TWI398448B - 多胜肽及抗體 - Google Patents

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TWI398448B TW095131655A TW95131655A TWI398448B TW I398448 B TWI398448 B TW I398448B TW 095131655 A TW095131655 A TW 095131655A TW 95131655 A TW95131655 A TW 95131655A TW I398448 B TWI398448 B TW I398448B
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Description

多胜肽及抗體
本案請求美國臨時專利申請案第60/713,433號，申請日2005年8月31日及美國臨時專利申請案第60/713,478號，申請日2005年8月31日之權益。美國臨時專利申請案第60/713,433號及第60/713,478號全文以引用方式倂入此處。
提供多胜肽。提供與此種多胜肽結合的抗體或抗原結合功能部位。也提供獲得可與腫瘤壞死因子(TNF)相關之細胞凋亡誘導配體(「TRAIL」)受體－2(TR－2)結合之抗體之方法，包含將至少一種此等多胜肽投予動物體，以及從該動物體獲得可與TR－2結合之抗體。提供與TR－2具有反應性之抗體。也提供可製造可與TR－2具有反應性之抗體之細胞、包含與TR－2具有反應性之抗體之醫藥組成物、與TR－2具有反應性之抗體之使用方法、以及包含與TR－2具有反應性之抗體之套件組。也提供經由投予此種多胜肽來減少或預防抗體與TR－2結合之方法。
TR－2與其配體亦即TRAIL間之交互作用於細胞凋亡的誘導上扮演某種角色(例如參考Almasan等人細胞激素及生長因子綜論14：337－348(2003))。TRAIL也稱作為Apo2配體，TRAIL是一種同質配體，其與TNF受體超族中的四個成員(TRAIL受體(「TR」)1至4交互作用)，且與相關的可溶性護骨素(opsteoprotegerin)(「OPG」)受體交互作用。TRAIL結合至細胞表面的TR－1或TR－2，可觸發該細胞的凋亡。於TRAIL初步結合於TR－1或TR－2後，胞內蛋白質被召喚至受體的胞內死亡功能部位，來形成一個發訊複體。某些胞內凋亡蛋白酶被召喚至該複體，於該處自動活化，又轉而活化額外的凋亡蛋白酶及胞內細胞凋亡串級。TR－3及TR－4及OPG缺乏負責傳遞細胞凋亡信號的胞內功能部位。如此，TRAIL結合至TR－3、TR－4、或OPG不會觸發細胞凋亡。TR－3及TR－4也稱作為「誘餌(decoy)」受體，其過度表現可保護細胞免於受到TRAIL誘導的細胞凋亡。TR2於多種細包表現包括肝、腦、乳房、腎、結腸、肺、脾、胸腺、周邊血液淋巴細胞、攝護腺、睪丸、卵巢、子宮以及多種沿著胃腸道的組織(例如參考Walczak等人，EMBO J.16：5386－5397(1997)；Spierings等人，J.Histochem.Cytochem.52：821－831(2004))。隨然廣泛表現TRAIL和TRAIL受體，但TRAIL和TRAIL受體於轉形細胞誘導細胞凋亡最具有活性(例如參考Daigle等人，瑞士Med.Wkly.131：231－237(2001))。
於若干實例中，提供一種單離的多胜肽包含選自於CDR1a、CDR2a、及CDR3a之至少一種互補決定區(CDR)：其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩醯胺酸酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩醯胺酸酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩醯胺酸酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TRAIL受體－2(TR－2)結合。
於若干實施例中，提供一種單離的多胜肽，包含選自於下列的至少一個互補決定區(CDR)：SEQ ID NO：2之胺基酸26至35；SEQ ID NO：2之胺基酸50至66；SEQ ID NO：2之胺基酸99至110；SEQ ID NO：4之胺基酸26至37；SEQ ID NO：4之胺基酸52至67；SEQ ID NO：4之胺基酸100至109；SEQ ID NO：6之胺基酸26至37；SEQ ID NO：6之胺基酸52至67；SEQ ID NO：6之胺基酸100至109；SEQ ID NO：8之胺基酸26至37；SEQ ID NO：8之胺基酸52至67；SEQ ID NO：8之胺基酸100至109；SEQ ID NO：10之胺基酸26至35；SEQ ID NO：10之胺基酸50至66；SEQ ID NO：10之胺基酸99至110；SEQ ID NO：12之胺基酸26至35；SEQ ID NO：12之胺基酸50至66；SEQ ID NO：12之胺基酸99至111；SEQ ID NO：14之胺基酸26至35；SEQ ID NO：14之胺基酸50至65；SEQ ID NO：14之胺基酸98至111；SEQ ID NO：16之胺基酸26至37；SEQ ID NO：16之胺基酸52至67；SEQ ID NO：16之胺基酸100至109；SEQ ID NO：18之胺基酸26至35；SEQ ID NO：18之胺基酸50至66；SEQ ID NO：18之胺基酸99至105；SEQ ID NO：20之胺基酸26至35；SEQ ID NO：20之胺基酸50至66；SEQ ID NO：20之胺基酸99至118；SEQ ID NO：22之胺基酸26至35；SEQ ID NO：22之胺基酸50至66；SEQ ID NO：22之胺基酸99至118；SEQ ID NO：24之胺基酸26至35；SEQ ID NO：24之胺基酸50至65；SEQ ID NO：24之胺基酸98至108；SEQ ID NO：26之胺基酸26至35；SEQ ID NO：26之胺基酸50至66；SEQ ID NO：26之胺基酸99至110；SEQ ID NO：28之胺基酸26至35；SEQ ID NO：28之胺基酸50至66；SEQ ID NO：28之胺基酸99至117；SEQ ID NO：30之胺基酸26至37；SEQ ID NO：30之胺基酸52至67；SEQ ID NO：30之胺基酸100至111；SEQ ID NO：32之胺基酸26至37；SEQ ID NO：32之胺基酸52至67；SEQ ID NO：32之胺基酸100至111；SEQ ID NO：34之胺基酸26至37；SEQ ID NO：34之胺基酸52至67；以及SEQ ID NO：34之胺基酸100至111；其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於某些實施例中，提供一種單離的多胜肽包含選自於CDR1b、CDR2b、及CDR3b之至少一種互補決定區：其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1 t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1，係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1，為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1，係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，提供一種單離的多胜肽，包含選自於下列的至少一個互補決定區(CDR)：SEQ ID NO：36之胺基酸24至34；SEQ ID NO：36之胺基酸50至56；SEQ ID NO：36之胺基酸89至97；SEQ ID NO：38之胺基酸24至34；SEQ ID NO：38之胺基酸50至56；SEQ ID NO：38之胺基酸89至97；SEQ ID NO：40之胺基酸24至34；SEQ ID NO：40之胺基酸50至56；SEQ ID NO：40之胺基酸89至97；SEQ ID NO：42之胺基酸24至34；SEQ ID NO：42之胺基酸50至56；SEQ ID NO：42之胺基酸89至97；SEQ ID NO：44之胺基酸24至34；SEQ ID NO：44之胺基酸50至56；SEQ ID NO：44之胺基酸89至97；SEQ ID NO：46之胺基酸24至34；SEQ ID NO：46之胺基酸50至56；SEQ ID NO：46之胺基酸89至97；SEQ ID NO：48之胺基酸24至40；SEQ ID NO：48之胺基酸56至62；SEQ ID NO：48之胺基酸95至103；SEQ ID NO：50之胺基酸24至39；SEQ ID NO：50之胺基酸55至61；SEQ ID NO：50之胺基酸94至102；SEQ ID NO：52之胺基酸24至40；SEQ ID NO：52之胺基酸56至62；SEQ ID NO：52之胺基酸95至103；SEQ ID NO：54之胺基酸24至34；SEQ ID NO：54之胺基酸50至56；SEQ ID NO：54之胺基酸89至97；SEQ ID NO：56之胺基酸24至34；SEQ ID NO：56之胺基酸50至56；SEQ ID NO：56之胺基酸89至97；SEQ ID NO：58之胺基酸24至40；SEQ ID NO：58之胺基酸56至62；SEQ ID NO：58之胺基酸95至103；SEQ ID NO：60之胺基酸24至34；SEQ ID NO：60之胺基酸50至56；SEQ ID NO：60之胺基酸89至97；SEQ ID NO：62之胺基酸24至34；SEQ ID NO：62之胺基酸50至56；SEQ ID NO：62之胺基酸89至97；SEQ ID NO：64之胺基酸24至35；SEQ ID NO：64之胺基酸51至57；SEQ ID NO：64之胺基酸90至88；SEQ ID NO：66之胺基酸24至34；SEQ ID NO：66之胺基酸50至57；SEQ ID NO：66之胺基酸89至97；SEQ ID NO：68之胺基酸24至34；SEQ ID NO：68之胺基酸50至56；以及SEQ ID NO：68之胺基酸89至97；其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，提供一種單離的多核苷酸，包含一序列編碼一多胜肽，該多胜肽包含選自於CDR1a、CDR2a及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)：其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TRAIL受體－2(TR－2)結合。
於若干實施例中，提供一種單離的多核苷酸，包含一序列編碼一多胜肽，該多胜肽包含選自於CDR1b、CDR2b及CDR3b中之至少一種互補決定區(CDR)：其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1 t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1’係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1’為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1’係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，提供一種包含一可變區及一恆定區之單離的anti－TR－2抗體，其中該抗體包含：(i)一第一多胜肽，包含選自於CDR1a、CDR2a、及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)：其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於絲胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩胺、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩胺、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k， l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；其中與抗體輕鏈相關聯之第一多胜肽結合TR－2；及(ii)一第二多胜肽，包含選自於CDR1a、CDR2a、及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)：其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1 t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1’係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1’為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1’係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之第二多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，提供一種包含一可變區及一恆定區之單離的anti－TR－2抗體，其中該抗體包含：包含如SEQ ID NO：2列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：36列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：4列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：38列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：6列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：40列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：8列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：42列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：10列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：44列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：12列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：46列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：14列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：48列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：16列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：50列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：18列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：52列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：20列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：54列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：22列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：56列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：24列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：58列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：26列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：60列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：28列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：62列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：30列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：64列舉之CDR之一第二多胜肽；包含如SEQ ID NO：32列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：66列舉之CDR之一第二多胜肽；或包含如SEQ ID NO：34列舉的互補決定區(CDR)之一第一多胜肽和包含如SEQ ID NO：68列舉之CDR之一第二多胜肽。
於若干實施例中，提供一種細胞包含：(a)一第一核苷酸，包含一序列編碼一第一多胜肽，包含選自於CDR1a、CDR2a、及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ I’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合；及(b)一第二核苷酸包含一序列編碼一第二多胜肽，包含選自於CDR1b、CDR2b、及CDR3b中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1 t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1’係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1’為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1’係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之第二多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，提供一種單離的抗體，其係特異性結合至一抗原決定部位，該抗原決定部位係由選自於下列之至少一種抗體所特異性結合：Ab A、Ab B、Ab C、Ab D、Ab E、Ab F、Ab G、Ab H、Ab I、Ab J、Ab K、Ab L、Ab M、Ab N、Ab O、Ab P及Ab Q。
於某些實施例中，提供一種多胜肽包含選自於SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95及SEQ ID NO：96中之至少一種胺基酸序列。
於某些實施例中，提供一種多胜肽主要係由選自於SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95及SEQ ID NO：96中之至少一種胺基酸所組成。
於某些實施例中，提供一種抗體或抗原結合功能部位，其係結合選自於SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95及SEQ ID NO：96中之至少一種胺基酸序列。
於某些實施例中，提供一種獲得可結合TR－2之抗體之方法，包含將選自於SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95及SEQ ID NO：96中至少一種多胜肽投予動物體，以及由該動物體獲得可結合TR－2之抗體。
於某些實施例中，提供一種減少或防止抗體與TR－2結合之方法，係經由投予一種多胜肽，該多胜肽包含選自於SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95及SEQ ID NO：96中之至少一種胺基酸序列。
於某些實施例中，提供一種減少或防止抗體與TR－2結合之方法，係經由投予一種多胜肽主要係由選自於SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95及SEQ ID NO：96中之至少一種胺基酸所組成。
此處使用之章節標題僅為組織目的，而不得解譯為限制本案所述主旨。本案引用之全部文件或文件部分包括但非限於專利案、專利申請案、文章、書籍及論文，全文皆是以外顯方式倂述於此以供參考。
定義
可使用標準技術於重組DNA、寡核苷酸合成及組織培養及轉形(例如電穿孔、脂感染)。酶反應及傳純化技術可根據製造商的規格或如技藝界一般方法或如此處所述進行。前述技術及程序通常係根據技藝界眾所周知之習知方法且於全文說明書引用及討論之多種一般性以及較為特定參考文獻所述來進行。例如參考森布魯克等人分子轉殖：實驗室手冊(第2版)，冷泉港實驗室出版社，冷泉港紐約(1989年))。除非特別提供定義，否則關聯此處所示之分析化學、合成有機化學、及醫藥化學及藥物化學之實驗室程序及技術採用之命名為技藝界眾所周知且常用的命名。對化學合成、化學分析、醫藥製備、配方、輸送及病人的治療可採用標準技術。
於本說明書中，除非特別另行規定，否則單數的使用係包括複數。本說明書中，除非另行陳述否則「或」的使用表示「及/或」。此外，使用「包括」一詞及其它形式並非限制性。此外，諸如「元件」或「組成元件」等詞除非特別另行規定，否則涵蓋包含組成一個單位的元件及組成元件、及包含多於一個亞單位的元件及組成元件二者。
如根據本揭示使用，除非另行指示，否則須瞭解下列術語之定義如後。
「單離的多核苷酸」一詞用於此處係表示一基因體、cDNA或合成來源之多核苷酸或其若干組合，由於其來源「單離的多核苷酸」(1)並未關聯於自然界找到「單離的多核苷酸」之一多核苷酸的全部或部分；(2)鍵聯至一於自然界並未鍵聯的多核苷酸；或(3)於自然界並未出現成為較大序列的一部分。
「多核苷酸」及「寡核苷酸」等詞可互換使用，於文中表示長度至少有10個鹼基的核苷酸之聚合形式。於若干實施例中，鹼基可包含核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸及任一型核苷酸的改性形式中之至少一者。該術語包括單股形及雙股形DNA。「多核苷酸」一詞也涵蓋包含SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、及67中之一或多者之序列。於若干實施例中，多核苷酸為於第3－19圖所示核苷酸序列具有約90%、或約95%、或約96%、或約97%、或約98%、或約99%相同的核苷酸序列。於若干實施例中，提供於編碼此處所述某些多胜肽之特定多核苷酸互補的多核苷酸。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一序列編碼一多胜肽，該多胜肽包含選自於CDR1a、CDR2a及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ I’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼CDR2a之序列，其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼CDR3a之序列，該CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g，係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TRAIL受體－2(TR－2)結合。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含選自於CDR1a、CDR2a、及CDR3a中之至少二互補決定區(CDR)，其中該與抗體輕鏈相關聯的多胜肽係結合TR－2。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含CDR1a、CDR2a、及CDR3a，其中多胜肽與抗體輕鏈相關聯而結合TR－2。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一抗體重鏈可變區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一人類抗體重鏈可變區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一重鏈恆定區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一人類重鏈恆定區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、或SEQ ID NO：34所列舉之胺基酸序列。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一非人類重鏈恆定區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一人類以外種屬的重鏈恆定區。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一多胜肽編碼序列，該多胜肽包含選自於下列之至少一個互補決定區(CDR)：SEQ ID NO：2之胺基酸26至35；SEQ ID NO：2之胺基酸50至66；SEQ ID NO：2之胺基酸99至110；SEQ ID NO：4之胺基酸26至37；SEQ ID NO：4之胺基酸52至67；SEQ ID NO：4之胺基酸100至109；SEQ ID NO：6之胺基酸26至37；SEQ ID NO：6之胺基酸52至67；SEQ ID NO：6之胺基酸100至109；SEQ ID NO：8之胺基酸26至37；SEQ ID NO：8之胺基酸52至67；SEQ ID NO：8之胺基酸100至109；SEQ ID NO：10之胺基酸26至35；SEQ ID NO：10之胺基酸50至66；SEQ ID NO：10之胺基酸99至110；SEQ ID NO：12之胺基酸26至35；SEQ ID NO：12之胺基酸50至66；SEQ ID NO：12之胺基酸99至111；SEQ ID NO：14之胺基酸26至35；SEQ ID NO：14之胺基酸50至65；SEQ ID NO：14之胺基酸98至111；SEQ ID NO：16之胺基酸26至37；SEQ ID NO：16之胺基酸52至67；SEQ ID NO：16之胺基酸100至109；SEQ ID NO：18之胺基酸26至35；SEQ ID NO：18之胺基酸50至66；SEQ ID NO：18之胺基酸99至105；SEQ ID NO：20之胺基酸26至35；SEQ ID NO：20之胺基酸50至66；SEQ ID NO：20之胺基酸99至118；SEQ ID NO：22之胺基酸26至35；SEQ ID NO：22之胺基酸50至66；SEQ ID NO：22之胺基酸99至118；SEQ ID NO：24之胺基酸26至35；SEQ ID NO：24之胺基酸50至65；SEQ ID NO：24之胺基酸98至108；SEQ ID NO：26之胺基酸26至35；SEQ ID NO：26之胺基酸50至66；SEQ ID NO：26之胺基酸99至110；SEQ ID NO：28之胺基酸26至35；SEQ ID NO：28之胺基酸50至66；SEQ ID NO：28之胺基酸99至117；SEQ ID NO：30之胺基酸26至37；SEQ ID NO：30之胺基酸52至67；SEQ ID NO：30之胺基酸100至111；SEQ ID NO：32之胺基酸26至37；SEQ ID NO：32之胺基酸52至67；SEQ ID NO：32之胺基酸100至111；SEQ ID NO：34之胺基酸26至37；SEQ ID NO：34之胺基酸52至67；以及SEQ ID NO：34之胺基酸100至111；其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一多胜肽編碼序列，該多胜肽包含SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、或34之CDR中之至少二者。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一多胜肽編碼序列，該多胜肽包含SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、或34之CDR中之至少三者。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：2之胺基酸26至35、SEQ ID NO：2之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：2之胺基酸99至110。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：4之胺基酸26至37、SEQ ID NO：4之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：4之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：6之胺基酸26至37、SEQ ID NO：6之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：6之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：8之胺基酸26至37、SEQ ID NO：8之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：8之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：10之胺基酸26至35、SEQ ID NO：10之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：10之胺基酸99－110。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：12之胺基酸26至35、SEQ ID NO：12之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：12之胺基酸99－111。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：14之胺基酸26至35、SEQ ID NO：14之胺基酸50至65、及SEQ ID NO：14之胺基酸98至110。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：16之胺基酸26至37、SEQ ID NO：16之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：16之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：18之胺基酸26至35、SEQ ID NO：18之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：18之胺基酸99至105。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：20之胺基酸26至35、SEQ ID NO：20之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：20之胺基酸99至118。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：22之胺基酸26至35、SEQ ID NO：22之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：22之胺基酸99至118。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：24之胺基酸26至35、SEQ ID NO：24之胺基酸50至65、及SEQ ID NO：24之胺基酸98至108。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：24之胺基酸26至35、SEQ ID NO：26之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：26之胺基酸99至110。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：28之胺基酸26至35、SEQ ID NO：28之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：28之胺基酸99至117。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：30之胺基酸26至37、SEQ ID NO：30之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：28之胺基酸100至111。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：32之胺基酸26至37、SEQ ID NO：32之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：30之胺基酸100至111。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：34之胺基酸26至37、SEQ ID NO：34之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：34之胺基酸100至111。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：34之胺基酸26至37、SEQ ID NO：34之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：34之胺基酸100至111。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一序列編碼一多胜肽，該多胜肽包含選自於CDR1b、CDR2b及CDR3b中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1’係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1’為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1’係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含選自於CDR1b、CDR2b、及CDR3b中之至少二互補決定區(CDR)，其中該與抗體重鏈相關聯的多胜肽係結合TR－2。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含CDR1b、CDR2b、及CDR3b，其中多胜肽與抗體重鏈相關聯而結合TR－2。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一抗體輕鏈可變區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一人類抗體輕鏈可變區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一輕鏈恆定區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一人類輕鏈恆定區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含如SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、或SEQ ID NO：68所列舉之胺基酸序列。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一非人類輕鏈恆定區。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含一人類以外種屬的輕鏈恆定區。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含選自於下列的至少一個互補決定(CDR)SEQ ID NO：36之胺基酸24至34；SEQ ID NO：36之胺基酸50至56；SEQ ID NO：36之胺基酸89至97；SEQ ID NO：38之胺基酸24至34；SEQ ID NO：38之胺基酸50至56；SEQ ID NO：38之胺基酸89至97；SEQ ID NO：40之胺基酸24至34；SEQ ID NO：40之胺基酸50至56；SEQ ID NO：40之胺基酸89至97；SEQ ID NO：42之胺基酸24至34；SEQ ID NO：42之胺基酸50至56；SEQ ID NO：42之胺基酸89至97；SEQ ID NO：44之胺基酸24至34；SEQ ID NO：44之胺基酸50至56；SEQ ID NO：44之胺基酸89至97；SEQ ID NO：46之胺基酸24至34；SEQ ID NO：46之胺基酸50至56；SEQ ID NO：46之胺基酸89至97；SEQ ID NO：48之胺基酸24至40；SEQ ID NO：48之胺基酸56至62；SEQ ID NO：48之胺基酸95至103；SEQ ID NO：50之胺基酸24至39；SEQ ID NO：50之胺基酸55至61；SEQ ID NO：50之胺基酸94至102；SEQ ID NO：52之胺基酸24至40；SEQ ID NO：52之胺基酸56至62；SEQ ID NO：52之胺基酸95至103；SEQ ID NO：54之胺基酸24至34；SEQ ID NO：54之胺基酸50至56；SEQ ID NO：54之胺基酸89至97；SEQ ID NO：56之胺基酸24至34；SEQ ID NO：56之胺基酸50至56；SEQ ID NO：56之胺基酸89至97；SEQ ID NO：58之胺基酸24至40；SEQ ID NO：58之胺基酸56至62；SEQ ID NO：58之胺基酸95至103；SEQ ID NO：60之胺基酸24至34；SEQ ID NO：60之胺基酸50至56；SEQ ID NO：60之胺基酸89至97；SEQ ID NO：62之胺基酸24至34；SEQ ID NO：62之胺基酸50至56；SEQ ID NO：62之胺基酸89至97；SEQ ID NO：64之胺基酸24至35；SEQ ID NO：64之胺基酸51至57；SEQ ID NO：64之胺基酸90至88；SEQ ID NO：66之胺基酸24至34；SEQ ID NO：66之胺基酸50至57；SEQ ID NO：66之胺基酸89至97；SEQ ID NO：68之胺基酸24至34；SEQ ID NO：68之胺基酸50至56；以及SEQ ID NO：68之胺基酸89至97；其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一多胜肽編碼序列，該多胜肽包含SEQ ID NO.36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66或68之CDR中之至少二者。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一多胜肽編碼序列，該多胜肽包含SEQ ID NO.36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66或68之CDR中之至少三者。
於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：36之胺基酸24至34、SEQ ID NO：36之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：36之胺基酸89－97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：38之胺基酸24至34、SEQ ID NO：38之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：38之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：40之胺基酸24至34、SEQ ID NO：40之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：40之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：42之胺基酸24至34、SEQ ID NO：42之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：42之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：44之胺基酸24至34、SEQ ID NO：44之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：44之胺基酸89－97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：46之胺基酸24至34、SEQ ID NO：46之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：46之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：48之胺基酸24至40、SEQ ID NO：48之胺基酸56至62、及SEQ ID NO：48之胺基酸95至103。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：50之胺基酸24至39、SEQ ID NO：50之胺基酸55至61、及SEQ ID NO：50之胺基酸94至102。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：52之胺基酸24至40、SEQ ID NO：52之胺基酸56至62、及SEQ ID NO：52之胺基酸95至103。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：54之胺基酸24至34、SEQ ID NO：54之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：54之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：56之胺基酸24至34、SEQ ID NO：56之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：56之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：58之胺基酸24至40、SEQ ID NO：58之胺基酸56至62、及SEQ ID NO：58之胺基酸95至103。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：60之胺基酸24至34、SEQ ID NO：60之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：60之胺基酸89－97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：62之胺基酸24至34、SEQ ID NO：62之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：62之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：64之胺基酸24至35、SEQ ID NO：64之胺基酸51至57、及SEQ ID NO：64之胺基酸90至88。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：66之胺基酸24至34、SEQ ID NO：66之胺基酸50至57、及SEQ ID NO：66之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多核苷酸包含一編碼一多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：68之胺基酸24至34、SEQ ID NO：68之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：68之胺基酸89至97。
於若干實施例中，本案討論若干編碼抗體重鏈和輕鏈之多核苷酸。於若干實施例中，本案討論若干編碼抗體重鏈可變區。於若干實施例中，本案討論若干編碼人類抗體重鏈可變區。於若干實施例中，本案討論若干編碼抗體輕鏈可變區。於若干實施例中，本案討論若干編碼人類抗體輕鏈可變區。於若干實施例中，本案討論若干編碼抗體重鏈恆定區。於若干實施例中，本案討論若干編碼人類抗體重鏈恆定區。於若干實施例中，本案討論若干編碼非人種屬抗體重鏈恆定區。於若干實施例中，本案討論若干編碼抗體輕鏈恆定區。於若干實施例中，本案討論若干編碼人類抗體輕鏈恆定區。於若干實施例中，本案討論若干編碼非人種屬抗體輕鏈恆定區。於若干實施例中，本案討論若干編碼單鏈抗體之多核苷酸。
於若干實施例中，此等抗體重鏈及輕鏈多核苷酸及多胜肽為人類抗體重鏈和輕鏈多核苷酸及多胜肽。於若干實施例中，一種多核苷酸包含如SEQ ID NO.1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65或67之所列舉之核苷酸序列。於若干實施例中，一種多核苷酸其包含一核苷酸序列，該胜肽序列具有該等序列中之一個或多個核苷酸之一種或多種刪失、加成、及/或取代。於若干實施例中，一種多核苷酸包含編碼胺基酸序列之一核苷酸序列，包含如SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、或68列舉之核苷酸序列。於若干實施例中，提供包含互補決定區(CDR)例如CDR1至CDR3之可變區序列。於若干實施例中，可變區多核苷酸及多胜肽為人類可變區多核苷酸及多胜肽。
「天然核苷酸」一詞包括去氧核糖核苷酸及核糖核苷酸。去氧核糖核苷酸包括但非限於腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶及胸腺嘧啶。核糖核苷酸包括但非限於腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶及尿嘧啶。「改性核苷酸」一詞包括但非限於具有改性糖基或取代糖基等之核苷酸。「多核苷酸鍵聯」一詞包括但非限於諸如硫代磷酸根、二硫代磷酸根、硒代磷酸根、二硒代磷酸根、磷醯硫代苯胺酸根、磷醯苯胺酸根、磷醯胺酸根等多核苷酸鍵聯。例如參考LaPlanche等人Nucl.Acids Res.14：9081(1986)；Stec等人J.Am.Chem.Soc.106：6077(1984)；Stein等人Nucl.Acids Res.16：3209(1988)；Zon等人抗癌藥物設計6：539(1991)；Zon等人寡核苷酸及類似物：實際辦法，87－108頁(F.Eckstein，編輯，牛津大學出版社，英國牛津(1991))；Stec等人美國專利第5,151,510號；Uhlmann及Peyman化學綜論90：543(1990)。於若干實施例中，多核苷酸可包括一檢測用標記。
「單離的多胜肽」一詞係表示任何多胜肽其(1)不含至少若干與其通常一起發現的蛋白質；(2)大致上不含來自於同一個來源例如來自於同一個種屬的其它蛋白質；(3)係由來自於不同種屬的細胞所表現；或(4)並未出現於自然界。
「多胜肽」、「胜肽」及「蛋白質」等詞於本文互換使用，且表示兩種或更多種胺基酸聚合物藉胜肽鍵結或改性胜肽鍵結共同接合，亦即胜肽同位質。該術語也應用於含有天然胺基酸之胺基酸聚合物、以及其中一個或多個胺基酸殘基為非天然出現胺基酸或天然出現胺基酸之化學類似物之胺基酸聚合物。胺基酸聚合物可含有已經經由一次或多次天然處理例如後轉譯處理而改性之一或多種胺基酸殘基，及/或已經藉由一種或多種技藝界已知之化學改性技術而改性之一種或多種胺基酸殘基。
述及多胜肽之一「片段」係指由該多胜肽之任何部分之胺基酸之接續拉伸。一片段可為任何少於所述多胜肽長度的任何長度。
所述多胜肽之一「變異株」係指與該所述多胜肽相關具有一或多個胺基酸取代、刪失或插入之一種多胜肽。於若干實施例中，所述多胜肽之變異株具有變更的後轉譯改性部位(亦即糖苷化部位)。於若干實施例中，所述多胜肽及所述多胜肽之變異株二者為特異性結合劑。於若干實施例中，所述多胜肽及所述多胜肽之變異株為抗體。
所述多胜肽之變異株包括但非限於糖苷化變異株。糖苷化變異株包括其中糖苷化部位的數目及/或類型比較所述多胜肽已經經過變更的變異株。於若干實施例中，所述多胜肽之糖苷化變異株包含比所述多胜肽更大量或更少數N鍵聯糖苷化部位。於若干實施例中，一種N鍵聯糖苷化部位之特徵為序列Asn－X－Ser或Asn－X－Thr，其中標示為X之胺基酸殘基可為脯胺酸以外的任何胺基酸殘基。於若干實施例中，所述多胜肽之糖苷化變異株包含N鍵聯碳水化合物鏈之重排，其中去除一個或多個N鍵聯糖苷化部位(典型為天然出現的N鍵聯糖苷化部位)，且形成一個或多個新的N鍵聯部位。
所述多胜肽之變異株包括但非限於半胱胺酸變異株。於若干實施例中，半胱胺酸變異株包括其中所述多胜肽之一個或多個半胱胺酸殘基係由一個或多個非半胱胺酸殘基所置換之變異株；及/或所述多胜肽之一個或多個非半胱胺酸殘基係由一個或多個半胱胺酸殘基所置換之變異株。於若干實施例中，當特定多胜肽必須重新摺疊成為生物活性構型時，例如於不溶性包含體單離後，可使用半胱胺酸變異株。於若干實施例中，所述多胜肽之半胱胺酸變異株具有比所述多胜肽更少的半胱胺酸殘基。於若干實施例中，所述多胜肽之半胱胺酸變異株具有偶數半胱胺酸來最小化因非成對半胱胺酸所導致的交互作用。於若干實施例中，半胱胺酸變異株具有比天然蛋白質更多的半胱胺酸殘基。
所述多胜肽之「衍生物」係指：一種多胜肽(1)具有所述多胜肽之一個或多個胺基酸殘基之一種或多種改性；及/或(2)其中一個或多個胜肽鍵聯已經以一個或多個非胜肽鍵聯置換；及/或(3)其中N端及/或C端已應經過改性。若干改性實例包括但非限於乙醯化、醯化、ADP核糖苷化、醯胺化、生物素化、黃素(flavin)之共價附接、血質部分之共價附接、核苷酸或核苷酸衍生物之共價附接、脂質或脂質衍生物之共價附接、磷脂基肌糖醇之共價附接、交聯、環化、雙硫鍵形成、去甲基化、共價交聯的形成、半胱胺酸的形成、焦麩胺酸根的形成、甲醯化、γ－羧化、糖苷化、GPI錨定形成、羥化、碘化、甲基化、肉豆蔻醯化、氧化、蛋白質分解加工、磷酸化、戊間二烯化、外消旋化、硒醯化、硫酸化、轉移RNA媒介之胺基酸加成至蛋白質諸如精胺醯化及泛素化。於若干實施例中，所述多胜肽及所述多胜肽之衍生物皆為特異性結合劑。於若干實施例中，所述多胜肽及所述多胜肽衍生物為抗體。
多胜肽包括但非限於藉天然處理程序例如後轉移處理程序改性之胺基酸序列；或藉技藝界眾所周知之化學改性技術改性之胺基酸序列。於若干實施例中，改性可出現於多胜肽的任一處，包括胜肽主鏈、胺基酸支鏈及胺基端或羧基端。於若干實施例中，改性可於一個特定多胜肽的數個部位存在至相等程度或不同程度。於若干實施例中，一個指定多胜肽含有多種類型的改性，諸如天然序列的一個或多個胺基酸之刪失、加成及/或取代。於若干實施例中，多胜肽可為分支及/或環狀。環狀多胜肽、分支多胜肽及分支環狀多胜肽可得自於後轉譯自然處理程序(包括但非限於泛素化)，或可藉合成方法製造。「多胜肽」一詞也涵蓋包含選自於如後述之Ab A、Ab B、Ab C、Ab D、Ab E、Ab F、Ab G、Ab H、Ab I、Ab J、Ab K、Ab L、Ab M、Ab N、Ab O、Ab P及Ab Q之抗體的重鏈及/或輕鏈之胺基酸序列(參考SEQ ID NO.：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66及68)。「多胜肽」一詞也涵蓋具有該等序列之一個或多個胺基酸之一種或多種刪失、加成及/或取代之序列。於若干實施例中，若干多胜肽序列包含至少一個互補決定區(CDR)。
於若干實施例中，一種多胜肽包含選自於CDR1a、CDR2a及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m n o p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，一種多胜肽包含選自於CDR1a、CDR2a、及CDR3a中之至少二互補決定區(CDR)，其中該與抗體輕鏈相關聯的多胜肽係結合TR－2。於若干實施例中，一種多胜肽包含CDR1a、CDR2a、及CDR3a，其中多胜肽與抗體輕鏈相關聯而結合TR－2。
於若干實施例中，一種多胜肽包含一抗體重鏈可變區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一人類抗體重鏈可變區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一重鏈恆定區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一人類重鏈恆定區。於若干實施例中，一種多胜肽包含如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、或SEQ ID NO：34所列舉之胺基酸序列。於若干實施例中，一種多胜肽包含一非人類重鏈恆定區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一人類以外種屬的重鏈恆定區。
於若干實施例中，一種多胜肽包含選自於下列之至少一個互補決定區(CDR)：SEQ ID NO：2之胺基酸26至35；SEQ ID NO：2之胺基酸50至66；SEQ ID NO：2之胺基酸99至110；SEQ ID NO：4之胺基酸26至37；SEQ ID NO：4之胺基酸52至67；SEQ ID NO：4之胺基酸100至109；SEQ ID NO：6之胺基酸26至37；SEQ ID NO：6之胺基酸52至67；SEQ ID NO：6之胺基酸100至109；SEQ ID NO：8之胺基酸26至37；SEQ ID NO：8之胺基酸52至67；SEQ ID NO：8之胺基酸100至109；SEQ ID NO：10之胺基酸26至35；SEQ ID NO：10之胺基酸50至66；SEQ ID NO：10之胺基酸99至110；SEQ ID NO：12之胺基酸26至35；SEQ ID NO：12之胺基酸50至66；SEQ ID NO：12之胺基酸99至111；SEQ ID NO：14之胺基酸26至35；SEQ ID NO：14之胺基酸50至65；SEQ ID NO：14之胺基酸98至111；SEQ ID NO：16之胺基酸26至37；SEQ ID NO：16之胺基酸52至67；SEQ ID NO：16之胺基酸100至109；SEQ ID NO：18之胺基酸26至35；SEQ ID NO：18之胺基酸50至66；SEQ ID NO：18之胺基酸99至105；SEQ ID NO：20之胺基酸26至35；SEQ ID NO：20之胺基酸50至66；SEQ ID NO：20之胺基酸99至118；SEQ ID NO：22之胺基酸26至35；SEQ ID NO：22之胺基酸50至66；SEQ ID NO：22之胺基酸99至118；SEQ ID NO：24之胺基酸26至35；SEQ ID NO：24之胺基酸50至65；SEQ ID NO：24之胺基酸98至108；SEQ ID NO：26之胺基酸26至35；SEQ ID NO：26之胺基酸50至66；SEQ ID NO：26之胺基酸99至110；SEQ ID NO：28之胺基酸26至35；SEQ ID NO：28之胺基酸50至66；SEQ ID NO：28之胺基酸99至117；SEQ ID NO：30之胺基酸26至37；SEQ ID NO：30之胺基酸52至67；SEQ ID NO：30之胺基酸100至111；SEQ ID NO：32之胺基酸26至37；SEQ ID NO：32之胺基酸52至67；SEQ ID NO：32之胺基酸100至111；SEQ ID NO：34之胺基酸26至37；SEQ ID NO：34之胺基酸52至67；以及SEQ ID NO：34之胺基酸100至111；其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、或34之CDR中之至少二者。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、或34之CDR中之至少三者。
於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：2之胺基酸26至35、SEQ ID NO：2之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：2之胺基酸99至110。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：4之胺基酸26至37、SEQ ID NO：4之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：4之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種包含SEQ ID NO：6之胺基酸26至37、SEQ ID NO：6之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：6之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：8之胺基酸26至37、SEQ ID NO：8之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：8之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：10之胺基酸26至35、SEQ ID NO：10之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：10之胺基酸99－110。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：12之胺基酸26至35、SEQ ID NO：12之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：12之胺基酸99－111。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：14之胺基酸26至35、SEQ ID NO：14之胺基酸50至65、及SEQ ID NO：14之胺基酸98至110。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：16之胺基酸26至37、SEQ ID NO：16之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：16之胺基酸100至109。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：18之胺基酸26至35、SEQ ID NO：18之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：18之胺基酸99至105。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：20之胺基酸26至35、SEQ ID NO：20之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：20之胺基酸99至118。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：22之胺基酸26至35、SEQ ID NO：22之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：22之胺基酸99至118。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：24之胺基酸26至35、SEQ ID NO：24之胺基酸50至65、及SEQ ID NO：24之胺基酸98至108。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：24之胺基酸26至35、SEQ ID NO：26之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：26之胺基酸99至110。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：28之胺基酸26至35、SEQ ID NO：28之胺基酸50至66、及SEQ ID NO：28之胺基酸99至117。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：30之胺基酸26至37、SEQ ID NO：30之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：28之胺基酸100至111。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：32之胺基酸26至37、SEQ ID NO：32之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：30之胺基酸100至111。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：34之胺基酸26至37、SEQ ID NO：34之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：34之胺基酸100至111。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：34之胺基酸26至37、SEQ ID NO：34之胺基酸52至67、及SEQ ID NO：34之胺基酸100至111。
於若干實施例中，一種多胜肽包含選自於CDR1b、CDR2b及CDR3b中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1 t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1’係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1’為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1’係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，一種多胜肽包含選自於CDR1b、CDR2b、及CDR3b中之至少二互補決定區(CDR)，其中該與抗體重鏈相關聯的多胜肽係結合TR－2。於若干實施例中，一種多胜肽包含CDR1b、CDR2b、及CDR3b，其中多胜肽與抗體重鏈相關聯而結合TR－2。
於若干實施例中，一種多胜肽包含一抗體輕鏈可變區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一人類抗體輕鏈可變區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一輕鏈恆定區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一人類輕鏈恆定區。於若干實施例中，一種多胜肽包含如SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、或SEQ ID NO：68所列舉之胺基酸序列。於若干實施例中，一種多胜肽包含一非人類輕鏈恆定區。於若干實施例中，一種多胜肽包含一人類以外種屬的輕鏈恆定區。
於若干實施例中，一種多胜肽包含選自於下列的至少一個互補決定(CDR)SEQ ID NO：36之胺基酸24至34；SEQ ID NO：36之胺基酸50至56；SEQ ID NO：36之胺基酸89至97；SEQ ID NO：38之胺基酸24至34；SEQ ID NO：38之胺基酸50至56；SEQ ID NO：38之胺基酸89至97；SEQ ID NO：40之胺基酸24至34；SEQ ID NO：40之胺基酸50至56；SEQ ID NO：40之胺基酸89至97；SEQ ID NO：42之胺基酸24至34；SEQ ID NO：42之胺基酸50至56；SEQ ID NO：42之胺基酸89至97；SEQ ID NO：44之胺基酸24至34；SEQ ID NO：44之胺基酸50至56；SEQ ID NO：44之胺基酸89至97；SEQ ID NO：46之胺基酸24至34；SEQ ID NO：46之胺基酸50至56；SEQ ID NO：46之胺基酸89至97；SEQ ID NO：48之胺基酸24至40；SEQ ID NO：48之胺基酸56至62；SEQ ID NO：48之胺基酸95至103；SEQ ID NO：50之胺基酸24至39；SEQ ID NO：50之胺基酸55至61；SEQ ID NO：50之胺基酸94至102；SEQ ID NO：52之胺基酸24至40；SEQ ID NO：52之胺基酸56至62；SEQ ID NO：52之胺基酸95至103；SEQ ID NO：54之胺基酸24至34；SEQ ID NO：54之胺基酸50至56；SEQ ID NO：54之胺基酸89至97；SEQ ID NO：56之胺基酸24至34；SEQ ID NO：56之胺基酸50至56；SEQ ID NO：56之胺基酸89至97；SEQ ID NO：58之胺基酸24至40；SEQ ID NO：58之胺基酸56至62；SEQ ID NO：58之胺基酸95至103；SEQ ID NO：60之胺基酸24至34；SEQ ID NO：60之胺基酸50至56；SEQ ID NO：60之胺基酸89至97；SEQ ID NO：62之胺基酸24至34；SEQ ID NO：62之胺基酸50至56；SEQ ID NO：62之胺基酸89至97；SEQ ID NO：64之胺基酸24至35；SEQ ID NO：64之胺基酸51至57；SEQ ID NO：64之胺基酸90至88；SEQ ID NO：66之胺基酸24至34；SEQ ID NO：66之胺基酸50至57；SEQ ID NO：66之胺基酸89至97；SEQ ID NO：68之胺基酸24至34；SEQ IDNO：68之胺基酸50至56；以及SEQ ID NO：68之胺基酸89至97；其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO.36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66或68之CDR中之至少二者。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO.36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66或68之CDR中之至少三者。
於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：36之胺基酸24至34、SEQ ID NO：36之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：36之胺基酸89－97。於若干實施例中，一種多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：38之胺基酸24至34、SEQ ID NO：38之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：38之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：40之胺基酸24至34、SEQ ID NO：40之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：40之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：42之胺基酸24至34、SEQ ID NO：42之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：42之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：44之胺基酸24至34、SEQ ID NO：44之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：44之胺基酸89－97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：46之胺基酸24至34、SEQ ID NO：46之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：46之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：48之胺基酸24至40、SEQ ID NO：48之胺基酸56至62、及SEQ ID NO：48之胺基酸95至103。於若干實施例中，一種多胜肽之序列，該多胜肽包含SEQ ID NO：50之胺基酸24至39、SEQ ID NO：50之胺基酸55至61、及SEQ ID NO：50之胺基酸94至102。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：52之胺基酸24至40、SEQ ID NO：52之胺基酸56至62、及SEQ ID NO：52之胺基酸95至103。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：54之胺基酸24至34、SEQ ID NO：54之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：54之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：56之胺基酸24至34、SEQ ID NO：56之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：56之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：58之胺基酸24至40、SEQ ID NO：58之胺基酸56至62、及SEQ ID NO：58之胺基酸95至103。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：60之胺基酸24至34、SEQ ID NO：60之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：60之胺基酸89－97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：62之胺基酸24至34、SEQ ID NO：62之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：62之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：64之胺基酸24至35、SEQ ID NO：64之胺基酸51至57、及SEQ ID NO：64之胺基酸90至88。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：66之胺基酸24至34、SEQ ID NO：66之胺基酸50至57、及SEQ ID NO：66之胺基酸89至97。於若干實施例中，一種多胜肽包含SEQ ID NO：68之胺基酸24至34、SEQ ID NO：68之胺基酸50至56、及SEQ ID NO：68之胺基酸89至97。
「天然」一詞當應用於一個物體表示該物體為天然出現。舉例言之，存在於有機體(包括病毒)可從天然分離且未曾由人類於實驗室中或以其它方式蓄意改性之多胜肽或多核苷酸可為天然。
「工作式鍵聯」一詞用於此處係指呈允許其以期望方式發揮功能之關係之組成元體。舉例言之，以多核苷酸序列而言，當控制序列和編碼序列係彼此以於控制序列的功能可相容的條件下達成編碼序列的表現而彼此關聯之一種編碼序列。
「控制序列」一詞係指多核苷酸序列，其可能影響與其相關聯的編碼序列之表現及處理。此種控制序列的本質可能依宿主有機體而異。原核細胞的若干控制序列實例包括但非限於啟動基因、核糖體結合部位及轉錄結束序列。若干真核生物細胞之控制序列實例包括但非限於啟動基因、促進基因及轉錄終結序列。於若干實施例中，「控制序列」可包括先導子序列及/或融合搭擋序列。
於若干實施例中，當第一和第二多核苷酸編碼序列係轉錄至單一接續mRNA，其可轉譯成單一接續多胜肽時，一第一多核苷酸編碼序列係工作式鍵聯至一多胜肽編碼序列。
就多胜肽而言，若各個鍵聯的多胜肽可以其期望的方式發揮功能，則兩個或更多個多胜肽為「工作式鍵聯」。當工作式鍵聯至另一個多胜肽可以期望方式發揮功能之一多胜肽，當非工作式鍵聯至另一個多胜肽時可能可以或可能無法以期望方式發揮功能。舉例言之，於若干實施例中，第一多胜肽當未經鍵聯時無法以期望方式發揮功能，但當鍵聯至第二多胜肽時可被穩定化，因而變成可以其期望方式發揮功能。另外，於若干實施例中，當未鍵聯時無法以其期望方式發揮功能之第一多胜肽，當工作式鍵聯至第二多胜肽時可能保有該項能力。
如此處使用，當兩個或更多個多胜肽係藉轉譯成為單一接續多胜肽序列而鍵聯，或係經由合成為單一接續多胜肽序列時，該兩個或多個多胜肽為「融合」。於若干實施例中，兩個或更多個融合多胜肽於活體內從兩個或更多個工作式鍵聯多核苷酸編碼序列轉譯。於若干實施例中，兩個或更多個融合多胜肽於試管內從兩個或更多個工作式鍵聯多核苷酸編碼序列轉譯。
如此處使用，若各個鍵聯的多胜肽可以期望方式發揮功能，則兩個或更多個多胜肽為「工作式融合」。
於若干實施例中，含有兩個或更多個分開的多胜肽單位之第一多胜肽被視為鍵聯至第二多胜肽，只要第一多胜肽之分開多胜肽單位中之至少一者係鍵聯至該第二多胜肽即可。至於非限制性實例，於若干實施例中，於下列各種情況的全部清況下，一種抗體被視為鍵聯至第二多胜肽：(a)第二多胜肽係鍵聯至抗體之重鏈多胜肽之一；(b)第二多胜肽係鍵聯至抗體之輕鏈多胜肽之一；(c)第二多胜肽之第一分子係鍵聯至抗體之重鏈多胜肽之一，而第二多胜肽之第二分子係鍵聯至抗體之輕鏈多胜肽之一；以及(d)第二多胜肽之第一分子及第二分子係鍵聯至抗體之第一及第二重鏈多胜肽，以及第二多胜肽之第三分子及第四分子係鍵聯至抗體之第一及第二輕鏈多胜肽。
於若干實施例中，「第一多胜肽鍵聯至第二多胜肽」一語涵蓋下列各種情況：(a)只有一個分子之第一多胜肽係鍵聯至只有一個分子之第二多胜肽；(b)只有一個分子之第一多胜肽係鍵聯至多於一個分子之第二多胜肽；(c)多於一個分子之第一多胜肽係鍵聯至只有一個分子之第二多胜肽；以及(d)多於一個分子之第一多胜肽係鍵聯至多於一個分子之第二多胜肽。於若干實施例中，當鍵聯的分子包含多於一個分子之第一多胜肽及只有一個分子之第二多胜肽時，全部或少於全部第一多胜肽分子可共價鍵聯或非共價鍵聯至第二多胜肽。於若干實施例中，當一個鍵聯的分子包含多於一分子之第一多胜肽時，一或多分子之第一多胜肽可為共價鍵聯或非共價鍵聯至該第一多胜肽之其它分子。
如此處使用，「可撓性聯結子」表示根據其化學結構無法預測固定於三度空間的任何聯結子。熟諳技藝人士可預測特定聯結子於其期望之方面為可撓性。於若干實施例中，包含三個或更多個胺基酸之胜肽聯結子為可撓性聯結子。
如此處使用，20種習知胺基酸及其縮寫係遵照慣用法。參考免疫學－合成(第2版，E.S.Golub及D.R.Gren編輯，Sinauer Associates，麻省山德藍(1991年))。於若干實施例中，一種或多種非習知胺基酸可結合於多胜肽。「非習知胺基酸」一詞係表示並非20種習知胺基酸之一的任一種胺基酸。「非天然胺基酸」一詞係指天然未出現的胺基酸。非天然胺基酸為非習知胺基酸之子集。非習知胺基酸包括但非限於20種習知胺基酸之立體異構物(例如D胺基酸)，非天然胺基酸諸如α－、α－二取代之胺基酸、N－烷基胺基酸、乳酸、高絲胺酸、包半胱胺酸、4－羥基脯胺酸、λ－羧基麩胺酸、ε－N,N,N－三甲基離胺酸、ε－N－乙醯基離胺酸、O－磷醯基絲胺酸、N－乙醯基絲胺酸、N－甲醯基蛋胺酸、3－甲基組胺酸、5－羥基離胺酸、σ－N－甲基精胺酸及技藝界已知之其它類似的胺基酸及亞胺基酸(例如4－羥基脯胺酸)。於此處使用之多胜肽表示法中，根據標準用法及習知用法，左手方向為胺基端方向，而右手方向為羧基端方向。
於若干實施例中，保守胺基酸取代包括以一個或多個非習知胺基酸殘基取代。於若干實施例中，於生物系統中，非習知胺基酸殘基係藉化學胜肽合成而非於生物系統中合成。
「酸性殘基」一詞表示呈D形式或L形式之胺基酸殘基，其包含至少一個酸性基團，當攙混於另外兩個相同或相異的胺基酸殘基間的多胜肽時，包含至少一個酸性基團。於若干實施例中，酸性殘基包含含至少一個酸性基團之支鏈。酸性殘基之實例包括但非限於天冬酸(D)及麩胺酸(E)。於若干實施例中，酸性殘基可為非習知胺基酸。
「芳香族殘基」一詞表示包含至少一個芳香族基團之呈D形式或L形式之胺基酸殘基。於若干實施例中，芳香族殘基包含含至少一個芳香族基團之支鏈。芳香族殘基之實例包括但非限於苯基丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)。於若干實施例中，芳香族殘基可為非習知胺基酸。
「鹼性殘基」一詞係指呈F形式或L形式之胺基酸殘基及當攙混於一個或多個相同或相異的胺基酸旁的多胜肽內部時可包含至少一個鹼性基團。於若干實施例中，鹼性殘基包含含至少一個鹼性基團之支鏈。鹼性殘基之實例包括但非限於組胺酸(H)、離胺酸(K)及精胺酸(R)。於若干實施例中，鹼性殘基可為非習知胺基酸。
「中性親水殘基」一詞係指當攙混於一個或多個相同或相異的胺基酸殘基旁的多胜肽時，包含至少一個親水基團及/或極性基團，但不包含酸性基團或鹼性基團之呈D形式或L形式之胺基酸殘基。中性親水殘基之實例包括但非限於丙胺酸(A)、半胱胺酸(C)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)、天冬醯胺(N)及麩醯胺酸(Q)。於若干實施例中，中性親水殘基可為非習知胺基酸。
「親脂殘基」及「Laa」等詞表示有至少一個未帶電的脂肪族基團及/或芳香族基團之呈D形式或L形式之胺基酸殘基。於若干實施例中，親脂殘基包含含至少一個未帶電之脂肪族基團及/或芳香族基團之支鏈。親脂支鏈之實例包括但非限於丙胺酸(A)、苯基丙胺酸(F)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)、新白胺酸(Nile)、蛋胺酸(M)、纈胺酸(V)、色胺酸(W)及酪胺酸(Y)。於若干實施例中，親脂殘基可為非習知胺基酸。
「兩親性殘基」一詞係指可為親水殘基或親脂殘基二者之呈D形式或L形式之胺基酸殘基。兩親性殘基之實例包括但非限於丙胺酸(A)。於若干實施例中，兩親性殘基可為非習知胺基酸。
「非官能性殘基」一詞係指當結合於一個或多個相同或相異之胺基酸殘基旁之多胜肽時，缺酸性基團、鹼性基團及芳香族基團之呈D形式或L形式之胺基酸殘基。非官能性胺基酸殘基之實例包括但非限於蛋胺酸(M)、甘胺酸(G)、丙胺酸(A)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)、及新白胺酸(Nle)。於若干實施例中，非官能性殘基可為非習知胺基酸。
甘胺酸(G)及脯胺酸(P)可視為影響多胜肽鏈方向性之胺基酸殘基。
於若干實施例中，保守取代涉及以一型殘基的成員置換同一型殘基的成員。至於非限制性實例，於若干實施例中，保守取代可涉及以不同酸性殘基如E置換酸性殘基如D。於若干實施例中，非保守取代涉及以一型殘基成員置換同型殘基成員。至於非限制性實例，於若干實施例中，非保守取代涉及以鹼性殘基K置換酸性殘基如D。於若干實施例中，半胱胺酸殘基以另一個胺基酸殘基置換，來防止於多胜肽之該位置形成雙硫鍵。
於進行保守取代或非保守取代中，根據若干實施例，可考慮胺基酸的厭水指數。各種胺基酸基於其疏水性及帶電特性，被分派一個厭水指數。20種天然胺基酸的厭水指數為異白胺酸(＋4.5)；纈胺酸(＋4.2)；白胺酸(＋3.8)；苯基丙胺酸(＋2.8)；半胱胺酸/胱胺酸(＋2.5)；蛋胺酸(＋1.9)；丙胺酸(＋1.8)；甘胺酸(－0.4)；蘇胺酸(－0.7)；絲胺酸(－0.8)；色胺酸(－0.9)；酪胺酸(－1.3)；脯胺酸(－1.6)；組胺酸(－3.2)；麩胺酸(－3.5)；麩醯胺酸(－3.5)；天冬酸(－3.5)；天冬醯胺(－3.5)；離胺酸(－3.9)；及精胺酸(－4.5)。
厭水胺基酸指數於蛋白質產生交互作用生物功能的重要性為技藝界所已知Kyte等人，J.Mol.Biol.,157：105－131(1982)。已知於若干情況下，某些胺基酸可取代其它具有類似的厭水指數或分數的其它胺基酸，但仍然保有類似的生物活性。於基於厭水指數做改變時，於若干實施例中，包括其厭水指數於±2以內的胺基酸的取代。於若干實施例中，含括於±1以內之胺基酸的取代，於若干實施例中，含括於±0.5以內之胺基酸的取代。
技藝界也須瞭解基於親水性可有效進行胺基酸的取代，特別藉此所形成之生物官能蛋白質或胜肽意圖用於免疫實施例，如本例。於若干實施例中，如由相鄰胺基酸之親水性掌控，蛋白質的最大局部平均親水性係與其免疫原性和抗原性有關，換言之與多胜肽的生物性質有關。
下列親水性數值分派於此等胺基酸殘基：精胺酸(＋3.0)；離胺酸(＋3.0)；天冬酸(＋3.0±1)；麩胺酸(＋3.0±1)；絲胺酸(＋0.3)；天冬醯胺(＋0.2)；麩醯胺酸(＋0.2)；甘胺酸(0)；蘇胺酸(－0.4)；脯胺酸(－0.5±1)；丙胺酸(－0.5)；組胺酸(－0.5)；半胱胺酸(－1.0)；蛋胺酸(－1.3)；纈胺酸(－1.5)；白胺酸(－1.8)；異白胺酸(－1.8)；酪胺酸(－2.3)；苯基丙胺酸(－2.5)及色胺酸(－3.4)。於若干實施例中，當基於類似的親水性數值做改變時，含括其親水性數值於±2以內之胺基酸取代；於若干實施例中，含括於±1以內；以及於若干實施例中，含括於±0.5以內。於若干情況下，可基於親水性而從主胺基酸序列識別抗原決定部位。此等區也稱作為「抗原決定部位核心區」。
胺基酸取代之實例列舉於表1。
同理，如此處使用，除非另行規定，否則單股多核苷酸序列之左側端為5’端；雙股多核苷酸序列之左手方向稱作為5’方向。新生RNA轉錄本之5’至3’加成方向於此處稱作為轉錄方向；具有與RNA相同序列且為RNA轉錄本5’端的5’方向之DNA股上的序列區於此處稱作為「上游序列」；具有與RNA相同序列且為RNA轉錄本3’端的3’方向之DNA股上的序列區於此處稱作為「下游序列」。
於若干實施例中，保守胺基酸取代涵蓋非天然胺基酸殘基，其典型係藉化學胜肽合成而攙混，而非於生物系統合成而攙混。此等非天然胺基酸殘基包括但非限於胜肽模擬物、或其它胺基酸部分之反向形式。
熟諳技藝人士將可使用眾所周知的技術來判定參考所述多胜肽之適當取代變異株。於若干實施例中，熟諳技藝人士經由鎖定目標於相信並非為活性的重要區，可識別可改變的分子適當區域而不會破壞活性。於若干實施例中，可識別類似的多胜肽中可保留的殘基及分子部分。於若干實施例中，即使對生物活性為重要區域包括但非限於抗體之CDR，或對結構為重要區域而接受保守胺基酸取代，而不會摧毀生物活性，或不會對多胜肽結構造成不良影響。
此外，於若干實施例中，熟諳技藝人士可綜覽結構功能研究，識別出對活性及/或結構有重要性之類似多胜肽中的殘基。於若干實施例中，有鑑於此種比較，可預測多胜肽中與類似多胜肽的活性或結構有重要性之胺基酸殘基相對應之胺基酸殘基的重要性。於若干實施例中，熟諳技藝人士適合以化學上類似之胺基酸來取代此等預測具有重要性之胺基酸殘基。
於若干實施例中，熟諳技藝人士也可分析與類似多胜肽之結構相關的三度空間結構及胺基酸序列。有鑑於此等資訊，熟諳技藝人士可具有其三度空間結構預測抗體之胺基酸殘基的校準。於若干實施例中，熟諳技藝人士可選擇對於預測位在蛋白質表面上的胺基酸殘基不做基團改變，原因在於此等殘基可能涉及與其它分子的重要交互作用。此外，於若干實施例中，熟諳技藝人士可於各個期望之胺基酸殘基產生含有單一胺基酸取代之試驗變異株。於若干實施例中，隨後變異株可使用熟諳技藝人士已知之活性檢定分析做篩選。舉例言之，於若干實施例中，變異株可篩選其結合於TR－2之活性。於若干實施例中，此等變異株可用來收集有關適當變異株之資訊。例如於若干實施例中，若發現特定胺基酸殘基的改變將導致活性破壞、非期望的降低或活性不適當，則可避免有此種改變的變異株。換言之，基於由例行實驗所收集資訊，熟諳技藝人士方便判定胺基酸是否應避免進一步取代，包括單獨取代或與其它突變組合的取代。
有多項科技公開文獻致力於預測二次結構。參考Moult J.,Curr.Op.生物化學，7(4)：422－427(1996)，Chou等人，生物化學，13(2)：222－245(1974)；Chou等人，生物化學，113(2)：211－222(1974)；Chou等人，Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.47：45－148(1978)；Chou等人，Ann.Rev.Biochem.,47：251－276及Chou等人，Biophys.J.,26：367－384(1979)。此外，目前電腦程式可用來輔助預測二次結構。預測二次結構之一種方法係基於同種模型化。例如，具有序列相同性大於30%，或具有類似性大於40%之兩種多胜肽或兩種蛋白質經常具有類似的結構形態。晚近蛋白質結構資料庫(PDB)的成長，已經提供二次結構的較高預測能力，包括於多胜肽的結構或蛋白質的結構內部可能的摺疊數目。參考Holm等人，Nucl.Acid.Res.,27(1)：244－247(1999)提示指定的多胜肽或蛋白質有有限數目的摺疊，一旦解開關鍵數目的結構，則結構的預測大為準確。例如參考Brenner等人，Curr.Op.Struct.Biol.7(3)：369－376(1997)。
預測二次結構的額外方法實例包括但非限於「執行續」(Jones,D.,Curr.Opin.Struct.Biol.,7(3)：377－87(1997)；Sippl等人，結構，4(1)：15－19(1996))、「外廓分析」(Bowie等人，科學，253－164－170(1991)；Gribskov等人Meth.Enzym.,183：146－159(1990)；Gribskov等人，Proc.Nat.Acad.Sci.,84(13)：4355－4358(1987))，及「演化世系」(參考Holm，參見上文(1999年)，及Brenner，參見上文(1997年))。
於若干實施例中，相關多胜肽的身分和類似性方便藉已知方法計算。此等方法包括但非限於述於下列參考文獻之方法，電腦分子生物學，Lesk,A.M.，編輯，牛津大學出版社，紐約(1988)；生物計算：資訊及基因體計畫，Smith,D.W.，編輯，學術出版社，紐約(1993年)；序列資料之電腦分析第一部分，Griffin,A.M.，及Griffin,H.G.，編輯，哈瑪那(Humana)出版社，紐澤西州(1994)；分子生物學之序列分析，von Heinje,G.，學術出版社(1987)；序列分析引子，Gribskov,M.及Devereux,J.，編輯，M.史達騰(M.Stockton)出版社，紐約(1991)；及Carillo等人，SIAM J.Applied Math.,48：1073(1988)。於若干實施例中，多胜肽具有與第3－19圖所示之胺基酸序列約90%，或約95%，或約96%，或約97%，或約98%，或約99%相同性。
於若干實施例中，判定相同性之方法係設計為可獲得測試序列的最大匹配。於若干實施例中，若干測定相同性之方法述於可公開取得的電腦程式。於若干實施例中，判定兩個序列間的相同性之若干電腦程式方法包括但非限於GCG套裝程式包括GAP(Devereux等人，Nucl.Acid.Res.,12：387(1984)；基因電腦群，威斯康辛大學，威斯康辛州馬里森，WI、BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul等人，J.Mol.Bio.,215：403－410(1990))。BLASTX程式由國家生技資訊中心(NCBI)及其它來源公諸大眾(BLAST手冊，Altschul等人，NCB/NLM/NIH馬里蘭州貝色拉20894；Altschul等人，參見上文(1990年))。於若干實施例中，技藝界已知之Smith Waterman演繹法則也可用來判定相同性。
若干校準兩個胺基酸序列的校準體系可能導致兩個序列中只有短區匹配，如此小的校準區可能有極高序列相同性，即使兩個全長序列間並無顯著關係亦如此。如此，於若干實施例中，選用之校準方法(GAP程式)將導致跨越目標多胜肽的至少50個接續胺基酸校準。
例如使用電腦演繹法則GAP(基因電腦群，威斯康辛大學，威斯康辛州馬里森)，欲測定序列相同性百分比的兩種多胜肽係校準來最佳匹配其個別的胺基酸(「匹配跨距」)如藉該演繹法則所測定)。於若干實施例中，間隙開啟罰函數(係以3倍平均對角線計算；「平均對角線」為所使用之比較矩陣之對角線平均值；「對角線」為藉特定比較矩陣而分派於各個完美胺基酸匹配之分數或號碼)，及間隙延長罰函數(約為間隙開啟罰函數的1/10倍)，以及比較矩陣諸如PAM 250或BLOSUM 62接合該演繹法之使用。於若干實施例中，該演繹法則也使用標準比較矩陣。例如參考Dayhoff等人，蛋白質序列及結構，地圖集5(3)(1978)有關PAM 250比較矩陣；Henikoff等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA,89：10915－10919(1992)有關BLOSUM 62比較矩陣。
於若干實施例中，多胜肽序列比較參數包括下列：演繹法則：Needleman等人，J.Mol.Biol.,48：443－453(1970)；比較矩陣：BLOSUM 62得自Henikoff等人，參見上文(1992年)；間隙罰函數：12間隙長度罰函數：4相似性臨界值：0
於若干實施例中，GAP程式可用於前述參數。於若干實施例中，前述參數為使用GAP演繹法則之多胜肽比較之內設參數(連同終端間隙)不含罰函數。
根據若干實施例，胺基酸取代為：(1)減少對蛋白質分解的敏感度，(2)降低對氧化的敏感度，(3)改變形成蛋白質複體的結合親和力，(4)改變結合親和力，及/或(5)提供或修改此種多胜肽的物理化學性質或功能性質。根據若干實施例，可於天然序列(於若干實施例中，於形成分子間接點的功能部位外側的多胜肽部分)做出單一或多種胺基酸取代(於若干實施例中，保守胺基酸取代)。
於若干實施例中，保守胺基酸取代典型無法實質上改變親代序列的結構特性(例如置換胺基酸不可打斷存在於親代序列的螺旋，或破壞其它型別的親代序列的特徵二級結構)。說明技藝界已知之多胜肽二級結構及三級結構之實例，例如參考蛋白質、結構及分子原理(Creighton，編輯，W.H.富利曼公司(W.H.Freeman and Company)，紐約(1984年))；蛋白質結構介紹(C.Branden及J.Tooze，編輯，嘉蘭出版公司(Garland Publishing)，紐約州紐約(1991年))；及松同等人，自然354：105(1991年)。
如此處使用，「多胜肽片段」一詞係指由胺基端刪失及/或羧基端刪失的多胜肽。於若干實施例中，片段長度至少長5至500胺基酸。須瞭解於若干實施例中，片段至少長5、6、8、10、14、20、50、70、100、150、200、250、300、350、400、450、或500胺基酸。
胜肽類似物常用於製藥界作為具有類似樣板胜肽的性質的非胜肽藥物。此等類型之非胜肽化合物定名為「胜肽模擬物」或「擬胜肽作用劑」。Fauchere.J.Adv.Drug Res.15：29(1986)；Veber及Freidinger TINS 392頁(1985)；及Evans等人J.Med.Chem.30：1229(1987)。此等化合物係借助於電腦化分子模型而發展。胜肽模擬物的結構係類似治療有用之胜肽，胜肽模擬物可用來產生類似的治療效果或預防效果。通常擬胜肽作用劑的結構類似範本多胜肽(亦即具有生化性質或藥理性質之多胜肽)，諸如人類抗體，但也可有一或多個胜肽鍵聯選擇性地由選自於下列的任一鍵聯所置換：－－CH2 NH－－、－－CH2 －S－－、－－CH2 － －CH2 －－、－－CH＝CH－(順及反)、－－COCH2 －－、－－CH(OH)CH2 －－、及－－CH2 SO－－，置換方法為技藝界眾所周知。同位序列之一個或多個胺基酸以相同型別之D胺基酸(例如D離胺酸來替代L離胺酸)作系統取代，可於某些實施例中用來產生更穩定的胜肽。此外，包含同位序列或實質上相同同位序列變化的約束胜肽可藉技藝界已知方法產生(Rizo及Gierasch Ann.Rev.Biochem.61：387(1992))；例如但非限制性，經由加入可形成分子內雙硫橋的內部半胱胺酸殘基來環化胜肽。
「特異性結合劑」一詞係指可特異性結合至目標的天然分子或非天然分子。特異性結合劑之實例包括但非限於蛋白質、胜肽、核酸、碳水化合物、脂質及小分子化合物。於若干實施例中，特異性結合劑為抗體。於若干實施例中，特異性結合劑為抗原結合區。
「特異性結合」一詞係指特定結合劑以比其結合至非目標更大的親和力來結合至目標。於若干實施例中，特異性結合表示結合至目標的親和力至少比對非目標的結合力大10、50、100、250、500或1000倍。於若干實施例中，親和力係藉親和ELISA檢定分析測定。於若干實施例中，親和力係藉親和BIAcore檢定分析測定。於若干實施例中，親和力係藉親和動態方法測定。於若干實施例中，親和力係藉親和平衡/溶液方法測定。
「對TR－2的特異性結合」一詞係指特異性結合任何TR－2部分之特異性結合劑。於若干實施例中，對TR－2的特異性結合劑為抗TR－2之抗體。於若干實施例中，特異性結合劑為抗原結合區。
「抗體」或「抗體胜肽」二者係指完好的抗體或其片段。於若干實施例中，抗體片段可為與完好抗體競爭特異性結合的結合片段。「抗體」一詞也涵蓋多株抗體及單株抗體。於若干實施例中，結合片段可經由重組DNA技術製造。於若干實施例中，結合片段係經由酶裂解或化學裂解完好的抗體而製造。於若干實施例中，結合片段係藉重組DNA技術製造。結合片段包括但非限於Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv及單鏈抗體。非抗原結合片段包括但非限於Fc片段。於若干實施例中，抗體特異性結合至抗原決定部位，該抗原部位係由選自於Ab A、Ab B、Ab C、Ab D、Ab E、Ab F、Ab G、Ab H、Ab I、Ab J、Ab K、Ab L、Ab M、Ab N、Ab O、Ab P及Ab Q中之至少一種抗體所特異性結合。「抗體」一詞也涵蓋特別結合至另一種抗體的可變區的抗特應型抗體。於若干實施例中，抗特應型抗體特異性結合至anti－TR－2抗體的可變區。於若干實施例中，抗特應型抗體可用來檢測樣本中特殊anti－TR－2抗體的存在，或用來阻斷anti－TR－2抗體的活性。
「anti－TR－2抗體」一詞用於此處表示可特異性結合TR－2之抗體。於若干實施例中，anti－TR－2抗體係與TR－2抗原決定部位結合，至少有一種選自於Ab A至Ab Q的抗體係與該anti－TR－2抗原決定部位結合。於多種實施例中，TR－2可為任一種TR－2，包括但非限於人類、長尾獼猴、小鼠及兔。判定抗體之特異性的若干檢定分析為熟諳技藝人士眾所周知，該等檢定分析包括但非限於ELISA、ELISPOT、西方墨點、BLAcore檢定分析、溶液親和力結合檢定分析、T細胞共同刺激檢定分析及T細胞遷移檢定分析。
「單離的抗體」一詞用於此處表示抗體(1)不含至少部分正常所建的若干蛋白質，(2)大致上不含來自於同一個來源例如來自於同一個種屬的其它蛋白質，(3)由來自於不同種屬的細胞表現，或(4)非天然出現。
「多株抗體」一詞表示結合至同一個抗原的不同的抗原決定部位之抗體非同質混合物。
「單株抗體」一詞表示由相同核苷酸分子所編碼的抗體集合。於若干實施例中，單株抗體係由單一融合瘤或其它細胞系所製造，或由轉移基因哺乳動物所製造。單株抗體典型可辨識相同的抗原決定部位。「單株」一詞並非限於任何特定抗體製造方法。
「CDR接枝抗體」一詞係指其中來自一抗體的CDR係插入另一個抗體的骨架內部抗體。於若干實施例中，CDR衍生抗體及骨架衍生抗體屬於不同種屬。於若干實施例中，CDR衍生抗體與骨架衍生抗體屬於不同異構型。
「多特異性抗體」一詞係指其中兩個或更多個可變區結合至不同的抗原決定部位之抗體。抗原決定部位可位在同一個或不同的目標上。於若干實施例中，多特異性抗體為「雙特異性抗體」，可辨識於相同抗原或不同抗原上的兩種不同決定部位。
「催化抗體」一詞係指附接一個或多個催化部分的抗體。於若干實施例中，催化抗體為包含胞毒性部分的胞毒性抗體。
「人化抗體」一詞係只其中全部或部分抗體骨架區係衍生自人類但全部或部分一或多種CDR區係衍生自其它種屬例如小鼠的一種抗體。
「人類抗體」及「全人類抗體」二詞可互換使用，表示其中CDR及骨架二者實質上包含人類序列之抗體。於若干實施例中，全人類抗體係於非人類哺乳動物包括但非限於小鼠、大鼠及兔製造。於若干實施例中，全人類抗體係於融合瘤細胞製造。於若干實施例中，全人類抗體係重組製造。
於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含：(i)一第一多胜肽，包含選自於CDR1a、CDR2a、及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)：其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ I’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合；及(ii)一第二多胜肽，包含選自於CDRlb、CDR2b、及CDR3b中之至少一種互補決定區(CDR)：其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1 t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1’係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1’為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1’係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之第二多胜肽係與TR－2結合。
於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：2所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：36所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：4所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：38所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：6所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：40所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：8所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：42所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：10所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：44所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：12所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：46所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：14所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：48所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：16所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：50所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：18所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：52所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：20所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：54所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：22所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：56所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：24所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：58所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：26所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：60所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：28所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：62所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：30所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：64所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：32所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：66所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如SEQ ID NO：34所列舉之互補決定區(CDR)之一第一多胜肽以及包含如SEQ ID NO：68所列舉之CDR之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如上[079]段列舉之一第一多胜肽以及如上[084]段列舉之一第二多胜肽。於若干實施例中，一種anti－TR－2抗體包含如上[080]段列舉之一第一多胜肽以及如上[085]段列舉之一第二多胜肽。於若干實施例中，anti－TR－2抗體為人類抗體。於若干實施例中，anti－TR－2抗體包含可檢測標記。於若干實施例中，anti－TR－2抗體為嵌合體抗體。
「嵌合體抗體」係指具有第一種屬的抗體可變區融合至另一個分子，例如融合至另一個第二種屬的抗體恆定區之一種抗體。例如參考美國專利第4,816,567號及莫力森等人，Proc Natl Acad Sci(USA),81：6851－6855(1985)。於若干實施例中，第一種屬可與第二種屬不同。於若干實施例中，第一種屬可與第二種屬相同。於若干實施例中，嵌合體抗體可經由突變發生或CDR接枝至anti－TR－2抗體可變區的已知序列部分來製作。CDR接枝典型係涉及具有所需特異性的抗體的CDR接枝至另一個抗體的骨架區(FR)。
於若干實施例中，「多特異性」抗體或「多官能」抗體以外之二價抗體須瞭解其典型具有各個結合部位為相同。
當過量抗體減少受體結合至配體的數量達至少約20%、40%、60%、80%、85%或以上(於試管內競爭結合檢定分析測量)時，抗體實質上可抑制配體黏著至受體。
「抗原決定部位」一詞係指可藉特異性結合劑結合的分子部分。抗原決定部位之實例包含可特異性結合至免疫球蛋白及/或T細胞受體之任何多胜肽決定子。抗原決定部位決定子之實例包括但非限於化學活性表面分子基團，包括但非限於胺基酸、糖支鏈、磷醯基及/或磺醯基。於若干實施例中，抗原決定部位決定子具有特異性三度空間結構特性及/或特異性電荷特性。於若干實施例中，抗原決定部位為抗原由抗體所結合的區。抗原決定部位可為接續或非接續。於若干實施例中，抗原決定部位可為模擬物，其中包含類似用來產生抗體的抗原決定部位之三度空間結構，但又未包含或只包含部分於用來產生抗體之抗原決定部位之胺基酸殘基。
「抑制作用及/或中和作用抗原決定部位」一詞係指當由特異性結合劑結合時將導致於活體內、於試管內、及/或於原位的生物活性降低的抗原決定部位。於若干實施例中，中和作用抗原決定部位係位在目標的生物活性區上或與生物活性區相關聯。
「活化抗原決定部位」一詞係指當由特異性結合劑結合時可獲得活體內、試管內及/或原位的生物活性活化或維持的一種抗原決定部位。於若干實施例中，活化抗原決定部位係位在目標之生物活性區上或與該區相關聯。
於若干實施例中，抗原決定部位係由選自於Ab A、Ab B、Ab C、Ab D、Ab E、Ab F、Ab G、Ab H、Ab I、Ab J、Ab K、Ab L、Ab M、Ab N、Ab O、Ab P及Ab Q的至少一種抗體特異性結合。於若干實施例中，抗原決定部位為實質上純質。於若干實施例中，抗原決定部位之濃度至少為1 nM。於若干此等實施例中，抗原決定部位之濃度為1 nM至5 nM。於若干此等實施例中，抗原決定部位之濃度為5 nM至10 nM。於若干此等實施例中，抗原決定部位之濃度為10 nM至15 nM。
於若干實施例中，一種特異性結合至一抗原決定部位之抗體，該抗原決定部位係由選自於Ab A、Ab B、Ab C、Ab D、Ab E、Ab F、Ab G、Ab H、Ab I、Ab J、Ab K、Ab L、Ab M、Ab N、Ab O、Ab P及Ab Q的至少一種抗體特異性結合，且為實質上純質。於若干此等實施例中，抗體之濃度至少為1 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為1 nM至5 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為5 nM至10 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為10 nM至15 nM。
於若干實施例中，一種抗體特異性結合成熟人類TR－2之胺基酸1至胺基酸85且為實質上純質。於若干此等實施例中，抗體之濃度至少為1 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為1 nM至5 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為5 nM至10 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為10 nM至15 nM。
於若干實施例中，一種抗體係與選自於Ab A、Ab B、Ab C、Ab D、Ab E、Ab F、Ab G、Ab H、Ab I、Ab J、Ab K、Ab L、Ab M、Ab N、Ab O、Ab P及Ab Q中之至少一種抗體競爭結合至一抗原決定部位。於若干此等實施例中，抗體為實質上純質。於若干此等實施例中，抗體之濃度為1 nM至5 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為5 nM至10 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為10 nM至15 nM。
於若干實施例中，一種抗體係與選自於Ab A、Ab B、Ab C、Ab D、Ab E、Ab F、Ab G、Ab H、Ab I、Ab J、Ab K、Ab L、Ab M、Ab N、Ab O、Ab P及Ab Q中之至少一種抗體競爭結合至成熟人類TR－2之胺基酸1至85。於若干此等實施例中，抗體為實質上純質。於若干此等實施例中，抗體之濃度為1 nM至5 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為5 nM至10 nM。於若干此等實施例中，抗體之濃度為10 nM至15 nM。
「作用劑」一詞用於此處係表示化學化合物、化學化合物混合物、生物巨分子、或得自生物材料的萃取物。
如此處使用，「標記」一詞係指可被檢測的任何分子。於若干實施例中，抗體可藉結合放射性標記胺基酸來加標記。於若干實施例中，可藉加標記的抗生物素(例如鏈絲菌抗生物素含有螢光記號或酶活性而可藉光學方法或比色法來檢測)所檢測之生物素部分可附接至抗體。於若干實施例中，標記可結合至或附加至另一個試劑，而另一個試劑又係結合至感興趣的抗體。於若干實施例中，標記可結合至或附接至抗體，而抗體又特異性結合感興趣的抗體。於若干實施例中，標記或記號可為治療作用。多種多胜肽及糖蛋白的加標記方法為技藝界所已知且可使用。若干標記類別包括但非限於酶標記、螢光標記、化學冷光標記及放射性標記。多胜肽標記之若干實例包括但非限於下列：放射性同位素或放射性核種(例如3 H、1 4 C、1 5 N、3 5 S、9 0 Y、9 9 Tc、1 1 1 In、1 2 5 I、1 3 1 I)、螢光標記[例如螢光素異硫氰酸酯(FITC)、若丹明、鑭化磷、菲可瑞絲林(phycoerythrin(PE))]、酶標記(例如辣根過氧化酶、β－半乳糖苷酶、蟲螢光素酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖－6－磷酸去氫酶、醇去氫酶、蘋果酸去氫酶、青黴素酶、蟲螢光素酶)、化學冷光標記、生物素基團、及可藉二次通報子所辨識的預定多胜肽抗原決定部位(例如白胺酸拉鏈對序列、二次蛋白結合部位、金屬結合功能部位、抗原決定部位標籤)。於若干實施例中，標籤係藉不等長度的間隔臂附接來減少可能造成的立體封阻。
「樣本」一詞用於此處包括但非限於來自於活體或先前為活體的物質。此等活體包括但非限於人類、小鼠、猴、大鼠、兔及其它動物。此等物質包括但非限於血液、血清、尿液、細胞、器官、組織、骨骼、骨髓、淋巴結及皮膚。
「藥劑或藥物」等詞用於此處係表示當適當投予病人時可誘導出期望的療效之化學化合物或組成物。
「調理劑」一詞用於此處係為可改變或變更分子活性或分子功能的化合物。例如，比較於無調理劑存在下觀察得的活性或功能幅度，調理劑可造成一個分子的某些活性或功能幅度增減。於若干實施例中，調理劑為抑制劑，其可降低一個分子的至少一種活性或功能的幅度。分子活性及功能之若干實例包括但非限於結合親和力、酶活性及信號轉導。若干抑制劑實例包括但非限於蛋白質、胜肽、抗體、胜肽體、碳水化合物及小型有機分子。胜肽體之實例例如述於WO 01/83525。
如此處使用「實質上純質」一詞係表示一個目的物種為存在的主要物種(亦即以莫耳濃度為基準，該物種比較組成物中之任何其它個別物種更豐富)。於若干實施例中，實質純質分量為一種組成物其中目的物種係占全部存在的巨分子物種的至少約50%(以莫耳濃度計)。於若干實施例中，實質純質組成物將占組成物中全部存在的巨分子種屬約80%、85%、90%、95%、或99%。於若干實施例中，目的物種被純化為實質上均質(污染物種無法藉習知檢測方法於組成物中檢測得)，其中該組成物主要係由單一巨分子物種所組成。
「病人」一詞包括人類個體及動物個體。
根據若干實施例中，提供一種表現anti－TR－2抗體之細胞系。
於若干實施例中，提供包含至少部分人類序列及另一個種屬序列的嵌合體抗體。於若干實施例中，此種嵌合體抗體結果導致比不含宿主的抗體序列之抗體，造成宿主體內免疫反應的下降。舉例言之，於若干情況下，感興趣動物可用作為特定人類疾病的研究模型。為了研究抗體對動物宿主體內該種疾病的效果，可使用來自於不同種屬的抗體。但於某些情況下，此種來自於不同種屬的抗體可能於宿主動物體內提引出對其本身抗體的免疫反應，如此妨礙抗體的評估。於若干實施例中，以來自於宿主動物的抗體胺基酸序列置換anti－TR－2抗體之胺基酸序列之一部分，可降低宿主動物的抗－抗體反應的幅度。
於若干實施例中，嵌合體抗體包含重鏈和輕鏈，其中輕鏈和種鏈的可變區係來自於第一種屬，而輕鏈和重鏈的恆定區係來自於第二種屬。於若干實施例中，抗體重鏈恆定區為人類以外種屬的抗體重鏈恆定區。於若干實施例中，抗體輕鏈恆定區為人類以外種屬的抗體輕鏈恆定區。於若干實施例中，抗體重鏈恆定區為人類抗體重鏈恆定區，而抗體重鏈可變區為人類以外的種屬之抗體重鏈可變區。於若干實施例中，抗體輕鏈恆定區為人類抗體輕鏈恆定區，而抗體輕鏈可變區為人類以外的種屬之抗體輕鏈可變區。抗體恆定區之實例包括但非限於人類抗體恆定區、長尾獼猴抗體恆定區、小鼠抗體恆定區及兔抗體恆定區。抗體可變區之實例包括但非限於人類抗體可變區、小鼠抗體可變區、豬抗體可變區、天竺鼠抗體可變區、長尾獼猴抗體可變區及兔抗體可變區。於若干實施例中，重鏈和輕鏈的可變區之骨架可以衍生自其它抗體序列的骨架區置換。
若干嵌合抗體實例可藉熟諳技藝人士眾所周知之方法製造。於若干實施例中，編碼可變區重鏈之第一種屬之多核苷酸與編碼恆定區重鏈之第一種屬之多核苷酸可融合。於若干實施例中，編碼可變區輕鏈之第一種屬之多核苷酸與編碼恆定區輕鏈之第一種屬之多核苷酸可融合。於若干實施例中，此等融合核苷酸序列可被導入單一表現載體(例如質體)或多重表現載體之細胞內部。於若干實施例中，包含至少一個表現載體之細胞可用來製造多胜肽。於若干實施例中，融合核苷酸序列可被導入細胞內部於分開表現載體或於單一表現載體。於若干實施例中，宿主細胞表現重鏈和輕鏈，重鏈與輕鏈組合來製造抗體。於若干實施例中，包含至少一個表現載體之細胞可用來製造抗體。表現抗體之製造方法實例討論如下。
於若干實施例中，對anti－TR－2抗體的重鏈和輕鏈的保守修改(以及編碼核苷酸的相對應修改)將產生具有類似原先抗體的功能和化學特性的抗體。相反地，於若干實施例中，anti－TR－2抗體之功能特性及/或化學特性之若干修改可經由下述方式來達成，經由選擇於重鏈和輕鏈之胺基酸序列的取代由該等取代於維持下列的效果有顯著差異：(a)於取代區維持分子主鏈結構例如呈片狀或螺形構型，(b)於目標位置分子的電荷或疏水性或(c)支鏈體積。
熟諳技藝人士於期望做此等取代時可判斷若干期望的胺基酸取代(保守取代或非保守取代)。於若干實施例中，胺基酸取代可用來識別anti－TR－2抗體的重要殘基，諸如可增減抗體對TR－2的親和力，或增減抗體的效應物功能。
於若干實施例中，經由測量疾病症狀的減少，可評估anti－TR－2抗體的功效。於若干實施例中，感興趣的疾病可藉病原來引發。於若干實施例中，經由導入物質(諸如致癌原)及基因操控等其它方法，可於動物宿主體內建立疾病。於若干實施例中，經由檢測於動物宿主的一種或多種不良影響可評估效果。「不良影響」一詞包括但非限於於接收抗體的動物宿主之不良影響，該種影響當動物宿主未接受抗體時不會存在於宿主體內。於若干實施例中，不良影響包括但非限於發燒、對抗體的免疫反應、發炎、及/或動物宿主死亡。
對一種抗原之多種特異性抗體可以多種方式產生。於若干實施例中，含有感興趣的抗原決定部位之抗原可被導入動物宿主(例如小鼠)體內，如此製造該抗原決定部位的特異性抗體。於若干情況下，對感興趣抗原決定部位的特異性抗體可得自於取自於自然暴露於抗原決定部位之宿主之生物樣本。於若干情況下，將人類免疫球蛋白(Ig)部位導入小鼠體內，其中內生性Ig基因已經被去活化，如此有機會獲得人類單株抗體(MAb)。
天然抗體結構
天然抗體結構單位典型包含一個四元體。各個四元體典型係由兩個相同的成對多胜肽鏈所組成，各對有一個全長「輕」鏈(於若干實施例中，約25 kDa)及一個全長「重」鏈(於若干實施例中，約50－70 kDa)。「重鏈」一詞包括有足量可變區序列來對特定抗原提供特異性之任一種多胜肽。全長重鏈包括一個可變區功能部位VH 和三個恆定區功能部位CH 1、CH 2、及CH 3。VH 功能部位為多胜肽的胺基端，CH 3功能部位位在羧基端。「重鏈」一詞如此處使用涵蓋全長抗體重鏈及其片段。
「輕鏈」一詞包括任何有足夠可變區序列來對特定抗原提供特異性之任一種多胜肽。全長輕鏈包括可變區功能部位VL 和恆定區功能部位CL 。類似重鏈，輕鏈的可變區功能部位係位在多胜肽的胺基端。如此處使用「輕鏈」一詞涵蓋全長輕鏈及其片段。
各鏈之胺基端部分典型包括約100至110或更多個胺基酸之可變區(重鏈為VH ，輕鏈為VL )其典型負責抗原辨識。各鏈的羧基端部分典型定義恆定區(重鏈的CH 和輕鏈的CL )，其負責效應物功能。抗體效應物功能包括補體的活化和調理吞噬的刺激。人類輕鏈典型被分成κ輕鏈和λ輕鏈。重鏈典型分類為μ、δ、γ、α或ε，且分別定義抗體的異構型為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。IgG有數種亞類包括但非限於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。IgM有包括但非限於IgMl及IgM2的亞類。同樣IgA也再分成包括但非限於IgA1及IgA2的亞類。於全長輕鏈和重鏈內部，典型地可變區和恆定區係藉至少約12個或更多個胺基酸的「J」全來接合，重鏈也包括約12個或更多個胺基酸的「D」區。例如參考基本免疫學第7章(Paul,W.編輯，第2版雷文印刷所(Raven Press)紐約(1989年))。各輕/重鏈對之可變區典型係形成抗原結合部位。
可變區典型係具有由3個高度可變區所接合的相對保守框架結構(FR)的相同概略結構，也稱作為互補性決定區或CDR。各對重鏈和輕鏈的CDR典型係藉骨架區校準，因而可結合至特定抗原決定部位。由N端至C端，輕鏈和重鏈可變區典型包含功能部位FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。胺基酸分派至各個功能部位典型係根據Kabat免疫蛋白質序列(國際衛生院，馬里蘭州貝色拉(1987年及1991年))或Chothia & Leak J.Mol.Biol.196：901－917(1987)；Chothia等人自然342：878－883(1989)的定義。
如前文討論，有數型抗體片段，Fab片段係由一個輕鏈和一個重鏈的CH 1和可變區所組成。Fab分子的重鏈無法與另一個重鏈分子形成雙硫鍵。Fab片段含有一個輕鏈和一個重鏈含有更多恆定區於CH 1與CH 2功能部位間，故於兩個重鏈間可形成鏈間雙硫鍵來形成F(ab’)2分子。Fab片段係類似F(ab’)2分子，但分子重鏈恆定區延長至CH 2功能部位的末端。Fv區包含重鏈和輕鏈的可變區，但缺乏恆定區。單鏈抗體為Fv分子，其中重鏈和輕鏈可變區已經藉可撓性聯結子連接來形成單一多胜肽鏈及形成一個抗原結合區。單鏈抗體之實例細節例如討論於WO 88/01649及美國專利第4,946,778及5,260,203號。Fc片段含有重鏈的CH 2和CH 3功能部位，且含有多個恆定區於CH 1與CH 2功能部位間，因此於二重鏈間可形成鏈間雙硫鍵。
於若干實施例中，功能部位、CH 1、CH 2、CH 3及中間序列可經過洗牌來形成不同的抗體恆定區。例如，於若干實施例中，此種混成恆定區可對血清半生期最佳化，對抗體四元體的組裝和摺疊最佳化，及/或對改良效應物功能最佳化。於若干實施例中，經修改的抗體恆定區可經由將單點突變導入恆定區的胺基酸序列來產生，測試所得抗體的改良品質例如前述一或多種品質。
於若干實施例中，一種異構型抗體藉異構型交換被轉換成為不同的異構型，而未喪失其對特定目標分子的特異性。異構型交換方法包括但非限於直接重組技術(例如參考美國專利第4,816,397號)及細胞－細胞融合技術(例如參考美國專利第5,916,771號)等。於若干實施例中，抗體可使用前述技術或以其它技藝界已知的技術從一種亞類轉換成另一種亞類，而未喪失其對特定目標分子的特異性，包括但非限於由IgG2亞類轉換成為IgG1、IgG3或IgG4亞類。
雙特異性抗體或雙功能抗體
雙特異性抗體或雙功能抗體典型為有兩個不同重/輕鏈對和兩個不同結合部位的人造混成抗體。雙特異性抗體可藉多種方法製造，該等方法包括但非限於融合瘤的融合、或Fab’片段的鍵聯。例如參考Songsivilal & Lachmann Clin.Exp.Immunol.79：315－321(1990),Kostelny等人，J.Immunol.148：1547－1553(1992)。
抗體的若干製備
於若干實施例中，抗體可於融合瘤細胞系以外的細胞系表現。於若干實施例中，特定抗體包括嵌合抗體的編碼序列可用於適當哺乳動物宿主細胞的轉形。根據若干實施例中，轉形可為藉任一種已知方法將多核苷酸導入宿主細胞，例如包括將多核苷酸封裝於病毒(或封裝於病毒載體內部)，且以病毒來轉導宿主細胞，或使用技藝界已知的程序來轉移感染載體，如美國專利第4,399,216；4,912,040；4,740,461；及4,959,455號之說明。
於若干實施例中，表現載體包含本文討論的任一種多核苷酸序列。於若干實施例中，提供一種製造多胜肽之方法，包含於適合表現其中所含的多核苷酸來製造多胜肽的條件下，於包含前述任一種表現載體的細胞製造多胜肽。
於若干實施例中，一種表現載體包含多核苷酸包含一序列編碼一多胜肽，該多胜肽包含選自於CDR1a、CDR2a及CDR3a中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1a包含胺基酸序列之a b c d e f g h i j k l，其中胺基酸a為甘胺酸；胺基酸b係選自於甘胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸c係選自於絲胺酸或蘇胺酸；胺基酸d係選自於異白胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸e係選自於絲胺酸、蘇胺酸或天冬醯胺；胺基酸f係選自於絲胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺、蘇胺酸或甘胺酸；胺基酸g係選自於甘胺酸、天冬酸或酪胺酸；胺基酸h係選自於甘胺酸、天冬酸、酪胺酸、天冬醯胺或絲胺酸；胺基酸i係選自於酪胺酸、異白胺酸、組胺酸、蛋胺酸或色胺酸；胺基酸j係選自於天冬醯胺、酪胺酸、組胺酸、絲胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸k為色胺酸或為不存在；以及胺基酸l為絲胺酸或為不存在；其中CDR2a包含胺基酸序列m n o p q r s t u v w x y z a’ b’ c’ ，其中胺基酸m係選自於色胺酸、酪胺酸、組胺酸、纈胺酸、麩胺酸或絲胺酸；胺基酸n係自於蛋胺酸或異白胺酸；胺基酸o係選自於天冬醯胺、酪胺酸、絲胺酸、色胺酸或組胺酸；胺基酸p係選自於脯胺酸、酪胺酸、絲胺酸、精胺酸、組胺酸、或天冬醯胺；胺基酸q係選自於天冬醯胺、絲胺酸、或天冬酸；胺基酸r係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸s係選自於天冬酸、絲胺酸、蘇胺酸、或精胺酸；胺基酸t係選自於天冬醯胺、蘇胺酸、丙胺酸、異白胺酸、或酪胺酸；胺基酸u係選自於蘇胺酸、酪胺酸、白胺酸、離胺酸、天冬醯胺、或異白胺酸；胺基酸v係選自於甘胺酸、酪胺酸、天冬酸、或半胱胺酸；胺基酸w係選自於酪胺酸、或天冬醯胺；胺基酸x係選自於丙胺酸或脯胺酸；胺基酸y係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或天冬酸；胺基酸z係選自於離胺酸、白胺酸或絲胺酸；胺基酸a’係選自於苯基丙胺酸、離胺酸或纈胺酸；胺基酸b’係選自於麩醯胺酸、絲胺酸或離胺酸；以及胺基酸c’為甘胺酸或為不存在；其中CDR3a包含胺基酸序列d’ e’ f’ g’ h’ i’ j’ k’ l’ m’ n’ o’ p’ q’ r’ s’ t’ u’ v’ w’，其中胺基酸d’係選自於色胺酸、天冬酸、甘胺酸、絲胺酸或麩胺酸；胺基酸e’係選自於天冬醯胺、天冬酸、甘胺酸、精胺酸、絲胺酸、纈胺酸、或白胺酸；胺基酸f’係選自於組胺酸、絲胺酸、丙胺酸、酪胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、甘胺酸或蘇胺酸；胺基酸g’係選自於酪胺酸、絲胺酸、丙胺酸、精胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸、胺基酸h’係選自於甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、蛋胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、或天冬酸；胺基酸i’係選自於絲胺酸、色胺酸、甘胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、酪胺酸、或蘇胺酸；胺基酸j’係選自於甘胺酸、蘇胺酸、絲胺酸、白胺酸、纈胺酸、天冬醯胺、色胺酸或酪胺酸；胺基酸k’係選自於絲胺酸、苯基丙胺酸、天冬酸、色胺酸、甘胺酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸l’係選自於組胺酸、天冬酸、丙胺酸、色胺酸、酪胺酸、絲胺酸、苯基丙胺酸、纈胺酸或甘胺酸、或為不存在；胺基酸m’係選自於苯基丙胺酸、酪胺酸、麩胺酸、脯胺酸、天冬酸、半胱胺酸、異白胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸n’係選自於天冬酸、苯基丙胺酸、丙胺酸、白胺酸、或絲胺酸或為不存在；胺基酸o’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、或纈胺酸或為不存在；胺基酸p’係選自於白胺酸、天冬酸、或酪胺酸或為不存在；胺基酸q’係選自於絲胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸r’為酪胺酸或為不存在；胺基酸s’係選自於甘胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸t’係選自於甘胺酸或蛋胺酸或為不存在；胺基酸u’係選自於蛋胺酸或天冬酸或為不存在；胺基酸v’係選自於天冬酸或纈胺酸或為不存在；及胺基酸w’為纈胺酸或為不存在；以及其中與抗體輕鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。於若干實施例中，提供一種製造多胜肽之方法，於適合表現其中含有的多核苷酸來製造多胜肽之條件下，於包含前述表現載體之細胞內，製造多胜肽。
於若干實施例中，一種表現載體包含多核苷酸包含一序列編碼一多胜肽，該多胜肽包含選自於CDR1b、CDR2b及CDR3b中之至少一種互補決定區(CDR)，其中CDR1b包含胺基酸序列a1 b1 c1 d1 e1 f1 g1 h1 i1 j1 k1 l1 m1 n1 o1 p1 q1，其中胺基酸a1係選自於精胺酸或離胺酸；胺基酸b1係選自於蘇胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸c1為絲胺酸；胺基酸d1為麩醯胺酸；胺基酸e1係選自於絲胺酸或甘胺酸；胺基酸f1係選自於異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；胺基酸g1係選自於絲胺酸、白胺酸、或精胺酸；胺基酸h1係選自於蘇胺酸、絲胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、精胺酸、組胺酸或酪胺酸；胺基酸i1係選自於酪胺酸、精胺酸、色胺酸、天冬酸或絲胺酸；胺基酸j1係選自於白胺酸、異白胺酸、天冬醯胺、酪胺酸或絲胺酸；胺基酸k1係選自於天冬醯胺、甘胺酸、纈胺酸、丙胺酸、或白胺酸；胺基酸l1係選自於酪胺酸、丙胺酸或天冬醯胺或為不存在；胺基酸m1係選自於天冬醯胺或離胺酸或為不存在；胺基酸n1係選自於酪胺酸、天冬醯胺或異白胺酸或為不存在；胺基酸o1係選自於白胺酸或酪胺酸或為不存在；胺基酸p1係選自於天冬酸或白胺酸或為不存在；以及胺基酸q1係存在於纈胺酸、丙胺酸或蘇胺酸或為不存在；其中CDR2b包含胺基酸序列r1 s1 t1 u1 v1 w1 x1，其中胺基酸r1係選自於丙胺酸、天冬酸、白胺酸、色胺酸、甘胺酸或纈胺酸；胺基酸s1係選自於蘇胺酸、纈胺酸、甘胺酸或丙胺酸；胺基酸t1為絲胺酸；胺基酸u1係選自於絲胺酸、天冬醯胺或蘇胺酸；胺基酸v1係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、或精胺酸；胺基酸w1係選自於麩醯胺酸、丙胺酸或麩胺酸；及胺基酸x1係選自於絲胺酸、精胺酸或蘇胺酸；其中CDR3b包含胺基酸序列y1 z1 a1’ b1’ c1’ d1’ e1’ f1’ g1’，其中胺基酸y1係選自於麩胺酸、蛋胺酸白或組胺酸；胺基酸z1係選自於麩醯胺酸或離胺酸；胺基酸a1’係選自於絲胺酸、蘇胺酸、丙胺酸、組胺酸、酪胺酸或苯基丙胺酸；胺基酸b1’係選自於酪胺酸、白胺酸、天冬醯胺、或甘胺酸；胺基酸c1’係選自於絲胺酸、麩醯胺酸、異白胺酸或離胺酸；胺基酸d1，係選自蘇胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、丙胺酸或絲胺酸；胺基酸e1’為脯胺酸；胺基酸f1’係選自於白胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、絲胺酸或精胺酸；以及胺基酸g1’係選自於蘇胺酸或絲胺酸；以及其中與抗體重鏈相關聯之多胜肽係與TR－2結合。提供一種製造多胜肽之方法，於適合表現其中含有的多核苷酸來製造多胜肽之條件下，於包含前述表現載體之細胞內，製造多胜肽。於若干實施例中，提供一種包含至少一種前述表現載體的細胞。提供一種製造多胜肽之方法，於適合表現其中含有的多核苷酸來製造多胜肽之條件下，於包含前述表現載體之細胞內，製造多胜肽。
於若干實施例中，一種表現載體可表現anti－TR－2抗體重鏈。於若干實施例中，一種表現載體可表現anti－TR－2抗體輕鏈。於若干實施例中，一種表現載體可表現anti－TR－2抗體重鏈及anti－TR－2抗體輕鏈二者。於若干實施例中，提供一種製造anti－TR－2抗體之方法，包含於適合表現其中所含多核苷酸來製造抗體之條件下，於包含此處所述至少一種表現載體之細胞製造抗體。
於若干實施例中，使用之轉移感染程序係依據欲轉形之宿主決定。若干將非同質多核苷酸導入哺乳動物細胞之方法為技藝界所已知，該等方法包括但非限於葡萄聚糖媒介之轉移感染、磷酸鈣沉澱、寶麗布倫(polybrene)媒介的轉移感染、原生質體融合、電泳、多核苷酸包封於微脂粒、以及DNA直接微注射入細胞核內部。
若干可用作為表現用宿主的哺乳動物細胞系為技藝界眾所周知，包括但非限於得自美國種型培養蒐集會(ATCC)，永生化細胞系，包括但非限於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、E5細胞、HeLa細胞、嬰倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞(例如Hep G2)、NS0細胞、SP20細胞、Per C6細胞、293細胞及多種其它細胞系。於若干實施例中，經由判定哪一種細胞系有高度表現程度，且製造具有組成抗原結合性質的抗體來選擇細胞系。
於若干實施例中，可被轉移感染宿主細胞的載體包含可工作式鍵聯至anti－TR－2抗體編碼多核苷酸的控制序列。於若干實施例中，控制序列輔助表現鍵聯的多核苷酸，如此製造由鍵聯的多核苷酸所編碼的多胜肽。於若干實施例中，載體也包含多核苷酸序列，其允許於宿主細胞的染色體相依性複製。載體實例包括但非限於質體(例如BlueScript,puc等)、黏接質體及YACS。
若干抗體用途
根據若干實施例中，抗體可用來檢測於樣本內部的特定抗原。於若干實施例中，如此允許識別出可製造蛋白質的細胞或組織。例如，於若干實施例中，anti－TR－2抗體可用來檢測樣本中存在有TR－2。於若干實施例中，檢測樣本中是否存在有TR－2之方法包含(a)組合anti－TR－2抗體與樣本；(b)分開與抗原結合的抗體與未結合的抗體；以及(c)檢測是否有結合於抗原的抗體存在。
其中抗體可用來檢測是否存在有抗原的檢定分析包括但非限於ELISA及西方墨點檢定分析。於若干實施例中，anti－TR－2抗體可加標記。於若干實施例中，anti－TR－2抗體可藉可結合至anti－TR－2抗體的加標記抗體來檢測。於若干實施例中，提供檢測樣本中是否存在有TR－2的套件組。於若干實施例中，套件組包含anti－TR－2抗體和檢測抗體的試劑。
於若干實施例中，抗體可用來實質上分離化學部分，諸如但非限於分離蛋白質。於若干實施例中，抗體可附接至「基質」，基質為用來制動抗體的支持材料。基質包括但非限於試管、平板(亦即多孔板)、珠粒例如微珠粒、過濾器、球及膜。於若干實施例中，基材可由水不溶性材料製成，諸如但非限於聚碳酸酯樹脂、聚矽氧樹脂或尼龍樹脂。用於親和層析術之基材實例包括但非限於纖維素、瓊脂糖、聚丙烯醯胺、葡萄聚糖、聚苯乙烯、聚乙烯醇及多孔矽氧。有多種市售層析術基材包括但非限於西法羅斯(Sepharose)2B、西法羅斯(Sepharose)4B、西法羅斯(Sepharose)6B及其它西法羅斯形式(法瑪西亞公司(Pharmacia)；生物膠(Bio－Gel)(以及各種生物膠形式例如生物膠A、P或CM)、西雷斯公司(Cellex)(及各種西雷斯形式例如西雷斯AE或西雷斯－CM)、層析膠(Chromagel)A、層析膠P及恩哲菲斯(Enzafix)(和光化學工業公司(Wako Chemical Indus.))。抗體親和管柱的使用為熟諳技藝人士已知。於若干實施例中，一種單離TR－2之方法包含(a)附接TR－2抗體至基材；(b)暴露含TR－2的樣本至部分(a)的抗體；以及(c)單離TR－2。於若干實施例中，提供一種單離TR－2用之套件組。於若干實施例中，該套件組包含附接至一基材的anti－TR－2抗體及單離TR－2用之試劑。
如此處使用「親和層析術」一詞表示分離及純化樣本中之感興趣的材料之方法，該方法係經由利用一對材料間的交互作用(例如親和力)來分離及純化，成對材料諸如抗原和抗體、酶和酶基質或受體與配體。
於若干實施例中，結合至特定蛋白質及阻斷與其它結合化合物的作用之抗體具有治療用途。於本應用中，當討論anti－TR－2抗體用於治療疾病或病症時，此種用途包括使用anti－TR－2抗體的本身；包含anti－TR－2抗體之組成物；及/或包含anti－TR－2抗體及一種或多種額外活性成分之組合治療。當anti－TR－2抗體用於「治療」疾病或病症時，此種治療可或可未包括疾病或病症的預防。於若干實施例中，anti－TR－2抗體可能阻斷TR－2受體與其配體TRAIL間之交互作用。於若干實施例中，anti－TR－2抗體可能活化TR－2受體。於若干實施例中，anti－TR－2抗體可能建設性活化TR－2受體。因TR－2係與細胞凋亡有關。於若干實施例中，anti－TR－2抗體具有於其中期望細胞死亡或預防細胞死亡的疾病的治療上具有治療用途。此等疾病包括但非限於與任何可表現TR－2的組織有關的癌症、發炎及病毒感染。於若干實施例中，anti－TR－2抗體係單獨投予。於若干實施例中，anti－TR－2抗體係於至少另一種治療劑投予前投予。於若干實施例中，anti－TR－2抗體係與至少另一種治療劑投予同時投予。於若干實施例中，anti－TR－2抗體係於投予至少另一種治療劑之後投予。治療劑之實例包括但非限於至少另一種癌症治療劑。癌症治療劑之實例包括但非限於放射性治療及化學治療。
於若干實施例中，anti－TR－2抗體醫藥組成物可以組合治療，亦即組合其它藥劑來投予。於若干實施例中，組合治療包含anti－TR－2抗體組合至少一種抗血管生成劑。血管生成劑之實例包括但非限於於活體內合成製備的化學組成物、抗體、抗原結合區、放射性核種及其組合及軛合物。於若干實施例中，任何藥劑皆可用作為激動劑、括抗劑、別構調理劑、或毒素。於若干實施例中，作用劑可用來抑制目標或刺激目標(例如受體或酶的活化或抑制)，藉此促進細胞死亡或中止細胞生長。
化學治療處理之實例包括但非限於抗腫瘤劑，包括但非限於烷化劑，包括但非限於：氮芥子素，包括但非限於美可伊沙明(mechlorethamine)、賽可羅弗斯法明(cyclophosphamide)、伊法斯邁得(ifosfamide)、美法藍(melphalan)及可藍布西爾(chlorambucil)；亞硝基脲類包括但非限於卡目史丁(carmustine)、BCNU、洛馬史丁(lomustine)、CCNU及瑟馬史丁(semustine)、甲基－CCNU；特莫達(TemodalT M )、特莫卓拉邁得(temozolamide)；伸乙基亞胺類/甲基蜜胺包括但非限於三伸乙基蜜胺(TEM)、三乙烯、硫基磷醯胺、西爾堤帕(thiotepa)、六甲基蜜胺(HMM)及亞崔它明(altretamine)、烷基磺酸酯類包括但非限於布蘇芳(busulfan)；三研類包括但非限於達卡巴曾(dacarbazine)(DTIC)；抗代謝劑包括但非限於葉酸類似物諸如美索特瑟特(methotrexate)及崔美索特瑟特(trimetrexate)；嘧啶類似物包括但非限於5－氟尿嘧啶(5FU)、氟去氧尿苷、晶西塔賓(gemcitabine)、胞嘧啶、阿拉伯糖苷(AraC、西塔拉賓(cytarabine))、5－吖胞苷及2,2’－二氟去氧胞苷；嘌呤類似物包括但非限於6－巰基嘌呤、6－巰基鳥嘌呤、亞雜索普恩(azathioprine)、2’－迪歐西可夫麥辛(deoxycoformycin)(潘妥史丁(pentostatin))、赤羥基壬基腺嘌呤(EHNA)、夫達拉賓(fludarabine)磷酸鹽、克拉利賓(cladribine)及2－氯去氧基腺苷(2－CdA)；天然產物包括但非限於抗有絲分裂劑諸如太平洋紫杉鹼(paclitaxel)；長春花生物鹼包括但非限於文布拉史丁(vinblastine)(VLB)、文克利史丁(vincristine)及文諾拉賓(vinorelbine)；紫杉萜(taxotere)；伊斯特目史丁(estramustine)及伊斯特目史丁磷酸鹽；鬼臼毒素類包括但非限於伊脫普賽得(etoposide)及天尼普賽得(teniposide)；抗生素類包括但非限於阿丁諾黴素(actinomycin)D、道諾黴素(daunomycin)、如比朵黴素(rubidomycin)、朵沙如比辛(doxorubicin)、米妥山中(mitoxantrone)、伊達如比辛(idarubicin)、布麗歐黴素(bleomycins)、普麗卡黴素(plicamycin)、米沙黴素(mithramycin)、米妥黴素(mitomycin)C及放線黴素(actinomycin)；酶類包括但非限於L天冬醯胺酶；生物反應性調理劑包括但非限於干擾素－α、IL－2、G－CSF及GM－CSF；朵西賽金(doxycyckine)；伊齡諾特肯(irnotecan)鹽酸鹽；各種藥劑包括但非限於鉑配價錯合物諸如西鉑丁(cisplatin)及卡鉑丁(carboplatin)；蒽二酮類包括但非限於米妥山中；經取代之脲類包括但非限於羥基脲；甲基肼衍生物包括但非限於N－甲基肼(MIH)及普羅卡巴晶(procarbazine)；腎上腺皮質抑制劑包括但非限於米妥塔尼(mitotane)(o,p’－DDD)及安米諾葛魯特麥得(aminoglutethimide)；激素類及拮抗劑包括但非限於腎上腺皮質類固醇拮抗劑諸如普尼松(prednisone)及相當物、德沙美沙松(dexamethasone)及安米諾葛魯特麥得；健澤(GemzarT M )、晶西塔賓；黃體固酮包括但非限於羥基孕酮已酸鹽、甲氧基孕酮乙酸鹽及美晶史特爾(megestrol)乙酸鹽；雌激素包括但非限於二乙基史迪比斯中(diethylstilbestrol)及低乙基雌二醇相當物；抗雌激素包括但非限於塔莫西芬(tamoxifen)；雄激素包括但非限於睪固酮丙酸鹽及夫羅西美斯特隆(fluoxymesterone)/相當物；抗雄激素包括但非限於夫塔麥得(flutamide)、促性腺激素－釋放激素類似物及魯普羅萊得(leuprolide)；及非類固醇抗雄激素類包括但非限於夫它麥得。
可與anti－TR－2抗體共同投予之癌症治療之實例包括但非限於鎖定目標之治療。鎖定目標之治療實例包括但非限於使用治療性抗體。治療性抗體之實例包括但非限於小鼠、小鼠人嵌合抗體、CDR接枝抗體、人化抗體及人抗體及合成抗體包括但非限於經由篩選抗體存庫所選出的抗體。抗體實例包括但非限於結合至細胞表面蛋白Her2之抗體、CDC20、CDC33、黏蛋白狀糖蛋白及存在於腫瘤細胞的表皮生長因子受體(EGFr)，視需要可於顯示此等蛋白的腫瘤細胞誘導細胞抑制效果及/或細胞毒性效果。抗體實例包括但非限於赫史丁(HERCEPTINT M )、特斯圖如馬伯(trastuzumab)可用來治療乳癌及其它形式的癌症；利特山、利特西馬伯、哲瓦林(ZEVALINT M )、伊比特莫馬伯(ibritumomab)杜色丹(tiuxetan)及林法西得(LYMPHOCIDET M )、伊普拉度珠馬伯(epratuzumab)可用來治療非何杰金氏淋巴瘤及其它形式的癌症；吉利維克(GLEEVECT M )、伊馬丁尼(imatinib)甲烷磺酸鹽可用來治療慢性骨隨性白血病及胃腸道基質腫瘤；及貝沙(BEXXART M )、碘131妥西杜莫馬伯(tositumomab)可用來治療非何杰金氏淋巴瘤。若干抗體實例也包括厄比杜克斯(ERBITUXT M )；IMC－C225；、伊瑞沙(IressaT M )；杰非尼伯(gefitinib)；塔西普(TARCEVAT M )、厄堤諾利伯(ertinolib)；KDR(激酶功能部位受體)抑制劑；抗VEGF抗體及拮抗劑(例如亞瓦史丁(AvastinT M )及VEGF－TRAP)；抗VEGF受體抗體及抗原結合區；anit－Ang－1及anit－Ang－2抗體及抗原結合區；Tie－2抗體及其它Ang－1及Ang－2受體；Tie－2配體；抗Tie－2激酶抑制劑抗體；及肯沛斯(Campath)、阿蘭杜朱馬伯(alemtuzumab)。於若干實施例中，癌症治療劑為可選擇性誘導腫瘤細胞的細胞凋亡之其它多胜肽包括但非限於TNF相關多胜肽，諸如TRAIL。
於若干實施例中，特定結合劑(包括但非限於anit－IGF－R1抗體)其拮抗配體IGF－1及/或IGF－2結合至仿胰島素生長1因子(「IGF－1R」)且促進可表現IGF－1R細胞的細胞凋亡之特定結合劑經過調配或組合可結合特定結合劑(包括但非限於TRAIL及anit－TR－2抗體)其可激動因此可促進可表現TRAIL－R2的細胞的細胞凋亡一起投藥。anit－IGF－1R抗體之實例為技藝界所已知且討論於例如WO 2006/069202，申請日2005年12月20日，以引用方式倂入此處。
於若干實施例中，癌症治療劑為可減少血管新生的抗血管生成劑。若干此等藥劑包括但非限於厄比杜克斯、IMC－C225；KDR(激酶功能部位受體)抑制劑(例如抗體及特異性結合激酶功能部位受體之抗原結合區)；anti－VEGF劑(例如特異性結合VEGF之抗體或抗原結合區、或可溶性VEGF受體或其配體結合區)諸如亞瓦史丁或VEGF－TRAP；anti－VEGF受體劑(例如特異性結合至抗體或抗原結合區)；EGFR抑制劑(例如特異性結合至抗體或抗原結合區)諸如ABX－EGF、潘尼杜目馬伯(panitumumab)、伊利沙(IRESSAT M )、杰非尼伯、塔西普、厄堤諾利伯、Ang1及anti－Ang2劑(例如特異性結合之抗體或抗原結合區或其受體例如Tie2/Tek)；及anti－Tie－2激酶抑制劑(例如特異性結合至抗體或抗原結合區)。於若干實施例中，醫藥組成物也可包括一種或多種特異性結合生長因子且抑制生長因子活性之藥劑(例如抗體、抗原結合區或可溶性受體)，諸如肝細胞生長因子(HGF也稱作史杰特(Scatter)因子)拮抗劑，及特異性結合其受體「c－met」的抗體或抗原結合區。
抗血管生成劑之實例包括但非限於肯沛斯、IL－8、B－FGF、Tek拮抗劑(Ceretti等人，美國專利申請公告案第2003/0162712號；美國專利第6,413,932號)；抗TWEAK劑(例如特異性結合抗體或抗原結合區，或可溶性TWEAK受體拮抗劑；例如參考Wiley，美國專利第6,727,225號)；ADAM離散素(disintegrin)功能部位來拮抗接合素(integrin)結合至其配體(Fanslow等人，美國專利申請公告案第2002/0042368號)；特異性結合anti－eph受體及/或anti－ephrin抗體或抗原結合區(美國專利第5,981,245；5,728,813；5,969,110；6,596,852；6,232,447；6,057,124號；及其家族專利成員)；anti－PDGF－BB拮抗劑(例如特異性結合抗體或抗原結合區)以及特異性結合PDGF－BB配體的抗體或抗原結合區及PDGFR激酶抑制劑(例如特異性結合至抗體或抗原結合區)。
抗血管新生劑/抗腫瘤劑之實例包括但非限於SF－7784(輝瑞公司，美國)；西冷吉塔得(cilengitide)(默克公司(Merck KgaA)，德國，EPO770622)；皮嘉塔尼伯公司(pegaptanib)八鈉(吉利得科學公司(Gilead Sciences)，美國)；阿爾發靜止素(Alphastatin)(拜耳阿塔公司(BioActa)，英國)；M－PGA(西拉晶公司(Celgene)，美國，美國專利第5,712,291號)；伊洛馬史塔(ilomastat)(亞里瓦(Arriva)，美國，美國專利第5,892,112號)；伊馬克山尼伯(emaxanib)(輝瑞公司，美國，美國專利第5,792,783號)；瓦塔藍尼伯(vatalanib)(諾華公司(Novartis)，瑞典)；2－甲氧基雌二醇(英特美得(EntreMed)，美國)；TLC ELL－12(伊藍公司(Elan)，愛爾蘭)；阿那可塔吾(anecortave)乙酸鹽(愛爾康公司(Alcon)，美國)；α－D148 Mab(安晶公司(Amgen)，美國)；CEP－7055(西法隆公司(Cephalon)，美國)；anti－Vn－Mab(庫所公司(Crucell)，荷蘭)；DAC：抗血管生成劑(康如肯公司(ConjuChem)，加拿大)；安吉歐西定(Angilcidin)(英刊藥品公司(InKine Pharmaceutical)，美國)；KM－2550(協和發酵公司(Kyowa Hakko)，日本)；SU－0879(輝瑞公司，美國)；CGP－79787(諾華公司，瑞典，EP 970070)；ARGENT技術(阿利亞得(Ariad)，美國)；YIGSR－史特爾斯(Strealth)(嬌生公司(Johnson & Johnson)，美國)；纖維蛋白原E片段(拜耳阿塔公司，英國)；血管生成抑制劑(崔晶公司(Trigen)，英國)；TBC－1635(英西西吾藥品公司(Encysive Pharmaceuticals)，美國)；SC－236(輝瑞公司，美國)；ABT－567(亞伯特公司(Abbott)，美國)；美塔史塔丁(Metastatin)(英特美得公司(EntreMed)，美國)；血管生成抑制劑(崔沛公司(Tripep)，瑞典)；馬斯平(maspin)(創成公司(Sosei)，日本)；2－甲氧基雌二醇(腫瘤科學公司(Oncology Sciences Corporation)，美國)；ER－68203－00(伊瓦克斯公司(IVAX)，美國)；比尼芬(Benefin)(藍質驗室(Lane labs)，美國)；Tz－93(津村公司(Tsumura)，日本)；TAN－1120(武田公司(Takeda)，日本)；FR－111142(藤澤公司(Fujisawa)，日本，JP 02233610)；血小板因子4(里普利晶公司(RepliGen)，美國，EP 407122)；血管內皮生長因子拮抗劑(伯里恩公司(Borean)，丹麥)；天斯羅里馬斯(temsirolimus)(CCI－779)(美國南加州大學)；比瓦西如馬伯(bevacizumab)(pINN)(吉南鐵克公司(Genentech)，美國)；血管生成抑制劑(蘇晶公司(SUGEN)，美國)；XL 784(伊西利克斯公司(Exelixis)，美國)；XL 647(伊西利克斯公司，美國)；Mab、α 5 β 3結合素、微塔克辛(Vitaxin)及第二代微塔辛(應用分子衍化公司(Applied Molecular Evolution，美國及美得英妙公司(MedImmune)美國)；里宜諾史塔特(Retinostat)基因治療(牛津生醫公司(Oxford BioMedica)，英國)；恩哲史妥林(enzastaurin)鹽酸鹽(USAN)(禮萊公司(Lily)，美國)；CEP 7055(西法隆公司(Cephalon)，美國)及賽諾非合成實驗室(Sanofi－Synthelabo)，法國)；BC 1(晶諾亞(Genoa)癌症研究室，義大利)；血管生成抑制劑(阿奇米亞公司(Alchemia)，澳洲)；VEGF拮抗劑(里吉那隆公司(Regeneron)，美國)；rBPI 21及BPI衍生抗血管生成劑(索瑪公司(XOMA)，美國)；PI 88(普羅晶公司(Progen)，澳洲)；西倫吉泰得(cilengitide)(pINN)(默克公司，德國；德國慕尼黑技術大學；史克伯公司(Scripps)臨床與研究基金會，美國)；西杜西馬伯(cetuximab)(INN)(亞文堤斯(Aventis)，法國)；AVE 8062(味之素公司(Ajinomoto)，日本)；AS 1404(癌症研究室(Cancer Reserch Laboratory)，紐西蘭)；SG 292(鐵里歐公司(Telios)，美國)；英多史塔丁(Endostatin)(美國波士頓兒童醫院)；2－甲氧基雌二醇(美國波士頓兒童醫院)；ZD 6474(亞斯塔吉尼卡公司(AstraZeneca)，英國)；ZD 6126(安吉洛晶藥品公司(Angiogene Pharmaceuticals)，英國)；PPI 2458(普里西斯公司(Praecis)，美國)；AZD 9935(亞斯塔吉尼卡公司，英國)；AZD 2171(亞斯塔吉尼卡公司，英國)；瓦塔拉尼伯(vatalanib)(pINN)(諾華公司，瑞典)及先靈公司(Schering AG，德國)；組織因子路徑抑制劑(英特美得，美國)；皮嘉塔尼伯公司(Pinn)(吉利得科學公司，美國)；山索西卓(xanthorrhizol)(南韓永謝(Yonsei)大學)；疫苗，基於基因VEGF－2(史克伯公司臨床及研究基金會，美國)；SPV5.2(蘇普拉鐵克(Supratek)，加拿大)；SDX 103(美國加州大學聖地牙哥分校)；PX 478(Pro1X，美國)；美塔史塔丁(Metastatin)(英特美得公司，美國)；特普寧(troponin)I(美國哈佛大學)；SU 6668(蘇晶公司，美國)；OXI 4503(歐西晶公司(OXiGENE)，美國)；o－鳥苷類(迪曼森內爾藥品公司(Dimensional Pharmaceuticals)，美國)；莫杜普拉明(motuporamine)C(加拿大大不列顛哥倫比亞大學)；CDP 791(西勒鐵克集團(Celltech Group)，英國)；亞堤普利莫得(atiprimod)(pINN)(葛蘭素史克公司(GlaxoSmithKline)，英國)；E 7820(衛材公司(Eisai)，日本)；CYC 381(美國哈佛大學)；AE 941(安特那公司(Aeterna)，加拿大)；FGF2癌症疫苗(英特美得公司，美國)；尿激酶胞質素原活化劑抑制劑(丹卓恩公司(Dendreon)，美國)；歐葛露芬尼得(oglufanide)(pINN)(美莫特(Melmotte)，美國)；HIF－1 α抑制劑(森諾瓦公司(Xenova)，英國)；CEP 5214(西法隆公司)，美國)；BAY RES 2622(拜耳公司(Bayer)，德國)；英吉歐西定(Angiocidin)(英津公司(InKine)，美國)；A6(安斯壯公司(Angstrom)，美國)；KR 31372(韓國化學技術研究所，南韓)；GW 2286(葛蘭素史克公司，英國)；EHT 0101(伊克松希公司(ExonHit)，法國)；CP 868596(輝瑞公司，美國)；CP 564959(OSI，美國)；CP 547632(輝瑞公司，美國)；786034(葛蘭素史克公司，英國)；KRN 633(麒麟釀造公司(Kirin Brewery)，日本)；藥物輸送系統，眼內，2－甲氧基雌二醇(英特美得公司，美國)；安吉尼斯(anginex)(馬斯企特大學(Maastricht，荷蘭)及美國明尼蘇達大學)；ABT 510(亞伯特公司，美國)；AAL 993(諾華公司，瑞士)；VEGI(保田鐵克公司(ProteomTech)，美國)；腫瘤壞死因子α抑制劑(美國國家老化研究所)；SU 11248(美國輝瑞公司及美國SUGEN)；ABT 518(亞伯特公司，美國)；YH16(陽台龍江公司(Yantai Rongchang)，中國)；S－3APG(美國波士頓兒童醫院及英特美得公司，美國)；Mab,KDR(英克隆系統公司(ImClone Systems)，美國)；Mab,α 5 β 1(蛋白質設計公司(Protein Design)，美國)；KDR激酶抑制劑(西萊鐵克集團公司，英國及嬌生公司，美國)；GFB 116(美國南佛羅里達大學和耶魯大學)；CS 706(三共公司(Sankyo)，日本)；肯布利抑制素(combretastatin)A4前藥(美國亞利桑那州立大學)；軟骨素酶AC(IBEX，加拿大)；BAY RES 2690(拜耳公司，德國)；AGM 1470(美國哈佛大學，日本武田藥廠及美國TAP公司)；AG 13925(安古隆公司(Agouron)，美國)；四硫基鉬酸鹽(美國密西根大學)；GCS 100(美國偉恩州立大學)；CV 247(Ivy醫藥公司(Ivy Medical)，英國)；CKD 732(鍾昆丹(Chong Kun Dang)，南韓)；Mab，血管內皮生長因子(辛諾瓦公司(Xenova)，英國)；埃索葛拉定(irsogladine)(INN)(日本新藥公司)，日本)；RG 13577(亞文堤斯公司，法國)；WX 360(威勒斯(Wilex)，德國)；鮫鯊胺(pINN)(吉尼拉公司(Genaera)，美國)；RPI 4610(瑟那公司(Sirna)，美國)；半乳糖岩藻聚糖硫酸鹽(馬利諾瓦公司(Marinova)，澳洲)；肝素烷酶抑制劑(英賽公司(InSight)，以色列)；KL 3106(可隆公司(Kolon)，南韓)；亨諾基爾(Honokiol)(美國伊莫利大學)；ZK CDK(先靈公司，德國)；ZK(安吉歐(Angio)(先靈公司，德國)；諾華公司，瑞士及先靈公司，德國)；XMP 300(XOMA，美國)；VGA 1102(太所公司(Taisho)，日本)；VEGF受體調理劑(美國藥典)；VE凱得林(cadherin)－2拮抗劑(英克隆系統公司(ImClone Systems)，美國)；血管抑制素(美國國家衛生院)；疫苗，Flk－1(英克隆系統公司，美國)；TZ 93(津村公司，日本)；探抑制素(TumStatin)(美國貝斯以色列醫院)；截頭可溶性FLT1(血管內皮生長因子受體1)(默克公司，美國)；Tie－2配體(里吉那隆，美國)；及血栓生成素1抑制劑(美國阿雷吉尼(Allegheny)衛生、教育與研究基金會)。
若干癌症治療劑包括但非限於；沙利竇邁(thalidomide)及沙利竇邁類似物(N－(2,6－二酮基－3－哌啶基)鄰苯二甲醯亞胺)；堤可嘉藍(tecogalan)鈉(硫酸化多醣胜肽基聚糖)；維卡得(Velcade)；伯堤卓米伯(bortezomib)；拉帕黴素(rapamycin)；TAN 1120(8－乙醯基－7,8,9,10－四氫－6,8,11－三羥基－1－甲氧基－10－[[八氫－5－羥基－2－(2－羥基丙基)－4,10－二甲基哌喃并[3,4－d]－1,3,6－二唑辛(dioxazocin)－8－基氧基]－5,12－萘二酮]；蘇拉迪斯塔(suradista)(7,7’－[羰基貳[亞胺基(1－甲基－1H－吡咯－4,2－二基)羰基亞胺基(1－甲基－1H－吡咯－4,2－二基)羰基亞胺基]]貳－1,3－萘二磺酸四鈉鹽)；SU 302；SU 301；SU 1498((E)－2－氰基－3－[4－羥基－3,5－貳(1－甲基乙基)苯基]－N－(3－苯基丙基)－2－丙烯醯胺)；SU 1433(4－(6,7－二甲基－2－喹啉基)－1,2－苯二醇)；ST 1514；SR 25989；可溶性Tie－2；SERM衍生物；法莫斯(Pharmos)；瑟美沙尼伯(semaxanib)(pINN)(3－[(3,5－二甲基－1H－吡咯－2－基)亞甲基]－1,3－二氫－2H－吲哚－2－酮]；S 836；RG 8803；RESTIN；R 440(3－(1－甲基－1H－吲哚－3－基)－4－(1－甲基－6－硝基－1H－吲哚－3－基)－1H－吡咯－2,5－二酮)；R123942(1－[6－(1,2,4－噻二唑－5－基)－3－嗒基]－N－[3－(三氟甲基)苯基]－4－哌啶胺)；脯胺醯基羥基酶抑制劑；進展提升基因；普利諾馬史體特(prinomastat)(INN)((S)－2,2－二甲基－4－[[對－(4－吡啶基氧基]苯基]磺醯基)－3－硫啉甲醯羥肟酸)；NV 1030；NM 3(8－羥基－6－甲氧基－α－甲基－1－酮基－1H－2－苯并哌喃－3－乙酸)；NF 681；NF 050；MIG；METH 2；METH 1；馬那山丁(manassantin)B(α－[1－[4－[5－[4－[2－(3,4－二甲氧基苯基)－2－羥基－1－甲基乙氧基]－3－甲氧基苯基]四氫－3,4－二甲基－2－呋喃基]－2－甲氧基苯氧基]乙基]－1,3－苯并二唑－5－甲醇)；KDR單株抗體；α 5 β 3接合素單株抗體；LY 290293(2－胺基－4－(3－吡啶基)－4H－萘并[1,2－b]哌喃－3－甲腈)；KP 0201448；KM 2550；接合素特異性胜肽；INGN 401；GYKI 66475；GYKI 66462；綠抑制素(greenstatin)(101－354－胞質素原(人類))；類風濕性關節炎、攝護腺癌、卵巢癌、神經膠細胞瘤、內皮抑制素、結腸直腸癌、ATF BTPI、抗血管新生基因、血管生成抑制劑或血管生成之基因治療；明膠酶抑制劑、FR 111142(4,5－二羥基－2－己烯酸5－甲氧基－4－[2－甲基－3－(3－甲基－2－丁烯)基]－1－螺[2.5]辛－6－基酯)；弗非尼美斯(forfenimex)(pINN)(S)－α－胺基－3－羥基－4－(羥基甲基)苯乙酸)；纖維蛋白膠拮抗劑(1－乙醯基－L－脯胺醯基－L－組胺醯基－L－絲胺醯基－L－半胱胺醯基－L－天冬醯胺)；纖維母細胞生長因子受體抑制劑；纖維母細胞生長因子拮抗劑；FCE 27164(7,7’－[羰基貳[亞胺基(1－甲基－1H－吡咯－4,2－二基)羰基亞胺基(1－甲基－1H－吡咯－4,2－二基)羰基亞胺基]]貳－1,3,5－萘三磺酸六鈉鹽)；FCE 26752(8,8’－[羰基貳[亞胺基(1－甲基－1H－吡咯－2,4－二基)羰基亞胺基(1－甲基－1H－吡咯－4,2－二基)羰基亞胺基]]貳－1,3,6－萘三磺酸)；內皮單核細胞活化多胜肽II；VEGFR反訊息寡核苷酸；抗血管生成及趨性因子；ANCHOR血管抑制劑；內皮抑制劑；De1－1血管生成蛋白質；CT 3577；康妥索抑制劑(contortrostatin)；CM 101；軟骨素酶AC；CDP 845；肯抑制素(CanStatin)；BST 2002；BST 2001；BLS 0597；BIBF 1000；ARRESTIN；阿巴米葛倫(apomigren)(1304－1388－型XV膠原(人類基因COL 15A1 α 1鏈前驅物))；血管抑制素；aaATIII；A 36；9 α－氟甲氧基孕酮乙酸鹽((6－α)－17－(乙醯氧基)－9－氟－6－甲基－孕－4－烯－3,20－二酮)；2－甲基－2－鄰苯二甲醯亞胺基－戊二酸(2－(1,3－二氫－1－酮基－2H－異吲哚－2－基)－2－甲基戊二酸)；釔90標記的單株抗體BC－1；瑟美沙尼伯(3－(4,5－二甲基吡咯－2－基亞甲基)吲哚啉－2－酮)(C15 H14 N2 O)；PI 88(磷酸甘露糖戊糖硫酸鹽)；亞沃西得(Alvocidib)(4H－1－苯并哌喃－4－酮、2－(2－氯苯基)－5,7－二羥基－8－(3－羥基－1－甲基－4－哌啶基)－順－(－)－)(C21 H20 Cl N O5)；E 7820；SU 11248(5－[3－氟－2－酮基－1,2－二氫吲哚－(3Z)－亞基甲基]－2,4－二甲基－1H－吡咯－3－羧酸(2－二乙基胺基乙基)醯胺)(C22 H27 F N4 O2)；鮫鯊胺(膽固烷－7,24－二醇、3－[[3－[(4－胺基丁基]胺基丙基)胺基]－、24－(氫硫酸鹽)、(3.β.,5.α.,7.α.)－](C34 H65 N3 O5 S)；伊利歐可隆(Eriochrome)黑T；AGM 1470(胺基甲酸、(氯乙醯基)－、5－甲氧基－4－[2－甲基－3－(3－甲基－2－丁烯基)基]－1－螺[2,5]辛－6－基酯、[3R－[3 α,4 α(2R,3R),5 β,6 β]])(C19 H28 Cl N O6)；AZD 9935；BIBF 1000；AZD 2171；ABT 828；KS－介白素－2；優特羅球素(Uteroglobin)；A 6；NSC 639366(1－[3－(二乙基胺基)－2－羥基丙基胺基]－4－(－2－基甲基胺基)蒽醌反丁烯二酸鹽)(C24 H29 N3 O4.C4 H4 O4)；ISV 616；anti－ED－B融合蛋白質；HUI 77；特普寧I；BC－1單株抗體；SPV 5.2；ER 68203；CKD 731(3－(3,4,5三甲氧基苯基)－2(E)－丙烯酸(3R,4S,5S,6R)－4－[2(R)－甲基3(R)－3(R)－(3－甲基－2－丁烯基)－2－基]－5－甲氧基－1－螺[2.5]辛－6－基酯)(C28 H38 O8)；IMC－1C11；aaATIII；SC 7；CM 101；安吉可(Angiocol)；克林(Kringle)5；CRD 732(3－[4－[2－(二甲基胺基)乙氧基]苯基]－2－(E)－丙烯酸)(C29 H41 N O6)；U995；肯抑制素；SQ 885；CT 2584(1－[11－(十二烷基胺基)－10－羥基十一烷基)－3,7－二甲基黃嘌呤)(C30 H55 N5 O3)；歇爾莫辛(Salmosin)；EMAP II；TX 1920(1－(4－甲基哌基)－2－(2－硝基－1H－1－咪唑基)－1－乙酮)(C10 H15 N5 O3)；α－v β－x抑制劑；CHIR 11509(N－(1－丙炔基)甘胺醯基－[N－(2－萘基)]甘胺醯基－[N－(胺基甲醯基甲基)]甘胺酸貳(4－甲氧基苯基)甲基醯胺)(C36 H37 N5 O6)；BST 2002；BST 2001；B0829、FR 111142；4,5－二羥基－2(E)－己烯酸(3R,4S,5S,6R)－4[(1R),2(R)－環氧基－1,5－二甲基－4－己烯基]－5－甲氧基－1－螺[2.5]辛－6－基酯(C22 H34 O7)；及激酶抑制劑包括但非限於N－(4－氯苯基)－4－(4－吡啶基甲基)－1－呔胺；4－[4－[[[[4－氯－3－(三氟甲基)苯基]胺基]羰基]胺基]苯氧基]－N－甲基－2－吡啶羧醯胺；N－[2－(二乙基胺基)乙基]－5－[(5－氟－1,2－二氫－2－酮基－3H－吲哚－3－亞基)甲基]－2,4－二甲基－1H－吡咯－3－羧醯胺；3－[(4－溴－2,6－二氟苯基)甲氧基]－5－[[[[4－(1－吡咯啶基)丁基]胺基]羰基]胺基]－4－異噻唑羧醯胺；N－(4－溴－2－氟苯基)－6－甲氧基－7－[(1－甲基－4－哌啶基)甲氧基]－4－喹唑啉胺；3－[5,6,7,13－四氫－9－[(1－甲基乙氧基)甲基]－5－酮基－12H－茚并[2,1－a]吡咯并[3,4－c]咔唑－12－基]丙酯N,N－二甲基甘胺酸；N－[5－[[[[5－(1,1－二甲基乙基)－2－唑基]甲基]硫酯]－2－噻唑基]－4－哌啶羧醯胺；N－[3－氯－4－[(3－氟苯基)甲氧基]苯基]－6－[5－[[[2－(甲基磺醯基)乙基]胺基]甲基]－2－呋喃基]－4－喹唑啉胺；4－[(4－甲基－1－哌基)甲基]－N－[4－甲基－3－[[4－(3－吡啶)－2－嘧啶]胺基]－苯基]苄醯胺；N－(3－氯－4－氟苯基)－7－甲氧基－6－[3－(4－味啉基)丙氧基]－4－喹唑啉胺；N－(3－乙炔基苯基)－6,7－貳(2－甲氧基乙氧基)－4－喹唑啉胺；N－(3－((((2R)－1－甲基－2－吡咯啶基)甲基)氧基)－5－(三氟甲基)苯基)－2－((3－(1,3－唑－5－基)苯基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；2－(((4－氟苯基)甲基)胺基)－N－(3－((((2R)－1－甲基－2－吡咯啶基)甲基)氧基)－5－(三氟甲基)苯基)－3－吡啶羧醯胺；N－[3－(吖呾－3－基甲氧基)－5－三氟甲基－苯基]－2－(4－氟－苄基胺基)－菸鹼醯胺；6－氟－N－(4－(1－甲基乙基)苯基)－2－((4－吡啶基甲基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；2－((4－吡啶基甲基)胺基)－N－(3－(((2S)－2－吡咯啶基甲基氧基)－5－(三氟甲基)苯基)－3－吡啶羧醯胺；N－(3－(1,1二甲基乙基)－1H－吡唑－5－基)－2－((4－吡啶基甲基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；N－(3,3－二甲基－2,3－二氫－1－苯并呋喃－6－基)－2－((4－吡啶基甲基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；N－(3－((((2S)－1－甲基－2－吡咯啶基)甲基)氧基)－5－(三氟甲基)苯基)－2－((4－吡啶基甲基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；2－((4－吡啶基甲基)胺基)－N－3－((2－(1－吡咯啶基)乙基)氧基)－4－(三氟甲基)苯基)－3－吡啶羧醯胺；N－(3,3－二甲基－2,3－二氫－1H－吲哚－6－基)－2－((4－吡啶基甲基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；N－(4－(五氟乙基)－3－(((2S)－2－吡咯啶基甲基)氧基)苯基)－2－((4－吡啶基甲基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；N－(3－((3－吖呾基甲基)氧基)－5－(三氟甲基)苯基)－2－((4－吡啶基甲基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；N－(3－(4－哌啶基氧基)－5－(三氟甲基)苯基)－2－((2－(3－吡啶基)乙基)胺基)－3－吡啶羧醯胺；N－(4,4－二甲基－1,2,3,4－四氫－異喹啉－7－基)－2－(1H－吲唑－6－基胺基)－菸鹼醯胺；2－(1H－吲唑－6－基胺基)－N－[3－(1－甲基吡咯啶－2－基甲氧基)－5－三氟甲基－苯基]－菸鹼醯胺；N－[1－(2－二甲基胺基－乙醯基)－3,3－二甲基－2,3－二氫－1H－吲哚－6－基]－2－(1H－吲哚－6－基胺基)－菸鹼醯胺；2－(1H－吲哚－6－基胺基)－N－[3－(吡咯啶－2－基甲氧基)－5－三氟甲基－苯基]－菸鹼醯胺；N－(1－乙醯基－3,3－二甲基－2,3－二氫－1H－吲哚－6－基)－2－(1H－吲哚－6－基胺基)－菸鹼醯胺；N－(4,4－二甲基－1－酮基－1,2,3,4－四氫－異喹啉－7－基)－2－(1H－吲哚－6－基胺基)－菸鹼醯胺；N－[4－(第三丁基)－3－(3－哌啶基丙基)苯基][2－(1H－吲唑－6－基胺基)(3－吡啶基)]羧醯胺；N－[5－(第三丁基)異唑－3－基][2－(1H－吲唑－6－基胺基)(3－吡啶基)]羧醯胺；及N－[4－(第三丁基)苯基][2－(1H－吲唑－6－基胺基)(3－吡啶基)]羧醯胺，及揭示於下列參考案之激酶抑制劑：美國專利案第6,258,812；6,235,764；6,630,500；6,515,004；6,713,485；5,521,184；5,770,599；5,747,498；5,990,141號；美國專利申請公告案第US2003/0105091；及專利合作條約公告案第WO01/37820；WO01/32651；WO02/68406；WO02/66470；WO02/55501；WO04/05279；WO04/07481；WO04/07458；WO04/09784；WO02/59110；WO99/45009；WO98/35958；WO00/59509；WO99/61422；WO00/12089；及WO00/02871，各個公開案以引用方式倂入此處。
TR－2係於多種細胞表現，包括肝、腦、腎、結腸、乳房、肺、脾、胸腺、周邊血液淋巴球、胰、攝護腺、睪丸、卵巢、子宮及胃腸道的各個組織。TR－2相關癌症之實例包括但非限於肝癌、腦癌、腎癌、乳癌、胰癌、結腸直腸癌、肺癌(小細胞肺癌及非小細胞肺癌)、脾癌、胸腺癌或血球癌(亦即白血病)、攝護腺癌、睪丸癌、卵巢癌、子宮癌、胃癌、頭頸鱗狀細胞癌、黑素瘤及淋巴瘤。
於若干實施例中，anti－TR－2抗體可單獨使用或與至少另一種癌症之治療劑組合使用。於若干實施例中，anti－TR－2抗體結合治療有效量之額外治療劑使用。可與anti－TR－2抗體一起投藥之治療劑實例包括但非限於安尼沙黴素(anisamycin)抗生素之潔達那黴素(geldanamycin)家族成員；Pro－HGF；NK2；c－Met胜肽抑制劑；Grb2 Src同種2之括抗劑；Gab 1調理劑；主控負Src；von－Hippel－Landau)抑制劑包括但非限於沃馬寧(wortmannin)；P13激酶抑制劑、其它抗受體療法、anti EGFr、COX－2抑制劑、希樂葆(CelebrexT M )、希樂西伯(celecoxib)、偉適(VioxxT M )、洛非可西伯(rofecoxib)；血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF調理劑、纖維母細胞生長因子(FGF)、FGF調理劑、表皮生長因子(EGF)；EGF調理劑；角質細胞生長因子(KGF)、KGF相關分子、KGF調理劑；及基質金屬蛋白酶(MMP)調理劑。
於若干實施例中，anti－TR－2抗體用於特定治療劑來治療各種癌症。於若干實施例中，鑑於病情及期望的治療程度，可投予兩種、三種或更多種藥劑。當化合物係與一種或多種其它成分一起使用時，該化合物和一種或多種其它成分可共同、分開或循序(例如於一種用藥形式)投藥。於若干實施例中，此等藥劑可經由含括於相同配方中一起提供。於若干實施例中，此種藥劑及anti－TR－2抗體可藉含括於相同配方中一起提供。於若干實施例中，此等藥劑可分開調配且經由含括於同一個治療套件組中一起提供。於若干實施例中，此等藥劑和anti－TR－2抗體可分開調配且含括於一個治療套件組中一起提供。於若干實施例中，此等藥劑可分開提供。
於若干實施例中，當藉基因治療投藥時，編碼蛋白質藥劑及/或anti－TR－2抗體之基因可含括於同一個載體內部。於若干實施例中，蛋白質藥劑及/或anti－TR－2抗體之編碼基因可於相同啟動基因區的控制之下。於若干實施例中，蛋白質藥劑及/或anti－TR－2抗體之編碼基因可於分開載體。
於若干實施例中，anti－TR－2抗體可用來治療非人動物，諸如寵物(犬、貓、鳥類、靈長類等)、及家禽家畜動物(馬、牛、羊、豬、鳥類等)。於若干此等情況下，適當劑量可根據動物體重決定。例如，於若干實施例中，可使用0.2－1毫克/千克劑量。於若干實施例中，劑量可根據動物體表面積決定劑量實例係於0.1至20毫克/平方吋或由5至12毫克/平方米之範圍。用於小型動物諸如犬或貓，於若干實施例中，適當劑量為0.4毫克/千克。於若干實施例中，anti－TR－2抗體係藉注射或其它適當途徑每週投予一次或多次直到動物的病情改善為止，或可無限期投藥。
須瞭解個別病人對前述藥物或組合治療的反應各異，各病人的適當有效藥物組合可由臨床醫師決定。
長尾獼猴對某些疾病可提供有用的研究模式。疾病實例包括但非限於移殖排斥症候群及發炎性腸病等疾病。當於長尾獼猴人類疾病研究模式中，測試人類MAb的效果時，於若干實施例中，可用來判定anti－TR－2抗體是否以可媲美的程度來結合至人體和長尾獼猴的TR－2。
於若干實施例中，anti－TR－2抗體可為包含anti－TR－2抗體之全部或部分及胞毒性劑的軛合物分子的一部分。「胞毒劑」一詞係指可抑制或妨礙細胞功能及/或造成細胞死亡或摧毀的物質。該術語包括但非限於放射性同位素(例如I1 3 1 、I1 2 5 、Y9 0 及Re1 8 6 )、化學治療劑及毒素諸如細菌性、真菌、植物或動物來源的酶活性毒素或其片段。細胞毒劑之實例包括但非限於亞追厄黴素、朵沙如比辛、5－氟尿嘧啶、胞嘧啶阿拉伯糖苷(「Arc－C」)、賽可羅弗斯法明、西爾堤帕、紫杉萜(達色塔希爾(docetaxel))、布蘇芳、賽妥辛(Cytoxin)、塔克索(Taxol)、美索特瑟特、西鉑丁、美法藍、文布拉史丁、布麗歐黴素、伊脫普賽得、伊法斯邁得、米妥黴素C、米妥山中、文克利史丁、文諾拉賓、卡鉑丁、天尼普賽得、道諾黴素、卡米諾黴素(Carminomycin)、阿米諾普特林(Aminopterin)、達堤諾黴素、米妥黴素、伊斯普拉黴素(Esperamicins)、美法藍及其它相關氮芥子素。
於若干實施例中，anti－TR－2 抗體可為包含全部或部分anti－TR－2抗體及前藥的軛合物分子之一部分。於若干實施例中，「前藥」一詞係指醫藥活性物質之前驅物或衍生物形式。於若干實施例中，前藥比親代藥物對細胞的胞毒性低，前藥可經過酶催化活化或轉成更具有活性的胞毒性親代形式。前藥實例包括但非限於含磷酸鹽前藥、含硫代磷酸鹽前藥、含硫酸鹽前藥、含胜肽前藥、D胺基酸改性前藥、糖苷化前藥、含β內醯胺前藥、含有視需要可經取代之苯氧基乙醯胺前藥、及含有視需要可經取代之苯基乙醯胺前藥、5－氟胞嘧啶及其它可轉成更具有活性之胞毒性自由態藥物之5－氟尿嘧啶前藥。可衍生成為前藥形式之胞毒性藥物實例包括但非限於前述該等胞毒性劑。例如參考U.S.Patent No.6,702,705。
於若干實施例中，抗體軛合物係藉下述發揮功能，抗體軛合物具有分子之抗體部分將分子的胞毒性部分或前藥部分鎖定目標於病人的特定細胞族群。於anti－TR－2抗體之情況下，可使用此種軛合物分子，例如於若干實施例中，此種軛合物分子用來摧毀異常增殖的細胞諸如癌細胞。
於若干實施例中，提供包含投予治療有效量之anti－TR－2抗體之治療病人之方法。於若干實施例中，提供包含投予治療有效量之抗體軛合物之治療病人之方法。於若干實施例中，抗體係結合治療有效量如前文討論之至少一種額外治療劑使用。
如前文討論，於若干實施例中，anti－TR－2抗體可與一或多種其它藥物共同投予同一位病人，各藥物係根據適合該藥物的用藥計畫投藥。此種處理涵蓋前處理、同時處理、循序處理及交替用藥。此等藥物之其它實例包括但非限於抗病毒劑、抗生素、止痛劑、皮質類固醇、發炎性細胞激素之拮抗劑、DMARD、非類固醇抗炎藥、化學治療劑、血管生成抑制劑、及血管生成刺激劑。
於若干實施例中，各種醫藥病症係以anti－TR－2抗體組合另一種細胞凋亡刺激劑一起治療。例如，於若干實施例中，anti－TR－2抗體可於組成物投藥，組成物也含有可刺激一個或多個細胞凋亡之化合物。於若干實施例中，anti－TR－2抗體及細胞凋亡刺激劑可呈分開組成物投予，可藉相同途徑或不同途徑投予。
於若干實施例中，提供醫藥組成物包含治療有效量之抗體連同醫藥上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑、保藏劑及/或輔劑。
於若干實施例中，提供醫藥組成物包含治療有效量之抗體及治療有效量之至少另一種治療劑，連同醫藥上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑、保藏劑及/或輔劑。
於若干實施例中，可接受之調配物質較佳於所採用的劑量和濃度對接受者不具毒性。於若干實施例中，本發明之抗體提供於無緩衝調配物中，如PCT/US06/22599申請日2006年6月8日揭示。該案以引用方式倂入此處。
於若干實施例中，醫藥組成物可含有用來修改、維持或保有例如pH、滲透度、黏度、澄清度、色彩、等張性、氣味、無菌性、安定性、溶解速率或釋放速率、組成物之吸附或滲透之調配物質。於若干實施例中，適當調配物質包括但非限於胺基酸類(諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(諸如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(諸如硼酸鹽、碳酸氫鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其它有機酸類)；增量劑(諸如甘露糖醇或甘胺酸)；螯合劑(諸如伸乙基二胺四乙酸(EDTA))；錯合劑(諸如咖啡因、聚乙烯基吡咯啶酮、β環糊精或羥丙基－β－環糊精)；填充劑；單醣類；雙醣類；及其它碳水化合物(諸如葡萄糖、甘露糖或糊精類)；蛋白質類(諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白類)；著色劑、矯味劑及稀釋劑；乳化劑；親水聚合物(諸如聚乙烯基吡咯啶酮)；低分子量多胜肽類；形成鹽之抗衡離子(諸如鈉)；保藏劑(諸如氯化苄烷鎓)、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、賽可羅西丁(chlorhexidine)、山梨糖酸或過氧化氫)；溶劑(諸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇類(諸如甘露糖醇或山梨糖醇)；懸浮劑；界面活性劑或濕潤液(諸如普隆尼斯(pluronics)、PEG、山梨聚糖酯類、波麗索貝(polysorbate)諸如波麗索貝20、波麗索貝80、崔頓(triton)、特米沙明(tromethamine)、卵磷脂、膽固醇、堤洛沙保(tyloxapal)；安定促進液(諸如蔗糖或甘露糖醇)；張力提升劑(諸如鹼金屬鹵化物較佳為氯化鈉或氯化鉀、甘露糖醇、山梨糖醇)；輸送載媒劑；稀釋劑；賦形劑及/或醫藥輔劑(雷明頓製藥科學第18版，A.R.Gennaro編輯，默克出版公司(1990年))。
於若干實施例中，抗體及/或其它治療分子聯結至技藝界已知之半生期延長之載媒劑。此等載媒劑包括但非限於Fc功能部位、聚乙二醇及葡萄聚糖。此等載媒劑例如述於美國專利第6,660,843號及公告的PCT申請案第WO99/25044號。
於若干實施例中，最佳醫藥組成物將由熟諳技藝人士例如依據投藥途徑、輸送格式及期望的劑量決定。例如參考雷明頓製藥科學，參見上文。於若干實施例中，此等組成物可能影響抗體的物理狀態、安定性，於活體內的釋放速率、及於活體內的廓清率。
於若干實施例中，醫藥組成物的主要載媒劑或載劑本質可為水性或非水性。例如於若干實施例中，適當載媒劑或載劑可為注射用水、生理食鹽水或人工腦脊髓液，且可能補充其它常用的注射投藥組成物。於若干實施例中，中性緩衝食鹽水或混合血清白蛋白的食鹽水屬於額外載媒劑實例。於若干實施例中，醫藥組成物包含約pH 7.0－8.5之Tris緩衝液或約pH 4.0－5.5之乙酸鹽緩衝液，其可進一步包括山梨糖醇或適當替代品。於若干實施例中，一種醫藥組成物為水性調配物或液體調配物包含約pH 4.0－5.5之乙酸鹽緩衝液、多羥基醇(多元醇)以及視需要可包括界面活性劑，其中組成物不含鹽例如氯化鈉，以及此種組成物對病人而言為等張性。多元醇之實例包括但非限於蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇及甘露糖醇。界面活性劑之實例包括但非限於波麗索貝。於若干實施例中，一種醫藥組成物為水性或液體調配物包含約pH 5.0之乙酸鹽緩衝液、山梨糖醇及波麗索貝，其中該組成物不含鹽，例如氯化鈉，以及其中該組成物對病人為等張性。若干組成物實例例如可參考美國專利第6,171,586號。額外醫藥載劑包括但非限於油類包括石腦油、動物油、植物油、花生油、大豆油、礦油、芝麻油等。於若干實施例中，也可使用水性葡萄聚糖及甘油溶液作為液體載劑，特別用於注射溶液劑。於若干實施例中，一種組成物包含抗體，帶有或未帶有至少另一種治療劑，可經由將具有期望純度的選定組成物與視需要使用之調配劑(雷明頓製藥科學，參見上文)混合成凍乾餅或水溶液形式準備儲存。此外，於若干實施例中，一種組成物包含抗體，帶有或未帶有至少另一種治療劑可使用適當賦形劑溶液(例如蔗糖)做為稀釋劑來調配成凍乾產物。
於若干實施例中，anti－TR－2抗體係以呈包含經純化的重組蛋白質結合生理可接受載劑、賦形劑或稀釋劑之生理上可接受的組成物形式投予。於若干實施例中，此等載劑於所使用的劑量和濃對對接受者為無毒。於若干實施例中，製備此等組成物可能涉及組合anti－TR－2抗體與緩衝劑、抗氧化劑如抗壞血栓、低分子量多胜肽(諸含少於10個胺基酸之多胜肽)、蛋白質胺基酸、碳水化合物諸如葡萄糖、蔗糖或糊精類、螯合劑如EDTA、麩胱甘肽及/或其它安定劑及賦形劑。於若干實施例中，適當劑量可於標準給藥試驗決定，且可根據選用的投藥途徑而改變。於若干實施例中，根據適當工業標準，可加入保藏劑，保藏劑包括但非限於苄醇。於若干實施例中，投藥量和投藥頻率可基於治療疾病的本質和嚴重程度、期望的反應、病人年齡和情況等決定。
於若干實施例中，醫藥組成物可選用供腸道外輸送。若干此等醫藥可接受之組成物之製備係屬於技藝界之技巧範圍。
於若干實施例中，調配成分係以投藥部位可接受的濃度存在。於若干實施例中，使用緩衝劑來將組成物維持於生理pH或略低的pH，典型係於約5至約8之pH之範圍。
於若干實施例中，當預期涵蓋腸道外投藥時，治療組成物可呈無熱源、腸道外可接受之水性溶液劑形式，包含期望之抗體，含有或不含額外治療劑，於醫藥上可接受之載媒劑。於若干實施例中，腸道外注射用之載媒劑為無菌蒸餾水，其中抗體、含或不含至少一種額外治療劑係調配成無菌等張溶液且經過適當保藏。於若干實施例中，製劑可能涉及期望之分子與下列作用劑調配，作用劑諸如注射微球、可生物溶解粒子、聚合化合物(諸如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠粒或微脂粒，該等作用劑可提供產品經過控制釋放或持續釋放，隨後可透過長效注射劑輸送。於若干實施例中，可使用玻尿酸，可具有促進於血循環中持續時間的效果。於若干實施例中，可植入之藥物輸送裝置可用來導入期望的分子。
於若干實施例中，醫藥組成物可調配供吸入投藥。於若干實施例中，抗體、含有或未含至少一種額外治療劑可調配成吸入用乾粉。於若干實施例中，吸入溶液劑包含抗體、含或不含至少一種額外治療劑可以噴霧輸送的推進劑一起調配。於若干實施例中，溶液可經過霧化。經肺臟投藥進一步說明於PCT公告案第WO94/20069號，該案說明化學改性蛋白質之經肺臟輸送。
於若干實施例中，預期調配物可經口投予。於若干實施例中，藉此方式投藥之抗體，含或不含至少一種額外治療劑可調配成含有或未含固體劑型諸如錠劑或膠囊劑混料中常用之載劑。於若干實施例中，膠囊劑可設計來於胃腸道之一點釋放出配方的活性成分，於該點的生物利用率為最大化，而系統前期的分解為最小化。於若干實施例中，至少另一種作用劑可含括來輔助抗體及/或任何額外治療劑的吸收。於若干實施例中，也可使用稀釋劑、矯味劑、低熔點蠟、植物油、潤滑劑、懸浮劑、錠劑、崩散劑及/或黏結劑。
於若干實施例中，一種醫藥組成物可能涉及有效量之抗體，含或不含至少一種額外治療劑與適合製造錠劑的無毒賦形劑混合。於若干實施例中，經由將錠劑溶解於無菌水或其它適當載媒劑，可將溶液劑製備成單位劑型。適當賦形劑包括但非限於惰性稀釋劑諸如碳酸鈣、碳酸鈉、或碳酸氫鈉、乳糖或磷酸鈣；及黏結劑如澱粉、明膠及金合歡膠；及潤滑劑諸如硬脂酸鎂、硬脂酸及滑石。
其它醫藥組成物為熟諳技藝人士顯然易知，包括涉抗體，含有或未含至少一種額外治療劑呈持續釋放或控制釋放配方之調配物。於若干持續釋放或控制釋放調配物實例包括但非限於微脂粒載劑、生物可分解微粒、多孔珠粒、及長效注射劑。若干調配物之製造技術實例為熟諳技藝人士所已知。例如參考PCT公告案第WO93/15722號，說明用於輸送醫藥組成物之多孔聚合物微粒之控制釋放。於若干實施例中，持續釋放製劑可包括半透性聚合物基體呈成形物件形式，例如呈薄膜或呈微囊。持續釋放基體包括但非限於聚酯類、水凝膠類、聚丙交酯類(美國專利第3,773,919號及EP 058,481)、L麩胺酸與L麩胺酸γ乙酯之共聚物(Sidman等人，生物聚合物，22：547－556(1983))、聚(2－羥基乙基－甲基丙烯酸酯)(Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.,15：167－277(1981)及Langer,Chem.Tech.,12：98－105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等人，參見上文)，及聚－D(－)－3－羥基丁酸(EP 133,988)。於若干實施例中，持續釋放組成物也包括微脂粒，於若干實施例中，可藉技藝界已知之數種方法之任一種製備。例如參考Eppstein等人，Proc.Nal.Acad.Sci USA,82：3688－3692(1985)；EP 036,676；EP 088 046及EP 143,949。
於若干實施例中，供活體內投藥之醫藥組成物為無菌。於若干實施例中，供活體內投藥之醫藥組成物係通過無菌過濾膜過濾而變成無菌。於若干實施例中，當組成物經凍乾時，使用無菌過濾膜滅菌可於凍乾前或於凍乾且重新調製之後進行。於若干實施例中，腸道外投藥用組成物可儲存成凍乾形式或溶液。於若干實施例中，腸道外組成物通常係置於具有無菌存取埠口的容器內，例如具有可藉皮下注射針頭刺穿的橡皮塞之無菌溶液袋或小瓶內。
於若干實施例中，於已經調配醫藥組成物後，可儲存於無菌小瓶呈溶液、懸浮液、凝膠、乳液固體，或呈脫水或凍乾粉末。於若干實施例中，此等調配物可儲存呈方便使用之形式或於使用前重新調製之形式(例如凍乾形式)。
於若干實施例中，提供製造單一劑量投藥單位之套件組。於若干實施例中，套件組各自含有含乾蛋白質之第一容器、及含水性調配物之第二容器。於若干實施例中，含括含單室及/或多室預填充注射器(例如液體注射器和凍乾注射器)之套件組。
於若干實施例中，有效量之醫藥組成物包含治療用之抗體，含或不含至少一種額外治療劑例如將依據治療內容及治療目的決定。熟諳技藝人士瞭解根據若干實施例，適當治療用之劑量濃度部分係依據輸送之分子、使用之抗體，含或不含至少一種額外治療劑之適應症、投藥途徑及病人身材(體重、體表面積或器官大小)及/或情況(年齡及一般健康狀況)決定。於若干實施例中，臨床醫師滴定劑量，修改投藥途徑來獲得最佳治療效果。於若干實施例中，依據前述各項因素而定，典型劑量係於約0.1微克/千克至高達約100毫克/千克或以上之範圍。於若干實施例中，劑量可於0.1微克/千克至約100毫克/千克；或1微克/千克至約100毫克/千克；或5微克/千克至約100毫克/千克；或0.1毫克/千克至約100毫克/千克之範圍。
於若干實施例中，投藥頻率將考慮於所使用配方中之抗體及/或任何額外治療劑之藥力學參數。於若干實施例中，臨床醫師將投予組成物直到達到可獲得期望效果的劑量。於若干實施例中，組成物可呈單劑投藥，或呈兩劑或多劑(可含有或可未含有等量期望分子)隨著時間之經過投藥，或透過植入裝置或套管呈連續輸注投藥。若干適當劑量之進一步精製方法係屬於熟諳技藝人士之技巧範圍。於若干實施例中，適當劑量可經由使用適當劑量－反應資料來確定。
於若干實施例中，醫藥組成物之投藥途徑係根據已知方法，例如經口、經靜脈、腹內、腦內(腦實質內)、腦室內、肌肉內、眼內、動脈內、靜脈內或病灶內途徑注射；或經由持續釋放系統或植入裝置投藥。於若干實施例中，組成物可藉大劑量注射、或連續輸注、或藉植入裝置投藥。
如前文討論，於多個實施例中，任一種有效投藥途徑皆可用來投予anti－TR－2抗體。於若干實施例中，當注射時，例如可透過關節內、靜脈內、肌肉內、病灶內、腹內、顱內、鼻內、吸入或皮下途徑藉大劑量注射或藉連續輸注投藥。投藥方法之實例包括但非限於由植體連續釋放、噴霧劑吸入、眼用滴劑、口服製劑包括丸粒劑、糖漿劑、口含錠和口香糖；及局部製劑諸如洗劑、膠漿劑、噴霧劑、軟膏及其它適當技術。
於若干實施例中，藉吸入投藥係於治療與肺部病症相關的疾病時有利。於若干實施例中，anti－TR－2抗體可藉植入可表現抗體的培養細胞來投予。於若干實施例中，病人本身的細胞經誘導來使用一個或多個編碼anti－TR－2抗體之載體活體內或活體外轉移感染來製造抗體。於若干實施例中，載體例如係經由注入裸露DNA或編碼anti－TR－2抗體的微脂粒包囊DNA或任何其它轉移感染方法而被導入病人細胞內部。當anti－TR－2抗體係組合一種或多種其它生物活性化合物投藥時，於若干實施例中，此等可藉相同途徑或不同途徑投予，可一起、分開、或循序投予。
於若干實施例中，組成物可透過植入膜、綿、或任何適當材料其上已經吸收或包囊期望分子來局部投藥。於若干實施例中，當使用植入裝置時，裝置可植入任何適當組織或器官，期望分子可透過輸注、定時釋放大劑量或連續投藥來輸送。
於若干實施例中，期望以活體外方式使用包含抗體，含或不含至少一種額外治療劑之一種醫藥組成物。於此種實施例中，細胞、組織及/或器官從病人體內移出暴露於包含抗體，含或不含至少一種額外治療劑之醫藥組成物；隨後細胞、組織及/或器官植回病人體內。
於若干實施例中，抗體和任何額外治療劑可使用本文所述方法經由植入若干已經經過基因工程處理的細胞表現及分泌多胜肽來輸送藥劑。於若干實施例中，此等細胞可為動物細胞或人細胞，此等細胞可為自體、異體或異種。於若干實施例中，細胞可經永生化處理。於若干實施例中，為了降低免疫反應的機會，細胞可經包囊來防止周圍組織的浸潤。於若干實施例中，包囊材料典型為可生物相容性、半透性聚合物包封或膜，該包封或膜允許蛋白質製品的釋放，但防止細胞被病人的免疫系統或來自於周圍組織的其它有害因素所摧毀。
實例 實例1 若干人類單株抗體之製造
人類anti－TR－2抗體係以兩種方式之一製造。可表現人類免疫球蛋白基因之轉移基因小鼠(西諾鼠(Xenomouse))暴露於人類TR－2。由此等小鼠使用融合瘤技術製造若干人類anti－TR－2抗體單株抗體。使用希諾美斯(XenoMax)技術由此等小鼠製造若干其它人類anti－TR－2單株抗體，該希諾美斯技術結合選擇淋巴細胞抗體方法(「SLAM」)技術(例如參考美國專利第5,627,052號；及Babcook等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7843－7848(1996))。
於可表現人類免疫球蛋白基因之轉移基因小鼠用來製造人類anti－TR－2單株抗體之方法如後。五組小鼠以具有C端六組胺酸標籤的重組人類TR－2(TR－2－His)免疫接種(成熟胺基酸序列ALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVT SSPGTPASRSGSSHHHHHH(SEQ ID NO：140))基因庫參考號碼NM－003842)，如第1圖所示。第一組、第三組、第四組及第五組小鼠經基因工程處理來製造IgG2同型抗體(第2圖)。第二組小鼠經基因工程處理來製造IgG4同型抗體(第2圖)。第一組包括7小鼠，第二組包括8小鼠，第三組包括8小鼠，第四組包括10小鼠及第五組包括5小鼠。第一組、第二組及第三組之小鼠係藉注射TR－2－His至足蹠(每次注射10微克)來免疫接種；第四組和第五組小鼠係以TR－2－His腹內免疫接種(每次注射10微克)。於第0日，藉所述途徑投予10微克抗原。於特定時間間隔，對小鼠追加接種。第一組小鼠於第5、11、14、18、24、28、34、42及第46日共追加接種9次。第二組及第三組小鼠追加接種7次；第二組小鼠係於第3、7、10、14、17、24及第27日；第三組係於第5、8、15、21、26、30、及第33日。第四組和第五組小鼠於第14、28、42、56、及第72日追加接種5次。第一次注射及各次追加接種注射含有10微克TR－2－His與輔劑，輔劑為泰特美斯(Titemax)金(第一、二及三組)、礬土凝膠(第一、二或三組)、完全福氏(Freund’s)輔劑(CFA)(第四組及第五組)、不完全福氏輔劑(IFA)(第四組及第五組)、或杜別克氏磷酸鹽緩衝食鹽水(D－PBS)(第一、二、三、四及第五組)(參考第1圖)。於三次注射後(第四組及第五組)、於四次注射後(第一、二及三組)、於六次注射後(第一及二組)、及十次注射後(第一組)由小鼠採血。各次出血對TR－2－His的反應性藉ELISA評估，顯示於第2圖。
ELISA檢定分析係如下進行。多孔板藉於4℃被動吸附隔夜而以可溶性TR－2－His(0.5微克/毫升)塗覆。塗覆之孔經洗滌且以乳汁封阻30分鐘。各10微升小鼠血清與40微升乳汁組合，於不同板之孔內培養1小時、1.5小時或2小時。各板以水洗5次。然後各板與山羊抗人IgG Fc特異性辣根過氧化酶－軛合抗體(皮爾斯)以終濃度1微克/毫升於室溫培養1小時。孔板以水洗五次。板與K藍酶基質(尼爾京公司(Neogen))共同培養30分鐘。陰性對照包括缺TR－2－His的空白孔、及包括TR－2－His但與預期缺乏anti－TR－2抗體的初次使用的G2血清共同培養之孔。
用來製造人類anti－TR－2單株抗體之方法如後。用於希諾美斯技術，CD19＋ B細胞係由超免疫轉移基因小鼠分離，該細胞係於免疫接種後第37日收穫(得自第三組之小鼠M712－7)或第76日收穫(得自第四組之小鼠M564－1以及得自第五組之小鼠M564－3、M564－5及M563－5)。B細胞培養一週，讓其擴增，隨後分化成為血漿細胞。含有分泌抗體的上清液保留用於進一步分析，各孔的血漿細胞於含10% DMSO及90% FCS之培養基於－80℃冷凍。用於融合瘤技術，得自其餘超免疫轉移基因小鼠的細胞係於第31、37或46日收穫供進一步如第1圖所示分析。
至於希諾美斯技術，得自B細胞培養基之上清液係藉ELISA篩檢TR－2抗體的存在。anti－TR－2抗體係經由使用抗人IgG抗體檢測試劑，經由評估與制動TR－2－His之結合來檢測如後。孔板於4℃藉被動吸附塗覆可溶性TR－2－His(0.5微克/毫升)隔夜。孔板以水洗滌5分鐘，使用乳汁封阻孔板30分鐘，得自各融合瘤10微升細胞培養上清液與40微升乳汁組合且於不同孔板的孔培養1小時、1.25小時或2小時。孔板以水洗5次，以山羊抗人IgG Fc特異性辣根過氧化酶(皮爾斯)－軛合抗體以終濃度1微克/毫升於室溫培養1小時。以水洗滌孔板5次後，孔板與K藍酶基質(尼爾京公司)共同培養30分鐘。陰性對照包括缺TR－2－His之空白孔、及使用預期缺anti－TR－2抗體之初次使用G2血清的孔。陽性樣本第二次藉ELISA對TR－2－His篩檢，來驗證產生TR－2特異性抗體的細胞身分。
前文識別之與TR－2反應之抗體使用細胞凋亡檢定分析來篩檢其誘導WM－266黑素瘤細胞(ATCC Cat.No.CRL－1676)之細胞凋亡的能力。WM－266細胞係以4500細胞/孔密度於微力價孔板，於如ATCC所推薦的普通培養基培養隔夜。對B細胞培養，20微升抗原特異性B細胞培養上清液，或對照B細胞培養上清液添加至180微升細胞凋亡培養基混合物(含1微克/毫升環己醯亞胺(CHX)及0.5%胎牛血清(「FCS」)之細胞培養基)。由WM－266細胞去除培養基，每次一列添加抗體－細胞凋亡培養基混合物至細胞。細胞與抗體－細胞凋亡培養基共同培養20小時來允許細胞凋亡的發生。DNA結合螢光染色碘化丙烷鎓(西格瑪公司)及赫斯特(Hoechst)33342(分子探針公司)分別以終濃度0.5微克/毫升及2.5微克/毫升添加至各孔。赫斯特33342為膜可透性，如此可標記活細胞和死細胞；碘化丙烷鎓並非膜可透性，因此只能標記死細胞。於37℃ 1小時後，拍攝各孔影像，分析細胞總數(經由評估赫斯特標籤量)和死細胞總數(經由評估碘化丙烷鎓標籤量評估)。測定凋亡百分比為(碘化丙烷鎓－陽性細胞/赫斯特陽性細胞)x 100。
用於希諾美斯技術，顯示最佳細胞凋亡誘導的數個孔的抗體選用來使用溶血斑塊檢定分析回收。TR－2－HiS經過生物素化，且塗覆於鏈絲菌抗生物素塗覆的羊紅血球細胞上。與抗原特異性孔相對應之血漿細胞經解凍，且於補體和天竺鼠抗人IgG加強血清的存在下，與經過抗原塗覆之紅血球一起培養。血漿細胞產生抗TR－2－His抗體，造成環繞血漿細胞的羊紅血球細胞溶解，如此可識別混合物中的抗原特異性血漿細胞。此等血漿細胞係藉得自混合物的單一細胞藉顯微操作來分離。
於分離期望的單一血漿細胞後，由細胞中萃取出mRNA。編碼重鏈和輕鏈可變序列的mRNA被轉成cDNA，使用人類IgG2和人類κ mRNA之先導子序列和恆定區之特異性簡倂反訊息引子，藉反錄酶來擴增。引子序列提供於下表2：
引子導入下列於重鏈cDNA之5’端(BglII)和3’端(Xba1)之限剪位置。同理，引子導入下列於κ鏈cDNA的5’端(BglII)和3’端(NheI)之限剪位置。
可變重鏈cDNA擴增區以適當限剪酶消化，該限剪酶適合用於PCR反應期間加入的限剪酶位置。消化產物轉殖入IgG1、IgG2及IgG4表現載體具有可相容之旁出部分供轉殖。IgG2及IgG4表現載體以BamHI及XbaI消化來產生供次轉殖用的可相容的旁出部分。IgG1表現組成體以BamHI及NheI消化來產生供次轉殖用之可相容之旁出部分。此等載體係經由將人類IgG1、IgG2或IgG4的恆定功能部位轉殖入載體pcDNA3.1＋/Hygro(英維特京公司(Invitrogen))的多個轉殖位置。
可變輕鏈cDNA擴增區以適當限剪酶消化，該限剪酶適合用於PCR反應期間加入的限剪酶位置。消化產物轉殖入已經以BamHI及NheI消化的IgK表現載體來提供次轉殖用的可相容的旁出部分。此種載體係經由將人類Igk基因的恆定功能部位轉殖入載體pcDNA4.1＋/Neo(英維特京公司)的多個轉殖位置。
然後重鏈和輕鏈表現載體共同脂質感染60毫米培養皿的70%融合的人胎腎293細胞(ATCC，Cat.No.CRL－1573)。經24小時時間，讓轉移感染的細胞可分泌具有與原先血漿細胞相同的特異性之重組抗體。由HEK 293細胞收穫上清液(3毫升)，完好抗體分泌係以夾層法ELISA驗證來特異性檢測人類IgG。對照孔板如同結合板，以2毫克/毫升山羊抗人IgG H＋L O/N塗覆。孔板以水洗五次。重組抗體從未經稀釋的脂質感染上清液對7孔滴定1：2。孔板以dH2 O洗5次。山羊抗人IgG Fc特異性HRP－軛合抗體係以終濃度1微克/毫升於室溫添加經歷1小時，用於分泌檢定分析和兩項結合檢定分析。孔板以dH2 O洗5次。板藉加入四甲基聯苯胺(TMB)30分鐘顯影，藉加入1 M磷酸來停止ELISA。
除了前述希諾美斯方法外，某些抗體使用融合瘤技術獲得。免疫接種的小鼠藉斬首犧牲，收穫引流的淋巴結，各組淋巴結經匯集。經由於杜別克改性鷹式培養基(「DMEM」)研磨來解離淋巴細胞，讓細胞從組織脫離。回收的淋巴細胞懸浮於DMEM。計算細胞數目，每一億個淋巴細胞添加0.9毫升DMEM至細胞丸粒來溫和但完全再懸浮細胞。再懸浮的細胞與每一億個細胞100微升CD90＋ 磁珠於4℃共同培育15分鐘。磁性標記的細胞懸浮液(含有至多108 陽性細胞(或高達2 x 109 細胞總量))載荷至LS＋ 管柱。管柱以DMEM洗滌。總流出物收集為CD90－ 陰性部分，預期大部分含B細胞。
融合之進行方式係將如上所得洗滌後之豐富B細胞及非分泌性骨髓瘤P3X63Ag＊ .653細胞(ATCC(CRL 1580，參考例如Kearney等人，J.Immunol.123,1979,1548－1550))以1：1比例混合進行融合。細胞混合物經由於800 x g離心溫和造粒。由細胞完全去除上清液後，細胞以2毫升至4毫升(普隆那斯(Pronase)溶液(卡爾拜肯公司(CalBiochem)；0.5毫克/毫升於磷酸鹽緩衝食鹽水(「PBS」))處理不超過2分鐘。添加3至5毫升胎牛血清(「FBS」)來停止酶活性，使用電細胞融合溶液(「ECFS」)(0.3M蔗糖，0.1 mM乙酸鎂、0.1 mM乙酸鈣)調整為40毫升總體積。離心後去除上清液，細胞再懸浮於40毫升ECFS。重複此洗滌步驟，細胞再度再懸浮於40毫升ECFS至2 x 106 細胞/毫升濃度。
使用融合產生器(型號ECM2001，晶尼特尼克公司(Genetronic))進行電細胞融合。使用之融合室大小為2.0毫升，使用下列儀器設定值校準條件：50伏特，50秒；膜於3000伏特30微米破裂；後融合維持時間3秒。
於進行電細胞融合後，於無菌條件下從融合室中小心取出細胞懸浮液，轉移至含有等量融合瘤培養基的無菌試管內，該培養基含有DMEM(JRH生科公司(JRH Biosciences)，15% FBS(海克隆公司(Hyclone))補充L麩醯胺酸、青黴素/鏈黴素、OPI(草醯乙酸酯、丙酮酸鹽、牛胰島素)及IL－6(百齡佳曼翰公司(Boehringer Mannheim))。細胞於37℃培養15至30分鐘，然後於400 x g(1000 rpm)離心5分鐘。細胞溫和再懸浮於小量融合瘤選擇培養基(融合瘤培養基補充以0.5x玻尿酸(西格瑪公司))。基於每96孔孔板最終接種量5 x 106 B細胞和每孔200微升，以更大量融合瘤選擇培養基來適當調整總量。溫和混合細胞，滴量入96孔孔板，讓其生長。於第7日或第10日，去除一半培養基，再度進給新鮮融合瘤選擇培養基。
培養14日後，藉ELISA篩檢融合瘤上清液的TR2特異性單株抗體。於一次篩檢中，ELISA孔板(費雪公司(Fisher)型號12－565－136)塗覆以50微升/孔的TR2蛋白質(2微克/毫升)於塗覆緩衝液(0.1 M碳酸鹽緩衝液，pH 9.6,NaHCO3 8.4 g/L)，然後於4℃隔夜。培育後，孔板以洗滌緩衝液(0.05%吞恩(Tween)20於PBS)洗一次。加入200微升/孔阻斷緩衝液(0.05% BSA,0.1%吞恩20,0.01%硫柳汞於1xPBS)，孔板於室溫培養1小時。培養後，孔板以洗滌緩衝液洗一次。加入整份(50微升/孔)融合瘤上清液和陽性對照及陰性對照，孔板於室溫培養2小時。實驗使用之陽性對照係得自超免疫西諾鼠的血清，陰性對照係得自KLH免疫接種西諾鼠的血清。培養後，孔板以洗滌緩衝液洗三次。加入100微升/孔檢測抗體山羊anti－huIgGFc－HRP(卡特格公司(Caltag Inc.)型號H10507，使用之濃度為1：2000稀釋液)，孔板於室溫培養1小時。培養後，孔板以洗滌緩衝液洗三次。加入100微升/孔TMB(拜耳FX實驗室(BioFX Lab.)，型號TMSK－0100－01)，讓孔板約顯影10分鐘(顯影至陰性對照孔些微開始顯示色彩為止)。然後加入50微升/孔停止溶液(TMB停止溶液(拜耳FX實驗室型號STPR－0100－01))，孔板於ELISA孔板讀取器上於450奈米波長讀取。
藉融合瘤所產生的抗體使用前述相同細胞凋亡檢定法分析。WM－266細胞於微力價孔板以4500細胞/孔密度於普通細胞培養基中培養隔夜。使用不含FCS之細胞培養基，額外加入1.8微克/毫升環己醯亞胺及0.9% FCS，製備2x細胞凋亡培養基混合物。使用分開的微力價孔板來以同型匹配陰性對照anti－KLH抗體並行滴定融合瘤上清液1：2(於該2x細胞凋亡培養基混合物)。由WM－266細胞去除細胞培養基，將100微升抗體－細胞凋亡培養基混合物加入各個含細胞孔，每次加入一列。微力價孔板培育20小時，允許進行細胞凋亡。DNA結合螢光染料碘化丙烷鎓(西格瑪公司)及赫斯特33342(分子探針公司)分別以終濃度0.5微克/毫升及2.5微克/毫升添加至各孔。於37℃ 1小時後，拍攝各孔的螢光影像，分析死細胞總數(PI)和細胞總數(赫斯特)。細胞凋亡百分比測定為(PI陽性細胞/赫斯特陽性細胞)x100。
使用西諾美斯方法或融合硫方法獲得17種不同anti－TR－2抗體(抗體A－Q)。全部抗體之序列經測定，識別重鏈可變區和輕鏈可變區序列(參考第3－19圖)。17種抗體之重鏈與輕鏈之校準顯示於第20圖和第21圖。
使用類似前文說明之細胞凋亡檢定分析，檢驗某些抗體誘導細胞凋亡的能力。WM－266黑素瘤細胞係於普通培養基內以4500細胞/孔密度，於微力價孔板培養隔夜。於分開微力價孔板，滴定欲測試的重組抗體、適當陽性對照(M413，一種小鼠IgG1 anti－TR－2抗體具有重鏈可變序列：MEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSTYGMSWVRQTPDKRLELVALINSQGGSTYNSDSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARRD YESLDSWGQGTSVTVSSG(SEQ ID NO：141))，及輕鏈可變序列：DIVLTQSPASLPVSLGQRATISCRASESVEYSGTSLIQWYRQKPGQPPKLLIYAASNVDSEVPARFSGSGSGTDFSLYIHPVEEDDIAMYFCQQSRKVPWTFGG
GTKLEIKRTDAAPGLEAA(SEQ ID NO：142))；及異型匹配陰性對照抗體(無法顯示活性之可能之anti－TR2抗體)，抗體終濃度涵蓋0.0001微克/毫升至5微克/毫升之範圍。抗體係於含有終濃度0.9微克/毫升CHX及0.45% FCS之細胞凋亡培養基內混合。由WM－266細胞去除培養基，將抗體－細胞凋亡培養基混合物加入細胞。培養20小時後，細胞以碘化丙烷鎓(西格瑪公司)及赫斯特33342(分子探針公司)染色。於37℃1小時後，拍攝各孔的螢光影像，分析死細胞總數(PI)和細胞總數(赫斯特)。細胞凋亡百分比測定為(PI陽性細胞/赫斯特陽性細胞)x100。以M413或以前述某些anti－TR－2抗體處理的細胞觀察到明顯細胞死亡。
實例2 anti－TR－2抗體結合至TR－2之動力學分析
anti－TR－2抗體A至Q結合至TR－2的動力學係使用拜亞科(Biacore)2000儀器分析。使用例行的胺偶合反應，於CM－5拜亞科晶片上製備高密度山羊抗人抗體表面。各個經純化之anti－TR－2抗體於含100微克/毫升BSA之HBS－P緩衝液稀釋至約1微克/毫升。各個anti－TR－2抗體係以2分鐘接觸時間而被捕捉於分開表面上，以5分鐘洗滌來穩定晶片上的anti－TR－2抗體表面。
為了分析TR－2結合至個別anti－TR－2抗體之動力學，226 nM重組人類TR－2－His(說明於實例1)動力注射各個anti－TR－2抗體表面，於25℃經歷1分鐘時間(使用金杰特(kinject))，接著為5分鐘的解離時間。於anti－TR－2抗體表面，從缺乏TR－2的緩衝液注射所得的基準線漂移值從於其它表面各別觀察得之基準線漂移值扣除。此外，TR－2結合至anti－TR－2抗體之資料係對捕捉於各表面的單株抗體量規度化。各資料集合匹配1：1互動模型來測定結合動力學。對各種抗體所得之ka 、kd 及Kd 值顯示於表3。
實例3 細胞殺滅檢定分析
細胞殺滅檢定分析係以實例2所述之某些人類anti－TR－2抗體進行，俾測定各種抗體觸發的細胞凋亡和細胞死亡的程度。某些人類anti－TR－2抗體及小鼠anti－TR－2抗體M412及M413係制動於96孔蛋白質G塗覆孔板的各孔(反應素結合蛋白質G塗覆孔板，皮爾斯型號15131)。M412為一種小鼠IgG1 anti－TR－2抗體，具有重鏈可變序列：KVQLQQSGTELVKPGASVKLSCKASGYTFTEYIIHWVKQRSGQGLEWIGWFYPGSGYIKYNEKFKDKATMTADKSSSTVYMELSRLTSEDSAVYFCTRHEED GYYAAYWGQGTLVTVSA(SEQ ED NO：143)及輕鏈可變序列：DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSSAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDYTLTISSVQAEDLALYYCQQHYSTPYTFGGGT
KLEIKR(SEQ ID NO：144)。M413為前文於實例1說明之小鼠IgG1 anti－TR－2抗體。各抗體係以50微克/毫升濃度添加至第一孔，且一連串以1：3x稀釋於另外7孔之各孔。各抗體稀釋重複3次。於使用前於4℃將孔板培養24小時。以培養基(RPMI加10% PBS)洗滌各孔後，4不同細胞系之一以每孔50,000細胞之密度於總體積200微升接種於各制動抗體上。雖然細胞系為COLO 205細胞(人類結腸腺癌)、MDA－231細胞(人類乳癌)、WM35細胞(人類黑素瘤)及WM793細胞(人類黑素瘤)。細胞於37℃/6% CO2 培養24小時，接著與3 H胸腺苷培養6小時。存活細胞的百分比之評估方式，係經由測定處理細胞結合之3 H胸腺苷濃度相對於結合於未經處理細胞的3 H胸腺苷濃度評估。經由測定相對於未經處理細胞可降低處理細胞的存活率達50%之抗體濃度，而從細胞存活率滴定曲線導出各種抗體之ED5 0 。人類抗體對COLO 205細胞之ED5 0 係與0微克/毫升至3.25微克/毫升之範圍。小鼠抗體M412及M413對該等細胞分別具有ED5 0 為1.85微克/毫升及0.07微克/毫升。人類抗體對MDA－231細胞之ED5 0 係於0.05微克/毫升至0.5微克/毫升之範圍。小鼠抗體M412及M413對該等細胞具有ED5 0 分別為0.6微克/毫升及0.07微克/毫升。人類抗體對WM35細胞之ED5 0 係於0.1微克/毫升至0.6微克/毫升之範圍。小鼠抗體M412及M413對該等細胞具有ED5 0 分別為1.85微克/毫升及0.07微克/毫升。人類抗體對WM793細胞之ED5 0 係於0.02微克/毫升至0.2微克/毫升之範圍。小鼠抗體M412和M413對該等細胞具有ED5 0 分別為1.85微克/毫升及0.05微克/毫升。
實例4 於腫瘤細胞系之人類TR－2的表現
篩檢人類腫瘤細胞系之TR－2的表現。使用的細胞系包括得自乳癌、中樞神經系統癌、結腸癌、肝癌、肺癌、子宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、胰癌、攝護腺癌及腎癌及白血病和黑素瘤的細胞系。
於人類腫瘤細胞之TR－2之表現係使用基於細胞之陣列測定。簡言之，4 x 105 細胞於100毫升CBA緩衝液(PBS，3% FBS 0.02%疊氮化物)分配至20片V字形底96孔孔板的各孔內。CBA緩衝液(150微升)添加至各孔，孔板經離心來沉澱細胞。培養基經拋棄，100微升於10微克/毫升之抗體溶液(抗體A至Q之一)添加至再懸浮於含2% PBS的PBS(「檢定分析緩衝液」)的細胞丸粒。於冰上培養25分鐘後，細胞於檢定分析緩衝液洗1次。100微升二次山羊抗人IgG Fc特異性辣根過氧化酶(HRP，皮爾斯公司)添加至各孔，孔板於冰上培養20分鐘。各板以檢定分析緩衝液洗兩次，於室溫添加100微升TMB酶基質(ZYMED)。孔板經離心，各50微升上清液移入含50微升停止緩衝液(拜耳FX實驗室)的乾淨孔板內。使用史貝克美斯/普拉斯(SpectraMax/plus)讀取器(分子裝置公司(Molecular Devices))於450奈米進行光密度讀取。經由扣除得自同型對照抗體的光密度值，將資料規度化。
數種細胞系於檢定分析具有OD4 5 0 大於0.1，包括乳癌細胞系HS 578.T(OD 0.122)及T－47D(OD 0.112)；結腸癌細胞系TE 671(u)(OD 0.109)、HT－29(OD 0.193)、SW－948(OD 0.122)、KM－12(OD 0.354)、及HCC－2998(OD 0.133)；肝癌細胞系NCI－N87(OD 0.154)及NCI－SNU－5(OD 0.137)；白血病細胞系HL－60(OD 0.233)及hPBMC(OD 0.131)；非小細胞肺癌細胞系JY(OD 0.118)、CCRF－CEM(OD 0.106)、NCI－H－2126(OD 0.108)及NCI－H460(OD 0.122)；黑素瘤細胞系SK－mel－5(OD 0.131)、LOX IMVI(OD 0.102)、RPMI 7951(OD 0.117)及UACC－62(OD 0.127)；胰癌細胞系pancreas HPAF II(OD 0.117)及CAPAN－1(OD 0.101)；攝護腺癌細胞系LNCaP(OD 0.174)；及腎癌細胞系Caki－1(OD 0.148)及UO－31(OD 0.104)。所研究的腫瘤細胞系中TR－2的最大表現出現於結腸癌細胞系KM－12及HT－29，及白血病細胞系HL－60。所研究的中樞神經系統、小細胞肝、子宮頸、子宮或卵巢癌細胞系皆具有OD450大於背景值。
為了判定於人類腫瘤細胞系之TR－2的表現側寫，前述腫瘤細胞系係以小鼠anti－TR－2抗體M412檢定分析。於人類腫瘤細胞之TR－2之表現係使用基於細胞之陣列測定。簡言之，4 x 105 細胞於100毫升CBA緩衝液(PBS,3% FBS 0.02%疊氮化物)分配至20片V字形底96孔孔板的各孔內。CBA緩衝液(150微升)添加至各孔，孔板經離心來沉澱細胞。培養基經拋棄，100微升於10微克/毫升之小鼠anti－TR－2單株抗體M412添加至再懸浮於含2% PBS的PBS(「檢定分析緩衝液」)的細胞丸粒。於冰上培養25分鐘後，細胞於檢定分析緩衝液洗1次。100微升二次山羊抗人IgG Fc特異性辣根過氧化酶(HRP，皮爾斯公司)添加至各孔，孔板於冰上培養20分鐘。各板以檢定分析緩衝液洗兩次，於室溫添加100微升TMB酶基質(ZYMED)。孔板經離心，各50微升上清液移入含50微升停止緩衝液(拜耳FX實驗室)的乾淨孔板內。使用史貝克美斯/普拉斯讀取器(分子裝置公司)於450奈米進行光密度讀取。經由扣除得自同型對照抗體的光密度值，將資料規度化。
多種細胞系有TR－2表現。最高表現基因(具有OD450奈米大於0.3)包括乳癌細胞系HS 578.T(OD 0.403)、MDA－MB－231(OD 0.408)、及T－47D(OD 0.366)；CNS癌細胞系SF－295(OD 0.354)及U251(OD 0.323)；結腸癌細胞系HCT－116(OD 0.41)、HT－29(OD 0.869)、SW－707(OD 0.323)、SW－948(OD 0.423)、KM－12(OD 0.77)及HCC－2998(OD 0.635)；肝癌細胞系NCI－SNU－1(OD 0.354)；白血病細胞系A 673(OD 0.347)；非小細胞肺癌細胞系HOP－62(OD 0.313)、HOP－62(OD 0.47)、NCI－H2126(OD 0.501)、NCI－H460(OD 0.326)；小細胞肺癌細胞系A549(OD 0.381)；黑素瘤細胞系LOX IMVI(OD 0.573)、RPMI 7951(OD 0.322)、及UACC－62(OD 0.319)；卵巢癌細胞系IGROV1(OD 0.312)；攝護腺癌細胞系DU 145(OD 0.372)、22Rv1(OD 0.301)及LNCaP(OD 0.63)；及腎癌細胞系Caki－1(OD 0.93)、Caki－2(OD 0.443)、SN12C(OD 0.313)、及UO－31(OD 0.331)。以小鼠anti－TR－2抗體處理的腫瘤細胞系中，TR－2的最大表現見於腎癌細胞系Caki－1，及結腸癌細胞系HT－29及KM－12。
實例5 抗體交叉反應性
評估某些人類anti－TR－2抗體阻斷其它抗體結合TR－2的能力，如Jia等人，J.Immunol.Methods 288：91－98(2004)所述。使用直接取自流明尼斯(Luminex)100使用者手冊1.7版的偶合程序，珠粒與抗人IgG抗體軛合。於活化珠粒後，遵照製造商的指示珠粒偶合至法明京(Pharmingen)小鼠anti－hIgG mAb。進行兩項實驗。於第一實驗中，經塗覆的珠粒於室溫培養2小時。於第二實驗中，經塗覆的珠粒於4℃隔夜培養。培養結束時，塗覆的珠粒經過封阻，然後使用庫特(Coulter)細胞計數器來計算數目。軛合的珠粒或即刻使用，或為儲存於暗處於4℃供未來使用。
基於抗原決定部位交叉反應性將anti－TR－2抗體分類係借助下列步驟進行。首先，如上所得各組珠粒－小鼠anti－hIgG複合物分別於轉子上於參考抗體(「參考抗體」)於4℃分開培養隔夜。參考抗體係選自前述anti－TR－2抗體A－Q。於抗體捕捉後，珠粒－小鼠anti－hIgG參考Ab複合物共2000個匯集在一根試管內，然後即刻添加至96孔孔板的各孔及抽吸。TR－2(50奈克)添加至各孔，於室溫培養1小時。洗滌各孔後，100－500奈克/毫升人類anti－TR－2抗體之另一者(「探針抗體」)添加至各孔，且於室溫培養2小時。洗滌各孔後，使用1微克/毫升用來捕捉參考抗體的相同單株小鼠anti－hIgG之生物素化版本檢測結合的探針抗體。於培養及洗滌各孔後，加入0.5微克/毫升鏈絲菌抗生物素－植物赤絲醇。混合物於室溫培養30分鐘，然後使用流明尼斯100檢測植物赤絲醇信號。缺抗原的另一個孔集合用作為陰性對照來輔助資料分析。
資料係於二步驟處理分析。首先，資料係使用陰性對照組規度化。其次，anti－TR－2抗體係根據其妨礙一或多種其它anti－TR－2抗體的結合能力來分群簇。用於群簇分析，由規度化強度矩陣，產生相異矩陣，使用SPLUS 2000附聚巢套階層群簇次常式，採用曼哈頓(Manhattan)計量法，使用實際平均相異矩陣的輸入相異矩陣，基於平均相異矩陣的數值將抗體分群簇。
基於該等發現，抗體置於四群不同抗原決定部位。於任一群中，群成員之一阻擋同一群的另一個成員結合至TR－2。但群1的成員之一結合至TR－2(舉例)不會阻擋群2、3或4的成員之一結合至TR－2。該等群顯示於第22圖。
實例6 抗原決定部位映射圖(Mapping)
為了識別對結合至某些所述anti－TR－2抗體重要的TR－2特定區，進行抗原映射研究。N－抗生物素－TR－2組成體之製造方式係經由PCR擴增來自於樣版來源的成熟TR－2編碼序列(MacFarlane,1997)，且於當插入HindIII位置時，TR－2序列係接合於抗生物素序列C端的方向，轉殖入含雞抗生物素序列之pCEP4載體(英維特京公司)。成熟TR－2編碼序列之正向型引子為GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)，而反向型引子為GATTAGGGATCCAGAGGCAGGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：146)。所得抗生物素TR－2融合蛋白質之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：69).
包含N抗生物素及人TR－2截頭的12個分子合成說明如後。三個分子只有人TR－2的C端截頭(TR－2－1至TR－2－3)及9個分子具有人TR－2的N端及C端的截頭(TR－2－4至TR－2－13)(示意顯示於第23圖)。編碼人類TR－2截頭之多核苷酸係使用後述引子藉PCR擴增而製備。為了形成12個分子，由擴增所得之截頭人TR－2插入前文說明之含雞抗生物素序列之pCEP4載體(英維特京公司)。成熟TR－2之多核苷酸編碼胺基酸1－43係使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向型引子TAGTTGGGATCCTCAGGAGATGCAATCTCTACCGT(SEQ ID NO：147)擴增。TR－2－1之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCIS(SEQ ID NO：70).
成熟TR－2之胺基酸1－85之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向型引子GGTAGTGGATCCTCACTGACACACTGTGTTTCTGG(SEQ ID NO：148)擴増TR－2－2之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTT－AVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQ(SEQ ID NO：71).
成熟TR－2之胺基酸1－126之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向型引子GTAATGGGATCCTCAGACACATTCGATGTCACTCC(SEQ ID NO：149)擴增。TR－2－3之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECV(SEQ ID NO：72).
成熟TR－2之胺基酸16－43之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTAATGAAGCTTGCCACAACA AAAGAGGTCCAG(SEQ ID NO： 150)及反向型引子TAGTTGGGATCCTCAGGAGATGCAATCTCTACCGT(SEQ ID NO：147)擴増。TR－2－4之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCIS(SEQ ID NO：73).
成熟TR－2之胺基酸16－85之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTAATGAAGCTTGCCACAACA AAAGAGGTCCAG(SEQ ID NO：150)及反向型引子GGTAGTGGATCCTCACTGACACACTGTGTTTCTGG(SEQ ID NO：148)擴增。TR－2－5之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQ(SEQ ID NO：74).
成熟TR－2之胺基酸16－126之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTAATGAAGCTTGCCACAACA AAAGAGGTCCAG(SEQ ID NO：150)及反向型引子GTAATGGGATCCTCAGACACATTCGATGTCACTCC(SEQ ID NO：149)擴增。TR－2－6之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECV(SEQ ID NO：75).
成熟TR－2之胺基酸42－85之編碼多核苷酸係使用正向型引子GATTGAAAGCTTGATCTCCTGCAAATATGGACAG(SEQ ID NO：151)及反向型引子GGTAGTGGATCCTCACTGACACACTGTGTTTCTGG(SEQ ID NO：148)擴增。TR－2－7之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRsSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLISCKYGQDYsTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQ(SEQ ID NO：76).
成熟TR－2之胺基酸42－126之編碼多核苷酸係使用正向型引子GATTGAAAGCTTGATCTCCTGCAAATATGGACAG(SEQ ID NO：151)及反向型引子GTAATGGGATCCTCAGACACATTCGATGTCACTCC(SEQ ID NO：149)擴增。TR－2－9之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECV(SEQ ID NO：77).
成熟TR－2之胺基酸85－154之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTAATGAAGCTTGCAGTGCGAAGAAGGCACCT(SEQ ID NO：152)及反向型引子GATTAGGGATCCAGAGGCAGGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：146)擴增。TR－2－10之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：78).
成熟TR－2之胺基酸42－154之編碼多核苷酸係使用正向型引子GATTGAAAGCTTGATCTCCTGCAAATATGGACAG(SEQ ID NO：151)及反向型引子GATTAGGGATCCAGAGGCAGGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：146)擴增。TR－2－11之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMIIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTNKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：79).
成熟TR－2之胺基酸16－66之編碼多核苷酸係使用正向型引子TGATTGAAGCTTGCCACAACAAAAGAGGTCCAG(SEQ ID NO：150)及反向型引子GATGGAGGATCCTCAACACCTGGTGCAGCGCAAG(SEQ ID NO：153)擴增。TR－2－12之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGCCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGNFTRLRTQKEQLLASLPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISYKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRC(SEQ ID NO：80).
成熟TR－2之胺基酸16至74之編碼多核苷酸係使用正向型引子TGATTGAAGCTTGCCACAACAAAAGAGGTCCAG(SEQ ID NO：150)及反向型引子GTAAGTGGATCCTCAGCAGGGACTTAGCTCCACT(SEQ ID NO：154)擴增。TR－2－13之基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNsKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHW NDLLFCLRCTRCDSGEVELS(SEQ ID NO：81)。包含N抗生物素及得自長尾獼後之TR－2截頭的四個分子合成如下。成熟獼猴TR－2之胺基酸1至132之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTTAGTAAGCTTGGCTCCAATCACCCGAC(SEQ ID NO：155)及反向型引子GTTGATGGATCCTTCTTTGTGGACACTCGAT(SEQ ID NO：156)擴增。獼猴TR－2(短)之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLAPITRQSLDPQRRAAPQQKRSSPTEGLCPPGHHISEDSRDCISCKYGQDYSTHWNDFLFCLRCTKCDSGEVEVSSCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEICRKCRTGCPRGMVKVKDCTPWSDIECPQRRIQT(SEQ ID NO：82).
成熟獼猴TR－2之胺基酸1至l54之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTTAGTAAGCTTGGCTCCAATCACCCGAC(SEQ ID NO：155)及反向型引子GTAGTTGGATCCTCAAGAAGCAGGAGTCCCAGGG(SEQ ID NO：157)擴增。獼猴TR－2(長)之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLAPITRQSLDPQRRAAPQQKRSSPTEGLCPPGHHISEDSRDCISCKYGQDYSTHWNDFLFCLRCTKCDSGEVEVSSCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEICRKCRTGCPRGMVKVKDCTPWSDIECVHKESGTKHTGEVPAVEKTVTTSPGTPAS(SEQ ID NO：83).
成熟獼猴TR－2之胺基酸1－85之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTTAGTAAGCTTGGCTCCAATCACCCGAC(SEQ ID NO：155)及反向型引子GTATGAGGGATCCTCACTGACACACCGTGTTTCTGG(SEQ ID NO：158)擴增。獼猴1－85之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLAPITRQSLDPQRRAAPQQKRSSPTEGLCPPGHHISEDSRDCISCKYGQDYSTHWNDFLFCLRCTKCDSGEVEVSSCTTTRNTVCQ(SEQ ID NO：84).
成熟獼猴TR－2之胺基酸16－85之編碼多核苷酸係使用正向型引子GTATGGAGCTTGCCACAACAAAAGAGATCCAGC(SEQ ID NO：159)及反向型引子GTATGAGGGATCCTC ACTGACACACCGTGTTTCTGG(SEQ ID NO：158)擴增。獼猴16－85之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLPQQKRSSPIEGLCPPGHHISEDSRDCISCKYGQDYSTHWNDFLFCLRCTKCDSGEVEVSSCTTTRNTVCQ(SEQ ID NO：85).
如第25圖所述，使用人TR－2及獼猴TR－2的不同部分也製造四種N抗生物素－融合的嵌合體。各嵌合體係經由製備有重疊端的兩個PCR產物，然後共同使用相同5’引子和3’引子擴增來成嵌合體。為了形成各個嵌合體，然後擴增後的多核苷酸係次轉殖株如前文說明含有雞抗生物素序列之pCEP4載體(英維特京公司)。人TR－2、獼猴(短)TR－2及小鼠TR－2序列之校準顯示於第26圖。
獼猴/人嵌合體# 1之製法係經由使用正向型引子GTTAGTAAGCTTGGCTCCAATCACCCGAC(SEQ ID NO：155)及反向型引子GGACCTCTTTTGTTGTGGAGCCGCTCTTCGCTGG(SEQ ID NO：159)，擴增與胺基酸1－16相對應之成熟獼猴TR－2之一區，且使用正向型引子CAGCGAAGAGCGGCTCCACAACAAAAG AGGTCCAG(SEQ ID NO：160)及反向型引子GGTAGTGGATCCTCACTGACACACTGTGTTTCTGG(SEQ ID NO：148)，擴增與胺基酸17－85相對應之成熟人TR－2之一區而製備。使用獼猴TR－2胺基酸1－16片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：155)及人TR－2胺基酸17－85片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：148)，進行獼猴TR－2片段與人TR－2片段之重疊PCR。獼猴/人嵌合體# 1之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLAPITRQSLDPQRRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQ(SEQ ID NO：86).
獼猴/人嵌合體# 2之製法係經由使用正向型引子GTTAGTAAGCTTGGCTCCAATCACCCGAC(SEQ ID NO：155)及反向型引子GGACCTCTTTTGTTGTGGAGCCGCTCTTCGCTGG(SEQ ID NO：159)，擴增與胺基酸17－154相對應之成熟獼猴TR－2之一區，且使用正向型引子CAGCGAAGAGCGGCTCCACAACAAAAG AGGTCCAG(SEQ ID NO：160)及反向型引子GATTAGGGATCAGAGGCAGGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：146)，擴增與胺基酸17－85相對應之成熟人TR－2之一區而製備。使用獼猴TR－2胺基酸1－16片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：155)及人胺基酸17－154片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：146)，進行獼猴TR－2片段與人TR－2片段之重疊PCR。獼猴/人嵌合體# 2之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLAPITRQSLDPQRRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDYISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：87).
獼猴/人嵌合體# 3之製法係經由使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向型引子GGATCTCTTTTGTTGTGGGGCCGCTCTCTGCTGG G(SEQ ID NO：161)，擴增與胺基酸1－16相對應之成熟獼猴TR－2之一區，且使用正向型引子ACAAAAGAGATCCAGC(SEQ ID NO：162)及反向型引子GTATGAGGGATCCTCACTGACACACCGTGTTTCTGG(SEQ ID NO：158)，擴增與胺基酸17－85相對應之成熟人TR－2之一區而製備。使用獼猴TR－2胺基酸1－16片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：145)及人胺基酸17－85片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：158)，進行獼猴TR－2片段與人TR－2片段之重疊PCR。獼猴/人嵌合體胺基酸序列為# 3 MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPTEGLCPPGHHISEDSRDCISCKYGQDYSTHWNDFLFCLRCTKCDSGEVEVSSCTTTRNTVCQ(SEQ ID NO：88).
獼猴/人嵌合體# 4之製法係經由使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向引子GGATCTCTTTTGTTGTGGGGCCGCTCTCTGCTGG G(SEQ ID NO：161)擴增與胺基酸1－16相對應之成熟人類TR－2之一區，並使用正向型引子CAGCAGAGAGCGGCCCACAACAAAAGAGATCCAGC(SEQ ID NO：162)及反向型引子GTAGTTGGATCCTCAAGAAGCAGGAGTCCCAGGG(SEQ ID NO：157)，擴增與胺基酸1－16相對應之成熟獼猴TR－2之一區。使用人類TR－2胺基酸1－16片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：145)及獼猴胺基酸17－154片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：157)，進行獼猴TR－2片段與人TR－2片段之重疊PCR。獼猴/人嵌合體胺基酸序列為#4 MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPTEGLCPPGHHISEDSRDCISCKYGQDYSTHWNDFLFCLRCTKCDSGEVEVSSCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEICRKCRTGCPRGMVKVKDCTPWSDIECV HKESGTKHTGEPAVEKTVTTSPGTPAS(SEQ ID NO：89)。於N－抗生物素融合中，以相對應之小鼠TR－2序列置換之人TR－2之短區，組成四個額外改性TR－2蛋白質。人/小鼠TR－2 # 1包含胺基酸1－22之小鼠TR－2序列和胺基酸23－150之人TR－2序列。人/小鼠TR－2 # 2包含胺基酸1－28及35－150之人TR－2序列和胺基酸29－34之小鼠TR－2序列。人/小鼠TR－2 # 3包含胺基酸1－53及60－150之人TR－2序列和胺基酸54－59之小鼠TR－2序列。人/小鼠TR－2 # 4包含胺基酸1－66及76－150之人TR－2序列和胺基酸67－75之小鼠TR－2序列。為了形成各個經改性之蛋白質，然後經擴增之多核苷酸次轉殖入前文說明的含雞抗生物素序列之pCEP4載體(英維特京公司)。
人/小鼠TR－2 # 1之製法係經由使用正向型引子CAGCGGCCGGAGGAGAGCCCCTCAGAGGGATTGT(SEQ ID NO：163)及反向型引子GATTGAGGATCCCTAAGAGGCAGGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：164)擴增與胺基酸23－150相對應之成熟人TR－2之一區；且使用正向型引子TGAATGAAGCTTGGTTCCAGTAACAGCTAACCCA(SEQ ID NO：165)及反向型引子TCCCTCTGAGGG GCTCTCCTCCGGCCGCTGTAG(SEQ ID NO：166)擴增與胺基酸1－22相對應之成熟小鼠TR－2之一區來製備。使用小鼠TR－2胺基酸1－22片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：165)及人TR－2胺基酸23－150片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：164)進行人TR－2片段與小鼠TR－2片段的重疊PCR。人/小鼠TR－2 # 1之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGsNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLVPVTANPAHNRPAGLQRPEESPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：90).
人/小鼠TR－2 # 2之製法係經由使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向型引子CAGGTACTGGCCTGCTAGACACAATCCCTCTGAGGGG(SEQ ID NO：167)擴增與胺基酸1－28相對應之成熟人TR－2之一區；且使用正向型引子CTAGCAGGCCAGTACCTGTCAGAAGACGGTAGAGATTGC(SEQ ID NO：168)及反向型引子GATTGAGGATCCCTAAGAGGCAGGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：164)擴增與胺基酸35－150相對應之成熟人TR－2之一區；且使用正向型引子CAGGTACTGGCCTGCTAGACACAATCCCTCTGAGGGG(SEQ ID NO：169)及反向型引子CTAGCAGGCCAGTACCTGTCAGAAGACGG TAGAGATTGC(SEQ ID NO：170)擴增與胺基酸29－34相對應之成熟小鼠TR－2之一區。使用小鼠TR－2胺基酸1－28片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：145)及人TR－2胺基酸35－150片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：170)進行人TR－2片與小鼠TR－2片段的重疊PCR。人/小鼠TR－2 # 2之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCLAGQYLSEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：91).
人/小鼠TR－2 # 3之製法係經由使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向型引子TGAATCCAGAGAATGGTTGGAGTGAGTGCTATAGTCCTGTC(SEQ ID NO：171)擴增與胺基酸1－53相對應之成熟人TR－2之一區；且使用正向型引子TCCAACCATTCTCTGGATTCATGCTTGCGCTGCACCAGG(SEQ ID NO：172)及反向型引子GATTGAGGATCCCTAAGAGGCAGGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：173)擴增與胺基酸60－154相對應之成熟人TR－2之一區。前述引子包括與胺基酸54－59相對應之編碼核苷酸小鼠TR－2。使用小鼠TR－2胺基酸1－53片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：145)及人TR－2胺基酸60－154片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：173)進行人TR－2片與小鼠TR－2片段的重疊PCR。人/小鼠TR－2 # 3之胺基酸序列為MVHATsPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYsTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：92).
人/小鼠嵌合# 4之製法係經由使用正向型引子GTAAGCAAGCTTGGCTCTGATCACCCAACAAGA(SEQ ID NO：145)及反向型引子TCGGGTTTCTACGACTTTATCTTCCTTACACCTGGTGCAGCGCAAG(SEQ ID NO：174)擴增與胺基酸1－66相對應之成熟人TR－2之一區；且使用正向型引子ATAAAGTCGTAGAAACCCGATGCACCACGACCAGAAAC AC(SEQ ID NO：175)及反向型引子GATTGAGGATCCCTAAGAGGCA GGAGTCCCTGG(SEQ ID NO：176)擴增與胺基酸76－154相對應之成熟人TR－2之一區。前述引子包括與胺基酸67－75相對應之編碼核苷酸小鼠TR－2。使用人類TR－2胺基酸1－66片段之正向型引子，前述(SEQ ID NO：145)及人TR－2胺基酸76－154片段之反向型引子，前述(SEQ ID NO：176)進行人TR－2片與小鼠TR－2片段的重疊PCR。人/小鼠TR－2 # 4之胺基酸序列為MVHATSPLLLLLLLSLALVAPGLSARKCSLTGKWTNDLGSNMTIGAVNSKGEFTGTYTTAVTATSNEIKESPLHGTQNTINKRTQPTFGFTVNWKFSESTTVFTGQCFIDRNGKEVLKTMWLLRSSVNDIGDDWKATRVGINIFTRLRTQKEQLLASLALITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHSNHSLDSCLRCTRCDSGE VELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKESGTKHSGEAPAVEETVTSSPGTPAS(SEQ ID NO：93).
抗生物素融合蛋白質之表現係經由於通風T75組織培養瓶中暫時轉移感染人293T黏合細胞進行。細胞於含10%經過透析的FBS及1x青黴素－鏈黴素－麩醯胺酸的DMEM中於37℃於5% CO2 下生長及維持細胞。為了準備轉移感染，約3 x 106 293T細胞接種於一系列含15毫升生長培養基之潔淨T75燒瓶之各瓶內，全部燒瓶生長隔夜約20小時。各個pCEP4－抗生物素(N)－TR－2組成體轉移感染不同的細胞如後。15微克DNA於Opti－MEM培養基(英維特京公司)存在下與75微升里波非它明(Lipofectamine)2000(英維特京公司)混合來形成DNA－里波非它明複合體。複合體培養20分鐘。於培養期間，從T75燒瓶中抽取去除生長培養基，以15毫升Opti－MEM替代。培養後，各個轉移感染之複合體接種於不同燒瓶內，於37℃培養4至5小時。培養期結束時，各燒瓶內的Opti－MEM培養基以新鮮生長培養基替代。轉移感染後約48小時，收穫經過調理的培養基且移至50毫升試管(菲爾空公司(Falcon))。試管於2000 x g於4℃離心10分鐘來去除細胞及殘骸，隨後移入潔淨50毫升試管內。遵照相同的方案，也製作缺轉移感染DNA的對照瓶，獲得陰性對照調理培養基用於結合實驗。
各種N抗生物素TR－2融合蛋白質之濃度係使用基於定量FACS檢定分析測定。抗生物素融合蛋白質捕捉於6.7微米生物素聚苯乙烯珠粒(史菲羅鐵克公司(Spherotech,Inc.))上。對各種融合蛋白質準備兩個樣本：5微升(約3.5x105 )珠粒懸浮液加20微升1x經調理之培養基，及5微升珠粒懸浮液加200微升1x經調理之培養基，全部樣本皆於室溫以旋轉培養1小時。藉離心由各樣本去除經調理的培養基，以含0.5% BSA的PBS(BPBS)洗滌。抗生物素珠粒以200微升0.5微克/毫升山羊FITC標示抗－抗生物素抗體(維特實驗室(Vector Labs)，加州布林根)於BPBS溶液染色。允許反應於室溫進行45分鐘，反應試管以金屬箔加蓋。培養後，藉離心再度收集珠粒，以BPBS洗滌，再懸浮於0.5毫升BPBS進行分析。FITC螢光係使用FACScan(貝克頓迪金森生科公司(Becton Dickinson Bioscience))檢測。信號係使用由重組抗生物所導出的標準曲線轉成蛋白質重量。
評估兩種人anti－TR－2抗體結合至人TR－2截頭、人TR－2及得自長尾獼猴TR－2之結合。結合檢定分析進行如後。前述生物素珠粒負載以100奈克N抗生物素融合蛋白質之一/3.5 x 105 珠粒，以生長培養基調整至定量。珠粒混合1微克FITC－軛合人anti－TR－2單株抗體於0.2毫升BPBS。於室溫培養1小時後，加入3毫升BPBS，於750 x g離心5分鐘，收集抗體－珠粒複合體。丸粒於3毫升BPBS洗滌。藉FACS分析檢測與抗生物素－珠粒複合體結合的抗體。對各樣本記錄平均螢光強度。此等抗體與缺TR－2之經調理的培養基的結合用作為陰性對照(「Neg CM」)。結果顯示於第24圖。
觀察得兩種抗體的結合圖樣類似。觀察得最強力的結合係陽性對照、人TR－2、平均螢光強度7349。觀察得抗體的結合(以螢光強度測量)：對截頭TR－2－2為6561－6693、對截頭TR－2－3及TR－2－5為3158－3866、對截頭TR－2－6為1959－2202、及對截頭TR－2－1為662－759。抗體對得自長尾獼猴之全長TR－2之結合(以螢光強度測量)為666－764。抗體不結合小鼠TR－2或大鼠TR－2，或不結合截頭TR－2－4、TR－2－7、TR－2－8、TR－2－9、TR－2－10、TR－2－11、TR－2－12或TR－2－13，由其結合類似實驗的背景值測定。
TR－2－1為TR－2於胺基酸43後的C端截頭，以TR－2－2、TR－2－3、TR－2－5及TR－2－6全部皆包括至少胺基酸16至85。結合係出現於得自胺基酸1至85的全區都存在時(參考TR－2－2的結果)。加入胺基酸86至126，降低結合約兩倍(比較TR－2－2與TR－2－3的結果)。於TR－2－2不存在有TR－2 N端之胺基酸1至15，降低結合達約兩倍(比較TR－2－2與TR－2－5之結果)。同時不存在有胺基酸1至15及加入胺基酸86至126，降低結合達約三倍(比較TR－2－2與TR－2－6)。去除殘基44至85(TR－2－1)減少結合達TR－2－2觀察得之結合之約11%。該等結果指出於胺基酸1至15(SEQ ID NO：94；ALITQQDLAPQQRAA)及胺基酸44至85(SEQ ID NO：95；CKYGQDYSTHWNDLL FCLRCTRCDSGEVE LSPCTTTRNTVCQ)各區之一個或多個殘基，兩種人anti－TR－2抗體和人TR－2的結合相當重要。
也評估人anti－TR－2抗體結合至各別獼猴TR－2截頭、人/獼猴嵌合體、及包含某些小鼠TR－2功能部位的人TR－2。anti－TR－2抗體強力結合至全長人TR－2(螢光強度(「FI」＝5681)。anti－TR－2抗體對獼猴TR－2之全長長形版本的結合比全長人TR－2的結合減少約5倍(FI＝1573)。對下列只觀察得背影程度的結合：獼猴TR－2之全長短版本(FI＝209)，以及獼猴TR－2截頭17－154(FI＝51)、獼猴1－85(FI＝11)及長尾獼猴17－85(FI＝8)。
也評估某些人類anti－TR－2抗體與獼猴/人TR－2嵌合體的結合(參考第27圖)。抗體對四種嵌合體觀察得之結合(FI)如下：獼猴/人嵌合體# 1：FI＝5977：獼猴/人嵌合體# FI＝47；獼猴/人嵌合體# 3：FI＝12；獼猴/人嵌合體# 4：FI＝1507。如前述，觀察得抗體對全長人TR－2之結合為5681，而抗體對全長獼猴TR－2之結合為1573(長形)及209(短形)。
因抗體結合獼猴/人嵌合體# 1係類似與嵌合體截頭TR－2－5的結合，故以相對應之獼猴序列置換胺基酸1－16顯然不影響於人胺基酸17－85的抗體的結合。但於全長人TR－2(獼猴/人# 2)以相對應之獼猴置換胺基酸1－16顯著破壞結合，證實於胺基酸1－16該區的至少一個胺基酸形成抗原決定部位之一部分。結合至獼猴/人嵌合體# 3和# 4比全長人TR－2顯著衰減，提示人序列之胺基酸17－85對結合相當重要。總而言之，於人序列1－85區(SEQ ID NO：96；ALITQQDLAPQQ RAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSG
EVELSPCTTTRNTVCQ)的一或多個胺基酸涉及抗原決定部位的結合。同理，以相對應之小鼠序列置換胺基酸於1－85該區之各個人序列，顯著衰減抗體結合(參考第27圖)，進一步證實該區的一個或多個胺基酸涉及抗原決定部位的結合。
第1圖顯示於表現人免疫球蛋白基因之轉移基因小鼠，透過足蹠注射(第1、2及3組)或透過腹內注射(第4及5組)，於實例1用於TR－2－His組成體之免疫接種排程計畫。
第2圖顯示根據實例1所述工作，測量第1圖所述得自所選小鼠之某些血清樣本對抗原TR－2的反應性之ELISA檢定分析結果。
第3圖顯示anti－TR－2抗體A之重鏈(SEQ ID NO：1)及輕鏈(SEQ ID NO：35)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：2)及輕鏈(SEQ ID NO：36)可變區之胺基酸序列。
第4圖顯示anti－TR－2抗體B之重鏈(SEQ ID NO：3)及輕鏈(SEQ ID NO：37)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：4)及輕鏈(SEQ ID NO：38)可變區之胺基酸序列。
第5圖顯示anti－TR－2抗體C之重鏈(SEQ ID NO：5)及輕鏈(SEQ ID NO：39)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：6)及輕鏈(SEQ ID NO：40)可變區之胺基酸序列。
第6圖顯示anti－TR－2抗體D之重鏈(SEQ ID NO：7)及輕鏈(SEQ ID NO：41)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：8)及輕鏈(SEQ ID NO：42)可變區之胺基酸序列。
第7圖顯示anti－TR－2抗體E之重鏈(SEQ ID NO：9)及輕鏈(SEQ ID NO：43)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：10)及輕鏈(SEQ ID NO：44)可變區之胺基酸序列。
第8圖顯示anti－TR－2抗體F之重鏈(SEQ ID NO：11)及輕鏈(SEQ ID NO：45)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：12)及輕鏈(SEQ ID NO：46)可變區之胺基酸序列。
第9圖顯示anti－TR－2抗體G之重鏈(SEQ ID NO：13)及輕鏈(SEQ ID NO：47)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：14)及輕鏈(SEQ ID NO：48)可變區之胺基酸序列。
第10圖顯示anti－TR－2抗體H之重鏈(SEQ ID NO：15)及輕鏈(SEQ ID NO：49)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：16)及輕鏈(SEQ ID NO：50)可變區之胺基酸序列。
第11圖顯示anti－TR－2抗體I之重鏈(SEQ ID NO：17)及輕鏈(SEQ ID NO：51)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：18)及輕鏈(SEQ ID NO：52)可變區之胺基酸序列。
第12圖顯示anti－TR－2抗體J之重鏈(SEQ ID NO：19)及輕鏈(SEQ ID NO：53)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：20)及輕鏈(SEQ ID NO：54)可變區之胺基酸序列。
第13圖顯示anti－TR－2抗體K之重鏈(SEQ ID NO：21)及輕鏈(SEQ ID NO：55)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：22)及輕鏈(SEQ ID NO：56)可變區之胺基酸序列。
第14圖顯示anti－TR－2抗體L之重鏈(SEQ ID NO：23)及輕鏈(SEQ ID NO：57)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：24)及輕鏈(SEQ ID NO：58)可變區之胺基酸序列。
第15圖顯示anti－TR－2抗體M之重鏈(SEQ ID NO：25)及輕鏈(SEQ ID NO：59)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：26)及輕鏈(SEQ ID NO：60)可變區之胺基酸序列。
第16圖顯示anti－TR－2抗體N之重鏈(SEQ ID NO：27)及輕鏈(SEQ ID NO：61)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：28)及輕鏈(SEQ ID NO：62)可變區之胺基酸序列。
第17圖顯示anti－TR－2抗體O之重鏈(SEQ ID NO：29)及輕鏈(SEQ ID NO：63)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：30)及輕鏈(SEQ ID NO：64)可變區之胺基酸序列。
第18圖顯示anti－TR－2抗體P之重鏈(SEQ ID NO：31)及輕鏈(SEQ ID NO：65)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：32)及輕鏈(SEQ ID NO：66)可變區之胺基酸序列。
第19圖顯示anti－TR－2抗體Q之重鏈(SEQ ID NO：33)及輕鏈(SEQ ID NO：67)可變區之編碼核苷酸序列，及該抗體之重鏈(SEQ ID NO：34)及輕鏈(SEQ ID NO：68)可變區之胺基酸序列。
第20圖為anti－TR－2抗體A至Q之重鏈可變區之胺基酸序列之校準(SEQ ID NO.：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32及34)。顯示各序列之架構區1至3(FR1、FR2、及FR3)及互補決定區1至3(CDR1、CDR2及CDR3)。
第21圖為anti－TR－2抗體A至Q之輕鏈可變區之胺基酸序列之校準(SEQ ID NO.：36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66及68)。顯示各序列之架構區1至3(FR1、FR2、及FR3)及互補決定區1至3(CDR1、CDR2及CDR3)。
第22圖為表格顯示根實例5所述工作，根據各自結合至截頭及嵌合體N抗生物素TR－2蛋白質的能力，來將某些人anti－TR－2抗體分成4反應性群之一。
第23圖顯示根據實例6所述工作，於抗原決定部位映射圖中使用的人N－抗生物素－TR－2 13截頭之示意代表圖。
第24圖為柱狀圖，顯示根據實例6所述工作，某些人anti－TR－2抗體結合至N－抗生物素－TR－2截頭。
第25圖顯示根據實例6所述工作，用於抗原決定部位的映射圖N－抗生物素－獼猴TR－2截頭及N－抗生物素－獼猴/人TR－2嵌合體之示意代表圖。
第26圖為根據實例6所述工作，人TR－2、獼猴TR－2(短形)及小鼠TR－2序列之校準。
第27圖為柱狀圖，顯示根據實例6所述工作，某些人anti－TR－2抗體結合至N－抗生物素－TR－2截頭、嵌合體及功能部位置換。
<110> 應用分子基因公司(AMGEN INC.)
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<220>
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<213> 人類
<400> 203
<210> 204
<211> 133
<212> PRT
<213> 小鼠種屬
<400> 204

Claims (22)

  1. 一種包含重鏈及輕鏈之經單離的抗體，其中重鏈包含SEQ ID NO：30之CDR1、CDR2及CDR3，及輕鏈包含SEQ ID NO：64之CDR1、CDR2及CDR3，其中此抗體係結合TRAIL受體-2(TR-2)。
  2. 如申請專利範圍第1項之經單離的抗體，其中此抗體為全人類抗體。
  3. 如申請專利範圍第1項之經單離的抗體，其專一性結合至經Ab O專一性結合的TRAIL受體-2(TR-2)上的抗原決定位(epitope)。
  4. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至3項中任一項之經單離的抗體及醫藥上可接受的載劑。
  5. 一種組成物，其包含編碼重鏈之第一經單離多核苷酸，其中重鏈包含SEQ ID NO：30之CDR1、CDR2及CDR3。
  6. 如申請專利範圍第5項之組成物，其中組成物進一步包含編碼輕鏈之第二經單離多核苷酸，其中輕鏈包含SEQ ID NO：64之CDR1、CDR2及CDR3。
  7. 一種組成物，其包含編碼輕鏈之經單離多核苷酸，其中輕鏈包含SEQ ID NO：64之CDR1、CDR2及CDR3。
  8. 一種組成物，其包含編碼重鏈之第一經單離多核苷酸，其中重鏈包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列。
  9. 如申請專利範圍第8項之組成物，其中組成物進一步包含編碼輕鏈之第二經單離多核苷酸，其中輕鏈包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列。
  10. 如申請專利範圍第6或9項之組成物，其中第一經單離多核苷酸為第一表現載體之一部分，第二經單離多核苷酸為第二載體之一部分。
  11. 如申請專利範圍第6或9項之組成物，其中第一經單離多核苷酸及第二經單離多核苷酸為相同載體之一部分。
  12. 如申請專利範圍第5或8項之組成物，其中第一經單離多核苷酸表現載體之一部分。
  13. 如申請專利範圍第10項之組成物，其中第一表現載體及第二表現載體係於宿主細胞中。
  14. 如申請專利範圍第11項之組成物，其中該表現載體係於宿主細胞中。
  15. 如申請專利範圍第12項之組成物，其中該表現載體係於宿主細胞中。
  16. 一種組成物，其包含編碼輕鏈之經單離多核苷酸，其中輕鏈包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列。
  17. 如申請專利範圍第7或16項之組成物，其中此經單離多核苷酸為表現載體之一部分。
  18. 如申請專利範圍第17項之組成物，其中該表現載體係於宿主細胞中。
  19. 一種製造抗體之方法，其包含載體於宿主細胞中適合表現的條件下培育如申請專利範圍第13項之組成物以產生抗體。
  20. 一種製造抗體之方法，其包含載體於宿主細胞中適合表 現的條件下培育如申請專利範圍第14項之組成物以產生抗體。
  21. 一種治療有效量之如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體於製造醫藥之用途，該醫藥係用於治療病患之癌症。
  22. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該癌症係選自肝癌、腦癌、腎癌、結腸直腸癌、肺癌、脾臟癌、胸腺或血液細胞癌(亦即白血病)、攝護腺癌、睪丸癌、卵巢癌、子宮癌、乳癌、胰臟癌、胃癌、頭頸鱗狀細胞癌、及淋巴瘤之至少一者。
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