε, Р146Ε, Э174Р и А226Р, по сравнению со связыванием с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1). Согласно другим осуществлениям, антигенсвязывающий белок демонстрирует существенное уменьшение связывания в случае мутантного антигена с-Гт8, содержащего одну или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) из следующих мутаций: №50Р, А74Р, Υ100Κ О122Р, Т130Р, С161Р, У175Р и А179Р по сравнению со связыванием с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1).

Несмотря на то что перечисленные мутантные формы получаются из последовательности внеклеточного домена дикого типа, показанного в δΕΟ ΙΌ N0: 1, в аллельном варианте с-Гт8 аминокислота в указанном положении может различаться. Также предусматриваются антигенсвязывающие белки, характеризующиеся существенным уменьшением связывания для таких аллельных форм с-Гт8. Соответственно, согласно одному осуществлению антигенсвязывающий белок имеет существенно уменьшенное связывание с аллельным антигеном с-Гт8 по сравнению с с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1), если один или более из следующих остатков (например, 1, 2, 3 или 4) аллельного антигена заменен аргинином или глутаминовой кислотой, как указано: 29Р, 121Р, 152Р и 185Е (положение в полипептиде: мутантный остаток, при этом нумерация остатков соответствует указанной для δΕΟ ΙΌ N0: 1). Согласно некоторым осуществлениям, антигенсвязывающий белок демонстрирует существенно уменьшенное связывание с аллельным антигеном с-Гт8, где один или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) из следующих остатков заменен аргинином или глутаминовой кислотой, как указано: 29Р, 121Р, 172Р, 274Р и 276Р, по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1). Согласно другому осуществлению, антигенсвязывающий белок имеет существенно уменьшенное связывание с аллельным антигеном с-Гт8, где один или более (например, 1, 2, 3, 4, 5 и т.д. до 23) из следующих остатков заменен аргинином или глутаминовой кислотой как указано: 106Е, 151Р, 152Р, 154Р, 155Р, 159Р, 171Р, 172Р, 173Р, 183Р, 184Е, 185Е, 218Р, 220Р, 228Р, 239Р, 240Р, 259Е, 274Р, 275Р, 276Р, 277Р и 282Р, по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1). В дополнительных осуществлениях антигенсвязывающий белок имеет существенно уменьшенное связывание с аллельным антигеном сГт8, где один или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) из следующих остатков заменен аргинином или глутаминовой кислотой как указано: 102Е, 144Е, 146Е, 174Р и 226Р, по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, δΕΟ ΙΌ N0: 1). Согласно другим осуществлениям, антигенсвязы- 48 023555 вающий белок демонстрирует существенно уменьшенное связывание с аллельным антигеном с-Гт8, где один или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) из следующих остатков заменен аргинином или глутаминовой кислотой как указано: 50К, 74К, 100К, 122К, 130К, 161К, 175К, и 179К, по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, БЕЦ ГО ЫО: 1).

Согласно некоторым осуществлениям, связывание антигенсвязывающего белка существенно уменьшается для мутантного антигена с-Гт8, в котором остаток в выбранном положении антигена с-Гт8 дикого типа мутирован в любой другой остаток. Например, в одном осуществлении антигенсвязывающий белок проявляет существенно уменьшенное связывание с мутантным антигеном с-Гт8, содержащим единичную аминокислотную замену в одном или более (например, 1, 2, 3 или 4) из положений 29, 121, 152 и 185 (где положения указаны по БЕЦ ГО ЫО: 1) по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, БЕЦ ГО ЫО: 11). Согласно некоторым осуществлениям, антигенсвязывающий белок имеет существенно уменьшенное связывание с мутантным антигеном с-Гт8, содержащем единичную аминокислотную замену в одном или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) из положений 29, 121, 172, 274 и 276 БЕЦ ГО ЫО: 1 по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, БЕЦ ГО ЫО: 1). В другом осуществлении связывание антигенсвязывающего белка существенно уменьшается для мутантного антигена с-Гт8, содержащего единичную аминокислотную замену в одном или более (например, 1, 2, 3, 4, 5 и т.д. до 23) из положений 106, 151, 152, 154, 155, 159, 171, 172, 173, 183, 184, 185, 218, 220, 228, 239, 240, 259, 274, 275, 276, 277 и 282 БЕЦ ГО ЫО: 1 по сравнению со связыванием с с-Гт8 дикого типа согласно БЕЦ ГО ЫО: 1. Согласно другим осуществлениям, антигенсвязывающий белок имеет существенно меньшее связывание с мутантным антигеном с-Гт8, содержащем единичную аминокислотную замену в одном или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) из положений 102, 144, 146, 174 и 226 БЕЦ ГО ЫО: 1, по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, БЕЦ ГО ЫО: 1). В других осуществлениях, антигенсвязывающий белок имеет существенно меньшее связывание с мутантным антигеном с-Гт8, содержащем единичную аминокислотную замену в одном или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) из положений 50, 74, 100, 122, 130, 161, 175 и 179, по сравнению с его способностью связывать с-Гт8 дикого типа (например, БЕЦ ГО ЫО: 1).

Как указано выше, остатки, непосредственно принимающие участие в связывании или покрытые антигенсвязывающим белком, можно идентифицировать на основе результатов тестирования. Таким образом, указанные остатки дают указание на домены или области БЕЦ ГО ЫО: 1, содержащие связывающие участки, с которыми взаимодействует антигенсвязывающий белок. Данные примера 14, показывают, что в одном осуществлении антигенсвязывающий белок связывается с доменом, содержащем аминокислоты 29-185 из БЕЦ ГО ЫО: 1. Согласно другому осуществлению антигенсвязывающий белок взаимодействует с участком, содержащим аминокислоты 29-276 из БЕЦ ГО ЫО: 1. Согласно другим осуществлениям антигенсвязывающий белок взаимодействует с участком, содержащим аминокислоты 106-282 из БЕЦ ГО ЫО: 1. В других осуществлениях антигенсвязывающий белок взаимодействует с участком, содержащим аминокислоты 102-226 из БЕЦ ГО ЫО: 1. Согласно еще одному осуществлению антигенсвязывающий белок взаимодействует с участком, содержащим аминокислоты 50-179 из БЕЦ ГО ЫО: 1. Согласно некоторым осуществлениям антигенсвязывающий белок взаимодействует с упомянутыми выше участками внутри фрагмента полноразмерной последовательности БЕЦ ГО ЫО: 1. В других осуществлениях антигенсвязывающие белки взаимодействуют с полипептидами, состоящими из данных участков. В определенных осуществлениях антигенсвязывающий белок взаимодействует с участком, содержащим аминокислоты 900-282 из БЕЦ ГО ЫО: 1. Согласно другому осуществлению антигенсвязывающий белок взаимодействует с одним или с обоими из следующих участков: аминокислоты 90-185 и аминокислоты 217-282 из БЕЦ ГО ЫО: 1. Еще в одном осуществлении антигенсвязывающий белок взаимодействует с одним или с обоими из следующих участков: аминокислоты 121-185 и аминокислоты 217-277 из БЕЦ ГО ЫО: 1.

Конкурентные антигенсвязывающие белки.

В другом аспекте предлагаются антигенсвязывающие белки, которые конкурируют с одним из типовых антител или их функциональными фрагментами, взаимодействующими с описанным выше эпитопом, за специфическое связывание с-Гт8. Такие антигенсвязывающие белки могут также взаимодействовать с тем же эпитопом, что один из антигенсвязывающих белков, приведенных здесь в качестве примера, или с перекрывающимся эпитопом. Предполагается, что антигенсвязывающие белки и фрагменты, которые конкурируют или связываются с тем же эпитопом, что и типовые антигенсвязывающие белки, будут иметь аналогичные функциональные свойства. К типовым антигенсвязывающим белкам и фрагментам относятся описанные выше, в том числе имеющие тяжелую и легкую цепь, вариабельные домены и СОК, перечисленные в табл. 1, 2, 3, и 4А-С. Таким образом, частным примером предложенных антигенсвязывающих белков являются белки, конкурирующие с антителами, имеющими:

(a) все 6 СОК, перечисленные для антитела в табл. 4С;

(b) У_Н и У_ъ, перечисленные для антитела в табл. 4С; или (c) две легких цепи и две тяжелых цепи, перечисленные для антитела в табл. 4С.

- 49 023555

Моноклональные антитела.

К предлагаемым антигенсвязывающим белкам относятся моноклональные антитела, которые связывают с-Гтк. Моноклональные антитела могут быть получены любым известным в данной области способом, например, иммортализацией спленоцитов, собранных от трансгенного животного после завершения схемы иммунизации. Иммортализацию спленоцитов проводят любым известным в данной области способом, например, слиянием с миеломными клетками с получением гибридом. Миеломные клетки для процедуры слияния с образованием гибридом предпочтительно не являются антитело-продуцирующими клетками, характеризуются высокой эффективностью слияния и являются энзимодефицитными, что делает их неспособными расти на селективных средах, которые поддерживают рост только определенных слитых клеток (гибридом). Примерами пригодных клеточных линий для слияния с мышиными клетками являются δρ-20, Р3-X63/А§8, Р3-X63-Аё8.653, №1/1.А§ 41, δр210-Аё14, Р0, №0/И, МРС-11, МРС11X45-ОΤО 1.7 и δ194/5ΧΧ0 Ви1; примерами клеточных линий для слияния с крысиными клетками являются Р210.РСΥ3, У3-Ад 1.2.3, ΙΕ983Ρ и 4В210. Другие клеточные линии для слияния -И-266, ОМ1500ОРО2, ЫСР-Ь0№НМу2 и ИС729-6.

В некоторых случаях клеточные линии гибридом получают путем иммунизации животного (например, трансгенного животного с человеческими последовательностями иммуноглобулина) иммуногеном с-Гтк; сбора спленоцитов от привитого животного; слияния собранных спленоцитов с миеломными клетками с образованием клеток гибридомы; установления клеточных линий гибридомы из клеток гибридомы, и идентификации клеточной линии гибридомы, которая продуцирует антитело, связывающее полипептидом с-Гтк. Такие клеточные линии гибридомы, а также моноклональные антитела против с-Гтк, которые они продуцируют, являются аспектами данной заявки.

Моноклональные антитела, секретируемые клеточной линией гибридомы, очищают любым из известных в данной области способов. Далее возможно тестирование гибридомы или МКА для идентификации МКА с определенными свойствами, такими как способность блокировать ^ηΐ-индуцированную активность. Примеры такого тестирования приведены ниже в разделе Примеры.

Химерные и гуманизированные антитела.

Также предлагаются химерные и гуманизированные антитела на основе приведенных выше последовательностей. Моноклональные антитела, предназначенные для применения в качестве лечебного средства, можно модифицировать разными способами перед использованием. Одним из примеров является химерное антитело, т.е. антитело, состоящее из сегментов белка различных антител, ковалентно связанных с образованием легкой или тяжелой цепи функционального иммуноглобулина или его иммунологически функциональной части. Обычно часть тяжелой цепи и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности антител, полученных от конкретного вида организмов или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, а остальная цепь(цепи) идентична или гомологична соответствующей последовательности антител, полученных от другого вида организмов или принадлежащего другому классу или подклассу антител. Способы получения химерных антител описаны, например, в патенте США № 4816567; Моткоп с соавт., 1985, Ргос. №л1. Асай. δ^. υδΛ 81:68516855, которые включены в данный документ посредством ссылки. Прививка СИР, например, описана в патентах США № 6180370, 5693762, 5693761, 5585089 и 5530101.

Обычно задачей получения химерного антитела является создание химерной частицы с максимальным количеством аминокислот от того вида, к которому принадлежит предполагаемый пациент. Одним из примеров является СИР-привитое антитело, в котором антитело содержит один или более определяющий комплементарность участок (СИР) от конкретного вида организмов или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, а остальная цепь(цепи) идентична или гомологична соответствующей последовательности антител, полученных от другого вида организмов или принадлежащего другому классу или подклассу антител. Для использования в организме человека вариабельную область или выбранный СИР от антитела грызуна часто прививают к антителу человека, заменяя при этом природные вариабельные области или СИР в антителе человека.

Полезным типом химерного антитела является гуманизированное антитело. В общем случае, гуманизированное антитело получают из моноклонального антитела, изначально выращенного в организме животного (а не человека). Определенные аминокислотные остатки данного моноклонального антитела, обычно находящиеся вне антиген-распознающей части антитела, модифицируют, делая гомологичными указанным остаткам антител человека соответствующего изотипа. Гуманизацию можно осуществить, различными способами, например, замещением хотя бы части вариабельной области грызуна на соответствующие участки антител человека (см., например, патенты США № 5585089 и 5693762; 1опек с соавт., 1986, №-11иге 321:522-525; ЮесЬтапп с соавт., 1988, №ш.1ге 332:323-27; Vе^Ьоеуеη с соавт., 1988, δ№η^ 239:1534-1536).

В одном аспекте, СИР вариабельных областей легкой и тяжелой цепи антител, предложенных в настоящем документе (см. табл. 3), прививают к каркасным областям (РР) антител от того же или другого филогенетического вида. Например, СИР вариабельных областей легкой и тяжелой цепи у_Н1, УН2, У^, У_Н4, У_Н5, ν^, У_Н7, У_Н8, У_Н9, ^10, ^11, ^12, ^13, ^14, ^15, ^16, ^17, ^18, ^19, ^20, ^21, У_Н22, У_Н23, У_Н24, ^25, ^26, ^27, ^28, ^29, ^30, ^31 и ^32 и/или ν_Σ1, ν 2, ν 3, ν4, ν_Σ5, ν 6,

- 50 023555

У_ъ7, У_ъ8, У_ъ9, У_ъ10, У_ъ11, У_ъ12, У_ъ13, У_ъ14, У_ъ15, У_ъ16, У_ъ17, У_ъ18, У_ъ19, У_ъ20, У_ъ21, У_ъ22, У_ъ23, У| 24, У_ъ25, У_ь26, У_ь27, У_ь28, У_Ь29,У_Ь30, У_ь31, У_ь32, У_ь33 и У_ь34 могут быть привиты к консенсусным РЕ человека. Для получения консенсусных РЕ человека проводят сравнение человеческих РЕ от нескольких аминокислотных последовательностей тяжелой цепи или легкой цепи для выявления консенсусных аминокислотных последовательностей. В других осуществлениях РЕ тяжелой цепи или легкой цепи, раскрытые в настоящем документе, заменены на РЕ из другой тяжелой цепи или легкой цепи. В одном аспекте редкие аминокислоты в РЕ тяжелой и легкой цепи антитела против с-Пп8 не заменяют, а остальную часть аминокислот РЕ заменяют. Редкие аминокислоты - это специфические аминокислоты, занимающие положение, в котором данная аминокислота обычно не обнаруживается в РЕ. В качестве альтернативы, привитые вариабельные области от одной тяжелой или легкой цепи используют с константной областью, отличной от константной области указанных тяжелой или легкой цепи, раскрытых в настоящем документе. Согласно другим осуществлениям, привитые вариабельные области являются частью одноцепочечных антител Ру.

В определенных осуществлениях гибридные антитела получают, сочетая константные области из организма животных с вариабельными областями человека.

Полностью человеческие антитела.

Предлагаются также полностью человеческие антитела. Существуют способы создания полностью человеческих антител, специфичных к определенному антигену, не воздействуя на человека данным антигеном (полностью человеческие антитела). Одним из специальных средств для получения полностью человеческих антител является гуманизация гуморальной иммунной системы мыши. Одним из способов получения полностью человеческих моноклональных антител (МКА) в организме мышей - животных, пригодных для иммунизации любым желаемым антигеном - является введение локусов иммуноглобулина человека Дд) мышам, у которых эндогенные гены Ι§ были инактивированы. Применение полностью человеческих антител снижает до минимума иммуногенные и аллергические реакции, которые иногда могут быть вызваны введением в качестве лечебного средства мышиных или полученных с помощью мышей МКА в организм человека.

Полностью человеческие антитела можно получить иммунизацией трансгенных животных (как правило, мышей), способных продуцировать набор антител человека в отсутствие продукции эндогенного иммуноглобулина. Антигены, предназначенные для этого, обычно содержат шесть или более заменимых аминокислот и могут быть необязательно конъюгированы с носителем, таким как гаптен. См., например, 1акоЬоуЦ8 с соавт., 1993, Ргос. №б. Асаб. δ^. υδΑ 90:2551-2555; 1акоЬоуЙ8 с соавт., 1993, №1иге 362:255-258; и Вгиддегтапп с соавт., 1993, Уеаг ίη ^тииок 7:33. В одном примере трансгенных животных создают, инактивируя эндогенные локусы иммуноглобулина мышей, кодирующие тяжелую и легкую цепь иммуноглобулина мыши, и внедряя в мышиный геном крупные фрагменты ДНК генома человека, содержащие локусы, кодирующие белки тяжелой и легкой цепи человека. Затем частично модифицированных животных, имеющих неполный комплемент локуса иммуноглобулина человека, скрещивают для получения животных, имеющих все требуемые модификации иммунной системы. При введении иммуногена эти трансгенные животные продуцируют антитела, иммуноспецифичные для иммуногена, но содержащие человеческие, а не мышиные аминокислотные последовательности, включая вариабельные области. Более подробно такие методы описаны, например, в \У0 96/33735 и \У0 94/02602. Дополнительные способы приготовления антител человека с помощью трансгенных мышей описаны в патентах США № 5545807; 6713610; 6673986; 6162963; 5545807; 6300129; 6255458; 5877397; 5874299 и 5545806; и в публикациях по договору о патентной кооперации \У0 91/10741, \У0 90/04036 и ΕΡ 546073В1, ΕΡ 546073А1.

Упомянутые трансгенные мыши, обозначенные в настоящем документе мыши НиМаЬ содержат минилокус гена иммуноглобулина человека, который кодирует неперестроенные последовательности иммуноглобулина тяжелой (мю и гамма) и каппа-легкой цепи, а также направленные мутации, которые инактивируют эндогенный локус мю- и каппа-цепи (ЬоиЬегд с соавт., 1994, №1иге 368:856-859). Соответственно, мыши характеризуются пониженной экспрессией мышиных Ι§Μ или каппа, а иммунизация и введение трансгенов (тяжелой и легкой цепи человека) вызывает переключение классов и соматическую мутацию с образованием высокоаффинных моноклональных человеческих антител ^С каппа (ЬоиЬегд с соавт., см. выше; ЬоиЬегд аиб Ни8/аг, 1995, Шеги. Ееу. Iттиио1. 13: 65-93; НагШид аиб ЬоиЬегд, 1995, Аии. ΝΥ. Асаб. δ^. 764:536-546). Подготовка мышей НиМаЬ подробно описана в Тау1ог с соавт., 1992, №с1е1с Ααάδ Еекеагсй 20:6287-6295; Сйеи с соавт., 1993, Iттиио1оду 5:647-656; ТиаШои с соавт., 1994, 1. Iттиио1. 152:2912-2920; ЬоиЬегд с соавт., 1994, №1иге 368:856-859; ЬоиЬегд, 1994, НаибЬоок оί Εχρ. Ркагтасо1оду 113:49-101; Тау1ог с соавт., 1994, Iи1е^ηа1^оηа1 Iттиио1оду 6:579-591; ЬоиЬегд аиб Ни8/аг, 1995, Шеги. Ееу. Iттиио1. 13:65-93; Нагбшд аиб ЬоиЬегд, 1995, Аии. N.Υ.Αсаб. δ^. 764:536546; Р18йто1б с соавт., 1996, №1иге В1о1есЬио1оду 14:845-851; указанные источники полностью включены в данный документ посредством ссылки для любых целей. См. патенты США № 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299 и 5770429; а также патент США № 5545807; международные публикации № \У0 93/1227; \У0 92/22646 и \У0 92/03918, описание из всех указанных источников полностью включено в данный документ посредством ссылки для любых целей.

- 51 023555

Технологии, применяемые для получения человеческих антител с помощью трансгенных мышей, можно также найти в \УО 98/24893, и Мепбе/ с соавт., 1997, ЫаШге Оепейс8 15:146-156, которые включены в данный документ посредством ссылки. Например, для получения антител против с-Гт8 могут служить штаммы трансгенных мышей НСо7 и НСо12. Получение человеческих антител с помощью трансгенных мышей описано ниже в примерах.

С помощью гибридомной технологии можно получить и селектировать антиген-специфические человеческие МКА с заданной специфичностью с помощью трансгенных мышей, подобных упомянутым выше. Такие антитела можно клонировать и экспрессировать с помощью подходящего вектора и клеткихозяина, либо антитела могут быть выделены из культивированных клеток гибридомы.

Полностью человеческие антитела могут быть получены из фаговых дисплейных библиотек (раскрыто в НоодепЬоот с соавт., 1991, ί. Мо1. Вю1. 227:381; и Магк8 с соавт., 1991, ί. Мо1. Вю1. 222:581). Технология фагового дисплея представляет собой имитацию иммунной селекции, где наборы антител помещаются на поверхность нитевидного бактериофага и затем проводится отбор фагов на основе их связывания с выбранным антигеном. Одна из таких методик описана в публикации по договору о патентной кооперации № \УО 99/10494 (включена в данный документ посредством ссылки), посвященной выделению высокоаффинных и функциональных агонистических антитела против рецепторов МРЬ и т8к.

Биспецифические или бифункциональные антигенсвязывающие белки.

К предлагаемым антигенсвязывающим белкам относятся также биспецифические и бифункциональные антитела, которые включают один или более СОК или одну или более вариабельную область, как описано выше. Биспецифическое или бифункциональное антитело в некоторых случаях - искусственное гибридное антитело, имеющие две различных пары тяжелой/легкой цепи и два разных участка связывания. Биспецифические антитела получают различными способами, в том числе, но без ограничения, слиянием гибридом или соединением фрагментов РаЬ'. См., например, Бопд81\акп апб Басйтапп, 1990, С1ш. Ехр. Иптипок 79:315-321; Ко81е1пу с соавт., 1992, ί. Иптипок 148:1547-1553.

Другие формы.

Некоторые из предлагаемых антигенсвязывающих белков являются вариантными формами антигенсвязывающих белков, раскрытых выше (например, характеризующихся последовательностями, приведенными в табл. 1-4). Например, некоторые антигенсвязывающие белки содержат одну или более консервативную аминокислотную замену в одной или более из тяжелых и легких цепей, вариабельной области или СОК, перечисленных в табл. 1-4.

Природные аминокислоты могут быть разделены на классы на основании общих свойств боковых цепей:

1) гидрофобные: норлейцин, Ме1, А1а, Уа1, Ьеи, Не;

2) нейтральные гидрофильные: Су8, Бег, Тйг, А8п, От;

3) кислотные: А8р, О1и;

4) основные: Н18, Ьу8, Агд;

5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: О1у, Рго; а также

6) ароматические: Нр, Туг, Рйе.

Консервативная аминокислотная замена может представлять собой замещение члена одного из указанных классов другим членом того же класса. Консервативные аминокислотные замены могут осуществляться с участием неприродных аминокислотных остатков, которые, как правило, появляются в ходе химического синтеза пептидов, а не при синтезе в биологических системах. К таковым относятся пептидомиметики и другие инвертированные формы аминокислотных фрагментов.

Неконсервативные замены могут представлять собой замещение члена одного из указанных классов на член другого класса. Такие замещенные остатки могут быть введены в участки антитела, гомологичные человеческим антителам или в негомологичные участки молекул.

При внесении таких изменений, в соответствии с некоторыми осуществлениями, можно учитывать индекс гидрофобности аминокислоты. Гидрофобный профиль белка рассчитывают, присвоив каждой аминокислоте численную величину (индекс гидрофобности), а затем многократно усредняя данные величины по пептидной цепи. Каждой аминокислоте присваивают индекс гидрофобности на основании ее гидрофобности и заряда. Далее приведены соответствующие величины: изолейцин (+4.5); валин (+4.2); лейцин (+3.8); фенилаланин (+2.8); цистеин/цистин (+2.5); метионин (+1.9); аланин (+1.8); глицин (-0.4); треонин (-0.7); серин (-0.8); триптофан (-0.9); тирозин (-1.3); пролин (-1.6); гистидин (-3.2); глутамат (-3.5); глутамин (-3.5); аспартат (-3.5); аспарагин (-3.5); лизин (-3.9) и аргинин (-4.5).

Для специалистов понятно значение гидрофобного профиля для придания белку его интерактивной биологической функции (см., например, Ку1е с соавт., 1982, ί. Мо1. Вю1. 157:105-131). Известно, что определенные аминокислоты могут быть заменены другими аминокислотами, имеющими близкий индекс (или число) гидрофобности, сохраняя при этом сходную биологическую активность. При внесении изменений на основе индекса гидрофобности в определенных осуществлениях предусмотрена замена аминокислот с индексами гидрофобности в пределах ±2. В некоторых аспектах предусмотрено различие в пре- 52 023555 делах ±1, а в других аспектах - в пределах ±0.5.

Для специалистов понятно также, что замена сходных аминокислот может быть основана на гидрофильности, особенно если создаваемый при этом биологически функциональный белок или пептид предназначен для применения в иммунологических осуществлениях, как в данном случае. В определенных осуществлениях максимальная локальная средняя гидрофильность белка, определяемая гидрофильностью соседних аминокислот, коррелирует с его иммуногенностью и антигенсвязыванием или с иммуногенностью, то есть, с биологической характеристикой белка.

Указанным аминокислотным остаткам присвоены следующие величины гидрофильности: аргинин (+3.0); лизин (+3.0); аспартат (+3.0±1); глутамат (+3.0+1); серин (+0.3); аспарагин (+0.2); глутамин (+0.2); глицин (0); треонин (-0.4); пролин (-0.5±1); аланин (-0.5); гистидин (-0.5); цистеин (-1.0); метионин (-1.3); валин (-1.5); лейцин (-1.8); изолейцин (-1.8); тирозин (-2.3); фенилаланин (-2.5) и триптофан (-3.4). При внесении изменений на основе близких величин гидрофильности в определенных осуществлениях предусмотрена замена аминокислот с величинами гидрофильности в пределах ±2. В некоторых аспектах предусмотрено различие в пределах ±1, а в других аспектах - в пределах ±0.5. В некоторых случаях можно также выявить эпитопы на основе первичной аминокислотной последовательности с учетом гидрофильности. Указанные участки называют также коровыми участками эпитопа.

Примеры консервативных аминокислотных замен приведены в табл. 5.

Таблица 5

Консервативные аминокислотные замены

Исходный остаток	Пример замены
А1а	Зег
Аг§	Ьуа
Лзп	Οίη, ΗΪ5
Аар	О1и
Су 5	Зег
От	Аап
О1и	Аар
О1у	Рго
ΗΪ5	Аап, Οίη
Не	Ьеи. \'а1
Ьеи	Не. Уа1
Ьуа	Аге, Οϊη, О1и
Ме1	Ьеи. Не
РЬе	МеЬ Ьеи, Туг
8ег	ТЬг
ТЬг	Зег
Тгр	Туг
Туг	Тгр, РЬе
Уа1	Не, Ьеи

Работающие в данной области могут определить известными способами приемлемые варианты для предлагаемых полипептидов. Специалист способен выявить приемлемые области молекул, для которых возможна такая замена без нарушения активности при направленном воздействии на участки, которые считаются не влияющими на активность. Квалифицированный специалист способен также выявить остатки и части молекул, которые остаются консервативными в ряду сходных полипептидов. Согласно ряду осуществлений, даже для областей, которые могут иметь значение для биологической активности или для структуры, возможны консервативные аминокислотные замены без уничтожения биологической активности и без неблагоприятного воздействия на структуру полипептида Далее, специалист в данной области может рассмотреть исследования строения и функций, выявляющие остатки в сходных полипептидах, принципиальные для их активности или строения. Располагая этими данными, можно предсказать значимость аминокислотных остатков в белке, соответствующих аминокислотным остаткам, которые значимы для активности или строения в сходных белках. Специалист может сделать выбор замены для химически сходных аминокислот для таких значимых аминокислотных остатков.

Специалист в данной области может также проанализировать трехмерную структуру и аминокис- 53 023555 лотную последовательность по отношению к структуре сходных полипептидов. Располагая этими данными, специалист способен предсказать результаты наложения аминокислотных остатков антитела на его трехмерную структуру. Специалист может предпочесть не делать радикальных замен в аминокислотных остатках, которые согласно прогнозу, окажутся на поверхности белка, так как данные остатки могут участвовать в важных взаимодействиях с другими молекулами. Далее, специалист может сгенерировать тестовые варианты, содержащие единичную аминокислотную замену по каждому из интересующих аминокислотных остатков. Для полученных вариантов проводятся испытания на с-Гт8-нейтрализующую активность (см. приведенные ниже примеры), которые позволяют выяснить, какие аминокислоты можно менять, а какие нельзя. Другими словами, на основании данных, полученных в стандартных экспериментах, специалист может легко определить положения аминокислот, в которых не следует делать замену либо отдельно, либо в сочетании с другими мутациями.

Ряд научных публикаций посвящен прогнозированию вторичной структуры. См., МоиИ, 1996, Сигг. 0р. ίη Вю1еск. 7:422-427; Скои с соавт., 1974, Вюскет. 13:222-245; Скои с соавт., 1974, Вюскет181гу 113:211-222; Скои с соавт., 1978, Айу. Εη/уток Ре1а£ Агеа8 Мо1. Вю1. 47:45-148; Скои с соавт., 1979, Апп. Реу. Вюскет. 47:251-276 и Скои с соавт., 1979, Вюрку8. 1. 26:367-384. Более того, существуют компьютерные программы, позволяющие прогнозировать вторичную структуру. Один из способов прогнозирования вторичной структуры основан на моделировании гомологии. Например, два полипептида или белка, характеризующиеся идентичностью последовательностей более 30% или сходством более 40% могут иметь аналогичную топологию структуры. Рост объема базы данных по структурам белков (РОВ), наблюдавшийся в последнее время, позволяет делать более точный прогноз вторичной структуры, в том числе возможное число изгибов в структуре полипептида или белка. См., но1т с соавт., 1999, N^1. АсИ. Ре8. 27:244-247. Было сделано предположение (Вгеппег с соавт., 1997, Сигг. 0р. δίπια. Вю1. 7:369-376), что в данном полипептиде или белке присутствует ограниченное число изгибов и, и после установления критического числа структур, структурный прогноз стал значительно более точным.

К дополнительным способам прогнозирования вторичной структуры относится протягивание нити (1кгеаФпд) Попе8, 1997, Сигг. Орт. δίπια. Вю1. 7:377-387; δίι^ΐ}! с соавт., 1996, δίπιανιπ; 4:15-19), профильный анализ (Во\\ю с соавт., 1991, δ^ι^ 253:164-170; СпЬ8коу с соавт., 1990, Ме1к. Εηζут. 183:146-159; СпЬ8коу с соавт., 1987, Ргос. №£ Асай. δ^. 84:4355-4358) и эволюционная (см. но1т, 1999, см. выше; и Вгеппег, 1997, см. выше).

Согласно некоторым осуществлениям, внесенные аминокислотные замены: (1) снижают склонность к протеолизу, (2) снижают склонность к окислению, (3) меняют аффинность при образовании комплексов белка, (4) меняют аффинность по отношению к лиганду или антигену и/или (4) придают или модифицируют другие физикохимические или функциональные свойства таких полипептидов. Например, в природные последовательности можно вносить единичные или множественные замены аминокислот (в некоторых осуществлениях консервативные аминокислотные замены). Замены можно осуществлять в той части антитела, которая расположена вне домена(ов), образующих межмолекулярные контакты. В таких осуществлениях проводят консервативные аминокислотные замены, которые не приводят к существенной модификации структурных характеристик исходной последовательности (например, одна или более замена аминокислоты, не нарушающая вторичную структуру, характеризующую исходный или нативный антигенсвязывающий белок). Примеры известных в данной области вторичных и третичных структур полипептида можно найти в Рго1ен18, δ1πκ:1ι^8 апй Мо1еси1аг Ргшс1р1е8 (Сге1дк1оп, Εά.), 1984, н. №\ν Уо^к: Ргеетап апй Сотрапу; ШгойисБоп Ю Рго1ет δίπιανιπ; (Вгапйеп апй Тоо/е, ей8.), 1991, №\ν Уо^к: Саг1апй РиЬ118Ппд; и ТкогпЮп с соавт., 1991, №Циге 354:105. которые включены в настоящий документ посредством ссылки.

Дополнительные предпочтительные варианты антител включают вариации по цистеину, где один или более остаток цистеина в исходной или нативной аминокислотной последовательностью удален или заменен другой аминокислотой (например, серином). Вариации по цистеину полезны, среди прочего, при необходимости рефолдинга антител в с образованием биологически активной конформации. В вариациях по цистеину может содержаться меньшее число остатков цистеина, чем в нативном антителе и обычно содержится четное число указанных остатков для минимизации взаимодействий, вызванных наличием неспаренных цистеиновых остатков.

Тяжелые и легкие цепи, вариабельные домены СОР, которые раскрываются в данном документе, позволяют получать полипептиды, содержащие антигенсвязывающую область, способную специфически связываться с полипептидом с-Гт8. Например, один или более из СОР, приведенных в табл. 3 и 4, может быть введен в молекулу (например, в молекулу полипептида) с образованием ковалентной связи или без него в результате иммуноадгезии. При иммуноадгезии СОР может быть введен в составе полипептидной цепи большего размера, может быть ковалентно связан с другой полипептидной цепью или может быть введен без образования ковалентной связи. При иммуноадгезии СОР специфически связывается с целевым антигеном (например, полипептидом с-Гт8 или его эпитопом).

Предлагаются также миметики (например, миметики пептидов или пептидомиметики) на основе доменов вариабельной области СОР, описанных в настоящем документе. Данные аналоги могут быть пептидами, непептидами или сочетанием пептидных и непептидных областей. Раискеге, 1986, Λάν. Эгид

- 54 023555

Ее8. 15:29; УеЬег аиб Рге1бшдег, 1985, ГОЖ с. 392; и Ενаη8 с соавт., 1987, 1. Меб. Сйет. 30:1229, включены в настоящий документ посредством ссылки для любой цели. Миметики пептидов, близкие по строению к пептидам, применяемым в терапии, могут быть полезны для получения аналогичного терапевтического или профилактического результата. Такие соединения часто создают с помощью компьютерного моделирования молекул. Как правило, пептидомиметики - белки, аналогичные по структуре антителу, проявляющему требуемую биологическую активность, в данном случае, способность к специфическому связыванию с-Гт8, но при этом в них один или более пептидный мостик не обязательно заменен мостиком, выбранным из группы -СН^Н-, -0Ή₂δ-, -СН₂-СН₂-, -СН-СН- (цис и транс), -С0СН₂-, -СН(0Н)СН₂- и -€Ή₂δ0-, хорошо известными в данной области способами. В определенных осуществлениях при систематической замене одной или более аминокислоты консенсусной последовательности на Ό-аминокислоту того же типа (например, Ό-лизин вместо Ь-лизина) получают более стабильные белки. Кроме того, способами, известными в данной области, могут быть получены пространственноограниченные пептиды, содержащие консенсусную последовательность или вариацию консенсусной последовательности с высокой степенью идентичности (Εί/о аиб С1ега8ск, 1992, Аии. Ееу. Вюсйет. 61:387, включено в данный документ посредством ссылки), например, присоединением внутренних остатков цистеина, способных образовать внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые вызывают циклизацию пептида.

Предлагаются также производные антигенсвязывающих белков, которые описаны в настоящем документе. Производные антигенсвязывающих белков могут содержать любую молекулу или вещество, которое придает желаемое свойство антителу или фрагменту, такому как увеличение времени полужизни при конкретном применении. Производное антигенсвязывающего белка может включать, например, обнаруживаемый фрагмент (метку) (например, радиоактивную, колориметрическую молекулу, антиген или фермент, обнаруживаемую гранулу (такую как магнитная или электроплотная, например, золотая гранула) или молекулу, которая связывается с другой молекулой (например, биотин или стрептавидин), терапевтический или диагностический фрагмент (например, радиоактивный, цитотоксический или фармацевтически активный фрагмент) или молекулу, повышающую эффективность антигенсвязывающего белка для конкретной области применения (например, для введения в организм, например, в организм человека, или для другого варианта применения ш У1уо или ш νίΙΐΌ). Примерами молекул, которые могут превратить антигенсвязывающий белок в его производное, являются альбумин (например, человеческий сывороточный альбумин) и полиэтиленгликоль (ПЭГ). Введение альбумина и ПЭГ в антигенсвязывающий белок для получения производных может осуществляться известными способами. Определенные антигенсвязывающие белки содержат одноцепочечный полипептид, связанный с ПЭГ, как описано в настоящем документе. Согласно одному осуществлению антигенсвязывающий белок конъюгирован или иным образом связан с транстиретином (ТТЕ) или вариантом ТТЕ. ТТЕ или его вариант может быть химически модифицирован, например, действием реагента, выбранного из группы, состоящей из декстрана, поли^-винилпирролидона), полиэтиленгликоля, гомополимеров пропиленгликоля, сополимеров пропиленоксида с этиленоксидом, полиоксиэтилированных полиолов и поливиниловых спиртов.

Другие производные - ковалентные или агрегационные конъюгаты связывающих с-Гт8 антигенсвязывающих белков с другими белками или полипептидами, например, при экспрессии рекомбинантных слитых белков, к которым относятся гетерологичные полипептиды, слитые с ^концом или С-концом связывающего с-Гт8 антигенсвязывающего белка. Например, конъюгат пептида может быть гетерологичным сигнальным (или лидерным) полипептидом, например, лидером альфа-фактора дрожжей или пептидом, таким как эпитопный тэг. Слитые белки, содержащие связывающий с-Гт8 антигенсвязывающий белок, могут также содержать пептиды, добавленные для повышения эффективности очистки или идентификации антигенсвязывающего белка (например, ро1у-Н18). Антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8, может также быть связан с пептидом РЬАС, как описано в Норр с соавт., 1988, Вю/ТесйиоШду 6:1204; и в патенте США № 5011912. Пептид РЬАС является высокоантигенным и предоставляет собой эпитоп, обратимо связанный со специфическим моноклональным антителом (МКА), что позволяет проводить простой анализ и простую очистку экспрессированного рекомбинантного белка. Реагенты, позволяющие получать слитые белки, в которых пептид РЬАС присоединен к заданному полипептиду, выпускаются в виде коммерческих препаратов ^1дта, δ1. Ьош8, МО).

Олигомеры, содержащие один или более антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8, могут служить в качестве антагонистов с-Гт8. Олигомеры могут находиться в форме ковалентно-связанных или нековалентно-связанных димеров, тримеров или высших олигомеров. Рассматривается применение олигомеров, содержащих два или более антигенсвязывающих белка, связывающих с-Гт8, одним из таких примеров является гомодимер. Другие олигомеры - это гетеродимеры, гомотримеры, гетеротримеры, гомотетрамеры, гетеротетрамеры и т.д.

Одно из осуществлений направлено на олигомеры, включающие множественные с-Гт8связывающие полипептиды, объединенные за счет ковалентных или нековалентных взаимодействий между пептидными фрагментами, соединенные с антигенсвязывающими белками, связывающими с-Гт8. Такие пептиды могут быть линкерами (спейсерами) или пептидами, способствующими олигомеризации. К пептидам, способным ускорить олигомеризацию присоединенных к ним с-Гт8-антигенсвязывающих

- 55 023555 белков, относятся лейциновые застежки и определенные полипептиды, полученные из антител, как более подробно изложено ниже.

Согласно отдельным осуществлениям, олигомеры включают два-четыре антигенсвязывающих белка, связывающих с-Гтк. Указанные связывающие с-Гтк антигенсвязывающие белки в составе олигомера могут находиться в любой из описанных выше форм, например, в форме вариантов или фрагментов. Предпочтительно олигомеры включают связывающие с-Гтк антигенсвязывающие белки, имеющие сГтк-связывающую активность.

Согласно одному осуществлению, олигомер получают из полипептидов -производных иммуноглобулинов. Получение слитых белков, содержащих определенные гетерологичные полипептиды, слитые с различными частями полипептидов-производных антител (включая домен Рс), было описано, например, в АкЬкепа/1 с соавт., 1991, Ргос. №-Н1. Асай. δ^. ^А 88:10535; Вугп с соавт., 1990, №Циге 344:677: и Но11епЬаидй с соавт., 1992, Сопкйисйоп оГ ^типодйЬиНп Рикюп Рго1етк в Сиггей Ргойсо1к ш Iттиηо1оду, 5ирр1. 4, с. 10.19.1-10.19.11.

Одно из осуществлений направлено на димер, содержащий два слитых белка, созданных соединением связывающего с-Гтк антигенсвязывающего белка и Рс-области антитела. Димер может быть получен, например, внедрением составного гена, кодирующего слитый белок в подходящий вектор экспрессии, который экспрессирует слитый белок в хозяйской клетке, трансформированной рекомбинантным вектором экспрессии, после чего экспрессированный слитый белок организуется аналогично молекулам антител, при этом между фрагментами Рс образуются межцепные дисульфидные связи, что дает искомый димер.

Термин Рс-полипептид в настоящем документе относится к нативной и мутеиновой формам полипептидов, полученных из Рс-области антитела. Понятие относится и к укороченным формам таких полипептидов, содержащих шарнирную область, способствующую димеризации. Слитые белки, содержащие Рс-фрагменты (и образованные из них олигомеры), дают возможность проводить эффективную очистку методом аффинной хроматографии на колонках с белком А или белком О.

Одним из применимых Рс-полипептидов, которые описаны в заявке РСТ \У0 93/10151 и в патентах США № 5426048 и № 5262522, является одноцепочечный полипептид, занимающий участок от шарнирной области на №конце до нативного С-конца Рс-области антитела человека ^О1. Еще одним соответствующим Рс-полипептидом является Рс-мутант, описанный в патенте США № 5457035, и в работе Вайт с соавт., 1994, ЕМВО 1. 13:3992-4001. Аминокислотная последовательность данного мутанта совпадает с нативной Рс-последовательностью, представленной в \У0 93/10151, с той разницей, что в положении 19 аминокислота Ьеи заменена на А1а, в положении 20 аминокислота Ьеи заменена на О1и, а в положении 22 аминокислота О1у заменена на А1а. Мутант обладает пониженной аффинностью к Рс-рецепторам.

Согласно другим осуществлениям, вариабельная часть тяжелой и/или легкой цепи антигенсвязывающего белка, раскрытого в настоящем документе, может заменить вариабельную часть тяжелой и/или легкой цепи антитела.

В качестве альтернативы, олигомер представляет собой слитый белок, состоящий из многих антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гтк, и либо содержащий, либо не содержащий пептидные линкеры (пептиды-спейсеры). Применимые пептидные линкеры описаны, например, в патентах США № 4751180 и 4935233.

Другой способ получения олигомерных производных антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гтк, основан на применении лейциновой застежки. Домены лейциновой застежки представляют собой пептиды, способствующие олигомеризаци белков, в которых они находятся. Лейциновые застежки были первоначально обнаружены в нескольких ДНК-связывающих белках (Ъ-ап0кс1ш1х с соавт., 1988, δ№ΐ'Β^ 240:1759), а позднее были найдены во многих белках. Среди известных лейциновых застежек - природные пептиды и их производные, которые димеризуются или тримеризуются. Примеры доменов лейциновой застежки, пригодных для получения растворимых олигомерных белков, описаны в заявке РСТ \У0 94/10308, а лейциновая застежка - производное легочного белка-сурфактанта (ЬРИ), описанная Норре с соавт., 1994, РΒВδ Ьейегк 344:191, включен в данный документ посредством ссылки. Применение модифицированной лейциновой застежки, способствующей стабильной тримеризации гетерологичного белка, слитого с ней, описано Рапк1о\у с соавт., 1994, δет^η. Iттиηо1 6:267-278. Согласно одному подходу, рекомбинантные слитые белки, включающие фрагмент или производное антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гтк, соединенные с пептидом - лейциновой застежкой - экспрессируются в соответствующих хозяйских клетках, и полученный растворимый олигомерный фрагмент или производное антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гтк, выделяют из супернатанта культуры.

Некоторые из предлагаемых антигенсвязывающих белков характеризуются измеренной скоростью ассоциации (ка) с с-Гтк, равной по крайней мере 10⁴/Мхсекунд, по крайней мере 10⁵/Мхсекунд, по крайней мере 10⁶/Мхсекунд, например, как это показано ниже в примерах. Некоторые из предлагаемых антигенсвязывающих белков характеризуются низкой скоростью диссоциации. Например, некоторые антигенсвязывающие белки имеют ка (скорость диссоциации), равную 1 х 10^-2 с^-1, или 1 х 10^-3 с^-1, или 1 х 10^-4 δ^-1, или 1 х 10^-5 к^-1. Согласно определенным осуществлениям, антигенсвязывающий белок характеризуется К_с

- 56 023555 (равновесная аффинность) менее чем 25, 50, 100, 500 пМ, 1 нМ, 5, 10, 25 или 50 нМ.

Еще один аспект представляет собой антигенсвязывающий белок, имеющий время полужизни по крайней мере 1 сутки ίη νίΐτο или ίη νίνο (например, при введении в организм человека). В одном осуществлении антигенсвязывающий белок имеет время полужизни по крайней мере трое суток. Согласно другому осуществлению, антитело или его часть имеет время полужизни, равное 4 суток или более. В другом осуществлении антитело или его часть имеет время полужизни, равное 8 суток или более. В другом осуществлении антитело или его антигенсвязывающую часть модифицируют или превращают в производное таким образом, что его время полужизни увеличивается по сравнению с исходным или немодифицированным антителом. В другом осуществлении антигенсвязывающий белок содержит точечные мутации, что увеличивает время полужизни в сыворотке, как описано в \У0 00/09560, опубликованном 24.02.2000, включен посредством ссылки.

Г ликозилирование.

Тип гликозилирования антигенсвязывающего белка может отличаться или быть изменен по сравнению с природным вариантом. Как известно в данной области, тип гликозилирования может зависеть и от аминокислотной последовательности белка (например, присутствия или отсутствия гликозилирования определенных аминокислотных остатков, обсуждаемого ниже), и от клетки-хозяина или организма, где белок продуцируется. Конкретные системы экспрессии обсуждаются ниже.

Гликозилирование полипептидов может быть ^связанным и О-связанным. ^гликозилирование соответствует присоединению углеводного фрагмента к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности - аспарагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где Х - любая аминокислота, кроме пролина, являются последовательностями узнавания при ферментативном присоединении углеводного фрагмента к боковой цепи аспарагина. Таким образом, наличие любой из указанных трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. О-связанное гликозилирование относится к присоединению одного из Сахаров - ^ацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы - к гидроксиаминокислоте, обычно, к серину или треонину, хотя в некоторых случаях - к 5гидроксипролину или 5-гидроксилизину.

Добавление сайтов гликозилирования в антигенсвязывающий белок несложно осуществить, изменяя аминокислотную последовательность, так чтобы она содержала одну или более из упомянутых выше трипептидных последовательностей (для сайтов ^гликозилирования). Другим способом изменения является введение в исходную последовательность одного или более остатка серина или треонина путем присоединения или замены (для сайтов О-гликозилирования). Для простоты аминокислотную последовательность антигенсвязывающего белка можно изменить на уровне ДНК, а именно введением мутаций в ДНК, кодирующую целевой полипептид, по заданным основаниям с получением кодонов, которые будут транслироваться в требуемые аминокислоты.

Другим способом повышения количества углеводных фрагментов в антигенсвязывающем белке является химическое или ферментативное введение гликозидов в белок. Преимущество такого подхода - в том, что при этом не требуется получение белка в клетке-хозяине, обладающей способностью к N и 0гликозилированию. В зависимости от выбранного режима введения, сахар(а) могут присоединиться к (а) аргинину и гистидину, (Ь) свободным карбоксильным группам, (с) свободным сульфгидрильным группам, таким как группы цистеина, (ά) свободным гидроксильным группам, таким как группы серина, треонина или гидроксипролина, (е) ароматическим остаткам, таким как остатки фенилаланина, тирозина или триптофана или (Т амидной группе глутамина. Данные способы описаны в \У0 87/05330, опубликованном 11.09.1987 и в Αρίίη апй ХУпкЮп, 1981, СКС Сп1. Кет, Β^οсЬет., р. 259-306.

Удаление углеводных фрагментов, имеющихся в исходном антигенсвязывающем белке, можно осуществить химическим или ферментативным способом. Химическое дегликозилирование требует обработки белка трифторметансульфоновой кислотой или аналогичным соединением. Такая обработка приводит к отщеплению большей части или всех сахаров, помимо связывающего остатка сахара (№ ацетилглюкозамин или ^ацетилгалактозамин), но не затрагивает полипептид. Химическое дегликозилирование описано накшиййш с соавт., 1987, АгсН. Вюскепт Вюркук. 259:52 и Екде с соавт., 1981, Апа1. Вгосйеп. 118:131. Ферментативное отщепление углеводных фрагментов от полипептида осуществляется действием различных эндо- и экзогликозидаз, как описано в Тйо1акита с соавт., 1987, Ме1к Εηζνιηοί. 138:350. Гликозилирование по потенциальным сайтам гликозилирования можно устранить с помощью соединения туникамицин, как описано ΩυδΚίη с соавт., 1982, ΐ. ΒίοΙ. СНет 257:3105. Туникамицин препятствует образованию связей белок-^гликозид.

Таким образом, аспекты изобретения относятся к вариантам гликозилирования антигенсвязывающих белков, где количество и/или тип сайтов гликозилирования меняется по сравнению с аминокислотными последовательностями исходного полипептида. В определенных осуществлениях варианты белкаантитела содержат больше или меньше сайтов ^гликозилирования, чем нативное антитело. Сайт N гликозилирования характеризуется последовательностью: Акп-Х-8ег или Акп-Х-ТНг, где аминокислотный остаток, обозначенный Х, может быть любым аминокислотным остатком, кроме пролина. При замене аминокислотного остатка для создания такой последовательности возникает новый потенциальный центр для присоединения ^связанной углеводной цепи. В качестве альтернативы, присоединению N

- 57 023555 связанной углеводной цепи, присутствующей в нативном полипептиде, будет препятствовать замена, которая уничтожит или изменит такую последовательность. Например, гликозилирование можно уменьшить за счет делеции Άδη или за счет замены Άδη на другую аминокислоту. Согласно другим осуществлениям, возникает один или более новый Ν-связанный сайт. Обычно антитела содержат сайт Νгликозилирования в области Рс.

Метки и эффекторные группы.

Согласно некоторым осуществлениям, связывание антигена подразумевает наличие одной или более метки. Термин группа, содержащая метку или метка означает любую детектируемую метку. Примерами групп, содержащих метку, являются, без ограничения: радиоизотопы или радионуклиды (например, ³Η, ¹⁴С, ^Ι5Ν, ³⁵δ, ⁹⁰Υ, ⁹⁹Тс, 'ίη, ¹²⁵Ι, ¹³¹Ι), флуоресцентные группы (например, ФИТЦ, родамин, лантанид-содержащие люминофоры), ферментативные группы (например, пероксидаза хрена, Ргалактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные группы, биотинилированные группы, или заранее определенные полипептидные эпитопы, узнаваемые вторичной репортерной группой (например, последовательности пар лейциновых застежек, участки связывания вторичных антител, домены связывания металла, эпитопные тэги). Согласно некоторым осуществлениям, группа, содержащая метку, соединяется с антигенсвязывающим белком через спейсеры различной длины для снижения потенциальных стерических препятствий. В данной области известны различные способы внесения меток в белки, они могут быть использованы по мере надобности.

Термин эффекторная группа относится к любой группе, соединенной с антигенсвязывающим белком и играющей роль цитотоксического агента. Примерами подходящих эффекторных групп являются радиоизотопы или радионуклиды (например, ³Η, ¹⁴С, ¹⁵Ν, ³⁵δ, ⁹⁰Υ, ⁹⁹Тс, ^!11Ιη, ¹²⁵Ι, ¹³¹Ι). Другими подходящими группами являются токсины, терапевтические группы или химиотерапевтические группы. Примеры подходящих групп - калихеамицин, ауристатин, гелданамицин и майтансин. Согласно некоторым осуществлениям, эффекторная группа соединена с антигенсвязывающим белком через спейсеры различной длины для снижения потенциальных стерических препятствий.

В общем случае, метки делятся на несколько классов, в зависимости от анализа, в котором планируется их детектирование: а) изотопные метки, которые могут быть радиоактивными или тяжелыми изотопами; Ь) магнитные метки (например, магнитные частицы); с) окислительно-восстановительные фрагменты; Д) оптические красители; ферментативные группы (например пероксидаза хрена, β-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза); е) биотинилированные группы; и £) заранее определенные полипептидные эпитопы, узнаваемые вторичной репортерной группой (например, последовательности пар лейциновых застежек, участки связывания вторичных антител, домены связывания металла, эпитопные тэги и т.д.). Согласно некоторым осуществлениям, группа, содержащая метку, соединена с антигенсвязывающим белком через спейсеры различной длины для снижения потенциальных стерических препятствий. В данной области известны различные способы внесения меток в белки.

К специальным меткам относятся оптические красители, в том числе, но без ограничения, хромофоры, люминофоры и флуорофоры, причем последние во многих случаях являются специфическими. Флуорофоры могут быть либо малыми молекулами, либо белками.

Под флуоресцентной меткой понимается любая молекула, которая может быть обнаружена вследствие ее флуоресцентных свойств. Подходящие флуоресцентные метки включают, без ограничения, флуоресцеин, родамин, тетраметилродамин, эозин, эритрозин, кумарин, метилкумарины, пирен, малахитовый зеленый, стильбен, люцифер желтый, Каскад блу, Дж, Техас красный, ΙΛΕΌΛΝδ, ΕΌΑΝδ, ΒΘΌΒΡΥ РЬ, ЬС КеД 640, Су5, Су5.5, ЬС КеД 705, орегон зеленый, красители Алекса-флуор (А1еха Р1иог 350, А1еха Р1иог 430, А1еха Р1иог 488, А1еха Р1иог 546, А1еха Р1иог 568, А1еха Р1иог 594, А1еха Р1иог 633, А1еха Р1иог 660, А1еха Р1иог 680), Каскад блу, Каскад йеллоу и К-фикоэритрин (РЕ) (Мо1еси1аг РгоЬез, Юджин, Орегон), РЕТС, Родамин, Теxаδ КеД (Пирс, Рокфорд, Иллинойс), Су5, Су5.5, Су7 (Атегзйат Ы1с 8аепсе, Писттсбург, Пенсильвания). Применимые оптические красители, в том числе флуорофоры, описаны в книге МОЬЕСиЬАК ΡΚΘΒΕδ НАЫЭВООК, КкЬатД Ρ. Наид1апД, явным образом включена в настоящий документ посредством ссылки.

К подходящим белковым флуоресцентным меткам также относятся, без ограничения, зеленый флуоресцентный белок, в том числе КепШа, РШозагсщ, зеленый флуоресцентный белок (СРР) из медузы Аесщогеа (Сйа1Пе с соавт., 1994, §аепсе 263:802-805), зеленый флуоресцентный белок с усиленной флуоресценцией (ЕСРР) (С1оШесй РаЬз., Шс., база данных СепЬапк, уникальный номер И55762), синий флуоресцентный белок (ВРР, ОнаЩнт ВШесНпоМщез, Шс., Квебек, Канада; МанЬег, 1998, В|о1есйп1цне5 24:462-471; Нет с соавт., 1996, Сигг. Вю1. 6:178-182), желтый флуоресцентный белок с усиленной флуоресценцией (ΕΥΡΡ, С1оп1есй Ьа^., Шс.), люцифераза ^сЬтк с соавт., 1993, I. Iттиηо1. 150:5408-5417). Ргалактозидаза (№1ап с соавт., 1988, ΡΐΌα №Ш АсаД. δα. ^А 85:2603-2607) и КепШа (АО 92/15673, АО 95/07463, АО 98/14605, АО 98/26277, АО 99/49019, патенты США № 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079, 5804387, 5874304, 5876995, 5925558).

- 58 023555

Нуклеиновые кислоты, кодирующие антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гт8.

Предлагаются также нуклеиновые кислоты, кодирующие антигенсвязывающие белки, описанные в настоящем документе, или их фрагменты, в том числе нуклеиновые кислоты, кодирующие одну или обе цепи антитела или его фрагмент, производное, мутант, или вариант; полинуклеотиды, кодирующие вариабельные области тяжелой цепи или только СОК: полинуклеотиды, пригодные для использования в качестве зондов для гибридизации, ПЦР-праймеров, праймеров секвенирования для идентификации, анализа, мутирования или амплификации полинуклеотида, кодирующего полипептид; антисмысловые нуклеиновые кислоты для ингибирования экспрессии полинуклеотида и их комплементарные последовательности. Нуклеиновые кислоты могут иметь любую длину. Они могут состоять, например, из 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1000, 1500, 3000, 5000 или более нуклеотидов и/или могут содержать одну или более дополнительную последовательность, например, регуляторную последовательность и/или представлять собой часть более длинной нуклеиновой кислоты, например, вектор. Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными и могут включать нуклеотиды РНК и/или ДНК и их синтетические варианты (например, пептид-нуклеиновые кислоты). В табл. 6 показаны примеры последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих константную область тяжелой цепи 1дО2 и константную область каппа-легкой цепи 1дО2. Любая вариабельная область, предложенная в настоящем документе, может быть присоединена к указанным константным областям, образуя полные последовательности тяжелой и легкой цепи. Однако следует иметь в виду, что указанные последовательности константных областей приводятся только как частные примеры. Согласно некоторым осуществлениям, последовательности вариабельных областей соединяются с другими известными последовательностями константных областей. Примеры последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, приведены в табл. 7.

Таблица 6

Примеры последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих константные области тяжелой и легкой цепи

Тип	Последовательность нуклеиновый кислоты/δΕΟ Ю ЫО.
тяжелая цепь 1дС2	дс1адсэссаадддссса1сдд^сйссссс(ддсдссс1дс(ссаддэдсзсс1ссдададсаса9сддссс(дддс1 дсс!дд1саэддас1асиесссдаассдд4дасдд{д1сд[ддаэс1саддсдс1йдасса9сддсд1дсэсассйсх садс1дкс1асад1сс<сээдас1е1асйхс1садсадсд1дд1дзссд{д«:с)ссэдсаасйсддсасссадасс1а сасс1дсааед1ада(сасаадсссадсаасассаадд{ддэсаадасадйдадсдсааа1дйд1д1сдад1дссс ассд(дсссадсассасйд!ддсаддасхд{сад(сйсс1с[1ссссссааэасссзаддасассс1са1дййсссд дасссс1дадд(сасд1дсд1дд1дд1ддасд1дадссасдаадассссдэдд1ссадйсаас(дд1асд(ддасддс д^дадд(дса(аа1дссаадасааадссасдддаддадсадйсаасадсасд1кжд{д(дд»садсд(сйсассд Йд1дсассаддас(ддс^аасддсааддад(асаад1дсаадд1с{ссаасаааддсс1схадсссссйсдада ааасса(с(£гаазассааадддсадссссдадаассасадд(д(асассс1дссссса1сссдддаддада1дасс аадэассадд1садсйдасс4дсс^д1саааддсййассссадсдэса1сдссд1ддад1дддададсаа1дддс адссддадаасзас1асаадассасасс1ссса1дс1ддас1ссдэсэдйсхйсПсс1с1асадсаадс1сассд(д дасзададсадд1ддсадсаддддаасд1сйс!са1дс1сод*да1дса1даддс1с1дсасаассас1асасдсада ададссЮахЗдЮссддд1заэ1да [2ΕΩ10 N0:247)
каппа легкая цепь 1дО2	сдисдд1д9с%сассййдк41сай#сссдха1йда1дад<^дйдааа)с(ддаэйдсййдпд1д1дсс(дс{ два(аас№1а(сссадададдссааад(асад(ддаадд(дда(аасдссй»аа1еддд(аас(еесаддадад1 дйясададсаддасадсааддасадсасс1асадсйсадсадсассс1дасдс1дещсааадсадас(асдада аасасааадк(асдсс(дсдаад(сассса1садддсйдадс(сдахд(сасааададс№:аасаддддадад1 дйад [5Е010 N0:248]

В табл. 7 приведены примеры последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, включающие различные последовательности СЭКНИ СОКН2, СОКН3, СПИМ, СОКЬ2 и С1Ж1Л

- 59 023555

Таблица 7

Примеры последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельные области тяжелой и легкой цепи

Ссылка	Обозначение	Последовательность нуклеиновой кислоты/ЗЕС! Ю N0.
Н1109 1Ν1Ο1	Ун1	садд(дсадйддйсад1с1ддддйдадд1даадаадсс1ддддсс1сад(даадд*сййдсаадд
сПс1дда1асассйсасодсс1ас1а{а1дсас^дд^сдасаддсосс1дд аса ад ддсбдад!дда 1ддда1дда1саассс1аасад1дд(ддсасааас1а1дсасадаадИсадддсаддд1сасса1дас садддасасд1сса(садсасадсс(аса(ддадс(дадсаддс1дада1с(даодасасддссд1д(а
дассасдд!сассд1с(сс1са [ЗЕО10 N0:249]
Н113 1Ν1Ο1	ν«2	садд»дсэдс(дсаддэд!сдддсссаддас»дд1даадсй(сддэдассс1дГсссГсэсс1дсас1д|
с(с^д!ддйссд1садсад[дд[ддНас1ас1ддадс1дда1ссддсадсссссадддааддэас1дд ад(ддаМддд1аШаПасэд1дддадсассагс4асаасс%<&сс1саадад1сдад(сасса1а1 сад(адасасд1ссаа0аассадйс1ссс(даад<йдадс1йд1дассдс1дсддасасддссд1д(а1 1ас1д1дсддссдд{а(адсадссас1дд(ассс1сШдэз(дс!ддддссадддаассс(дд!сэссдЬ;1 сйса [ЗЕО. Ю N0:250]
Н1131 1Ν1Θ1	ν«3	сНс1дда1асассйсассддс1ас1а1а(асас1ддд1эсдасаддсссйддасаадддсИдад1дда (ддда)дда1саассйаасад1дд(ддсасааас1а1дсасадаад№садддсаддд1сасса1дас садддасасд(сса(садсасадсс(аса(ддадс(дадсаддс1дада1с(дасдасасддссд(91а 11айд1дсдадада1едадддсадс1айддНа1ддйс1ас1айайасдд1а1ддасд1с1ддддссаа дддассасдд1сассд!йсс1са [ЗЕО Ю N0:251]
Н1134 1Ν161	ν«4	садд(дсадс(дд^дад1с(дддддаддод1дд1ссадсс1дддаддЮсс1дздаск;{сс(д1дсадс д(с1ддайсассйсадйдс1а(ддса1дсас1ддд1ссдссаддс1м:аддсааддддс(ддад1ддд1 ддсад№а{а1дд(а(да1ддаэд1аа1заа(ас(а»дсадас(ссд1даадддссдаПсасса1с(ссад адасаайссаадаасасдйдй{йдсааа1даасадсс(дададссдаддасасддсГэ1д1аПас Гд1дссэдсадсадс1дд(сс1ас1асдд1а(ддасд1с(ддддссаад9дэссасдд1са(;сд(с1сс(с а ]5Е0 Ю N0:252]
Н1143 1Ν1Ο1	Ун5	япгя1г(гяядядя1дя1(пяаяяяягягт]г(д1я1гЬ]гяяя!дяяг'лдгг1дяяяяппдяддягягя
д(с1ддддссаадддассасдд1сассд1с1сйса [ЗЕО Ю N0:253]
Н1144 1Ν151	ν«6	дадд|дсадсйи^дад1с1д9дддаддсйддйаадсс1дддддд1сссйадайс1ссшсадс С(с1дда«сас1«сад1аасдсс{дда1дадс1ддд1ссдссаддс1ссадддааддддс1ддад1ддд (1ддссд1аПаааадсаааас(да^д1дддасаасадас(асдс^сасссд(даааддсада1(сас гмММглалял я*лаМга аадоагаллр<л1а1п1г1гаа аа доглалпагагапг
сд1дййас1д(ассасадад1ас!а1дд1сдддддддд1Вдд1ас1асдд1а1ддасд1йддддссаа дддассасдд1сассд1йсйса [ЗЕО Ю N0:254)
Н116 1Ν1Ο1	νΗ7	дадд<дсэдс1ддфдад!с1дддддаддс11дд(ааадсс^ддддд!ссс(йдас1с1сс1д1дсадс
иМуу Ы1дол щлу Цмиу илу у аиуоуищуу иХу 1ХЗд у С1ССЭу уу аау уд у СЩуад Ьд ду Кддссд1а#аааадсаааайда(ддКддасаасадайасдйдсасссд1даааддсада№ас са!с1саадада(дайсаааааэсасдс1д1а»с1дсааа1даасадсс1даааассдаддасасадс сд1д1а1йс1д1ассасада1с1ссд1а1аас1ддаэс1эсйаИас1эс1ас1ас1асдд1а1ддасд1с1д дддссаадддассасдд{сассдМсс1са [ЗЕО 10 N0:255]

- 60 023555

Η121Ν161	ν«8	садд«садо1дд1дсад1с(ддадс1дадд1даадаадсс1ддддсс1йад1дааддй;1сс1дсаадд ддда1дда1садсдс1йсаа(дд(аасасааас(афсасадзадс1ссааддсадад№асса1дэс сасадасаса(ссасдадсасадсс1аса(ддадс1даддадсс^ада(с(дасдасасддссд1д( айэс1д1дсдададад1сд1ддйсддддадд1айсшдэс1ас1ддддссадддаассс1дд1с8ссд1 о!сс(са [5ЕО10 N0:256]
Η1 25 1Ν101		дадд(дсаде^д(ддад1с1дддддаддс(^д1ааадссйдддддйхсйадас1й(х1д1дсадс Пддссд1аиаааадсаааас^а(дд^ддасаасадас(асдс(дсасссд(даааддсадаКсас са(с1саэд^а:дайсаааааасасдс1д12{с(дсааа(даасадсс(даааассдаддэсасадс сд(д1айэс1д1ассасэдзд1ж1а1ддПсддддддддШдд(эс1асдд1а1ддзсд1с1ддддссаа дддасхасддкассдюссгса |8ЕО 10 N0:257)
Η1 27 1Ν101	νΗ10	дадд1дсадс(дд{ддад1с«дддддаддсйдд(ааадсс1дддддд1сссйадас1с1сс1д1дсадс с(с1ддайсас1йсад1аасдсйдда11дадс1ддд1ссдссаддс1ссадддааддддс(ддад1ддд (1ддссд1аааааадсаааас1да»дд1дддасаасадас1ас9с1дсасссд1даааддсадайсае са(с!саададаЛда№аааааасасдс1д№1дсааа(даасадсс1даааассдаддасасадс сд1д1айас^|1ассасада(ддддс»асдд1дд1аас1ссдд9д(ас1ас1айасдд(асддасд1с1д дддссаадддассэсдд!сассд1с(сс1са [8ЕО Ю N0:258]
Η1 30 1Ν161	νΗ11	садд№:адс1дд1дсад1йддадс(дадд1даадаадсс1ддддмйсад1даадд1йсс1дсаадд сГСсфдНасассП1ассадс1а1дд1а1садс*ддд1дсдасаддсссс1ддасаэдддсНдад1дда1 дэда1дда)садсдс(1асаа4дд[аасасааайа1дсасадаадс1ссэдддсадад:сасса(дас; гаг:^япягя1ггягпяг1Г^япгНяга1г1плтг:1г1Яппяпгг1пя*тя1Нг1ЯГГ1Ягягпг1Гггт1г11
айэс{д1дсдэд^ад(сд1ддКсддддадд!аКИЙдэс{ас1ддддссадддаассс(зд1сассд1 с!сс1са [5ΕΩ ГО N0:259)
Η1331- 1Ν1Ο1	Ϋη12	садд(дсадс^д1дсад1с^9д9с^адд(даадаадсс1ддддсйсад1даадд^с(сс1дсаадд сЙс(дда1асассйсасхддс1ас1а1а1дсэс1эдд1дсдэсаддсссх1ддасзадддсПдаа1дда 1ддда1дда1саассс1аасад1дд1ддсасааайа1дс1садаадЮсадддсзддд(саеса1дас
айд1дсдададасадсаас1дд1ассасаэс1ддйсдасссс1ддддссад9даассс1дд1сассд 1с1сйса[ЗЕ0 Ю N0:260]
Η133 1Ν161	Ϋη13	садд1дсадс1дд1дсад1с1ддддс(дадд1даадаадсйддддсс1сад1даадд(с1сс1дсаадд сПс1дда1асэссйсассддс1ас1а(а1дсас(ддд1дсдасаддсс1х1ддасзадддсПдаа1дда 1ддда1дда(сааса;1аасад1дд1ддсасааас1а1дс1садаздМсадддсаддд1сасса1дас
айдйсдададасадсаайдд1ассасаас15дИсдасссс1ддддссадддаассс^д1сассд 1с1сс1са [5Е0 Ю N0:261]
Η1 34 1Ν161	νΗ14	дадд^садс1дд^дад1с(дддддаддсНдд1ааадсс1ддддддйхсИадас1с1сс1д1дсадс
с1с^даЙсасШсад(аасдсс(дда1дадс(ддд(ссд ссаддйссадддаад ддд ефдад1д дд йддссд1айаааадсаааайда1дд»дддасаасадас1асдйдсасссд1даааддсадайсас са1с(саадада1дайсаааааасасдс1д1з1йдсааа1даасадсйдаааассдаддасасадс сд№йайд1ассасада1ддддсй1сдд^д1аас1ссдддд1айайас1асдд1асддасд1с1д дддссаадддзссасдд(сэссд1йсйса ]ЗЕ0 Ю N0:262]

- 61 023555

Η1 39 1Ν101	νΗ15	дэддГдслас1ддэдад(с{дддддаэдсПдд{ааэдсс1дддддд1ссс«адас1с1с<1д1дсадс с1с1э&айсэсЖсад1аасдсс19да19адс*ддд»ссдссаддс1ссадддааддддс1ддад1эдд 8ддссд(айаааадсаааас1да1дд»дддасэдсадас(эсдс1дсэсссфдаааддсада11Еэс са!с1саадада1да1к;аааааасасде]д1а1с1дсааз1дааеадсс1дааааседаддасасаде сд1д1айас1д(ассасадаадд1сссйсад1дас1асддд1ас1айас(ас9д1а^дасд1с^дддс саадддассасдд1сассдЛс1сс1са [5ЕС Ю N0:263]
Η1 42 1Ν101	νΗ16
ддда!дда1садсдсйасаа(дд1аасасааас1а^сасадаадс1ссадддсадэд(сасса1дас э(1ас1д!дсдададэд]сд»ддЬсддддадд1а№с«1дас(ас1ддддссадддаасссГдд{сассд( с(сс1са[8ЕОЮ N0:264]
Η1 64 1Ν1Θ1	νΗ17	дадд(дсадс(дд(ддад1с1дддддаддсКдд1асадсс1дддддд1ссс1дадвсЮ1сс{д1дсадс с1с1ддаПсассКсад(адс(асдасаАдсас(ддд1ссдссаадс1асаддаааадд1с1ддад(ддд( с1садд1а#дд1ас1дйдд1дасэса(ас1а1ссаддс1ссд1дааддди:дайсаэса1с1ссадада ааа!дссаадаас(ссад(а1с11сааа(дахадсс1дададссддддасасддс1д1д1аПас(д(дс ΙΟΝΟ^^39^13089'110 С|ЭУ95 3399 С1 а^9
Η166 1Ν101	νΗ18	садд4дсадс4дд{ддад1с1эдэддаддсд1дд»ссадсс{дддадд1ссс1дадас1с1сс1д1дсадс д1с1ддаПсассКсад1адйа1ддсгйдсас1ддд1ссдссэддс1ссаддсааддддс1ддэд1ддд1 ддсадйа!а(дд1а(да|ддаад1аа^аа1ас1йдсадас1ссд1даадддссдайсассаЬ(ссад 1д(дсдсаск:д1ссдддаас1ае(асда1а(ддасд1с1ддддссаэдддассасдд1сассд1с1сс1с а [ЗЕО10 N0:266]
Ун19	νΗ19	дадд(дсадс1дд1ддад1с(дддддаддс11дд(ададсс(дддддд1сссйадас1йсс1д1дсаде с(с(ддаШ:эсМ1сад1ассдсс1дда(дадс1дэд1ссдссаддс1ссадд дааддддйдд ад!дд д1
сд!д1нйас^1ассасадаадд1сссйсад(аас»асддд1эс1ас1эс1асдд(д1ддасд1йддддс саад9дассасдд(сэссд(с1сс4са [5ЕО Ю N0:267]
Η1 90 1Μ1Β1	νΗ2Ο	Садд^]садс^д1ддад1с{дддддад9сд(дд1ссадсс(дддадд1ссс1дадас1с(сс1д(дсад сд(с1ддайассвсад1адс1а^дса1дсас1ддд1ссдссаддс1ссад дсааддддс(д дад!дд д^дсадна(а(дд(а1да(ддаад(аа1ааа1ас(а^садас(£сд(даадддссдабсасса№са д адасаакссаад аасасдс(д1а1с^сааа^аасадсс1дад адсод аддасэсддй д1д1аШа
с1д1дсдадсадс4сд1сзаэс1ййсда1а(9дэсд1йддддссзэдд даоса сддйассдЫссй а[5Е0 Ю N0:268]
Η2103 1Ν1Θ2	νΗ21	дэдд!дсадс1дд1ддад1с1дэдддэддс11дд1ааадсх:!дддддд1сссПасас1с1сс1д(дсадс сМдда«сасИсаа1аасдсс(дда(дадс1ддд1ссдссаддс1ссадддааддддс]ддэд1ддд сд1д1аЙас(д1ассасадаа1аИасса1а1Щдас1дд8сдййас(ас1сс1ас1асдд1а1ддасд1с1д дддссаадддассасдд1сассд(с{сс1са [ЗЕО ГО N0:269]

- 62 023555

Н2131 1Ν162	ν«22	садд1дсадс1дсаддад1сдддсссаддэс1дд!даадссисддэдассс[д*1ссс(сэсс1дсас1д1 Йс1дд(ддскса(сад1аа((ас1ас1ддадс1д9а1с(^дсад1ссдсодддаад9дас^дад^да Ндддсд1а(с(а(ассад^ддадсасссас1асаасссс№сс(саадад(сда^са(са1д1сад1дд асасд(осаадаассадйс{ас19аадс1дадс1с»д1дассдссдсддасасддссд1д(айас1д^ са эоааа1сааа1сНс1асскпайаасФс1аааоссааоаазаасаа1сэсса1с1сс1са ГЗ ЕО Ю N0*270]
Н2291 1Ν102	Ϋη23	садд1дсадйдд1ддадЗДдддад9сд19д»ссада1дддадд1ссс1дадайс1сс1д^садс ддсадПа(а{дд1а1эа1эдаадПа1ааа1йс1а1дсадас(ссд1даадддссдайсасса(с1ссада д1дсдададааддддайас1ссдас1ас1а^д1а^да(^1с1ддддссаадддассасдд1сассд 1с1сс1са[2ЕО Ι0 N0.271]
Н2360 1Ν102	Ун24	садд(ссад(Ддд(асад1йддддс(дадд19аадаадсс1ддддсс4<ад1даадд1с1иЯдсаавд Жссдда(аг^г1т1т4даяМа1г^л1дюу4ддд1дсдйсяддс1сс>ддаааадддсПдад1дда>
дддадд(Шда1сс(даада(дд^ааасаа1с1эсдсасадаад11схадддсадад(сасса1дасс даддасасаШасадасасад№аса|1ддадс(дадсадсс1дада1с1даддасасддссд1д(аи ас(д(дсаасаддддПа(эа(1асд111дс}дддад«а1сдПддссас1сс1ас1асдд(а195асд1с(дд ддссаадддассасдд(сассд1с1сс1га [ЗЕО 10 N0272)
Н2369 1Ν102	Ун26	садд(ссадс(дд(асадк1ддддсСдадд1даадаадсс1ддддсс1сад1даадд№1сс(дсаадд И1схэда1хассс1сайдаайсйссйдсас1д9д1дсдасаддс1сс1ддаааадддсйдад1дда1 дддадд1йда1сс1даада{дд1дааасаа1с1асдсасздаадйссадддсадэд1сасса1дасс даддасаса(с1асадасасадсс1аса(ддадс1дадсадсс1дада(с1даддасасддссд1д1аН ас(д(дсаасаадддйддаасдасдИддсс1ас1ас1ас1асдс1а1ддасд1с1ддддссаадддэс сасдд(сассд1йсс1са [ЗЕО Ю N0:273]
Н2380 1Ν102	νΗ27	садд1дсадс1дсаддад1сдддсссаддэс1дд(даадссйсддэдассс1д1ссс1сасс(дсас1д1 с1йдд1ддс(сса(сад1адйас1ас1ддадс1^а1ссддсадсссссадддаадддас1ддад^да Ндддй1айайасад1дддаэсэссазс1асаасссс1ссс1саадад1сдайеасс11а1саа1ада д!д1а1адсаас1сддссс111дас1аг1дсддссадддяассс1дд1сасед1с1сс1са [ЗЕО 10
N0.274] ............. ‘
Н2475 1Ν102	Ун23	садд^садс!дд(ддадЫдддддаддсд(дд(ссадсс[дддадд(ссс(дадас(с(сс1д1дсадс д1саддаНсасс11са1садс1аЦдса1дсас1дддксдссаддйссаддгаэдд9дс1ддэд1ддд 1ддсад№1а^д^а(да1ддаад(аа{ааа1ас1а№|садасЬ;сд1даадддссда(1сасса(с(ссад адзсааиссзэдаэсасдс1д1а1с(дсзаа1даасадсс1дэдада;дзддасэсддс1д!д1аиас 1д1дсдда1адсад|ддсдас1ас(асдд1ак|дасд4с1ддддссаадддассасддЬ:ассд(с(сс1с а [ЗЕО Ю N0:275]
И2 508 1Ν102	Ун29
даддасаса1с1асадасэсадайа1а1ддадс1дадсадсс1дада1с1д^дасасддссд(д1ай ас^1дсаасадсддддс1ддааа(асдд1ддИсдаоссс1ддддссадддаассс1дд1сасод1с1с с(са [ЗЕО 10 N0276]

- 63 023555

Н2534 1Ν162	УиЗО	садд1дсадс19садэад1сдддсссаддас1дд[даадссйсасадэссс1д1ссс1сасс(дсас[д1
ад1адасасд1с1аадсахад(1с1ссс1даддйдадс1с1д[дасйссдсддасасддссд»д1а«а с1д1дсдад1с(адасск1асдд1дас1асМдас(эс)ддддссадддаассс(дд1саад1с1сс1са [5Ε0Ι0 N0:277)
Н2550 1Ν162	Ун31	саддйсадйддйсад1сйдадс^адд1даадаадсс1ддддсс1сад1даад91с«сй9саад9
плля1ппя(гялглг:11ягяя1™11я^г гл яяня1плягяпяа1111пляг1(тплялял1гялля1г1ялл
1^5чадада(садддаКа5|Ю^^^^^^^ас^^шш1 аассс*дд1сассд1с1сс1са [5Е0 Ю N0:276]
Н?65 1Ν162	Ун32	дадд1дсэдсфд1ддэд1с1дддддзддс(1дд1ааадсс1дддддд1ссс11эдас1с1сс1д1дсадс 11ддсод1а(1аааассаааэс1да^д(дддэсаасадэ:1асдс1дсасссд(дааа9дсадайсас са(с1саадада1даКсзсаазасасдс1д1а1с1дсаза1даасадсс1даааассдаддасасадс
0д1д1аПасЕд1ассасадаа1аНасдд(а((д(дас1дд11сд№(а№)С1эс(ас(асдд1з{ддасд1с|д дддссаадддассэсдд!сассд1с1сс1са [5ΕΘ Ю N0279]
Н1109 1Ν1Κ	уд	даса1ссада^)8сссад1сЬ5са1сс<ссйд1с1дся1с^1аддадасадад1сасса1сас11дсхад дсдзд1сзэаэсэ11здсаэсй№ада11ддй1садсадааассадддаэадсссс1азсс»сс1да1с 1асда1дса1ссдаШдда1ссаддд@1ссса(сааддПсад1ддаад(дда(с(дддэс^а11Пас(П ЛЯ лля)лял ля г*'г+яляпгл1ляи1я(яНлгаягга1аИяНп1ляя' япЬНпНяпк'+ггггн+гягй
1сддсддадддассаадд1ддада{сааа [5Е0 Ю N0:260]
Н1 131 1Ν1Κ	ν,3	да(аа1д|да1дасссадас1ссасГс)с1с1д1ссд1сасссс1ддэсадсхдэсс1сса1с1сс1дсаэд1 сасадсКс1да1с1а^аа9й1осаассдд«с1с(ддад(дссадайдд1(сад1ддсадсдддЬ:ад ддэсадаШсасэс1дзаза«сэдссддд1ддаддс1дздда1даддддГКаПас1дса19сааад1а 1асадсйсШсасМсд9сддадддассаэдд1ддада1сааа [5Е0 Ю N0:281]
Н1134 1Ν1Κ	УД	даса(ссэда1дасссэд1с1сса1сс(ссс1д1с1дса1с1д1аддадасадад1сасса1сас(1дссэд дсдад(саддасаПаасаас!аШааа(^д(а1садсадааассадддааадсссс1аадс№с(да( л1алдя(д м1лмяйддааа1адддд (гсся1ляяддйпяд1ддяад1дда1с1дддасадя1НляЖ
1сасса(садсад1с1дсадсс1даада1а(1дсааса1айас1д»саасад[а(да(аа111сссд«сасй1 сддсддадддассаадд1ддада1сааа [5Е0 Ю N0:282]
Н1143 1Ν1Κ	νιδ	с1асда(аса1ссааН1ддаассадддд1ссса1саадд11сад1ддаад(дда1с!дддэсадаШэс1 Лтялгя1лядлядлл1дсядсс1дяядяМ(дляяля4я1(»лкд1ляяляя)я1дч1аа1с1сс{сэссй
сддссаадддасасдас1ддаааПааа |$Ё010 N0283]
Н1144 1Ν1Κ	Усб	даса!ссэдафасссад1с<ссакй(ХйдМдса1с^1аддздасадад1сасса(сас№дссад ллпяп!йЯ(1ПЯГя11япляял1яН1яая41лп1я1лялля1яяялляппляяяплглл1яяял1лл(п1*
с1^а<дса1ссааМддааэсадддд(аха1саадд(1сад1ддаад1дда1с1дддасада№1ас(
сдясддэдддассаадд1ддэда1сзаа |5Е0 Ю N0:284]

- 64 023555

Η1161Ν1Κ	νί7	даса1ссэда1дасссад1с1<ха:сс(ссс1д1с(дса1с(д1аддадасадад1сасса{сжПдссад
с(эсда!д са1ссаай1ддааэсадддд(ссса1сааддМ1ад1д9аад1дд айкдд да сад аННасй 1сэсса(садсадсс(деадсс:даадаШдсааса1айас1д1саасэй(а(да1аа1с1да1сасс11с ддссаадддасасдас(ддадаНааа [8Е0 Ю N0235)
Η121Ν1Κ	ν,ε	даса1сд(да1дасссад(с1ссэдас1ссс(ддс1д!д1с1с1дддсдадздддссзсса1саас1дсаа д1ссад(хадад1дипадэсэдс£ссдасаа1аадаас1асКадсПддГассадсадааассаддас ддГс1дддасада(йс1с1с1сасса1садсадс(5дсаддс1даада1д1ддсадтаПэс(д(са9саа й«айд(да1ссаПсэсЮсддссс(дддассааад1дда1а1сааа [5Е0 Ю N0:286]
Н1 271Ν1Κ	Уь10	дэ^1ссада(дэсссад!с(сса1сс(ссс(д1с1дса1с1д1адд1дасэдад(сасеа(сас11дссэдд сдад»саддасаНадма1'.1аП1ааа«дд1а1саэсадаээсс.адддааадса:с1ааас1сс1да1с 1асда»дса1ссааЙ1ддааасадддд»ссса1сааддйсад1ддаад1дда1с1дддасадаЙКайИ
аадоШЦдСЭДСсВДЦаСщ игЗаСс^ендаимлДу^ ЬлДИиу дсддэдддассзэдд(ддада(сааа [5Е0 ю N0:287]
Η1301Ν1Κ	7(.11	даса1сд1да1дасссад1с1ссадас1ссйддс1д(д1йс1дддсдададддссасса1сдас1дсаа д(ссадссаддд1д1№адэсадс1ссаасаа(задаас«сйадс«дд1ааадсадзаассзддж адсс1ссйадс(дси:а11^сйддса1с1аассдддаа1ссддддкс«д1ссдапсад(ддсадсд ддМдддасадаМсас1с1сасса(садсадсс^сад9с1даада^1ддсас1йа«ас1д1садса а1аПа1ад1да1ссайсасШсддссс1дддассааэд1дда1а{сааа [5Ε0 Ю N0:288]
Η1 33-1 1Ν1Κ	νι12	Эаса1сх;ада1дасссад1с1сса1сс1ссс1д1с1дса1сЬд1а9дадасадад1сасса1сас11дссдд дсаздЬзд адсаЙад1дас1а1Кааа{1дд(а(садсадааассадддааад ссссйасс(сс(да1 с1а(дс(дса1ссадтдсадад^ддд(ссса(сааддПсад(ддсад1ддакДдддасаэаШсас(
Ксддссс1дддассааад1ддай[саза [5Е010 N0:289]
Ш 34 1Ν1Κ	ν^3	даса1ссада(дасссад{с)аа(сс1ссс1д1с1дса(с{д1аддадасадад1сасса1еаеНдссад дсдад{саддаса(1адсаас(а(Пааа(1дд(а(сддсадааассадддзаадсссс1аадс(сс(да1 1сасса1садсадсс1асадсс(даадйаКдсэаса(а«ас1д1сзасад1а(да1ааМ9с1сэс(йс 9дсддадддассаадд1ддада1сааа [5Е0 Ю N0:290]
Η1 391Ν1Κ
дсдвд(саддасакадсаас1аюааа11дд1а(садсадааассадддааадсссс1ааэд1сйда1 с1асда(дса{ссаа(«ддааэсадддд1ссса1сэаддйсад(ддаад1дда1йдддасада(П1ас(
5(Юддадддассаадд1ддада1сааа [5Е0 ю N0:291)
Η1421Ν1Κ	ΚΙ 5	да^(сд1дэ1дэсссад1йссадас1ссс1ддс1д1д№1дддсдададддсса(ха(сдж1дсаа дКсадссад эд(у№адасад с(осаасаэ{аад аасНсНадсйдд&ссадсад ааассад дас адсс1сс1аадс1дс1са«1ас1дддса1с1азссдэдаа<ссдддд1ссс(дассдаксад1ддсадсд дд№1дддасада№ас№&эая№адсадсс1дсаддс1даадэ(д1ддсадМа11ас(д1садса а1айа(ад(да(ссаПсастсддссс1дддассааэд(ддаГа1сааа [5ЕО10 N0:292]
Η1641Ν1Κ	ν^θ	д аза11д1д№дасдсаэ(йссаддсассс1д(сИд1йхадддд ааадздссассс1с1сс1дсадд дссад1садад1дПадсадсддс19с«адсс1эсйадсс1дд1ассадсадааассГддссадд(Л:с саддс<сс1са(с1а(дд(дса1ссадсасддссас|ддса№ссадасадд№ад(ддсад(ддд(с(д ддасадас№ас(сь^сса(садсадас|ддадсс(даадаНКдсад1д1аиас1д(садсад|1а1(дд 1адс1сэссда(сасс1{сддссаадддэсасдас1ддадайааа [8Е0 Ю N0:293]

- 65 023555

Ж 661Ν1Κ	V, 17	даса4ссада1дасссад1с(сса(сс1ссс1д1с1дса1с1д1аддадасадад1сэсса1сасИдссад ссоао1саосасаНа1каасМ11ааайдд{акаасааадассаадоаааосссс1эаас1сс1оа1 с!асда1дса1ссааМддааасадддд1ссса1сдаддисад1ддаад1ддак:1ддд асадаКНай Ймка1сад(^с1дсадсс(даада1айдгааса1айас^(еаасад1а1д^аа1йсссайсас Юсддссс1дддассааад1дда1а1сааа [5ЕО Ю N0:294]
Η1721Ν1Κ	νοβ	даса(ссада1дасссад!с(сса1сс{ссс1д1с{дса1с1д(аддадасадад1сасса(сас11дссад дсдад1саддасайадсаас1аМааайдд(а1садсадааассэдддааадсссс1ааас1сс1да1 с1асда!дса<ссаатддааэс<эдддд1ссса1сзаддйсад1ддаад15да1с1дддасада1тас1 Всагса1садсадсйдсэдсйдаэдаТОдсзаса1аКас1д1сзасад1а1да1аа1с1сс1сасМс ддсдда9ддассаадд1ддада1сааа [8Е0 ГО N0:295]
Ж 90 1 КИК	7(.19	даса(ссада(дас<хад1с1сса1сскхс(д(с(дса(с1д(аддадасадад(сасса(сас(1дссад дсдад1саддасаИэдсаас1аМааа11дд1а1садсадааассаддааааэсссс{аадс1сйда1 с(асда1дса(ссаатддазасадддд1ссса1сазддКсад(ддаад(дда1с1дддасадаШас1 Исасса1садсадсс1дсадсс1даадаЛаНдсааса(аНайд1саасдд1а(да1да1йсссда1са ссКсддссааддджасдэсСддадзЦэаа [5Е0 Ю N0:296]
Н2103 1Ν1Κ	Л2О	даса1ссада1дасссад{с1сса1сс1ссс1д1ск|са1с1д{дддадасадад1сасса1сасйдссад дсдад1саддасаНадсаас1а(йаааИ9д1а(садсададассадддаааэсссйаадйсйда1 с1асда1дсейссааП1ддааасадддд1ссса1сааддНсад1ддаад{дда1с1дддасада1И8й Йсаоса11садсадсйдсадсс»даа5а1аС(дсааса1а(1ас^йаасад1а1да(аа1йдс1сасН1с ддсддадддассаадд(ддада1сааа [ЗЕО ГО N0:297]
Н2 131 1Ν1Κ	^21	даса1ссада1дасссад(с1сса(сс№сс{д(с^са1с1д(аддадасадад(сасса1сас({дссдд дсдад1сэдддсШадсаа«атэдсс<дд1а1садсадазассадддааадПсс1аадс1сс1да1с1 а1дйдса1ссасМдсад1садддд{ссса(е1сддйсад[ддсад1дда1е1дддаеада»сайс1с асса(са9садсс1дсадсс(даада1дидсаасиаПзс1д1саазад1а1аасад(9сссс9с(сэс11 1сддсддадддаоеаадд(ддада1сааа [ЗЕО10 N0:298]
Н2360 1Ν1Κ	7,22	даса1ссада1дасссад(с1сса1сс1ссс1д1с1дса1с1д1аддадэсадад1сзсса1сасйд«:дд дсдад1садддса(1аасзаПа1((а9сс1дд{а1садсадааэссадддазадПсс1садйсс(дак: ОДНдса(ссэс№дсаакадддд1ссса1с(сддМсад(ддсад1дда№1дддаса9а1Йсас(£1с асса1садсадсс1дсадсс1даада1д#дсаасНаиас1д1саааад1а1аасад1ддсссайсасМ сддссйдддэссазэд(дда1а1сааэ [5Е0 Ю N0:299]
Н2369 1Ν1Κ	7ι24	даса1ссада(дасссад1с(сса1сс№сс|д(с1дса1с1д(аддадасадад(сасса(сасЦдссдд дсаад1сададсаНадсадд1аЙ1ааайдд1а1садсадааассадддааадсссс1аасс(сс1да1 сса1дйдсакхад(#дсааад1дддд1ссса1саэдд#сад1ддсад1дда1йдддасада1йсас1 <Лсасса1сэдсадк1дсаасс1даадаЙй9саас(1ас1эс1д1саасададаасаЦасссс1сссад ййддссаддддэссаадйддадаксааа [ЗЕО Ю N0:300]
N2380 1Ν1Κ	^25	даса(ссада1дасссад1с!сса1сс1ссск(1с1дса1с1д{аддадаса9ад1сасса1сасйдссдд дсаадКадддсаПадааа(да1Падас1дд(а1садсэдазассадддааадссссГаадсдсс1д а(сГа1дс1дса1ссадМдсааад1дддд(ссса[с1аддксадсддсад1дда1с1д9дасадаайса €1с1сасза{саасадсс1дсэдсс(даадаййдсаасаа{1эс1д1йасэд1а1аа(адйасссда1са ссКсддссаздддасасдвйддадаВзаа [ЗЕО 10 N0:301]
Н2475 1Ν1Κ	Уи26	дасэ1ссада(да(ссад(йх№х1ссс(д1с(дса(йд)сддадасэдад(сасса1сасЦдссаэд сдзд1сасдасаЦйдсаас1аШаааКдд1а1садсадаазссадддааадсссс(аад№сс1даЬй ссда(дса(ссааМ9дааасадэдд1(Хса1саадд[1сад1д9аад}дда»с1дддасада(№асП1 сжса1сад[ЭД«Лдсадсйдаада1аЯдсааса1аиайд1саасад1а(да(аа1с1сссдс1сас{ йсддсддадддзссаадд^дадаЬзаа [ЗЕОГО N0:302)

- 66 023555

Н2508 1Ν1Κ 7,27	Н25081Ν1Κ ν,27	да(а1д1да(дайсад1с(ссэск(ссс(дсссдкасссс1ддададссддсс(сса(йос1дсадд1с 1ап1гяла1|1пН||тг{пга1яг|1яА1пп<Нягяаг*я*Нпл!И*лл1ягаЧпглляагм*пялплгялГпягт
асадИсс(да!с1а1((дддйс1айсдддсс1ссдддд{ссс1дасадд11сад1д5сад1дда1саддса садаЙ11дсас1дасаа(еадсадад1ддаддс1дадда1дКддддМабас1дса1дсаадс1с1аса аайсс1сддасдНсддссаадддассаадд(ддааа(сааа [ЗЕО Ю N0:303]
Н2 534 1Ν1Κ 723	Η2 5341Ν1Κ ^28	дааайд1дс(дас(сад1с1ссадаса1сад«с«д|дас»ссааадд9дааад1сасса(сассйссдд аас1а(дШсссадкШк(садддд(сст£}сдаддйсад1ддсэдГдда1с1дддасадаМсассс1 сасса(саа(адсШддаад(йдаада^с1дсаасд(а((ас(д1са1садад(ад1ад(ПассаПсасв 1сд9ссс1дддэссзаад1дда1а1сзаа [ЗЕО !ϋ N0:304)
Н2550 1Ν1Κ 7ι29	Η2 550 1Ν1Κ	даса1сд1да1дасссадНосадас1ссс1ддс1д^(с(с1д9дсдсдадддссасса1е1сс1дсаад
дгх(гс1аадс1дс1са111ас1дддса1с1ассодддаа;ссдддд(ссс(дассдаНсад1ддсадсдд д1с1дд9асадай1сас1йсасса1сэдсассйдсаддс1даада]д1ддсадШаиас1д«;адсаа1 айз1эс1ас1а1ссдасдйсддссаадддассаадд1д9ааа1сааа [ЗЕО 10 N0:305]
Η2 65 1Ν1Κ 7,.30	Η265 1Ν1Κ УьЗО	даса1ссада1дасссад1с1зса(сс1са:1д1с(дса1сУаддадасадад1сасса1сйс«дссад дсдад1саддаса(1аасаас1аШааа11дд1а(саасадааасжадддааадсосс(ааас{ос^а{ сШсда1дса(ссааЩддааэсадддд1сссэ(сааддНсад1ддаад1дда(с1ддэасада[Мзс( ддсддадддэссаадд(ддада(саза [ЗЕО 10 N0:306]

Нуклеиновые кислоты, кодирующие определенные антигенсвязывающие белки или их фрагменты (например, полноразмерное антитело, тяжелую или легкую цепь, вариабельный домен, или СЭКнИ СЭКн2, СЭКн3, СЭКЫ, СЭКБ2 или СОКБ3), можно выделить из В-клеток мышей, иммунизированных с-£т8 или его иммуногенным фрагментом. Нуклеиновую кислоту можно выделить обычным способом, например, с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Другим примером известной технологии получения производных антител и других антигенсвязывающих белков является фаговый дисплей. Согласно одному подходу, полипептиды - компоненты целевого антигенсвязывающего белка - экспрессируются в любой подходящей рекомбинантной системе экспрессии, а экспрессированные полипептиды организуются в молекулы антигенсвязывающего белка.

Нуклеиновые кислоты, представленные в табл. 6 и 7, приведены только в качестве примеров. Вследствие вырожденности генетического кода, каждая из полипептидных последовательностей, приведенных в табл. 1-4 или изображенных в настоящем документе иным образом, кодируется также большим числом других последовательностей нуклеиновых кислот, помимо приведенных. Для специалиста обычной квалификации понятно, что настоящее изобретение таким образом предоставляет адекватное письменное описание и раскрытие для каждой вырожденной последовательности нуклеотидов, кодирующей каждый антигенсвязывающий белок.

Далее в одном из аспектов предлагаются нуклеиновые кислоты, которые гибридизуются с другими нуклеиновыми кислотами (например, нуклеиновыми кислотами, имеющими последовательность нуклеотидов из табл. 6 и табл. 7) при определенных условиях гибридизации. Способы гибридизации нуклеиновых кислот хорошо известны. См., например, СиггеШ РгоЮсоК ίη Мо1еси1аг Вю1о§у, ίοΐιη \УПеу & §оп8, Ν.Υ. (1989), 6.3.1-6.3.6. Умеренно жесткие условия гибридизации в настоящем документе означают раствор для предварительной промывки, содержащий 5х системы хлорид натрия/цитрат натрия (δΌδ), 0.5% ДД-С№, 1.0 мМ ЭДТА (рн 8.0), буфер для гибридизации - около 50% формамида, 6х №-1-цитратного буфера (88С), температуру гибридизации - 55°С (либо другой аналогичный раствор для гибридизации, например, содержащий около 50% формамида при температуре 42°С) и условия промывки - температура 60°С, 0.5х§§С, 0.1% ДД-С№а Жесткие условия гибридизации означают: гибридизация в 6х §§С при 45°С с последующей одной или более промывкой в 0.1х §§С, 0.2% ДД-С№-1 при 68°С. Далее, специалист может менять условия гибридизации и/или промывки, увеличивая или уменьшая жесткость гибридизации, таким образом, что гибридизованными друг с другом обычно остаются нуклеиновые кислоты, имеющие последовательности нуклеотидов, идентичные по крайней мере на 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98 или 99%.

Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и указания по подбору условий опубликованы, например, в ЗатЬгоок, РгШск апб МашаШ (2001, Мо1еси1аг С1оШпд: А БаЬогаЮгу Мапиа1, Со1б 8ргшд нагЬог ЬаЬогаШгу Рге88, Со1б §ргтд нагЬог, Ν.Υ., см. выше; и СиггеШ РгоЮсоК ίη Мо1еси1аг Вю1о§у, 1995, Аи8иЬе1 е1 а1., ред., 1о1т \УПеу & §оп8, 1пс., разделы 2.10 и 6.3-6.4), а также могут быть легко определены рядовым специалистом на основании, например, длины и/или состава оснований нуклеиновой кислоты.

Изменения можно получить при внесении в нуклеиновую кислоту мутаций, приводящих к изменениям аминокислотной последовательности полипептида (например, антитела или производного антитела), который она кодирует. Внесение мутаций осуществляется любым известным способом. В одном

- 67 023555 осуществлении один или более определенный аминокислотный остаток заменяют по методике, например, сайт-специфического мутагенеза. Согласно другому осуществлению, один или более случайно выбранный остаток изменяют, например, по методике случайного мутагенеза. Как бы это ни было сделано, мутантный полипептид можно экспрессировать и протестировать на заданное свойство.

Внесение мутаций в нуклеиновую кислоту возможно без значительного изменения биологической активности полипептида, который она кодирует. Например, можно осуществить нуклеотидную замену, ведущую к аминокислотной замене по заменимому аминокислотному остатку. При этом в нуклеиновую кислоту можно внести одну или более мутацию, которая селективно изменит биологическую активность полипептида, который она кодирует. Например, мутация может количественно или качественно изменить биологическую активность. Примерами количественных изменений являются повышение, снижение или устранение активности. Примером качественных изменений является изменение антигенспецифичности антитела. В одном осуществлении мутацию нуклеиновой кислоты, кодирующей любой из описанных в настоящем документе антигенсвязывающий белок, изменяющую аминокислотную последовательность, можно провести хорошо разработанными методами молекулярной биологии. Например, в примере 4 описана мутация последовательностей нуклеиновой кислоты (см. табл. 6) с внесением одной или более аминокислотной замены в определенные антигенсвязывающие белки с образованием антигенсвязывающих белков 1.2 δΜ 1.109 δΜ и 2.360 δΜ. Другие антигенсвязывающие белки, содержащие другие мутации, могут быть получены аналогичным образом.

Согласно другому аспекту, предлагаются молекулы нуклеиновых кислот, которые могут служить праймерами или зондами гибридизации для детектирования последовательностей нуклеиновой кислоты. Молекула нуклеиновой кислоты может содержать только часть последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующую полноразмерный полипептид, например, фрагмент, который может служить зондом или праймером или фрагмент, кодирующий активную часть (например, связывающую с-Гт8 часть) полипептида.

Зонды на основе последовательности нуклеиновой кислоты могут служить для детектирования данной нуклеиновой кислоты или аналогичных нуклеиновых кислот, например, транскриптов, кодирующих полипептид. Зонд может представлять собой группу, содержащую метку, например, радиоизотоп, флуоресцентное соединение, фермент или кофактор фермента. Такие зонды применяются для идентификации клетки, которая экспрессирует данный полипептид.

В другом аспекте предлагаются векторы, состоящие из нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид или его часть (например, фрагмент, содержащий один или более СОЕ или один или более вариабельный домен). Примерами векторов являются, без ограничения, плазмиды, вирусные векторы, неэписомные векторы млекопитающих и векторы экспрессии, например, рекомбинантные векторы экспрессии. Рекомбинантные векторы экспрессии могут представлять собой нуклеиновую кислоту в форме, пригодной для экспрессии нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине. Рекомбинантные векторы экспрессии включают одну или более регуляторные последовательности, выбранные на основе клеток-хозяев, предназначенных для экспрессии, и функционально связанные с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая будет экспрессироваться. К регуляторным последовательностям относятся последовательности, направляющие конститутивную экспрессию нуклеотидных последовательностей во многих типах клеток-хозяев (например, ранний энхансер гена δν40, промотор вируса саркомы Рауса и промотор цитомегаловируса), направляющие экспрессию нуклеотидных последовательностей только в определенных клетках-хозяевах (например, тканеспецифические регуляторные последовательности, см. Уо88 с соавт., 1986, Тгеиб8 Вюсйет. δ^. 11: 287, МашаЙ8 с соавт., 1987, δс^еисе 236:1237, полностью включены в данный документ посредством ссылки), а также направляющие индуцибельную экспрессию нуклеотидных последовательностей в ответ на определенное воздействие или состояние (например, металлотионеиновый промотор в клетках млекопитающих и реагирующий на тетрациклин и/или стрептомицин промотор в системах прокариотов и эукариотов (см. 1б). Для специалиста понятно, что разработка вектора экспрессии может зависеть от таких факторов, как выбор клетки-хозяина для трансформации, уровень экспрессии целевого белка и т.д. Векторы экспрессии вводят в клетки-хозяева для образования белков или пептидов, в том числе слитых белков или пептидов, которые кодируются нуклеиновыми кислотами, как здесь описано.

Согласно другому аспекту, предлагается клетка-хозяин, в которую введен рекомбинантный вектор экспрессии. Клетка-хозяин может быть любой прокариотной клеткой (например, Е.сой) или эукариотной клеткой (например, клеткой дрожжей, насекомого или млекопитающего (например, клетки СН0)). Вектор ДНК может быть введен в прокариотные или эукариотные клетки стандартными способами трансформации или трансфекции. Для стабильной трансфекции клеток млекопитающих известно, что в зависимости от вектора экспрессии и используемого способа трансфекции, только малая часть клеток может интегрировать чужеродную ДНК в свой геном. Для идентификации или отбора указанных интегрантов ген, кодирующий селектируемый маркер (например, придающий устойчивость к антибиотикам), в общем случае вводится в клетку-хозяин наряду с целевым геном. Предпочтительными селектируемыми маркерами являются придающие устойчивость к антибиотикам, таким как С418, гигромицин и метотрексат. Помимо других способов, клетки, стабильно трансфецированные введенной нуклеиновой кислотой, мо- 68 023555 гут быть идентифицированы выбором лекарства (например, клетки с введенным геном селектируемого маркера, сохранятся, а остальные клетки погибнут).

Получение антигенсвязывающих белков.

Предлагаемые антитела, не принадлежащие человеку, могут быть получены, например, от любого продуцирующего антитела животного, такого как мышь, крыса, кролик, коза, осел, приматы, отличные от человека (такие как обезьяны, например яванский макак, макак-резус или шимпанзе). Антитела животных могут применяться, например, в клеточных культурах ίη νίΐτο и для целей, связанных с клеточными культурами, а также в любых других случаях, где иммунный ответ на введение антитела незначителен, отсутствует, может быть предотвращен, не имеет значения или желателен. В определенных осуществлениях антитела могут быть получены при иммунизации полноразмерным с-Тп! или внеклеточным доменом с-Тп!. В ином случае определенные антитела, не принадлежащие человеку, можно вырастить путем иммунизации аминокислотами, являющимися сегментами с-Тп!, образующими часть эпитопа, с которым связываются некоторые из предложенных в настоящем документе антител (см. ниже). Антитела могут быть поликлональными, моноклональными, либо могут быть синтезированы в клетке-хозяине при экспрессии рекомбинантной ДНК.

Полностью человеческие антитела могут быть получены, как описано выше, путем иммунизации трансгенных животных, содержащих локусы человеческого иммуноглобулина, или подбором библиотеки фагового дисплея, которая экспрессирует набор человеческих антител.

Моноклональные антитела (МКА) могут быть получены различными способами, в том числе по обычной методике получения моноклональных антител, например, стандартным способом гибридизации клеток, описанным в ΚοΙιΙογ ;·ιηά МП81еш, 1975, №-11иге 256:495. Иначе, возможно применение и других способов получения моноклональных антител, например, вирусная или онкогенная трансформация Влимфоцитов. Одной из применяемых систем для получения гибридом на основе животных является мышиная система, для которой методика хорошо разработана. Протокол иммунизации и способы выделения иммунизированных спленоцитов для слияния известны. Для таких способов В-клетки иммунизированных мышей сливают с иммортализованной клеткой-партнером, например, с клеткой линии мышиной миеломы. При желании, вместо мышей, можно проводить иммунизацию крыс или других млекопитающих, и сливать В-клетки указанных животных с клетками линии мышиной миеломы для получения гибридомы. В качестве альтернативы, вместо мышиной, пригодна также линия клеток миеломы от другого животного. Технологии слияния для получения гибридом также хорошо известны.

Предлагаемые одноцепочечные антитела получаются при связывании фрагментов вариабельного домена тяжелой и легкой цепи (Ρν-область) через аминокислотный мостик (короткий пептидный линкер) с образованием единой полипептидной цепи. Такие одноцепочечные Ρν^Ρνδ) могут быть получены внедрением ДНК, кодирующей пептидный линкер, между молекулами ДНК кодирующими оба полипептида вариабельного домена (У и У_н). Полученные полипептиды складываются, замыкаясь на себя, образуя антигенсвязывающие мономеры, также они могут образовать мультимеры (например, димеры, тримеры или тетрамеры), в зависимости от длины гибкого линкера между двумя вариабельными доменами (Κοτΐΐ с соавт., 1997, Ρτοΐ. Εη§. 10:423; Κοτΐΐ с соавт., 2001, Βίοιηοί. Εη§. 18:95-108). Комбинируя различные У_ъ- и У_н-содержащие полипептиды, можно сформировать мультимеры 8сΡν, которые связываются с разными эпитопами (Κ^^аη§кит с соавт., 2001, Βίοιηοί. Εη§. 18:31-40). Способы, разработанные для получения одноцепочечных антител, были описаны в патенте США № 4946778; Βίτά, 1988, 8аег1се 242:423; ни8Фп с соавт., 1988, Ргос. №ΐ1. АсаД 8с£ И8А 85:5879; \Уагк с соавт., 1989, №Лиге 334:544, 4е ОтааТ с соавт., 2002, Ме11ю08 Мο1. ΒίοΙ. 178:379-387. Одноцепочечные антитела, полученные из антител, предложенных в настоящем документе, включают, без ограничения, 8сΡν, содержащие комбинации вариабельных областей тяжелой и легкой цепи, приведенных в табл. 2 или комбинации вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи, включающие СГОК, приведенные в табл. 3 и 4.

Антитела, предложенные в настоящем документе, относящиеся к одному подклассу, можно поменять на антитела, относящиеся к разным подклассам, с помощью способов переключения подкласса. Так, например, антитело 1дО можно получить из антитела 1дМ и наоборот. Такая технология позволяет получать новые антитела, имеющие антигенсвязывающие свойства данного (исходного) антитела, но также биологические свойства, относящиеся к изотипу или подклассу антител, отличному от исходного. В этом случае применимы технологии рекомбинантной ДНК с участием клонированной ДНК, кодирующей конкретные полипептиды антитела, например, ДНК, кодирующая константный домен антитела заданного изотипа. См., например, БаШЮ с соавт., 2002, МеΐЬοά8 Мο1. ΒίοΙ. 178:303-316.

Соответственно, к предлагаемым антителам относятся, например, антитела, содержащие комбинации вариабельных доменов, описанные выше, которые принадлежат к заданному изотипу (например, 1дА, 1дО1, 1дО2, 1дО3, 1дО4, 1дЕ и Ι§ϋ), а также их фрагменты РаЬ или Р(аЬ')₂. Далее, если требуется 1дО4, может также понадобиться внести точечную мутацию (СР8СР^СРРСР) в шарнирной области, как описано в Βίοοιη с соавт., 1997, Рго1еш 8с1ег1се 6:407, включен посредством ссылки) для снижения склонности к образованию дисульфидной связи внутри цепи н, что может привести к неоднородности антител 1дО4.

Далее, известны также технологии получения антител, имеющих разные свойства (переменная аф- 69 023555 финность к антигену, с которым оно связывается). Одна из таких технологий, называемая шаффлингом цепей, включает размещение набора вариабельных доменов гена иммуноглобулина на поверхности нитевидного бактериофага, что часто называется технологией фазового дисплея. Метод шаффлинга цепей позволил получить высокоаффинные антитела к гаптену 2-фенилоксазол-5-ону, как описано Магкк с соавт., 1992, ВюТесЬпо1о§у 10:779.

Для вариабельных областей тяжелых и легких цепей, приведенных в табл. 2, или для СИР, приведенных в табл. 3 и 4, можно осуществить консервативные модификации (наряду с соответствующими модификациями кодирующих нуклеиновых кислот), получая антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гтк, имеющий функциональные и биохимические характеристики. Способы осуществления таких модификаций были рассмотрены выше.

Антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гтк, могут быть далее модифицированы различным образом. Например, если они предназначены для терапии, то их конъюгируют с полиэтиленгликолем для увеличения времени полужизни в сыворотке или улучшения доставки белка. В качестве альтернативы, ν-область рассматриваемого антитела или его фрагментов может быть слита с Р-областью другой молекулы антитела. Предназначенную для этого область Рс модифицируют, так чтобы она не связывала комплемент, снижая таким образом вероятность индуцирования лизиса клеток в организме пациента при применении слитого белка в качестве лечебного средства. Помимо этого, рассматриваемые антитела или их функциональные фрагменты можно конъюгировать с человеческим сывороточным альбумина для увеличения времени полужизни антитела или его фрагмента в сыворотке. Другим партнером для слияния с антигенсвязывающим белком или его фрагментом является транстиретин (ТТР). Транстиретин способен образовывать тетрамер, соответственно, слитый белок антитело-ТТР может служить в качестве поливалентного антитела, в результате чего авидность связывания может повыситься.

В качестве альтернативы, функциональные и/или биохимические характеристики антигенсвязывающих белков, описанных в настоящем документе, можно значительно модифицировать, создавая замены в аминокислотной последовательности тяжелой и легкой цепей, которые могут значительно различаться по влиянию на сохранение (а) структуры основной цепи макромолекулы в области замены, например, типа лист или спиральной конформации, (Ь) заряда и гидрофобности молекулы на целевом участке или (с) объемности боковой цепи. Консервативная аминокислотная замена может предполагать замену нативного аминокислотного остатка на остаток, не встречающийся в природе, который влияет мало или совсем не влияет на полярность или заряд аминокислотного остатка в данном положении. См. табл. 3, выше. Далее, любой нативный остаток в полипептиде также может быть заменен аланином, как было описано ранее для аланин-сканирующего мутагенеза.

Специалист способен осуществить аминокислотную замену (консервативную или неконсервативную) в обсуждаемых антителах стандартными способами. Замены аминокислот могут быть предназначены для идентификации важных участков антител, предложенных в настоящем документе, или для повышения или понижения аффинности указанных антител к с-Гтк человека или для модифицирования аффинности других антигенсвязывающих белков, описанных в настоящем документе.

Способы экспрессии антигенсвязывающих белков.

В настоящем документе предлагаются также конструкции и системы экспрессии в форме плазмид, векторов экспрессии, транскрипции и экспрессионных кассет, содержащие хотя бы один полинуклеотид из описанных выше, а также клетки-хозяева, содержащие такие конструкции или системы экспрессии.

Антигенсвязывающие белки, предложенные в настоящем документе, могут быть получены с помощью ряда обычных способов. Например, антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гтк, продуцируются рекомбинантными системами экспрессии при использовании любого известного в данной области метода. См., например, Мопос1опа1 АпйЬойек, НуЬгйотак: А №\ν Иипепкюп ш Вю1одюа1 Апа1укек, Кеппе1 с соавт. (ред.), Р1епит Ргекк, Нью-Йорк (1980); и АпйЬойек: А ЬаЬогайгу Мапиа1, Наг1о\у апй Ьапе (ред.), Со1й δρηπβ НагЬог ЬаЬогайгу Ргекк, Со1й δρππβ НагЬог, Нью-Йорк (1988).

Антигенсвязывающие белки могут экспрессироваться в клеточных линиях гибридом (например, в частности, экспрессия антител осуществляется в гибридомах) или в негибридомных клеточных линиях. Экспрессионные конструкции, кодирующие антитела, могут служить для трансформации клетки-хозяина млекопитающего, насекомого или микроорганизма. Трансформацию проводят при введении полинуклеотидов в клетку-хозяина любым известным способом, например, упаковкой полинуклеотида в вирус или бактериофаг и воздействием конструкции на клетку-хозяина с применением технологий трансфекции, известных в данной области, примеры чего можно найти в патентах США № 4399216; 4912040; 4740461; 4959455. Оптимальный способ трансформации зависит от типа клетки-хозяина, подлежащей трансформации. Способы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающего хорошо известны в данной области, к ним относятся, без ограничения, декстран-опосредованная трансфекция, осаждение фосфатом кальция, полибрен-опосредованная трансфекция, слияние протопластов, электропорация, инкапсулирование полинуклеотида(ов) в липосомах, смешивание нуклеиновой кислоты с положительно зараженными липидами и прямая микроинъекция ДНК в ядро.

В рекомбинантную конструкцию экспрессии обычно входит молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, включающий один или более из следующих элементов: один или более СИР, пред- 70 023555 ложенный в настоящем документе; константную область легкой цепи; вариабельную область легкой цепи; константную область тяжелой цепи (например, С_Н1, С_Н2 и/или С_Н3); и/или другой скаффолд-участок антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гпъ. Указанные последовательности нуклеиновой кислоты вставляют в соответствующий вектор экспрессии с помощью стандартных технологий лигирования. В одном осуществлении константную область тяжелой или легкой цепи прикрепляют к С-концу анти-с-сГт8-специфической вариабельной области тяжелой или легкой цепи и лигируют в вектор экспрессии. Вектор обычно выбирают с учетом его функционирования в данной клетке-хозяине (т.е. вектор совместим с аппаратом клетки-хозяина, позволяет амплификацию и/или экспрессию гена). Согласно некоторым осуществлениям, применяются векторы, где применяется комплементационный анализ фрагментов белка с помощью репортерных белков, таких как дигидрофолатредуктаза (см., например, патент США № 6270964, включен в данный документ посредством ссылки). Применимые векторы экспрессии можно приобрести, например, в компании ’ТпуЬтодеп ЫГе ТесЬпо1од1е§ или ΒΌ Вюкаепсек (ранее С1оп1есН). Другие пригодные векторы для клонирования и экспрессии антител и фрагментов описаны в Β^аηсЬ^ апД МсОтеу, 2003, Βΐθΐ£θΗ. Β^оΐесЬηо1. Β^πβ. 84:439-44. Публикация включена в данный документ посредством ссылки. Дополнительные подходящие векторы экспрессии обсуждаются, например, в МеШоДк Еп/уто1, уо1. 185 (Ό. У. ОоеДДе1, ред.), 1990, Нью-Йорк: АсаДеттс ΡϊΌδδ.

Как правило, векторы экспрессии, которые применяются с любыми клетками-хозяевами, содержат последовательности для сохранения плазмиды и для клонирования и экспрессии экзогенных последовательностей нуклеотидов. Такие последовательности, носящие общее название фланкирующие последовательности, в определенных осуществлениях содержат одно или несколько из перечисленного: промотор, один или более энхансер, начало репликации, последовательность терминации транскрипции, полную последовательность интрона, содержащую донорный и акцепторный сайты сплайсинга, последовательность, кодирующую лидерную последовательность для секреции полипептида, сайт связывания рибосом, последовательность полиаденилирования, участок полилинкера для внедрения нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, экспрессия которого предполагается, и элемент селектируемого маркера. Ниже обсуждается каждая из указанных последовательностей.

Не обязательно, вектор может содержать последовательность, кодирующую тэг, т.е. молекулу олигонуклеотида, расположенную на 5'- или 3'-конце кодирующей последовательности антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гпъ; олигонуклеотидная последовательность кодирует ро1уН18 (например, НехаН18) или другой тэг, такой как РЬАО®, ГА (гемагглютинин вируса гриппа) или тус, антитела для которого выпускаются в виде коммерческих препаратов. Такой тэг обычно присоединяется к полипептиду при его экспрессии и позволяет проводить аффинную очистку или идентифицировать антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8, в хозяйской клетке. Аффинную очистку осуществляют, например, колоночной хроматографией, с антителами против данного тэга в качестве матрицы. Не обязательно, тэг можно впоследствии удалить из очищенного с-Гт8-антигенсвязывающего белка различными способами, например, расщеплением под действием пептидазы.

Фланкирующие последовательности могут быть гомологичными (т.е. принадлежать тому же виду организмов и/или штамму, что и клетка-хозяин), гетерологичными (т.е. принадлежать другому виду или штамму, чем клетка-хозяин), гибридными (т.е. комбинацией фланкирующих последовательностей более чем из одного источника), синтетическими или нативными. В этом отношении источником фланкирующей последовательности может быть любой прокариотный или эукариотный организм, любой организм позвоночного или беспозвоночного, либо любое растение, при условии, что данная фланкирующая последовательность является функциональной в аппарате клетки-хозяина и может быть им активирована.

Фланкирующие последовательности, пригодные для векторов, могут быть получены одним из нескольких способов, хорошо известных в данной области. Как правило, в данном документе фланкирующие последовательности были предварительно идентифицированы методами картирования и/или рестрикционного анализа и таким образом могут быть выделены из соответствующей ткани с помощью эндонуклеаз рестрикции. В некоторых случаях известна полная последовательность нуклеотидов фланкирующей последовательности. Тогда возможен синтез фланкирующей последовательности способами, описанными здесь для синтеза нуклеиновых кислот или клонированием.

Независимо от того, известна ли вся фланкирующая последовательность или только ее часть, ее можно получить с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и/или тестированием геномной библиотеки подходящим зондом, таким как фрагмент олигонуклеотидной и/или фланкирующей последовательности, принадлежащей тому же или другому виду. Если фланкирующая последовательность неизвестна, можно выделить фрагмент ДНК, содержащий фланкирующую последовательность, из большего фрагмента ДНК, содержащего, например, кодирующую последовательность или даже другой ген или гены. Выделение можно осуществить действием эндонуклеаз рестрикции с получением нужного фрагмента ДНК с последующей очисткой на агарозном геле, методом колоночной хроматографии на 01адеп® (СНаШуогГИ, СА) или другим способом, известным специалистам. Выбор ферментов для указанной задачи очевиден для рядового работника данной области.

Начало репликации обычно представляет собой часть коммерчески закупаемых прокариотных век- 71 023555 торов экспрессии, его роль - содействие амплификации вектора в хозяйской клетке. Если выбранный вектор не содержит сайта начала репликации, его можно синтезировать химическим путем на основе известной последовательности и лигировать в вектор. Например, для большей части грамотрицательных бактерий применимо начало репликации из плазмиды рВК322 (Ыете Епд1апб Вю1аЬ8, Веуег1у, МА), а различные начала репликации вирусного типа (например, БУ40, вирус полиомы, аденовирус, вирус везикулярного стоматита (УБУ) или вирусы папилломы, такие как ВПЧ или ВПБ) пригодны для клонирования векторов в клетках млекопитающих. В общем случае, компонент начала репликации не является необходимым для векторов экспрессии млекопитающих (например, БУ40 применяется часто лишь потому, что он содержит также ранний промотор вируса).

Последовательность терминации транскрипции обычно расположена у 3'-конца полипептидкодирующей области и служит для прекращения транскрипции. Обычно последовательность терминации транскрипции в прокариотных клетках - это О-С-богатый фрагмент, за которым идет последовательность поли-Т. Такую последовательность можно легко клонировать из библиотеки или даже приобрести коммерческий препарат как часть вектора, а также синтезировать, используя методы синтеза нуклеиновых кислот, такие как описаны в настоящем документе.

Ген селектируемого маркера кодирует белок, необходимый для существования и роста клеткихозяина, выращенной в селективной культуральной среде. Типовые гены селектируемых маркеров кодируют белки, которые (а) придают устойчивость к антибиотикам и другим токсинам, например, ампициллину, тетрациклину или канамицину в случае прокариотных хозяйских клеток; (Ь) восполняют ауксотрофный дефицит клетки; или (с) поставляют важные питательные вещества, которые нельзя получить из комплексных сред или сред определенного состава. Специфическими селектируемыми маркерами является ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину. Для селекции как в прокариотных, так и эукариотных хозяйских клетках может успешно применяться и ген устойчивости к неомицину.

Для амплификации экспрессируемого гена можно применять другие селектируемые гены. Амплификация представляет собой процесс, при котором гены, необходимые для продукции белка, важного для роста или жизнедеятельности клеток, многократно воспроизводятся в хромосомах последующих генераций рекомбинантных клеток. Примерами подходящих селектируемых маркеров для клеток млекопитающих являются ген дигидрофолатредуктазы (ОНРК) и беспромоторный ген тимидинкиназы. Трансформированные клетки млекопитающих подвергают действию селекционного давления, причем только трансформанты адаптируются к условиям существования за счет селектируемого гена, присутствующего в векторе. Селекционное давление создают при культивировании трансформируемых клеток в условиях, при которых концентрация селектирующего агента в среде постоянно повышается, что приводит к амплификации как селектируемого гена, так и ДНК, кодирующей другой ген, такой как антигенсвязывающий белок, который связывается с полипептидом с-Гт8. В результате этого амплифицированная ДНК приводит к синтезу повышенного количества полипептида, например, антигенсвязывающего белка.

Сайт связывания рибосом обычно требуется для начала трансляции мРНК и характеризуется последовательностью Шайна Дальгарно (прокаритоты) или последовательностью Козака (эукариоты). Данный элемент обычно располагается в 3' направлении от промотора и 5' от кодирующей последовательности полипептида, экспрессия которого предполагается.

В некоторых случаях, например, когда в системе экспрессии на основе эукариотной клетки-хозяина предпочтительно гликозилирование, то можно воспользоваться различными пре- или пропоследовательностями для оптимизации гликозилирования или выхода. Например, можно изменить сайт расщепления пептидазой определенного сигнального пептида или добавить про-последовательности, которые также могут повлиять на гликозилирование. Конечный белок может иметь в положении -1 (по отношению к первой аминокислоте зрелого белка) одну или более дополнительную аминокислоту, полученную при экспрессии, которая не была полностью удалена. Например, конечный белок может иметь один или два аминокислотных остатка, присутствующих в сайте пептидазного расщепления, связанных с амино-концом. Либо применение некоторых сайтов ферментативного расщепления может привести к слегка укороченной форме целевого полипептида, если расщепление под действием фермента произошло внутри зрелого полипептида.

При экспрессии и клонировании обычно присутствует промотор, узнаваемый организмом-хозяином и функционально связанный с молекулой, кодирующей антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8. Промоторы - это нетранскрибируемые последовательности, вышележащие (т.е. 5') по отношению к стартовому кодону структурного гена (обычно длиной 100-1000 п.о.), регулирующие транскрипцию структурного гена. Промоторы обычно подразделяют на два класса: индуцибельные промоторы и конститутивные промоторы. Индуцибельные промоторы инициируют повышение уровня транскрипции ДНК (под своим контролем) в ответ на изменение условий среды для культивации, например, появление или исчезновение питательного вещества или изменение температуры. Конститутивные промоторы, с одной стороны, равномерно транскрибируют ген, с которым они функционально связаны, то есть, при незначительном или отсутствующем регулировании экспрессии гена. Хорошо известно большое количество промоторов, узнаваемых различными потенциальными клетками-хозяевами. Подходящий промотор

- 72 023555 функционально связан с ДНК, кодирующей тяжелую цепь или легкую цепь, включающую с-Гт8антигенсвязывающий белок, за счет удаления промотора из исходной ДНК действием фермента рестриктазы и введения выбранной промоторной последовательности в вектор.

Также хорошо известны промоторы, подходящие для применения с клетками-хозяевами дрожжей. Энхансеры на основе дрожжей успешно применяются с промоторами на основе дрожжей. Промоторы, пригодные для применения в клетках-хозяевах млекопитающих, также хорошо известны, к ним относятся, без ограничения, промоторы, полученные из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы птиц, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы быка, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирусы, вирус гепатита В и обезьяний вирус δν40. К другим промоторам млекопитающих относятся гетерологичные промоторы млекопитающих, например, промоторы теплового шока и промотор актина.

Дополнительные промоторы, которые могут представлять интерес, включают, без ограничения: ранний промотор δν40 (Веио181 аиб СНатЬои, 1981, №1иге 290:304-310); СМУ-промотор (ТНот8еи с соавт., 1984, Ргос. №11. Асаб. ЖА 81:659-663); промотор, содержащийся в 3'-длинный концевой повтор вируса саркомы Рауса (УататоЮ с соавт., 1980, Се11 22:787-797); промотор тимидинкиназы герпеса (^адиег с соавт., 1981, Ргос. №И. Асаб. δ^. ЖА 78:1444-1445); промоторные и регуляторные последовательности из гена металлотионеина (Ргш81ег с соавт., 1982, №1иге 296:39-42); и прокариотные промоторы, такие как промотор бета-лактамазы (УШа-КатагоГГ с соавт., 1978, Ргос. №И. Асаб. δα. ЖА 75:3727-3731); или 1ас-промотор (ИеВоег с соавт., 1983, Ргос. №11. Асаб. δ^. ЖА 80:21-25). Могут также представлять интерес следующие участки контроля транскрипции на основе животных, проявляющие тканевую специфичность и применяемые для трансгенных животных: контрольный участок гена эластазы Ι, который активен в ацинарных клетках поджелудочной железы (δχνίίΐ с соавт., 1984, Се11 38:639-646; 0пШ/ с соавт., 1986, Со1б δρτί^ НагЬог δутρ. ОнаШ. Вю1. 50:399-409; МасОотйб, 1987, Нера1о1оду 7:425-515); контрольный участок гена инсулина, который активен в бета-клетках поджелудочной железы (НагаНат 1985, №1иге 315:115-122); контрольный участок гена иммуноглобулина, который активен в лимфоидных клетках (Сго88сйеб1 с соавт., 1984, Се11 38:647-658; Абате8 с соавт., 1985, №1иге 318:533538; А1ехаибег с соавт., 1987, Мо1. Се11. Вю1. 7:1436-1444); контрольный участок вируса опухоли молочной железы мышей, который активен в тестикулярных, лимфоидных и тучных клетках и клетках молочной железы (Ьебег с соавт., 1986, Се11 45:485-495); контрольный участок гена альбумина, который активен в печени (Ршкей с соавт., 1987, Сеие8 аиб Эеуе1. 1:268-276); контрольный участок гена альфафетопротеина, который активен в печени (Кгит1аиГ с соавт., 1985, Мо1. Се11. Вю1. 5:1639-1648; Наттег с соавт., 1987, δс^еисе 253:53-58); контрольный участок гена альфа 1-антитрипсина, который активен в печени (Ке18еу с соавт., 1987, Сеие8 аиб Эеуе1. 1:161-171); контрольный участок гена бета-глобина, который активен в миелоидных клетках (Модгат с соавт., 1985, №йге 311:338-340; КоШа8 с соавт., 1986, Се11 46:89-94); контрольный участок гена основного миелинового белка, который активен в клетках олигодендроцитах мозга (Ееабйеаб с соавт., 1987, Се11 48:703-712); контрольный участок гена легкой цепи-2 миозина, который активен в скелетных мышцах (ТОт, 1985, №1иге 314:283-286); и контрольный участок гена гонадотропного гормона, который активен в гипоталамусе (Ма8ои с соавт., 1986, δс^еисе 234:13721378).

Для усиления транскрипции ДНК, кодирующей легкую цепь или тяжелую цепь, представляющие собой антигенсвязывающий белок, связывающийся с с-Гт8 человека, высшими эукариотами в вектор можно ввести энхансерную последовательность. Энхансеры представляют собой действующие в цисположении элементы ДНК, длиной обычно 10-300 п.о., которые воздействуют на промотор, усиливая транскрипцию. Энхансеры сравнительно независимы по положению и относительной ориентации, обнаруживаясь в положениях и 5', и 3' к участку транскрипции. Известен ряд энхансерных последовательностей из генов млекопитающих (например, глобин, эластаза, альбумин, альфа-фетопротеин и инсулин). Тем не менее, как правило, выбирают энхансер на основе вируса. Примерами таких элементов, активирующих эукариотные промоторы, являются известные энхансер δУ40, энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер вируса полиомы и энхансеры аденовируса. Хотя энхансер может быть расположен в векторе в положении как 5', так и 3' от кодирующей последовательности, как правило, он находится на участке 5' от промотора. Для активации внеклеточной секреции антитела в вектор экспрессии может быть включена последовательность, кодирующая соответствующую нативную или гетерологичную сигнальную последовательность (лидерную последовательность или сигнальный пептид). Выбор сигнального пептида или лидера зависит от типа клетки-хозяина, где предполагается продукция антитела, при этом гетерологичная сигнальная последовательность может заменить нативную сигнальную последовательность. Примерами сигнальных пептидов, функциональных в клетках-хозяевах млекопитающих, являются: сигнальная последовательность для интерлейкина-7 ДЬ-7), описанная в патенте США № 4965195; сигнальная последовательность для рецептора интерлейкина-2, описанная в Со8таи с соавт., 1984, №1иге 312:768; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-4, описанный в Европейском патенте № 0367566; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1, тип Ι, описанный в патенте США № 4968607; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1, тип ΙΙ, описанный в Европейском патенте № 0460846.

Предлагаемые векторы экспрессии смогут быть построены из исходного вектора, например, на ос- 73 023555 нове коммерческого препарата вектора. Такие векторы могут содержать (но могут и не содержать) все выбранные фланкирующие последовательности. Если одна или более из фланкирующих последовательностей, описанных в настоящем документе, не присутствуют заранее в векторе, то она может быть получена индивидуально и лигирована в вектор. Способы получения фланкирующих последовательностей хорошо известны специалистам.

После того как вектор сконструирован и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, тяжелую цепь или и легкую цепь, и тяжелую цепь, представляющая собой последовательность, связывающую с-Гт8-антиген, вставлена в соответствующий участок вектора, завершенный вектор можно поместить в подходящую клетку-хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Трансформацию вектора экспрессии антигенсвязывающего белка в выбранную клетку-хозяина можно провести хорошо известными способами, к которым относится трансфекция, инфицирование, соосаждение с фосфатом кальция, электропорация, микроинъекция, липофекция, ПЕАЕ-декстран-опосредованная трансфекция или другие известные способы. Выбор способа в некоторой степени зависит от типа клетки-хозяина. Указанные и другие подходящие способы хорошо знакомы квалифицированным специалистам и приведены, например, в 8атЬгоок с соавт., 2001, см. выше.

При культивировании в заданных условиях клетка-хозяин синтезирует антигенсвязывающий белок, который затем может быть выделен из культуральной среды (если он выделяется из клетки-хозяина в среду) или непосредственно из продуцирующей его клетки-хозяина (если он не выделяется в среду). Выбор клетки-хозяина зависит от ряда факторов, таких как желаемый уровень экспрессии, модификации полипептида, которые предпочтительны либо необходимы для проявления активности (такие как гликозилирование или фосфорилирование) и легкость укладки в биологически активную молекулу.

Существующие клеточные линии млекопитающих - потенциальные хозяева для экспрессии - хорошо известны в данной области. К ним относятся, без ограничения, иммортализованные клеточные линии, имеющиеся в Американской коллекции типовых культур (АТСС), в том числе, но без ограничения, клетки яичников китайского хомячка (Сн0), клетки неЬа, клетки почек детеныша хомячка (ВнК), клетки почек обезьяны (С08), клетки злокачественной гепатомы человека (например, нер С2) и ряд других клеточных линий. В определенных осуществлениях клеточные линии можно выбрать, определив, какие клеточные линии характеризуются высоким уровнем экспрессии и конститутивной продукцией антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гт8. В другом осуществлении можно выбрать клеточную линию из рода В-клеток, не производящую собственное антитело, но способную формировать и выделять гетерологичное антитело.

Применение антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гт8 человека, для диагностики и лечения.

Антигенсвязывающие белки применяются для обнаружения с-Гт8 в биологических образцах и для идентификации клеток или тканей, которые продуцируют с-Гт8. Например, с-Гт8-антигенсвязывающие белки можно применять в диагностических анализах, например, в анализах связывания для качественного и/или количественного определения с-Гт8, который экспрессируется в клетке или в ткани. Антигенсвязывающие белки, которые специфически связывают с-Гт8, также могут служить для лечения заболеваний, связанных с с-Гт8, у нуждающихся в этом пациентов. Кроме того, с-Гт8-антигенсвязывающие белки могут служить для ингибирования образования комплекса с-Гт8 с его лигандом КСФ-1, модулируя таким образом биологическую активность с-Гт8 в клетке или ткани. Примерами видов активности, которые могут быть модулированы, являются, без ограничения, ингибирование аутофосфорилирования с-Гт8, снижение хемотаксиса моноцитов, ингибирование миграции моноцитов, ингибирование накопления опухоль-ассоциированных макрофагов в опухоли или поврежденной ткани и/или ингибирование ангиогенеза. Антигенсвязывающие белки, которые связываются с с-Гт8, модулируют и/или блокируют таким образом взаимодействие с другими связывающими соединениями и в этом качестве могут применяться в терапевтических целях против заболеваний, связанных с с-Гт8.

Показания.

Многие опухолевые клетки выделяют КСФ-1, который, в свою очередь, привлекает моноциты/макрофаги, а также способствует выживанию этих клеток и активирует их за счет родственного рецептора с-Гт8. Уровень КСФ-1 в опухолях человека имеет положительную корреляцию с количеством ТАМ, присутствующих в этих опухолях (Мигбосй с соавт., 2004, В1ооб 104:2224-2234). В нескольких исследованиях высокие числа ТАМ связывали с низкой выживаемостью пациентов с различными формами онкологических заболеваний. В недавних исследованиях было показано существование аутокринной петли в клетках опухолей. В других исследованиях показано, что с-Гт8 играет роль при различных воспалительных заболеваниях. Таким образом, регулирование сигнального пути с-Гт8-КСФ-1 действием антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гт8 человека, предложенных в настоящем документе, будет ингибировать, нарушать, или модулировать хотя бы один из биологических откликов, связанных с сГт8, и в этом отношении будет полезным против воздействия заболеваний или состояний, связанных с сГт8. С-Гт8-связывающие белки, предложенные в настоящем документе, могут также служить для диагностики, профилактики или лечения таких заболеваний или состояний.

Заболевание или состояние, связанное с человеческим с-Гт8, может быть любым заболеванием или

- 74 023555 состоянием, начало которого у пациента вызвано, хотя бы частично, взаимодействием с-Гтк с лигандом КСФ-1 и/или ΙΕ-34. Тяжесть заболевания или состояния может увеличиться или уменьшиться при взаимодействии с-Гтк с КСФ-1 и/или ΙΕ-34. Примерами заболеваний и состояний, которые можно лечить антигенсвязывающими белками, являются различные онкологические заболевания, воспалительные заболевания и костные нарушения. Антигенсвязывающие белки могут служить также для лечения или профилактики метастазирования при онкологическом заболевании и остеолиза костей, связанного с метастазированием рака в кости. Высокий уровень ТАМ связан с ростом опухоли при различных видах рака, в том числе рак молочной железы (Ткйкш с соавт., 2005, 0псо1. Рер. 14:425-431; Ьеек с соавт., 1999, Вг. 1. Сапсег 79:991-995; Ьеек апй Натк, 2002, 1. Маттагу О1апй Вй1 апй №ор1аыа 7:177-189), предстательной железы (ЫккЬгай с соавт. 2000, ΙπΙ. 1. 0псо1. 17:445-451), эндометрия (01по с соавт., 2004, АпЕсапсег Рек. 24:3335-3342), мочевого пузыря (Напайа с соавт., 2000, Ш, 1. Иго1 7:263-269), почек (Натайа с соавт.; 2002, Апйсапсег Рек. 22:4281-4284), пищевода (ЬеМк апй Ро11ай, 2006, Сапсег Рек. 66(2):606-612), плоскоклеточный рак (Койе с соавт., 2004, Ат. 1. Сак1гоеп1его1. 99:1667-1674), увеальная меланома (Макйе с соавт., 2001, йуекк 0рййа1то1. ν® δ^. 42: 1414-1421), фолликулярная лимфома (Рагшйа с соавт., 2005, В1оой 106:2169-2174), почечный и цервикальный рак (Кита с соавт., 2007, Сапсег Рек 67: 19181926). При раке молочной железы, предстательной железы, эндометрия, мочевого пузыря, почек, пищевода, плоскоклеточном раке, увеальной меланоме, фолликулярных лимфомах и раке яичников высокий уровень ТАМ также указывает на низкую выживаемость. Таким образом, с-Гтк-связывающие белки, предложенные в настоящем документе, могут ингибировать накопление ТАМ, снижающее выживаемость, и функционирование ТАМ в опухоли, оказывая отрицательное воздействие на рост опухоли и повышая выживаемость пацентов.

Другие онкологические заболевания, которые таким образом можно лечить, включают, без ограничения, солидные опухоли, рак легких, рак яичников, колоректальный рак, рак мозга, рак поджелудочной железы, головы, шеи и печени, лейкемию, лимфомы и заболевание Ходжкина, множественную миелому (РаппЪа с соавт., 2005, В1оой 106:2169-2174), меланому, рак желудка, астроцитарный рак, аденокарциному легкого. Ыйдапи с соавт., 2003, Апйсапсег Рекеагсй 23:4079-4083; Сагико с соавт., 1999, Мойегп Ра11ю1оду 12:386-390; ^йсйег с соавт., 2004, Рекеагсй δиρρо^ι 104:3335-3342; Нагап-ОЬега с соавт. 1997, В1оой 89:2537-2545; Никкеш с соавт., 2006 йИегпайопа1 1оигпа1 оГ Е.\рептеп1а1 Райойду 87:163-76; Ьаи с соавт. 2006 Вгйкй 1оигпа1 оГ Сапсег. 94:1496-1503, Ьеипд с соавт. 1997, Асй №игорайо1од1са. 93:518-527, Сйайо с соавт., 2004, 1оигпа1 оГ СИтса1 Й1уекйда1юп 114:623-633; К1гта с соавт., 2007, Сапсег Рекеагсй 67:1918-26, νаη Рауепк\уаау с соавт., 1992, ЬаЬогайгу ^екйдайоп 67:166-174.

Антигенсвязывающие белки применимы также для торможения роста опухоли, ее прогрессирования и/или метастазирования. Такое торможение можно контролировать различными способами. Например, торможение может привести к снижению размера опухоли и/или снижения метаболической активности в опухоли. Оба указанных фактора могут быть измерены, например, методами МРТ или ПЭТ. Кроме того, торможение можно контролировать при биопсии, определяя уровень некроза, гибели клеток опухоли и уровня васкуляризации в опухоли. Степень метастазирования и остеолиза, связанного с метастазированием, можно определять известными способами.

Доказательство существования аутокринной петли означает, что ингибирование активности с-Гтк может влиять на опухоль-ассоциированные макрофаги, но также и на опухолевые клетки. Так в одном осуществлении опухоли, имеющие аутокринную петлю, являются первичной мишенью. В других осуществлениях ТАМ и опухоль одновременно служат мишенями с получением суммарного действия. В прочих осуществлениях мишенями служат опухоли, использующие паракринную петлю или аутокринную и паракринную петлю.

Антигенсвязывающие белки, связывающие человеческий с-Гтк, предложенные в настоящем документе, в определенных осуществлениях можно вводить отдельно, но также в составе комбинированной терапии с одним или более другим вариантом лечения онкологического заболевания, таким как, например, химиотерапия, лучевая терапия или хирургическая операция. При введении с химиотерапевтическим препаратом антигенсвязывающий белок можно принимать до или после химиотерапевтического препарата или одновременно (например, в составе той же композиции).

Химиотерапевтические препараты, которые можно проводить в сочетании с предлагаемым антигенсвязывающим белком, включают, без ограничения, антинеопластические средства, в том числе алкилирующие агенты, включая азотистые иприты, такие как мехлоретамин, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан и хлорамбуцил; нитрозомочевины, такие как кармустин (ВСИИ), ломустин (ССИИ) и семустин (метил-ССКи); Темодал™ (темозоламид), этиленимины/метилмеламин, такие как триэтиленмеламин (ТЕМ), триэтилен, тиофосфамид (тиотепа), гексаметилмеламин (НММ, алтретамин); алкилсульфонаты, такие как бусульфан; триазины, такие как дакарбазин (ИТЮ); антиметадолиты, в том числе аналоги фолиевой кислоты, такие как метотрексат и триметрексат, пиримидиновые аналоги, такие как 5-фторурацил (5РИ), фтородезоксиуридин, гемцитабин, цитозин-арабинозид (АгаС, цитарабин), 5-азацитидин, 2,2'дифтордезоксицитидин, аналоги пурина, такие как 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, азатиоприн, 2'дезоксикоформицин (пентостатин), эритрогидроксинониладенин (ΒΗNА), флударабина фосфат и 2хлордезоксиаденозин (кладрибин, 2-СйА); природные вещества, включая антимитотические препараты,

- 75 023555 такие как паклитаксел, алкалоиды барвинка, в том числе винбластин (У_ЪВ), винкристин и винорелбин, таксотер, эстрамустин и эстрамустина фосфат; пиподофиллотоксины, такие как этопозид и тенипозид; антибиотики, такие как актиномицин Ό, дауномицин (рубидомицин), доксорубицин, митоксантрон, идарубицин, блеомицины, пликамицин (митрамицин), митомицин С и актиномицин; ферменты такие как Ьаспарагиназа; модификаторы биологического ответа, такие как интерферон-альфа, 1Ь-2, Г-КСФ и ГМКСФ; прочие препараты, в том числе координационные соединения платины, такие как цисплатин и карбоплатин, антрацендионы, такие как митоксантрон, замещенные мочевины, такие как гидроксмочевина, производные метилгидразина, в том числе ^метилгидразин (МИ) и прокарбазин, супрессоры коры надпочечников, такие как митотан (ο,ρ-ΌΌΌ) и аминоглютетимид; гормоны и антагонисты, в том числе антагонисты адренокортикостероидов, такие как преднизолон и его эквиваленты, дексаметазон и аминоглютетимид; Гемзар™ (гемцитабин), прогестин, такой как гидроксипрогестерон-капроат, медроксипргестерон-ацетат и мегестрол ацетат; эстроген, такой как диэтилстилбестрол и эквиваленты этинилэстрадиола; антиэстрогены, такие как тамоксифен; андрогены, в том числе тестостерон-пропионат и флуоксиместерон/эквиваленты; антиандрогены, такие как флутамид, аналоги гонадотропин-выделяющего гормона и леупролид; и нестероидные антиандрогены, такие как флутамид. Препараты, действующие по эпигенетическому механизму, включая, но без ограничения, ингибиторы гистон-деацетилазы, деметилирующие агенты (например, Видаза), а также терапия на основе репрессоров транскрипции (АТКА) также могут сочетаться с антигенсвязывающими белками.

Виды терапии рака, которые могут сочетаться с введением антигенсвязывающего белка, также включают, без ограничения, таргетную терапию. Примерами таргетной терапии является, без ограничения, применение терапевтических антител. Примерами терапевтических антител являются, без ограничения, мышиные, химерные мышь-человек, СОК-привитые, гуманизированные и полностью человеческие антитела, а также синтетические антитела, в том числе, но без ограничения, выбранные при тестировании библиотек антител. Примерами антител являются, без ограничения, антитела, которые связываются с белками на поверхности клетки нег2, СЭС20, СЭС33, муциноподобный гликопротеин и рецептор эпидермального фактора роста (ЕОРК), присутствующий на опухолевых клетках, и которые необязательно оказывают цитостатическое и/или цитотоксическое действие на опухолевые клетки, содержащие такие белки. Примерами антител являются также нЕКСЕРТШ™ (трастузумаб), который может применяться для лечения рака молочной железы и других видов рака, К1ТИХА№^М (ритуксимаб), 2ЕУАи№™ (ибритумомаб тиуксетан), ОЬЕЕУЕС™, ^ΥМΡН0СI^Е™ (эпратузумаб), которые применяют при лечении неходжкиских лимфом и других видов рака. Некоторые примеры антител - также ЕКВ1ТИХ™ (ЕМС-С225); эртинолиб (1ге88а); ВЕХХАК™ (йод-131 тозитумомаб); ингибиторы КОК (рецептора киназного домена); антитела против УЕОР и антагонисты (например, Ανа8ΐ^η™ и УЕОАР-ТКАР); антитела против рецептора УЕОР и антигенсвязывающие области; антитела против Ап§-1 и Ап§-2 и антигенсвязывающие области; антитела против Ие-2 и других рецепторов Ап§-1 и Ап§-2; лиганды Ие-2; антитела против ингибиторов киназы Ие-2; ингибиторы нТ-1а и Сапра!!'™ (Алемтузумаб). В определенных осуществлениях препараты для терапии рака представляют собой полипептиды, селективно индуцирующие апоптоз опухолевых клеток, в том числе, но без ограничения, полипептид ТКА1Ь, связанный с фактором некроза опухолей (ФНО).

Дополнительными частными примерами химиотерапевтических агентов являются, таксол, таксены (например, доцетаксел и таксотер), модифицированный паклитаксел (например, Абраксан и 0рахю), доксорубицин, Авастин®, сутент, нексавар и другие ингибиторы мультикиназы, цисплатин и карбоплатин, этопозид, гемцитабин и винбластин. В комбинации с антигенсвязывающими белками применимы также специфические ингибиторы других киназ, в том числе, но без ограничения, ингибиторы пути МАРК (например, ингибиторы ЕКК, ^NΚ и р38), ингибиторы РВкшаке/АКТ и ингибиторы Рин Другие ингибиторы включают ингибиторы нкр90, ингибиторы протеасом (например, Велкад) и ингибиторы множественного механизма действия, такие как трисенокс.

В определенных осуществлениях антигенсвязывающий белок, предлагаемый в настоящем документе, применяют в комбинации с одним или более антиангиогенным препаратом, снижающим ангиогенез. Примерами таких препаратов являются, без ограничения, антагонисты 1Ь-8; антагонисты кэмпаса, ВРОР; РОР; антагонисты Тек (СеггеШ с соавт., Публикация США № 2003/0162712; СеггеШ с соавт., патент США № 6413932 и СеггеШ с соавт., патент США № 6521424, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки для любых целей); препараты анти-Т\УЕАК (к которым относятся, без ограничения, антитела и антигенсвязывающие области); растворимые антагонисты рецепторов ТХУЕАК (^УИеу, патент США № 6727225); домен АОАМ дезинтегрин - антагонист связывания интегрина с его лигандами (Ε;·ιη8ίο\ν с соавт., публикация США № 2002/0042368); рецептор анти-ерН и антитела к эфрину; антигенсвязывающие области или антагонисты (патенты США № 5981245; 5728813; 5969110; 6596852; 6232447; 6057124 и семейство патентов-аналогов); агенты анти-УЕОР (например, антитела или антигенсвязывающие области, которые специфически связывают УЕОР или растворимые рецепторы УЕОР или их лигандсвязывающие области), такие как Ανа8ΐ^η™ или агенты УЕОР-ТКАР™ и анти-УЕОР рецепторов (например, антитела или антигенсвязывающие области, которые специфически с ними свя- 76 023555 зываются), ингибиторы ЕОРК (например, антитела или антигенсвязывающие области, которые специфически с ними связываются), такие как панитумумаб, ЖЕ88А™ (гефитиниб), ТАКСЕУА™ (эрлотиниб), препараты анти-Апд-1 и анти-Апд-2 (например, антитела или антигенсвязывающие области, которые специфически связываются с ними или с их рецепторами, например, Т1е-2/ТЕК), ингибиторы киназы анти-Т1е-2е (например, антитела или антигенсвязывающие области, которые специфически связываются и ингибируют активность факторов роста, такие как антагонисты факторов роста гепатоцитов (НОР, известен также как фактор диссеминации), а также антитела или антигенсвязывающие области, которые специфически связывают их рецептор с-теГ; антагонисты к ΡΌΟΡ-ΒΒ; антитела и антигенсвязывающие области к лигандам ΡΌΟΡ-ΒΒ; и ингибиторы киназы ΡΩΟΡΡ.

Другие антиангиогенные препараты, которые можно применять в комбинации с антигенсвязывающим белком, представляют собой ингибиторы ММР-2 (матриксная металлопротеиназа 2), ингибиторы ММР-9 (матриксная металлопротеиназа 9) и ингибиторы СОХ-ΙΙ (циклооксигеназа ΙΙ). Примерами подходящих ингибиторов СОХ-ΙΙ являются ЦЕЛЕБРЕКС™ (целекоксиб), валдекоксиб и рофекоксиб.

В определенных осуществлениях препараты для терапии рака представляют собой ингибиторы ангиогенеза. Некоторые из таких ингибиторов, без ограничения, -δΌ-7784 (ΡΓί/ег, США); циленгитид (Мегск КОаА, Германия, ΕΡО 770622); пегаптаниб натриия (ОПеаД §аепсе8, США); альфастатин (ΒίοАс1а, Великобритания); М-БОА (Се1депе, США, патент США № 5712291); иломастат (Атуа, США, патент США № 5892112); семаксаниб (ΡΠ/ег, США, патент США № 5792783); ваталаниб (№уагЛ8, Швейцария); 2-метоксиэстрадиол (ЕйгеМеД, США); ТЬС ЕЬЬ-12 (Е1ап, Ирландия); анекортав ацетат (А1соп, США); моноклональные антитела к альфа-0148 (Атдеп, США); СЕР-7055 (СерНа1оп, США); моноклональные антитела к Уп (Сгисе11, Нидерланды), антиангиогенный ЭАС (СопщСЬет, Канада); ангиоцидин ДпКше Ρйа^тасей^са1, США); КМ-2550 (Куоуа Накко, Лирин); 8И-0879 (ΡΠ/ег, США); ΟΟΡ-79787 (Νοуагйв, Швейцария, ЕР 970070); технология АКОЕЫТ (АпаД, США); ΥIОδК-δΐеаЙй (Лойп8оп & Лойп8оп, США); фрагмент фибриногена-Е (ЬюА^а, Великобритания); ингибитор ангиогенеза (Тпдеп, Великобритания); ТВС-1635 (Епсу81уе Ρйа^тасеийса18, США); 8С-236 (ΡΓί/ег, США); АВТ-567 (АЬЬой, США); метастатин (ЕпйеМеД, США); ингибитор ангиогенеза (Тпрер, 8уеДеп); маспин (§о8ер Япония); 2метоксиэстрадиол (Опсо1оду 8аепсе8 Сотротайоп, США); ЕК-68203-00 ДУАХ, США); бенефин (Ьапе ЬаЬ8, США); Т/-93 (Т8итита, Япония); ТАХ-1120 (ТакеДа, Япония); РК-111142 (Рир8ауа, Япония, ΙΡ 02233610); фактор роста тромбоцитов 4 (КерПОеп, США, ΕΡ 407122); антагонист васкулярного эндотелиального фактора роста Щотеап Дания); терапия рака (Университет Южной Каролины, США); бевацизумаб φΙΝΝ) (Оепейесй, США); ингибиторы ангиогенеза (8иОЕК США); ХЬ 784 (Ехейх18, США); ХЬ 647 (ЕхеНх18, США); моноклональное антитело, альфа-5-бета-3-интегрин, второе поколение (АррйеД Мо1еси1аг Еуо1йюп, США и МеД1ттипе, США); генная терапия, ретинопатия (ОхГогД Β^оМеД^са, Великобритания); энзастаурин гидрохлорид (и8АЫ) (ЬП1у, США); СЕР 7055 (СерНа1оп, США и §апой8уййе1аЬо, Франция); ВС 1 (Институт исследования рака, Генуя, Италия); ингибиторы ангиогенеза (А1сйетта, Австралия); антагонист УЕОР (Кедепегоп, США); антиангиогенные производные τΒΡΙ 21 и ΒΡΙ (ХОМА, США); ΡΙ 88 (Тгодеп, Австралия); циленгитид φΙΝΝ) (Мегск КОаА, Оегтап; Технический университет Мюнхена, Германия, §сйрр8 СПшс и Ке8еагсй РоипДайоп, США); цетуксимаб (ΙΝΝ) (АуепЙ8, Франция); АУЕ 8062 (АрпотоЮ, Япония); А§ 1404 (Лаборатория исследования рака, Новая Зеландия); 8О 292 (ТеЛо8, США); Эндостатин (Бостонская детская больница, США); ΑТN 161 (Айепиоп, США); АНГИОСТАТИН (Бостонская детская больница, США); 2-метоксиэстрадиол (Бостонская детская больница, США); ΖΌ 6474 (А81пФепеса, Великобритания); ΖΌ 6126 (Апдюдепе Ρйа^тасеийса18, Великобритания); ΡΡΙ 2458 (Ρπκα8, США); ΑΖ^ 9935 (А81нФепеса, Великобритания); ΑΖ^ 2171 (А81нФепеса, Великобритания); ваталаниб φΙΝΝ) (ΝουηγΠ8, Швейцария и §сйетшд АО, Германия); ингибиторы пути тканевого фактора (ЕйгеМеД, США); пегаптаниб (Ρίπτι) (ОПеаД 8аепсе8, США); ксанторизол (Университет Ионсей, Южная Корея); вакцина на генной основе УЕОР-2 (§спрр8 СПтс апД Ке8еагсй РоипДайоп, США); δΡν5.2 фиртаЛек, Канада); 8ЭХ 103 (Университет Калифорнии в Сан-Диего, США); РХ 478 (ТгсИХ, США); МЕТАСТАТИН (ЕйгеМеД, США); тропонин 1 (Гарвардский университет, США); δυ 6668 фиОЕЫ, США); ОXI 4503 (ОХЮЕКЕ, США); о-гуанидины (ЭЛпеп8Юпа1 ЕНагтасеиПсай, США); мотупорамин С (Университет Британской Колумбии, Канада); СЭЙ 791 (Се1Йесй Огоир, Великобритания); атипримод (ΡΙΝΝ) (О1ахо8тййКНпе, Великобритания); Е 7820 (Е18а1, Япония); СΥС 381 (Гарвардский университет, США); АЕ 941 (Ае1егпа, Канада); вакцина, ангиогенез (ЕйгеМеД, США); ингибитор активатора плазминогена урокиназы (ЭепДгеоп, США); оглуфанид φΙΝΝ) (Ме1тойе, США); ингибиторы ШР-1а1Га (Хепоуа, Великобритания); СЕР 5214 (Серйа1оп, США); ΒΑΥ КЕ8 2622 (Байер, Германия); АпдюсЛДш ДпКше, США); А6 (Апд81гот, США); КК 31372 (Корейский исследовательский институт химической технологии, Южная Корея); ОА 2286 (О1ахо8тНйК1ше, Великобритания); ЕНТ 0101 (ЕхопНй, Франция); СР 868596 (ΡΙΊ/ег, США); СР 564959 (О8Т, США); СР 547632 (ΡΙΊ/ег, США); 786034 (О1ахо8тййКНпе, Великобритания); ККИ 633 (Кшп Βκ^ιγ, Япония); система доставки лекарственного вещества, внутриглазной 2-метоксиэстрадиол (ЕйгеМеД, США); ангинекс (Университет Маастрихта, Нидерланды, и Университет Миннесоты, США); АВТ 510 (АЬЬой, США); МЬ 993 (№уагП8, Швейцария); УΕОI (Гго1еот Тесй, США); ингибиторы альфа-фактора некроза опухоли (Национальный институт старения,

- 77 023555

США); δυ 11248 (ΡΤίζβΓ, США и δυΟΕΝ США); АВТ 518 (АЬЬой, США); ΥΗ16 (Υ;ιιιΙ;ιϊ КопдсБапд, Китай); 8-3АРС (Бостонская детская больница, США и Еп1геМей, США); МКА КОК (1тС1опе δνκ^ιηκ, США); МКА альфа5 бета 1 (Рго1с1п Оеыди, США); ингибитор киназы КОК (СеШесН Сгоир, Великобритания, и 1оНпкоп & .Тойикоп, США); СРВ 116 (Университет Южной Флориды, США и Йельский университет, США); С8 706 (§апкуо, Япония); пролекарство комбретастатин А4 (Университет штата Аризона, США); хондроитиназа АС (ΙΒΕΧ, Канада); ΒΑΥ КЕ§ 2690 (Байер, Германия); АСМ 1470 (Гарвардский Университет, США, Такеба, Япония, и ТАР, США); АС 13925 (Адоигоп, США); тетратиомолибдат (Университет Мичигана, США); СС8 100 (Государственный университет Уэйна, США) СУ 247 (Ινν МеФса1, Великобритания); СКО 732 (СБопд Кип Оапд, Южная Корея); МКА, васкулярный эндотелиальный фактор роста (Хепоуа, Великобритания); ирсогладин (ΙΝΝ) (№рроп §Ыпуаки, Япония); КС 13577 (Ауепйк, Франция); \УХ 360 (ХУПех, Германия); скваламин (ρΙΝΝ) (Сепаега, США); КР1 4610 (δίιη;·ι, США); терапия рака (Маппоуа, Австралия); ингибиторы гепараназы (1п§1дЫ, Израиль); КЬ 3106 (Ко1оп, Южная Корея); Нопокю1 (Университет Эмори, США); 2К СОК (8сНеппд АС, Германия); 2К Апдю (8сНеппд АС, Германия); 2К 229561 (ХоуагШ, Швейцария, и 5>сНеппд АС, Германия); ХМР 300 (ХОМА, США); УСА 1102 (ТаМю, Япония); модуляторы рецептора УЕСР (Фармакопея, США); антагонисты УЕ-кадхерин-2 (1тС1опе 8у81ет8, США); вазостатин (Национальные институты здравоохранения, США); вакцина, Р1к-1 (1тС1опе 8у81ет8, США); ΤΖ 93 (Ткитига, Япония); Тит§1айп (Израильский госпиталь Бет, США); усеченный растворимый РЬТ 1 (рецептор васкулярного эндотелиального фактора роста 1) (Мегск & Со, США); лиганды Т1е-2 (Кедепегоп, США); ингибитор тромбоспондина 1 (Фонд здравоохранения, образования и исследований Пллегени, США); 2-бензолсульфамид, 4-(5-(4-хлорфенил)-3-(трифторметил)-1Нпиразол-1-ил)-; Атуа; С-Ме1. АУЕ 8062 ((2§)-2-амино-3-гидрокси-Х-[2-метокси-5-[(Ш)-2-(3,4,5триметоксифенил)этенил]фенил]пропанамид моногидрохлорид); метелимумаб (ρΙΝΝ) (иммуноглобулин С4, антитела (трансформирующий фактор роста человека бета.1 (человеческие моноклональные САТ 192.гамма.4-цепи)), дисульфид с человеческими моноклональными САТ 192.каппа-цепи, димер); лиганд Ρ1ΐ3; лиганд СО40; интерлейкин-2; интерлейкин-12; лиганд 4-1ВВ; антитела к 4-1ВВ; антагонисты ФНО и антагонисты к ФНО-рецептору, в том числе ФН-ОК/Рс, антагонисты ТХУЕАК и антагонисты ТХУЕАКК, в том числе Т\УЕАК-К./Рс; ТКАШ; антагонисты УЕСР, в том числе антитела к УЕСР; антагонисты рецептора УЕСР (в том числе УЕСР-К1 и УЕСР-К2, также известные как РЙ1 и Р1к1 или КОК); агонисты СО148 (называемые также ОЕР-1, ЕСКТР и РТРКТ, см. ТакайакЫ с соавт., 1. Ат. §ос. №рйго1. 10: 213545 (1999), включен в данный документ посредством ссылки для любых целей); ингибитор тромбоспондина 1 и ингибиторы одного или обоих из лигандов Т1е-2 или Т1е-2 (такой как Апд-2). В данной области известно несколько ингибиторов Апд-2, в том числе антитела к Апд-2, описанные в опубликованной патентной заявке США № 20030124129 (соответствует РСТ, заявка № \УО 03/030833) и патенте США № 6166185, содержание которых целиком включено в данный документ посредством ссылки. Кроме того, известны пептидные антитела к Апд-2, описанные, например, в опубликованной патентной заявке США № 20030229023 (соответствует заявке РСТ № \УО 03/057134) и опубликованной патентной заявке США № 20030236193, содержание которых целиком включено в данный документ посредством ссылки для любых целей.

Некоторые препаратам для терапии рака представляют собой, без ограничения:

талидомид и аналоги талидомида ^-(2,6-диоксо-3-пиперидил)фталимид); текогалан натрия (сульфатированный полисахарид пептидогликан); ΤΑN 1120 (8-ацетил-7,8,9,10-тетрагидро-6,8,11тригидрокси-1-метокси-10-[[октагидро-5-гидрокси-2-(2-гидроксипропил)-4,10-диметилпирано[3,4-й]1,3,6-диоксазоцин-8-ил]окси]-5,12-нафтацендион); сурадиста (7,7'-[карбонил-бис-[имино(1-метил-1Нпиррол-4,2-диил)карбонилимино(1 -метил-1Н-пиррол-4,2-диил)карбонилимино]]-бис-1,3нафталиндисульфоновая кислота, тетранатриевая соль); δυ 302; δυ 301; δυ 1498 ((Е)-2-циано-3-[4гидрокси-3,5-бис(1-метилэтил)фенил]-Н-(3-фенилпропил)-2-пропенамид); δυ 1433 (4-(6,7-диметил-2хиноксалинил)-1,2-бензолдиол); 8Т 1514; §К 25989; растворимый Т1е-2; производные 8ЕКМ, Рйагток; семаксаниб (ρΙΝΝ) (3-[(3,5-диметил-1Н-пиррол-2-ил)метилен]-1,3-дигидро-2Н-индол-2-он); δ 836; КС 8803; рестин; К 440 (3-(1-метил-1Н-индол-3-ил)-4-(1-метил-6-нитро-1Н-индол-3-ил)-1Н-пиррол-2,5дион); К 123942 (1-[6-(1,2,4-тиадиазол-5-ил)-3-пиридазинил]-Н-[3-(трифторметил)фенил]-4-пиперидинам ин); ингибитор пролилгидроксилазы; гены, активированные при прогрессировании (ргодгеккюп е1еуа1ей депек); приномастат (ΙΝΝ) (^)-2,2-диметил-4-[[п-(4-пиридилокси)фенил]сульфонил]-3тиоморфолинкарбогидрокса мовая кислота); NУ 1030; ИМ 3 (8-гидрокси-6-метокси-альфа-метил-1-оксо1Н-2-бензопиран-3-уксусная кислота); ΝΓ 681; ΝΓ 050; МЮ; МЕТН 2; МЕТН 1; манассантин В (альфа[ 1-[4-[5-[4-[2-(3,4-диметоксифенил)-2-гидрокси-1 -метилэтокси] -3 -метоксифенил]тетрагидро-3,4диметил-2-фуранил]-2-метоксифенокси]этил]-1,3-бензодиоксол-5-метанол); МКА КОК; моноклональное антитело альфа5бета3 интегрин; ΓΥ 290293 (2-амино-4-(3-пиридинил)-4Н-нафто[1,2-Ь]пиран-3карбонитрил); КР 0201448; КМ 2550; интегрин-специфические пептиды; INСN 401; СΥΚI 66475; СУК! 66462; гринстатин (101-354-плазмогенин (человека)); генная терапия ревматоидного артрита, рака предстательной железы, рака яичников, глиомы, эндостатин, колоректального рака, АТР ВТРР гены антиангиогенеза, ингибитор ангиогенеза или ангиогенез; ингибитор желатиназы, РК 111142 (4,5-дигидрокси-2гексеновая кислота, 5-метокси-4-[2-метил-3-(3-метил-2-бутенил)оксиранил]-1-оксаспиро[2.5]окт-6- 78 023555 иловый эфир); форфенимекс (Р1ЫЫ) (Б)-альфа-амино-3-гидрокси-4-(гидроксиметил)бензолуксусная кислота); антагонист фибронектина(1-ацетил-Ь-пролил-Ь-гистидил-Ь-серил-Ь-цистеинил-Ь-аспатамид); ингибитор рецептора фактора роста фибробластов; антагонист фактора роста фибробластов; РСЕ 27164 (7,7'-[карбонил-бис-[имино(1-метил-1Н-пиррол-4,2-диил)карбонилимино(1-метил-1Н-пиррол-4,2диил)карбонилимино]]-бис-1,3,5-нафталинтрисульфокислота, гексанатриевая соль); РСЕ 26752 (8,8'[карбонил-бис-[имино(1-метил-1Н-пиррол-4,2-диил)карбонилимино(1-метил-1Н-пиррол-4,2диил)карбонилимино]]-бис-1,3,6-нафталинтрисульфокислота); эндотелиальный полипептид II, активирующий моноциты; антисмысловой олигонуклеотид УЕОРК; антиангиогенный и трофический факторы; ангиостатический агент АЫСНОК; эндостатин; ангиогенный белок Эе1-1; СТ 3577; контортростатин; СМ 101; хондроитиназа АС; СОР 845; канстатин; ВБТ 2002; ВБТ 2001; ВЬБ 0597; ВВР 1000; АККЕБТПЫ; апомигрен (коллаген тип 1304-1388 ХУ (предшественник альфа-1-цепи человеческого гена СОЬ15А1)); ангиоингибин; ааАТШ; А 36; 9-альфа-фтормедроксипрогестерона ацетат ((6-альфа)-17-(ацетилокси)-9фтор-6-метилпрегн-4-ен-3,20-дион); 2-метил-2-фталимидиноглутаровая кислота (2-(1,3-дигидро-1-оксо2Н-изоиндол-2-ил)-2-метилпентандиовая кислота); меченное иттрием-90 моноклональное антитело ВС-1; семаксаниб (3-(4,5-диметилпиррол-2-илметилен)индолин-2-он) (С15 Н14 Ы2 О); РI 88 (фосфоманнопентаозосульфат); альвоцидиб (4Н-1-бензопиран-4-он, 2-(2-хлорфенил)-5,7-дигидрокси-8-(3-гидрокси-1метил-4-пиперидинил)-цис-(-)-) (С21 Н2О С1 Ы О5); Е 7820; Би 11248 (5-[3-фтор-2-оксо-1,2дигидроиндол-(32)-илиденметил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3-карбо новая кислота (2диэтиламиноэтил)амид) (С22 Н27 Р Ы4 О2); скваламин (холестан-7,24-диол, 3-[[3-[(4аминобутил)аминопропил]амино]-, 24-(гидросульфат), (3.бета,5.альфа,7.альфа.)-) (С34 Н65 Ы3 О5 Б); эриохром черный Т; АОМ 1470 (карбаминовая кислота, (хлорацетил)-, 5-метокси-4-[2-метил-3-(3-метил2-бутенил)оксиранил]-1-оксаспиро[2,5]окт-6-иловый эфир, [3К-[3 альфа, 4 альфа(2К,3К), 5бета, ббета]]) (С19 Н28 С1 Ы О6); ΆΖΌ 9935; ВШР 1000; ΛΖΌ 2171; АВТ 828; КБ-интерлейкин-2; Утероглобин; А 6; ЫБС 639366 (1-[3 -(диэтиламино)-2-гидроксипропиламино] -4-(оксиран-2-илметиламино)антрахинонф умарат) (С24 Н29 Ы3 О4. С4 Н4 О4); КУ 616; слитые белки против ЕО-В; НШ 77; тропонин I; моноклональное антитело ВС-1; БРУ 5.2; ЕК 68203; СКЭ 731 (3-(3,4,5-триметоксифенил)-2(Е)-пропеновая кислота (3К,4Б,5Б,6К)-4-[2(К)-метил-3(К)-3(К)-(3-метил-2-бутенил)оксиран-2-ил]-5-метокси-1-оксаспиро[2.5]окт-6-иловый эфир) (С28 Н38 О8); ]МС-1С11; ааАТШ; БС 7; СМ 101; ангиокол; Крингл 5; СКЭ 732 (3-[4-[2-(диметиламино)этокси]фенил]-2(Е)-пропеновая кислота) (С29 Н41 Ы О6); и 995; канстатин; БО 885; СТ 2584 (1-[11-(додециламино)-10-гидроксиундецил]-3,7-диметилксантин)(С30 Н55 Ы5 О3); салмосин; ЕМАР II; ТХ 1920 (1-(4-метилпиперазино)-2-(2-нитро-1Н-1-имидазолил)-1-этанон) (С10 Н15 Ы5 О3); Альфа-ν бета-х-ингибитор; СШК 11509 (Ы-(1-пропинил)глицил [Ы-(2-нафтил)]глицил-[Ы(карбамоилметил)]глицин бис-(4-метоксифенил)метиламид) (С36 Н37 Ы5 О6); ВБТ 2002; ВБТ 2001; В 0829; РК 111142; 4,5-дигидрокси-2(Е)-гексеновая кислота (3К,4Б,5Б,6К)-4-[1(К),2(К)-эпокси-1,5диметил-4-гексенил]-5-метокси-1-оксаспиро[2.5]октан-6-иловый эфир (С22 Н34 07); и ингибиторы киназы, в том числе, но без ограничения, Ы-(4-хлорфенил)-4-(4-пиридинилметил)-1-фталазинамин; 4-[4-[[[[4хлор-3-(трифторметил)фенил]амино]карбонил]амино]фенокси]-Ы-метил-2-пиридинкарбоксамид; Ы-[2(диэтиламино)этил]-5-[(5-фтор-1,2-дигидро-2-оксо-3Н-индол-3-илиден)метил]-2,4-диметил-1Н-пиррол-3карбоксамид; 3-[(4-бром-2,6-дифторфенил)метокси]-5-[[[[4-(1-пирролидинил)бутил]амино]карбонил]амино]-4-изатиазолкарбоксамид; Ы-(4-бром-2-фторфенил)-6-метокси-7-[(1-метил-4-пиперидинил)метокси]-4-хиназолинамин; 3-[5,6,7,13-тетрагидро-9-[(1-метилэтокси)метил]-5-оксо-2Н-индено[2,1а]пирроло[3,4-с]карбазол-12-ил]пропиловый эфир Ы,Ы-диметилглицина; Ы-[5-[[[5-(1,1-диметилэтил)-2оксазолил]метил]тио]-2-тиазолил]-4-пиперидинкарбоксамид; Ы-[3-хлор-4-[(3-фторфенил)метокси]фенил]-6-[5-[[[2-(метилсульфонил)этил]амино]метил]-2-фуранил]4-хиназолинамин; 4-[(4-метил-1пиперазинил)метил]-Ы-[4-метил-3-[[4-(3-пиридинил)-2-пиримидинил]амино]-фенил]бензамид; Ы-(3хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6-[3-(4-морфолинил)пропокси]-4-хиназолинамин; Ы-(3-этинилфенил)-6,7бис(2-метоксиэтокси)-4-хиназолинамин; Ы-(3-((((2К)-1-метил-2-пирролидинил)метил)окси)-5-(трифторметил)фенил)-2-((3-(1,3-оксазол-5-ил)фенил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; 2-(((4-фторфенил)метил)амино)-Н-(3-((((2К)-1-метил-2-пирролидинил)метил)окси)-5-(трифторметил)фенил)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-[3-(азетидин-3-илметокси)-5-трифторметилфенил]-2-(4-фторбензиламино)никотинамид; 6-фтор-Ы-(4-(1-метилэтил)фенил)-2-((4-пиридинилметил)амино)-3-пиридинкарбоксамид2-((4-пиридинилметил)амино)-Ы-(3-(((2Б)-2-пирролидинилметил)окси)-5-(трифторметил)фенил)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(3-(1,1-диметилэтил)-1Н-пиразол-5-ил)-2-((4-пиридинилметил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(3,3-диметил-2,3-дигидро-1-бензофуран-6-ил)-2-(4-пиридинилметил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(3-((((2Б)-1-метил-2-пирролидинил)метил)окси)-5-(трифторметил)фенил)-2-((4-пиридинилметил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; 2-((4-пиридинилметил)амино)-Ы-(3-((2-(1-пирролидинил)этил)окси)-4(трифторметил)фенил)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(3,3-диметил-2,3-дигидро-1Н-индол-6-ил)-2-((4пиридинилметил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(4-(пентафторэтил)-3-(((2Б)-2-пирролидинилметил)окси)фенил)-2-((4-пиридинилметил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(3-((3-азетидинилметил)окси)-5(трифторметил)фенил)-2-((4-пиридинилметил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(3-(4-пиперидинилокси)-5-(трифторметил)фенил)-2-((2-(3-пиридинил)этил)амино)-3-пиридинкарбоксамид; Ы-(4,4-диметил1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-7-ил)-2-(1Н-индазол-6-иламино)никотинамид; 2-(1Н-индазол-6-иламино)- 79 023555

М-[3-(1 -метилпирролидин-2-илметокси)-5 -трифторметилфенил] никотинамид; N-[1 -(2-диметиламиноацетил)-3,3-диметил-2,3-дигидро-1н-индол-6-ил]-2-(1н-индазол-6-иламино)никотинамид; 2-(1ниндазол-6-иламино)-Н-[3-(пирролидин-2-илметокси)-5-трифтор-метил-фенил]никотинамид; №(1-ацетил3,3-диметил-2,3-дигидро-1н-индол-6-ил)-2-(1н-индазол-6-иламино)никотинамид; №(4,4-диметил-1 оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-7-ил)-2-(1н-индазол-6-иламино)никотинамид; N-[4-(трет-бутил)-3 (3-пиперидилпропил)фенил][2-(1Н-индазол-6-иламино)(3-пиридил)]карбоксамид; К-[5-(третбутил)изоксазол-3-ил][2-(1н-индазол-6-иламино)(3-пиридил)]карбоксамид; N-144 трет-бутил)фенил][2(1н-индазол-6-иламино)(3-пиридил)]карбоксамид и ингибиторы киназы, раскрытые в патентах США № 6258812; 6235764; 6630500; 6515004; 6713485; 5521184; 5770599; 5747498; 5990141; публикации США № и8 20030105091; и публикациях по договору о патентной кооперации № \0 01/37820; \0 01/32651; \0 02/68406; \0 02/66470; \0 02/55501; \0 04/05279; \0 04/07481; \0 04/07458; \0 04/09784; \0 02/59110; \0 99/45009; \0 98/35958; \0 00/59509; \0 99/61422; \0 00/12089 и \0 00/02871, каждая из указанных публикаций включена в данный документ посредством ссылки для любых целей.

Антигенсвязывающий белок, предлагаемый в настоящем документе, можно также применять в комбинации с ингибитором фактора роста. Примерами таких препаратов являются, без ограничения, агенты, ингибирующие ответы ЕОР-Р (рецептора эпидермального фактора роста), такие как антитела к ЕОР-Р, антитела к ЕОР и молекулы, ингибирующие ЕОР-Р; ингибиторы васкулярного эндотелиального фактора роста (УЕОР), такие как рецепторы УЕОР и молекулы, способные ингибировать УЕОР; и ингибиторы рецепторов егЬВ2, такие как органические молекулы или антитела, которые связываются с рецептором егЬВ2, например, нЕРСЕРТ1™ (ОепеШесН, 1пс.). Ингибиторы ЕОР-Р описаны, например, в патенте США № 5747498, \0 98/14451, \0 95/19970 и \0 98/02434.

Конкретными вариантами комбинированной терапии являются, например, антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8, в сочетании с таксолом или таксенами (например, доцетакселом и таксотером) или с модифицированным паклитакселом (например, Абраксан и 0рахю), доксорубицином и/или Авастином® для лечения рака молочной железы; антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8 человека, в сочетании с ингибиторами мультикиназы (МК1, 8и1еШ, №хауаг, или 706) и/или доксорубицином для лечения рака почек; антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8, в сочетании с цисплатином и/или облучением для лечения плоскоклеточной карциномы; антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8, в сочетании с таксолом и/или карбоплатином для лечения рака легких.

Помимо применения в онкологии, связывающие белки, предлагаемые в настоящем документе, могут служить для лечения или диагностики воспалительных заболеваний. При воспалительных заболеваниях, в патологии которых участвуют макрофаги, способность антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гт8, снижать уровни макрофагов в других внутриклеточных компонентах указывает на его полезные свойства в лечении таких заболеваний. В нескольких исследованиях предполагается, что антигенсвязывающий белок, связывающий с-Гт8 человека, может участвовать в модулировании воспалительных заболеваний, например, таких как воспалительный артрит, атеросклероз и рассеянный склероз.

Другие заболевания, которые можно лечить, включают, без ограничения, воспалительные заболевания кишечника, Болезнь Крона, язвенный колит, ревматоидный спондилит, анкилозирующий спондилит, артрит, псориатический артрит, ревматоидный артрит, остеоартрит, экзему, контактный дерматит, псориаз, токсический шок, сепсис, септический шок, эндотоксиновый шок, астму, хроническое воспалительное заболевание легких, силикоз, саркоидоз легких, остеопороз, рестеноз, сердечную и почечную реперфузию, тромбоз, гломерулонефрит, диабет, реакцию трансплант против хозяина, отторжение аллотрансплантата, рассеянный склероз, мышечную дегенерацию, мышечную дистрофию, болезнь Альцгеймера и инсульт.

Антигенсвязывающие белки применимы также для лечения кахексии, поскольку считается, что провоспалительные цитокины, продуцируемые макрофагами, участвуют в развитии кахексии (8\гее1 с соавт., 2002, 1. 1ттипо1. 168:392-399; Воббаей с соавт., 2006, Сигг. 0рт. 0псо1. 8:335-340 и \апд с соавт. 2006 1. Епбосгшо1о§у 190:415-423).

В случае возможности применения антигенсвязывающих белков в лечении различных воспалительных заболеваний, их можно применять отдельно либо в комбинации с другими противовоспалительными препаратами. Примерами таких препаратов являются, без ограничения ингибиторы фактора некроза опухоли ФНО-альфа, такие как препараты ФНО (например, ниМ1РА™, РЕМ1САЭЕ™) и молекулы иммуноглобулина - рецептора к ФНО (такие как ЕNВРЕ^™), ингибиторы 1Ь-1, антагонисты рецепторов или растворимые 1Ь-1га (например, Кинерет или ингибиторы интерлейкин-конвертирующего фермента (1СЕ), ингибиторы СОХ-2 и ингибиторы металлопротеазы, такие как описано выше и лиганды альфа-2дельта (например, РРЕОАВАЬШ™ и ХЕиР0ТШ™).

В определенных осуществлениях антигенсвязывающие белки могут служить также для терапии различных костных заболеваний, вследствие важной роли с-Гт8 в развитии и активации остеокластов (например, Ро1Г, Р. с соавт. (2008), 1. Вю1. Сйет. 55:340-349, и \а1агп, А. с соавт. (2006) 1. Вопе Мшега1 Ме(аЬоЙ8т 24:274-282). Таким образом, антигенсвязывающие белки могут быть полезны для лечения пацентов с различными нарушениями, связанными с повышенной потерей костной массы, или пацентов,

- 80 023555 у которых требуется формирование новой кости, даже если повышенной активности остеокластов не наблюдается. Увеличение активности остеокластов происходит при многих остеопенических расстройствах, для лечения которых применимы предлагаемые антигенсвязывающие белки, и к которым относятся остеопения, остеопороз, периодонтит, болезнь Педжета, потеря костной массы при длительной неподвижности, литические местастазыы в кости и артрит, в том числе ревматоидный артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит и другие состояния, включающие костную эрозию. Известно, что при некоторых онкологических заболеваниях повышается активность остеокластов и возникает резорбция костей, например, это рак молочной железы и предстательной железы. С потерей костной массы связана также множественная миелома, которая возникает в костном мозге.

В отношении метастазов рака в кости ингибирование взаимодействия КСФ-1/с-Гт8 антиген связывающими белками, предлагаемыми в настоящем документе, может оказывать терапевтическое действие согласно различным механизмам. К ним относятся ингибирование инвазии и метастазирования за счет потери матрикс-разрушающих ферментов, продуцированных ТАМ, подавление обсеменения костного мозга опухолевыми клетками за счет снижения числа и функций остеокластов, ингибирование роста метастазов опухоли за счет упомянутого выше уменьшение ТАМ и ингибирование остеолиза, связанного с метастатическим поражением костей (0Ημ, Н. с соавт. (2008), Мо1еси1аг Саисег Тйегареи11с8. 5:26342643). Антигенсвязывающие белки могут оказывать терапевтическое действие в отношении остеосаркомы, которая представляет собой онкологического заболевания кости.

Кроме того, возможно лечение других состояний, связанных с низкой костной массой, в том числе различных форм остеопороза, включая, без ограничения, остеопороз, вызванный глюкокортикоидами; остеопороз, вызванный трансплантацией; остеопороз, связанный с химиотерапией (например, остеопороз, индуцированный химиотерапией); остеопороз, вызванный неподвижностью; остеопороз вследствие механической разгрузки; и остеопороз вследствие применения противосудорожных препаратов. Другие заболевания костей, которые можно лечить указанным образом, включают заболевания, связанные с почечной недостаточностью и алиментарными, желудочно-кишечными и/или печеночными расстройствами.

Возможно лечение различных форм артрита, примерами являются остеоартрит и ревматоидный артрит. Антигенсвязывающие белки пригодны также для лечения системной потери костной массы, связанной с артритом (например, ревматоидным артритом). При лечении артрита могут быть полезны инъекции в антигенсвязывающего белка в поврежденный участок или в соседние участки. Например, возможны инъекции антигенсвязывающего белка непосредственно в воспаленный сустав или рядом с ним, что стимулирует восстановление поврежденной кости на этом участке.

Антигенсвязывающие белки, описанные в настоящем документе, также можно применять для целей восстановления кости. Например, для замедления остеолиза, вызванного продуктами износа искусственных суставов, ускорения заживления трещин костей и более эффективного включения костных трансплантатов в окружающую живую кость, в которую трансплантат был внедрен.

Для целей лечения костных нарушений антигенсвязывающие белки, предлагаемые в настоящем документе, можно вводить отдельно или в сочетании с другими лечебными средствами, например, в сочетании с препаратами для терапии рака, препаратами, ингибирующими активность остеокластов, или с другими агентами, повышающими активность остеобластов. Например, антигенсвязывающие белки можно вводить в организм онкологических пацентов, проходящих лучевую терапию или химиотерапию. Хемотерапевтическими агентами для сочетания с антигенсвязывающими белками могут быть антрациклины, таксол, тамоксифен, доксорубицин, 5-фторурацил, оксалоплатин, Уе1сабе® ([(1Е)-3-метил-1[[(2δ)-1-оксо-3-фенил-2-[(пиразинилкарбонил)амино]пропил]амино]бутил]борная кислота) и/или другие лекарства на основе малых молекул, применяемые при лечении рака.

Для лечения указанных выше состояний, приводящих к потере костной массы, антигенсвязывающие белки можно применять либо отдельно, либо в сочетании с терапевтически эффективным количеством (анаболического) препарата, ускоряющего рост костей или антирезорбтивного препарата, включая, без ограничения: морфогенетические факторы костей, обозначаемые ВМР-1-ВМР-12; члены семейства трансформирующих факторов роста ТСР-Р; факторы роста фибробластов РСР-1-РСР-10; ингибиторы интерлейкина-1 (в том числе ГЬ-1га, антитела к ГЬ-1 и антитела к рецепторам ГЬ-1); ингибиторы ФНОальфа (в том числе этанерцепт, адалибумаб и инфликсимаб); ингибиторы ЕАЫК-лиганда (в том числе растворимый ЕАЫК, остеопротегерин и антагонистические антитела, специфически связывающие ЕАЫК или ЕАЫК-лиганд), ингибиторы Экк-1 (например, антитела к Экк-1), паратиреоидный гормон, простагландины серии Е, бисфосфонаты и минеральные вещества, усиливающие рост костей, такие как фторид и кальций. Анаболические препараты, которые можно комбинировать с антигенсвязывающими белками и их функциональными фрагментами, включают паратиреоидный гормон и инсулиноподобный фактор роста ^СР), причем последний предпочтительно образует комплекс с ЮР-связывающим белком. Антагонист рецептора Ю-1, пригодный для такой комбинированной терапии, описан в \У0 89/11540, а подходящий растворимый ФНО рецептор-1 описан в \У0 98/01555. Примеры антагонистов ЕАЫК лигандов раскрыты, например, в \У0 03/086289, \У0 03/002713, в патентах США № 6740511 и 6479635. Все упомянутые патенты и патентные заявки включены в данный документ посредством ссылки.

- 81 023555

Антигенсвязывающие белки могут также служить для ингибирования ангиогенеза (например, в опухолях). Например, антигенсвязывающие белки можно применять для подавления образования кровеносных сосудов в тех случаях, когда воспалительный ангиогенез в основном происходит за счет РОР-2. Согласно некоторым осуществлениям, антигенсвязывающие белки применяют для ингибирования ангиогенеза в опухолях с низким уровнем УЕОР и высокой васкулярной плотностью.

Способы диагностики.

Предлагаемые антигенсвязывающие белки могут служить для целей диагностики - для обнаружения, диагностирования или контроля за ходом заболеваний и/или состояний, связанных с с-Гт8. Они позволяют обнаруживать присутствие с-Гт8 в образце с помощью классических иммуногистологических методов, известных специалистам (например, Тц88еп, 1993, Ргасбсе апб Тйеогу оГ Еп/уте Iттииοа88ау8, Уо1 15 (ред.: К.Н. Вигбоп апб Р.Н. νаи КшррепЬегд, ЕЕеСег, Ат81егбат); Ζο1а, 1987, Мοиοс1οиа1 Άиΐ^Ьοб1е8: А Мапиа1 оГ ТесЬтдие8, р. 147-158 (СКС Рге88, Шс.); ШПк-теп с соавт., 1985, I. Се11. Вю1. 101:976-985; .Ебкапеп с соавт., 1987, ί. Се11 Вю1. 105:3087-3096). Обнаружение с-Гт8 возможно ηι νί\Ό или т νίΙΐΌ.

Диагностическая область применения, предлагаемая в настоящем документе, включает обнаружение экспрессии с-Гт8 и связывания лигандов с с-Гт8 с помощью антигенсвязывающих белков. Примерами методов, пригодных для обнаружения присутствия с-Гт8, являются методы иммунологического анализа, такие как твердофазный иммуноферментный анализ (ТИФА) и радиоиммуноанализ (РИА).

Для целей диагностики в антигенсвязывающий белок обычно вводят метку в составе детектируемей группы, содержащей метку. К подходящим группам, содержащим метку, относятся, без ограничения, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, ³Н, ¹⁴С, ^ИЫ, ³⁵Б, ⁹⁰Υ, ⁹⁹Тс, '+, ¹²⁵ф ¹³¹Σ), флуоресцентные группы (например, ФИТЦ, родамин, лантанидсодержащие люминофоры), ферментативные группы (например, пероксидаза хрена, Р-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные группы, биотинилированные группы, или заранее определенные полипептидные эпитопы, узнаваемые вторичной репортерной группой (например, последовательности пар лейциновых застежек, участки связывания вторичных антител, домены связывания металла, эпитопные тэги). Согласно некоторым осуществлениям, группа, содержащая метку, соединена с антигенсвязывающим белком через спейсеры различной длины для снижения потенциальных стерических препятствий. В данной области известны различные способы внесения меток в белки, они могут быть использованы.

В другом аспекте антигенсвязывающий белок можно применять для идентификации клетки или клеток, экспрессирующих с-Гт8. В конкретном осуществлении антигенсвязывающий белок имеет в своем составе группу, содержащую метку, и обнаруживается связывание меченого антигенсвязывающего белка и с-Гт8. В другом конкретном осуществлении связывание антигенсвязывающего белка и с-Гт8 обнаруживается Нг νί\Ό. В другом конкретном осуществлении антигенсвязывающий белок, связывающий сГт8, выделяют и определяют с помощью способов, известных в данной области. См., например, Наг1о\у апб Е-апе, 1988, Аиΐ^Ьοб^е8: А ЬаЬогаФгу Мапиа1, Ыете Υο^к: Со1б Брппд НагЬог (ред. 1991 и периодические дополнения); Шкп Е. СоНдап, еб., 1993, Сиггей Рго1осо18 Ш Iттииο1οду Ыете Υο^к: Ш1т \УПеу & Боп8.

В другом аспекте изобретения предлагается обнаружение присутствия исследуемых молекул, конкурирующих с антигенсвязывающим белком за связывание с-Гт8. Примером такого анализа является определение количества свободного антигенсвязывающего белка в растворе, содержащем некоторое количество с-Гт8 в присутствии или в отсутствие испытуемых молекул. Увеличение количества свободного антигенсвязывающего белка (т.е. антигенсвязывающего белка, не связанного с с-Гт8) указывает на способность исследуемой молекулы конкурировать с антигенсвязывающим белком за связывание с-Гт8. В одном осуществлении антигенсвязывающий белок имеет в своем составе группу, содержащую метку. В качестве альтернативы, метка присутствует в исследуемой молекуле, при этом контролируется количество свободных исследуемых молекул в присутствии и в отсутствие антигенсвязывающего белка.

Способы лечения: фармацевтические рецептуры, пути введения.

Предлагаются также способы применения антигенсвязывающих белков. В некоторых способах пациенты получают антигенсвязывающие белки. Антигенсвязывающий белок ингибирует связывание КСФ-1 и с-Гт8 человека. Введение антигенсвязывающего белка, в соответствии с некоторыми способами, также способно ингибировать аутофосфорилироване с-Гт8 человека за счет ингибирования связывания КСФ-1 и с-Гт8 человека. Далее, в определенных способах при введении эффективного количества хотя бы одного антигенсвязывающего белка в организм снижается хемотаксис моноцитов. Согласно некоторым способам, миграция моноцитов в опухоль ингибируется при введении эффективного количества антигенсвязывающего белка. Кроме того, накопление опухоль-ассоциированных макрофагов в опухоли или поврежденной ткани может ингибироваться при введении антигенсвязывающего белка, предлагаемого в настоящем документе.

Предлагаются также фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество одного или ряда антигенсвязывающих белков и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель, солюбилизатор, эмульгирующий агент, стабилизатор и/или адъювант. Кроме того, предполагаются способы лечения пациента введением такой фармацевтической композиции. Термин пациент относится к человеку.

- 82 023555

Компоненты рецептур нетоксичны для реципиентов в тех количествах и при тех концентрациях, при которых они используются. В конкретных осуществлениях предлагаются фармацевтические композиции, включающие терапевтически эффективное количество антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гпъ человека.

В определенных осуществлениях компоненты рецептур предпочтительно нетоксичны для реципиентов в тех количествах и при тех концентрациях, при которых они используются. В определенных осуществлениях фармацевтическая композиция может содержать компоненты рецептур, которые служат для модификации, поддержания или сохранения таких свойств композиции как, например, величина рН, осмолярность, вязкость, прозрачность, цвет, изотоничность, запах, стерильность, стабильность, скорость растворения или высвобождения, адсорбция или пенетрация. В таких осуществлениях к приемлемым компонентам рецептур относятся, без ограничения, аминокислоты (такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин); противомикробные вещества; антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия); буферы (такие как боратный, бикарбонатный, Трис-нС1, цитратный, фосфатный или на основе другой органической кислоты); создающие объем компоненты (такие как маннит или глицин); комплексоны (такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)); комплексообразующие вещества (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды; дисахариды; и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины); белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины); красители, ароматизаторы и разбавители; эмульгаторы; гидрофильные полимеры (такие как поливинилпирролидон); низкомолекулярные полипептиды; солеобразующие противоионы (такие как натрий); стабилизаторы (такие как бензалконий хлорид, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенэтиловый спирт, метилпарабен, полипарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или пероксид водорода); растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль); многоатомные спирты (такие как маннит или сорбит); суспендирующие средства; ПАВ или увлажняющие средства (такие как плюроники, ПЭГ, эфиры сорбитана, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат, тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапол); вещества, повышающие стабильность (такие как сахароза или сорбит); вещества, повышающие тоничность (такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия); индифферентные основы; разбавители; среды и/или фармацевтические адъюванты. См., КЕМШОТ0№8 РнАКМАСЕиТ1САЬ 8СIЕNСЕ8, 18 издание, (ред. А.К Сеитю), 1990, Маск РиЬНкЬтд ^пра^.

В определенных осуществлениях специалист в данной области может составить оптимальную фармацевтическую композицию в зависимости, например, от предполагаемого пути введения, формы препарата и желаемой дозировки. См., например, КЕМШОТ0№8 РнАКМАСЕиТ1САЕ 8СIЕNСЕ8, см. выше. В определенных осуществлениях от состава композиции может зависеть фазовое состояние, стабильность, скорость высвобождения в организме и скорость выведения предлагаемых антигенсвязывающих белков. В определенных осуществлениях первичная основа или носитель в фармацевтической композиции может быть водной либо неводной природы. Например, приемлемой основой или носителем может быть вода для инъекций, физиологический раствор или искусственная спинномозговая жидкость, возможно с добавлением других веществ, обычно присутствующих в композициях для парентерального введения. Другие примеры основ - нейтральный буферированный физиологический раствор или физиологический раствор в смеси с сывороточным альбумином. В конкретных осуществлениях фармацевтические композиции содержат буфер Трис с рн около 7.0-8.5 или ацетатный буфер с рн около 4.0-5.5, а также могут содержать сорбит или приемлемый заменитель. В определенных осуществлениях композиции антигенсвязывающего белка, связывающего с-Тщ! человека, можно приготовить для хранения, смешивая заданную композицию с желаемой степенью чистоты и необязательные компоненты рецептуры (КЕМШОТ0№8 РнАКМАСЕиТЮАЬ 8СIЕNСЕ8, см. выше) в виде лиофилизированного брикета или водного раствора. Далее в определенных осуществлениях антигенсвязывающий белок, связывающий сПп8 человека, может быть компонентом рецептуры в форме лиофилизата с применением соответствующих сред, таких как сахароза.

Фармацевтические композиции могут быть предназначены для парентерального введения. В качестве альтернативы, композиции могут быть предназначены для ингаляций или для доставки через ЖКТ, например, перорально. Приготовление таких фармацевтически приемлемых композиций входит в компетенцию специалиста в данной области.

Компоненты рецептур предпочтительно присутствуют в концентрациях, приемлемых для данного варианта введения. В определенных осуществлениях добавляются буферные растворы для поддержания физиологических значений рн или несколько более низких рн, обычно в интервале приблизительно от 5 до 8.

Если рассматривается парентеральное введение, терапевтические композиции можно приготовить в виде апирогенного приемлемого для парентерального введения водного раствора, содержащего заданный антигенсвязывающий белок, связывающий сТЛ человека, в фармацевтически приемлемой основе. Оптимальной основой для парентеральной инъекции является стерильная дистиллированная вода, где антигенсвязывающий белок, связывающий с-Тп! человека, находится в виде стерильного изотонического

- 83 023555 раствора, который хранится соответствующим образом. В определенных осуществлениях приготовление включает смешение заданных молекул с агентом, таким как микросферы для инъекций, частицы, биоразрушаемые частицы, полимеры (такие как полимолочная кислота или полигликолевая кислота), микросферы или липосомы, которые могут обеспечить регулируемое или замедленное высвобождение продукта при введении методом пролонгированной инъекции. В определенных осуществлениях применяют гиалуроновую кислоту, оказывающую промотирующий эффект на длительность циркуляции в кровотоке. В определенных осуществлениях применяют имплантируемые устройства для доставки антигенсвязывающего белка.

Определенные фармацевтические композиции предназначены для ингаляций. В некоторых осуществлениях антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гт8 человека, входят в рецептуру в виде сухого порошка для ингаляции. В конкретных осуществлениях растворы антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гт8 человека, для ингаляций могут содержать также сжатый газ для аэрозольного введения. В определенных осуществлениях растворы могут распыляться. Введение препарата в легкие и способы приготовления составов описаны в Международной патентной заявке № РСТ/и894/001875, которая включена в данный документ посредством ссылки и которая описывает введение химически модифицированных белков через легкие. Некоторые составы можно вводить перорально. Антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гт8 человека, которые вводят таким способом, могут содержать либо не содержать носители, которые применяются обычно для приготовления сухих лекарственных форм, таких как таблетки и капсулы. В определенных осуществлениях капсула может быть предназначена для высвобождения активной части состава в той точке ЖКТ, где биодоступность максимальна, а пресистемное разложение минимально. Для повышения эффективности абсорбции антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гт8 человека, вводят дополнительные компоненты. Состав может включать разбавители, ароматизаторы, низкоплавкий воск, растительное масло, смазки, суспендирующие средства, агенты, повышающие распадаемость таблетки, и связующие.

Некоторые фармацевтические композиции включают эффективное количество одного или ряда антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гт8 человека, в смеси с нетоксичными средами, пригодными для изготовления таблеток. Растворяя таблетки в стерильной водной среде или другой подходящей основе, можно приготовить растворы в виде единичной дозы. Соответствующие среды включают, без ограничения, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат или бикарбонат натрия, лактозу, фосфат кальция; или связующие, такие как крахмал, желатин или камедь; или смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк.

Дополнительные фармацевтические композиции очевидны для специалиста, в том числе рецептуры, включающие антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гт8 человека, в форме, предполагающей замедленную или регулируемую доставку. Специалистам в данной области также известны и способы составления рецептур, содержащих средства замедленной или регулируемой доставки, такие как липосомы в качестве носителя, биоразрушаемые микрочастицы или пористые микросферы, а также пролонгированные инъекции. См., например, Международная патентная заявка № РСТ/и893/00829, которая включена в данный документ посредством ссылки и описывает регулируемое высвобождение пористых полимерных микрочастиц для доставки фармацевтических композиций. Препараты для замедленного высвобождения могут содержать полупроницаемые полимерные матрицы в виде изделий определенной формы, например, пленки или микрокапсулы. Матрицы для замедленного высвобождения могут включать полиэфиры, гидрогели, полилактиды (раскрытые в патенте США № 3773919 и Европейской патентной заявке, публикация № ЕР 058481, которые включены в данный документ посредством ссылки), сополимеры Ь-глутаминовой кислоты и гамма-этил-Ь-глутамата (81йтап с соавт., 1983, Вюро1утет8 2:547556), поли(2-гидроксиэтилметакрилат) (Ьапдет с соавт., 1981, 1. Вютей. Ма!ег. Ке8. 15:167-277 и Ьапдет, 1982, СНет. ТесН. 12:98-105), этиленвинилацетат (Ьапдет с соавт., 1981, см. выше) или поли-Э(-)-3гидроксимасляную кислоту (Европейская патентная заявка, публикация № ЕР 133988). В композиции для замедленного высвобождения могут входить липосомы, которые получают одним из нескольких методов, известных в данной области. См., например, Ерр81еш с соавт., 1985, Ргос. №-Н1. Асай. δα. υδΛ 82:3688-3692; Европейская патентная заявка, публикации № ЕР 036676; ЕР 088046 и ЕР 143949, включены посредством ссылки.

Фармацевтические композиции для применения ш У1уо обычно поставляются в виде стерильного препарата. Стерилизацию можно осуществлять фильтрацией через стерильные фильтрационные мембраны. Если композиция лиофилизирована, стерилизацию этим методом можно проводить до или после лиофилизации и восстановления. Композиции для парентерального введения можно хранить в лиофилизированной форме или в виде раствора. Обычно парентеральные композиции помещают в контейнер со стерильным входным отверстием, например, пакет для раствора для внутривенного введения или флакон с пробкой, протыкаемой иглой для подкожных инъекций.

В определенных осуществлениях клетки, экспрессирующие рекомбинантный антигенсвязывающий белок, раскрытый в настоящем документе, инкапсулированы для его получения (см. 1пуе81. 0рН(На1то1 У18 δ^ 43:3292-3298, 2002 и Ргос. №И. Асай. δс^еηсе8 103:3896-3901, 2006).

В определенных рецептурах антигенсвязывающий белок присутствует в концентрации по крайней

- 84 023555 мере 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или 150 мг/мл. В некоторых рецептурах присутствует буфер, сахароза и полисорбат. Один из примеров рецептуры содержит 50-100 мг/мл антигенсвязывающего белка, 5-20 мМ ацетата натрия, 5-10% (мас./об.) сахарозы и 0.002-0.008% (мас./об.) полисорбата. Определенные рецептуры содержат, например, 65-75 мг/мл антигенсвязывающего белка в 9-11 мМ натрийацетатном буфере, 8-10% (мас./об.) сахарозы и 0.005-0.006% (мас./об.) полисорбата. Величина рН некоторых из таких рецептур находится в интервале 4.5-6. Другие рецептуры имеют величину рН 5.0-5.5 (например, рН 5.0, 5.2 или 5.4).

После приготовления рецептуры фармацевтической композиции ее можно хранить в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества, кристаллов или в виде высушенного или лиофилизированного порошка. Такие рецептуры можно хранить готовыми к применению или в форме (например, лиофилизат), которая требует приготовления непосредственно перед приемом. Предлагаются также наборы для приготовления единичной дозы. В определенные наборы входит первый контейнер с высушенным белком и второй контейнер с рецептурой на водной основе. В определенных осуществлениях предлагаются наборы, включающие одно и многокамерные предварительно наполненные шприцы (например, шприцы с жидкостями и двухкамерные шприцы). Терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей антигенсвязывающий белок, связывающий сГтк человека, для применения будет зависеть, например, от терапевтической ситуации и цели терапии. Специалист в данной области способен оценить, что правильная дозировка для лечения будет меняться, частично в зависимости от конкретной молекулы, показаний к применению антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гтк человека, пути введения, а также размера (масса тела, поверхность тела или размер органа) и/или состояния (возраст и общее состояние здоровья) пациента. В определенных осуществлениях лечащий врач может изменять дозировку и путь введения для получения оптимального терапевтического эффекта.

Типовые дозировки находятся в интервале от около 1 мкг/кг до около 30 мг/кг или более, в зависимости от упомянутых выше факторов. Согласно конкретным осуществлениям, дозировки находятся в интервале от 10 мкг/кг до около 30 мг/кг, необязательно от 0.1 до около 30 мг/кг, либо от 0.3 до около 20 мг/кг. В некоторых вариантах применения дозировка варьирует от 0.5 мг/к до 20 мг/кг. В некоторых случаях антигенсвязывающий белок дозируют в размере 0.3, 0.5, 1, 3, 10 или 20 мг/кг. Схема применения в некоторых режимах лечения 0.3 мг/кг раз в неделю, 0.5 мг/кг раз в неделю, 1 мг/кг раз в неделю, 3 мг/кг раз в неделю, 10 мг/кг раз в неделю или 20 мг/кг раз в неделю.

Частота приема зависит от фармакокинетических параметров конкретного антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гтк человека, в данной рецептуре препарата. Как правило, лечащий врач вводит композицию, пока не достигнута дозировка, при которой получается желаемый эффект. Поэтому композицию можно вводить в виде единичной дозы или двух или более доз (которые могут содержать или не содержать одинаковое количество желаемых молекул) за некоторый промежуток времени или непрерывно в виде инфузии через имплантированное устройство или катетер. Правильную дозировку можно установить с помощью корреляций доза-эффект. В определенных осуществлениях антигенсвязывающие белки вводят пациентам в течение длительного периода времени. Длительное введение антигенсвязывающего белка снижает иммунные и аллергические побочные эффекты, обычно связанные с приемом антигенсвязывающих белков, не являющихся полностью человеческими, например антител против человеческого антигена, выращенных в организме животного, например, не полностью человеческое антитело или нечеловеческое антитело, полученное не в человеческом организме.

Пути введения фармацевтической композиции соответствуют известным вариантам, например, перорально; путем внутривенных, внутрибрюшинных, внутрицеребральных (внутри-паренхимных), интрацеребровентрикулярных, внутримышечных, внутриглазных, внутриартериальных, интрапортальных инъекций или инъекций в место повреждения; с помощью систем замедленного высвобождения или имплантируемых устройств. В определенных осуществлениях композицию вводят путем болюсного вливания или непрерывно - путем инфузии или через имплантированное устройство.

Подразумевается, кроме того, и местное введение композиции путем имплантации мембраны, тампона или другого материала, который адсорбирует или инкапсулирует молекулы препарата. В определенных осуществлениях, где участвует имплантированное устройство, его можно имплантировать в любую подходящую ткань или орган, при этом доставка молекул препарата происходит за счет диффузии, болюса с фиксированным временем высвобождения или непрерывно.

Может возникнуть необходимость ех νί\Ό применения фармацевтических композиций антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гтк человека, в соответствии с изобретением. В таких случаях производят воздействие фармацевтической композицией антигенсвязывающих белков, связывающих с-Гтк человека, на ткани или органы, которые были удалены из организма пациента, после чего клетки, ткани и/или органы снова имплантируют в организм.

В частности, антигенсвязывающие белки, связывающие с-Гтк человека, можно доставлять в организм, имплантируя определенные клетки, подвергшиеся операциям генной инженерии описанными здесь способами экспресии и секреции полипептида. В определенных осуществлениях такие клетки могут быть клетками животного или человека и могут быть аутологичными, гетерологичными или ксеноген- 85 023555 ными. В определенных осуществлениях клетки могут быть иммортализованы. В других осуществлениях для снижения вероятности иммунной реакции клетки можно инкапсулировать, что предотвращает их инфильтрацию в окружающие ткани. В других осуществлениях материалы для инкапсулирования, как правило, биосовместимые полупроницаемые полимерные оболочки или мембраны, через которые может происходить высвобождение белковых продуктов, но не происходит разрушение клеток под действием иммунной системы пациента или других факторов окружающих тканей.

Приведенные ниже примеры, в том числе проведенные эксперименты и полученные результаты, служат только для целей иллюстрации и не должны считаться ограничением области притязаний по приложенной формуле изобретения.

Примеры

Анализы.

Анализы с клетками острой миелогенной лейкемии АМЬ-5.

С целью выяснения способности антител, направленных против с-Гтк, связывать и проявлять функциональную активность в блокировании взаимодействия с-Гтк/КСФ-1 проводили биотестирование клеток. В данном анализе количественно измеряли вызванную КСФ-1 пролиферацию клеточной линии миеломоноцитов человека АМЬ5, зависящей от фактора роста (ЬшуегкПу неаИЪ №1\\όγ1<, Торонто, Онтарио). Т.е. при анализе определяется ингибирование данной пролиферации при введении агентов, блокирующих этот путь. Клетки АМЬ-5 инкубировали с 10 нг/мл КСФ-1 в присутствии снижающихся концентраций антитела. Через 72 ч пролиферацию клеток измеряли с помощью красителя Аламар блу™ (Βίοкоигсе) - косвенным методом, основанным на метаболической активности клетки.

Анализы костного мозга.

В аналогичном анализе для определения способности антител давать перекрёстную реакцию с с-Гшз яванского макака антитела испытывали по отношению к вызванной КСФ-1 пролиферацией клетокмоноцитов из первичного костного мозга макак. Аналогично анализу пролиферации АМЬ-5, клетки костного мозга макак инкубировали с 10 нг/мл КСФ-1 в присутствии снижающихся концентраций антитела. Через 72 ч измеряли пролиферацию клеток с помощью красителя Аламар блу.

Клоны антител, использованные в экспериментах.

В приведенных ниже экспериментах применяли три клона антител, обозначенные 1.109, 1.2, 2.360, которые представляют собой тетрамеры, включающие две полных тяжелых цепи и две полных легких цепи. Клон 1.109 содержит две тяжелых цепи н1 (8ЕЦ ГО N0: 4) и две легких цепи Ь1 (8ЕЦ ГО N0: 36), клон 1.2 содержит две тяжелых цепи Н8 (8ЕЦ ГО N0: 11) и две легких цепи Ь8 (8ЕЦ ГО N0: 43), а клон 2.360 содержит две тяжелых цепи Н24 (8ЕЦ ГО N0: 27) и две легких цепи Ь22 (8ЕЦ ГО N0: 57).

Пример 1. Получение гибридом с-Гшз.

При осуществлении возможно применение технологии ХепоМоике® для разработки полностью человеческих моноклональных антител против с-Гтк человека. Для целей иммунизации применяли с-ГшзРс - внеклеточный домен с-Гтк человека (остатки 1-512, см. фиг. 8; §ЕЦ ГО N0: 1) с С-терминальным доменом Рс человека. Помимо этого, для тестирования антител против с-Гтк применяли с-Гтк-БХ внеклеточный домен с-Гтк человека (остатки 1-512) с С-терминальным доменом-лейциновой застежкой (Атдеп Ьо1 #45640-43), а также клеточную линию 293Т/с-Гтк, клеточную линию эмбриональной человеческой почки, трансформированную аденовирусом человека типа 5, трансфецированную полноразмерным с-Гтк человека.

Мыши ХепоМюе® группа 1 (1дС,) и группа 2 (1§С₂) были иммунизированы/повторно иммунизированы с-Гтк-Рс. Титры сыворотки определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА), и клетки селезенок мышей обеих групп 1 и 2 сливали для получения гибридом. Полученные поликлональные супернатанты тестировали на связывание с-Гтк-БХ методом ТИФА и по отношению к клеткам 293Т/с-Гтк методом флюорометрического объемного микроанализа (РМАТ). Было исследовано всего 828 положительных супернатантов, определялось ингибирование связывания КСФ-1 и клеток сГтк/293Т методом активированной флуоресценцией сортировки клеток (РАС8). Полученные 168 положительных супернатантов далее испытывали на ингибирование КСФ-1-индуцированной пролиферации клеток острой миелогенной лейкемии (АМЬ)-5. На основании тестирования было выявлено 33 гибридомы, являющихся антагонистами активности КСФ-1, которые были отобраны для клонирования.

Пример 2. Исследование гибридом противс-Гтк.

Из 33-х отобранных гибридом 29 (19 изотипа 1§С1 и 10 изотипа 1дО2) успешно клонировали, и супернатанты указанных клонов испытывали на ингибирование связывания КСФ-1 с клетками 293Т/с-Гтк и на ингибирование КСФ-1-индуцированной пролиферации клеток АМЬ-5. Анализ связывания в системе В1асоге низкого разрешения с мономерным белком с-Гтк показал, что величины К_с указанных 29 гибридом против с-Гтк находятся в интервале 0.1-43 нМ (см. табл. 8). Антитела 1§С против человеческих антигенов иммобилизовали через аминогруппы на четырех проточных кюветах сенсорного элемента. Неочищенные образцы гибридом разбавляли вдвое и закрепляли на поверхности антиЧдО. Анализировали мономерный с-Гтк (остатки 1-512)-рШк с концентрацией 125 нМ. Проводили генеалогический анализ для 29 гибридом (см. фиг. 2).

- 86 023555

Таблица 8

Анализ связывания в системе Ыасоге низкого разрешения для гибридом анти-с-Гпъ

Клон МКА	Клон МКА	ΜΙ/Мс)		Кп (нМ)
1.109.1	1	3.85Е+О5	4.36Е-05	0.1
2.131.2	2	4.30Е+04	1.00Е-05	0.2
2.508.1	3	7.49Е+04	5.28Е-05	0.7
1.33.1.1	4	9.89Е+04	Ы6Е-04	1.2
1.2.1	5	8.17Е+05	ЫЗЕ-ОЗ	1.4
1.42.3	6	6.60Е+05	1.О7Е-ОЗ	1.6
1.64.1	7	2.55Е+05	6.40Е-04	2.5
1.30.2	8	4.06Е+05	1.40Е-03	3.4
1.134.1	9	1.53Е+О5	7.03Е-04	4.6
2.475.2	10	3.00Ε+05	1.40Е-03	4.7
2.103.1	11	7.51Е+04	3.64Е-04	4.8
1.39.3	12	1.13Е+О5	6.08Е-04	5.4
1.72.2	13	1.ОЗЕ+О5	5.68Е-04	5.5
2.3603	14	6.05Е+04	3.38Е-04	5.6
1.13.2	15	1.20Е+05	7.73Е-04	6.4
2.65.2	16	1.68Е+05	1.60Е-03	9.5
1.143.2	17	5.50Е+04	5.59Е-04	10
1.90.2	18	1.93Е+05	2.00Е-03	10
1.144.1	19	2.30Е+05	2.50Е-03	11
1.26.1	20	2.39Е+05	2.63Е-03	11
2.369.3	21	1.00Е+05	1.38Е-03	14
1.16.2	22	1.29Е+05	2.96Е-03	23
1.66.1	23	2.39Е+05	5.50Е-03	23
2.5501	24	3.00Ε+05	7.24Е-03	24
2.291.2	25	2.86Е+05	9.30Е-03	33
1.27.3	26	2.99Е+05	1.00Е-02	33
1.34.3	27	3.65Е+05	1.31Е-02	36
ЫЗЫ	28	5.31Е+04	2.15Е-03	41
2.534.1	29	3.45Е+05	1.50Е-02	43

На основании результатов анализов ингибирования связывания и ингибирования пролиферации для дальнейшего исследования было отобрано 16 из 29 супернатантов (11 изотипов ί§01 и 5 изотипов ί§02). Перекрестную реакцию на с-Гпъ мышей и яванских макак исследовали по ингибированию соответственно КСФ-1-индуцированной пролиферации мышиных клеток ЭВМ (гак- и тус-иммортализованных моноцитарных клеточных линий, полученных из культуры Эе\1ег костного мозга мышей) и первичных клеток костного мозга яванских макак. В отношении пролиферации клеток, ни один из супернатантов не ингибировал пролиферацию мышиных клеток ЭВМ (данные не приведены), но 13 из 16 супернатантов ингибировали пролиферацию клеток костного мозга яванских макак. Супернатанты испытывали также на ингибирование КСФ-1-индуцированной пролиферации моноцитов СЭ14' из периферической крови человека и повторно биотестировали с клетками АМЬ-5 (см. раздел выше). Полученные результаты приведены в табл. 9 и 10. В качестве положительного контроля брали антитело 2-4А5 (Вюкоигсе), являющееся антителом крысы против с-Ттк человека.

Четыре антитела изотипа ЦЦ характеризовались величиной активности <10 пМ при биотестировании с клетками АМЬ-5, а три антитела - клоны ίΌ № 1.2.1, 1.109.3 и 1.134.1 - ингибировали пролиферацию клеток костного мозга яванских макак. Из этих трех антител наиболее высокая аффинность к с-Ттк в анализе связывания в системе В1асоге была выявлена для клонов 1.2.1 и 1.109.3. Два антитела изотипа ЦС - 2.103.3 и 2.360.2 - продемонстрировали высокую активность в анализах с АМЬ-5 и с клетками костного мозга яванских макак и близкую аффинность к с-Ттк в анализе на В1асоге. Пять антител, имеющих высокую активность в анализах с АМЬ-5 и с клетками костного мозга яванских макак, также имели различия в последовательностях. На основании факторов активности, аффинности и различий для даль- 87 023555 нейшей работы и исследований были выбраны клоны 1.2.1, 1.109.3 и 2.360.2.

Таблица 9

Результаты биотестирования супернатантов гибридом анти-с-Гт8

Клон Ш	Биотестирование с клетками костного мозга яванских макак (среди,, и=2) 1С;о (пМ)	Биотестирование с моноцитами СО14+ человека (и=1) 1С»(нМ)	Биотестирование с АМЬ-5 (среди., и=3 или 4) 1См (рМ)
1.2.1	40	<7	6
1.26.1	33	13	27
1.27.2	933	200	73
1.30.3	267	67	40
1.39.2	67	67	27
1.42.3	200	67	20
1.64.2	отс.*	13	4
1.66.2	47	67	27
1 109.3	73	20	5
1.134.1	40	<7	7
1.143.1	360	не опр.**	100
2.103.3	27	133	53
2.360.2	53	67	27
2.475.2	167	67	40
2.508.2	отс.*	133	20
2.534.2	отс.*	47	20
2-4А5	8333	667	187
с-Гтз-Рс	617	556	210
антитело к КСФ-1	3333	667	20

Отс. = отсутствие активности, перекрестной реакции нет;

** не опр. = анализ не проводили.

Таблица 10

Резюме по результатам биотестирования супернатантов гибридом анти-с-Гт8

Клон	Половина максимальной запрещающей концентрации (1Ся», нг/мл)
Бнотестнрование с клетками костного мозга яванских макак (среди., п=2)	Биотести рован не с моноцитами СО 14+ человека (п=1)	Биотести рованне с АМЬ-5 (среди., и=3 или 4)	Различие АМЬ-5 х
1.2	6	<1	0.9	4
1.26.1	5	2	4	24
1.27.2	140	30	11	44
1.30.3	10	10	6	24
1.39.2	30	10	4	24
1.42.3		10	3	9
1.64.2	отс.*	2	0.6	8
1.66.2	7	10	4	12
1.109.3	11	3	0.7	1.4
1.134.1	6	<1	1	3
1.143.1	54	не опр.**	15	119
2.103.1	4	20	8	19
2.360.2	8	10	4	11
2.475.2	25	10	6	18
2.508.2	отс.*	20	5	20
2.534.2	отс.*	7	3	12
2-4 А5	1250	100	28
с-£ггб- Рс	100	90	34
анти-К СФ-1	500	100	3 (п=1)

Отс. = отсутствие активности, перекрестной реакции нет;

** не опр. = анализ не проводили.

Пример 3. Экспрессия и исследование антител.

Гены тяжелой и легкой цепи клонов антител 1.2, 1.109 и 2.360 выделяли и клонировали в конструкции для экспрессии как тяжелые цепи 1дО₂ и каппа-легкие цепи. Антитела получали путем транзиентной экспрессии в клетках С08/РКВ и очищали методом хроматографии с белком А. Выходы антител составляли 3.6-7.4 мг/л, что находится в пределах обычных величин для данной системы экспрессии.

Активность клонированных антител и антител, экспрессированных гибридомами сравнивали в анализе пролиферации клеток АМЬ-5. Клетки АМЬ-5 инкубировали с 10 нг/мл КСФ-1 в присутствии сни- 88 023555 жающихся концентраций антитела. Через 72 ч измеряли пролиферацию клеток с помощью красителя Аламар блу (см. фиг. 3). Рекомбинантные антитела обладали близкой нейтрализующей активностью к супернатантам гибридом, а превращение 1.2 и 1.109 из ΙβΟ1 в ΙβΟ2 не оказывало заметного воздействия. Рекомбинантные антитела также показали высокую нейтрализующую активность в анализе пролиферации с клетками яванских макак, как показано на фиг. 4. Как и в случае анализа пролиферации с клетками АМЬ-5, клетки костного мозга макак инкубировали с 10 нг/мл КСФ-1 в присутствии снижающихся концентраций антитела. Через 72 ч определяли пролиферацию с помощью красителя Аламар блу.

Анализ очищенных антител методами электрофореза на ДД^^-ПААТ и эксклюзионной хроматографии (ЭХ) привел к обычным результатам, за исключением легкой цепи клона 1.109, который мигрировал на ДДС-'№1-ПААГ на большее расстояние, чем предполагалось. Это исключение не было неожиданностью, так как в СГОГО ранее была отмечена, последовательность сайта ^связанного гликозилирования Миграция на большее расстояние по сравнению с ожидаемым позволяет предположить, что данный сайт гликозилирования занят.

Секвенирование Юконца антител подтвердило, что сигнальные пептиды были процессированы, как предполагалось, и что Ютерминальные глутаминовые остатки тяжелой цепи вероятно циклизовались с образованием пироглутаминовой кислоты, как и следовало ожидать. После ферментативного дегликозилирования проводили масс спектрометрический анализ индивидуальных цепей антител. Массы тяжелых цепей подтвердили, что Ютерминальные глутаминовые остатки были циклизованы в пироглутаминовую кислоту и что С-терминальные остатки лизина отсутствуют. Других посттрансляционных модификаций не обнаружено. Массы легких цепей клонов 1.2 δΜ и 2.360 подтвердили их интактность и отсутствие посттрансляционных модификаций. Для легкой цепи клона 1.109 масса не была получена, возможно вследствие устойчивости сайта гликозилирования к ферментативному отщеплению, что делает невозможным определение точной массы.

Пример 4. Коррекция соматических мутаций ^М).

Сравнение последовательностей клонов ΙβΟ2 антител 1.2, 1.109 и 2.360 с известными зародышевыми последовательностями обнаружили соматические мутации, которые приведены в табл. 11, при этом нумерация в таблице соответствует зрелым последовательностям, показанным на фиг. 1А и 1В.

Таблица 11

Соматические мутации по отношению к наиболее близкой зародышевой последовательности

Цепь антитела	соматическая мутация	остаток в зародышевой последователь ности	комментарии
1.2 ЬС	8ег-78 в РЕЗ	ТНг
1 2 НС	Нет
1.109 ЬС	Азп-28 в С1Л<1; Азп-45 в РК2	Азр: Ьуз	Азп-28 создает сайт Ν-связанного гликозилирования
1109 НС	Нет
2,360 ЬС	ΟΙη-45 в РК2	Ьуз
2 360 НС	Уа1-79 в РКЗ	А1а

Для проверки возможности конвертации соматических мутаций в остатки зародышевых последовательностей были генерированы соответствующие конструкции и проведена транзиентная экспрессия антител в клетках С0δ/ΡКВ. Антитела были очищены хроматографией с белком А, их обозначение клоны ΙβΟ₂ 1.2 8М, 1.109 δΜ и 2.360 δΜ ^М = излеченная соматическая мутация). Для 1.109 ЬС было изготовлено две конструкции. В первой конструкции А8и-28 превращали в А8р-28 для удаления сайта Ю гликозилирования, а во второй конструкции А8и-28 превращали в А8р-28, а А8и-45- в Ьу8-45. Выходы составили 1.7-4.5 мг/л, что находится в обычных пределах для данной системы экспрессии.

Исследование очищенных антител методом электрофореза на ДДС-На-ПААГ и методом эксклюзионной хроматографии (ЭХ) привела к обычным результатам. Исследование на ДДС-Ш-ПААГ двух форм клона ΙβΟ₂ 1.109 δΜ показало, что миграция легкой цепи проходила быстрее, чем в случае легкой цепи исходного антитела, что подтвердило удаление сайта Юсвязанного гликозилирования. Секвенирование Юконца подтвердило, что Юконцы цепей антитела были интактны, а масс спектрометрическое исследование показало, что соматические мутации были конвертированы в остатки зародышевых линий.

Пример 5. Характеристика антител со скорректированными соматическими мутациями.

После коррекции соматической мутации, очищенные антитела ΙβΟ₂ повторно испытывали в анализах пролиферации клеток АМЬ-5 костного мозга макак. Величины Κ.\₀ в анализе пролиферации АМЬ-5 не изменялись для клонов ΙβΟ₂ 1.2 δΜ и 1.109 δΜ ^М = излеченная соматическая мутация) по отношению к исходному антителу ΙβΟ₂, но было обнаружено десятикратное снижение активности для клонированного антитела ΙβΟ₂ 2.360 δΜ (см. табл. 12).

Аффинность антител со скорректированными соматическими мутациями по отношению к мономерному белку с-Гт8 определяли методом поверхностного плазменного резонанса на приборе Биакор 3000. Аффинность клона антитела ΙβΟ₂ 1.2 δΜ существенно не менялось по отношению к исходному

- 89 023555 антителу, в то время как аффинность клонов антител 1дО₂ 1.109 8М и 2.360 8М были в два раза ниже, чем у соответствующих исходных антител (см. табл. 12).

Далее исходные (РТ) и мутированные (8М) 1дО₂-антитела испытывали на способность ингибировать связывание ¹²⁵1-1-КСФ-1 с клетками АМЬ-5. Первоначально было определено, что кажущаяся аффинность ¹²⁵1-1-КСФ-1 по отношению к клеткам АМЬ-5 составляет 46 пМ, а величина Κ_Ι для немеченого Н-КСФ-1 составила 17.8 пМ (см. пример 10). Как показано в табл. 12, величина Κ_Ι для антитела 1.2 находилась в соответствии с величиной ΙΟ₅₀, определенной в биотестировании с клетками АМЬ-5, и для 1.2 8М получены аналогичные результаты. Величина Κ_Ι для антитела 1.109 также соответствовала величине ΙΟ₅₀, и для антитела 1.109 8М изменений не обнаружено, несмотря на двукратное снижение аффинности к мономерному с-Тпк по данным Вхатоте. Антитела 2.360, как и антитела 1.2 и 1.109 не проявляли ингибирования, а 2.360 8М были менее эффективными ингибиторами, чем исходные антитела.

Таблица 12

Свойства исходного антитела (РТ) по сравнению с мутированным (8М) антителом

Антитело	Биотестирование с АМЬ-5 1С5о(пМ)	Бнотестированне с клетками костного мозга яванских макак 1С5о(пМ)	Ингибирование (Κι) связывания П51-КСФ-1 е АМЬ-5 (пМ)	Аффинность (Ко) пот отношении) к мономерному с-Гт$ по данным В)асоге (пМ)
1.2	27	78	8.5	516
1.2 8М*	12	81	11.5	548
1.109	27	16	13.5	51
1.109 8М*		23	9.7	102
2.360	60	67	-160	535
2.360 8М*			-900	1200

* 8М = излеченная соматическая мутация.

Активность антител 1.2 8М далее исследовали в анализах пролиферации с моноцитами костного мозга человека или яванских макак. Для анализа с человеческими клетками их инкубировали с 11.1 нг/мл рекомбинантного человеческого КСФ-1 в присутствии снижающихся концентраций антитела 1.2 8М. Для анализа с клетками яванского макака клетки инкубировали с 29.63 нг/мл рекомбинантного человеческого КСФ-1 в присутствии снижающихся концентраций антитела 1.2 8М. Контрольные опыты проводили с человеческим I§О2-аитителом. Через 7 суток определяли пролиферацию клеток на приборе СеИТйег-ОЬ (Ρ^οтеда, Маά^8οη νΙ), измеряя уровень АТР. Величину Ιί.’₅₀ антитела рассчитывали, обрабатывая кривую методом нелинейной регрессии. В табл. 13 приведены результаты указанной серии экспериментов.

Таблица 13

Активность клона антитела 1.2 8М в анализе пролиферации клеток

Моноциты костного мозга	1С50 для 1.2 8М в присутствии ЬКСФ-1 (пМ)
опыт 1	опыт 2	опыт 3	среднее	δϋ
Человек	15.5	20.1	10.9	15.5	4.6
Яванский макак	42.55	26.01	22.90	32.73	13.89

Пример 6. Ингибирование фосфорилирования с-Тпк-тирозина.

Для демонстрации способности МКА против с-Тп! Ι^₂ 1.109, 1.2 и 2.360 полностью или почти полностью ингибировать ответ фосфотирозина (рТуг) клетки 293Т/с-Тп8 обрабатывали указанными антителами в течение 1 ч в различных концентрациях при температуре 37°С перед стимуляцией КСФ-1.

Различные концентрации МКА ^О^ полученные разбавлением титрованием, составляли 1.0, 0.1, 0.01, 0.001 и 0.0001 нг/мл. В качестве контроля использовали неблокирующие моноклональные антитела МКА к с-Тпк 3-4А4 (Έ^οιπόο, Ιηΐί.) и нерелевантные антитела НСЭ39 М105 в концентрации по 1.0 нг/мл. Бессывороточные клетки 293Т/с-Тп8 обрабатывали каждым из МКА Ι^₂ (РТ) в различных концентрациях, перечисленных выше, при этом для каждой концентрации в десятикратном разбавлении проводили стимуляцию КСФ-1 в течение 5 мин и при концентрации 50 нг/мл. После стимуляции собирали цельноклеточные лизаты, проводили иммунопреципитацию поликлональнами антителами к с-Тп8 С20 (8айа ίτιιζ В^есНш^^у, Шс.) при 4°С, оставляя на ночь, затем анализировали методом вестернблоттинга с генерическими антителами к рТуг 4О10 (Ир81а1е ВюЮсНгю^ду) и антителами к с-Тпк С20 соответственно для определения уровня фосфорилирования тирозина с-Тп! и непосредственно с-Тп8.

Для выращивания клеток 293Т/с-Тп8 на чашках 24х 10 см при 37°С в 5% С0₂ отбирали одиннадцать флаконов Т175 (~50-60%-ная конфлюэнтность) по 4 мл трипсина на флакон (О^Ьсο-Iην^ΐ^οдеη) и переносили в 70 мл среды ЭМЕМ (О^Ьсο)/10% РВ8 (Шн Рюкаемсе!). На каждую 10-см чашку помещали 10 мл среды и инокулировали 2 мл отобранных клеток. Среду ЭМЕМ/-РВ8 готовили в течение 1 ч при 37°С. Культуральную среду удаляли с 10-см чашек путем тщательного отсасывания, удаляя при этом по возможности больше РВ8-содержащей среды. Добавляли 10 мл среды ЭМЕМ/-РВ8 и инкубировали смесь в течение 1 ч при 37°С.

После выдерживания в бессывороточной среде в течение 1 ч при 37°С, среду удаляли. Для обработ- 90 023555 ки антителами и минус-АЬ контроля использовали либо по 4.0 мл последовательно разбавленных образцов, содержащих антитело, либо только среду ОМЕМ/-РВ§, после чего снова инкубировали в течение 1 ч при 37°С, таким образом время выдержки в бессывороточной среде достигало 2 ч. Данные по предварительной обработке антителами и стимуляции лигандом приведены в табл. 14.

Таблица14

Чашка	Предварительная обработка антителом	Стимуляция лигандом
#1	ϋΜΕΜΑΡΒδ (мину с АЬ)	только среда
#2	ОМЕМ-РВ8 (минус АЬ)	КСФ-1
#3	КЛОН 1.109®: 1.0 мкг/мл	только среда
#4	КЛОН 1.2® 1.0 мкг/мл	только среда
#5	КЛОН 2.360 @1.0 мкг/мл	только среда
#6	3-4А4(® 1.0 мкг/мл	только среда
#7	М105@1.0 мкг/мл	только среда
#8	КЛОН 1.109® 1.0 мкг/мл	КСФ-1
#9	КЛОН 1.109®:0.1 мкг/мл	КСФ-1
#10	КЛОН 1.109 (οι 0.01 мкг/мл	КСФ-1
#11	КЛОН 1.109 @ 0.001 мкг/мл	КСФ-1
#12	КЛОН 1.109 @ 0.001 мкг/мл	КСФ-1
#13	КЛОН 1.2® 1.0 мкг/мл	КСФ-1
#14	КЛОН 1.2® 0.1 мкг/мл	КСФ-1
#15	КЛОН 1.2 @ 0.01 мкг/мл	КСФ-1
#16	КЛОН 1.2® 0.001 мкг/мл	КСФ-1
#17	КЛОН 1.2 ® 0.0001 мкг/мл	КСФ-1
#18	КЛОН 2.360® 1,0 мкг/мл	КСФ-1
#19	КЛОН 2.360® 0.1 мкг/мл	КСФ-1
#20	КЛОН 2.360 ®' 0.01 мкг/мл	КСФ-1
#21	КЛОН 2.360 @ 0.001 мкг/мл	КСФ-1
#22	КЛОН 2.360 @ 0.0001 мкг/мл	КСФ-1
#23	3-4А4® 1.0 мкг/мл	КСФ-1
#24	М105® 1.0 мкг/мл	КСФ-1

Свежий флакон КСФ-1 (К&О §ук1етк/216-МС/Ьо1 СС093091) с концентрацией 50 нг/мкл (25 мкг/флакон) разводили в 500 мкл фосфатного буфера РВ§ (С1Ьсо)/0.1% бычьего сывороточного альбумина (В8А, §1дта) и выдерживали на льду. Разбавление исходного раствора КСФ-1 в отношении 1:1000 (60 мкл) готовили в среде ОМЕМ/-РВ§ (60 мл) приблизительно за 5 мин до окончания обработки антителами. Клетки 293Т/с-Ттк инкубировали с 50 нг/мл КСФ-1 в течение 5 мин при 37°С. Супернатанты удаляли и добавляли 2 мл холодного буфера для лизиса (100 мл РВ§/1% Тритон, 100 мкл 0.5 М ЭДТА, 100 мкл 1.0 М ΝηΕ 200 мкл 0.5 М бета-глицерофосфата, 500 мкл ванадата натрия (100х), 10.0 мкл окадаевой кислоты (10000х) и 4 таблетки ингибитора Сотр1е1е Рго1еаке). Лизаты (2.0 мл) объединяли с 30 мкл 50% белка А/С на 8ерйагоке (Атегкйат) и инкубировали 1 ч при 4°С на качающейся платформе для удаления неспецифически связывающихся белков. После центрифугирования фракций супернатанты декантировали в свежие пробирки объемом 15 мл.

Иммунопреципитацию цельноклеточных лизатов проводили действием 2.5 мкг/мл антитела С20 против с-Ттк (25 мкл; 0.2 мкг/мкл). Смеси антитело-клеточный лизат инкубировали, оставляя на ночь, при 4°С на качающейся платформе для зондирования суммарного с-Ттк. Добавляли ослиные антитела к антигенам кролика ^С/НКР (1:10000 в блокирующем растворе; 1асккоп) и снова инкубировали 30 мин при 4°С. Иммунокомплексы анализировали методом электрофореза на ДДС-Ыа-ПААГ и методом иммуноблоттинга. Вестерн-блот анализы проводили с антителами к рТуг 4С10 или с антителами С20 против с-Ттк соответственно для определения рТуг с-Ттк и суммарного с-Ттк.

Как показано на фиг. 5, клоны ΙβΟ₂ (РТ) 1.109, 1.2 и 2.360 проявили способность ингибировать лиганд-индуцированный рТуг/с-Ттк в системе с 293Т3/с-Ттк. Обработка 0.1 мкг/мл (8.3 нМ) клона ΙβΟ₂ (РТ) 1.109 или 1.2 в течение 1 ч перед стимуляцией КСФ-1 снижала сигнал фосфотирозина до уровня фона. С другой стороны, клон ΙβΟ₂ (РТ) 2.360 оказывал равное ингибирующее действие при 1.0 мкг/мл (83 нМ). Тем не менее обработка любым из антител при концентрации 0.01 мкг/мл (0.83 нМ) или менее не приводила к ингибированию рТуг. В отличие от этого, неблокирующие антитела 3-4А4 против с-Ттк и нерелевантные антитела НСЭ39 М105, присутствующие в максимальной дозе (1.0 мкг/мл) не оказывали воздействия на лиганд-индуцированный сигнал рТуг по сравнению с контролем - МКА/+КСФ-1. Таким образом, ингибирование образования рТуг непосредственно связано с блокированием связывания КСФ-1.

В предположении, что трансфецированные клетки 293Т/с-Ттк, использованные в данных анализах, сохраняли ранее измеренную поверхностную плотность с-Ттк, равную ~30000 рецепторов на клетку, ~3 млн клеток будут содержать ~90х10 с-Ттк, что значительно меньше величины ~5.0х 10¹¹ МКА в 4.0 мл предварительно обработанного образца при концентрации 0.1 мкг/мл. Так как антитела МКА присутствуют в ~10000-кратном избытке по отношению к мишени, насыщение имеющегося с-Ттк достаточно ве- 91 023555 роятно. Это означает, что клон (РТ) 1.109 или 1.2 в концентрации 8.3 нМ эффективно блокирует сигнал КСФ-1 в концентрации 50 нг/мл или 1.0 нМ, что соответствует мольному отношению около 10:1 (МКА: с-Гт8). Пороговое значение эффективности клонов (РТ) 1.109 и 1.2 для данных систем вероятно расположено между 0.1 и 0.01 мкг/мл (0.83-8.3 нМ).

Обработка 1.0 мкг/мл МКА 1дС₂ (РТ) без добавления КСФ-1 не привела к появлению сигнала рТуг выше уровня фона. Предыдущие опыты со всеми тремя исследованными формами 1дС₂ (РТ) в концентрации 10 мкг/мл также не выявили сигнала рТуг в тех же условиях. Агонистической активности, связанной с указанными МКА, не обнаружено.

Пример 7. Ингибирование лиганд-индуцированного рТуг/с-Гт8 с помощью форм РТ и δМ 1дС₂.

Задачей данного исследования было определение наличия функциональных изменений в возвращенных к зародышевым последовательностям формах ^М) клонов 1дС₂ 1.109, 1.2 и 2.360, по сравнению с соответствующими исходными формами (РТ). Для приготовления клеток 293Т/с-Гт8 для опыта клетки, выращенные из пяти флаконов Т175 (~80-90%-ная конфлюэнтность), отбирали с 4 мл трипсина на флакон и переносили в 75 мл среды ИМЕМ с 10% ΡΒδ. На каждую из 24х 10-см чашек помещали 9 мл среды и инокулировали 3 мл отобранных клеток. Среду ^МЕМ/-РВδ готовили и/или нагревали 1 ч при 37°С. Культуральную среду удаляли с 10-см чашек путем тщательного отсасывания, удаляя при этом по возможности больше ΡΒδ-содержащей среды. Добавляли 10 мл среды ^МЕМ/-РВδ и инкубировали смесь в течение 1 ч при 37°С. Готовили холодный буфер для лизиса и хранили на льду.

Титрованные моноклональные антитела в соответствии с табл. 15 готовили и хранили при комнатной температуре.

Таблица 15

Титрование моноклональных антител 1дС₂ против с-Гт8

МКА (мкг/мкл)	Использованный объем	ОМЕМ/- ГВЗ
Клон 1.109 РТ (0.41)	14,6 мкл	6,0 мл
Клон 1.109 ЗМ (О) (0.34)	17,6 мкл	6,0 мл
Клон 1.109 8М (Р/О) (0.58)	10,3 мкл	6,0 мл
Клон 1.2 РТ (1 57)	3,8 мкл	6,0 мл
Клон 1.2 ЗМ (0.35)	17,1 мкл	6,0 мл
Клон 2.360 РТ (0.41)	14,6 мкл	6,0 мл
Клон 2.360 8М(0.55)	10,9 мкл	6,0 мл
3-4А4 (0.2)	15 мкл	3,0 мл

Испытывали серию последовательных разбавлений антител (300 мкл + 2.7 мл ^МЕМ/-ΡΒδ) в интервале 1.0 мкг/мл до 0.1 мкг/мл для каждого МКА. После выдерживания в бессывороточной среде 1 ч при 37°С, среду удаляли и готовили предварительно обработанные антитела и контроль минус-АЬ аналогично описанному в табл. 13. Предварительная обработка антител и стимуляция лигандом описаны ниже в табл. 16.

- 92 023555

Таблица 16

Чашка	Предварит, обработка антителом	Стимуляция лигандом
1	ОМЕМ/-РВ8 (мине· с АЬ)	только среда
2	ОМЕМ/-РВ8 (мине· с АЬ)	КСФ-1
3	3-4А42; 1.0 мкг/мл	КСФ-1
4	Клон 1.109(2; 1.0 мкг/мл	только среда
5	Клон 1.109 (а), 1.0 мкг/мл	КСФ-1
6	Клон 1.109 (2 0.1 мкг/мл	КСФ-1
7	Клон 1.109 3М-С(й) 1.0 мкг/мл	только среда
8	Клон 1.109 8М-С(Й1 1-0 мкг/мл	КСФ-1
9	Клон 1.109 ЗМ-С @ 0.1 мкг/мл	КСФ-1
10	Клон 1.109 8М-Р/О(й) 1.0 мкг/мл	только среда
11	Клон 1.Ю9 8М-Р/О2) 1.0 мкг/мл	КСФ-1
12	Клон 1.109 ЗМ-Р/С (й) 0.1 мкг/мл	КСФ-1
13	Клон 1.2 (й; 1,0 мкг/мл	только среда
14	Клон 1.2 (й; 1,0 мкг/мл	КСФ-1
15	Клон 1.2 (й; 0.1 мкг/мл	КСФ-1
16	Клон 1.2 ЗМ (й) 1.0 мкг/мл	только среда
17	Клон 1.2 8М(й) 1,0 мкг/мл	КСФ-1
18	Клон 1.2 ЗМ (й) 0.1 мкг/мл	КСФ-1
19	Клон 2.360 (й) 1.0 мкг/мл	только среда
20	Клон 2.360 (й) 1.0 мкг /мл	КСФ-1
21	Клон 2.360 (й) 0.1 нг/мл	КСФ-1
22	Клон 2.360 8М(й) 1.0 мкг/мл	только среда
23	Клон 2.360 ЗМ (αι, 1.0 мкг/мл	КСФ-1
24	Клон 2.360 ЗМ (№, 0.1 мкг/мл	КСФ-1

Ингибирование лиганд-индуцированного ответа рТуг действием антител МКА против с-Гпъ (форма 8М) проводили, как описано в примере 6 для форм РТ.

В опытах с клетками 293Т/с-Гт8 при сравнении влияния форм РТ и 8М трех МКА 1§О₂ в концентрации 1.0 и 0.1 мкг/мл не обнаружено различий в их способности ингибировать лигандиндуцированный рТуг/С-Гтк (см. фиг. 6). Клоны 1.109 и 1.2 (формы как РТ, так и 8М) оказывали ингибирующее действие при более низкой концентрации, чем 2.360 (формы РТ и 8М).

Клоны 1.109 и 1.2 (РТ или 8М) были способны блокировать лиганд-индуцированный рТуг/с-Гтк ш νίΙΐΌ при обработке клеток 293Т/с-Гт5 моноклональными антителами в концентрации 0.1 мкг/мл (8.3 нМ) или выше в течение 1 ч при 37°С перед добавлением КСФ-1 (50 нг/мл, 1.0 нМ). Способность указанных моноклональных антител блокировать образование рТуг/с-Гтк должно привести к ингибированию сигнального пути КСФ-1, миграции моноцитов и затем накопления ТАМ. Агонистической активности, связанной с указанными МКА, не обнаружено, что исключает активацию рецептора вне зависимости от КСФ-1. Антитела в концентрации 1.0 мкг/мл и даже 10 мкг/мл не проявили агонистической активности (данные не приводятся).

Соответственно МКА были способны блокировать лиганд-индуцированный рТуг/с-Гтк ш νίΙΐΌ.

Пример 8. Иммунопреципитация с-Гпъ действием моноклональных антител к с-Гпъ.

Способность МКА 1§С₂ к с-Гпъ связывать и образовывать иммунопреципитат с-Гпъ исследовали с помощью стабильно трансфецированных клеток 293Т/с-Гт5. как описано выше. Иммунопреципитацию цельноклеточных лизатов нестимулированных клеток проводили, оставляя на ночь, действием каждого из антител (РТ и 8М) и антитела С20 к с-Гпъ, затем определяли с-Гпъ методом вестерн-блоттинга с антителом С20 (8ап!а Сги/ Вю1есЬпо1о§у, 1пс.). С’-Гпъ образовывал иммунопреципитат под действием моноклональных антител. Лизаты стабильно трансфецированнык клеток 293Т/с-Гт5 готовили при 37°С/5% СО₂ до ~75%-ной конфлюэнтности и объединяли с моноклональными антителами как показано в табл. 17.

- 93 023555

Таблица 17

Пробирка №	Антитело (мкг/мкл)	Антитело (мкл)
1	Клон 1.109 (0.41)	6.1
2	Клон 1.109 8М Р/О (0 58)	4.3
3	Клон 1.2 (1.57)	16
4	Клон 1.2 8М (0.35)	7.1
5	Клон 2.360 (0.41)	6.1
6	Клон 2.360 8М (0.52)	4.8
7	С20 (0.2)	12.5
8	С19 (0.2)	12.5

Опыты по иммунопреципитации с необработанными цельноклеточными лизатами стабильных клеток 293Т/с-Гт8 показали сравнимую способность разных МКА (за исключением 2.360 δΜ) связывать и осаждать с-Гт8 в сравнении с контрольными поликлональными антителами С20 к с-Гт8; однако клон 2.360-δΜ проявил пониженную способность в данном анализе (см. фиг. 7).

Пример 9. Иммунопреципитация ОНП-вариантов действием МКА ^С₂.

Одиночный нуклеотидный полиморфизм (ОНП) - вариация ДНК, возникающая при изменении одиночного нуклеотида (А, С, Т или С) в геномной последовательности. ОНП может появиться как в кодирующей так и некодирующей области человеческого генома. Многие ОНП не оказывают воздействия на функции клеток, но ученые полагают, что некоторые ОНП могут вызвать предрасположенность человека к заболеваниям или влиять на его реакцию на лекарства. Вариации в последовательности ДНК могут быть решающим фактором, от которого зависит реакция человека на заболевание, неблагоприятные факторы окружающей среды (например, бактерии, вирусы, токсины и химические вещества), лекарственные препараты и другие виды терапии. По этой причине ОНП имеют большое значение в биомедицинских исследованиях, разработке фармацевтических препаратов и медицинской диагностике. Далее карты ОНП позволяют ученым проводить идентификацию множественных генов, связанных со сложными заболеваниями, такими как рак, диабет и заболевания сосудов.

Внеклеточную область с-Гт8 человека можно разделить на пять повторяющихся доменов, подобных иммуноглобулину (¾) (обозначаются А-Е). См., например, натре, А. с соавт. (1989), 0псодепе Ре8. 4:917, где обсуждаются такие домены в человеческом белке. См., например, \Уапд с соавт. (1993), Мо1еси1аг апй Се11 Вю1оду 13:5348-5359, где приводятся соответствующие домены в белке мышей. Было показано, что домены А-С содержат участок связывания КСФ-1, а домен Ό участвует в регуляции димеризации рецептора при связывании лиганда. Было получено три существующих в природе варианта ОНП с-Гт8 человека - Λ345δ, У279М в !д- домене С и н362Р в ^-домене Ό (см. фиг. 8, где приведена аминокислотная последовательность внеклеточного домена с-Гт8). Указанные ОНП находятся в КСФ-1-связывающем участке или около него и обнаруживаются методом вестерн-блот-анализа с антителами Н-300 против сГт8 (поликлональное антитело кролика, выращенное против аминокислот 11-310 около Шконца с-Гт8 человека/КСФ-1Р; δаηΐа Сги/ Вю1еск., кгс., Са1. №. 8с-13949).

Для исследования взаимодействия ОНП вариантов с-Гт8 человека с различными антителами против с-Гт8, предлагаемыми в настоящем документе, оценивали способность каждого МКА против с-Гт8 связывать варианты ОНП при иммунопреципитации с использованием транзиентно-трансфецированных клеток 293Т, экспрессирующих три типа вариантов ОНП с-Гт8, упомянутых выше, с-Гт8 дикого типа (^Т) (а также нерелевантный контрольный образец с тем же вектором).

Клетки 293Т трансфецировали в двух экземплярах в 10-см чашках, содержащих с-Гт8 Λ345δ, У279М, н362Р, с-Гт8 дикого типа и конструкцию нерелевантного контроля, в вектор экспрессии млекопитающих рС'Чпео и выращивали 48 ч при 37°С/5% С0₂. Клеточные лизаты готовили, как описано выше. К каждому лизату добавляли МКА против с-Гт8 и поликлональные антитела С20 против с-Гт8 или С19 против с-кк (2.5 мкг/мл) в виде аликвот по 1.0 мл, как показано в табл. 18.

- 94 023555

Таблица 18

Пробирка	Трансфектант	Антитело для иммунопреципитации (нг/мкл)	Антитело для иммунопреципитации (мкл)
1	с-Гтз	Клон 1.2(1.57)	16
2	с-Гтз	Клон 1.2 8М (0.5)	5.0
3	с-Гтз	Клон 1.109 (0.41)	6.1
4	с-Гтз	Клон 1.109 8М(0.5)	5.0
5	с-Гтз	Клон 2.360 (0.41)	6.1
6	с-Гтз	Клон 2.360 8М(0.5)	5.0
7	с-Гтз	С20(0,2)	12.5
8	с-Гтз	С19(0.2)	12.5
9	А2458	Клон 1.2(1.57)	16
10	А2458	Клон 1.2 ЗМ (0.5)	5.0
11	А2458	Клон 1.109 (0.41)	61
12	А2458	Клон 1.109 8М(0.5)	5.0
13	А2458	Клон 2.360 (0.41)	60
14	А2458	Клон 2.360 8М(0.5)	5,0
15	А2458	С20(0.2)	12.5
16	У279М	Клон 1.2(1.57)	16
17	У279М	Клон 1.2 ЗМ (0.5)	5.0
18	У279М	Клон 1.109 (0.41)	61
19	У279М	Клон 1.109 8М(0.5)	5.0
20	У279М	Клон 2.360 (0.41)	61
21	У279М	Клон 2.360 8М (0.5)	5,0
22	У279М	С20(0.2)	12.5
23	Н362К	Клон 1.2(1.57)	16
24	Н362К	Клон 1.2 ЗМ (0.5)	5.0
25	Н362К	Клон 1.109(0.41)	61
26	Н362К	Клон 1.109 8М(0.5)	5.0
27	Н362К	Клон 2.360 (0.41)	61
28	Н362К	Клон 2.360 8М(0.5)	5,0
29	Н362К	С20(0.2)	12.5
30	минус-контроль	Клон 1.2(1.57)	16
31	минус-контроль	Клон 1.2 ЗМ (0.5)	5.0
32	минус-контроль	Клон 1.109(0.41)	61
33	минус-контроль	Клон 1.109 ЗМ (0,5)	5,0
34	минус-контроль	Клон 2.360 (0.41)	61
35	минус-контроль	Клон 2.360 ЗМ (0.5)	5.0
36	минус-контроль	С20 (0.2)	12.5
37	минус-контроль	С19(0.2)	12.5

Клетки инкубировали при 4°С, оставляя на ночь, на качалке, как описано в примере 6.

Для антител не обнаружено снижения способности к связыванию форм ОНП по сравнению с контрольным \УТ (фиг. 9). Вероятно, МКА проявляют способность к связыванию во всем интервале природных вариантов с-Гтк.

При иммунопреципитации из необработанных цельноклеточных лизатов стабильных 293Т/с-Гтк было показано, что все различные МКА (за исключением 2.360 δМ) имеют одинаковую способность к связыванию и осаждению с-Гтк по сравнению с контрольными поликлональными антителами с-Гтк; клон 2.360 δМ показал заметно более низкую способность в данном анализе. Исследование способности различных МКА образовывать иммунопреципитат с с-Гтк и вариантами ОНП из транзиентно трансфецированных клеток 293Т/с-Гтк не обнаружило снижения способности к связыванию по отношению к формам ОНП. Способность различных МКА связывать ОНП с-Гтк показывает, что они узнают белки с-Гтк по всему спектру их вариантов, известных для человека.

Пример 10. Ингибирование связывания ¹²⁵Т-Ь-КСФ-1 моноклональными антителами против с-Гтк.

Аффинность анти-с-Гтк МКА по отношению к с-Гтк человека, экспрессированного на поверхности клетки, определяли по ингибированию связывания ¹²⁵Т-Ь-КСФ-1 с клетками АМЬ-5.

Рекомбинантный 1-КСФ-1 (Атдеп) йодировали действием ¹²⁵Ι (Атегкйат) и ЮИ0СЕХ® (Р1егсе). В предварительно покрытую ЮИ0СЕЖ® пробирку для йодирования добавляли 75 мкл РВδ, 10 мкг 1КСФ-1, и 1 мКи ¹²⁵Ι и оставляли на льду на 15 мин. Смесь переносили в колонку Р6 объемом 2 мл, приведенную в равновесие, где отделяли ¹²⁵Т-Ь-КСФ-1 от свободного ¹²⁵Ι методом гель-фильтрации. Фракции, содержащие йодированный 1-КСФ-1, собирали, разбавляли до концентрации 100 нМ средой для связывания (РРМЫ640 с 2.5% фракции ν бычьего альбумина, 20 мМ буфера ΗΒРΒδ и 0.2% азида натрия, рН 7.2). На основании начальной концентрации белка 1-КСФ-1 и степени извлечения 80%, полученной в контрольном опыте, где для аликвоты ¹²⁵Т-Ь-КСФ-1 была проделана вся процедура йодирования, но без добавления дополнительного ¹²⁵Ι, была рассчитана величина удельной активности, равная

- 95 023555

4.8х10¹⁵ имп./мин ммоль.

Опыт по радиолигандному связыванию до насыщения проводили при каждом анализе ингибирования с целью определения величин К_с и К[ для связывания й-КСФ-1 и с-Гт8, экспрессированного на поверхности клеток АМР-5. Смеси помещали на 96-луночные круглодонные микропланшеты для титрования объемом 150 мкл/лунка. Все реагенты разбавляли средой для связывания, содержащей 0.2% азида натрия, опыты проводили при 4°С для снижения возможной интернализации рецептора и отщепления.

Для анализа связывания до насыщения готовили серию двукратных разбавлений ¹²⁵Рй-КСФ-1, начиная с концентрации ~1.7 нМ и достигая через 12 лунок концентрации ~1.5 пМ. Неспецифическое связывание измеряли при одной концентрации ¹²⁵Т-й-КСФ-1 (~80 пМ, три параллельных определения) в присутствии 1000-кратного молярного избытка немеченого й-КСФ-1, предполагая линейную зависимость этой величины от концентрации й-КСФ-1, содержащего радиоизотопную метку.

Для анализа ингибирования ¹²⁵Т-й-КСФ-1 начальная концентрация немеченого й-КСФ-1 составляла 5 нМ. Исходные концентрации антител против с-Гт8 1.2, 1.109 и 2.360 (в каждом случае формы РТ и БМ) составляли соответственно 0.312; 1.25 и 20 нМ. Для каждого образца готовили серию двукратных разбавлений на 15 лунок. В начале, в середине и в конце анализа готовили по три лунки, содержащие только среду для связывания, и по три лунки, содержащие 1000-кратный молярный избыток немеченого й-КСФ1 в качестве контроля для определения процента ингибирование. В каждую лунку добавляли единичную концентрацию ¹²⁵Рй-КСФ-1 (~9 пМ).

Клетки дважды промывали РВБ и добавляли на каждый планшет из расчета 1x10 клеток/на лунку непосредственно перед инкубацией.

В обоих анализах образцы инкубировали при 4°С на мини-орбитальном шейкере в течение 4 ч время, необходимое для достижения равновесия, как было установлено в отдельных опытах. По две аликвоты (60 мкл) каждой смеси для инкубирования переносили в охлажденные полиэтиленовые кюветы центрифуги объемом 400 мкл, содержащие 200 мкл фталатного масла, и центрифугировали в течение 1.5 мин при 4°С в настольной микроцентрифуге (Богуа11,) при 9615хд для отделения Рй-КСФ-1, связанного с клетками, от свободного Кй-КСФ-1. Ячейки вскрывали, собирали осадки и супернатанты в отдельные стеклянные пробирки размером 12x75 мм, которые помещали в гамма-счетчик СОВКА (Раскагб Ш81гитеп1 Сотрапу) для измерения числа импульсов в минуту. Для величин, полученных в параллельных опытах с аликвотами, взятыми из той же лунки, рассчитывали среднее.

Обработка данных по связыванию до насыщения методом нелинейной регрессии по программе Рп8т версии 3.03 (ОгарйРаб БоГШаге, Шс.) приводила к простому уравнению связывания на одном участке, при этом получена кажущая средняя величина 1+,=46 пМ для связывания ¹²⁵Рй-КСФ-1 с с-Гт8 человека, экспрессированного на поверхности клетки. Обработка данных по ингибированию методом нелинейной регрессии по программе Рп8т приводила к уравнению конкурентного ингибирования на одном участке. На основе величины К_с для ¹²⁵Рй-КСФ-1, полученной при анализе конкурентного связывания, найдена 1+ для немеченого й-КСФ-1 (кажущаяся средняя 1+ = 17.8 пМ) и для всех МКА против с-Гт8. За результат брали среднюю величину 1+ из двух параллельных опытов (см. табл. 13).

Пример 11. Определение констант скорости и аффинности при связывании мономерного с-Гт8 с МКА против с-Гт8.

Аффинность человеческого с-Гт8 (1-512).рНГБ (Атдеп) к МКА против с-Гт8 измеряли в системе Биакор. Опыты проводили при 25°С на приборе В1асоге 3000 (В1асоге АВ), снабженном сенсорным элементом СМ4. Сенсорные элементы, амин-связывающие реагенты (ЕЭС - 1-этил-3(3диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид), ЫНБ (Ы-гидроксисукцинимид) и этаноламин-НС1, рН 8.5), 10 мМ раствор ацетата натрия, рН 5.5, буфер НВБ-ЕР (0.01 М НЕРЕБ, рН 7.4, 0.15 М ЫаС1, 3 мМ ЭДТА, 0.005 об.% ПАВ Р20) и 10 мМ глицина-НС1, рН 1.5, были приобретены от компании В1асоге АВ. Бычий сывороточный альбумин (ВБА, Воуипипаг БЕтбагб Ро\убег) - от компании Бего1од1са1 Согрогайоп. Аффинно-очищенные ^О козы против антигенов человека, специфические к фрагменту Рсу - от компании 1аск8оп IттииοКе8еа^сй ЬаЬогаШйе8.

Рсу - специфические антитела ^О против антигенов человека ковалентно иммобилизовали на элементах СМ4 с помощью стандартных химических реакций для связывания аминогрупп с НВБ-ЕР в качестве буфера. Кратко, каждую проточную кювету активировали 7 мин действием смеси 0.1 М Ыгидроксисукцинимида (ЫНБ) и 0.4 М этиламинопропилкарбодиимида (ЕЭС) состава 1:1 (об.) при скорости потока 5 мкл/мин. Козьи ^О к антигенам человека в концентрации 28 мкг/мл в 10 мМ растворе ацетата натрия, рН 5.5, иммобилизовали до величины ~2700 единиц отклика КИ. Оставшаяся реакционноспособная поверхность была деактивирована добавлением 1 М раствора этаноламина в течение 7 мин со скоростью потока 5 мкл/мин. Для удаления остатков несвязанных ковалентно антител и для кондиционирования поверхности трижды добавляли по 50 мкл 10 мМ раствора глицин-НС1, рН 1.5, со скоростью потока 100 мкл/мин. Для последующих стадий рабочий буфер заменяли на НВБ-ЕР с 0.1 мг/мл ВБА.

Антитела 1.2 или 1.2 БМ против с-Гт8 (0.25 мкг/мл) вводили поверх козьих ^О против антигенов человека Рсу в одну проточную кювету в течение 2 минут (10 мкл/мин) до величины ~47 единиц КИ. Еще одна проточная кювета с козьими !дО против человеческого антигена Рсу служила в качестве поверхно- 96 023555 сти сравнения. Каждый анализ начинали с десяти циклов анализа буфера для стабилизации сигнала. Образцы человеческого мономерного с-Гт8 ^^^УрН^ готовили в концентрациях 30, 10, 3.33, 1.11, 0.37 и 0.12 нМ по три параллельных пробы на каждую концентрацию и вводили с шестью холостыми пробами буфера в случайном порядке со скоростью потока 100 мкл/мин на иммобилизованные антитела против сГт8 и на поверхности сравнения. Для каждого комплекса проводили связывание в течение 2 минут и отщепление в течение 5 мин. Поверхность регенерировали после каждого ввода с-Гт8 или буфера 30секундным впрыскиванием 10 мМ раствора глицин-НС1, рН 1.5 (00 мкл/мин) и последующим 30секундным вводом буфера.

Другие антитела против с-Гт8 испытывали аналогичным образом, но по несколько измененной методике для учета различий в характеристиках связывания. Антитела 1.109 и 1.109 §М против с-Гт8 вводили после козьих фО против человеческого антигена (0.5 мкг/мл) в течение 1.5 мин со скоростью 10 мкл/мин до получения на поверхности соответственно 59 и 91 единиц Ки. Образцы человеческого с-Гт8 ^^^^рН^ готовили в концентрациях 10, 3.33, 1.11, 0.37, 0.12 и 0.041 нМ для связывания антитела 1.109 против с-Гт8, и тот же самый набор, за исключением образца 0.041 нМ, готовили для связывания анти-сГт8 1.109 §М. Человеческий мономерный с-Гт8 ^^^УрН^ оставляли для отщепления от анти-с-Гт8 1.109 на 20 мин, а от 1.109 §М - на 15 мин. Антитела против с-Гт8 2.360 и 2.360 §М вводили после козьих фО против антигенов человека Рсу (1 мкг/мл) в течение соответственно 1.5 и 2 мин (10 мкл/мин) до поверхностной концентрации ~100 единиц Ки. Образцы человеческого с-Гт8 ^^^ХрН^ готовили в концентрациях 30, 10, 3.33, 1.11 и 0.37 нМ для связывания анти-с-Гт8 2.360, и тот же самый набор с добавлением образца 0.12 нМ готовили для связывания анти-с-Гт8 2.360 §М. Человеческий мономерный сГт8 ^^^УрН^ оставляли для отщепления от анти-с-Гт8 2.360 на 8 мин, а от 2.360 §М - на 5 мин.

Данные дважды контролировали вычитанием ответа, полученного с поверхности сравнения - для учета изменений объемного показателя преломления, а затем вычитая усредненный ответ, полученный в холостом опыте с буфером - для учета систематической ошибки, связанной с экспериментальной проточной ячейкой. Данные обрабатывали в рамках модели взаимодействия 1:1 с локальной величиной К_тах по программе ΒIΑеνа1иаΐ^оη (уегаоп 4.1, Βί;κοΐΌ ΑΒ), получая таким образом кинетические константы скорости к_а и к_Д. Хотя для каждой концентрации готовили три параллельных пробы с-Гт8, далее использовали только две из них, вследствие ограничения на число параметров, свойственное программе ΒIΑеуа1иаРоп. Величину К_с рассчитывали как отношение к_Д/к_а. Полученные результаты приведены в табл. 19. Данные приведенных выше примеров суммированы в табл. 20.

Таблица 19

Аффинность МКА против с-Гт8 к растворимому мономерному белку с-Гт8 по данным измерений на Β^асо^е 3000

Антитело	ка(1/Мс)	к. (1/с)	Кв(пМ)
1.2	3.84x10°	1.98x10”°	516
1.2 8М* **	3.62 х 10°	1.99\10’	548
1.109	2.54x10°	1.29x1“*	51
1.109 ЯМ*	2.66x10°	2.71 х 10“*	102
2.360	1.25 х10°	6.67x10“*	535
2.360 ЯМ*	7.94x10°	9.55 х 10 4	1200

* §М = Соматические мутации удалены.

Таблица 20

Суммарные данные по МКА 1.2,1.109 и 2.360

Моноклональное антитело	Пролиферация АМЬ-5 1С5, (пМ)*	Пролиферация клеток костного мозга яванских макак 1Сзд (пМ)	Ингибирование (К,) связывання|251КСФ-1 с клетками АМЬ-5 (пМ)	Аффинность (К[0 К С-Т|118 по данным В|асоге (пМ)	И мму но и реини итацня из клеток Ι93Τ, зкспресснрующ их с-Гтд \УТ и ОНИ	Лнганд- нндуинро ванное ингибирование рТуг С-Г|118
1.2	27	78	8.5	516	+++	+++
1.2 5М+ +	12	81	11.5	548	+++	+++
1.109	27	16	13.5	51	+++	+++
1.109 5М+ +		23	9.7	102	+++	+++
2.360	60	67	-160	535	+++	++
2.360 5М+ +			-900	1200	++	++

* Анализ первичных клеток с человеческой мишенью;

** §М = соматическиемутации удалены.

Пример 12. Картирование эпитопов клонов антител к с-Гт8 фО₂ 1.109. 1.2 и 2.36.

Приготовление слитых конструкций с-Гт8-авидин.

Слитые конструкции для экспрессии с-Гт8-а\тДт показаны на фиг. 10. Для экспрессии каждого слитого белка кодирующую последовательность внеклеточного домена человеческого с-Гт8 ПЦРамплифицировали и клонировали в рСЕР4-Авидин(Ы) таким образом, что последовательность с-Гт8 была объединена с С-концом последовательности авидина цыпленка с помощью рестриктазы Хйо1. Сиг- 97 023555 нальную последовательность с-Гтк не включали, так как сигнальная последовательность авидина цыпленка в векторе рСЕР4-авидин(Л) оставалась интактной.

Как указано выше, внеклеточный домен содержит пять разных 1д-подобных областей. Разные домены в составе человеческого с-Гтк обсуждаются, например, в работе Натре с соавт., 1989, Опсодепе Кек. 4:9-17. Обсуждение соответствующих доменов в мышином с-Гтк приведено, например, в работе \Уапд с соавт., 1993, Мо1еси1аг апй Се11 Вю1оду 13:5348-5359. Были приготовлены следующие разные конструкции авидина (см. фиг. 8, где приведена аминокислотная последовательность внеклеточного домена; 8ЕЦ ГО N0: 1).

Сигнал: аминокислоты 1-19;

1д-подобный домен 1: аминокислоты 20-126;

1д-подобный домен 1-2: аминокислоты 20-223;

1д-подобный домен 1-3: аминокислоты 20-320;

1д-подобный домен 1-4: аминокислоты 20-418;

1д-подобный домен 1-5: аминокислоты 20-512; только 1д-подобный домен 2: аминокислоты 85-223.

Таким образом, для создания конкретных участков человеческого с-Гтк (укорочения) для картирования эпитопа проводили ПЦР-амплификацию следующих аминокислот: 1д-подобная петля 1 (ΙΡνίΆΤ-ΤΡ), 1д-подобные петли 1 и 2 (ΙΡνί-ΛΟίν), 1д-подобные петли 1-3 (ГОУБЕОЬЛ), 1д-подобные петли 14 (ΙΡνί-ОТЬЬ) и 1д-подобные петли 1-5 (IΡVI-ΡΡ^Ε), а также отдельно 1д-подобная петля 2 (ΤΕΡΟАЦГУ). Последовательности, приведенные в скобках, - соответственно начальная и конечная последовательности для каждого домена (см. фиг. 8). Обозначенные участки были выбраны так, чтобы сохранить дисульфидные связи, образованные цистеиновыми остатками, так как эти связи имеют важное значение для фиксации природной трехмерной структуры доменов. Далее, по той же причине конструкция для отдельно 1д-подобной петли 2 содержит некоторые последовательности из 1д-подобный петли 1. В результате этого, перечисленная начальная и конечная аминокислота доменов несколько отличается от участков доменов, указанных в работе Натре апй \Уапд, упомянутой выше.

Экспрессия слитых с авидином белков.

Экспрессия слитых с авидином белков осуществлялась при транзиентной трансфекции адгезивных клеток 293Т человека во флаконах Т75 с культурой ткани. Клетки выращивали и хранили в среде ЭМЕМ (высокое содержание глюкозы) с 10% диализованного РВ8 и 1 х стрептомицина (Ρеη-кΐ^еρ)-глутамина (среда для роста) при 37°С и 5% СО₂. Приблизительно 3х10⁶ клеток 293Т инокулировали во флаконы Т75, содержащие 15 мл среды для роста и оставляли на ночь (около 20 ч). Клетки трансфецировали конструкциями рСЕР4-авидин(Л)-с-Гтк. В каждом флаконе смешивали 15 мкг ДНК с 75 мкл ЫроГесйтте 2000 (1п\йгодеп) в присутствии среды Орй-МЕМ (1^йгодеп), затем комплекс инкубировали 20 мин. Комплекс, полученный при трансфекции, инокулировали в соответствующий флакон и инкубировали 4-5 ч при 37°С в среде Орй-МЕМ. По окончании времени инкубирования, среду Орй-МЕМ заменяли свежей порцией среды для роста. Приблизительно через 48 ч после трансфекции кондиционированную среду собирали и центрифугировали при 2000х д в течение 10 мин при 4°С для удаления клеток и дебриса, после чего переносили в пробирки объемом 50 мл. Те же самые операции проводили для контрольного флакона, но без участия ДНК (трансфекция вектором без вставки) для получения среды отрицательного контроля для исследования связывания.

Обнаружение слитых белков.

Концентрацию каждого слитого белка с-Гтк-авидин определяли методом активированной флуоресценцией сортировки клеток (РАС8). Слитые белки с-Гтк-авидин иммобилизовали на биотинполистирольных микросферах размером 6.7 мкм (8рЬего1есЬ, 1пс., иЬег1у\а11е III). Кондиционированную среду 1х (20 и 200 мкл) прибавляли к 5 мкл (~3.5х 10⁵) микросфер и инкубировали 1 ч при комнатной температуре при вращении. Кондиционированную среду удаляли центрифугированием, и образцы промывали буфером ΡΒ8, содержащим 0.5% В8А (ΒΡΒ8). Авидиновые микросферы окрашивали действием 200 мкл раствора ФИТЦ-меченых козьих антител против авидина ^ес1ог ЬаЬк, Берлингем, Калифорния) с концентрацией 0.5 мкг/мл в ΒΡΒ8 в течение 45 мин при комнатной температуре, накрыв фольгой. После инкубирования микросферы повторно отделяли центрифугированием, промывали ΒΡΒ8 и повторно суспендировали в 0.5 мл ΒΡΒ8 для анализа. Флуоресценцию ФИТЦ обнаруживали с помощью программ РАС8сап (ВесЮп Эюкткоп Вюкаепсе, Франклин-Лэйкс, Нью-Джерси). Интенсивность сигнала пересчитывали в массу белка с помощью стандартной кривой, полученной с авидином. Для картирования эпитопа биотиновые микросферы смешивали с ~100 нг слитого белка с-Гтк-авидин (3.5х 10 микросфер) и доводили до нужного объема средой для роста.

РАС8-анализ связывания антител.

Покрытые биотином полистирольные микросферы (8рЬего1есЬ, 1пс.), несущие нормализованное количество слитых белков субдомена С-РМ8, смешивали с 1 мкг моноклональных антител против с-Гтк (1.109, 1.2 и 2.36), конъюгированных с ФИТЦ, в 0.2 мл ΒΡΒ8. После инкубирования 1 ч при комнатной температуре добавляли 3 мл буфера для промывки (ΒΡΒ8), и комплекс антител с микросферами отделя- 98 023555 ли центрифугированием в течение 5 мин при 750х д. Осадок промывали в 3 мл ВРВЗ. Антитела, связанные с комплексами авидин-микросфера, определяли методом анализа РАСЗ (Вес1оп Эюкпъоп). Для каждого образца фиксировали среднюю интенсивность флуоресценции (X).

Конкурентный анализ антител.

Для подготовки к внесению флуоресцеиновой метки, моноклональные антитела диализовали или суспендировали в буфере РВЗ (ρΗ 7.4) в концентрации 1 мг/мл. Метку (сукцинимидиловый эфир [6флуоресцеин-5- (и -6)-карбоксамидо]гексановой кислоты 5(6)-ЗРХ), смесь изомеров от Мо1еси1аг РгоЬек (Р-2181), вводили в белок в молярном отношении 9.5:1 (метка: белок) из исходного раствора (5 мг/мл) метки в ДМСО. Смеси инкубировали при комнатной температуре 1 час в темноте. Меченые антитела отделяли от свободной метки диализом в буфере РВЗ. Для каждого опыта по конкурентному связыванию в реакции связывания участвовал 20-кратный избыток (20 мкг/мл) немеченых конкурирующих антител 3.5х10⁵ биотиновых микросфер, покрытых слитым авидиновым белком в ВРВЗ. После предварительного инкубирования немеченых конкурирующих антител в течение 30 мин добавляли ФИТЦ-меченые антитела (1 мкг/мл). Далее процесс проводили как в одноцветовом методе.

Все слитые белки (фиг. 11), экспрессированные в клетках 293Т, можно обнаружить с помощью ФИТЦ-меченых антител против авидина по программе РАСЗсап. Для выяснения, какой из 1д-подобных доменов с-Гтк служит участком связывания антител, проводили анализ связывания для всех шести слитых белков. Клоны антител 1.109, 1.2 и 2.36 связываются со слитыми белками, образованными 1дподобным 1-2, 1д-подобным 1-3, 1д-подобным 1-4 и 1д-подобным 1-5 субдоменами с-Гтк человека. Они не связываются со слитыми белками, образованными одиночным 1д-подобным 1 и 1д-подобным 2 доменами с-Гтк. Для сравнения брали внеклеточный домен человеческого с-Гтк как положительный контроль (фиг. 11 и 12). Полученные результаты показывают, что эпитопы трех указанных антител в основном расположены на Шконце 1д-подобной петли 1 и 1д-подобной петли 2 человеческого с-Гтк и требуют одновременного присутствия участков 1д-подобной петли 1 и 1д-подобной петли 2. Также из полученных результатов следует, что антитела неспособны непосредственно блокировать участок высокоаффинного связывания лиганда, расположенный в основном на 1д-подобной петле 3. Они могут косвенно влиять на связывание лиганда, обусловленное 1д-подобными петлями 1 и 2, которые имеют принципиальное значение для связывания лиганда (\Уапд, с соавт., 1993, Мо1еси1аг Се11 Вю1оду 13:5348-5359).

Из трех антител клон 1.109 характеризуется максимальным сигналом связывания по сравнению с двумя другими антителами при концентрации 1 мкг/мл. Данные по конкуренции показывают, что три антитела могут блокировать друг друга при наличии 20-кратного избытка немеченого антитела (см. фиг. 13, 14 и 15). На основании результатов по конкурентному связыванию можно полагать, что эпитопы трех указанных антител аналогичны или расположены рядом в 1д-подобной петле 1 и 2.

Пример 13. Картирование эпитопов антитела 1.2 ЗМ против с-Гтк по сравнению с коммерческим препаратом антител.

Данный опыт проводили для выяснения, связывают ли некоторые из человеческих антител, раскрытых в настоящем документе, тот же самый или другой эпитоп по сравнению с рядом коммерческих препаратов антител.

Материалы и методы: исследованные коммерческие антитела против с-Гтк.

Исследованные крысиные и мышиные антитела приведены в табл. 21 и табл. 22.

Таблица 21

Антитела крыс

Источник	Са(. №. н клон №	Краткое обозначение	Участок связывания, указанный производителем
Вюзоигсе	Са1.№АНТ1512, клон 2-4А5-2	2-4 А5-2	Интервал аминокислот 349-512
из Вю1о§1са1	СаГ № С2447-53, клон 5Л5	5 Л 5	Интервал аминокислот 349-512
из Вш1о£1са1	СаГ № С2447-50. клон Ο.Ν. 178	0Ν178	не описан

Таблица 22

Антитела мышей

Источник	Са(. №. и клон №	Краткое обозначение	Участок связывания, указанный производителем
Κ&ϋ Зуйепв	СаГ № МАВ329, клон 61708	МАВ329	внеклеточный домен, применение в качестве иммуногена
Κ&ϋ Яу<;1ет<,	СаГ № МАВ3291, клон 61701	МАВ3291	внеклеточный домен, применение в качестве

- 99 023555

			иммуногена
Κ&ϋ ЗукТепв	Са1. № МАВ3292, клон 61715	МАВ3292	внеклеточный домен, применение в качестве иммуногена

Слитые конструкции с-Гпъ-авидин и экспрессия слитых белков, содержащих авидин.

Конструкцию для экспрессии слитого белка человеческий с-Гпъ-авидин готовили, как описано в примере 12. Экспрессию авидинсодержащих слитых белков проводили при транзиентной трансфекции адгезивных клеток 293Т человека на культуральных планшетах размером 10 см. Клетки выращивали и хранили в среде ИМЕМ (высокое содержание глюкозы), содержащей 5% соответствующего РВ8 с добавлением 1х стрептомицина (Реи-81тер)-глутамина (1^йгодеп), 1х заменимых аминокислот (1^йгодеи) и 1х натриевой соли пировиноградной кислоты (1^йгодеи) (среда для роста), при 37°С и 5% С0₂. Приблизительно 2.5х10⁶ клеток 293Т инокулировали в 10-см планшеты содержащие 10 мл среды для роста и оставляли на ночь (около 20 ч). Клетки трансфецировали конструкциями рСЕР4-авидин(№)- с-Гтх Для каждой трансфекции смешивали 7.5 мкг ДНК с 45 мкл Ри0еие6 (КосЬе) в присутствии среды ИМЕМ без добавок (1^йгодеи), затем комплекс инкубировали 20 мин. Комплекс, полученный при трансфекции, добавляли на соответствующий планшет и инкубировали при 37°С, оставляя на ночь. На следующее утро клетки дважды промывали 1х солевой средой Дульбекко с фосфатным буфером (РВ8) ОтЦгодеи) и добавляли 5 мл бессывороточного ИМЕМ, содержащего упомянутые выше добавки плюс инсулин, транмикросферрин, селен-Х (1Т8-Х) ОтЦгодег!). Приблизительно через 48 ч после трансфекции кондиционированную среду собирали и центрифугировали при 2000х д в течение 10 мин при 4°С для удаления клеток и дебриса, после чего переносили в пробирки объемом 15 мл. Те же самые операции проводили для контрольного планшета, но без участия ДНК (трансфекция вектором без вставки) для получения среды отрицательного контроля для исследования связывания.

Обнаружение слитых белков.

Концентрацию каждого слитого белка с-Гпъ-авидин определяли методом активированной флуоресценцией сортировки клеток (РАС8). Слитые белки с-Гпъ-авидин иммобилизовали на биотинполистирольных микросферах размером 6.7 мкм (8рЬето1есЬ, 1ис., ЫЬеПул'Ше III). Кондиционированную среду 1х (2, 20 и 200 мкл) прибавляли к 5 мкл (~3.5х 10⁵) микросфер и инкубировали 1 час при комнатной температуре при вращении. Кондиционированную среду удаляли центрифугированием, и образцы промывали РВ8, содержащим 2% РВ8 (РРВ8). Авидиновые микросферы окрашивали 500 мкл раствора ФИТЦ-меченых козьих антител против авидина (Уес!ог ЬаЬк, Вигйидате, СА) с концентрацией 1.0 мкг/мл в РРВ8 в течение 30 мин при комнатной температуре при вращении. После инкубирования микросферы повторно отделяли центрифугированием, промывали РРВ8 и повторно суспендировали в 0.5 мл РРВ8 для анализа. Флуоресценцию ФИТЦ обнаруживали по программе РАС8саи (Весйи Пюктеои Вюкщеисе, РтаикНи Ьаке8, N1). Интенсивность сигнала конвертировали в массу белка с помощью стандартной кривой, полученной с авидином. Для картирования эпитопа биотиновые микросферы смешивали с ~200 нг слитого белка с-Гпъ-авидин (3.5х 10⁵ микросфер) и доводили до нужного объема средой РРВ8.

РАС8-анализ связывания антител.

Покрытые биотином полистирольные микросферы (8рЬето1есЬ, 1ис.), несущие нормализованное количество слитых белков субдомена С-РМ8, смешивали с 1 мкг моноклональных антител против с-Гпъ человека (1.2), мышиным моноклональным антителом против с-Гпъ (МАВ 329, МАВ 3291 и МАВ3292 [К&И 8у81ет8]) или крысиным моноклональным антителом против с-Гпъ (2-4А5-2 [1^Игодеи], Ο.Ν. 178 и 5Л5 [и.8. В1о1од1са1]) в 0.2 мл РРВ8. После инкубирования 1 ч при комнатной температуре комплексы антител с микросферами трижды промывали 1.25 мл промывочного буфера (РРВ8), отделяя продукт между промывками центрифугированием в течение 1 мин при 18000х д. Антитела окрашивали соответствующими вторичными козьими антителами, конъюгированными с ФИТЦ (8ои1Ьеги В1о1есН) при концентрации 1.0 мкг/мл в течение 30 мин. Стадии промывки повторяли и комплексы антитела-микросферы суспендировали в 0.5 мл РРВ8 для анализа. Антитела, связанные с комплексами авидин-микросфера, определяли методом РАС8 (Вес1ои Пюкткои). Для каждого образца фиксировали среднюю интенсивность флуоресценции (Х).

Конкурентный анализ антител.

Для подготовки к внесению флуоресцеиновой метки, моноклональные антитела диализовали или суспендировали в РВ8 (рН 7.4) в концентрации 1 мг/мл. Метку (сукцинимидиловый эфир [6флуоресцеин-5- (и -6)-карбоксамидо]гексановой кислоты 5(6)-8РХ), смесь изомеров от Мо1еси1аг РтоЬек (Ρ-2181) вводили в белок в молярном отношении 10:1 (метка: белок) из исходного раствора (10 мг/мл) метки в ДМСО. Смеси инкубировали при комнатной температуре 1 ч в темноте. Меченые антитела отделяли от свободной метки методом колоночной хроматографии на NАР 5 в РВ8 с последующей фильтрацией 0.2 мкм. Для каждого опыта по конкурентному связыванию, проводили реакцию 25-кратного избытка (25 мкг/мл) немеченых конкурирующих антител, 3.5 х10⁵ биотиновых микросфер, покрытых слитым авидиновым белком в РРВ8. После предварительного инкубирования в течение 15 мин добавляли ФИТЦ-меченые антитела (1 мкг/мл). Далее процесс проводили как в одноцветовом методе.

- 100 023555

Обсуждение полученных результатов.

Все слитые белки, экспрессированные в клетках 293Т, могут быть обнаружены с помощью ФИТЦмеченых антител против авидина по программе ΡАСδсаη. Как описано в примере 12, несколько исследованных антител связывают близкие эпитопы, которые требуют одновременного присутствия участков 18подобной петли 1 и 1д- подобной петли 2, присутствующих в слитых конструкциях 1д1-2-авидин. В результате, исследование связывания и конкурентного связывания проводили с одним из человеческих антител, предлагаемых в настоящем документе, с коммерческим препаратом антител против с-Гт8 человека и выбранными представителями слитых конструкций авидина.

Как и ожидалось, все коммерческие препараты антител оказались способны успешно связывать полноразмерную конструкцию 1д1-5 внеклеточного домена с-Гт8. Один из шести коммерческих препаратов антител (МАВ 3291) связывался с конструкцией 1д1-2, что указывало на возможную конкуренцию за эпитопы антител к человеческому с-Гт8. Дальнейшие эксперименты проводили с конструкцией 1д1. Показано, что МАВ3291 связывает конструкцию 1д1, что свидетельствует о расположении его эпитопа полностью внутри 1д1-подобного домена. Слабый сигнал МАВ329 в конструкциях 1д1 и 1д1-2 соответствовал фоновому связыванию антитела с микросферами.

Результаты исследований по конкурентному связыванию показали, что ни один из коммерческих препаратов антител не способен блокировать репрезентативное человеческое антитело даже при 25кратном избытке антитела-конкурента.

Совокупность данных, полученных в опытах по связыванию и конкурентному связыванию, показывает, что коммерческие препараты антител связываются с эпитопами, которые не используются антителами против с-Гт8 человека.

Пример 14. Картирование эпитопов антител против с-Гт8 с помощью тестирования с-Гт8 методом аргинин/глутаминовая кислота.

Для картирования связывания антитела и с-Гт8 применяли методику тестирования аргинин/глутаминовая кислота. Боковые цепи аргинина и глутаминовой кислоты заряжены и имеют большой размер, поэтому они могут нарушить связывание антитела и с-Гт8. Таким образом, метод позволяет обнаружить остатки, которые при наличии в них мутации, отрицательно сказываются на связывании антигенсвязывающего белка и с-Гт8. Следовательно, соответствующие остатки в немутированном антигенсвязывающем белке могут находиться в контакте с антигенсвязывающим белком или в непосредственной близости к антителу, так что замена на аргинин или на глутаминовую кислоту оказывается достаточной, чтобы повлиять на связывание.

Конструирование, экспрессия и исследование мутантов аргинин/глутаминовая кислота.

Для мутации было выбрано 95 аминокислот, распределенных по трем первым 1д доменам с-Гт8. Выбор был направлен на заряженные или полярные аминокислоты за исключением цистеина и пролина с целью снижения вероятности того, что мутация приведет к неправильно упакованному белку. Неаргининовые аминокислоты мутировали в аргинин; а аргинин и лизин - в глутаминовую кислоту.

Смысловые и антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие мутированные остатки, синтезировали в 96-луночном формате. Мутагенез конструкции внеклеточный домен с-Гт8 -Р1ад-Н18-тэг (дикого типа) проводили с помощью набора ЦшксНапде II ^1га1адепе, #200523). Все мутантные конструкции сГт8, содержащего Р1ад-Н18-тэг, в векторе рТТ5 экспрессировали в транзиентно трансфецированных суспензионных клетках 293-6Е (ΝΚ-СС) в 96-луночных планшетах. Уровень экспрессии и целостность рекомбинантного белка в кондиционированных средах характеризовали методом вестерн-блоттинга с использованием Н18-тэга, а затем - антитела против изотипа А1еха-йиог. Последующие опыты по картированию эпитопов проводили с белками в кондиционированных средах.

Экспрессию мутантов характеризовали, исследуя супернатанты из каждой лунки методом электрофореза на ДДС-№-1-ПААГ на приборе еРаде (1пуйтодеп), блоттинга и зондирования антителами против Н18 (№уадеп), а затем - антителами против изотипа А1еха-йиог. Каждую мутантную конструкцию экспрессировали.

Определение конформационных эпитопов.

Для изучения возможности связывания антител против с-Гт8 с конформационным эпитопом на сГт8 проводили индивидуальный вестерн-блот анализ в восстановительных и невосстановительных условиях для трех антител против с-Гт8 (1.2 δМ, 1.109 δМ и 2.360) и с-Гт8. Было показано, что антитела 1.2 δМ и 2.360 связывают конформационный эпитоп, что подтверждается отсутствием полос в вестерн-блот анализе в восстановительных условиях, в то время как в случае антитела 1.109 δМ наблюдается полоса, указывающая на возможность связывания линейного эпитопа.

Анализ связывания ВюР1ех.

Для одновременного определения связывания антител с 95 мутантами с-Гт8, с-Гт8 дикого типа и отрицательным контролем проводили мультиплексный анализ с микросферами. Микросферы ЬитАу1Йш (Ьиттех) с цветовым кодом, покрытые стрепавидином (100 комплектов), связывали с биотинилированными антителами против реп1аН|8 (Ц1адеп, #1019225) в течение 1 ч при комнатной температуре, затем промывали. Для каждого комплекта микросфер с цветовым кодом проводили связывание с мутантом сГт8, с-Гт8 дикого типа и отрицательным контролем в 100 мкл супернатанта в течение 1 ч при комнатной

- 101 023555 температуре и промывали.

Комплекты микросфер с цветовым кодом, каждая из которых связана с определенным белком, объединяли. Отбирали аликвотные порции объединенных микросфер в 96 лунок фильтровального планшета на 96 лунок (МПНроге, #М§ВУМ250). 100 мкл антител против с-Гтк (1.2 8М, 1.109 §М и 2.360) в трехкратном разбавлении помещали на три колонки для проведения трех параллельных опытов, инкубировали 1 ч при комнатной температуре и промывали. В каждую лунку добавляли 100 мкл разбавленного в отношении 1:200 1§С Рс против антигенов человека, конъюгированного с фикоэритрином (ФЭ) Цасккоп 1ттипогекеагсЬ, #109-116-170) и инкубировали 1 ч при комнатной температуре, и затем промывали.

Микросферы повторно суспендировали в 1% В8А в ΡΒδ, встряхивали 10 мин и считывали показания прибора ВюР1ех (Βίο-Каб). Прибор идентифицировал микросферы по цветовому коду, и количество антитела, связанного с микросферами определялось по интенсивности флуоресценции красителя ФЭ. Связывание антител с каждым мутантом непосредственно сопоставляли его связыванием с белком дикого типа из той же группы.

Идентификация связывания антител с мутантным с-Гтк.

Вариативность аналитической системы и значимость изменений в связывании определяли эмпирически. Вариативность микросфер и лунок определяли экспериментально по связыванию с-Гтк дикого типа со всеми 100 комплектами микросфер с цветной кодировкой. Микросферы распределяли в каждую лунку 96-луночного планшета и зондировали антителами против с-Гтк 1.2 §М в трехкратном разбавлении вдоль каждой колонки планшета и поперек всех 12 колонок планшета. ЕС₅₀ определяли по подгонке кривой, полученной при измерении вариативности максимальных сигналов, минимальных сигналов и наклона. Измерение вариативности позволило установить, является ли сдвиг величины ЕС50 значимым.

Строили график зависимости средней интенсивности флуоресценции (СИФ) при связывании антитела с помощью взвешенной 4-параметрической логистической подгонки кривой (4РЬ с УагРо^ег в 8р1ик). Экспериментальную вариативность определяли с тремя контрольными пробами белка дикого типа для каждой группы. Связывание антитела с мутантным антигеном сравнивали с каждым контролем. Рассчитывали 99%-ный доверительный интервал (С1) для величины кратного изменения значения ЕС₅₀ между мутантом и контрольным образцом дикого типа, и выбирали результат сравнения с контрольным образцом дикого типа с большей величиной р. Поправку на множественность вносили по критерию количества ложных идентификаций (РОК) Беньямини-Хохберга. Мутации, для которых величина С1 99% для ЕС₅₀ значительно отличалась от ЕС₅₀ образца дикого типа, т.е. при величине р, рассчитанной по критерию РОК, 0.02 или менее считались значимыми для реакции специфического связывания между белком-антигеном и антигенсвязывающим белком. Кроме того, мутации, которые уменьшали связывание, что определялось по снижению максимального сигнала СИФ до 30% или менее по сравнению с контрольным образцом дикого типа, считали значительно влияющими на связывание между белкомантигеном и антигенсвязывающим белком. В табл. 23 приведены хиты или положения мутаций, которые существенно уменьшали способность антител 1.2 8М, 1.109 и 2.36 связывать внеклеточный домен сГтк человека. Обозначения, использованные в табл. 23 - остаток дикого типа: положение в полипептиде: мутантный остаток, а нумерация соответствует нумерации в §ЕЦ ГО N0: 1.

Таблица 23

Мутации, влияющие на связывание антител

Антитело	Положение
1.2 8М	Е29К, О121К, Т152К, К185Е
1.109	Е29Е.. 0121 к. 8172Г<, О274К. Υ276Κ
2.36	К.106Е. Н151К, Т152К, Υ154Κ, 8155К. λΥ159Κ. 0171 К. 8172К, О173К.. О183К.. К.184Е. К185Е, Е218К, А220К, 8228К, Н239Е.. Ν240Κ, К259Е, О274К, Ν275Κ, Υ276Κ, 8277К, Ν282Κ
	сдвиг ЕС50	К102Е, К.144Е, К146Е, Ω174Κ, А226К
Все	слабое связывание/отсу тствие	Ύ50Κ, А74К, Υ100Κ, ϋ122Κ, Т130К, О161К, Υ175Κ, А179К

Так как связывание хотя бы одного антитела сохраняется в присутствии определенных мутаций, приведенных в табл. 23, маловероятно, что мутантные белки окажутся в значительной мере неправильно упакованными или образуют агрегаты в результате внесенной мутации. Последнее верно и для мутаций, которые привели к сдвигу величины ЕС50 для всех антител, так как антитела по-прежнему способны к связыванию антигена. Хотя исследованные антитела связываются с близкими участками, как показано при цветовом анализе (биннинге), каждое антитело можно обнаружить по мутациям, которые ингибируют связывание антител с мутантным антигеном. Тот факт, что некоторые мутации влияют на многие антитела, согласуется с фактом, что антитела относятся к тем же ячейкам.

Пример 15. Ингибирование роста ксенотрансплантата аденокарциномы молочной железы МОАМВ231.

Поскольку антигенсвязывающие белки, предлагаемые в настоящем документе, связывают с-Гтк человека, но не с-Гтк мыши, была проведена серия опытов ш νίνο с антителом, которое связывает мыши- 102 023555 ный с-Гт8, с целью демонстрации пригодности антител против с-Гт8 для лечения онкологических заболеваний.

Мышам, лишенным тимуса и вилочковой железы, имплантировали подкожно 10 млн. клеток МЭАМВ231 человеческой аденокарциномы молочной железы в присутствии матригеля (1:1). Через сутки после имплантации опухолевых клеток мышам начали ставить внутрибрюшинные инъекции либо 400 мкг антител против с-Гт8 мыши или 400 мкг контрольных крысиных 1дО против антигенов мыши в 100 мкл РВ8, трижды в неделю в течение всего исследования. Результаты изменений опухоли и время лечения приведены на фиг. 16. Через 51 сут. проводили эвтаназию мышей, опухоли собирали и фиксировали в формалине. Исследовали срезы, окрашенные гематоксилином и эозином, и иммуногистохимические срезы Р4/80 (маркер макрофага). Расчет проводили слепым методом по отношению к лечению и группам. Срезы, полученные от мышей, которых лечили антителами против мышиного с-Гт8, окрашивались значительно хуже, чем от мышей, получивших лечение контрольным препаратом, что подтверждает существенное снижение количества опухоль-ассоциированных макрофагов. Для более объективной оценки степени некроза цифровые изображения АР0О-окрашенных срезов обрабатывали по программе МеШуие, измеряя общую площадь поперечного сечения и площадь поперечного сечения опухоли. Затем по данным измерений рассчитывали процент некроза для каждой опухоли. Результаты приведены на фиг. 16. Полученные результаты показывают, что антитела против с-Гт8 могут снижать уровень опухольассоциированных макрофагов, усиливать некроз и ингибировать рост ксенотрансплантата аденокарциномы молочной железы МЭАМВ231.

Пример 16. Ингибирование роста устойчивого ксенотрансплантата аденокарциномы легкого N^1975.

Мышам, лишенным тимуса и вилочковой железы, имплантировали подкожно 10 млн. клеток человеческой аденокарциномы легкого NСIΗ1975 в присутствии матригеля (1:1). После роста опухолей до размеров 250-300 мм³, мыши получали внутрибрюшинные инъекции либо 400 мкг антител против с-Гт8 мыши или 400 мкг контрольных крысиных 1§О против антигенов мыши в 100 мкл РВ8, трижды в неделю в течение всего исследования. Третья группа мышей получала инъекции 30 мг/кг таксотера (положительный контроль) раз в неделю. Результаты изменений опухоли и время лечения приведены на фиг. 17, где видно, что антитела против с-Гт8 способны ингибировать рост устойчивого ксенотрансплантата аденокарциномы легкого NСIΗ1975.

Приведенные модели опухолей демонстрируют полезные свойства антител против с-Гт8, ингибирующих активность взаимодействия КСФ-1/с-Гт8, которые раскрыты в настоящем документе, для лечения онкологических заболеваний. Способность таких антител снижать инфильтрацию макрофагов в пораженной ткани означает, что антитела можно также использовать при метаболических и воспалительных заболеваниях.

Пример 17. Модулирование взаимодействия КСФ-1/КСФ-1Р для регулирования ангиогенеза.

Для выяснения возможности участия КСФ-1-опосредованной пролиферации, дифференциации и стимуляции макрофагов в промотировании ангиогенеза в опухоли или в нормальной ткани было исследовано влияние двух различных нейтрализующих моноклональных антител крысы против мышиного КСФ-1Р (М279, генерированное в организме; и Р898, полученное от ЕЫо8с1епсе8) на ангиогенез в роговице глаза мышей ш νί\Ό. На пятый день после введения единичной системной дозы контрольных МКА, М279 или АР898, определяли и анализировали следующие параметры:

1) плотность сосудов, связанную с ответом на ангиогенез в роговице мыши,

2) уровень циркулирующего КСФ-1 мыши и

3) уровень инфильтрации макрофагов в роговицу и другие ткани.

Анализ кармана роговицы мышей.

Тампон из ПВС размером 4 мм (М-РАСТ \Уог1б\\тбе, Еибога, К8) точно разрезали на две равные части и погружали в 8 мкл фосфатного буфера РВ8, содержащего 2.4 мкг рекомбинантного человеческого РОР-2 или 48 мкг рекомбинантного человеческого УЕОР (Κ&Ό 8у81ет8, М1ппеаро118, МХ). Далее тампон делили на 48 близких по размеру мини-фрагментов (шариков), пригодных для подсадки в карман роговицы. Каждый мини-фрагмент содержал около 50 нг рекомбинантного человеческого РОР-2 или 1 мкг рекомбинантного человеческого УЕОР. Самок мышей С57 ВЬ/6 (возраст 7-10 недель) подвергали общей анестезии, глаза готовили к надрезу роговицы, внося в каждый глаз по одной капле местного анестетика пропаракаина. В центре роговицы делали маленький надрез, получая в строме роговицы отверстие (карман), соответствующее изгибу глаза, на расстоянии примерно 1 мм от края. Шарики, содержащие буфер РВ8, УЕОР или РОР-2, помещали в карманы роговицы, затем животные получали иммунопреципитат крысиных 1§О (81дта, 81. Ьош8, МО) (250 мкг в 200 мкл апирогенного РВ8) или очищенные крысиные КСФ-1Р против мышиных антигенов (250 мкг). На пятый день после подсадки шарика мышей подвергали общей анестезии и исследовали каждый глаз (роговицу) под стереомикроскопом, соединенным с цифровой камерой ПъщЫ 8ро1 при близком вертикальном освещении с углом падения 45° по отношению к полярной оси в точке, содержащей шарик. Полученные цифровые изображения обрабатывали с помощью субтрактивных светофильтров (АбоЬе Р1ю1о81юр) и анализировали по программам анализа изображения Вюдиай (НгюНуШе, ТК) для определения доли пикселей от общей плотности периметра

- 103 023555 роговицы, превышающих пороговое значение видимых капилляров. Общую плотность сосудов в роговице определяли по доле пикселей, результат выражали в виде отношения числа пикселей, приходящихся на кровеносные сосуды, к общему числу пикселей в пределах глаза.

- 104 023555

ТИФА мышиного КСФ-1.

Уровень мышиного КСФ-1 в сыворотке определяли в качестве биомаркера активности антител к КСФ-ΙΕ методом ТИФА в системе с антителами ^υ0δΕΤ (Ε&Ό 8у81ет8) в соответствии с инструкциями производителя.

Иммунолокализация макрофагов и кровеносных сосудов в печени и ткани роговицы мышей.

Для выяснения влияния антител против мышиного КСФ-1Е на уровни макрофагов и кровеносных сосудов в тканях определяли уровень макрофагов с помощью антмышиных Р4/80 крысы (макрофагограниченный гликопротеин клеточной поверхности), конъюгированных с клоном ВМ8 А1еха 488 (1:1000). Для обнаружения эндотелиальных клеток СГО31 применяли антмышиные РЕСАМ-1 Ι§Ο2η крысы, конъюгированные с клоном 390 РЕ (1 мкг/мл). После отделения ткани замораживали в ОСТ для дальнейшей работы. Срезы печени или роговицы толщиной 5 микрон фиксировали в холодном ацетоне в течение 15 мин при комнатной температуре, затем дважды промывали ΡВδ. После промывки срезы инкубировали в блокирующем растворе (БР) 30 мин при комнатной температуре. Как Р4/80-488, так и С^31-ΡΕ прибавляли к БР в указанных выше концентрациях и инкубировали срезы 30 мин при комнатной температуре, после чего дважды промывали ΡВδ. Шлифы помещали в заливочную среду и получали флуоресцентные изображения с помощью системы ^е^са-Ηатати18и-Ορеη1аЬ.

Результаты и выводы.

Нейтрализующие антитела крыс против мышиного КСФ-1Е - М279 и АРЬ98 - в значительной степени ингибируют РСР-2, но не УВСР-индуцированный ангиогенез в роговице глаза мышей, приблизительно на 80% (Р < 0.01). Единичная доза 250 мкг М279 или АРЬ98 значительно повышала уровень мышиного КСФ-1 в сыворотке по сравнению с уровнем, которые наблюдается при введении мышам крысиного ΙβΟ (повышение в 45-83 раз). Результаты иммунофлуоресцентного окрашивания/локализации (ИМФ) срезов с мышиной роговицы глаза показывают, что подсадка шариков с РСР-2 и УЬСР повышает инфильтрацию макрофагов в роговицу по сравнению с одной только хирургической операцией/подсадкой шарика с ΡВδ. Терапия М279 надежно (приблизительно на 85-96%) снижает стимулиндуцированную (как РСР-2, так и УЬСР) инфильтрацию макрофагов в роговицу по сравнению с контрольной терапией крысиными Ι§Ο. Данные ИМФ по срезам печени мышей также показали, что однократное воздействие М279 или АРБ98 существенно (приблизительно на 60%) снижало количество Р4/80положительных макрофагов в печени мышей, но при этом не приводило к значительным изменениям плотности сосудов по данным ИМФ СГО31 (Р < 0.01). Макрофаги распространяются по системе кровеносных сосудов, но в васкуляризированной роговице глаза мышей они общем случае не локализуются совместно с микрососудами.

При оценке обоих ангиогенных стимулов (РСР-2 и УЬСР) блокирование взаимодействия КСФ1/КСФ-1Е уменьшало инфильтрацию макрофагов в тканях, но, по данным визуализации плотности сосудов роговицы, ингибировало ангиогенез только для РСР-2. На основании полученных результатов можно заключить, что воспалительное окружение определяет, когда тканевые макрофаги, реагирующие на КСФ-1, могут содействовать/способствовать ангиогенезу, но в то же время на множественных участках воспаления для присутствия тканевых макрофагов в очаге воспаления требуется постоянное взаимодействия КСФ-1/КСФ-1Е. Полученные результаты означают, что в тех случаях, когда воспалительный ангиогенез происходит в основном под действием РСР-2 ингибирование взаимодействия КСФ-1/КСФ-1Е может быть полезным, так как оно снижает образование новых кровеносных сосудов, особенно в опухолях с невысоким уровнем УΕСР, но с высокой плотностью сосудов.

Пример 18. Токсикологические исследования на яванских макаках.

Яванским макакам вводили антитело 1.2 δΜ и измеряли фармакодинамические маркеры. В табл. 24 приведены данные по когорте, для которой проводили исследование влияния антигенсвязывающего белка, связывающего с-Гт8. Антитело 1.2 δΜ вводили яванским макакам один раз в неделю в течение 4 недель в виде внутривенных инъекций, после чего следовал 11-недельный период восстановления, при этом заключительную аутопсию проводили на 29-й день, а аутопсию после восстановления - через 3 месяца. Определяли фармакодинамические маркеры, в том числе уровень КСФ-1 в сыворотке, концентрация тартрат-устойчивой кислой фосфатазы 5Ь (Тгар5Ь) и количество макрофагов в толстой кишке. Как указано ниже более подробно, измерение каждого из маркеров подтвердило способность антитела связывать с-Гт8 и ингибировать взаимодействие с-Гт8/КСФ-1. Уровень маркеров коррелировал с уровнем антител в крови.

- 105 023555

Таблица 24

Когорта для токсикологического исследования

Группа	Доза (мг/кг)	Самцы /самки (кол-во)	Конечная аутопсия, самцы /самки (кол-во)	Аутопсия после восстановления, самцы /самки (кол-во)
1	0	5/5	3/3	2/2
2	20	5/5	3/3	2/2
3	100	5/5	3/3	2/2
4	300	5/5	3/3	2/2

Влияние антител 1.2 δΜ на уровень КСФ-1 в сыворотке.

Сывороточный уровень КСФ-1 представляет собой биомаркер на присутствие и активность антител против с-Гтк. Об этом свидетельствует селективное разложение макрофагом ^-меченого КСФ-1 в организме мышей (Ти8Ып8к1 Р1 с соавт. Се11 (1982) 28:71-81); наблюдаемый факт возрастания уровня КСФ-1 у мышей, не имеющих с-Гпъ (Όοί ХМ с соавт. В1оой (2002) 99:111-120); и выявление возрастания уровня КСФ-1 в сыворотке у мышей, получавших антитела против мышиного с-Гтк.

Относительные концентрации КСФ-1 у макак определяли в образцах сыворотки, отобранных на -7, 8, 29, 57, 85 и 99 день. Образцы анализировали методом твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА) в соответствии с методикой производителя (Р&Э δу8ΐет8 нитап СδР-1 ^иоδеΐ Ε^IδΛ кк; Мшпеарокк, МХ). Концентрации КСФ-1 у макак определяли сравнением со стандартной кривой для человеческого КСФ-1.

Для измерения концентрации антитела 1.2 δΜ в сыворотке мышиные антитела анти-1.2 δΜ пассивно адсорбировались на лунках микропланшета Μаx^8о^р (№пс). После удаления избытка мышиных антител 1.2 δΜ, лунки микропланшета блокировали δире^В1оск®Τ20 (Р1егсе, РоскГогй, ТЪ). Стандарты и образцы для контроля качества (ОС) готовили добавлением антител 1.2 δΜ в 100%-ную сборную сыворотку яванского макака. После блокирования лунки микропланшета промывали. Стандарты, матрикс для холостого опыта (неспецифическое связывание), образцы ОС и исследуемые образцы размораживали при комнатной температуре, затем помещали в лунки микропланшета после их обработки 1/50 δире^В1оск®Т20. Антитела 1.2 δΜ в образцах фиксировали иммобилизованными мышиными антителами 1.2 δΜ. Свободные антитела 1.2 δΜ удаляли промывкой лунок микропланшета. После промывки в лунки микропланшета повторно вносили мышиные антитела 1.2 δΜ, конъюгированные с пероксидазой хрена (нРР), для связывания фиксированных антител 1.2 δΜ. Свободные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена, удаляли промывкой. В лунки вносили двухкомпонентный субстратный раствор (3,3,5,5'тетраметилбензидин (ТМБ)). Субстратный раствор ТМБ взаимодействовал с пероксидом, что в присутствии нРР давало колориметрический сигнал, пропорциональный количеству антител 1.2 δΜ, связанных с реагентом для фиксации на начальной стадии. Формирование окраски останавливали и измеряли интенсивность окраски (оптическую плотность, 0Ό) на длинах волн 450 - 650 нм. Сокращение объёма данных проводили с помощью пакета программ \Уа15оп уеплоп 7.0.0.01 по регрессионной модели БодкОс (автооценка) (4-параметрическая логарифмическая модель; 4-РЬ) с весовым коэффициентом 1/Υ.

Лечение обезьян антителами 1.2 δΜ приводило к значительному повышению сывороточного уровня КСФ-1, что коррелировало с концентрацией антител в сыворотке. Таким образом, показано, что сывороточный уровень КСФ-1 после введения антитела и его накопления в сыворотке повышается, а затем после окончания введения и при уменьшении сывороточного уровня антитела - снижается. Полученные результаты находятся в согласии с действием антител на взаимодействие с-Гт8/КСФ-1.

Реакция уровня тартрат-устойчивой кислой фосфатазы Тгар5Ь на воздействие антител 1.2 δΜ.

Уровень Тгар5Ь представляет собой маркер на антитела против с-Гтк. Тгар5Ь является продуктом специфической экспрессии остеокластов и индикатором количества остеокластов. Остеокласты, возникающие при миелоидной дифференциации гематопоэтических клеток, экспрессируют с-Гтк и используют КСФ-1. С этим согласуется наблюдение, согласно которому потеря КСФ-1 приводит к снижению количества остеокластов и к снижению уровня Тгар5Ь у мышей, лишенных КСФ-1 (с генетически детерминированным остеопетрозом - ор/ор) (Όοί ХМ с соавт., В1оой (2002) 99:111 -120).

Для количественного определения Тгар5Ь в организме объекта использовали анализ костной резорбции ВопеТРАР® (!ттипоЙ1адпо511с δу8ΐет8 Ыткей, Роийат нРГО А2). Концентрацию антител 1.2 δΜ в сыворотке определяли как описано выше. Сывороточные уровни ТРАР5Ь и антитела 1.2 δΜ определяли в образцах сыворотки, отобранных на -7, 8, 29, 57, 85 и 99 сутки.

На 29 сутки фазы дозирования для все объектов, получивших антитела 1.2 δΜ, наблюдали понижение уровня Тгар5Ь. После воздействия антител 1.2 δΜ сывороточная концентрация Тгар5Ь повышалась с понижением сывороточной концентрации антител. Введение антител 1.2 δΜ коррелировало с понижением сывороточной концентрации Тгар5Ь.

Реакция макрофагов на воздействие антител 1.2 δΜ.

В качестве дополнительного показателя активности антител 1.2 δΜ в организме яванского макака определяли количество макрофагов, присутствующих в ткани толстой кишки методом лазерной сканирующей цитометрии ГОАС) тканей, окрашенных СЭ68. Образцы толстой кишки отбирали от трех живот- 106 023555 ных/пол/группа, подвергнутых аутопсии на 29-е сутки, и двух животных/пол/группа, подвергнутых аутопсии на 100-е сутки. Образец каждой ткани отбирали в среде обеспечивающей оптимальную температуру разрезания (ОСТ, §а1сига Рше1ек, Торранс, Калифорния) и замораживали в сухом льду/бутановой бане. Макрофаги окрашивали по обычным методикам иммуногистохимии антителами к СЭ68 или изотипом антител. Положительные результаты определения с диаминобензидином (ДАБ) регистрировали методом лазерной сканирующей цитометрии (Ь§С). Применяли метод двойного сканирования, в котором поглощение света лазером измеряется фотодиодным детектором над основанием. При первом проходе с низким разрешением определяется положение среза на слайде, а при следующем проходе высокого разрешения записывают изображения. Количественный анализ окрашивания ЭАВ проводили по программам 1Су1е для лазерной сканирующей цитометрии.

В табл. 25 показаны изменения количества макрофагов в ткани толстой кишки непосредственно после введения антител 1.2 §М (29 сутки) и после периода восстановления, когда антитела уже не вводили 1.2 §М (99 сутки). Данные таблицы показывают, что введение антитела 1.2 §М снижает количество макрофагов в ткани толстой кишки, а после прекращения воздействия антител количество макрофагов увеличивается, что подтверждает активность антител.

Таблица 25

Влияние антител 1.2 §М на численность макрофагов

Дисперсионный анализ	Сравнение групп
Сутки	Эффект	Величина р	Доэа (мг/кг)	Среднее по группе	% снижения (по ср. с контролем)	величины р (по ср. с контролем))
29	ПОЛ	0.4461	0	11.05
	доза	0.0005	20	1.75	84.16%	0.0013
			100	2.36	78.64%	00037
			300	1.94	82.44%	0.0003
99	пол	0.8172	0	10.62
	доза	0.1043	20	12.12	-14.12%	0.9953
			100	9.23	13.09%	0.8493
			300	2.67	74.86%	0.0975

Пример 19. Лечение опухоли у пациента с помощью с-Ттк-связывающего белка.

Пациенту был поставлен диагноз злокачественной опухоли. Пациент получал лечение эффективным количеством с-Ттк-связывающего белка, описанного в настоящем документе. После введения с-Ттксвязывающего белка определяли размер и/или метаболическую активность опухоли (например, методами МРТ или ПЭТ). В ответ на введение с-Ттк-связывающего белка наблюдали существенное уменьшение размера и/или метаболической активности или других показателей роста опухоли, а также ее жизнеспособности и метастазирования.

Пример 20. Снижение уровня ТАМ в организме пациентов со злокачественной опухолью под действием с-Ттк-связывающего белка.

Пациенту был поставлен диагноз злокачественной опухоли. Пациент получал лечение эффективным количеством с-Ттк-связывающего белка, описанного в настоящем документе. После введения с-Ттксвязывающего белка определяли количество ТАМ. В ответ на введение с-Ттк-связывающего белка наблюдали существенное уменьшение количества ТАМ.

Пример 21. Лечение кахексии действием с-Ттк-связывающего белка.

Пациенту был поставлен диагноз онкологического заболевания. Пациент получал лечение эффективным количеством с-Ттк-связывающего белка, описанного в настоящем документе. После введения сТтк-связывающего белка оценивали уровень кахексии. В ответ на введение с-Ттк-связывающего белка наблюдали существенное уменьшение уровня кахексии.

Пример 22. Снижение васкуляризации с помощью с-Ттк-связывающего белка.

Пациенту был поставлен диагноз злокачественной опухоли. Пациент получал лечение эффективным количеством с-Ттк-связывающего белка, описанного в настоящем документе. После введения с-Ттксвязывающего белка брали биопсию опухоли и оценивали уровень васкуляризации. В ответ на введение с-Ттк-связывающего белка наблюдали существенное снижение уровня и/или функционирования васкуляризации опухоли.

Пример 23. Лечение воспалительного артрита действием с-Ттк-связывающего белка.

Пациенту был поставлен диагноз воспалительного артрита. Пациент получал лечение эффективным количеством с-Ттк-связывающего белка, описанного в настоящем документе. После введения с-Ттксвязывающего белка оценивали уровень воспаления и/или плотность костей. В ответ на введение с-Ттксвязывающего белка наблюдали существенное снижение уровня воспаления и/или костного остеолиза.

Все упомянутые патенты и прочие публикации в явном виде включены в данный документ посредством ссылки для целей раскрытия и описания, например, в связи с описанием, могут применяться методики, описанные в упомянутых публикациях. Указанные публикации процитированы исключительно с целью раскрытия до даты подачи настоящей заявки. В этом отношении ничто не должно быть истолковано как признание того факта, что изобретатели не имеют права датировать раскрытые данные более

- 107 023555 ранним числом на основании более раннего изобретения или по другой причине. Все формулировки относительно даты или представления содержания указанных документов основаны на информации, доступной заявителям, и не представляют собой признания правильности дат или содержания указанных документов.

Список последовательностей <110> АМГЕН ИНК,

БРЕЙЗЕЛ, Кеннет, Аллан смозерс, Джеймс, Ф. серретти, Дуглас, пэт мелин, Кристофер сан, джилин фостер, Стивен <120> АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ С-РМ5 ЧЕЛОВЕКА <13О> АРМОБ.007УРС <150> 60/957,148 <151> 2007-08-21 <150> 61/084,588 <151> 2008-07-29 <160> 326 <170> РавсБЕЦ Сили Итпбоюв Уегвтоп 4.0 <210> 1 <211> 512 <212> БЕЛОК <213> ното Бартелз <400> 1

Мес

21 у

Рго

21 у

Уа1

Беи

Беи

Беи

Беи

1_еи

Уа1

Д1а

ТКг

А1а

тгр

Нт в

1

5

10

15

б1у

21 η

о!у

11 е

РГО

νβΐ

11 е

21 и

Рго

Бег

уа1

Рго

21 и

Беи

уа1

уа1

20

25

30

БуВ

Рго

с!у

А1а

ТКг

Уа1

тКг

Беи

Агд

Суз

Уа1

21у

АВП

61 у

Бег

Уа1

35

40

45

С1и

тгр

Авр

21 у

Рго

Рго

Бег

Рго

нтв

тгр

ТКг

Беи

туг

5ег

Авр

21у

50

55

60

Бег

Бег

Бег

Пе

1_еи

5ег

ТКг

АВП

АВП

А1а

ТКг

РКе

С1п

АВП

ТКг

21 у

65

70

75

80

тКг

туг

Агд

суз

тКг

21 и

РГО

21 у

Авр

Рго

Беи

21 у

21 у

Бег

А1а

А1а

85

90

95

Пе

НТ 5

|_еи

туг

уа!

ьуз

АВр

Рго

А1а

Агд

Рго

тгр

А5П

Уа1

Беи

А1а

100

105

110

21 п

21 и

Уа1

Уа1

Уа1

РКе

21 и

Авр

21Л

Авр

А1а

ьеи

Беи

Рго

Суз

Беи

115

120

125

Беи

тКг

АВр

РГО

уа1

Беи

21 и

А1а

61 у

Уа1

Бег

Беи

Уа1

Агд

Уа1

Агд

130

135

140

с1у

Агд

РГО

Беи

мес

Агд

нтв

тКг

АВП

туг

Бег

РКе

5ег

Рго

тгр

НТ 5

145

150

155

160

с1у

РКе

тКг

Пе

НТВ

Агд

А1а

|_ув

РКе

ΐΐ е

С1п

Бег

21 η

Авр

туг

21 η

165

170

175

СУ5

Бег

А1а

Беи

Мес

21 у

21 у

Агд

ί/3

Уа1

мес

Бег

Пе

Бег

Пе

Агд

180

185

190

Беи

1_У5

Уа1

С1л

БуВ

Уа1

11 е

Рго

61 у

Рго

РГО

А1а

Беи

тКг

Беи

Уа1

195

200

205

Рго

А1а

21 и

Беи

Уа1

Агд

Пе

Агд

61 у

21 и

А1а

А1а

С1п

Пе

Уа1

Суз

210

215

220

- 108 023555

Зег

А1а

5ег

5ег

Уа1

Азр

Уа1

АЗП

РЬе

А5р

Уа1

РЬе

ьеи

С1п

Нт'з

А5П

225

230

235

240

АЗП

тЬг

Ьуз

ьеи

А1а

11 е

Рго

б1п

61 п

5ег

Азр

РЬе

нт'з

АЗП

Азп

Агд

245

250

255

Туг

С1п

ьуз

Уа1

Ьеи

тЬг

ьеи

АЗП

ьеи

Азр

6ΐπ

уа1

Азр

РЬе

б1п

НТ 5

260

265

270

А1а

С1у

А5П

туг

Зег

суз

Уа1

А1а

Зег

Азп

Уа1

с!п

б1у

ьуз

НТ 3

Зег

275

280

285

ТЬг

зег

мет

РЬе

РЬе

Агд

Уа1

Уа1

б1и

Зег

А1а

Туг

Ьеи

АЗП

Ьеи

Зег

290

295

300

Зег

61 и

61η

АЗП

ьеи

11 е

6ΐη

С1и

Уа1

ТЬг

Уа1

б!у

б1и

61 у

Ьеи

АЗП

305

310

315

320

ьеи

ьуз

Уа1

мет

уа1

С1и

А1а

туг

Рго

61 у

Ьеи

б!п

61 у

РЬе

А5П

Тгр

325

330

335

тЬг

туг

Ьеи

С1у

РГО

РЬе

Зег

АЗр

НТ 5

61 п

РГО

б!и

Рго

Ьуз

Ьеи

А1а

340

345

350

А5П

Αΐ а

ТЬг

тЬг

ьуз

Азр

ТЬг

туг

Агд

Нт 5

ТЬг

РЬе

тЬг

Ьеи

Зег

ьеи

355

360

365

рго

Агд

ьеи

ьуз

Рго

Зег

б!и

А1а

с!у

Агд

Туг

зег

РЬе

Ьеи

А1а

Агд

370

375

380

АЗП

Рго

б1у

С1у

тгр

Агд

А1а

ьеи

ТЬг

РЬе

б1и

ьеи

тЬг

Ьеи

Агд

туг

385

390

395

400

Рго

РГО

61 и

уа1

зег

Уа1

Пе

Тгр

ТЬг

РЬе

Пе

АЗП

61 у

5ег

61 у

ТЬг

405

410

415

ьеи

ьеи

суз

А1а

Αΐ а

Зег

61 у

туг

РГО

с1п

Рго

АЗП

уа1

ТЬг

тгр

Ьеи

420

425

430

6ΐη

суз

Зег

б1у

НТ 5

тЬг

Азр

Агд

суз

Азр

б1и

А1а

б!п

Уа1

Ьеи

С1п

435

440

445

Уа1

Тгр

Азр

Азр

рго

туг

Рго

61 и

Уа1

ьеи

Зег

61 п

61 и

Рго

РЬе

Нтз

450

455

460

ЬУЗ

Уа1

ТЬг

уа1

61η

Зег

ьеи

ьеи

ТЬг

уа1

61 и

ТЬг

ьеи

61 и

НТ 5

АЗП

465

470

475

480

6ΐη

ТЬг

Туг

С1и

суз

Агд

А1а

НТЗ

АЗП

зег

Уа1

61 у

зег

61 у

5ег

Тгр

485

490

495

А1а

РЬе

Пе

Рго

ίί е

Зег

А1а

б!у

А1а

НТ 5

ТЬг

нтз

Рго

Рго

АЗр

б!и

500

505

510

<210> 2 <211> 326 <212> БЕЛОК <213> ното :

Зартепз

<400> 2

А1а

зег

ТЬг

ьуз

61 у

Рго

Зег

уа1

РЬе

Рго

ьеи

д1а

Рго

суз

Зег

дгд

1

5

10

15

Зег

тЬг

5ег

б1и

5ег

тЬг

А1а

А1а

ьеи

б1у

суз

ьеи

Уа1

Ьуз

АЗр

туг

20

25

30

РЬе

рго

61 и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

зег

тгр

Азп

Зег

б!у

А1а

Ьеи

тЬг

зег

35

40

45

б1у

Уа1

нтз

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

уа1

Ьеи

61 п

Зег

Зег

61 у

Ьеи

туг

зег

50

55

60

ьеи

Зег

Зег

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Зег

Зег

Азп

РЬе

б1у

ТЬг

с1п

тЬг

65

70

75

80

туг

тЬг

СУЗ

Азп

Уа1

А5р

нт 5

ьуз

Рго

Зег

Азп

ТЬг

ьуз

Уа1

Азр

ьуз

85

90

95

ТЬг

Уа1

61 и

Агд

Ьуз

Суз

Суз

Уа1

61 и

Суз

Рго

рго

суз

Рго

А1а

Рго

100

105

но

Рго

Уа1

А1а

С1у

Рго

Зег

Уа1

РЬе

ьеи

РЬе

Рго

рго

ьуз

Рго

ьуз

А5р

115

120

125

тЬг

Ьеи

меЬ

Не

Зег

Агд

ТЬг

рго

б1и

Уа1

ТЬг

суз

Уа1

Уа1

Уа1

Азр

130

135

140

- 109 023555

Уа1

Бег

НТ 5

С1и

АЗр

Рго

б1и

уа1

С1 п

Рйе

АЗП

Тгр

Туг

νβΐ

АЗр

с! у

145

150

155

160

Уа1

С1и

Уа1

НТ 5

АЗП

А1а

Ьуз

ТЙГ

ьуз

Рго

Агд

О1и

о1и

Οί п

Рйе

АЗП

165

170

175

Бег

ТЙГ

Рйе

дгд

Уа1

Уа1

Бег

Уа1

Ьеи

тйг

Уа1

Уа1

НТ 5

С1п

А5р

тгр

180

185

190

ьеи

АЗП

01 у

ьуз

о!и

Туг

Ьуз

Су5

ьуз

Уа1

Бег

Азп

ьуз

о! у

Ьеи

Рго

195

200

205

А1а

РГО

11 е

с!и

ЬУ5

ТЙГ

ίί е

Бег

ьуз

Тйг

ьуз

01 у

Οίη

РГО

лгд

С1 и

210

215

220

РГО

Οίη

Уа1

туг

ТЙГ

Ьеи

РГО

Рго

Бег

Агд

б1и

О1и

мет

тйг

ьуз

АЗП

225

230

235

240

Οίη

Уа1

Бег

ьеи

тйг

Суз

ьеи

Уа1

ьуз

О1у

Рйе

Туг

рго

Бег

Α5Ρ

Пе

245

250

255

А1а

Уа1

01 и

Тгр

С1и

Бег

А5 П

61 у

οίη

РГО

б1и

АЗП

АЗП

туг

ьуз

тйг

260

265

270

тйг

РГО

Рго

мет

ьеи

А5р

Бег

Аэр

С1 у

Бег

Рйе

Рйе

Ьеи

Туг

Бег

ьуз

275

280

285

Ьеи

ТЙГ

Уа1

Азр

1-У5

Бег

Агд

Тгр

01 η

С1п

О1у

АЗП

Уа1

рйе

Бег

суз

290

295

300

Бег

Уа1

мет

НТ £

01 и

А1а

ьеи

НТ 5

Азп

НТ 3

туг

тйг

С1 п

ьуз

Бег

ьеи

305

310

315

320

Бег

Ьеи

Бег

Рго

о1у

ьуз

325

<210> 3 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Бартепз

<400> 3 Агд ТЙГ

Уа1

А1а

А1а

Рго

Бег

Уа1

Рйе

11е

Рйе

Рго

Рго

Бег

Азр

О1и

1

5

10

15

οίп ьеи

Ьуз

Бег

с! у

ТЙГ

А1а

Бег

Уа1

Уа1

суз

Ьеи

ьеи

Азп

АЗП

Рйе

20

25

30

Туг РГО

Агд

С1и

л1а

ьуз

Уа1

Οίη

тгр

ьуз

νβΐ

Азр

АЗП

А1а

ьеи

01 п

35

40

45

Бег О1у

Азп

Бег

С1п

01 и

Бег

Уа1

Тйг

С1и

С1п

АЗр

Бег

ьуз

Азр

Бег

50

55

60

ТЙГ Туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

тйг

ьеи

тйг

ьеи

Бег

ьуз

А1а

АЗр

Туг

01 и

65

70

75

80

Ьуз НТ 5

ьуз

Уа1

туг

А1а

суз

01 и

Уа1

тйг

нт 5

01 п

01 у

ьеи

Бег

Бег

85

90

95

рго Уа1

тйг

ьуз

Бег

Рйе

АЗП

Агд

б1у

01 и

суз

100

105

<210> 4

<211> 451

<212> БЕЛОК

<213> Ното :

Бартепз

<400> 4

01 п Уа1

Οίη

Ьеи

Уа1

01 п

Бег

01 у

А1а

О1и

Уа1

ьуз

Ьуз

РГО

б!у

А1а

1

5

10

15

Бег Уа1

ьуз

Уа1

Бег

Суз

ьуз

А1а

Бег

01 у

Туг

ТЙГ

Рйе

ТЙГ

А1а

туг

20

25

30

туг мет

нтз

Тгр

νβΐ

Агд

Οίη

д1а

РГО

01 у

61 п

О1у

ьеи

С1и

Тгр

мет

35

40

45

о!у тгр

ίί е

АЗП

РГО

Азп

Бег

О1у О1у

ТЙГ

А5П

туг

А1а

Οίη

ьуз

Рйе

55 60

- 110 023555

Οίη

61 у

Агд

Уа1

ТЬг

мет

ТЬг

Агд

Азр

тЬг

Бег

Пе

Бег

тЬг

А1а

туг

65

70

75

80

мег

с!и

Ьеи

Бег

Агд

ьеи

Агд

Бег

Азр

АЗр

тЬг

А! а

Уа!

туг

Туг

Суз

85

90

95

А! а

Агд

о! у

О! у

Туг

Бег

с! у

туг

Аэр

Ьеи

О! у

туг

Туг

Туг

01 у

МеХ

100

105

110

АЗр

Уа!

тгр

01 у

С1п

С1 у

ТЬг

ТЬг

уа!

тЬг

Уа!

Бег

Бег

а! а

Бег

ТЬг

115

120

125

1.У5

о!у

РГО

Бег

Уа1

РЬе

Рго

Ьеи

А! а

Рго

суз

Бег

Агд

Бег

тЬг

Бег

130

135

140

с1и

Бег

ТЬг

А1а

А1а

ьеи

О! у

суз

Ьеи

Уа1

ьуз

А5Р

Туг

РЬе

РГО

О1и

145

150

155

160

РГО

Уа!

ТЬг

Уа!

Бег

Тгр

АЗП

Бег

о1у

А! а

Ьеи

тЬг

Бег

О1у

Уа1

нтз

165

170

175

ТЬг

РЬе

РГО

А! а

Уа!

Ьеи

61 п

Бег

Бег

01 у

Ьеи

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

180

185

190

Уа1

уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Бег

Бег

Азп

РЬе

О! у

ТЬг

о!п

ТЬг

туг

ТЬг

суз

195

200

205

Д5П

уа!

Азр

ΗΊ5

Ьуз

Рго

Бег

Азп

ТЬг

ьуз

уа!

Азр

ьуз

ТЬг

Уа!

01 и

210

215

220

Агд

ьуз

суз

Суз

Уа1

01 и

Суз

РГО

РГО

Суз

РГО

А1а

РГО

Рго

Уа!

А! а

225

230

235

240

б!у

РГО

Бег

Уа1

РЬе

ьеи

РЬе

РГО

РГО

ьуз

Рго

Ьуз

АЗр

ТЬг

ьеи

Мег

245

250

255

Пе

Бег

лгд

ТЬг

РГО

О1и

Уа1

ТЬг

суз

Уа1

уа1

Уа!

АЗр

Уа!

Бег

нтз

260

265

270

с1и

АЗр

Рго

01и

уа!

Οίη

РЬе

А5П

Тгр

Туг

Уа!

Азр

С1 у

Уа!

О1и

Уа1

275

280

285

НТ5

АЗП

А1а

ьуз

тЬг

ьуз

РГО

Агд

с! и

О1и

С1 η

РЬе

АЗП

Бег

ТЬг

РЬе

290

295

300

Агд

уа!

Уа1

Бег

Уа!

Ьеи

ТЬг

Уа!

уа!

НТ 5

С1П

АЗр

тгр

ьеи

АЗП

С!у

305

310

315

320

ьуз

о! и

туг

ьуз

суз

ьуз

Уа!

Бег

АЗП

ьуз

61 у

Ьеи

РГО

л1а

Рго

11 е

325

330

335

01и

ьуз

тЬг

Пе

Бег

ьуз

ТЬг

ьуз

с! у

Οίη

Рго

Агд

о! и

РГО

С! η

Уа!

340

345

350

туг

тЬг

Ьеи

РГО

Рго

Бег

Агд

о1и

О1и

мех

ТЬг

ьуз

А5П

О1п

Уа!

Бег

355

360

365

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

уа!

ьуз

о! у

РЬе

Туг

РГО

Бег

Азр

11 е

а! а

Уа!

с! и

370

375

380

Тгр

О1и

Бег

АЗП

О1 у

о! П

Рго

о1и

АЗП

АЗП

туг

ьуз

ТЬг

тЬг

РГО

Рго

385

390

395

400

мет

Ьеи

Азр

Бег

АЗр

О! у

Бег

РЬе

РЬе

ьеи

туг

Бег

ьуз

ьеи

ТЬг

Уа!

405

410

415

Азр

ьуз

Бег

Агд

Тгр

с! η

С! п

О! у

АЗП

Уа!

РЬе

Бег

суз

Бег

Уа1

мех

420

425

430

НТЗ

О1и

а! а

ьеи

НТЗ

Азп

ΗΪ 5

Туг

ТЬг

о!п

ЬУ5

Бег

Ьеи

Бег

Ьеи

Бег

435

440

445

РГО

С! у

ьуз

450

<210>	5
<211>	447
<212>	БЕЛОК
<213>	Ното БартепБ
<400>	5
с!η Уа! с!η ьеи с!η	01 и	Бег	с1у	РГО	61 у Ьеи	Уа!	ьуз	РГО	Бег	О! и
1	5					10				15
тЬг ьеи Бег ьеи тЬг	Суз	тЬг	Уа!	Бег	б! у С1у	Бег	Уа!	Бег	Бег	о! у

25 30

- 111 023555

С1у туг туг тгр Бег тгр Пе Агд СТп Рго рго СТу Ьуз СТу Ьеи СТи

35

40

45

Тгр

Пе

СТу

Туг

Пе

туг

Туг

Бег

С1у

Бег

тЬг

АЗП

туг

АЗП

рго

Бег

50

55

60

ьеи

ьуз

Бег

дгд

уаТ

ТЬг

Пе

Бег

УаТ

АЗр

тЬг

Бег

ьуз

АЗП

сТп

рЬе

65

70

75

80

Бег

ьеи

ьуз

ьеи

Бег

Бег

уаТ

ТЬг

АТа

АТа

АЗр

тЬг

АТа

УаТ

туг

Туг

85

90

95

су 5

АТа

АТа

СТу

Пе

АТа

АТа

ТЬг

СТу

тЬг

Ьеи

РЬе

АЗр

Суз

тгр

СТу

100

105

110

СТп

СТу

ТЬг

Ьеи

УаТ

ТЬг

УаТ

Бег

Бег

АТа

Бег

ТЬг

Ьуз

СТу

РГО

Бег

115

120

125

Уа1

РЬе

Рго

Ьеи

АТа

Рго

су 5

Бег

Агд

Бег

ТЬг

Бег

СТи

Бег

ТЬг

АТа

130

135

140

А1а

Ьеи

сТу

Суз

Ьеи

УаТ

ьуз

Азр

туг

рЬе

Рго

С1и

РГО

уаТ

тЬг

УаТ

145

150

155

160

Бег

тгр

АЗП

Бег

СТу

АТа

ьеи

ТЬг

Бег

СТу

УаТ

НТЗ

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

165

170

175

Уа1

Ьеи

СТп

Бег

Бег

С1у

ьеи

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

УаТ

УаТ

ТЬг

УаТ

180

185

190

Рго

Бег

Бег

Азп

рЬе

сТу

ТЬг

С1п

ТЬг

туг

ТЬг

Суз

Азп

УаТ

Азр

НТ 5

195

200

205

ьуз

Рго

Бег

АЗП

ТЬг

ьуз

УаТ

АЗр

ьуз

тЬг

УаТ

СТи

Агд

ьуз

суз

Суз

210

215

220

уаТ

СТи

Суз

Рго

рго

Суз

Рго

АТа

Рго

РГО

Уа1

АТа

СТу

Рго

Бег

УаТ

225

230

235

240

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

рго

ьуз

Рго

ЬУЗ

Азр

ТЬг

ьеи

МеТ

Пе

Бег

Агд

ТЬг

245

250

255

Рго

СТи

УаТ

Т1тг

Суз

УаТ

УаТ

УаТ

Азр

УаТ

Бег

НТ 5

С1и

Азр

Рго

СТи

260

265

270

Уа1

С1п

РЬе

АЗП

Тгр

Туг

УаТ

Азр

СТу

УаТ

61 и

УаТ

НТ 5

Азп

АТа

ьуз

275

280

285

ТЬг

ьуз

Рго

Агд

СТи

СТи

СТп

РЬе

АЗП

Бег

ТЬг

РЬе

Агд

уаТ

УаТ

Бег

290

295

300

УаТ

Ьеи

ТЬг

УаТ

Уа1

НТ 5

СТп

АЗр

Тгр

Ьеи

Азп

СТу

ьуз

СТи

туг

ьуз

305

310

315

320

Суз

ьуз

Уа1

Бег

АЗП

ьуз

СТу

ьеи

Рго

АТа

Рго

Пе

СТи

ьуз

ТЬг

Пе

325

330

335

Бег

ьуз

тЬг

ЬУ5

СТу

СТп

Рго

Агд

сТи

Рго

сТп

УаТ

туг

ТЬг

Ьеи

Рго

340

345

350

Рго

Бег

Агд

С1 и

сТи

мет

ТЬг

ьуз

Азп

сТп

уаТ

Бег

ьеи

тЬг

Суз

Ьеи

355

360

365

УаТ

Ьуз

СТу

РЬе

туг

Рго

Бег

А5р

Пе

А1а

УаТ

СТи

тгр

СТи

Бег

Азп

370

375

380

СТу

СТ η

Рго

СТи

АЗП

А5П

туг

ьуз

ТЬг

ТЬг

РГО

Рго

мет

ьеи

Аэр

Бег

385

390

395

400

Азр

СТ у

Бег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Бег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

УаТ

Азр

ьуз

Бег

Агд

405

410

415

тгр

СТ η

СТп

С1у

АЗП

УаТ

РЬе

Бег

Суз

Бег

УаТ

мет

НТ 5

СТи

А1а

Ьеи

420

425

430

НТ5

АЗП

нт 5

Туг

ТЬг

СТп

ьуз

Бег

Ьеи

Бег

ьеи

Бег

Рго

сТу

ьуз

435

440

445

<210> 6 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Нолю БартепБ <400> 6 сТп νβΐ сТп ьеи Уа1 СТп Бег сТу АТ а СТи УаТ ьуг 1_у5 Рго СТу А1а 15 10 15

- 112 023555

Бег

Уа1

туз

Уа1 20

Бег

Суз Туз А1а Бег о!у Туг тНг РНе тНг о!у

Туг

25

30

туг

ίί е

нтз

тгр

Уа1

Агд

01 п

А1а

РГО

с!у

о1п

с1 у

Теи

С1и

Тгр

мет

35

40

45

С1у

тгр

Пе

АЗП

Рго

Азп

Бег

01 у

С1у

тНг

АЗП

туг

А1а

01 п

туз

РНе

50

55

60

οίη

01 у

Агд

Уа1

тНг

МеТ

ТНг

Агд

АЗр

ТНг

Бег

Пе

Бег

ТНг

А1а

Туг

65

70

75

80

мет

01и

сеи

Бег

Агд

ьеи

Агд

Бег

Азр

Азр

ТНг

А1а

Уа1

Туг Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

АЗр

Агд

01 у

01 п

Теи

тгр

ьеи

тгр

Туг

туг

туг

туг

туг

О1у

100

105

110

мет

А5р

Уа1

Тгр

01 у

01 п

01 у

ТНг

ТНг

уа!

тНг

Уа1

Бег

Бег

А1а

Бег

115

120

125

тНг

|_уз

О1у

Рго

Бег

Уа1

РНе

РГО

Теи

л1а

Рго

суз

Бег

Агд

Бег

ТНг

130

135

140

Бег

с!и

Бег

ТНг

д1а

А1а

ьеи

01 у

суз

Ьеи

Уа1

туз

Азр

туг

РНе

Рго

145

150

155

160

О1и

РГО

уа1

ТНг

уа1

Бег

тгр

АЗП

Бег

01 у

А1а

Теи

ТНг

Бег

о!у

Уа1

165

170

175

ΗΪ3

тК г

РНе

Рго

А1а

Уа1

теи

01 п

Бег

Бег

С1у

теи

Туг

Бег

теи

Бег

180

185

190

Бег

Уа1

Уа1

тНг

Уа1

РГО

Бег

Бег

АЗП

рНе

О1у

тНг

Οίη

тНг

Туг

тНг

195

200

205

Суз

Азп

Уа1

Азр

нтз

ьуз

Рго

Бег

АЗП

ТНг

туз

Уа1

Агр

туз

ТНг

Уа1

210

215

220

О1и

Агд

ьуз

Суз

Суз

уа!

01 и

Суз

РГО

Рго

Суз

РГО

А1а

Рго

РГО

Уа1

225

230

235

240

А1а

01 у

Рго

Бег

Уа1

рНе

Теи

РНе

Рго

рго

туз

рго

ьуз

АЗр

ТНг

теи

245

250

255

МеТ

Пе

Бег

Агд

ТНг

Рго

С1и

Уа1

ТНг

Суз

Уа1

Уа1

Уа!

Азр

Уа1

Бег

260

265

270

Н13

01и

Азр

Рго

О1и

Уа1

С1п

РНе

АЗП

тгр

Туг

νβΐ

Азр

01 у

Уа1

о!и

275

280

285

уа!

ΗΪ 5

АЗП

Д1а

Туз

ТНг

Туз

Рго

Агд

о!и

01и

Οίη

РНе

АЗП

Бег

ТНг

290

295

300

рНе

Агд

уа1

νβΐ

Бег

Уа1

теи

ТНг

Уа1

Уа1

нтз

01 п

АЗр

тгр

Теи

АЗП

305

310

315

320

О1у

ЬУ5

01 и

туг

туз

Суз

ьуз

Уа1

Бег

АЗП

Туз

61 у

ьеи

РГО

А1а

РГО

325

330

335

ίί е

01 и

суз

ТМг

Пе

Бег

туз

тНг

ьуз

01у

с!п

Рго

Агд

с!и

РГО

οίη

340

345

350

уа!

туг

ТНг

|_еи

РГО

Рго

Бег

Агд

01и

о!и

мет

тНг

туз

АЗП

οίη

Уа1

355

360

365

5ег

Теи

тНг

Суз

Теи

Уа1

ьуз

01 у

РНе

туг

Рго

Бег

АЗр

Пе

л1а

νβΐ

370

375

380

61 и

Тгр

С1и

Бег

Азп

С1у

С1п

Рго

01 и

АЗП

Азп

Туг

ЬУ5

ТНг

ТНг

Рго

385

390

395

400

Рго

мет

теи

Азр

Бег

АЗр

01 у

Бег

РНе

РНе

Теи

Туг

Бег

туз

Теи

ТНг

405

410

415

Уа1

Азр

ьуз

Бег

Агд

тгр

01 п

01 п

61 у

АЗП

Уа1

РНе

Бег

суз

Бег

νβΐ

420

425

430

МеТ

ΗΪ 5

01 и

А1а

Теи

нт'з

АЗП

нт'з

туг

тНг

с!п

туз

Бег

Теи

Бег

Теи

435 440 445

Бег Рго б1у Ьуз 450 <210> 7 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз

- 113 023555

<400> 7

Οίη

Уа1

сТп

ьеи

УаТ

СТи

Бег

сТу

СТу

СТу

УаТ

УаТ

сТп

РГО

С1у

Агд

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

суз

А1а

АТа

Бег

СТу

РНе

тНг

РНе

Бег

Бег

туг

20

25

30

сТу

мет

НТ 5

тгр

УаТ

Агд

СТп

АТа

РГО

С1у

ьуз

СТ у

ьеи

СТи

тгр

уа1

35

40

45

АТа

УаТ

Не

Тгр

туг

АЗр

СТу

Бег

Азп

Ьуз

Туг

Туг

АТа

А5р

Бег

УаТ

50

55

60

О1у

Агд

Р1те

тНг

1Те

Бег

Агд

Азр

Азп

Бег

Ьуз

АЗП

ТНг

Ьеи

туг

65

70

75

80

ьеи

6ΐη

мет

АЗП

Бег

ьеи

Агд

АТа

СТи

АЗр

ТНг

АТа

УаТ

туг

туг

Суз

85

90

95

АТа

Бег

Бег

Бег

Тгр

Бег

Туг

Туг

СТу

МеТ

Азр

УаТ

Тгр

СТу

СТп

СТу

100

105

110

тНг

тНг

УаТ

тНг

УаТ

Бег

Бег

АТа

Бег

ТНг

ьуз

сТу

Рго

Бег

Уа1

РНе

115

120

125

Рго

Ьеи

АТ а

Рго

Суз

Бег

Агд

Бег

тНг

Бег

СТи

Бег

тНг

АТа

АТа

ьеи

130

135

140

СТу

Суз

ьеи

УаТ

ьуз

Азр

туг

РНе

РГО

СТи

Рго

УаТ

ТНг

УаТ

Бег

тгр

145

150

155

160

АЗП

Бег

СТ у

АТа

ьеи

ТНг

Бег

сТу

УаТ

ΗΊ 5

ТНг

РНе

Рго

АТа

УаТ

Ьеи

165

170

175

СТп

Бег

Бег

сТу

Ьеи

Туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

УаТ

УаТ

ТНг

Уа1

Рго

Бег

180

185

190

Бег

АЗП

РКе

С1у

тНг

СТп

ΤΗ г

туг

тНг

Суз

АЗП

уаТ

Азр

НТ 5

ьуз

Рго

195

200

205

Бег

АЗП

тНг

ьуз

УаТ

Азр

Ьуз

ТНг

УаТ

СТи

Агд

Ьуз

Суз

Суз

УаТ

СТи

210

215

220

СУЗ

Рго

Рго

СУ5

Рго

АТа

Рго

Рго

УаТ

А1а

СТу

Рго

Бег

УаТ

РНе

Ьеи

225

230

235

240

РНе

РГО

Рго

ьуз

Рго

ьуз

А5р

тНг

Ьеи

мет

Пе

Бег

Агд

ТНг

Рго

СТи

245

250

255

УаТ

тНг

Суз

УаТ

УаТ

УаТ

Азр

УаТ

Бег

НТ 5

СТи

Азр

РГО

СТи

уаТ

61 п

260

265

270

РНе

АЗП

тгр

туг

УаТ

Азр

СТу

УаТ

СТи

УаТ

НТ 5

АЗП

АТа

ьуз

тНг

ьуз

275

280

285

РГО

Агд

сТи

сТи

СТп

РНе

АЗП

Бег

тНг

РНе

Агд

УаТ

УаТ

Бег

Уа1

Ьеи

290

295

300

тНг

УаТ

УаТ

НТ 5

сТп

Азр

тгр

Ьеи

АЗП

СТу

Ьуз

С1и

туг

Ьуз

Суз

ьуз

305

310

315

320

УаТ

Бег

А5П

Ьуз

СТу

Ьеи

РГО

АТа

РГО

Пе

СТи

ьуз

ТНг

Пе

Бег

ьуз

325

330

335

ТНг

ЬУ5

СТ у

СТп

РГО

Агд

сТи

Рго

СТп

УаТ

туг

ТНг

Ьеи

РГО

Рго

Бег

340

345

350

Агд

сТи

сТи

Мет

ТНг

ЬУЗ

АЗП

сТп

УаТ

Бег

Ьеи

тНг

суз

ьеи

УаТ

Ьуз

355

360

365

СТу

РНе

туг

Рго

Бег

АЗр

Пе

АТа

УаТ

СТи

тгр

СТи

Бег

АЗП

ОТ у

СТп

370

375

380

Рго

СТи

АЗП

АЗП

туг

Ьуз

ТНг

тНг

Рго

Рго

мет

ьеи

Азр

Бег

АЗр

сТу

385

390

395

400

Бег

РНе

РКе

Ьеи

туг

Бег

Ьуз

ьеи

тНг

УаТ

Азр

Ьуз

Бег

Агд

тгр

С1 п

405

410

415

СТп

СТ у

АЗП

УаТ

РНе

Бег

Суз

Бег

УаТ

мет

НТ 5

СТи

АТа

Ьеи

нтз

АЗП

420

425

430

НТ 5

туг

ТНг

СТ η

ьуз

Бег

ьеи

Бег

ьеи

Бег

Рго

СТу

ьуз

435

440

445

<210> 8

<211> 455

- 114 023555 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 8

б!и Уа1 1

б!п

ьеи

Уа1 5

б1и

Бег б!у

б1у

б1у 10

Ьеи

Уа1

ьуз

РГО

С1у 15

б!у

Бег

ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

А1а

А1а

Бег

61 у

РЬе

ТЬг

Уа1

Бег

АБП

А1а

20

25

30

тгр

МеТ

Бег

тгр

Уа1

Агд

61 η

А1а

Рго

б1у

ьуз

б1у

ьеи

б1и

тгр

Уа1

35

40

45

61 у

Агд

Пе

ЬуБ

Бег

ЬуБ

тЬг

Азр

С1у б!у

тЬг

тЬг

АБр

АБП

А1а

А1а

50

55

60

РГО

уа!

1-У2

61 у

Агд

РЬе

ТЬг

Пе

Бег

Агд

АЗр

Азр

Бег

ьуз

АБП

ТЬг

65

70

75

80

Беи

Туг

Ьеи

61 η

Мет

Абп

Бег

Ьеи

ьуз

тЬг

б1и

АЗр

тЬг

А1а

уа!

Туг

85

90

95

туг

СУ£

тЬг

ТЬг

с!у 61 у

Бег

ьеи

ьеи

тгр

ТЬг

61 у

РГО

абп

Туг

туг

100

105

110

Туг

Туг

61 у

мет

АБр

Уа1

Тгр

61 у

6ΐη

б!у

ТЬг

тЬг

Уа1

тЬг

Уа1

Бег

115

120

125

Бег

а1 а

Бег

ТЬг

ьуз

61 у

Рго

Бег

Уа1

рЬе

Рго

ьеи

А1а

Рго

Суз

Бег

130

135

140

Агд

Бег

ТЬг

Бег

С1и

Бег

ТЬг

А1а

А1а

ьеи

61 у

Суз

ьеи

Уа1

Ьуз

АЗр

145

150

155

160

туг

РЬе

рго

61 и

РГО

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

тгр

А5П

Бег

61 у

А1а

ьеи

ТЬг

165

170

175

Бег

б!у

Уа1

Н1 5

ТЬг

рЬе

Рго

А1а

уа1

Ьеи

6ΐη

Бег

Бег

б!у

Ьеи

туг

180

185

190

Бег

ьеи

Бег

Бег

уа1

Уа1

тЬг

Уа1

Рго

Бег

Бег

АБП

РЬе

б1у

ТЬг

61 η

195

200

205

ΤΙΊΓ

туг

тЬг

Суз

АБП

Уа1

АБр

НТ 5

ьуз

РГО

Бег

АБП

ТЬг

ьуз

Уа1

Азр

210

215

220

Ьуз

тЬг

Уа1

61 и

Агд

ьуз

СУБ

суз

Уа1

б1и

Суз

рго

Рго

Суз

РГО

А1а

225

230

235

240

РГО

Рго

Уа1

А1а

61 у

РГО

Бег

Уа1

РЬе

ьеи

РЬе

РГО

РГО

Ьуз

Рго

ьуз

245

250

255

АБр

ТЬг

Ьеи

мет

11 е

Бег

Агд

тЬг

РГО

б!и

Уа1

ТЬг

Суз

Уа1

Уа1

Уа1

260

265

270

АБр

Уа1

Бег

НТ 5

б!и

Азр

Рго

61 и

Уа1

61 η

РЬе

АБП

тгр

туг

Уа1

А5р

275

280

285

б1у

Уа1

б1и

Уа1

НТ 5

абп

А1а

Ьуз

тЬг

ьуз

Рго

Агд

б1и

61 и

6ΐη

РЬе

290

295

300

АБП

Бег

ТЬг

рЬе

Агд

Уа1

Уа1

Бег

Уа1

ьеи

тЬг

Уа1

Уа1

НТ 5

6ΐπ

Азр

305

310

315

320

тгр

ьеи

АБП

61 у

ьуз

61 и

Туг

ьуз

Суз

Ьуз

Уа1

Бег

Абп

Ьуз

61 у

Ьеи

325

330

335

Рго

А1а

Рго

Пе

61 и

ЬУ5

ТЬг

Пе

Бег

Ьуз

ТЬг

ьуз

61 у

61 п

Рго

Агд

340

345

350

61 и

Рго

с1п

νβΐ

Туг

тЬг

Ьеи

Рго

Рго

Бег

Агд

б1и

б1и

Мет

тЬг

ьуз

355

360

365

АБП

6ΐη

Уа1

Бег

ьеи

тЬг

Суз

Ьеи

Уа1

ЬУ5

б!у

РЬе

Туг

Рго

Бег

АБР

370

375

380

Не

А1а

Уа1

61 и

тгр

61 и

Бег

АБП

61 у

61 η

Рго

б1и

абп

АБП

Туг

ьуз

385

390

395

400

тЬг

ТЬг

Рго

Рго

мет

Ьеи

АБр

Бег

Азр

б!у

Бег

рЬе

рЬе

ьеи

туг

Бег

405

410

415

ЬУБ

Ьеи

ТЬГ

Уа1

АБр

ЬуБ

Бег

Агд

тгр

61 η

61 η

61 у

АБП

Уа1

РЬе

Бег

420

425

430

СУ5

Бег

Уа1

Мет

НТ 5

б!и

А1а

Ьеи

НТ 5

АБП

НТ 5

туг

тЬг

61 п

ьуз

Бег

435 440 445

Ьеи Бег ьеи Бег рго 61 у ьуз 450 455

- 115 023555 <210> 9 <213> 452 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 9

б!и

Уа!

с! η

ьеи

уа!

б1и

Бег

61 у

61 у

61 у

ьеи

уа!

ьуз

РГО

б! у

61 у

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

А! а

А1а

Бег

61 у

РНе

ТНг

РНе

Бег

АЗП

а! а

20

25

30

тгр

мег

Бег

Тгр

уа!

Агд

с! η

А1а

Рго

б1у

ьуз

61 у

ьеи

б1и

тгр

Уа1

35

40

45

61 у

Агд

Не

Ьуз

Бег

Ьуз

ТНг

АЗр

б1у

б!у

тНг

ТНг

Аэр

туг

а! а

а! а

50

55

60

рго

уа!

ьуз

С! у

Агд

РНе

ТНг

Не

Бег

Агд

Азр

Азр

Бег

ьуз

АЗП

ТНг

65

70

75

80

ьеи

Туг

ьеи

С! η

мет

АЗП

Бег

ьеи

ьуз

тНг

б1и

Азр

ТНг

А1а

Уа!

Туг

85

90

95

туг

СУ5

тНг

ТНг

С! и

туг

туг

б1у

Бег

61 у

б1у

Уа!

Тгр

Туг

Туг

С! у

100

105

но

мет

Азр

уа!

Тгр

б!у

С! η

с! у

тНг

тНг

Уа1

тНг

Уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

115

120

125

ТНГ

ьуз

61 у

РГО

Бег

уа!

рНе

Рго

Ьеи

А! а

Рго

суз

Бег

Агд

Бег

ТНг

130

135

140

Бег

о! и

Бег

тНг

А! а

А1а

Ьеи

б!у

суз

ьеи

Уа!

ьуз

Агр

туг

РНе

Рго

145

150

155

160

61 и

Рго

уа1

тНг

уа!

Бег

тгр

АЗП

Бег

б! у

А1а

ьеи

тНг

Бег

б!у

Уа!

165

170

175

ΗΪ 5

тНг

РНе

РГО

а! а

Уа!

ьеи

61 п

Бег

Бег

61 у

ьеи

туг

Бег

Ьеи

Бег

180

185

190

5ег

Уа1

уа!

тНг

уа!

РГО

Бег

Бег

АЗП

рНе

б1у

тНг

б!п

ТНг

туг

тНг

195

200

205

Су 5

АЗП

Уа!

Азр

НТ 5

1-уз

Рго

Бег

АЗП

ТНг

ьуз

Уа!

Азр

Ьуз

ТНг

Уа!

210

215

220

б1и

Агд

ьуз

Суз

суз

Уа1

б1и

суз

Рго

рго

суз

Рго

А! а

рго

Рго

уа!

225

230

235

240

А! а

61 у

РГО

Бег

уа1

РНе

Ьеи

РНе

РГО

РГО

ьуз

РГО

ьуз

Азр

тНг

Ьеи

245

250

255

мер

Не

Бег

Агд

тНг

рго

с! и

Уа!

ТНг

суз

Уа1

Уа1

Уа1

Азр

Уа1

Бег

260

265

270

НТ 5

о! и

Азр

Рго

с! и

уа!

С! η

РНе

АЗП

тгр

Туг

уа!

Азр

61 у

Уа!

б!и

275

280

285

Уа1

НТ 5

АЗП

А1 а

ьуз

ТНг

Ьуз

Рго

Агд

б1и

61 и

61 η

рНе

АЗП

Бег

тНг

290

295

300

РНе

Агд

уа!

Уа1

Бег

Уа!

Ьеи

ТНг

Уа!

Уа1

НТ 5

б!п

Азр

Тгр

Ьеи

АЗП

305

310

315

320

б!у

Ьуз

с! и

туг

ьуэ

суз

ьуз

Уа1

Бег

АЗП

ьуз

61 у

ьеи

РГО

А1а

Рго

325

330

335

11 е

С1 и

Ьуз

ТНг

Не

Бег

ьуз

ТНг

ьуз

61 у

6ΐπ

Рго

Агд

61 и

Рго

61 п

340

345

350

Уа1

Туг

тНг

ьеи

рго

Рго

Бег

Агд

б! и

61 и

Мет

ТНг

ьуз

АЗП

61 п

Уа!

355

360

365

Бег

Ьеи

тНг

Суз

ьеи

Уа1

ьуз

61 у

РНе

Туг

Рго

Бег

Азр

Не

А1а

Уа!

370

375

380

61 и

тгр

б1и

зег

АЗП

С! у

61 η

РГО

б! и

А5П

АЗП

Туг

ьуз

тНг

тНг

рго

385

390

395

400

РГО

мет

ьеи

Азр

Бег

Азр

61 у

Бег

РНе

РНе

ьеи

Туг

Бег

Ьуз

Ьеи

ТНг

405

410

415

να!

АЗр

ьуз

Бег

Агд

тгр

61 η

61 η

б!у

А5П

уа!

РНе

Бег

суз

Бег

Уа!

420 425 430

- 116 023555

Мег Нтз С1и А1а кеи Нтз Азп Нтз Туг ТНг б!п куз Бег кеи Бег кеи
	435	440	445
5ег	Рго б!у куз
	450

<210> 10

<211> 455

<212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 10

61 и

Уа!

с1п

кеи

уа!

с! и

Бег

б!у

б!у

61 у

кеи

Уа!

куз

РГО

61 у

61 у

1

5

10

15

Бег

кеи

Агд

кеи

Бег

Суз

а! а

а! а

Бег

б!у

РНе

тНг

РНе

Бег

АЗП

А! а

20

25

30

тгр

мет

Бег

тгр

Уа!

Агд

61 η

А! а

Рго

с! у

куз

б! у

кеи

б!и

Тгр

Уа!

35

40

45

с!у

Агд

Пе

ьуз

Бег

ьуз

тНг

Азр

б!у

Тгр

тНг

тНг

Азр

Туг

а! а

А! а

50

55

60

РГО

уа!

ьуз

61 у

Агд

РНе

ТНг

ΐ! е

Бег

Агд

абр

АЗР

Бег

ьуз

Азп

ТНг

65

70

75

80

кеи

туг

кеи

с! η

мет

Азп

Бег

кеи

куз

ТНг

б1и

АЗр

тНг

А1а

Уа!

туг

85

90

95

Туг

Суз

тНг

тНг

Азр

кеи

Агд

Не

ТНг

б1у

ТНг

ТНг

Туг

туг

туг

Туг

100

105

но

Туг

Туг

б1у

мет

АЗр

Уа!

Тгр

б1у

6ΐη

б!у

тНг

тНг

Уа1

ТНг

Уа!

Бег

115

120

125

Бег

А1а

Бег

тПг

ЬУ5

б1у

Рго

Бег

Уа1

РНе

Рго

кеи

А! а

Рго

Суз

Бег

130

135

140

Агд

Бег

тНг

Бег

б!и

Бег

тНг

А1а

А! а

кеи

б!у

суз

кеи

уа!

куз

Азр

145

150

155

160

Туг

РНе

Рго

61 и

РГО

уа1

ТНг

Уа!

Бег

Тгр

Азп

Бег

61 у

А! а

кеи

ТНг

165

170

175

Бег

С1 у

Уа!

НТ 5

ТНг

РНе

Рго

А! а

Уа!

кеи

б!п

Бег

Бег

61 у

кеи

Туг

180

185

190

Бег

|_еи

Бег

Бег

уа!

Уа!

ТНг

уа1

Рго

Бег

Бег

АЗП

РНе

б!у

тНг

б1п

195

200

205

ТНг

туг

ТНг

Суз

АЗП

Уа!

АЗр

нтз

ьуз

Рго

Бег

АЗП

тНг

куз

Уа!

Азр

210

215

220

ЬУ5

тК г

Уа!

б1и

Агд

ьуз

Суз

Суз

Уа!

б1и

суз

Рго

Рго

суз

РГО

ΑΊ а

225

230

235

240

Рго

Рго

Уа!

А! а

с! у

РГО

Бег

уа!

рНе

кеи

РНе

РГО

РГО

куз

рго

куз

245

250

255

азр

тНг

кеи

мет

Не

Бег

Агд

тНг

РГО

61 и

Уа1

ТНг

суз

Уа!

Уа1

Уа!

260

265

270

АЗр

Уа1

Бег

НТ 5

б!и

А5р

Рго

с! и

Уа1

61 η

РНе

АЗП

тгр

туг

уа1

АЗр

275

280

285

с1у

Уа!

б!и

Уа!

НТ 5

А5П

А! а

1-У5

ТНг

куз

РГО

Агд

61 и

61 и

б!п

РНе

290

295

300

АЗП

Бег

тНг

РНе

Агд

Уа1

Уа!

Бег

Уа!

кеи

тНг

уа!

Уа!

Нтз

б1п

Азр

305

310

315

320

тгр

1.еи

А5П

61 у

1_уз

б!и

туг

1_уз

суз

куз

Уа!

Бег

АЗП

куз

б1у

кеи

325

330

335

РГО

А1а

Рго

Пе

61 и

ТНг

Не

Бег

куз

тНг

куз

б1у

б1п

РГО

Агд

340

345

350

61 и

Рго

с! η

Уа1

туг

ТНг

(.ей

Рго

Рго

Бег

Агд

б1и

б1и

мет

ТНг

куз

355

360

365

АЗП

б!п

Уа!

Бег

кеи

ТНг

Суз

1.еи

Уа!

куз

61 у

РНе

Туг

Рго

Бег

Азр

370

375

380

Не

А1 а

Уа!

61 и

Тгр

б! и

Бег

А5П

61 у

61 η

Рго

61 и

АЗП

АЗП

туг

ЬУ5

385

390

395

400

- 117 023555

ΤΐΊΓ

тНг

рго

Рго

мет ьеи Азр Зег Д5р С1у Зег РНе РНе ьеи туг зег

405

410

415

ЬуЗ

ьеи

тНг

Уа1

Азр

ЬУ5

Зег

Агд

Тгр

61 η

С1п

С1у

АЗП

Уа1

РНе

Зег

420

425

430

СУЗ

Зег

Уа1

мег

Ηί 5

51 и

д1 а

ьеи

НТЗ

АЗП

ΗΊ5

туг

ТНг

61 η

ЬУ5

зег

435

440

445

Ьеи

Зег

Ьеи

5ег

Рго

С1у

Ьуз

450

455

<210> 11 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> ното :

Зартепз

<400> 11

51 η

Уа1

61 п

ьеи

Уа1

61 η

зег

51 у

А1а

51 и

уа!

ьуз

ьуз

Рго

51 у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

А1а

5ег

51 у

Туг

ТНг

РНе

ТНг

5ег

Туг

20

25

30

с1у

11 е

Зег

тгр

Уа1

Агд

51П

А1а

Рго

51 у

51 п

С1у

ьеи

51 и

тгр

мет

35

40

45

51у

Тгр

11 е

зег

А1а

туг

АЗП

с!у

АЗП

ТНг

АЗП

Туг

А1а

51 п

ьуз

ьеи

50

55

60

С1п

С1у

Агд

Уа1

ТНг

мет

ТНг

тНг

Азр

ТНг

Зег

ТНг

Зег

ТНг

А1а

туг

65

70

75

80

мет

51 и

ьеи

Агд

зег

Ьеи

Агд

Зег

Азр

Азр

ТНг

А1а

Уа1

туг

туг

Суз

85

90

95

Д1а

Агд

С1и

5ег

тгр

РНе

51 у

51 и

Уа1

рНе

РНе

Азр

туг

тгр

51 у

51 п

100

105

110

б1у

ТНг

Ьеи

Уа1

ТНг

Уа1

Зег

Зег

А1а

Зег

тНг

ьуз

51 у

Рго

Зег

Уа1

115

120

125

РНе

Рго

ьеи

л1а

Рго

Суз

Зег

Агд

Зег

тНг

Зег

С1и

Зег

тНг

А1а

А1а

130

135

140

Ьеи

с1у

Суз

ьеи

Уа1

ьуз

Азр

туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Уа1

тНг

Уа1

Зег

145

150

155

160

Тгр

АЗП

5ег

С1у

А1а

Ьеи

ТНг

5ег

51 у

Уа1

НТЗ

тНг

РНе

РГО

А1а

Уа1

165

170

175

ьеи

с1п

Зег

Зег

б1у

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

уа1

Уа1

ТНг

Уа1

РГО

180

185

190

Зег

Зег

Азп

РНе

51у

ТНг

С1п

тНг

туг

ТНг

Суз

Азп

Уа1

Азр

НТ 5

Ьуз

195

200

205

РГО

Зег

АЗП

тНг

ьуз

Уа1

Азр

ьуз

ТНг

Уа1

51 и

Агд

ЬУ5

СУ 5

Суз

Уа1

210

215

220

с!и

суз

РГО

РГО

Суз

Рго

л1а

РГО

Рго

Уа1

А1а

С1у

РГО

Зег

Уа1

рНе

225

230

235

240

Ьеи

РНе

Рго

Рго

ьуз

Рго

ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

мет

11 е

зег

Агд

тНг

Рго

245

250

255

51 и

Уа1

ТНг

Суз

Уа1

Уа1

Уа1

Азр

Уа1

зег

Ηί 5

51 и

АЗр

Рго

51 и

Уа1

260

265

270

С1п

рНе

АЗП

тгр

туг

Уа1

Азр

51 у

Уа1

51 и

уа1

Нт £

АЗП

А1а

ьуз

ТНг

275

280

285

ьуз

РГО

Агд

б1и

б1и

6ΐη

РНе

АЗП

Зег

ТНг

РНе

Агд

Уа1

Уа1

Бег

Уа1

290

295

300

ьеи

тНг

уа1

уа1

НТЗ

61 η

А5Р

Тгр

ьеи

АЗП

с1у

ьуз

51 и

туг

ьуз

суз

305

310

315

320

Ьуз

Уа1

5ег

АЗП

ьуз

51 у

Ьеи

Рго

А1а

Рго

Пе

С1и

Ьуз

ТНг

Пе

5ег

325

330

335

ьуз

тНг

ьуз

С1у

51 η

РГО

Агд

51 и

Рго

51П

Уа1

туг

ТНг

Ьеи

РГО

Рго

340

345

350

Зег

Агд

с!и

б1и

мет

тНг

ьуз

А5П

51 п

Уа1

Зег

Ьеи

тНг

Суз

ьеи

Уа1

355 360 365

- 118 023555

ЬУ£

СТ у РНе Туг Рго Бег А5р Пе дТа УаТ

СТ и Тгр 380

сТи

Бег

АЗП

СТ у

370

375

сТп

Рго

С1и

АЗП

АЗП

Туг

ьу5

тНг

тНг

РГО

Рго

мег

геи

Αερ

Бег

Αερ

385

390

395

400

с!у

Бег

РНе

РНе

Геи

туг

Бег

ЬУ5

Геи

тНг

УаТ

Азр

гуз

Бег

Агд

тгр

405

410

415

сТп

сТп

СТу

АЗП

Уа1

рНе

Бег

СУ5

Бег

УаТ

меГ

НТ 5

с1и

АТа

Геи

НТ 5

420

425

430

АЗП

Н1 5

туг

ТНг

СТп

1_у5

Бег

геи

Бег

Геи

Бег

РГО

СТ у

ГУ5

435

440

445

<210> 12

<211> 452 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Барт епз

<400> 12

СТи

УаТ

СТп

Геи

УаТ

СТи

Бег

СТу

СТу СТу

геи

УаТ

гуз

Рго

СТу СТу

1

5

10

15

Бег

Геи

Агд

Геи

Бег

Суз

АТа

АТа

Бег

СТу

РНе

тНг

РНе

Бег

А5П

АТа

20

25

30

тгр

мег

Бег

тгр

УаТ

Агд

СТп

АТа

Рго

СТу

гуз

сТу

геи

сТи

тгр

УаТ

35

40

45

сТу

Агд

Пе

ГУ5

Бег

гуз

ТНг

Азр

СТу сТу

тНг

тНг

АЗр

туг

АТа

АТа

50

55

60

Рго

УаТ

гуз

СТу

Агд

РНе

тНг

Пе

Бег

Агд

Азр

Азр

Бег

гуз

Азп

ТНг

65

70

75

80

Геи

туг

Геи

СТп

мег

АЗП

Бег

Геи

гуз

ТНг

СТи

Азр

ТНг

АТа

УаТ

Туг

85

90

95

туг

СУ5

ТНг

ТКг

СТи

туг

Туг

СТу

Бег

СТу

СТу

УаТ

тгр

туг

Туг

сТу

100

105

110

мег

Αερ

УаТ

тгр

СТу

СТп

СТу

ТНг

тНг

УаТ

ТНг

УаТ

Бег

Бег

лТа

Бег

115

120

125

ΤίΤΓ

гуз

СТу

Рго

Бег

УаТ

РНе

РГО

Геи

АТа

РГО

Суз

Бег

Агд

Бег

тНг

130

135

140

Бег

СТи

Бег

ТНг

АТа

АТа

ίβυ

ст у

Суз

Геи

УаТ

гуз

Азр

Туг

РНе

Рго

145

150

155

160

СТи

Рго

УаТ

ТКг

УаТ

Бег

Тгр

Азп

Бег

СТу

АТа

геи

ТНг

Бег

СТу

УаТ

165

170

175

Ητε

ТНг

РКе

рго

дТа

УаТ

Геи

СТп

Бег

Бег

СТу

Геи

туг

Бег

Геи

Бег

180

185

190

Бег

УаТ

УаТ

ТНг

УаТ

РГО

Бег

Бег

Αεη

РНе

СТу

ТНг

СТп

ТНг

туг

ТНг

195

200

205

Суг

Αεη

УаТ

Азр

нтз

гуз

рго

Бег

Азп

ТНг

гуз

УаТ

Азр

Гуз

тНг

УаТ

210

215

220

СТи

Агд

гуз

Суз

суз

УаТ

СТи

Суз

Рго

Рго

Суз

рго

АТа

Рго

рго

УаТ

225

230

235

240

АТа

СТу

Рго

Бег

УаТ

рКе

геи

РНе

Рго

РГО

гуз

рго

гуз

Αερ

тНг

Геи

245

250

255

мег

Пе

Бег

Агд

тНг

РГО

СТи

УаТ

тНг

Суз

УаТ

УаТ

уаТ

Αερ

УаТ

Бег

260

265

270

Нт 5

СТи

Αερ

РГО

СТи

УаТ

СТп

РНе

Азп

тгр

туг

УаТ

АЗР

СТу

УаТ

СТи

275

280

285

УаТ

Ητε

Αεη

АТа

гуз

тНг

гуз

Рго

Агд

сТи

сТи

СТп

РНе

Αεη

Бег

ТНг

290

295

300

РНе

Агд

УаТ

УаТ

Бег

УаТ

Геи

ТНг

УаТ

УаТ

нтз

СТп

Азр

тгр

Геи

Азп

305

310

315

320

СТу

Гуз

СТи

туг

гуз

суз

гуз

УаТ

Бег

АЗП

гуз

СТу

геи

Рго

АТа

Рго

325

330

335

Пе

СТи

гуз

тНг

Пе

Бег

гуз

ТНг

Гуз

СТу

сТп

РГО

Агд

СТи

РГО

СТп

340 345 350

- 119 023555

Уа1

туг тКг 355

ьеи Рго

Рго

Зег

Агд 61 и б1и мет ТКг ьуз азп 61η Уа1

360

365

5ег

Ьеи

тКг

СУ5

Ьеи

Уа1

ьув

61 у

рКе

Туг

Рго

Зег

Азр

11 е

А1а

Уа1

370

375

380

01 и

тгр

61 и

Зег

АЗП

61 у

61 η

Рго

с1и

АЗП

АЗП

туг

ьуз

ТКг

ТКг

Рго

385

390

395

400

Рго

мет

ьеи

АЗр

Зег

АЗр

61 у

5ег

РКе

РКе

Ьеи

туг

зег

Ьуз

Ьеи

ТКг

405

410

415

Уа1

Азр

ьуз

5ег

Агд

тгр

б1п

6ΐη

б1у

АЗП

νβΐ

рКе

зег

СУЗ

Зег

Уа1

420

425

430

мет

НТЗ

б1и

А1а

Ьеи

НТ 5

АЗП

НТ 5

Туг

тКг

6ΐη

ЬУ5

Зег

ьеи

Зег

Ьеи

435

440

445

Зег

РГО

61 у

ЬУ5

450

<210> 13 <211> 454 <212> БЕЛОК <213> ното :

ЗартепБ

<400> 13

б1и

Уа!

61 г

ьеи

уа1

61 и

Зег

б!у б!у

б1у

Ьеи

Уа1

ьуз

РГО

61 у

61 у

1

5

10

15

Зег

ьеи

Агд

ьеи

Зег

СУЗ

А1а

А1а

Зег

б!у

РКе

ТКг

РКе

зег

А5П

А1а

20

25

30

тгр

Мет

Зег

Тгр

Уа1

Агд

61η

А1а

Рго

б1у

ЬУБ

б1у

ьеи

б1и

Тгр

Уа1

35

40

45

61 у

Агд

11 е

Ьуз

Зег

Ьуз

ТКг

Азр

б1у б!у

ТКг

ТКг

Азр

Туг

А1а

А1а

50

55

60

Рго

Уа1

ьуа

61 у

Агд

РКе

ТКг

11 е

5ег

Агд

Азр

Азр

Зег

ьуз

АЗП

ТКг

65

70

75

80

Ьеи

Туг

ьеи

61 η

мет

АЗП

Зег

Ьеи

Ьуз

ТКг

61 и

АЗр

ТКг

А1а

Уа!

Туг

85

90

95

туг

СУБ

тКг

тКг

АЗр

61 у

А1а

ТКг

Уа1

Уа1

ТКг

РГО

61 у

Туг

Туг

Туг

100

105

110

туг

61 у

ТКг

Азр

Уа1

Тгр

61 у

6ΐπ

б1у

ТКг

тКг

Уа!

ТКг

Уа1

зег

зег

115

120

125

А1а

зег

ТКг

ьуз

61 у

Рго

Зег

Уа1

РКе

РГО

Ьеи

А1а

РГО

суз

зег

Агд

130

135

140

5ег

ТКг

Зег

б1и

Зег

тКг

А1а

А1а

ьеи

б1у

суз

ьеи

Уа1

ьуз

Азр

туг

145

150

155

160

РКе

Рго

61 и

Рго

Уа1

тКг

Уа1

Зег

Тгр

АБП

5ег

б1у

А1а

Ьеи

тКг

Зег

165

170

175

б1у

Уа1

НТ 5

тКг

рКе

Рго

А1а

Уа1

ьеи

61 η

Зег

Зег

61 у

ьеи

туг

зег

180

185

190

Ьеи

Зег

Зег

Уа!

Уа1

тКг

Уа1

РГО

Зег

Зег

АЗП

рКе

61 у

тКг

61 η

тКг

195

200

205

туг

ТКг

Су£

АБП

Уа1

АЗр

НТ 5

ЬУБ

Рго

Зег

АЗП

тКг

Ьуз

Уа1

АЗр

ьуз

210

215

220

тКг

Уа1

61 и

Агд

ьуз

суз

Суз

Уа1

с!и

суз

РГО

Рго

суз

Рго

А1а

РГО

225

230

235

240

РГО

Уа1

А1а

с1у

Рго

Зег

Уа1

рКе

ьеи

РКе

Рго

РГО

ьуз

РГО

ьуз

АЗр

245

250

255

тКг

ьеи

мет

11 е

Зег

Агд

ТКг

РГО

б1и

Уа1

ТКг

суз

Уа1

Уа1

Уа1

АЗр

260

265

270

Уа1

Зег

НТ 5

б!и

А5р

Рго

б!и

Уа1

61 η

рКе

АЗП

Тгр

Туг

Уа1

Азр

61 у

275

280

285

Уа1

б1и

Уа1

НТ 5

АЗП

А1а

ьуз

ТКг

ьуз

Рго

Агд

61 и

61 и

61 п

РКе

АЗП

290

295

300

Зег

тКг

рКе

Агд

уа!

Уа1

Зег

Уа1

Ьеи

ТКг

Уа1

Уа1

НТ 5

6ΐη

Азр

Тгр

305

310

315

320

- 120 023555

Сеи Азп б!у суз б!и

туг

|_уз суз суз Уа! 330

Бег

АЗП

Ьуз С1у 1_еи 335

Рго

325

А1а

РГО

11е

б1и

ЬУ£

ТЬг

11 е

Бег

ьуз

ТЬг

1-уз

61 у

6ΐη

Рго

Агд

61 и

340

345

350

Рго

б1п

Уа1

Туг

ТКг

1_еи

Рго

Рго

Бег

Агд

61 и

61 и

МеТ

ТКг

Ьуз

АЗП

355

360

365

6ΐη

Уа1

5ег

Сеи

ТКг

Суз

Сеи

Уа1

Суз

СТ у

РКе

туг

Рго

Бег

Азр

11 е

370

375

380

А1а

Уа1

б1и

тгр

б1и

Бег

АЗ П

б!у

6ΐη

РГО

б1и

АЗП

А5П

туг

ьуз

тКг

385

390

395

400

ТКг

Рго

Рго

МеТ

Сеи

Азр

Бег

Азр

б1у

Бег

РКе

РКе

Геи

Туг

Бег

Ьуз

405

410

415

Сеи

тКг

Уа1

Аар

Суз

Бег

Агд

тгр

С1п

61 η

61 у

АЗП

Уа1

РКе

Бег

Суз

420

425

430

5ег

Уа1

МеТ

НТ 5

б1и

А1а

Сеи

НТ 5

АЗП

Нт 5

Туг

ТКг

С1п

Суз

Бег

Сеи

435

440

445

Бег

Сеи

5ег

Рго

б!у

ьуз

450

<210> 14 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> ното :

Барт епз

<400> 14

6ΐη

Уа1

61 η

сеи

уа!

61 η

Бег

61 у

А1а

б1и

Уа1

суз

ίγε

Рго

б1у

А1а

1

5

10

15

Бег

уа1

ьуз

Уа1

Бег

Суз

суз

А1а

Бег

б!у

туг

ТКг

РКе

тКг

Бег

туг

20

25

30

б!у

ϊϊ е

Бег

Тгр

Уа1

Агд

61 η

А1а

Рго

61 у

61 п

61 у

сеи

б!и

тгр

мет

35

40

45

61 у

Тгр

11 е

Бег

А1а

туг

Азп

С1у

Азп

ТКг

А5П

Туг

А1а

б1п

Суз

Сеи

50

55

60

б1п

б!у Агд

Уа1

ТКг

мет

тКг

тКг

Азр

ТКг

Бег

ТКг

Бег

тКг

А1а

Туг

65

70

75

80

Мет

б1и

сеи

Агд

Бег

ьеи

Агд

зег

АЗр

АЗр

ТКг

А1а

Уа1

туг

туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

61 и

Бег

тгр

РКе

61 у

б1и

уа1

РКе

РКе

Азр

Туг

тгр

61 у

б!п

100

105

110

С1у

тЬг

Сеи

Уа1

тКг

Уа1

Бег

Бег

А1а

Бег

тКг

ьуз

б1у

Рго

Бег

Уа1

115

120

125

РКе

Рго

Беи

А1а

РГО

Суз

Бег

Агд

Бег

ТКг

Бег

61 и

Бег

ТКг

А1а

А1а

130

135

140

Беи

61 у

суз

сеи

Уа1

ьуз

Азр Туг

РКе

Рго

б1и

Рго

Уа1

тКг

Уа1

Бег

145

150

155

160

тгр

АЗП

Бег

б1у

А1а

(_еи

ТКг

Бег

б1у

Уа!

Нтз

ТКг

РКе

РГО

А1а

Уа1

165

170

175

сеи

б!п

Бег

Бег

61 у

сеи

туг

Бег

Сеи

Бег

Бег

Уа1

уа1

ТКг

Уа1

Рго

180

185

190

Бег

Бег

Д5П

РКе

61 у

ТКг

61 п

тКг

туг

ТКг

суз

Азп

Уа1

Азр

НТ 5

1-У5

195

200

205

РГО

Бег

АЗП

ТКг

Су5

Уа1

Азр

суз

ТКг

Уа!

61 и

Агд

суз

суз

суз

Уа!

210

215

220

б1и

суз

РГО

РГО

Суз

РГО

А1а

РГО

РГО

Уа1

А1а

б!у

рго

Бег

Уа1

рКе

225

230

235

240

|_еи

РКе

РГО

РГО

суз

РГО

ЬУ5

Азр

ТКг

ίβϋ

мет

Не

Бег

Агд

ТКг

Рго

245

250

255

с1и

уа!

ТКг

Су5

\/а1

Уа1

Уа1

Азр

Уа!

Бег

Нт 5

61 и

Азр

Рго

61 и

Уа!

260

265

270

6ΐη

РКе

АЗП

тгр

туг

Уа1

Азр

б1у

Уа1

б!и

Уа1

НТ 5

А5П

А1а

суз

тКг

275 280 285

- 121 023555

1-У5

рго дгд 61 и 61 и 61 η РЬе

Азп

Бег тЬг РЬе Агд 300

Уа!

Уа!

Бег

Уа1

290

295

Ьеи

ТЬг

Уа1

Уа1

НТЗ

с1п

Азр

тгр

ьеи

Азп

б1у

ьуз

б1и

Туг

ьуз

суз

305

310

315

320

ъуз

Уа1

Бег

АЗП

ьуз

61 у

Ьеи

Рго

А1а

Рго

11 е

б!и

ьуз

тЬг

11 е

Бег

325

330

335

ьуз

тЬг

1-уз

61 у

61 п

Рго

Агд

С1и

Рго

С1п

Уа1

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

340

345

350

Бег

Агд

б1и

б!и

мет

ТЬг

ьуз

АЗП

61 п

Уа1

Бег

ьеи

ТЬг

Суз

ьеи

уа!

355

360

365

ЬУ5

б1у

рЬе

туг

Рго

Бег

Азр

11е

А1а

уа1

61 и

тгр

61 и

Бег

АЗП

61 у

370

375

380

СТ η

РГО

61 и

АЗП

АЗП

туг

ьуз

тЬг

тЬг

РГО

РГО

мет

ьеи

Азр

Бег

Азр

385

390

395

400

С1 у

Бег

РЬе

РЬе

Ьеи

туг

Бег

ьуз

ьеи

тЬг

Уа1

Азр

ьуз

Бег

Агд

тгр

405

410

415

01 η

61 η

СТ у

Азп

Уа1

РЬе

Бег

Суз

Бег

Уа1

МеТ

Нт 5

б!и

А1а

Ьеи

Нт 5

420

425

430

АЗП

Н1 5

туг

ТЬг

б!п

ьуз

Бег

Ьеи

Бег

ьеи

Бег

Рго

б1у

ьуз

435

440

445

<210> 15

<211> 446 <212> БЕЛОК

<213> кото !

Бартепз

<400> 15

б1п

Уа!

б1п

Ьеи

Уа!

с1п

Бег

С1у

А1а

61 и

Уа1

Ьуз

ьуз

Рго

б1у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа!

Ьуз

уа!

Бег

Суз

Ьуз

А1а

Бег

С1у

Туг

тЬг

РЬе

тЬг

с!у

Туг

20

25

30

Туг

мет

нтз

Тгр

уа1

Агд

61 п

А1а

Рго

б1у

б1п

б!у

Ьеи

б!и

тгр

мет

35

40

45

С1у

тгр

11 е

АЗП

рго

АЗП

Бег

С1у С1у

ТЬг

Азп

Туг

А1а

б!п

Ьуз

РЬе

50

55

60

61 п

с1у Агд

Уа!

ТЬг

мет

ТЬг

Агд

АЗр

ТЬг

Бег

11е

Бег

тЬг

А1а

туг

65

70

75

80

МеТ

61 и

Ьеи

Бег

Агд

Ьеи

Агд

Бег

АЗр

АЗр

ТЬг

А1а

РЬе

туг

туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

Бег

АЗП

Тгр

туг

нтз

АЗП

тгр

рЬе

Азр

Рго

тгр

С1у

с1п

100

105

110

б1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

ТЬг

ьуз

б1у

Рго

Бег

Уа1

115

120

125

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Суз

Бег

Агд

Бег

тЬг

Бег

б1и

Бег

тЬг

А1а

А1а

130

135

140

ьеи

61 у

Суз

Ьеи

Уа1

ьуз

АЗр

Туг

рЬе

Рго

б1и

Рго

Уа1

тЬг

Уа1

Бег

145

150

155

160

тгр

АЗП

Бег

б1у

А1а

ьеи

тЬг

Бег

С1у

Уа1

Н1 5

ТЬг

РЬе

РГО

л1а

Уа!

165

170

175

Ьеи

с1п

Бег

Бег

с!у

ьеи

Туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

РГО

180

185

190

Бег

Бег

АЗП

РЬе

б!у

тЬг

с1п

ТЬг

туг

ТЬг

Суз

АЗП

Уа!

Азр

нтз

ьуз

195

200

205

Рго

Бег

АЗП

тЬг

ьуз

Уа1

АЗр

Ьуз

ТЬг

Уа1

61 и

Агд

ьуз

суз

Суз

уа1

210

215

220

б1и

Суз

РГО

РГО

Суз

РГО

А1а

РГО

РГО

Уа1

А1а

С1у

Рго

Бег

Уа1

РЬе

225

230

235

240

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

ьуз

Рго

ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

мет

Пе

Бег

Агд

ТЬг

Рго

245

250

255

61 и

уа!

ТЬг

Суз

Уа1

Уа!

Уа!

Азр

Уа!

Бег

НТ 5

С1и

АЗр

Рго

б!и

Уа!

260 265 270

- 122 023555

Οίη Рйе АЗП тгр

Туг

Уа1

Азр

61 у Уа1 280

01 и

уа1

НТ 5

Азп А1а 285

ьуз

Тйг

275

ьуз

РГО

Агд

О1и

01 и

01 п

рйе

Азп

Бег

ТЙГ

Рйе

Агд

Уа1

Уа1

Бег

Уа1

290

295

300

ьеи

тйг

Уа1

Уа1

нтз

Οίη

АЗР

тгр

ьеи

АЗП

01 у

ьуз

С1и

туг

ьуз

Суз

305

310

315

320

Ьуз

уа1

Бег

Азп

ьуз

01 у

Ьеи

Рго

А1а

Рго

Пе

01 и

ьуз

ТЙГ

Пе

Бег

325

330

335

ьуз

тйг

ьуз

о1у

Οίη

рго

Агд

с1и

Рго

Οίη

Уа1

Туг

ТЙГ

ьеи

Рго

РГО

340

345

350

Бег

Агд

С1и

01 и

мет

тйг

ьуз

АЗП

С1п

Уа1

Бег

Ьеи

ТЙГ

суз

Ьеи

Уа1

355

360

365

ьуз

о1у

Рйе

Туг

Рго

Бег

Азр

Пе

А1а

Уа1

01и

тгр

О1и

Бег

А5П

О1у

370

375

380

01 η

Рго

с1и

Азп

АЗП

Туг

ьуз

тйг

ТЙГ

Рго

Рго

мет

Ьеи

Азр

Бег

Азр

385

390

395

400

01 у

Бег

Рйе

Рйе

ьеи

туг

Бег

ьуз

Ьеи

ТЙГ

Уа1

Азр

ьуз

Бег

Агд

тгр

405

410

415

С1п

οίη

с1у

АЗП

Уа1

рйе

Бег

суз

Бег

Уа1

мет

Нтз

о!и

А1а

ьеи

нтз

420

425

430

Азп

НТЗ

Туг

ТЙГ

01 п

ЬУЗ

Бег

Ьеи

Бег

Ьеи

Бег

РГО

01 у

ьуз

435

440

445

<210> 16 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> ното

5артеп5

<400> 16

οίη

Уа1

οίη

ьеи

Уа1

Οίη

Бег

с!у

АТ а

б1и

νβΐ

ьуз

ьуз

Рго

с!у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа1

ьуз

Уа1

Бег

Суз

ьуз

А1а

5ег

О1у

туг

тйг

Рйе

тйг

01 у

Туг

20

25

30

туг

мет

нтз

тгр

νβΐ

Агд

οίη

А1а

РГО

о!у

01 п

О1у

ьеи

01 и

тгр

мет

35

40

45

О1у

тгр

Пе

Азп

РГО

АЗП

Бег

О1у О1у

ТЙГ

А5П

Туг

А1а

Οίη

ьуз

Рйе

50

55

60

οίη

с!у

Агд

Уа1

Тйг

мет

тйг

Агд

Азр

ТЙГ

Бег

Пе

Бег

Тйг

А1а

туг

65

70

75

80

мет

01 и

Ьеи

Бег

Агд

ьеи

Агд

Бег

АЗр

АЗр

ТЙГ

А1а

Рйе

туг

туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

Бег

АЗП

Тгр

Туг

нтз

АЗП

тгр

рйе

Азр

РГО

тгр

О1у

Οίη

100

105

110

01 у

ТЙГ

ьеи

Уа1

ТЙГ

Уа1

Бег

Бег

А1а

Бег

ТЙГ

ьуз

01 у

Рго

Бег

уа1

115

120

125

Рйе

РГО

ьеи

А1а

РГО

суз

Бег

Агд

Бег

ТЙГ

Бег

01и

Бег

тйг

А1а

А1а

130

135

140

ьеи

01у

суз

Ьеи

уа1

ьуз

Азр

Туг

Рйе

Рго

01 и

рго

Уа1

тйг

νβΐ

Бег

145

150

155

160

Тгр

АЗП

Бег

01 у

А1а

ьеи

тйг

Бег

61 у

Уа1

нтз

тйг

Рйе

Рго

А1а

Уа1

165

170

175

ьеи

01 п

Бег

Бег

01 у

ьеи

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

Уа1

Уа1

тйг

νβΐ

РГО

180

185

190

Бег

Бег

АЗП

рйе

С1у

тйг

01 п

ТЙГ

туг

Тйг

Суз

АЗП

Уа1

Азр

НТ 5

ьуз

195

200

205

РГО

Бег

АЗП

тйг

ьуз

Уа1

Азр

ьуз

тйг

Уа1

01 и

Агд

ьуз

суз

суз

Уа1

210

215

220

с1и

Суз

Рго

рго

Суз

Рго

А1а

Рго

Рго

Уа1

А1а

с1у

Рго

Бег

Уа1

Рйе

225

230

235

240

Ьеи

Рйе

рго

Рго

ьуз

РГО

ьуз

Азр

тйг

ьеи

мет

Пе

Бег

Агд

тйг

Рго

245

250

255

- 123 023555

о!и Уа!

тНг Суз уа! 260

Уа1

уа!

лзр Уа1 265

Бег

нтз

01 и

АЗр

Рго 270

О1и

Уа!

Οίη

РНе

АЗП

тгр

туг

Уа1

Азр

С1у

Уа1

с1и

Уа!

нтз

А5П

А1а

туз

тНг

275

280

285

туз

РГО

Агд

с!и

С1и

01 п

РНе

АЗП

Бег

тНг

РНе

Агд

Уа1

Уа1

Бег

Уа!

290

295

300

Теи

тНг

Уа1

Уа1

Нтз

01 п

Азр

тгр

Теи

Азп

с1у

ЬУ5

С1и

туг

ТУ5

Суз

305

310

315

320

туз

Уа1

Бег

АЗП

туз

01у

ьеи

рго

А1а

Рго

11 е

С1и

Туз

ТНг

Пе

Бег

325

330

335

туз

ТНг

туз

01 у

01 п

Рго

Агд

01 и

РГО

01 п

Уа1

туг

ТНг

Теи

Рго

РГО

340

345

350

Бег

Агд

С1и

о!и

мет

ТНг

Туз

АЗП

Οίη

уа!

Бег

Теи

тНг

Суз

ьеи

Уа1

355

360

365

ьуз

01 У

РНе

Туг

Рго

Бег

АЗР

Пе

А1а

Уа1

б!и

тгр

О1и

Бег

АЗП

01 у

370

375

380

01 η

Рго

о!и

АЗП

АЗП

туг

Туз

тНг

ТНг

РГО

Рго

мет

ьеи

Азр

Бег

АЗр

385

390

395

400

о!у

Бег

РНе

рНе

теи

туг

Бег

ЬУЗ

Теи

тНг

Уа1

Азр

туз

Бег

Агд

тгр

405

410

415

οίη

οίη

01 у

Азп

Уа1

РНе

Бег

суз

Бег

уа1

мет

Нт 5

01 и

А1а

Теи

нтз

420

425

430

АЗП

НТ 5

туг

ТНг

οίη

туз

Бег

Теи

Бег

теи

Бег

РГО

С1у

туз

435

440

445

<210> 17

<211> 454

<212> БЕЛОК

<213> Ното :

Бартепз

<400> 17

01 и

Уа!

οίη

Теи

Уа1

с!и

Бег

с!у о!у о!у

Ьеи

Уа!

ьуз

РГО

О1у о!у

1

5

10

15

Бег

Теи

лгд

Теи

Бег

суз

А1а

А1а

Бег

01У

РНе

ТНг

рНе

Бег

АЗП

А1а

20

25

30

Тгр

МеТ

Бег

тгр

Уа1

Агд

01 η

А1а

РГО

б1у

туз

01 у

теи

б1и

тгр

Уа1

35

40

45

о!у

Агд

ίί е

ьуз

Бег

Ьуз

тНг

АЗр

С1у 01у

тНг

ТНг

Азр

Туг

А1а

А1а

50

55

60

рго

уа!

Ьуз

С1у Агд

РНе

ТНг

Пе

Бег

Агд

А5р

Азр

Бег

туз

АЗП

ТНг

65

70

75

80

Теи

Туг

теи

01 п

мет

АЗП

Бег

Теи

Туз

ТНг

01 и

АЗр

тНг

А1а

Уа1

туг

85

90

95

Туг

Суз

ТНг

тНг

Азр

о!у

А1а

ТНг

Уа1

Уа1

тНг

РГО

о! у

туг

Туг

туг

100

105

по

туг

01 у

ТНг

Азр

Уа!

Тгр

С1у

Οίη

01 у

тНг

ТНг

Уа!

ТНг

Уа1

Бег

Бег

115

120

125

А1а

Бег

тНг

туз

01 у

РГО

Бег

Уа1

РНе

РГО

Теи

А1а

РГО

суз

Бег

Агд

130

135

140

Бег

ТНг

Бег

01 и

Бег

тНг

А1а

А1а

Теи

С1у

суз

Теи

Уа1

Ьуз

Азр

Туг

145

150

155

160

РНе

РГО

С1и

РГО

Уа1

ТНг

Уа1

Бег

тгр

АЗП

Бег

О1у

А1а

ьеи

ТНг

Бег

165

170

175

с1у

Уа1

нтз

тНг

РНе

РГО

А1а

Уа1

Теи

οίη

Бег

Бег

с1у

Теи

туг

Бег

180

185

190

ьеи

Бег

Бег

Уа1

Уа!

ТНг

Уа1

Рго

Бег

Бег

АЗП

РНе

01 у

ТНг

01 η

тНг

195

200

205

Туг

тНг

Суз

АЗП

Уа!

АЗр

НТ 5

туз

Рго

Бег

А5П

тНг

Туз

Уа1

АЗр

туз

210

215

220

тНг

Уа!

о!и

Агд

туз

суз

суз

уа!

01 и

суз

РГО

РГО

суз

РГО

А1а

Рго

225

230

235

240

- 124 023555

Рго Уа!

А1а С1у

РГО 245

Бег

Уа1

РКе

Беи

РКе Рго рго Був Рго Був

Авр

250

255

ТКг

Беи

мес

Не

Бег

Агд

ТКг

Рго

21 и

Уа1

ТКг

сув

Уа1

Уа1

Уа1

А5р

260

265

270

Уа1

Бег

Нтв

21 и

двр

Рго

21 и

Уа1

21 η

РКе

Авп

Тгр

Туг

Уа1

Авр

21 у

275

280

285

Уа1

21 и

Уа1

НТВ

АВП

А1а

БУВ

ТНг

БУВ

РГО

Агд

21 и

21 и

С1п

РКе

АВП

290

295

300

Бег

ТКг

РКе

Агд

Уа1

Уа!

Бег

Уа!

Беи

ТКг

Уа1

Уа1

Нтв

21П

Авр

тгр

305

310

315

320

Беи

АВП

21 у

БУВ

21 и

туг

Буз

суз

Був

Уа1

Бег

АВП

БУВ

21у

Беи

Рго

325

330

335

А1а

Рго

11 е

21 и

БУЗ

тКг

11 е

Бег

Був

ТКг

Був

с!у

21 П

РГО

Агд

21 и

340

345

350

Рго

21 п

Уа!

туг

ТКг

Беи

Рго

РГО

Бег

Агд

С1и

21 и

мес

ТКг

БУВ

АВП

355

360

365

с!п

Уа1

Бег

Беи

тКг

Сув

Беи

Уа1

Був

21 у

РКе

Туг

Рго

Бег

Авр

11е

370

375

380

А1а

Уа1

21 и

Тгр

21 и

Бег

АВП

21 у

21 η

РГО

21 и

АВП

АВП

туг

Був

ТКг

385

390

395

400

ТКг

Рго

Рго

МеС

Беи

Авр

Бег

Авр

21 у

Бег

РКе

РКе

Беи

Туг

Бег

Був

405

410

415

Беи

тКг

Уа1

Авр

Буз

Бег

Агд

Тгр

21П

21 η

21 у

АВП

Уа!

РКе

Бег

суз

420

425

430

Бег

Уа!

мес

НТВ

б1и

А1а

Беи

НТВ

АВП

Нт 5

Туг

ТКг

б!п

Був

Бег

Беи

435

440

445

Бег

Беи

Бег

Рго

21 у

БуВ

450

<210> 18

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепв

<400> 18

21 и

Уа1

21п

Беи

уа!

21 и

Бег

21у 21у 21у

Беи

Уа1

Був

Рго

21 у 21 у

1

5

10

15

Бег

ьеи

Агд

Беи

Бег

Суз

А1 а

А1а

Бег

61 у

РКе

тКг

РКе

Бег

Авп

А1а

20

25

30

Тгр

мес

Бег

Тгр

Уа1

Агд

21 п

А1а

РГО

21 у

Був

с!у

Беи

21 и

тгр

Уа!

35

40

45

21 у

Агд

ΐΐ е

БУЗ

Бег

Був

ТКг

АВр

21У

21У

ТКг

А1а

АВр

туг

А1а

л1а

50

55

60

РГО

Уа!

Був

21 у

Агд

РКе

тКг

11 е

Бег

Агд

Авр

Авр

Бег

БУВ

АВП

тКг

65

70

75

80

Беи

Туг

Беи

21П

мес

АВП

Бег

Беи

Був

тКг

21 и

АВр

ТКг

А1а

Уа1

туг

85

90

95

Туг

Суз

тКг

тКг

б!и

21 у

РГО

туг

Бег

Авр

Туг

21у

туг

туг

туг

Туг

100

105

110

21 у

мес

Авр

Уа1

Тгр

21 у

21 п

21 у

ТКг

тКг

Уа1

ТКг

Уа1

Бег

Бег

А1а

115

120

125

Бег

тКг

Був

21 у

РГО

Бег

Уа1

РКе

РГО

Беи

А1а

Рго

Суз

Бег

Агд

Бег

130

135

140

ТКг

Бег

С1и

Бег

ТКг

А1а

А1а

Беи

21у

суз

Беи

Уа!

Був

Авр Туг

РКе

145

150

155

160

РГО

21 и

РГО

Уа1

ТКг

Уа!

Бег

тгр

АВП

Бег

21 у

А1а

Беи

ТКг

Бег

21 у

165

170

175

Уа1

НТВ

тКг

РКе

РГО

А1а

уа1

Беи

С1п

Бег

Бег

21 у

Беи

туг

Бег

Беи

180

185

190

Бег

Бег

Уа1

Уа1

ТКг

Уа!

РГО

Бег

Бег

АВП

РКе

21 у

ТКг

21П

ТКг

туг

195

200

205

- 125 023555

ТЬг Суз

АЗП

уа1

Азр Нтз Ьу5 Рго Зег А5П ТЬг Ьуз Уа! Азр Ьуз ТЬг

210

215

220

Уа1

61 и

Агд

Ьуз

Суз

Суз

Уа!

01 и

Суз

Рго

Рго

суз

Рго

А1а

Рго

Рго

225

230

235

240

Уа1

А1а

О1у

Рго

5ег

Уа1

РЬе

ьеи

рЬе

Рго

Рго

1-уз

Рго

ьуз

Азр

ТЬг

245

250

255

ьеи

мет

Пе

Зег

Агд

ТЬг

Рго

61 и

Уа!

тЬг

суз

Уа1

Уа1

Уа1

АЗр

Уа!

260

265

270

зег

НТ 5

О!и

Азр

Рго

0! и

Уа!

61 η

РЬе

АЗП

тгр

туг

Уа!

АЗр

01 у

Уа!

275

280

285

О1и

Уа!

НТЗ

АЗП

л! а

ьуз

тЬг

Ьуз

РГО

лгд

01 и

01 и

61 л

РЬе

АЗП

Бег

290

295

300

тЬг

РЬе

Агд

Уа!

Уа!

Бег

Уа!

Ьеи

ТЬг

уа!

уа1

нтз

61 η

АЗр

тгр

ьеи

305

310

315

320

АЗП

С! у

ьуз

С1и

туг

ьуз

суз

ьуз

уа1

Бег

АЗП

ьуз

61 у

Ьеи

РГО

А1а

325

330

335

Рго

11 е

с! и

Ьуз

ТЬг

Пе

Бег

Ьуз

ТЬг

Ьуз

01 у

01 η

Рго

Агд

01 и

Рго

340

345

350

01 η

Уа1

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Бег

Агд

01 и

01 и

Мет

ТЬг

Ьуз

А5П

01 η

355

360

365

Уа1

Зег

Ьеи

тЬг

суз

Ьеи

Уа!

ьуз

С1у

РЬе

Туг

Рго

Бег

Азр

11 е

А1а

370

375

380

Уа1

О1и

тгр

01и

Зег

АЗП

С! у

01 η

Рго

С1и

Азп

АЗП

Туг

ьуз

тЬг

тЬг

385

390

395

400

рго

РГО

мет

ьеи

Азр

Бег

Азр

01 у

Бег

РЬе

РЬе

ьеи

туг

Бег

ьуз

Ьеи

405

410

415

ТЬг

Уа1

Азр

ьуз

Зег

Агд

Тгр

01 η

Οίη

01 у

АЗП

Уа1

РЬе

Бег

суз

Бег

420

425

430

Уа!

Мет

ΗΊ5

01и

А1а

Ьеи

нтз

АЗП

НТЗ

туг

ТЬг

01 η

Ьуз

Бег

Ьеи

Бег

435

440

445

ьеи

Зег

РГО

с! у

ьуз

450

<210> 19 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Барт епз

<400? 19

С! η

Уа1

Οίη

Ьеи

Уа1

61 п

Бег

61 у

А1а

01 и

Уа!

1-У5

ьуз

Рго

01 у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа1

ьуз

Уа1

Бег

суз

ьуз

а! а

Бег

О1у

Туг

ТЬг

рЬе

тЬг

Бег

Туг

20

25

30

01у

Пе

Бег

Тгр

Уа1

Агд

Οίη

а! а

РГО

61 у

01 η

61 у

Ьеи

01и

тгр

мет

35

40

45

01 у

тгр

Пе

Бег

А1а

туг

АЗП

С1у

АЗП

ТЬг

АЗП

туг

А1а

01 η

ьуз

Ьеи

50

55

60

О1п

О1у

Агд

Уа1

тЬг

мет

ТЬг

ТЬг

АЗР

тЬг

Бег

тЬг

Бег

ТЬг

А1а

туг

65

70

75

80

мет

о1и

Ьеи

Агд

Бег

Ьеи

Агд

Бег

АЗр

АЗр

ТЬг

А1а

Уа1

туг

туг

Суз

85

90

95

л1а

Агд

01и

Бег

тгр

РЬе

01 у

01 и

Уа1

РЬе

рЬе

АЗр

туг

Тгр

01 у

01 п

100

105

по

01у

тЬг

Ьеи

Уа!

ТЬг

уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

ТЬг

ьуз

01 у

рго

Бег

Уа1

115

120

125

рЬе

РГО

Ьеи

А! а

РГО

суз

Бег

Агд

Бег

ТЬг

Бег

01 и

Бег

ТЬг

А1а

А1а

130

135

140

ьеи

01 у

Суз

Ьеи

Уа1

ьуз

АЗр Туг

РЬе

Рго

01 и

РГО

Уа1

ТЬг

Уа!

Бег

145

150

155

160

Тгр

АЗП

Бег

01 у

а! а

ьеи

ТЬг

Бег

01 у

Уа!

НТЗ

ТЬг

рЬе

Рго

А1а

Уа!

165 170 175

- 126 023555

Ьеи С1п Бег

Бег 180

СТу

ьеи Туг Бег ьеи Бег Бег УаТ 185

УаТ

тЬг 190

УаТ

Рго

Бег

Бег

АЗП

РЬе

С1у

тЬг

СТп

ТЬг

туг

ТЬг

суз

Азп

УаТ

АЗр

Нтз

ьуз

195

200

205

РГО

Бег

АЗП

тЬг

ьуз

УаТ

АЗР

ьуз

ТЬг

УаТ

СТи

Агд

ьуз

Су5

суз

Уа1

210

215

220

бТи

суз

Рго

Рго

суз

Рго

АТа

Рго

РГО

УаТ

А1а

СТу

Рго

Бег

УаТ

РЬе

225

230

235

240

ьеи

РЬе

Рго

РГО

Ьуз

Рго

ьуз

АЗр

ТЬг

Ьеи

мет

Пе

Бег

Агд

ТЬг

Рго

245

250

255

бТи

УаТ

тЬг

Суз

УаТ

Уа1

УаТ

Азр

УаТ

Бег

НТ 5

СТи

Азр

рго

СТи

УаТ

260

265

270

СТп

РЬе

Азп

Тгр

Туг

Уа1

Азр

СТу

УаТ

СТи

УаТ

Нтз

Азп

АТа

Ьуз

ТЬг

275

280

285

ьуз

Рго

Агд

СТи

СТи

С1п

РЬе

АЗП

Бег

тЬг

РЬе

Агд

УаТ

уаТ

Бег

УаТ

290

295

300

ьеи

ТЬг

УаТ

УаТ

нтз

СТп

Азр

тгр

Ьеи

Азп

СТу

Ьуз

сТи

туг

ьуз

суз

305

310

315

320

ьуз

УаТ

Бег

Азп

ьуз

СТу

ьеи

РГО

АТа

Рго

Пе

СТи

ьуз

ТЬг

Пе

Бег

325

330

335

ьуз

ТЬг

Ьуз

СТу

СТп

Рго

Агд

СТи

Рго

СТп

Уа1

туг

ТЬг

Ьеи

Рго

РГО

340

345

350

Бег

Агд

СТи

с!и

мет

ТЬг

ьуз

АЗП

СТп

УаТ

Бег

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

УаТ

355

360

365

ьуз

СТу

РЬе

туг

РГО

Бег

АЗр

Пе

лТа

УаТ

СТи

Тгр

СТи

Бег

АЗП

СТу

370

375

380

СТп

РГО

сТи

АЗП

АЗП

туг

ьуз

ТЬг

тЬг

Рго

Рго

мет

Ьеи

Азр

Бег

Азр

385

390

395

400

С1у

Бег

РЬе

РЬе

Ьеи

туг

Бег

ьуз

Ьеи

тЬг

УаТ

Азр

ьуз

Бег

Агд

тгр

405

410

415

С1п

61 η

61 у

АЗП

УаТ

РЬе

Бег

суз

Бег

УаТ

мет

нтз

С1и

АТа

Ьеи

нтз

420

425

430

АЗП

НТЗ

туг

ТЬг

СТп

ьуз

Бег

Ьеи

Бег

Ьеи

Бег

Рго

СТ у

Ьуз

435

440

445

<210> 20 <211> 443 <212> БЕЛОК <213> ното :

Бартепз

<400> 20

СТи

УаТ

СТп

ьеи

УаТ

СТи

Бег

СТу

сТу

СТу

Ьеи

УаТ

С1п

РГО

СТу

с!у

1

5

10

15

Бег

ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

АТа

АТа

Бег

СТу

РЬе

тЬг

РЬе

Бег

Бег

Туг

20

25

30

Азр

мет

нтз

тгр

Уа1

Агд

СТп

АТа

тЬг

СТу

ьуз

сТу

Ьеи

СТи

тгр

УаТ

35

40

45

Бег

сТу

Пе

СТу

тЬг

АТа

СТу

АЗр

тЬг

туг

туг

РГО

СТу

Бег

Уа1

ьуз

50

55

60

С1у

Агд

РЬе

Азп

Пе

Бег

Агд

СТи

Азп

АТа

ьуз

А5П

Бег

Ьеи

туг

Ьеи

65

70

75

80

сТп

мет

А5П

Бег

Ьеи

Агд

АТа

С1у

Азр

ТЬг

АТа

УаТ

Туг

туг

суз

АТа

85

90

95

Агд

СТи

СТу

Бег

Тгр

туг

СТу

РЬе

АЗр

Туг

тгр

СТу

СТп

СТу

ТЬг

Ьеи

100

105

110

УаТ

ТЬг

УаТ

Бег

Бег

АТа

Бег

ТЬг

ьуз

61 у

РГО

Бег

УаТ

РЬе

РГО

ьеи

115

120

125

А1а

РГО

суз

Бег

Агд

Бег

тЬг

Бег

СТи

Бег

тЬг

АТа

АТа

Ьеи

ОТ у

Суз

130

135

140

Ьеи

УаТ

ьуз

АЗр

Туг

РЬе

РГО

СТи

РГО

УаТ

ТЬг

УаТ

Бег

Тгр

АЗП

Бег

145

150

155

160

- 127 023555

СТу АТа

Ьеи ТНг

Бег 165

СТу УаТ

Нтз

ТНг РНе Рго 170

АТа

Уа1

Ьеи

СТп 175

Бег

Бег

сТу

Ьеи

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

уаТ

уаТ

тНг

уаТ

Рго

Бег

Бег

АЗП

180

185

190

РНе

СТу

тНг

61 п

тНг

туг

ТНг

суз

АЗП

УаТ

Азр

нтз

ьуз

РГО

Бег

АЗП

195

200

205

тНг

ьуз

УаТ

Азр

ьуз

тНг

УаТ

с1и

Агд

ьуз

суз

суз

Уа1

СТи

суз

Рго

210

215

220

РГО

Суз

Рго

АТа

Рго

Рго

УаТ

АТа

СТу

РГО

Бег

УаТ

РНе

Ьеи

РНе

Рго

225

230

235

240

РГО

ьуз

Рго

ьуз

Азр

тНг

Ьеи

мет

Пе

Бег

Агд

ТНг

Рго

С1и

УаТ

ТНг

245

250

255

суз

уа1

УаТ

УаТ

Азр

УаТ

Бег

нтз

СТи

Азр

Рго

С1 и

УаТ

сТп

РНе

АЗП

260

265

270

Тгр

туг

УаТ

Азр

сТу

УаТ

СТи

УаТ

нтз

АЗП

АТа

ьуз

ТНг

ьуз

РГО

лгд

275

280

285

СТ и

СТи

СТп

рНе

АЗП

Бег

тНг

рНе

Агд

УаТ

УаТ

Бег

УаТ

ьеи

тНг

УаТ

290

295

300

уаТ

нтз

СТп

Азр

тгр

Ьеи

Азп

СТу

ьуз

61 и

туг

Ьуз

Су5

ьуз

УаТ

Бег

305

310

315

320

АЗП

Ьуз

СТу

ьеи

Рго

АТа

Рго

Пе

61 и

ьуз

ТНг

Пе

Бег

ьуз

ТНг

ьуз

325

330

335

СТу

СТп

Рго

Агд

С1и

Рго

СТп

УаТ

Туг

тНг

ьеи

Рго

Рго

Бег

Агд

СТи

340

345

350

сТи

мет

ТНг

ьуз

АЗП

СТп

уаТ

Бег

ьеи

тНг

суз

ьеи

УаТ

ьуз

СТу

РНе

355

360

365

Туг

РГО

Бег

АЗр

Пе

А1а

УаТ

СТи

Тгр

СТи

Бег

АЗП

СТу

С1п

Рго

СТи

370

375

380

АЗП

АЗП

туг

ьуз

ТНг

ТНг

РГО

РГО

мет

ьеи

АЗр

Бег

Азр

сТу

Бег

РНе

385

390

395

400

РНе

Ьеи

Туг

Бег

Ьуз

Ьеи

ТНг

Уа1

Азр

ьуз

Бег

Агд

Тгр

СТп

С1п

С1у

405

410

415

АЗП

Уа1

РНе

Бег

Суз

Бег

УаТ

мет

нтз

СТи

АТа

ьеи

нтз

АЗП

НТЗ

Туг

420

425

430

ТНг

СТ η

ьуз

Бег

ьеи

Бег

ьеи

Бег

Рго

СТу

ьуз

435

440

<210> 21

<211> 445 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартелз

<400> 21

СТп

уаТ

СТп

Ьеи

УаТ

СТи

Бег

СТу СТу СТу

уа1

УаТ

СТп

РГО

СТу

Агд

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

суз

АТа

А1а

Бег

С1у

рНе

тНг

РНе

Бег

Бег

Туг

20

25

30

СТу

Мет

нтз

тгр

УаТ

Агд

СТп

АТа

Рго

СТу

ьуз

СТу

Ьеи

СТи

Тгр

УаТ

35

40

45

АТа

УаТ

Пе

тгр

туг

Азр

сТу

Бег

Азп

СТи

Туг

Туг

АТа

Азр

Бег

УаТ

50

55

60

ьуз

СТу

Агд

РНе

тНг

Пе

Бег

Агд

Азр

АЗП

Бег

ьуз

Бег

тНг

Ьеи

туг

65

70

75

80

Ьеи

СТп

мет

АЗП

Бег

ьеи

лгд

АТа

СТи

АЗР

тНг

АТа

уа1

туг

туг

Суз

85

90

95

АТа

НТЗ

Бег

Бег

сТу

Азп

туг

туг

Азр

мет

Азр

уаТ

тгр

СТу

сТп

С1 у

100

105

110

тНг

ТНг

УаТ

ТНг

уа1

Бег

Бег

АТа

Бег

тНг

ьуз

С1у

РГО

Бег

уаТ

РНе

115

120

125

Рго

ьеи

АТа

Рго

суз

Бег

Агд

Бег

тНг

Бег

сТи

Бег

ТНг

АТа

АТа

ьеи

130 135 140

- 128 023555

ОТ у

Суз

геи

УаТ

гуз

Азр

Туг

РНе

Рго

СТи

Рго

УаТ

ТНг

УаТ

Бег

тгр

145

150

155

160

АЗП

Бег

СТу

АТа

Геи

тНг

Бег

СТу

УаТ

нт 5

тНг

рНе

Рго

АТа

УаТ

Геи

165

170

175

СТ η

Бег

Бег

СТу

Геи

Туг

Бег

Геи

Бег

Бег

УаТ

УаТ

ТНг

УаТ

Рго

Бег

180

185

190

Бег

АЗП

РНе

СТу

ТНг

СТп

ТНг

ТУГ

ТНг

Суз

АЗП

УаТ

Азр

нтз

Гуз

Рго

195

200

205

Бег

АЗП

ТНг

Гуз

УаТ

Αερ

гуз

ТНг

УаТ

СТи

Агд

гуз

Суз

суз

УаТ

СТи

210

215

220

суз

Рго

Рго

су 5

РГО

АТа

РГО

Рго

УаТ

АТа

сТу

Рго

Бег

УаТ

РНе

геи

225

230

235

240

РНе

Рго

Рго

гуз

Рго

Гуз

Азр

ТНг

Геи

мех

Пе

Бег

Агд

ТНг

Рго

СТ и

245

250

255

УаТ

тНг

Суз

уаТ

УаТ

УаТ

АЗр

УаТ

Бег

НТЗ

СТи

АЗр

Рго

СТи

УаТ

СТп

260

265

270

РНе

Азп

Тгр

Туг

УаТ

АЗр

СТу

уаТ

сТи

уаТ

нтз

АЗП

АТа

гуз

тНг

гуз

275

280

285

Рго

Агд

СТи

сТи

сТп

РНе

АЗП

Бег

тНг

РНе

Агд

УаТ

УаТ

Бег

УаТ

Геи

290

295

300

тНг

УаТ

УаТ

Н15

СТп

Азр

Тгр

геи

АЗП

сТу

1уз

СТи

Туг

гуз

Суз

гуз

305

310

315

320

УаТ

Бег

АЗП

гуз

сТу

Геи

РГО

АТа

РГО

Пе

СТи

гуз

ТНг

Пе

Бег

Гуз

325

330

335

тНг

|_уз

СТу

СТп

рго

Агд

СТи

Рго

СТп

УаТ

туг

ТНг

Геи

Рго

Рго

Бег

340

345

350

Агд

СТи

сТи

мех

тНг

гуз

Азп

сТп

УаТ

Бег

геи

тНг

суз

геи

УаТ

1-У5

355

360

365

СТу

РНе

туг

РГО

Бег

Азр

Пе

АТа

УаТ

СТи

Тгр

СТи

Бег

Азп

СТу

СТп

370

375

380

Рго

сТи

АЗП

АЗП

туг

гуз

тНг

ТНг

РГО

РГО

мех

Геи

АЗр

Бег

АЗр

СТу

385

390

395

400

Бег

РНе

РНе

геи

туг

Бег

гуз

Геи

ТНг

УаТ

Азр

Гуз

Бег

Агд

тгр

СТп

405

410

415

СТп

сТу

АЗП

УаТ

рНе

Бег

Суз

Бег

УаТ

мех

НТЗ

сТи

АТа

геи

нтз

АЗП

420

425

430

нтз

туг

тНг

сТп

ьуз

Бег

геи

Бег

Геи

Бег

Рго

сТу

ЬУ5

435

440

445

<210> 22

<2Г

1> 453

<2ΐ;

2> БЕЛОК

<21;

}> ното Барт!

£П5

<400> 22

СТи

уаТ

СТп

Геи

УаТ

сТи

Бег

сТу

СТу

сТу

Геи

УаТ

СТи

Рго

сТу

СТу

1

5

10

15

Бег

Геи

Агд

Геи

Бег

Суз

АТа

АТа

Бег

СТу

РНе

ТНг

РНе

Бег

ТНг

АТа

20

25

30

тгр

мех

Бег

тгр

УаТ

Агд

сТп

АТа

РГО

СТу

гуз

СТу

геи

СТи

тгр

УаТ

35

40

45

сТу

Агд

Пе

гуз

Бег

гуз

тНг

Азр

СТу

СТу

тНг

тНг

АЗр

туг

АТа

АТа

50

55

60

Рго

УаТ

гуз

СТу

Агд

РНе

ТНг

Пе

Бег

Агд

А5Р

Азр

Бег

гуз

АЗП

тНг

65

70

75

80

геи

туг

геи

СТп

Мех

АЗП

Бег

Геи

Гуз

Азп

СТи

Азр

ТНг

АТа

УаТ

туг

85

90

95

Туг

Суз

ТНг

ТНг

СТ и

СТу

РГО

туг

Бег

АЗП

Туг

СТу

Туг

Туг

Туг

туг

100

105

110

СТу

УаТ

Азр

УаТ

Тгр

сТу

СТп

СТу

тНг

тНг

УаТ

ТНг

УаТ

Бег

Бег

АТа

115 120 125

- 129 023555

Бег ТЬг

Ьу5 С!у

Рго Бег

Уа1 135

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго 140

суз

Бег

Агд

Бег

130

тЬг

Бег

б! и

Бег

тЬг

А1а

Αί а

Ьеи

61 у

Суз

ьеи

Уа!

ьуз

АЗр

туг

РЬе

145

150

155

160

рго

61 и

Рго

Уа!

ТЬг

Уа1

Бег

тгр

Азп

Бег

б!у

А1а

Ьеи

ТЬг

Бег

61 у

165

170

175

уа1

НТЗ

ТЬг

РЬе

РГО

А1а

Уа!

Ьеи

С1п

Бег

Бег

б!у

ьеи

Туг

Бег

Ьеи

180

185

190

Бег

Бег

Уа1

Уа!

ТЬг

Уа1

рго

Бег

Бег

АЗП

РЬе

61 у

ТЬг

61 п

тЬг

туг

195

200

205

ТЬг

Суз

АЗП

Уа!

Азр

НТ 5

ьуз

рго

Бег

Д5П

тЬг

ьуз

Уа1

Азр

ьуз

ТЬг

210

215

220

Уа!

с! и

Агд

ьуз

суз

Суз

Уа!

б1и

Суз

Рго

рго

суз

РГО

А1а

РГО

Рго

225

230

235

240

Уа1

д1а

б!у

РГО

Бег

Уа1

рЬе

ьеи

РЬе

рго

Рго

ьуз

РГО

ьуз

АЗр

ТЬг

245

250

255

ьеи

МеТ

Пе

Бег

Агд

ТЫ

РГО

61 и

Уа!

ТЫ

Суз

Уа!

уа!

Уа1

АЗР

Уа1

260

265

270

Бег

Нт 5

б1и

Азр

Рго

б1и

уа!

б!п

РЬе

АЗП

Тгр

Туг

Уа1

А5р

б!у

Уа1

275

280

285

С! и

Уа!

НТ 5

АЗП

А1а

ьуз

ТЬг

ьуз

Рго

Агд

б!и

61 и

б1п

РЬе

АЗП

Бег

290

295

300

тЬг

РЬе

Агд

Уа1

Уа1

Бег

Уа1

Ьеи

тЬг

Уа1

Уа1

Нтз

61 п

Азр

тгр

Ьеи

305

310

315

320

АЗП

С! у

ьуз

61 и

Туг

ьуз

суз

ьуз

Уа1

Бег

АЗП

ьуз

б!у

ьеи

РГО

А1а

325

330

335

Рго

Пе

С! и

ьуз

ТЬг

Пе

Бег

ьуз

тЬг

ьуз

б!у

б1п

РГО

Агд

б!и

РГО

340

345

350

61 η

Уа!

Туг

ТЬг

ьеи

РГО

Рго

Бег

Агд

61 и

61 и

мет

ТЬг

ьуз

АЗП

61 п

355

360

365

Уа1

Бег

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

Уа1

ьуз

б1у

рЬе

туг

Рго

Бег

АЗр

Пе

л1а

370

375

380

Уа1

б!и

Тгр

61 и

Бег

АЗП

б!у

с!п

РГО

б!и

АЗП

АЗП

Туг

ьуз

ТЬг

тЬг

385

390

395

400

Рго

Рго

Мет

ьеи

Азр

Бег

Азр

б!у

Бег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Бег

Ьуз

Ьеи

405

410

415

ТЬг

Уа1

Азр

Ьуз

Бег

Агд

Тгр

61 п

61 п

61 у

Азп

Уа!

РЬе

Бег

суз

Бег

420

425

430

Уа1

мет

нтз

61 и

А1а

Ьеи

нтз

АЗП

Нтз

Туг

ТЬг

с1п

ьуз

Бег

ьеи

Бег

435

440

445

ьеи

зег

РГО

61 у

Ьуз

450

<210> 23

<211> 456 <212> БЕЛОК

<213> Ното :

Зартепз

<400> 23

б!и Уа1 б1п

ьеи

Уа1

61 и

Бег

61 у 61 у б!у

ьеи

Уа!

ьуз

РГО

61 у б1у

1

5

10

15

Бег ьеи тЫ

ьеи

Бег

суз

А1а

А1а

Бег

61 у

РЬе

ТЬг

РЬе

АЗП

АЗП

А1а

20

25

30

тгр мет Бег

Тгр

Уа!

Агд

б1п

А1а

Рго

61 у

ьуз

61 у

ьеи

61 и

тгр

уа!

35

40

45

С1у лгд Пе

ьуз

Бег

ьуз

тЬг

А5р

С1у

61 у

тЬг

ТЬг

А5Р

Туг

А1а

А1а

50

55

60

Рго Уа! ьуз

61 у

Агд

РЬе

ТЬг

11 е

Бег

Агд

АЗр

Азр

Бег

ьуз

Азп

тЬг

65

70

75

80

Ьеи Туг ьеи

б!п

мет

АЗП

Бег

Ьеи

ьуз

ТЬг

61 и

Азр

ТЬг

А1а

Уа!

туг

90 95

- 130 023555

туг

суз

ТНг

тНг

51и

туг

туг

НТ 5

Пе

Ьеи

ТНг

с!у

Зег

РНе

Туг

туг

100

105

110

Зег

туг

туг

с! у

мет

Азр

уа1

тгр

С1у

61 η

б!у

ТНг

тНг

Уа1

ТНг

уа1

115

120

125

Зег

Зег

А1а

зег

тНг

ьуз

<з! у

РГО

Зег

Уа!

РНе

Рго

ьеи

л!а

РГО

Суз

130

135

140

зег

Агд

зег

ТНг

зег

<31 и

Зег

ТНг

л1а

А1а

Ьеи

51 у

суз

Ьеи

Уа!

ьуз

145

150

155

160

Азр

Туг

РНе

Рго

С1и

Рго

Уа1

ТНг

Уа!

Зег

тгр

АЗП

Зег

б!у

А1а

ьеи

165

170

175

ТНг

Зег

С1у

Уа!

НТЗ

ТНг

РНе

Рго

А1а

Уа1

ьеи

б!п

Зег

5ег

51у

Ьеи

180

185

190

Туг

Зег

Ьеи

Зег

зег

Уа1

уа!

ТНг

Уа1

Рго

5ег

Зег

АЗП

РНе

С1у

тНг

195

200

205

С1п

тНг

туг

тНг

Суз

А5П

Уа1

А5р

нтз

ьуз

Рго

зег

АЗП

тНг

ьуз

Уа1

210

215

220

Азр

ьуз

ТНг

Уа!

сТи

Агд

ьуз

суз

Суз

Уа1

51 и

Суз

Рго

рго

суз

РГО

225

230

235

240

А1а

РГО

Рго

Уа!

А1а

<31 у

Рго

5ег

Уа1

РНе

ьеи

РНе

Рго

рго

ьуз

Рго

245

250

255

ьуз

АЗр

тНг

Ьеи

мет

11 е

Зег

Агд

ТНг

Рго

б!и

Уа1

тНг

суз

Уа!

Уа1

260

265

270

Уа1

Азр

Уа1

Зег

НТЗ

51и

Азр

Рго

С1и

Уа1

б1п

РНе

АЗП

тгр

туг

Уа!

275

280

285

АЗр

С1у

Уа1

51и

УаТ

нт 5

АЗП

А1а

Ьуз

тНг

ьуз

РГО

Агд

б1и

51 и

51 п

290

295

300

РНе

АЗП

Зег

тНг

рНе

Агд

Уа!

Уа!

5ег

Уа1

Ьеи

тНг

Уа!

Уа1

нтз

61 п

305

310

315

320

АЗр

тгр

ьеи

АЗП

б!у

ьуз

<31 и

Туг

Ьуз

Суз

ьуз

Уа!

Зег

АЗП

ьуз

51 у

325

330

335

Ьеи

РГО

АТ а

РГО

11 е

61 и

ьуз

ТНг

11 е

Зег

ьуз

ТНг

Ьуз

51 у

С1п

РГО

340

345

350

Агд

С1и

Рго

б!п

Уа1

туг

ТНг

Ьеи

РГО

РГО

зег

Агд

51 и

51 и

мет

тНг

355

360

365

ьу®

АЗП

б1п

УаТ

Зег

ьеи

тНг

суз

ьеи

Уа1

ьуз

51у

рНе

туг

РГО

зег

370

375

380

Азр

Пе

А1а

УаТ

с1и

Тгр

б!и

Зег

А5П

51 у

51П

Рго

б!и

АЗП

АЗП

туг

385

390

395

400

ьуз

ТНг

ТНг

Рго

Рго

мет

Ьеи

Азр

Зег

Азр

С1у

зег

РНе

РНе

ьеи

туг

405

410

415

5ег

ьуз

Ьеи

тНг

Уа1

Аэр

ьуз

Зег

Агд

тгр

б1п

б!п

51 у

Азп

Уа1

РНе

420

425

430

Зег

суз

5ег

УаТ

мет

нтз

<з1и

А1а

ьеи

нтз

А5П

нтз

туг

тНг

с!п

ьуз

435

440

445

Зег

ьеи

Зег

Ьеи

Зег

РГО

<31 у

ьуз

450

455

<21О> 24

<211> 445

<212> БЕЛОК

<213> Ното !

Бартепз

<400> 24

51п Уа1 51 п

ьеи

Уа1

51и

5ег

51 у 51у

51у

Уа1

Уа1

51п

Рго

61 у

Агд

1

5

10

15

зег ьеи Агд

Ьеи

Зег

суз

А1а

А1а

Зег

51 у

рНе

ТНг

рНе

зег

Зег

туг

20

25

30

51у Мет Нтз

тгр

Уа1

Агд

б!п

А1а

Рго

51у

ьуз

51у

Ьеи

с!и

тгр

Уа1

35

40

45

А1а Уа! Пе

Тгр

туг

АЗр

51У

Зег

АЗП

ьуз

туг

туг

А1а

Азр

зег

уа!

55 60

- 131 023555

ЬУ5

61 у

Агд

рНе

ТНг

11е

Бег

Агд

АЗр

АЗП

Бег

куз

АЗП

тНг

кеи

Туг

65

70

75

80

кеи

6ΐη

мет

АЗП

Бег

кеи

Агд

А! а

б1и

Азр

ТНг

а! а

Уа!

Туг

туг

суз

85

90

95

а! а

Бег

Бег

Бег

Бег

А5П

РНе

Туг

Азр

мет

Азр

Уа!

тгр

б1у

б!п

б!у

100

105

110

тНг

тНг

Уа!

ТНг

Уа!

Бег

Бег

а! а

Бег

ТНг

куз

б!у

Рго

Бег

Уа!

РНе

115

120

125

Рго

кеи

А1а

Рго

Су5

Бег

Агд

Бег

ТНг

зег

б1и

5ег

ТНг

А1а

А1а

ьеи

130

135

140

61 у

Суз

кеи

уа!

куз

Азр

Туг

РНе

РГО

61 и

РГО

Уа1

ТНг

Уа!

Бег

тгр

145

150

15 5

160

АЗП

зег

61 у

А1а

ьеи

ТНг

Зег

61 у

Уа1

Нтз

ТНг

рНе

Рго

А1а

Уа1

кеи

165

170

175

61 η

Бег

Бег

б1у

кеи

туг

Бег

кеи

Бег

Бег

Уа!

Уа1

ТНг

Уа1

рго

Бег

180

185

190

Зег

А5П

РНе

б1у

тНг

б! η

тНг

Туг

ТНг

суз

АЗП

Уа1

Азр

Нтз

куз

Рго

195

200

205

Бег

А5П

ТНг

куз

Уа1

Азр

куз

ТНг

Уа1

б!и

Агд

куз

суз

суз

Уа!

с! и

210

215

220

Суз

Рго

Рго

суз

Рго

А1а

Рго

Рго

Уа1

а! а

61 у

Рго

Бег

уа1

рНе

кеи

225

230

235

240

РНе

Рго

Рго

куз

Рго

иуа

АЗр

ТНг

кеи

Мет

Не

Бег

Агд

тНг

РГО

61 и

245

250

255

Уа!

тНг

суз

Уа!

Уа!

Уа!

АЗр

Уа!

Бег

Нтз

б! и

АЗр

Рго

б1и

Уа!

61 п

260

265

270

рНе

АЗП

тгр

Туг

Уа!

Агр

6! у

Уа!

61 и

уа!

нтз

АЗП

А1а

куз

ТНг

1-У5

275

280

285

РГО

Агд

б1и

б!и

61 η

РНе

АЗП

Бег

ТНг

рНе

Агд

Уа1

Уа!

Бег

Уа1

кеи

290

295

300

тНг

уа1

уа!

нтз

61 η

АЗр

тгр

кеи

АЗП

с1у

куз

61 и

Туг

куз

Суз

куз

305

310

315

320

Уа1

Бег

А5П

куз

б1у

кеи

Рго

А1а

Рго

Пе

б1и

ку5

ТНг

П е

Бег

куз

325

330

335

ТНг

куз

61 у

б!п

Рго

Агд

С1и

Рго

61 п

Уа!

Туг

тНг

кеи

РГО

РГО

Бег

340

345

350

Агд

с1и

61 и

мет

тНг

куз

АЗП

б!п

Уа!

Бег

кеи

ТНг

суз

кеи

Уа!

куз

355

360

365

б1у

РНе

Туг

Рго

Бег

Азр

11 е

а! а

Уа1

61 и

тгр

61 и

Бег

Азп

61 у

б1п

370

375

380

РГО

с1и

АЗП

АЗП

Туг

куз

тНг

тНг

РГО

Рго

мет

кеи

Азр

Бег

АЗр

61 у

385

390

395

400

Бег

РНе

РНе

кеи

туг

Бег

куз

кеи

ТНг

уа!

Азр

куз

Бег

Агд

Тгр

61 п

405

410

415

61 η

С1у

АЗП

Уа!

рНе

Бег

суз

Бег

Уа!

Мет

нтз

б!и

а! а

кеи

НТЗ

АЗП

420

425

430

НТ 5

туг

ТНг

61 η

куз

Бег

кеи

Бег

кеи

Бег

РГО

с! у

куз

435 440 445 <210> 25 <211> 443 <212=- БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 25

б!п

Уа!

с1п

кеи

б1п

б!и

Бег

с! у

Рго

с1у

кеи

Уа1

куз

рго

Бег

б!и

1

5

10

15

ТНг

кеи

Бег

кеи

ТНг

Суз

ТНг

Уа!

Бег

61 у

б!у

Бег

Не

Бег

АЗП

Туг

20

25

30

Туг

тгр

Бег

тгр

Пе

Агд

б!п

Бег

а! а

б!у

куз

б!у

кеи

61 и

тгр

Не

40 45

- 132 023555

С1у Агд Пе 50

Туг ТЬг

Бег

с1у Бег тЬг 55

нтз

туг

Азп рго 60

Бег

ьеи

ьуз

Бег

Агд

Пе

Пе

МеТ

Бег

Уа1

Азр

ТЬг

Бег

ьуз

АЗП

61 п

рЬе

Бег

Ьеи

65

70

75

80

ьуз

ьеи

Бег

Бег

уа1

тЬг

А1а

д1а

АЗр

тЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

А1а

85

90

95

Агд

АЗр

Агд

Уа1

РЬе

Туг

61 у

МеТ

Азр

Уа1

Тгр

61 у

С1п

С1у

ТЬг

ТЬг

100

105

110

Уа1

тЬг

Уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

тЬг

ьуз

б1у

Рго

Бег

Уа1

РЬе

Рго

ьеи

115

120

125

А1а

Рго

Суз

Бег

Агд

Бег

ТЬг

Бег

б1и

Бег

ТЬг

А1а

А1а

Ьеи

61 у

Суз

130

135

140

Ьеи

Уа1

ьуз

Азр

Туг

РЬе

РГО

б!и

Рго

Уа1

тЬг

Уа1

Бег

тгр

АЗП

Бег

145

150

155

160

б1у

А1 а

Ьеи

ТЬг

Бег

б1у

Уа1

Нтз

ТЬг

РЬе

Рго

д1а

Уа1

Ьеи

61 п

Бег

165

170

175

Бег

с!у

ьеи

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

Уа!

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Бег

Бег

АЗП

180

185

190

РЬе

б1у

тЬг

6ΐη

тЬг

Туг

ТЬг

Суз

АЗП

Уа1

Азр

нтз

ьуз

РГО

Бег

АЗП

195

200

205

тЬг

ьуз

Уа1

Азр

ьуз

ТЬг

Уа1

б!и

Агд

Ьуз

Суз

Суз

Уа1

б!и

Суз

РГО

210

215

220

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

Рго

Уа1

А1а

61 у

Рго

Бег

Уа!

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

225

230

235

240

РГО

ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

ьеи

мет

Пе

Бег

Агд

ТЬг

РГО

б1и

Уа!

ТЬг

245

250

255

Суз

уа1

уа1

Уа1

Азр

Уа1

Бег

Нтз

б1и

А5Р

Рго

61 и

Уа!

61 п

РЬе

Азл

260

265

270

тгр

туг

Уа!

Азр

б!у

Уа1

б1и

Уа!

нтз

АЗП

А1а

ьуз

ТЬг

ьуз

Рго

Агд

275

280

285

б1и

б!и

С1п

РЬе

АЗЛ

Бег

ТЬг

РЬе

Агд

Уа!

Уа1

Бег

Уа1

ьеи

ТЬг

уа1

290

295

300

Уа1

НТЗ

С1п

АЗр

тгр

Ьеи

АЗП

б1у

ьуз

б1и

туг

Ьуз

Суз

Суз

уа!

Бег

305

310

315

320

А5П

ьуз

с1у

Ьеи

Рго

А1а

Рго

Пе

С1и

Ьуз

ТЬг

Пе

Бег

ьуз

тЬг

ьуз

325

330

335

61 у

61 η

Рго

Агд

б!и

Рго

6ΐη

уа!

туг

ТЬг

ьеи

рго

РГО

Бег

Агд

С1и

340

345

350

61 и

мет

ТЬг

ьуз

Азп

61 л

Уа1

Бег

ьеи

тЬг

Суз

ьеи

Уа!

ьуз

61 у

рЬе

355

360

365

Туг

Рго

Бег

Азр

Пе

А1а

Уа1

б1и

Тгр

б1и

Бег

Азп

С1у

61 п

РГО

б!и

370

375

380

Азл

Азл

Туг

1-уз

ТЬг

ТЬг

Рго

Рго

МеТ

Ьеи

Азр

Бег

Αερ

61 у

Бег

РЬе

385

390

395

400

РЬе

ьеи

туг

Бег

ьуз

Ьеи

тЬг

уа!

Азр

ьуз

Бег

Агд

тгр

61 п

б1п

61 у

405

410

415

АЗЛ

Уа!

РЬе

Бег

Суз

Бег

Уа1

мет

НТ 5

б!и

А1а

ьеи

НТ 5

АЗП

НТЗ

Туг

420

425

430

ТЬг

61 п

Ьуз

Бег

Ьеи

Бег

Ьеи

Бег

Рго

61 у

Ьуз

435

440

<210> 26 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> кото Бартепз
<400> 26 6ΐπ Уа! б1п ьеи Уа!	б1и	Бег	б1у б1у	С1у	Уа1	Уа!	61 п	РГО	с1у	Агд
1 5				10					15
Бег ьеи Агд ьеи Бег	Суз	А1а	А1а Бег	61 у	рЬе	тЬг	РЬе	Бег	Бег	туг

25 30

- 133 023555

б! у

мет нт 5 тгр 35

Уа!

Агд б! п

а!а Рго 61 у ьуз С1у ьеи 61 и тгр Уа!

40

45

А! а

Уа!

11 е

Тгр

Туг

Азр

С1у

Бег

Туг

ьуз

туг

туг

А1а

Азр

Бег

Уа!

50

55

60

ьуз

С! у

Агд

РНе

ТНг

11 е

Бег

Агд

А5р

АЗП

Бег

ьуз

Азп

тНг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

ьеи

61 п

мет

АЗП

Бег

ьеи

Агд

А1а

б1и

Азр

ТНг

А! а

Уа!

туг

туг

суз

85

90

95

А1а

Агд

б1и

б1у

Азр

Туг

Бег

Азр

туг

Туг

б! у

МеТ

Азр

Уа!

тгр

б! у

100

105

110

С1п

б!у

ТНг

тНг

Уа!

тНг

Уа!

Бег

Бег

а! а

Бег

тНг

ьуз

б1у

РГО

Бег

115

120

125

уа!

РНе

рго

Ьеи

а! а

рго

суз

Бег

Агд

Бег

ТНг

Бег

61 и

Бег

ТНг

А1а

130

135

140

А! а

Ьеи

б1у

суз

Ьеи

уа!

ьуз

Азр

Туг

РНе

РГО

61 и

Рго

Уа1

ТНг

Уа1

145

150

155

160

Бег

Тгр

АЗП

Бег

б1у

а! а

Ьеи

тНг

Бег

б!у

Уа!

НТ 5

тНг

РНе

РГО

а! а

165

170

175

Уа1

Ьеи

61 п

Бег

Бег

61 у

Ьеи

Туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

Уа1

Уа!

ТНг

Уа!

180

185

190

РГО

Бег

Бег

АЗП

РНе

61 у

ТНг

6ΐη

ТНг

Туг

тНг

суз

АЗП

Уа!

Азр

НТЗ

195

200

205

ьуз

рго

Бег

АЗП

тНг

Ьуз

Уа1

Азр

ьуз

ТНг

Уа!

б!и

Агд

ьуз

суз

суз

210

215

220

Уа!

61 и

Суз

РГО

РГО

Суз

РГО

А! а

Рго

Рго

Уа!

А! а

61 у

Рго

Бег

уа1

225

230

235

240

РНе

Ьеи

РНе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

ьуз

Азр

ТНг

Ьеи

МеТ

11 е

Бег

Агд

ТНг

245

250

255

РГО

61 и

уа!

ТНг

Суз

Уа1

уа!

Уа!

Азр

Уа!

Бег

нтз

с! и

Азр

Рго

61 и

260

265

270

Уа!

б!п

РНе

АЗП

тгр

Туг

уа!

Азр

б!у

Уа!

С1и

Уа1

нтз

Азп

А! а

ьуз

275

280

285

ТНг

Ьуз

РГО

Агд

61 и

61 и

61 η

РНе

АЗП

Бег

ТНг

РНе

Агд

Уа!

Уа!

Бег

290

295

300

уа!

Ьеи

тНг

Уа!

Уа1

НТ 5

б!п

Азр

Тгр

ьеи

Азп

б1у

ьуз

б!и

туг

ьуз

305

310

315

320

суз

ьуз

уа!

Бег

АЗП

Ьуз

61 у

Ьеи

РГО

А! а

Рго

11 е

б1и

Ьуз

ТНг

Не

325

330

335

Бег

Ьуз

ТНг

ьуз

б1у

61 π

РГО

Агд

б!и

Рго

б1п

Уа!

туг

ТНг

Ьеи

Рго

340

345

350

Рго

Бег

Агд

б! и

с! и

мет

тНг

ьуз

АЗП

6ΐη

уа!

Бег

Ьеи

тНг

Суз

ьеи

355

360

365

Уа!

ьуз

б!у

РНе

туг

РГО

Бег

АЗр

ϊϊ е

А1а

Уа1

б!и

Тгр

б1и

Бег

АЗП

370

375

380

б1у

с1п

Рго

б1и

Азп

АЗП

Туг

ьуз

тНг

ТНг

Рго

Рго

мет

Ьеи

Азр

Бег

385

390

395

400

Азр

С! у

Бег

рНе

РНе

ьеи

Туг

Бег

ьуз

ьеи

ТНг

уа1

АЗр

ьуз

Бег

Агд

405

410

415

тгр

б1п

С1п

б1у

Азп

Уа!

РНе

Бег

Суз

Бег

Уа!

мет

НТ 5

б1и

А1а

Ьеи

420

425

430

НТ 5

АЗП

нтз

Туг

ТНг

61 п

ьуз

Бег

Ьеи

Бег

Ьеи

Бег

Рго

б!у

ьуз

435

440

445

<210> 27 <211> 455 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 27 б1п Уа! б!п ьеи Уа! с!п Бег б!у А1а б1и Уа! Ьуз Ьуз Рго С1у А1а 15 10 15

- 134 023555

Зег Уа!

ьуз Уа1 20

5ег

суз

ьуз Уа!

Зег 25

б!у

туг тЬг

Ьеи

тЬг 30

б1и

Ьеи

Зег

мег

НТ 5

тгр

Уа!

Агд

61 п

А1а

Рго

61 у

ьуз

б1у

ьеи

б1и

тгр

мет

35

40

45

б!у б!у

РЬе

Азр

Рго

б1и

Азр

61 у

б1и

ТЬг

Пе

туг

А1а

б1п

ьуз

РЬе

50

55

60

6ΐη

с1у

Агд

Уа!

тЬг

мет

ТЬг

61 и

Азр

тЬг

Зег

тЬг

Азр

тЬг

Уа!

Туг

65

70

75

80

Мет

б!и

ьеи

Зег

Зег

ьеи

Агд

Зег

61 и

АЗр

тЬг

А1а

Уа1

туг

туг

Суз

85

90

95

А1а

тЬг

б!у

Уа!

мет

Пе

ТЬг

РЬе

С1у

61 у

уа1

Пе

Уа1

б1у

НТЗ

Зег

100

105

110

туг

туг

61 у

мет

Азр

Уа1

тгр

С1у

61 п

61 у

тЬг

ТЬг

Уа1

тЬг

Уа!

Бег

115

120

125

5ег

А1а

зег

ТЬг

Ьуз

б1у

Рго

5ег

Уа!

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

суз

Зег

130

135

140

Агд

5ег

ТЬг

Зег

61 и

Зег

тЬг

А1а

А1а

Ьеи

б!у

Суз

Ьеи

Уа1

ьуз

Азр

145

150

155

160

Туг

рЬе

рго

61 и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Тгр

Азп

зег

61 у

А1а

Ьеи

ТЬг

165

170

175

Зег

б1у

Уа1

Нтз

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

Уа1

ьеи

61 п

зег

Зег

61 у

Ьеи

Туг

180

185

190

Зег

Ьеи

5ег

Зег

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Зег

Зег

АЗП

РЬе

б!у

ТЬг

61 п

195

200

205

тЬг

туг

ТЬг

суз

АЗП

Уа1

Азр

Нтз

ьуз

Рго

Бег

АЗП

ТЬг

ьуз

Уа1

А5р

210

215

220

Ьуз

ТЬг

Уа1

б1и

Агд

Ьуз

суз

суз

Уа!

С1и

Суз

Рго

РГО

суз

Рго

А1а

225

230

235

240

Рго

Рго

уа1

А1а

б1у

Рго

Зег

Уа!

РЬе

ьеи

рЬе

РГО

РГО

ьуз

РГО

ьуз

245

250

255

Азр

тЬг

Ьеи

Мет

Пе

5ег

Агд

ТЬг

РГО

б1и

уа1

тЬг

Суз

Уа!

Уа1

Уа1

260

265

270

Азр

Уа1

Бег

нт'з

б!и

АЗР

Рго

61 и

Уа1

61 п

рЬе

А5П

тгр

Туг

Уа1

Азр

275

280

285

б!у

Уа!

б1и

Уа1

нтз

А5П

А1а

ьуз

тЬг

ьуз

РГО

Агд

61 и

б!и

61 п

РЬе

290

295

300

Азп

Зег

ТЬг

РЬе

Агд

Уа1

Уа1

Зег

Уа1

ьеи

ТЬг

Уа!

Уа!

НТЗ

61 п

АЗр

305

310

315

320

тгр

ьеи

АЗП

61 у

ьуз

61 и

туг

ьуз

суз

ьуз

Уа1

Зег

АЗП

ьуз

61 у

ьеи

325

330

335

РГО

А1а

Рго

Пе

С1и

ьуз

тЬг

ίί е

Зег

ЬУЗ

тЬг

ьуз

б1у

С1п

Рго

Агд

340

345

350

б!и

Рго

С1п

Уа1

Туг

тЬг

Ьеи

Рго

РГО

Зег

Агд

С1и

б!и

мет

тЬг

Ьуз

355

360

365

АЗП

б!п

Уа1

Зег

ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

Уа1

ьуз

61 у

РЬе

Туг

рго

Зег

АЗр

370

375

380

Пе

А1а

Уа1

61 и

тгр

61 и

5ег

Азп

61 у

С1п

Рго

б1и

АЗП

АЗП

Туг

ьуз

385

390

395

400

тЬг

ТЬг

Рго

Рго

мет

Ьеи

Азр

Зег

Азр

б1у

Зег

РЬе

РЬе

Ьеи

туг

Бег

405

410

415

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа!

Азр

ьуз

Зег

Агд

Тгр

б1п

о1п

б!у

АЗП

Уа1

РЬе

Зег

420

425

430

Суз

Зег

уа!

Мет

нтз

б!и

А1а

Ьеи

нт’з

АЗП

нтз

туг

тЬг

б!п

ьуз

5ег

435 440 445

Ьеи Зег ьеи 5ег Рго б!у Ьуз 450 455 <210> 28 <211> 455 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепг

- 135 023555

<400> 28

61 π

Уа1

61 п

Ьеи

уа!

61 п

Зег

61 у

А1а

61 и

Уа!

Ьуз

ьуз

РГО

61 у

А1а

1

5

10

15

5ег

Уа!

ьуз

Уа1

5ег

Суз

ьуз

Уа1

Зег

б!у

туг

ТКг

Ьеи

ТКг

61 и

Ьеи

20

25

30

Зег

Мет

Ш 5

Тгр

Уа1

лгд

61 п

А1а

Рго

61 у

ьуз

61 у

Ьеи

б!и

Тгр

Меь

35

40

45

61 у

б1у

РКе

Азр

РГО

б1и

Азр

б1у

б1и

тКг

Пе

Туг

А1а

61 п

ьуз

рКе

50

55

60

С1п

61 у

Агд

Уа!

тКг

МеЬ

ТКг

б!и

Азр

ТКг

Зег

ТКг

Азр

ТКг

А1а

Туг

65

70

75

80

Мег

61 и

Ьеи

Зег

зег

Ьеи

Агд

Зег

61 и

Азр

ТКг

А1а

Уа!

туг туг

суз

85

90

95

А1а

ТКг

61 у

Уа!

мет

11 е

ТКг

РКе

б!у С1у

Уа1

Пе

Уа!

61 у

НТЗ

зег

100

105

110

туг

туг

61 у

Меь

Азр

Уа1

Тгр

61 у

61 η

61 у

тКг

ТКг

Уа1

ТКг

Уа1

Зег

115

120

125

Зег

д1а

Зег

ТКг

ьуз

61 у

Рго

5ег

уа1

РКе

РГО

ьеи

А1а

РГО

суз

Зег

130

135

140

Агд

Зег

ТКг

зег

61 и

5ег

ТКг

А1а

А1а

Ьеи

б1у

Суз

ьеи

уа!

ьуз

Азр

145

150

155

160

Туг

РКе

Рго

61 и

Рго

Уа1

ТКг

Уа!

Зег

Тгр

АЗП

Зег

61 у

А1а

Ьеи

ТКг

165

170

175

зег

61 у

уа1

НТЗ

тКг

РКе

РГО

л1а

Уа1

Ьеи

61 п

Зег

Зег

61 у

Ьеи

Туг

180

185

190

Зег

Ьеи

Зег

Зег

Уа!

Уа!

ТКг

Уа!

Рго

Зег

Зег

Азп

РКе

б1у

ТКг

61 η

195

200

205

тКг

туг

ТКг

суз

АЗП

Уа!

Азр

НТЗ

ьуз

Рго

Зег

АЗП

тКг

ьуз

Уа1

Азр

210

215

220

ЬУ5

ТКг

Уа1

61 и

Агд

Ьуз

суз

Суз

Уа!

б!и

Суз

Рго

Рго

суз

РГО

А1а

225

230

235

240

РГО

рго

Уа1

А1а

61 у

Рго

Зег

Уа1

РКе

Ьеи

РКе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

245

250

255

Азр

тКг

ьеи

Мег

11 е

Зег

Агд

тКг

РГО

б1и

Уа1

тКг

Суз

Уа1

Уа1

Уа1

260

265

270

АЗр

Уа1

Зег

Нт 5

С1и

Азр

Рго

61 и

Уа!

б!п

РКе

А5П

Тгр

Туг

Уа!

Азр

275

280

285

б1у

Уа1

с!и

Уа!

НТЗ

Азп

А1а

Ьуз

тКг

ьуз

РГО

Агд

С1и

б!и

С1п

РКе

290

295

300

АЗП

5ег

тКг

РКе

Агд

Уа1

Уа1

Зег

Уа1

ьеи

тКг

Уа1

Уа!

НТ 5

61 п

АЗр

305

310

315

320

тгр

Ьеи

АЗП

б1у

ьуз

б1и

Туг

ьуз

суз

ьуз

Уа!

5ег

А5П

ьуз

б1у

ьеи

325

330

335

Рго

а! а

РГО

11 е

61 и

Ьуз

ТКг

Не

5ег

ьуз

ТКг

ьуз

б!у

61 η

РГО

Агд

340

345

350

С1и

Рго

61 п

Уа1

туг

ТКг

ьеи

РГО

Рго

Зег

Агд

61 и

61 и

МеЬ

ТКг

Ьуз

355

360

365

АЗП

61 η

Уа!

5ег

Ьеи

тКг

суз

Ьеи

Уа!

ьуз

с! у

РКе

туг

РГО

Зег

АЗР

370

375

380

Не

А1а

Уа1

б1и

тгр

С1и

Зег

АЗП

б1у

с! п

РГО

С1и

АЗП

Азп

Туг

ЬУ5

385

390

395

400

ТКг

тКг

Рго

РГО

меь

Ьеи

АЗр

Зег

АЗр

61 у

Зег

РКе

РКе

ьеи

туг

5ег

405

410

415

Ьуз

Ьеи

ТКг

Уа1

Азр

ьуз

Зег

Агд

Тгр

61 η

61П

61 у

Азп

Уа!

РКе

Зег

420

425

430

суз

Зег

Уа1

меь

НТЗ

61 и

А1а

ьеи

НТЗ

АЗП

НТЗ

Туг

тКг

61 η

ьуз

Зег

435

440

445

ьеи

Зег

ьеи

зег

Рго

б!у

ьуз

450

455

- 136 023555 <210> 29 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 29

οίη

Уа1

Οίη

ьеи

Уа1

01 п

Бег

01 у

А1а

С1и

Уа1

ьуз

Ьуз

Рго

01 у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа1

ьуз

Уа1

Бег

суз

ьуз

Уа!

Бег

61 у

туг

тйг

ьеи

ТЙГ

01и

ьеи

20

25

30

Бег

мет

нтз

тгр

Уа1

Агд

01 п

А1а

Рго

01 у

ьуз

С1у

ьеи

С1и

Тгр

мет

35

40

45

01 у

с!у

Рйе

АЗр

Рго

01и

Азр

01 у

01и

тйг

Пе

Туг

А1а

с1п

ЬУЗ

Рйе

50

55

60

01 η

01 у

Агд

Уа!

Тйг

Мет

Тйг

01 и

Азр

тйг

Бег

ТЙГ

Азр

Тйг

А1а

Туг

65

70

75

80

мет

о!и

ьеи

Бег

Бег

ьеи

Агд

Бег

01 и

Α5Ρ

Тйг

А! а

уа1

Туг

туг

суз

85

90

95

А1а

Тйг

Агд

А1а

б!у

ТЙГ

ТЙГ

Ьеи

А1а

Туг

туг

туг

туг

л1а

мет

Азр

100

105

110

Уа1

тгр

01 у

01 п

О1у

ТЙГ

тйг

Уа1

тйг

Уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

ТЙГ

ЬУЗ

115

120

125

01 у

РГО

Бег

Уа1

Рйе

РГО

Ьеи

А1а

РГО

Суз

Бег

Агд

Бег

ТЙГ

Бег

С1и

130

135

140

Бег

Тйг

А1а

л1а

ьеи

01 у

Суз

ьеи

Уа!

ьуз

Азр

Туг

Рйе

Рго

01 и

Рго

145

150

155

160

Уа1

Тйг

Уа1

Бег

тгр

АЗП

Бег

01 у

А1а

ьеи

ТЙГ

Бег

О1у

уа!

нтз

тйг

165

170

175

Рйе

РГО

А1а

Уа1

ьеи

01 п

Бег

Бег

01 у

Ьеи

Туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

Уа1

180

185

190

Уа1

тйг

уа!

Рго

Бег

Бег

Азп

Рйе

С1у

ТЙГ

01 п

Тйг

туг

ТЙГ

Суз

АЗП

195

200

205

Уа1

АЗр

нтз

ьуз

РГО

Бег

Азп

Тйг

ьуз

уа!

А5р

ьуз

ТЙГ

Уа1

С1и

Агд

210

215

220

ьуз

Суз

суз

уа!

с!и

Суз

Рго

РГО

суз

РГО

А1а

Рго

Рго

Уа!

Д1а

С1у

225

230

235

240

РГО

Бег

Уа!

Рйе

ьеи

Рйе

Рго

РГО

ьуз

Рго

ЬУЗ

АЗр

Тйг

Ьеи

мет

Пе

245

250

255

Бег

Агд

тйг

РГО

О1и

Уа1

Тйг

суз

Уа1

Уа!

Уа!

АЗр

Уа1

Бег

НТЗ

01 и

260

265

270

Азр

РГО

О1и

Уа!

Οίη

Рйе

А5П

Тгр

Туг

Уа!

Агр

01 у

Уа1

01и

Уа1

НТ 5

275

280

285

АЗП

А1а

ьуз

Тйг

ьуз

Рго

Агд

01 и

01и

01 п

Рйе

АЗП

Бег

ТЙГ

Рйе

Агд

290

295

300

уа1

Уа!

Бег

Уа!

Ьеи

ТЙГ

Уа!

Уа1

нтз

Οίη

Азр

тгр

ьеи

АЗП

01 у

ьуз

305

310

315

320

01 и

туг

Ьуз

Суз

ьуз

Уа1

Бег

АЗП

ьуз

01 у

Ьеи

РГО

А1а

РГО

Пе

01 и

325

330

335

ьуз

тйг

11 е

Бег

ьуз

тйг

ьуз

О1у

01 η

Рго

Агд

О1и

Рго

01 п

Уа1

Туг

340

345

350

тйг

Ьеи

РГО

Рго

Бег

Агд

01 и

о1и

мет

ТЙГ

ьуз

АБП

01 п

Уа1

Бег

ьеи

355

360

365

тйг

суз

Ьеи

Уа1

ьуз

01 у

Рйе

Туг

РГО

Бег

АЗр

11е

А1а

Уа1

01 и

тгр

370

375

380

о1и

Бег

Азп

01 у

С1п

Рго

01 и

АЗП

АЗП

туг

ЬУ5

Тйг

ТЙГ

РГО

Рго

мет

385

390

395

400

ьеи

АБр

Бег

АЗр

с1у

Бег

рйе

Рйе

ьеи

туг

Бег

ЬУЗ

ьеи

ТЙГ

Уа!

Азр

405

410

415

ЬУ5

Бег

Агд

Тгр

Οίη

Οίη

01у

Абп

Уа1

Рйе

Бег

Суз

Бег

Уа!

МеТ

Нтз

420

425

430

с!и

А1а

Ьеи

НТ 5

АЗП

НТ 5

туг

Тйг

С1п

ьуз

Бег

ьеи

Бег

Ьеи

Бег

РГО

435 440 445

- 137 023555 б1у 1_уа 450 <210> 30 <211> 442 <212> БЕЛОК <213> ногао Бартелз <400> 30

б1п 1

УаТ 6ΐη теи

6ΐη б!и Бег С1у Рго С1у

теи

Уа1

суз

Рго

Бег 15

С1и

5

10

ТКг

Теи

Бег

Ьеи

ТКг

суз

ТКг

Уа1

Бег

61 у б!у

Бег

11 е

Бег

Бег

Туг

20

25

30

Туг

Тгр

Бег

Тгр

Не

Агд

61 п

Рго

Рго

61 у

суз

б!у

теи

С1и

Тгр

11 е

35

40

45

б1у

туг

11 е

туг

туг

5ег

б!у

АЗП

ТКг

А5П

туг

А5П

Рго

Бег

1_еи

суз

50

55

60

Бег

Агд

РКе

тКг

Теи

Бег

11 е

АЗр

ТКг

Бег

Ьуз

АЗП

61 п

РКе

Бег

Теи

65

70

75

80

Агд

теи

Бег

Бег

Уа!

тКг

А1а

А1а

Азр

тКг

А1а

Уа!

Туг

Туг

Суз

А1а

85

90

95

суз

11 е

А1а

тКг

Агд

Рго

РКе

А5р

туг

Тгр

б!у

б!п

б1у

ТКг

Теи

Уа1

100

105

110

ТКг

Уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

ТКг

цуз

с!у

Рго

Бег

Уа1

РКе

Рго

Теи

А1а

115

120

125

РГО

суз

Бег

Агд

Бег

ТКг

Бег

61 и

Бег

ТКг

А1а

А1а

теи

61 у

суз

Теи

130

135

140

Уа1

туз

Азр

туг

рКе

Рго

б!и

Рго

Уа1

ТКг

Уа!

Бег

тгр

АЗП

Бег

б1у

145

150

155

160

АТ а

теи

ТКг

Бег

С1у

Уа!

НТ 5

тКг

РКе

Рго

А1а

Уа1

1еи

С1п

Бег

Бег

165

170

175

С1у

Теи

туг

Бег

Теи

Бег

Бег

Уа!

Уа!

ТКг

Уа!

Рго

Бег

Бег

АЗП

РКе

180

185

190

61 у

ТКг

с!п

ТКг

Туг

тКг

суз

АЗП

Уа!

АЗр

нтз

туз

РГО

Бег

АЗП

тКг

195

200

205

СУЗ

Уа!

А5р

Суз

ТКг

Уа1

61 и

Агд

Туз

суз

суз

Уа!

б1и

суз

Рго

Рго

210

215

220

суз

РГО

А1а

Рго

РГО

уа1

А1а

61 у

РГО

Бег

Уа1

РКе

теи

РКе

Рго

Рго

225

230

235

240

1.У5

РГО

туз

АЗр

тКг

Теи

мет

Не

Бег

Агд

тКг

РГО

б1и

Уа1

ТКг

Суз

245

250

255

уаТ

Уа1

Уа!

АЗр

Уа1

Бег

нтз

С1и

Азр

Рго

б!и

Уа!

61 п

РКе

АЗП

тгр

260

265

270

туг

Уа1

Азр

б!у

Уа1

б1и

Уа1

нтз

АЗП

А1а

суз

ТКг

СУЗ

Рго

Агд

С1и

275

280

285

С1и

6ΐη

РКе

Азп

Бег

ТКг

РКе

Агд

Уа!

Уа!

Бег

Уа1

Теи

ТЬг

Уа1

Уа!

290

295

300

нтз

61 η

Азр

Тгр

Теи

Азп

б1у

Суз

б1и

Туг

суз

суз

суз

Уа!

Бег

АЗП

305

310

315

320

ьуз

б1у

теи

Рго

А1а

РГО

11е

б1и

туз

тКг

XI е

Бег

суз

ТКг

суз

б!у

325

330

335

б1п

РГО

Агд

б1и

Рго

61 п

уа1

Туг

ТКг

|_еи

Рго

Рго

Бег

Агд

61 и

б1и

340

345

350

мет

ТКг

1-уз

Азп

61 п

Уа1

Бег

теи

ТКг

Суз

сеи

Уа1

Суз

61 у

РКе

Туг

355

360

365

РГО

Бег

Азр

11 е

А1а

Уа1

с!и

Тгр

С1и

Бег

АЗП

С1у

с!п

Рго

б!и

АЗП

370

375

380

АЗП

туг

туз

ТКг

тКг

РГО

РГО

мет

Теи

Азр

Бег

АЗр

61 у

Бег

РКе

РКе

385

390

395

400

1_еи

туг

Бег

туз

Теи

ТКг

уа!

Азр

туз

Бег

Агд

тгр

61 π

б!п

61 у

АЗП

405 410 415

- 138 023555

Уа1	РНе	Бег	Суз	Бег	Уа1	мег	НТЗ	01 и	А1а теи	НТ 5 АЗП НТ 5 Туг ТНг
			420					425		430
С1п	ьуз	Бег	1_еи	Бег	ьеи	5ег	Рго	С1у	1-уз
		435					440

<210> 31 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> ното :

Бартепз

<400> 31

01 η

Уа!

01 п

Теи

Уа!

о!и

Бег

с!у с! у с! у

Уа!

Уа!

Οίη

Рго

С1у

Агд

1

5

10

15

Бег

ьеи

лгд

Теи

Бег

суз

А1а

А1а

Бег

С1у

РНе

ТНг

РНе

Пе

Бег

Туг

20

25

30

01 у

мет

нтз

тгр

Уа!

Агд

01 п

А1а

Рго

о!у

туз

с!у

теи

с!и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

Уа1

Пе

тгр

туг

Азр

С1у

Бег

АЗП

туз

Туг

туг

А1а

Азр

Бег

Уа1

50

55

60

туз

О1у

Агд

рНе

тНг

Пе

Бег

Агд

АЗР

А5П

Бег

туз

АЗП

тНг

Ьеи

туг

65

70

75

80

Теи

С1п

мет

Азп

Бег

теи

Агд

А1а

01 и

АЗР

ТНг

А1а

Уа!

туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Азр

Бег

Бег

01у

Азр

Туг туг

С1у

МеТ

А5Р

Уа1

тгр

01 у

Οίη

01 у

100

105

110

ТНг

ТНг

Уа!

ТНг

Уа1

Бег

Бег

А1а

Бег

тНг

Туз

01у

Рго

Бег

уа!

РНе

115

120

125

Рго

Теи

А! а

Рго

суз

Бег

Агд

Бег

ТНг

Бег

о!и

Бег

ТНг

А1а

А1а

теи

130

135

140

С1у

Суз

Теи

Уа1

туз

Азр Туг

РНе

Рго

О1и

РГО

Уа!

ТНг

Уа1

Бег

Тгр

145

150

155

160

Д5П

Бег

01 у

А1а

Теи

ТНг

Бег

01 у

Уа!

Нтз

ТНг

РНе

Рго

Д1а

Уа1

Теи

165

170

175

01 η

Бег

Бег

с! у

Теи

Туг

Бег

Теи

Бег

Бег

Уа1

Уа!

ТНг

Уа1

Рго

Бег

180

185

190

Бег

Азп

РНе

С! у

тНг

01 η

тНг

туг

тНг

Суз

АЗП

Уа1

Азр

Нтз

Туз

Рго

195

200

205

Бег

Азп

тНг

Туз

Уа1

Азр

туз

тНг

Уа!

с!и

Агд

туз

Суз

суз

Уа1

о!и

210

215

220

суз

РГО

Рго

суз

Рго

А1а

РГО

Рго

Уа!

А1а

С1у

Рго

Бег

Уа!

РНе

Теи

225

230

235

240

РНе

РГО

Рго

туз

РГО

туз

АЗр

ТНг

Теи

мет

Пе

Бег

Агд

ТНг

РГО

01 и

245

250

255

Уа1

ТНг

суз

Уа!

Уа!

Уа!

Азр

Уа!

Бег

НТ 5

С1и

Азр

Рго

о1и

Уа1

Οίη

260

265

270

РНе

АЗП

тгр

туг

Уа1

Азр

с1у

Уа1

01 и

Уа1

Нтз

А5П

А1а

туз

ТНг

ьуз

275

280

285

РГО

Агд

01 и

О1и

01 п

РНе

АЗП

Бег

тНг

РНе

Агд

Уа1

уа!

Бег

Уа1

теи

290

295

300

ТНг

уа!

Уа!

НТЗ

Οίη

АЗр

Тгр

теи

Азп

01 у

туз

01 и

туг

ьуз

суз

ьуз

305

310

315

320

Уа1

Бег

АЗП

ьуз

01 у

теи

Рго

А1а

Рго

Пе

01 и

туз

ТНг

Пе

Бег

Туз

325

330

335

ТНг

|_уз

с! у

οίη

РГО

Агд

с!и

Рго

Οίη

Уа!

Туг

тНг

Теи

Рго

РГО

Бег

340

345

350

Агд

с! и

о! и

мет

тНг

туз

АЗП

01 п

Уа1

Бег

ьеи

ТНг

Суз

Теи

уа!

туз

355

360

365

с!у

РНе

туг

Рго

Бег

АЗр

Пе

А1а

Уа1

01 и

тгр

01 и

Бег

АЗП

о1у

οίη

370

375

380

рго

О1и

АЗП

АЗП

туг

ьуз

ТНг

тНг

РГО

Рго

мет

Ьеи

Азр

Бег

Азр

01 у

385

390

395

400

- 139 023555

Бег

РКе РКе

Беи туг Бег Бу5 Беи тКг Уа!

А5Р Ьу5 5ег Агд

Тгр 415

21 η

405

410

2ΐη

С1у

АВП

Уа1

РМе

Бег

Сув

Бег

Уа1

мес

нтв

с1и

А! а

Беи

нтв

АВП

420

425

430

НТВ

туг

тКг

С! η

1_у5

Бег

Беи

Бег

Беи

Бег

Рго

21 у

Був

435

440

445

<210> 32 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Бартепв

<400> 32

21 η

Уа1

21 п

Беи

Уа1

21 п

Бег

21 у

А1а

21 и

Уа1

Буз

Був

РГО

21 у

А1а

1

5

10

15

вег

Уа1

БуВ

Уа1

Бег

суз

БУЗ

Уа1

Бег

21 у

туг

ТКг

Беи

ТКг

21 и

Беи

20

25

30

Бег

мес

НТВ

тгр

Уа1

Агд

21 п

А1а

Рго

21 у

БУЗ

21 у

Беи

21 и

тгр

мес

35

40

45

21у 21у

РКе

АВр

Рго

21 и

Авр

61 у

21и

ТКг

Пе

Туг

А1а

21 П

Був

РКе

50

55

60

21 η

21У

Агд

Уа1

ТКг

мес

тКг

21 и

Авр

ТКг

Бег

ТКг

А5р

ТКг

А1а

Туг

65

70

75

80

мес

21 и

Беи

Бег

Бег

Беи

Агд

Бег

б1и

Авр

ТКг

А1а

Уа!

туг

Туг

суз

85

90

95

А1а

ТКг

А1а

21у

Беи

21 и

Пе

Агд

тгр

РКе

Авр

Рго

Тгр

21 у

21 η

21 у

100

105

110

ТКг

Беи

Уа1

ТКг

Уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

тКг

Був

21 у

Рго

Бег

Уа1

РКе

115

120

125

РГО

Беи

А1а

РГО

суз

Бег

Агд

Бег

тКг

Бег

21 и

Бег

ТКг

А1а

А1а

Беи

130

135

140

21 у

сув

Беи

Уа1

Був

Авр

Туг

РКе

Рго

21 и

Рго

Уа1

тКг

Уа1

Бег

тгр

145

150

155

160

Авп

Бег

21 у

А1а

Беи

ТКг

Бег

61 у

Уа1

Нтв

ТКг

РКе

Рго

А1а

Уа1

Беи

165

170

175

21 η

Бег

Бег

21 у

Беи

туг

Бег

Беи

Бег

Бег

Уа1

Уа1

ТКг

Уа1

РГО

Бег

180

185

190

Бег

АВП

РКе

21 у

тКг

о1п

тКг

туг

ТКг

Суз

Авп

Уа1

Азр

НТ 5

БУЗ

Рго

195

200

205

Бег

Авп

ТКг

Був

Уа!

АЗр

Був

ТКг

Уа1

21и

Агд

Був

сув

сув

Уа1

21 и

210

215

220

Сув

Рго

Рго

Сув

РГО

А1а

Рго

Рго

Уа1

А1а

б1у

Рго

Бег

уа1

РКе

Беи

225

230

235

240

РКе

Рго

Рго

БУЗ

РГО

Був

Авр

тКг

Беи

мес

11 е

Бег

Агд

ТКг

Рго

21 и

245

250

255

Уа1

тКг

сув

Уа1

Уа1

Уа!

Авр

Уа1

Бег

нт в

21 и

Азр

Рго

21 и

Уа!

21п

260

265

270

РКе

АВП

Тгр

туг

уа1

АВр

21 у

уа1

21 и

Уа1

НТВ

Авп

А1а

Був

ТКг

Буз

275

280

285

РГО

Агд

21 и

21 и

61 гт

РКе

АВП

Бег

тКг

РКе

Агд

Уа!

Уа1

Бег

Уа1

Беи

290

295

300

тКг

Уа1

Уа1

нтв

б1п

А5р

тгр

Беи

АВП

21у

Був

21 и

туг

Був

суз

Буз

305

310

315

320

Уа1

Бег

АВП

Буз

21 у

Беи

Рго

А1а

РГО

11 е

21 и

Був

тКг

Пе

Бег

Був

325

330

335

тКг

Бу а

21 у

21 п

Рго

Агд

21и

Рго

21 п

Уа!

туг

ТКг

Беи

Рго

Рго

Бег

340

345

350

Агд

21 и

С1и

мес

тКг

Був

Авп

21 п

уа1

Бег

Беи

ТКг

Суз

Беи

Уа1

Був

355

360

365

21 у

РКе

туг

Рго

Бег

Авр

Пе

А1а

уа!

21 и

тгр

21 и

Бег

АВП

21 у

21 η

370 375 380

- 140 023555

Рго

С1и

АЗП

АЗП

Туг

ьуз

ТЬг

тЬг

Рго

Рго

мет

ьеи

Азр

Бег

Азр

С! у

385

390

395

400

Бег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Бег

ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа!

АЗр

ьуз

Бег

Агд

тгр

б1п

405

410

415

с1п

С1у

АЗП

уа1

рЬе

Бег

суз

Бег

Уа1

мет

НТЗ

С1и

а! а

ьеи

НТЗ

АЗП

420

425

430

ΗΪ 5

туг

ТЬг

61 п

Ьуз

Бег

Ьеи

Бег

ьеи

Бег

РГО

С! у

ьуз

435

440

445

<210> 33 <211> 446 <212> БЕЛОК <213? Ното :

Бартелз

<400? 33

С1п

уа1

6ΐη

Ьеи

61 η

С1и

Бег

61 у

Рго

С1у

Ьеи

Уа!

ьуз

Рго

Бег

6ΐη

1

5

10

15

ТЬг

Ьеи

Бег

Ьеи

ТЬг

суз

ТЬг

Уа!

Бег

61 у б!у

Бег

11 е

Бег

Бег

с1 у

20

25

30

61 у

туг

Туг

тгр

Бег

тгр

11 е

Агд

61 η

НТ 5

Рго

61 у

ьуз

61 у

ьеи

61 и

35

40

45

Тгр

Пе

61 у

Туг

11 е

Бег

Туг

Бег

61 у

Азр

тЬг

Туг

Туг

АЗП

рго

Бег

50

55

60

Ьеи

ЬУ5

Бег

Агд

Ьеи

тЬг

Пе

Бег

Уа1

АЗр

тЬг

Бег

Ьуз

нтз

б!п

рЬе

65

70

75

80

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Бег

Уа1

ТЬг

Бег

А1а

Азр

ТЬг

А1а

Уа!

Туг

Туг

85

90

95

суз

л! а

Бег

ьеи

АЗр

Ьеи

туг

61 у

АЗр

туг

РЬе

АЗр

туг

Тгр

б!у

61η

100

105

110

С1у

тЬг

Ьеи

Уа!

ТЬг

Уа!

Бег

Бег

А1а

Бег

ТЬг

ьуз

б!у

Рго

Бег

Уа!

115

120

125

РЬе

РГО

Ьеи

А1а

РГО

суз

Бег

Агд

Бег

тЬг

Бег

с!и

Бег

ТЬг

А1а

А1а

130

135

140

ьеи

с! у

Суз

Ьеи

Уа1

ьуз

Азр

туг

рЬе

Рго

61 и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

145

150

155

160

тгр

АЗП

Бег

С1у

А1а

Ьеи

ТЬг

Бег

с!у

Уа!

НТЗ

тЬг

РЬе

РГО

А1а

Уа!

165

170

175

ьеи

61 п

Бег

Бег

б1у

Ьеи

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

Уа!

Уа!

ТЬг

Уа!

РГО

180

185

190

Бег

Бег

АЗП

РЬе

б1у

тЬг

61 η

ТЬг

туг

тЬг

Суз

АЗП

Уа1

АЗр

Нт 5

ьуз

195

200

205

Рго

Бег

АЗП

ТЬг

ьуз

Уа!

АЗр

ьуз

тЬг

Уа1

б!и

Агд

ьуз

суз

Суз

Уа1

210

215

220

С! и

Суз

рго

Рго

Суз

РГО

А1а

Рго

Рго

уа!

А1а

61 у

РГО

Бег

Уа!

РЬе

225

230

235

240

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

ьуз

Рго

ьуз

Азр

тЬг

ьеи

Мет

Пе

Бег

Агд

ТЬг

Рго

245

250

255

о! и

уа1

ТЬг

суз

Уа!

Уа1

Уа1

Азр

Уа1

Бег

Нтз

б1и

А5р

РГО

С1и

Уа!

260

265

270

б1п

РЬе

АЗП

тгр

Туг

Уа!

Азр

61 у

Уа!

б1и

Уа!

Нтз

АЗП

А1а

ьуз

тЬг

275

280

285

ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

6ΐη

РЬе

АЗП

Бег

ТЬг

РЬе

Агд

Уа!

Уа1

Бег

Уа1

290

295

300

ьеи

тЬг

уа!

уа1

нтз

61 η

АЗР

тгр

Ьеи

АЗП

61 у

ьуз

б1и

Туг

ьуз

суз

305

310

315

320

Ьуз

Уа!

Бег

АЗП

Ьуз

61 у

Ьеи

Рго

А1а

РГО

Пе

61 и

ьуз

тЬг

Пе

Бег

325

330

335

ьуз

ТЬг

Ьуз

61 у

6ΐη

Рго

Агд

С1и

Рго

6ΐη

Уа1

туг

ТЬг

ьеи

Рго

Рго

340

345

350

Бег

Агд

61 и

б!и

мет

ТЬг

ьуз

АЗП

61 π

Уа!

Бег

Ьеи

ТЬг

суз

Ьеи

уа!

355 360 365

- 141 023555

ьуз

01 у 370

РЬе

Туг РГО

Бег

Азр Пе 375

д1а

уаТ

61 и

тгр 380

СТи

Бег

АЗП

сТу

СТп

Рго

с1и

АЗП

Азп

Туг

ьуз

тЬг

тЬг

Рго

Рго

мет

Ьеи

А5р

Бег

Азр

385

390

395

400

сТу

Бег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Бег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

УаТ

Азр

Ьуз

Бег

Агд

Тгр

405

410

415

СТп

01 η

С1у

АЗП

Уа1

РЬе

Бег

Су5

Бег

УаТ

мет

нтз

СТи

АТа

Ьеи

нтз

420

425

430

А5П

нтз

туг

ТЬг

СТп

ЬУ5

Бег

ьеи

Бег

ьеи

Бег

Рго

сТу

ьуз

435

440

445

<210> 34 <211> 451 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз

<400> 34

сТп

уаТ

СТп

ьеи

УаТ

СТп

Бег

61 у

АТа

СТ и

УаТ

Ьуз

ьуз

Рго

СТу

АТа

1

5

10

15

Бег

УаТ

ЬУ5

УаТ

Бег

СУ5

ьуз

АТа

Бег

СТу

Туг

тЬг

ьеи

тЬг

Бег

Туг

20

25

30

01 у

Пе

Бег

Тгр

УаТ

Агд

СТп

АТа

РГО

СТу

СТп

СТу

Ьеи

СТи

Тгр

меь

35

40

45

СТу

Тгр

Пе

Бег

АТа

Туг

АЗП

сТу

Азп

Рго

АЗП

Туг

АТа

СТп

ьуз

рЬе

50

55

60

бТп

СТу

Агд

УаТ

ТЬг

мет

ТЬг

тЬг

АЗр

ТЬг

Бег

ТЬг

Бег

ТЬг

АТа

туг

65

70

75

80

мет

СТи

Ьеи

Агд

Бег

Ьеи

Агд

Бег

АЗр

АЗр

тЬг

АТа

УаТ

туг

Туг

Суз

85

90

95

АТа

Агд

Азр

сТп

ОТ у

ьеи

Ьеи

с1у

рЬе

сТу

С1и

Ьеи

сТи

СТу

ьеи

РЬе

100

105

по

Аэр

Туг

тгр

СТу

СТп

СТу

ТЬг

Ьеи

УаТ

тЬг

УаТ

Бег

Бег

АТа

Бег

тЬг

115

120

125

ьуз

СТу

Рго

Бег

УаТ

рЬе

РГО

Ьеи

А1а

Рго

Суз

Бег

Агд

Бег

ТЬг

Бег

130

135

140

СТи

Бег

ТЬг

АТа

АТа

ьеи

С1у

суз

Ьеи

УаТ

ьуз

Азр

туг

РЬе

Рго

сТи

145

150

155

160

Рго

УаТ

ТЬг

УаТ

Бег

тгр

АЗП

Бег

СТу

АТа

Ьеи

ТЬг

Бег

СТу

УаТ

НТЗ

165

170

175

ТЬг

РЬе

Рго

АТа

УаТ

ьеи

сТп

Бег

Бег

СТу

ьеи

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

180

185

190

УаТ

Уа1

ТЬг

УаТ

РГО

Бег

Бег

Азп

РЬе

СТу

тЬг

СТп

тЬг

туг

ТЬг

суз

195

200

205

Азп

УаТ

Азр

нтз

ьуз

рго

Бег

АЗП

тЬг

ьуз

Уа1

Азр

ьуз

тЬг

УаТ

СТи

210

215

220

Агд

ьуз

Суз

Суз

УаТ

СТи

Суз

РГО

Рго

Суз

РГО

АТа

РГО

РГО

УаТ

АТа

225

230

235

240

СТу

РГО

Бег

УаТ

РЬе

ьеи

РЬе

РГО

РГО

ьуз

РГО

Ьуз

Азр

тЬг

Ьеи

МеЬ

245

250

255

Пе

Бег

Агд

ТЬг

РГО

СТи

УаТ

ТЬг

Суз

Уа1

УаТ

Уа1

АЗр

УаТ

Бег

Нтз

260

265

270

СТи

АЗр

РГО

СТи

УаТ

СТп

РЬе

АЗП

тгр

туг

УаТ

А5р

сТу

УаТ

бТи

Уа1

275

280

285

НТЗ

АЗП

АТа

ьуз

ТЬг

ьуз

РГО

Агд

СТи

сТи

С1П

РЬе

АЗП

Бег

ТЬг

РЬе

290

295

300

Агд

УаТ

УаТ

Бег

УаТ

Ьеи

ТЬг

УаТ

УаТ

ΗΊ5

СТп

Азр

Тгр

ьеи

АЗП

СТу

305

310

315

320

ьуз

61 и

туг

ьуз

суз

ьуз

УаТ

Бег

А5П

ьуз

С1у

Ьеи

Рго

А1а

Рго

Пе

325

330

335

СТ и

ьуз

тЬг

Пе

Бег

ьуз

ТЬг

Ьуз

СТу

сТп

РГО

Агд

бТи

Рго

бТп

УаТ

340

345

350

- 142 023555

Туг ТНг Ьеи Рго 355

Рго Бег

Агд 61 и б1и 360

мет

ТНг

ьуз

АЗП 365

СТп

УаТ

Бег

Ьеи

тНг

суз

ьеи

Уа1

ьуз

61 у

РНе

Туг

Рго

Бег

Азр

Пе

А1а

Уа1

б1и

370

375

380

Тгр

сТи

5ег

АЗП

бТу

СТп

Рго

бТи

АЗП

Азп

туг

ьуз

тНг

тНг

РГО

Рго

385

390

395

400

Мет

ьеи

Азр

Бег

АЗр

сТу

Бег

РНе

РНе

Ьеи

Туг

Бег

ьуз

Ьеи

тНг

УаТ

405

410

415

Азр

ьуз

Бег

Агд

тгр

61 п

сТп

б1у

Азп

Уа1

РНе

Бег

суз

Бег

УаТ

мет

420

425

430

Н15

бТи

АТа

ьеи

Н15

АЗП

Нтз

Туг

тНг

СТп

ьуз

Бег

ьеи

Бег

ьеи

Бег

435

440

445

РГО

61 у

ьуз

450

<210> 35 <211> 456 <212> БЕЛОК <213> ното :

Бартеп з

<400> 35

бТи

УаТ

СТп

ьеи

УаТ

сТи

Бег

бТу

бТу

бТу

Ьеи

УаТ

Ьуз

Рго

бТу бТу

1

5

10

15

Бег

ьеи

Агд

Ьеи

Бег

суз

АТа

АТа

Бег

сТу

РНе

тНг

РНе

Бег

А5П

АТа

20

25

30

Тгр

мет

Бег

тгр

уаТ

Агд

61 п

АТа

Рго

СТу

ьуз

СТу

ьеи

СТи

тгр

УаТ

35

40

45

бТу

лгд

Пе

ьуз

ТНг

ьуз

ТНг

Азр

СТу

бТу

ТНг

тНг

Азр

Туг

АТа

АТа

50

55

60

РГО

УаТ

ьуз

С1у

Агд

РНе

ТНг

Пе

Бег

Агд

Азр

Азр

Бег

СТп

Азп

ТНг

65

70

75

80

ьеи

туг

ьеи

61 п

мет

Азп

Бег

Ьеи

ьуз

ТНг

СТи

Азр

тНг

АТа

УаТ

Туг

85

90

95

туг

суз

тНг

ТНг

сТи

Туг

туг

СТу

Пе

Уа1

тНг

СТу

Бег

РНе

туг

Туг

100

105

110

туг

туг

Туг

СТу

мет

Азр

УаТ

Тгр

СТу

б1п

СТу

ТНг

ТНг

УаТ

ТНг

УаТ

115

120

125

Бег

Бег

АТа

Бег

тНг

ьуз

бТу

Рго

Бег

УаТ

РНе

Рго

ьеи

дТа

рго

суз

130

135

140

Бег

Агд

Бег

ТНг

Бег

СТи

Бег

ТНг

АТа

АТа

Ьеи

СТу

Суз

Ьеи

УаТ

ьу5

145

150

155

160

Азр

Туг

рНе

РГО

сТи

РГО

УаТ

ТНг

УаТ

Бег

тгр

АЗП

Бег

61 у

АТа

ьеи

165

170

175

ТНг

Бег

СТу

Уа1

Нтз

тНг

РНе

Рго

АТа

УаТ

Ьеи

СТп

Бег

Бег

61 у

Ьеи

180

185

190

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

УаТ

УаТ

тНг

Уа1

Рго

Бег

Бег

АЗП

РНе

бТу

ТНг

195

200

205

сТп

ТНг

туг

ТНг

суз

АЗП

УаТ

А5р

нтз

ьуз

Рго

Бег

АЗП

ТНг

ьуз

УаТ

210

215

220

Азр

Ьуз

тНг

уа1

сТи

Агд

ьуз

суз

суз

уа!

сТи

Суз

РГО

РГО

суз

РГО

225

230

235

240

АТа

РГО

РГО

Уа1

А1а

СТу

РГО

Бег

УаТ

РНе

ьеи

РНе

РГО

Рго

ьуз

Рго

245

250

255

Ьуз

А5р

тНг

Ьеи

мет

Пе

Бег

Агд

тНг

Рго

сТи

УаТ

тНг

Суз

УаТ

УаТ

260

265

270

УаТ

АЗр

уаТ

Бег

НТЗ

СТи

АЗр

Рго

СТи

УаТ

С1п

РНе

АЗП

тгр

Туг

УаТ

275

280

285

Азр

бТу

УаТ

61 и

УаТ

нтз

Азп

АТа

Ьуз

ТНг

1-У5

РГО

Агд

СТи

61 и

61 п

290

295

300

рНе

АЗП

Бег

ТНг

РНе

Агд

УаТ

УаТ

Бег

УаТ

Ьеи

тНг

УаТ

УаТ

НТЗ

СТп

305

310

315

320

- 143 023555

АЗр

тгр

геи

АЗП

СТу гуз СТи Туг Гуз Суз Гуз УаТ

Бег

АЗП

гуз 335

СТу

325

330

Геи

Рго

АТа

Рго

П е

СТи

ХУ5

тНг

1Те

Бег

гуз

ТНг

гуз

СТу

СТп

Рго

340

345

350

Агд

сТи

Рго

СТп

УаТ

туг

ТНг

геи

Рго

Рго

Бег

Агд

сТи

СТи

мех

ТНг

355

360

365

Гуз

АЗП

СТп

УаТ

Бег

Геи

ТНг

Суз

Геи

УаТ

гуз

СТу

РНе

Туг

РГО

Бег

370

375

380

Азр

11 е

АТа

УаТ

сТи

Тгр

СТи

Бег

Азп

СТу

СТп

РГО

СТи

АЗП

АЗП

туг

385

390

395

400

ЕУ5

ТНг

ТНг

РГО

РГО

мех

геи

Азр

Бег

Азр

СТу

Бег

РНе

РНе

Геи

туг

405

410

415

Бег

гуз

геи

тНг

УаТ

Азр

Цуз

Бег

Агд

тгр

СТп

сТп

СТу

Азп

УаТ

РНе

420

425

430

Бег

суз

Бег

УаТ

мех

Н15

СТи

АТа

геи

нТз

АЗП

нтз

туг

ТНг

СТп

гуз

435

440

445

Бег

геи

Бег

Геи

Бег

РГО

сТу

гуз

450

455

<210> 36

<211> 214 <212> БЕЛОК <213> Ното БарТепз

<400> 36

Азр

Пе

СТп мех тНг

СТп

Бег

РГО

Бег

Бег

Геи

Бег

АТа

Бег

УаТ

сТу

1

5

10

15

Азр

Агд

УаТ ТНг Пе

ТНг

суз

СТп

АТа

Бег

СТп

А5П

Пе

Бег

АЗП

РНе

20

25

30

Геи

Азр

Тгр Туг СТп

СТп

гуз

РГО

СТу

гуз

АТа

РГО

АЗП

геи

геи

Пе

35

40

45

туг

А5р

АТа Бег Азр

геи

Азр

РГО

СТу

уаТ

Рго

Бег

Агд

РНе

Бег

СТу

50

55

60

Бег

СТу

Бег СТу ТНг

Азр

РНе

тНг

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

Геи

СТп

Рго

65

70

75

80

СТ и

А5Р

Пе АТа ТНг

туг

туг

суз

СТп

сТп

Туг

УаТ

Бег

геи

РГО

геи

85

90

95

тНг

РНе

сТу сТу сТу

ТНг

гуз

УаТ

СТи

Пе

гуз

Агд

ТНг

уаТ

АТа

аТ а

100

105

110

РГО

Бег

УаТ РНе Пе

РНе

РГО

Рго

Бег

Азр

СТи

СТп

Геи

гуз

Бег

СТу

115

120

125

ТНг

АТа

Бег УаТ УаТ

Суз

Геи

геи

АЗП

АЗП

рНе

туг

Рго

Агд

СТи

АТа

130

135

140

гуз

УаТ

сТп тгр гуг

УаТ

Азр

А5П

АТа

Геи

сТп

Бег

СТу

Азп

Бег

сТп

145

150

155

160

СТи

Бег

УаТ тНг сТи

СТп

А5р

Бег

гуз

АЗр

Бег

тНг

туг

Бег

геи

Бег

165

170

175

Бег

ТНг

Геи ТНг Геи

Бег

гуз

АТа

А5р

туг

СТи

гуз

НТ 5

гуз

УаТ

Туг

180

185

190

АТа

Суз

СТи УаТ ТНг

нтз

СТп

СТу

Геи

Бег

Бег

Рго

УаТ

ТНг

гуз

Бег

195 200 205

РНе Азп Агд СТ у с1и Суз 210 <210> 37 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 37

- 144 023555

Азр

Пе

61 η

мет

тКг

61 и

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

л1а

Бег

Уа1

с1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

тКг

Пе

ТКг

суз

61 η

А1а

Бег

б1п

АЗр

Пе

Бег

АЗП

рКе

20

25

30

Ьеи

Азр

тгр

Туг

с1п

6ΐη

ьуз

Рго

б1у

ьуз

д1а

Рго

ьуз

Ьеи

Ьеи

Пе

35

40

45

туг

Азр

А1а

Бег

Азр

Ьеи

Азр

Рго

б1у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РКе

Бег

с1у

50

55

60

Бег

С1у

Бег

С1у

тКг

Азр

РКе

тКг

РКе

тКг

Пе

Бег

Бег

ьеи

б1п

Рго

65

70

75

80

б!и

Азр

Π е

А1а

тКг

туг

туг

Суз

б1п

С1п

туг

уа1

Бег

ьеи

Рго

Ьеи

85

90

95

тКг

рКе

СТ у

61 у

С1у

ТКг

ьуз

Уа1

б1и

Пе

Ьуз

Агд

ТКг

Уа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

Бег

Уа1

РКе

Пе

РКе

РГО

РГО

Бег

А5р

с!и

б1п

ьеи

ьуз

Бег

б1у

115

120

125

тКг

д1а

Бег

Уа!

уа1

Суз

ьеи

ьеи

АЗП

АЗП

РКе

Туг

РГО

лгд

с!и

А1а

130

135

140

ьуз

уа!

с1п

тгр

Ьуз

Уа!

АЗр

АЗП

А1а

Ьеи

С1п

Бег

с!у

АЗП

Бег

61 п

145

150

155

160

С1и

Бег

Уа!

тЬг

61 и

6ΐη

АЗр

Бег

ьуз

Азр

Бег

тКг

Туг

Бег

ьеи

Бег

165

170

175

Бег

ТКг

Ьеи

тКг

ьеи

Бег

ьуз

А1а

Азр

туг

с1и

ьуз

Нт 3

ьуз

Уа!

Туг

180

185

190

А1а

суз

61 и

Уа1

тКг

НТЗ

61 η

б1у

Ьеи

Бег

Бег

рго

Уа!

ТКг

ьуз

Бег

195

200

205

РКе

А5П

Агд

б!у

61 и

Суз

210

<210> 38 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Нолю :

Барт епз

<400> 38

АЗр

АЗП

Уа1

МеТ

ТКг

б!п

ТКг

РГО

Ьеи

Бег

ьеи

Бег

Уа1

ТКг

РГО

61 у

1

5

10

15

61 п

РГО

А1а

Бег

Пе

Бег

суз

ьуз

Бег

Бег

61 п

Бег

Ьеи

Ьеи

НТЗ

Бег

20

25

30

Азр

С1у

ьуз

ТКг

Туг

Ьеи

туг

Тгр

Туг

Ьеи

б1п

ьуз

Рго

б1у

61 п

Рго

35

40

45

Рго

61 п

Ьеи

Ьеи

11 е

туг

61 и

А1а

Бег

Азп

Агд

РКе

Бег

б1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РКе

Бег

61 у

Бег

О1у

Бег

61 у

тКг

Азр

РКе

тКг

Ьеи

ьуз

Пе

65

70

75

80

Бег

Агд

Уа1

б1и

А1а

б1и

Азр

Уа!

С1у

Уа1

туг

Туг

суз

меь

б1п

Бег

85

90

95

Пе

61 п

ьеи

Рго

Ьеи

ТКг

РКе

б!у б!у

61 у

ТКг

ьуз

Уа!

61 и

Пе

ьуз

100

105

110

Агд

ТКг

уа1

А1а

А1а

Рго

Бег

Уа1

РКе

Не

рКе

Рго

Рго

Бег

АЗр

б1и

115

120

125

61 π

Ьеи

ьуз

Бег

61 у

ТКг

А1а

Бег

Уа1

Уа1

суз

Ьеи

Ьеи

Азп

АЗП

РКе

130

135

140

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

ьуз

Уа1

с1п

тгр

Ьуз

Уа1

Азр

АЗП

А1а

Ьеи

с1п

145

150

155

160

Бег

61 у

АЗП

Бег

61 п

б1и

Бег

Уа1

ТКг

б1и

С1п

Азр

Бег

Ьуз

Азр

Бег

165

170

175

ТКг

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

ТКг

ьеи

тКг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

АЗр

туг

б1и

180

185

190

ьуз

НТ5

ьуз

Уа!

Туг

А1а

суз

б1и

Уа!

ТКг

НТЗ

с!п

61 у

ьеи

Бег

Бег

195 200 205

- 145 023555

Рго Уа1 ТНг куз Бег РНе азп Агд С1у С1и Суз 210 215 <210> 39 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 39

Азр

11 е

С1п

мет

тНг

61 η

Бег

Рго

Бег

Бег

кеи

Бег

а! а

Бег

уа!

б1у

1

5

10

15

АЗр

Агд

Уа1

тНг

11 е

тНг

суз

6ΐη

А! а

Бег

б!п

А5Р

Пе

АЗП

АЗП

туг

20

25

30

кеи

АЗП

тгр

Туг

б1п

б!п

ку5

рго

61 у

куз

А! а

Рго

куз

кеи

кеи

Пе

35

40

45

туг

Азр

а! а

Бег

Азп

кеи

61 и

Пе

б1у

Уа1

Рго

Бег

Агд

рНе

Бег

61 у

50

55

60

Бег

С1у

Бег

б1у

ТНг

Азр

рНе

Пе

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

кеи

б!п

Рго

65

70

75

80

б1и

Азр

Пе

А! а

ТНг

Туг

Туг

суз

с! η

С! η

Туг

Азр

АЗП

РНе

рго

РНе

85

90

95

тНг

РНе

с! у

61 у

б!у

ТНг

куз

Уа1

б!и

Пе

куз

Агд

тНг

Уа!

А! а

А! а

100

105

110

рго

Бег

Уа!

РНе

Пе

РНе

РГО

Рго

Бег

Азр

61 и

6ΐη

кеи

куз

Бег

б! у

115

120

125

тНг

А1а

Бег

Уа1

Уа!

Суз

кеи

кеи

АЗП

АЗП

РНе

туг

РГО

Агд

б1и

А1а

130

135

140

куз

уа!

61 п

тгр

куз

Уа!

А5р

АЗП

А1а

кеи

61 п

Бег

61 у

АЗП

Бег

б!п

145

150

155

160

61 и

Бег

Уа!

ТНг

б1и

б! η

Азр

Бег

куз

Азр

Бег

ТНг

туг

Бег

кеи

Бег

165

170

175

Бег

тНг

кеи

тНг

кеи

Бег

куз

а! а

Азр

туг

б!и

куз

нтз

куз

Уа!

Туг

180

185

190

А1а

суз

61 и

Уа!

ТНг

нтз

61 п

б!у

кеи

Бег

Бег

Рго

уа!

тНг

куз

Бег

195

200

205

рНе

АЗП

Агд

61 у

61 и

Суз

210

<210> 40 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> ното :

Бартепз

<400> 40

Азр Не

б!п

мет

ТНг

б!п

Бег

РГО

Бег

Бег

кеи

Бег

А1а

Бег

Уа!

б!у

1

5

10

15

Азр Агд

Уа!

тНг

Пе

ТНг

Суз

61 п

а! а

Бег

61 π

АЗр

ϊϊ е

Азп

АЗП

Туг

20

25

30

кеи Азп

тгр

туг

б1п

б1п

куз

Рго

б1у

куз

А! а

Рго

куз

кеи

кеи

Пе

35

40

45

туг Азр

тНг

Бег

АЗП

кеи

61 и

Рго

61 у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РНе

Бег

61 у

50

55

60

Бег б!у

Бег

01у

ТНг

Азр

рНе

ТНг

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

кеи

б1п

Рго

65

70

75

80

61 и Азр

Пе

а! а

ТНг

Туг

Туг

Суз

61 п

б!п

Туг

Азр

Абп

кеи

кеи

ТНг

85

90

95

РНе б1у

б1п

61 у

ТНг

Агд

кеи

61 и

Пе

куз

Агд

тНг

Уа1

а! а

А1а

Рго

100

105

110

Бег Уа!

РНе

Не

РНе

Рго

Рго

Бег

Азр

б!и

с!п

кеи

куз

Бег

б!у

тНг

115 120 125

- 146 023555

А1а Бег уа!

Уа1

суз

ьеи

ьеи 135

АЗП АЗП

рНе

Туг Рго Агд 140

61 и

л1а

ьуз

130

уа!

61 η

тгр

ьуз

Уа!

Азр

АЗП

А! а

Ьеи

С! η

Бег

61 у

Азп

Бег

6ΐη

С1и

145

150

155

160

Бег

Уа1

ТНг

б1и

61 η

АЗр

Бег

Ьуз

АЗр

Бег

ТНг

Туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

165

170

175

тНг

ьеи

ТНг

ьеи

Бег

Ьуз

А1а

АЗр

Туг

б! и

Ьуз

Нтз

Ьуз

Уа!

Туг

А1 а

180

185

190

суз

б1и

Уа1

ТНг

Нт 5

б!п

б!у

Ьеи

Бег

Бег

РГО

Уа!

тНг

ьуз

Бег

РНе

195

200

205

АЗП

Агд

б!у

б!и

суз

210

<210> 41 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> ното !

Барт епз

<400> 41

АЗр

Не

б!п

мет

ТНг

б!п

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

а! а

Бег

Уа1

с! у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

тНг

Не

ТНг

Суз

61 п

а! а

Бег

с! η

Азр

Не

Бег

АЗП

Туг

20

25

30

Ьеи

АЗП

Тгр

туг

61 η

нтз

ьуз

Рго

б1у

ьуз

Αΐ а

РГО

ьуз

Ьеи

Ьеи

Не

35

40

45

Туг

Аэр

А1а

Бег

Азп

Ьеи

61 и

ТНг

б!у

Уа1

РГО

Бег

Агд

РНе

Бег

61 у

50

55

60

Бег

61 у

Бег

б1у

тНг

Азр

РНе

ТНг

РНе

тНг

Не

Бег

Бег

ьеи

61 η

Рго

65

70

75

80

б1и

Азр

Не

а! а

тНг

Туг

туг

суз

с1п

61η

Туг

А5р

АЗП

ьеи

Ьеи

ТНг

85

90

95

РНе

б!у б!у б!у

ТНг

ьуз

уа!

б1и

Не

ьуз

Агд

тНг

Уа!

а! а

а! а

Рго

100

105

110

Бег

Уа!

РНе

Не

РНе

РГО

Рго

Бег

АЗр

б!и

б!п

Ьеи

ьуз

Бег

б! у

тНг

115

120

125

А1а

Бег

уа!

Уа!

Суз

ьеи

Ьеи

АЗП

Α5Π

РНе

Туг

РГО

Агд

61 и

А! а

ЬУ5

130

135

140

Уа!

б1п

тгр

ьуз

уа1

АЗр

АЗП

А! а

ьеи

61 п

Бег

б1у

АЗП

Бег

61 η

61 и

145

150

155

160

Бег

Уа1

тНг

61 и

61 п

Азр

Бег

ьуз

Азр

Бег

ТНг

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

165

170

175

ТНг

Ьеи

тНг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

АЗр

туг

61 и

ьуз

нтз

ьуз

Уа!

туг

А! а

180

185

190

Суз

б!и

Уа1

ТНг

НТ 5

б!п

с!у

Ьеи

Бег

Бег

Рго

Уа!

тНг

ьуз

Бег

рНе

195

200

205

АЗП

Агд

б!у

б!и

суз

210

<210> 42 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> ното

Бартепз

<400> 42 Азр 11 е б1п

мет

тНг

б!п

Бег

Рго

Бег

Бег

Ьеи

Бег

а! а

Бег

Уа!

61 у

1

5

10

15

Азр Агд Уа!

ТНг

Не

тНг

суз

б!п

А! а

Бег

61 п

АЗр

ι! е

Бег

АЗП

туг

20

25

30

Ьеи Азп тгр

туг

б!п

61 η

ьуз

РГО

61 у

ьуз

А! а

РГО

ьуз

РНе

Ьеи

Не

40 45

- 147 023555

туг А5р А1а 5ег Абп ьеи б!и ТЬг

61 у

Уа1

Рго

Бег 60

Агд

РНе

Бег

61 у

50

55

Бег

С1у

Бег

б1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

Ьеи

61 п

Рго

65

70

75

80

61 и

Азр

11 е

А1а

ТНг

туг

туг

суз

61 п

61 η

Туг

АЗр

АЗП

Ьеи

Не

ТНг

85

90

95

РНе

б1у

61 п

61 у

ТНг

Агд

Ьеи

61 и

11 е

Ьуз

Агд

тНг

Уа!

Д1а

А1а

Рго

100

105

110

Бег

Уа1

РНе

П е

РНе

РГО

РГО

Бег

Азр

б1и

6ΐη

Ьеи

Ьуз

Бег

с!у

ТНг

115

120

125

А1а

Бег

Уа1

Уа1

Суз

ьеи

ьеи

АЗП

Азп

РНе

туг

РГО

Агд

б1и

Αί а

ьуз

130

135

140

Уа1

б!п

тгр

ьуз

Уа1

Азр

АЗП

А1а

Ьеи

61 η

Бег

б!у

Азп

Бег

61 η

б1и

145

150

155

160

Бег

Уа1

тНг

61 и

6ΐη

Азр

Бег

ьуз

Азр

Бег

ТНг

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

165

170

175

ТНг

Ьеи

ТНг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

АЗр

туг

б1и

Ьуз

Нт 5

ьуз

Уа1

туг

д1а

180

185

190

Су5

б1и

уа!

ТНг

нт з

61 гт

61 у

Ьеи

Бег

Бег

РГО

уа!

тНг

ьуз

Бег

РНе

195

200

205

Азп

Агд

б!у

С1и

суз

210

<210> 43 <211> 220 <212> БЕЛОК <213> кото

Барт епз

<400> 43

АЗр

11 е

Уа!

Μβΐ

ТНг

С1п

Бег

Рго

Азр

Бег

ьеи

А1а

уа!

Бег

Ьеи

61 у

1

5

10

15

61 и

Агд

А1а

тНг

11 е

Азп

суз

ьуз

Бег

Бег

61 п

Бег

Уа1

ьеи

Азр

Бег

20

25

30

Бег

Азр

АЗП

ьуз

АЗП

туг

ьеи

А1а

тгр

туг

б!п

с1п

ьуз

РГО

б1у

61 π

35

40

45

Рго

рго

ьуз

Ьеи

Ьеи

Не

туг

Тгр

А1а

Бег

АЗП

Агд

С1и

Бег

61 у

Уа1

50

55

60

РГО

Азр

Агд

РНе

Бег

61 у

Бег

б1у

Бег

б!у

тНг

Азр

РНе

Бег

ьеи

тНг

65

70

75

80

11 е

Бег

Бег

ьеи

б1п

А1а

61 и

АЗр

Уа1

А1а

Уа1

туг

Туг

суз

61 п

б1п

85

90

95

Туг

туг

Бег

Азр

РГО

РНе

тНг

РНе

б1у

Рго

б1у

тНг

Ьуз

Уа1

Азр

11 е

100

105

110

ьуз

Агд

тНг

Уа1

А1а

А1а

РГО

Бег

Уа1

РНе

Пе

РНе

Рго

РГО

Бег

АЗр

115

120

125

б!и

6ΐη

ьеи

ьуз

Бег

61 у

ТНг

А1а

Бег

уа1

Уа1

суз

ьеи

ьеи

АЗП

АЗП

130

135

140

РЬе

Туг

Рго

Агд

б1и

А1а

Ьуз

Уа1

б1п

Тгр

ЬуЗ

Уа!

Азр

Азп

А1а

Ьеи

145

150

155

160

6ΐη

Бег

61 у

Азп

Бег

61 η

61 и

Бег

Уа!

тНг

б1и

б1п

АЗр

Бег

ьуз

Азр

165

170

175

Бег

тНг

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

ТНг

ьеи

тНг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

Азр

туг

180

185

190

б!и

Ьуз

Нт 3

ьуз

Уа1

Туг

А1а

Суз

61 и

Уа1

ТНг

Нт 5

61 п

С1у

Ьеи

Бег

195

200

205

Бег

РГО

Уа1

ТНг

ьуз

Бег

РНе

АЗП

Агд

61 у

61 и

Суз

210 215 220 <210> 44 <211> 220

- 148 023555 <212> БЕЛОК <213> ното Зартепз <400> 44

Азр 11е Уа! 1

мет

тНг 5

с!п

Зег

РГО Азр

Зег Ьеи А1а Уа! 10

Бег

Ьеи 15

61 у

с! и

Агд

А1а

тНг

Пе

Азп

суз

ьуз

Зег

Зег

с1п

Бег

Уа!

Ьеи

Азр

зег

20

25

30

Зег

АЗр

АЗП

ьуз

АЗП

Туг

ьеи

А1а

тгр

туг

51 П

61 п

ьуз

Рго

С1у

61 п

35

40

45

Рго

Рго

ьуз

ьеи

ьеи

ιί е

туг

Тгр

А1а

Зег

АЗП

Агд

51 и

Зег

б1у

Уа!

50

55

60

Рго

Азр

Агд

рНе

Зег

С1у

Зег

01 у

Зег

б!у

тНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

ТНг

65

70

75

80

Пе

Зег

Зег

ьеи

51 п

А1а

51и

Азр

Уа1

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

б!п

б!п

85

90

95

туг

туг

Зег

Азр

Рго

РНе

ТНг

РНе

61 у

Рго

51 у

ТНг

ьуз

уа!

АЗр

Пе

100

105

110

ьуз

дгд

тНг

уа!

а! а

А1а

РГО

Зег

Уа1

рНе

Пе

рНе

РГО

РГО

Зег

Азр

115

120

125

с1и

с1п

Ьеи

ьуз

Зег

51 у

тНг

А1а

Зег

Уа1

Уа1

суз

ьеи

Ьеи

АЗП

АЗП

130

135

140

РНе

Туг

Рго

Агд

51 и

А1а

Ьуз

Уа1

51п

Тгр

ьуз

Уа1

Азр

Азп

А1а

ьеи

145

150

155

160

с! ΙΊ

Зег

с1у

АЗП

зег

51 π

51 и

Зег

Уа1

тНг

51 и

С1п

А5р

Зег

ьуз

Азр

165

170

175

Зег

ТНг

туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

ТНг

Ьеи

ТНг

ьеи

Зег

Ьуз

А1а

АЗр

туг

180

185

190

с! и

ьуз

Нтз

ьуз

Уа1

туг

а1 а

Суз

51 и

Уа!

тНг

НТ 5

С1п

С1у

Ьеи

зег

195

200

205

Зег

Рго

Уа!

тНг

ьуз

Зег

рНе

АЗП

Агд

51у

с!и

суз

210

215

220

<210> 45 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> нолю :

Барт еп5

<400> 45

Азр

11е б1п

мет

тНг

51 п

Зег

Рго

зег

Бег

ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа1

б!у

1

5

10

15

Азр

Агд Уа1

тНг

Пе

тНг

суз

51 п

А1а

Бег

С1п

Азр

Пе

5ег

АЗП

туг

20

25

30

Ьеи

азп тгр

туг

51 п

61 π

ьуз

РГО

51у

ьуз

л!а

РГО

ьуз

ьеи

ьеи

Пе

35

40

45

туг

Азр А1а

Бег

А5П

Ьеи

51 и

тНг

51у

Уа1

Рго

Зег

Агд

РНе

Зег

с1у

50

55

60

Бег

С1у зег

61 у

тНг

Азр

РНе

ТНг

РНе

ТНг

Пе

5ег

5ег

Ьеи

61 η

РГО

65

70

75

80

61 и

Азр Пе

А1а

ТНг

туг

Туг

суз

61 п

61 п

туг

Азр

АЗП

Ьеи

Ьеи

ТНг

85

90

95

РНе

51у С1у С1у

ТНг

Ьуз

Уа1

51 и

Пе

Ьуз

Агд

ТНг

Уа!

А1а

А1а

Рго

100

105

110

Зег

Уа1 РНе

Пе

РНе

Рго

Рго

Зег

Азр

51 и

61 п

Ьеи

Ьуз

Зег

51 у

тНг

115

120

125

А1а

Зег Уа1

Уа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

АЗП

рНе

туг

Рго

Агд

б1и

А1а

ьуз

130

135

140

Уа1

б1п Тгр

ьуз

Уа1

Азр

АЗП

А1а

Ьеи

б!п

5ег

б1у

АЗП

Зег

51п

б!и

145

150

155

160

Зег

уа! ТНг

61 и

51п

АЗр

Зег

Ьуз

Азр

Зег

ТНг

туг

5ег

Ьеи

Зег

Зег

165

170

175

- 149 023555

Тйг Ьеи тйг ьеи Бег ьуз д!а Азр туг о!и ьуэ нтз Ьу5 Уа!

туг

А1а

180

185

190

суз

01 и

Уа1

ТЙГ

Нтз

01п

01 у

1_еи

Бег

Бег

РГО

Уа!

ТЙГ

Ьуз

Бег

Рйе

195

200

205

АЗП

Агд

01 у

01 и

Суз

210

<210> 46

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 46

Азр

11е

уа!

мет

тйг

01П

Бег

Рго

АЗР

Бег

ьеи

А1а

уа!

Бег

ьеи

с1у

1

5

10

15

01и

дгд

А1а

тйг

Пе

АЗр

суз

ЬУ5

Бег

Бег

Οίη

о1у

уа!

ьеи

АЗр

Бег

20

25

30

Бег

АЗП

Азп

ьуз

АЗП

Рйе

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

с1п

Οίη

ьуз

Рго

о!у

С1п

35

40

45

Рго

Рго

Ьуз

Ьеи

ьеи

И е

туг

Тгр

А1а

Бег

Азп

Агд

С1и

Бег

О1у

Уа1

50

55

60

Рго

Уа1

Агд

Рйе

Бег

01 у

Бег

С1у

Бег

С1у

тйг

Азр

Рйе

ТЙГ

Ьеи

Тйг

65

70

75

80

11 е

Бег

Бег

ьеи

Οίη

А1а

С1и

Азр

Уа!

А1а

Ьеи

Туг

туг

Суз

Οίη

Οίη

85

90

95

туг

туг

Бег

Азр

Рго

Рйе

Тйг

Рйе

с!у

Рго

с!у

ТЙГ

ьуз

Уа1

Азр

Пе

100

105

110

ьуз

Агд

тйг

Уа1

А1а

А1а

РГО

Бег

Уа1

рйе

Пе

Рйе

Рго

РГО

Бег

АЗр

115

120

125

о1и

οί η

ьеи

ьуз

Бег

61 у

тйг

А1а

Бег

уа!

Уа1

Суз

ьеи

ьеи

АЗП

А5П

130

135

140

Рйе

Туг

РГО

Агд

01и

А1а

ьуз

Уа1

Οίη

тгр

ьуз

Уа!

Азр

Азп

А1а

Ьеи

145

150

155

160

01 п

Бег

с1у

АЗП

Бег

οίη

С1и

Бег

Уа1

тйг

С1и

Οίη

Азр

Бег

Ьуз

Азр

165

170

175

Бег

Тйг

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

Тйг

Ьеи

тйг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

АЗр

туг

180

185

190

ΟΊιι

Ьуз

Нт 5

Ьуз

Уа!

Туг

А1а

Суз

С1и

Уа!

ТЙГ

Нтз

01п

С1у

Ьеи

Бег

195

200

205

Бег

РГО

уа!

тйг

ьуз

Бег

Рйе

АЗП

Агд

61 у

01 и

Суз

210

215

220

<210> 47 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> ното :

Бартепз

<400> 47 Азр Пе С1п

мет

Тйг

οίη

Бег

РГО

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

01 у

1

5

10

15

А5р Агд Уа1

Тйг

11 е

тйг

суз

Агд

А1а

Бег

Οίη

Бег

Пе

Бег

АЗр

туг

20

25

30

Ьеи Азп тгр

туг

61 п

οίη

ьуз

Рго

О1у

ьуз

А1а

РГО

АЗП

ьеи

ьеи

11 е

35

40

45

Туг А1а А1а

Бег

Бег

ьеи

Οίη

Бег

01 у

Уа1

РГО

Бег

Агд

Рйе

Бег

о!у

50

55

60

Бег С1у Бег

01 у

Тйг

Азр

Рйе

Тйг

Ьеи

ТЙГ

Пе

Бег

Бег

Ьеи

οίη

РГО

65

70

75

80

С1и Азр Рйе

А! а

ТЙГ

Туг

Рйе

суз

Οίη

о! п

тйг

туг

Бег

АЗр

Рго

Рйе

90 95

- 150 023555

ТКг

РКе

б!у

Рго

61 у

ТКг

Ьуз

Уа1

Азр

Не

ьуз

Агд

ТКг

Уа!

А1а

А1а

100

105

110

рго

Зег

Уа1

РКе

11 е

рКе

Рго

РГО

Зег

Α5Ρ

с!и

б1п

ьеи

Ьуз

Зег

с1у

115

120

125

тКг

А1 а

Зег

Уа1

Уа1

суз

ьеи

ьеи

Азп

АЗП

РКе

туг

Рго

дгд

б1и

А1а

130

135

140

ьуз

Уа1

Οίη

Тгр

ьуз

Уа1

Азр

А5П

А1а

Ьеи

б1п

Зег

61 у

АЗП

Зег

б1п

145

150

155

160

С1и

Зег

Уа1

ТКг

61 и

61 η

АЗр

зег

ьуз

АЗр

Зег

тКг

туг

Зег

ьеи

Зег

165

170

175

Зег

ТКг

Ьеи

ТКг

ьеи

Зег

ьуз

А1а

АЗр

туг

61 и

ьуз

ΗΪ 5

ьуз

Уа1

туг

180

185

190

А1а

суз

61 и

Уа1

ТКг

НИ'5

б!п

61 у

Ьеи

Зег

Зег

РГО

Уа1

ТКг

ьуз

зег

195

200

205

рКе

АЗП

Агд

б!у

б!и

суз

210

<210> 48 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> ното зартепз

<400> 48

Азр

Не

6ΐη

меь

тКг

6ΐπ

Зег

Рго

Зег

Зег

Ьеи

зег

л1а

Зег

Уа1

61 у

1

5

10

15

АЗр

Агд

Уа1

тКг

Пе

ТКг

суз

61 п

А1а

Зег

61 η

АЗр

П е

5ег

АЗП

туг

20

25

30

Ьеи

Азп

тгр

Туг

61 π

61 η

ьуз

Рго

61 у

ьуз

А1а

Рго

ьуз

Ьеи

ьеи

11 е

35

40

45

Туг

Азр

А1а

Зег

АЗП

ьеи

б1и

ТКг

61 у

Уа1

Рго

5ег

Агд

РКе

зег

б1у

50

55

60

5ег

б1у

5ег

С1у

ТКг

Азр

РКе

тКг

РКе

ТКг

Пе

Зег

Зег

ьеи

б1п

РГО

65

70

75

80

С1и

А5р

ίί е

А1а

тКг

Туг

Туг

Суз

С1п

б!п

туг

Азр

Азп

Ьеи

Ьеи

ТКг

85

90

95

РКе

С1у

б!у

б!у

ТКг

ьуз

Уа1

б1и

Пе

ьуз

Агд

ТКг

Уа1

А1а

А1а

Рго

100

105

110

Зег

Уа!

РКе

Пе

РКе

РГО

Рго

зег

Азр

61 и

61 η

ьеи

ьуз

Зег

61 у

тКг

115

120

125

л1а

Зег

Уа1

Уа!

суз

ьеи

Ьеи

АЗП

АЗП

РКе

туг

Рго

Агд

С1и

А1а

ьуз

130

135

140

Уа1

б!п

тгр

Ьуз

Уа1

Азр

АЗП

А1а

Ьеи

61 η

Зег

61 у

Д5П

Зег

61 η

61 и

145

150

155

160

5ег

Уа1

ТКг

61 и

61 η

Азр

Зег

ьуз

Азр

Зег

ТКг

Туг

Зег

Ьеи

5ег

Зег

165

170

175

тКг

ьеи

тКг

ьеи

Зег

1-У5

А1а

Азр

Туг

б1и

1-У5

НТЗ

ьуз

Уа1

Туг

А1а

180

185

190

суз

б1и

Уа1

ТКг

нт 5

б!п

61 у

ьеи

Зег

Зег

РГО

Уа!

ТКг

ьуз

5ег

РКе

195

200

205

АЗП

Агд

С1у

61 и

суз

210

<210> 49 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> ното Зартепз
<400>	49
Азр Пе б!п мех ТКг αΐη	5ег Рго Зег Зег	ьеи Зег А1а Зег Уа! б1у
1	5	10	15

- 151 023555

АЗр

Агд

Уа1

ТЬг 20

11 е ТЬг Суз б!п А1а Зег б!п Азр Пе Зег Азп

туг

25

30

Ьеи

АЗП

тгр

туг

61 п

61 п

ьуз

РГО

61 у

ьуз

А1а

РГО

ьуз

Уа1

Ьеи

Пе

35

40

45

Туг

Азр

А! а

Зег

Азп

ьеи

61 и

ТЬг

61 у

Уа1

РГО

зег

Агд

рЬе

Зег

61 у

50

55

60

5ег

б1у

Зег

с! у

тЬг

АЗр

РЬе

ТЬг

РЬе

ТЬг

Пе

Зег

Зег

Ьеи

61 п

Рго

65

70

75

80

С1и

Азр

Пе

А! а

ТЬг

Туг

туг

суз

6ΐη

С1п

Туг

Азр

Азп

ьеи

ьеи

ТЬг

85

90

95

РЬе

СТ У С1у С1у

ТЬг

ьуз

Уа!

б1и

Пе

ьуз

Агд

ТЬг

Уа1

А1а

А1а

Рго

100

105

110

зег

Уа!

рЬе

11 е

РЬе

Рго

Рго

зег

Азр

б!и

б!п

Ьеи

ьуз

Зег

С1у

ТЬг

115

120

125

А1а

5ег

Уа!

Уа1

суз

ьеи

ьеи

АЗП

АЗП

РЬе

туг

Рго

Агд

61 и

А1а

ьуз

130

135

140

Уа1

61 п

тгр

ьуз

Уа1

АЗр

А5П

А1а

ьеи

С1п

Зег

С1у

Азп

Зег

С1п

б!и

145

150

155

160

Зег

уа!

тЬг

61 и

61 п

АЗр

Зег

ьуз

А5р

Зег

ТЬг

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

165

170

175

тЬг

ьеи

тЬг

Ьеи

Зег

ьуз

А1а

АЗр

Туг

С1и

ьуз

нтз

ьуз

Уа1

Туг

А1а

180

185

190

суз

с! и

Уа!

ТЬг

ΗΪ5

б1п

с!у

ьеи

Зег

Зег

РГО

уа!

ТЬг

ьуз

Зег

рЬе

195

200

205

АЗП

Агд

с! у

б!и

суз

210

<210> 50 <211> 220 <212> БЕЛОК <213> Ното !

ьарт епз

<400> 50

Азр

11 е

Уа1

МеТ

тЬг

61 п

Зег

Рго

АЗр

Зег

Ьеи

А1а

Уа1

Зег

Ьеи

61 у

1

5

10

15

61 и

Агд

А1а

ТЬг

Пе

Азр

суз

ьуз

5ег

Зег

б1п

Бег

Уа!

Ьеи

Азр

5ег

20

25

30

зег

Азп

АЗП

Ьуз

АЗП

РЬе

Ьеи

А! а

тгр

Туг

б!п

С1п

ьуз

РГО

б!у

б1п

35

40

45

Рго

рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Пе

туг

Тгр

А1а

Зег

АЗП

Агд

б!и

Бег

б!у

Уа!

50

55

60

Рго

Азр

Агд

РЬе

5ег

б!у

Зег

б!у

Зег

б1у

тЬг

Азр

РЬе

тЬг

Ьеи

ТЬг

65

70

75

80

Пе

Зег

зег

Ьеи

с1п

А1а

б!и

АЗр

уа!

А1а

Уа1

туг

Туг

Суз

61 η

б1п

85

90

95

Туг

туг

зег

Азр

Рго

РЬе

ТЬг

РЬе

61 у

Рго

61 у

ТЬг

ьуз

уа1

Азр

11 е

100

105

110

ьуз

Агд

ТЬг

Уа!

А1а

А1а

Рго

Зег

Уа!

РЬе

Пе

РЬе

Рго

Рго

Бег

Азр

115

120

125

61 и

б1п

Ьеи

ьуз

Зег

61 у

ТЬг

А1а

зег

Уа1

уа!

суз

ьеи

ьеи

Азп

АЗП

130

135

140

РЬе

Туг

Рго

Агд

б1и

А1а

ьуз

Уа1

61 п

Тгр

ьуз

Уа!

АЗр

АЗП

А1а

ьеи

145

150

155

160

с!п

Зег

61 у

АЗП

Зег

с!п

б1и

Зег

Уа1

тЬг

61 и

61 η

Азр

зег

ьуз

АЗР

165

170

175

Зег

тЬг

туг

Зег

ьеи

зег

зег

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Зег

ьуз

А1а

АЗр

туг

180

185

190

61 и

ьуз

нтз

ьуз

Уа1

туг

А1а

СУЗ

С1и

Уа1

тЬг

нтз

С1п

61 у

ьеи

Зег

195

200

205

Зег

Рго

Уа!

тЬг

ьуз

Зег

РЬе

АЗП

Агд

б!у

б!и

суз

210

215

220

- 152 023555 <210> 51 <211> 218 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 51

61 и

Не

Уа1

теи

тКг

с1п

Бег

РГО

С1у

тКг

ьеи

Бег

теи

Бег

Рго

б!у

1

5

10

15

61 и

Агд

А1а

ТКг

теи

Бег

Суз

Агд

А1а

Бег

б1п

Бег

уа!

Бег

Бег

б1у

20

25

30

Туг

теи

А1а

туг

теи

А1а

тгр

Туг

61 п

б1п

туз

Рго

б1у

б1п

А1а

Рго

35

40

45

Агд

Теи

теи

Не

туг

С1у

А1а

Бег

Бег

ТКг

А1а

ТКг

С1у

Не

Рго

Азр

50

55

60

Агд

РКе

Бег

б! у

Бег

б!у

Бег

б1у

тКг

Азр

рКе

тКг

Теи

ТКг

11 е

Бег

65

70

75

80

Агд

Теи

б1и

Рго

61 и

АЗр

рКе

А1а

Уа1

туг

туг

суз

б1п

б1п

туг

б!у

85

90

95

Бег

Бег

РГО

11 е

тКг

РКе

б!у

61 п

б1у

тКг

Агд

теи

С1и

Не

туз

Агд

100

105

110

ТКг

Уа1

а! а

А1а

РГО

Бег

Уа!

РКе

Не

РКе

Рго

Рго

Бег

Азр

61 и

б1п

115

120

125

Теи

туз

Бег

б1у

тКг

А1а

Бег

Уа1

Уа!

суз

Теи

Теи

АЗП

АЗП

РКе

Туг

130

135

140

РГО

Агд

с! и

А1а

туз

Уа1

61 п

тгр

туз

Уа!

АЗр

АЗП

А1а

теи

61 п

Бег

145

150

155

160

С1у

АЗП

Бег

61 п

С1 и

Бег

Уа!

ТКг

61 и

б1п

Азр

Бег

Туз

Азр

Бег

ТКг

165

170

175

Туг

Бег

теи

Бег

Бег

тКг

Теи

тКг

теи

Бег

туз

А1а

Азр

Туг

б1и

Туз

180

185

190

нтз

туз

Уа1

туг

А1а

суз

б1и

Уа!

ТКг

нтз

61 п

С1у

теи

Бег

Бег

РГО

195

200

205

Уа!

тКг

туз

Бег

РКе

АЗП

Агд

61 у

б1и

суз

210

215

<210> 52

<211> 214 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Барт епз

<400> 52

АЗр

Не

61 п

мех

ТКг

61 π

Бег

РГО

Бег

Бег

Теи

Бег

А1а

Бег

Уа1

С1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа!

тКг

Не

ТКг

Су5

б!п

А1а

Бег

61 п

АЗр

Не

Бег

Азп

РКе

20

25

30

теи

А5П

тгр

туг

61 п

61 п

Агд

Рго

б!у

туз

А1а

РГО

туз

теи

Теи

Не

35

40

45

туг

АЗр

А1а

Бег

АЗП

теи

б!и

ТКг

61 у

уа1

РГО

Бег

Агд

рКе

Бег

б!у

50

55

60

Бег

61 у

Бег

б!у

ТКг

А5Р

РКе

ТКг

РКе

ТКг

Не

Бег

Бег

теи

61 π

Рго

65

70

75

80

61 и

А5Р

Не

А1а

ТКг

Туг

туг

Суз

б1п

61 п

туг

А5р

А5П

ьеи

Рго

РКе

85

90

95

тКг

РКе

61 у

Рго

б!у

тКг

ьуз

Уа1

АЗр

Не

туз

Агд

тКг

Уа!

А1а

А1а

100

105

110

Рго

Бег

Уа1

РКе

Не

РКе

Рго

Рго

Бег

Азр

б!и

б1п

Теи

туз

Бег

61 у

115

120

125

тКг

А1а

Бег

Уа!

уа!

суз

ьеи

Ьеи

АЗП

АЗП

рКе

туг

Рго

Агд

С1и

А1а

130 135 140

- 153 023555

1-У5

УаТ

СТп

Тгр

Ьуз

УаТ

Азр

АЗП

АТа

Геи

СТп

Бег

СТу

Азп

Бег

СТп

145

150

155

160

СТ и

Бег

УаТ

тНг

СТи

СТп

Азр

Бег

ьуз

Аэр

Бег

тНг

Туг

Бег

Геи

Бег

165

170

175

Бег

тйг

1_еи

ТНг

Геи

Бег

ьуз

АТа

Азр

туг

СТи

гуз

НТ 5

гуз

УаТ

Туг

180

185

190

АТа

СуЗ

СТи

уаТ

ТНг

НТЗ

сТп

СТу

|_еи

Бег

Бег

РГО

УаТ

тНг

Гуз

Бег

195

200

205

РНе

АЗП

Агд

СТу

СТи

СуЗ

210

<210> 53 <213> 213 <212> БЕЛОК <213> ното !

Бартепз

<400> 53

АЗр

Пе

СТп

мех

тНг

сТп

Бег

РГО

Бег

Бег

геи

Бег

дТа

Бег

УаТ

сТу

1

5

10

15

АЗр

Агд

УаТ

тНг

Пе

тНг

суз

СТп

АТа

Бег

СТп

Азр

тТе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

геи

АЗП

тгр

туг

СТп

сТп

гуз

Рго

СТу

гуз

АТа

Рго

гуз

Геи

геи

11 е

35

40

45

Туг

АЗр

АТа

Бег

Азп

Геи

сТи

ТНг

СТу

УаТ

Рго

Бег

Агд

РНе

Бег

СТу

50

55

60

Бег

СТу

Бег

СТу

ТНг

Азр

РНе

ТНг

РНе

ТНг

1Те

Бег

Бег

геи

сТп

Рго

65

70

75

80

СТи

Азр

рНе

АТа

тНг

туг

туг

суз

СТп

СТп

туг

Азр

АЗП

Геи

геи

тНг

85

90

95

рНе

СТу сТу сТу

тНг

гуз

уаТ

СТи

Пе

ЬУЗ

Агд

тНг

уаТ

АТа

АТа

Рго

100

105

110

Бег

уаТ

РНе

Пе

РНе

Рго

РГО

Бег

Азр

СТи

СТп

ίευ

гуз

Бег

СТу

Тйг

115

120

125

А1а

Бег

уаТ

УаТ

суз

геи

геи

Азп

АЗП

РНе

туг

Рго

Агд

СТи

АТа

ГУЗ

130

135

140

УаТ

СТп

тгр

гуз

УаТ

АЗр

А5П

АТа

Геи

СТп

Бег

СТу

АЗП

Бег

СТп

сТи

145

150

155

160

Бег

УаТ

ТНг

СТи

СТп

АЗр

Бег

гуз

Азр

Бег

тНг

Туг

Бег

Геи

Бег

Бег

165

170

175

ТНг

геи

ТНг

Геи

Бег

Гуз

АТа

Азр

туг

сТи

Гуз

нтз

гуз

уаТ

туг

АТа

180

185

190

Суз

СТ и

УаТ

ТНг

нтз

СТп

СТу

Геи

Бег

Бег

РГО

УаТ

тНг

гуз

Бег

РНе

195

200

205

АЗП

Агд

СТу

СТи

Суз

210

<210> 54 <211> 214 <212> БЕЛОК

<213> Ното Бартелз

<400> 54 дзр 11 е СТп

мех

тНг

СТп

Бег

Рго

Бег

Бег

геи

Бег

АТа

Бег

УаТ

СТу

1

5

10

15

Азр Агд УаТ

ТНг

1Те

тНг

Суз

СТп

АТа

Бег

СТп

Азр

Пе

Бег

Азп

туг

20

25

30

геи Азп Тгр

туг

СТп

С1п

гуз

РГО

сТу

гуз

АТа

Рго

гуз

геи

Ьеи

Пе

35

40

45

Туг А5Р АТа

Бег

АЗП

Геи

СТи

тНг

СТу

уаТ

РГО

Бег

Агд

рНе

Бег

СТу

55 60

- 154 023555

Бег

61 у

Бег

61 у

тЬг

АЗр

РЬе

ТЬг

рЬе

ТЬг

Пе

Бег

Бег

ьеи

б!п

Рго

65

70

75

80

61 и

АЗр

Не

а! а

ТЬг

Туг

Туг

суз

61 π

Агд

Туг

Азр

АЗр

Ьеи

Рго

Пе

85

90

95

тЬг

РЬе

С1 у

б!п

61 у

ТКг

Агд

Ьеи

б!и

11е

ьуз

Агд

ТКг

Уа!

А1а

А1а

100

105

по

Рго

Бег

Уа1

РЬе

Пе

РЬе

РГО

РГО

Бег

А5р

б1и

б1п

ьеи

Ьуз

Бег

б1у

115

120

125

ТЬг

А1а

Бег

Уа!

Уа1

суз

ьеи

Ьеи

АЗП

АЗП

РКе

туг

РГО

Агд

б1и

А1а

130

135

140

ьуз

Уа1

6ΐη

Тгр

ьуз

Уа1

АЗр

АЗП

А1а

Ьеи

с1п

Бег

б!у

АЗП

Бег

С1п

145

150

155

160

61 и

Бег

Уа!

тЬг

61 и

б1п

АЗр

Бег

ьуз

Азр

Бег

ТКг

Туг

Бег

Ьеи

Бег

165

170

175

Бег

тКг

ьеи

ТЬг

ьеи

Бег

ьуз

А1а

АЗр

туг

б1и

ьуз

нтз

Ьуз

Уа!

Туг

180

185

190

А1а

суз

б1и

Уа!

тКг

НТЗ

б!п

б1у

Ьеи

Бег

Бег

РГО

Уа!

тКг

Ьуз

Бег

195

200

205

РКе

АЗП

Агд

С! у

С1и

Суз

210

<210> 55

<211> 213 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 55

АЗр

Пе С1п

МеТ

ТКг

61 П

Бег

Рго

Бег

Бег

Ьеи

Бег

л!а

Бег

Уа!

б1у

1

5

10

15

АЗр

лгд Уа!

ТКг

Пе

тКг

Суз

61 п

А1а

Бег

61 п

Азр

Пе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

ьеи

азп тгр

туг

б!п

б!п

Агд

РГО

б1у

ьуз

А1а

РГО

ьуз

Ьеи

Ьеи

11 е

35

40

45

Туг

Азр А1а

Бег

АЗП

Ьеи

61 и

ТКг

61 у

Уа!

Рго

Бег

Агд

РКе

Бег

61 у

50

55

60

Бег

б!у Бег

61 у

тКг

АЗР

РКе

ТКг

РКе

тКг

11 е

Бег

Бег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

61 и

Азр Пе

А! а

ТКг

туг

туг

суз

61 η

61 п

Туг

Азр

Азп

Ьеи

Ьеи

ТКг

85

90

95

РКе

б1у б1у

61 у

тКг

ьуз

Уа1

61 и

Пе

ьуз

Агд

ТКг

Уа1

А1а

А1а

РГО

100

105

по

Бег

Уа! РКе

Пе

РЬе

Рго

РГО

Бег

Азр

б!и

с1п

ьеи

ьуз

Бег

б!у

тКг

115

120

125

А1а

Бег Уа1

Уа1

Суз

Ьеи

ьеи

Азп

АЗП

РКе

туг

Рго

Агд

61 и

А1а

ьуз

130

135

140

Уа!

б1п тгр

ЬУ5

уа1

Азр

АЗП

А1а

ьеи

61 п

Бег

61 у

АЗП

Бег

б1п

61 и

145

150

155

160

Бег

Уа! ТКг

б1и

6ΐη

Азр

Бег

ьуз

А5р

Бег

тКг

Туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

165

170

175

ТКг

Ьеи тКг

Ьеи

Бег

ьуз

а1 а

АЗр

туг

61 и

ьуз

нтз

ьуз

Уа1

Туг

А1а

180

185

190

суз

б!и Уа!

ТЬг

НТ 5

Οίη

61 у

ьеи

Бег

Бег

РГО

уа!

тКг

ьуз

Бег

РКе

195 200 205 азп Агд б!у б1и Суз 210 <210> 56 <211? 214 <212> БЕЛОК с213> Ното Бартепз

- 155 023555 <400> 56

Азр

Пе

сТп

Меь

тЬг

СТп

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

АТа

Бег

УаТ

СТу

1

5

10

15

Азр

Агд

УаТ

тЬг

Пе

тЬг

суз

Агд

АТа

Бег

с1п

СТу

рЬе

Бег

АЗП

Туг

20

25

30

Ьеи

АТа

Тгр

туг

СТп

СТп

ьуз

РГО

СТу

суз

УаТ

РГО

ьуз

ьеи

Ьеи

Пе

35

40

45

туг

АТа

АТа

Бег

ТЬг

ьеи

сТп

Бег

61 у

УаТ

РГО

Бег

Дгд

рЬе

Бег

сТу

50

55

60

Бег

еТу

Бег

СТу

ТЬг

АЗР

РЬе

тЬг

Ьеи

тЬг

Пе

Бег

Бег

ьеи

СТп

рго

65

70

75

80

СТи

АЗр

уа1

АТа

ТЬг

туг

туг

суз

С1п

ьуз

Туг

Азп

Бег

АТа

Рго

Ьеи

85

90

95

тЬг

РЬе

СТу

СТу

СТу

тЬг

ьуз

УаТ

61 и

Пе

ьуз

Агд

ТЬг

Уа1

АТа

АТа

100

105

110

РГО

Бег

УаТ

РЬе

Пе

РЬе

рго

рго

Бег

Азр

СТи

сТп

Ьеи

ьуз

Бег

сТу

115

120

125

ТЬг

АТа

Бег

УаТ

УаТ

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

АЗП

РЬе

Туг

Рго

Агд

СТи

АТа

130

135

140

ьуз

уа1

СТп

тгр

ьуз

УаТ

АЗр

АЗП

АТа

Ьеи

СТп

Бег

СТу

АЗП

Бег

СТп

145

150

155

160

СТи

Бег

УаТ

ТЬг

СТи

61 η

А5р

Бег

Ьуз

А5Р

Бег

ТЬг

Туг

Бег

Ьеи

Бег

165

170

175

Бег

ТЬг

ьеи

ТЬг

ьеи

Бег

ьуз

АТа

Азр

туг

СТи

ьуз

нтз

ьуз

уаТ

туг

180

185

190

АТа

Суз

СТи

УаТ

тЬг

нтз

СТп

СТу

ьеи

Бег

Бег

РГО

УаТ

ТЬг

ьуз

Бег

195

200

205

рЬе

АЗП

Агд

СТу

СТи

Суз

210

<210> 57

<211> 214 <212> БЕЛОК

<213> Ното :

Бартепз

<400> 57

Азр

Не

СТп

мех

тЬг

С1п

Бег

РГО

Бег

Бег

ьеи

Бег

АТа

Бег

уаТ

СТу

1

5

10

15

Азр

Агд

УаТ

тЬг

Не

тЬг

суз

Агд

АТа

Бег

СТп

сТу

Пе

АЗП

АЗП

туг

20

25

30

ьеи

АТа

тгр

Туг

СТп

СТп

ьуз

Рго

СТу

Ьуз

УаТ

Рго

СТп

Ьеи

Ьеи

Пе

35

40

45

туг

УаТ

АТа

Бег

ТЬг

ьеи

сТп

Бег

СТу

УаТ

Рго

Бег

Агд

рЬе

Бег

сТу

50

55

60

Бег

СТу

Бег

СТу

тЬг

Азр

РЬе

ТЬг

ьеи

ТЬг

Пе

Бег

Бег

Ьеи

СТп

Рго

65

70

75

80

СТи

Азр

Уа1

АТа

ТЬг

Туг

Туг

Суз

СТп

Ьуз

Туг

АЗП

Бег

СТу

РГО

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

СТу

Рго

СТу

ТЬг

ьуз

УаТ

АЗР

Не

ЬУ5

Агд

тЬг

УаТ

АТа

АТа

100

105

110

Рго

Бег

УаТ

РЬе

Пе

РЬе

РГО

Рго

Бег

Азр

СТи

сТп

ьеи

ьуз

Бег

СТу

115

120

125

тЬг

АТа

Бег

УаТ

УаТ

суз

ьеи

Ьеи

АЗП

Д5П

РЬе

Туг

Рго

Агд

СТи

АТа

130

135

140

Ьуз

УаТ

СТп

Тгр

ьуз

УаТ

Азр

АЗП

АТа

ьеи

С1п

Бег

еТу

АЗП

Бег

сТп

145

150

155

160

СТи

Бег

УаТ

тЬг

С1и

СТп

Азр

Бег

ьуз

Азр

Бег

тЬг

туг

Бег

Ьеи

Бег

165

170

175

Бег

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Бег

ьуз

АТа

АЗр

Туг

СТи

ьуз

Нт 3

ьуз

УаТ

туг

180 185 190

- 156 023555

А1а	суз	С1и	Уа!	ТКг	Нт з 21 η	21 у Беи	Бег Бег Рго Уа! ТКг Буз Бег
		195				200	205
РКе	АЗП	Агд	21 у	21 и	суз
	210

<210> 58 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз

<400> 58

А5р

11 е

21П

мес

тКг

21 η

Бег

РГО

Бег

Бег

Беи

Бег

А1а

Бег

Уа1

21 у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа!

ТКг

Не

ТКг

Суз

Агд

А1а

Бег

21 π

21 у

11 е

А5П

Азп

туг

20

25

30

Беи

А1а

Тгр

Туг

21 гт

21 η

Буз

Рго

21 у

Буз

Уа!

Рго

Буз

Беи

Беи

11 е

35

40

45

Туг

Уа1

А1а

Бег

тКг

Беи

6ΐη

Бег

21 у

Уа1

РГО

Бег

Агд

РКе

Бег

21 у

50

55

60

Бег

21 у

Бег

21 у

ТКг

АЗр

РКе

тКг

Беи

ТКг

Пе

Бег

Бег

Беи

21П

Рго

65

70

75

80

с! и

А5Р

Уа!

А1а

тКг

туг

туг

суз

21П

Буз

туг

АЗП

Бег

21 у

РГО

РКе

85

90

95

тКг

РКе

61 у

Рго

21у

ТКг

Буз

Уа!

Азр

Пе

Буз

Агд

тКг

Уа!

А1а

А1а

100

105

110

Рго

Бег

уа1

РКе

И е

РКе

Рго

РГО

Бег

Азр

21 и

21п

Беи

Буз

Бег

б!у

115

120

125

ТКг

Αΐ а

Бег

Уа!

Уа!

суз

Беи

Беи

АЗП

АЗП

РКе

туг

рго

Агд

21 и

А1а

130

135

140

Буз

Уа1

С1п

Тгр

1У5

Уа!

Азр

Азп

А1а

Беи

С1п

Бег

21 у

Азп

Бег

21 п

145

150

155

160

21 и

Бег

Уа1

ТКг

21 и

21П

АЗр

Бег

Буз

АЗр

Бег

ТКг

Туг

Бег

ьеи

Бег

165

170

175

Бег

тКг

Беи

ТКг

Беи

Бег

Буз

А1а

АЗр

туг

21 и

БУЗ

Нт 5

БУЗ

Уа!

Туг

180

185

190

А! а

суз

21 и

Уа1

ТКг

НТ 5

21П

21 у

Беи

Бег

Бег

РГО

уа!

ТКг

БУЗ

Бег

195

200

205

РКе

АЗП

Агд

61 у

21 и

суз

210

<210> 59 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Зартепз

<400> 59 А5р 11 е 21 п

мес

ТКг

21 п

Бег

РГО

Бег

Бег

Беи

Бег

А1а

Бег

Уа1

21 у

1

5

10

15

лзр Агд Уа1

ТКг

11 е

тКг

Суз

Агд

А1а

Бег

21 п

Бег

Пе

Бег

Агд

Туг

20

25

30

Беи Азп Тгр

Туг

21 п

21 п

Буз

РГО

21 у

суз

А1а

Рго

Азп

Беи

Беи

Пе

35

40

45

Нт з А1а А1а

Бег

Бег

Беи

21 π

Бег

21 у

Уа!

Рго

Бег

Агд

РКе

Бег

б!у

50

55

60

Бег 01у Бег

с1у

тКг

Азр

РКе

ТКг

Беи

тКг

ΐΐ е

Бег

Бег

Беи

21П

РГО

65

70

75

80

21 и Азр РКе

А1а

тКг

туг

Туг

Суз

21 п

21 п

Бег

туг

Пе

тКг

РГО

РГО

85

90

95

Бег РКе 21 у

21 п

21 у

ТКг

Буз

Беи

21 и

Не

Буз

Агд

ТКг

Уа!

А1а

А1а

100 105 110

- 157 023555

рго Бег

Уа! 115

РНе

11е РНе Рго Рго Бег Азр 61 и 61 п теи

туз

Бег

61 у

120

125

ТНг

А1а

Бег

Уа!

Уа1

Суз

теи

теи

АЗП

АЗП

РНе

туг

рго

Агд

б!и

А1а

130

135

140

ьуз

Уа!

с1п

Тгр

ьуз

Уа!

Азр

АЗП

А1а

Теи

б!п

Бег

б1у

АЗП

Бег

б1п

145

150

155

160

с!и

Бег

Уа!

тНг

б1и

С1п

А5р

Бег

туз

Азр

Бег

тНг

туг

Бег

Теи

Бег

165

170

175

Бег

ТНг

(.ей

ТНг

Теи

Бег

туз

А1а

АЗр

Туг

61 и

Туз

нтз

ьуз

Уа1

Туг

180

185

190

А1 а

Суз

с! и

Уа!

ТНг

НТЗ

С1п

С1у

теи

Бег

Бег

Рго

Уа1

ТНг

Ьуз

Бег

195

200

205

РНе

АЗП

Агд

0! у

б!и

Суз

210

<210> 60 <213> 214 <212> БЕЛОК <213> ното :

Бартепз

<400> 60

Азр

Пе

С1п

мет

тНг

б1п

Бег

РГО

Бег

Бег

Теи

Бег

А1а

Бег

Уа!

б1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

тНг

Пе

ТНг

Суз

Агд

А1а

Бег

61 π

б1у

Пе

Агд

А5П

Азр

20

25

30

теи

А5р

Тгр

Туг

б!п

61 η

Рго

61 у

Туз

А1а

Рго

Ьуз

Агд

теи

Пе

35

40

45

туг

А1а

А1а

Бег

Бег

теи

61 п

Бег

б!у

Уа1

рго

Бег

Агд

РНе

Бег

с!у

50

55

60

Бег

61 у

Бег

с1у

ТНг

б1и

рНе

ТНг

теи

тНг

Пе

АЗП

Бег

теи

61 п

Рго

65

70

75

80

б1и

Азр

рНе

А1а

ТНг

туг

туг

Суз

теи

61 п

туг

АЗП

Бег

Туг

Рго

Пе

85

90

95

ТНг

РНе

б!у

б1п

б1у

ТНг

Агд

ьеи

б1и

Пе

туз

Агд

тНг

Уа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

Бег

Уа!

РНе

Пе

РНе

РГО

РГО

Бег

АЗр

б1и

61 п

Теи

ьуз

Бег

б!у

115

120

125

тНг

А1а

Бег

уа1

Уа1

Суз

Теи

Теи

АЗП

АЗП

РНе

Туг

РГО

лгд

61 и

А1а

130

135

140

туз

Уа!

б1п

ТГР

Уа1

Азр

АЗП

А1а

Теи

б!п

Бег

б!у

Азп

Бег

б1п

145

150

155

160

61 и

Бег

Уа1

ТНг

61 и

6ΐη

Азр

Бег

Туз

Азр

Бег

ТНг

Туг

Бег

Теи

Бег

165

170

175

Бег

тНг

Теи

ТНг

теи

Бег

туз

А1а

Азр

туг

61 и

туз

нтз

туз

Уа1

туг

180

185

190

А1а

Суз

б1и

Уа1

тНг

нт’з

б!п

61 у

теи

Бег

Бег

рго

Уа1

тНг

ьуз

Бег

195

200

205

рНе

АЗП

лгд

61 у

61 и

Суз

210

<210> 61 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз
<400> 61 лзр 11 е б1п мет Пе	С1п	Бег	Рго	Бег	Бег	теи	Бег	А1а	Бег	Уа1	61 у
1 5					10					15
Азр Агд уа! тНг Пе	тНг	Суз	61 п	А1а	Бег	нтз	Азр	Не	Бег	Азп	туг

25 30

- 158 023555

ьеи

АЗП

тгр 35

Туг СТп СТп ьуз

Рго СТу 40

Ьуз АТа

Рго

ьуз 45

рНе

Ьеи

Пе

Бег

Азр

АТа

Бег

А5П

ьеи

СТи

ТНг

СТу

УаТ

Рго

Бег

лгд

РНе

Бег

с1у

50

55

60

Бег

СТу

Бег

С1у

тНг

Азр

РНе

ТНг

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

ьеи

сТп

Рго

65

70

75

80

СТи

А5Р

Пе

д1а

тНг

туг

туг

суз

61 п

СТп

туг

Азр

Азп

Ьеи

рго

Ьеи

85

90

95

ТНг

РНе

СТу

о1у

ОТ у

тНг

ьуз

УаТ

ОТ и

Пе

ьуз

Агд

ТНг

УаТ

АТа

А1а

100

105

110

РГО

Бег

УаТ

РНе

Пе

РНе

рго

РГО

Бег

Азр

СТи

СТп

ьеи

ьуз

Бег

С1у

115

120

125

тНг

АТа

Бег

УаТ

Уа1

суз

Ьеи

Ьеи

Азп

АЗП

рНе

туг

Рго

Агд

сТи

АТа

130

13 5

140

ьуз

УаТ

СТп

Тгр

ьуз

УаТ

Азр

Азп

АТа

ьеи

б1п

Бег

61 у

АЗП

Бег

СТп

145

150

155

160

СТи

Бег

УаТ

ТНг

сТи

с1п

АЗр

Бег

ьуз

АЗр

Бег

тНг

туг

Бег

Ьеи

Бег

165

170

175

Бег

ТНг

Ьеи

ТНг

ьеи

Бег

ьуз

АТа

Азр

Туг

СТи

ьуз

нтз

ьуз

УаТ

Туг

180

185

190

АТа

Суз

СТи

УаТ

тНг

ΗΪ 5

СТп

СТу

Ьеи

Бег

Бег

Рго

уаТ

ТНг

ьуз

Бег

195

200

205

РНе

АЗП

Агд

сТу

СТи

суз

210

<210> 62

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Ното :

БарТепз

<400> 62

Азр

Пе

уаТ

Мет

ТНг

СТп

Бег

РГО

Ьеи

Бег

Ьеи

РГО

УаТ

тНг

РГО

сТу

1

5

10

15

СТи

РГО

АТа

Бег

Пе

Бег

Суз

Агд

Бег

Бег

сТп

Бег

Ьеи

Ьеи

Н1 Б

Бег

20

25

30

Азп

СТу

Туг

АЗП

туг

ьеи

Азр

тгр

Туг

ьеи

сТп

ьуз

Рго

СТу

СТп

Бег

35

40

45

РГО

СТп

РНе

Ьеи

Пе

туг

ьеи

ОТ у

Бег

Пе

Агд

А1а

Бег

СТу

Уа1

РГО

50

55

60

Азр

Агд

рНе

Бег

СТу

Бег

СТу

Бег

С1у

ТНг

Азр

РНе

АТа

Ьеи

тНг

Пе

65

70

75

80

Бег

Агд

Уа1

СТи

АТа

СТи

АЗр

УаТ

СТу

УаТ

туг

туг

суз

мет

СТп

АТа

85

90

95

Ьеи

СТп

ТНг

Рго

Агд

тНг

РНе

СТу

сТп

сТу

тНг

ьуз

уа1

сТи

Пе

ьуз

100

105

110

Агд

тНг

УаТ

АТа

АТа

Рго

Бег

УаТ

РНе

Пе

РНе

Рго

РГО

Бег

Азр

сТи

115

120

125

СТп

Ьеи

ьуз

Бег

ОТ у

тНг

АТа

Бег

Уа1

УаТ

Суз

ьеи

ьеи

А5П

АЗП

рНе

130

135

140

Туг

РГО

Агд

СТи

А1а

ьуз

уа!

с1п

тгр

ьуз

Уа1

АЗр

АЗП

А1а

ьеи

СТп

145

150

155

160

Бег

СТу

Азп

Бег

СТп

СТи

Бег

УаТ

тНг

СТи

СТп

Азр

Бег

ьуз

Азр

Бег

165

170

175

ТНг

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

ТНг

ьеи

тНг

ьеи

Бег

ьуз

АТа

Азр

туг

СТи

180

185

190

ьуз

ΗΊ3

ьуз

УаТ

туг

АТа

Су5

СТи

УаТ

ТНг

Н15

СТп

СТу

ьеи

Бег

Бег

195

200

205

РГО

УаТ

тНг

ьуз

Бег

РНе

АЗП

лгд

СТу

СТи

Су5

210

215

- 159 023555 <210> 63 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 63

61 и

Пе

Уа1

Ьеи

ТНг

61 η

Бег

РГО

АЗр

РНе

6ΐη

Бег

Уа!

ТНг

Рго

куз

1

5

10

15

б!и

кУ5

Уа1

ТНг

Не

тНг

суз

Агд

а! а

Бег

61 η

туг

Пе

б!у

Бег

Бег

20

25

30

кеи

НТЗ

тгр

туг

с! η

С1п

ТНг

РГО

АЗр

С! η

Бег

РГО

куз

кеи

кеи

ΐ! е

35

40

45

АБП

туг

Уа1

Бег

6ΐη

Бег

РНе

Бег

б1у

Уа!

Рго

Бег

Агд

РНе

Бег

б1у

50

55

60

Бег

61 у

Бег

б1у

тНг

АБр

РНе

тНг

кеи

тНг

Пе

АЗП

Бег

кеи

б! и

а! а

65

70

75

80

б1и

Азр

А1а

А! а

тНг

туг

туг

суз

нтз

б1п

Бег

Бег

Бег

кеи

Рго

РНе

85

90

95

ТНг

РНе

б1у

РГО

С! у

ТНг

куз

Уа!

АЗр

Пе

куз

Агд

тНг

Уа!

А1а

л1а

100

105

110

РГО

Бег

уа!

РНе

Пе

РНе

Рго

РГО

Бег

АЗр

61 и

61 η

кеи

куз

Бег

С1у

115

120

12 5

ТНг

А! а

Бег

Уа!

уа!

суз

кеи

кеи

Азп

АЗП

РНе

Туг

Рго

Агд

б1и

А1а

130

13 5

140

1_У5

уа1

61η

тгр

куз

Уа1

АБр

АЗП

а! а

кеи

61 η

Бег

б1у

Азп

Бег

01 η

145

150

155

160

б1и

Бег

Уа!

тНг

с! и

С! η

АБр

Бег

куз

АЗр

Бег

ТНг

Туг

Бег

кеи

Бег

165

170

175

Бег

тНг

кеи

тНг

кеи

Бег

куз

а! а

Азр

Туг

б! и

куз

Нтз

ку5

Уа1

Туг

180

185

190

А1а

Суз

С! и

Уа1

тНг

Нтз

б!п

С! у

кеи

Бег

Бег

Рго

Уа!

ТНг

куз

Бег

195

200

205

РНе

Абп

Агд

С! у

с! и

суз

210

<210> 64

<211> 220 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 64

Азр

Пе

Уа!

Мет

ТНг

б1п

Бег

Рго

Азр

Бег

кеи

Α1 а

Уа!

Бег

кеи

6! у

1

5

10

15

А1а

Агд

а! а

тНг

Пе

Бег

Суз

куз

Бег

Бег

б!п

Бег

Уа!

кеи

Туг

Бег

20

25

30

Бег

Абп

АЗП

куз

Α5Π

Туг

кеи

А! а

Тгр

Туг

61 п

б!п

куз

Рго

61 у

б!п

35

40

45

Рго

Рго

куз

кеи

кеи

Пе

Туг

Тгр

А! а

Бег

ТНг

Агд

61 и

Бег

61 у

Уа1

50

55

60

Рго

Азр

Агд

РНе

Бег

61 у

Бег

б1у

Бег

61 у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

кеи

ТНг

65

70

75

80

Пе

Бег

ТНг

кеи

с1п

А! а

б1и

Азр

Уа1

а! а

Уа!

туг

Туг

Суз

61 η

61 п

85

90

95

Туг

туг

ТНг

тНг

РГО

РГО

ТНг

РНе

С!у

61 п

6! у

ТНг

куз

Уа1

б! и

Пе

100

105

110

ьуз

Агд

ТНг

Уа!

А1а

а! а

рго

Бег

Уа!

РНе

Пе

РНе

Рго

РГО

Бег

Азр

115

120

125

с! и

6ΐη

кеи

ьуз

Бег

б!у

тНг

А! а

Бег

Уа!

Уа!

суз

кеи

кеи

Азп

Азп

130

135

140

рНе

туг

Рго

Агд

б! и

А1а

куз

уа!

б!п

тгр

куз

уа!

Азр

АЗП

а! а

кеи

145

150

155

160

- 160 023555

б!п Бег б!у Азп Бег

с! η

б!и Бег

Уа!

ТЬг 170

с!и б!п Агр

Бег

ьуз 175

Азр

165

Бег

ТКг

туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

ТЬг

Ьеи

тЬг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

Азр

туг

180

185

190

6! и

ьуз

Н13

ьуз

Уа!

туг

А1а

Суз

О1и

Уа1

тЬг

НТЗ

б1п

о! у

Ьеи

Бег

195

200

205

Бег

РГО

уа!

ТЬг

ьуз

Бег

РЬе

Азп

Агд

01 у

01 и

СУ5

210

215

220

<210> 65

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 65

Азр

Не

С! η

мет

тЬг

Οίη

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

а! а

Бег

Уа1

С! у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа!

ТЬг

11 е

ТЬг

Суз

01 п

А! а

Бег

01 п

Агр

Не

АЗП

АЗП

туг

20

25

30

ьеи

АЗП

тгр

Туг

01 η

С1п

ьуз

рго

С1у

ьуз

А! а

Рго

ьуз

ьеи

ьеи

Не

35

40

45

туг

Азр

А1а

Бег

АЗП

ьеи

01 и

ТЬг

С1у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РЬе

Бег

О! у

50

55

60

Бег

б!у

Бег

С1 у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

РЬе

тЬг

Не

Бег

Бег

ьеи

ο! η

Рго

65

70

75

80

01 и

Азр

Не

А! а

ТЬг

туг

туг

Суз

С1п

С1п

туг

Азр

АЗр

Ьеи

Ьеи

ТЬг

85

90

95

РНе

С1у С1 у С1у

тЬг

ьуз

Уа!

с! и

Не

Ьуз

Агд

ТЬг

уа!

а! а

А! а

Рго

100

105

110

Бег

Уа!

РЬе

Не

РЬе

РГО

РГО

Бег

АЗр

01 и

01 п

Ьеи

ьуз

Бег

С1 у

ТЬг

115

120

125

А1а

Бег

Уа!

Уа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

АЗП

РЬе

Туг

Рго

Агд

01 и

а! а

ьуз

130

135

140

Уа1

01п

Тгр

Ьуз

Уа1

Азр

АЗП

А1а

ьеи

01 п

Бег

01 у

АЗП

Бег

С1п

о! и

145

150

155

160

Бег

Уа!

ТЬг

с! и

б1п

АЗр

Бег

ьуз

Азр

Бег

ТЬг

Туг

Бег

Ьеи

Бег

Бег

165

170

175

тЬг

Ьеи

ТЬг

ьеи

Бег

ьуз

А! а

Азр

туг

01 и

ьуз

нтз

ьуз

Уа!

туг

а! а

180

185

190

Суз

01 и

Уа1

ТЬг

Нт 5

С! η

01 у

ьеи

Бег

Бег

Рго

Уа!

тЬг

ьуз

Бег

РЬе

195

200

205

АЗП

Агд

С! у

01 и

Суз

210

<210> 66

<211> 214 <212> БЕЛОК

<213> Ното :

Бартепз

<400> 66 Азр ι!е 61 п

Мет

ТЬг

61 п

Бег

РГО

Бег

Бег

Ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

С1у

1

5

10

15

Азр Агд Уа!

ТЬг

Не

тЬг

Суз

61 п

А1а

Бег

01п

Азр

Не

Бег

АЗП

туг

20

25

30

ьеи Азп Тгр

Туг

о!п

61 π

ьуз

РГО

б! у

ьуз

А! а

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Не

35

40

45

Туг Азр А1а

Бег

АЗП

ьеи

С1и

ТЬг

б! у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РЬе

Бег

01у

50

55

60

Бег с!у Бег

О! у

ТЬг

Азр

РЬе

тЬг

РЬе

Не

Не

Бег

Бег

Ьеи

б!п

РГО

65

70

75

80

- 161 023555

б!и дзр 11е А1а

тйг туг туг суз 61 п б!п Рйе дзр Азп ьеи Рго Рго

85

90

95

тйг

Рйе

61 у 61 у

61 у

ТЙГ

ьуз

Уа!

б1и

Бег

Ьуз

Агд

ТЙГ

Уа1

А1а

А1а

100

105

110

рго

Бег

Уа1

Рйе

11 е

Рйе

РГО

РГО

Бег

дзр

61 и

61 η

Ьеи

ьуз

Бег

61 у

115

120

125

Тйг

А1а

Бег

Уа1

Уа1

Су5

Ьеи

Ьеи

Азп

АЗП

рйе

Туг

Рго

Агд

б1и

А1а

130

135

140

ьуз

Уа1

С1п

Тгр

ьуз

Уа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

б1п

Бег

61 у

Азп

Бег

б1п

145

150

155

160

61 и

Бег

уа1

тйг

61 и

61 п

АЗр

Бег

ьуз

АЗр

Бег

тйг

Туг

Бег

ьеи

Бег

165

170

175

Бег

Тйг

Ьеи

тйг

ьеи

Бег

Ьуз

д!а

А5р

Туг

61 и

Ьуз

Нтз

ьуз

Уа1

Туг

180

185

190

А1а

суз

б1и

Уа1

ТЙГ

нтз

61 п

61 у

Ьеи

Бег

Бег

РГО

Уа1

ТЙГ

ьуз

Бег

195

200

205

Рйе

АЗП

лгд

61 у

61 и

суз

210

<210> 67 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> ното :

Бартепз

<400> 67

Азр

Пе б!п

мет

тйг

б1п

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа!

б!у

1

5

10

15

А5р

лгд Уа1

тйг

11 е

Тйг

Суз

61 п

А1а

Бег

61 π

Азр

Пе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

Ьеи

Азп тгр

туг

б!п

Нтз

ьуз

РГО

С1у

ьуз

А1а

РГО

ьуз

Ьеи

Ьеи

Не

35

40

45

туг

Азр А1а

Бег

АЗП

ьеи

61 и

ТЙГ

61 у

Уа!

РГО

Бег

Агд

Рйе

Бег

б1у

50

55

60

Бег

С1у Бег

С1у

тйг

Азр

Рйе

ТЙГ

Рйе

ТЙГ

Не

Бег

Бег

ьеи

61 п

РГО

65

70

75

80

б1и

Аэр 11е

А1 а

Тйг

Туг

туг

Суз

61 п

Οίη

Туг

АЗр

Азп

Ьеи

Ьеи

ТЙГ

85

90

95

Рйе

б!у С1у б!у

Тйг

ьуз

Уа!

б1и

Пе

ьуз

Агд

тйг

Уа1

А1а

А1а

Рго

100

105

110

Бег

Уа1 Рйе

11 е

рйе

Рго

Рго

Бег

АЗр

61 и

61 п

ьеи

Ьуз

Бег

б!у

тйг

115

120

12 5

А1а

Бег Уа1

Уа1

суз

Ьеи

Ьеи

АЗП

АЗП

Рйе

туг

Рго

Агд

б1и

А1а

ьуз

130

135

140

уа1

С1п тгр

ьуз

уа1

лзр

АЗП

А1а

Ьеи

б1п

Бег

с1у

А5П

Бег

б1п

б1и

145

150

155

160

Бег

уа! тйг

о!и

61 п

АЗр

Бег

Ьуз

АБр

Бег

ТЙГ

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

165

170

175

тйг

Ьеи тйг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

Азр

туг

б1и

ьуз

нтз

Ьуз

Уа!

туг

А1а

180

185

190

Суз

61 и уа!

тйг

НТ 5

61 п

61 у

Ьеи

Бег

Бег

Рго

Уа!

ТЙГ

Ьуз

Бег

Рйе

195 200 205

Азп Агд б!у б!и Суз 210 <210> 68 <211> 222 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 68

- 162 023555

Азр

Уа!

Уа!

мет

ТКг

с1п

Бег

Рго

ьеи

Бег

ьеи

Рго

Уа!

тКг

ьеи

б1у

1

5

10

15

С! η

Рго

А1а

Бег

11 е

Бег

Суз

Агд

Бег

Бег

б!п

Бег

Ьеи

Уа!

туг

Бег

20

25

30

Азр

С1у

А5П

ТКг

туг

ьеи

АЗП

тгр

РКе

61 η

61 п

Агд

Рго

61 у

61 п

Бег

35

40

45

РГО

Агд

лгд

ьеи

ΐί е

туг

ьуз

Уа1

Бег

Азп

тгр

АЗр

Бег

61 у

уа1

РГО

50

55

60

Азр

Агд

рКе

Бег

б1у

Бег

61 у

Бег

б!у

тКг

А5Р

РКе

тКг

Ьеи

ьуз

11 е

65

70

75

80

Бег

Агд

Уа!

б1и

А1а

б!и

Азр

Уа1

С1у

Уа!

Туг

Туг

Суз

мет

б1п

61 у

85

90

95

ТКг

Нтз

тгр

Рго

Агд

61 у

ьеи

РКе

ТКг

РКе

б1у

Рго

61 у

тКг

ьуз

Уа1

100

105

110

АЗр

11е

ьуз

Агд

ТКг

Уа1

А1а

А1а

РГО

Бег

уа!

рКе

11 е

РКе

Рго

Рго

115

120

125

Бег

Азр

С1и

61 η

Ьеи

Ьуз

Бег

б!у

тКг

л1а

Бег

Уа!

Уа!

Су5

Ьеи

ьеи

130

135

140

АЗП

АЗП

РКе

туг

Рго

Агд

61 и

А1а

ьуз

Уа!

С1п

Тгр

Ьуз

Уа1

Азр

Азп

145

150

155

160

А1а

Ьеи

б1п

Бег

61 у

АЗП

Бег

б1п

б1и

Бег

Уа!

ТКг

б1и

С1п

АЗР

Бег

165

170

175

ьуз

Азр

Бег

ТКг

туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

тКг

Ьеи

ТКг

ьеи

Бег

ьуз

А1а

180

185

190

АЗр

туг

с! и

ьуз

нтз

ьуз

Уа1

туг

А1а

суз

С1и

Уа1

ТКг

нтз

61 п

61 у

195

200

205

ьеи

Бег

Бег

рго

уа!

тКг

ьуз

Бег

РКе

Азп

Агд

С1у

С1и

Суз

210

215

220

<210> 69 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> ното !

Бартепз

<400> 69

Азр

Уа1

Уа1

МеТ

ТКг

б1п

Бег

рго

Ьеи

Бег

Ьеи

Рго

Уа1

ТКг

Ьеи

б!у

1

5

10

15

б!п

Рго

А1а

Бег

11 е

Бег

суз

лгд

Бег

Бег

61 п

Бег

ьеи

Уа1

Туг

Бег

20

25

30

АЗр

61 у

АЗП

ТКг

Туг

ьеи

АЗП

тгр

РКе

б1п

61 п

Агд

РГО

61 у

61 п

Бег

35

40

45

Рго

Агд

Агд

Ьеи

Пе

туг

Ьуз

Уа1

Бег

АЗП

тгр

А5р

Бег

61 у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РКе

Азп

61 у

Бег

б!у

Бег

б1у

ТКг

Аэр

РКе

ТКг

Ьеи

Ьуз

11 е

65

70

75

80

Бег

Агд

Уа!

б1и

А1а

С1и

Азр

Уа!

б!у

Уа1

туг

Туг

суз

мет

61 η

61 у

85

90

95

ТКг

нтз

Тгр

Рго

Пе

тКг

РКе

61 у

61 п

61 у

ТКг

61 у

Ьеи

61 и

Пе

ьуз

100

105

110

Агд

ТКг

Уа1

А1а

А1а

Рго

Бег

Уа!

РКе

Пе

РКе

Рго

Рго

Бег

Азр

б!и

115

120

125

61 п

ьеи

ьуз

Бег

б1у

тКг

А1а

Бег

Уа1

Уа!

суз

Ьеи

Ьеи

А5П

АЗП

рКе

130

135

140

Туг

Рго

Агд

б!и

А1а

ьуз

Уа1

61 п

Тгр

ьуз

Уа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

61 п

145

150

155

160

Бег

61 у

Азп

Бег

61 п

61 и

Бег

Уа1

тКг

б1и

б1п

А5р

Бег

ьуз

Азр

Бег

165

170

175

ТКг

Туг

Бег

ьеи

Бег

Бег

ТКг

Ьеи

ТКг

Ьеи

Бег

ьуз

А1а

АЗр

Туг

61 и

180

185

190

ьуз

нтз

ьуз

Уа!

туг

А1а

суз

61 и

Уа!

тКг

нт 5

С1п

б!у

ьеи

Бег

Бег

195 200 205

- 163 023555

рго Уа! ТЬг ьуз Бег РНе Азп	Агд с1у С1и Суз
210	215
<210> 70
<211> 125
<212> БЕЛОК
<213> Ното Бартепз
<400> 70
С1п Уа1 С1п ьеи Уа! б1п	Бег	С1у А1а О1и Уа1 ьуз ьуз Рго б1у А1а
1 5		10 15
Бег Уа! ьуз Уа1 Бег Суз	ьуз	А1а Бег С1у туг тЬг РЬе ТЬг А1а Туг
20		25 30
туг мет нтз тгр уа! дгд	01 п	А1а Рго с1у С1п С1у ьеи б1и тгр мет
35		40 45
б!у Тгр 11е Абп Рго Азп	Бег	С1у С1у тНг азп туг А1а С1п Ьуз РЬе
50	55	60
С1п о!у Агд Уа1 тЬг мет	ТЬг	Агд Азр тНг Бег 11е Бег ТНг А1а Туг
65 70		75 80
мет с!и ьеи Бег Агд ьеи	Агд	Бег Азр Азр тЬг А1а Уа1 туг туг суз
85		90 95
А1а Агд С1у С1у Туг Бег	О1у Туг Азр Ьеи 01у Туг Туг Туг о!у МеТ
100		105 110
Азр Уа! Тгр 01у с1п 01у	ТЬг	ТЬг Уа! тЬг Уа! Бег Бег
115		120 125

<210> 71

<211> 121

<212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 71

01 п

Уа!

Οίη

Ьеи

О1п

01и

Бег

О1у

Рго

01 у

Ьеи

Уа1

ьуз

РГО

Бег

01и

1

5

10

15

тЬг

Ьеи

Бег

ьеи

ТНг

суз

тЬг

уа1

Бег

01 у

01у

Бег

уа1

Бег

Бег

01 у

20

25

30

С1у

туг

туг

тгр

Бег

тгр

Пе

дгд

С1п

РГО

РГО

01 у

ьуз

С1у

ьеи

01 и

35

40

45

тгр

11 е

01у

туг

Не

Туг

Туг

Бег

01 у

Бег

ТЬг

Азп

Туг

Азп

Рго

Бег

50

55

60

ьеи

ьуз

Бег

Агд

Уа1

ТЬг

11 е

Бег

Уа!

Азр

ТЬг

Бег

ьуз

АЗП

б1п

РЬе

65

70

75

80

Бег

ьеи

Ьуз

Ьеи

Бег

Бег

Уа1

тНг

А1а

А1а

Азр

тЬг

А1а

Уа!

Туг

Туг

85

90

95

Суз

д!а

А1а

01 у

11 е

А1а

Αί а

тЬг

б!у

тЬг

ьеи

рЬе

Азр

Суз

Тгр

01 у

100

105

110

Οίη

с! у

тНг

Ьеи

уа!

ТЬг

Уа1

Бег

Бег

115

120

<210>

72

<211>

126

<212>

БЕЛОК

<213>

Ното Бартепз

<400>

72

01 п Уа! О1п ьеи Уа1

01 п

Бег

01 у

А1а

01 и

Уа!

Ьуз

Ьуз

Рго

01 у

А1а

1

5

10

15

Бег уа! ьуз Уа! Бег

суз

ьуз

А1а

Бег

б!у

туг

тЬг

рЬе

тЬг

б!у

туг

25 30

- 164 023555

Туг Пе

Нт 5 Тгр Уа! Агд 61 η а!а Рго С!у 61 η с!у ьеи с!и

тгр

мет

35

40

45

с1у

Тгр

Пе

АЗП

Рго

АБП

Зег

01у 01у

ТЬг

А5П

Туг

А1а

С! η

ьуз

рЬе

50

55

60

01 η

б1у

Агд

Уа!

ТЬг

МеТ

ТЬг

Агд

Азр

ТЬг

Зег

Пе

Зег

ТЬг

а! а

туг

65

70

75

80

мет

б!и

Ьеи

5ег

Агд

Ьеи

Агд

Зег

АЗР

АЗР

ТЬг

а! а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

Агд

61 у

С! η

ьеи

Тгр

Ьеи

Тгр

Туг

Туг

туг

Туг

Туг

С! у

100

105

110

мет

Азр

уа!

тгр

б!у

с! η

С! у

ТЬг

ТЬг

Уа!

ТЬг

Уа!

Зег

Зег

115 120 125 <210> 73 <211> 119 <212> БЕЛОК

<213> Ното

Зартепз

<400> 73

С!η Уа1 6ΐη

ьеи

Уа!

б!и

Зег

01 у 01 у

01 у

Уа1

Уа!

61 п

РГО

61 у

Агд

1

5

10

15

Зег ьеи Агд

Ьеи

Зег

суз

А! а

А1а зег

с!у

РЬе

ТЬг

РНе

зег

Зег

Туг

20

25

30

01у мет нтз

тгр

Уа!

Агд

б1п

А1а Рго

01 у

ьуз

61 у

ьеи

61 и

тгр

уа1

35

40

45

а!а Уа1 Пе

тгр

Туг

Азр

01 у

5ег Азп

ьуз

туг

Туг

А1а

Α5Ρ

Зег

Уа1

50

55

60

Ьу5 С!у Агд

РЬе

ТЬг

Пе

Зег

Агд Азр

Азп

5ег

ьуз

АЗП

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

ьеи 6ΐη Мет

Азп

5ег

ьеи

Агд

А1а 01 и

Азр

ТЬг

А1а

уа!

туг

туг

суз

85

90

95

А1а зег зег

Зег

Тгр

Бег

Туг

Туг б!у

МеТ

АЗр

Уа!

тгр

б!у

б!п

с!у

100

105

110

тЬг тЬг уа!

тЬг

Уа!

Зег

зег

115

<210> 74

<211> 129

<212> БЕЛОК

<213> Ното !

Бартепз

<400> 74

б1и Уа! с!η

Ьеи

Уа!

б1и

зег

с!у о!у с!у

ьеи

Уа!

ьуз

РГО

б!у б!у

1

5

10

15

5ег Ьеи Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а Зег

С1у

РЬе

ТЬг

Уа1

Зег

Азп

А1а

20

25

30

тгр мет зег

тгр

Уа!

Агд

б!п

А1а Рго

61 у

ьуз

01 у

Ьеи

61 и

Тгр

Уа1

35

40

45

С!у Агд Пе

ьуз

Зег

Ьуз

тЬг

АЗр С1у

61 у

ТЬг

тНг

Азр

Азп

А1а

А1а

50

55

60

рго Уа! ьуз

с! у

Агд

рЬе

ТЬг

Пе 5ег

Агд

АЗр

Азр

Зег

ьуз

Азп

тЬг

65

70

75

80

Ьеи Туг ьеи

61 п

Мет

АЗП

Зег

ьеи ьуз

ТЬг

б1и

АЗР

тЬг

д1а

Уа1

Туг

85

90

95

туг суз тЬг

тЬг

б!у б!у

Зег

Ьеи Ьеи

тгр

ТЬг

61 у

РГО

АЗП

туг

туг

100

105

110

туг Туг с! у

мет

Азр Уа!

тгр

с!у с!п

о!у

ТЬг

ТЬг

Уа!

ТЬг

уа!

Зег

115 120 125

Зег

- 165 023555 <210> 75 <211> 126 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз <400> 75

б1и

Уа!

6ΐπ

Ьеи

Уа1

е!и

Зег

61 у

61 у

б!у

Ьеи

Уа!

Ьуз

РГО

61 у

61 у

1

5

10

15

5ег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

суз

А1а

А! а

5ег

61 у

РКе

ТКг

РКе

зег

АЗП

А1а

20

25

30

тгр

мет

Зег

тгр

уа!

Агд

61 π

а! а

Рго

с1у

Ьуз

61 у

ьеи

61 и

тгр

уа1

35

40

45

61 у

Агд

Пе

ьуз

зег

ьуз

ТКг

АЗр

61 у

б!у

ТКг

ТКг

Азр

туг

А1а

А1а

50

55

60

Рго

Уа!

ьуз

С! у

Агд

РКе

ТКг

Пе

Зег

Агд

АЗр

АЗр

Зег

СУ5

Азп

тКг

65

70

75

80

ьеи

туг

Ьеи

б1п

мег

АЗП

Зег

ьеи

ьуз

ТКг

б1и

Азр

тКг

А1а

Уа1

Туг

85

90

95

Туг

Суз

тКг

ТКг

с! и

туг

Туг

б1у

5ег

б!у

61 у

Уа1

тгр

туг

Туг

б!у

100

105

110

мет

Азр

уа!

Тгр

с! у

с!п

С! у

тКг

ТКг

Уа!

ТКг

Уа!

зег

Зег

115 120 125 <210> 76 <211> 129 <212> БЕЛОК <213> Нолю Зартепз <400> 76

б!и

Уа!

с!п

Ьеи

Уа1

б1и

Зег

б1у

б!у

61 у

Ьеи

Уа!

ьуз

РГО

С1у

с1 у

1

5

10

15

5ег

Ьеи

Агд

Ьеи

5ег

суз

А1а

А1а

Зег

61 у

РКе

тКг

рКе

зег

АЗП

А1а

20

25

30

тгр

меь

зег

Тгр

уа!

Агд

61 π

А1а

Рго

б!у

ьуз

б1у

ьеи

61 и

тгр

Уа1

35

40

45

61 у

Агд

Пе

ьуз

зег

Ьуз

ТКг

Азр

б!у

Тгр

тКг

тКг

Азр

Туг

А1а

А1а

50

55

60

Рго

Уа!

Ьуз

б!у

Агд

РКе

ТКг

Пе

Зег

Агд

Азр

Азр

5ег

Ьуз

Азп

ТКг

65

70

75

80

Ьеи

Туг

Ьеи

61 п

мет

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

ТКг

б1и

А5р

ТКг

А1а

Уа1

туг

85

90

95

туг

Суз

тКг

ТКг

АЗр

Ьеи

Агд

Пе

тКг

б1у

ТКг

тКг

туг

Туг

туг

туг

100

105

по

Туг

туг

б1у

мег

АЗр

Уа!

Тгр

б1у

61 п

61 у

ТКг

ТКг

Уа1

тКг

Уа!

5ег

115

120

125

5ег

<210> 77 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз
<400> 77 б!п Уа1 С1п Ьеи Уа!	б1п	Зег	б1у	А1а	61 и	Уа!	Ьуз	ьуз	Рго	61 у	А1а
1 5					10					15
зег Уа! ьуз Уа! зег	суз	ьуз	д1а	зег	б!у	Туг	ТКг	рКе	ТКг	Зег	туг

25 30

- 166 023555

б!у

Пе

Бег

тгр

Уа1

Агд

б!п

А1а

рго

С1у

с1п

61 у

ьеи

61 и

Тгр

Мет

35

40

45

с!у

тгр

Пе

Бег

А1а

Туг

А5П

б!у

А5П

ТЬг

АЗП

Туг

А1а

Οίη

ьуз

ьеи

50

55

60

С1п

61 у

Агд

Уа!

тЬг

мет

ТЬг

ТЬг

АЗР

ТЬг

Бег

ТЬг

Бег

ТЬг

А1а

туг

65

70

75

80

мет

б1и

Ьеи

Агд

Бег

ьеи

Агд

Бег

А5р

Азр

ТЬг

А1а

Уа!

Туг

Туг

суз

85

90

95

д1а

Агд

61 и

Бег

тгр

рЬе

61 у

б1и

Уа1

рЬе

рЬе

Азр

туг

тгр

61 у

61 п

100

105

110

б!у

тЬг

Ьеи

Уа!

ТЬг

Уа!

Бег

Бег

115 120 <210> 78 <211> 126 <212> БЕЛОК <213> Ното Бар1еп5 <400> 78

61 и

Уа1

Οίη

ьеи

Уа!

С1и

Бег

б!у

б1у

61 у

ьеи

Уа1

ьуз

Рго

61 у

б1у

1

5

10

15

Бег

ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

А1а

л1а

Бег

61 у

РЬе

ТЬг

РЬе

Бег

АЗП

А1а

20

25

30

Тгр

мет

Бег

Тгр

Уа!

Агд

Οίη

А1а

РГО

61 у

ьуз

61 у

Ьеи

61 и

тгр

уа!

35

40

45

61 у

Агд

Пе

ьуз

Бег

Ьуз

ТЬг

Азр

61 у

С1у

тЬг

тЬг

Азр

туг

А1а

А1а

50

55

60

Рго

Уа1

ьуз

61 у

Агд

РЬе

ТЬг

Пе

Бег

Агд

Азр

Азр

Бег

ьуз

АЗП

ТЬг

65

70

75

80

Ьеи

туг

ьеи

61 η

мет

АЗП

Бег

ьеи

Ьуз

ТЬг

С1и

Азр

тЬг

А1а

Уа!

Туг

85

90

95

туг

Суз

ТЬг

ТЬг

С1и

туг

туг

61 у

Бег

61 у

61 у

уа1

тгр

туг

Туг

с!у

100

105

110

мет

Азр

Уа1

Тгр

61 у

61 η

61 у

тЬг

ТЬг

Уа!

тЬг

Уа!

Бег

Бег

115

120

125

<210> 79 <211> 128 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Зартепз

<400> 79

С1и

Уа!

Οίη

ьеи

Уа1

б1и

Бег

б!у С1у

61 у

Ьеи

Уа1

ьуз

РГО

б!у

С1у

1

5

10

15

Бег

ьеи

Агд

ьеи

зег

суз

А1а

А1а

Бег

б!у

рЬе

ТЬг

РЬе

Бег

Азп

А1а

20

25

30

Тгр

мет

Бег

тгр

Уа1

Агд

6ΐη

А1а

РГО

С1у

Ьуз

61 у

Ьеи

С1и

тгр

Уа!

35

40

45

61 у

Агд

Пе

ьуз

Бег

Ьуз

ТЬг

А5Р

б!у

61 у

ТЬг

ТЬг

Азр

туг

А1а

А1а

50

55

60

Рго

Уа1

ьуз

61 у

Агд

рЬе

тЬг

11 е

Бег

Агд

Аэр

Азр

Бег

ьуз

АЗП

ТЬг

65

70

75

80

Ьеи

Туг

Ьеи

б1п

Мет

АЗП

Бег

Ьеи

Ьуз

ТЬг

61 и

АЗр

ТЬг

л1а

Уа1

туг

85

90

95

туг

суз

тЬг

тЬг

Азр

С1у

А1а

тЬг

Уа!

Уа!

ТЬг

РГО

б!у

Туг

туг

Туг

100

105

но

туг

61 у

ТЬг

Азр

Уа!

Тгр

61 у

61 η

61 у

ТЬг

ТЬг

Уа!

тЬг

Уа!

Бег

Бег

115

120

125

- 167 023555 <210> 80 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 80

61 п

Уа!

61 η

Ьеи

Уа!

6ΐη

Бег

61 у

А1а

С1и

Уа!

ьуз

ьуз

Рго

б1у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа1

Ьуз

уа!

Бег

Суз

ьуз

А1а

Бег

61 у

туг

тйг

рйе

тйг

Бег

туг

20

25

30

б1у

Пе

Бег

тгр

Уа!

Агд

61 η

А1а

РГО

61 у

61 п

61 у

ьеи

б1и

тгр

мет

35

40

45

б1у

тгр

Пе

Бег

а1 а

туг

АЗП

61 у

Азп

тйг

АЗП

туг

А1а

б!п

ьуз

Ьеи

50

55

60

61 п

С1у

Агд

Уа!

ТЙГ

МеТ

тйг

ТЙГ

Азр

Тйг

Бег

Тйг

Бег

тйг

А1а

туг

65

70

75

80

мет

61 и

ьеи

Агд

Бег

ьеи

Агд

Бег

АЗр

Азр

Тйг

А1а

Уа!

Туг

туг

суз

85

90

95

А1а

Агд

б1и

Бег

тгр

рйе

б1у

б1и

Уа1

рйе

рйе

Азр

туг

тгр

б!у

б!п

100

105

110

61 у

тйг

ьеи

уа!

тйг

Уа1

Бег

Бег

115 120 <210> 81 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 81

б1п

Уа1

б1п

Ьеи

Уа1

б1п

Бег

61 у

А1а

б!и

Уа1

ьуз

ьуз

РГО

б!у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа1

ьуз

Уа!

Бег

суз

ьуз

А1а

Бег

б1у

туг

тйг

Рйе

тйг

б1у

туг

20

25

30

туг

мет

нтз

тгр

Уа!

Агд

61 η

А1а

РГО

с1 у

б!п

С1у

ьеи

б1и

тгр

мет

35

40

45

61 у

тгр

Пе

АЗП

РГО

АЗП

Бег

61 у

61 у

тйг

Азп

туг

А1а

б!п

ьуз

рйе

50

55

60

61 п

61 у

Агд

Уа!

ТЙГ

мет

ТЙг

Агд

Азр

ТЙГ

Бег

Пе

Бег

тйг

д1а

туг

65

70

75

80

мет

б1и

Ьеи

Бег

Агд

Ьеи

Агд

Бег

Азр

Азр

ТЙГ

А1а

Рйе

туг

туг

суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

Бег

Азп

Тгр

Туг

Нт 5

АЗП

Тгр

Рйе

Азр

Рго

тгр

б!у

61 п

100

105

110

б!у

тйг

ьеи

Уа1

ТЙГ

уа!

Бег

Бег

115

120

<210> 82 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз

<400> 82 61п Уа! б1п

ьеи

Уа1

б1п

Бег

б1у

А1а

61 и

Уа1

ьуз

ьуз

Рго

С1у

а! а

1

5

10

15

Бег Уа1 ьуз

Уа1

Бег

суз

ьуз

л1а

Бег

б1у

Туг

ТЙГ

Рйе

ТЙГ

б!у Туг

20

25

30

туг мет нтз

тгр

Уа1

Агд

б!п

А1а

РГО

б1у

б1п

с1у

Ьеи

61 и

тгр

мет

35

40

45

61 у тгр Пе

АЗП

РГО

АЗП

Бег

61 у 61 у

ТЙГ

АЗП

туг

А1а

б!п

Ьуз

Рйе

55 60

- 168 023555

СТ η

01 у

Агд

Уа1

тКг

мет

ТКг

Агд

Азр

ТКг

Бег

Пе

Бег

тКг

АТа

Туг

65

70

75

80

мет

О1и

Ьеи

Бег

Агд

ьеи

Агд

Бег

Азр

Азр

ТКг

АТа

РКе

Туг

Туг

Суз

85

90

95

АТа

Агд

АЗр

Бег

АЗП

тгр

туг

Н15

Азп

Тгр

РКе

Азр

Рго

Тгр

СТ у

О1п

100

105

по

ОТ у

тКг

Ьеи

уа!

ТКг

уа!

Бег

Бег

115 120 <210> 83 <211> 128 <212> БЕЛОК

<2ΐ;

3> ното ί

Бартепз

<400> 83

о!и

Уа1

СТ η

ьеи

уаТ

СТ и

Бег

СТ у

с1у

о!у

Ьеи

УаТ

ьуз

РГО

с!у

о!у

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

ьеи

Бег

Суз

АТа

АТа

Бег

С1у

РКе

ТКг

РКе

Бег

Азп

А1а

20

25

30

Тгр

мет

Бег

тгр

уа1

лгд

СТп

АТа

Рго

СТ у

-У5

ОТ у

ьеи

С!и

Тгр

УаТ

35

40

45

СТ у

Агд

Пе

ьуз

Бег

ьуз

ТКг

Азр

О1у

СТу

ТКг

ТКг

Азр

туг

АТа

АТа

50

55

60

РГО

Уа!

ьуз

01у

Агд

рКе

ТКг

Пе

Бег

Агд

Азр

Азр

Бег

1-У5

АЗП

ТКг

65

70

75

80

ьеи

туг

ьеи

Οίη

мет

АЗП

Бег

Ьеи

ьуз

ТКг

СТ и

АЗр

тКг

А1а

Уа1

туг

85

90

95

туг

суз

ТКг

ТКг

Азр

СТ у

АТа

тКг

УаТ

Уа1

ТКг

Рго

СТ У

Туг

туг

туг

100

105

110

Туг

О1у

ТКг

Азр

УаТ

тгр

01 у

СТп

С1у

тКг

тКг

УаТ

ТКг

УаТ

Бег

Бег

115

120

125

<210> 84

<211? 127 <212> БЕЛОК

<213> ното :

5артеп5

<400> 84

01 и

Уа1

οίη

Ьеи

Уа1

с!и

Бег

с!у

С1у

01 у

Ьеи

Уа1

ьуз

Рго

с!у О1у

1

5

10

15

Бег

ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

А1а

А1а

Бег

01 у

РКе

ТКг

РКе

Бег

АЗП

А1а

20

25

30

тгр

МеЬ

Бег

тгр

Уа1

Агд

Οίη

А1а

РГО

01 у

ьуз

с!у

Ьеи

О1и

Тгр

Уа!

35

40

45

С1у

Агд

Пе

ьуз

Бег

ьуз

ТКг

АЗр

С1у о!у

тКг

А1а

Азр

Туг

д!а

А1а

50

55

60

РГО

уа1

ьуз

о!у

Агд

РКе

тКг

Пе

Бег

Агд

АЗр

АЗр

Бег

ьуз

АЗП

ТКг

65

70

75

80

ьеи

Туг

Ьеи

с!п

мет

Азп

Бег

Ьеи

ьуз

тКг

С1и

АЗр

тКг

А1а

Уа1

туг

85

90

95

Туг

суз

тКг

тКг

о1и

С1у

Рго

туг

Бег

Азр

туг

с1у

туг

Туг

туг

туг

100

105

110

с!у

мет

Азр

Уа!

Тгр

СТу

С1 п

СТу

ТКг

тКг

уа!

тКг

Уа!

Бег

Бег

115 120 125 <210> 85 <211> 120 <212? БЕЛОК <213> ното Бартепз

- 169 023555

<400> 85

СТп УаТ СТп

Хеи

УаТ

С1п

Зег

СТу

АТа

сТи

уа!

хуз

хуз

Рго

СТу

АТа

1

5

10

15

Зег УаТ хуз

УаТ

Зег

суз

ьуз

АТа

зег

сТу

туг

тКг

РКе

тНг

зег

Туг

20

25

30

СТу Пе зег

тгр

УаТ

лгд

СТп

АТа

Рго

СТу

<Лп

СТу

хеи

СТи

тгр

мех

40 сТу тгр Пе зег АТа туг азп сТу 50 55

СТп С1у Агд Уа1 ТКг мех тКг ТКг 65 70

Мех С1и 1_еи Агд Зег Хеи Агд Зег Азр Азр ТКг АТа УаТ 85 90

А5П ТНг АЗр ТКг

АТа	Агд	СТи	5ег	тгр	РКе	СТу	СТи	УаТ РКе РКе Азр
			100					105
СТу	тНг	Хеи	Уа1	ТКг	УаТ	5ег	5ег
		115					120

А5п туг АТа с1п Хуз Хеи 60

Зег ТКг зег ТКг АТа туг 75 80 туг туг суз 95

Тгр СТу СТп 110 <210> 86 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 86

ОТ и

УаТ

сТп

хеи

УаТ

С1и

Бег

сТу

сТу

СТу

Хеи

УаТ

С1п

Рго

СТу

сТу

1

5

10

15

Зег

хеи

Агд

хеи

Бег

суз

АТа

АТа

Бег

СТу

РКе

ТКг

РКе

Бег

Бег

туг

20

25

30

АЗр

мех

Нтз

тгр

УаТ

Агд

СТп

АТа

ТКг

СТу

хуз

СТу

Хеи

СТи

Тгр

УаТ

35

40

45

5ег

сТу

Пе

сТу

тЬг

АТа

СТу

АЗр

ТКг

Туг

туг

Рго

СТу

Бег

уаТ

хуз

50

55

60

СТу

Агд

рКе

АЗП

Пе

Бег

Агд

СТи

Азп

АТа

хуз

АЗП

Бег

хеи

Туг

хеи

65

70

75

80

сТп

мех

Азп

Зег

хеи

Агд

АТа

сТу

А5р

ТКг

АТа

УаТ

туг

туг

суз

АТа

85

90

95

Агд

сТи

СТу

Зег

Тгр

туг

СТу

РКе

Азр

туг

тгр

сТу

СТп

сТу

тКг

хеи

100

105

110

уаТ

тКг

УаТ

5ег

Бег

115

<210> 87 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 87

СТп	УаТ	СТп	Хеи	УаТ	СТи	Бег	сТу
1				5
Бег	хеи	Агд	хеи 20	Бег	суз	аТ а	АТа
СТу	мех	Нтз 35	Тгр	УаТ	Агд	С1п	АТа 40
дТа	УаТ 50	Пе	тгр	туг	Азр	сТу 55	Бег
хуз 65	ОТ у	Агд	РКе	тКг	Пе 70	Бег	Агд
хеи	СТп	Мех	АЗП	Бег 85	Хеи	Агд	АТа

СТу СТу 10	УаТ	УаТ	СТп	Рго	СТу 15	Агд
Бег 25	ОТ у	рКе	ТКг	РКе	Бег 30	Бег	Туг
РГО	ОТ у	хуз	сТу	хеи 45	о1и	тгр	уаТ
А5П	с1и	туг	туг 60	АТа	Азр	Бег	УаТ
АЗр	АЗП	Бег 75	хуз	Бег	тКг	хеи	Туг 80
сТи	Азр 90	тКг	АТа	УаТ	туг	туг 95	суз

- 170 023555

АТа	Нт5 Бег Бег СТу Азп Туг Туг Азр МеЬ Αϊρ УаТ Тгр еТу СТп еТу
100	105	110
ТКг	ТКг УаТ ТКг УаТ Бег	Бег
	115

<210> 88 <211> 127 <212> БЕЛОК <213> Ното :

5артеп5

<400> 88

СТи

УаТ

С1п

ьеи

уаТ

СТи

Бег

СТу сТу сТу

ьеи

Уа1

сТи

РГО

СТу

СТу

1

5

10

15

Бег

ьеи

Агд

Ьеи

Бег

суз

АТа

АТа

Бег

СТу

рКе

ТКг

рКе

Бег

тКг

АТа

20

25

30

Тгр

меь

Бег

тгр

УаТ

Агд

СТп

АТа

РГО

СТу

ьуз

СТу

ьеи

СТи

тгр

УаТ

35

40

45

СТу

Агд

Пе

Ьуз

Бег

ьуз

ТКг

АЗр

СТу

СТу

ТКг

ТКг

Азр

Туг

АТа

АТа

50

55

60

РГО

уаТ

ьуз

СТу

Агд

РКе

тКг

Пе

Бег

лгд

АЗр

АЗр

Бег

ьуз

АЗП

тКг

65

70

75

80

ьеи

туг

Ьеи

СТп

меь

АЗП

Бег

Ьеи

Ьуз

Азп

СТи

Азр

ТКг

АТа

УаТ

Туг

85

90

95

туг

суз

тКг

ТКг

СТи

СТу

Рго

туг

Бег

АЗП

туг

СТу

Туг

Туг

Туг

туг

100

105

110

СТу

УаТ

АЗр

УаТ

Тгр

СТу

СТп

СТу

ТКг

ТКг

УаТ

ТКг

УаТ

Бег

Бег

115

120

125

<210> 89 <211> 130 <212> БЕЛОК <213> Ното !

Бартепз

<400> 89

СТи

уаТ

СТп

ьеи

УаТ

СТи

Бег

СТу

СТу

СТу

ьеи

Уа1

ьуз

РГО

СТу

СТу

1

5

10

15

Бег

Ьеи

ТКг

Ьеи

Бег

Суз

АТа

АТа

Бег

СТу

РКе

ТКг

РКе

Азп

Д5П

АТа

20

25

30

тгр

мет

Бег

тгр

УаТ

Агд

СТп

АТа

Рго

СТу

ьуз

СТу

Ьеи

СТи

тгр

УаТ

35

40

45

СТу

Агд

Пе

ьуэ

Бег

ьуз

тКг

Азр

СТу СТу

тКг

тКг

Азр

туг

АТа

АТа

50

55

60

РГО

уаТ

ьуз

СТу

Агд

РКе

ТКг

Пе

Бег

Агд

АЗр

АЗр

Бег

ьуз

АЗП

тКг

65

70

75

80

ьеи

туг

ьеи

СТп

мет

АЗП

Бег

ьеи

ьуз

ТКг

СТи

АЗр

ТКг

АТа

уаТ

Туг

85

90

95

туг

суз

ТКг

ТКг

СТи

туг

туг

нтз

Пе

Ьеи

ТКг

сТу

Бег

рКе

туг

туг

100

105

110

Бег

Туг

Туг

СТу

МеЬ

Азр

УаТ

Тгр

СТу

СТп

СТу

ТКг

ТКг

УаТ

ТКг

УаТ

115 120 12 5

Бег Бег 130 <210> 90 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 90

- 171 023555

Οίη

уа!

61 η

Ьеи

Уа!

61 и

Бег

б1у

о1у

б1у

уа!

уа1

61 п

Рго

С1у

Агд

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

суз

Αί а

А1а

Бег

б1у

РЬе

ТЬг

рЬе

Бег

Бег

Туг

20

25

30

61 у

мет

Нтз

тгр

Уа1

Агд

б!п

А1а

РГО

б!у

ьуз

61 у

ьеи

б1и

тгр

Уа!

35

40

45

А1а

уа1

Пе

тгр

туг

Азр

б!у

Бег

АЗП

ьуз

Туг

Туг

А1а

Азр

Бег

Уа1

50

55

60

ьуз

б1у

дгд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

АЗр

АЗП

Бег

ьуз

АЗП

ТЬг

ьеи

туг

65

70

75

80

Ьеи

61 η

мет

Азп

Бег

Ьеи

Агд

А1а

61 и

АЗр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Бег

Бег

Бег

Бег

АЗП

РЬе

туг

Азр

мет

Азр

Уа!

Тгр

б!у

б!п

61 у

100

105

110

тЬг

ТЬг

Уа!

ТЬг

Уа!

Бег

Бег

115

<210> 91

<211> 117 <212> БЕЛОК

<213> Ното Бартепз

<400> 91 61 η Уа1 с!п ьеи

б1п

61 и

Бег

б!у

РГО

61 у

Ьеи

Уа1

ьуз

РГО

Бег

61 и

1

5

10

15

тЬг ьеи Бег ьеи

ТЬг

Суз

ТЬг

Уа1

Бег

61 у

61 у

Бег

11 е

Бег

Азп

туг

20

25

30

туг тгр Бег тгр

11 е

Дгд

б1п

Бег

А1а

б1у

ьуз

б1у

Ьеи

б1и

тгр

Пе

35

40

45

61 у Агд 11 е Туг

ТЬг

Бег

б!у

Бег

тЬг

Нтз

Туг

Азп

Рго

Бег

Ьеи

Ьуз

50

55

60

Бег Агд 11 е 11е

МеТ

Бег

Уа!

Азр

ТЬг

Бег

ьуз

АЗП

с!п

РЬе

Бег

Ьеи

65

70

75

80

Ьуз Ьеи Бег Бег

Уа1

ТЬг

А1а

А1а

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

туг

Туг

Суз

А1а

85

90

95

Агд Азр лгд уа1

рЬе

Туг

61 у

Мет

АЗР

Уа!

тгр

б!у

б!п

б!у

тЬг

тЬг

100

105

110

Уа1 ТЬг Уа! Бег

Бег

115

<210> 92 <211> 121 <212> БЕЛОК

<213> Ното Бартепз

<400> 92

61п Уа! 61 η Ьеи

Уа1

б!и

Бег

б!у б1у

61 у

Уа!

Уа!

61 п

РГО

61 у

Агд

1

5

10

15

Бег ьеи Агд ьеи

Бег

суз

А1а

А1а

Бег

б1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Бег

Бег

Туг

20

25

30

б1у мет нтз тгр

Уа!

Агд

б1п

А1а

РГО

б1у

ьуз

61 у

ьеи

С1и

тгр

Уа1

35

40

45

А1а Уа! 11 е Тгр

туг

АЗр

61 у

Бег

Туг

Ьуз

Туг

туг

А1а

АЗр

Бег

Уа!

50

55

60

ьуз 61 у Агд РЬе

ТЬг

Пе

Бег

Агд

АЗр

АЗП

Бег

ьуз

АЗП

ТЬг

ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи б1п МеТ Азп

Бег

Ьеи

Агд

А1а

б!и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

туг

Суз

85

90

95

А1а Агд б!и б!у

АЗр

туг

Бег

АЗР

туг

туг

С1у

мет

АЗр

уа!

тгр

С! у

100 105 110

- 172 023555

01 п с1у тНг

тНг Уа!

тНг

Уа!

5ег

Зег

115

120

<210> 93

<211> 129

<212> БЕЛОК

<213> Ното :

Зартепз

<400> 93

01 п уа! 01 п

ьеи

Уа1

о!п

Зег

01 у

А1а

01 и

Уа1

ьуз

ЬУ5

Рго

01 у

А1а

1

5

10

15

зег Уа1 ьуз

Уа1

Зег

Суз

ьуз

Уа1

Зег

01 у

туг

ТНг

ьеи

ТНг

01и

ьеи

20

25

30

Зег мет Нтз

тгр

Уа1

Агд

01 п

А1а

РГО

С1у

Ьуз

О1у

Ьеи

С1и

Тгр

мет

35

40

45

01у С1у РНе

АЗр

Рго

01 и

Азр

01 у

01 и

ТНг

11е

Туг

А1а

01 п

ьуз

рНе

50

55

60

01 п 01у Агд

Уа!

ТНг

МеТ

ТНг

О1и

Азр

ТНг

Зег

ТНг

Азр

ТНг

Уа!

Туг

65

70

75

80

мет С1и Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

01и

Азр

ТНг

А1а

Уа!

туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а тНг о1у

Уа1

мет

Не

ТНг

РНе

О1у 01 у

Уа1

Не

Уа!

01 у

нтз

Зег

100

105

110

туг туг 01 у

мет

Азр

Уа!

тгр

с!у

01п

С1у

ТНг

тНг

Уа!

ТНг

Уа1

Зег

115

120

125

Зег

<210> 94

<211> 129

<212> БЕЛОК

<213> ното !

Бартепз

<400> 94

01 п Уа1

01 п

ьеи

Уа1

О1п

5ег

С1у

А1 а

01 и

Уа!

ьуз

Ьуз

Рго

01 у

А1а

1

5

10

15

зег Уа1

Ьуз

уа!

Зег

суз

1-У5

Уа1

Зег

61 у

туг

ТНг

ьеи

ТНг

о1и

ьеи

20

25

30

зег мет

нтз

Тгр

Уа!

Агд

с!п

А1а

РГО

01у

Ьуз

б!у

ьеи

С1и

Тгр

мет

35

40

45

С1у о1у

РНе

АЗр

РГО

О1и

Азр

С1у

01и

ТНг

Пе

туг

А1а

О1п

ьуз

РНе

50

55

60

С1п 01 у

Агд

Уа1

тНг

мет

тНг

01 и

Азр

тНг

Зег

тНг

АЗр

тНг

А1а

туг

65

70

75

80

мет 01 и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

б!и

Азр

ТНг

А1а

Уа!

туг

туг

суз

85

90

95

А1а тНг

01у

Уа1

мет

И е

тНг

РНе

С1у С1у

Уа1

11 е

уа1

01 у

нт з

Зег

100

105

110

Туг Туг

01у

мет

Агр

уа!

тгр

01 у

61 п 01 у

тНг

ТНг

уа!

ТНг

Уа!

Зег

115 120 125

Зег <210> 95 <211> 124 <212> БЕЛОК <213> ното Зартепз <400> 95

- 173 023555

СТп

Уа!

СТп

Беи

Уа1

СТп

Бег

СТ у

АТа

СТи

Уа1

Буз

Буз

Рго

сТу

АТа

1

5

10

15

Бег

уа1

Буз

УаТ

Бег

суз

БУЗ

УаТ

Бег

сТу

Туг

тНг

Беи

тНг

С1 и

Беи

20

25

30

Бег

мес

нтз

тгр

Уа1

Агд

СТп

АТа

Рго

СТ у

Буз

С1у

Беи

С1и

Тгр

мес

35

40

45

сТу

с1у

РНе

Азр

Рго

СТ и

Азр

С1у

сТи

ТНг

Пе

Туг

АТа

С1п

Буз

РНе

50

55

60

СТ и

СТ у

Агд

УаТ

ТЫ

Мес

ТНг

С1и

Азр

ТНг

Бег

ТНг

Азр

тНг

А1а

Туг

65

70

75

80

мес

сТи

Беи

Бег

Бег

Беи

Агд

Бег

С1и

Азр

тНг

АТа

УаТ

туг

Туг

суз

85

90

95

АТа

тНг

Агд

А1а

СТ у

ТНг

ТНг

Беи

А1а

туг

туг

туг

туг

АТа

мес

АЗр

100

105

110

УаТ

тгр

С1у

СТп

СТ у

тНг

ТНг

УаТ

ТНг

уа!

Бег

Бег

115

120

<210> 96

<211> 116 <212> БЕЛОК

<213> Ното :

Бартепз

<400> 96

СТп УаТ

СТп

Беи

СТп

СТи

Бег

С1у

РГО

СТу

Беи

УаТ

БУЗ

Рго

Бег

СТи

1

5

10

15

ТНг Беи

Бег

Беи

тНг

Суз

ТНг

Уа!

Бег

сТу СТу

Бег

Пе

Бег

Бег

Туг

20

25

30

Туг тгр

Бег

Тгр

Пе

Агд

СТ π

Рго

Рго

сТу

Буз

СТу

Беи

СТи

Тгр

Пе

35

40

45

с1у туг

Пе

туг

туг

Бег

СТу

АЗП

ТНг

Азп

Туг

АЗП

Рго

Бег

Беи

Буз

50

55

60

Бег Агд

РНе

тНг

Беи

Бег

Пе

Азр

ТНг

Бег

Буз

АЗП

оТп

РНе

Бег

Беи

65

70

75

80

Агд Беи

Бег

Бег

УаТ

тНг

АТа

АТа

АЗр

ТНг

АТа

УаТ

туг

Туг

Суз

А1а

85

90

95

Суз Пе

А1а

ТНг

Агд

Рго

РНе

Аэр

Туг

Тгр

СТу

СТп

СТу

ТНг

Беи

УаТ

100

105

110

ТНг УаТ

Бег

Бег

115

<210> 97 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Зарлепз

<400> 97

СТп УаТ

СТп

Беи

УаТ

С1и

Бег

СТу

сТу

СТу

УаТ

УаТ

СТп

РГО

сТу

Агд

1

5

10

15

Бег Беи

Агд

Беи

Бег

Суз

АТа

АТа

Бег

С1у

РНе

ТНг

РНе

Пе

Бег

Туг

20

25

30

СТу МеС

ΗΪ5

Тгр

УаТ

Агд

С1п

АТа

Рго

С1у

Буз

С1у

Беи

СТи

Тгр

УаТ

35

40

45

АТа УаТ

Пе

тгр

Туг

Азр

с1у

Бег

АЗП

Буз

туг

Туг

АТа

Азр

Бег

УаТ

50

55

60

Буз сТу

Агд

РНе

ТНг

Пе

Бег

Агд

АЕР

АЗП

Бег

Буз

Азп

тНг

Беи

туг

65

70

75

80

Беи СТп

мес

АЗП

Бег

Беи

Агд

АТа

сТи

АЗр

ТНг

А1а

УаТ

туг

туг

суз

85

90

95

АТа лзр

Бег

Бег

СТу

Азр

туг

Туг

сТу

мес

Азр

УаТ

тгр

СТу

еТп

СТу

100 105 110

- 174 023555

ТЬг тЬг Уа1 ТЬг Уа! Бег Бег 115 <210> 98 <211> 119 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 98

61 п

уа!

б!п

Теи

Уа1

С1п

Бег

С! у

А! а

61 и

Уа!

туз

туз

РГО

61 у

А1а

1

5

10

15

Бег

уа1

ьуз

Уа1

Бег

суз

туз

Уа1

Бег

С1у

туг

ТЬг

теи

ТЬг

С1и

Теи

20

25

30

Бег

мет

Нтз

Тгр

Уа!

лгд

61 п

А1а

РГО

о1у

туз

61 у

теи

01 и

Тгр

Мет

35

40

45

б! у

с! у

рЬе

Азр

Рго

б!и

Азр

С! у

61 и

тЬг

ίί е

Туг

А1а

Οίη

туз

РЬе

50

55

60

С1п

б1у

Агд

Уа!

тЬг

МеТ

ТЬг

01и

Азр

ТЬг

Бег

тЬг

Азр

тЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

мет

б1и

ьеи

Бег

Бег

ьеи

Агд

Бег

б1и

А5Р

ТЬг

А1а

уа!

туг

Туг

суз

85

90

95

А1а

тЬг

А! а

с! у

Теи

с! и

Пе

Агд

Тгр

РЬе

Азр

Рго

Тгр

61 у

С1п

б! у

100

105

110

ТЬг

[.ей

Уа!

ТЬг

Уа!

Бег

Бег

115

<210> 99 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> ното :

зартепз

<400> 99

6ΐη Уа1

б1п

Теи

01 η

б1и

Бег

с1у

рго

б1у

Теи

Уа1

туз

Рго

Бег

Οίη

1

5

10

15

ТЬг Теи

Бег

Ьеи

ТНг

Суз

тЬг

Уа1

Бег

С1у б!у

Бег

Пе

Бег

Бег

О1у

20

25

30

б!у Туг

Туг

тгр

Бег

тгр

Пе

Агд

6ΐη

НТЗ

РГО

с!у

туз

61 у

теи

б!и

35

40

45

тгр 11е

01 у

Туг

Пе

зег

Туг

Бег

б1у

АЗр

тЬг

туг

туг

АЗП

РГО

Бег

50

55

60

ьеи 1уз

Бег

Агд

теи

тЬг

Пе

Бег

Уа1

Азр

тЬг

Бег

туз

нтз

61 η

РЬе

65

70

75

80

Бег Теи

Агд

Теи

Бег

Бег

Уа!

тЬг

Бег

А1а

Азр

тЬг

Д1а

Уа1

туг

Туг

85

90

95

суз А1а

Бег

Теи

АЗр

теи

Туг

61 у

АЗр

Туг

РЬе

АЗр

Туг

Тгр

61 у

61(1

100

105

110

о!у тЬг

теи

Уа!

ТЬг

Уа1

зег

Бег

115

120

<210>

100

<211>

125

<212>

БЕЛОК

<213>

Ното Бартепз

<400>

100

61 η Уа! б1п теи Уа!

Οίη

Бег

61 у

д!а

61 и

Уа1

ьуз

туз

Рго

61 у

А1а

1

5

10

15

Бег Уа! Туз Уа! Бег

суз

туз

А1а

5ег

б!у

туг

тНг

Теи

тЬг

Бег

туг

25 30

- 175 023555

б!у

Пе Бег 35

тгр

Уа1

Агд

6ΐη

А!а Рго С1у б!п б!у ьеи б!и тгр мет

40

45

61 у

Тгр

Пе

Зег

а! а

Туг

АЗП

б!у

АЗП

РГО

АЗП

туг

А1а

61 η

1_уз

РНе

50

55

60

6ΐη

б!у

Агд

Уа!

тНг

мет

тНг

тНг

Азр

тНг

Зег

тНг

Зег

тНг

а! а

Туг

65

70

75

80

мег

б!и

1_еи

Агд

зег

ьеи

Агд

5ег

АЗр

АЗр

тНг

а! а

Уа!

туг

туг

суз

85

90

95

А1а

Агд

АЗр

61 η

61 у

1_еи

|_еи

61 у

РНе

61 у

61 и

|_еи

61 и

61 у

1_еи

РНе

100

105

ПО

Азр

туг

Тгр

С! у

б!п

б!у

тНг

1_еи

Уа!

ТНг

уа!

Зег

Зег

115

120

125

<210> 101 <211> 130 <212> БЕЛОК <213> Ното !

Бартепз

<400> 101

61 и Уа1

6ΐη

Ьеи

Уа1

б1и

Бег

б!у о! у

61 у

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

б!у с!у

1

5

10

15

Зег теи

Агд

ьеи

Бег

Суз

А1а

А1а

Бег

61 у

РНе

тНг

РНе

Бег

АЗП

л1а

20

25

30

тгр мет

Бег

тгр

Уа!

Агд

б!п

А1а

РГО

б1у

туз

61 у

1_еи

б!и

тгр

Уа!

35

40

45

61 у Агд

Не

|_уз

тНг

|_уз

тНг

Азр

б!у б!у

тНг

ТНг

АЗр

туг

А1а

А1а

50

55

60

Рго Уа1

туз

61 у

Агд

РНе

тНг

Не

Бег

Агд

АЗр

А5Р

Бег

61 п

АЗП

тНг

65

70

75

80

|_еи туг

ьеи

б! η

мет

АЗП

Бег

Теи

ьуз

ТНг

б!и

А5р

тНг

А1а

Уа1

туг

85

90

95

Туг Суз

тНг

ТНг

б!и

туг

Туг

61 у

Пе

Уа1

ТНг

61 у

Бег

РНе

Туг

Туг

100

105

110

Туг Туг

туг

61 у

меТ

АЗр

Уа!

тгр

61 у

б!п

61 у

тНг

ТНг

уа!

ТНг

Уа!

115

120

125

Бег Бег

130

<210> 102

<211> 107 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 102 Аэр 11е б!п

мет

тНг

61 п

Бег

РГО

Бег

Бег

|_еи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б!у

1

5

10

15

Азр Агд уа1

ТНг

11 е

ТНг

суз

б!п

А1а

Бег

б1п

АЗП

Пе

Бег

АЗП

РНе

20

25

30

Теи Аэр Тгр

Туг

61 π

б1п

Ьу5

РГО

б!у

ЬУ5

А1а

Рго

АЗП

Ьеи

1_еи

Пе

35

40

45

туг Азр А1а

Бег

А5р

ьеи

АЗР

Рго

б1у

Уа1

Рго

Бег

Агд

рНе

Бег

б!у

50

55

60

Бег б!у Бег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

Ьеи

б!п

Рго

65

70

75

80

б!и Азр Пе

А1а

тНг

Туг

туг

Суз

б1п

б1п

туг

Уа!

Бег

ьеи

Рго

г_еи

85

90

95

тНг РНе б!у 61 у б!у

ТНг

1_уз

Уа!

б1и

Пе

Ьуз

100 105

- 176 023555 <210> 103 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартелз <400> 103

Азр

Не

б!п

мех

ТКг

б1п

Бег

Рго

Бег

Бег

Хеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б!у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

тКг

Не

ТКг

Суз

61 η

А1а

Бег

6ΐη

Азр

Не

Бег

АЗП

РКе

20

25

30

|.еи

АЗр

тгр

Туг

С1п

С1п

1-У5

Рго

с1у

ьуз

А1а

РГО

ьуз

|_еи

хеи

Не

35

40

45

Туг

АЗр

А1а

Бег

Азр

Хеи

АЗр

Рго

б!у

Уа1

РГО

Бег

Агд

РКе

Бег

б1у

50

55

60

Бег

61 у

Бег

61 у

ТКг

Азр

РКе

ТКг

РКе

тКг

Не

Бег

Бег

Хеи

6ΐη

Рго

65

70

75

80

61 и

АЗр

Не

А1а

ТКг

туг

туг

суз

61 η

б!п

туг

Уа!

Бег

хеи

Рго

хеи

85

90

95

ТКг

РКе

61 у

61 у

б!у

тКг

[.уз

Уа!

61 и

Не

хуз

100

105

<210> 104 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Ното

Бартепз

<400> 104 Азр АЗП Уа1

мех

ТКг

6ΐη

ТКг

Рго

Хеи

Бег

Хеи

Бег

Уа!

тКг

Рго

61 у

1

5

10

15

61п Рго А1а

Бег

Не

Бег

суз

ЬУ5

Бег

Бег

61 п

Бег

Хеи

Хеи

НТ 5

Бег

20

25

30

Азр б1у Хуз

ТКг

Туг

Хеи

Туг

тгр

Туг

Хеи

61 п

1_уз

РГО

б!у

61 п

Рго

35

40

45

Рго 6ΐη хеи

хеи

Не

Туг

61 и

А1а

Бег

Азп

Агд

РКе

Бег

61 у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр Агд РКе

Бег

б!у

Бег

б!у

Бег

б1у

тКг

АЗр

рКе

тКг

хеи

хуз

Не

65

70

75

80

Бег Агд Уа1

б1и

А1а

б!и

Азр

уа!

б!у

Уа!

туг

туг

Суз

мех

б1п

Бег

85

90

95

11 е б!п хеи

РГО

|_еи

ТКг

РКе

б!у б!у б!у

ТКг

хуз

Уа!

б1и

Не

хуз

100

105

110

<210> 105

<211> 107 <212> БЕЛОК

<213> Ното !

Бартепз

<400> 105 Азр 11е б!п

мех

ТКг

61 п

Бег

Рго

Бег

Бег

Хеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б1у

1

5

10

15

Авр Агд Уа1

тКг

Не

ТКг

Суз

61 п

А1а

Бег

61 п

Азр

Не

АЗП

АЗП

Туг

20

25

30

Хеи Азп Тгр

Туг

б1п

С1п

ьуз

Рго

б1у

ьуз

А1а

РГО

Хуз

Хеи

Хеи

11 е

35

40

45

Туг АЗр А1а

Бег

АЗП

хеи

61 и

Не

61 у

Уа!

Рго

Бег

Агд

РКе

Бег

61 у

50

55

60

Бег б1у Бег

б1у

ТКг

Азр

РКе

Не

рКе

ТКг

ϊϊ е

Бег

Бег

Хеи

61 п

Рго

65

70

75

80

б!и А5р 11е

д!а

ТКг

Туг

Туг

суз

б!п

61 п

туг

АЗр

АЗП

рКе

РГО

рКе

85

90

95

- 177 023555

тНг РНе б!у б!у о!у

ТНг Ьу5 Уа!

б1и 105

Не

ьуз

100

<210> 106 <211> 106 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 106 Азр 11 е С1п

мет

тНг

Οίη

Бег

Рго

Бег

Бег

Ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б1у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

ТНг

Не

ТНг

суз

61 п

А1а

Бег

61 η

АБр

Пе

АЗП

АЗП

Туг

20

25

30

ьеи Азп тгр

туг

Οίη

С1п

ьуз

Рго

01 у

ьуз

А1а

РГО

ьуз

Ьеи

ьеи

Не

35

40

45

Туг Азр тНг

Бег

АЗП

Ьеи

С1и

Рго

С1у

Уа1

Рго

зег

Агд

РНе

Бег

61 у

50

55

60

зег о!у зег

б1у

тНг

Азр

рНе

ТНг

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

ьеи

61 п

Рго

65

70

75

80

б1и Азр 11 е

А1а

ТНг

Туг

туг

суз

б1п

Οίη

туг

АЗр

АЗП

ьеи

Ьеи

тНг

85

90

95

рНе о1у с!п

с!у

ТНг

Агд

ьеи

б1и

Пе

ьуз

100

105

<210> 107 <211> 106 <212> БЕЛОК

<213> Ното Бартепз

<400> 107 Азр 11 е Οίη

мет

ТНг

Οίη

Бег

рго

Бег

Бег

Ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа!

О1у

1

5

10

15

лзр Агд уа1

ТНг

Пе

ТЬг

Суз

61 η

А1а

Бег

Οίη

А5р

Не

Бег

АЗП

Туг

20

25

30

Ьеи А5п тгр

Туг

Οίη

НТ5

ьуз

РГО

С1у

ьуз

А1а

рго

ьуз

Ьеи

ьеи

Пе

35

40

45

туг Азр А1а

Бег

АЗП

ьеи

61 и

ТНг

61 у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РНе

Бег

С1у

50

55

60

Бег б!у Бег

б!у

ТНг

А5Р

РНе

ТНг

РНе

ТНг

Пе

Бег

Бег

ьеи

б!п

Рго

65

70

75

80

61 и Азр Пе

А1а

ТНг

туг

Туг

Суз

61 η

61 η

туг

АЗР

АЗП

ьеи

Ьеи

ТНг

85

90

95

рНе 61 у о!у 61 у

ТНг

Ьуз

Уа1

61 и

Пе

ьуз

100

105

<210> 108 <211> 106 <212> БЕЛОК

<213> Ното Бартепз

<400> 108 Азр 11е οίη

мет

тНг

01 η

Бег

РГО

Бег

Бег

Ьеи

Бег

А! а

Бег

Уа!

61 у

1

5

10

15

Азр Агд Уа!

тНг

Пе

ТНг

СУ5

б1п

А1а

Бег

61 η

Азр

Пе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

Ьеи Азп Тгр

туг

61 п

Οίη

ьуз

Рго

б1у

ьуз

А1а

Рго

ьуз

РНе

Ьеи

Пе

35

40

45

Туг Азр А1а

Бег

Азп

ьеи

<51 и

ТНг

61 у

Уа!

Рго

Бег

Агд

РНе

Бег

61 у

55 60

- 178 023555

Бег 65 С1и РНе

СТу Бег с1у тНг Азр РНе тНг РНе тНг 70

Пе Бег Бег ьеи СТп 75

Рго 80 ТНг

А5р СТу

Пе АТа ТНг 85

туг Туг Суз СТп СТп 90

туг

Азр АЗП

Ьеи

Пе 95

СТп СТу 100

тНг

Агд

ьеи

С1и

Пе 105

ьуз

<210> 109

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Ното БартепЕ

<400> 109

АЗр

11 е

УаТ МеЬ

ТНг

С1 п

Бег

РГО

Азр

Бег

ьеи

А1а УаТ

Бег

Ьеи

С1у

1

5

10

15

СТи

Агд

АТа ТНг

Пе

Азп

суз

Ьуз

Бег

Бег

сТп

Бег УаТ

ьеи

АЗр

Бег

20

25

30

Бег

Азр

А5П Ьуз

А5П

туг

ьеи

АТа

тгр

туг

С1п

СТп Ьу5

РГО

61 у

СТп

35

40

45

Рго

рго

ьуз ьеи

ьеи

Пе

туг

тгр

А1а

Бег

АЗП

Агд СТи

Бег

СТу

уа!

50

55

60

Рго

Азр

Агд рНе

Бег

С1у

Бег

С1у

Бег

СТу

ТНг

Азр РНе

Бег

ьеи

тНг

65

70

75

80

Пе

Бег

Бег ьеи

СТ п

АТа

сТи

Азр

УаТ

АТа

Уа1

туг Туг

суз

СТп

СТп

85

90

95

Туг

туг

Бег Азр

Рго

РНе

ТНг

РНе

СТу

Рго

СТу

ТНг Ьуз

УаТ

Азр

Пе

100

105

110

ьуз

<210> 110

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Ното Бартепз

<400> 110

АЗр

Пе

Уа1 Мет

тНг

СТп

Бег

Рго

АЗр

Бег

ьеи

АТа УаТ

Бег

ьеи

СТу

1

5

10

15

СТи

Агд

А1а тНг

Пе

АЗП

Суз

ьуз

Бег

Бег

СТп

Бег уаТ

ьеи

АЗр

Бег

20

25

30

Бег

АБр

АЗП Ьуз

Азп

туг

ьеи

АТа

тгр

туг

С1п

с1п ьуз

Рго

ОТ у

СТп

35

40

45

Рго

Рго

Ьуз ьеи

ьеи

Пе

туг

тгр

АТа

Бег

АЗП

Агд сТи

Бег

с1у

УаТ

50

55

60

Рго

АЗр

Агд РНе

Бег

сТу

Бег

С1у

Бег

С1у

ТНг

Азр РНе

ТНг

ьеи

тНг

65

70

75

80

Не

Бег

Бег ьеи

сТп

АТа

сТи

АЗр

УаТ

АТа

УаТ

туг Туг

Суз

Οίη

СТп

85

90

95

туг

туг

Бег Азр

рго

РНе

тНг

РНе

сТу

Рго

СТу

тНг ьуз

УаТ

АЗр

Пе

100

105

110

ьуз

<210> 111

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> ното Бартепз

<400> 111

- 179 023555

Азр

Пе

б1п

МеТ

ТКг

б1п

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

уа!

б1у

1

5

10

15

АЗр

Агд

уа!

ТКг

ΐί е

ТКг

Суз

61 п

А1а

Бег

61 п

А5р

Пе

Бег

АЗП

Туг

20

25

30

ьеи

Азп

тгр

Туг

б1п

61 п

ьуз

Рго

61 у

ьуз

А1а

рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Пе

35

40

45

туг

Азр

А1а

Бег

Азп

Ьеи

б1и

тКг

С1у

Уа!

Рго

Бег

дгд

РКе

Бег

б1у

50

55

60

Бег

б1у

Бег

б1у

ТКг

Аэр

РКе

тКг

РКе

тКг

11 е

Бег

Бег

Ьеи

61 п

Рго

65

70

75

80

61 и

АЗр

Не

А1а

ТКг

Туг

туг

Суз

61 п

С1п

Туг

Азр

Азп

Ьеи

ьеи

ТКг

85

90

95

РКе

б!у

б!у

61 у

ТКг

ьуз

уа!

61 и

Пе

ьуз

100

105

<210> 112

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> ното :

Барт епз

<400> 112

Азр Пе

уа1

мет

тКг

б!п

Бег

РГО

Азр

Бег

Ьеи

д1а

Уа!

Бег

ьеи

б1у

1

5

10

15

б1и Агд

А1а

тКг

Пе

АЗр

суз

Ьуз

Бег

Бег

61 п

61 у

Уа1

ьеи

Азр

Бег

20

25

30

Бег Азп

АЗП

ьуз

АЗП

РКе

Ьеи

А1а

тгр

Туг

с1п

б1п

ьуз

РГО

б!у

б!п

35

40

45

Рго Рго

ьуз

ьеи

ьеи

Пе

туг

тгр

А1а

Бег

АЗП

Агд

61 и

Бег

б1у

Уа1

50

55

60

рго Уа1

Агд

РКе

Бег

б1у

Бег

61 у

Бег

б1у

тКг

А5р

рКе

тКг

Ьеи

тКг

65

70

75

80

Пе Бег

Бег

ьеи

6ΐπ

А1а

б1и

Азр

Уа!

д1а

ьеи

туг

туг

суз

61 п

б!п

85

90

95

Туг Туг

Бег

Азр

Рго

РКе

ТКг

РКе

61 у

РГО

61 у

ТКг

ьуз

уа!

АЗр

Не

100

105

110

ьуз

<2ΐο> из

<211> 107 <212> БЕЛОК

<213> Ното :

Бартепз

<4оо> из Азр 11е б!п

мет

тКг

б1п

Бег

рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б1у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

ТКг

Пе

ТКг

Суз

Агд

А1а

Бег

б!п

Бег

11 е

Бег

Азр

туг

20

25

30

ьеи Азп тгр

туг

б1п

б1п

ьуз

рго

б1у

ьуз

А1а

Рго

Азп

Ьеи

Ьеи

Пе

35

40

45

Туг А1а А1а

Бег

Бег

Ьеи

б1п

Бег

61 у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РКе

Бег

С1у

50

55

60

Бег б!у Бег

61 у

ТКг

Азр

РКе

тКг

Ьеи

ТКг

Пе

Бег

Бег

Ьеи

61 п

Рго

65

70

75

80

с1и Азр РКе

А1а

тКг

Туг

рКе

суз

б!п

С1п

ТКг

туг

Бег

АЗр

Рго

рКе

85

90

95

ТКг РКе 61 у

РГО

61 у

ТКг

ьуз

Уа!

АЗР

Пе

Ьуз

100 105

- 180 023555 <210> 114 <211> 106 <212> БЕЛОК

<213> Ното

Зартепз

<400> 114

Азр

11е

б1п

Мет

тКг

б1п

Зег

Рго

5ег

5ег

Ьеи

Зег

А1а

5ег

Уа1

б!у

1

5

10

15

АЗр

Агд

Уа1

ТКг

Пе

ТКг

суз

61 п

А1а

Зег

61 п

АЗр

11 е

Зег

Азп

Туг

20

25

30

ьеи

АЗП

Тгр

туг

61 п

61 п

ьуз

РГО

61 у

ьуз

А1а

РГО

ьуз

Ьеи

ьеи

11 е

35

40

45

туг

А5Р

А1а

5ег

АЗП

ьеи

61 и

тКг

61 у

Уа!

Рго

зег

Агд

рКе

Зег

б1у

50

55

60

Зег

С1у

Зег

б1у

ТКг

Азр

РКе

ТКг

РКе

ТКг

Пе

5ег

зег

ьеи

б!п

Рго

65

70

75

80

б1и

Азр

Не

А1а

тКг

туг

Туг

Суз

б!п

б!п

Туг

Азр

АЗП

ьеи

ьеи

тКг

85

90

95

РКе

б!у

61 у

б!у

ТКг

ьуз

Уа1

61 и

П е

ьуз

100

105

<210> 115

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> ното :

Зартепз

<400> 115

Азр 11е б1п

МеЬ

ТКг

61 п

Зег

Рго

Зег

Зег

Ьеи

5ег

А1а

Зег

Уа1

С1у

1

5

10

15

Азр Агд уа1

тКг

11 е

ТКг

Суз

61 п

А1а

Зег

С1п

Азр

Пе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

ьеи Азп тгр

туг

с!п

б!п

ьуз

рго

б1у

ьуз

А1а

Рго

Ьуз

уа1

ьеи

Пе

35

40

45

туг Азр А1а

Зег

Азп

Ьеи

61 и

ТКг

61 у

Уа!

РГО

Зег

Агд

РКе

зег

б!у

50

55

60

зег б1у зег

б!у

тКг

АЗр

РКе

ТКг

РКе

ТКг

Пе

Зег

зег

ьеи

б1п

РГО

65

70

75

80

б!и Азр Пе

А1а

ТКг

туг

туг

суз

б1п

61 п

Туг

АЗр

АЗП

Ьеи

ьеи

ТКг

85

90

95

РКе б!у б!у б!у

тКг

ьуз

Уа!

б!и

Пе

ьуз

100

105

<210> 116 <2ΐι> из <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз

<400> 116 Азр 11е Уа1

МеТ

ТКг

С1п

5ег

Рго

Азр

Зег

ьеи

А1а

уа1

Зег

ьеи

61 у

1

5

10

15

б1и Агд А1а

ТКг

Пе

Азр

Суз

ьуз

Зег

5ег

61 η

Зег

Уа1

ьеи

А5р

Зег

20

25

30

5ег АЗП Азп

ьуз

Азп

РКе

ьеи

А1а

тгр

туг

С1п

61 п

Ьуз

рго

б1у

б!п

35

40

45

Рго Рго Ьуз

Ьеи

ьеи

Пе

туг

тгр

А1а

зег

Азп

Агд

б1и

зег

б!у

Уа!

50

55

60

Рго Азр Агд

РКе

5ег

51у

5ег

б1у

зег

б!у

ТКг

АЗр

РКе

ТКг

ьеи

ТКг

65

70

75

80

11е Зег Зег

Ьеи

61 п

А1а

б1и

Азр

Уа!

А1а

Уа!

туг

туг

Суз

б1п

61 п

90 95

- 181 023555

Туг Туг	Бег Азр Рго Рйе тйг	Рйе б1у	Рго с1у тйг ьуз Уа1 Азр 11е
ьуз	100	105	110

<210> 117 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Бартепз

<400> 117 б1и 11 е Уа1

Ьеи

тйг

61 η

Бег

РГО

с1у

Тйг

ьеи

Бег

ьеи

Бег

РГО

61 у

1

5

10

15

с!и Агд А1а

ТЙГ

ьеи

Бег

суз

Агд

А1а

Бег

С1п

Бег

Уа!

Бег

Бег

61 у

20

25

30

Туг Ьеи А1а

туг

Ьеи

А1а

тгр

Туг

с1п

С1п

Ьуз

Рго

б!у

6ΐη

А1а

РГО

35

40

45

дгд ьеи ьеи

Не

Туг

б1у

А1а

Бег

Бег

Тйг

А1а

ТЙГ

61 у

Пе

Рго

Азр

50

55

60

дгд рйе Бег

б!у

Бег

б1у

Бег

б!у

тйг

Азр

Рйе

тйг

ьеи

тйг

Пе

Бег

65

70

75

80

Агд ьеи б1и

Рго

61 и

АЗр

рйе

А1а

Уа!

Туг

туг

Суз

6ΐη

61 η

Туг

61 у

85

90

95

Бег Бег Рго

Пе

ТЙГ

Рйе

61 у

С1п

С1у

Тйг

Агд

ьеи

б!и

11 е

ьуз

100

105

110

<210> 118 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> ното

Бартепз

<400> 118 Азр 11е б1п

мет

ТЙГ

б!п

Бег

рго

Бег

Бег

Ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

О1у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

тйг

Пе

Тйг

Суз

б1п

А1а

Бег

61 п

АЗр

Не

Бег

Азп

Рйе

20

25

30

ьеи азп тгр

туг

61 п

61 п

Агд

Рго

61 у

ьуз

А1а

Рго

ьуз

Ьеи

ьеи

11 е

35

40

45

туг Азр А1а

Бег

АЗП

Ьеи

б!и

тйг

61 у

Уа!

Рго

Бег

Агд

Рйе

Бег

61 у

50

55

60

Бег б!у Бег

б1у

ТЙГ

Азр

Рйе

тйг

Рйе

тйг

Пе

Бег

Бег

ьеи

б!п

РГО

65

70

75

80

61 и лзр Пе

д1а

ТЙГ

туг

туг

Суз

61 п

б1п

туг

Азр

АЗП

ьеи

Рго

Рйе

85

90

95

тйг Рйе б!у

рго

61 у

тйг

ьуз

Уа!

Азр

Пе

ьуз

100

105

<210> 119 <21Ь 106 <212> БЕЛОК <213> Ногоо

Бартепз

<400> 119 Азр Пе б1п

мет

тйг

б1п

Бег

РГО

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б!у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

тйг

11 е

тйг

суз

б!п

А1а

Бег

61 п

А5Р

Пе

Бег

АЗП

Туг

20

25

30

Ьеи азп Тгр

туг

εΐη

б!п

ьуз

рго

б!у

ьуз

А1а

Рго

ьуз

ьеи

Ьеи

Пе

40 45

- 182 023555

Туг

Азр 50

А1а

Бег

Азп Ьеи бТи ТКг СТу УаТ 55

Рго

Бег 60

дгд

РКе

Бег

СТу

Бег

СТу

Бег

СТу

тКг

Азр

РКе

ТКг

РКе

ТКг

Пе

Бег

Бег

Ьеи

бТп

рго

65

70

75

80

сТи

Азр

рКе

АТа

тКг

туг

туг

Суз

СТп

61 п

туг

АЗр

АЗП

ьеи

ьеи

ТКг

85

90

95

РКе

СТу СТу СТу

ТКг

Ьуз

УаТ

СТи

Пе

Ьуз

100

105

<210> 120 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 120

Азр

11 е

сТп

меЬ

ТКг

СТп

Бег

Рго

Бег

Бег

Ьеи

Бег

АТа

Бег

УаТ

ОТ у

1

5

10

15

АЗр

Агд

уаТ

ТКг

Не

ТКг

Суз

СТп

АТа

Бег

СТп

АЗр

ίί е

Бег

Азп

Туг

20

25

30

Ьеи

АЗП

тгр

туг

с1п

С1п

ьуз

Рго

СТу

ьуз

АТа

Рго

ьуз

ьеи

ьеи

Пе

35

40

45

Туг

АЗр

л1а

Бег

Азп

Ьеи

с1и

тКг

С1у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РКе

Бег

С1у

50

55

60

Бег

С1у

Бег

с1у

ТКг

Азр

рКе

тКг

рКе

тКг

11е

Бег

Бег

Ьеи

СТп

Рго

65

70

75

80

С1и

Азр

Пе

АТа

ТКг

туг

Туг

суз

СТп

Агд

Туг

Азр

Азр

ьеи

РГО

Не

85

90

95

ТКг

РКе

сТу

СТп

СТу

ТКг

лгд

ьеи

СТи

Пе

ьуз

100

105

<210> 121 <211> 106 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 121

Азр

Не

С1п

МеЬ

тКг

61 п

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

АТа

Бег

УаТ

ОТ у

1

5

10

15

Азр

Агд

УаТ

тКг

Пе

ТКг

Суз

СТп

АТа

Бег

СТп

Азр

Пе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

Ьеи

АЗП

тгр

туг

СТ η

61 п

Агд

Рго

СТу

ьуз

АТа

РГО

ьуз

ьеи

Ьеи

Пе

35

40

45

туг

Азр

АТа

Бег

Азп

Ьеи

сТи

ТКг

С1у

Уа1

РГО

Бег

Агд

РКе

Бег

сТу

50

55

60

Бег

С1у

Бег

С1у

ТКг

А5р

РКе

ТКг

РКе

ТКг

Пе

Бег

Бег

ьеи

СТп

РГО

65

70

75

80

СТи

Азр

Пе

АТа

ТКг

туг

туг

Суз

С1п

С1п

туг

Азр

АЗП

ьеи

ьеи

тКг

85

90

95

РКе

сТу

СТу

СТу

ТКг

ьуз

УаТ

СТи

Пе

Ьуз

100

105

<210> 122 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз
<400>	122
Азр Не СТп меь тКг сТп Бег	Рго Бег Бег	ьеи Бег АТа Бег УаТ СТу
1	5	10	15

- 183 023555

АЗр

Агд

Уа!

ТНг

ιί е

ТНг

суз

дгд

А1а

Зег

Οίη

О1у

РНе

зег

АЗП

Туг

20

25

30

Ьеи

А1а

тгр

туг

01 п

01 п

ьуз

РГО

О1у

Ьуз

Уа!

РГО

ьуз

Ьеи

Ьеи

11 е

35

40

45

Туг

А1а

А1а

Зег

ТНг

Ьеи

01 п

Зег

01 у

Уа1

РГО

Зег

Агд

РНе

Зег

61 у

50

55

60

Зег

01 у

Зег

01 у

ТНг

АЗр

РНе

тНг

Ьеи

ТНг

Пе

5ег

Зег

ьеи

О1п

Рго

65

70

75

80

с1и

АЗр

Уа!

А1а

ТНг

туг

туг

суз

61 п

ьуз

туг

Азп

Зег

А1а

РГО

Ьеи

85

90

95

ТНг

РНе

О1у

01 у

01 у

тНг

Ьуз

Уа!

О1и

11 е

ьуз

100

105

<210> 123 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Нолю зартепз

<400> 123 дзр ιίе 01 п

Мет

тНг

01 п

5ег

РГО

Зег

Зег

ьеи

Зег

А1а

зег

уа!

01 у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

ТЬг

11 е

тНг

суз

Агд

А1а

зег

οίη

61 у

ιί е

АЗП

АЗП

Туг

20

25

30

ьеи А1а тгр

Туг

οίη

01 п

ьуз

Рго

01у

ьуз

Уа1

Рго

01 п

ьеи

ьеи

11 е

35

40

45

Туг Уа1 А1а

зег

тНг

ьеи

Οίη

5ег

01у

Уа!

Рго

5ег

Агд

РНе

Зег

б!у

50

55

60

зег С1у Зег

С1у

ТНг

Азр

РНе

тНг

Ьеи

ТНг

Пе

Зег

Зег

ьеи

01 п

Рго

65

70

75

80

С1и Азр Уа!

А1а

тНг

Туг

Туг

Суз

01 п

Ьуз

туг

АЗП

зег

01 у

Рго

РНе

85

90

95

ТНг РНе 01у

Рго

01 у

ТНг

ьуз

Уа!

Азр

11 е

ьуз

100

105

<210> 124

<211> 107 <212> БЕЛОК

<213> нолю :

Зартепз

<400> 124 Азр 11 е Οίη

МеТ

ТНг

С1п

Зег

Рго

Зег

Зег

Ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа!

01 у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

тНг

Пе

ТНг

Суз

Агд

А1а

зег

01 п

01 у

Пе

АЗП

Азп

туг

20

25

30

ьеи А1а тгр

туг

01 п

01 п

ьуз

Рго

01 у

ьуз

Уа!

РГО

ьуз

ьеи

ьеи

Пе

35

40

45

туг Уа1 А1а

зег

ТНг

ьеи

οίη

Зег

01 у

Уа!

Рго

зег

Агд

РНе

зег

С1у

50

55

60

зег с!у зег

с1у

ТНг

Азр

РНе

тНг

Ьеи

тНг

Пе

Зег

Зег

Ьеи

61 п

РГО

65

70

75

80

с1и Азр Уа1

А1а

ТНг

Туг

туг

суз

Οίη

ьуз

туг

АЗП

Зег

01 у

Рго

РНе

85

90

95

тНг рНе о!у

РГО

01 у

тНг

ьуз

уа!

Азр

П е

ьуз

100 105 <210> 125 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> ното Зартепз

- 184 023555 <400> 125

Азр

Пе

6ΐη

мет

тЬг

6ΐη

Бег

рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

О1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа!

тЬг

Пе

Т(тг

суз

Агд

А1а

Бег

61л

Бег

Пе

Бег

Агд

Туг

20

25

30

Ьеи

Азл

тгр

туг

Οίη

6ΐη

ЬУБ

Рго

61 у

ьуз

А1а

Рго

АЗП

ьеи

Ьеи

Пе

35

40

45

нт'з

Αΐ а

А1а

Бег

Бег

ьеи

61 η

Бег

б!у

Уа!

РГО

Бег

Агд

РЬе

Бег

61 у

50

55

60

Бег

С1у

Бег

61 у

ТЬг

АЗр

РЬе

ТЬг

ьеи

ТЬг

Пе

Бег

Бег

ьеи

61 л

Рго

65

70

75

80

б1и

Азр

РЬе

д1а

тЬг

туг

туг

Суз

61 л

61 η

Бег

туг

Пе

тЬг

РГО

Рго

85

90

95

Бег

РЬе

61 у

6ΐη

б!у

ТЬг

ьуз

ьеи

й!и

11 е

ьуз

100 105 <210> 126 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> ното Бартелз <400> 126

АЗР

Пе

61 η

мет

ТЬг

61 η

Бег

рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа!

б!у

1

5

10

15

АЗР

Агд

Уа1

ТЬг

Пе

ТЬг

суз

Агд

А1а

Бег

61 η

б1у

Пе

Агд

АЗП

Азр

20

25

30

Ьеи

Азр

тгр

Туг

6ΐη

6ΐη

ьуз

РГО

б!у

ьуз

А1а

Рго

ьуз

Агд

ьеи

Пе

35

40

45

Туг

А1а

А1а

Бег

Бег

ьеи

с1п

Бег

61 у

Уа1

Рго

Бег

Агд

рЬе

Бег

б1у

50

55

60

Бег

б1у

Бег

61 у

ТЬг

С1и

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Пе

АЗП

Бег

Ьеи

61 η

Рго

65

70

75

80

61 и

Азр

РЬе

А1а

ТЬг

туг

туг

Суз

Ьеи

6ΐη

туг

АЗП

Бег

Туг

РГО

Не

85

90

95

ТЬг

рЬе

61 у

6ΐη

61 у

тЬг

Агд

ьеи

б!и

Пе

ьуз

100

105

<210> 127 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Ното !

Бартелз

<400> 127 Азр ίίе б!п

мет

Пе

61 п

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б1у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

тЬг

11 е

ТЬг

суз

б!п

д!а

Бег

нтз

Азр

Пе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

ьеи Азп тгр

туг

61 п

61 п

ьуз

РГО

б!у

Ьуз

А1а

Рго

ьуз

РЬе

Ьеи

Пе

35

40

45

Бег Азр А1а

Бег

АЗП

Ьеи

б!и

ТЬг

б1у

Уа1

РГО

Бег

Агд

РЬе

Бег

с!у

50

55

60

Бег С1у Бег

б!у

ТЬг

А5р

РЬе

ТЬг

рЬе

ТЬг

П е

Бег

Бег

Ьеи

С1п

Рго

65

70

75

80

б1и Д5р Пе

А1а

ТЬг

Туг

Туг

Су5

С1п

С1п

Туг

Азр

Азп

Ьеи

Рго

Ьеи

85

90

95

ТЬг РЬе 61у

б!у 61 у

ТЬг

Ьуз

Уа!

б!и

Пе

Ьуз

100 105

- 185 023555 <210> 128 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 128

Азр

Пе

УаТ

мех

ТКг

сТп

Бег

Рго

Ьеи

Бег

Ьеи

РГО

УаТ

тКг

РГО

сТу

1

5

10

15

сТи

РГО

АТа

Бег

Пе

Бег

суз

Агд

Бег

Бег

СТп

Бег

Хеи

Хеи

Н1 5

Бег

20

25

30

АЗП

СТ у

Туг

АЗП

Туг

хеи

Азр

Тгр

туг

Хеи

СТп

хуз

Рго

СТу

СТп

Бег

35

40

45

Рго

СТп

рКе

хеи

Пе

туг

Хеи

СТу

Бег

Пе

Агд

АТа

Бег

СТу

УаТ

РГО

50

55

60

Азр

Агд

рКе

Бег

СТу

Бег

сТу

Бег

СТу

тКг

А5Р

РКе

АТа

хеи

тКг

Пе

65

70

75

80

Бег

Агд

УаТ

СТи

АТа

СТ и

Азр

УаТ

СТу

УаТ

туг

Туг

Суз

мех

СТп

АТа

85

90

95

Хеи

СТп

ТКг

РГО

Агд

ТКг

РКе

СТу

С1п

СТу

ТКг

хуз

УаТ

СТи

Пе

Ьуз

100

105

110

<210> 129 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> ното :

Барт епз

<400> 129 СТи Пе УаТ

Хеи

ТКг

СТп

Бег

Рго

Азр

РКе

СТп

Бег

УаТ

тКг

РГО

Хуз

1

5

10

15

сТи хуз УаТ

тКг

Пе

тКг

Суз

Агд

АТа

Бег

СТп

туг

Пе

СТу

Бег

Бег

20

25

30

хеи нтз тгр

туг

СТп

СТп

ТКг

Рго

Азр

СТп

Бег

РГО

хуз

хеи

Хеи

Пе

35

40

45

Азп туг УаТ

Бег

СТп

Бег

рКе

Бег

сТу

УаТ

РГО

Бег

Агд

рКе

Бег

СТу

50

55

60

Бег сТу Бег

СТу

ТКг

АЗр

РКе

ТКг

Хеи

ТКг

Пе

АЗП

Бег

хеи

СТи

лТа

65

70

75

80

СТи Азр АТа

АТа

ТКг

Туг

Туг

Суз

Нтз

СТп

Бег

Бег

Бег

Хеи

Рго

РКе

85

90

95

ТКг РКе СТу

Рго

СТу

ТКг

хуз

УаТ

Азр

Пе

хуз

100

105

<210> 130 <211> ИЗ <212з БЕЛОК <213> Ното

Бартепз

<400> 130 Азр Пе уаТ

мех

ТКг

СТп

Бег

Рго

АЗр

Бег

Хеи

АТа

уаТ

Бег

хеи

СТу

1

5

10

15

АТа Агд АТа

тКг

Пе

Бег

Суз

хуз

Бег

Бег

СТп

Бег

УаТ

хеи

туг

Бег

20

25

30

Бег Азп Азп

Хуз

Азп

Туг

Хеи

АТа

Тгр

Туг

СТп

СТп

Хуз

Рго

СТу

СТ п

35

40

45

Рго Рго Хуз

Хеи

Хеи

Пе

Туг

Тгр

АТа

Бег

ТКг

Агд

СТи

Бег

СТу

УаТ

50

55

60

Рго Азр Агд

РКе

Бег

сТу

Бег

СТу

Бег

СТу

тКг

АЗр

РКе

тКг

Ьеи

ТКг

65

70

75

80

Пе Бег ТКг

хеи

СТп

АТа

СТи

Азр

УаТ

АТа

УаТ

туг

Туг

Суз

СТп

СТп

85

90

95

- 186 023555

Туг туг	ТКг тКг РГО	Рго ТКг РКе С1у 01 η С1у ТКг	ьуз Уа! οΊιι Пе
ьуз	100	105	110

<210> 131

<211? 106 <212? БЕЛОК

<213> Ното :

Бартепз

<400> 131 Азр Пе Οίη

МеТ

ТКг

01 п

Бег

РГО

Бег

Бег

Ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1

б!у

1

5

10

15

Азр Агд Уа!

ТКг

Пе

ТКг

Суз

οίη

А1а

Бег

01 п

Аэр

Пе

Азп

Азп

Туг

20

25

30

ьеи Азп тгр

Туг

Οίη

οίη

ьуз

РГО

о1у

ьуз

д!а

Рго

ьуз

Ьеи

ьеи

Пе

35

40

45

туг Азр А1а

Бег

А5П

ьеи

С1 и

ТКг

01 у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РКе

Бег

01 у

50

55

60

Бег С1у Бег

б!у

тКг

Азр

рКе

тКг

рКе

ТКг

11 е

Бег

Бег

Ьеи

Οίη

Рго

65

70

75

80

б!и Азр Пе

А1а

ТКг

туг

туг

суз

Οίη

Οίη

туг

Азр

АЗр

ьеи

ьеи

тКг

85

90

95

РКе с!у о1у о!у

тКг

ьуз

уа!

с!и

11 е

ьуз

100

105

<210> 132 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Ното :

Бартепз

<400? 132 Азр Пе Οίη

мет

тКг

С1п

Бег

РГО

Бег

Бег

Ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа!

о!у

1

5

10

15

Азр Агд уа!

тКг

Пе

тКг

Суз

01 п

А1а

Бег

01 п

Азр

Пе

Бег

АЗП

туг

20

25

30

ьеи Азп тгр

туг

61 п

Οίη

ьуз

Рго

01 у

ЬУ5

А1а

Рго

ьуз

ьеи

ьеи

Пе

35

40

45

Туг А5Р А1а

Бег

Азп

Ьеи

о1и

ТКг

с!у

Уа!

РГО

Бег

Агд

РКе

Бег

о!у

50

55

60

Бег 01 у Бег

01 у

тКг

Азр

РКе

тКг

РКе

Пе

11 е

Бег

Бег

Ьеи

01 п

Рго

65

70

75

80

о!и Азр ιίе

А1а

тКг

туг

туг

суз

01 п

Οί п

рКе

Азр

АЗП

ьеи

Рго

Рго

85

90

95

тКг РКе о!у О1у С1у

тКг

ьуз

Уа!

С1и

Бег

ьуз

100

105

<210> 133 <211> 106 <212? БЕЛОК <213> ното

Бартепз

<400> 133 Азр ιί е 01 η

мет

тКг

Οίη

Бег

Рго

Бег

Бег

ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа!

01 у

1

5

10

15

Азр Агд Уа1

ТКг

Пе

ТКг

Суз

01 п

А1а

Бег

01 п

А5Р

Пе

Бег

Азп

Туг

20

25

30

Ьеи Азп тгр

туг

01 п

Нт 5

ьуз

РГО

61 у

ьуз

А1а

РГО

ьуз

Ьеи

ьеи

Пе

40 45

- 187 023555

туг

АЗр 50

А1а

Бег

Азп ьеи б!и ТЬг б1у уа! 55

РГО

Бег 60

Агд

РЬе

Бег

61 у

Бег

с! у

Бег

б1у

тЬг

АЗр

РЬе

тЬг

РЬе

тЬг

Пе

Бег

Бег

Ьеи

б1п

РГО

65

70

75

80

61 и

Азр

Пе

д1а

ТЬг

Туг

Туг

суз

61 π

61 п

Туг

Азр

Азп

ьеи

Ьеи

ТЬг

85

90

95

РЬе

61 у

б!у

61 у

тЬг

ьуз

Уа!

б!и

Пе

ьуз

100

105

<210> 134

<211> 115 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 134

Азр Уа!

Уа!

мет

ТЬг

б1п

Бег

Рго

Ьеи

Бег

ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

ьеи

б!у

1

5

10

15

б!п Рго

А1а

Бег

Пе

Бег

Суз

Агд

Бег

Бег

61 п

Бег

ьеи

Уа1

Туг

Бег

20

25

30

АЗр 61 у

АЗП

ТЬг

туг

Ьеи

АЗП

тгр

РЬе

с1п

б!п

лгд

Рго

б!у

61 п

Бег

35

40

45

Рго Агд

Агд

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа!

Бег

Абп

Тгр

Азр

Бег

61 у

Уа!

Рго

50

55

60

Азр Агд

РЬе

Бег

б1у

Бег

б!у

Бег

б!у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

ьеи

ьуз

П е

65

70

75

80

Бег лгд

Уа1

61 и

А1а

с!и

АЗр

Уа1

61 у

Уа1

туг

туг

суз

мет

61 п

61 у

85

90

95

ТЬг нтз

Тгр

Рго

Агд

б!у

ьеи

рЬе

ТЬг

рЬе

б!у

РГО

61 у

тЬг

ьуз

Уа!

100

105

110

Агр 11е

Ьуз

115

<210> 135

<211> 112 <212> БЕЛОК

<213> ното :

Бартепз

<400> 135 Азр Уа! Уа!

мет

тЬг

б1п

Бег

Рго

Ьеи

Бег

Ьеи

РГО

Уа!

тЬг

Ьеи

б1у

1

5

10

15

61п Рго А1а

Бег

Пе

Бег

Суз

Агд

Бег

Бег

б1п

Бег

Ьеи

Уа1

туг

Бег

20

25

30

Азр б!у Азп

ТЬг

туг

Ьеи

Азп

тгр

РЬе

б1п

б1п

Агд

рго

б!у

б!п

Бег

35

40

45

Рго Агд Агд

Ьеи

Пе

Туг

ьуз

Уа!

Бег

АЗП

Тгр

Азр

Бег

б!у

Уа!

РГО

50

55

60

лзр Агд РЬе

Азп

с!у

Бег

б!у

Бег

61 у

ТЬг

АЗр

РЬе

тЬг

Ьеи

ьуз

Пе

65

70

75

80

Бег Агд уа1

61 и

л!а

61 и

АЗр

Уа!

61 у

Уа!

туг

туг

суз

мет

61 п

61 у

85

90

95

ТЬг Нтз Тгр

Рго

Пе

тЬг

рЬе

б!у

б!п

б!у

ТЬг

б!у

ьеи

б!и

ιί е

ьуз

100

105

110

<210> 136 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 136

- 188 023555

Бег сТу сТу туг туг тгр Бег 1 5 <210> 137 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 137

Азп А1а Тгр Мет Бег 1 5 <210> 138 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> ното 5ар1епз <400> 138 т(гг АТа Тгр Мет Бег 1 5 <210> 139 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 139

СТу Туг Туг Мет Нтз 1 5 <210> 140 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 140

АТа туг туг мет нтз 1 5 <210> 141 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 141

Бег туг Азр мет Нтз 1 5 <210> 142 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 142

С1и Ьеи Бег мет Нтз 1 5

- 189 023555 <210> 143 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 143

Бег туг с1у мет нтз 1 5 <210> 144 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 144

Бег туг туг тгр Бег 1 5 <210> 145 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 145

Азп Туг Туг Тгр Бег 1 5 <210> 146 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 146 бТу туг туг IIе Нтз 1 5 <210> 147 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 147

Бег Туг С1у Пе Бег 1 5 <210> 148 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 148 туг IIе Туг Туг Бег с!у Бег тКг Азп Туг Азп Рго Бег ьеи Ьуз Бег 15 10 15

- 190 023555 <210> 149 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 149

Туг Пе Бег туг Бег с!у Азр тНг Туг туг Азп Рго Бег Ьеи Ьуз Бег 15 10 15 <210> 150 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 150

Агд Пе Ьуз Бег Ьуз ТНг Азр С1у С1у ТНг ТНг Азр Туг А1а А!а Рго 15 10 15

Уа! Ьуз а! у <210> 151 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 151

Агд Пе ьуз Бег Ьуз ТНг Азр б!у С1у ТНг ТНг Азр Азп А1а А1а Рго 15 10 15

Уа! ьуз с! у <210> 152 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 152

Агд 11е ьуз Бег ьуз ТНг Азр С1у С1у ТНг А1а Азр туг А1а А1а Рго 15 10 15

Уа! Ьуз б!у <210> 153 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Ното БартепБ <400> 153

Агд Пе Ьуз ТНг Ьуз ТНг Азр б1у С1у тНг ТНг Азр Туг А1а А!а Рго 15 10 15

Уа! Ьуз с!у <210> 154 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз

- 191 023555 <400> 154

Агд Пе ьуз Бег ьуз тЬг Азр 01у тгр тНг тНг Азр туг А1а А1а Рго

10 15

Уа! ьуз б!у <210> 155 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Кото Бартепз <400> 155 тгр IIе Азп Рго Азп Бег б1у С1у тНг Азп туг А1а б1п Ьуз РНе 6ΐη 15 10 15 у

<21О> 156 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 156 у II е с1у ТНг А1а 61 у Азр ТНг Туг Туг Рго б1у Бег Уа1 ьуз 61 у 15 10 15 <210> 157 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепг <400> 157 б!у РНе Азр Рго С1и Азр б1у б1и тНг Пе туг А1а 61η иуз РНе 61η 15 10 15 б!у <210> 158 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 158 уа1 ίίе Тгр Туг Азр С1у Бег Азп иуз Туг Туг А1а Азр Бег Уа! иуз 15 10 15 б1у <210> 159 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 159 туг Пе туг туг Бег б!у Азп тНг Азп туг азп Рго Бег иен ьуз Бег 15 10 15

- 192 023555 <210> 160 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 160

Уа1 IIе тгр Туг А5р С1у Бег азп б1и Туг туг А1а Азр Бег Уа! Хуз

10 15 б!у <210> 161 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 161

Агд Не туг тКг Бег а1у Бег тКг нтз туг Азп Рго Бег хеи хуз Бег 15 10 15 <210> 162 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 162

УаТ IIе тгр Туг А5р сТу Бег Туг Хуз Туг Туг АТа Αερ Бег УаТ Хуз

10 15 б!у <210> 163 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 163

Тгр IIе Бег АТа туг Азп б1у Азп ТКг Азп туг А1а 61 п Хуз хеи С1п 15 10 15 б!у <210> 164 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 164

Тгр Не Бег А1а туг азп б1у Азп Рго Азп туг А1а 61η Хуз РКе 61 п

10 15 б!у <210> 165 <211> 11

- 193 023555 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 165

С1у IIе А1а А1а ТНг сТу тНг теи РНе Азр суз 15 10 <210> 166 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 166 б!и туг туг б!у Бег С1у б1у Уа1 тгр Туг туг с1у Мет Азр Уа1 15 10 15 <210> 167 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 167 бТу б1у Бег теи теи тгр тНг С1у Рго Азп туг туг туг туг С1у мет 15 10 15

Азр Уа!

<210> 168 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 168

Азр Бег АЗП Тгр Туг НТ 5 Азп тгр РНе Азр РГО 15 10 <210> 169 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 169

С1у о1у туг Бег С1у туг дзр Теи С1у туг туг Туг с1у Мет Азр Уа1 15 10 15 <210> 170 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 170

С1и С1у Рго Туг Бег Азр Туг С1у Туг Туг Туг Туг С1у МеТ Азр Уа1 15 10 15 <210> 171 <211> 10

- 194 023555 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 171 ьеи Азр Беи туг сТу Азр Туг РНе Азр туг 1 5 10 <210> 172 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 172

СТи СТу Бег Тгр туг СТу РНе Азр Туг 1 5 <210> 173 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 173 сТи туг туг ΗΪΞ Х1е Беи тНг сТ у Бег РНе туг туг Бег Туг туг С1 у 15 10 15 мес Аэр УаТ <210> 174 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 174

СТи Туг Туг СТу 1Те УаТ ТНг СТу Бег РНе Туг Туг Туг Туг Туг СТу 15 10 15 мес Азр УаТ <210> 175 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 175

Агд АТа 01 у тНг тНг Беи А1а туг туг Туг туг АТа МеС Азр УаТ 15 10 15 <210> 176 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 176

А1а СТу Беи сТи 1Те дгд тгр РНе Азр Рго 1 5 10

- 195 023555 <210> 177 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 177

Бег Бег с! у дзр туг Туг с!у мет Азр уа! 15 10 <210> 178 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 178 ΐίе А1а тКг Агд Рго РКе Азр туг 1 5 <210> 179 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 179

Азр дгд Уа1 РКе туг с1у мет Азр Уа! 1 5 <210> 180 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 180

С1и С1у Азр Туг Бег Азр Туг Туг С1у МеТ Азр Уа1 15 10 <210> 181 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <4ОО> 181

Азр Агд с!у с1п ьеи Тгр ьеи тгр туг туг туг туг туг с! у Мет Азр 15 10 15

Уа!

<210> 182 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 182

Бег Бег С1у Аэп Туг Туг Азр МеТ Азр Уа1 1 5 10

- 196 023555 <210> 183 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> ното Зартепз <400> 183

5ег 5ег зег азп РКе туг Азр мет Азр уа! 15 10 <210> 184 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз <400> 184

Азр ьеи Агд 11е тКг б1у тКг тКг туг туг туг туг туг туг б1у мет 15 10 15

Азр Уа!

<210> 185 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз <400> 185

Азр б!п с!у Ьеи Ьеи б1у РКе с!у 61 и Ьеи С1и 61 у Ьеи РКе Азр Туг 15 10 15 <210> 186 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз <400> 186

С1и Зег тгр РКе б!у б1и Уа! РНе РКе Агр туг 1 5 10 <210> 187 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз <400> 187

С1у Уа1 мек Пе ТКг РКе с1у с!у Уа1 Пе Уа1 с!у нтз 5ег Туг туг 15 10 15 у МеК Азр Уа1 20 <210> 188 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз <400> 188 б!и б!у Рго Туг Зег Азп Туг б!у Туг Туг Туг Туг б!у Уа! Азр Уа1 15 10 15

- 197 023555 <210> 189 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 189

Азр сТу д1а тНг Уа1 Уа1 тНг рго сТу туг туг туг туг с1у тНг Азр 15 10 15

УаТ <210> 190 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 190

Бег Бег тгр Бег туг туг С1у мет Азр Уа1 1 5 10 <210> 191 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 191

Агд Бег Бег СТп Бег Ьеи УаТ Туг Бег А5р СТу Азп тНг Туг Ьеи Азп 15 10 15 <210> 192 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 192

Агд А1а Бег СТп Бег 11е Бег Азр туг ьеи Азп 15 10 <210> 193 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 193

Ьуз Бег Бег 61п Бег УаТ Ьеи Азр Бег Бег Азр Агп Ьуз азп Туг Ьеи 15 10 15

АТа <210> 194 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 194

- 198 023555

Ьуз Бег Бег 6ΐη Бег Уа! Ьеи АБр Бег 1 5 а! а

Бег Азп Азп Ьуз Абп РЬе 1_еи 10 15 <210> 195 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 195

Ьуз Бег Бег б1п с!у νβΐ ьеи А5р Бег Бег абп абп ьуз азп РНе ьеи 15 10 15

А1а <210> 196 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 196

Агд А1а Бег б!п Бег 11е Бег Агд Туг ьеи Азп 1 5 10 <210> 197 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 197

Ьу5 Бег Бег С1п Бег Ьеи Ьеи Бег Азр С1у ьуз ТЬг Туг 1_еи Туг 15 10 15 <210> 198 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 198 б!п А1а Бег 61 п А5р IIе Бег Азп Туг ьеи Азп 1 5 10 <210> 199 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 199

С!п А1а Бег 61 π Азр Пе Азп Азп туг Ьеи А5П 1 5 10 <210> 200 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз

- 199 023555 <400> 200

61η А1а Бег Нтз Азр 11е Бег Азп туг хеи азп 15 10 <210> 201 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 201 с1п А1а Бег С1п азп Пе Бег Азп РКе хеи Азр 15 10 <210> 202 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 202

С1п А1а Бег С1п Азр Не Бег Азп РКе Хеи Азр 1 5 10 <210> 203 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 203 с1п А1а Бег с1п Азр 11е Бег азп РКе хеи Азп 15 10 <210> 204 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бар1еп5 <400> 204

1_уз Бег Бег с1п Бег Уа1 ьеи туг Бег Бег Азп А5П хуз азп туг ьеи 15 10 15

А1а <210> 205 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 205

Агд А1а Бег С1п С1у РКе Бег Азп Туг хеи А1а 1 5 10 <210> 206 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз

- 200 023555 <400> 206

Агд А1а Бег οίη с1у 11е Азп абп туг ьеи А1а 1 5 10 <210> 207 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 207

Агд Бег Бег с1п Бег ьеи ьеи нтз Бег Азл с!у Туг азп туг ьеи Азр 15 10 15 <210> 208 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 208

Агд А1а Бег οίη туг 11е С1у Бег Бег Ьеи Нтз 1 5 10 <210> 209 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 209

Агд А1а Бег С1п Бег Уа! Бег Бег о! у Туг Ьеи А1а Туг Ьеи А1а 15 10 15 <210> 210 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 210

Агд А1а Бег οΐπ с1у 11е Агд Аэп Азр Ьеи Азр 1 5 10 <210> 211 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 211

Ьуз Уа1 Бег Азп тгр Азр Бег 1 5 <210> 212 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 212

- 201 023555

А1а А1а Бег Бег Ьеи С1п Бег 1 5 <210> 213 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 213

Тгр А1а Бег тНг Агд с1и Бег 1 5 <210> 214 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 214

Тгр А1а Бег Азп Агд С1и Бег 1 5 <210> 215 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 215

С1и А1а Бег азп Агд РНе Бег 1 5 <210> 216 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 216

Азр А1а Бег А$п ьеи с1и тНг 1 5 <210> 217 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 217

Азр тНг Бег Азп кеи с1и Рго 1 5 <210> 218 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 218

А5р А1а Бег Азр ьеи Азр Рго 1 5

- 202 023555 <210> 219 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 219

Азр А1а Бег азп ьеи с1и Не 1 5 <210> 220 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепг <400> 220

АТа д1а Бег тйг ьеи б1п Бег 1 5 <210> 221 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 221

Уа! А1а Бег тйг ьеи С1п Бег 1 5 <210> 222 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 222 туг Уа1 Бег с!п Бег Рйе Бег 1 5 <210> 223 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепг <400> 223

С1у А1а Бег Бег Тйг А1а Тйг 1 5 <210> 224 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 224

Ьеи с1у Бег Пе Агд А1а Бег 1 5

- 203 023555 <210> 225 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 225

МеС СТп СТу ТНг Нт5 Тгр рго IIе ТНг 1 5 <21О> 226 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 226

МеТ СТп сТу тНг Нт5 Тгр Рго Агд сТу Беи РНе ТНг 1 5 10 <210> 227 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 227

СТп оТп ТНг Туг Бег Азр Рго РНе тНг 1 5 <210> 228 <211> 9 <212> БЕЛОК .

<213> Ното БартепБ <400> 228

СТп СТп туг туг Бег Агр Рго РНе тНг 1 5 <210> 229 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 229 сТп сТп Бег туг Не ТНг рго рго Бег 1 5 <210> 230 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 230 мет сТп Бег Не С1п Беи рго Беи тНг 1 5 <210> 231 <211> 8

- 204 023555 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 231

С1п Οίη Туг Азр Азп Ьеи 11е ткг 1 5 <21О> 232 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 232

С1п Агд Туг Аэр Азр ьеи Рго 11е ткг 1 5 <210> 233 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> ното 5артеп5 <400> 233

Οίη Οίη Туг Азр Аэп Ьеи Ьеи ткг 1 5 <210> 234 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Ното 5артеп5 <400> 234

01п 01п Туг Азр А5р Ьеи Ьеи Ткг 1 5 <210> 235 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 235 οίη о1п туг Азр Азп ьеи Рго ьеи ткг 1 5 <210> 236 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 236 οίη οίη Туг Уа1 Бег ьеи Рго Ьеи Ткг 1 5 <210> 237 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз

- 205 023555 <400> 237 с1п С1п Туг Азр Азп РКе Рго РНе тНг 1 5 <210> 238 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 238

С1п С1п РНе Азр Азп ьеи Рго Рго ТНг 1 5 <210> 239 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <400> 239

СТп С1п Туг туг тНг тНг Рго Рго тНг 1 5 <21О> 240 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 240

С1п С1п Туг Азр Азп Ьеи Рго РНе ТНг 1 5 <210> 241 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 241 б!п ьуз туг Азп Бег АТа рго ьеи тНг 1 5 <210> 242 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <40О> 242

С1п Ьуз Туг Азп Бег С1у Рго РНе ТНг 1 5 <210> 243 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 243

- 206 023555

Мег 01η а!а ьеи οίη ТЬг Рго Агд тЬг 1 5 <210> 244 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз <400> 244 нт5 οίη Бег Бег Бег ьеи рго РЬе тЬг 1 5 <210> 245 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното БартепБ <400> 245

01п 01 л Туг 01 у Бег Бег Рго XIе тЬг 1 5 <210> 246 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> ното БартепБ <400> 246

Ьеи 01 η Туг абп Бег туг Рго IIе тЬг 1 5 <210> 247 <211> 981 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 247 дсьадсасса адддсссаьс ддтсььсссс сЬддсдсссь дсьссаддад сассьссдад 60 адсасадсдд ссстдддсЬд ссЬддьсаад дасЬастЬсс ссдаассддь дасддЬдТсд 120 ьддаастсад дсдсхсТдас садсддсдтд сасассттсс садстдтсст асадтсстса 180 ддастстаст ссстсадсад сдтддтдасс дтдссстсса дсаасттсдд сасссадасс 240

Тасасстдса асдтадаТса саадсссадс аасассаадд тддасаадас адТТдадсдс 300 аааТдТТдТд ТсдадТдссс ассдТдссса дсассассТд Тддсаддасс дтсадТсттс 360 стсттссссс саааасссаа ддасассстс атдатстссс ддасссстда ддтсасдтдс 420 дтддтддтдд асдтдадсса сдаадасссс даддтссадт тсаастддта сдтддасддс 480 дТддаддТдс аТааТдссаа дасааадсса сдддаддадс адТТсаасад сасдТТссдт 540 дТддТсадсд тсстсассдт тдтдсассад дастддстда асддсаадда дтасаадтдс 600 ааддтстсса асаааддсст сссадссссс атсдадаааа ссатстссаа аассаааддд 660 садссссдад аассасаддт дтасассстд сссссатссс дддаддадат дассаадаас 720 саддтсадсс тдасстдсст ддТсаааддс ТТсТасссса дсдасатсдс сдТддадТдд 780 дададсаатд ддсадссдда даасаастас аадассасас стсссатдст ддастссдас 840 ддстссттст тсстстасад саадстсасс дтддасаада дсаддтддса дсаддддаас 900 дТсТТсТсаТ дсТссдтдаТ дсаТдаддст стдсасаасс асТасасдса даададсстс 960 тссстдтстс сдддТаааЬд а 981 <210> 248 <211> 324 <212> ДНК <213> ното БартепБ

- 207 023555 <400> 248 сдхасддхдд схдсассахс хдхсххсахс ддаасХдссх схдххдхдхд ссХдсхдаа! хддааддхдд ахаасдсссх ссаахсдддх адсааддаса дсассхасад ссХсадсадс ааасасааад хсХасдссхд сдаадхсасс адсххсааса ддддададхд ххад <210> 249 <211> 375 <212> днк <213> Ното 5артепз <400> 249 саддхдсадс хддхдсадхс хддддсхдад Хссхдсаадд схтсхддаХа сассХХсасс ссхддасаад ддсххдадхд дахдддахдд дсасадаадх ххсадддсад ддхсассахд ахддадсхда дсаддсхдад ахсхдасдас хахадхддсх асдахххддд схасхасхас дхсассдхсх ссхса <210> 250 <211> 363 <212> ДНК <213> Ното зартепз <400> 250 саддхдсадс хдсаддадхс дддсссадда ассХдсасХд хсхсхддхдд схссдхсадс садсссссад ддаадддасх ддадхддахх хасаассссх сссхсаадад хсдадхсасс ХсссХдаадс хдадсхсхдх дассдсхдсд аХадсадсса сХддХасссХ сХХХдасХдс Хса <210> 251 <211> 378 <212> ДНК <213> Ното 5артеп5 <400> 251 саддхдсадс хддхдсадхс хддддсхдад хссхдсаадд сХХсХддаХа сассХХсасс ссхддасаад ддсХХдадХд даХдддаХдд дсасадаадх ххсадддсад ддхсассахд ахддадсхда дсаддсхдад ахсхдасдас дддсадсхах ддххахддха схасхасхас асддХсассд хсхссхса <210> 252 <211> 357 <212> ДНК <213> Ното зартепг <400> 252 саддхдсадс хддхддадхс хдддддаддс хссхдхдсад сдхсхддахх сассххсадх ссаддсаадд ддсгддадхд ддхддсадхх дсадасхссд хдаадддссд аххсассахс схдсааахда асадссхдад адссдаддас ххсссдссах схдахдадса дххдааахсх 60 аасххсХаХс ссадададдс сааадХасад 120 аасхсссадд ададхдхсас ададсаддас 180 асссхдасдс хдадсааадс адасхасдад 240 саХсадддсс хдадсХсдсс сдхсасааад 300

324 дхдаадаадс схддддссХс адхдааддхс 60 дссхасХаха хдсасхдддх дсдасаддсс 120 ахсаасссха асадхддхдд сасааасхах 180 ассадддаса сдхссахсад сасадссхас 240 асддссдхдх аххасхдхдс дададдхдда 300 ддхахддасд хсхддддсса адддассасд 360

375 схддхдаадс сххсддадас ссхдхсссхс 60 адхддхддхх асхасхддад схддахссдд 120 дддхахахсх аххасадхдд дадсассаас 180 ахахсадхад асасдхссаа даассадххс 240 дасасддссд хдхаххасхд хдсддссддх 300 Хддддссадд даасссХддх сассдхсхсс 360

363 дхдаадаадс схддддссХс адхдааддхс 60 ддсХасХаХа ХасасХдддХ дсдасаддсс 120 аХсаасссХа асадхддхдд сасааасХаХ 180 ассадддаса сдхссахсад сасадссхас 240 асддссдхдх аххасхдхдс дададахсда 300 ХасддХахдд асдХсхдддд ссаадддасс 360

378 дхддхссадс схдддаддхс ссхдадасхс 60 адсхахддса хдсасхдддх ссдссаддсх 120 ахахддхахд ахддаадхаа хааахасхах 180 хссададаса аххссаадаа сасдсхдхах 240 асддсхдХдХ аххасхдхдс садсадсадс 300

- 208 023555

ХддХссХасХ асддхахдда сдхсхддддс <210> 253 <211> 387 <212> днк <213> Ното Зартепз <400> 253 даддХдсадс ХддХддадХс Хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхдхсадх ссадддаадд ддсхддадхд ддххддссдх дасаасдсхд сасссдхдаа аддсадаххс схдхахсхдс ааахдаасад ссхдаааасс ддадддхсах хасхахддас сдддсссаас саадддасса сддхсассдх сХссхса <210> 254 <211> 378 <212> ДНК <213> ното зартепз <400> 254 даддХдсадс хддхддадхс хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсхддадхд ддххддссдх дасхасдсхд сасссдхдаа аддсадаххс схдхахсхдс ааахдаасад ссхдаааасс дадхасхаХд дххсдддддд ддхххддхас асддхсассд хсхссхса <210> 255 <211> 387 <212> ДНК <213> Ното Зартепз <400> 255 даддХдсадс хддхддадхс хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсхддадхд ддххддссдх дасхасдсхд сасссдхдаа аддсадаххс схдхахсхдс ааахдаасад ссхдаааасс даХсХссдХа ХаасХддаас ХассХаХХас саадддасса сддХсассдХ сХссХса <210> 256 <211> 360 <212> ДНК <213> Ното Зартепз <400> 256 саддХХсадс хддхдсадХс Хддадсхдад хссхдсаадд сххсхддхха сассхххасс ссхддасаад ддсххдадхд дахдддахдд дсасадаадс хссадддсад адхсассахд аХддадсХда ддадссхдад ахсхдасдас ХддХХсдддд аддхаххсхх ХдасХасХдд саадддасса сддХсассдХ схссХса ххддхааадс схддддддхс ссххадасхс аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх аххаааадса ааасхдахдд хдддасааса ассахсхсаа дадаХдаХХс аааааасасд даддасасад ссдХдХаХХа сХдхассаса хасхасхасх асддхахдда сдхсхддддс ххддхааадс схддддддхс ссххадасхс аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх аххаааадса ааасхдахдд хдддасааса ассахсхсаа дадахдаххс аааааасасд даддасасад ссдхдхахха сХдхассаса хасддхахдд асдхсхдддд ссаадддасс ххддхааадс схддддддхс ссххадасхс аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх аххаааадса ааасхдахдд ххддасааса ассахсхсаа дадахдаххс аааааасасд даддасасад ссдхдхахха сХдхассаса ХасХасХасХ асддХаХдда сдхсхддддс дхдаадаадс схддддссхс адхдааддхс адсхахддха хсадсхдддх дсдасаддсс ахсадсдсхх асаахддхаа сасааасхах ассасадаса сахссасдад сасадссхас асддссдХдХ аХХасХдХдс дадададХсд ддссадддаа сссХддХсас сдхсХссХса <210> 257 <211> 378 <212> ДНК <213> ното Зартепз

120

180

240

300

360

387

120

180

240

300

360

378

120

180

240

300

360

387

120

180

240

300

360

- 209 023555 <400> 257 даддхдсадс хддхддадхс Хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсХддадХд ддХХддссдх дасХасдсХд сасссдХдаа аддсадаХХс схдхахсхдс аааХдаасад ссХдаааасс дадхасхахд дххсдддддд ддхххддхас асддхсассд хсхссХса <210> 258 <211> 384 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 258 даддхдсадс ХддХддадХс Хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсхддадХд ддХХддссдх дасхасдсхд сасссдХдаа аддсадаххс сХдХаХсХдс аааХдаасад ссХдаааасс дахддддсха сддхддхаас хссддддхас дддассасдд ХсассдХсхс сХса <210> 259 <211> 360 <212> ДНК <213> Ното Бартелз <400> 259 саддххсадс Хддхдсадхс Хддадсхдад хссхдсаадд сххсхддхха сассхххасс ссхддасаад ддсххдадхд дахдддахдд дсасадаадс хссадддсад адхсассахд ахддадсхда ддадссхдад ахсХдасдас хддххсдддд аддхаххххх хдасхасхдд ххддхааадс схддддддхс ссххадасхс 60 аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх 120 аХХаааадса ааасхдаХдд Хдддасааса 180 ассаХсХсаа дадаХдаххс аааааасасд 240 даддасасад ссдхдхахха схдхассаса 300 хасддхахдд асдхсхдддд ссаадддасс 360

378 ххддхааадс .схддддддхс ссххадасхс 60 аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх 120 аХХаааадса ааасХдаХдд Хдддасааса 180 ассаХсХсаа дадахдаххс аааааасасд 240 даддасасад ссдхдхахха схдхассаса 300 хасхасхасд дхасддасдх схддддссаа 360

384 дхдаадаадс схддддссхс адхдааддхс 60 адсхахддха хсадсхдддх дсдасаддсс 120 ахсадсдсхх асаахддхаа сасааасхах 180 ассасадаса сахссасдад сасадссхас 240 асддссдхдх аххасхдхдс дадададХсд 300 ддссадддаа сссхддхсас сдхсхссхса 360 <210> 260 <211> 360 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 260 саддхдсадс ХддХдсадХс ХддддсХдад хссхдсаадд сххсхддаха сассххсасс ссхддасаад ддсххдаахд дахдддахдд дсхсадаадх ххсадддсад ддхсассахд аХддадсХда дсадасХдад аХсХдасдас аасХддХасс асаасхддхх сдассссхдд дхдаадаадс сХддддссХс адхдааддхс 60 ддсхасхаха хдсасхдддх дсдасаддсс 120 ахсаасссха асадхддхдд сасааасхах 180 ассадддаса сдхссахсад сасадссхас 240 асддссХХХХ аХХасХдХдс дададасадс 300 ддссадддаа сссхддхсас сдхсхссхса 360 <210> 261 <211> 360 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 261 саддхдсадс хддхдсадхс ХддддсХдад хссхдсаадд сххсхддаха сассххсасс ссхддасаад ддсххдаахд дахдддахдд дсхсадаадх ххсадддсад ддхсассахд дхдаадаадс схддддссхс адхдааддхс 60 ддсхасхаха хдсасхдддх дсдасаддсс 120 ахсаасссха асадхддхдд сасааасхах 180 ассадддаса сдХссаХсад сасадссхас 240

210 023555 ахддадсхда дсадасхдад ахсхдасдас аасхддхасс асаасхддхх сдассссхдд асддссхххх аХХасХдХдс дададасадс 300 ддсеадддаа сссхддхсас сдхсхссхса 360 <210> 262 <211> 384 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 262 даддхдсадс хддхддадхс Хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсхддадхд ддххддссдх дасХасдсхд сасссдХдаа аддсадаххс схдхахсхдс ааахдаасад ссхдаааасс дахддддсха сддхддхаас хссддддхас дддассасдд гсассдХсХс сХса <21О> 263 <211> 381 <212> днк <213> Ното Бартепз <400> 263 даддХдсаас ХддХддадхс Хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсХддадХд ддХХддссдХ дасхасдсхд сасссдхдаа аддсадаххс схдхахсхдс ааахдаасад ссхдаааасс дааддХсссХ асадхдасХа сдддХасХас ассасддхса ссдхсхссхс а <21О> 264 <211> 360 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 264 саддХХсадс ХддхдсадХс Хддадсхдад Хссхдсаадд сххсхддхха сассхххасс ссхддасаад ддсххдадхд дахдддахдд дсасадаадс хссадддсад адхсассахд ахддадсхда ддадссхдад ахсхдасдас ХддХХсдддд аддхаххсхх ХдасХасХдд ххддхааадс ехддддддхе ссххадасхс 60 аасдссхдда ХдадсХдддХ ссдссаддсХ 120 аххаааадса ааасхдахдд хдддасааса 180 ассахсхсаа дадаХдаХХс аааааасасд 240 даддасасад ссдХдХаХХа сХдХассаса 300 хасхасхасд дхасддасдх схддддссаа 360

384

ХХддХааадс ехддддддхе ссХХадасХс 60 аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсХ 120 аХХаааадса ааасХдаХдд хдддасадса 180 ассахсхсаа дадахдаххс аааааасасд 240 даддасасад ссдхдхахха сХдХассаса 300 хасхасддХа Хддасдхсхд дддссааддд 360

381 дхдаадаадс схддддссхс адхдааддхс 60 адсХаХддХа хсадсхдддх дсдасаддсс 120 ахсадсдсхх асаахддхаа сасааасхах 180 ассасадаса саХссасдад сасадссХас 240 асддссдхдх аххасхдхдс дадададхсд 300 ддсеадддаа сссХддХсас сдхсхссхса 360 <210> 265 <211> 351 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 265 даддхдсадс хддхддадхс хдддддаддс ХссХдХдсад ссХсХддаХХ сассХХсадх асаддаааад дхсхддадхд ддХсхсаддх ддсхссдхда адддссдахх саасахсхсс саааХдааса дссХдададс сддддасасд хддхасддсх ххдасхасхд дддссаддда <210> 266 <211> 357 <212> ДНК ххддхасадс ехддддддхе ссхдадасхс 60 адсхасдаса хдсасхдддх ссдссаадсх 120 аххддХасхд схддхдасас ахасхахсса 180 ададаааахд ссаадаасхс сххдхахсхх 240 дсХдХдХаХХ асХдХдсаад ададддсадс 300 асссхддхса ссдхсхссхс а 351

- 211 023555 <213> ното Бартепз <400> 266 саддхдсадс ХддХддадХС Хдддддаддс хссХдХдсад сдХсХддаХХ сассХХсадХ ссаддсаадд ддсхддадхд ддхддсадхх дсадасхссд хдаадддссд аххсассахс схдсааахда асадссхдад адссдаддас дддаасхасХ асдаХахдда сдхсхддддс <21О> 267 <211> 381 <212> ДНК <213> ното Бартепз <4ОО> 267 даддхдсадс хддхддадХс хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсхддадхд ддххддссдх дасхасдсхд сасссдхдаа аддсадаххс схдхахсхдс ааахдаасад ссхдааааас дааддхсссх асадхаасха сдддхасхас ассасддхса ссдхсхссхс а <21О> 268 <211> 357 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 268 саддхдсадс хддхддадХс хдддддаддс хссхдхдсад сдхсхддахх сассххсадх ссаддсаадд ддсхддадхд ддхддсадхх дсадасхссд хдаадддссд аххсассахс сХдсаааХда асадссхдад адссдаддас хсааасххсх асдаХахдда сдХсХддддс <210> 269 <211> 390 <212> днк <213> Ното БартепБ <400> 269 даддхдсадс ХддхддадХс Хдддддаддс хссхдхдсад ссхсхддахх сасхххсаах ссадддаадд ддсхддадхд ддххддссдх дасхасдсхд сасссдхдаа аддсадаххс схдхахсхдс ааахдаасад ссхдаааасс дааХаХХасс аХаХХХХдас ХддХХсдХХс ддссааддда ссасддХсас сдХсХссХса <210> 270 <211> 351 <212> ДНК <213> Ното БартепБ <400> 270 саддхдсадс гдсаддадхс дддсссадда ассХдсасХд ХсХсХддХдд сХссаХсадХ дссдддаадд дасхддадХд даХХдддсдХ сссХсссХса ададхсдаах сахсахдхса аадсХдадсХ сХдХдассдс сдсддасасд дхддХссадс схдддаддхс ссХдадасХс 60 адсХаХддса ХдсасХдддх ссдссаддсХ 120 ахахддхахд ахддаадхаа хдаахасхах 180 хссададаса аххссаадад сасдсхдхах 240 асддсхдхдх аххасхдхдс дсасхсдхсс 300 саадддасса сддХсассдХ сХссХса 357 ххддхададс схддддддхс ссххадасхс 60 ассдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх 120 аххаааадса ааасхдахдд хдддасааса 180 ассахсхсаа дадахдаххс аааааасасд 240 даддасасад ссдхдхахха схдхассаса 300 хасхасддХд хддасдХсхд дддссааддд 360

381 дхддхссадс схдддаддхс ссхдадасхс 60 адсхахддса ХдсасХдддх ссдссаддсх 120 ахахддхахд ахддаадхаа саааХасхах 180 хссададаса аххссаадаа сасдсхдхах 240 асддсхдхдх аххасхдхдс дадсадсхсд 300 саадддасса сддХсассдХ сХссХса 357

ХХддХааадс сХддддддХс ссХХасасХс 60 аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх 120 аххаааадса ааасхдахдд хдддасааса 180 ассахсхсаа дадахдаххс аааааасасд 240 даддасасад ссдхдхахха схдхассаса 300 ХасХасХссХ асХасддХаХ ддасдХсХдд 360

390 схддхдаадс сххсддадас ссхдхсссхс 60 ааххасхасх ддадсХддаХ ссддсадХсс 120 аХсХаХасса дХдддадсас ссасхасаас 180 дхддасасдх ссаадаасса дххсхсссхд 240 дссдХдХаХХ асхдхдсдад адаХсдадХс 300

- 212 023555

ххсхасддха	хддасдхсхд	дддссааддд	ассасддХса	ссдХсХссХс	а	351
<21О> 271
<211> 363
<212> ДНК
<213> Ното	Бар-ΐ епз
<400> 271
саддхдсадс	хддхддадхс	хдддддаддс	дхддхееаде	схдддаддхс	ссхдадасхс	60
ХссХдХдсад	сдХсХддаХХ	сассХХсадХ	адсХаХддса	хдсасхдддх	ссдссаддсх	120
ссаддсаадд	ддсХддадХд	ддХддсадХХ	аХаХддХахд	аХддаадхха	ХаааХасхах	180
дсадасхссд	хдаадддссд	аххсассахс	хссададаса	аххссаадаа	сасдсхдхах	240
схдсааахда	асадссхдад	адссдаддас	асддсхдхдх	аХХасХдХдс	дададааддд	300
даХХасХссд	асХасХасдд	хахддасдХс	хддддссаад	ддассасддх	сассдХсхсс	360
Хса						363
<210> 272
<211> 387
<212> ДНК
<213> Ното	Барт епз
<400> 272
саддХссадс	ХддХасадхс	хддддсХдад	дХдаадаадс	схддддссхс	адхдааддхс	60
хссхдсаадд	хххссддаха	сасссхсасх	дааххахсса	хдсасхдддх	дсдасаддсх	120
ссхддаааад	ддсХХдадХд	даХдддаддх	ХХХдаХссХд	аадаХддХда	аасааХсХас	180
дсасадаадХ	Хссадддсад	адХсассахд	ассдаддаса	саХсХасада	сасадхххас	240
ахддадсхда	дсадссхдад	ахсхдаддас	асддссдхдх	аххасхдхдс	аасаддддхх	300
ахдаххасдх	ххдддддадх	ХаХсдХХддс	сасХссХасХ	асддХахдда	сдХсХддддс	360
саадддасса	сддХсассдх	схссхса				387
<210> 273
<211> 372
<212> ДНК
<213> Ното	Бартепз
<400> 273
саддхссадс	ХддХасадХс	ХддддсХдад	дХдаадаадс	сХддддссХс	адХдааддХс	60
хссхдсаадд	хххссддаха	сасссхсасх	дааххахсса	хдсасхдддх	дсдасаддсх	120
ссхддаааад	ддсххдадхд	даХдддаддх	хххдахссхд	аадахддхда	аасаахсхас	180
дсасадаадХ	Хссадддсад	адхсассаХд	ассдаддаса	саХсХасада	сасадссхас	240
ахддадсхда	дсадссхдад	ахсхдаддас	асддссдхдх	аХХасХдХдс	аасаадддсх	300
ддаасдасдХ	ХддссХасХа	схасхасдсх	ахддасдхсх	ддддссаадд	дассасддхс	360
ассдхсхссх	са					372
<210> 274
<211> 348
<212> ДНК
<213> Ното	Барт епз
<400> 274
саддхдсадс	хдсаддадхс	дддсссадда	схддхдаадс	сххсддадас	ссхдхсссхс	60
ассХдсасХд	ХсХсХддХдд	схссахсадх	адххасхасх	ддадсхддах	ссддсадссс	120
ссадддаадд	дасхддадхд	даххдддхах	ахсхаххаса	дХдддаасас	саасхасаас	180
сссхсссхса	ададхсдахх	сассххахса	ахадасасдх	ссаадаасса	дххсхсссхд	240
аддсхдадсх	схдхдассдс	хдсддасасд	дссдхдхахх	асхдхдсдхд	хахадсаасх	300
сддсссХХХд	асХасХдддд	ссадддаасс	сХддХсассд	ХсХссХса		348

<210> 275 <211> 357 <212> ДНК <213> Ното Бартепэ

- 213 023555 <400> 275 саддхдсадс хддхддадхс хдддддаддс хссхдхдсад сдхсаддахх сассххсахс ссаддсаадд ддсхддадхд ддхддсадхх дсадасХссд Хдаадддссд аХХсассаХс сХдсаааХда асадссхдад адссдаддас ддсдасХасХ асддХаХдда сдХсХддддс <210> 276 <211> 357 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 276 саддхссадс ХддхасадХс ХддддсХдад Хссхдсаадд ХХХссддаХа сасссХсасХ ссХддаааад ддсХХдадХд дахдддаддх дсасадаадх Хссадддсад адХсассаХд ахддадсхда дсадссхдад ахсхдаддас сХддаааХас ддхддххсда ссссхддддс <21О> 277 <211> 360 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 277 саддхдсадс хдсаддадхс дддсссадда ассХдсасХд ХсХсХддХдд схссаХсадс садсасссад ддаадддссХ ддадхддахх ХасаасссдХ сссХсаадад ХсдасХХасс хсссхдаддс хдадсхсхдх дасххссдсд дассхсхасд дХдасХасХХ ХдасХасХдд дхддхссадс сХдддаддХс ссХдадасхс 60 адсхахддса хдсасхдддх ссдссаддсх 120 ахахддхахд ахддаадхаа хааахасхах 180 Хссададаса аХХссаадаа сасдсХдХах 240 асддсхдхдх аххасхдхдс ддахадсадХ 300 саадддасса сддХсассдХ схссхса 357 дХдаадаадс сХддддссХс адХдааддХс 60 дааХХахсса ХдсасХдддХ дсдасаддсх 120 ХХХдаХсеХд аадаХддхда аасаахсхас 180 ассдаддаса саХсХасада сасадссХаХ 240 асддссдХдХ аххасхдхдс аасадсдддд 300 садддаассс ХддХсассдХ сХссхса 357 схддхдаадс сххсасадас ссхдхсссхс 60 адхддхддхх асХасхддад схддахссдс 120 дддхасахсх сххасадхдд ддасассхас 180 аХаХсадХад асасдХсХаа дсассадХХс 240 дасасддссд хдхаххасхд хдсдадхсха 300 ддссадддаа сссхддхсас сдхсхссхса 360 <210> 278 <211> 375 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 278 саддххсадс ХддХдсадХс ХддадсХдад хссхдсаадд сххсхддхха сассххаасс ссхддасаад ддсххдадхд дахдддахдд дсасадаадх хссадддсад адхсассахд ахддадсхда ддадссхдад ахсхдасдас ддаххасхад ддХХсдддда асХсдадддд дхсассдхсх ссхса <210> 279 <211> 390 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 279 даддХдсадс ХддХддадХс Хдддддаддс хссхдхдсад ссхехддахх сасхххсадх ссадддаадд ддсхддадхд ддХХддссдх дасхасдсхд сасссдХдаа аддсадаххс сХдХаХсХдс аааХдаасад ссхдаааасс даахаххасд дхаххдхдас ХддХХсдХХХ ддссааддда ееасддтсас сдхсхссхса дХдаадаадс сХддддссХс адХдааддХс 60 адсХаХддХа ХсадсХдддХ дсдасаддсс 120 ахсадсдсхх асаахддхаа сссааасхах 180 ассасадаса сахссасдад сасадссхас 240 асддссдХдХ аххасхдхдс дададахсад 300 сХсХХХдасХ асХддддсса дддаасссХд 360

375

ХХддХааадс сХддддддхс ссххадасхс 60 аасдссхдда хдадсхдддх ссдссаддсх 120 аХХаааасса ааасХдаХдд Хдддасааса 180 ассаХсхсаа дадаХдаХХс асаааасасд 240 даддасасад ссдхдхахха схдхассаса 300 хаххасхасх асхасддхах ддасдхсхдд 360

390

- 214 023555 <210> 280 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 280 дасахссада хдасссадхс хссахссхсс схдхсхдсах схдхаддада сададхсасс 60 ахсасххдсс аддсдадхса ааасаххадс аасхххххад аххддхахса дсадааасса 120 дддааадссс схаассхссх дахсхасдах дсахссдахх хддаХссадд ддхсссаХса 180 аддххсадхд даадХддахс Хдддасадах хххасхххса ссахсадсад ссхасадссх 240 даадаХаХХд саасахахха сХдХсаасад хахдххадхс хсссдсХсас хххсддсдда 300 дддассаадд хддадахсаа а 321 <210> 281 <211> 336 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 281 даХааХдХда хдасссадас хссасхсхсх схдхссдхса ссссхддаса дссддссхсс 60 ахсхссхдса адхсдадхса дадссхссхд сахадхдахд ддаадассХа хххдхаххдд 120 хассхдсада адссаддсса дссхссасад схссхдахсх ахдаадсххс саассддххс 180

ХсХддадХдс садаХаддХХ садхддсадс дддхсаддда садахххсас асХдааааХс 240 адссдддхдд аддсхдадда хдххддддхх хаххасхдса хдсааадхах асадсххссх 300 схсасхххсд дсддадддас сааддхддад ахсааа 336 <210> 282 <211> 321 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 282 дасахссада хдасссадхс хссахссхсс схдхсхдсах схдхаддада сададхсасс 60 аХсасХХдсс аддсдадхса ддасаХХаас аасХаХХХаа аХХддХаХса дсадааасса 120 дддааадссс сХаадсхссх даХсхасдах дсаХссаахх хддаааХадд ддхсссаХса 180 аддххсадхд даадХддахс Хдддасадах ххсаххххса ссахсадсад Хсхдсадссх 240 даадаХаХХд саасахахха сХдХсаасад хаХдаХааХХ хсссдХХсас хххсддсдда 300 дддассаадд хддадахсаа а 321 <210> 283 <211> 318 <212> ДНК <213> Ното БартепБ <400> 283 дасаХссада хдасссадХс хссахссхсс схдхсхдсах схдхаддада сададхсасс 60 ахсасххдсс аддсдадхса ддасаххаас аасхахххаа аххддхахса дсадааасса 120 дддааадссс сХаадсХссХ дахсХасдаХ асаХссааХХ Хддаассадд ддхсссаХса 180 аддххсадхд даадХддахс Хдддасадах хххасхххса ссахсадсад ссХдсадссХ 240 даадаХаХХд саасаХаХХа сХдХсаасаа ХаХдаХааХс ХссХсассХХ сддссааддд 300 асасдасХдд аааХХааа 318 <210> 284 <211> 318 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 284 дасахссада ахсасххдсс дддааадссс хдасссадхс аддсдадхса схааасхссх хссахссхсс ддасаххадс дахсхасдах схдхсхдсах аасхахххаа дсахссаахх схдхаддада аххддхахса

Хддааасадд сададхсасс дсахааасса ддхсссаХса

120

180

- 215 023555 аддххсадхд даадХддахс хдддасадах даадахаххд саасахахха схдхсаасад ассааддХдд адахсааа <210> 285 <211> 318 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 285 дасаХссада хдасссадХс Хссахссхсс ахсасххдсс аддсдадхса ддасаХХадс дддааадссс схаадххссх дахсхасдах аддХХХадхд даадХддахс хдддасадах даадахаххд саасахахха схдхсаасад асасдасхдд адаХХааа <210> 286 <211> 339 <212> днк <213> Ното Бартепз <400> 286 дасаХсдХда ХдасссадХс ХссадасХсс ахсаасхдса адхссадсса дадхдхххха хддхассадс адааассадд асадссхссх даахссдддд хсссхдассд аххсадхддс аХсадсадсс хдсаддсХда адаХдхддса ссаххсасхх ХсддсссХдд дассааадХд <210> 287 <211> 318 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 287 дасахссада хдасссадХс хссахссхсс ахсасххдсс аддсдадхса ддасаХХадс дддааадссс схааасхссх дахсхасдах аддххсадхд даадХддахс хдддасадах даадахаххд саасахахха схдхсаасад ассааддХдд адахсааа <210> 288 <211> 339 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 288 дасахсдхда хдасссадхс ХссадасХсс ахсдасхдса адхссадсса дддхдхххха хддхассадс адааассадд асадссхссх даахссдддд хсссхдхссд аххсадхддс аХсадсадсс хдсаддсХда адахдхддса ссаххсасхх хсддсссхдд дассааадхд <21О> 289 <211> 321 <212> ДНК <213> ното Бартепз <4ОО> 289

ХХХасХХХса ссахсадсад ссХдсадссХ 240 хахдахаахс хдсхсассхх сддсддаддд 300

318 схдхсхдсах схдхаддада сададхсасс 60 аасХаХХХаа аХХддХаХса дсадааасса 120 дсахссаахх хддааасадд ддхсссахса 180 ХХХасХХХса ссахсадсад ссХдсадссХ 240 хахдахаахс хдахсассхх сддссааддд 300

318 схддсХдХдХ сХсХдддсда дадддссасс 60 дасадсхссд асаахаадаа схасххадсх 120 аадсХдсХса ХХХасХдддс ахсХаассдд 180 адсдддхсхд ддасадаххх схсхсхсасс 240 дхххаххасх дхсадсааха ХХаХадХдаХ 300 даХаХсааа 339 схдхсхдсах схдхаддхда сададхсасс 60 аасхахххаа аХХддХаХса асадааасса 120 дсахссаахх хддааасадд ддХсссаХса 180 хххасхххса ссахсадсад ссхасадссх 240 хахдаХааХс хдсхсасххх сддсддаддд 300

318 схддсхдхдх схсхдддсда дадддссасс 60 дасадсхсса асаахаадаа сххсххадсх 120 аадсхдсхса хххасхдддс ахсхаассдд 180 адсдддхсхд ддасадаххх сасхсхсасс 240 сХХХаХХасх дхсадсааха ХХаХадХдаХ 300 дахахсааа 339

- 216 023555 дасахссада хдасссадхс хссахссхсс аХсасХХдсс дддсаадХса дадсаХХадХ дддааадссс сХаассХссХ даХсХаХдсХ аддххсадхд дсадхддахс хдддасадах даадаххххд саасххасхх схдхсаасад дддассааад ХддаХаХсаа а <210> 290 <211> 318 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 290 дасахссада хдасссадхс ХссаХссХсс ахсасххдсс аддсдадхса ддасаххадс дддааадссс схаадсХссХ дахсхасдах аддххсадхд даадхддахс хдддасадах даадахаххд саасахахха схдхсаасад ассааддхдд адахсааа <210> 291 <211> 318 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 291 дасаХссада хдасссадХс хссахссхсс аХсасХХдсс аддсдадХса ддасаХХадс дддааадссс сХааддХссХ даХсХасдаХ аддххсадхд даадхддахс хдддасадах даадаХаХХд саасаХаХХа схдхсаасад ассааддхдд адахсааа <210> 292 <211> 339 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 292 дасахсдхда хдасссадхс хссадасхсс ахсдасхдса адхссадсса дадхдхххха Хддхассадс адааассадд асадссХссХ даахссдддд хсссхдассд аххсадхддс ахсадсадсс ХдсаддсХда адахдхддса ссаХХсасХХ хсддсссхдд дассааадХд <210> 293 <211> 333 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 293 даааххдхдх хдасдсадхс хссаддсасс схсхссхдса дддссадХса дадхдххадс садсадааас схддссаддс хсссаддсхс ддсахсссад асаддххсад хддсадхддд адасХддадс сХдаадаХХХ ХдсадХдХаХ ассххсддсс аадддасасд асхддадахх <210> 294 <211> 321 <212> ДНК сХдХсХдсаХ сХдХаддада сададХсасс 60 дасХаХХХаа аХХддхаХса дсадааасса 120 дсахссадХХ ХдсададХдд ддхсссахса 180 ххсасхсхса ссахсадсад хсхдсаассх 240 асххасадхд асссаххсас хххсддсссх 300

321 сХдХсхдсаХ сХдХаддада сададхсасс 60 аасхахххаа аххддхахса дсадааасса 120 дсахссаахх хддааасадд ддхсссахса 180 хххасхххса ссахсадсад ссХасадссХ 240 хахдахаахс хдсхсасххх сддсддаддд 300

318 сХдХсхдсаХ сХдХаддада сададхсасс 60 аасХаХХХаа аХХддХаХса дсадааасса 120 дсаХссааХХ Хддааасадд ддхсссахса 180 хххасхххса ссахсадсад ссхдсадссх 240 хахдахаахс хссХсасХХХ сддсддаддд 300

318 схддсхдхдх схсхдддсда дадддссасс 60 дасадсхсса асаахаадаа сххсххадсх 120 аадсХдсХса ХХХасХдддс аХсХаассдд 180 адсдддхсХд ддасадаХХХ сасхсХсасс 240 дхххаххасх дхсадсааха ххахадхдах 300 даХаХсааа 339 схдхсхххдх схссадддда аададссасс 60 адсддсхасх хадссхасхх адссхддхас 120 схсахсхахд дхдсахссад сасддссасх 180 ХсХдддасад асххсасхсх сассаХсадс 240 ХасХдХсадс адХаХддХад сХсассдаХс 300 ааа 333

- 217 023555 <213> Ното ЗартепБ <4ОО> 294 дасахссада ХдасссадХс ХссаХссХсс аХсасХХдсс аддсдадхса ддасаххадс дддааадссс схаадсХссх даХсХасдах аддххсадхд даадхддахс хдддасадах даадаХаХХд саасахахха схдхсаасад дддассааад хддахахсаа а <210> 295 <211> 318 <212> ДНК <213> Ното ЗартепБ <400> 295 дасахссада ХдасссадХс ХссаХссХсс аХсасХХдсс аддсдадхса ддасаХХадс дддааадссс схааасхссх даХсХасдах аддххсадхд даадхддахс хдддасадах даадаххххд саасахахха схдхсаасад ассааддХдд адахсааа <210> 296 <211> 321 <212> ДНК <213> ното ЗартепБ <400> 296 дасахссада хдасссадхс хссахссхсс аХсасХХдсс аддсдадхса ддасаххадс ддаааадссс схаадсхссх дахсхасдах аддХХсадХд даадхддахс Хдддасадах даадахаххд саасахахха схдхсаасдд дддасасдас хддадаХХаа а <210> 297 <211> 318 <212> ДНК <213> ното 5артеп5 <400> 297 дасахссада хдасссадхс хссахссхсс аХсасХХдсс аддсдадхса ддасаххадс дддааадссс схаадсхссх дахсхасдах аддххсадхд даадхддахс хдддасадах даадахаххд саасахахха схдхсаасад ассааддХдд адахсааа <210> 298 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното 5артеп5 <400> 298 дасахссада хдасссадхс хссахссхсс ахсасххдсс дддсдадхса дддсхххадс дддааадххс схаадсхссх даХсХаХдсХ сддххсадхд дсадхддаХс хдддасадах даадахдххд саасххахха схдхсаааад дддассаадд хддадахсаа а сХдХсХдсаХ схдхаддада сададхсасс 60 аасхххххаа аххддхахса дсададасса 120 дсаХссааХХ Хддааасадд ддХсссахса 180 хххасхххса ссахсадсад ссхдсадссх 240 хахдахаахс хсссаххсас хххсддсссх 300

321 сХдХсХдсаХ сХдХаддада сададХсасс 60 аасхахххаа аххддхахса дсадааасса 120 дсаХссааХХ Хддааасадд ддХсссахса 180 хххасхххса ссахсадсад ссхдсадссх 240 хахдахаахс хссхсасххх сддсддаддд 300

318 схдхсхдсах схдхаддада сададхсасс 60 аасхахххаа аххддхахса дсадааасса 120 дсахссаахх хддааасадд ддХсссахса 180 ХХХасХХХса ссахсадсад ссхдсадссх 240 хахдахдахс хсссдахсас сххсддссаа 300

321 схдхсхдсах схдхдддада сададхсасс 60 аасхахххаа аххддхахса дсададасса 120 дсахссаахх хддааасадд ддХсссахса 180 хххасхххса ссахсадсад ссхдсадссх 240 хахдахаахс хдсхсасххх сддсддаддд 300

318 схдхсхдсах схдхаддада сададхсасс 60 ааХХаХХХад ссхддхахса дсадааасса 120 дсаХссасХХ ХдсадХсадд ддХсссаХсХ 180 ХХсасХсХса ссахсадсад ссхдсадссх 240 хахаасадхд ссссдсхсас хххсддсдда 300

321

- 218 023555 <210> 299 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 299 дасахссада ахсасххдсс дддааадххс сддххсадхд даадахдххд дддассааад

ХдасссадХс дддсдадхса схсадсхссх дсадхддахс саасххахха хддахахсаа

ХссаХссхсс дддсаХХаас даХсХаХдХХ хдддасадах схдхсаааад ехдхсхдеах ааХХаХХХад дсаХссасХХ ххсасхсхса

ХаХаасадХд схдхаддада ссХддХаХса

ХдсааХсадд ссахсадсад дсссаХХсас сададхсасс 60 дсадааасса 120 ддхсссахсх 180 ссхдсадссх 240 ХХХсддсссХ 300

321 <210> 300 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 300 дасахссада ахсасххдсс дддааадссс аддххсадхд даадаХХХХд дддассаадс

ХдасссадХс дддсаадхса сХаассХссХ дсадхддахс саасххасха

ХддадаХсаа

ХссаХссХсс дадсаххадс даХссаХдсХ хдддасадах сХдХсаасад сХдХсХдсаХ аддхахххаа дсаХссадХХ ххсасхсхса адххасахха схдхаддада аххддхахса

ХдсааадХдд ссахсадсад ссссХсссад сададхсасс 60 дсадааасса 120 ддхсссахса 180 хсхдсаассх 240 ХХХХддссад 300

321 <210> 301 <211> 321 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 301 дасаХссада аХсасХХдсс дддааадссс аддххсадсд даадаххххд дддасасдас

ХдасссадХс дддсаадхса схаадсдссх дсадХддахс саасххахха

ХддадаХХаа хссаХссХсс дддсаХХада дахсхатдсх

Хдддасадаа схдхсхасад сХдХсХдсаХ ааХдаХХХад дсахссадхх

ХХсасХсХса хахаахадхх схдхаддада асХддХаХса хдсааадхдд сааХсаасад асссдахсас сададхсасс 60 дсадааасса 120 ддхсссахсх 180 ссХдсадссХ 240 сххсддссаа 300

321 <210> 302 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 302 дасахссада ахсасххдсс дддааадссс аддххсадхд даадаХаХХд дддассаадд хдахссадхс аддсдадхса схаадххссх даадхддахс саасаХаХХа хддадахсаа хссххссхсс сдасаххадс даХсХссдах хдддасадах сХдХсаасад ехдхсхдеах аасхахххаа дсаХссаахх хххасхххса

ХахдаХааХс схдхсддада аххддхахса хддааасадд ссахсадсад

ХсссдсХсас сададхсасс 60 дсадааасса 120 ддхсссахса 180 ссхдсадссх 240 хххсддсдда 300

321 <210> 303 <211> 336 <212> ДНК <213> ното Бартепг <400> 303 дахаххдхда хдасхсадхс хссасхсхсс схдсссдхса ссссхддада дссддссхсс 60 ахсхссхдса ддХсХадХса дадссхссхд саХадХааХд даХасаасХа ХХХддаХХдд 120 хассхдсада адссадддса дхсассасад ххссхдахсх ахххдддххс хаххсдддсс 180 Хссддддхсс сХдасаддХХ садхддсадх ддаХсаддса садаххххдс асХдасааХс 240

- 219 023555 адсададХдд аддсХдадда ХдХХддддХХ ХаХХасХдса хдсаадсхсх асааасхссх 300 сддасдХХсд дссаадддас сааддХддаа ахсааа 336 <210> 304 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 304 даааХХдХдс Хдасхсадхс хссадасххх садхсхдхда схссааадда дааадхсасс 60 ахсассхдсс дддссадхса дхасаххддх адхадсххас асХддХасса дсадасасса 120 дахсадхсхс сааадсхссх сахсаасхах дхххсссадх ссххсхсадд ддхссссхсд 180 аддХХсадХд дсадхддахс хдддасадах ххсасссхса ссахсаахад ссхддаадсх 240 даадаХдсХд саасдхахха схдхсахсад адхадхадхх хассаххсас ххтсддсссх 300 дддассааад хддахахсаа а 321 <210> 305 <211> 339 <212> ДНК <213> Ното Бартепз <400> 305 дасахсдхда хдасссадХс Хссадасхсс сХддсХдХдХ сХсХдддсдс дадддссасс 60 ахсхссхдса адхссадсса дадхдхххха хасадсхсса асаахаадаа схасххадсх 120 хддхассадс адааассадд ссадссхссх аадсхдсхса хххасхдддс ахсхасссдд 180 даахссдддд хсссхдассд аххсадхддс адсдддХсХд ддасадаХХХ сасХсХсасс 240 аХсадсассс ХдсаддсХда адахдхддса дхххаххасх дХсадсааХа ххахасхасх 300 ссхссдасдх хсддссаадд дассааддхд даааХсааа 339 <210> 306 <211> 318 <212> ДНК <213> ното Барт епэ <400> 306 дасахссада хдасссадхс хссахссхсс схдхсхдсах сХдХаддада сададХсасс 60 ахсасххдсс аддсдадхса ддасаххаас аасхахххаа аххддхахса асадааасса 120 дддааадссс схааасхссх дахсхасдах дсахссаахх хддааасадд ддхсссахса 180 аддХХсадХд даадХддахс хдддасадах хххасхххса ссахсадсад сстдсадссх 240 даадахаххд саасахахха СХдХсаасад хаХдаХдаХс ХдсХсасХХХ сддсддаддд 300 ассааддхдд адахсааа 318 <210> 307 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепг <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 4 <223> Хаа = РЬе или ьеи <400> 307

С1у Туг ТКг Хаа ТЬг Бег Туг С1у Не Бег 1 5 10 <210> 308 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> ното Бартепз

- 220 023555 <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 9 <223> Хаа = ТНг или Рго <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 15 <223> Хаа = ьеи или РНе <400> 308

Тгр Пе Бег А1а Туг Азп с1 у Азп Хаа Азп Туг А1а С1п Ьуз Хаа С1п 15 10 15

С1у

<210> <211> <212> <213>	309 16 БЕЛОК ното Бартепз
<220>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	1
<223>	Хаа = б1и или А5р
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	2
<223>	хаа = Бег или б!п
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	3
<223>	хаа = С1у или отсутствует
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	4, 5
<223>	Хаа = ьеи или отсутствует
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	6
<223>	хаа = тгр или с1у
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	10
<22 3>	хаа = Уа1 или ьеи
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	(11)... (11)
<22 3>	Хаа = с!и или отсутствует
<22О>
<221>	ВАРИАНТ

- 221 023555 <222> (12)...(12) <223> Хаа = о!у или отсутствует <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> (13)...(13) <223> Хаа = РКе или Ьеи <400> 309 хаа хаа хаа хаа хаа хаа РКе б!у с1и хаа хаа хаа хаа РКе Азр туг 15 10 15 <210> 310 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 4 <223> Хаа = С1п или Бег <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 8 <223> хаа = Аэр или Туг <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 11 <223> Хаа = Азп или Азр <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 15 <223> хаа = РКе или туг <400> 310

Ьуз Бег Бег хаа С1у 7а1 1_еи хаа Бег Бег хаа Азп Ьуз Азп Хаа Ьеи 15 10 15

А1а <210> 311 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепг <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 4 <223> Хаа = Азп или ТКг <400> 311

Тгр А1а Бег Хаа Агд С1и Бег 1 5 <210> 312

- 222 023555

<211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Зартепз
<220> <221>	ВАРИАНТ
<222>	5
<22 3>	хаа = зег	ИЛИ	ТНг
<220> <221>	ВАРИАНТ
<222>	6
<223>	Хаа = Азр	или	ТНг
<22О> <221>	ВАРИАНТ
<222>	8
<223>	хаа = РНе	или	Рго
<400>	312
ΟΊ п Οίη Туг Тур	хаа	Хаа Рго Хаа тНг

5

<210>	313
<211>	10
<212>	БЕЛОК
<213>	Ното Зартепз
<220>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	4
<223>	Хаа = РНе	или	Уа1
<220>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	5
<223>	хаа = зег	или	Азп
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	6
<223>	хаа = Азп	или	ТНг
<400>	313
С1у РНе ТНг Хаа	Хаа	Хаа А1а Тгр	МеХ Зег
1		5		10
<210>	314
<211>	19
<212>	БЕЛОК

<213> Ното 5ар1епз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 4 <223> Хаа = Зег или ТНг <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 9

- 223 023555

<223> Хаа = с!у или тгр
<22О> <221> <222> <223>	ВАРИАНТ 11 хаа - тпг	ИЛИ	а! а
<220> <221> <222> <223>	ВАРИАНТ 13 хаа = туг	или	Азп
<400> 314 Агд Пе Туз хаа	ЬУ5	ТЬг Аэр о!у Хаа тНг хаа Азр хаа А!а А!а Рго

10 15

Уа! Туз С! у <210> 315 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 1 <223> Хаа = С1и, Азр или С1у <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 2 <223> Хаа = Туг, Ьеи или отсутствует <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 3 <223> Хаа = Туг, Агд или с!у <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 4 <223> хаа = нтз, с1у, Бег, или отсутствует <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 5 <223> Хаа = Пе, а!а, ьеи, или отсутствует <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 6 <223> Хаа = теи, Уа!, туг, Рго или отсутствует <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (7)...(7) <223> Хаа = ТНг, Уа!, Туг, с!у, Тгр, или отсутствует

- 224 023555

<22О> <221> ВАРИАНТ <222> (8). ..(8) <223> хаа = с!у, Уа!, Бег, или тЬг
<220> <221>	ВАРИАНТ
<222>	(9)... (9)
<223>	хаа = Бег, тКг,	Азр, АЗП,	или	01 у
<22О> <221>	ВАРИАНТ
<222>	(10)...(10)
<223>	хаа = о1у, РКе,	РГО, или	туг
<22О> <221>	ВАРИАНТ
<222>	(11)...(11)
<223>	Хаа = 61 у, туг,	ИЛИ АЗП
<220> <221>	ВАРИАНТ
<22 2>	(12)...(12)
<22 3>	хаа = уа! или туг
<22О> <221>	ВАРИАНТ
<222>	(13)...(13)
<223>	хаа = тгр, Бег ι	или туг
<220> <221>	ВАРИАНТ
<222>	(17)...(17)
<223>	хаа = мет, тКг,	или Уа!
<400>	315
Хаа хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа	хаа	Хаа хаа	хаа хаа Туг туг с1у
1	5			10	15
хаа Азр Уа!

<210> 316 <211> И <212> БЕЛОК <213> ното Бартелз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 7 <223> хаа = Бег или Азп <400> 316

С1п А1а Бег С1п Азр 11е Хаа Абп Туг Ьеи Абп 15 10

- 225 023555

<210> 317 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ногтю Бартепг
<220> <221> <222> <223>	ВАРИАНТ 2 хаа = А1а	ИЛИ	ТНг
<220> <221> <222> <223>	ВАРИАНТ 7 хаа = тНг	или	РГО
<400> 317 Азр Хаа Бег Азп	1_еи	С1и хаа

5

<210> <211> <212> <213>	318 8 БЕЛОК Ното Бартепз
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	5
<223>	Хаа = азп или Азр
<220>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	7
<223>	хаа = ьеи или 11е
<400>	318
С1п С1п Туг Азр Хаа Ьеи
1	5
<210>	319
<211>	10
<212>	БЕЛОК

<213> ното Бартепз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 5 <223> хаа = Бег или 11е <400> 319

С1у РНе тНг РНе хаа Бег туг С1у мех Нтз 1 5 10 <210> 320 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <220>

- 226 023555 <221> ВАРИАНТ <222> 9 <223> хаа = 01 и или Ьуз <400> 320

Уа1 IIе Тгр Туг Азр 01у 5ег Азп Хаа Туг туг А1а Азр Бег УаТ ьуз 15 10 15

О1у

<210>	321
<211>	10
<212>	БЕЛОК
<213>	ното Бартепз
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	3
<223>	хаа = 01 у, Бег или	Тгр
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	4
<223>	хаа = Азп, Аьр или	Бег
<22О>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	5
<223>	хаа = Туг или РЬе
<220>
<221>	ВАРИАНТ
<222>	7
<223>	хаа = Азр или с1у
<400>	321
Бег Бег Хаа хаа хаа туг хаа мет
1	5

Азр

УаТ

<210>	322
<211>	11
<212>	БЕЛОК
<213>	ното Бартепз
<220> <221>	ВАРИАНТ
<222>	4
<223>	хаа = оТп	или	НТ 5
<220> <221>	ВАРИАНТ
<222>	7
<223>	хаа = Бег	или	А5П
<22О> <221>	ВАРИАНТ
<222>	9
<223>	хаа = РЬе	или	Туг
<400>	322

- 227 023555

СТп АТа Бег хаа Азр Не хаа Азп хаа ьеи Азп 1 5 10 <210> 323 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 7 <223> хаа = тНг или Пе <400> 323

Азр А1а зег азп ьеи с1и хаа 1 5 <210> 324 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 2 <223> Хаа = сТп или Агд <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 5 <223> хаа = Азп или Азр <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 6 <223> Хаа = ьеи или РНе <22О>

<221> ВАРИАНТ <222> 8 <223> хаа = РНе, ьеи или Не <400> 324

Οίη Хаа туг Азр Хаа хаа Рго Хаа тНг 1 5 <210> 325 <211> 12 <212> ДНК <213> ното Бартепз <400> 325 дддаааддда аа 12 <210> 326 <211> 203 <212> БЕЛОК <213> Ното Бартепз

- 228 023555

<400> 326

11 е

рго

Уа1

11 е

61 и

Рго

Ее г

Уа1

Рго

б! и

ьеи

Уа!

Уа!

Ьуз

Рго

б!у

1

5

10

15

А1а

тНг

Уа1

ТНг

ьеи

Агд

Суз

Уа1

61 у

АЗП

б1у

Бег

Уа!

с! и

Тгр

Азр

20

25

30

б1у

Рго

Рго

Ее г

Рго

нтз

Тгр

тНг

ьеи

Туг

Еег

АЗр

б1у

Еег

Бег

Еег

35

40

45

Пе

ьеи

Еег

ТНг

АЗП

А5П

А1а

ТНг

РНе

б!п

Азп

ТНг

б1у

тНг

туг

Агд

50

55

60

СУ5

ТНг

б!и

Рго

б1у

АЗР

рго

ьеи

с! у

б1у

Бег

А1а

А! а

11 е

нтз

ьеи

65

70

75

80

Туг

Уа!

ЬУ5

Азр

Рго

А1а

Агд

Рго

Тгр

Азп

Уа!

Ьеи

А1а

б1п

б! и

Уа!

85

90

95

Уа1

Уа1

РНе

61 и

А5р

б!п

АЗр

А! а

Ьеи

Ьеи

РГО

суз

Ьеи

Ьеи

ТНг

АЗр

100

105

110

Рго

Уа1

Ьеи

61 и

А! а

61 у

уа!

Ее г

ьеи

νβΐ

Агд

Уа!

Агд

61 у

Агд

РГО

115

120

125

Ьеи

мех

Агд

Нт 5

ТНг

А5П

Туг

Еег

РНе

Еег

РГО

тгр

нтз

б! у

РНе

ТНг

130

135

140

Пе

НТ5

Агд

А! а

ЬУ5

РНе

Пе

61 η

Еег

61 п

Азр

туг

61 п

суз

Еег

А! а

145

150

155

160

Ьеи

мех

61 у

61 у

Агд

ьуз

Уа1

мех

Еег

Пе

Еег

П е

Агд

Ьеи

ьуз

Уа!

165

170

175

61 η

ЬУ5

Уа!

11 е

РГО

б1у

Рго

Рго

а! а

ьеи

тНг

ьеи

Уа!

рго

а! а

Ьеи

180

185

190

Уа!

Агд

П е

Агд

61 у

61 и

А! а

а! а

61 η

Пе

Уа!

195 200

Claims (16)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Антигенсвязывающий белок, содержащий ν_Η и У_ь, который связывает с-Гтз. отличающийся тем, что:

   (a) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕЦ ГО N0: 77, и Уь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 109;

   (b) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 77, и У_ь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 110;

   (c) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 78, и У_ь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 133;

   (й) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 79, и У_ь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 111;

   (е) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 80, и ν содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 112;

   (Г) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 84, и У_ь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 115;

   (ё) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 85, и У_ь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 116;

   (1т) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 86, и У_ь содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 117;

   (ί) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 87, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 118;

   (ί) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 70, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 102;

   (k) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 70, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 103;

   (l) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 73, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 105;

   (т) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную ЗЕО ГО N0: 74, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную

   - 229 023555

   81%) ΙΌ N0: 106;

   (η) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕЦ ГО N0: 89, и ν^ содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 81%) ГО N0: 121;

   (о) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕЦ ГО N0: 93, и V содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 81%) ГО N0: 123;

   (Ρ) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕЦ ГО N0: 94, и V содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 81%) ГО N0: 124;

   (ς) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕЦ ГО N0: 97, и V содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 81%) ГО N0: 127;

   (г) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕЦ ГО N0: 98, и V содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 81%) ГО N0: 128;

   (б) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 8ЕЦ ГО N0: 99, и V содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную 81%) ГО N0: 129.
2. 2. Антигенсвязывающий белок по п.1, включающий 0ΌΚΉ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 147, 0ΌΚΉ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 163, СЭКИЗ. содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 186, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 193, СОКЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 214, и СОКЬ
3. 3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 228; или включающий ί'.ΌΚΗ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 137, ί'.ΌΚΗ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 150, ί'.ΌΚΗ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 166, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 198, СОКЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 216, и СОКЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 233; или включающий ί'.ΌΚΗ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 137, ί'.ΌΚΗ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 150, ί'.ΌΚΗ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 189, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 198, СОКЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 216, и СОКЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 233; или включающий ί'.ΌΚΗ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 147, ί'.ΌΚΗ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 163, ί'.ΌΚΗ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 186, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 195, СОКЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 214, и СОКЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 228; или включающий ί'.ΌΚΗ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 137, ί'.ΌΚΗ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 152, ί'.ΌΚΗ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 170, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 198, СОКЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 216, и СОКЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 233; или включающий ί'.ΌΚΗ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 147, ί'.ΌΚΗ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 163, ί'.ΌΚΗ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 186, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 194, СОКЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 214, и СОКЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 228; или включающий ί'.ΌΚΗ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 141, ί'.ΌΚΗ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 156, ί'.ΌΚΗ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 172, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 209, СОКЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 223, и СОКЬ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 245; или включающий ί'.ΌΚΗ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 143, ί'.ΌΚΗ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 160, ί'.ΌΚΗ3, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 182, СПКЬ1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 203, СОКЬ2, содержащий аминокис- 230 023555 лотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 216, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 240; или включающий СПЕНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 140, СГОЕН2. содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 155, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 169, СГОЕЕЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 202, СЭЕЕ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0:

   218, и СГОЕЕЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 236; или включающий СГОЕНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 140, СГОЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 155, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 169, СГОЕЕЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 201, СГОЕЕ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 218, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 2З6; или включающий СГОЕНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 14З, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 158, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 190, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 199, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0:

   219, и СГОЕЕЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 2З7; или включающий СГОЕНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 1З7, СГОЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 151, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 167, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 199, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 217, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 2ЗЗ; или включающий СГОЕНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 1З7, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 150, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 17З, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 198, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 216, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 2ЗЗ; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 142, СГОЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 157, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 187, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 206, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 221, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 242; или включающий СГОЕНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 14З, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 158, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 177, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 200, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 216, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 2З5; или включающий СПЕН1, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 142, СГОЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 157, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 176, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 207, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 224, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 24З; или включающий СГОЕНЕ содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 1З6, СПЕН2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 149, СГОЕНЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 171, СПЕТО, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 208, СПЕЬ2, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 222, и СПЕЬЗ, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 244.

   З. Антигенсвязывающий белок по п.1, содержащий У_Н и У_ь, отличающийся тем, что:

   (a) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 77, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 109;

   (b) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 77, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 110;

   (c) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 78, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 1ЗЗ;

   (б) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 79, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 111;

   (е) У_Н содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 80, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 112;

   - 2З1 023555 (ί) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 84, и У_ъ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 115;

   (д) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 85, и У₃ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 116;

   (к) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 86, и У₃ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 117;

   (ί) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 87, и У₃ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 118;

   (ί) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 70, и νΗ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 102;

   (k) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 70, и У[, содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 103;

   (l) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 73, и У[, содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 105;

   (т) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 74, и У₃ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 106;

   (η) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 89, и У₃ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 121;

   (о) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 93, и У₃ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 123;

   (ρ) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 94, и У[, содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 124;

   (η) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 97, и У[, содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 127;

   (г) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 98, и У[, содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 128;

   (δ) ν_Η содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 99, и У₃ содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 129.
4. 4. Антигенсвязывающий белок по п.1, в котором ν_Η является частью тяжелой цепи, а У[, является частью легкой цепи, отличающийся тем, что:

   (a) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 11, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 43;

   (b) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 11, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 44;

   (c) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 12, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 67;

   (ά) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 13, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 45;

   (е) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 14, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 46;

   (ί) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 18, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 49;

   (д) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 19, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 50;

   (к) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 20, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 51;

   (ί) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 21, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 52;

   (ί) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 4, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 36;

   (k) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 4, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 37;

   (l) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 7, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 39;

   (т) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 8, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 40;

   (η) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 23, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 55;

   (о) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 27, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 57;

   (ρ) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 28, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8Е0 ГО N0: 58;

   - 232 023555 (с.|) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 31, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в §ЕЦ ГО N0: 61;

   (г) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в §ЕЦ ГО N0: 32, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в §ЕЦ ГО N0: 62;

   (з) тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в §ЕЦ ГО N0: 33, и легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, как указано в §ЕЦ ГО N0: 63.
5. 5. Антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что полипептидная структура антигенсвязывающего белка основана на:

   (a) антителах и их фрагментах или (b) моноклональных антителах, биспецифических антителах, мини-антителах, доменных антителах, синтетических антителах, химерных антителах, гуманизированных антителах, человеческих антителах, слитых антителах и их фрагментах.
6. 6. Антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-5, который представляет собой человеческий антигенсвязывающий белок.
7. 7. Антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-6, который представляет собой антитело или его фрагмент.
8. 8. Антигенсвязывающий белок по п.7, который:

   (a) представляет собой моноклональное антитело, рекомбинантное антитело, человеческое антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело, мультиспецифическое антитело или их фрагмент;

   (b) представляет собой Ι§01-, 1§С2-, 1§03- или 1дС4-тип;

   (c) представляет собой РаЬ фрагмент, РаЬ' фрагмент, Р(аЬ')₂ фрагмент, Ρν фрагмент, димер диабоди, доменное антитело или одноцепочечную молекулу антитела или (ά) представляет собой иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина и имеет происхождение из любого млекопитающего, выбранного из человека, мыши, крысы, верблюда или кролика.
9. 9. Нуклеиновая кислота, кодирующая антигенсвязывающий белок по любому из пп.1-8.
10. 10. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.9.
11. 11. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.10 и/или нуклеиновую кислоту по п.9.
12. 12. Фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения состояния, связанного с с-Гтз. содержащая эффективное количество по меньшей мере одного антигенсвязывающего белка по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.
13. 13. Фармацевтическая композиция по п.12, дополнительно содержащая:

    (a) дополнительный активный агент, выбранный из группы, включающей радиоизотоп, радионуклид, токсин, терапевтический или химиотерапевтический препарат; или (b) дополнительный активный агент, выбранный из группы, включающей противовоспалительный агент, агент для терапии рака, агент, усиливающий рост костей (анаболический), антирезорбтивный агент, агент, ингибирующий активность остеокластов, или агент, повышающий активность остеобластов.
14. 14. Применение антигенсвязывающего белка по любому из пп.1-8 для лечения или предотвращения состояния, связанного с с-Гтз.
15. 15. Применение антигенсвязывающего белка по любому из пп.1-8 в лечении или предотвращении состояния, связанного с с-Гтз, у пациента, где состояние выбирается из рака, костного заболевания и воспалительного заболевания.
16. 16. Способ получения антигенсвязывающего белка по любому из пп.1-8, включающий культивирование клетки-хозяина по п.11 в условиях, обеспечивающих экспрессию и секрецию указанного антигенсвязывающего белка; и выделение указанного антигенсвязывающего белка.